(57)【要約】【課題】４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの新規な製造方法を提供する。【解決手段】本発明は、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを製造する方法であって、γ−ブチロラクトンとシュウ酸ジエステルとを塩基の存在下で縮合させて第１中間体を得る第１工程、該第１中間体を塩基で処理した後にアセトアルデヒドと反応させて第２中間体を得る第２工程、該第２中間体のエステル部分を還元することにより第３中間体を得る第３工程、該第３中間体のヒドロキシ基をより良い脱離基に変換した後、アジド化剤でアジドに変換して第４中間体を得る第４工程、及び該第４中間体とトリオルガノホスフィンとを反応させて４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを得る第５工程、を含む方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2015145346.tif 000020
（式中、波線はＥ体及び／又はＺ体の幾何異性体を示す。）
で表される４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを製造する方法であって、
式（２）：
【化２】
2015145346.tif 000021
で表されるγ−ブチロラクトンと、Ｒ１ＯＯＣ−ＣＯＯＲ１（式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基を示す。）で表されるシュウ酸ジエステルとを塩基の存在下で縮合させて、式（３）：
【化３】
2015145346.tif 000022
（式中、Ｒ１は、上記と同様である。）
で表される第１中間体を得る第１工程、
該第１中間体を塩基で処理した後にアセトアルデヒドと反応させて、式（４）：
【化４】
2015145346.tif 000023
で表される第２中間体を得る第２工程、
該第２中間体のエステル部分を還元することにより、式（５）：
【化５】
2015145346.tif 000024
で表される第３中間体を得る第３工程、
該第３中間体のヒドロキシ基をより良い脱離基に変換した後、アジド化剤でアジドに変換して、式（６）：
【化６】
2015145346.tif 000025
で表される第４中間体を得る第４工程、及び
該第４中間体とトリオルガノホスフィンとを反応させて、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを得る第５工程、
を含む方法。
【請求項２】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）又はその塩を有効成分として含む抗酸化剤。
【請求項３】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）又はその塩を有効成分として含む抗炎症剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケシ目ケマンソウ科キケマン属（Papaverales Fumariaceae Corydalis）の植物に属するムラサキケマン(Corydalis incisa)は、殺虫、解毒等の作用を有することが知られている（例えば、非特許文献１）。また、ツルケマン（別名：ツルキケマン）(Corydalis ochotensis)は、解熱、鎮痛、利尿等の作用を有することが知られている（例えば、非特許文献２及び３）。
【０００３】
本発明者は、以前、ツルケマン又はムラサキケマンからハイドロディスティレーション法により精油を得た後、ガスクロマトグラフィーにより精製することにより、（Ｅ）−及び（Ｚ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを単離し、この化合物がアセチルコリンエステラーゼ阻害作用、殺虫作用、害虫忌避作用等の活性を有することを報告した（特許文献１）。
【０００４】
（Ｅ）−及び（Ｚ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールは、上記のような活性を有することから、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、殺虫剤、害虫忌避剤等への利用が期待されるが、該化合物をこれらの用途に用いるためには、該化合物を天然物から単離する以外の方法によって効率よく製造できることが必要となる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１２−０８７０８３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】中薬大辞典 小学館 初版 第二巻 p1017-1018
【非特許文献２】Arch. Pharm. Res. 23, 459-460, (2000)
【非特許文献３】Lee, T. B., Illustrated Flora of Korea. Hanygmoonsa, Seoul, p.385 (1989)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の主な目的は、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの新規な製造方法を提供することにある。本発明はまた、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの新たな用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、γ−ブチロラクトンを原料として使用し、このγ−ブチロラクトンから５つの工程を経ることにより、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを製造することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、以下の４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの製造方法等に関する。
【００１０】
項１．  式（１）：
【００１１】
【化１】
2015145346.tif 000002
【００１２】
（式中、波線はＥ体及び／又はＺ体の幾何異性体を示す。）
で表される４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを製造する方法であって、
式（２）：
【００１３】
【化２】
2015145346.tif 000003
【００１４】
で表されるγ−ブチロラクトンと、Ｒ１ＯＯＣ−ＣＯＯＲ１（式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基を示す。）で表されるシュウ酸ジエステルとを塩基の存在下で縮合させて、式（３）：
【００１５】
【化３】
2015145346.tif 000004
【００１６】
（式中、Ｒ１は、上記と同様である。）
で表される第１中間体を得る第１工程、
該第１中間体を塩基で処理した後にアセトアルデヒドと反応させて、式（４）：
【００１７】
【化４】
2015145346.tif 000005
【００１８】
で表される第２中間体を得る第２工程、
該第２中間体のエステル部分を還元することにより、式（５）：
【００１９】
【化５】
2015145346.tif 000006
【００２０】
で表される第３中間体を得る第３工程、
該第３中間体のヒドロキシ基をより良い脱離基に変換した後、アジド化剤でアジドに変換して、式（６）：
【００２１】
【化６】
2015145346.tif 000007
【００２２】
で表される第４中間体を得る第４工程、及び
該第４中間体とトリオルガノホスフィンとを反応させて、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを得る第５工程、
を含む方法。
【００２３】
項２．  ４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）又はその塩を有効成分として含む抗酸化剤。
【００２４】
項３．  ４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）又はその塩を有効成分として含む抗炎症剤。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の製造方法によれば、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールをγ−ブチロラクトンから合成することができる。このように、本発明の製造方法を用いれば、従来の天然物から単離する以外の方法により４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを製造することができる。また、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールは、高い抗酸化作用及び抗炎症作用を有するので、抗酸化剤、抗炎症剤等として使用することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例１の製造方法を説明するスキームである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、式（１）：
【００２８】
【化７】
2015145346.tif 000008
【００２９】
（式中、波線はＥ体及び／又はＺ体の幾何異性体を示す。）
で表される４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールを、式（２）：
【００３０】
【化８】
2015145346.tif 000009
【００３１】
で表されるγ−ブチロラクトンから製造する方法である。上記４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールは、原料であるγ−ブチロラクトン（２）から下記に示す５つの工程により製造することができる。以下、製造方法について詳細を説明する。
【００３２】
第１工程は、式（２）：
【００３３】
【化９】
2015145346.tif 000010
【００３４】
で表されるγ−ブチロラクトンと、Ｒ１ＯＯＣ−ＣＯＯＲ１（式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基を示す。）で表されるシュウ酸ジエステルとを塩基の存在下で縮合させて、式（３）：
【００３５】
【化１０】
2015145346.tif 000011
【００３６】
（式中、Ｒ１は、上記と同様である。）
で表される第１中間体を得る工程である。
【００３７】
Ｒ１で示される炭素数１〜６のアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられる。具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられる。
【００３８】
シュウ酸ジエステルとして、シュウ酸ジメチル又はシュウ酸ジエチルを用いることが好ましい。
【００３９】
シュウ酸ジエステルは、γ−ブチロラクトン（２）に対して、通常１〜２倍モル程度、好ましくは１〜１．５倍モル程度添加される。
【００４０】
使用する塩基として、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等のアルカリ金属アルコキシド；水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム等のアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水素化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩等が挙げられる。これらの中で、アルカリ金属アルコキシドが好ましく、ナトリウムエトキシドが特に好ましい。塩基は、γ−ブチロラクトン（２）に対して、通常１〜３倍モル程度、好ましくは１〜２倍モル程度使用される。
【００４１】
反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール等のアルコール類中で行われる。これらの溶媒の中でも、メタノール、エタノールが好ましい。
【００４２】
反応温度は、通常、０〜５０℃程度で行われ、好ましくは１５〜４０℃程度である。
【００４３】
反応時間は、通常０．５〜１０時間程度、好ましくは１〜８時間程度である。
【００４４】
反応が完了した後に、反応混合物を酸で酸性化することにより、γ−ブチロラクトン（２）のα位にＲ１ＯＯＣ−ＣＯ−基が導入された第１中間体（３）が得られる。酸としては希酸、例えば、希塩酸、希酢酸、希硫酸、希硝酸等を用いることができる。
【００４５】
得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることもできるが、常法に従って反応混合物から単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。
【００４６】
第２工程は、第１工程で得られた第１中間体（３）を塩基で処理した後にアセトアルデヒドと反応させて、式（４）：
【００４７】
【化１１】
2015145346.tif 000012
【００４８】
で表される第２中間体を得る工程である。
【００４９】
使用する塩基として、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム等のアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等のアルカリ金属アルコキシド；炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩等が挙げられる。これらの中で、アルカリ金属又はアルカリ土類金属の水素化物が好ましく、水素化ナトリウムが特に好ましい。塩基は、第１中間体（３）に対して、通常１〜３倍モル程度、好ましくは１〜２倍モル程度使用される。
【００５０】
アセトアルデヒドは、第１中間体（３）に対して、通常２〜２０倍モル程度、好ましくは５〜１５倍モル程度添加される。
【００５１】
反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール等のアルコール類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)等の非プロトン性極性溶媒等又はそれらの混合物中で行われる。これらの溶媒の中でも、メタノール、エタノールが好ましい。
【００５２】
反応温度は、通常０〜５０℃程度、好ましくは１５〜４０℃程度である。室温下で反応を行うことも可能である。
【００５３】
反応時間は、通常３〜２４時間程度、好ましくは８〜２０時間程度である。
【００５４】
得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることもできるが、常法に従って反応混合物から単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。
【００５５】
第３工程は、第２工程で得られた第２中間体（４）のエステル部分を還元することにより、式（５）：
【００５６】
【化１２】
2015145346.tif 000013
【００５７】
で表される第３中間体を得る工程である。
【００５８】
還元剤として、エステル部分をアルデヒドまで還元して、アルデヒドの状態で単離できるものであれば、制限なく用いることができる。例えば、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（ジイソブチルアルミニウムヒドリド）、ＭＤＢＢＡ（金属ジイソブチル−ｔ−ブトキシアルミニウムヒドリド、Ｍ（金属）は、Ｌｉ、Ｎａ又はＫである）等を用いることができる。これらの中で、ジイソブチルアルミニウムヒドリドが好ましい。還元剤としてＤＩＢＡＬ−Ｈを用いる場合には、第２中間体（４）に対して正確に１倍モル使用し、反応は約−７８℃で行う。反応時間は、通常０．５〜４８時間程度、好ましくは１〜８時間程度である。
【００５９】
還元反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)等の非プロトン性極性溶媒；アセトン、２−ブタノン等のケトン類、トルエン等の芳香族炭化水素類；クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素又はそれらの混合物中で行われる。これらの溶媒の中でも、ジクロロメタン等が好ましい。
【００６０】
得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることもできるが、常法に従って反応混合物から単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。
【００６１】
第４工程は、第３工程で得られた第３中間体のヒドロキシ基をより良い脱離基に変換した後、アジド化剤でアジドに変換して、式（６）：
【００６２】
【化１３】
2015145346.tif 000014
【００６３】
で表される第４中間体を得る工程である。
【００６４】
第４工程は、ヒドロキシ基をアジドへ変換する工程であり、ｉ）ヒドロキシ基のより良い脱離基への変換、ｉｉ）アジド化剤による置換反応の２段階で行うことができる。
【００６５】
まず、ヒドロキシ基を、求核置換反応に対してより良い脱離基へ変換する。本明細書で使用される「より良い脱離基」とは、ヒドロキシ基より脱離基を意味する。より良い脱離基としては、メシレート（−ＯＭｓ、Ｍｓはメタンスルホニルである）、トシレート（−ＯＴｓ、Ｔｓはトルエンスルホニルである）、ノシレート（−ＯＮｓ、Ｎｓはｐ−ニトロベンゼンスルホニルである）、ブロシレート（−ＯＢｓ、Ｂｓはｐ−ブロモベンゼンスルホニルである）、トリフレート（−ＯＴｆ、Ｔｆはトリフルオロメタンスルホニルである）、ノナフレート（ノナフルオロブタンスルホネート）、トレシレート（２、２，２，−トリフルオロエタンスルホネート）等が挙げられる。
【００６６】
ヒドロキシ基の脱離基への変換は、溶媒の存在下、上述のより良い脱離基を含む酸のハロゲン化物又は無水物及び塩基と、第３中間体とを接触させることにより行われる。
【００６７】
溶媒としては、第３中間体と相溶性があり、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、ジクロロメタン、トルエン、ピリジン等又はそれらの混合物を使用することができる。
【００６８】
塩基として、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、（重）炭酸ナトリウム、（重）炭酸カリウム等の無機塩基、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン等の有機塩基が挙げられる。
【００６９】
より良い脱離基を含む酸のハロゲン化物又は無水物は、第３中間体に対して、通常１．１〜４倍モル程度、好ましくは１．２〜３倍モル程度使用される。
【００７０】
反応温度は、０℃以下の温度であり、通常約−７８〜０℃、好ましくは約−２０〜０℃である。また、窒素もしくはアルゴン等の不活性雰囲気下で反応を行ってもよい。
【００７１】
反応時間は、通常１分間〜３時間程度、好ましくは５分間〜２時間程度である。
【００７２】
得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の反応に用いることもできるが、常法に従って反応混合物から単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。
【００７３】
次に、得られたより良い脱離基を有する化合物をアジド化剤でアジドに変換する。
【００７４】
アジド化剤としては、
Ｍ１（ＣＨ２）ｘ-１Ｎ３
（式中、Ｍ１は、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属を示す。ｘは１又は２を示す。）で表される有機アジド化合物のアルカリ金属塩を用いることができる。アジド化剤として、アジ化ナトリウムが好ましい。アジド化剤は、より良い脱離基を有する化合物に対して、通常３〜１０倍モル程度、好ましくは４〜６倍モル程度使用される。
【００７５】
アジド化反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)等の非プロトン性極性溶媒；アセトン、２−ブタノン等のケトン類等又はそれらの混合物中で行われる。これらの溶媒の中でも、ＤＭＦが好ましい。
【００７６】
反応温度は、通常５０〜１００℃程度で行われ、好ましくは６０〜９０℃程度である。
【００７７】
反応時間は、通常０．５〜１０時間程度、好ましくは２〜８時間程度である。
【００７８】
得られた生成物は反応液のまま、又は粗生成物として次の工程に用いることもできるが、常法に従って反応混合物から単離することもでき、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に精製することもできる。
【００７９】
第５工程は、第４工程で得られた第４中間体とトリオルガノホスフィンとを反応させて、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を得る工程である。
【００８０】
この反応において、トリオルガノホスフィンと第４中間体のアジド部分とが反応してアザリンイリドが生じ、このアザリンイリドが第４中間体のアルデヒド部分と反応することによりイミンである４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）が生成する。
【００８１】
トリオルガノホスフィンは、
Ｒ２Ｒ３Ｒ４Ｐ
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ炭素数１〜１８の直鎖または分岐鎖のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基、あるいはこれらのヒドロキシ基もしくはアルコキシ基置換体のいずれかを示し、それぞれが同一の基でもよく、また異なる基であってもよい。）
で表される化合物である。
【００８２】
Ｒ２、Ｒ３及びＲ４として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル等のアルキル基；シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等のシクロアルキル基；フェニル、トリル、キシリル等のアリール基；ベンジル、フェニチル等のアラルキル基；前記アルキル基、アリール基又はアラルキル基をヒドロキシル基又はアルコキシ基で置換した基等が挙げられる。また、 Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、同一の基であっても、そうでなくてもよい。
【００８３】
トリオルガノホスフィンとして、例えば、トリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィン、ジフェニルブチルホスフィン、ジブチルフェニルホスフィン等が挙げられ、トリフェニルホスフィンが好ましい。
【００８４】
トリオルガノホスフィンは、第４中間体に対して、通常１．１〜２倍モル程度、好ましくは１．１〜１．５倍モル程度使用される。
【００８５】
反応は、反応に悪影響を及ぼさない慣用の溶媒、例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン等のエーテル類；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)等の非プロトン性極性溶媒；ベンゼン、トルエン、ヘキサン等の炭化水素類、又はそれらの混合物中で行われる。これらの溶媒の中でも、ＴＨＦが好ましい。
【００８６】
反応温度は、通常０〜１５０℃程度で行われ、好ましくは２５〜６０℃程度である。
【００８７】
反応時間は、通常３〜１０時間程度、好ましくは４〜８時間程度である。
【００８８】
得られた生成物は、常法に従って反応混合物から単離することができ、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留等の通常の分離手段によって容易に下記の式（１−Ｅ）で表されるＥ体（（Ｅ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール）と下記の式（１−Ｚ）で表されるＺ体（（Ｚ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール）とに精製することもできる。
【００８９】
【化１４】
2015145346.tif 000015
【００９０】
このように、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を、γ−ブチロラクトン（２）から５工程で製造することができる。
【００９１】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）は、高い抗酸化作用、抗炎症作用等の活性を有している。
【００９２】
抗酸化活性に関しては、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）は、一般的な抗酸化物質であるＴｒｏｌｏｘより高い活性を有している（試験例１参照）。
【００９３】
抗炎症活性に関しては、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）は、ポジティブコントロールであるアスピリンより高いＣＯＸ−２阻害活性を有している（試験例２参照）。
【００９４】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）は、上記の活性を有するため、医薬組成物（抗酸化剤等）、化粧料として用いることができる。
【００９５】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を医薬品の抗酸化剤として用いる場合、例えば、鎮痛、抗エイズ、アルコール中毒改善、抗アレルギー、抗狭心症、抗不整脈、抗動脈硬化、抗喘息、抗菌、抗糖尿病、解毒、抗炎症、抗高脂血症、ＤＮＡ変異抑制、抗パーキンソン病、抗乾癬、抗リウマチ、抗潰瘍、能機能保護、細胞増殖抑制、皮膚疾患改善、肝機能賦活、降圧、免疫抑制、腎機能賦活、神経細胞保護、向知能、眼科疾患改善、放射線防御、血管賦活、抗ウイルス、傷薬、虚弱体質の改善等に有効な効果を奏することができる。
【００９６】
抗酸化剤は、慣用されている方法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、被覆錠剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、旧乳剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、眼軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等の剤に製剤化することができる。
【００９７】
製剤化には通常用いられる賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等、及び必要により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤等を使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分及び配合量を適宜選択して常法により製剤化される。
【００９８】
製剤を投与する場合、その形態は特に限定されず、通常用いられる方法であればよく、経口投与でも非経口投与でもよい。本発明に係る投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて、製剤学的な有効量を適宜選ぶことができる。
【００９９】
本発明の抗酸化剤中に含まれる有効成分の割合は、該抗酸化剤が抗酸化能を発揮する限りにおいて特に制限されない。また、（Ｅ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールだけ、（Ｚ）−４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールだけ、Ｅ異性体及びＺ異性体の混合物からなるものであってもよい。また、これらの塩であってもよい。４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）の塩を形成し得る酸としては、特に限定はなく、無機酸及び有機酸が挙げられる。無機酸の具体例として、塩酸、硝酸、臭化水素酸、硫酸等が挙げられる。有機酸の具体例として、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等の低級（例えば、炭素数１〜１１）脂肪酸；フマル酸、マレイン酸、コハク酸、アジピン酸等の多塩基酸；グリコール酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸等のヒドロキシカルボン酸；安息香酸、アニス酸等の芳香族カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等の低級（例えば、炭素数１〜１１）脂肪酸スルホン酸；ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の芳香族スルホン酸等が挙げられる。
【０１００】
４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を医薬品（抗酸化剤）として用いる場合、医薬品全体に対し、Ｅ異性体及び／又はＺ異性体を、通常０．０１〜１００重量％程度（好ましくは、０．１〜５重量％程度）含有していればよい。
【０１０１】
化粧料として用いる場合、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）に加え、必要に応じて、粉末、顔料、油脂類、保湿剤、界面活性剤、酸化防止剤、増粘剤、洗浄剤、賦形剤、乳化剤、可塑剤、防腐剤、防黴剤、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、アミノ酸、香料等の通常の化粧料に用いられる成分を本発明の効果を損なわない範囲で適当に配合することができる。
【０１０２】
化粧料の剤型は任意であり、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分酸系、水−油二層系、水−油−粉末三層系等の剤型とすることができる。皮膚への安全性の点からｐＨ４〜８程度に調整されることが好ましい。
【０１０３】
化粧料としては、皮膚、顔皮、口唇等に適用されるあらゆる化粧料が含まれ、化粧料の用途として、例えば、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック、ファンデーション、口紅、リップクリーム、アイシャドー、ボディーローション、ボディークリーム、クレンジングフォーム、洗顔料、ハンドソープ、ボディーソープ等に用いることができる。
【０１０４】
化粧料における上記有効成分の含量は、化粧料の使用目的、剤型、組成、設定される使用期限、設定される保存状態、共存する成分等によって異なるが、通常０．００１〜５重量％程度、好ましくは０．０５〜１重量％程度である。
【実施例】
【０１０５】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【０１０６】
実施例１
γ−ブチロラクトン（２）から４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を合成する操作を、図１に示す。なお、図１において、第１中間体（３）のＲ１基はエチル（Ｅｔ）である。また、以下の工程において、減圧濃縮は、ロータリーエバポレーターを用いて行った。
【０１０７】
（１）第１工程
エタノール（４０ｍｌ）にナトリウムエトキシド（８．４６ｇ、０．１２４ｍｏｌ）を溶解させた溶液に、０℃下でシュウ酸ジエチル（１７．０ｇ、０．１１６ｍｏｌ）を添加した。そこにγ−ブチロラクトン（２）（１０．０ｇ、０．１１６ｍｏｌ）を１５分間かけて滴下し、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。溶液を室温に加温し、さらに５時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテルと水とで分配した。水層を希塩酸で酸性化し、ジクロロメタンで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムにより乾燥した後、減圧下で濃縮し、ラクトン（３）（２１．４ｇ、収率９９％）を得た。
【０１０８】
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 4.49 (3H, t, J = 8.0 Hz), 4.37 (2H, q, J = 7.2Hz), 3.29 (2H, t, J = 8.0Hz), 1.39 (3H, t, J = 7.2Hz)
13C NMR (100MHz, CDCl3) δ= 176.5, 161.9, 151.9, 105.5, 67.8, 62.3, 26.0, 14.1.
IR (film) ν =1773, 1739, 1702, 1647, 1238, 1191, 1018 cm-1.
【０１０９】
（２）第２工程
エタノール（２００ｍｌ）に、ラクトン（３）（２１．４ｇ、０．１１５ｍｏｌ）を溶解させ、水酸化ナトリウム水溶液（４．６０ｇ、０．１１５ｍｏｌ）を加えた。この混合物にアセトアルデヒド（６４．６ｍｌ、１．１５ｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。次いで、溶液を水（６００ｍｌ）で希釈し、炭酸水素ナトリウム（７７ｇ）を添加した。１時間攪拌後、反応溶液をジクロロメタン（２００ｍｌ×３）で抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥した後、濃縮させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製し、ラクトン（４）（１１．２６ｇ、収率８８％）を得た。
【０１１０】
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=5.63 (1H, q, J = 6.8Hz), 3.68 (2H, t, J = 6.0Hz), 2.41 (2H, t, J = 6.0Hz), 1.65 (2H, d, J = 6.8Hz)
13C NMR (CDCl3) δ= 194.5, 136.9, 125.3, 61.3, 32.0, 13.2
IR (film) ν= 1757, 1681, 1218, 1169, 1131, 1033, 1010, 990 cm-1.
【０１１１】
（３）第３工程
ジクロロメタン（２７０ｍｌ）にラクトン（４）（６．５７ｇ、５９ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液に、−７８℃下においてＤＩＢＡＬ−Ｈ（５８．７ｍｌ、５９ｍｍｏｌ、１Ｍのヘキサン含む）を滴下し、４０分間撹拌した。そこにジクロロメタン（２７０ｍｌ）を加え、−４０℃に昇温させ、水（２．３ｍｌ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（２．３ｍｌ）および水（３．４ｍｌ）をこの順に添加した。液温が室温に到達した後、１時間撹拌した。この混合物を、硫酸ナトリウム（６５ｇ）を添加し、さらに２時間激しく攪拌した。混合物をセライトのパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により精製し、アルコール（５）（４．７２ｇ、収率７０％）を得た。
【０１１２】
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ= 9.42 (1H, s), 6.75 (1H, q, J = 7.2Hz), 3.67 (2H, t, J = 6.4Hz), 2.57 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.05 (3H, d, J = 7.2 Hz)
13C NMR (100MHz, CDCl3): δ= 195.8, 152.3, 141.5, 61.3, 27.4, 15.0.
IR (film) ν= 3430, 1685, 1678, 1644, 1043 cm-1.
【０１１３】
（４）第４工程
アルコール（５）（１．６ｇ、１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）に溶解させ、０℃でトリエチルアミン（３．０ｍｌ、２２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、メシルクロリド（１．３ｍｌ、１７ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。これを水（２．０ｍｌ）で反応停止させ、室温で１．５時間撹拌した。この反応溶液をジクロロメタンで２回抽出した。抽出物を硫酸マグネシウムにより乾燥し、減圧下で濃縮し、メシレート（２．４３ｇ）を得、直ちに次の反応に用いた。乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）中に、上記のメシレートを溶解させ、アジ化ナトリウム（２．４７ｇ、３８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で７時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水とで分配し、有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥した後、濃縮させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製し、アジドアルデヒド（６）（１．４０ｇ、収率７２％）を得た。
【０１１４】
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ= 9.40 (1H, s), 6.76 (1H, q, J = 6.8Hz), 3.34 (2H, t, J = 6.8Hz ), 2.57 (2H, t, J = 6.8Hz), 2.06 (3H, d, J = 6.8Hz)
13C NMR (CDCl3): δ= 194.5, 152.5, 140.7, 49.8, 23.6, 15.0.
IR (film) ν= 2882, 2824, 2715, 2099, 1685, 1646, 1269, 1054 cm-1.
【０１１５】
（５）第５工程
テトラヒドロフラン（１３ｍｌ）溶媒中に、アジドアルデヒド（６）（９４５ｍｇ、６．８ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａ（３００ｍｇ）を加えた。３０分間撹拌した後、トリフェニルホスフィン（２．１４ｇ、８．１７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を５０℃で４時間撹拌させた。反応混合物にジエチルエーテルを加え、ガラスフィルターによりろ過した後、濾液を３％ＨＣｌ水溶液（７．０ｍｌ）およびジエチルエーテル中（１０ｍｌ）に分配した。水層を固体の炭酸ナトリウムの添加により塩基性化した。得られた混合物をジエチルエーテル（２×２０ｍｌ）で抽出した。これを硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮し、４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン＝１：１）により精製し、（Ｅ／Ｚ）−１（４８８ｍｇ、収率７５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲによりＥ体およびＺ体は６：１であると決定した。すべての物性値が天然物から単離した４−エチリデン−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１）と一致した。得られた化合物（１）のＮＭＲスペクトルデータを表１に示す。
【０１１６】
【表１】
2015145346.tif 000016
【０１１７】
試験例１（抗酸化試験（ＯＲＡＣ））
Oxygen Radical Absorbance Capacity（ＯＲＡＣ）はＡＡＰＨから誘導されるペルオキシラジカルにより蛍光プローブであるフルオレセインが分解されて蛍光を失う過程の抑制を評価するものである。操作方法は、以下のとおりである、親油性であるサンプルを１％  β−シクロデキストリン溶液とリン酸緩衝溶液を用いて、１時間、室温でプレインキュベーションした後、フルオレセインを加え３７℃で３０分間インキュベーションし、そこへ反応開始剤でもあるＡＡＰＨを添加し、１分ごとに９０分間蛍光波長を測定した。得られた阻害値を以下の計算式のもと、一般的な抗酸化物質であるＴｒｏｌｏｘ当量で表すことで阻害値を算出して評価した。その結果を表２に示す。
【０１１８】
【数１】
2015145346.tif 000017
【０１１９】
【表２】
2015145346.tif 000018
【０１２０】
その結果、化合物１は、Ｔｒｏｌｏｘの約３．２倍の抗酸化能を有していることが確認された。
【０１２１】
試験例２（抗炎症試験（ＣＯＸ阻害試験））
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の阻害は、ＣＯＸ（羊由来）スクリーニングアッセイキット（Cayman Chemical, USA）を使用して比色分析で評価した。ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２（１０μｌ）、阻害剤（１０μｌ）（ＥｔＯＨに各物質の最終濃度が１０００、８００、４００、２００又は１００μＭになるように調整した阻害溶液）、及びヘム（１０μｌ）をウェル中で混合し、アッセイバッファー（１５０μｌ）を添加した。混合液を２５℃で５分間前保温した。比色基質溶液（２０ｍｌ）を混合液に加え、反応はアラキドン酸（２０μｌ）を添加することによって開始した。それから、混合液を２５℃で１５分間保温した。５９０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（ＭＴＰ−８００Ｌａｂ，コロナ電気株式会社製）で測定し、すべての試験とコントロールアッセイを、ブランクを用いた非酵素的加水分解で補正した。各アッセイを少なくとも３回行った。ＣＯＸ活性は次の式によって求めた。
【０１２２】
ＣＯＸ活性（％）＝［（Ａ−Ｂ）／（Ｃｐ−Ｃｎ）］×１００
ここで、Ａはサンプルの吸光度（ＣＯＸ、ＥｔＯＨ中の阻害剤、ヘム、比色基質溶液、アッセイバッファー、及びアラキドン酸）、Ｂは試験ブランクサンプルの吸光度（ＥｔＯＨ中の阻害剤、ヘム、比色基質溶液、アッセイバッファー、及びアラキドン酸）、Ｃｐはポジティブコントロールの吸光度（ＣＯＸ、ＥｔＯＨ、ヘム、比色基質溶液、アッセイバッファー、及びアラキドン酸）、そしてＣｎはネガティブコントロールの吸光度（ＥｔＯＨ、ヘム、比色基質溶液、アッセイバッファー、及びアラキドン酸）である。
【０１２３】
当該試験方法により得られた結果を表３に示す。
【０１２４】
【表３】
2015145346.tif 000019
【０１２５】
その結果、化合物１は、ＣＯＸ−１阻害活性については２０００μＭにおいて５０％阻害がみられ、ＣＯＸ−２阻害活性については４６５．７μＭにおいて５０％阻害を示した。故に、（ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２）は、４．３と高い数値であるため、強いＣＯＸ−２選択阻害を示した。比較標準物質として非ステロイド系抗炎症剤であるアスピリンについてもＩＣ５０値（μＭ）の検討を行ったところ、化合物１は、副作用の原因となるＣＯＸ−１阻害活性において、アスピリンと比較しても非常に優位な結果であり、副作用のリスクが低いものと考えられた。
【図１】
2015145346.tif 000026