(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳動物の生物学的系に投与されると、その系のエーテル脂質合成能とは、独立に、特異的なｓｎ−２置換エタノールアミンプラスマローゲンの細胞濃度の上昇をもたらし、膜コレステロールレベルを低下させ、アミロイド分泌を低下させることができる、老化による疾患を治療又は予防するために使用することができる化合物を提供。【解決手段】化合物ＰＰＩ−１００９に代表される１−アルキル，２−アシルグリセロール誘導体、および医薬組成物。2015145388.tif 000045【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Ｉの構造による化合物：
【化１】
2015145388.tif 000039
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なり、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、ＣＨ３（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）９−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１−、ＣＨ３（ＣＨ２）２３−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）２（ＣＨ２）６−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）３（ＣＨ２）６−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）４（ＣＨ２）２−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）５（ＣＨ２）２−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１１、及びＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−；からなる群から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖から選択され、
Ｒ３は、式Ｉの構造による前記化合物からリパーゼによって分離可能であり、かつカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸基及び下記に示されている構造の基からなる群から選択され、
【化２】
2015145388.tif 000040
Ｒ４及びＲ５は、独立に、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ６は、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素又は低級アルキルである］。
【請求項２】
Ｒ２がＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウム（ＰＰＩ−１００９）、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１１）及び（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１４）からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
薬学的に許容される担体と、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物とを含む医薬組成物。
【請求項５】
膜コレステロールレベルの増加、アミロイドレベルの増加又はプラスマローゲンレベルの低下が関連している老化による疾患を治療又は予防するための、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
老化による疾患が、神経変性、認識障害、認知症、癌及び血管疾患からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病及び加齢性黄斑変性からなる群から選択されるか、
癌が、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌及び腎臓癌からなる群から選択されるか、
血管疾患が、アテローム動脈硬化症及び高コレステロール血症からなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ＰｌｓＥｔｎ欠乏系又はＰｌｓＥｔｎ充足系においてコントロールレベルを超えるまでＰｌｓＥｔｎレベルを上昇させることにより、プラスマローゲン欠乏により媒介される老化による疾患を治療又は予防するための、又はコレステロール輸送タンパク質の異常な遺伝的発現から生じる障害を治療又は予防するためであって、前記老化による疾患又は前記障害が、神経変性、認識障害、認知症、癌及び血管疾患からなる群から選択される、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Ｉの化合物：
【化３】
2015145388.tif 000041
［式中、
Ｒ３は、式Ｉの構造による前記化合物からリパーゼによって分離可能であり、かつ脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸基及び下記に示されている構造の基からなる群から選択され、
【化４】
2015145388.tif 000042
Ｒ１、Ｒ２及びＲ４〜Ｒ８は、請求項１に定義されている通りである］。
【請求項９】
Ｒ２がＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウム（ＰＰＩ−１００９）、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ））−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１１）及び（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１４）からなる群から選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
コレステロール輸送タンパク質がアポリポタンパク質Ｅである、請求項８〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
アルツハイマー病、パーキンソン病及び加齢性黄斑変性からなる群から選択される神経変性疾患を治療又は予防するための、又はアテローム動脈硬化症及び高コレステロール血症からなる群から選択される血管疾患を治療又は予防するための、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Ｉの化合物：
【化５】
2015145388.tif 000043
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なり、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、ＣＨ３（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）９−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１−、ＣＨ３（ＣＨ２）２３−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）２（ＣＨ２）６−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）３（ＣＨ２）６−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）４（ＣＨ２）２−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）５（ＣＨ２）２−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１１、及びＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−；からなる群から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖から選択され、
Ｒ３は、式Ｉの構造による前記化合物からリパーゼによって分離可能であり、かつ脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸基及び下記に示されている構造の基からなる群から選択され、
【化６】
2015145388.tif 000044
Ｒ４及びＲ５は、独立に、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ６は、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素又は低級アルキルである］。
【請求項１３】
Ｒ２がＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウム（ＰＰＩ−１００９），（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１１）及び（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１４）からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有用な生化学的、生理化学的及び臨床特性を有する新規な化学成分の合成及び有用性に関する。より具体的には、疾患を治療又は予防するために使用することができる一連の１−アルキル，２−アシルグリセロール誘導体を提供する。本発明はまた、そのような化合物が組み込まれている医薬組成物及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌、認知症又は認識機能低下などの多くの多様なヒト疾患は、加齢と共に発生率が上昇することはよく知られている。疫学的及び統計学的な観点では、これらの疾患は、非常に相似して見えることが多い。しかし、臨床的な観点では、癌、認知症及び認識機能低下はそれぞれ、非常に異なっている。現在、これらの障害での最大の危険因子は、対象の年齢である。さらに、大抵の癌、認知症及び認識機能低下は、疾患が存在するが、準臨床的症状発現の状態にある長期の前駆相（５〜１５年）を有することが十分に確立されている。加齢性の膜コレステロールの増加（Calderini G, Bonetti AC, Battistella A, Crews FT, Toffano G (1983) Biochemical changes of rat brain membranes with aging. Neurochem Res. 8:483-92、Hashimoto M, Hossain S, Masumura S (1999) Effect of aging on plasma membrane fluidity of rat aortic endothelial cells. Exp Gerontol. 34:687-98、Kessler AR, Kessler B, Yehuda S (1985) Changes in the cholesterol level, cholesterol-to-phospholipid mole ratio, and membrane lipid microviscosity in rat brain induced by age and a plant oil mixture. Biochem Pharmacol. 34:1120-1）及びミトコンドリア膜コレステロールの増加（Lewin MB, Timiras PS (1984) Lipid changes with aging in cardiac mitochondrial membranes. Mech Ageing Dev. 24:343-51、Modi HR, Katyare SS, Patel MA (2008) Ageing-induced alterations in lipid/phospholipid profiles of rat brain and liver mitochondria: implications for mitochondrial energy-linked functions. J Membr Biol. 221:51-60、Wu CC, Su MJ, Chi JF, Wu MH, Lee YT (1997) Comparison of aging and hypercholesterolemic effects on the sodium inward currents in cardiac myocytes. Life Sci. 61:1539-51）が報告されている。膜コレステロールのこれらの増加は、膜流動度の低下（Hashimoto M, Hossain S, Masumura S (1999) Effect of aging on plasma membrane fluidity of rat aortic endothelial cells. Exp Gerontol. 34:687-98）、イオンチャネル機能の低下（Wu CC, Su MJ, Chi JF, Wu MH, Lee YT (1997) Comparison of aging and hypercholesterolemic effects on the sodium inward currents in cardiac myocytes. Life Sci. 61:1539-51、Guo J, Chi S, Xu H, Jin G, Qi Z (2008) Effects of cholesterol levels on the excitability of rat hippocampal neurons. Mol Membr Biol. 25:216-23、Santiago J, Guzman GR, Rojas LV, Marti R, Asmar-Rovira GA, Santana LF, McNamee M, Lasalde-Dominicci JA (2001) Probing the effects of membrane cholesterol in the Torpedo californica acetylcholine receptor and the novel lipid-exposed mutation alpha C418W in Xenopus oocytes. J Biol Chem. 276:46523-32）、５’−ヌクレオチダーゼ（Hashimoto M, Hossain S, Tanabe Y, Shido O (2005) Effects of aging on the relation of adenyl purine release with plasma membrane fluidity of arterial endothelial cells. Prostoglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 73 :475-83）及びα−セクレターゼ（Xiu J, Nordberg A, Qi X, Guan ZZ (2006) Influence of cholesterol and lovastatin on alpha-form of secreted amyloid precursor protein and expression of alpha7 nicotinic receptor on astrocytes. Neurochem Int. 49:459-65）などの一部の膜結合酵素の活性の低下並びに酸化窒素などのシグナル伝達分子の拡散特性の変化（Miersch S, Espey MG, Chaube R, Akarca A, Tweten R, Ananvoranich S, Mutus B (2008) Plasma membrane cholesterol content affects nitric oxide diffusion dynamics and signaling. J Biol Chem. 283:18513-21）をもたらす。
【０００３】
膜コレステロールの増加を患っている対象は、神経変性疾患（例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症及び加齢性黄斑変性）、認識障害、認知症、癌（例えば前立腺、肺、乳房、卵巣及び腎臓の癌）、骨粗鬆症、双極性障害及び血管疾患（アテローム硬化症、高コレステロール血症）の有病率の上昇を証明している。
【０００４】
具体的な疾患に関しては、コレステロールは、アルツハイマー病患者の脳膜に重症度に依存して蓄積している（Cultler RG, Kelly J, Storie K, Pedersen WA, Tammara A, Hatanpaa K, Troncoso JC, Mattson MP (2004) Involvement of oxidative stress-induced abnormalities in ceramide and cholesterol metabolism in brain aging and Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 101:2070-5、Corrigan FM, Horrobin DF, Skinner ER, Besson JA, Cooper MB (1998) Abnormal content of n-6 and n-3 long-chain unsaturated fatty acids in the phosphoglycerides and cholesterol esters of parahippocampal cortex from Alzheimer's disease patients and its relationship to acetyl CoA content. Int J Biochem Cell Biol. 30:197-207、Distl R, Meske V, Ohm TG (2001) Tangle-bearing neurons contain more free cholesterol than adjacent tangle-free neurons. Acta Neuropathol. 101:547-54）。このことに関連して、膜コレステロールの減少は、β−及びγ−セクレターゼの活性を低減させ、β−アミロイドの病原性プロセッシングをブロックすることが判明している（Grimm MO, Grimm HS, Tomic I, Beyreuther K, Hartmann T, Bergmann C (2008) Independent inhibition of Alzheimer disease beta- and gamma-secretase cleavage by lowered cholesterol levels. J Biol Chem. 283:11302-11、Simons M, Keller P, De Strooper B, Beyreuther K, Dotti CG, Simons K (1998) Cholesterol depletion inhibits the generation of beta-amyloid in hippocampal neurons. Proc Natl Acad Sci U S A. 95:6460-4）。分子レベルでは、コレステロールは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の膜貫通ドメインに結合して、β−及びγ−セクレターゼリッチなコレステロールリッチな膜ドメインへのＡＰＰの輸送を活性化させ、アミロイド−β産生をもたらす（Beel AJ, Mobley CK, Kim HJ, Tian F, Hadziselimovic A, Jap B, Prestegard JH, Sanders CR (2008) Structural studies of the transmembrane C-terminal domain of the amyloid precursor protein (APP): does APP function as a cholesterol sensor? Biochemistry. 47:9428-46）。コレステロールの増加から生じるシナプス膜変化もまた、膜リン脂質を利用してコリン作動性神経伝達を支持する際の重要な因子であり得る（オートカニバリズム（autocannibalism）概念）（Sigle JP, Zander J, Ehret A, Honegger J, Jackisch R, Feuerstein TJ (2003) High potassium-induced activation of choline-acetyltransferase in human neocortex: implications and species differences. Brain Res Bull. 60:255-62）。スタチンの早期利用はまた、アルツハイマー病及びパーキンソン病の発生率を低減させるか、又はそれらの発症を遅延させると示唆されている（Wolozin B, Wang SW, Li NC, Lee A, Lee TA, Kazis LE (2007) Simvastatin is associated with a reduced incidence of dementia and Parkinson's disease. BMC Med. 5:20）。コレステロール蓄積はまた、加齢性黄斑変性と関連して脈絡膜硝子疣でも生じる（Li CM, Clark ME, Rudolf M, Curcio CA (2007) Distribution and composition of esterified and unesterified cholesterol in extra-macular drusen. Exp Eye Res. 85:192-201）。膜コレステロールはまた、癌で増加し（Hager MH, Solomon KR, Freeman MR (2006) The role of cholesterol in prostate cancer. Curr Opin Clin Nutr Metab Care. ;9:379-85）、ミトコンドリア膜コレステロールの増加は、多くの癌細胞が関連しているワールブルク効果をもたらす異常であると仮定されている（Campbell AM, Chan SH (2008) Mitochondrial membrane cholesterol, the voltage dependent anion channel (VDAC), and the Warburg effect. J Bioenerg Biomembr）。ワールブルク効果は、エネルギーに関してほぼ全て呼吸に頼っている正常な細胞とは異なり、癌細胞はエネルギーのために呼吸と解糖作用の両方を利用し得るという癌細胞の定義的特徴である。
【０００５】
コレステロール蓄積の複雑でマイナスの膜作用に加えて、オキシステロール産生の増加もまた存在する（Vejux A, Malvitte L, Lizard G (2008) Side effects of oxysterols: cytotoxicity, oxidation, inflammation, and phospholipidosis. Braz J Med Biol Res. 41:545-56）。これらのオキシステロールは、細胞毒性（アポトーシス及び壊死）、炎症誘発性であり、ＧＳＨを枯渇させ、リン脂質症を誘発する（Vejux A, Malvitte L, Lizard G (2008) Side effects of oxysterols: cytotoxicity, oxidation, inflammation, and phospholipidosis. Braz J Med Biol Res. 41:545-56、Streit WJ, Sparks DL (1997) Activation of microglia in the brains of humans with heart disease and hypercholesterolemic rabbits. J Mol Med. 75:130-8、Diestel A, Aktas O, Hackel D, Hake I, Meier S, Raine CS, Nitsch R, Zipp F, Ullrich O (2003) Activation of microglial poly(ADP-ribose)-polymerase-1 by cholesterol breakdown products during neuroinflammation: a link between demyelination and neuronal damage. J Exp Med. 198:1729-40、Thirumangalakudi L, Prakasam A, Zhang R, Bimonte-Nelson H, Sambamurti K, Kindy MS, Bhat NR (2008) High cholesterol-induced neuroinflammation and amyloid precursor protein processing correlate with loss of working memory in mice. J Neurochem. 106:475-85）。これらの毒性オキシステロールが関与している可能性のある疾患には、神経変性（神経及び脱髄の両方）、骨粗鬆症、加齢性黄斑変性及び心臓血管疾患、特にアテローム硬化症が包含される（Vejux A, Malvitte L, Lizard G (2008) Side effects of oxysterols: cytotoxicity, oxidation, inflammation, and phospholipidosis. Braz J Med Biol Res. 41:545-56）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Calderini G, Bonetti AC, Battistella A, Crews FT, Toffano G (1983) Biochemical changes of rat brain membranes with aging. Neurochem Res. 8:483-92
【非特許文献２】Hashimoto M, Hossain S, Masumura S (1999) Effect of aging on plasma membrane fluidity of rat aortic endothelial cells. Exp Gerontol. 34:687-98
【非特許文献３】Kessler AR, Kessler B, Yehuda S (1985) Changes in the cholesterol level, cholesterol-to-phospholipid mole ratio, and membrane lipid microviscosity in rat brain induced by age and a plant oil mixture. Biochem Pharmacol. 34:1120-1
【非特許文献４】Lewin MB, Timiras PS (1984) Lipid changes with aging in cardiac mitochondrial membranes. Mech Ageing Dev. 24:343-51
【非特許文献５】Modi HR, Katyare SS, Patel MA (2008) Ageing-induced alterations in lipid/phospholipid profiles of rat brain and liver mitochondria: implications for mitochondrial energy-linked functions. J Membr Biol. 221:51-60
【非特許文献６】Wu CC, Su MJ, Chi JF, Wu MH, Lee YT (1997) Comparison of aging and hypercholesterolemic effects on the sodium inward currents in cardiac myocytes. Life Sci. 61:1539-51
【非特許文献７】Guo J, Chi S, Xu H, Jin G, Qi Z (2008) Effects of cholesterol levels on the excitability of rat hippocampal neurons. Mol Membr Biol. 25:216-23
【非特許文献８】Santiago J, Guzman GR, Rojas LV, Marti R, Asmar-Rovira GA, Santana LF, McNamee M, Lasalde-Dominicci JA (2001) Probing the effects of membrane cholesterol in the Torpedo californica acetylcholine receptor and the novel lipid-exposed mutation alpha C418W in Xenopus oocytes. J Biol Chem. 276:46523-32
【非特許文献９】Hashimoto M, Hossain S, Tanabe Y, Shido O (2005) Effects of aging on the relation of adenyl purine release with plasma membrane fluidity of arterial endothelial cells. Prostoglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 73 :475-83
【非特許文献１０】Xiu J, Nordberg A, Qi X, Guan ZZ (2006) Influence of cholesterol and lovastatin on alpha-form of secreted amyloid precursor protein and expression of alpha7 nicotinic receptor on astrocytes. Neurochem Int. 49:459-65
【非特許文献１１】Miersch S, Espey MG, Chaube R, Akarca A, Tweten R, Ananvoranich S, Mutus B (2008) Plasma membrane cholesterol content affects nitric oxide diffusion dynamics and signaling. J Biol Chem. 283:18513-21
【非特許文献１２】Cultler RG, Kelly J, Storie K, Pedersen WA, Tammara A, Hatanpaa K, Troncoso JC, Mattson MP (2004) Involvement of oxidative stress-induced abnormalities in ceramide and cholesterol metabolism in brain aging and Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 101:2070-5
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
コレステロールを低下させるための現在の臨床療法は主に、コレステロール合成をスタチンを用いて阻害するか、又はエゼチミブを用いて胃腸管からのコレステロール吸収をブロックすることからなる。本発明者らの知識では、現在、膜外へのコレステロール輸送をもたらす薬物は存在しない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、異常な膜コレステロールレベルが関連している老化による疾患を治療するための化合物及び方法に関する。記載の化合物には、膜遊離コレステロールレベルを低下させ、細胞膜から輸送するためのコレステロールエステル化を増大させる新規なプラスマローゲン前駆体が包含される。したがってこれらの化合物は、膜コレステロールレベルの上昇を患っている対象において膜コレステロールレベルを低下させるために有用である。化合物はまた、神経変性疾患（これらに限られないがアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症及び加齢性黄斑変性を包含）、認識障害、認知症、癌（これらに限られないが前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌及び腎臓癌を包含）、骨粗鬆症、双極性障害及び血管疾患（これらに限られないがアテローム硬化症及び高コレステロール血症を包含）などの膜コレステロールの増加が関連している疾患を治療又は予防するために使用することができる。さらに、これらの化合物は、アポリポタンパク質Ｅなどのコレステロール輸送タンパク質の異常な遺伝的発現から生じる障害を治療する際に有用である。
【０００９】
これらのプラスマローゲン前駆体は、グリセロール骨格をｓｎ−１でのアルキル又はアルケニル脂質置換及びｓｎ−２でのアシル脂質置換を伴って含有する。極性置換基がｓｎ−３の所に、医薬特性（安定性及び／又は生物学的利用能の改良又は塩としての製剤のためなど）を改良するために設けられている。
【００１０】
理論に拘束されることは望まないが、ある種の実施形態では、ｓｎ−３置換基がリパーゼにより分離され、次いで、生じた１−アルキル，２−アシルグリセロール又は１−アルケニル，２−アシルグリセロールが小胞体で、プラスマローゲンに変換されて、それにより、老化に伴って機能低下を示し得るペルオキシソームコンパートメントをバイパスすると考えられる。
【００１１】
したがって、組成に関して、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルも包含する、式Ｉの化合物を提供する：
【００１２】
【化１】
2015145388.tif 000002
【００１３】
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なってよく、表１又は２から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖であり、
【００１４】
【表１】
2015145388.tif 000003
【００１５】
【表２】
2015145388.tif 000004
【００１６】
Ｒ３は、脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸及び下記の表３に示されている構造の基から選択される基である。
【００１７】
【表３】
2015145388.tif 000005
【００１８】
Ｒ４及びＲ５は、同じか又は異なり、水素又は低級アルキル、例えばメチル又はエチルであってよく、
Ｒ６は、水素又は低級アルキル、例えばメチル又はエチルであり、
Ｒ７及びＲ８は、同じか又は異なり、水素又は低級アルキル、例えばメチル及びエチルであってよい］。
【００１９】
本発明の他の態様は、薬学的に許容される担体と上記の化合物とを含む医薬組成物を対象としている。
【００２０】
本発明の一実施形態では、Ｒ２は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）側鎖又はＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−であってよい。
【００２１】
他の実施形態では、化合物は、２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウムであってよい。
【００２２】
【化２】
2015145388.tif 000006
【００２３】
他の実施形態では、化合物は、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イルドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート：
【００２４】
【化３】
2015145388.tif 000007
【００２５】
又は（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イルドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート：
【００２６】
【化４】
2015145388.tif 000008
【００２７】
であってよい。
本発明はまた、ＰＰＩ−１００９、ＰＰＩ−１０１１、ＰＰＩ−１０１４又はそれらの組み合わせを含む医薬組成物を包含する。
【００２８】
理論に拘束されることは望まないが、本明細書に記載の化合物のある種の実施形態は、プラスマローゲンレベル及びｓｎ−３位からのアセチル−Ｌ−カルニチンの加水分解を増加させると考えられ、（ｉ）その構造、動力学、機能及びターンオーバーの変更をもたらす、ペプチド及びタンパク質中のアミノ酸及びＮ−末端アミノ酸内の−ＮＨ２及び−ＯＨ官能基のアセチル化；及び／又は（ii）より大きな分子の構造、分子動力学及び機能の変化をもたらす、より大きな分子に対する分子シャペロンとしての作用を包含する起こり得る分子的機構に関与し得る。
【００２９】
カルニチンは、脂肪酸のβ酸化において重要であり、アセチル部分は、アセチル−ＣｏＡレベルを維持するために使用され得る。アセチル−Ｌ−カルニチン（ＡＬＣＡＲ）作用には、（ｉ）脳エネルギー及びリン脂質代謝；（iii）神経栄養因子及びホルモンを包含する細胞高分子；（iii）シナプス形態；並びに（iv）複数の神経伝達物質のシナプス伝達のモジュレーションが包含される。
【００３０】
本発明のさらなる態様では、プラスマローゲン欠乏により媒介される老化による疾患を治療又は予防する方法を提供し、この方法は、それを必要とする患者に、有効量の上記の化合物又は組成物を投与することを含む。
【００３１】
本発明のさらなる態様では、膜コレステロールの増加、アミロイドの増加及びプラスマローゲンレベルの低下が関連している老化による疾患を治療する方法を提供し、この方法は、それを必要とする患者に、有効量の上記の化合物又は組成物を投与することを含む。
【００３２】
本発明はまた、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式IIの構造による化合物を調製する方法に関する：
【００３３】
【化５】
2015145388.tif 000009
【００３４】
［式中、Ｒ１及びＲ４〜Ｒ８は、上記の通りであり、Ｒ９は、ブロック基である］。
【００３５】
この方法は、式IIIの化合物を
【００３６】
【化６】
2015145388.tif 000010
【００３７】
適切な溶媒中で、求核性触媒、塩基及びブロック剤と、前記式IIの化合物が生じる条件下で反応させ、場合によって生じた化合物を精製することを伴う。
【００３８】
ある種の非限定的な実施形態では、ブロック剤は、シランブロック剤、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルハロゲン化物であってよく、これは次いで、Ｒ９がｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基であるようにする。
【００３９】
他の非限定的な実施形態では、求核性触媒はＤＭＡＰであってよく、塩基はトリエチルアミンであってよく、溶媒はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びＣＨ２Ｃｌ２を含んでよい。
【００４０】
限定することは望んでいないが、ある種の実施形態では、ブロック剤を加える前に、式IIIの化合物、求核性触媒及び塩基を適切な溶媒中に０〜５℃で包含する溶液を調製し、続いて、ブロック剤を加え、次いで、反応を約１５〜約２５℃、例えば約２０℃の温度で実施することが好ましいことがある。次いで、反応を好ましくは、完了するまで進行させるが、これは２０時間までになり得る。
【００４１】
また、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式IIの構造による中間体化合物を提供する
【００４２】
【化７】
2015145388.tif 000011
【００４３】
［式中、Ｒ１及びＲ４〜Ｒ９は上記の通りである］。
【００４４】
本発明のこれらの形態及び他の形態は、添付の図面を参照する下記の記載によりさらに明瞭になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】本発明の実施形態に従ってＰＰＩ−１００９：２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウムを調製するための一般的な実験手順を示す図である。
【図２】対照ＣＨＯ細胞と比較して、Ｎ−Ｒｅｌ細胞における全ＤＨＡプラスマローゲンレベルの低下が、ＰＰＩ−１００５（Ｒ１＝１６：０；Ｒ２＝ＤＨＡ；Ｒ３＝ＯＨ）により濃度依存的に回復することを示すグラフである。７２時間インキュベーション。＊ｐ＜０／０５ｖｓ．媒体（ｖｅｈ）。
【図３】（Ａ）プラスマローゲンへのＰＰＩ−１００９（１０μＭ）組み込みの時間経過及びＮ−Ｒｅｌ細胞のキミルアルコール又は関連アルケニル−アシル−グリセロール（Ｂ）の細胞レベルでの効果の欠如を示すグラフである（０、６、１２、２４、４８及び７２時間）。細胞プラスマローゲン及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）はＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより定量し、キミルアルコールはＧＣ−ＭＳにより定量した。
【図４】（Ａ）ＰＰＩ−１００５及びＰＰＩ−１００９を用いた場合のＣＨＯ細胞におけるＤＨＡプラスマローゲンの濃度依存性（７２時間）増加を示すグラフである。キミルアルコールはＮ−Ｒｅｌ細胞においてはＤＨＡ−プラスマローゲンを増加させたが、ＣＨＯ細胞には効果はなかった（Ｂ）。細胞プラスマローゲンをＬＣ−ＭＳにより定量し、ＣＨＯ対照又はＮ−Ｒｅｌ対照と比較して表した。
【図５】１６：０（ｓｎ−１アルキル）／ＤＨＡ（ｓｎ−２アシル）グリセロール（ＰＬＭ−０５）と共に４８時間インキュベーションした後のＮ−Ｒｅｌ細胞における膜コレステロールの減少に関する濃度応答を示すグラフである。コレステロールレベルが、ＣＨＯ細胞と比較してＮＲｅｌ細胞では著しく上昇していること（ｐ＜０．０５）及び２０μＭでは（ＰＬＭ−０５）は膜遊離コレステロールを減少させ、膜コレステロールエステルを増加させることに注目されたい（ｐ＜０．０５）。
【図６】ＰＰＩ−１００５（Ａ；１及び５μＭ）及びＰＰＩ−１００９（Ｂ；０．５、１、２、３＆１０μＭ）を用いてのＮ−Ｒｅｌ細胞の関連プラスマローゲン（Ｒ１＝１６：０、Ｒ２＝２２：６、Ｒ３＝ホスホエタノールアミン）への構造特異的及び濃度依存性組み込み（７２時間）を示すグラフである。ｓｎ−２での脂肪酸置換はまた、脱アシル化及び再アシル化を受けて、ｓｎ−２の所に２０：４、１８：３、１８：２及び１８：１を伴う関連プラスマローゲンを形成した。細胞プラスマローゲンをＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより定量し、媒体で処理されたＮ−Ｒｅｌ細胞に対して正規化した。
【図７】膜コレステロールが、対照ＣＨＯ細胞と比較して、突然変異Ｎ−Ｒｅｌ細胞において増加することを示すグラフである。Ｎ−Ｒｅｌ細胞における膜コレステロールは、ｓｎ−２の所の不飽和脂肪酸、特にはＤＨＡと組み合わせてｓｎ−１にパルミチン酸（１６：０）又はステアリン酸（１８：０）を有するプラスマローゲン前駆体と共に４８時間インキュベーション（２０μＭ）した後に減少する（ｐ＜０．０５）。２０μＭで、遊離ＤＨＡは、膜遊離コレステロールレベルを変化させる効果はなかった。ｓｎ−１にアルキル結合を有する類似体の活性と比較して、ジアシル類似体（１６：０＊：ＤＨＡグリセロール）は、不活性であった。ＰＰＩ−１００９（１６：０／ＤＨＡ／ＡＬＣＡＲ）は、遊離コレステロールの最も活発な減少及びエステル化コレステロールの増大をもたらした。Ｖは媒体。
【図８】２０μＭの１６：０（ｓｎ−１アルキル）／ＤＨＡ（ｓｎ−２アシル）グリセロール、１８：０／ＤＨＡグリセロール又は１６：０／１８：３グリセロールと共に４８時間インキュベーションした後のＨＥＫ２９３細胞における膜コレステロールの減少を示すグラフである（ｐ＜０．０４）。２０μＭでは、１６：０／１８：１グリセロール、１６：０／１８：２グリセロール、１６：０／２０：４グリセロール及び遊離ＤＨＡは、膜遊離コレステロールレベルを変化させる効果はなかった。ｓｎ−１にアルキル結合を有する類似体の活性と比較して、ジアシル類似体（１６：０＊：ＤＨＡグリセロール）は不活性であった。
【図９】１６：０（ｓｎ−１アルキル）／ＤＨＡ（ｓｎ−２アシル）／アセチル−Ｌ−カルニチン（ｓｎ−３アシル）グリセロール（ＰＰＩ−１００９）と共に４８時間インキュベーションした後のＨＥＫ２９３細胞における膜コレステロールの減少に関する濃度応答を示すグラフである。
【図１０】ＰＰＩ−１００５（５ａ、２０μＭ）が、ＨＥＫ２９３細胞による基礎及びコレステロール（２５．８μＭ）刺激Ａβ４２分泌を減少させることを示すグラフである（Ａ）。ＰＰＩ−１００９（ＰＬＭ０９、１０μＭ）も同様に作用した（Ｂ）。
【図１１】ウサギ血漿中のプラスマローゲンに対するＰＰＩ−１０１１の効果を示すグラフである。ＰＰＩ−１０１１は、ゼラチンカプセルで２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した１、３、６及び１２時間後に血漿エタノールアミンプラスマローゲン（ＰｌｓＥｔｎ）及びホスファチジルエタノールアミン（ＰｔｄＥｔｎ）に組み込まれた。デアシラーゼを介してのｓｎ−２からのＤＨＡ（遊離２２：６）の放出も監視した。群は、３〜５匹のウサギからなった。
【図１２】プラスマロゲン（pasmalogen）前駆体ＰＰＩ−１０１１の循環Ｐｌｓ１６：０／２２：６、ＤＨＡ、Ｐｌｓ１８：０／２２：６、Ｐｌｓ１８：１／２２：６及びＰｔｄ １６：０／２２：６への組み込みの時間経過を示すプロットである。ＰＰＩ−１０１１の血漿エタノールアミンプラスマローゲン（Ｐｌｓ）及びホスファチジルエタノールアミン（Ｐｔｄ）への組み込みを、ゼラチンカプセルで２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した１、３、６、１２、１８、２４及び４８時間後に測定した。デアシラーゼを介してのｓｎ−２からのＤＨＡの放出もまた、監視した。群は３〜５匹のウサギからなったが、但し、２つの別の実験からの７匹のウサギを包含する１２時間時点は除く。
【図１３】ＰＰＩ−１０１１の血漿プラスマローゲン及びホスファチジルエタノールアミンへの用量依存性組み込みを示すグラフである。ＰＰＩ−１０１１の血漿エタノールアミンプラスマローゲン（Ｐｌｓ）及びホスファチジルエタノールアミン（Ｐｔｄ）への組み込みを、ゼラチンカプセルで１０、７５、２００、５００及び１０００ｍｇ／ｋｇを経口投与した６時間後に測定した。デアシラーゼを介してのｓｎ−２からのＤＨＡの放出もまた監視した。群は、３〜５匹のウサギからなった。
【図１４】ウサギ腎臓におけるＰＰＩ−１０１１による組織プラスマローゲン及びＤＨＡの増大を示すグラフである。腎臓エタノールアミンプラスマローゲン（ＰｌｓＥｔｎ）及びホスファチジルエタノールアミン（ＰｔｄＥｔｎ）へのＰＰＩ−１０１１の組み込みを、ゼラチンカプセルで２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した１、３、６及び１２時間後に測定した。デアシラーゼを介してのｓｎ−２からのＤＨＡ（遊離２２：６）放出もまた、監視した。群は、３〜５匹のウサギからなった。
【図１５】ウサギ腎臓におけるＰＰＩ−１０１１による組織プラスマローゲン及びＤＨＡ増大の時間経過を示すグラフである。腎臓エタノールアミンプラスマローゲン（１６：０／２２：６）へのＰＰＩ−１０１１の組み込みを、ゼラチンカプセルで２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した１、３、６、１２、１８、２４及び４８時間後に測定した。群は３〜５匹のウサギからなった。
【図１６】ウサギ肝臓におけるＰＰＩ−１０１１による組織プラスマローゲン及びＤＨＡ増大の時間経過を示すグラフである。肝臓エタノールアミンプラスマローゲン（１６：０／２２：６）へのＰＰＩ−１０１１の組み込みを、ゼラチンカプセルで２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した１２、１８、２４及び４８時間後に測定した。群は、３〜５匹のウサギからなった。
【図１７】７２時間後のＮ−Ｒｅｌエタノールアミンプラスマローゲン（ＰｌｓＥｔｎ）及びホスファチジルエタノールアミン（ＰｔｄＥｔｎ）へのＰＰＩ−１０１４の構造特異的及び濃度依存性組み込みを示すグラフである（５、１０及び２０μＭ）。細胞プラスマローゲンをＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより定量し、媒体で処理されたＮ−Ｒｅｌ細胞に対して正規化した。群は、３つの１０ｃｍ２プレートからなった。
【図１８】（Ａ）コレステロール負荷ＨＥＫ２９３細胞中の膜在住タンパク質に対するＰＰＩ−１００５濃度上昇の効果、（Ｂ）野生型ＨＥＫ２９３細胞中の膜在住タンパク質に対するＰＰＩ−１００５の効果及び（Ｃ）膜在住タンパク質ＡＤＡＭ１０及びＳＯＡＴ１に対するプラバスタチンの効果を示すグラフである。β−アクチンを負荷対照として使用した。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本明細書では、そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Iの構造による化合物を記載する：
【００４７】
【化８】
2015145388.tif 000012
【００４８】
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なり、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、ＣＨ３（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）９−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１−、ＣＨ３（ＣＨ２）２３−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）２（ＣＨ２）６−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）３（ＣＨ２）６−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）４（ＣＨ２）２−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）５（ＣＨ２）２−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１１、及びＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−；からなる群から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖から選択され、
Ｒ３は、脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸及び下記に示されている構造の基から選択される基であり：
【００４９】
【化９】
2015145388.tif 000013
【００５０】
Ｒ４及びＲ５は、独立に、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ６は、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素又は低級アルキルである］。
【００５１】
このような化合物は、膜コレステロールの増加、アミロイドの増加又はプラスマローゲンレベルの低下が関連している老化による疾患を治療又は予防するために有用である。
【００５２】
このような化合物はまた、プラスマローゲン欠乏により媒介される老化による疾患を治療又は予防するためにも有用である。
【００５３】
このような化合物はまた、神経変性疾患（これらに限られないが、アルツハイマー病、パーキンソン病及び加齢性黄斑変性を包含）、認識障害、認知症、癌（これらに限られないが、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌及び腎臓癌を包含）、骨粗鬆症、双極性障害及び血管疾患（これらに限られないが、アテローム硬化症及び高コレステロール血症を包含）を治療するために使用することもできる。
【００５４】
本発明の目的では、式Iの化合物のグリセロール骨格のｓｎ−１、ｓｎ−２及びｓｎ−３位にあるヒドロキシ基は、慣用のプラスマローゲン命名法を使用して命名されている、即ち、カルボニル基−Ｃ＝Ｏ（アセチル）、−Ｃ（エーテル結合を形成）及び−Ｐ（ホスホリル）に結合しているグリセロールの酸素原子が、式Iにおいて示されている。
【００５５】
ある種の非限定的な実施形態では、本明細書に記載されている化合物は、１つ又は２つ以上のキラル中心を含有することがある。典型的には、このような化合物は、ラセミ混合物として調製されるはずである。しかし所望の場合には、このような化合物は、純粋な立体異性体、即ち、個々の鏡像異性体若しくはジアステレオ異性体として、又は立体異性体濃縮混合物として調製又は単離することができる。このような式Iの化合物の立体異性体（及び濃縮混合物）は全て、本発明の範囲内に包含される。純粋な立体異性体（又は濃縮混合物）は、例えば、当技術分野でよく知られている光学的に活性な出発物質又は立体選択的試薬を使用して調製することができる。別法では、このような化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割剤などを使用して分離することができる。
【００５６】
定義：
本発明のアルキル／アシル脂肪酸（表１、表２）及び生物学的に活性な化合物（表３）、医薬組成物及び方法を記載する場合、下記の用語は、別段に規定されていない限り、下記の意味を有する。
【００５７】
「脂肪酸」は、動物性又は植物性脂肪、オイル又はワックスに由来するか、又はそれらの中にエステル化された形態で含有される脂肪族モノカルボン酸である。天然脂肪酸は通常、飽和又は不飽和であってよい４〜２８個の炭素からなる鎖（通常、非分岐状で偶数鎖）を有する。これらは、環式脂肪族カルボン酸として知られている。
【００５８】
飽和脂肪酸の意味では、「飽和」という用語は、可能な限り多くの水素を含有する炭素を指す（当初カルボン酸［−ＣＯＯＨ］基は別にして）。言い換えると、オメガ（ω）末端は、３個の水素原子（ＣＨ３−）を含有し、鎖内の炭素は、２個の水素原子を含有する。
【００５９】
不飽和脂肪酸（これらに限られないが、表２に記載されている例を包含）は、飽和脂肪酸と同様の形態であるが、但し、１又は２個以上のアルケニル官能基が、鎖に沿って存在し、その際、各アルケンが、鎖の単結合−ＣＨ２−ＣＨ２−部分を二重結合−ＣＨ＝ＣＨ−部分に代えている（即ち、炭素が他の炭素に二重結合している）。これらは、ＣＩＳ／ＴＲＡＮＳ及びＣ：Ｄと称され、ここで、Ｃは炭素原子の数として知られており、Ｄは二重結合として知られている。
【００６０】
「非置換及び置換アミノ酸」は、アミノ基、カルボン酸基及び可変性の側鎖を含有する置換されていてもよいアミノ酸部分を指し、この側鎖には、一般的なアミノ酸側鎖、即ち、タンパク質の形成で使用されるもの又は当技術分野で知られている他のものが包含され得る。タンパク質を形成するアミノ酸部分が特に好ましく、これらには、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンアミノ酸基が包含される。アミノ酸部分での置換もまた、可能であり、これらに限られないが、低級アルキル、アセテート、ホスフェート、脂質及び炭水化物を包含する官能基での置換が包含される。
【００６１】
「低級アルキル」という用語は、１〜７個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ７）及びある種の非限定的な実施形態では１〜４個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ４）からなる環式、分岐又は直鎖一価アルキルラジカルを指す。この用語はさらに、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル（又は２−メチルプロピル）、シクロプロピルメチル、ｉ−アミル、ｎ−アミル、ヘキシル及びヘプチルなどのラジカルにより例示される。低級アルキル基はまた、非置換又は置換であってよく、ここで、置換アルキルの具体的な例は、１，１−ジメチルヘプチルである。
【００６２】
「ヒドロキシル」は、−ＯＨを指す。
【００６３】
「薬学的に許容される塩」は、その生物学的特性を保持しており、生物学的に、又はその他の観点から望ましくないものではない本発明の化合物の任意の塩を指す。このような塩は、当技術分野でよく知られている様々な有機及び無機カウンターイオンに由来してもよく、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどを包含し、分子が塩基性官能基を含有する場合には、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの有機又は無機酸の塩を包含する。「薬学的に許容されるカチオン」という用語は、酸性官能基の薬学的に許容されるカチオンカウンターイオンを指す。このようなカチオンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムカチオンなどにより例示される。
【００６４】
「薬学的に許容されるエステル」は、カルボキシル基を有する慣用的にエステル化された式Iの化合物を指し、このエステルは、式Iの化合物の生物学的有効性及び特性を保持しており、インビボで（生体内で）分離されて、対応する活性なカルボン酸になる。エステル及び医薬化合物を送達するためのエステルの使用に関する情報は、Design of Prodrugs. Bundgaard H ed. (Elsevier 1985)で得ることができる。また、H. Ansel et. al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)、pp. 108-109; Krogsgaard-Larsen, et. al. Textbook of Drug Design and Development (2d Ed. 1996)、pp. 152-191も参照されたい。
【００６５】
「薬剤」又は「薬物」は、対象に正しく投与されると、所望の治療的又は予防的効果を誘発し得る化学化合物又は組成物を指す。
【００６６】
「有効量」という用語は、例えば研究者又は臨床家により求められている組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を惹起するはずの薬物又は薬剤の量を意味する。さらに、「治療的有効量」という用語は、そのような量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害若しくは副作用の改善された治療、治癒、予防若しくは改善又は疾患又は障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、正常な生理学的機能を増強するのに有効な量もその範囲内に包含する。
【００６７】
全ての化学化合物は、（＋）及び（−）立体異性体の両方、さらに、（＋）又は（−）立体異性体を包含する。
【００６８】
本明細書中の他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1985)及びThe Condensed Chemical Dictionary (1981)により例示されるような当技術分野で慣用の用法に従って使用されている。
【００６９】
ｓｎ−１及びｓｎ−２には脂肪酸での置換及びｓｎ−３には脂肪酸での置換を伴うグリセロール骨格に由来するプラスマローゲン前駆体又は内生代謝中間体化合物を包含する本明細書に記載されている化合物は、容易に利用可能な出発物質から、図１に示されている下記の一般的な方法及び手順を使用して調製することができる。典型的又は好ましい方法条件（即ち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が示されている場合、他の方法条件もまた、別段に述べられていない限り使用することができることは理解されるであろう。最適な反応条件は、使用される特定の反応物又は溶媒によって変動することがあるが、そのような条件は、当業者であれば日常的な最適化手順により決定することができる。
【００７０】
加えて、当業者には明らかであろう通り、ある種の官能基を望ましくない反応を受けることから保護するために、慣用の保護基が必要なことがある。特定の官能基に適した保護基、さらに保護及び脱保護に適した条件の選択は、当技術分野ではよく知られている。例えば、多数の保護基並びにその導入及び除去が、T. W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second Edition, Wiley, New York, 1991及びそこで挙げられている参考文献に記載されている。
【００７１】
ｓｎ−１及びｓｎ−２には脂肪酸での及びｓｎ−３には脂肪酸でのグリセロール置換を包含する本明細書に記載の化合物又は本明細書に記載の内生代謝中間体化合物の好ましい合成方法では、グリセロール骨格のヒドロキシル基を適切な保護基で保護／脱保護し、続いて、化合物をＯ−アルキル化及びＯ−アシル化することにより調製する；例えば、ＰＰＩ−１００９、ＰＰＩ−１０１１及びＰＰＩ−１０１４。
【００７２】
薬剤として使用する場合、本明細書に記載されている化合物を典型的には、医薬組成物の形態で投与する。このような組成物は、医薬分野でよく知られている手順を使用して調製することができ、少なくとも１種の活性な化合物を含む。
【００７３】
一般に、本発明の化合物を、医薬的に有効な量で投与する。実際に投与される化合物の量は典型的には、医師が、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重症度などを包含する関連する状況を考慮して決定するはずである。
【００７４】
本明細書に記載の化合物及び組成物は、対象、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに、例としては、経口、局所、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、鼻腔内などを包含する任意の適切な経路により疾患を治療及び／又は予防するために投与することができる。所定の送達経路に応じて、本発明の化合物を好ましくは、経口、局所又は注射可能な組成物として製剤化する。
【００７５】
経口投与用の医薬組成物は、原液溶液若しくは懸濁液又は原散剤の形を取ることができる。しかしより一般的には、このような組成物は、正確な投与を容易にする単位剤形で提供される。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位用量として適している物理的に別個の単位を指し、ここで、各単位は、所望の治療効果をもたらすように算出された予め決定された量の活性物質を適切な医薬添加剤と共に含有する。典型的な単位剤形には、液体組成物が予め充填され、予め測定されたアンプル若しくはシリンジ又は固体組成物の場合には丸剤、錠剤、カプセル剤などが包含される。
【００７６】
経口投与に適した液体形態には、適切な水性又は非水性媒体が緩衝剤、懸濁化剤及び分配剤、着色剤、香味剤などと共に包含されていてもよい。固体形態には、例えば、任意の下記の成分又は同様の性質の化合物が包含されていてもよい：微結晶性セルロース、ゴムトラガント又はゼラチンなどの結合剤；デンプン又はラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Primogel又はコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動化促進剤；スクロース又はサッカリンなどの甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料などの香味剤。
【００７７】
局所組成物を典型的には、有効成分（複数可）を一般に約０．０１〜約２０重量％、好ましくは約０．１〜約１０重量％、より好ましくは約０．５〜約１５重量％の範囲の量で含有する局所軟膏剤又はクリーム剤として製剤化する。軟膏剤として製剤化する場合、有効成分を典型的には、パラフィン系又は水混和性軟膏基剤と組み合わせる。別法では、有効成分を、例えば、水中油型クリーム基剤を用いてクリーム剤に製剤化してもよい。このような局所製剤は、当技術分野でよく知られており、一般には、有効成分又は製剤の皮膚浸透又は安定性を増大させる追加的な成分を包含する。このような知られている局所製剤及び成分は全て、本発明の範囲内に包含される。
【００７８】
本発明の化合物はまた、経皮デバイスにより投与することもできる。したがって、局所投与を、レザバー若しくは多孔性膜タイプのパッチ又は様々な固体マトリックス型のパッチを使用して達成することができる。
【００７９】
注射可能な組成物は典型的には、当技術分野で知られている注射可能な無菌食塩水若しくはリン酸緩衝食塩水又は他の注射可能な担体をベースとしている。前記の通り、このような組成物中のアルキルニトロン化合物は典型的には、少量成分であり、約０．０５〜１０重量％であることが多く、残りは、注射可能な担体などである。
【００８０】
経口及び局所投与可能又は注射可能な組成物での上記成分は、代表に過ぎない。他の物質、さらには加工技術などが、参照により本明細書に援用されるPart 8 of Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, 1990, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 18042に記載されている。
【００８１】
本発明の化合物はまた、徐放形態で、又は徐放薬物送達系から投与することもできる。代表的な徐放物質の記載は、Remington's Pharmaceutical Sciencesの組み込み物質に見出すことができる。
【００８２】
本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、液剤、注射製剤又は軟膏剤に製剤化することができる。しかし、本発明は、下記の医薬組成物に限られない。例えば、何ら制限することは依然として望んでいないが、式Ｉの化合物を緩衝無菌食塩水の注射可能な水性媒質に約５ｍｇ／ｍＬの適切な濃度まで溶かすことができる。
【００８３】
本発明はまた、医薬的に活性な薬剤を動物に投与することを簡単にし得るキットを包含する。本発明の典型的なキットは、本発明による医薬組成物の単位剤形を含む。一実施形態では、単位剤形は、有利には無菌であることができ、本発明の医薬組成物を含有するコンテナ（バイアル、パウチ、チューブ、シリンジなど）である。キットはさらに、状態を治療又は予防するための医薬的に活性な薬剤の使用を指示するラベル又は印刷された指示書を含むことができる。他の実施形態では、キットは、本発明の医薬組成物の単位剤形及び医薬組成物を投与するためのドロッパー、シリンジ又は他のアプリケーターを含む。典型的には、キットの構成要素、例えば、単位剤形及び指示書は、適切なパッケージング材料内に含まれる。
【００８４】
本明細書において、ｓｎ−２にドコサヘキサエン酸（２２：６）置換を伴う生物学的に利用可能なプラスマローゲン前駆体が、膜コレステロールレベルを低下させたことが判明している。対照的に、ｓｎ−２の所のステアリン酸（１８：０）、オレイン酸（１８：１）、リノール酸（linoeic acid）（１８：２）、アラキドン酸（２０：４）又はリノレン酸（１８：３）は、活性がかなり劣り、遊離ＤＨＡは、不活性であった。ｓｎ−１での脂肪酸置換は、アルケニル結合のための絶対要件であることが証明されており、この際、アシル結合は、コレステロール低下活性を完全に消した。アルケニル結合は、小胞体でアルキル前駆体（例えばＰＰＩ−１００９）から生じさせることができる。しかし、合成アルケニル形態もまた、有望な治療分子であり得るであろう。これらの標的とされているプラスマローゲン前駆体の医薬特性をまた、ｓｎ−３に極性置換基を加えることで改良することができる。この置換は、ｉ）ｓｎ−３への遊走からのｓｎ−２置換の安定化（Shin J, Thompson DH (2003) Direct synthesis of plasmenylcholine from allyl-substituted glycerols. J Org Chem. 68:6760-6、Gupta CM, Radhakrishnan R, Khorana HG (1977) Glycerophospholipid synthesis: improved general method and new analogs containing photoactivable groups. Proc Natl Acad Sci U S A. 74:4315-9）、ii）製剤及び薬物の溶解及び吸収を改良するために薬学的に許容される塩を生成し得ること、及びiii）前駆体が対応する内生プラスマローゲンへと変換され得るように、ｓｎ−３置換基がリパーゼにより容易に除去され得ること（Watt MJ, Steinberg GR (2008) Regulation and function of triacylglycerol lipases in cellular metabolism. Biochem J. 414:313-25）を包含する改良された医薬特性をもたらす。
【００８５】
したがって、本発明の化合物を哺乳動物の生物学的系に投与すると、その系のエーテル脂質合成能とは独立した特異的なｓｎ−２置換エタノールアミンプラスマローゲンの細胞濃度の上昇が生じる。これらの特異的なｓｎ−２置換種のレベルの上昇は、膜コレステロールレベルを低下させ、アミロイド分泌を低下させるので、したがって、これらの化合物を膜コレステロールの増加、アミロイドの増加及びプラスマローゲンレベルの低下が関連している老化による疾患を治療又は予防するために有用なものとしている。
【００８６】
理論に拘束されることは望んでいないが、本明細書に記載の化合物は、ペルオキシソームエーテル脂質生合成経路をバイパスすることができ、プラスマローゲン欠乏対象におけるプラスマローゲンレベルの回復と、さらに、医薬的に有効にコレステロールを減少させるレベルの特異的にコレステロールを減少させるプラスマローゲンの送達との両方を可能にすると考えられる。したがって、これらの分子は、プラスマローゲンレベルの低下、膜コレステロールレベルの上昇又はアミロイドレベルの上昇が関連している疾患を治療又は予防するために使用することができる。これらの因子は、神経変性（限定ではないが、アルツハイマー病、パーキンソン病及び加齢性黄斑変性を包含）、認識障害、認知症、癌（限定ではないが、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌及び腎臓癌を包含）、骨粗鬆症、双極性障害及び血管疾患（これらに限られないが、アテローム硬化症及び高コレステロール血症を包含）などの幅広い様々なヒト疾患において珍しくないと考えられる。したがって、本発明は、前記のプラスマローゲン前駆体を使用してこれらの疾患を治療することに関する。さらに、これらの誘導体は、アポリポタンパク質Ｅなどのコレステロール輸送タンパク質の異常な遺伝的発現から生じる障害を治療する際に有用性を有する。
【００８７】
また本明細書では、１−アルキル−２−アルキルグリセロールの投与は、ＰｌｓＥｔｎ正常系及びＰｌｓＥｔｎ欠乏系の両方において、ＰｌｓＥｔｎレベルの立体選択的上昇をもたらすことが判明している。また、これらのデータは初めて、１−アルキル，２−アシルグリセロールが、膜コレステロールレベル及びアミロイドレベルを低下させること及びこれらの効果は、ｓｎ−２位での特異的な脂肪酸置換を必要とすることを証明している。
【００８８】
また、本発明者らは本明細書において、
１）ｓｎ−１でのエーテル結合は安定であり、デサチュラーゼ（小胞体）によりさらに処理されて、プラスマローゲンに特徴的なｓｎ−１に必須のアルケニル結合を生ずるが、この脱飽和は、ＣＤＰ−エタノールアミントランスフェラーゼ（小胞体）によりホスホエタノールアミンが加えられた後に生じること、
２）ｓｎ−３での荷電置換は、ｓｎ−２での脂肪酸置換をｓｎ−３への移動から安定化させること（Shin J, Thompson DH (2003) Direct synthesis of plasmenylcholine from allyl-substituted glycerols. J Org Chem. 68:6760-6、Gupta CM, Radhakrishnan R, Khorana HG (1977) Glycerophospholipid synthesis: improved general method and new analogs containing photoactivable groups. Proc Natl Acad Sci U S A. 74:4315-9）、
３）ｓｎ−３での荷電置換は、細胞リパーゼにより容易に分離されて、ＣＤＰ−エタノールアミントランスフェラーゼ（小胞体）によりホスホエタノールアミンを加えるための遊離ヒドロキシル基をもたらすこと、
４）ｓｎ−２の脂肪酸置換基は、細胞中の他の脂肪酸により脱アシル化及び再アシル化を受け得ること、
５）ｓｎ−２でのＤＨＡ置換は、膜コレステロールを低下させるためには最適であること、及び
６）ｓｎ−３での荷電置換は、示されている新規なプラスマローゲン前駆体の医薬特性（安定性、生物学的利用能及び塩としての形成）を改良すること
を証明している。
【００８９】
本発明の化合物は、プラスマローゲン生合成能が損なわれている細胞及びプラスマローゲン生合成能が損なわれていない細胞においてＰｌｓＥｔｎ種へと有効に変換される。これらの結果は、他のプラスマローゲン前駆体に関する先行技術とはまったく対照的である。１−アルキル，２−ヒドロキシグリセロール（キミル、バチル、サラキル（salachyl）アルコール）は、ＰｌｓＥｔｎ欠乏系においてＰｌｓＥｔｎレベルをコントロールレベルまでは上昇させることが判明しているが、ＰｌｓＥｔｎ欠乏系又はＰｌｓＥｔｎ充足系においてはコントロールレベルを超えるまでではない。したがって、本発明の化合物は、プラスマローゲン欠乏により媒介される老化による疾患を予防する際に有用であり得るが、ＰｌｓＥｔｎレベルを、ＰｌｓＥｔｎ欠乏系又はＰｌｓＥｔｎ充足系においてコントロールレベルを超えるまで上昇させる。
【００９０】
上記で検討した通り、本明細書に記載の化合物は、様々な薬物送達系で使用するために適している。しかし、限定することは望まないが、化合物は特に、カプセル剤又は錠剤で経口送達するために有用である。このような実施形態では、最大全用量は、４０〜８０ｋｇのヒト患者で２ｇ／日を超えることは予測されていない。
【００９１】
下記の実施例では、下記の略語は、下記の意味を有する。下記で定義されていない略語は、その一般に認められている意味を有する。
ｂｄ＝ブロードの二重項
ｂｓ＝ブロードの一重項
ｄ＝二重項
ｄｄ＝二重項の二重項
ｄｅｃ＝分解
ｄＨ２Ｏ＝蒸留水
ＥＬＩＳＡ＝酵素結合免疫吸着検定法
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エタノール
ｇ＝グラム
ｈ＝時間
Ｈｚ＝ヘルツ
ｉｐ＝腹腔内
Ｌ＝リットル
ｍ＝多重項
ｍｉｎ＝分
Ｍ＝モル
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｇ＝ミリグラム
ＭＨｚ＝メガヘルツ
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍ．ｐ．＝融点
Ｎ＝正常
ｐｏ＝経口
ｑ＝四重項
ｑｕｉｎｔ．＝五重項
ｓ＝一重項
ｔ＝三重項
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ｔｌｃ＝薄層クロマトグラフィー
μｇ＝マイクログラム
μＬ＝マイクロリットル
ＵＶ＝紫外線。
【００９２】
下記の実施例では、温度は全て、別段に示されていない限り、摂氏温度である。
【００９３】
下記の合成及び生物学的実施例は、本発明を説明するために示されており、本発明の範囲を制限するものとは決して解釈されるべきではない。
［実施例］
【実施例１】
【００９４】
化学合成
ＰＰＩ−１００９：２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウムを、下記の一般的な実験手順に従って調製した。
【００９５】
ステップ−１
０℃で、未標識のＰＰＩ−１００１（５０ｇ、１５８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、イミダゾール（２１．５ｇ、３１６ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合物を１０分間撹拌した。ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（２６．２ｇ、１７４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液を滴加し、生じた溶液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で抽出した。有機層を氷水（２×１００ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、粗製化合物４を得、これを、カラムクロマトグラフィー（中性アルミナ、ＥｔＯＡｃ−石油エーテル（０．５：９．５）により精製して、化合物３（４５ｇ、６６％）を得た。Ｒｆ＝０．６５（ＥｔＯＡｃ−石油エーテル（１−９））。
【００９６】
ステップ−２
０℃で、化合物３（７５ｇ、１７４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７５０ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（オイル中６０％の分散液、５ｇ、２０９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、３０分間撹拌し、臭化ベンジル（４４．８ｇ、２６２ｍｍｏｌ）を１時間にわたって滴加し、徐々に室温にし、ｔｌｃ分析により証明される通り化合物３が完全に消費されるまで、一晩撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、メタノール（５ｍＬ）、氷冷水（５０ｍＬ）を加え、Ｅｔ２Ｏ（２×２５０ｍＬ）で抽出し、有機層を水（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、粗製化合物４（９０ｇ）を黄色のオイル（Ｒｆ＝０．７；ＥｔＯＡｃ−石油エーテル［５−９５］）として得、これをそのまま、さらに精製することなく、次のステップで使用した。
【００９７】
ステップ−３
−１５℃で、化合物４（１．７ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（１．７ｇ、６．５３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を加え、反応混合物を室温に徐々に加温し、ｔｌｃ分析により証明される通り化合物４が完全に消費されるまで一晩撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、粗製化合物６を得、これを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル、ＥｔＯＡｃ−石油エーテル（３：７）により精製して、化合物５（８５０ｍｇ、６５％）を明黄色のオイルとして得た。Ｒｆ＝０．５４（ＥｔＯＡｃ−石油エーテル（３：７）。
【００９８】
ステップ−４
０℃で、化合物７（８ｇ、３９ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）−ＤＭＦ（３滴）溶液に、塩化オキサリル（４．２ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合物を室温に徐々に加温し、５時間撹拌した。過剰の塩化オキサリルを蒸発させ、残渣をトルエンに溶かし、溶媒を蒸発させて、化合物６を得た。化合物６の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）溶液を、化合物５（１１ｇ、２０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液に滴加し、ｔｌｃ分析により証明される通り化合物５が完全に消費されるまで、生じた溶液をアルゴンガスでパージした。反応混合物を濃縮して、粗製化合物８（１４ｇ）を得、これをそのまま、さらに精製することなく次のステップで使用した。Ｒｆ＝０．４５（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３（１：４））。
【００９９】
ステップ−５
ＴＬＣ分析により示される通り化合物８が完全に消費されるまで、化合物８（粗製１４ｇ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ上、４０ｐｓｉで、水素化した。反応混合物を濾過し、蒸発させて、粗製化合物９を得、これを、カラムクロマトグラフィーにより、中性アルミナ上で精製して、化合物９（６ｇ、６ｇ、２ステップで６１％）を明茶色のオイルとして得た Ｒｆ＝０．２５（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３（２：３））。
【０１００】
ステップ−６
０℃で、化合物９（８．２ｍｇ、１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に、触媒量のＤＭＡＰ（１．９ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ピリジン（７．６ｍＬ、９０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。この溶液に、ＤＨＡ−Ｃｌ（塩化オキサリル（２．５ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液を０℃でＤＨＡ酸（７．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）に加え、過剰の塩化オキサリルを蒸発させて、ＤＨＡ−Ｃｌを得ることにより調製）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液を反応混合物に０℃で滴加し、０．５時間撹拌した。反応混合物を室温に徐々に加温し、２４時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、粗製物を得、これを、カラムクロマトグラフィー（中性アルミナ ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３（５：９５））により精製して、ＰＰＩ−１００９（１．２ｇ、約１０％、ＨＰＬＣ純度９７％、不純物１．７ｇを伴う）を明茶色の半固体 Ｒｆ＝０．４５（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３（１５：８５））として得た。
【実施例２】
【０１０１】
生物学的試験
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、Ｎ−Ｒｅｌ（Nagan N, Hajra AK, Larkins LK, Lazarow P, Purdue PE, Rizzo WB, Zoeller RA. (1998) Isolation of a Chinese hamster fibroblast variant defective in dihydroxyacetonephosphate acyltransferase activity and plasmalogen biosynthesis: use of a novel two-step selection protocol. Biochem J. 332:273-9）（ペルオキシソーム酵素ジヒドロキシアセトンホスフェートアシルトランスフェラーゼの欠失した突然変異ＣＨＯ細胞系）及びヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞を１０ｃｍ２皿中、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ／Ham's F12（１：１）中で増殖させた。細胞をエタノールに溶かしたプラスマローゲン前駆体（０．１％の最終エタノール濃度）と共にインキュベーションし、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ（Goodenowe DB, Cook LL, Liu J, Lu Y, Jayasinghe DA, Ahiahonu PW, Heath D, Yamazaki Y, Flax J, Krenitsky KF, Sparks DL, Lerner A, Friedland RP, Kudo T, Kamino K, Morihara T, Takeda M, Wood PL (2007) Peripheral ethanolamine plasmalogen deficiency: a logical causative factor in Alzheimer's disease and dementia. J Lipid Res. 48:2485-98）によるプラスマローゲンの分析及び市販の熱量計キット（BioVision社製 #K613）を利用してのコレステロール及びコレステロールエステルの分析のために採取した。
【０１０２】
ｓｎ−１に１６：０、ｓｎ−２にＤＨＡ及びｓｎ−３にＯＨ又はアセチル−Ｌ−カルニチンを伴う１−アルキル，２−アシルグリセロール、ＰＰＩ−１００５又はＰＰＩ−１００９はそれぞれ、プラスマローゲン生合成能が損なわれている細胞（Ｎ−Ｒｅｌ、図２、３Ａ）及びプラスマローゲン生合成能が損なわれていない細胞（ＣＨＯ、図４Ａ）において、ＰｌｓＥｔｎ種に有効に変換された。これらの結果は、他のプラスマローゲン前駆体に関する先行技術とはまったく対照的である。１−アルキル，２−ヒドロキシグリセロール（キミル、バチル、サラキルアルコール）は、ＰｌｓＥｔｎ欠乏系のＰｌｓＥｔｎレベルをコントロールレベルまでは上昇させるが、ＰｌｓＥｔｎ欠乏系又はＰｌｓＥｔｎ充足系でコントロールレベルを超えるまでは上昇させないことが判明している（図４Ｂ）。加えて、本発明に記載の１−アルキル，２−アシルグリセロールの生物変換反応は、キミルアルコール又は１−アルケニル，２−アシルグリセロール（図３Ｂ）のレベルの上昇はもたらさなかったが、このことは、キミルアルコールも１−アルケニル，２−アシルグリセロールも、記載の分子がＰｌｓＥｔｎになる生物変換反応経路の中間体ではないことを示している。
【０１０３】
化合物ＰＰＩ−００５は、出願人の同時係属出願ＰＣＴ／ＣＡ２００７／００１４７２号パンフレットに記載されており、下記で示される：
【０１０４】
【化１０】
2015145388.tif 000014
【０１０５】
ｓｎ−１に１６：０、ｓｎ−２にＤＨＡ及びｓｎ−３にＯＨ又はアセチル−Ｌ−カルニチンを伴う１−アルキル，２−アシルグリセロールで細胞を処理すると、ｓｎ−２にＤＨＡを有するＰｌｓＥｔｎの構造特異的富化が生じた（図６）。これは、ＰｌｓＥｔｎの構造特異的富化の最初の記載である。
【０１０６】
ＰＰＩ−１００９は、医薬特性の改良を伴うプラスマローゲン前駆体である。この分子は、室温で塩として存在し、今まで報告された中で最初の非オイルベースのプラスマローゲン前駆体である。
【０１０７】
先在のプラスマローゲン合成の欠乏及び後続の低プラスマローゲンレベルを伴う生物学的系（Ｎ−Ｒｅｌ ｖｓ． ＣＨＯ）（図１）は、膜コレステロールレベルの上昇を有する（図５）。ＰＰＩ−１００５による、コントロール値の８０％までのＤＨＡ−ＰｌｓＥｔｎの上昇（図２）は、膜コレステロールの著しい低減をもたらした（図５）。
【０１０８】
ＰｌｓＥｔｎレベルの上昇のコレステロール低下効果は、ｓｎ−２置換基に依存していることが発見された（図７及び８）。ポリ不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、１８：３）のみが、ＨＥＫ２９３細胞においてコレステロール低下活性を有することが観察され、他方で、飽和、モノ及びジ不飽和脂肪酸は、効果を有さなかった。ＤＨＡ−ＰｌｓＥｔｎレベルの回復のみが、プラスマローゲンレベルの低下の結果としてＮ−Ｒｅｌ細胞で観察される膜コレステロールレベルの上昇を強力に緩和した（図７）。これらの結果は、ポリ不飽和脂肪酸含有ＰｌｓＥｔｎは、膜コレステロールホメオスタシスに選択的に関与していることを示している。ＰＰＩ−１００９はまた、ＮＲｅｌ（図７）及びＨＥＫ２９３細胞（図９）における膜コレステロールレベルを濃度に依存して低下させることも示された。これらの結果は、ＰｌｓＥｔｎレベルの上昇の膜低下効果は、特異的なｓｎ−２置換を有するＰｌｓＥｔｎレベルを選択的に高め得るプラスマローゲン前駆体を投与することを必要とすることを示している。
【０１０９】
ＰＰＩ−１００５又はＰＰＩ−１００９でＨＥＫ２９３細胞を処理すると、正常細胞及びコレステロール負荷細胞の両方においてＡＢ−４０及びＡＢ−４２の両方のレベルの低下が生じた（図１０）。これらの結果はさらに、プラスマローゲン前駆体の機能的有用性を膜タンパク質機能をプラスにモジュレートするその能力により例示している。これに関連して、膜コレステロールレベルの低下は、アミロイドペプチド産生をマイナスにモジュレートすることが知られている（Grimm MO, Grimm HS, Tomic I, Beyreuther K, Hartmann T, Bergmann C (2008) Independent inhibition of Alzheimer disease beta- and gamma-secretase cleavage by lowered cholesterol levels. J Biol Chem. 283:11302-11）。ＨＥＫ２９３細胞において膜コレステロールを低下させることに加えて、ＰＰＩ−１００５及びＰＰＩ−１００９はまた、アミロイドペプチドの分泌を低下させることも観察されている（図１０）。
【０１１０】
Ｎ−Ｒｅｌエタノールアミンプラスマローゲン（ＰｌｓＥｔｎ）及びホスファチジルエタノールアミン（ＰｔｄＥｔｎ）へのＰＰＩ−１０１４の構造特異的及び濃度依存的組み込みもまた、５、１０及び２０μＭ濃度のＰＰＩ−１０１４を使用して７２時間後に観察された（図１７）。
【実施例３】
【０１１１】
ＰＰＩ−１０１１の調製
【０１１２】
【化１１】
2015145388.tif 000015
【０１１３】
合成スキーム：
【０１１４】
【化１２】
2015145388.tif 000016
【０１１５】
ＰＰＩ−１０１１の合成スキーム
【０１１６】
【化１３】
2015145388.tif 000017
【０１１７】
反応ステップ：
【０１１８】
【化１４】
2015145388.tif 000018
【０１１９】
簡単な手順：化合物１（２．０Ｋｇ、１５．１５ｍｏｌ）の１０％ＮａＯＨ溶液（１０．０Ｌ）中の溶液を８０℃で１時間撹拌し、ＴＢＡＢ（９９２．０ｇ、３．０３ｍｏｌ）を加え、１５分間撹拌した。臭化セチル（５．５ｋｇ、１８．１８ｍｏｌ）を徐々に加え、反応混合物を８０℃で２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中３０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４溶液を使用して、個々のスポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１（０．１）、化合物２（０．７）。
【０１２０】
後処理及び精製：反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３．０Ｌ）で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２層をＮａＨＣＯ３溶液（１．０Ｌ）、水（２×２．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物２（２．９Ｋｇ、粗製）を淡黄色の液体として得、これを、次のステップで使用した。
【０１２１】
反応ステップ：
【０１２２】
【化１５】
2015145388.tif 000019
【０１２３】
簡単な手順：化合物２（２．９Ｋｇ、８１．２３ｍｏｌ）の２０％ＨＣｌ水溶液（１４．５Ｌ）中の溶液を８５℃で１６時間撹拌した。（少量のアリコットを水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中４０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物２（０．８）、化合物３（０．２）。
【０１２４】
後処理及び精製：反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×４．０Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３溶液（１．０Ｌ）、水（２×２．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これを、石油エーテル中５％の酢酸エチル（２×１．０Ｌ）と共に摩砕し、乾燥させて、化合物３（２．０Ｋｇ、２ステップから４２％）を得たが、これは、オフホワイト色の固体として得られた。
【０１２５】
反応ステップ：
【０１２６】
【化１６】
2015145388.tif 000020
【０１２７】
簡単な手順：冷却されている化合物３（１．０Ｋｇ、３．１６ｍｏｌ）のＤＭＦ（６４０．０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（４００．０ｍＬ）中の溶液に０℃で、ＤＭＡＰ（３８．６ｇ、０．３２ｍｏｌ）を、続いてトリエチルアミン（７３５．０ｇ、７．２７ｍｏｌ）を加えた。加えた後に、反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、ＴＢＳＣｌ（５７２．０ｇ、３．７９ｍｏｌ）を等量のポーション（３ポーション）で１時間で加え、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中２０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物３（０．１５）、化合物４（０．７）。
【０１２８】
後処理及び精製：反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）で希釈し、水（３×３．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。得られた粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤として石油エーテル中５％の酢酸エチルを使用して精製して、化合物４（８５０ｇ、９０％）を得たが、これは、淡黄色オイルとして得られた。
【０１２９】
反応ステップ：
【０１３０】
【化１７】
2015145388.tif 000021
【０１３１】
簡単な手順：冷却されている化合物５（１６０．０ｇ、０．４８７ｍｏｌ）、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（５００．０ｍＬ）中の溶液に０℃で、塩化オキサリル（１０５．０ｇ、０．８２８ｍｏｌ）を３０分間で徐々に加えた。添加の後に、反応混合物を２６℃で４時間撹拌した。（少量のアリコットをＭｅＯＨでクエンチし、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中１０％の酢酸エチル）、ＫＭｎＯ４溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物５（０．３）、化合物６（０．８）。
【０１３２】
後処理及び精製：反応混合物をＮ２雰囲気下で濃縮して、粗製化合物６（１７５ｇ、粗製）を得た。
【０１３３】
反応ステップ：
【０１３４】
【化１８】
2015145388.tif 000022
【０１３５】
簡単な手順：冷却されている化合物４（１５０．０ｇ、０．３４８ｍｏｌ）のトルエン（１．２５Ｌ）溶液に０℃で、ピリジン（１１０．０ｇ、１．３９ｍｏｌ）を、続いて、ＤＭＡＰ（１２２．２ｇ、０．３４８ｍｏl）を加え、１０分間撹拌した。粗製化合物６（１７５．０ｇ、０．５０４ｍｏｌ）のトルエン（２５０．０ｍＬ）溶液を１５分間で加えた。加えた後に、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中５％の酢酸エチル）、ＫＭｎＯ４溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物４（０．２）、化合物７（０．５）。
【０１３６】
後処理及び精製：反応混合物を酢酸エチル（３．０Ｌ）で希釈し、水（１．０Ｌ）、０．０５ＮのＨＣｌ（５００．０ｍＬ）、水（２×１．０Ｌ）、ブライン溶液（５００．０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物７を得、これを、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により溶離剤として石油エーテル中２％の酢酸エチルを使用して精製して、化合物７（１６２ｇ、６２．７％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１３７】
反応ステップ：
【０１３８】
【化１９】
2015145388.tif 000023
【０１３９】
簡単な手順：冷却されている化合物７（１６０．０ｇ、２１６．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．０ｍＬ）及び酢酸（５２．０ｇ）中の溶液に０℃で、ＴＢＡＦ（２２６．０ｇ、８６４．８６ｍｍｏｌ）を等量のポーションで３０分間で加えた。添加の後に、反応混合物を室温で６時間撹拌した。（分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中２０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物７（０．９）、化合物ＰＰＩ−１００５（０．４）。
【０１４０】
後処理及び精製：反応混合物を酢酸エチル（３．０Ｌ）で希釈し、水（２×２．０Ｌ）、ブライン（５００．０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤として石油エーテル中７％の酢酸エチルを使用して精製して、化合物ＰＰＩ−１００５（７２ｇ、５３％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１４１】
反応ステップ：
【０１４２】
【化２０】
2015145388.tif 000024
【０１４３】
簡単な手順：冷却されているα−リポ酸１（１２．０ｇ、５８．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００．０ｍＬ）溶液に０℃で、トリエチルアミン（８．１ｍＬ、５８．２５ｍｍｏｌ）を１０分間で徐々に加え、続いて、２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（１４．２ｇ、５８．２５ｍｍｏｌ）を加えた。添加の後に、反応混合物を室温にし、１８時間撹拌した。（分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中２０％のＥｔＯＡｃ）、２５４ｎｍＵＶ光及びHanessian染色液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１（０．２）、中間体（０．６）。
【０１４４】
反応混合物を濾別し、固体をＴＨＦ（２５．０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を、Ｎ２雰囲気下での減圧を使用して濃縮して、粗製の無水物を得、これをベンゼン（５００．０ｍＬに溶かし、０℃に冷却し、ＤＭＡＰ（７．１ｇ、５８．２５ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。反応混合物に、ＰＰＩ−１００５（４０．１ｇ、６４．０７ｍｍｏｌ）のベンゼン（１００．０ｍＬ）溶液を徐々に０℃で加えた。添加の後に、反応混合物を室温にし、２４時間撹拌した。（少量のアリコットをＨ２Ｏでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中１５％のＴＨＦ）、２５４ｎｍのＵＶ光及びHanessian染色液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：ＰＰＩ−１００５（０．３）、ＰＰＩ−１０１１（０．５）。
【０１４５】
後処理及び精製：反応混合物を酢酸エチル（２０００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×４００ｍＬ）、０．０５ＮのＨＣｌ（１×４００ｍＬ）、水（１×４００ｍＬ）、ブライン（１×４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（中性シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤として石油エーテル中２．５〜５％のＴＨＦを使用して精製した。
【０１４６】
表題化合物ＰＰＩ−１０１１（２８．０ｇ、５４％）が淡茶色のオイルとして得られた。
【実施例４】
【０１４７】
ＰＰＩ−１００９を調製するための別の方法
【０１４８】
【化２１】
2015145388.tif 000025
【０１４９】
合成スキーム：
【０１５０】
【化２２】
2015145388.tif 000026
【０１５１】
反応ステップ：
【０１５２】
【化２３】
2015145388.tif 000027
【０１５３】
手順：化合物１（２．０Ｋｇ、１５．１５ｍｏｌ、Alfa Aesar社製）の１０％ＮａＯＨ溶液（１０．０Ｌ）中の溶液を８０℃で１時間撹拌し、ＴＢＡＢ（９９２．０ｇ、３．０３ｍｏｌ、Rajdhani scientific社製）を加え、１５分間撹拌した。臭化セチル（５．５ｋｇ、１８．１８ｍｏｌ、Alfa Aesar社製）を徐々に加え、反応混合物を８０℃で２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中３０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４溶液を使用して、個々のスポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１（０．１）、化合物２（０．７）。反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３．０Ｌ）で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２層をＮａＨＣＯ３溶液（１．０Ｌ）、水（２×２．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製の化合物２（２．９Ｋｇ、粗製）を淡黄色の液体として得、これを、次のステップで使用した。
【０１５４】
反応ステップ：
【０１５５】
【化２４】
2015145388.tif 000028
【０１５６】
手順：化合物２（２．９Ｋｇ、８１．２３ｍｏｌ）の２０％ＨＣｌ水溶液（１４．５Ｌ）中の溶液を８５℃で１６時間撹拌した。（少量のアリコットを水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中４０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物２（０．８）、化合物３（０．２）。反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×４．０Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３溶液（１．０Ｌ）、水（２×２．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これを、石油エーテル中５％の酢酸エチル（２×１．０Ｌ）と共に摩砕し、乾燥させて、化合物３（２．０Ｋｇ、２ステップで４２％）を得たが、これはオフホワイト色の固体として得られた。
【０１５７】
反応ステップ：
【０１５８】
【化２５】
2015145388.tif 000029
【０１５９】
手順：冷却されている化合物３（１．０Ｋｇ、３．１６ｍｏｌ）のＤＭＦ（６４０．０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（４００．０ｍＬ）中の溶液に０℃で、ＤＭＡＰ（３８．６ｇ、０．３２ｍｏｌ）を、続いてトリエチルアミン（７３５．０ｇ、７．２７ｍｏｌ、Rankem社製）を加えた。添加の後に、反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、ＴＢＳＣｌ（５７２．０ｇ、３．７９ｍｏｌ、Fluoro chem社製３．０ｋｇ）を等量のポーション（３ポーション）で１時間で加え、反応混合物を室温で２０時間撹拌した（少量のアリコットを水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中２０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物３（０．１５）、化合物４（０．７）。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）で希釈し、水（３×３．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。得られた粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤として石油エーテル中５％の酢酸エチルを使用して精製して、化合物４（８５０ｇ、９０％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１６０】
反応ステップ：
【０１６１】
【化２６】
2015145388.tif 000030
【０１６２】
手順：冷却されている化合物４（７３４ｇ、１．７０６ｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５Ｌ）溶液に０℃で、６０％ＮａＨ（２０４．０ｇ、５．１２ｍｏｌ）を少量ずつ３０分間で加えた。添加の後に、反応混合物を０℃でさらに３０分間撹拌し、臭化ベンジル（４３８．０ｇ、２．５６ｍｏｌ、S.D fine chemicals社製）を１時間で滴加した。室温にした反応混合物を２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中５％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物４（０．２）、化合物５（０．５）。反応混合物をメタノール（２５０ｍＬ）、冷水（１５００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２×２．０Ｌ）を使用して抽出した。合わせた酢酸エチル層を水（３×１．０Ｌ）、ブライン溶液（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。得られた粗製化合物５（８８７ｇ）をさらに精製することなく、次のステップで使用した。
【０１６３】
反応ステップ：
【０１６４】
【化２７】
2015145388.tif 000031
【０１６５】
手順：冷たい粗製化合物５（８８７．０ｇ、１．７０２ｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０Ｌ）溶液に０℃で、ＴＢＡＦ（１．３Ｋｇ、５．１０７ｍｏｌ、Chemrich fine chemicals社製）のＴＨＦ（１．０Ｌ）溶液を徐々に１時間で加えた。添加の後に、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。（少量のアリコットを水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中３０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物５（０．９）、化合物６（０．３）。反応混合物を酢酸エチル（２．５Ｌ）で希釈し、水（２×１．０Ｌ）、ブライン（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤として石油エーテル中７％の酢酸エチルを使用して精製して、化合物６（３３０ｇ、２ステップで４８％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１６６】
反応ステップ：
【０１６７】
【化２８】
2015145388.tif 000032
【０１６８】
手順：冷たいＮ−アセチルカルニテン８（２３９．０ｇ、１．１７７ｍｏｌ、Molecula life Sciences社製）のＣＨ２Ｃｌ２（５００．０ｍＬ）及びＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の溶液に０℃で、塩化オキサリル（１７９．４ｇ、１．４１２ｍｏｌ）を徐々に３０分間で加え、室温で４時間撹拌した。反応混合物から溶媒を減圧下での蒸留により除去し、痕跡量の塩化オキサリルをＣＨ２Ｃｌ２との共蒸留により除去した。得られた粗製化合物９（２５０ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２（５００．０ｍＬ）に溶かし、冷たい化合物６（３３４．０ｇ、０．８２３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５００．０ｍＬ）溶液に０℃で、Ｎ２ガスを気泡導入しながら徐々に加えた。添加の後に、反応混合物を、Ｎ２の気泡導入を継続しながら室温で２０時間撹拌した（少量のアリコットを水でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（クロロホルム中２５％のＭｅＯＨ）、Ｍｏ染色液及びＫＭｎＯ４を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物６（０．８）及び化合物１０（０．３）。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２．０Ｌ）で希釈し、ブライン溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤としてクロロホルム中５％のＭｅＯＨを使用して精製して、化合物１０（１５３．０ｇ、３１．５％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１６９】
反応ステップ：
【０１７０】
【化２９】
2015145388.tif 000033
【０１７１】
簡単な手順：１０％Ｐｄ／Ｃ（４０．０ｇ、２５％ｗ／ｗ、AlfaAesar社製）のエタノール（１．２Ｌ）懸濁液に、化合物１０（１５０ｇ、０．２９８ｍｏｌ）を加え、室温で２０時間水素化した（Ｈ２、圧力４０ｐｓｉ）。（分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（クロロホルム中２５％のＭｅＯＨ）、Ｍｏ染色液及びニンヒドリン溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１０（０．４）、化合物１１（０．２）。反応混合物をセライト床で濾別し、ケークをエタノール（２×２００ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤としてクロロホルム中１０％のメタノールを使用して精製して、化合物１１（７５ｇ、６０％）を得たが、これは、淡黄色のオイルとして得られた。
【０１７２】
反応ステップ：
【０１７３】
【化３０】
2015145388.tif 000034
【０１７４】
簡単な手順：冷却されている化合物５（４８．０ｇ、０．１４６ｍｏｌ、Nu-Chek-Prep Inc社製）、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（３００．０ｍＬ）中の溶液に０℃で、塩化オキサリル（２２．３ｇ、０．１７５ｍｏｌ、Molecula Lifesciences社製）を徐々に３０分間で加えた。添加の後に、反応混合物を２６℃で４時間撹拌した。（少量のアリコットをＭｅＯＨでクエンチし、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中１０％の酢酸エチル）、ＫＭｎＯ４溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１２（０．３）、化合物１３（０．８）。反応混合物をＮ２雰囲気下で濃縮して、粗製化合物６（５７ｇ、粗製）を得た。
【０１７５】
反応ステップ：
【０１７６】
【化３１】
2015145388.tif 000035
【０１７７】
簡単な手順：０℃に冷却されている化合物１１（５０．０ｇ、０．１０２ｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０Ｌ）溶液に、ピリジン（３２．３ｇ、０．４０９ｍｏｌ）を、続いて、ＤＭＡＰ（１２．５ｇ、０．１０２ｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。粗製化合物１３（５７．０ｇ、０．１６３ｍｏｌ）のトルエン（１．０ｍＬ）溶液を１５分間で加えた。添加の後に、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。（少量のアリコットを水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（クロロホルム中２０％のメタノール）、Ｍｏ染色液及びニンヒドリン溶液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：化合物１１（０．２）及びＰＰＩ−１００９（０．５）。反応混合物を酢酸エチル（２．０Ｌ）で希釈し、０．５ＮのＨＣｌ（２５０ｍＬ）、ブライン溶液（２５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１００〜２００メッシュ）により、溶離剤としてクロロホルム中２０％のメタノールを使用して精製して、化合物ＰＰＩ−１００９（２７ｇ、３３．３％）を得たが、これは、淡黄色オイルとして得られた。
【実施例５】
【０１７８】
ＰＰＩ−１０１４の調製
標的分子
【０１７９】
【化３２】
2015145388.tif 000036
【０１８０】
合成スキーム
【０１８１】
【化３３】
2015145388.tif 000037
【０１８２】
反応ステップ：
【０１８３】
【化３４】
2015145388.tif 000038
【０１８４】
簡単な手順：冷却されているＰＰＩ−１００５（１２．０ｇ、１９．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６００ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフェン（Triphenyl phosphene）（７．５ｇ、２８．７５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１０分間撹拌し、続いて、ＤＩＥＡＤ（５．８ｇ、２８．７５ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。０℃で３０分間撹拌した後に、反応混合物にＮ−アセチルシステイン（４．６ｇ、２８．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。（酢酸エチルで抽出し、分析用シリカゲルＴＬＣプレートにスポットし（石油エーテル中３０％の酢酸エチル）、Ｍｏ染色液を使用して、スポットを可視化することにより、反応の進行を監視した）。下記は、混合物の成分のＲｆである：ＰＰＩ−１００５（０．８）、ＰＰＩ−１０１４（０．４）。
【０１８５】
後処理及び精製：反応混合物を水（７５ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）を使用して抽出した。合わせた酢酸エチル層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗製化合物を得、これをカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により、溶離剤として石油エーテル中０〜１３％の酢酸エチルを使用して精製した。
【０１８６】
表題化合物ＰＰＩ−１０１４（３．２ｇ、２２％）が淡黄色のオイルとして得られ、これは、下記の特性を示した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．３５（ｂｓ，１Ｈ）、５．３９〜５．２２（ｍ，１３Ｈ）、４．９２〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、４．５５〜４．２２（ｍ，３Ｈ）、３．５５〜３．４１（ｍ，５Ｈ）、３．０２〜２．９７（ｍ，２Ｈ）、２．８５〜２．７７（ｍ，１０Ｈ）、２．４０（ｓ，５Ｈ）、２．１１２．０４（ｍ，５Ｈ）、１．５７〜１．５２（ｍ，２Ｈ）、１．３６〜１．２５（ｍ，３０Ｈ）、０．９７（ｔ，Ｊ＝７．６６Ｈｚ；３Ｈ）、０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６３Ｈｚ；３Ｈ）。質量（Ｍ＋Ｈ）：７７２．３、ＨＰＬＣ純度〜９３．６８％。
【実施例６】
【０１８７】
動物研究
雄のニュージーランドウサギ（１．８〜２．５ｋｇ）に、ＰＰＩ−１０１１を硬ゼラチンカプセル剤（サイズ３）のままで経口投与した。時間経過研究では、ウサギに、ＰＰＩ−１０１１ ２００ｍｇ／ｋｇを投与し、動物をエウテノール（euthenol）過量を介して、１、３、６、１２、１８、２４及び４８時間目に屠殺した。血液を心臓穿刺により採取し、血漿を後続の分析のために−７０℃で凍らせた。腎臓及び肝臓もまた採取して、後続の分析のために−７０℃で貯蔵した。これらの研究を、１２時間目に群が重なる２つの実験として行った（実験１：１、３、６及び１２時間；実験２：１２、１８、２４及び４８時間）。対照を各時点で採取した。プラスマローゲン及び脂質を抽出し、既に報告されている通りにＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した（Goodenowe DB, Cook LL, Liu J, Lu Y, Jayasinghe DA, Ahiahonu PW, Heath D, Yamazaki Y, Flax J, Krenitsky KF, Sparks DL, Lerner A, Friedland RP, Kudo T, Kamino K, Morihara T, Takeda M, Wood PL (2007) Peripheral ethanolamine plasmalogen deficiency: a logical causative factor in Alzheimer's disease and dementia. J Lipid Res. 48:2485-98）。
【０１８８】
図１１で分かる通り、プラスマローゲン前駆体ＰＰＩ−１０１１ ２００ｍｇ／ｋｇの経口投与での使用は、循環プラスマローゲンに組み込まれた。ｓｎ−２での脱アシル化、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の放出も観察された。１６：０／２２：６、１８：０／２２：６及び１８：１／２２：６エタノールアミンプラスマローゲン及びホスファチジルエタノールアミンに最も多く組み込まれた。参照のホスファチジルエタノールアミン１６：０／１８：０では変化は観察されなかった。
【０１８９】
血漿での組み込みのさらなる時間経過試験（図１２）により、最大の組み込みが１２時間目であり、組み込みのこのレベルが残りの観察期間を通して維持された（４８時間）ことが明らかになった。これは、ホスファチジルエタノールアミン及びエタノールアミンプラスマローゲンの両方で当てはまった。対照的に、循環ＤＨＡレベルは、６時間目にピークに達し、１８時間までにより低い定常状態まで低下した。
【０１９０】
血漿プラスマローゲン及びホスファチジルエタノールアミンへのＰＰＩ−１０１１の用量依存性組み込みの研究（図１３）により、これらの循環リン脂質における新規の定常状態レベルは、用量依存的に１０〜２００ｍｇ／ｋｇで達成されることが証明された。しかし、用量をさらに増加させても、プラスマローゲン及びホスファチジルエタノールアミンの定常状態レベルは、２００ｍｇ／ｋｇで得られるレベルを超えて上昇しなかった。対照的に、循環ＤＨＡの最大の定常状態レベルは、５００ｍｇ／ｋｇで得られ、１０００ｍｇ／ｋｇの用量ではさらに上昇することはなかった。
【０１９１】
組織プラスマローゲン及びＤＨＡの増大はまた、腎臓（図４及び５）及び肝臓（図６）組織でも観察された。
【０１９２】
これらの結果は、ＰＰＩ−１０１１は、ウサギにおいて経口で生物学的に利用可能であり、脱アシル化／再アシル化反応を介して、ＤＨＡ含有エタノールアミンプラスマローゲン及びホスファチジルエタノールアミンに変換されることを示している。加えて、これらの結果は、内生代謝系が、薬理学的に増大され得る最大上昇を制限しているであろうことを示唆している。
【実施例７】
【０１９３】
プラスマローゲン前駆体を用いてのインビトロでの膜タンパク質発生量のモジュレーション
下記の研究により、膜在住タンパク質の発生量の変化におけるプラスマローゲン前駆体（１−アルキル−２アシルグリセロール）の有効性を証明する。化合物の細胞での効果を、野生型細胞で、さらに、人工的に高められた膜コレステロールの条件下で証明する。
【０１９４】
野生型細胞において、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）をモジュレートする酵素ＡＤＡＭ１０及びコレステロールエステル化タンパク質ＳＯＡＴ１の上昇が、プラスマローゲン前駆体濃度の上昇に伴って観察された。同様の効果が、コレステロール負荷モデルにおいて観察された。加えて、別のＡＰＰプロセシング酵素、ＢＡＣＥ１が、コレステロール負荷細胞においてのみ、発生量の低下を示した。理論に拘束されることは望まないが、この証拠は、アルツハイマー病の状況においてアミロイド負荷を低減し、同時に、系の膜コレステロール含分を再平衡させて、アルツハイマー病に加えてアテローム硬化症及び高コレステロール血症などの疾患の治療において有望な利益をもたらす方法を支持するものである。
【０１９５】
ＡＰＰは主に、γ−セクレターゼ（プレセニリン１／２遺伝子によりコードされる）及びα−セクレターゼ（ＡＤＡＭ１０によりコードされる）による連続分解からなる古典的経路によりプロセシングされる。このＡＰＰの非病的プロセシングは、神経栄養（neutotrophic）ペプチド（ｓＡＰＰα）の形成をもたらし、これは、グルタメート毒性及び低血糖に対する保護を示す（Araki W, Kitaguchi N, Tokushima Y, Ishii K, Aratake H, Shimohama S, Nakamura S and Kimura J (1991) Trophic effect of beta-amyloid precursor protein on cerebral cortical neurons in culture. Biochem Biophys Res Commun 181:265-271、Mattson MP, Cheng B, Culwell AR, Esch FS, Lieberburg I and Rydel RE (1993) Evidence for excitoprotective and intraneuronal calcium-regulating roles for secreted forms of the beta-amyloid precursor protein. Neuron 10:243-254、Postina R, Schroeder A, Dewachter I, Bohl J, Schmitt U, Kojro E, Prinzen C, Endres K, Hiemke C, Blessing M, Flamez P, Dequenne A, Godaux E, van Leuven F and Fahrenholz F (2004) A disintegrin-metalloproteinase prevents amyloid plaque formation and hippocampal defects in an Alzheimer disease mouse model. J Clin Invest 113:1456-1464、Fahrenholz F (2007) Alpha-secretase as a therapeutic target. Curr Alzheimer Res 4:412-417）。別のＡＰＰプロセシング経路こそが、アルツハイマー病を症状発現させ、その場合、ＡＰＰは、コレステロールリッチな脂質ラフトにおいてγ−及びβ−セクレターゼにより分離される。この「非古典的」経路は、３８〜４３アミノ酸長さのＡβペプチドの形成をもたらし、これは凝集して、ＡＤのホールマークである細胞外基質におけるプラークになる傾向がある（Selkoe DJ (2002) Alzheimer's disease is a synaptic failure. Science 298:789-791、Selkoe DJ (2003) Folding proteins in fatal ways. Nature 426:900-904、Meyer-Luehmann M, Spires-Jones TL, Prada C, Garcia-Alloza M, de Calignon A, Rozkalne A, Koenigsknecht-Talboo J, Holtzman DM, Bacskai BJ and Hyman BT (2008) Rapid appearance and local toxicity of amyloid-beta plaques in a mouse model of Alzheimer's disease. Nature 451:720-724）。早発性家族性ＡＤは、ＡＰＰ又はＡＰＰプロセシング酵素（ＰＳＥＮ１／２、ＢＡＣＥ、ＡＤＡＭ）における遺伝的病変により説明されており、遅発性散発性ＡＤ（非病原性プロセシングから病原性ＡＰＰプロセッシングへのスイッチ）のベースにある原因は未だ解明されていない。
【０１９６】
ＡＤの病因におけるコレステロールホメオスタシスの重要性が、ヒトにおいて（Corder EH, Saunders AM, Strittmatter WJ, Schmechel DE, Gaskell PC, Small GW, Roses AD, Haines JL and Pericak-Vance MA (1993) Gene dose of apolipoprotein E type 4 allele and the risk of Alzheimer's disease in late onset families. Science 261:921-923、Saunders AM, Strittmatter WJ, Schmechel D, George-Hyslop PH, Pericak-Vance MA, Joo SH, Rosi BL, Gusella JF, Crapper-MacLachlan DR, Alberts MJ and et al. (1993) Association of apolipoprotein E allele epsilon 4 with late-onset familial and sporadic Alzheimer's disease. Neurology 43:1467-1472、Blacker D, Haines JL, Rodes L, Terwedow H, Go RC, Harrell LE, Perry RT, Bassett SS, Chase G, Meyers D, Albert MS and Tanzi R (1997) ApoE-4 and age at onset of Alzheimer's disease: the NIMH genetics initiative. Neurology 48:139-147、Hofman A, Ott A, Breteler MM, Bots ML, Slooter AJ, van Harskamp F, van Duijn CN, Van Broeckhoven C and Grobbee DE (1997) Atherosclerosis, apolipoprotein E, and prevalence of dementia and Alzheimer's disease in the Rotterdam Study. Lancet 349:151-154）及び動物モデルにおいて（Joyce CW, Amar MJ, Lambert G, Vaisman BL, Paigen B, Najib-Fruchart J, Hoyt RF, Jr., Neufeld ED, Remaley AT, Fredrickson DS, Brewer HB, Jr. and Santamarina-Fojo S (2002) The ATP binding cassette transporter A1 (ABCA1) modulates the development of aortic atherosclerosis in C57BL/6 and apoE-knockout mice. Proc Natl Acad Sci U S A 99:407-412、Singaraja RR, Fievet C, Castro G, James ER, Hennuyer N, Clee SM, Bissada N, Choy JC, Fruchart JC, McManus BM, Staels B and Hayden MR (2002) Increased ABCA1 activity protects against atherosclerosis. J Clin Invest 110:35-42、Van Eck M, Singaraja RR, Ye D, Hildebrand RB, James ER, Hayden MR and Van Berkel TJ (2006) Macrophage ATP-binding cassette transporter A1 overexpression inhibits atherosclerotic lesion progression in low-density lipoprotein receptor knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol 26:929-934、Wahrle SE, Jiang H, Parsadanian M, Kim J, Li A, Knoten A, Jain S, Hirsch-Reinshagen V, Wellington CL, Bales KR, Paul SM and Holtzman DM (2008) Overexpression of ABCA1 reduces amyloid deposition in the PDAPP mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest 118:671-682）調査されてきた。形質膜のコレステロール含分の変化は、膜在住タンパク質の機能に影響を及ぼすことが判明している（Scanlon SM, Williams DC and Schloss P (2001) Membrane cholesterol modulates serotonin transporter activity. Biochemistry 40:10507-10513、Lange Y, Ye J and Steck TL (2004) How cholesterol homeostasis is regulated by plasma membrane cholesterol in excess of phospholipids. Proc Natl Acad Sci U S A 101:11664-11667）。脳コレステロールの上昇が、ＡＤを有する対象で判明し（Mori T, Paris D, Town T, Rojiani AM, Sparks DL, Delledonne A, Crawford F, Abdullah LI, Humphrey JA, Dickson DW and Mullan MJ (2001) Cholesterol accumulates in senile plaques of Alzheimer disease patients and in transgenic APP(SW) mice. J Neuropathol Exp Neurol 60:778-785）、コレステロールリッチな食餌を給餌されたウサギは、脳においてプラークを進展させることが判明している（Ghribi O, Larsen B, Schrag M and Herman MM (2006) High cholesterol content in neurons increases BACE, beta-amyloid, and phosphorylated tau levels in rabbit hippocampus. Exp Neurol 200:460-467）。インビトロデータは、プラスマローゲン欠乏細胞は、膜中での遊離コレステロールの上昇を有することを示し、ヒトでは、血清−プラスマローゲン欠乏は、認識状態の減退と関連することが示されている（Goodenowe DB, Cook LL, Liu J, Lu Y, Jayasinghe DA, Ahiahonu PW, Heath D, Yamazaki Y, Flax J, Krenitsky KF, Sparks DL, Lerner A, Friedland RP, Kudo T, Kamino K, Morihara T, Takeda M, Wood PL (2007) Peripheral ethanolamine plasmalogen deficiency: a logical causative factor in Alzheimer's disease and dementia. J Lipid Res. 48:2485-98）。��れらの観察に基づき、我々は、コレステロールとプラスマローゲンとの相互作用を調査し、それら２つのバランスが、分泌されるＡβに関して測定されるＡＤの病理学的症状発現にどのように影響を及ぼすのかを同定した。
【０１９７】
提案される作用機序：膜脂質モジュレーションを介してのＡＰＰプロセシングの変化
ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞はＡＰＰ及びＡＰＰをプロセシングするために必要な膜結合機構を発現するので、これは、ＡＰＰプロセシングを研究するための良好なモデルとなっている。本インビトロ調査は、先行する研究を確証するものであったが、ここでは、コレステロール負荷及び／又はプラスマローゲン前駆体追加を介して膜流動性をモジュレートして、細胞外Ａβ４２含分を変化させた。ＨＥＫ２９３細胞にコレステロールを負荷すると、４８時間のインキュベーション期間の後に、細胞中において遊離コレステロールの量が１７％（対照と比較して）上昇する。この上昇は、対照と比較して、調整培地中でのＡβ４２含分の並行する重要な増大（ｐ＜０．０５）を随伴する。アミロイドの６５％上昇は主に、β−セクレターゼ濃度の２２％上昇により（図１８Ａ、レーン２）；基礎ＡＰＰレベルは、コレステロール負荷を伴っても変化しないままである。コレステロール負荷されたＨＥＫ２９３系をプラスマローゲン前駆体ＰＰＩ−１００５で処理すると、細胞膜の遊離コレステロール含分が著しく低下した（ｐ＜０．０５）。調整培地中のＡβ４２含分は２０μＭ濃度で、コレステロール負荷されたレベルから７０％低下し（ｐ＝０．０００１）、調整培地中のｓＡＰＰα含分は上昇した。ＡＰＰプロセシングに対する効果は、ＡＰＰ発現の変化によるようではなく、むしろ、ＡＰＰプロセシング酵素の発生量の変化によるＡＰＰプロセシング経路の変化によるようである。β−セクレターゼは、２０μＭ濃度のＰＰＩ−１００５で正常レベルに回復し、ｓＡＰＰα種の７３％上昇が、調整培地中で検出された。この上昇は、ｓＡＰＰα形成をもたらす酵素であるＡＤＡＭ１０の６３％上昇により説明された（図１８Ａ、レーン３）。
【０１９８】
プラスマローゲン追加後の細胞のコレステロールプロファイルの変化は、プラスマローゲン濃度を上昇させることで、遊離コレステロールのエステル化をもたらす酵素であるＳＯＡＴ１が、約２５％アップレギュレーションされる（コレステロール負荷された状態と比較して）（図１８Ａ、レーン５）という観察により説明され得る。
【０１９９】
別の研究では、ＰＰＩ−１００５の効果を、コレステロールを負荷されていない野生型ＨＥＫ２９３細胞で調査した。図１８Ｂは、ＡＤＡＭ１０（３５％）及びＳＯＡＴ１（５０％）の発生量の濃度依存性上昇を示しており、ＢＡＣＥ１又はＡＰＰ発生量に変化は観察されなかった。プラバスタチンによるＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害により、ＨＥＫ２９３細胞からコレステロールが枯渇するが、ＡＤＡＭ１０及びＳＯＡＴ１タンパク質レベルは一定なままであった（図１８Ｃ）。プラスマローゲン及びプラバスタチン処理は両方とも、細胞中の遊離コレステロールの割合を著しく低下させる一方で、細胞中のＡＤＡＭ１０及びＳＯＡＴレベルを変えるのは、プラスマローゲン処理のみである。このことは、ＡＤＡＭ１０及びＳＯＡＴ１発生量に対する効果は、膜コレステロール含分ではなく膜プラスマローゲン含分の効果であることを示唆している。
【０２００】
したがって、膜在住タンパク質の発生量を、細胞プラスマローゲン含分をモジュレーションすることによりインビトロで変化させることができ、これは、本明細書に記載されているプラスマローゲン前駆体で細胞を処理することにより達成される。
【０２０１】
材料及び方法
コレステロール負荷
ＤＭＥＭ中、１０％ＦＢＳ、３７℃、５％ＣＯ２で培養されたＨＥＫ２９３細胞を、処理の前日に播種した。翌日、細胞膜に、外生コレステロールを１０μｇ／培地ｍｌの濃度で、記載の通りにコレステロールを送達するための担体としてメチル−β−シクロデキストリンを使用して負荷した（Rong JX, Shapiro M, Trogan E and Fisher EA (2003) Transdifferentiation of mouse aortic smooth muscle cells to a macrophage-like state after cholesterol loading. Proc Natl Acad Sci U S A 100:13531-13536）。
【０２０２】
コレステロールアッセイ
細胞をプラスマローゲン前駆体ＰＰＩ−１００５で、又は対照としてのエタノールで処理した。細胞をVersene:TryPLe expressカクテルを使用して４８時間後に収集し、ＰＢＳで洗浄した。脂質を１％Triton X-100を含有するクロロホルムで抽出した。有機フラクションを回収し、窒素流下で乾燥させた。乾燥させた脂質をコレステロール反応緩衝液（Biovision社製、Mountain View、CA）に再懸濁させ、コレステロールの全フラクション、遊離フラクション、及びエステル化フラクションを、コレステロール定量化キット（Biovision社製、Mountain View、CA）を製造者の推奨により使用して定量化した。コレステロールを初めに、μｇ／細胞１００万として算出し、各実験で対照条件に対するパーセンテージとして報告した。
【０２０３】
アミロイドアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に、上記の通りの外生コレステロールを負荷し、ＰＰＩ１００５で、又は対照としてのエタノールで処理した。処理細胞からの調整培地を４８時間のインキュベーション期間の終了時に集めた。Ａβ１−４２含分をアッセイするために、調整培地を、Amicon超遠心フィルターデバイス（Millipore社製、Billerica、MA）を使用して濃縮し、その後、マイクロプレートに負荷した。ＥＬＩＳＡを製造者の推奨（Covance Labs社、Princeton、NJ）により実施した。反応を、基質を加えた２５分後にクエンチし、吸光度を４９５ｎｍで読み取った。実験を三重に実施した。値をｐｇ／調整培地ｍｌとして算出し、未処理のコレステロール負荷された対照ＨＥＫ２９３細胞からの調整培地中で検出されたＡβの量に対して正規化した。
【０２０４】
免疫ブロット法及び免疫沈降
ＨＥＫ２９３細胞をアミロイドアッセイにおいて記載された通りに処置した。細胞ペレットをＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Sigma社製、St. Louis、MI）を含有するＲＩＰＡ緩衝液中で溶解させた。細胞溶解産物中のタンパク質を、Bio-Radタンパク質アッセイ（Bio-Rad社製、Hercules、CA）を使用して定量化した。下記の抗体をウエスタン分析のために使用した：ＡＰＰ（Calbiochem社製、Darmstadt、Germany）、ＢＡＣＥ１及びＡＤＡＭ１０（Millipore社製、Temecula、CA）、ｓＡＰＰα（IBL社製、Gunma、Japan）、ＳＯＡＴ１（Santa Cruz Biotechnology Inc.社製、CA)及びβ−アクチン（Sigma社製、St. Louis、MI）。免疫沈降を実施して、調整培地中のｓＡＰＰαを推定した。簡単には、ｓＡＰＰαに対する抗体を調整培地に加え、４℃で１６時間インキュベーションした。ＩＰを、タンパク質Ａ／Ｇアガロースビーズと共に４℃で６時間インキュベーションすることにより実施した。ビーズをＰＢＳで洗浄し、溶離したタンパク質を免疫ブロット法により抗ｓＡＰＰα抗体を用いて検出した。バンド強度を、Image Processing and AnalysisをJava（ImageJ）ソフトウェア（National Institutes of Health製、Bethesda、MD）で使用して定量化した。
【０２０５】
統計学的分析
データの統計学的分析を、Microsoft(商標) Office Excel 2007及びＪＭＰバージョン８を使用して行った。多重比較Dunnett試験を適用して、処理と対照との間の差違を分析した。
【０２０６】
請求項に定義されている本発明の範囲から逸脱することなく、いくつかの変化及び変更を行うことができることは、当業者には明らかであろう。
【０２０７】
下記の参考文献、さらに、上記で示された参考文献は、参照により本明細書に援用される。
【０２０８】
（参照文献）
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【図１】
2015145388.tif 000046
【図２】
2015145388.tif 000047
【図３】
2015145388.tif 000048
【図４】
2015145388.tif 000049
【図５】
2015145388.tif 000050
【図６】
2015145388.tif 000051
【図７】
2015145388.tif 000052
【図８】
2015145388.tif 000053
【図９】
2015145388.tif 000054
【図１０】
2015145388.tif 000055
【図１１】
2015145388.tif 000056
【図１２】
2015145388.tif 000057
【図１３】
2015145388.tif 000058
【図１４】
2015145388.tif 000059
【図１５】
2015145388.tif 000060
【図１６】
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【図１７】
2015145388.tif 000062
【図１８】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年4月14日(2015.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Ｉの化合物：
【化１】
2015145388.tif 000064
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なり、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、ＣＨ３（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）９−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１−、ＣＨ３（ＣＨ２）２３−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）２（ＣＨ２）６−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）３（ＣＨ２）６−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）４（ＣＨ２）２−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）５（ＣＨ２）２−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１１、及びＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−；からなる群から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖から選択され、
Ｒ３は、式Ｉの構造による前記化合物からリパーゼによって分離可能であり、かつ脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸基及び以下に示されている構造の基からなる群から選択され、
【化２】
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Ｒ４及びＲ５は、独立に、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ６は、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素又は低級アルキルである］を含む、
ＰｌｓＥｔｎ欠乏系又はＰｌｓＥｔｎ充足系においてコントロールレベルを超えるまでＰｌｓＥｔｎレベルを上昇させることにより、プラスマローゲン欠乏により媒介される老化による疾患を治療又は予防するための、又はコレステロール輸送タンパク質の異常な遺伝的発現から生じる障害を治療又は予防するための医薬組成物であって、前記老化による疾患又は前記障害が、神経変性、認識障害、認知症、癌及び血管疾患からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項２】
式Ｉ中のＲ２がＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
式Ｉの化合物が、２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウム（ＰＰＩ−１００９）、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ））−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１１）及び（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１４）からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
コレステロール輸送タンパク質がアポリポタンパク質Ｅである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
そのラセミ化合物又は単離された立体異性体及び薬学的に許容される塩又はエステルを包含する、式Ｉの化合物：
【化３】
2015145388.tif 000066
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、同じか又は異なり、ＣＨ３（ＣＨ２）３−、ＣＨ３（ＣＨ２）５−、ＣＨ３（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）９−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１−、ＣＨ３（ＣＨ２）２３−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１３（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１７（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）１９（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）２１（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）５（ＣＨ＝ＣＨ）−、ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）２（ＣＨ２）６−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）３（ＣＨ２）６−、ＣＨ３（ＣＨ２）４（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）４（ＣＨ２）２−、ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）５（ＣＨ２）２−、ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１１、及びＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−；からなる群から選択されるアルキル又はアルケニル炭化水素鎖から選択され、
Ｒ３は、式Ｉの構造による前記化合物からリパーゼによって分離可能であり、かつ脂肪酸、カルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−カルニチン、チオカルニチン、アセチル−Ｄ／Ｌ−チオカルニチン、クレアチン、ノルカルニチン、ホスホコリン、リポ酸、ジヒドロリポ酸、ホスホエタノールアミン、ホスホセリン、Ｎ−アセチルシステイン、置換又は非置換アミノ酸基及び以下に示されている構造の基からなる群から選択され、
【化４】
2015145388.tif 000067
Ｒ４及びＲ５は、独立に、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ６は、水素又は低級アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は、独立に、水素又は低級アルキルである］を含む、
アルツハイマー病、パーキンソン病及び加齢性黄斑変性からなる群から選択される神経変性疾患を治療又は予防するための、又はアテローム動脈硬化症及び高コレステロール血症からなる群から選択される血管疾患を治療又は予防するための医薬組成物。
【請求項６】
式Ｉ中のＲ２がＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ＝ＣＨＣＨ２）６ＣＨ２−である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
式Ｉの化合物が、２−アセトキシ−４−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロポキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−４−オキソブタン−１−アミニウム（ＰＰＩ−１００９），（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（５−（（Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−イル）ペンタノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１１）及び（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−１−（２−アセトアミド−３−メルカプトプロパノイルオキシ）−３−（ヘキサデシルオキシ）プロパン−２−イル  ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエノエート（ＰＰＩ−１０１４）からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。