(57)【要約】      （修正有）【課題】異種遺伝子を送達するための組換えアデノウイルスの提供。【解決手段】アデノウイルスキャプシドを有する組換えアデノウイルスベクターであって、前記キャプシドがヘキソンタンパク質、ペントンタンパク質およびファイバータンパク質を含み、前記ヘキソンタンパク質がＳＡｄＶ−４３のヘキソンタンパク質、前記キャプシドが宿主細胞中の転写、翻訳および／若しくは発現を制御する発現制御配列に作動可能に連結されている遺伝子を保有する異種分子ならびに複製および包皮化に必要な５’および３’アデノウイルスシスエレメントを被包化する、組換えアデノウイルスベクター。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノウイルスキャプシドを有する組換えアデノウイルスベクターであって、前記キャプシドがヘキソンタンパク質、ペントンタンパク質およびファイバータンパク質を含み、前記ヘキソンタンパク質がＳＡｄＶ−４３のヘキソンタンパク質、配列番号１１のアミノ酸１ないし９５９であり、前記キャプシドが宿主細胞中の転写、翻訳および／若しくは発現を制御する発現制御配列に作動可能に連結されている遺伝子を保有する異種分子ならびに複製および包皮化に必要な５’および３’アデノウイルスシスエレメントを被包化する、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項２】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記ペントンタンパク質が、配列番号７４のアミノ酸１ないし５６３のＳＡｄＶ−４６ペントンタンパク質、配列番号６のアミノ酸１ないし６５１のＳＡｄＶ−４３ペントンタンパク質、配列番号４３のアミノ酸１ないし６６４のＳＡｄＶ−４５ペントンタンパク質、配列番号１０４のアミノ酸１ないし５８０のＳＡｄＶ−４７ペントンタンパク質、配列番号１３４のアミノ酸１ないし５０４のＳＡｄＶ−４８ペントンタンパク質、配列番号１６２のアミノ酸１ないし５１１のＳＡｄＶ−４９ペントンタンパク質、配列番号１８８のアミノ酸１ないし５１１のＳＡｄＶ−５０ペントンタンパク質の１種以上よりなる群から選択される、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項３】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記ファイバータンパク質が、配列番号８９のアミノ酸１ないし３５３のＳＡｄＶ−４６ファイバータンパク質、配列番号２２のアミノ酸１ないし５９９のＳＡｄＶ−４３ファイバータンパク質、配列番号５９のアミノ酸１ないし６０１のＳＡｄＶ−４５ファイバータンパク質、配列番号１１９のアミノ酸１ないし３２２のＳＡｄＶ−４７ファイバータンパク質、配列番号１４７のアミノ酸１ないし５７０のＳＡｄＶ−４８ファイバータンパク質、配列番号１７４のアミノ酸１ないし５２１のＳＡｄＶ−４９ファイバータンパク質、配列番号１７５のアミノ酸１ないし４１８のＳＡｄＶ−４９ファイバータンパク質、配列番号２００のアミノ酸１ないし５２１のＳＡｄＶ−５０ファイバータンパク質、配列番号２０１のアミノ酸１ないし４１８のＳＡｄＶ−５０ファイバータンパク質の１種以上よりなる群から選択される、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項４】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記アデノウイルスが複製欠損である、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項５】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記アデノウイルスがＥ１遺伝子の全部若しくは一部を欠く、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項６】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記アデノウイルスキャプシドがＳＡｄＶ−４３からのファイバーおよびペントンキャプシドタンパク質を含むＳＡｄＶ−４６キャプシドである、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項７】
請求項１に記載の組換えアデノウイルスベクターであって、前記ウイルスがＳＡｄＶ−４６、ＳＡｄＶ−４５、ＳＡｄＶ−４７、ＳＡｄＶ−４８若しくはＳＡｄＶ−５０から選択される１種以上のキャプシドタンパク質を含むハイブリッドキャプシドを有する、組換えアデノウイルスベクター。
【請求項８】
アデノウイルスファイバー、ペントンおよびヘキソンタンパク質を含むキャプシドを有する組換えアデノウイルスであって、前記ヘキソンタンパク質がキメラであり、かつ、サルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）ヘキソンタンパク質のフラグメントおよびＳＡｄＶに対し
て異種の核酸配列を含み、前記ＳＡｄＶヘキソンタンパク質のフラグメントが長さ約５０アミノ酸のＮ末端若しくはＣ末端切断を伴う配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のＳＡｄＶヘキソンタンパク質であるか、または
配列番号１１のアミノ酸残基１２５ないし４４３；
配列番号１１のアミノ酸残基１３８ないし４４１；
配列番号１１のアミノ酸残基１３８ないし１６３；
配列番号１１のアミノ酸残基１７０ないし１７６；および
配列番号１１のアミノ酸残基４０４ないし４３０
よりなる群から選択され、
前記キャプシドが宿主細胞中の転写、翻訳および／若しくは発現を制御する発現制御配列に作動可能に連結されている遺伝子ならびにアデノウイルス５’逆方向末端反復およびアデノウイルス３’逆方向末端反復を含む複製および包皮化に必要な５’および３’アデノウイルスシスエレメントを保有する異種分子被包化する、組換えアデノウイルス。
【請求項９】
請求項８に記載の組換えアデノウイルスであって、キャプシドがＳＡｄＶ−４６、ＳＡｄＶ−４３、ＳＡｄＶ−４５、ＳＡｄＶ−４７、ＳＡｄＶ−４８、ＳＡｄＶ−４９若しくはＳＡｄＶ−５０ファイバーおよび／若しくはペントンタンパク質をさらに含む、組換えアデノウイルス。
【請求項１０】
請求項１ないし９のいずれかに記載の組換えアデノウイルスおよび製薬学的に許容されるキャリヤーを含んでなる組成物。
【請求項１１】
有効成分として請求項１ないし９のいずれかに記載のアデノウイルスベクターを含んでなる宿主細胞に遺伝子を送達するための製薬学的製剤。
【請求項１２】
配列番号１のサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）ヌクレオチド１ないし３７１８９およびその相補物からなる群より選択されるＳＡｄＶ核酸を含んでなるベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なアデノウイルスおよびその使用、具体的には、宿主細胞へ異種遺伝子を送達するための使用、に関する
【背景技術】
【０００２】
アデノウイルスは約３６キロ塩基（ｋｂ）のゲノムサイズをもつ二本鎖ＤＮＡウイルスであり、多様な標的組織での高度に効率的な遺伝子移入を達成するその能力および大きな導入遺伝子容量により遺伝子移入の応用に広範に使用されている。慣習的には、アデノウイルスのＥ１遺伝子が欠失され、そして選択すべきプロモーター、目的の遺伝子のｃＤＮＡ配列およびポリＡシグナルよりなる導入遺伝子カセットで置き換えられて、複製欠損組換えウイルスをもたらす。
【０００３】
アデノウイルスは、多数の他の少量のタンパク質ＶＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＩＩＩａおよびＩＶａ２と一緒に３種の主要なタンパク質ヘキソン（ＩＩ）、ペントンベース（ＩＩＩ）およびノブ（ｋｎｏｂｂｅｄ）ファイバー（ＩＶ）よりなる正二十面体キャプシドをもつ特徴的形態を有する（非特許文献１）。該ウイルスゲノムは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）を有する５’末端に末端タンパク質が共有結合されている直鎖状二本鎖ＤＮＡである。該ウイルスＤＮＡは高度に塩基性のタンパク質ＶＩＩおよび小ペプチドｐＸ（以前はμと称される）と緊密に会合している。別のタンパク質ＶはこのＤＮＡ−タンパク質複合体でパッケージングされ、そしてタンパク質ＶＩを介してキャプシドへの構造的結合を提供する。該ウイルスは、成熟感染性ウイルスを産生するための構造的タンパク質のいくつかのプロセシングに必要である、ウイルスにコードされるプロテアーゼもまた含有する。
【０００４】
ヒト、サル、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌおよびオポッサムのアデノウイルスを包含するマストアデノウイルスファミリーの分類スキームが作成されている。この分類スキームは赤血球を凝集させる該ファミリー中のアデノウイルス配列の異なる能力に基づいて作成された。該結果は、サブグループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦと現在称される６サブグループであった。非特許文献２を参照されたい。
【０００５】
宿主細胞への異種分子の送達のための組換えアデノウイルスが記述されている。２種のチンパンジーアデノウイルスのゲノムを記述する特許文献１を参照されたい。サルアデノウイルスＣ５、Ｃ６およびＣ７はワクチンベクターとして有用であるとして特許文献２に記述されている。他のチンパンジーアデノウイルスがアデノウイルスワクチン担体を作成するのに有用であるとして特許文献３に記述されている。
【０００６】
当該技術分野で必要とされるものは、集団における選択されたアデノウイルス血清型に対する既存の免疫の影響を回避する効果的なベクターである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第６，０８３，７１６号明細書
【特許文献２】米国特許第７，２４７，４７２号明細書
【特許文献３】第ＷＯ  ２００５／１０７１０９３号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｗ．Ｃ．Ｒｕｓｓｅｌｌ、Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．８１：２５７３−２６０４（Ｎｏｖ  ２０００）
【非特許文献２】Ｔ．Ｓｈｅｎｋら、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ”、第６７章、ＦＩＥＬＤ’Ｓ  ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第６版、Ｂ．Ｎ  Ｆｉｅｌｄｓらにより編中、（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、フィラデルフィア、１９９６）、ｐ．１１１−２１１２
【発明の概要】
【０００９】
サル（ゴリラ）アデノウイルス−４３（ＳＡｄＶ−４３）、−４５（ＳＡｄＶ−４５）、−４６（ＳＡｄＶ−４６）、−４７（ＳＡｄＶ−４７）、サル（カニクイザル）アデノウイルス−４８（ＳＡｄＶ−４８）、−４９（ＳＡｄＶ−４９）および−５０（ＳＡｄＶ−５０）の単離された核酸配列およびアミノ酸配列、ならびにこれらの配列を含有するベクターを本明細書に提供する。本明細書に記述されるＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０配列を含有するベクターおよび細胞の多数の使用方法もまた提供される。
【００１０】
本明細書に記述される方法は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターを投与することにより１種若しくはそれ以上の選択された異種遺伝子を哺乳動物患者に送達することを必要とする。ワクチン接種のための本明細書に記述される組成物の使用は、防御免疫応答の誘発のための選択された抗原の提示を可能にする。サルアデノウイルス４５に基づくベクターは異種遺伝子産物をｉｎ  ｖｉｔｒｏで製造するのにもまた使用しうる。こうした遺伝子産物は本明細書に記述されるような多様な目的上多様な状態でそれら自身有用である。
【００１１】
本発明のこれらおよび他の態様および利点を下により詳細に記述する。
【００１２】
ゴリラ糞便から単離されたサルアデノウイルス４３、４５、４６および４７から、ならびにカニクイザル糞便から単離されたサルアデノウイルス４８、４９および５０からの新規核酸およびアミノ酸配列が提供される。引用することにより本明細書に組み込まれる配列表に関して、数字識別子＜２２３＞の下のいかなる「フリーテキスト」も、配列表フリーテキストと見出しを付けられた請求の範囲に先行する節に提供される。
【００１３】
組換えタンパク質若しくはフラグメントまたは他の試薬のｉｎ  ｖｉｔｒｏ製造での使用のための新規アデノウイルスベクターおよびそれらのベクターを製造するためのパッケージング細胞株もまた提供される。治療若しくはワクチンの目的上の異種分子の送達における使用のための組成物がさらに提供される。こうした治療若しくはワクチン組成物は挿入された異種分子を保有するアデノウイルスベクターを含有する。加えて、該新規ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの製造に必要とされる不可欠のヘルパー機能の提供において有用である。従って、こうした製造法でこれらの配列を使用するヘルパー構築物、方法および細胞株が提供される。
【００１４】
核酸若しくはそのフラグメントを指す場合の「実質的相同性」若しくは「実質的類似性」という用語は、適切なヌクレオチドの挿入若しくは欠失を伴い別の核酸（若しくはその相補鎖）と最適に整列される場合に、整列された配列の最低約９５ないし９９％のヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。
【００１５】
複数のアミノ酸若しくはそれらのフラグメントを指す場合の「実質的相同性」若しくは「実質的類似性」という用語は、適切なアミノ酸の挿入若しくは欠失を伴い別のアミノ酸（若しくはその相補鎖）と最適に整列される場合に、整列された配列の最低約９５ないし
９９％のアミノ酸配列同一性が存在することを示す。好ましくは、相同性は、完全長配列若しくはそのタンパク質、または長さ最低８アミノ酸若しくはより望ましくは最低１５アミノ酸であるそのフラグメントにわたる。適するフラグメントの例を本明細書に記述する。
【００１６】
核酸配列の文脈の「配列同一性パーセント」若しくは「同一の」という用語は、最大の対応のため整列される場合に同一である該２配列中の残基を指す。１配列を別のものと整列するためにギャップが必要とされる場合、スコアリングの程度はギャップについてのペナルティを伴わずより長い配列に関して計算される。ポリヌクレオチド若しくはそれによりコードされるポリペプチドの機能性を保存する配列はより緊密に同一である。配列同一性比較の長さは、ゲノムの完全長（例えば約３６ｋｂｐ）、遺伝子のオープンリーディングフレーム、タンパク質、サブユニット若しくは酵素の完全長（例えば、アデノウイルスコーディング領域を提供する表を参照されたい）にわたることができるか、または、最低約５００ないし５０００ヌクレオチドのフラグメントが望ましい。しかしながら、例えば最低約９ヌクレオチド、通常は最低約２０ないし２４ヌクレオチド、最低約２８ないし３２ヌクレオチド、最低約３６若しくはそれ以上のヌクレオチドのより小さいフラグメントの間の同一性もまた望ましいことができる。同様に、「配列同一性パーセント」はタンパク質の完全長若しくはそのフラグメントにわたるアミノ酸配列について容易に決定しうる。適しては、フラグメントは長さ最低約８アミノ酸でありかつ約７００アミノ酸まででありうる。適するフラグメントの例を本明細書に記述する。
【００１７】
同一性は、本明細書で定義されるようなアルゴリズムおよびコンピュータプログラムをデフォルトの設定で使用して容易に決定される。好ましくは、こうした同一性は、タンパク質、酵素、サブユニットの完全長にわたるか、若しくは長さ最低約８アミノ酸のフラグメントにわたる。しかしながら、同一遺伝子産物が使用されている使用に適する場合、同一性はより短い領域に基づいてもよい。
【００１８】
本明細書に記述されるところのアライメントは、インターネットのウェブサーバーを通じてアクセス可能な「Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ」のような多様な公的に若しくは商業的に利用可能な多配列アライメントプログラムのいずれかを使用して実施する。あるいは、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）ユーティリティ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）もまた使用される。上述されたプログラムに含有されるものを包含する、ヌクレオチド配列同一性を評価するのに使用し得る当該技術分野で既知の多数のアルゴリズムもまた存在する。別の例として、ポリヌクレオチド配列はＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１中のプログラムＦａｓｔａを使用して比較し得る。Ｆａｓｔａは、クエリおよび検索配列の間の最良のオーバーラップ領域のアライメントおよび配列同一性パーセントを提供する。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１（引用することにより本明細書に組み込まれる）に提供されるところのそのデフォルトのパラメータ（６のワードサイズ（ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ）およびスコアリングマトリックスのＮＯＰＡＭファクター）でＦａｓｔａを使用して決定し得る。同様に、アミノ酸アライメントを実施するためのプログラムが利用可能である。一般に、これらのプログラムはデフォルト設定で使用するとは言え、当業者はこれらの設定を必要とされるとおり変更し得る。あるいは、当業者は、少なくとも参照されるアルゴリズムおよびプログラムにより提供されるもののような同一性のレベル若しくはアライメントを提供する別のアルゴリズム若しくはコンピュータプログラムを利用し得る。
【００１９】
ポリヌクレオチドに適用されるところの「組換え」は、該ポリヌクレオチドが、クローニング、制限若しくはライゲーション段階、および天然に見出されるポリヌクレオチドと異なる構築物をもたらす他の手順の多様な組合せの産物であることを意味している。組換えウイルスは組換えポリヌクレオチドを含んでなるウイルス粒子である。該用語は、それ
ぞれ、元のポリヌクレオチド構築物の複製物および元のウイルス構築物の子孫を包含する。
【００２０】
「異種」は、それが比較されている実体の残部のものと遺伝子型が異なる実体由来を意味している。例えば、遺伝子工学技術により異なる種由来のプラスミド若しくはベクターに導入されるポリヌクレオチドは異種ポリヌクレオチドである。その本来のコーディング配列から取り出されかつそれが連結されて天然に見出されないコーディング配列に効果的に連結されているプロモーターは異種プロモーターである。ウイルスのゲノム、若しくは該ウイルスのゲノムがそれを天然に含有しないウイルスベクターにクローン化されている部位特異的組換え部位は異種組換え部位である。組換え酵素のコーディング配列をもつポリヌクレオチドを使用して、通常は組換え酵素を発現しない細胞を遺伝子的に変える場合、該ポリヌクレオチドおよび該組換え酵素の双方が該細胞に対し異種である。
【００２１】
本明細および請求の範囲を通じて使用されるところの「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、および他の変形のなかでも「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでなること」を包含するその変形は、他の成分、要素、整数、段階などに包括的なものである。「よりなる」若しくは「よりなること」という用語は他の成分、要素、整数、段階などを除外する。
【００２２】
Ｉ．サルアデノウイルス配列
サルアデノウイルス−４３（ＳＡｄＶ−４３）、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０の核酸配列およびアミノ酸配列が、本明細書に引用することに組み込まれる配列表に提供されている。これらのアデノウイルスおよびそれらの配列は、それらが天然に会合している他の物質から単離されている。ＳＡｄＶ−４８、−４９および−５０はカニクイザルから単離された。
【００２３】
ＳＡｄＶ−４３およびＳＡｄＶ−４５はゴリラから単離され、そしてヒトサブグループＣと同一サブグループにあることが確認されている。ＳＡｄＶ−４６およびＳＡｄＶ−４７はゴリラから単離され、そしてヒトサブグループＢと同一サブグループにあることが確認されている。従って、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６および−４７ならびにそれらの配列に基づく構築物は、ＩＦＮα、ＩＬ−６、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＩＰ１αを包含するサイトカイン／ケモカインを誘導若しくは発現するのに有用でありうる。
【００２４】
ＳＡｄＶ−４８、−４９および−５０は既存のアデノウイルスファミリーＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ若しくはＥのいずれにも容易に適合しない。ＳＡｄＶ−４８、−４９および−５０はこれらのファミリー内のアデノウイルスと血清型がおよび免疫学的により大きく異なり、そしてこれらのアデノウイルス由来のベクターは従ってヒト集団で既存の免疫に直面することがより少なくありそうであることが予期される。さらに、ＳＡｄＶ−４８、−４９および−５０は、例えばアカゲザルおよびカニクイザルを包含するヒト以外およびチンパンジー以外の霊長類種での抗原の評価に有用であることが予期される。これは、ヒトおよびチンパンジーモデルがいずれかの多様な理由上利用可能でない場合にとりわけ有用である。
【００２５】
Ａ．核酸配列
本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４３核酸配列は配列番号１のヌクレオチド１ないし３７１８９を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４５核酸配列は配列番号３８のヌクレオチド１ないし３７１５２を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４６核酸配列は配列番号６９のヌクレオチド１ないし３５６０８を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４７核酸配列は配列番号９９のヌクレオチド１ないし３５５６３を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４８核酸配列は配列番号１２９のヌクレオチド１ないし３４２０１を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４９核酸配列は配列番号１５７
のヌクレオチド１ないし３５４９９を包含する。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−５０核酸配列は配列番号１８３のヌクレオチド１ないし３５５１２を包含する。本明細書に引用することにより組み込まれる配列表を参照されたい。一態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０の核酸配列は、それぞれ配列番号１、３８、６９、９９、１２９、１５７および１８３の配列に相補的である鎖、ならびに以下の配列およびそれらの相補鎖の配列に対応するＲＮＡおよびｃＤＮＡ配列をさらに包含する。別の態様において、該核酸配列は、配列表に９８．５％以上同一、および好ましくは約９９％以上同一である配列をさらに包含する。一態様において、配列番号１、３８、６９、９９、１２９、１５７および１８３に提供される配列およびそれらの相補鎖の天然のバリアントおよび工作された改変もまた包含する。こうした改変は、例えば、当該技術分野で既知である標識、メチル化、および天然に存在するヌクレオチドの１個若しくはそれ以上の縮重ヌクレオチドでの置換を包含する。
【００２６】
【表１−１】
2015231379.tif 000002
【００２７】
【表１−２】
2015231379.tif 000003
【００２８】
【表１−３】
2015231379.tif 000004
【００２９】
これらの配列由来のアデノウイルスベクターにおけるようなある態様において、これらの領域の一方若しくは双方の機能を、例えば該領域の欠失、該遺伝子のプロモーターの破壊、若しくは別の機能欠失により排除しうる。しかしながら、他の態様において、これらの領域の保持が望ましいことがある。
【００３０】
一態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０の配列、ならびにそれらの相補鎖すなわちそれらに相補的なｃＤＮＡおよびＲＮＡのフラグメントが提供される。適するフラグメントは長さ最低１５ヌクレオチドであり、そして機能的フラグメントすなわち生物学的に興味深いフラグメントを包含する。例えば、機能的フラグメントは、所望のアデノウイルス産物を発現し得るか、若しくは組換えウイルスベクターの製造で有用でありうる。こうしたフラグメントは本明細書の表に列挙される遺伝子配列およびフラグメントを包含する。該表は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列中の転写物領域およびオープンリーディングフレームを提供する。ある種の遺伝子について、転写物およびオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は配列番号１に提示されるものに相補的な鎖上に位置する。例えばＥ２ｂ、Ｅ４およびＥ２ａを参照されたい。コードされるタンパク質の計算された分子量もまた示される。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０のＥ１ａオープンリーディングフレームおよびＥ２ｂのオープンリーディングフレームは内部スプライス部位を含有することに注意されたい。これらのスプライス部位は上の表中に示される。
【００３１】
ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０アデノウイルス核酸配列は、治療薬としてならびに多様なベクター系および宿主細胞の構築で有用である。本明細書で使用されるところのベクターは、裸のＤＮＡ、プラスミド、ウイルス、コスミド若しくはエピソームを包含するいかなる適する核酸分子も包含する。これらの配列および産物は、単独で、あるいは他のアデノウイルス配列若しくはフラグメントと組合せ、または他のアデノウイルス若しくはアデノウイルス以外の配列からのエレメントと組合せで使用しうる。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列は、アンチセンス送達ベクター、遺伝子治療ベクター若しくはワクチンベクターとしてもまた有用である。従って、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列を含有する核酸分子、遺伝子送達ベクターおよび宿主細胞がさらに提供される。
【００３２】
例えば、本発明のサルＡｄＶ（ＳＡｄＶ）−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０のＩＴＲ配列を含有する核酸分子。別の例において、本発明は所望のＡｄ遺伝子産物をコードするＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列を含有する核酸分子を提供する。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列を使用して構築されるなお他の核酸分子は、本明細書に提供される情報を鑑みれば当業者に容易に明らかであろう。
【００３３】
一態様において、本明細書で同定されるサルＡｄ遺伝子領域を異種分子の細胞への送達のための多様なベクターで使用しうる。例えば、パッケージング宿主細胞中でウイルスベクターを生成させる目的上、アデノウイルスキャプシドタンパク質（若しくはそのフラグメント）の発現のためのベクターを生成する。こうしたベクターはトランスでの発現のため設計しうる。あるいは、こうしたベクターは、所望のアデノウイルス機能、例えばＥ１ａ、Ｅ１ｂ、末端反復配列、Ｅ２ａ、Ｅ２ｂ、Ｅ４、Ｅ４ＯＲＦ６領域の１種若しくはそれ以上を発現する配列を安定に含有する細胞を提供するよう設計する。
【００３４】
加えて、該アデノウイルス遺伝子配列およびそれらのフラグメントは、ヘルパー依存ウイルス（例えば必須機能を欠失されたアデノウイルスベクター、若しくはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ））の製造に必要なヘルパー機能を提供するのに有用である。こうした製造方法のため、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列を、ヒトＡｄについて記述されたものに類似の様式でこうした方法で利用し得る。しかしながら、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列
とヒトＡｄのものの間の配列の差違により、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列の使用は、ｒＡＡＶ産生の間に感染性アデノウイルス汚染物質（ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔ）を産生しうるヒトＡｄ  Ｅ１機能を保有する宿主細胞、例えば２９３細胞中でのヘルパー機能との相同的組換えの可能性を大きく最小化するか若しくは排除する。
【００３５】
アデノウイルスヘルパー機能を使用するｒＡＡＶの製造方法はヒトアデノウイルス血清型とともに文献に詳細に記述されている。例えば米国特許第６，２５８，５９５号明細書およびその中に引用される参考文献を参照されたい。米国特許第５，８７１，９８２号明細書；第ＷＯ  ９９／１４３５４号明細書；第ＷＯ  ９９／１５６８５号明細書；第ＷＯ
９９／４７６９１号明細書もまた参照されたい。これらの方法はヒト以外の霊長類のＡＡＶ血清型を包含するヒト以外の血清型のＡＡＶの製造でもまた使用しうる。必要なヘルパー機能（例えばＥ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａおよび／若しくはＥ４  ＯＲＦ６）を提供するＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列は、ヒト起源に典型的であるｒＡＡＶパッケージング細胞中に存在するいずれかの他のアデノウイルスとの組換えの可能性を最小化若しくは排除する一方で必要なアデノウイルス機能の提供においてとりわけ有用であり得る。従って、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列の選択された遺伝子若しくはオープンリーディングフレームをこれらのｒＡＡＶ製造方法で利用しうる。
【００３６】
あるいは、組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターをこれらの方法で利用しうる。こうした組換えアデノウイルスサルベクターは、例えば、サルＡｄ配列が例えばＡＡＶ  ３’および／若しくは５’ＩＴＲならびにその発現を制御する制御配列の制御下の導入遺伝子から構成されるｒＡＡＶ発現カセットに隣接しているハイブリッドサルＡｄ／ＡＡＶを包含しうる。当業者は、なお他のサルアデノウイルスベクターならびに／若しくはＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０遺伝子配列が、ｒＡＡＶ、およびアデノウイルスヘルパーに依存する他のウイルスの製造に有用であることができることを認識するであろう。
【００３７】
なお別の態様において、核酸分子は、所望の生理学的効果を達成するための宿主細胞中の選択されたアデノウイルス遺伝子産物の送達および発現のため設計される。例えば、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のＥ１ａタンパク質をコードする配列を含有する核酸分子を癌治療薬としての使用のため被験体に送達しうる。場合によっては、こうした分子を脂質に基づく担体中で処方しかつ癌細胞を優先的に標的指向化する。こうした製剤を他の癌治療薬（例えばシスプラチン、タキソールなど）と組合せうる。本明細書に提供されるアデノウイルス配列のなお他の用途は当業者に容易に明らかであろう。
【００３８】
加えて、当業者は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列を、治療および免疫原性分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ若しくはｉｎ  ｖｉｖｏ送達のための多様なウイルスおよびウイルス以外のベクター系のための使用に容易に適合させ得ることを容易に理解するであろう。例えば、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０サルＡｄ配列を多様なｒＡｄおよびｒＡｄ以外のベクター系で利用し得る。こうしたベクター系は、とりわけ、例えばプラスミド、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルスおよびアデノ随伴ウイルス系を包含しうる。これらのベクター系の選択は本発明の制限でない。
【００３９】
本発明のサルおよびサル由来タンパク質の製造に有用な分子もまた提供される。該ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のＤＮＡ配列を包含するポリヌクレオチドを保有するこうした分子は、裸のＤＮＡ、プラスミド、ウイルス
、若しくはいずれかの他の遺伝因子の形態にあり得る。
【００４０】
Ｂ．アデノウイルスタンパク質
本明細書に記述されるアデノウイルス核酸によりコードされるタンパク質、酵素およびそれらのフラグメントのようなＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０アデノウイルスが提供される。他の方法により生成されるこれらの核酸配列によりコードされるアミノ酸配列を有するＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０のタンパク質、酵素およびそれらのフラグメントがさらに包含される。こうしたタンパク質は、上の表で同定されるオープンリーディングフレームによりコードされるもの、下の表のタンパク質（配列表中にもまた示される）、ならびに該タンパク質およびポリペプチドのそれらのフラグメントを包含する。
【００４１】
【表２−１】
2015231379.tif 000005
【００４２】
【表２−２】
2015231379.tif 000006
【００４３】
従って、一局面において、実質的に純粋である、すなわち他のウイルスおよびタンパク質性タンパク質を含まない独特なサルアデノウイルス４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０タンパク質が提供される。好ましくは、これらのタンパク質は最低１０％同種、より好ましくは６０％同種、および最も好ましくは９５％同種である。
【００４４】
一態様において、独特なサル由来キャプシドタンパク質が提供される。本明細書で使用されるところのサル由来キャプシドタンパク質は、これらのタンパク質の生成手段に対する制限を伴わず、キメラキャプシドタンパク質、融合タンパク質、人工キャプシドタンパク質、合成キャプシドタンパク質および組換えキャプシドタンパク質を制限なしに包含する、上で定義されたところのＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のキャプシドタンパク質またはそれらのフラグメントを含有するいかなるアデノウイルスキャプシドタンパク質も包含する。
【００４５】
適しては、これらのサル由来キャプシドタンパク質は、本明細書に記述されるところの多様なアデノウイルス血清型のキャプシド領域若しくはそれらのフラグメントまたは改変されたサルキャプシドタンパク質若しくはフラグメントと組合せの１種若しくはそれ以上のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０の領域若しくはそれらのフラグメント（例えばヘキソン、ペントン、ファイバー若しくはまたのフラグメント）を含有する。本明細書で使用されるところの「変えられた向性を伴うキャプシドタンパク質の改変」は、変えられたキャプシドタンパク質、すなわちペントン、ヘキソン若しくはファイバータンパク質領域、またはファイバー領域のノブドメインのようなそれらのフラグメント、あるいは特異性が変えられているようなものをコードするポリヌクレオチドを包含する。該サル由来キャプシドは、サルＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０の１種若しくはそれ以上、またはヒト若しくはヒト以外の起源のものでありうる別のＡｄ血清型を用いて構築しうる。こうしたＡｄは、ＡＴＣＣ、商業的および学術的供給源を包含する多様な供給源から得ることができるか、またはＡｄの配列はＧｅｎＢａｎｋ若しくは他の適する供給源から得ることができる。
【００４６】
ＳＡｄＶ−４３（配列番号６）、ＳＡｄＶ−４５（配列番号４３）、ＳＡｄＶ−４６（配列番号７４）、ＳＡｄＶ−４７（配列番号１０４）、ＳＡｄＶ−４８（配列番号１３４）、ＳＡｄＶ−４９（配列番号１６２）およびＳＡｄＶ−５０（配列番号１８８）のペントンタンパク質のアミノ酸配列が提供される。適しては、該ペントンタンパク質若しくはそれらの独特のフラグメントを多様な目的上利用しうる。適するフラグメントの例は、上および配列番号６、４３、７４、１０４、１３４、１６２若しくは１８８に提供されるアミノ酸番号付けに基づき約５０、１００、１５０若しくは２００アミノ酸のＮ末端および／若しくはＣ末端切断を有するペントンを包含する。他の適するフラグメントはより短い内部、Ｃ末端若しくはＮ末端フラグメントを包含する。さらに、該ペントンタンパク質は当業者に既知の多様な目的上改変しうる。
【００４７】
ＳＡｄＶ−４３（配列番号１１）、ＳＡｄＶ−４５（配列番号４８）、ＳＡｄＶ−４６（配列番号７９）、ＳＡｄＶ−４７（配列番号１０９）、ＳＡｄＶ−４８（配列番号１３９）、ＳＡｄＶ−４９（配列番号１６７）およびＳＡｄＶ−５０（配列番号１９３）のヘキソンタンパク質のアミノ酸配列もまた提供される。適しては、該ヘキソンタンパク質若しくはそれらの独特のフラグメントを多様な目的上利用しうる。適するフラグメントの例は、上および配列番号１１、４８、７９、１０９、１３９、１６７および１９３に提供されるアミノ酸番号付けに基づき約５０、１００、１５０、２００、３００、４００若しくは５００アミノ酸のＮ末端および／若しくはＣ末端切断を有するヘキソンを包含する。他の適するフラグメントはより短い内部、Ｃ末端若しくはＮ末端フラグメントを包含する。例えば、ＤＥ１およびＦＧ１と呼称される１種の適するフラグメントヘキソンタンパク質のループ領域（ドメイン）若しくはその超可変領域。こうしたフラグメントは、配列番号１１、４８、７９、１０９、１３９、１６７若しくは１９３を参照して、サルヘキソンタンパク質のアミノ酸残基約１２５ないし４４３；約１３８ないし４４１にわたる領域、若しくは、約残基１３８ないし残基１６３；約１７０ないし約１７６；約１９５ないし約２０３；約２３３ないし約２４６；約２５３ないし約２６４；約２８７ないし約２９７；お
よび約４０４ないし約４３０にわたるもののようなより小さいフラグメントを包含する。他の適するフラグメントは当業者により容易に同定されうる。さらに、該ヘキソンタンパク質は当業者に既知の多様な目的上改変しうる。該ヘキソンタンパク質はアデノウイルスの血清型の決定子であるため、こうした人工ヘキソンタンパク質は人工血清型を有するアデノウイルスをもたらすとみられる。他の人工キャプシドタンパク質を、１１、４８、７９、１０９、１３９、１６７および／若しくは１９３のペントン配列および／若しくはファイバー配列ならびに／またはそれらのフラグメントを使用してもまた構築し得る。
【００４８】
一態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ヘキソンタンパク質の配列を利用する変えられたヘキソンタンパク質を有するアデノウイルスを生成しうる。ヘキソンタンパク質の適する一変化方法は米国特許第５，９２２，３１５号明細書（引用することにより組み込まれる）に記述されている。この方法では、アデノウイルスヘキソンの最低１個のループ領域が別のアデノウイルス血清型の最低１個のループ領域で変えられる。従って、こうした変えられたアデノウイルスヘキソンタンパク質の最低１個のループ領域はＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のサルＡｄヘキソンループ領域である。一態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ヘキソンタンパク質の１個のループ領域が別のアデノウイルス血清型からの１個のループ領域により置換される。別の態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ヘキソンのループ領域を使用して別のアデノウイルス血清型からのループ領域を置換する。適するアデノウイルス血清型は、本明細書に記述されるところのヒトおよびヒト以外の血清型のなかから容易に選択しうる。適する血清型の選択は本発明の制限でない。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ヘキソンタンパク質配列のなお他の用途は当業者に容易に明らかであろう。
【００４９】
ＳＡｄＶ−４３（配列番号２２）、ＳＡｄＶ−４５（配列番号５９）、ＳＡｄＶ−４６（配列番号８９）、ＳＡｄＶ−４７（配列番号１１９）およびＳＡｄＶ−４８（配列番号１４７）のファイバータンパク質のアミノ酸配列が提供される。ＳＡｄＶ−４９およびＳＡｄＶ−５０はそれぞれ２種のファイバータンパク質を有する。ＳＡｄＶ−４９のファイバータンパク質１および２はそれぞれ配列番号１７４および１７５のアミノ酸配列を有する。ＳＡｄＶ−５０のファイバータンパク質１および２はそれぞれ配列番号２０１および２００のアミノ酸配列を有する。適しては、これらのファイバータンパク質若しくはそれらの独特のフラグメントを多様な目的上利用しうる。１種の適するフラグメントはファイバーノブである。他の適するフラグメントの例は、配列番号２２、５９、８９、１１９、１４７、１７４、１７５、２００および２０１に提供されるアミノ酸番号付けに基づき約５０、１００、１５０若しくは２００アミノ酸のＮ末端および／若しくはＣ末端切断を有するファイバーを包含する。なお他の適するフラグメントは内部フラグメントを包含する。さらに、ファイバータンパク質は当業者に既知の多様な技術を使用して改変しうる。
【００５０】
ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０のタンパク質の独特のフラグメントは長さ最低８、最低１５若しくは最低２０アミノ酸である。しかしながら他の所望の長さのフラグメントを容易に利用し得る。加えて、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０遺伝子産物の収量および／若しくは発現を高めるために導入されうるところの改変、例えばＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０遺伝子産物の全部若しくは１フラグメントが高めるための融合パートナーと（直接若しくはリンカーを介してのいずれかで）融合される融合分子の構築が、本明細書で提供される。他の適する改変は、通常切断されるプレ若しくはプロタンパク質を除外しかつ成熟タンパク質若しくは酵素を提供するためのコーディング領域（例えばタンパク質若しくは酵素）の切断、および／または分泌可能な遺伝子産物を提供するためのコーディング領域の突然変異を制限なしに包含する。なお他の改変
は当業者に容易に明らかであろう。本明細書に提供されるＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０タンパク質に対する最低約９９％の同一性を有するタンパク質がさらに包含される。
【００５１】
本明細書に記述されるところの、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のアデノウイルスキャプシドタンパク質を含有するベクターは、中和抗体が他のＡｄ血清型に基づくベクターならびに他のウイルスベクターの有効性を低下させる応用での使用にとりわけ良好に適する。該ｒＡｄベクターは、反復遺伝子治療のため、若しくは免疫応答（ワクチン力価）を高めるための再投与でとりわけ有利である。
【００５２】
ある状況下では、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０遺伝子産物の１種若しくはそれ以上（例えばキャプシドタンパク質若しくはそのフラグメント）を使用して抗体を生成することが望ましいことがある。本明細書で使用されるところの「抗体」という用語は、あるエピトープに特異的に結合することが可能である免疫グロブリン分子を指す。抗体は、例えば高親和性ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、合成抗体、キメラ抗体、組換え抗体およびヒト化抗体を包含する多様な形態で存在しうる。こうした抗体は免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥから発する。
【００５３】
こうした抗体は当該技術分野で既知の多数の方法のいずれを使用しても生成しうる。適する抗体は、公知の慣習的技術、例えばＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎおよびその多くの既知の変法により生成しうる。同様に、所望の高力価抗体は、これらの抗原に対し発生されたモノクローナル若しくはポリクローナル抗体に既知の組換え技術を適用することにより生成する（例えば、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ８５／００３９２号明細書；英国特許出願公開第ＧＢ２１８８６３８Ａ号明細書；Ａｍｉｔら、１９８６  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３：７４７−７５３；Ｑｕｅｅｎら、１９８９  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３；ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＷＯ９００７８６１号明細書；およびＲｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｈｕｓｅら、１９８８ａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１を参照されたい）。あるいは、抗体は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０、またはタンパク質若しくはそれらの他のフラグメントに対する動物若しくはヒト抗体の相補性決定領域を操作することにより製造し得る。例えば、Ｅ．ＭａｒｋとＰａｄｌｉｎ、“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、第４章、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１１３、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（Ｊｕｎｅ、１９９４）；Ｈａｒｌｏｗら、１９９９、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク；Ｈａｒｌｏｗら、１９８９、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー；Ｈｏｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＢｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６を参照されたい。抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）および抗抗イディオタイプ抗体（Ａｂ３）がさらに提供される。例えば、Ｍ．Ｗｅｔｔｅｎｄｏｒｆｆら、“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”Ｉｄｉｏｔｙｐｉｃ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｊ．ＣｅｒｎｙとＪ．Ｈｉｅｒｎａｕｘにより編中、１９９０  Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ワシントンＤＣ：ｐｐ．２０３−２２９を参照されたい）。これらの抗イディオタイプおよび抗抗イディオタイプ抗体は当業者に公知の技術を使用して製造する。これらの抗体は、診断および
臨床的な方法およびキットを包含する多様な目的上使用しうる。
【００５４】
ある状況下で、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０の遺伝子産物、抗体、若しくは他の構築物に検出可能な標識（ｌａｂｅｌ）若しくは標識（ｔａｇ）を導入することが望ましいかもしれない。本明細書で使用されるところの検出可能な標識（ｌａｂｅｌ）は、単独で若しくは別の分子との相互作用に際して検出可能なシグナルを提供することが可能である分子である。最も望ましくは、標識は免疫組織化学的分析若しくは免疫蛍光顕微鏡検査での即座の使用のために例えば蛍光により視覚的に検出可能である。例えば、適する標識は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、コリホスフィン−Ｏ（ＣＰＯ）若しくはタンデム色素、ＰＥ−シアニン−５（ＰＣ５）およびＰＥ−テキサスレッド（ＥＣＤ）を包含する。これらの蛍光色素の全部は商業的に入手可能であり、また、それらの用途は当該技術分野に既知である。他の有用な標識はコロイド状金標識を包含する。なお他の有用な標識は放射活性化合物若しくは元素を包含する。加えて、標識は、アッセイで比色シグナルを表すよう機能する多様な酵素系を包含し、例えばグルコース酸化酵素（グルコースを基質として使用する）は生成物として過酸化物を放出し、この過酸化物は過酸化酵素、およびテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）のような水素供与体の存在下で青色として見られる酸化型ＴＭＢを産生する。他の例は、ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ならびに、ＡＴＰ、グルコースおよびＮＡＤ＋と反応してとりわけ３４０ｎｍの波長で増大された吸光度として検出されるＮＡＤＨを生じるグルコース−６−リン酸脱水素酵素を伴うヘキソキナーゼを包含する。
【００５５】
本明細書に記述される方法で利用される他の標識系は他の手段により検出可能であり、例えば、色素が埋め込まれている着色ラテックス微粒子（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、インジアナ州）を、適用されるアッセイで生じる複合体の存在を示す視覚的シグナルを提供する標的配列とコンジュゲートを形成するために酵素の代わりに使用する。
【００５６】
所望の分子と標識の結合若しくは会合方法は同様に慣習的でありかつ当業者に既知である。既知の標識結合方法が記述されている（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、第６版、Ｒ．Ｐ．Ｍ．Ｈａｕｇｌａｎｄ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．オレゴン州ユージーン、１９９６；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード、１９９４／１９９５を参照されたい）。従って標識および結合方法の選択は本発明を制限しない。
【００５７】
ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０の配列、タンパク質およびフラグメントは、組換え製造、化学合成若しくは他の合成手段を包含するいずれかの適する手段により製造しうる。適する製造技術は当業者に公知である。例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）を参照されたい。あるいは、ペプチドは公知の固相ペプチド合成法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（１９６２）；ＳｔｅｗａｒｔとＹｏｕｎｇ、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｆｒｅｅｍａｎ、サンフランシスコ、１９６９）ｐｐ．２７−６２）によってもまた合成し得る。これらおよび他の適する製造方法は当業者の知識内にあり、そして本発明の制限でない。
【００５８】
加えて、当業者は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および
−５０配列を、治療および免疫原性分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ若しくはｉｎ  ｖｉｖｏ送達のための多様なウイルスおよびウイルス以外のベクター系のための使用に容易に適合し得ることを容易に理解するであろう。例えば、一態様において、本明細書に記述されるサルＡｄキャプシドタンパク質および他のサルアデノウイルスタンパク質は、遺伝子、タンパク質、ならびに他の所望の診断、治療および免疫原性分子のウイルス以外のタンパク質に基づく送達に使用される。こうした一態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のタンパク質は、アデノウイルスの受容体をもつ細胞へのターゲッティングのためある分子に直接若しくは間接的に結合される。好ましくは、ヘキソン、ペントン、ファイバーのようなキャプシドタンパク質若しくは細胞表面受容体のリガンドを有するそれらのフラグメントをこうしたターゲッティングに選択する。送達に適する分子は、本明細書に記述される治療分子およびそれらの遺伝子産物のなかから選択される。脂質、ポリＬｙｓなどを包含する多様なリンカーをリンカーとして利用しうる。例えば、サルペントンタンパク質は、Ｍｅｄｉｎａ−Ｋａｕｗｅ
ＬＫら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００１  Ｍａｙ；８（１０）：７９５−８０３およびＭｅｄｉｎａ−Ｋａｕｗｅ  ＬＫら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００１  Ｄｅｃ；８（２３）：１７５３−１７６１に記述されるものに類似の様式でサルペントン配列を使用する融合タンパク質の製造によりこうした目的上容易に利用しうる。あるいは、サルＡｄタンパク質ＩＸのアミノ酸配列を、米国特許出願第２００１００４７０８１号明細書に記述されるとおり細胞表面受容体にベクターを標的指向化するのに利用しうる。適するリガンドはＣＤ４０抗原、ＲＧＤ含有若しくはポリリシン含有配列などを包含する。例えばヘキソンタンパク質および／若しくはファイバータンパク質を包含するなお他のサルＡｄタンパク質をこれらおよび類似の目的に使用しうる。
【００５９】
なお他のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０アデノウイルスタンパク質を、当業者に容易に明らかであろう多様な目的上、単独として若しくは他のアデノウイルスタンパク質と組合せで使用しうる。加えて、該ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０アデノウイルスタンパク質のなお他の用途が当業者に容易に明らかであろう。
【００６０】
ＩＩ．組換えアデノウイルスベクター
本明細書に記述される組成物は、治療若しくはワクチンいずれかの目的上細胞に異種分子を送達するベクターを包含する。本明細書で使用されるところのベクターは、裸のＤＮＡ、ファージ、トランスポゾン、コスミド、エピソーム、プラスミド若しくはウイルスを制限なしに包含するいかなる遺伝因子も包含しうる。こうしたベクターは、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および／若しくは−５０のサルアデノウイルスＤＮＡおよびミニ遺伝子を含有する。「ミニ遺伝子」により、選択された異種遺伝子、ならびに宿主細胞中での該遺伝子産物の翻訳、転写および／若しくは発現を駆動するのに必要な他の調節エレメントの組合せを意味している。
【００６１】
典型的には、選択されたアデノウイルス遺伝子に固有の領域中に他のアデノウイルス配列を含有する核酸分子中にミニ遺伝子が配置されるようなＳＡｄＶ由来アデノウイルスベクターを設計する。該ミニ遺伝子は、所望の場合はその領域の機能を破壊するように既存の遺伝子領域に挿入しうる。あるいは、該ミニ遺伝子は部分的に若しくは完全に欠失されたアデノウイルス遺伝子の部位に挿入しうる。例えば、該ミニ遺伝子は、選択されうるもののなかで、機能的Ｅ１欠失若しくは機能的Ｅ３欠失の部位のような部位に配置しうる。「機能的に欠失された」若しくは「機能的欠失」という用語は、該遺伝子領域が遺伝子発現の機能的産物を産生することがもはや可能でないように十分な量の遺伝子領域が除去または別の方法で例えば突然変異若しくは改変により損傷されることを意味している。所望の場合は該遺伝子領域全体を除去しうる。遺伝子破壊若しくは欠失の他の適する部位は本出願の別の場所で論考する。
【００６２】
例えば、組換えウイルスの生成に有用な生産ベクターについて、該ベクターは、ミニ遺伝子、ならびにアデノウイルスゲノムの５’端若しくはアデノウイルスゲノムの３’端のいずれかまたはアデノウイルスゲノムの５’および３’端の双方を含有しうる。アデノウイルスゲノムの５’端は、パッケージングおよび複製に必要な５’シスエレメント、すなわち５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列（複製起点として機能する）ならびに天然の５’パッケージングエンハンサードメイン（直鎖状Ａｄゲノムをパッケージングするのに必要な配列およびＥ１プロモーターのエンハンサーエレメントを含有する）を含有する。アデノウイルスゲノムの３’端はパッケージングおよび被包化に必要な３’シスエレメント（ＩＴＲを包含する）を包含する。適しては、組換えアデノウイルスは５’および３’双方のアデノウイルスシスエレメントを含有し、また、ミニ遺伝子は該５’および３’アデノウイルス配列の間に配置される。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０に基づくアデノウイルスベクターは、これら若しくは他の供給源からの付加的なアデノウイルス配列もまた含有しうる。
【００６３】
適しては、これらのＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０に基づくアデノウイルスベクターは、それぞれＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０のアデノウイルスゲノム由来の１個若しくはそれ以上のアデノウイルスエレメントを含有する。一態様において、該ベクターはＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０からのアデノウイルスＩＴＲならびに同一アデノウイルス血清型からの付加的なアデノウイルス配列を含有する。別の態様において、該ベクターはＩＴＲを提供するものと異なるアデノウイルス血清型由来であるアデノウイルス配列を含有する。
【００６４】
本明細書で定義されるところのシュードタイピングされた（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ）アデノウイルスは、アデノウイルスのキャプシドタンパク質がＩＴＲを提供するアデノウイルスと異なるアデノウイルスからであるアデノウイルスを指す。
【００６５】
さらに、キメラ若しくはハイブリッドアデノウイルスを、当業者に既知の技術を使用して、本明細書に記述されるアデノウイルスを使用して構築しうる。例えば米国特許第７，２９１，４９８号明細書を参照されたい。
【００６６】
ＩＴＲのアデノウイルス供給源およびベクター中に存在するいかなる他のアデノウイルス配列の供給源の選択も本態様の制限でない。多様なアデノウイルス株がＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州マナサスから入手可能であるか、若しくは多様な商業的および組織的供給源から求めにより入手可能である。さらに、多くのこうした株の配列は例えばＰｕｂＭｅｄおよびＧｅｎＢａｎｋを包含する多様なデータベースから入手可能である。他のサル若しくはヒトアデノウイルスから製造された相同なアデノウイルスベクターが公表された文献に記述されている（例えば米国特許第５，２４０，８４６号明細書を参照されたい）。Ａｄ５型（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ７３２６０）を包含する多数のアデノウイルス型のＤＮＡ配列がＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。アデノウイルス配列は、血清型２、３、４、７、１２および４０のような、ならびに現在同定されているヒト型のいずれもさらに包含するいずれの既知のアデノウイルス血清型からも得ることができる。同様に、ヒト以外の動物（例えばサル）を感染されることが既知のアデノウイルスもまた該ベクター構築物で使用しうる。例えば米国特許第６，０８３，７１６号明細書を参照されたい。
【００６７】
本明細書に記述されるベクターの構築で使用されるウイルス配列、ヘルパーウイルス（必要な場合）および組換えウイルス粒子、ならびに他のベクター成分および配列は上述されたとおり得られる。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および
／若しくは−５０のＤＮＡ配列を、ベクターおよびこうしたベクターの製造で有用な細胞株を構築するのに使用する。
【００６８】
配列の欠失、挿入および他の突然変異を包含する該ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および／若しくは−５０ベクターを形成する核酸配列の改変は、標準的な分子生物学技術を使用して生成することができ、そして本態様の範囲内にある。
【００６９】
Ａ．「ミニ遺伝子」
導入遺伝子の選択、「ミニ遺伝子」のクローニングおよび構築ならびにウイルスベクターへのその挿入に使用される方法は、本明細書に提供される教示を与えられる当該技術分野の熟練内にある。
【００７０】
１．導入遺伝子
導入遺伝子は、目的のポリペプチド、タンパク質若しくは他の産物をコードする導入遺伝子に隣接するベクター配列に異種の核酸配列である。核酸コーディング配列は、宿主細胞中での導入遺伝子の転写、翻訳および／若しくは発現を可能にする様式で調節成分に効果的に連結されている。
【００７１】
導入遺伝子配列の組成は、生じるベクターが利用されるであろう使用に依存することができる。例えば、１種の導入遺伝子配列は、発現に際して検出可能なシグナルを生じるレポーター配列を包含する。こうしたレポーター配列は、β−ラクタマーゼ、β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、例えばＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８を包含する膜結合タンパク質、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質、およびそれに向けられた高親和性抗体が存在するか若しくは慣習的手段により製造され得る当該技術分野で公知の他者、ならびにとりわけヘマグルチニン若しくはＭｙｃからの抗原標識ドメインに適切に融合された膜結合タンパク質を含んでなる融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列を制限なしに包含する。これらのコーディング配列は、それらの発現を駆動する調節エレメントと会合される場合に、酵素的、Ｘ線撮影、比色、蛍光、若しくは他の分光学的アッセイ、蛍光標示式細胞分取アッセイ、ならびに酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および免疫組織化学を包含する免疫学的アッセイを包含する慣習的手段により検出可能なシグナルを提供する。例えば、マーカー配列がＬａｃＺ遺伝子である場合、シグナルを保有するベクターの存在はβ−ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイにより検出する。導入遺伝子がＧＦＰ若しくはルシフェラーゼである場合、該シグナルを保有するベクターはルミノメーターで色若しくは光産生により視覚的に測定しうる。
【００７２】
一態様において、導入遺伝子は、タンパク質、ペプチド、ＲＮＡ、酵素若しくはＲＮＡ触媒のような生物学および医学で有用である産物をコードするマーカー以外の配列である。望ましいＲＮＡ分子はｔＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、ＲＮＡ触媒およびアンチセンスＲＮＡを包含する。有用なＲＮＡ配列の一例は、処置された動物中での標的にされた核酸配列の発現を消滅させる配列である。
【００７３】
導入遺伝子は、例えば遺伝子欠損症の処置に、癌治療薬若しくはワクチンとして、免疫応答の誘導のため、および／または予防ワクチンの目的上使用しうる。本明細書で使用されるところの免疫応答の誘導は、ある分子（例えば遺伝子産物）に対するＴ細胞および／若しくは体液性免疫応答を誘導する該分子の能力を指す。例えば多サブユニットタンパク質により引き起こされる状態を是正若しくは改善するための複数の導入遺伝子を使用を企図している。ある状況において、異なる導入遺伝子を、タンパク質の各サブユニットをコードする、または異なるペプチド若しくはタンパク質をコードするのに使用しうる。これ
は、該タンパク質サブユニットをコードするＤＮＡの大きさが大きい場合、例えば免疫グロブリン、血小板由来増殖因子若しくはジストロフィンタンパク質について望ましい。細胞が多サブユニットタンパク質を産生するために、細胞を多様なサブユニットのそれぞれを含有する組換えウイルスに感染させる。あるいは、１タンパク質の多様なサブユニットを同一導入遺伝子によりコードしうる。この場合、単一導入遺伝子がサブユニットのそれぞれをコードするＤＮＡを包含し、各サブユニットのＤＮＡは配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）により分離される。これは、サブユニットのそれぞれをコードするＤＮＡの大きさが小さい、例えば該サブユニットをコードするＤＮＡおよびＩＲＥＳの全体の大きさが５キロ塩基未満である場合に望ましい。ＩＲＥＳに対する一代替として、該ＤＮＡは翻訳後事象で自己切断する２Ａペプチドをコードする配列により分離してもよい。例えばＭ．Ｌ．Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７８（Ｐｔ  １）：１３−２１（Ｊａｎ  １９９７）；Ｆｕｒｌｅｒ，Ｓ．ら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８（１１）：８６４−８７３（Ｊｕｎｅ  ２００１）；Ｋｌｕｍｐ  Ｈ．ら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８（１０）：８１１−８１７（Ｍａｙ  ２００１）を参照されたい。この２ＡペプチドはＩＲＥＳよりかなり小さく、空間が制限因子である場合にそれを使用に十分に適するようにする。しかしながら、選択される導入遺伝子は、いかなる生物学的に活性の産物若しくは他の産物、例えば研究に所望の産物もコードしうる。
【００７４】
適する導入遺伝子は当業者により容易に選択されうる。導入遺伝子の選択は本態様の制限であるとみなされない。
【００７５】
２．調節エレメント
ミニ遺伝子について上で同定された主要エレメントに加え、該ベクターは、本明細書に記述される方法により製造されかつ／若しくは当業者に既知のプラスミドベクターでトランスフェクトされた若しくはウイルスに感染させた細胞中でのその転写、翻訳および／若しくは発現を可能にする様式で導入遺伝子に作動可能に連結されている必要な慣習的調節領域もまた包含する。「調節領域」若しくは「制御配列」は、ポリヌクレオチドの複製、重複、転写、スプライシング、翻訳若しくは分解を包含する該ポリヌクレオチドの機能制御に寄与する分子の相互作用に関わるヌクレオチド配列である。調節は該過程の頻度、速度若しくは特異性に影響を与える可能性があり、そして本質的に高める若しくは阻害性であることができる。調節領域は当該技術分野で既知であり、そしていくつかの例を本明細の別の場所で論考する。本明細書で使用されるところの「作動可能に連結されている」配列は、目的の遺伝子に隣接する発現制御配列、およびトランスで若しくは少し離れて作用して目的の遺伝子を制御する発現制御配列の双方を包含する。
【００７６】
発現制御配列は、適切な転写開始、終止、プロモーターおよびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化（ポリＡ）シグナルのような効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を高める配列（すなわちコザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を高める配列；ならびに所望の場合はコードされる産物の分泌を高める配列を包含する。
【００７７】
天然の、構成的、誘導可能および／若しくは組織特異的であるプロモーターを包含する多数の発現制御配列が当該技術分野で既知でありかつ利用されうる。構成的プロモーターの例は、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター（場合によってはＲＳＶエンハンサーを伴う）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（場合によってはＣＭＶエンハンサーを伴う）（例えばＢｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５）を参照されたい）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素プロモーター、β−アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、およびＥＦ１αプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を制限なしに包含する。
【００７８】
誘導可能なプロモーターは遺伝子発現の調節を可能にし、そして外的に供給される化合物、温度のような環境因子、若しくは特定の生理学的状態、例えば急性期、細胞の特定の分化段階の存在により、または複製細胞中でのみ調節され得る。誘導可能なプロモーターおよび誘導可能な系はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣｌｏｎｔｅｃｈおよびＡｒｉａｄを制限なしに包含する多様な商業的供給源から入手可能である。多くの他の系が記述されておりかつ当業者により容易に選択され得る。例えば、誘導可能なプロモーターは、亜鉛で誘導可能なヒツジメタロチオニン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）（ＭＴ）プロモーターおよびデキサメサゾン（Ｄｅｘ）で誘導可能なマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターを包含する。他の誘導可能な系は、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター系（第ＷＯ  ９８／１００８８号明細書）；エクジソン昆虫プロモーター（Ｎｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：３３４６−３３５１（１９９６））、テトラサイクリンで抑制可能な系（Ｇｏｓｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：５５４７−５５５１（１９９２））、テトラサイクリンで誘導可能な系（Ｇｏｓｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６８：１７６６−１７６９（１９９５）、Ｈａｒｖｅｙら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５１２−５１８（１９９８）もまた参照されたい）を包含する。他の系は、ＦＫ５０６二量体、カストラジオール（ｃａｓｔｒａｄｉｏｌ）を使用するＶＰ１６若しくはｐ６５、ジフェノールムリスレロン（ｄｉｐｈｅｎｏｌ  ｍｕｒｉｓｌｅｒｏｎｅ）、ＲＵ４８６で誘導可能な系（Ｗａｎｇら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：２３９−２４３（１９９７）およびＷａｎｇら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：４３２−４４１（１９９７））ならびにラパマイシンで誘導可能な系（Ｍａｇａｒｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２８６５−２８７２（１９９７））を包含する。いくつかの誘導可能なプロモーターの有効性は時間とともに増大する。こうした場合には、複数のリプレッサーをタンデムに挿入することにより（例えばＩＲＥＳによりＴｅｔＲに結合したＴｅｔＲ）こうした系の有効性を高め得る。あるいは、所望の機能についてスクリーニングする前に最低３日待機し得る。この系の有効性を高めるための既知手段により所望のタンパク質の発現を高め得る（例えばウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を使用して）。
【００７９】
別の態様において、導入遺伝子の天然のプロモーターを使用することができる。該天然のプロモーターは、該導入遺伝子の発現が天然の発現を模倣すべきであることが望ましい場合に好ましいことがある。該天然のプロモーターは、導入遺伝子の発現が一時的に若しくは発達的に、または組織特異的様式で、あるいは特定の転写刺激に応答して調節されなければならない場合に使用しうる。さらなる一態様において、エンハンサーエレメント、ポリアデニル化部位若しくはコザックコンセンサス配列のような他の天然の発現調節領域もまた天然の発現を模倣するのに使用しうる。
【００８０】
導入遺伝子の別の態様は組織特異的プロモーターに作動可能に連結されている導入遺伝子を包含する。例えば、骨格筋での発現が望ましい場合は筋で活性のプロモーターを使用すべきである。これらは、骨格β−アクチン、ミオシン軽鎖２Ａ、ジストロフィン、筋クレアチンキナーゼをコードする遺伝子からのプロモーター、ならびに天然に存在するプロモーターより高い活性をもつ合成筋プロモーター（Ｌｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：２４１−２４５（１９９９）を参照されたい）を包含する。組織特異的であるプロモーターの例は、とりわけ、肝（アルブミン、Ｍｉｙａｔａｋｅら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：５１２４−３２（１９９７）；Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター、Ｓａｎｄｉｇら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．３：１００２−９（１９９６）；α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａｒｂｕｔｈｎｏｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１５０３−１４（１９９６））、骨オステオカルシン（Ｓｔｅｉｎら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．２４：１８５−９６（１９９７））；骨シアロプロテイン（Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１１：６５４−６４（１９９６））、リンパ球（ＣＤ２、Ｈａｎｓａｌら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１６１：１０６３−８（１９９８）；免疫グロブリンＨ鎖；Ｔ細胞受容体鎖）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター（Ａｎｄｅｒｓｅｎら、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１３：５０３−１５（１９９３））、神経フィラメント軽鎖遺伝子（Ｐｉｃｃｉｏｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：５６１１−５（１９９１））、および神経特異的ｖｇｆ遺伝子（Ｐｉｃｃｉｏｌｉら、Ｎｅｕｒｏｎ、１５：３７３−８４（１９９５））のような神経の（ｎｅｕｒｏｎａｌ）について既知である。
【００８１】
場合によっては、治療上有用な若しくは免疫原性の産物をコードする導入遺伝子を保有するベクターは、選択可能なマーカー若しくはレポーター遺伝子もまた包含することができ、とりわけジェネチシン、ハイグロマイシン若しくはピューリマイシン（ｐｕｒｉｍｙｃｉｎ）耐性をコードする配列を包含しうる。アンピシリン耐性のような、こうした選択可能なレポーター若しくはマーカー遺伝子（好ましくはウイルス粒子中にパッケージングされるようにウイルスゲノムの外側に配置される）を、細菌細胞中の該プラスミドの存在を知らせるのに使用し得る。ベクターの他成分は複製起点を包含しうる。これらおよび他のプロモーターならびにベクターエレメントの選択は慣習的であり、そして多くのこうした配列が利用可能である（例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、およびその中に引用される参考文献を参照されたい）。
【００８２】
これらのベクターは、当業者に既知の技術とともに本明細書に提供される技術および配列を使用して生成する。こうした技術は、教科書（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）に記述されるもののようなｃＤＮＡの慣習的クローニング技術、アデノウイルスゲノムのオーバーラップオリゴヌクレオチド配列の使用、ポリメラーゼ連鎖反応、および所望のヌクレオチド配列を提供するいずれかの適する方法を包含する。
【００８３】
ＩＩＩ．ウイルスベクターの製造
一態様において、サルアデノウイルスプラスミド（若しくは他のベクター）を使用してアデノウイルスベクターを製造する。一態様においてアデノウイルスベクターは複製欠損であるアデノウイルス粒子である。一態様において、アデノウイルス粒子はＥ１ａおよび／若しくはＥ１ｂ遺伝子の欠失により複製欠損にされている。あるいは、アデノウイルスは、場合によってはＥ１ａおよび／若しくはＥ１ｂ遺伝子を保持しつつ別の手段により複製欠損にされている。該アデノウイルスベクターは、アデノウイルスゲノムに対する他の突然変異、例えば他の遺伝子中の温度感受性突然変異若しくは欠失もまた含有し得る。他の態様において、アデノウイルスベクター中に無傷のＥ１ａおよび／若しくはＥ１ｂ領域を保持することが望ましい。こうした無傷のＥ１領域は、アデノウイルスゲノム中のその天然の場所に配置しうるか、若しくは天然のアデノウイルスゲノム中の欠失の部位（例えばＥ３領域中）に置くことができる。
【００８４】
ヒト（若しくは他の哺乳動物）細胞への遺伝子の送達のための有用なサルアデノウイルスベクターの構築において、ある範囲のアデノウイルス核酸配列を該ベクター中で使用し得る。例えば、アデノウイルス後初期遺伝子（ｄｅｌａｙｅｄ  ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ）Ｅ３の全部若しくは一部分を、組換えウイルスの一部を形成するサルアデノウイルス配列から除外しうる。サルＥ３の機能は組換えウイルス粒子の機能および産生に無関係であると考えられている。Ｅ４遺伝子の少なくともＯＲＦ６領域、およびより望ましくはこの領域の機能の冗長性によりＥ４領域全体の欠失を有するサルアデノウイルスベクターもまた構築しうる。なお別のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターは後初期遺伝子Ｅ２ａ中に欠失を含有する。欠失はサルアデノウイルスゲノムの後期遺伝子Ｌ１からＬ５のいずれで行ってもまたよい。同様に、中間遺伝子（ｉ
ｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｇｅｎｅ）ＩＸおよびＩＶａ2中の欠失がいくつかの目的上有用でありうる。他の欠失を他の構造的若しくは非構造的アデノウイルス遺伝子中で行いうる。上で論考された欠失は個別に使用しうる。すなわち、本明細書に記述されるところの使用のためのアデノウイルス配列は単一領域のみに欠失を含有しうる。あるいは、遺伝子全体、若しくはそれらの生物学的活性を破壊するのに効果的なそれらの部分の欠失をいかなる組合せで使用してもよい。例えば、一例示的ベクター中で、アデノウイルス配列は、Ｅ３の欠失を伴う若しくは伴わない、Ｅ１遺伝子およびＥ４遺伝子、若しくはＥ１、Ｅ２ａおよびＥ３遺伝子、若しくはＥ１およびＥ３遺伝子、若しくはＥ１、Ｅ２ａおよびＥ４遺伝子などの欠失を有しうる。上で論考されたとおり、こうした欠失を、所望の結果を達成するために温度感受性突然変異のような他の突然変異とともに使用しうる。
【００８５】
いずれかの必須アデノウイルス配列（例えばＥ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａ、Ｅ２ｂ、Ｅ４  ＯＲＦ６、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４およびＬ５）を欠くアデノウイルスベクターは、ウイルスの感染性およびアデノウイルス粒子の増殖に必要とされる該欠けているアデノウイルス遺伝子産物の存在下で培養しうる。これらのヘルパー機能は、１種若しくはそれ以上のヘルパー構築物（例えばプラスミド若しくはウイルス）またはパッケージング宿主細胞の存在下で該アデノウイルスベクターを培養することにより提供しうる。例えば、１９９６年５月９日に公開されかつ引用することにより本明細書に組み込まれる国際特許出願第ＷＯ９６／１３５９７号明細書中の「最小」ヒトＡｄベクターの製造について記述される技術を参照されたい。
【００８６】
１．ヘルパーウイルス
従って、ミニ遺伝子を保有するため使用されるウイルスベクターのサルアデノウイルス遺伝子内容に依存して、ヘルパーアデノウイルス若しくは非複製ウイルスフラグメントが、該ミニ遺伝子を含有する感染性組換えウイルス粒子を製造するのに必要な十分なサルアデノウイルス遺伝子配列を提供するのに必要でありうる。有用なヘルパーウイルスは、アデノウイルスベクター構築物に存在せずかつ／若しくは該ベクターがトランスフェクトされるパッケージング細胞株により発現されない、選択されたアデノウイルス遺伝子配列を含有する。一態様において、該ヘルパーウイルスは複製欠損でありかつ上述された配列に加えて多様なアデノウイルス遺伝子を含有する。こうしたヘルパーウイルスは、望ましくはＥ１発現細胞株とともに使用する。
【００８７】
ヘルパーウイルスは、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６９８５−１６９８７（１９８９）；Ｋ．Ｊ．ＦｉｓｈｅｒとＪ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２９９：４９（Ａｐｒｉｌ  １、１９９４）に記述されるところのポリカチオン複合物中でもまた形成しうる。ヘルパーウイルスは場合によっては第二のレポーターミニ遺伝子を含有しうる。多数のこうしたレポーター遺伝子が当該技術分野に既知である。アデノウイルスベクター上の導入遺伝子と異なるヘルパーウイルス上のレポーター遺伝子の存在が、Ａｄベクターおよびヘルパーウイルスの双方が独立にモニターされることを可能にする。本第二のレポーターは、精製に際して、生じる組換えウイルスとヘルパーウイルスの間の分離を可能にするのに使用する。
【００８８】
２．補完細胞株
上述された遺伝子のいずれかで欠失された組換えサルアデノウイルス（Ａｄ）を生成するためには、欠失された遺伝子領域の機能を、該ウイルスの複製および感染性に不可欠である場合に、ヘルパーウイルス若しくは細胞株すなわち補完若しくはパッケージング細胞株により該組換えウイルスに供給しなければならない。多くの状況で、ヒトＥ１を発現する細胞株を使用して該サルＡｄベクターをトランス補完し（ｔｒａｎｓｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）得る。これは、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０配列と現在入手可能なパッケージング細胞で見出されるヒトＡｄＥ１配列の間の多
様性により、現在のヒトＥ１含有細胞の使用が複製および製造過程の間の複製能力のあるアデノウイルスの生成を予防するため、とりわけ有利である。しかしながら、ある状況では、Ｅ１欠失サルアデノウイルスの製造に利用し得るＥ１遺伝子産物を発現する細胞株を利用することが望ましいであろう。こうした細胞株は記述されている。例えば米国特許第６，０８３，７１６号明細書を参照されたい。
【００８９】
所望の場合は、選択された親細胞株中での発現のためのプロモーターの転写制御下にＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０からの少なくともアデノウイルスＥ１遺伝子を発現するパッケージング細胞若しくは細胞株を生成しうる。誘導可能な若しくは構成的プロモーターを本目的上使用しうる。こうしたプロモーターの例は本明細の別の場所に詳述されている。親細胞をいずれかの所望のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０遺伝子を発現する新規細胞株の生成のため選択する。制限なしに、こうした親細胞株は、とりわけＨｅＬａ（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ  ２）、Ａ５４９（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ  １８５）、ＨＥＫ  ２９３、ＫＢ（ＣＣＬ  １７）、Ｄｅｔｒｏｉｔ（例えばＤｅｔｒｏｉｔ  ５１０、ＣＣＬ  ７２）およびＷＩ−３８（ＣＣＬ  ７５）細胞でありうる。これらの細胞株は全部Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９から入手可能である。他の適する親細胞株は他の供給源から得ることができる。
【００９０】
こうしたＥ１発現細胞株は組換えサルアデノウイルスＥ１欠失ベクターの生成において有用である。加えて、若しくは、別法として、１種若しくはそれ以上のサルアデノウイルス遺伝子産物、例えばＥ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａおよび／若しくはＥ４  ＯＲＦ６を発現する細胞株を、本質的に同一の手順を使用して構築することができ、組換えサルウイルスベクターの生成で使用する。こうした細胞株を、それらの産物をコードする必須遺伝子が欠失されたアデノウイルスベクターをトランス補完する、若しくはヘルパー依存ウイルス（例えばアデノ随伴ウイルス）のパッケージングに必要なヘルパー機能を提供するのに利用し得る。宿主細胞の製造は選択されたＤＮＡ配列の集成のような技術を必要とする。この集成は慣習的技術を利用して成し遂げうる。こうした技術は、公知でありかつ上で引用されたＳａｍｂｒｏｏｋらに記述されるｃＤＮＡおよびゲノムクローニング、ポリメラーゼ連鎖反応と組み合わせたアデノウイルスゲノムのオーバーラップオリゴヌクレオチド配列の使用、合成法、ならびに所望のヌクレオチド配列を提供するいずれかの他の適する方法を包含する。
【００９１】
なお別法において、必須アデノウイルス遺伝子産物はアデノウイルスベクターおよび／若しくはヘルパーウイルスによりトランスに提供する。こうした場合に、適する宿主細胞は、原核生物（例えば細菌）細胞、ならびに昆虫細胞、酵母細胞および哺乳動物細胞を包含する真核生物細胞を包含するいかなる生物有機体からも選択し得る。とりわけ望ましい宿主細胞は、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、３Ｔ３、１０Ｔ１／２、ＨＥＫ  ２９３細胞若しくはＰＥＲＣ６（その双方は機能的アデノウイルスＥ１を発現する）（Ｆａｌｌａｕｘ，ＦＪら、（１９９８）、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：１９０９−１９１７）、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ細胞、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、ならびにヒト、サル、マウス、ラット、ウサギおよびハムスターを包含する哺乳動物由来の初代線維芽細胞、肝細胞および筋芽細胞のような細胞を制限なしに包含するいかなる哺乳動物種のなかからも選択される。細胞を提供する哺乳動物種の選択は本発明の制限でなく、哺乳動物細胞の型すなわち線維芽細胞、肝細胞、腫瘍細胞などもそうでない。
【００９２】
３．ウイルス粒子の集成および細胞株のトランスフェクション
一般に、ミニ遺伝子を含んでなるベクターをトランスフェクションにより送達する場合、該ベクターは、約１×１０4細胞ないし約１×１０13細胞、および好ましくは約１０5細
胞に対し約５μｇから約１００μｇまでのＤＮＡ、および好ましくは約１０ないし約５０μｇのＤＮＡの量で送達される。しかしながら、宿主細胞に対するベクターＤＮＡの相対量は、選択されるベクター、送達方法および選択される宿主細胞のような因子を考慮に入れて調節してよい。
【００９３】
該ベクターは、裸のＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、エピソーム、ウイルスなどを包含する当該技術分野で既知の若しくは上で開示されたいずれのベクターでもよい。ベクターの宿主細胞への導入は、トランスフェクションおよび感染を包含する当該技術分野で既知の若しくは上で開示されたところのいずれの手段によっても達成しうる。アデノウイルス遺伝子の１種若しくはそれ以上が、宿主細胞のゲノム中に安定に組込まれうるか、エピソームとして安定に発現されうるか、若しくは一過性に発現されうる。遺伝子産物は全部、エピソーム上で一過性に発現されうるか若しくは安定に組込まれうるか、または、遺伝子産物の数種が安定に発現されうる一方で他者は一過性に発現される。さらに、アデノウイルス遺伝子のそれぞれのプロモーターは、構成的プロモーター、誘導可能なプロモーター若しくは天然のアデノウイルスプロモーターから独立に選択しうる。プロモーターは、例えば生物体若しくは細胞の特定の生理学的状態により（すなわち分化状態により、または複製中の若しくは静止状態の細胞中で）、あるいは外的に添加される因子により調節しうる。
【００９４】
宿主細胞中への（プラスミド若しくはウイルスのような）分子の導入は、当業者に既知のおよび本明細を通じて論考されるところの技術を使用してもまた達成しうる。好ましい態様において、標準的トランスフェクション技術、例えばＣａＰＯ4トランスフェクション若しくは電気穿孔法を使用する。
【００９５】
アデノウイルスの選択されたＤＮＡ配列（ならびに導入遺伝子および他のベクターエレメント）の多様な中間プラスミドへの集成、ならびに組換えウイルス粒子を製造するためのプラスミドおよびベクターの使用は全部慣習的技術を使用して達成される。こうした技術は、教科書（上で引用されたＳａｍｂｒｏｏｋら）に記述されるもののようなｃＤＮＡの慣習的クローニング技術、アデノウイルスゲノムのオーバーラップオリゴヌクレオチド配列の使用、ポリメラーゼ連鎖反応、および所望のヌクレオチド配列を提供するいずれかの適する方法を包含する。標準的トランスフェクションおよびコトランスフェクション技術、例えばＣａＰＯ4沈殿技術を使用する。使用される他の慣習的方法は、ウイルスゲノムの相同的組換え、アガーオーバーレイ中のウイルスのプラーク形成（ｐｌａｑｕｉｎｇ）、シグナル発生の測定方法などを包含する。
【００９６】
例えば、所望のミニ遺伝子含有ウイルスベクターの構築および集成後に、該ベクターをヘルパーウイルスの存在下にｉｎ  ｖｉｔｒｏでパッケージング細胞株にトランスフェクトする。相同的組換えがヘルパーおよびベクター配列間で起こり、それは該ベクター中のアデノウイルス−導入遺伝子配列が複製されかつビリオンキャプシドにパッケージングされることを可能にし、組換えウイルスベクター粒子をもたらす。こうしたウイルス粒子の現在の製造方法はトランスフェクションに基づく。しかしながら本発明はこうした方法に制限されない。生じる組換えサルアデノウイルスは選択された細胞への選択された導入遺伝子の移入において有用である。
【００９７】
ＩＶ．組換えアデノウイルスベクターの使用
組換えサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０に基づくベクターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ
ｖｉｖｏでヒト若しくはサル以外の家畜患者への遺伝子移入に有用である。
【００９８】
本明細書に記述される組換えアデノウイルスベクターを、異種遺伝子によりコードされ
る産物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの製造のための発現ベクターとして使用し得る。例えば、Ｅ１欠失の場所に挿入された遺伝子を含有する組換えアデノウイルスを、上述されたところのＥ１発現細胞株にトランスフェクトしうる。あるいは、複製能力のあるアデノウイルスを別の選択された細胞株で使用しうる。該トランスフェクトした細胞をその後慣習的様式で培養して、組換えアデノウイルスにプロモーターから遺伝子産物を発現させる。該遺伝子産物をその後、培養物からの既知の慣習的なタンパク質単離および回収方法により培地から回収しうる。
【００９９】
ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０由来組換えサルアデノウイルスベクターは、生物体が１種若しくはそれ以上のＡＡＶ血清型に対する中和抗体を有する場合であっても、選択された宿主細胞に選択された導入遺伝子をｉｎ  ｖｉｖｏ若しくはｅｘ  ｖｉｖｏで送達し得る効率的遺伝子移入媒体を提供する。一態様において、ｒＡＡＶおよび細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで混合し；慣習的方法論を使用して感染細胞を培養し；そして形質導入された細胞を患者に再注入する。これらの組成物は、治療目的上、および保護免疫を誘導することを包含する免疫化のための遺伝子送達にとりわけ良好に適する。
【０１００】
より一般的には、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０組換えアデノウイルスベクターは、下述されるとおり治療若しくは免疫原性分子の送達に利用することができる。該組換えアデノウイルスベクターが組換えアデノウイルスベクターの反復送達を必要とする療法での使用にとりわけ良好に適することが双方の応用について容易に理解されるであろう。こうした療法は、典型的に、ウイルスキャプシドが変えられている一連のウイルスベクターの送達を必要とする。ウイルスキャプシドは、各その後の投与について、または予め選択された数の特定の一血清型キャプシドの投与（例えば１、２、３、４回若しくはそれ以上）の後に変えることができる。従って、ある療法は、第一のサルキャプシドをもつｒＡｄの送達、第二のサルキャプシドをもつｒＡｄを用いる送達、および第三のサルキャプシドを用いる送達を必要としうる。単独で、相互と組合せで、若しくは他のアデノウイルス（好ましくは免疫学的に交差反応性でない）と組合せでＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０キャプシドを使用する多様な他の療法が当業者に明らかであろう。場合によっては、こうした療法は、本明細書に記述されるような他のヒト以外の霊長類のアデノウイルス、ヒトアデノウイルス若しくは人工配列のキャプシドをもつｒＡｄの投与を必要としうる。療法の各相は、単一Ａｄキャプシドを用いる一連の注入（若しくは他の送達経路）の投与、次いで異なるＡｄ供給源からの別のキャプシドを伴うシリーズを必要としうる。あるいは、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターを、他のウイルス系、ウイルス以外の送達系、タンパク質、ペプチドおよび他の生物学的に活性の分子を包含する、他のアデノウイルスに媒介されない送達系を必要とする療法で利用しうる。
【０１０１】
以下のセクションは、該ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターを介して送達しうる例示的分子に焦点を当てることができる。
【０１０２】
Ａ．治療分子のＡｄ媒介性送達
一態様において、上述された組換えベクターを公表された遺伝子治療方法に従ってヒトに投与する。選択された導入遺伝子を持つサルウイルスベクターは、好ましくは生物学的に適合性の溶液若しくは製薬学的に許容できる送達ベヒクルに懸濁して患者に投与しうる。適するベヒクルは滅菌生理的食塩水を包含する。製薬学的に許容できる担体であることが既知かつ当業者に公知の他の水性および非水性の等張の滅菌注入溶液ならびに水性および非水性の滅菌懸濁液を本目的上使用しうる。
【０１０３】
該サルアデノウイルスベクターは、医学の技術分野の当業者により決定され得る、標的
細胞を形質導入し、ならびに不要な有害作用を伴わず若しくは医学上許容できる生理学的効果を伴い治療上の利益を提供するのに十分なレベルの遺伝子移入および発現を提供するのに十分な量で投与する。慣習的かつ製薬学的に許容できる投与経路は、限定されるものでないが、網膜への直接送達および他の眼内送達法、肝への直接送達、吸入、鼻内、静脈内、筋肉内、気管内、皮下、皮内、直腸、経口および他の非経口投与経路を挙げることができる。投与経路は、所望の場合は組合せうるか、または導入遺伝子若しくは状態に依存して調節しうる。投与経路は、主として、処置されている状態の性質に依存することができる。
【０１０４】
ウイルスベクターの投与量は、主として、処置されている状態、患者の齢、重量および健康状態のような因子に依存することができ、そして従って患者間で異なりうる。例えば、ウイルスベクターの治療上有効な成体のヒト若しくは家畜の投与量は、一般に約１×１０6から約１×１０15粒子まで、約１×１０11ないし１×１０13粒子、若しくは約１×１０9ないし１×１０12粒子のウイルスの濃度を含有する約１００μＬから約１００ｍＬまでの担体の範囲にある。投与量は動物の大きさおよび投与経路に依存して変動することができる。例えば、筋肉内注入に適するヒト若しくは家畜の投与量（約８０ｋｇの動物について）は、単一部位について１ｍＬあたり約１×１０9ないし約５×１０12粒子の範囲にある。場合によっては複数の投与部位が送達されうる。別の例において、適するヒト若しくは家畜の投与量は、経口製剤について約１×１０11ないし約１×１０15粒子の範囲にありうる。当業者は、投与経路および該組換えベクターを使用する治療若しくはワクチンの応用に依存してこれらの用量を調節しうる。導入遺伝子の発現のレベル、若しくは免疫原については循環抗体のレベルをモニターして投与量の投与頻度を決定し得る。投与の頻度のタイミングのなお他の決定方法は当業者に容易に明らかであろう。
【０１０５】
任意の方法の一段階は、適する量の短時間作用型免疫調節物質のウイルスベクターの投与と同時、またはその前若しくは後のいずれかの患者への共投与を必要とする。選択される免疫調節物質は、組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターに向けられる中和抗体の形成を阻害することが可能な、若しくは該ベクターの細胞溶解性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）排除を阻害することが可能な剤と本明細書で定義する。免疫調節物質は、Ｔヘルパーサブセット（ＴH1若しくはＴH2）とＢ細胞の間の相互作用を妨害して中和抗体形成を阻害しうる。あるいは、免疫調節物質は、ＴH1細胞とＣＴＬの間の相互作用を阻害して該ベクターのＣＴＬ排除の発生を低下させうる。多様な有用な免疫調節物質およびそれらの使用のための投与量が、例えばＹａｎｇら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０（９）（Ｓｅｐｔ．１９９６）；１９９６年５月２日に公開された国際特許出願第ＷＯ９６／１２４０６号明細書；および国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９６／０３０３５号明細書（全部は引用することにより本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【０１０６】
１．治療的導入遺伝子
導入遺伝子によりコードされる有用な治療的産物は、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体化ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様増殖因子ＩおよびＩＩ（ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−ＩＩ）、ＴＧＦ、アクチビン、インヒビンを包含するトランスフォーミング増殖因子スーパーファミリーのいずれか１種、若しくは骨形成タンパク質（ＢＭＰ）ＢＭＰ１〜１５のいずれか、増殖因子のヘレグルイン（ｈｅｒｅｇｌｕｉｎ）／ニューレグリン／ＡＲＩＡ／ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）ファミリーのいずれか１種、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄
養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ−３およびＮＴ−４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューツリン、アグリン、セマフォリン／コラプシンのファミリーのいずれか１種、ネトリン−１およびネトリン−２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグならびにチロシン水酸化酵素を制限なしに包含するホルモンならびに増殖および分化因子を包含する。
【０１０７】
他の有用な導入遺伝子産物は、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ）ＩＬ−１からＩＬ−２５（例えばＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８を包含する）、単球化学誘引物質タンパク質、白血病阻害因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子、ならびにインターフェロン、および幹細胞因子、ｆｌｋ−２／ｆｌｔ３リガンドのようなサイトカインおよびリンホカインを制限なしに包含する免疫系を調節するタンパク質を包含する。免疫系により産生される遺伝子産物もまた有用である。これらは、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、一本鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子、ならびに工作された免疫グロブリンおよびＭＨＣ分子を制限なしに包含する。有用な遺伝子産物は、補体調節タンパク質、メンブレンコファクタープロテイン（ＭＣＰ）、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、ＣＲ１、ＣＦ２およびＣＤ５９のような補体調節タンパク質もまた包含する。
【０１０８】
なお他の有用な遺伝子産物は、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、リンホカイン、調節タンパク質および免疫系タンパク質の受容体のいずれか１種を包含する。低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）受容体、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）受容体およびスカベンジャー受容体を包含するコレステロール調節のための受容体もまた本明細書に包含される。グルココルチコイド受容体およびエストロゲン受容体を包含するステロイドホルモン受容体スーパーファミリーのメンバー、ビタミンＤ受容体ならびに他の核受容体のような遺伝子産物もまた企図している。加えて、有用な遺伝子産物は、ｊｕｎ、ｆｏｓ、ｍａｘ、ｍａｄ、血清応答因子（ＳＲＦ）、ＡＰ−１、ＡＰ２、ｍｙｂ、ＭｙｏＤおよびミオゲニン、ＥＴＳボックス含有タンパク質、ＴＦＥ３、Ｅ２Ｆ、ＡＴＦ１、ＡＴＦ２、ＡＴＦ３、ＡＴＦ４、ＺＦ５、ＮＦＡＴ、ＣＲＥＢ、ＨＮＦ−４、Ｃ／ＥＢＰ、ＳＰ１、ＣＣＡＡＴボックス結合タンパク質、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ−１）、ウィルムス腫瘍タンパク質、ＥＴＳ結合タンパク質、ＳＴＡＴ、ＧＡＴＡボックス結合タンパク質例えばＧＡＴＡ−３、およびウィングドヘリックスタンパク質のフォークヘッドファミリーのような転写因子を包含する。
【０１０９】
他の有用な遺伝子産物は、カルバモイル合成酵素Ｉ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギノコハク酸合成酵素、アルギノコハク酸脱離酵素、アルギナーゼ、フマリルアセト酢酸加水分解酵素、フェニルアラニン水酸化酵素、α−１アンチトリプシン、グルコース−６−ホスファターゼ、ポルフォビリノーゲン脱アミノ酵素、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、シスタチオンβ合成酵素、分枝状鎖ケト酸脱炭酸酵素、アルブミン、イソバレリルｃｏＡ脱水素酵素、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、グルタリルＣｏＡ脱水素酵素、インスリン、β−グルコシダーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼ、肝ホスホリラーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、グリシン脱炭酸酵素、Ｈ−プロテイン、Ｔ−プロテイン、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）配列およびジストロフィンのｃＤＮＡ配列を包含する。
【０１１０】
他の有用な遺伝子産物は、挿入、欠失若しくはアミノ酸置換を含有する天然に存在しないアミノ酸配列を有するキメラ若しくはハイブリッドポリペプチドのような天然に存在しないポリペプチドを包含する。例えば、一本鎖の工作された免疫グロブリンはある種の免疫無防備状態の患者で有用であり得る。他の型の天然に存在しない遺伝子配列は、標的の
過剰発現を低下させるのに使用し得るアンチセンス分子およびリボザイムのような触媒的核酸を包含する。
【０１１１】
遺伝子の発現の低下および／若しくは調節は、癌および乾癬がそうであるような過剰増殖細胞を特徴とする過剰増殖状態の処置にとりわけ望ましい。標的ポリペプチドは、過剰増殖細胞中で独占的に若しくは正常細胞と比較してより高レベルで産生されるポリペプチドを包含する。標的抗原は、ｍｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎのような癌遺伝子ならびに転位遺伝子ｂｃｒ／ａｂｌ、ｒａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋおよびＥＧＲＦによりコードされるポリペプチドを包含する。標的抗原としての癌遺伝子産物に加え、抗癌処置および保護療法の標的ポリペプチドは、いくつかの態様において自己免疫疾患の標的抗原としてもまた使用される、Ｂ細胞リンパ腫により作成される抗体の可変領域およびＴ細胞リンパ腫のＴ細胞受容体の可変領域を包含する。モノクローナル抗体１７−１Ａおよび葉酸結合ポリペプチドにより認識されるポリペプチドを包含する、腫瘍細胞中でより高レベルで見出されるポリペプチドのような他の腫瘍関連ポリペプチドを、標的ポリペプチドとして使用し得る。
【０１１２】
他の適する治療的ポリペプチドおよびタンパク質は、細胞受容体を包含する自己免疫と関連する標的および自己に向けられた抗体を産生する細胞に対する広範な保護免疫応答を賦与することにより、自己免疫疾患および障害に苦しめられている個体を処置するのに有用でありうるものを包含する。Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮病、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾癬、血管炎、ヴェゲナー肉芽腫症、クローン病および潰瘍性大腸炎を包含する。これらの疾患のそれぞれは、内在性抗原に結合しかつ自己免疫疾患と関連する炎症カスケードを開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を特徴とする。
【０１１３】
本明細書のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０配列に基づくサルアデノウイルスベクターは、導入遺伝子の複数のアデノウイルス媒介性送達が望ましい治療計画に、例えば同一導入遺伝子の再送達を必要とする療法、若しくは他の導入遺伝子の送達を必要とする併用療法でとりわけ良好に適する。こうした療法は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０サルアデノウイルスベクターの投与、次いで同一血清型アデノウイルスからのベクターを用いる再投与を必要としうる。とりわけ望ましい療法は、第一の投与で送達されるベクターのアデノウイルスキャプシド配列の供給源がその後の投与の１回若しくはそれ以上で利用されるウイルスベクターのアデノウイルスキャプシド配列の供給源と異なるＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０サルアデノウイルスベクターの投与を必要とする。例えば、ある治療計画は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターの投与、ならびに同一若しくは異なる血清型の１種若しくはそれ以上のアデノウイルスベクターを用いる反復投与を必要とする。別の例において、治療計画は、アデノウイルスベクターの投与、次いで第一の送達されるアデノウイルスベクター中のキャプシドの供給源と異なるキャプシドを有するＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターを用いる反復投与、ならびに、場合によっては前の投与段階のベクターのアデノウイルスキャプシドの供給源と同一であるか若しくは好ましくは異なる別のベクターを用いるさらなる投与を必要とする。これらの療法は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０配列を使用して構築されるアデノウイルスベクターの送達に制限されない。むしろ、これらの療法は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターの１種若しくはそれ以上と組合せの、他のサルアデノウイルス配列（例えばＰａｎ９若しくはＣ６８、Ｃ１など）、他のヒト以外の霊長類アデノウイルス配列またはヒトアデノウイルス配列を制限なしに包含するベクター他のアデノウイルス配列を容易に利用
し得る。こうしたサル、他のヒト以外の霊長類およびヒトのアデノウイルス血清型の例は本文書の別の場所で論考する。さらに、これらの治療計画は、アデノウイルス以外のベクター、ウイルス以外のベクター、および／または多様な他の治療上有用な化合物若しくは分子と組合せのＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０アデノウイルスベクターの同時若しくは連続いずれかの送達を必要としうる。ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターの使用はこれらの治療計画に制限されず、多様なそれらが当業者に容易に明らかであろう。
【０１１４】
Ｂ．免疫原性導入遺伝子のＡｄ媒介性送達
該組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターは免疫原性組成物としてもまた使用しうる。本明細書で使用されるところの免疫原性組成物は、それに対する体液性（例えば抗体）若しくは細胞性（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）応答が、哺乳動物、および好ましくは霊長類への送達後に該免疫原性組成物により送達される導入遺伝子産物に対し開始される組成物である。組換えサルＡｄは所望の免疫原をコードする遺伝子をそのアデノウイルス配列欠失のいずれかに含有し得る。該サルアデノウイルスは、ヒト起源のアデノウイルスに比較して多様な動物種で生組換えウイルスワクチンとしての使用により良好に適することがありそうであるが、しかしこうした使用に制限されない。該組換えアデノウイルスは、免疫応答の誘導にきわめて重要でかつ病原体の拡散を制限することが可能な抗原（１種若しくは複数）が同定されておりかつｃＤＮＡが利用可能であるいかなる病原体に対する予防的若しくは治療的ワクチンとしても使用し得る。こうしたワクチン（若しくは他の免疫原性）組成物は上述されたとおり適する送達ベヒクル中で処方する。一般に免疫原性組成物の用量は治療的組成物について上で定義された範囲にある。選択された遺伝子の免疫のレベルをモニターしてブースターの必要性（あれば）を決定し得る。血清中の抗体力価の評価後に、任意のブースター免疫化が望ましいかもしれない。
【０１１５】
場合によっては、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターのワクチン組成物は例えばアジュバント、安定剤、ｐＨ調節剤、保存剤などを包含する他の成分を含有するように処方しうる。こうした成分はワクチンの技術分野の当業者に公知である。適するアジュバントの例は、リポソーム、アルム、モノホスホリルリピドＡ、およびサイトカイン、インターロイキン、ケモカイン、リガンドのようないずれかの生物学的に活性の因子、ならびに最適にはそれらの組合せを制限なしに包含する。これらの生物学的に活性の因子のあるものは例えばプラスミド若しくはウイルスベクターを介してｉｎ  ｖｉｖｏで発現させ得る。例えば、こうしたアジュバントは、抗原のみをコードするＤＮＡワクチンでのプライミングに際して生成される免疫応答と比較して抗原特異的免疫応答を高めるように、抗原をコードするプライミングＤＮＡワクチンとともに投与し得る。
【０１１６】
該組換えアデノウイルスは「免疫原性量」、すなわち所望の細胞をトランスフェクトしかつ免疫応答を誘導するために選択された遺伝子の十分なレベルの発現を提供するのにある投与経路で効果的である組換えアデノウイルスの量で投与する。保護免疫が提供される場合、該組換えアデノウイルスは、感染および／若しくは再発性疾患の予防において有用なワクチン組成物であると考えられる。
【０１１７】
あるいは、若しくは加えて、該ベクターは、選択された免疫原に対する免疫応答を誘導するペプチド、ポリペプチド若しくはタンパク質をコードする導入遺伝子を含有しうる。該組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターは、該ベクターにより発現される挿入された異種抗原タンパク質に対する細胞溶解性Ｔ細胞および抗体の誘導で高度に有効であると期待される。
【０１１８】
例えば、免疫原は多様なウイルス科から選択しうる。それに対する免疫応答が望ましいとみられるウイルス科の例は、感冒の症例の約５０％の原因であるライノウイルス属を包含するピコルナウイルス科；ポリオウイルス、コックサッキーウイルス、エコーウイルスおよびＡ型肝炎ウイルスのようなヒトエンテロウイルスを包含するエンテロウイルス属；ならびに主にヒト以外の動物における口蹄疫の原因であるアプトウイルス属を包含する。ウイルスのピコルナウイルス科内の標的抗原はＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４およびＶＰＧを包含する。別のウイルス科は、流行性胃腸炎の重要な原因病原体であるノーウォーク群のウイルスを包含するカルシウイルス（ｃａｌｃｉｖｉｒｕｓ）科を包含する。ヒトおよびヒト以外の動物で免疫応答を誘導するための抗原の標的指向化における使用に望ましいなお別のウイルス科は、シンドビスウイルス、ロスリバーウイルス、ならびにベネズエラ、東部および西部ウマ脳炎を包含するアルファウイルス属、ならびに風疹ウイルスを包含するルビウイルスを包含するトガウイルス科である。フラビウイルス科は、デング熱、黄熱病、日本脳炎、セントルイス脳炎およびダニ媒介性脳炎ウイルスを包含する。他の標的抗原は、Ｃ型肝炎、あるいは伝染性気管支炎ウイルス（家禽）、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ブタ）、ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス（ブタ）、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ネコ）、ネコ腸内コロナウイルス（ネコ）、イヌコロナウイルス（イヌ）のような多数のヒト以外のウイルスおよび感冒を引き起こしうるヒト呼吸器コロナウイルスを包含するコロナウイルス科ならびに／または非Ａ、非Ｂ若しくは非Ｃ型肝炎から生成しうる。コロナウイルス科内の標的抗原は、Ｅ１（Ｍ若しくはマトリックスタンパク質ともまた呼ばれる）、Ｅ２（Ｓ若しくはスパイクタンパク質ともまた呼ばれる）、Ｅ３（ＨＥ若しくはヘマグルチン−エルテロース（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ−ｅｌｔｅｒｏｓｅ）ともまた呼ばれる）糖タンパク質（全コロナウイルスに存在するわけではない）またはＮ（ヌクレオキャプシド）を包含する。なお他の抗原が、ベシクロウイルス属（例えば水疱性口内炎ウイルス）および一般的リッサウイルス（例えば狂犬病）を包含するラブドウイルス科に対し標的指向化されうる。
【０１１９】
ラブドウイルス科内の適する抗原はＧタンパク質若しくはＮタンパク質に由来しうる。マールブルグおよびエボラウイルスのような出血熱ウイルスを包含するフィロウイルス科は抗原の適する供給源となりうる。パラミクソウイルス科は、パラインフルエンザウイルス１型、パラインフルエンザウイルス３型、ウシパラインフルエンザウイルス３型、ルブラウイルス（流行性耳下腺炎ウイルス）、パラインフルエンザウイルス２型、パラインフルエンザウイルス４型、ニューカッスル病ウイルス（ニワトリ）、牛疫、麻疹およびイヌジステンパーを包含するモルビリウイルス、ならびにＲＳウイルスを包含するニューモウイルスを包含する。インフルエンザウイルスはオルソミクソウイルス科内に分類され、そして抗原（例えばＨＡタンパク質、Ｎ１タンパク質）の適する供給源である。ブニヤウイルス科は、ブニヤウイルス属（カリフォルニア脳炎、ラクロス）、フレボウイルス（リフトバレー熱）、ハンタウイルス（プレマラ（ｐｕｒｅｍａｌａ）はヘマハギン（ｈｅｍａｈａｇｉｎ）熱ウイルスである）、ナイロウイルス（ナイロビ羊病）および多様な割り当てられていないブンガウイルス（ｂｕｎｇａｖｉｒｕｓ）を包含する。アレナウイルス科はＬＣＭおよびラッサ熱ウイルスに対する抗原の供給源を提供する。レオウイルス科は、レオウイルス、ロタウイルス（小児で急性胃腸炎を引き起こす）、オルビウイルスおよびクルチウイルス（ｃｕｌｔｉｖｉｒｕｓ）（コロラドダニ熱、レボンボ（ヒト）、ウマ脳症、ブルータング）属を包含する。
【０１２０】
レトロウイルス科は、ネコ白血病ウイルス、ＨＴＬＶＩおよびＨＴＬＶＩＩ、レンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｌ）（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルスおよびスプマビリナル（ｓｐｕｍａｖｉｒｉｎａｌ）を包含する）のようなヒトおよび家畜の疾患を包含するオンコビリナル（ｏｎｃｏｖｉｒｉｎａｌ）亜科を包含する。レンチウイルスのなかで多くの適する抗原が記述され、そして容易に選択し得る。適するＨＩＶおよび
ＳＩＶ抗原の例は、ｇａｇ、ｐｏｌ、Ｖｉｆ、Ｖｐｘ、ＶＰＲ、Ｅｎｖ、Ｔａｔ、ＮｅｆおよびＲｅｖタンパク質、ならびにそれらの多様なフラグメントを制限なしに包含する。例えば、Ｅｎｖタンパク質の適するフラグメントは、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、ｇｐ４１のようなそのサブユニット、若しくは例えば長さ最低約８アミノ酸のそれらのより小さいフラグメントのいずれも包含しうる。同様にｔａｔタンパク質のフラグメントも選択しうる。（米国特許第５，８９１，９９４号明細書および米国特許第６，１９３，９８１号明細書を参照されたい。）Ｄ．Ｈ．Ｂａｒｏｕｃｈら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（５）：２４６２−２４６７（Ｍａｒｃｈ  ２００１）およびＲ．Ｒ．Ａｍａｒａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２９２：６９−７４（６  Ａｐｒｉｌ  ２００１）に記述されるＨＩＶおよびＳＩＶタンパク質もまた参照されたい。別の例において、ＨＩＶおよび／若しくはＳＩＶの免疫原性タンパク質若しくはペプチドを使用して、融合タンパク質若しくは他の免疫原性分子を形成しうる。例えば、２００１年８月２日に公開された第ＷＯ  ０１／５４７１９号明細書および１９９９年４月８日に公開された第ＷＯ  ９９／１６８８４号明細書に記述されるＨＩＶ−１  Ｔａｔおよび／若しくはＮｅｆ融合タンパク質ならびに免疫化療法を参照されたい。本明細書に記述されるＨＩＶおよび／若しくはＳＩＶ免疫原性タンパク質若しくはペプチドは単に例示的である。加えて、これらのタンパク質に対する多様な改変が記述されているか、若しくは当業者により容易に作成され得る。例えば米国特許第５，９７２，５９６号明細書に記述される改変ｇａｇタンパク質を参照されたい。さらに、いかなる所望のＨＩＶおよび／若しくはＳＩＶ免疫原も単独若しくは組合せで送達しうる。こうした組合せは単一ベクター若しくは複数のベクターからの発現を包含しうる。場合によっては、別の組合せは、タンパク質の形態の免疫原の１種若しくはそれ以上の送達を伴う１種若しくはそれ以上の発現された免疫原の送達を必要としうる。こうした組合せを下により詳細に論考する。
【０１２１】
パボーバウイルス科は、ポリオーマウイルス亜科（ＢＫＵおよびＪＣＵウイルス）ならびにパピローマウイルス亜科（癌若しくは乳頭腫の悪性の進行と関連する）を包含する。アデノウイルス科は呼吸器疾患および／若しくは腸炎を引き起こすウイルス（ＥＸ、ＡＤ７、ＡＲＤ、Ｏ．Ｂ．）を包含する。パルボウイルス科はネコパルボウイルス（ネコ腸炎）、ネコ汎白血球減少症ウイルス、イヌパルボウイルスおよびブタパルボウイルスを包含する。ヘルペスウイルス科は、シンプレックスウイルス（ＨＳＶＩ、ＨＳＶＩＩ）、バリセロウイルス（偽性狂犬病、帯状疱疹）属を包含するアルファヘルペスウイルス亜科、およびサイトメガロウイルス属（ＨＣＭＶ、ムロメガロウイルス）を包含するベータヘルペスウイルス亜科、ならびに、リンホクリプトウイルス属、ＥＢＶ（バーキットリンパ腫）、伝染性鼻気管炎、マレック病ウイルスおよびラジノウイルス属を包含するガンマヘルペスウイルス亜科を包含する。ポックスウイルス科は、オルトポックスウイルス（大疱瘡（天然痘）およびワクシニア（牛痘））、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス属を包含するチョルドポックスウイルス亜科、ならびにエントモポックスウイルス亜科を包含する。ヘパドナウイルス科はＢ型肝炎ウイルスを包含する。抗原の適する供給源となりうる１種の分類されないウイルスはＤ型肝炎ウイルスである。なお他のウイルス供給源は、トリ伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスおよびブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルスを包含しうる。アルファウイルス科はウマ動脈炎ウイルスおよび多様な脳炎ウイルスを包含する。
【０１２２】
他の病原体に対しヒト若しくはヒト以外の動物を免疫するのに有用である免疫原は、例えば、ヒトおよびヒト以外の脊椎動物を感染させる細菌、真菌、寄生性微生物若しくは多細胞寄生動物、または癌細胞若しくは腫瘍細胞からを包含する。細菌性病原体の例は、肺炎球菌；ブドウ球菌；および連鎖球菌をはじめとする病原性グラム陽性球菌を包含する。病原性グラム陰性球菌は髄膜炎菌；淋菌を包含する。病原性腸グラム陰性桿菌は、腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）；シュードモナス、アシネトバクテリア（ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｉａ）およびエイケネラ（ｅｉｋｅｎｅｌｌａ）；類鼻疽
；サルモネラ（ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）；シゲラ（ｓｈｉｇｅｌｌａ）；ヘモフィルス（ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）；モラクセラ（ｍｏｒａｘｅｌｌａ）；軟性下疳菌（Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ）（軟性下疳を引き起こす）；ブルセラ（ｂｒｕｃｅｌｌａ）；フラニセラ  ツラレンシス（Ｆｒａｎｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）（野兎病を引き起こす）；エルジニア（ｙｅｒｓｉｎｉａ）（パスツレラ）；ストレプトバシラス  モニリフォルミス（ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）およびスピリルムを包含し；グラム陽性桿菌は、リステリア  モノシトゲネス（ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；エリジペロスリックス  ルシオパチエ（ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）；ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）（ジフテリア）；コレラ；炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）（炭疽）；ドノヴァン症（鼠径部肉芽腫）；およびバルトネラ症を包含する。病原性嫌気性細菌により引き起こされる疾患は破傷風；ボツリヌス中毒；他のクロストリジウム；結核；らい；および他のミコバクテリア感染症を包含する。病原性スピロヘータ疾患は梅毒；トレポネーマ症；イチゴ腫、ピンタおよび風土病性梅毒；ならびにレプトスピラ症を包含する。より高病原性の細菌および病原性真菌により引き起こされる他の感染症は、放線菌症；ノカルジア症；クリプトコックス症、ブラストミセス症、ヒストプラスマ症およびコクシジオイデス真菌症；カンジダ症、アスペルギルス症およびムコール症；スポロトリクス症；パラコクシジオイデス真菌症、ペトリエリジオーシス（ｐｅｔｒｉｅｌｌｉｄｉｏｓｉｓ）、トルロプシス症、菌腫およびクロモミコーシス；ならびに皮膚糸状菌症を包含する。リケッチア感染症は、発疹チフス、ロッキー山熱、Ｑ熱およびリケッチア痘を包含する。マイコプラスマおよびクラミジア感染症の例は：マイコプラスマ肺炎；性病性リンパ肉芽腫；オウム病；および周産期クラミジア感染症を包含する。病原性真核生物は病原性原生動物および蠕虫を包含し、また、それらにより生じられる感染症は：アメーバ症；マラリア；リーシュマニア；トリパノソーマ症；トキソプラスマ症；ニューモシスチス  カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）；トリカンス（Ｔｒｉｃｈａｎｓ）；トキソプラスマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）；バベシア症；ジアルジア症；旋毛虫症；フィラリア症；住血吸虫症；線虫；吸虫（ｔｒｅｍａｔｏｄｅｓ）すなわち吸虫（ｆｌｕｋｅｓ）；および条虫（ｃｅｓｔｏｄｅ）（条虫（ｔａｐｅｗｏｒｍ））感染症を包含する。
【０１２３】
これらの生物体および／若しくはそれらにより産生される毒素の多くは、生物学的攻撃での使用の可能性を有する剤として疾病対策センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）（（ＣＤＣ）、米国保健省の部門）により特定されている。例えば、これらの生物学的剤のいくつかは、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）（炭疽）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）およびその毒素（ボツリヌス中毒）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）（ペスト）、大疱瘡（天然痘）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）（野兎病）、ならびにウイルス性出血熱（フィロウイルス（例えばエボラ、マールブルグ）ならびにアレナウイルス（例えばラッサ、マチュポ））（それらの全部は現在カテゴリーＡの剤に分類されている）；コクシエラ  ブルネティ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｔｉ）（Ｑ熱）；ブルセラ属（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）スピーシーズ（ブルセラ症）、バークホルデリア  マレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）（鼻疽）、類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）（メロイドーシス（ｍｅｌｏｉｄｏｓｉｓ））、トウゴマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）およびその毒素（リシントキシン）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）およびその毒素（ε毒素）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）スピーシーズおよびそれらの毒素（エンテロトキシンＢ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）（オウム病）、水の安全性に対する脅威（例えばコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｅｒａｅ）、クリトスポリジウム  パルブム（Ｃｒｙｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ
ｐａｒｖｕｍ））、発疹チフス（発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｈｅｔｔｓｉａ  ｐｏ
ｗａｚｅｋｋｉ））、ならびにウイルス性脳炎（アルファウイルス、例えばベネズエラウマ脳炎；東部ウマ脳炎；西部ウマ脳炎）；（それらの全部は現在カテゴリーＢの剤として分類されている）；ならびにニパンウイルスおよびハンタウイルス（現在カテゴリーＣの剤として分類されている）を包含する。加えて、そのように分類されるか若しくは異なって分類される他の生物体が将来同定かつ／若しくはこうした目的上使用されうる。本明細書に記述されるウイルスベクターおよび他の構築物が、これらの生物学的剤への感染症若しくはそれらとの他の有害反応を予防かつ／若しくは処置することができる、これらの生物体、ウイルス、それらの毒素若しくは他の副生成物からの抗原を送達するのに有用であることが容易に理解されるであろう。
【０１２４】
Ｔ細胞の可変領域に対する免疫原を送達するためのＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターの投与は、それらのＴ細胞を排除するためのＣＴＬを包含する免疫応答を導き出すことが予期される。ＲＡにおいて、該疾患に関与するＴＣＲの数個の特定の可変領域が特徴づけられている。これらのＴＣＲはＶ−３、Ｖ−１４、Ｖ−１７およびＶα−１７を包含する。従って、これらのポリペプチドの最低１種をコードする核酸配列の送達はＲＡに関与するＴ細胞を標的指向化することができる免疫応答を導き出すことができる。ＭＳにおいて、該疾患に関与するＴＣＲの数個の特定の可変領域が特徴づけられている。これらのＴＣＲはＶ−７およびＶα−１０を包含する。従って、これらのポリペプチドの最低１種をコードする核酸配列の送達はＭＳに関与するＴ細胞を標的指向化することができる免疫応答を導き出すことができる。強皮症において、該疾患に関与するＴＣＲの数個の特定の可変領域が特徴づけられている。これらのＴＣＲはＶ−６、Ｖ−８、Ｖ−１４およびＶα−１６、Ｖα−３Ｃ、Ｖα−７、Ｖα−１４、Ｖα−１５、Ｖα−１６、Ｖα−２８ならびにＶα−１２を包含する。従って、これらのポリペプチドの最低１種をコードする組換えサルアデノウイルスの送達は強皮症に関与するＴ細胞を標的指向化することができる免疫応答を導き出すことができる。
【０１２５】
Ｃ．Ａｄ媒介性送達方法
選択された遺伝子の治療レベル若しくは免疫のレベルをモニターしてブースターの必要性（あれば）を決定し得る。血清中のＣＤ８＋  Ｔ細胞応答若しくは場合によっては抗体力価の評価後に任意のブースター免疫化が望ましいかもしれない。場合によっては、組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターを、単回投与で、あるいは多様な組合せ療法で、例えば他の有効成分を必要とする処置の療法若しくはクールと組合せで、またはプライム−ブースト（ｐｒｉｍｅ−ｂｏｏｓｔ）療法で送達しうる。多様なこうした療法が当該技術分野で記述されており、そして容易に選択されうる。
【０１２６】
例えば、プライム−ブースト療法は、タンパク質のような伝統的な抗原若しくはこうした抗原をコードする配列を保有する組換えウイルスを用いる第二のブースター投与に対し免疫系をプライミングするためのＤＮＡ（例えばプラスミド）に基づくベクターの投与を必要としうる。例えば２０００年３月２日に公開された第ＷＯ  ００／１１１４０号明細書（引用することにより組み込まれる）を参照されたい。あるいは、免疫化レジメンは、抗原を保有するベクター（ウイルス若しくはＤＮＡに基づくもののいずれか）またはタンパク質に対する免疫応答を増強するための組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターの投与を必要としうる。なお別の代替において、免疫化レジメンは、タンパク質、次いで抗原をコードするベクターを含むブースターの投与を必要とする。
【０１２７】
一態様において、選択された抗原を保有するプラスミドＤＮＡベクターを送達すること、次いで組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターを用いて増強することによる、前記抗原に対する免疫応答のプライミングおよ
び増強方法が記述される。一態様において、該プライム−ブースト療法はプライムおよび／若しくはブースト媒体からの多タンパク質の発現を必要とする。例えば、ＨＩＶおよびＳＩＶに対する免疫応答を生成させるのに有用なタンパク質サブユニットの発現のための多タンパク質療法を記述するＲ．Ｒ．Ａｍａｒａ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９２：６９−７４（６  Ａｐｒｉｌ  ２００１）を参照されたい。例えば、ＤＮＡプライムは、単一転写物からのＧａｇ、Ｐｏｌ、Ｖｉｆ、ＶＰＸおよびＶｐｒならびにＥｎｖ、ＴａｔおよびＲｅｖを送達しうる。あるいは、ＳＩＶ  Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＨＩＶ−１  Ｅｎｖを組換えＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０アデノウイルス構築物中で送達する。なお他のレジメンは第ＷＯ  ９９／１６８８４号明細書および第ＷＯ  ０１／５４７１９号明細書に記述されている。
【０１２８】
しかしながら、該プライム−ブースト療法はＨＩＶについての免疫化若しくはこれらの抗原の送達に制限されない。例えば、プライミングは、第一のＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターを用いて送達すること、次いで第二のＡｄベクター、若しくはタンパク質の形態の抗原それ自体を含有する組成物を用いて増強することを必要としうる。一例において、該プライム−ブースト療法は、抗原が由来するウイルス、細菌若しくは他の生物体に対する保護免疫応答を提供し得る。別の態様において、該プライム−ブースト療法は、治療が投与されている状態の存在の検出のための慣例アッセイを使用して測定し得る治療効果を提供する。
【０１２９】
プライミング組成物は、所望の免疫応答が標的指向化されている抗原に依存する用量依存性の様式で体内の多様な部位に投与しうる。注入（１回若しくは複数）の量若しくは場所または製薬学的担体は制限でない。むしろ、該療法は、毎時、毎日、毎週若しくは毎月または毎年投与される単一用量若しくは投与量をそれぞれが包含しうるプライミングおよび／若しくは増強段階を必要としうる。一例として、哺乳動物は、約１０μｇないし約５０μｇの間のプラスミドを担体中に含有する１若しくは２用量を受領しうる。ＤＮＡ組成物の所望の量は約１μｇないし約１０，０００μｇの間のＤＮＡベクターの範囲にわたる。投与量は被験体体重約１ｋｇあたり約１μｇから１０００μｇのＤＮＡまで変動しうる。送達の量若しくは部位は、望ましくは哺乳動物の正体および状態に基づいて選択する。
【０１３０】
哺乳動物への抗原の送達に適するベクターの投与量単位を本明細書に記述する。該ベクターは、等張の塩水；こうした投与の当業者に明らかであろう等張塩溶液若しくは他の製剤のような製薬学的若しくは生理学的に許容できる担体中に懸濁若しくは溶解されることにより投与のために調製される。適切な担体は当業者に明らかであることができ、そして投与経路に大きな部分依存することができる。本明細書に記述される組成物は、生物分解性の生物適合性ポリマーを使用する徐放製剤で、若しくはミセル、ゲルおよびリポソームを使用するその場の（ｏｎ−ｓｉｔｅ）送達により、上述された経路に従って哺乳動物に投与しうる。場合によっては、プライミング段階は、本明細書に定義されるような適する量のアジュバントをプライミング組成物とともに投与することもまた包含する。
【０１３１】
好ましくは、増強組成物は、哺乳動物被験体にプライミング組成物を投与した約２ないし約２７週後に投与する。増強組成物の該投与は、プライミングＤＮＡワクチンにより投与されると同一の抗原を含有する若しくは送達することが可能な有効量の増強組成物を使用して成し遂げる。該増強組成物は、同一ウイルス供給源（例えばそれぞれＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０アデノウイルス配列）または別の供給源由来の組換えウイルスベクターから構成しうる。あるいは、「増強組成物」は、プライミングＤＮＡワクチンにコードされると同一の抗原をしかしタンパク質若しくはペプチドの形態で含有する組成物であり得、この組成物が宿主中で免疫応答を誘導する。別の態様において、増強組成物は、哺乳動物細胞中でのその発現を指図する制御配列の制御下に抗原をコードするＤＮＡ配列、例えば公知の細菌若しくはウイルスベクターのよ
うなベクターを含有する。増強組成物の主要件は、該組成物の抗原がプライミング組成物によりコードされるものと同一の抗原若しくは交差反応性抗原であることである。
【０１３２】
別の態様において、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０ベクターは多様な他の免疫化および治療計画での使用にもまた良好に適する。こうした療法は、異なる血清型キャプシドのＡｄベクターと同時若しくは連続してのＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターの送達、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターをＡｄ以外のベクターと同時若しくは連続送達する療法、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９若しくは−５０ベクターをタンパク質、ペプチドおよび／または他の生物学的に有用な治療若しくは免疫原性化合物と同時若しくは連続送達する療法を必要としうる。こうした用途は当業者に容易に明らかであろう。
【０１３３】
以下の実施例は、ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０のクローニングならびに例示的組換えベクターの構築を具体的に説明する。これらの実施例は具体的説明のみであり、そして本発明の範囲を制限しない。
【実施例１】
【０１３４】
サルアデノウイルス（ＳＡｄＶ−４３、−４５、−４６、−４７、−４８、−４９および−５０）の単離ならびにＰＣＲ分析
糞便サンプルは動物を収容している施設で収集しかつハンクス平衡塩類溶液に懸濁し、そして氷上でペンシルバニア大学に送付した。微粒子を遠心分離により除去し、そして０．２μｍシリンジフィルターを通して無菌濾過した。各濾過したサンプル１００μｌを、１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシンおよび５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含むハムＦ１２中で増殖させたＡ５４９細胞に接種した。培養約１ないし２週後に、接種菌液のいくつかを含む細胞培養物で視覚的ＣＰＥが明らかであった。培養物中のアデノウイルスの存在を、ヘキソンの内的１．９ｋｂ（超可変領域を包含しかつ血清型特異性を賦与する主な原因である領域）のＰＣＲ増幅により確認した。
【０１３５】
ＰＣＲに利用したプライマー対は、配列番号３２：ＣＡＧＧＡＴＧＣＴＴＣＧＧＡＧＴＡＣＣＴＧＡＧおよび配列番号３３：ＴＴＧＧＣＮＧＧＤＡＴＤＧＧＧＴＡＶＡＧＣＡＴＧＴＴであった。この領域から得た配列を使用して、アデノウイルス種および血清型の新規性の初期決定を行った。アデノウイルス単離物は、標準的手順を使用して、Ａ５４９細胞でプラーク精製し、高力価まで増殖させ、そして塩化セシウム勾配で精製した。
【０１３６】
精製したウイルス調製物から得たウイルスＤＮＡを完全に配列決定した（Ｑｉａｇｅｎ
Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、独国ヒルデン）。加えて、アウタープライマー、配列番号３４：ＴＧＡＴＧＣＧＹＴＴＣＴＴＡＣＣＴＹＴＧＧＴＹＴＣＣＡＴＧＡＧおよび配列番号３５：ＡＧＴＴＹＴＡＣＡＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＴＴＡＣＣＧ、ならびにインナープライマー、配列番号３６：ＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＣＣＧＴＡおよび配列番号３７：ＴＣＡＣＧＴＧＧＣＣＴＡＣＡＣＴＴＡＣＡＡＧＣＣＡＡＴＣＡＣを用いるＤＮＡポリメラーゼに特異的な感受性ネステッドＰＣＲを、アデノウイルス排出の特異的診断として使用した。
【実施例２】
【０１３７】
系統発生分析
その後の系統発生分析に使用するための８種の遺伝子：ファイバー、ヘキソン、ペントン、プロテアーゼ、Ｅ１Ａ、ＤＮＡ結合タンパク質（ＤＢＰ）、ポリメラーゼ、末端タンパク質前駆体（ｐＴＰ）。注釈付けられたサルアデノウイルスゲノムＳＡｄＶ−２５．２を、注釈付けられない（標的）ゲノム中のこれらの遺伝子のコーディング配列を見出すた
めの参照として使用した。標的ゲノム中のある遺伝子を検出するため、以下の手順を実施した。すなわち、１）焦点の遺伝子（ｆｏｃａｌ  ｇｅｎｅ）を参照ゲノムから抽出し、そしてそれを標的ゲノムと整列した。これは標的ゲノム中の焦点の遺伝子のおおまかな場所を提供した。２）整列された領域と重なる標的ゲノム中の全ＯＲＦを同定した。３）該遺伝子がイントロン（Ｅ１Ａ、ポリメラーゼおよびｐＴＰ遺伝子）を有することが既知であった場合は、参照遺伝子に関して３０％までの第一エキソンの長さおよび６０％までの該イントロンの長さを保存した全部のＧＴ−ＡＧのイントロンの開始−終止シグナル対を同定し；全部のこうした潜在的イントロンを切り出し、潜在的コーディング配列のプールを生成した。４）このプールからの各コーディング配列について、対応するアミノ酸配列を参照アミノ酸配列と整列した。５）コーディング配列をそれらのアライメントスコアに従って並べ替えた。最高のスコアをもつコーディング配列を標的ゲノム中の焦点の遺伝子のコーディング配列とみなした。全部のアライメントはＣｌｕｓｔａｌＷ  ｖ．２．０．９ソフトウェア（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２２：４６７３−４６８０（１９９４））を用いて実施した。
【０１３８】
各遺伝子について生じるヌクレオチド配列アライメントから、トランジション／トランスバージョン比、不変部位の割合、および部位を横断する速度の離散化Γ分布（Ｙａｎｇ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｖｏｌ．３９：３０６−３１４（１９９４））を用いるＨＫＹ８５モデル（Ｈａｓｅｇａｗａら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｖｏｌ，２２：１６０−１７４（１９８５））でＰｈｙＭＬソフトウェア（ＧｕｉｎｄｏｎとＧａｓｃｕｅｌ，Ｓｙｓｔ  Ｂｉｏｌ，５２：６９６−７０４（２００３））を使用して、系統発生樹を再構築した。再構築した系統樹の信頼性を評価するため、１００回のブートストラップ再構築を各遺伝子について実施した。
【０１３９】
Ｂ、Ｃ、ＥおよびＤクレイド内の進化速度を正確に推定するため、旧世界ザルから単離された全アデノウイルスならびにＨＡｄＶ−４０およびＨＡｄＶ−１２単離物を除去した。残存するタンパク質配列を整列し、そしてＰＡＬ２ＮＡＬソフトウェア（Ｓｕｙａｍａら、Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，３４：Ｗ６０９−６１２（２００６））を使用してＤＮＡに逆翻訳した。このための系統樹は前と同一のモデルでこのデータサブセットを用いて生成した。最後に、枝特異的モデルでＰＡＭＬソフトウェア（Ｙａｎｇ，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｅｖｏｌ，２４：１５８６−１５９１（２００７））を使用して、枝の長さを固定して保つ多様な枝でのｄｎ／ｄｓ比を推定した。相同性の内的分析はＳＩＭＰＬＯＴスライディングウィンドウ解析（ウィンドウ：１０００ｂｐ、ステップ：２０ｂｐ）（Ｌｏｌｅら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，７３：１５２−１６０（１９９９））により行った。
【０１４０】
この分析の終わりに、今やサルアデノウイルス４３および４５と呼称されかつ本明細書に開示される配列がサブファミリーＣにあることが決定された。今やサルアデノウイルス４６および４７と呼称されかつ本明細書に開示される配列はサブファミリーＢにあることが決定された。
【０１４１】
今やサルアデノウイルス４８、４９および５０と呼称されかつ本明細書に開示される配列は、サブファミリーＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥのそれぞれに入らないことが決定された。ＳＡｄＶ−４８、−４９および−５０は従って以前に特徴付けられていないクレイドに位置する。ＳＡｄＶ−４８はおそらくＳＡｄＶ−３およびＳＡｄＶ−６（双方とも以前にアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）から単離されかつまた双方ともサブファミリーＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥの外側）に関係づけられる。ＳＡｄＶ−４９およびＳＡｄＶ−５０のある種の遺伝子は種ＡおよびＦアデノウイルスとの相同性を示した。
【実施例３】
【０１４２】
形質細胞様樹状細胞サイトカイン放出アッセイによるサイトカイン放出の分析
ＰＢＭＣを、１０００ｇで２５分間のＦｉｃｏｌｌ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）密度勾配遠心後にＥＤＴＡ若しくはヘパリン含有バキュテナーチューブに収集した全血から単離した。細胞を中間層から収集しかつＰＢＳで洗浄した。ＰＢＭＣをＡＣＫ溶解緩衝液とインキュベートして赤血球を溶解し、洗浄し、そして１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５０μｇ／ｍｌ硫酸ゲンタマイシンおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有する完全ＲＰＭＩ培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）に再懸濁した。
【０１４３】
形質細胞様樹状細胞は、形質細胞様樹状細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ペンシルベニア大学のＡＩＤＳ研究センター（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｆｏｒ
ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：ＣＦＡＲ）免疫学コア（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｃｏｒｅ）から得たヒトＰＢＭＣから単離した。
【０１４４】
細胞を示されるとおり１０，０００のＭＯＩで多様なアデノウイルスに感染させた。４８時間後に上清を収集し、そして、ＥＬＩＳＡ（ＩＦＮ−α、Ｐｉｅｒｃｅ）ならびに多重サイトカイン分析（インターロイキン−ｇ（ＩＬ−６）およびマクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ／Ｌｕｍｉｎｅｘ）の組合せを使用して多様なサイトカインおよびケモカインの誘導についてアッセイした。末梢血中の極端に少数のｐＤＣにより、提示されるデータは複数のドナーから単離された細胞を表す。
【０１４５】
適切なデータセットの統計学的有意性は、ｐ＜０．０１の場合に両側の対応のあるｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定により確立された。
【０１４６】
細胞内サイトカイン染色（ＩＣＣＳ）。単離されたリンパ球によるサイトカイン産生の測定を、モノクローナル抗体を用いる組合せた表面および細胞内染色ならびにその後の５色フローサイトメトリー分析により実施した。１０6リンパ球を、ＣＤ４９ｄおよびＣＤ２８に対する精製抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびにＧｏｌｇｉＰｌｕｇ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）の存在下に１０10粒子の熱不活性化ＳＡｄＶ−４８若しくは１μｇのＨＡｄＶ−５ヘキソンペプチドライブラリーと６時間インキュベートした。細胞を洗浄し、そしてＥＣＤ−ＣＤ８（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＡＰＣ−ＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）抗ヒト抗体で染色した。細胞を洗浄し、２５０μｌのＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ溶液で４℃で２０分間透過処理し、透過／洗浄溶液で洗浄し、そしてＦＩＴＣ−ＴＮＦ−α（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＰＥ−ＩＬ２（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＰＥ−Ｃｙ７−ＩＦＮ−Γ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を包含する抗サイトカイン抗体で４℃で３０分間染色した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより検査し、そしてＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ、オレゴン州）を使用してデータを解析した。
【０１４７】
同一の種グループに属するアデノウイルスとのサイトカイン／ケモカイン発現のプロファイルの顕著な類似性が存在した。種Ｃウイルスはいずれかのサイトカイン／ケモカインの有意の量を合成することに失敗した一方、高レベルの数種のサイトカイン／ケモカインが種Ｅウイルスへの曝露後に産生された。検出可能なしかしより大きく変動するレベルのサイトカインが種Ｂウイルスへの曝露後に見出された。それぞれの種グループ内で、ヒトおよびヒト以外の霊長類のアデノウイルスの間で一貫した差違は存在しなかった。
【０１４８】
ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴ
Ｃｏｖａｎｃｅ（Ｎ＝１５）およびＯｒｅｇｏｎ（Ｎ＝１５）からのアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）ならびにわれわれの施設からのカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）（Ｎ＝１０）から得たＰＢＭＣを、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、多様な抗原（ＨＡｄＶ−５（種Ｃ）、ＳＡｄＶ−２４（種Ｅ）、
ＳＡｄＶ−３２（種Ｂ）、３種のサル由来ウイルス（ＳＡＤＶ−４８、ＳＡｄＶ−４９およびＳＡｄＶ−５０）ならびにＨＡｄＶ−５ヘキソンペプチド）に対するアデノウイルス特異的Ｔ細胞について評価した。
【０１４９】
マルチスクリーン９６ウェル滴定プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）をＰＢＳ中のヒト（クローンＤＫ−１、Ｍａｂｔｅｃｈ）若しくはサル（クローンＧＺ−４、Ｍａｂｔｅｃｈ）ＩＦＮ−γに対する抗体で一夜被覆した。プレートを洗浄し、そしてその後完全培地（１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地）で１時間ブロッキングした。プレートをＲＰＭＩ培地で洗浄し、そしてリンパ球をウェルあたり１および２×１０5細胞で１００ｍｌの完全培地に播種した。刺激物質ペプチドプール若しくはウイルスを、２μｇ／ｍｌの各ペプチドの最終濃度まで、若しくは１００μｌの完全培地中本文中に示されるところのウイルスの多様な濃度で、各ウェルに添加した。細胞を５％ＣＯ2下３７℃で２０時間インキュベートした。プレートを洗浄し（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ）、そしてその後２％ＦＢＳを含有する洗浄緩衝液で希釈したヒトおよびサルＩＦＮ−γ（クローンＢ６−１；Ｍａｂｔｅｃｈ）に対するビオチニル化抗体とインキュベートした。プレートを２時間インキュベートしかつその後洗浄した。アビジンワサビペルオキシダーゼ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を各ウェルに添加し、そしてプレートを１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、そしてスポットをＡＥＣ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で発色させた。スポットを自動ＥＬＩＳＰＯＴリーダー（ＡＩＤ）で計数した。ＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ）およびＣＥＦペプチドプール（Ｍａｂｔｅｃｈ）を陽性対照として各分析に包含した。１０6リンパ球あたり５５スポット形成単位（ＳＦＵ）以上かつバックグラウンドの３倍の値をもつＥＬＩＳＰＯＴカウントのみを陽性と見なした。
【０１５０】
ＳＡｄＶ−４８で刺激した細胞からのＥＬＩＳＰＯＴデータは、低レベル応答をともなう若干の動物が存在したとは言え、ほとんどの動物からの細胞が、評価されたいずれかのアデノウイルス抗原に応答することに失敗したことを示した。
【０１５１】
選択されたアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）およびカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）を剖検し、そして末梢血ならびに腸からの多様な部位（回腸、結腸および直腸）から収集した単核細胞を、抗原としてＨＡｄＶ−５およびＳＡｄＶ−４８を使用してアデノウイルス特異的Ｔ細胞の存在について評価した。動物福祉の観点は類人猿での同様の研究を除外した。アデノウイルス特異的Ｔ細胞は、細胞を刺激するのにＳＡｄＶ−４８を使用した場合に腸全体で検出され、それらはセントラルメモリーおよびエフェクターメモリーの表現型をもつ細胞の混合物を示した。興味深いことに、腸でのアデノウイルス特異的Ｔ細胞の存在は、一貫して陰性であったか若しくは非常に低い応答を有した対応するＰＢＭＣの分析に基づき予測されなかった。サルで内因性アデノウイルス感染に対し生成されるＴ細胞は、血液若しくは粘膜からの細胞を使用してＨＡｄＶ−５で効果的に刺激されなかった。抗原としてＳＡｄＶ−４８を使用するアデノウイルスに対する数種のサルからの腸サンプルの細胞内サイトカイン染色（ＩＣＣＳ）は、ＣＤ４
Ｔ細胞の優勢を示したとは言え、該頻度は低いがしかしＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２の発現について陽性であった。糞便抽出物を、ＳＡｄＶ−３５（種Ｂ）およびＳＡｄＶ−４０（種Ｃ）に対する中和抗体の存在についてもまたアッセイした。罹患率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）および力価の双方が血清中のものより一貫して低いことが見出された。
【実施例４】
【０１５２】
ヒトアデノウイルスのＥ３遺伝子座は、対応するサルアデノウイルスと比較してより少なくかつより小さいＣＲ１オープンリーディングフレームを含有する。
【０１５３】
ヒトアデノウイルスの以前の研究は、Ｅ３遺伝子座が、宿主応答の調節で重要であるが
しかし複製に不可欠でないタンパク質をコードすることを示した。Ｅ３オープンリーディングフレームの構造および機能の変動は、類人猿とヒトの間で観察された宿主応答の顕著な差違に寄与しているかもしれない。
【０１５４】
アデノウイルスのＥ３領域は９種までのオープンリーディングフレームをコードし得る。ＳＡｄＶ−４８アデノウイルスはわずか６種のオープンリーディングフレーム、すなわち１２．４Ｋタンパク質、ＣＲ１−α、ＣＲ１−α、ＲＩＤ−α、ＲＩＤ−βおよび１４．７タンパク質を含有する。ＳＡｄＶ−４９およびＳＡｄＶ−５０アデノウイルスはわずか５種のオープンリーディングフレーム、すなわち１２．４Ｋタンパク質、ＣＲ１（他のアデノウイルスからのＣＲ１−β遺伝子に対する最高の相同性を有する）、ＲＩＤ−α、ＲＩＤ−βおよび１４．７タンパク質を含有する。
【０１５５】
抗アポトーシスタンパク質ＲＩＤ−α、ＲＩＤ−βおよび１４．７Ｋタンパク質（Ｔｏｌｌｅｆｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３９２：７２６−７３０（１９９８））、未知の機能の１２．５Ｋタンパク質をコードする第一のＥ３オープンリーディングフレームの産物、ならびにＭＨＣクラスＩ発現を下方制御することが既知であるｇｐ１９ｋタンパク質（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，４３：２１５−２２２（１９８５））をコードする最後の３種のオープンリーディングフレームを包含する、多くのアデノウイルスで見出される９種までのオープンリーディングフレームは、ヒトおよび類人猿のアデノウイルスにわたり高度に保存されている。
【０１５６】
多様な単離物で２から４まで番号付けされている残存するＥ３オープンリーディングフレームは、保存されたドメインすなわちＣＲ１（ｐｆａｍ  ＰＦ０２４４０）を含有しかつそれぞれＣＲ１−α、ＣＲ１−β、ＣＲ１−γおよびＣＲ１−δと呼称される、未知の機能の膜貫通タンパク質をコードする。ウイルスのそれぞれの種グループは、異なる種グループ間で変動したＣＲ１オープンリーディングフレームの特徴的な構造を示した。しかしながら、ある種グループ内で、ヒトおよび類人猿の単離物の間で一貫した差違が存在した。
【０１５７】
種Ｃの類人猿ウイルスは全部、３種のＣＲ１  ｏｒｆ、すなわちＣＲ１−α、ＣＲ１−βおよびＣＲ１−γを含有し、種Ｃファミリーのヒト代表物（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ）は一貫してＣＲ１−γ  ｏｒｆを欠いていた。種Ｂの類人猿ウイルスは全範囲の４種のＣＲ１を含有し、種Ｂファミリーのヒト代表物は、ＣＲ１−δ（ヒトＢ２）を欠いていたか、若しくは実質的に切断されたバージョンのＣＲ１−δ（ヒトＢ１）を含有したかのいずれかであった。種Ｅの類人猿ウイルスもまた全４種のＣＲ１  ｏｒｆを含有し、このファミリーの単独のヒト代表物ＨＡｄＶ−４は実質的に切断されたバージョンのＣＲ１−γを含有した。
【０１５８】
類人猿ウイルスと比較したヒトウイルス中のＣＲ１構造の明らかな変性は、宿主の免疫検出および排除を回避するウイルスの能力に影響しうる。ヒトウイルス中のＥ３機能の相対的減少が、ヒトで観察されるより効果的なＴ細胞応答および減少された排出を説明しうる。
【０１５９】
オープンリーディングフレームのＣＲ１ファミリーのこの分析は、アデノウイルスの異種間感染に関する可能なシナリオをさらに精密にするのに役立つ。系統発生樹全体のＥ３遺伝子座の構造は、種Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦウイルスの共通の祖先での重複事象、次いでとりわけヒトを感染させる血清型での（例えばＣＲ１−δの場合の）その後の遺伝子喪失を反映していることがありそうである。これは類人猿からヒトへのアデノウイルスの感染と最も一致する。他のより少なくありそうな説明は、独立した複数の重複がそれらの分岐後にＢ、ＣおよびＥ種内で発生したことである。
【実施例５】
【０１６０】
Ｅ１欠失アデノウイルスベクターの構築
ベクターは、例えばＲｏｙら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １５：５１９−５３０（Ｍａｙ  ２００４）に記述されるところの慣習的技術により製造する。例えば、サブファミリーＢのＥ１欠失ベクターを、２００９年６月１１日に公開された国際特許公開第ＷＯ  ２００９／０７３１０３号明細書に記述されるとおり製造する。同様に、サブファミリーＣのＥ１欠失ベクターは、２００９年８月２７日に公開された国際特許公開第ＷＯ  ２００９／１０５０８４号明細書に記述されるとおり製造する。
【０１６１】
インフルエンザウイルス核タンパク質を発現するＥ１欠失アデノウイルスベクターを構築するため、Ｈ１Ｎ１  インフルエンザＡウイルスＮＰ（Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ  Ｒｉｃｏ／８／３４／Ｍｏｕｎｔ  Ｓｉｎａｉ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ３８９１１９．１）をコードするヌクレオチド配列をコドン最適化しかつ完全合成した（Ｃｅｌｔｅｋ  Ｇｅｎｅｓ、テネシー州ナッシュビル）。ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーター、合成イントロン（プラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）から得た）、コドン最適化したインフルエンザＡ  ＮＰコーディング配列およびウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルから構成される発現カセットを構築した。プラスミドｐＳｈｕｔｔｌｅ  ＣＭＶ  ＰＩ  ＦｌｕＡ  ＮＰは上述された発現カセットを持ち、そこでそれはそれぞれまれに切断する（ｒａｒｅ−ｃｕｔｔｉｎｇ）制限酵素Ｉ−ＣｅｕＩおよびＰＩ−ＳｃｅＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）の認識部位により隣接される。Ｅ１欠失アデノウイルスベクターの分子クローンを創製するため、まれに切断する制限酵素Ｉ−ＣｅｕＩおよびＰＩ−ＳｃｅＩの認識部位がＥ１欠失の代わりに挿入されているＥ１欠失アデノウイルスのプラスミド分子クローンを最初に創製した。該Ｅ１欠失アデノウイルスプラスミドをその後Ｉ−ＣｅｕＩおよびＰＩ−ＳｃｅＩで消化し、そして発現カセット（同一酵素により消化した）を連結した。生じるアデノウイルスプラスミド分子クローンを、組換えアデノウイルスベクターをレスキューするためＨＥＫ  ２９３細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション後のレスキューが、制限酵素消化により該プラスミドから直鎖状アデノウイルスゲノムを最初に放出することにより促進されることが見出された。Ｒｏｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ  ２５：６８４５−６８５１（Ａｕｇｕｓｔ  ２００７）；２００９年６月１１日に公開された国際特許公開第ＷＯ  ２００９／０７３１０３号明細書；および２００９年８月２７日に公開された国際特許公開第ＷＯ  ２００９／１０５０８４号明細書を参照されたい。
【実施例６】
【０１６２】
アデノウイルスインフルエンザＡ核タンパク質四量体ワクチン
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｒｏｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ  ２５：６８４５−６８５１（Ａｕｇｕｓｔ  ２００７）のプロトコルに従い、インフルエンザＡ核タンパク質（ＮＰ）四量体をコードするサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）ベクター１×１０11粒子形成単位（ＰＦＵ）を筋肉内に注入した。ＳＡｄＶ−４５（サブファミリーＣ）およびＳＡｄＶ−４６（サブファミリーＢ）による送達をヒトアデノウイルス（ＨＡｄＶ）５（サブファミリーＣ）に対し評価した。ＮＰ四量体に対するＴｅｒ＋  ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答のキネティクスおよびＴ細胞表現型を注入後第１０および２０日に確認した。サイトカインプロファイルを注入後第１０日に確認した。
【０１６３】
キネティクス
注入後第１０日に、約８％のＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞がＨＡｄＶ−５により送達されたＮＰに特異的であった。約５．５％のＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞がＳＡｄＶ−４６により送達されたＮＰに特異的であった。約０．５％のＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞がＳＡｄＶ−４５により送達されたＮＰに特異的であった（パーセンテージ約±０．５％）。注入後
第２０日に、ＨＡｄＶ−５により送達されたＮＰに特異的なＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞は５．５％に減少しており、ＳＡｄＶ−４６により送達されたＮＰに特異的なＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞は７％に増加しており、そしてＳＡｄＶ−４５により送達されたＮＰに特異的なＴｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞は一定のままであった。
【０１６４】
メモリー表現型
Ｔｅｒ＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞を表現型について評価した。注入後第１０日に、約７．５％のＴ細胞がＨＡｄＶ−５により送達されたＮＰに特異的であった。約０．５％がセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）であり、約３％がエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）であり、そして約４％がエフェクターＴ細胞（ＴＥ）であった。第２０日に、約５．５％のＴ細胞がＨＡｄＶ−５により送達されたＮＰに特異的であった。約０．５％がＴＣＭであり、約２．５％がＴＥＭであり、そして約２．５％がＴＥであった。
【０１６５】
注入後第１０日に、約４．５％のＴ細胞がＨＡｄＶ−４６により送達されたＮＰに特異的であった。約０．５％がＴＣＭであり、約２％がＴＥＭであり、そして約２％がＴＥであった。第２０日に、約７％のＴ細胞がＨＡｄＶ−４６により送達されたＮＰに特異的であった。約０．５％がＴＣＭであり、約４％がＴＥＭであり、そして約２．５％がＴＥであった。（パーセンテージ約±０．５％）
【０１６６】
サイトカインプロファイル
ＣＤ８＋  Ｔ細胞を、脾および肺組織中の注入後第１０日の分泌されるサイトカインのプロファイルについて評価した。データを以下の表に要約する。
【０１６７】
【表３】
2015231379.tif 000007
【０１６８】
ＳＡｄＶ−４５の結果は免疫応答を示さなかった。しかしながら、これは反復されているベクター産生に関連すると考えられた。
【０１６９】
上で列挙された全部の文書、配列表、および全部２００８年１０月３１日に出願された米国仮出願第６１／１０９，９５５号；同第６１／１０９，９５８号；同第６１／１０９，９５７号；同第６１／１１０，０２８号；同第６１／１０９，９７９号；同第６１／１０９，９８６号；同第６１／１０９，９９７号明細書は引用することにより本明細書に組
み込まれる。多数の改変および変形が、上で同定される明細の範囲に包含され、そして当業者に明らかであることが期待される。多様なミニ遺伝子の選択またはベクター若しくは免疫調節物質の選択若しくは投与量のような組成物および方法に対するこうした改変および変更は、これに付随される請求の範囲の範囲内にあると考えられる。
【０１７０】
本発明の主たる特徴又は態様は次のとおりである。
【０１７１】
態様１：（ａ）ＳＡｄＶ−４６のヘキソンタンパク質、配列番号７９のアミノ酸１ないし９５９；ＳＡｄＶ−４３のヘキソンタンパク質、配列番号１１のアミノ酸１ないし９５５；ＳＡｄＶ−４５のヘキソンタンパク質、配列番号４８のアミノ酸１ないし９５３；ＳＡｄＶ−４７のヘキソンタンパク質、配列番号１０９のアミノ酸１ないし９５８；ＳＡｄＶ−４８のヘキソンタンパク質、配列番号１３９のアミノ酸１ないし９３４；ＳＡｄＶ−４９のヘキソンタンパク質、配列番号１６７のアミノ酸１ないし９１６；ＳＡｄＶ−５０のヘキソンタンパク質、配列番号１９３のアミノ酸１ないし９２０；
（ｂ）ＳＡｄＶ−４６のペントンタンパク質、配列番号７４のアミノ酸１ないし５６３；ＳＡｄＶ−４３のペントンタンパク質、配列番号６のアミノ酸１ないし６５１；ＳＡｄＶ−４５のペントンタンパク質、配列番号４３のアミノ酸１ないし６６４；ＳＡｄＶ−４７のペントンタンパク質、配列番号１０４のアミノ酸１ないし５８０；ＳＡｄＶ−４８のペントンタンパク質、配列番号１３４のアミノ酸１ないし５０４；ＳＡｄＶ−４９のペントンタンパク質、配列番号１６２のアミノ酸１ないし５１１；ＳＡｄＶ−５０のペントンタンパク質、配列番号１８８のアミノ酸１ないし５１１；
（ｃ）ＳＡｄＶ−４６のファイバータンパク質、配列番号８９のアミノ酸１ないし３５３；ＳＡｄＶ−４３のファイバータンパク質、配列番号２２のアミノ酸１ないし５９９；ＳＡｄＶ−４５のファイバータンパク質、配列番号５９のアミノ酸１ないし６０１；ＳＡｄＶ−４７のファイバータンパク質、配列番号１１９のアミノ酸１ないし３２２；ＳＡｄＶ−４８のファイバータンパク質、配列番号１４７のアミノ酸１ないし５７０；ＳＡｄＶ−４９のファイバータンパク質、配列番号１７４のアミノ酸１ないし５２１；ＳＡｄＶ−４９のファイバータンパク質、配列番号１７５のアミノ酸１ないし４１８；ＳＡｄＶ−５０のファイバータンパク質、配列番号２００のアミノ酸１ないし５２１；ＳＡｄＶ−５０のファイバータンパク質、配列番号２０１のアミノ酸１ないし４１８
よりなる群から選択されるキャプシドタンパク質を含んでなるキャプシドであって、
宿主細胞中の転写、翻訳および／若しくは発現を制御する発現制御配列に作動可能に連結されている遺伝子を保有する異種分子を被包化するキャプシド
を有するアデノウイルス。
【０１７２】
態様２：複製および被包化に必要な５’および３’アデノウイルスシスエレメントをさらに含んでなる、態様１に記載のアデノウイルス。
【０１７３】
態様３：前記アデノウイルスがＥ１遺伝子の全部若しくは一部を欠く、態様１に記載のアデノウイルス。
【０１７４】
態様４：前記アデノウイルスが複製欠損である、態様３に記載のアデノウイルス。
【０１７５】
態様５：前記ウイルスがハイブリッドキャプシドを有する、態様１に記載のアデノウイルス。
【０１７６】
態様６：前記ウイルスが、ＳＡｄＶ−４６、ＳＡｄＶ−４３、ＳＡｄＶ−４５、ＳＡｄＶ−４７、ＳＡｄＶ−４８、ＳＡｄＶ−４９およびＳＡｄＶ−５０から選択される１種以上のキャプシドタンパク質を含んでなる、態様５に記載のアデノウイルス。
【０１７７】
態様７：サルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）ヘキソンタンパク質のフラグメントを含有するヘキソンおよびＳＡｄＶに対し異種の核酸配列を含んでなるキャプシドを有する組換えアデノウイルスであって、該ＳＡｄＶヘキソンタンパク質のフラグメントが、長さ約５０アミノ酸のＮ末端若しくはＣ末端切断を伴う配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のＳＡｄＶヘキソンタンパク質であるか、または
配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のアミノ酸残基１２５ないし４４３；
配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のアミノ酸残基１３８ないし４４１；
配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のアミノ酸残基１３８ないし１６３；
配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のアミノ酸残基１７０ないし１７６；および
配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７若しくは１９３のアミノ酸残基４０４ないし４３０
よりなる群から選択される、上記組換えアデノウイルス。
【０１７８】
態様８：キャプシドがＳＡｄＶ−４６、ＳＡｄＶ−４３、ＳＡｄＶ−４５、ＳＡｄＶ−４７、ＳＡｄＶ−４８、ＳＡｄＶ−４９若しくはＳＡｄＶ−５０ファイバータンパク質をさらに含んでなる、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１７９】
態様９：キャプシドがＳＡｄＶ−４６、ＳＡｄＶ−４３、ＳＡｄＶ−４５、ＳＡｄＶ−４７、ＳＡｄＶ−４８、ＳＡｄＶ−４９若しくはＳＡｄＶ−５０ペントンタンパク質をさらに含んでなる、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８０】
態様１０：前記アデノウイルスが複製および被包化に必要な５’および３’アデノウイルスシスエレメントを含んでなるシュードタイピングされたアデノウイルスであり、前記シスエレメントがアデノウイルス５’逆方向末端反復およびアデノウイルス３’逆方向末端反復を含んでなる、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８１】
態様１１：アデノウイルスが、宿主細胞中での産物の発現を指図する配列に効果的に連結されている前記産物をコードする核酸配列を含んでなる、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８２】
態様１２：組換えアデノウイルスが１種若しくはそれ以上のアデノウイルス遺伝子を含んでなる、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８３】
態様１３：組換えアデノウイルスが複製欠損である、態様７に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８４】
態様１４：組換えアデノウイルスがアデノウイルスＥ１中で欠失されている、態様１３に記載の組換えアデノウイルス。
【０１８５】
態様１５：製薬学的に許容できる担体中に態様１ないし１４のいずれかに記載のウイルスを含んでなる組成物。
【０１８６】
態様１６：態様１ないし１４のいずれかに記載のウイルスを被験体に送達することを含んでなる、アデノウイルス受容体を有する細胞の標的指向化方法。
【０１８７】
態様１７：配列番号６９のＳＡｄＶ−４６のヌクレオチド１ないし３５６０８およびその
相補物；配列番号１のＳＡｄＶ−４３のヌクレオチド１ないし３７１８９およびその相補物；
配列番号３８のＳＡｄＶ−４５のヌクレオチド１ないし３７１５２およびその相補物；
配列番号９９のＳＡｄＶ−４７のヌクレオチド１ないし３５５６３およびその相補物；
配列番号１２９のＳＡｄＶ−４８のヌクレオチド１ないし３４２０１およびその相補物；配列番号１５７のＳＡｄＶ−４９のヌクレオチド１ないし３５４９９およびその相補物；ならびに
配列番号１８３のＳＡｄＶ−５０のヌクレオチド１ないし３５５１２およびその相補物よりなる群から選択される、単離されたサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）核酸。
【０１８８】
態様１８：ＳＡｄＶ−４６、配列番号６９およびＳＡｄＶ−４７、配列番号９９の
（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；
（ｂ）アデノウイルスＥ１ａ領域；
（ｃ）アデノウイルスＥ１ｂ領域、若しくはスモールＴ、ラージＴおよびＩＸ領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｄ）Ｅ２ｂ領域、若しくはｐＴＰ、ポリメラーゼおよびＩＶａ２領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｅ）Ｌ１領域、若しくは５２／５５ｋＤタンパク質およびＩＩＩａタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｆ）Ｌ２領域、若しくはペントン、ＶＩＩ、ＶおよびｐＸタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｇ）Ｌ３領域、またはＶＩ、ヘキソン若しくはエンドプロテアーゼのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｈ）Ｅ２ａタンパク質、若しくはＤＢＰのオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｉ）Ｌ４領域、若しくは１００ｋＤタンパク質、３３ｋＤホモログ、２２ｋＤタンパク質およびＶＩＩＩのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｊ）Ｅ３領域、若しくはＥ３  １２．５Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−αタンパク質、Ｅ３  ｇｐ１９Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−βタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−γタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  αタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  βタンパク質およびＥ３  １４．７Ｋタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｋ）Ｌ５領域、若しくはファイバータンパク質のオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｌ）Ｅ４領域、若しくはＥ４  ＯＲＦ６／７、Ｅ４  ＯＲＦ６、Ｅ４  ＯＲＦ４、Ｅ４
ＯＲＦ３、Ｅ４  ＯＲＦ２およびＥ４  ＯＲＦ１のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；ならびに
（ｍ）３’ＩＴＲ
よりなる群から選択されるサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）核酸配列を含んでなるベクター。
【０１８９】
態様１９：ＳＡｄＶ−４３、配列番号１およびＳＡｄＶ−４５、配列番号３８の
（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；
（ｂ）アデノウイルスＥ１ａ領域；
（ｃ）アデノウイルスＥ１ｂ領域、若しくはスモールＴ、ラージＴおよびＩＸ領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｄ）Ｅ２ｂ領域、若しくはｐＴＰ、ポリメラーゼおよびＩＶａ２領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｅ）Ｌ１領域、若しくは５２／５５ｋＤタンパク質およびＩＩＩａタンパク質のオープ
ンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｆ）Ｌ２領域、若しくはペントン、ＶＩＩ、ＶおよびｐＸタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｇ）Ｌ３領域、またはＶＩ、ヘキソン若しくはエンドプロテアーゼのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｈ）Ｅ２ａタンパク質、若しくはＤＢＰのオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｉ）Ｌ４領域、若しくは１００ｋＤタンパク質、３３ｋＤホモログ、２２ｋＤタンパク質およびＶＩＩＩのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｊ）Ｅ３領域、若しくはＥ３  １２．５Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−αタンパク質、Ｅ３  ７．１Ｋタンパク質、Ｅ３  ｇｐ１９Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−βタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−γタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  αタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  βタンパク質およびＥ３  １４．７Ｋタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｋ）Ｌ５領域、若しくはファイバータンパク質のオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｌ）Ｅ４領域、若しくはＥ４  ＯＲＦ６／７、Ｅ４  ＯＲＦ６、Ｅ４  ＯＲＦ４、Ｅ４
ＯＲＦ３、Ｅ４  ＯＲＦ２およびＥ４  ＯＲＦ１のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；ならびに
（ｍ）３’ＩＴＲ
よりなる群から選択されるサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）核酸配列を含んでなるベクター。
【０１９０】
態様２０：配列番号１２９の
（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；
（ｂ）アデノウイルスＥ１ａ領域；
（ｃ）アデノウイルスＥ１ｂ領域、若しくはスモールＴ、ラージＴおよびＩＸ領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｄ）Ｅ２ｂ領域、若しくはｐＴＰ、ポリメラーゼおよびＩＶａ２領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｅ）Ｌ１領域、若しくは５２／５５ｋＤタンパク質およびＩＩＩａタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｆ）Ｌ２領域、若しくはペントン、ＶＩＩ、ＶおよびｐＸタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｇ）Ｌ３領域、またはＶＩ、ヘキソン若しくはエンドプロテアーゼのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｈ）Ｅ２ａタンパク質、若しくはＤＢＰのオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｉ）Ｌ４領域、若しくは１００ｋＤタンパク質、３３ｋＤホモログ、２２ｋＤタンパク質およびＶＩＩＩのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｊ）Ｅ３領域、若しくはＥ３  １２．５Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−αタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１−βタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  αタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  βタンパク質およびＥ３  １４．７Ｋタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｋ）Ｌ５領域、若しくはファイバータンパク質のオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｌ）Ｅ４領域、若しくはＥ４  ＯＲＦ６／７、Ｅ４  ＯＲＦ６、Ｅ４  ＯＲＦ４、Ｅ４
ＯＲＦ３、Ｅ４  ＯＲＦ２およびＥ４  ＯＲＦ１のオープンリーディングフレームより
なる群から選択されるそのフラグメント；ならびに
（ｍ）３’ＩＴＲ
よりなる群から選択されるサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）４８核酸配列を含んでなるベクター。
【０１９１】
態様２１：ＳＡｄＶ−４９、配列番号１５７およびＳＡｄＶ−５０、配列番号１８３の
（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列；
（ｂ）アデノウイルスＥ１ａ領域；
（ｃ）アデノウイルスＥ１ｂ領域、若しくはスモールＴ、ラージＴおよびＩＸ領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｄ）Ｅ２ｂ領域、若しくはｐＴＰ、ポリメラーゼおよびＩＶａ２領域のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｅ）Ｌ１領域、若しくは５２／５５ｋＤタンパク質およびＩＩＩａタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群のなかから選択されるそのフラグメント；
（ｆ）Ｌ２領域、若しくはペントン、ＶＩＩ、ＶおよびｐＸタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｇ）Ｌ３領域、またはＶＩ、ヘキソン若しくはエンドプロテアーゼのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｈ）Ｅ２ａタンパク質、若しくはＤＢＰのオープンリーディングフレームよりなるそのフラグメント；
（ｉ）Ｌ４領域、若しくは１００ｋＤタンパク質、２２ｋＤタンパク質およびＶＩＩＩのオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｊ）Ｅ３領域、若しくはＥ３  １２．５Ｋタンパク質、Ｅ３  ＣＲ１タンパク質、Ｅ３
ＲＩＤ  αタンパク質、Ｅ３  ＲＩＤ  βタンパク質およびＥ３  １４．７Ｋタンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｋ）Ｌ５領域、若しくはファイバー１タンパク質およびファイバー２タンパク質のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；
（ｌ）Ｅ４領域、若しくはＥ４  ＯＲＦ６／７、Ｅ４  ＯＲＦ６、Ｅ４  ＯＲＦ４、Ｅ４
ＯＲＦ３、Ｅ４  ＯＲＦ２およびＥ４  ＯＲＦ１のオープンリーディングフレームよりなる群から選択されるそのフラグメント；ならびに
（ｍ）３’ＩＴＲ
よりなる群から選択されるサルアデノウイルス（ＳＡｄＶ）核酸配列を含んでなるベクター。
【０１９２】
態様２２：態様１８から２１のいずれかに記載の核酸配列によりコードされるサルアデノウイルスタンパク質。
【０１９３】
態様２３：Ｅ１ａ、配列番号９６、２９、６６、１２６、１５４、１８２および２０８；Ｅ１ｂ、スモールＴ／１９Ｋ、配列番号７０、２、３９、１００、１３０、１５８および１８４；
Ｅ１ｂ、ラージＴ／５５Ｋ、配列番号９１、２４、６１、１２１、１４８、１７７および２０３；
ＩＸ、配列番号７１、３、４０、１０１、１３１、１５９および１８５；
５２／５５Ｄ、配列番号７２、４、４１、１０２、１３２、１６０および１８６；
ＩＩＩａ、配列番号７３、５、４２、１０３、１３３、１６１および１８７；
ペントン、配列番号７４、６、４３、１０４、１３４、１６２および１８８；
ＶＩＩ、配列番号７５、７、４４、１０５、１３５、１６３および１８９；
Ｖ、配列番号７６、８、４５、１０６、１３６、１６４および１９０；
ｐＸ、配列番号７７、９、４６、１０７、１３７、１６５および１９１；
ＶＩ、配列番号７８、１０、４７、１０８、１０９、１３８、１６６および１９２；
ヘキソン、配列番号７９、１１、４８、１０９、１３９、１６７および１９３；
エンドプロテアーゼ、配列番号８０、１２、４９、１１０、１４０、１６８および１９４；
１００ｋＤ、配列番号８１、１３、５０、１１１、１４１、１６９および１９５；
３３ｋＤ、配列番号９８、３１、６８、１２８および１５６；
２２ｋＤ、配列番号９２、２５、６２、１２２、１５０、１７８および２０４；
ＶＩＩＩ、配列番号８２、１４、５１、１１２、１４２、１７０および１９６；
Ｅ３／１２．５Ｋ、配列番号８３、１５、５２、１１３、１５１、１７１および１９７；ＣＲ１−α、配列番号９３、２６、６３、１２３および１４３；
Ｅ３／７．１Ｋ、配列番号１６および５３；
ｇｐ１９Ｋ、配列番号８４、１７、５４および１１４；
ＣＲ１−β、配列番号８５、１８、５５、１１５および１４４；
ＣＲ１−γ、配列番号８６、１９、５６および１１６；
ＲＩＤ−α、配列番号８７、２０、５７、１１７、１４５、１７２および１９８；
ＲＩＤ−β、配列番号９４、２１、５８、１２４、１５２、１８０および２０６；
Ｅ３／１４．７Ｋ、配列番号８８、２７、６４、１１８、１４６、１７３および１９９；ならびに
ファイバー、配列番号８９、２２、５９、１１９、１４７、１７４、１７５、２００、２０１
よりなる群から選択される１種若しくはそれ以上のサルアデノウイルスタンパク質を含んでなる組成物。
【０１９４】
態様２４：態様２３に記載の組成物を被験体に送達することを含んでなる、アデノウイルス受容体を有する細胞の標的指向化方法であって、前記組成物が、ヘキソン、ペントンおよびファイバーから選択される１種若しくはそれ以上のサルアデノウイルスタンパク質を含んでなる、上記方法。
【配列表フリーテキスト】
【０１９５】
以下の情報は数字識別子＜２２３＞の下のフリーテキストを含有する配列を提供する。
【０１９６】
【表４−１】
2015231379.tif 000008
【０１９７】
【表４−２】
2015231379.tif 000009
【０１９８】
【表４−３】
2015231379.tif 000010
【０１９９】
【表４−４】
2015231379.tif 000011
【０２００】
【表４−５】
2015231379.tif 000012
【配列表】
2015231379000001.app