(57)【要約】【課題】副作用の少ない終末糖化産物生成抑制剤を提供すること。また、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療に有用であり、且つ副作用の少ない医薬組成物、ならびに皮膚老化の予防および／または改善に有用であり、且つ副作用の少ない皮膚外用剤を提供すること。【解決手段】レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤を提供する。また、かかる抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する医薬組成物および皮膚外用剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤。
【請求項２】
レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物。
【請求項３】
終末糖化産物生成抑制有効量の抗糖化植物抽出物を含有するものである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
糖尿病合併症が、糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病血管合併症および動脈硬化症からなる群より選ばれる１種以上の疾患である、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
糖類含有量が５ｇ以上であり、且つアミノ酸含有量および／または蛋白質含有量が２０ｇ以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与されるものである、請求項２〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤および吸入剤からなる群より選ばれる剤形のものである、請求項２〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する非ヒト動物用医薬組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の終末糖化産物生成抑制剤または請求項７に記載の医薬組成物を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法。
【請求項９】
レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を飲食品に配合または添加することを特徴とする、機能性飲食品の製造方法。
【請求項１０】
サプリメントの製造のための、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物の使用。
【請求項１１】
レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤。
【請求項１２】
終末糖化産物生成抑制有効量の抗糖化植物抽出物を含有するものである、請求項１１に記載の皮膚外用剤。
【請求項１３】
化粧料である、請求項１１または１２に記載の皮膚外用剤。
【請求項１４】
乳液、美容液、ローション、パック、クリーム、ハンドクリーム、ファンデーション、化粧下地、リップクリームおよび口紅からなる群より選ばれる形態のものである、請求項１３に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物から選ばれる１種以上の植物抽出物を有効成分として含む終末糖化産物生成抑制剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸と還元糖の混合物を加熱すると褐変する現象は、一般にメイラード反応と呼ばれ、食品分野では、食品の加熱処理や貯蔵中に生じる現象として知られている。メイラード反応は、生体内においても発生しており、１９６８年にはグリコシルヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）が生体内で同定されたことにより、糖尿病や老化の進行に伴い蛋白質の糖化反応が進行することが明らかにされた。そして、近年では、蛋白質の糖化反応における終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下「ＡＧＥｓ」とも称する）が糖尿病合併症や動脈硬化といった生活習慣病の発症や老化の進行に関与することが報告されている（非特許文献１〜３）。
【０００３】
生体内における蛋白質糖化反応の詳細は明らかとなっていないが、蛋白質に存在するアミノ基と還元糖に存在するアルデヒド基が反応し、シッフ塩基を形成した後、安定なアマドリ化合物を経由し、さらに長期の反応を経て、ＡＧＥｓに移行すると考えられている。
【０００４】
ＡＧＥｓは特定の物質を指すものではなく、その全容は未だ解明されていないが、蛍光性や架橋構造の有無によって、ペントシジン、ピロピリジン、ピラリン等、様々な物質の存在が確認されている。ＡＧＥｓの物理化学的な特徴としては、黄褐色で蛍光性（主に、Ｅｘ:３７０ｎｍ、Ｅｍ:４４０ｎｍ）を持ち、タンパク質間に架橋を形成することが挙げられる。しかし、ピラリンのように蛍光性を示さず、架橋構造を有しないＡＧＥｓも確認されている。
【０００５】
これらＡＧＥｓの体内蓄積は、腎糸球体組織硬化症や腎動脈硬化症などの糖尿病合併症だけでなく、アルツハイマー病などの神経変性疾患、皮膚の弾力性の低下や黄色化といった皮膚老化、骨の老化、眼球の老化、アルブミン蛋白の老化に深く関与することが報告されている（非特許文献４および５）
【０００６】
したがって、生体内の糖化反応を阻止することは、糖尿病合併症、動脈硬化、骨粗鬆症、変形性関節症などの疾患の発症・進展を防ぐ効果が期待される。また、糖化反応の阻止は、皮膚の弾力性の低下や黄色化等の予防・改善にも効果があるものと期待される。このため、さまざまな糖化反応阻害剤やＡＧＥｓ生成阻害剤が開発・検討されてきている。
【０００７】
特許文献１には、アミノグアニジン等の化合物を含むメイラード反応阻害剤が開示されている。アミノグアニジンは当該技術分野における開発において最も研究されている、抗糖化作用を示す物質であるが、肝障害等の副作用を有することが確認されており、実用化には至っていない。
【０００８】
その他にも、特許文献２に記載のガンビールノキやシラカバ等の植物の抽出物によるメイラード反応阻害剤などが知られているが、有効性や安全性の点に課題を残すものであった。
【０００９】
そこで、種々の疾患の発症や悪化ならびに皮膚老化等に関与するＡＧＥｓの生成を抑制することができ、かつ、重篤な副作用を有さない安全性の高い薬剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特公平６−６７８２７号公報
【特許文献２】特開２００５−０３５９１１号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】The Journal of Clinical Investigation, 1993, vol.91, pp.2470-2478
【非特許文献２】The New England Journal of Medicine, 1991, vol.325, pp.836-842
【非特許文献３】The Biochemical Journal, 2000, vol.350, pp.381-387
【非特許文献４】New Food Industry, 2011, vol.53, No.6
【非特許文献５】Fragrance Journal, 2012, vol.40, No.4, pp.32-34
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、副作用の少ないＡＧＥｓ生成抑制剤を提供することを目的とする。本発明はまた、生活習慣病、特に糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療に有用であり、且つ副作用の少ない医薬組成物、ならびに皮膚老化、特に皮膚の弾力性低下や黄色化の予防および／または改善に有用であり、且つ副作用の少ない皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、抗糖化作用に優れ、且つ副作用が少ない物質について、天然物であり、食経験のある植物からのスクリーニングを試みた結果、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物が強いＡＧＥｓ生成抑制効果を発揮することを見出し、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち本発明は、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤（以下、「本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤」とも称する）を提供する。
【００１５】
本発明はまた、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物（以下、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」とも称する）を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含む非ヒト動物用医薬組成物、該医薬組成物または本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法、該抗糖化植物抽出物を飲食品に配合または添加することを特徴とする機能性飲食品の製造方法、ならびにサプリメントの製造のための該抗糖化植物抽出物の使用を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤（以下、「本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤」とも称する）を提供する。
【発明の効果】
【００１８】
ＡＧＥｓは、種々の生活習慣病や皮膚老化との関連が示唆されている物質であり、特に、糖尿病およびその合併症の発症および／または進行、ならびに皮膚の弾力性低下および皮膚の黄色化の発生および／または進行に深く関与するものである。したがって、本発明者らによりＡＧＥｓの生成を抑制する作用が見出されたレモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物は、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物、または皮膚の弾力性低下もしくは黄色化等の皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤における、副作用の少ない有効成分として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書において「抗糖化植物抽出物」とは、アミノ酸、ペプチドもしくはタンパク質の糖化反応（メイラード反応）を阻害する作用を有する植物抽出物をいう。
【００２０】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を有効成分として含有するものである。
【００２１】
レモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）は、オーストラリア原住民であるアボリジニが料理や薬草に使用している他、リラックス効果を有することが知られており、世界中でハーブティーの茶葉として用いられている。ハマボウフウ（Ｇｌｅｈｎｉａ  ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）は、おとその材料として用いられている他、天ぷらや酢の物として食されている。キャッサバ（Ｍａｎｉｈｏｔ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）は、その塊根部がデンプンの原料として用いられているほか、ビタミン類を豊富に含む葉部が食材として利用されている。
【００２２】
抗糖化植物抽出物の原料として用いるレモンマートル、ハマボウフウおよびキャッサバの植物体は、開花期のものであっても栄養生長期のものであってもよく、生の状態であっても乾燥させたものであってもよい。また、抽出効率を高めるため、植物体を適宜細断ないし粉砕等したもの、例えば粉末状のものを抽出原料として用いてもよい。原料として用いる植物体の部位に関しては、花、葉、茎、根、またはこれらを含む全草のいずれを抽出原料として用いてもよいが、特に葉部からの抽出物に強い効果が認められるため、かかる部位を用いることが好ましい。
【００２３】
以下、抗糖化植物抽出物を得るための抽出方法および条件について記載する。レモンマートル、ハマボウフウおよびキャッサバのいずれを原料として用いる場合であっても、本明細書に記載の抽出方法および条件を同等に適用することができる。
【００２４】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病予防／治療用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の有効成分である抗糖化植物抽出物は、一般的な植物成分抽出方法を用いて得ることができる。かかる抽出方法としては、例えば、熱水抽出法、煮沸抽出法、浸漬抽出法、振とう抽出法、ソックスレー抽出法、水蒸気蒸留法などが挙げられる。
【００２５】
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級アルコール類、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル等のエステル類等を用いることができ、これらの中から抽出原料とする植物の種類、後に行う加工処理、抽出物の使用目的などを考慮した上で選択すれば良い。抽出物を食品用途等へ使用するため有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用すれば良く、抽出後に除去しやすいエタノールを単独で、又は水との任意の割合の混液として使用しても良い。一つの態様において、好ましい抽出溶媒は、水またはエタノールである。
【００２６】
抽出溶媒の使用量は、重量比で、１：２〜１：３０（植物原料：抽出溶媒）が好ましく、１：３〜１：２５がより好ましく、１：４〜１：２０がさらに好ましい。
【００２７】
抽出温度は各溶媒によって適宜決定すれば良いが、水抽出の場合は４〜１３０℃が好ましく、２５〜１１０℃がより好ましく、４０〜１００℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１３０℃を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合、抽出温度は４〜１００℃が好ましく、１０〜８０℃がより好ましく、２０〜６０℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１００℃を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。
【００２８】
また、抽出時間は、水抽出の場合は１分〜１５日間が好ましく、３分〜１日間がより好ましく、５分〜１時間がさらに好ましい。抽出時間が１分間未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合は１時間〜１５日間が好ましく、１２時間〜１０日間がより好ましく、１〜８日間がさらに好ましい。抽出時間が１時間未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。
【００２９】
本明細書において、「抽出物」の用語には、溶媒を用いる各種抽出方法によって得られる抽出液、該抽出液を濃縮した濃縮液、該抽出液を適当な溶媒で希釈した希釈液、該抽出液またはその濃縮液もしくは希釈液から加熱乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの種々の方法によって溶媒を除くことにより得られる固形の抽出物（例えば粉末状や粒状のもの）、ならびに固形化剤やゲル化剤の添加等によって得られる固形もしくは半固形の抽出物が含まれるものとする。一つの好ましい態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病予防／治療用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の有効成分として用いる抗糖化植物抽出物は、抽出液から溶媒を除去した固形抽出物の形態である。
【００３０】
抗糖化植物抽出物の抽出方法の例としては、（１）原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜２５重量部の水を加え、４０〜９０℃で１０〜１２０分間静置、あるいは１００℃で５〜１５分間煮沸する方法や、（２）原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜２５重量部のエタノールを加え、１０〜８０℃で１２時間〜１０日間静置、好ましくは２０〜６０℃で１〜８日間静置する方法等が挙げられる。
【００３１】
本発明において用い得る抗糖化植物抽出物の具体例としては、レモンマートル水抽出物、レモンマートルエタノール抽出物、ハマボウフウ水抽出物、ハマボウフウエタノール抽出物、キャッサバ水抽出物およびキャッサバエタノール抽出物が挙げられる。
【００３２】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、抗糖化植物抽出物によるＡＧＥｓ生成抑制効果が妨げられない限り、賦形剤等を含むものであってもよい。
【００３３】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤中の抗糖化植物抽出物の割合は特に限定されない。例えば、固形抽出物を用いる場合、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、抗糖化植物抽出物を４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、６０重量％以上、７０重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上または９８重量％以上含むものであり得る。あるいは、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、抗糖化植物抽出物のみからなるものであってもよい。
【００３４】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ペントシジン、クロスリン、ピロピリジン、グリオキサール由来リジンダイマー（ＧＯＬＤ）、メチルグリオキサール由来リジンダイマー（ＭＯＬＤ）等の蛍光性ＡＧＥｓおよびピラリン、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、３−デオキシグルコソン由来リジンダイマー（ＤＯＬＤ）、イミダゾロン化合物等の非蛍光性ＡＧＥｓを含む種々のＡＧＥｓの生成を抑制することができる。一つの態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、蛍光性ＡＧＥｓであるペントシジンの生成抑制のために用いられるものである。別の態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、非蛍光性ＡＧＥｓであるカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の生成抑制のために用いられるものである。
【００３５】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤と同様、有効成分としてレモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を含有するものである。
【００３６】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物中に有効成分として含有させる抗糖化植物抽出物の合計量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、固形抽出物を用いる場合、通常、１〜９８重量％程度であればよく、２〜９５重量％程度であることが好ましく、３〜９０重量％程度であることがより好ましい。
【００３７】
本明細書において、糖尿病もしくは糖尿病合併症の「治療」には、既に糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患している患者における症状の進行を阻止することも含まれる。
【００３８】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与方法は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。また、投与時期は特に限定されず、食前、食中、食後、食間のいずれであってもよいが、例えば、糖類含有量が５ｇ以上である食事、またはアミノ酸および／または蛋白質含有量が２０ｇ以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましく、糖類ならびにアミノ酸および／または蛋白質を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのがより好ましい。前記アミノ酸としては、リジン、アルギニン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易いリジンおよび／またはアルギニンを前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。また、前記蛋白質としては、卵白アルブミン、乳アルブミン、グリアジン、乳カゼイン、大豆カゼイン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易い卵白アルブミン、乳アルブミンおよび乳カゼインから選ばれる１種以上を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。ここで、一般的に「食事」とは、生存に必要な栄養分をとるために毎日の習慣として物を食べること（飲食行為）あるいはその飲食物を意味するが、本明細書において用いる「食事」の用語は、一回の飲食行為において摂取する一まとまりの飲食物を意味するものとする。
【００３９】
本明細書において用いる場合、「糖類」とは、単糖および／または二糖を意味するものとする。これに対し「糖質」とは、炭水化物のうち食物繊維以外のものをいい、糖類の他に、オリゴ糖、多糖、糖アルコール等が含まれる。
【００４０】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与量は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択されるが、ＡＧＥｓの生成を抑制することができる量（以下、「ＡＧＥｓ生成抑制有効量」とも称する）を投与すればよい。ＡＧＥｓ生成抑制有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。
【００４１】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制有効量の抗糖化植物抽出物を一度に投与するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて投与するものであっても良い。複数回に分けて投与する場合は、一日に投与される抗糖化植物抽出物の合計量がＡＧＥｓ生成抑制有効量となればよく、食事の回数に合わせて投与するのが好ましい。
【００４２】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患した者、または健常者のいずれに対しても投与することができるが、ＡＧＥｓとの関連性が高い糖尿病に罹患した者に対して投与するのが好ましい。糖尿病に罹患した者とは、ヘモグロビンＡ１ｃが６．１％（ＪＤＳ値）以上で、且つ、以下の（１）〜（３）のいずれかに該当する者を指す：（１）空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄＬ以上、（２）随時血糖値（空腹か食後かにかかわらず）が２００ｍｇ／ｄＬ以上、および（３）ブドウ糖負荷後２時間値が２００ｍｇ／ｄＬ以上。糖尿病診断基準の詳細は、日本糖尿病学会による「糖尿病の分類と診断基準に関する委員会報告」（同学会のホームページ等から入手可能）に記載されている。
【００４３】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病に伴って発症する糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病血管合併症、動脈硬化症、腎不全、アルツハイマー病、神経変性疾患、がん等の糖尿病合併症の予防および／または治療のために用いることができる。これらの糖尿病合併症の中でも、発症率の高い糖尿病網膜症、糖尿病腎症および／または糖尿病神経障害の予防および／または治療のために用いることが好ましい。
【００４４】
さらに、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、健常者に投与することにより、糖尿病およびその合併症を効果的に予防することができる。
【００４５】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、抗糖化植物抽出物による糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療効果を妨げない範囲であれば、抗糖化植物抽出物の他にさらに賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、矯味剤、懸濁化剤、乳化剤、着香剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤等の成分を添加して各種の剤形とすることができる。
【００４６】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の剤形としては、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）等が挙げられる。これらの中でも経口投与のし易さの点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤が好ましく、生体内に吸収され易い点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤がより好ましい。
【００４７】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、エキス剤、丸剤、酒精剤、浸剤・煎剤、茶剤、チンキ剤、芳香水剤、流エキス剤等の生薬関連製剤に本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を添加した剤形で使用することもできる。これら剤形は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択される。
【００４８】
更に、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する他の薬剤をさらに含むものとすることができる。これらの薬剤としては、例えば、インスリン抵抗性改善薬、脂質異常症治療薬、アンジオテンシンII１型受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、メトホルミン等が例示される。
【００４９】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤またはその有効成分である抗糖化植物抽出物は、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療するために用いることもできる。したがって、本発明の一態様において、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を含む非ヒト動物用医薬組成物（以下、本発明の非ヒト動物用医薬組成物とも称する）が提供される。また、該非ヒト動物用医薬組成物または本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法も提供される。非ヒト動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ等の家畜類や、イヌ、ネコ等のペットとして飼育される動物等が例示される。
【００５０】
本発明の非ヒト動物用医薬組成物に含有させる抗糖化植物抽出物の量、該医薬組成物の投与方法、投与時期、投与量および剤形、該医薬組成物において抗糖化植物抽出物と併用可能な他の薬剤、天然物および天然由来物質、ならびに本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与する場合における投与方法、投与時期、投与量等については、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」について上述した内容と同様である。
【００５１】
上記の抗糖化植物抽出物は、食品添加剤として用いることもできる。したがって、レモンマートル抽出物、ハマボウフウ抽出物およびキャッサバ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の抗糖化植物抽出物を飲食品に配合または添加することにより、ＡＧＥｓの生成を抑制する機能性飲食品を提供することができる。また、該抗糖化植物抽出物を成分として使用することにより、ＡＧＥｓ生成を抑制するサプリメントを製造することもできる。この場合、製造するサプリメントの剤形に応じて適宜、賦形剤等を配合することができる。
【００５２】
さらに、上記の抗糖化植物抽出物は、皮膚老化の予防／改善のための皮膚外用剤の有効成分として用いることもできる。本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤中に含有させる抗糖化植物抽出物の合計量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、固形抽出物を用いる場合、通常、０．０１〜２０重量％程度であればよく、０．０５〜１５重量％程度であることが好ましく、０．１〜１０重量％程度であることがより好ましい。
【００５３】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の皮膚への適用量は、皮膚老化の程度、その他の皮膚トラブルの程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択されるが、ＡＧＥｓの生成を抑制することができる量（ＡＧＥｓ生成抑制有効量）を適用すればよい。ＡＧＥｓ生成抑制有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。
【００５４】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ＡＧＥｓ生成抑制有効量の抗糖化植物抽出物を一度に適用するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて適用するものであっても良い。複数回に分けて適用する場合は、一日に適用される抗糖化植物抽出物の合計量がＡＧＥｓ生成抑制有効量となればよい。
【００５５】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、塗布等の方法で皮膚に適用することにより、皮膚老化、例えば皮膚の弾力性低下や黄色化を効果的に予防することができるほか、これら皮膚老化を改善し、または皮膚老化の進行を阻止することができる。
【００５６】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、抗糖化植物抽出物による皮膚老化の予防および／または改善効果を妨げない範囲であれば、抗糖化植物抽出物の他にさらに安定剤、防腐剤、緩衝剤、酸化防止剤、懸濁化剤、界面活性剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤、香料等の成分を添加して各種の剤形とすることができる。
【００５７】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、化粧料または医薬組成物であり得る。該化粧料は、通常、化粧品もしくは医薬部外品として提供され得るものである。
【００５８】
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の形態としては、乳液、美容液、ローション、パック、クリーム、ハンドクリームなどの基礎化粧料、ファンデーション、化粧下地、リップクリーム、口紅などのメークアップ化粧料、洗顔料、石鹸、メイク落とし、ボディーシャンプーなどの洗浄用化粧料、ヘアートニック、ヘアーローションなどの頭髪用化粧料、入浴剤などが挙げられる。
【００５９】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物、食品添加剤および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する天然物または天然由来物質をさらに含むものとすることもできる。これらの天然物または天然由来物質としては、例えば、ドクダミ、セイヨウサンザシ、カモミール、ブドウ葉等のハーブ類、桜の花、トウモロコシの花柱および柱頭、セイヨウオオバコ種子、マロニエ、シャクヤク、バラの花、梅果実、山ぶどう、紫菊花、小麦胚芽、小麦胚芽由来のポリアミン、マンゴスチン等が例示される。
【００６０】
以下、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら記載に限定されるものではない。
【実施例】
【００６１】
実施例１
レモンマートル抽出物の製造（エタノールによる抽出）
レモンマートルの乾燥させた葉（５００．５ｇ）を９９．５％エタノール（８０９１．８ｇ）に浸漬し、２５℃で７日間静置して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：１６）。抽出液を減圧乾燥にて乾燥し、固形抽出物（４１．８ｇ）を得た。以下、かかるエタノール抽出物をレモンマートル抽出物（Ｅ）と表記する。
【００６２】
レモンマートル抽出物の製造（水による抽出）
レモンマートルの乾燥させた葉（１１１ｇ）に水（２２３２．２ｇ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：２０）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥し、固形抽出物（２６．８ｇ）を得た。以下、かかる熱水抽出物をレモンマートル抽出物（Ｗ）と表記する。
【００６３】
蛍光性ＡＧＥｓ強度の測定
レモンマートル抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法で蛍光性ＡＧＥｓ強度を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４００−６００ｎｍ）を９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて測定し、この値を以下に示す蛍光性ＡＧＥｓ強度計算式中のａ１とした。該計算式中のｂ１〜ｄ１についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定し、蛍光性ＡＧＥｓ強度を算出した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
蛍光性ＡＧＥｓ強度＝ａ１−ｂ１−ｃ１−ｄ１
ａ１：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋アミノ酸液１．０ｍＬ＋糖液０．２５ｍｌ
ｂ１：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
ｃ１：アミノ酸液１．０ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）０．５ｍｌ
ｄ１：糖液０．２５ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
【００６４】
【表１】
2015024982.tif 000002
【００６５】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるレモンマートル抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べ蛍光性ＡＧＥｓ強度が低下しており、該抽出物が蛍光性ＡＧＥｓの生成を抑制していることが確認された。結果を表２に示す。
【００６６】
【表２】
2015024982.tif 000003
【００６７】
ＣＭＬ生成量の測定
レモンマートル抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でＣＭＬ生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のＣＭＬ生成量をＣｉｒｃｕＬｅｘ ＣＭＬ／Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（株式会社サイクレックス製）を用いて測定した。まず、反応液６０μＬに第一次抗体液６０μＬを加え混合した。次にＣＭＬ固層化プレートに混合液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１０分間振とうした。その後、プレートに反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるＣＭＬ量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００６８】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるレモンマートル抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べＣＭＬ生成量が減少しており、該抽出物がＣＭＬの生成を抑制していることが確認された。結果を表３に示す。
【００６９】
【表３】
2015024982.tif 000004
【００７０】
ペントシジン生成量の測定
レモンマートル抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でペントシジン生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のペントシジン生成量を、ペントシジン測定キット「ＦＳＫペントシジン(登録商標)」（株式会社伏見製薬所）を用いて測定した。まず、反応液５０μＬを酵素剤チューブに添加し、５５℃で９０分間反応させた。つぎに、１００℃で１５分間処理し酵素を失活させた。室温まで冷却した後、補助剤５０μＬを添加し混合した。次に抗原固層プレートに混合液５０μＬおよび第一次抗体液５０μＬを添加した後、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、３７℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で９分間静置した。その後、反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるペントシジン量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００７１】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるレモンマートル抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べペントシジン生成量が減少しており、該抽出物がペントシジンの生成を抑制していることが確認された。結果を表４に示す。
【００７２】
【表４】
2015024982.tif 000005
【００７３】
実施例２
ハマボウフウ抽出物の製造（エタノールによる抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したハマボウフウの葉（６０１．６ｇ）を９９．５％エタノール（３００４．９ｇ）に浸漬し、２５℃で７日間静置して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：５）。抽出液を減圧乾燥にて乾燥し、固形抽出物（１７．３ｇ）を得た。以下、かかるエタノール抽出物をハマボウフウ抽出物（Ｅ）と表記する。
【００７４】
ハマボウフウ抽出物の製造（水による抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したハマボウフウの葉（３４１．９ｇ）に水（２７３５．９ｇ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：８）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥し、固形抽出物（１５．７ｇ）を得た。以下、かかる熱水抽出物をハマボウフウ抽出物（Ｗ）と表記する。
【００７５】
蛍光性ＡＧＥｓ強度の測定
ハマボウフウ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法で蛍光性ＡＧＥｓ強度を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表５に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４００−６００ｎｍ）を９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて測定し、この値を以下に示す蛍光性ＡＧＥｓ強度計算式中のａ２とした。該計算式中のｂ２〜ｄ２についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定し、蛍光性ＡＧＥｓ強度を算出した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
蛍光性ＡＧＥｓ強度＝ａ２−ｂ２−ｃ２−ｄ２
ａ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋アミノ酸液１．０ｍＬ＋糖液０．２５ｍｌ
ｂ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
ｃ２：アミノ酸液１．０ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）０．５ｍｌ
ｄ２：糖液０．２５ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
【００７６】
【表５】
2015024982.tif 000006
【００７７】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるハマボウフウ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べ蛍光性ＡＧＥｓ強度が低下しており、該抽出物が蛍光性ＡＧＥｓの生成を抑制していることが確認された。結果を表６に示す。
【００７８】
【表６】
2015024982.tif 000007
【００７９】
ＣＭＬ生成量の測定
ハマボウフウ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でＣＭＬ生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表５に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のＣＭＬ生成量をＣｉｒｃｕＬｅｘ ＣＭＬ／Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（株式会社サイクレックス製）を用いて測定した。まず、反応液６０μＬに第一次抗体液６０μＬを加え混合した。次にＣＭＬ固層化プレートに混合液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１０分間振とうした。その後、プレートに反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるＣＭＬ量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００８０】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるハマボウフウ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べＣＭＬ生成量が減少しており、該抽出物がＣＭＬの生成を抑制していることが確認された。結果を表７に示す。
【００８１】
【表７】
2015024982.tif 000008
【００８２】
ペントシジン生成量の測定
ハマボウフウ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でペントシジン生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表５に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のペントシジン生成量を、ペントシジン測定キット「ＦＳＫペントシジン(登録商標)」（株式会社伏見製薬所）を用いて測定した。まず、反応液５０μＬを酵素剤チューブに添加し、５５℃で９０分間反応させた。つぎに、１００℃で１５分間処理し酵素を失活させた。室温まで冷却した後、補助剤５０μＬを添加し混合した。次に抗原固層プレートに混合液５０μＬおよび第一次抗体液５０μＬを添加した後、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、３７℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で９分間静置した。その後、反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるペントシジン量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００８３】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるハマボウフウ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べペントシジン生成量が減少しており、該抽出物がペントシジンの生成を抑制していることが確認された。結果を表８に示す。
【００８４】
【表８】
2015024982.tif 000009
【００８５】
実施例３
キャッサバ抽出物の製造（エタノールによる抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したキャッサバの乾燥させた葉（９９．９ｇ）を９９．５％エタノール（１９９８．９ｇ）に浸漬し、２５℃で７日間静置して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：２０）。抽出液を減圧乾燥にて乾燥し、固形抽出物（６．５ｇ）を得た。以下、かかるエタノール抽出物をキャッサバ抽出物（Ｅ）と表記する。
【００８６】
キャッサバ抽出物の製造（水による抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したキャッサバの乾燥させた葉（１００．０ｇ）に水（４００．０ｇ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：４）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥し、固形抽出物（４．２ｇ）を得た。以下、かかる熱水抽出物をキャッサバ抽出物（Ｗ）と表記する。
【００８７】
蛍光性ＡＧＥｓ強度の測定
キャッサバ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法で蛍光性ＡＧＥｓ強度を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表９に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４００−６００ｎｍ）を９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて測定し、この値を以下に示す蛍光性ＡＧＥｓ強度計算式中のａ３とした。該計算式中のｂ３〜ｄ３についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定し、蛍光性ＡＧＥｓ強度を算出した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
蛍光性ＡＧＥｓ強度＝ａ３−ｂ３−ｃ３−ｄ３
ａ３：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋アミノ酸液１．０ｍＬ＋糖液０．２５ｍｌ
ｂ３：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
ｃ３：アミノ酸液１．０ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）０．５ｍｌ
ｄ３：糖液０．２５ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
【００８８】
【表９】
2015024982.tif 000010
【００８９】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるキャッサバ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べ蛍光性ＡＧＥｓ強度が低下しており、該抽出物が蛍光性ＡＧＥｓの生成を抑制していることが確認された。結果を表１０に示す。
【００９０】
【表１０】
2015024982.tif 000011
【００９１】
ＣＭＬ生成量の測定
キャッサバ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でＣＭＬ生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表９に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のＣＭＬ生成量をＣｉｒｃｕＬｅｘ ＣＭＬ／Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（株式会社サイクレックス製）を用いて測定した。まず、反応液６０μＬに第一次抗体液６０μＬを加え混合した。次にＣＭＬ固層化プレートに混合液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１０分間振とうした。その後、プレートに反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるＣＭＬ量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００９２】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるキャッサバ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べＣＭＬ生成量が減少しており、該抽出物がＣＭＬの生成を抑制していることが確認された。結果を表１１に示す。
【００９３】
【表１１】
2015024982.tif 000012
【００９４】
ペントシジン生成量の測定
キャッサバ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でペントシジン生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表９に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のペントシジン生成量を、ペントシジン測定キット「ＦＳＫペントシジン(登録商標)」（株式会社伏見製薬所）を用いて測定した。まず、反応液５０μＬを酵素剤チューブに添加し、５５℃で９０分間反応させた。つぎに、１００℃で１５分間処理し酵素を失活させた。室温まで冷却した後、補助剤５０μＬを添加し混合した。次に抗原固層プレートに混合液５０μＬおよび第一次抗体液５０μＬを添加した後、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、３７℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で９分間静置した。その後、反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるペントシジン量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
【００９５】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるキャッサバ抽出物を用いた試験区では、ブランクに比べペントシジン生成量が減少しており、該抽出物がペントシジンの生成を抑制していることが確認された。結果を表１２に示す。
【００９６】
【表１２】
2015024982.tif 000013
【００９７】
実施例４
散剤の製造
表１３に示す割合で原材料を混合し、散剤を製造した。該散剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、または本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【００９８】
【表１３】
2015024982.tif 000014
【００９９】
錠剤の製造
表１４に示す割合で原材料を混合した後、連続式打錠機（Ｐｉｃｃｏｌａ Ｂ−１０／ＲＩＶＡ社製）を用い、杵金型（φ８ｍｍ、Ｒ１２ｍｍ）、１錠あたりの重量１５０〜２００ｍｇ、回転盤の回転数１２ｒｐｍ、打錠圧４ｋＮの打錠条件で直接打錠し、錠剤を製造した。該錠剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、または本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【０１００】
【表１４】
2015024982.tif 000015
【０１０１】
経口液剤の製造
表１５に示す割合で原材料を蒸留水に溶解し、経口液剤を製造した。該経口液剤は、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【０１０２】
【表１５】
2015024982.tif 000016
【０１０３】
化粧水の製造
表１６に示す割合で原材料を蒸留水に溶解し、化粧水を製造した。該化粧水は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
【０１０４】
【表１６】
2015024982.tif 000017
【０１０５】
乳液の製造
表１７に示す割合で原材料を混合し、乳液を製造した。該乳液は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
【０１０６】
【表１７】
2015024982.tif 000018