(57)【要約】【目的】特定の波長域を有する光を照射して栽培したフェヌグリークの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤を提供する。【構成】本発明のフェヌグリーク（学名：Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ  ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ）は、特定の波長域を有する光を照射して栽培したものであり、この抽出物は、優れた抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果を示し、これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培したフェヌグリークの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、４:１〜２:１であることを特徴とする請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするフェヌグリーク。
【請求項４】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたフェヌグリーク又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項５】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたフェヌグリーク又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする食品。
【請求項６】
波長域５７０〜７３０ｎｍ及び／又は４００〜５１５ｎｍの光を照射して栽培したフェヌグリークの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項７】
波長域５７０〜７３０ｎｍ及び／又は４００〜５１５ｎｍの光を照射して栽培したフェヌグリーク、又は、そのフェヌグリークの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果、セラミド産生促進効果などに優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内の活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化したり、ガンや心筋梗塞など様々な生活習慣病が発症すると考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等が開発されている（特許文献１，２参照）。
【０００３】
皮膚は、紫外線、乾燥、寒冷、熱、薬物等の様々な物理的及び化学的ストレスに日々曝されている。その結果、皮膚の機能低下が引き起こされ、様々な皮膚の老化現象が顕在化する。皮膚の老化現象の一つに、しわがある。しわには、表皮性のしわと、真皮性のしわの二種類が存在することが知られている。表皮性のしわは小じわと呼ばれ、皮膚の乾燥により、表皮角質層中の水分量が低下することによって一時的に生じるしわである。小じわの改善方法としては、保湿効果を有する化粧品の使用が一般的である。一方、真皮性のしわは、太陽光線に含まれる紫外線や加齢によって形成されるしわである。その形成メカニズムとしては、紫外線や加齢による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン合成能の低下が挙げられる。
【０００４】
乾燥に起因する表皮性のしわと真皮性のしわでは、組織学的形態、発症メカニズム、治療方法が異なり、紫外線や加齢により生じる真皮性のしわは、保湿効果を有する化粧品の使用によっては改善できない。
【０００５】
これまでに、紫外線によって生じる真皮性のしわを改善することを目的として、加水分解アーモンドを有効成分とする皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献３）、ジョチョウケイ、テンキシ及びキセンウの抽出物を有効成分とする紫外線照射に起因するしわの改善剤（特許文献４）が報告されている。
【０００６】
また、真皮には線維芽細胞やコラーゲンが存在し、Ｉ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはＩＩＩ、Ｖ、ＸＩＩ及びＸＩＶ型コラーゲンの存在が知られている。しわやたるみの原因の一つとして、Ｉ型コラーゲンの減少があげられる。従って、Ｉ型コラーゲンの生成を促進させることが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。また、Ｉ型コラーゲンの生成促進は皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。
【０００７】
また、線維芽細胞はコラーゲンなどのタンパク質を産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のシワやタルミが発生すると考えられている。
【０００８】
一般に、シミ、ソバカス、日焼け等に見られる皮膚の色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線の刺激により、皮膚内に存在するメラノサイトがメラニン色素を過剰に生成し、これが皮膚内に沈着することが原因と考えられている。このような色素沈着を防ぐ方法の一つに、メラニンの過剰な生成を抑制する方法が知られている。従来、色素沈着の治療には、内用や外用などにおいて、アスコルビン酸（ビタミンＣ）等が用いられてきた。
【０００９】
セラミドは、スフィンゴ脂質の一種であり、スフィンゴシンと脂肪酸がアミド結合した化合物群の総称である。セラミドは、細胞膜において高濃度で存在することが知られている。又、セラミドは、角質細胞間脂質の構成成分の一種であり、角化の過程において細胞外に分泌され、皮膚のバリア機能や水分保持能に重要な役割を果たしている。更に、セラミドは、シグナル伝達物質として、細胞の増殖、分化及びアポトーシス等を制御することが知られている。これらのことから、セラミドの産生を促進する物質には、細胞の増殖抑制、分化誘導及びアポトーシスの誘導効果等が期待でき、これらの異常に起因する疾患に対する治療効果が期待できると考えられる。
セラミドとの関連性が高い皮膚疾患として、例えば、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等が挙げられる。これらのことから、皮膚におけるセラミドの産生を促進することによって、扁平上皮癌、乾癬及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患を治療及び予防することが可能である
【００１０】
ヒト皮膚には、７系統のセラミドが存在することが確認されており、全種類のセラミドが角質層に存在する比率で補うことが理想的である。従来、この様な肌荒れ、乾燥肌の予防改善に有効な化粧料として、セラミドが種々の皮膚外用剤に配合されているが、ヒトの皮膚に存在する全種類のセラミドを適正な比率で補充することは技術的に困難であった。したがって、生体内におけるセラミド産生を促進する事が重要であると考えられる。セラミド産生促進剤としては、特許文献５や特許文献６が報告されている。
【００１１】
フェヌグリークの公知文献としては、保湿効果や抗炎症効果（特許文献７）などが知られていた。
【００１２】
一方で、植物の栽培方法によって植物の薬効を高める方法として、植物体内のビタミンやポリフェノール、ルチンなどの機能性物質を特徴的に増加させる方法は、すでに特許文献で報告されている。特許文献８には、大豆もやしに近紫外〜青色領域波長の光を照射することにより、含有ビタミンＡ、ビタミンＥを増量させる方法が開示されており、特許文献９には、小松菜に対して、人工紫外線照射を１日５分間行うことで、機能性物質であるα−トコフェロールやビタミンＣを増加させる栽培方法が開示され、特許文献１０には、人工光源の青色光、赤色光及び遠赤色光の強度を調整することにより、小松菜、レタスのビタミンＣやビタミンＡを増加させる方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開平９−１１８６３０号公報
【特許文献２】特開平９−２０８４８４号公報
【特許文献３】特開２０００−１１９１２５号公報
【特許文献４】特開２００６−１９９６１１号公報
【特許文献５】特開平８−２１７６５８号
【特許文献６】特開２００１−２２０３４５号
【特許文献７】特開平８−３０１７７９号公報
【特許文献８】特開平１１−１０３６８０号公報
【特許文献９】特開２００４−３０５０４０号公報
【特許文献１０】特開平８−２０５６７７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果、セラミド産生促進効果などに優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、特定の波長域を有する２種の光を同時に照射して栽培したフェヌグリークの抽出物に、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果が優れていることを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（７）からなる。
【００１７】
（１）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培したフェヌグリークの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
（２）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、４:１〜２:１であることを特徴とする請求項１記載の皮膚外用剤。
（３）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするフェヌグリーク。
（４）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたフェヌグリーク又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
（５）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が８:１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したフェヌグリークと比較して、抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めたフェヌグリーク又は、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする食品。
（６）波長域５７０〜７３０ｎｍ及び／又は４００〜５１５ｎｍの光を照射して栽培したフェヌグリークの、水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
（７）波長域５７０〜７３０ｎｍ及び／又は４００〜５１５ｎｍの光を照射して栽培したフェヌグリーク、又は、そのフェヌグリークの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒によって抽出される抽出物。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のフェヌグリーク又はその抽出物は、優れた抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品の分野において貢献できるものである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下に、本発明について詳細に述べる。
【００２０】
本発明に用いるフェヌグリークの抽出物とは、マメ科レイリョウコウ属のフェヌグリーク、別名コロハ（学名：Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ  ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ）の花、実、種子、茎、葉、根等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。また、本発明においては、抽出物の代わりに、植物体のまま使用することもでき、生のままでも、乾燥して用いることもでき、目的によって使い分けることができる。さらには、抽出物と植物体を併用することもできる。
【００２１】
栽培方法としては、土を用いた栽培や水耕栽培で行うことができる。水耕栽培で行う場合には、種子を播種後、出根した状態で、水耕栽培に供することができる。栽培は、温度、光、二酸化炭素濃度が制御された施設で栽培することが好ましい。栽培温度は、１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃である。栽培期間は、照射する条件によって異なるが、概ね１０〜３０日で収穫できる。これ以上栽培することも可能である。
【００２２】
光源は、植物の栽培施設で用いる光源などを使用することができ、発光ダイオード（ＬＥＤ）、レーザーダイオードなどの光半導体素子があげられるが、特定の範囲の波長域が選択的に照射できる光源であればＬＥＤに限らない。
【００２３】
フェヌグリークの栽培において、照射する波長としては、波長域４００〜５１５ｎｍの青色光、５７０〜７３０ｎｍの赤色光であることが好ましく、波長域４３０〜４６０ｎｍ、６３０〜６８０ｎｍの光がさらに好ましい。これらの光は、同時に照射することが最も好ましい。このときの波長は、照射スペクトルの極大波長（ピーク波長）のことをいう。このような波長のピークを有する光源であれば、独自に作成したものや市販のものを使用することもできる。また、上記波長を選択的に照射できるように、光学フィルタを用いても良い。上記の２種の範囲の光に加え、太陽光や蛍光灯などの光源を使用することもできる。
【００２４】
照射する光量としては、光合成有効光量子束密度（ＰＰＦＤ）として表される。発光体を２種組み合わせて照射する場合には、その合計の光量を意味する。その光量は、発芽後は１０〜３００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１が好ましく、５０〜２００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１がさらに好ましい。この範囲外の光強度の場合は、生育障害、生育不良になる場合がある。照射は、フェヌグリークの上部１０〜５０ｃｍの位置から照射することが好ましい。照射時間は、植物の特性や目的に応じて適宜変更できるが、６時間以上が好ましく、１２〜２４時間がより好ましい。
【００２５】
赤と青の光量比においては、それぞれのＰＰＦＤの比を意味しており、収量や有効性など目的に応じて選択が可能である。
【００２６】
中でも、植物体の収量を高めるには、赤と青の光量比が１：０〜０：１が好ましく、さらに好ましくは、１：０〜２：１であり、４：１〜２：１が最も好ましい。
【００２７】
活性酸素消去作用（フリーラジカル捕捉除去作用）においては、赤色と青色の光量比が１：０〜０：１が効果の面で好ましく、８：１〜０：１がより好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜１：１が最も好ましい。
【００２８】
Ｉ型コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ）発現促進作用においては、赤色と青色の光量比が１：０〜１：１が効果の面で好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜１：１が最も好ましい。
【００２９】
メラニン生成抑制作用においては、赤色と青色の光量比が１：０〜１：１が効果の面で好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜２：１が最も好ましい。
【００３０】
セラミド生成促進作用においては、赤色と青色の光量比が４：１〜０：１が効果の面で好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１が最も好ましい。
【００３１】
以上のことを総じていえば、赤色と青色の光量比が８：１〜１：１が好ましく、４：１〜２：１が最も好ましい。
【００３２】
抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール）、液状多価アルコール（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００３３】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。また、サラダなど、生で食することもできる。
【００３４】
本発明の外用剤又は内用剤には、食品も含むものとし、これには、上記植物体及び／又は抽出物をそのまま使用しても良く、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を配合することもできる。
【００３５】
本発明は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料、ティーパック、スパイス、サラダなどの生鮮食品等が挙げられる。
【００３６】
本発明に用いる上記抽出物の配合量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜１０重量％がより好ましい。さらに、０．０１〜５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜５ｇがより好ましい。さらに、１００ｍｇ〜１ｇが最も好ましい。
【００３７】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるフェヌグリークの抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例に示す％とは重量％を、実施例に示す配合量の部とは重量部を示す。
【実施例１】
【００３８】
（１）実験材料および生育条件
水分を含んだメッシュにフェヌグリークの種子を播種し、温度２２〜２４℃・暗所で発芽させ、これをスポンジに包み、２２〜２４℃で２４時間白色蛍光灯下で栽培し、育苗した。その後、水耕栽培装置を用いて、室温２１〜２３℃で２４時間、植物の真上３０ｃｍの位置から、青色ＬＥＤ（ピーク波長４５０ｎｍ）及び赤色ＬＥＤ（ピーク波長６６０ｎｍ）を同時に照射し、赤色と青色ＬＥＤの合計光合成有効光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように、赤色と青色の光量比を１：０〜０：１にして、栽培を行った。また、比較例１として光合成有効光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように白色蛍光灯下で栽培を行い、比較例２として太陽光下で栽培を行った。なお、栽培中は光量比を変えなかった。４週間栽培した後、収穫し、生フェヌグリークを得た。これを約６０℃で温風乾燥させることで、フェヌグリークの乾燥物を得た（表１）。
【００３９】
【表１】
2015178489.tif 000002
【００４０】
（２）抽出
製造例１Ａ  熱水抽出物
乾燥物１０ｇに精製水２００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た（表２）。
【００４１】
製造例１Ｂ  ５０％エタノール抽出物
乾燥物１０ｇに５０％エタノール２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４２】
製造例１Ｃ  エタノール抽出物
乾燥物１０ｇにエタノール２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４３】
上記と同様に、赤色と青色ＬＥＤの合計光合成有効光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように、赤色と青色の光量比を変化させて栽培したフェヌグリークまたは比較例として光合成有効光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように白色蛍光灯下で上記の生育条件と同様に栽培したフェヌグリーク、比較例２として太陽光で栽培したフェヌグリークを用い、上記の製造例１Ａ〜１Ｃと同様に抽出し、製造例２Ａ〜７Ｃ、比較製造例１Ａ〜１Ｃとした（表２）。
【００４４】
【表２】
2015178489.tif 000003
【実施例２】
【００４５】
実験例１  活性酸素消去作用
フリーラジカル捕捉除去作用の評価を行った。陽性対照としてはアスコルビン酸を用いた。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα，α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長５１７ｎｍの吸光度の減少量から測定した。
【００４６】
フリーラジカル捕捉除去作用の測定方法
各試料を、最終濃度０．３〜０．７ｍｇ／ｍＬ（アスコルビン酸は０．０１ｍｇ／ｍＬ）となるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍＬに無水エタノール２ｍＬ及び０．５ｍＭ  ＤＰＰＨ無水エタノール溶液１ｍＬを加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を加えた反応液を用いて吸光度を測定した。ブランクと比較して、吸光度が５０％減少したときの試料の濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【００４７】
これらの試験結果を表３に示した。本発明の抽出物は、安定で優れたフリーラジカル捕捉除去作用を有していることが認められた。特に、赤色と青色の光量比が１：０〜０：１に高い効果が認められ、８：１〜０：１により高い効果が認められた。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜１：１のとき、従来技術である太陽光による栽培品と比較して顕著に高い効果が認められた。なお、アスコルビン酸は、１００℃、１時間の熱処理で失活するが、本発明の抽出物は、活性に変化はなかった。
【００４８】
【表３】
2015178489.tif 000004
【００４９】
実験例２  コラーゲン生成促進効果
Ｉ型コラーゲン（ＣＯＬ１Ａ）  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０μｇ／ｍＬを添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＣＯＬ１Ａ  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＣＯＬ１Ａ発現量は、コントロールのＣＯＬ１Ａ  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＣＯＬ１Ａ  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。
【００５０】
ＣＯＬ１Ａ用のプライマーセット
ＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴ（配列番号１）
ＴＴＧＣＡＧＴＧＧＴＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧ（配列番号２）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００５１】
これらの実験結果を表４に示した。その結果、本発明の抽出物は、優れたＣＯＬ１Ａ発現促進効果（コラーゲン生成促進効果）が認められた。特に、赤色と青色の光量比が１：０〜１：１に高い効果が認められた。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜１：１に高い効果が認められた。
【００５２】
【表４】
2015178489.tif 000005
【００５３】
実験例３  メラニン生成抑制試験
対数増殖期にあるＢ１６マウスメラノーマ細胞を６０ｍｍ  ｄｉｓｈに３×１０４個播種し、各試料（最終濃度１０μｇ／ｍＬ）を含むＥａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％牛胎児血清含有）培地にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で５日間培養した。次に、細胞をｄｉｓｈから剥離し、超音波破砕した後、４Ｎ  ＮａＯＨを加え６０℃で２時間の処理を行い、分光光度計でＯ．Ｄ．４７５ｎｍを測定した。尚、超音波処理後の細胞破砕液についてＬｏｗｒｙの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５−２７５，１９５１）にてタンパク定量し、タンパク量当りのメラニン量を算出、試料未添加のメラニン生成量をコントロールとし、コントロールに対する試料添加時のメラニン生成量の値からメラニン生成抑制率を算出した。
【００５４】
これらの試験結果を表５に示した。本発明の抽出物は、優れたメラニン生成抑制作用を有していることが認められた。特に、赤色と青色の光量比が１：０〜１：１に高い効果が認められた。その中でも特に、赤色と青色の光量比が８：１〜２：１に高い効果が認められた。
【００５５】
【表５】
2015178489.tif 000006
【００５６】
また、従来技術である太陽光による栽培品と、最も効果が高い製造例３Ａとを比較した際にも、顕著に高い効果が認められた。最終濃度１００μｇ／ｍＬの試験結果を表６に示した。
【００５７】
【表６】
2015178489.tif 000007
【００５８】
実験例４  セラミド生成促進試験
セラミド合成における律速酵素遺伝子であるｓｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｌｏｎｇ  ｃｈａｉｎ  ｂａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  １  （ＳＰＴＬＣ１）のｍＲＮＡ発現量を指標として評価した。すなわち、ケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり５×１０４個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。次に、各試料（最終濃度１０μｇ／ｍＬ）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＳＰＴＬＣ１  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＳＰＴＬＣ１発現量は、コントロールのＳＰＴＬＣ１  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＳＰＴＬＣ１  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００５９】
ＳＰＴＬＣ１用のプライマーセット
ＴＧＧＴＣＡＣＧＧＴＧＧＡＡＣＡＡＡＣＡ（配列番号５）
ＧＣＣＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＣＣＴＴＧＡ（配列番号６）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ（配列番号７）
ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＧ（配列番号８）
【００６０】
これらの実験結果を表７に示した。その結果、本発明の抽出物はセラミド生成促進効果を示した。特に、赤色と青色の光量比が４：１〜０：１に高い効果が認められた。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１に高い効果が認められた。
【００６１】
【表７】
2015178489.tif 000008
【実施例３】
【００６２】
処方例１  化粧水
処方                                                            配合量（部）
１．製造例３Ａの抽出物                                            １．０
２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００６３】
処方例２  クリーム
処方                                                            配合量（部）
１．製造例４Ａの抽出物                                            ０．５
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００６４】
処方例２において、製造例４Ａの抽出物を製造例１Ａの抽出物、製造例７Ａの抽出物及び製造例４Ｂの抽出物に置き換えたものを処方例３、４及び５とした。
【００６５】
処方例６  乳液
処方                                                            配合量（部）
１．製造例２Ａの抽出物                                            １．０
２．スクワラン                                                    ５．０
３．オリーブ油                                                    ５．０
４．ホホバ油                                                      ５．０
５．セタノール                                                    １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
９．香料                                                          ０．１
１０．プロピレングリコール                                          １．０
１１．グリセリン                                                    ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００６６】
処方例７  ゲル剤
処方                                                            配合量（部）
１．製造例４Ｃの抽出物                                            ０．００１
２．エタノール                                                    ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
５．香料                                                          適量
６．１，３‐ブチレングリコール                                    ５．０
７．グリセリン                                                    ５．０
８．キサンタンガム                                                ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
１０．水酸化カリウム                                                ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００６７】
処方例８  パック
処方                                                            配合量（部）
１．製造例５Ａの抽出物                                            ０．１
２．製造例５Ｂの抽出物                                            ０．１
３．ポリビニルアルコール                                        １２．０
４．エタノール                                                    ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
８．クエン酸                                                      ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                            ０．３
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００６８】
処方例９  ファンデーション
処方                                                            配合量（部）
１．製造例３Ａの抽出物                                            １．０
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００６９】
処方例１０  浴用剤
処方                                                            配合量（部）
１．製造例６Ａの抽出物                                          ５．０
２．製造例６Ｂの抽出物                                          １．０
３．炭酸水素ナトリウム                                        ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                            適量
５．香料                                                          適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００７０】
処方例１１  軟膏
処方                                                            配合量（部）
１．製造例４Ｂの抽出物                                            ０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                                  １０．０
４．流動パラフィン                                                ５．０
５．セタノール                                                    ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
７．プロピレングリコール                                        １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００７１】
処方例１２  散剤
処方                                                            配合量（部）
１．製造例４Ａの抽出物                                          ２０．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ３０．０
３．微結晶セルロース                                            ５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【００７２】
処方例１３  錠剤
処方                                                            配合量（部）
１．製造例４Ａの抽出物                                            ３．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ２７．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                        ２０．０
４．微結晶セルロース                                            ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                          ７．０
６．タルク                                                        ３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００７３】
処方例１４  錠菓
処方                                                            配合量（部）
１．製造例５Ａの抽出物                                            ０．５
２．乾燥コーンスターチ                                          ５０．０
３．エリスリトール                                              ４０．０
４．クエン酸                                                      ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                                          ３．０
６．香料                                                          適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００７４】
処方例１５  飲料
処方                                                            配合量（部）
１．製造例５Ａの抽出物                                            ２．０
２．果糖ブドウ糖液糖                                            １２．５
３．クエン酸                                                      ０．1
４．香料                                                          ０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を混合し、飲料とする。
【００７５】
処方例１６  粉末飲料
処方                                                            配合量（部）
１．製造例７Ａの抽出物                                          １０．０
２．粉糖                                                        ６５．０
３．粉末ピーチ果汁                                              １５．０
４．Ｌ−アスコルビン酸                                            ８．０
５．結晶クエン酸                                                  １．２
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．７５
７．アスパルテーム                                                ０．０２
８．粉末ピーチ香料                                                ０．０３
［製造方法］成分１〜８を混合し、粉末飲料とする。
【００７６】
処方例１７  ハーブティ
処方                                                            配合量（部）
１．フェヌグリーク乾燥物（比較例を除く実施例１の表１）            １．０
２．ペパーミント                                                  ０．５
３．ローズヒップ                                                  ０．５
［製造方法］成分１〜３を混合し、ティーバッグに２ｇを封入してハーブティーとする。
【産業上の利用可能性】
【００７７】
以上のことから、特定の波長域を有する光を照射して栽培したフェヌグリークやその抽出物は、優れた抗酸化効果、コラーゲン生成促進効果、美白効果及びセラミド産生促進効果を示し、これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。
【配列表】
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