(57)【要約】【課題】励起光による熱的な励起を防止する。【解決手段】観察方法であって、観察対象を、当該観察対象を支持する第１支持体から分離する分離段階と、第１支持体から分離された観察対象に励起光を照射して、観察対象から射出された散乱光を検出する顕微鏡により観察対象を観察する観察段階とを備える。上記観察方法において、分離段階は、観察対象を第１支持体から引き離す引き離し段階を含んでもよい。また、上記観察方法において、引き離し段階は、観察対象に対して励起光が、第１支持体の熱的励起を誘起する範囲よりも遠ざかるまで引き離してもよい。【選択図】図６
2015145941.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
観察対象を、当該観察対象を支持する第１支持体から分離する分離段階と、
前記第１支持体から分離された前記観察対象に励起光を照射して、前記観察対象から射出された散乱光を検出する顕微鏡により前記観察対象を観察する観察段階と
を備える観察方法。
【請求項２】
前記分離段階は、前記観察対象を前記第１支持体から引き離す引き離し段階を含む請求項１に記載の観察方法。
【請求項３】
前記分離段階は、前記観察対象に照射された前記励起光によって前記第１支持体が熱的励起を誘起される範囲よりも前記観察対象と前記第１支持体との間隔が大きくなるように、前記観察対象を前記第１支持体から分離する請求項１または２に記載の観察方法。
【請求項４】
前記分離段階は、前記第１支持体の高分子材料からなる接着層が前記励起光によって熱的励起を誘起される範囲よりも前記観察対象と前記第１支持体との間隔が大きくなるように、前記観察対象を前記第１支持体から分離する請求項２または３に記載の観察方法。
【請求項５】
前記分離段階は、前記接着層を解除することにより前記観察対象を前記第１支持体から分離する段階を含む請求項４に記載の観察方法。
【請求項６】
前記分離段階は、前記接着層である温度応答性ポリマー層を臨界温度よりも低い温度まで冷却して接着を解除する段階を含む請求項５に記載の観察方法。
【請求項７】
前記観察段階は、前記第１支持体から分離した前記観察対象を、前記第１支持体を収容した支持容器の内部において観察する段階を含む請求項１から請求項６までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項８】
前記分離段階は、前記第１支持体から分離した前記観察対象を、前記第１支持体とは異なる第２支持体に支持させるべく搬送する搬送段階を含む請求項１から請求項７までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項９】
前記搬送段階は、前記観察対象を前記第２支持体に固定する固定段階を含む請求項８に記載の観察方法。
【請求項１０】
前記固定段階は、前記観察対象における一方の面の一部を、前記第２支持体の接着領域に接着する接着段階を含む請求項９に記載の観察方法。
【請求項１１】
前記固定段階は、一方の面から観察される前記観察対象における他方に面において、前記観察対象を前記第２支持体の前記接着領域に接着する段階を含む請求項１０に記載の観察方法。
【請求項１２】
前記接着領域は、前記第２支持体の一部に設けられた温度応答性ポリマー層を含む請求項１０または請求項１１に記載の観察方法。
【請求項１３】
前記観察段階において観察した前記観察対象を、前記第２支持体から他の支持体に搬送して、当該他の支持体に再固定する再固定段階を更に含む請求項８から請求項１１までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項１４】
前記再固定段階は、前記観察対象を、前記第１支持体に戻す段階を含む請求項１３に記載の観察方法。
【請求項１５】
前記搬送段階は、前記観察対象に接触して搬送する搬送部材が前記観察対象に接触する前に、当該搬送部材を滅菌する滅菌段階を更に備える請求項８から請求項１４までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項１６】
前記観察段階は、前記観察対象における非線形光学効果により生じた散乱光を検出する検出段階を含む請求項１から請求項１５までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項１７】
前記観察対象は、細胞シート、細胞組織片および微生物のいずれかである請求項１から請求項１６までのいずれか一項に記載の観察方法。
【請求項１８】
観察対象を支持する支持部と、
前記支持部に支持された前記観察対象に照射する励起光を透過させる透過部と
前記透過部を透過した前記励起光の光路を避けた位置で、前記観察対象の一部を前記支持部に固定する固定部と、
を備える観察用支持体。
【請求項１９】
前記固定部は、前記観察対象の一部を接着する接着領域を有する請求項１８に記載の観察用支持体。
【請求項２０】
前記接着領域は、前記透過部の一部に配される請求項１９に記載の観察用支持体。
【請求項２１】
前記接着領域は、前記透過部にグラフトされた温度応答性ポリマー層を含む請求項１９または請求項２０に記載の観察用支持体。
【請求項２２】
観察の対象となる観察対象を、当該観察対象を支持する第１支持体から分離する分離部と、
前記第１支持体から分離された前記観察対象に励起光を照射して、前記観察対象から射出された散乱光を検出する顕微鏡により前記観察対象を観察する観察部と
を備える観察装置。
【請求項２３】
前記分離部は、前記観察対象を前記第１支持体から引き離す引き離し部を含む請求項２２に記載の観察装置。
【請求項２４】
前記分離部は、前記観察対象に照射された前記励起光によって、前記第１支持体が熱的励起を誘起される範囲よりも前記観察対象と前記第１支持体との間隔が大きくなるように、前記観察対象を前記第１支持体から分離する請求項２２または２３に記載の観察装置。
【請求項２５】
前記分離部は、前記観察対象を前記第１支持体に接着する接着層を臨界温度よりも低い温度まで冷却して接着を解除する温度調節部を備える請求項２２から請求項２４までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項２６】
前記観察部は、前記第１支持体から分離した前記観察対象を、前記第１支持体を収容した支持容器の内部において観察する請求項２２から請求項２５までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項２７】
前記分離部は、前記第１支持体から分離した前記観察対象を、前記第１支持体とは異なる第２支持体に支持させるべく搬送する搬送部を含む請求項２２から請求項２５までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項２８】
前記搬送部は、前記観察対象を一時的に吸着するゼラチンゲル層を有する請求項２７に記載の観察装置。
【請求項２９】
前記搬送部は、前記観察対象に対して外部から伝播する振動を遮断する振動遮断部を有する請求項２７または請求項２８に記載の観察装置。
【請求項３０】
前記搬送部は、前記観察対象に接触して搬送する搬送部材が前記観察対象に接触する前に、当該搬送部材を滅菌する滅菌部を更に備える請求項２７から請求項２９までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項３１】
前記観察部は、前記観察対象における非線形光学効果により生じた散乱光を検出する検出部を含む請求項２２から請求項３０までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項３２】
前記観察対象は、細胞シート、細胞組織片および微生物のいずれかである請求項２２から請求項３１までのいずれか一項に記載の観察装置。
【請求項３３】
前記観察部は、静止した前記観察対象に対して移動する対物光学系を有する請求項３２に記載の観察装置。
【請求項３４】
前記対物光学系は、共通の焦点に対して相対位置を固定されて一体的に移動する複数の対物レンズを含む請求項３３に記載の観察装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、観察方法、観察用支持体および観察装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
非線形光学効果を利用した観察装置がある（特許文献１参照）。
特許文献１  特開２０１１−２５７６９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
非線形光学効果を励起する励起光が照射対象を熱的に励起する範囲は、非線形光学効果を励起する範囲よりも広い。このため、観察装置においては、観察対象の周辺までが励起光の影響を受ける場合がある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の第１態様においては、観察対象を、当該観察対象を支持する第１支持体から分離する分離段階と、第１支持体から分離された観察対象に励起光を照射して、観察対象から射出された散乱光を検出する顕微鏡により観察対象を観察する観察段階とを備える観察方法が提供される。
【０００５】
本発明の第２態様においては、観察対象を支持する支持部と、支持部に支持された観察対象に照射する励起光を透過させる透過部と透過部を透過した励起光の光路を避けた位置で、観察対象の一部を支持部に固定する固定部とを備える観察用支持体が提供される。
【０００６】
本発明の第３態様においては、観察の対象となる観察対象を、当該観察対象を支持する第１支持体から分離する分離部と、第１支持体から分離された観察対象に励起光を照射して、観察対象から射出された散乱光を検出する顕微鏡により観察対象を観察する観察部とを備える観察装置が提供される。
【０００７】
上記の発明の概要は、本発明の必要な特徴の全てを列挙したものではない。これらの特徴群のサブコンビネーションも発明となり得る。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】観察装置１０１の構造を示す模式図である。
【図２】サンプル２００の断面図である。
【図３】観察装置１０１を用いた観察手順を示す流れ図である。
【図４】引き離し具３２０の動作を説明する模式図である。
【図５】分離部３００の動作を説明する模式図である。
【図６】サンプル２００の断面図である。
【図７】観察部１００の動作を説明する模式図である。
【図８】焦点１４５付近の状態を示す模式図である。
【図９】観察装置１０２の構造を示す模式図である。
【図１０】観察装置１０２を用いた観察手順を示す流れ図である。
【図１１】搬送具３４０の動作を説明する模式図である。
【図１２】搬送具３４０の動作を説明する模式図である。
【図１３】搬送部３０１の動作を説明する模式図である。
【図１４】観察用容器４１０の平面図である。
【図１５】搬送部３０１の動作を説明する模式図である。
【図１６】観察用容器４２０の平面図である。
【図１７】観察用容器４３０の平面図である。
【図１８】搬送部３０２の動作を説明する模式図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、発明の実施の形態を通じて本発明を説明するが、下記の実施形態は特許請求の範囲に係る発明を限定するものではない。実施形態の中で説明されている特徴の組み合わせの全てが発明の解決手段に必須であるとは限らない。
【００１０】
図１は、細胞観察に使用できる観察装置１０１の構造を示す模式図である。観察装置１０１は、ステージ１１０、レーザ装置１２０、走査系１３０、光学系１４０、検出系１５０、制御系１６０および分離部３００を備える。観察装置１０１において、分離部３００を除く部分は観察部１００を形成する。ただし、制御系１６０は、観察部１００および分離部３００で共用される。
【００１１】
観察装置１０１において、ステージ１１０は、観察の対象となるサンプル２００を支持する。また、観察装置１０１において、ステージ１１０と、光学系１４０とは、図中に矢印ｘ−ｙで示す紙面に直交する面に沿って相対移動する。図示の例では、固定されたステージ１１０に対して光学系１４０を移動させる。これにより、光学系１４０は、サンプル２００を光路上に位置させる観察位置と、光路がサンプル２００からはずれた予備位置とをとり得る。
【００１２】
観察装置１０１におけるレーザ装置１２０は、複数のレーザ光源１２２、１２４と、コンバイナ１２６とを有する。レーザ光源１２２、１２４は、例えばＣＡＲＳ光検出による観察に用いられるパルスレーザを発生する。また、レーザ光源１２２、１２４が発生するパルスレーザは、互いに異なる波長λＰ、λＳを有する。
【００１３】
レーザ光源１２２、１２４としては、例えば、モードロックピコ秒Ｎｄ：ＹＶＯ４レーザ、モードロックピコ秒イットリビウムレーザー等を用いることができる。なお、レーザ光源１２２、１２４の一方を、他方のレーザ光源１２２、１２４が発生したパルスレーザの波長を変換する光パラメトリック発振器に置き換えてもよい。
【００１４】
レーザ光源１２２、１２４により発生した２波長のピコ秒パルスのうち、短い方の波長λＰを有するパルスレーザは、ＣＡＲＳ光観察におけるポンプ光として利用される。また、レーザ光源１２２、１２４の発生するピコ秒パルスのうち、長い方の波長λＳ有するパルスレーザは、ＣＡＲＳ光観察におけるストークス光として利用される。
【００１５】
コンバイナ１２６は、複数のレーザ光源１２２、１２４が発生したレーザ光を統合して単一の光路上に励起光として射出する。これにより、ポンプ光とストークス光とを併せた励起光をサンプル２００に照射して、サンプル２００においてＣＡＲＳ光を発生させることができる。
【００１６】
なお、レーザ装置１２０には、レーザ光源１２２、１２４が発生するポンプ光のパルスとストークス光のパルスとを同期させる目的で遅延光路を設けてもよい。遅延光路は、互いの間隔を変更できる複数の反射鏡により形成できる。また、レーザ装置１２０においては、フォトニック結晶ファイバを用いてストークス光を広帯域化してもよい。
【００１７】
観察装置１０１において、走査系１３０は、ガルバノスキャナ１３２およびスキャンレンズ１３４を有する。ガルバノスキャナ１３２は、互いに向きが異なる２軸の周りを揺動する反射鏡を備え、入射した励起光の光路を、光軸と交差する方向に二次元的に変位させる。
【００１８】
スキャンレンズ１３４は、ガルバノスキャナ１３２から射出された励起光を、予め定められた一次像面１３６上に合焦させる。これにより、レーザ装置１２０から射出された励起光は、サンプル２００の観察領域において焦点を結ぶ。また、ガルバノスキャナ１３２が動作した場合は、図中に矢印ｘ−ｙで示す平面と平行に励起光の焦点を走査させて、予め定められた広さを有する観察領域に励起光を照射して、ＣＡＲＳ光を発生させることができる。
【００１９】
光学系１４０は、ステージ１１０に対して検出系１５０側に配された対物レンズ１４２と、ステージ１１０に対してレーザ装置１２０側に配された下側の対物レンズ１４４およびコンデンサレンズ１４６とを有する。下側の対物レンズ１４４は、サンプル２００に向かって照射される励起光を、サンプル２００における観察領域内で合焦させる。また、一対の対物レンズ１４２、１４４は、互いに同じ開口数（ＮＡ）を有する。
【００２０】
光学系１４０の入射端側において、レーザ装置１２０と対物レンズ１４２との間の励起光の光路上には、反射鏡１４８が配される。反射鏡１４８は、励起光の光路を折り曲げて、観察装置１０１の構造物が過剰に高くなることを防止する。反射鏡１４８としては、全反射プリズムではなく、入射光を表面で反射させる金属鏡を用いてもよい。光学系１４０から射出された光の伝搬光路には検出系１５０が配される。
【００２１】
検出系１５０は、集光レンズ１５２、リレーレンズ１５４、光電子増倍管１５６およびダイクロイックミラー１５８を有して、サンプル２００から射出されたＣＡＲＳ光の検出に用いられる。ダイクロイックミラー１５８は、サンプル２００から射出された光からＣＡＲＳ光を分岐させて、集光レンズ１５２およびリレーレンズ１５４を通じて光電子増倍管１５６に導入する。よって、ＣＡＲＳ光は、光量を低下することなく、光電子増倍管１５６に効率よく受光される。
【００２２】
制御系１６０は、制御部１６２、キーボード１６４、マウス１６６および表示部１６８を有する。制御部１６２は、汎用パーソナルコンピュータに後述する制御手順を実行させるプログラムを実装することにより形成できる。
【００２３】
キーボード１６４およびマウス１６６は、制御部１６２に接続され、制御部１６２にユーザの指示を入力する場合に操作される。表示部１６８は、キーボード１６４およびマウス１６６によるユーザの操作に対してフィードバックを返すと共に、制御部１６２が生成した画像または文字列をユーザに向かって表示する。
【００２４】
また、制御部１６２は、レーザ装置１２０、検出系１５０および走査系１３０の各々に接続され、それぞれの動作を制御する。更に、制御部１６２は、分離部３００の動作も制御する。また更に、制御部１６２は、検出系１５０の検出結果に基づいて、サンプル２００の観察画像を生成して、表示部１６８に表示する。
【００２５】
観察装置１０１において、観察部１００は、ＣＡＲＳ（コヒーレント反ストークスラマン散乱）、ＳＲＳ（誘導ラマン散乱）等の非線形光学効果を利用して、培養した細胞、組織および微生物等を生かしたまま観察することができる。非線形光学効果は、観察対象に対して励起光を照射することにより発生する。検出系１５０は、励起光が照射された側と反対の側から射出されるＣＡＲＳ光を検出して観察画像を形成する。
【００２６】
観察装置１０１において、光学系１４０が予備位置にある場合、ステージ１１０に置かれたサンプル２００は、分離部３００による操作の対象となる。また、サンプル２００を観察する場合は、光路上にステージ１１０を進入させる観察位置に光学系１４０を移動させた上で、サンプル２００の一方の面（図示の例では図中下面）から励起光を照射する。
【００２７】
更に、観察装置１０１は、分離部３００を備える。分離部３００は、温度調節部３１０および引き離し具３２０を有する。温度調節部３１０は、サンプル２００に対して温風または冷風を吹きつけて、サンプル２００の温度を制御する。引き離し具３２０は、サンプル２００の一部を吸着して持ち上げる場合に使用するが、引き離し具３２０については、他の図を参照して後述する。
【００２８】
図２は、観察の対象となるサンプル２００の断面図である。サンプル２００は、観察の対象である細胞シート２０１と、細胞シート２０１を収容した培養容器２１０とを含む。
【００２９】
細胞シート２０１は、被検者から採取した細胞を培養して作成された、薄いシート状をなす生きた細胞組織であり、培養液に浸漬された状態で取り扱われる。培養された細胞シートは、最終的に、生きた状態のまま被検者の生体組織に付着させる。
【００３０】
培養容器２１０は、保持枠２１２および透過部２１４を有する。保持枠２１２は、樹脂等の成形し易いにより形成され、短い円筒形の形状を有する。培養容器２１０において、保持枠２１２は円筒形の側壁を形成し、当該側壁の下端面においてステージ１１０等の上面に接する。保持枠２１２は、下面に開口部２１１を有する。
【００３１】
透過部２１４は、保持枠２１２により保持され、保持枠２１２の開口部２１１を液密に封止して、培養容器２１０の底面を形成する。これにより、培養容器２１０は、培養液２２０を漏らすことなく収容できる。また、透過部２１４により形成された培養容器２１０の底面は光学的に透明になる。
【００３２】
保持枠２１２は、例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリジメチルシロキサン、シリコーンポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート等の高分子材料により形成できる。透過部２１４は、例えば、カバーガラス等の透明な無機材料により形成できる。
【００３３】
培養容器２１０において、透過部２１４の上面、即ち、培養容器２１０の内側の底面には、温度応答性ポリマー層２１６が配され、細胞シート２０１の支持体を形成する。温度応答性ポリマー層２１６は、透過部２１４にグラフトされて、培養容器２１０に対して固定される。温度応答性ポリマー層２１６は、例えば、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド等の高分子材料により形成できる。
【００３４】
ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド等の温度応答性ポリマーは、予め設定された臨界温度を境として水和力が変化する。また、この臨界温度は、細胞シート２０１にダメージを与えない摂氏３０度前後に設定できる。一方、細胞シート２０１は、疎水性を示す温度応答性ポリマー層２１６に対して接着し、親水性を示す温度応答性ポリマー層２１６からは容易に剥離できる。また、温度応答性ポリマーは、グラフト共重合により、それ自体を他の材料に対して固定できる。
【００３５】
このような温度応答性ポリマー層の性質を利用して、培養容器２１０に設けられた温度応答性ポリマー層２１６を臨界温度よりも高い温度まで加熱することにより、細胞シート２０１を接着して固定できる。また、温度応答性ポリマー層２１６を臨界温度よりも低い温度まで冷却することにより接着を解除して、酵素処理等によるダメージを与えることなく、細胞シート２０１を培養容器２１０の底面から開放できる。
【００３６】
なお、温度応答性ポリマー層２１６の材料はポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミドに限られるわけではなく、（メタ）アクリルアミド化合物、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドなどのＮ−（またはＮ，Ｎ−ジ）アルキル置換（メタ）アクリルアミド誘導体およびビニルエーテル誘導体のいずれか、または、２種以上を組み合わせて使用できる。また、上記以外のモノマー類との共重合、ポリマー同士のグラフトまたは共重合、ポリマー、コポリマーの混合物を用いてもよい。更に、所与の温度応答性を喪失しない範囲で架橋させて使用することもできる。
【００３７】
図３は、上記のようなサンプル２００を、観察装置１０１により観察する場合の手順を示す流れ図である。観察装置１０１により観察する場合は、まず、観察対象となる細胞シートを含むサンプルを、光学系１４０が予備装置にある状態で、ステージ１１０に置く（ステップＳ１０１）。
【００３８】
図４は、サンプル２００をステージ１１０に置いた状態を示す。ステージ１１０に置かれた時点のサンプル２００においては、細胞シート２０１が温度応答性ポリマー層２１６の表面に接着されている。
【００３９】
ステージ１１０には、ステージ１１０上に置かれた培養容器２１０の底面を露出させる観察窓１１４が設けられている。これにより、ステージ１１０に置かれた培養容器２１０は、底面側からも、上面側からも観察することができる状態になる。また、ステージ１１０に置かれた培養容器２１０に対しては、底面側からも、上面側からも励起光を照射できる。
【００４０】
ステージ１１０に置かれた培養容器２１０の透過部２１４には、観察窓１１４を通じて温度調節部３１０が臨んでいる。また、ステージ１１０の上方から、ステージ１１０上の培養容器２１０に収容された細胞シート２０１に対しては、引き離し具３２０が上方から臨んでいる。
【００４１】
再び図３を参照すると、分離部３００において、温度調節部３１０は冷風を吹きつけることによりステージ１１０に置かれた培養容器２１０を冷却する（ステップＳ１０２）。これにより、温度応答性ポリマー層２１６の温度が予め設定された臨界温度よりも低くなり、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から剥離し易い状態になる。次に、分離部３００においては、引き離し具３２０を用いて、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から分離させる（ステップＳ１０３）。
【００４２】
図５は、引き離し具３２０の動作を説明する図である。引き離し具３２０は、ステム３２２、温度調節部３２４および温度応答性ポリマー層３２６を備える。ステム３２２は、図中上方に延在するので、サンプル２００から離れた位置で引き離し具３２０を操作することを可能にする。
【００４３】
温度応答性ポリマー層３２６は、引き離し具３２０の下端面全体に形成され、引き離し具３２０を培養容器２１０内に降ろした場合に、細胞シート２０１の上面に確実に接触する。引き離し具３２０の温度調節部３２４は、ペルチェ効果素子等の温度調節素子を含み、引き離し具３２０の外部からの電気的な制御により、温度応答性ポリマー層３２６の温度を上昇または降下させることができる。
【００４４】
よって、培養容器２１０の温度応答性ポリマー層２１６を冷却して親水性にした状態で、加熱して疎水性になった引き離し具３２０の温度応答性ポリマー層３２６を接触させることにより、引き離し具３２０に細胞シート２０１を接着して操作できる状態にする。次いで、引き離し具３２０を図中上方に移動させて培養容器２１０から遠ざけることにより、細胞シート２０１の接着した部分を培養容器２１０の温度応答性ポリマー層２１６から引き離すことができる。
【００４５】
図６は、サンプル２００において、細胞シート２０１が温度応答性ポリマー層２１６から分離された状態を示す断面図である。引き離し具３２０により一部が温度応答性ポリマー層２１６から引き離されると、細胞シート２０１と温度応答性ポリマー層２１６との間に培養液２２０が流れ込む。これにより、細胞シート２０１の他の部分も温度応答性ポリマー層２１６から分離し、細胞シート２０１は、培養液２２０の液中を漂う状態になる。これにより、細胞シート２０１の全体が温度応答性ポリマー層２１６から分離する。
【００４６】
再び図３を参照すると、上記のようなステップＳ１０２およびステップＳ１０３により分離段階Ｐ１０１が完了すると、観察装置１０１の光学系１４０が観察位置に移動し、観察段階Ｐ１０２が開始される。
【００４７】
観察段階Ｐ１０２においては、観察対象である細胞シート２０１に対物レンズ１４２、１４４の焦点が合わされ、励起光が照射される。これにより、対物レンズ１４２、１４４の焦点の位置において非線形光学効果が生じ、細胞シート２０１に含まれる特定の分子が検出される。
【００４８】
図７は、細胞シート２０１に照射された励起光の焦点においてＣＡＲＳ光が発生するＣＡＲＳ過程を説明する模式図である。ＣＡＲＳ過程は、互いに異なる光周波数ω１、ω２を有するポンプ光およびストークス光の二つのレーザ光を含む励起光を被観察物に照射して、ポンプ光の光周波数ω１とストークス光の光周波数ω２との差［ω１−ω２］が、被観察物に含まれる分子の固有振動の角振動数ω０と一致した場合に発生する。
【００４９】
ＣＡＲＳ過程により、被観察物に含まれる特定の分子構造の振動モードが励振されると、分子振動が光周波数ω３を有する第３のレーザ光であるプローブ光と相互作用することにより、三次の非線形分極に由来するＣＡＲＳ光がラマン散乱光として発生する。
【００５０】
更に、ポンプ光はプローブ光としても利用できるので、［ω１＝ω３］という条件の下で、ＣＡＲＳ光が発生する。被観察物において発生するＣＡＲＳ光は、［ωＣＡＲＳ＝ω１−ω２＋ω３］を満たす光周波数を有する。
【００５１】
よって、被観察物から射出されたＣＡＲＳ光を検出することにより、被観察物に含まれる特定の分子構造、例えば官能基の存在を検出できる。また、励起光を被観察物に照射する位置を変えながら繰り返しＣＡＲＳ光を検出することにより、被観察物における特定の分子構造の分布を画像化することができる。
【００５２】
ＣＡＲＳ光は自発ラマン散乱光等に比べると光強度が高いので、光電気変換素子を用いた場合に短時間で検出できる。よって、検出に要する時間が単に短くなるばかりではなく、ビデオレートでの観察もできる。
【００５３】
これにより、特定分子構造の分布だけではなく、分布の変化も検出することができる。また、被観察物に照射する励起光の帯域を、生細胞に与えるダメージが少ない赤外帯域とすることにより、被観察物の生細胞を生かしたまま観察することができる。
【００５４】
更に、非線形効果により生じるＣＡＲＳ光は、下側の対物レンズ１４４により励起光が絞り込まれた極めて狭い領域において発生する。このため、ＣＡＲＳ光検出の対象となる領域は、照射光の光軸に交差する方向と、光軸と平行な方向の両方に関して狭い領域となる。よって、ＣＡＲＳ光による被観察物の観察は、立体的に高い解像度を有する。
【００５５】
よって、赤外帯域または近赤外帯域の照射光を用いて、観察平面を被観察物の内部に形成してもよい。また、観察平面を、被観察物の深さ方向に順次移動させることにより、特定の分子構造の三次元的な分布を反映した画像を生成できる。
【００５６】
また更に、被観察物の特定の位置に照射する照射光の光周波数を変化させることにより、当該照射位置から射出されたラマン散乱光の周波数分布を示すスペクトル画像が得られる。また、照射光の光路に対して交差する方向に被観察物を移動させながら照射光を繰り返し照射することにより、上側の対物レンズ１４２の焦点を含む観察平面における特定の分子の分布を画像化して検出画像を生成できる。
【００５７】
再び図３を参照すると、対物レンズ１４２、１４４の焦点の初期位置は、例えば、細胞シート２０１の図中上面に当たる表面に設定される。ここから、制御部１６２は、まず、ガルバノスキャナ１３２により焦点１４５を走査させて（ステップＳ１０４）、細胞シート２０１の表面における一定の領域からＣＡＲＳ光を検出して二次元的な観察画像を生成する。
【００５８】
なお、以下の説明において、単に「焦点」と記載した場合は、対物レンズ１４２、１４４共通の焦点を意味する。また、観察対象である細胞シート２０１に対して焦点を移動させる場合は、一対の対物レンズ１４２、１４４の相対位置を固定して、一対の対物レンズ１４２、１４４を一体的に移動させる。
【００５９】
最初の平面における観察画像が生成されると、制御部１６２は、対物レンズ１４２、１４４の焦点を、図中に矢印ｚで示す細胞シート２０１の厚さ方向に移動させる（ステップＳ１０５）。ここで、制御部１６２は、対物レンズ１４２、１４４の焦点が、細胞シート２０１の外に出ていないかどうかを調べる（ステップＳ１０６）。
【００６０】
ステップＳ１０６において、焦点が細胞シート２０１の厚さの内で移動したことが判った場合（ステップＳ１０６：ＮＯ）、制御部１６２は、細胞シート２０１の厚さ方向に異なる次の観察平面においてＣＡＲＳ光による観察画像を生成する。以下、制御部１６２は、焦点の位置が細胞シート２０１の厚さ内にある限り、ｚ方向の移動と観察画像の生成を繰り返して、細胞シート２０１の立体的な観察画像を生成する。
【００６１】
一方、ステップＳ１０６において、焦点が細胞シート２０１の厚さを超えて移動したことが判った場合（ステップＳ１０６：ＹＥＳ）、制御部１６２は、焦点の位置をｚ方向についてリセットして、再び細胞シート２０１の表面に戻す（ステップＳ１０７）。次に、制御部１６２は、細胞シート２０１の面方向について、全域の観察画像が生成されたか否かを調べる（ステップＳ１０８）。
【００６２】
なお、「全域」とは、細胞シート２０１の全面積を意味するとは限らない。ＣＡＲＳ光による観察の解像度は高いので、細胞シート２０１を隈なく観察すると、観察に膨大な時間を要する。よって、「全域」といった場合は、細胞シート２０１において観察することを予め選択された部分的な領域の全てを意味する。
【００６３】
ステップＳ１０８において、細胞シート２０１の全域がまだ観察されていない場合（ステップＳ１０８：ＮＯ）、制御部１６２は、図中に矢印ｘ−ｙで示す細胞シート２０１の面方向に焦点の位置を移動させる（ステップＳ１０９）。次に、制御部１６２は、制御を再びステップＳ１０４に戻してＣＡＲＳ光による細胞シート２０１の観察画像の生成を繰り返す。
【００６４】
ステップＳ１０８において細胞シート２０１の全領域が観察されたことが判った場合（ステップＳ１０８：ＹＥＳ）、制御部１６２は、観察段階Ｐ１０２を完了する。次いで、制御部１６２は、光学系１４０を予備位置に戻してステージ１１０の上方を開放した上で、温度調節部３１０により温度応答性ポリマー層２１６を加熱する（ステップＳ１１０）。
【００６５】
これにより、温度応答性ポリマー層２１６は疎水性を回復し、細胞シート２０１を接着できる状態になる。更に、制御部１６２は、状況に応じて引き離し具３２０を操作して、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６に接着させる（ステップＳ１１１）。こうして、観察が終了したサンプル２００は、ステップＳ１０１において装入された状態を回復する回復段階が完了する（Ｐ１０３）。
【００６６】
図８は、細胞シート２０１を観察している状態を示す模式図である。ステージ１１０上に置かれた培養容器２１０は、上下の対物レンズ１４２、１４４の間に位置し、下側の対物レンズ１４４は、観察窓１１４を通じて、培養容器２１０の底面をなす透過部２１４下面に接近する。
【００６７】
対物レンズ１４４と培養容器２１０の透過部２１４との間隙は、水１４３により充填される。これにより、下側の対物レンズ１４４の実効的な開口数が増加し、対物レンズの実効的な倍率を大きくできる。
【００６８】
図示の状態において、対物レンズ１４４により結ばれる励起光の焦点は、細胞シート２０１の下面近傍に位置する。よって、観察装置１０１の検出系１５０は、細胞シート２０１の下面近傍の観察画像を生成する。
【００６９】
ここで、励起光による熱的な励起は、焦点１４５の周囲にも及ぶ。図中には、熱的な励起が生じ得る熱励起圏１４７を点線により示す。焦点が細胞シート２０１の下面近傍に位置する場合、熱励起圏１４７は、図示のように、細胞シート２０１の外側まで拡がっている。しかしながら、図示のサンプル２００においては、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から分離した上で、熱励起圏１４７が温度応答性ポリマー層２１６から遠ざかるまで引き離しているので、温度応答性ポリマー層２１６が熱励起圏１４７に熱的に励起されることはない。
【００７０】
なお、細胞シート２０１下面近傍においては、熱励起圏１４７に培養液２２０が存在している。しかしながら、培養液２２０は加熱された場合に対流を生じるので、励起光による熱的な影響を受け難い。
【００７１】
このように、観察装置１０１は、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から分離した後に励起光を照射して観察する。励起光が培養容器２１０や温度応答性ポリマー層２１６等に照射されたり、培養容器２１０等が熱励起圏１４７に入ったりすると、培養容器２１０等の分子が吸収した光エネルギーの一部が熱エネルギーに変換されるいわゆる熱的励起が生じることにより、培養容器２１０等の温度が所定の温度以上に上昇したり、局所的に高温になった表面層が蒸発することで原子、分子、プラズマおよびそれらのクラスターが放出するいわゆるアブレーションが培養容器２１０等に生じる可能性がある。
【００７２】
例えば、培養容器２１０等の温度が上昇すると、培養容器２１０等から細胞シート２０１に熱が伝わり、細胞シート２０１の細胞が死亡または変性する虞がある。細胞が死亡または変性する可能性がある温度は例えば３７℃以上である。また、培養容器２１０等にアブレーションが生じると細胞シート２０１が損傷を受ける虞がある。これに対し、本実施例に記載の観察装置１０１は、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から分離した後に励起光を照射して観察することから、培養容器２１０等に励起光が照射されたり、培養容器２１０等が熱励起圏１４７に入ったりすることが防止されるため、観察対象である細胞シート２０１に損傷を与えることなく細胞シート２０１を隅々まで観察できる。
【００７３】
なお、温度応答性ポリマー層２１６から分離した細胞シート２０１を観察する場合、細胞シート２０１は、どこにも固定されずに、培養液２２０中に浮遊した状態になる。よって、細胞シート２０１における観察領域を安定させるには、浮遊する細胞シート２０１を収容した培養容器２１０を動かさないことが好ましい。
【００７４】
このような観点から、サンプル２００を載せたステージ１１０を動かすことなく、光学系１４０を含む観察部１００の方を移動させて、細胞シート２０１を観察することが好ましい。また、少なくとも観察中は、ステージ１１０および培養容器２１０に外部から伝播する振動を遮断する振動遮断部を設けることが好ましい。
【００７５】
図９は、他の観察装置１０２の構造を示す模式図である。観察装置１０２は、下記に説明する部分を除くと、図１に示した観察装置１０１と同じ構造を有する。そこで、観察装置１０２において、観察装置１０１と共通の要素には同じ参照番号を付して重複する説明を省く。
【００７６】
図１に示した観察装置１０１は、ステージ１１０に対して光学系１４０が移動する構造を有していた。これに対して、図示の観察装置１０２は、ステージ１１０および光学系１４０がいずれも固定されている。また、観察装置１０２は、分離部３００に換えて搬送部３０１を備える。更に、観察装置１０２を用いた細胞シート２０１の観察においては、培養容器２１０とは別に観察用容器４１０を用いる。
【００７７】
観察装置１０２において、搬送部３０１は、温度調節部３１０、搬送テーブル３３０および搬送具３４０を有する。搬送テーブル３３０は、外部から搬入されたサンプル２００を載せる領域と、後述する観察用容器４１０を載せる領域とを有する。温度調節部３１０は、制御部１６２の制御の下に、搬送テーブル３３０に置かれたサンプル２００および観察用容器４１０を個別に温度調節する。
【００７８】
搬送具３４０は、搬送テーブル３３０において、サンプル２００の培養容器２１０と観察用容器４１０との間で細胞シート２０１を搬送する場合に用いられる。搬送具３４０については、他の図を参照して後述する。培養容器２１０は、観察装置１０１の場合と同じものを用いることができる。
【００７９】
図１０は、サンプル２００を、観察装置１０１を用いて観察する場合の観察手順を示す流れ図である。観察装置１０２により細胞シート２０１を観察する場合は、まず、観察対象となる細胞シート２０１と、それを収容した培養容器２１０を含むサンプル２００を、搬送テーブル３３０に置く（ステップＳ２０１）。次に、温度調節部３１０と搬送具３４０とを用いて、分離段階Ｐ１０１を実行する。
【００８０】
即ち、まず、温度調節部３１０により培養容器２１０の底面に冷風を吹きつけて、培養容器２１０の温度応答性ポリマー層２１６を冷却する（ステップＳ１０２）。これにより、温度応答性ポリマー層２１６の温度を臨界温度よりも低くして、接着されていた細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から剥離できる状態にする。続いて、搬送具３４０を用いて、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層２１６から分離させる（ステップＳ１０３）。
【００８１】
図１１は、搬送具３４０の動作を説明する模式図である。搬送具３４０は、ステム３４２、温度調節部３４４および温度応答性ポリマー層３４６を備える。ステム３４２は、図中上方に延在するので、サンプル２００から離れた位置で搬送具３４０を操作できる。
【００８２】
温度応答性ポリマー層３４６は搬送具３４０の下端面全体に形成され、搬送具３４０を培養容器２１０内に降ろした場合に、細胞シート２０１の上面に全体で接触する。搬送具３４０の温度調節部３４４は、ペルチェ効果素子等の温度調節素子を含み、搬送具３４０の外部からの電気的な制御により、温度応答性ポリマー層３４６の温度を上昇または降下させることができる。
【００８３】
よって、培養容器２１０の温度応答性ポリマー層２１６を冷却して親水性にした状態で、加熱により疎水性になった搬送具３４０の温度応答性ポリマー層３４６を細胞シート２０１に接触させることにより、搬送具３４０に細胞シート２０１を接着できる。更に、図１２に示すように、細胞シート２０１を温度応答性ポリマー層３４６に接着した状態で搬送具３４０を上昇させることにより、細胞シート２０１を培養容器２１０から搬出できる。
【００８４】
次いで、図１３に示すように、搬送具３４０を搬送テーブル３３０の面方向に移動させることにより、培養容器２１０とは異なる観察用容器４１０の上方に細胞シート２０１を移動する。これにより、細胞シート２０１を観察用容器４１０に搬入できる状態になる。
【００８５】
観察用容器４１０は、培養容器２１０に似た構造を有するが、温度応答性ポリマー層４１６の配置が異なる。即ち、観察用容器４１０は、保持枠４１２および透過部４１４を有する。保持枠４１２は、樹脂等の成形し易いにより形成され、短い円筒形の形状を有する。観察用容器４１０において、保持枠４１２は円筒形の側壁を形成し、当該側壁の下端面において搬送テーブル３３０等の上面に接する。保持枠４１２は、下面に開口部４１１を有する。
【００８６】
透過部４１４は、保持枠４１２により保持され、保持枠４１２の開口部４１１を液密に封止して、観察用容器４１０の底面を形成する。これにより、観察用容器４１０は、培養液２２０を漏らすことなく収容できる。また、透過部４１４により形成された観察用容器４１０の底面は光学的に透明になる。
【００８７】
保持枠４１２は、例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリジメチルシロキサン、シリコーンポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート等の高分子材料により形成できる。透過部２１４は、例えば、カバーガラス等の透明な無機材料により形成できる。
【００８８】
観察用容器４１０において、透過部４１４の上面、即ち、観察用容器４１０の内側の底面には、温度応答性ポリマー層４１６が配される。温度応答性ポリマー層４１６は、透過部４１４にグラフトされて、観察用容器４１０に対して固定される。温度応答性ポリマー層４１６は、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド等の高分子材料により形成できる。
【００８９】
図１４は、観察用容器４１０の平面図である。観察用容器４１０の透過部４１４において、温度応答性ポリマー層４１６は、保持枠４１２に沿って周縁の領域に設けられ、透過部４１４の内側の領域には設けられていない。
【００９０】
図１５は、搬送部３０１の動作を説明する図である。搬送具３４０により細胞シート２０１が観察用容器４１０の上方まで搬送されてきた場合、制御部１６２は、温度調節部３１０により観察用容器４１０を加熱して、温度応答性ポリマー層４１６を疎水性にする。続いて、制御部１６２は、搬送具３４０を下降させて、臨界温度以上に加熱した温度応答性ポリマー層４１６に、細胞シート２０１を接着させて観察用容器４１０に固定する。
【００９１】
ここで、図１４を参照して説明した通り、観察用容器４１０においては、温度応答性ポリマー層４１６の一部が省かれて、部分的な接着領域が設けられている。よって、細胞シート２０１は、一部だけが温度応答性ポリマー層４１６に接着されている。温度応答性ポリマー層４１６が省かれた領域では、励起光により温度応答性ポリマー層４１６の温度が上昇すること、および、温度応答性ポリマー層４１６がアブレーションを生じることがないので、細胞シート２０１の厚さ全体に励起光を照射して観察することができる。
【００９２】
再び図１０を参照すると、上記のようにして細胞シート２０１を固定された観察用容器４１０は（ステップＳ２０３）、観察部１００のステージ１１０に移され、観察用容器４１０に収容された細胞シート２０１に対して観察段階Ｐ１０２が開始される。観察段階Ｐ１０２については、図３を参照して既に説明した通りである。
【００９３】
観察用容器４１０において温度応答性ポリマー層４１６が配された領域に関しては、励起光の熱励起圏１４７が温度応答性ポリマー層４１６を励起しない程度に観察が制限される。しかしながら、温度応答性ポリマー層４１６が配された領域は周縁の一部なので、細胞シート２０１の多くの領域について、十分な観察をすることができる。
【００９４】
再び図１０を参照すると、上記のようにして観察段階Ｐ１０２を終えると、観察された細胞シート２０１を収容した観察用容器４１０は、再び搬送テーブル３３０に戻される（ステップＳ２０５）。搬送テーブル３３０においては、まず、制御部１６２は、温度調節部３１０により観察用容器４１０を冷却することにより温度応答性ポリマー層４１６による細胞シート２０１の固定を解除する（ステップＳ２０６）。
【００９５】
次に、制御部１６２は、搬送具３４０を用いて、細胞シート２０１を観察用容器４１０から搬出し（ステップＳ２０７）、更に、搬出した細胞シート２０１を再び培養容器２１０に搬入する（ステップＳ２０８）。ここで搬入する培養容器２１０は、観察装置１０２に当初搬入されたものであってもよいし、他の新しい培養容器２１０を用いてもよい。
【００９６】
培養容器２１０に戻された細胞シート２０１は、搬送テーブル３３０の温度調節部３１０により培養容器２１０の温度応答性ポリマー層２１６を加熱することにより（ステップＳ１１０）、培養容器２１０に固定できる。こうして、ステップＳ１０１において観察装置１０２に搬入されたサンプル２００の状態を回復する回復段階（Ｐ１０３）が完了し、制御部１６２は処理を終了する。
【００９７】
上記のように、搬送部３０１を備えた観察装置１０２を用いた場合は、培養容器２１０と観察用容器４１０との間で細胞シート２０１を搬送する手順が加わる代わりに、観察部１００において、細胞シート２０１を固定した状態で観察することができる。よって、細胞シートにおける観察領域が安定し、観察精度を向上させることができる。
【００９８】
図１６は、他の観察用容器４２０の平面図である。図示の観察用容器４２０は、次に説明する部分を除くと、図１３から図１５に示した観察用容器４１０と同じ構造を有する。そこで、同じ要素には同じ参照番号を付して重複する説明を省く。
【００９９】
観察用容器４２０は、透過部４１４における温度応答性ポリマー層４２６の配置について独特の構造を有する。即ち、観察用容器４２０においては、ドット状の温度応答性ポリマー層４２６が、透過部４１４の前端に分散して配置される。
【０１００】
これにより、温度応答性ポリマー層４２６の温度上昇およびアブレーションに配慮することなく、細胞シート２０１の多くの領域を観察できる。また、細胞シート２０１の周縁部についても、厚さ方向について十分に深く観察することができる。
【０１０１】
図１７は、また他の観察用容器４３０の平面図である。図示の観察用容器４３０は、次に説明する部分を除くと、図１３から図１５に示した観察用容器４１０と同じ構造を有する。同じ要素には同じ参照番号を付して重複する説明を省く。
【０１０２】
観察用容器４３０は、透過部４１４における温度応答性ポリマー層４３６の配置について独特の構造を有する。即ち、観察用容器４３０においては、セクター状の温度応答性ポリマー層４３６が、観察用容器４３０の周方向について等間隔に配される。個々の温度応答性ポリマー層４３６と、その間に現れる透過部４１４は、それぞれ、観察用容器４３０の周方向について１５度毎に交互に配される。
【０１０３】
よって、観察用容器４３０を用いて観察する場合、まず、温度応答性ポリマー層４３６を用いて細胞シート２０１を観察用容器４３０に固定し、温度応答性ポリマー層４３６が存在していない領域について細胞シート２０１を観察する。次に、温度応答性ポリマー層４３６を冷却して細胞シート２０１の固定を解除し、細胞シート２０１を、観察用容器４３０の周方向に１５度回転させた後に再び観察用容器４３０に固定する。これにより、温度応答性ポリマー層４３６に接着されていて最初に観察されなかった領域を、温度上昇およアブレーションの発生を考慮することなく観察できる。
【０１０４】
図１８は、他の搬送部３０２の他の動作を説明する模式図である。図示の搬送部３０２は、２本の搬送具３４１、３４３を備える。搬送具３４１、３４３の各々は、搬送具３４０と同様に、ステム３４２、温度調節部３４４および温度応答性ポリマー層３４６をそれぞれ備える点で、搬送具３４０と共通する。
【０１０５】
ただし、搬送具３４１、３４２は、図中に白抜きの矢印Ａ、Ｂで示すように、紙面に垂直な回転軸の回りにステム３４２を回転させることにより、保持した細胞シート２０１の傾きを変えることができる。これにより、一方の搬送具３４１から他方の搬送具３４３に細胞シート２０１を受け渡すことができる。
【０１０６】
即ち、まず、一方の搬送具３４１により細胞シート２０１を観察用容器４１０から持ち上げた後、ステム３４２を回転させて細胞シート２０１を搬送テーブル３３０に対して垂直にする。次に、他方の搬送具３４３により細胞シート２０１を受け取った後に当該搬送具３４３のステム３４２を回転させて、細胞シート２０１を、再び搬送テーブル３３０と水平にする。この状態で、細胞シート２０１を観察用容器４１０に戻すことにより、観察用容器４１０において、細胞シート２０１を裏返すことができる。
【０１０７】
既に説明した通り、細胞シート２０１内に焦点を結ぶ励起光において、熱励起圏１４７が細胞シート２０１の外まで拡がる場合がある。この拡がった熱励起圏１４７が、細胞シート２０１を接着する温度応答性ポリマー層４１６を熱的に励起することを避けると、温度応答性ポリマー層４１６の直近では細胞シート２０１を観察できなくなる。しかしながら、細胞シート２０１を裏返すことにより、細胞シート２０１において当初は観察できなかった部分を観察できるので、結果的に、細胞シート２０１を隈なく観察することができる。
【０１０８】
なお、細胞シート２０１は、それ自体が生きた細胞により形成されていると共に、人体に対して貼り付けて使用される。よって、細胞シート２０１に接触する培養容器２１０、観察用容器４１０、引き離し具３２０および搬送具３４０は、使用の都度、細胞シート２０１に接触する前に滅菌することが好ましい。また、培養容器２１０から細胞シート２０１を一時的に搬出する場合も、細胞シート２０１を収容していない間に培養容器２１０を滅菌し、培養液２２０を交換することが好ましい。
【０１０９】
本実施例では、被観察物である細胞シートを観察対象とした例を示した。しかしながら、光線形効果を利用したレーザ顕微鏡は、細胞シートに代えて、シート状をなさない細胞、例えば皮膚の断片のような組織、細菌のような微生物等の観察に、本発明を用いることができる。細胞の種類も、人工多機能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）や胚性幹細胞（ＥＳ細胞）等を用いてもよい。
【０１１０】
また、観察対象である細胞シートを培養容器内の培養液に浸漬したサンプル２００を例にあげて説明したが、サンプル２００の形態は、これに限定されない。即ち、観察対象の形態および形状に応じて、スライドガラス等の平坦な支持体を用いたサンプル２００もある。また、培養液無しに容器に収容されたサンプル２００を観察する場合もある。
【０１１１】
上記の例では、引き離し具３２０および搬送具３４０において、温度調節部３２４、３４４および温度応答性ポリマー層３２６、３４６により細胞シート２０１を保持または開放する構造を例示した。しかしながら、引き離し具３２０、搬送具３４０等の構造がこれに限られるわけではなく、ゼラチンゲルによる保持と、ゼラチンゲルの溶解による開放等、細胞シートを保持する他の方法も使用できる。
【０１１２】
以上、実施の形態を用いて本発明を説明したが、本発明の技術的範囲は上記実施の形態に記載の範囲には限定されない。上記実施の形態に、多様な変更または改良を加えることが可能であることが当業者に明らかである。その様な変更または改良を加えた形態も本発明の技術的範囲に含まれ得ることが、特許請求の範囲の記載から明らかである。
【０１１３】
特許請求の範囲、明細書、および図面中において示した装置、システム、プログラム、および方法における動作、手順、ステップ、および段階等の各処理の実行順序は、特段「より前に」、「先立って」等と明示しておらず、また、前の処理の出力を後の処理で用いるのでない限り、任意の順序で実現しうることに留意すべきである。特許請求の範囲、明細書、および図面中の動作フローに関して、便宜上「まず、」、「次に、」等を用いて説明したとしても、この順で実施することが必須であることを意味するものではない。
【符号の説明】
【０１１４】
１００  観察部、１０１、１０２  観察装置、１１０  ステージ、１１４  観察窓、１２０  レーザ装置、１２２、１２４  レーザ光源、１２６  コンバイナ、１３０  走査系、１３２  ガルバノスキャナ、１３４  スキャンレンズ、１３６  一次像面、１４０  光学系、１４２、１４４  対物レンズ、１４３  水、１４６  コンデンサレンズ、１４５  焦点、１４７  熱励起圏、１４８  反射鏡、１５０  検出系、１５２  集光レンズ、１５４  リレーレンズ、１５６  光電子増倍管、１５８  ダイクロイックミラー、１６０  制御系、１６２  制御部、１６４  キーボード、１６６  マウス、１６８  表示部、２００  サンプル、２０１  細胞シート、２１０  培養容器、２１１、４１１  開口部、２１２、４１２  保持枠、２１４、４１４  透過部、２１６、３２６、３４６、４１６、４２６、４３６  温度応答性ポリマー層、２２０  培養液、３００  分離部、３０１、３０２  搬送部、３１０、３２４、３４４  温度調節部、３２０  引き離し具、３２２、３４２  ステム、３３０  搬送テーブル、３４０、３４１、３４３  搬送具、４１０、４２０、４３０  観察用容器
【図１】
2015145941.tif 000003
【図２】
2015145941.tif 000004
【図３】
2015145941.tif 000005
【図４】
2015145941.tif 000006
【図５】
2015145941.tif 000007
【図６】
2015145941.tif 000008
【図７】
2015145941.tif 000009
【図８】
2015145941.tif 000010
【図９】
2015145941.tif 000011
【図１０】
2015145941.tif 000012
【図１１】
2015145941.tif 000013
【図１２】
2015145941.tif 000014
【図１３】
2015145941.tif 000015
【図１４】
2015145941.tif 000016
【図１５】
2015145941.tif 000017
【図１６】
2015145941.tif 000018
【図１７】
2015145941.tif 000019
【図１８】
2015145941.tif 000020