(57)【要約】      （修正有）【課題】悪性腫瘍を治療するための治療薬として有用である、新規なアポトーシス阻害因子（ＩＡＰ）の阻害剤の提供。【解決手段】式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩、並びに当該化合物又はその医薬的に許容される塩を含む組成物であって、哺乳動物に有効量の化合物を投与することにより、哺乳動物におけるＩＡＰの過剰発現に関連する疾患又は状態を治療する組成物。2015199738.tif 000017［Ｐｈはフェニル；Ｒ1はＣ３−７シクロアルキル；Ｒ2〜Ｒ6は各々独立にＨ又はＣ１−６アルキル］【選択図】図１
2015199738.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2015199738.tif 000016
（式中、
Ｐｈは、フェニルであり；
Ｒ1は、Ｃ3-7シクロアルキルであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、互いに独立して、ＨまたはＣ1-6アルキルである）
の化合物；または
その医薬的に許容される塩。
【請求項２】
（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド（Ｉａ）である、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ2〜Ｒ6はそれぞれ独立してＨまたはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1はシクロヘキシルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1はシクロヘキシルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ2およびＲ3の一方はＨであり、他方はメチルである；またはＲ4はメチルである；またはＲ5およびＲ6はそれぞれＨである、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、
ＩＡＰタンパク質を請求項１に記載の化合物に接触させることにより、ＩＡＰタンパク質のカスパーゼタンパク質への結合を阻害することを特徴とする組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、
哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することにより、哺乳動物におけるＩＡＰの過剰発現に関連する疾患または状態を治療することを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、
細胞に請求項１に記載の化合物を導入することにより、細胞におけるアポトーシスを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、
細胞に請求項１に記載の化合物を導入することにより、細胞をアポトーシスシグナルに対し増感させることを特徴とする組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物を含む組成物であって、
前記細胞を、シタラビン、フルダラビン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ブレオマイシン、シスプラチン、シクロホスファミド、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ミトキサントロン、カンプトテシン、トポテカン、コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タモキシフェン、フィナステリド、ドセタキセルおよびマイトマイシンＣからなる群から選択される化合物に接触させることにより前記アポトーシスシグナルを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項１２】
請求項１０に記載の化合物を含む組成物であって、
前記細胞をＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬに接触させることにより前記アポトーシスシグナルを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物を含む組成物であって、
前記哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することにより、癌を治療することを特徴とする組成物。
【請求項１４】
請求項２に記載の化合物を含む組成物であって、
ＩＡＰタンパク質を請求項２に記載の化合物に接触させることにより、ＩＡＰタンパク質のカスパーゼタンパク質への結合を阻害することを特徴とする組成物。
【請求項１５】
請求項２に記載の化合物を含む組成物であって、
哺乳動物に有効量の請求項２に記載の化合物を投与することにより、哺乳動物における
ＩＡＰの過剰発現に関連する疾患または状態を治療することを特徴とする組成物。
【請求項１６】
請求項２に記載の化合物を含む組成物であって、
細胞に請求項２に記載の化合物を導入することにより、細胞におけるアポトーシスを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載の化合物を含む組成物であって、
細胞に請求項２に記載の化合物を導入することにより、細胞をアポトーシスシグナルに対し増感させることを特徴とする組成物。
【請求項１８】
請求項１７に記載の化合物を含む組成物であって、
前記細胞を、シタラビン、フルダラビン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ブレオマイシン、シスプラチン、シクロホスファミド、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ミトキサントロン、カンプトテシン、トポテカン、コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タモキシフェン、フィナステリド、ドセタキセルおよびマイトマイシンＣからなる群から選択される化合物に接触させることにより前記アポトーシスシグナルを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の化合物を含む組成物であって、
前記細胞をＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬに接触させることにより前記アポトーシスシグナルを誘導することを特徴とする組成物。
【請求項２０】
請求項２に記載の化合物を含む組成物であって、
前記哺乳動物に有効量の請求項２に記載の化合物を投与することにより、癌を治療することを特徴とする組成物。
【請求項２１】
請求項１に記載の化合物および少なくとも１つの医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２２】
請求項２に記載の化合物および少なくとも１つの医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物における治療および／または予防に有用な有機化合物に関し、特に、癌の治療に有用なＩＡＰタンパク質の阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスまたはプログラム細胞死は、無脊椎動物ならびに脊椎動物の発生および恒常性において重要な役割を担う、遺伝的および生化学的に調節された機構である。早期細胞死を導くアポトーシスの異常は、様々な発達障害と関連する。細胞死の欠如をもたらすアポトーシスの欠陥は、癌および慢性ウイルス感染に関連する（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６７，１４５６−１４６２）。
【０００３】
アポトーシスにおける主要なエフェクター分子の一つは、カスパーゼ（アスパラギン酸特異的プロテアーゼを含むシステイン）である。カスパーゼは、アスパラギン酸残基の後ろを切断する強力なプロテアーゼであり、一旦活性化されると、細胞内から重要な細胞タンパク質を消化する。カスパーゼはこのように強力なプロテアーゼであるため、早期細胞死を防止するためにはこのタンパク質ファミリーを厳格に制御することが必要である。一般に、カスパーゼは、大部分が不活性であり活性になるにはタンパク質分解処理を必要とするチモーゲンとして合成される。このタンパク質分解処理は、カスパーゼを調節する方法の１つに過ぎない。第２の機構では、カスパーゼに結合しこれを阻害するタンパク質ファミリーが介在する。
【０００４】
カスパーゼを阻害する分子ファミリーは、アポトーシス阻害因子（ＩＡＰ）である（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９９），１９：３８８−３９８）。ＩＡＰは、もともと、抗アポトーシス遺伝子であるＰ３５タンパク質を代替する機能的な能力により、バキュロウイルスにおいて発見された（Ｃｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６７，２１６８−２１７４）。ＩＡＰはショウジョウバエからヒトに至る生物において説明されている。それらの由来にかかわらず、構造的に、ＩＡＰは１〜３つのバキュロウイルスＩＡＰ反復（ＢＩＲ）ドメインを含み、そしてそれらのほとんどはカルボキシル末端ＲＩＮＧフィンガーモチーフも有する。ＢＩＲドメイン自体は、４つのαヘリックスおよび３つのβ鎖を含み、亜鉛イオンを配位するシステインおよびヒスチジン残基を有する約７０残基のジンク結合ドメインである（Ｈｉｎｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６，６４８−６５１）。カスパーゼを阻害、したがってアポトーシスを阻害することによって抗アポトーシス効果を引き起こすと考えられているのはＢＩＲドメインである。例として、ヒトＸ染色体に結合したＩＡＰ（ＸＩＡＰ）は、カスパーゼ３、カスパーゼ７およびＡｐａｆ−１−チトクロムＣが介在するカスパーゼ９の活性化を阻害する（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＥＭＢＯ  Ｊ．１７，２２１５−２２２３）。カスパーゼ３および７はＸＩＡＰのＢＩＲ２ドメインにより阻害されるが、一方カスパーゼ９活性はＸＩＡＰのＢＩＲ３ドメインにより阻害される。ＸＩＡＰはほとんどの成人および胎児の組織に普遍的に発現し（Ｌｉｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３７９（６５６３）：３４９）、ＮＣＩ６０細胞株パネルにおける数多くの腫瘍細胞株において過剰発現する（Ｆｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０００，７０：１１３；Ｔａｍｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０００，６（５）：１７９６）。腫瘍細胞においてＸＩＡＰが過剰発現すると、様々なプロアポトーシス的な刺激に対して保護され、化学療法に対する耐性が増強されることが実証された（ＬａＣａｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９８，１７（２５）：３２４７）。これと一致するが、急性骨髄性白血病の患者では、ＸＩＡＰタンパク質の量と生存率との間に強い相関があることが実証された（Ｔａｍｍ  ｅｔ  ａｌ，ｓｕｐｒａ）。アンチセンスオリゴヌクレオチドによりＸＩＡＰ発現を下方制御すると、インビトロおよびインビボの両方で、腫瘍細胞は、広範囲のプロアポトーシス促進剤による誘導死に対し増感されることが示されている（Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２０００，６０（２０）：５６５９；Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，２００１，３５３：２９９；Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，２００３，９（７）：２８２６）。また、Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ由来ペプチドは、多くの異なる腫瘍細胞株を、様々なプロアポトーシス薬により誘導されるアポトーシスに対し増感させることが実証された（Ａｒｎｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７（４６）：４４２３６；Ｆｕｌｄａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，２００２，８（８）：８０８；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２００２，９９（９）：３４１９；Ｖｕｃｉｃ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７（１４）：１２２７５；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，２００３，６３（４）：８３１）。
【０００５】
メラノーマＩＡＰ（ＭＬ−ＩＡＰ）は、ほとんどの正常成人組織では検出できないが、黒色腫では強く上方制御されるＩＡＰである（Ｖｕｃｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏ  １０：１３５９−１３６６）。タンパク質構造の決定により、ＭＬ−ＩＡＰ  ＢＩＲおよびＲＩＮＧフィンガードメインは、ヒトＸＩＡＰ、Ｃ−ＩＡＰ１およびＣ−ＩＡＰ２に存在する対応ドメインに対し有意に相同性があることが示された。ＭＬ−ＩＡＰのＢＩＲドメインは、ＸＩＡＰ、Ｃ−ＩＡＰ１およびＣ−ＩＡＰ２のＢＩＲ２およびＢＩＲ３に対し最も類似していると考えられ、欠失分析によって決定されるように、アポトーシス阻害の原因であると考えられる。さらに、Ｖｕｃｉｃらは、ＭＬ−ＩＡＰが、化学療法剤誘発性アポトーシスを阻害し得ることを実証した。アドリアマイシンおよび４−第三級ブチルフェノール（４−ＴＢＰ）等の薬剤をＭＬ−ＩＡＰを過剰発現しているメラノーマの細胞培養系で試験したところ、これらの化学療法剤は、正常なメラニン細胞の対照と比較して、優位に細胞殺傷効果が低かった。ＭＬ−ＩＡＰが抗アポトーシス活性を生じる機構は、カスパーゼ３および９の阻害のうちの部分的なものである。ＭＬ−ＩＡＰは、カスパーゼ１、２、６または８を効果的に阻害しなかった。
【０００６】
アポトーシスは複数の相互作用因子により厳格に制御された経路なので、ＩＡＰ自体が制御されるという発見は珍しくはなかった。キイロショウジョウバエでは、Ｒｅａｐｅｒ（ｒｐｒ）、Ｈｅａｄ  Ｉｎｖｏｌｕｔｉｏｎ  Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ（ｈｉｄ）およびＧＲＩＭタンパク質が、ショウジョウバエＩＡＰファミリーに物理的に相互作用してその抗アポトーシス活性を阻害する。哺乳動物では、タンパク質ＳＭＡＣ／ＤＩＡＢＬＯが、ＩＡＰをブロックしアポトーシスを進行させるよう作用する。正常なアポトーシスでは、ＳＭＡＣが活性型へとプロセシングされ、ミトコンドリアから細胞質に放出され、そこでＩＡＰに物理的に結合し、ＩＡＰをカスパーゼに結合させないようにするということが示された。このようにＩＡＰが阻害されることにより、カスパーゼが活性型のままとなり、アポトーシスが進行する。興味深いことに、ＩＡＰ阻害因子間の配列相同性により、プロセシングされた活性タンパク質のＮ末端に４つのアミノ酸モチーフが存在することが示されている。このテトラペプチドが、ＢＩＲドメイン中の疎水性ポケットに結合し、カスパーゼに結合するＢＩＲドメインを破壊するようである（Ｃｈａｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ４０６：８５５−８６２，Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ４０８：１００４−１００８，Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ４０８  １００８−１０１２）。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の一態様では、一般式（Ｉ）
【０００８】
【化１】
2015199738.tif 000003
【０００９】
（式中、
Ｒ1は、Ｃ3-7シクロアルキルであり、
Ｐｈは、フェニルであり、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、およびＲ6は、互いに独立して、ＨまたはＣ1-6アルキルである）  を有するＩＡＰタンパク質の新規な阻害剤またはそれらの医薬的に許容される塩が提供される。
【００１０】
式Ｉは、全ての立体異性体を含む。
【００１１】
本発明の別の態様では、式Ｉの化合物および担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物が提供される。
【００１２】
本発明の別の態様では、細胞に式Ｉの化合物を導入することを含む、細胞におけるアポトーシスを誘導する方法が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様では、細胞に式Ｉの化合物を導入することを含む、細胞をアポトーシスシグナルに対し増感させる方法が提供される。
【００１４】
本発明の別の態様では、ＩＡＰタンパク質を式Ｉの化合物に接触させることを含む、ＩＡＰタンパク質のカスパーゼタンパク質への結合を阻害する方法が提供される。
【００１５】
本発明の別の態様では、哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、哺乳動物におけるＩＡＰタンパク質の過剰発現に関連する疾患または状態を治療する方法が提供される。
【００１６】
本発明の別の態様では、癌を治療する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、Ｃａｌｕ−６肺腺癌細胞を用いた異種移植モデルにおける、Ｉａのみ、Ｉａとアポマブを組み合わせた場合、先行技術の化合物であるＩＩＩのみ、ＩＩＩとアポマブを組み合わせた場合についての有効性のデータを示す。Ｉａは経口投与し、ＩＩＩは静脈内投与した。薬物の最大耐量となるような用量を選択した。
【００１８】
【図２】図２は、Ｃｏｌｏ２０５結腸直腸腺癌細胞を用いた異種移植モデルにおける、Ｉａのみ、Ｉａとアポマブを組み合わせた場合、先行技術の化合物であるＩＩＩのみ、ＩＩＩとアポマブを組み合わせた場合についての有効性のデータを示す。Ｉａは経口投与し、ＩＩＩは静脈内投与した。薬物の最大耐量となるような用量を選択した。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書等で使用する場合、単数形の語句「ａ」または「ａｎ」が付いた物質は、１つ以上の物質のことを指し；例えば、化合物が単数形で示される場合（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は、１つ以上の化合物または少なくとも１つの化合物のことを指す。そのようなものとして、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上の」、および「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用できる。
【００２０】
本明細書等で使用する場合、移行句であっても特許請求の範囲の本文であっても、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープンエンドの意味を有すると解釈されるべきである。すなわちこれらの用語は、「少なくとも有する（ｈａｖｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ）」または「少なくとも含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ）」という言い回しと同義であると解釈すべきである。方法における文脈で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、その方法が少なくとも列挙された工程を含むが、追加の工程を含んでもよいことを意味する。化合物または組成物における文脈で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、その化合物または組成物が、少なくとも列挙された特徴または成分を含むが、追加の特徴または成分を含んでもよいことを意味する。
【００２１】
用語「独立して」とは、本明細書で使用する場合、ある変数が、同じ化合物内において同じまたは異なる定義を有する別の変数が存在するか否かにかかわらず、任意の例で適用されることを示す。従って、ある化合物内で、Ｒ”が２回表示され、「独立して、炭素または窒素」であると定義される場合、両方のＲ”が炭素であってもよく、両方のＲ”が窒素であってもよく、または一方のＲ”が炭素で他方のＲ”が窒素であってもよい。
【００２２】
用語「場合により（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「場合により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、本明細書で使用する場合、それに続いて記載される事象または状況が起こりうることを意味するが、必ず起こらなくてはならないということを意味せず、その事象または状況が起こる場合と起こらない場合の双方を含む。例えば、「場合により置換される」とは、置換部分に水素を含む場合または置換基を含む場合があることを意味する。
【００２３】
本明細書で使用する場合、用語「約」は、概略的に、大体その範囲内またはその周辺にあるということ意味する。用語「約」をある数値範囲と組み合わせて使用する場合、その記載数値の上限下限を拡げその範囲を変更するということである。一般に、用語「約」は、記載値の数値を上下２０％の変動で変更するものとして本明細書で使用する。
【００２４】
本明細書で使用する場合、変数の数値範囲を列挙することは、本発明が、その範囲内の任意の値と等しい変数で実施可能であることを示す意図である。したがって、本質的に不連続である変数については、その変数はその範囲の終点を含む数値範囲の任意の整数に等しいとすることができる。同様に、本質的に連続的である変数については、その変数はその範囲の終点を含む数値範囲の任意の実数と等しいとすることができる。一例として、０と２の間の値を有するものとして記載する変数は、本質的に不連続である変数の場合、０、１、または２とすることができ、本質的に連続的である変数の場合、０．０、０．１、０．０１、０．００１、または他の任意の実数とすることができる。
【００２５】
式Ｉの化合物は、互変異性体を示す。互変異性化合物は、２つ以上の相互可変種として存在し得る。プロトトロピー互変異性体は、共有結合した水素原子の２原子間における移動によるものである。互変異性体は、一般に平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離しようとすると、通常、混合物が生成され、その化学的および物理的性質は化合物を混合したものと一致する。平衡の位置は、分子内の化学的特徴に依存する。例えば、アセトアルデヒド等の多くの脂肪族アルデヒドおよびケトンでは、ケト型が優勢であるが、フェノール類では、エノール型が優勢である。一般的なプロトトロピー互変異性体には、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−  ⇔  −Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−  ⇔  −Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）およびアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−  ⇔  −Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体が挙げられる。後者の２つは、ヘテロアリールおよび複素環で特に一般的である。本発明は、本明細書に記載される化合物の全ての互変異性型を包含する。
【００２６】
「アルキル」とは、指定しない限り、６個までの炭素原子を有する分岐または非分岐飽和脂肪族炭化水素基を意味し、例えば「アルキルアミノ」等の他の用語の一部として使用する場合も同様である。好ましいアルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、等が挙げられる。用語「低級アルキル」「Ｃ1−Ｃ4アルキル」および「１〜４個の炭素原子のアルキル」は同義であり、メチル、エチル、１−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、１−ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔ−ブチルを意味するのに互換的に使用される。
【００２７】
シクロアルキル基は、３〜７個の炭素原子の一、二、または三環式脂肪族環であり得る。好ましい基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル基が挙げられ、より好ましいのはシクロプロピルおよびシクロヘキシルであり、最も好ましいのはシクロヘキシルである。
【００２８】
「アミノ保護基」とは、反応が化合物上の他の官能基で行われている間、アミノ基をブロックまたは保護するのに通常用いられる基の誘導体を指す。このような保護基の例として、カルバメート、アミド、アルキルおよびアリール基、イミン類、並びに所望のアミン基を再生するために除去可能な多くのＮ−ヘテロ原子誘導体が挙げられる。好ましいアミノ保護基は、Ｂｏｃ、ＦｍｏｃおよびＣｂｚである。さらに、これらの基の例として、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，２ndｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９１，ｃｈａｐｔｅｒ７；Ｅ．Ｈａｓｌａｍ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９７３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５、およびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８１に見ることができる。用語「保護アミノ」とは、上記のアミノ保護基の一つで置換されたアミノ基を指す。これらの基は、合成中に使用可能である。
【００２９】
「カルボキシ保護基」とは、反応が化合物上の他の官能基で行われている間、カルボキシル酸基をブロックまたは保護するのに通常用いられるカルボキシル酸基のエステル誘導体の一つを指す。このようなカルボキシル酸保護基の例として、４−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、２，４−ジメトキシベンジル、２，４，６−トリメトキシベンジル、２，４，６−トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、３，４−メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、４，４’−ジメトキシベンズヒドリル、２，２’，４，４’−テトラメトキシベンズヒドリル、アルキル、例えば、ｔ−ブチルまたはｔ−アミル、トリチル、４−メトキシトリチル、４，４’−ジメトキシトリチル、４，４’，４”−トリメトキシトリチル、２−フェニルプロプ−２−イル、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、フェナシル、２，２，２−トリクロロエチル、β−（トリメチルシリル）エチル、β−（ジ（ｎ−ブチル）メチルシリル）エチル、ｐ−トルエンスルホニルエチル、４−ニトロベンジルスルホニルエチル、アリル、シンナミル、１−（トリメチルシリルメチル）プロプ−１−ｅｎ−３−イル、および類似の部分が挙げられる。使用するカルボキシ保護基の種は、誘導カルボキシル酸が分子内の他の位置におけるその後の反応条件に対して安定であり、かつ分子の残りの部分を破壊することなく適切な位置で除去できる限り、重要ではない。特に、カルボキシ保護分子を、水酸化リチウムまたはＮａＯＨ等の強い求核塩基、あるいはＬｉＡｌＨ4等の高活性化金属水素化物を用いる還元条件に曝さないことが重要である。このような過酷な除去条件はアミノ保護基およびヒドロキシ保護基を除去する場合においても避けるべきである。好ましいカルボキシル酸保護基は、アルキル（例えば、メチル、エチル、ｔ−ブチル）、アリル、ベンジルおよびｐ−ニトロベンジル基である。セファロスポリン、ペニシリンおよびペプチドの分野で使用される同様のカルボキシ保護基もカルボキシ基置換基を保護するために使用できる。さらに、これらの基の例として、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，２ndｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９１，ｃｈａｐｔｅｒ  ５；Ｅ．Ｈａｓｌａｍ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９７３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５、およびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８１，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５に見ることができる。用語「保護カルボキシ」とは、上記のカルボキシ保護基の一つで置換されたカルボキシ基を指す。これらの基は、合成中に使用可能である。
【００３０】
「ヒドロキシ保護基」とは、反応が化合物上の他の官能基で行われている間、ヒドロキシ基をブロックまたは保護するのに通常用いられるヒドロキシ基の誘導体を指す。このような保護基の例として、テトラヒドロピラニルオキシ、ベンゾイル、アセトキシ、カルバモイルオキシ、ベンジル、およびシリルエーテル（例えば、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ）基が挙げられる。さらに、これらの基の例として、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，２ndｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９１，ｃｈａｐｔｅｒｓ２−３；Ｅ．Ｈａｓｌａｍ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９７３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５、およびＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８１に見ることができる。用語「保護ヒドロキシ」とは、上記のヒドロキシ保護基の一つで置換されたヒドロキシ基を指す。これらの基は、合成中に使用可能である。
【００３１】
「阻害剤」とは、ＩＡＰタンパク質がカスパーゼタンパク質に結合するのを低減または防止する、あるいはＩＡＰタンパク質（例えば、ｃ−ＩＡＰ１、ｃ−ＩＡＰ２、Ｘ−ＩＡＰまたはＭＬ−ＩＡＰ）がアポトーシスを阻害するのを低減または防止する化合物を意味する。あるいは、「阻害剤」とは、Ｘ−ＩＡＰのカスパーゼへの結合相互作用、またはＭＬ−ＩＡＰのＳＭＡＣへの結合相互作用を防止する化合物を意味する。
【００３２】
「医薬的に許容される塩」は、酸および塩基付加塩の両方を含む。「医薬的に許容される酸付加塩」とは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸などの無機酸、およびギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等の有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、カルボキシル酸、およびスルホン酸クラスから選択され得る有機酸と形成される、その遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、かつ生物学的にまたは他の理由により望ましくないものではない塩を指す。「医薬的に許容される塩基付加塩」としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等の無機塩基から誘導されるものが挙げられる。特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩である。医薬的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、一級、二級、および三級アミン、天然に存在する置換アミンおよび環状アミンを含む置換アミン、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂といった塩基性イオン交換樹脂の塩等が挙げられる。。特に好ましい有機非毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。また、式Ｉは、化合物の水和物および溶媒和物を包含する意図である。
【００３３】
本発明は、一般式Ｉ
【００３４】
【化２】
2015199738.tif 000004
【００３５】
を有する新規化合物を提供する。
【００３６】
特定の実施形態では、Ｒ1はシクロヘキシルである。別の特定の実施形態では、Ｒ1はシクロペンチルである。特別な実施形態では、Ｒ1は、それが含有するアミノ酸またはアミノ酸アナログが、Ｌ−配置にあるように配向される。
【００３７】
Ｒ2およびＲ3は、独立してＨまたはＣ1-6アルキルである。一の実施形態では、Ｒ2およびＲ3は、両方ともＨである。別の特定の実施形態では、Ｒ2はメチルであり、Ｒ3はＨである。
【００３８】
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-6アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ4は、Ｈまたはメチルである。別の特定の実施形態では、Ｒ4は、メチルである。別の特定の実施形態では、Ｒ4は、それが含有するアミノ酸またはアミノ酸アナログが、Ｌ−配置にあるように配向される。
【００３９】
Ｒ5およびＲ6は、それぞれ独立してＨまたはＣ1-6アルキルである。一の実施形態では、Ｒ5およびＲ6は、Ｈまたはメチルである。一の実施形態では、Ｒ5はＨであり、Ｒ6はメチルである。別の実施形態では、Ｒ5はメチルでありＲ6はＨである。別の特定の実施形態では、Ｒ5およびＲ6は、両方ともメチルである。別の実施形態では、Ｒ5およびは、両方ともＨである。
【００４０】
本発明の別の態様では、式Ｉにかかる化合物は、（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド（Ｉａ）である。
【００４１】
【化３】
2015199738.tif 000005
【００４２】
本発明の化合物は、１つ以上の不斉炭素原子を含有する。従って、化合物は、ジアステレオマー、エナンチオマーまたはそれらの混合物を含む立体異性体として存在してもよい。化合物の合成には、出発物質または中間体として、ラセミ体、ジアステレオマーまたはエナンチオマーを使用することができる。ジアステレオマー化合物は、クロマトグラフィーによる方法または結晶化による方法で分離できる。同様に、エナンチオマー混合物は、当技術分野で公知の技術と同様の技術等を用いて分離できる。各不斉炭素原子は、ＲまたはＳ配置であってもよく、これらの配置の両方が本発明の範囲内である。好ましくは、本発明の化合物は、以下の式Ｉｂの立体化学配置を有する（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は本明細書に記載の通りである）。
【００４３】
【化４】
2015199738.tif 000006
【００４４】
Ａは、場合により置換される１〜４個のヘテロ原子を含む５員複素環である式ＩＩの化合物は、米国出願公開番号第２００６００１４７００号に開示されている。この刊行物に開示されたいくつかの化合物において、Ａは、Ｎ−（４−フェニルチアゾール−５−イル）である。
【００４５】
【化５】
2015199738.tif 000007
【００４６】
現在、Ａが２−（オキサゾール−２−イル）−４−フェニルチアゾール−５−イルである本発明に係る化合物は、効力および経口生体利用効率が増加したことが予想外に見出された。加えて、本発明の化合物は、例えば、米国出願公開番号第２００６００１４７００号に開示される化合物である化合物ＩＩＩと比較して、肺毒性が改善されているなど、一般的に副作用が低い。図１および２は、異種移植腫瘍モデルにおいて、ＩＩＩを静脈内投与した場合と本発明の化合物Ｉａを経口投与した場合の活性の比較を示す。
【００４７】
合成
本発明の化合物は、標準的な有機合成技術を用いて市販の出発物質および試薬から調製される。一般的な技法は、国際公開公報第ＷＯ９８／４６５７６号および米国特許番号第７，２４４，８５１号に開示されており、これらをそこで開示された調整方法について参照により本明細書に援用する。本発明の化合物の調製に用いられる合成手順は化合物中に存在する特定の置換基に依存し、そして有機合成において標準であるように種々の保護および脱保護が必要な場合があることが理解されるであろう。一般的な合成スキームにおいて、本発明の化合物は、典型的なペプチド化学技術を用いて、典型的なアミドカップリング手順でアミノ酸残基アナログをカップリングすることにより調製できる。スキーム１では、アミン保護アミノ酸残基アナログが順次カップリングおよび脱保護され、ペプチド合成プロトコールを用いて最終化合物が得られる。
【００４８】
【化６】
2015199738.tif 000008
【００４９】
アミノ酸アナログは、任意の順序でカップリングでき、当該技術分野において通常の固相支持体を用いて調製できることが理解されるであろう。
【００５０】
本発明の化合物がＨではないＲ2またはＲ3置換基を組み込む場合、それらは脱離基を含む適切なアミノ酸中間体を所望のアミンに置換することによっても調製できる。例えば、スキーム２によれば、Ｂｒ−ＣＨ（Ｒ4）−Ｃ（Ｏ）−ＯＨを、アミンＲ2−ＮＨ2またはＲ2−ＮＨ−Ｒ3で置換する。
【００５１】
【化７】
2015199738.tif 000009
【００５２】
あるいは、スキーム３に示すように、Ｒ2またはＲ3置換基を導入する置換反応を、化合物の調製における最終工程として行うことができる。
【００５３】
【化８】
2015199738.tif 000010
【００５４】
特別な実施形態では、２−ブロモプロピオン酸を、ＤＭＦに溶解した適切なアミンと反応させ、置換が完了しＮ−置換アラニン残基が形成するまでバブリングする。
【００５５】
本発明の化合物を調製するための中間体となるアミン置換環Ａ化合物は、市販されているか、または市販の試薬から標準的な有機化学技術を用いて調製される。２−（オキサゾール−２−イル）−４−フェニルチアゾール−５−アミンは、硫黄およびＴＥＡの存在下で、α−アミノフェニルアセトニトリル塩酸塩およびオキサゾール−２−カルバルデヒドを縮合することにより調製できる（スキーム４）。
【００５６】
【化９】
2015199738.tif 000011
【００５７】
有用性
本発明の化合物は、ＩＡＰタンパク質のカスパーゼへの結合、特にＸ−ＩＡＰのカスパーゼ３および７への結合相互作用を阻害する。この化合物は、ＭＬ−ＩＡＰのＳｍａｃタンパク質への結合も阻害する。従って、本発明の化合物は、細胞におけるアポトーシスを誘導する、または、細胞、特に、癌細胞をアポトーシスシグナルに対し増感させるのに有用である。本発明の化合物は、ＩＡＰタンパク質（例えば、ｃ−ＩＡＰ１、ｃ−ＩＡＰ２、Ｘ−ＩＡＰまたはＭＬ−ＩＡＰ）を過剰発現する細胞においてアポトーシスを誘導するのに有用である。あるいは、本発明の化合物は、例えば、Ｂｃｌ−２を上方制御またはＢａｘ／Ｂａｋを下方制御することにより、ＭＬ−ＩＡＰタンパク質からのＳｍａｃの放出を阻害するようにミトコンドリアアポトーシス経路が破壊された細胞においてアポトーシスを誘導するのに有用である。より広義には、当該化合物は、癌の治療に使用することができる。
【００５８】
これらの化合物は、アポトーシスが機能していない全ての種類の癌の治療に特に有用である。このような癌の種類としては、例えば、神経芽細胞腫、腸癌、例えば、直腸癌、結腸癌、家族性腺腫性ポリポーシス癌および遺伝性非ポリポーシス結腸直腸癌、食道癌、口唇癌、喉頭癌、下咽頭癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、腎臓癌、腎臓柔組織癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮体癌、子宮内膜癌腫、絨毛癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、乳癌、泌尿器癌、メラノーマ、脳腫瘍、例えば、膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄膜腫、髄芽腫および末梢神経外胚葉性腫瘍、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫、肝細胞癌、胆嚢癌、気管支癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多発性骨髄腫、基底細胞腫、奇形腫、網膜芽細胞腫、脈絡膜メラノーマ、セミノーマ、横紋筋肉腫、頭蓋咽頭腫、骨肉腫、軟骨肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、ユーイング肉腫および形質細胞腫が挙げられる。固形腫瘍の治療に有用である。また、乳癌、膵臓腺癌または悪性黒色腫の治療にも有用である。
【００５９】
本発明の化合物は、細胞をアポトーシスシグナルに対し増感させるのに有用である。従って、この化合物は、放射線療法または細胞増殖抑制剤もしくは抗腫瘍化学療法剤の投与前、同時、または後に投与してもよい。適切な細胞増殖抑制化学療法化合物としては、例えば以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）代謝拮抗剤、例えばシタラビン、フルダラビン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素またはメトトレキサート；（ｉｉ）ＤＮＡ−断片化剤、例えばブレオマイシン；（ｉｉｉ）ＤＮＡ架橋剤、例えばクロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミドまたはナイトロジェンマスタード；（ｉｖ）インターカレート剤、例えばアドリアマイシン（ドキソルビシン）またはミトキサントロン；（ｖ）タンパク質合成阻害剤、例えばＬ−アスパラギナーゼ、シクロヘキシミド、ピューロマイシンまたはジフテリア毒素；（Ｖｉ）トポイソメラーゼＩ毒、例えばカンプトテシンまたはトポテカン；（ｖｉｉ）トポイソメラーゼＩＩ毒、例えばエトポシド（ＶＰ−１６）またはテニポシド；（ｖｉｉｉ）微小管指示剤、例えばコルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチンまたはビンクリスチン；（ｉｘ）キナーゼ阻害剤、例えばフラボピリドール、スタウロスポリン、ＳＴＩ５７１（ＣＰＧ５７１４８Ｂ）またはＵＣＮ−０１（７−ヒドロキシス）；（ｘ）多種多様な治験薬、例えばチオプラチン、ＰＳ−３４１、フェニルブチレート、ＥＴ−１８−ＯＣＨ3、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ−７３９７４９、Ｌ−７４４８３２）；ポリフェノール、例えばケルセチン、レスベラトロール、ピセタノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸およびそれらの誘導体；（ｘｉ）ホルモン類、例えばグルココルチコイドまたはフェンレチニド；（ｘｉｉ）ホルモンアンタゴニスト、例えばタモキシフェン、フィナステリドまたはまたはＬＨＲＨアンタゴニスト。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、シスプラチン、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびマイトマイシンＣからなる群から選択される細胞増殖抑制化合物と同時に投与される。最も好ましい細胞増殖抑制化合物はドキソルビシンである。有用なのは、５−ＦＵ、ゲムシタビン、カペシタビン、ビノレルビン、ベバシズマブ、またはタキサンとの組み合わせである。
【００６０】
本発明において使用できる別のクラスの活性化合物は、デスレセプターに結合することによりアポトーシスを増感または誘導することができるもの（「デスレセプターアゴニスト」）である。このようなデスレセプターのアゴニストには、デスレセプターリガンド、例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦ−β、リンホトキシン−α）、ＬＴ−β（リンホトキシン−β）、ＴＲＡＩＬ（Ａｐｏ２Ｌ、ＤＲ４リガンド）、ＣＤ９５（Ｆａｓ、ＡＰＯ−１）リガンド、ＴＲＡＭＰ（ＤＲ３、Ａｐｏ−３）リガンド、ＤＲ６リガンドならびに任意の前記リガンドの断片および誘導体が挙げられる。好ましくは、デスレセプターリガンドはＴＮＦ−αである。より好ましくは、デスレセプターリガンドはＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬである。さらに、デスレセプターアゴニストは、抗ＣＤ９５抗体、抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１（ＤＲ４）抗体、抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ２（ＤＲ５）抗体、抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ３抗体、抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ４抗体、抗ＤＲ６抗体、抗ＴＮＦ−Ｒ１抗体および抗−ＴＲＡＭＰ（ＤＲ３）抗体、並びに任意の前記抗体の断片および誘導体のようなデスレセプターに対するアゴニスト抗体を含む。
【００６１】
細胞をアポトーシスに対し増感させる目的で、本発明の化合物を放射線療法と組み合わせて使用してもよい。語句「放射線療法」とは、新生組織形成の治療における電磁気または粒状放射線の使用を指す。放射線療法は、高線量の放射線を標的領域に当てると、腫瘍および正常組織の双方における再生細胞が死ぬ結果になるという原理に基づいている。放射線量レジメンは、一般に、放射線吸収線量（ｒａｄ）、時間および割合の観点で決定されており、腫瘍学者により注意深く決定されなければならない。患者が受ける放射線量は、種々の考慮事項に依存するが、最も重要な２つの考慮事項は、体内の他の重要な構造または器官に対する腫瘍の位置、および腫瘍の広がりの程度である。放射線療法剤の例は、放射線療法内に設けられ当該分野において公知である（Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｎｃｅｒ，ｉｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２４８７５（Ｄｅｖｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，４ｔｈ  ｅｄ．，ｖｏｌ１，１９９３）が、これらに限定されない。放射線療法における近年の進歩には、三次元原体外部ビーム照射、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）、定位放射線外科および近接照射療法（組織内照射治療）が挙げられ、後者のものは、「種」を移植するように、腫瘍に直接放射線源を配置するものである。これらの新しい治療法では、標準的な外照射療法と比較した場合、効果が増大した分、高い線量の放射線が腫瘍に照射される。
【００６２】
ベータ放射性核種による電離放射は、電離粒子（電子）の線エネルギー付与（ＬＥＴ）およびその中間範囲（典型的には組織中数ミリメートル）が中程度なので、放射線治療用途に最も有用であると考えられる。ガンマ線は、低レベルの線量で長距離に及ぶ。アルファ粒子は、その真逆であり、非常に高いＬＥＴ線量を及ぼすが、その範囲は非常に制限されるので、治療する組織の細胞と密接に接触しなければならない。さらに、アルファ放射体は一般的に重金属であるので可能な化学物質が限定され、そして放射性核種が治療領域から漏出する過度の危険性がある。全ての種類の放射体が本発明の範囲内で治療する腫瘍に応じて考慮可能である。
【００６３】
さらに、本発明は、例えば紫外線（ＵＶ）照射、高エネルギーの可視光線、マイクロ波照射（温熱治療）、赤外線（ＩＲ）放射線およびレーザーなどの各種の非電離放射線をも包含する。本発明の特別の実施形態では、ＵＶ照射が適用される。
【００６４】
より一般的には、本発明の化合物は、併用療法で使用できる。「併用療法」には、対象化合物を、他の生物学的に活性な成分（例えば、これに限定されないが、第二の異なる抗新生物剤）および非薬物療法（例えば、これに限定されないが、外科手術または放射線治療）と、組み合わせて投与することを含む。例えば、本発明の化合物は、他の医薬的に活性な化合物、好ましくは本発明の化合物の効果を増強することができる他の化合物と組み合わせて使用できる。本発明の化合物は、他の薬物療法と同時（単一の調製物または別々の調製物として）または連続的に投与できる。一般に、併用療法は、治療の単一サイクルまたは経過中に二つ以上の薬物を投与することを想定している。
【００６５】
したがって、本発明の一態様では、対象化合物は、種々の疾患状態またはその下流の標的に関与するプロテインキナーゼを調節する１つ以上の別々の薬剤と組み合わせて投与してもよい。かかるキナーゼの例としては、セリン／スレオニン特異的キナーゼ、受容体チロシン特異的キナーゼおよび非受容体チロシン特異的キナーゼが挙げられるが、これらに限定されない。セリン／スレオニンキナーゼには、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、減数分裂特異的キナーゼ（ＭＥＫ）、ＲＡＦおよびオーロラキナーゼが挙げられる。受容体キナーゼファミリーの例には、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）（例えば、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＥｒｂＢ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、Ｘｍｒｋ、ＤＥＲ、Ｌｅｔ２３）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体（例えば、ＦＧＦ−Ｒ１、ＧＦＦ−Ｒ２／ＢＥＫ／ＣＥＫ３、ＦＧＦ−Ｒ３／ＣＥＫ２、ＦＧＦ−Ｒ４／ＴＫＦ、ＫＧＦ−Ｒ）；肝細胞増殖／散乱因子受容体（ＨＧＦＲ）（例えば、ＭＥＴ、ＲＯＮ、ＳＥＡ、ＳＥＸ）；インスリン受容体（例えば、ＩＧＦＩ−Ｒ、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ、ｍＴｏｒ）；Ｅｐｈ（例えば、ＣＥＫ５、ＣＥＫ８、ＥＢＫ、ＥＣＫ、ＥＥＫ、ＥＨＫ−１、ＥＨＫ−２、ＥＬＫ、ＥＰＨ、ＥＲＫ、ＨＥＫ、ＭＤＫ２、ＭＤＫ５、ＳＥＫ）；Ａｘｌ（例えば、Ｍｅｒ／Ｎｙｋ、Ｒｓｅ）；ＲＥＴ；および血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）（例えば、ＰＤＧＦα−Ｒ、ＰＤＧβ−Ｒ、ＣＳＦ１−Ｒ／ＦＭＳ、ＳＣＦ−Ｒ／Ｃ−ＫＩＴ、ＶＥＧＦ−Ｒ／ＦＬＴ、ＮＥＫ／ＦＬＫ１、ＦＬＴ３／ＦＬＫ２／ＳＴＫ−１）が挙げられる。非受容体チロシンキナーゼファミリーの例には、ＢＣＲ−ＡＢＬ（例えば、ｐ４３abl、ＡＲＧ）；ＢＴＫ（例えば、ＩＴＫ／ＥＭＴ、ＴＥＣ）；ＣＳＫ、ＦＡＫ、ＦＰＳ、ＪＡＫ、ＳＲＣ、ＢＭＸ、ＦＥＲ、ＣＤＫおよびＳＹＫが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
本発明の別の態様では、対象化合物は非キナーゼ的な生物学的標的またはプロセスを調節する１つ以上の別々の薬剤と組み合わせて投与してもよい。かかる標的には、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）、ヒートショックプロテイン（例えば、ＨＳＰ９０）、ヘッジホッグ阻害剤およびプロテオソームが挙げられる。
【００６７】
好ましい実施形態では、対象化合物は、エリベッジ、ゾリンザ、タルセバ、イレッサ、タイカーブ、グリベック、スーテント、スプリセル、ネクサバール、ＣＮＦ２０２４、ＲＧ１０８、ＢＭＳ３８７０３２、アフィニタック、アバスチン、ハーセプチン、エルビタックス、ＡＧ２４３２２、ＰＤ３２５９０１、ＺＤ６４７４、ＰＤ１８４３２２、オバトクラックス、ＡＢＴ７３７およびＡＥＥ７８８などの１つ以上の生物学的標的を阻害する抗新生物薬剤（例えば小分子、モノクローナル抗体、アンチセンスＲＮＡ、および融合タンパク質）と組み合わせることができる。また、特定のキナーゼおよび／または受容体、例えば、本明細書その他に記載のもの、に対するモノクローナル抗体が含まれる。このように組み合わせると、単独の薬剤のいずれかによって達成される効力よりも治療的効力を増強することができ、耐性変異体の出現を予防または遅延できる。
【００６８】
特定の好ましい実施形態では、本発明の化合物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。化学療法剤は、腫瘍学の分野における広い範囲の治療的処置にわたるものである。これらの薬剤は、腫瘍の縮小、手術後に残った残存癌細胞を破壊、寛解を誘導、寛解の維持および／または癌もしくはその治療に関連する症状を緩和する目的のために疾患の様々な段階で投与される。かかる薬剤の例として（その内のいくつかは上述した）、アルキル化剤、例えばマスタードガス誘導体（メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、イホスファミド）、エチレンイミン（チオテパ、ヘキサメチルメラニン）、アルキルスルホネート（ブスルファン）、ヒドラジンおよびトリアジン（アルトレタミン、プロカルバジン、ダカルバジンおよびテモゾロミド）、ニトロソ尿素（カルムスチン、ロムスチンおよびストレプトゾシン）、イホスファミドおよび金属塩類（カルボプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチン）；植物アルカロイド、例えばポドフィロトキシン（エトポシドおよびテニポシド）、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ならびにカンプトアナログ（イリノテカンおよびトポテカン）；抗腫瘍抗生物質、例えばクロモマイシン（ダクチノマイシンおよびプリカマイシン）、アントラサイクリン（ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、バルルビシンおよびイダルビシン）、ならびに種々の抗生物質、例えばマイトマイシン、アクチノマイシンおよびブレオマイシン；代謝拮抗物質、例えば葉酸アンタゴニスト（メトトレキサート、ペメトレキシド、ラルチトレキシド、アミノプテリン）、ピリミジンアンタゴニスト（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、カペシタビン、およびゲムシタビン）、プリンアンタゴニスト（６−メルカプトプリンおよび６−チオグアニン）ならびにアデノシンデアミナーゼ阻害剤（クラドリビン、フルダラビン、メルカプトプリン、クロファラビン、チオグアニン、ネララビンおよびペントスタチン）；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばトポイソメラーゼＩ阻害剤（イロノテカン、トポテカン）ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤（アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド）；モノクローナル抗体（アレムツズマブ、ゲムツズマブオゾガミシン、リツキシマブ、トラツズマブ、イブリツモマブチオキセタン、セツキシマブ、パニツムマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ）；ならびに種々の抗新生物形成薬剤、例えばリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（ヒドロキシ尿素）；副腎皮質ステロイド阻害剤（ミトタン）；酵素（アスパラギナーゼおよびペガスパルガーゼ）；抗微小管薬剤（エストラムスチン）；ならびにレチノイド類（ベキサロテン、イソトレチノイン、トレチノイン（ＡＴＲＡ））等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
本発明は、また、本発明の化合物および治療的に不活性な担体、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物または医薬、ならびにこのような組成物および医薬を調製するために、本発明の化合物を使用する方法も包含する。典型的に、本発明の方法で使用する式Ｉの化合物は、生理学的に許容される担体、すなわち、生薬投与形態に使用される投与量および濃度においてレシピエントに対して非毒性である担体と、周囲温度、適切なｐＨ、および所望の純度で混合することによって調合される。製剤のｐＨは主に化合物の特定の用途および濃度に依存するが、好ましくは約３〜約８の間のいずれかの範囲である。酢酸緩衝液中において製剤がｐＨ５であるのが好適な実施形態である。
【００７０】
本明細書で使用する阻害化合物は好ましくは滅菌されている。化合物は通常、固体組成物として保存されるが、凍結乾燥製剤または水溶液も可能である。
【００７１】
本発明の組成物は、医学的実用性に合わせた様式で調合、投薬、および投与される。ここで考慮すべき事項には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医師が知るその他の事項が挙げられる。投与される化合物の「有効量」は、このような考慮事項により支配され、標的疾患を治療する、例えば、ＩＡＰがカスパーゼと相互作用するのを阻害する、アポトーシスを誘導または悪性細胞をアポトーシスシグナルに対して増感させる、のに必要な最小量である。かかる量は、好ましくは、全体として、正常細胞または哺乳動物に対して毒性となる量より少ない量である。
【００７２】
一般的に、本発明の化合物は、１日１回または複数回投与することができる。これらはまた、休薬せず連続的に毎日投与できる。これらは、よって休薬を伴った投与もできる。他の薬剤または様式で使用した場合にも、これらの選択肢が利用できる。本発明の化合物について、非経口投与の場合、用量当たり医薬的に有効な初期量は、一日あたり患者の体重につき約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、通常は、一日あたり化合物が０．３〜１５ｍｇ／ｋｇという初期範囲で使用される。錠剤およびカプセルなどの経口単位剤形では、好ましくは、本発明の化合物が約２５〜約１０００ｍｇで含まれる。経口投与が好ましい。投薬／休薬スケジュールは癌治療で一般的なものに従ってよい、例えば、毎日１、２、３、４週間等投薬し、その後１、２週間等休薬し、その後、毎日１、２、３、４週間等投薬するなどが挙げられる。好ましい選択肢では、本発明の化合物を、１日あたり約２５〜約３０００ｍｇ、より好ましくは約３００〜約１５００ｍｇの範囲で毎日投与する。
【００７３】
本発明の化合物は、経口、局所、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内を含む、任意の適切な手段により、そして、局所治療のために所望であれば、病巣内投与により投与できる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。適切な経口剤形の例としては、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、または５００ｍｇの本発明の化合物を、約９０〜３０ｍｇ無水ラクトース、約５〜４０ｍｇクロスカルメロースナトリウム、約５〜３０ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０、および約１〜１０ｍｇのステアリン酸マグネシウムと共に調合して含有する錠剤が挙げられる。最初に粉末成分を一緒に混合し、次にＰＶＰの溶液と混合する。得られた組成物を乾燥し、造粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、そして従来の装置を用いて錠剤形態に圧縮できる。例えば、５〜４００ｍｇの本発明の化合物を、例えば、リン酸緩衝液等の適切な緩衝液中に溶解し、所望であれば、例えば、塩化ナトリウムなどの塩といった等張化剤を添加することによってエアロゾル製剤を調製してもよい。溶液は、典型的には、例えば、０．２ミクロンのフィルターで濾過して不純物および汚染物を除去する。
【００７４】
より一般的には、本発明の化合物は、国際公開公報第ＷＯ９８／４６５７６号および米国特許番号第７，２４４，８５１号の開示に従って使用することができ、そこでの開示は、化合物の使用方法の一般的なガイダンスについて参照により本明細書に援用する。
【実施例】
【００７５】
本発明は、以下の実施例を参照してより良好に理解されよう。しかし、それらは本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書中で使用される略語は以下の通りである。
ＡＣＮ：アセトニトリル；
Ｃｈｇ：シクロヘキシルグリシン；
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン；
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；
ＥＥＤＱ：２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析；
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アゾベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸；
ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロリン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンアミド；
ＴＡＳＦ：トリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート；
ＴＥＡ：トリエチルアミン；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
【００７６】
参考例１
１−［２−シクロヘキシル−２−（２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アミド
【００７７】
【化１０】
2015199738.tif 000012
【００７８】
Ｂｏｃ−ＭｅＡｌａ−Ｃｈｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（４７．０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）およびピリジン（２６μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（３００μＬ）中に含む溶液を０℃に冷却し、塩化オキサリルをジクロロメタン（５４μＬ、２．０Ｍ、０．１１ｍｍｏｌ）中に含む溶液を１０分かけて滴下した。混合物を０℃で１５分、その後周囲温度で４５分撹拌し、そして５−アミノ−１−フェニルピラゾール（１５．９ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ；ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ  ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ０１７４）およびピリジン（１５．５μＬ、０．１９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（０．５ｍＬ）中に含む溶液を加えた。得られた混合物を、周囲温度で１６時間攪拌し、ジクロロメタンで２０ｍＬに希釈し、そして０．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、真空下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、６０％酢酸エチルを含むヘキサンから１００％酢酸エチル）により精製して黄色の油状物：ｍ／ｚ５８１（Ｍ＋Ｈ+）を得た。この油状物を、５％トリフルオロ酢酸をジクロロメタン（２ｍＬ）中に含む溶液で処理し、１８時間後、溶媒を真空中で除去した。得られた油状物（２９．３ｍｇ、２工程で５７％の収率）をさらに逆相ＨＰＬＣで精製し、生成物（ＴＦＡ塩、９．６ｍｇ、１５％の収率）：ｍ／ｚ４８１（Ｍ＋Ｈ+）、５０３（Ｍ＋Ｎａ+）を得た。
【００７９】
参考例２
酸フッ化物カップリング手順
【００８０】
【化１１】
2015199738.tif 000013
【００８１】
Ｂｏｃ−ＭｅＡｌａ−Ｃｈｇ−Ｐｒｏ−ＯＨ（２．３ｍｍｏｌ）およびピリジン（６．９ｕｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（２３ｍｌ）中に含む溶液を０℃に冷却し、シアヌル酸フルオリド（２．３ｍｍｏｌ）を３０秒かけて滴下した。混合物を０℃で１５分、室温で５時間撹拌し、その後水でクエンチした。混合物をＤＣＭ（合計１００ｍｌ）で３回抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。濾過および真空濃縮により、無色の透明な油状物としてペプチドの酸フッ化物を得て、これをさらに精製することなく直接使用した。
【００８２】
この粗酸フッ化物（０．５０ｍｍｏｌ）とピリジン（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．５ｍｌ）中に含む溶液を固体アミン（１４、０．５０ｍｍｏｌ）に加え、得られた混合物を室温または５０℃のいずれかで撹拌した（密閉容器）。混合物をＮａＨＣＯ3水溶液に注ぎ、その後ジクロロメタン（合計１００ｍｌ）で３回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過および真空濃縮した。粗ぺプチドアミドをさらに精製することなく直接使用した。
【００８３】
参考例３
１−［２−シクロヘキシル−２−（２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（４−フェニル−［１，２，３］チアジアゾール−５−イル）−アミド
【００８４】
【化１２】
2015199738.tif 000014
【００８５】
工程１：Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（２等量）、ＨＯＢｔ（１．９等量）、ＥＤＣ−ＨＣｌ（１．９等量）およびＤＩＰＥＡ（５等量）をＤＭＦ（１０〜１５容量）中に含む溶液に、４−フェニル−１，２，３−チアジアゾール−５−アミン（１６）を加えた。最初穏やかに発熱性であるこの反応物を７５℃に加熱して一晩撹拌し、室温に冷却し、ＤＭＦを部分的に真空中で除去した。この溶液をＥｔＯＡｃ（１０〜１５容量）で希釈し、その後１Ｍ  ＨＣｌ（２×）、ＮａＨＣＯ3（１×）、および塩水（１×）（１：１ａｑ／ｏｒｇ）で洗浄した。有機層を真空中で濃縮し、得られた固体を、還流ＭｅＣＮ（容易に攪拌するのに必要な最小量）中で３０分スラリー化し、その後室温に冷却した。吸引濾過により、Ｂｏｃ保護複合生成物（Ｂｏｃ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔ）をオフホワイトの結晶性固体としておよそ７７％の収率で得た。このＢｏｃ保護生成物を、４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（４〜５当量の酸）およびＭｅＣＮ（ジオキサン溶液に対し１体積当量）の溶液で懸濁し、室温で、ＬＣＭＳにより完全な脱保護が示されるまで（およそ１時間）撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、得られた固体を、還流ＭｅＣＮ（容易に攪拌するのに必要な最小量）中で激しくスラリー化し、室温に冷却し、固体を吸引濾過により回収し、ケーキから残留色が除去されるまで冷ＭｅＣＮで洗浄することにより、（Ｓ）−Ｎ−（４−フェニル−１，２，３−チアジアゾール−５−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１７）のＨＣｌ塩をオフホワイトの固体として、ほぼ定量的収率で得た。
【００８６】
工程２：１７およびＤＩＰＥＡ（５等量）をＤＭＦ（１０〜１５容量）中に含む溶液に、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｃｈｇ（１．５等量）、ＨＯＢｔ（１．４等量）およびＥＤＣ−ＨＣｌ（１．４等量）を加えた。反応物をおよそ２時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（１５容量）で希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ（２×）、ＮａＨＣＯ3（１×）、および塩水（１×）（１：１ａｑ／ｏｒｇ）で洗浄した。有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過および真空濃縮した。得られた固体をＥｔＯＨ／ヘキサン（２０：８０）（容易に攪拌するのに必要な最小量）中でスラリー化し、濾過し、Ｂｏｃ保護複合生成物を綿毛状白色固体としておよそ８０％の収率で得た。Ｂｏｃ保護物を、４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（４〜５当量の酸）およびＭｅＣＮ（ジオキサン溶液に対し０．２５体積当量）の溶液に溶解し、室温でおよそ１時間撹拌した。反応物をトルエン（２×）（脱保護溶液と同容量）で乾燥するまで濃縮し、（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−２−シクロヘキシルアセチル）−Ｎ−（４−フェニル−１，２，３−チアジアゾール−５−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド（１８）のＨＣｌ塩を白色の結晶性固体として、ほぼ定量的収率で得た。
【００８７】
工程３：１８およびＤＩＰＥＡ（５等量）をＤＭＦ（１０〜１５容量）中に含む溶液に、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｎ−メチルＡｌａ（１．５等量）、ＨＯＢｔ（１．４等量）、およびＥＤＣ−ＨＣｌ（１．４等量）を加えた。反応物をおよそ１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１５容量）で希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ（２×）、ＮａＨＣＯ3（１×）、および塩水（１×）（１：１ａｑ／ｏｒｇ）で洗浄した。有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過および真空濃縮し、Ｂｏｃ保護複合生成物を、ベージュ色泡状の固体として、およそ８５％の収率で得た。Ｂｏｃ保護生成物を４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（４〜５当量の酸）およびＭｅＣＮ（ジオキサン溶液に対し０．２５体積当量）の溶液に溶解し、室温でおよそ１時間撹拌した。反応物をトルエン（２×）（脱保護溶液と同容量）で乾燥するまで濃縮し、得られた固体をＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ（７０：３０）（容易に攪拌するのに必要な最小量）の溶液中でスラリー化し、濾過、回収し、粗（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド）アセチル）−Ｎ−（４−フェニル−１，２，３−チアジアゾール−５−イル）ピロリジン−２−カルボキサミド（ｄ）をオフホワイトの自由に流動する固体として得た。粗ＨＣｌ塩を、ＭｅＯＨ（最小で４容量）中に懸濁し、６５℃で撹拌しながら溶解した。温かい酢酸イソプロピル（６〜８容量）２回に分けて加え、温度をおよそ６０℃に保ってから、この溶液を撹拌しながら冷却させた。結晶化が急速に起こり、懸濁液を室温で数時間撹拌してから、０℃で１時間撹拌し、その後固体を吸引濾過により回収した。粗生成物を、ＭｅＯＨ／ｉＰｒＯＡｃ（１：４、２容量）で洗浄、乾燥し、１９を白色／オフホワイトの結晶性固体としておよそ８０％の収率で得た。
【００８８】
参考例４
５−アミノ−２−（オキサゾール−２−イル）−４−フェニルチアゾール
α−アミノフェニルアセトニトリル塩酸塩（１．５２ｇ、８．９９ｍｍｏｌ）、粉末硫黄（２８９ｍｇ、９．０１ｍｍｏｌ）およびオキサゾール−２−カルバルデヒド（８７３ｍｇ、８．９９ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１８ｍＬ）中に含む懸濁液を、ＴＥＡ（１．８８ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を５０℃で６０分撹拌した。冷却した混合物を、室温で一晩ヒドロキシルアミン水溶液（１．００ｍｌ、５０％ｗｔ、１５ｍｍｏｌ）で処理し、濾過および真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃおよびＮａＨＣＯ3水溶液で分離し、分離有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過および真空濃縮し、暗褐色油状物を得た。この粗油状物をＳｉＯ2に予め吸収させ、ヘキサン中５〜７０％酢酸エチルの勾配で溶出する自動フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、５−アミノ−２−（オキサゾール−２−イル）−４−フェニルチアゾール（２０、１５９ｍｇ、７．３％）を得た。
【００８９】
実施例１
（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド（Ｉａ）
工程１：氷浴中で冷却したＢｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏｌｉｎｅ（４．５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびピリジン（８．４５ｍＬ、０．１０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）中に含む溶液に、フッ化シアヌル（５．３５ｍＬ、０．０６２７ｍｍｏｌ）を滴下した。添加後、反応物が乳白色になった。この溶液を０℃で１０分撹拌した後、ＲＴにして４時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し、真空濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（フルオロカルボニル）ピロリジン−１−カルボキシレートを得た。この粗酸フッ化物を直ちに次のカップリング反応に使用した。
【００９０】
新たに調製した酸フッ化物（４．５５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（２０ｍＬ）に溶解し、２０（１．７ｇ、０．００７ｍｍｏｌ）およびピリジン（２．８２ｍＬ、０．０３５ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を５０℃に一晩加熱した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3でクエンチし、ＥｔＯＡｃで三回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。この粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配（５０〜８０％ＥｔＯＡｃ）で溶出するＳｉＯ2クロマトグラフィーで精製し、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（オキサゾール−２−イル）−４−フェニルチアゾール−５−イルカルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート（２１）を得た。
【００９１】
Ｂｏｃ保護基の除去およびＢｏｃＨＮ−Ｃｈｇ−ＯＨおよびＨ（Ｍｅ）Ｎ−Ａｌａ−ＯＨとの連続的カップリングを参考例３の工程２および３の手順に従って実施した。また、Ｃｈｇカップリング生成物の精製もＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配（５０〜８０％ＥｔＯＡｃ）で溶出するＳｉＯ2クロマトグラフィーにより行った。粗Ｂｏｃ保護トリペプチド生成物をＩＳＣＯ（５０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製した。Ｂｏｃ基の除去後、最終生成物を分取ＨＰＬＣで精製し、純Ｉａ：（Ｍ＋Ｈ）+＝ｍｓ５６５．３を得た。
【００９２】
実施例２
本発明の他の化合物、例えば、
１．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロプロピル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド；
２．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロペンチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド；
３．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘプチル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド；
４．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−エチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド；
５．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−Ｎ−メチル−アミド；および
６．（Ｓ）−１−［（Ｓ）−２−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−メチルアミノ−プロピオニルアミノ）−２−メチル−アセチル］−ピロリジン−２−カルボキシル酸（２−オキサゾール−２−イル−４−フェニル−チアゾール−５−イル）−アミド、
は、実施例１の化合物と同様に、対応する類似の出発物質を用いて実施例１の手順により調製できる。
【００９３】
実施例３
ＩＡＰ阻害アッセイ
以下の実験において、１１０残基のうち１１残基がＸＩＡＰ−ＢＩＲ３に見られるものと対応し残りはＭＬ−ＩＡＰ−ＢＩＲに対応するＭＬＸＢＩＲ３ＳＧと称されるキメラＢＩＲドメインを使用した。キメラタンパク質ＭＬＸＢＩＲ３ＳＧは、どの天然ＢＩＲドメインよりも有意にカスパーゼ９と結合しこれを阻害することが示されているが、Ｓｍａｃベースのペプチドおよび成熟Ｓｍａｃには天然ＭＬ−ＩＡＰ−ＢＩＲドメインと同様の親和性で結合した。ＭＣＦ７細胞へのトランスフェクトの場合、キメラＢＩＲドメインＭＬＸＢＩＲ３ＳＧによるカスパーゼ−９の阻害の改善は、ドキソルビシン誘導性アポトーシスの阻害の増加と相関していた。
【００９４】
ＭＬＸＢＩＲ３ＳＧ配列：
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＭＬＥＴＥＥＥＥＥＥＧＡＧＡＴＬＳＲＧＰＡＦＰＧＭＧＳＥＥＬＲＬＡＳＦＹＤＷＰＬＴＡＥＶＰＰＥＬＬＡＡＡＧＦＦＨＴＧＨＱＤＫＶＲＣＦＦＣＹＧＧＬＱＳＷＫＲＧＤＤＰＷＴＥＨＡＫＷＦＰＧＣＱＦＬＬＲＳＫＧＱＥＹＩＮＮＩＨＬＴＨＳＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．：１）
【００９５】
ＴＲ−ＦＲＥＴペプチド結合アッセイ
時間分解蛍光共鳴エネルギー転移競合実験を、Ｋｏｌｂ  ｅｔ  ａｌの手順（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，１９９６，１（４）：２０３）に従って、Ｗａｌｌａｃ  Ｖｉｃｔｏｒ２マルチラベルカウンターリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて行った。３００ｎＭのｈｉｓタグしたＭＬＸＢＩＲ３ＳＧ；２００ｎＭビオチン化ＳＭＡＣペプチド（ＡＶＰＩ）；５μｇ／ｍＬ抗−ｈｉｓアロフィコシアニン（ＸＬ６６５）（ＣＩＳＢｉｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）；および２００ｎｇ／ｍＬストレプトアビジン−ユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を含む試薬カクテルを試薬バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ７．２］、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％ウシグロブリン、５ｍＭ  ＤＴＴおよび０．０５％オクチルグルコシド）内で調製した。（代わりに、このカクテルは、それぞれ６．５ｎＭおよび２５ｎＭの濃度のユーロピウム標識抗−Ｈｉｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）およびストレプトアビジン−アロフィコシアニン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて製造できる）。試薬カクテルを室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、カクテルを３８４ウェルブラックＦＩＡプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ，Ｉｎｃ．）中で、アンタゴニスト化合物の１：３連続希釈物（５０μＭの出発濃度）に加えた。室温で９０分間インキュベートした後、ユーロピウムの励起（３４０ｎｍ）ならびにユーロピウム（６１５ｎｍ）およびアロフィコシアニン（６６５ｎｍ）の発光波長用のフィルターを用いて蛍光を読み取った。アンタゴニストのデータを、６１５ｎｍでのユーロピウムの発光シグナルに対する６６５ｎｍでのアロフィコシアニンの発光シグナルの比として計算した（これらの比は、データ操作を容易にするために１０，０００の係数で乗算した）。得られた値を、アンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、Ｋａｌｅｉｄｏｇｒａｐｈソフトウエア（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＰＡ）を用いて、４パラメータの式にあてはめた。アンタゴニストの効力指数はＩＣ５０値より決定した。このアッセイにおいて、本発明の化合物はＩＡＰ阻害活性を有することが実証された。
【００９６】
蛍光偏光ペプチド結合アッセイ
偏光実験を、Ａｎａｌｙｓｔ  ＨＴ９６−３８４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．）で、Ｋｅａｔｉｎｇ，Ｓ．Ｍ．，Ｍａｒｓｔｅｒｓ，Ｊ，Ｂｅｒｅｓｉｎｉ，Ｍ．，Ｌａｄｎｅｒ，Ｃ．，Ｚｉｏｎｃｈｅｃｋ，Ｋ．，Ｃｌａｒｋ，Ｋ．，Ａｒｅｌｌａｎｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｂｏｄａｒｙ．，Ｓ．（２０００）ｉｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ＳＰＩＥ：Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ（Ｃｏｈｎ，Ｇ．Ｅ．，Ｅｄ．）ｐｐ１２８−１３７，Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ，ＷＡの手順に従って実施した。蛍光偏光親和性測定のための試料は、偏光緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ７．２］、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ウシグロブリン５ｍＭ  ＤＴＴおよび０．０５％オクチルグルコシド）中で、最終濃度が５μＭのＭＬＸＢＩＲ３ＳＧから出発し、最終濃度が５ｎＭの５−カルボキシフルオレセイン結合ＡＶＰｄｉ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＡＶＰ−ｄｉＰｈｅ−ＦＡＭ）になる１：２連続希釈物を加えることにより調製した。
【００９７】
【化１３】
2015199738.tif 000015
【００９８】
反応は、９６ウェルブラックＨＥ９６プレート（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．）中で、室温で１０分間インキュベーションした後に、フルオレセインフルオロフォア（λex＝４８５ｎｍ；λem＝５３０ｎｍ）用の標準的なカットオフフィルターを用いて読み取った。蛍光値をタンパク質濃度の関数としてプロットし、ＩＣ５０を、Ｋａｌｅｉｄｏｇｒａｐｈソフトウエア（Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＰＡ）を用いて４パラメータの式にデータをあてはめることによって得た。５ｎＭのＡＶＰ−ｄｉＰｈｅ−ＦＡＭプローブを含むウェルに、３０ｎＭのＭＬＸＢＩＲ３ＳＧを加え、そして分極緩衝液中３００μＭというアンタゴニスト化合物の濃度から出発する１：３連続希釈物を加えることにより競合実験を実施した。試料は、１０分間のインキュベーション後に読み取った。蛍光偏光値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、ＩＣ５０値を、Ｋａｌｅｉｄｏｇｒａｐｈソフトウエア（Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＰＡ）を用いて４パラメータの式にデータをあてはめることによって得た。アンタゴニストに対する阻害定数（Ｋi）はＩＣ50値から決定した。このアッセイにおいて、本発明の化合物はＩＡＰ阻害活性を有することが実証された。例えば、化合物ＩａについてのＫi値は０．０１４（ＭＬ−ＩＡＰ−ＢＩＲ）である。
【００９９】
実施例４
腫瘍異種移植試験（図１および２）
動物に関わるすべての手順は、ジェネンテック動物実験委員会の使用ガイドラインに従って実施した。ヒト乳房ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、結腸直腸、Ｃｏｌｏ２０５、またはＮＳＣＬＣ、Ｃａｌｕ６癌細胞といった癌細胞は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。細胞をＨＢＳＳに再懸濁する（Ｃｏｌｏ２０５）、または細胞懸濁液をマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ＭＤＡ−ＭＢ−２３１，Ｃａｌｕ６）と１：１で混合した。次に、細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１では１．５×１０7個；Ｃｏｌｏ２０５，Ｃａｌｕ６では５．０×１０7個）を、６〜８週齢の雌ヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）の右脇腹に皮下移植した。腫瘍の体積を、式ｖ＝０．５×ａ×ｂ2にノギスで測定した平均直径を代入して計算した（ａおよびｂはそれぞれ最大および最小垂直腫瘍直径）。適切な平均腫瘍容積を有する１０匹のマウスを６群の各々に無作為に割り当てた。６群全てについての平均腫瘍容積±平均標準誤差（ＳＥＭ）は、治療開始時（０日目）に１６８±３ｍｍ3であった。マウスは、試験中毎日観察し、腫瘍容積および体重を毎週２回測定した。腫瘍増殖阻害率（％）は、式％ＴＧＩ＝１００×（１-腫瘍容積用量／腫瘍容積ビヒクル）を用いて計算した。
【０１００】
ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１・Ｘ１細胞を用いたこのアッセイにおいて、本発明の化合物Ｉａ（週一回静脈内投与）は３．４ｍｇ／ｋｇのＭＥＤ値を有する。これは、同じ条件（ＭＥＤ＝１８．６ｍｇ／ｋｇ）の下で同じアッセイにおいて、先行技術の化合物ＩＩＩに必要な量の５分の１である。ＩａについてのＡＵＣは、同等の有効性を有するＩＩＩの４分の１である。
【０１０１】
本明細書および特許請求の範囲に開示され、必要に応じ、開示された機能を実施するための手段、あるいは開示された結果を得るための方法または工程について特定の態様で表現された特徴は、個別に、またはかかる特徴の任意の組み合わせで、本発明を実現するために多様な形態で用いられる。
【０１０２】
前述の発明は、明確さと理解を目的として、例示および実施例によりいくらか詳細に記載されている。変更および改変が添付の特許請求の範囲内で可能であることが当業者には明らかであろう。したがって、上記の説明は例示であって制限的なものではない意図であることを理解すべきである。本発明の範囲は、従って、上記の明細書を参照して決定されるべきではなく、添付の特許請求の範囲およびその権利範囲内における均等なものの全範囲を参照して決定されるべきである。
【０１０３】
本明細書において言及した特許、公開出願、および科学文献は、当業者の知識を確立するもので、よって各々を具体的かつ個々に参照により援用したのと同程度にその全体を参照により本明細書に援用する。本明細書に引用した文献の記載と、本明細書における具体的な教示との間に矛盾がある場合、後者を支持して解釈すべきである。同様に、単語または語句について、当該分野で理解される定義と、本明細書において具体的に教示した単語または語句との間に矛盾がある場合、後者を支持して解釈すべきである。
【図１】
2015199738.tif 000018
【図２】
2015199738.tif 000019