(57)【要約】【課題】レーザ照射に伴う細胞の光毒性や蛍光の退色を考慮して、効率的な画像撮影を行うことが出来るレーザ走査型顕微鏡システムおよびレーザ光強度設定方法を提供する。【解決手段】蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出可能なレーザ光源と、生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力する光検出器と、複数のレーザ光の強度と、レーザ光の強度ごとの、レーザ光が記生体標本に与える光毒性の度合いおよび輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む第１の関係情報を予め記憶した記憶部と、光検出器の出力を基に輝度値による蛍光画像を生成し、生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、算出した代表的な輝度値を基に、第１の関係情報を参照して、光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する制御部とを有する制御装置とを具備する。【選択図】図１
2015082088.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出可能なレーザ光源と、
前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力する光検出器と、
複数の前記レーザ光の強度と、
前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報と
を含む第１の関係情報を予め記憶した記憶部と、
前記光検出器の出力を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、
前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、
前記算出した代表的な輝度値を基に、前記第１の関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する制御部と
を有する制御装置と
を具備するレーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項２】
請求項１に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
複数の前記レーザ光の強度と、
前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える前記蛍光の退色の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報と
を含む第２の関係情報を更に予め記憶し、
前記制御部は、
前記算出した代表的な輝度値を基に、
前記第１の関係情報を参照して判定した、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度および
前記第２の関係情報を参照して判定した、前記退色の許容度を満たすレーザ光の強度のうち、
低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項３】
請求項２に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の表面から前記励起光の照射位置までの深さと、前記励起光の減衰の度合いとの関係を示す第３の関係情報を更に予め記憶し、
前記制御部は、
前記選択されたレーザ光の強度を、前記第３の関係情報を参照して、補正する
レーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項４】
請求項３に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記制御部は、
前記補正されたレーザ光の強度に基づいて、前記光検出器の感度を設定する
レーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項５】
請求項４に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第４の関係情報を予め記憶し、
前記制御部は、
前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第４の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項６】
請求項４に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える退色の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第５の関係情報を予め記憶し、
前記制御部は、
前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第５の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
【請求項７】
蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出し、
前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力し、
複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む関係情報を予め記憶し、
前記出力された信号を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、
前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、
前記算出した代表的な輝度値を基に、前記関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する
レーザ光強度設定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、細胞の光毒性や蛍光の退色を考慮した、レーザ走査型顕微鏡システムおよびレーザ光強度設定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、共焦点顕微鏡や多光子励起顕微鏡などのレーザ顕微鏡では、細胞など標本への光毒性によるダメージを軽減するために、光源となるレーザの発光強度を制御する様々な工夫がなされている。
【０００３】
例えば、特許文献１において開示されている技術では、標本の断面画像を標本の表面から深さ方向に順次取得し、これらの断面画像の蛍光分布に基づいて、レーザ光の強度を調整するようになっている。標本表面からの深さに応じてレーザ光の強度調節を行うので、標本の厚さに基づく散乱等の影響を排除して、均一な明るさの蛍光画像を取得することが出来るという。
【０００４】
また、蛍光染色した標本の観察時には、蛍光体の励起により蛍光が退色するという問題があった。この退色の問題に対処するためには、例えば、特許文献２に開示されている技術を用いることが出来る。この技術では、蛍光の退色に対応するため、複数枚の画像を撮影する際、レーザ光強度を高強度から低強度の順に変化させ、また光検出器の感度を高感度から低感度の順に変化させる。蛍光が退色する前にレーザ光強度を高強度とし、感度を高感度として画像を撮影するので、標本である細胞の低輝度領域も鮮明に撮影することが出来る。この技術では、蛍光強度の異なる複数の画像を撮影し、これらの画像を合成するので、広ダイナミックレンジの合成画像を得ることが出来る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１２−２１２１３３号公報
【特許文献２】特開２０１２−１２８３５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記特許文献１の技術では、例えば標本の表面に近い断面を鮮明に撮影するためにレーザ光強度を弱めており、光毒性に対する考慮は間接的なものであった。また、上記特許文献２の技術は、レーザ光照射に起因する蛍光の退色という現象そのものに対処するものでは無かった。
【０００７】
このように、レーザ走査型顕微鏡システムには、効率的な画像撮影を行うには様々な点において改良の余地があった。
【０００８】
以上のような事情に鑑み、本技術の目的は、効率的な画像撮影を行うことが出来るレーザ走査型顕微鏡システムおよびレーザ光強度設定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムは、蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出可能なレーザ光源と、前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力する光検出器と、複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む第１の関係情報を予め記憶した記憶部と、前記光検出器の出力を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、前記算出した代表的な輝度値を基に、前記第１の関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する制御部とを有する制御装置とを具備する。
【００１０】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムでは、前記記憶部は、複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える前記蛍光の退色の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む第２の関係情報を更に予め記憶し、前記制御部は、前記算出した代表的な輝度値を基に、前記第１の関係情報を参照して判定した、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度および前記第２の関係情報を参照して判定した、前記退色の許容度を満たすレーザ光の強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する構成でもよい。
【００１１】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムでは、前記記憶部は、前記生体標本の表面から前記励起光の照射位置までの深さと、前記励起光の減衰の度合いとの関係を示す第３の関係情報を更に予め記憶し、前記制御部は、前記選択されたレーザ光の強度を、前記第３の関係情報を参照して、補正する構成でもよい。
【００１２】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムでは、前記制御部は、前記補正されたレーザ光の強度に基づいて、前記光検出器の感度を設定する構成でもよい。
【００１３】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムでは、前記記憶部は、前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第４の関係情報を予め記憶し、前記制御部は、前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第４の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する構成でもよい。
【００１４】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ走査型顕微鏡システムでは、前記記憶部は、前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える退色の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第５の関係情報を予め記憶し、前記制御部は、前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第５の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する構成でもよい。
【００１５】
上記目的を達成するため、本技術の一形態に係るレーザ光強度設定方法では、蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出し、前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力し、複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む関係情報を予め記憶し、前記出力された信号を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、前記算出した代表的な輝度値を基に、前記関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する。
【発明の効果】
【００１６】
以上のように、本技術によれば、レーザ照射に伴う細胞の光毒性や蛍光の退色を考慮して、効率的な画像撮影を行うことが出来る。
【００１７】
なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本開示中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】顕微鏡システム１の概略構成図である。
【図２】撮影時に用いられる設定情報（撮影用設定情報）の具体例とその用途を挙げた図である。
【図３】標本に関して、蛍光観察を行うユーザにより入力される情報（ユーザ入力情報）の具体例とその用途を挙げた図である。
【図４】システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。
【図５】レーザ光の波長および蛍光試薬の種類の組み合わせにおいて適切なレーザ光強度を示すテーブルの図である。
【図６】レーザ光の強度を算出する方法について説明するフローチャートである。
【図７】レーザ光強度の制御を行うことにより、光毒性による細胞死がどのように調整されるかについて、そのイメージを説明する図である。
【図８】システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。
【図９】顕微鏡システム１ａの概略構成図である。
【図１０】システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。
【図１１】レーザ光の強度を算出する方法について説明するフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本技術に係る実施形態を、図面を参照しながら説明する。なお、以下では、蛍光顕微鏡のうち、共焦点顕微鏡を例に挙げて説明する。但し、本技術は共焦点顕微鏡に限って利用できるというものではなく、他の顕微鏡、例えば多光子顕微鏡などでも利用できることはもちろんである。
【００２０】
＜第１の実施形態＞
［顕微鏡システムの構成について］
最初に、本技術に係る顕微鏡システム１の構成について概略を説明する。なお、この顕微鏡システム１は、レーザ走査型顕微鏡システムである。図１は、顕微鏡システム１の概略構成図である。
【００２１】
顕微鏡システム１は、レーザ光源ユニット（レーザ光源）１０、スキャナユニット２０、顕微鏡３０、顕微鏡コントローラ４０、システムコントロールＰＣ（Personal Computer）（制御装置）５０を具備している。なお、システムコントロールＰＣ５０で行われる画像解析などの処理は、ローカルネットワーク上にある画像解析サーバ１００、またはインターネットクラウド上にある画像解析クラウドサーバ２００により行われてもよい。
【００２２】
レーザ光源ユニット１０は、蛍光標識された細胞などの標本（生体標本）から蛍光を発生させるための励起光を生成する。生成された励起光は、スキャナユニット２０に導入される。
【００２３】
レーザ光源ユニット１０は、レーザコントローラ１１を具備しており、レーザコントローラ１１により、励起光の強度や発光間隔などが制御される。この実施形態では、システムコントロールＰＣ５０において決定されたレーザ光強度は、後述するスキャナコントローラを経由して、レーザコントローラ１１に通知される。
【００２４】
スキャナユニット２０は、スキャナコントローラ２１、ガルバノミラー２２、ダイクロイックミラー２３、および光検出器２４を具備している。
【００２５】
ガルバノミラー２２は、レーザ光源ユニット１０から導入された励起用のレーザ光が顕微鏡３０のステージ３５上に置かれた標本の水平方向（ＸＹ方向）に移動して照射されるように、Ｘ方向およびＹ方向それぞれでレーザ光の向きを変更する。ガルバノミラー２２で方向を整えられたレーザ光は、ダイクロイックミラー２３を透過後、顕微鏡３０に導入される。顕微鏡３０に導入されたレーザ光は、標本に照射され、照射により励起された蛍光が顕微鏡３０からスキャナユニット２０に戻ってくる。
【００２６】
ダイクロイックミラー２３は、顕微鏡３０から戻ってきたレーザ光および蛍光のうち、蛍光のみを光検出器２４に向けて反射させる。
【００２７】
光検出器２４は、一般にＰＭＴ（Photomultiplier Tube、光電子増倍管）が用いられ、レーザ光が照射された標本において励起された蛍光を検出する。なお、共焦点顕微鏡の場合、光路上、光検出器２４の手前にピンホールが設置される。このピンホールが設置される位置は、後述する対物レンズ３２の焦点位置と共役位置にある。
【００２８】
スキャナコントローラ２１は、標本をＸＹ方向に走査するために、ガルバノミラー２２を制御したり、光検出器２４を制御したりする。光検出器２４により検出された信号は、走査されるＸＹ平面上の１点ごとの輝度値として、システムコントロールＰＣ５０に伝送される。
【００２９】
顕微鏡３０は、フィルタ３１、対物レンズ３２、ステージ３５、ステージ駆動部３４を具備している。なお、ステージ３５上には、観察が行われる標本が載置される。
【００３０】
フィルタ３１は、スキャナユニット２０から導入されたレーザ光を対物レンズ３２に導く。また、フィルタ３１は、レーザ照射により標本から発生した蛍光をスキャナユニット２０に導く。
【００３１】
対物レンズ３２は、フィルタ３１を経由してスキャナユニット２０から導入されたレーザ光を、対物レンズ３２の焦点位置に集光させる。また、対物レンズ３２は、標本から発生した蛍光を、フィルタ３１を介してスキャナユニット２０に導く。
【００３２】
ステージ３５には、標本が載置される、ステージ３５は、ステージ駆動部３４により、対物レンズ３２の光軸と垂直なＸＹ方向に、そして対物レンズ３２の光軸に沿ったＺ方向に、ステージ３５を移動される。
【００３３】
顕微鏡コントローラ４０は、システムコントロールＰＣ５０からの、オートフォーカスや細胞追尾露光などに関する指示に基づき、ステージ駆動部３４に対し、ステージ３５を移動させる指示を出す。
【００３４】
システムコントロールＰＣ５０は、制御部５１および記憶部５２を具備している。
【００３５】
制御部５１は、顕微鏡システム１全体の制御を行ったり、光検出器２４で検出された輝度値とその輝度値が検出されたＸＹ平面上の座標値とから蛍光画像を合成したり、合成された蛍光画像を解析して最適なレーザ光強度を算出してレーザ光の強度を制御したりする。また、制御部５１は、上述した通り、顕微鏡コントローラ４０を制御し、顕微鏡３０のオートフォーカス機能や細胞追尾露光などの機能を実現する。なお、制御部５１は、ＣＰＵ（Central Processing Unit）により、記憶部５２に記憶されたプログラムが実行されることにより実現される。
【００３６】
記憶部５２は、ハードディスクドライブや半導体メモリにより構成され、ＣＰＵで実行される上記のプログラム群や、スキャナユニット２０から取得された蛍光画像、そして、輝度・光毒性テーブル５２ａ（第１の関係情報、関係情報）、輝度・退色テーブル５２ｂ（第２の関係情報）、深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃ（第３の関係情報）などが記憶される。記憶部５２に記憶されるこれら３種類のテーブル、輝度・光毒性テーブル５２ａ、輝度・退色テーブル５２ｂ、および深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃについては後述する。
【００３７】
以上、顕微鏡システム１の構成について概略を説明した。
【００３８】
［３種類のテーブルについて］
ここでは、上述した３種類のテーブルについて説明する。これらのテーブルは、本技術の基本的な仕組みに関係するものである。
【００３９】
本技術の基本的な仕組みでは、最初に蛍光画像の撮影を行い、撮影された蛍光画像のＲＯＩ（Region Of Interest）領域の輝度値に基づいて、現在の光毒性および退色の度合いを割り出し、割り出した光毒性および退色の度合いが観察に悪影響を与えないようにレーザ光強度を調整する。そして、調整されたレーザ光を用いて、次の撮影を行う、というものである。
【００４０】
なお、ここでいうＲＯＩ領域とは、例えば、撮影され合成された蛍光画像を縦横それぞれ３２個に区分したブロックにおいて、高い輝度値を多く有する（輝度の密度が高い）ブロックのことである。本技術では、ＲＯＩ領域を代表する輝度値を用いてレーザ光強度の調整を行う。ＲＯＩ領域を代表する輝度値として、このＲＯＩ領域のダイナミックレンジの値を用いてもよい。
【００４１】
上述した、輝度値に基づいて現在の光毒性および退色の度合いを割り出す処理を行う為には、標本として観察されると予想される細胞と、観察に使用されると予想される蛍光試薬との組み合わせごとに、予め、様々なレーザ光強度を用いて、得られる蛍光強度（輝度値）と光毒性の度合いや蛍光の退色の度合いとの関係を測定しておく必要がある。様々な細胞と蛍光試薬の組み合わせでデータを収集するのは、これらの組み合わせごとに、得られる蛍光の強度、光毒性の度合い、および退色の度合いが異なるからである。
【００４２】
このようにして、レーザ光強度ごとに測定された、輝度値と光毒性の関係を表すテーブルが、上述した輝度・光毒性テーブル５２ａである。
【００４３】
また、同様に、レーザ光強度ごとに測定された、輝度値と退色の関係を表すテーブルが、上述した輝度・退色テーブル５２ｂである。輝度・退色テーブル５２ｂは、蛍光試薬の種類ごとにも作成される。
【００４４】
なお、深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃは、レーザ光が照射される標本の表面から観測点までの深さにより、レーザ光がどれだけ弱まるかを測定したデータのテーブルである。
【００４５】
これらのテーブルは、レーザ光強度ごと、標本の種類ごと、蛍光試薬の種類ごとに作られるので、非常に多くのテーブルが作成されることになる。
【００４６】
以下の説明では、これら３種類のテーブルを用いることにより、輝度値から得られた光毒性の度合い、退色の度合い、およびレーザ光の劣化の度合いを、それぞれ、光毒性パラメータ、退色パラメータ、およびレーザ光劣化パラメータと呼ぶこととする。
【００４７】
なお、上記の説明では、輝度値と、光毒性、退色、および深さとの関係をテーブルで表すとしたがこれに限らない。可能であれば、これらの関係を関数として表してもよい。関数で表す場合は、上記テーブルの代わりに、関数式が記憶部５２に記憶される。
【００４８】
以上、３種類のテーブルについて説明した。
【００４９】
［処理の流れについて］
本実施形態における処理の流れは、大きく、初期設定の処理と本撮影の処理に分けることが出来る。初期設定の処理は、本撮影処理の前に一度行われる。本撮影の処理は、輝度値をフィードバックしながらレーザ光強度を調整し、繰り返し行われる。
【００５０】
以下の処理に関する説明では、最初に初期設定の処理において収集される情報について説明した後、処理全体の流れについて説明する。
【００５１】
（初期設定の処理で収集される情報について）
ここでは、初期設定の処理時に制御部５１により収集される情報の詳細について説明する。収集される情報は、本撮影処理において最初の撮影時のレーザ光強度を設定するためなどに用いられる。
【００５２】
図２に、撮影時に用いられる設定情報（撮影用設定情報）の具体例とその用途を挙げる。また、図３に、標本に関して、蛍光観察を行うユーザにより入力される情報（ユーザ入力情報）の具体例とその用途を挙げる。
【００５３】
まず、撮影用設定情報の１つとして、レーザ波長が挙げられる。レーザ波長は、例えば、上記３種類のテーブルについて、レーザ光強度ごとに作成するのに加え、レーザ波長ごとに作成した場合に、レーザ波長ごとのテーブルを選択する基準として用いられる。なお、レーザ波長ごとのテーブルは、レーザ光の減衰レベルを場合分けするために用いられる。
【００５４】
次に、撮影時間が挙げられる。撮影時間は、蛍光観察を行う最大時間を予測するために用いられる。
【００５５】
次に、顕微鏡種類情報が挙げられる。この情報は、蛍光画像の撮影が、共焦点型で行われるか、多光子型で行われるかの区別を示すものである。この区別をレーザ光強度の設定に用いるのは、多光子型にくらべ、共焦点型のほうが、光毒性が強いからである。
【００５６】
次に、Ｚ方向位置が挙げられる。この情報は、標本表面から観察位置までの深さにより、レーザ光強度を調整するために用いられる。
【００５７】
次に、光検出器感度が挙げられる。この情報は、撮影時のダイナミックレンジを適切に調整するために用いられる。
【００５８】
なお、上記撮影用設定情報のうち、撮影時間以外は、画像撮影時に必須の情報なので、本撮影前に必ず取得することが出来る。
【００５９】
次に、図３の説明に移る。この図に示すユーザ入力情報の１つとして、まず、観察対象の情報が挙げられる。観察対象の情報は、上記テーブルの選択に用いられる。標本が、例えば、一般的な細胞であるか、特殊な神経細胞であるかによっても、設定すべきレーザ光強度が異なってくるからである。なお、選択されるテーブルは、輝度・光毒性テーブル５２ａおよび深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃである。
【００６０】
次に、蛍光色素の情報が挙げられる。蛍光色素（蛍光試薬）とは、例えば、ＤＡＰＩ（4',6-diamidino-2-phenylindole）、ＣＦＰ（Cyan Fluorescent Protein）、ＧＦＰ（Green Fluorescent Protein）などである。この情報は、適切な輝度・退色テーブル５２ｂの選択に用いられる。
【００６１】
次に、測定内容の情報が挙げられる。この情報は、例えば、観察の目的が蛍光寿命を測定するために行われるのか、ＦＲＥＴ（Fluorescence resonance energy transfer）を測定するためにおこなわれるのか、カルシウムイメージングを行うためなのか、などを示す。この情報は、本撮影においてレーザ光強度の調整を行うか否かを判断するために用いられる。例えば蛍光寿命の測定であれば、レーザ光強度を一定にするべきであり、調整は行うべきではないからである。
【００６２】
以上、初期設定処理時に収集される、撮影用設定情報およびユーザ入力情報について、詳細を説明した。
【００６３】
（処理全体の流れについて）
ここでは、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明する。図４は、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。
【００６４】
まず制御部５１は、ユーザ入力情報の取得を行う（ステップＳ１０）。ユーザ入力情報の詳細は、上述したとおりである。
【００６５】
次に、制御部５１は、撮影用設定情報の取得を行う（ステップＳ２０）。撮影用設定情報の詳細は、上述したとおりである。
【００６６】
次に、制御部５１は、取得したユーザ入力情報および撮影用設定情報に基づいて、最初に蛍光画像を撮影するための初期レーザ光強度を決定する。そして決定された初期レーザ光強度は、レーザコントローラ１１に設定される（ステップＳ３０）。
【００６７】
ステップＳ１０からＳ３０までの処理が、初期設定処理である。ステップＳ４０以降の処理が、本撮影処理である。
【００６８】
次に、制御部５１は、レーザコントローラ１１、スキャナコントローラ２１、および顕微鏡コントローラ４０に指示して、標本の蛍光画像を撮影させ、撮影された蛍光画像の取得を行う（ステップＳ４０）。
【００６９】
次に、制御部５１は、撮影を終了するか否かを判断する（ステップＳ５０）。
【００７０】
まだ撮影を終了しない場合（ステップＳ５０のＮ）、次に、制御部５１は、取得された蛍光画像の解析を行い、ＲＯＩ領域の設定とそのＲＯＩ領域を代表する輝度値の算出を行う（ステップＳ６０）。
【００７１】
次に、制御部５１は、算出された輝度値と記憶部５２に記憶された輝度・光毒性テーブル５２ａとから、光毒性パラメータ（レーザ光強度）を算出する（ステップＳ７０）。
【００７２】
次に、制御部５１は、算出された輝度値と記憶部５２に記憶された輝度・退色テーブル５２ｂとから、退色パラメータ（レーザ光強度）を算出する（ステップＳ８０）。
【００７３】
次に、制御部５１は、取得されたＺ方向位置に基づいて一般的な公知の方法により算出された、標本表面からの測定点までの深さと記憶部５２に記憶された深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃとから、レーザ光劣化パラメータを算出する（ステップＳ９０）。
【００７４】
次に、制御部５１は、光毒性パラメータ、退色パラメータ、およびレーザ光劣化パラメータを用いて、次の撮影で用いるレーザ光の強度を算出する（ステップＳ１００）。なお、光毒性パラメータ、退色パラメータ、およびレーザ光劣化パラメータを用いたレーザ光の強度の算出方法の詳細は、後述する。
【００７５】
次に、制御部５１は、算出したレーザ光強度を用いて、撮影用のレーザ光強度をレーザコントローラ１１に再設定する（ステップＳ１１０）。ここで行うレーザ光強度の調整により、蛍光画像のサチレーションを抑えてダイナミックレンジを有効活用することが出来る。
【００７６】
次に、制御部５１は、再設定されたレーザ光強度と組み合わせて最適なダイナミックレンジが得られるように、蛍光強度を予測し、光検出器２４の感度も再設定する（ステップＳ１２０）。
【００７７】
ステップＳ１２０の処理の後、制御部５１は、ステップＳ４０に戻って、再設定されたレーザ光強度や感度を用いて、標本の撮影を行う。
【００７８】
なお、上記のステップＳ３０では、取得したユーザ入力情報および撮影用設定情報に基づいて、最初に蛍光画像を撮影するための初期レーザ光強度を決定するとした。この際、図５に示すように、レーザ光の波長および蛍光試薬の種類の組み合わせにおいて適切なレーザ光強度のテーブルを用意しておき、このテーブル内の条件に合ったレーザ光強度を初期レーザ光強度としてもよい。
【００７９】
以上、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明した。
【００８０】
（レーザ光強度の算出方法について）
ここでは、上述したステップＳ１００におけるレーザ光の強度を算出する方法について説明する。図６は、レーザ光の強度を算出する方法について説明するフローチャートである。
【００８１】
なお、ここで説明する方法では、細胞に対する光毒性と蛍光の退色のうち、影響が大きいほうのパラメータを選択してレーザ光強度を計算する。ここで、影響が大きい方のパラメータを選択するとは、例えば、レーザ光の強度が低いほうのレーザ光強度を選択するということである。
【００８２】
なお、影響の大小を比較するために、以下では、光毒性を抑えるために求められるレーザ光強度（光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度）と、退色を抑えるために求められるレーザ光強度（退色の許容度を満たすレーザ光の強度）とを比較している。
【００８３】
そして、より低いレーザ光強度が求められるパラメータのほうを選択してから、選択したパラメータと、レーザ光劣化パラメータを用いて、再設定に用いる最終的なレーザ光の強度を算出している。
【００８４】
このような計算方法を用いるのは、光毒性や退色の影響を抑えて、観察時間を長く取ることが出来るようにレーザ光強度を決定する必要があるからである。観察する標本がどちらの影響を大きく受けるかにより、再設定するレーザ光強度を計算するための基準を変更している。
【００８５】
まず、制御部５１は、ステップＳ７０において算出した光毒性パラメータに基づいて、第１のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０１）。
【００８６】
次に、制御部５１は、ステップＳ８０において算出した退色パラメータに基づいて、第２のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０２）。
【００８７】
次に、制御部５１は、第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高いか否かを判断する（ステップＳ１０３）。
【００８８】
第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高い場合（ステップＳ１０３のＹ）、制御部５１は、弱いほうのレーザ光強度を優先して最終的なレーザ光強度を計算するために、退色パラメータを採用する。そして、採用した退色パラメータと、レーザ光劣化パラメータとを用いて、再設定に用いる最終的なレーザ光強度を計算する（ステップＳ１０４）。
【００８９】
最終的なレーザ光強度は、以下の数式で求める。ここで、ｌｒｏｉは、ＲＯＩ領域を代表する輝度値であり、Ｓｆ（）は退色パラメータであり、ｚは標本表面から観測位置までの深さであり、Ｄ（）はレーザ光劣化パラメータである。
【００９０】
最終的なレーザ光強度＝Ｓｆ（ｌｒｏｉ）×Ｄ（ｚ）      …  （１）
【００９１】
これに対し、第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高くない場合（ステップＳ１０３のＮ）、制御部５１は、弱いほうのレーザ光強度を優先して最終的なレーザ光強度を計算するために、光毒性パラメータを採用する。そして、採用した光毒性パラメータと、レーザ光劣化パラメータとを用いて、再設定に用いる最終的なレーザ光強度を計算する（ステップＳ１０５）。
【００９２】
最終的なレーザ光強度は、以下の数式で求める。ここで、ｌｒｏｉは、ＲＯＩ領域を代表する輝度値であり、Ｓｐ（）は光毒性パラメータであり、ｚは標本表面から観測位置までの深さであり、Ｄ（）はレーザ光劣化パラメータである。
【００９３】
最終的なレーザ光強度＝Ｓｐ（ｌｒｏｉ）×Ｄ（ｚ）      …  （２）
【００９４】
なお、再設定に用いる最終的なレーザ光強度を計算する際には、光毒性パラメータまたは退色パラメータに、レーザ光劣化パラメータを乗じることにより、計算を行ってもよい。光毒性パラメータまたは退色パラメータにレーザ光劣化パラメータを乗じることは、光毒性または退色の状態に、深さ方向のバイアスをかける事に相当する。
【００９５】
以上、上述したステップＳ１００におけるレーザ光の強度を算出する方法について説明した。
【００９６】
［レーザ光強度の制御イメージについて］
ここでは、上述したレーザ光強度の制御を行うことにより、光毒性による細胞死がどのように調整されるかについて、そのイメージを説明する。図７は、レーザ光強度の制御を行うことにより、光毒性による細胞死がどのように調整されるかについて、そのイメージを説明する図である。
【００９７】
この図のグラフにおいて、横軸は、観察時間（単位：秒）である。また、縦軸は、標準的なレーザ光強度を１とした相対的なレーザ光強度と、観察開始時の生存細胞数を１とした相対的な生存細胞の割合とを示す。
【００９８】
まず、レーザ光強度を標準パワーである１に固定（グラフ中、「標準パワー」の直線で示す）して観察を行った場合、時間の経過に伴って、生存する細胞の割合がどう変化するかを「細胞死」の線によって示す。
【００９９】
「細胞死」の線が示すように、レーザ光強度を一定に保った場合、例えば６０秒経過すると生存する細胞の割合は半分以下に減ってしまう。そして、その後も、生存細胞率は、逓減していく。
【０１００】
これに対し、レーザ光強度をグラフの「制御」の線が示す値に、時間の経過と共に制御した場合、グラフの「調整値」の線が示すように、細胞死の発生は抑えられ、生存細胞率が逓減することは無い。
【０１０１】
なお、蛍光の退色に対する制御の様子も、この光毒性に関するグラフと同様となる。
【０１０２】
以上、レーザ光強度の制御を行うことにより、光毒性による細胞死がどのように調整されるかについて、そのイメージを説明した。
【０１０３】
［本実施形態の概要について］
本実施形態の概要は、以下のとおりである。すなわち、本実施形態のレーザ走査型の顕微鏡システム１は、蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出可能なレーザ光源ユニット１０と、前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力する光検出器２４と、複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む第１の関係情報を予め記憶した記憶部５２と、前記光検出器２４の出力を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、前記算出した代表的な輝度値を基に、前記第１の関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する制御部５１とを有するシステムコントロールＰＣ５０とを具備する。
【０１０４】
＜第２の実施形態＞
次に、第２の実施形態について説明する。第１の実施形態では、初期レーザ光強度を設定するために、撮影用設定情報およびユーザ入力情報の取得を行った。これに対し、本実施形態では、ユーザ入力情報の取得を行わずに初期レーザ光強度を設定する。ユーザ入力情報の取得を行わないことにより、処理の更なる自動化を促進することが出来る。
【０１０５】
なお、本実施形態では、ユーザ入力情報を取得する代わりとして、レーザ光強度を弱く設定して標本の予備撮影を行う。そして、予備撮影により得られた蛍光画像の画像認識を行う事により、ユーザ入力情報に相当する情報を得ている。
【０１０６】
［顕微鏡システムの構成について］
顕微鏡システムの構成は、第１の実施形態における顕微鏡システム１の構成と同じなので、説明は省略する。第１の実施形態と異なる点は、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１における処理として、標本の予備撮影処理および予備撮影した蛍光画像の画像認識処理が行われることである。
【０１０７】
なお、第１の実施形態と同様に、画像認識処理は、制御部５１において行われる代わりに、ローカルネットワーク上の画像解析サーバ１００やインターネットクラウド上の画像解析クラウドサーバ２００上で行われてもよい。
【０１０８】
以上、顕微鏡システム１の構成について説明した。
【０１０９】
［処理の流れについて］
本実施形態における処理の流れは、大きく、予備撮影の処理と本撮影の処理に分けることが出来る。予備撮影の処理は、本撮影処理の前に一度行われる。本撮影の処理は、第１の実施形態におけるものと同じであり、輝度値をフィードバックしながらレーザ光強度を調整し、繰り返し行われる。
【０１１０】
以下の処理に関する説明では、最初に予備撮影の処理において収集される情報について説明した後、処理全体の流れのうち、第１の実施形態と異なる部分について説明する。
【０１１１】
（予備撮影の処理で収集される情報について）
ここでは、予備撮影の処理時に制御部５１により収集される情報の詳細について説明する。収集される情報は、第１の実施形態と同じ撮影用設定情報と、予備撮影を行った時のレーザ光強度の情報と、予備撮影により得られた蛍光画像である。
【０１１２】
撮影用設定情報、予備撮影時のレーザ強度情報、および予備撮影により得られた蛍光画像は、予備撮影後の画像認識処理を行うため、そして本撮影処理における最初の撮影時のレーザ光強度を設定するためなどに用いられる。
【０１１３】
（処理の流れ（相違部分））
ここでは、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れのうち、第１の実施形態と異なる部分について説明する。図８は、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。
【０１１４】
まず制御部５１は、撮影用設定情報の取得を行う（ステップＳ２０）。撮影用設定情報の詳細は、上述したとおりである。
【０１１５】
次に、制御部５１は、予備撮影用に、レーザ光強度を弱く設定する（ステップＳ２１）。レーザ光の強度は、標本を撮影した蛍光画像の画像認識により、ユーザ入力情報に相当する情報が得られる程度であればよい。
【０１１６】
次に、制御部５１は、レーザコントローラ１１、スキャナコントローラ２１、および顕微鏡コントローラ４０に指示して、標本の蛍光画像を撮影させ、撮影された蛍光画像の取得を行う（ステップＳ２２）。
【０１１７】
次に、制御部５１は、ステップＳ２２の予備撮影で得られた蛍光画像の画像認識処理を行う。画像認識は、一般的な公知の方法により行うことが出来る。
【０１１８】
例えば、観察されることが予想される複数の標本について、同じく観察に利用されることが予想される様々な蛍光試薬で染色を行い、予め多くの蛍光画像を取得しておく。画像認識処理では、これら予め取得しておいた画像と、予備撮影で得られた画像とのマッチング処理を行って、ユーザ入力情報に相当するものを推定する。すなわち、蛍光画像に撮影された標本が何であるか、どの蛍光試薬が使用されているか、観察の目的は何であるかを推定する。
【０１１９】
次に、制御部５１は、取得した撮影用設定情報および推定したユーザ入力情報に基づいて、本撮影処理における初期レーザ光強度を決定する。そして決定された初期レーザ光強度は、レーザコントローラ１１に設定される（ステップＳ３０）。
【０１２０】
ここまでが予備撮影処理であり、第１の実施形態とは異なる部分である。これ以降の処理は、第１の実施形態と同じ処理なので、説明は省略する。
【０１２１】
以上、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れのうち、第１の実施形態と異なる部分について説明した。
【０１２２】
＜第３の実施形態＞
上記の実施形態では、撮影した蛍光画像の輝度値をフィードバックすることにより、標本の光毒性の状態や蛍光の退色の状態を把握し、次の撮影に用いるレーザ光の強度を調整した。これに対し、本実施形態では、輝度値に加え、観察時の経過時間もフィードバックすることにより、レーザ光の調整精度の向上を図っている。
【０１２３】
なお、経過時間をフィードバックしてレーザ光強度に反映させるためには、第１の実施形態で示した図７のグラフを用いる。経過時間を取得し、取得した経過時間に対して、「制御」の線が示す相対レーザ光強度を用いることにより、光毒性を考慮したレーザ光強度の調整を行うことが出来る。蛍光の退色に関しても同様である。
【０１２４】
なお、以下の説明は、第１の実施形態をベースとして、第１の実施形態と異なる部分のみを説明する。
【０１２５】
［顕微鏡システムの構成について］
最初に、本技術に係る顕微鏡システム１ａの構成について概略を説明する。なお、この顕微鏡システム１ａは、レーザ走査型顕微鏡システムである。図９は、顕微鏡システム１ａの概略構成図である。
【０１２６】
第１の実施形態との違いは、記憶部５２に、新たに、光毒性用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｄ（第４の関係情報）および退色用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｅ（第５の関係情報）が記憶されている点である。
【０１２７】
［５種類のテーブルについて］
ここでは、記憶部５２に記憶され、レーザ光調整に用いられる５種類のテーブルについて説明する。５種類のテーブルのうち、３種類は、第１の実施形態と同じもの、すなわち輝度・光毒性テーブル５２ａ、輝度・退色テーブル５２ｂ、および深さ・レーザ光劣化テーブル５２ｃである。
【０１２８】
新たに追加された光毒性用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｄは、図７のグラフにおいて「制御」の線で示した、経過時間と光毒性を抑えるための相対レーザ光強度の関係をテーブルにしたものである。
【０１２９】
また、新たに追加された退色用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｅは、図示はしていないが、図７のグラフにおいて「制御」の線で示したものと同様に、経過時間と退色を抑えるための相対レーザ光強度の関係をテーブルにしたものである。
【０１３０】
これらのテーブルは、複数の測定を行うことにより予め作成しておくものである。予め行う測定時には、グラフの「制御」の線は制御結果の値を示すものであるが、本撮影時にはグラフの「制御」の線は制御の目標値を示すものとして用いられる。
【０１３１】
［処理の流れについて］
本実施形態における処理の流れは、標本を観察する際の経過時間を取得する処理と、蛍光画像撮影時に再設定するレーザ光強度の計算処理を除いて、第１の実施形態のものと同じである。そのため、ここでは、経過時間の取得処理とレーザ光強度の算出方法についてのみ、説明を行う。
【０１３２】
（経過時間の取得処理について）
図１０は、システムコントロールＰＣ５０の制御部５１が行う処理全体の流れについて説明するフローチャートである。第１の実施形態と異なる部分は、ステップＳ９０のレーザ光劣化パラメータの取得の後に、観察における経過時間の取得を行うステップＳ９１が追加されたことと、レーザ光強度の計算処理の内容が変更され、ステップＳ１００がステップＳ１００ａとなったことである。
【０１３３】
（レーザ光強度の算出方法について）
ここでは、上述したステップＳ１００ａにおけるレーザ光の強度を算出する方法について説明する。図１１は、レーザ光の強度を算出する方法について説明するフローチャートである。
【０１３４】
まず、制御部５１は、ステップＳ７０において算出した光毒性パラメータに基づいて、第１のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０１）。
【０１３５】
次に、制御部５１は、ステップＳ８０において算出した退色パラメータに基づいて、第２のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０２）。
【０１３６】
次に、制御部５１は、第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高いか否かを判断する（ステップＳ１０３）。
【０１３７】
第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高い場合（ステップＳ１０３のＹ）、制御部５１は、計算に用いる基準として退色パラメータを採用する。そして、採用した退色パラメータと、レーザ光劣化パラメータとを用いて、第３のレーザ光強度を計算する（ステップＳ１０４ａ）。
【０１３８】
次に、制御部５１は、取得した経過時間を用いて、退色用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｅから第５のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０６）。
【０１３９】
次に、制御部５１は、算出した第３のレーザ光強度と第５のレーザ光強度のうち、低い方を再設定に用いる最終的なレーザ光強度とする（ステップＳ１０８）。
【０１４０】
これに対し、第１のレーザ光強度が第２のレーザ光強度よりも高くない場合（ステップＳ１０３のＮ）、制御部５１は、計算に用いる基準として光毒性パラメータを採用する。そして、採用した光毒性パラメータと、レーザ光劣化パラメータとを用いて、第４のレーザ光強度を計算する（ステップＳ１０５ａ）。
【０１４１】
次に、制御部５１は、取得した経過時間を用いて、光毒性用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｄから第６のレーザ光強度を求める（ステップＳ１０７）。
【０１４２】
次に、制御部５１は、算出した第４のレーザ光強度と第６のレーザ光強度のうち、低い方を再設定に用いる最終的なレーザ光強度とする（ステップＳ１０９）。
【０１４３】
以上、ステップＳ１００ａにおけるレーザ光の強度を算出する方法について説明した。
【０１４４】
＜変形例１＞
上記第３の実施形態では、輝度値と経過時間の両方を用いて、レーザ光強度を再設定するためのフィードバックを行った。これに対し、本変形例では、経過時間のみを用いて、レーザ光強度の再設定を行う。
【０１４５】
この場合、レーザ光強度を求めるためのテーブルとして、２種類のテーブル、すなわち、光毒性用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｄおよび退色用経過時間・レーザ光強度テーブル５２ｅのみが用いられることになる。
【０１４６】
なお、本変形例の構成や処理の流れは、上述したものから一部を取り出したものとなるので、詳細な説明は省略する。
【０１４７】
［補足事項］
その他、本技術は、上述の実施形態にのみ限定されるものではなく、本技術の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。
【０１４８】
［本技術におけるその他の構成］
なお、本技術は以下のような構成もとることができる。
（１）
蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出可能なレーザ光源と、
前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力する光検出器と、
複数の前記レーザ光の強度と、
前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報と
を含む第１の関係情報を予め記憶した記憶部と、
前記光検出器の出力を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、
前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、
前記算出した代表的な輝度値を基に、前記第１の関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する制御部と
を有する制御装置と
を具備するレーザ走査型顕微鏡システム。
（２）
前記（１）に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
複数の前記レーザ光の強度と、
前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える前記蛍光の退色の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報と
を含む第２の関係情報を更に予め記憶し、
前記制御部は、
前記算出した代表的な輝度値を基に、
前記第１の関係情報を参照して判定した、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度および
前記第２の関係情報を参照して判定した、前記退色の許容度を満たすレーザ光の強度のうち、
低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
（３）
前記（１）または（２）に記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の表面から前記励起光の照射位置までの深さと、前記励起光の減衰の度合いとの関係を示す第３の関係情報を更に予め記憶し、
前記制御部は、
前記選択されたレーザ光の強度を、前記第３の関係情報を参照して、補正する
レーザ走査型顕微鏡システム。
（４）
前記（１）から（３）のうちいずれか１つに記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記レーザ光の強度に基づいて、前記光検出器の感度を設定する
レーザ走査型顕微鏡システム。
（５）
前記（１）から（４）のうちいずれか１つに記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第４の関係情報を予め記憶し、
前記制御部は、
前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第４の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
（６）
前記（１）から（４）のうちいずれか１つに記載のレーザ走査型顕微鏡システムであって、
前記記憶部は、
前記生体標本の観察経過時間と、前記励起光が前記生体標本に与える退色の許容度を満たすレーザ光の強度との関係を示す第５の関係情報を予め記憶し、
前記制御部は、
前記補正されたレーザ強度および前記観察経過時間に基づいて前記第５の関係情報を参照して判定したレーザ光強度のうち、低いほうのレーザ光の強度を選択する
レーザ走査型顕微鏡システム。
（７）
蛍光染色された生体標本を発光させるための励起光としてレーザ光を射出し、
前記生体標本が発した蛍光を検出して輝度値に対応する信号を出力し、
複数の前記レーザ光の強度と、前記レーザ光の強度ごとの、前記レーザ光が前記生体標本に与える光毒性の度合いおよび前記輝度値の取り得る１以上の相関を示す情報とを含む関係情報を予め記憶し、
前記出力された信号を基に前記輝度値による蛍光画像を生成し、
前記生成した蛍光画像からＲＯＩ領域における代表的な輝度値を算出し、
前記算出した代表的な輝度値を基に、前記関係情報を参照して、前記光毒性の許容度を満たすレーザ光の強度を判定する
レーザ光強度設定方法。
【符号の説明】
【０１４９】
１、１ａ  …  顕微鏡システム
１０  …  レーザ光源ユニット
１１  …  レーザコントローラ
２０  …  スキャナユニット
２１  …  スキャナコントローラ
２２  …  ガルバノミラー
２３  …  ダイクロイックミラー
２４  …  光検出器
３０  …  顕微鏡
３１  …  フィルタ
３２  …  対物レンズ
３３  …  標本
３４  …  ステージ駆動部
３５  …  ステージ
４０  …  顕微鏡コントローラ
５０  …  システムコントロールＰＣ
５１  …  制御部
５２  …  記憶部
５２ａ…  輝度・光毒性テーブル
５２ｂ…  輝度・退色テーブル
５２ｃ…  深さ・レーザ光劣化テーブル
５２ｄ…  光毒性用経過時間・レーザ光強度テーブル
５２ｅ…  退色用経過時間・レーザ光強度テーブル
【図１】
2015082088.tif 000003
【図２】
2015082088.tif 000004
【図３】
2015082088.tif 000005
【図４】
2015082088.tif 000006
【図５】
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【図６】
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【図７】
2015082088.tif 000009
【図８】
2015082088.tif 000010
【図９】
2015082088.tif 000011
【図１０】
2015082088.tif 000012
【図１１】
2015082088.tif 000013