(57)【要約】【課題】新たな軽度認知機能障害（ＭＣＩ）或いはアルツハイマー病を含む種々の認知症の予防剤及び治療剤を提供すること。【解決手段】長い臨床試験の結果からヒトでの安全性が確立している、ヒト型結核菌の熱水抽出物を用いる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含む認知症の予防剤及び治療剤。
【請求項２】
ヒト型結核菌が青山Ｂ株である、請求項１記載の予防剤及び治療剤。
【請求項３】
認知症がアルツハイマー病である、請求項１または２記載の予防剤及び治療剤。
【請求項４】
ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含む軽度認知機能障害の予防剤及び治療剤。
【請求項５】
ヒト型結核菌が青山Ｂ株である、請求項４記載の予防剤及び治療剤。
【請求項６】
認知症の予防及び治療に使用する、ヒト型結核菌の熱水抽出物。
【請求項７】
ヒト型結核菌が青山Ｂ株である、請求項６記載のヒト型結核菌の熱水抽出物。
【請求項８】
認知症がアルツハイマー病である、請求項６または７記載のヒト型結核菌の熱水抽出物。
【請求項９】
軽度認知機能障害の予防及び治療に使用する、ヒト型結核菌の熱水抽出物。
【請求項１０】
ヒト型結核菌が青山Ｂ株である、請求項９記載のヒト型結核菌の熱水抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含むアルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）を始めとする種々の認知症の予防剤及び治療剤に関する。また、本発明は、ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含む、認知症の全段階にあたる軽度認知機能障害の予防剤及び治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
認知症（dementia）とは、脳血管疾患、アルツハイマー病その他の要因に基づく脳の器質的な変化により、日常生活に支障が生じる程度にまで記憶機能及びその他の認知機能が低下した状態をいう。認知症は、高齢期では誰にでも起こる可能性があると言われている。
【０００３】
認知症の原因となる主な疾患には、脳血管障害、アルツハイマー病などの変性疾患、正常圧水頭症、ビタミンなどの代謝・栄養障害、甲状腺機能低下などがあり、これらの原因により生活に支障をきたすような認知機能障害が表出してきた場合に認知症と診断される。認知症の原因疾患は大きく分けると変性疾患と脳血管性認知症、その他の疾患に区分することができる。
【０００４】
変性疾患としては、脳の神経細胞がゆっくり死んでいく疾患で、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症、レビー小体病、ハンチントン病などが挙げられる。
脳血管性認知症は、神経の細胞に栄養や酸素が行き渡らなくなり、その結果、その部分の神経細胞が死んだり、神経のネットワークが壊れてしまうことを原因とするもので、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、脳動脈硬化によるものなどが挙げられる。
【０００５】
上記認知症の中でも最も多いのが「アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）」である。
【０００６】
いま全世界のアルツハイマー病患者は２４３０万人いるといわれている。そして毎年４６０万人の新しい患者が発症している。そしてアルツハイマー病 (Alzheimer’s disease)の予備軍である軽度認知機能障害 (Mild Cognitive Impairment, ＭＣＩ）の患者を含めると約３倍の６０００万人ともいわれている（Lancet, 2005 Dec 17;366(9503):2112-7）。アルツハイマー病の特徴は進行性であること、それと発症してしばらく進むと人格が崩壊してしまうことである。アルツハイマー病は２１世紀に人類が取り組むべき「最大の悪性疾患」であることは間違いない。
【０００７】
認知症は大きく分けて脳血管性認知症とアルツハイマー病に分けて考える。さらに認知症には中核症状といわれる記憶、思考、見当識、学習や計算などが障害される場合と周辺症状といわれる不安、不眠、抑うつ、徘徊や譫妄などがあり両方の症状を呈するのが認知症である。脳血管性認知症は何らかの脳血管障害を起こした患者が対象になる。脳出血や脳梗塞を発症した結果、脳内の発症した部位の細胞が脱落することによって認知機能の低下が現れる。脳血管障害の発症のリスクを抑えること、また発症した後は失われた機能の回復が主にやるべき治療である。
【０００８】
アルツハイマー病の場合は少し事情が異なる。アルツハイマー病は大脳皮質や海馬の神経細胞が進行性に変性した結果に発症する。その発症の原因については現在、仮説の段階ではあるが老人斑と呼ばれるアミロイドβタンパクの凝集塊と神経原線維変化とよばれるタウタンパクが異常にリン酸化されてできたタンパクの凝集塊が原因物質と目されている。
【０００９】
しかし、いま世界でアルツハイマー病治療薬として承認・使用されているものは、上記の原因物質を除くものではない。それでは現在、治療に使われている薬剤にはどんなものがあるのか概観してみたい。
【００１０】
世界が承認したアルツハマイー病治療薬はコリン仮説に基づくものでタクリン、ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミンの４品とＮＭＤA受容体拮抗作用にもとづくメマンチンの５品のみである。実際にはタクリンは安全性などの理由で使われていないことから４品が臨床で使われていることになる。しかしこれらの薬剤はいずれも対症療法にすぎずアルツハイマー病の進行を止めることはできない。
【００１１】
アルツハイマー病の根本治療薬として期待されたものに先に述べたアミロイドβタンパク産生阻害剤としてタレンフルビルやセマガスタットなどが大規模な臨床治験を展開したが失敗した。またアミロイドβタンパクの凝集抑制剤としてトラミプロセートが臨床治験に供されたが失敗した。さらに最も期待されたアミロイドβのワクチンは脳炎を引き起こす副作用のためにこれも失敗した。
【００１２】
次ぎにもう一つの原因物質と考えられているタウタンンパクの凝集を抑える薬剤として色素の一種であるメチレンブルーが臨床治験の第２相まで行っているか最終的な結果がでるまではまだ数年はかかると言われている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】再公表特許 WO 99/045917（発明の名称：AIDS治療剤）
【特許文献２】再公表特許 WO 00/053203（発明の名称：抗HIV治療剤）
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Fujita K, Hirai T, Maruyama C, Ogawa H, Iki Y, A case of metastatic lung cancer healed clinically with an extract from human tubercle bacilli (Maruyama vaccine：SSM), Cancer Detection and Prevention；4：337-346，1981
【非特許文献２】平井敏之、藤田敬四郎、飯田和美、後藤博一、仲地紀良、新井愛彦、岩城弘子、丸山千里、進行期癌の結核菌体抽出物質長期使用の現況とその意義、日本医事新報；3007：43-46，1981
【非特許文献３】Kimoto T, Role of polysaccharides extracted from human-type Mycobacterium tuberculosis in the collagen proliferation and the suppression of cancer growth：From a point of pathobiological view, Kawasaki Med J；13：151-16，1987
【非特許文献４】Kimoto T, Watanabe S, Hyodoh F, Saito T, Collagen fiber formation and proliferation as a mechanism of cancer prevention and regression induced by extract from Mycobacterium tuberculosis ： correlation between clinical observation and animal experiments, Cancer Detection and Prevention；11：173-189，1988
【非特許文献５】Iida K，Fujita K，Hirai T，Goto H，Miyazaki S，Arai Y，Iwaki H，Otake M，Sassa S，Maemura M，Nakayama T，Kudo H，Sakamoto M, Preventive effects of polysaccharides extracted from human tubercle bacilli (Specific Substance of Maruyama) on colonic carcinogenesis, Cancer Detection and Prevention；21：476-482，1997
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明者らは、新たなアルツハイマー病治療薬及び予防薬を始めとする種々の認知症の治療薬及び予防薬を開発すべく研究、検討を重ねてきた。その過程で本発明者らは、複数の高齢者たちが癌の治療及び予防のためにヒト型結核菌の熱水抽出物を接種していたところ、わずか１か月で癌とはまったく関係なく当該高齢者たちの認知機能が極めて良くなったことに気がついた。まったく副作用がなく認知機能を改善することに我々は瞳目した。
【００１６】
ヒト型結核菌の熱水抽出物は、１９５７年に日本医科大学皮膚科学研究室の丸山千里博士によってヒト型結核菌青山Ｂ株から生産された物質である。この物質はヒト型結核菌より抽出された物質で、アラビノース、マンノース及びグルコースを主成分とする多糖類と核酸を含む混合物である。
【００１７】
当該物質は造血機能亢進作用並びに白血球減少回復促進作用が見出され、１９９１年より放射線療法による白血球減少抑制剤として販売されている。また、当該物質はがん治療の現場で「丸山ワクチン」（ＳＳＭ：Specific Substance of Maruyama）という名称で、有償治験薬として過去４５年以上にわたって約３９万人の患者さんに投与され、多くの効果をあげている。ヒト型結核菌の熱水抽出物が種々のがん治療に有効であることがこれまでに報告されている（例えば、非特許文献１〜非特許文献６を参照）。しかし、ヒト型結核菌の熱水抽出物がアルツハイマー病等の認知症に有効であるという報告はこれまでになされていない。
【００１８】
ヒト型結核菌の熱水抽出物に関するヒトでの安全性については、問題がないことは過去に長い臨床試験の結果から明白である。そこで本発明者は、ヒト型結核菌の熱水抽出物をアルツハイマー病のモデル動物を用いて治療効果を観察し、極めて顕著な認知機能の改善が確認でき本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含む、アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）を始めとする種々の認知症の予防剤及び治療剤を提供する。
また、本発明は、ヒト型結核菌の熱水抽出物を有効成分として含む軽度認知機能障害の予防と治療剤を提供する。
【発明の効果】
【００２０】
アルツハイマー病のモデルマウスで認知機能の改善効果を調べてみたところ、極めて顕著な効果が確認された。０．２μgという極めて低用量でわずか４週間の投与実験でその効果を確認した。
【００２１】
ヒト型結核菌の熱水抽出物は、長い臨床試験の結果からヒトでの安全性が確立しており、軽度認知機能障害及びアルツハイマー病の予防剤及び治療剤の双方としての早期の実用化が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】アルツハイマー病モデルマウスであるTg2576マウスとWild type mouse（野生型マウス）とを用いて行ったY-mazeテスト（４週間にわたる丸山ワクチンの投与）の結果を示すグラフである。
【図２】Tg2576マウスとWild type mouseを用いて、４週間にわたるY-mazeテストを行った後に再びY-mazeテスト行った後の結果を示すグラフである。
【図３】再びY-mazeテスト行った後のControl群、Vehicle群、Drug群における体重減少の変化を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において使用するヒト型結核菌の熱水抽出物とは、ヒト型結核菌の熱水性媒体による抽出物を精製することによって得られた物を意味する。具体的には、ヒト結核菌の菌体に熱水性媒体抽出を施し、次いで得られた抽出液を除蛋白処理及び１０５以上の分子量を有する多糖体除去処理をすることによって得ることができる。使用するヒト型結核菌としては、青山Ｂ株、Ｈ３７Ｒｖ株、Ｈ３７Ｒａ株等が挙げられるが、特に限定されない。青山Ｂ株が特に好ましい。
【００２４】
熱水抽出は、６０〜１２０℃の熱水性媒体を用いて行うのが好ましい。水性媒体としては、水、食塩水、水酸化ナトリウム水溶液等が挙げられるが、水が特に好ましい。また、除蛋白処理は、アルコール、アセトン、硫酸アンモニウム、トリクロロ酢酸、スルホサリチル酸、リンタングステン酸等の蛋白沈殿剤を用いて蛋白を沈殿させ、その上澄みを分取することにより行うのが好ましい。また、分子量１０５以上の多糖体除去処理は、適当量のエタノール、メタノール、アセトン等を用いて分子量１０５以上の多糖体を沈殿させ、その上澄みを分取することにより行うのが好ましい。
【００２５】
本発明において使用するヒト型結核菌の熱水抽出物を含む薬剤の剤形は、特に限定されないが、注射剤が好ましく、当該注射剤を皮下注射により投与するのが特に好ましい。また、本発明において使用するヒト型結核菌の熱水抽出物を含む薬剤の投与量は、０．０５μｇ〜１００μｇ／日が好ましく、０．２μｇ〜５０μｇ／日が特に好ましい。
【００２６】
本発明において使用するヒト型結核菌の熱水抽出物は、通常薬学的に許容される担体を添加して製剤化される。製剤化に際して用いることのできる担体としては、賦形剤、希釈剤、湿潤剤、懸濁剤、乳化剤、分散剤、等張化剤、補助剤、甘味剤、着色剤、風味剤、緩衝剤、防腐剤、保存剤、緩衝剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、安定化剤等が例示され、目的とする剤形に応じて周知慣用の担体から必要なものを選択することができる。なお、賦形剤または補助剤としては、例えば、乳糖、種々のデンプン（例えば、トウモロコシデンプン）、キチン、キトサン、ブドウ糖、スクロース、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸塩、タルク、植物油（例えば、大豆油、ラッカセイ油。オリーブ油）、レシチン等が挙げられる。
【実施例】
【００２７】
以下に、実施例により本発明を更に詳しく説明する。但し、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
［製造例］ヒト型結核菌の熱水抽出物の製造
ヒト型結核菌の熱水抽出物を再公表特許 WO 99/045917に記載された下記の方法により製造した。
【００２８】
凍結乾燥保存（−２０℃）されたヒト型結核菌青山Ｂ株（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｓｔｒａｉｎ  Ａｏｙａｍａ  Ｂ）を、ソートン馬鈴薯培地中（１）、３７±１℃にて種培養した。この種培養菌を製造用培地（２）に移植し、３７±１℃で５〜７週間培養（本培養）して得られた菌体を、注射用水で洗浄後、その湿菌体重量の２０倍量の注射用水を加えて、１００℃、１２０分間加熱して抽出液を得た。この抽出液を０．４５μｍのメンブレンフィルターで濾過後、糖含量（フェノール−硫酸法によるＤ−アラビノース換算）が４．０〜６．０ｍｇ／ｍｌとなるように減圧濃縮し、濃縮液を得た。次いで、除蛋白を目的として、この濃縮液に１ｗ／ｖ％のスルホサリチル酸を加え、１０℃以下で１５〜２０分間放置後、析出物を遠心除法（１０℃以下、１１５０×Ｇ、１０分間）し、上澄み液を回収した。本上澄み液の蛋白質濃度は、０．３０ｍｇ／ｍｌ（Ｌｏｗｒｙ法、チロシン換算）以下であった。さらに、上澄み液を検出限界以下（１０ｐｐｍ以下、塩化第二鉄液法）となるまでスルホサリチル酸を除去した。この溶液を、糖含量が１．８〜２．２ｍｇ／ｍｌとなるように減圧濃縮し、これに塩化ナトリウム（０．９ｗ／ｖ％）及び濃縮液と等容量の冷エタノールを加え、１０℃以下、４０時間以上放置後、析出物（高分子領域の多糖類）を遠心除去（１０℃以下、２０４０×Ｇ、１０分間）により沈殿物を回収した。この沈殿物を注射用水に溶解し、糖含量を１．８〜２．２ｍｇ／ｍｌに調整後、０．４５μｍメンブランフィルターでの濾過、及び高圧蒸気滅菌（１２１℃、２０分間）を施して、液体組成物（ａ）を得た。
（注）
（１）ソートン馬鈴薯培地
ソートン培地に洗浄馬鈴薯片を浸漬させ、１１５℃、１５分間滅菌した後に、ソートン馬鈴薯培地として用いる、
ソートン培地
Ｌ−アスパラギン酸（１水和物）        ４．０ｇ
クエン酸（１水和物）                  ２．０ｇ
硫酸マグネシウム（７水和物）          ０．５ｇ
リン酸−水素カリウム（無水）          ０．５ｇ
クエン酸鉄アンモニウム                ０．０５ｇ
グリセリン                          ６０ｍｌ
以上を水に溶解し、１０００ｍｌとする。ｐＨは、水酸化ナトリウム溶液で、７．０〜７．３に調整する。
（２）製造用培地
Ｌ−アスパラギン酸（１水和物）        ４．０ｇ
クエン酸（１水和物）                  ２．０ｇ
硫酸マグネシウム（７水和物）          ０．５ｇ
リン酸−水素カリウム（無水）          ０．５ｇ
クエン酸鉄アンモニウム                ０．０５ｇ
グリセリン                          ６０ｍｌ
以上を水に溶解し、１０００ｍｌとし、高圧蒸気殺菌（１２１℃、２０分間）する。ｐＨは、水酸化ナトリウム溶液で、７．０〜７．３に調整する。
【００２９】
得られた液体組成物の物理化学的性質は以下の通りであった。
（１）外観
微黄色澄明液体
（２）ｐＨ
４．５０〜５．３０
（３）蛋白含量
凍結乾燥品中、３．５ｗｔ％（アミノ酸として）
（４）核酸含量
凍結乾燥品中、０．１ｗｔ％
（５）多糖体の主な構成単糖
マンノース（４３．４ｗｔ％）、アラビノース（１８．２ｗｔ％）、グルコース（１０．４ｗｔ％）。（２Ｎ  トリフルオロ酢酸で１００℃、２時間加水分解後、２−シアノアセトアミド蛍光誘導体による液体クロマトグラフ法による（Ｓ．Ｈｏｎｄａ，ｅｔ  ａｌ，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，５２，１０７９（１９８０））
［試験例］
Y-maze行動試験測定方法
Y字型の装置（マウス用Y字迷路MY-10, バイオリサーチセンター）の手前側のアームをA, 左奥をB, 右奥をCと定義した。Aにマウスを置き自由に8分間移動させ、マウスのアームへの進入回数を記録した。その際、マウスの後ろ足がアームにはいった状態を進入したと定義し、前足のみ入った状態は進入していないとした。
【００３０】
Y-maze行動試験により、マウスの自発的行動量と空間作業記憶を評価した。
自発的行動量はアームへの総進入回数から算出した。（最初のポジションAは除く）空間作業記憶は3回連続して異なるアームへ進入した回数を、アームへの総進入回数から１を引いた値で割った後１００をかけることで算出した。なお、算出した空間作業記憶はエクセルでグラフ化し、群分けはt-test, 連投後はOne-way ANOVAにて検定を行った。
Y-mazeテストの実施
：アルツハイマー病モデルマウスであるTg2576マウスを使用しY-mazeテストを実施した。Tg2576マウスは記憶障害が始まると言われている10ヵ月齢の中齢マウスを使用した。同月齢のTg2576 mouse(Tg2576マウス、以下Tg)を18匹、Wild type mouse（野生型マウス、以下WT）を１０匹、投与直前にY-mazeテストにより群分けした。群分けにより１０ヵ月齢のWTとTg間において短期空間作業記憶に有意な差があることが確認できた（図１）。図１における統計的な意味は下記の通りである。
検定方法：独立ｔ検定
Ｐ値（両側Ｐ値）について
Ｐ値について
Ｐ＜０．０００１
平均値はＰ＜０．０５で有意差あり。
ｔ値、ｄｆ値：ｔ＝６．１６７  ｄｆ＝２７
群分け後、土日を除く4週間にわたって上記製造例によって得られた液体組成物（ａ）の連投を開始した。
【００３１】
各群の投与溶液は以下のとおりでそれぞれ用時調整とした。
Control(WT)：Saline=n10, Vehicle(Tg)：Saline=n9, Drug(Tg)：液体組成物（ａ）（0.2 μg）in Saline=n9とした。
【００３２】
4週間にわたる投与経路は皮下投与とし、1週間ごとに体重測定を実施した。
4週間連投後、再びY-mazeテストにより各群の空間作業記憶を測定した。その結果Vehicle群で短期空間作業記憶が低下しているのに対してDrug群では有意に回復した（図２）。また、投与1週間目は連投によるストレスと思われる体重減少がControl群とVehicle群に見られたが、Drug群に関しては投与4週間までほぼ横ばいの傾向となった（図３）。
【００３３】
図２における統計的な意味は下記の通りである。
図２は、一元配置分散分析の結果を表すグラフである。
Ｐ値＝０．０１７８
平均値はＰ＜０．０５で有意差あり。
群の数：３
Ｆ値：４７２４
Ｒ二乗値：０．２６６５
図３中、各英語の用語は下記の意味を有する。
Body weight (g)：体重（ｇ）
Day 0, Day 7, Day 14, Day21, Day：０日後（試験開始時）、７日後、１４日後、２１日後、経過日数
CTL：Control群（対照群）
Vehicle：Vehicle群（賦形剤投与群）
Drug：Drug群（薬剤投与群）
上記Y-mazeテストの結果から明らかなように、短期空間作業記憶が低下しているTg2576マウスに液体組成物（ａ）（ヒト型結核菌の熱水抽出物）を連投することにより記憶障害が有意に改善した。
【００３４】
なお、上記ヒト型結核菌の熱水抽出物の製造例は飽くまでも一例であって、同様の製造方法によって得られたヒト型結核菌の熱水抽出物であれば本発明の治療剤及び予防剤として使用することができる。丸山ワクチン（ＳＳＭ−Ａ（濃度２μｇ／ｍｌ）とＳＳＭ−Ｂ（濃度０．２μｇ／ｍｌ）の２種類がある）を用いても同じ効果が得られることを確認した。
【００３５】
なお、図１〜図３の各々における英語の用語は下記の意味を有する。
（図１における各英語の用語について）
Unpaired t test：独立ｔ検定
P value  Ｐ＜0.0001：Ｐ値  Ｐ＜０．０００１
P value summary：Ｐ値要約
Are means signif. Different? (P<0.05)Yes：平均値は有意差ありか？Ｐ＜０．０５で有意差あり。
One- or two-tailed P value?  Two-tailed：片側Ｐ値かそれとも両側Ｐ値か？両側Ｐ値である。
t, df  t=6.167 df=27：ｔ値、ｄｆ値  ｔ＝６．１６７  ｄｆ＝２７
（図２における各英語の用語について）
One-way analysis：一元配置分散分析
P value  0.0178：Ｐ値  ０．０１７８
P value summary：Ｐ値要約
Are means signif. Different? (P<0.05)Yes：平均値は有意差ありか？Ｐ＜０．０５で有意差あり。
Number of groups 3：群の数  ３
F 4724：Ｆ値  ４７２４
R squared 0.2665：Ｒ二乗値  ０．２６６５
（図３における各英語の用語について）
Body weight (g)：体重（ｇ）
Day 0, Day 7, Day 14, Day21, Day：０日後（試験開始時）、７日後、１４日後、２１日後、経過日数
CTL：Control群（対照群）
Vehicle：Vehicle群（賦形剤投与群）
Drug：Drug群（薬剤投与群）
【産業上の利用可能性】
【００３６】
ヒト型結核菌の熱水抽出物は安全性がヒトにおいて保障されており、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）をもつヒトにおいて顕著な認知機能改善効果を示すことに驚きを禁じ得ない。さらにアツハイマー病のモデル動物を用いた認知機能改善効果も確認できた。これらの結果から、ヒト型結核菌の熱水抽出物は軽度認知機能障害の治療薬及び予防薬は固より、アルツハイマー病を含む種々の認知症の治療薬及び予防薬になる可能性が極めて大きいことを示すものである。
【００３７】
本発明は、２１世紀においてもっとも克服すべき疾患の筆頭と考えられている軽度認知機能障害とアルツハイマー病を含む種々の認知症の治療および予防に最もすぐれた薬剤を提供するものであり、医薬産業上極めて有用な発明である。
【図１】
2015157763.tif 000002
【図２】
2015157763.tif 000003
【図３】
2015157763.tif 000004