(57)【要約】【目的】アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の抽出物及び／又は種子油を含有するヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を提供する。【構成】本発明のアケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の抽出物及び／又は種子油は、優れたヒアルロン酸生成促進効果、コラーゲン生成促進効果及びマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果を有し、しわ形成防止・改善剤などに特に有効である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アケビの抽出物及び／又は種子油を含有することを特徴とするヒアルロン酸生成促進剤。
【請求項２】
アケビの抽出物及び／又は種子油を含有することを特徴とするコラーゲン生成促進剤。
【請求項３】
アケビの抽出物及び／又は種子油を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
【請求項４】
アケビの抽出物及び／又は種子油を含有することを特徴とする皮膚のしわ形成防止・改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な皮膚のしわ形成防止・改善剤、ヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びＭＭＰ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、紫外線、乾燥、寒冷、熱、薬物等のさまざまな物理的及び化学的ストレスに日々さらされている。その結果、皮膚の機能低下が引き起こされ、さまざまな皮膚の老化現象が顕在化する。皮膚の老化現象の一つに、しわがある。しわには、表皮性のしわと、真皮性のしわの二種類が存在することが知られている。表皮性のしわは小じわと呼ばれ、皮膚の乾燥により、表皮角質層中の水分量が低下することによって一時的に生じるしわである。小じわの改善方法としては、保湿効果を有する化粧品の使用が一般的である。一方、真皮性のしわは、太陽光線に含まれる紫外線や加齢によって形成されるしわである。その形成メカニズムとしては、紫外線や加齢による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン合成能の低下や、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の増加によるコラーゲンの分解促進が挙げられる。
【０００３】
乾燥に起因する表皮性のしわと真皮性のしわでは、組織学的形態、発症メカニズム、治療方法が異なり、紫外線や加齢により生じる真皮性のしわは、保湿効果を有する化粧品の使用によって改善させることはできない。
【０００４】
これまでに、紫外線によって生じる真皮性のしわを改善することを目的として、加水分解アーモンドを有効成分とする皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献１）、ジョチョウケイ、テンキシ及びキセンウの抽出物を有効成分とする紫外線照射に起因するしわの改善剤（特許文献２）が報告されている。
【０００５】
また、真皮には線維芽細胞やコラーゲンが存在し、Ｉ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはＩＩＩ、Ｖ、ＸＩＩ及びＸＩＶ型コラーゲンの存在が知られている。しわやたるみの原因の一つとして、Ｉ型コラーゲンの減少があげられる。従って、Ｉ型コラーゲンの生成を促進させることが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。また、Ｉ型コラーゲンの生成促進は皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。
【０００６】
また、線維芽細胞はコラーゲンなどのタンパク質およびヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のシワやタルミが発生すると考えられている。
【０００７】
特にヒアルロン酸は結合組織に広く分布する高分子多糖体として知られており、真皮中でゲル状の形態を呈し、肌の弾力を維持している。従って、ヒアルロン酸の変質や減少が皮膚老化において重要であると考えられている。また、ヒアルロン酸は高分子であるため、それを配合した化粧料を皮膚に直接塗布しても吸収されにくいという問題があった。そこで、これまで、線維芽細胞を活性化することで、細胞自らのコラーゲンやヒアルロン酸の合成を促進させることができる皮膚外用剤が模索されてきた（特許文献３）。また、ヒアルロン酸は、関節にも存在しており、関節の荷重の衝撃を和らげたり、関節の動きを滑らかにしたりする機能を果たしていることが知られている。変形性関節症、慢性関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風性関節炎などの場合は、関節液中のヒアルロン酸量が低下したり、加齢によって低下したりすることが知られている。このような疾患において、潤滑機能の改善、関節軟骨の被覆や保護、痛みの抑制及び病的関節液の改善若しくは正常化のために、関節液中のヒアルロン酸量を増加させることが考えられる。例えば、慢性関節リウマチ、外傷性関節症、骨関節炎及び変形性関節症の患者にヒアルロン酸ナトリウムの関節注入療法を行うと上記症状の改善が認められることが知られている。しかし、これらの治療は長期にわたる。従って、日常生活の中で手軽に治療できるヒアルロン酸生成促進剤を含有させた医薬品が望まれている。また、熱傷後の治癒過程で、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られており、熱傷の初期の治療薬としても、ヒアルロン酸生成促進剤が期待されている。
【０００８】
コラーゲンは、哺乳動物組織の約１/３を占める主要な構造タンパク質であり、軟骨、骨、腱、及び皮膚を含む多くのマトリックス組織の必須な成分である。マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に属するコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）により１箇所を切断されると、通常の組織内では安定なコラーゲン分子は、変性して一本鎖のゼラチンとなり、他の様々なプロテアーゼにより分解されるようになる。その結果、マトリックス組織の構造の完全性が失われてしまう。
【０００９】
ＭＭＰに属するゼラチナーゼは、線維芽細胞や内皮細胞、ガン細胞等が産生する酵素であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン（動脈、腱、皮膚など弾性組織の特殊成分をなす構造タンパク質）等の基質を分解する。従って、ゼラチナーゼに対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰはガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等の種々の病態での細胞外基質の分解に関与していることが報告されている。よって、ＭＭＰの阻害活性を有すれば、ガンの転移、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の治療及び改善に有用である。
【００１０】
アケビの公知文献としては、保湿効果（特許文献４、５）が示されているが、これは表皮性の肌性状変化を改善するものであり、真皮性のしわの形成を防止・改善するものではない。また、これらのヒアルロン酸生成促進効果、コラーゲン生成促進効果、ＭＭＰ阻害効果を有する植物由来の天然原料として、アケビは検討されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２０００−１１９１２５号公報
【特許文献２】特開２００６−１９９６１１号公報
【特許文献３】特開２００７−１９２４号公報
【特許文献４】特開２０００−７２６１６号公報
【特許文献５】特開２００１−２２６２４９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、皮膚のしわ形成防止・改善剤、ヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びＭＭＰ阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、アケビの抽出物及び／又は種子油に、ヒアルロン酸生成促進効果、コラーゲン生成促進効果及びＭＭＰ阻害効果を有し、優れたしわ形成防止・改善効果などが発揮されることを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
本発明に用いるアケビの抽出物とは、アケビ科アケビ属アケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）、ミツバアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  tｒｉｆｏｌｉａ）、ゴヨウアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌａ）、ホザキアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｌｏｎｇｅｒａｃｅｍｏｓａ）などが用いられ、部位としては、花、花穂、果実、茎、葉、枝、枝葉、根、種子等の植物体の一部又は全草を用いて抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。中でも、効果の面で果皮や種子が好ましい。
【００１５】
抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１６】
アケビの種子の場合は、そのまま前記溶媒にて抽出することができるが、場合によっては、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）によって油脂を除き、脱脂したものについて、さらに前記の抽出溶媒にて抽出することができる。種子は、圧搾や抽出後の残渣を使用することもできる。このように抽出を行うことにより、薬効を高めることができる。例としては、アケビ種子の圧搾後の残渣を炭化水素類で抽出し、その残渣を水、低級アルコール類、液状多価アルコール、ケトン類、炭化水素類の抽出溶媒（一種でも二種以上を混合して用いても良い）で抽出することが好ましく、水、エタノール、ヘキサンの抽出溶媒（一種でも二種以上を混合して用いても良い）がより好ましく、含水エタノール（水とエタノールの混液）又はエタノールが最も好ましい。
【００１７】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１８】
また、本発明に用いるアケビの種子油とは、アケビ科アケビ属アケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）、ミツバアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  tｒｉｆｏｌｉａ）、ゴヨウアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌａ）、ホザキアケビ（学名：Ａｋｅｂｉａ  ｌｏｎｇｅｒａｃｅｍｏｓａ）などの種子から得られた油である。
【００１９】
上記種子油は、圧搾や抽出など、食用油脂分野において通常行われる方法によって得ることができる。また、これらの種子油を脱ガム、脱酸、脱色、脱ロウ、脱臭のいずれか一つ以上の処理を行ってもよい。
【００２０】
本発明の皮膚のしわ形成防止・改善剤、ヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びＭＭＰ阻害剤には、上記抽出物及び／又は種子油をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロース又はその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等の成分を配合することができる。
【００２１】
本発明の皮膚のしわ形成防止・改善剤、ヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びＭＭＰ阻害剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、錠菓、カプセル剤、チョコレート、ガム、飴、飲料、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤、坐剤、注射用溶液等が挙げられる。
【００２２】
本発明に用いる上記抽出物及び／又は種子油の配合量は、本発明の皮膚のしわ形成防止・改善剤、ヒアルロン酸生成促進剤、コラーゲン生成促進剤及びＭＭＰ阻害剤に対し、抽出物の場合には固形物に換算し、種子油の場合にはその重量（溶媒を含まない状態の重量）にて、０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜５０重量％、さらに好ましくは０．０１〜２０重量％の配合が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。５０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００２３】
本発明のアケビの抽出物及び／又は種子油は、優れたヒアルロン酸生成促進効果、コラーゲン生成促進効果及びＭＭＰ阻害効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品の分野において貢献できるものである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物及び／又は種子油の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例に示す％とは重量％を、処方例に示す配合量の部とは重量部を示す。
【実施例１】
【００２５】
製造例１  アケビ果皮の熱水抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の果皮の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアケビの熱水抽出物を９．７ｇ得た。
【００２６】
製造例２  アケビ果皮の５０％エタノール抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の果皮の乾燥物２０ｇに５０％エタノール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビの５０％エタノール抽出物を９．４ｇ得た。
【００２７】
製造例３  アケビ果皮のエタノール抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の果皮の乾燥物５０ｇにエタノール１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビのエタノール抽出物を７．６ｇ得た。
【００２８】
製造例４  アケビ果皮の５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の果皮の乾燥物２０ｇに５０％１，３‐ブチレングリコール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、アケビの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を３８０ｇ得た。
【００２９】
製造例５  アケビ油
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の乾燥物７０ｋｇを圧搾し、未精製油１７ｋｇを得た。これに脱ガム処理を施し、アケビ油１５．６ｋｇを得た。
【００３０】
製造例６  アケビ種子の熱水抽出物１
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアケビの熱水抽出物を３．４ｇ得た。
【００３１】
製造例７  アケビ種子の５０％エタノール抽出物１
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣２０ｇに５０％エタノール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビの５０％エタノール抽出物を４．１ｇ得た。
【００３２】
製造例８  アケビ種子のエタノール抽出物１
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣５０ｇにエタノール１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビのエタノール抽出物を７．０ｇ得た。
【００３３】
製造例９  アケビ種子の５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物１
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣２０ｇに５０％１，３‐ブチレングリコール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、アケビの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を３８０ｇ得た。
【００３４】
製造例１０  アケビ種子の熱水抽出物２
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣をヘキサンに浸漬し撹拌後、濾過し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してアケビ種子の熱水抽出物を４．０ｇ得た。
【００３５】
製造例１１  アケビ種子の５０％エタノール抽出物２
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣をヘキサンに浸漬し撹拌後、濾過し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣２０ｇに５０％エタノール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビ種子の５０％エタノール抽出物を４．７ｇ得た。
【００３６】
製造例１２  アケビ種子のエタノール抽出物２
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣をヘキサンに浸漬し撹拌後、濾過し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣５０ｇにエタノール１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビ種子のエタノール抽出物を８．０ｇ得た。
【００３７】
製造例１３  アケビ種子の５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物２
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣をヘキサンに浸漬し撹拌後、濾過し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣２０ｇに５０％１，３‐ブチレングリコール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、アケビ種子の５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を３８０ｇ得た。
【００３８】
製造例１４  アケビ種子のアセトン抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣をヘキサンに浸漬し撹拌後、濾過し、残渣を減圧乾燥した。得られた残渣５０ｇにアセトン１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビ種子のアセトン抽出物を６．７ｇ得た。
【００３９】
製造例１５  アケビ種子のヘキサン抽出物
アケビ（Ａｋｅｂｉａ  ｑｕｉｎａｔａ）の種子の圧搾後の残渣５０ｇにヘキサン１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、アケビ種子のヘキサン抽出物を１．８ｇ得た。
【００４０】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例２】
【００４１】
実験例１  ヒアルロン酸合成酵素２（ＨＡＳ２）、１型コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ）、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡ発現量の測定
ヒト線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、コンフルエントになった時点で、終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように試料を添加した。コントロールには、試料を希釈した溶媒を添加した。２４時間培養後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＨＡＳ２、ＣＯＬ１Ａ、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＨＡＳ２発現率は、コントロールのＨＡＳ２  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＨＡＳ２  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。ＣＯＬ１Ａ発現率及びＭＭＰ発現率についても、同様に算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００４２】
ＨＡＳ２用のプライマーセット
ＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＧＡＡＧＣＧＡＴＴＡ（配列番号１）
ＧＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＡＴＧＡＧ（配列番号２）
ＣＯＬ１Ａ用のプライマーセット
ＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴ（配列番号３）
ＴＴＧＣＡＧＴＧＧＴＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧ（配列番号４）
ＭＭＰ−１用のプライマーセット
ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ（配列番号５）
ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ（配列番号６）
ＭＭＰ−２用のプライマーセット
ＣＣＧＴＣＧＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡ（配列番号７）
ＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＴＧＴＣＣＴＴ（配列番号８）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号９）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号１０）
【００４３】
これらの実験結果を表１〜４に示した。その結果、本発明のアケビの抽出物及び／又は種子油には、優れたＨＡＳ２発現促進効果（ヒアルロン酸生成促進効果）、ＣＯＬ１Ａ発現促進効果（コラーゲン生成促進効果）及びＭＭＰ発現抑制効果（ＭＭＰ阻害効果）が認められた。
【００４４】
【表１】
2015017048.tif 000002
【００４５】
【表２】
2015017048.tif 000003
【００４６】
【表３】
2015017048.tif 000004
【００４７】
【表４】
2015017048.tif 000005
【実施例３】
【００４８】
処方例１  化粧水
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                            １．０
２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００４９】
処方例１において、アケビ果皮の熱水抽出物を製造例６及び１０に置き換えたものを処方例２及び３とした。
【００５０】
処方例４  クリーム
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の５０％エタノール抽出物（製造例２）                ０．５
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００５１】
処方例４において、アケビ果皮の５０％エタノール抽出物を製造例７及び１１に置き換えたものを処方例５及び６とした。
【００５２】
処方例７  乳液
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮のエタノール抽出物（製造例３）                      １．０
２．スクワラン                                                    ５．０
３．オリーブ油                                                    ５．０
４．ホホバ油                                                      ５．０
５．セタノール                                                    １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
９．香料                                                          ０．１
１０．プロピレングリコール                                          １．０
１１．グリセリン                                                    ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００５３】
処方例７において、アケビ果皮のエタノール抽出物を製造例８及び１２に置き換えたものを処方例８及び９とした。
【００５４】
処方例１０  ゲル剤
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                            ０．００１
２．エタノール                                                    ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
５．香料                                                          適量
６．１，３‐ブチレングリコール                                    ５．０
７．グリセリン                                                    ５．０
８．キサンタンガム                                                ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
１０．水酸化カリウム                                                ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００５５】
処方例１１  パック
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ種子の熱水抽出物１（製造例６）                          ０．１
２．アケビ油（製造例５）                                          ０．１
３．ポリビニルアルコール                                        １２．０
４．エタノール                                                    ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
８．クエン酸                                                      ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                            ０．３
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００５６】
処方例１２  ファンデーション
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物（製造例４）１．０
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５７】
処方例１３  浴用剤
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                            ５．０
２．アケビ油（製造例５）                                          １．０
３．炭酸水素ナトリウム                                          ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                            適量
５．香料                                                          適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００５８】
処方例１４  軟膏
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ種子のアセトン抽出物（製造例１４）                      ０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                                  １０．０
４．流動パラフィン                                                ５．０
５．セタノール                                                    ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
７．プロピレングリコール                                        １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７、８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５９】
処方例１４において、アケビ種子のアセトン抽出物を製造例１５に置き換えたものを処方例１５とした。
【００６０】
処方例１６  散剤
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                          ２０．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ３０．０
３．微結晶セルロース                                            ５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【００６１】
処方例１７  錠剤
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮のエタノール抽出物（製造例３）                      ５．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ２９．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                        ２０．０
４．微結晶セルロース                                            ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                          ７．０
６．タルク                                                        ３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００６２】
処方例１８  錠菓
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ油（製造例５）                                          １．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ５０．０
３．エリスリトール                                              ４０．０
４．クエン酸                                                      ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                                          ３．０
６．香料                                                          適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００６３】
処方例１９  飲料
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                            ２．０
２．果糖ブドウ糖液糖                                            １２．５
３．クエン酸                                                      ０．1
４．香料                                                          ０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を混合し、飲料とする。
【００６４】
処方例２０  粉末飲料
処方                                                              配合量（部）
１．アケビ果皮の熱水抽出物（製造例１）                          １０．０
２．粉糖                                                        ６５．０
３．粉末ピーチ果汁                                              １５．０
４．Ｌ−アスコルビン酸                                            ８．０
５．結晶クエン酸                                                  １．２
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．７５
７．アスパルテーム                                                ０．０２
８．粉末ピーチ香料                                                ０．０３
［製造方法］成分１〜８を混合し、粉末飲料とする。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
以上のことから、アケビの抽出物及び／又は種子油は、ヒアルロン酸生成促進効果、コラーゲン生成促進効果及びマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果を有し、優れたしわ形成防止・改善剤などとして有効である。
【配列表】
2015017048000001.app