(57)【要約】【課題】本発明は、食習慣があり安全であるマコンブと、同じく食習慣があり安全である納豆菌を用いて発酵したマコンブ発酵物を有効成分として、血圧上昇抑制作用の作用剤または組成物を提供することを課題とする。【解決手段】本発明により納豆菌を用いたマコンブ発酵物を有効成分とする血圧上昇の予防・改善用機能性食品または食品素材、内服剤として、ヒト若しくはヒト以外の動物に与えられる医薬品（動物用治療薬も含む）用、飲食品用、および飼料用またはペットフードの組成物が提供される。【選択図】図１
2015021001.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
納豆菌を用いたマコンブ発酵物を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
【請求項２】
納豆菌を用いたマコンブ発酵物を含有する組成物を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
【請求項３】
［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる機能性食品。
【請求項４】
［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる食品素材。
【請求項５】
［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなるペットフード。
【請求項６】
［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する飲食用組成物。
【請求項７】
［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する医薬用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明は納豆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｕｓ  ｎａｔｔｏを用いたマコンブ発酵物を有効成分として含有する血圧上昇抑制作用に関する。本発明は、血圧上昇抑制機能性食品または食品素材、内服剤として、ヒト若しくはヒト以外の動物に与えられる医薬品（動物用治療薬も含む）用、飲食品用、および飼料用またはペットフードの組成物を意味する。
【背景技術】
【０００２】高血圧は生活習慣病の一つである。高血圧は原因が分かっている二次性高血圧と原因がわからない本態性高血圧の二つがあるが、日本における高血圧患者の約９０％が本態性高血圧である。血圧は、心拍出量と末梢血管抵抗その他さまざまな因子によって調節されており、なかでも、レニン・アンジオテンシン系は、血圧の制御に関して大きな役割を担っている。肝臓でアンジオテンシノーゲンが合成され、アンジオテンシノーゲンは腎臓で合成されるレニンによってアンジオテンシンＩに変換される。さらにアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によってアンジオテンシンＩＩへと変換される。アンジオテンシンＩＩがアンジオテンシンＩＩ受容体に結合することで、血管平滑筋が収縮し、結果として血圧が上昇する。高血圧は自覚症状がないため、放置してしまうことが多く、動脈硬化、心臓病、脳卒中を引き起こすことがある。【０００３】前述の高血圧については、これを解消するための医療品が種々提案され、既に数多く市販されている。治療剤としては、腎臓でのナトリウムと水の再吸収を抑制し循環血液量を減少させて血圧を下げる利尿薬、交感神経のα受容体の血管収縮作用を遮断し血管を拡張させ血圧を下げるα遮断薬、交感神経のβ受容体の心臓収縮力強化や昇圧ホルモン産生などの作用を遮断して血圧を下げるβ遮断薬、カルシウムイオンの細胞内への取り込みを抑制し血管を拡張することで血圧を下げるカルシウム拮抗薬、強力な昇圧ホルモンであるアンジオテンシンＩＩの生産を減少させ、血圧を下げるＡＣＥ阻害薬、昇圧ホルモンであるアンジオテンシンＩＩが作用する受容体の働きを阻害することで血圧を下げるアンジオテンシンＩＩ受容体阻害薬（ＡＲＢが用いられるが、これら医療用合成製剤は、処方箋を必要とするため、簡易には入手できないばかりか、製剤の投与又は服用により種々の副作用を伴うことがある。従って、高血圧の治療に使用される抗高血圧剤として、入手が容易でかつ副作用ができるだけ少ない天然物起源のものが求められている。天然物起源の高血圧の改善剤としては、ＡＣＥ阻害を示すノリ、カツオ、ワカメなどのペプチド、副交感神経を刺激し血管平滑筋が弛緩され血圧が降下作用を示す杜中葉抽出物、ノルアドレナリンの分泌を抑制し血圧降下作用を示すγ−アミノ酪酸を配合特定保健用食品が知られており、これらは特定保健用食品としての承認を得ている。【０００４】一方、海藻類のマコンブは褐藻類コンブ目コンブ属の海藻として知られており、コンブ類の中でも肉厚で良質な昆布である。主に北海道道南地方で生産され、養殖の生産量も多く大変なじみ深い海藻である。マコンブから抽出した成分が血糖値上昇抑制作用、抗酸化作用を有することが報告されている。また、マコンブ等特定の褐藻類及び紅藻類から水抽出される成分を含有する薬剤が、魚類の養殖場における細菌感染症による斃死を軽減することが知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】本発明の課題は、日常の食生活において容易に入手および摂取でき、血圧上昇を抑制することができる、副作用の少ない予防・改善用機能性食品又は食品素材や、飼料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】本発明者は、上述の目的を達成するために、マコンブの機能性成分と納豆菌の機能性に着目し、鋭意研究を行った結果、納豆菌を用いたマコンブ発酵物１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）抽出物に血圧上昇抑制作用があることを見出すに至った。【０００７】本発明は、このような知見に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明の血圧上昇抑制作用は、いずれもマコンブ発酵物を有効成分とすることを特徴とするものである。【０００８】納豆菌を用いたマコンブ発酵物に含まれる血圧上昇抑制作用を有する物質がいかなる化合物であるかについては、未だその詳細は不明であるが、マコンブ発酵物から１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）抽出により溶出させた成分が血圧上昇抑制作用を発揮することは実験的に確かめられている。したがって、納豆菌を用いたマコンブ発酵物は、そのまま本発明の血圧上昇抑制作用の構成成分とすることで予防・改善が発現する。【０００９】即ち本発明が提供するのは以下の通りである。【００１０】［１］納豆菌を用いたマコンブ発酵物を有効成分として含有する。【００１１】［２］納豆菌を用いたマコンブ発酵物を含有する組成物を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。【００１２】［３］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる機能性食品。【００１３】［４］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる食品素材。【００１４】［５］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなるペットフード。【００１５】［６］［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する飲食用組成物。【００１６】［７］［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する医薬用組成物。
【発明の効果】
【００１７】本発明の血圧上昇抑制剤、またはこれを含有する組成物は、体内でアンジオテンシンＩを、昇圧作用を持つアンジオテンシンＩＩに変換するＡＣＥの活性を抑制することから、血圧上昇抑制作用が期待できる。従って、血圧上昇抑制に有用である。さらに、食経験のある材料から本発明の剤または組成物を製造することが可能であるので、摂取しても安全である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】本明細書の血圧上昇抑制剤は、納豆菌を用いたマコンブ発酵物を有効成分として含有するＡＣＥ害作用を有する剤および組成物である。上記の化合物の含有量は限定されないが、血圧上昇抑制作用を発揮できる範囲で含まれていれば良い。【００１９】本発明の飲食用組成物は、上記の血圧上昇抑制剤を含有する組成物であり、これらを一般的な食品に混合したものである。また、公知の食品として適当な担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態にしたものでもよい。ここに言う飲食用とは、例えば、一般食品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品、ペットフードなどである。ここにいう一般食品とは、飲料、乳製品、発酵乳、乳酸菌飲料、加工乳、コーヒー飲料、ジュース、アイスクリーム、飴、ビスケット、ウェハース、ゼリー、スープ、麺類、を含むがそれに限定されるものではない。好ましくは飲料、乳製品、加工乳、発酵乳、乳酸菌飲料、ウェハース、ゼリーを含む。【００２０】本発明の医薬用組成物は、上記の血圧上昇抑制剤を含有する組成物であり、上記剤そのものであってもよいし、所望により医薬的に許容される担体を含有する組成物であってもよい。その用途は限定されず、例えば一般用医薬品（ＯＴＣ）など容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などが挙げられる。医薬用組成物の形態は限定されず、例えば、丸薬剤、液剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル錠剤、トローチ剤、シロップ剤、ドライシロップ剤などである。好ましくはカプセル剤、液剤、エリクシル、錠剤、カシエ、座薬などとするほうが良い。また医薬的に許容される担体とは、経口、経腸、経皮、および皮下投与のために好適である任意の材料であり、例えば水、ゼラチン、アラビアガム、ラクトース、微結晶性セルロース、スターチ、ナトリウムスターチグリコレート、燐酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイド性二酸化ケイ素、などが挙げられる。【００２１】納豆菌を用いたマコンブ発酵物ならびに該組成物は、血圧上昇抑制剤の有効成分として配合されるが、血圧上昇抑制剤として製剤化する場合、剤形としては、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形を採用することができる。その際、保存や取り扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等のキャリヤ、保存料、その他任意の助剤を必要に応じて配合することができる。またその形態は限定されず、飲食用組成物、医薬用組成物を含む。これらの含有量は限定されないが、血圧上昇抑制作用に対して効果が発揮できる範囲で含まれていれば良い。【００２２】前期血圧上昇抑制剤は、ＡＣＥの活性を阻害してアンジオテンシンＩＩが生成されないようにする。【００２３】納豆菌を用いたマコンブ発酵物を有効成分として含有する本発明の血圧上昇の予防・改善用機能性食品又は食品素材は、前記本発明の血圧上昇の予防・改善剤を飲食品原料の一部として用いたり、あるいは製造工程又は製造後に添加・配合することにより得ることができる。かかる機能性食品としては特に制限されるものではなく、調味類、ふりかけ類、菓子類、スナック類、麺類、魚肉練り製品、乳製品、飲料などを具体的に例示することができる。
【実施例】
【００２４】以下に本発明をより詳細に説明する為に実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。【００２５】サンプルは５００μｍ程度に粉砕したマコンブ粉末（北海道道南産）２．５ｇを５０ｍｌの蒸留水に加え、ｐＨを８．０に調整後、加圧加熱滅菌を行った。納豆菌前培養液を５００μｌ接種し、３０℃で１６０ｒｐｍで回転振とう培養した。５日間培養後凍結乾燥を行い、マコンブ発酵物１ｇに１００ｍｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）を添加し、５０℃で１時間振とうさせ、温水抽出したものの上清をサンプルとした。【００２６】納豆菌を用いたマコンブ発酵物のＡＣＥ活性阻害作用に関する検討
納豆菌を用いたマコンブ発酵物のＡＣＥ活性への影響について、試験管内での酵素反応系を用いて検討した。蒸留水で希釈した各濃度のサンプル溶液１０μｌを添加し全量を１３０μｌ／反応ウェルとした。【００２７】本試験は（株）同仁化学研究所のＡＣＥ  Ｋｉｔ−ＷＳＴを使用した。本試験の反応に用いた溶液（Ａ〜Ｃ液）は、以下のとおり調製した。Ａ液はキット付属のＳｕｂｓｔｒａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒである。Ｂ液はキット付属のＥｎｚｙｍｅ  Ｂを２ｍｌの蒸留水で溶解し、溶解した酵素液１．５ｍｌをキット付属品のＥｎｚｙｍｅ  Ａに加え溶解した。Ｃ液はキット付属のＥｎｚｙｍｅ  Ｃを３ｍｌの蒸留水で溶解した。同じくキット付属のＣｏｅｎｚｙｍｅを３ｍｌの蒸留水で溶解した。溶解したＥｎｚｙｍｅ  ＣとＣｏｅｎｚｙｍｅをそれぞれ２．８ｍｌずつキット付属のＩｎｄｉｃａｔｏｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎに添加した。【００２８】プレート内でのＡＣＥ反応は、各濃度に希釈したサンプル１０μｌ、Ａ液１０μｌとＢ液１０μｌを混合し、３７℃で１時間プレインキュベーションした。次にＣ液１００μｌを加えて室温で１０分間インキュベーションすることで実施させた。その後、４５０ｎｍの吸光度を測定することでＡＣＥ阻害活性を評価した。コントロールは、サンプルの代わりに各サンプルと同等の１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）を添加した。各試験区には、Ｂ液の代わりにＡ液を添加したブランクを設定した。
阻害率は以下の計算式から求めた。阻害率＝１−（サンプルの吸光度−サンプルのブランクの吸光度）／（コントロールの吸光度−コントロールのブランクの吸光度）。コントロールを１００として溶媒と濃度に関連して、相対的のＡＣＥ阻害率を表２に示した。【００２９】図１から明らかなように、納豆菌を用いたマコンブ発酵物にＡＣＥ活性阻害が認められた。阻害のＩＣ５０値は、７０μｇ／ｍｌであった。したがって、納豆菌を用いたマコンブ発酵物はＡＣＥ活性の阻害に有効であることが実証された。【００３０】納豆菌を用いたマコンブ発酵物の血圧上昇抑制試験に関する検討
納豆菌を用いたマコンブ発酵物のＡＣＥへの影響について、動物実験においてＴａｉｌ−ｃｕｆｆ法を用いて検討した。【００３１】本試験では、温水抽出物を減圧乾固したものサンプルとして用いた。本試験では溶液（Ａ〜Ｂ液）は、以下のとおり調整した。Ａ液はサンプル３００ｍｇを２ｍｌの蒸留水に溶解した。Ｂ液はアンジオテンシンＩ（和光純薬）４．５ｍｇを１０ｍｌの蒸留水に溶解した。【００３２】  ｄｄＹマウス、雄性、５週齢（日本ＳＬＣ）を固形飼料（ＭＲストック、日本農産工業）で飼育室（２５℃±２）にて１週間予備飼育後、１群８匹とし群分けを行った。マウスに蒸留水またはＡ液を０．４ｍｌ経口投与し、腹腔内カニューレを装着後、測定用ケージに入れた。投与から３０分後にカフを装着し、マウス・ラット用無加温型非観血式血圧計（ＢＬＯＯＤ  ＰＲＥＳＵＲＥ  ＭＯＮＩＴＯＲ  ＦＯＲ  ＭＩＣＥ＆ＲＡＴ  Ｍｏｄｅｌ  ＭＫ−２０００，室町機械）を使用し、自動で尾動脈血圧を６回測定し、その平均値をアンジオテンシンＩ投与前収縮期血圧として評価した。腹腔内カニューレを用いてＢ液を１００μｌ投与した。投与から２分後に同様に血圧を測定し、アンジオテンシンＩ投与後収縮期血圧とした。アンジオテンシンＩ投与前と投与後の収縮期血圧の差を血圧上昇値とした。【００３３】図２および図３から明らかなように、納豆菌を用いたマコンブ発酵物に動物体内においてＡＣＥ阻害活性が認められた。したがって、納豆菌を用いたマコンブ発酵物はＡＣＥ活性の阻害に有効であることが実証された。
【図面の簡単な説明】
【図１】納豆菌を用いたマコンブ発酵物による効果を示すグラフであり、コントロールを１００とする相対的ＡＣＥ阻害率を示した。
【図２】納豆菌を用いたマコンブ発酵物による効果を示すグラフであり、収縮期血圧を示した。
【図３】納豆菌を用いたマコンブ発酵物による効果を示すグラフであり、血圧上昇値を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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