(57)【要約】      （修正有）【課題】プリオンを含まないナノ粒子組成物および方法の提供。【解決手段】アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬物を含むナノ粒子を含むプリオン非含有組成物、プリオン非含有組成物を作製する方法およびそのナノ粒子組成物からプリオンタンパク質を除去する方法、それらの組成物を使用する方法、ならびにそれらの方法を行うために有用なキット。いくつかの実施形態において、組成物は、約１００ｆｇ／ｍｌ未満のプリオンタンパク質を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１ＬＤ５０／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２００９年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／１６９，６６５号および２００９年８月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／２３８，０５２号（これらの各々の内容は、参考として本明細書に援用される）への優先権の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬物を含むナノ粒子を含むプリオン非含有組成物、それを作製する方法およびそれを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）としても知られるプリオン病は、致死性の伝染性神経変性疾患の一群である。ＴＳＥの具体例としては、ヒツジおよびヤギが発症するスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝染性ミンク脳症、ネコ海綿状脳症、ならびに慢性消耗病（ＣＷＤ）が挙げられる。ヒトにおいては、ＴＳＥ病は、クールー、クロイツフェルト・ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊｅｋｏｂ）病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性不眠症および変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）として紹介されることがある。ｖＣＪＤは、英国で流行したＢＳＥの結果としてヒトにおいて出現したものであり、十中八九、ＢＳＥまたは「狂牛病」に感染したウシに由来する食品を消費したことによって引き起こされる（非特許文献１）。経口的にかかった疾患に対する潜伏期間は、ヒトにおいて２０年を超えることがあるので、ｖＣＪＤの真の発生率は、長年にわたって明らかにならないかもしれない。
【０００４】
ウシ起源の感染した製品を摂取することに加えて、輸血および臓器移植が、ｖＣＪＤのヒト間における別の伝播様式である（Ｂｒｏｗｎら（１９９８）Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ
３８：８１０−８１６；Ｄｉｒｉｎｇｅｒら（１９８４）Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ８２：１０５−１０９；Ｍａｎｕｅｌｉｄｉｓら（１９７８）Ｎａｔｕｒｅ  ２７１：７７８−７７９）。１９９０年代中頃以来、ｖＣＪＤがＴＳＥ感染個体からの輸血またはそのような個体から製造された他の血液製剤によって伝染しうるという重大な懸念が持ち上がった。これらの個体は、ｖＣＪＤの長い症状発現前の期間および潜伏期の間は無症候性である場合があり、そのようなドナーから得られた血液は、そのドナーに由来する血液または血液製剤を投与された人にその疾患を伝染させることができる可能性がある。
【０００５】
輸血によってｖＣＪＤに感染したヒトの症例は英国でこれまでに少なくとも４例報告されている。２２人のドナーから全血を輸血された６４人のうち、４人がｖＣＪＤを発症した。第１の事象（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ）では、レシピエントは、無症候性のままで血液提供の３年後になってｖＣＪＤの徴候を示しただけのドナーから赤血球を得た７年後に発病した（Ｌｌｅｗｅｌｙら（２００４）Ｌａｎｃｅｔ  ３６３：４１７−４２１）。第２の事象では、ドナーは、血液提供の２年後にｖＣＪＤが原因で死亡し、レシピエントは、血液提供の５年後に動脈瘤が原因で（ｖＣＪＤではない）死亡した（Ｐｅｄｅｎら（２００４）Ｌａｎｃｅｔ  ３６４：５２７−５２９）。そのレシピエントの剖検では、ＰｒＰｓｃがリンパ節および脾臓に存在していたが、脳には存在していなかった。第３の事象では、レシピエントは、血液提供の２０ヶ月後にｖＣＪＤを発症したドナーからの輸血の７年半後にｖＣＪＤが原因で死亡した（Ｗｒｏｅら（２００６）Ｌａｎｃｅｔ  ３６８：２０６１−２０６７）。第４の事象は、第３の症例と同じドナーからの輸血の８年半後にレシピエントにおいて起きた（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇｅｎｃｙ−Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅｐｏｒｔ，（２００７）Ｖｏｌ  １，Ｎｏ  ３，２６。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｐａ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｈｐｒ／ａｒｃｈｉｖｅｓ／２００７／ｎｅｗｓ２００７／ｎｅｗｓ０３０７．ｈｔｍにおいて入手可能）。
【０００６】
すべてのプリオン病に共通する特徴は、正常な細胞プリオンタンパク質（ＰｒＰｃ）から異常なアイソフォーム（ＰｒＰｓｃ）への変換である。ＰｒＰｃとＰｒＰｓｃとの違いは、単にコンフォメーションであると考えられており、ＰｒＰｃは、主にアルファヘリックス構造を有し、ＰｒＰｓｃは、主に、集合することにより凝集物を形成することが多いベータシートを有する。ＰｒＰｓｃは、同じ異常なアイソフォームに変換するように正常なタンパク質分子を誘導する鋳型として作用し、その異常なアイソフォームは、その後順番に、より多くのＰｒＰｃをＰｒＰｓｃに変換する（Ｐｒｕｓｉｎｅｒら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１３３６３−１３３８３）。この自己触媒プロセスによって、神経毒性のあるＰｒＰｓｃ凝集物が指数関数的に形成される（Ａｇｕｚｚｉら（２００７）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８：５５２−５６１）。プリオンタンパク質リガンドおよびその使用は、特許文献１、特許文献２５、特許文献３および特許文献４に記載されている。
【０００７】
研究によって、血液にプリオン感染性が現れる最も早い段階は、その疾患の潜伏期間の初期であり得ることが示されている（Ｂｒｏｗｎら（２００６）Ｂｌｏｏｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ  ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｃｈａｐｔｅｒ  ４  Ｉｎ：Ｔｕｒｎｅｒ  ＭＬ，ｅｄ．９５−１１８）。疾患症状が発症するまで長い時間が経過しうるので、静止感染した個体は、なおも健常で有効な血液ドナーとして見なされ得る。さらに、一部の個体は、疾患を発症しないまま永続的または一過性に感染し得る。ゆえに、血液由来の生成物用の血液の供給源がプリオンを含まないことを確実にすることは、不可能ではないにしても困難である。
【０００８】
アルブミンに基づくナノ粒子組成物は、実質的に水に溶けない薬物を送達するための薬物送達系として開発された。例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；同第６，５０６，４０５号；同第６，７４９，８６８号および同第６，５３７，５７９号、また、米国特許公開番号２００５／０００４００２および２００７／００８２８３８を参照のこと。アルブミンに基づくナノ粒子の技術は、実質的に水に溶けない薬物を疾患部位に輸送するためおよび送達するために、アルブミンタンパク質の独特の天然の特性を利用している。これらのナノ粒子は、身体自体の輸送プロセスに容易に取り込まれ、腫瘍がアルブミンに引きつけられる傾向を活用することができることから、より高濃度の活性な薬物を標的部位に送達することができる。さらに、アルブミンに基づくナノ粒子の技術は、投与プロセスにおける溶媒などの有毒な化学物質の必要性を回避することによって薬物の溶解性を改善することも可能にするので、溶媒関連の副作用を排除することによって安全性を改善する可能性を秘めている。
【０００９】
本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、本明細書中でそれらの全体が本明細書によって参考として援用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０４／０５０８５１号
【特許文献２】国際公開第０６／０１０９１５号
【特許文献３】国際公開第０４／０９０１０２号
【特許文献４】国際公開第０６／０４４４５９号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｗｉｌｌら、Ｌａｎｃｅｔ（１９９６）３４７：９２１〜９２５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の簡単な要旨
本発明は、１つの局面において、プリオン非含有ナノ粒子組成物（例えば、薬学的組成物）を提供する。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、無菌である。いくつかの実施形態において、組成物は、濾過滅菌可能（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｆｉｌｔｅｒａｂｌｅ）である。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、組成物は、約１００ｆｇ／ｍｌ未満のプリオンタンパク質を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１ＬＤ５０／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質ミスフォールディング周期的増幅（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｓｆｏｌｄｉｎｇ  ｃｙｃｌｉｃ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＰＭＣＡ）アッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、ＩＰＣＲアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有し、ＰＭＣＡアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有し、ＩＰＲＣアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。
【００１５】
本明細書中に記載される組成物は、通常、ＰｒＰｓｃを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、ＰｒＰｃも実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物中のＰｒＰｓｃとＰｒＰｃとのモル比は、約１：１を超えず、例えば、約１：１０、１：１００、１：１０００、１：１００００または１：１０００００のいずれか１つを超えない。
【００１６】
本明細書中に記載される組成物は、いくつかの実施形態において、プリオン除去処理中に導入されるある量（例えば、痕跡量）の物質を含む。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、プリオンタンパク質に結合することができるある量（例えば、痕跡量）のリガンドを含む。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、ある量（例えば、痕跡量）の支持材料（例えば、樹脂をはじめとした本明細書中に記載される支持材料）を含む。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、ある量のＰＲＤＴ樹脂（例えば、痕跡量のＰＲＤＴ樹脂）を含む。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、ある量のＤＶＲ樹脂（例えば、痕跡量のＤＶＲ樹脂）を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本組成物中のアルブミン安定剤のレベルは、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物中のレベルより低い。これらのアルブミン安定剤としては、例えば、Ｎ−アセチルトリプトファネートおよびカプリル酸ナトリウムが挙げられる。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物と生物学的に等価である。
【００１９】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミン組成物から除去する工程をさらに包含する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、ａ）最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させることにより、リガンドとプリオンタンパク質との複合体を形成させる工程、およびｂ）その複合体を最初の組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。
【００２１】
いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、血液由来の生成物である。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、体液（例えば、血液）から調製されたアルブミン組成物である。いくつかの実施形態において、アルブミンは、ヒト血清アルブミンである。
【００２２】
いくつかの実施形態において、リガンドは、ペプチド（例えば、表１に提供される任意のペプチド）である。いくつかの実施形態において、リガンドは、プリオンタンパク質を認識する抗体である。いくつかの実施形態において、リガンドは、化合物（例えば、トリアジンに基づく化合物）である。いくつかの実施形態において、リガンドは、アミノ樹脂上にアミノ基などのアミノ基を備える。
【００２３】
上記リガンドは、例えば、カラム、ビーズ、マトリックス、フィルターおよび膜をはじめとした支持材料に接着され得る。
【００２４】
別の局面において、プリオン非含有ナノ粒子組成物を作製する方法が提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは、プリオンタンパク質を最初のアルブミン組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する方法によって得られたものである。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは：ａ）最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、およびｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を最初の組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。
【００２５】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は：ａ）プリオンタンパク質を最初のアルブミン組成物から除去する工程；ｂ）プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は：ａ）最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させることにより、そのリガンドとプリオンタンパク質との複合体を形成させる工程、ｂ）その複合体を最初のアルブミン組成物から除去する工程；およびｃ）プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。
【００２６】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミン溶液をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン溶液から除去する工程、およびｃ）前記アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、その混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００２７】
上記プリオンは、ナノ粒子の形成中に除去され得る。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、その方法は：ｂ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、その方法は、ｃ）その混合物を高剪断条件に供する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、その混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００２８】
上記プリオンタンパク質は、ナノ粒子組成物を形成した後でも除去され得る。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含し、ここで、その混合物は、リガンドと接触する前に高剪断条件に供されている。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、およびｂ）その混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、その方法は：ｃ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、その混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００２９】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、プリオンタンパク質を含むと疑われる組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、前記方法は、ａ）そのナノ粒子組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をナノ粒子組成物から除去する工程を包含する。いくつかの実施形態において、異常なプリオンタンパク質を含むと疑われるアルブミン組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミンを含む組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン組成物から除去する工程を包含し、ここで、前記アルブミン組成物は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含むナノ粒子を含む組成物を作製するために使用される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、その方法は：ａ）その組成物中のプリオンタンパク質の有無を判定する工程、ｂ）その組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、およびｃ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を組成物から除去する工程を包含する。
【００３１】
プリオン除去処理によって生成された組成物も提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドをさらに含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子と、支持材料（例えば、本明細書中に記載される１つ以上の支持材料）に接着されたプリオンタンパク質に結合することができるリガンドとを含む混合物が提供される。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が充填されたカラムが提供され、ここで、そのカラムは、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドを備える。
【００３２】
本明細書中に記載される方法によって生成される組成物も提供される。本明細書中に記載されるプリオン非含有組成物を使用する方法も提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する方法が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する工程を包含する、疾患（例えば、癌）を処置する方法が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。
【００３３】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する方法が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、そのプリオン除去処理は、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミン組成物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する工程を包含する、疾患（例えば、癌）を処置する方法が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。
【００３４】
本明細書中に記載されるプリオン非含有ナノ粒子組成物を含むキットおよび剤形（例えば、バイアル、例えば、密封バイアル）、ならびに本明細書中に記載される方法にとって有用なキットも提供される。さらに、本明細書中に記載される１つ以上の方法を行うためのシステム（装置を含む）が提供される。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物であって、ここで、該組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない、組成物。
（項目２）
前記組成物が、約１００ｆｇ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記組成物が、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する、項目１または２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目４）
前記組成物が、タンパク質ミスフォールディング周期的増幅（ＰＭＣＡ）アッセイに基づくかまたはＩＰＣＲアッセイに基づいて、プリオンタンパク質の存在を示さない、項目１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目５）
プリオンタンパク質に結合することができる痕跡量のリガンドをさらに含む、項目１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６）
痕跡量の支持材料をさらに含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目７）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物であって、ここで、該組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、該プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する、組成物。
（項目８）
前記プリオン除去処理が、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミンおよび前記組成物から除去する工程をさらに包含する、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記リガンドが、ペプチドである、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記リガンドが、トリアジンに基づく化合物である、項目８に記載の組成物。
（項目１１）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、該方法は：ａ）最初のアルブミン組成物からプリオンタンパク質を除去する工程；ｂ）該プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と、有機溶媒に分散された該実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する、方法。
（項目１２）
工程ａ）が：１）前記最初のアルブミン溶液をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
工程ａ）が：２）前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミン溶液から除去する工程をさらに包含する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記有機溶媒を前記混合物から除去する工程をさらに包含する、項目１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記有機溶媒の除去が、蒸発による、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記リガンドが、ペプチドである、項目１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記リガンドが、トリアジンに基づく化合物である、項目１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記最初のアルブミン組成物が、血液由来の生成物である、項目１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、該方法は：ａ）該実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、およびｂ）プリオンタンパク質を該混合物から除去する工程を包含する、方法。
（項目２０）
工程ｂ）が：１）前記混合物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
工程ｂ）が：２）前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記混合物から除去する工程をさらに包含する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記リガンドが、ペプチドである、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記リガンドが、トリアジンに基づく化合物である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２４）
項目１１〜２３のいずれか１項に記載の方法によって作製された組成物。
（項目２５）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、プリオンタンパク質を含むと疑われる組成物からプリオンタンパク質を除去する方法であって、該方法は：ａ）プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと該組成物を接触させる工程、ｂ）該リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を該組成物から除去する工程を包含する、方法。
（項目２６）
前記リガンドが、ペプチドである、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記リガンドが、トリアジンに基づく化合物である、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物であって、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドをさらに含む、組成物。
（項目２９）
前記リガンドが、ペプチドである、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記リガンドが、トリアジンに基づく化合物である、項目２８に記載の組成物。
（項目３１）
疾患を処置するための、項目１〜１０および２４のいずれかに記載の組成物の使用。
（項目３２）
前記疾患が癌である、項目３１に記載の使用。
【００３５】
本発明のこれらおよび他の局面および利点は、この後に続く詳細な説明および添付の請求項から明らかになるだろう。本明細書中に記載される様々な実施形態の特性の１つ、いくつか、またはすべてが組み合わされることにより、本発明の他の実施形態が形成され得ることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、２０％または２５％アルブミン中の０．０１％および０．００５％のスクレイピーハムスター脳ホモジネートを曝露されたＤＶＲ樹脂のウエスタンブロットおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを提供している。ＡＭＮ３１は、ポジティブコントロール樹脂だった。観察されたシグナルは、結合画分だった。「−ＰＫ」および「＋ＰＫ」は、プロテイナーゼＫによる消化なしまたは消化ありを表している。
【図２】図２は、２０％または２５％アルブミン中の０．０１％および０．００５％のスクレイピーハムスター脳ホモジネートを曝露されたＹＶＨＥＡ樹脂およびＳＹＡ樹脂のウエスタンブロットおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを提供している。ＡＭＮ３１は、ポジティブコントロール樹脂だった。観察されたシグナルは、結合画分だった。「−ＰＫ」および「＋ＰＫ」は、プロテイナーゼＫによる消化なしまたは消化ありを表している。
【図３】図３は、２０％または２５％アルブミン中の０．０１％および０．００５％のスクレイピーハムスター脳ホモジネートを曝露されたＤ４樹脂のウエスタンブロットおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを提供している。ＡＭＮ３１は、ポジティブコントロール樹脂だった。観察されたシグナルは、結合画分だった。「−ＰＫ」および「＋ＰＫ」は、プロテイナーゼＫによる消化なしまたは消化ありを表している。
【図４】図４は、２０％アルブミンに対するプリオン低減樹脂カラム（ＰＲＤＴ（Ｐａｔｈｏｇｅｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）カラム）によるＴＳＥ除去のプロセスのフロースキームを表している。
【図５】図５は、２０％アルブミンに対するＰＲＤＴカラムによるＴＳＥ除去研究におけるスパイクラン（ｓｐｉｋｅｄ  ｒｕｎ）のクロマトグラフィプロファイルを示している。
【図６】図６は、遠心分離を用いた２０％アルブミン溶液のウエスタンブロット干渉試験を示している（１０倍濃縮ありおよびなし）。
【図７】図７は、２５％アルブミンに対するプリオン低減樹脂カラム（ＰＲＤＴカラム）によるＴＳＥ除去のプロセスのフロースキームを表している。
【図８】図８は、２５％アルブミンに対するＰＲＤＴカラムによるＴＳＥ除去研究におけるスパイクランのクロマトグラフィプロファイルを示している。
【図９】図９は、遠心分離を用いた２５％アルブミン溶液のウエスタンブロット干渉試験を示している（１０倍濃縮ありおよびなし）。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
発明の詳細な説明
本発明は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含むプリオン非含有組成物（例えば、薬学的組成物）、ならびにプリオン非含有組成物を作製する方法を提供する。
【００３８】
本発明は、１つの局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を提供し、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。
【００３９】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含むプリオン非含有組成物（例えば、薬学的組成物）を作製する方法が提供される。その作製プロセスの方法によって作製された組成物もまた提供される。
【００４０】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含むプリオン非含有組成物（例えば、薬学的組成物）を使用する方法が提供される。
【００４１】
本明細書中に記載されるプリオン非含有ナノ粒子組成物を含むキットおよび剤形（例えば、バイアル、例えば、密封バイアル）、ならびに本明細書中に記載される方法にとって有用なキットおよびシステム（装置を含む）も提供される。
【００４２】
「プリオン非含有」は、便宜のため、かつ通常、発明性のある組成物を記載するために本明細書で使用され、本明細書中に記載されるすべての実施形態を包含すると意図される。
【００４３】
本明細書中の「約」ある値またはパラメータに対する言及は、その値またはパラメータそれ自体に関する実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」と言及している記載は、「Ｘ」の記載を包含する。
【００４４】
本明細書中に記載される本発明の局面および実施形態は、局面および実施形態「からなる」ことならびに／または「から本質的になる」ことを含むと理解される。
【００４５】
プリオン非含有ナノ粒子組成物
本発明は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物（例えば、薬学的組成物）を提供し、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、無菌である。いくつかの実施形態において、組成物は、濾過滅菌可能である。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む。
【００４６】
いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質は、約１００ｆｇ／ｍｌまたはそれより高い検出感度を有する検出方法では組成物中で検出され得ず、すなわち、約１００ｆｇ／ｍｌまたはそれより高い検出感度（例えば、約５０ｆｇ／ｍｌ、約１０ｆｇ／ｍｌ、約１ｆｇ／ｍｌ、約０．１ｆｇ／ｍｌという検出感度）を有する方法を用いたアッセイでは試験結果は陰性である。本組成物中のプリオン含有量は、その組成物から直接測定され得る。あるいは、本組成物は、組成物中のプリオンタンパク質の検出および定量化を容易にするために、測定の前に処理され得、例えば、濃縮され得るかまたは濃厚にされ得る。
【００４７】
組成物がプリオンタンパク質を実質的に含まないか否かを判定する１つの方法は、インビボ感染性アッセイである。例えば、インビボにおける感染性は、試験組成物をマウス、ミンク、ハムスターまたはヤギのモデルに接種することによって証明され得る。感染性は、致死量（ＬＤ５０）、すなわち、所与の経路（例えば、脳内経路）によって投与されたときに、曝露された動物の５０％において疾患を誘導する用量によって測定され得る。あるいは、感染性は、感染単位、すなわち、所与の経路によって１匹の実験動物から別の実験動物に疾患を伝染させることができる最少の感染用量によって測定され得る。一般に、１００ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ（脳内経路によって測定される感染単位）は、約１０ＬＤ５０／ｍｌおよび１ｐｇ／ｍｌのプリオンタンパク質に相当する。
【００４８】
組成物中のプリオンタンパク質を測定するための別の方法は、イムノ−ポリメラーゼ連鎖反応（ＩＰＣＲ）であり、これは、ＰＣＲの指数関数的な増幅能力を、ＥＬＩＳＡ形式での抗体によるタンパク質の検出と結合させ、改変リアルタイムＩＰＣＲ法において適用することにより超低レベルのプリオンタンパク質を検出することによる手法である。Ｂａｒｌｅｔｔａら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄ，１２７（２００５）：１５４−１０４を参照のこと。ＩＰＣＲを用いると、組換えハムスターＰｒＰｃは、ばらつきなく１ｆｇ／ｍｌで検出され、プロテイナーゼＫ（ＰＫ）で消化され、１０−８（およそ１０〜１００感染単位）に希釈されたスクレイピー感染ハムスター脳ホモジネートは、半定量的用量反応で検出された。
【００４９】
いくつかの実施形態において、組成物中のプリオンタンパク質は、タンパク質ミスフォールディング周期的増幅（ＰＭＣＡ）によって測定される。この方法は、血液中のＰｒＰｓｃを検出するために使用されている。組成物中のプリオンタンパク質の測定に適した他の方法としては：時間分解解離−増強蛍光法（ｔｉｍｅ−ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いた定量的サンドイッチＥＬＩＳＡ；二色蛍光共焦点スキャニング（ｄｕａｌ−ｃｏｌｏｒ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｃｏｎｆｏｃａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ）；コンフォメーション依存性イムノアッセイ（ＣＤＩ）が挙げられるがこれらに限定されない。ウエスタンブロッティング、ビーズブロット、ゲル移動度シフトアッセイ、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション解析（ＦＩＳＨ）、放射性マーカーもしくは生物発光性マーカーの追跡、核磁気共鳴、電子常磁性共鳴、ストップトフロー分光法（ｓｔｏｐｐｅｄ−ｆｌｏｗ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、カラムクロマトグラフィ、キャピラリー電気泳動または他の方法もまた組成物中のプリオンタンパク質を検出するために発展され得る。
【００５０】
いくつかの実施形態において、組成物は、プリオンタンパク質を検出するためのアッセイのうちの１つ（例えば、上に記載されたアッセイのいずれか１つ）に基づいて、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物を解析するために２つ以上のアッセイが使用され、これらの異なるアッセイ間の相互関係を用いることにより、その組成物がプリオンタンパク質を含まないか否かが判定される。
【００５１】
したがって、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、約１００ｆｇ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約１ＬＤ５０／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質ミスフォールディング周期的増幅（ＰＭＣＡ）アッセイに基づいて、プリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、ＩＰＣＲアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有し、かつＰＭＣＡアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、いくつかの実施形態において、組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有し、かつＩＰＲＣアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍｅａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｐｄｆｓ／ｈｕｍａｎ／ｂｗｐ／５１３６０３ｅｎ．ｐｄｆで入手可能なＧｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｓｍａ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｇａｒｄ  ｔｏ  ｖＣＪＤ  Ｒｉｓｋ（ＣＰＭＰ５１３６／０３）（その内容の全体が本明細書中で援用される）において提供される基準に基づいてプリオンタンパク質を含まない。
【００５２】
本明細書中に記載される組成物は、通常、ＰｒＰｓｃを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、ＰｒＰｃも実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物中のＰｒＰｓｃとＰｒＰｃとのモル比は、約１：１を超えない（例えば、約１：１０、１：１００、１：１０００、１：１００００または１：１０００００のいずれか１つを超えない）。
【００５３】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒト、ウシ、ヒツジおよびげっ歯類（例えば、ハムスター、マウスおよびミンク）由来のプリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、Ｈ型プリオンタンパク質、Ｌ型プリオンタンパク質またはその両方を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、細胞に結合したプリオンタンパク質、遊離プリオンタンパク質またはその両方を実質的に含まない。
【００５４】
本明細書中で使用される用語「ＰｒＰｃ」とは、哺乳動物の身体内で天然に発現される天然型プリオンタンパク質分子のことを指す。本明細書中で使用される用語「ＰｒＰｓｃ」とは、感染性であると考えられる立体構造的に変化した形態のＰｒＰｃ分子のことを指す。
【００５５】
本明細書中で使用される「アルブミン」とは、天然に存在するアルブミンのことを指し、組換え的に生成されたアルブミンを包含しない。天然に存在するアルブミンは、インビボにおけるアルブミンレセプターに対する天然のリガンドであるので、組換えアルブミンよりも都合がよい。本明細書中に記載される方法において使用されるアルブミンは、通常、アルブミンの翻訳後修飾を受けており、ゆえに、免疫原性のリスクが低い。いくつかの実施形態において、アルブミンは、血液由来の組成物から得られる。本明細書中で使用される「血液由来の組成物」には、全血、赤血球濃縮物、血漿、血清、血小板が豊富な画分および血小板が少ない画分、血小板濃縮物、白血球（ｗｈｉｌｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）、血漿沈殿物、血漿画分の沈殿物および上清、血漿画分の中間物、血液に由来する様々な他の物質などが含まれる。いくつかの実施形態において、アルブミンは、ヒト由来である。いくつかの実施形態において、アルブミンは、動物（例えば、ウシ、ヒツジおよびげっ歯類（例えば、マウス、ハムスターおよびミンク））由来である。いくつかの実施形態において、アルブミンは、個体（例えば、ヒト）の集団から得られ、その集団の少なくとも一部は、プリオンに感染している。いくつかの実施形態において、アルブミンは、個体（例えば、ヒト）の集団から得られ、その集団の少なくとも一部は、プリオンに感染していると疑われる。いくつかの実施形態において、アルブミンは、大きなバッチサイズの個体のプールから得られる。
【００５６】
本明細書中に記載される組成物は、いくつかの実施形態において、プリオン除去処理によって導入された痕跡量の物質を含む。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、プリオンタンパク質に結合することができる痕跡量のリガンドを含む。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、痕跡量の支持材料（例えば、樹脂をはじめとした本明細書中に記載される支持材料で作製された材料）を含む。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まず、その組成物は、プリオンタンパク質に結合することができる痕跡量のリガンドおよび痕跡量の支持材料（例えば、樹脂をはじめとした本明細書中に記載される支持材料で作製された材料）を含む。
【００５７】
「痕跡量」とは、組成物の特性、例えば、バイオアベイラビリティおよび／または生物学的等価性に関して影響しない検出可能な量のことを指す。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物と生物学的に等価である。生物学的等価性は、例えば、ＣｍａｘとＡＵＣの両方に対して０．８０〜１．２５の９０％信頼区間、またはＡＵＣに関して０．８０〜１．２５の９０％信頼区間およびＣｍａｘに対して０．７０〜１．４３の９０％信頼区間によって確証され得る。
【００５９】
いくつかの実施形態において、組成物中のアルブミン安定剤のレベルは、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物のレベルより低い。これらのアルブミン安定剤としては、例えば、Ｎ−アセチルトリプトファネートおよびカプリル酸ナトリウムが挙げられる。
【００６０】
本明細書中に記載される組成物は、通常、実質的に水に溶けない薬学的に活性な薬剤およびアルブミンを含むナノ粒子を含む。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤およびアルブミンを含むナノ粒子を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物中のナノ粒子は、約１０００ｎｍを超えない平均直径（例えば、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０または６０ｎｍのいずれか１つを超えない平均直径を含む）を有する。いくつかの実施形態において、組成物中の全ナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つ）が、約１０００ｎｍを超えない直径（例えば、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０または６０ｎｍのいずれか１つを超えない直径を含む）を有する。いくつかの実施形態において、組成物中の全ナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つ）は、約２０〜約２００ｎｍ（例えば、約３０〜約１８０ｎｍのいずれか１つならびに約４０〜約１５０、約５０〜約１２０および約６０〜約１００ｎｍのいずれか１つを含む）の範囲内に入る。
【００６１】
いくつかの実施形態において、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約５％（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％のいずれか１つを含む）は、架橋されている（例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって架橋されている）。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）でコーティングされた実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤をナノ粒子と非ナノ粒子の両方の形態として含み、ここで、その組成物中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つは、ナノ粒子の形態である。いくつかの実施形態において、ナノ粒子中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、そのナノ粒子の約５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％または９９重量％のいずれか１つよりも多くを占める。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、非ポリマーマトリックスを有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、ポリマー材料（例えば、ポリマーマトリックス）を実質的に含まない実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤のコアを含む。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、界面活性物質または有機溶媒（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ８０、または実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の投与のために使用される他の任意の有機溶媒）を実質的に含まない（例えば、含まない）。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、約２０％未満、１５％未満、１０％未満、７．５％未満、５％未満、２．５％未満、１％未満のいずれか１つまたはそれ以下の有機溶媒を含む。
【００６４】
アルブミン含有組成物からプリオンを除去することにより、プリオンについて心配せずに、より多い量のアルブミンを投与することが可能になる。したがって、本発明は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物（例えば、薬学的組成物）も企図し、ここで、アルブミンと実質的に水に溶けない医薬品との重量比は、約２０：１またはそれ以上（例えば、約３０：１もしくはそれ以上、約４０：１もしくはそれ以上または約５０：１もしくはそれ以上のいずれか１つ）である。例示的な比としては、例えば、約２０：１〜約４０：１、約４０：１〜約６０：１、約６０：１〜約８０：１または約９０：１〜約１００：１が挙げられる。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物中のアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１８：１またはそれ以下（例えば、約１５：１またはそれ以下、例えば、約１０：１またはそれ以下）である。いくつかの実施形態において、組成物中のアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１３：１、約４：１〜約１２：１、約５：１〜約１０：１のいずれか１つの範囲内に入る。いくつかの実施形態において、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５のいずれか１つまたはそれ以下である。
【００６５】
いくつかの実施形態において、粒子組成物は、上記の特性の１つ以上を備える。
【００６６】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、ＡｂｒａｘａｎｅＴＭである。他の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、ドセタキセルおよびオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ））を含むナノ粒子組成物もまた、上記の特性の１つ以上を備え得る。
【００６７】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミン組成物から除去する工程をさらに包含する。
【００６８】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、ａ）アルブミンを含む最初の組成物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させることにより、そのリガンドとプリオンタンパク質との複合体を形成させる工程、およびｂ）その複合体を最初の組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。
【００６９】
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬物を含むナノ粒子は、さらに下記においてより詳細に記載される。組成物（例えば、最初のアルブミン組成物、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子組成物、またはナノ粒子を作製するプロセス中に形成される中間体組成物）からプリオンを除去する方法が、さらに下記においてより詳細に記載される。本発明は、本明細書中に記載される方法のいずれかによって作製される組成物を包含する。
【００７０】
本明細書中に記載される組成物は、通常、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物と比べて、低いプリオンタンパク質レベルを有する。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物よりも約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％のいずれかよりも少ないかまたはそれ以下のプリオンタンパク質を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物よりも約１、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７または８ｌｏｇのいずれかだけ少ないプリオンタンパク質を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物よりも約１、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７または８ｌｏｇのいずれかだけ低い感染性を有する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、プリオン除去処理によってアルブミンが清浄にされていない組成物と生物学的に等価である。
【００７１】
本願は、アルブミンに焦点を当てているが、血液または血漿中に通常見られる他のタンパク質（それらとしては、免疫グロブリン（ＩｇＡおよびＩｇＧを含む）、リポタンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アルファ酸糖タンパク質、ベータ−２−マクログロブリン、チログロブリン、トランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｉｎ）、フィブロネクチン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子などが挙げられるが、これらに限定されない）もまた企図されることが理解されるべきである。本明細書中に提供されるアルブミンについて関連する記載のすべてが、これらの他のタンパク質がナノ粒子の形成において利用される限り、それらの他のタンパク質に等しく適用可能である。
【００７２】
プリオン非含有ナノ粒子組成物を作製する方法
別の局面において、プリオン非含有ナノ粒子組成物を作製する方法が提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは、プリオンタンパク質を最初のアルブミン組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する方法によって得られたものである。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は、アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含し、ここで、そのアルブミンは、ａ）最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、およびｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を最初の組成物から除去する工程を包含する方法によって得られたものである。
【００７３】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は：ａ）プリオンタンパク質を最初のアルブミン組成物から除去する工程；ｂ）プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は：ａ）最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させることにより、そのリガンドとプリオンタンパク質との複合体を形成させる工程、およびｂ）その複合体を最初のアルブミン組成物から除去する工程；ｃ）プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。
【００７４】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミン溶液をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン溶液から除去する工程、ｃ）前記アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００７５】
上記プリオンは、ナノ粒子の形成中に除去され得る。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｂ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、ｃ）その混合物を高剪断条件に供する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、有機溶媒を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００７６】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミン溶液と、有機溶媒に分散された実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程；およびｂ）その混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｃ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、有機溶媒を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００７７】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は、有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含し、ここで、その混合物は、リガンドに接触する前に高剪断条件に供されている。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、およびｂ）その混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｃ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｄ）水相を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００７８】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、ｂ）前記有機溶媒を除去する工程、およびｃ）有機溶媒が除去された混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｄ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｄ）水相を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００７９】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、ｂ）前記有機溶媒を除去する工程、ｃ）その混合物にアルブミンを加える工程、およびｄ）その混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｅ）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は：ｆ）水相を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、混合物は、界面活性物質を実質的に含まない。
【００８０】
本明細書中に記載される方法は、通常、有機溶媒に分散された実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、高剪断条件は、例えば、約３０００〜約３０，０００ｐｓｉ（例えば、約６０００〜約２５，０００ｐｓｉ、約９０００〜約１８，０００ｐｓｉ、約１０，０００〜約２５，０００ｐｓｉ、約１５，０００〜約２５，０００ｐｓｉを含む）の範囲内の圧力での、高圧均質化である。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、実質的に水不混和性の有機溶媒（例えば、クロロホルムまたは塩化メチレン）と、水溶性有機溶媒（例えば、エタノールおよびｔ−ブタノールをはじめとした水溶性アルコール）との混合物である。いくつかの実施形態において、実質的に水不混和性の有機溶媒と水溶性有機溶媒との比（ｖ／ｖ）（例えば、クロロホルム／エタノールまたはクロロホルム／ブタノールの比）は、約１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１もしくは９：１のいずれか、または約３：７、５：７、４：６．６：４、５：５、６：５、８：５、９：５、９．５：５、５：３、７：３、６：４もしくは９．５：０．５のいずれかの比である。
【００８１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、有機相を混合物から除去する工程（例えば、減圧下での蒸発による除去）をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、水相を混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上に記載された方法によって形成されたナノ粒子を濾過滅菌する工程をさらに包含する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、プリオンタンパク質を含むと疑われる組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、前記方法は：ａ）そのナノ粒子組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をナノ粒子組成物から除去する工程を包含する。いくつかの実施形態において、異常なプリオンタンパク質を含むと疑われるアルブミン組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、その方法は：ａ）アルブミンを含む組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン組成物から除去する工程を包含し、ここで、前記アルブミン組成物は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含むナノ粒子を含む組成物を作製するために使用される。
【００８３】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、その方法は：ａ）その組成物中のプリオンタンパク質の有無を判定する工程、ｂ）その組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、およびｃ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を組成物から除去する工程を包含する。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法の１つ以上の工程は、バッチモードで行われる。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法の１つ以上の（ｏｎｅ  ｏｆ  ｍｏｒｅ）工程は、連続モードで行われる。
【００８５】
ナノ粒子形成前のプリオンの除去
上記プリオンタンパク質は、アルブミン含有ナノ粒子組成物が作製される前に最初のアルブミン組成物から除去され得る。通常、上記方法は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ならびにそのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン組成物から除去する工程を包含する。このプロセスは、同じまたは異なるリガンドを用いて１回以上繰り返され得る。プリオン除去処理において、同時に２つ以上のリガンドも使用され得る。
【００８６】
いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、血液由来の組成物である。例えば、いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、全血、赤血球濃縮物、血漿、血清、血小板が豊富な画分および血小板が少ない画分、血小板濃縮物、白血球、血漿沈殿物、血漿画分の沈殿物ならびに上清または血漿画分の中間物である。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、ヒトから得られる。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、動物（例えば、ウシ、ヒツジおよびげっ歯類（例えば、マウス、ハムスターおよびミンク））由来である。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、個体（例えば、ヒト）の集団から得られ、その集団の少なくとも一部は、プリオンに感染している。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、個体（例えば、ヒト）の集団から得られ、その集団の少なくとも一部は、プリオンに感染していると疑われる。
【００８７】
いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、イオン交換クロマトグラフィ、アフィニティークロマトグラフィ、ゲル浸透クロマトグラフィおよび／もしくは疎水性クロマトグラフィ、ならびに／または示差沈殿（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）をはじめとした、当該分野において通常の様々な方法のいずれかによって体液（例えば、血液）から調製されたアルブミン組成物である。いくつかの実施形態において、最初の組成物は、血液（例えば、ヒト血液）から精製されたアルブミン組成物である。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、血清（例えば、ヒト血清）から精製されたアルブミン組成物である。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物は、約１００ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ、９０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ、５０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌまたは１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌというプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物中のアルブミンの濃度は、約１％（ｗ／ｖ）（例えば、約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％を含む）である。
【００８８】
プリオン除去処理において、リガンドは、最初のアルブミン組成物と接触され、最初のアルブミン組成物中のプリオンタンパク質に結合する。この結合に適した条件は、リガンドの性質およびプリオンタンパク質への結合特異性に基づいて決定され得、また、リガンドがプリオンタンパク質に結合するのを促進するように最適化され得る。いくつかの実施形態における結合は、約０℃〜約３９℃の温度（例えば、約２０℃〜約２５℃を含む）において行われる。結合は、約４〜約１０のｐＨ（例えば、約５〜約９、約６〜約８、約６．８〜約７．５、約６．９〜約７．４または約７を含む）において行われ得る。必要に応じて、リガンドへの非特異的結合を減少させるためにブロッキング剤が使用され得る。
【００８９】
接触工程の後、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質が、組成物の残りの部分から除去される。本明細書中で使用される用語「除去する」とは、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン含有組成物から分離することを指す。この分離は、リガンド、および分離を促進するために使用される支持材料（もしあれば）の性質に応じて、種々の方法において行われ得る。例えば、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質は、クロマトグラフィ（例えば、薄層クロマトグラフィ、カラムクロマトグラフィおよびバッチクロマトグラフィであるがこれらに限定されない）；固体支持体および膜を用いた分離；リアクターを用いた分離；磁気分離、免疫分離；コロイド分離（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）；沈降；沈殿；または遠心分離によって分離され得る。
【００９０】
いくつかの実施形態において、リガンドは、ビーズまたは膜などの支持材料に接着され得、そしてその支持材料は、最初のアルブミン組成物に接触される。リガンドが固定化された支持体は、プリオン−リガンド複合体を形成させるのに十分な条件下で最初のアルブミン組成物に接触される。次いで、その固相を組成物から分離し、それによって、リガンドに結合したプリオンタンパク質がサンプルから除去される。例えば、１つの例示的な実施形態において、リガンドをクロマトグラフィカラムなどのカラムに固定化し、次いで、サンプル（例えば、最初のアルブミン組成物）を、重力によって、または高圧液体クロマトグラフィカラムにおけるような加圧下で、カラムに通す。サンプル中のプリオンタンパク質は、カラムに固定化されたリガンドに結合し、通過したサンプルが回収され得る。このプロセスを、同じまたは異なるリガンドを用いて数回繰り返すことにより、所望の結果を得ることができる。
【００９１】
カラムにおけるサンプル（例えば、最初のアルブミン組成物）の流速は、リガンドとサンプル中のプリオンタンパク質との結合を最大にするように調整され得る。いくつかの実施形態において、結合は、約０．１ｍｌ／分〜約５．０ｍｌ／分、約０．１ｍｌ／分〜約２．５ｍｌ／分、約０．１ｍｌ／分〜約０．２５ｍｌ／分、約０．２５／分〜約０．５ｍｌ／分、約０．５ｍｌ／分〜約１．０ｍｌ／分、約１．０ｍｌ／分〜約１．５ｍｌ／分、約１．５ｍｌ／分〜約２．０ｍｌ／分、約２．０ｍｌ／分〜約２．５ｍｌ／分、約２．５ｍｌ／分〜約３．０ｍｌ／分、約３．０ｍｌ／分〜約３．５ｍｌ／分、約３．５ｍｌ／分〜約４．０ｍｌ／分、約４．０ｍｌ／分〜約４．５ｍｌ／分または約４．５ｍｌ／分〜約５．０ｍｌ／分（例えば、約０．１ｍｌ／分、０．２５ｍｌ／分、０．５ｍｌ／分、１．０ｍｌ／分、１．５ｍｌ／分、１．７ｍｌ／分、１．８ｍｌ／分、１．９ｍｌ／分、２．０ｍｌ／分、２．１ｍｌ／分、２．３ｍｌ／分、２．５ｍｌ／分、２．７ｍｌ／分、３．０ｍｌ／分、３．５ｍｌ／分、４．０ｍｌ／分、４．５ｍｌ／分または５．０ｍｌ／分を含む）の流速で行われる。いくつかの実施形態において、流速は、少なくとも約１０ｍｌ／分（例えば、少なくとも約２０ｍｌ／分、３０ｍｌ／分、４０ｍｌ／分、５０ｍｌ／分のいずれか）である。
【００９２】
結合プロセスにおける総フロースルー体積または総通過時間もまた、リガンドとサンプル（例えば、最初のアルブミン組成物）中のプリオンタンパク質との結合を最大にするように調整され得る。いくつかの実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約１倍〜約１０００倍（例えば、カラム体積の約２倍〜約１０倍、カラム体積の約１０倍〜約２０倍、カラム体積の約２０倍〜約３０倍、カラム体積の約３０倍〜約４０倍、カラム体積の約４０倍〜約５０倍、カラム体積の約５０倍〜約１０００倍、カラム体積の約５０倍〜約５００倍、カラム体積の約１００倍〜約６００倍またはカラム体積の約２００倍〜約８００倍を含む）である。いくつかの実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約１００倍である。他の実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約５００倍である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約１時間〜約３０時間（例えば、約２時間〜約２５時間、約３時間〜約２０時間または約３時間〜約１７時間を含む）である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間または２０時間のいずれかである。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約２４時間超である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約８時間未満（例えば、７、６、５、４、３、２、１または０．５時間未満のいずれかを含む）である。
【００９３】
あるいは、まずリガンドが、プリオン−リガンド複合体を形成させるのに十分な条件下で最初のアルブミン組成物に接触され得る。次いで、そのプリオン−リガンド複合体が、親和性に基づくクロマトグラフィなどのカラムを用いることによって除去される。分離を促進するために、リガンドは、結合パートナーに結合体化され得、その結果、リガンド／プリオン複合体は、例えば、結合パートナーを認識する分子を備えるアフィニティーカラムを用いることによって、その結合パートナーを介して除去され得る。
【００９４】
バッチクロマトグラフィまたはカラムクロマトグラフィに加えて、プリオンタンパク質結合のためのリガンドの使用の他の種々の設定、変法およびバリエーションもまた構想される。そのようなバリエーションおよび変法としては：バッチプロセス、連続プロセス、移動床クロマトグラフィプロセス；低圧、中圧もしくは高圧プロセス；またはスモールスケール、ミディアムスケールもしくはラージスケールプロセスが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リガンドは、膜上、繊維上、ビーズ上に存在するか、不織メッシュに含浸されるか、またはフィルターハウジング内に入れられたコーティング繊維の上に存在する。
【００９５】
いくつかの実施形態において、除去工程は、収量損失、ならびに／またはアルブミンの特性および／もしくは安定性の変化を著しくもたらさない。いくつかの実施形態において、元の生物学的状態でのアルブミンの回収は、少なくとも５０％超のレベル（例えば、８０％もしくは９０％またはそれ以上を含む）に実質的に維持される。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理からのアルブミンの回収率は、約８０％、９０％、９５％または９９％のいずれかよりも高い。いくつかの実施形態において、最初のアルブミン組成物中のアルブミンの濃度は、プロセス中の非特異的結合およびアルブミンの損失を最小にするために、プリオン除去工程の前に調整されるかまたは制御される。例えば、アルブミンの濃度は、約１％〜約５０％、約５％〜約２５％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％などの範囲内（例えば、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％のアルブミンを含む）であり得る。
【００９６】
プリオン除去処理の浄化率（ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｒａｔｅ）を測定するために、得られたアルブミン組成物が解析され得る。浄化率を測定するために、プリオンタンパク質が結合したリガンドもまた解析され得る（直接または溶出後に）。
【００９７】
プリオンタンパク質の除去は、プリオンタンパク質の減少または感染性の低下に基づいて評価され得る。いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％を含む）が、最初のアルブミン組成物から除去される。いくつかの実施形態において、除去後のアルブミン組成物の感染性は、最初のアルブミン組成物の感染性よりも少なくとも約１０×、２０×、３０×、４０×、５０×、８０×、１００×、２００×、５００×、１０００×、１０４×、１０５×、１０６×、１０７×、１０８×、１０９×低い。
【００９８】
いくつかの実施形態において、段階的な感染性（ｓｅｒｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）を用いることにより、プリオン除去処理の浄化率が測定される。サンプルの段階希釈物を作製し、希釈物を、感染活性について、例えばアッセイ動物において調べる。その動物の半数が感染する希釈度が、感染力価である。例えば、５倍希釈が必要である場合、サンプルは、５ｌｏｇの感染性を有すると定義され得る。最初のアルブミン組成物のｌｏｇ感染性と除去後のアルブミン組成物のｌｏｇ感染性とを比較することによって、プリオン除去処理の浄化率が決定され得る。いくつかの実施形態において、プリオン除去方法によって、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、３または４、５、６、７、８、９または１０ｌｏｇのいずれか１つの感染性の低下がもたらされる。
【００９９】
いくつかの実施形態において、プリオン除去処理の浄化率は、プリオン除去方法に対する本明細書中に記載される工程に従うことによる感染性材料を用いたスパイク実験に基づいて測定される。適当なスパイク物質（ｓｐｉｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としては、脳ホモジネート、ミクロソーム、カベオラ様ドメイン、精製ＰｒＰｓｃおよびプリオン原線維が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、スパイク物質は、洗浄剤に可溶性（ｓｏｌｕｂｌｉｚｅｄ）（例えば、サルコシルに可溶性）である。いくつかの実施形態において、組成物中のスパイク比率は、約０．００１％〜約５％、約０．００１％〜約０．２５％、約０．００１％〜約０．１％、約０．００１％〜約０．００５％、約０．００５％〜約０．０７５％、約０．０７５％〜約０．０１％、約０．０１％〜約０．１％、約０．１％〜約０．５％、約０．５％〜約０．７５％、約０．７５％〜約１％、約１％〜約２％、約２％〜約３％または約３％〜約５％の範囲内（例えば、約０．００１％、０．００５％、０．０７５％、０．０１％、０．１％、０．５％、０．７５％、１％、２％、３％または５％を含む）である。
【０１００】
いくつかの実施形態において、プリオン除去処理の浄化率を決定するために減少係数（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ）（ＲＦ）が使用される。ＲＦは、式：
ＲＦ＝（Ｖ１×Ｔ１）／（Ｖ２×Ｔ２）
または
Ｌｏｇ１０［ＲＦ］＝［Ｌｏｇ１０（Ｖ１）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ１）］−［Ｌｏｇ１０（Ｖ２）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ２）］
を用いて計算され得る。式中、Ｖ１およびＴ１は、それぞれ最初のアルブミン組成物の体積および力価であり、Ｖ２およびＴ２は、除去後のアルブミン組成物の体積および力価である。減少係数は、最後の計算の後に小数第１位に丸められ得る。いくつかの実施形態において、少なくとも約１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５または８．０ｌｏｇ１０感染性という減少係数のプリオンタンパク質が、最初のアルブミン組成物から除去される。例えば、プリオンタンパク質は、２０％アルブミン組成物にスパイクされた０．５％サルコシル可溶性画分において２．５ｌｏｇ１０と等しいかまたはそれより高い減少係数だけ除去される。別の例として、プリオンタンパク質は、２５％アルブミン組成物にスパイクされた０．５％サルコシル可溶性画分において２．０ｌｏｇ１０と等しいかまたはそれより高い減少係数だけ除去され得る。
【０１０１】
プリオンの除去は、標準的なウエスタンブロット解析によって評価され得る。例えば、まず、結合後のリガンドを、すべてのＰｒＰｃを消化するがＰｒＰｓｃを消化しないプロテイナーゼＫで処理し得る。次いで、その消化物をＳＤＳゲルにおいて泳動し、ニトロセルロースのシートまたはＰＶＤＦ膜にトランスブロットする。次いで、分離されたＰｒＰｓｃバンドを、３Ｆ４または６Ｈ４を用いて可視化する。３Ｆ４は、ヒト、ハムスターおよびネコ由来のアミノ酸残基１０９〜１１２ＰｒＰと反応する。１つの例示的な実施形態において、０．６μｇ／ｍｌという濃度で最低１時間インキュベーションを行い、その後、過剰の抗体を洗い流し、膜をウサギ抗マウス西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体（１：１０００希釈）とともに最低１時間インキュベートした。その膜をＴＴＢＳでしっかり洗浄した後、高感度化学発光を用いて現像した。いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質の除去は、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｓｍａ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｇａｒｄ  ｔｏ  ｖＣＪＤ  Ｒｉｓｋ（ＣＰＭＰ５１３６／０３）に従って評価される。
【０１０２】
プリオンタンパク質に結合することができるリガンドおよび支持材料
本明細書中で使用される「リガンド」とは、プリオンタンパク質またはプリオンペプチドに結合する分子のことを指す。「プリオンタンパク質に結合することができるリガンド」とは、適当な条件下でプリオンタンパク質に特異的に結合するリガンドのことを指す。いくつかの実施形態において、リガンドは、ヒトプリオンタンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、リガンドは、ハムスタープリオンタンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、リガンドは、マウスタンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、リガンドは、複数の種由来のプリオンタンパク質に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、リガンドは、ヒトプリオンタンパク質、ハムスタープリオンタンパク質およびマウスプリオンタンパク質に結合する。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、リガンドは、高結合親和性でプリオンタンパク質（例えば、ヒトプリオンタンパク質、ハムスタープリオンタンパク質および／またはマウスプリオンタンパク質）に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、リガンドは、約１０７、１０８、１０９、１０１０または１０１１のいずれかよりも高い結合会合定数（ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｋａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を有する。
【０１０４】
プリオンタンパク質に結合するいくつかのリガンドが同定されており、ゆえに、それらは本発明の方法において使用され得る。例えば、ＷＯ０４／０９０１０２、ＷＯ０４／０５０８５１、ＷＯ０６／０１０９１５およびＷＯ０６／０４４４５９を参照のこと。これらとしては、例えば、ペプチド、化合物、およびプリオンタンパク質を特異的に認識する抗体が挙げられる。そのリガンドは、すべての形態のプリオンタンパク質を組成物から除去するために使用され得るか、または１つの形態のプリオンタンパク質を検出するためもしくは除去するために選択的に選ばれ得る。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、プリオンを除去するためのリガンドは、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ０４／０５０５１に記載されているペプチドなどのペプチドである。例えば、いくつかの実施形態において、リガンドは、表１に示されるような配列番号１〜２３２のいずれかのアミノ酸を有するペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、配列番号４８、１０２、１０５、１０８、１０９、１１０、１１１、１４３、１４８、１９３、１９４、１９５、２０２、２０３、２０４または２１０のいずれか１つのアミノ酸配列を有するペプチドなどのトリペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、配列番号１５２、１５３、１８０、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９または１９０のいずれか１つのアミノ酸配列を有する６−ｍｅｒなどの６アミノ酸を有するペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、配列番号１５０または１５１のアミノ酸配列を有する。
【０１０６】
【表１−１】
2015157839.tif 000002
【０１０７】
【表１−２】
2015157839.tif 000003
【０１０８】
【表１−３】
2015157839.tif 000004
いくつかの実施形態において、リガンドは、ＤＶＲ、ＳＹＡ、ＡＭＮ３１、Ｄ４またはＹＶＨＥＡのアミノ酸配列のペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、ＤＶＲ、ＳＹＡ、ＡＭＮ３１、Ｄ４またはＹＶＨＥＡと同様またはそれ以上の親和性でプリオンタンパク質に結合するペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、ＤＶＲである。他の実施形態において、リガンドは、ＡＭＮ３１である。いくつかの実施形態において、ペプチドリガンドは、樹脂の形態で（例えば、樹脂に結合した状態で）提供される。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、リガンドは、プリオンタンパク質を認識する抗体である。プリオンタンパク質を認識する抗体は、当該分野で公知である。これらとしては、モノクローナル抗体３Ｆ４、６Ｈ４または１６Ａ１８が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、その抗体は、ＩＣＳＭ−４およびＩＣＳＭ−１０などのグリコフォーム特異的抗体である。本明細書中に記載される方法に有用な適当な抗体としては、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、一本鎖抗体、ＦａｂフラグメントならびにＦｖフラグメントが挙げられる。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、リガンドは、プリオンタンパク質の特定配列に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、リガンド（例えば、ペプチドリガンドまたは抗体リガンド）は、表２に列挙されるプリオンタンパク質配列である配列番号１３３〜１４６のいずれか１つに結合する。
【０１１１】
【表２】
2015157839.tif 000005
いくつかの実施形態において、リガンドは、化合物である。プリオンタンパク質に結合することができる化合物は、例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ０６／０１０９１５（その全体が本明細書中で援用される）に見られる。いくつかの実施形態において、リガンドは、置換トリアジンである。いくつかの実施形態において、リガンドは、式（Ｉ）：
【０１１２】
【化１】
2015157839.tif 000006
を有する化合物であり、
式中、Ｒ１およびＲ２は、同じかまたは異なり、各々、必要に応じて置換されるアルキル、必要に応じて置換されるシクロアルキル、必要に応じて置換されるアリールまたは必要に応じて置換されるヘテロアリール基であり；Ｒ３は、水素もしくはアリール置換基であるか、またはＲ３は、スペーサーを介して必要に応じて接着される固体支持体であり；Ｚは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ４に相当し；Ｙは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ５に相当し；ここで、同じかまたは異なり得るＲ４およびＲ５は、水素、１〜６個の炭素原子を含む必要に応じて置換されるアルキル、必要に応じて置換されるフェニル、必要に応じて置換されるベンジルまたは必要に応じて置換されるβ−フェニルエチルに相当し；そしてＸ１およびＸ２のうちの一方は、窒素原子に相当し、Ｘ１およびＸ２の他方は、窒素原子またはＣＲ６に相当し、ここで、Ｒ６は、水素またはアリール置換基に相当し；この化合物は、プリオンタンパク質の親和性結合のためのものである。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、リガンドは、式（ＩＩ）
【０１１４】
【化２】
2015157839.tif 000007
の化合物であり、式中、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｍ−Ｑ１基に相当し、ここで、ｍは、０〜７であり、Ｑ１は、−ＣＲ１１Ｒ１２Ｒ１３または−ＮＲ１１Ｒ１２に相当し、ここで、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルに相当するか、またはＲ１１、Ｒ１２およびＲ１３のうちの２つが、それらが結合している炭素原子または窒素原子と一体となって、必要に応じて置換されるシクロアルキル基または必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｑ２基に相当し、ここで、ｎは、０〜７であり、Ｑ２は、−ＣＲ２１Ｒ２２Ｒ２３または−ＮＲ２１Ｒ２２に相当し、ここで、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は、独立して、水素、アルキル、シクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルに相当するか、またはＲ１１、Ｒ１２およびＲ１３のうちの２つが、それらが結合している炭素原子または窒素原子と一体となって、必要に応じて置換されるシクロアルキル基または必要に応じて置換されるヘテロシクロアルキル基を形成し、Ｒ３は、水素もしくはアリール置換基であるか、またはＲ３は、スペーサーを介して必要に応じて接着される固体支持体であり；Ｚは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ４に相当し；Ｙは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ５に相当し；ここで、同じかまたは異なり得るＲ４およびＲ５は、水素、１〜６個の炭素原子を含む必要に応じて置換されるアルキル、必要に応じて置換されるフェニル、必要に応じて置換されるベンジルまたは必要に応じて置換されるβ−フェニルエチルに相当し；そしてＸ１およびＸ２のうちの一方は、窒素原子に相当し、Ｘ１およびＸ２の他方は、窒素原子またはＣＲ６に相当し、ここで、Ｒ６は、水素またはアリール置換基に相当し；この化合物は、プリオンタンパク質の親和性結合のためのものである。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、ａ）Ｘ１およびＸ２は、両方とも窒素であり；ｂ）ＺとＹの両方がＮＲ４に相当し、特にＲ４は水素であり；ｃ）ｍは、０〜４、より好ましくは、０〜３、最も好ましくは、１〜３であり；ｄ）Ｑ１は、−ＮＲ１１Ｒ１２であり；そしてＲ１１およびＲ１２は、好ましくは、それらが結合している窒素原子と一体となって、ヘテロシクロアルキル基を形成し；ｅ）ｎは、０〜４、より好ましくは、０〜２、最も好ましくは、０であり；そしてｆ）Ｒ２１およびＲ２２は、それらが結合している炭素原子または窒素原子と一体となって、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル基を形成する。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、Ｑ２は、疎水性のシクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基、特に、少なくとも６個の原子を含む環系を有するものに相当する。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、Ｑ１は、ヘテロシクロアルキル基、特に、ピペリジル、特に、１−ピペリジル、またはピペラジニル、特に、１−ピペラジニルに相当する。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、リガンドは、式（ＩＩＩ）
【０１１９】
【化３】
2015157839.tif 000008
の化合物であり、式中、Ｒ１は、１つ以上のカルボキシル基によって置換され、１つ以上のさらなるアルキル置換基によって必要に応じて置換される、アルキレン鎖−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ３（ｐは、０〜６である）に相当し；Ｒ２は、−（ＣＨ２）ｑ−Ａｒ基（ｑは０〜７であり、Ａｒは必要に応じて置換されるアリール基に相当する）に相当し；そしてＲ３は、水素もしくはアリール置換基であるか、またはＲ３は、スペーサーを介して必要に応じて接着される固体支持体であり；Ｚは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ４に相当し；Ｙは、酸素原子、硫黄原子またはＮＲ５に相当し；ここで、同じかまたは異なり得るＲ４およびＲ５は、水素、１〜６個の炭素原子を含む必要に応じて置換されるアルキル、必要に応じて置換されるフェニル、必要に応じて置換されるベンジルまたは必要に応じて置換されるβ−フェニルエチルに相当し；そしてＸ１およびＸ２のうちの一方は、窒素原子に相当し、Ｘ１およびＸ２の他方は、窒素原子またはＣＲ６に相当し、ここで、Ｒ６は、水素またはアリール置換基に相当し；この化合物は、プリオンタンパク質の親和性結合のためのものである。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、ａ）Ｘ１およびＸ２は、両方とも窒素であり；ｂ）ＺとＹの両方がＮＲ４に相当し、特にＲ４は水素であり；ｃ）ｐは、０〜４、より好ましくは、０〜３であり；ｄ）Ｒ１は、１つまたは２つのカルボキシル基で置換され、それらのカルボキシル基のうちの少なくとも１つは、アルキレン鎖−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ３の末端炭素原子によって保持され；ｅ）ｑは、０〜４、より好ましくは、０〜３、最も好ましくは、１または２であり；そしてｆ）Ａｒは、フェニル、フェノキシ、トリル、クロロベンジル、メトキシベンジル、フルオロベンジル、ピリジルおよびインドイルからなる群から選択される１つ以上の置換基によって必要に応じて置換される、単環式の炭素環式または複素環式の芳香族基である。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、カルボキシメチル、４−カルボキシブチルまたは１−（１，３−ジカルボキシ）プロピルである。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、Ａｒは、フェニル、４−ヒドロキシフェニルまたはピリジル、特に、２−ピリジルである。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、水素もしくはアリール置換基であるか、またはＲ３は、スペーサーを介して必要に応じて接着される固体支持体であり；Ｘ１およびＸ２は、両方ともＮであり；ＹおよびＺは、両方ともＮＨに相当し；ｍは、２に相当し；Ｑ１は、ピペリジルまたはピペラジニルに相当し；ｎは、０または２に相当し；そしてＱ２は、１−ピペリジルまたはアダマンチルに相当する。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、水素もしくはアリール置換基であるか、またはＲ３は、スペーサーを介して必要に応じて接着される固体支持体であり；Ｘ１およびＸ２は、両方ともＮであり；ＹおよびＺは、両方ともＮＨに相当し；Ｒ１は、カルボキシメチル、４−カルボキシブチルおよび１−（１，３−ジカルボキシ）プロピルに相当し；ｑは、２に相当し；そしてＡｒは、フェニル、２−ピリジルまたは４−ヒドロキシフェニルを表す。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、リガンドは、無機化合物または無機成分（例えば、アルミニウム（例えば、酸化アルミニウム）またはシリカ（例えば、溶融石英）であるがこれらに限定されない）である。いくつかの実施形態において、無機化合物は、Ａ１２０３またはＳｉＯ２である。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、リガンドは、１つ以上の官能基を含む。用語「官能基」は、特徴的な化学的作用、物理的作用または物理化学的作用を分子または材料に付与する化学基、部分基（ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ）または下部構造を表すために本明細書中で使用される。本明細書中に記載される官能基としては、親水性（例えば、正電荷、負電荷もしくは無電荷または中性）または疎水性のものが挙げられるが、これらに限定されない。両親媒性または多官能性の官能基もまた考えられ、それらも本発明の範囲内に入る。官能基には、有機官能基および無機官能基が含まれる。好ましい官能基は、アミン基、フェニル基または亜硫酸（ｓｕｌｆｉｔｅ）基を含む。好ましいアミン基は、一級、二級、三級または四級アンモニウムイオン（例えば、ジメチルアミノエチル（ＤＭＡＥ）またはトリメチルアミノエチル（ＴＭＡＥ））である。
【０１２７】
他の例示的な官能基としては：−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＮＨ２；−Ｃ６Ｈ５；−（ＣＨ２）３−ＣＩＩ３；−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ（Ｃ２Ｈ５）２；−ＳＯ２−ＣＨ２−ＣＦ３’−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｈ（ＣＨ３）２；−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ３）３；−ＳＯ３２−が挙げられるが、これらに限定されない。さらに有用な官能基としては、スルホニル基およびトレシル基が挙げられる。官能基は、本来的にリガンドに存在し得るか、または化学修飾によってリガンドに付加され得ることが理解されるべきである。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、リガンドは、アミノ基を含む。これらとしては、例えば、アミノ樹脂（例えば、ＴｏｙｏｐｅａｒｌＴＭＡｍｉｎｏ−６５０Ｍ、ＴｏｙｏｐｅａｒｌＴＭＡｍｉｎｏ−ＡＭＮ３１、ＴＳＫ−ＧＥＬＴＭ−Ａｍｉｎｏ７５０Ｃ）またはその機能的等価物が挙げられる。いくつかの実施形態において、リガンドは、フェニル基を含む。これらとしては、例えば、ＴＳＫ−ＧＥＬＴＭＰｈｅｎｙｌ−５ＰＷまたはその機能的等価物が挙げられる。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、リガンドは、選択的および特異的にプリオンタンパク質に結合する、クロマトグラフィ樹脂（例えば、アミノ樹脂）などのポリマー材料である。クロマトグラフィ樹脂の例は、ＰＲＤＴ  Ｐｒｉｏｎ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  Ｒｅｓｉｎｓ（ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｔｄ，２１１  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐａｒｋ，Ｍｉｌｔｏｎ  Ｒｏａｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＣＢ４  ０ＷＡ，ＵＫ）である。いくつかの実施形態において、ポリマー材料は、上に記載された官能基などの１つ以上の官能基を含む。いくつかの実施形態において、リガンドは、メタアクリレート骨格を有するポリマー材料（例えば、商業的に入手可能なＴＳＫ樹脂、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ樹脂またはＦＡＣＴＯＧＥＬ樹脂（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）であるがこれらに限定されない）である。
【０１３０】
本発明の方法において使用され得る他のリガンドとしては、例えば、アミロイド斑と相互作用するリガンド、例えば、Ｃｏｎｇｏ：Ｅ；Ｌｅｄ（Ｉｎｇｒｏｓｓｏ，Ｌ．ら、Ｃｏｎｇｏ  Ｒｅｄ：Ｐｒｏｌｏｎｇｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ  Ｐｅｒｉｏｄ  ｉｎ  Ｓｃｒａｐｉｅ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  Ｈａｍｓｔｅｒｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６９：５０６−５０８（１９９５））；１，４−ヨード，４−デオキシドキソルビシン（Ｔａｇｌｉａｖｉｎｉ，Ｆ．ら、Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｒｉｏｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｉｎ  Ｓｙｒｉａｎ  Ｈａｍｓｔｅｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：１１１９−１１２２（１９９７））；アンホテリシン１３、ポルフィリン（ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ）およびフタロシアニン（Ｐｒｉｏｌａ，Ｓ．Ａ．ら、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  ａｎｄ  Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  Ａｎｔｉｓｃｒａｐｉｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１５０３−１５０６（２０００））；金属（Ｓｔｏｃｋｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３７，７１８５−７１９３（１９９８））；ＰｒＰと相互作用して複合体を形成するペプチド（Ｐｒｕｓｉｎｅｒらに対する米国特許第５，７５０，３６１号およびＳｏｌｏ，Ｃ．ら、Ｒｅｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐ−ｓｈｅｅｔ  Ｂｒｅａｋｅｒ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｌａｎｃｅｓ，３５５：１９２−１９７（２０００）を参照のこと）；ヘパリンおよび他の多硫酸化（ｐｏｌｙｓｕｌｐｈａｔｅｄ）ポリアニオン（Ｃａｕｇｈｅｙ，Ｂ．ら、Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｆｏｒｍ  ｏｆ  Ｐｒｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰｒＰ  ｔｏ  Ｓｕｌｐｈａｔｅｄ  Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｇｏ  Ｒｅｄ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６８：２１３５−２１４１（１９９４））；抗体（Ｋａｓｃｓａｋ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｒｉｏｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔ．２６：２５９−２６８（１９９７））；ならびに他のタンパク質、例えば、プラスミノゲン（Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｍ．Ｂ．ら、Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｔｏ：Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：４７９−４８３（２０００））が挙げられる。
【０１３１】
上記リガンドは、任意の支持材料に接着され得る。本明細書中で使用される「支持材料」とは、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を組成物の残りの部分から分離する物理的手段または化学的手段を提供し得る任意の化合物または材料のことを指す。その支持材料は、粒状または非粒状、可溶性または不溶性、多孔性または非多孔性であり得る。
【０１３２】
支持材料の例としては、天然に存在するポリマー、例えば、多糖（例えば、アガロース、アルギネート、カラギナン、キチン、セルロース、デキストランまたはデンプン）；合成ポリマー（例えば、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリアクロレイン、ポリビニルアルコール、ポリメチルアクリレート、パーフルオロカーボン）；無機化合物（例えば、シリカ、ガラス、珪藻土（ｋｉｅｓｅｌｑｕｈｒ）、アルミナ、酸化鉄または他の金属酸化物）または２種以上の天然に存在するポリマー、合成ポリマーもしくは無機化合物の任意の組み合わせからなる共重合体が挙げられるがこれらに限定されない。液体分割において使用するための親和性−リガンドマトリックス結合体を提供する、ポリマー（例えば、デキストラン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコールまたは加水分解デンプン）を含む可溶性支持材料もまた企図される。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、支持材料は、固体支持体（例えば、カラム、ビーズ、膜、カートリッジ、フィルター、計深棒、マイクロタイタープレート、試験管、固体粉末、注型モジュールまたは押出成形されたモジュール、メッシュ、磁性粒子複合物）または他の任意の固体材料である。その固体材料は、物質（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリアクリレート、ポリエチレンテレフタレート、レーヨン、ナイロン、ポリ（ビニルブチレート）、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）、シリコーン、ポリホルムアルデヒド、セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロースなど）でコーティングされ得る。あるいは、ゲルを形成する物質（例えば、タンパク質（例えば、ゼラチン）、リポ多糖類、シリケート、アガロースおよびポリアクリルアミド）が使用される。ポリマー（例えば、デキストラン、ポリアルキレングリコールまたは界面活性物質（例えば、リン脂質、長鎖（１２〜２４炭素原子）アルキルアンモニウム塩など））もまた使用され得る。リガンドは、支持材料に接着されるか、または支持材料全体に散在される。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、支持材料は、活性化されたアガロース、シリカ、セルロース、ガラス、メタアクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクリルアミド、スチレンジビニルベンゼン、Ｈｙｐｅｒ  Ｄまたはパーフルオロカーボンである。いくつかの実施形態において、支持材料は、商品名Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，１５６  Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ  Ｉ  １８９３６，ＵＳＡから入手可能）として販売されているタイプのメタアクリレート材料である。ＷＯ９７／１０８８７には、親和性リガンドを支持マトリックスに接着する方法、例えば、活性化する方法の使用、およびスペーサーを介して親和性リガンドをマトリックスに接着することにより（例えば縮合反応によって）、親和性リガンド−マトリックス結合体を形成する方法が記載されている。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、リガンドおよび／または支持材料は、再利用可能である。いくつかの実施形態において、リガンドおよび／または支持材料は、単なる使い捨てである。
【０１３６】
リガンドのプリオン結合能は、リガンドにおける感染力価を測定することによって評価され得る。例えば、参照原液の段階希釈物を調製し、標準的なウエスタンブロットアッセイにおいて試験する。参照原液から観察された力価をバイオアッセイにおいて観察された対応する力価と比較する。次いで、式：力価［バイオアッセイ］＝力価［ウエスタンブロット］＋（線形回帰分析の切片）／（線形回帰分析の傾き）を用いて、ウエスタンブロット力価を感染力価に変換することができる。１ｍｌあたりの感染力価が計算されたら、カラムに結合している総プリオンタンパク質を決定することができる。リガンドのプリオン結合能は、リガンドに直接結合したと観察されたプリオンタンパク質の量を用いて測定される。いくつかの実施形態において、リガンドのプリオン結合能は、リガンド１ｍｌあたり少なくとも約２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．５または１０．０ｌｏｇ１０ＩＤ５０である。いくつかの実施形態において、リガンドのプリオン結合能は、リガンド１ｍｌあたり少なくとも約１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７または１０８ＩＤ５０である。
【０１３７】
ナノ粒子を作製する方法
アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む組成物を作製する方法は、当該分野で公知である。例えば、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤およびアルブミンを含むナノ粒子は、高剪断力（例えば、超音波処理、高圧均質化など）の条件下で調製され得る。これらの方法は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；同第６，５０６，４０５号；同第６，７４９，８６８号および同第６，５３７，５７９号、ならびに米国特許公開番号２００５／０００４００２および２００７／００８２８３８、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９９／００１１３（これらの各々の全体が本明細書によって参考として援用される）に開示されている。
【０１３８】
１つの例示的な実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）は、有機溶媒に溶解される。適当な有機溶媒としては、例えば、ケトン類、エステル類、エーテル類、塩素系溶媒および当該分野で公知の他の溶媒が挙げられる。例えば、有機溶媒は、塩化メチレンであり得る。いくつかの実施形態において、有機溶媒は、水不混和性の溶媒（例えば、クロロホルム）と水混和性の溶媒（例えば、水混和性のアルコール溶媒）との混合物（例えば、クロロホルム／メタノール、クロロホルム／エタノール、クロロホルム／プロパノールまたはクロロホルム／ｔ−ブタノール）（例えば、約１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１もしくは９：１のいずれかの比（ｖ／ｖ）または約３：７、５：７、４：６、５：５、６：５、８：５、９：５、９．５：５、５：３、７：３、６：４もしくは９．５：０．５のいずれかの比（ｖ／ｖ）での混合物）であり得る。その溶液は、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）に加えられる。その混合物は、高圧均質化に供される（例えば、標準的な均質化デバイスを用いて）。そのエマルジョンは、約２〜約１００サイクル（例えば、約５〜約５０サイクルまたは約８〜約２０サイクル（例えば、約８、１０、１２、１４、１６、１８または２０サイクルのいずれか））だけ高圧ホモジナイザーに通して循環され得る。次いで、有機溶媒が、この目的で知られている適当な装置（ロータリーエバポレーター、薄膜蒸発装置（ｔｈｉｎ  ｆｉｌｅ  ｅｖａｐｏｒａｔｏｒｓ）、流下液膜式蒸発装置、ワイプ式薄膜蒸発装置（ｗｉｐｅｄ  ｆｉｌｍ  ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）、噴霧乾燥機などが挙げられるがこれらに限定されない）を利用した蒸発によって除去され得る。溶媒は、例えば、減圧下（例えば、約５ｍｍＨｇ、１０ｍｍＨｇ、１５ｍｍＨｇ、２０ｍｍＨｇ、２５ｍｍＨｇ、３０ｍｍＨｇ、４０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、１００ｍｍＨｇ、２００ｍｍＨｇまたは３００ｍｍＨｇのいずれか）において除去され得る。減圧下で溶媒を除去するために使用される時間の長さは、製剤の体積に基づいて調整され得る。例えば、３００ｍＬのスケールで作製される製剤の場合、溶媒は、約１〜約３００ｍｍＨｇ（例えば、約５〜１００ｍｍＨｇ、１０〜５０ｍｍＨｇ、２０〜４０ｍｍＨｇまたは２５ｍｍＨｇのいずれか）で、約１〜約１２０分間（約５〜約６０分間（例えば、約７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２５または３０分間のいずれか）を含む）にわたって除去され得る。
【０１３９】
所望であれば、アルブミン溶液（例えば、プリオンが除去されたアルブミン溶液）を、分散物中のアルブミンと薬物（例えば、パクリタキセル）との比を調整するためまたは分散物中のタキサン（例えば、パクリタキセル）の濃度を調整するために、その分散物に加えてもよい。例えば、アルブミン溶液（例えば、２５％ｗ／ｖ）と実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）との比を約１８：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７．５：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７または１：１８のいずれかに調整するために、上記アルブミンが加えられ得る。例えば、分散物中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）の濃度を約０．５ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌのいずれかに調整するために、アルブミン溶液（例えば、２５％ｗ／ｖ）または別の溶液が加えられる。分散物は、個別にまたは連続的に１つ以上のフィルター（例えば、１．２μｍ、０．８μｍ、０．４５μｍおよび０．２２μｍフィルター）；その２つ以上の組み合わせ、または当該分野で公知の他の任意のフィルターとの組み合わせで濾過され得る。
【０１４０】
所望であれば、第２の治療薬（例えば、癌を処置するために有用な１つ以上の化合物）、抗菌剤（例えば、クエン酸塩またはエデト酸塩）、糖（例えば、スクロース）および／または安定化剤もまた、組成物中に含められ得る。この追加の薬剤は、組成物の調製中に実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）および／もしくはアルブミンと混合され得るか、またはナノ粒子組成物が調製された後に加えられ得る。いくつかの実施形態において、その薬剤は、凍結乾燥前にナノ粒子組成物と混合される。いくつかの実施形態において、その薬剤は、凍結乾燥された組成物に加えられる。薬剤の添加によって組成物のｐＨが変化するいくつかの実施形態において、その組成物のｐＨは、通常、所望のｐＨに調整される（が必ずしもそうではない）。組成物の例示的なｐＨ値は、例えば、約５〜約８．５の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは、約６を下回らないように調整される（例えば、約６．５、７または８（例えば、約８）のいずれかを下回らない値を含む）。
【０１４１】
下記でより詳細に論じられるように、プリオン除去処理は、製造プロセスと同時に行われ得る。例えば、プリオン除去処理は、アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との混合物が形成された後、かつ、その混合物を高剪断条件に供する前に、行われ得る。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、上記混合物が高剪断条件に供された後、かつ、有機溶媒の除去前に、行われ得る。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、有機溶媒の除去後に行われる。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理の前に、蒸発後の懸濁液に追加のアルブミンが加えられる。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、無菌条件下で行われる。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、同時に組成物を濾過滅菌するカートリッジを用いることによって行われる。
【０１４２】
プリオンをナノ粒子組成物または中間体組成物から除去する方法
本発明は、１つの局面において、プリオンタンパク質をナノ粒子組成物（例えば、上に記載された方法によって形成されたナノ粒子組成物）から除去する工程を包含する方法を提供する。別の局面において、ナノ粒子製造プロセス中に生成される中間体組成物（本明細書中以後、「中間体組成物」と呼ぶ）からプリオンタンパク質を除去する方法が提供される。
【０１４３】
通常、上記方法は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ならびにそのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をナノ粒子組成物から除去する工程を包含する。このプロセスは、同じまたは異なるリガンドを用いて１回以上繰り返され得る。このプリオン除去処理では、同時に２つ以上のリガンドも使用され得る。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物または中間体組成物は、約１００ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ、９０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ、５０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌまたは１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌというプリオン感染性を有する。
【０１４５】
プリオン除去処理中に、リガンドは、ナノ粒子組成物または中間体組成物と接触され、ナノ粒子組成物中または中間体組成物中のプリオンタンパク質に結合することが可能になる。この結合に適した条件は、リガンドの性質およびプリオンタンパク質への結合特異性に基づいて、決定され得、また、リガンドがプリオンタンパク質に結合するのを促進するように最適化され得る。いくつかの実施形態において、結合は、約０℃〜約３９℃の温度（例えば、約２０℃〜約２５℃を含む）において行われる。結合は、約４〜約１０のｐＨ（例えば、約５〜約９、約６〜約８、約６．８〜約７．５、約６．９〜約７．４または約７を含む）において行われ得る。必要に応じて、リガンドへの非特異的結合を減少させるためにブロッキング剤が使用され得る。
【０１４６】
接触工程の後、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質は、組成物の残りの部分から除去される。その除去は、リガンド、および分離を促進するために使用される支持材料（もしあれば）の性質に応じて、種々の方法において行われ得る。例えば、リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質は、クロマトグラフィ（例えば、薄層クロマトグラフィ、カラムクロマトグラフィおよびバッチクロマトグラフィであるがこれらに限定されない）；固体支持体および膜を用いた分離；リアクターを用いた分離；磁気分離、免疫分離；およびコロイド分離によって分離され得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、リガンドは、ビーズまたは膜などの支持体に固定化され得、そしてその支持体は、ナノ粒子組成物または中間体組成物に接触される。リガンドが固定化された支持体は、プリオン−リガンド複合体を形成させるのに十分な条件下でナノ粒子組成物または中間体組成物に接触される。次いで、その固相を組成物から分離し、それによって、リガンドに結合したプリオンタンパク質をサンプルから除去する。例えば、１つの例示的な実施形態において、リガンドをクロマトグラフィカラムなどのカラムに固定化し、次いで、サンプル（例えば、ナノ粒子組成物）を、重力によって、または高圧液体クロマトグラフィカラムにおけるような加圧下で、カラムに通す。サンプル中のプリオンタンパク質は、カラムに固定化されたリガンドに結合し、通過したサンプルが回収され得る。このプロセスを、数回繰り返すことにより、所望の結果を得ることができる。
【０１４８】
カラムにおけるサンプル（例えば、ナノ粒子組成物または中間体組成物）の流速は、リガンドとサンプル中のプリオンタンパク質との結合を最大にするように調整され得る。いくつかの実施形態において、結合は、約０．１ｍｌ／分〜約５．０ｍｌ／分、約０．１ｍｌ／分〜約２．５ｍｌ／分、約０．１ｍｌ／分〜約０．２５ｍｌ／分、約０．２５／分〜約０．５ｍｌ／分、約０．５ｍｌ／分〜約１．０ｍｌ／分、約１．０ｍｌ／分〜約１．５ｍｌ／分、約１．５ｍｌ／分〜約２．０ｍｌ／分、約２．０ｍｌ／分〜約２．５ｍｌ／分、約２．５ｍｌ／分〜約３．０ｍｌ／分、約３．０ｍｌ／分〜約３．５ｍｌ／分、約３．５ｍｌ／分〜約４．０ｍｌ／分、約４．０ｍｌ／分〜約４．５ｍｌ／分または約４．５ｍｌ／分〜約５．０ｍｌ／分（例えば、約０．１ｍｌ／分、０．２５ｍｌ／分、０．５ｍｌ／分、１．０ｍｌ／分、１．５ｍｌ／分、１．７ｍｌ／分、１．８ｍｌ／分、１．９ｍｌ／分、２．０ｍｌ／分、２．１ｍｌ／分、２．３ｍｌ／分、２．５ｍｌ／分、２．７ｍｌ／分、３．０ｍｌ／分、３．５ｍｌ／分、４．０ｍｌ／分、４．５ｍｌ／分または５．０ｍｌ／分を含む）の流速で行われる。いくつかの実施形態において、流速は、少なくとも約１０ｍｌ／分（例えば、少なくとも約２０ｍｌ／分、３０ｍｌ／分、４０ｍｌ／分、５０ｍｌ／分のいずれか）である。
【０１４９】
結合プロセスにおける総フロースルー体積または総通過時間もまた、リガンドとサンプル（例えば、ナノ粒子組成物または中間体組成物）中のプリオンタンパク質との結合を最大にするために調整され得る。いくつかの実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約５０倍〜約１０００倍（例えば、カラム体積の約５０倍〜約５００倍、カラム体積の約１００倍〜約６００倍またはカラム体積の約２００倍〜約８００倍を含む）である。いくつかの実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約１００倍である。他の実施形態において、総フロースルー体積は、カラム体積の約５００倍である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約１時間〜約３０時間（例えば、約２時間〜約２５時間、約３時間〜約２０時間または約３時間〜約１７時間を含む）である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間または２０時間のいずれかである。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約２４時間超である。いくつかの実施形態において、総通過時間は、約８時間未満（例えば、７、６、５、４、３、２、１または０．５時間未満のいずれかを含む）である。
【０１５０】
あるいは、まず、リガンドが、プリオン−リガンド複合体を形成させるのに十分な条件下でナノ粒子組成物または中間体組成物に接触され得る。次いで、そのプリオン−リガンド複合体を、親和性に基づくクロマトグラフィなどのカラムを用いることによって除去する。分離を促進するために、リガンドは、結合パートナーに結合体化され得、その結果、リガンド／プリオン複合体は、結合パートナーを認識する分子を備えるアフィニティーカラムを用いることによって除去され得る。
【０１５１】
バッチクロマトグラフィまたはカラムクロマトグラフィに加えて、プリオンタンパク質結合のためのリガンドの使用の種々の設定、変法およびバリエーションもまた構想される。そのようなバリエーションおよび変法としては：バッチプロセス、連続プロセス、移動床クロマトグラフィプロセス；低圧、中圧もしくは高圧プロセス；またはスモールスケール、ミディアムスケールもしくはラージスケールプロセスが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リガンドは、膜上、繊維上、ビーズ上に存在するか、不織メッシュに含浸されるか、またはフィルターハウジング内に入れられたコーティング繊維の上に存在する。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、除去工程は、収量損失、ならびに／またはアルブミンの特性および／もしくは安定性の変化を著しくもたらさない。実際的には、元の生物学的状態でのアルブミンの回収は、少なくとも５０％超のレベル（例えば、８０％もしくは９０％またはそれ以上を含む）で実質的に維持されるべきである。いくつかの実施形態において、プリオンプロセスからのアルブミンの回収率は、約８０％、９０％、９５％または９９％のいずれかよりも高い。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物中のアルブミンの濃度は、プロセス中の非特異的結合およびアルブミンの損失を最小にするために、プリオン除去工程の前に調整されるかまたは制御される。例えば、アルブミンの濃度は、約１％〜約５０％、約５％〜約２５％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約１０％、約１０％〜約１５％、約１５％〜約２０％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％などの範囲内（例えば、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％または３０％のアルブミンを含む）であり得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、除去工程は、収量損失、ならびに／または組成物中のナノ粒子の特性および／もしくは安定性の変化を著しくもたらさない。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、除去工程は、収量損失、ならびに／または組成物中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の特性もしくは充填性の変化を著しくもたらさない。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、除去工程は、組成物中のアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的物質との比の変化を著しくもたらさない。
【０１５６】
プリオン除去処理の浄化率を測定するために、プリオンが除去された組成物が解析され得る。浄化率を測定するために、プリオンタンパク質が結合したリガンドもまた解析され得る（直接または溶出後に）。
【０１５７】
プリオンタンパク質の除去は、プリオンタンパク質レベルの低下および／または感染性の低下に基づいて判定され得る。いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％を含む）が、ナノ粒子組成物から除去される。いくつかの実施形態において、除去後のアルブミン組成物の感染性は、ナノ粒子組成物の感染性の少なくとも約１０×、２０×、３０×、４０×、５０×、８０×、１００×、２００×、５００×、１０００×、１０４×、１０５×、１０６×低い。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、段階的な感染性を用いることにより、プリオン除去処理の浄化率が測定される。サンプルの段階希釈物が生成され、希釈物は、感染活性について、例えばアッセイ動物において調べられる。その動物の半数が感染する希釈度が、感染力価である。例えば、５倍希釈が必要である場合、サンプルは、５ｌｏｇの感染性を有すると定義され得る。ナノ粒子組成物のｌｏｇ感染性と除去後のナノ粒子組成物のｌｏｇ感染性とを比較することによって、プリオン除去処理の浄化率が決定され得る。いくつかの実施形態において、プリオン除去方法によって、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、３または４、５、６、７、８、９または１０ｌｏｇのいずれか１つの感染性の減少がもたらされる。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、プリオン除去処理の浄化率は、プリオン除去方法に対する本明細書中に記載される工程に従うことによる感染性材料を用いたスパイク実験に基づいて測定される。適当なスパイク物質としては、脳ホモジネート、ミクロソーム、カベオラ様ドメイン、精製ＰｒＰｓｃおよびプリオン原線維が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、スパイク物質は、洗浄剤に可溶性（例えば、サルコシルに可溶性）である。いくつかの実施形態において、組成物中のスパイク比率は、約０．００１％〜約５％、約０．００１％〜約０．２５％、約０．００１％〜約０．１％、約０．００１％〜約０．００５％、約０．００５％〜約０．０７５％、約０．０７５％〜約０．０１％、約０．０１％〜約０．１％、約０．１％〜約０．５％、約０．５％〜約０．７５％、約０．７５％〜約１％、約１％〜約２％、約２％〜約３％または約３％〜約５％の範囲内（例えば、約０．００１％、０．００５％、０．０７５％、０．０１％、０．１％、０．５％、０．７５％、１％、２％、３％または５％を含む）である。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、プリオン除去処理の浄化率を測定するために減少係数（ＲＦ）が使用される。ＲＦは、式：
ＲＦ＝（Ｖ１×Ｔ１）／（Ｖ２×Ｔ２）
または
Ｌｏｇ１０［ＲＦ］＝［Ｌｏｇ１０（Ｖ１）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ１）］−［Ｌｏｇ１０（Ｖ２）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ２）］
を用いて計算され得る。式中、Ｖ１およびＴ１は、それぞれ最初のアルブミン組成物の体積および力価であり、Ｖ２およびＴ２は、除去後のアルブミン組成物の体積および力価である。減少係数は、最後の計算の後に小数第１位に丸められ得る。いくつかの実施形態において、少なくとも約１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５または８．０ｌｏｇ１０感染性という減少係数のプリオンタンパク質が、最初のアルブミン組成物から除去される。例えば、プリオンタンパク質は、２０％アルブミン組成物にスパイクされた０．５％サルコシル可溶性画分において２．５ｌｏｇ１０と等しいかまたはそれより高い減少係数だけ除去される。別の例として、プリオンタンパク質は、２５％アルブミン組成物にスパイクされた０．５％サルコシル可溶性画分において２．０ｌｏｇ１０と等しいかまたはそれより高い減少係数だけ除去され得る。
【０１６１】
プリオンの除去は、標準的なウエスタンブロット解析によって評価され得る。例えば、まず、結合後のリガンドを、すべてのＰｒＰｃを消化するがＰｒＰｓｃを消化しないプロテイナーゼＫで処理し得る。次いで、その消化物をＳＤＳゲルにおいて泳動し、ニトロセルロースのシートまたはＰＶＤＦ膜にトランスブロットする。次いで、分離されたＰｒＰｓｃバンドを、３Ｆ４または６Ｈ４を用いて可視化する。３Ｆ４は、ヒト、ハムスターおよびネコ由来の残基１０９〜１１２ＰｒＰと反応する。１つの例示的な実施形態において、０．６μｇ／ｍｌという濃度で最低１時間インキュベーションを行い、その後、過剰の抗体を洗い流し、膜をウサギ抗マウス西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体（１：１０００希釈）とともに最低１時間インキュベートした。その膜をＴＴＢＳでしっかり洗浄した後、高感度化学発光を用いて現像した。いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質の除去は、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｓｍａ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｇａｒｄ  ｔｏ  ｖＣＪＤ  Ｒｉｓｋ（ＣＰＭＰ５１３６／０３）に従って評価される。
【０１６２】
プリオン除去処理によって作製される組成物もまた本明細書中で企図される。したがって、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、さらにプリオンタンパク質に結合することができるリガンドを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子と、本明細書中に記載される１つ以上の支持材料などの支持材料に接着されたプリオンタンパク質に結合することができるリガンドとを含む混合物が提供される。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が充填されたカラムが提供され、ここで、そのカラムは、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドを備える。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子、ならびにプリオン（ｐｒｉｏｒ）タンパク質に結合することができるリガンドを含む樹脂を含む組成物が提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子ならびにＤＶＲ樹脂を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子ならびにＰＲＤＴ樹脂を含む組成物が提供される。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、水性アルブミン溶液と有機溶媒に分散された実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との混合物を含み、さらにプリオンタンパク質に結合することができるリガンドを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、水性アルブミン溶液と有機溶媒に分散された実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との混合物、ならびに本明細書中に記載される１つ以上の支持材料などの支持材料に接着されたプリオンタンパク質に結合することができるリガンドを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、水性アルブミン溶液と有機溶媒に分散された実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との混合物を含む組成物が充填されたカラムが提供され、ここで、そのカラムは、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドを備える。
【０１６４】
本明細書中に記載される方法によって作製される組成物もまた提供される。その組成物は、いくつかの実施形態において、プリオン除去処理に供されていない組成物と生物学的に等価である。
【０１６５】
ナノ粒子組成物
本明細書中に記載されるナノ粒子組成物は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）を含む（様々な実施形態では、それらから本質的になる）ナノ粒子を含む。水難溶性薬物（例えば、タキサン）のナノ粒子は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；同第６，５０６，４０５号；同第６，７４９，８６８号および同第６，５３７，５７９号、ならびに米国特許公開番号２００５／０００４００２および２００７／００８２８３８、ならびにＰＣＴ特許出願ＷＯ０８／１３７１４８（これらの各々の内容の全体が本明細書中で援用される）に開示されている。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、組成物は、約１０００ナノメートル（ｎｍ）を超えない（例えば、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００および１００ｎｍのいずれかを超えない）平均直径または中間直径（ｍｅａｎ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有するナノ粒子を含む。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の平均直径または中間直径は、約２００ｎｍを超えない。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の平均直径または中間直径は、約１５０ｎｍを超えない。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の平均直径または中間直径は、約１００ｎｍを超えない。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の平均直径または中間直径は、約２０〜約４００ｎｍである。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の平均直径または中間直径は、約４０〜約２００ｎｍである。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、濾過滅菌可能である。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物中のナノ粒子は、約２００ｎｍを超えない平均直径（例えば、約１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０または６０ｎｍのいずれか１つを超えない平均直径を含む）を有する。いくつかの実施形態において、組成物中の全ナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つ）は、約２００ｎｍを超えない直径（例えば、約１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０または６０ｎｍのいずれか１つを超えない直径を含む）を有する。いくつかの実施形態において、組成物中の全ナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つ）は、約２０〜約２００ｎｍ（例えば、約３０〜約１８０ｎｍのいずれか１つ、ならびに約４０〜約１５０、約５０〜約１２０および約６０〜約１００ｎｍのいずれか１つを含む）の範囲内に入る。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約５％（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％のいずれか１つを含む）は、架橋されている（例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって架橋されている）。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）でコーティングされた実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を非ナノ粒子の形態で含み、ここで、その組成物中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つが、ナノ粒子の形態である。いくつかの実施形態において、ナノ粒子中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、そのナノ粒子の約５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％または９９重量％のいずれか１つより多くを占める。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、非ポリマーマトリックスを有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、ポリマー材料（例えば、ポリマーマトリックス）を実質的に含まない実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤のコアを含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、組成物は、その組成物のナノ粒子と非ナノ粒子の両方の部分においてアルブミンを含み、ここで、その組成物中のアルブミンの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のいずれか１つが、その組成物の非ナノ粒子の部分に存在する。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、界面活性物質（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ８０、または実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の投与のために使用される他の有機溶媒）を実質的に含まない（例えば、含まない）。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、約２０％未満、１５％未満、１０％未満、７．５％未満、５％未満、２．５％未満、１％未満のいずれか１つまたはそれ以下の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物中のアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１８：１またはそれ以下（例えば、約１５：１またはそれ以下、例えば、約１０：１またはそれ以下）である。いくつかの実施形態において、組成物中のアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１３：１、約４：１〜約１２：１、約５：１〜約１０：１のいずれか１つの範囲内に入る。いくつかの実施形態において、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１５のいずれか１つまたはそれ以下である。いくつかの実施形態において、組成物中のアルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）と実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、以下：約１：１〜約１８：１、約１：１〜約１５：１、約１：１〜約１２：１、約１：１〜約１０：１、約１：１〜約９：１、約１：１〜約８：１、約１：１〜約７：１、約１：１〜約６：１、約１：１〜約５：１、約１：１〜約４：１、約１：１〜約３：１、約１：１〜約２：１または約１：１のいずれか１つである。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、上記の特性の１つ以上を備える。
【０１７３】
本明細書中に記載されるナノ粒子は、乾燥製剤（例えば、凍結乾燥された組成物）中に存在してもよいし、生体適合性の媒質中に懸濁されていてもよい。適当な生体適合性の媒質としては、水、緩衝水性媒質、食塩水、緩衝食塩水、必要に応じて緩衝されるアミノ酸溶液、必要に応じて緩衝されるタンパク質溶液、必要に応じて緩衝される糖溶液、必要に応じて緩衝されるビタミン溶液、必要に応じて緩衝される合成ポリマー溶液、脂質含有エマルジョンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、薬学的に許容可能なキャリアは、ヒト血清アルブミンを含む。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、Ｍｒ６５Ｋの高度に可溶性の球状タンパク質であり、５８５アミノ酸からなる。ＨＳＡは、血漿中で最も豊富なタンパク質であり、ヒト血漿のコロイド浸透圧の７０〜８０％を占める。ＨＳＡのアミノ酸配列は、合計１７個のジスルフィド架橋、１つの遊離チオール（Ｃｙｓ３４）および単一のトリプトファン（Ｔｒｐ２１４）を含む。ＨＳＡ溶液の静脈内での使用は、血液量減少性ショック（ｈｙｐｏｖｏｌｕｍｉｃ  ｓｈｏｃｋ）の予防および処置のため、ならびに新生児高ビリルビン血症の処置における交換輸血と併用して、必要とされている。ウシ血清アルブミンなどの他のアルブミンも企図される。そのような非ヒトアルブミンの使用は、例えば、非ヒト哺乳動物において（例えば、獣医学において（家庭内のペットおよび農業の状況を含む））これらの組成物を使用する状況では適切であろう。
【０１７５】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、複数の疎水性結合部位（ＨＳＡの内因性リガンドである脂肪酸に対しては合計８つ）を有し、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤、特に、中性および負に帯電した疎水性化合物の多様なセットに結合する。２つの高親和性の結合部位が、ＨＳＡのサブドメインＩＩＡおよびＩＩＩＡに存在すると提唱されており、それらは、極性リガンドの形に対する接着点として機能する帯電したリジン残基およびアルギニン残基を表面付近に有する非常に細長い疎水性ポケットである。
【０１７６】
組成物中のアルブミンは、通常、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤に対するキャリアとして働き、すなわち、組成物中のアルブミンのおかげで、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、アルブミンを含まない組成物よりも容易に水性媒質に懸濁可能になるか、またはその懸濁を維持するのが助けられる。このことにより、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を可溶化するために毒性のある溶媒（または界面活性物質）の使用を回避することができ、それによって、個体（例えば、ヒト）への実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の投与の１つ以上の副作用を低減することができる。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ）を含む）などの界面活性物質を実質的に含まない（例えば、含まない）。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物は、界面活性物質を実質的に含まない（例えば、含まない）。組成物中のＣｒｅｍｏｐｈｏｒまたは界面活性物質の量が、ナノ粒子組成物が個体に投与されたときにその個体において１つ以上の副作用を引き起こすのに十分でない場合、その組成物は、「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒを実質的に含まない」または「界面活性物質を実質的に含まない」。
【０１７７】
本明細書中に記載される組成物中のアルブミンの量は、組成物中の他の構成要素に応じて変動し得る。いくつかの実施形態において、組成物は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を水性懸濁液中で（例えば、安定なコロイド懸濁液（例えば、ナノ粒子の安定な懸濁液）の形態で）安定化するのに十分な量でアルブミンを含む。いくつかの実施形態において、アルブミンは、水性媒質中における、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の沈降速度を低下させる量で存在する。粒子含有組成物の場合、アルブミンの量は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤のナノ粒子のサイズおよび密度にも左右される。
【０１７８】
実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤が、長時間（例えば、少なくとも約０．１、０．２、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２４、３６、４８、６０または７２時間のいずれか）にわたって水性媒質中に懸濁されたまま（例えば、目に見える沈殿または沈降なく）である場合、その実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、水性懸濁液中で「安定化されている」。懸濁液は、通常、個体（例えば、ヒト）への投与に適しているが、必ずしもそうではない。懸濁液の安定性は、通常、貯蔵温度（例えば、室温（例えば、２０〜２５℃）または冷蔵条件（例えば、４℃））において評価される（が必ずしもそうではない）。例えば、懸濁液を調製した約１５分後に、裸眼で見えるフロキュレーションもしくは粒子凝集を示さないか、または１０００倍の光学顕微鏡下において観察されたときにフロキュレーションもしくは粒子凝集を示さない場合、その懸濁液は、貯蔵温度において安定である。安定性は、加速試験条件下（例えば、約４０℃を超える温度）でも評価され得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、アルブミンは、ある特定の濃度で実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を水性懸濁液中に安定化するのに十分な量で存在する。例えば、組成物中の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の濃度は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌのいずれかを含む）である。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の濃度は、少なくとも約１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌのいずれかである。いくつかの実施形態において、アルブミンは、界面活性物質（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）の使用を回避する量で存在し、その結果、組成物は、界面活性物質（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）を含まないかまたは実質的に含まない。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、液体の形態の組成物は、約０．１％〜約５０％（ｗ／ｖ）（例えば、約０．５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、約４０％（ｗ／ｖ）または約５０％（ｗ／ｖ））のアルブミンを含む。いくつかの実施形態において、液体の形態の組成物は、約０．５％〜約５％（ｗ／ｖ）のアルブミンを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物中のアルブミンの重量比、例えば、アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、十分な量の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤が細胞に結合するかまたは細胞によって運搬されるような重量比である。アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との種々の組み合わせに対して最適化されなければならないが、通常、アルブミンの重量比、例えば、アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比（ｗ／ｗ）は、約０．０１：１〜約１００：１、約０．０２：１〜約５０：１、約０．０５：１〜約２０：１、約０．１：１〜約２０：１、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１２：１、約４：１〜約１０：１、約５：１〜約９：１または約９：１である。いくつかの実施形態において、アルブミンと実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤との重量比は、約１８：１またはそれ以下、１５：１またはそれ以下、１４：１またはそれ以下、１３：１またはそれ以下、１２：１またはそれ以下、１１：１またはそれ以下、１０：１またはそれ以下、９：１またはそれ以下、８：１またはそれ以下、７：１またはそれ以下、６：１またはそれ以下、５：１またはそれ以下、４：１またはそれ以下および３：１またはそれ以下のいずれかである。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、アルブミンは、著しい副作用なく組成物が個体（例えば、ヒト）に投与されるのを可能にする。いくつかの実施形態において、アルブミンは、ヒトへの実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の投与の１つ以上の副作用を低減するのに有効な量で存在する。用語「実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の投与の１つ以上の副作用を低減する」とは、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤によって引き起こされる１つ以上の望ましくない作用、ならびに実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を送達するために使用される送達ビヒクル（例えば、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を注射に適するものにする溶媒）によって引き起こされる副作用の低減、軽減、排除または回避のことを指す。そのような副作用としては、例えば、骨髄抑制、神経毒性、過敏症、炎症、静脈刺激、静脈炎、疼痛、皮膚過敏、末梢神経障害、好中球減少性発熱、アナフィラキシー反応、静脈血栓症、血管外遊出およびそれらの組み合わせが挙げられる。しかしながら、これらの副作用は、単なる例示であって、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤に関連する他の副作用または副作用の組み合わせも低減され得る。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、組成物は、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（またはＮａｂ−パクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（またはＮａｂ−パクリタキセル）である。Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）は、ヒトアルブミンＵＳＰによって安定化されたパクリタキセルの製剤であり、直接注射可能な生理学的溶液に分散され得るものである。ＡｂｒａｘａｎｅＴＭは、０．９％塩化ナトリウム注射剤または５％デキストロース注射剤などの適当な水性媒質に分散されるとき、パクリタキセルの安定なコロイド懸濁液を形成する。そのコロイド懸濁液中のナノ粒子の中間粒径は、約１３０ナノメートルである。ＨＳＡは、自由に水に可溶性であるので、ＡｂｒａｘａｎｅＴＭは、希薄（０．１ｍｇ／ｍｌパクリタキセル）から濃厚（２０ｍｇ／ｍｌパクリタキセル）にわたる広範な濃度（例えば、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌを含む）において再構成され得る。
【０１８４】
実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤
本明細書中に記載される組成物は、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む。例えば、約２０〜２５℃での水難溶性の薬剤の水溶解性は、約１０ｍｇ／ｍｌ未満（例えば、約５、２、１、０．５、０．２、０．１、０．０５、０．０２または０．０１ｍｇ／ｍｌのいずれか未満を含む）であり得る。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、固体である。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、液体である。本明細書中に記載される実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、例えば、医薬品、診断用薬剤または栄養的価値のある薬剤であり得る。
【０１８５】
適当な医薬品としては、抗癌剤または抗悪性腫瘍剤、抗微小管剤、免疫抑制剤、麻酔薬、ホルモン、心臓血管障害において使用するための薬剤、抗不整脈薬、抗生物質、抗真菌薬、血圧降下薬、抗喘息薬、抗炎症剤、抗関節炎薬、血管作動剤、鎮痛薬／解熱薬、抗うつ薬、抗糖尿病薬、抗真菌剤、抗炎症薬、抗不安剤、免疫抑制剤、抗片頭痛剤、鎮静薬、抗狭心症薬、抗精神病薬、抗躁剤、抗関節炎剤、抗痛風剤、抗凝固薬、血栓溶解剤、抗線溶剤、血液レオロジー剤（ｈｅｍｏｒｈｅｏｌｏｇｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）、抗血小板薬、抗痙攣薬、抗パーキンソン病剤、抗ヒスタミン剤／鎮痒剤、カルシウム調節に有用な薬剤、抗ウイルス剤、抗菌薬、抗感染薬、気管支拡張薬（ｂｒｏｎｃｈｏｄｉａｌａｔｏｒｓ）、ホルモン、血糖降下剤、抗高脂血症薬、抗潰瘍剤／抗逆流剤、抗嘔吐薬／制吐薬および油溶性ビタミン（例えば、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、以下：チロシンキナーゼインヒビター、セリン（ｓｅｒｉｅｓ）／トレオニンキナーゼインヒビター、ヘッジホッグインヒビター、トポイソメラーゼインヒビター、微小管構築のインヒビター、ＡＫＴキナーゼ経路のインヒビター、プロテアソームインヒビター、代謝拮抗物質、および白金に基づく薬剤のうちのいずれか１つである。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、抗悪性腫瘍剤である。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、化学療法剤である。
【０１８８】
適当な実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤としては、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、オルタタキセルおよび他のタキサン）、エポチロン、カンプトテシン、コルヒチン、ゲルダナマイシン（ｇｅｌａｄａｎａｍｙｃｉｎｓ）、アミオダロン、甲状腺ホルモン、アンホテリシン、コルチコステロイド、プロポフォール、メラトニン、シクロスポリン、ラパマイシン（シロリムス）および誘導体、タクロリムス、ミコフェノール酸、イホスファミド、ビノレルビン、バンコマイシン、ゲムシタビン、ＳＵ５４１６、チオテパ、ブレオマイシン、診断用放射線造影剤ならびにそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。発明性のある組成物において有用な他の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号、同第６，０９６，３３１号、同第６，７４９，８６８号および同第６，５３７，５３９号に記載されている。実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤の追加の例としては、水難溶性であり、かつＴｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘの“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｃａｔｅｇｏｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ”（１２ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９６）に列挙されている化合物が挙げられる。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＹ１９６、オルタタキセルまたは他のタキサンもしくはタキサンアナログ、１７−アリルアミノゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）（１７−ＡＡＧ）、１８−誘導体化ゲルダナマイシン、カンプトテシン、プロポフォール、アミオダロン、シクロスポリン、エポチロン、ラディシコール（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ラパマイシン、アンホテリシン、リオチロニン、エポチロン、コルヒチン、チオコルヒチンおよびその二量体、甲状腺ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、コルチコステロイド、メラトニン、タクロリムス、ミコフェノール酸、エポチロン、ラディシコール、コンブレタスタチンおよびそれらのアナログまたは誘導体のいずれかである（いくつかの実施形態では、それらからなる群から選択される）。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＹ１９６、オルタタキセルまたは他のタキサン、ゲルダナマイシン、１７−アリルアミノゲルダナマイシン、チオコルヒチンおよびその二量体、ラパマイシン、シクロスポリン、エポチロン、ラディシコールおよびコンブレタスタチンのいずれかである（いくつかの実施形態では、それらからなる群から選択される）。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、ラパマイシンである。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、１７−ＡＡＧである。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、チオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）である。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、タキサンである。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、パクリタキセルである。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、ドセタキセルである。いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、ＣＹ１９６である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤は、タキサンまたはその誘導体であり、それらとしては、パクリタキセル、ドセタキセルおよびＩＤＮ５１０９（オルタタキセル）またはそれらの誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、組成物は、非晶質および／またはアモルファスのタキサン（例えば、パクリタキセルまたはその誘導体）を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、無水タキサン（例えば、無水ドセタキセルまたはその誘導体）を使用することによって調製される。無水ドセタキセルは、ドセタキセルの三水和物または半水和物などのドセタキセル水和物を用いて生成され得る製剤よりも安定な製剤を生成すると示されている。
【０１９１】
ナノ粒子組成物中の他の構成要素
本明細書中に記載されるナノ粒子は、他の薬剤、賦形剤または安定剤を含む組成物中に存在し得る。例えば、ナノ粒子の負のゼータ電位を上昇させることによって安定性を高めるために、ある特定の負に帯電した構成要素が加えられ得る。そのような負に帯電した構成要素としては、グリココール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、タウロコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、リトコール酸（ｌｉｔｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ウルソデオキシコール酸、デヒドロコール酸などからなる胆汁酸の胆汁酸塩；以下のホスファチジルコリン：パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、パルミトイルリノレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルリノレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルオレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルアラキドイルホスファチジルコリンおよびジパルミトイルホスファチジルコリンをはじめとした、レシチン（卵黄）に基づくリン脂質を含むリン脂質が挙げられるが、これらに限定されない。他のリン脂質としては、Ｌ−ａ−ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅａｒｙｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）（ＤＳＰＣ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）および他の関連化合物が挙げられる。負に帯電した界面活性物質または乳化剤（例えば、硫酸コレステリルナトリウムなど）もまた、添加物として適している。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、組成物は、ヒトへの投与に適している。いくつかの実施形態において、組成物は、哺乳動物（例えば、獣医学の状況において、家庭内のペットおよび農業用動物）への投与に適している。ナノ粒子組成物の多種多様の適当な製剤が存在する（例えば、米国特許第５，９１６，５９６号および同第６，０９６，３３１号を参照のこと）。以下の製剤および方法は、単なる例示であって、決して限定ではない。経口投与に適した製剤は、（ａ）液体溶液（例えば、希釈剤（例えば、水、食塩水またはオレンジジュース）に溶解された有効量の化合物）、（ｂ）カプセル、サシェまたは錠剤（各々が、所定の量の活性成分を固体または顆粒として含む）、（ｃ）適切な液体における懸濁液、および（ｄ）適当なエマルジョンからなり得る。錠剤の形態は、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ならびに他の賦形剤、着色料、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存料、着香剤および薬理学的に適合性の賦形剤のうちの１つ以上を含み得る。不活性な基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシア）中に活性成分を含むトローチ剤、活性成分に加えて当該分野で公知であるような賦形剤を含むエマルジョン、ゲルなどと同様に、舐剤の形態は、香料、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガント中の活性成分を含み得る。
【０１９３】
適当なキャリア、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、食塩水溶液、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ならびに鉱油が挙げられるが、これらに限定されない。上記の製剤は、さらに、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤、甘味剤または着香剤を含み得る。
【０１９４】
非経口投与に適した製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、およびその製剤を意図されるレシピエントの血液と適合性にする溶質を含み得る水性および非水性で等張性の無菌の注射溶液、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および保存料を含み得る水性および非水性の無菌懸濁液が挙げられる。それらの製剤は、単位用量または複数回用量の密封された容器（例えば、アンプルおよびバイアル）として提供され得、使用の直前に、注射用の無菌の液体賦形剤、例えば、注射用の水を加えることだけが必要なフリーズドライされた（凍結乾燥された）状態で保存され得る。即時調合の注射溶液および懸濁液は、先に記載された種類の無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。注射可能な製剤が、好ましい。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、組成物は、約４．５〜約９．０のｐＨ範囲（例えば、約５．０〜約８．０、約６．５〜約７．５および約６．５〜約７．０のいずれかのｐＨ範囲が挙げられる）を有するように製剤化される。いくつかの実施形態において、組成物のｐＨは、約６を下回らない（例えば、約６．５、７または８のいずれか（例えば、約８）を下回らないを含む）ように製剤化される。その組成物はまた、グリセロールなどの適当な張度調節物質（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）を加えることによって血液と等張性であるように作製され得る。
【０１９６】
プリオン非含有ナノ粒子組成物を使用する方法
本明細書中に記載されるプリオン非含有組成物を使用する方法も提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する方法が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、疾患（例えば、癌）を処置する方法が提供され、その方法は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を投与する方法が提供され、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミン組成物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、個体における疾患（例えば、癌）を処置する方法が提供され、その方法は、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む有効量の組成物をその個体に投与する工程を包含し、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、個体は、ｖＣＪＤを有する。いくつかの実施形態において、個体は、すでにプリオンタンパク質に感染している。いくつかの実施形態において、個体は、ｖＣＪＤを有すると疑われるかまたはプリオンタンパク質に感染していると疑われる。いくつかの実施形態において、個体は、プリオンタンパク質の無症候性（ａｓｙｍｐｔｏｍｉｃ）保有者である。いくつかの実施形態において、個体は、少なくとも１回、輸血を受けたことがある。いくつかの実施形態において、個体は、少なくとも６０歳であり、例えば、少なくとも約６５、７０または７５歳である。いくつかの実施形態において、個体は、免疫低下している。いくつかの実施形態において、個体は、癌患者である。
【０１９９】
本明細書中で使用される用語「有効量」とは、特定の障害、状態または疾患を処置する（例えば、その症状の１つ以上を回復させる、緩和する、和らげるおよび／または遅延させる）のに十分な化合物または組成物の量のことを指す。癌または他の望まれない細胞の増殖に関して、有効量は、腫瘍を縮めるおよび／または腫瘍の成長速度を低下させる（例えば、腫瘍の成長を抑制する）のに十分な量を含む。いくつかの実施形態において、有効量は、発症を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態において、有効量は、出現および／または再発を予防するのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。
【０２００】
本明細書中に記載される組成物（例えば、抗悪性腫瘍剤（例えば、タキサン、ラパマイシンおよび１７−ＡＡＧ）を含む組成物）によって処置される癌としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に記載される組成物によって処置され得る癌の例としては、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌（扁平上皮ＮＳＣＬＣを含む）を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（消化器癌を含む）、膵癌（例えば、進行膵癌）、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌腫）、膀胱癌、ヘパトーム（ｈｅｐｔｏｍａ）、乳癌、結腸癌、メラノーマ、子宮内膜（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｃａｌ）癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌（例えば、進行前立腺癌）、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌腫、頭頸部癌、直腸結腸癌、直腸癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変（ｂｕｌｋｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ミエローマ、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄芽球性白血病および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する浮腫）およびメイグス症候群が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、転移性癌（すなわち、原発腫瘍から転移した癌）を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態において、細胞増殖および／または細胞遊走を減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、過形成を処置する方法が提供される。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、進行期の癌を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態において、例えば、進行乳癌、ステージＩＶの乳癌、局所進行乳癌および転移性乳癌をはじめとした、乳癌（ＨＥＲ２陽性またはＨＥＲ２陰性であり得る）を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態において、癌は、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ、例えば、進行ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ、例えば、進行ＳＣＬＣ）および肺における進行固形悪性腫瘍をはじめとした肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、卵巣癌、頭頸部癌、胃の悪性腫瘍、メラノーマ（転移性メラノーマを含む）、直腸結腸癌、膵癌および固形腫瘍（例えば、進行固形腫瘍）である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、直腸結腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、頭頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、グリオーマ、神経膠芽腫、神経芽細胞腫および多発性骨髄腫のいずれかである（いくつかの実施形態では、それらからなる群から選択される）。いくつかの実施形態において、癌は、固形腫瘍である。
【０２０２】
これらの組成物の投与に適した個体は、水難溶性医薬品の性質、ならびに処置および／または予防される疾患／状態／障害に依存する。したがって、個体という用語は、脊椎動物、哺乳動物およびヒトのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、個体は、哺乳動物であり、それらとしては、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類または霊長類が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。
【０２０３】
個体（例えば、ヒト）に投与される発明性のある組成物の用量は、特定の組成物、投与方法および処置される特定の疾患によって変動し得る。用量は、望ましい反応（例えば、特定の疾患に対する治療的または予防的な反応）をもたらすのに十分であるべきである。例えば、組成物中のパクリタキセルの投薬量は、３週間のスケジュールで投与されるとき、１００〜４００ｍｇ／ｍ２の範囲内であり得るか、または毎週のスケジュールにおいて投与されるとき、５０〜２５０ｍｇ／ｍ２の範囲内であり得る。さらに、規則正しいレジメン（例えば、毎日または１週間に数回）で投与される場合、投薬量は、約５〜７５ｍｇ／ｍ２の範囲内であり得る。
【０２０４】
本明細書中に記載される組成物は、様々な経路（例えば、静脈内、動脈内、肺内、門脈内、肝臓内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、鞘内、経粘膜および経皮が挙げられる）を介して個体（例えば、ヒト）に投与され得る。例えば、発明性のある組成物は、気道の状態を処置するために、吸入によって投与され得る。その組成物は、呼吸器の状態（例えば、肺線維症、閉塞性細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｅｏｌｉｔｉｓ  ｏｂｌｉｔｅｒａｎｓ）、肺癌、気管支肺胞癌腫など）を処置するために使用され得る。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、組成物の投与は、プリオン除去フィルターと併用して行われる。
【０２０６】
ナノ粒子組成物の投与に関連する副作用を低減する方法もまた本明細書中に提供される。例えば、本発明は、水難溶性医薬品の投与に関連する様々な副作用を低減する方法を提供し、その副作用としては、骨髄抑制、神経毒性、過敏症、炎症、静脈刺激、静脈炎、疼痛、皮膚過敏、末梢神経障害、好中球減少性発熱、アナフィラキシー反応、血液学的毒性および脳または神経性の毒性、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、水難溶性医薬品の投与に関連する過敏症反応（例えば、重篤な発疹、蕁麻疹、潮紅、呼吸困難、頻拍などが挙げられる）を低減する方法が提供される。
【０２０７】
キットおよびシステム
本発明はまた、本方法において使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、プリオン非含有ナノ粒子組成物を含む１つ以上の容器を備え、さらに、いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される方法のいずれかに従って使用するための指示書も備える。このキットはさらに、適当な個体の選択または処置に関する説明を備え得る。本発明のキットに供給される指示書は、代表的には、ラベルに記載された指示書または添付文書（例えば、キットに含められる紙のシート）であるが、機械読取り可能な指示書（例えば、磁気ディスクまたは光学式記憶ディスクに収められた指示書）もまた許容可能である。
【０２０８】
本発明のキットは、適当な包装の中に存在する。適当な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性のパッケージ（例えば、密閉されたＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、緩衝液および説明の情報などの追加の構成要素も必要に応じて提供し得る。
【０２０９】
ナノ粒子組成物の使用に関する指示書は、通常、意図される処置のための投薬量、投薬スケジュールおよび投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量のパッケージ）または単位用量以下のものであり得る。例えば、長期間（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月またはそれ以上のいずれか）にわたって個体を有効に処置するのに十分な投薬量の、本明細書中に開示されるような実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤（例えば、実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤）を備えるキットが提供され得る。キットはまた、複数の単位用量の実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤および薬学的組成物、ならびに使用するための指示書も備え得、薬局、例えば、院内薬局および調剤薬局（ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ  ｐｈａｒｍａｃｉｅｓ）での貯蔵および使用に十分な量で包装され得る。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子組成物からプリオンタンパク質を除去するためのキットが提供され、そのキットは、プリオンタンパク質に結合することができるリガンドを備える。いくつかの実施形態において、そのキットはさらに、支持材料を備える。いくつかの実施形態において、そのキットはさらに、ナノ粒子組成物からプリオンを除去するためにリガンドを使用するための指示書を備える。
【０２１１】
本明細書中に記載される方法を行うためのシステムもまた提供される。例えば、いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むプリオン非含有ナノ粒子組成物を製造するためのシステムが提供され、前記システムは、１）ナノ粒子組成物を作製するための装置；および２）ナノ粒子組成物を作製するために使用されるアルブミンからプリオンタンパク質を除去するための装置を備える。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物を作製するために使用される前記アルブミンからプリオンタンパク質を除去するための装置は、ナノ粒子組成物を作製するための装置に統合される。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物を作製するための装置は、ナノ粒子組成物を作製するために使用されるアルブミンからプリオンタンパク質を除去するための装置から分離している。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むプリオン非含有ナノ粒子組成物を製造するためのシステムが提供され、前記システムは、１）ナノ粒子組成物を作製するための装置；および２）プリオンタンパク質を除去する（例えば、ナノ粒子の生成中に生成される中間体組成物または生成されたナノ粒子組成物から除去する）ための装置を備える。いくつかの実施形態において、プリオンタンパク質を除去するための装置は、ナノ粒子組成物を作製するための装置に統合される。いくつかの実施形態において、ナノ粒子組成物を作製するための装置は、プリオンタンパク質を除去するための装置から分離している。
【０２１３】
いくつかの実施形態が本発明の範囲内および精神内に存在し得ることを当業者は認識するだろう。
【０２１４】
本明細書中で引用されるすべての参考文献（刊行物、特許出願および特許を含む）は、各参考文献が、参考として援用されると個別かつ明確に示され、かつ本明細書中にその全体が示されたのと同程度に、本明細書によって参考として援用される。
【０２１５】
本発明を行うために本発明者らが知っている最良の形態を含む本発明の好ましい実施形態が、本明細書中に記載される。前述の説明を読めば、それらの好ましい実施形態の実施形態は当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者が必要に応じてそのような実施形態を使用することを予想し、また、本発明者らは、本明細書中に明確に記載されるものとは別な方法で本発明が実施されることも意図している。したがって、本発明は、適用法が認めるように、本明細書に添付されている請求項に列挙されている内容の改変および等価物のすべてを包含する。さらに、すべての可能性のある実施形態における上に記載されたエレメントの任意の組み合わせは、本明細書中に別段示されないか、または文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。
【０２１６】
本願の例示的な実施形態
１つの局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物は、プリオンタンパク質を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、約１００ｆｇ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、上に記載された組成物のいずれか１つであり、ここで、その組成物は、約１０ＩＵ−ｉｃ／ｍｌ未満のプリオン感染性を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、上に記載された組成物のいずれか１つであり、ここで、その組成物は、タンパク質ミスフォールディング周期的増幅（ＰＭＣＡ）アッセイ基づくかまたはＩＰＣＲアッセイに基づいてプリオンタンパク質の存在を示さない。いくつかの実施形態において、組成物は、プリオンタンパク質に結合することができる痕跡量のリガンドをさらに含む上に記載された組成物のいずれか１つである。いくつかの実施形態において、組成物は、痕跡量の支持材料をさらに含む上に記載された組成物のいずれか１つである。
【０２１７】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物が提供され、ここで、その組成物中のアルブミンは、プリオン除去処理を包含する方法によって得られたものであり、前記プリオン除去処理は、最初のアルブミン組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、プリオン除去処理は、前記リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記アルブミンおよび組成物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、リガンドは、ペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、トリアジン（ｔｒａｚｉｎｅ）に基づく化合物である。
【０２１８】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、前記方法は：ａ）プリオンタンパク質を最初のアルブミン組成物から除去する工程；ｂ）プリオンが除去されたアルブミンを含む溶液と有機溶媒に分散された前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とを含む混合物を高剪断条件に供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、工程ａ）は：１）最初のアルブミン溶液をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、工程ａ）は：２）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質をアルブミン溶液から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、前記有機溶媒を混合物から除去する工程をさらに包含する、上に記載された方法のいずれかである。いくつかの実施形態において、前記有機溶媒の除去工程は、蒸発によるものである。いくつかの実施形態において、上記方法は、前記リガンドがペプチドである、上に記載された方法のいずれか１つである。いくつかの実施形態において、上記方法は、リガンドがトリアジンに基づく化合物である、上に記載された方法のいずれか１つである。いくつかの実施形態において、上記方法は、最初のアルブミン組成物が血液由来の生成物である、上に記載された方法のいずれか１つである。
【０２１９】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法が提供され、その方法は：ａ）前記実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含む有機相とアルブミン溶液とを含む混合物を高剪断条件に供する工程、およびｂ）前記混合物からプリオンタンパク質を除去する工程を包含する。いくつかの実施形態において、工程ｂ）は：１）混合物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、工程ｂ）は：２）リガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を前記混合物から除去する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、リガンドは、ペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、トリアジンに基づく化合物である。
【０２２０】
請求項１１〜２３のいずれか１項に記載の方法によって作製される組成物も提供される。癌などの疾患を処置するための、上に記載された組成物のいずれか１つの使用も提供される。
【０２２１】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、プリオンタンパク質を含むと疑われる組成物からプリオンタンパク質を除去する方法が提供され、その方法は：ａ）その組成物をプリオンタンパク質に結合することができるリガンドと接触させる工程、ｂ）そのリガンドおよび該リガンドに結合したタンパク質を組成物から除去する工程を包含する。いくつかの実施形態において、リガンドは、ペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、トリアジンに基づく化合物である。上記方法の後に得られる組成物も提供される。
【０２２２】
別の局面において、アルブミンおよび実質的に水に溶けない薬理学的に活性な薬剤を含むナノ粒子を含み、さらにプリオンタンパク質に結合することができるリガンドを含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態において、リガンドは、ペプチドである。いくつかの実施形態において、リガンドは、トリアジンに基づく化合物である。
【０２２３】
以下の実施例は、本発明を例示するために提供されるものであって、限定するためのものではない。本明細書中に記載される実施例が、例示目的だけであること、およびそれに鑑みて様々な改変または変更が当業者に提案され、それらが本願の精神および範囲の中に含められるべきであることが、理解される。
【実施例】
【０２２４】
実施例１：プリオンタンパク質をアルブミン調製物から除去するためのアフィニティー吸着体の開発
本研究は、異なる２つの濃度（０．０１％または０．００５％）のスクレイピーハムスター脳ホモジネートでスパイクされた異なる２つの商業的に入手可能なアルブミン調製物（２０％ｗ／ｖまたは２５％ｗ／ｖアルブミンを含む）を４樹脂パネルに曝露することによってプリオン結合リガンドの４樹脂パネルをスクリーニングした。その４樹脂パネルは、以前に、２５％アルブミンの存在下における良好なプリオン結合剤としてＰＲＤＴ（Ｐａｔｈｏｇｅｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ；ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）によって同定されたものである。最適な樹脂の選択によって、アルブミンナノ粒子の生成へのプリオン低減工程の組み入れが最適化され得る。
【０２２５】
方法
６つのＰｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＰＩＫＳＩＴＭ，ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ）キットは、４種類のＰＲＤＴ樹脂およびコントロール樹脂（Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  Ａｍｉｎｏ  ＡＭＮ３１）の各々の１２本のカラム（約０．５ｍＬ）とともに包装されていた。各樹脂のプリオンタンパク質への結合能を評価することを目指して、０．０１％または０．００５％のスクレイピーハムスター脳ホモジネート（ＳＢＨ）でスパイクされた２０％および２５％アルブミンを含む溶液を各樹脂に３カラム連続形式で曝露した。樹脂性能の比較は、ウエスタンブロットおよびデンシトメトリーによって測定されたプリオンタンパク質への結合に基づいた。総タンパク質結合プロファイルを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルによって測定した。結合したタンパク質を、プリオンタンパク質結合の検出と総タンパク質結合の検出の両方のために樹脂から取り出した。２８０ｎｍにおける吸光度を測定するＮａｎｏＤｒｏｐ（登録商標）ＮＤ−１０００分光光度計を用いて、アルブミンの結合を測定した。ウエスタンブロットおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにおいて観察されたシグナルは、それぞれプリオンタンパク質の結合画分および総タンパク質に対応する。
【０２２６】
本発明において使用された市販のアルブミン調製物は、Ａｌｂｕｍｉｎ（Ｈｕｍａｎ）Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｈｕｍａｎ  Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｇｒｉｆｏｌｓ（登録商標）２０％，Ｌｏｔ  Ｎｏ．ＩＢＡＢ８ＭＪ００１およびＡｌｂｕｍｉｎ（Ｈｕｍａｎ），ＵＳＰ，２５％溶液Ｂａｘｔｅｒ，Ｌｏｔ  Ｎｏ．ＬＡ０６Ｄ０４ＡＡだった。
【０２２７】
結果
ウエスタンブロットおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ
得られた結果は、４つすべての樹脂が、２０％または２５％ヒトアルブミン溶液にスパイクされたＰｒＰｓｃに結合したことを示している。ウエスタンブロットにおけるＰｒＰｓｃシグナル強度（図１〜３）は、プリオン結合が、ＤＶＲにおいて最も強く、それにＹＶＨＥＡ、ＳＹＡおよびＤ４樹脂が続いたことを示唆している。コントロール樹脂であるＡＭＮ３１は、予想された強いシグナルを有した。ＤＶＲ樹脂を使用することによって得られたシグナルのレベルは、高濃度のアルブミンがプリオン結合を干渉しなかったことを示唆している。
【０２２８】
試験された様々な条件においてＤＶＲ（図１）を使用したとき、より長い曝露時間を試験したときでさえも、第２および第３のカラムでは、検出可能なシグナルは観察されなかったことから、すべての検出可能なＰｒＰｓｃが第１のＤＶＲカラムによって捕捉されたことが示唆される。
【０２２９】
他の樹脂については、第１のカラムにおけるシグナル強度はそれより弱く、そのシリーズの第２のカラムでもプリオンタンパク質が検出されたことから（図２および３）、プリオンタンパク質の結合に対するアルブミンの干渉の可能性が示唆される。３つすべてのリガンドが、第３のカラムにおいてプリオンシグナルを示さなかったことから、それらの樹脂が、ＳＢＨでスパイクされたアルブミン溶液からプリオンを選択的に除去することが可能であることが示唆される。ハムスター脳におけるＰｒＰｓｃの濃度は、２５０ｍｇ／ｍＬアルブミン溶液にスパイクされた、０．０１％ＳＢＨにおける約５ｎｇ／ｍＬのＰｒＰｓｃ（アルブミンが５０，０００，０００倍過剰となる）と等価である約５０μｇ／ｇだった。
【０２３０】
クマシー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにおいて観察された総タンパク質のパターン（図１〜３）は、ＤＶＲが、残りのプリオン結合樹脂よりも一層低いレベルで総タンパク質と結合したことを示しているにもかかわらず、このことは、総タンパク質ゲルにおいて観察されたバンドのほとんどが脳ホモジネートスパイクに由来したという事実から、利点であると考えられる。予想どおり、ＤＶＲゲルにおいて確認できる１本のタンパク質バンドは、アルブミンと同様の見かけの分子量（６６．５ＫＤａ）を有している。
【０２３１】
デンシトメトリー
ＳＢＨでスパイクされたアルブミン溶液中に存在するシグナルに対する、樹脂に結合したＰｒＰｓｃの濃度測定の（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ）シグナルの比を計算することによっても間接的にプリオン除去を評価した。ＤＶＲ樹脂がプリオンに結合する能力は、ほぼすべての利用可能なＰｒＰｓｃを第１のカラムにおいて吸着するポジティブコントロール樹脂に匹敵するほどだった。プリオン結合に対する測定値として感染性の用量を用いると、０．５ｍＬのＤＶＲカラムは、ＳＢＨでスパイクされた１０ｍＬのアルブミン溶液中のプリオン（約１０６ＩＤ５０と等価）を除去することができたことから、０．１％ＳＢＨは、約１０６ＩＤ５０／ｍＬを含むと考えられる。ウエスタンブロットにおいて観察された結果と同様に、ＤＶＲは、ＹＶＨＥＡ、Ｄ４およびＳＹＡよりもプリオン結合の最良の性能を有した。３種類の樹脂のすべてが、ＳＢＨでスパイクされたアルブミン溶液中に存在する任意の検出可能なプリオンタンパク質とさらに結合するために各シリーズの第２のカラムを必要とした。
【０２３２】
アルブミンの結合
タンパク質定量化のための吸光度２８０ｎｍにおいてＮａｎｏＤｒｏｐ（登録商標）ＮＤ−１０００分光光度計を用いて、アルブミン濃度を測定した。ＳＢＨでスパイクされたアルブミン溶液を４種類の樹脂（ＤＶＲ、ＹＶＨＥＡ、ＳＹＡおよびＤ４）およびコントロール樹脂（ＡＭＮ３１）の各々に通した後のアルブミンの濃度について、各フロースルーを測定した。０．０１％または０．００５％ＳＢＨスパイクの非存在下または存在下における２０％および２５％の上記市販アルブミン溶液のタンパク質濃度を、樹脂カラムに流す前に測定した。得られた結果を表３に示す。
【０２３３】
【表３】
2015157839.tif 000009
上記市販アルブミン溶液の濃度は、特に、２０％ｗ／ｖアルブミン溶液を含む調製物に対して、商業的にラベル表示されている値よりも高く測定された。しかしながら、この研究は、比較値で論じられるので、これは問題ではなかった。３つの値の平均を得たところ、スパイクの量は、タンパク質濃度を測定する際の溶液中に存在するアルブミンの量と比べるとき、無視できると考えられた。ＳＢＨでスパイクされたアルブミン溶液を、表４および５に示されるような樹脂に通した後に、アルブミンの濃度を得た。
【０２３４】
【表４】
2015157839.tif 000010
【０２３５】
【表５】
2015157839.tif 000011
試験された樹脂のいずれもが、著しいアルブミンの損失を示さなかった。実際に、上記条件のほとんどについて、損失は検出されなかった。実測値は、約±５％のばらつきを示す。上記データから、アルブミンの損失が、試験された条件の範囲内のこのスケールにおいて上記樹脂から１つを選択するための因子になることはありそうもないことが示唆される。
【０２３６】
結論
得られた結果に基づくと、市販のアルブミン溶液からプリオンを除去するためには、試験された４種類の樹脂のうちＤＶＲが、最良の樹脂である。この樹脂は、０．５ｍＬカラムにおいておよそ１０６ＩＤ５０を除去することができた。この値は、他の曝露に対して以前に行われた試みで得られた値と似ている。２０個の２０または２５％アルブミン／樹脂を用いた試験された曝露の比において、アルブミンの損失はほとんど検出されなかった。この比は増加する可能性があるので、アルブミンの結合は、プロセス条件においてより少なくなるはずである。
【０２３７】
実施例２：パクリタキセルを含む製剤化された懸濁液およびヒトアルブミン溶液のプリオン除去の実行可能性研究
ナノ粒子組成物におけるプリオン除去技術の適用を、パクリタキセル（例えば、ＡｂｒａｘａｎｅＴＭ）を含む製剤化された懸濁液および様々なパーセンテージのアルブミン（％ｗ／ｖ）を含むヒトアルブミン溶液を用いて評価した。
【０２３８】
実験条件
研究の系
ＡｂｒａｘａｎｅＴＭおよび糖−パクリタキセル製剤に対する製剤化された懸濁液を評価した。ＡｂｒａｘａｎｅＴＭに対する製剤化された懸濁液（ＦＳ）は、上記製品から得られた蒸発後の（ｐｏｓｔ−ｅｖａｐｏｒａｔｅｄ）懸濁液（ＰＥ）およびヒトアルブミン溶液（２５％，Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）を用いて製剤化されたものであり、これは、およそ７ｍｇ／ｍＬパクリタキセルおよび５６ｍｇ／ｍＬヒトアルブミンを含んでいた。糖−パクリタキセル製剤に対する製剤化された懸濁液（ＦＳ）は、上記製品から得られた蒸発後の懸濁液（ＰＥ）、ヒトアルブミン溶液（２５％，Ｂａｘｔｅｒ）、スクロース、塩化ナトリウムおよびエデト酸二ナトリウム二水和物を用いて製剤化されたものであり、これは、およそ７ｍｇ／ｍｌパクリタキセル、５６ｍｇ／ｍｌヒトアルブミン；３２ｍｇ／ｍｌスクロース、８．４ＮａＣｌｍｇ／ｍｌおよび０．０７ｍｇ／ｍｌＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を含んでいた。
【０２３９】
２５％、２０％および５％のヒトアルブミン溶液も評価した。２５％または２５０ｍｇ／ｍｌのヒトアルブミン溶液は、Ｂａｘｔｅｒから入手し；２０％または２００ｍｇ／ｍｌのヒトアルブミン溶液（例えば、Ｇｒｉｆｏｌｓ（登録商標））は、Ｇｒｉｆｏｌｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）から入手した。ヒトアルブミン溶液５％は、２５％ヒトアルブミン（Ｂａｘｔｅｒ）を注射用の滅菌水で希釈することによって作製した。
【０２４０】
プリオン除去カラム
本研究において使用されたプリオン除去カラム（１ｍｌ）は、ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｔｄ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から供給される、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  Ａｍｉｎｏ  ６５０ＣＵ樹脂（サンプルＡＭＮ３１）を備える商業的に入手可能なＰＩＫＳＩ（登録商標）（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）キットカラムだった。
【０２４１】
フロースルー条件
製剤化懸濁液における研究について、総フロースルー体積は、約５００ｍＬであり、これは、カラム体積（１ｍｌ）の５００倍だった。流速は、約０．５ｍｌ／分だった。総通過時間は、１６時間超だった。サンプルは、２時間ごとに採取した。カラムの目詰まりは観察されなかった。
【０２４２】
アルブミン溶液における研究について、総フロースルー体積は、少なくとも１００ｍＬであり、これは、カラム体積（１ｍｌ）の１００倍だった。流速は、約０．５ｍｌ／分だった。総通過時間は、３時間超だった。サンプルは、１時間ごとに採取した。カラムの目詰まりは観察されなかった。
【０２４３】
結果および考察
製剤化された懸濁液についてのプリオン除去の実行可能性研究の結果を表６および表７にまとめる。ＡｂｒａｘａｎｅＴＭに対する製剤化された懸濁液についての物理的および化学的な試験結果は、粒径、ｐＨ、パクリタキセルアッセイ結果および不純物、ヒトアルブミンアッセイ結果ならびにヒトアルブミン組成に関して、カラム前の懸濁液とカラム後の懸濁液との間に著しい差がないことを示している。同様に、糖−パクリタキセル製剤に対する製剤化された懸濁液についての物理的および化学的な試験結果は、粒径、ｐＨ、パクリタキセルアッセイ結果および不純物、ヒトアルブミンアッセイ結果、ヒトアルブミン組成、スクロースならびにＥＤＴＡに関して、カラム前の懸濁液とカラム後の懸濁液との間に著しい差がないことを示している。
【０２４４】
【表６】
2015157839.tif 000012
【０２４５】
【表７】
2015157839.tif 000013
アルブミン溶液についてのプリオン除去の実行可能性研究の結果を表８にまとめる。ヒトアルブミンアッセイおよびヒトアルブミン組成に関して、カラム前の溶液とカラム後の溶液との間に著しい差はない。
【０２４６】
【表８−１】
2015157839.tif 000014
本研究から、プリオン除去カラム処理が、ヒトアルブミン溶液、ならびにＡｂｒａｘａｎｅＴＭと糖−パクリタキセル製剤の両方に対する製剤化された懸濁液の物理的特性および化学的特性に対して悪影響を及ぼさないことが証明される。
【０２４７】
実施例３：２０％アルブミンに対するプリオン低減樹脂によるＴＳＥ除去
本研究では、２０％（ｗ／ｖ）アルブミン（Ｇｒｉｆｏｌｓ（登録商標））におけるプリオン低減樹脂（ＰＲＤＴカラム；ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｔｄ）によるＴＳＥ除去の可能性を評価した。ＴＳＥ除去プロセス工程に対する出発物質を、モデルＴＳＥ物質でスパイクした。このプロセス工程は、ＶｉｒｕｓＳｕｒｅ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｖｉｒｕｓｕｒｅ  Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ｕｎｄ  Ｅｎｔｗｉｃｋｌｕｎｇ  ＧｍｂＨ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）において行われた。プロセス工程の実施中に様々な画分を回収し、ＰｒＰｓｃの検出のためにウエスタンブロットアッセイを用いて、そのプロセスのＴＳＥ除去能をＴＳＥ物質のレベルの測定値に基づいて計算した。
【０２４８】
本研究は、１）ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／２６８／９５（１９９６年改訂版），Ｎｏｔｅ  ｆｏｒ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｏｎ  Ｖｉｒｕｓ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ：Ｔｈｅ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｖａｌｉｄａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｍｏｖａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｕｓｅｓ；２）ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／５１３６／０３  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｓｍａ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｇａｒｄｓ  ｔｏ  ｖＣＪＤ  Ｒｉｓｋ；３）ＥＮＶ／ＭＣ／ＣＨＥＭ（９８）１７に概要が示されているＯＥＣＤ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（１９９７年改訂版）；４）２１  ＣＦＲ  ｐａｒｔ  ５８，Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ＵＳ  ＦＤＡ；５）ＥＵ  ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ２００４／９／ＥＧ，Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ  ｕｎｄ  Ｕｅｂｅｒｐｒｕｅｆｕｎｇ  ｄｅｒ  Ｇｕｔｅｎ  Ｌａｂｏｒｐｒａｘｉｓ（ＧＬＰ）；６）ＥＵ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ２００４／１０／ＥＧ，Ａｎｗｅｎｄｕｎｇ  ｄｅｒ  Ｇｒｕｎｄｓａｅｔｚｅ  ｄｅｒ  ｇｕｔｅｎ  Ｌａｂｏｒｐｒａｘｉｓ  ｕｎｄ  ｚｕｒ  Ｋｏｎｔｒｏｌｌｅ  ｉｈｒｅｒ  Ａｎｗｅｎｄｕｎｇ  ｂｅｉ  Ｖｅｒｓｕｎｃｈｅｎ  ｍｉｔ  ｃｈｅｍｉｓｃｈｅｎ  Ｓｔｏｆｆｅｎ；７）Ａｕｓｔｒｉａｎ  ＢＧＢＩ．ＩＩ，２１１．Ｖｅｒｏｒｄｎｕｎｇ，Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ−ＧＬＰ−Ｉｎｓｐｅｋｔｉｏｎｓｖｅｒｏｒｄｎｕｎｇ，Ｊａｈｒｇａｎｇ  ２０００；および８）Ａｕｓｔｒｉａｎ  ＢＧＢＩ．ＩＩ，４５０．Ｖｅｒｏｒｄｎｕｎｇ，ｇｕｔｅ  Ｌａｂｏｒｐｒａｘｉｓ  ２００６，Ｊａｈｒｇａｎｇ  ２００６を含む上記のガイドラインに従い、それらを参照した。
【０２４９】
材料および方法
以下の試験物質、試薬および材料を、２０％アルブミン（Ｇｒｉｆｏｌｓ（登録商標））に対するプリオン低減樹脂（ＰＲＤＴカラム）によるＴＳＥ除去を調べるために本研究の進行中に使用した。
【０２５０】
Ｇｒｉｆｏｌｓ（登録商標）Ａｌｂｕｍｉｎ（ヒト）（ＵＳＰ２０％溶液（Ｌｏｔ：ＩＢＡＢ７ＧＸ００１／ＴＡ０９／０１２２））を、スパイクランおよび干渉試験のために使用した。
【０２５１】
９％食塩水が充填された５ｍｌのプリオン除去樹脂を備える使い捨てＳｅｐＦａｓｔＴＭＣｏｌｕｍｎ（ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ．）をプロセスラン（ｐｒｏｃｅｓｓ  ｒｕｎ）のために使用した。
【０２５２】
様々な緩衝液を調製した。それらは、以下のものを含んでいた：
１）０．９％ＮａＣＬ（９ｇ／ｌ）は、プリオン低減樹脂用の平衡緩衝液として調製された；
２）Ｔｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳ）は、クロマトグラフィ後の樹脂の再懸濁液として調製された；
３）２Ｍ  ＮａＣｌ（１１６．８８ｇ／ｌ）は、プリオン低減樹脂の再生緩衝液として調製された；
４）ＮａＯＨ（０．１Ｍ、０．５Ｍおよび１．０Ｍ）緩衝液は、スパイクされた研究サンプルのｐＨ調整および感染性材料のプロセス中間体の不活性化のために調製された；および
５）ＨＣＬ（０．１Ｍおよび１．０Ｍ）緩衝液は、スパイクされた研究サンプルおよびプロセス中間体のｐＨ調整のために調製された。
【０２５３】
２６３スクレイピー
２６３Ｋ株ハムスター順化スクレイピー（０．５％サルコシル処理済み）を本研究において使用した。ハムスター順化スクレイピーの２６３Ｋ株は、ハムスター脳における高力価という利点を提供する。１０％脳ホモジネートについての代表的な力価は、１０８〜１０１０ＩＤ５０単位／ｍｌの範囲内である。この物質によって沈着されたＰｒＰｓｃタンパク質は、プロテイナーゼＫ消化に対して比較的抵抗性であることから、疾患に関連しない形態のＰｒＰｃタンパク質と識別できる可能性がある。ハムスター順化スクレイピーの種（ｓｅｅｄ）の２６３Ｋ株は、Ｄｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｒｏｈｗｅｒの研究室（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｍａｉｌ  Ｓｔｏｐ  １５１−Ａ，１０  Ｎｏｒｔｈ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ  ２１２０１，ＵＳＡ）から１０％ホモジネートとして供給された。０．５％サルコシルで処理された画分を、この実験のために選択した。この画分は、０．５％サルコシルで処理した後、分画遠心法によって大きな凝集物を除去し、洗浄剤で可溶化されたフラグメントだけを上清中に残すことによって、粗脳ホモジネート（このホモジネートからはミクロソーム／サイトゾルの２６３Ｋ画分がすでに除去されている）から調製された。この０．５％サルコシルで処理された画分は、洗浄剤で可溶化された汚染物質を模倣するように（すなわち、溶媒洗浄剤を含むプロセスに見られるように）調製されたものであり、このタイプの画分は、ヒト血漿製品および組換え製品に対するプリオンクリアランス研究において広く使用されている。
【０２５４】
ＰｒＰｓｃを検出するためのウエスタンブロットアッセイ
ＰｒＰｓｃを検出するためのウエスタンブロットアッセイを、様々なサンプル中のＴＳＥレベル（ＰｒＰｓｃ）の半定量的測定のために使用した。ウエスタンブロットアッセイの測定範囲（ｄｙｎａｍｉｃ  ｒａｎｇｅ）は、通常、シグナルが失われる前は４〜５ｌｏｇ１０希釈の範囲内であり、よって、このアッセイは、ハムスターバイオアッセイよりも感度が低い。しかしながら、このウエスタンブロットアッセイは、生物医薬品製造プロセスによるプリオン除去を評価する際の有用なツールである。
【０２５５】
ウエスタンブロットアッセイでは、まず、サンプルをプロテイナーゼＫで消化することにより、正常型のタンパク質であるＰｒＰｃを除去した（すべてのプロセスサンプルが、８３ｐｇ／ｍｌというプロテイナーゼＫ濃度を用いて消化された）。タンパク分解性反応を阻止した後、サンプルをＳＤＳ緩衝液と混合し、煮沸することにより、ＰｒＰｓｃをその凝集型から変性させた。次いで、サンプルの０．５ｌｏｇ１０希釈物を調製し、分子量マーカーとともにＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに充填する。電気泳動の後、ゲルをＰＶＤＦ膜にウエスタンブロットした後、ブロッキングし、抗体でプロービングすることにより、結合したＰｒＰｓｃタンパク質の検出が抗体３Ｆ４によって可能になった。スクレイピーの２６３Ｋ株は、２５〜３３ＫＤａの範囲に特徴的なバンドパターンをもたらす（このバンドパターンは、サンプル中のＰｒＰｓｃタンパク質の存在の確認を補助する）。サンプルの力価の終点を、ウエスタンブロットにおいてシグナルが観察されなかった１番目の希釈度と定義した。
【０２５６】
減少係数の計算
減少係数（ＲＦ）を以下のとおり計算した：
ＲＦ＝（Ｖ１×Ｔ１）／（Ｖ２×Ｔ２）
式中：
Ｖ１およびＴ１は、それぞれ、出発物質の体積および力価であり、そして
Ｖ２およびＴ２は、それぞれ、生成画分の体積および力価である。
【０２５７】
対数では、この式は、以下のように表され得る：
Ｌｏｇ１０［ＲＦ］＝［Ｌｏｇ１０（Ｖ１）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ１）］−［Ｌｏｇ１０（Ｖ２）＋Ｌｏｇ１０（Ｔ２）］  。
【０２５８】
減少係数は、最後の計算の後に小数第１位に丸められ得る。
【０２５９】
干渉試験
出発物質を希釈せずに試験し、その後、ＴＢＳＡ中に１．０ｌｏｇ１０に事前希釈した。未希釈の出発物質サンプルおよび事前希釈した出発物質サンプルを、スパイクのために使用されたスクレイピー原液の終点のおよそ２ｌｏｇ１０以内の力価に等しい最終濃度に２６３Ｋでスパイクした後、室温にて６０分間、１５．５５８×ｇで遠心分離した。遠心分離後、上清を慎重にデカントし、ペレットを、遠心分離した元のサンプル体積の１／１０のＴＢＳＡで再懸濁した（事前に１．０ｌｏｇ１０希釈されたサンプルに対しては効果のない濃度に等しく、かつ未希釈サンプルに対しては１０倍濃度に等しい）。次いで、標準的なプロトコルに従って、プロテアーゼＫ消化およびウエスタンブロッティングを行った。再生サンプルおよびカラムサンプルを、ウエスタンブロッティングによる解析前に、それぞれ、０．５ｌｏｇ１０に希釈するか、または希釈せずに試験した（すなわち、遠心分離なし）。
【０２６０】
ｐＨの調整
等分前かつ≦−６０℃での貯蔵の前に、サンプルをｐＨ６〜８であるか調べた（いずれのサンプルについてもｐＨ調整は必要なかった）。
【０２６１】
装置
以下の主要な設備機器を、本研究を行うために使用した。Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｃｌａｓｓ
ＩＩ  Ｂｉｏｈａｚａｒｄ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｃａｂｉｎｅｔ、Ｓａｎｙｏ  ＆  Ａｎｇｅｌａｎｔｏｎｉ  ≦−６０℃冷凍庫、Ａｎｇｅｌａｎｔｏｎｉ  ２〜８℃冷蔵庫および≦−１５℃冷凍庫、ＳａｒｔｏｒｉｕｓまたはＫｅｒｎ（化学）天秤およびプリンター、Ｈａｎｎａ電子式温度計、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ｐＨメーター、ＧｒａｎｔまたはＳｅｌｅｃｔａウォーターバス、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｉｍｅｒ、Ｈｅｔｔｉｃｈ痕跡量遠心機、ＢｉｏＲａｄ  Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  Ｃｅｌｌ、ＢｉｏＲａｄ  Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ  Ｂｌｏｔｔｅｒ、ＡＫＴＡ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙシステム、Ｗｅａｌｔｅｃ  Ｐｏｗｅｒ  Ｓｕｐｐｌｙ、Ａｇｆａ  Ｆｉｌｍ  ＤｅｖｅｌｏｐｅｒおよびＰＲＤＴ樹脂が充填されたＢｉｏｔｏｏｌｏｍｉｃｓカラム。
【０２６２】
プロセスの流れ
プロセスのフロースキームを、回収されたサンプルとともに図４に表す。各サンプルの体積は、結果の項の表９に見られる。
【０２６３】
プロセスフローに備えて、Ｌａｍｉｎａｒ  Ｆｌｏｗ（ＬＦ）安全キャビネットを清掃し、少なくとも１０〜１５分間運転することにより、平衡化した。上記ウォーターバスを３０±２℃に平衡化し、２９．５℃の温度に達するまで出発物質を平衡化した。０．５％サルコシルで可溶化されたスパイクを同じウォーターバスにおいて解凍し、解凍したらすぐに、使用するまで氷上に置いた。ＰＲＤＴカラムを一晩、外界温度（２３．０±５．０℃）に平衡化した。
【０２６４】
カラム入口の管材料（上部）をＡＫＴＡの出口に接続した。カラム出口の管材料（下部）に適切な回収容器（ビーカーまたは５０ｍｌ使い捨て遠心管）をあてがった。気泡がシステムに入らないように、前もってすべての管材料にＷＦＩ（注入用の水）を入れておいた。
【０２６５】
上記カラムをまず５カラム体積（ＣＶ）のＷＦＩ、次いで、１０ＣＶの平衡緩衝液で平衡化した。全体を通して目標流速は、２．０±０．１ｍｌ／分だった。
【０２６６】
サンプルの調製およびプリオン低減樹脂クロマトグラフィ
５０．７ｍｌの平衡化された出発物質を、０．５％サルコシルで可溶化された０．５１ｍｌの２６３Ｋホモジネートでスパイクした。次いで、ｐＨを調べたところ、ｐＨが６．９〜７．４の標的範囲内であることが見出された。続いて、０．５ｍｌのアリコートを取り出し（サンプルＳＳＭ）、等分して≦−６０℃で保存した。
【０２６７】
次いで、スパイクされたサンプルを、１．８±０．１ｍｌ／分の流速で上記平衡化されたＰＲＤＴカラムに適用し、フロースルーを以下の画分として回収した：
【０２６８】
【表８−２】
2015157839.tif 000015
吸光度が、最大測定限界（ｆｕｌｌ  ｓｃａｌｅ  ｄｅｆｌｅｃｔｉｏｎ）の８０％に達したら、Ｅ１の回収を開始した。各ランについて、フロースルー画分を回収した（回収された各溶出液サンプルの体積は、秤量によって測定された）。スパイクされたアルブミン溶液を充填した後、カラムを１０．０ｍｌの平衡緩衝液で洗浄した。吸光度が最大測定限界の８０％未満に低下したら、Ｅ５サンプルの回収を停止した。カラムを、平衡緩衝液で洗浄した後、＞２０．０ｍｌの２Ｍ  ＮａＣｌを用いて再生し（サンプルＲＥＧ）、再生後、樹脂を取り出し、５ｍｌのＴＢＳに再懸濁した（サンプルＣＯＬ）。
【０２６９】
結果
スパイクランからのサンプル
下記の表９には、各サンプルの体積とともに、スパイクランから回収されたサンプルが列挙されている。サンプルサイズが重量によって決定された場合、１．０ｇ／ｍｌという密度を仮定して、各サンプルに対する体積の計算を行った。すべてのサンプルを、解析するまで、等分して−６０℃で保存した。スパイクランからのスキャンされたクロマトグラフィプロファイルの再現を図５に示す。
【０２７０】
【表９】
2015157839.tif 000016
干渉結果
干渉に打ち勝つために、再生サンプルおよび樹脂サンプルを除くすべてのサンプルを、０．１％ＢＳＡを含むＴＢＳで１．０ｌｏｇ１０希釈した後、遠心分離および１／１０濃縮を行った。１０×濃度で干渉について試験された未希釈のサンプルは、強い干渉を示した。再生サンプルについては、ＮａＣｌの濃度を低下させるために試験前に０．５ｌｏｇ１０希釈物を調製した。樹脂サンプルについては、樹脂がＴＢＳ緩衝液に再懸濁されたので、これらのサンプルを事前希釈することなく試験した。
【０２７１】
アルブミンによる干渉に打ち勝つために必要なサンプルの希釈は、遠心分離および元の１／１０の体積での再懸濁とともに、１．０Ｌｏｇ１０の事前希釈を用いて行われた。図６を参照のこと。
【０２７２】
プリオンの滴定データおよび減少係数の計算
上記プロセスランに対するプリオン低減係数の計算結果を表１０に示す。干渉に打ち勝つために使用されたサンプルの希釈も表１０に示す。
【０２７３】
【表１０】
2015157839.tif 000017
ＰＲＤＴカラムを通過した最初の２．０ｍｌに相当するＥ１サンプルについては、スパイクされた出発材料を基準として２．５ｌｏｇ１０という減少係数が計算された。サンプルＥ２〜Ｅ５では、フロースルー画分へのＰｒＰｓｃの突破が観察された（サンプルＥ５について減少係数１．５ｌｏｇ１０）。ＰｒＰｓｃは、再生サンプル中に検出されず、ＰＲＤＴ樹脂に結合したＰｒＰｓｃの等価物は、下記のＰＲＤＴ樹脂のプリオン結合能の計算の項でより詳細に論じられた。
【０２７４】
プリオン低減樹脂のプリオン結合能の計算
感染性プリオンタンパク質用のプリオン低減樹脂（ＰＲＤＴ樹脂）に対する結合能を推定するために、ウエスタンブロット試験において観察された力価を感染力価と結びつけた。上記ウエスタンブロットアッセイでは、既知の力価の２６３Ｋ原液を使用した。ウエスタンブロットアッセイでは、参照原液の希釈系列を調製し、試験した。得られた力価を、ハムスターバイオアッセイにおいて観察されたそれぞれの力価に対してプロットした後、線形回帰分析を行うことにより、２つの試験系の関係を評価した。回帰直線についての傾きおよび切片は、それぞれ１．０６６７および−４．５８６７と計算された。それらの回帰パラメータを用いることにより、以下の式を用いてウエスタンブロット力価を感染力価に変換した：
力価［バイオアッセイ］＝（力価［ウエスタンブロット］＋４．５８６７）／（１．０６６７）  。
【０２７５】
１ｍｌあたりの感染力価が計算されたら、カラムに結合した総プリオンを決定することができた。プリオン低減樹脂のプリオンタンパク質結合能の計算値を下記の表１１に示す。この能力は、プリオン低減樹脂に直接結合したと観察されたＰｒＰｓｃの量を用いて決定された（サンプルＲｅｇおよびＣｏｌ）。
【０２７６】
【表１１−１】
2015157839.tif 000018
２Ｍの塩で洗浄した後のＰＲＤＴ樹脂へのＰｒＰｓｃの総結合は、７．４ｌｏｇ１０ＩＤ５０／ｍｌだった。ＰｒＰｓｃは、ウエスタンブロットによって塩洗浄画分中に検出されなかった。著しいＰｒＰｓｃの除去（≧２．５ｌｏｇ１０）も観察された。
【０２７７】
干渉試験を行った際、出発物質を未希釈のまま、遠心分離および１０倍濃縮を用いて試験した。これを行うことにより、サンプル濃縮についての可能性の評価が可能になり、ゆえに、より高い減少係数が達成される。
【０２７８】
実施例４：２５％アルブミンに対するプリオン低減樹脂によるＴＳＥ除去
本研究では、２５％アルブミン（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）におけるプリオン低減樹脂（ＰＲＤＴカラム）によるＴＳＥ除去の可能性を評価した。Ｂａｘｔｅｒ製のＡｌｂｕｍｉｎ（Ｈｕｍａｎ）ＵＳＰ２５％溶液（Ｌｏｔ：ＬＡ０７Ｄ０５１ＡＢ／ＴＡ０９／０１２３）をスパイクランおよび干渉試験のための出発物質として使用したことを除いて、使用した材料および方法は、実施例３に記載したものと同じだった。
【０２７９】
プロセスの流れ
規模を縮小したプロセスを確立し、ＶｉｒｕＳｕｒｅ  ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓにおいて行った。プロセスのフロースキームを、回収されたサンプルとともに図７に表した。各サンプルの体積は、結果の項の表１２に見られる。プロセスの流れの説明に使用されたパラメータおよび手順（ＡＫＴＡとカラムとの接続、カラムの平衡を含む）は、実施例３に記載されたものと同じである。
【０２８０】
サンプルの調製およびプリオン低減樹脂クロマトグラフィ
５０．１ｍｌの平衡化された出発物質を、０．５％サルコシルで可溶化された０．５１ｍｌの２６３Ｋホモジネートでスパイクした。次いで、ｐＨを調べたところ、０．１Ｍ  ＨＣＬまたは０．５Ｍ  ＮａＯＨを用いて６．９〜７．４の標的範囲内であることが見出された。スパイクされた出発物質のｐＨ（６．８５）は、６．９〜７．４の標的範囲外だった（Ｄｅｖｉａｔｉｏｎの項を参照のこと）。６５μＬの０．１Ｍ  ＮａＯＨおよび５０μｌの１Ｍ  ＮａＯＨを加えた後、ｐＨ値が変化しないままだったことから、このｐＨで出発物質が充填されたと判定された。続いて、０．５ｍｌのアリコートを取り出し（サンプルＳＳＭ）、等分して≦−６０℃で保存した。
【０２８１】
次いで、スパイクされたサンプルを、１．８±０．１ｍｌ／分の流速で上記平衡化されたＰＲＤＴカラムに適用し、フロースルーを以下の画分として回収した：
【０２８２】
【表１１−２】
2015157839.tif 000019
吸光度が最大測定限界の８０％に達したら、Ｅ１の回収を開始した。各ランについて、フロースルー画分を回収した（回収された各溶出液サンプルの体積は、秤量によって測定された）。スパイクされたアルブミン溶液を充填した後、カラムを１０．０ｍｌの平衡緩衝液で洗浄した。吸光度が最大測定限界の８０％未満に低下したら、Ｅ５サンプルの回収を停止した。カラムを、平衡緩衝液で洗浄した後、＞２０．０ｍｌの２Ｍ  ＮａＣｌを用いて再生し（サンプルＲＥＧ）、再生後、樹脂を取り出し、５ｍｌのＴＢＳに再懸濁した（サンプルＣＯＬ）。
【０２８３】
結果
スパイクランからのサンプル
下記の表１２には、各サンプルの体積とともに、スパイクランから回収されたサンプルが列挙されている。サンプルサイズが重量によって決定された場合、１．０ｇ／ｍｌという密度を仮定して、各サンプルに対する体積の計算を行った。すべてのサンプルを、解析するまで、等分して≦−６０℃で保存した。スパイクランからのスキャンされたクロマトグラフィプロファイルの再現を図８に示す。
【０２８４】
【表１２】
2015157839.tif 000020
干渉結果
アルブミンによる干渉に打ち勝つために、再生サンプルおよび樹脂サンプルを除くすべてのサンプルを、０．１％ＢＳＡを含むＴＢＳで１．０ｌｏｇ１０希釈した後、遠心分離および１／１０濃縮を行った。１０倍濃度で干渉について試験された未希釈のサンプルは、強い干渉を示した。再生サンプルについては、ＮａＣｌの濃度を低下させるために試験前に０．５ｌｏｇ１０希釈物を調製した。樹脂サンプルについては、樹脂がＴＢＳ緩衝液に再懸濁されたので、これらのサンプルを事前希釈することなく試験した。
【０２８５】
干渉に打ち勝つために必要なサンプルの希釈は、遠心分離および元の１／１０の体積での再懸濁とともに、１．０Ｌｏｇ１０の事前希釈を用いて行われた。図９を参照のこと。
【０２８６】
プリオンの滴定データおよび減少係数の計算
上記プロセスランに対するプリオン低減係数の計算を表１３に示す。干渉に打ち勝つために使用されたサンプルの希釈も表１３に示す。
【０２８７】
【表１３】
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ＰＲＤＴカラムを通過した最初の２．０ｍｌに相当するＥ１サンプルについては、スパイクされた出発材料を基準として≧２．５ｌｏｇ１０という減少係数が計算された。サンプルＥ２〜Ｅ５では、フロースルー画分へのＰｒＰｓｃの突破が観察された（サンプルＥ５について減少係数１．５ｌｏｇ１０）。ＰｒＰｓｃは、再生サンプル中に検出されず、ＰＲＤＴ樹脂に結合したＰｒＰｓｃの等価物は、下記のＰＲＤＴ樹脂のプリオン結合能の計算の項でより詳細に論じられた。
【０２８８】
プリオン低減樹脂のプリオン結合能の計算
感染性プリオンタンパク質用のプリオン低減樹脂（ＰＲＤＴ樹脂）に対する結合能を推定するために、ウエスタンブロット試験において観察された力価を感染力価と結びつけた。上記ウエスタンブロットアッセイでは、既知の力価の２６３Ｋ原液を使用した。ウエスタンブロットアッセイでは、参照原液の希釈系列を調製し、試験した。得られた力価を、ハムスターバイオアッセイにおいて観察されたそれぞれの力価に対してプロットした後、線形回帰分析を行うことにより、２つの試験系の関係を評価した。回帰直線についての傾きおよび切片は、それぞれ１．０６６７および−４．５８６７と計算された。それらの回帰パラメータを用いることにより、以下の式を用いてウエスタンブロット力価を感染力価に変換した：
力価［バイオアッセイ］＝（力価［ウエスタンブロット］＋４．５８６７）／（１．０６６７）  。
【０２８９】
１ｍｌあたりの感染力価が計算されたら、カラムに結合した総プリオンが決定された。ＰＲＤＴ樹脂のプリオンタンパク質結合能の計算値を下記の表１４に示す。その能力は、ＰＲＤＴ樹脂に直接結合したと観察されたＰｒＰｓｃの量を用いて決定された（サンプルＲｅｇおよびＣｏｌ）。
【０２９０】
【表１４】
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２Ｍの塩で洗浄した後のＰＲＤＴマトリックスへのＰｒＰｓｃの総結合は、７．４ｌｏｇ１０ＩＤ５０／ｍｌだった。ＰｒＰｓｃは、ウエスタンブロットによって塩洗浄画分中に検出されなかった。著しいＰｒＰｓｃの除去（≧２．０ｌｏｇ１０）もまた観察された。
【０２９１】
スパイクされた出発物質のｐＨは、６．８５だった。６５μｌの０．１Ｍ  ＮａＯＨおよび５０μｌの１Ｍ  ＮａＯＨを加えた後も、ｐＨ値は、変化しないままだった。この作用は、おそらく、２５％アルブミンの著しい緩衝能力に起因した。
【０２９２】
干渉試験を行った際、出発物質を未希釈のまま、遠心分離および１０倍濃縮を用いて試験した。これは、研究計画に記載された干渉試験に加えられたものであり、これを行うことにより、サンプル濃縮についての可能性の評価が可能になり、ゆえに、より高い減少係数が達成される。
【０２９３】
実施例５．プリオン除去によって処理されたヒトアルブミンについてのプロセス途中の解析および安定性解析
この実験では、ヒトアルブミンの濃度および組成に対するプリオン除去カラムの影響を評価した。２つの別個の実験において、１リットルのアルブミンをＰＲＩＯＣＬＥＡＲＴＭＢカラム（５０ｍｌ）（ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で処理した。次いで、無処理サンプル、ランの始めに回収されたサンプル、およびランの終わりに回収されたサンプルを濃度および組成の解析に供した。結果を表１５および１６に示す。
【０２９４】
【表１５】
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【０２９５】
【表１６】
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プリオン除去処理の前後のアルブミンについて著しい差は観察されなかった。
【０２９６】
本発明者らはさらに、プリオン除去のために処理されたヒトアルブミン、およびプリオン除去のために処理されたヒトアルブミンを用いて製造されたＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）懸濁液のプロセス途中の安定性を評価した。結果を表１７および１８に示す。
【０２９７】
【表１７】
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【０２９８】
【表１８】
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本発明者らはさらに、プリオン除去のために処理されたヒトアルブミンを用いて製造されたＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）完成品（プリオン除去のために処理されたヒトアルブミンを用いたパイロットプラントバッチ）およびプリオン除去のために処理されていないヒトアルブミンを用いて製造されたＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）完成品（Ａｂｒａｘａｎｅ  Ｅｘｈｉｂｉｔ  ｌｏｔ、Ａｂｒａｘａｎｅ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｌｏｔおよびＡｂｒａｘａｎｅパイロットプラントバッチ）におけるヒトアルブミンの加速安定性を比較した。結果を表１９に示す。
【０２９９】
【表１９】
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安定性データの比較から、５５℃での２週間にわたる貯蔵は、４０℃での３ヶ月間にわたる貯蔵と等しいことが示される。製造プロセス中およびプロセス途中の試験中において、プリオン除去のために処理されたヒトアルブミンを用いて製造されたパイロットプラントバッチと無処理ヒトアルブミンを用いて製造されたパイロットプラントバッチとの間に著しい差は観察されなかった。プリオン除去のために処理されたヒトアルブミンを用いて製造された完成品の特性と無処理ヒトアルブミンを用いて製造された完成品の特性との間に著しい差はなかった。
【０３００】
実施例６：Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）プロセス途中懸濁液に対するプリオン除去カラムの影響の評価
この実験は、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）プロセス途中懸濁液、すなわち、凍結乾燥前のＡｂｔａｘａｎｅ（登録商標）の懸濁液に対するプリオン除去の影響を評価する。Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  Ａｍｉｎｏ  ６５０ＣＵ樹脂，ＰｒｏＭｅｔｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓを含む商業的に入手可能なＰＩＫＳＩキットカラム（１ｃｃ）をこの実験において使用した。
【０３０１】
２つの別個の実験において、ヒトアルブミンを含む０．５ＬのＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）プロセス途中懸濁液を上記カラムに通した。解析の結果を表２０にまとめている。
【０３０２】
【表２０】
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サンプル１：無処理のＡｂｒａｘａｎｅプロセス途中懸濁液
サンプル２：ランの始めに回収されたサンプルであるプリオン除去カラム後のＡｂｒａｘａｎｅプロセス途中懸濁液
サンプル３：ランの終わりに回収されたサンプルであるプリオン除去カラム後のＡｂｒａｘａｎｅプロセス途中懸濁液（０．５Ｌ）
表２０に示されるように、プリオン除去のために処理されたＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）プロセス途中懸濁液の物理的試験および化学的試験から、粒径、ｐＨ、パクリタキセルアッセイ値および不純物、ヒトアルブミン（ＨＡ）アッセイ値ならびにＨＡ組成に関して、無処理懸濁液と処理懸濁液との間に著しい差がないことが示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
2015157839000001.app
【外国語明細書】
2015157839000001.pdf