(57)【要約】【課題】新規なアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物を提供する。【解決手段】アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、下記式（１）で表される。2015120665.tif 000071  （式（１）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。ｋは、１〜９の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。−Ｘ（Ａ１）−は、−Ｘ−Ａ１−と、−Ａ１−Ｘ−と、−Ｘ−とのうちのいずれか１つを示す。Ｘは、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを示す。Ａ１は、所定の構造を示す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物。
【化１】
2015120665.tif 000065
（式（１）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。ｋは、１〜９の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。−Ｘ（Ａ１）−は、−Ｘ−Ａ１−と、−Ａ１−Ｘ−と、−Ｘ−とのうちのいずれか１つを示す。Ｘは、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを示す。Ａ１は、下記式（２ａ）で表される構造と、下記式（２ｂ）で表される構造と、下記式（２ｃ）で表される構造とのうちのいずれか１つである。）
【化２】
2015120665.tif 000066
【化３】
2015120665.tif 000067
【化４】
2015120665.tif 000068
【請求項２】
下記式（３）で表されるアルキニル基含有化合物と、下記式（４）で表されるホスホリルコリン基含有化合物とを用意し、
前記アルキニル基含有化合物と前記ホスホリルコリン基含有化合物とを付加反応させる
アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法。
【化５】
2015120665.tif 000069
（式（３）中、Ｙは、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。ｊは、０〜１５の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。）
【化６】
2015120665.tif 000070
（式（４）中、Ｚは、前記Ｙと反応可能な官能基であり、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。ｋは、１〜９の整数を示す。）
【請求項３】
請求項１記載のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物からなり、
アジド基を有する化合物をホスホリルコリン基で修飾する
アジド基含有化合物修飾剤。
【請求項４】
請求項３に記載のアジド基含有化合物修飾剤であって、
前記アジド基を有する化合物が、アジド化タンパク質、アジド化ポリエチレングリコール、アジド化多糖、又はアジド化ペプチドである
アジド基含有化合物修飾剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物及びその製造方法、並びにアジド基含有化合物修飾剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスホリルコリン基は、生体膜を構成するリン脂質の極性基である。ホスホリルコリン基は、親水性、保湿性、生体適合性に優れ、またタンパク質の吸着を抑制する作用を有する。
【０００３】
ホスホリルコリン基を有する化合物として、例えば、α−グリセロホスホリルコリンや、特許文献１，２に記載された２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体が知られている。α−グリセロホスホリルコリンは、例えば、乳化剤や保湿剤の原料として用いることができる。２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体は、例えば、化粧品やコンタクトレンズや医療材料の原料として用いることができる。
【０００４】
ホスホリルコリン基と末端アルキニル基との両方を同一分子内に有する化合物（アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物）は、アジド基を有する化合物をホスホリルコリン基で修飾するための修飾剤として用いることができる。アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法が特許文献３，４に開示されている。
【０００５】
特許文献３に記載の技術では、トリアゾール保護した塩化ホスホリルに、末端アルキニル基を有するアルコール及びコリントシラートを順次反応させることにより、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物が得られる。
【０００６】
特許文献４に記載の技術では、２−クロロ−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホラン（ＣＯＰ）に、末端アルキニル基を有する化合物を反応させた後、トリメチルアミンを用いて開環反応させることにより、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物が得られる。
【０００７】
また、特許文献４には、アジド化した金属製センサーチップの表面に、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物を反応させることにより、センサーチップの表面にホスホリルコリン基を配置させる技術が開示されている。ホスホリルコリン基はＣＲＰ（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）と特異的に結合するため、表面にホスホリルコリン基があるセンサーチップは、例えば、ＣＲＰ検出用センサーチップとして用いることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平７−１１８１２３号公報
【特許文献２】特開２０００−２７９５１２号公報
【特許文献３】米国特許第２０１２０２１５００６号明細書
【特許文献４】米国特許第２０１２０１２８５３６号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、特許文献３に開示されたアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法では、モノアルコール化、モノコリン化を高い精度で制御することが難しい。また、モノアルコール化、モノコリン化を行うために、塩素部位を予めトリアゾールにより保護する工程が必要となる。したがって、この製造方法では、製造工程が煩雑になる。
【００１０】
また、特許文献４に開示されたアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法では、上記のトリメチルアミンを用いた開環反応にアミンが必要なため、多くの量のアミンが必要となる。したがって、この製造方法では、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の収率が低くなる。
【００１１】
更に、特許文献３及び特許文献４に記載のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物では、アルキニル基とホスホリルコリン基とがアルキレン基やエーテル結合により接続されている。一方で、水酸基やアミノ基を含むアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は一般的に知られていない。
【００１２】
以上のような事情に鑑み、本発明の目的は、新規なアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物及びその製造方法、並びにアジド基含有化合物修飾剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を達成するため、本発明の一形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、下記式（１）で表される。
【化１】
2015120665.tif 000002
（式（１）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。ｋは、１〜９の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。−Ｘ（Ａ１）−は、−Ｘ−Ａ１−と、−Ａ１−Ｘ−と、−Ｘ−とのうちのいずれか１つを示す。Ｘは、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを示す。Ａ１は、下記式（２ａ）で表される構造と、下記式（２ｂ）で表される構造と、下記式（２ｃ）で表される構造とのうちのいずれか１つである。）
【化２】
2015120665.tif 000003
【化３】
2015120665.tif 000004
【化４】
2015120665.tif 000005
【発明の効果】
【００１４】
新規なアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物及びその製造方法、並びにアジド基含有化合物修飾剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の一実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、下記式（４）で表される。
【化５】
2015120665.tif 000006
（式（４）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。−Ｘ（Ａ１）−は、−Ｘ−Ａ１−と、−Ａ１−Ｘ−と、−Ｘ−とのうちのいずれか１つを示す。Ｘは、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを示す。Ａ１は、下記式（５ａ）で表される構造と、下記式（５ｂ）で表される構造と、下記式（５ｃ）で表される構造とのうちのいずれか１つである。）
【化６】
2015120665.tif 000007
【化７】
2015120665.tif 000008
【化８】
2015120665.tif 000009
【００１６】
この構成によれば、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを含むアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物を提供することができる。
【００１７】
本発明の一実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法では、下記式（７）で表されるアルキニル基含有化合物と、下記式（８）で表されるホスホリルコリン基含有化合物とを用意し、上記アルキニル基含有化合物と上記ホスホリルコリン基含有化合物とを付加反応させる。
【化９】
2015120665.tif 000010
（式（７）中、Ｙは、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。ｊは、０〜１５の整数を示す。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。）
【化１０】
2015120665.tif 000011
（式（８）中、Ｚは、上記Ｙと反応可能な官能基であり、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。ｋは、１〜９の整数を示す。）
【００１８】
この構成によれば、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを含むアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法を提供することができる。
【００１９】
本発明の一実施形態に係るアジド基含有化合物修飾剤は、上記アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物からなり、アジド基を有する化合物をホスホリルコリン基で修飾する。
上記アジド基を有する化合物が、アジド化タンパク質、アジド化ポリエチレングリコール、アジド化多糖、又はアジド化ペプチドであってもよい。
【００２０】
この構成によれば、アジド基を有する化合物をホスホリルコリン基で良好に修飾可能なアジド基含有化合物修飾剤を提供することができる。
【００２１】
以下、本発明の実施形態を説明する。
【００２２】
＜アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物＞
本発明の一実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、アルキニル基及びホスホリルコリン基を有する。具体的に、本実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（９）で表される。
【化１１】
2015120665.tif 000012
【００２３】
式（９）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。ｊは、入手のしやすさから、０又は１であることが好ましい。ｋは、１〜９の整数を示す。ｋは、入手のしやすさから、１、４又は９であることが好ましい。Ｗは、直鎖状又は環状のアルキニル基を示す。−Ｘ（Ａ１）−は、−Ｘ−Ａ１−と、−Ａ１−Ｘ−と、−Ｘ−とのうちのいずれか１つを示す。Ｘは、エステル結合と、ウレタン結合と、２級アミノ基を含むメチレン基とのうちのいずれか１つを示す。Ａ１は、式（１０）で表される構造と、式（１１）で表される構造とのうちのいずれか１つである。
【化１２】
2015120665.tif 000013
【化１３】
2015120665.tif 000014
【００２４】
なお、Ａ１の向きは任意である。例えば、式（１０）で表される構造は−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−であっても、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−であってもよい。更に、Ｘの官能基の向きは任意である。例えば、エステル結合は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であっても、−ＯＣ（Ｏ）−であってもよい。また、ウレタン結合は、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−であっても、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−であってもよい。２級アミノ基を含むメチレン基は、−ＮＨＣＨ２−であっても−ＣＨ２ＮＨ−であってもよい。
【００２５】
式（９）において、Ｗが直鎖状のアルキニル基であり、Ｘが―Ｃ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１０）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、３−（エチニルカルボニルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（エチニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシブチルホスホリルコリン、５−（エチニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、７−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（エチニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシオクチルホスホリルコリン、９−（エチニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（エチニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシデシルホスホリルコリン、１１−（エチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−ヒドロキシ−３−（７−オクチニルカルボニルオキシ）プロピルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−５−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−７−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−９−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−１１−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、３−（９−デシニルカルボニルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（９−デシニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−（９−デシニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（９−デシニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（９−デシニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、７−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００２６】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１２）で表される６−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンや、式（１３）で表される１１−（エチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化１４】
2015120665.tif 000015
【化１５】
2015120665.tif 000016
【００２７】
式（９）において、Ｗが環状のアルキニル基であり、Ｘが―Ｃ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１０）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、６−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル−エチルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、１１−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルエチルジチオエチルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００２８】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１４）で表される６−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル−エチルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化１６】
2015120665.tif 000017
【００２９】
式（９）において、Ｗが直鎖状のアルキニル基であり、Ｘが―Ｃ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１１）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、２−（エチニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、３−（エチニルカルボニルオキシ）−４−ヒドロキシブチルホスホリルコリン、４−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、５−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、６−（エチニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、７−（エチニルカルボニルオキシ）−８−ヒドロキシオクチルホスホリルコリン、８−（エチニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、９−（エチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシデシルホスホリルコリン、１０−（エチニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（３−ブチニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（５−ヘキシニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−２−（７−オクチニルカルボニルオキシ）プロピルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−４−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−６−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−８−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１１−ヒドロキシ−１０−（７−オクチニルカルボニルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、２−（９−デシニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（９−デシニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（９−デシニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（９−デシニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（９−デシニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、５−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、６−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（１６−ヘプタデシニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００３０】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１５）で表される５−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンや、式（１６）で表される１０−（エチニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化１７】
2015120665.tif 000018
【化１８】
2015120665.tif 000019
【００３１】
式（９）において、Ｗが環状のアルキニル基であり、Ｘが―Ｃ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１１）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、５−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル−エチルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、１０−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルエチルジチオエチルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００３２】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１７）で表される５−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル−エチルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化１９】
2015120665.tif 000020
【００３３】
式（９）において、Ｗが直鎖状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１０）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、３−エチニルカルバモイルオキシ−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−エチニルカルバモイルオキシ−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−エチニルカルバモイルオキシ−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−エチニルカルバモイルオキシ−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−エチニルカルバモイルオキシ−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−４−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ブチルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−６−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）オクチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−９−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−１０−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）デシルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−１１−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、２−ヒドロキシ−３−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−５−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−７−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−９−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−１１−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、３−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、２−ヒドロキシ−３−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−５−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−７−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−９−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−１１−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、２−ヒドロキシ−３−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−５−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−７−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−９−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−１１−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、３−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−４−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、７−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−６−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、９−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−８−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１１−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００３４】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１８）で表される２−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリンや、式（１９）で表される５−ヒドロキシ―６―（２−プロピルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２０】
2015120665.tif 000021
【化２１】
2015120665.tif 000022
【００３５】
式（９）において、Ｗが環状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１０）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、３−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、６−［（ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イル）メチルオキシカルバモイルエチルカルバモイルオキシ］−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００３６】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２０）で表される３−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２２】
2015120665.tif 000023
【００３７】
式（９）において、Ｗが直鎖状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（３）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、２−エチニルカルバモイルオキシ−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−エチニルカルバモイルオキシ−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−エチニルカルバモイルオキシ−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−エチニルカルバモイルオキシ−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−エチニルカルバモイルオキシ−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−２−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、４−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ブチルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−４−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、６−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−６−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、８−ヒドロキシ−７−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）オクチルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−８−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１０−ヒドロキシ−９−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）デシルホスホリルコリン、１１−ヒドロキシ−１０−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−２−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−４−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−６−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−８−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１１−ヒドロキシ−１０−（４−ペンチニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、２−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（６−ヘプチニルカルバモイルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−２−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−４−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−６−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−８−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１１−ヒドロキシ−１０−（８−ノニニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、３−ヒドロキシ−２−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、５−ヒドロキシ−４−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ペンチルホスホリルコリン、７−ヒドロキシ−６−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ヘプチルホスホリルコリン、９−ヒドロキシ−８−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ノニルホスホリルコリン、１１−ヒドロキシ−１０−（１０−ウンデシニルカルバモイルオキシ）ウンデシルホスホリルコリン、２−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、４−（１１−ドデシデシニルカルバモイルオキシ）−５−ヒドロキシペンチルホスホリルコリン、６−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−７−ヒドロキシヘプチルホスホリルコリン、８−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−９−ヒドロキシノニルホスホリルコリン、１０−（１１−ドデシニルカルバモイルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００３８】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２１）で表される３−ヒドロキシ−２−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、又は式（２２）で表される６−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２３】
2015120665.tif 000024
【化２４】
2015120665.tif 000025
【００３９】
式（９）において、Ｗが環状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ―であり、Ａ１が式（１１）で表される構造であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物としては、例えば、２−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、５−［（ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イル）メチルオキシカルバモイルエチルカルバモイルオキシ］−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００４０】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２３）で表される２−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニルエチルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２５】
2015120665.tif 000026
【００４１】
式（９）において、Ｗが直鎖状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣＨ２―である化合物としては、例えば、２−（２−プロピニルアミノ）エチルホスホリルコリン、２−（４−ペンチニルアミノ）エチルホスホリルコリン、２−（６−ヘプチニルアミノ）エチルホスホリルコリン、２−（８−ノニニルアミノ）エチルホスホリルコリン、２−（１０−ウンデシニルアミノ）エチルホスホリルコリン、２−（１１−ドデシニルアミノ）エチルホスホリルコリン、４−（２−プロピニルアミノ）ブチルホスホリルコリン、６−（２−プロピニルアミノ）ヘキシルホスホリルコリン、８−（２−プロピニルアミノ）オクチルホスホリルコリン、１０−（２−プロピニルアミノ）デシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００４２】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２４）で表される２−（２−プロピニルアミノ）エチルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２６】
2015120665.tif 000027
【００４３】
式（９）において、Ｗが環状のアルキニル基であり、Ｘが―ＮＨＣＨ２―である化合物としては、例えば、（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル）エチルアミノエチルホスホリルコリン、１０−［（ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イル）メチルオキシカルバモイルエチルアミノ］デシルホスホリルコリン等が挙げられる。
【００４４】
合成容易性の観点から、上記のアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（１９）で表される１０−［（ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イル）メチルオキシカルバモイルエチルアミノ］デシルホスホリルコリンであることが好ましい。
【化２７】
2015120665.tif 000028
【００４５】
＜アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物の製造方法＞
式（９）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２６）で表されるアルキニル基含有化合物と、式（２７）で表されるホスホリルコリン基含有化合物との付加反応により得ることができる。
【化２８】
2015120665.tif 000029
【化２９】
2015120665.tif 000030
【００４６】
式（２６）中、ｊは、０〜１５の整数を示す。ｊは、入手のしやすさから、０又は１であることが好ましい。Ｗは、直鎖状のアルキニル基、あるいは単素環又は複素環からなる環状のアルキニル基を示す。Ｙは、式（２７）中のＺと反応可能な官能基であり、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。
【００４７】
式（２７）中、Ｚは、式（２６）中のＹと反応可能な官能基であり、カルボキシル基と、一級アミノ基と、エポキシ基と、ホルミル基と、シクロカーボネート基とのうちのいずれか１つを示す。ｋは、１〜９の整数を示す。ｋは、入手のしやすさから、１、４又は９であることが好ましい。
【００４８】
式（２６）中のＹ、及び式（２７）中のＺは、反応可能な組み合わせで選択される。例えば、Ｙがカルボキシル基である場合、Ｚは、一級アミノ基、エポキシ基、又はシクロカーボネート基である。Ｙが一級アミノ基である場合、Ｚは、カルボキシル基、エポキシ基、ホルミル基、又はシクロカーボネート基である。Ｙがエポキシ基である場合、Ｚは、カルボキシル基、又は一級アミノ基である。Ｙがホルミル基である場合、Ｚは、一級アミノ基である。Ｙがシクロカーボネート基である場合、Ｚは、カルボキシル基、又は一級アミノ基である。
【００４９】
式（９）において、Ｘが―Ｃ（Ｏ）Ｏ―であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物とを、非プロトン性極性溶媒中、塩基存在下で反応させることにより得られる。
【００５０】
式（２６）のＷが直鎖状のアルキニル基であり、Ｙがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、プロピオール酸、３−ブチン酸、５−ヘキシン酸、７−オクチン酸、９−デシン酸、１７−オクタデシン酸等が挙げられる。
【００５１】
式（２６）のＷが環状のアルキニル基であり、Ｙがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、３−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル）プロパン酸、３−［（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン−５−カルボニル）エチルカルバモイルエチルジチオ］プロパン酸等が挙げられる。
【００５２】
式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物としては、例えば、２，３−エポキシプロピルホスホリルコリン、３，４−エポキシブチルホスホリルコリン、４，５−エポキシペンチルホスホリルコリン、５，６−エポキシヘキシルホスホリルコリン、６，７−エポキシヘプチルホスホリルコリン、７，８−エポキシオクチルホスホリルコリン、８，９−エポキシノニルホスホリルコリン、９，１０−エポキシデシルホスホリルコリン、１０，１１−エポキシウンデシルホスホリルコリンが挙げられる。
【００５３】
式（９）において、Ｘが―ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ―であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物とを、極性溶媒中で反応させることにより得られる。
【００５４】
式（２６）のＷが直鎖状のアルキニル基であり、Ｙがアミノ基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、エチニルアミン、プロパルギルアミン、４−ペンチニルアミン、６−ヘプチニルアミン、８−ノニニルアミン、１０−ウンデシニルアミン、１１−ドデシニルアミン等が挙げられる。
【００５５】
式（２６）のＷが環状のアルキニル基であり、Ｙがアミノ基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、５−（３−アミノ−１−オキソプロピル）−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン、５−（３−アミノエチルカルバモイル−１−オキソプロピル）−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン、５−［３−アミノエチルカルバモイルエチルジチオエチルカルバモイル−１−オキソプロピル］］−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン等が挙げられる。
【００５６】
式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物としては、例えば、（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルホスホリルコリン、２−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）エチルホスホリルコリン、３−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）プロピルホスホリルコリン、４−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ブチルホスホリルコリン、５−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ペンチルホスホリルコリン、６−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ヘキシルホスホリルコリン、７−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ヘプチルホスホリルコリン、８−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）オクチルホスホリルコリン、９−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ノニルホスホリルコリンが挙げられる。
【００５７】
式（９）において、Ｘが―ＮＨＣＨ２―であるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物とを、プロトン性極性溶媒中で反応させ、更に還元剤と反応させることにより得られる。
【００５８】
式（２６）のＷが直鎖状のアルキニル基であり、Ｙがアミノ基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、エチニルアミン、プロパルギルアミン、４−ペンチニルアミン、６−ヘプチニルアミン、８−ノニニルアミン、１０−ウンデシニルアミン、１１−ドデシニルアミン等が挙げられる。
【００５９】
式（２６）のＷが環状のアルキニル基であり、Ｙがアミノ基であるアルキニル基含有化合物としては、例えば、５−（３−アミノ−１−オキソプロピル）−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン、５−（３−アミノエチルカルバモイル−１−オキソプロピル）−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン、５−［３−アミノエチルカルバモイルエチルジチオエチルカルバモイル−１−オキソプロピル］−１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンズ［ｂ，ｆ］アゾシン等が挙げられる。
【００６０】
式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物としては、例えば、ホルミルメチルホスホリルコリン、２−ホルミルエチルホスホリルコリン、３−ホルミルプロピルホスホリルコリン、４−ホルミルブチルホスホリルコリン、５−ホルミルペンチルホスホリルコリン、６−ホルミルヘキシルホスホリルコリン、７−ホルミルヘプチルホスホリルコリン、８−ホルミスオクチルホスホリルコリン、９−ホルミルノニルホスホリルコリンが挙げられる。
【００６１】
式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物は、例えば、米国特許第５，１４４，０４５号明細書に記載された製造方法により得ることができる。
【００６２】
式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物は、例えば、特開２００９−２４２２８９号公報に記載された製造方法により得ることができる。
【００６３】
式（２７）のＺがホルミル基であり、ｋ＝１であるホスホリルコリン基含有化合物は、例えば、特開２００５−１８７４５６号公報に記載された製造方法により得ることができる。
【００６４】
式（２７）のＺがホルミル基であり、ｋ＝２〜９であるホスホリルコリン基含化合物は、例えば、ジヒドロキシル基含有ホスホリルコリン化合物を酸化的開裂することにより得ることができる。このジヒドロキシル基含有ホスホリルコリン化合物は、例えば、米国特許第５，１４４，０４５号明細書に記載されたアルケニル基含有ホスホリルコリン化合物のエポキシ化により得られるエポキシ基含有ホスホリルコリン化合物を酸触媒存在下で開環することにより得ることができる。
【００６５】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物を、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物に開環付加反応させて、式（１２）〜（１７）で表されるようなエステル結合及び水酸基を有する反応生成物を得ることができる。得られる反応生成物は、そのまま未精製で用いることができる他、減圧乾燥、再沈殿、再結晶、カラム、イオン交換、ゲルろ過等の処理による単離、精製後に用いることもできる。
【００６６】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応に用いられる溶媒としては、一般的な非プロトン性溶媒を採用可能である。
【００６７】
採用可能な非プロトン性溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、エチルメチルケトン、塩化メチレン、クロロホルム、シクロペンチルメチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチル−２−ピロリドンが挙げられる。なお、化合物の溶解性、化合物の反応性の観点から、非プロトン性溶媒はクロロホルムであることが好ましい。
【００６８】
本実施形態にて使用する非プロトン性溶媒の量は、式（２７）のＺがエポキシ基であるアルキニル基含有化合物に対して質量比で通常１〜２０倍量、好ましくは２〜１５倍量、最も好ましくは４〜１０倍量である。
【００６９】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物の量は、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物に対してモル比で０．５〜２．０倍量、好ましくは０．８〜１．５倍量、最も好ましくは１．０〜１．２倍量である。
【００７０】
アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して０．５倍量より少ない場合には、高い反応転化率が得られない場合がある。また、アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して２．０倍量よりも多い場合には、反応転化率の向上に寄与せずに無駄になるアルキニル基含有化合物が発生する。
【００７１】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応に用いられる塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムが挙げられる。なお、これら塩基の中でも、トリエチルアミンが特に好ましい。
【００７２】
本実施形態にて使用する塩基の量は、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物に対してモル比で０．０５〜０．５倍量、好ましくは０．１〜０．２倍量である。
【００７３】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物を、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物に開環付加反応させて、式（１８）〜（２３）で表されるようなウレタン結合及び水酸基を有する反応生成物を得ることができる。得られる反応生成物は、そのまま未精製で用いることができる他、減圧乾燥、再沈殿、再結晶、カラム、イオン交換、ゲルろ過等の処理により単離、精製後に用いることもできる。
【００７４】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがカルボキシル基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがエポキシ基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応における反応温度は、通常０〜８０℃、好ましくは３０〜６０℃、最も好ましくは４０〜５０℃の範囲である。
【００７５】
反応温度が０℃よりも低い場合には、反応に長時間を要する場合がある。また、８０℃を超える反応温度では、反応温度を高くしても反応速度が向上しないため、製造コストなどの観点から反応温度は８０℃以下に抑えることが好ましい。反応時間は、反応温度や濃度などの条件により適宜決定されるが、通常１〜１０時間程度であることが好ましい。
【００７６】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応に用いられる溶媒としては、一般的な極性溶媒を採用可能である。
【００７７】
採用可能な極性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチル−２−ピロリドンが挙げられる。なお、化合物の溶解性、化合物の反応性の観点から、極性溶媒はメタノールであることが好ましい。
【００７８】
本実施形態にて使用する極性溶媒の量は、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物に対して質量比で通常１〜２０倍量、好ましくは２〜１５倍量、最も好ましくは４〜１０倍量である。
【００７９】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物の量は、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物に対してモル比で０．５〜３．０倍量、好ましくは１．０〜２．５倍量、最も好ましくは１．５〜２．０倍量である。
【００８０】
アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して０．５倍量より少ない場合は、高い反応転化率が得られない場合がある。また、アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して３．０倍量よりも多い場合には、反応転化率の向上に寄与せずに無駄になるアルキニル基含有化合物が発生する。
【００８１】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがシクロカーボネート基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応における反応温度は、通常０〜５０℃、好ましくは１０〜４０℃、最も好ましくは２０〜３０℃の範囲である。
【００８２】
反応温度が０℃よりも低い場合には、反応に長時間を要する場合がある。また、５０℃を超える反応温度では、反応温度を高くしても反応速度が向上しないため、製造コストなどの観点から反応温度は５０℃以下に抑えることが好ましい。反応時間は、反応温度、濃度などの条件により適宜決定されるが、通常５〜２４時間程度であることが好ましい。
【００８３】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物を、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物に付加反応させて、式（２４）〜（２５）で表されるようなアミノ結合を有する反応生成物を得ることができる。得られる反応生成物は、そのまま未精製で用いることができる他、減圧乾燥、再沈殿、再結晶、カラム、イオン交換、ゲルろ過等の処理により単離、精製後に用いることもできる。
【００８４】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応に用いられる溶媒としては、一般的なプロトン性溶媒を採用可能である。
【００８５】
採用可能なプロトン性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブタノール等が挙げられる。なお、化合物の溶解性、化合物の反応性の観点から、プロトン性溶媒はメタノール、エタノールであることが好ましい。
【００８６】
本実施形態にて使用するプロトン性溶媒の量は、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物に対して質量比で通常１〜６０倍量、好ましくは１０〜５０倍量、最も好ましくは２０〜４０倍量である。
【００８７】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物の量は、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物に対してモル比で０．５〜２．０倍量、好ましくは０．８〜１．５倍量、最も好ましくは１．０〜１．２倍量である。
【００８８】
アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して０．５倍量より少ない場合には、高い反応転化率が得られない場合がある。また、アルキニル基含有化合物の量がホスホリルコリン基含有化合物に対して２．０倍量よりも多い場合には、反応転化率の向上に寄与しない無駄なアルキニル基含有化合物が発生する。
【００８９】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基であるアルキニル基含有化合物と、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物との反応に用いられる還元剤としては、例えば、２−ピコリンボラン、シアノヒドロホウ素化ナトリウム等が挙げられる。なお、還元剤は、２−ピコリンボランであることが好ましい。
【００９０】
本実施形態にて使用する還元剤の量は、式（２７）のＺがホルミル基であるホスホリルコリン基含有化合物に対してモル比で１．０〜２．５倍量、好ましくは１．５〜２．０倍量である。
【００９１】
本実施形態に係る製造方法において、式（２６）のＹがアミノ基である化合物と、式（２７）のＺがホルミル基である化合物との反応における反応温度は、通常０〜６０℃、好ましくは１０〜４０℃、最も好ましくは２０〜３０℃の範囲である。
【００９２】
反応温度が０℃よりも低い場合には、反応に長時間を要する場合がある。また、６０℃を超える反応温度では、反応温度を高くしても反応速度が向上しないため、製造コストなどの観点から反応温度は６０℃以下に抑えることが好ましい。反応時間は、反応温度、濃度などの条件により適宜決定されるが、通常１〜５時間程度であることが好ましい。
【００９３】
＜アジド基含有化合物修飾剤＞
本実施形態に係る式（９）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物によって修飾可能なアジド基を有する化合物としては、例えば、アジド化多糖、アジド化ポリエチレングリコール、アジド化ペプチド、アジド化タンパク質が挙げられる。
【００９４】
上記のアジド化多糖としては、例えば、アジド基を有するデンプン、アジド基を有するセルロース、アジド基を有するキチン、アジド基を有するキトサン、アジド基を有するヒアルロン酸、アジド基を有するデキストリンが挙げられる。
【００９５】
上記のアジド化ポリエチレングリコールの分子量は４００〜２００００である。
【００９６】
上記のアジド基を有するペプチドの分子量は１００〜１０００である。ペプチドを構成するアミノ酸の種類は任意である。
【００９７】
上記のアジド化タンパク質としては、例えば、アジド基を有するＢＳＡ（アルブミン  ウシ血清由来），アジド基を有するＫＬＨ（キーホールリモペットヘモシアニン），アジド基を有するオボアルブミンが挙げられる。
【００９８】
アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物と、アジド基を有する化合物とを銅触媒存在下で［３＋２］環化付加反応させることで、アジド基を有する化合物をホスホリルコリン基で修飾することができる。得られる反応生成物は、そのまま未精製で用いることができる他、減圧乾燥、再沈殿、再結晶、カラム、イオン交換、ゲルろ過等の処理により単離、精製後に用いることもできる。
【００９９】
本実施形態に係るアジド基含有化合物への修飾方法において、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物とアジド基含有化合物との反応における溶媒としては、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物が溶解する溶媒を適宜採用可能である。
【０１００】
採用可能な溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｔ−ブタノール、Ｎ−Ｎ‘−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。化合物の溶解性、化合物の反応性の観点から、溶媒は水であることが好ましい。
【０１０１】
本実施形態にて使用される溶媒の量は、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物に対して質量比で通常１〜６０倍量、好ましくは１０〜５０倍量、最も好ましくは２０〜４０倍量である。
【０１０２】
アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物とアジド基含有化合物との反応において、触媒は必須ではないが、反応時間短縮の観点から触媒を用いることが好ましい。
【０１０３】
使用可能な触媒としては、例えば、１価又は２価の銅塩が挙げられる。１価又は２価の銅塩としては、例えば、酢酸銅（Ｉ）、酢酸銅（ＩＩ）、塩化銅（Ｉ）、臭化銅（Ｉ）、ヨウ化銅（Ｉ）、硫酸銅（ＩＩ）、硫酸銅（ＩＩ）５水和物、トリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）等が挙げられる。
【０１０４】
本実施形態にて使用される触媒の量は、アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物に対してモル比で０．０１〜１倍量、好ましくは０．０２〜０．５倍量、最も好ましくは０．０５〜０．１倍量である。
【０１０５】
アルキニル基含有ホスホリルコリン化合物とアジド基含有化合物との反応における反応温度は、通常０〜８０℃、好ましくは２０〜７０℃、最も好ましくは４０〜６０℃の範囲である。
【０１０６】
反応温度が０℃よりも低い場合には、反応に長時間を要する場合がある。また、８０℃を超える反応温度では、反応温度を高くしても反応速度が向上しないため、製造コストなどの観点から反応温度は８０℃以下に抑えることが好ましい。反応時間は、反応温度、濃度などの条件により適宜決定されるが、通常１〜２４時間程度であることが好ましい。なお、反応温度は、ペプチド及びタンパク質が変性しない温度（３０〜４０℃）であることが特に好ましい。
【０１０７】
本実施形態に係るアジド化タンパク質への修飾方法において用いられる縮合剤としては、アミノ基とカルボキシル基とを縮合できるものが採用可能である。
【０１０８】
採用可能な縮合剤としては、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）、ジベンジルシクロオクチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−カルボベンゾキシオキシスクシンイミド、Ｎ−（２−クロロベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニルオキシ］スクシンイミド、Ｎ−スクシンイミジルアクリレート、Ｎ−スクシンイミジル−６−（２，４−ジニトロアニリロ）ヘキサノエイト、Ｎ−（１，２，２，２−テトラクロロエトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニルオキシ］スクシンイミド等が挙げられる。反応性の観点から、縮合剤は、ジベンジルシクロオクチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであることが好ましい。
【０１０９】
＜本実施形態で得られる効果＞
本実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、分子内に親水性、保湿性、タンパク質吸着の抑制などの優れた生体適合性を示すホスホリルコリン基を有し、かつアジド基と[３＋２]環化付加反応できるアルキニル基を有する。そのため、本実施形態に係る修飾剤では、アジド基を有する低分子化合物、ポリマー、生体分子等に穏やかな条件下でホスホリルコリン基を導入することができる。
【０１１０】
また、本実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、ウレタン結合、水酸基、エステル結合、あるいはアミノ基等の水素結合性官能基を鎖中に有するため、高い水溶性を有している。そのため、本実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、生体分子と水中で容易に結合が可能である。
【０１１１】
更に、本実施形態に係るアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物は、アミノ基又はカルボキシル基を有するアルキニル化合物と、これらの官能基と温和な条件で容易に反応可能であるエポキシ基、ホルミル基、あるいはシクロカーボネート基を有するホスホリルコリン基とを反応させることにより、高収率で簡便に合成可能である。
【実施例】
【０１１２】
以下、実施例について説明するが、本発明は実施例に限定されない。
【０１１３】
［合成例１］式（２９）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（５，６−エポキシヘキシルホスホリルコリン）の合成
１００ｍＬのフラスコに、式（２８）で表される５−ヘキセニルホスホリルコリン１．０６ｇ（４．０ｍｍｏｌ）、メタクロロ過安息香酸１．７３ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）、及びクロロホルム４０ｍＬを加えて、室温で２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水２０ｍＬを加えた。析出した白色固体をろ過（ろ紙：Ｎｏ．５Ｃ）により除去したろ液を酢酸エチル２０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（２９）で表される５，６−エポキシヘキシルホスホリルコリンを得た。収量は９２０ｍｇ（３．２３ｍｍｏｌ）、収率は８２％であった。
【化３０】
2015120665.tif 000031
【化３１】
2015120665.tif 000032
【０１１４】
［合成例２］式（３１）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（１０，１１−エポキシウンデシルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、式（３０）で表される１０−ウンデセニルホスホリルコリン３３５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、メタクロロ過安息香酸４３１ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、及びクロロホルム１０ｍＬを加えて、室温で２４時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水１０ｍＬを加えた。析出した白色固体をろ過（ろ紙：Ｎｏ．５Ｃ）により除去したろ液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（３１）で表される１０，１１−エポキシウンデシルホスホリルコリンを得た。収量は２７３ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）、収率は７８％であった。
【化３２】
2015120665.tif 000033
【化３３】
2015120665.tif 000034
【０１１５】
［合成例３］式（３２）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（１，３−ジオキソラン−２−オン−４−メチルホスホリルコリン）の合成
５００ｍＬの四つ口フラスコに、グリセリンカーボネート（１，３−ジオキソラン−２−オン−メタノール）２０．０ｇ（１６９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１７．１ｇ（１６９ｍｍｏｌ）、及びテトラヒドロフラン２５０ｍＬを加えて、攪拌しながら０℃まで冷却した。２−クロロ−２−オキサ−１，３，２−ジオキサホスホラン（シグマ−アルドリッチ社製）２４．０ｇ（１６９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン５０ｍＬに溶解し、得られた溶液を上記のフラスコに滴下ロートを用いて滴下した。滴下終了後、反応混合物を昇温して室温で２時間反応を継続させた。副生成物として析出したトリエチルアミン塩酸塩をろ別し、ろ液中に１，３−ジオキソラン−２−オン−４−メチルエチレンサイクリックホスフェイトがあることをＮＭＲにて確認した。得られたろ液、及びアセトニトリル３００ｍＬを、１Ｌの密栓付き耐圧瓶に移し替え、その耐圧瓶にトリメチルアミン４０．０ｇ（６７６ｍｍｏｌ）を加えて密栓し、７０℃で２０時間反応させた。過剰のトリメチルアミンを留去後、反応液を−２０℃で半日放置して結晶を生成させた。生成物をろ過し、アセトニトリル１Ｌで洗浄し、５０℃で一晩減圧乾燥させ、式（２４）で表される１，３−ジオキソラン−２−オン−４−メチルホスホリルコリンを得た。収量は２１．５ｇ（７６．１ｍｍｏｌ）、収率は４５．０％であった。
【化３４】
2015120665.tif 000035
【０１１６】
［合成例４］式（３３）で表される化合物（４−（４−ヒドロキシブチル）−１，３−ジオキソラン−２−オン）の合成
２００ｍＬのフラスコに、１，２，６−ヘキサントリオール（東京化成工業製）２６．８ｇ（２００ｍｍｏｌ）、炭酸ジメチル１９．８ｇ（２２０ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム６０．８ｇ（４４０ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で１５時間反応させた。反応混合物を酢酸エチル１００ｍＬに希釈した液体を、水１００ｍＬで３回洗浄した。有機層を減圧濃縮し、残渣を減圧乾燥させ、式（３３）で表される４−（４−ヒドロキシブチル）−１，３−ジオキソラン−２−オンを得た。収量は２５．３ｇ（１５８ｍｍｏｌ）、収率は７９％であった。
【化３５】
2015120665.tif 000036
【０１１７】
［合成例５］式（３４）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（４−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ブチルホスホリルコリン）の合成
５００ｍＬの四つ口フラスコに、式（３３）で表される４−（４−ヒドロキシブチル）−１，３−ジオキソラン−２−オン２０．０ｇ（１２５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１２．６ｇ（１２５ｍｍｏｌ）、及びテトラヒドロフラン２５０ｍＬを加えて、攪拌しながら０℃まで冷却した。２−クロロ−２−オキサ−１，３，２−ジオキサホスホラン（シグマ−アルドリッチ社製）１７．８ｇ（１２５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン５０ｍＬに溶解し、得られた溶液を上記のフラスコに滴下ロートを用いて滴下した。滴下終了後、反応混合物を昇温して室温で２時間反応を継続させた。副生成物として析出したトリエチルアミン塩酸塩をろ別し、ろ液中に１，３−ジオキソラン−２−オン−４−ブチルエチレンサイクリックホスフェイトがあることをＮＭＲにて確認した。得られたろ液、及びアセトニトリル３００ｍＬを１Ｌの密栓付き耐圧瓶に移し替え、その耐圧瓶にトリメチルアミン２９．６ｇ（５００ｍｍｏｌ）を加えて密栓し、７０℃で２０時間反応させた。過剰のトリメチルアミンを留去後、反応液を−２０℃で半日放置して結晶を生成させた。生成物をろ過し、アセトニトリル１Ｌで洗浄し５０℃で一晩減圧乾燥させ、式（３４）で表される４−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ブチルホスホリルコリンを得た。収量は１７．６ｇ（５３．８ｍｍｏｌ）、収率は４３．０％であった。
【化３６】
2015120665.tif 000037
【０１１８】
［合成例６］式（３６）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（ホルミルメチルホスホリルコリン）の合成
５００ｍＬの四つ口フラスコに、式（３５）で表される特開２００９−２４２２８９号公報に記載される２，３−ジヒドロキシプロピルホスホリルコリン５．１４ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）、及び水１７０ｍＬを加えて攪拌した。過ヨウ素酸ナトリウム６．４１ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣にメタノールを加えた。析出した固体をろ過（ろ紙：Ｎｏ．５Ｃ）により除去し、ろ液にイオン交換樹脂（三菱化学製ＤＩＡＩＯＮ  ＷＡ２１）を加えて３時間攪拌した。ろ過（ＰＴＦＥフィルター：０．４５μｍ）により固体を除去し、ろ液を減圧濃縮して、式（３６）で表されるホルミルメチルホスホリルコリンを得た。収量は３．９０ｇ（１７．３ｍｍｏｌ）、収率は８７％であった。
【化３７】
2015120665.tif 000038
【化３８】
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【０１１９】
［合成例７］式（３８）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（１０，１１−ジヒドロキシウンデシルホスホリルコリン）の合成
２００ｍＬのフラスコに、式（３７）で表される米国特許第５，１４４，０４５号明細書に記載される１０−ウンデシルホスホリルコリン１．６８ｇ（５．０ｍｍｏｌ）、メタクロロ過安息香酸２．１６ｇ（１２．５ｍｍｏｌ）、アンバーリスト６５０ｍｇ、クロロホルム１５ｍＬ、及び水３０ｍＬを加えて室温で４８時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水１０ｍＬを加えた。析出した白色固体をろ過（ろ紙：Ｎｏ．５Ｃ）により除去し、ろ液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（３０）で表される１０，１１−ジヒドロキシウンデシルホスホリルコリンを得た。収量は１．７５ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）、収率は９５％であった。
【化３９】
2015120665.tif 000040
【化４０】
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【０１２０】
［合成例８］式（３９）で表されるホスホリルコリン基含有化合物（９−ホルミルノニルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬフラスコに、式（３８）で表される１０，１１−ジヒドロキシウンデシルホスホリルコリン３６９ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及び水１０ｍＬを加えて攪拌した。過ヨウ素酸ナトリウム３２１ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣にメタノールを加えた。析出した固体をろ過（ろ紙：Ｎｏ．５Ｃ）により除去し、ろ液にイオン交換樹脂（三菱化学製ＤＩＡＩＯＮ  ＷＡ２１）を加えて３時間攪拌した。ろ過（ＰＴＦＥフィルター：０．４５μｍ）により固体を除去し、ろ液を減圧濃縮して、式（３９）で表される９−ホルミルノニルホスホリルコリンを得た。収量は２９７ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）、収率は８８％であった。
【化４１】
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【０１２１】
［実施例１−１］式（４１）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（６−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン）、及び式（４２）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（５−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例１で合成した式（２９）で表される５，６−エポキシヘキシルホスホリルコリン２８２ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、式（４０）で表されるプロピオール酸７７．１ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）、及びクロロホルム５ｍＬを加えて、室温で攪拌した。トリエチルアミン１０．１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で５時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水１０ｍＬを加えた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（４１）で表される６−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、及び式（４２）で表される５−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンを７：３の比で得た。収量は２４５ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）、収率は７０％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．４５−１．７０（ｍ，６Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−），３．２２（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６３−３．６４（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．７５−４．６０（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ−，−ＯＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＨ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１３
【化４２】
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【化４３】
2015120665.tif 000044
【化４４】
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【０１２２】
［実施例１−２］式（４３）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（１１−（エチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン）、及び式（４４）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（１０−（エチニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例２で合成した式（３１）で表される１０，１１−エポキシウンデシルホスホリルコリン３５１ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、式（４０）で表されるプロピオール酸７７．１ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）、及びクロロホルム５ｍＬを加えて、室温で攪拌した。トリエチルアミン１０．１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で５時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水１０ｍＬを加えた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（４３）で表される１１−（エチニルカルボニルオキシ）−１０−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリン、及び式（４４）で表される１０−（エチニルカルボニルオキシ）−１１−ヒドロキシウンデシルホスホリルコリンを７：３の比で得た。収量は３０７ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）、収率は７３％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．４５−１．８５（ｍ，１６Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−），３．２５（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６５−３．６７（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．７９−４．６４（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ−，−ＯＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＨ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１５
【化４５】
2015120665.tif 000046
【化４６】
2015120665.tif 000047
【０１２３】
［実施例１−３］式（４６）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（６−（１６−ヘプチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン）、及び式（４７）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（５−（１６−ヘプチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例１で合成した式（２９）で表される５，６−エポキシヘキシルホスホリルコリン２８２ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、式（４５）で表される１７−オクタデシニルカルボン酸３０８．５０ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）、及びクロロホルム５ｍＬを加えて、室温で攪拌した。トリエチルアミン１０．１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で５時間反応させた。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に水１０ｍＬを加えた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（４６）で表される６−（１６−ヘプチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリン、及び式（４７）で表される５−（１６−ヘプチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンを７：３の比で得た。収量は３５４ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）、収率は６３％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１５−１．８０（ｍ，３２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−，−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．０５（ｍ，１Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．２２（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．３７（ｔ，２Ｈ，−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．２３（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６１−３．６２（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．７０−４．５５（ｍ，７Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−Ｏ−，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１９
【化４７】
2015120665.tif 000048
【化４８】
2015120665.tif 000049
【化４９】
2015120665.tif 000050
【０１２４】
［実施例１−４］式（４９）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（３−（２−エチニルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン）、及び式（５０）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（２−（２−エチニルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例３で合成した式（３２）で表される（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルホスホリルコリン２８３ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（４８）で表されるエチニルアミン８２．１ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）中に滴下した。上澄みを除去し、沈殿物を減圧乾燥して、式（４１）で表される３−（２−エチニルカルバモイルオキシ）−２−ヒドロキシプロピルホスホリルコリン、及び式（４２）で表される２−（２−エチニルカルバモイルオキシ）−３−ヒドロキシプロピルホスホリルコリンを３：２の比で得た。収量は２７２ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）、収率は８４％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２．６８−２．７１（ｍ，１Ｈ，−ＯＣＯＮＨ−Ｃ≡ＣＨ），３．２３（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６４−３．６６（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６８−４．１９（ｍ，５Ｈ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−），４．２５−４．３４（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．９９，１．０７
【化５０】
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【化５１】
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【化５２】
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【０１２５】
［実施例１−５］式（５２）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（２−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン）、及び式（５３）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（３−ヒドロキシ−２−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例３で合成した式（３２）で表される（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチルホスホリルコリン１．１３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（５１）で表されるプロパルギルアミン４４１ｍｇ（８．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル（２００ｍＬ）中に滴下した。上澄みを除去し、沈殿物を減圧乾燥して、式（５２）で表される２−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、及び式（５３）で表される３−ヒドロキシ−２−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリンを３：２の比で得た。収量は１．２２ｇ（３．６ｍｍｏｌ）、収率は９０％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２．５９−２．６１（ｍ，１Ｈ，−ＯＣＯＮＨ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．２３（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６４−３．６６（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６８−４．１９（ｍ，７Ｈ，−ＯＣＯＮＨ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−），４．２５−４．３４（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．９５，１．０２
【化５３】
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【化５４】
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【化５５】
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【０１２６】
［実施例１−６］式（５４）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（５−ヒドロキシ−６−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン）、及び式（４７）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（６−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例５で合成した式（３４）で表される４−（２−オキソ−１，３−ジオキソラン−４−イル）ブチルホスホリルコリン３２５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（５１）で表されるプロパルギルアミンを加え、室温で２４時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を酸エチル（５０ｍＬ）中に滴下した。上澄みを除去し、沈殿物を減圧乾燥して、式（５４）で表される５−ヒドロキシ−６−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン、及び式（５５）で表される６−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリンを３：２の比で得た。収量は３８７ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）、収率は８４％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．４３−１．６８（ｍ，６Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−），２．５６−２．５８（ｍ，１Ｈ，−ＯＣＯＮＨ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．２３（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６１−３．６３（ｍ，４Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ−），３．６４−４．１５（ｍ，７Ｈ，−ＯＣＯＮＨ−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ，−ＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２−），４．２２−４．３１（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３）
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．０６
【化５６】
2015120665.tif 000057
【化５７】
2015120665.tif 000058
【０１２７】
［実施例１−７］式（５６）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（２−（２−プロピニルアミノ）エチルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例６で合成した式（３６）で表されるホルミルメチルホスホリルコリン２２５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（５１）で表されるプロパルギルアミン５５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及び２−ピコリンボラン２１４ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を水１０ｍＬに溶解させた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（５６）で表される２−（２−プロピニルアミノ）エチルホスホリルコリンを得た。収量は２６４ｍｇ（０．８０ｍｍｏｌ）、収率は８０％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：２．６２（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．９０（ｔ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２２（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．４４（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．６２−３．６５（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３），３．９７−４．０１（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−），４．２５−４．３１（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．８４
【化５８】
2015120665.tif 000059
【０１２８】
［実施例１−８］式（５８）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（２−（１１−ドデシニルアミノ）エチルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例６で合成した式（３６）で表されるホルミルメチルホスホリルコリン２２５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（５７）で表される１１−ドデシニルアミン１８１ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及び２−ピコリンボラン２１４ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を水１０ｍＬに溶解させた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（５０）で表される２−（１１−ドデシニルアミノ）エチルホスホリルコリンを得た。収量は３９０ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）、収率は８４％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．１３−１．６６（ｍ，１６Ｈ，−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）２．０６（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．２９（ｔ，２Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．９１−２．９９（ｍ，４Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．２２（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．６２−３．６５（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３），３．９７−４．０１（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−），４．２５−４．３１（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：０．９０
【化５９】
2015120665.tif 000060
【化６０】
2015120665.tif 000061
【０１２９】
［実施例１−９］
式（５９）で表されるアルキニル基含有ホスホリルコリン化合物（２−（１１−ドデシニルアミノ）エチルホスホリルコリン）の合成
５０ｍＬのフラスコに、合成例８で合成した式（３９）で表される９−ホルミルノニルホスホリルコリン３３７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及びメタノール１０ｍＬを加えた。式（５１）で表されるプロパルギルアミン５５ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、及び２−ピコリンボラン２１４ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応液を減圧濃縮し、残渣を水１０ｍＬに溶解させた。この水溶液を酢酸エチル１０ｍＬで３回洗浄し、水層を減圧濃縮して、式（５１）で表される１０−（２−プロピニルアミノ）デシルホスホリルコリンを得た。収量は２７４ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）、収率は７３％であった。得られた生成物に関する１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲの測定結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．３９−１．８０（ｍ，１６Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−），２．６０（ｔ，１Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），２．８５（ｔ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−），３．２０（ｓ，９Ｈ，−Ｎ＋（ＣＨ３）３），３．４８（ｄ，２Ｈ，−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ），３．６０−３．６３（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３），３．９２−４．０３（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−），４．２８−４．３４（ｍ，２Ｈ，−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋−（ＣＨ３）３
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．０１
【化６１】
2015120665.tif 000062
【０１３０】
［実施例２−１］ホスホリルコリン基含有セルロースの合成
５０ｍＬフラスコに、セルロース（重量平均分子量＝１５０，０００，シグマ−アルドリッチ社製）４ｇ、トリエチルアミン２０２ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）、塩化リチウム１ｇ、及びジメチルアセトアミド１０ｍＬを加えた。塩化パラトルエンスルホニル１９０ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応混合物をエタノールで２回再沈殿し、減圧乾燥後に、凍結乾燥を行った。
５０ｍＬフラスコに、得られた生成物、及びジメチルスルホキシド１０ｍＬを加えた。アジ化ナトリウム９７．５ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で攪拌した。反応混合物をエタノールで２回再沈殿し、減圧乾燥後に凍結乾燥を行って、アジド化セルロースを得た。
５０ｍＬフラスコに、得られたアジド化セルロース、実施例１−７で合成した式（５６）で表わされる２−（２−プロピニルアミノ）エチルホスホリルコリン２６４ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、酢酸銅１２．２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）、及び水１０ｍＬを加え、６０℃で１時間攪拌した。反応混合物をエタノールで２回再沈殿し、減圧乾燥後に凍結乾燥を行って、ホスホリルコリン基含有セルロースを得た。
【０１３１】
［実施例２−２］ホスホリルコリン基含有ポリエチレングリコールの合成
５０ｍＬフラスコに、アジド基含有ポリエチレングリコール（Ｏ‐（２‐Ａｍｉｎｏ  ｅｔｈｙｌ）‐Ｏ’‐（２‐ａｚｉｄｏ  ｅｔｈｙｌ）ｎｏｎａ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ，重量平均分子量＝５２６，シグマ−アルドリッチ社製）１．０ｇ（１．０ｍｍｏｌ）、実施例１−５で合成した式（５２）で表される２−ヒドロキシ−３−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン、実施例１−５で合成した式（５３）で表される３−ヒドロキシ−２−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）プロピルホスホリルコリン混合物２８３ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、酢酸銅１２．２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）、及び水１０ｍＬを加え、６０℃で１時間攪拌した。反応混合物をエタノールで２回再沈殿し、減圧乾燥後に凍結乾燥を行って、ホスホリルコリン基含有ポリエチレングリコールを得た。
【０１３２】
［実施例２−３］ホスホリルコリン基含有ペプチドの合成
５０ｍＬフラスコに、アジド化ポリリジン（重量平均分子量＝９１７，受託合成品，シグマ−アルドリッチ社製）１０ｍｇ、実施例１−６で合成した式（５４）で表される５−ヒドロキシ−６−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン、実施例１−６で合成した式（５５）で表される６−ヒドロキシ−５−（２−プロピニルカルバモイルオキシ）ヘキシルホスホリルコリン混合物１１５ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、酢酸銅６．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、及び水を加え、３０℃で１時間攪拌した。反応混合物をエタノールで２回再沈殿させ、減圧乾燥後に凍結乾燥を行って、ホスホリルコリン基含有ペプチドを得た。
【０１３３】
［実施例２−４］ホスホリルコリン基含有ＢＳＡの合成
ＢＳＡ（アルブミン  ウシ血清由来）（シグマ−アルドリッチ社製）１００ｍｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７−９）１０ｍＬに溶解させ、リン酸緩衝液で平衡化したゲルろ過カラム（ＰＤ−１０カラム  ＧＥヘルスケア社製）にかけた。この溶出液に、ジベンジルシクロオクチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル１０ｍｇのジメチルスルホキシド溶液２ｍＬを加え、室温で３０分攪拌した後、１Ｍ  トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を１ｍＬ加えて室温で５分攪拌し、反応溶液をリン酸緩衝液で平衡化したＰＤ−１０カラムにかけた。この溶出液にアジド化ポリリジン（重量平均分子量＝９１７，受託合成品，シグマ−アルドリッチ社製）１０ｍｇのリン酸緩衝溶液２．５ｍＬを加え、室温で３時間攪拌した。実施例１−１で合成した式（４１）で表される６−（エチニルカルボニルオキシ）−５−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンと、実施例１−１で合成した式（４２）で表される５−（エチニルカルボニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシルホスホリルコリンとの混合物３５１ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）の水溶液５ｍＬ、及び酢酸銅１２．２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応混合物をリン酸緩衝液で平衡化したＰＤ−１０カラムにかけ、凍結乾燥を行って、ホスホリルコリン基含有ＢＳＡを得た。
【０１３４】
＜りんの定量＞
実施例２−１、実施例２−２、実施例２−３、及び実施例２−４で合成した化合物についてホスホリルコリン基が良好に修飾されていることを確認するため、りんの定量（モリブデン青法）を行った。りんの定量にはメルク社製のりん定キット（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｃｅｌｌ  ｔｅｓｔ）を用いて、簡易型全リン計によりＰ元素の含有量を測定した。
【０１３５】
具体的には、反応セルに、所定の濃度（≒０．０１ｗｔ％）に調製した、実施例２−１、実施例２−２、実施例２−３、及び実施例２−４に係るホスホリルコリン基含有化合物（セルロース、ポリエチレングリコール、ペプチド、ＢＳＡ）の水溶液５ｍＬを加え、ｐ−１ｋ試薬を１回分添加して攪拌混合後、リアクター（ＣＲ３２００）内で、１２０℃で３０分反応させる。リファレンスとして各ホスホリルコリン基含有化合物を含まないイオン交換水のみの反応セルにも、ｐ−１ｋを加えた後に同様にリアクター内で反応させた。反応後、３０分間室温で冷却し、各反応セルにｐ−２ｋ試薬を５滴ずつ加えて攪拌混合する。その後、ｐ−３ｋ試薬を各反応セルに１回分加え、５分間放置する。その後、ｐＨｏｔｏＦｌｅｘにより６１２ｎｍの吸光度からＰ元素の含量（ｍｇ／ｌ）を測定した。
【０１３６】
測定結果を用い、以下の式（ａ）により、ホスホリルコリン（ＰＣ）基導入率を算出した。
【数１】
2015120665.tif 000063
【０１３７】
表１は、実施例２−１、実施例２−２、実施例２−３、及び実施例２−４についてＰＣ基導入率を示している。実施例２−１、実施例２−２、実施例２−３、及び実施例２−４のいずれでも、ＰＣ基導入率が充分に高く、ホスホリルコリン基の修飾が良好に行われていた。
【０１３８】
【表１】
2015120665.tif 000064
【０１３９】
以上、本発明の実施形態について説明したが、本発明は上述の実施形態にのみ限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。