(57)【要約】【課題】複数回にわたる遠心分離と沈殿物回収を試料の移し替え回数を減らすことにより、簡便性を有し、コンタミネーションを防止した遠心分離技術を提供すること。【解決手段】回収容器110、反応容器120、ガイド130、キャップ140の４種類の容器を組み合わせることにより、薬剤を気泡が無い状態で流路で接続した状態を保持でき、遠心分離後に遠心ローターから全ての部材を1度に取り出せ、全ての薬剤と反応後に沈殿するサンプルを回収プラグ111で上澄みを排出すること無く簡単に回収できる遠心分離容器を提供する。【選択図】  図１
2015017850.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤を収納する複数の薬剤収納部と、遠心分離により沈殿物を回収する回収部と、を有する遠心分離容器において、
複数の薬剤収納部は互いに直列に配置され、
一方の端に配置された薬剤収納部は回収部に接続され、
さらに、隣接する薬剤収容部間には接続流路部を有し、当該接続流路部の流路幅は薬剤収容部の薬剤収容部分よりも幅が狭いことを特徴とする、遠心分離容器。
【請求項２】
請求項１において、
複数の薬剤収納部を直列に格納する格納部を有する、遠心分離容器。
【請求項３】
請求項１において、
各々の薬剤収容部は、互いに係合し合う固定ツメと固定ツメ溝を有する、遠心分離容器。
【請求項４】
請求項１において、
接続流路部の接続口は、シールによって密封されている、遠心分離容器。
【請求項５】
請求項１において、
接続流路部は、空気口を有する、遠心分離容器。
【請求項６】
請求項１において、
接続流路部は、端部にいくほど流路幅が広がっている、遠心分離容器。
【請求項７】
請求項６において、
接続流路部と薬剤収納部の接続部分は、薬剤収容部の断面の中心からずれた位置に配置されている、遠心分離容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
遠心分離容器に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
遠心分離は医薬品・化学薬品製造など幅広い分野で利用される一般的な分離技術である。この遠心分離は溶液中の物質を遠心力により溶液から分離濃縮し、容器の底に沈殿させることが出来る。多くの場合、その沈殿物を回収し、別の溶液に懸濁し反応させ、その溶液を遠心分離し沈殿物を回収するという操作を繰り返す。このような煩雑な操作は、次に示す医療分野でも行われている。
【０００３】
現在、敗血症または菌血症の患者の血液から何の細菌に侵されているかを判定する時に、血液培養後に寒天培養を経て得られる高純度で多量の細菌検体が必要である。しかし、培養工程は１〜２日間の時間を要するので、患者への最初の薬剤投与には間に合わず様々な細菌に対応する薬剤を投与している。様々な細菌に対応する薬剤は患者への負担を増やし、薬剤耐性を持った細菌の発生も起こしかねないのが現状である。
【０００４】
ここで、この最も時間を要する培養工程を行わず、血液の血球成分を除去し、細菌のみを回収する技術が研究されている。その一つに3つの薬剤を用いて血液中の血球成分のみを破砕し細菌のみを回収する技術が開発されている。この技術は薬剤aに血液を反応させた後、遠心分離を行い、その時の沈殿物を回収し、その回収物を薬剤bに懸濁させ、また遠心分離を行い、その沈殿物を回収し、その回収物を薬剤cに懸濁させて、また遠心を行い、その沈殿物を回収するというものである。この３回の遠心分離操作と沈殿物回収は人の手で行われる。
【０００５】
ここで、特許文献1には遠心後のサンプル回収を簡便に行える遠心分離容器が考案されている。この遠心分離容器は２つの溶液収納部があり、その溶液収納部は細い流路によって接続されているものである。
【０００６】
また、特許文献２には３つの薬剤収納部を有し、遠心分離により溶液中の粒子を沈殿させ、その沈殿物を次の薬剤収容部に簡便に導入できる分離デバイスが考案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平1-199159
【特許文献２】特表2012-525257
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
病院の病理室で働く作業者は様々な検査を同時に行っているため、何度も試料を入れ替える同じ作業を繰り返す煩雑な操作を行うことは現実的ではない。
【０００９】
解決しようとしている問題点は複数回の遠心分離操作と沈殿物回収を人の手で行われており、手間が掛る点である。また、入れ替え操作を複数回繰り返すことでコンタミネーションを起こすリスクがある。従来の複数の溶液収納部を有する遠心分離容器では、使用できる薬剤の種類は遠心分離容器が有する溶液収納部の数に限られていた。また、遠心分離容器の有する溶液収納部は流路で接続されているため、容器の開口部から溶液を入れる時に開口部から遠い溶液収納部に溶液を入れるには２つの溶液収納部を接続している流路よりも管を有した特殊なキャピラリ―ピペットが必要であった。また、沈殿物を効率的に回収できる構造ではなかった。
【００１０】
このように、人による操作能力や遠心分離条件などの使用環境に強い制約があった。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は用いる複数の薬剤が任意に決めた順序で気泡が無く流路で接続された状態を、ガイド部材を用いることで保持できる遠心分離容器を提供する。その遠心分離容器の薬剤セッティング方法を提供する。
【００１２】
本発明は用いる複数の薬剤が任意に決めた順序で気泡が無く流路で接続された状態を、各部材同士が固定し合うことで保持できる遠心分離容器を提供する。その遠心分離容器の薬剤セッティング方法を提供する。
本発明は用いる複数の薬剤がシール等によって密封された流路を有した容器を任意の順序でシールを取り外し、組み付けることで、複数の薬剤を任意の順序で気泡が無く流路で接続された状態を保持できる遠心分離容器を提供する。その遠心分離容器の薬剤セッティング方法を提供する。
【００１３】
セッティングした遠心分離容器に検体を入れ、この遠心分離容器を遠心分離機で遠心力を掛けることにより、任意にセッティングした順序で薬剤と反応し、その遠心力により沈殿物が生成されると同時に、その遠心力で次の薬剤に導入される。最後の部材の底に全ての薬剤と反応してもなお沈殿する粒子が濃縮される。
セッティングした遠心分離容器を遠心分離機で処理した後の沈殿物を回収する方法を提供する。
【００１４】
この遠心分離容器を用いて反応させる検体は血液などの液体または液体に溶解するものであっても良い。
【発明の効果】
【００１５】
遠心分離後に沈殿物を回収し、その沈殿物を別の薬剤に懸濁させ、また遠心分離を行うという煩雑な操作を減らすことができる。また、別の容器に入れ替える時に起こる不純物が操作中に誤って混入してしまうコンタミネーションのリスクも抑えられる技術を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例１の遠心分離容器の特徴を示した投影図。
【図２】実施例１の遠心分離容器の薬剤セッティング方法を示した模式図。
【図３】実施例２の遠心分離容器の特徴を示した投影図。
【図４】実施例２の遠心分離容器の薬剤セッティング方法を示した模式図。
【図５】実施例３の遠心分離容器の特徴を示した投影図。
【図６】実施例３の遠心分離容器の薬剤セッティング方法を示した模式図。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を実施するための好適な形態について図面を参照しながら３つの実施例を説明する。各実施例について、次の項目について説明する。
１．各部材の概略
２．薬剤のセッティング方法
３．検体試料の処理
４．沈殿物の回収
【００１８】
なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本実施例が狭く解釈されることはなく、様々な変形例が含まれる。例えば、上記した実施例は本実施例を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。また、ある実施例の構成の一部を他の実施例の構成に置き換えることが可能であり、また、ある実施例の構成に他の実施例の構成を加えることも可能である。また、各実施例の構成の一部について、他の構成の追加・削除・置換をすることが可能である。
【実施例１】
【００１９】
１．各部材の概略
図１は本実施例に係る遠心分離容器の構成を示す模式図である。
遠心分離容器は着脱可能な反応容器120と回収容器110、この２つの部材の取り扱いを容易にするガイド130、内容物の飛散を防止するキャップ140の４種類の部材で構成されたものである。遠心分離の際に沈殿する方向を下流側とすると、ガイド130の中の下流側に回収容器110を設置し、上流に向かって反応容器120を任意の薬剤の種類だけ重ねて接続するものである。
【００２０】
反応容器120は薬剤が格納される反応層123と、反応層123と下流側に隣接する反応容器の反応層123もしくは回収容器の反応層112とを接続する流路122と、流路122の下流側に有するテーパー口121で構成される。細い流路に気泡が入らないように導入出来るテーパー口121は、流路122から下流側に隣接する反応容器の反応層123もしくは回収容器の反応層112に気泡が入らないように導入出来るように上流側にむかって断面積が小さくなっていく構成である。反応層123は、反応層123内の遠心分離による沈殿物が、流路122に導入され易いように、下流方向に断面積が小さくなっていくテーパーの構成を持ち、テーパーを介して流路122と接する。流路122は、接続される反応層内の薬剤が混ざり難いように断面積を出来るだけ小さくした流路が望ましい。
【００２１】
回収容器110は薬剤が格納される反応層112と沈殿物だけを簡単に取り出せる回収プラグ111で構成される。回収プラグ111はネジを切ってあり遠心力では外れることはない。反応層112内の遠心分離による沈殿物が回収プラグ111に導入され易いように、反応層112は回収プラグ側方向に断面積が小さくなっていくテーパーを介して回収プラグ111と接する。
【００２２】
ガイド130は着脱可能である回収容器110と反応容器120を1つの容器として扱うためのガイドであり、特に遠心分離機のローターから容易に全ての部材を取り出すためのものである。ガイド130の上下は開口しており、挿入口131から回収容器110を最初に挿入し、回収容器110を挿入後、任意の数量の反応容器120を挿入する。そして、取り出し口132から回収プラグ111を取り出す。回収容器110が底から抜けないように取り出し口132は挿入口131より小さくしてあると望ましい。
【００２３】
キャップ140はバイオセーフティーを考慮したもので、遠心分離を行っても溶液が飛散しないのであれば、キャップ140を付けなくても良い。
【００２４】
テーパーは上下左右対称に形成せずに、非対称に形成しても良い。遠心分離後に上澄み溶液を回収する場合、容器の底に張り付いた沈殿物を上澄み溶液に再懸濁しないように、容器を傾けた時に沈殿物が上澄み溶液から早く取り出せるためである。
【００２５】
回収容器110、反応容器120、ガイド130の素材は液中の気泡の有無を確認するために、すべて透明であることが望ましい。また、この遠心分離容器の外形は角柱または円柱であっても良い。
【００２６】
２．薬剤のセッティング方法
図２は検体を遠心分離する前に行う薬剤セッティング方法を模式的に示したものである。本実施例には、検体を３種類の薬剤a，b，cと反応させたい場合について示している。
【００２７】
図２（A）に示すようにガイド130内に回収容器110を設置し、検体が最後に反応する薬剤a 150を回収容器110内の反応層112に分注する。ここで、回収プラグ111は完全に密閉された状態にする。
【００２８】
その後、図２（B）に示すように、薬剤a 150が入った回収容器110に反応容器120を接続し、図２（C）に示すように、流路122に薬剤a 150を満たす。回収容器110と反応容器120を接続するときはゆっくり接続し、回収容器110中に気泡が無い状態にする。また、流路から表面張力で薬剤a 150が少し出ている状態にするのが望ましい。これはこの上に溶液を積層させる時に気泡が入らないようにするためである。
【００２９】
図２（D）に示すように、検体が最後から2番目に反応する薬剤b 151を反応容器120に分注する。薬剤a 150と薬剤b 151が混合することを避けたい場合は緩衝液を数滴積層させてから薬剤b 151を分注する。
【００３０】
次に、薬剤b 151を分注した反応容器120の上流に、反応容器120を接続し、図２（E）に示すように流路122に薬剤b 151を満たす。その後、接続した反応容器120に検体が最初に反応する薬剤c 152を積層させる。この積層させる薬剤c 152の場所に、検体と薬剤c 152を懸濁し、既に反応させた溶液を積層させても良い。また、３種類より多くの種類の薬剤と反応させたい場合は、同じようにして反応容器を積み重ねる。
【００３１】
図２（F）に示すように、全ての薬剤が積層出来たら回収容器110に付いている回収プラグ111を調節して、各薬剤界面が流路の中に来るように回収容器220の反応層112内にある薬剤を下流の回収プラグに移すようにする。これは薬剤間の混合を遅くさせるためである。
【００３２】
また、薬剤の比重が上の薬剤よりも軽い場合は積層させることは難しいので、ショ糖やグリセロールなど薬剤と反応せず比重が重い試薬を混合させて上の薬剤よりも比重を重くすると良い。
【００３３】
これで薬剤セッティングが完了する。
【００３４】
３．検体試料の処理
本実施例の検体試料の処理には、３種類の所定の薬剤により血液中から細菌を回収する方法を記載しているが、本実施例に記載される所定の薬剤に限られず、任意の複数の薬剤に対しても実施できる。
【００３５】
（１）図２（F）中の薬剤c 152を反応容器120に積層させた際に検体を懸濁していない場合、薬剤c 152に検体試料を懸濁する。
【００３６】
（２）図２（F）に示すように、内容物が飛散しないようにキャップ140を取り付ける。
【００３７】
（３）検体と薬剤を全てセッティングした遠心分離容器を遠心分離機のローターにセッティングする。ここで、遠心分離機のローターにはスウィングローターが望ましい。
【００３８】
遠心分離を行う時の遠心条件（回転速度や遠心時間）については溶液の粘性と比重と細菌の比重から算出される沈降速度から決定する。この沈降速度は以下の式に示す、ストークスの式から算出される。
【００３９】
【数１】
2015017850.tif 000003
【００４０】
通常、遠心分離条件は中型の遠心分離機では回転数2000RPM、遠心時間10分で完了する。
【００４１】
この決定した遠心条件で遠心分離を行う。
【００４２】
（４）薬剤c 152により検体中の赤血球が破砕される。白血球、血小板と細菌が破壊されずに残る。
【００４３】
（５）遠心力により破壊されなかった白血球、血小板と細菌が遠心力により下の薬剤b 151に導入される。
【００４４】
（６）薬剤b 151では白血球と血小板が破砕される。細菌のみが破壊されずに残る。
【００４５】
（７）遠心力により破壊されなかった細菌が薬剤a 150に導入される。薬剤a 150はゴミを除去して、精製率を上げる役割を果たす。
【００４６】
（８）遠心力により細菌が回収プラグ111に沈殿物として張り付く。
【００４７】
４．沈殿物の回収
遠心分離後、回収プラグ111を外して細菌を回収する。回収した細菌はグラム染色やラマンスペクトルによるグラム判定などが行われ、細菌の菌種を同定する。
【実施例２】
【００４８】
１．各部材の概略
図３は本実施例に係る遠心分離容器の構成を示す模式図である。
遠心分離容器は着脱可能な反応容器220と回収容器210、内容物の飛散を防止するキャップ230の３種類の部材で構成されたものである。遠心分離の際に沈殿する方向を下流側とすると、下流に回収容器210を設置し、上流に向かって反応容器220を任意の薬剤の種類だけ重ねて接続するものである。
【００４９】
反応容器220は薬剤が格納される反応層223と、反応層223と下流側に隣接する反応容器の反応層223もしくは回収容器の反応層212とを接続する流路222と、流路222の下流側に有するテーパー口221で構成される。テーパー口221は、流路222から下流側に隣接する反応容器の反応層223もしくは回収容器の反応層212に気泡が入らないように導入出来るように上流側にむかって断面積が小さくなっていく構成である。また、隣接する反応容器220または回収容器210、キャップ230同士を連結した状態で固定するために、反応容器220は隣接する反応容器220もしくは回収容器210の有する固定ツメ溝に係合する固定ツメ225と、隣接する反応容器もしくは回収容器が有する固定ツメに対する固定ツメ溝224を有する。反応層223と流路222は遠心分離による沈殿物が流路に導入され易いようにテーパーで接続されている。流路222は接続される反応層内の薬剤が混ざり難いように断面積を出来るだけ小さくした流路が望ましい。
【００５０】
回収容器210は下流に設置され、薬剤が格納される反応層212と沈殿物だけを簡単に取り出せる回収プラグ211で構成される。また、回収容器210は上流側に隣接する反応容器220と接続して固定出来るように、反応容器220が有する固定ツメ225もしくは固定ツメ溝224に係合する固定ツメ溝214もしくは固定ツメ213を有する。回収プラグ211はネジを切ってあり遠心力では外れることはない。反応層212内の遠心分離による沈殿物が回収プラグ211に導入され易いように、反応層212は回収プラグ側方向に断面積が小さくなっていくテーパーを介して回収プラグ211と接続されている。
【００５１】
キャップ230は固定ツメ溝232を有した構造である。キャップ230はバイオセーフティーを考慮したもので、遠心分離を行っても溶液が飛散しないのであれば、キャップ230を付けなくても良い。
【００５２】
テーパーは上下左右対称に形成せずに、非対称に形成しても良い。遠心分離後に上澄み溶液を回収する場合、容器の底に張り付いた沈殿物を上澄み溶液に再懸濁しないように、容器を傾けた時に沈殿物が上澄み溶液から早く取り出せるためである。
【００５３】
回収容器210、反応容器220の素材は液中の気泡の有無を確認するために、すべて透明であることが望ましい。また、この遠心分離容器の外形は角柱または円柱であっても良い。
【００５４】
２．薬剤のセッティング方法
図４は検体を遠心分離する前に行う薬剤セッティング方法を模式的に示したものである。
【００５５】
本実施例には、検体を３種類の薬剤a，b，cと反応させたい場合について示している。
【００５６】
また、本実施例では、下流側の容器が固定ツメを有し、隣接する上流側の容器がその固定ツメに係合する固定ツメ溝を有する構成であるが、下流側の容器が固定ツメ溝を有し、隣接する上流側の容器がその固定ツメ溝に係合する固定ツメを有する構成でもよい。
【００５７】
図４（A）に示すように、回収容器210内に検体が最後に反応する薬剤a 240を分注する。ここで、回収プラグ211は完全に密閉された状態にする。
【００５８】
図４（B）に示すように、この薬剤a 240が入った回収容器210に反応容器220を接続し、回収容器210の固定ツメ213を接続した反応容器220の固定ツメ溝224に係合させることで固定する。回収容器210と反応容器220を接続するときはゆっくり接続し、回収容器210中に気泡が無い状態にする。
【００５９】
図４（C）に示すように、反応容器220の流路221に薬剤a 240を満たす。流路222から表面張力で薬剤a 240が少し出ている状態にするのが望ましい。これはこの上に溶液を積層させる時に気泡が入らないようにするためである。
【００６０】
次に図４(D)に示すように、検体が最後から2番目に反応する薬剤b 241を反応層223に分注する。薬剤a 240と薬剤b 241が混合することを避けたい場合は緩衝液を数滴積層させてから薬剤b 241を分注する。
【００６１】
次に、薬剤b 241を分注した反応容器220の上流に、反応容器220を接続し、下流側の反応容器220の固定ツメ225を接続した上流側の反応容器220の固定ツメ溝224に係合させることで固定する。
【００６２】
図４(E)に示すように、上流に接続した反応容器220の流路222には、下流側に分注した薬剤b 241を満たし、反応層223には検体が最初に反応する薬剤c 242を積層させる。この積層させる薬剤c 242の場所に、検体と薬剤c 242を懸濁し、既に反応させた溶液を積層させても良い。また、３種類より多くの種類の薬剤と反応させたい場合は、同じようにして反応容器220を積み重ねる。
【００６３】
図４(F)に示すように、全ての薬剤が積層出来たら回収容器210に付いている回収プラグ211を調節して、各薬剤界面が流路の中に来るようにする。これは薬剤間の混合を遅くさせるためである。
【００６４】
また、薬剤の比重が上の薬剤よりも軽い場合は積層させることは難しいので、ショ糖やグリセロールなど薬剤と反応せず比重が重い試薬を混合させて上の薬剤よりも比重を重くすると良い。
【００６５】
これで薬剤セッティングが完了する。
【００６６】
３．検体試料の処理
（１）図４(F)中の薬剤c 242に検体を懸濁していない場合、薬剤c 242に検体試料を懸濁する。
【００６７】
（２）図４(F)に示すように、内容物が飛散しないようにキャップ230を取り付ける。
【００６８】
（３）検体と薬剤を全てセッティングした遠心分離容器を遠心分離機のローターにセッティングする。ここで、遠心分離機のローターにはスウィングローターが望ましい。
【００６９】
遠心分離を行う時の遠心条件（回転速度や遠心時間）については溶液の粘性と比重と細菌の比重から算出される沈降速度から決定する。この沈降速度は以下の式に示す、ストークスの式から算出される。
【００７０】
【数２】
2015017850.tif 000004
【００７１】
通常、遠心分離条件は中型の遠心分離機では回転数2000RPM、遠心時間10分で完了する。
【００７２】
この決定した遠心条件で遠心分離を行う。
【００７３】
（４）薬剤c 242により検体中の赤血球が破砕される。白血球、血小板と細菌が破壊されずに残る。
【００７４】
（５）遠心力により破壊されなかった白血球、血小板と細菌が遠心力により下の薬剤b 241に導入される。
【００７５】
（６）薬剤b 241では白血球と血小板が破砕される。細菌のみが破壊されずに残る。
【００７６】
（７）遠心力により破壊されなかった細菌が薬剤a 240に導入される。薬剤a 240はゴミを除去して、精製率を上げる役割を果たす。
【００７７】
（８）遠心力により細菌が回収プラグ211に沈殿物として張り付く。
【００７８】
４．沈殿物の回収
遠心分離後、回収プラグ211を外して細菌を回収する。回収した細菌はグラム染色やラマンスペクトルによるグラム判定などが行われ、細菌の菌種を同定する。
【実施例３】
【００７９】
１．各部材の概略
図５は本実施例に係る遠心分離容器の構成を示す模式図である。遠心分離容器は着脱可能な反応容器320と回収容器310、内容物の保存・保持または飛散を防止するキャップ330の３種類の部材で構成されたもので、回収容器310に反応容器320を薬剤の種類だけ重ねて接続するものである。
【００８０】
反応容器320は薬剤が事前に格納されている反応層323、別の隣接する反応層と接続される流路322、別の隣接する反応層の薬剤と事前に薬剤が格納されている反応層323を接続する時に、流路に気泡が入らないように接続出来るテーパー口321、別の隣接する反応層の薬剤と事前に薬剤が格納されている反応層323を接続する時に気泡を大気中に逃がす空気口326で構成される。また、隣接する反応容器320または回収容器310同士を連結した状態で固定するために、固定ツメ325と固定ツメ溝324を有する。反応層323と流路322は遠心分離による沈殿物が流路に導入され易いようにテーパーで接続されている。流路322は接続される反応層内の薬剤が混ざり難いように断面積を出来るだけ小さくした流路が望ましい。
【００８１】
回収容器310は薬剤が格納される反応層312と沈殿物だけを簡単に取り出せる回収プラグ311で構成される。また、反応容器320と接続し、固定出来るように固定ツメ313を有する。回収プラグはネジを切ってあり遠心力では外れることはない。反応層312は回収プラグ311へは、遠心分離による沈殿物が流路に導入され易いようにテーパーで接続されている。
【００８２】
キャップ330は密封穴333、密封穴へ気泡が無く薬剤を導入するテーパー口331、隣接する反応容器320または回収容器310と固定するための固定ツメ溝332で構成される。キャップ330は次の２つ用途で用いる。1つ目の用途は薬剤を事前に気泡が無い状態で回収容器310や反応容器320に格納するためである。2つ目の用途はバイオセーフティーを考慮したもので、遠心分離を行っても溶液が飛散しないようにするためである。飛散しないのであれば、キャップ330を付けなくても良い。密封穴333は針などで穴が開けられるような膜で薬剤を密封する。
【００８３】
テーパーは上下左右対称に形成せずに、非対称に形成しても良い。遠心分離後に上澄み溶液を回収する場合、容器の底に張り付いた沈殿物を上澄み溶液に再懸濁しないように、容器を傾けた時に沈殿物が上澄み溶液から早く取り出せるためである。
【００８４】
回収容器310、反応容器320、キャップ330の素材は液中の気泡の有無を確認するために、すべて透明であることが望ましい。また、この遠心分離容器の外形は角柱または円柱であっても良い。
【００８５】
２．薬剤のセッティング方法
図６は検体を遠心分離する前に行う薬剤セッティング方法を模式的に示したものである。
【００８６】
図６(A)に示すように、検体が最後に反応させる薬剤a 340が格納されている回収容器310と最後から2番目に反応させる薬剤ｂ 341が格納されている反応容器320を用意する。薬剤a 340はキャップ330で気泡が無い状態で密封されている。薬剤b 341はキャップ330とシール350で気泡が無い状態で密封されている。ここで、回収プラグ311は完全に閉めた状態である。
【００８７】
図６(B)に示すように、回収容器310のキャップ330を外し、反応容器320のシール350を外す。キャップ330が取り外し難い場合はキャップの密封穴の膜に針などで穴を開け、空気が入るようにする。反応容器320のキャップ330は内部の薬剤ｂ 341が流出させないために取り外さない。
【００８８】
図６(C)この薬剤a 340が入った回収容器310に薬剤ｂ 341が入った反応容器320を接続する。固定ツメ313を固定ツメ溝324に固定する。回収容器310と反応容器320を接続するときはゆっくり接続し、気泡が空気口326から外に出すようにする。
【００８９】
図６(D)に示すように、反応容器320のキャップ330を取り外す。
【００９０】
図６(E)に示すように、検体が最初に反応する薬剤c 342が格納された反応容器320を図６(B)(C)(D)と同様に接続する。ここで、最後の反応容器320を接続する前に密封シール350を外す前にキャップ330を外し、検体を薬剤c 342と反応させて、キャップ330をしてから図６(B)(C)(D)を行っても良い。３種類より多くの種類の薬剤と反応させたい場合は、同じようにして積み重ねる。全ての薬剤が積層出来たら各反応容器320の空気口326をシール351で塞ぎ、薬剤が流出するのを防ぐ。
【００９１】
また、薬剤の比重が上の薬剤よりも軽い場合は積層させることは難しいので、ショ糖やグリセロールなど薬剤と反応せず比重が重い試薬を混合させて上の薬剤よりも比重を重くすると良い。
【００９２】
これで薬剤セッティングが完了する。
【００９３】
３．検体試料の処理
（１）図６(F)中の薬剤c 342に検体を懸濁していない場合、薬剤c 242に検体試料を懸濁する。
【００９４】
（２）図６(F)に示すように、内容物が飛散しないように反応容器320にキャップ330を取り付ける。キャップ330が取り付けづらい場合はキャップ330の密封穴333に針などで穴を開け、反応容器330にキャップ330を取り付けてから、シールなどで穴を塞ぐ。
【００９５】
（３）検体と薬剤を全てセッティングした遠心分離容器を遠心分離機のローターにセッティングする。ここで、遠心分離機のローターにはスウィングローターが望ましい。遠心分離を行う時の遠心条件（回転速度や遠心時間）については溶液の粘性と比重と細菌の比重から算出される沈降速度から決定する。この沈降速度は以下の式に示す、ストークスの式から算出される。
【００９６】
【数３】
2015017850.tif 000005
【００９７】
通常、遠心分離条件は中型の遠心分離機では回転数2000RPM、遠心時間10分で完了する。
【００９８】
この決定した遠心条件で遠心分離を行う。
【００９９】
（４）薬剤c 342により検体中の赤血球が破砕される。白血球、血小板と細菌が破壊されずに残る。
【０１００】
（５）遠心力により破壊されなかった白血球、血小板と細菌が遠心力により下の薬剤b 341に導入される。
【０１０１】
（６）薬剤b 341では白血球と血小板が破砕される。細菌のみが破壊されずに残る。
【０１０２】
（７）遠心力により破壊されなかった細菌が薬剤a 340に導入される。薬剤a 340はゴミを除去して、精製率を上げる役割を果たす。
【０１０３】
（８）遠心力により細菌が回収プラグ311に沈殿物として張り付く。
【０１０４】
４．沈殿物の回収
遠心分離後、回収プラグ311を外して細菌を回収する。回収した細菌はグラム染色やラマンスペクトルによるグラム判定などが行われ、細菌の菌種を同定する。
【符号の説明】
【０１０５】
110    回収容器
111    回収プラグ
112    反応層
120    反応容器
121    テーパー口
122    流路
123    反応層
130    ガイド
131    挿入口
132    取り出し口
140    キャップ
150    薬剤a
151    薬剤b
152    薬剤c
210    回収容器
211    回収プラグ
212    反応層
213    固定ツメ
214    固定ツメ溝
220    反応容器
221    テーパー口
222    流路
223    反応層
224    固定ツメ溝
225    固定ツメ
230    キャップ
231    固定ツメ溝
240    薬剤a
241    薬剤b
242    薬剤c
310    回収容器
311    回収プラグ
312    反応層
313    固定ツメ
320    反応容器
321    テーパー口
322    流路
323    反応層
324    固定ツメ溝
325    固定ツメ
326    空気口
330    キャップ
331    テーパー口
332    固定ツメ溝
333    密封穴
340    薬剤a
341    薬剤b
342    薬剤c
350    シール
351    シール
【図１】
2015017850.tif 000006
【図２】
2015017850.tif 000007
【図３】
2015017850.tif 000008
【図４】
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【図５】
2015017850.tif 000010
【図６】
2015017850.tif 000011