(57)【要約】      （修正有）【課題】脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減のための剤、及び、方法の提供。【解決手段】下記式を代表例とする甜菜種子由来のフェノール性アミド化合物を有効成分とする経口用組成物、及びその使用。2015017044.tif 000007【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化３で示されるフェノール性アミド化合物、及び／又は、下記化４で示されるフェノール性アミド化合物を有効成分としてなる脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減剤。
【化３】
2015017044.tif 000005
【化４】
2015017044.tif 000006
【請求項２】
フェノール性アミド化合物が甜菜由来であることを特徴とする、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
フェノール性アミド化合物が甜菜種子由来であることを特徴とする、請求項２に記載の剤。
【請求項４】
１食当たりの単位包装形態からなり、該単位中に、フェノール性アミド化合物を５〜６００ｍｇ含有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
５〜６００ｍｇ／日のフェノール性アミド化合物が、ヒトに対して１日１回経口摂取されるように用いられることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項６】
請求項１の化３及び／又は化４で示されるフェノール性アミド化合物を５〜６００ｍｇ含有する飲食品を経口的に継続摂取させることを特徴とする、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法（ヒトに対する医療行為を除く）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪蓄積抑制技術、脂肪蓄積量低減技術に関するものである。詳細には、ヒトなどにおいて、安全に且つ効果的に脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減をさせるための剤、及び、当該剤を用いたヒトなどの脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
食の欧米化が進んだ近年の日本では、生活習慣病（糖尿病、高脂血症、高血圧症など）が多く発生しており、肥満はこれらの疾患の原因のひとつとされている。この肥満の対策としては、脂質摂取量（あるいは食事量）の制限、野菜類の摂取比率向上、継続的な運動などが挙げられているが、おいしいものを食べたいという欲求に相反する場合が多く、また日常生活の習慣を変えにくい場合も多く、簡単ではない。
【０００３】
肥満のうち、腹腔内の内臓の隙間に脂肪が蓄積した内臓脂肪型肥満は、皮下脂肪型肥満よりも脂質が血管に入り込みやすく、生活習慣病の危険因子により強い関係があると言われている。肥満には、脂肪細胞が重要な役割を果たしており、脂肪細胞中に蓄えられる油滴の肥大化と新しい脂肪細胞への分化の繰り返しが肥満につながるとされている。
【０００４】
この脂肪細胞の肥大化や分化を抑制する方法としては、医薬品だけでなく、トレハロース（特許文献１）、酢酸又は酢酸塩（特許文献２）、イネ科植物の種子及び／又は地上部茎葉から抽出される成分（特許文献３）などの食品由来成分も提案され、これらを添加した飲食品も開発されている。
【０００５】
最近では、温州みかんなどから得られるβ−クリプトキサンチンの体脂肪低減作用が認められ（非特許文献１）、これを有効成分とする脂肪蓄積抑制剤及びそれを含有する飲食品も開発されている（特許文献４）。
【０００６】
しかし、当業界においては、安全に且つ効果的にヒトなどの脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減（脂肪細胞の肥大化や分化の抑制）ができる更なる成分、方法等の開発が引き続き望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００４／０８９９６４号
【特許文献２】特開２０１０−１１１５８５公報
【特許文献３】特開２００５−２４７６９５公報
【特許文献４】特開２０１０−２５４５９２公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｆｏｏｄ  Ｓｔｙｌｅ  ２１；ｖｏｌ１６，Ｎｏ．７，ｐ２７−３０（２０１２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、簡便且つ効果的で安全性の高い、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減をするための剤、及び、当該剤を用いた脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するため、本発明者らは鋭意研究の結果、主に甜菜種子から抽出される下記化１で示されるフェノール性アミド化合物（以下、ビートアミド１ということもある）、及び／又は、下記化２で示されるフェノール性アミド化合物（以下、ビートアミド２ということもある）を有効成分としてヒトなどに経口投与又は給与することで、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減を効果的に行うことができることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明の実施形態は次のとおりである。
（１）下記化１で示されるフェノール性アミド化合物、及び／又は、下記化２で示されるフェノール性アミド化合物を有効成分としてなる脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減剤（言い換えれば、脂肪細胞中の中性脂肪蓄積抑制及び／又は中性脂肪蓄積量低減剤、更に言えば、脂肪細胞の肥大化及び／又は分化抑制剤）。
（２）フェノール性アミド化合物が甜菜由来であることを特徴とする、（１）に記載の剤。
（３）フェノール性アミド化合物が甜菜種子由来であることを特徴とする、（２）に記載の剤。
（４）１食当たりの単位包装形態からなり、該単位中に、フェノール性アミド化合物を５〜６００ｍｇ含有することを特徴とする、（１）〜（３）のいずれか１つに記載の剤。
（５）５〜６００ｍｇ／日のフェノール性アミド化合物が、ヒトに対して１日１回経口摂取されるように用いられることを特徴とする、（１）〜（３）のいずれか１つに記載の剤。
（６）（１）の化１及び／又は化２で示されるフェノール性アミド化合物を５〜６００ｍｇ含有する飲食品を経口的に継続摂取させることを特徴とする、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法（ヒトに対する医療行為を除く）。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、下記化１で示されるフェノール性アミド化合物、及び／又は、下記化２で示されるフェノール性アミド化合物を有効成分としてなる剤等を用いることで、簡便に、また安全に且つ効果的に、脂肪細胞中の中性脂肪蓄積を抑制し、ひいては脂肪細胞の肥大化や分化を抑制し、内臓脂肪などの体内の脂肪が蓄積するのを抑制及び／又は脂肪蓄積量を低減させることができる。そして、これによって肥満を改善・抑制し、糖尿病やメタボリックシンドロームなどの発症を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】コントロール（ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド；ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ））、あるいは、５０μＭのビートアミド１（Ｂｅｅｔ  Ａｍｉｄｅ−Ｉ）、ビートアミド２（Ｂｅｅｔ  Ａｍｉｄｅ−ＩＩ）、又はフェルラ酸（Ｆｅｒｕｌｉｃ  ａｃｉｄ；ＦＡ）存在下での脂肪細胞の中性脂肪蓄積について測定した結果を示すグラフである。左上が分化誘導６日目の各中性脂肪（ＴＧ）量、右上が分化誘導８日目の各中性脂肪量、左下が分化誘導１０日目の各中性脂肪量を示し、右下がこれらをまとまた折れ線グラフである（縦軸がＴＧ量、横軸が分化誘導日数、グラフ中黒丸がコントロール（ＤＭＳＯ）、黒四角がビートアミド１、黒菱形がビートアミド２、黒三角がフェルラ酸を示す）。
【図２】コントロール（ＤＭＳＯ）、あるいは、１００μＭのビートアミド１（Ｂｅｅｔ  Ａｍｉｄｅ−Ｉ）、ビートアミド２（Ｂｅｅｔ  Ａｍｉｄｅ−ＩＩ）、又はフェルラ酸（Ｆｅｒｕｌｉｃ  ａｃｉｄ；ＦＡ）存在下での脂肪細胞の中性脂肪蓄積について測定した結果を示すグラフである。左上が分化誘導６日目の各中性脂肪（ＴＧ）量、右上が分化誘導８日目の各中性脂肪量、左下が分化誘導１０日目の各中性脂肪量を示し、右下がこれらをまとめた折れ線グラフである（縦軸がＴＧ量、横軸が分化誘導日数、グラフ中黒丸がコントロール（ＤＭＳＯ）、黒四角がビートアミド１、黒菱形がビートアミド２、黒三角がフェルラ酸を示す）。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明においては、主に甜菜種子から抽出される下記化１で示されるフェノール性アミド化合物（ビートアミド１；Ｎ−トランス−フェルロイルホモバニリルアミン）、及び／又は、下記化２で示されるフェノール性アミド化合物（ビートアミド２；Ｎ−トランス−フェルロイルチラミン）を脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減剤等の有効成分として使用する。
【００１５】
【化１】
2015017044.tif 000002
【００１６】
【化２】
2015017044.tif 000003
【００１７】
ビートアミド１、ビートアミド２は、例えば、甜菜種子から有機溶媒（アセトン、エタノールなど）により抽出し、シリカゲルカラム等で分離、精製することで取得できる。また、種子以外の甜菜原料を用いても良いし、上記アミド化合物が含まれる他の植物原料等を用いることもできる。そして、ビートアミド１、ビートアミド２は、必要に応じて乾燥粉末状、顆粒状、液体状、ペースト状等として使用することができ、その形態は限定されるものではない。また、ビートアミド１及び／又はビートアミド２の粗精製品の使用も除外はされないが、一定以上（例えば１０％以上）の含有率まで精製されたものを用いることが好ましい。
【００１８】
本発明に係る剤の形態としては、例えばビートアミド１及び／又はビートアミド２を粉末状、顆粒状、液状、ペースト状等として粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤、ゲル剤等としたものが例示される。これらの各種製剤は、有効成分となるビートアミド１及び／又はビートアミド２のみを経口投与できるよう単独成分として製剤化しても良いし、必要であれば医薬剤などの製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤等を併用して、常法により製剤化することもできる。また、ビートアミド１及びビートアミド２以外の脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減に関与する有効成分の併用も完全には除外されないが、本発明ではビートアミド１及び／又はビートアミド２のみを有効成分とすることが好適である。
【００１９】
製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤等としては、例えば、添加剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、界面活性剤、防腐剤（抗菌剤）、香料、増粘剤、抗酸化剤、キレート剤、ビタミン類、アミノ酸類、水性媒体、糖質、水溶性高分子、ｐＨ調整剤、発泡剤など例示することができ、これらの成分の１種又は２種以上を適宜組み合わせて、目的とする剤型に応じて、原料の段階から製品が完成するまでの工程で配合されたものであればよい。
【００２０】
本発明に係るビートアミド１及び／又はビートアミド２を有効成分として含有する剤等は、ヒトなどに対して経口投与又は給与を行う。投与量は、５〜６００ｍｇ／日の有効成分が、ヒトに対して１日１回経口摂取されることが例示され、好ましくは１００〜４００ｍｇ／日の有効成分が、ヒトに対して１日１回経口摂取されるのが有効である。なお、この数値から体重等による所要の換算等を行って投与量を設定してもよく、投与時期についても特に限定されず、１日摂取量を数回に分けて摂取しても構わない。
【００２１】
本発明は、主としてヒトの脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減をするものであるが、対象動物はヒトに限定されるものではなく、家畜、ペットなどのヒトを除く脂肪細胞を有する動物を対象として、これらに上記有効成分を経口投与又は給与しても良い。
【００２２】
このようにして、安全性の高いビートアミド１及び／又はビートアミド２を有効成分としてなる本発明に係る脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減剤を用いることにより、簡便に、また安全に且つ効果的に、脂肪細胞中の中性脂肪蓄積を抑制し、ひいては脂肪細胞の肥大化や分化を抑制し、内臓脂肪や皮下脂肪などが蓄積するのを抑制及び／又は低下させることができる。
【００２３】
なお、本発明において「脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減剤」とは、ビートアミド１及び／又はビートアミド２を医薬有効成分としてなる医薬剤だけでなく、上記有効成分を含有し、健康補助食品、保健機能食品、サプリメント等の特定の機能及び形態を有し、健康維持などを目的として摂取され、有効成分の用量（有効量）や用法が規定され且つ単位包装当たりでその用量が摂取できる、単に食品としてのみ利用されるものとは明確に区別される脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減用途の食品組成物（医薬部外品を含む）も包含される。但し、畜肉加工品、乳製品、魚肉加工品などの単に食品として利用されるのみの組成物に上記成分を含有させたものは除外され、また、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減用途以外のものは当然除外される。
【００２４】
しかし、本発明の「脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法（ヒトに対する医療行為を除く）」においては、上記食品組成物だけでなく、ビートアミド１及び／又はビートアミド２を５〜６００ｍｇ含有する飲食品（畜肉加工品、乳製品、魚肉加工品などの単に食品として利用されるのみの組成物を包含する）を経口的に継続摂取（毎日連続摂取）させる方法が包含される。
【００２５】
以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではなく、本発明の技術的思想内においてこれらの様々な変形が可能である。
【実施例１】
【００２６】
（ビートアミド１及びビートアミド２の取得）
ビートアミド１及びビートアミド２の取得は、以下のようにして行った。
【００２７】
まず、粉砕した甜菜種子を、等量以上のアセトンで３回抽出し、次にアセトンと同量のエタノールで３回抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、これを炭酸水素ナトリウムで中和した後にヘキサンで洗浄して油分を除去した。得られた水溶性成分を含む溶液を等量以上の酢酸エチルで６回抽出し、酢酸エチル層を減圧濃縮して濃縮液を得た。これを、シリカゲルカラムに供給し、ベンゼン、酢酸エチル、エタノールの混合比を変えながら溶出し、第４フラクションからビートアミド１及びビートアミド２を単離した。
【実施例２】
【００２８】
（ビートアミド１及びビートアミド２の生理活性確認試験）
実施例１で取得したビートアミド１、ビートアミド２の生理活性をフェルラ酸と比較確認するため、以下の試験を実施した。
【００２９】
３Ｔ３−Ｌ１細胞（マウス胎児性由来前駆脂肪細胞）を２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ上で培養（３７℃、５％ＣＯ２存在下）した。下記表１に示す分化誘導培地で３日間培養した後、維持培地に交換することで脂肪細胞への分化（脂肪蓄積）を誘導した。分化誘導培地添加時を０日目として、１０日目まで培養を続けた。ビートアミド及びフェルラ酸は、最終濃度５０μＭ又は１００μＭで０日目から培地に添加した。脂肪細胞は０、６、８、１０日目にサンプリングした。サンプリングした細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）で２回洗浄後、再度ＰＢＳ１００μＬを添加し、超音波破砕装置で細胞ホモジネートの作成を行った。その後、ホモジネートとイソプロパノール（５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含有する）を４：１の割合で混合し、３０秒間撹拌した。中性脂肪量の測定にはＴＧ−ＥＮカイノス（株式会社カイノス製品）を用いた。全ての数値は平均値±標準偏差で表した。有意差の判定は一元配置分散分析後、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの検定で行った（Ｐ＜０．０５）。
【００３０】
【表１】
2015017044.tif 000004
【００３１】
この試験結果を図１及び図２に示した。図１は５０μＭのビートアミド１、ビートアミド２、又はフェルラ酸存在下での脂肪細胞の中性脂肪蓄積について測定した結果である。ビートアミド２群がコントロール群およびビートアミド１群に比べて６、８、１０日目の全てで有意な中性脂肪量の減少を示した。ビートアミド１群はビートアミド２群に比べて効果が弱いものの、６、８日目ではコントロール群より有意に中性脂肪蓄積を抑制した。フェルラ酸群は６日目ではビートアミド２群と同程度の強い抑制効果を示したが、８日目以降では抑制効果がビートアミド２群に比べ弱くなり、ビートアミド１群とほぼ同等の効果を示すにとどまった。
【００３２】
図２は、添加濃度を高めた場合（１００μＭ）での中性脂肪蓄積についての測定結果である。５０μＭ添加時と同様に、ビートアミド２群がコントロール群に比べて６、８、１０日目の全てで有意な中性脂肪量の減少を示し、ビートアミド１群に比べて６、８日目で有意な中性脂肪量の減少を示した。特に６日目ではフェルラ酸群よりも有意に低下し、この数値は図１で示した５０μＭビートアミド２群の６日目の数値よりもさらに低値であった。１００μＭビートアミド１群はビートアミド２群に比べて抑制効果が弱かったが、コントロール群に対して６、８、１０日目で有意な減少を示した。フェルラ酸群についてもビートアミド２群に比べて抑制効果が弱かったが、コントロール群に対して６、８日目で有意な減少を示した。ただし、１０日目ではコントロール群との間に有意な差は見られなくなっていた。
【００３３】
これらの結果から、アミド化合物（ビートアミド１及びビートアミド２）とフェルラ酸は３Ｔ３−Ｌ１細胞での中性脂肪蓄積を抑制することが明らかとなった。特にビートアミド２はビートアミド１及びフェルラ酸よりも強い抑制効果を示し、かつその効果は他に比べて極めて持続性の高いものであった。
【００３４】
以上より、ビートアミド１及びビートアミド２が脂肪細胞中の中性脂肪蓄積を抑制する効果を発揮すること、つまり、ビートアミド１及びビートアミド２が脂肪蓄積抑制の生理活性を有することが確認された。
【００３５】
本発明を要約すれば、以下の通りである。
【００３６】
本発明は、簡便且つ効果的で安全性の高い、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減をするための剤、及び、当該剤を用いた脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減方法等を提供することを目的とする。
【００３７】
そして、上記化１で示されるフェノール性アミド化合物（ビートアミド１）、及び／又は、上記化２で示されるフェノール性アミド化合物（ビートアミド２）を有効成分として経口投与又は給与することで、脂肪蓄積抑制及び／又は脂肪蓄積量低減を効果的に行うことができる。
【図１】
2015017044.tif 000008
【図２】
2015017044.tif 000009