(57)【要約】      （修正有）【課題】術後における組織の癒着を防止し、かつ、創傷治癒を促進する新規生物医学材料及び前記材料の製造方法の提供。【解決手段】バリア膜層形成材料１０３を多孔質足場材料層１０１の表面にコーティングし、二層中間産物を形成する工程、及び前記二層中間産物を乾燥させ、互いに分離できない多孔質足場材料層１０１とバリア膜層１０３とを含む二層複合材料１００を形成する工程を含む二層複合材料１００を形成する方法。多孔質足場材料１０１及びバリア膜層１０３形成材料として、コラーゲン、ゼラチン、キトサン及びヒアルロン酸から１以上の生分解ポリマーを用いる二層複合材料１００を形成する方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリア膜層形成材料を多孔質足場材料層の表面にコーティングし、二層中間産物を形成するステップ、および
前記二層中間産物を乾燥させ、互いに分離できない前記多孔質足場材料層とバリア膜層とを含む二層複合材料を形成するステップ
を含む、二層複合材料を形成する方法であって、
前記多孔質足場材料層を形成する方法が、
コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せからなるグループから選択される少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップ、
前記スラリーを鋳型に入れて、前記スラリーを凍結するステップ、
前記スラリーに凍結乾燥法を行い、水分子を除去して、足場本体を得るステップ、ならびに
前記足場本体に真空加熱法を行い、前記足場本体を脱水および架橋し、前記多孔質足場材料層を形成するステップ
を含み、
前記バリア膜層形成材料を形成する方法が、
コラーゲン、ゼラチン、キトサン、およびヒアルロン酸からなるグループから選択される第２の生分解性ポリマーを第２の溶剤と混合させ、それを静置してゲルを形成するステップ、ならびに
前記ゲルを均質状態になるまで撹拌し、前記バリア膜層形成材料を形成するステップ
を含む、二層複合材料を形成する方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、スラリーの約１．０〜２．０ｗｔ％を占める、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーがコラーゲンである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項４】
前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、請求項３に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップの前に、
前もって、前記コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンを約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、混合物を形成するステップ、および
前記ヒアルロン酸の溶液を前記混合物に注ぐステップ
を更に含む、請求項５に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、コラーゲンとヒアルロン酸の組合せである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項８】
前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、請求項７に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項９】
前記コラーゲン対前記ヒアルロン酸の重量比が、約９０〜９９．９：１０〜０．１である、請求項７に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１０】
第１の溶剤が、水、イソプロパノール、または酢酸を含む、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１１】
前記スラリーを鋳型に入れて前記スラリーを凍結するステップでは、前記スラリーが、約−４０〜−２０℃で凍結される、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１２】
前記凍結乾燥法の圧力が約３０〜２００ｍＴｏｒｒである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１３】
前記凍結乾燥法が、
約−４０〜−２０℃で前記スラリーを約３〜６時間凍結するステップ、
約−４０〜１０℃で前記スラリーを約１２〜１６時間凍結するステップ、および
約２０〜３０℃で前記スラリーを約３〜６時間置くステップ
を含む、請求項１２に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１４】
前記真空加熱法の圧力が約３０〜２００ｍＴｏｒｒである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１５】
前記真空加熱法の温度が約８０〜１１０℃である、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１６】
前記真空加熱法の時間が約１２〜２４時間である、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップと、前記スラリーを鋳型に入れて前記スラリーを凍結するステップとの間に、前記スラリー内のガスを除去するステップを更に含む、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１８】
前記第２の生分解性ポリマーが、前記ゲルの約３〜１０％ｗ／ｖを占める、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項１９】
前記第２の生分解性ポリマーがヒアルロン酸である、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２０】
前記第２の生分解性ポリマーがコラーゲンである、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２１】
前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、請求項２０に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２２】
第２の溶剤が水または酢酸を含む、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２３】
第２の生分解性ポリマーを第２の溶剤と混合させ、それを静置するステップでは、静置時間が約１２〜２４時間である、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２４】
前記ゲルを均質状態になるまで撹拌するステップの後、前記ゲル内の気泡を除去するステップを更に含む、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２５】
前記二層中間産物が約１５〜３０℃で乾燥される、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２６】
前記二層中間産物が約１２〜２４時間乾燥される、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２７】
前記二層中間産物が、室温で約２４時間乾燥される、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法。
【請求項２８】
薄膜形状、または少なくとも１つの開口を有する中空部もしくはチャネルを含む３次元形状である、請求項１に記載の二層複合材料を形成する方法によって形成された二層複合材料。
【請求項２９】
前記３次元形状が、球形状、楕円形状、管状、漏斗状、または円錐形状である、請求項２８に記載の二層複合材料。
【請求項３０】
少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状である、二層複合材料であって
前記多孔質足場材料層が前記３次元形状の外部に配置され、一方前記バリア膜層が前記３次元形状の内部に配置され、かつ前記中空部もしくはチャネルを囲むか、または
前記バリア膜層が前記３次元形状の外部に配置され、一方前記多孔質足場材料層が前記３次元形状の内部に配置され、かつ前記中空部もしくはチャネルを囲む、
請求項２８に記載の二層複合材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照 
本出願は、２０１４年２月１４日に出願された米国仮出願第６１／９４０，２５７号の恩典を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
本出願は、２０１５年２月５日に出願された台湾出願番号第１０４１０３８３１号に基づき、かつその優先権を主張するものであり、この開示はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００３】
技術分野
本発明は、生物医学材料に関し、特に、二層複合材料およびその形成方法に関するものである。
【背景技術】
【０００４】
癒着をもたらす繊維組織は、通常２つの組織間の結合をし、通常、腹腔などの体腔の空間を通過している。一般的に、術後癒着の原因は、組織石灰、内臓の処理、内臓と内部組織の乾燥、内部組織と異物（例えば、ガーゼ、手術用手袋、針など）の接触、および手術中に洗浄されなかった血または血栓によるものを含み得る。
【０００５】
下腹部と骨盤の手術は、腸と婦人科手術を含み、術後癒着のリスクは高い。癒着による「接続」は問題を生じないかもしれないが、その両端の組織または器官がねじれる、またはそれらの正常な位置から離れる可能性がある。これは、組織と器官の正常な生理機能に悪影響し、痛みや合併症を生じることがある。
【０００６】
従って、術後の創傷治癒を促進するのに用いられる、新しい抗癒着材が必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、バリア膜層形成材料を多孔質足場材料層の表面にコーティングし、二層中間産物を形成するステップ、および二層中間産物を乾燥させ、多孔質足場材料層とバリア膜層が互いに分離できない、多孔質足場材料層とバリア膜層を含む二層複合材料を形成するステップを含む、二層複合材料を形成する方法を提供し、多孔質足場材料層を形成する方法は、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せからなるグループから選択される少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップ、スラリーを鋳型に入れ、スラリーを凍結するステップ、スラリーに凍結乾燥法を行い、水分子を除去して、足場本体を得るステップ、および足場本体に真空加熱法を行い、足場本体を脱水および架橋し、多孔質足場材料層を形成するステップを含む。バリア膜層形成材料を形成する方法は、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、およびヒアルロン酸からなるグループから選択される第２の生分解性ポリマーを第２の溶剤と混合させ、それを静置してゲルを形成するステップ、およびゲルを均質状態になるまで撹拌し、バリア膜層形成材料を形成するステップを含む。
【０００８】
本発明は、上述の二層複合材料を形成する方法によって形成された二層複合材料も提供する。
【０００９】
本発明は、上述の二層複合材料を形成する方法によって形成された二層複合材料を含む生物医学機器を更に提供する。
【００１０】
本発明は、創傷治癒および／または組織再生を加速する効果を有する多孔質足場材料層、および組織癒着を防止する効果を有する多孔質足場材料層の表面に形成されたバリア膜層を含み、多孔質足場材料層とバリア膜層が、互いに分離できず、多孔質足場材料層が、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーによって形成され、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せからなるグループから選択される、バリア膜層が第二の生分解性ポリマーによって形成され、第二の生分解性ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、およびヒアルロン酸からなるグループから選択される、二層複合材料を提供する。
【００１１】
また、本発明は、上述の二層複合材料を含む生物医学機器を提供する。
【００１２】
より具体的には、本発明は以下を提供する：
［１］バリア膜層形成材料を多孔質足場材料層の表面にコーティングし、二層中間産物を形成するステップ、および
前記二層中間産物を乾燥させ、互いに分離できない前記多孔質足場材料層とバリア膜層とを含む二層複合材料を形成するステップ
を含む、二層複合材料を形成する方法であって、
前記多孔質足場材料層を形成する方法が、
コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せからなるグループから選択される少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップ、
前記スラリーを鋳型に入れて、前記スラリーを凍結するステップ、
前記スラリーに凍結乾燥法を行い、水分子を除去して、足場本体を得るステップ、ならびに
前記足場本体に真空加熱法を行い、前記足場本体を脱水および架橋し、前記多孔質足場材料層を形成するステップ
を含み、
前記バリア膜層形成材料を形成する方法が、
コラーゲン、ゼラチン、キトサン、およびヒアルロン酸からなるグループから選択される第２の生分解性ポリマーを第２の溶剤と混合させ、それを静置してゲルを形成するステップ、ならびに
前記ゲルを均質状態になるまで撹拌し、前記バリア膜層形成材料を形成するステップ
を含む、二層複合材料を形成する方法；
［２］前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、スラリーの約１．０〜２．０ｗｔ％を占める、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［３］前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーがコラーゲンである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［４］前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、［３］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［５］前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［６］前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップの前に、
前もって、前記コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンを約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、混合物を形成するステップ、および
前記ヒアルロン酸の溶液を前記混合物に注ぐステップ
を更に含む、［５］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［７］前記少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが、コラーゲンとヒアルロン酸の組合せである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［８］前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、［７］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［９］前記コラーゲン対前記ヒアルロン酸の重量比が、約９０〜９９．９：１０〜０．１である、［７］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１０］第１の溶剤が、水、イソプロパノール、または酢酸を含む、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１１］前記スラリーを鋳型に入れて前記スラリーを凍結するステップでは、前記スラリーが、約−４０〜−２０℃で凍結される、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１２］前記凍結乾燥法の圧力が約３０〜２００ｍＴｏｒｒである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１３］前記凍結乾燥法が、
約−４０〜−２０℃で前記スラリーを約３〜６時間凍結するステップ、
約−４０〜１０℃で前記スラリーを約１２〜１６時間凍結するステップ、および
約２０〜３０℃で前記スラリーを約３〜６時間置くステップ
を含む、［１２］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１４］前記真空加熱法の圧力が約３０〜２００ｍＴｏｒｒである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１５］前記真空加熱法の温度が約８０〜１１０℃である、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１６］前記真空加熱法の時間が約１２〜２４時間である、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１７］少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを、約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成するステップと、前記スラリーを鋳型に入れて前記スラリーを凍結するステップとの間に、前記スラリー内のガスを除去するステップを更に含む、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１８］前記第２の生分解性ポリマーが、前記ゲルの約３〜１０％ｗ／ｖを占める、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［１９］前記第２の生分解性ポリマーがヒアルロン酸である、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２０］前記第２の生分解性ポリマーがコラーゲンである、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２１］前記コラーゲンがＩ型コラーゲンである、［２０］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２２］第２の溶剤が水または酢酸を含む、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２３］第２の生分解性ポリマーを第２の溶剤と混合させ、それを静置するステップでは、静置時間が約１２〜２４時間である、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２４］前記ゲルを均質状態になるまで撹拌するステップの後、前記ゲル内の気泡を除去するステップを更に含む、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２５］前記二層中間産物が約１５〜３０℃で乾燥される、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２６］前記二層中間産物が約１２〜２４時間乾燥される、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２７］前記二層中間産物が、室温で約２４時間乾燥される、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法；
［２８］薄膜形状、または少なくとも１つの開口を有する中空部もしくはチャネルを含む３次元形状である、［１］に記載の二層複合材料を形成する方法によって形成された二層複合材料；
［２９］前記３次元形状が、球形状、楕円形状、管状、漏斗状、または円錐形状である、［２８］に記載の二層複合材料；ならびに
［３０］少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状である、二層複合材料であって、
前記多孔質足場材料層が前記３次元形状の外部に配置され、一方前記バリア膜層が前記３次元形状の内部に配置され、かつ前記中空部もしくはチャネルを囲むか、または
前記バリア膜層が前記３次元形状の外部に配置され、一方前記多孔質足場材料層が前記３次元形状の内部に配置され、かつ前記中空部もしくはチャネルを囲む、
［２８］に記載の二層複合材料。
【００１３】
詳細な説明は、添付の図面と併せて以下の実施形態に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
添付の図面とともに以下の本発明の様々な実施形態の詳細な説明を検討することで、本発明はより完全に理解できる。
【図１】本発明の二層複合材料の構造を示している。
【図２】薄膜状の本発明の二層複合材料を示している。
【図３】少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の楕円状の実施形態を示している。
【図４】少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の楕円状のもう１つの実施形態を示している。
【図５】図５Ａおよび図５Ｂは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の管状の実施形態を示しており、図５Ａは、正面図、図５Ｂは、断面図である。
【図６】図６Ａおよび図６Ｂは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の管状のもう１つの実施形態を示しており、図６Ａは、正面図、図６Ｂは、断面図である。
【図７】図７Ａ〜図７Ｄは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の漏斗状の実施形態を示しており、図７Ａは、正面図、図７Ｂは、縦断面図であり、図７Ｃは、上面図であり、図７Ｄは、底面図である。
【図８】図８Ａ〜図８Ｄは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の漏斗状のもう１つの実施形態を示しており、図８Ａは、正面図、図８Ｂは、縦断面図であり、図８Ｃは、上面図であり、図８Ｄは、底面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
詳細な説明
以下の詳細な説明では、説明のために、多数の特定の詳細が本実施形態の完全な理解を提供するために述べられる。しかしながら、１つ以上の実施形態では、これらの特定の詳細なしに行い得ることは明らかである。他の例では、従来公知の構造および装置は、図を簡素化するために概略的に示されている。
【００１６】
１つの実施形態では、本発明は、創傷治癒および／または組織再生を加速すると同時に組織癒着を防止する効果を有する二層複合材料を形成する方法を提供する。
【００１７】
本発明の二層複合材料を形成する方法は、以下のステップを含むことができるが、これに限定されるものではない。
【００１８】
まず、バリア膜層形成材料が多孔質足場材料層の表面にコーティングされ、二層中間産物を形成する。
【００１９】
次いで、二層中間産物は、乾燥され、多孔質足場材料層とバリア膜層を含む二層複合材料を形成する。上述の二層中間産物は、約１５〜３０℃で乾燥されることができるが、これに限定されるものではない。１つの実施形態では、二層中間産物は、室温で乾燥されることができる。また、二層中間産物は、約１２〜２４時間乾燥されることができる。１つの実施形態では、二層中間産物は、約２４時間乾燥されることができる。１つの特定の実施形態では、二層中間産物は、約２４時間室温で乾燥され、二層複合材料を形成することができる。
【００２０】
本発明の上述の方法によって形成された二層複合材料では、多孔質足場材料層は、創傷治癒および／または組織再生を加速する効果を有し、バリア膜層は、組織癒着を防止する効果を有する。多孔質足場材料層とバリア膜層は、互いに分離できない。
【００２１】
また、本発明の二層複合材料を形成する方法で述べられた多孔質足場材料層を形成する方法は、これに限定されるものではないないが以下のステップを含むことができる。
【００２２】
まず、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが低温で第１の溶剤と高速撹拌で混合されて、スラリー（ｓｌｕｒｒｙ）を形成する。上述の少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、スラリーの約１．０〜２．０ｗｔ％を占めることができるが、これに限定されるものではない。
【００２３】
この混合のステップでは、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、約４〜１０℃、例えば５℃で、第１の溶剤と混合されることができるが、これに限定されるものではない。また、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、約３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度、例えば約１０５００ｒｐｍの撹拌速度において、第１の溶剤と撹拌されることができるが、これに限定されるものではない。また、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、約９０〜１８０分間、例えば９０分間、第１の溶剤と混合されることができるが、これに限定されるものではない。１つの実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約４〜１０℃で、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合されて、スラリーを形成する。また、１つの特定の実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、約５℃で、１０５００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０分間、第１の溶剤と混合されて、スラリーを形成する。
【００２４】
上述の多孔質足場材料層を形成する方法に用いるのに好適な少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーの例は、これらに限定されるものではないが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せなどを含むことができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、コラーゲン、例えばＩ型コラーゲンであることができる。また、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンとヒアルロン酸との組合せ、例えばコラーゲンとヒアルロン酸の組合せを含むことができる。
【００２５】
少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーがコラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せであり得る実施形態では、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサン対ヒアルロン酸の重量比は、約９０〜９９．９：１０〜０．１であることができるが、これに限定されるものではない。例えば、コラーゲン対ヒアルロン酸の重量比は、約９３〜９４：７〜６であることができる。
【００２６】
また、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーがコラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せであり得る実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを低温で第１の溶剤と高速撹拌で混合させて、スラリーを形成するステップの前に、多孔質足場材料層を形成する方法は、まず、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンを低温で第１の溶剤と高速撹拌で混合させて、混合物を形成し、次いでヒアルロン酸の溶液を混合物内に入れるステップを更に含むことができるが、これに限定されるものではない。
【００２７】
１つの実施形態では、まず、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンを低温で第１の溶剤と高速撹拌で混合させるステップは、例えば、まず、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンを約４〜１０℃で、３５００〜１２０００ｒｐｍの撹拌速度において、約９０〜１８０分間、第１の溶剤と混合させて、スラリーを形成することであり得る。
【００２８】
また、ヒアルロン酸の溶液は、ヒアルロン酸を溶剤に溶解することによって形成することができる。ヒアルロン酸を溶解するのに好適な溶剤の例は、水、酢酸、イソプロパノールなどを含むことができる。１つの実施形態では、酢酸は、０．０５Ｍ酢酸である。
【００２９】
また、上述の多孔質足場材料層を形成する方法に用いられる第１の溶剤は、水、イソプロパノール、または酢酸を含むことができるが、これに限定されるものではない。１つの実施形態では、上述の多孔質足場材料層を形成する方法に用いられる第１の溶剤は、イソプロパノールであり、前記イソプロパノールは、約１０〜２０％のイソプロパノール、例えば１０％のイソプロパノールであることができるが、これに限定されるものではない。もう１つの実施形態では、上述の多孔質足場材料層を形成する方法に用いられる第１の溶剤は、酢酸であり、前記酢酸は、約０．０２〜０．０５Ｍ酢酸、例えば０．０５Ｍ酢酸であるが、これに限定されるものではない。
【００３０】
少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーが第１の溶解と混合されてスラリーを形成した後、形成されたスラリーは、鋳型に入れられて凍結される。このステップでは、スラリーは、約−４０〜−２０℃で凍結することができるが、これに限定されるものではない。もう１つの実施形態では、スラリーは、約−３０℃で凍結することができる。
【００３１】
次いで、スラリーが鋳型に入れられて凍結された後、スラリーに凍結乾燥法が行われ、水分子を除去して、足場本体を得る。上述の凍結乾燥法の圧力は、約３０〜２００ｍＴｏｒｒ、例えば約２００ｍＴｏｒｒであるが、これに限定されるものではない。また、凍結乾燥法は、約−４０〜−２０℃でスラリーを約３〜６時間凍結させ、次いで約−４０〜１０℃でスラリーを約１２〜１６時間凍結させ、その後約２０〜３０℃でスラリーを約３〜６時間置くステップを含むことができるが、これに限定されるものではない。１つの実施形態では、上述の凍結乾燥法の圧力は、２００ｍＴｏｒｒであることができ、この実施形態では、凍結乾燥法は、約−３０℃でスラリーを約３〜６時間凍結させ、次いで約０℃でスラリーを約１２〜１６時間凍結させ、その後約３０℃でスラリーを約３〜６時間置くステップを含むことができる。
【００３２】
また、スラリーに凍結乾燥法を行って、水分子を除去して足場本体を得るステップの後、真空加熱法が得られた足場本体に行われて、足場本体を脱水および架橋し、上述の多孔質足場材料層を形成する。真空加熱法の圧力は、約３０〜２００ｍＴｏｒｒ、例えば約２００ｍＴｏｒｒであることができるが、これに限定されるものではない。また、真空加熱法の温度は、約８０〜１１０℃であることができるが、これに限定されるものではない。また、真空加熱法の時間は、約１２〜２４時間、例えば約２４時間であることができるが、これに限定されるものではない。１つの特定の実施形態では、真空加熱法の圧力は、約２００ｍＴｏｒｒであり、真空加熱法の温度は、約８０〜１１０℃であり、真空加熱法の時間は、約２４時間である。
【００３３】
また、１つの実施形態では、上述のステップの他、多孔質足場材料層を形成する方法は、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーを低温で第１の溶剤と高速撹拌で混合させてスラリーを形成するステップとスラリーを鋳型に入れてスラリーを凍結するステップとの間に、スラリー内のガスを除去するステップを更に含むことができる。スラリー内のガスを除去する方式には特定の制限はない。１つの実施形態では、スラリー内のガスは、真空加熱によって除去することができる。
【００３４】
また、本発明の二層複合材料を形成する方法で述べられたバリア膜層形成材料を形成する方法は、これに限定されるものではないが、以下のステップを含むことができる。
【００３５】
まず、第２の生分解性ポリマーが第２の溶剤と混合されて、静置され、ゲルを形成する。第２の生分解性ポリマーは、ゲルの約３〜１０％ｗ／ｖを占めることができるが、これに限定されるものではない。
【００３６】
上述のバリア膜層形成材料を形成する方法に用いるのに好適な第２の生分解性ポリマーの例は、これらに限定されるものではないが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、ヒアルロン酸などを含むことができる。１つの実施形態では、第２の生分解性ポリマーは、コラーゲン、例えばＩ型コラーゲンであることができる。
【００３７】
また、上述のバリア膜層形成材料を形成する方法に用いられる第２の溶剤は、水または酢酸を含むことができるが、これに限定されるものではない。１つの実施形態では、上述の多孔質足場材料層を形成する方法に用いられる第２の溶剤は、酢酸であり、前記酢酸は、約０．１〜０．５Ｍ酢酸、例えば０．５Ｍ酢酸であることができるが、これに限定されるものではない。
【００３８】
次いで、ゲルを形成した後、ゲルは、均質状態になるまで撹拌され、バリア膜層形成材料を形成する。
【００３９】
また、１つの実施形態では、上述のステップの他、バリア膜層形成材料を形成する方法は、ゲルを均質状態になるまで撹拌するステップの後、ゲル内の気泡を除去するステップを更に含むことができる。
【００４０】
もう１つの実施形態では、本発明は、任意の本発明の二層複合材料を形成する方法で形成された二層複合材料を提供し、上述の二層複合材料を形成する方法は、各種の前述の多孔質足場材料層を形成する方法と、各種の上述のバリア膜層形成材料を形成する方法も含むことができる。
【００４１】
本発明の二層複合材料を形成する方法で形成された二層複合材料は、図１に示される構造を有する。図１は、本発明の二層複合材料１００が多孔質足場材料層１０１とバリア膜層１０３を有し、バリア膜層１０３が多孔質足場材料層１０１の表面上に形成されていることを示している。
【００４２】
本発明の二層複合材料は、創傷治癒および／または組織再生を加速すると同時に組織癒着を防止する効果を有する。本発明の二層複合材料は、生物医学的用途に用いることができ、例えば、本発明の二層複合材料は、これに限定されるものではないが術後の創傷に用いることができる。また、本発明の二層複合材料の使用法は、二層複合材料の多孔質足場材料層を創傷にあてることである。
【００４３】
本発明の二層複合材料の多孔質足場材料層は、創傷治癒および／または組織再生を加速する効果を有し、創傷が治癒された後、自然に分解されることができる。上述の多孔質足場材料層は、足場構造であり、多孔質足場材料層の孔径は、これに限定されるものではないが約１００〜５００μｍであることができる。
【００４４】
本発明の二層複合材料のバリア膜層は、組織癒着を防止する効果を有する。本発明の二層複合材料が創傷に施されたとき、バリア膜層は、２４〜４８時間以内にゲルとなり、ゆっくりと吸収されて２８日未満で体から排出されることができる。上述のバリア膜層は、非多孔層であり、バリア膜層は、これに限定されるものではないが損傷部位から解離する特性、および創傷と他の領域間に適切な界面を提供して、炎症のシグナル伝達を減弱するなどの機能を有する。
【００４５】
本発明の二層複合材料は、これに限定されるものではないが、薄膜状または３次元形状であることができる。
【００４６】
図２は、多孔質足場材料層１０１とバリア膜層１０３を有する薄膜状の本発明の二層複合材料２００を示している。
【００４７】
本発明の二層複合材料は、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状を含むことができ、３次元形状は、これらに限定されるものではないが、例えば、球形状、楕円形状、管状、漏斗状、円錐形状などであることができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料では、多孔質足場材料層が３次元形状の外部に配置され、バリア膜層が３次元形状の内部に配置されて、中空部またはチャネルを囲む。もう１つの実施形態では、バリア膜層が３次元形状の外部に配置され、多孔質足場材料層が３次元形状の内部に配置されて、中空部またはチャネルを囲む。
【００４８】
図３は、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の楕円状の実施形態を示している。図３の本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む楕円状の二層複合材料３００では、バリア膜層１０３は、本発明の楕円状の二層複合材料の外部に配置され、多孔質足場材料層１０１は、本発明の楕円状の二層複合材料３００の内部に配置されて、中空部３０１と開口３０３を囲む。
【００４９】
図４は、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の楕円状のもう１つの実施形態を示している。図４の本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む楕円状の二層複合材料４００では、バリア膜層１０３は、本発明の楕円状の二層複合材料の外部に配置され、多孔質足場材料層１０１は、本発明の楕円状の二層複合材料４００の内部に配置されて、中空部４０１と開口４０３を囲む。
【００５０】
図５Ａと図５Ｂは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の管状の実施形態を示している。図５Ａは、正面図であり、図５Ｂは、断面図である。図５Ａと図５Ｂの本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む管状の二層複合材料５００では、多孔質足場材料層１０１は、本発明の管状の二層複合材料の外部に配置され、バリア膜層１０３は、本発明の管状の二層複合材料５００の内部に配置されて、チャネル５０１、開口５０３、および開口５０５を囲む。
【００５１】
図６Ａと図６Ｂは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の管状のもう１つの実施形態を示している。図６Ａは、正面図、図６Ｂは、断面図である。図６Ａと図６Ｂの本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む管状の二層複合材料６００では、バリア膜層１０３は、本発明の管状の二層複合材料の外部に配置され、多孔質足場材料層１０１は、本発明の管状の二層複合材料６００の内部に配置されて、チャネル６０１、開口６０３、および開口６０５を囲む。
【００５２】
図７Ａ〜図７Ｄは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の漏斗状の実施形態を示している。図７Ａは、正面図、図７Ｂは、縦断面図であり、図７Ｃは、上面図であり、図７Ｄは、底面図である。図７Ａ〜図７Ｄの本発明７００の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む漏斗状の二層複合材料では、多孔質足場材料層１０１は、本発明の漏斗状の二層複合材料の外部に配置され、バリア膜層１０３は、本発明の漏斗状の二層複合材料７００の内部に配置されて、チャネル７０１、開口７０３、および開口７０５を囲む。１つの実施形態では、本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む漏斗状の二層複合材料７００は、子宮頚部手術の術後の創傷処置に用いることができる。
【００５３】
図８Ａ〜図８Ｄは、少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む３次元形状の本発明の二層複合材料の漏斗状のもう１つの実施形態を示している。図８Ａは、正面図、図８Ｂは、縦断面図であり、図８Ｃは、上面図であり、図８Ｄは、底面図である。図８Ａ〜図８Ｄの本発明８００の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む漏斗状の二層複合材料では、多孔質足場材料層１０１は、本発明の漏斗状の二層複合材料の外部に配置され、バリア膜層１０３は、本発明の漏斗状の二層複合材料８００の内部に配置されて、漏斗状の中空部８０１、漏斗状の中空部の首部の開口８０３、および漏斗状の中空部の底部の開口８０５を囲む。１つの実施形態では、本発明の少なくとも１つの開口を有する中空部またはチャネルを含む漏斗状の二層複合材料８００は、子宮頚部手術の術後の創傷処置に用いることができる。
【００５４】
もう１つの実施形態では、本発明は、上述の本発明の二層複合材料を形成する方法によって形成された二層複合材料を含む生物医学機器を更に提供する。
【００５５】
また、１つの実施形態では、本発明は、二層複合材料も提供する。
【００５６】
上述の本発明の二層複合材料は、これらに限定されるものではないが、多孔質足場材料層および多孔質足場材料層の表面に形成されたバリア膜層を含むことができ、多孔質足場材料層とバリア膜層は、互いに分離できない。
【００５７】
上述の多孔質足場材料層の厚さは、これに限定されるものではないが、約０．５〜５．０ｍｍであることができる。また、バリア膜層の厚さは、これに限定されるものではないが、約０．０５〜０．５ｍｍであることができる。
【００５８】
本発明の二層複合材料の多孔質足場材料層は、創傷治癒および／または組織再生を加速する効果を有する。また、本発明の二層複合材料の多孔質足場材料層は、創傷が治癒された後、自然に分解されることができる。上述の多孔質足場材料層は、足場構造であり、多孔質足場材料層の孔径は、これに限定されるものではないが約１００〜５００μｍであることができる。
【００５９】
上述の本発明の二層複合材料のバリア膜層は、組織癒着を防止する効果を有する。上述のバリア膜層は、非多孔層であり、バリア膜層は、これに限定されるものではないが損傷部位から解離する特性、および創傷と他の領域間に適切な界面を提供して、炎症のシグナル伝達を減弱するなどの機能を有する。本発明の二層複合材料が創傷に施されたとき、バリア膜層は、２４〜４８時間以内にゲルとなり、ゆっくりと吸収されて２８日未満で体から排出されることができる。
【００６０】
上述の多孔質足場材料層は、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーによって形成されることができる。上述の多孔質足場材料層を形成するのに好適な少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーの例は、これらに限定されるものではないが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、および、コラーゲン、ゼラチン、またはキトサンと、ヒアルロン酸との組合せなどを含むことができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、コラーゲン、例えばＩ型コラーゲンであることができる。また、もう１つの実施形態では、少なくとも１つの第１の生分解性ポリマーは、コラーゲンとヒアルロン酸の組合せであることができる。
【００６１】
また、上述のバリア膜層は、第２の生分解性ポリマーによって形成されることができる。上述のバリア膜層を形成するのに好適な第２の生分解性ポリマーの例は、これらに限定されるものではないが、コラーゲン、ゼラチン、キトサン、ヒアルロン酸などを含むことができる。
【００６２】
本発明の二層複合材料は、これに限定されるものではないが、薄膜状または３次元形状（例えば、図２〜図７Ｄを参照）であることができる。
【００６３】
もう１つの実施形態では、本発明は、上述の二層複合材料を含む生物医学機器を更に提供する。
【実施例】
【００６４】
Ａ． 本発明の異なる二層複合材料の準備
実施例１
多孔質コラーゲン足場材料層とヒアルロン酸バリア膜層を有する二層複合材料を準備する。
【００６５】
多孔質コラーゲン足場材料層とヒアルロン酸バリア膜層を有する二層複合材料を準備する方法が以下に説明される。
【００６６】
１．  ４．５ｇのＩ型コラーゲンを３００ｍｌの１０％のイソプロピルアルコールを含む混合器の中に加え、５．０℃で、１０５００ｒｐｍにおいて、９０分間混合して、スラリーを得た。
２．  スラリーを真空になるように真空炉に入れて、スラリー内のガスを除去した。
３．  １０ｍｌのスラリーを６×６ｃｍ２の大きさの鋳型に入れ、凍結乾燥機に入れて、−３０℃で凍結させた。
４．  凍結乾燥機の真空ポンプを起動して、凍結乾燥機チャンバの圧力を２００ｍＴｏｒｒに維持した。
５．  凍結乾燥機内のスラリーが−３０℃で３時間維持された。
６．  凍結乾燥機の温度を０℃に上げ、スラリーを、この温度で１２時間維持した。
７．  凍結乾燥機の温度を３０℃に上げ、スラリーを、この温度で６時間維持した。
８．  凍結乾燥器の真空ポンプを停止し、形成された足場本体を、真空チャンバから取り出した。
９．  足場本体を真空炉に入れ、真空ポンプを起動し、圧力を２００ｍＴｏｒｒに維持し、次いで真空炉の温度を１０５℃に上げて、足場本体をこの温度で２４時間維持した。
１０．  ３０ｍｌの水と２．０ｇのヒアルロン酸を５０ｍｌの注射器に加え、一晩静置し、ゲルを形成させた。
１１．  注射器内の総含有量が５０ｍｌとなるように、水を注射器に加えた。
１２．  形成されたヒアルロン酸ゲルが均質状態になるまで優しく撹拌した。
１３．  注射器を垂直に静置し、気泡をヒアルロン酸ゲルの表面から分離させた。
１４．  ２０ｍｌのヒアルロン酸ゲルを６×６ｃｍ２の大きさのプラスチック製の鋳型に加えて、ヒアルロン酸ゲルの表面が平坦になるのを待った。
１５．  足場本体をヒアルロン酸ゲルの表面上に配置し、層流で２４時間室温において空気乾燥させた。
【００６７】
実施例２
多孔質コラーゲン／ヒアルロン酸足場材料層とコラーゲンバリア膜層を有する二層複合材料を準備する。
【００６８】
多孔質コラーゲン／ヒアルロン酸足場材料層とコラーゲンバリア膜層を有する二層複合材料を準備する方法が以下に説明される。
【００６９】
１．  ４．５ｇのＩ型コラーゲンを２５０ｍｌの０．０５Ｍの酢酸を含む混合器の中に加え、５．０℃で、１０５００ｒｐｍにおいて、９０分間混合して、コラーゲンスラリーを得た。
２．  ０．１５ｇのヒアルロン酸を５０ｍｌの０．０５Ｍの酢酸に加え、よく溶解されるように撹拌した。
３．  ヒアルロン酸の溶液を上述のコラーゲンスラリーを含む混合器の中に加え、５．０℃で、１０５００ｒｐｍにおいて、９０分間混合して、コラーゲン／ヒアルロン酸スラリーを得た。
４．  コラーゲン／ヒアルロン酸スラリーを真空になるように真空炉に入れて、コラーゲン／ヒアルロン酸スラリー内のガスを除去した。
５．  １０ｍｌのコラーゲン／ヒアルロン酸スラリーを６×６ｃｍ２の大きさの鋳型に入れ、凍結乾燥機に入れて、−３０℃で凍結させた。
６．  凍結乾燥機の真空ポンプを起動し、凍結乾燥機チャンバの圧力を２００ｍＴｏｒｒに維持した。
７．  凍結乾燥機内のスラリーを−３０℃で３時間維持した。
８．  凍結乾燥機の温度を０℃に上げ、スラリーを、この温度で１２時間維持した。
９．  凍結乾燥機の温度を３０℃に上げ、スラリーを、この温度で４時間維持した。
１０．  凍結乾燥器の真空ポンプを停止し、形成されたコラーゲン／ヒアルロン酸足場本体を、真空チャンバから取り出した。
１１．  コラーゲン／ヒアルロン酸足場本体を真空炉に入れ、真空ポンプを起動し、圧力を２００ｍＴｏｒｒに維持し、次いで真空炉の温度を１０５℃に上げ、足場本体をこの温度で２４時間維持した。
１２．  ３０ｍｌの０．５Ｍの酢酸と４．０ｇのコラーゲンを５０ｍｌの注射器に加え、一晩静置し、ゲルを形成させた。
１３．  注射器内の総含有量が５０ｍｌとなるように、０．５Ｍの酢酸を注射器に加えた。
１４．  形成されたコラーゲンゲルが均質状態になるまで優しく撹拌した。
１５．  注射器を垂直に静置し、気泡をコラーゲンゲルの表面から分離させた。
１６．  ２０ｍｌのコラーゲンゲルを６×６ｃｍ２の大きさのプラスチック製の鋳型に加えて、コラーゲンゲルの表面が平坦になるのを待った。
１７．  コラーゲン／ヒアルロン酸足場本体をコラーゲンゲルの表面上に配置し、層流で２４時間室温において空気乾燥させた。
【００７０】
Ｂ．  動物実験
（ａ）  材料と方法
１．  電子設備：  体重計、電気カミソリ、電気凝固装置（６０Ｗ）
２．  麻酔薬：  Ｚｏｌｅｔｉｌ ５０： ０．０２５ｍｌ／１００ｇ体重（Ｂ．Ｗ．）＋ キシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ）： ０．０２５ｍｌ／１００ｇ体重（ＳＤ Ｒａｔ）
３．  溶液：  エタノール、生理食塩水、ヨードチンキ、ホルマリン固定液
４．  一般材料：  ペーパータオル、５０ｍｌ遠心分離管、プラスチック点滴器、ガーゼ、ゴミ袋、１ｍｌ注射器
５．  縫合糸：  ３−０黒絹縫合糸
手術器具：  手術用ハサミ、シングルフック包交鉗子、持針器、止血鉗子、メス
【００７１】
（ｂ）  実験動物
１．  ラット
動物種（ｓｔｒａｉｎ）：  スプラーグドーリー（ＳＤ）ラット
性別：  メス
年齢：  １２〜１４週
体重：  ２１０〜２６０ｇ
【００７２】
（ｃ）  実験方法と結果
１．  方法
１．１  ラットは３つのグループに分けられ、第１のグループは対照グループであり、第２のグループは商品、Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（登録商標）で処理され、第３のグループは本発明の二層複合材料（上述の実施例１によって形成された二層複合材料）で処理された。
【００７３】
または、ラットは４つのグループに分けられ、第１のグループは対照グループであり、第２のグループは市販品、Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（登録商標）で処理され、第３のグループと第４のグループの両グループは本発明の二層複合材料（上述の実施例１によって形成された二層複合材料）で処理された。
【００７４】
または、ラットは６つのグループに分けられ、第１のグループ、第２のグループ、および第３のグループは対照グループであり、第４のグループ、第５のグループ、および第６のグループは全て、本発明の二層複合材料（上述の実施例２によって形成された二層複合材料）で処理された。
【００７５】
１．２  麻酔薬
Ｚｏｌｅｔｉｌ ５０： ０．０２５ｍｌ／１００ｇ体重（Ｂ．Ｗ．）＋ キシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ）： ０．０２５ｍｌ／１００ｇ体重；  腹腔（Ｉ．Ｐ）注射
【００７６】
１．３  剃毛およびエタノール噴霧
電気カミソリによって腹毛が剃毛され、次いで感染を防ぐために、そこにエタノールが噴霧され、局部消毒を行った。
【００７７】
１．４  開腹
ラットの腹部が肛門近傍の第２の対の乳頭から上向きに切開され、３〜４ｃｍの創傷が作製された。
【００７８】
１．５  創傷を作製する
１．５．１  右腹膜壁のボタン縫合（ｓｔｉｔｃｈ  ｂｕｔｔｏｎ）
ボタン縫合は、第２の対の乳頭に対応する位置から右腹膜壁に縫合され、全部で４つのボタンを形成した。ボタンは、０．５ｃｍの間隔を空けられた。各ボタンはそこにで３つの結び目を有した。
【００７９】
１．５．２  左子宮角の切開および縫合
子宮の上方１ｃｍの位置近傍の子宮角に１ｃｍの創傷が切開され、３針縫合された。
【００８０】
１．５．３  左腹膜壁の創傷
直径約２ｃｍと深さ約０．５〜１ｍｍの創傷が左腹膜壁に形成された。
【００８１】
１．６  癒着防止薄膜の使用
創傷から余剰液が除去された後、２ｃｍ×２ｃｍの大きさの癒着防止薄膜（Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（登録商標）または本発明の二層複合材料）が乾燥鉗子によって提供され、創傷を被覆した（対照グループには被覆しなかった）。癒着防止薄膜は、創傷を完全に被覆して完全な保護を提供しなければならなかった。
【００８２】
１．７  創傷縫合
縫合は、３−０黒絹縫合糸によって行われた。筋肉層は、連続縫合によって縫合され、表皮層は、不連続な縫合によって縫合された。最後に、ヨードチンキが表皮層の創傷に塗布され、ラットが回復するのを待った。
【００８３】
１．８  癒着防止薄膜の有効性の評価
手術後１４日目、術後癒着は、二重チェックでオペレータによって評価され、Ｌｉｎｓｋｙ 評価（ｓｃｏｒｉｎｇ）システム（Ｊ. Ｒｅｐｒｏｄ. Ｍｅｄ., ３２, １７−２０, １９８７ と Ｈｕｍａｎ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｖｏｌ. １８, Ｎｏ.８ ｐｐ.１７０３‐１７０６, ２００３を参照に、引用によって本願に援用される）に応じて、癒着評価表が製作された。また、組織修復の病理学的評価のために組織標本が収集された。
【００８４】
Ｌｉｎｓｋｙ評価システムの評価基準が以下に説明される。
（１）癒着範囲
０＝癒着がない
１＝損傷領域の２０％が癒着
２＝損傷領域の５０％が癒着
３＝全域が癒着
（２）癒着の重症度
０＝分離に対して抵抗性がない
０．５＝分離に対していくらかの抵抗性がある（適度な力が必要とされる）
１＝鋭的な剥離が必要とされる
【００８５】
１．９  注意事項
１．９．１  各ラットの処理の時間は同じでなければならない（２５〜３０分／ラット）。
１．９．２  全ての手術は、同一人物によって行われ、整合性を確保する必要がある。
【００８６】
２．実験結果
（１）実施例１での材料の動物実験
３つの独立した実験が行われた。
【００８７】
（i）第１の実験
第１の実験で創傷を作製する位置と方式は、右腹膜壁のボタン縫合、右子宮角の電気凝固と、左子宮角の切開および縫合を含んだ。手術後、ラットは、２８日間観察され、術後の１４日目に、創傷癒着評価が各グループのラットに行われた。１−１と番号付けされたラットは、術後、死亡した。各グループの創傷癒着の評価結果は、表１に示される。表１に見られるように、市販品に比べ、本発明の二層複合材料は、よりよい抗癒着効果を有する。
【００８８】
（表１）第１の実験の癒着評価
2015164526.tif 000003
2015164526.tif 000004
Ｅ：  癒着範囲
Ｓ：  癒着の重症度
【００８９】
（ii）第２の実験
第２の実験で創傷を作製する位置と方式は、右腹膜壁のボタン縫合、左腹膜壁の電気凝固と、左子宮角の切開および縫合を含んだ。手術後、ラットは、１４日間観察され、術後の１４日目に、創傷癒着評価が各グループのラットに行われた。３−１と番号付けされたラットは、術後、死亡した。各グループの創傷癒着の評価結果は、表２に示される。表２に見られるように、市販品に比べ、本発明の二層複合材料は、よりよい抗癒着の効果を有する。
【００９０】
（表２）第２の実験の癒着評価
2015164526.tif 000005
2015164526.tif 000006
Ｅ：  癒着範囲
Ｓ：  癒着の重症度
【００９１】
（iii）第３の実験
第３の実験で創傷を作製する位置と方式は、右腹膜壁のボタン縫合、左腹膜壁の電気凝固と、左子宮角の切開および縫合を含んだ。手術後、ラットは、１４日間観察され、術後の１４日目に、創傷癒着評価が各グループのラットに行われた。各グループの創傷癒着の評価結果は、表３に示される。表３に見られるように、市販品に比べ、本発明の二層複合材料は、よりよい抗癒着効果を有する。
【００９２】
（表３）第３の実験の癒着評価
2015164526.tif 000007
2015164526.tif 000008
Ｅ：  癒着範囲
Ｓ：  癒着の重症度
【００９３】
（２）実施例２の材料の動物実験
創傷を作製する位置と方式は、左腹膜壁の電気凝固と左子宮角の切開および縫合を含んだ。手術後、ラットは、１４日間観察され、術後の１４日目に、創傷癒着評価が各グループのラットに行われた。各グループの創傷癒着の評価結果は、表４に示される。表４に見られるように、本発明の二層複合材料は、よりよい抗癒着効果を有することがわかる。
【００９４】
（表４）癒着評価
2015164526.tif 000009
Ｅ：  癒着範囲
Ｓ：  癒着の重症度
【００９５】
本発明の実施形態において種々の修正及び変更を行い得ることが、当業者には明らかである。明細書および実施例は、例示的なものであるに過ぎず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びその均等物によって示されることが意図される。
【符号の説明】
【００９６】
１００  本発明の二層複合材料
１０１  多孔質足場材料層
１０３  バリア膜層
２００  本発明の二層複合材料
３００  本発明の楕円状の二層複合材料
３０１  中空部
３０３  開口
４００  本発明の楕円状の二層複合材料
４０１  中空部
４０３  開口
５００  本発明の管状の二層複合材料
５０１  チャネル
５０３  開口
５０５  開口
６００  本発明の管状の二層複合材料
６０１  チャネル
６０３  開口
６０５  開口
７００  本発明の漏斗状の二層複合材料
７０１  チャネル
７０３  開口
７０５  開口
８００  本発明の漏斗状の二層複合材料
８０１  漏斗状の中空部
８０３  開口
８０５  開口
【図１】
2015164526.tif 000010
【図２】
2015164526.tif 000011
【図３】
2015164526.tif 000012
【図４】
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【図５】
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【図６】
2015164526.tif 000015
【図７】
2015164526.tif 000016
【図８】
2015164526.tif 000017
【外国語明細書】
2015164526000001.pdf