(57)【要約】【課題】従来の細胞培養容器における機能を損なうことなく、培養失敗に繋がるリスクを低減させることができる細胞培養容器を提供すること。【解決手段】底壁と側壁を有し、底壁に細胞を収容するための凹部（マイクロウェル）が一つ以上配置された細胞培養容器において、凹部が垂直断面形状において開口端部に円弧を有するようにし、前記円弧の半径ｒが凹部の最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲となるようにする。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
底壁と側壁を有する細胞培養容器であって、底壁に細胞を収容するための凹部が一つ以上配置されており、
凹部は、垂直断面形状において開口端部に円弧を有し、
前記円弧の半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲であることを特徴とする、前記細胞培養容器。
【請求項２】
半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１倍超２倍以下の範囲である、請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
凹部の底面が、円錐状または円錐台状の陥凹部を有することを特徴とする、請求項１または２に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
凹部の底面が円形であり、その直径が５００μｍ以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞培養容器。
【請求項５】
前記円弧と凹部開口面との交点により画定される凹部の最大開口径が、凹部底面の最大径の１．０５〜２．０倍の範囲である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞培養容器。
【請求項６】
細胞培養容器を用いて細胞を培養する方法であって、
前記細胞培養容器は、底壁と側壁を有し、底壁に細胞を収容するための凹部が一つ以上配置されており、
凹部は、垂直断面形状において開口端部に円弧を有し、
前記円弧の半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲であることを特徴とする、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、受精卵などの個別管理が必要な細胞を培養するための細胞培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵（接合子）を作製して、さらに受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となり、この卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術（ＡＲＴ）が、家畜領域のみならずヒトの不妊医療でも確立されている。
【０００３】
しかし、体外受精による妊娠成功率は必ずしも高くはなく、たとえばヒトにおいては、その妊娠成功率は、依然として２５〜３５％程度に留まっている。その原因の一つとして、培養において子宮への移植に適した良質な受精卵を得られる確率が高くないことが挙げられる。培養された受精卵は、専門家が顕微鏡で個別に観察することにより、子宮への移植に適した良質な受精卵であるか否か判別されている。
【０００４】
体外受精においては、容器中に培養液のドロップを作り、この中に受精卵を入れて体外培養するマイクロドロップ法が用いられることが多い。従来、このマイクロドロップ法には、細胞培養容器として、底面が単一平面であり、直径が３０〜６０ｍｍのシャーレが使用され、シャーレの底面に、培養液のドロップを、間隔をあけて複数個作製し、その中で細胞を培養する方法が使用されてきた。
【０００５】
通常のシャーレでドロップを作成すると、受精卵自身の細胞運動やドロップ内の対流によって受精卵の位置が変わってしまい、その中で培養して観察していた受精卵の特定が難しくなるという問題があった。したがって、受精卵の位置を制御できる手段が求められていた。
【０００６】
受精卵の培養効果をより効率的にするためには受精卵同士の相互作用（パラクライン効果）を利用することが好ましいとされている。これらの効果を利用しつつ、受精卵の位置を制御する目的で、シャーレの底面に受精卵のサイズと同程度のマイクロウェルを形成し、複数個のマイクロウェルを覆うように培養液のドロップを添加し、培養液で満たされたマイクロウェルに受精卵を配置して培養を行うシステムが知られている（特許文献１）。それにより複数の受精卵の位置を制御して個別観察を可能としつつ、少量の培養液の中で複数の受精卵の培養を行うことができ、パラクライン効果を利用できる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４７２４８５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
受精卵培養を行う際にマイクロウェルを有する細胞培養容器を利用すると、マイクロウェルのサイズが非常に小さいために、細胞を出し入れする際に、マイクロウェル開口部の縁に細胞を当てて傷つけてしまったり、あるいはマイクロウェル開口部の縁にピペットを当ててピペットまたはマイクロウェルを破損してしまったりするというリスクがある。本発明は、従来の細胞培養容器におけるマイクロウェルの受精卵の保持機能などを損なうことなく、そのような培養失敗に繋がるリスクを低減させることができる細胞培養容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、検討の結果、マイクロウェルの開口端部に、マイクロウェルの深さＤに対して所定の範囲内にある半径ｒを有する円弧を持たせることにより、上記課題が解決できることを見出した。本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）底壁と側壁を有する細胞培養容器であって、底壁に細胞を収容するための凹部が一つ以上配置されており、
凹部は、垂直断面形状において開口端部に円弧を有し、
前記円弧の半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲であることを特徴とする、前記細胞培養容器。
（２）半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１倍超２倍以下の範囲である、（１）に記載の細胞培養容器。
（３）凹部の底面が、円錐状または円錐台状の陥凹部を有することを特徴とする、（１）または（２）に記載の細胞培養容器。
（４）凹部の底面が円形であり、その直径が５００μｍ以下である、（１）〜（３）のいずれかに記載の細胞培養容器。
（５）前記円弧と凹部開口面との交点により画定される凹部の最大開口径が、凹部底面の最大径の１．０５〜２．０倍の範囲である、（１）〜（４）のいずれかに記載の細胞培養容器。
（６）細胞培養容器を用いて細胞を培養する方法であって、
前記細胞培養容器は、底壁と側壁を有し、底壁に細胞を収容するための凹部が一つ以上配置されており、
凹部は、垂直断面形状において開口端部に円弧を有し、
前記円弧の半径ｒが、凹部の最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲であることを特徴とする、前記方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、受精卵などの培養細胞に損傷を与えることなく、効率よく培養を行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の細胞培養容器の構成の一例を示す上面図である。
【図２】本発明の細胞培養容器の構成の一例を示す垂直断面図である。
【図３】従来のマイクロウェルの態様の一例を表す垂直断面図である。
【図４】従来のマイクロウェルと本発明のマイクロウェルとの差異を説明する垂直断面図である。
【図５】本発明のマイクロウェルの他の実施形態を表す垂直断面図である。
【図６】本発明のマイクロウェルのさらに他の実施形態を表す垂直断面図である。
【図７】円弧１０と壁面７または開口面８とにより形成される角度（θ１またはθ２）を説明する図である。
【図８】本発明のマイクロウェルのさらに他の実施形態を表す垂直断面図である。
【図９】図８に示したマイクロウェル４において底面６が円錐状の陥凹部を有する実施形態を示す図である。
【図１０】受精卵等の培養細胞１１を各マイクロウェル４にピペットを用いて１個ずつ配置する本発明の細胞培養容器の使用例を説明する図である。
【図１１】図９に示すマイクロウェルを複数配置した際の中心間距離Ｌを説明する図である。
【図１２】実施例１のマイクロウェルの構造を示す垂直断面図である。
【図１３】実施例２〜４のマイクロウェルの構造を示す垂直断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
図１および図２は、本発明の細胞培養容器の構成の一例を示す上面図および垂直断面図である。細胞培養容器１は、底壁２と側壁３とを有し、底壁２に培養する細胞を収容するための凹部であるマイクロウェル４が複数個配置されている。マイクロウェル４が配置されている細胞培養領域は、内壁５により、底壁２のその他の領域から画定されている。図２に示したように、内壁５は一定の高さを有し、細胞培養領域に液体を貯留することができるようになっている。なお、内壁５は本発明の細胞培養容器の必須の構成要件ではない。
【００１３】
細胞培養容器１のサイズは、特に制限されないが、開口部が好ましくは円形で、開口幅が、好ましくは３０〜６０ｍｍ、特に３５ｍｍのものが用いられる。これは従来の細胞培養に用いられているシャーレと同等のサイズであり、製造法によっては汎用のシャーレから簡便に作製できること、および既存の培養装置等に適合しやすいことから、上記のようなサイズのものが好ましい。マイクロウェル４は、細胞培養容器１の底壁２に形成され、底壁２は通常平面状であり、細胞培養容器１は、通常、その底壁平面が水平となる状態で配置されて使用される。１個または複数近接して形成されたマイクロウェル４は、それらを囲む内壁５により、培養容器内のその他の部分と隔てられていると、その内部に培養液を収容して安定なドロップを形成し、培養液の分散を防ぐことができるため好ましい。
【００１４】
本明細書において、培養する細胞を収容するための凹部である「マイクロウェル」とは、底面６の最大径Ｒ（底面が円形である場合はその直径、楕円形である場合はその長直径）が好ましくは５００μｍ以下、より好ましくは４００μｍ以下、特に好ましくは３００μｍ以下であるものを意味する。培養する細胞は最大径が１００〜２００μｍの範囲のサイズであることが想定されるが、上記のようなサイズのマイクロウェルは、特に受精卵などの培養する細胞を個別に収容するのに好ましい。マイクロウェルの底面形状は、特に限定されないが、円形または楕円形であることが好ましい。なお、本明細書において底面６の最大径Ｒは、マイクロウェルの垂直断面形状において底面６を構成する直線と壁面７を構成する直線の交点を求め、その交点により描かれる図形（例えば円または楕円）の最大径を意味する。例えば、マイクロウェルの垂直断面形状において、底面６を構成する直線と壁面７を構成する直線とが円弧を介して滑らかに連続しているような場合は、底面６を構成する直線と壁面７を構成する直線に基づいて仮想の交点を求め、その仮想の交点に基づいて最大径Ｒを規定する。
【００１５】
マイクロウェルの深さＤは５０〜５００μｍ、特に５０〜３００μｍの範囲、とりわけ１００〜３００μｍの範囲であると、作業性向上および培養細胞を安定的に保持できる点から好ましい。より具体的には、マイクロウェルの深さＤはその中にいれる培養細胞の最大径の１／３以上、特に１／２以上であると、培養容器の輸送時や細胞の分裂時などに細胞が動いてマイクロウェルの外に出てしまうことがなく確実に細胞を保持できるため好ましい。一方、マイクロウェルの深さＤは開口部の大きさに対して深すぎると、培養液や細胞をその中に導入することが難しくなるため、開口部の最大開口径に対して３倍以下とすることが好ましく、１倍以下、さらに１／２以下とすると培養液の導入が容易となるためより好ましい。
【００１６】
図３は、本発明のベースとなる、従来のマイクロウェルの態様の一例を表す垂直断面図である。なお、本明細書においてマイクロウェル４の垂直断面とは、細胞培養容器１の底壁２（マイクロウェル４の底面６が平面である場合には底面６）に対して垂直な方向におけるマイクロウェル４の断面を意味する。垂直断面は、マイクロウェル４のいずれの位置の断面でもよく、例えばマイクロウェル４が円形である場合には底面６の中心点を通る断面が挙げられる。マイクロウェル４は、底面６、壁面７および開口面８により画定される凹形状の領域であり、その領域に培養細胞が収容される。従来のマイクロウェル４では、壁面７と開口面８により画定される開口端９が鋭角を有し、培養細胞が開口端９に当たることにより生じる培養細胞の損傷や、培養細胞を導入するのに用いるピペットが当たることによるピペットまたはマイクロウェル４の損傷の原因となっていた。
【００１７】
図４は、図３に示したような従来のマイクロウェルと本発明のマイクロウェルとの差異を説明する垂直断面図である。図４（ａ）は図３に示したものと同じ従来のマイクロウェル４、図４（ｂ）は本発明のマイクロウェル４である。図示するように、本発明のマイクロウェル４は、開口端９に半径ｒを有する円に由来する円弧１０を有することを特徴とする。本明細書においてマイクロウェル４の開口端９とは、マイクロウェルの断面形状において、壁面７を構成する直線と開口面８を構成する直線との交点を意味する。また、開口端９に円弧１０を有するとは、マイクロウェルの断面形状において、開口面８を構成する直線と壁面７を構成する直線とが円弧１０を介して接続されている状態を意味する。後述するような、円弧１０の基準となる円が、底面６および壁面７の交点（すなわち底面６の端部）において、当該交点を通る底面６（底面６が平面ではない場合には細胞培養容器１の底壁２）の垂線（これを仮想壁面とする）が円の接線となるように描かれている場合も、開口端９に円弧１０を有するとの概念に包含されるものとする。なお、円弧１０の基準となる円は真円に限られず楕円であってもよい。また、円弧１０は同一または異なる半径ｒを有する２個以上、例えば２個または３個の円を重ねあわせて形成されるものであってもよい。
【００１８】
円弧１０の基準となる円の半径ｒは、マイクロウェル４の底面６において最も低い位置から開口面８までを垂直に測った深さである最深部における深さＤの１／１０以上２倍以下の範囲、好ましくは１／１０以上１．７５倍以下の範囲、より好ましくは１／５以上１．７５倍以下の範囲である。より具体的には、半径ｒは１０μｍ〜１０００μｍの範囲、特に１０μｍ〜６００μｍの範囲、とりわけ２０μｍ〜６００μｍの範囲であることが好ましい。マイクロウェル４の開口端９がそのような円弧１０を有することにより、培養細胞やピペットが鋭角を有する開口端部で損傷したり、あるいはマイクロウェルの開口端部自体が破損したりすることを防ぐことができ、かつ培養細胞や培養液の保持機能も維持することができる。なお、円弧１０の基準となる円が楕円である場合、その長半径と短半径の両方が上記の半径ｒの範囲内であることが好ましい。また、円弧１０が２個以上の円を重ねあわせて形成されたものである場合、少なくとも１個の円の半径ｒが上記の範囲内であることが好ましく、その２個以上のすべての円の半径ｒが上記の範囲内であることがより好ましい。
【００１９】
図４の実施形態において、円弧１０の基準となる円は、その半径ｒがマイクロウェル４の最深部における深さＤよりも小さく、壁面７および開口面８がいずれも円の接線となるように描かれている。このように壁面７および開口面８がいずれも円の接線となるように円弧１０の基準となる円を描く場合、半径ｒは深さＤの１／１０以上１倍以下の範囲、特に１／１０以上〜０．８５倍以下の範囲、とりわけ１／１０以上０．７５倍以下の範囲であることが好ましい。
【００２０】
図５は、本発明のマイクロウェルの他の実施形態を表す垂直断面図である。この実施形態では、円弧１０の基準となる円の半径ｒが、マイクロウェル４の最深部における深さＤよりも大きく、かつ円は底面６および壁面７の交点（底面６の端部）において壁面７（当該交点を通る底面６の垂線）が円の接線となるように描かれている。図５に示した実施形態によれば、培養細胞やピペットなどの損傷を防ぐ効果に加えて、円弧１０のカーブがなだらかとなり、培養液をマイクロウェルに入れる際に気泡が入りにくくなったり、あるいはマイクロウェルを鋳型により成形する際に、鋳型との摩擦が減り鋳型から製品が抜きやすくなり、マイクロウェルの加工精度が向上したりといった効果が得られるため、より好ましい。この実施形態のように底面６および壁面７の交点（底面６の端部）において壁面７（当該交点を通る底面６の垂線）が円の接線となるように円弧１０の基準となる円を描く場合、半径ｒは深さＤの１倍超２倍以下の範囲、特に１倍超１．８５倍以下の範囲、とりわけ１倍超１．７５倍以下の範囲であることが好ましい。半径ｒがこのような範囲であれば、上述したような、培養液に気泡が入りにくくなったり、あるいは鋳型から製品を抜きやすくなったりというような効果が十分得られる。
【００２１】
図６は、本発明のマイクロウェルのさらに他の実施形態を表す垂直断面図である。この実施形態では、図５に示した実施形態と同様に、円弧１０の基準となる円の半径ｒがマイクロウェル４の最深部における深さＤよりも大きいが、その円は壁面７および開口面８がいずれも円の接線とはならないように描かれている。このように、円弧１０の基準となる円は、壁面７および開口面８のいずれもが接線とならないように描かれていてもよく、あるいは壁面７および開口面８のいずれかのみが接線となるように描かれていてもよい。
【００２２】
いずれの場合でも、円弧１０と壁面７または開口面８とにより形成される角度（円弧１０と壁面７または開口面８との交点において、円の接線と壁面７または開口面８とがなす角度、図７（ａ）のθ１および図７（ｂ）のθ２）は、培養細胞やピペットに損傷を与えないためには１３５°以上、特に１４０°以上、とりわけ１４５°以上となることが好ましい。特にθ２は、そのような角度であると、上述したような培養液に気泡が入りにくくなったり、あるいは鋳型から製品を抜きやすくなったりというような効果を得られるため好ましい。また、θ２は１７９°以下、特に１７７°以下、とりわけ１７５°以下であると、培養液に気泡が入りにくい上に培養細胞および培養液の保持機能が十分得られるため好ましい。
【００２３】
図８は、本発明のマイクロウェルのさらに他の実施形態を表す垂直断面図である。この実施形態では、図８（ａ）に表すように、ベースとなるマイクロウェル４の壁面７が、外側方向に傾いた傾斜面となっており、そのようなマイクロウェル４の開口端９に、半径ｒを有する円に由来する円弧１０を有することを特徴とする。図８（ｂ）に表すように、マイクロウェル４の壁面７が傾斜面を有するようにすることにより、マイクロウェル４へ細胞を入れる際などに取り扱い性が向上する。傾斜面である壁面７が底面６の垂線に対してなす角度θ３は、４５°以下、特に４０°以下、とりわけ３５°以下であると、細胞や培養液の保持機能を損なわないため好ましい。また、取り扱い性向上のためには５°以上、特に１０°以上であることが好ましい。図８に示すような実施形態では、底面６の最大径Ｒは培養する細胞のサイズよりも小さくすることがでる。前述のとおり、培養する細胞は最大径が１００〜２００μｍの範囲のサイズであることが想定されるが、図８に示した実施形態では、底面６の最大径Ｒは例えば５０μｍ以上、特に７５μｍ以上、さらに１００μｍ以上のサイズを有していれば、培養細胞および培養液を保持するマイクロウェル４の機能を損なうことがない。
【００２４】
図４、５、６および８に示したような本発明のマイクロウェル４において、少なくとも培養細胞がその上に乗ることとなる底面６に関し、表面粗さが大きい値であると、顕微鏡で透過観察を行った画像を輪郭抽出処理に付す際に、表面の凹凸に起因して光が乱反射し明瞭な輪郭が得られない恐れがあるため、表面粗さは可能な限り小さい値であることが好ましい。具体的には、最大高さＲｙ（粗さ曲線からその平均線の方向に基準長さだけを抜き取り、この抜き取り部分における山頂線と谷底線との間隔をいう）が１．０μｍ未満、特に０．５μｍ未満であることが好ましい。また、培養細胞のサイズが底面６よりも大きい場合は、さらに細胞培養容器１を上面視した場合に視認可能である面、すなわち円弧１０により形成される面、および壁面７が傾斜面を有する場合はその傾斜面に関しても、底面６と同様にＲｙ値が１．０μｍ未満、特に０．５μｍ未満であることが好ましい。なお、上述した各面における表面粗さは、例えば細胞培養容器１の鋳型を作製する際に磨き処理を施す等して、鋳型の加工精度を高めることにより小さくすることができる。
【００２５】
図４、５、６および８に示したような本発明のマイクロウェル４において、底面６は円錐状または円錐台状の陥凹部を有していてもよい。図９は、図８に示したマイクロウェル４において底面６が円錐状の陥凹部を有する実施形態を示す図である。円錐状または円錐台状の部分は、マイクロウェル４の底面６に、円錐の頂点または円錐台の上面および下面のうち面積の狭い方の面が下側となるように形成される。円錐状には、円錐および楕円錐、これらに類似の形状、例えば、円錐または楕円錐の頂点が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。円錐台状には、円錐台および楕円錐台、これらに類似の形状、例えば、円錐台または楕円錐台の上面または下面と円錐面との接合部が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。
【００２６】
底面６の陥凹部が円錐台状である場合、下側の面積が狭い方の面の直径は、収容する細胞の最大径よりも小さいことが好ましい。具体的には、面積が狭い方の面の直径が１０μｍ以下、特に８μｍ以下、とりわけ５μｍ以下であることが好ましい。また、円錐または円錐台の中心線と母線とのなす角度（図９のα）は８９〜４５°、好ましくは８８〜６５°、より好ましくは８５〜８０°とすると、重力により細胞を最深部まで誘導させやすく、かつ顕微鏡で透過観察する場合にも傾斜面で反射や散乱が起こりにくくなり好ましい。
【００２７】
図４、５、６、８および９に示したような本発明のマイクロウェル４では、円弧と開口面との交点により画定される最大開口部径Ｒ’（開口部が円形である場合はその直径、楕円形である場合はその長直径）は、底面６の最大径Ｒの１．０５〜２．０倍の範囲、特に１．０５〜１．８５倍の範囲とすることが好ましい。底面６に対して開口径が大きすぎるとマイクロウェル４に要求される細胞および溶媒の保持機能が損なわれるおそれがあるが、そのような範囲であれば十分機能を果たすことができる。最大開口部径Ｒ’は、具体的には２５０μｍ〜１ｍｍの範囲、特に３００μｍ〜７５０μｍの範囲、とりわけ５００μｍ〜７５０ｍｍの範囲とすることが好ましい。そのようなサイズであれば、マイクロウェル４の開口部サイズが培養細胞を扱うためのピペットなどの外径の２倍程度となり、作業者の経験則上、作業性が向上するといえる。
【００２８】
本発明の細胞培養容器１の底壁２には、図４、５、６、８または９に示したようなマイクロウェル４が、好ましくは４個以上、さらに好ましくは８個以上で、好ましくは５０個以下、より好ましくは３０個以下の個数で配置されている。本発明の細胞培養容器１は、図１０に例示するように、受精卵等の培養細胞１１を各マイクロウェル４にピペット１２などを用いて１個ずつ配置して、複数の細胞を同時に培養する用途に適している。複数のマイクロウェル４の中心間距離Ｌ（図９に示すマイクロウェルを複数配置した例を示す図１１参照）は１ｍｍ以下、特に０．８５ｍｍ以下、とりわけ０．７５ｍｍ以下であることが好ましい。ここで、マイクロウェル４の中心とは、底面６の外縁が形成する図形の重心位置を意味する。そのような個々独立しつつも近接した複数のマイクロウェル４を用いて受精卵等の細胞を培養することにより、良好なパラクライン効果やオートクライン効果を期待することができる。また、近接する４個以上のマイクロウェル４は、正方格子状または最密充填状に配置されていることが好ましい。例えば、２５個の凹部を５×５の正方格子状に配置する場合を挙げることができる。マイクロウェル４を正方格子状または最密充填状に配置することにより、細胞培養容器１の底壁２における各マイクロウェル４の位置の特定が容易になり、自動化処理に適用しやすいという利点がある。
【００２９】
本発明の細胞培養容器１の材質は、特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、およびシリコン等の無機材料、プラスチック（例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂）で代表される有機材料を挙げることができる。本発明の細胞培養容器１は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料からなる容器を製造する場合には、慣用の成形法、例えば射出成形により製造することができる。
【００３０】
本発明の細胞培養容器１は、培養細胞の非特異的接着を防止し、また培養液のドロップが表面張力によって偏ることを防止する観点から、プラズマ処理などの表面親水化処理することが好ましい。製造後の容器に付着している菌数（バイオバーデン数）が１００ｃｆｕ／容器以下であることが好ましい。また、さらにγ線滅菌などの滅菌処理を施されていることがより好ましい。
【００３１】
本発明の細胞培養容器１は、受精卵の発育を促進するような表面処理または表面コートがなされていてもよい。特に、受精卵の発育を促進するために、他の器官の細胞（例えば、子宮内膜細胞や卵管上皮細胞）と共培養をする場合、これらの細胞をあらかじめ培養容器に接着させる必要がある。このような場合に、培養容器の表面に細胞接着性の材料をコートすると有利である。
【００３２】
培養対象となる細胞は、特に制限されないが、例えば、受精卵、卵細胞、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）およびｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞）が挙げられる。卵細胞は、未受精の卵細胞をさし、未成熟卵母細胞および成熟卵母細胞が含まれる。受精卵は、受精後、卵割により２細胞期、４細胞期、８細胞期と細胞数が増えていき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。受精卵には、２細胞胚、４細胞胚および８細胞胚などの初期胚、桑実胚、胚盤胞（初期胚盤胞、拡張胚盤胞および脱出胚盤胞を含む）が含まれる。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊からなる胚を意味する。ＥＳ細胞は胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性または全能性細胞をさす。ｉＰＳ細胞は、体細胞（主に線維芽細胞）へ数種類の遺伝子（転写因子）を導入することにより、ＥＳ細胞に似た分化多能性を持たせた細胞をさす。本発明における細胞には、受精卵や胚盤胞のように複数の細胞の集合体も包含される。
【００３３】
本発明の細胞培養容器１は、好ましくは哺乳動物および鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物をさし、例えば、ヒトおよびサルなどの霊長類、マウス、ラットおよびウサギなどの齧歯類、イヌおよびネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマおよびブタなどの家畜が挙げられる。本発明の細胞培養容器１は、ヒトの受精卵の培養に特に好適である。
【実施例】
【００３４】
（実施例１）
図１２に示したような断面形状を有し、底面および開口部形状が円形であるマイクロウェルを作製した。マイクロウェルの底面の最大径Ｒは２８５μｍ、最深部における深さＤは１６１μｍとし、底面には円の中心を頂点とする円錐状の陥凹部を設けた。円錐の中心線と母線とのなす角度αは８３°とした。開口端には、壁面および開口面がいずれも接線となるように描いた半径ｒが２０μｍである円に基づく円弧を設けた。最大開口部径Ｒ’は３２５μｍであった。作製したマイクロウェルにピペットを用いて細胞を出し入れする操作を行ったところ、ピペットが破損することも細胞に損傷を与えることもなかった。
【００３５】
（比較例１）
開口端に円弧を有さず、最大開口部径Ｒ’が底面の最大径Ｒと同じ２８５μｍである以外は実施例１と同じ構成であるマイクロウェルを作製した。作製したマイクロウェルにピペットを用いて細胞を出し入れする操作を行ったところ、開口端に接することにより、ピペットが破損したり、ピペットに傷がついたり、あるいは細胞に傷がついたりすることがあった。
【００３６】
（実施例２〜４）
図１３に示したような断面形状を有し、底面および開口部形状が円形であるマイクロウェルを作製した。図５に示した実施形態に沿って、マイクロウェルの最深部における深さＤよりも大きい半径ｒを有し、底面および壁面の交点において当該交点を通る底面の垂線（仮想壁面）が接線となるように描いた円に基づく円弧を有するマイクロウェルとした。底面の最大径Ｒ、最深部における深さＤ、円弧の基準となる円の半径ｒ、および最大開口部径Ｒ’は、それぞれ下記の表１に示したとおりとした。また、底面には実施例１と同様に円錐状の陥凹部を設けた。実施例２〜４のいずれのマイクロウェルでも、ピペットを用いて細胞を出し入れする操作を行った際に、ピペットが破損することも細胞に損傷を与えることもなかった。
【００３７】
【表１】
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【符号の説明】
【００３８】
１      細胞培養容器
２      底壁
３      側壁
４      マイクロウェル
５      内壁
６      マイクロウェル底面
７      マイクロウェル壁面
８      マイクロウェル開口面
９      開口端
１０    円弧
１１    培養細胞
１２    ピペット先端部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１０】
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【図１１】
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