(57)【要約】【課題】オートタキシンアイソフォームα、β及びγの測定により、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするオートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の、検出方法、検出薬及び推定方法を提供すること。【解決手段】血清等の検体中のオートタキシンアイソフォームα、β及びγを、抗体を用いた免疫化学的測定法により測定することにより、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等、例えば慢性肝疾患や妊娠等を検出する。またオートタキシンアイソフォームα、β及びγ濃度を測定し、その値を換算することにより、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度を推定する。【選択図】  図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
オートタキシンアイソフォームα、β及びγを測定することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の検出方法。
【請求項２】
前記疾患等が慢性肝疾患である請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
前記疾患等が悪性リンパ腫である請求項１に記載の検出方法。
【請求項４】
前記疾患等が膵疾患である請求項１に記載の検出方法。
【請求項５】
前記疾患等がステロイド服用効果モニターである請求項１に記載の検出方法。
【請求項６】
前記疾患等が妊娠又は妊娠高血圧症候群である請求項１に記載の検出方法。
【請求項７】
前記オートタキシンアイソフォームα、β及びγが完全長のオートタキシンアイソフォームα、β及びγ、部分的に切断を受けたオートタキシンアイソフォームα、β及びγ、又は一部の遺伝子の変異を受けたオートタキシンアイソフォームα、β及びγである、請求項１から６いずれかに記載の検出方法。
【請求項８】
検体が、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液である、請求項１から７いずれかに記載の検出方法。
【請求項９】
前記方法が、抗体を用いた免疫化学的方法である、請求項１から８いずれかに記載の検出方法。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれかに記載の検出方法を利用することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε測定により検出しうる疾患等の検出薬。
【請求項１１】
オートタキシンアイソフォームα、β及びγ濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度の推定方法。
【請求項１２】
オートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ及びε濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、オートタキシンアイソフォームα、β及びγ濃度の推定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オートタキシンアイソフォームα、β及びγの測定による、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするオートタキシン全量濃度の測定により検出しうる疾患等の、検出方法、検出薬及び推定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オートタキシンにはいくつかのアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ、構造は異なるが同じ機能をもつタンパク質）があることが知られている。一例として、スプライシングバリアントα、β、γ、δ、εが遺伝子として同定されているオートタキシンアイソフォームα、β、γ、δ、ε（以下それぞれをＡＴＸα、β、γ、δ、εと略す）がある（非特許文献１、２）。
前記アイソフォームのアミノ酸配列の相同性を確認した結果、ＡＴＸα、β及びγ（以下、ＡＴＸα、β、γと定義する）は、Ｌ２リンカー領域でＶａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（配列番号１）を有し、ＡＴＸδ及びεはＬ２リンカー領域で配列番号１のアミノ酸配列を欠損していることが明らかとなっている（非特許文献２）。
【０００３】
オートタキシンの測定に関しては、特許文献１にて、ヒト血清等ヒト検体中のＡＴＸα、β、γ、δ及びε（以下ＡＴＸ全量と定義する）濃度を簡便、短時間、かつ信頼性高く定量可能な方法が開示されており、悪性リンパ腫、肝臓の線維化、膵疾患、ステロイド服用効果モニター、妊娠および妊娠高血圧症候群の検出が可能となっている（特許文献１、２、３、４、５）。また、特許文献６にて、ヒト血清等ヒト検体中のＡＴＸα、β、γのみを簡便、短時間、かつ信頼性高く定量可能な方法が開示されているが、各種疾患におけるＡＴＸα、β、γの濃度はこれまで不明であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００８／０１６１８６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２０１１／０８１２１４号パンフレット
【特許文献３】特開２０１２−５２８７５号公報
【特許文献４】特開２０１２−２５８８号公報
【特許文献５】特開２００９−１６２６１６号公報
【特許文献６】特開２０１３−１４５５８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３、７７７６、２００８
【非特許文献２】Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１５１、８９−９７、２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで本発明は、ＡＴＸα、β、γの測定により、慢性肝疾患、妊娠をはじめとするＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の、検出方法、検出薬及び推定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題に鑑みてなされた本発明は、以下の態様を包含する：
（１）ＡＴＸα、β、γを測定することを特徴とする、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出方法。
（２）前記疾患等が慢性肝疾患である（１）に記載の検出方法。
（３）前記疾患等が悪性リンパ腫である（１）に記載の検出方法。
（４）前記疾患等が膵疾患である（１）に記載の検出方法。
（５）前記疾患等がステロイド服用効果モニターである（１）に記載の検出方法。
（６）前記疾患等が妊娠又は妊娠高血圧症候群である（１）に記載の検出方法。
（７）前記ＡＴＸα、β、γが完全長のＡＴＸα、β、γ、部分的に切断を受けたＡＴＸα、β、γ、又は一部の遺伝子の変異を受けたＡＴＸα、β、γである、（１）から（６）いずれかに記載の検出方法。
（８）検体が、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液である、（１）から（７）いずれかに記載の検出方法。
（９）前記方法が、抗体を用いた免疫化学的方法である、（１）から（８）いずれかに記載の検出方法。
（１０）（１）から（９）のいずれかに記載の検出方法を利用することを特徴とする、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出薬。
（１１）ＡＴＸα、β、γ濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、ＡＴＸ全量濃度の推定方法。
（１２）ＡＴＸ全量濃度を測定し、その値を換算することを特徴とする、ＡＴＸα、β、γ濃度の推定方法。
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
【０００９】
本発明者らはＡＴＸのアイソフォームに着目し、ヒト血中のＡＴＸα、β、γを検出することを試みた。その結果、慢性肝疾患患者では、その値が健常人からなる正常値に対し有意差をもって高値を示した。妊婦では、その値が非妊娠健常人測定値からなる正常値に対し有意差をもって高値を示した。悪性リンパ腫では、その値が健常人からなる正常値に対し有意差をもって高値を示す。非癌膵疾患患者では、その値が健常人からなる正常値に対し低値を示し、非癌膵疾患患者では、その値が膵臓癌患者に対し低値を示す。ステロイド服用により、その値が低値を示す。妊娠高血圧症候群では、その値が正常妊娠群の測定値に対して有意差をもって低値を示す。
【００１０】
測定されるＡＴＸα、β、γは、完全長のＡＴＸα、β、γだけでなく、部分的に切断を受けたＡＴＸα、β、γ、又は一部の遺伝子の変異を受けたＡＴＸα、β、γも含まれる。検体は、血液成分又は細胞若しくは組織の抽出液があげられる。測定方法は、ＡＴＸα、β、γを検出可能な方法であれば検出方法を選ばない。特異性、感度、汎用性などの点から、免疫化学的方法が優れている。本発明の検出方法を利用して、ＡＴＸ全量測定により検出しうる疾患等の検出薬とすることもできる。特許文献６の方法に従い、免疫学的定量試薬を用い測定すれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でＡＴＸα、β、γを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な本発明の検出薬を提供することが可能である。
【００１１】
また、ＡＴＸα、β、γ濃度はＡＴＸ全量濃度と、疾患によらず有意な正の相関があり、ＡＴＸα、β、γはＡＴＸ全量に対し約６７％の比率で存在した。したがって、ＡＴＸα、β、γ濃度を０．６７で除すことにより、ＡＴＸ全量濃度を推定することができ、ＡＴＸ全量濃度に０．６７を乗ずることにより、ＡＴＸα、β、γ濃度を推定することができる。
【発明の効果】
【００１２】
特許文献６の方法を用いれば、検体中に含まれる内在性の測定妨害因子や競合酵素の影響を受けることなく、かつ短時間でＡＴＸα、β、γを定量可能であり、小規模医療施設においても簡便、低コストで診断可能な本発明の検出薬を提供することが可能である。ＡＴＸα、β、γの測定により、ＡＴＸ全量測定と同様に、慢性肝疾患、妊娠を診断することが可能である。また、ＡＴＸα、β、γ濃度はＡＴＸ全量濃度と良好な正の相関性を示すこと、ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸα、β、γ濃度の比率は約６７％と疾患によらずほぼ一定であることから、ＡＴＸα、β、γの測定によりＡＴＸ全量を推定することができ、またその逆も可能である。したがって、ＡＴＸα、β、γの測定は、ＡＴＸ全量の血中濃度の上昇又は下降を伴う疾患等、例えば、悪性リンパ腫、膵疾患、ステロイド服用効果モニター、および妊娠高血圧症候群の診断にも使用することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】健常人と慢性肝疾患患者のＡＴＸα、β、γ  Ｉｎｄｅｘを示す図である。
【図２】健常人と慢性肝疾患患者のＡＴＸ全量Ｉｎｄｅｘを示す図である。
【図３】健常人女性と妊婦のＡＴＸα、β、γ濃度を示す図である。
【図４】健常人女性と妊婦のＡＴＸ全量濃度を示す図である。
【図５】健常人のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸα、β、γ濃度の相関性を示す図である。
【図６】慢性肝疾患患者のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸα、β、γ濃度の相関性を示す図である。
【図７】妊婦のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸα、β、γ濃度の相関性を示す図である。
【図８】健常人、慢性肝疾患患者および妊婦のＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸα、β、γ濃度の比率を示す図である。
【実施例】
【００１４】
以下に実施例を示すが、本発明は実施例に記載された例に限られるものではない。なお、以下の実験例で使用したヒト検体は、インフォームドコンセントのもと採血された検体を用い実施した。また、ＡＴＸ全量濃度の測定は特許文献１の方法、ＡＴＸα、β、γ濃度の測定は特許文献６の方法に基づき、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー（株）製）を用い実施した。
【００１５】
実施例１：健常人検体のＡＴＸα、β、γ濃度の定量
患者検体測定に先立ち、コントロール群として健常人血清のＡＴＸα、β、γ濃度を測定した。男性８１名（１９〜６１歳）、女性５２名（１９〜５０歳）の健常人血清中のＡＴＸα、β、γ濃度を全自動免疫測定装置にて実施した。
【００１６】
結果を表１に示す。女性血清中のＡＴＸα、β、γ濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である０．７０１ｍｇ／Ｌ、０．９２５ｍｇ／Ｌで除した値「オートタキシンα、β、γ指数」（ＡＴＸα、β、γ  ｉｎｄｅｘ＝ＡＴＸα、β、γ測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
【００１７】
【表１】
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実施例２：健常者検体のＡＴＸ全量濃度の定量
実施例１と同じ健常者検体中のＡＴＸ全量濃度を全自動免疫測定装置にて実施した。
【００１８】
結果を表２に示す。女性検体中のＡＴＸ全量濃度は男性に比べ明らかに高濃度であり、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ  ｔｅｓｔではＰ＜０．００１の有意差を示した。患者検体測定時には男女の性差を考慮する必要があるため、患者検体測定値を男女それぞれの９５パーセンタイル上限値である１．０１３ｍｇ／Ｌ、１．３５４ｍｇ／Ｌで除した値「オートタキシン全量指数」（ＡＴＸ全量  ｉｎｄｅｘ＝ＡＴＸ全量測定値／９５パーセンタイル上限値）にて男女性差を補正した値を用い以下の評価を実施した。
【００１９】
【表２】
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実施例３：慢性肝疾患患者検体のＡＴＸα、β、γ濃度とＡＴＸ全量濃度の定量
慢性肝疾患患者血清のＡＴＸα、β、γ濃度を健常人と比較した。比較のために、ＡＴＸ全量濃度の測定を行なった。結果を表３（男性及び女性のＡＴＸα、β、γ濃度）、表４（性差を考慮したＡＴＸα、β、γ  Ｉｎｄｅｘ）、表５（男性及び女性のＡＴＸ全量濃度）、表６（性差を考慮したＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘ）、図１（性差を考慮したＡＴＸα、β、γ  Ｉｎｄｅｘ）および図２（性差を考慮したＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘ）に示す。
【００２０】
ＡＴＸα、β、γ濃度およびＡＴＸα、β、γ  Ｉｎｄｅｘは、ＡＴＸ全量濃度およびＡＴＸ全量  Ｉｎｄｅｘと同様に慢性肝疾患患者において有意に高いことが確認された。
【００２１】
【表３】
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【００２２】
【表４】
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【００２３】
【表５】
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【００２４】
【表６】
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実施例４：妊婦検体のＡＴＸ全量濃度とＡＴＸα、β、γ濃度
妊婦血清のＡＴＸα、β、γ濃度を、健常人女性と比較した。また、比較のために、ＡＴＸ全量濃度の測定を行なった。結果を表７（ＡＴＸα、β、γ濃度）、表８（ＡＴＸ全量濃度）、図３（ＡＴＸα、β、γ濃度）および図４（ＡＴＸ全量濃度）に示す。
【００２５】
ＡＴＸα、β、γ濃度は、ＡＴＸ全量濃度と同様に妊婦において有意に高いことが確認された。
【００２６】
【表７】
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【００２７】
【表８】
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実施例５：ＡＴＸα、β、γ濃度とＡＴＸ全量濃度の相関
健常人検体、慢性肝疾患患者検体、妊婦検体におけるＡＴＸ全量濃度を横軸に、ＡＴＸα、β、γ濃度を縦軸にしてプロットし、相関関係を確認した。結果を図５（健常人）、図６（慢性肝疾患患者）、図７（妊婦）に示す。
【００２８】
図５、６、７に示されるとおり、健常人、慢性肝疾患患者、妊婦でＡＴＸα、β、γ濃度とＡＴＸ全量濃度は良好な正の相関性を示した。
【００２９】
また、健常人、慢性肝疾患患者、妊婦における、ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸα、β、γ濃度の比率（ＡＴＸα、β、γ濃度（ｍｇ／Ｌ）／ＡＴＸ全量濃度（ｍｇ／Ｌ））の結果を表９、図８に示す。ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸα、β、γ濃度の比率の平均は、健常人検体では０．６６６、慢性肝疾患患者検体では０．６１５、妊婦では０．６８０であった。これらのことから、ＡＴＸ全量濃度に占めるＡＴＸα、β、γ濃度の比率は疾患によらずほぼ一定の０．６７であることから、ＡＴＸα、β、γ濃度を０．６７で除すことにより、ＡＴＸ全量濃度を推定することができ、ＡＴＸ全量濃度に０．６７を乗ずることにより、ＡＴＸα、β、γ濃度を推定することができる。
【００３０】
【表９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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