(57)【要約】      （修正有）【課題】植物抽出物を有効成分とするセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤及び保湿剤の提供。【解決手段】ウーロン茶の一種である岩茶の抽出物を有効成分とするセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤及び保湿剤。該岩茶としては、中国福建省の北部の武夷山で育成された茶木から作られたものである大紅袍であることが好ましい。該岩茶抽出物としては、水及びエタノールから選ばれる少なくとも１種の溶剤の抽出物であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
岩茶抽出物を有効成分とするセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤。
【請求項２】
岩茶抽出物を有効成分とする保湿剤。
【請求項３】
岩茶が、大紅袍である請求項１記載のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は請求項２記載の保湿剤。
【請求項４】
前記岩茶抽出物が、水及びエタノールから選ばれる少なくとも１種の溶剤の抽出物である、請求項１又は３記載のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は請求項２又は３記載の保湿剤。
【請求項５】
前記岩茶抽出物が、岩茶の石油エーテル抽出残渣に対して、水、又は水及びエタノールで抽出して得られる、請求項４記載のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は保湿剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
スフィンゴ脂質の一つであるセラミドは皮膚の角質層に存在し、角質層中で細胞間脂質の約５０％を占めている。スフィンゴ脂質（sphingolipid）とは、スフィンゴシン骨格を含む複合脂質の総称である。また、グルコシルセラミドは、セラミドにグルコースが結合したスフィンゴ脂質の一種である。皮膚表皮細胞で合成されたセラミドは一旦グルコシルセラミドまたはスフィンゴミエリンの形で蓄えられた後、細胞外へ排出されて、β-グルコセレブロシダーゼ（β-グルコシダーゼ）とスフィンゴミエリナーゼの作用を受けて、再びセラミドとなり、細胞間脂質としての機能を成す。
【０００３】
従来、セラミド、グルコシルセラミド、ガラクトシルセラミド等のスフィンゴ脂質は、角質層の水分保持能力を亢進し、肌荒れの改善に効果があることが知られている（特許文献１〜２）。また、皮膚はセラミド／グルコシルセラミドを産生する能力を有するが、その能力は必ずしも十分ではないため、特許文献３のようにセラミド含有組成物を外部から皮膚に補充する方法も一般的に知られている。また、これらの方法により充分のセラミドを供給するためには、セラミド含有組成物中のセラミドの含有量を向上する必要があるが、セラミド含有組成物の安定性などから考慮する場合、セラミドの含有量を向上するには制限があり、且つ、セラミドの含有量の向上により製造コストが高くなるという問題もある。
【０００４】
一方、皮膚自らのセラミド／グルコシルセラミド産生能力を増強または促進させることができれば、外からセラミド／グルコシルセラミドを補充することなく、皮膚自身がセラミド／グルコシルセラミドを産生することで皮膚のバリヤ機能、水分保持機能を向上させることができると考えられる。さらに、皮膚自身が産生するため、通常の皮膚が有する構造のセラミドが合成され、皮膚への適応性がよくない等の安全性問題が無いと考えられる。
【０００５】
そこで、最近では、皮膚の角質層において、表皮セラミドの生成の促進を目的とした物質を生産する研究が活発に進められている。ここでセラミドの生成を促進し得る物質としては、マンネンタケ、ビーポーレン（Ｂｅｅ Ｐｏｌｌｅｎ）、センキュウなどの抽出物を有効成分とするセラミド産生促進剤が報告されている（特許文献４〜５）。しかし、上記植物性原料が高価ため、これらセラミド産生促進剤の製造コストも高くなり、より安価な原料が望まれている。
【０００６】
一般的にウーロン茶や緑茶は、その水抽出物を飲むことにより、脂肪の吸収を抑え、脂肪分解を促進する働きがあることが報告されている。また、ウーロン茶の抽出物を皮膚に塗布することにより、抗酸化効果（特許文献６）、メラニン生成抑制効果及び美白効果（特許文献７-８）、体臭抑制効果（特許文献９）などの効果が得られることが報告されている。
【０００７】
しかし、ウーロン茶の一種である岩茶又はその抽出物がセラミド産生促進効果を有することについては、これまで全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開昭６１−２６０００８号公報
【特許文献２】特開昭６１−２７１２０５号公報
【特許文献３】特開２００８−１２０７３１号公報
【特許文献４】特開２００５−１９４２４０号公報
【特許文献５】特開２０１０−７０４９９号公報
【特許文献６】特開２００４−３３９１４２号公報
【特許文献７】特開２００３−１０４８３５号公報
【特許文献８】特開２００１−２０６８３６号公報
【特許文献９】特開２００２−２９９５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、セラミドの産生を促進し得る物質であって、しかも天然に存在するものを得るべく研究を重ねた結果、岩茶抽出物に、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進効果があり、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、並びに保湿剤として使用できることを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の１）〜２）に係るものである。
１）岩茶抽出物を有効成分とするセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤。
２）岩茶抽出物を有効成分とする保湿剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係るセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤によれば、皮膚の持つセラミド／グルコシルセラミドの産生能力を向上させることができ、皮膚の保湿機能を有効的に向上させることができる。また、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤は、大量に入手が容易である岩茶を用いることから、工業的に安価で効率良く得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明において用いられる「岩茶」は、茶葉を発酵途中で加熱して発酵を止め、半発酵させた茶であり、ウーロン茶の一種である。「岩茶」は、福建省北部で生産され、福建省南部で生産される鉄観音等とは区別される。岩茶としては、大紅袍、小紅袍、鉄羅漢、半天腰、武夷肉桂、武夷水仙、武夷奇種、白鶏冠、水金亀等の銘柄が知られている。このうち、本発明においては大紅袍が好ましい。大紅袍は、福建省の北部の武夷山で育成された茶木から作られた岩茶である。
【００１４】
岩茶は、上記の各種岩茶を単独で用いてもよく、また、複数種を混合して用いてもよい。また、そのほかのツバキ科植物由来の茶を混合したブレンド茶も含まれる。本発明で用いる岩茶は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進効果や生産量の多さなどの点から、「大紅袍」が好ましい。
【００１５】
岩茶の抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。なお、抽出操作としては、回分操作、半連続操作、向流多段接触操作のいずれの方式も使用可能である。
【００１６】
上記溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて抽出操作を繰り返し行うことも可能である。このうち、セラミド及び／又はグルコシルセラミド産生促進の効果を高める観点から、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール又は石油エーテル等を用いるのが好ましく、更に水、エタノール、又はこれらを組み合せて用いるのが好ましく、水を用いるのがより好ましい。
【００１７】
水及び／又はエタノール抽出する場合には、好適な方法として、本発明の岩茶茶葉に対して石油エーテルを用いて抽出し、茶渣を分離して石油エーテルを発揮除去させた後、水で抽出し、茶渣を濾別して、水抽出物を得ること、また更に当該水抽出液に対して、減圧濃縮、エタノールを加えて静置沈殿した後分離させて、エタノール抽出物をそれぞれ得ることが挙げられる。
具体的な操作として、例えば、下記の態様で実施することができる。先ず、乾燥した岩茶茶葉を石油エーテルで抽出して、岩茶の石油エーテルの抽出物（a）を得、茶渣（i）を分離する。得られた茶渣（i）の中の石油エーテルを除去して茶渣（ii）を得、その後、水で茶渣（ii）を抽出して、水抽出液（b）を得、茶渣（iii）を得る。水抽出液（b）を減圧濃縮した後、エタノール沈殿法で、エタノールに溶解しない水抽出物（b1）とエタノールに溶解する水抽出物（b2）を得る。
【００１８】
各抽出工程において使用する溶剤の量は、抽出効率、抽出後の利用形態及び経済性の点から、岩茶1質量部に対して１質量部以上、好ましくは５質量部以上、さらに好ましくは８質量部以上で、３０質量部以下、好ましくは２０質量部以下、さらに好ましくは１５質量部である。また、１〜３０質量部、好ましくは５〜２０質量部、さらに好ましくは８〜１５質量部である。
【００１９】
各抽出工程において抽出温度及び抽出時間は、岩茶成分を充分且つ効率的に溶出させるように適宜調整することができる。抽出効率、抽出後の利用形態及び経済性の点から、温度は、４０℃以上、好ましくは５０℃以上、より好ましく５５℃以上であり、１００℃以下、好ましくは９０℃以下、より好ましくは８５℃以下である、また、４０〜１００℃、好ましくは５０〜９０℃、より好ましくは５５〜８５℃である。抽出時間は、３０秒以上、好ましくは３０分以上、より好ましくは１時間であり、９６時間以下、好ましくは４８時間以下、より好ましくは２４時間以下である。また、３０秒〜９６時間、好ましくは３０分〜４８時間、より好ましくは１時間〜２４時間である。
【００２０】
本発明において、各抽出工程で得られた各抽出液、又は各抽出液を合わせて得られる抽出液に対して、さらに濾過、濃縮、乾燥を行うことで、粉末状の岩茶抽出物が得られる。ここで、濾過、濃縮、乾燥の方法は特に限定されず、例えば、吸引ろ過、遠心分離などの濾過；蒸発濃縮、膜濃縮、凍結濃縮などの濃縮；噴霧乾燥、通風乾燥、真空乾燥などの乾燥、といった公知の方法を用いることができる。または、必要に応じて公知の方法で精製、脱臭、脱色等の処理を更に施してもよい。
【００２１】
上述の本発明の岩茶抽出物は、得られた抽出液をそのまま用いてもよく、適当な溶剤で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは加熱又は減圧下で濃縮した抽出物や乾燥粉末としたり、ペースト状に調整したものでもよい。また、凍結乾燥し、用いる時、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２２】
本発明の岩茶抽出物は、後記実施例に示すように、正常ヒト角化細胞において、セラミド及びグルコシルセラミドの量を増加させる作用を有する。従って、本発明の岩茶抽出物は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤又は保湿剤となり得、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進又は保湿のために、治療目的又は非治療目的で使用することができる。ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。非治療目的の使用には、美容目的の使用や、健康状態の維持のための使用などが含まれる。また、上記のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進又は保湿のための、治療目的の使用と、非治療目的の使用は、分けて行われることもできる。
また、本発明の岩茶抽出物は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤又は保湿剤を製造するために使用できる。
【００２３】
本発明において、「セラミド又はグルコシルセラミド産生促進」とは、セラミド又はグルコシルセラミドの合成及び／又は分泌能力を高め、皮膚におけるセラミド又はグルコシルセラミドの蓄積量を増加させる作用を意味する。ここで、セラミドとは、ヒト皮膚に存在する天然型セラミドを意味し、グルコシルセラミドは、当該セラミドにグルコースが結合したスフィンゴ脂質を意味する。
また、「保湿」とは、肌水分量を良好に保ち、肌のすべすべ感、なめらかさ若しくはしっとり感等を維持又は改善することを意味する。
【００２４】
セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤又は保湿剤を含む組成物は、角質層中のセラミド又はグルコシルセラミドの量を増加させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を回復又は維持するための医薬品、医薬部外品、化粧品、食品等として使用でき、また、食品にはセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤又は保湿剤として配合することができる。すなわち、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤又は保湿剤を配合した組成物は、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進又は保湿剤をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した日本国における医薬品、医薬部外品、化粧品、食品として使用することができる。
【００２５】
上記組成物の製剤形態は特に限定されない。医薬品の剤型としては、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、液剤、乳剤、注射液などが挙げられる。化粧品や日本国における医薬部外品の剤型としては、化粧水、ローション、クリーム、ゲル剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、口紅、軟膏等の皮膚に適用される皮膚外用剤が挙げられる。食品の剤型としては、菓子、チョコレート、ガム、飴、飲料等の通常の食品形態が挙げられる。また、これらの医薬品、医薬部外品、化粧品、食品には、使用目的に応じて効果を損なわない範囲内で他の任意の成分を含むことができる。
【００２６】
前記「日本国における医薬部外品」（quasi drug）とは、日本の薬事法第２条第２項に決められた特殊効果を有する化粧品であり、医薬品より効果が緩和である。
【００２７】
上記製剤中の本発明の岩茶抽出物の含有量（抽出物の乾燥物換算）は、一般的に製剤全質量の０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上であり、更に好ましくは１質量％以上であり、且つ２０質量％以下、好ましくは１０質量％以下、さらに好ましくは５％以下である。また０．０１〜２０質量％、好ましくは０．１〜１０量％、さらに好ましくは１〜５質量％である。
【００２８】
上記医薬品又は食品の成人１人当たりの１日の投与又は摂取量は、通常、本発明の岩茶抽出物（抽出物の乾燥物換算）として  １００ｍｇ以上、好ましくは１０００ｍｇ以上であり、且つ１０００００ｍｇ以下、好ましくは１００００ｍｇ以下である。また、１００〜１０００００ｍｇ、好ましくは１０００〜１００００ｍｇである。また、上記製剤の摂取頻度は任意であるが、１日１回〜数回に分けて摂取することが好ましい。
【００２９】
投与又は摂取対象としては、皮膚の保湿を必要とする若しくは希望するヒトであれば特に限定されないが、特に、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬等の皮膚疾患者における摂取が有効である。
【００３０】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞岩茶抽出物を有効成分とするセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤。
＜２＞岩茶抽出物を有効成分とする保湿剤。
＜３＞岩茶が、大紅袍である＜１＞のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は＜２＞の保湿剤。
＜４＞前記抽出物が、水及びエタノールから選ばれる少なくとも１種の溶剤の抽出物である、＜１＞又は＜３＞のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は＜２＞又は＜３＞の保湿剤。
＜５＞前記抽出物が、岩茶の石油エーテル抽出残渣に対して、水、又は水及びエタノールで抽出して得られる、＜４＞のセラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤、又は保湿剤。
【００３１】
＜６＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の温度は４０〜１００℃である。
＜７＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の温度は５０〜９０℃である。
＜８＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の温度は５５〜８５℃である。
＜９＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の時間は３０秒〜９６時間である。
＜１０＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の時間は３０分〜４８時間である。
＜１１＞＜１＞〜＜５＞において、抽出の時間は１時間〜２４時間である。
＜１２＞＜１＞〜＜５＞において、抽出溶剤の使用量は、岩茶１質量部に対して１〜３０質量部である。
＜１３＞＜１＞〜＜５＞において、抽出溶剤の使用量は、岩茶１質量部に対して５〜２０質量部である。
＜１４＞＜１＞〜＜５＞において、抽出溶剤の使用量は、岩茶１質量部に対して８〜１５質量部である。
【実施例】
【００３２】
次に、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【００３３】
（１）セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤の製造
表１に示す大紅袍（岩茶）及び鉄観音２０ｇのそれぞれに対して、１０倍質量部の石油エーテルを加え、６３〜６５℃にて３０分間の攪拌抽出を行った。このような抽出を３回繰り返してから、濾過により残渣Ｘを分離した。３回の石油エーテル抽出液を回収して、さらに減圧濃縮、真空乾燥して大紅袍及び鉄観音それぞれの抽出物（「抽出物Ｃ」という）を得た。この工程を石油エーテル抽出工程という。当該抽出物Ｃを１００ｖ／ｖ％のエタノールに溶解して、１％（ｗ/ｖ）及び０.１％（ｗ/ｖ）の濃度に調製後、次のセラミド及びグルコシルセラミド産生促進試験に供する。
【００３４】
【表１】
2015024992.tif 000002
【００３５】
次に、石油エーテル抽出工程後の残渣に対して、室温で残渣に残留する石油エーテルを揮発させてから、１０倍量（体積比）の水を加え、８０〜８５℃にて３０分間の攪拌抽出を２回繰り返し行った。濾過により水抽出液と残渣を分離した。水抽出液を６０℃で減圧濃縮し、１００ｍＬの水濃縮液にメスアップして、１００％エタノールを４００ｍＬ添加し、８０％のエタノール溶液を作り、２０分間の攪拌し、４℃に静置した後離心して、濾過によりエタノール抽出液と沈殿物を分離した。
分離した沈殿物を真空乾燥して大紅袍及び鉄観音それぞれの抽出物（「抽出物Ａ」という）を得た。当該抽出物Ａを１０％のエタノールに溶解して、１％（ｗ/ｖ）の濃度に調製後、次のセラミド及びグルコシルセラミド産生促進試験に供する。
【００３６】
一方、回収したそれぞれのエタノール抽出液Ｙに対して、さらに減圧濃縮、真空乾燥して大紅袍及び鉄観音それぞれの抽出物（「抽出物Ｂ」という）を得た。当該抽出物Ｂを５０ｖ／ｖ％のエタノールで溶解して、１％（ｗ/ｖ）及び０.１％（ｗ/ｖ）の濃度のエタノール溶液に調製後、次のセラミド及びグルコシルセラミド産生促進試験に供する。
【００３７】
（２）セラミド及びグルコシルセラミド産生促進試験
＜角化細胞（Keratinocytes）の培養＞
まず、正常ヒトの活性化角化細胞（Cascade Co., Ltd）を初代細胞として、７５ｃｍ２の培養フラスコ（増殖因子を含有する培地２ｍＬ）に、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターにて８０〜９０％コンフルエントの状態に達するまで培養した。また、継代細胞を１７５ｃｍ２の培養フラスコに８０〜９０％コンフルエントの状態に達するまでに持続培養した。さらに１２well Plate （細胞数１×１０５個/ｍＬ）に２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターにて８０〜９０％コンフルエントの状態に達するまで持続培養した。
【００３８】
次いで、上記１２well Plateにおいて増殖因子を含有しない培地を変更して、それぞれ上述実施例１及び比較例１で得た抽出物Ａ、Ｂ、Ｃの各エタノール溶液を２０μＬ/Ｗｅｌｌずつ添加した。なお、抽出物Ａ、Ｂ、Ｃのコントロールとして、それぞれ１０ｖ／ｖ％、５０ｖ／ｖ％、１００ｖ／ｖ％のエタノールのみ（セラミド及びグルコシルセラミド産生促進剤無添加）を添加した。同じ条件で７２時間培養した。７２時間培養した後、上清の培養液を除去し、PBS（２ｍＬ/Ｗｅｌｌ）にて細胞を２回洗浄した後、１ｍＬＰＢＳを入れ、各々細胞をセルハーベスターで試験管に回収した。それを、後のセラミド、グルコシルセラミド及び蛋白質の解析するための試料とした。
【００３９】
＜脂質抽出＞
脂質抽出は、Bligh & Dyer法を用いて行った。具体的には、前記回収した細胞を含むＰＢＳ液１ｍＬに、まず、メタノール：クロロホルム（２．５ｍＬ：１．２５ｍＬ）加え攪拌し、次に、２０分間振とう混合した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）を行い、上清Ａと沈殿Ｂを取り分けて、その上清Ａをセラミド量及びグルコシルセラミド量解析に供し、沈殿Ｂを次のタンパク量解析に供する。
【００４０】
＜タンパク量解析＞
細胞中のセラミド量及びグルコシルセラミド量を表示するためにタンパク量解析を行った。回収した沈殿Ｂに、９００μＬ  ＳＤＳ溶液を入れ、混合し、６０℃の水浴で２時間加熱した後、タンパク質を変性・分解させるように冷却した。次いで、２ＮのＨＣｌを１００μＬ加え、ＢＣＡ  Ｋｉｔ法によりタンパク量（Proと示す、単位はμｇ/ｍＬである）を測定した。
【００４１】
＜セラミド量及びグルコシルセラミド量の解析＞
残った上清ＡにPBS：クロロホルム（１．２５ｍＬ：１．２５ｍＬ）を入れ、２０分間振動混合し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）を行い、下相にあるクロロホルム層を単離、回収した。回収したクロロホルム層を３０℃、窒素還流下で乾固させて乾燥品を得た。乾燥品をクロロホルム−メタノール混合溶剤（クロロホルム：メタノール＝２.５ｍＬ：１.２５ｍＬ）１００μＬに溶解して、下記の薄層クロマトグラフィーによりセラミド及びグルコシルセラミドの定量（それぞれをCer及びGlyCerとし、単位μｇ/ｍＬ）を行った。
【００４２】
上記サンプルを５０μＬのサンプルインジェクターで取って、乾燥のＴＬＣ板にスポッティングした後、展開溶剤Ａであるクロロホルム：メタノール：酢酸＝１９０：９：１（ｖ/ｖ/ｖ）で薄層クロマトグラフィーを行った。展開剤がＴＬＣ板のトップに到達した後、ドライヤーで展開剤を乾燥した。次いで上記操作を１回繰り返した。その後、展開溶剤Ｂであるクロロホルム：メタノール：アセトン＝７６：２０：４（ｖ/ｖ/ｖ）で薄層クロマトグラフィーを行った。展開剤がＴＬＣ板のボタムからの２．５ｃｍの位置に到達した後、展開を停止し、ドライヤーで展開剤を乾燥した。硫酸銅のリン酸溶液（Ｈ３ＰＯ4：ＣｕＳＯ４:Ｈ２Ｏ＝４０ｍＬ：５０ｇ：４６０ｍＬ）を吹き、乾燥して、ＴＬＣ板を１８０℃のヒータに置き７分間加熱して顕色させた。顕色されたＴＬＣ板をスキャンしてセラミド（又はグルコシルセラミド）の量（それぞれをCer及びGlyCerとし、単位μｇ/ｍＬ）を解析した。
【００４３】
その後、下式１より、各サンプルに対して、得られたセラミド及びグルコシルセラミドの量（単位μｇ/ｍＬ）を各々のタンパク量（単位μｇ/ｍＬ）で割り、Cer/ProとGlyCer/Proが得られる。前記コントロールのそれぞれCer/ProとGlyCer/Proを１として、実施例１及び比較例１のCer/ProとGlyCer/Proの相対値を算出した。
【００４４】
【数１】
2015024992.tif 000003
【００４５】
＜結果＞
実施例１において、１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ａを用いた場合、Cer/Proの相対値が「4.40」であり、GlyCer/Proの相対値が「5.34」であった。また、0.１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ａを用いた場合、Cer/Proの相対値が「1.32」であり、GlyCer/Proの相対値が「1.27」であった。
実施例１において、１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ｂを用いた場合、Cer/Proの相対値が「3.88」、GlyCer/Proの相対値が「1.62」であった。また、0.１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ｂを用いた場合、Cer/Proの相対値が「1.11」であった。
実施例１において、抽出物Ｃを用いた時、１％（ｗ/ｖ）の濃度の場合Cer/Proの相対値が「1.94」、０．１％（ｗ/ｖ）の濃度の場合Cer/Proの相対値が「1.54」であった。
【００４６】
比較例１において、１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ａを用いた場合、Cer/Proの相対値が「1.48」であり、GlyCer/Proの相対値が「1.11」であった。
比較例１において、１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ｂを用いた場合、Cer/Proの相対値が「2.60」であり、１％（ｗ/ｖ）の濃度で抽出物Ｃを用いた場合、Cer/Proの相対値が「1.66」であった。
【００４７】
上記のように、実施例１で得た岩茶抽出物(抽出物Ａ, 抽出物Ｂ及び抽出物Ｃ)は、何れも、セラミド産生促進効果及びグルコシルセラミド産生促進効果を示し、その効果は比較例１の鉄観音抽出物に比べて優れていた。
【００４８】
以上から、本発明の岩茶抽出物はセラミド及びグルコシルセラミド産生促進効果を有し、よって、セラミド又はグルコシルセラミド産生促進剤として使用可能であることが確認された。