(57)【要約】      （修正有）【課題】シュレム管におけるTie2活性化作用に基づく新規眼圧降下剤の提供。【解決手段】Tie2活性化剤からなる眼圧降下剤、及び前記眼圧降下剤を有効成分として含有する緑内障の予防及び／又は治療のための医薬組成物。前記Tie2活性化剤は、シベリアニンジン及び／又はケイヒの抽出物であることが好ましく、前記抽出物はアルコール抽出物であることが好ましい。前記医薬組成物は、経口投与剤型又は点眼剤であることが好ましい。【選択図】図２
2015199733.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Tie2（tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain2）活性化剤からなる、眼圧降下剤。
【請求項２】
前記Tie2活性化剤が、シュレム管におけるTie2を活性化する、請求項１に記載の眼圧降下剤。
【請求項３】
前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）及び／又はケイヒの抽出物である、請求項１又は２に記載の眼圧降下剤。
【請求項４】
前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）及び／又はケイヒのアルコール抽出物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼圧降下剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の眼圧降下剤を含有する、組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の眼圧降下剤を含有する、医薬組成物。
【請求項７】
緑内障を予防及び／又は治療するための、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
経口投与の剤型にある、請求項６又は７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
点眼剤の剤型にある、請求項６又は７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はTie2活性化（リン酸化）剤からなる、眼圧降下剤を提供する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会となった日本では、加齢に伴う眼疾患が増加している。現在、緑内障は中途失明の原因の第一位となり、潜在的な緑内障患者を含めるとわが国には４００万人の患者がいることが推測されている。緑内障は40歳以上の約5%が罹患し、現在本邦において失明原因第一位の疾患である。緑内障は、視機能を司る網膜神経節細胞(Retinal ganglion cell; RGC)の障害に伴いRGCの菲薄化を生じ、その結果として視野障害を生じる視神経症である。RGCの障害の主な原因の一つは眼圧の上昇である。現状では唯一エビデンスのある眼圧下降治療により視野進行を遅らせることが緑内障治療の主流となっている。緑内障治療の中心となる方法は点眼薬や内服薬を用いて眼圧を低下させることである。しかしながら、緑内障において眼圧の低下に加え眼球の血行動態もまた重要であり、眼球血流循環の障害が緑内障を進行させることが報告されている。いずれにせよ病態に即した更なる新しい予防法や治療法の開発が望まれている。
【０００３】
眼圧は、房水と呼ばれる眼内を循環する体液の一種により制御されている。眼には透過性の高い血管（脳血流関門のような構造であり、透過性が低い）及びリンパ管が存在しないため、房水が栄養の供給を担っている。房水は毛様体で産生され、約９０％以上がシュレム管を経由して眼外の静脈系へと流出する。シュレム管自体の組織解剖学的な研究は十分にされていないため、シュレム管のどのような機構を通じて房水の排出が行われているのかは未だ解明されていない。
【０００４】
血管構造の安定化や血管新生に関与する因子としてアンジオポエチン（angiopoietin；Ang）が知られる。Angは血管内皮細胞に発現する受容体型チロシンキナーゼTie（tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain）-2を活性化させ、その機能を発揮することで知られる（非特許文献１）。Ang等のTie2活性化剤は、血管内皮細胞に発現するTie-2を介し、血管内皮細胞と、周皮細胞（ペリサイト）や血管平滑筋細胞のような血管壁細胞との接着を制御し、血管の構造的安定化に機能していることが理解されている（非特許文献２）。また、Tie2（tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain 2）活性化剤からなる、リンパ管の安定化剤が開示されており、該Tie2活性化剤が、アンジオポエチン１(Ang-1)、ニッケイ（Cinnamomum)属植物の抽出物、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）抽出物及びシリンガレシノールなどであることも開示されている。しかしながら、上記のとおり、そもそも眼内には透過性の高い血管もリンパ管も存在しないため、Tie-2と眼圧との関係が知られる由もない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００９／１５４２３７号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日薬理誌 (Folia Pharmacol. Jpn.) 163, 26-30 (2010)
【非特許文献２】実験医学 Vol. 20, No.8 (2002), pp. 52-57
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、Tie2活性化（リン酸化）剤からなる、眼圧降下剤の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
冒頭で述べたとおり、眼内圧は毛様体より産生・分泌される体液の一種である房水により調節される。房水の約90％はシュレム管を通じて排出されることまでは解明されているが、シュレム管自体の組織解剖学的な知見は得られておらず、房水流出機構は解明されていない。本発明者は、シュレム管の生理学的・生化学的諸性質を調べたところ、シュレム管にはリンパ管と同様、Tie2が発現していることを見出した。この知見は全くの新規発見であり、また新規シュレム管内皮のマーカーになる可能性がある。この知見に基づき、Tie2活性化剤を投与してみたところ、コントロールと比較して眼圧が低下することを発見した。特に理論に拘束されるものではないが、これは、Tie2活性化剤の投与により、シュレム管におけるTie2が活性化され、房水が適切に排出されることによると考えられる。
【０００９】
発明者らは、研究の結果、Tie2活性化剤の投与が、眼圧を低下させることを見出し、以下の発明を完成するに至った：
(1-1)Tie2（tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain2）活性化剤からなる、眼圧降下剤。
(1-2)前記Tie2活性化剤が、シュレム管におけるTie2を活性化する(1-1)に記載の眼圧降下剤。
(1-3)前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）及び／又はケイヒの抽出物である、(1-1)又は(1-2)に記載の眼圧降下剤。
(1-4)前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）及び／又はケイヒのアルコール抽出物である、(1-1)〜(1-3)のいずれかに記載の眼圧降下剤。
(1-5)(1-1)〜(1-4)のいずれかに記載の眼圧降下剤を含有する、組成物。
(1-6)(1-1)〜(1-4)のいずれかに記載の眼圧降下剤を含有する、医薬組成物。
(1-7)緑内障を予防及び／又は治療するための、(1-6)に記載の医薬組成物。
(1-8)経口投与の剤型にある、(1-6)又は(1-7)に記載の医薬組成物。
(1-9)点眼剤の剤型にある、(1-6)又は(1-7)に記載の医薬組成物。
(2-1)眼圧低下のために使用するための、Tie2活性化剤。
(2-2)シュレム管におけるTie2を活性化する、(2-1)に記載のTie2活性化剤。
(2-3)シベリアニンジン及び／又はケイヒの抽出物である、(2-1)又は(2-2)に記載のTie2活性化剤。
(2-4)シベリアニンジン及び／又はケイヒのアルコール抽出物である、(2-1)〜(2-3)のいずれかに記載のTie2活性化剤。
(2-5)緑内障を予防及び／又は治療するための、(2-1)〜(2-4)のいずれかに記載のTie2活性化剤。
(2-6)前記Tie2活性化剤が、経口で投与される、(2-1)〜(2-5)のいずれかに記載のTie2活性化剤。
(2-7)前記Tie2活性化剤が、点眼剤として投与される、(2-1)〜(2-5)のいずれかに記載のTie2活性化剤。
(3-1)眼圧低下を必要とする対象者にTie2活性化剤を投与することによる、眼圧低下方法。
(3-2)前記Tie2活性化剤が、シュレム管におけるTie2を活性化する、(3-1)に記載の方法。
(3-3)前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン及び／又はケイヒの抽出物である、(3-1)又は(3-2)に記載の方法。
(3-4)前記Tie2活性化剤が、シベリアニンジン及び／又はケイヒのアルコール抽出物である、(3-1)〜(3-3)のいずれかに記載の方法。
(3-5)緑内障を予防及び／又は治療するための、(3-1)〜(3-4)のいずれかに記載の方法。
(3-6)前記Tie2活性化剤が、経口で投与される、(3-1)〜(3-5)のいずれかに記載の方法。
(3-7)前記Tie2活性化剤が、点眼剤として投与される、(3-1)〜(3-5)のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、Tie2活性化剤の投与により、シュレム管のTie2を活性化し、眼圧を低下させることができる。本発明によれば、Tie2活性化剤からなる眼圧降下剤を含有する医薬組成物やサプリメント等の食品組成物を、緑内障を予防及び／又は治療するために用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、シュレム管におけるTie2の発現状態を示す。図１Ａは、眼の解剖学的模式図を示す。図１Ｂは、ＨＥ染色した眼球組織切片を示す(4倍)。図１Ｃは、図１Ｂを拡大したものを示し(10倍)、矢印はシュレム管を指す。図１Ｄは、同じ組織をanti-Tie2抗体で染色したものを示し、矢印はanti-Tie2抗体で染色されたシュレム管を指す。図１Ｅは、同じ組織をHoechstで核染色したものを示し、矢印はシュレム管を指す。
【図２】図２は、シベリアニンジン抽出物を朝９時に経口投与した場合の、９時と１７時における眼圧を示す。
【図３】図３は、シベリアニンジン抽出物を午前８時に経口投与した場合の、各時間における眼圧を示す。
【図４】図４は、ケイヒ抽出物を朝９時に経口投与した場合の、９時と１７時における眼圧を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
一つの態様では、本発明は、Tie2活性化剤からなる眼圧降下剤に関する。また、本発明は、Tie2活性化剤からなる眼圧降下剤を含有する医薬組成物やサプリメント等の食品組成物に関する。本発明の医薬組成物やサプリメント等の食品組成物は、極めて優れた眼圧降下作用を有するので、緑内障、高眼圧症の予防及び／又は治療するために用いることができる。これまでに知られている眼圧降下剤としては、交感神経刺激薬、交感神経遮断薬、副交感神経刺激薬、プロスタグランジン関連薬、炭酸脱水素酵素阻害薬などがあるが、本発明のようにシュレム管におけるTie2を活性化することにより、房水の適切な排出を促す眼圧降下剤はこれまで知られていない。
【００１３】
Tie2の活性化剤は特に限定されるものではないが、アンジオポエチン1など、Tie2を活性化する活性を有することが周知のものや、ニッケイ（Cinnamomum)属植物由来の抽出物、シベリアニンジン（Siberian Ginseng）抽出物あるいはシリンガレシノール、エレウテロシドＥ（Eleutheroside）、エレウテロシドＥ１といった、本発明者がその活性を有することを見出したものが挙げられる。なお、ここでいうTie2の活性化とはTie2をリン酸化することでその活性体（リン酸化Tie2）に変換できる能力をいう。
【００１４】
ニッケイ属はクスノキ目（Lauraceae)、クスノキ科（Lauraceae)の植物であり、300以上の種が存在し、例えばケイ（Cinnamomum cassia Blume)、クスノキ（C. camphora）、マルバニッケイ（C. daphnoides）シバニッケイ（C. doederleinii）、ヤブニッケイ（C. japonicum）、オガサワラヤブニッケイ（C. pseudo-pedunculatum）、ニッケイ（C. sieboldii）、シバヤブニッケイ(Cinnamomum x takushii)、セイロンニッケイ（C. verum）、シナモン（C. zeylanicum）が知られる。本発明におけるTie2活性化剤として好ましくはケイ（Cinnamomum cassia Blume)、特にケイの若枝であるケイシ（桂枝）又はケイヒ（桂皮）由来の抽出物が使用される。
【００１５】
シベリアニンジン（Siberian Ginseng）は、エゾウコギとも呼ばれ、ウコギ科に属する植物である。薬用部分は根皮であり、古くから漢方や生薬の原料として使われてきている。
【００１６】
上記抽出物は常法により得ることができ、例えばその起源となる植物を抽出溶媒とともに常温又は加熱して浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水性溶媒、例えば水、生理食塩水、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、あるいは有機溶媒、例えばエタノール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。好ましくは、溶媒として水が使用される。上記溶媒で抽出して得られた抽出物をそのまま、あるいは例えば凍結乾燥などにより濃縮したエキスを使用でき、また必要であれば吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトXAD-2）のカラムにて吸着させた後、所望の溶媒で溶出し、さらに濃縮したものや活性成分のみも使用することができる。
【００１７】
本発明の医薬組成物の投与形態は、経口、非経口、外用等であってよい。剤型としては、例えば錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤、又は注射剤、点滴剤、点眼剤、若しくは坐剤等の非経口投与剤軟膏、クリーム、乳液、ローション等の外用剤を挙げることができる。食品組成物の投与形態としてはサプリメント、顆粒剤、ドリンク剤等を挙げることができる。
【００１８】
本発明の医薬組成物中や食品組成物中のTie2活性化剤の配合量は、用途に応じて適宜決定できるが、一般には剤全量中、0.0001〜20.0モル％、好ましくは0.0001〜10.0モル％である。
【００１９】
また、本発明の医薬組成物中や食品組成物中には、例えば、通常の食品や医薬品に使用される賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２０】
本発明の眼用医薬組成物は、その剤形に依存して慣用の医薬的に許容される担体を併用することができる。
【００２１】
本発明の眼用医薬組成物には、任意的に、糖質、電解質、アミノ酸、ビタミン、脂質、医薬品添加物、医薬品等の各種成分が配合されていてよい。そのような成分の例には、例えば、糖類、例えばグルコース、マルトース等、オリゴ糖、マンニトール、糖アルコール類、例えばソルビトール等；電解質、例えば塩化ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム等；アミノ酸、例えばグリシン、アラニン等； ビタミン類、例えば塩酸チアミン、リン酸リボフラビンナトリウム、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸アミド、葉酸、ビオチン、ビタミンＡ 、Ｌ− アスコルビン酸、α−グリコシルアスコルビン酸等及びそれらの誘導体が挙げられ、必要に応じてこれらを適宜組合せて配合してよい。
【００２２】
本発明の眼用医薬組成物としては、通常使用される添加剤、例えば保存剤、例えばパラオキシ安息香酸メチル、デヒドロ酢酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム等；安定化剤、例えばエデト酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等；緩衝剤、例えば硼砂、硼酸、炭酸水素ナトリウム等；増粘剤、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、コンドロイチン硫酸、ポリビニルアルコール、プルラン等；溶解補助剤、例えばポリソルベート80等；を配合してよい。
【００２３】
本発明の眼用医薬組成物が緑内障治療又は予防薬として用いるときは、コリン系眼圧降下剤(例えばピロカルピン、縮瞳効果に優れたカルバコール等)、抗コリンステラーゼ(例えばデメカリウム、D.F.P.、エコチオフェート等)、縮瞳剤としてのサリチル酸フイゾスチグミン、塩酸ピロカルピン等、静注用高浸透圧剤としてのマンニトール、グリセリン、イソソルバイド等、点眼剤用防腐剤としてのクロロブタノール、ベンズアルコニウムクロリド、プロピルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、他の炎症疾患予防および治療に用いられるペニシリン、サルファ剤、クロラムフェニコール、コルチネゾン、クロルフェニラミン等を配合してもよい。
【実施例】
【００２４】
次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。
【００２５】
実験１：シュレム管におけるTie2の発現
マウス眼球をパラホルムアルデヒド固定した後、6μmの凍結切片をスライドガラス上で作製した。一次抗体をanti-Tie2抗体（Santa Cruz Biotechnology、希釈倍率200倍）、2次抗体をAlexa Fluor594で標識されたanti-rabbit IgGにて発色した。蛍光顕微鏡（オリンパス）にて観察し、写真を取得した。
図１ＣはＨＥ染色した眼球組織切片を拡大したものであり、矢印はシュレム管を指す。図１Ｄは同じ組織をanti-Tie2抗体で染色したものであり、矢印はanti-Tie2抗体で染色されたシュレム管を指す。シュレム管が染色されたことにより、シュレム管においてTie2が発現していることが分かる。
【００２６】
実験２：眼圧測定試験１（シベリアニンジン）
対象者はゴールドマン圧平眼圧計にて両眼の眼圧が22mmHg以下、かつ細隙灯顕微鏡検査および眼底検査にて明らかな異常を認めず、眼圧・眼球血流に影響を及ぼす眼疾患・手術歴の既往や高血圧症や糖尿病などの全身疾患の既往、喫煙歴、点眼薬・内服歴のない成人の健常者とする。Tie2活性化剤として、シベリアニンジンの根を30％エタノールで抽出したシベリアニンジン抽出物（アスク薬品）であるシベリア人参粉末を使用した。
サンプルサイズを20名（男女各10名）と予測し、全対象者についてシベリア人参粉末を投与する。洗い流し期間を1ヶ月以上あけ、3回の内服と前後における眼圧や血圧、脈拍、レーザースペックル検査を行う。主要エンドポイントは眼圧の低下であり、副次エンドポイントはレーザースペックルフローグラフィにより計測された眼球血流の増加である。これらエンドポイントに対しシベリア人参粉末について統計解析（ANOVA）をおこなった。
図２は、摂取時（午前9時）と17時における眼圧を示す。シベリア人参粉末摂取後、3時間程度で眼圧の低下が見られ、8時間程度持続した。なお、コントロールはシベリア人参粉末を摂取していない同一の対象者とし、眼圧の測定はシベリア人参粉末の摂取日とは異なる日に行った。
【００２７】
実験３：眼圧測定試験２（シベリアニンジン）
内服時を午前8時とし、非接触型眼圧計により眼圧を測定した以外は、実験２と同様の条件を用いた。
図３は、各時間における眼圧を示す。シベリア人参粉末摂取後、10時間程度まで眼圧の低下が見られた。
【００２８】
実験４：眼圧測定試験（ケイヒ）
対象者はゴールドマン圧平眼圧計にて両眼の眼圧が22mmHg以下、かつ細隙灯顕微鏡検査および眼底検査にて明らかな異常を認めず、眼圧・眼球血流に影響を及ぼす眼疾患・手術歴の既往や高血圧症や糖尿病などの全身疾患の既往、喫煙歴、点眼薬・内服歴のない成人の健常者とする。Tie2活性化剤として、ケイヒの樹皮を３０％エタノールで抽出したケイヒエキスパウダー（日本粉末薬品株式会社）を使用した。
サンプルサイズを８名（女性5名・男性3名）とし、全対象者について午前９時を投与時刻としてケイヒエキスパウダーを１００ｍｇ摂取させ（市販のミネラルウォーターとともに：商品名；い・ろ・は・す）（登録商標）、ゴールドマン圧平眼圧計により眼圧を測定した。洗い流し期間を1ヶ月以上あけ、１回の内服と前後における眼圧や血圧、脈拍、レーザースペックル検査を行った。主要エンドポイントは眼圧の低下であり、副次エンドポイントはレーザースペックルフローグラフィにより計測された眼球血流の増加である。これらエンドポイントに対しケイヒ粉末について統計解析（ANOVA）をおこなった。
図４は、各時間における左眼の眼圧を示す。ケイヒ粉末摂取後、3時間で有意に眼圧の減少が見られた。このような眼圧の低下は、ケイヒ粉末摂取後10時間程度まで見られた。なお、コントロールはケイヒ粉末を摂取していない同一の対象者とし、眼圧の測定はケイヒ粉末の摂取日とは異なる日に行った。
【図２】
2015199733.tif 000003
【図３】
2015199733.tif 000004
【図４】
2015199733.tif 000005
【図１】
2015199733.tif 000006