(57)【要約】      （修正有）【課題】ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞の選択的枯渇に有用な結合物質の提供。【解決手段】細胞、特にＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞の表面に発現したＩＣＯＳにいったん結合すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでそれが結合した細胞の枯渇をもたらすＩＣＯＳ結合物質。ＩＣＯＳ結合物質を用いたＴ細胞関連疾患の治療方法、及びＩＣＯＳ結合物質を含む医薬組成物、ＩＣＯＳ結合物質の同定方法、及びその表面にＩＣＯＳを発現する細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで除去可能な抗ＩＣＯＳモノクローナル抗体。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞、特にＩＣＯＳを有するＴ細胞の表面に発現したＩＣＯＳにいったん結合すると、
ｉｎ  ｖｉｖｏでそれが結合した細胞の枯渇をもたらす、ＩＣＯＳ結合物質。
【請求項２】
ＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質を含む、請求項１に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項３】
抗体又は抗体断片を含む、請求項１又は２に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項４】
Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕ
ｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２
６４５で寄託したハイブリドーマ細胞株ＭＩＣ−９４４、又はＤＳＭＺに受託番号ＤＳＭ
ＡＣＣ  ２６４６で寄託したハイブリドーマ細胞株９Ｆ３によって分泌されるモノクロ
ーナル抗体であるか又はそれと競合する、請求項３に記載の抗体又は抗体断片。
【請求項５】
ＩＣＯＳがヒトＩＣＯＳである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＩＣＯＳ結合物
質。
【請求項６】
請求項４に記載の抗体のエピトープと機能的に同等のエピトープに結合する、請求項５
に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項７】
ＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質が、可溶性ＩＣＯＳ−Ｌ、改変ＩＣＯＳ−Ｌ、又
はそれらの断片である、請求項２に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項８】
１以上のエフェクター分子に結合したＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質を含む、請
求項１〜７のいずれか１項に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項９】
少なくとも１つのエフェクター分子が細胞毒素である、請求項８に記載のＩＣＯＳ結合
物質。
【請求項１０】
少なくとも１つのエフェクター分子が免疫グロブリンＦｃ領域である、請求項８又は９
に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１１】
少なくとも１つのエフェクター分子がＰＥＧである、請求項８〜１０のいずれか１項に
記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１２】
抗ＩＣＯＳ抗体又はその断片が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗
体、ヒト型抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、特に組換え抗体、又は抗体断片であ
る、請求項３〜６及び８〜１１のいずれか１項に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１３】
抗ＩＣＯＳ抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、又はｓｃＦｖ、特に組換
え抗体断片である、請求項１２に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１４】
ＩＣＯＳ結合物質のＩＣＯＳへの結合がＩＣＯＳ−ＬのＩＣＯＳへの結合を妨げる、請
求項１〜１３のいずれか１項に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１５】
ＩＣＯＳシグナル伝達を刺激することなくＩＣＯＳに結合する、請求項１〜１４のいず
れか１項に記載のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１６】
ＩＣＯＳに結合すると細胞内へ内部移行する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の
ＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１７】
ＩＣＯＳに結合しても細胞内へ内部移行しない、請求項１〜１５のいずれか１項に記載
のＩＣＯＳ結合物質。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれかに記載のＩＣＯＳ結合物質を、医薬的に許容可能な担体と組
み合わせて含む、医薬組成物。
【請求項１９】
その表面にＩＣＯＳを発現する細胞によって直接的若しくは間接的に介在される病態の
治療用又は予防用医薬を製造するための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＩＣＯ
Ｓ結合物質の使用。
【請求項２０】
Ｔ細胞によって直接的若しくは間接的に介在される病態の治療用又は予防用医薬を製造
するための、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＩＣＯＳ結合物質の使用。
【請求項２１】
病態が、Ｔ細胞によって介在されるアレルギー、炎症、又は自己免疫疾患、及び／又は
がんである、請求項１９又は２０に記載の使用。
【請求項２２】
病態が、アレルギー性喘息、花粉症、ハチ毒アレルギー、食物アレルギー、多発性硬化
症、サルコイドーシス、関節リウマチ、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、全身性エリ
テマトーデス、炎症性大腸炎（潰瘍性大腸炎、クローン病）、乾癬、血管炎、ＩＣＯＳを
発現するＴ細胞性リンパ腫、移植臓器又は組織の拒絶反応、及び移植片対宿主疾患から成
る群より選択されるＴ細胞介在疾患である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
細胞、特にＩＣＯＳを有するＴ細胞の表面に発現したＩＣＯＳにいったん結合すると、
細胞の枯渇をもたらすＩＣＯＳ結合物質の同定方法であって、以下の工程：
（ａ）ＩＣＯＳを有する細胞を準備し、
（ｂ）試験化合物を準備し、そして
（ｃ）ＩＣＯＳを有する細胞の枯渇に対する試験化合物の影響を測定するか又は検出する
、
ことを含む、前記方法。
【請求項２４】
試験化合物を化学化合物ライブラリーの形態で準備する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＣＯＳを有する細胞に対する試験化合物の影響をｉｎ  ｖｉｖｏで測定又は検出する
、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法で同定した、ＩＣＯＳ結合物質。
【請求項２７】
Ｔ細胞によって直接的若しくは間接的に介在される病態を治療するための医薬を製造す
る方法であって、請求項２６に記載のＩＣＯＳ結合物質を、１以上の医薬的に許容可能な
担体とともに製剤化することを含む、前記方法。
【請求項２８】
病態が、Ｔ細胞によって介在されるアレルギー、炎症、又は自己免疫疾患、及び／又は
がんから成る群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
病態が、アレルギー性喘息、花粉症、ハチ毒アレルギー、食物アレルギー、多発性硬化
症、サルコイドーシス、関節リウマチ、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、全身性エリ
テマトーデス、炎症性大腸炎（潰瘍性大腸炎、クローン病）、乾癬、ＩＣＯＳを発現する
Ｔ細胞性リンパ腫、移植臓器又は組織の拒絶反応、及び移植片対宿主疾患から成る群より
選択される、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴ細胞の選択的枯渇に有用な結合物質に関
する。より詳細には、本発明は、細胞、特にＩＣＯＳを有するＴ細胞の表面に発現したＩ
ＣＯＳにいったん結合すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでそれが結合した細胞の枯渇をもたらすＩ
ＣＯＳ結合物質に関する。ＩＣＯＳ結合物質を用いたＴ細胞関連疾患の治療方法、ＩＣＯ
Ｓ結合物質を含む医薬組成物、ＩＣＯＳ結合物質の同定方法、及びその表面にＩＣＯＳを
発現する細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで除去可能な抗ＩＣＯＳモノクローナル抗体も提供される
。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患及び移植においてＴ細胞を枯渇させるという概念は新しいものではなく、
臨床において数十年にわたりうまく実施されてきた（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ  ＲＥＧ、Ｔ
ｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；１０：１３０−
１３５）。しかしながら、Ｔ細胞上で標的とされる抗原（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５２）は
全て、静止Ｔ細胞及び活性化Ｔ細胞において、又は他の細胞種においてさえも広く発現し
ている。したがって、既存の治療計画は概して免疫抑制的である。ＩＣＯＳは活性化エフ
ェクターＴ細胞においてのみ有意に発現しているため（Ｌｏｈｎｉｎｇ  Ｍ、Ｊｏｕｒｎ
ａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００３；１９７：１８１
−１９３；Ｂｏｎｈａｇｅｎ  Ｋ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ  ２００３；３３：３９２−４０１）、本発明に記載するように、ｉｎ  ｖ
ｉｖｏでＩＣＯＳを発現する活性化Ｔ細胞の枯渇は、非常に高度に特異的な治療効果を提
供する。
【０００３】
欧州特許出願ＥＰ１  １５８  ００４  Ａ２には、ヒト末梢血リンパ球による抗体依存
性細胞障害（ＡＤＣＣ）のメカニズムに基づいて、ＩＣＯＳを過剰発現するトランスフェ
クタントをｉｎ  ｖｉｔｒｏで殺傷することができるヒト抗体が記載されている。記載の
実験は、用いた抗体はある種のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞障害を介在できるが、ＩＣＯＳ発現
Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで完全に枯渇できるかどうかの情報を提供しないことを明示して
いる。この実験がこの情報を提供できない理由は数多くある：１．  生理的にＩＣＯＳを
発現する正常Ｔ細胞ではなく、ＩＣＯＳを過剰発現するトランスフェクションされた株を
標的として用いたこと。２．  記載の実験で使用されたＡＤＣＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細
胞枯渇メカニズムとしてしばしば立証されているが、ｉｎ  ｖｉｖｏ細胞枯渇のメカニズ
ムとしては主として除外されていること（Ａｌｔｅｒｓ  ＳＥ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９０；１４４：４５８７−４５９２；Ｕｃｈｉｄａ  Ｊ、Ｊ
ｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；１９９
：１６５９−１６６９）。ＡＤＣＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞障害性細胞によって認識
されるべき正しいアイソタイプを有する表面分子に結合可能な抗体によりｉｎ  ｖｉｔｒ
ｏで作用するであろう。３．  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ枯渇試験が一般にｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇の
予測値を示さない（Ｕｃｈｉｄａ  Ｊ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；１９９：１６５９−１６６９；Ｉｓａａｃｓ  ＪＤ、
Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００１；４０：７２４−７３８）さまざまな理由が更にあ
る（以下を参照されたい）。これが、これらの標的に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えばＡ
ＤＣＣに基づいて）Ｔ細胞枯渇はうまく作用するが（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ  ＲＥＧ、Ｔ
ｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；１０：１３０−
１３５）、ＣＴＬＡ−４又はＯＸ４０のような他のＴ細胞表面活性化抗原に対するｉｎ  
ｖｉｖｏ枯渇抗体を作製することが困難である理由である。
【０００４】
所定の細胞表面分子がｉｎ  ｖｉｖｏ細胞枯渇の標的として使用できるかどうかを決定
する上で非常に多くの要因が重要である：細胞表面に発現した標的分子レベル、標的抗原
の結合価、標的抗原の細胞表面分布、細胞膜への接近性、抗体結合後の標的分子の出現又
は非内部移行、生理的発現の経過又は期間、さまざまな組織における標的抗原の接近可能
性（リンパ節、脾臓、血液）、及び他の要因（Ａｌｔｅｒｓ  ＳＥ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏ
ｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９０；１４４：４５８７−４５９２；Ｕｃｈｉｄａ  Ｊ
、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００４；１
９９：１６５９−１６６９；Ｉｓａａｃｓ  ＪＤ、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００１
；４０：７２４−７３８）。これらの要因、したがって細胞枯渇の標的としての所定の分
子の一般的有用性は、適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを用いてのみ試験することができる。
【０００５】
更に、共刺激分子としてのＩＣＯＳは、抗体又はＩＣＯＳに対する他の物質が、枯渇の
代わりに、潜在的に重篤な疾患を悪化させる効果とともにｉｎ  ｖｉｖｏでＩＣＯＳ+Ｔ
細胞の厄介な活性化や増殖をもたらす危険性を有する。これまで、共刺激分子を標的とし
て用いることによってＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇できるかどうかを示す有効なデータ
はない。多くの重大なパラメータをｉｎ  ｖｉｔｒｏで正しく再現できない（例えばＩＣ
ＯＳの表面密度及び表面分布、ＩＣＯＳ結合物質のさまざまな組織への結合特性、など）
ため、ＩＣＯＳ共刺激効果に関するｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験はｉｎ  ｖｉｖｏ状況の予測値
を示さない。したがって、不都合な細胞活性化や増殖もなく、ＩＣＯＳをｉｎ  ｖｉｖｏ
で活性化Ｔ細胞の治療的枯渇の標的として使用できるかどうかという問題は、適切なｉｎ
ｖｉｖｏ疾患モデルにおいてのみ回答することができる。そのようなｉｎ  ｖｉｖｏ試
験のみが治療標的としてのＩＣＯＳの有用性に関する予測能力を有する。同時に、ｉｎ  
ｖｉｖｏ試験のみがＩＣＯＳに対するモノクローナル抗体の枯渇剤としての有用性に関す
る予測値を示す。
【発明の開示】
【０００６】
本発明では、肺アレルギーモデルにおいて、モノクローナル抗体の使用により、不都合
な反応（例えばＩＣＯＳ発現Ｔ細胞の細胞活性化、増殖、増加）もなくｉｎ  ｖｉｖｏで
ＩＣＯＳ発現Ｔ細胞を枯渇可能であることを記載する。更に、ＩＣＯＳ+細胞をｉｎ  ｖ
ｉｖｏで枯渇させることによってモデル疾患を軽減可能であることを証明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
免疫系は、Ｔリンパ球を含め、さまざまな非常に特殊化した細胞種で構成される。生理
的に、Ｔリンパ球は静止状態で体内を循環する。これらの状況では、Ｔ細胞は、抗原認識
に関与するＴ細胞受容体を表面に発現している。静止Ｔリンパ球は、Ｔ細胞受容体に加え
て他の多くの細胞表面分子を構成的様式で発現する。これらの表面タンパク質のいくつか
は体内区画を通るＴ細胞の適正な遊走に関与し、いくつかは免疫系の他の細胞への結合力
（「接着」）を提供し、いくつかはＴ細胞が抗原（例えばＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ
２８）を認識するとＴ細胞の適切な活性化を保証するために発現する。さまざまな体内区
画を巡回するＴ細胞は、Ｔ細胞受容体が指向する抗原に遭遇しない限り静止状態のままで
あり、細胞表面分子パターンは変化しない。Ｔ細胞が「抗原提示細胞」（例えば樹状細胞
）によって提示された抗原にいったん遭遇すると、Ｔ細胞は部分的に活性化される。Ｔ細
胞受容体単独での抗原認識は、多くの場合、Ｔリンパ球の完全な活性化には不十分であり
、更なるＴ細胞表面分子（以後、「共刺激物質」又は「共刺激分子」ともいう）による同
時刺激を通常必要とする。抗原による活性化後、Ｔ細胞は多くの新たな細胞表面分子（例
えばＣＤ２５、ＣＤ６９）を発現し始め、その中には新たな共刺激分子（例えばＩＣＯＳ
、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ（Ｃａｒｒｅｎｏ  Ｂら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．２００２、２０：２９−５３；Ｃｒｏｆｔ  Ｍ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２
００３、３：６０９−６２０））も含まれる。活性化Ｔ細胞は増殖も開始し、多数のサイ
トカイン、例えばメッセンジャーとして機能するＩＬ−２及びＩＦＮ−γを合成し始める
。したがって、Ｔ細胞活性化は単一工程ではなく、初期活性化と、その後の進行中のＴ細
胞活性化と分化の連続工程から成る。この活性化工程の終点は、完全に活性化され、さま
ざまなエフェクター機能を発揮可能な武装したＴ細胞である「エフェクターＴ細胞」であ
る。典型的なエフェクター機能は：ａ）細胞障害性物質（他の細胞を「殺傷」するために
利用される）の合成及び分泌、ｂ）Ｔ細胞表面分子又は分泌されたサイトカインを介した
免疫系の他の細胞との情報伝達である。これらのエフェクター機能を介して、Ｔ細胞は抗
原特異的免疫反応を監督する。エフェクターＴ細胞は病原体侵入部位に蓄積し、細胞障害
性物質を放出することによって感染細胞を排除可能である。また、エフェクターＴ細胞は
炎症を誘発し、Ｂ細胞による抗原特異的抗体の産生を監督及び制御する。生理的免疫防御
では、細胞障害性細胞や特異的に形成された抗体が、体内に侵入したウイルス性又は細菌
性の病原体を排除する。病原体が一掃されると、この病原体に対する免疫防御に参加して
いたＴ細胞は生理的に死滅するか又は「記憶」Ｔ細胞に形質転換する。
【０００８】
しかしながら、免疫系はある状況下では静止状態に戻らない。機能不良の１つのタイプ
は病原体に対する過剰反応である。その場合、抗原特異的Ｔ細胞は侵入病原体によって非
常に強力に活性化され、これは病原体（ウイルス、細菌）に感染した体細胞を非常に強力
に殺傷する。この種の異常反応の例は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染した場合に観察されるこ
とがある劇症肝不全であろう。この状況では、大多数の肝細胞がＢ型肝炎ウイルスに感染
している。宿主は公然と強力な免疫反応を開始し、Ｂ型肝炎ウイルス抗原を認識する多く
の細胞障害性Ｔ細胞を発達させる。その結果、大多数の宿主肝細胞はＴ細胞エフェクター
相で殺傷され、患者の機能性肝細胞を大きく枯渇させ、生命を脅かす肝不全をもたらす。
【０００９】
他の種類の免疫系機能不良は、自己免疫反応である。自己免疫反応の開始誘因はほとん
ど知られておらず、最初は感染であるかもしれない。最初の原因が何であっても、自己免
疫病態の共通する特徴は、免疫系が自己抗原を「外来」として異常認識し、自己組織に対
する免疫防御（Ｔ細胞、Ｂ細胞）に変化することである。免疫系によって「外来」と認識
される組織の種類に応じてさまざまな臨床像が生ずる。臨床的に十分に特徴付けられた「
自己免疫疾患」は、例えば関節リウマチ、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、炎症性大
腸炎（潰瘍性大腸炎、クローン病）、多発性硬化症、サルコイドーシス、乾癬、全身性エ
リテマトーデス、血管炎、その他である。これらの疾患の全てにおいて、Ｔ細胞は宿主自
身の組織を直接攻撃するか、又は疾患を引き起こす自己反応性抗体の産生をＢ細胞に指示
する（Ｔａｎ  ＥＭ、Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９７、８１５：１−１４）
。自己免疫反応の全ての場合において、エフェクターＴ細胞は攻撃された組織に蓄積する
。
【００１０】
他の種類の免疫系機能不良はアレルギー反応である。生理的に、免疫系は、宿主にとっ
て危険な外来病原体に由来する抗原を認識するようにデザインされる。逆に、宿主にとっ
て危険でない外来抗原は無視される。この非危険性外来抗原群には、多くの環境抗原、例
えば花粉、食物抗原、又はハチ毒が属する。アレルギー性の宿主の免疫系はこれらの環境
抗原を異常認識し、これらの環境抗原に対するＴ細胞エフェクターを産生することによっ
てそれらと反応する。同時に、宿主は、これらの抗原に対するＢ細胞免疫系を活性化する
ことによって反応する。また、Ｂ細胞によるアレルギー反応は、エフェクターＴ細胞によ
って監督及び制御される。環境抗原に対するこの異常認識の結果、認識される抗原の種類
に応じて、アレルギー性の個人はさまざまな病態に罹患する。１つの主要な疾患の実体は
肺のアレルギー性喘息であり、吸入した外来タンパク質（木又は草の花粉であることが多
い）が免疫系によって異常認識され、肺組織の炎症や、抗原に対する抗体反応の進行（Ｉ
ｇＥアイソタイプによることが多い）をもたらす。アレルギー反応は、食物成分によって
誘発されることができ、生命を脅かす急性の病態を生ずることも多い。生命を脅かす病態
は、ハチ毒に対するアレルギーからも生じ得る。
【００１１】
Ｔ細胞及びＢ細胞免疫系の無用な反応は同種異系組織移植の後にも遭遇する。宿主は、
ドナーから臓器を受けるか、又はそこから免疫細胞が生ずる造血細胞（例えば幹細胞、骨
髄）を受ける。第１の場合、宿主は、臓器を外来として認識し、外来組織（「臓器拒絶」
）に対する免疫防御（エフェクターＴ細胞、エフェクターＴ細胞によって監督される液性
Ｂ細胞反応）を開始することが多い。第２の場合、移植外来幹細胞又は骨髄細胞は、宿主
に対する免疫攻撃を開始できる。この免疫攻撃は、「移植片対宿主疾患」をもたらす。臓
器拒絶又は移植片対宿主疾患は、関与する宿主又は移植片のエフェクターＴ細胞を抑制及
び／又は除去することによって予防することができる（Ｈａｌｅ  Ｇら、Ｂｌｏｏｄ  １
９９８、９２：４５８１−４５９０）。
【００１２】
がん疾患は、自己細胞の抑制されない持続性増殖を特徴とする。免疫系細胞は、制御さ
れない増殖によって影響される場合があり、これらの病態をリンパ腫という。Ｔ細胞リン
パ腫は特徴的にＴ細胞表面活性化抗原を発現し、その点で活性化Ｔ細胞と似ている。
【００１３】
Ｔ細胞が関与し、侵入する病原体に対して指向する生理的免疫反応だけでなく、自己免
疫疾患（疾患の非限定的なリストに関しては上記を参照されたい）、慢性アレルギー反応
（疾患の非限定的なリストに関しては上記を参照されたい）、又は移植反応（臓器拒絶、
移植片対宿主疾患を含む）の経過における病的炎症プロセスも全て免疫反応部位における
抗原特異的活性化エフェクターＴ細胞の蓄積をもたらす。
【００１４】
今日までに採用された免疫療法は比較的非特異的である。ステロイド化合物、シクロス
ポリンＡ、又はラパマイシンのような薬理免疫抑制剤は、非常に広範な方法で作用を発揮
し、免疫系の多くの細胞に影響を及ぼす。したがって、これらの免疫抑制剤の適用は、レ
シピエントを厳しい免疫抑制状態にし、多くの無用の副作用をもたらす。同時に、これら
の薬剤はＴ細胞の活性化を抑制するがＴ細胞を排除しないため、適用時のみ作用する。そ
の結果、この種の免疫抑制剤がいったん取り除かれると、適当なＴ細胞受容体を有するＴ
細胞は自己抗原又はアレルゲンを認識し、無用の免疫反応を再度開始するであろう。
【００１５】
代替治療方法は、あるＴ細胞を永続的に排除するためのモノクローナル抗体又はポリク
ローナル抗体の使用である。抗体の結合後、Ｔ細胞は循環から除去され、永続的に破壊さ
れる。Ｔ細胞表面分子ＣＤ３に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いた治療が過去
において採用されている（Ｂｒｏｃｋ  ＭＶら、Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔ．２００１、２０：１２８２−１２９０）。しかしながら、この種の治療は、
Ｔ細胞集団全体を排除し、患者を厳しい免疫不全状態にし、したがって非常に感染しやす
くする。好ましいアプローチは、残存するＴ細胞集団は無傷のまま、自己免疫／アレルギ
ー／炎症／拒絶反応に積極的に関与するＴ細胞のみを選択的に排除することであろう。こ
の治療方法は未だ達成されていない。
【００１６】
ＩＣＯＳは異常な発現特性を有する共刺激分子である。静止Ｔ細胞（例えばナイーブＴ
細胞、静止記憶Ｔ細胞）では発現しないが、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴ細胞活性化後の細胞表面
で新たに発現し、Ｔ細胞エフェクター相全体を通して細胞表面に残存する（Ｂｏｎｈａｇ
ｅｎ  Ｋら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３、３３：３９２−４１０）。Ｂ細胞
、樹状細胞、又はマクロファージのような免疫系の他の細胞には発現しない（Ｈｕｔｌｏ
ｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９、３９７：２６３−２６６）。ＩＣＯＳは、体内のさま
ざまな細胞で発現する他の細胞表面分子、ＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）と生理的に
相互作用する（Ｃａｒｒｅｎｏ  Ｂら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２、
２０：２９−５３）。抗原存在下における天然リガンドによるＩＣＯＳの拘束及び架橋は
、全てのＴ細胞エフェクター機能を生理的に増強する（例えば増殖、サイトカイン及び細
胞障害性分子の分泌、細胞表面分子の上方制御（Ｙｏｓｈｉｎａｇａ  ＳＫら、Ｎａｔｕ
ｒｅ  １９９９、４０２：８２７−８３２））。しかしながら、ＩＣＯＳ−Ｌのｉｎ  ｖ
ｉｖｏ過剰発現はＴ細胞を刺激し、形質細胞の病的増殖及び免疫系の機能的破壊を生ずる
（Ｙｏｓｈｉｎａｇａ  ＳＫら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９、４０２：８２７−８３２）。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、全てのＴ細胞機能の共刺激は、細胞表面でＩＣＯＳと架橋するＩ
ＣＯＳ特異的抗体によるＩＣＯＳの拘束後も観察することができる（Ｈｕｔｌｏｆｆら、
Ｎａｔｕｒｅ  １９９９、３９７：２６３−２６６）。したがって、これらのデータに基
づくと、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体によるＩＣＯＳの拘束は、ｉｎ  ｖ
ｉｖｏでＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞の望ましくない共刺激性の活性化や増殖を多くの厄介な効果
とともに誘発する可能性が高い（実施例４も参照されたい）。
【００１７】
現在、発明者らは、それらが結合するＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇を引き起こすＩＣＯ
Ｓ結合物質を単離可能であることを発見している。したがって、本発明は、望ましくない
免疫反応を駆動するエフェクターＴ細胞を特異的に枯渇させる方法を提供する。
【００１８】
本発明は、既存の療法形態に対して多くの利点を有する。無用の自己免疫／アレルギー
／炎症／移植抗原を認識するＴ細胞のみを非常に特異的且つ永続的に免疫系から除去し、
有益な効果が治療休止後も持続する。治療された個人は感染性病原体に対して完全に免疫
応答性であろう。これらのエフェクターＴ細胞は抗原特異的Ｂ細胞の産生も監督し、した
がって抗原特異的抗体の分泌を支配するため、抗原特異的エフェクターＴ細胞の除去は抗
原特異的Ｂ細胞反応の抑制ももたらし得る。したがって、ＩＣＯＳ陽性細胞の免疫系から
の枯渇は、無用の免疫反応を有する多くの病態の治療に主要な進歩を表す。本発明の目的
の場合、ＩＣＯＳ陽性細胞は、細胞、特にＴ細胞、好ましくは活性化Ｔ細胞の表面にＩＣ
ＯＳを発現する細胞を含むと理解される。
【００１９】
本発明の第１の側面は、細胞、好ましくはＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞の表面に発現
したＩＣＯＳにいったん結合すると、ｉｎ  ｖｉｖｏでそれが結合した細胞の枯渇をもた
らすＩＣＯＳ結合物質について言及する。
【００２０】
本発明において「枯渇」という用語は、免疫系からのＩＣＯＳ陽性細胞の部分的又は好
ましくは完全な除去を意味する。したがって、本発明のＩＣＯＳ結合物質は、ＩＣＯＳに
結合可能であり、免疫系からＩＣＯＳ陽性細胞を部分的に又は好ましくは完全に除去可能
な物質であり得る。好ましくは、ＩＣＯＳ陽性細胞の枯渇は、細胞表面にＩＣＯＳを発現
する細胞、好ましくは活性化ＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞を免疫系から治療的に有効に枯渇させる
ことを意味する。
【００２１】
ＩＣＯＳ陽性細胞の治療的に有効な枯渇は、病原体に対する過剰反応、自己免疫疾患、
炎症性疾患、アレルギー反応、移植片対宿主疾患、又はＴ細胞リンパ腫を患う個人におい
て、活性化Ｔ細胞の減少をもたらすことができる。ＩＣＯＳ陽性細胞の治療的に有効な枯
渇は、上記の異常な又は不適切な免疫反応において治療効果をもたらすことが好ましい。
治療的に有効な枯渇は、特に患者から採取した血液又は組織サンプルにおける全ＩＣＯＳ
陽性細胞数の減少をｉｎ  ｖｉｖｏで観察することによって、又は異常な若しくは不適切
な免疫反応の抑制によって検出することができる。ＩＣＯＳ陽性細胞の枯渇は、例えば、
実施例に記載の方法を用いることによって、又は当該技術分野において公知の他の好適な
方法（例えば組織学）によって検出することができる。
【００２２】
ＩＣＯＳ結合物質は、細胞、好ましくはＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞の表面に発現し
たＩＣＯＳに結合可能なＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質を含むことが好ましく、結
合は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質が結合した細胞の枯渇をも
たらす。ＩＣＯＳ結合物質は、ヒトＩＣＯＳに結合し、特にＩＣＯＳ発現細胞の不都合な
細胞活性化、増殖、又は発現を伴うことなく、その表面にＩＣＯＳを発現するヒト細胞、
特に活性化Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させることが好ましい。
【００２３】
本明細書において、「結合タンパク質」又は「結合ペプチド」という用語は、細胞表面
に発現したＩＣＯＳに結合し、それらが結合した、ＩＣＯＳを有する細胞、特にＩＣＯＳ
を有する活性化Ｔ細胞を、限定されるものではないが、ＩＣＯＳに対するポリクローナル
抗体又はモノクローナル抗体、抗体断片、及びタンパク質骨格、例えばＩＣＯＳに対する
アンチカリンを含めた治療的に有効な方法で枯渇させるタンパク質又はペプチドのクラス
を表す。ＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞の枯渇の治療的有効性は、循環又は影響を受けた組織におけ
るＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞レベルをモニターすることによって直接評価することができ、例え
ば局所的若しくは全身性の炎症パラメータを測定することによって、自己抗体レベルを測
定することによって、又は臓器機能を試験することによって間接的に評価することもでき
る。
【００２４】
本発明の好ましい態様では、ＩＣＯＳ結合ペプチド又はタンパク質は、細胞、好ましく
はＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞の表面に発現したＩＣＯＳに結合する抗体又はその断片
であり、結合は、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗ＩＣＯＳ抗体又はその断片が結合した細胞の枯渇を
もたらす。抗体又は抗体断片を調製する手順は、標準的なハイブリドーマ技術（例えば実
施例１を参照されたい）を用いて、又は当業者に周知の組換え法にしたがい（Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ  Ｆｅａｔｕｒｅ、Ｎａｔｕｒｅ  ２００３、４２６：７２５−７３１；Ｈｕ
ｄｓｏｎ  ＰＪ、Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００３、９：１２９−１３４）実施する
ことが好ましい。
【００２５】
本明細書において、抗体又は抗体断片という用語は、組換え法で調製され、必要に応じ
て改変された、キメラ抗体、ヒト化抗体、多機能抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗
体、１本鎖抗体、及びＦａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ）2断片（例えばＥＰ−Ｂ１−０
３６８  ６８４号、ＵＳ４，８１６，５６７号、ＵＳ４，８１６，３９７号、ＷＯ８８
／０１６４９号、ＷＯ９３／０６２１３号、又はＷＯ９８／２４８８４号を参照されたい
）、Ｆａｂ発現ライブラリーから作製された断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、並
びに上記のいずれかのエピトープ結合断片のような抗体、抗体断片、又はそれらの抗原結
合部、特に抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を意味するものとしても理解される。
【００２６】
古典的な抗体の代替物としては、例えばＩＣＯＳに対するタンパク質骨格、例えばリポ
カリンに基づいているアンチカリン（Ｂｅｓｔｅら、（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９６、１８９８−１９０３）を使用することも可能である。
リポカリンの天然リガンド結合部位、例えばレチノール結合タンパク質又はビリン結合タ
ンパク質は、例えば「コンビナトリアルタンパク質デザイン」アプローチで、選択したハ
プテン、ここではＩＣＯＳに結合するように変えることができる（Ｓｋｅｒｒａ、２００
０、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１４８２、３３７−５０）。他の公知
のタンパク質骨格は、分子認識のための抗体の代替物として知られている（Ｓｋｅｒｒａ
（２０００）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．、１３、１６７−１８７）。
【００２７】
本発明の有益な態様では、ＩＣＯＳ結合物質は、結合したＩＣＯＳ陽性細胞を、補体の
誘引及び活性化を介して枯渇させる抗ＩＣＯＳ抗体又はその断片を含む。次に活性化補体
は、その細胞障害作用で細胞を殺傷する。あるいは、ＩＣＯＳ陽性細胞は、結合した抗Ｉ
ＣＯＳ抗体又はその断片を、ｉｎ  ｖｉｖｏでそのＦｃ受容体を介して拘束し、抗体で標
識された細胞を貪食するためのシグナルを受ける食細胞によって枯渇させることができる
。
【００２８】
ＩＣＯＳ陽性細胞の除去を介在する抗体及び抗体断片は、本明細書において抗ＩＣＯＳ
抗体又は抗ＩＣＯＳ抗体断片ともいう。ＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させる
ＩＣＯＳ結合物質は、ＩＣＯＳ結合物質をスクリーニングする本発明の方法を用いて同定
することもできる。
【００２９】
出願人によって２００４年４月１４日にＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ
Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（Ｄ
ＳＭＺ）、ブラウンシュワイク、ドイツに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２６４５で寄託され
たハイブリドーマＭＩＣ−９４４によって作製されるモノクローナル抗体ＭＩＣ−９４４
、及び出願人によって２００４年４月１４日にＤＳＭＺに受託番号ＤＣＭ  ＡＣＣ  ２６
４６で寄託されたハイブリドーマ９Ｆ３によって作製されるモノクローナル抗体９Ｆ３も
本発明によって提供される。これらの抗体はマウスＩＣＯＳに結合し、その表面にＩＣＯ
Ｓを有するマウスＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させることが証明されている（実施例１
、３、４、及び５を参照されたい）。
【００３０】
１つの態様では、ヒトＩＣＯＳに結合する本発明のＩＣＯＳ結合物質は、モノクローナ
ル抗体ＭＩＣ−９４４及び／又は９Ｆ３によるマウスＩＣＯＳ陽性細胞の枯渇に匹敵する
方法でヒトＩＣＯＳ陽性細胞を枯渇させる。
【００３１】
１つの態様では、ＩＣＯＳ結合物質は、マウスＩＣＯＳに対するモノクローナル抗体Ｍ
ＩＣ−９４４及び／又は９Ｆ３の特異性と同様に、ヒトＩＣＯＳに対してエピトープ特異
性を有する抗体又はその抗原結合断片であり、モノクローナル抗体ＭＩＣ−９４４及び／
又は９Ｆ３が結合するマウスＩＣＯＳエピトープのような、ヒトＩＣＯＳ上の同一又は機
能的に同等なエピトープに反応性の抗体又は抗原結合断片を含む。
【００３２】
エピトープという用語は、抗体が認識し、結合可能な抗原の部分を表すことを意味する
。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖鎖のような分子の化学的に活性な表面配置から成
り、特異的３次元構造特性、及び特異的電荷特性を有する。本発明のＩＣＯＳ結合物質が
結合するＩＣＯＳエピトープは、ＩＣＯＳの共刺激を生じず、代わりにＩＣＯＳ結合物質
によってＩＣＯＳを有する細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させるものであることが好ましい
。
【００３３】
したがって、機能的に同等なエピトープは、本発明のＩＣＯＳ結合物質が結合したとき
、好ましくはＩＣＯＳの共刺激を生じず、代わりにＩＣＯＳ結合物質によってＩＣＯＳを
有する細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させるものであるエピトープ、例えばＭＩＣ−９４４
及び／又は９Ｆ３抗体が認識するマウスＩＣＯＳのエピトープのようなヒトＩＣＯＳ又は
マウスＩＣＯＳのエピトープである。
【００３４】
エピトープが保存された種の場合は、競合アッセイを用いてＩＣＯＳ結合物質のスクリ
ーニングを行うことができる。試験されるＩＣＯＳ結合物質がモノクローナル抗体ＭＩＣ
−９４４又は９Ｆ３の１つと競合する場合は、ＩＣＯＳ結合物質が同一の又は密接に関連
したエピトープに結合する可能性が高い。物質が本明細書に記載のモノクローナル抗体Ｍ
ＩＣ−９４４及び／又は９Ｆ３の特異性を有するかどうかを決定する更に他の方法は、こ
れらのモノクローナル抗体のうちの１つをＩＣＯＳとプレインキュベーションして結合さ
せ、次に試験物質を加えて、試験物質がＩＣＯＳ結合能を阻害されるかどうか決定するこ
とである。阻害される場合、ほとんど確実に本明細書に記載の抗ＩＣＯＳモノクローナル
抗体ＭＩＣ−９４４又は９Ｆ３と同一又は機能的に同等なエピトープへの結合特異性を有
する。
【００３５】
有利なことには、ＩＣＯＳ特異的抗体は、補体の最適な結合のために、好適なＩｇＧ重
鎖を有するキメラ抗体を用いて遺伝子操作することができる。ここで、補体結合領域は、
場合により、補体成分の最大結合のために標準法（Ｍｉｌｅｔｉｃ  ＶＤら、Ｃｕｒｒ．
Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５、７：４１−４７）にしたがい変異されている。
【００３６】
他の態様では、ＩＣＯＳ特異的抗体は、食細胞のＦｃ受容体への最適な結合のために、
標準法（Ｆ．Ｓｈａｋｉｂ（監修）、ヒトＩｇＧサブクラス、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅ
ｓｓ  １９９０；Ｗｉｎｋｅｌ  ＪＧ  ｖａｎ  ｄｅ、Ｃａｐｅｌ  ＰＪ（監修）、ヒト
ＩｇＧＦｃ受容体、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  １９９６）にしたがい遺伝子操作することができ
、その結果ｉｎ  ｖｉｖｏで最適な枯渇をもたらす。
【００３７】
抗体には、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、即
ち抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子が含まれる。本発明の免疫グロブ
リン分子は、免疫グロブリン分子のいかなるクラス（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＤ、及びＩｇＡ）、又はサブクラスでもよい。
【００３８】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９
７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリ
ドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４：７２
）、及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、モノクローナル抗体とがん療法、ｐ
ｐ７７−９６、Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ社、１９８５）などの当該技術分野において公知
の方法で調製することができる。
【００３９】
本発明に用いる抗体又はその断片は、単一リンパ球抗体法を用いて、例えばＢａｂｃｏ
ｏｋ，Ｊ．ら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３（１５
）：７８４３−７８４８及びＷＯ９２／０２５５１号に記載の方法によって特異的抗体を
作製するために選択された単一リンパ球から作製された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡ
をクローニング及び発現させることによって作製することもできる。
【００４０】
ヒト化抗体は、非ヒト種の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びヒト免疫グロブリ
ン分子のフレームワーク領域を有する、非ヒト種抗体分子であることが好ましい（例えば
ＵＳ５，５８５，０８９号を参照されたい）。
【００４１】
キメラ抗体は、軽鎖及び重鎖の遺伝子が異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメ
ントで構成されるように遺伝子操作されている免疫グロブリン遺伝子によってコードされ
た抗体であることが好ましい。これらのキメラ抗体は抗原性が低い可能性が高い。２価抗
体は、当該技術分野において公知の方法（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ
３０５：５３７−５３９；ＷＯ９３／０８８２９号；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９
１、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９）で作製することができる。多価抗体は、
複数の特異性を含んでいてもよいし、単一特異性であってもよい（例えばＷＯ９２／２２
８５３号を参照されたい）。
【００４２】
本発明に用いる抗体は、当該技術分野において公知のさまざまなファージディスプレイ
法を用いて作製することもでき、Ｂｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ、１９９５、１８２：４１−５０）、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ、１９９５、１８４：１７７−１８６）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、２４：９５２−９５８）、Ｐｅｒｓｉｃら（Ｇｅｎｅ、
１９９７、１８７、９−１８）、Ｂｕｒｔｏｎら（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ、１９９４、５７：１９１−２８０）、並びにＷＯ９０／０２８０９号；ＷＯ
９１／１０７３７号；ＷＯ９２／０１０４７号；ＷＯ９２／１８６１９号；ＷＯ９３／１
１２３６号；ＷＯ９５／１５９８２号；ＷＯ９５／２０４０１号；並びにＵＳ５，６９８
，４２６号；５，２２３，４０９号；５，４０３，４８４号；５，５８０，７１７号；５
，４２７，９０８号；５，７５０，７５３号；５，８２１，０４７号；５，５７１，６９
８号；５，４２７，９０８号；５，５１６，６３７号；５，７８０，２２５号；５，６５
８，７２７号；５，７３３，７４３号；及び５，９６９，１０８号に開示されたものが含
まれる。ＵＳ４，９４６，７７８号に記載されているような１本鎖抗体の作製技術を、Ｉ
ＣＯＳに対する１本鎖抗体を作製するために適合させることもできる。トランスジェニッ
クマウス、又は他の哺乳動物を含めた他の生物を用いてヒト化抗体を発現させることもで
きる。
【００４３】
本発明の他の好ましい態様では、ＩＣＯＳ結合物質は、１以上のエフェクター分子に結
合したＩＣＯＳ結合成分を含む。好適なＩＣＯＳ結合成分の例は、上記のような抗ＩＣＯ
Ｓ抗体及びその断片、並びにＩＣＯＳ−Ｌ及びその断片を含むことが好ましい。
【００４４】
１つの例では、本発明のＩＣＯＳ結合物質に用いるＩＣＯＳ結合成分は、ＩＣＯＳ−Ｌ
（Ｂ７ｈ、ＧＬ５０、ＢＲＰ−１、Ｂ７−Ｈ２、ＬＩＣＯＳ）の全部又は部分、ＩＣＯＳ
−ＬのＩＣＯＳ結合変異体、又はＩＣＯＳ−ＬのＩＣＯＳ結合断片、好ましくは可溶性Ｉ
ＣＯＳ−Ｌ、又はＩＣＯＳ−Ｌの可溶性断片若しくは変異体を含むことができる。ＩＣＯ
Ｓ−Ｌは、ヒトＩＣＯＳ−Ｌの１〜２５８残基を含む細胞外領域を含むことが好ましい（
Ｌｉｎｇ  Ｖら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００、１６４：１６５３−１６５７）。この
配列は、ＩＣＯＳへの結合親和性を最適にするために改変することができる。
【００４５】
本明細書において「エフェクター分子」という用語には、例えば抗腫瘍薬、薬物、毒素
、生物活性タンパク質、酵素、他の抗体又は抗体断片、合成又は天然ポリマー、核酸及び
その断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらの断片、放射性核種、特に放射性ヨウ化物
、放射性同位体、キレートされた金属、ナノ粒子、並びに蛍光化合物又はＮＭＲ若しくは
ＥＳＲ分光法で検出できる化合物のようなレポーター基が含まれる。
【００４６】
好ましい態様では、エフェクター分子は、それが結合したＩＣＯＳ陽性細胞のｉｎ  ｖ
ｉｖｏ枯渇の誘引に関与する。１つの態様では、エフェクター分子は補体を動員し、活性
化し、又は抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）をｉｎ  ｖｉｖｏで介在すること、又はｉｎ
ｖｉｖｏでＦｃ受容体に結合することによって食作用を介在することが可能である。そ
のような成分には、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３、マウスＩｇＧ２ａ、又はラットＩｇＧ２
ｂなどの、これらの特徴を発揮することが知られている免疫グロブリンＦｃ領域サブタイ
プを含めることができる。これらの免疫グロブリンサブタイプは、これらのエフェクター
機能をｉｎ  ｖｉｖｏで高めるために更に改変することができる。
【００４７】
他の例では、エフェクター分子は、細胞に有害な（例えば殺傷する）物質を含めた細胞
毒素又は細胞毒性物質であることができる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ
、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノ
ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシ
ン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマ
イシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイ
ン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、並びにそれらのアナログ又
はホモログが挙げられる。エフェクター分子には、限定されるものではないが、代謝拮抗
剤（例えばメトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、
５−フルオロウラシル  ダカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオテ
パ  クロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮ
Ｕ）、シクロフォスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾドシ
ン、マイトマイシンＣ、及びｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）  シスプ
ラチン）、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びド
キソルビシン）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレ
オマイシン、ミトラマイシン、アンスラマイシン（ＡＭＣ）、カリケアマイシン、又はデ
ュオカルマイシン）、並びに抗分裂剤（例えばビンクリスチン及びビンブラスチン）も含
まれる。
【００４８】
他のエフェクター分子には、111Ｉｎ及び90Ｙ、Ｌｕ177、ビスマス213、カリホルニウ
ム252、イリジウム192、及びタングステン188／レニウム188などの放射性核種；又は限定
されるものではないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩインヒビター、タキ
ソイド、及びスラミンなどの薬物を含めることができる。
【００４９】
ＩＣＯＳ結合物質は、結合した細胞のアポトーシスを誘導することによってＩＣＯＳ陽
性細胞を枯渇させることもできる。ＩＣＯＳ結合物質は、例えばこれらの細胞でアポトー
シスを誘導するように他の薬理物質と組み合わせて、ＩＣＯＳ陽性エフェクターＴ細胞を
枯渇させるように最適化することができる（Ｙｕ  ＸＺら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００
３、１７０：３００２−３００６）。
【００５０】
そのようなエフェクター分子をタンパク質へ結合させる技術は当該技術分野において周
知である（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、制御薬物送達、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら監修、１
９８７、ｐｐ．６２３−５３；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６
２：１１９−５８；及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  
ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７−１２３を参照されたい）。ＩＣＯＳ結
合物質が抗体である１つの例では、抗体又はその断片は、共有結合（例えばペプチド結合
）を介して、他のタンパク質（又はその部分；タンパク質の少なくとも１０、２０、又は
５０アミノ酸部分が好ましい）のアミノ酸配列に、場合によりＮ端又はＣ端で融合させる
ことができる。抗体又はその断片は、他のタンパク質に、抗体の定常ドメインのＮ端で連
結されることが好ましい。組換えＤＮＡ法を用いて、例えばＷＯ８６／０１５３３号及び
ＥＰ０３９２７４５に記載のような融合体を作製することができる。
【００５１】
更なる態様では、エフェクター分子は、ＩＣＯＳ結合物質の半減期をｉｎ  ｖｉｖｏで
上昇させ、及び／又はＩＣＯＳ結合物質、特に抗体の、免疫系への上皮バリアーを越えた
送達を高め、及び／又はＩＣＯＳ結合物質の免疫原性を減少させることができる。
【００５２】
ＩＣＯＳ結合成分が抗体である好ましい態様では、抗体はポリ（エチレングリコール）
（ＰＥＧ）部分に付着していることが好ましい。抗体は抗体断片でもよく、ＰＥＧ分子は
抗体断片に局在している利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば遊離の
アミノ基、イミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、又はカルボキシル基を介して付着す
ることができる。そのようなアミノ酸は、抗体断片に天然に存在していても、組換えＤＮ
Ａ法を用いて断片に組み込んでもよい。例えばＵＳ５，２１９，９９６号及びＵＳ５，６
７７，４２５号を参照されたい。複数の部位を用いて２以上のＰＥＧ分子を付着させるこ
とができる。ＰＥＧ分子は、抗体断片に局在する少なくとも１つのシステイン残基のチオ
ール基を介して共有結合的に連結されることが好ましい。チオール基を付着点として用い
る場合、適切に活性化したエフェクター分子、例えばマレイミド誘導体及びシステイン誘
導体のようなチオール選択性誘導体を用いることができる。
【００５３】
抗体は、例えばＥＰ０９４８５４４号に開示の方法（「ポリ（エチレングリコール）の
化学、生物工学的・生物医学的応用」、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ（監
修）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク；「ポリ（エチレングリコール）の化学
と生物学的応用」、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ及びＳ．Ｚａｌｉｐｓｋ
ｙ（監修）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、ワシントンＤＣ；
並びに「生物医科学のための生体結合タンパク質カップリング技術」、１９９８、Ｍ．Ａ
ｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ニューヨーク；Ｃｈａ
ｐｍａｎ，Ａ．２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅ
ｗｓ  ２００２、５４：５３１−５４５も参照されたい）にしたがい、ＰＥＧ化された、
即ち共有結合的に付着したＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する改変Ｆａｂ’
断片であることが好ましい。ＰＥＧは、ヒンジ領域のシステインに付着していることが好
ましい。１つの例では、ＰＥＧで修飾されたＦａｂ’断片は、改変ヒンジ領域の単一チオ
ール基に共有結合的に連結したマレイミド基を有する。リジン残基は、マレイミド基に共
有結合的に連結することができ、リジン残基上のそれぞれのアミン基には、分子量およそ
２０，０００Ｄａのメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーが付着することができ
る。したがって、Ｆａｂ’断片に付着したＰＥＧの合計分子量は、およそ４０，０００Ｄ
ａであり得る。
【００５４】
１つの例では、本発明のＩＣＯＳ結合物質は、ＩＣＯＳ−ＬのＩＣＯＳへの結合もブロ
ックする。リガンドブロッキングは、標準的フローサイトメトリー又は表面プラズモン共
鳴法で測定することができる。
【００５５】
ＩＣＯＳ結合物質、タンパク質、又はペプチドは、ＩＣＯＳの刺激を妨げるように、し
たがってＴ細胞の共刺激を妨げるように選択及び／又は改変することが好ましい。共刺激
は、ＴＣＲによって介在されるＴ細胞活性化の上昇として検出可能であることが好ましい
。共刺激は、細胞増殖、又はサイトカイン、例えばＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、
ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１０の産生、又は細胞生存率の上昇の誘導を検出する標
準技術によって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定することができる。共刺激は、炎症、自己免疫
、及びアレルギー性疾患、移植、及びがんの動物モデルにおける免疫細胞数、具体的には
Ｔ細胞数の増加、並びに疾患の症状の悪化によってｉｎ  ｖｉｖｏで検出することができ
る。
【００５６】
選択したエフェクター分子に応じて、本発明に用いるＩＣＯＳ結合物質は、ｉｎ  ｖｉ
ｖｏで細胞表面に留まるように、又は細胞表面から迅速に内部移行可能なように選択及び
／又は改変することができる。少なくとも１つのエフェクター分子が細胞毒性物質である
場合、ＩＣＯＳ結合物質は細胞表面からＩＣＯＳ陽性細胞内へ急速に内部移行することが
好ましい。ＩＣＯＳ結合物質のＩＣＯＳ陽性細胞内へのｉｎ  ｖｉｖｏ内部移行は、標準
的フローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡で測定することができる。
【００５７】
以下に議論するように、本発明は疾患の治療における本発明のＩＣＯＳ結合物質の有利
な使用についても言及する。
したがって、本発明の第２の側面は、ＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させる
ＩＣＯＳ結合物質、並びに医薬的に許容可能な希釈剤、賦形剤及び／又は担体を含む医薬
組成物について言及する。ＩＣＯＳ結合物質は、本発明のいずれかの態様から選択するこ
とができる。医薬組成物は、医薬的に有効量の少なくとも１以上のＩＣＯＳ結合物質、特
に細胞、好ましくは活性化Ｔ細胞の表面に発現したＩＣＯＳに結合する少なくとも１つの
抗体又は抗体断片を含むことが好ましい。
【００５８】
本発明の第３の側面は、ＩＣＯＳをその表面に発現する細胞によって直接的又は間接的
に介在される病態の治療又は予防用医薬を製造するための、ＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖ
ｉｖｏ枯渇させるＩＣＯＳ結合物質の使用について言及する。ＩＣＯＳ陽性細胞は活性化
Ｔ細胞であることが好ましい。医薬は、例えばＴ細胞が介在する病原体に対する過剰反応
、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー反応、移植臓器拒絶、移植片対宿主疾患、又は
がんなどの病態の予防又は治療のためのものであることが好ましい。
【００５９】
医薬は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、炎症性大腸炎（潰瘍性大
腸炎、クローン病）、多発性硬化症、サルコイドーシス、乾癬、全身性エリテマトーデス
、血管炎、及びその他の自己免疫疾患の予防又は治療のためのものであることが好ましい
。本発明によって提供される予防又は治療は、臓器拒絶又は移植片対宿主疾患、アレルギ
ー性喘息、食物及びハチ毒のアレルギーのようなアレルギー性疾患についても言及する。
患者の身体の細胞表面にＩＣＯＳ分子を発現するがん細胞の排除についても言及する。
【００６０】
そのような使用には、ＩＣＯＳ結合物質は医薬組成物の形態で投与することが好ましい
であろう。
本明細書において「治療」という用語には、治療的又は予防的療法が含まれることが好
ましい。本明細書において、具体的なＩＣＯＳ結合物質を用いた疾患又は病態の治療又は
予防方法に言及する場合は、そのような言及は、疾患の治療及び／又は予防用医薬を製造
するためのＩＣＯＳ結合物質の使用も含むことを意図するものと理解すべきである。本発
明に用いるＩＣＯＳ結合物質は、例えば同時に、連続的に、又は個別に、例えば他の免疫
抑制剤又は抗がん療法であり得る１以上の他の治療的に活性な化合物と組み合わせて投与
することができる。
【００６１】
本発明の第４の側面は、本発明のＩＣＯＳ結合物質の態様にしたがい有効量のＩＣＯＳ
結合物質を投与することを含む、ヒト宿主においてＩＣＯＳを発現するＴ細胞集団を減少
させる方法について言及する。有効量のＩＣＯＳ結合物質は、本明細書に記載の免疫疾患
の１つに罹患する患者から採取した血液又は組織サンプルにおける活性化Ｔ細胞のタイタ
ーの測定可能な減少に十分であることが好ましい。
【００６２】
本発明の第５の側面は、活性化Ｔ細胞によって直接的に又は間接的に介在される病態に
罹患する患者の治療方法についても言及し、この方法は、活性化Ｔ細胞を治療的に有効に
枯渇させる、有効量のＩＣＯＳ結合物質を患者に投与することを含む。
【００６３】
本明細書に記載するように、十分量又は有効量のＩＣＯＳ結合物質は、治療的に有効量
、特に単位用量の医薬の投与であることが好ましい。
本明細書に記載の患者は、限定されるものではないが、アレルギー性喘息、花粉症、ハ
チ毒アレルギー、食物アレルギー、多発性硬化症、サルコイドーシス、関節リウマチ、強
直性脊椎炎、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、炎症性大腸炎（潰瘍性大腸
炎、クローン病）、乾癬、血管炎、ＩＣＯＳを発現するＴ細胞性リンパ腫、移植臓器又は
組織の拒絶反応、及び移植片対宿主疾患から成る群より選択される病態に罹患しているか
もしれない。ＩＣＯＳのｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇は、ＩＣＯＳ+Ｔ細胞がエフェクター細胞、
即ち疾患プロセスを駆動するＴ細胞の主要集団に相当する全ての疾患において治療的に有
効であろう。
【００６４】
具体的な患者に対するＩＣＯＳ結合物質の有効用量は、疾患の種類及び重篤度、剤形、
患者の年齢、体重、及び性別、治療期間、並びに医学の分野で周知の要因を含めたさまざ
まな要因に依存するであろう。単位用量は、成人、子供、小さな子供、又は新生児の治療
に治療的に有効であることが好ましい。
【００６５】
ＩＣＯＳ結合物質の合計日用量は、例えば約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重以上、好
ましくは約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の量であり得る。単一用量組成物は、日用量を
構成するためにそのような量又はその約数を含有することができる。一般に、治療は、１
日あたり約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇのＩＣＯＳ結合物質の、単回又は複数回用量での投
与を含む。１より多いＩＣＯＳ結合物質の組み合わせを医薬の製造に用いてもよい。
【００６６】
医薬の製造のために、ＩＣＯＳ結合物質は、投与の種類に応じて、生理的バッファー溶
液、例えば塩化ナトリウム溶液；脱イオン水；プロテアーゼインヒビター又はヌクレアー
ゼインヒビター、好ましくはアプロチニン、ε−アミノカプロン酸、又はペプスタチンＡ
のような安定剤；又はＥＤＴＡのような金属イオン封鎖剤；白ワセリン、低粘度パラフィ
ン及び／又は密ろうのようなゲル化製剤、などの１以上の医薬的に許容可能な添加剤又は
補助物質とともに製剤化することが好ましい。
【００６７】
更なる好適な添加剤は、例えば界面活性剤、例えばＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００又はデオ
キシコール酸ナトリウムなど、並びにポリオール、例えばポリエチレングリコール又はグ
リセロルなど、糖、例えばショ糖又はグルコースなど、両性イオン化合物、例えばグリシ
ン、又は特にタウリン若しくはベタインのようなアミノ酸など、及び／又はタンパク質、
例えばウシ若しくはヒトの血清アルブミンなどである。界面活性剤、ポリオール、及び／
又は両性イオン化合物が好ましい。
【００６８】
生理的バッファー溶液のｐＨはおよそ６．０〜８．０が好ましく、とりわけおよそ６．
８〜７．８、特におよそ７．４であり、及び／又は浸透圧はおよそ２００〜４００ｍＯｓ
ｍ／ｌが好ましく、好ましくはおよそ２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｌである。医薬組成物の
ｐＨは、通常好適な有機又は無機のバッファーを用いて調製する。
【００６９】
ＩＣＯＳ結合物質を含む医薬組成物又は医薬は、慣用の方法で、例えば、経口剤形、例
えば錠剤又はカプセルによって、例えば鼻腔又は口腔の粘膜によって、吸入、注射、輸液
、又はゲルによって投与することができる。更に、医薬組成物をリポソーム複合体の形態
で局所及び局部投与可能である。更に、経皮治療システム（ＴＴＳ）で治療することがで
きる。これは、医薬組成物の時間的に制御された放出を可能にする。ＴＴＳは、例えばＥ
Ｐ０  ９４４  ３９８Ａ１号、ＥＰ０  ９１６  ３３６Ａ１号、ＥＰ０  ８８９  ７２３
Ａ１号、又はＥＰ０  ８５２  ４９３Ａ１号から公知である。
【００７０】
医薬組成物は、経口、経鼻、直腸、非経口、気管内、局所、又は膣内投与用に製造する
ことができる。非経口投与には、特に好適に調製された注射液又は輸液を用いた、皮下、
皮内、筋肉内、静脈内、又は腹腔内投与が含まれる。
【００７１】
本発明の第６の側面は、ＩＣＯＳ結合物質のスクリーニング方法について言及する。こ
の方法は、以下の工程：（ａ）ＩＣＯＳを有する細胞を準備し、（ｂ）試験化合物を準備
し、そして（ｃ）ＩＣＯＳを有する細胞の枯渇に対する試験化合物の影響を測定又は検出
することを含む。
【００７２】
好ましい態様では、試験化合物は化学化合物ライブラリーの形態で提供される。「化学
化合物ライブラリー」という用語は、多数の化学化合物を表すことが好ましく、化学合成
分子及び天然産物を含めた複数の供給源から集めるか、又はコンビナトリアル化学技術に
よって作製する。
【００７３】
試験化合物は、原則として、天然化合物、又は天然化合物と同一若しくは類似の化学合
成化合物、又は天然には発生しない化学合成化合物など、いかなる化学化合物でもよい。
天然化合物は、多細胞生物若しくは単細胞生物において検出できるか、又はそれらから
単離できる化合物、特に動物、植物、真菌、酵母、細菌、若しくは他の細胞含有生物、又
はウイルスにおいて検出できるか、又はそれらから単離できる化合物であることができる
。天然には発生しない化学合成化合物は、コンビナトリアル化学で合成することができる
。
【００７４】
試験化合物は天然化合物に由来するリード構造を含むことが好ましく、好ましくはＩＣ
ＯＳに結合するペプチド又はタンパク質のリード構造を含む。試験化合物は、例えば以下
の実施例１の融合タンパク質又はヒトＩＣＯＳ誘導体のような可溶性ＩＣＯＳ誘導体を用
いた動物の免疫に由来する抗体又はその断片であることが好ましい。試験化合物は、抗Ｉ
ＣＯＳ抗体又はその断片の組換え誘導体であることもできる。
【００７５】
試験化合物は、抗ＩＣＯＳ抗体、好ましくは活性化Ｔ細胞の表面に局在するＩＣＯＳと
反応する抗体であることができる。試験化合物は、抗ＩＣＯＳモノクローナル抗体又はそ
の断片を含むことが好ましく、特に抗ＩＣＯＳモノクローナル抗体の組換えにより作製し
た誘導体又はその断片、特にヒト化モノクローナル抗体又はその断片、又は抗ＩＣＯＳ抗
体の少なくとも１つ、好ましくは３つ全ての相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体断片を
含む。
【００７６】
ＩＣＯＳを有する細胞は活性化Ｔ細胞であることが好ましく、好ましくはヒトＴ細胞、
又はＴ細胞受容体、好ましくはヒトＴ細胞受容体を有する動物若しくはヒトの組換え細胞
である。活性化Ｔ細胞は、好ましくは病原体に対する過剰反応、自己免疫疾患、炎症、ア
レルギー反応、移植臓器拒絶、移植片対宿主疾患、又は好ましくは本発明の態様内で記載
したようなリンパ腫の患者から単離することができる。
【００７７】
あるいは、ＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞は、実験動物、特にＴ細胞受容体のトランス
ジェニック動物に由来することができる。ＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容
体によって特異的に認識される抗原を用いるＴ細胞の刺激によって、又は例えばブドウ球
菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）のようなポリクローナルＴ細胞アクチベーターを用いる
ことによって得ることができる。トランスジェニックＴ細胞は、トランスジェニックＴ細
胞受容体によって認識される抗原で刺激することが好ましい。
【００７８】
ＩＣＯＳを有する活性化Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏ刺激、特にトランスジェニックＴ細
胞を含む動物を免疫若しくは再曝露することによって、及び／又は例えば以下の実施例２
〜５におけるＩＣＯＳを有するＴ細胞の作製におけるようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激若しく
は再刺激によって作製することができる。ＩＣＯＳを有する細胞に対する試験化合物の影
響は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルを用い
てスクリーニングすることができる。
【００７９】
以下に、本発明の全ての側面に関連する、好ましくは本発明の第６の側面によるＩＣＯ
Ｓ結合物質のスクリーニング方法に関連する、いくつかの特に好ましい態様を記載する。
ＩＣＯＳ発現細胞の作製。ＩＣＯＳ発現細胞は、ヒト初代培養Ｔ細胞を、例えば抗原、
又はフィトヘムアグルチニン若しくはホルボールミリスチン酸アセテートのようなポリク
ローナル刺激物質をイオノマイシンと組み合わせて活性化することによって作製すること
ができる。あるいは、ＩＣＯＳ発現細胞は、適切な細胞株を、ＩＣＯＳの細胞外部分に対
するｃＤＮＡを含有する真核細胞発現ベクターでトランスフェクションすることにより作
製することができる。活性化Ｔ細胞、Ｔ細胞クローン、又はトランスフェクタントは、最
適なＩＣＯＳ発現に関し、ＩＣＯＳ特異的ｍＡｂで染色することにより、又は可溶性ＩＣ
ＯＳ−Ｌで染色してフローサイトメトリーで解析することにより、モニターすることがで
きる。
【００８０】
組換えＩＣＯＳポリペプチドの作製。ヒトＩＣＯＳの細胞外部分の配列を含有する組換
えポリペプチドは、大腸菌で又は真核細胞発現系（例えば酵母、動物、又はヒトの細胞株
）で、適切な発現ベクターを用いて標準技術により発現させることができる。精製を容易
にするために、例えばＨｉｓタグ又は抗体の定常領域のような好適なタグをＩＣＯＳポリ
ペプチドに付着させることができる。ポリペプチドを大腸菌において封入体中の変性型で
のみ発現可能な場合には、ポリペプチドを完全に変性させ、続いて好適なバッファー中で
再生させ、次いで標準的クロマトグラフィ技術を用いて均一になるまで精製することがで
きる。
【００８１】
ＩＣＯＳ−Ｌの細胞外部分を発現させることによるＩＣＯＳ結合物質の産生。ＩＣＯＳ
−Ｌの細胞外部分は高度に特異的にＩＣＯＳに結合し、ＩＣＯＳ結合物質として用いるこ
とができる。ＩＣＯＳ−ＬのＩＣＯＳへの親和性を高めるために、ＩＣＯＳへの結合に関
与するＩＣＯＳ−Ｌの細胞外部分をコードするｃＤＮＡを標準技術で変異させることがで
きる。天然型でも最適型でも、ＩＣＯＳ−ＬのＩＣＯＳ結合領域を、組換え技術で作製し
たＩＣＯＳ結合物質を枯渇させる成分として用いることができる。
【００８２】
動物の免疫によるＩＣＯＳ結合物質の作製。ＩＣＯＳ結合物質は、動物（例えばマウス
、ラット、ハムスター、ウサギ）を、ＩＣＯＳ発現細胞で、又はヒトＩＣＯＳの細胞外部
分の全部若しくは一部を含有する組換えタンパク質で免疫することによって作製すること
ができる。免疫動物由来（例えば脾臓、リンパ節、骨髄、又は末梢血由来）のＢ細胞芽球
を、永久細胞株（例えば骨髄腫株又はがん遺伝子が駆動する永久細胞株）と融合させ、Ｉ
ＣＯＳ特異的ｍＡｂｓを分泌するハイブリドーマ株を作製することができる。あるいは、
免疫動物由来のＢ細胞芽球をＩＣＯＳ結合に関して選択し、Ｂ細胞受容体のＩＣＯＳ結合
領域をコードするｃＤＮＡのクローニングに用いる。組換えＩＣＯＳ結合物質の遺伝子操
作にこのクローン化されたＩｇＧ−Ｖ領域を用いることができる。あるいは、ＩＣＯＳ結
合物質は、単一リンパ球抗体法を用いて、特異的抗体の作製のために選択された単一リン
パ球から作製された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニングし、発現させること
により、例えばＢａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ  ９３（１５）：７８４３−７８４８及びＷＯ９２／０２５５１号に記載の
方法によって作製することもできる。
【００８３】
合成レパートリーのスクリーニングによるＩＣＯＳ結合物質の作製。動物を免疫する代
わりに、ＩＣＯＳ結合物質を合成レパートリー、例えば抗体ディスプレイライブラリーか
ら単離することができる。それぞれの（例えばファージ）ディスプレイライブラリーは、
ＥＬＩＳＡ又は親和性に基づいた好適な技術（例えばパニング）により、ＩＣＯＳ結合物
質に関してスクリーニングされる。ＩＣＯＳポリペプチドの高親和性結合を確実にするた
め、結合物質のｃＤＮＡコード配列を単離し、無作為変異法（例えば変異性ＰＣＲ、ＤＮ
Ａシャッフリング、部位特異的ＰＣＲ）に供する。結合物質をコードする変異ｃＤＮＡを
再度発現させて、細胞外ＩＣＯＳポリペプチドの最適な結合に関してスクリーニングする
。次に、この最終ｃＤＮＡを、生物学的に有用なＩＣＯＳ結合物質（例えば抗体、部分的
抗体など）を構築するための成分として用いる。
【００８４】
悪影響を伴わないｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇に必要な親和性に関するＩＣＯＳ結合物質のスク
リーニング。ＩＣＯＳ結合物質の種類及び供給源が何であれ（ＩＣＯＳ−Ｌ構築体、免疫
動物から得たｍＡｂ、又はＢ細胞芽球若しくは合成レパートリー由来の組換え結合物質）
、ＩＣＯＳ結合物質は、ｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇に最適な親和性を有するＩＣＯＳへの結合に
関してスクリーニングされる。このため、組換え型の細胞外ＩＣＯＳポリペプチド又はＩ
ＣＯＳ発現細胞を標的として結合アッセイに用いる。結合パートナー（ＩＣＯＳポリペプ
チド又はＩＣＯＳ結合物質）の１つを固定し、他の（標識された）成分の結合特性を好適
なアッセイ（例えばＢｉａｃｏｒｅ）で観察する。適切な結合定数を有するＩＣＯＳ結合
物質を選択する。
【００８５】
特異性に関するＩＣＯＳ結合物質のスクリーニング。所望により、例えばフローサイト
メトリー及び／又は免疫組織化学を用いて、ＩＣＯＳに対する特異性に関し、結合物質を
スクリーニングすることができる。
【００８６】
ヒトにおける免疫原性を最小にするためのＩＣＯＳ結合物質の遺伝子操作。ＩＣＯＳ結
合物質がヒト抗体に由来しない場合、処置患者における中和抗体の発生を妨げるために「
ヒト化」することができる。このため、標準の分子生物学的技術を用いて細胞外ＩＣＯＳ
ポリペプチドの結合に関与する領域をヒトポリペプチドフレームワーク（例えばＩｇＧ定
常領域）上に「移植」し、その結果、組換えＩＣＯＳ結合物質は主として非免疫原性ヒト
タンパク質配列を含有する。
【００８７】
ｉｎ  ｖｉｖｏで補体を最適に結合させるためのＩＣＯＳ結合物質の遺伝子操作。補体
の結合を利用して、ＩＣＯＳ陽性細胞を循環から枯渇させることができる。このため、最
適な補体の結合を保証する領域を含有するようにＩＣＯＳ結合物質を遺伝子操作する。ｉ
ｎ  ｖｉｖｏでは、ＩＣＯＳ結合物質への補体の結合は、ＩＣＯＳを有する細胞の細胞死
を誘引するであろう。この作用に関して、ＩＣＯＳを有する生細胞、ＩＣＯＳ結合物質、
及びヒト補体を含有するアッセイ系を用いてＩＣＯＳ結合物質をｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験
することができる。補体結合の有効性は、例えば、液相における可溶性補体の長期にわた
る減少によって、又は標準法（例えば51クロム放出、細胞内色素の放出、又は生細胞の計
数）を用いてＩＣＯＳを有する細胞の細胞死を測定することによって測定することができ
る。
【００８８】
ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＣＯＳ陽性細胞の食作用を最適に誘導するのためのＩＣＯＳ結合物
質の遺伝子操作。ＩＣＯＳ陽性細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇は、ＩＣＯＳ結合物質によって
介在される食細胞（例えば肝臓のマクロファージ、クッパー細胞、腸及び肺のマクロファ
ージ、脾臓マクロファージ）によるＩＣＯＳ陽性細胞の食作用によって達成することがで
きる。これは、例えば、Ｆｃ受容体によって介在される食作用、又はＩＣＯＳと食細胞上
の好適な標的（例えばＦｃ受容体）とを認識する点で２価であるＩＣＯＳ結合物質を用い
て誘導した食作用であり得る。ＩＣＯＳ結合物質は、さまざまな量のＩＣＯＳ結合物質の
存在下、ＩＣＯＳ陽性細胞を食細胞とともに培養することによって、最適な食作用誘導作
用に関して選択することができる。食作用の程度は、標準アッセイ、例えばＩＣＯＳ陽性
細胞と食細胞を異なって着色する色素を用いて標識した後、標準の顕微鏡技術により食作
用の程度を決定するアッセイによって決定する。
【００８９】
ＩＣＯＳを有する初代培養細胞の最小の活性化に関するＩＣＯＳ結合物質のスクリーニ
ング。ＩＣＯＳ陽性細胞を補体の活性化又は食作用により患者の循環から除去可能なＩＣ
ＯＳ結合物質を作製するには、ｉｎ  ｖｉｖｏで厄介な細胞の活性化又は増殖をもたらす
であろう刺激活性が最小の又は刺激活性がないＩＣＯＳ結合物質を用いることが望ましい
。最小のＴ細胞共刺激活性に関するＩＣＯＳ結合物質のスクリーニングは、標準の共刺激
アッセイを用いて、例えば固相に結合した次善最適量のｍＡｂ  ＯＫＴ３を、やはり固相
に結合した漸増量のＩＣＯＳ結合物質と組み合わせて用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うこ
とができる。共刺激活性を欠失したＩＣＯＳ結合物質は、ｍＡｂ  ＯＫＴ３単独で用いて
観察される細胞増殖又はサイトカイン合成の程度を増加させないであろう。
【００９０】
ＩＣＯＳ結合物質依存性細胞障害をｉｎ  ｖｉｖｏで誘導するためのＩＣＯＳ結合物質
の遺伝子操作。抗体依存性細胞障害は十分に特徴付けられた現象であり、例えばｍＡｂが
抗原結合領域で標的細胞に結合し、Ｆｃ領域で細胞障害性細胞上のＦｃ受容体（例えばＮ
Ｋ細胞上のＣＤ１６）に結合する場合、観察することができる。Ｆｃ受容体（例えばＣＤ
１６）の架橋を誘導することにより、標的細胞を溶解させる細胞障害性細胞の細胞障害能
を活性化する。他の細胞、例えばマクロファージも抗体依存性細胞障害を発揮する。ＩＣ
ＯＳ結合物質は、この種の細胞障害性を介在するために、最適なＦｃ領域をタンパク質構
築体の一部として選択することにより最適化することができる。そのような物質を細胞障
害性の誘導に関してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験することは標準的手法である。ＩＣＯＳを有
する標的細胞を、ＮＫ細胞又は他の細胞障害性細胞の存在下、ＩＣＯＳ結合物質とともに
培養し、ＩＣＯＳ結合物質によって誘導される標的細胞の溶解度（標識の放出）を長期に
わたり測定する。
【００９１】
ＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでアポトーシス誘導するためのＩＣＯＳ結合物質の
遺伝子操作。ＩＣＯＳは、ナイーブＴ細胞又は記憶Ｔ細胞と比較してアポトーシスしやす
いエフェクターＴ細胞上で発現するため、ＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇させ
るための代替法は、これらの細胞においてアポトーシスを誘導することにより達成するこ
とができる。ＩＣＯＳ陽性標的細胞のアポトーシスは、標準アッセイ（例えばｔｕｎｎｅ
ｌアッセイ）で測定する。
【００９２】
最適なｉｎ  ｖｉｖｏ内部移行のためのＩＣＯＳ結合物質の遺伝子操作。細胞毒素に共
有結合的に結合したＩＣＯＳ結合物質の最適なｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇作用は、多くの場合、
ＩＣＯＳ結合物質の急速な内部移行を必要とする。したがって、ＩＣＯＳ結合物質を、Ｉ
ＣＯＳの急速な内部移行を誘導するＩＣＯＳ上のエピトープを認識するように遺伝子操作
する。あるいは、ＩＣＯＳ結合物質は、ＩＣＯＳ陽性細胞上の更なる細胞表面分子を２価
的に認識し、この２重特異性を介してＩＣＯＳの急速な内部移行を誘導する。ＩＣＯＳの
内部移行は、標準アッセイによって、例えばＩＣＯＳ結合物質を蛍光標識した後、標準的
顕微鏡解析（蛍光シグナルの内部移行）を行うことによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定す
ることができる。
【００９３】
ＩＣＯＳ陽性細胞を最適にｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇するために身体のコンパートメントへ注
射（例えば皮下、腹腔内、気管内、静脈内、又は筋肉内）した後のＩＣＯＳ結合物質の工
学技術と試験。このアプローチは、上記のＩＣＯＳ結合物質の枯渇特性（例えば食作用、
抗体依存性細胞障害、アポトーシス、細胞毒素の内部移行、補体結合を介した枯渇）に関
する最終の機能スクリーニングとして、又は最適に枯渇させるＩＣＯＳ結合物質を選択す
るための唯一のスクリーニングアプローチとして用いることができる。ＩＣＯＳ結合物質
が、ヒトとラット、又はヒトとマウスのＩＣＯＳによって共有されるＩＣＯＳエピトープ
を認識する場合（Ｂｕｏｎｆｉｇｌｉｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９、２
９：２８６３−２８７４）、動物系（例えばラット又はマウス）で直接スクリーニング試
験を行うことができる。ヒトｍＡｂは食細胞上の動物Ｆｃ受容体へ結合し、食作用を誘導
可能であるため、この試験には食作用によって介在される枯渇試験が含まれる（Ｉｓａａ
ｃｓ  ＪＤ、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００１、４０：７２４−７３８）。好適な動
物系は、アレルギー性肺炎症モデル（以下の実施例５を参照されたい）であり得る。代替
の標準疾患モデル、例えば炎症性大腸炎モデル、移植モデル、又は自己免疫モデルは同様
に適切である。ＩＣＯＳ結合物質がヒトと霊長類動物にのみ共有されるエピトープを認識
する場合、ＩＣＯＳ結合物質の枯渇能試験は霊長類動物（例えば移植モデル、炎症モデル
）で行うことができる。ＩＣＯＳ陽性細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇は、ＩＣＯＳ結合物質を
遺伝子操作することによって達成することもできる。その際、ＩＣＯＳ結合領域を、ヒト
において確立した枯渇能を有する抗体、例えばＴ細胞上のＣＤ４細胞表面分子に対するｃ
Ｍ−Ｔ４１２ｍＡｂの免疫グロブリンフレームワーク（生物作用を介在する定常領域）上
に移植する（Ｉｓａａｃｓ  ＪＤ、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００１，４０：７２４
−７３８）。ヒトＩＣＯＳに特異的であるがマウス又はラットのＩＣＯＳは認識しないＩ
ＣＯＳ結合物質のための代替スクリーニングシステムは、「ヒト化」動物モデル、例えば
「ヒト化」ＳＣＩＤマウスであり得る。ＩＣＯＳ陽性ヒト細胞は、そのような動物に移植
することができ、これらの動物はＴ細胞及びＢ細胞を欠失しているため拒絶されない。ヒ
トＩＣＯＳ陽性細胞を移植後、上記のように、選択したＩＣＯＳ結合物質でこれらの動物
を処理する。全てのｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、ＩＣＯＳ結合物質のＩＣＯＳ陽性細
胞枯渇能を標準的様式で評価することができる。とりわけ、以下のパラメータを測定する
ことができる：１）フローサイトメトリー若しくは組織学による循環又は身体の臓器中の
ＩＣＯＳ陽性細胞レベル；２）移したＩＣＯＳ陽性細胞がマーカー（例えば同種マーカー
、トランスジェニック受容体、蛍光標識）を有する場合はマーカー陽性細胞の割合；２）
標的臓器における炎症性浸潤の程度；３）全身性炎症のパラメータ（例えばＣ反応性タン
パク質）；４）臓器機能（例えば糖尿病の自己免疫モデルにおける血糖レベル）；５）重
さ；６）臨床疾患スコア。
【００９４】
本発明の第７の側面は、Ｔ細胞によって直接的又は間接的に介在される病態を治療する
ための医薬の製造方法について言及するものであり、この方法は以下の工程を含む：（ａ
）本発明のＩＣＯＳ結合物質スクリーニング方法を実施し、（ｂ）Ｔ細胞によって直接的
又は間接的に介在される病態の治療に好適な、測定又は検出された試験化合物を単離し、
そして（ｃ）測定又は検出された試験化合物を、１以上の医薬的に許容可能な担体ととも
に製剤化する。
【００９５】
好ましい態様では、治療される病態は、Ｔ細胞によって介在されるアレルギー性疾患又
は自己免疫疾患、炎症性疾患、又はがんである。病態は、病原体に対する過剰反応、自己
免疫疾患、アレルギー反応、移植臓器拒絶、移植片対宿主疾患、又はがんであることが好
ましい。好ましくは、病態は、アレルギー性喘息、花粉症、ハチ毒アレルギー、食物アレ
ルギー、多発性硬化症、サルコイドーシス、関節リウマチ、強直性脊椎炎、シェーグレン
症候群、全身性エリテマトーデス、炎症性大腸炎（潰瘍性大腸炎、クローン病）、乾癬、
ＩＣＯＳを発現するＴ細胞性リンパ腫、移植臓器又は組織の拒絶反応、及び移植片対宿主
疾患から成る群より選択され得る。
【００９６】
本発明の第８の側面は、本発明のＩＣＯＳ結合物質スクリーニング方法を用いて同定で
きるＩＣＯＳ結合物質について言及する。
以下に図１〜５を参照して本発明を説明するが実施例１〜６に限定されるものではない
。
【実施例１】
【００９７】
マウスＩＣＯＳに対するｍＡｂの作製
ＬＥＷＩＳラットを、記載のように（Ｍａｇｅｓ  ＨＷら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．２０００、３０：１０４０−１０４７）可溶性キメラマウスＩＣＯＳ−ウサギＩｇ融
合タンパク質で免疫し、脾臓細胞を標準技術により骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ア
メリカン・タイプ・カルチャー・コレクション）と融合し、得られたハイブリドーマを、
マウスＩＣＯＳでトランスフェクションしたＬ細胞を用いてフローサイトメトリーでスク
リーニングした（Ｍａｇｅｓ  ＨＷら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００、３０：
１０４０−１０４７）。このアプローチを用いて、マウスＩＣＯＳに対する１２の異なる
ｍＡｂを得た。
【実施例２】
【００９８】
ＩＣＯＳ特異的ｍＡｂを枯渇能に関して試験するためのｉｎ  ｖｉｖｏモデルの確立
オボアルブミン（ＯＶＡ）に特異的なトランスジェニック受容体を有するＴ細胞を含有
する、ＤＯ１１．１０マウス由来の脾臓細胞をＯＶＡ323-339ペプチドで３日間、ｉｎ  
ｖｉｔｒｏで刺激した。この培養終了時、９０％のトランスジェニックＴ細胞がＩＣＯＳ
を発現していた。次に、トランスジェニックＴ細胞を静脈内経路で同系ＢＡＬＢ／ｃマウ
ス（１０×１０6Ｔ細胞／マウス）に移植した。移植後１日、２日、３日、及び４日目に
、活性化表面分子ＩＣＯＳ、ＣＤ６９、及びＣＤ２５の発現に関し、リンパ節（ＬＮ）、
脾臓、及び血液のトランスジェニックＴ細胞（トランスジェニックＴ細胞受容体に対する
ｍＡｂ  ＫＪ１−２６で追跡することができる）を解析した。実験は、活性化ＩＣＯＳ陽
性Ｔ細胞がｉｎ  ｖｉｖｏで増殖し続け、４日目には調べたコンパートメントにおいて全
リンパ球の４％以下に相当したことを実証した（図１ａ）。実験は、移植されたトランス
ジェニックＴ細胞が数日間にわたってＩＣＯＳをｉｎ  ｖｉｖｏで発現し続け（図１ｂ）
、より低い範囲では活性化分子ＣＤ６９及びＣＤ２５も発現し続けるが、より急速な様式
で下方制御されている（図１ｃ及びｄ）ことも示した。
【実施例３】
【００９９】
ＯＶＡを局部投与することなくトランスジェニックＩＣＯＳ陽性ＯＶＡ特異的Ｔ細胞を
養子移植した後の、マウスＩＣＯＳに対するｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇に関する試験
実験の基本設定は実施例２に記載の通りである。ＯＶＡペプチドとともにｉｎ  ｖｉｔ
ｒｏで培養後２日目に、５×１０6  ＤＯ１１．１０  ＯＶＡ−ＴＣＲトランスジェニッ
クＫＪ１．２６+Ｔ細胞（５０％がＩＣＯＳ陽性）をＢＡＬＢ／ｃマウスに静脈内移植し
た。移植後直ちに、さまざまなＩＣＯＳ特異的ｍＡｂを、３０μｌのＰＢＳ中５００μｇ
の用量で腹腔内投与した。陰性対照はＰＢＳで処理し、ｍＡｂ  ＧＫ１．５（枯渇能が公
知の抗ＣＤ４  ｍＡｂ）による処理を陽性対照とした。６日目に、末梢ＬＮを除去し、ト
ランスジェニックＫＪ１．２６+Ｔ細胞の割合についてフローサイトメトリー（ＰＢＳ＝
１００％で疑似治療）で解析した。この実験は、ＯＶＡ（トランスジェニックＴ細胞によ
って認識される抗原）の非存在下で、いくつかのｍＡｂ（ＭＩＣ−９４４、９Ｆ３、及び
ＭＩＣ−４０３）はＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで有効に枯渇させるが、他のＩ
ＣＯＳ特異的ｍＡｂは効果がないか、又は１２Ａ７及びＭＩＣ−６９７の場合はＩＣＯＳ
陽性Ｔ細胞を上昇させることを究明した（図２）。
【実施例４】
【０１００】
トランスジェニックＩＣＯＳ陽性ＯＶＡ特異的Ｔ細胞を養子移植し、フロイント完全ア
ジュバント中のＯＶＡを局部投与した後の、マウスＩＣＯＳに対するｍＡｂのｉｎ  ｖｉ
ｖｏ枯渇試験。
【０１０１】
ＩＣＯＳに対する抗体が、抗原ＯＶＡの存在下でも望ましくない共刺激性作用を伴うことなくＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させるかどうかを試験することが望ましい。ＤＯ１１．１０脾臓細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで４８時間、ＯＶＡペプチドで刺激した。この培養物から、１０×１０６  ＯＶＡ特異的トランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞（培養終了時、８０％がＩＣＯＳ陽性）を、ＢＡＬＢ／ｃレシピエントに静脈内注射によって移植した。移植前２日目に、フロイント完全アジュバント中の２００μｇＯＶＡで、レシピエントマウスを、背中の４つの異なる領域において皮下免疫し、免疫系に対してＯＶＡ抗原を提供した。次にマウスを表示のｍＡｂ（１回の注射あたり２００μｇを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与）で０日（移植日）、１日、及び３日目に処理した。５日目に、流入領域鼠径部ＬＮを除去し、フローサイトメトリーでＫＪ１−２６＋トランスジェニックＴ細胞の存在について解析した。この実験は、ｍＡｂ  ＭＩＣ−９４４による処理は、名目抗原ＯＶＡの存在下で、ＰＢＳ単独処理した対照動物と比較してＯＶＡ特異的Ｔ細胞数をｉｎ  ｖｉｖｏで強力に減少させることを実証した（図３）。他のＩＣＯＳ特異的ｍＡｂの適用は、わずかに（１２Ａ７、ＭＩＣ−１１３）、又は顕著に（ＭＩＣ−６９７、ＭＩＣ−２８０）トランスジェニックＴ細胞数をｉｎ  ｖｉｖｏで増加させた。この実験は、ａ）ＩＣＯＳに対する特定のｍＡｂを用いたＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇は可能であること、ｂ）ＩＣＯＳに対する他のｍＡｂは、厄介な逆効果、即ち抗原が存在する場合、ＩＣＯＳシグナル伝達を刺激することによってＩＣＯＳ陽性細胞をｉｎ  ｖｉｖｏ増殖させる可能性があることを実証した。
【実施例５】
【０１０２】
ＩＣＯＳ陽性Ｔ細胞の枯渇によるアレルギー性肺炎症の予防
マウスＩＣＯＳに対するｍＡｂが、マウスアレルギー性喘息モデルにおいてアレルギー
性炎症を予防できるかどうかについて試験した。ＤＯ１１．１０脾臓細胞はＣＤ８+Ｔ細
胞を枯渇させ、ＯＶＡペプチド323-339の存在下、Ｔｈ２の分極条件下で６日間培養し、
５日目にＩＬ−２を添加した。これらの条件下で、トランスジェニックＴ細胞は分化し、
炎症性アレルギー性サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３を産生する。６日
間の培養期間後、トランスジェニックＴ細胞（２×１０6／マウス）を、静脈内注射で同
系ＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した。９５％の移植細胞がトランスジェニックＴ細胞であり
、９０％がＩＣＯＳ陽性であった。レシピエントマウスを、移植前日（−１日目）、移植
日（０日目）、並びに移植後１日及び２日目に、経鼻（ｉ．ｎ．）投与で抗原ＯＶＡ（５
０μｇ）に曝した（図４ａ）。このモデルでは、トランスジェニックＴ細胞は肺まで遊走
し、局部投与されたＯＶＡ抗原によって活性化され、アレルギー性／炎症性メディエータ
ーを放出し、そして肺のアレルギー性炎症を誘発する。アレルギー性炎症の程度は、動物
の気管支における好酸球及びより少ないリンパ球の出現により測定することができる。肺
炎症反応の程度は、移植後４日目に気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を除去し、ＢＡＬに存在す
る細胞をフローサイトメトリー及び顕微鏡的細胞分化で解析することによって評価した。
レシピエント動物を、−１日、０日、１日、２日目に４００μｇのＩＣＯＳ特異的ｍＡｂ
９Ｆ３又はＭＩＣ−４０３又はＭＩＣ−９４４で、静脈内注射と腹腔内注射とを交互に
行うことによって処理した（図４ａ）。陰性対照動物はＰＢＳの経鼻投与を受け、ＰＢＳ
で疑似処理された（「ＰＢＳ対照」）。陽性対照動物はＯＶＡの経鼻投与を受け、ＰＢＳ
で疑似処理された（「ＯＶＡ対照」）。図４ｂ及び４ｃのデータは、ｍＡｂ  ９Ｆ３の適
用のみが肺のアレルギー性炎症反応を完全に抑制すること（即ち「ＰＢＳ対照」で観察さ
れたレベルまで減少）を実証した。ｍＡｂ  ＭＩＣ−９４４でもいくらかの抑制効果が観
察されたが、ｍＡｂ  ＭＩＣ−４０３処理では抗アレルギー作用が達成されなかった。フ
ローサイトメトリーによる更なる解析により、ｍＡｂ  ９Ｆ３はＢＡＬにおいてトランス
ジェニックＫＪ１−２６+ＣＤ４+Ｔ細胞数を有効に減少させることを示した（図４ｄ）。
トランスジェニックＴ細胞の減少はｍＡｂ  ＭＩＣ−９４４でも達成されるが、ｍＡｂ  
ＭＩＣ−４０３では減少しなかった。これらの実験は、肺のアレルギー性炎症の発症は抗
ＩＣＯＳ  ｍＡｂの適用により有効に予防できることを究明した。更に、実験は、ヒトア
レルギー性肺喘息と類似した動物モデルにおいて有効性を実証するには、抗ＩＣＯＳ  ｍ
Ａｂの注意深い選択が必要であることを実証した。本明細書に記載の方法は、いかにして
そのような抗体を同定できるかの１例を表す。
【実施例６】
【０１０３】
がん細胞におけるＩＣＯＳの発現
ヒト血管免疫芽球性リンパ腫由来の組織切片を、標準の免疫組織学的技術であるＡＰＡ
ＡＰを用いて、ヒトＩＣＯＳに対するｍＡｂ  Ｆ４４（Ｈｕｔｌｏｆｆ  Ａら、Ｎａｔｕ
ｒｅ  １９９９、３９７：２６３−２６６）で染色した（図５）。染色パターンは、この
リンパ腫が細胞表面でＩＣＯＳを発現することを示しており、がん患者におけるＩＣＯＳ
陽性細胞の枯渇に使用するためのＩＣＯＳ特異的抗体を同定できることを実証している。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】ＩＣＯＳに対するｍＡｂを枯渇能に関して試験するためのｉｎ  ｖｉｖｏモデルの確立。
【図２】ＯＶＡを局所投与することなくトランスジェニックＩＣＯＳ陽性ＯＶＡ特異的Ｔ細胞を養子移植した後のマウスＩＣＯＳに対するｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇に関する試験。
【図３】トランスジェニックＩＣＯＳ陽性ＯＶＡ特異的Ｔ細胞の養子移植、及びフロイント完全アジュバント中のＯＶＡの局所投与後のマウスＩＣＯＳに対するｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇に関する試験。
【図４】ＢＡＬＢ／ｃマウスの気道アレルギー性炎症モデにおける抗ＩＣＯＳ抗体の効果を解析するために用いた実験の設定。
【図５】がん細胞によるＩＣＯＳの発現を実証するＩＣＯＳ特異的ｍＡｂ  Ｆ４４によるヒト血管免疫芽球性リンパ腫の染色。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【外国語明細書】
2015120724000001.pdf