(57)【要約】【課題】本発明は、ドライマウスやムスカリン受容体の活性化が必要な症状を軽減するのに効果的な物質を提供する。【解決手段】アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化剤又は唾液分泌促進剤、或いは、これらいずれかの剤を有効成分として含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化用又は唾液分泌促進用組成物、並びに、アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を食品に添加することを含む、食品にムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を付与する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化剤。
【請求項２】
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、唾液分泌促進剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の剤を有効成分として含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化用又は唾液分泌促進用組成物。
【請求項４】
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を１〜５０質量％含有することを特徴とする、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を食品に添加することを含む、食品にムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を付与する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ムスカリン受容体活性化剤及び唾液分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）は、ルイボスとも呼ばれ、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）アスパラトゥス属（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ）に属し、針葉樹様の葉を持つ植物である。その葉を乾燥させて作るお茶は「ルイボス茶（ルイボスティー）」と呼ばれる健康茶の一種として知られている。
【０００３】
特許文献１には、ルイボス茶が、不眠症、神経の緊張、胃痙攣及びアレルギー症状の緩和に有効であることが知られていること、ルイボス茶中のフラボノイドは、強力な抗酸化活性及びフリーラジカルスカベンジ活性を有し、抗癌剤及び抗動脈硬化剤として作用する可能性を有することが知られていることが記載されている。また、特許文献１には、ルイボス茶が、抗糖尿病剤として有用であることが記載されている。
【０００４】
特許文献２には、ルイボス葉の抽出エキスを含有するアディポネクチン産生阻害剤が記載されており、当該アディポネクチン産生阻害剤を痩身用途に使用することが記載されている。
【０００５】
特許文献３には、アスパラサス・リネアリス抽出物を口臭消臭剤として含有する口腔用組成物が記載されており、該組成物を口腔湿潤剤に用いることが記載されている。
【０００６】
特許文献４には、ルテオリンを有効成分とする口腔用抗菌剤が記載されている。
【０００７】
ドライマウスは日常生活でも経験され、べとべとした不快感、会話の困難さ、口臭の発生等を伴う。更に病的になると、口腔内菌叢の変化から、う蝕、歯周疾患、種々の感染症等、口腔機能のみならず全身健康の不全を生ずる。したがって、唾液の分泌を促進して口腔内を潤すことは、口腔を爽快に保ち、口腔疾患や全身疾患を予防する上で重要である。
【０００８】
特許文献５には、ポリグルタミン酸及びその塩が優れた唾液分泌促進活性と保湿作用を示すことが記載されている。しかしながら、ポリグルタミン酸及びその塩は、粘度が高く、製剤化する際、問題となる場合があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特表２０１０−５２０９１３号公報
【特許文献２】特開２００８−２４６２０号公報
【特許文献３】特開２００６−１１７５６３号公報
【特許文献４】特開２０００−２３９１３６号公報
【特許文献５】国際公開第２００５／０４９０５０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、ドライマウスを軽減するのに効果的な物質の探索が求められていたことから、本発明は、ドライマウスを軽減するのに効果的な物質を提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討を重ねたところ、アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物、及びルテオリンが、唾液腺細胞に存在するムスカリン受容体を活性化すること、持続的に唾液分泌を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明は、以下の発明を提供する。
〔１〕  アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化剤。
〔２〕  アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、唾液分泌促進剤。
〔３〕  〔１〕又は〔２〕に記載の剤を有効成分として含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化用又は唾液分泌促進用組成物。
〔４〕  アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を１〜５０質量％含有することを特徴とする、〔３〕記載の組成物。
〔５〕  アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を食品に添加することを含む、食品にムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を付与する方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係るアスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンは、ムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用を有し、ドライマウスの症状を効果的に寛解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ムスカリン受容体に対するルテオリンの活性化作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ａ】図２Ａは、ムスカリン受容体に対するアピインの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ムスカリン受容体に対するアスパラチンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ムスカリン受容体に対するアピゲニンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｄ】図２Ｄは、ムスカリン受容体に対するケルセチンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｅ】図２Ｅは、ムスカリン受容体に対するルテオリン−７−Ｏ−グルコシドの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｆ】図２Ｆは、ムスカリン受容体に対するルテオリン−８−Ｃ−グルコシドの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｇ】図２Ｇは、ムスカリン受容体に対する４’，６，７−トリメトキシイソフラボンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｈ】図２Ｈは、ムスカリン受容体に対する３’，４’，７−トリメトキシフラボンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｉ】図２Ｉは、ムスカリン受容体に対するダイジンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｊ】図２Ｊは、ムスカリン受容体に対するダイゼインの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｋ】図２Ｋは、ムスカリン受容体に対するゲニステインの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｌ】図２Ｌは、ムスカリン受容体に対するゲニスチンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｍ】図２Ｍは、ムスカリン受容体に対するグリシチンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｎ】図２Ｎは、ムスカリン受容体に対するグリシテインの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｏ】図２Ｏは、ムスカリン受容体に対するイプリフラボンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図２Ｐ】図２Ｐは、ムスカリン受容体に対する５，７，４’−トリメトキシフラボンの作用を示すグラフである（実施例１）。
【図３】図３は、ルイボス茶抽出物の唾液分泌促進効果（洗口）を示すグラフである（実施例２）。
【図４】図４は、ルイボス茶抽出物の唾液分泌促進効果（内服）を示すグラフである（実施例３）。
【図５】図５は、ルイボス茶抽出物による唾液分泌の実感（内服）を示すグラフである（実施例３）。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の一実施態様では、アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、ムスカリン受容体活性化剤を提供する。
本発明の別の実施態様では、アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有することを特徴とする、唾液分泌促進剤を提供する。
【００１６】
＜アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）抽出物＞
アスパラサス・リネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）は、ルイボスとも呼ばれ（以下、単に「ルイボス」と称する。）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）アスパラトゥス属（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ）に属する。
【００１７】
ルイボスの抽出部位としては、特に制限はなく、本発明所望の効果を達成することができる限り、適宜選択することができ、例えば、葉部、若葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部、根部などが挙げられる。これらの中でも、若葉部、枝部が好ましい。
【００１８】
ルイボスの抽出部位の調製方法としては、発酵処理、粗砕機を用いた粉砕処理、又は乾燥処理、或いはこれらを組み合わせた後、後述の溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記発酵処理としては、特に制限されず、一般に用いられている方法を用いることができる。例えば、水を含水させた後、１〜２４時間、２０〜４０℃でインキュベートすることが好ましい。前記乾燥処理としては、特に制限されず、一般に用いられている方法を用いることができる。例えば、６０℃以下で行うことが好ましい。
【００１９】
ルイボス抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。ルイボス抽出物の具体的態様は、特に制限はなく、本発明所望の効果を達成することができる限り、適宜選択することができ、例えば、抽出物自体、抽出物の乾燥物、抽出物の希釈液、抽出物の希釈液の乾燥物、抽出物の濃縮液（濃縮エキス）、抽出物の濃縮液の乾燥物などを用いることができる。
【００２０】
ルイボスの抽出方法としては、特に制限はなく、本発明所望の効果を達成することができる限り、適宜選択することができる。例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料であるルイボスの抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を取り除くことにより、ルイボス抽出物を得ることができる。
【００２１】
ルイボスの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、並びにルイボスの抽出溶媒の使用量は、特に制限はなく、抽出方法等に応じて、本発明所望の効果を達成することができる限り、適宜選択することができる。
【００２２】
ルイボスの抽出溶媒としては、特に制限はなく、本発明所望の効果を達成することができる限り、適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、疎水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。水としては、特に制限はなく、投与経路や投与方法等に応じて、適宜選択することができる。例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。親水性溶媒としては、特に制限はなく、投与経路や投与方法等に応じて、適宜選択することができる、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜６の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜６の多価アルコールなどが挙げられる。疎水性溶媒としては、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭素；酢酸エチル、アセトニトリル、エーテル等の有機溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭素などが挙げられる。混合溶媒としては、特に制限はなく、上記水や上記親水性溶媒等を、適宜混合して使用することができる。低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記ルイボスの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。
【００２３】
ルイボス抽出物は、必要に応じて、精製して用いることができ、その精製方法に特に制限はなく、適宜選択することができる。例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離、超臨界流体抽出などの精製方法が挙げられる。
【００２４】
例えば、ルイボス抽出物としては、市販のルイボス茶エキス粉末を用いることができ、かかる市販のルイボス茶エキス粉末の製造方法としては、ルイボスの発酵した若葉の熱水抽出物をろ過し、ろ液を濃縮乾燥して粉末にする方法が知られている。
【００２５】
＜ルテオリン＞
ルテオリンは、ルイボスに含まれることが周知の成分であり、以下の構造を有する化合物である。
【００２６】
【化１】
2015107925.tif 000002
【００２７】
本発明において使用するルテオリンは、ルイボス抽出物から得てもよいし、化学的に合成することによって得てもよいし、市販品を使用してもよい。ルテオリンの化学的合成方法としては、例えば、Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎａｌｅｎ，  Ｖｏｌｕｍｅ  １９９５，  Ｉｓｓｕｅ  ９，  ｐａｇｅｓ  １７１１−１７１５，  １９９５に記載されている。
【００２８】
ルイボス抽出物及び／又はルテオリンを、有効量、被験者に摂取させる（投与する）。「有効量」とは、被験者のムスカリン受容体を活性化する又は唾液分泌を促進するのに有意な量を意味する。当該有意な量は、本願明細書の実施例の記載等を参酌して、当業者が適宜設定することができる。当該有意な量は、通常、被験者の状態や年齢に依存する。
【００２９】
本発明の剤又は組成物は、ムスカリン受容体を活性化することができるので、発汗促進作用、胃酸分泌促進作用、排尿促進作用、蠕動運動促進、唾液分泌促進作用などが期待できる。
【００３０】
ルイボス抽出物の乾燥末の場合、上記有意な量は、例えば、１ｍｇ／ｄａｙ〜１００００ｍｇ／ｄａｙが好ましく、１０ｍｇ／ｄａｙ〜１０００ｍｇ／ｄａｙがより好ましく、２０ｍｇ／ｄａｙ〜５００ｍｇ／ｄａｙが更により好ましい。かかる量を１日１回摂取（投与）してもよいし、１日に複数回に分けて摂取（投与）してもよい。複数回に分けて摂取（投与）する場合には、抽出前の乾燥ルイボスに換算して、５ｍｇ／回〜５００００ｍｇ／回が好ましく、５０ｍｇ／回〜１００００ｍｇ／回がより好ましく、１００ｍｇ／回〜５０００ｍｇ／回が更により好ましい。
【００３１】
ルテオリンの場合、上記有意な量は、例えば、１μｇ／ｄａｙ〜１００００μｇ／ｄａｙが好ましく、１０μｇ／ｄａｙ〜１０００μｇ／ｄａｙがより好ましく、２０μｇ／ｄａｙ〜５００μｇ／ｄａｙが更により好ましい。かかる量を１日１回摂取（投与）してもよいし、１日に複数回に分けて摂取（投与）してもよい。複数回に分けて摂取（投与）する場合には、０．５μｇ／回〜５０００μｇ／回が好ましく、５μｇ／回〜５００μｇ／回がより好ましく、１０μｇ／回〜２５０μｇ／回が更により好ましい。
【００３２】
本発明の剤又は組成物は、本発明所望の効果を得られる限り、摂取（投与）経路は特に限定されない。例えば、経口（例えば、口腔内、舌下など）、非経口（静脈内、筋肉内、皮下、経皮、経鼻、経肺など）などの経路が挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない経路が好ましく、経口がより好ましい。
【００３３】
ルイボス抽出物及び／又はルテオリンの摂取（投与）は、好ましくは経口摂取（経口投与）による。
【００３４】
経口摂取（経口投与）の場合の本発明のルイボス抽出物及び／又はルテオリンの一態様としては、例えば、粉末、細粒、顆粒、カプセル、サシェ、タブレット、ボーラス、ロゼンジ、フィルム等の固体態様；水溶液、エキス、懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルジョン、分散体等の液体態様；半液体状、クリーム状、ペースト状、ゲル状等の態様が挙げられる。ルイボス抽出物及び／又はルテオリンは、ピルの形態（カプセル中の粉末又は液体）、又は（粉末茶を飲むのと同様に）水やお湯等の液体に入れたり又は溶かしたりした後で摂取され得る粉末形態や顆粒形態（フリーズドライ顆粒を含む）で摂取（投与）してもよい。
【００３５】
非経口投与の場合の本発明のルイボス抽出物及び／又はルテオリンの一態様としては、例えば、水溶液、エキス、懸濁液、エマルジョン、分散体等の液体などの静脈内注射剤、筋肉内注射剤又は皮下注射剤；水溶液、エキス、懸濁液、エマルジョン、分散体等の液体などの経皮投与剤；水溶液、エキス、懸濁液、エマルジョン、分散体等の液体、粉末、細粒などの経鼻投与剤又は経肺投与剤などの態様が挙げられる。
【００３６】
本発明の剤は、そのまま摂取（投与）してもよい。また、飲食品や機能性食品、組成物に、ムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を付与するための添加剤として使用してもよい。さらに、本発明の剤は、ムスカリン受容体活性化用又は唾液分泌促進用組成物に、有効成分として含めることもできる。かかる組成物としては、例えば、口腔用組成物、内服組成物、医薬組成物が好ましい。当該組成物の有効成分として含有せしめる場合、ルイボス抽出物及びルテオリンからなる群から選ばれる少なくとも１種を０．００００１〜９０質量％（ルイボス抽出物の場合、ルイボスの乾燥末に換算して）含有させることが好ましく、０．０００１〜５０質量％含有させることがより好ましく、０．０１〜１０質量％含有させることが更により好ましい。
【００３７】
本発明の剤を、ムスカリン受容体活性化作用及び唾液分泌促進作用からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を付与するための添加剤として配合し得る飲食品や機能性食品、組成物には、特に制限はなく、例えば、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、菓子類（クッキー、ケーキ、ガム、キャンディー、タブレット、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、アイスクリーム、シャーベットなど）、水産加工品（かまぼこ、ちくわ、はんぺんなど）、畜産加工品（ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ウィンナー、チーズ、バター、ヨーグルト、生クリーム、マーガリン、発酵乳など）、スープ（粉末状スープ、液状スープなど）、主食類（ご飯類、麺（乾麺、生麺）、パン、シリアルなど）、調味料（マヨネーズ、ショートニング、ドレッシング、ソース、たれ、しょうゆなど）、練り歯磨剤、液体歯磨剤、液状歯磨剤、粉歯磨剤などの歯磨剤組成物、洗口剤組成物、塗布剤組成物、口腔用パスタ、口中清涼剤組成物が挙げられる。
【００３８】
本発明の剤又は組成物は、ルイボス抽出物及び／又はルテオリンに加えて、固形剤形や液体剤形を製造するのに用いられている慣用の任意の補助成分、例えば、賦形剤、希釈剤、緩衝剤、着香剤、着色剤、矯味剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑択剤、懸濁剤、防腐剤、酸化防止剤、研磨剤、湿潤剤、粘結剤、ｐＨ調整剤、光沢剤、薬用成分、溶剤、賦形剤などの１種以上を含有せしめてもよい。任意の補助成分は、剤型に応じて適宜選択し得る。本発明に配合可能な成分はこれらに制限されるものではない。
【００３９】
本発明の剤又は組成物を摂取（投与）するタイミングは、特に限定されるものではないが、本発明の剤又は組成物は即効性があることから、ドライマウスを感じた時に摂取（投与）するのが好ましい。
【００４０】
以下に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明の実施態様は、本実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】
［実施例１］ムスカリン受容体活性化作用
ポジティブコントロールとして塩化アセチルコリン（和光純薬工業株式会社）を、リガンドサンプルとしてルイボス抽出物（茶葉０．２５％熱水抽出物、丸紅株式会社）、ルテオリン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、アピイン（Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ）、アスパラチン（Ｐｈｙｔｏｌａｂ）、アピゲニン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、ケルセチン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、ルテオリン−７−Ｏ−グルコシド（別名：シナロシド、ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、ルテオリン−８−Ｃ−グルコシド（別名：オリエンチン、ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、４’，６，７−トリメトキシイソフラボン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、３’，４’，７−トリメトキシフラボン（ＥＸＴＲＡＳＹＮＴＨＥＳＥ）、ダイジン（和光純薬工業株式会社）、ダイゼイン（和光純薬工業株式会社）、ゲニステイン（和光純薬工業株式会社）、ゲニスチン（和光純薬工業株式会社）、グリシチン（和光純薬工業株式会社）、グリシテイン（和光純薬工業株式会社）、イプリフラボン（和光純薬工業株式会社）、５，７，４’−トリメトキシフラボン（ＩＮＤＯＦＩＮＥ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｉｎｃ．）を用いた。
サンプルは熱水抽出を行ったルイボス抽出物以外は１００％エタノール（和光純薬工業）に懸濁し、アッセイキットに付属しているバッファーで希釈した。細胞はマウスムスカリンＭ３受容体を発現しているＭ３ＷＴ５（ＡＴＣＣ）をそれぞれＨａｍ’ｓ  Ｆ−１２  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に終濃度１％のＦＢＳを添加した培地で２×１０４ｃｅｌｌｓ／５０μｌ／ｗｅｌｌになるようにＢｉｏｃｏａｔ  Ｐｏｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓｉｎｅ  ３８４−Ｗｅｌｌ  Ｂｌａｃｋ／Ｃｌｅａｒ  Ｐｌａｔｅ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に播種した。これを一晩ＣＯ２インキュベーターで培養し、アッセイに供した。
アッセイはＦｌｕｏ−４  Ｄｉｒｅｃｔ（登録商標）  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を１ウェルあたり４２μｌ添加し、遮光して室温で３０分静置した。その後、ＦＤＳＳ（浜松ホトニクス株式会社）を用いて、ムスカリンＭ３受容体の阻害剤であるアトロピン（株式会社日本点眼薬研究所）、又はＨＢＳＳ−２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを１ウェルあたり６μｌ添加した。アトロピンは終濃度が１０μＭになるように１０倍濃度に調製した。阻害剤又はＨＥＰＥＳを添加した後、ＣＯ２インキュベーターで１０分培養した。培養後、ルイボス抽出物については前記熱水抽出物をそれぞれ５％、０．５％、０．１％にＨＢＳＳ−２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳで希釈したものを、ＦＤＳＳを用いてそれぞれ１２μｌ添加した。また、それ以外のサンプルについては終濃度より５倍濃いリガンド又はＨＢＳＳ−２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを１ウェルあたり１２μｌ添加し、３分間測定を行った。ポジティブコントロールであるアセチルコリンは１０ｎＭから細胞内のカルシウムを上昇させ、アトロピンが共存することによってその上昇の抑制が認められた。ルイボス抽出物はいずれのサンプルについても細胞内のカルシウムイオンが上昇し、その上昇がアトロピンを添加することで大きく抑制されることを確認した。そこでルイボス抽出物に含まれるルテオリンについて上記アッセイ系に供したところ、図１に示すように、ルテオリンはマウスムスカリンＭ３受容体を刺激することが確認された。また、この応答はアトロピン添加で阻害された。一方で、ルテオリン以外のフラボノイド関連サンプルでは上記応答は見られなかった（図２Ａ〜図２Ｐ）。
【００４２】
［実施例２］洗口での唾液分泌促進作用
１質量％ルイボスエキス粉末（ルイボス茶エキスパウダーＭＦ、丸善製薬株式会社）の水溶液２０ｍＬを口に含み、３０秒後に吐き出した。その後、各タイムポイントで唾液を飲み込まないようにし、口腔内に溜まった唾液を遠沈管に吐き出した。遠沈管の重量を測定することにより、唾液分泌量を測定した。本試験のコントロールは水であり、ｎ数は、１２人である。
コントロール（水）の際の唾液分泌量を１００％とした。
結果（平均値）を図３に記載した。
結果から、コントロールでの洗口時に比べ、ルイボスエキス水溶液での洗口時の方が、唾液分泌量が増大したことが分かる。
【００４３】
［実施例３］内服での唾液分泌促進作用
ルイボスエキス粉末１００ｍｇ（ルイボス茶乾燥エキスＦ、丸善製薬株式会社）を水で内服し、内服２時間後までの唾液分泌量を、実施例２の測定方法と同様にして測定した。
また、下記の評価基準で実感評価による官能的評価も行った。本試験のコントロールは水であり、ｎ数は、５人である。
結果（平均値）を図４、図５に記載した。
結果から、コントロール内服時に比べ、ルイボスエキス内服時の方が、唾液分泌量が増大したこと、口中に潤いが感じられた割合が高いことが分かる。
＜評価基準＞
１点；口中にうるおいが与えられた感じを、非常に感じた。
２点；口中にうるおいが与えられた感じを、感じた。
３点；口中にうるおいが与えられた感じを、やや感じた。
４点；口中にうるおいが与えられた感じは、どちらともいえない。
５点；口中にうるおいが与えられた感じを、あまり感じなかった。
６点；口中にうるおいが与えられた感じを、感じなかった。
７点；口中にうるおいが与えられた感じを、全く感じなかった。
【図１】
2015107925.tif 000003
【図２Ａ】
2015107925.tif 000004
【図２Ｂ】
2015107925.tif 000005
【図２Ｃ】
2015107925.tif 000006
【図２Ｄ】
2015107925.tif 000007
【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図２Ｊ】
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【図２Ｋ】
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【図２Ｌ】
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【図２Ｍ】
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【図２Ｎ】
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【図２Ｏ】
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【図２Ｐ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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