(57)【要約】      （修正有）【課題】グルコース及び／又はインスリン代謝に関連する病態及び疾患の予防及び治療で、好都合な用途をもたらす、改善されたトレハルロース−及びイソマルツロース−含有組成物（以下では「ビタロース」又は「トレハルロース含有組成物」と呼ぶ）の提供。【解決手段】20〜78重量％のトレハルロース含量、20〜50重量％のイソマルツロース含量及び0.1〜2.0重量％のグルコース(それぞれ乾燥質量を基準)を含む、トレハルロース含有組成物を含むシロップであって、晶出しないシロップ、前記シロップを含む飲食品及び医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）スクロース含有組成物を適切な条件下でシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物と接触させ、（ｂ）トレハルロース含有組成物を生成させる、トレハルロース含有組成物の調製方法。
【請求項２】
スクロース含有組成物が、水性媒体に溶解又は懸濁されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞又は細胞抽出物が、少なくとも１つの担体に固定化されている、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
両方の属の微生物の細胞又は細胞抽出物が、同一の担体に共固定化されている、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法に従って調製されたビタロース（トレハルロース含有組成物）。
【請求項６】
２０〜９５重量％（乾燥質量基準）のトレハルロース含量を含んでいる、請求項５に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）。
【請求項７】
８〜５０重量％（乾燥質量基準）のイソマルツロース含量を含んでいる、請求項５又は６に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）。
【請求項８】
請求項５〜７のいずれかに記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）及び少なくとも１種の添加剤を含んでいる、ヒト又は動物の消費用製品。
【請求項９】
製品が、０．０２〜３．０重量％の少なくとも１種の添加剤及び９７．０〜９９．９８重量％のビタロース（トレハルロース含有組成物）を含んでいる（それぞれ乾燥質量を基準）、請求項８に記載の製品。
【請求項１０】
製品が、３〜９５重量％のビタロース（トレハルロース含有組成物）及び５〜９７重量％の少なくとも１種の添加剤を含んでいる（それぞれ乾燥質量を基準）、請求項８に記載の製品。
【請求項１１】
添加剤が、ステビア抽出物及びステビオルグリコシドのうちの少なくとも一つである、請求項８又は９に記載の製品。
【請求項１２】
添加剤が、ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物である、請求項８〜１１のいずれかに記載の製品。
【請求項１３】
添加剤が、酸味剤、果実風味剤、甘味風味剤、旨味風味剤、塩気風味剤、強力甘味剤、糖アルコール、スクロマルト、リボース、タガトース、トレハロース、有機酸、果物抽出物、バルク甘味剤、ファイバー剤、プレバイオティック剤、増粘剤、ビタミン剤、ミネラル剤、防腐剤、食品着色剤及び治療剤からなる群から選択される、請求項８〜１２のいずれかに記載の製品。
【請求項１４】
添加剤が、クレアチン、ポリフェノール、Ｌ−カルニチン、オメガ−３ポリ不飽和脂肪酸、オメガ−６ポリ不飽和脂肪酸、緑茶抽出物、ＥＧＣＧ（エピガロカテキンガラート）、アミノ酸及びペプトプロからなる群から選択される、請求項８〜１３のいずれかに記載の製品。
【請求項１５】
添加剤が、トリプトファン含有ペプチド組成物である、請求項８〜１４のいずれかに記載の製品。
【請求項１６】
食品、動物飼料又は医薬製品である、請求項８〜１５のいずれかに記載の製品。
【請求項１７】
ゼリー、飲料、果物調製物、濃縮果物ジュース、果物ジュース又はスムージーである、請求項８〜１６のいずれかに記載の製品。
【請求項１８】
グルコースを持続して放出し且つ同時に低インスリン応答を引き起こすことができるように設計された、ヒト又は動物の消費用製品を調製するための請求項５〜１７のいずれかに記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）もしくは製品又はトレハルロースの使用。
【請求項１９】
製品が、医薬製品である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
請求項５〜１７のいずれかに記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用し、それによって低インスリン応答及び持続したグルコースの放出を引き起こさせる、グルコース又はインスリン代謝関連病態又は疾患の治療方法。
【請求項２１】
インスリン関連疾患が、糖尿病、代謝症候群、耐糖能障害、インスリン抵抗、過脂肪、過体重、肥満、高脂血、ガン、肝疾患、インスリン感受性及び関節硬化からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項５〜１７のいずれかに記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象における歯の疾患の予防及び治療方法。
【請求項２３】
請求項５〜１７のいずれかに記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、消費者の口中におけるプラーク形成を低減させるための、好ましくは請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項５〜１７のいずれかに記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象の精神的及び／又は身体的能力を改善させるための方法。
【請求項２５】
請求項５〜１７のいずれかに記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象の体重を管理するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トレハルロース含有組成物（これはビタロース［vitalose］を意味する）、その調製方法及びそれを用いるための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トレハルロース（１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−フルクトース）及びイソマルツロース（パラチノース、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−フルクトース）は、スクロースの知られている構造異性体である。これらの異性体は、天然には、蜂蜜に少量含まれている。いずれも非齲蝕性の糖として知られている。しかしながら、それらの物理的及び化学的特性はいくぶん異なっており、特にトレハルロースはイソマルツロースよりも水により溶けるという事実を鑑みた場合、結果としては、食品の構成成分としてのその使用が異なっている。
【０００３】
例えば（特許文献１）からも、イソマルツロース及びトレハルロースは、いずれもヘテロ二糖であることが知られており、このヘテロ二糖は、スクロースに比較して、ヒト又は動物の消費者の小腸ではゆっくりとした加水分解速度を見せるものであって、これにより、血糖値をコントロールするための、特には糖尿病や耐糖能障害を病む患者に用いるための、あるいは肥満を予防するための栄養分組成物の提供が提案されている。しかしながら、この文献は、その栄養分組成物中に含有されているイソマルツロース及びトレハルロースの特異的な役割及び関連性については記載されていない。
【０００４】
（特許文献２）は、トレハルロース及びイソマルツロースを含む組成物の調製方法を開示している。特には、シュードモナス・メソアシドフィラ（Pseudomonas mesoacidophila）ＭＸ−４５（ＦＥＲＭ−ＢＰ３６１９）又はアグロバクテリウム・ラジオバクター（Agrobacterium radiobacter）ＭＸ−２３２（ＦＥＲＭ−ＢＰ３６２０）を用いてスクロース含有培地を、主にはトレハルロース含有溶液だが、有意な量のイソマルツロース含有溶液にも変換させた。つまり、開示された方法は、シュードモナス・メソアシドフィラか又はアグロバクテリウム・ラジオバクターのα−グリコシルトランスフェラーゼの能力を用いてスクロースをトレハルロース及びイソマルツロースの双方に変換させるものであったが、ここではもっぱらトレハルロースが得られている。
【０００５】
（特許文献３）は、スクロース溶液からトレハルロース含有組成物を産生させるためのシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）、テルムス・ルベル（Thermus ruber）、テルムス・アクアチカ（Thermus aquatica）又はピメロバクター（Pimelobacter）から得られるマルトース／トレハルロース変換酵素を用いたトレハルロース含有多糖類組成物の調製を開示している。
【０００６】
（特許文献４）は、固定化細菌細胞、特にはプロタミノバクター・ルブルム（Protaminobacter rubrum）（ＣＢＳ５７４．７７）の細胞を用いたイソマルツロースの調製方法を開示している。そこに開示されている方法はスクロース含有溶液を用いるものであり、これをそのような固定化細胞にさらして主にイソマルツロース含有組成物を得ようとするものであるが、その組成物は、しかしながら、トレハルロースも含んでいる。
【０００７】
（特許文献５）は、集中力と注意力を持続させるための作用物質、特にはそのような作用物質を含有している食品及び飲料を開示している。この文献はヒト消費用の製品を開示するものであり、この製品は、その製品中に含有されているイソマルツロースの存在により集中力と注意力を向上させると述べられている。
【０００８】
（特許文献６）は、イソマルツロース及び／又はトレハルロースとベタインの同時製造方法を開示している。
【０００９】
これらの各方法はすべてトレハルロース又はイソマルツロース含有組成物か又はさらには純粋なトレハルロースもしくはイソマルツロースを製造してその知られている生理学的特性、特にはその非齲蝕性並びにその小腸でのゆっくりとした加水分解速度を利用しようとするものである。イソマルツロースは、過体重、肥満、糖尿病さらには他のグルコース又はインスリン代謝関連病態及び疾患を予防及び治療するのに適している製品を開発するのに興味をそそる作用物質であるが、さらにより効果的な活性成分を提供するというニーズがなお依然として存在している。
【００１０】
高含量のイソマルツロースを含んでいる、トレハルロース含有組成物（ビタロースとも呼ばれる）の製造は、イソマルツロースが、特には水性環境における用途で、晶出する傾向があるので、ゼリーや果物ジュースのような、多くの用途にとっては、当を得たものではない。高含量のトレハルロースを含んでいる組成物の調製は一部の用途にとっては好都合であるが、他の用途にとってはその結晶能力がひどく阻害されているという不都合がある。これまで、トレハルロース及びイソマルツロースの双方を有意な量で含むトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を得るための方法、及び、容易で、費用がかからずまた商業的にも適している方法でその製造を可能とする、及び、その組成物のメリットをもたらす、特にはそのトレハルロース対イソマルツロースの比が、その製造されたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の特定の用途の特異的なニーズに応じて調節可能である方法についての報告はない。さらには、当技術分野には、ヒト又は動物の身体におけるグルコース及び／又はインスリン代謝に関連する病態及び疾患の改善された予防及び治療の手段及び方法を提供するというニーズが、特には、炭水化物（特には糖含有食）が供給されるのが相応しくないとこれまでみなされてきた、特異的な患者の群に対して、存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】欧州特許出願公開第１４２４０７４号明細書
【特許文献２】欧州特許第０４８３７５５号明細書
【特許文献３】欧州特許第０７９４２５９号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第００９１０６３号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第１３９３６３７号明細書
【特許文献６】欧州特許第０９８３３７４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
つまり、本発明の根底にある技術課題は、上記で明らかにした不都合を克服する、また、特には、好ましくは特異的な消費者又は患者の群に対して、グルコース及び／又はインスリン代謝に関連する病態及び疾患の予防及び治療で、好都合な用途をもたらす、改善されたトレハルロース−及びイソマルツロース−含有組成物（以下では「ビタロース」又は「トレハルロース含有組成物」と呼ぶ）を提供することである。つまり、本発明の文脈では、用語「トレハルロース含有組成物」及び「ビタロース」は、同じ「トレハルロース−及びイソマルツロース−含有組成物」のことをいい、相互交換可能に使われる。本発明の根底にある技術課題は、また、工業スケールでのトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の製造方法、特には特定的に調節可能な方法で、すなわち、好ましくは予め選択された、好ましくは特異的な、好ましくは予め選択されたトレハルロース／イソマルツロース比を呈する、生成物組成の製造を可能にする方法でその製造を可能にする方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、その各独立請求項の教示するところにより、上記課題を解決するものである。
【００１４】
つまり、好ましい実施形態で、本発明は、（ａ）スクロース含有組成物を適切な条件下でシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物と接触させ、（ｂ）トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を生成させる、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の調製方法を提供することによって、その技術課題を解決するものである。
【００１５】
つまり、上記で特定した本発明の方法は、スクロース含有組成物、特にはスクロースを含んでいる水性培地を、酵素活性、特には、好ましくはシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の、細胞又は細胞抽出物に含有されている、α−グルコシルトランスフェラーゼ活性に、スクロースをトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）に変換させるのに相応しい条件下及び時間期間さらすことを先見するものである。好ましい実施形態では、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、好ましくはスクロースが完全に変換（すなわち１００％変換）又はほぼ完全に変換（これは少なくとも９５、９６、９７、９８又は９９％変換を意味する）した後、単離され、場合によりさらに精製される。得られるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、先行技術の方法に従って、また意図される用途から生じる特定のニーズに従って、さらに精製され得る。好ましい実施形態では、例えば、得られたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を、クロマトグラフィー、濾過、脱イオン、脱色、酵素処理、触媒処理及び／又は分別蒸留により、さらに精製することがあり得る。
【００１６】
つまり、本発明は、シュードモナス属微生物の細胞又は細胞抽出物及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物を１つの単一プロセスに同時に且つ一緒に用いてスクロース含有組成物からトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）、好ましくは予め選択されたまた容易に適応可能なその各成分組成を有するトレハルロース含有組成物を作出し得るという好都合な、思いも寄らぬ教示を提供するものである。好都合なこととして、本教示は、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を、その各成分（特にトレハルロース及びイソマルツロース）の広い範囲の比で、製造することを可能にするものである。特には、シュードモナス及びプロタミノバクター双方の細胞又は細胞抽出物の組み合わせの、且つ、同時の使用は、主にトレハルロース及びイソマルツロースの双方を含んでいる、以下では「トレハルロース含有組成物」（これはビタロースを意味する）と呼ばれる、好都合な組成物、特には甘味剤組成物を生成するものであって、この組成物は、以下に詳述するメリット、すなわち、この組成物は、思いも寄らぬ血糖及び血中インスリン挙動を示し、特には体重並びに一般的にはグルコース・インスリン代謝関連病態及び糖尿病のコントロールにおいて、その組成物のさらなる好都合な方法及び使用の可能性を開くというメリットをもたらす。本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、本質的に非齲蝕性、好ましくは完全に非齲蝕性であり、また、低血糖及び血中低インスリンの指標を有している。本組成物は、健康志向消費者及び特には糖尿病患者にも向いている、低カロリー組成物であり、感じのよい甘味効果と優れた増稠特性（これは、好都合なこととして、固体形態に調製され得るが、好都合なこととして、シロップ、特には懸濁液の形態あるいは溶液の形態でも用いられ得る）を組み合わせるものである。特には、本発明の組成物は、用いられる濃度では晶出しない。本発明の組成物は、理論によって縛られるものではないが、主にそのさまざまな各成分の特異的な比、特にはトレハルロース対イソマルツロースの比及びトレハルロース対少量炭水化物成分イソマルトース、イソメレジトース及びオリゴマーの比によるものと考えられる、一つの組成を有している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図２】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図３】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図４】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図５】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図６】本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロース含有組成物の変換を、シュードモナス・メソアシドフィラとプロタミノバクター・ルブルムのいくつかの比について、グラフで示す図である。
【図７】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図８】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図９】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１０】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１１】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１２】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１３】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１４】本発明に従って調製されたゼリーの従来型スクロースをベースとしたゼリーに比較しての硬度及び稠度をグラフで示した図である。
【図１５】イソマルツロース及びトレハルロースを消費した後の消費者の血糖レベルを示した図である。
【図１６】イソマルツロース及びトレハルロースを消費した後の消費者の血液インスリンレベルを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下においては、パーセント（％）の言及は、特に断らない限り、重量％の言及である。本発明の文脈では、すべての量は、特には組成物の各成分の相対量は、表示されている、組成物乾燥重量か又は組成物全体重量を基準にして、１００％を超えることはなく、好ましくは合計１００％になる。
【００１９】
本発明の文脈では、スクロース含有組成物は、好ましくは、１〜１００％、好ましくは１〜９９重量％又は９０〜１００重量％スクロース（乾燥重量の重量％）を含んでいる組成物である。特に好ましい実施形態ではスクロース含有組成物は、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０〜９８重量％、好ましくは３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０〜９７重量％、好ましくは４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０〜９６重量％、好ましくは５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０〜９５、９６、９７、９８又は９９重量％、好ましくは６０〜９０重量％、好ましくは７０〜８０重量％、好ましくは３０〜６０重量％又は好ましくは４０〜５０重量％スクロース（それぞれ組成物の乾燥重量を基準）のスクロース含有量を有している。最も好ましくは、スクロース含有組成物のスクロース含有量は、９０〜９９重量％、好ましくは９０〜９８重量％（それぞれ組成物の乾燥重量を基準）である。
【００２０】
特に好ましい実施形態では、スクロース含有組成物は、液体形態で用いられ、特には水性媒体に溶解又は懸濁され、好ましくは水性スクロース含有溶液又は懸濁液である。好ましくは、上記で特定したスクロース含有組成物は、水に０．１〜８０重量％、好ましくは４０〜７５重量％、好ましくは４０〜６０重量％、特には１０〜６０重量％、好ましくは２０〜５５重量％のスクロース含有組成物を含んでいる溶液又は懸濁液が得られるように、水性媒体、例えば水、に溶解又は懸濁され得る（つまり１００％（溶液又は懸濁液の全体重量を基準）まで水又は水性媒体が加えられる）。特に好ましい実施形態ではスクロース含有溶液又は懸濁液は、０．１〜８０重量％、好ましくは５〜３０重量％、２０〜３０重量％、２０〜６０重量％、３０〜６０重量％又は４０〜７５重量％、好ましくは４０〜６０重量％、特には１０〜６０重量％、好ましくは２０〜５５重量％スクロース（液体溶液又は懸濁液の全体重量を基準）のスクロース含有量を有している。特に好ましい実施形態ではスクロース含有溶液又は懸濁液は、好ましくは５〜３０％、好ましくは２０〜２７％の乾燥物質含有量を有している製糖工場製希薄液又は濃厚液であり得る。また製糖工場に見られる糖蜜や他の純粋でないスクロース組成物も用いられ得る。
【００２１】
本発明の文脈ではシュードモナス属微生物の細胞又は細胞抽出物は、適切な条件下で、スクロースをトレハルロース及びイソマルツロースを含んでいる組成物に変換させるのに適しているものである。本発明の文脈ではプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物は、適切な条件下で、スクロースをトレハルロース及びイソマルツロースを含んでいる組成物に変換させるのに適しているものである。つまり、本発明ではシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物は、スクロースからトレハルロース及びイソマルツロースを生成することができる細胞又は細胞抽出物である。
【００２２】
本発明の文脈では細胞抽出物とは、本発明に従って用いられる微生物の１種又はそれ以上の細胞の抽出物又は一部であることを意味し、例えば破壊細胞のことをいう。特に好ましい実施形態では細胞抽出物とは、スクロースをトレハルロース及びイソマルツロースに変換する能力を有している酵素又は酵素系の溶液又は懸濁液のこともいい、特にはシュードモナス及び／又はプロタミノバクターのα−グルコシルトランスフェラーゼ、すなわち好ましくはα−グルコシルトランスフェラーゼ又はスクロース−６−グルコシルムターゼ（EC5.4.99.10）を含有している溶液又は懸濁液である。つまり、本発明は、細胞又は細胞抽出物の使用を先見するものであって、ここでは好ましい実施形態における用語「細胞抽出物」は酵素も意味し、酵素系も包含したこの用語にはそのようなα−グルコシルトランスフェラーゼも含まれる。本発明によれば、微生物の全細胞又は破壊細胞を用いて、その細胞を酵素系のキャリアーとして機能させることがあり得る。細胞、特には固定化細胞は、好ましくは、死んだものである。本発明に従って用いられる酵素又は酵素系は、通常の技術、例えば溶媒抽出、フレンチ・プレス、凍結乾燥及び／又は酵素処理により、微生物の細胞から抽出され得る。抽出を促進させるために、細胞破壊や浸透圧ショックのような補助的プロセスを用いることがあり得る。抽出された酵素又は酵素系は、さらに精製されることがあり得るしあるいはそのまま用いられることもあり得る。本発明は、天然に存在するシュードモナス及び／又はプロタミノバクターの野生型酵素、すなわちα−グルコシルトランスフェラーゼを用いることを先見するのみならず、遺伝子工学的に工作されたその誘導体並びにシュードモナス及び／又はプロタミノバクターを遺伝子工学的に工作した変異体の細胞を用いることも先見するものである。
【００２３】
本発明の特に好ましい実施形態では、シュードモナス属微生物は、種シュードモナス・メソアシドフィラの微生物であって、好ましくはシュードモナス・メソアシドフィラＭＸ−４５（ＦＥＲＭ−ＢＰ３６１９）（この生物体は例えば欧州特許第０４８３７５５号明細書又は欧州特許第０６２５５７８号明細書に開示されていて、ＦＥＲＭ１１８０８でも寄託されており、あるいはNagai et al. (Biosc. Sci. Biotech. Biochem. 58 (10), (1994) 1789 - 1793)からも公的に入手可能である）である。本発明の特に好ましい実施形態ではプロタミノバクター属微生物は、種プロタミノバクター・ルブルムの微生物であって、好ましくはプロタミノバクター・ルブルムＣＢＳ５７４．７７である（プロタミノバクター・ルブルムＣＢＳ５７４．７７は例えば欧州特許出願公開第００９１０６３号明細書又は欧州特許第０６２５５７８号明細書に記載されている）。
【００２４】
スクロース含有組成物をトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）に変換させるための適切な条件は、好ましい実施形態では、１０℃の温度、好ましくは１５℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３７℃、好ましくは２５℃〜４０℃、好ましくは３０℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜２５℃、好ましくは１５℃〜３０℃、１８℃〜２６℃そして最も好ましくは１０℃〜２０℃であって、特に好ましくは１０〜１７℃である。
【００２５】
さらに好ましい実施形態では本方法は、５．０〜９．０、好ましくは５．０〜７．０、好ましくは６．０〜７．０のｐＨ値で行われる。
【００２６】
さらに好ましい実施形態ではスクロース含有組成物は、２０〜１００％、好ましくは３０〜９５、９６、９７、９８、９９％及び好ましくは１００％、好ましくは４０〜９８％、好ましくは５０、６０又は７０〜９７％、好ましくは５０、６０、７０又は８０〜９８％、好ましくは７５〜９８％、最も好ましくは５０〜９９％、最も好ましくは６０〜９８％、８５〜１００％のそして好ましくは９５、９６、９７、９８又は９９％より多い（スクロースの量を基準）トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）へのスクロースの変換を達成するのに相応しい時間期間及び条件下で微生物プロタミノバクター及びシュードモナスの属の細胞又は細胞抽出物にさらされる。最も好ましくは、得られたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、実質的にスクロースを含まず、好ましくはスクロースをまったく含まない。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態では、生きている又は死んでいるものであり得る細胞又はその細胞抽出物は、非固定化形態で用いられ得る。さらなる好ましい実施形態では細胞又はその細胞抽出物、特にはその酵素は、少なくとも１つの担体に、好ましくは２つの異なるタイプの担体に固定化される。この好ましい実施形態に従って１つの担体はシュードモナス属の微生物の細胞又は細胞抽出物を固定化しており、もう一つの異なる担体はプロタミノバクター属の微生物の細胞又は細胞抽出物を固定化している。
【００２８】
特に好ましい実施形態ではシュードモナス属の微生物の細胞又は細胞抽出物及びプロタミノバクター属の微生物の細胞又は細胞抽出物が同じ担体に共固定化されている。つまり、この実施形態では同一の担体が、すなわち好ましくは１つのタイプの担体粒子が、その担体上に又はその担体中に組み合わせられた双方の細胞又は細胞抽出物を確かに含有している。
【００２９】
固定化は、先行技術の技術を用いて行われ得る。好ましくは、本発明は、ゲル内への取り込みを用いることを先見するものである。細胞は、好ましくは、支持体内部上に物理的にも吸着され得る。細胞は、好ましくは、支持体内部に共有結合的にもカップリングされ得るしあるいは細胞は架橋剤を用いることによって凝集もされ得る。本発明によれば、ゲルへの取り込みが好ましい。適するゲル材は、アルギン酸塩、ポリアクリルアミド、カンテン、キサンタンガム／ローカストビーンガム、カッパカラギーナン又はカッパカラギーナン／ローカストビーンガム、コラーゲン又はセルロースアセタートであり得る。
【００３０】
好ましい実施形態で、本発明は、アルギン酸塩担体、特にはアルギン酸カルシウムへの細胞又は細胞抽出物の固定化を用いることを先見するものである。好ましい固定化は、不活性三次元ポリマー網目構造を作り出し、スクロースの高度の内部に向けての拡散と高安定性をもたらすものである。好ましい実施形態では、好ましくはアルギン酸塩ゲルに、固定化された細胞又は細胞抽出物を調製するために、好ましくは双方の微生物の属の、細胞又は細胞抽出物を一緒に、可溶性アルギン酸塩、例えばアルギン酸ナトリウムの水性溶液と混合する。好ましい方法においてはこれは全細胞又は破壊細胞（すなわち細胞抽出物）を可溶性アルギン酸塩でスラリー化することを伴うだろう。好ましい実施形態では、細胞の濃度は、その溶液の１〜９０重量％、好ましくは１０〜４０重量％、好ましくはその溶液の２０重量％（それぞれ正味重量（体積））である。得られるアルギン酸塩混合物は、このあと、可溶性アルギン酸塩がゲルを形成する金属塩溶液に計量投入される（例えば塩化カルシウムを用いることによって生成されるアルギン酸カルシウム）。シュードモナス属の微生物をプロタミノバクター属の微生物とは別々にして固定化し、スクロース変換が始まる前の後のほうの段階でその別々に固定化された微生物の双方を混合するということもあり得る。
【００３１】
スラリー又は他のアルギン酸塩混合物を離散液滴として計量投入することにより、好ましい実施形態では、細胞又は細胞抽出物を取り込んでいる球形ペレットのゲルを作り出すことが可能である。好ましくはこのペレットサイズは変えられ得るものであって、３〜５直径のサイズを有しているペレットが好ましい。さらに好ましい実施形態では細胞又は細胞抽出物をゲルのブロック、ゲルのロープに、あるいは超極細粒子に固定化することも可能である。細胞又は細胞抽出物をＤＥＡＥ−セルロースに吸着させることも可能でありあるいは例えばグルタルアルデヒドで、細胞又は細胞抽出物を架橋することによっても可能である。
【００３２】
本発明の特に好ましい実施形態では本発明の方法に、シュードモナスとプロタミノバクターの特異的な比、特には酵素活性の比又は細胞又は細胞抽出物の重量比を用いることが先見されている。特に好ましい実施形態では、シュードモナス対プロタミノバクターの細胞又は細胞抽出物の重量比又は酵素活性比が、１０：１〜１：１０、特には８：１〜１：８、５：１〜１：５、３：１〜１：３、２：１〜１：２である、そして特には１：１である、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の製造方法が提供される。本発明のさらに好ましい実施形態では、シュードモナス対プロタミノバクターの重量又は酵素活性の比が１０：１〜１．１：１、８：１〜１．１：１、５：１〜１．１：１、３：１〜１．１：１、好ましくは２：１〜１．１：１である、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の製造方法が提供される。本発明のさらに好ましい実施形態では、シュードモナス対プロタミノバクターの重量又は酵素活性の比が１：１．１〜１：１０、１：１．１〜１：８、１：１．１〜１：５、１：１．１〜１：３、１：１．１〜１：２である、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の製造方法が提供される。上記によれば特に好ましい実施形態では、シュードモナス対プロタミノバクターの細胞又は細胞抽出物の重量又は酵素活性の比が１：１比とは異なる、特には、その比が１よりも大きい（これは＞１：１を意味する）又は＜１：１を意味する１よりも小さい方法が提供される。
【００３３】
本発明に従った方法は、好ましくは、連続プロセス、不連続プロセスとして、好ましくはバッチ式操作又は半連続方式で行われる。この方法は、好ましくは、固定床反応器中で行われ得る。この方法は、好ましくは、反応容器、バイオ発酵槽又はタンク中で、好ましくは機械撹拌下に行われる。
【００３４】
さらなる一実施形態では固定化細胞又は細胞抽出物がカラムに装填され、基質、すなわちスクロース含有溶液又は懸濁液がカラムの中に通されて、通過画分中にトレハルロース含有組成物が収穫される。好ましくは数個のカラムが、例えば回転ラック上で、平行で用いられ得る。
【００３５】
本発明は、特には前述の各方法のいずれか１つに従って取得される又は取得可能である、トレハルロース及びイソマルツロースを含んでいる、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）も提供するものである。特には、シュードモナス属微生物及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物の組み合わせの且つ同時の使用は、スクロース含有組成物を、好都合なこととして、特異的なトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）に変換する。天然の、本質的に非齲蝕性、血中低インスリンまた低血糖の甘味剤組成物である、この組成物は、本明細書に開示されている生理学的に好都合な特性をもたらすものでありまた同時に、イソマルツロース又はトレハルロースそれぞれを単独で含んでいる組成物では見られない、スクロース様時間的プロファイル及び風味プロファイルをもたらす。好ましくは、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、液体形態、特にはシロップの形態で用いられるものであり、これは、好都合なこととして、特に好ましい実施形態では、晶出しない。本発明のトレハルロース及びトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、水性媒体への良好な溶解度を有しており、これは特に広い範囲の用途を可能にするものである。
【００３６】
本発明の文脈では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、主にトレハルロース及びイソマルツロースを含み、並びに、特にはイソマルトース、イソメレジトース、ＤＰ（重合度）３以上炭水化物オリゴマーの、少量成分、及び場合によりグルコース、フルクトース及び／又はスクロースを含む、組成物である。本発明の一実施形態では、その少量成分の１つ、それ以上又はすべて、例えばイソマルトース、イソメレジトース及び／又はオリゴマーを除去することが先見される。一実施形態では、本発明の甘味剤組成物は、トレハルロース又はイソマルツロースそれぞれを単独で含む甘味剤組成物よりもよりスクロース様時間的プロファイル及び／又はスクロース様風味プロファイルを呈する。本明細書で使われている、用語「スクロース様特性」、「スクロース様味質」、「スクロース様甘味」、及び「スクロース様」は、同意語であって、常にスクロースに関するものと理解する。スクロース様特性にはスクロースの特性に似たあらゆる特性が包含され、限定するものではないが、最大応答、風味プロファイル、時間的プロファイル、適応挙動、口当たり、濃度／応答作用挙動、味・風味物質／甘味味質相互作用、分布様式選択性、及び温度効果が包含される。特性がよりスクロース様、イソマルツロース様又はトレハルロース様であるか否かは、スクロースと、このトレハルロース及び／又はイソマルツロースを含んでいる組成物の専門家官能パネル評価によって決定される。そのような評価は、トレハルロース及び／又はイソマルツロースを含んでいる組成物の特性と、スクロースを含んでいる組成物の特性の類似性を定量化するものである。
【００３７】
本発明の特に好ましい実施形態では、本発明に従って調製されるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、本明細書に説明されている好都合な生理学的特性、特には消費者の血液中に引き起こされる低インスリン応答を達成するのに相応しいトレハルロース含有量を含んでいる。特に好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、その組成物が、本明細書に説明されている好都合な生理学的特性、すなわち消費者の血液中に引き起こされる低インスリン応答を達成するのに相応しい含有量でトレハルロース及びイソマルツロースそれぞれを含んでいる。本発明の特に好ましい実施形態では本発明のヒト又は動物の消費用製品は、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を、本明細書に説明されている好都合な生理学的特性をその消費者身体中に達成するのに、特にはその消費者身体の血液中に所望の低インスリン応答を引き起こすのに相応しい量で含んでいる。
【００３８】
特に好ましい実施形態では本発明に従って調製されるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、２０〜９５重量％、好ましくは３０〜９０重量％、好ましくは２５〜７５重量％、好ましくは４０〜８０重量％及び特には３０〜７０重量％、好ましくは３５〜６５重量％、好ましくは４５〜７０重量％のトレハルロース（組成物の乾燥重量を基準）を含んでいる。最も好ましくは、トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、７０〜８０重量％、好ましくは６５〜７８重量％のトレハルロースを含んでいる。好ましくは、この組成物の残りの部分については、イソマルツロース、又は、場合によりイソマルツロース及び０．１〜１、２、３又は４重量％の前記少量成分が加えられて、合計１００％になる。
【００３９】
さらに好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、８、１０、２０、３０又は３５〜５０重量％、特には９〜４０重量％、好ましくは９〜３０重量％、好ましくは２２〜３５重量％、好ましくは２０〜４０重量％、好ましくは２０〜３０重量％、好ましくは１８〜２７重量％そして最も好ましくは２０〜２５重量％のイソマルツロース（組成物の乾燥重量を基準）含んでいる。好ましくは、この組成物の残りの部分については、トレハルロース、又は、場合によりトレハルロース及び０．１〜１、２、３又は４重量％の前記少量成分が加えられて、合計１００％になる。
【００４０】
本発明のさらに好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、０．０、好ましくは０．１〜２．０、０．１〜１．５、好ましくは０．１〜１．０、好ましくは０．１〜０．４重量％のグルコース含んでいる。
【００４１】
本発明のさらなる、好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、０．０、好ましくは０．１〜２．０、０．１〜１．５、好ましくは０．１〜１．０、好ましくは０．１〜０．４重量％のフルクトースを含んでいる。
【００４２】
本発明のさらなる、好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、０．０、好ましくは０．１〜２．０、０．１〜１．５、好ましくは０．１〜１．０、好ましくは０．１〜０．４重量％のイソマルトースを含んでいる。
【００４３】
本発明のさらなる、好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、０．０、好ましくは０．１〜２．０、０．１〜１．５、好ましくは０．１〜１．０、好ましくは０．１〜０．４重量％のイソメレジトースを含んでいる。
【００４４】
本発明のさらなる、好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、０．０、好ましくは０．１〜２．０、０．１〜１．５、好ましくは０．１〜１．０、好ましくは０．１〜０．４重量％の、好ましくはＤＰ≧３の炭水化物オリゴマーを含んでいる。
【００４５】
特に好ましい実施形態では本発明に従って調製されるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、７０〜８０重量％のトレハルロース及び２０〜３０重量％のイソマルツロースを含んでいる。特に好ましい実施形態ではこのトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、イソマルツロース及びトレハルロース以外の他の成分を含んでいない。もう一つの好ましい実施形態では本発明に従って調製されるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、７０〜８０重量％のトレハルロース及び２０〜３０重量％のイソマルツロース並びにイソマルトース、イソメレジトース及び炭水化物オリゴマーからなる群から選択される１つ又はそれ以上の炭水化物をその組成物の乾燥重量が加えて合計１００重量％になるまで、好ましくは１〜６、１〜５、１〜４そして最も好ましくは１〜３重量％（組成物の重量を基準）の合計で含んでいる。さらに好ましい実施形態ではトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、イソマルトース、イソメレジトース、グルコース、フルクトース、スクロース及び炭水化物オリゴマーも、好ましくは全体合計が加えて１００重量％（ＤＭ）になるまで、好ましくは１〜６、１〜５、１〜４そして最も好ましくは１〜３重量％（組成物の重量を基準）の合計で含んでいる。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態では、得られるトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）のその少量成分の１つ又はそれ以上、好ましくはスクロース、グルコース、フルクトース、イソマルトース、イソメレジトース及び炭水化物オリゴマーからなる群のうちの１つ又はそれ以上、最も好ましくはグルコース、フルクトース及びスクロースからなる群からの１つ又はそれ以上が除去されることが先見される。好ましい実施形態ではそのような除去は、濾過、クロマトグラフィー等の、当技術分野では公知の方法、例えばアニオン及び／又はカチオン交換クロマトグラフィー及び酵素（例えばインベルターゼ）又は触媒開裂によって行われ得る。好ましくは、活性炭及び／又はレジン処理が行われ得る。つまり、特に好ましい実施形態では、グルコース、フルクトース及びスクロースを含まず、完全に非齲蝕性であるそして特に低い血糖及び血中インスリンの指標をもたらすトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を製造することが可能である。
【００４７】
本発明のさらに好ましい実施形態で、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）及び少なくとも１種の添加剤を含む、ヒト又は動物の消費用製品が提供される。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態ではヒト又は動物の消費用製品は、０．０２〜３．０重量％、特には０．０２〜１．０重量％、好ましくは０．０２〜０．５重量％の少なくとも１種の添加剤、及び、加えて合計１００％になる量のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）、特には９７〜９９．９８重量％、好ましくは９９．０〜９９．９８重量％、特には９９．５〜９９．９８重量％のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含んでいる（それぞれ乾燥重量を基準）。好ましくは、製品中に、好ましくは０．０２〜３．０重量％の量で含有されるその少なくとも１種の添加剤は、（ａ）ステビア抽出物又はステビオルグリコシド、（ｂ）ステビア抽出物又はステビオルグリコシド、及び、ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つ、又は（ｃ）ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態ではこのヒト又は動物の消費用製品は、３〜９５重量％、好ましくは５〜９５重量％、好ましくは２０〜９５重量％、好ましくは５〜９０重量％、好ましくは１０〜９０重量％、好ましくは２０〜８０重量％、好ましくは７〜７０重量％、最も特定的には４０〜６０重量％の本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）、及び、５〜９７重量％、好ましくは５〜９５重量％、最も好ましくは５〜８０重量％の、好ましくは加えて合計１００重量％になる、少なくとも１種の添加剤を含んでいる（それぞれ製品全体の乾燥重量を基準）。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態ではその添加剤は強力甘味剤であって、好ましくはステビア抽出物又はステビオルグリコシドのうちの少なくとも１つ、特にはレバウジオシド、好ましくはレバウジオシドＡ（Ｒｅｂ  Ａ、ＣＡＳ  ｎｏ．５８５４３−１６−１、Ｃ４４Ｈ７０Ｏ２３）である。最も好ましくは、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、添加剤としてのＲｅｂ  Ａと一緒にヒト又は動物の消費用製品中に存在している。
【００５１】
例えば、特定の実施形態は、ステビオルグリコシドとの組み合わせも含み得る。
【００５２】
組み合わせられ得る又は組み合わせられ得ない適するステビオルグリコシドの非限定例としては、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ルブソシド、ステビオシド（ＣＡＳ  ｎｏ．５７８１７−８９−７、Ｃ３８Ｈ６０Ｏ１８）、又はステビオルビオシドが挙げられる。本発明の特に望ましい実施形態によれば、強力甘味剤の組み合わせには、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、ステビオシド、ステビオルビオシド、ズルコシドＡ又はこれらの組み合わせとの組み合わせにあるレバウジオシドＡが含まれる。化学命名法についてはFAO JECFA Monographs 4（2007)に公開されている68th JECFA meeting（2007)を参照のこと。
【００５３】
特に好ましい実施形態では本発明に従って強力甘味添加剤として用いられるステビオルグリコシドは、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＣ、ズルコシドＡ、ルブソシド、ステビオルビオシド及びレバウジオシドＢからなる群のうちの少なくとも１つである。
【００５４】
本発明の特に好ましい実施形態では本発明に用いられる強力甘味剤は、少なくとも９５重量％（甘味剤組成物の乾燥重量を基準）のステビオルグリコシドを含んでいる、Ｒｅｂ  Ａ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、ズルコシドＡ、ルブソシド、ステビオルビオシド及びステビオシドの混合物である。
【００５５】
本発明の特に好ましい実施形態では、レバウジオシドＡ含有量が甘味剤組成物乾燥重量の少なくとも９７重量％である、好ましくは＞９７重量％である、レバウジオシドＡを含む強力甘味剤が用いられる。
【００５６】
特に望ましい実施形態によれば、この強力甘味剤は、強力甘味剤混合物中にレバウジオシドＡが強力甘味剤混合物の全体重量を基準にして約７５〜約８５重量パーセントの範囲の量で存在している；ステビオシドが約１〜約６重量パーセントの範囲の量で存在している；レバウジオシドＢが約２〜約５重量パーセントの範囲の量で存在している；レバウジオシドＣが約３〜約８重量パーセントの範囲の量で存在している；及びレバウジオシドＦが約０．１〜約２重量パーセントの範囲の量で存在している；レバウジオシドＡ、ステビオシド、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、及びレバウジオシドＦの混合物を含んでいる。
【００５７】
特に好ましい実施形態によれば、用いられるレバウジオシドＡの純度は、約５０％〜約１００％；約７０％〜約１００％；約８０％〜約１００％；約９０％〜約１００％；約９５％〜約１００％；約９５％〜約９９．５％；約９６％〜約１００％；約９７％〜約１００％；約９８％〜約１００％；及び約９９％〜約１００％；であり得る。特に好ましい実施形態によれば、粗製レバウジオシドＡを結晶化させると、その実質的に純粋なレバウジオシドＡ組成物は、乾燥ベースで約９５重量％より高くて約１００重量％までの純度でレバウジオシドＡを含んでいる。他の好ましい実施形態では、実質的に純粋なレバウジオシドＡは、乾燥ベースで約９７重量％より高くて約１００重量％までの、乾燥ベースで約９８重量％より高くて約１００重量％までの、又は乾燥ベースで約９９重量％より高くて約１００重量％レバウジオシドＡまでのレバウジオシドＡ純度値を有する。
【００５８】
本発明のさらに好ましい実施形態では、その添加剤は、ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである。本発明によればそのようなラクトビオン酸系添加剤の使用は、なかでも甘味化合物の異味質苦味をマスク又は低減するというメリットをもたらしまた甘味風味付け増強効果をもたらす。
【００５９】
ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物は、このように、例えば苦味風味をマスクすることができる。ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物が、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）と、異味質苦味を呈することが知られているステビア抽出物又はステビオルグリコシド（例えばＲｅｂ  Ａ）との組み合わせで用いられる、本発明の好ましい一実施形態では、特にはステビア抽出物又はステビオルグリコシド（例えばレバウジオシドＡ）に起因している、苦味風味がマスクされる。
【００６０】
つまり、好ましくは、このトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、ステビア抽出物又はステビオルグリコシド、特にレバウジオシド、特にはレバウジオシドＡと、及び、もう１つの添加剤、特にはラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つと組み合わせられる。
【００６１】
好ましい実施形態ではヒト又は動物の消費用製品は、したがって、本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）及び少なくとも２種の添加剤、すなわちステビア抽出物又はステビオルグリコシド（特にはＲｅｂ  Ａ）及びラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン又はその塩もしくはこれらの混合物のうちの少なくとも１つを含んでいる。そのような製品は、従来型スクロース又はスクロース／グルコース系製品に似た甘味の強さを呈するが、本明細書に開示されている生理学的に好都合な特性を有しておりまた従来型人工甘味剤に起因していることが知られている望ましくない官能刺激つまり味質の特徴を示すこともない。特には、そのような製品は、スクロース様特性のプロファイル、特にはスクロース様味質及び甘味と組み合わせられた、高栄養的及びさらには治療的価値をもたらす。
【００６２】
ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物の風味増強及び／又はマスク効果の恩恵を受けるために好ましくは食品組成物に組み込まれ得るそれらの量は、広い範囲内で変わり得るものであって、その食品組成物全体を基準にして、好ましくは０．０１重量％〜９０重量％の範囲内にある。好ましくは、食品組成物に組み込まれるラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物の量は、その食品組成物の全体を基準にして、少なくとも０．０５、０．１０、０．２５、０．５０、又は１．００重量％である。好ましくは食品組成物に組み込まれるラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物の量は、その食品組成物の全体を基準にして、多くて９５、８５、７５、６５、５５、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、又は１０重量％である。濃縮物、卓上甘味料、さらには塩代替品に用いるのには５又は１０重量％〜９０重量％の量のラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物の用量が多くの場合適している。さらには、ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物のそのような高用量は、担体、例えば芳香の担体、としてのその使用と結び付けられ得ることを見出した。
【００６３】
ラクトビオン酸がそのようなものとして用いられる場合は、ラクトビオン酸−δ−ラクトンの形成を生じ得る。その場合は、ラクトビオン酸とラクトビオン酸−δ−ラクトンの比は、少なくとも部分的には、その特異的な使用の状態によって決まる。同様に、ラクトビオン酸−δ−ラクトンのそのようなものとしての使用は、ラクトビオン酸の形成を生じ得る。そのような形成及びそのあとのラクトビオン酸−δ−ラクトン又はラクトビオン酸の存在は、本発明の使用に因るものであると理解される。
【００６４】
ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン及びラクトビオン酸の塩の混合物が好ましい実施形態で用いられる場合はその重量比、一方の、ラクトビオン酸及びラクトビオン酸−δ−ラクトンの合計、対、他方の、その混合物中のラクトビオン酸の塩は、好ましくは１：１０〜１０：１にある。
【００６５】
本発明のさらに好ましい実施形態では、添加剤は、酸味剤、果実風味剤、甘味風味剤、旨味風味剤、塩気風味剤、強力甘味剤、糖アルコール、スクロマルト、リボース、タガトース、トレハロース、有機酸（例えばクエン酸酸又は乳酸）、果物抽出物、バルク甘味剤、ファイバー剤、プレバイオティック剤、増粘剤、ビタミン剤、ミネラル剤、防腐剤、果物調製物、食品着色剤、水やミルク等の液体媒体、及び治療剤からなる群から選択される。
【００６６】
本発明のさらに好ましい実施形態では添加剤は、クレアチン、ポリフェノール、Ｌ−カルニチン、オメガ−３ポリ不飽和脂肪酸、オメガ−６ポリ不飽和脂肪酸、緑茶抽出物、ＥＧＣＧ（エピガロカテキンガラート）、アミノ酸及びペプトプロ（peptopro）（これは部分消化カゼイン由来蛋白である）からなる群から選択される。
【００６７】
強力甘味剤としてのさらなる特に好ましい実施形態ではアスパルテーム（aspartame）、モネリン（monellin）、ブラッゼイン（brazzeine）、チクロ（cyclamate）、ネオテーム（neotame）、アセスルファムＫ（acesulfam K）、グリシルリシン（glycyrrhicine）、サッカリン（saccharine）、スクラロース（sucralose）、アリテーム（alitame）、ネオヘスペリジン−ジヒドロカルコン（neohesperidine-dihydrochalcone）、ステビオシド、Ｒｅｂ  Ａ又はタウマチン（thaumatin）が用いられ得る。
【００６８】
つまり、このトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、イソマルト、イソマルトＳＴ、イソマルトＧＳ、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトール、エリトリトール又はマルチトールからなる群から好ましくは選択される、少なくとも１つの糖アルコールである、添加剤とも組み合わせられ得る。
【００６９】
好ましい実施形態では、添加剤としてファイバー剤、好ましくは可溶ファイバー剤、特には難消化性デキストリン、難消化性マルトデキストリン（例えばヌトリオース）、ペクチン、カラギーナン、コメデンプン、コメシロップ、ポリデキストロース、オリゴサッカリド（例えばガラクトオリゴサッカリドやフルクトオリゴサッカリド）又はフルクタン（例えばイヌリン）が、用いられ得る。
【００７０】
本発明のさらに好ましい実施形態では、添加剤は、トリプトファン含有ペプチド組成物、特にはトリプトファン含有ペプチド又はトリプトファンそのものである。好ましい実施形態ではこのトリプトファン含有ペプチド組成物は、少なくとも２種の異なるトリプトファン含有ペプチド、好ましくは水可溶ペプチドを含んでいる。特に好ましい実施形態ではこのトリプトファン含有ペプチドは、ジ−又はトリ−ペプチドである。特に好ましい実施形態ではビタロースとこのトリプトファン含有ペプチド組成物とを含んでいる食品、飼料又は医薬製品は、０．５〜５重量％、好ましくは０．９〜３．５重量％（乾燥重量）のトリプトファン含有ペプチド組成物を含んでいる。本発明の特に好ましい実施形態ではそのような製品は、対象の精神的能力を改善させるのに特に有用である。
【００７１】
本発明は、また、食品、動物飼料又は医薬製品であるヒト及び動物の消費用製品を提供するものである。本発明による製品は、好ましくは、お菓子、お菓子内容物、ソフトキャラメル、ハードキャラメル、フォンダン、ヨーグルト、パン類、チューインガム、アイスクリーム、乳製品、ゼリー、飲料、果物ジュース濃縮物、果物調製物、ママレード又はスムージーである。好ましくは、この製品は、果物調製物、果物ジュース、ゼリー又はフォンダンである。飲料は、好ましくは、ビール、果物ジュース、ミルクドリンク、ソフトドリンク、アイソトニックドリンク、ハイパートニックドリンク、カカオドリンク、ライスドリンク、ダイズドリンク、さらにはアルコールフリー飲料、熱・ｐＨ安定性浸透圧飲料、エネルギードリンク又はスポーツドリンクであり得る。
【００７２】
本発明の好ましい実施形態では、ヒト又は動物の消費用製品は、飲料、特には少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０又は７０重量％の本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含んでいて場合により少なくとも１種の本発明添加剤を包含しており残りの部分が液体媒体、特には水やミルクのような、水性又は牛乳溶液である飲料、及び、特には多くて１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、７５又は８０重量％（それぞれ飲料の全体重量を基準）の本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含んでいて場合により少なくとも１種の本発明添加剤を包含しており残りの部分が液体媒体、特には水やミルクのような、水性又は牛乳溶液である飲料である。特に好ましい実施形態ではこの飲料は、１〜３０％、好ましくは２〜２５％、最も好ましくは３〜１５％（それぞれ飲料の全体重量を基準）の本発明トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含んでいて場合により少なくとも１種の本発明添加剤を包含しており残りの部分が液体媒体、特には水やミルクのような、水性又は牛乳溶液である。つまり、好ましい実施形態では飲料は、上記で特定した添加剤のうちの１つ又はそれ以上、特には（ａ）ステビア抽出物又はステビオルグリコシド、好ましくはＲｅｂ  Ａ、又は（ｂ）ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物、又は、（ａ）と（ｂ）の混合物又は（ａ）と（ｂ）の双方を含有し得る。本発明の特に好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）又は本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含んでいる製品は、そのトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）自体以外のさらなる甘味剤は含んでいない。本発明のさらに好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）又はそのような組成物を含有している製品は、ビタロースを意味するそのようなトレハルロース含有組成物中に含有されている糖以外の他の糖は含んでいない。
【００７３】
本発明のさらに好ましい実施形態では本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）又は本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を含有している製品は、強力甘味剤を含んでいないし、糖アルコールのような、砂糖代替剤を含んでいないし、その双方を含むこともない。本発明の特に好ましい実施形態ではトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）又はそのような組成物を含有している製品は、ソルビトールを含んでいないし、マンニトールを含んでいないし、ラクチトールを含んでいないし、マルチトールを含んでいないし、キシリトールを含んでいないし、エリトリトールを含んでいないし、これらのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はすべてを含むこともない。
【００７４】
本発明は、消費者にグルコースの持続放出、及び、低血液インスリン応答、特にはイソマルツロース単独によって引き起こされるよりも有意により低いインスリン応答を同時に引き起こすこと（本明細書では誘発とも呼ばれる）ができるように設計された、ヒト又は動物の消費用製品を調製するための本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）又はトレハルロース自体の使用にも関する。
【００７５】
本発明は、製品が医薬製品である、上記の使用にも関する。
【００７６】
本発明は、製品がそれを必要としている対象に適用され、それによって低インスリン応答及びグルコースの持続放出が引き起こされる、グルコース又はインスリン代謝関連病態又は疾患の治療方法に関するものである。
【００７７】
本発明は、グルコース又はインスリン関連病態又は疾患が、糖尿病、代謝症候群、耐糖能障害、インスリン抵抗、過脂肪、過体重、肥満、高脂血、ガン（特には結腸ガン）、肝疾患、インスリン感受性及び関節硬化からなる群から選択される、上記した方法に関するものである。
【００７８】
本発明は、このように、トレハルロースは、ヒト又は動物の消費者によって摂取されると、イソマルツロースに比較して増大したレベルの血糖をもたらし且つ同時に、イソマルツロースに比較して、血液中により低いレベルのインスリンを引き出すという思いも寄らぬ発見に基づくものでもある。つまり、イソマルツロース及びトレハルロースはいずれも低血糖の糖であるが、トレハルロースは、思いも寄らぬこととしてまた好都合なこととして、ヒト又は動物の身体中に摂取されるとイソマルツロースとは対照的により高いレベルの血糖をもたらし且つ同時に、イソマルツロースとは対照的に、より低いインスリン応答を引き起こす（すなわちより低い血中インスリンレベル）。つまり、トレハルロースは、特には、低ＧＩ（血糖インデックス）を有する低血糖作用物質であり、また、きわめて低いインスリン応答をもたらす、すなわち非常に低いＩＩ（インスリンインデックス）をもたらす。
【００７９】
本発明の文脈では「低インスリン応答」とは、トレハルロースによって引き起こされるものであって、イソマルツロースによって引き起こされるインスリン応答よりも低いインスリン応答である。本発明は、したがって、イソマルツロース及びトレハルロースはいずれも低ＧＩを有していて、トレハルロースは、特には、低インスリン応答、すなわちイソマルツロースのインスリン応答よりも低いインスリン応答をもたらすことを意味する、低インスリンインデックス（ＩＩ）を有しているという思いも寄らぬ教示を提供するものである。本発明は、したがって、上記で特定した発見を利用する、トレハルロース及びトレハルロース含有組成物の新規なまた好都合な方法及び用途の可能性を開くものである。特には本発明は、イソマルツロースのみを含んでいる食品とは対照的に、グルコースの持続放出をもたらし且つ同時にもっぱら低インスリン応答を引き起こすよう設計された、及び、そうするのに相応しい、特にはヒト及び動物の消費用の、製品の調製には、トレハルロース又はトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を用いるという教示を提供するものである。つまり、本発明に従う食品は、血液中のインスリンのレベルを低下させることを目標とするものであって、肥満、過体重、過脂肪、真性糖尿病さらには他のグルコース及びインスリン関連疾患又は病態を予防及び治療するのに助けとなる。
【００８０】
つまり、特定した量のトレハルロースを含んでいる本発明による組成物又は食品は、なかでもその血中低インスリンの指標により、公知の組成物、特にはもっぱら又は主にイソマルツロースを含有している組成物又は製品に比較して、思いも寄らぬほどに好都合なものである。つまり、本発明は、比較的に高量のグルコースを供給しそれによってその消費者の血液中に非常に低いインスリン応答をもたらす食品組成物又は治療剤を提供するために他の甘味剤、特にはスクロース、グルコース及び／又はイソマルツロースを、完全に又は部分的に置き換えるべく、組成物、食品又は治療方法に、あるトレハルロース含有量を特異的に用いて適応させるという技術的な教示を提供するものである。つまり、本発明は、本発明の特異的な教示を用いることによってあるレベルのエネルギー供給に対しては比較的により低い血中インスリン負荷がその消費者に負荷されるという、又は、逆に、ある血中インスリン負荷ではより高量のエネルギーがその消費者に供給され得るという好都合な教示を提供するものであり、これは、イソマルツロースとは対照的にきわめて低い血糖値及び比較的により高いグルコース供給をその消費者にもたらすというトレハルロースの特殊な特性を意味するものである。
【００８１】
本発明は、したがって、グルコース又はインスリン代謝関連病態又は疾患を治療するための製品、使用及び方法も提供するものであり、そこでは、本発明による製品が所望効果を達成するのに相応しい量でそれを必要としている対象、特にはヒト又は動物に適用されそれによって低インスリン応答及びグルコースの持続放出が引き起こされる。本発明の文脈ではグルコース又はインスリン代謝関連疾患は、糖尿病（特には真性糖尿病（ＩＩ型））、代謝症候群、耐糖能障害、インスリン抵抗、インスリン感受性、過脂肪、肥満、高脂血、ガン、肝疾患、結腸ガン及び過体重からなる群から選択される。本発明は、本発明のトレハルロース又はトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の使用は、身体的及び精神的能力を改善させ、脂肪の消費及び酸化を増大させ、血糖及びインスリンレベルをコントロールし、遊離の脂肪酸を動員し、グリコーゲンの消費を低下させるという教示も提供するものである。
【００８２】
本発明は、本発明のトレハルロース又はトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、その消費者の身体に、特にはその脳、神経、血液及び筋肉の細胞に、グルコースを、長時間また持続した時間、イソマルツロースによって供給されるよりもさらにより高レベルで、連続して供給することができ、他方では、同時に、特にはイソマルツロースに比較して、比較的に低いインスリン応答が引き起こされるという好都合な教示を提供するものである。このように、身体には長続きする、連続したエネルギー供給が供給されて、身体的及び精神的能力の低下が回避され、身体的及び精神的持久力、健康状態及び活動が増進される一方、他方ではグリコーゲン貯蔵の消費が低減され、体重コントロール及び体重低減が支持される。
【００８３】
本発明はまた歯の疾患（特にはプラーク形成）又は歯の欠陥（特には齲蝕）の予防及び治療方法に関するものであって、ここでは本発明の製品又は組成物が、所望の効果を達成するのに相応しい量でそれを必要としている対象に適用される。特には、本発明においては、本発明の製品又は組成物がそれを必要としている対象に適用されることにより、その消費者の口におけるプラーク形成が低減される。つまり、本発明は、歯の健康を増進させるための方法を提供するものである。
【００８４】
さらに好ましい実施形態では本発明は精神的及び／又は身体的能力、特には持久力を増進させるための方法に関し、ここでは本発明による製品又は組成物が所望の効果を達成するのに相応しい量でそれを必要としている対象に適用される。つまり、本発明は特に好ましい実施形態において持久力の改善を必要としている対象の持久力を改善するための方法を提供するものであり、それによって特に好ましい実施形態においてはグリコーゲンの消費が低減される。
【００８５】
さらに好ましい実施形態では本発明は脂肪酸化の改善を必要としている対象の脂肪酸化を改善、好ましくは増進させるための方法に関し、ここでは本発明による製品又は組成物が所望の効果を達成するのに相応しい量でそれを必要としている対象に適用される。さらには、本発明は体重の管理方法にも関し、ここでは本発明による組成物又は製品がそれを必要としている対象に適用される。
【００８６】
特に好ましい実施形態において、本発明は患者の呼吸商（ＲＱ＝消失したＣＯ２／消費したＯ２）を低下させるための方法を提供するものであり、ここでは本発明による製品又は組成物が所望の効果を達成するのに相応しい量で身体運動の前、その間、又はその後にそれを必要としている対象に適用される。
【００８７】
本発明の製品及び組成物を用いるという方法はすべて治療的な方法又は非治療的な方法であり得、例えば美容的な、精力関連の、運動競技の、又はライフスタイル指向の方法に関係し得る。
【００８８】
さらなる好ましい実施形態は、従属請求項の対象となっているものである。
【実施例】
【００８９】
次に本発明を以下の実施例及び同伴の図により説明する。
【００９０】
（実施例１：ビタロースの調製）
Ａ．プロタミノバクター生体触媒の調製
砂糖工場製濃厚ジュース（乾燥物質含有量６５％）８ｋｇ、トウモロコシ浸出液２ｋｇ、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４０．１ｋｇ及び蒸留水８９．９ｋｇからできている、必要ならｐＨ７．２に調整された滅菌栄養基質の１０ｍｌで株プロタミノバクター・ルブルム（ＣＢＳ５７４．７７）の継代培養から細胞を濯ぎ出す。この懸濁液を上記組成の栄養溶液２００ｍｌが入っている１リットルフラスコ中でのシェーカー前培養のための接種材として用いる。
【００９１】
２９℃で３０時間のインキュベーション時間の後、３０リットル小型発酵槽中の上記組成の栄養溶液１８リットルを、各場合、１０フラスコ（全体内容量２リットル）で接種し、１分間あたり２０リットルの空気及び３５０ｒｐｍの撹拌機速度で２９℃にて培養する。
【００９２】
微生物カウントが５×１０９微生物／ｍｌ以上に達した後、培養を停止し、遠心分離により細胞を発酵槽溶液から収穫し、２％濃度アルギン酸ナトリウム溶液に懸濁させ、この懸濁液を滴下で２％濃度塩化カルシウム溶液に加えることによって固定化する。
【００９３】
得られる固定化物ビーズを水で洗浄する。この生体触媒は、４℃で数週間貯蔵され得る。
【００９４】
Ｂ．シュードモナス生体触媒の調製
この生体触媒を調製するために、砂糖工場製濃厚ジュース（乾燥物質含有量＝６５％）８ｋｇ、トウモロコシ浸出液２ｋｇ、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４０．１ｋｇ及び蒸留水８９．９ｋｇからできている、必要ならｐＨ７．２に調整された滅菌栄養基質の１０ｍｌで株シュードモナス・メソアシドフィラＭＸ−４５（ＦＥＲＭ  ＢＰ３６１９）の継代培養から細胞を濯ぎ出した。この懸濁液を前記栄養溶液２００ｍｌが入っている１リットルフラスコ中でのシェーカー前培養のための接種材として用いた。
【００９５】
２９℃で３０時間のインキュベーションの後、３０リットル小型発酵槽中の上記組成の栄養溶液１８リットルを、各場合、１０フラスコ（全体内容量２リットル）で接種し、１分間あたり２０リットルの空気及び３５０ｒｐｍの撹拌機速度で２９℃にて培養した。
【００９６】
微生物カウントが５×１０９微生物／ｍｌ以上に達した後、培養を停止し、遠心分離により細胞を発酵槽溶液から収穫し、２％濃度アルギン酸ナトリウム溶液に懸濁させ、この懸濁液を滴下で２％濃度塩化カルシウム溶液に加えることによって固定化した。得られた固定化物ビーズを水で洗浄した。この生体触媒は、４℃で数週間貯蔵され得る。
【００９７】
Ｃ．ビタロースの調製
Ａ）のようにして得られた固定化細胞をＢ）のようにして得られた固定化細胞と１：１重量比で混合し、温度自動調節であり得る及び２５〜３０℃に温度自動調節されているカラム反応器に一緒に充填し、そしてＤＭ（乾燥物質）含有量が３５〜４５％のスクロース溶液を連続的に流し通す。この場合における流量は、用いたスクロースの少なくとも９７％が所望のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）に変換されるように調整する。
【００９８】
カラム反応器から出て来るトレハルロース含有組成物のＨＰＬＣ分析は、以下の組成：
フルクトース            ＤＭの１．０％
グルコース              ＤＭの１．０％
スクロース              ＤＭの１．０％
イソマルツロース        ＤＭの２２．９％
トレハルロース          ＤＭの７３．３％
イソマルトース          ＤＭの０．５％
イソメレジトース        ＤＭの０．１％
オリゴマー（ＤＰ＞３）  ＤＭの０．２％
を示した。
【００９９】
Ｄ．残存スクロースの場合による除去
残存スクロースを、場合により、このようにして得られたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）から、以下のようにしてそれをＨ＋イオンが負荷された強酸性カチオン交換材中で、又は、カラム反応器中の適する触媒で処理することによって除去した。
【０１００】
ｉ）強酸性カチオン交換材での残存スクロースの除去
１００ｃｍ３の強酸性カチオン交換体（例えばＬｅｗａｔｉｔ（登録商標）ＯＣ１０５２）を６０℃に温度自動調節された適するガラスカラムに充填し、公知の方法によりＨＣｌで再生することによってＨ＋イオンを負荷した。
【０１０１】
実施例１Ｃで得られたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）をこのようにして準備されたカチオン交換体カラムに１００ｃｍ３・ｈ−１の流量でポンプ送りした。カラム出口で得られた生成物は、以下の組成（ＨＰＬＣ）：
フルクトース            ＤＭの１．５％
グルコース              ＤＭの１．５％
スクロース              ＤＭの０．０％
イソマルツロース        ＤＭの２２．９％
トレハルロース          ＤＭの７３．３％
イソマルトース          ＤＭの０．５％
イソメレジトース        ＤＭの０．１％
オリゴマー（ＤＰ＞３）  ＤＭの０．２％
を有していた。
【０１０２】
ｉｉ）別法として、残存スクロースの除去は、固定化インベルターゼ（例えばＮＯＶＯ  ＮＯＲＤＩＳＫ  Ａ／Ｓ  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ製ＳＰ３６２）を用いて行われた。３３ｃｍ３の床体積に対応する１１ｇのそのような固定化酵素を６０℃に温度自動調節された適するガラスカラムに充填した。
【０１０３】
実施例１Ｃで得られたトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）をこのカラムに２１０ｃｍ３・ｈ−１の流量で連続的にポンプ送りした。
【０１０４】
この「インベルターゼカラム」から出て来る生成物のＨＰＬＣ分析は、先の、セクション１Ｄのｉ）に示されている組成を示した。
【０１０５】
いずれのケースでも、残存スクロースは完全にグルコースとフルクトースに開裂された。これらの単糖の含有量は対応してより高かったがトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）の他の成分は変わっていなかった。
【０１０６】
完全に非齲蝕性の甘味剤が得られるように、グルコース並びにフルクトースを除去することも可能である。
【０１０７】
（実施例２：シュードモナスとプロタミノバクターのいくつかの比でのスクロースの変換）
この実施例では、生成物組成に対するシュードモナス・メソアシドフィラＭＸ−４５（ＦＥＲＭ  ＢＰ３６１９）とプロタミノバクター・ルブルムＣＢＳ５７４．７７のいくつかの比の影響を解析した。
【０１０８】
水性培地の形態にあるスクロース含有組成物を調製するために１．５８ｇ／ｌ酢酸カルシウム（酢酸で５．５のｐＨに調整）の水性溶液を調製することによって先ず「溶液Ａ」を調製した。そのあと、溶液Ａを合計１ｌになるまで５００ｇスクロースに対応している１．４６０２ｍｏｌ／ｌスクロースに加えることによって「溶液Ｂ」を調製した。
【０１０９】
双方の微生物株、すなわち、Ｐ．メソアシドフィラＭＸ−４５及びＰ．ルブルムＣＢＳ５７４．７７を実施例１Ａ及び実施例１Ｂに特定されているようにして別々に培養した。それぞれの微生物カウントが５×１０９微生物／ｍｌ以上に達した後、双方の微生物の培養を停止し、遠心分離により細胞を収穫して２％濃度アルギン酸ナトリウム溶液に一緒に貯留し、この懸濁液を滴下で２％濃度塩化カルシウム溶液に加えることにより、その結果、一緒に固定化した。これによって調製されるアルギナートビーズ上へのこの双方の微生物株の組み合わせに採用した重量比は下記から明らかである、すなわちシュードモナス対プロタミノバクターの１：２、１：１及び２：１の比である。
【０１１０】
指定されているようにして調製した生体触媒の５ｇを５０ｍｌの溶液Ａと混合し、室温に３時間保持した。
【０１１１】
上記で調製した生体触媒の懸濁液を撹拌反応器中で２００ｍｌの先に調製したスクロース含有溶液Ｂと２０℃で混合することによりスクロースの変換を開始させた。
【０１１２】
実験の第１のセットでは、担体上の微生物の全負荷のうちの３３％がＰ．・メソアシドフィラＭＸ−４５であり、６７％がＰ．ルブルムである生体触媒が用いられた（全微生物負荷の重量をベースにした％）。実験の第２のセットでは全微生物負荷の５０％がＭＸ−４５であり、５０％がＰ．ルブルムであった（全微生物負荷の重量をベースにした％）。実験の第３のセットでは微生物の全負荷の６７％がＭＸ−４５であり、３３％がＰ．ルブルムであった（全微生物負荷の重量をベース）。
【０１１３】
サンプルを５、１０、１５、２０、２５、３０、３５及び６０分、３時間さらには２０．５時間後に採取した。採取したサンプルを調理し、濾過し、１０°Ｂｘ（ブリックス、１００ｇ中１０ｇ溶液）の濃度に希釈し、ＨＰＬＣにより分析した。
【０１１４】
結果を図１〜６に示す。
【０１１５】
図１〜６から、本発明の方法は、スクロースのトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）への完全又はほぼ完全変換をもたらすことが見て取れる。
【０１１６】
特には固定化された２つの異なる微生物株細胞間の特異的な重量比に応じてトレハルロース対イソマルツロースのさまざまな比が得られる得ることが見て取れる。特には、Ｐ．・メソアシドフィラがより多く用いられると、その生成物組成中のトレハルロース含有量はより高くなって、Ｐ．ルブルムの割合がより高くなると、得られる生成物中のイソマルツロース含有量はより高くなる。特には、このデータは、双方の微生物及び双方の酵素栄養を同時に一緒に用いて変換させることが可能であることまたそうすることがきわめて好都合であること、及び、全体的な変換に対しては負の影響が生じないことを示している。
【０１１７】
（実施例３：いくつかのゼリーの調製）
次に、甘味剤としてスクロースとグルコースの混合物を用いたゼリー用の４つのレシピ、及び、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を用いた４つのレシピを調製する。調製されたゼリーを貯蔵及びＴＰＡ分析で比較試験した。
【０１１８】
（３Ａ：レシピ）
【表１】
2015109841.tif 000002
説明：
サンプル番号１〜４：スクロース／グルコース組成物
サンプル番号５〜８：本発明のビタロース（トレハルロース含有組成物）
サンプル５〜８の組成：
【表２】
2015109841.tif 000003
【０１１９】
（３Ｂ：ＴＰＡ分析）
上記の、実施例３Ａで調製したサンプルを比較試験で詳細に分析した、すなわち、いくつかの増粘剤（ペクチン、ゼラチン、スターチ及び／又はアラビアガム）を含有しているスクロース／グルコース組成物をトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）に対して比較した。
【０１２０】
ｉ）ＴＰＡ分析（硬度、稠度）
ｉｉ）密閉ＰＥ（ポリエチレン）バッグに２５℃で８週間貯蔵
ＴＰＡ試験及び貯蔵挙動についての分析の時間間隔は、Ｏ（貯蔵の開始）、１、２、４、８週間後に行われた。
【０１２１】
すべてのゼリーレシピにおいて従来型のスクロースとグルコースの甘味剤組み合わせは、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）で置き換えられ得ると考える。トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）を用いての調製は、まさしく、スクロース／グルコース組成物を用いての調製と同じであった。調製の間中、特にはゼリーを調理しているとき、トレハルロースの分解は、まったく観察されなかった。
【０１２２】
図７〜１４に示されている結果から明らかなように、硬度及び稠度のＴＰＡ測定は、本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）から作られたゼリーは、従来型のスクロース／グルコースベースの製品に等しい又は非常に似ていることを示している。貯蔵挙動も比肩し得るものである。冷蔵庫温度（これは７℃を意味する）での貯蔵は、特に良好な安定性と長期間のシェルフライフを示した。
【０１２３】
つまり、これらの結果は、調製並びに製品特性のいずれの点においても、本トレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）は、ゼリーでは、従来用いられているスクロース／グルコース甘味剤の代わりに用いられ得ることを示しているが、加えて、本発明組成物は、本明細書で言及されているメリット、すなわち血糖及び血中インスリン挙動に関しての特異的な生理学的及び栄養学的なメリットをもたらす。
【０１２４】
（実施例４：本発明のトレハルロース含有組成物（これはビタロースを意味する）でのいくつかの製品の調製）
４．１）シリアルバー
【表３】
2015109841.tif 000004
＊  ここでは「トレハルロース」とは９０：１０トレハルロース／イソマルツロース混合物のことをいう。
【０１２５】
４．２）ハードキャンディー（単位は重量％）
【表４】
2015109841.tif 000005
ｅｘ：実施例
＃：Ｒｅｂ  Ａ含有量は全Ｒｅｂ  Ａ甘味剤乾燥質量の＞９７重量％
＊  Ａ：のど飴
＊  Ｂ：レモンキャンディ
【０１２６】
４．３）アイスクリーム（単位は重量％）
【表５】
2015109841.tif 000006
＃：全Ｒｅｂ  Ａ甘味剤の乾燥質量の≧９５重量％のＲｅｂ  Ａ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、ズルコシドＡ、ステビオシド、ルブソシド及びステビオルビオシド
【０１２７】
４．４）オレンジ缶詰（単位は重量％）
【表６】
2015109841.tif 000007
【０１２８】
４．５）ニンジンジュース（単位は重量％）
【表７】
2015109841.tif 000008
【０１２９】
４．６）フォンダン（単位は重量％）
【表８】
2015109841.tif 000009
【０１３０】
（実施例５：甘味の強さ）
相対的な甘味の強さの関係を明らかにするために、以下の溶液群を、各場合、１５人の試験者による３点比較試験で互いを比較した。
【０１３１】
ａ）２つの７％濃度スクロース溶液対実施例１Ｄによる甘味剤の１５．５％濃度溶液。 
ｂ）２つの７％濃度スクロース溶液対実施例１Ｄによる甘味剤の１７．５％濃度溶液。 
ｃ）２つの７％濃度スクロース溶液対実施例１Ｄによる甘味剤の１８．５％濃度溶液。
【０１３２】
試験ａ）では、６人がこの甘味剤を識別した（各スクロース溶液からは統計的に立証される差はなかった）。
【０１３３】
試験ｂ）では、１２人が本甘味剤を「より甘い」と識別した（ｐ＝０．９９で統計的に立証された差）。
【０１３４】
試験ｃ）では、同じく１２人が本甘味剤を「より甘い」と識別した（ｐ＝０．９９で統計的に立証された差）。
【０１３５】
本発明による甘味剤の甘味の強さは、スクロースのそれの約半分である。甘味の強さを増大させるためには、この甘味剤は、例えばＲｅｂ  Ａ及びラクトビオン酸と混ぜ合わせられ得る。
【０１３６】
（実施例６：アイスクリーム）
実施例１Ｄの甘味剤でアイスクリームを製造するために、２２．１ｋｇの生クリーム（乾燥質量中４０％脂）、５８．１ｋｇの全乳（ＤＭ中３．７％脂）及び４．５ｋｇのスキムミルクを１５ｋｇの実施例１Ｄの甘味剤及び０．３ｋｇの安定剤と混合し、ホモジナイズし、殺菌した。
【０１３７】
殺菌した後、５３ｇの微細粉砕フェニルアラニルアスパルタートをこのアイス組成物に加え、撹拌し、ホイップし、凍らせた。この製品は、１５ｋｇの砂糖で製造したアイスクリームと同じ甘さ及び同じ味質を有する。フルーツアイスクリームの場合では、この甘味剤はフルーツの味質をかなりよく引き出すので、Ｒｅｂ  Ａ等の、さらなる甘味剤なしで済ますのが特に好都合であり得る。
【０１３８】
（実施例７：ストローベリージャム）
低カロリーストローベリージャムを製造するために、１ｋｇの刻みイチゴを１ｋｇの実施例１Ｃの甘味剤並びに８ｇの中度エステル化ペクチン及び７ｇの酒石酸と３分間一緒にボイルし、準備したビンにビン詰めにした。
【０１３９】
スクロースで製造されたジャムとの比較では稠度の差は見られず、その甘さはいくぶん低かったが、これはそのイチゴの味質が検出可能により強かったことで相殺された。６ヶ月の期間の貯蔵の後、この甘味剤は、結晶化する傾向を見せなかった。
【０１４０】
（実施例８）
血糖応答（血糖インデックス、ＧＩ）及びインスリン応答（血中インスリンの指標、ＩＩ）に対するトレハルロースの影響をイソマルツロースとの対比で調査した。
【０１４１】
この解析は、男女１０人の健常な対象に対して無作為クロスオーバー解析として行われた。
【０１４２】
イソマルツロース又はトレハルロースを消費（それぞれ２５ｇ炭水化物及び２５０ｍｌ水）した後の０〜１８０分の間隔における血糖プロファイル及び血液インスリンプロファイルを次の時間点０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０及び１８０分で取った。
【０１４３】
結果を図１５と図１６に示す。トレハルロースの血糖レベルについてのグラフが示すように、トレハルロースは、増大したまたより長く持続するグルコースの供給（ＧＩ）をもたらすが、これは、イソマルツロースによってもたらされる供給よりもより長くてまた合計でもより多い供給である。
【０１４４】
イソマルツロースのインスリン応答（ＩＩ）は、イソマルツロースの血糖応答から予測されるように、血糖応答に平行して進む。それにひきかえ、トレハルロースは、イソマルツロースよりも有意により低いインスリン応答（ＩＩ）を示し、また、トレハルロースの血糖応答から予測されているのとは違って有意により低い血液インスリンレベルを示している。つまり、トレハルロースは、イソマルツロースよりもより長い、より持続した、より大きい血糖レベルをもたらし、同時に、思いも寄らぬこととして、イソマルツロースに比較しては有意により低い、さらにはトレハルロース自体の血糖プロファイルを考慮して予測されるよりもより低いインスリン応答をもたらす。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年1月15日(2015.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
20〜78重量％のトレハルロース含量、20〜50重量％のイソマルツロース含量及び0.1〜2.0重量％のグルコース(それぞれ乾燥質量を基準)を含む、トレハルロース含有組成物を含むシロップであって、晶出しない、前記シロップ。
【請求項２】
65〜78重量％のトレハルロース(乾燥質量基準)を含む、請求項１記載のトレハルロース含有組成物を含むシロップ。
【請求項３】
0.1〜2.0重量％のフルクトースを含む、請求項１又は２記載のトレハルロース含有組成物を含むシロップ。
【請求項４】
0.1〜0.4重量％のグルコースを含む、請求項１〜３のいずれか１項記載のトレハルロース含有組成物を含むシロップ。
【請求項５】
0.1〜0.4重量％のフルクトースを含む、請求項１〜３のいずれか１項記載のトレハルロース含有組成物を含むシロップ。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載のトレハルロース含有組成物を含むシロップ及び少なくとも1種の添加剤を含む、ヒト又は動物の消費用製品。
【請求項７】
製品が、3〜95重量％のトレハルロース含有組成物及び5〜97重量％の少なくとも1種の添加剤を含む(それぞれ乾燥質量を基準)、請求項６記載の製品。
【請求項８】
添加剤が、ステビア抽出物及びステビオルグリコシドのうちの少なくとも1つである、請求項６又は７記載の製品。
【請求項９】
添加剤が、酸味剤、果実風味剤、甘味風味剤、旨味風味剤、塩気風味剤、強力甘味剤、糖アルコール、スクロマルト、リボース、タガトース、トレハロース、有機酸、果物抽出物、バルク甘味剤、ファイバー剤、プレバイオティック剤、増粘剤、ビタミン剤、ミネラル剤、防腐剤、食品着色剤及び治療剤から成る群より選択されるか、又は、添加剤が、クレアチン、ポリフェノール、L-カルニチン、オメガ-3ポリ不飽和脂肪酸、オメガ-6ポリ不飽和脂肪酸、緑茶抽出物、EGCG(エピガロカテキンガラート)、アミノ酸及びペプトプロから成る群より選択される、請求項６〜８のいずれか１項記載の製品。
【請求項１０】
ゼリー、飲料、果物調製物、濃縮果物ジュース、果物ジュース又はスムージーである、請求項６〜９のいずれか１項記載の製品。
【請求項１１】
グルコースを持続して放出し且つ同時に低インスリン応答を引き起こすことができるように設計された、ヒト又は動物の消費用製品を調製するための請求項１〜１０のいずれか１項記載のトレハルロース含有組成物若しくは製品又はトレハルロースの使用。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項記載のシロップ又は製品を含む、グルコース又はインスリン代謝関連病態又は疾患を治療するための医薬組成物。
【請求項１３】
インスリン関連疾患が、糖尿病、代謝症候群、耐糖能障害、インスリン抵抗、過脂肪、過体重、肥満、高脂血、癌、肝疾患、インスリン感受性及び関節硬化から成る群より選択される、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
(a)スクロース含有組成物を適切な条件下でシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物と接触させ、(b)トレハルロース含有組成物を生成させる、請求項１〜５のいずれか１項記載のトレハルロース含有組成物の調製方法。
【請求項１５】
スクロース含有組成物が、水性媒体に溶解又は懸濁されている、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
細胞又は細胞抽出物が、少なくとも1つの担体に固定化されている、請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】
両方の属の微生物の細胞又は細胞抽出物が、同一の担体に共固定化されている、請求項１４〜１６のいずれか１項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
さらなる好ましい実施形態は、従属請求項の対象となっているものである。
以下、本発明の実施形態を示す。
（１）（ａ）スクロース含有組成物を適切な条件下でシュードモナス属及びプロタミノバクター属微生物の細胞又は細胞抽出物と接触させ、（ｂ）トレハルロース含有組成物を生成させる、トレハルロース含有組成物の調製方法。
（２）スクロース含有組成物が、水性媒体に溶解又は懸濁されている、（１）に記載の方法。
（３）細胞又は細胞抽出物が、少なくとも１つの担体に固定化されている、（１）又は（２）に記載の方法。
（４）両方の属の微生物の細胞又は細胞抽出物が、同一の担体に共固定化されている、（１）〜（３）のいずれか１に記載の方法。
（５）（１）〜（４）のいずれか１に記載の方法に従って調製されたビタロース（トレハルロース含有組成物）。
（６）２０〜９５重量％（乾燥質量基準）のトレハルロース含量を含んでいる、（５）に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）。
（７）８〜５０重量％（乾燥質量基準）のイソマルツロース含量を含んでいる、（５）又は（６）に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）。
（８）（５）〜（７）のいずれか１に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）及び少なくとも１種の添加剤を含んでいる、ヒト又は動物の消費用製品。
（９）製品が、０．０２〜３．０重量％の少なくとも１種の添加剤及び９７．０〜９９．９８重量％のビタロース（トレハルロース含有組成物）を含んでいる（それぞれ乾燥質量を基準）、（８）に記載の製品。
（１０）製品が、３〜９５重量％のビタロース（トレハルロース含有組成物）及び５〜９７重量％の少なくとも１種の添加剤を含んでいる（それぞれ乾燥質量を基準）、（８）に記載の製品。
（１１）添加剤が、ステビア抽出物及びステビオルグリコシドのうちの少なくとも一つである、（８）又は（９）に記載の製品。
（１２）添加剤が、ラクトビオン酸、ラクトビオン酸−δ−ラクトン、ラクトビオン酸の塩又はこれらの混合物である、（８）〜（１１）のいずれか１に記載の製品。
（１３）添加剤が、酸味剤、果実風味剤、甘味風味剤、旨味風味剤、塩気風味剤、強力甘味剤、糖アルコール、スクロマルト、リボース、タガトース、トレハロース、有機酸、果物抽出物、バルク甘味剤、ファイバー剤、プレバイオティック剤、増粘剤、ビタミン剤、ミネラル剤、防腐剤、食品着色剤及び治療剤からなる群から選択される、（８）〜（１２）のいずれか１に記載の製品。
（１４）添加剤が、クレアチン、ポリフェノール、Ｌ−カルニチン、オメガ−３ポリ不飽和脂肪酸、オメガ−６ポリ不飽和脂肪酸、緑茶抽出物、ＥＧＣＧ（エピガロカテキンガラート）、アミノ酸及びペプトプロからなる群から選択される、（８）〜（１３）のいずれか１に記載の製品。
（１５）添加剤が、トリプトファン含有ペプチド組成物である、（８）〜（１４）のいずれか１に記載の製品。
（１６）食品、動物飼料又は医薬製品である、（８）〜（１５）のいずれか１に記載の製品。
（１７）ゼリー、飲料、果物調製物、濃縮果物ジュース、果物ジュース又はスムージーである、（８）〜（１６）のいずれか１に記載の製品。
（１８）グルコースを持続して放出し且つ同時に低インスリン応答を引き起こすことができるように設計された、ヒト又は動物の消費用製品を調製するための（５）〜（１７）のいずれか１に記載のビタロース（トレハルロース含有組成物）もしくは製品又はトレハルロースの使用。
（１９）製品が、医薬製品である、（１８）に記載の使用。
（２０）（５）〜（１７）のいずれか１に記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用し、それによって低インスリン応答及び持続したグルコースの放出を引き起こさせる、グルコース又はインスリン代謝関連病態又は疾患の治療方法。
（２１）インスリン関連疾患が、糖尿病、代謝症候群、耐糖能障害、インスリン抵抗、過脂肪、過体重、肥満、高脂血、ガン、肝疾患、インスリン感受性及び関節硬化からなる群から選択される、（２０）に記載の方法。
（２２）（５）〜（１７）のいずれか１に記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象における歯の疾患の予防及び治療方法。
（２３）（５）〜（１７）のいずれか１に記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、消費者の口中におけるプラーク形成を低減させるための、好ましくは（２２）に記載の方法。
（２４）（５）〜（１７）のいずれか１に記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象の精神的及び／又は身体的能力を改善させるための方法。
（２５）（５）〜（１７）のいずれか１に記載の組成物又は製品を、それを必要としている対象に適切な量で適用する、対象の体重を管理するための方法。
【外国語明細書】
2015109841000001.pdf