(57)【要約】【課題】本発明は、簡単な操作で迅速かつ高感度に検査を行うことが可能な微生物夾雑物検査用容器、微生物夾雑物検査キットおよび微生物夾雑物検査方法を提供することを主目的とする。【解決手段】本発明は、微生物夾雑物の検査に用いられる微生物夾雑物検査用容器であって、流体入口および流体出口を有する容器本体と、上記流体出口に設けられた突刺し部と、上記容器本体内に収納された試薬と、上記流体入口および上記流体出口を密閉する密閉部材とを有することを特徴とする微生物夾雑物検査用容器を提供することにより、上記課題を解決する。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物夾雑物の検査に用いられる微生物夾雑物検査用容器であって、
流体入口および流体出口を有する容器本体と、
前記流体出口に設けられた突刺し部と、
前記容器本体内に収納された試薬と、
前記流体入口および前記流体出口を密閉する密閉部材と
を有することを特徴とする微生物夾雑物検査用容器。
【請求項２】
前記容器本体内に設けられ、前記試薬を固定する固定部を有することを特徴とする請求項１に記載の微生物夾雑物検査用容器。
【請求項３】
前記微生物夾雑物がエンドトキシンまたは（１→３）−β−Ｄ−グルカンであり、前記試薬がライセート試薬、エンドトキシン標準品または（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品であることを特徴とする請求項１または請求項２に記載の微生物夾雑物検査用容器。
【請求項４】
請求項１から請求項３までのいずれかに記載の微生物夾雑物検査用容器と、第２容器とを有する微生物夾雑物検査キットであって、
前記第２容器は、流体入口を有する第２容器本体と、前記流体入口を密閉する第２密閉部材とを有し、前記第２容器本体の内部が減圧されていることを特徴とする微生物夾雑物検査キット。
【請求項５】
前記第２容器本体内に第２試薬が収納されていることを特徴とする請求項４に記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項６】
前記第２試薬が発色合成基質または蛍光基質、あるいは発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物であることを特徴とする請求項５に記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項７】
流体入口および流体出口を有する第３容器本体と、前記第３容器本体内に収納された第３試薬と、前記流体入口および前記流体出口を密閉する第３密閉部材とを有する第３容器をさらに有し、
前記微生物夾雑物検査用容器の容器本体および前記第３容器本体が積層可能であり、前記微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と前記第３容器本体の流体出口とが気密嵌合可能であることを特徴とする請求項４から請求項６までのいずれかに記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項８】
前記第３容器は、前記第３容器本体内に設けられ、前記第３試薬を固定する固定部を有することを特徴とする請求項７に記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項９】
前記第３試薬がライセート試薬、エンドトキシン標準品または（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品であることを特徴とする請求項７または請求項８に記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項１０】
光学検出器をさらに有することを特徴とする請求項４から請求項９までのいずれかに記載の微生物夾雑物検査キット。
【請求項１１】
請求項４から請求項１０までのいずれかに記載の微生物夾雑物検査キットを用いて微生物夾雑物を検査する微生物夾雑物検査方法であって、
試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体内に液体試料を導入する第１工程と、
前記微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺して第２容器本体内に前記液体試料を導入する第２工程と、
前記第２工程後、前記液体試料中の微生物夾雑物を光学的に測定する測定工程と
を有することを特徴とする微生物夾雑物検査方法。
【請求項１２】
前記試薬がライセート試薬であり、前記第１工程では、前記液体試料中の微生物夾雑物および前記ライセート試薬を反応させることを特徴とする請求項１１に記載の微生物夾雑物検査方法。
【請求項１３】
前記第２容器本体内に発色合成基質または蛍光基質が収納されており、前記第２工程では、前記第２容器本体内に前記液体試料を導入した後、前記微生物夾雑物を含む前記ライセート試薬および前記発色合成基質または蛍光基質を反応させることを特徴とする請求項１２に記載の微生物夾雑物検査方法。
【請求項１４】
前記第２容器本体内に発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物が収納されており、前記第２工程では、前記第２容器本体内に前記液体試料を導入した後、前記液体試料中の微生物夾雑物および前記ライセート試薬を反応させ、前記微生物夾雑物を含む前記ライセート試薬および前記発色合成基質または蛍光基質を反応させることを特徴とする請求項１１に記載の微生物夾雑物検査方法。
【請求項１５】
前記微生物夾雑物検査用容器の容器本体上に第３容器の第３容器本体が積層され、前記微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口および前記第３容器本体の流体出口が気密嵌合された積層容器を用いることを特徴とする請求項１１から請求項１４までのいずれかに記載の微生物夾雑物検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドトキシン、リポ多糖、（１→３）−β−Ｄ−グルカン等の微生物夾雑物の検査に用いられる微生物夾雑物検査用容器、微生物夾雑物検査キットおよび微生物夾雑物検査方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁に存在する物質であり、発熱性等の種々の生物活性を有している。そのため、医薬品や医療用具がエンドトキシンで汚染された場合、ごく微量でも重篤な結果を招くことがあり、これらのエンドトキシン汚染量は厳密に管理されなければならない。
【０００３】
エンドトキシン検出試験には定性試験および定量試験があり、定性試験としてはゲル化法、定量試験としては比濁法、比色法、蛍光法が一般に知られている。いずれの方法においても、正確な検査を行うには煩雑な手順や長時間を要する。そのため、簡便な操作で迅速に検査を行うことが求められている。
【０００４】
例えば特許文献１には、エンドトキシン検査に必要な試薬がすべて封入された板状のカートリッジが提案されている。このようなカートリッジを用いることで、簡単な操作で迅速に検査を行うことができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００７−５０１０２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１に記載の板状のカートリッジには試薬が既に封入されているため、カートリッジ毎に検出感度が予め決められている。しかしながら、カートリッジ毎に検出感度のばらつきがあることから、エンドトキシンが検出されなかった場合において、カートリッジの検出感度が低いために検出できなかったのか、エンドトキシンが無いのかが判断できない場合がある。そのため、液体試料中のエンドトキシンが極微量である場合には、複数のカートリッジを用いて繰り返し検査を行わなければならない場合があり、エンドトキシン検査が煩雑になるという問題があった。
【０００７】
本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、簡単な操作で迅速かつ高感度に検査を行うことが可能な微生物夾雑物検査用容器、微生物夾雑物検査キットおよび微生物夾雑物検査方法を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成するために、本発明は、微生物夾雑物の検査に用いられる微生物夾雑物検査用容器であって、流体入口および流体出口を有する容器本体と、上記流体出口に設けられた突刺し部と、上記容器本体内に収納された試薬と、上記流体入口および上記流体出口を密閉する密閉部材とを有することを特徴とする微生物夾雑物検査用容器を提供する。
【０００９】
本発明によれば、試薬が微生物夾雑物検査用容器に収納されており、突刺し部を突き刺すことで容器本体内に導入された液体試料を他の容器に移動させることができるため、本発明の微生物夾雑物検査用容器を用いることにより簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。また本発明においては、検査に必要なすべての試薬を容器本体内に収納するのではなく、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と他の容器とを組み合わせて用いることができるため、目的に応じて試薬の種類や試薬の濃度を適宜調整することができる。例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬の濃度を高くし、エンドトキシンの検出感度を高めることも可能になる。
【００１０】
本発明の微生物夾雑物検査用容器は、上記容器本体内に設けられ、上記試薬を固定する固定部を有していてもよい。試薬を容器本体内に容易に固定することが可能になる。
【００１１】
また本発明においては、上記微生物夾雑物がエンドトキシンまたは（１→３）−β−Ｄ−グルカンであり、上記試薬がライセート試薬、エンドトキシン標準品または（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品であることが好ましい。
【００１２】
また本発明は、上述の微生物夾雑物検査用容器と、第２容器とを有する微生物夾雑物検査キットであって、上記第２容器は、流体入口を有する第２容器本体と、上記流体入口を密閉する第２密閉部材とを有し、上記第２容器本体の内部が減圧されていることを特徴とする微生物夾雑物検査キットを提供する。
【００１３】
本発明によれば、上述の試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と第２容器とを有しており、微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺すことで、微生物夾雑物検査用容器の容器本体から第２容器の第２容器本体に液体試料を移動させることができるため、本発明の微生物夾雑物検査キットを用いることにより簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。また本発明によれば、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と第２容器とを組み合わせて用いることができるため、目的に応じて試薬の種類や試薬の濃度を適宜調整することができ、例えば微生物夾雑物の検出感度を高めることも可能になる。
【００１４】
上記発明においては、上記第２容器本体内に第２試薬が収納されていることが好ましい。この場合、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と第２試薬が収納された第２容器とを組み合わせて用いることができる。
【００１５】
上記の場合、上記第２試薬が発色合成基質または蛍光基質、あるいは発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物であることが好ましい。この場合、微生物夾雑物を高感度に検出することが可能になる。
【００１６】
本発明の微生物夾雑物検査キットは、流体入口および流体出口を有する第３容器本体と、上記第３容器本体内に収納された第３試薬と、上記流体入口および上記流体出口を密閉する第３密閉部材とを有する第３容器をさらに有していてもよい。この第３容器は、上記微生物夾雑物検査用容器の容器本体および上記第３容器本体が積層可能であり、上記微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と上記第３容器本体の流体出口とが気密嵌合可能である。第３容器を組み合わせて用いることにより、目的に応じて微生物夾雑物検査キットの構成をカスタマイズすることができる。
【００１７】
上記の場合、上記第３容器は、上記第３容器本体内に設けられ、上記第３試薬を固定する固定部を有していてもよい。第３試薬を第３容器本体内に容易に固定することが可能になる。
【００１８】
また上記の場合、上記第３試薬がライセート試薬、エンドトキシン標準品または（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品であることが好ましい。
【００１９】
また本発明の微生物夾雑物検査キットは、光学検出器をさらに有していてもよい。微生物夾雑物を光学的に測定することができる。
【００２０】
また本発明は、上述の微生物夾雑物検査キットを用いて微生物夾雑物を検査する微生物夾雑物検査方法であって、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体内に液体試料を導入する第１工程と、上記微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺して第２容器本体内に上記液体試料を導入する第２工程と、上記第２工程後、上記液体試料中の微生物夾雑物を光学的に測定する測定工程とを有することを特徴とする微生物夾雑物検査方法を提供する。
【００２１】
本発明によれば、上述の微生物夾雑物検査キットを用いるため、簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。また、例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬の感度を確認するための測定をエンドトキシン標準品を用いて簡単に行うことも可能である。また本発明によれば、目的に応じて試薬の種類や試薬の濃度等を適宜選択することができ、例えば微生物夾雑物の検出感度を高めることも可能である。
【００２２】
上記発明においては、上記試薬がライセート試薬であり、上記第１工程では、上記液体試料中の微生物夾雑物および上記ライセート試薬を反応させてもよい。
【００２３】
上記の場合、上記第２容器本体内に発色合成基質または蛍光基質が収納されており、上記第２工程では、上記第２容器本体内に上記液体試料を導入した後、上記微生物夾雑物を含む上記ライセート試薬および上記発色合成基質または蛍光基質を反応させてもよい。この場合、微生物夾雑物を高感度に検出することが可能になる。
【００２４】
また上記発明においては、上記第２容器本体内に発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬とが収納されており、上記第２工程では、上記第２容器本体内に上記液体試料を導入した後、上記液体試料中の微生物夾雑物および上記ライセート試薬を反応させ、上記微生物夾雑物を含む上記ライセート試薬および上記発色合成基質または蛍光基質を反応させてもよい。この場合も、微生物夾雑物を高感度に検出することが可能になる。
【００２５】
また本発明においては、上記微生物夾雑物検査用容器の容器本体上に第３容器の第３容器本体が積層され、上記微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口および上記第３容器本体の流体出口が気密嵌合された積層容器を用いてもよい。第３容器を組み合わせて用いることにより、目的に応じた微生物夾雑物の検査が可能になる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は、目的に応じて試薬の種類や試薬の濃度等を適宜調整することができ、簡単な操作で迅速かつ高感度に微生物夾雑物検査を行うことが可能であるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の微生物夾雑物検査用容器の一例を示す概略平面図および断面図である。
【図２】本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図および断面図である。
【図３】本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図および断面図である。
【図４】本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の一例を示す工程図である。
【図５】本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す工程図である。
【図６】本発明における第３容器の一例を示す概略平面図および断面図である。
【図７】本発明における第３容器の他の例を示す概略平面図および断面図である。
【図８】本発明における第３容器の他の例を示す概略平面図および断面図である。
【図９】本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図および断面図である。
【図１０】本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す模式図である。
【図１１】本発明における光学検出器の一例を示す模式図である。
【図１２】本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す工程図である。
【図１３】本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の微生物夾雑物検査用容器、微生物夾雑物検査キットおよび微生物夾雑物検査方法について詳細に説明する。
【００２９】
Ａ．微生物夾雑物検査用容器
本発明の微生物夾雑物検査用容器は、微生物夾雑物の検査に用いられる微生物夾雑物検査用容器であって、流体入口および流体出口を有する容器本体と、上記流体出口に設けられた突刺し部と、上記容器本体内に収納された試薬と、上記流体入口および上記流体出口を密閉する密閉部材とを有することを特徴とするものである。
【００３０】
本発明の微生物夾雑物検査用容器について図面を参照して説明する。
図１（ａ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の一例を示す概略平面図であり、図１（ｂ）は図１（ａ）のＡ−Ａ線断面図、図１（ｃ）は図１（ａ）のＢ−Ｂ線断面図である。なお、図１（ａ）において密閉部材は省略されている。図１（ａ）〜（ｃ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器１は、流体入口３および流体出口４を有する容器本体２と、容器本体２内に設けられ、試薬１０を固定する固定部７と、容器本体２内に収納され、固定部７に固定された試薬１０と、流体出口４に設けられた突刺し部８と、容器本体２全体を密封包装する袋状の密閉部材５とを有している。固定部７は容器本体２と一体に形成されており、十字状の形状を有している。
【００３１】
図２（ａ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図であり、図２（ｂ）は図２（ａ）のＡ−Ａ線断面図である。なお、図２（ａ）において密閉部材は省略されている。図２（ａ）、（ｂ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器１は、流体入口３および流体出口４を有する容器本体２と、容器本体２内に収納され、試薬１０を含浸させた不織布９と、流体出口４に設けられた突刺し部８と、容器本体２全体を密封包装する袋状の密閉部材５とを有している。不織布９は試薬１０を固定する固定部の一つである。
【００３２】
図３（ａ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図であり、図３（ｂ）は図３（ａ）のＡ−Ａ線断面図である。なお、図３（ａ）において密閉部材は省略されている。図３（ａ）、（ｂ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器１は、流体入口３および流体出口４を有する容器本体２と、容器本体２内に収納された試薬１０と、流体出口４に設けられた突刺し部８と、流体入口３を密閉するシート状の密閉部材６ａと、流体出口４を密閉するキャップ状の密閉部材６ｂとを有している。試薬１０は容器本体２の内壁の段差にリング状に固定されている。
【００３３】
図４（ａ）〜（ｂ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の一例を示す工程図であり、図２（ａ）〜（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器の使用方法の一例を示す。この例においてはエンドトキシン検査を示す。図２（ａ）、（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器１では、容器本体２内に試薬１０（ライセート試薬）が収納されている。図４（ａ）、（ｂ）に示すように、第２容器２０は、流体入口２２を有する第２容器本体２１と、流体入口２２を密閉する第２密閉部材２３と、第２容器本体２１内に収納された第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）とを有しており、第２容器本体２１の内部は減圧されている。まず、図２（ａ）〜（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器において、袋状の密閉部材５を開封して容器本体２を取り出し、図４（ａ）に示すように、流体入口３から容器本体２内に液体試料１５を導入する。液体試料１５が容器本体２内に導入されると、試薬１０（ライセート試薬）が溶解する。次に、図４（ｂ）に示すように、容器本体２の流体出口４に設けられた突刺し部８を第２容器２０の第２密閉部材２３に突き刺す。このとき、第２容器本体２１の内部は減圧されているため、液体試料１５は第２容器本体２１内に導入される。液体試料１５が第２容器本体２１内に導入されると、第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）が溶解する。第２容器２０は光学セルであり、液体試料１５の光学特性の変化を検出することができる。発色合成基質の場合、エンドトキシンによりライセート試薬中の凝固酵素が活性化され（ＬＡＬ反応）、活性化された凝固酵素の作用により発色合成基質から発色基が遊離されるので（遊離反応）、発色基の量を吸光度または透過率で測定することにより、液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン濃度を測定することができる。また、蛍光基質の場合、エンドトキシンによりライセート試薬中の凝固酵素が活性化され（ＬＡＬ反応）、活性化された凝固酵素の作用により蛍光基質から蛍光基が遊離されるので（遊離反応）、蛍光基の量を蛍光度で測定することにより、液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン濃度を測定することができる。
【００３４】
また、図４（ａ）〜（ｂ）に示す本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法においては、次のような使用もできる。この例においてはエンドトキシン検査を示す。図２（ａ）、（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器１では、容器本体２内に試薬１０（エンドトキシン標準品）が収納されている。図４（ａ）、（ｂ）に示す第２容器２０では、第２容器本体２１内に第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物）が収納されている。まず、図２（ａ）〜（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器において、袋状の密閉部材５を開封して容器本体２を取り出し、図４（ａ）に示すように、流体入口３から容器本体２内に液体試料１５を導入する。液体試料１５が容器本体２内に導入されると、試薬１０（エンドトキシン標準品）が溶解する。次に、図４（ｂ）に示すように、容器本体２の流体出口４に設けられた突刺し部８を第２容器２０の第２密閉部材２３に突き刺す。このとき、第２容器本体２１の内部は減圧されているため、液体試料１５は第２容器本体２１内に導入される。液体試料１５が第２容器本体２１内に導入されると、第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物）が溶解する。第２容器２０は光学セルであり、液体試料１５の光学特性の変化を検出することができる。発色合成基質の場合、エンドトキシンによりライセート試薬中の凝固酵素が活性化され（ＬＡＬ反応）、活性化された凝固酵素の作用により発色合成基質から発色基が遊離されるので（遊離反応）、発色基の量を吸光度または透過率で測定することにより、エンドトキシン標準品が添加された液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン濃度を測定することができる。また、蛍光基質の場合、エンドトキシンによりライセート試薬中の凝固酵素が活性化され（ＬＡＬ反応）、活性化された凝固酵素の作用により蛍光基質から蛍光基が遊離されるので（遊離反応）、蛍光基の量を蛍光度で測定することにより、エンドトキシン標準品が添加された液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン濃度を測定することができる。
【００３５】
図５（ａ）〜（ｂ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す工程図であり、図２（ａ）〜（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器の使用方法の他の例を示す。この例においてはエンドトキシン検査を示す。図２（ａ）、（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器１では、容器本体２内に試薬１０（ライセート試薬）が収納されている。図５（ａ）、（ｂ）に示すように、第２容器２０は、流体入口２２を有する第２容器本体２１と、流体入口２２を密閉する第２密閉部材２３とを有しており、第２容器本体２１の内部は減圧されている。まず、図２（ａ）〜（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器において、袋状の密閉部材５を開封して容器本体２を取り出し、図５（ａ）に示すように、流体入口３から容器本体２内に液体試料１５を導入する。液体試料１５が容器本体２内に導入されると、試薬１０（ライセート試薬）が溶解する。次に、図５（ｂ）に示すように、容器本体２の流体出口４に設けられた突刺し部８を第２容器２０の第２密閉部材２３に突き刺す。このとき、第２容器本体２１の内部は減圧されているため、液体試料１５は第２容器本体２１内に導入される。第２容器２０は光学セルであり、液体試料１５の光学特性の変化を検出することができる。エンドトキシンによりライセート試薬中の凝固酵素が活性化され（ＬＡＬ反応）、エンドトキシンの存在下で液体試料およびライセート試薬の混合物の凝固反応が生じゲル化するので、ゲル化に伴う濁度を測定することにより、液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン濃度を測定することができる。
【００３６】
本発明によれば、微生物夾雑物検査に使用される試薬が微生物夾雑物検査用容器に収納されており、微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を突き刺すことで容器本体から他の容器に液体試料を移動させることができるため、本発明の微生物夾雑物検査用容器を用いることにより簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。
【００３７】
また、従来の微生物夾雑物検査においては板状のカートリッジに必要な試薬がすべて封入されていたため、検査対象に応じてカートリッジを適宜選択する必要があった。これに対し本発明においては、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と他の容器とを組み合わせて用いることができる。例えばエンドトキシン検査の場合、本発明の微生物夾雑物検査用容器にライセート試薬を収納し、別の容器に発色合成基質または蛍光基質をしたり、また本発明の微生物夾雑物検査用容器にエンドトキシン標準品を収納し、別の容器に発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物をしたりすることができる。したがって、検査対象に応じて試薬の種類や試薬の濃度を適宜調整することができる。
ここで、例えばライセート試薬の濃度が高くなるほど、エンドトキシンの検出感度が高くなる。そのため、例えばライセート試薬の濃度が異なる微生物夾雑物検査用容器を複数使用し、ライセート試薬の濃度が低いものとライセート試薬の濃度が高いものとを同時に測定することで、エンドトキシンの検出感度を高めることができる。したがって、液体試料中のエンドトキシンが極微量である場合においても、高感度にエンドトキシン検査を行うことができる。
このように本発明においては、高感度に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。
これに対し、従来の板状のカートリッジではカートリッジ内に試薬がすべて封入されているため、カートリッジ毎に検出感度があらかじめ決められている。また、カートリッジ毎に検出感度のばらつきがある。そのため、微生物夾雑物が検出されなかった場合でも、再度検査を行わなければならない場合があり、検査が煩雑になる。
【００３８】
また、例えばエンドトキシン検査の場合、エンドトキシン標準品を用いたライセート試薬の表示感度確認試験（ライセート試薬の感度の確認）や、エンドトキシン標準品を用いた検量線の作成、エンドトキシン標準品を用いた反応干渉因子試験（エンドトキシン濃度を測定する液体試料にＬＡＬ反応を抑制する因子が含まれていないかの検定）等、試料の調製が煩雑である。これに対し本発明においては、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と他の容器とを組み合わせて用いることができ、また複数の試料を同時に測定することもできるので、簡便かつ正確な測定が可能になる。
【００３９】
本発明の微生物夾雑物検査用容器は、微生物夾雑物の検査に用いられるものである。微生物夾雑物としては、エンドトキシン、リポ多糖、（１→３）−β−Ｄ−グルカンを例示することができる。
エンドトキシンとしては、各種グラム陰性菌、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ等のリポ多糖が挙げられる。
【００４０】
例えばエンドトキシン検査においては、リポ多糖や（１→３）−β−Ｄ−グルカンで陽性になる場合がある。一方、深在性真菌症の検査においては、（１→３）−β−Ｄ−グルカンを検出する場合のＬＡＬ反応と類似酵素の反応とでは逆にエンドトキシンで陽性になる場合がある。また、生理食塩や医薬品のエンドトキシン検査においては、一部の医薬品がＬＡＬ反応の抑制物質として働くことも考慮し、局方では検量線を含むライセート試薬の感度の確認および検体自体に抑制反応がないかの確認を行っている。そのため、本発明のように、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と他の容器とを組み合わせて用いることができ、また複数の試料を同時に測定することができるのは有用である。
【００４１】
以下、本発明の微生物夾雑物検査用容器における各構成について説明する。
【００４２】
１．容器本体
本発明における容器本体は、流体入口および流体出口を有し、流体出口に突刺し部が設けられているものである。
【００４３】
容器本体の形状としては、流体入口および流体出口を有し、流体出口に突刺し部を設けることが可能な形状であれば特に限定されるものではなく、例えば筒状、カップ状等とすることができる。
【００４４】
中でも、本発明においては、図６（ｄ）、図７（ｃ）、図８（ｃ）に例示するように、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２と第３容器の第３容器本体３２とが積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２の流体入口と第３容器の第３容器本体３２の流体出口とが気密嵌合可能であることが好ましい。
ここで、「微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器の第３容器本体が積層可能である」とは、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器の第３容器本体の流体出口とが気密嵌合することにより微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器の第３容器本体が積層することをいう。
また、「微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器の第３容器本体の流体出口とが気密嵌合可能である」とは、微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器の第３容器本体を積層した際に、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器の第３容器本体の流体出口との間に隙間がなく、気体の流通を妨げるように流体入口と流体出口とが嵌合することをいう。
この場合、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器の第３容器本体の流体出口とは気密嵌合可能であることから、通常、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口の内径は、第３容器の第３容器本体の流体出口の外径と等しい。これにより、第３容器の第３容器本体の流体出口を微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口に隙間なく挿入できる。
なお、第３容器について詳しくは後述の「Ｂ．微生物夾雑物検査キット」で説明する。
【００４５】
また、上述したように突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺すことで液体試料を移動させることから、通常、流体入口および流体出口は容器本体の両端にそれぞれ配置される。
【００４６】
容器本体の材質は、所定の形状を有する容器本体を形成可能なものであればよく、例えば樹脂を挙げることができる。容器本体は透明、半透明、不透明のいずれであってもよいが、試薬および液体試料を視認しやすいことから、透明または半透明であることが好ましい。
【００４７】
容器本体の内壁には、試薬を固定するために段差や突起が設けられていてもよい。図２に例示するように、容器本体２の内壁に段差があることで、固定部として不織布９を配置したり、図３に例示するように容器本体２の内壁の段差に試薬１０を固定したりすることができる。
また、これらの段差や突起は、微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器の第３容器本体を積層したり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口および第３容器の第３容器本体の流体出口を気密嵌合したりするために設けられているものであってもよい。
【００４８】
本発明の微生物夾雑物検査用容器は、図１〜図３に例示するように１個の容器本体２を有するものであってもよく、図９に例示するように複数個の容器本体２が連結されたものであってもよい。
図９（ａ）は本発明の微生物夾雑物検査用容器の他の例を示す概略平面図であり、図９（ｂ）は図９（ａ）のＡ−Ａ線断面図である。なお、図９（ａ）において密閉部材は省略されている。図９（ａ）、（ｂ）に示す微生物夾雑物検査用容器１は、複数の容器本体２が連結されたものである。各容器本体２は流体入口３および流体出口４を有し、流体出口４には突刺し部８が設けられ、流体入口３および流体出口４は複数の容器本体２全体を密封包装する袋状の密閉部材５で密閉されており、各容器本体２内には試薬１０を含浸させた不織布９が収納されている。
【００４９】
２．突刺し部
本発明における突刺し部は、上記容器本体の流体出口に設けられるものである。
突刺し部の形状としては、後述する第２容器の第２密閉部材を貫通することが可能な形状であれば特に限定されるものではない。
突刺し部は、通常、容器本体と一体に形成される。
【００５０】
３．密閉部材
本発明における密閉部材は、上記容器本体の流体入口および流体出口を密閉するものである。
密閉部材としては、流体入口および流体出口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、例えば図１（ｂ）、（ｃ）、図２（ｂ）、図９（ｂ）に示すような容器本体２全体を密封包装する袋状の密閉部材５であってもよく、図３（ｂ）に示すようなシート状の密閉部材６ａやキャップ状の密閉部材６ｂであってもよい。
密閉部材の材質としては、流体入口および流体出口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、密閉部材の形状等に応じて異なるが、例えば樹脂、アルミニウム箔等の金属箔、ゴム等を挙げることができる。
【００５１】
また、密閉部材は除去可能なものであってもよい。本発明の微生物夾雑物検査用容器を使用する際に、例えば袋状の密閉部材の場合は密閉部材を開封し容器本体を取り出して使用したり、シート状やキャップ状の密閉部材の場合は容器本体から密閉部材を剥離または外して使用したりすることができる。
また、シート状の密閉部材の場合、密閉部材は、ある程度の強度を有し、針等を容易に貫通させることができるものであってもよい。この場合、密閉部材は二重シートになっており、外側のシートを剥離して内側のシートに針等を貫通させて使用してもよい。
【００５２】
４．固定部
本発明の微生物夾雑物検査用容器は、上記容器本体内に設けられ、試薬を固定する固定部を有していてもよい。
固定部の形状としては、試薬を固定可能であり、固定部が形成されていても流体入口から流体出口まで液体試料を通過させることができる形状であれば特に限定されるものではなく、例えば図１（ａ）に示すような十字状、図２（ａ）に示すようなメッシュ状を挙げることができる。
固定部の材質は、固定部の形状等に応じて適宜選択される。例えば図１に示すような十字状の固定部７の場合、固定部の材質としては容器本体と同様に樹脂を挙げることができる。この場合、固定部の形成が容易であることから、固定部は容器本体と一体に形成されていることが好ましい。また例えば図２に示すように固定部として不織布９を用いることもできる。不織布は試薬を含浸させて用いられる。
【００５３】
５．試薬
本発明において、試薬は上記容器本体内に収納される。
本発明に用いられる試薬としては、検査する微生物夾雑物の種類に応じて適宜選択される。例えばエンドトキシンまたは（１→３）−β−Ｄ−グルカンの検査の場合、試薬としては、ライセート試薬、エンドトキシン標準品、（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品を用いることができる。
【００５４】
ライセート試薬としては、カブトガニの血球抽出成分（Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ；ＬＡＬ）により調製されたものを用いることができる。また、ライセート試薬として、生体由来成分から単離精製されたファクターＣ等（ファクターＣ、ファクターＧ、凝固酵素等）や遺伝子組換え技術によって作製された組換えファクターＣ等を適宜使用して調製した「ＬＡＬの同等物」を用いることもできる。
【００５５】
エンドトキシン標準品は、ライセート試薬の感度を確認する上で、日本薬局方が定めた定量保証のエンドトキシンであり、例えば医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団や、エンドトキシン検出試薬メーカーである生化学工業、和光純薬、ロンザ等から入手することができる。
【００５６】
（１→３）−β−Ｄ−グルカン標準品は、日本薬局方の定めはないが、体外診断薬測定キットを販売している日水製薬、和光純薬、マルハニチロから入手することができる。標準品としては、体外診断薬測定キットの特性に合せた、パキマン、カードランまたはレンチナン由来の標準品を使用することができる。
【００５７】
また、本発明の微生物夾雑物検査用容器が、図９に例示するように複数個の容器本体２が連結されたものである場合には、事前に調製された試薬の組み合わせを用いることができる。例えば、検量線作成用の濃度の異なる３種類以上のエンドトキシン標準品の組み合わせや、感度を変化させるための濃度が異なる複数種類のライセート試薬の組み合わせ等を用いることができる。
【００５８】
６．その他の構成
本発明の微生物夾雑物検査用容器には、図９（ｂ）に例示するように容器本体２を固定するための係合部１１が形成されていてもよい。例えば図１０に示すように係合部１１によって容器本体２を第２容器２０に固定することができる。
係合部は、通常、容器本体と一体に形成される。
【００５９】
７．使用方法
本発明の微生物夾雑物検査用容器の使用方法について説明する。
図４（ａ）〜（ｂ）および図１１を例に挙げて説明する。この例においてはエンドトキシン検査を示す。まず、図２（ａ）、（ｂ）に例示する試薬１０（ライセート試薬）が収納された微生物夾雑物検査用容器１と、図４（ａ）に例示する第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）が収納された第２容器２０とを準備する。次いで、図示しないが微生物夾雑物検査用容器１において袋状の密閉部材５を開封して容器本体２を取り出し、図４（ａ）に例示するように流体入口３から容器本体２に液体試料１５を導入する。液体試料１５が容器本体２内に導入されると、試薬１０（ライセート試薬）が溶解する。次に、図４（ｂ）に示すように、流体出口４に設けられた突刺し部８を第２容器２０の第２密閉部材２３に突き刺す。このとき、第２容器本体２１の内部は減圧されているため、液体試料１５は第２容器本体２１内に導入される。液体試料１５が第２容器本体２１内に導入されると、第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）が溶解する。この第２容器２０は光学セルである。
【００６０】
具体的には、ライセート試薬が液体試料に溶解すると、液体試料中に存在するエンドトキシンがライセート試薬とカスケード反応を起こして凝固酵素を活性化する（ＬＡＬ反応、凝固酵素の活性化反応）。また、発色合成基質または蛍光基質が液体試料に溶解すると、活性化された凝固酵素が発色合成基質または蛍光基質に作用し、発色基または蛍光基が遊離される（遊離反応）。
【００６１】
次に、図１１に示す光学検出器５０を用いて、発色基による発色または蛍光基による蛍光を測定し、液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン量を算出する。例えば発色基の量を吸光度または透過率で測定したり、蛍光基の量を蛍光度で測定したりすることで、エンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン量を算出することができる。
図１１に例示する光学検出器５０は、第２容器を挿入する挿入口５１と、表示部５２とを備えている。光学検出器５０では、発色または蛍光は光学検出器５０が備える光学系により測定および解析され、結果が表示部５２に表示される。この光学検出器５０では、６個の挿入口５１が備えられており、６個同時に測定できる。
【００６２】
次に、図１２（ａ）〜（ｃ）および図１１を例に挙げて説明する。まず、図２（ａ）、（ｂ）に例示する試薬１０（ライセート試薬）が収納された微生物夾雑物検査用容器１と、図７（ａ）、（ｂ）に例示する第３試薬３１（エンドトキシン標準品）が収納された第３容器３０と、図４（ａ）に例示する第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）が収納された第２容器２０とを準備する。次いで、図示しないが図２（ａ）、（ｂ）に例示する微生物夾雑物検査用容器１において袋状の密閉部材５を開封して容器本体２を取り出し、図７（ａ）、（ｂ）に例示する第３容器３０において流体出口３４側の第３密閉部材３６ｂを剥離し、図１２（ａ）に示すように微生物夾雑物検査用容器の容器本体２および第３容器の第３容器本体３２を積層する。次いで、図１２（ｂ）に示すように、突刺し部８を第２容器２０の第２密閉部材２３に突き刺す。次に、図示しないが第３密閉部材３６ａに注射針等を貫通させて第３容器本体３２内に液体試料を導入する。このとき、第２容器本体２１の内部は減圧されているため、図１２（ｃ）に示すように液体試料１５は第３容器本体３２、容器本体２を順に通過し、第３試薬３１（エンドトキシン標準品）および試薬１０（ライセート試薬）を順次溶解して、第２容器本体２１内に導入される。液体試料１５が第２容器本体２１内に導入されると第２試薬２４（発色合成基質または蛍光基質）が溶解する。このとき、上述のようにＬＡＬ反応（凝固酵素の活性化反応）および遊離反応が起こる。
次に、図１１に示す光学検出器５０を用いて、発色基による発色または蛍光基による蛍光を測定し、エンドトキシン標準品が添加された液体試料中のエンドトキシンを検出するまたはエンドトキシン量を算出する。
【００６３】
この場合、例えば図１３に示すように、６個の第２容器２０のうち、１個の第２容器２０には図１２に例示するようにライセート試薬が収納された容器本体２とエンドトキシン標準品が収納された第３容器本体３２とを積層することで添加回収測定用とし、残り５個の第２容器２０には図４に例示するようにライセート試薬が収納された容器本体２のみを積層することで試料検査用とすることができる。これにより、液体試料を検査すると同時にエンドトキシンの添加回収率を測定し反応干渉因子試験を行うことができる。
【００６４】
本発明の微生物夾雑物検査用容器を用いて微生物夾雑物を検査する際には、容器本体内に液体試料を導入した後に突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺すことで第２容器内に液体試料を移動させてもよく、突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺した後に容器本体内に液体試料を導入して第２容器内に液体試料を移動させてもよい。
後者の場合、第２容器および容器本体は密閉系になっていることが好ましい。例えば図１２（ｂ）においては第２容器２０と容器本体２と第３容器本体３２とは密閉系になっている。
【００６５】
また、微生物夾雑物の検査に際して、測定中の容器本体への微生物夾雑物の混入を防ぐために、密閉部材を除去する場合には、密閉部材を除去して液体試料を導入した後、容器本体の流体入口に蓋を配置してもよい。また、密閉部材を剥離せずに、注射針等を密閉部材に貫通させて液体試料を導入してもよい。さらに、密閉部材が二重シートである場合には、外側のシートを剥離した後に内側のシートに注射針等を貫通させて液体試料を導入してもよい。
【００６６】
Ｂ．微生物夾雑物検査キット
本発明の微生物夾雑物検査キットは、上述の微生物夾雑物検査用容器と、第２容器とを有する微生物夾雑物検査キットであって、上記第２容器は、流体入口を有する第２容器本体と、上記流体入口を密閉する第２密閉部材とを有し、上記第２容器本体の内部が減圧されていることを特徴とするものである。
【００６７】
図４（ａ）〜（ｂ）は本発明の微生物夾雑物検査キットの使用方法の一例を示す工程図である。なお、図４については上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【００６８】
本発明によれば、上述の試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器と第２容器とを有しており、微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺すことで、微生物夾雑物検査用容器の容器本体から第２容器の第２容器本体に液体試料を移動させることができるため、本発明の微生物夾雑物検査キットを用いることにより簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。
【００６９】
また本発明においては、試薬が収納された微生物夾雑物検査と第２容器とを組み合わせて用いることができるため、目的に応じて試薬の種類や試薬の濃度をカスタマイズできる。例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬の濃度を高くし、エンドトキシンの検出感度を高めることもできる。
【００７０】
本発明の微生物夾雑物検査キットは、第３容器をさらに有していてもよい。
図１２（ａ）〜（ｃ）は本発明の微生物夾雑物検査キットの使用方法の他の例を示す工程図である。なお、図１２については上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器」に記載したので、ここでの説明は省略する。
本発明の微生物夾雑物検査キットが第３容器をさらに有する場合、第３容器には第３試薬が収納されており、第３容器の第３容器本体は微生物夾雑物検査用容器の容器本体に積層可能であるため、検査対象に応じて試薬の種類や試薬の濃度等を適宜調整することができる。すなわち、目的に応じて試薬や検査用器具をカスタマイズできる。
【００７１】
例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬が収納された第３容器を用い、ライセート試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体にライセート試薬が収納された第３容器の第３容器本体を積層することで、ライセート試薬の濃度を調整することができる。
具体的には、微生物夾雑物検査用容器の容器本体に第３容器の第３容器本体を積層したライセート試薬の濃度が高いものと、微生物夾雑物検査用容器の容器本体のみのライセート試薬の濃度が低いものとを同時に測定することで、エンドトキシンの検出感度を高めることができる。したがって、液体試料中のエンドトキシンが極微量である場合においても、高感度にエンドトキシン検査を行うことができる。
【００７２】
また例えばエンドトキシン検査の場合、エンドトキシン標準品が収納された第３容器を用い、ライセート試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体にエンドトキシン標準品が収納された第３容器の第３容器本体を積層することで、添加回収測定用とすることができる。
具体的には、図１３に示すように、６個の第２容器２０のうち、５個を試料検査用、１個を添加回収測定用とすることができる。また、図１３において、微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器の第３容器本体の積層の組み合わせを変更することで、添加回収測定用を増やすこともできる。このように、検査対象に応じて使用者が検査用器具の構成を容易にカスタマイズできる。
これに対し、従来の板状のカートリッジでは、カートリッジ内に試薬がすべて封入されているため、使用者がカートリッジの構成をカスタマイズすることはできない。
【００７３】
以下、本発明の微生物夾雑物検査キットにおける他の構成について説明する。
【００７４】
１．微生物夾雑物検査用容器
微生物夾雑物検査用容器については、上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器」に詳しく記載したので、ここでの説明は省略する。
【００７５】
本発明の微生物夾雑物検査キットにおいて、微生物夾雑物検査用容器の数は１個であってもよく複数個であってもよい。また、微生物夾雑物検査用容器において容器本体は１個であってもよく、複数個の容器本体が連結されていてもよい。微生物夾雑物検査用容器の数および微生物夾雑物検査用容器における容器本体の数は、目的に応じて適宜選択される。
【００７６】
２．第２容器
本発明における第２容器は、流体入口を有する第２容器本体と、流体入口を密閉する第２密閉部材とを有し、第２容器本体の内部が減圧されているものである。
以下、第２容器の各構成について説明する。
【００７７】
（１）第２容器本体
本発明における第２容器本体は、流体入口を有し、内部が減圧されているものである。
【００７８】
通常、第２容器本体は開口部を１つのみ有する。第２容器本体の形状としては、流体入口を有する形状であれば特に限定されるものではなく、例えば筒状、カップ状等とすることができる。
第２容器本体の材質は、所定の形状を有する第２容器本体を形成可能なものであればよく、例えば樹脂、ガラスを挙げることができる。第２容器本体は光学セルになることから、透明または半透明である。
【００７９】
第２容器本体の内部の減圧の程度としては、第２容器の第２密閉部材に微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を貫通させた際に第２容器本体内に液体試料を導入可能な程度であればよく、液体試料の量等によって適宜調整される。
【００８０】
（２）第２密閉部材
本発明における第２密閉部材は、上記第２容器本体の流体入口を密閉するものである。
第２密閉部材としては、流体入口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、例えばシート状、キャップ状等の第２密閉部材が挙げられる。
第２密閉部材の材質としては、流体入口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、第２密閉部材の形状等に応じて異なるが、例えば樹脂、アルミニウム箔等の金属箔、ゴム等を挙げることができる。
【００８１】
（３）第２試薬
本発明において、上記第２容器本体内には第２試薬が収納されていることが好ましい。
第２試薬としては、微生物夾雑物の検査に使用される試薬であれば特に限定されるものではなく、発色合成基質または蛍光基質、あるいは発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物が挙げられる。
なお、ライセート試薬については上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【００８２】
発色合成基質および蛍光基質としては、ライセート試薬中の凝固酵素の作用によって発色基または蛍光基を遊離することができる合成基質であれば特に限定されるものではなく、例えばパラニトロアニリン発色団を含むものを挙げることができ、具体的にはアセテート−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡ等が挙げられる。アセテート−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡの場合、凝固酵素によってｐＮＡ（パラニトロアニリン）基を遊離する。
また、例えば、米国特許第５，３１０，６５７号に記載されている一般式：Ｒ１−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｂ−Ｒ２で表される発色合成基質や蛍光基質を挙げることができる。ここで、Ｒ１は、水素、ブロックしている芳香族炭化水素またはアシル基を表し、Ａ１は、Ｉｌｅ、ＶａｌまたはＬｅｕから選択されるＬ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸を表し、Ａ２は、ＧｌｕまたはＡｓｐを表し、Ａ３は、ＡｌａまたはＣｙｓを表し、Ａ４は、Ａｒｇを表し、Ｂは、エステルおよびアミドから選択される連結を表し、Ｒ２は、Ｂ連結を介してアルギニンにＣ末端に共有結合される発色基または蛍光基を表す。
また、米国特許第４，１８８，２６４号に記載されている配列：Ｒ１−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｒ２におけるＬ−アミノ酸からなる構造を有するペプチド基質を挙げることができる。ここで、Ｒ１は、Ｎ−ブロックされたアミノ酸を表し、Ｒ２は、凝固酵素による加水分解によって遊離されて、発色化合物ＨＲ２を生じる基である。さらに、米国特許第４，５１０，２４１号に記載されている発色性ペプチド基質を挙げることができる。この発色性ペプチド基質はＧｌｙ部分がＡｌａまたはＣｙｓによって配列中で置換されたものである。
さらに、例えば、ジニトロフェニルアラニン、シクロヘキシルアラニン等の発色団を含むものや、７−アミノ−４−メチルクマリン、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン、４−メトキシ−２−ナフチルアミン等の発色団を含むものも挙げられる。
【００８３】
（４）第２容器
本発明の微生物夾雑物検査キットにおいて、第２容器の数は１個であってもよく複数個であってもよい。第２容器の数は、目的に応じて適宜選択される。
【００８４】
３．第３容器
本発明における第３容器は、流体入口および流体出口を有する第３容器本体と、第３容器本体内に収納された第３試薬と、流体入口および前記流体出口を密閉する第３密閉部材とを有するものであり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器本体が積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器本体の流体出口とが気密嵌合可能であるものである。
【００８５】
図６（ａ）は本発明における第３容器の一例を示す概略平面図であり、図６（ｂ）は図６（ａ）のＡ−Ａ線断面図、図６（ｃ）は図６（ａ）のＢ−Ｂ線断面図である。なお、図６（ａ）において第３密閉部材は省略されている。図６（ａ）〜（ｃ）に示すように、第３容器３０は、流体入口３３および流体出口３４を有する第３容器本体３２と、第３容器本体３２内に設けられ、第３試薬３１を固定する固定部３７と、容器本体３２内に収納され、固定部３７に固定された第３試薬３１と、第３容器本体３２全体を密封包装する袋状の密閉部材３５とを有している。固定部３７は第３容器本体３２と一体に形成されており、十字状の形状を有している。また、図６（ｄ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２および第３容器の第３容器本体３２は積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２の流体入口と第３容器の第３容器本体３２の流体出口とは気密嵌合可能である。
【００８６】
図７（ａ）は本発明における第３容器の他の例を示す概略平面図であり、図７（ｂ）は図７（ａ）のＡ−Ａ線断面図である。なお、図７（ａ）において第３密閉部材は省略されている。図７（ａ）、（ｂ）に示すように、第３容器３０は、流体入口３３および流体出口３４を有する第３容器本体３２と、第３容器本体３２内に収納され、第３試薬３１を含浸させた不織布３９と、流体入口３３を密閉するシート状の第３密閉部材３６ａと、流体出口３４を密閉するシート状の第３密閉部材３６ｂとを有している。不織布３９は第３試薬３１を固定する固定部の一つである。また、図７（ｃ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２および第３容器の第３容器本体３２は積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２の流体入口と第３容器の第３容器本体３２の流体出口とは気密嵌合可能である。
【００８７】
図８（ａ）は本発明における第３容器の他の例を示す概略平面図であり、図８（ｂ）は図８（ａ）のＡ−Ａ線断面図である。なお、図８（ａ）において第３密閉部材は省略されている。図８（ａ）、（ｂ）に示すように、第３容器３０は、流体入口３３および流体出口３４を有する第３容器本体３２と、第３容器本体３２内に収納された第３試薬３１と、第３容器本体３２全体を密封包装する袋状の密閉部材３５とを有している。第３試薬３１は第３容器本体３２の内壁の段差にリング状に固定されている。また、図８（ｃ）に示すように、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２および第３容器の第３容器本体３２は積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体２の流体入口と第３容器の第３容器本体３２の流体出口とは気密嵌合可能である。
【００８８】
以下、第３容器の各構成について説明する。
【００８９】
（１）第３容器本体
本発明における第３容器本体は、流体入口および流体出口を有するものであり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体および第３容器本体が積層可能であり、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と第３容器本体の流体出口とが気密嵌合可能であるものである。
【００９０】
第３容器本体の形状としては、流体入口および流体出口を有し、微生物夾雑物検査用容器の容器本体と積層可能で、第３容器本体の流体出口が微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口と気密嵌合可能である形状であれば特に限定されるものではなく、例えば筒状、カップ状等とすることができる。また、第３容器本体の形状は、微生物夾雑物検査用容の容器本体と同一の形状であってもよい。
【００９１】
中でも、第３容器本体が積層可能であり、流体入口と流体出口とが気密嵌合可能であることが好ましい。これにより、例えば図７（ｄ）に示すように、第３容器本体３２を複数積層することができ、第３試薬３１の種類や第３試薬３１の濃度等を適宜調整することが可能になる。
ここで、「第３容器本体が積層可能である」とは、一の第３容器本体の流体入口と他の第３容器本体の流体出口とが気密嵌合することにより複数の第３容器本体が積層することをいう。
また、「流体入口と流体出口とが気密嵌合可能である」とは、複数の第３容器本体を積層した際に流体入口と流体出口との間に隙間がなく、気体の流通を妨げるように流体入口と流体出口とが嵌合することをいう。
【００９２】
第３容器本体の流体入口および流体出口は気密嵌合可能であることから、通常、流体出口の外径と流体入口の内径とは等しい。これにより、一の第３容器本体の流体出口を他の第３容器本体の流体入口に隙間なく挿入できる。
また、通常、流体入口および流体出口は容器本体の両端にそれぞれ配置される。
【００９３】
第３容器本体の材質は、所定の形状を有する第３容器本体を形成可能なものであればよく、例えば樹脂を挙げることができる。第３容器本体は透明、半透明、不透明のいずれであってもよいが、第３試薬および液体試料を視認しやすいことから、透明または半透明であることが好ましい。
【００９４】
第３容器本体の内壁には、第３試薬を固定するために段差や突起が設けられていてもよい。図７に例示するように、第３容器本体３２の内壁に段差があることで、固定部として不織布３９を配置したり、図８に例示するように第３容器本体２の内壁の段差に第３試薬３１を固定したりすることができる。
また、これらの段差や突起は、第３容器本体を積層したり、流体入口および流体出口を気密嵌合したりするために設けられているものであってもよい。
【００９５】
（２）第３密閉部材
本発明における第３密閉部材は、上記第３容器本体の流体入口および流体出口を密閉するものである。
第３密閉部材としては、流体入口および流体出口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、例えば図６（ｂ）、（ｃ）、図８（ｂ）に示すような第３容器本体３２全体を密封包装する袋状の密閉部材３５であってもよく、図７（ｂ）に示すようなシート状の第３密閉部材３６ａ、３６ｂであってもよい。また、図示しないが流体出口には突起を折ることにより開封可能な第３密閉部材が配置されていてもよい。
第３密閉部材の材質としては、流体入口および流体出口を密閉できるものであれば特に限定されるものではなく、第３密閉部材の形状等に応じて異なるが、例えば樹脂、アルミニウム箔等の金属箔、ゴム等を挙げることができる。
【００９６】
また、第３密閉部材は除去可能なものであってもよい。第３容器を使用する際に、例えば袋状の第３密閉部材の場合は密閉部材を開封し第３容器本体を取り出して使用したり、シート状の第３密閉部材の場合は第３容器本体から第３密閉部材を剥離して使用したりすることができる。また、突起を折ることにより開封可能な密閉部材の場合には、突起を折って第３容器本体を使用することができる。
また、シート状の第３密閉部材の場合、第３密閉部材は、ある程度の強度を有し、針等を容易に貫通させることができるものであってもよい。この場合、第３密閉部材は二重シートになっており、外側のシートを剥離して内側のシートに針等を貫通させて使用してもよい。
【００９７】
（３）固定部
本発明における第３容器は、上記第３容器本体内に設けられ、第３試薬を固定する固定部を有していてもよい。
なお、固定部については、上記微生物夾雑物検査用容器の固定部と同様とすることができるので、ここでの説明は省略する。
【００９８】
（４）第３試薬
本発明において、第３容器に収納される第３試薬としては、微生物夾雑物の検査に使用される試薬であれば特に限定されるものではなく、ライセート試薬、エンドトキシン標準品が挙げられる。
なお、ライセート試薬およびエンドトキシン標準品については上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【００９９】
（５）第３容器
本発明の微生物夾雑物検査キットにおいて、第３容器の数は１個であってもよく複数個であってもよい。第３容器の数は、目的に応じて適宜選択される。
【０１００】
４．光学検出器
本発明の微生物夾雑物検査キットは、光学検出器をさらに有していてもよい。光学検出器を組み合わせることにより微生物夾雑物検査システムを構築することができ、微生物夾雑物の検査を簡便かつ迅速に行うことができる。
光学検出器としては、エンドトキシンの検出方法、例えば比濁法、比色法、蛍光法等に応じて適宜選択されるものであり、具体的には分光光度計、蛍光測定器、ルミノメーター等を挙げることができる。
また、光学検出器において、測定波長としては、微生物夾雑物の検出方法ならびに使用する発色合成基質または蛍光基質に応じて適宜選択されるものであり、例えば約２００ｎｍ〜７００ｎｍの範囲内、好ましくは約３５０ｎｍ〜４５０ｎｍの範囲内における波長に設定することができる。
【０１０１】
５．使用方法
本発明の微生物夾雑物検査キットの使用方法について説明する。
本発明の微生物夾雑物検査キットの使用方法の一例としては、上述の微生物夾雑物検査用容器の使用方法と同様とすることができる。
【０１０２】
なお、本発明の微生物夾雑物検査キットの使用方法のその他の点については、上述の微生物夾雑物検査用容器の使用方法と同様とすることができるので、ここでの説明は省略する。
【０１０３】
また、本発明の微生物夾雑物検査キットは、例えば１種類の液体試料を検査するものであってもよく、１種類の液体試料を複数回同時に検査するものであってもよく、複数種類の液体試料を同時に検査するものであってもよく、液体試料を検査すると同時にエンドトキシンの添加回収率を測定し反応干渉因子試験を行うものであってもよい。
【０１０４】
また、微生物夾雑物を検査するに際しては、事前に調製された試薬の組み合わせを用いることができる。例えば、検量線作成用の濃度が異なる３種類以上のエンドトキシン標準品の組み合わせや、感度を変化させるための濃度が異なる複数種類のライセート試薬の組み合わせ、また濃度が異なる複数種類のライセート試薬とそれに対応した濃度の発色合成基質または蛍光基質との組み合わせ等を挙げることができる。
【０１０５】
Ｃ．微生物夾雑物検査方法
本発明の微生物夾雑物検査方法は、上述の微生物夾雑物検査キットを用いて微生物夾雑物を検査する微生物夾雑物検査方法であって、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体内に液体試料を導入する第１工程と、上記微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺して第２容器本体内に上記液体試料を導入する第２工程と、上記第２工程後、上記液体試料中の微生物夾雑物を光学的に測定する測定工程とを有することを特徴とする。
【０１０６】
本発明によれば、上述の微生物夾雑物検査キットを用いるため、簡単な操作で迅速に微生物夾雑物検査を行うことが可能である。また本発明においては、目的に応じて試薬の濃度や試薬の種類等を適宜調整することができる。例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬の濃度を高くし、エンドトキシンの検出感度を高めることもできる。
【０１０７】
本発明においては、上記「Ｂ．微生物夾雑物検査キット」に記載したように、第３容器をさらに用いてもよい。
例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体上にライセート試薬が収納された第３容器の第３容器本体が積層され、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口および第３容器の第３容器本体の流体出口が気密嵌合された積層容器を用いることで、ライセート試薬の濃度を高くし、エンドトキシンの検出感度を高めることができる。
また例えばエンドトキシン検査の場合、ライセート試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体上にエンドトキシン標準品が収納された第３容器の第３容器本体が積層され、微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口および第３容器の第３容器本体の流体出口が気密嵌合された積層容器を用いることで、添加回収測定用とすることができる。
【０１０８】
本発明の微生物夾雑物検査方法における第１工程、第２工程および測定工程は、微生物夾雑物検査キットの構成や微生物夾雑物の検出方法等に応じて適宜調整される。
【０１０９】
以下、本発明の微生物夾雑物検査方法における各工程について説明する。
【０１１０】
１．第１工程
本発明における第１工程では、試薬が収納された微生物夾雑物検査用容器の容器本体内に液体試料を導入する。
微生物夾雑物検査用容器にはライセート試薬が収納されていてもよく、第１工程では、液体試料中の微生物夾雑物およびライセート試薬を反応させてもよい。例えばエンドトキシン検査の場合、第１工程では、液体試料中に存在するエンドトキシンがライセート試薬とカスケード反応を起こして凝固酵素を活性化する（ＬＡＬ反応、凝固酵素の活性化反応）。
【０１１１】
凝固酵素を確実に活性化するために、必要に応じて容器本体を加熱してもよい。加熱温度としては例えば約３７℃にすることができる。加熱方法としては、例えば光学検出器が加熱手段を備えており、光学検出器で加熱してもよく、光学検出器とは別の加熱装置により容器本体を加熱してもよい。本発明においては容器本体を加熱するため、従来の板状のカートリッジを加熱するよりも容易に加熱を行うことができる。
【０１１２】
微生物夾雑物検査用容器の容器本体の流体入口から容器本体内に液体試料を導入する方法としては、微生物夾雑物検査キットの構成に応じて異なる。なお、詳しくは上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器  ７．使用方法」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【０１１３】
２．第２工程
本発明における第２工程では、上記微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺して第２容器本体内に上記液体試料を導入する。
【０１１４】
第２容器本体内には発色合成基質または蛍光基質が収納されていてもよく、第２工程では、第２容器本体内に液体試料を導入した後、微生物夾雑物を含むライセート試薬および発色合成基質または蛍光基質を反応させてもよい。例えばエンドトキシン検査の場合、第２工程では、上記第１工程にて活性化された凝固酵素が発色合成基質または蛍光基質に作用し、発色基または蛍光基が遊離する（遊離反応）。
【０１１５】
また、第２容器本体内には発色合成基質または蛍光基質とライセート試薬との混合物が収納されていてもよく、第２工程では、第２容器本体内に液体試料を導入した後、液体試料中の微生物夾雑物およびライセート試薬を反応させ、微生物夾雑物を含むライセート試薬および発色合成基質または蛍光基質を反応させてもよい。例えばエンドトキシン検査の場合、第２工程では、液体試料中に存在するエンドトキシンがライセート試薬とカスケード反応を起こして凝固酵素を活性化し（ＬＡＬ反応、凝固酵素の活性化反応）、活性化された凝固酵素が発色合成基質または蛍光基質に作用し、発色基または蛍光基が遊離する（遊離反応）。
【０１１６】
また、第２容器本体内には試薬が収納されていなくてもよく、この場合には、活性化された凝固酵素により凝固タンパク質（コアギュロゲン）が加水分解され、ゲルが生成する。
【０１１７】
遊離反応を確実に行うために、必要に応じて第２容器を加熱してもよい。加熱温度としては例えば約３７℃にすることができる。加熱方法としては、例えば光学検出器が加熱手段を備えており、光学検出器で加熱してもよく、光学検出器とは別の加熱装置により加熱してもよい。
【０１１８】
液体試料を微生物夾雑物検査用容器の容器本体に導入する工程、および、微生物夾雑物検査用容器の突刺し部を第２容器の第２密閉部材に突き刺す工程の順序としては、いずれが先であってもよい。なお、詳しくは上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器  ７．使用方法」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【０１１９】
３．測定工程
本発明における測定工程では、上記第２工程後、上記液体試料中の微生物夾雑物を光学的に測定する。
微生物夾雑物を光学的に測定する方法としては、例えばエンドトキシン検査の場合、一般的なエンドトキシンの検出方法を適用することができ、具体的には比濁法、比色法、蛍光法等が挙げられる。
エンドトキシンを光学的に測定する際の測定波長としては、エンドトキシンの検出方法ならびに使用する発色合成基質または蛍光基質に応じて適宜選択されるものであり、例えば約２００ｎｍ〜７００ｎｍの範囲内、好ましくは約３５０ｎｍ〜４５０ｎｍの範囲内における波長とすることができる。
（１→３）−β−Ｄ−グルカンやリポ多糖の検査の場合も、上記エンドトキシンの検出方法と同様の方法により測定可能である。
微生物夾雑物を光学的に測定する際には、通常、光学検出器が用いられる。なお、光学検出器については、上記「Ａ．微生物夾雑物検査用容器  ７．使用方法」および「Ｂ．微生物夾雑物検査キット」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【０１２０】
本発明は、上記実施形態に限定されるものではない。上記実施形態は例示であり、本発明の特許請求の範囲に記載された技術的思想と実質的に同一な構成を有し、同様な作用効果を奏するものは、いかなるものであっても本発明の技術的範囲に包含される。
【実施例】
【０１２１】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【０１２２】
［実施例１］
（第２容器の作製）
第２容器の作製にはマイクロタイタープレートを用いた。
生化学工業製のエンドトキシン測定試薬エンドスペーシーＥＳ−５０Ｍセットのライセート試薬および発色合成基質の混合物に同セットの緩衝液全量を加え溶解させた。この発色合成基質を含むライセート試液５０μＬを９６穴Ｕ底マイクロタイタープレートにシリンジで分取し、−２０度で凍結し、凍結乾燥機で減圧することで、再度凍結乾燥状態に戻した。マイクロタイタープレートの天面の４つの穴の中心位置各７７箇所に５μＬのオキシムシリコン接着剤をシリンジで添着させ、これをスペーサーにして上からアルミピアーシングタイプのプレートシール（深江化成社）をのせた。このマイクロタイタープレートを真空チャンバーに入れ−８００ｍｍＨｇまで減圧し、再度常圧に戻して、減圧シールされたマイクロタイタープレートを作製した。
【０１２３】
（微生物夾雑物検査用容器および第３容器の作製）
微生物夾雑物検査用容器の作製にはピペットチップを用いた。
オートピペットの２００μＬチップを超音波カッターでピペット本体と嵌合する補強梁のついた部分とストレートな円錐部で切り離し、この円錐部を突刺し部を備える容器本体とした。
【０１２４】
（エンドトキシン検査）
まず、突刺し部を備える容器本体の突刺し部を下にして、容器本体の内部にエンドトキシンフリーな大塚製薬の注射水３７．５μＬをシリンジで入れ、注射水が先端約１／３の位置に留まったのを確認してタイタープレートのアルミを突き刺した。容器本体の液体はタイタープレート内に吸引されるのが確認された。
また、日本薬局方エンドトキシン標準品を注射水で１０万倍に希釈し、これを１２．５μＬシリンジで別の突刺し部を備える容器本体へ分取した。次に、さらに別の突刺し部を備える容器本体に注射水２５μＬをシリンジ分取し、エンドトキシン標準品が入った容器本体の上から注射水が入った容器本体を静かに篏合させ、同じくマイクロタイタープレートに突き刺した。２個の容器本体の液体はマイクロタイタープレート内に吸引された。
室温で３０分後、注射水、ライセート試薬および発色合成基質のみが入ったウェルでは着色が観察されなかったが、さらにエンドトキシン標準品が入ったウェルでは着色が観察された。
【０１２５】
［実施例２］
（第２容器の作製）
生化学工業製のエンドトキシン測定試薬エンドスペーシーＥＳ−５０Ｍセットのライセート試薬および発色合成基質の混合物をマイクロプレートへ分注、凍結乾燥して、アルミピアーシングタイプのプレートシールで減圧シールした。
【０１２６】
（微生物夾雑物検査用容器の作製）
実施例１と同様にして、２００μＬのチップを加工し、突刺し部を備える容器本体を作製した。
【０１２７】
（エンドトキシン検査）
日本薬局方エンドトキシン標準品を注射水で１０，０００ＥＵ／ｍＬに溶解し、注射水での１０倍希釈を５段階繰り返し、０．１ＥＵ／ｍＬに調整した。さらに、４倍希釈を２回行い、０．０２５ＥＵ／ｍＬと０．００６２５ＥＵ／ｍＬに調整した。
突刺し部を備える容器本体に０．１ＥＵ／ｍＬ、０．０２５ＥＵ／ｍＬ、０．００６２５ＥＵ／ｍＬのエンドトキシン溶液２５μＬをそれぞれシリンジ分取し、減圧シールされたマイクロプレートに突き刺し、反応を開始した。３７℃で加温したマイクロプレートリーダー内で３０分間のカイネティックな被色変化データを入手し、検量線とした。
【符号の説明】
【０１２８】
１  …  微生物夾雑物検査用容器
２  …  容器本体
３  …  流体入口
４  …  流体出口
５、６ａ、６ｂ  …  密閉部材
７  …  固定部
８  …  突刺し部
９  …  不織布
１０  …  試薬
１５  …  液体試料
２０  …  第２容器
２１  …  第２容器本体
２２  …  流体入口
２３  …  第２密閉部材
２４  …  第２試薬
３０  …  第３容器
３１  …  第３試薬
３２  …  第３容器本体
３３  …  流体入口
３４  …  流体出口
３５、３６ａ、３６ｂ  …  第３密閉部材
３７  …  固定部
３９  …  不織布
５０  …  光学検出器
【図１】
2015155846.tif 000003
【図２】
2015155846.tif 000004
【図３】
2015155846.tif 000005
【図４】
2015155846.tif 000006
【図５】
2015155846.tif 000007
【図６】
2015155846.tif 000008
【図７】
2015155846.tif 000009
【図８】
2015155846.tif 000010
【図９】
2015155846.tif 000011
【図１０】
2015155846.tif 000012
【図１１】
2015155846.tif 000013
【図１２】
2015155846.tif 000014
【図１３】
2015155846.tif 000015