(57)【要約】【課題】オートタキシンアイソフォームδ及びεを測定することにより、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするオートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の、検出方法および検出薬を提供すること。【解決手段】血清等の検体中のオートタキシンアイソフォームδ及びεを、抗体を用いた免疫化学的方法により測定することにより、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患、例えば慢性肝疾患や妊娠等を検出する。また、オートタキシンアイソフォームδ及びε濃度を測定し、その値を換算することにより、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度を推定する。【選択図】  図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
オートタキシンアイソフォームδ及びεを測定することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の検出方法。
【請求項２】
前記疾患等が慢性肝疾患である請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
前記疾患等が悪性リンパ腫である請求項１に記載の検出方法。
【請求項４】
前記疾患等が膵疾患である請求項１に記載の検出方法。
【請求項５】
前記疾患等がステロイド服用効果モニターである請求項１に記載の検出方法。
【請求項６】
前記疾患等が妊娠又は妊娠高血圧症候群である請求項１に記載の検出方法。
【請求項７】
前記オートタキシンアイソフォームδ及びεが完全長のオートタキシンアイソフォームδ及びε、部分的に切断を受けたオートタキシンアイソフォームδ及びε、又は一部の遺伝子の変異を受けたオートタキシンアイソフォームδ及びεである、請求項１から６いずれかに記載の検出方法。
【請求項８】
検体が、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液である、請求項１から７いずれかに記載の検出方法。
【請求項９】
前記方法が、抗体を用いた免疫化学的方法である、請求項１から８いずれかに記載の検出方法。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれかに記載の検出方法を利用することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の検出薬。
【請求項１１】
オートタキシンアイソフォームδ及びε濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度の推定方法。
【請求項１２】
オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームδ及びε濃度の推定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オートタキシンアイソフォームδ及びεの測定による、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするオートタキシン全量濃度の測定により検出しうる疾患等の、検出方法、検出薬及び推定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オートタキシンにはいくつかのアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ、構造は異なるが同じ機能をもつタンパク質）があることが知られている。一例として、スプライシングバリアントα、β、γ、δ、εが遺伝子として同定されているオートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ、ε（以下それぞれをＡＴＸα、β、γ、δ、εと略す）がある（非特許文献１、２）。
【０００３】
前記アイソフォームのアミノ酸配列の相同性を確認した結果、ＡＴＸα、β及びγ（以下、ＡＴＸα、β、γと定義する）は、Ｌ２リンカー領域でＶａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（配列番号１）を有し、ＡＴＸδ及びε（以下ＡＴＸδ、εと定義する）はＬ２リンカー領域で配列番号１のアミノ酸配列を欠損していることが明らかとなっている（非特許文献２）。ＡＴＸδはＡＴＸβに次いで主要なアイソフォームであり、ＡＴＸβに類似した生化学的性質をもつ（非特許文献１）。
【０００４】
オートタキシンの測定に関しては、特許文献１にて、ヒト血清等ヒト検体中のＡＴＸα、β、γ、δ及びε（以下ＡＴＸ全量と定義する）濃度を簡便、短時間、かつ信頼性高く定量可能な方法が開示されており、悪性リンパ腫、肝臓の線維化、膵疾患、ステロイド服用効果モニター、妊娠および妊娠高血圧症候群の検出が可能となっている（特許文献１、２、３、４、５）が、各種疾患におけるＡＴＸδ、εの濃度はこれまで不明であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００８／０１６１８６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２０１１／０８１２１４号パンフレット
【特許文献３】特開２０１２−５２８７５号公報
【特許文献４】特開２０１２−２５８８号公報
【特許文献５】特開２００９−１６２６１６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、７７７６、２００８
【非特許文献２】Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１５１、８９−９７、２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明は、ＡＴＸδ、εの測定により、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の、検出方法、検出薬及び推定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題に鑑みてなされた本発明は、以下の態様を包含する：
（１）ＡＴＸδ、εを測定することを特徴とする、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出方法。
（２）前記疾患等が慢性肝疾患である（１）に記載の検出方法。
（３）前記疾患等が悪性リンパ腫である（１）に記載の検出方法。
（４）前記疾患等が膵疾患である（１）に記載の検出方法。
（５）前記疾患等がステロイド服用効果モニターである（１）に記載の検出方法。
（６）前記疾患等が妊娠又は妊娠高血圧症候群である（１）に記載の検出方法。
（７）前記ＡＴＸδ、εが完全長のＡＴＸδ、ε、部分的に切断を受けたＡＴＸδ、ε、又は一部の遺伝子の変異を受けたＡＴＸδ、εである、（１）から（６）いずれかに記載の検出方法。
（８）検体が、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液である、（１）から（７）いずれかに記載の検出方法。
（９）前記方法が、抗体を用いた免疫化学的方法である、（１）から（８）いずれかに記載の検出方法。
（１０）（１）から（９）のいずれかに記載の検出方法を利用することを特徴とする、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出薬。
（１１）ＡＴＸδ、ε濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、ＡＴＸ全量濃度の推定方法。
（１２）ＡＴＸ全量濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、ＡＴＸδ、ε濃度の推定方法。
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１０】
本発明者らはＡＴＸのアイソフォームに着目し、ヒト血中のＡＴＸδ、εを検出することを試みた。その結果、慢性肝疾患患者では、その値が健常人からなる正常値に対し有意差をもって高値を示した。妊婦では、その値が非妊娠健常人測定値からなる正常値に対し有意差をもって高値を示した。悪性リンパ腫では、その値が健常人からなる正常値に対し有意差をもって高値を示す。非癌膵疾患患者では、その値が健常人からなる正常値に対し低値を示し、非癌膵疾患患者では、その値が膵臓癌患者に対し低値を示す。ステロイド服用により、その値が低値を示す。妊娠高血圧症候群では、その値が正常妊娠群の測定値に対して有意差をもって低値を示す。
【００１１】
測定されるＡＴＸδ、εは、完全長のＡＴＸδ、εだけでなく、部分的に切断を受けたＡＴＸδ、ε、又は一部の遺伝子の変異を受けたＡＴＸδ、εも含まれる。検体は、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液があげられる。
【００１２】
本発明においてＡＴＸδ、εの測定方法は、ＡＴＸδ、εを検出可能な方法であれば検出方法を選ばない。好ましくは、特異性、感度、汎用性などの点から、免疫化学的方法である。
【００１３】
このとき用いられる抗ＡＴＸδ、ε抗体は、例えばＡＴＸのアミノ酸配列のうち、ヒトＡＴＸδ、ε上に存在するアミノ酸配列Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（配列番号２）からなるアミノ酸配列を含むオートタキシンを特異的に認識し、ヒトＡＴＸα、β、γ上に存在するアミノ酸配列Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ（配列番号３）からなるアミノ酸配列を含むオートタキシンを認識しないものである。
【００１４】
ここで、配列番号２のアミノ酸配列は、ヒトＡＴＸβ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ００８５５．１、配列番号４）の５６９番目〜５８６番目までのアミノ酸からなるオリゴペプチド（配列番号３）から、５番目のバリン〜８番目のリジンまでのアミノ酸（すなわち、配列番号１からなるアミノ酸配列）を欠損させたオリゴペプチドに相当する。
【００１５】
抗ＡＴＸδ、ε抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドをマウス、ラット、ウサギ等の動物に免疫することにより取得することができる。
【００１６】
抗ＡＴＸδ、ε抗体と、ＡＴＸのアミノ酸配列のうち配列番号２からなるアミノ酸配列以外の領域を認識する抗体とを含むオートタキシン測定試薬を用いることで、配列番号２からなるアミノ酸配列を含むオートタキシン、即ちＡＴＸδ、εをサンドイッチイムノアッセイにより特異的に検出することができる。
【００１７】
本発明の検出方法を利用して、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出薬とすることもできる。特に前述のようなＡＴＸδ、εのサンドイッチイムノアッセイ法は、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でＡＴＸδ、εを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な本発明の検出薬を提供することが可能である。
【００１８】
また、ＡＴＸδ、ε濃度はＡＴＸ全量濃度と、疾患によらず有意な正の相関があり、ＡＴＸδ、εはＡＴＸ全量に対し約３２％の比率で存在した。したがって、ＡＴＸδ、ε濃度を０．３２で除すことにより、ＡＴＸ全量濃度を推定することができ、ＡＴＸ全量濃度に０．３２を乗ずることにより、ＡＴＸδ、ε濃度を推定することができる。
【発明の効果】
【００１９】
前記の方法を用いれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でＡＴＸδ、εを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な本発明の検出薬を提供することが可能である。ＡＴＸδ、εの測定により、ＡＴＸ全量測定と同様に、慢性肝疾患、妊娠を診断することが可能である。また、ＡＴＸδ、ε濃度はＡＴＸ全量濃度と良好な正の相関性を示すこと、ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸδ、ε濃度の比率は約３２％と疾患によらずほぼ一定であることから、ＡＴＸδ、εの測定によりＡＴＸ全量を推定することができ、またその逆も可能である。したがって、ＡＴＸδ、εの測定は、ＡＴＸ全量の血中濃度の上昇又は下降を伴う疾患等、例えば、悪性リンパ腫、膵疾患、ステロイド服用効果モニター、および妊娠高血圧症候群）の診断にも使用することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】健常人（丸）と慢性肝疾患患者（四角）のＡＴＸδ、ε  Ｉｎｄｅｘを示す図である。
【図２】健常人（丸）と慢性肝疾患患者（四角）のＡＴＸ全量Ｉｎｄｅｘを示す図である。
【図３】健常人女性（丸）と妊婦（四角）のＡＴＸδ、ε濃度を示す図である。
【図４】健常人女性（丸）と妊婦（四角）のＡＴＸ全量濃度を示す図である。
【図５】健常人のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸδ、ε濃度の相関性を示す図である。
【図６】慢性肝疾患患者のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸδ、ε濃度の相関性を示す図である。
【図７】妊婦のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸδ、ε濃度の相関性を示す図である。
【図８】健常人、慢性肝疾患患者および妊婦のＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸδ、ε濃度の比率を示す図である。
【実施例】
【００２１】
以下に実施例を示すが、本発明は実施例に記載された例に限られるものではない。なお、以下の実験例で使用したヒト検体は、インフォームドコンセントのもと採血された検体を用い実施した。また、ＡＴＸ全量濃度の測定は特許文献１の方法、ＡＴＸδ、ε濃度の測定は以下の方法に基づき、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー（株）製）を用い実施した。
【００２２】
参考例：
免疫抗原は、合成したペプチド（配列番号２）をＩｍｊｅｃｔ  Ｋｅｙｈｏｌｅ  Ｌｉｍｐｅｔ  Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ＰＩＥＲＣＥ社；品番７７１５３）を用い、プロトコールに従って、コンジュゲーションすることで作製した。この免疫抗原をラットを用いて、フロイント完全アジュバント（ＤＩＦＣＯ）と共に、エーテル麻酔下で後足に免疫した。１カ月後、ラットより鼠頚リンパ節および腸骨リンパ節を採取し、Ｂ細胞を回収し、ミエローマ細胞と融合することにより、ハイブリドーマ細胞を作製した。
【００２３】
クローンの選択は、スクリーニング用ペプチド−ＢＳＡコンジュゲート抗原を用い、配列番号２のオリゴペプチド−ＢＳＡと反応性を示し、かつ配列番号３のオリゴペプチド−ＢＳＡと反応性を示さないクローンを選択した。スクリーニング用ペプチド−ＢＳＡコンジュゲート抗原は、Ｉｍｊｅｃｔ  Ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（ＰＩＥＲＣＥ社；品番７７１７１）を用い、プロトコールに従って、コンジュゲーションすることでペプチド−ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ）を作製した。スクリーニング陽性ウェル中の細胞を限界希釈法によりモノクローナル化を行いハイブリドーマとして樹立した。
【００２４】
本発明で使用した抗ＡＴＸδ、εモノクローナル抗体はクローン名ＡＴＸＲ４−１２７、抗ＡＴＸモノクローナル抗体（ＡＴＸのアミノ酸配列のうち配列番号２からなるアミノ酸配列以外の領域を認識するもの）は、特許文献１に記載の方法で得られたクローン名ＡＴＸＲ１０．２３である。
【００２５】
またＡＴＸδ、ε測定試薬は、特許文献１の方法に従い調製した。調製した試薬は、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー（株）製）で使用可能である。具体的には以下に示す方法で実施した。
【００２６】
水不溶性担体（内部にフェライトを練り込んだ粒子径約１．５ｍｍのエチレンビニルアルコール製担体）に抗ＡＴＸδ、εモノクローナル抗体（ＡＴＸＲ４−１２７）を１００ｎｇ／担体になるように３０℃にて一昼夜物理的に吸着させ、その後１％ＢＳＡを含む１００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．０）にて４０℃、４時間ブロッキングを行なうことで抗体固定化担体を調製した。抗ＡＴＸモノクローナル抗体（ＡＴＸＲ１０．２３）をアルカリフォスファターゼ標識用キット−ＮＨ２（同仁化学研究所、品番：ＬＫ１２）を用いてアルカリ性フォスファターゼと結合させることで標識抗体を調製した。
【００２７】
磁力透過性の容器（容量１．２ｍＬ）に１２個の抗体固定化担体を入れた後、０．７μｇ／ｍＬの標識抗体を含む緩衝液（３％ＢＳＡを含むトリス緩衝液、ｐＨ８．０）５０μＬを容器に添加し凍結乾燥を施しＡＴＸδ、ε測定試薬とした。ＡＴＸ測定試薬は窒素充填下密閉封印シールを施し測定まで４℃にて保管した。
【００２８】
既知濃度ＡＴＸδ標準品を特許文献１記載の方法に従い調製した。具体的には、下記に示す方法で実施した。ＡＴＸモノクローナル抗体（ＡＴＸＲ１０．２３）結合カラムを用い、牛血清中のオートタキシンを吸着させることで、ＡＴＸ非含有血清を調整した。バキュロウイルスを用いて調製した組み換えＡＴＸδを用い、ＡＴＸ非含有血清に適当な濃度添加することで、濃度の異なる５濃度（ＡＴＸ非含有血清を加えると６濃度）の標準品を作製した。標準品の濃度は特許文献１に記載のＡＴＸ全量定量試薬にて決定した。
【００２９】
なお組み換えＡＴＸδは、特許文献１の方法に従い、バキュロウイルスを用いて調製した。具体的な方法を以下に示す。Ａｕｔｏｔａｘｉｎ−ｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  Ｌ４６７２０）のうち、塩基番号６０番目から２６４８番目までのヌクレオチドからなるｃＤＮＡ（配列番号５）をバキュロウイルス用トランスファーベクターｐＦＡＳＴＢａｃ−ＨＴ（インビトロジェン）に導入し、プロトコールに従い、ポリヒスチジンを付加した、配列番号１からなるアミノ酸配列を含むオートタキシン（ＡＴＸβ）発現用バキュロウイルスプラスミドを調製した。ポリヒスチジンを付加した、配列番号１からなるアミノ酸を含まないオートタキシン（ＡＴＸδ）発現用プラスミドとして、ＡＴＸβ発現用バキュロウイルスプラスミドを鋳型として、ＫＯＤ−Ｐｌｕｓ−Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（東洋紡績）を用いて、配列番号５からなるポリヌクレオチドのうち１７１７番目から１７２８番目のヌクレオチド（ＧｅｎＢａｎｋ  Ｎｏ．Ｌ４６７２９の１７７６番目から１７８７番目までのヌクレオチドに相当）を欠損したポリヌクレオチド（配列番号６）を含むプラスミドを調製した。作製したプラスミドを用い、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃシステム（インビトロジェン）にて組換えバキュロウイルスを調製した。調製したバキュロウイルスを用いて、常法に従い、ｓｆ９昆虫細胞に感染させることにより、ＡＴＸδを含む培養上清を調製した。発現タンパク質の精製を特開２０１１−０３７８０２号公報に従い実施した。具体的には以下に示す方法で実施した。
【００３０】
抗オートタキシンモノクローナル抗体Ｒ１０．７（特許文献１）をＨｉＴｒａｐ  ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＨＰカラム（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス）に結合させ、ＡＴＸδ発現培養上清を前記カラムにロードした。ＴＢＳ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）で十分洗浄を行った。１００ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ５．０）により結合したＡＴＸδを溶出した。
【００３１】
実施例１：健常人検体のＡＴＸδ、ε濃度の定量
患者検体測定に先立ち、コントロール群として健常人血清のＡＴＸδ、ε濃度を測定した。男性８１名（１９〜６１歳）、女性５２名（１９〜５０歳）の健常人血清中のＡＴＸδ、ε濃度を全自動免疫測定装置にて実施した。
【００３２】
結果を表１に示す。女性血清中のＡＴＸδ、ε濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である０．３６９ｍｇ／Ｌ、０．４８９ｍｇ／Ｌで除した値「オートタキシンδ、ε指数」（ＡＴＸδ、ε  ｉｎｄｅｘ＝ＡＴＸδ、ε測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
【００３３】
【表１】
2015072196.tif 000003
実施例２：健常者検体のＡＴＸ全量濃度の定量
実施例１と同じ健常者検体中のＡＴＸ全量濃度を全自動免疫測定装置にて実施した。
【００３４】
結果を表２に示す。女性検体中のＡＴＸ全量濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である１．０１３ｍｇ／Ｌ、１．３５４ｍｇ／Ｌで除した値「オートタキシン全量指数」（ＡＴＸ全量  ｉｎｄｅｘ＝ＡＴＸ全量測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
【００３５】
【表２】
2015072196.tif 000004
実施例３：慢性肝疾患患者検体のＡＴＸδ、ε濃度とＡＴＸ全量濃度の定量
慢性肝疾患患者血清のＡＴＸδ、ε濃度を健常人と比較した。比較のために、ＡＴＸ全量濃度の測定を行なった。結果を表３（男性及び女性のＡＴＸδ、ε濃度）、表４（性差を考慮したＡＴＸδ、ε  Ｉｎｄｅｘ）、表５（男性及び女性のＡＴＸ全量濃度）、表６（性差を考慮したＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘ）、図１（性差を考慮したＡＴＸδ、ε  Ｉｎｄｅｘ）および図２（性差を考慮したＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘ）に示す。
【００３６】
ＡＴＸδ、ε濃度およびＡＴＸδ、ε  Ｉｎｄｅｘは、ＡＴＸ全量濃度およびＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘと同様に慢性肝疾患患者において有意に高いことが確認された。
【００３７】
【表３】
2015072196.tif 000005
【００３８】
【表４】
2015072196.tif 000006
【００３９】
【表５】
2015072196.tif 000007
【００４０】
【表６】
2015072196.tif 000008
実施例４：妊婦検体におけるＡＴＸ全量濃度とＡＴＸδ、ε濃度
妊婦血清のＡＴＸδ、ε濃度を、健常人女性と比較した。また、比較のために、ＡＴＸ全量濃度の測定を行なった。結果を表７（ＡＴＸδ、ε濃度）、表８（ＡＴＸ全量濃度）、図３（ＡＴＸδ、ε濃度）および図４（ＡＴＸ全量濃度）に示す。
【００４１】
ＡＴＸδ、ε濃度は、ＡＴＸ全量濃度と同様に妊婦において有意に高いことが確認された。
【００４２】
【表７】
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【００４３】
【表８】
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実施例５：ＡＴＸδ、ε濃度とＡＴＸ全量濃度の相関
健常人検体、慢性肝疾患患者検体、妊婦検体におけるＡＴＸ全量濃度を横軸に、ＡＴＸδ、ε濃度を縦軸にしてプロットし、相関関係を確認した。結果を図５（健常人）、図６（慢性肝疾患患者）、図７（妊婦）に示す。
【００４４】
図５、６、７に示されるとおり、健常人、慢性肝疾患患者、妊婦でＡＴＸδ、ε濃度とＡＴＸ全量濃度は良好な正の相関性を示した。
【００４５】
また、健常人、慢性肝疾患患者、妊婦における、ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸδ、ε濃度の比率（ＡＴＸδ、ε濃度（ｍｇ／Ｌ）／ＡＴＸ全量濃度（ｍｇ／Ｌ））の結果を表９、図８に示す。ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸδ、ε濃度の比率の平均は、健常人検体では０．３１７、慢性肝疾患患者検体では０．３１８、妊婦では０．３４９であった。これらのことからＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸδ、ε濃度の比率は疾患によらずほぼ一定の０．３２であることから、ＡＴＸδ、ε濃度を０．３２で除すことにより、ＡＴＸ全量濃度を推定することができ、ＡＴＸ全量濃度に０．３２を乗ずることにより、ＡＴＸδ、ε濃度を推定することができる。
【００４６】
【表９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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