(57)【要約】【課題】本発明により、安全性に優れ、製造効率に優れ、製造コストが低い、特定の重合度を有するプロアントシアニジンを製造する方法、並びに上記方法により製造されたプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤を提供する。【解決手段】本発明は、小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、混合液のｐＨ値を３〜６に調整する工程、遠心分離して沈澱を除去する工程、上清のｐＨ値を中和する工程、上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、混合液のｐＨ値を３〜６に調整する工程、遠心分離して、上清を除去する工程、および得られた沈澱を乾燥する工程を含むことを特徴とする小豆由来のプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤の製造方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）小豆のゆで汁を提供する工程、
（ｂ）該小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｃ）該工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた沈澱を除去する工程、
（ｄ）該工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和する工程、
（ｅ）該上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｆ）該工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた上清を除去する工程、
を含むことを特徴とする、重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上である小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法。
【請求項２】
前記工程（ｂ）の分離大豆タンパクの濃度が、前記小豆のゆで汁の体積をベースとして、０．１〜０．７質量体積％であり、該工程（ｅ）の分離大豆タンパクの濃度が、前記工程（ｄ）で得られた上清の体積をベースとして、０．４〜３．０質量体積％である、請求項１記載の小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法。
【請求項３】
前記工程（ｆ）の後に、
（ｇ）前記工程（ｆ）で得られた沈澱を溶離液と混合して濾過し、得られる溶出液を乾燥して溶出物を作製する工程
を含む、請求項１記載の小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法。
【請求項４】
（ａ）小豆のゆで汁を提供する工程、
（ｂ）該小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｃ）該工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた沈澱を除去する工程、
（ｄ）該工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和する工程、
（ｅ）該上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｆ）該工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた上清を除去する工程、
を含むことを特徴とする、小豆のゆで汁から重合度６以上のプロアントシアニジンを除去する方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項記載の方法を用いて製造された小豆由来のプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上である小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法、および上記製造方法を用いて得られる小豆由来のプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロアントシアニジンは、一般的にはポリフェノール化合物として公知であり、大豆、小豆、小麦、ブドウ、リンゴ、柿、クランベリー、カカオ、クルミ、アーモンド、落花生、茶、杉、桧、松、ミョウガなどに含まれており、酸で分解すると赤色のアントシアニジン色素を生成する化合物であると定義されている。その構造は、カテキンなどに代表されるフラバン‐３‐オールをベースとした構成単位が重合した広い重合度分布を有する構造をベースとしている。
【０００３】
また、プロアントシアニジンは、高い抗酸化作用を有することは特に有名であるが、更に動脈硬化抑制作用、胃潰瘍抑制効果、発がん抑制作用（非特許文献１）、腹部冷え性予防または改善効果（特許文献１）、脂質代謝亢進効果（特許文献２）、カルシウム吸収促進効果（特許文献３）、抗ウイルス性（特許文献６）などを有することも知られている。
【０００４】
更に、プロアントシアニジンは、重合度、即ち、分子量の大きさによって、吸収性が異なると言われており、５量体以下、特に２量体から４量体のプロアントシアニジンをＯＰＣ（オリゴメリックプロアントシアニジン）と呼び、吸収性が高く、有効性が高いプロアントシアニジンとして知られている（特許文献１〜３）。プロアントシアニジンは、非特許文献１などにも記載されているように、同族体や異性体が数多く存在するため、最も代表的なプロアントシアニジンの構造を以下の式：
【化１】
2015120655.tif 000002
に示す。例えば、ｎが１の時に３量体となる。
【０００５】
以上のことから、プロアントシアニジンを含む製剤や食品などを製造する上で、製造効率に優れ、製造コストの低い、上記の植物などの原料から所望の重合度を有するプロアントシアニジンを製造する方法への要求がますます高まってきた。
【０００６】
これまでに、そのようなプロアントシアニジンの製造方法が数多く提案されてきた（特許文献４〜６など）。特許文献４には、プロアントシアニジン含有液をポリスチレン系樹脂に吸着させた後、該吸着区分を極性溶媒を用いて５０℃以下で洗浄し、次いで６０℃以上で極性溶媒を用いて溶出させることを特徴とするプロアントシアニジンの製造法が記載されている。
【０００７】
しかしながら、上記特許文献４の製造方法には、特許文献５（段落［０００３］〜［０００６］）にも記載されているように、６０℃以上の温度で極性溶媒を用いて溶出させるものであることから、加熱装置と、その熱源とが必要であることに加えて、低沸点極性溶媒における高い温度での取扱いにより、製造工程及び製造設備が複雑になって、製造コストの大幅なアップを招くという問題があり、
水等を用いて洗浄した後の吸着樹脂を、湿潤した状態のまま、次の工程である６０℃以上の温度で極性溶媒を用いた溶出に移行するものであって、酢酸エチル等のように、水に対して一定の割合でしか溶解することができない極性溶媒では、湿潤した状態の吸着樹脂との親和性が悪いことから、プロアントシアニジンの収率が著しく低いという問題があり、
プロアントシアニジンの純度を高めるために、吸着したあとの吸着樹脂を、水等によって洗浄することにより、前記吸着樹脂の表面等に付着されている不純物を除去するようにしているが、この洗浄が不完全であると、その後における溶出工程において、この不純物がプロアントシアニジンと一緒に極性溶媒に溶出して、回収したプロアントシアニジンの純度が低下するため、上記洗浄に充分な手間と時間とを掛けて完全に行うようにしなければならないから、コストの大幅なアップを招くという問題があった。
【０００８】
上記のような特許文献４の製造方法の問題点を解決することを目的とした特許文献５には、プロアントシアニジン含有溶液をポリスチレン系の吸着樹脂に吸着し、次いで、この吸着樹脂を、一旦、乾燥したのち、極性の小さい極性溶媒を用いて溶出することを特徴とするプロアントシアニジンの製造方法が記載されている。加熱装置が必要であることに加えて、低沸点極性溶媒における高い温度での取扱いにより、製造工程及び製造設備が複雑になって、製造コストの大幅なアップを招くことや、極性溶媒を用いた溶出に移行するものであって、酢酸エチル等のように、水に対して一定の割合でしか溶解することができない極性溶媒を用いた溶出から、プロアントシアニジンの収率が著しく低いことや、不純物除去のための洗浄に充分な手間と時間とを掛ける必要があるため、製造コストの大幅なアップを招くという問題については解決されているものの、特許文献５は、プロアントシアニジン含有溶液から不純物を除去してプロアントシアニジンのみを得る方法であり、重合度の異なるものを分離することは記載されていない。
【０００９】
特許文献６には、アズキから抽出されたアズキプロアントシアニジンを含有するアズキ抽出成分と、ビタミンＣ、トコフェロール、システイン、グルタチオン、およびトリス・トリメチル・サイレーンの中から選ばれる１種または２種以上である還元剤とを有効成分として含有する、ことを特徴とする抗ウイルス剤が記載されている。更に上記抗ウイルス剤の製造方法として、アズキからアズキプロアントシアニジン（ＡＰＡ）を含有する可溶成分をエタノール水溶液に溶出させ、ＡＰＡ含有溶液と固形分とを遠心分離し、ＡＰＡ含有溶液をシリカゲル系吸着剤が充填されたカラムに通し、ＡＰＡを含有する目的画分を分取する方法が記載されている。しかしながら、上記のように特許文献６では、上記アズキプロアントシアニジン含有溶液を、シリカゲル系吸着剤充填カラムを用いて所望の画分を分取するため、大規模な上記カラムが必要であるだけでなく、製造時間が長くなって製造効率が低下するという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００６‐１４３６５４号公報
【特許文献２】特開２００６‐１６３３０号公報
【特許文献３】特開２００９‐１０７９５１号公報
【特許文献４】特開昭６３‐１６２６８５号公報
【特許文献５】特開平６‐４９０５３号公報
【特許文献６】特開２００８‐１４３８４０号公報
【００１１】
【非特許文献１】片岡茂博、有賀敏明、赤ワインの有効成分プロアントシアニジン  なぜ赤ワインが体によいのか、ファルマシア・日本薬学会、Ｖｏｌ.３４、Ｎｏ.１０、ｐｐ９９８−１００２（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、上記のような従来のプロアントシアニジンを含む医薬品などの物品およびその製造方法、特にプロアントシアニジンの製造方法の有する問題点を解決し、安全性に優れ、製造効率に優れ、製造コストの低い、小豆から特定の重合度を有するプロアントシアニジンを効率よく製造する方法、並びに上記方法により製造されたプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、長年ヒトが食してきた小豆のゆで汁を用いることによって安全性に優れ、餡などの小豆を使用する製品の製造工程で出る産業廃棄物としてのゆで汁（渋切り水）を有効利用することができ、分離大豆タンパクの濃度を調整してプロアントシアニジンとの反応条件を選択することによって、分取用カラムなどの装置および多量の有機溶媒を必要としないため製造コストが低く、特定の重合度を有するプロアントシアニジンを効率よく製造することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
即ち、本発明は、
（ａ）小豆のゆで汁を提供する工程、
（ｂ）該小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｃ）該工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた沈澱を除去する工程、
（ｄ）該工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和する工程、
（ｅ）該上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｆ）該工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた上清を除去する工程、
を含むことを特徴とする、重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上である小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法に関する。
【００１５】
本発明を更に好適に実施するためには、
上記工程（ｂ）の分離大豆タンパクの濃度が、上記小豆のゆで汁の体積をベースとして、０．１〜０．７質量体積％であり、上記工程（ｅ）の分離大豆タンパクの濃度が、前記工程（ｄ）で得られた上清の体積をベースとして、０．４〜３．０質量体積％であり；
上記工程（ｆ）の後に、
（ｇ）前記工程（ｆ）で得られた沈澱を溶離液と混合して濾過し、得られる溶出液を乾燥して溶出物を作製する工程
を含む；ことが好ましい。
【００１６】
本発明の別の態様として、前述のような小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法を用いて製造された小豆由来のプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤がある。
【００１７】
本発明の更に別の態様として、
（ａ）小豆のゆで汁を提供する工程、
（ｂ）該小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｃ）該工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた沈澱を除去する工程、
（ｄ）該工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和する工程、
（ｅ）該上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｆ）該工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた上清を除去する工程、
を含むことを特徴とする、小豆のゆで汁から重合度６以上のプロアントシアニジンを除去する方法がある。
【発明の効果】
【００１８】
本発明により、廃棄物の有効利用が可能であり、安全性に優れ、製造効率に優れ、製造コストが低い、特定の重合度を有するプロアントシアニジンを効率よく製造する方法、並びに上記方法により製造されたプロアントシアニジンを含有する抗動脈硬化剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】比較例のプロアントシアニジンポリマー（Ａ）および実施例の本発明のプロアントシアニジンオリゴマー（Ｂ）のＨＰＬＣによるクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の小豆由来のプロアントシアニジンの製造方法は、
（ａ）小豆のゆで汁を提供する工程、
（ｂ）該小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｃ）該工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた沈澱を除去する工程、
（ｄ）該工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和する工程、
（ｅ）該上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合する工程、
（ｆ）該工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整して、生じた上清を除去する工程、
を含み、
重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上である
ことを特徴とする。
【００２１】
本明細書中で用いられる「小豆のゆで汁」とは、小豆をゆでて小豆餡を製造する際に生じるもの（渋切り水など）であり、通常、廃液として廃棄していることが多いが、本発明ではこれを有効利用するものである。
【００２２】
上記工程（ａ）の小豆のゆで汁を作製する条件としては、特に限定されないが、乾燥大豆を６倍の質量の水中で、弱火（約６０〜１００℃）で１０〜４０分間加熱することが望ましい。上記加熱時間が１０分間未満では十分に抽出されず、４０分間を超えると小豆が煮崩れて、デンプンなどの夾雑物が上記抽出液に混入してプロアントシアニジンの回収率が低下する。
【００２３】
上記工程（ｂ）において、上記工程（ａ）得られた小豆のゆで汁に分離大豆タンパク溶液を加えて混合し、小豆ゆで汁および分離大豆タンパク溶液の混合液を形成する。混合条件および混合装置は特に限定されず、液体を混合することができる混合機を用いて、室温で１〜６０分間混合すればよい。ここで、上記「分離大豆タンパク」とは、大豆タンパクの原料となる脱脂大豆が、糖類、灰分、細胞壁などの繊維（オカラ）とタンパク質で構成されており、この脱脂大豆からタンパク質だけを分離したものを言う。
【００２４】
また、ポリフェノール類がタンパクと結合してポリフェノール‐タンパク複合体を形成する性質は公知である（例えば、特開２００２‐６８９９１号公報など）。本発明者らは、上記分離大豆タンパクとプロアントシアニジンとの反応性について検討する中で、プロアントシアニジンの重合度が高くなると上記反応性が高くなることを見出した。本発明者らは、このような上記タンパクとプロアントシアニジンとの反応に注目したのである。
【００２５】
本発明の特定の重合度を有するプロアントシアニジンを製造する方法においては、最初に、小豆のゆで汁に含まれる重合度分布の広いプロアントシアニジンに低濃度の分離大豆タンパクを加えて、重合度の高いプロアントシアニジンと優先的に結合させて沈澱として重合度の高いプロアントシアニジンを除去し、次に高濃度の分離大豆タンパクを加えて、重合度の高いプロアントシアニジンを除去したプロアントシアニジンと結合させて、他の不純物を除く目的のプロアントシアニジンのみを沈澱として回収する。
【００２６】
本発明においては、上記工程（ｂ）の分離大豆タンパクの濃度が、上記小豆のゆで汁の体積をベースとして、０．１〜０．７質量体積％、好ましくは０．１５〜０．５質量体積％、より好ましくは０．２〜０．３質量体積％であることが望ましい。上記分離大豆タンパクの濃度が、０．１質量体積％未満では重合度の高いプロアントシアニジンが十分に除去できず、０．７質量体積％を超えると目的とするプロアントシアニジンオリゴマーまで除去してしまう。
【００２７】
上記工程（ｃ）において、上記工程（ｂ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整するｐＨ調整剤は特に限定されないが、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、塩酸、硫酸などを用いることができる。上記混合液のｐＨ値を３〜６に調整するのは、以下の理由によるものである。タンパクは分子内に塩基性を示すアミノ基と酸性を示すカルボキシル基を有しているので、タンパクの水溶液はｐＨによって、分子内に正負両電荷が存在する双性イオン、陰イオンおよび陽イオンが平衡状態にあり、これらの平衡混合物の電荷が０（ゼロ）となっているときのｐＨを等電点という。大豆タンパクの等電点、即ち、電荷がなくなって不溶化するｐＨは３〜６付近にあるため、ｐＨ値が３〜６、より好ましくは４〜５の条件下で最も収率が高くなるのである。
【００２８】
上記工程（ｃ）において、ｐＨ調整した混合液を遠心分離して沈澱を除去することが好ましく、遠心分離の条件は特に限定されず、５００〜１００００ｒｐｍで１〜３０分間が好ましい。
【００２９】
上記工程（ｄ）において、上記工程（ｃ）で得られた上清のｐＨ値を中和するが、使用する中和剤としては特に限定されないが、炭酸水素カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどを用いることができる。
【００３０】
上記工程（ｅ）において、上記工程（ｄ）で得られた中和した上清に分離大豆タンパク溶液を加えて混合するが、混合条件および混合装置は特に限定されず、液体を混合することができる混合機を用いて、室温で１〜６０分間混合すればよい。上記分離大豆タンパクの濃度が、上記工程（ｄ）で得られた上清の体積をベースとして、０．４〜３．０質量体積％、好ましくは０．５〜２．０質量体積％、より好ましくは０．８〜１．２質量体積％であることが望ましい。上記分離大豆タンパクの濃度が、０．４質量体積％未満ではプロアントシアニジンを十分に回収できず、３．０質量体積％を超えると大豆タンパクの使用量が増大し、製造コストの大幅なアップを招き、上記工程（ｆ）で得られる沈殿物中のプロアントシアニジン含有率も著しく低下する。
【００３１】
上記工程（ｆ）において、上記工程（ｅ）で得られた混合液のｐＨ値を３〜６に調整するｐＨ調整剤は特に限定されないが、上記工程（ｃ）のｐＨ調整剤と同様のものが使用できる。
【００３２】
上記工程（ｆ）において、得られたｐＨ調整した混合液を遠心分離して上清を除去することが好ましく、遠心分離の条件は特に限定されず、５００〜１００００ｒｐｍで１〜３０分間が好ましい。また、上記上清を除去した後、更に水などの溶媒を加えて混合し、更に遠心分離を行って上清を除去する工程を行って、更に沈澱を洗浄してもよい。
【００３３】
次に、上記工程（ｆ）で得られた沈澱を乾燥するが、乾燥条件や乾燥装置は特に限定されず、３０〜１００℃で１０分間〜３日間乾燥すればよい。
【００３４】
本発明の小豆由来のプロアントシアニジンとして、上記のようにして得られた乾燥した沈澱を溶離液と混合して濾過し、得られる溶出液を乾燥して、溶出物としてのプロアントシアニジンを得る。上記溶離液としては、上記沈澱からプロアントシアニジンを溶出できる溶媒であれば特に限定されないが、アセトン水溶液、エタノール水溶液、メタノール水溶液などが挙げられる。
【００３５】
上記の方法によって得られる本発明の小豆由来のプロアントシアニジンには、重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上、好ましくは７０〜９０質量％、より好ましくは７５〜８５質量％を含むことを要件とする。上記重合度２〜５のプロアントシアニジンが、７０質量％未満では十分な抗動脈硬化作用が得られない。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３７】
（実施例；プロアントシアニジンオリゴマーの調製）
乾燥小豆（品種：エリモショウズ）１５０ｇを沸騰させた蒸留水９００ｍＬに加え、３０分間加熱して小豆煮汁を作製した。上記小豆煮汁をフィルターペーパーで濾過し、３０７ｍＬの濾液を得た。上記濾液１００ｍＬに０．２５質量体積％分離大豆タンパク水溶液１００ｍＬを加え、マグネチックスターラーを用いて混合した。酢酸でｐＨ５に調整し、遠心分離（２０００ｒｐｍで３分間）した。上清を回収し、炭酸水素ナトリウムでｐＨ７に調整し、１質量体積％分離大豆タンパク水溶液を加え、マグネチックスターラーを用いて室温で５分間混合した。上記混合液を酢酸でｐＨ５に調整し、遠心分離（２０００ｒｐｍで３分間）した。得られた沈殿を、酢酸でｐＨ５に調整した蒸留水で洗浄後、乾燥させ、プロアントシアニジンオリゴマー‐タンパク結合物８３３ｍｇを得た。更に７０％アセトン水溶液でプロアントシアニジンを溶出後、乾燥させることで、プロアントシアニジンオリゴマー２６ｍｇを得た。
【００３８】
（比較例；プロアントシアニジンポリマーの調製）
上記実施例と同様にして、小豆煮汁の濾液１００ｍＬに１％分離大豆タンパク水溶液１００ｍＬを加え、マグネチックスターラーを用いて混合した。酢酸でｐＨ５に調整し、遠心分離（２０００ｒｐｍで３分間）した。得られた沈殿を、酢酸でｐＨ５に調整した蒸留水で洗浄後、乾燥させ、プロアントシアニジンオリゴマー‐タンパク結合物９２９ｍｇを得た。更に７０％アセトン水溶液でプロアントシアニジンを溶出後、乾燥させることで、プロアントシアニジンポリマー８６ｍｇを得た。
【００３９】
（１）重合度分布の測定
実施例のプロアントシアニジンオリゴマー、および比較例のプロアントシアニジンポリマーを７０％アセトン水溶液に溶解し、ＨＰＬＣに供し、重合度分布の測定を行った。分析条件は下記の通りである。
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ １００ Ｄｉｏｌ‐５（４．６×２５０ｍｍ）
カラム温度：３０℃
移動相Ａ；アセトニトリル：酢酸（９８：２）
移動相Ｂ；メタノール：水：酢酸（９５：３：２）
（０分から３５分にかけて移動相Ｂを０％から４０％に増加させ４０分まで保持）
流速：０．８ｍＬ／分
検出：蛍光検出（励起；２７６ｎｍ、蛍光；３１６ｎｍ）
【００４０】
得られたクロマトグラムを図１に示す。Ａは比較例のプロアントシアニジンポリマーのＨＰＬＣによるクロマトグラムであり、Ｂは実施例のプロアントシアニジンオリゴマーのＨＰＬＣによるクロマトグラムである。上記条件でプロアントシアニジンを重合度別に分離できるため、各ピーク面積をプロアントシアニジン量とし、重合度分布を算出した。
【００４１】
前述のように、代表的なプロアントシアニジンの構造は以下の式：
【化２】
2015120655.tif 000003
で表される。例えば、ｎが１の時、３量体である。
【００４２】
図１に示されるように、本発明の方法を用いることによって、上記式においてｎが４である６量体以上のプロアントシアニジンをかなり除去することができていることがわかる。更に表１から明らかなように、比較例のプロアントシアニジン（ＰＡ）ポリマーに比べ、実施例のプロアントシアニジン（ＰＡ）オリゴマーは２量体から５量体までのプロアントシアニジンオリゴマー（ｎが０および１〜３）を非常に多く含むことを確認することができた。
【００４３】
【表１】
2015120655.tif 000004
【００４４】
（２）血管内皮細胞による抗動脈硬化作用評価試験
実施例である本発明のプロアントシアニジン（ＰＡ）オリゴマーと、比較例であるプロアントシアニジン（ＰＡ）ポリマーの抗動脈硬化作用を、ＭＣＰ‐１とＣＯＸ‐２の遺伝子発現量で比較した。具体的には、ヒト血管内皮細胞（ＥＡ．ｈｙ９２６）をマイクロプレートに播種し、２４時間予備培養した。その後、動脈硬化の初期段階と同様の炎症を誘導するためにリポポリサッカライド（ＬＰＳ）と各サンプルを添加し、６時間培養した。培養終了後、細胞を回収し、リアルタイムＰＣＲを用いて各遺伝子発現量を測定した。
【００４５】
表２は、コントロールを１とした時の各処理群の遺伝子発現量を示している。ＬＰＳを加えることで各遺伝子発現量は大きく増加したが、プロアントシアニジンオリゴマーの添加により顕著に抑制された。その効果はプロアントシアニジンポリマーに比べて高かった。
【００４６】
【表２】
2015120655.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の製造方法は、安全性に優れ、製造効率に優れ、製造コストが低く、かつ顕著な抗動脈硬化作用を示す重合度２〜５のプロアントシアニジンが、プロアントシアニジンの総質量をベースとして、７０質量％以上である小豆由来のプロアントシアニジンを製造することができるため、上記製造方法により得られたプロアントシアニジンは、抗動脈硬化剤の用途に用いることができる。
【符号の説明】
【００４８】
Ａ …  比較例のプロアントシアニジンポリマーのＨＰＬＣによるクロマトグラム
Ｂ …  実施例のプロアントシアニジンオリゴマーのＨＰＬＣによるクロマトグラム
【図１】
2015120655.tif 000006