(57)【要約】      （修正有）【課題】自己免疫疾患の一つとして考えられるＴ細胞媒介性炎症性疾患のである乾せん、例えば慢性乾せんを治療する方法及び組成物の提供。【解決手段】インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及び関連するサイトカインＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することによって対象における慢性乾せんを治療する方法。（ｉ）１か月以内に生のウイルス薬のワクチン接種を受けていない対象を選択する段階と、及び（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階とを含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）慢性乾せんに罹患した対象を選択する段階と、及び
（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階と
を含み、それによって対象における慢性乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項２】
前記対象が乾せんの臨床診断を少なくとも６か月間有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が安定な尋常性乾せんを少なくとも２か月間有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
（ｉ）全身的又は生物学的抗ＩＬ−１２療法への以前の曝露；非尋常性乾せん；治療の少なくとも２週間前の局所的乾せん療法、治療の少なくとも２週間前の紫外線Ｂ光線療法、治療の少なくとも４週間前のソラレン−紫外線光線療法、治療の少なくとも４週間前の全身療法、治療の少なくとも１２週間前の生物学的療法を中止できないこと；治療中に経口又は注射用コルチコステロイドの摂取が必要なこと；スクリーニング前１０年間における入院を要するぜん息の悪化；感染症又は重症感染症の危険因子；治療に成功した基底細胞癌以外の悪性腫ようの病歴；及び免疫グロブリンＧ含有薬剤に対する重大な免疫応答の病歴からなる群から選択される条件を持たない対象を選択する段階と、及び
（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階と
を含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項５】
（ｉ）１か月以内に生のウイルス薬のワクチン接種を受けていない対象を選択する段階と、及び
（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階と
を含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項６】
（ｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階と、
（ｉｉ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ又はアラニントランスアミナーゼ＞正常上限の５倍、血清総ビリルビン＞正常上限の３倍、血清クレアチニン＞正常上限の３倍、クレアチンホスホキナーゼ＞正常上限の５倍、ヘモグロビン＜８ｇ／ｄＬ、白血球数＜２×１０９／Ｌ及び血小板数＜７５×１０９／Ｌからなる群から選択される臨床的に有意な異常検査結果について対象をモニターする段階と、
（ｉｉｉ）臨床的に有意な異常検査結果が検出された対象において、抗体又はその抗原結合性部分の投与を中止する段階と
を含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項７】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
抗体又はその抗原結合性部分が約１００ｍｇの用量で投与される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分がｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ｐ４０サブユニットがＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分がｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するときに及びｐ４０サブユニットがＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分がｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
慢性乾せんが慢性尋常性乾せんである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
乾せんが慢性乾せんである、請求項４から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
慢性乾せんが慢性尋常性乾せんである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後長期間、少なくともＰＡＳＩ９０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項１８】
長期間が少なくとも約１２週間である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
抗体が単回投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
抗体又はその抗原結合性部分が約１００ｍｇの用量で投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
乾せんが慢性乾せんである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
対象にＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後長期間、明確な又は最小のＰＧＡ評点を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項２６】
長期間が少なくとも約１２週間である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
抗体又はその抗原結合性部分が単回投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
抗体又はその抗原結合性部分が約１００ｍｇの用量で投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
乾せんが慢性乾せんである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
対象にＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約８週までに、改善されたＰＡＳＩスコアを示し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項３４】
抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約４週間までに対象が改善されたＰＡＳＩスコアを示す、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約２週間までに対象が改善されたＰＡＳＩスコアを示す、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約１週間までに対象が改善されたＰＡＳＩスコアを示す、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
抗体又はその抗原結合性部分が単回投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
抗体又はその抗原結合性部分が約１００ｍｇの用量で投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
乾せんが慢性乾せんである、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後長期間、少なくともＰＡＳＩ１００応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項４４】
長期間が少なくとも約１２週間である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
乾せんが慢性乾せんである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ５０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項５０】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ７５応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項５１】
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ９０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法。
【請求項５２】
長期間が少なくとも約１２週間である、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
抗体が少なくとも約１２週間投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
抗体又はその抗原結合性部分が隔週投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
抗体又はその抗原結合性部分が毎週投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
抗体又はその抗原結合性部分が単回投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
抗体又はその抗原結合性部分が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
抗体又はその抗原結合性部分が約１００ｍｇの用量で投与される、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
乾せんが慢性乾せんである、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
乾せんが治療されるように、ヒトＩＬ−１２とヒトＩＬ−２３に対する抗体を対象に隔週投与計画で投与することを含む、対象における乾せんを治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、その各々の内容全体を参照により本明細書に組み入れる、２００７年１月１６日に出願された米国仮特許出願第６０／８８０，７６７号、２００７年２月２７日に出願された米国仮特許出願第６０／９０４，０２２号、２００７年４月２４日に出願された米国仮特許出願第６０／９２５，９６０号、２００７年７月２４日に出願された米国仮特許出願第６０／９６１，７６４号、及び２００７年９月２８日に出願された米国仮特許出願第６０／９９７，０１２号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
乾せんは、世界的な罹患率は広範に変動するが、成体の約２％から３％が罹患する最も一般的な自己免疫疾患の１つと考えられるＴ細胞媒介性炎症性疾患である（Ｓｔｅｒｎ  Ｒ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２００４，  ９：  １３６−３９；  Ｄａｖｉｄｓｏｎ  Ａ  ａｎｄ  Ｄｉａｍｏｎｄ  Ｂ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００１，  ３４５：  ３４０−５０；  Ｌａｎｇｌｅｙ  Ｒ．Ｇ．Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００５，  ６４（Ｓｕｐｐｌ  ＩＩ）：  ｉｉ１８−２３）。乾せんは、生活の質に重大な影響を及ぼし（ｄｅ  Ｋｏｒｔｅ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２００４，  ９：  １４０−７；  Ｋｒｕｅｇｅｒ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  １３７：  ２８０−４；  Ｆｉｎｌａｙ  ＡＹ  ａｎｄ  Ｃｏｌｅｓ  ＥＣ，  Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９５，  １３２：  ２３６−４４）、幾つかの心理学的及び心理社会的問題を伴う（Ｋｉｍｂａｌｌ  ＡＢ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００５，  ６：  ３８３−９２；  Ｒｕｓｓｏ  ＰＡ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｕｓｔｒａｌａｓ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００４，  ４５：  １５５−９）。多くの伝統的な乾せん療法は有害作用を有し、したがって、その長期の使用は限られている（Ｌｅｂｗｏｈｌ  Ｍ．  ａｎｄ  Ａｌｉ  Ｓ．，  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  ４５：  ４８７−９８；  Ｌｅｂｗｏｈｌ  Ｍ．  ａｎｄ  Ａｌｉ  Ｓ．，  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  ４５：  ６４９−６１）。また、多くの乾せん患者が伝統的な療法に満足していない（Ｓｔｅｒｎ  ＲＳ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２００４，  ９：  １３６−３９；  Ｆｉｎｌａｙ  ＡＹ  ａｎｄ  Ｏｒｔｏｎｎｅ  ＪＰ，  Ｊ  Ｃｕｔａｎ  Ｍｅｄ  Ｓｕｒｇ  ２００４，  ８：  ３１０−２０）。したがって、より安全でより容易に使用でき、長期処方することができる療法が明確に求められている。
【０００３】
インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及び関連するサイトカインＩＬ−２３は、ｐ４０サブユニットを共有するサイトカインのＩＬ−１２スーパーファミリーのメンバーである（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＥＪＲ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  ２００６，  ２７：  ４２５−４２）。両方のサイトカインは、乾せんにおけるタイプ１Ｔヘルパー細胞（Ｔｈ１）免疫応答の発生の一因になるが、各々独特の役割を有する（Ｒｏｓｍａｒｉｎ  Ｄ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ＢＥ，  Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００５，  ４：  ３１８−２５；  Ｈｏｎｇ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９，  １６２：  ７４８０−９１；  Ｙａｗａｌｋａｒ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９８，  １１１：  １０５３−５７）。ＩＬ−１２は、Ｔｈ１細胞の分化とそれに続くインターフェロンガンマの分泌を主に刺激するのに対して、ＩＬ−２３は、炎症誘発性伝達物質ＩＬ−１７を分泌するエフェクターＴヘルパー細胞（Ｔｈ１７）へのナイーブＴ細胞の分化を優先的に刺激する  Ｒｏｓｍａｒｉｎ  Ｄ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ＢＥ，  Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００５，  ４：  ３１８−２５；  Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，  ６：  １１２３−３２；  Ｐａｒｋ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，  ６：  １１３２−４１）。乾せん皮膚病変部におけるＩＬ−１２  ｐ４０及びＩＬ−２３  ｐ４０メッセンジャーＲＮＡの過剰発現は、ＩＬ−１２／２３  ｐ４０サブユニットタンパク質に対する中和抗体を用いたＩＬ−１２及びＩＬ−２３の阻害が乾せん治療に有効な治療手法を提供し得ることを示唆している（Ｙａｗａｌｋａｒ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９８，  １１１：  １０５３−５７；  Ｌｅｅ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４，  １９９：  １２５−３０；  Ｓｈａｋｅｒ  ＯＧ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００６，  ３９：  １１９−２５；  Ｐｉｓｋｉｎ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６，  １７６：  １９０８−１５）。乾せん治療のかかる治療手法が、当分野では明確に求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｔｅｒｎ  Ｒ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２００４，  ９：  １３６−３９
【非特許文献２】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  Ａ  ａｎｄ  Ｄｉａｍｏｎｄ  Ｂ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００１，  ３４５：  ３４０−５０
【非特許文献３】Ｌａｎｇｌｅｙ  Ｒ．Ｇ．Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２００５，  ６４（Ｓｕｐｐｌ  ＩＩ）：  ｉｉ１８−２３
【非特許文献４】ｄｅ  Ｋｏｒｔｅ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２００４，  ９：  １４０−７
【非特許文献５】Ｋｒｕｅｇｅｒ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  １３７：  ２８０−４
【非特許文献６】Ｆｉｎｌａｙ  ＡＹ  ａｎｄ  Ｃｏｌｅｓ  ＥＣ，  Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９５，  １３２：  ２３６−４４
【非特許文献７】Ｋｉｍｂａｌｌ  ＡＢ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００５，  ６：  ３８３−９２
【非特許文献８】Ｒｕｓｓｏ  ＰＡ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｕｓｔｒａｌａｓ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００４，  ４５：  １５５−９
【非特許文献９】Ｌｅｂｗｏｈｌ  Ｍ．  ａｎｄ  Ａｌｉ  Ｓ．，  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  ４５：  ４８７−９８
【非特許文献１０】Ｌｅｂｗｏｈｌ  Ｍ．  ａｎｄ  Ａｌｉ  Ｓ．，  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００１，  ４５：  ６４９−６１
【非特許文献１１】Ｆｉｎｌａｙ  ＡＹ  ａｎｄ  Ｏｒｔｏｎｎｅ  ＪＰ，  Ｊ  Ｃｕｔａｎ  Ｍｅｄ  Ｓｕｒｇ  ２００４，  ８：  ３１０−２０
【非特許文献１２】Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＥＪＲ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  ２００６，  ２７：  ４２５−４２
【非特許文献１３】Ｒｏｓｍａｒｉｎ  Ｄ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ＢＥ，  Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００５，  ４：  ３１８−２５
【非特許文献１４】Ｈｏｎｇ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９，  １６２：  ７４８０−９１
【非特許文献１５】Ｙａｗａｌｋａｒ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １９９８，  １１１：  １０５３−５７
【非特許文献１６】Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  Ｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，  ６：  １１２３−３２
【非特許文献１７】Ｐａｒｋ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，  ６：  １１３２−４１
【非特許文献１８】Ｌｅｅ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４，  １９９：  １２５−３０
【非特許文献１９】Ｓｈａｋｅｒ  ＯＧ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００６，  ３９：  １１９−２５
【非特許文献２０】Ｐｉｓｋｉｎ  Ｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６，  １７６：  １９０８−１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合する抗体又はその抗原結合性部分を用いて、乾せん、例えば慢性乾せんを治療する方法及び組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様においては、本発明は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に対する抗体又はその抗原結合性部分を対象に隔週、毎週又は単回投与することを含む、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【０００７】
一実施形態において、対象は、抗体又はその抗原結合性部分の隔週、毎週又は単回投与に対する応答を長期間、例えば少なくとも約１２週間又は少なくとも約２４週間維持する。
【０００８】
別の一実施形態において、対象は、ヒトＩＬ−１２とヒトＩＬ−２３に対する抗体又はその抗原結合性部分を対象に隔週、毎週又は単回投与後に、少なくともＰＡＳＩ７５応答を長期間維持する。更に別の一実施形態において、対象は、ヒトＩＬ−１２とヒトＩＬ−２３に対する抗体又はその抗原結合性部分を対象に隔週、毎週又は単回投与後に、少なくともＰＡＳＩ９０応答を長期間維持する。更に別の一実施形態において、対象は、ヒトＩＬ−１２とヒトＩＬ−２３に対する抗体又はその抗原結合性部分を対象に隔週、毎週又は単回投与後に、少なくともＰＡＳＩ１００応答を長期間維持する。
【０００９】
一実施形態において、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に対する抗体の用量は約２００ｍｇ又は約１００ｍｇである。
【００１０】
一実施形態において、乾せんは尋常性乾せん、例えば慢性尋常性乾せんである。別の一実施形態において、乾せんは慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せんである。更に別の一実施形態において、乾せんは、中度から重度の乾せん、例えば、中度から重度の尋常性乾せん、中度から重度の慢性乾せん、又は中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００１１】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分を皮下投与する。
【００１２】
別の一態様においては、本発明は、（ｉ）慢性乾せんに罹患した対象を選択する段階と、（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階とを含み、それによって対象における慢性乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００１３】
一実施形態において、対象は乾せんの臨床診断を少なくとも６か月間有する。別の一実施形態において、対象は安定な尋常性乾せんを少なくとも２か月間有する。
【００１４】
更に別の一態様においては、本発明は、（ｉ）全身的又は生物学的抗ＩＬ−１２療法への以前の曝露；非尋常性（ｎｏｎｐｌａｑｕｅ）乾せん；治療の少なくとも２週間前の局所的乾せん療法、治療の少なくとも２週間前の紫外線Ｂ光線療法、治療の少なくとも４週間前のソラレン−紫外線光線療法、治療の少なくとも４週間前の全身療法、治療の少なくとも１２週間前の生物学的療法を中止できないこと；治療中に経口又は注射用コルチコステロイドの摂取が必要なこと；スクリーニング前１０年間における入院を要するぜん息の悪化；感染症又は重症感染症の危険因子；治療に成功した基底細胞癌以外の悪性腫ようの病歴、例えば、へん平上皮癌又は頚部上皮内癌の病歴；及び免疫グロブリンＧ含有薬剤（例えば、ガンマグロブリン静脈注射、融合タンパク質又はモノクローナル抗体）に対する重大な免疫反応（例えば、血清病又はアナフィラキシー様反応）の病歴からなる群から選択される条件を持たない対象を選択する段階と、（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階とを含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００１５】
更に別の一態様においては、本発明は、（ｉ）１か月以内に生のウイルス薬のワクチン接種を受けていない対象を選択する段階と、及び（ｉｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階とを含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００１６】
更に別の一態様においては、本発明は、（ｉ）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与する段階と、及び（ｉｉ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ又はアラニントランスアミナーゼ＞正常上限の５倍、血清総ビリルビン＞正常上限の３倍、血清クレアチニン＞正常上限の３倍、クレアチンホスホキナーゼ＞正常上限の５倍、ヘモグロビン＜８ｇ／ｄＬ、白血球数＜２×１０９／Ｌ及び血小板数＜７５×１０９／Ｌからなる群から選択される臨床的に有意な異常検査結果について対象をモニターする段階と、（ｉｉｉ）臨床的に有意な異常検査結果が検出された対象において、抗体又はその抗原結合性部分の投与を中止する段階とを含み、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００１７】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は隔週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は毎週又は単回投与される。
【００１８】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ又は２２０ｍｇの用量で投与される。
【００１９】
一実施形態において、ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。別の一実施形態において、ｐ４０サブユニットがＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。更に別の一実施形態において、ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するときに及びｐ４０サブユニットがＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。
【００２０】
一実施形態において、乾せんは、慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せん、例えば中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００２１】
別の一態様においては、本発明は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後長期間、少なくともＰＡＳＩ９０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００２２】
一実施形態において、長期間は、少なくとも約１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４週間である。
【００２３】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は隔週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は毎週投与される。更に別の一実施形態において、抗体は単回投与される。
【００２４】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ又は２２０ｍｇの用量で投与される。
【００２５】
一実施形態において、乾せんは、慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せん、例えば中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００２６】
更に別の一態様においては、本発明は、対象にＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後長期間、明確な又は最小のＰＧＡ評点を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００２７】
一実施形態において、長期間は、少なくとも約１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４週間である。
【００２８】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は隔週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は毎週投与される。更に別の一実施形態において、抗体は単回投与される。
【００２９】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ又は２２０ｍｇの用量で投与される。
【００３０】
一実施形態において、乾せんは、慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せん、例えば中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００３１】
更に別の一態様においては、本発明は、対象にＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約８週までに、改善されたＰＡＳＩスコアを示し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００３２】
一実施形態において、対象は、抗体又はその抗原結合性部分の初回投与後約７週、約６週、約５週、約４週、約３週、約２週又は約１週までに、改善されたＰＡＳＩスコアを示す。
【００３３】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は隔週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は毎週投与される。更に別の一実施形態において、抗体は単回投与される。
【００３４】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ又は２２０ｍｇの用量で投与される。
【００３５】
一実施形態において、乾せんは、慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せん、例えば中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００３６】
別の一態様においては、本発明は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ５０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００３７】
関連する一態様においては、本発明は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ７５応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００３８】
更に別の関連する一態様においては、本発明は、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である抗体又はその抗原結合性部分を対象に投与することを含み、前記対象は、抗体又はその抗原結合性部分の投与中止後長期間、少なくともＰＡＳＩ９０応答を維持し、それによって対象における乾せんを治療する、対象における乾せんを治療する方法を提供する。
【００３９】
一実施形態において、抗体投与中止後の長期間は少なくとも約１２週間である。
【００４０】
一実施形態において、抗体は少なくとも約１２週間投与される。
【００４１】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は隔週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は毎週投与される。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は単回投与される。
【００４２】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ又は２２０ｍｇの用量で投与される。
【００４３】
一実施形態において、乾せんは、慢性乾せん、例えば慢性尋常性乾せん、例えば中度から重度の慢性尋常性乾せんである。
【００４４】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ＩＬ−１２のｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。
【００４５】
別の一実施形態において、ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。更に別の一実施形態において、ｐ４０サブユニットがｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。一実施形態において、ｐ４０サブユニットがＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに結合するとき及びｐ４０サブユニットがｐ１９サブユニットに結合するときに、抗体又はその抗原結合性部分はｐ４０サブユニットのエピトープに結合可能である。
【００４６】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、Ｙ６１及びＪ６９５からなる群から選択される抗体が結合するＩＬ−１２のｐ４０サブユニットのエピトープに結合する。
【００４７】
別の一実施形態において、抗体は第１のヘテロ二量体に更に結合可能であり、第２のヘテロ二量体にも結合可能であり、第１のヘテロ二量体は、Ｉｌ−１２のｐ４０サブユニット及びＩｌ−１２のｐ３５サブユニットを含み、第２のヘテロ二量体は、ＩＬ−１２のｐ４０サブユニット及びｐ１９サブユニットを含む。
【００４８】
更なる一実施形態において、抗体は、第１のヘテロ二量体の活性を中和する。別の一実施形態において、抗体は、第２のヘテロ二量体の活性を中和する。更に別の一実施形態において、抗体は、第１のヘテロ二量体及び第２のヘテロ二量体の活性を中和する。
【００４９】
更なる一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  ｂｌａｓｔ）増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、又はヒトＩＦＮγ産生を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。
【００５０】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴で測定して、１×１０−１０Ｍ以下のＫｄ又は１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でＩＬ−１２のｐ４０サブユニットから解離する。
【００５１】
一実施形態において、本発明の方法に使用される単離抗体又はその抗原結合性部分は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である。
【００５２】
別の一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する。
【００５３】
更なる一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２とを有する。
【００５４】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを有する。
【００５５】
別の一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ｐ４０サブユニットを含むインターロイキンに結合可能である。一実施形態において、インターロイキンは、ｐ４０サブユニット及びｐ３５サブユニットを含み、例えば、インターロイキンはＩＬ−１２である。別の一実施形態において、インターロイキンは、ｐ４０サブユニット及びｐ１９サブユニットを含む。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インターロイキンの活性を中和する。
【００５６】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ｐ４０サブユニットのエピトープに結合する。
【００５７】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、抗体又はその抗原結合性部分と薬学的に許容される担体とを含む薬剤組成物中で対象に投与される。薬剤組成物は、治療薬、例えば、ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、（ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの）抗体又は作動物質、（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０の）抗体又はそのリガンド、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＴＧＦβなどの追加の薬剤も含み得る。
【００５８】
別の一実施形態において、対象に投与される薬剤組成物中の治療薬は、抗ＴＮＦ抗体及びその抗体断片、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、ＴＡＣＥ阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤、コルチコステロイド、ブデノシド、デキサメタゾン、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ｒａ、チロシンキナーゼ阻害剤、６−メルカプトプリン及びＩＬ−１１からなる群から選択することができる。
【００５９】
別の一実施形態において、治療薬は、コルチコステロイド、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、４−アミノピリジン、チザニジン、インターフェロンβ１ａ、インターフェロンβ１ｂ、コポリマー１、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、クラドリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）、（ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦの）抗体又は作動物質、（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０に対する）抗体又はそのリガンド、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、キナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、ｓＩＬ−１３Ｒ、抗Ｐ７、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、及びＴＧＦβからなる群から選択することができる。
【００６０】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴で測定して、それぞれ、１×１０−１０Ｍ以下のＫｄ及び１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から解離する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離する。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離する。
【００６１】
別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、表面プラズモン共鳴で測定してそれぞれ１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩｌ−２３から解離する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離する。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離する。
【００６２】
更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３からそれぞれ１．３４×１０−１０Ｍ以下のＫｄで解離する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３からそれぞれ９．７４×１０−１１Ｍ以下のＫｄで解離する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、組換え抗体又はその抗原結合性部分である。
【００６３】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、中和抗体であり、例えば、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３の活性を中和する。一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロ植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）において植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、中和抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を５×１０−１２Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。
【００６４】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する。一実施形態において、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２とを更に有する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを更に有する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、さらに、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。更に別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、さらに、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する。
【００６５】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。一実施形態において、抗体重鎖定常領域はＩｇＧ１である。別の一実施形態において、抗体は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片又は単鎖Ｆｖ断片である。
【００６６】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から１×１０−１０Ｍ以下のＫｄで解離し、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニット上のエピトープに結合する。
【００６７】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、
ａ）表面プラズモン共鳴で測定して１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、
ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ヒト抗体又はその抗原結合性部分である。
【００６８】
別の一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離する。更なる一実施形態において、ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離する。
【００６９】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２に結合し、
配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインと、及び
配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインと
を含む、ヒト抗体又はその抗原結合性部分である。
【００７０】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を有し及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメインを有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を有する。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインを更に有するＬＣＶＲと及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメインを更に含むＨＣＶＲとを含む。更に別の一実施形態において、ＬＣＶＲは、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを更に有し、ＨＣＶＲは、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを有する。
【００７１】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、ＡＢＴ−８７４とも称される抗体Ｊ６９５又はその抗原結合性部分である。
【００７２】
一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３に結合し、１．３４×１０−１０Ｍ以下のＫｄでヒトＩＬ−１２から解離し、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３を中和する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３から９．７４×１０−１１Ｍ以下のＫｄで解離する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＦＮγ産生を５×１０−１２Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。
【００７３】
一実施形態において、本発明の方法に使用される抗体又はその抗原結合性部分は、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３受容体結合アッセイ（ＲＢＡ）において、その受容体に結合するＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３をそれぞれ１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３受容体結合アッセイ（ＲＢＡ）において、その受容体に結合するＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３をそれぞれ１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３受容体結合アッセイ（ＲＢＡ）において、その受容体に結合するＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３をそれぞれ１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】試験の患者の割り付けを示す図である。（「ｅｏｗ」という用語は、隔週投薬を指す。）
【図２】試験の１２週部分において乾せんの面積と重症度指数が少なくとも７５％改善した（ＰＡＳＩ７５）患者の割合を示すグラフである。第８週までに、２００ｍｇ×１群を除いて、ＰＡＳＩ７５応答を示した患者の割合は、治療意図（ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）集団の観察データの分散分析に基づいて、プラセボと各々比較して、各ＡＢＴ−８７４投与群の方が統計的に有意に高かった（ｐ＜０．００１）。（「ｅｏｗ」という用語は、隔週投薬を指す。）
【図３】ベースラインからの乾せんの面積と重症度指数（ＰＡＳＩ）のスコアの平均改善率を示すグラフである。データによれば、治療意図集団の観察データの分散分析に基づいて、（第１週の１００ｍｇ  ｅｏｗ、ｐ＝０．０２３を除く）全時点において、プラセボと比較した各ＡＢＴ−８７４投与群は＊ｐ＜０．００１である。（「ｅｏｗ」という用語は、隔週投薬を指す。）
【図４Ａ】試験の第２４週において、すなわち抗体投与中止後の第１２週において、それぞれＰＡＳＩ５０、ＰＡＳＩ７５及びＰＡＳＩ９０応答を維持した患者の割合を示すグラフである。
【図４Ｂ】試験の第２４週において、すなわち抗体投与中止後の第１２週において、それぞれＰＡＳＩ５０、ＰＡＳＩ７５及びＰＡＳＩ９０応答を維持した患者の割合を示すグラフである。
【図４Ｃ】試験の第２４週において、すなわち抗体投与中止後の第１２週において、それぞれＰＡＳＩ５０、ＰＡＳＩ７５及びＰＡＳＩ９０応答を維持した患者の割合を示すグラフである。
【図４Ｄ】試験の２４週間にわたってＰＡＳＩ７５応答を維持する患者の割合を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
発明の詳細な説明
本発明をより容易に理解できるように、幾つかの用語をまず定義する。
【００７６】
「活性増強アミノ酸残基」という用語は、抗体の活性を改善するアミノ酸残基を含む。活性増強アミノ酸残基は、接触、超変異又は好ましい選択的変異誘発位置におけるアミノ酸残基を置換し得、さらに、１個を超える活性増強アミノ酸残基が１個以上のＣＤＲ内に存在し得ることを理解すべきである。活性増強アミノ酸残基としては、抗体の結合特異性／親和性、例えば、ヒトＩＬ−１２への抗ヒトＩＬ−１２抗体の結合を改善するアミノ酸残基が挙げられる。活性増強アミノ酸残基は、抗体、例えばヒトＩＬ−１２を阻害するヒトＩＬ−１２抗体の中和能を改善するアミノ酸残基も含むものとする。
【００７７】
「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、すなわち、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖で構成される免疫グロブリン分子を含む。各重鎖は、（ＨＣＶＲ又はＶＨと略記する）重鎖可変領域と重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、（ＬＣＶＲ又はＶＬと略記する）軽鎖可変領域と軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１個のドメインＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的である領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域に更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で整列する３個のＣＤＲと４個のＦＲで構成される。一実施形態において、本発明の組成物及び方法に使用される抗体は、参照により本明細書に組み入れる米国特許第６，９１４，１２８号に記載の抗体である。別の一実施形態において、本発明の組成物及び方法に使用される抗体は、Ｊ６９５とも称される抗体ＡＢＴ−８７４（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）である。
【００７８】
抗体の「抗原結合性部分」（又は「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ｈＩＬ−１２）に特異的に結合する能力を保持する抗体断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって発揮され得ることが示された。抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわち、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋で連結された２個のＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬとＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：  ５４４−５４６）、及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。また、ＶＬとＶＨは、Ｆｖ断片の２個のドメインＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、ＶＬ領域とＶＨ領域が一対になって一価の分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる、例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  ４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：  ５８７９−５８８３を参照されたい。）として生成させることができる合成リンカーを用いて、組換え方法によって連結することができる。かかる単鎖抗体も、抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含されるものとする。二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）などの単鎖抗体の他の形態も包含される。二重特異性抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、短かすぎて同じ鎖上でのこれら２個のドメインの対形成が不可能であるリンカーを用いることによって、これらのドメインを別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２個の抗原結合部位を生成させた、二価の二重特異的な抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：  ６４４４−６４４８；  Ｐｏｌｊａｋ  Ｒ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。さらに、抗体又はその抗原結合性部分は、抗体又は抗体部分と１種類以上の別のタンパク質又はペプチドとの共有結合性又は非共有結合性会合によって形成される、より大きい免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）分子の一部であり得る。かかる免疫接着分子の例としては、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，  Ｓ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：  ９３−１０１）、並びに二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，  Ｓ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：  １０４７−１０５８）が挙げられる。Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、抗体全体のそれぞれパパイ���消化、ペプシン消化などの従来技術を用いて、抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分及び免疫接着分子は、本明細書に記載の標準組換えＤＮＡ技術によって得ることができる。好ましい抗原結合性部分は、完全なドメイン又は完全なドメインの対である。
【００７９】
「復帰変異」という用語は、ヒト抗体の体細胞変異アミノ酸の一部又は全部が、相同生殖系列抗体配列由来の対応する生殖系列残基で置換される過程を指す。本発明のヒト抗体の重鎖及び軽鎖配列を、ＶＢＡＳＥデータベース中の生殖系列配列と別々に整列させて、最大の相同性を有する配列を特定する。かかる異なるアミノ酸をコードする規定のヌクレオチド位置を変異させることによって、本発明のヒト抗体における差を生殖系列配列に戻す。復帰変異候補としてこうして特定された各アミノ酸の役割は、抗原結合における直接又は間接的役割について検討されるべきであり、ヒト抗体の任意の望ましい特性に影響を及ぼすことが変異後に判明したいずれのアミノ酸もを最終ヒト抗体に含めるべきではない。一例として、選択的変異誘発手法によって特定された活性増強アミノ酸は、復帰変異を受けやすくはない。復帰変異を受けやすいアミノ酸の数を最小限に抑えるために、最も近い生殖系列配列とは異なるが、第２の生殖系列配列中の対応するアミノ酸と同一であることが判明したアミノ酸位置は残すことができる。ただし、第２の生殖系列配列は、当該アミノ酸の両側の少なくとも１０個、好ましくは１２個のアミノ酸に関して本発明のヒト抗体の配列と同一であり、共直線性（ｃｏｌｉｎｅａｒ）である。復帰変異は、抗体最適化のいずれの段階でも起こり得る。好ましくは、復帰変異は、選択的変異誘発手法の直前又は直後に起こる。より好ましくは、復帰変異は、選択的変異誘発手法の直前に起こる。
【００８０】
本明細書では（ｈＩＬ−１２又はＩＬ−１２と略記する）「ヒトインターロイキン１２」という句は、マクロファージ及び樹状細胞によって主として分泌されるヒトサイトカインを含む。この用語は、ジスルフィド架橋で連結された３５ｋＤサブユニット（ｐ３５）と４０ｋＤサブユニット（ｐ４０）を含むヘテロ二量体タンパク質を含む。このヘテロ二量体タンパク質を「ｐ７０サブユニット」と称する。ヒトＩＬ−１２の構造は、例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７０：  ８２７−８４５；  Ｓｅｄｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９０：  １０１８８−１０１９２；  Ｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １５４：  １１６−１２７；  Ｐｏｄｌａｓｋｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２９４：  ２３０−２３７に更に記述されている。ヒトＩＬ−１２という用語は、標準組換え発現方法によって調製することができる組換えヒトＩＬ−１２（ｒｈ  ＩＬ−１２）を含むものとする。
【００８１】
「Ｋａｂａｔ付番」、「Ｋａｂａｔ定義及び「Ｋａｂａｔ標識化」という用語は、本明細書では区別なく使用される。当分野で認められたこれらの用語は、抗体又はその抗原結合性部分の重鎖及び軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりも可変（すなわち超可変）であるアミノ酸残基に付番するシステムを指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７１）  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ，  Ｓｃｉ．  １９０：  ３８２−３９１、及びＫａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０から６５、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置９５から１０２の範囲である。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０から５６、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置８９から９７の範囲である。
【００８２】
本明細書では、Ｋａｂａｔ付番を使用して、本発明の抗体中でなされるアミノ酸修飾の位置を示す。例えば、Ｙ６１抗ＩＬ−１２抗体は、重鎖ＣＤＲ１の３１位においてセリン（Ｓ）からグルタミン酸（Ｅ）に変異し得（Ｈ３１Ｓ→Ｅ）、又は軽鎖ＣＤＲ３の９４位においてグリシン（Ｇ）はチロシン（Ｙ）に変異し得る（Ｌ９４Ｇ→Ｙ）。
【００８３】
「ヒト抗体」という用語は、Ｋａｂａｔ等（Ｋａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）によって記述されたヒト生殖系列免疫グロブリン配列に対応する可変及び定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為若しくは部位特異的変異誘発によって、又は生体内での体細胞変異によって、導入される変異）を、例えばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中に、含み得る。変異は、好ましくは、本明細書に記載の「選択的変異誘発手法」によって導入される。ヒト抗体は、アミノ酸残基、例えば、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされない活性増強アミノ酸残基で置換された少なくとも１つの位置を有し得る。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の一部ではないアミノ酸残基で置換された最高２０個の位置を有し得る。他の実施形態において、最高１０個、最高５個、最高３個又は最高２個の位置が置換される。好ましい一実施形態において、これらの置換は、以下に詳述するようにＣＤＲ領域内にある。しかし、本明細書では「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの他のほ乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含まないものとする。
【００８４】
「組換えヒト抗体」という句は、下記ＩＩ節に更に記述する宿主細胞に移入された組換え発現ベクターを用いて発現される抗体、下記ＩＩＩ節に更に記述する組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を導入したトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０：  ６２８７−６２９５参照）、別のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製又は単離された抗体など、組換え手段によって調製、発現、作製又は単離されたヒト抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）。しかし、ある実施形態において、かかる組換えヒト抗体は、インビトロでの変異誘発（又はヒトＩｇ配列を導入した動物を使用するときには、生体内での体細胞変異誘発）を受け、したがって組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し及びこれらに関係するものの、生体内でのヒト抗体生殖系列レパートリーに天然には存在しないかもしれない配列である。しかし、ある実施形態において、かかる組換え抗体は、選択的変異誘発手法若しくは復帰変異又はその両者の結果である。
【００８５】
「単離抗体」としては、異なる抗原特異性を有する別の抗体を実質的に含まない抗体が挙げられる（例えば、ｈＩＬ−１２に特異的に結合する単離抗体は、ｈＩＬ−１２以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。ｈＩＬ−１２に特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のＩＬ−１２分子に結合し得る（以下で更に詳述する。）。さらに、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。
【００８６】
「中和抗体」（又は「ｈＩＬ−１２活性を中和した抗体」）としては、ｈＩＬ−１２に結合することによって、ｈＩＬ−１２の生物活性を阻害する抗体が挙げられる。ｈＩＬ−１２の生物活性のこの阻害は、植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡ）におけるヒト植物性血球凝集素芽細胞増殖の阻害、ヒトＩＬ−１２受容体結合アッセイにおける受容体結合の阻害など、ｈＩＬ−１２生物活性の１つ以上の指標を測定することによって評価することができる（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３−インターフェロンガンマ誘導アッセイ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）参照）。ｈＩＬ−１２生物活性のこれらの指標は、当分野で公知の幾つかの標準インビトロ又は生体内アッセイの１つ以上によって評価することができる（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）。
【００８７】
「活性」という用語は、抗原に対する抗体（例えば、ＩＬ−１２抗原に結合する抗ｈＩＬ−１２抗体）の結合特異性／親和性、及び／又は抗体（例えば、ｈＩＬ−１２に結合してｈＩＬ−１２の生物活性を阻害（例えば、ＰＨＡ芽細胞増殖の阻害、又はヒトＩＬ−１２受容体結合アッセイにおける受容体結合の阻害）する抗ｈＩＬ−１２抗体）の中和能などの活性を含む（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）。
【００８８】
「表面プラズモン共鳴」という句は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、実時間での生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を含む。詳細は、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例５、Ｊｏｎｓｓｏｎ，  Ｕ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ５１：  １９−２６；  Ｊｏｎｓｓｏｎ，  Ｕ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：  ６２０−６２７；  Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ８：  １２５−１３１、及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８：  ２６８−２７７を参照されたい。
【００８９】
本明細書では「Ｋｏｆｆ」という用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離のオフ速度定数を指すものとする。
【００９０】
本明細書では「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離定数を指すものとする。
【００９１】
「核酸分子」という句は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含む。核酸分子は、一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００９２】
ｈＩＬ−１２に結合する抗体又は抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関連して本明細書で使用する、「単離抗体」）を含めた「単離核酸分子」という句は、抗体又は抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ｈＩＬ−１２以外の抗原に結合する抗体又は抗体部分をコードする別のヌクレオチド配列を含まない核酸分子を含み、この別の配列は、ヒトゲノムＤＮＡ中の核酸に天然に隣接し得る。したがって、例えば、抗ＩＬ−１２抗体のＶＨ領域をコードする本発明の単離核酸は、ＩＬ−１２以外の抗原に結合する別のＶＨ領域をコードする別の配列を含まない。「単離核酸分子」という句は、ＶＨ及びＶＬ領域が二重特異性抗体の配列以外の別の配列を含まない二重特異性抗体などの二価の二重特異的な抗体をコードする配列も含むものとする。
【００９３】
「ベクター」という用語は、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子を含む。ベクターの１タイプは「プラスミド」である。プラスミドは、追加のＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。ある種のベクターは、ベクターが導入された宿主細胞中で自己複製することができる（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター、及びエピソームほ乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソームほ乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノム中に組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある種のベクターは、それが作用可能に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターを本明細書では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と称する。一般に、組換えＤＮＡ技術に有用な発現ベクターはプラスミドの形態であることが多い。本明細書においては、プラスミドが最も一般的に使用されるベクター形態であるので、「プラスミド」と「ベクター」を区別なく使用することができる。しかし、本発明は、等価な機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形態も含むものとする。
【００９４】
「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）という句は、組換え発現ベクターが導入された細胞を含む。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も指すものであることを理解すべきである。変異又は環境の影響のためにある種の改変が後継世代に起こり得るので、かかる子孫は、親細胞と実際には同一でないこともあるが、それでも本明細書の「宿主細胞」という用語の範囲に含まれる。
【００９５】
本明細書では「修飾する」という用語は、抗体又はその抗原結合性部分中の１個以上のアミノ酸を変化させることを指すものとする。この変化は、１つ以上の位置においてアミノ酸を付加、置換又は欠失させることによって生成させることができる。変化は、ＰＣＲ変異誘発などの公知技術によって生成させることができる。
【００９６】
「接触位置」という句は、２６個の公知の抗体−抗原構造の１個において抗原に接触するアミノ酸によって占められる、抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３中のアミノ酸位置を含む。２６個の公知の解明された抗体抗原複合体構造のいずれかにおけるＣＤＲアミノ酸が抗原に接触すると、そのアミノ酸は接触位置を占有すると考えられる。接触位置は、抗原に接触するアミノ酸によって占有される可能性が非接触位置よりも高い。好ましくは、接触位置は、２６個の構造のうち３個を超える（＞１１．５％）構造において抗原に接触するアミノ酸を含むＣＤＲ位置である。最も好ましくは、接触位置は、２５個の構造のうち８個を超える（＞３２％）構造において抗原に接触するアミノ酸を含むＣＤＲ位置である。
【００９７】
「超変異位置」という用語は、生体内での抗体の親和性成熟中の体細胞超変異について高い頻度又は確率を有すると考えられる抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域中の位置を占めるアミノ酸残基を含む。「体細胞超変異について高い頻度又は確率」は、残基が生体内での抗体の親和性成熟中に体細胞超変異を受ける５％から約４０％の頻度又は確率を含む。この範囲内の全範囲、例えば５％から約３０％、例えば５％から約１５％、例えば１５％から約３０％も、本発明の一部として意図されることを理解すべきである。
【００９８】
「好ましい選択的変異誘発位置」という用語は、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域中の、接触と超変異位置の両方であることが考えられる位置を占めるアミノ酸残基を含む。
【００９９】
「選択的変異誘発手法」という句は、少なくとも１つの好ましい選択的変異誘発位置、超変異及び／又は接触位置のＣＤＲアミノ酸を選択し、個別に変異させることによって、抗体の活性を改善する方法を含む。「選択的変異」ヒト抗体は、選択的変異誘発手法を用いて選択された位置に変異を含む抗体である。別の一実施形態において、選択的変異誘発手法は、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３（以下、それぞれＨ１、Ｈ２及びＨ３）、又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３（以下、それぞれＬ１、Ｌ２及びＬ３と称する。）において、選択した個々のアミノ酸残基を優先的に変異させる方法を提供するものとする。アミノ酸残基は、好ましい選択的変異誘発位置、接触位置又は超変異位置から選択され得る。個々のアミノ酸は、軽鎖又は重鎖可変領域中のその位置に基づいて選択される。超変異位置は接触位置でもあり得ることを理解すべきである。一実施形態において、選択的変異誘発手法は「標的手法」である。「標的手法」という語は、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３又は軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３において、選択した個々のアミノ酸残基を標的様式で優先的に変異させる方法を含むものとする（例えば、「群ごとの標的手法」又は「ＣＤＲごとの標的手法」）。「群ごとの標的手法」では、Ｌ３及びＨ３を含めたＩ群、Ｈ２及びＬ１を含めたＩＩ群及びＬ２及びＨ１を含めたＩＩＩ群を含めて、特定の群中の個々のアミノ酸残基が選択的変異の標的になる。これらの群は、標的化の好ましい順に列挙されている。「ＣＤＲごとの標的手法」では、特定のＣＤＲ中の個々のアミノ酸残基は、標的化の好ましい順、すなわちＨ３、Ｌ３、Ｈ２、Ｌ１、Ｈ１及びＬ２の順に、選択的変異の標的になる。選択されたアミノ酸残基は、例えば、少なくとも２個の別のアミノ酸残基に変異し、抗体の活性に対する変異の効果が決定される。活性は、抗体の結合特異性／親和性、及び／又は抗体の中和能の変化として測定される。選択的変異誘発手法は、ファージディスプレイ、ヒトＩｇＧ生殖系列遺伝子を有するトランスジェニック動物、ヒトＢ細胞から単離されたヒト抗体を含めて、任意の出所に由来する任意の抗体の最適化に使用できることを理解すべきである。好ましくは、選択的変異誘発手法は、ファージディスプレイ技術を用いて更に最適化することができない抗体に対して使用される。ファージディスプレイ、ヒトＩｇＧ生殖系列遺伝子を有するトランスジェニック動物、ヒトＢ細胞から単離されたヒト抗体を含めて、任意の出所に由来する抗体は、選択的変異誘発手法の前後に復帰変異を受けやすいことを理解すべきである。
【０１００】
「活性増強アミノ酸残基」という用語は、抗体の活性を改善するアミノ酸残基を含む。活性増強アミノ酸残基は、好ましい選択的変異誘発位置、接触位置又は超変異位置におけるアミノ酸残基を置換し得、さらに、１個を超える活性増強アミノ酸残基が１個以上のＣＤＲ内に存在し得ることを理解すべきである。活性増強アミノ酸残基としては、抗体の結合特異性／親和性、例えば、ヒトＩＬ−１２への抗ヒトＩＬ−１２抗体の結合を改善するアミノ酸残基が挙げられる。活性増強アミノ酸残基は、抗体、例えばヒトＩＬ−１２を阻害するヒトＩＬ−１２抗体の中和能を改善するアミノ酸残基も含むものとする。
【０１０１】
本明細書では「投薬」という用語は、治療目的（例えば、リウマチ様関節炎の治療）を達成するための物質（例えば、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体）の投与を指す。
【０１０２】
本明細書では「隔週投薬計画」、「隔週投薬」及び「隔週投与」という用語は、治療目的を達成するために対象に物質（例えば、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体）を投与する時間経過を示し、この時間経過は隔週（ｅｏｗ）である。隔週投薬計画は、毎週の投薬計画を含むものではない。好ましくは、９から１９日ごと、より好ましくは１１から１７日ごと、更により好ましくは１３から１５日ごと、最も好ましくは１４日ごとに物質を投与する。
【０１０３】
「第２の薬剤と組み合わせた第１の薬剤」という句におけるような「組み合わせ」という用語は、例えば薬学的に許容される同じ担体に溶解若しくは混合することができる、第１の薬剤と第２の薬剤の同時投与、第１の薬剤の投与とそれに続く第２の薬剤の投与、又は第２の薬剤の投与とそれに続く第１の薬剤の投与を含む。したがって、本発明は、組合せ治療処置方法及び組合せ薬剤組成物を含む。
【０１０４】
「同時治療処置」という句におけるような「同時」という用語は、ある薬剤を第２の薬剤の存在下で投与することを含む。同時治療処置方法は、第１、第２、第３又は更なる薬剤を同時投与する方法を含む。同時治療処置方法は、第１又は更なる薬剤を第２又は更なる薬剤の存在下で投与する方法も含み、第２又は更なる薬剤は、例えば、あらかじめ投与することができる。同時治療処置方法は、異なる行為者によって段階的に実施することができる。第１の薬剤（及び更なる薬剤）が第２の薬剤（及び更なる薬剤）の存在下での投与後である限り、例えば、ある行為者が第１の薬剤を対象に投与することができ、第２の行為者が第２の薬剤を対象に投与することができ、投与段階は、同時に、ほぼ同時に、又は離れた時間に実施することができる。行為者と対象は、同じ実体（例えば、ヒト）とすることができる。
【０１０５】
本明細書では「併用療法」という用語は、２種類以上の治療物質、例えば、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体及び別の薬物の投与を指す。他方の薬物を抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体の投与と同時に、投与前に、又は投与後に投与することができる。
【０１０６】
本明細書では「キット」という用語は、ＩＬ−１２関連障害の治療のために本発明の抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体と一緒に投与する成分を含むパッケージ製品を指す。キットは、好ましくは、キットの成分を収容する箱又はコンテナを含む。箱又はコンテナには、ラベル又は米国食品医薬品局によって承認された手順書が添付されている。箱又はコンテナは、プラスチック、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン又はプロピレン容器に好ましくは入れられた、本発明の成分を収容する。容器は、蓋付きの管又はビンとすることができる。キットは、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−２３抗体を投与するための説明書も含むことができる。
【０１０７】
本発明の種々の態様を以下の項で更に詳細に記述する。
【０１０８】
Ｉ．  ヒトＩＬ−１２に結合するヒト抗体
本発明は、ヒトＩＬ−１２に結合するヒト抗体又はその抗原結合性部分を乾せん治療に使用するための方法及び組成物を提供する。本発明は、ＩＬ−１２とＩＬ−２３の両方に結合する抗体を使用するための方法及び組成物も含む。好ましくは、本発明に使用されるヒト抗体は、組換え中和ヒト抗ｈＩＬ−１２抗体である。
【０１０９】
一実施形態において、本発明に使用される抗体は、抗体ＡＢＴ−８７４である（米国特許第６，９１４，１２８号参照）。ＡＢＴ−８７４は、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及びＩＬ−２３に対する完全ヒト抗体である。ＡＢＴ−８７４は、乾せん（Ｐｓ）治療における有効な標的である、ＩＬ−１２とＩＬ−２３に共通したｐ４０サブユニットに高親和性で結合する。
【０１１０】
ヒトＩＬ−１２に結合する抗体は、例えば、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に記載のファージディスプレイ技術によってなど、１つ以上のヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡライブラリーをｈＩＬ−１２でスクリーニングすることによって、選択することができる。ヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングによって、一連の抗ＩＬ−１２抗体を最初に特定し、本明細書では「Ｊｏｅ  ９」（又は「Ｊｏｅ野生型」）と称するそのうちの１種類の抗体を更なる開発用に選択した。Ｊｏｅ  ９は、比較的低親和性のヒトＩＬ−１２抗体（例えば、約０．１ｓｅｃ−１のＫｏｆｆ）であるが、ｈＩＬ−１２に特異的に結合し、ｈＩＬ−１２を検出するのに有用である。Ｊｏｅ  ９抗体の親和性は、重鎖及び軽鎖ＣＤＲの変異誘発を実施し、「異質なものを組み合わせ（ｍｉｘｅｄ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈｅｄ）」、更に変異を受けた一群（ｐａｎｅｌ）の軽鎖及び重鎖可変領域を作製し、ｈＩＬ−１２に対して高親和性を有する多数の追加の抗ｈＩＬ−１２抗体を誘導することによって改善された（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１、表２（Ａｐｐｅｎｄｉｘ  Ａ参照）、及び米国特許第６，９１４，１２８号の図１Ａ−Ｄの配列アラインメント参照）。
【０１１１】
これらの抗体のうち、本明細書でＹ６１と称するヒト抗ｈＩＬ−１２抗体が、結合親和性のかなりの改善を示した（例えば、約２×１０−４ｓｅｃ−１のＫｏｆｆ）。Ｙ６１抗ｈＩＬ−１２抗体は、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ内の特異的アミノ酸残基を個別に変異させることによって、更なる親和性成熟用に選択された。Ｙ６１のアミノ酸残基は、好ましい選択的変異誘発位置、接触及び／又は超変異位置を占めるアミノ酸残基に基づく部位特異的変異（選択的変異誘発手法）用に選択された。重鎖及び軽鎖ＣＤＲ中の選択位置における置換の概要は、米国特許第６，９１４，１２８号の図２Ａ−２Ｈに示されている。（ＡＢＴ−８７４（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とも称する、本明細書ではＪ６９５と称する本発明の好ましい組換え中和抗体は、Ｙ６１の軽鎖ＣＤＲ２の５０位におけるＧｌｙからＴｙｒへの置換、及びＹ６１の軽鎖ＣＤＲ３の９４位におけるＧｌｙからＴｙｒへの置換から生じた。
【０１１２】
Ｊｏｅ  ９野生型からＪ６９５までの系列の、本発明に使用される一群の抗ＩＬ−１２抗体の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列アラインメントは、米国特許第６，９１４，１２８号の図１Ａ−１Ｄに示されている。この配列アラインメントによって、Ｊｏｅ  ９からＪ６９５までの系列の、ｈＩＬ−１２に結合する本発明の抗体の好ましい重鎖及び軽鎖可変領域に対するコンセンサス配列、並びにＣＤＲ３、ＣＤＲ２及びＣＤＲ１に対するコンセンサス配列の特定が可能になった。さらに、図２Ａ−２Ｈに要約されたＹ６１変異誘発分析によって、Ｙ６１からの改変を有するが、それでも優れたｈＩＬ−１２結合特性を保持する配列を包含するＹ６１からＪ６９５までの系列の、ｈＩＬ−１２に結合する重鎖及び軽鎖可変領域に対するコンセンサス配列、並びにｈＩＬ−１２に結合するＣＤＲ３、ＣＤＲ２及びＣＤＲ１に対するコンセンサス配列の特定が可能になった。添付の配列表中の配列識別子によって特定される（コンセンサス配列を含めた）本発明の好ましいＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列を以下に要約する。
【０１１３】
【表１】
2015145389.tif 000002
2015145389.tif 000003
2015145389.tif 000004
【０１１４】
Ｊｏｅ  ９野生型の親和性成熟から生成された抗体を、表面プラズモン共鳴分析によって機能的に特徴付けて、Ｋｄ及びＫｏｆｆ速度を求めた。約０．１ｓ−１から約１×１０−５ｓ−１の範囲内のＫｏｆｆ速度、より好ましくは約１×１０−４ｓ−１から１×１０−５ｓ−１以下のＫｏｆｆを有する一連の抗体が生成した。抗体は、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３に記載のように、植物性血球凝集素（ＰＨＡ）芽細胞増殖を阻害する能力に関してもインビトロで特徴付けられた。約１×１０−６Ｍから約１×１０−１１Ｍ、より好ましくは約１×１０−１０Ｍから１×１０−１１Ｍ以下の範囲のＩＣ５０値を有する一連の抗体が生成した。
【０１１５】
したがって、一態様においては、本発明は、ヒトＩＬ−１２に結合し、表面プラズモン共鳴で測定して０．１ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離する単離ヒト抗体若しくはその抗原結合性部分、又はインビトロ植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）において植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する単離ヒト抗体若しくはその抗原結合性部分を使用するための方法及び組成物を提供する。好ましい実施形態において、単離ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−２ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロＰＨＡアッセイにおいて１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害する。より好ましい実施形態において、単離ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロＰＨＡアッセイにおいて１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害する。より好ましい実施形態において、単離ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−４ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロＰＨＡアッセイにおいて１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害する。より好ましい実施形態において、単離ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−５ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロＰＨＡアッセイにおいて１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害する。更により好ましい実施形態において、単離ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、１×１０−５ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロＰＨＡアッセイにおいて１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害する。
【０１１６】
ＩＬ−１２抗体の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）は、表面プラズモン共鳴によって測定することができる（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例５参照）。一般に、表面プラズモン共鳴分析は、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、リガンド（バイオセンサーマトリックス上に固定された組換えヒトＩＬ−１２）と分析物（抗体溶液）の実時間結合相互作用を測定する。表面プラズモン分析は、分析物（バイオセンサーマトリックス上の抗体）を固定し、リガンド（組換えＩＬ−１２溶液）を提示することによっても実施することができる。ＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分の中和活性は、幾つかの適切なインビトロアッセイの１つ以上によって評価することができる（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）。
【０１１７】
抗体重鎖及び軽鎖ＣＤＲが、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性に重要な役割を果たすことは当分野で周知である。したがって、本発明は、Ｊｏｅ  ９の軽鎖及び重鎖ＣＤＲを有するヒト抗体、並びに該抗体の結合特異性／親和性を改善するために修飾されたＣＤＲを有する他の抗体を包含する。米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に示されたように、軽鎖及び重鎖ＣＤＲに対する一連の修飾は、ヒト抗ｈＩＬ−１２抗体の親和性成熟をもたらす。ヒトＩＬ−１２に結合するＪｏｅ  ９野生型からＪ６９５までの一連のヒト抗体の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列のアラインメントは、米国特許第６，９１４，１２８号の図１Ａ−１Ｄに示されている。抗体のＣＤＲのコンセンサス配列モチーフは、配列アラインメントから決定することができる。例えば、Ｊｏｅ  ９からＪ６９５までの系列のＶＨ  ＣＤＲ３に対するコンセンサスモチーフは、配列番号７で示されるコンセンサスＨＣＶＲの９５位から１０２位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列（Ｈ／Ｓ）−Ｇ−Ｓ−（Ｈ／Ｙ）−Ｄ−（Ｎ／Ｔ／Ｙ）（配列番号１）を含む。ＶＬ  ＣＤＲ３に対するコンセンサスモチーフは、配列番号８で示されるコンセンサスＬＣＶＲの８９位から９７位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列Ｑ−（Ｓ／Ｔ）−Ｙ−（Ｄ／Ｅ）−（Ｓ／Ｒ／Ｋ）−（Ｓ／Ｇ／Ｙ）−（Ｌ／Ｆ／Ｔ／Ｓ）−（Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｗ／Ｈ）−（Ｇ／Ｐ）−（Ｓ／Ｔ／Ａ／Ｌ）−（Ｒ／Ｓ／Ｍ／Ｔ／Ｌ−Ｖ／Ｉ／Ｔ／Ｍ／Ｌ）（配列番号２）を含む。
【０１１８】
したがって、別の一態様においては、本発明は、以下の特性を有する、すなわち、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分を含む方法及び組成物を提供する。
【０１１９】
好ましい一実施形態において、抗体は、アミノ酸配列配列番号７を含むコンセンサスＨＣＶＲの５０位から６５位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列Ｆ−Ｉ−Ｒ−Ｙ−Ｄ−Ｇ−Ｓ−Ｎ−Ｋ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号３）を含むＶＨ  ＣＤＲ２を更に含み、アミノ酸配列配列番号８を含むコンセンサスＬＣＶＲの５０位から５６位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列（Ｇ／Ｙ）−Ｎ−（Ｄ／Ｓ）−（Ｑ／Ｎ）−Ｒ−Ｐ−Ｓ（配列番号４）を含むＶＬ  ＣＤＲ２を更に含む。
【０１２０】
別の好ましい一実施形態において、抗体は、アミノ酸配列配列番号７を含むコンセンサスＨＣＶＲの２７位から３５位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列Ｆ−Ｔ−Ｆ−Ｓ−（Ｓ／Ｅ）−Ｙ−Ｇ−Ｍ−Ｈ（配列番号５）を含むＶＨ  ＣＤＲ１を更に含み、アミノ酸配列配列番号８を含むコンセンサスＬＣＶＲの２４位から３４位のアミノ酸を包含するアミノ酸配列（Ｓ／Ｔ）−Ｇ−（Ｇ／Ｓ）−（Ｒ／Ｓ）−Ｓ−Ｎ−Ｉ−（Ｇ／Ｖ）−（Ｓ／Ａ）−（Ｎ／Ｇ／Ｙ）−（Ｔ／Ｄ）−Ｖ−（Ｋ／Ｈ）（配列番号６）を含むＶＬ  ＣＤＲ１を更に含む。
【０１２１】
更に別の好ましい一実施形態において、本発明に使用される抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲと、配列番号８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲとを含む。
【０１２２】
追加のコンセンサスモチーフは、米国特許第６，９１４，１２８号の図２Ａ−２Ｈに要約されたＹ６１に対して実施され、Ｊ６９５抗体をもたらした変異解析に基づいて決定することができる。米国特許第６，９１４，１２８号の図２Ａ−２Ｈに示されたグラフによって実証されるように、Ｙ６１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲのある種の残基は、抗体のｈＩＬ−１２結合性をさほど損なわずに置換するのに適した。例えば、１２個の異なるアミノ酸残基によるＣＤＲ  Ｈ１中の３０位の個々の置換は、抗体のＫｏｆｆ速度をさほど低下させなかった。これは、この位置が、種々のアミノ酸残基での置換に適していることを示唆する。したがって、変異解析（すなわち、他のアミノ酸残基による置換に適したＹ６１内の位置）に基づいて、コンセンサスモチーフを決定した。重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３に対するコンセンサスモチーフはそれぞれ配列番号９及び１０で示され、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ２に対するコンセンサスモチーフはそれぞれ配列番号１１及び１２で示され、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１に対するコンセンサスモチーフはそれぞれ配列番号１３及び１４で示される。ＶＨ及びＶＬ領域に対するコンセンサスモチーフは、それぞれ配列番号１５及び１６で示される。
【０１２３】
したがって、一態様においては、本発明は、以下の特徴を有する、すなわち、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分を含む。
【０１２４】
好ましい一実施形態において、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２を更に含み、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２を更に含む。
【０１２５】
別の好ましい一実施形態において、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１を更に含み、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１を更に含む。
【０１２６】
更に別の好ましい一実施形態において、本発明に使用される抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲと、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲとを含む。
【０１２７】
本発明に使用される好ましい抗体であるヒト抗ｈＩＬ−１２抗体Ｙ６１は、ＣＤＲ３のＰＣＲ変異誘発による（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に記載のように）Ｊｏｅ  ９野生型の親和性成熟によって生成し得る。Ｙ６１は、表面プラズモン共鳴によって及びインビトロ中和アッセイによって判定された、改善された特異性／結合親和性を有した。Ｙ６１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号１７及び１８で示され、Ｙ６１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ２はそれぞれ配列番号１９及び２０で示され、Ｙ６１の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１はそれぞれ配列番号２１及び２２で示される。Ｙ６１のＶＨは配列番号２３のアミノ酸配列を有し、Ｙ６１のＶＬは配列番号２４のアミノ酸配列を有する（これらの配列は、Ｊｏｅ  ９と並置されて、米国特許第６，９１４，１２８号の図１Ａ−１Ｄにも示されている。）。
【０１２８】
したがって、別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１２９】
好ましい一実施形態において、本発明の方法及び組成物に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２とを有する。
【０１３０】
別の好ましい一実施形態において、本発明の方法及び組成物に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを有する。
【０１３１】
更に別の好ましい一実施形態において、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明の方法及び組成物に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分。
【０１３２】
ある実施形態において、完全長抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ定常領域などの重鎖定常領域、並びにＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に記載の任意のアロタイプ変種を含む。好ましくは、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域である。或いは、抗体部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’２）断片又は単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０１３３】
Ｙ６１の個々の残基を修飾すると、米国特許第６，９１４，１２８号の図２Ａ−２Ｈに示された一群の抗体が生成した。各抗体の特異性／結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって及び／又はインビトロ中和アッセイによって求められた。
【０１３４】
したがって、別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号４０４−配列番号４６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及び
ｃ）配列番号５３４−配列番号５７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分を特徴とする。
【０１３５】
好ましい実施形態において、本発明の方法及び組成物に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号３３５−配列番号４０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号５０６−配列番号５３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２とを有する。
【０１３６】
別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２８８−配列番号３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と及び配列番号４７０−配列番号５０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを有する。
【０１３７】
更に別の好ましい一実施形態において、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分。
【０１３８】
ある実施形態において、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ定常領域などの重鎖定常領域、並びにＫａｂａｔ（，Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に記載の任意のアロタイプ変種を含む、完全長抗体。好ましくは、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域である。或いは、抗体部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’２）断片又は単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０１３９】
本発明に使用することができる特に好ましい組換え中和抗体Ｊ６９５は、抗体Ｙ６１の接触及び超変異アミノ酸残基の部位特異的変異誘発によって作製された（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例２、及び下記ＩＩＩ節参照）。Ｊ６９５は、軽鎖ＣＤＲ２の５０位におけるＹ６１中のＧｌｙからＴｙｒへの置換によって、また、軽鎖ＣＤＲ３の９４位におけるＧｌｙからＴｙｒへの置換によって、Ｙ６１とは異なる。Ｊ６９５の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号２５及び２６で示され、Ｊ６９５の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ２はそれぞれ配列番号２７及び２８で示され、Ｊ６９５の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１はそれぞれ配列番号２９及び３０で示される。Ｊ６９５のＶＨは配列番号３１のアミノ酸配列を有し、Ｊ６９５のＶＬは配列番号３２のアミノ酸配列を有する（これらの配列は、Ｊｏｅ  ９と並置されて、米国特許第６，９１４，１２８号の図１Ａ−１Ｄにも示されている。）。
【０１４０】
したがって、別の一態様においては、本発明は、ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、及びｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する、単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分を特徴とする。
【０１４１】
好ましい実施形態において、本発明に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２とを有する。
【０１４２】
別の好ましい一実施形態において、本発明に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを有する。
【０１４３】
更に別の好ましい一実施形態において、本発明に使用される単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する。
【０１４４】
ある実施形態において、完全長抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ定常領域などの重鎖定常領域、並びにＫａｂａｔ（，Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に記載の任意のアロタイプ変種を含む。好ましくは、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域である。或いは、抗体部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’２）断片又は単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０１４５】
Ｊｏｅ  ９からＪ６９５の系列、又は系列Ｙ６１からＪ６９５の抗体のＣＤＲ３、ＣＤＲ２及びＣＤＲ１に対する好ましいコンセンサス配列中に追加の変異を施して、本発明の追加の抗ＩＬ−１２抗体を提供することができる。かかる修飾方法は、ＰＣＲ変異誘発などの標準分子生物学技術を使用し、軽鎖及び／又は重鎖ＣＤＲにおける個々の接触又は超変異アミノ酸残基を標的とし、続いて本明細書に記載の修飾抗体の動態解析及び機能解析（例えば、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３に記載の中和アッセイ、及び米国特許第６，９１４，１２８号の実施例５に記載のＢＩＡｃｏｒｅ分析によって）によって実施することができる。
【０１４６】
したがって、別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有し、及び
ｃ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１４７】
別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有し、及び
ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１４８】
例えばＹ６１において又はＪ６９５において、抗体のＣＤＲ領域に対して追加の変異を施して、本発明の追加の抗ＩＬ−１２抗体を提供できることも当業者は理解する。かかる修飾方法は、上記のように、標準分子生物学技術を用いて実施することができる。修飾抗体の機能解析及び動態解析は、それぞれ米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３及び米国特許第６，９１４，１２８号の実施例５に記載のように実施することができる。Ｊ６９５の特定につながるＹ６１の個々の残基の修飾は、米国特許第６，９１４，１２８号の図２Ａ−２Ｈに示され、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例２に記載されている。
【０１４９】
したがって、別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有し、及び
ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１５０】
別の一態様においては、本発明は、
ａ）インビトロＰＨＡアッセイにおいて植物性血球凝集素芽細胞増殖を１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し、
ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有し、及び
ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は好ましい選択的変異誘発位置若しくは超変異位置に１個以上のアミノ酸置換を有するこれらの変異体を含み、前記変異体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１とを含む抗体よりも１０倍以下の高いｋｏｆｆ速度を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１５１】
更に別の一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１２並びにヒヒＩＬ−１２、マーモセットＩＬ−１２、チンパンジーＩＬ−１２、カニクイザルＩＬ−１２及びアカゲザルＩＬ−１２からなる群から選択される少なくとも１種類の追加の霊長類ＩＬ−１２の活性を中和するが、マウスＩＬ−１２の活性を中和しない、単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を提供する。
【０１５２】
ＩＩ  組換えヒト抗体の選択
本発明に使用することができる組換えヒト抗体は、ヒトリンパ球由来のｍＲＮＡから調製されたヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡを用いて調製された組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、好ましくはｓｃＦＶファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによって単離することができる。本発明の方法及び組成物に使用することができる抗体を特定する方法は、参照により本明細書に組み入れる米国特許第６，９１４，１２８号に記載されている。かかるライブラリーの調製及びスクリーニング方法は当分野で公知である。ファージディスプレイライブラリーを作製するための市販キット（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１、及びＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）に加えて、抗体ディスプレイライブラリーの作製及びスクリーニング用に特に適した方法及び試薬の例は、例えば、Ｋａｎｇ他、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｗｉｎｔｅｒ他、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２０７９１；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ他、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ他、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：  １３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：  ８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：  １２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）  ３４８：  ５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：  ７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：  ８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：  ６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  ＰＮＡＳ  ８９：  ３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：  １３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：  ４１３３−４１３７、及びＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＰＮＡＳ  ８８：  ７９７８−７９８２に見られる。
【０１５３】
この方法に使用される抗体ライブラリーは、好ましくは、ヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡから調製されたｓｃＦｖライブラリーである。ｓｃＦＶ抗体ライブラリーを、好ましくは組換えヒトＩＬ−１２を抗原として用いてスクリーニングして、ＩＬ−１２への結合活性を有するヒト重鎖及び軽鎖配列を選択する。ＩＬ−１２のｐ３５サブユニット又はｐ７０ヘテロ二量体に対して特異的な抗体を選択するために、過剰の遊離ｐ４０サブユニットの存在下でスクリーニングアッセイを実施した。サブユニットの優先度は、例えば米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に記載のｍｉｃｒｏ−Ｆｒｉｇｕｅｔ滴定によって、決定することができる。
【０１５４】
最初のヒトＶＬ及びＶＨセグメントを選択した後、選択したＶＬセグメントとＶＨセグメントの異なる対をＩＬ−１２結合についてスクリーニングする「異質なものを組み合わせた（ｍｉｘ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈ）」実験を実施して、好ましいＶＬ／ＶＨ対の組合せを選択する（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１参照）。また、ｈＩＬ−１２結合に対する親和性を更に改善し、及び／又はオフ速度定数を低下させるために、自然免疫応答中の抗体の親和性成熟を担う生体内体細胞変異プロセスに類似のプロセスにおいて、好ましいＶＬ／ＶＨ対のＶＬ及びＶＨセグメントを、好ましくはＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ３領域内で、無作為に変異させることができる。このインビトロでの親和性成熟は、それぞれＶＨ  ＣＤＲ３又はＶＬ  ＣＤＲ３に好意的な（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）ＰＣＲプライマーを用いてＶＨ及びＶＬ領域を増幅することによって実施することができる。これらのプライマーは、得られるＰＣＲ産物が、ＶＨ及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３領域に無作為な変異が導入されたＶＨ及びＶＬセグメントをコードするように、特定の位置に４個のヌクレオチド塩基の無作為混合物が「加えられて（ｓｐｉｋｅｄ）」いる。これらの無作為変異ＶＨ及びＶＬセグメントは、ｈＩＬ−１２との結合について再選択し、再スクリーニングすることができ、ＩＬ−１２結合に対して高親和性及び低オフ速度を示す配列を選択することができる。表２（米国特許第６，９１４，１２８号のＡｐｐｅｎｄｉｘ  Ａ参照）は、インビトロでの親和性成熟の結果として生じた結合特異性／親和性の変化を示した抗体を示す。
【０１５５】
本発明の抗ｈＩＬ−１２抗体を組換え免疫グロブリンディスプレイライブラリーから選択し、単離し、スクリーニングした後、選択した抗体をコードする核酸をファージ粒子から（例えば、ファージゲノムから）回収することができ、標準組換えＤＮＡ技術によって別の発現ベクターにサブクローニングすることができる。必要に応じて、核酸を更に操作して、本発明の他の抗体型形態（例えば、追加の定常領域などの追加の免疫グロブリンドメインをコードする核酸に連結された）を作製することができる。コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離した組換えヒト抗体を発現させるために、下記ＩＶ節で詳述するように、抗体をコードするＤＮＡを組換え発現ベクターにクローン化し、ほ乳動物宿主細胞に導入する。
【０１５６】
ファージディスプレイ技術によってヒトＩＬ−１２結合抗体を選択する方法、及びＣＤＲ領域の無作為又は部位特異的変異誘発による選択抗体の親和性成熟は、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に更に詳細に記載されている。
【０１５７】
米国特許第６，９１４，１２８号の実施例１に記載のように、ヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングによって一連の抗ＩＬ−１２抗体が特定され、そのうちＪｏｅ  ９抗体を更なる開発用に選択した。Ｊｏｅ  ９の重鎖可変領域をＶＢＡＳＥデータベースから選択された重鎖生殖系列配列と比較すると、Ｊｏｅ  ９はＣＯＳ−３生殖系列配列に類似していることが判明した。ＣＯＳ−３は、生殖系列配列のＶＨ３ファミリーに属する。
【０１５８】
ＶＨ３ファミリーは、ヌクレオチド配列の相同性に基づいて７つのファミリーＶＨ１−ＶＨ７にグループ分けされるヒトＶＨ生殖系列レパートリーの一部である（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７，  ７７６−７９８、及びＣｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，  １６，  ２３７−２４２）。ＶＨ３ファミリーは、メンバー数が最も多く、生殖系列のレパートリーに最大の寄与をする。任意の所与のヒトＶＨ３生殖系列抗体配列の場合、ＶＨ３ファミリー全体内のアミノ酸配列同一性は高い（例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７，  ７７６−７９８、及びＣｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，  １６，  ２３７−２４２参照）。ＶＨ３ファミリーの任意の２個の生殖系列ＶＨ配列間のアミノ酸配列同一性の範囲は、約１００個のＶＨ残基のうち６９−９８個の残基（すなわち、任意の２個の生殖系列ＶＨ配列間で６９−９８％のアミノ酸配列相同性）である。生殖系列配列の大部分の対では、少なくとも８０以上の同一のアミノ酸残基が存在する（すなわち、少なくとも８０％のアミノ酸配列相同性）。ＶＨ３ファミリーメンバー間のアミノ酸配列相同性が高いと、ある種のアミノ酸残基がＶＨ鎖のＣＤＲ及びフレームワーク領域中の重要な部位に存在するようになる。これらのアミノ酸残基は、構造的特徴をＣＤＲに付与する。
【０１５９】
抗体構造の研究によれば、ＣＤＲの立体配座は、ＣＤＲ及びフレームワーク領域中のある位置を占める重要なアミノ酸残基に基づく基準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）ＣＤＲ構造のファミリーにグループ分けすることができる。その結果、同一の重要なアミノ酸残基を含む基準構造を有する異なる抗体中に類似の局所的ＣＤＲ立体配座が存在する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６，  ９０１−９１７、及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４２，  ８７７−８８３）。ＶＨ３ファミリー内では、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２基準構造の重要な部位においてアミノ酸残基同一性が保存されている（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７，  ７９９−８１７）。
【０１６０】
ＣＯＳ−３生殖系列ＶＨ遺伝子は、ＶＨ３ファミリーのメンバーであり、３−３０（ＤＰ−４９）生殖系列ＶＨ対立遺伝子の変種である。ＣＯＳ−３は、わずか５箇所しかＪｏｅ  ９  ＶＨアミノ酸配列と異ならない。Ｊｏｅ９  ＶＨとＣＯＳ−３間、及びＪｏｅ９  ＶＨと別のＶＨ３ファミリーメンバー間のアミノ酸配列相同性が高い場合も、ＣＤＲ構造相同性が高くなる（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７，  ７９９−８１７、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６，  ９０１−９１７、及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４２，  ８７７−８８３）。
【０１６１】
Ｊｏｅ  ９に対するアミノ酸配列及び基準構造の高い類似性に基づいて、他のＶＨ３ファミリーメンバーを用いても、ヒトＩＬ−１２に結合する抗体を作製できることを当業者は理解されたい。これは、例えば、鎖シャフリング技術（Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １２，  ４３３−５５）によって適切なＶＬを選択することによって又は本発明の抗体由来のＣＤＲを含めて、げっ歯類若しくは他のヒト抗体由来のＣＤＲをＶＨ３ファミリーのフレームワーク上に移植することによって、実施することができる。
【０１６２】
ヒトＶラムダ生殖系列レパートリーは、ヌクレオチド配列相同性に基づく１０のファミリーにグループ分けされる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２６４，  ２２０−２３２）。Ｊｏｅ  ９の軽鎖可変領域をＶＢＡＳＥデータベースから選択された軽鎖生殖系列配列と比較することによって、Ｊｏｅ  ９はＤＰＬ８ラムダ生殖系列に類似することが明らかとなった。Ｊｏｅ９  ＶＬは、わずか４つのフレームワーク位置でしかＤＰＬ８配列と異ならず、他のＶλ１ファミリーメンバーのフレームワーク配列と高度に相同である。Ｊｏｅ  ９に対するアミノ酸配列相同性及び基準構造の高い類似性に基づいて、他のＶλ１ファミリーメンバーを用いても、ヒトＩＬ−１２に結合する抗体を作製することができる。これは、例えば、鎖シャフリング技術（Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）によって適切なＶＨを選択することによって又は本発明の抗体由来のＣＤＲを含めてげっ歯類若しくは他のヒト抗体由来のＣＤＲをＶλ１ファミリーのフレームワーク上に移植することによって、実施することができる。
【０１６３】
本発明の方法は、生殖系列配列のＶＨ３ファミリーのメンバーに由来する重鎖可変領域と及び生殖系列配列のＶλ１ファミリーのメンバーに由来する軽鎖可変領域とを含む、ｈＩＬ−１２に結合する組換え抗体を含むものとする。さらに、ＶＨ３ファミリー重鎖配列の任意のメンバーをＶλ１ファミリー軽鎖配列の任意のメンバーと組み合わせ得ることを当業者は理解する。
【０１６４】
生殖系列のアミノ酸配列の変化をもたらすＤＮＡ配列多型が集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることも当業者は理解されたい。生殖系列配列におけるかかる遺伝的多型は、天然の対立遺伝子変動のために、集団内の個体間に存在し得る。かかる天然の対立遺伝子変動は、典型的には、遺伝子のヌクレオチド配列の１−５％の変動を生じ得る。天然の対立遺伝子変動の結果である、生殖系列配列におけるいずれもの及びすべてのかかるヌクレオチド変化、及びその結果生じるアミノ酸多型は、本発明の範囲内であるものとする。
【０１６５】
したがって、一態様においては、本発明は、以下の特徴を有する、すなわち、
ａ）ヒトＩＬ−１２に結合し、表面プラズモン共鳴で測定して０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロ植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）において１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害し、
ｂ）ＶＨ３生殖系列ファミリーのメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、重鎖可変領域は、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有し、
ｃ）Ｖλ１生殖系列ファミリーのメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し、軽鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分を特徴とする。
【０１６６】
好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、重鎖ＣＤＲ３に変異を有する。別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、軽鎖ＣＤＲ３に変異を有する。別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、重鎖ＣＤＲ２に変異を有する。別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、軽鎖ＣＤＲ２に変異を有する。別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、重鎖ＣＤＲ１に変異を有する。別の好ましい一実施形態において、単離ヒト抗体又は抗原結合は、軽鎖ＣＤＲ１に変異を有する。
【０１６７】
ＶＨ３生殖系列ファミリーのメンバー間、又は軽鎖Ｖλ１生殖系列ファミリーのメンバー間の高いアミノ酸配列類似性に基づいて、生殖系列配列の変異によって、ヒトＩＬ−１２に結合する追加の抗体が生成し得ることを当業者は理解する。米国特許第６，９１４，１２８号の表１（米国特許第６，９１４，１２８号のＡｐｐｅｎｄｉｘ  Ａも参照されたい。）は、ＶＨ３ファミリーメンバーの生殖系列配列を示し、ファミリーメンバー内のかなりの配列相同性を示す。米国特許第６，９１４，１２８号の表１は、Ｖλ１ファミリーメンバーの生殖系列配列も示す。Ｊｏｅ  ９の重鎖及び軽鎖配列が比較として記載されている。ＶＨ３又はＶλ１ファミリーメンバーの生殖系列配列に対する変異は、例えば、本発明の抗体の変異（例えば、Ｊｏｅ  ９における変異）と同じアミノ酸位置においてなされ得る。修飾は、ＰＣＲ変異誘発などの標準分子生物学技術を使用し、生殖系列配列中の個々のアミノ酸残基を標的とし、続いて本明細書に記載の修飾抗体の動態解析及び機能解析によって（例えば、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３に記載の中和アッセイ、及び米国特許第６，９１４，１２８号の実施例５に記載のＢＩＡｃｏｒｅ分析によって）、実施することができる。
【０１６８】
したがって、一態様においては、本発明は、以下の特徴を有する、すなわち、
ａ）配列番号５９５−６６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、重鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有し、
ｂ）配列番号６６９−６７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し、軽鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１６９】
Ｊｏｅ  ９とＣＯＳ−３重鎖生殖系列配列間、及びＪｏｅ  ９とＤＰＬ８ラムダ生殖系列配列間の高いアミノ酸配列類似性に基づいて、これらの生殖系列配列のＣＤＲ領域に対する別の変異によって、ヒトＩＬ−１２に結合する追加の抗体が生成し得ることを当業者は理解する。かかる修飾方法は、上記標準分子生物学技術を用いて実施することができる。
【０１７０】
したがって、一態様においては、本発明は、以下の特徴を有する、すなわち、
ａ）ヒトＩＬ−１２に結合し、表面プラズモン共鳴で測定して０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロ植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）において１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害し、
ｂ）ＣＯＳ−３生殖系列アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、重鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有し、
ｃ）ＤＰＬ８生殖系列アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し、軽鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１７１】
軽鎖及び重鎖可変領域中のＣＤＲ及びフレームワーク領域において重要な部位を占めるある種のアミノ酸残基によって、構造的特徴がこれらの領域に付与される。特に、ＣＤＲ２及びＣＤＲ１領域は、基準構造分類に属する。ファミリーメンバー間には高度のアミノ酸配列相同性が存在するので、これらの基準の特徴がファミリーメンバー間に存在する。これらの基準構造を与えるアミノ酸残基における修飾によって、ＩＬ−１２に結合する追加の抗体が生成されることを当業者は理解する。修飾は、上記標準分子生物学技術を用いて実施することができる。
【０１７２】
したがって、別の一態様においては、本発明は、以下の特徴を有する、すなわち、
ａ）ヒトＩＬ−１２に結合し、表面プラズモン共鳴で測定して０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離し、又はインビトロ植物性血球凝集素芽細胞増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）において１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で植物性血球凝集素芽細胞増殖を阻害し、
ｂ）ＶＨ３生殖系列ファミリーのメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し、重鎖可変領域は、別のＶＨ３生殖系列ファミリーメンバー由来のＣＤＲ２に構造的に類似したＣＤＲ２と及び別のＶＨ３生殖系列ファミリーメンバー由来のＣＤＲ１に構造的に類似したＣＤＲ１とを含み、重鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有し、
ｃ）Ｖλ１生殖系列ファミリーのメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し、軽鎖可変領域は、別のＶλ１生殖系列ファミリーメンバー由来のＣＤＲ２に構造的に類似したＣＤＲ２と及び別のＶλ１生殖系列ファミリーメンバー由来のＣＤＲ１に構造的に類似したＣＤＲ１とを含み、軽鎖可変領域は、好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に活性増強アミノ酸残基を有する変異を有する、
単離ヒト抗体又はその抗原結合性部分の使用を特徴とする。
【０１７３】
本発明に使用される組換えヒト抗体は、ＶＢＡＳＥデータベースから選択されるヒト生殖系列免疫グロブリン配列と相同である可変及び定常領域を有する。例えば無作為変異誘発又はＰＣＲ変異誘発による組換えヒト抗体に対する変異は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸を生じる。また、ヒトドナーに由来した組換え抗体のライブラリーは、Ｂ細胞の発達中に起こる正常な体細胞変異過程のために、その対応する生殖系列配列とは異なる抗体配列を含む。ＰＣＲ増幅によって得られた「生殖系列」配列が、フレームワーク領域において真の生殖系列構成とのアミノ酸差（すなわち、真の生殖系列配列と比べた増幅配列の差）をコードする場合には、このアミノ酸差を変化させて真の生殖系列配列に戻すこと（すなわち、生殖系列構成へのフレームワーク残基の「復帰変異」）が望ましい場合があることに留意すべきである。したがって、本発明は、復帰変異段階を含んでもよい。そのために、まず、ＶＢＡＳＥデータベース中に例として見られる生殖系列によってコードされる重鎖及び軽鎖のアミノ酸を、変異免疫グロブリン重鎖及び軽鎖フレームワークアミノ酸配列と比較して、最も近い生殖系列配列とは異なる変異免疫グロブリンフレームワーク配列中のアミノ酸残基を特定する。次いで、なすべきヌクレオチド変化を決定する遺伝子コードを用いて、変異免疫グロブリン配列の適切なヌクレオチドを復帰変異させて、生殖系列配列に対応させる。ＰＣＲ産物が変異を含むように、変異ヌクレオチドがＰＣＲプライマー中に組み入れられたＰＣＲ媒介変異誘発、部位特異的変異誘発などの標準方法によって、変異免疫グロブリンフレームワーク配列の変異誘発を実施する。復帰変異候補として特定された各アミノ酸の役割は、抗原結合における直接又は間接的役割について検討されるべきであり、ヒト抗体の任意の望ましい特性に影響を及ぼすことが変異後に判明した任意のアミノ酸を最終ヒト抗体に含めるべきではない。一例として、選択的変異誘発手法によって特定された活性増強アミノ酸は、復帰変異を受けやすくはない。変異誘発に起因する抗体の諸特性を決定するアッセイとしては、ＥＬＩＳＡ、競合的ＥＬＩＳ、インビトロ及び生体内中和アッセイ、及び／又は（例えば、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）（ヒト、霊長類及び／又は他の種を含めて）種々の出所に由来する組織切片を用いた免疫組織化学が挙げられる。
【０１７４】
復帰変異を受けやすいアミノ酸の数を最小限に抑えるために、最も近い生殖系列配列とは異なるが、第２の生殖系列配列中の対応するアミノ酸と同一であることが判明したアミノ酸位置は残すことができる。ただし、第２の生殖系列配列は、当該アミノ酸の両側の少なくとも１０個、好ましくは１２個のアミノ酸に関して本発明のヒト抗体の配列と同一であり、共直線性である。それによって、本発明のヒト抗体で処理された対象における専門の抗原提示細胞によって免疫系に提示されるいずれのペプチドエピトープも外来性ではなく、自己抗原（すなわち、第２の生殖系列配列によってコードされる免疫グロブリン）と同一であることが確保される。復帰変異は、抗体最適化の任意の段階で起こり得る。好ましくは、復帰変異は、選択的変異誘発手法の直前又は直後に起こる。より好ましくは、復帰変異は、選択的変異誘発手法の直前に起こる。
【０１７５】
ＩＩＩ．  好ましい選択的変異誘発位置、接触及び／又は超変異位置の修飾
通常、親和性の改善された抗体は、上記ＩＩ節、及び参照により本明細書に組み入れる米国特許第６，９１４，１２８号に記載のように、ファージディスプレイ法を用いて選択することができる。これは、ＣＤＲ残基の組合せを無作為に変異させ、異なる配列の抗体を含む大規模ライブラリーを作製することによって実施することができる。しかし、これらの選択法が機能するには、抗体抗原反応が平衡に向かい、抗原に対してより親和性の高い抗体が経時的に優先的に結合できるようになる必要がある。一定レベル（すなわち、抗体Ｙ６１のレベル）の親和性に達すると、ファージディスプレイ法を使用して、選択された抗ＩＬ−１２抗体の親和性を改善したときに、（恐らくは、抗原とファージ粒子間の更なる非特異的相互作用のために）平衡を確立することができる選択条件を決定することができなかった。したがって、親和性の更に高い抗体をファージディスプレイ法によって選択することはできなかった。したがって、少なくともある種の抗体又は抗原に対して、ファージディスプレイ法は、高度に改善された結合特異性／親和性を有する抗体を選択する能力が限られている。したがって、この限界を克服するために、抗体のファージディスプレイ親和性成熟を必要としない選択的変異誘発手法と称する方法が確立され、本発明によって提供される。この選択的変異誘発手法は、ファージディスプレイ系を用いた限界を克服するために開発されたが、この方法は、ファージディスプレイ系との併用も可能であることに留意すべきである。さらに、選択的変異誘発手法を使用して、任意の抗体の活性を改善することができる。
【０１７６】
抗体の活性（例えば、親和性又は中和活性）を改善するために、理想的には、重鎖と軽鎖の両方におけるＣＤＲ位置ごとに他のあらゆる可能なアミノ酸残基に変異させたいことがある。しかし、抗体内には平均７０個のＣＤＲ位置が存在するので、かかる手法は多大な時間と労力が必要である。したがって、本発明の方法は、重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲ内のある選択された残基のみを変異させることによって、抗体の活性を改善することができる。さらに、本発明の方法は、抗体の他の望ましい諸性質に影響を及ぼさずに、抗体の活性を改善することができる。
【０１７７】
抗原に接触している抗体可変領域のアミノ酸残基を決定することは、一次配列又は可変領域内のその位置に基づいて正確に予想することができない。それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ等によって実施された、異なる特異性を有する抗体由来の配列のアラインメントによって、抗体間でかなり異なるＣＤＲが可変領域内の局所領域として特定された（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７１）  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ，  Ｓｃｉ．  １９０：  ３８２−３９３，，  Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。構造研究によれば、抗原結合表面は、ＣＤＲ中に存在するアミノ酸残基によって形成される。ＣＤＲ外の他のアミノ酸残基は、構造的役割を果たすことも知られており、又は抗原結合に直接関与することも知られている。したがって、各抗原抗体対において、ＣＤＲ内及びＣＤＲ外のアミノ酸残基が重要であり得る。
【０１７８】
Ｔｏｍｌｉｓｏｎ等による配列アラインメント研究によって、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ２において、また、体細胞変異の高頻度部位であるカッパ鎖ＣＤＲ３の一部において、幾つかの位置が特定された。（Ｔｏｍｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２５６：  ８１３−８１７）。特に、位置Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３３、Ｈ３３Ｂ、Ｈ５２Ｂ、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３１Ａ、Ｌ５０、Ｌ５３、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３及びＬ９４が、体細胞変異の高頻度部位として特定された。しかし、この分析は、重要な重鎖ＣＤＲ３領域を除外し、また、抗体結合部位の中心に位置することが知られ、抗原との重要な相互作用を潜在的にもたらす軽鎖ＣＤＲ３の部分を除外している。さらに、Ｔｏｍｌｉｓｏｎ等は、体細胞の多様性のみでは、抗原結合における特定のアミノ酸の役割を必ずしも予測せず、抗原に接触する保存アミノ酸残基、及び抗原に接触しない多様なアミノ酸残基を必ずしも示唆しないと提唱している。この結論は、抗体親和性に対する体細胞変異の役割に関する変異研究によって更に裏付けられている（Ｓｈａｒｏｎ，  （１９９０），  ＰＮＡＳ，  ８７：  ４８１４−７）。高親和性抗ｐ−アゾフェニルアルソナート（Ａｒｓ）抗体中の１９個の体細胞変異がそれらの対応する生殖系列残基で同時に置換され、活性が２００倍低下した抗Ａｒｓ抗体の生殖系列バージョンが生成した。抗Ａｒｓ抗体の完全な親和性は、１９個の体細胞変異のうちわずか３個を修復することによって回復することができ、抗原結合活性に寄与しない多数の体細胞変異が許容され得ることを示している。
【０１７９】
この結果は、抗体の多様性自体の性質によって部分的に説明することができる。未成熟Ｂ細胞は、幾つかの自己又は非自己抗原を認識する低親和性抗体を初期に産生し得る。さらに、抗体は、親和性成熟の過程において、自己反応性を引き起こし得る配列変化を受け得る。かかる低親和性抗体の超変異は自己反応性を消失させる役割を果たし（「負の選択」）、外来抗原に対する親和性を増加させ得る。したがって、多数の抗体の主要な構造データの解析は、（１）親和性成熟プロセスと望ましくない抗原に対する親和性を低下させるプロセスにおける体細胞超変異部位の役割を対比して予測する方法を与えず、（２）所与のアミノ酸が特定の抗原抗体対の諸性質に寄与する仕方を予測する方法も与えない。
【０１８０】
抗原認識における特定のアミノ酸残基の役割を扱う他の試みは、抗原抗体複合体の幾つかの結晶構造を分析することによってなされた（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２：  ７３２−７４５）。ＣＤＲ内外の位置の潜在的役割が示された。分析された２６個の構造のうち１０個を超える構造において抗原結合に関与するＣＤＲ中の位置としては、重鎖中のＨ３１、Ｈ３３、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８及びＨ１００、並びに軽鎖中のＬ３０Ａ、Ｌ３２、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９６が挙げられた。しかし、著者によれば、これら及び他の構造データを用いた抗原接触の予測は、接触位置を過剰又は過小に予測することがあり、異なる抗原に対して異なる戦略を適用しなければならない場合があり得るという見解に至った。
【０１８１】
Ｐｉｎｉ等は、大規模ファージディスプレイライブラリーにおける抗体ＣＤＲ配列中の複数の残基を無作為化して、抗体親和性を急速に増加させることを記述した（Ｐｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７３：  ２１７６９−２１７７６）。しかし、Ｐｉｎｉ等によって考察された高親和性抗体は合計８つの位置に変異を有し、必要最小限のアミノ酸に対して試験すべき組合せ候補が多いので、抗体の親和性改善に不可欠な変化の還元的（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｒｙ）解析は実行不可能になる。
【０１８２】
さらに、複数残基の無作為化は、抗体の他の所望の性質を必ずしも維持できるとは限らない。抗体の望ましい性質又は特性は、当分野で認識されており、例えば、他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、及びヒト生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体配列の維持、中和能の改善を含む。他の望ましい性質又は特性としては、種の交差反応性の維持能力、エピトープ特異性の維持能力、及びほ乳動物細胞における高いタンパク質発現レベルの維持能力が挙げられる。望ましい性質又は特性は、ＥＬＩＳＡ、競合的ＥＬＩＳＡ、インビトロ及び生体内中和アッセイ（例えば、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）、必要に応じてヒト、霊長類又は他の出所を含めた異なる出所に由来する組織切片を用いた免疫組織化学、並びにほ乳動物細胞における一過性発現又は安定発現による発現研究を含めて、ただしこれらだけに限定されない、当分野で認められた技術を用いて観察又は測定することができる。
【０１８３】
さらに、Ｐｉｎｉ等の方法は、親和性の改善に実際に必要な最小数よりも多い変化を導入する可能性があり、ヒト対象における抗ヒト抗体（ＨＡＭＡ）形成を誘発する抗体をもたらし得る。さらに、他の場所で考察したように、本明細書に示すファージディスプレイ、又はリボソームディスプレイを含めた他の関連する方法は、抗体と抗原間で一定の親和性に達すると、適切に機能しなくなる場合があり、他のファージ又はリボソーム成分及び抗原との相互作用を含めた更なる相互作用のために、平衡到達に必要な条件が合理的な時間枠内に確立されない場合がある。
【０１８４】
当業者は、上で考察した参考文献の教示から、抗体の多様性の起源に関する興味深い科学情報を少しずつ収集することができる。しかし、本発明は、抗体の他の適切な特徴又は望ましい特性を維持しつつ、特定の抗原抗体対の抗体親和性を増加させる方法を提供する。これは、抗原結合を含めて、多数の異なる特性を特定の抗体に付与する望ましさを考慮すると、特に重要である。
【０１８５】
出発抗体が、保持する必要がある望ましい性質又は特性を有する場合には、選択的変異誘発手法は、抗体の活性を改善しつつ、これらの望ましい性質を維持するための最良の戦略であり得る。例えば、Ｙ６１の変異誘発においては、目的は、所望の性質を維持しつつ、ｈＩＬ−１２に対する親和性を増加させることであり、抗体の中和能を改善することであった。Ｙ６１の所望の性質としては、（１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、（２）優れたエピトープ特異性の維持、すなわち、好ましくはｐ７０（ｐ４０／ｐ３５）ヘテロ二量体においてｐ４０エピトープを認識することによって、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止すること、及び（３）それぞれの生殖系列免疫グロブリン配列にできるだけ近い重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する抗体の生成が挙げられた。
【０１８６】
一実施形態において、本発明の方法は、親和性及び／又は中和能を改善しつつ、抗体の望ましい性質又は特性を維持するための戦略として、選択的変異誘発手法を提供する。「選択的変異誘発手法」という用語は、上で定義したとおりであり、選択したアミノ酸残基を個別に変異させる方法を含む。変異させるべきアミノ酸残基は、好ましい選択的変異誘発位置からまず選択し、次いで接触位置から選択し、次いで超変異位置から選択することができる。個々の選択位置は、少なくとも２種類のアミノ酸残基に変異させることができ、抗体の所望の性質と抗体活性の改善の両方に対する変異の効果が決定される。
【０１８７】
選択的変異誘発手法は、
１）好ましい選択的変異誘発位置、２）接触位置、３）超変異位置の順序で候補位置を選択し、その位置を抗体の重鎖及び軽鎖可変領域内の位置の場所に基づいて順位付けする段階（ＣＤＲ３はＣＤＲ２よりも好ましく、ＣＤＲ２はＣＤＲ１よりも好ましい。）、
好ましい選択的変異誘発位置候補、超変異及び／又は接触位置候補を順位の順に、他のすべての可能なアミノ酸残基に個別に変異させ、活性増強アミノ酸残基を決定するために、抗体の活性に対する個々の変異の効果を分析する段階、
必要に応じて、個々の活性増強アミノ酸残基の段階的な組合せを作製し、抗体の活性に対する種々の組合せの効果を分析し、活性増強アミノ酸残基を有する変異抗体を選択し、アミノ酸置換の免疫原性の潜在能力に関して、アミノ酸置換の場所及びアイデンティティに基づいて変異抗体を順位付けする段階を含む。最高順位は、生殖系列データベースに記載された可変領域配列とほぼ同じアミノ酸配列を含む変異抗体、又は他のヒト抗体と類似のアミノ酸配列を有する可変領域配列とほぼ同じアミノ酸配列を含む変異抗体に与えられる。より低い順位は、生殖系列配列又は別のヒト抗体の配列のどちらかにおいて稀に遭遇するアミノ酸置換を含む変異抗体に与えられる。最低順位は、生殖系列配列又は別のヒト抗体の配列では遭遇しないアミノ酸置換を有する変異抗体に与えられる。上述したように、ＣＤＲ３中に位置する少なくとも１個の活性増強アミノ酸残基を含む変異抗体は、ＣＤＲ２中に位置するものよりも好ましく、ＣＤＲ２中に位置するものは、ＣＤＲ１中に位置するものよりも好ましい。重鎖可変領域のＣＤＲは、軽鎖可変領域のＣＤＲよりも好ましい。
【０１８８】
変異抗体は、例えばその対応する親抗体と比較したときに、活性の改善について研究することもできる。変異抗体の活性の改善は、例えば、中和アッセイ又は表面プラズモン共鳴分析による結合特異性／親和性によって判断することができる（米国特許第６，９１４，１２８号の実施例３参照）。好ましくは、活性の改善は、親抗体の少なくとも２−２０倍高くなり得る。活性の改善は、親抗体の少なくとも「ｘ１」から「ｘ２」倍高くなり得る。ここで、「ｘ１」及び「ｘ２」は２から２０の整数（２と２０を含む。）であり、表記範囲内の範囲、例えば２−１５、例えば５−１０を含む。
【０１８９】
活性増強アミノ酸残基を有する変異抗体は、少なくとも１つの他の望ましい性質が変異後に保持されるかどうかを判定するために研究することもできる。例えば、抗ｈＩＬ−１２抗体を用いた以下の試験：（１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、（２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくはｐ７０（ｐ４０／ｐ３５）ヘテロ二量体におけるｐ４０エピトープを認識することによって、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止すること、及び（３）それぞれの生殖系列免疫グロブリン配列にできるだけ近い重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する抗体の生成、及び生殖系列配列との相違数に基づく、ヒト免疫応答を誘発する可能性が最も低い抗体の決定。１個を超える活性増強アミノ酸残基、例えば、少なくとも２個又は少なくとも３個の活性増強アミノ酸残基を有する抗体に対して同じ観察を実施して、望ましい性質又は特性が保持されたかどうかを判定することができる。
【０１９０】
Ｙ６１の変異誘発における「選択的変異誘発手法」の使用の例を以下に記述する。個々の変異Ｈ３１Ｓ→Ｅ、Ｌ５０→Ｙ又はＬ９４Ｇ→Ｙは各々、抗体の中和活性を改善した。しかし、組合せクローンを試験すると、組合せクローンＨ３１Ｓ→Ｅ＋Ｌ５０→Ｙ＋Ｌ９４Ｇ→Ｙの活性は、Ｌ５０→Ｙ＋Ｌ９４Ｇ→Ｙ（Ｊ６９５）よりも優れていなかった。したがって、ＣＤＲ１の３１位の生殖系列アミノ酸残基ＳｅｒからＧｌｕへの変化は、Ｙ６１よりもＪ６９５の活性を改善させるのに不要であった。したがって、選択的変異誘発手法は、最終活性に寄与した変化の最小数を確認し、それによって最終抗体の免疫原性の潜在能力を低下させ、抗体の他の所望の性質を維持する。
【０１９１】
選択された変異誘発手法によって作製されたＶＨ及びＶＬをコードする単離ＤＮＡは、ＩＶ節に記載するように、完全長抗体鎖遺伝子、ｓｃＦＶ遺伝子に関してＦａｂ断片遺伝子に変換され得る。選択された変異誘発手法によって作製されたＶＨ及びＶＬ領域の発現のために、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを、ＩＶ節に詳述するように、様々な宿主細胞に移入することができる。好ましい宿主細胞としては、原核宿主細胞、例えばＥ  コリ（Ｅ  ｃｏｌｉ）、又は真核宿主細胞、例えば酵母細胞、例えばＳ．セレビサエ（Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）が挙げられる。最も好ましい真核宿主細胞は、ＩＶ節に詳述したほ乳動物宿主細胞である。選択的変異誘発手法は、他の手段による抗体の事前の親和性成熟なしに、改善された活性を有する抗体を生成する方法を提供する。
【０１９２】
選択的変異誘発手法は、復帰変異を受けやすい、親和性の改善された抗体を生成する方法を提供する。選択的変異誘発手法は、親和性成熟抗体の活性を改善させる方法も提供する。
【０１９３】
当業者は、選択的変異誘発手法を当分野で公知の標準的抗体操作技術に使用できることを認識する。例としては、ＣＤＲ移植抗体、キメラ抗体、ｓｃＦＶ断片、完全長抗体のＦａｂ断片、及び他の出所、例えばトランスジェニックマウス由来のヒト抗体が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１９４】
抗体の迅速な大規模変異解析としては、リボソームディスプレイ技術を用いたインビトロ転写及び翻訳が挙げられる（例えば、Ｈａｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９４：  ４９３７−４９４２；  Ｄａｌｌ  Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃ．  Ｂｉｏｌ．  ８：  ４４３−４５０；  Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．  ２５：  ５１３２−５１３４）、及びＫａｗａｓａｋｉに発行された米国特許第５，６４３，７６８号及び米国特許第５，６５８，７５４号参照）。選択的変異誘発手法は、リボソームディスプレイ技術を用いて選択することができる、活性の改善された抗体を生成する方法も提供する。
【０１９５】
本発明の方法において、抗体又はその抗原結合性部分は、ＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲのＣＤＲ中の個々の位置を変化させることによって更に修飾される。これらの修飾はファージディスプレイされた抗体において施すことができるが、本発明の方法は、細菌、酵母、ほ乳動物細胞発現系などの他のタイプの宿主系において発現される抗体を用いて実施することができる点で有利である。修飾用に選択されたＣＤＲ内の個々の位置は、接触及び／又は超変異位置である位置に基づく。
【０１９６】
本明細書に定義する好ましい接触位置及び超変異位置は、米国特許第６，９１４，１２８号の表３（米国特許第６，９１４，１２８号のＡｐｐｅｎｄｉｘ  Ａ参照）に示されており、本発明の方法によるそれらの修飾は、米国特許第６，９１４，１２８号の実施例２に詳述されている。好ましい接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される。好ましい超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択される。（「好ましい選択的変異誘発位置」と称する）より好ましいアミノ酸残基は、接触位置と超変異位置の両方であり、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択される。好ましい活性増強アミノ酸残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される位置にあるアミノ酸残基を置換する。より好ましい活性増強アミノ酸残基は、位置Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４に位置するアミノ酸残基を置換する。特に、好ましい活性増強アミノ酸残基は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択される位置にあるアミノ酸残基を置換する。
【０１９７】
一般に、本発明の方法は、目的の親抗体又はその抗原結合性部分の重鎖又は軽鎖のＣＤＲ内の特定の好ましい選択的変異誘発位置、接触及び／又は超変異位置を選択すること、その個々の位置を無作為に変異させること（例えば、修飾抗体の「ミニライブラリー」を作製する変異原性オリゴヌクレオチドを用いた遺伝学的手段によって）、又はある位置を特定の所望のアミノ酸に変異させて、発現する活性増強アミノ酸残基を同定すること、及び（例えば、非ファージディスプレイ宿主系中の）修飾抗体を精製すること、抗原に対する修飾抗体の活性を測定すること（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析によってｋｏｆｆ速度を測定することによって）、他のＣＤＲ位置に対してこれらの段階を必要に応じて繰り返すこと、及び改善された活性を有することが判明した個々の変異を組み合わせること、及びこの組合せが、親抗体よりも更に大きな活性（例えば、親和性又は中和能）を有する抗体又はその抗原結合性部分を生成するかどうかを試験することを含む。
【０１９８】
したがって、一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の１）好ましい選択的変異誘発位置、２）接触位置、又は３）超変異位置を変異用に順次選択し、それによって、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること、
ｅ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ａ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した個々の変異を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。好ましくは、選択された抗体又は複数の抗体は、上記親抗体の少なくとも１つの望ましい特性又は性質を喪失せずに又は保持して、改善された活性を有する。望ましい特性又は性質は、当業者が、当分野で認められた技術を用いて、測定又は観察することができる。
【０１９９】
好ましい接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される。好ましい超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択される。より好ましい好ましい選択的変異誘発位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択される。
【０２００】
別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ａ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２０１】
好ましい接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される。好ましい超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択される。より好ましい好ましい選択的変異誘発位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択される。
【０２０２】
別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ａ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した３個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２０３】
好ましくは、活性増強アミノ酸残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される位置にあるアミノ酸残基を置換する。
【０２０４】
個々の選択位置の変異誘発に続いて、変異クローンの配列を決定して、各クローン中の選択位置に導入されたアミノ酸残基を同定することができる。統計学的に１０−１５種類の独特の抗体を生成するはずである少数（例えば、約２４個）のクローンを配列決定用に選択することができるが、より多数の（例えば、６０を超える）クローンの配列を決定して、あらゆる可能な置換を選択位置に有する抗体を確実に特定することができる。
【０２０５】
一実施形態において、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ３領域内の接触及び／又は超変異位置を変異誘発のためにまず選択する。しかし、ファージディスプレイ選択を介したＣＤＲ３領域の無作為変異誘発によってインビトロで既に親和性成熟された抗体の場合には、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ１又はＣＤＲ２内の接触位置及び／又は超変異位置をまず選択することが好ましいことがある。
【０２０６】
より好ましい一実施形態において、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ３領域内の好ましい選択的変異誘発位置を変異誘発のためにまず選択する。しかし、ファージディスプレイ選択を介したＣＤＲ３領域の無作為変異誘発によってインビトロで既に親和性成熟された抗体の場合には、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ１又はＣＤＲ２内の好ましい選択的変異誘発位置をまず選択することが好ましいことがある。
【０２０７】
別の好ましい一実施形態において、選択的変異誘発手法による選択抗体の最適化を以下のように順次実施する。すなわち、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置を、各々少なくとも２個の他のアミノ酸（好ましくは、５−１４個の他のアミノ酸）にまず変異させ、生成した抗体を親和性、中和能の増加について（恐らくは、他の場所で考察した少なくとも１つの他の保持された特性又は性質についても）特徴付ける。単一の好ましい選択的変異誘発位置の変異によって親和性又は中和能が全く又は十分に増加しない場合には、また、好ましい選択的変異誘発位置においてアミノ酸を置換する複数の活性増強アミノ酸の組合せにおいても（親和性及び／又は中和能を含めた）目標活性を満たす組合せ抗体を生じない場合には、追加のアミノ酸残基を選択的変異誘発のためにＨ３５、Ｈ５０、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｌ３０Ａ及びＬ９６からなる群から選択し、各々少なくとも２個の他のアミノ酸（好ましくは、５−１４個の他のアミノ酸）に変異させ、生成した抗体を親和性、中和能の増加について（恐らくは、他の場所で考察した少なくとも１つの他の保持された特性又は性質についても）特徴付ける。
【０２０８】
Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｌ３０Ａ及びＬ９６からなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異によって（親和性及び／又は中和能を含めた）活性が全く又は十分に増加しない場合には、また、これらの位置においてアミノ酸を置換する複数の活性増強アミノ酸の組合せにおいても（親和性及び／又は目標中和能を含めた）目標活性を満たす組合せ抗体を生じない場合には、追加のアミノ酸残基を選択的変異誘発のためにＨ３３Ｂ、Ｈ５２Ｂ及びＬ３１Ａからなる群から選択し、各々少なくとも２個の他のアミノ酸（好ましくは、５−１４個の他のアミノ酸）に変異させ、生成した抗体を親和性、中和能の増加について（恐らくは、他の場所で考察した少なくとも１つの他の保持された特性又は性質についても）特徴付ける。
【０２０９】
連続した選択的変異誘発手法は、所望の（親和性及び／又は中和能を含めた）活性を有する抗体が特定された時点で直ちに、上に概説した段階のいずれにおいても終了できることを理解すべきである。あらかじめ選択された位置の変異誘発によって活性増強アミノ酸残基が同定されたが、組合せ抗体が目標の（親和性及び／又は中和能を含めた）活性セットをなお満たさない場合には及び／又は同定された活性増強アミノ酸が他の望ましい特性にも影響を及ぼし、したがって許容できない場合には、残りのＣＤＲ残基を変異誘発に供することができる（ＩＶ節参照）。
【０２１０】
本発明の方法を使用して、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善して、所定の目標活性（例えば、所定の親和性及び／又は中和能、及び／又は所望の性質若しくは特性）に到達することができる。
【０２１１】
したがって、本発明は、
ａ）親抗体、その抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置を選択すること、
ｃ）選択された好ましい選択的変異誘発位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、第１の群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）第１の群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、単一の選択的変異誘発位置の変異によって、所定の目標活性又は部分的目標活性を有する抗体又はその抗原結合性部分が生成するかどうかを判定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した個々の変異を段階的に組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、
ｆ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、組合せ抗体又はその抗原結合性部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを判定すること、
ｇ）段階ｄ）又はｆ）によって、所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合性部分が生成しない、又は部分的活性しか持たない抗体が生成する場合には、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、９８、Ｌ３０Ａ及びＬ９６からなる群から選択される追加のアミノ酸残基を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に変異させて、第２の群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｈ）第２の群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｌ３０Ａ及びＬ９６からなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異によって、所定の目標活性又は部分的活性を有する抗体又はその抗原結合性部分が生成するかどうかを判定すること、
ｉ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した段階ｇ）の個々の変異を段階的に組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、
ｊ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、組合せ抗体又はその抗原結合性部分が所定の目標活性又は部分的目標活性を有するかどうかを判定すること、
ｋ）段階ｈ）又はｊ）によって、所定の目標活性を有する抗体若しくはその抗原結合性部分が生成しない、又は部分的活性しか持たない抗体が生成する場合には、Ｈ３３Ｂ、Ｈ５２Ｂ及びＬ３１Ａからなる群から選択される追加のアミノ酸残基を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に変異させて、第３の群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｌ）第３の群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、Ｈ３３Ｂ、Ｈ５２Ｂ及びＬ３１Ａからなる群から選択される単一のアミノ酸残基の変異によって、所定の目標活性又は部分的活性を有する抗体又はその抗原結合性部分が生成するかどうかを判定すること、
ｍ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した段階ｋ）の個々の変異を段階的に組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、
ｎ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を評価して、組合せ抗体又はその抗原結合性部分が所定の目標活性を有するかどうかを判定して、所定の目標活性を有する抗体又はその抗原結合性部分を作製すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善して、所定の目標活性を達成する方法を提供する。
【０２１２】
ＰＣＲアセンブリー、クンケル（ｄｕｔ−ｕｎｇ−）及びチオホスファート（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｓｃｕｌｐｔｏｒキット）オリゴヌクレオチド指定変異誘発を含めて、幾つかの変異誘発法を使用することができる。
【０２１３】
細菌、酵母、バキュロウイルス及びほ乳動物の発現系（及びファージディスプレイ発現系）を含めて、多種多様な宿主発現系を使用して、変異抗体を発現させることができる。適切な細菌発現ベクターの例は、ｐＵＣ１１９（Ｓｆｉ）である。他の抗体発現系が当分野で公知であり、及び／又は以下のＩＶ節に記載する。
【０２１４】
本発明の方法によって作製された修飾抗体又はその抗原結合性部分は、選択のためのファージディスプレイ法に依存せずに特定することができる。したがって、本発明の方法は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性をファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない、組換え親抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善するのに特に有利である。
【０２１５】
したがって、別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること（組換え親抗体又はその抗原結合性部分は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない。）、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択し、それによって、選択された接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること、
ｅ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ｂ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した個々の変異を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の親和性を改善する方法を提供する。
【０２１６】
好ましい接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択される。好ましい超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択される。より好ましい好ましい選択的変異誘発位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択される。
【０２１７】
利用可能な方法を用いて、上で考察した抗体の別の性質又は特性を保持しつつ、結合親和性及び中和能の増加した抗体を誘導することは不可能であり、又は極めて手間がかかる。しかし、本発明の方法は、かかる抗体を容易に特定することができる。本発明の方法に供される抗体は、あらゆる出所に由来し得る。
【０２１８】
したがって、別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択し、それによって、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を適切な発現系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること（該性質又は特性は、抗体中に保持される必要があるものである。）
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２１９】
好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差活性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２０】
別の好ましい一実施形態において、超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２１】
より好ましい一実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２２】
より好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２３】
したがって、特定の抗原に対する抗体の親和性を改善すべきであるが、ファージディスプレイ法（又はリボソームディスプレイを含めた関連する系）がもはや適用できず、他の望ましい性質又は特性を保持すべき場合には、本発明の方法を使用することができる。したがって、別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された別の性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること（組換え親抗体又はその抗原結合性部分は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない。）、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択し、それによって、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること（該性質又は特性は、保持される必要があるものである。）、
ｆ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ａ）からｅ）を繰り返すこと、
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性及び少なくとも１つの保持された性質又は特性を有することが判明した少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｈ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２２４】
好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差活性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２５】
別の好ましい一実施形態において、超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２６】
より好ましい一実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２７】
より好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２２８】
別の一実施形態において、本発明は、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること（組換え親抗体又はその抗原結合性部分は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない。）、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択し、それによって、選択された接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること（該性質又は特性は、保持される必要があるものである。）
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２２９】
好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差活性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３０】
別の好ましい一実施形態において、超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３１】
より好ましい一実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３２】
より好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３３】
別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること（組換え親抗体又はその抗原結合性部分は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない。）、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を変異用に選択し、それによって、選択された接触又は超変異位置を特定すること、
ｃ）前記選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること（該性質又は特性は、保持される必要があるものである。）、
ｆ）必要に応じて、少なくとも１つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に対して段階ａ）からｅ）を繰り返すこと、
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性及び少なくとも１つの保持された他の特性を有することが判明した少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｈ）組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２３４】
好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差活性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３５】
別の好ましい一実施形態において、超変異位置は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５３及びＬ９３からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３６】
より好ましい一実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ５２、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ５０、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３７】
より好ましい一実施形態において、接触位置は、Ｌ５０及びＬ９４からなる群から選択され、他の特性は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２３８】
ＩＶ．  他のＣＤＲ残基の修飾
最終的には、活性増強アミノ酸残基として必要とされ、及び／又は抗原との結合及び／又は抗体の他の望ましい性質若しくは特性の保持に直接又は間接に必要とされることが任意の手段によって確認された、所与の抗体抗原対におけるすべてのＣＤＲ残基。かかるＣＤＲ残基を「好ましい選択的変異誘発位置」と称する。特定の状況においては、好ましい選択的変異誘発残基は、抗体と抗原の共結晶化、及び分子モデリングを含めて、他の手段によっても特定できることに注意すべきである。
【０２３９】
上記好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に焦点を合わせて活性増強アミノ酸を特定する好ましい試みが検討し尽くされた場合、又は更なる改善が必要な場合には、残りのＣＤＲ残基を下記のように修飾することができる。抗体は、上で考察した実施形態に従って、任意の１つ以上の接触又は超変異位置において既に修飾されている場合があるが、更なる改善を必要とする場合もあることを理解すべきである。したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を、例えば、少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、変異抗体若しくは一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）変異抗体若しくは一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、変異抗体若しくは一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性の変化について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２４０】
好ましくは、他の特性又は性質は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２４１】
単一の残基の変異誘発が不十分である場合には、他の残基を含めることができる。したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）ｂ）で選択された位置ではなく、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６の位置でもない、少なくとも１つの他のＣＤＲ位置に対して、段階ｂ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２４２】
上記接触又は超変異位置に焦点を合わせて活性増強アミノ酸を特定する好ましい試みが検討し尽くされた場合、又は更なる改善が必要とされ、当該抗体を変異誘発及びファージディスプレイ（又は関連するリボソームディスプレイ）法によって更に最適化することができない場合には、残りのＣＤＲ残基を下記のように修飾することができる。抗体は、上で考察した実施形態に従って、任意の１つ以上の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置において既に修飾されている場合があるが、更なる改善を必要とする場合もあることを理解すべきである。
【０２４３】
したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）組換え親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること（組換え親抗体又はその抗原結合性部分は、ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない。）、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択された接触又は超変異位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、前記一群を非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性の変化について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２４４】
好ましくは、他の特性又は性質は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２４５】
単一の変異誘発が抗体の親和性を増加させるのに不十分である場合には、他の残基を変異誘発に含めることができる。したがって、別の一実施形態において、本発明は、親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、
ａ）ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない、親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）ｂ）で選択された位置ではなく、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４の位置でもない、少なくとも１つの他の位置に対して、段階ｂ）からｄ）を繰り返すこと、
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明した少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｈ）２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性及び別の性質又は特性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２４６】
好ましくは、他の特性又は性質は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２４７】
記載の好ましい選択的変異誘発位置、接触又は超変異位置に焦点を合わせて活性増強アミノ酸を特定する好ましい試みが検討し尽くされる場合、又は更なる改善が必要な場合には、抗体の別の性質又は特性を保持することが重要である。
【０２４８】
したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び保持された別の性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性の変化について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、他の特性に影響を及ぼさずに、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２４９】
好ましくは、他の特性又は性質は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２５０】
単一の残基の変異誘発が不十分である場合には、他の残基を含めることが可能である。したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製すること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ．）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の特性又は性質の変化について親抗体又はその抗原部分と比較して評価すること、
ｅ）ｂ）で選択された位置ではなく、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６の位置でもない、少なくとも１つの他のＣＤＲ位置に対して、段階ｂ）からｅ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有することが判明し、少なくとも１つの別の性質又は特性に影響を及ぼさない、少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された別の性質又は特性を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性及び少なくとも１つの別の性質又は特性の保持を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２５１】
好ましい選択的変異誘発位置、接触及び超変異残基の変異誘発が抗体の親和性を十分に増加させない場合があり、変異誘発及びファージディスプレイ法（又は関連するリボソームディスプレイ法）がもはや有用ではない場合があり、抗体の少なくとも１つの別の特性又は性質は保持されるべきである。
【０２５２】
したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない、親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、活性の改善された抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を少なくとも１つの別の性質又は特性の変化について親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の親和性を改善する方法を提供する。
【０２５３】
好ましくは、他の特性又は性質は、１）他のタンパク質又はヒト組織との非交差反応性の維持、２）エピトープ認識の維持、すなわち、好ましくは、遊離の可溶性ｐ４０からの結合妨害を阻止するｐ７０  ｐ４０／ｐ３５ヘテロ二量体において、ｐ４０エピトープを認識すること、及び／又は３）生殖系列免疫グロブリン配列に近い抗体を産生することから選択される。
【０２５４】
単一の残基の変異誘発が不十分である場合には、他の残基を含めることが可能である。したがって、別の一実施形態において、本発明は、
ａ）ファージディスプレイ系における選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によって更に改善することができない、親抗体又はその抗原結合性部分を準備すること、
ｂ）相補性決定領域（ＣＤＲ）内のＨ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６以外のアミノ酸残基を変異用に選択すること、
ｃ）前記選択位置を少なくとも２個の別のアミノ酸残基に個別に変異させて、一群の変異抗体又はその抗原結合性部分を作製し、非ファージディスプレイ系において発現させること、
ｄ）一群の変異抗体又はその抗原結合性部分の活性及び少なくとも１つの別の性質又は特性の保持を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価し、それによって活性増強アミノ酸残基を特定すること、
ｅ）ｂ）で選択された位置ではなく、Ｈ３０、Ｈ３１、Ｈ３１Ｂ、Ｈ３２、Ｈ３３、Ｈ３５、Ｈ５０、Ｈ５２、Ｈ５２Ａ、Ｈ５３、Ｈ５４、Ｈ５６、Ｈ５８、Ｈ９５、Ｈ９６、Ｈ９７、Ｈ９８、Ｈ１０１、Ｌ３０、Ｌ３１、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ５０、Ｌ５２、Ｌ５３、Ｌ５５、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４及びＬ９６の位置でもない、少なくとも１つの他のＣＤＲ位置に対して、段階ｂ）からｄ）を繰り返すこと、
ｆ）親抗体又はその抗原結合性部分において、改善された活性を有し、少なくとも１つの別の性質又は特性に影響を及ぼさないことが判明した、少なくとも２個の個々の活性増強アミノ酸残基を組み合わせて、組合せ抗体又はその抗原結合性部分を形成すること、並びに
ｇ）親抗体又はその抗原結合性部分と比較して、改善された活性及び少なくとも１つの保持された別の特性又は性質を有する抗体又はその抗原結合性部分が得られるまで、２個の活性増強アミノ酸残基を有する組合せ抗体又はその抗原結合性部分の活性及び少なくとも１つの性質又は特性の保持を親抗体又はその抗原結合性部分と比較して評価すること
を含む、抗体又はその抗原結合性部分の活性を改善する方法を提供する。
【０２５５】
Ｖ．  抗体の発現
本発明の抗体又は抗体部分は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖及び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現させるために、軽鎖及び重鎖が宿主細胞中で発現され、好ましくは、宿主細胞を培養する培地中に分泌され、この培地から抗体を回収することができるように、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡ断片を含む１個以上の組換え発現ベクターを宿主細胞に移入する。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（ｅｄｓ），  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．，（１９８９）、Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９）、及びＢｏｓｓ他、米国特許第４，８１６，３９７号に記載の方法などの標準組換えＤＮＡ方法を使用して、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子を得、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み入れ、ベクターを宿主細胞に導入する。
【０２５６】
Ｊｏｅ  ９ｗｔ又はＪｏｅ  ９ｗｔ関連抗体の重鎖可変領域をコードするＤＮＡ断片を得るために、ＩＩ節に記載したように、ヒトＩＬ−１２に特異的な抗体をヒトライブラリーからスクリーニングし、変異させた。Ｊｏｅ  ９ｗｔ又はＪｏｅ  ９ｗｔ関連ＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片を得た後、ＰＣＲ部位特異的変異誘発（ＰＣＲ産物が変異を含むように、変異ヌクレオチドがＰＣＲプライマーに組み入れられるＰＣＲ媒介性変異誘発）、他の部位特異的変異誘発法などの標準的方法によって、これらの配列の変異誘発を実施する。望ましいレベルの活性及び結合特異性／親和性を示したヒトＩＬ−１２抗体、例えばＪ６９５を、標準組換えＤＮＡ技術によってさらに操作して、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換した。これらの操作においては、ＶＬ又はＶＨをコードするＤＮＡ断片を、抗体定常領域、柔軟なリンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作用可能に連結する。本明細書では「作用可能に連結する」という用語は、２個のＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列が翻訳領域内に保たれるように２個のＤＮＡ断片を連結することを意味するものとする。
【０２５７】
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域、及びＫａｂａｔ（，Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に記載のいずれかのアロタイプ変種であり得るが、最も好ましくはＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に連結することができる。
【０２５８】
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当分野で公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）、これらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ又はラムダ定常領域であり得るが、最も好ましくはラムダ定常領域である。
【０２５９】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨ及びＶＬ配列が、ＶＬ領域とＶＨ領域が柔軟なリンカーで連結された連続単鎖タンパク質として発現され得るように、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ断片を、柔軟なリンカーをコードする（例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする）別の断片に作用可能に連結する（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  ４２３−４２６；  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：  ５８７９−５８８３；  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）  ３４８：  ５５２−５５４参照）。
【０２６０】
本発明の抗体又は抗体部分を発現させるために、上述したように得られた、部分又は完全長軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡを、遺伝子が転写及び翻訳調節配列に作用可能に連結されるように発現ベクターに挿入する。本明細書では「作用可能に連結する」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳調節配列が、抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節する所期の機能を果たすように、抗体遺伝子をベクターに連結することを意味するものとする。発現ベクター及び発現制御配列は、使用する発現宿主細胞に適合するように選択される。抗体軽鎖遺伝子と抗体重鎖遺伝子は別個のベクターに挿入することができる又はより典型的には、両方の遺伝子を同じ発現ベクターに挿入する。抗体遺伝子は、標準方法（例えば、抗体遺伝子断片上とベクター上の各相補的制限酵素切断部位の連結、又は制限酵素切断部位がない場合には平滑末端連結）によって、発現ベクターに挿入される。Ｊ６９５又はＪ６９５関連軽鎖又は重鎖配列を挿入する前に、発現ベクターは抗体定常領域配列を既に含み得る。例えば、Ｊ６９５又はＪ６９５関連ＶＨ及びＶＬ配列を完全長抗体遺伝子に変換する一手法は、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作用可能に連結され、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作用可能に連結されるように、それぞれ重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を既にコードする発現ベクターにこれらの配列を挿入することである。これに加えて又はこれとは別に、組換え発現ベクターは、宿主細胞由来の抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクター中にクローン化することができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【０２６１】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中で抗体鎖遺伝子の発現を制御する制御配列を有する。「制御配列」という用語は、プロモーター、エンハンサー及び抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を調節する他の発現調節要素（例えば、ポリアデニレーションシグナル）を含むものとする。かかる制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ（１９９０）に記載されている。制御配列の選択を含めて、発現ベクターの設計は、形質転換すべき宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの要因によって左右され得ることを当業者は理解されたい。ほ乳動物宿主細胞発現の好ましい制御配列としては、（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなどの）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなどの）シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーなど、ほ乳動物細胞中で高レベルのタンパク質発現を誘導するウイルス要素などが挙げられる。ウイルス調節エレメント及びその配列の詳細については、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉ、米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌ他、米国特許第４，５１０，２４５号、及びＳｃｈａｆｆｎｅｒ他、米国特許第４，９６８，６１５号、Ｂｕｊａｒｄ他、米国特許第５，４６４，７５８号、及びＢｕｊａｒｄ他、米国特許第５，６５４，１６８号を参照されたい。
【０２６２】
抗体鎖遺伝子及び制御配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中でベクターの複製を調節する配列（例えば、複製開始点）、選択マーカー遺伝子などの追加の配列を含み得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞の選択を容易にする（例えば、すべてＡｘｅｌ他による米国特許第４，３９９，２１６号、同４，６３４，６６５号及び同５，１７９，０１７号参照）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞にＧ４１８、ハイグロマイシン、メトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子としては、（メトトレキサート選択／増幅を用いたｄｈｆｒ宿主細胞用）ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子、ｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）などが挙げられる。
【０２６３】
軽鎖及び重鎖の発現の場合、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを標準技術によって宿主細胞に移入する。「移入」という用語の様々な形態は、外来ＤＮＡを原核生物又は真核生物宿主細胞に導入するのに一般に使用される多種多様な技術、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン移入などを包含するものとする。原核生物宿主細胞でも真核生物宿主細胞でも本発明の抗体を発現することは理論的に可能であるが、真核細胞、最も好ましくはほ乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましい。というのは、かかる真核細胞、特にほ乳動物細胞は、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が原核細胞よりも高いからである。本発明の組換え抗体を発現するのに好ましいほ乳動物宿主細胞としては、（例えば、Ｒ．Ｊ．  Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．  Ｓｈａｒｐ  （１９８２）  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５９：  ６０１−６２１に記載の、ＤＨＦＲ選択マーカーと一緒に使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  （１９８０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：  ４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞を含めた）チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２細胞などが挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターをほ乳動物宿主細胞に導入するときには、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現に十分な期間、より好ましくは宿主細胞が成長する培地中に抗体を分泌するのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって作製される。抗体は、標準タンパク質精製法によって培地から回収することができる。
【０２６４】
宿主細胞を使用して、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ分子など、完全抗体の一部を作製することもできる。上記手順の変形も本発明の範囲内であることを理解されたい。例えば、本発明の抗体の軽鎖又は重鎖（ただし、両方ではない。）をコードするＤＮＡを宿主細胞に移入することが望ましい場合もある。組換えＤＮＡ技術を使用して、ｈＩＬ−１２との結合に不要である、軽鎖と重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去することもできる。かかる切断型ＤＮＡ分子から発現される分子も本発明の抗体に包含される。また、一方の重鎖と一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖と軽鎖がｈＩＬ−１２以外の抗原に特異的である二官能性抗体は、本発明の抗体を第２の抗体に標準化学架橋法によって架橋することによって作製することができる。
【０２６５】
本発明の抗体又はその抗原結合性部分の組換え発現の好ましい系においては、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞にリン酸カルシウムを用いた移入によって導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は、例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント、ＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなど、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するエンハンサー／プロモーター調節エレメントに各々作用可能に連結されて、高レベルの遺伝子転写を駆動する。組換え発現ベクターは、ベクターが移入されたＣＨＯ細胞をメトトレキサート選択／増幅によって選択することができるＤＨＦＲ遺伝子も含む。選択した形質転換宿主細胞を培養して、抗体重鎖及び軽鎖を発現させ、完全抗体を培地から回収する。標準分子生物学技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞に移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培地から回収する。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ヒト免疫グロブリン遺伝子が導入されたトランスジェニック動物（例えば、マウス）中で発現させることができる（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０：  ６２８７−６２９５参照）。植物細胞を改変して、本発明の抗体又はその抗原結合性部分を発現するトランスジェニック植物を作製することもできる。
【０２６６】
上記を考慮して、本発明の別の一態様は、本発明の抗体及び抗体部分の組換え発現に使用することができる核酸、ベクター及び宿主細胞組成物に関する。好ましくは、本発明は、Ｊ６９５のＣＤＲをコードする又はＪ６９５の完全重鎖及び／又は軽鎖可変領域をコードする単離核酸を特徴とする。したがって、一実施形態において、本発明は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＪ６９５重鎖ＣＤＲ３をコードする抗体重鎖可変領域をコードする単離核酸を特徴とする。好ましくは、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＪ６９５重鎖ＣＤＲ２を更にコードする。より好ましくは、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＪ６９５重鎖ＣＤＲ１を更にコードする。更により好ましくは、単離核酸は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域（Ｊ６９５の完全ＶＨ領域）をコードする。
【０２６７】
別の実施形態において、本発明は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＪ６９５軽鎖ＣＤＲ３をコードする抗体軽鎖可変領域をコードする単離核酸を特徴とする。好ましくは、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＪ６９５軽鎖ＣＤＲ２を更にコードする。更に好ましくは、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＪ６９５軽鎖ＣＤＲ１を更にコードする。更により好ましくは、単離核酸は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域（Ｊ６９５の完全ＶＬ領域）をコードする。
【０２６８】
本発明は、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターも提供する。例えば、一実施形態において、本発明は、
ａ）配列番号３１のアミノ酸を含む可変領域を有する抗体重鎖、及び
ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体軽鎖
をコードする組換え発現ベクターを提供する。
【０２６９】
本発明は、本発明の組換え発現ベクターの１個以上が導入された宿主細胞も提供する。好ましくは、宿主細胞はほ乳動物宿主細胞であり、より好ましくは、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞又はＣＯＳ細胞である。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を適切な培地中で本発明の組換えヒト抗体が合成されるまで培養することによって、本発明の組換えヒト抗体を合成する方法を提供する。この方法は、組換えヒト抗体を培地から単離することを更に含み得る。
【０２７０】
ＶＩ．  薬剤組成物及び薬剤投与
本発明の抗体及び抗体部分は、対象への投与に適切な薬剤組成物に組み込むことができる。典型的には、薬剤組成物は、本発明の抗体又は抗体部分と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書では「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合する、任意及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤、吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノールなどの１種類以上及びこれらの組合せが挙げられる。等張化剤（例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール又は塩化ナトリウム）を組成物中に含むことが好ましい場合が多い。薬学的に許容される担体は、抗体又は抗体部分の品質保持期間又は有効性を向上させる、湿潤剤、乳化剤、防腐剤、緩衝剤などの補助物質の少量を更に含み得る。
【０２７１】
本発明の抗体及び抗体部分は、非経口投与に適切な薬剤組成物に組み入れることができる。好ましくは、抗体又は抗体部分は、０．１−２５０ｍｇ／ｍｌ抗体を含む注射液として調製される。注射液は、フリント若しくはこはく色のバイアル、アンプル又は充填済みシリンジ中の液体又は凍結乾燥剤形で構成され得る。緩衝剤は、ｐＨ５．０から７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１−５０ｍＭ）、最適には５−１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝剤としては、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムが挙げられるが、これらだけに限定されない。塩化ナトリウムを０−３００ｍＭ（液体剤形の場合、最適には１５０ｍＭ）の濃度で使用して、溶液の毒性を加減することができる。凍結保護物質、主に０−１０％スクロース（最適には０．５−１．０％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。他の適切な凍結保護物質としては、トレハロース、ラクトースなどが挙げられる。充填剤、主に１−１０％マンニトール（最適には２−４％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。安定剤、主に１−５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適には５−１０ｍＭ）を液剤と凍結乾燥剤形の両方で使用することができる。他の適切な充填剤としてはグリシン、アルギニンなどが挙げられ、０−０．０５％ポリソルベート−８０（最適には０．００５−０．０１％）として含めることができる。別の界面活性剤としては、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０２７２】
好ましい一実施形態において、薬剤組成物は、投与量約１００ｍｇ−２００ｍｇ／回の抗体を含む。
【０２７３】
本発明の組成物は、種々の剤形であり得る。剤形としては、例えば、溶液剤（例えば、注射及び注入液剤）、分散液剤又は懸濁液剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤、坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が挙げられる。好ましい剤形は、意図する投与方法及び治療用途に応じて決まる。典型的な好ましい組成物は、他の抗体と一緒にヒトの受動免疫に使用される組成物に類似した組成物など、注射液又は注入液の剤形である。好ましい投与方法は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい一実施形態において、抗体は、皮下注射によって投与される。
【０２７４】
治療用組成物は、典型的には、製造及び貯蔵条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、又は高薬物濃度に適切な他の秩序構造（ｏｒｄｅｒｅｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）として処方することができる。無菌注射液は、必要に応じて、必要量の活性化合物（すなわち、抗体又は抗体部分）を適切な溶媒中で上記成分の１種類又は組合せと混合し、続いてろ過滅菌して調製することができる。一般に、分散物は、基本分散媒と上記成分から選択される他の必要成分とを含む無菌ビヒクル中に活性化合物を混合することによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分と任意の所望の追加成分との粉末を、あらかじめ無菌ろ過したその溶液から生成する、真空乾燥及び噴霧乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径を維持することによって及び界面活性剤を使用することによって、維持することができる。注射用組成物の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に入れることによって延長することができる。
【０２７５】
本発明の抗体及び抗体部分は、当分野で公知である種々の方法によって投与することができるが、多くの治療用途では、好ましい経路／投与方法は皮下注射、静脈内注射又は注入である。当業者には理解されるように、投与の経路及び／又は方法は所望の結果に応じて変わる。ある実施形態において、活性化合物は、移植片、皮膚貼付剤及びマイクロカプセル送達系を含めて、制御放出製剤などの急速放出に対して化合物を保護する担体と一緒に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤を調製する多数の方法が特許化され、又は当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照されたい。
【０２７６】
ある実施形態において、本発明の抗体又は抗体部分を、例えば、不活性希釈剤、又は同化可能な食用担体と一緒に経口投与することができる。この化合物（及び必要に応じて他の成分）は、硬若しくは軟ゼラチンカプセルに封入することもでき、圧縮して錠剤にすることもでき又は対象の食事に直接混合することもできる。経口治療投与の場合、この化合物は、賦形剤と一緒に混合することができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェーハ剤などの剤形で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外で投与するために、その不活性化を防止する材料で化合物を被覆することが必要な場合があり又はその不活性化を防止する材料とこの化合物を同時投与することが必要な場合もある。
【０２７７】
追加の活性化合物を組成物に混合することもできる。ある実施形態において、本発明の抗体又は抗体部分は、ＩＬ−１２活性が有害である障害の治療に有用である１種類以上の追加の治療薬と同時処方及び／又は同時投与される。例えば、本発明の抗ｈＩＬ−１２抗体又は抗体部分を、他の標的に結合する１種類以上の追加の抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体、又は細胞表面分子に結合する抗体）と同時処方及び／又は同時投与することができる。また、本発明の１種類以上の抗体を上記治療薬の２種類以上と併用することもできる。かかる併用療法は、投与治療薬のより少ない投与量を有利に利用することができ、したがって種々の単独療法に付随して起こり得る毒性又は合併症を回避することができる。本発明の抗体を併用療法の一部として使用するときには、抗体のみを対象に投与するときよりも低用量の抗体が望ましい場合があることを当業者は理解する（例えば、相乗的治療効果が併用療法の使用によって得られる場合があり、併用療法の使用によって、より低用量の抗体を使用して、所望の治療効果を得ることができる。）。
【０２７８】
インターロイキン１２は、免疫及び炎症性要素を含む多様な疾患に関連する病理に重要な役割を果たす。これらの疾患としては、リウマチ様関節炎、骨関節炎、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾せん性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰よう性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、ぜん息、アレルギー疾患、乾せん、皮膚炎  強皮症、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に付随する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫よう、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性、多内分泌腺機能低下Ｉ型及び多内分泌腺機能低下ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾せん性関節症、潰よう性結腸炎性関節症、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水ほう症、尋常性天ぽうそう、落葉状天ほうそう、類天ほうそう、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｃ型肝炎、一般的な種々の（ｃｏｍｍｏｎ  ｖａｒｉｅｄ）免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、特発性線維化肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、リウマチ様関節炎関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬剤性間質性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ性浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫に付随するＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に付随する急性免疫疾患、臓器移植に付随する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、特定不能な（ＮＯＳ）腎疾患、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性又は特定不能な男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、イン��リン依存性糖尿病、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺病変、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎及び白斑が挙げられるが、これらだけに限定されない。本発明のヒト抗体及び抗体部分は、リウマチ性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎を含めて、自己免疫疾患、特に、炎症に関連する自己免疫疾患の治療に使用することができる。
【０２７９】
好ましくは、本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ＶＩＩ節により詳細に記述するように、リウマチ様関節炎、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及び乾せんの治療に使用される。
【０２８０】
本発明のヒト抗体又は抗体部分は、自己免疫疾患及び炎症性疾患の治療に有用である１種類以上の追加の治療薬と一緒に投与することもできる。
【０２８１】
本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、かかる疾患の治療に単独で、又は組み合わせて使用することができる。本発明のＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分は、単独で、又は追加の薬剤、例えば治療薬と組み合わせて、使用できることを理解すべきである。追加の薬剤は、その意図する目的に合わせて、当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本発明の抗体によって治療される疾患又は症状の治療に有用であると当分野で認識されている治療薬であり得る。追加の薬剤は、治療用組成物に有益な特質を付与する薬剤、例えば、組成物に粘性をもたらす薬剤でもあり得る。
【０２８２】
さらに、本発明に包含される組合せは、その意図する目的に有用である組合せであることを理解すべきである。以下の薬剤は、説明のためのものであって、限定的なものではない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体と、下表から選択される少なくとも１種類の追加の薬剤であり得る。組合せは、形成される組成物がその意図した機能を果たすことができるような組合せである場合、１種類を超える追加の薬剤、例えば、２又は３種類の追加の薬剤を含むこともできる。また、ＩＬ−１２抗体と併用される本明細書に記載の追加の薬剤は、治療のためにそれらの原因である障害に限定されない。
【０２８３】
好ましい組合せは、イブプロフェンのような薬物を含めて、ＮＳＡＩＤとも称される非ステロイド性抗炎症薬である。別の好ましい組合せは、プレドニゾロンを含めたコルチコステロイドである。ステロイド使用の周知の副作用は、本発明の抗ＩＬ−１２抗体と組み合わせて患者を治療するときに必要なステロイド用量を漸減させることによって軽減することができ又は排除することさえできる。本発明の抗体又は抗体部分と組み合わせることができるリウマチ様関節炎治療薬の非限定的例としては、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、他のヒトサイトカイン又は成長因子、例えば、（アダリムマブ／ＨＵＭＩＲＡを含めた）ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦに対する抗体又は拮抗物質が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０又はこれらのリガンド（ＣＤ１５４（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ）を含む。）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０２８４】
治療薬の好ましい組合せは、自己免疫とそれに続く炎症カスケードの異なるポイントにおいて干渉し得る。好ましい例としては、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７、（１９９６年２月９日に出願された米国特許出願第０８／５９９，２２６号）、ｃＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ  ５７１、抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＤＰ８７０）、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、その誘導体、（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）のようなＴＮＦ拮抗物質、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）、並びにＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が挙げられる。同様に、ＩＬ−１阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０、ＩＬ−１ＲＡなどのインターロイキン１変換酵素阻害剤）も同じ理由で有効であり得る。他の好ましい組合せは、インターロイキン１１、抗Ｐ７ｓ及びｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）を含む。更に別の好ましい組合せは、ＩＬ−１２機能と並行して、ＩＬ−１２機能に依存して又はＩＬ−１２機能と協調して作用し得る自己免疫応答の他の重要な物質（ｋｅｙ  ｐｌａｙｅｒ）である。特に好ましいのは、ＩＬ−１８抗体若しくは可溶性ＩＬ−１８受容体を含めたＩＬ−１８拮抗物質又はＩＬ−１８結合タンパク質である。ＩＬ−１２とＩＬ−１８は、重複するが、別個の機能を有し、ＩＬ−１２とＩＬ−１８の両方に対する拮抗物質の組合せが最も有効であり得ることが示された。更に別の好ましい組合せは、非減少性（ｎｏｎ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）抗ＣＤ４阻害剤である。更に別の好ましい組合せとしては、抗体、可溶性受容体又は拮抗性リガンドを含めた、同時刺激経路の拮抗物質ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）が挙げられる。
【０２８５】
抗ＩＬ１２抗体又はその抗原結合性部分は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリン  スルファサラジン、メサラジン、オルサラジン  クロロキニーネ／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオリンゴ酸塩（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、ベータ−２アドレナリン受容体作動物質（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン（ａｄｅｎｓｏｓｉｎｅ）作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦα、ＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体及び誘導体Ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３））、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）などの薬剤と組み合わせることもできる。好ましい組合せは、メトトレキサート又はレフルノミドを含み、中度又は重度のリウマチ様関節炎の症例では、シクロスポリンを含む。
【０２８６】
抗ＩＬ−１２抗体又は抗体部分と組み合わせることができる炎症性腸疾患治療薬の非限定的例としては、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体拮抗物質、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、他のヒトサイトカイン又は成長因子、例えば、（アダリムマブ／ＨＵＭＩＲＡを含めた）ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦに対する抗体又は拮抗物質が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦα、ＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３））及び抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）などの薬剤と組み合わせることもできる。
【０２８７】
抗体又は抗原結合性部分と組み合わせることができるクローン病治療薬の好ましい例としては、ＴＮＦ拮抗物質、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（アダリムマブ／ＨＵＭＩＲＡ）、ｃＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ  ５７１、抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＤＰ８７０）、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）及びＰＤＥ４阻害剤が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシド及びデキサメタゾンと組み合わせることができる。抗体は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジン、ＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインの合成又は作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）及びＩＬ−１ｒａなどの薬剤と組み合わせることもできる。抗体又はその抗原結合性部分は、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンと併用することもできる。抗体又はその抗原結合性部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることができる。
【０２８８】
抗体又は抗体部分と組み合わせることができる多発性硬化症治療薬の非限定的例としては、コルチコステロイド、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、４−アミノピリジン、チザニジン、インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ、Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンβ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ、Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１、Ｃｏｐａｘｏｎｅ、Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、クラドリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）、他のヒトサイトカイン又は成長因子、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦに対する抗体又は拮抗物質が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０又はこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＴＮＦα、ＩＬ−１などの炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体及びその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３））及び抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）などの薬剤と組み合わせることもできる。
【０２８９】
抗体又はその抗原結合性部分と組み合わせることができる多発性硬化症治療薬の好ましい例としては、インターフェロンβ、例えば、ＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮβ１ｂ；Ｃｏｐａｘｏｎｅ、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤並びにＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０２９０】
抗体、抗体部分は、別の皮膚症状治療薬と併用することができる。例えば、本発明の抗体、抗体部分又は別のＩＬ−１２阻害剤をＰＵＶＡ治療と組み合わせる。ＰＵＶＡは、多種多様な皮膚症状の治療に使用される、ソラレン（ｐ）と長波長紫外線（ＵＶＡ）の組合せである。本発明の抗体、抗体部分又は別のＩＬ−１２阻害剤は、ピメクロリムスと組み合わせることもできる。別の一実施形態において、本発明の抗体を、該抗体をタクロリムスと組み合わせて投与する、乾せん治療に使用する。更なる一実施形態において、タクロリムス及びＩＬ−１２阻害剤をメトトレキサート及び／又はシクロスポリンと組み合わせて投与する。更に別の一実施形態において、本発明のＩＬ−１２阻害剤を、乾せん治療のためにエキシマレーザー治療と組み合わせて投与する。
【０２９１】
本発明の薬剤組成物は、本発明の抗体又は抗体部分の「治療有効量」又は「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の治療成果を得るのに有効な量を指す。抗体又は抗体部分の治療有効量は、個体の病態、年齢、性別及び体重、抗体又は抗体部分が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変わり得る。治療有効量は、抗体又は抗体部分の任意の毒性効果又は有害効果よりも治療上有益な効果がまさる量でもある。「予防有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の予防成果を得るのに有効な量を指す。典型的には、予防投与量は疾患前又は初期に対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【０２９２】
投与計画は、所望の最適応答（例えば、治療反応又は予防反応）が得られるように調節することができる。例えば、単一ボーラスを投与することができ、幾つかの分割用量をある期間にわたって投与することができ又は投与量を治療状況の緊急性に比例して増減することができる。投与を容易にし、投与量を均一にするために、非経口組成物を単位用量形態で処方することが特に有利である。本明細書では単位用量形態とは、治療すべきほ乳動物対象に対する単位投与量として適切な物理的に分離した単位を指す。各単位は、必要な薬剤担体と一緒に、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の単位用量形態の仕様は、（ａ）活性化合物特有の特性及び達成すべき特定の治療又は予防効果並びに（ｂ）個体における感受性に対処してかかる活性化合物を配合する技術に固有の制約に従う及び直接左右される。
【０２９３】
一実施形態において、ＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分を、例えば、隔週投与量約５０から３００ｍｇ、投与量約１００ｍｇから約２００ｍｇ及び投与量約１２５から約１７５ｍｇを含めて、隔週投与計画で投与する。或いは、ＩＬ−１２抗体を、例えば、用量約２００ｍｇ、用量約１００ｍｇを含めて、一括投与することができる。別の一実施形態において、ＩＬ−１２抗体を、例えば、用量約５０から３００ｍｇ、投与量約１００ｍｇから約２００ｍｇ、及び投与量約１２５から約１７５ｍｇを含めて、毎週投与計画で投与する。指定範囲内の用量、例えば、８５ｍｇ、９７ｍｇなども本発明に含まれることに留意されたい。
【０２９４】
別の一実施形態において、ヒトＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分を、ＩＬ−１２活性が有害である障害、例えば乾せんを有する対象に単回投与して、治療する。ＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分に対する応答は、対象において長期間維持することができる。応答の維持は、治療する障害に応じてモニターすることができる。例えば、乾せん治療に対するＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分を用いた応答の維持は、対象のＰＡＳＩ７５応答によって経時的に判断することができる。
【０２９５】
投与量は、軽減すべき症状のタイプ及び重症度とともに変わり得ることに留意すべきである。さらに、特定の対象のいずれについても、具体的投与計画は、個々の必要性、及び組成物の投与者又は投与管理者の専門的判断に従って、経時的に調節すべきであり、本明細書に記載する投与量範囲は単なる例示にすぎず、特許請求の範囲に記載の組成物の範囲又は実施を限定するものではないことを理解すべきである。
【０２９６】
ＶＩＩ．  本発明の使用
本発明は、ＩＬ−１２活性が有害である障害に罹患した対象におけるＩＬ−１２活性を阻害する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２抗体又はその抗原結合性部分を単回投与することを含む、乾せんを治療する方法を提供する。
【０２９７】
ＩＬ−１２は、多種多様な障害の病態生理に関係している（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８２：  １９８５−１９９６；  Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ．  ４１：  ３０６−３１４；  Ｂｕｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０３：  ３４７−３６７；  Ｆａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．  １４：  ２３５−２３８；  Ｐａｒｒｏｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．  １５０：  ８２３−８３２；  Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  １１２：  １１６９−１１７８、及びＢｅｒｒｅｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ  １５２：  ６６７−６７２；  Ｐａｒｒｏｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．  １５０：  ８２３−８３２）。本発明は、対象におけるＩＬ−１２活性を阻害するように本発明の抗体又は抗体部分を対象に投与することを含む、かかる障害に罹患した対象におけるＩＬ−１２活性を阻害する方法を提供する。好ましくは、ＩＬ−１２はヒトＩＬ−１２であり、対象はヒト対象である。或いは、対象は、本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１２を発現するほ乳動物であり得る。さらに、対象は、（例えば、ｈＩＬ−１２の投与、又はｈＩＬ−１２導入遺伝子の発現によって）ｈＩＬ−１２が導入されたほ乳動物であり得る。本発明の抗体は、（以下で更に考察する）治療目的でヒト対象に投与することができる。さらに、本発明の抗体は、獣医学目的で、又はヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＩＬ−１２を発現する非ヒトほ乳動物に投与することができる。ヒト疾患の動物モデルに関して、かかる動物モデルは、本発明の抗体の治療効果を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量及び投与の時間的経過の試験）。
【０２９８】
本明細書では「ＩＬ−１２活性が有害である障害」という句は、障害に罹患した対象におけるＩＬ−１２の存在が、障害の病態生理の原因又は障害の悪化の一因であることが判明した又はその疑いがある疾患及び他の障害を含むものとする。したがって、ＩＬ−１２活性が有害である障害は、ＩＬ−１２活性の阻害によって障害の症候及び／又は進行が軽減されると予想される障害である。かかる障害は、例えば、障害に罹患した対象の体液のＩＬ−１２濃度の上昇（例えば、対象の血清、血しょう、滑液などのＩＬ−１２濃度の上昇）によって明らかになり得る。ＩＬ−１２濃度の上昇は、例えば、上記抗ＩＬ−１２抗体を用いて検出することができる。ＩＬ−１２活性が有害である障害の例は多数ある。一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、本明細書に記載の疾患又は障害を治療する治療法に使用することができる。別の一実施形態において、抗体又はその抗原結合性部分は、本明細書に記載の疾患又は障害の治療用医薬品の製造に使用することができる。少数の非限定的具体的障害の治療における本発明の抗体及び抗体部分の使用を以下で更に考察する。
【０２９９】
Ａ．  リウマチ様関節炎：
インターロイキン１２は、リウマチ様関節炎などの炎症性疾患においてある役割を果たすことに関係している。誘導性ＩＬ−１２ｐ４０メッセージが、リウマチ様関節炎患者から得られた滑液中に検出され、ＩＬ−１２が、リウマチ様関節炎患者から得られた滑液中に存在することが示された（例えば、Ｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４１：  ３０６−３１４参照）。ＩＬ−１２陽性細胞が、リウマチ様関節炎滑膜の下内層中に存在することが見いだされた。本発明のヒト抗体及び抗体部分は、例えば、リウマチ様関節炎、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、リウマチ性脊椎炎、骨関節炎及び通風性関節炎の治療に使用することができる。典型的には、抗体又は抗体部分は全身投与されるが、ある種の疾患では、抗体又は抗体部分の局所投与が有益であり得る。本発明の抗体又は抗体部分は、自己免疫疾患の治療に有用である１種類以上の追加の治療薬と一緒に投与することもできる。
【０３００】
リウマチ様関節炎のコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）ネズミモデルにおいて、関節炎の前に抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（ラット抗マウスＩＬ−１２モノクローナル抗体Ｃ１７．１５）でマウスを処理すると、疾患の発症が大幅に抑制され、疾患の発生率及び重症度が低下した。関節炎の発症後早期に抗ＩＬ−１２ｍＡｂで処理すると重症度が低下したが、疾患の発症後、抗ＩＬ−１２ｍＡｂによるマウスの処理が遅いと、疾患の重症度に対する効果が最低であった。
【０３０１】
Ｂ．  クローン病
インターロイキン１２は、炎症性腸疾患であるクローン病においてもある役割を果たす。ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１２の発現は、クローン病患者の腸管粘膜中で増加する（例えば、Ｆａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ｊ．  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．  １４：  ２３５−２３８；  Ｐａｒｒｏｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ａｍｅｒ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １５０：  ８２３−８３２；  Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１２：  １１６９−１１７８；  Ｂｅｒｒｅｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９８）  Ａｍｅｒ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １５２：  ６６７−６７２参照）。抗ＩＬ−１２抗体は、結腸炎マウスモデル、例えば、ＴＮＢＳ誘導性結腸炎ＩＬ−２ノックアウトマウス、及び最近ではＩＬ−１０ノックアウトマウスにおいて、疾患を抑制することが示された。したがって、本発明の抗体及び抗体部分は、炎症性腸疾患の治療に使用することができる。
【０３０２】
Ｃ．  多発性硬化症
インターロイキン１２は、多発性硬化症の重要な媒介物質として関係付けられた。誘導性ＩＬ−１２  ｐ４０メッセージ又はＩＬ−１２自体の発現は、多発性硬化症患者の病変部にて示され得る（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８２：  １９８５−１９９６、Ｄｒｕｌｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｓｃｉ．  １４７：  １４５−１５０）。慢性進行性の多発性硬化症患者は、高いＩＬ−１２循環レベルを有する。多発性硬化症患者から得られたＴ細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を用いた研究によって、Ｔｈ１型免疫応答をもたらす進行性多発性硬化症の基礎として、永続可能な一連の免疫相互作用が明らかになった。Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ分泌の増加は、ＡＰＣによるＩＬ−１２産生を増加させ、ＩＬ−１２産生の増加は、Ｔｈ１型免疫活性化及び疾患の慢性状態をもたらすサイクルを永続させた（Ｂａｌａｓｈｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ９４：  ５９９−６０３）。多発性硬化症におけるＩＬ−１２の役割が、多発性硬化症のマウス及びラット実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを用いて検討された。マウスにおける多発性硬化症の再発寛解型ＥＡＥモデルにおいて、抗ＩＬ−１２ｍＡｂによる前処理は、麻ひを遅延させ、臨床スコアを低下させた。麻ひのピーク時、又はその後の寛解期中の抗ＩＬ−１２ｍＡｂによる処理は、臨床スコアを低下させた。したがって、本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトにおける多発性硬化症に付随する症候の軽減に役立ち得る。
【０３０３】
Ｄ．  インスリン依存性糖尿病
インターロイキン１２は、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）の重要な媒介物質として関係付けられた。ＩＤＤＭは、ＮＯＤマウスにおいてＩＬ−１２投与によって誘導され、抗ＩＬ−１２抗体は、ＩＤＤＭの養子移入モデルにおいて保護的であった。早期発症型ＩＤＤＭ患者は、残存するある島細胞機能が維持される、いわゆる「ハネムーン期間」を経験することが多い。この残存島細胞はインスリンを産生し、投与されたインスリンよりも良好に血中グルコースレベルを制御する。これらの早期発症患者の抗ＩＬ−１２抗体による処置は、島細胞の更なる破壊を防止し、それによってインスリンの体内源を維持することができる。
【０３０４】
Ｅ．  乾せん
インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及び関連するサイトカインＩＬ−２３は、乾せんにおける重要な媒介物質として関係付けられた。乾せんは、ＴＨ１型サイトカイン発現プロファイルに関連する急性及び慢性皮膚病変部を含む（Ｈａｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １：  ２２５−２３１；  Ｔｕｒｋａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  １：  ６９０−６９９）。ＩＬ−１２及びＩＬ−２３の両方は、乾せんにおける１型Ｔヘルパー細胞（Ｔｈ１）免疫応答の発生の一因になる。さらに、ＩＬ−１２  ｐ４０及びＩＬ−２３  ｐ４０メッセンジャーＲＮＡは、乾せん皮膚病変部において過剰発現される。したがって、本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、乾せんなどの慢性皮膚疾患の軽減に役立ち得る。
【０３０５】
一実施形態において、本発明は、乾せん治療方法を提供する。乾せんの治療は、局所的コルチコステロイド、ビタミンＤアナログ及び局所的若しくは経口レチノイド又はこれらの組合せを含むことが多い。一実施形態において、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３抗体を、これらの一般的治療の１つと組み合わせて又はその存在下で投与する。乾せんの治療にＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３抗体と組み合わせることができる追加の治療薬を以下により詳細に記述する。
【０３０６】
乾せんの診断は、通常、皮膚の外観に基づく。さらに、皮膚生検又は皮膚斑点の擦過標本及び培養物が、他の皮膚疾患を除外するのに必要になり得る。関節痛があり持続する場合には、ｘ線を使用して、乾せん性関節炎を検査することができる。
【０３０７】
対象における乾せんの改善は、対象の乾せん面積及び重症度指数スコア（Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ  Ｓｃｏｒｅ）（ＰＡＳＩ）によってモニターすることができる。ＰＡＳＩを決定する方法は、Ｆｒｅｄｒｉｋｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  （１９７８）  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １５７：  ２３８、及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １２５：  ２３５に記載されている。手短に述べると、この指数は、頭部、上肢、体幹及び下肢を含めた４箇所の解剖部位の紅斑、硬結及び落屑についての５段階評価（０＝無症候、１＝軽微、２＝中度、３＝顕著、４＝極めて顕著）に基づく。所与の解剖部位における病変部の程度に基づいて、患部に数値を割り当てる（０＝０、１＝＜１０％、２＝１０−２９％、３＝３０−４９％、４＝５０−６９％、５＝７０＝８９％、６＝９０−１００％）。次いで、ＰＡＳＩスコアを計算する。ＰＡＳＩスコアの可能な範囲は０．０から７２．０であり、最高スコアは、最も重度の完全な紅皮症を表す。
【０３０８】
本発明の一実施形態において、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３抗体は、慢性尋常性乾せん、滴状乾せん、逆性乾せん、膿ほう性乾せん、尋常性天ぽうそう、乾せん性紅皮症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に付随する乾せん、及びリウマチ様関節炎（ＲＡ）に付随する乾せんを含めて、乾せんの治療に使用される。別の一実施形態において、Ｊ６９５／ＡＢＴ−８７４などのＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３抗体は、乾せんを有する対象の治療にＰｓＡと併用される。本発明の治療方法に含まれる乾せんの具体的タイプを以下に詳細に記述する。
【０３０９】
ａ．  慢性尋常性乾せん
尋常性乾せんとも称される慢性尋常性乾せんは、乾せんの最も一般的な形態である。慢性尋常性乾せんは、硬貨の大きさからはるかに大きなものまで、膨れた赤い皮膚斑点を特徴とする。慢性尋常性乾せんにおいては、プラークは、単一の場合も複数の場合もあり、数ミリメートルから数センチメートルまで大きさが変動し得る。プラークは、通常、赤く、鱗状表面を有し、軽くひっかくと光を反射して、「銀白色」効果を示す。慢性尋常性乾せん由来の対称的であることが多い病変部は、体全面に生じるが、膝、肘、腰仙部、頭皮及び爪を含めて伸側面に好発する。慢性尋常性乾せんは、時折、陰茎、外陰部及び弯曲部に発生し得るが、鱗は通常ない。慢性尋常性乾せん患者の診断は、通常、臨床上の上記特徴に基づく。特に、慢性尋常性乾せんの病変部の分布、色及び典型的な銀白色の鱗屑は、慢性尋常性乾せんに特徴的である。
【０３１０】
ｂ．  滴状乾せん
滴状乾せんとは、特徴的な水滴形状の鱗状プラークを有する乾せんの一形態を指す。滴状乾せんの発赤は、一般に、感染、最も顕著には連鎖球菌性咽頭感染後に起こる。滴状乾せんの診断は、通常、皮膚の外観、及び最近の咽頭炎の病歴がある場合が多いという事実に基づく。
【０３１１】
ｃ．  逆性乾せん
逆性乾せんは、患者が、赤く炎症を起こした滑らかで通常は湿った皮膚領域を有する乾せんの一形態であり、尋常性乾せんに付随する鱗とは異なる。逆性乾せんは、間擦性（ｉｎｔｅｒｔｉｇｉｎｏｕｓ）乾せん又は間擦疹型乾せんとも称される。逆性乾せんは、大部分がえきか、鼠径部、乳房の下、並びに生殖器及びでん部周囲の他の皮膚のしわに発生し、その発生場所の結果として、こすること及び発汗は患部を刺激し得る。
【０３１２】
ｄ．  膿ほう性乾せん
膿ほう性乾せんは、手掌足底乾せん（ｐａｌｍａｒ  ｐｌａｎｔａｒ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）とも称され、大きさや位置は異なるが、手や足に発生することが多い膿ほうを生じる乾せんの一形態である。ほう疹は、局所的である場合もあれば、体の大きな領域に広がる場合もある。膿ほう性乾せんは、圧痛があり、有痛性であり、発熱し得る。
【０３１３】
ｅ．  他の乾せん障害
ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３抗体によって治療することができる乾せん障害の他の例としては、乾せん性紅皮症、尋常性、ＩＢＤに付随する乾せん、及びリウマチ様関節炎を含めた関節炎に付随する乾せんが挙げられる。
【０３１４】
本発明を以下の実施例によって更に説明するが、これらの実施例は限定するものとして決して解釈してはならない。本願を通して引用する文献、発行特許及び公開特許出願を含めて、すべての引用参考文献の内容を参照により本明細書に明示的に組み入れる。本明細書に添付するすべての表の内容（米国特許第６，９１４，１２８号のＡｐｐｅｎｄｉｘ  Ａ参照）、及び米国特許第６，９１４，１２８号の内容全体が参照により本明細書に組み入れられることを更に理解すべきである。
【実施例１】
【０３１５】
中度から重度の尋常性乾せんの治療における、完全ヒトＩＬ−１２／ＩＬ−２３モノクローナル抗体ＡＢＴ−８７４の有効性
ＡＢＴ−８７４は、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及びＩＬ−２３に対する完全ヒト抗体である。ＡＢＴ−８７４は、乾せん（Ｐｓ）治療における有効な標的である、ＩＬ−１２とＩＬ−２３に共通したｐ４０サブユニットに高親和性で結合する。
【０３１６】
以下の試験の目的は、中度から重度の尋常性Ｐｓ患者の治療において、ＡＢＴ−８７４の皮下注射の有効性を評価することであった。
【０３１７】
ベースラインで≧１０％体表面積（ＢＳＡ）が罹患し、乾せんの面積と重症度指数（ＰＡＳＩ）スコア≧１２の成人Ｐｓ患者は、この１２週間の二重盲検プラセボ対照試験に適格であった。患者を以下の６集団（ａｒｍ）の１つに無作為化した：１）ＡＢＴ−８７４  １００ｍｇ隔週（ｅｏｗ）１２週間、２）第０週にＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  １回投与、３）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週４週間、４）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  ｅｏｗ  １２週間、５）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週１２週間、又は６）プラセボ。主要評価項目は、第１２週における≧ＰＡＳＩ７５応答であった。別の有効性評価としては、ＰＡＳＩ５０及び医師の全体的評価（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（ＰＧＡ）が挙げられた。主要評価項目を満たした患者は、３６週間の盲検／再処置段階を開始し、応答消失時間がモニターされた。
【０３１８】
合計１８０名の患者が試験に登録された（各集団３０名）。ベースライン特性は、集団間で類似しており、中度から重度のＰｓを示した（男性％を除く全平均値）：年齢４６歳、男性７４％；Ｐｓ期間２１年；ＰＡＳＩ１９；及び罹患ＢＳＡ  ２５％。第１２週において、≧ＰＡＳＩ７５に達した患者の割合は、５つのＡＢＴ−８７４集団の各々における患者がプラセボよりも統計的に有意に高かった（それぞれ、９３％、６３％、９０％、９３％、９０％と３％、ｐ＜０．００１、ＩＴＴ）。また、≧ＰＡＳＩ５０に達した患者の割合は、５つのＡＢＴ−８７４集団の各々における患者がプラセボよりも統計的に有意に高かった（１００％、７７％、９７％、９７％及び１００％と１７％、ｐ＜０．００１）。第１２週におけるＰＡＳＩの平均低下率（改善）は、ＡＢＴ−８７４集団においてそれぞれ９０％、７０％、９２％、９２％及び９０％であり、プラセボで２６％であった。同様に、正常／最小のＰＧＡ患者の割合は、ＡＢＴ−８７４集団においてそれぞれ８３％、５０％、７３％、８７％及び８７％であり、プラセボで３％であった。
【０３１９】
結論として、ＡＢＴ−８７４は、中度から重度の尋常性乾せんの治療においてプラセボよりも有意に効果的であった。
【実施例２】
【０３２０】
中度から重度の尋常性乾せんの治療における、完全ヒトＩＬ−１２／−２３モノクローナル抗体ＡＢＴ−８７４の安全性及び有効性
ＡＢＴ−８７４は、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）及びＩＬ−２３に対する完全ヒト抗体である。ＡＢＴ−８７４は、乾せん（Ｐｓ）治療における有効な標的である、ＩＬ−１２とＩＬ−２３に共通したｐ４０サブユニットに高親和性で結合する。この第二相試験の目的は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療において、ＡＢＴ−８７４の皮下注射の有効性及び安全性を検討することであった。
【０３２１】
≧１０％体表面積（ＢＳＡ）が罹患し、ＰＡＳＩスコア≧１２のＰｓを有する成人は、この１２週間の二重盲検プラセボ対照試験に適格であった。患者を以下の６集団の１つに無作為化した：１）ＡＢＴ−８７４  １００ｍｇ隔週（ｅｏｗ）１２週間、２）第０週にＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  １回投与、３）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週４週間、４）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  ｅｏｗ  １２週間、５）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週１２週間、又は６）プラセボ。主要評価項目は、第１２週における≧ＰＡＳＩ７５応答であった。主要評価項目を満たした患者は、３６週間の盲検／再処置段階を開始し、応答消失時間がモニターされた。全患者を安全性について５４週にわたって評価した。
【０３２２】
１８０名の患者が登録した（各集団３０名）。ベースライン特性は集団間で類似した（男性％を除く平均値）：年齢４６歳、男性７４％；Ｐｓ期間２１年；ＰＡＳＩ＝１９；及び罹患ＢＳＡ  ２５％。第１２週において、≧ＰＡＳＩ７５の患者％は、５つのＡＢＴ−８７４集団の各々においてプラセボよりも統計的に有意に高かった（それぞれ、９３％、６３％、９０％、９３％、９０％と３％、ｐ＜０．００１、ＩＴＴ）。１２週のＤＢ期間中、ＡＢＴ−８７４群の感染性ＡＥは２３−４３％の範囲であり、プラセボ群は２３％であり、最も一般的なのは鼻咽頭炎であった（ＡＢＴ−８７４で７−１７％、プラセボで３％）。集団間で統計的有意差はなかった。重篤な感染性ＡＥは報告されず、死亡者（ｄｅａｔｈ）もいなかった。
【０３２３】
結論として、ＡＢＴ−８７４は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療においてプラセボよりも有意に効果的であり、良好な安全性プロファイルを有すると考えられる。
【実施例３】
【０３２４】
中度から重度の尋常性乾せんの治療における、完全ヒトＩＬ−１２／−２３モノクローナル抗体ＡＢＴ−８７４を用いた応答の維持
ＡＢＴ−８７４の有効性及び安全性を、１２週間の第二相無作為化管理下試験及び３６週間の経過観察期において評価した。以下の実施例の目的は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療において、ＡＢＴ−８７４の皮下注射のこの第二相試験の第２の１２週間中の療法中止後の応答の維持を分析することであった。
【０３２５】
≧１０％体表面積（ＢＳＡ）が罹患し、ＰＡＳＩスコア≧１２のＰｓを有する成人は、この１２週間の二重盲検プラセボ対照試験に適格であった。患者を以下の６集団の１つに無作為化した：
１）ＡＢＴ−８７４  １００ｍｇ隔週（ｅｏｗ）１２週間、
２）第０週にＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  １回投与、
３）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週４週間、
４）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  ｅｏｗ  １２週間、
５）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週１２週間、又は
６）プラセボ。
【０３２６】
主要評価項目は、第１２週における≧ＰＡＳＩ７５応答であった。主要評価項目を満たした患者は、３６週間の盲検／再処置段階を開始した。試験薬物による治療を中止し、患者の応答消失時間（３６週間の経過観察期間中の任意の時点におけるＰＡＳＩスコアの＜ＰＡＳＩ５０への低下）をモニターした。ＰＡＳＩ応答の維持を２４週間評価した。
【０３２７】
合計１８０名の患者が登録した（各集団３０名）。ベースライン特性は集団間で類似した（男性％を除く平均値）：年齢４６歳、男性７４％；Ｐｓ期間２１年；ＰＡＳＩ＝１９；及び罹患ＢＳＡ  ２５％。第１２週において、≧ＰＡＳＩ７５の患者の割合は、５つのＡＢＴ−８７４集団の各々がプラセボよりも統計的に有意に高かった（表１）。
【０３２８】
第２４週において、積極的治療集団におけるＰＡＳＩ７５応答者のかなりの割合が少なくともＰＡＳＩ５０の応答を維持した。
【０３２９】
【表２】
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【０３３０】
結論として、ＡＢＴ−８７４は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療においてプラセボよりも有意に効果的であった。ＰＡＳＩ７５応答者のかなりの割合は、積極的治療の中止後、第２４週においてこれらの応答を維持した。
【実施例４】
【０３３１】
中度から重度の慢性尋常性乾せんの治療における、完全ヒトＩＬ−１２／−２３モノクローナル抗体ＡＢＴ−８７４の安全性及び有効性
以下の実施例の目的は、臨床的に安定な中度から重度の慢性尋常性乾せん患者の治療において、ある範囲の用量のヒトＩＬ−１２／２３モノクローナル抗体（ＡＢＴ−８７４）の有効性及び安全性をプラセボと比較して示すことであった。
【０３３２】
Ｉ．  材料及び方法
Ａ．  試験設計：  以下の試験は、米国（１６箇所）及びカナダ（８箇所）の２４施設で実施された１２週間の多施設無作為二重盲検第二相プラセボ対照試験であった。ＡＢＴ−８７４（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）は、ＩＬ−１２／２３  ｐ４０サブユニットタンパク質に対して高親和性を有する、遺伝子操作された相補性決定領域を含むヒトモノクローナル抗体である。患者は、１：１：１：１：１：１比で無作為化され、以下の６つの処置の１つを受けた：ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ、第０週１回（２００ｍｇ×１）；ＡＢＴ−８７４  １００ｍｇ隔週（ｅｏｗ）１２週間（１００ｍｇ  ｅｏｗ）；ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ最初の４週間毎週（２００ｍｇ×４）；ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  ｅｏｗ  １２週間（２００ｍｇ  ｅｏｗ）；ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週１２週間（２００ｍｇ毎週）；又はプラセボ。第１２週後、乾せんの面積と重症度指数（ＰＡＳＩ７５）応答が少なくとも７５％低下した患者はすべて、継続して３６週間の盲検観察／再処置期に入った。
【０３３３】
Ｂ．  患者：  患者は≧１８歳であり、患者問診、及び研究者による理学的検査を通した診断の確認によって判定される乾せんの臨床診断を少なくとも６か月有し、スクリーニング前のベースライン来診時に対象問診で判断して安定な尋常性乾せんを少なくとも２か月有し、ベースライン来診における≧１０％体表面積（ＢＳＡ）の関与によって定義される中度から重度の尋常性乾せんを有し、ベースライン来診においてＰＡＳＩスコア≧１２を有し、ベースライン来診において少なくとも中度疾患の医師の全体的評価（ＰＧＡ）を有した。
【０３３４】
全身的若しくは生物学的抗ＩＬ−１２療法への以前の曝露；非尋常性乾せん；ベースライン来診前に以下の治療を中止できないこと：少なくとも２週間前の局所的乾せん療法、少なくとも２週間前の紫外線Ｂ光線療法、少なくとも４週間前のソラレン−紫外線光線療法、少なくとも４週間前の全身療法、及び少なくとも１２週間前の生物学的療法；試験中の経口若しくは注射用コルチコステロイドの摂取が必要なこと（安定な病状のための吸入コルチコステロイドは許容された。）；スクリーニング前１０年間における入院を要するぜん息の悪化；感染症、若しくは重症感染症の危険因子；治療に成功した基底細胞癌以外の悪性腫よう（へん平上皮癌の病歴を有する患者を除外した。）若しくは頚部上皮内癌の病歴；又は免疫グロブリンＧ含有薬剤（例えば、静脈内ガンマグロブリン、融合タンパク質又はモノクローナル抗体）に対する重大な免疫反応（例えば、血清病又はアナフィラキシー様反応）の病歴を有する場合、患者は不適格であった。
【０３３５】
患者は、試験の過程において、手掌、足底、顔、乳房下部及び鼠径部に、コルチコステロイドを含まない薬用シャンプー、無刺激（ベータ又はアルファヒドロキシ酸を含まない）皮膚軟化薬、又はクラスＶＩ若しくはＶＩＩ低効力局所コルチコステロイドによる処置を続けることができた。これらの局所的乾せん療法は、試験来診の２４時間以内には適用されなかった。ＡＢＴ−８７４投薬前１か月以内、試験中、及び最後の試験薬物投与後１か月間は、生のウイルス薬のワクチン接種を禁止した。
【０３３６】
以下の臨床的に有意な異常検査結果のいずれかが発生した場合、患者は試験から即時に離脱した：アスパラギン酸トランスアミナーゼ若しくはアラニントランスアミナーゼ＞正常上限の５倍、血清総ビリルビン＞正常上限の３倍、血清クレアチニン＞正常上限の３倍、クレアチンホスホキナーゼ＞正常上限の５倍、ヘモグロビン＜８ｇ／ｄＬ、白血球数＜２×１０９／Ｌ、又は血小板数＜７５×１０９／Ｌ。
【０３３７】
Ｃ．  有効性評価：  主要有効性評価は、ベースラインスコアに対して少なくとも７５％のＰＡＳＩスコアの低下として定義される、第１２週におけるＰＡＳＩ７５応答に達した患者の割合であった。ＰＡＳＩは、（紅斑、硬結及び落屑の点で）乾せん病変部の重症度、及びＢＳＡ関与の程度の尺度である。ＰＡＳＩスコアは、０（乾せんなし）から７２（重度疾患）の範囲である（Ｆｒｅｄｒｉｋｓｓｏｎ  Ｔ，  Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  Ｕ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １９７８；  １５７：  ２３８−４４）。別の有効性の尺度としては、第１、２、４及び８週において少なくともＰＡＳＩ７５に達した患者の割合、第１、２、４、８及び１２週において少なくともＰＡＳＩ５０又はＰＡＳＩ９０に達した患者の割合、並びに第１２週及び第１、２、４及び８週において正常又は最小のＰＧＡに達した患者の割合が挙げられた。ＰＧＡは、疾患の重症度を０（疾患なし、すなわち正常）から５（極めて重度）の６段階で評価する（４９ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ；  Ｍａｒｃｈ  ２０，  １９９８；  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤで口頭発表された、Ｋｏ  Ｈ−Ｓ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．）。
【０３３８】
Ｄ．  安全性評価：  有害事象、検査値及び生命徴候を試験を通して評価した。患者を感染、悪性腫よう及び免疫反応の徴候について綿密にモニターした。試験治療下で発現したＡＥは、第０週から、最後の非欠損（ｎｏｎｍｉｓｓｉｎｇ）試験薬物投与後４５日間の初期まで、又は（３６週間の試験を続行した患者の場合）初回再処置投与の１日前までに発生した事象として定義された。
【０３３９】
Ｅ．  統計解析：  試料サイズをｎＱｕｅｒｙ  Ａｄｖｉｓｏｒ（登録商標）４．０（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｓａｕｇｕｓ、ＭＡ）によって計算した。プラセボ群の患者の１５％が第１２週にＰＡＳＩ７５応答に達するという仮定で、試験設計者は、各投与群で２６の試料サイズが、処置群からの少なくとも４５％の差を検出力９０％のフィッシャーの正確確率検定によって両側有意水準０．０５で検出するのに十分であると判断した。試験は、約１８０名の患者（各群３０名の患者）を登録するように設計された。
【０３４０】
治療意図集団は、第０週に無作為化され、少なくとも１回の試験薬物注射を受けたすべての患者を含み、この集団を有効性分析に使用した。すべての試験をα＝０．０５で実施した。非応答者補完（ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎ）をすべての有効性分析に用い、いずれかの来診時のＰＡＳＩ又はＰＧＡスコアが欠損している患者をその来診時は非応答者とみなした。欠損データの影響を評価するために、第１２週のデータの感度分析をＬＯＣＦ（ｌａｓｔ−ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ−ｃａｒｒｉｅｄ−ｆｏｒｗａｒｄ）法によって完了した。第１２週におけるＰＡＳＩ７５応答の主要分析を以下の順番で実施して、重複度を考慮して調節した：毎週２００ｍｇ対プラセボ、２００ｍｇ  ｅｏｗ対プラセボ、１００ｍｇ  ｅｏｗ対プラセボ、２００ｍｇ×４対プラセボ、及び２００ｍｇ×１対プラセボ。ＰＡＳＩスコアの平均変化率に対する各ＡＢＴ−８７４投与群とプラセボ群の処置差を、ベースラインＰＡＳＩスコア及び投与群を因子として分散分析によって評価した。安全性分析は、少なくとも１回の試験薬物注射を受けたすべての患者を含む安全性集団を用いて実施された。
【０３４１】
ＩＩ．  結果
Ａ．  患者：  合計１８０名の患者が登録され、６つの投与群の１つに無作為化された（図１）。患者の大多数（プラセボ処置患者の７６．７％、及び全ＡＢＴ−８７４投与群患者の９８％）が、試験の１２週間部分を終了した。
【０３４２】
患者は、人口統計学的特性及び疾患活動性に関して、投与群全体にわたって十分均衡が取れていた（表１）。患者は、主に男性（７４．４％）の白人（９２．２％）であった。平均ＢＳＡ関与は２５％であり、平均ＰＡＳＩスコアは１８．８であった。
【０３４３】
Ｂ．  有効性：  第１２週においてＰＡＳＩ７５応答の主要評価項目を達成した患者の割合は、ＡＢＴ−８７４投与群のすべて（２００ｍｇ×１：６３．３％、３０名中１９名；１００ｍｇ  ｅｏｗ：９３．３％、３０名中２８名；２００ｍｇ×４：９０．０％、３０名中２７名；２００ｍｇ  ｅｏｗ：９３．３％、３０名中２８名；２００ｍｇ毎週：９０．０％、３０名中２７名）がプラセボ（３．３％、３０名中１名）よりも統計的に有意に高かった（ｐ＜０．００１）。この試験の比較的短い期間、全ＡＢＴ−８７４投与群におけるＰＡＳＩ７５応答は、２００ｍｇ×１投与群を除いて類似していた（図２）。
【０３４４】
人口統計学による亜群分析（性別、年齢、人種及び体重）、ベースライン疾患特性（乾せん性関節炎の病歴、ＢＳＡ、及びＰＡＳＩスコア）、及び試験処置を受けた１２か月以内の乾せんのベースライン療法（全身的生物学的及び非生物学的、局所的、並びに光線療法）によれば、種々の亜群内のＡＢＴ−８７４処置患者は、第１２週において高レベルのＰＡＳＩ７５応答が一貫して得られた。
【０３４５】
高ＡＢＴ−８７４投与群のほぼ１００％が第１２週までに少なくともＰＡＳＩ５０応答に達した（２００ｍｇ×１：７６．７％、３０名中２３名；１００ｍｇ  ｅｏｗ：１００．０％、３０名中３０名；２００ｍｇ×４：９６．７％、３０名中２９名；２００ｍｇ  ｅｏｗ：９６．７％、３０名中２９名；２００ｍｇ毎週：１００．０％、３０名中３０名；プラセボ：１６．７％、３０名中５名；プラセボと各々比較してｐ＜０．００１）。第１２週において少なくともＰＡＳＩ９０応答に達した患者の割合は、以下のように、ＡＢＴ−８７４投与群の１つ（２００ｍｇ×１）以外のすべてにおいてプラセボよりも統計的に有意に高かった（ｐ＜０．００１）：２００ｍｇ×１：１６．７％、３０名中５名；１００ｍｇ  ｅｏｗ：５３．３％、３０名中１６名；２００ｍｇ×４：６３．３％、３０名中１９名；２００ｍｇ  ｅｏｗ：７６．６％、３０名中２３名；２００ｍｇ毎週：５３．３％、３０名中１６名；及びプラセボ：０％、３０名中０名。また、第１２週までに、以下のように、プラセボ群の患者よりも有意に多い（ｐ＜０．００１）全ＡＢＴ−８７４投与群の患者が、正常な又は最小のＰＧＡ評点を得た：２００ｍｇ×１：５０．０％、３０名中１５名；１００ｍｇ  ｅｏｗ：８３．３％、３０名中２５名；２００ｍｇ×４：７３．３％、３０名中２２名；２００ｍｇ  ｅｏｗ：８６．７％、３０名中２６名；２００ｍｇ毎週：８６．７％、３０名中２６名；対プラセボ：３．３％、３０名中１名。
【０３４６】
第１２週においてＰＡＳＩ１００応答の主要評価項目を達成した患者の割合は、以下のＡＢＴ−８７４投与群（２００ｍｇ  ｅｏｗ：４６．７％、３０名中１４名；２００ｍｇ毎週：３６．７％、３０名中１１名）においてプラセボ（０％、３０名中０名）よりも統計的に有意に高かった（ｐ＜０．００１）。
【０３４７】
ＡＢＴ−８７４に対する応答は、急速であった。ベースラインからのＰＡＳＩスコアの平均改善率は、全ＡＢＴ−８７４投与群で経時的に増加し（図３）、各時点において各ＡＢＴ−８７４投与群がプラセボよりも統計的に有意に高かった（ｐ＜０．００１。第１週における１００ｍｇ  ｅｏｗ群を除く（ｐ＝０．０２３）。）。
【０３４８】
Ｃ．  安全性：  ＡＢＴ−８７４療法は一般に耐容性が良好であった（表２）。ＡＢＴ−８７４で処置された１名（０．７％）の患者が局部的皮膚変色のために試験を中止し、プラセボで処置された２名（６．７％）の患者が、１名は乾せん性関節症、１名は卵巣癌のために試験を中止した。２名（１．１％）の患者は重篤な有害作用（ＡＥ）を経験し、１名のプラセボ処置患者は３７日目に卵巣癌と診断され、１名のＡＢＴ−８７４処置患者（２００ｍｇ×１）は１０日目に肋軟骨炎と診断された。心筋又は脳梗塞を経験した患者はいなく、死亡者もいなかった。
【０３４９】
ＡＢＴ−８７４のいずれかの用量を投与した患者は、試験薬物に少なくとも関連したと考えられるＡＥを経験する可能性が、プラセボ投与患者よりも有意に高かった（ｐ＝０．０３３）（ＡＢＴ−８７４：３６．０％、１５０名中５４名；プラセボ：１０．０％、３０名中３名；表２）。これらのＡＥの大部分は、注射部位に関係した（注射部位反応、紅斑、掻よう又は刺激）。
【０３５０】
大部分のＡＥは軽度であった（軽度ＡＥは、ＡＢＴ−８７４処置患者の４６．０％［１５０名中６９名］、及びプラセボ処置患者の３０．０％［３０名中９名］で生じた。）。最も一般的なＡＥは、注射部位反応であり、ＡＢＴ−８７４のいずれかの用量で処置した患者の１６．７％（１５０名中２５名）で生じた（プラセボ処置患者では注射部位反応は報告されなかった。ｐ＝０．０２８、表３）。ＡＢＴ−８７４処置患者とプラセボ処置患者における別のＡＥの発生率は、統計的有意差がなかった。次に高い頻度で報告されたＡＥは、鼻咽頭炎及び上気道感染であった。
【０３５１】
感染性ＡＥは、全患者の３２．８％（１８０名中５９名）（プラセボ：２３．３％、３０名中７名；全ＡＢＴ−８７４処置患者：３４．７％、１５０名中５２名）で報告された。いずれのＡＢＴ−８７４投与群でも、報告された最も一般的な感染性ＡＥは、鼻咽頭炎（１２．０％、１５０名中１８名）、上気道感染（１０．７％、１５０名中１６名）、並びに気管支炎及びウイルス感染（どちらも２．７％、１５０名中４名）であった。重篤な感染性ＡＥは報告されなかった。
【０３５２】
２名の患者が試験中に悪性腫ようを報告した。１名のプラセボ処置患者は、１２９日時点で進行中の卵巣癌と診断された。１名のＡＢＴ−８７４処置患者（２００ｍｇ×４）は、非黒色腫皮膚癌（へん平上皮癌）と診断された。癌は１３３日目に除去された。この患者の病歴は、２００５年３月の良性皮膚増殖の除去を含んだ。
【０３５３】
プラセボと比較して、臨床的に有意な血液学、（血糖濃度を含めた）化学的性質又は生命徴候の変化はなかった。
【０３５４】
【表３】
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【０３５５】
【表４】
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【０３５６】
【表５】
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【０３５７】
ＩＩＩ．  結論
本実施例に記載の第二相多施設無作為二重盲検プラセボ対照試験によって、中度から重度の慢性尋常性乾せんの治療におけるＡＢＴ−８７４の統計的及び臨床的に有意な有効性が示された。ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ×１投与群を除いて、全ＡＢＴ−８７４投与群の患者の９０％以上は、プラセボ処置患者の３．３％と比較して、第１２週までにＰＡＳＩ７５以上を達成した。試験薬物を１回しか投与していない群（２００ｍｇ×１）でも、患者の大部分（６３．３％）は第１２週までに少なくともＰＡＳＩ７５を達成した。また、ＡＢＴ−８７４処置患者のほぼ１００％が、第１２週までに臨床的に有意な改善と考えられるＰＡＳＩ５０以上に達した（Ｃａｒｌｉｎ  ＣＳ，  Ｆｅｌｄｍａｎ  ＳＲ，  Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＪＧ，  Ｍｅｎｔｅｒ  Ａ，  Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ．  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００４；  ５０：  ８５９−６６）。ＰＡＳＩ９０、正常又は最小のＰＧＡなどの他の副次的評価項目の結果は、主要有効性分析と一貫し、主要有効性分析を裏付けた。
【０３５８】
ＡＢＴ−８７４に対する応答は、急速であった。プラセボ処置患者とＡＢＴ−８７４処置患者の統計的に有意な分離は、ＰＡＳＩスコアの平均改善率では早くも第１週に生じた。改善は、ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ×１及び２００ｍｇ×４投与群患者でさえも、試験の１２週間持続した。
【０３５９】
ＡＢＴ−８７４は耐容性が良好であり、大部分のＡＥは軽度であった。ＡＢＴ−８７４処置患者は、試験薬物に少なくとも関連したと考えられるＡＥを経験する可能性が有意に高いが、その大部分は、注射部位に関連したＡＥ（注射部位反応、紅斑、掻よう又は刺激）であった。高ＡＢＴ−８７４用量とＡＥの高発生率に明白な関連性はなかった。心筋梗塞も脳梗塞もなかったことが注目される。
【０３６０】
免疫関連事象は、抗ＩＬ−１２／２３抗体投与患者では特に興味深い。最も頻繁に報告された感染性ＡＥは、鼻咽頭炎、上気道感染、気管支炎及びウイルス感染であった。この試験期間に報告された重篤な感染性ＡＥはなかった。試験中に診断された２つの悪性腫ようのうち、卵巣癌はプラセボ処置患者で診断され、非黒色腫皮膚癌は、良性皮膚増殖の病歴を有するＡＢＴ−８７４処置患者で診断された。
【０３６１】
要約すると、ＡＢＴ−８７４は、中度から重度の慢性尋常性乾せん患者の治療に対して統計的及び臨床的に有意な利点を有し、耐容性が良好であった。
【実施例５】
【０３６２】
中度から重度の尋常性乾せんの治療における、完全ヒトＩＬ−１２／−２３モノクローナル抗体ＡＢＴ−８７４を用いた応答の維持
ＡＢＴ−８７４の有効性及び安全性を、１２週間の第二相無作為化管理下試験及び３６週間の経過観察期において評価した。以下の実施例の目的は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療において、ＡＢＴ−８７４の皮下注射のこの第二相試験の第２の１２週間中の療法中止後の応答の維持を分析することであった。
【０３６３】
≧１０％体表面積（ＢＳＡ）が罹患し、ＰＡＳＩスコア≧１２のＰｓを有する成人は、この１２週間の二重盲検プラセボ対照試験に適格であった。患者を以下の６集団の１つに無作為化した：
１）ＡＢＴ−８７４  １００ｍｇ隔週（ｅｏｗ）１２週間、
２）第０週にＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  １回投与、
３）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週４週間、
４）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ  ｅｏｗ  １２週間、
５）ＡＢＴ−８７４  ２００ｍｇ毎週１２週間、又は
６）プラセボ。
【０３６４】
主要評価項目は、第１２週における≧ＰＡＳＩ７５応答であった。主要評価項目を満たした患者は、３６週間の盲検／再処置段階を開始した。試験薬物による治療を中止し、ＰＡＳＩ５０、ＰＡＳＩ７５及びＰＡＳＩ９０応答を含めて、３６週間の経過観察期間中の任意の時点における患者のＰＡＳＩスコアをモニターした。ＰＡＳＩ応答の維持を２４週間評価した。
【０３６５】
合計１８０名の患者が登録した（各集団３０名）。ベースライン特性は集団間で類似した（男性％を除く平均値）：年齢４６歳、男性７４％；Ｐｓ期間２１年；ＰＡＳＩ＝１９；及び罹患ＢＳＡ  ２５％。
【０３６６】
第１２週において、≧ＰＡＳＩ７５の患者の割合は、５つのＡＢＴ−８７４集団の各々がプラセボよりも統計的に有意に高かった（表４）。第２４週において、積極的治療集団におけるＰＡＳＩ７５応答者のかなりの割合が少なくとも≧ＰＡＳＩ５０のＰＡＳＩスコアを維持した。さらに、積極的治療集団におけるＰＡＳＩ７５応答者のかなりの割合が、少なくとも≧ＰＡＳＩ７５のＰＡＳＩスコアと≧ＰＡＳＩ９０のＰＡＳＩスコアも維持した（表４及び図４Ａ−Ｃ）。２４週間にわたってＰＡＳＩ７５応答を維持する患者の割合を図４Ｄに示す。
【０３６７】
【表６】
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【０３６８】
結論として、ＡＢＴ−８７４は、中度から重度の尋常性Ｐｓの治療においてプラセボよりも有意に効果的であった。ＰＡＳＩ７５応答者のかなりの割合は、積極的治療の中止後、第２４週において≧ＰＡＳＩ５０、≧ＰＡＳＩ７５及び≧ＰＡＳＩ９０の応答を維持した。
【０３６９】
均等形態
当業者は、本明細書に記載した本発明の具体的実施形態の多数の均等形態を、せいぜい定常的な実験法によって、認識し又は確認することができる。かかる均等形態も、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【配列表】
2015145389000001.app