(57)【要約】【課題】本発明は、デンプン分解酵素を調整するための落花生皮抽出物を提供することを目的とする。【解決手段】落花生皮抽出物は抽出用溶媒で落花生皮に対して抽出・遠心処理をして得られるものである。抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせであり、調整は活性を阻害することを意味し、デンプン分解酵素はα−アミラーゼ又はα−グルコシダーゼである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
デンプン分解酵素を調整するための落花生皮抽出物であって、抽出用溶媒で落花生皮に対して抽出・遠心処理をして得られ、該抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせであり、該抽出用溶媒と落花生皮との体積比は１０〜２０：１〜５であることを特徴とする落花生皮抽出物。
【請求項２】
該調整は活性を阻害することを特徴とする請求項１に記載の落花生皮抽出物。
【請求項３】
該デンプン分解酵素はα−アミラーゼ又はα−グルコシダーゼであることを特徴とする請求項１に記載の落花生皮抽出物。
【請求項４】
前記抽出は、超音波抽出であることを特徴とする請求項１に記載の落花生皮抽出物。
【請求項５】
デンプンの分解を抑制し、腸の炭水化物の吸収速度を低下させることを特徴とする請求項１に記載の落花生皮抽出物。
【請求項６】
デンプン分解酵素の活性を調整するための組成物であって、請求項１に記載の有効量の落花生皮抽出物と、薬学的に許容可能な担持体とを含むことを特徴とする組成物。
【請求項７】
粉末、粒子、液体、ゴム又はペーストであることを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
食品、飲料、薬品、試薬又はサプリメントとして用いられることを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
デンプン分解酵素の活性を調整するための落花生皮抽出物の製造方法であって、抽出用溶媒で落花生皮を抽出する工程（ａ）と、得られたものに対して遠心処理をする工程（ｂ）と、遠心処理後の上澄み液を濾過してろ液を得る工程（ｃ）と、該ろ液を噴霧乾燥又は冷凍乾燥する工程（ｄ）とを含み、該抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせであり、該抽出用溶媒と落花生皮との体積比は１０〜２０：１〜５であることを特徴とする落花生皮抽出物の製造方法。
【請求項１０】
前記工程（ｃ）の後、４５〜７０℃で該ろ液に対して減圧濃縮処理を行う工程をさらに含むことを特徴とする請求項９に記載の落花生皮抽出物の製造方法。
【請求項１１】
前記工程（ａ）での抽出は超音波抽出であることを特徴とする請求項９に記載の落花生皮抽出物の製造方法。
【請求項１２】
該超音波抽出は、２０〜３０℃で行われることを特徴とする請求項１１に記載の落花生皮抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デンプン分解酵素を調整する抽出物に関し、特にデンプン分解酵素を調整する落花生皮抽出物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人間が摂取する炭水化物がデンプンである場合、デンプンが直鎖であるか分鎖であるかにもかかわらず、唾液腺及び膵臓のα−アミラーゼによって急速に分解される。デンプンアミラーゼは分解酵素であって、二重鎖構造のブドウ糖における連結されたα−１,４−グルコシド結合を加水分解する酵素である。作用のしかたによってα−アミラーゼとβ−デンプンアミラーゼと区別される。α−アミラーゼは、多量のα鎖及びα鎖に連結される多糖（例えば、デンプン、グリコーゲン）を加水分解してブドウ糖及びマルトースを生成する酵素である。α−アミラーゼが人体やその他の哺乳類に存在する場合、デンプンアミラーゼ（唾液、膵臓など）となり、デンプンを含む種子にも存在し、食べ物として貯蓄される。また、多数の微生物からα−アミラーゼが分泌される。
【０００３】
同様に、α−グルコシダーゼはグリコシド（配糖体）を加水分解する酵素であって、α−アミラーゼと共にデンプン分解酵素である。α−グルコシダーゼは、炭水化物、例えばデンプン及びグリコーゲンの複雑な結合を切断し、複合糖質（ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）のグルコシル残基（ｇｌｕｃｏｓｙｌ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ）の分岐点を分解し、ブドウ糖のα及びβが結合したポリマーを含む。
【０００４】
しかし、現在よく用いられるα−グルコシダーゼ阻害剤は、複合糖類の消化及び吸収を遅らせるように、α−グルコシダーゼの受容体と結合することで食べ物の二糖類が単糖類に変換するのを抑制する。α−グルコシダーゼ阻害剤は、糖類の消化作用を低減するため、ブドウ糖が腸に吸収されるのを遅らせることができる。全体的に言うと、α−グルコシダーゼ阻害剤は、糖類の吸収速度を低下させて食後の血糖値の上昇を緩やかにするため、食後の血糖値を低下させることができる。一方、α−グルコシダーゼ阻害剤は、通常、主に２型糖尿病をコントロールするのに用いられるアカルボース（ａｃａｒｂｏｓｅ）及びミグリトール（ｍｉｇｌｉｔｏｌ）処方薬である。
【０００５】
ピーナツ（学名：Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ  Ｌ．）は、落花生とも呼ばれ、マメ科植物であって、台湾では重要な農作物である。また、主に食用や、オイルの生成、落花生系の製品にすることができる。世界においても、落花生はオイルを生成するための主な作物であるため、人々の生活の中で重要な役割を果たしている。従来、落花生には豊富な栄養素が含まれ、よく使われるレギューム（Ｌｅｇｕｍｅ）のように、種子は栄養が高く、４４％〜５６％の油分が含まれ、不飽和脂肪酸及び人体に必要な脂肪酸の含有量が８０％〜８５％（例えばリノール酸）であるため、人体にある血清コレステロールの低下、動脈硬化及び冠状動脈性心臓病の防止、美容潤肌などの効用を有する。一方、落花生は、タンパク質の含有量が２５％〜３０％で、アルギニン、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ  ａｃｉｄ）及びプロリン（ｐｒｏｌｉｎｅ）などの人体に必要なアミノ酸を主とする。また、豊富なリボフラビン、コリン、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＫ及びカルシウムなどの２０数種類の微量元素をも含む。
【０００６】
落花生皮は、落花生の副産物であって、落花生の主製品（例えば、ピーナッツバター、落花生スナック又は落花生飴）を製造するときに生じるものである。また、地球規模での年間産出量は約１００万トンである。しかし、落花生皮は食感が悪く、苦みがあるので、愛食されていない。そのため、落花生皮は主に動物用飼料として用いられる。
【０００７】
しかし、落花生皮には、タンパク質が１２％、脂肪が１６％、炭水化物が７２％それぞれ含まれ、豊富なポリフェノール（ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ）、例えばプロシアニジンズ（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ）をも含んでいる。従来、プロシアニジンズが良好な抗酸化機能を有することや、投与量によっては脂質の過酸化、ＤＮＡの断片化の分裂や細胞の壊死などを抑制できることがすでに検証されている。食事においてプロシアニジンズの摂取量を増やすことで、悪玉コレステロールの過酸化を抑制することができ、遊離基の除去能力を高めることができる。同時に、プロシアニジンズは血管組織に対して親和力を持ち、結合組織におけるコラーゲン蛋白及び弾性蛋白との２つのタンパク質の保護において重要な役割を果たし、コラーゲン蛋白、弾性蛋白及びヒアルロン酸の分解と関係する酵素の発生を抑制することができる。また、プロシアニジンズは過酸化水素を用いて膵臓のβ細胞の増殖や膵臓のβ細胞の壊死を低減させることができる。なお、マウスによる実験からも、プロシアニジンズがタンパク質キナーゼＣの発生を選択的に抑制し、毛のうの生長を活発化させ、毛のう上皮細胞の増殖を強化することができることを発見した。一方で、ブドウ種子のプロシアニジンズにおいて、プロシアニジンズは、リン脂質の二層に挟まれることで、紫外線による赤血球の破壊を防止することができ、紫外線に破壊された遊離基を除去して、ビタミンＥを低濃度（１ｍｇ／ｍＬ）に保つことができる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従来の落花生の皮に関する研究によると、落花生の皮は、抗酸化作用を有し、遊離基を除去し、血を止め、コリをなくし、むくみを解消する作用を有し、繊維蛋白の溶解に耐えられ、骨髓で血小板を生成するのを促進し、血友病、原発性及び続発性免疫血小板減少性紫斑病、肝臓出血病、手術後の出血、胃、腸、肺、子宮などの出血に用いられるといった開示しかされていない。
【０００９】
また、前記文献や研究において、いずれも落花生皮抽出物が優れたデンプン分解酵素阻害活性を有することが開示されていない。本発明は、落花生皮抽出物が優れたデンプン分解酵素阻害活性を有し、デンプンの分解を抑制する機能を有することを発見した。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そこで、本発明の目的の一つは、デンプン分解酵素を調整するための落花生皮抽出物を提供することにある。該デンプン分解酵素を調整するための落花生皮抽出物は、抽出用溶媒で落花生皮に対して抽出・遠心処理をして得られるものである。該抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせである。また、該抽出用溶媒と落花生皮との体積比は１０〜２０：１〜５であって、該抽出は超音波にて行われる。該調整は活性を阻害することであり、該デンプン分解酵素はα−アミラーゼ又はα−グルコシダーゼであり、デンプンの分解を抑制し、腸の炭水化物の吸収速度を遅らせるために用いられる。
【００１１】
本発明のその他の目的は、デンプン分解酵素の活性を調整するための組成物を提供することにある。該組成物は有効量の落花生皮抽出物と、医薬的に許容可能な担持体とを含み、該組成物は粉末、粒子、液体、ゴム又はペーストであり、しかもその剤形は食品、飲料、薬品、試薬又はサプリメントとすることができる。  
【００１２】
本発明のさらなるその他の目的は、デンプン分解酵素の活性を調整するための落花生皮抽出物の製造方法を提供することにある。該製造方法は、超音波にて、２０〜３０℃の温度で、落花生皮との体積比は１０〜２０：１〜５である抽出用溶媒で落花生皮を抽出する工程（ａ）と、落花生皮が抽出された溶媒に対して遠心処理をする工程（ｂ）と、遠心処理後の上澄み液を濾過してろ液（filtrate）を得る工程（ｃ）と、該ろ液を噴霧乾燥する工程（ｄ）とを含む。また、該抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせであり、工程（ｃ）の後に、４５〜７０℃で該ろ液に対して減圧濃縮処理を行う。
【００１３】
そのため、本発明が提供する落花生皮抽出物は、デンプン分解酵素を効果的に阻害することができるため、二糖類の分解を抑制し、腸におけるブドウ糖の吸収率を低下させる機能を有する。
【００１４】
以下は、図面を用いて本発明の実施形態を説明する。以下例示する実施例は本質的に本発明を表すものであって、本発明の範囲を限定するものではない。当該技術を熟知する当業者が、本発明の精神や範囲を逸脱しない範囲で若干の修飾や変更を加えることができる。そのため、本発明の保護範囲は請求の範囲にて決められるものを基準とするべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明における各濃度の落花生皮抽出物（２ｍｇ／ｍＬ、０．３  ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ及び１ｍｇ／ｍＬ）と、１ｍｇ／ｍＬ処方薬であるＧｌｕｃｏｂａｙとのα−アミラーゼに対する活性の阻害能力を比較する比較図である。
【図２】本発明における各濃度の落花生皮抽出物（１．０μｇ／ｍＬ、１．５μｇ／ｍＬ、２．０μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ及び３．０  μｇ／ｍＬ）と、８００μｇ／ｍＬ処方薬であるＧｌｕｃｏｂａｙとの、α−グルコシダーゼに対する活性の阻害能力を比較する比較図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の好ましい実施例は、超音波にて低温で落花生皮を抽出するものである。超音波にて低温で抽出を行った後、連続型遠心機で不純物を除去して、減圧濃縮装置で所定量まで濃縮して、超高温商業滅菌法で滅菌し、噴霧乾燥した後、落花生皮抽出物を４℃以下の温度で冷凍保存する。同時に、アフラトキシン（ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ）の含有量を検出する。該含有量の規格は国によって異なるが、台湾の法定規格は１５ｐｐｂ未満、中国の法定規格は２０ｐｐｂ未満、日本の法定規格は１０ｐｐｂ未満、ヨーロッパの食品の法定規格は６ｐｐｂ未満、加工品の法定規格は２３ｐｐｂ未満である。本抽出液の検出結果は、アフラトキシンを「未検出」というものであった。該落花生皮抽出物は、デンプンアミラーゼの活性を効果的に阻害し、デンプンの代謝を遅らすことができる。そのため、血糖値に問題のあるユーザに対して血中の血糖濃度を安定化させることができる。また、肥満患者に対してデンプンの摂取や消化を低減させることができ、体重を管理できる目的を実現することができる。
【００１７】
実施例１  落花生皮抽出物の製造工程
１．１  落花生皮を抽出する前の用意
本発明の好ましい実施例は、雲林県北港台南１１号落花生を選択して皮を脱離する。自動殻脱離という方法で、土や不良品を除去して、コンピュータで落花生を選別して高温で（温度は９０℃以下）皮の脱離を行い、機械で粗く砕いた後、落花生の皮の水分吸着を回避するようにパッケージして、素早く４℃で冷凍保存する。これにより、黄色麹菌（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）の生長を効果的に防止することができる。その後の抽出は、まず、アフラトキシン（ａｆｌａｔｏｘｉｎ）の含有量を検出し、１５ｐｐｂ未満という台湾の法定規格に満たす場合に行われる。アフラトキシンの検出は、行政院衛生庁の公告で指定された中華国民国家規格（ＣＮＳ）総号４０９０類号Ｎ６０９７食品中のアフラトキシンの検出法にて行われてもよい。
【００１８】
１．２  落花生皮の抽出プロセス
本発明の好ましい実施例は、超音波にて低温で落花生皮を抽出するものである。まず、体積が落花生皮の１０〜２０倍である抽出液を落花生皮に加える。抽出用溶媒は水、アルコール類、含水アルコール類又はこれらのいずれかの組み合わせであるが、水でかつ逆浸透水であることが好ましい。抽出用溶媒と落花生皮との体積比は１０〜２０：１〜５であるが、１０：１であることが好ましい。超音波にて２０〜３０℃で落花生皮の抽出を３０〜６０分間行い、連続式遠心機で遠心処理（４，８００ｒｐｍ）を行い、遠心処理された上澄み液をろ過する。ろ過方式としては、活性炭素やろ紙を用いることができるが、ろ紙であることが好ましい。ろ紙（ＴＯＹＯ１号）を用いて該上澄み液をろ過して不純物を除去する。続いて、減圧濃縮装置によって４５〜７０℃で濃縮を行い、元の体積の１０％まで濃縮する。これにより、濃縮された落花生皮抽出液が得られる。この抽出液は濃い茶色となっている。
【００１９】
１．３  落花生皮抽出液を濃縮乾燥した粉末の製造
超高温商業滅菌法（Ｕｌｔｒａ  Ｈｉｇｈ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）で濃縮された該落花生皮を滅菌した後、冷凍乾燥又は噴霧乾燥の方式で落花生皮抽出液中の水分を除去し、落花生皮抽出液が濃縮乾燥された粉末を形成する。該冷凍乾燥方式の条件は、乾燥温度が−４０〜−６０℃、真空度が２〜３０  ｍｉｌｌｉｔｏｒｒ、冷凍乾燥が１２時間である。また、落花生皮である原料から９〜１２％の乾燥粉末を得ることができる。該噴霧乾燥方式の条件は、材料を投入する温度が９０〜１８０℃、液の供給速度が１〜４０ｍＬ／ｍｉｎ、噴霧の圧力が０．２〜０．５Ｍｐａ、空気の流量が０．５〜１．０ｍ３／ｍｉｎである。また、落花生皮である原料から９〜１２％の乾燥粉末を得ることができる。落花生皮抽出物を４℃の環境に冷凍保存し乾燥するとともに、アフラトキシンの含有量を検出する。約１キロ当たり、９０グラムの落花生皮の粗い抽出物が得られる。
【００２０】
実施例２  落花生皮抽出液から濃縮乾燥された粉末の成分含有量の分析
前記本発明の製造方法で得られた落花生皮抽出液から濃縮乾燥された粉末をさらに分析した。分析方法は下記の通りである。
【００２１】
２．１  ポリフェノールの総含有量の測定
フォリンーチオカルトによる比色法で抗酸化ポリフェノールの総含有量を測定して、量的には、トリヒドロキシ安息香酸当量でフェノールの相対含有量を表すものとする。用意する材料はフォリンーチオカルト試薬、７．５％炭酸ナトリウム及び１０００μｇ／ｍＬトリヒドロキシ安息香酸（水溶液）を含む。
【００２２】
１０００μｇ／ｍＬのトリヒドロキシ安息香酸から、２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、６０μｇ／ｍＬ、８０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬのトリヒドロキシ安息香酸の標準溶液を調製する。各濃度のトリヒドロキシ安息香酸標準溶液を１００μＬずつ取り、微量の遠心管に入れる。フォリンーチオカルト試薬を５００μＬ加えて、均一に混ぜた後に３分間放置する。７．５％炭酸ナトリウムを４００μＬ加えて均一に混ぜた後に、常温で３０分間反応させる。分光光度計で７３０ｎｍの吸光度を測定し、標準グラフを描く。
【００２３】
落花生皮抽出物を適度に希釈した後、落花生皮抽出物の試料を１００μＬ取り、微量の遠心管に入れる。フォリンーチオカルト試薬を５００μＬ加えて、均一に混ぜた後に３分間放置する。７．５％炭酸ナトリウムを４００μＬ加えて均一に混ぜた後に、常温で３０分間反応させる。分光光度計で５３１ｎｍの吸光度を測定し、標準グラフを描く。
【００２４】
２．２  フラボノイドの総含有量の測定
ルチン当量でフラボノイドの総含有量を表すものとして、フラボノイドの総含有量を測定する。用意する材料は１０％硝酸アルミニウム（水溶液）、５％クエン酸ナトリウム（水溶液）、４％水酸化ナトリウム（水溶液）及び２００μｇ／ｍＬルチン（メタノール溶液）を含む。
【００２５】
上記ルチンの標準溶液を０μＬ、２００μＬ、４００μＬ、６００μＬ、８００μＬ及び１０００μＬを取り、それぞれ試験管に入れる。水を１２００μＬ、１０００μＬ、８００μＬ、６００μＬ、４００μＬ、２００μＬ及び０μＬの順に入れ、振って均一に混ぜる。各濃度のルチン溶液を２００μＬ取り、それぞれに５％クエン酸ナトリウムを２００μＬ加え、均一に混ぜた後６分間放置する。１０％硝酸アルミニウムを２００μＬ加えて、均一に混ぜた後６分間放置する。さらに４％水酸化ナトリウムを２ｍＬ加えて均一に混ぜた後に、Ｈ２Ｏを１．４ｍＬ加えて均一に混ぜる。前記の反応液を２００μＬ取り、９６ウェルプレートに入れ、分光光度計で５００ｎｍの吸光度を測定し、標準グラフを描く。
【００２６】
落花生皮抽出物を適度に希釈した後、試験管に落花生皮抽出物の試料を２００μＬ入れる。５％クエン酸ナトリウムを２００μＬ加え、均一に混ぜた後６分間放置する。１０％硝酸アルミニウムを２００μＬ加えて、均一に混ぜた後６分間放置する。さらに４％水酸化ナトリウムを２ｍＬ加えて均一に混ぜた後に、Ｈ２Ｏを１．４ｍＬ加えて均一に混ぜる。前記の反応液を２００μＬ取り、９６ウェルプレートに入れ、分光光度計で５００ｎｍの吸光度を測定する。
【００２７】
２．３  プロシアニジンズの含有量の測定
カテキン当量でプロシアニジンズの相対的な含有量を表すものとして、プロシアニジンズの含有量を測定する。用意する材料は１％ワニリン（ｖａｎｉｌｌｉｎ）溶液と、９Ｍメタノール性塩酸溶液と１０００ｐｐｍのカテキンとを含む。
【００２８】
メスフラスコに前記カテキン標準溶液を０ｍＬ、０．２ｍＬ、０．５ｍＬ、１．０ｍＬ、１．５ｍＬ及び２．０ｍＬ入れ、１０ｍＬ、９．８ｍＬ、９．５ｍＬ、９．０ｍＬ、８．５ｍＬ及び８．０ｍＬのメタノールを順に加えて、よく振って均一に混ぜる。各濃度のカテキンを１ｍＬ取り、試験管に入れる。１％バニリン溶液を２．５ｍＬ加えて、９Ｍメタノール性塩酸溶液を２．５ｍＬさらに加えて、よく振って均一に混ぜる。混合液を３０℃の温水槽にて２０分間反応させ、分光光度計で５００ｎｍの吸光度を測定し、標準のグラフを描く。
【００２９】
メタノールで落花生皮抽出物を適度に希釈した後、落花生皮抽出物の試料を１ｍＬ取り、試験管に入れる。１％バニリン溶液を２．５ｍＬ加えて、９Ｍメタノール性塩酸溶液を２．５ｍＬさらに加えて、よく振って均一に混ぜる。混合液を３０℃の温水槽にて２０分間反応させ、分光光度計で５００ｎｍの吸光度（ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）を測定し、標準のグラフを描く。
【００３０】
２．４  濃度の算出
上記含有量の測定は、吸光度と対応する標準濃度とで検出線を描いた。内差法で落花生皮抽出物試料の予測成分の含有量を推測した。予測成分が低重合プロシアニジンズである場合の計算式は以下の通りである。
【００３１】
吸光度Ａ＝（Ａｓ−Ａｂ）−（Ａｃ−Ａ０）
Ａｓ  ＝落花生皮抽出物試料の吸光度
Ａｂ  ＝落花生皮抽出物試料が０ｐｐｍである場合の吸光度
Ａｃ  ＝カテキンの吸光度
Ａ０＝カテキンが０ｐｐｍである場合の吸光度
低重合プロシアニジンズ（ｐｐｍ）＝内差法で得た濃度×希釈倍数
【００３２】
そのため、前記本発明の製造方法で得られた落花生皮抽出液から濃縮乾燥された粉末を分析した結果、落花生皮抽出液から濃縮乾燥された粉末は、１キロ当たり、フェノール（ｐｈｅｎｏｌｉｃ）が２４５ｍｇの没食子酸（ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）、総フラボノイド（Ｔｏｔａｌ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）が８４３ｍｇのルチン（ｒｕｔｉｎ）及び低重合プロシアニジンズ（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）が２１５ｍｇのカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）を含む。なお、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ：ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）でレスベラトロールの含有量を測定し、従来の食品金属検出方式（ＣＮＳ１２６３８）でその他の金属の含有量を測定した（表1を参照）。
【００３３】
【表１】
2015017045.tif 000002
【００３４】
実施例３  落花生皮抽出物のα−アミラーゼに対する阻害能力の分析
３．１  α−アミラーゼ阻害能力の分析実験前の材料調製
α−アミラーゼの阻害能力を分析するのに必要な材料は、０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（塩化ナトリウムを６ｍＭ含み、ｐＨ６．９）、２Ｎ水酸化ナトリウム、ジニトロ基サリチル酸（ｄｉｎｉｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）試薬、１％可溶性デンプン（ｓｔａｒｃｈ）及びα−アミラーゼ（α−ａｍｙｌａｓｅ）を含む。
【００３５】
ジニトロ基サリチル酸試薬（終結剤ともいう）の製造方法は以下の通りである。即ち、３,５−ジニトロ基サリチル酸を１ｇ取り、５０ｍＬの脱イオン水を加え、酒石酸カリウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｔａｒｔｒａｔｅ  ｔｅｔｒａｈｙｄｒａｔｅ）をゆっくりと３０ｇ加え、２Ｎ水酸化ナトリウムをさらに２０ｍＬ加え、脱イオン水で量を１００ｍＬにする。二酸化炭素を充填してジニトロ基サリチル酸試薬が保存され、保存期間は２週間を限度とする。
【００３６】
１％可溶性デンプンの製造方法は以下の通りである。即ち、可溶性デンプンを１ｇ取り、１００ｍＬの０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液に溶解させ、ゆっくりと加熱して完全に溶解させてから、室温まで温度を下げた後、量を１００ｍＬにする。分析する前、室温で少なくとも４〜５分間放置する。
【００３７】
α−アミラーゼ（５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）：０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液でα−アミラーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，アメリカ）を溶解させる。その固形活性が１０〜３０ｕｎｉｔｓ／ｍｇであるため、１ｍｇ当たり１００ｕｎｉｔｓで計算すると、５００ＫＵには約５０ｇのα−アミラーゼ固体が存在し、５ｕｎｉｔｓ／ｍＬで１００Ｌのα−アミラーゼを調製することができ、氷浴で保存するか４℃の環境に保存する。
【００３８】
３．２  α−アミラーゼ阻害能力の実験
市販のグルコバイ（商品名：Ｇｌｕｃｏｂａｙ、Ｂａｙｅｒ株式会社、ドイツ）口服薬を対照群の標準グラフとする。グルコバイの主成分はアカルボース（ａｃａｒｂｏｓｅ）であって、微生物から抽出された偽四糖類（ｐｓｅｕｄｏｔｅｔｒａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）である。また、主に腸の中で働き、腸における二糖、オリゴ糖及び多糖を分解する酵素、即ちα−グルコシダーゼを主に阻害する働きがある。この働きは、服用する薬の量によって炭水化物の分解を遅らすことができる。最も重要なのは、炭水化物がブドウ糖に分解して全身を循環するのを遅らすことができるということである。グルコバイは、上記の働きを利用して食後の血糖値の上昇を遅延低減させることができ、腸におけるブドウ糖の吸収のバランスをとることができる。そのため、２４時間にわたって血糖濃度を安定させ、平均血糖値を低下させることができる。よって、本実験では、グルコバイ口服薬を対照群とする。
【００３９】
０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（６ｍＭ塩化ナトリウムを含み、ｐＨ６．９）を比較群とする。試料群の濃度はそれぞれ０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ及び１ｍｇ／ｍＬであって、各濃度の試料群及び比較群は、それぞれ０分間反応群及び１０分間反応群を有する。
【００４０】
試料群及び比較群を用意して、それぞれ２００μＬ取り、微量の遠心管に入れ、それぞれ二管を作り、一方を０分間反応群とし、他方は１０分間反応群とする。それぞれの群にリン酸ナトリウム緩衝液に溶解するα−アミラーゼ（５ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）を２００μＬ加え、均一に混ぜた後に、２５℃で１０分間培養して酵素を働かせる。０分間反応群については、まず、ジニトロ基サリチル酸試薬（終結剤として）を加え、反応が持続していくのを回避するように１％可溶性デンプンを２００μＬ加える。１０分間反応群については、１％可溶性デンプンを２００μＬ加えて、均一に混ぜた後、２５℃で１０分間培養してから、ジニトロ基サリチル酸試薬を加えて均一に混ぜた後、室温まで冷却する。０分間反応群及び１０分間反応群は、共に測定可能な範囲まで適量の水で希釈する。例えば、反応後の試料及び水はそれぞれ１５０μＬ、８５０μＬである。分光光度計で５４０ｎｍの吸光度を測定し、緩衝溶液で背景値をゼロとする。
【００４１】
３．３  α−アミラーゼ阻害能力分析の計算式
α−アミラーゼ阻害能力分析計算式は以下の通りである。
【００４２】
α−アミラーゼ阻害パーセンテージ＝〔１−（ＡＳａｍｐｌｅ１０−ＡＳａｍｐｌｅ  ０）／（  ＡＢｌａｎｋ１０−ＡＢｌａｎｋ０）〕×１００％
ＡＳａｍｐｌｅ１０＝試料群の１０分間反応群の吸光度
ＡＳａｍｐｌｅ０  ＝試料群の０分間反応群の吸光度
ＡＢｌａｎｋ１０  ＝比較群の１０分間反応群の吸光度
ＡＢｌａｎｋ０  ＝比較群の０分間反応群の吸光度
【００４３】
３．４  α−アミラーゼデンプンアミラーゼ阻害能力の結果についての分析
図１に示すように、落花生皮抽出物の濃度の増加に伴い、α−アミラーゼの活性への阻害能力が直線的に増加することが確認される。同時に、落花生皮抽出物の濃度が１ｍｇ／ｍＬである場合、α−アミラーゼの活性への阻害能力は８８％となっており、処方薬である１ｍｇ／ｍＬＧｌｕｃｏｂａｙの阻害能力の９４％に近い。そのため、落花生皮抽出物も食後の血糖値の上昇を遅延低減させることができ、落花生皮抽出物の濃度が高いほどα−アミラーゼ活性への阻害能力が高くなる。
【００４４】
実施例４  落花生皮抽出物のα−グルコシダーゼ阻害能力についての分析
４．１  α−グルコシダーゼ阻害能力分析実験の前における材料の調製
α−グルコシダーゼ阻害能力の分析に必要な材料は、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）と、２．５ｍＭのｐ−ナイトフェノール−α−Ｄ−グルコピラノソイド（ＰＮＰＧ、ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）試薬と、０．２Ｍ炭酸ナトリウムと、α−グルコシダーゼ（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）とを含む。
【００４５】
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）の製造方法は以下の通りである。即ち、リン酸水素二ナトリウム及びリン酸二水素ナトリウムをそれぞれ４．７２８３ｇ、２．００２８ｇ取り、４００ｍＬの逆浸透水を入れ、溶解後逆浸透水で量を５００ｍＬにする。
【００４６】
２．５ｍＭのｐ−ニトロフェノール−α−Ｄ−グルコピラノソイド（ＰＮＰＧ）の製造方法は以下の通りである。即ち、逆浸透水で０．０３７７ｇのＰＮＰＧを溶解して量を１００ｍＬにする。使用前に薄い黄色に変わったかどうかを観察し、薄い黄色に変わった場合は、溶媒が酸化されたことを意味し、改めて調製する必要がある。
【００４７】
０．２Ｍ炭酸ナトリウムの製造方法は下記の通りである。即ち、炭酸ナトリウムを２．１１９８ｇ取り、逆浸透水で溶解後に量を１００ｍＬにする。  
【００４８】
α−グルコシダーゼ（０．２ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）：０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液でα−グルコシダーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，アメリカ）を溶解させ、その固体活性が２６ｕｎｉｔｓ／ｍｇであるため、固体活性は合計３．８５ｍｇである。リン酸ナトリウム緩衝液を２．０ｍＬ取り、フラスコに入れ、酵素を振り溶解する。これにより、５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬであるα−グルコシダーゼを調製し、−２０℃の冷蔵庫に入れて予備品とする。使用の際、α−グルコシダーゼ（５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）を０．１ｍＬ取り、２．０ｍＬリン酸ナトリウム緩衝液で量を２５ｍＬにすると、０．２ｕｎｉｔｓ／ｍＬのα−グルコシダーゼが得られる。
【００４９】
４．２  α−グルコシダーゼ阻害能力実験
市販のグルコバイ（商品名：Ｇｌｕｃｏｂａｙ、Ｂａｙｅｒ株式会社、ドイツ）口服薬を対照群の標準グラフとする。０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（６ｍＭの塩化ナトリウムを含み、ｐＨ６．９）を比較群とする。試料群の濃度は、それぞれ１．０μｇ／ｍＬ、１．５μｇ／ｍＬ、２．０μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ及び３．０μｇ／ｍＬとする。各濃度の試料群及び比較群は、それぞれ０分間反応群及び１５分間反応群を有する。
【００５０】
試料群及び比較群を用意して、それぞれ１６０μＬ取り、９６ウェルプレートに入れ、２回取り、それぞれを０分間反応群及び１５分間反応群とする。それぞれに０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液を２０μＬ加えてから、α−グルコシダーゼ（０．２ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）を加え、均一に混ぜた後、２５℃で１０分間培養して酵素を働かせる。０間反応群については、まず８０μＬの炭酸ナトリウム（０．２Ｍ）（終結剤として）を加えてから、反応が持続しいていくのを回避するように２０μＬのＰＮＰＧ（２．５ｍＭ）をさらに加える。１５分間反応群については、２０μＬのＰＮＰＧ（２．５ｍＭ）を加え、均一に混ぜた後，３７℃に放置して１５分間培養する。８０μＬの炭酸ナトリウム（０．２Ｍ）をさらに加え、均一に混ぜる。その後、０分間反応群及び１５分間反応群について、分光光度計で４０５ｎｍの吸光度を測定して、緩衝溶液で背景値をゼロとする。
【００５１】
４．３  α−グルコシダーゼ阻害能力分析の計算式
α−グルコシダーゼ阻害能力分析計算式は以下の通りである。
【００５２】
α−グルコシダーゼ阻害パーセンテージ＝〔１−（ＡＳａｍｐｌｅ１５−ＡＳａｍｐｌｅ０）／（ＡＢｌａｎｋ１５−ＡＢｌａｎｋ０）〕×１００％
ＡＳａｍｐｌｅ１５＝試料群の１５分間反応群の吸光度
ＡＳａｍｐｌｅ０＝試料群の０分間反応群の吸光度
Ａ  Ｂｌａｎｋ１５＝比較群の１５分間反応群の吸光度
Ａ  Ｂｌａｎｋ０＝比較群の０分間反応群の吸光度
【００５３】
４．４  α−グルコシダーゼデンプンアミラーゼ阻害能力結果についての分析
図２に示すように、落花生皮抽出物の濃度の増加に伴い、α−アミラーゼの活性への阻害能力がリニアに増加することが確認される。同時に、落花生皮抽出物の濃度が３ｍｇ／ｍＬである場合、α−アミラーゼの活性への阻害能力は８８％となり、処方薬である８００ｍｇ／ｍＬＧｌｕｃｏｂａｙの阻害能力の８４％を超えている。そのため、落花生皮抽出物も食後の血糖値の上昇を遅延又は低下させ、腸を介してのブドウ糖利用のバランスをとることができるとともに、落花生皮抽出物の濃度が高いほどα−アミラーゼの活性の阻害能力が高くなる。
【００５４】
以上のように、本発明の製造方法により得られた落花生皮抽出物は、デンプン分解酵素の活性を効果的に阻害することができ、デンプンの分解を抑制することができるとともに、食後の血糖値の上昇を遅延低減させることができ、食後の血糖値の上昇を緩やかにすることができる。一方、落花生皮抽出物は、天然抽出物であるため、デンプン分解酵素の調整に用いられる場合であっても、服用者に不快感を与えることがなく、毒性の生成や併発症状の引き起こしなどの副作用もない。そのため、健康食品及び飲料、薬品、試薬又はサプリメントなどを製造することができる。該組成物は、有効量の落花生皮抽出物以外に、薬学的に許容可能な担持体を含むことができる。担持体は賦形剤（例えば、水）、充填剤（例えば、ショ糖又はデンプン）、接着剤（例えば、セルロース誘導体）、希釈剤、崩壊剤、吸收促進剤又は甘味料であるが、これらに限定されるものではない。本発明の組成物は、従来の薬学又は食品学の製造方法で製造されることができ、有効成分量の落花生皮抽出物と１種類以上の担持体とを混合して、必要とする剤形を調剤することができる。剤形は、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル又は他の液体製剤とすることができるが、これらに限定されるものではない。
【図１】
2015017045.tif 000003
【図２】
2015017045.tif 000004