(57)【要約】【課題】純度の高いデルタ−シクロデキストリンを効率的に製造する、デルタ−シクロデキストリンの製造方法の提供を課題とする。【解決手段】シクロデキストリン混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理して前記混合物からデルタ−シクロデキストリンを精製する、デルタ−シクロデキストリンの製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロデキストリン混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理して前記混合物からデルタ−シクロデキストリンを精製する、デルタ−シクロデキストリンの製造方法。
【請求項２】
前記シリカゲルに吸着したデルタ−シクロデキストリンをアルコール溶液で溶出する、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記シクロデキストリン混合物が、沈殿法によりアルファ−、ベータ−及びガンマ−シクロデキストリンを除去したシクロデキストリン混合物である、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
前記炭素数６のアルキルシリル基がn-ヘキシルシリル基である、請求項１〜３のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項５】
ゲルろ過クロマトグラフィー分離を基本モードとする水系充填カラムを用いてデルタ−シクロデキストリンをさらに精製する、請求項１〜４のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項６】
コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸及びこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種のコール酸化合物を使用してシクロデキストリン混合物を製造する、請求項１〜５のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項７】
コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸及びこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種のコール酸化合物の存在下で、アルファ−シクロデキストリンを基質とし、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理することでデルタ−シクロデキストリンを製造する、デルタ−シクロデキストリンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デルタ−シクロデキストリン（本明細書において、「δ-シクロデキストリン」、又は「δ-CD」ともいう）の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリン（本明細書において、単に「CD」ともいう）は数分子のD-グルコースがα-グルコシド結合によって結合し環状構造をとった環状オリゴ糖の一種である。CDとしては、グルコースが５個以上結合したものが知られている。一般的なものとして、D-グルコースが６個結合しているものがアルファ−シクロデキストリン（本明細書において、「α-シクロデキストリン」又は「α-CD」ともいう）、D-グルコースが７個結合しているものがベータ-シクロデキストリン（本明細書において、「β-シクロデキストリン」又は「β-CD」ともいう）、D-グルコースが８個結合しているものがガンマ−シクロデキストリン（本明細書において、「γ-シクロデキストリン」又は「γ-CD」ともいう）、D-グルコースが９個結合しているものがデルタ−シクロデキストリン（本明細書において、「δ-シクロデキストリン」又は「δ-CD」ともいう）、などが知られている。また、D-グルコースが９個以上結合しているCDは、大環状シクロデキストリンと呼ばれている（本明細書において、大環状シクロデキストリンはCDnとも表記し、nはシクロデキストリン環中のD-グルコースの数を示す。例えば、δ-CDはCD9とも表記する）。
CDは中央に空洞を有するため、CDは中央の空洞に疎水性物質を包接することができる。また、CDを構成するD-グルコースの数によって中央の空洞の大きさが異なるため、CDの種類によって包接可能な疎水性物質の種類が異なる。例えば、δ-CDは、中央の空洞にフラーレンＣ60、フラーレンＣ70などを包接することができる。そのため、δ-CDはフラーレンの可溶化、あるいは薬物送達システムなどに利用できる可能性がある。
【０００３】
これまでに提案されているδ-CDの製造方法としては、デンプンなどのα-1,4-グルカンやα-CDを基質とし、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理することで得られるα-CD、β-CD、γ-CD、δ-CDなどのCD混合物から、δ-CDを調製する方法が知られている（例えば、非特許文献１参照）。しかし、CD混合物からδ-CDを製造する過程においては、他種のCDの種類が混在して生成されるために、δ-CDのみを分離することが必要となる。非特許文献１に記載の方法では、δ-CDのみを効率良く分離することが難しく、製造コストが高くなるという問題がある。
【０００４】
一方、複数の化学物質の混合物から特定の物質を分離するために、シリカゲルが広く用いられている。例えば、特許文献１には、アルキルシリル基で化学修飾を施したシリカゲルに特定の化学物質を吸着させることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平７−２３２０６０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Yoon  S.-H．et  al.，Carbohydrate  Research，2002，Vol．337，No．21，pp．2245-2254
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、純度の高いδ-CDを効率的に製造する、δ-CDの製造方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った。その結果、δ-CDなどの大環状シクロデキストリンの他に、α-CD、β-CD、γ-CDなどを含むCD混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理することで、純度の高いδ-CDが得られることを見いだした。本発明はこれらの知見に基づくものである。
【０００９】
本発明によれば、以下の手段が提供される。
（１）CD混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理して前記混合物からδ-CDを精製する、δ-CDの製造方法。
（２）前記シリカゲルに吸着したδ-CDをアルコール溶液で溶出する、前記（１）項記載の製造方法。
（３）前記CD混合物が、沈殿法によりα-、β-及びγ-CDを除去したシクロデキストリン混合物である、前記（１）又は（２）項記載の製造方法。
（４）前記炭素数６以上のアルキルシリル基がn-ヘキシルシリル基である、前記（１）〜（３）のいずれか１項記載の製造方法。
（５）ゲルろ過クロマトグラフィー分離を基本モードとする水系充填カラムを用いてδ-CDをさらに精製する、前記（１）〜（４）のいずれか１項記載の製造方法。
（６）コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸及びこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種を使用してシクロデキストリン混合物を製造する、前記（１）〜（５）のいずれか１項記載の製造方法。
（７）コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸及びこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の存在下で、α-CDを基質とし、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理することでδ-CDを製造する、δ-CDの製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、純度の高いδ-CDを効率的に製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図２】図２は、炭素数８のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図３】図３は、炭素数１８のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図４】図４は、炭素数０のシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図５】図５は、炭素数２のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図６】図６は、炭素数４のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて得られた水溶出液及び50％メタノール溶出液のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図７】図７は、実施例で得られた50％メタノール溶出液についてのδ-CD、CD11及びCD12のトラップ率を示す図である。
【図８】図８（ａ）は、実施例１で得られた溶出液２についてHPLC分析を行った結果を示す図である。図８（ｂ）は、オーセンテイックな標準δ-CDについてHPLC分析を行った結果を示す図である。
【図９】図９の上段は、炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルカラムを用いて50％メタノール溶出液の凍結乾燥体のMALDI-TOF  MSスペクトルを示す図である。中段は、50％メタノール溶出液の凍結乾燥体を、RI検出器を付したGPCカラムモードでのHPLC分離で得られたδ-CDのピークの確認を示す図である。下段は同じく50％メタノール溶出液の凍結乾燥体を、RI検出器を付したGPCカラムモードでのHPLC分離で得られたCD10のピークの確認を示す図である。
【図１０】図１０は、実施例で得られたδ-CD  richサンプルについてHPLC分析を行った結果を示す図である。
【図１１】図１１の上段は実施例で得られたδ-CD  pureサンプルのHPAEC-PAD分析結果を示す図である。中段は実施例で得られたδ-CD  richサンプルのHPAEC-PAD分析結果を示す図である。下段は実施例で得られたCD混合物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図１２】図１２の上段はタウロコール酸ナトリウム塩存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。中段はアダマンタンカルボン酸存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。下段は添加物非存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【図１３】図１３の上段はコール酸ナトリウム存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。中段はタウリン存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。下段は添加物非存在下で調製した生成物のHPAEC-PAD分析結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のδ-CDの製造方法では、CD混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理して前記混合物からδ-CDの精製を行う。
後述の実施例で示すように、本発明によれば、純度の高いδ-CDを効率的に製造することができる。
【００１３】
本発明で用いるCD混合物は、δ-CDを含むよう、常法に従い適宜製造することができる。たとえば、非特許文献１に記載されているように、α-CDを基質とし、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理することで、α-CD、β-CD、γ-CD、δ-CDなどを含有するCD混合物を得ることができる。
【００１４】
本発明で用いるCD混合物を調製する際、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸及びこれらの塩の少なくとも１種（本明細書において、「コール酸化合物」ともいう）の存在下で、α-CDを基質とし、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理してもよい。コール酸化合物を共存させることで、δ-CDとの包接作用によりδ-CDの生成量が上昇する。
本発明で好ましく用いることができるコール酸化合物は適宜選択することができ、具体例としては、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、コール酸ナトリウム塩、デオキシコール酸ナトリウム塩、タウロコール酸ナトリウム塩、タウロデオキシコール酸ナトリウム塩が挙げられる。
コール酸化合物の使用量についても溶解性の限度の範囲内で適宜設定することができる。例えば、α-CDの38.91ｇに対して、コール酸化合物の使用量は8.2ｇ以上が好ましく、24.5ｇ以上がより好ましい。
【００１５】
本発明で用いるCD混合物は、予め沈殿法によりある程度α-、β-及びγ-CDを除去したものが好ましい。沈殿法で用いる溶剤は適宜選択することができ、テトラクロロエタン、ブロモベンゼン、シクロオクタジエンなどを用いることができる。沈殿法による除去方法については、特開平６−６２８８３号公報などを参考にすることができる。
【００１６】
炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルに前記CD混合物を負荷し、吸着物を溶出させることで、前記混合物からδ-CDを精製することができる。
シリカゲルを表面修飾するためのアルキルシリル基としては適宜選択することができるが、n-ヘキシルシリル基が好ましい。また、前記シリカゲルに吸着したδ-CDは、メタノール水溶液、エタノール水溶液などのアルコール溶液で溶出することが好ましい。
【００１７】
本発明において、CD混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理したのち、ゲルろ過クロマトグラフィー（以下、「GPC」ともいう）分離を基本モードとする水系充填カラム（以下、「GPCモードカラム」ともいう）を用いてさらにδ-CDを精製してもよい。具体的には、JAIGEL-GS310（商品名、日本分析工業社製）を用いることができる。このような操作を行うことで、δ-CD以外の成分を除去することが可能となり、δ-CDの純度をより向上させることができる。なお、本明細書において「GPC分離を基本モードとする水系充填カラム」とは、水又は水を主体とする水溶液（例えば、3％メタノール水溶液、5％メタノール含む1/15M-炭酸アンモニウム水溶液、1/15M-炭酸アンモニウム水溶液）を移動相として用いて、分子サイズの差に基づいて分離を行う液体クロマトグラフィー用カラムである。
GPC分離を基本モードとする水系充填カラムとしては市販のものを用いることができ、具体的には、トヨパール（商品名、東ソー社製）、セファデックス（商品名、General  Electric社製）、バイオゲル（商品名、Bio-Rad社製）が挙げられる。
【実施例】
【００１８】
以下、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１９】
（CD混合物の調製）
38.91gのα-CDを920mLの50mM酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）に溶解して調製した40mMα-CD水溶液920mLと、50mM酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液（pH5.5）を用いて調製したシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（商品名：コンチザイム、天野エンザイム社製）の希釈液とを混合した。混合液を40℃で5時間インキュベートし、沸騰水浴中で約10分間熱処理して反応を停止させた。
反応を停止させた反応液にグルコアミラーゼ（商品名：GLA-111、東洋紡績社製）800unitsを添加した。混合液を40℃で24時間インキュベートし、沸騰水浴中で約10分間熱処理して反応を停止させた。
濾紙上にセライトを積層した濾材を使用した吸引濾過装置で反応溶液を吸引濾過し、不溶性生成物を取り除いた。濾液をそのままナスフラスコに移して-60〜-70℃で凍結し、凍結乾燥装置により真空下、一夜凍結乾燥した。
【００２０】
（沈殿法によるα-、β-及びγ-CDの除去）
酵素反応後、濾過して凍結乾燥したサンプル121.8gに対し、水500mL、テトラクロロエタン30mL、ブロモベンゼン30mL、及びシクロオクタジエン30mLを加えて、4℃冷却下で一夜撹拌し、白色沈殿を濾別した。ろ液をGPC充填カラムを用いRI検出器を付したHPLCで純度を確認したところ、まだγ-CDの残留が多かったので、再度シクロオクタジエン30mLを加えて4℃で冷却下で一夜撹拌し、白色沈殿を濾別した。ろ液約500mLをエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、粗精製δ-CDを得た（収量26.77g、収率21.9％）。
【００２１】
（シリカゲルを用いたδ-CDの精製）
実施例１
n-ヘキシルシリル基で表面修飾したシリカゲル（商品名：Isolute  C6、Biotage社製）２ｇを充填したカラムにCD混合物の水溶液（10mg/mL）を負荷した。精製水20mLをカラムに添加し溶出液１を回収した。その後、50％メタノール水溶液70mLをカラムに添加し、溶出液２を回収した。
【００２２】
溶出液１及び２をそれぞれ濃縮乾固して少量の水に溶解して、不溶物を濾過にて取り除いた。濾液10μLをHPAEC-PAD（電気化学検出陰イオン交換クロマトグラフィー）に注入して分析した。なお、移動相にpH12付近の水酸化ナトリウム水溶液を使用し、糖類のアルコール性水酸基を強制的にイオン化し、このアニオンを陰イオン交換樹脂により分離した。また、検出はパルスドアンペロメトリック検出器を使用した。
その結果を図１に示す。
【００２３】
比較例１
実施例１で用いたシリカゲルに代えて、n-オクチルシリル基で表面修飾したシリカゲル（商品名：Isolute  C8、Biotage社製）を用いた以外は実施例１と同様にδ-CDの精製を行い、溶出液の成分分析を行った。その結果を図２に示す。
【００２４】
比較例２
実施例１で用いたシリカゲルに代えて、n-オクタデシルシリル基で表面修飾したシリカゲル（商品名：Isolute  C18、Biotage社製）を用いた以外は実施例１と同様にδ-CDの精製を行い、溶出液の成分分析を行った。その結果を図３に示す。
【００２５】
比較例３
実施例１で用いたシリカゲルに代えて、表面修飾を行っていないシリカゲル（商品名：Isolute  SI、Biotage社製社製）を用いた以外は実施例１と同様にδ-CDの精製を行い、溶出液の成分分析を行った。その結果を図４に示す。
【００２６】
比較例４
実施例１で用いたシリカゲルに代えて、エチルシリル基で表面修飾したシリカゲル（商品名：Isolute  C2、Biotage社製）を用いた以外は実施例１と同様にδ-CDの精製を行い、溶出液の成分分析を行った。その結果を図５に示す。
【００２７】
比較例５
実施例１で用いたシリカゲルに代えて、n-ブチルシリル基で表面修飾したシリカゲル（商品名：Isolute  C4、Biotage社製社製）を用いた以外は実施例１と同様にδ-CDの精製を行い、溶出液の成分分析を行った。その結果を図６に示す。
【００２８】
図１〜図６に示すクロマトグラムにおいて、保持時間40分で現れるピークがδ-CD由来のピークであり、保持時間３６分で現れるピークがCD11由来のピークであり、保持時間４８分で現れるピークがCD12由来のピークである。そこで、図１〜図６に示す、前記実施例及び比較例で得られた溶出液１（水溶出）と溶出液２（50％メタノール溶出）のクロマトグラムについて、δ-CD由来のピークを比較した。
その結果、表面修飾を行っていないシリカゲル（比較例３）、又は炭素数が６未満のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲル（比較例４及び５）を用いた場合、大部分のδ-CDは溶出液１（水溶出液）に含まれていた。これに対し、炭素数が６以上満のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲル（実施例１、並びに比較例１及び２）を用いた場合、大部分のδ-CDは溶出液２（メタノール溶出液）に含まれていた。
【００２９】
さらに、図１〜図６に示すクロマトグラムから、溶出液２に含まれるδ-CD、CD11及びCD12の含有量をトラップ率として算出した。ここでトラップ率は、溶出液１及び２をHPAEC-PADにて分析した際に得られる各ピークの面積を算出し、トラップ率（％）＝溶出液２の対応ピークの面積／（溶出液１の対応ピークの面積＋溶出液２の対応ピークの面積）×１００により計算した。その結果を図７に示す。ここで、図７に示すグラフの横軸は、シリカゲルの表面修飾に用いたアルキルシリル基の炭素数を示し、縦軸はトラップ率を示す。
【００３０】
図７に示す結果から、炭素数８又は１８のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルを用いた場合、δ-CDのトラップ率は高いものの、CD11及びCD12のトラップ率も高く、純度の高いδ-CDは得られなかった。これに対して、炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルを用いた場合、δ-CDのトラップ率は高く、かつCD11及びCD12のトラップ率は低かった。
【００３１】
（δ-CDの純度の測定）
実施例１で得られた溶出液２におけるδ-CDの純度を下記の方法により測定した。
実施例１で得られた溶出液２（以下、「δ-CD  rich」ともいう）をpH8.0の微アルカリ溶液に１ｍｇ／ｍＬの割合で溶解し、RI検出計を付したGPC系カラムに注入し、下記に示す条件でHPLCにて分析を行った。その結果を図８（ａ）に示す。また、オーセンテイックな標準δ-CDについても同様にHPLC分析した結果を図８の（ｂ）に併せて示す。
その結果、図８（ａ）に示すように、主ピークは保持時間40.16分に見られ、これは図８（ｂ）の標準δ-CD由来のピーク（保持時間40.28分）と良く一致し、δ-CDと同定された。
また、図８（ａ）に示すクロマトグラムにおけるδ-CD由来のピークの面積比率（％）を求めたところ、面積比率は約８８％以上であった。なお、図８（ａ）のクロマトグラムでは、保持時間38.01分にCD10と同定されるピーク、保持時間52.55分にβ-CDと同定されるピークが認められた。
HPLC/RI分析条件
Column：JAIGEL-GS310（商品名、日本分析工業社製）
Size：21.5mmID×500mmL×2本
Eluent：1/15M炭酸アンモニウム（pH8.0）
Flow  rate：5.0mL/min(Pressure10.6〜11.3MPa)
Detector：示差式屈折計Shodex  RI-101
サンプル濃度：実施例１で得られた溶出液２  21.0mgを上記の移動相溶液に溶かし、0.5mLを注入した。
【００３２】
以上の結果から、シクロデキストリン混合物を炭素数６のアルキルシリル基で表面修飾したシリカゲルで処理することで、純度の高いδ-CDを効率的に製造することができることがわかる。
【００３３】
（GPCモードカラムを用いたδ-CDの精製）
前述のJAIGEL-GS310を用いて、図８（ａ）で得られたクロマトグラムに対応して、保持時間38.01分のピーク成分及び保持時間40.16分のピークをそれぞれ注意深く分取して、濃縮乾固した後、水溶液として凍結乾燥した。なお、前者のピークはCD10に由来し、後者のピークはδ-CDに由来することを図９に示すMSスペクトルから確認した。また、保持時間40.16分のピークを分取したサンプルを「δ-CD  pureサンプル」とした。
δ-CD  richサンプル、δ-CD  pureサンプル及びCD10サンプルについて、それぞれの凍結乾燥で得られた白色粉末状のサンプルを1mgとり、1mLの水溶液を調製した。キャピラリーで１滴を、MS測定用の金属プレートに滴下して室温で乾燥した。MS測定用のマトリックスとして、DHB（2,5-Dihydroxybenzoic  acid）を用いた。装置はBruker  Daltonics  flexAnalysisを使用した。
【００３４】
δ-CD  richサンプルのMALDI-TOF  MS分析結果を図９の上段に、δ-CD  pureサンプルのMALDI-TOF  MS分析結果を図９の中段に、CD10サンプルのMALDI-TOF  MS分析結果を図９の下段にそれぞれ示す。これによってサンプルの同定が出来た。
【００３５】
前記δ-CD  pureサンプルについて、前述の方法と同様にHPLC分析を行った。その結果を図１０に示す。図１０に示すクロマトグラムにおけるδ-CD由来のピークの面積比率（％）を求めたところ、面積比率は約98％であった。
【００３６】
前記δ-CD  richサンプル及びδ-CD  pureサンプルについて、前述の方法と同様にHPAEC-PAD分析を行った。その結果を前記CD混合物サンプル及び水の分析結果と併せて図１１に示す。
図１１に示すように、δ-CD  richサンプルでは、δ-CDの他に、α-CD、β-CD、γ-CD、CD10、直鎖デキストリンなどに由来するピークが確認された。これに対して、GPCモードカラムを用いてδ-CD  richサンプルを精製することで、δ-CD以外の成分が除去され、δ-CDの純度がさらに上昇していることがわかる。
【００３７】
以上の結果から、GPCモードカラムを用いることで、より純度の高いδ-CDを効率的に製造することができることがわかる。
【００３８】
（コール酸化合物を用いたCD混合物の調製）
α-CDを基質としシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを用いて酵素反応を行う際に、１０％エタノール存在下、α-CDと等モルのタウロコール酸ナトリウム塩又はアダマンタンカルボン酸を添加した以外は、前記方法と同様にしてCD混合物を調製し、共存物をアセトン又はエタノールを用いて除去した。得られたCD混合物について、前述の方法と同様にHPAEC-PAD分析を行った。その結果を、タウロコール酸ナトリウム塩及びアダマンタンカルボン酸のいずれも添加しない場合の結果と併せて図１２に示す。
また、タウロコール酸ナトリウム塩又はアダマンタンカルボン酸に代えて、コール酸ナトリウム塩又はタウリンを添加した以外は前記方法と同様にしてCD混合物を調製し、前述の方法と同様にHPAEC-PAD分析を行った。その結果を、コール酸ナトリウム及びタウリンのいずれも添加しない場合の結果と併せて図１３に示す。
【００３９】
図１２に示すように、タウロコール酸ナトリウムを添加した場合、δ-CDの顕著な増加が認められた。またタウロコール酸の構成成分であるコール酸ナトリウム及びタウリンの影響を確認したところ、図１３に示すように、タウリンの共存による影響は認められず、コール酸の共存によってδ-CD生成量の増加が確認された。
添加物の存在・非存在下で調製した反応生成物溶液についてδ-CD由来のピークの大きさで比較したところ、コール酸ナトリウムを添加したときピーク面積が４倍以上増加した。
以上の結果から、コール酸化合物の存在下で、α-CDを基質としシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼで処理することで、δ-CDの生成量が上昇することがわかる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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