(57)【要約】  本発明は、化合物１、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソｌ−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インド−ル−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド、および充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤および滑沢剤から選択される少なくとも１種の添加剤を含む医薬組成物であって、嚢胞性線維症のようなＣＦＴＲ仲介疾患を処置するための、それを必要とする患者に経口投与するのに好適な組成物を提供する。化合物１の医薬組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者の処置法もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．化合物１；
ｂ．充填剤；
ｃ．希釈剤；
ｄ．崩壊剤；
ｅ．滑沢剤；および
ｆ．流動促進剤を含む、経口投与用錠剤。
【請求項２】
化合物１が、化合物１ アモルファス形態である、請求項１に記載の錠剤。
【請求項３】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約１ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１または２に記載の錠剤。
【請求項４】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約１０ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項５】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約２５ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項６】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約５０ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項７】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約１０ｍｇの量で錠剤中に存在する、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項８】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約５０ｍｇの量で錠剤中に存在する、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項９】
化合物１または化合物１ アモルファス形態が、約１００ｍｇの量で錠剤中に存在する、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１０】
錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量が、錠剤重量の約１重量％ないし約８０重量％の範囲である、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１１】
錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量が、錠剤重量の約１０重量％ないし約５０重量％の範囲である、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１２】
錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量が、錠剤重量の約２０重量％ないし約３０重量％の範囲である、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１３】
錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量が、錠剤重量の約４重量％である、請求項１ないし４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１４】
錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量が、錠剤重量の約２５重量％である、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１５】
充填剤が、セルロース、修飾セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、セルロースアセテート、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、スクロース、ラクトース、コーンデンプン、ジャガイモデンプン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１ないし１４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１６】
充填剤が微結晶セルロース（ＭＣＣ）であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約９０重量％の範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１ないし１５のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１７】
希釈剤が、ラクトース一水和物、マンニトール、ソルビトール、セルロース、リン酸カルシウム、デンプン、糖またはそれらの何れかの組み合わせから選択される、請求項１ないし１６のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１８】
希釈剤がラクトース一水和物であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約９０重量％の範囲の量で錠剤中に存在する、請求項１ないし１７のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項１９】
崩壊剤が、寒天−寒天、アルギン、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クレ−(clay)、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メチルセルロース、ポラクリリンカリウム、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１ないし１８のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２０】
崩壊剤がクロスカルメロースナトリウムであり、錠剤の重量に対して６重量％またはそれ以下の濃度で錠剤中に存在する、請求項１ないし１９のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２１】
滑沢剤が、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油、ナトリウムステアリルフマラ−ト、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２２】
滑沢剤がステアリン酸マグネシウムであり、錠剤の重量に対して２重量％未満の濃度で錠剤中に存在する、請求項１ないし２１のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２３】
流動促進剤が、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、コーンデンプン、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１ないし２２のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２４】
流動促進剤がコロイド状二酸化ケイ素であり、錠剤の重量に対して３重量％またはそれ以下の濃度で錠剤中に存在する、請求項１ないし２３のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２５】
錠剤が着色剤をさらに含む、請求項１ないし２４のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２６】
複数の顆粒を含む医薬組成物であって、
ａ．組成物重量に対して約４重量％ないし約５０重量％の範囲の量の化合物１ アモルファス形態;
ｂ．組成物重量に対して約１０重量％ないし約４５重量％の範囲の量の充填剤；
ｃ．組成物重量に対して約１０重量％ないし約４５重量％の範囲の量の希釈剤；
ｄ．組成物重量に対して約１重量％ないし約５重量％の範囲の量の崩壊剤；
ｅ．組成物重量に対して約０．３重量％ないし約３重量％の範囲の量の滑沢剤；および
ｆ．組成物重量に対して約０．３量％ないし約３重量％の範囲の量の流動促進剤
を含む、組成物。
【請求項２７】
化合物１が化合物１ アモルファス形態であり、噴霧乾燥した分散剤である、請求項１ないし２６のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項２８】
噴霧乾燥した分散剤がポリマーを含む、請求項２６に記載の錠剤。
【請求項２９】
ポリマーがヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である、請求項２８に記載の錠剤。
【請求項３０】
ポリマーが、２０重量％ないし７０重量％の量で存在する、請求項２８または２９に記載の錠剤。
【請求項３１】
ポリマーが、３０重量％ないし６０重量％の量で存在する、請求項２８ないし３０のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項３２】
ポリマーが、約４９．５重量％の量で存在する、請求項２８ないし３１のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項３３】
界面活性剤をさらに含む、請求項２７ないし３２のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項３４】
界面活性剤がラウリル硫酸ナトリウムである、請求項３３に記載の錠剤。
【請求項３５】
界面活性剤が、錠剤の重量に対して０．１重量％ないし５重量％の量で錠剤中に存在する、請求項３３または３４に記載の錠剤。
【請求項３６】
界面活性剤が、約０．５重量％の量で存在する、請求項３３ないし３５のいずれか一項に記載の錠剤。
【請求項３７】
下記処方の錠剤：
【表１】
2013536231.tif 000059
【請求項３８】
下記処方の錠剤：
【表２】
2013536231.tif 000060
【請求項３９】
下記処方の錠剤：
【表３】
2013536231.tif 000061
【請求項４０】
錠剤の投与方法であって、
ａ．約１ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；
ｂ．充填剤；
ｃ．希釈剤；
ｄ．崩壊剤；
ｅ．界面活性剤；
ｆ．流動促進剤；および
ｇ．滑沢剤
を含む錠剤を、患者に少なくとも１日１回経口投与することを含む、方法。
【請求項４１】
錠剤が、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
錠剤が、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
錠剤が、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
錠剤の投与方法であって、
ａ．約１ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；
ｂ．充填剤；
ｃ．希釈剤；
ｄ．崩壊剤；
ｅ．界面活性剤；
ｆ．流動促進剤；および
ｇ．滑沢剤
を含む錠剤を、患者に１日２回経口投与することを含む、方法。
【請求項４５】
錠剤が、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
錠剤が、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
錠剤が、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
錠剤の投与方法であって、以下：
ａ．約１ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；
ｂ．充填剤；
ｃ．希釈剤；
ｄ．崩壊剤；
ｅ．界面活性剤；
ｆ．流動促進剤；および
ｇ．滑沢剤
を含む錠剤を、患者に１２時間毎に１回経口投与することを含む、方法。
【請求項４９】
錠剤が、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
錠剤が、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
錠剤が、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
請求項１から３９のいずれか一項記載の錠剤または医薬組成物を対象に投与することを含む、該対象における疾患の処置法または重症度の軽減法であって、該疾患が、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘導性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側精管欠損症（ＣＢＡＶＤ）に起因する男性不妊症、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−繊維素溶解欠乏症、プロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、脂質プロセシング欠損症、家族性高コレステロ−ル血症、１型カイロミクロン血症、無βリポタンパク質血症、リソソーム蓄積症、Ｉ細胞病／偽性ハーラー症候群、ムコ多糖沈着症、サンドホフ／テイ・サックス、クリグラー・ナジャ−ＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、骨端軟骨性ＤＩ、腎性ＤＩ（neprogenic ＤＩ）、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス・メルバッハー病、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、ハンチントン病、脊髄小脳性運動失調症Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（dentatorubal pallidoluysian）、筋緊張性ジストロフィー、海綿状脳症、遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）、ファブリー病、シュトロイスラー・シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ、シェーグレン症候群、骨粗鬆症、骨減少症、ゴーラム症候群、塩素チャネル病、先天性筋強直症（トムソン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、癲癇、驚愕過剰症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛ジスキネジア（ＰＣＤ）、線毛の構造および／または機能の遺伝性障害、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知）、内臓逆位を伴わないＰＣＤ、または毛様体無形成から選択される、方法。
【請求項５３】
疾患が、嚢胞性線維症、気腫、ドライアイ疾患、ＣＯＰＤまたは骨粗鬆症である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
疾患が嚢胞性線維症である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
該対象が、ΔＦ５０８変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する、請求項５２ないし５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
該対象が、Ｒ１１７Ｈ変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する、請求項５２ないし５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
該対象が、Ｇ５５１Ｄ変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する、請求項５２ないし５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
付加的治療剤を投与することを含む、請求項５２ないし５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
付加的治療剤が、粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、化合物１以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤である、請求項５８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参考文献
本出願は、２０１０年８月２３日出願の、米国特許出願番号第６１／３７５，９７６号および２０１１年７月１１日出願の、米国特許出願番号第６１／５０６，２２０号に対して優先権の利益を主張し、それらの内容全体を引用により本明細書中に包含させる。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド（化合物１）を含む医薬組成物、かかる組成物の製造方法および該化合物を含む医薬組成物の投与方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ＣＦＴＲは、吸収性および分泌性上皮細胞を含む種々の細胞型で発現されるｃＡＭＰ／ＡＴＰ伝達型陰イオンチャンネルであり、そこで膜を通過する陰イオンの流速、ならびに他のイオンチャンネルおよびタンパク質の活性が調節される。上皮細胞では、ＣＦＴＲの正常な機能が気道および消化組織を含む全身への電解質輸送の維持にとって非常に重要である。ＣＦＴＲは、各々６個の貫膜へリックスを含む貫膜ドメインおよびヌクレオチド結合ドメインの縦列反復からなるタンパク質をコード化する約１４８０個のアミノ酸により構成される。２つの貫膜ドメインは、チャンネル活性および細胞輸送機構を調節する多重リン酸化部位を有する大きな極性調節性（Ｒ）−ドメインにより結合されている。
【０００４】
ＣＦＴＲをコード化する遺伝子は既に同定および配列決定されている（Gregory, R. J. et al. (1990) Nature 347:382−386; Rich, D. P. et al. (1990) Nature 347:358−362, Riordan, J. R. et al. (1989) Science 245:1066−1073を参照）。この遺伝子での欠損が、ＣＦＴＲにおいて突然変異を誘発し、高頻度で起こる、ヒトにとっては致命的遺伝疾患である、嚢胞性線維症（ＣＦ）を誘発する。嚢胞性線維症は、合衆国では幼児２５００人に約１人の割合で発生する。一般的合衆国母集団内では、その悪影響が見受けられない形で、１０００万人ぐらいまでの人々が単一コピーの欠損遺伝子をもつ。対照的に、２コピーのＣＦ関連遺伝子をもつ個体は、慢性肺疾患を含め、衰弱をもたらす致命的なＣＦの影響を被っている。
【０００５】
嚢胞性線維症の患者では、気道上皮で内因的に発現されるＣＦＴＲでの突然変異により、イオンおよび体液輸送において不均衡を誘発する頂端側（apical）の陰イオン分泌の減少が誘導される。その陰イオン輸送の減少は、肺における粘液蓄積の増大およびそれに付随する微生物感染の一因となり、最終的にＣＦ患者の死を招くことになる。気道疾患に加えて、ＣＦ患者は、胃腸の問題および膵臓機能不全を有するのが典型的であり、未処置で放置した場合、死亡することになる。さらに、嚢胞性線維症の男性の大多数は生殖能力が無く、嚢胞性線維症の女性では生殖能力が低下している。２コピーのＣＦ関連遺伝子の深刻な影響とは対照的に、単一コピーのＣＦ関連遺伝子を有する個体は、コレラおよび下痢による脱水症に対して高い耐性を呈することから、母集団内における比較的高頻度のＣＦ遺伝子が説明されると考えられる。
【０００６】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列解析により、病因となる様々な突然変異が明らかにされている（Cutting, G. R. et al. (1990) Nature 346:366−369; Dean, M. et al. (1990) Cell 61:863:870; and Kerem, B−S. et al. (1989) Science 245:1073−1080; Kerem, B−S et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447−8451）。現在までのところ、科学および医学の文献で報告されるように、ＣＦ遺伝子では１０００を越える病因となる突然変異が同定されている。最も優勢な突然変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位でのフェニルアラニンの欠失であり、一般的にはΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この突然変異は、嚢胞性線維症の症例の約７０％で起こり、重篤な疾患と関連している。他の変異としては、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄが挙げられる。
【０００７】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失により、形成されつつあるタンパク質の正確な折りたたみが妨げられる。この結果、突然変異タンパク質がＥＲを出て、原形質膜へ輸送されることが不可能となる。結果として、膜に存在するチャンネルの数は、野生型ＣＦＴＲを発現する細胞で観察されるものより遥かに少なくなる。損なわれた輸送機構に加えて、突然変異はチャンネル開閉にも欠陥をもたらす。まとめて考えると、膜におけるチャンネル数の減少および欠陥のある開閉により、上皮を超える陰イオン輸送は低下し、イオンおよび体液輸送の欠陥を招くことになる（Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709−2727）。しかしながら、本発明は、膜における減少した数のΔＦ５０８−ＣＦＴＲが、野生型ＣＦＴＲより少ないが、機能的であることを示している（Dalemans et al. (1991), Nature Lond. 354: 526−528; Denning et al., supra; Pasyk and Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347−50）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲに加えて、輸送機構、合成および／またはチャンネル開閉に欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける他の病因突然変異を上方または下方制御することにより、陰イオン分泌が改変され、病気の進行および／または重症度も緩和され得る。
【０００８】
ＣＦＴＲは陰イオンに加えて種々の分子を輸送するが、この役割（陰イオンの輸送）が、上皮を通ってイオンおよび水を輸送する重要な機構における一要素を表すことは明らかである。他の要素には、上皮Ｎａ＋チャンネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび基底側膜Ｋ＋チャンネルがあり、これらは細胞への塩化物の取込に関与している。
【０００９】
これらの要素が共に作用して、細胞内におけるそれらの選択的発現および局在化により上皮を通って方向性をもつ輸送を達成する。塩化物吸収は、頂端側膜に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲの協調活性および細胞の基底膜側表面で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよびＣｌ−チャンネルにより行われる。管腔側からの塩化物の二次性能動輸送により、細胞内塩化物の蓄積が促され、次いでＣｌ−チャンネルにより受動的に細胞から離されることにより、ベクトル輸送となり得る。Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび基底膜側表面での基底膜Ｋ＋チャンネルおよび管腔側でのＣＦＴＲの配置を調和させることにより、管腔側でＣＦＴＲを介した塩化物の分泌を促す。水はそれ自体能動輸送されないと思われるため、上皮を通るその流れは、ナトリウムイオンおよび塩化物イオンの大きな流れにより生じた小さな経上皮浸透圧勾配に左右される。
【００１０】
上記で検討した通り、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失により、形成されつつあるタンパク質の正確な折りたたみが阻まれ、その結果、この突然変異タンパク質がＥＲを出て、原形質膜へ輸送されることが不可能になると考えられている。結果として、原形質膜に存在する成熟タンパク質の量は不十分となり、上皮組織内での塩化物輸送は著しく低下する。事実、小胞体（ＥＲ）機構によるＡＢＣ輸送体の欠陥ＥＲプロセッシングというこの細胞現象は、ＣＦ疾患だけでなく、広範囲の他の孤発性および遺伝性疾患の根底にある基礎要因であることが示されている。ＥＲ機構が機能不全に陥り得る２つの過程は、分解に至るタンパク質のＥＲ輸送体へのカップリングの喪失によるか、またはこれらの欠陥／ミスフォールディングタンパク質のＥＲ蓄積によるものである［Aridor M, et al., Nature Med., 5(7), pp 745−751 (1999); Shastry, B.S., et al., Neurochem. International, 43, pp 1−7 (2003); Rutishauser, J., et al., Swiss Med Wkly, 132, pp 211−222 (2002); Morello, JP et al., TIPS, 21, pp. 466−469 (2000); Bross P., et al., Human Mut., 14, pp. 186−198 (1999)］。
【００１１】
（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミドは、国際ＰＣＴ出願 ＷＯ２０１００５３４７１およびＷＯ２０１００５４１３８（これらの出願の内容全体は、引用により本明細書中に包含させる）にＣＦＴＲ活性のモジュレーターであって、嚢胞性線維症のようなＣＦＴＲ介在疾患の処置に有用であることが記載されている。形態Ａおよびアモルファス形態の、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミドが、２０１０年３月２５日出願の米国特許出願番号第６１／３１７，３７６号、２０１０年４月１日出願の米国特許出願番号第６１／３１９，９５３号、２０１０年４月７日出願の米国特許出願番号第６１／３２１，５６１号および２０１０年４月７日出願の米国特許出願番号第６１／３２１，６３６号に記載されており、これらの内容全体は、引用により本明細書中に包含させる。しかしながら、容易に製造され、治療剤としての使用に好適な化合物１を含む医薬組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【００１２】
発明の概要
本発明は、以下の構造
【化１】
2013536231.tif 000002
を有する（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド（化合物１）を含む医薬組成物、医薬製剤および固体投与量形態に関する。
【００１３】
一面において、本発明は、ａ）化合物１；ｂ）充填剤；ｃ）希釈剤；ｄ）崩壊剤；ｅ）滑沢剤；ならびにｆ）流動促進剤、を含む経口投与用錠剤を提供する。
【００１４】
ある態様において、化合物１は、実質的にアモルファス形態である（化合物１ アモルファス形態）。他の態様において、化合物１は、実質的に結晶固体形態である。一態様において、化合物１は、実質的に結晶形態Ａ（化合物１形態Ａ）である。他の態様において、化合物１は、固体（すなわち、アモルファスおよび結晶）形態の混合物である。
【００１５】
一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約１ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約１０ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約２５ｍｇないし約２５０ｍｇの範囲の量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約５０ｍｇないし約２００ｍｇの量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約１０ｍｇの量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約５０ｍｇの量で錠剤中に存在する。一態様において、化合物１または化合物１ アモルファス形態は、約１００ｍｇの量で錠剤中に存在する。
【００１６】
一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約１重量％ないし約８０重量％の範囲である。一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約４重量％ないし約５０重量％の範囲である。一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約１０重量％ないし約５０重量％の範囲である。一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約２０重量％ないし約３０重量％の範囲である。一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約５重量％である。一態様において、錠剤中の、化合物１または化合物１ アモルファス形態の量は、錠剤重量の約２５重量％である。
【００１７】
一態様において、充填剤は、セルロース、修飾セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、セルロースアセテート、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、スクロース、ラクトース、コーンデンプン、ジャガイモデンプン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。一態様において、充填剤は、微結晶セルロース（ＭＣＣ）であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約９０重量％の範囲の量で錠剤中に存在する。一態様において、充填剤は、微結晶セルロース（ＭＣＣ）であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約４５重量％の範囲の量で錠剤中に存在する。
【００１８】
一態様において、希釈剤は、ラクトース一水和物、マンニトール、ソルビトール、セルロース、リン酸カルシウム、デンプン、糖、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。一態様において、希釈剤は、ラクトース一水和物であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約９０重量％の範囲の量で錠剤中に存在する。一態様において、希釈剤は、ラクトース一水和物であり、錠剤の重量に対して約１０重量％ないし約４５重量％の範囲の量で錠剤中に存在する。
【００１９】
一態様において、崩壊剤は、寒天−寒天、アルギン、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クレー(clay)、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メチルセルロース、ポラクリリンカリウム、アルギン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。一態様において、崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウムであり、錠剤の重量に対して６重量％またはそれ以下の濃度で錠剤中に存在する。
【００２０】
一態様において、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油、ナトリウムステアリルフマラート、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。一態様において、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、錠剤の重量に対して２重量％未満の濃度で存在する。
【００２１】
一態様において、流動促進剤は、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、コーンデンプン、またはそれらの組み合わせから選択される。一態様において、流動促進剤は、コロイド状二酸化ケイ素であり、錠剤の重量に対して３重量％またはそれ以下の濃度で存在する。
【００２２】
一態様において、錠剤はさらに着色剤を含む。
【００２３】
一面において、本発明は、複数の顆粒を含む錠剤であって、ａ）組成物重量に対して約１０重量％ないし約５０重量％の範囲の量の化合物１ アモルファス形態;ｂ）組成物重量に対して約１０重量％ないし約３０重量％の範囲の量の充填剤；ｃ）組成物重量に対して約１０重量％ないし約３０重量％の範囲の量の希釈剤；ｄ）組成物重量に対して約１重量％ないし約５重量％の範囲の量の崩壊剤；ｅ）組成物重量に対して約０．３重量％ないし約３重量％の範囲の量の滑沢剤；およびｆ）組成物重量に対して約０．３量％ないし約３重量％の範囲の量の流動促進剤を含む錠剤組成物を特徴とする。
【００２４】
一態様において、化合物１は、化合物１ アモルファス形態であり、噴霧乾燥させた分散剤である。一態様において、噴霧乾燥させた分散剤は、ポリマーを含む。一態様において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。一態様において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネ−ト（ＨＰＭＣＡＳ）である。
【００２５】
一態様において、ポリマーは、２０重量％ないし７０重量％の量で存在する。一態様において、ポリマーは、３０重量％ないし６０重量％の量で存在する。一態様において、ポリマーは、約４９．５重量％の量で存在する。
【００２６】
一態様において、錠剤はさらに界面活性剤を含む。一態様において、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムである。一態様において、界面活性剤は、０．１重量％ないし５重量％の量で存在する。一態様において、界面活性剤は、約０．５重量％の量で存在する。
【００２７】
他の面において、本発明は、表１に記載の処方の錠剤を特徴とする：
【表１】
2013536231.tif 000003
【００２８】
他の面において、本発明は、表２に記載の処方の錠剤を特徴とする：
【表２】
2013536231.tif 000004
【００２９】
他の面において、本発明は、表３に記載の処方の錠剤を特徴とする：
【表３】
2013536231.tif 000005
【００３０】
他の面において、本発明は、化合物１、ならびに１種以上の薬学的に許容される添加剤、例えば充填剤、崩壊剤、界面活性剤、希釈剤、流動促進剤および滑沢剤およびそれらの任意の組み合わせを含む錠剤形態の医薬組成物であって、該錠剤が、約３０分間に少なくとも約５０％が溶解する溶解性を有する、医薬組成物を提供する。別の態様において、溶解速度は、約３０分間に少なくとも約７５％である。別の態様において、溶解速度は、約３０分間に少なくとも約９０％である。
【００３１】
他の面において、本発明は、化合物１、ならびに１種以上の薬学的に許容される添加剤、例えば、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、希釈剤、流動促進剤および滑沢剤を含む粉末混合物または顆粒を含む錠剤形態の医薬組成物であって、該錠剤が少なくとも約５ｋＰ（ｋＰ＝キロポンド；１ｋＰ＝〜９．８Ｎ）の硬度を有する、医薬組成物を提供する。別の態様において、該錠剤は、４００回転後に１．０％未満の脆砕性を有する。
【００３２】
他の面において、本発明は、付加的治療剤をさらに含む本明細書に記載の医薬組成物を提供する。一態様において、該付加的治療剤は、粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、化合物１以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤である。いくつかの態様において、該付加的治療剤は、Ｎ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミドである。
【００３３】
一面において、本発明は、錠剤の投与方法であって、ａ）約２．５ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；ｂ）充填剤；ｃ）希釈剤；ｄ）崩壊剤；ｅ）界面活性剤；ｆ）流動促進剤；およびｇ）滑沢剤を含む錠剤を、患者に少なくとも１日１回経口投与することを含む方法を特徴とする。一態様において、該錠剤は、約２．５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。
【００３４】
一面において、本発明は、錠剤の投与方法であって、ａ）約２．５ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；ｂ）充填剤；ｃ）希釈剤；ｄ）崩壊剤；ｅ）界面活性剤；ｆ）流動促進剤；およびｇ）滑沢剤を含む錠剤を、患者に１日２回経口投与することを含む方法を特徴とする。一態様において、該錠剤は、約２．５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。
【００３５】
一面において、本発明は、錠剤の投与方法であって、ａ）約２．５ないし２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態；ｂ）充填剤；ｃ）希釈剤；ｄ）崩壊剤；ｅ）界面活性剤；ｆ）流動促進剤；およびｇ）滑沢剤を含む錠剤を、患者に１２時間毎に１回経口投与することを含む方法を特徴とする。一態様において、該錠剤は、約２．５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。一態様において、該錠剤は、約２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。
【００３６】
一面において、本発明は、本発明の錠剤を対象に投与することを含む、該対象における疾患の処置法または重症度の軽減法であって、該疾患が、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘導性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側精管欠損症（ＣＢＡＶＤ）に起因する男性不妊症、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−繊維素溶解欠乏症、プロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、脂質プロセシング欠損症、家族性高コレステロール血症、１型カイロミクロン血症、無βリポタンパク質血症、リソソーム蓄積症、Ｉ細胞病／偽性ハーラー症候群、ムコ多糖沈着症、サンドホフ／テイ・サックス、クリグラー・ナジャ−ＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、骨端軟骨性ＤＩ、腎性ＤＩ（neprogenic ＤＩ）、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス・メルバッハー病、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、ハンチントン病、脊髄小脳性運動失調症Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（dentatorubal pallidoluysian）、筋緊張性ジストロフィー、海綿状脳症、遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）、ファブリー病、シュトロイスラー・シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ、シェーグレン症候群、骨粗鬆症、骨減少症、ゴーラム症候群、塩素チャネル病、先天性筋強直症（トムソン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、癲癇、驚愕過剰症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛ジスキネジア（ＰＣＤ）、線毛の構造および／または機能の遺伝性障害、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知）、内臓逆位を伴わないＰＣＤ、または毛様体無形成から選択される方法を特徴とする。
【００３７】
一態様において、該疾患は、嚢胞性線維症、気腫、ドライアイ疾患、ＣＯＰＤまたは骨粗鬆症である。
【００３８】
一態様において、該対象は、ΔＦ５０８変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する。一態様において、該対象は、Ｒ１１７Ｈ変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する。一態様において、該対象は、Ｇ５５１Ｄ変異を有する嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を有する。
【００３９】
一態様において、該方法は、付加的治療剤を投与することを含む。一態様において、該付加的治療剤は、粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、化合物１以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤である。いくつかの態様において、該付加的治療剤は、Ｎ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミドである。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
図面の簡単な説明
【図１】図１は、噴霧乾燥法により製造された化合物１ アモルファス形態のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】図２は、噴霧乾燥法により製造された化合物１ アモルファス形態の変調示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）トレースを示す。
【図３】図３は、化合物１ アモルファス形態の固体状態 １３Ｃ ＮＭＲスペクトル（１５．０ ｋＨスピニング）を示す。
【図４】図４は、化合物１ アモルファス形態の固体状態 １９Ｆ ＮＭＲスペクトル（１２．５ｋＨｚスピニング）を示す。
【図５】図５は、回転蒸発法により製造された化合物１ アモルファス形態のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図６】図６は、回転蒸発法により製造された化合物１ アモルファス形態の変調示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）トレースを示す。
【図７】図７は、溶媒としてＤＣＭを用いてスラリー法（２週間）により製造された化合物１ 形態Ａの実際のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図８】図８は、化合物１ 形態Ａの単結晶構造から計算されるＸ線回折パターンを示す。
【図９】図９は、化合物１ 形態Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースを示す。
【図１０】図１０は、高速蒸発法によりアセトニトリルから製造された化合物１ 形態Ａの実際のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１１】図１１は、ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを用いる貧溶媒法（anti solvent method）により製造された化合物１ 形態Ａの実際のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図１２】図１２は、単晶Ｘ線解析に基づく、化合物１ 形態Ａの配座を示す。
【図１３】図１３は、化合物１ 形態Ａの固体状態 １３Ｃ ＮＭＲスペクトル（１５．０ｋＨｚスピニング）を示す。
【図１４】図１４は、化合物１ 形態Ａの固体状態 １９Ｆ ＮＭＲスペクトル（１２．５ｋＨｚスピニング）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
発明の詳細な説明
定義
本明細書で用いる用語“ＣＦＴＲ”は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子または制御活性能を有するその変異体を意味し、ΔＦ５０８  ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ  ＣＦＴＲが含まれるが、これらに限定されない（例えば、ＣＦＴＲ変異体について、http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/を参照のこと）。
【００４２】
本明細書で用いる用語“アモルファス”は、規則性のない分子配置より構成され、区別可能な結晶格子を有しない固体形態を意味する。
【００４３】
本明細書で用いる用語“結晶”は、構造単位が、固定された幾何パターンまたは格子状に配置されている化合物または組成物を意味し、結晶固体は、厳密な長距離秩序を有する。結晶構造を構成する構造単位は、原子、分子またはイオンであり得る。結晶固体は、明確な融点を示す。
【００４４】
本明細書で用いる用語“修飾”は、例えば活性の、測定可能な量の増加または減少を意味する。
【００４５】
本明細書で用いる用語“化学的に安定な”は、化合物１の固体形態が、特定の条件、例えば、４０℃／７５％相対湿度に、特定の時間、例えば、１日、２日、３日、１週間、２週間、またはそれ以上さらされたとき、１種またはそれ以上の異なる化合物に分解しないことを意味する。いくつかの態様において、化合物１の固体形態の２５％未満が分解し、いくつかの態様において、化合物１の固体形態の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約３％未満、約１％未満、約０．５％未満が、記載の条件下で分解する。いくつかの態様において、化合物１の固体形態の検出可能な量の分解はない。
【００４６】
本明細書で用いる用語“物理的に安定な”は、化合物１の固体形態が、特定の時間、例えば１日、２日、３日、１週間、２週間、またはそれ以上の間、特定の条件下、例えば、４０℃／７５％相対湿度にさらされたとき、化合物１の１種以上の異なる物理的形態（例えば、ＸＲＰＤ、ＤＳＣなどにより測定される、異なる固体形態）に変化しないことを意味する。いくつかの態様において、化合物１の固体形態の２５％未満が、特定の条件下にさらされたとき、化合物１の１種以上の異なる物理的形態に変化する。いくつかの態様において、化合物１の固体形態の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約３％未満、約１％未満、約０．５％未満が、特定の条件下にさらされたとき、化合物１の１種以上の異なる物理的形態に変化する。いくつかの態様において、化合物１の固体形態の検出不可能な量が、化合物１の１種以上の物理的に異なる固体形態に変化する。
【００４７】
化合物１の特定の固体形態（例えば、本明細書に記載のアモルファス形態または結晶形態）に言及するとき、用語“実質的に遊離形の”（“形態Ｘの実質的に遊離形の”なる用語中の）は、２０％（重量）未満の指定された形態（複数可）または共形態(co−form)（複数可）（例えば、化合物１の結晶形態またはアモルファス形態）が存在し、より好ましくは、１０％（重量）未満の指定された形態（複数可）が存在し、より好ましくは、５％（重量）未満の指定された形態（複数可）が存在し、最も好ましくは、１％（重量）未満の指定された形態（複数可）が存在することを意味する。
【００４８】
本明細書で用いる用語“分散体”は、第一の物質である分散相が、第二の物質（連続相またはビヒクル）中に不連続単位で分散している分散系を意味する。分散相のサイズは、著しく変化し得る（例えば、ナノメートルないし数ミクロンサイズのコロイド状粒子、）。一般的に、分散相は、固体、液体、気体であり得る。固体分散体のとき、分散相および連続相が両方とも固体である。医薬適用において、固体分散体は、アモルファスポリマー（連続相）中の結晶性薬物（分散相）を含むか、あるいは、アモルファスポリマー（連続相）中のアモルファス薬物（分散相）を含み得る。いくつかの態様において、アモルファス固体分散体は、分散層を構成するポリマーを含み、薬物は連続層を構成する。いくつかの態様において、分散相は、アモルファス化合物１または実質的にアモルファスな化合物１を含む。
【００４９】
本明細書で用いる用語“固体アモルファス分散体”は、一般的に、２種またはそれ以上の成分の固体分散体を意味し、通常、薬物およびポリマーであるが、界面活性剤または他の医薬添加剤のような他の成分を含み得て、化合物１がアモルファス形態または実質的にアモルファス形態（例えば、結晶化合物１の実質的に遊離形態）であるとき、アモルファス薬物の物理的安定性および／または溶解および／または溶解性は、他の成分により増強される。
【００５０】
略語”ＭＴＢＥ”および“ＤＣＭ”は、それぞれ、メチル ｔ−ブチルエーテルおよびジクロロメタンを表す。
【００５１】
略語“ＸＲＰＤ”は、Ｘ線粉末回折を表す。
【００５２】
略語“ＤＳＣは、示差走査熱量測定を表す。
【００５３】
略語“ＴＧＡ”は、熱重量分析を表す。
【００５４】
本明細書で用いる用語“活性な医薬品成分”または“ＡＰＩ”は、生物学的に活性な化合物を意味する。ＡＰＩの例としては、（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド（化合物１）が挙げられる。
【００５５】
（Ｒ）−１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（１−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−１Ｈ−インドール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド（化合物１）を意味するために本明細書で用いられるとき、用語“固体形態”、“複数の固体形態”および関連用語は、液体または気体状態がほとんど存在しない化合物１を含む、固体形態、例えば、アモルファス粉末または結晶などを意味する。
【００５６】
本明細書で用いる用語“実質的にアモルファス形態”は、その分子の位置がほとんど又は全く規則的秩序を有しない固体物質を意味する。例えば、実質的にアモルファスな物質は、約１５％未満の結晶性（例えば、約１０％未満の結晶性または約５％未満の結晶性）を有する。用語“実質的にアモルファス形態の”には、結晶性を有しない（０％）物質を意味する記述語“アモルファス形態”が含まれることも特記される。
【００５７】
本明細書で用いる用語“実質的に結晶形態”（本明細書中、実質的に結晶形態の化合物１形態Ａのような）は、その分子の位置に関し、優先的に広範囲の規則性を有する固体物質を意味する。例えば、実質的に結晶形態の物質は、約８５％以上の結晶性（例えば、約９０％以上の結晶性または約９５％以上の結晶性）を有する。用語“実質的に結晶形態の”には、１００％結晶性を有する物質を意味する記述語“結晶形態”が含まれることも特記される。
【００５８】
物質、成分、製品または形態を記載する際に用いるとき、本明細書で用いる用語“結晶形態”および関連用語は、物質、成分または製品が、Ｘ線結晶回折により決定される通り実質的に結晶形態であることを意味する（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams ＆ Wilkins, Baltimore, Md. (2003); The United States Pharmacopeia, 23rd ed., 1843−1844 (1995)を参照のこと）。
【００５９】
本明細書で用いる用語“組成物”は、一般的に、２種以上の成分、通常１種以上の薬剤（例えば、１種の薬剤（例えば、化合物１ アモルファス形態））および１種以上の薬学的添加剤の組成物を意味する。
【００６０】
本明細書で用いる用語“固体投与量形態”は、一般的に、経口投与に用いるとき、カプセル、錠剤、丸剤、粉剤および顆粒剤を含む医薬組成物を意味する。かかる固体投与量形態において、活性化合物は、少なくとも１個の不活性な薬学的に許容される添加剤または担体と混合される。
【００６１】
本明細書で用いる“添加剤”には、医薬組成物中での機能性および非機能性成分が含まれる。
【００６２】
本明細書で用いる“崩壊剤”は、医薬組成物を水和し、錠剤の分散を補助する添加剤を意味する。本明細書で用いる“希釈剤”または“充填剤”は、医薬組成物にかさ高さ(bulkiness)を付加する添加剤を意味する。
【００６３】
本明細書で用いる“界面活性剤”は、医薬組成物に増大した溶解性および／または湿潤性(wetability)を付与する添加剤を意味する。
【００６４】
本明細書で用いる“結合剤”は、医薬組成物に増大した凝集性または抗張力（例えば、硬度）を供する添加剤を意味する。
【００６５】
本明細書で用いる“流動促進剤”は、医薬組成物に増大した流動特性を供する添加剤を意味する。
【００６６】
本明細書で用いる“着色剤”は、医薬組成物に所望の色を供する添加剤を意味する。着色剤の例には、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ ＃ １ アルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ ＃２、他のＦＤ＆Ｃ Ｂｌｕｅ色素、二酸化チタン、酸化銅および／またはそれらの組合せのような市販されている色素が含まれる。一態様において、本発明により提供される医薬組成物は、紫色である。
【００６７】
本明細書で用いる“滑沢剤”は、錠剤に圧縮される医薬組成物に添加される添加剤を意味する。滑沢剤は、顆粒を錠剤に圧縮し、錠剤形態の医薬組成物を打抜プレスから取り出すことを目的とする。
【００６８】
本明細書で用いる“立方センチメートル”および“ｃｃ”は、容積単位を示すために互換的に用いられる。１ｃｃ＝１ｍＬである。
【００６９】
本明細書で用いる“キロポンド”および“ｋＰ”は、互換的に用いられ、尺度を意味し、ｋＰ＝約９．８ニュートンである。
【００７０】
本明細書で用いる“脆砕性”は、外圧に対して変化せず、その形態を保持する錠剤の性質を意味する。脆砕性は、式（１）で示される数式を用いて定量化され得る：
【数１】
2013536231.tif 000006
式中、Ｗ０は、錠剤の元の重量であり、Ｗｆは、脆砕性の試験装置（friabilator）に通した後の錠剤の最終重量である。脆砕性を、実験錠剤を１００または４００回転させる標準的ＵＳＰ試験装置を用いて測定する。本発明のいくつかの錠剤は、５．０％未満の脆砕性を有する。別の態様において、該脆砕性は２．０％未満である。別の態様において、目標となる脆砕性は、４００回転後に１．０％未満である。
【００７１】
本明細書で用いる“平均粒径”は、レーザー光散乱法、画像分析または篩分析等の技術を用いて測定される平均粒径である。一態様において、本発明で供される医薬組成物を製造するために使用される顆粒は、１．０ｍｍ未満の平均粒径を有する。
【００７２】
本明細書で用いる“バルク密度”は、粒子が占める総容積で割った材料の粒子質量である。総容積は、粒子体積、粒子間の空隙容量および内部細孔容積を含む。バルク密度は、材料固有の性質ではなく、材料が処理される方法によって変化し得る。一態様において、本発明で供される医薬組成物を製造するために使用される顆粒は、約０．５−０．７ｇ／ｃｃのバルク密度を有する。
【００７３】
本発明の薬剤化合物の有効量または“治療的有効量”は、疾患状態、対象の年齢および体重ならびに対象における所望の応答を引き出すための本発明の化合物の能力のような因子によって変化し得る。投与量レジメンは、な治療応答を供するために調節され得る。有効量はまた、本発明の化合物の毒性または有害な作用（例えば、副作用）が、治療的に有益な効果を上回らない量である。
【００７４】
本明細書で用いる用語、化合物の“治療的有効量”および“有効量”は、他に特記されない限り、疾患または障害の処置または対処において治療的利点を提供するか、または疾患または障害と関係する１種以上の症状を遅延または縮小するのに十分な量を意味する。化合物の“治療的有効量”および“有効量”は、疾患または障害の処置または対処において治療的利点を提供する、単独の、または１種以上の他の薬剤と組み合わせた治療剤の量を意味する。用語“治療的有効量”および“有効量”は、治療全体を改善するか、疾患または障害の症状または原因を軽減または回避するか、または別の治療剤の治療的硬化を増強する量を包含し得る。
【００７５】
語句“実質的に純粋な化合物１ アモルファス形態”中で用いる“実質的に純粋な”は、約９０％以上の純度であることを意味する。別の態様において、“実質的に純粋な”は、約９５％以上の純度であることを意味する。別の態様において、“実質的に純粋な”は、約９８％以上の純度であることを意味する。別の態様において、“実質的に純粋な”は、約９９％以上の純度であることを意味する。
【００７６】
化合物１（例えば、化合物１ アモルファス形態または化合物１形態Ａ）に関して、用語“約”および“およそ”が、用量、量または組成物もしくは投与量形態の成分の重量％と関連して用いられるとき、それは、特定の用量、量または重量％から得られるものと同等の薬理学的効果を提供すると当業者に認識される、用量、量または重量％を意味する。具体的には、用語“約”または“およそ”は、当業者により決定される通り、特定の値について許容される誤差を意味し、その値がどのように測定されるか、または決定されるかにある程度左右される。ある態様において、用語“約”または“およそ”は、１、２、３または４標準偏差以内を意味する。ある態様において、用語“約”または“およそ”は、所定の値または範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％または０．０５％以内を意味する。
【００７７】
他に特記されない限り、本明細書に記載される構造にはまた、全ての異性体構造（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何（または立体）異性体）；例えば、各不斉中心に対するＲおよびＳ体の立体異性体、（Ｚ）および（Ｅ）二重結合異性体、ならびに（Ｚ）および（Ｅ）立体異性体が包含されることが意図される。故に、単一の立体化学異性体ならびに本発明の化合物のエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何（または立体）異性体混合物は、本発明の範囲内である。化合物１の全ての互変異性体形態は、本明細書中に包含される。例えば、化合物１は、互変異性体として存在してよく、その両方が本明細書中に包含される。
【化２】
2013536231.tif 000007
【００７８】
さらに、他に特記しない限り、本明細書に記載される構造はまた、１個以上の同位元素に富む原子の存在のみが異なる化合物を含むことを意味する。例えば、１個以上の水素原子の重水素もしくはトリチウムによる置換、または１個以上の炭素原子の１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−富化炭素による置換を有する化合物１は本発明の範囲内である。かかる化合物は、例えば分析ツール、生物学的アッセイにおけるプローブ、または改善された治療プロファイルを有する化合物として有用である。
【００７９】
医薬組成物
本発明は、化合物１ アモルファス形態または化合物１形態Ａを含む錠剤のような医薬組成物、製剤および固体投与量形態を提供する。いくつかの態様において、化合物１は結晶形態Ｉ（化合物１形態Ｉ）である。この面のいくつかの態様において、医薬組成物中に存在する化合物１の量は、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇである。この面のいくつかの態様において、医薬組成物中に存在する化合物１の重量／重量相対的割合は、１０ないし５５％である。これらのおよび他の態様において、化合物１は、実質的に純粋な化合物１ アモルファス形態として存在する。“実質的に純粋な”とは、９０％純度以上；好ましくは、９５％純度以上；より好ましくは、９９．５％純度以上である（すなわち、化合物１の結晶形態が混入していない）ことを意味する。
【００８０】
故に、一面において、本発明は、
ａ． 化合物１ アモルファス形態；
ｂ． 充填剤；
ｃ． 崩壊剤；
ｄ． 希釈剤；
ｅ． 滑沢剤；および
ｇ． 流動促進剤
を含む、医薬組成物を提供する。
【００８１】
この面の一態様において、医薬組成物は２．５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の一態様において、医薬組成物は、５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の一態様において、医薬組成物は、１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の一態様において、医薬組成物は、２５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の別の態様において、医薬組成物は、５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の別の態様において、医薬組成物は、１００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の別の態様において、医薬組成物は、１２５ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の別の態様において、医薬組成物は、１５０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。この面の別の態様において、医薬組成物は、２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。
【００８２】
いくつかの態様において、医薬組成物は化合物１ アモルファス形態を含み、ここで、化合物１ アモルファス形態は、組成物重量に対して少なくとも４重量％（例えば、少なくとも５重量％、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、または少なくとも６０重量％）の量で存在する。
【００８３】
いくつかの態様において、医薬組成物は、化合物１ アモルファス形態、充填剤、希釈剤、崩壊剤、流動促進剤および滑沢剤を含む。この態様において、組成物は、組成物重量に対して約４重量％ないし約５０重量％（例えば、約１０−４５重量％）の化合物１ アモルファス形態、より典型的には、組成物重量に対して２０重量％ないし約４０重量％（例えば、約２５−３０重量％）の化合物１ アモルファス形態を含む。
【００８４】
いくつかの態様において、医薬組成物は、化合物１ アモルファス形態、充填剤、希釈剤、崩壊剤、流動促進剤および滑沢剤を含む。この態様において、組成物は、組成物重量に対して約４重量％ないし約５０重量％（例えば、約１０−４５重量％）の化合物１ アモルファス形態、より典型的には、組成物重量に対して２０重量％ないし約４０重量％（例えば、約２５−３０重量％）の化合物１ アモルファス形態を含む。
【００８５】
組成物中の化合物１ アモルファス形態の濃度は、所望の量の化合物１ アモルファス形態および医薬組成物の所望の溶解プロフィ−ルを得るために必要な医薬組成物の量のような種々の因子に左右される。
【００８６】
別の態様において、医薬組成物は化合物１を含み、その固体形態中の化合物１は、（例えば、英国のMalvern Instrumentsから市販されているマルバ−ン マスタ−サイザ−を用いて）光散乱により測定された０．１ミクロンないし１０ミクロンの平均粒子径を有する。別の態様において、化合物１の粒子サイズは１ミクロンないし５ミクロンである。別の態様において、化合物１は、Ｄ５０が２．０ミクロンの粒子サイズを有する。
【００８７】
上記の通り、化合物１ アモルファス形態に加えて、本発明のいくつかの態様において、経口投与される医薬組成物はまた、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、希釈剤、流動促進剤、滑沢剤、着色剤、または芳香剤およびそれらの任意の組み合わせのような１種以上の添加剤を含む。
【００８８】
本発明に好適な充填剤は、医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわちそれらは、医薬組成物の溶解性、硬度、化学的安定性、物理的安定性または生物学的活性を実質的に低減させることがない。充填剤の例としては、セルロース、修飾セルロース（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース）、セルロースアセテート、微結晶セルロース、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、デンプン類（例えば、コーンデンプン、ジャガイモデンプン）、糖類（例えば、ソルビトール、ラクトース、スクロースなど）、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００８９】
故に、一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して少なくとも５重量％（例えば、少なくとも約２０重量％、少なくとも約３０重量％、または少なくとも約４０重量％）の量の少なくとも１つの充填剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１０重量％ないし約６０重量％（例えば、約１０重量％ないし約５５重量％、約１５重量％ないし約３０重量％、または約２０重量％ないし約２５重量％）の充填剤を含む。別の例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して少なくとも約２０重量％（例えば、少なくとも２０重量％）の微結晶セルロース、例えばMCC Avicel PH102を含む。
【００９０】
本発明に好適な崩壊剤は、医薬組成物の分散性を向上させ、且つ医薬組成物の成分と適合し、すなわち、崩壊剤は、医薬組成物の化学的安定性、物理的安定性、硬度または生物学的活性を実質的に低減させない。崩壊剤の例としては、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウムまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９１】
故に、一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１０重量％以下（例えば、約７重量％以下、約６重量％以下、または約５重量％以下）の量の崩壊剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１重量％ないし約１０重量％（例えば、約１．５重量％ないし約７．５重量％または約２．５重量％ないし約６重量％）の崩壊剤を含む。ある例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して約０．１％ないし約１０重量％（例えば、約０．５重量％ないし約７．５重量％または約１．５重量％ないし約６重量％）の崩壊剤を含む。さらなる他の例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して約０．５％ないし約１０重量％（例えば、約１．５重量％ないし約７．５重量％または約２．５重量％ないし約６重量％）の崩壊剤を含む。
【００９２】
本発明に好適な界面活性剤は、医薬組成物の湿潤性を向上させ、且つ医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、界面活性剤は、医薬組成物の化学的安定性、物理的安定性、硬度、または生物学的活性を実質的に低減させない。界面活性剤の例としては、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ナトリウムステアリルフマラート（ＳＳＦ）、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレア−ト（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標））、またはそれらの任意の組み合わせなどが挙げられる。
【００９３】
故に、一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１０重量％以下（例えば、約５重量％以下、約２重量％以下、約１重量％以下、約０．８重量％以下、または約０．６重量％以下）の界面活性剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１０重量％ないし約０．１重量％（例えば、約５重量％ないし約０．２重量％または約２重量％ないし約０．３重量％）の界面活性剤を含む。さらに別の例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して約１０重量％ないし約０．１重量％（例えば、約５重量％ないし約０．２重量％または約２重量％ないし約０．３重量％）のラウリル硫酸ナトリウムを含む。
【００９４】
本発明に好適な希釈剤は、所望のサイズの錠剤を製造するために製剤に必要とされるかさ高さを付加し得て、一般的に、医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、希釈剤は、医薬組成物の溶解性、硬度、化学的安定性、物理的安定性または生物学的活性を実質的に低減させない。希釈剤の例としては、糖類、例えば粉砂糖、圧縮糖（compressible sugar）、デキストレート（dextrate）、デキストリン、デキストロース、ラクトース、ラクトース一水和物、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび修飾セルロース、例えば、粉末化セルロース、タルク、リン酸カルシウム、デンプンまたはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００９５】
故に、一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して４０重量％以下（例えば、３５重量％以下、３０重量％以下、２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、または１０重量％以下）の希釈剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約４０重量％ないし約１重量％（例えば、約３５重量％ないし約５重量％または約３０重量％ないし約７重量％、約２５重量％ないし約１５重量％）の希釈剤を含む。別の例において、医薬組成物は、組成物の重量に対して４０重量％以下（例えば、３５重量％以下または２５重量％以下）のラクトース一水和物を含む。さらに別の例において、医薬組成物は、組成物の重量に対して約３５重量％ないし約１重量％（例えば、約３０重量％ないし約５重量％または約２５重量％ないし約１０重量％）のラクトース一水和物を含む。
【００９６】
本発明に好適な流動促進剤は、医薬組成物の流動性を向上させ、且つ医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、流動促進剤は、医薬組成物の溶解度、硬度、化学的安定性、物理的安定性、または生物学的活性を実質的に低減させない。流動促進剤の例には、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、またはそれらの組み合わせが含まれる。
【００９７】
故に、一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して２重量％以下（例えば、１．７５重量％、１．２５重量％以下、または１．００重量％以下）の量の流動促進剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約２重量％ないし約０．０５重量％（例えば、約１．５重量％ないし約０．０７重量％または約１．０重量％ないし約０．０９重量％）の流動促進剤を含む。別の例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して２重量％以下（例えば、１．７５重量％、１．２５重量％以下、または１．００重量％以下）のコロイド状二酸化ケイ素を含む。さらに別の例では、医薬組成物は、組成物の重量に対して約２重量％ないし約０．０５重量％（例えば、約１．５重量％ないし約０．０７重量％または約１．０重量％ないし約０．０９重量％）のコロイド状二酸化ケイ素を含む。
【００９８】
いくつかの態様において、医薬組成物は、表面（例えば、混合用ボウルの表面、圧縮加工型および／またはパンチ）への顆粒ビ−ズ混合物の接着を阻止し得る滑沢剤を含み得る、経口固体医薬投与量形態を含み得る。滑沢剤はまた、顆粒内の粒子間摩擦を低減し、圧縮および打抜プレスからの圧縮された医薬組成物の取り出しを改善し得る。滑沢剤はまた、医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、滑沢剤は、医薬組成物の溶解性、硬度または生物学的活性を実質的に低減させない。滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、ステアリン酸アルミニウム、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。一態様において、医薬組成物は、組成物の重量に対して５重量％以下（例えば、４．７５重量％、４．０重量％以下、または３．００重量％以下、または２．０重量％以下）の量の滑沢剤を含む。例えば、医薬組成物は、組成物の重量に対して約５重量％ないし約０．１０重量％（例えば、約４．５重量％ないし約０．５重量％または約３重量％ないし約０．５重量％）の滑沢剤を含む。別の例において、医薬組成物は、組成物の重量に対して５重量％以下（例えば、４．０重量％以下、３．０重量％以下、または２．０重量％以下、または１．０重量％以下）のステアリン酸マグネシウムを含む。さらに別の例において、医薬組成物は、組成物の重量に対して約５重量％ないし約０．１０重量％（例えば、約４．５重量％ないし約０．１５重量％または約３．０重量％ないし約０．５０重量％）のステアリン酸マグネシウムを含む。
【００９９】
本発明の医薬組成物は、組成物の視覚的好感度、味、および／または香気を向上させるために１種以上の着色剤、香味剤および／または香料を含んでいてよい。好適な着色剤、香味剤または香料は、医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、それらは、医薬組成物の溶解度、化学的安定性、物理的安定性、硬度、または生物学的活性を実質的に低減させない。一態様において、医薬組成物は、着色剤、香味剤および／または香料を含む。一態様において、本発明により供される医薬組成物は紫色である。
【０１００】
いくつかの態様において、医薬組成物は錠剤を含むか、または錠剤に製剤されてよく、該錠剤は、着色剤でコーティングされ、好適なインクを使用してロゴ、他の画像、および／またはテキストでラベルを付されてもよい。さらに他の態様において、医薬組成物は錠剤を含むか、または錠剤に製剤されてよく、該錠剤は着色剤でコーティングされ、ワックス加工され、好適なインクを使用してロゴ、他の画像、および／またはテキストでラベルを付されてもよい。好適な着色剤およびインクは、医薬組成物の成分に適合可能であり、すなわち、着色剤は、医薬組成物の溶解度、化学的安定性、物理的安定性、硬度、または生物学的活性を実質的に低減させない。好適な着色剤およびインクは、任意の色であってよく、水ベースであるか溶媒ベースである。一態様において、医薬組成物から製剤した錠剤を着色剤でコーティングし、次いで、好適なインクを使用してロゴ、他の画像、および／またはテキストでラベルを付する。例えば、本明細書中に記載の医薬組成物を含む錠剤を、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の着色剤を含むフィルムコーティングでコーティングすることができる。着色した錠剤を、好適なインクを使用して、錠剤中の活性成分の含量を表示したロゴおよびテキストでラベルを付することができる。別の例では、本明細書に記載の医薬組成物を含む錠剤を、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の着色剤を含むフィルムコーティングでコーティングすることができる。
【０１０１】
別の態様において、医薬組成物から製剤した錠剤を、着色剤でコーティングし、ワックス処理し、次いで、好適なインクを使用してロゴ、他の画像、および／またはテキストでラベルを付する。例えば、本明細書に記載の医薬組成物を含む錠剤を、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の着色剤を含むフィルムコーティングでコーティングすることができる。着色した錠剤を、出発錠剤コア重量の約０．０１％ ｗ／ｗに秤量したカルナウバ蝋粉末でワックス処理することができる。ワックス処理した錠剤を、好適なインクを使用して錠剤中の活性成分の強度を表示したロゴおよびテキストでラベルを付することができる。別の例では、本明細書に記載の医薬組成物を含む錠剤を、約３重量％（例えば、約６重量％未満または約４重量％未満）の着色剤を含むフィルムコーティングでコーティングすることができる。着色した錠剤を、出発錠剤コア重量の約０．０１％ ｗ／ｗに秤量したカルナウバ蝋粉末でワックス処理することができる。ワックス処理した錠剤を、黒色インク（例えば、オパコード（登録商標）Ｓ−１−１７８２３、溶媒ベースのインク、Colorcon,Inc.of West Point,PA.より市販されている）のような医薬グレ−ドのインクを使用して錠剤中の活性成分の強度を表示したロゴおよびテキストでラベルを付することができる。
【０１０２】
一例の医薬組成物は、組成物の重量に対して約４重量％ないし約７０重量％（例えば、約１０重量％ないし約６０重量％、約１５重量％ないし約５０重量％、約２５重量％ないし約５０重量％、約２０重量％ないし約７０重量％、約３０重量％ないし約７０重量％、約４０重量％ないし約７０重量％、または約５０重量％ないし約７０重量％）の化合物１ アモルファス形態を含む。上記の組成物はまた、１種以上の薬学的に許容される添加剤、例えば約２０重量％ないし約５０重量％の充填剤；約１重量％ないし約５重量％の崩壊剤；約２重量％ないし約０．２５重量％の界面活性剤；約１重量％ないし約３０重量％の希釈剤；約２重量％ないし約０．０５重量％の流動促進剤；および、約５重量％ないし約０．１重量％の滑沢剤を含み得る。または、該医薬組成物は、組成物の重量に対して約１５重量％ないし約７０重量％（例えば、約２０重量％ないし約６０重量％、約２５重量％ないし約５５重量％、または約３０重量％ないし約５０重量％）の化合物１ アモルファス形態；ならびに、１種以上の添加剤、例えば、約２０重量％ないし約５０重量％の充填剤；約１重量％ないし約５重量％の崩壊剤；約２重量％ないし約０．２５重量％の界面活性剤；約１重量％ないし約３０重量％の希釈剤；約２重量％ないし約０．０５重量％の流動促進剤；および、約５重量％ないし約０．１重量％の滑沢剤を含む組成物を包含する。
【０１０３】
別の例の医薬組成物は、組成物の重量に対して約４重量％ないし約７０重量％（例えば、約１０重量％ないし約６０重量％、約１５重量％ないし約５０重量％、約２５重量％ないし約５０重量％、約２０重量％ないし約７０重量％、約３０重量％ないし約７０重量％、約４０重量％ないし約７０重量％、または約５０重量％ないし約７０重量％）の化合物１ アモルファス形態、ならびに１種以上の添加剤、例えば、約２０重量％ないし約５０重量％の充填剤；約１重量％ないし約５重量％の崩壊剤；約２重量％ないし約０．２５重量％の界面活性剤；約１重量％ないし約３０重量％の希釈剤；約２重量％ないし約０．０５重量％の流動促進剤；および、約２重量％ないし約０．１重量％の滑沢剤を含む。
【０１０４】
一態様において、本発明は、
ａ．組成物の重量に対して約２５重量％の化合物１ アモルファス形態；
ｂ．組成物の重量に対して約２２．５重量％の微結晶セルロース；
ｃ．組成物の重量に対して約２２．５重量％のラクトース一水和物；
ｄ．組成物の重量に対して約３重量％のナトリウムクロスカルメロースナトリウム；
ｅ．組成物の重量に対して約０．２５重量％のラウリル硫酸ナトリウム；
ｆ．組成物の重量に対して約０．５重量％のステアリン酸マグネシウム；および
ｇ．組成物の重量に対して約１．２５重量％のコロイド状シリカ
を含む、乾式混合または粒状医薬組成物である。
【０１０５】
一態様において、本発明は、
ａ．組成物の重量に対して約２５重量％の化合物１ アモルファス形態；
ｂ．組成物の重量に対して約２２．５重量％の微結晶セルロース；
ｃ．組成物の重量に対して約２２．５重量％のラクトース一水和物；
ｄ．組成物の重量に対して約３重量％のナトリウムクロスカルメロースナトリウム；
ｅ．組成物の重量に対して約０．２５重量％のラウリル硫酸ナトリウム；
ｆ．組成物の重量に対して約０．５重量％のステアリン酸マグネシウム；
ｇ．組成物の重量に対して約１．２５重量％のコロイド状シリカ；および
ｈ．約２５重量％のポリマー
を含む、乾式混合または粒状医薬組成物である。
【０１０６】
一態様において、本発明は、
ａ．組成物の重量に対して約５重量％の化合物１ アモルファス形態；
ｂ．組成物の重量に対して約４２．９重量％の微結晶セルロース；
ｃ．組成物の重量に対して約４２．９重量％のラクトース一水和物；
ｄ．組成物の重量に対して約３重量％のナトリウムクロスカルメロースナトリウム；
ｅ．組成物の重量に対して約０．５重量％のステアリン酸マグネシウム；
ｇ．組成物の重量に対して約１．２５重量％のコロイド状シリカ；および
ｈ．約５重量％のポリマー
を含む、乾式混合または粒状医薬組成物である。
【０１０７】
別の態様において、ポリマーはＨＰＭＣＡＳである。
【０１０８】
本発明の医薬組成物は、錠剤形態、カプセル形態、パウチ形態、ロゼンジ形態または経口投与に好適な他の形態に処理され得る。故に、いくつかの態様において、医薬組成物は錠剤形態である。
【０１０９】
さらに別の本発明の経口医薬組成物において、初期硬度が５−２１Ｋｐ±２０％の錠剤形の医薬組成物は、組成物の重量に対して約２５重量％の化合物１ アモルファス形態；組成物の重量に対して約２２．５重量％の微結晶性セルロース；組成物の重量に対して約２２．５重量％のラクトース一水和物；組成物の重量に対して約３重量％のナトリウムクロスカルメロースナトリウム；組成物の重量に対して約０．２５重量％のラウリル硫酸ナトリウム；組成物の重量に対して約０．５重量％のステアリン酸マグネシウム；および、組成物の重量に対して約１．２５重量％のコロイド状シリカを含む。錠剤形の医薬組成物中の化合物１ アモルファス形態の量は、１錠剤当たり、約２５ｍｇないし約２００ｍｇ、例えば５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの範囲である。
【０１１０】
ある態様において、錠剤形の医薬組成物は、約１０ｍｇの化合物１ アモルファス形態を含む。ある態様において、錠剤形の医薬組成物は、約５０ｇの化合物１ アモルファス形態を含む。ある態様において、錠剤形の医薬組成物は、約１００ｇの化合物１ アモルファス形態を含む。
【０１１１】
本発明の別の面は、化合物１ アモルファス形態および他の添加剤（例えば、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤、着色剤、滑沢剤、またはそれらの任意の組み合わせ）（それぞれ、上記および下記の実施例に記載の通りである）を含む錠剤またはカプセル剤からなる医薬製剤であって、該錠剤は、約３０分間に、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％）が溶解する溶解性を有する、医薬製剤を提供する。一例において、医薬組成物は、２５ｍｇないし２００ｍｇ、例えば２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの範囲の量の化合物１ アモルファス形態、ならびに１種以上の添加剤（例えば、充填剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤、着色剤、滑沢剤またはそれらの任意の組み合わせ）（それぞれ、上記および下記の実施例に記載の通りである）を含む錠剤からなり、該錠剤は、約３０分間に、約５０％ないし約１００％（例えば、約５５％ないし約９５％または約６０％ないし約９０％）が溶解する溶解性を有する。
【０１１２】
一態様において、錠剤は、少なくとも約１０ｍｇ（例えば、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３０ｍｇ、少なくとも約４０ｍｇ、または少なくとも約５０ｍｇ）の化合物１ アモルファス形態；ならびに、充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤および滑沢剤から選択される１種以上の添加剤を含む組成物を含む。別の態様において、錠剤は、少なくとも約１０ｍｇ（例えば、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約３０ｍｇ、少なくとも約４０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、または少なくとも１５０ｍｇ）の化合物１ アモルファス形態ならびに充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤および滑沢剤から選択される１種以上の添加剤を含む組成物を含む。
【０１１３】
溶解を、約３７℃の温度で約５０−７５ｒｐｍで撹拌しながら、５０ｍＭの一リン酸カリウムを用いてｐＨ６．８で緩衝した９００ｍＬのＤＩ水に溶解した０．１％ ＣＴＡＢの溶解媒質を用いる標準的ＵＳＰタイプＩＩ装置で測定することができる。単一の実験錠剤を、該装置の各試験容器中で試験する。溶解はまた、約３７℃の温度で約６５ｒｐｍで撹拌しながら、９００ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解した０．７％ラウリル硫酸ナトリウムの溶解媒質を用いる標準的ＵＳＰタイプＩＩ装置で測定することもできる。単一の実験錠剤を、該装置の各試験容器中で試験する。溶解はまた、約３７℃の温度で約６５ｒｐｍで撹拌しながら、９００ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）に溶解した０．５％ラウリル硫酸ナトリウムの溶解媒質を用いて標準的なＵＳＰタイプＩＩ装置を使用して測定することもできる。単一の実験錠剤を、該装置の各試験容器中で試験する。
【０１１４】
化合物１ アモルファス形態および化合物１形態Ａの製造方法
化合物１は、出発化合物として用いられ、一態様において、スキーム１−４に従い、酸塩化物部分とアミン部分をカップリングさせて製造することができる。
スキーム１．塩化物部分の合成
【化３】
2013536231.tif 000008
【０１１５】
スキーム２．塩化物部分の合成−別の合成
【化４】
2013536231.tif 000009
【０１１６】
スキーム３．アミン部分の合成
【化５】
2013536231.tif 000010
【０１１７】
スキーム４．化合物１の形成
【化６】
2013536231.tif 000011
【０１１８】
化合物１ アモルファス形態の製造方法
化合物１、あるいは化合物１の結晶形態から出発して、化合物１ アモルファス形態を、回転蒸発法または噴霧乾燥法により製造することができる。
【０１１９】
化合物１をメタノールのような適当な溶媒に溶解し、メタノールを回転蒸発により除去して、泡状生成物である化合物１ アモルファス形態を得る。いくつかの態様において、温水浴を、蒸発を早めるために用いる。
【０１２０】
化合物１ アモルファス形態はまた、化合物１から噴霧乾燥法を用いて製造され得る。噴霧乾燥は、液体供給物を乾燥した粒子形態に変換する工程である。所望により、流動床乾燥または真空乾燥のような二次的乾燥工程を、残留溶媒を薬学的に許容されるまで減少させるために使用できる。典型的に、噴霧乾燥は、例えば高度に分散した液体懸濁液または溶液、および、液滴の蒸発および乾燥を生ずるのに十分量の熱空気を接触させることを含む。噴霧乾燥すべき製剤は、選択した噴霧乾燥装置を使用して霧化し得る全ての溶液、粗製懸濁液、スラリー、コロイド状分散体、またはペーストであり得る。標準法において、本製剤は、溶媒を蒸発させ、所望の生成物をコレクター(例えば、サイクロン)へ輸送する暖かい濾過空気の流れの中に噴霧される。次いで、消費された空気を溶媒と共に廃棄するか、あるいは消費された空気を、溶媒を捕捉しリサイクルする可能性を高めるために凝集器(コンデンサー)に送る。市販されているタイプの装置を本噴霧乾燥の実行に使用できる。例えば、市販の噴霧乾燥機はBuchi Ltd. およびNiroにより製造されている(例えば、Niroにより製造されているＰＳＤラインの噴霧乾燥機)(ＵＳ２００４／０１０５８２０；ＵＳ２００３／０１４４２５７参照)。
【０１２１】
噴霧乾燥は、典型的に約３重量％から約３０重量％、例えば約４重量％から約２０重量％、好ましくは少なくとも約１０重量％の固体負荷量(すなわち、薬剤＋添加剤)を用いる。一般に、固体負荷量の上限は、得られる溶液の粘性(例えば、ポンプ輸送できる能力)、得られる溶液および溶液中の成分の溶解度により決定される。一般に、溶液の粘性は、得られる粉末生成物の粒子サイズを決定し得る。
【０１２２】
噴霧乾燥の技術および方法は、 Perry's Chemical Engineering Handbook, 6th Ed., R.H. Perry, D.W. Green ＆ J.O. Maloney, eds.), McGraw−Hill book co. (1984);およびMarshall “Atomization and Spray−Drying” 50, Chem. Eng. Prog. Monogr. Series 2 (1954)に見ることができる。一般に、本噴霧乾燥は、約６０℃から約２００℃、例えば、約９５℃から約１８５℃、約１１０℃から約１８２℃、約９６℃から約１８０℃、例えば、約１４５℃の入口温度で行う。本噴霧乾燥は、一般に約３０℃から約９０℃、例えば約４０℃から約８０℃、約４５℃から約８０℃、例えば、約７５℃の出口温度で行う。噴霧化流速は、一般的に、約４ｋｇ／ｈないし約１２ｋｇ／ｈ、例えば、約４．３ｋｇ／ｈないし約１０．５ｋｇ／ｈ、例えば、約６ｋｇ／ｈまたは約１０．５ｋｇ／ｈである。供給流速は、一般的に、約３ｋｇ／ｈないし約１０ｋｇ／ｈ、例えば、約３．５ｋｇ／ｈないし約９．０ｋｇ／ｈ、例えば、約８ｋｇ／ｈまたは約７．１ｋｇ／ｈである。噴霧化率は、一般的に、約０．３ないし１．７、例えば約０．５ないし１．５、例えば約０．８または約１．５である。
【０１２３】
溶媒の除去は、トレイ乾燥、流動床乾燥(例えば、およそ室温から約１００℃)、真空乾燥、マイクロ波乾燥、回転ドラム乾燥または双円錐形真空乾燥(例えば、およそ室温から約２００℃)のような連続した乾燥段階を必要とし得る。
【０１２４】
一態様において、固体分散体は、流動床乾燥される。
【０１２５】
ある工程において、溶媒は、揮発性溶媒、例えば約１００℃未満の沸点を有する溶媒を含む。いくつかの態様において、溶媒は、溶媒の混合物、例えば揮発性溶媒の混合物または揮発性および不揮発性溶媒の混合物を含む。溶媒の混合物が使用されるとき、該混合物は、１種以上の不揮発性溶媒を含み得、例えば、不揮発性溶媒が，混合物中に、約１５％未満、例えば約１２％未満、約１０％未満、約８％未満、約５％未満、約３％未満、または約２％未満存在する。
【０１２６】
好ましい溶媒は、化合物１が、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、少なくとも約１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、またはそれ以上）の溶解性を有する溶媒である。より好ましい溶媒には、化合物１が、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌの溶解性を有するものが挙げられる。
【０１２７】
試され得る溶媒の例としては、アセトン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、酢酸エチル、エチルエーテル、氷酢酸（ＨＡｃ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）、メチル ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ペンタン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、およびトルエンが挙げられる。共溶媒の例としては、アセトン／ＤＭＳＯ、アセトン／ＤＭＦ、アセトン／水、ＭＥＫ／水、ＴＨＦ／水、ジオキサン／水が挙げられる。２溶媒系において、溶媒は、約０．１％ないし約９９．９％存在し得る。いくつかの好ましい態様において、水は、アセトンとの共溶媒であり、ここで、水は約０．１％ないし約１５％、例えば約９％ないし約１１％、例えば約１０％存在する。いくつかの好ましい態様において、水は、ＭＥＫとの共溶媒であり、ここで、水は、約０．１％ないし約１５％、例えば約９％ないし約１１％、例えば約１０％存在する。いくつかの態様において、溶媒溶液は、３種の溶媒を含む。例えば、アセトンおよび水は、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＤＭＩ、ＤＭＳＯ、またはＨＡｃのような第３の溶媒と混合され得る。アモルファス化合物１が固体アモルファス分散体の１成分である例において、好ましい溶媒は、化合物１とポリマーの両方を溶解する。好適な溶媒としては、上記の溶媒、例えば、ＭＥＫ、アセトン、水、メタノール、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１２８】
粒子サイズおよび乾燥温度範囲ｈあ、最適な固体分散体を製造するために改変され得る。当業者には明らかなとおり、小さい粒子サイズは、改善された溶媒除去をもたらし得る。しかしながら、本発明者らは、より小さい粒子サイズが、ある条件下で、錠剤化のような下流の工程に最適な固体分散体を提供しない綿毛状の粒子（fluffy particle）をもたらし得ることを見いだした。より高い温度では、化合物１の結晶化または化学的分解が起こり得る。より低い温度では、十分量の溶媒が除去され得ない。本明細書で供する方法は、最適粒子サイズおよび最適乾燥温度を提供する。
【０１２９】
一般的に、粒子サイズは、Ｄ１０（μｍ）が約５未満、例えば約４.５未満、約４.０未満、または約３.５未満であり、Ｄ５０（μｍ）が一般に約１７未満、例えば約１６未満、約１５未満、約１４未満、約１３未満であり、およびＤ９０（μｍ）が一般に約１７５未満、例えば約１７０未満、約１７０未満、約１５０未満、約１２５未満、約１００未満、約９０未満、約８０未満、約７０未満、約６０未満、または約５０未満となるものである。一般に噴霧乾燥粒子のバルク密度は、約０.０８ｇ／ｃｃ〜約０.２０ｇ／ｃｃ、例えば約０.１０〜約０.１５ｇ／ｃｃ、例えば約０.１１ｇ／ｃｃまたは約０.１４ｇ／ｃｃである。一般に噴霧乾燥粒子のタップ密度は、１０タップについては、約０.０８ｇ／ｃｃ〜約０.２０ｇ／ｃｃ、例えば約０.１０〜約０.１５ｇ／ｃｃ、例えば約０.１１ｇ／ｃｃまたは約０.１４ｇ／ｃｃの範囲であり、５００タップについては、０.１０ｇ／ｃｃ〜約０.２５ｇ／ｃｃ、例えば約０.１１〜約０.２１ｇ／ｃｃ、例えば約０.１５ｇ／ｃｃ、約０.１９ｇ／ｃｃ、または約０.２１ｇ／ｃｃであり、１２５０タップについては、約０.１５ｇ／ｃｃ〜約０.２７ｇ／ｃｃ、例えば約０.１８〜約０.２４ｇ／ｃｃ、例えば約０.１８ｇ／ｃｃ、約０.１９ｇ／ｃｃ、約０.２０ｇ／ｃｃ、または約０.２４ｇ／ｃｃであり、２５００タップについては、０.１５ｇ／ｃｃ〜約０.２７ｇ／ｃｃ、例えば約０.１８〜約０.２４ｇ／ｃｃ、例えば約０.１８ｇ／ｃｃ、約０.２１ｇ／ｃｃ、約０.２３ｇ／ｃｃ、または約０.２４ｇ／ｃｃである。
【０１３０】
ポリマー
化合物１ アモルファス形態およびポリマー（または固体担体）を含む固体分散体もまた本発明に包含される。例えば、化合物１は、固体アモルファス分散体の一成分としてアモルファス化合物として存在する。固体アモルファス分散体は、一般的に、化合物１およびポリマーを含む。ポリマーの例としては、ＨＰＭＣまたはＨＰＭＣＡＳのようなセルロースポリマー、およびＰＶＰ／ＶＡのようなピロリドン含有ポリマーがある。いくつかの態様において、固体アモルファス分散体は、１種以上のさらなる添加剤、例えば界面活性剤を含む。
【０１３１】
一態様において、ポリマーは水性媒質に溶解可能である。ポリマーの溶解度は、ｐＨ非依存的またはｐＨ依存的であり得る。後者は１種以上の腸溶ポリマーを含む。用語「腸溶ポリマー」は、胃の強い酸性環境に対して小腸の弱い酸性環境で優先的に溶け得るポリマー、例えば酸性水性媒質には不溶性であるが、ｐＨが５〜６より高くなると可溶性になるポリマーをいう。好適なポリマーは、化学的および生物学的に不活性であるべきである。固体分散体の物理的安定性を改良するためには、ポリマーは、可能な限り高いガラス転移温度（Ｔｇ）を有するべきである。例えば、好ましいポリマーは、薬物（すなわち、化合物１）のガラス転移温度と少なくとも同等またはそれを超えるガラス転移温度を有する。他の好ましいポリマーは、薬物（すなわち、化合物１）の約１０ないし約１５℃以内であるガラス転移温度を有する。ポリマーの好適なガラス転移温度の例には、少なくとも約９０℃、少なくとも約９５℃、少なくとも約１００℃、少なくとも約１０５℃、少なくとも約１１０℃、少なくとも約１１５℃、少なくとも約１２０℃、少なくとも約１２５℃、少なくとも約１３０℃、少なくとも約１３５℃、少なくとも約１４０℃、少なくとも約１４５℃、少なくとも約１５０℃、少なくとも約１５５℃、少なくとも約１６０℃、少なくとも約１６５℃、少なくとも約１７０℃、または少なくとも約１７５℃がある（乾燥条件下で測定）。理論に縛られることを意図しないが、根本的な機序は、Ｔｇの高いポリマーの方が一般的に、室温での分子移動度も低くなることであり、これがアモルファス固体分散体の物理的安定性を安定させる上での決定的因子であり得ると考えられている。
【０１３２】
さらに、ポリマーの吸湿性は、低い、例えば約１０％未満であるべきである。本願において比較を目的とした場合、ポリマーまたは組成物の吸湿性は、約６０％相対湿度を特徴としている。いくつかの好ましい態様において、ポリマーは、約１０％未満の吸水性、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、または約２％未満の吸水性を有する。吸湿性はまた、固体分散体の物理的安定性にも影響を及ぼし得る。一般的に、ポリマーに吸着される水分は、ポリマーおよび得られた固体分散体のＴｇを大きく低下させ得ることから、上記の固体分散体の物理的安定性についてもさらに低下させる。
【０１３３】
一態様において、ポリマーは、１種以上の水溶性ポリマー（複数も可）または部分水溶性ポリマー（複数も可）である。水溶性または部分水溶性ポリマーには、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ））またはエチルセルロース；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）；アクリレート、例えばポリメタクリレート（例えば、Eudragit（登録商標）Ｅ）；シクロデキストリン（例えば、β−シクロデキストリン）およびコポリマーおよびその誘導体、例えばＰＶＰ−ＶＡ（ポリビニルピロリドン−酢酸ビニル）があるが、これらに限定はされない。
【０１３４】
いくつかの態様において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、例えばＨＰＭＣ Ｅ５０、ＨＰＭＣＥ１５またはＨＰＭＣ６０ＳＨ５０である。
【０１３５】
本明細書に記載の通り、ポリマーはｐＨ依存的腸溶ポリマーであり得る。かかるｐＨ依存的腸溶ポリマーには、セルロース誘導体（例えば、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ））、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）またはその塩（例えば、ナトリウム塩、例えば（ＣＭＣ−Ｎａ））；セルロースアセテートトリメリテ−ト（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルセルロースアセテートフタレート（ＨＰＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチル−セルロースアセテートフタレート（ＨＰＭＣＡＰ）、およびメチルセルロースアセテートフタレート（ＭＣＡＰ）、またはポリメタクリレート（例えば、Eudragit（登録商標）Ｓ）があるが、これらに限定はされない。いくつかの態様において、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）である。いくつかの態様において、、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート ＨＧグレ−ド（ＨＰＭＣＡＳ−ＨＧ）である。
【０１３６】
さらに別の態様において、ポリマーは、ポリビニルピロリドンコポリマー、例えばビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（ＰＶＰ／ＶＡ）である。
【０１３７】
化合物１がポリマー、例えばＨＰＭＣ、ＨＰＭＣＡＳまたはＰＶＰ／ＶＡポリマーと固体分散体を形成する態様において、固体分散体の全重量に対するポリマーの量は、約０.１重量％〜９９重量％の範囲である。他に特記されない限り、分散体内における上記の薬物、ポリマーおよび他の添加剤の割合については重量％で示す。ポリマーの量は、典型的には少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約３０％、例えば少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または約５０％（例えば、４９.５％）である。この量は、典型的には約９９％またはそれ未満、好ましくは約８０％またはそれ未満、例えば約７５％またはそれ未満、約７０％またはそれ未満、約６５％またはそれ未満、約６０％またはそれ未満、または約５５％またはそれ未満である。一態様において、ポリマーは、分散体の全重量の約５０％以下（さらに具体的には、約４０％〜５０％の範囲、例えば約４９％、約４９.５％、または約５０％）の量で存在する。ＨＰＭＣおよびＨＰＭＣＡＳは、ShinEtsu製の種々のグレ−ドの製品で入手可能であり、例えば、ＨＰＭＣＡＳは、ＡＳ−ＬＦ、ＡＳ−ＭＦ、ＡＳ−ＨＦ、ＡＳ−ＬＧ、ＡＳ−ＭＧ、ＡＳ−ＨＧを含む種々の種類の製品で入手可能である。これらの等級は、各々アセテートおよびサクシネートの置換パ−セントにより変化する。
【０１３８】
いくつかの態様において、化合物１およびポリマーは、ほぼ等量で存在し、例えばポリマーと薬物は、各々分散体の重量％の約半分を構成する。例えば、ポリマーは、約４９.５％で存在し、薬剤は約５０％存在する。
【０１３９】
いくつかの態様において、化合物１およびポリマーは合して、噴霧乾燥前に、非固体分散体の全固体含量の１ｗ／ｗ％ないし２０ｗ／ｗ％存在する。いくつかの態様において、化合物１およびポリマーは、合して、噴霧乾燥前に、非固体分散体の全固体含量の５ｗ／ｗ％ないし１５ｗ／ｗ％存在する。いくつかの態様において、化合物１およびポリマーは、合して、噴霧乾燥前に、非固体分散体の全固体含量の約１１ｗ／ｗ％存在する。
【０１４０】
いくつかの態様において、分散体は、さらに他の少量成分、例えば界面活性剤（例えば、ＳＬＳ）を含む。いくつかの態様において、界面活性剤は、分散体の約１０％未満、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％、または約０.５％の割合で存在する。
【０１４１】
ポリマーを含む態様では、ポリマーは、固体分散体の安定化に有効な量で存在するべきである。安定化には、化合物１の結晶化の阻止または防止が含まれる。かかる安定化は、化合物１がアモルファス形態から結晶形態へ変換するのを阻止する。例えば、ポリマーは、化合物１の少なくとも一部分（例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％またはまたはそれ以上）がアモルファス形態から結晶形態へ変換するのを防止する。安定化は、例えば、固体分散体のガラス転移温度を測定するか、アモルファス材料の緩和速度を測定するか、または化合物１の溶解度または生物学的利用能を測定することにより測定され得る。
【０１４２】
化合物１と組み合わせて使用するのに好適なポリマー、例えば固体分散体、例えばアモルファス固体分散体を形成させるのに好適ポリマーは、以下の特性の一つまたはそれ以上を有するべきである：
【０１４３】
ポリマーのガラス転移温度は、化合物１のガラス転移温度より約１０〜１５℃程度低い温度とするべきである。好ましくは、ポリマーのガラス転移温度は、化合物１のガラス転移温度より高く、一般には薬剤製品の所望の貯蔵温度より少なくとも５０℃高い。例えば、少なくとも約１００℃、少なくとも約１０５℃、少なくとも約１１０℃、少なくとも約１２０℃、少なくとも約１３０℃、少なくとも約１４０℃、少なくとも約１５０℃、少なくとも約１６０℃、またはそれより高温である。
【０１４４】
ポリマーは、相対的に非吸湿性であるべきである。例えば、ポリマーは、標準条件下での貯蔵時には、約１０％未満、例えば約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、または約５％未満、約４％未満、または約３％未満の水分吸収であるべきである。好ましくは、ポリマーは、標準条件下での貯蔵時には、吸着水分を実質的に含まない。
【０１４５】
ポリマーは、化合物１の溶解度と比較して噴霧乾燥処理に好適な溶媒において同等または改善された溶解度を示すべきである。好ましい態様では、ポリマーは、化合物１の場合と同じ溶媒または溶媒系の１種以上に溶解し得る。ポリマーは、少なくとも１種の非ヒドロキシ含有溶媒、例えば塩化メチレン、アセトンまたはそれらの組合せに可溶性であるのが好ましい。
【０１４６】
ポリマーは、例えば固体分散体または液体懸濁液中で化合物１と組み合わせたとき、ポリマーの非存在下における化合物１の溶解度と比べて、またはレファレンスポリマーと組み合わせた場合の化合物１の溶解度と比べて、生理学的に関連性のある水性媒質中における化合物１の溶解度を増加させるべきである。例えば、ポリマーは、固体アモルファス分散体または液体懸濁液から結晶性化合物１に変換するアモルファス化合物１の量を減少させることによりアモルファス化合物１の溶解度を増加させ得る。
【０１４７】
ポリマーはアモルファス物質の緩和速度を減少させるべきである。
ポリマーは、化合物１の物理的および／または化学的安定性を高めるべきである。
ポリマーは、化合物１の製造可能性を改善するべきである。
ポリマーは、化合物１の取扱い、投与または貯蔵特性の一つまたはそれ以上を改善するべきである。
ポリマーは、他の医薬成分、例えば添加剤と不利な形で相互作用するべきではない。
【０１４８】
候補ポリマー（または他の成分）の適合性は、アモルファス組成物を形成させるために、本明細書記載の噴霧乾燥法（または他の方法）を用いて試験され得る。候補組成物は、安定性、結晶形成に対する抵抗性、または他の特性に関して比較され、レファレンス調製物、例えばニ−トのアモルファス化合物１または結晶性化合物１の調製物と比較され得る。例えば、候補組成物を試験することにより、それが溶媒中での結晶化開始までの時間を阻止するかどうか、または制御条件下における所定の時点での変換割合を、レファレンス調製物と比べて少なくとも５０％、７５％、１００％または１１０％抑制するか否かを決定し得るか、または候補組成物を試験することにより、それが結晶性化合物１と比べて改善された生物学的利用能または溶解度を有するか否かを決定し得る。
【０１４９】
界面活性剤
固体分散体または他の組成物は、界面活性剤を含み得る。界面活性剤または界面活性剤混合物は、一般に固体分散体と水性媒質間の界面張力を減少させる。適当な界面活性剤または界面活性剤混合物はまた、固体分散体からの化合物１の水溶性および生物学的利用能を向上させ得る。本発明に関して使用される界面活性剤には、ソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、Spans（登録商標））、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類（例えば、Tweens（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＳＤＢＳ）ジオクチルナトリウムスルホサクシネート（ドキュセ−ト）、ジオキシコ−ル酸ナトリウム塩（ＤＯＳＳ）、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＨＴＡＢ）、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ミリスチン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、Gelucire ４４／１４、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ビタミンＥｄ−アルファトコフェリルポリエチレングリコール１０００サクシネート（ＴＰＧＳ）、レシチン、ＭＷ６７７−６９２、グルタン酸一ナトリウム一水和物、ラブラソール、ＰＥＧ８カプリル／カプリン酸グリセリド、トランスクトール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ソルトールＨＳ−１５、ポリエチレングリコール／ヒドロキシステアレート、タウロコ−ル酸、プルロニックＦ６８、プルロニックＦ１０８、およびプルロニックＦ１２７（または他のいずれかのポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー類（Pluronics、登録商標）または飽和ポリグリコール化グリセリド（Gelucirs 、登録商標））があるが、これらに限定されない。本発明に関して使用され得る上記界面活性剤の具体例には、Span ６５、Span ２５、Tween２０、Capryol９０、Pluronic Ｆ１０８、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、プルロニックおよびコポリマーがあるが、これらに限定されない。ＳＬＳが一般的には好ましい。
【０１５０】
固体分散体の全重量に対する界面活性剤（例えば、ＳＬＳ）の量は、０.１〜１５％の間であり得る。好ましくは、それは、約０.５〜約１０％、さらに好ましくは約０.５〜約５％、例えば約０．５〜４％、約０．５〜３％、約０．５〜２％、約０．５〜１％または約０．５％である。
【０１５１】
ある態様において、固体分散体の全重量に対する界面活性剤の量は、少なくとも約０.１、好ましくは約０.５％である。これらの態様において、界面活性剤は、約１５％まで、好ましくは約１２％まで、約１１％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％または約１％の量で存在する。界面活性剤が約０.５重量％の量で存在する態様が好ましい。
【０１５２】
候補界面活性剤（または他の成分）は、ポリマーの試験について記載した内容と同様にして本発明での使用に関する適合性について試験され得る。
【０１５３】
化合物１形態Ａの製造方法
一態様において、化合物１形態Ａは、有効な時間の間、適当な溶媒中で化合物１をスラリー化することにより製造される。別の態様において、適当な溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、ＭＴＢＥ、酢酸イソプロピル、種々の比の水／エタノール溶液、種々の比の水／アセトニトリル溶液、種々の比の水／メタノール溶液、または種々の比の水／イソプロピルアルコール溶液である。例えば、種々の比の水／エタノール溶液としては、水／エタノール １：９（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、水／エタノール １：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、および水／エタノール ９：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）が挙げられる。種々の比の水／アセトニトリル溶液としては、水／アセトニトリル １：９（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、水／アセトニトリル １：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、および水／アセトニトリル ９：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）が挙げられる。種々の比の水／メタノール溶液としては、水／メタノール １：９（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、水／メタノール １：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、および水／メタノール ９：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）が挙げられる。種々の比の水／イソプロピルアルコール溶液としては、水／イソプロピルアルコール １：９（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、水／イソプロピルアルコール １：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、および水／イソプロピルアルコール ９：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）が挙げられる。
【０１５４】
一般的に、約４０ｍｇの化合物１は、有効な時間の間、室温で、約１．５ｍｌの適当な溶媒中（標的濃度、２６．７ｍｇ／ｍｌ）でスラリー化される。いくつかの態様において、有効な時間は、約２４時間ないし約２週間である。いくつかの態様において、有効な時間は、約２４時間ないし約１週間である。いくつかの態様において、有効な時間は、約２４時間ないし約７２時間である。その後、固体が収集される。
【０１５５】
別の態様において、化合物１形態Ａは、適当な溶媒中に化合物１を溶解し、次いで溶媒を蒸発させることにより製造される。一態様において、適当な溶媒は、化合物１が２０ｍｇ／ｍｌ以上の溶解度を有するものである。例えば、これらの溶媒としては、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトンなどが挙げられる。
【０１５６】
一般的に、化合物１は、適当な溶媒中に溶解され、濾過され、その後、ゆっくり蒸発されるか、または迅速に蒸発される。ゆっくりした蒸発の一例は、化合物１溶液を含むバイアルのような容器を、１つ穴を開けたパラフィンフィルムで覆う。迅速な蒸発の一例は、化合物１溶液を含みバイアルのような容器を封をせずに放置する。その後に固体を集める。
【０１５７】
別の面において、本発明は、第一溶媒に化合物１を溶解し、化合物１がそれに低溶解性（溶解度＜１ｍｇ／ｍｌ）の第二溶液を添加することを含む、化合物１形態Ａの製造方法を特徴とする。例えば、第一溶媒は、化合物１がそれへの溶解度２０ｍｇ／ｍｌ以上である、例えば酢酸エチル、エタノール、イソプロピルアルコール、またはアセトンのような溶媒であり得る。第二溶媒は、例えば、ヘプタンまたは水であり得る。
【０１５８】
一般的に、化合物１は第一溶媒に溶解され、濾過されて、種晶を取り除かれる。第二溶媒は、拡販しながらゆっくり添加される。固体が沈殿し、濾過により集められる。
【０１５９】
医薬組成物の製造方法
本発明の投与量単位形態は、混合物または組成物、例えば、粉末または顆粒を、圧力下で圧縮または加圧して、安定な三次元形（例えば、錠剤）を形成することにより製造され得る。本明細書で用いる“錠剤”には、コーティングされるか、またはコーティングされない、全ての形態およびサイズの圧縮された医薬投与量単位形態が包含される。
【０１６０】
本明細書で用いる語句“投与量単位形態”は、処置される患者に好適な薬剤の物理的に独立した単位を意味する。一般的に、圧縮された混合物は、圧縮前の混合物の密度よりも高い密度を有する。本発明の投与量単位形態は、凹面および／または凸面、角を丸めた又は丸めない、および円形から直線的な形状を含む、ほとんど全ての形態を有し得る。いくつかの態様において、本発明の圧縮された投与量形態は、平らな面を有する円形の錠剤を含む。本発明の固形医薬投与量形態は、圧縮固体医薬投与量形態を形成する分野の当業者に公知の何れかの圧縮および加圧法により製造され得る。特定の態様において、本発明で提供する製剤は、例えば、関連するテキストブックに記載の通り、製剤分野の当業者に公知の常套方法を用いて製造され得る。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams ＆ Wilkins, Baltimore, Md. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms And Drug Delivery Systems, 7th Edition, Lippincott Williams ＆ Wilkins, (1999); The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); Gibson, Pharmaceutical Preformulation And Formulation, CRC Press (2001)（これらの文献は、引用によりその内容を本明細書中に包含させる）を参照のこと。
【０１６１】
造粒および圧縮
いくつかの態様において、活性剤である化合物１ アモルファス形態および包含される薬学的に許容される添加剤（例えば、充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、流動促進剤、滑沢剤またはそれらの何れかの組み合わせ）を含む粉末を含む固体形態は、乾燥造粒処理され得る。乾燥造粒処理は、粉末を、さらなる処理に好適なサイズを有する、より大きな粒子に凝集させる。乾燥造粒は、質量の変動または含量の均一性の要求に適合する錠剤を製造することが可能であるために、混合物の流動性を改善し得る。
【０１６２】
本明細書に記載の製剤は、１回以上の混合および乾燥造粒工程を用いて製造され得る。混合および造粒工程の順序および回数は、重要ではない。しかしながら、添加剤の少なくとも１つおよび化合物１は、錠剤への圧縮前に、乾燥造粒または湿式高せん断造粒処理され得る。錠剤圧縮の前に共に製造された化合物１ アモルファス形態および添加剤の乾燥造粒は、驚くことに、本発明の組成物の成分どうしの近接した物理的接触を提供する、単純で、安価かつ効率的な方法であり、良好な安定特性を有する錠剤製剤をもたらすと考えられる。乾燥造粒は、機械的処理により行われ得て、それは、湿式造粒処理とは対照的に、液体物質を使用することなく（水溶液、有機溶質ベースの溶液またはそれらの混合物の形態のいずれも使用することなく）混合物にエネルギ−を転移し、また本発明での実行が予定されている。一般的に機械的処理には、ローラー圧縮により供される圧縮のような圧縮力が必要とされる。乾燥造粒の別法の例としては、スラッギングが挙げられる。
【０１６３】
いくつかの態様において、ローラー圧縮は、１個以上の物質の高度に強化された機械的圧縮を含む造粒処理である。いくつかの態様において、粉末の混合物を含む医薬組成物は、圧縮され、すなわち２つの反回転ローラーの間でローラー圧縮されて固体シ−トを作製し、その後、篩いで砕いて粒子状物質を形成する。この粒子状物質において、成分間の近接した機械的接触が得られ得る。ローラー圧縮装置の例としては、Gerteis Maschinen社とProcessengineering AG の Minipactor(登録商標)、Gerteis 3W−Polygranが挙げられる。
【０１６４】
いくつかの態様において、本発明の錠剤圧縮は、液体物質を使用することなく（水溶液、有機溶質ベースの溶液、またはそれらの混合物のいずれも使用せず）行われ得て、すなわち、乾燥造粒処理である。典型的な態様において、得られるコアまたは錠剤は、１ないし１５ｋＰ；例えば、１．５ないし１２．５ｋＰ、好ましくは２ないし１０ｋＰの範囲の圧縮強度を有する。
【０１６５】
製造方法の簡単な説明
いくつかの態様において、本明細書に記載の式に当てはめて各成分の重さを測定する。次に、全ての顆粒内成分を篩にかけ、よく混合する。該成分を、好適な滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムを添加して潤滑し得る。次工程は、粉末混合物の圧縮／スラッギングおよび成分の篩い分けを含み得る。次に、圧縮されるか、またはスラッギングされた混合物を、顆粒に粉砕し、所望のサイズを得るために篩い分けする。次に、顆粒を、例えばステアリン酸マグネシウムを添加して潤滑し得る。次いで、本発明の顆粒状組成物を、好適な穿孔機で本発明の種々の医薬製剤に圧縮し得る。要すれば、錠剤を、フィルム、着色剤または他のコーティングで被覆し得る。
【０１６６】
本発明の別の面は、化合物１ アモルファス形態および充填剤、希釈剤、流動促進剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤から選択される１種以上の添加剤を含む組成物の混合物を提供し、約３０分間に少なくとも約５０％の溶解性を有する錠剤に該組成物を圧縮することを含む、医薬組成物の製造方法を提供する。
【０１６７】
別の態様において、湿式造粒処理は、粉末および液体成分の混合物から本発明の医薬製剤を得るために行われる。例えば、化合物１ アモルファス形態および充填剤、希釈剤、、流動促進剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤から選択される１種以上の添加剤を含む組成物の混合物を含む医薬組成物を、本明細書に記載の式に当てはめて重さを測定する。次に、全ての顆粒内成分を篩い分けし、水または界面活性剤を含む水または結合剤を含む水または界面活性剤と結合剤を含む水を用いて、高せん断または低せん断造粒機中で混合して、粉末混合物を造粒する。水以外の液体もまた、粉末混合物を造粒するために界面活性剤および／または結合剤の有無で使用可能である。次に、要すれば、好適な粉砕機を用いて湿式顆粒を粉砕することができる。次に、要すれば、好適な方法で成分を乾燥させることにより水を混合物から除去することができる。次に、要すれば、乾燥させた顆粒を、要されるサイズに粉砕することが可能である。次に、顆粒外添加剤（例えば、充填剤、希釈剤および崩壊剤）を、混合により添加し得る。次に、大きさを設定された顆粒を、ステアリン酸マグネシウムおよび崩壊剤、例えばクロスカルメロースナトリウムを添加してさらに潤滑し得る。次に、本発明の顆粒状組成物を、十分な時間の間ふるい分けして、正確なサイズを得て、次いで、本発明に従い、好適な穿孔機で種々の医薬製剤に圧縮され得る。要すれば、錠剤を、フィルム、着色剤または他のコーティングで被覆し得る。
【０１６８】
この例示的混合物の各成分は上記および下記の実施例の通りである。さらに、混合物は、任意の添加物、例えば上記および下記の実施例に記載の通りの１種以上の着色剤、１種以上の香味剤、および／または１種以上の香料を含み得る。いくつかの態様において、混合物中のこれらの各成分（および任意の選択的添加物）の相対濃度（例えば、重量％）もまた、上記および下記の実施例に記載されている。混合物を構成する成分を、連続的または添加物の任意の組み合わせで提供することができ、成分または成分の組み合わせを、任意の順序で提供することができる。一態様において、滑沢剤は、混合物に添加される最後の成分である
【０１６９】
別の態様において、混合物は、化合物１ アモルファス形態の組成物、および添加剤；流動促進剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤、および充填剤の何れか１種以上を含み、これらの各成分を、粉末形態で提供する（例えば、光散乱で測定した２５０μｍ以下（例えば、１５０μｍ以下、１００μｍ以下、５０μｍ以下、４５μｍ以下、４０μｍ以下、または３５μｍ以下）の平均粒径を有する粒子として提供する）。例えば、混合物は、化合物１ アモルファス形態の組成物、希釈剤、流動促進剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤を含み、これらの各成分を、粉末形態で提供する（例えば、光散乱で測定した２５０μｍ以下（例えば、１５０μｍ以下、１００μｍ以下、５０μｍ以下、４５μｍ以下、４０μｍ以下、または３５μｍ以下）の平均粒径を有する粒子として提供する）。別の例において、混合物は、化合物１ アモルファス形態の組成物、希釈剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤を含み、これらの各成分を、粉末形態で提供する（例えば、光散乱で測定した２５０μｍ以下（例えば、１５０μｍ以下、１００μｍ以下、５０μｍ以下、４５μｍ以下、４０μｍ以下、または３５μｍ以下）の平均粒径を有する粒子として提供する）。
【０１７０】
別の態様において、混合物は、化合物１ アモルファス形態の組成物、ならびに流動促進剤、希釈剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤の任意の組み合わせを含み、これらの各成分は実質的に水を含まない。各成分は、成分の重量に対して５重量％未満（例えば、２重量％未満、１重量％未満、０．７５重量％未満、０．５重量％未満、または０．２５重量％未満）の水を含む。例えば、混合物は、化合物１ アモルファス形態の組成物、希釈剤、流動促進剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤を含み、これらの各成分は実質的に水を含まない。いくつかの態様において、各成分は、成分の重量に対して５重量％未満（例えば、２重量％未満、１重量％未満、０．７５重量％未満、０．５重量％未満、または０．２５重量％未満）の水を含む。
【０１７１】
別の態様において、混合物の錠剤への圧縮は、型（例えば、鋳型）に混合物を充填し、混合物を加圧することによって行われる。打抜プレスまたは他の同様の装置を使用してこれを行うことができる。いくつかの態様において、化合物１ アモルファス形態および添加剤の混合は、顆粒形態への最初の処理であり得る。次いで、該顆粒を篩い分けし、製剤分野で公知の方法に従い錠剤に圧縮するか、または製剤化する。型中の混合物の加圧を、各加圧中に同一の圧力を使用するか、または加圧中に異なる圧力を使用して繰り返し得ることも特記される。別の例において、粉末成分または顆粒の混合物を、十分に加圧する打抜プレスを使用して圧縮して、約３０分間で約５０％以上（例えば、約３０分間で約５５％以上または約３０分間で約６０％以上）が溶解する溶解性を有する錠剤を形成する。例えば、混合物を、打抜プレスを使用して圧縮して、錠剤硬度が少なくとも約５Ｋｐ（少なくとも約５．５Ｋｐ、少なくとも約６Ｋｐ、少なくとも約７Ｋｐ、少なくとも約１０Ｋｐ、または少なくとも１５Ｋｐ）の錠剤を製造する。いくつかの例において、混合物を圧縮して、約５Ｋｐないし２０Ｋｐの錠剤硬度を得る。
【０１７２】
いくつかの態様において、本明細書に記載の医薬組成物を含む錠剤は、錠剤の重量に対して約３．０重量％の着色剤を含むフィルムコーティングで被覆され得る。ある例において、錠剤を被覆するために用いる着色剤の懸濁液または溶液は、着色剤の懸濁液または溶液の重量に対して約２０％ｗ／ｗの固体を含む。さらなる例において、被覆した錠剤を、ロゴ、他の画像またはテキストでラベリングすることができる。
【０１７３】
別の態様において、医薬組成物の製造方法は、固体形態の混合物、例えば、化合物１ アモルファス形態、ならびに流動促進剤、希釈剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤から選択される１種以上の添加剤を含む混合物を提供し、混合物が実質的に均一になるまで該混合物を混合し、混合物を顆粒形態に圧縮することを含む。次いで、化合物１ アモルファス形態を含む顆粒状組成物を、上記または下記の実施例に記載の通りに錠剤に圧縮するか、またはカプセルに製剤し得る。あるいは、医薬組成物の製造方法は、化合物１ アモルファス形態、ならびに１種以上の添加剤、例えば、流動促進剤、希釈剤、界面活性剤、滑沢剤、崩壊剤および充填剤を含む混合物を提供し、混合物が実質的に均一になるまで該混合物を混合し、混合物を上記または下記の実施例に記載の通りに乾燥顆粒状組成物を用いて圧縮造粒機を用いて顆粒形態に圧縮する(compressing／compacting)か、あるいは別法として、上記または下記の実施例に記載の通りに高せん断湿式造粒圧縮処理機を用いて顆粒に圧縮することを含む。医薬製剤、例えば、本明細書に記載の錠剤は、本明細書に記載の選択された添加剤に加えて化合物１ アモルファス形態を挿入して製造される顆粒を用いて製造され得る。
【０１７４】
いくつかの態様において、手作業による混合、ミキサー、ブレンダー、またはそれらの何れかの組み合わせ等を使用する撹拌、混合または振とう等によって混合物を混合する。成分または成分の組み合わせを連続的に添加するとき、混合は、連続的な添加中、成分の添加を通して継続的に、成分または成分の組み合わせの全ての添加後、またはそれらの任意の組み合わせにて行われ得る。混合物が実質的に均一な組成物になるまで混合物を混合する。
【０１７５】
一態様において、本発明の医薬組成物は、以下のフローチャートに従い製造され得る：
【表４】
2013536231.tif 000012
↓
【表５】
2013536231.tif 000013
↓
【０１７６】
【表６】
2013536231.tif 000014
↓
【０１７７】
【表７】
2013536231.tif 000015
↓
【表８】
2013536231.tif 000016
【０１７８】
別の態様において、本発明の医薬組成物は、以下のフローチャートに従い製造され得る：
【表９】
2013536231.tif 000017
↓
【０１７９】
【表１０】
2013536231.tif 000018
↓
【０１８０】
【表１１】
2013536231.tif 000019
↓
【表１２】
2013536231.tif 000020
↓
【０１８１】
【表１３】
2013536231.tif 000021
【０１８２】
別の態様において、本発明の医薬組成物は、以下のフローチャートに従い製造され得る：
【表１４】
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↓
【０１８３】
【表１５】
2013536231.tif 000023
【０１８４】
別の態様において、化合物１ アモルファス形態は、混合物の５０重量％がポリマーおよび界面活性剤と混合され、用いる流動促進剤としてのコロイド状二酸化ケイ素はＣａｂｏｔ Ｍ５Ｐであり、用いる崩壊剤としてのクロカスメロースナトリウムはＡｃＤｉＳｏｌであり、用いる充填剤としての微結晶セルロースはＡｖｉｃｅｌ ＰＨ１０１であり、用いる希釈剤としてのラクトース一水和物は、Ｆｏｒｅｍｏｓｔ ３１０である。別の態様において、化合物１ アモルファス形態ポリマーは、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）であり、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムである。別の態様において、化合物１ アモルファス形態ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）である。別の態様において、化合物１ アモルファス形態ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート−ハイグレ−ド（ＨＰＭＣＡＳ−ＨＧ）である。
【０１８５】
種々の態様において、第２の治療剤は、単一形態または単回用量形態、例えば錠剤またはカプセル剤を形成するために化合物１と共に製剤され得る。
【０１８６】
活性物質が投与量形態から放出される速度を測定するために、上記の通りに製造される投与量形態は、United States Pharmacopoeia 29, United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md., 2005 (“USP”)にてTest 711“溶解”の記載に従い、インビトロの溶解評価を受け得る。活性物質の内容量および不純物レベルは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のような技術によって簡便に測定される。
【０１８７】
いくつかの態様において、本発明は、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）および／またはポリプロピレンおよび／またはガラス製の容器および密閉材、グラシン紙ホイル、アルミニウム製の袋、およびアルミニウムまたは高密度ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）からなるブリスタ−またはストリップのような包装材の使用を含み、要すれば、乾燥剤、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリビニリデン二塩化物（ＰＶＤＣ）、ＰＶＣ／ＰＥ／ＰＶＤＣなどを含み得る。これらの包装材は、医薬分野で通常用いられる化学的または物理的滅菌技術を用いて包装およびその内容物を好適に滅菌後、種々の医薬組成物および製剤を滅菌状態で貯蔵するために用いられ得る。
【０１８８】
医薬組成物の投与方法
一面において、本発明の医薬組成物は、１日１回または約２４時間毎に患者に投与され得る。あるいは、本発明の医薬組成物は、１日２回または約１２時間毎に患者に投与され得る。これらの医薬組成物は、約２.５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇまたは２００ｍｇの化合物１ アモルファス形態１を含む経口用製剤として投与される。この面において、医薬組成物は、化合物１ アモルファス形態に加えて、充填剤；希釈剤；崩壊剤；界面活性剤；流動促進剤；および滑沢剤を含む。
【０１８９】
本発明の化合物および薬学的に許容される組成物および製剤を併用療法で使用可能であること、すなわち、化合物１ アモルファス形態およびその薬学的に許容される組成物を１種以上の他の所望の治療または医学的手順と同時に、その前に、または後に投与することが可能であることも認識され得る。組み合わせレジメンで使用するための治療（治療法または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療および／または手順の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れ得る。用いられる治療法が同一の障害に所望の効果を達成することができる（例えば、本発明の化合物を同一の障害の処置のために用いられる別の薬剤と同時に投与することができる）こと、または治療法によって異なる効果（例えば、任意の有害作用の制御）が達成され得ることも認識され得る。本明細書で用いる、特定の疾患、例えばＣＦＴＲ仲介疾患、または状態を処置または予防するために通常投与される付加的治療剤は、“処置される疾患または状態に好適である”として公知である。
【０１９０】
一態様において、付加的治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染剤、抗炎症薬、本発明の化合物１以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤から選択される。
【０１９１】
一態様において、付加的治療剤は抗生物質である。本明細書中で有用な抗生物質の例としては、トブラマイシン吸入用粉末（ＴＩＰ）を含むトブラマイシン、アジスロマイシン、アズトレオナムのエアゾール化形態を含むアズトレオナム、アミカシン（そのリポソーム製剤が含まれる）、シプロフロキサシン（吸入投与に好適なその製剤が含まれる）、レボフロキサシン（そのエアロゾル製剤が含まれる）、および２種の抗生物質の組み合わせ（例えば、ホスホマイシンおよびトブラマイシン）が挙げられる。
【０１９２】
別の態様において、付加的薬剤は、粘液溶解薬である。本明細書中で有用な粘液溶解薬の例としては、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）が挙げられる。
【０１９３】
別の態様において、付加的薬剤は、気管支拡張薬である。気管支拡張薬の例としては、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール(metaprotenerol)、酢酸ピルブテロール、サルメテロール、または硫酸テトラブリンが挙げられる。
【０１９４】
別の態様において、付加的薬剤は、肺気道表面の液体の回復に有効である。かかる薬剤は、細胞内外への塩の移動を改善して肺気道内の粘液をより水和させ、それにより、粘液をより容易に除去する。かかる薬剤の例としては、高張食塩水、デヌホソール四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］リン酸水素）、またはブロンキトール（マンニトールの吸入用製剤）が挙げられる。
【０１９５】
別の態様において、付加的薬剤は抗炎症剤である。すなわち、該薬剤は、肺での炎症を低減し得る。本明細書中で有用なかかる薬剤の例としては、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入用グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチン（simavastatin）が挙げられる。
【０１９６】
別の態様において、付加的薬剤は、化合物１以外のＣＦＴＲモジュレーターである。すなわち、該薬剤は、ＣＦＴＲ活性を調節する効果を有する。かかる薬剤の例としては、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、およびコビプロストン（７−｛（２Ｒ、４ａＲ、５Ｒ、７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）が挙げられる。
【０１９７】
別の態様において、付加的薬剤は栄養剤である。栄養剤の例としては、パンクレリパーゼ（膵酵素置換薬）（パンクレアーゼ（登録商標）、パンクレアカーブ（登録商標）、ウルトラーゼ（登録商標）、またはクレオン（登録商標）が含まれる）、リプロトマーゼ（登録商標）（以前はトリジテク（登録商標））、アクアデクス（登録商標）、またはグルタチオン吸入剤が挙げられる。一態様において、さらなる栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０１９８】
別の態様において、付加的薬剤は、ゲンタマイシン、クルクミン、シクロホスファミド、４−フェニル酪酸、ミグルスタット、フェロジピン、ニモジピン、フロキシンＢ、ゲニステイン、アピゲニン、ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ調節剤、例えばロリプラム、シルデナフィル、ミルリノン、タダラフィル、アムリノン、イソプロテレノール、アルブテロールおよびサルメテロール(almeterol)、デオキシスペルグアリン、ＨＳＰ９０阻害剤、ＨＳＰ７０阻害剤、プロテオソーム阻害剤、例えばエポキソミシ、ラクタシスチン等から選択される化合物である。
【０１９９】
他の態様において、付加的薬剤は、ＷＯ２００４０２８４８０号、ＷＯ２００４１１０３５２号、ＷＯ２００５０９４３７４号、ＷＯ２００５１２０４９７号、またはＷＯ２００６１０１７４０号に記載の化合物である。別の態様において、付加的薬剤は、ＣＦＴＲ調節活性を示すベンゾ［ｃ］キノリニウム誘導体またはＣＦＴＲ調節活性を示すベンゾピラン誘導体である。別の態様において、付加的薬剤は、米国特許第７，２０２，２６２号、米国特許第６，９９２，０９６号、ＵＳ２００６０１４８８６４号、ＵＳ２００６０１４８８６３号、ＵＳ２００６００３５９４３号、ＵＳ２００５０１６４９７３号、ＷＯ２００６１１０４８３号、ＷＯ２００６０４４４５６号、ＷＯ２００６０４４６８２号、ＷＯ２００６０４４５０５号、ＷＯ２００６０４４５０３号、ＷＯ２００６０４４５０２号、またはＷＯ２００４０９１５０２号に記載の化合物である。別の態様において、付加的薬剤は、ＷＯ２００４０８０９７２号、ＷＯ２００４１１１０１４号、ＷＯ２００５０３５５１４号、ＷＯ２００５０４９０１８号、ＷＯ２００６０９９２５６号、ＷＯ２００６１２７５８８号またはＷＯ２００７０４４５６０号に記載の化合物である。別の態様において、付加的薬剤は、Ｎ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミドである。
【０２００】
一態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に投与し、次いで１５０ｍｇのＮ−（５−ヒドロキシ−２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド（化合物２）を共投与することができる。別の態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に投与し、次いで２５０ｍｇの化合物２を共投与することができる。これらの態様において、投与量は、本発明の１個以上の錠剤の投与により達成され得る。化合物２は、化合物２および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与され得る。投与期間は、疾患の改善が達成されるか、対象の担当医が指示するまで継続され得て、例えば投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間または１ヶ月もしくはそれ以上であり得る。共投与期間に先だって、化合物１のみの投与期間が先行し得る。例えば、１００ｍｇの化合物１の２週間投与後に、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇの化合物２のさらに１週間の共投与が行われ得る。
【０２０１】
一態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に１日１回投与し、次いで１５０ｍｇの化合物２を１日１回共投与し得る。別の態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に１日１回投与し、次いで、２５０ｍｇの化合物２を１日１回共投与し得る。これらの態様において、投与量は、本発明の１個以上の錠剤の投与により達成され得る。化合物２は、化合物２および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与され得る。投与期間は、疾患の改善が達成されるか、対象の担当医が指示するまで継続され得て、例えば投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間または１ヶ月もしくはそれ以上であり得る。共投与期間に先だって、化合物１のみの投与期間が先行し得る。例えば、１００ｍｇの化合物１の２週間投与後に、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇの化合物２のさらに１週間の共投与が行われ得る。
【０２０２】
一態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に１日１回投与し、次いで１５０ｍｇの化合物２を１２時間毎に共投与し得る。別の態様において、１００ｍｇの化合物１を、それを必要とする対象に１日１回投与し、次いで、２５０ｍｇの化合物２を１２時間毎に共投与し得る。これらの態様において、投与量は、本発明の１個以上の錠剤の投与により達成され得る。化合物２は、化合物２および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与され得る。投与期間は、疾患の改善が達成されるか、対象の担当医が指示するまで継続され得て、例えば投与期間は、１週間未満、１週間、２週間、３週間または１ヶ月もしくはそれ以上であり得る。共投与期間に先だって、化合物１のみの投与期間が先行し得る。例えば、１００ｍｇの化合物１の２週間投与後に、１５０ｍｇまたは２５０ｍｇの化合物２のさらに１週間の共投与が行われ得る。
【０２０３】
これらの併用投与は、嚢胞性線維症を含む本明細書に記載の疾患の処置に有用である。これらの併用投与はまた、本明細書に記載のキットに有用である。
【０２０４】
本発明の組成物中に存在する付加的治療剤の量は、治療剤を唯一の活性剤として含む組成物で通常投与され得る量以上の量ではない。好ましくは、本明細書に記載の組成物中の付加的治療剤の量は、治療剤を唯一の治療的活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％ないし１００％の範囲であり得る。
【０２０５】
医薬組成物の治療的使用
ある態様において、化合物１ アモルファス形態および任意に付加的薬剤を含む薬学的に許容される組成物は、呼吸器および非呼吸器上皮細胞の頂端膜での残留ＣＦＴＲ活性を示す患者における嚢胞性線維症の処置または重症度の改善に有用である。上皮表面での残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当技術分野で公知の方法、例えば標準的な電気生理的、生化学的または組織化学的技術を用いて容易に検出可能である。かかる方法は、インビボまたはエスクビボ電気生理的技術、汗または唾液のＣｌ−濃度の測定、または細胞表面密度をモニタ−するエクスビボ生化学的もしくは組織化学的技術を用いてＣＦＴＲ活性を確認する。かかる方法を用いて、残留ＣＦＴＲ活性は、最も多くみられる変異ΔＦ５０８のホモ接合またはヘテロ接合、ならびにＧ５５１Ｄ変異またはＲ１１７Ｈ変異のような他の変異を有する患者を含む、種々の異なる変異のヘテロ接合またはホモ接合の患者にて容易に検出され得る。
【０２０６】
一態様において、本明細書に記載の、化合物１ アモルファス形態、またはその薬学的に許容される組成物は、残留ＣＦＴＲ活性を示す任意の遺伝子型、例えば、クラスＩＩＩ変異（調節またはチャネル開閉の障害）、クラスＩＶ変異（変化した伝導度）、またはクラスＶ変異（減少した合成）を有する患者における嚢胞性線維症の処置または重症度の改善に有用である（Lee R. Choo−Kang, Pamela L., Zeitlin, Type I, II, III, IV, and V cystic fibrosis Tansmembrane Conductance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinion in Pulmonary Medicine 6:521−529, 2000）。残留ＣＦＴＲ活性を示す他の遺伝子型の患者には、これらのクラスの１つのヘテロ接合またはクラスＩ変異、クラスＩＩ変異、または分類されていない変異を含む何れかの他の変異クラスとのヘテロ接合を有する患者が含まれる。
【０２０７】
一態様において、本明細書に記載の、化合物１ アモルファス形態またはその薬学的に許容される組成物は、ある臨床像、例えば、上皮の頂端膜における残留ＣＦＴＲ活性量と典型的に相関する中度から軽度の臨床像内の患者において、嚢胞性線維症の処置または重症度の軽減に有用である。かかる臨床像としては、膵機能不全を示す患者、または特発性膵炎および先天性両側精管欠損症、または軽度の肺疾患と診断された患者が含まれる。
【０２０８】
正確な必要量は、対象の種、年齢および全身状態、感染の重症度、特定の薬剤、その投与方法などに応じて、対象ごとに異なり得る。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、単位投与量形態で製剤される。本明細書で用いる表現“単位投与量形態”は、治療すべき患者のための適切な薬剤の物理的に分離した単位を意味する。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、正しい医学的判断の範囲内で担当医によって決定され得ることが理解され得る。任意の特定の患者または生物体に対する具体的有効用量レベルは、治療する障害および障害の重症度；使用する具体的化合物の活性；使用する具体的組成物；患者の年齢、体重、全般的健康状態、性別および食事；使用する具体的化合物の投与時間、投与経路および排出速度；治療期間；使用する具体的化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、を含む種々の因子、ならびに医学分野で周知の同様の因子に応じて決定され得る。本明細書で用いる用語“患者”は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【実施例】
【０２０９】
実施例
方法および材料
変調型示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
変調型示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）を、化合物のアモルファス形態および噴霧乾燥分散体のガラス転移温度を試験するために使用した。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、結晶性物質の融点を決定し、異なる多形体を区別するために用いた。データをTA DSC Q2000示差走査熱量計（TA Instruments, New Castle, DE）を用いて集めた。該装置をインジウムで温度測定した。約１−５ｍｇの試料を秤量して密封アルミニウムパンに入れ、１個のピンホールがあるリッドを用いてセットした。ＭＤＳＣに関して、サンプルを、６０秒毎の＋／−１℃で調節する２℃／分の加熱速度で−２０℃ないし２２０℃でスキャンした。ＤＳＣに関して、サンプルを、１０℃／分の加熱速度で、２５℃ないし２２０℃の温度でスキャンした。データを、Thermal Advantage Q Series（商標）ソフトウェア（version: 2.7.0.380）で集め、Universal Analysis ソフトウェア（version: 4.4A, build: 4.4.0.5）（TA Instruments, New Castle, DE）で分析した。
【０２１０】
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
Ｘ線粉末回折を、現在までに製造されたロット単位の物理的形態を特徴付け、同定された異なる多形体を特徴つけるために使用した。化合物のＸＲＰＤデータをPANalytical X’pert Pro Powder Ｘ線回折計（Almelo, the Netherlands）で集めた。ＸＲＰＤパターンを銅の放射線（１．５４０６０ Ａ）を用いて室温で記録した。Ｘ線を、４５ｋＶ、４０ｍＡのＣｕ線で、ニッケル Ｋβ抑制フィルターを備える密封管を用いて発生させた。入射ビ−ム角は、試料および回折ビ−ム側での光量を一定にするために可変的な発散スリットから構成された；スキャンモ−ドで測定した２．１２度  ２θの有効長で、高速線形固体状態検出器を用いた。粉末試料をゼロバックグラウンドのシリコンホルダーのくぼんだ領域に詰め、回転をより良好な統計値を達成するために行った。対称型スキャンを、０．０１７度間隔の４−４０度  ２θおよび１５．５秒のスキャン間隔時間で測定した。データ収集ソフトウェアは、X’pert Data Collector（version 2.2e）である。データ分析ソフトウェアは、X’pert Data Viewer（version 1.2d）またはX’pert Highscore（version: 2.2c）のいずれかである。
【０２１１】
熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡを、特徴づけられたロット中の残留溶媒の存在を調べ、試料の分解が起こる温度を確認するために用いた。ＴＧＡデータを、TA Q500 Thermogravimetric Analyzer（TA Instruments, New Castle, DE）で集めた。約２−５ｍｇの重量の試料を、１０℃／分の加熱速度で２５℃ないし３００℃でスキャンした。データをThermal Advantage Q Series（商標）ソフトウェア（version 2.5.0.255）で集め、Universal Analysis ソフトウェア（version 4.4A, build 4.4.0.5）（TA Instruments, New Castle, DE）で分析した。
【０２１２】
化合物１形態Ａ  単一結晶構造の決定
回折データは、密封管 Ｃｕ Ｋα源およびＡｐｅｘ  ＩＩ  ＣＣＤ検出器を備えるＢｒｕｋｅｒ  Ａｐｅｘ  ＩＩ回折計を用いて得られた。ＳＨＥＬＸプログラム（Sheldrick,G.M.,Acta Cryst., (2008) A64, 112−122）を用いて構造が解析され、精緻化された。強度統計値および消滅則(systematic absence)に基づき、構造は、Ｃ２空間群で解析され精緻化された。絶対配置を、異常回折を用いて決定した。フラックパラメーターを、モデルが正しいエナンチオマー［（Ｒ）］を表すことを示す０．００（１８）に精緻化した。
【０２１３】
固体状態ＮＭＲ
固体状態ＮＭＲを、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｂｉｏｓｐｉｎ  ４ｍｍ ＨＦＸプローブを備えるＢｒｕｋｅｒ−Ｂｉｏｓｐｉｎ  ４００ＭＨｚ  広口径分光計で行った。試料をＺｒＯ２ロ−タ−に入れ、回転速度１２．５ｋＨｚでMagic Angle Spinning（ＭＡＳ）状態下で回転させた。プロトン緩和時間を、最初に、１３Ｃ  交差分極（ＣＰ）ＭＡＳ装置の適当な待ち時間(recycle delay)を設定するために、１Ｈ  ＭＡＳ  Ｔ１  飽和回復装置を用いて測定した。炭素 ＣＰＭＡＳ装置のＣＰ接触時間は、２ｍに設定された。線形ランプ（５０％ないし１００％）によるＣＰプロトンパルスを用いた。Ｈａｒｔｍａｎｎ−Ｈａｈｎマッチを、外部参照サンプル（グリシン）で最適化した。フッ素 ＭＡＳスペクトルをプロトンカップリング法で記録した。ＴＰＰＭ１５脱カップリング配列を、１３Ｃおよび１９Ｆの両方の捕捉のために約１００ｋＨｚの電界強度と共に用いた。
【０２１４】
反応試薬および化合物
Ｖｉｔｒｉｄｅ(登録商標)（ナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムハイドライド［または、ＮａＡｌＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）２］、トルエン中、６５重量％溶液）をAldrich Chemicalsから購入した。３−フルオロ−４−ニトロアニリンをCapot Chemicalsから購入した。５−ブロモ−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールをAlfa Aesarから購入した。２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−カルボン酸をSaltigo(Lanxess Corporationの系列会社)から購入した。
【０２１５】
本明細書中のいずれかの場所で、化合物の名称が、化合物の構造を正しく記載していないとき、構造がその名前よりも優先され、該化合物を意味する。
【０２１６】
化合物１の合成
酸塩化物部分
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１−酢酸エチル−アセトニトリルの合成
【化７】
2013536231.tif 000024
反応器に窒素を入れ、９００ｍＬのトルエンを入れた。溶媒を１６時間以上の窒素パ−ジにより脱気した。次いで、該反応器にＮａ３ＰＯ４（１５５．７ｇ、９４９．５ｍｍｏｌ）を入れ、その後、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（７．２８ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）を入れた。ヘキサン中、１０重量％のｔｅｒｔ−ブチルホスフィン溶液（５１．２３ｇ、２５．３２ｍｍｏｌ）を、窒素パ−ジした添加管を用いて、２３℃で１０分かけて入れた。混合物を５０分間撹拌し、その間に、５−ブロモ−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール（７５ｇ、３１６．５ｍｍｏｌ）を１分かけて添加した。さらに５０分間撹拌後、混合物にシアノ酢酸エチル（７１．６ｇ、６３３．０ｍｍｏｌ）を５分かけて添加し、次いで水（４．５ｍＬ）を一度に添加した。混合物を４０分以上７０℃まで加熱し、反応物の生成物への変換割合をＨＰＬＣで１−２時間毎に分析した。変換の完了が観察された後（典型的に、５−８時間後に１００％変換）、混合物を２０−２５℃まで冷却し、セライトパッドを通して濾過した。セライトパッドをトルエンで濯ぎ（２Ｘ４５０ｍＬ），合わせた有機層を、６０−６５℃で、減圧下、３００ｍＬまで濃縮した。濃縮物を２２５ｍＬのＤＭＳＯに添加し、真空下、７０−８０℃で、溶媒の能動的蒸発が終わるまで濃縮した。溶液を、２０−２５℃まで冷却し、工程２の製造のためにＤＭＳＯを用いて９００ｍＬまで希釈した。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.16−7.10 (m, 2H), 7.03 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.19 (m, 2H), 1.23 (t, J＝7.1 Hz, 3H).
【０２１７】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルの合成
【化８】
2013536231.tif 000025
上記の（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１−酢酸エチル−アセトニトリルのＤＭＳＯ溶液を、３Ｎ  ＨＣｌ（６１７．３ｍＬ、１．８５ｍｏｌ）に２０分かけて添加し、その間、内部温度を＜４０℃に維持した。次いで、混合物を１時間かけて７５℃まで加熱し、変換割合をＨＰＬＣで１−２時間毎に分析した。＞９９％の変換が観察されたとき（典型的に、５−６時間後）、反応物を２０−２５℃まで冷却し、抽出中の完全な相分離を可能にする十分な時間で、ＭＴＢＥで抽出した（２Ｘ５２５ｍＬ）。合わせた有機抽出物を５％  ＮａＣｌで洗浄した（２Ｘ３７５ｍＬ）。次いで、溶液を、冷却した受容フラスコを備える１．５−２．５トール真空に適当な装置に移した。溶液を、＜６０℃で、真空下で濃縮して溶媒を除去した。次いで、（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルを、得られた油状物から１２５−１３０℃（オーブン温度）および１．５−２．０トールで蒸留した。（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルを、５−ブロモ−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールから６６％収率（２工程）で、かつ９１．５％  ＡＵＣのＨＰＬＣ純度（９５％のｗ／ｗアッセイに相当）で透明油状物として単離した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.44 (br s, 1H), 7.43 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 7.22 (dd, J＝8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H).
【０２１８】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルの合成
【化９】
2013536231.tif 000026
５０重量％ＮａＯＨのストック溶液を、１６時間以上、窒素パ−ジにより脱気した。適当量のＭＴＢＥを同様に数時間脱気した。窒素でパ−ジした反応器に、脱気したＭＴＢＥ（１４３ｍＬ）を入れ、次いで、（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリル（４０．９５ｇ、２０７．７ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロマイド（２．２５ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物の容量を記録し、混合物を３０分間、窒素ガスで脱気した。混合物を脱気する前の元の容量に戻すために、十分に脱気したＭＴＢＥを添加した。２３．０℃で撹拌中の混合物に、脱気した５０重量％ＮａＯＨ（１４３ｍＬ）を１０分かけて添加し、次いで、１−ブロモ−２−クロロエタン（４４．７ｇ、３１１．６ｍｍｏｌ）を３０分かけて添加した。反応を、変換割合をＨＰＬＣで１時間毎に分析した。サンプリング前に、撹拌を停止し、層を分離させた。頂部の有機層を分析のためにサンプリングした。＞９９％の変換割合が観察されたとき（典型的に、２．５−３時間後）、反応混合物を１０℃まで冷却し、水（４６１ｍＬ）を温度が＜２５℃に維持されるような速度で添加した。温度を２０−２５℃に合わせ、層を分離させた（注：十分な時間は、完全な相分離を可能にするべきである）。水層をＭＴＢＥ（１２３ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を１Ｎ  ＨＣｌ（１６３ｍＬ）および５％  ＮａＣｌ（１６３ｍＬ）で洗浄した。（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルのＭＴＢＥ溶液を、真空下、４０−５０℃で、１６４ｍＬまで濃縮した。溶液にエタノール（２５６ｍＬ）を添加し、再び、真空下、５０−６０℃で、１６４ｍＬまで濃縮した。エタノール（２５６ｍＬ）を添加し、混合物を，真空下、５０−６０℃で、１６４ｍＬまで濃縮した。得られた混合物を２０−２５℃まで冷却し、次工程のためにエタノールで２６６ｍＬまで希釈した。
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.43 (d, J＝8.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J＝1.9 Hz, 1H), 7.30 (dd, J＝8.4, 1.9 Hz, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.53 (m, 2H). 
【０２１９】
１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸の合成
【化１０】
2013536231.tif 000027
上記工程からの（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルのエタノール溶液に、２０分かけて６Ｎ  ＮａＯＨ（２７７ｍＬ）を添加し、４５分かけて、７７−７８℃の内部温度まで加熱した。反応の進行を１６時間後、ＨＰＬＣでモニタ−した。注：（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルおよび（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボニトリルの部分的加水分解から生じた一級アミドの両方の消費がモニタ−される。＞９９％の変換割合が観察されたとき（典型的に、１６時間後に１００％変換）、反応混合物を２５℃まで冷却し、エタノール（４１ｍＬ）およびＤＣＭ（１６４ｍＬ）を添加した。溶液を１０℃まで冷却し、６Ｎ ＨＣｌ（２９０ｍＬ）を温度が＜２５℃に維持されるような速度で添加した。２０−２５℃まで温めたのち、層を分離させた。下部の有機層を集め、上部の水層を再びＤＣＭ（１６４ｍＬ）で抽出した。注：水層は、高濃度の無機塩のために、抽出の前後で多少濁った。有機層を合わせ、真空下で１６４ｍＬまで濃縮した。トルエン（３２８ｍＬ）を添加し、混合物を、７０−７５℃で、１６４ｍＬまで濃縮した。混合物を４５℃まで冷却し、ＭＴＢＥ（３６４ｍＬ）を添加し、６０℃で２０分間撹拌した。溶液を２５℃まで冷却し、光沢剤を濾去し、残留無機塩を除去した。ＭＴＢＥ（１２３ｍＬ）を用いて反応器および集めた固体を濯いだ。合わせた有機層を、次工程の製造における綺麗な反応器に移した。
【０２２０】
１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸の分離
【化１１】
2013536231.tif 000028
上記工程からの１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸の溶液を、真空下で１６４ｍＬまで濃縮し、トルエン（３２８ｍＬ）を添加し、７０−７５℃で１６４ｍＬまで濃縮した。次いで、混合物を１００−１０５℃まで加熱し、均一な溶液を得た。その温度で３０分間撹拌後、溶液を２時間かけて５℃まで冷却し、３時間５℃に維持した。次いで、混合物を濾過し、反応器および集めた固体を冷１：１  トルエン／ｎ−ヘプタン（２Ｘ１２３ｍＬ）溶液で洗浄した。生成物を真空下、５５℃で１７時間乾燥させて、１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸をオフホワイト色結晶固体として得た。１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸を、（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルから７９％収率で、かつ９９．０％  ＡＵＣのＨＰＬＣ純度で単離した（単離を含む３工程）。 ESI−MS m/z 計算値242.04、実測値 241.58 (M+1)+; 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.40 (s, 1H), 7.40 (d, J＝1.6 Hz, 1H), 7.30 (d, J＝8.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J＝8.3, 1.7 Hz, 1H), 1.46 (m, 2H), 1.17 (m, 2H).
【０２２１】
酸塩化物部分の別の合成
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノールの合成
【化１２】
2013536231.tif 000029
市販されている２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−カルボン酸（１．０当量）を、トルエン（１０容量）中でスラリー化した。Ｖｉｔｒｉｄｅ(登録商標)（２当量）を、滴下ロートにより温度が１５−２５℃に維持される速度で添加した。添加の最後に、温度を２時間４０℃まで加熱した。次いで、１０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液（４．０当量）を滴下ロートにより温度を４０−５０℃に維持しながら注意深く添加した。さらに３０分撹拌後、層を４０℃で分離させた。有機層を２０℃まで冷却し、水で洗浄し（２ｘ１．５容量）、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、粗（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノールを得て、それを次工程に直接用いた。
【０２２２】
５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールの合成
【化１３】
2013536231.tif 000030
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−メタノール（１．０当量）をＭＴＢＥ（５容量）に溶解した。触媒量のＤＭＡＰ（１ｍｏｌ％）およびＳＯＣｌ２（１．２当量）を滴下ロートにより添加した。ＳＯＣｌ２を、反応器内の温度が１５−２５℃に維持されるような速度で添加した。温度を１時間３０℃まで上昇させて、次いで２０℃まで冷却し、その後、水（４容量）を、温度を３０℃未満に維持しながら滴下ロートにより添加した。さらに３０分撹拌後、層を分離させた。有機層を撹拌し、１０％（ｗ／ｖ）ＮａＯＨ水溶液（４．４容量）を添加した。１５ないし２０分撹拌後、層を分離させた。次いで、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、粗５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソールを得て、それを次工程に直接用いた。
【０２２３】
（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリルの合成
【化１４】
2013536231.tif 000031
５−クロロメチル−２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール（１当量）のＤＭＳＯ溶液（１．２５容量）を、ＮａＣＮ（１．４当量）のＤＭＳＯ中のスラリー（３容量）に、温度を３０−４０℃に維持しながら添加した。混合物を１時間撹拌し、次いで水（６容量）を添加し、その後ＭＴＢＥ（４容量）を添加した。３０分撹拌後、層を分離させた。水層をＭＴＢＥ（１．８容量）で抽出した。合わせた有機層を水（１．８容量）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、粗（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−アセトニトリル（９５％）を得て、それを次工程に直接用いた。
その後の工程は上記の酸部分の合成に記載の方法と同じである。
【０２２４】
アミン部分
２−ブロモ−５−フルオロ−４−ニトロアニリンの合成
【化１５】
2013536231.tif 000032
フラスコに３−フルオロ−４−ニトロアニリン（１．０当量）を添加し、次いで酢酸エチル（１０容量）を添加し、撹拌して全ての固体を溶解させた。Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．０当量）を、内部温度が２２℃に維持されるように少しずつ添加した。反応の最後に、反応混合物を真空下でロータリーエバポレーターにより濃縮した。残渣を蒸留水（５容量）中でスラリー化し、スクシンイミドを溶解させ除去した（スクシンイミドもまた、水での後処理により除去され得る）。水を捨て、固体を２−プロパノール（５容量）中で一晩スラリー化した。得られたスラリーを濾過し、湿式ケーキを２−プロパノールで洗浄し、真空オーブン下、５０℃で一晩、Ｎ２気流処理しながら、一定重量が達成されるまで乾燥させた。黄色がかった褐色固体を単離した（５０％収率、９７．５％ＡＵＣ）。他の不純物は、ブロモ−位置異性体（１．４％  ＡＵＣ）およびジブロモ付加物（１．１％  ＡＵＣ）であった。1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.19 (1 H, d, J＝8.1 Hz), 7.06 (br. s, 2 H), 6.64 (d, 1 H, J＝14.3 Hz).
【０２２５】
ベンジルグリコール化−４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリントシル酸塩の合成
【化１６】
2013536231.tif 000033
Ｎ２下で完全に乾燥させたフラスコに以下のものを添加した：活性化粉末４Ａ  モレキュラ−・シ−ブ（２−ブロモ−５−フルオロ−４−ニトロアニリンに基づく５０重量％）、２−ブロモ−５−フルオロ−４−ニトロアニリン（１．０当量）、過塩素酸亜鉛二水和物（２０ｍｏｌ％）、およびトルエン（８容量）。混合物を室温でＮＭＴ３０分間撹拌した。最後に、（Ｒ）−ベンジルグリシジルエーテル（２．０当量）のトルエン溶液（２容量）を一定流量で添加した。反応を８０℃まで加熱し（内部温度）、約７時間または２−ブロモ−５−フルオロ−４−ニトロアニリンが＜５％ＡＵＣとなるまで撹拌した。
【０２２６】
反応物を室温まで冷却し、セライト（５０重量％）を添加し、次いで酢酸エチル（１０容量）を添加する。得られた混合物を濾過してセライトを除去し、篩いにかけ、酢酸エチル（２容量）で洗浄した。濾液を塩化アンモニウム溶液（４容量、２０％ｗ／ｖ）で洗浄した。有機層を重炭酸ナトリウム溶液（４容量ｘ２．５％ ｗ／ｖ）で洗浄した。有機層を真空下でロータリーエバポレーターにより濃縮した。得られたスラリーを酢酸イソプロピル（１０容量）に溶解し、この溶液をＢｕｃｈｉ 水素化装置に移した。
【０２２７】
該水素化装置に５ｗｔ％ Ｐｔ（Ｓ）／Ｃ（１．５ｍｏｌ％）を入れ、混合物をＮ２下で３０℃で撹拌した（内部温度）。反応物をＮ２でフラッシュし、次いで水素でフラッシュした。水素化装置の圧力を１バールに合わせ、混合物を素早く撹拌した（＞１２００ｒｐｍ）。反応の最後に、触媒をセライトパッドにより濾過除去し、ジクロロメタン（１０容量）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮した。残留酢酸イソプロピルをジクロロメタン（２容量）で除去し、ロータリーエバポレーターで乾燥濃縮させた。
【０２２８】
得られた残渣をジクロロメタン（１０容量）に溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．２当量）を添加し、一晩撹拌した。生成物を濾過し、ジクロロメタン（２容量）で洗浄し、真空乾燥させた。湿式ケーキを乾燥トレイに移し、真空オーブン中に入れ、Ｎ２気流下、４５℃で、一定重量が達成されるまで乾燥させた。ベンジルグリコール化−４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリントシル酸塩をオフホワイト色固体として単離した。
【０２２９】
キラル純度は、＞９７％ｅｅであると決定された。
【０２３０】
（３−クロロ−３−メチルブト−１−イニル）トリメチルシランの合成
【化１７】
2013536231.tif 000034
プロパルギルアルコール（１．０当量）を容器に入れた。塩酸水溶液（３７％、３．７５容量）を添加し、撹拌を開始した。固体アルコールの溶解中、穏やかな吸熱反応（５−６℃）が観察された。得られた混合物を一晩（１６時間）撹拌し、ゆっくり暗赤色になった。３０Ｌのジャケット付き容器に水（５容量）を入れ、次いで１０℃に冷却した。反応混合物を、混合物の内部温度を２５℃以下に維持しながら、減圧により吸引でゆっくり水中に入れた。ヘキサン（３容量）を添加し、得られた混合物を０．５時間撹拌した。層を分離させ、水層（ｐＨ＜１）を除去した。有機層をロータリーエバポレーターを用いて真空下で濃縮させ、最終的に生成物を赤色油状物として得た。
【０２３１】
（４−（ベンジルオキシ）−３，３−ジメチルブト−１−イニル）トリメチルシランの合成
【化１８】
2013536231.tif 000035
方法Ａ
この方法に記載の全ての当量および容量は、２５０ｇの反応をベースにしている。粉末状マグネシウム（magnesium turning）（６９．５ｇ、２．８６ｍｏｌ、２．０当量）を、３Ｌの４口反応器に入れ、窒素下で０．５時間、マグネシウムスタ−ラ−を用いて撹拌した。反応器を氷水浴に浸した。塩化プロパルギル（２５０ｇ、１．４３ｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ溶液（１．８Ｌ、７．２容量）を、撹拌しながら、最初の発熱反応（〜１０℃）が観察されるまで反応器にゆっくり添加した。グリニャール試薬形成を、１Ｈ−ＮＭＲ分光学を用いてＩＰＣにより確認した。発熱反応が止まると、バッチ温度を＜１５℃に維持しながら残りの溶液をゆっくり添加した。添加に〜３．５時間を要した。得られた暗緑色混合物を２Ｌの密封ボトルに静かに注いだ。
【０２３２】
この方法に記載の全ての当量および容量は、５００ｇの反応をベースにしている。２２Ｌの反応器にベンジルクロロメチルエーテル（９５％、３７５ｇ、２．３１ｍｏｌ、０．８当量）のＴＨＦ溶液（１．５Ｌ、３容量）を入れた。反応器を氷水浴中で冷却した。上記の通りに製造した２個のグリニャール試薬バッチを合わせ、次いで、滴下ロートにより、バッチ温度を２５℃以下に維持しながら、ベンジルクロロメチルエーテル溶液にゆっくり添加した。添加に１．５時間を要した。反応混合物を一晩（１６時間）撹拌した。
【０２３３】
この方法に記載の全ての当量および容量は、１ｋｇの反応をベースにしている。１５％塩化アンモニウム溶液を、３０Ｌのジャケット付き容器（８．５ｋｇの水中、１．５ｋｇ、１０容量）中で製造した。溶液を５℃に冷却した。上記の通りに製造した２個のグリニャール反応混合物を合わせ、次いでヘッダ−管により塩化アンモニウム溶液に入れた。このクエンチで発熱反応が観察され、これを、内部温度を２５℃以下に維持するような速度で行った。添加が完了すると、容器のジャケット温度を２５℃に設定した。ヘキサン（８Ｌ、８容量）を添加し、混合物を０．５時間撹拌した。層の分離後、水層（ｐＨ９）を排出除去した。残りの有機層を水（２Ｌ、２容量）で洗浄した。有機層を、２２Ｌのロータリーエバポレーターを用いて真空下で濃縮させ、粗生成物を橙色油状物として得た。
【０２３４】
方法Ｂ
粉末状マグネシウム（１０６ｇ、４．３５ｍｏｌ、１．０当量）を２２Ｌの反応器に入れ、次いで、ＴＨＦ（７６０ｍＬ、１容量）中に懸濁させた。容器をバッチ温度が２℃になるように氷水浴中で冷却した。塩化プロパルギル（７６０ｇ、４．３５ｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ溶液（４．５Ｌ、６容量）を該反応器にゆっくり添加した。１００ｍＬを添加後、添加をやめ、混合物を１３℃の発熱反応が観察され、グリニャール試薬形成の開始が示されるまで撹拌した。発熱反応が止まると、別の５００ｍＬの塩化プロパルギル溶液を、バッチ温度を＜２０℃以下に維持しながらゆっくり添加した。グリニャール試薬形成を、１Ｈ−ＮＭＲ分光学を用いてＩＰＣにより確認した。バッチ温度を＜２０℃に維持しながら残りの塩化プロパルギル溶液をゆっくり添加した。添加に〜１．５時間を要した。得られた暗緑色溶液を０．５時間撹拌した。２Ｌの密封ボトルに静かに注いだ。グリニャール試薬形成を、１Ｈ−ＮＭＲ分光学を用いてＩＰＣにより確認した。そのままのベンジルクロロメチルエーテルを滴下ロートにより該反応器に入れ、次いでバッチ温度を２５℃以下に維持しながら滴下した。添加に１．０時間要した。反応混合物を一晩撹拌した。水溶液の後処理および濃縮を方法Ａと同様の方法および相対量の物質を用いて行い、橙色油状物として生成物を得た。
【０２３５】
４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチルブト−１−インの合成
【化１９】
2013536231.tif 000036
３０Ｌのジャケット付き容器にメタノール（６容量）を入れ、次いで５℃まで冷却した。水酸化カリウム（８５％、１．３当量）を反応器に添加した。１５−２０℃の発熱反が、水酸化カリウムの溶解として観察された。ジャケットの温度を２５℃に設定した。４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチル−１−トリメチルシリルブト−１−イン（１．０当量）のメタノール溶液（２容量）を添加し、得られた混合物をＨＰＬＣによる測定される反応の完了まで撹拌した。２５℃での典型的な反応時間は３−４時間であった。反応混合物を水（８容量）で希釈し、次いで０．５時間撹拌した。ヘキサン（６容量）を添加し、得られた混合物を０．５時間撹拌した。層を分離させ、次いで水層（ｐＨ１０−１１）を排出除去した。有機層をＫＯＨ（８５％、０．４当量）の水溶液（８容量）で洗浄し、次いで水（８容量）で洗浄した。次いで、有機層をロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、表題化合物を黄色−橙色油状物として得た。この化合物の典型的な純度は、主に存在している単一の不純物を含み、８０％の範囲内である。1H NMR (400 MHz, C6D6) δ 7.28 (d, 2 H, J＝7.4 Hz), 7.18 (t, 2 H, J＝7.2 Hz), 7.10 (d, 1H, J＝7.2 Hz), 4.35 (s, 2 H), 3.24 (s, 2 H), 1.91 (s, 1 H), 1.25 (s, 6 H).
【０２３６】
Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールの合成
【化２０】
2013536231.tif 000037
方法Ａ
ベンジルグリコール化４−アミノ−２−（４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチルブト−１−イニル）−５−フルオロアニリンの合成
ベンジルグリコール化４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリン トシル酸塩を、透明な有機層が達成されるまで、ＥｔＯＡｃ（５容量）および飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５容量）中で固体を撹拌することにより、遊離塩基とした。得られた層を分け、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５容量）で洗浄し、次いで塩水で洗浄し、真空下で濃縮して、ベンジルグリコール化４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリントシル酸塩を油状物として得た。
【０２３７】
次いで、フラスコにベンジルグリコール化４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリントシル酸塩（遊離塩基、１．０当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）（４．０ｍｏｌ％）、ｄｐｐｂ（６．０ｍｏｌ％）および粉末Ｋ２ＣＯ３（３．０当量）を入れ、アセトニトリル（６容量）と共に室温で撹拌した。得られた反応混合物を、Ｎ２気流中でバブリングしながら約３０分間脱気した。次いで、アセトニトリル（２容量）に溶解した４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチルブト−１−イン（１．１当量）を、高速ガス流中に添加し、８０℃まで加熱し、４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリントシル酸塩の消費の完了が達成されるまで撹拌した。反応スラリーを室温まで冷却し、セライトパッドを通して濾過し、アセトニトリル（２容量）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、残渣をＥｔＯＡｃ（６容量）に再溶解した。有機層をＮＨ４Ｃｌ溶液（２０％ｗ／ｖ、４容量）および塩水（６容量）で２回洗浄した。得られた有機層を濃縮して褐色油状物を得て、次反応工程に用いた。
【０２３８】
Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールの合成
【化２１】
2013536231.tif 000038
ベンジルグリコール化４−アミノ−２−（４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチルブト−１−イニル）−５−フルオロアニリンの粗油状物をアセトニトリル（６容量）に溶解し、（ＭｅＣＮ）２ＰｄＣｌ２（１５ｍｏｌ％）を室温で添加した。得られた混合物を、Ｎ２気流を用いて約３０分間脱気した。次いで、反応混合物を、８０℃でＮ２雰囲気下、一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、セライトパッドを通して濾過し、ケーキをアセトニトリル（１容量）で洗浄した。得られた濾液を真空下で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５容量）に再溶解した。Ｄｅｌｏｘａｎｅ−ＩＩ  ＴＨＰ（Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールの理論的収率に基づき５重量％）を添加し、室温で一晩撹拌した。次いで、混合物をシリカパッド（奥行き２．５インチ、直径６インチのフィルター）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（４容量）で洗浄した。濾液を濃縮して暗褐色残渣を得て、それを次反応工程に用いた。
【０２３９】
粗Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールの再精製
粗Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールをジクロロメタン（〜１．５容量）に溶解し、初めシリカパッドを３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを用いて通して濾過し、不純物を除去した。次いで、シリカパッドを、薄い色が濾液中に観察されるまで、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで洗浄して、Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールを単離した。この濾液を真空下で濃縮して、褐色油状物を得て、それを室温で静置して結晶化させた。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.38−7.34 (m, 4 H), 7.32−7.23 (m, 6 H), 7.21 (d, 1 H, J＝12.8 Hz), 6.77 (d, 1H, J＝9.0 Hz), 6.06 (s, 1 H), 5.13 (d, 1H, J＝4.9 Hz), 4.54 (s, 2 H), 4.46 (br. s, 2 H), 4.45 (s, 2 H), 4.33 (d, 1 H, J＝12.4 Hz), 4.09−4.04 (m, 2 H), 3.63 (d, 1H, J＝9.2 Hz), 3.56 (d, 1H, J＝9.2 Hz), 3.49 (dd, 1H, J＝9.8, 4.4 Hz), 3.43 (dd, 1H, J＝9.8, 5.7 Hz), 1.40 (s, 6 H).
【０２４０】
Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールの合成
【化２２】
2013536231.tif 000039
方法Ｂ
酢酸パラジウム（３３ｇ、０．０４当量）、ｄｐｐｂ（９４ｇ、０．０６当量）および炭酸カリウム（１．５ｋｇ、３．０当量）を、反応器に入れた。遊離塩基形の油状ベンジルグリコール化４−アンモニウム−２−ブロモ−５−フルオロアニリン（１．５ｋｇ、１．０当量）をアセトニトリル（８．２Ｌ、４．１容量）中に溶解し、次いで反応器に添加した。混合物をＮＬＴの窒素ガスで１時間パ−ジした。４−ベンジルオキシ−３，３−ジメチルブト−１−イン（７０％、１．１ｋｇ、１．０５当量）のアセトニトリル溶液を混合物に添加し、次いで、それをＮＬＴの窒素ガスで１時間パ−ジした。混合物を８０℃まで加熱し、次いで一晩撹拌した。ＨＰＬＣによるＩＰＣを行い、反応の完了を１６時間後に決定した。混合物を環境温度まで冷却し、次いでセライトパッド（２２８ｇ）を通して濾過した。反応器およびセライトパッドをアセトニトリル（２ｘ２Ｌ、２容量）で洗浄した。合わせた層を２２Ｌのロータリーエバポレーターを用いて８Ｌの溶媒が集まるまで濃縮し、７Ｌ（３．５容量）のアセトニトリル中に粗生成物が残った。
【０２４１】
ビス−アセトニトリルジクロロパラジウム（１４４ｇ、０．１５当量）を反応器に入れた。粗溶液を反応器に戻し、ロータリーエバポレーターのバルブをアセトニトリルで洗浄した（４Ｌ、２容量）。合わせた溶液をＮＬＴの窒素ガスで１時間パ−ジした。反応混合物を８０℃までＮＬＴで１６時間加熱した。反応工程の制御において、ＨＰＬＣにより出発物質の完全な消費が示された。反応混合物をセライト（３００ｇ）を通して濾過した。反応器および濾過ケーキをアセトニトリル（３Ｌ、１．５容量）で洗浄した。合わせた濾液を回転蒸発により濃縮して油状物を得た。該油状物を酢酸エチル（８．８Ｌ、４．４容量）に溶解した。溶液を２０％塩化アンモニウム（５Ｌ、２．５容量）で洗浄し、次いで５％塩水（５Ｌ、２．５容量）で洗浄した。シリカゲル（３．５ｋｇ、１．８重量当量．）を有機層に添加し、それを一晩撹拌した。Ｄｅｌｏｘａｎ ＴＨＰ ＩＩ 金属スカベンジャ−（３５８ｇ）およびヘプタン（１７．６Ｌ）を添加し、得られた混合物をＮＬＴで３時間撹拌した。混合物を焼結ガラス管を通して濾過した。濾過ケーキを３０％酢酸エチルのヘプタン溶液（２５Ｌ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮して、Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドールを褐色ペーストとして得た（１．４ｋｇ）。
【０２４２】
化合物１の合成
ベンジル保護した化合物１の合成
【化２３】
2013536231.tif 000040
【０２４３】
１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸（１．３当量）を、トルエン（２．５容量、１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸に基づき）中でスラリー化し、混合物を６０℃まで加熱した。ＳＯＣｌ２（１．７当量）を滴下ロートにより添加した。得られた混合物を２時間撹拌した。トルエンおよび過剰量のＳＯＣｌ２をロータリーエバポレーターを用いて蒸発させて除去した。さらなるトルエン（２．５容量、１−（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−シクロプロパンカルボン酸に基づき）を添加し、再び蒸発させた。粗酸塩化物をジクロロメタン（２容量）中に溶解し、温度を０−３℃（内部温度）に維持しながら、Ｎ−ベンジルグリコール化−５−アミノ−２−（２−ベンジルオキシ−１，１−ジメチルエチル）−６−フルオロインドール（１．０当量）およびトリエチルアミン（２．０当量）のジクロロメタン（７容量）中の混合物を滴下ロートにより添加した。得られた混合物を０℃で４時間撹拌し、次いで室温で一晩温めた。蒸留水（５容量）を反応混合物に添加し、ＮＬＴで３０分間撹拌し、層を分離させた。有機層を２０重量％Ｋ２ＣＯ３（４容量ｘ２）で洗浄し、次いで塩水（４容量）で洗浄し、濃縮して粗ベンジル保護した化合物１を濃褐色油状物として得て、それをさらにシリカパッド濾過を用いて精製した。
【０２４４】
シリカゲルパッド濾過：粗ベンジル保護した化合物１を、活性炭素Ｄａｒｃｏ−Ｇ（１０ｗｔ％、ベンジル保護した化合物１の理論的収率に基づく）の存在下、酢酸エチル（３容量）中に溶解し、室温で一晩撹拌した。この混合物に、ヘプタン（３容量）を添加し、シリカゲルパッド（２ｘ粗ベンジル保護した化合物１の重量）を通して濾過した。該シリカパッドを酢酸エチル／ヘプタン（１：１、６容量）で洗浄するか、または濾液に色がなくなるまで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、ベンジル保護した化合物１を粘性の赤色かかった褐色油状物として得て、それを次工程に直接用いた。
【０２４５】
再精製：ベンジル保護した化合物１を、ジクロロメタン（１容量、ベンジル保護した化合物１の理論的収率に基づく）中に再溶解し、シリカゲルパッド（２ｘ粗ベンジル保護した化合物１の重量）上に充填した。シリカパッドをジクロロメタン（２容量、ベンジル保護した化合物１の理論的収率に基づく）で洗浄し、濾液を捨てた。シリカパッドを３０％酢酸エチル／ヘプタン（５容量）で洗浄し、濾液を真空下で濃縮して、ベンジル保護した化合物１を粘性の赤色がかった橙色油状物として得て、それを次工程に直接用いた。
【０２４６】
化合物１の合成
【化２４】
2013536231.tif 000041
方法Ａ
２０Ｌのオートクレーブを窒素ガスで３回フラッシュし、次いでパラジウム炭素を加えた（Ｅｖｏｎｉｋ  Ｅ  １０１  ＮＮ／Ｗ、５％Ｐｄ、６０％湿度、２００ｇ、０．０７５ｍｏｌ、０．０４当量）。次いで、該オートクレーブを窒素で３回フラッシュした。粗ベンジル保護した化合物１（１．３ｋｇ、〜１．９ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（８Ｌ、６容量）を、吸引により該オートクレーブに添加した。容器を密封し、次いで窒素ガスで３回フラッシュした。穏やかに撹拌しながら、容器を水素ガスで３回フラッシュし、窒素で希釈することにより大気を排気した。オートクレーブは、３バールの水素で加圧して、撹拌速度を８００ｒｐｍまで増して行った。迅速な水素の取り込みが観察された（溶解）。取り込みがおさまると、容器を５０℃まで加熱した。
【０２４７】
安全を目的として、サーモスタットを実験日毎に最後に取り外した。容器を４バールの水素で加圧して、次いで水素タンクから取り出した。
【０２４８】
反応の丸２日後、さらにＰｄ／Ｃ（６０ｇ、０．０２３ｍｏｌ、０．０１当量）を混合物に添加した。これを窒素ガスで３回フラッシュし、次いで固体添加口から触媒を添加した。反応の再開を上記の通りに行った。丸４日後、反応をは、ＨＰＬＣにより、出発物質の消失のみでなく、モノ−ベンジル化中間体に対応するピークの消失によって完了とみなした。
【０２４９】
反応混合物をセライトパッドを通して濾過した。容器および濾過ケーキをＴＨＦ（２Ｌ、１．５容量）で洗浄した。次いで、セライトパッドを水でぬらし、ケーキを適当に廃棄した。合わせた濾液およびＴＨＦ洗浄液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、粗生成物を黒色油状物（１ｋｇ）として得た。
【０２５０】
以下の精製における当量および容量は、１ｋｇの粗物質に基づく。粗黒色油状物を、１：１酢酸エチル−ヘプタンに溶解した。混合物をフリット漏斗中のシリカゲルパッド（１．５ｋｇ、１．５重量当量）に添加し、それを１：１酢酸エチル−ヘプタンで飽和させた。シリカパッドを、最初に１：１酢酸エチル−ヘプタン（６Ｌ、６容量）でフラッシュし、次いで純粋な酢酸エチル（１４Ｌ、１４容量）でフラッシュした。溶離剤を４画分に集め、ＨＰＬＣにより分析した。
【０２５１】
以下の精製における当量および容量は、０．６ｋｇの粗物質に基づく。画分３を回転蒸発により濃縮し、褐色泡状物（６００ｇ）を得て、その後ＭＴＢＥ（１．８Ｌ、３容量）に再溶解させた。暗褐色溶液を環境温度で一晩撹拌し、その間に結晶化が生じた。ヘプタン（５５ｍＬ、０．１容量）を添加し、混合物を一晩撹拌した。混合物をＢｕｃｈｎｅｒ漏斗を用いて濾過し、濾過ケーキを３：１ ＭＴＢＥ−ヘプタン（９００ｍＬ、１．５容量）で洗浄した。濾過ケーキを１時間、空気乾燥させて、次いで環境温度で１６時間、真空乾燥させて、最後に２５３ｇの化合物１をオフホワイト色固体として得た。
【０２５２】
以下の精製における当量および容量は、１．４ｋｇの粗物質に基づく。上記のシリカゲル濾過物の画分２および３、ならびに上記の反応からの物質を合わせ、濃縮して１．４ｋｇの黒色油状物に濃縮した。混合物を上記のシリカゲル濾過（１．５ｋｇのシリカゲル、３．５Ｌ、２．３容量の１：１ 酢酸エチル−ヘプタン、次いで９Ｌ、６容量の純粋な酢酸エチルで溶出）により再濾過し、それを濃縮して黄褐色泡状固体（３９０ｇ）を得た。
【０２５３】
以下の精製における当量および容量は、３９０ｇの粗物質に基づく。黄褐色固体はＭＴＢＥに不溶性であるため、メタノール（１．２Ｌ、３容量）に溶解させた。ロングパス蒸留ヘッドを備える４Ｌのモ−トン反応器を用いて、混合物を蒸留して２容量に減量した。ＭＴＢＥ（１．２Ｌ、３容量）を添加し、混合物を蒸留して２容量に減量した。さらに２２回目のＭＴＢＥ（１．６Ｌ、４容量）を添加し、混合物を蒸留して２容量に減量した。さらに３回目のＭＴＢＥ（１．２Ｌ、３容量）を添加し、混合物を３容量に減量した。ＧＣによる蒸留物の分析は、〜６％メタノールの構成を明らかにした。サーモスタットを４８℃（ＭＴＢＥ−メタノール共沸混合物の沸点である５２℃以下）に設定した。混合物を２時間以上２０℃に冷却し、その間に、比較的迅速に結晶化が起こった。混合物を２時間撹拌後、ヘプタン（２０ｍＬ、０．０５容量）を添加し、混合を一晩撹拌した（１６時間）。混合物をブフナー漏斗を用いて濾過し、濾過ケーキを３：１のＭＴＢＥ−ヘプタン（８００ｍＬ、２容量）を用いて洗浄した。濾過ケーキは１時間空気乾燥させ、真空乾燥を環境温度で１時間行い、オフホワイト色固体として１３０ｇの化合物１を得た。
【０２５４】
方法Ｂ
ベンジル保護した化合物１をＴＨＦ（３容量）に溶解し、次いで乾燥させて残留溶媒を全て除去した。ベンジル保護された化合物１をＴＨＦ（４容量）に再び溶解させ、５重量％Ｐｄ／Ｃ（２．５ｍｏｌ％、６０％湿度、Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｅ５  Ｅ１０１  ＮＮ／Ｗ）を含む水素化装置に添加した。反応の内部温度を５０℃に合わせ、Ｎ２（ｘ５）でフラッシュし、次いで水素（ｘ３）でフラッシュした。該水素化装置の圧力を３バールの水素に合わせ、混合物を素早く撹拌した（＞１１００ｒｐｍ）。反応の最後に、触媒をセライトパッドを通して濾過し、ＴＨＦ（１容量）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、褐色泡状残渣を得た。得られた残渣をＭＴＢＥ（５容量）および０．５Ｎ ＨＣｌ溶液（２容量）に溶解し、蒸留水（１容量）を添加した。混合物をＮＬＴで３０分間撹拌し、得られた層を分離させた。有機層を１０ｗｔ％  Ｋ２ＣＯ３溶液（２容量ｘ２）で洗浄し、次いで塩水で洗浄した。有機層をシリカゲル（２５重量％）、Ｄｅｌｏｘａｎ−ＴＨＰ  ＩＩ（５ｗｔ％、７５％湿度）およびＮａ２ＳＯ４を含むフラスコに添加し、一晩撹拌した。得られた混合物をセライトパッドを通して濾過し、１０％ＴＨＦ／ＭＴＢＥ（３容量）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、粗化合物１を淡黄褐色泡状物として得た。
【０２５５】
母液からの化合物１の回収：オプションＡ
シリカゲルパッド濾過：母液を真空下で濃縮して褐色泡状物を得て、ジクロロメタン（２容量）に溶解し、シリカパッド（３ｘ粗化合物１の重量）を通して濾過した。該シリカパッドを酢酸エチル／ヘプタン（１：１、１３容量）で洗浄し、濾液を捨てた。シリカパッドを１０％ＴＨＦ／酢酸エチル（１０容量）で洗浄し、濾液を真空下で濃縮して化合物１を淡黄褐色泡状物として得た。上記の結晶化方法を、残りの化合物１を単離するために行った。
【０２５６】
母液からの化合物１の回収：オプションＢ．
シリカゲルカラムクロマトグラフィー：シリカゲルクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサンないし１００％酢酸エチル）の後、所望の化合物を淡黄褐色泡状物として単離した。上記の結晶化方法を、残りの化合物１を単離するために行った。
【０２５７】
化合物１のさらなる再結晶
固体化合物１（１．３５ｋｇ）をＩＰＡ（５．４Ｌ、４容量）に懸濁し、次いで８２℃まで加熱した。溶解の完了後（視覚的に）、ヘプタン（５４０ｍＬ、０．４容量）をゆっくり添加した。混合物を５８℃まで冷却した。次いで、混合物を５１℃までゆっくり冷却し、その間に結晶化が起こった。熱源を切り、再結晶混合物を自然に一晩かけて冷ました。混合物をｂｅｎｃｈｔｏｐ  Ｂｕｃｈｎｅｒ濾過器を用いて濾過し、濾過ケーキをＩＰＡ（２．７Ｌ、２容量）で洗浄した。濾過ケーキを大気流下、濾過器内で８時間乾燥させ、次いで真空下、４５−５０℃で一晩オーブン乾燥させて、１．０２ｋｇの再結晶化合物１を得た。
【０２５８】
化合物１はまた、米国特許出願ＵＳ２００９０１３１４９２(引用によりその開示内容を本明細書中に包含させる)に記載のいくつかの合成法の１つによっても製造され得る。
【０２５９】
以下の表４は、化合物１の分析データを示す。
【表１６】
2013536231.tif 000042
【０２６０】
化合物１ アモルファス形態の合成
スプレー乾燥法
９．９５ｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート  ＨＧグレ−ド（ＨＰＭＣＡＳ−ＨＧ）を、５０ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）と共に５００ｍｌビーカー中に計量した。ＭｅＯＨ（２００ｍｌ）を該固体と共に混合した。材料を４時間撹拌した。最大の溶解を確実にするために、２時間の撹拌後、溶液を５分間ソニケーションし、次いで撹拌を残り２時間継続した。ＨＰＭＣＡＳの極めて細かい懸濁液が溶液中に残った。しかしながら、視覚的観察では、粘性部分が、容器の壁または容器を傾けた後の底に残された部分として観察されなかったことが決定された。
【０２６１】
化合物１（１０ｇ）を５００ｍｌのビーカーに注ぎ、系を撹拌し続けた。溶液を以下のパラメーターを用いてスプレー乾燥させた：
【表１７】
2013536231.tif 000043
【０２６２】
およそ１６ｇの化合物１ アモルファス形態（８０％収率）を回収した。化合物１ アモルファス形態を、ＸＲＰＤ（図１）およびＤＳＣ（図２）により確認した。
【０２６３】
化合物１ アモルファス形態の固体状態 １３Ｃ ＮＭＲスペクトルを図３に示す。表５は、関連するピークの化学シフトを提供する。
【表１８】
2013536231.tif 000044
【０２６４】
化合物１ アモルファス形態の固体状態 １９Ｆ ＮＭＲスペクトルを図４に示す。アスタリスクを付したピークは、スピニングサイドバンドを示す。表６は、関連するピークの化学シフトを提供する。
【表１９】
2013536231.tif 000045
【０２６５】
回転蒸発法
化合物１（およそ１０ｇ）を、１８０ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、５０℃の浴中で回転蒸発させて泡状物にした。ＸＲＰＤ（図５）およびＤＳＣ（図６）が、化合物１のアモルファス形態について確認された。
【０２６６】
化合物１形態Ａの合成
スラリー法
ＥｔＯＡｃ、ＭＴＢＥ、酢酸イソプロピルまたはＤＣＭに対して、約４０ｍｇの化合物１を、１−２ｍｌの上記の溶媒のいずれか１種を含むバイアルに添加した。スラリーを室温で２４時間、２週間の間撹拌し、化合物１形態Ａを、懸濁液を遠心することにより集めた（フィルターを備える）。図７は、溶媒としてＤＣＭを用いてこの方法により得られた化合物１形態Ａの実際のＸＲＰＤパターンを記載する。表７は図７のピークを列記する。
【表２０】
2013536231.tif 000046
【０２６７】
化合物１形態Ａの単結晶構造から計算されるＸ線回折パターンを図８に示す。表８は、図８の計算したピークを列記する。
【表２１】
2013536231.tif 000047
【０２６８】
化合物１形態ＡのＤＳＣトレースを図９に示す。化合物１形態Ａの融点は約１７２−１７８℃である。
ＥｔＯＨ／水溶液に対して、約４０ｍｇの化合物１を３個の別個のバイアルに添加した。第一のバイアルに、１．３５ｍｌのＥｔＯＨおよび０．１５ｍｌの水を添加した。第二のバイアルに、０．７５ｍｌのＥｔＯＨおよび０．７５ｍｌの水を添加した。第三のバイアルに、０．１５ｍｌのＥｔＯＨおよび１．３５ｍｌの水を添加した。３個全てのバイアルを室温で２４時間撹拌した。その後、各懸濁液を個別に遠心して（フィルターを備える）化合物１形態Ａを集めた。
【０２６９】
イソプロピルアルコール／水溶液に対して、約４０ｍｇの化合物１を３個の別個のバイアルに添加した。第一のバイアルに、１．３５ｍｌのイソプロピルアルコールおよび０．１５ｍｌの水を添加した。第二のバイアルに、０．７５ｍｌのイソプロピルアルコールおよび０．７５ｍｌの水を添加した。第三のバイアルに、０．１５ｍｌのイソプロピルアルコールおよび１．３５ｍｌの水を添加した。３個全てのバイアルを室温で２４時間撹拌した。その後、各懸濁液を個別に遠心して（フィルターを備える）化合物１形態Ａを集めた。
【０２７０】
メタノール／水溶液に対して、約４０ｍｇの化合物１をバイアルに添加した。０．５ｍｌのメタノールおよび１ｍｌの水を添加し、懸濁液を室温で２４時間撹拌した。懸濁液を遠心して（フィルターを備える）化合物１形態Ａを集めた。
【０２７１】
アセトニトリルに対して、約５０ｍｇの化合物１を、２．０ｍｌのアセトニトリルを含むバイアルに添加した。懸濁液を室温で２４時間撹拌し、化合物１形態Ａを遠心により集めた（フィルターを備える）。
【０２７２】
アセトニトリル／水溶液に対して、約５０ｍｇの化合物１を２．５ｍｌのアセトニトリルに溶解して、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、１ｍｌをバイアルに吸引した。２．２５ｍｌの水を添加し、濁った懸濁液を得た。懸濁液を室温で２４時間撹拌し、化合物１形態Ａを遠心により集めた（フィルターを備える）。
【０２７３】
低速蒸発法
約５５ｍｇの化合物１を０．５ｍｌのアセトンに溶解し、ソニケーション後に透明な溶液を得た。該溶液を濾過し、０．２ｍｌをバイアルに吸引した。バイアルをパラフィンフィルムで密封し、それに１個の穴を開けて、静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２７４】
高速蒸発法
イソプロピルアルコールに対して、約４３ｍｇの化合物１を２．１ｍｌのイソプロピルアルコールに溶解しし、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液をバイアルに濾過し、封をせずに静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２７５】
メタノールに対して、約５８ｍｇの化合物１を０．５ｍｌのメタノールに溶解し、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、０．２ｍｌを封をしていないバイアルに吸引し、静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２７６】
アセトニトリルに対して、約５１ｍｇの化合物１を２．５ｍｌのアセトニトリルに溶解し、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、半量の溶液を封をしていないバイアルに吸引し、静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。図１０は、この方法により製造した化合物１形態ＡのＸＲＰＤパターンを示す。
【０２７７】
貧溶媒法(Anti−solvent Method)
ＥｔＯＡｃ／ヘプタンに対して、約３０ｍｇの化合物１を１．５ｍｌのＥｔＯＡｃに溶解し、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、２．０ｍｌのヘプタンを該濾過した溶液に添加し、その間、ゆっくり撹拌した。溶液をさらに１０分撹拌し、静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。図１１は、この方法により製造した化合物１形態ＡのＸＲＰＤパターンを示す。
【０２７８】
イソプロピルアルコール／水に対して、約２１ｍｇの化合物１を１．０ｍｌのイソプロピルアルコールに溶解して、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、０．８ｍｌの溶液を得た。１．８ｍｌの水を添加し、その間、ゆっくり撹拌した。さらに０．２ｍｌの水を添加して濁った懸濁液を得た。撹拌を５分間停止し、透明な溶液を得た。溶液をさらに２分間撹拌し、静置した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２７９】
エタノール／水に対して、約４０ｍｇの化合物１を１．０ｍｌのエタノールに溶解し、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、１．０ｍｌの水を添加した。溶液を１日、室温で撹拌した。再結晶した化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２８０】
アセトン／水に対して、約５５ｍｇの化合物１を０．５ｍｌのアセトンに溶解して、ソニケーション後に透明な溶液を得た。溶液を濾過し、０．２ｍｌをバイアルに吸引した。１．５ｍｌの水を添加し、次いでさらに０．５ｍｌの水を添加して濁った懸濁液を得た。懸濁液を１日、室温で撹拌した。化合物１形態Ａを濾過により集めた。
【０２８１】
以下の表９は、化合物１形態Ａを形成するための種々の方法をまとめたものである。
【表２２】
2013536231.tif 000048
【０２８２】
結晶構造について、結晶格子サイズおよびパッキングを含むさらに詳細なデータを供する単結晶データを化合物１形態Ａについて得た。
【０２８３】
結晶製造法
化合物１形態Ａの結晶を、メタノールの濃縮溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）より低速蒸発法により得た。０．２０×０．０５×０．０５ｍｍの格子寸法を有する化合物１形態Ａの無色結晶を選択し、鉱油を用いて洗浄し、ＭｉｃｒｏＭｏｕｎｔ上にマウントし、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩ回折計の中心に置いた。逆格子空間で分けられた４０フレームの３個のバッチを、配向マトリックスおよび最初の単位格子パラメーターを得るために得た。最後の単位格子パラメーターは完全なデータセットに基づいて得られ、精緻化された。
【０２８４】
実験
逆格子空間の回折データセットを、各々のフレームについて３０秒の露出で０．５°ステップを用いた０．８３Åの分解度で得た。データを、室温［２９５（２）Ｋ］で集めた。強度の統合および細胞パラメーターの改善を、ＡＰＥＸＩＩソフトウェアを用いて達成した。データ収集後の結晶の観察では、分解の徴候は示されなかった。
【表２３】
2013536231.tif 000049
【０２８５】
形状：全てのｅｓｄｓ（２個のｌ．ｓ．面の間の上反角のｅｓｄを除く）を、完全な共分散マトリックスを使用して推定した。格子ｅｓｄｓを、距離、角度およびねじれ角度のesdsの評価において、個々に考慮した；格子パラメーターのｅｓｄｓ間の相関関係は、それらが結晶の左右対称性によって定義されるときのみ用いる。格子ｅｓｄｓのおよその（等方性）処理が、ｌ．ｓ．面を含むｅｓｄｓを推定するために用いられる。
【表２４】
2013536231.tif 000050
【０２８６】
データ収集：Ａｐｅｘ  ＩＩ；格子精緻化：Ａｐｅｘ  ＩＩ；データ整理：Ａｐｅｘ  ＩＩ；構造を解析するために用いたプログラム（等）：ＳＨＥＬＸＳ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９０）；構造を精緻化するために用いたプログラム（等）：ＳＨＥＬＸＬ９７（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ、１９９７）；分子グラフィックス：Ｍｅｒｃｕｒｙ；発表のための素材を作成するために用いたソフトウェア：ｐｕｂｌＣＩＦ。
【表２５】
2013536231.tif 000051
【０２８７】
精緻化：全ての反射に対するＦ２の精密化。計量したＲ因子  ｗＲおよび適合度Ｓは、Ｆ２に基づき、通常のＲ因子  Ｒは、ネガティブＦ２についてＦを０に設定したＦに基づく。Ｆ２＞２σ（Ｆ２）の閾値表現が、Ｒ因子（ｇｔ）などを計算するためにのみ用いられ、精密化のための反射の選択には関連しない。Ｆ２に基づくＲ因子は、Ｆに基づくＲ因子よりも統計的約２倍に大きく、全てのデータに基づくＲ因子はさらに大きい。
【０２８８】
単結晶Ｘ線分析に基づく化合物１形態Ａの立体構造図を図１２に示す。該結晶構造は、分子のパッキング密度を明らかにする。化合物１形態Ａは、以下の単位格子密度を有する単斜晶系、Ｃ２空間群である：ａ＝２１．０９５２（１６）Å、ｂ＝６．６２８７（５）Å、ｃ＝１７．７９１７（１５）Å、β＝９５．８６７（６）°、γ＝９０°。
【０２８９】
化合物１  形態Ａの固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、図１３に示す。表１３は関連のあるピークの化学シフトを供する。
【表２６】
2013536231.tif 000052
【０２９０】
化合物１  形態Ａの固体状態  １９Ｆ  ＮＭＲスペクトルを図１４に示す。アスタリスクを付したピークは、スピニングサイドバンドを示す。表１４は、関連するピークの化学シフトを提供する。
【表２７】
2013536231.tif 000053
【０２９１】
化合物１を含む経口医薬製剤の例
錠剤を、表１５−１７に列記した成分および量で製造する。
【表２８】
2013536231.tif 000054
【表２９】
2013536231.tif 000055
【表３０】
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【０２９２】
ローラー圧縮ローラー圧縮顆粒組成物からの錠剤形態
装置／処理
装置
【表３１】
2013536231.tif 000057
【０２９３】
スクリ−ニング／計量
固体噴霧乾燥分散体としての化合物１ アモルファス形態およびＣａｂｏｔ  Ｍ５Ｐを合わせ、２０メッシュを通して篩いにかけ、２Ｌ  Ｔｕｒｂｕｌａ  Ｔ２Ｆ  シェーカー・ミキサー中で１０分間、３２ＲＰＭで混合した。
【０２９４】
粒内混合
AcDiSol、Avicel PH101、およびForemost 310を添加し、さらに１５分間混合した。次いで、混合物をQuadro Comill 197（メッシュ：０．０３２”Ｒ；インペラー：１６０７；ＲＰＭ：１０００ＲＰＭ）を通した。ステアリン酸マグネシウムを、上記の混合物の量(量)を手で２０メッシュに通して２−３回ふるいにかけた。得られた混合物をＴｕｒｂｕｌａ  ｍｉｘｅｒ中で４分間、３２ＲＰＭで混合した。
【０２９５】
ローラー圧縮
Ｋｏｒｓｃｈ  ＸＬ１００  ロータリー打錠機（重力送り機構 １／２ インチ径、丸型、平面ツ−リング）中の上記混合物を、約０．７２−０．７７  固体画分までスラグ化する。固体画分を計量し、かさ高さを測定し、工程中に決定された正確な密度を用いて算出する。ロータリー式打錠機スラグ化工程のために、圧縮力はダイの容れ目量およびスラグの最終重量によって変化し得る。スラグをすり鉢とすりこぎで軽く壊しておよそ１／４インチ片とする。壊れたスラグをQuadro Comill 197（篩い目：０．０７９”Ｇ；インペラー：１６０７；ＲＰＭ：１０００）に通す。
【０２９６】
粒外混合
粒外顆粒  Ｃａｂｏｔ  Ｍ５Ｐを、上記の混合物の量(量)を手で２０メッシュに通して２−３回ふるいにかけた。この粒外顆粒Ｃａｂｏｔ  Ｍ５Ｐ予混合物を主混合物に添加し、２ＬのTurbula T2F シェーカー・ミキサー  中で、１５分間、３２ＲＰＭで混合する。粒該顆粒ステアリン酸マグネシウムを、上記の混合物の量(量)を手で２０メッシュに通して２−３回ふるいにかけた。この粒該顆粒ステアリン酸マグネシウム予混合物を主混合物に添加し、Turbular mixer中で、４分間、３２ＲＰＭで混合する。
【０２９７】
圧縮
錠剤は、重力送り機構および０．２８９”ｘ０．５８７９”の修正楕円形ツ−リングを備えるKorsch XL 100を用いて１４．５±３．５ｋｐの目的硬度に圧縮される。
【０２９８】
フィルムコーティング
錠剤は、例えば、O’Hara Labcoatのようなパンコーティング器を用いてフィルムコーティングされ得る。
【０２９９】
プリント
フィルムコートした錠剤は、例えば、Hartnett Delta printerで錠剤表面の一方または両方にモノグラムをプリントされ得る。
【０３００】
用量投与スケジュ−ル
他の面において、本発明は、有効量の本発明で提供される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＣＦＴＲ仲介疾患の処置法に関する。別の態様において、医薬組成物は、対象に２週間毎に１回投与される。別の態様において、医薬組成物は、対象に１週間に１回投与される。別の態様において、医薬組成物は、対象に３日毎に１回投与される。別の態様において、医薬組成物は、対象に１日１回投与される。一態様において、医薬組成物が表１、２または３の錠剤であるとき、１日１回投与される。
【０３０１】
アッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ矯正（correction）特性を検出および測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための光学的膜電位方法
【０３０２】
光学的膜電位アッセイは、蛍光変化の測定装置、例えば電位差／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）（Gonzalez, J. E., K. Oades, et al. (1999) “Cell−based assays and instrumentation for screening ion−channel targets” Drug Discov Today 4(9): 43１−439を参照のこと）と組み合わせて、GonzalezおよびTsienにより記載される膜電位感受性ＦＲＥＴセンサーを利用する（Gonzalez, J. E. and R. Y. Tsien (1995) “Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells” Biophys J 69(4): 127２−80、およびGonzalez, J. E. and R. Y. Tsien (1997) “Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer” Chem Biol 4(4): 269−77を参照のこと）。
【０３０３】
これらの電位感受性アッセイは、膜−可溶性の電位−感受性色素であるＤｉＳＢＡＣ２（３）と、蛍光リン脂質であるＣＣ２−ＤＭＰＥ（それは、原形質膜の外側に結合して、ＦＲＥＴ供与体として作用する。）の間の、蛍光共鳴エネルギ−転移（ＦＲＥＴ）における変化に基づく。膜電位（Ｖｍ）の変化は、負電荷のＤｉＳＢＡＣ２（３）が原形質膜を通過して再分布するのを誘発し、それによってＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギ−伝達量が変化する。蛍光放射の変化を、ＶＩＰＲ（登録商標）ＩＩを用いて測定することができ、それは、９６−または３８４−ウェルマイクロタイタープレートにおいて細胞ベースのスクリ−ニングを行うよう設計された、統合した液体処理システム（handler）および蛍光検出器である。
【０３０４】
１．矯正化合物の同定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲと関係する輸送障害を矯正する小分子を同定するため、単一付加（single−addition）ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。細胞を、試験化合物の存在または不存在（ネガティブコントロール）下、３７℃で１６時間、血清不含有培地中でインキュベートした。ポジティブコントロールとして、３８４ウェルプレートに播いた細胞を、２７℃で１６時間インキュベートし、“温度−矯正”ΔＦ５０８−ＣＦＴＲとした。その後、細胞をクレブスリンゲル溶液で３回濯ぎ、電位感受性色素を充填した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するため、１０μＭフォルスコリンおよびＣＦＴＲ増強剤、ゲニステイン（２０μＭ）を、各ウェルにＣｌ−不含有媒体と共に添加した。Ｃｌ−不含有媒体の添加は、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性化に応答してＣｌ−排出を促進し、その結果の膜脱分極を、電位感受性色素を用いて光学的に測定した。
【０３０５】
２．増強化合物の同定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強剤を同定するため、二重付加（double−addition）ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。最初の添加中、試験化合物を含むか、または含まないＣｌ−不含有媒体を各ウェルに添加した。２２秒後、２−１０μＭフォルスコリンを含むＣｌ−不含有媒体の２回目の添加を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するために添加した。両方の添加後の細胞外Ｃｌ−濃度は２８ｍＭであって、それは、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性化に応答してＣｌ−排出を促進し、結果としての膜脱分極を、ＦＲＥＴベースの電位感受性色素を用いて光学的に測定した。
【０３０６】
３．溶液
浴溶液＃１：ＮａＣｌ １６０ｍＭ、ＫＣｌ ４．５ｍＭ、ＣａＣｌ２ ２ｍＭ、ＭｇＣｌ２ １ｍＭ、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ、ＮａＯＨでｐＨ７．４。
塩化物不含有浴溶液：浴溶液＃１中塩化物塩を、グルコン酸塩に置き換える。
ＣＣ２−ＤＭＰＥ：ＤＭＳＯ中、１０ｍＭストック溶液として製造し、−２０℃で貯蔵した。
ＤｉＳＢＡＣ２（３）： ＤＭＳＯ中、１０ｍＭストック溶液として製造し、−２０℃で貯蔵した。
【０３０７】
４．細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定に用いた。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、および２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを添加したダルベッコの改変イーグルス媒体中で、３７℃にて５％ＣＯ２下で、９０％湿度にて維持した。全ての光学アッセイに関して、細胞を、３８４ウェルのマトリゲル−コートしたプレート中、３０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養し、その後、増強剤アッセイのために２７℃で２４時間培養した。矯正アッセイに関して、細胞を１６−２４時間、化合物を含有または不含有下、２７℃または３７℃で培養した。
【０３０８】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための電気生理的アッセイ
１．ユッシングチャンバーアッセイ
ユッシングチャンバー実験を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現する極性化上皮細胞で行い、光学的アッセイで同定したΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーターをさらに特徴付けた。Costar Snapwell 細胞培養インサート上に増殖したＦＲＴΔＦ５０８−ＣＦＴＲ 上皮細胞を、ユッシングチャンバー(Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA)にマウントし、単層を、電圧固定（Voltage−clamp）システム（Department of Bioengineering, University of Iowa, IA および Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA）を用いて継続的に短絡回路電流を測定した。経上皮電気抵抗を、２ｍＶパルスを用いて測定した。これらの条件下、ＦＲＴ上皮細胞は、４ＫΩ／ｃｍ２またはそれ以上の抵抗性を示した。溶液を２７℃に維持し、空気をバブリングさせた。電極オフセット電位および流体抵抗を、無細胞インサートを使用して矯正した。これらの条件下、電流は、頂端膜において発現されるΔＦ５０８−ＣＦＴＲを介したＣｌ−の流動を反映する。ＭＰ１００Ａ−ＣＥインターフェースおよびＡｃｑＫｎｏｗｌｅｄｇｅソフトウェア（ｖ３．２．６；BIOPAC Systems, Santa Barbara, CA）を使用して、ＩＳＣをデジタル方式で得た。
【０３０９】
２．矯正化合物の同定
典型的なプロトコ−ルは、基底側から頂端膜のＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を設定するため、通常のリンゲル溶液を基底側膜に用い、一方、頂端ＮａＣｌを、等モルのグルコン酸ナトリウムに置き換え（ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４に滴定）、上皮を横切る大きなＣｌ−濃度勾配を得た。全ての実験を、無傷の単層で行った。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを完全に活性化するため、頂端側に、フォルスコリン（１０μＭ）、ＰＤＥ阻害剤、ＩＢＭＸ（１００μＭ）を添加し、次いでＣＦＴＲ増強剤、ゲニステイン（５０μＭ）を添加した。
【０３１０】
他の細胞タイプにおける観察として、△Ｆ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現するＦＲＴ細胞の低温でのインキュベートは、細胞膜でのＣＦＴＲの機能的密度を増大する。矯正化合物の活性を決定するため、細胞を１０μＭの試験化合物と共に２４時間３７℃にてインキュベートし、その後、３回洗浄して、記録した。化合物処理した細胞におけるｃＡＭＰ−およびゲニステイン−仲介ＩＳＣを、２７℃および３７℃での対照に対して標準化し、活性％として現した。細胞と矯正化合物のプレインキュベーションは、３７℃対照と比較して、ｃＡＭＰ−およびゲニステイン−仲介ＩＳＣを顕著に増大させた。
【０３１１】
３．増強化合物の同定
典型的なプロトコ−ルは、基底側から頂端膜のＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を設定するため、通常のリンゲル溶液を基底側膜に用い、ナイスタチン（３６０μｇ／ｍｌ）で透過性にし、一方、頂端側ＮａＣｌを等モルの（ＮａＯＨでｐＨ７．４に滴定された）グルコン酸ナトリウムで置き換え、上皮を横切る大きなＣｌ−濃度勾配を得た。すべての実験をナイスタチン透過処理の３０分後に行った。フォルスコリン（１０μＭ）および全ての試験化合物を、細胞培養インサートの両側に添加した。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強剤の有効性を、公知の増強剤ゲニステインのそれと比較した。
【０３１２】
４．溶液
側底溶液（ｍＭ）：ＮａＣｌ（１３５）、ＣａＣｌ２（１．２）、ＭｇＣｌ２（１．２）、Ｋ２ＨＰＯ４（２．４）、ＫＨＰＯ４（０．６）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（１０）、およびデキストロース（１０）。ＮａＯＨを使用して溶液をｐＨ７．４に滴定した。
頂端溶液（ｍＭ）：側底溶液と同じ。ただし、ＮａＣｌをグルコン酸Ｎａ（１３５）で置き換えた。
【０３１３】
５．細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現するＦｉｓｈｅｒラット上皮（ＦＲＴ）細胞（ＦＲＴΔＦ５０８−ＣＦＴＲ）を、本発明者らの光学的アッセイから特定された推定ΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーターのユッシングチャンバー実験に用いた。細胞をＣｏｓｔａｒ Ｓｎａｐｗｅｌｌ細胞培養インサート上で培養し、５％ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＣｏｏｎの改変Ｈａｍ Ｆ−１２培地中で３７℃および５％ＣＯ２で５日間培養した。化合物の増強物質活性を特徴付るのに使用する前に、細胞を２７℃で１６〜４８時間インキュベートし、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを矯正した。矯正化合物の活性を決定するために、細胞を、２７℃または３７℃で化合物の有無下、２４時間インキュベートした。
【０３１４】
６．全細胞(Whole−cell)記録
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現する、温度および試験化合物で矯正されたＮＩＨ３Ｔ３細胞における巨視的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ電流（ＩΔＦ５０８）を、穿孔パッチホールセル記録を使用してモニタ−した。簡単には、ＩΔＦ５０８の電位固定記録を、Ａｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を用いて室温で実施した。全ての記録をサンプリング周波数１０ｋＨｚで取得し、１ｋＨｚの低域フィルターにかけた。ピペットは、細胞内液で満たすと５〜６ＭΩの抵抗を有した。これらの記録条件下で、室温でのＣｌ−の計算逆転電位（ＥＣｌ）は−２８ｍＶであった。すべての記録は、シール抵抗＞２０ＧΩおよび直列抵抗＜１５ＭΩであった。パルス発生、データ取得および分析を、Ｃｌａｍｐｅｘ ８に接続されたＤｉｇｉｄａｔａ １３２０ Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣ装置（Axon Instruments Inc.）を使用して行った。浴は、食塩水＜２５０μｌを含み、重力駆動の潅流システムを使用して速度２ｍｌ／分で連続的に洗い流した。
【０３１５】
７．矯正化合物の同定
細胞膜中の機能的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの密度を増加させる矯正化合物の活性を求めるために、本発明者らは、上記の穿孔パッチ記録技術を用いて、矯正化合物で２４時間処理した後の電流密度を測定した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを十分に活性化するために、１０μＭフォルスコリンおよび２０μＭゲニステインを細胞に添加した。本発明者らの記録条件下では、２７℃で２４時間インキュベートした後の電流密度は、３７℃で２４時間インキュベートした後に観察された電流密度より高かった。これらの結果は、細胞膜中のΔＦ５０８−ＣＦＴＲの密度に対する低温インキュベーションの公知の効果と一致する。ＣＦＴＲ電流密度に対する矯正化合物の効果を決定するために、細胞を１０μＭ試験化合物と共に３７℃で２４時間インキュベートし、電流密度を２７℃および３７℃の対照と比較した（％活性）。記録前に、細胞を細胞外記録培地で３回洗浄して、残留試験化合物を除去した。１０μＭ矯正化合物と共にプレインキュベートすると、ｃＡＭＰおよびゲニステインに依存性した電流が３７℃の対照に比べてかなり増加した。
【０３１６】
８．増強物質化合物の特定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増加させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強剤の能力もまた、穿孔パッチ記録技術を用いて調べた。光学的アッセイから特定された増強剤は、光学的アッセイにおいて認められた類似の作用強度および効力でＩΔＦ５０８の用量依存的増加を惹起した。試験したすべての細胞において、増強剤の適用前および適用中の逆転電位は、約−３０ｍＶであった。約−３０ｍＶは、計算したＥＣｌ（−２８ｍＶ）である。
【０３１７】
９．溶液
細胞内液（ｍＭ）：アスパラギン酸Ｃｓ（９０）、ＣｓＣｌ（５０）、ＭｇＣｌ２（１）、ＨＥＰＥＳ（１０）および２４０μｇ／ｍｌアンホテリシンＢ（ＣｓＯＨを用いてｐＨ７．３５に調節した）。
細胞外液（ｍＭ）：Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ（１５０）、ＭｇＣｌ２（２）、ＣａＣｌ２（２）、ＨＥＰＥＳ（１０）（ＨＣｌを用いてｐＨ７．３５に調節した）。
【０３１８】
１０．細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を全細胞記録に用いる。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中の２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコの改変イーグル培地中で３７℃、５％ＣＯ２および湿度９０％で維持する。全細胞記録の場合、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンでコートしたカバーガラス上に播き、２７℃で２４〜４８時間培養した後、増強剤の活性を試験するのに使用した。さらに、矯正化合物の有無下、３７℃でインキュベートして、矯正化合物の活性を測定した。
【０３１９】
１１．単一チャネル記録
ＮＩＨ３Ｔ３細胞中で安定に発現された温度−矯正ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの単一チャネル活性および増強剤化合物の活性を、切り出したインサイドアウト膜パッチを用いて観察した。簡単には、単一チャネル活性の電位固定記録を、Ａｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を用いて室温で行った。すべての記録をサンプリング周波数１０ｋＨｚで取得し、４００Ｈｚの低域フィルターにかけた。パッチピペットは、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｋｏｖａｒ Ｓｅａｌｉｎｇ＃７０５２ガラス（World Precision Instruments,Inc., Sarasota, FL）から作製され、細胞外液で満たしたときに５〜８ＭΩの抵抗を有した。切り出し後に１ｍＭ Ｍｇ−ＡＴＰおよび７５ｎＭ ｃＡＭＰ依存性タンパク質キナ−ゼ触媒サブユニット（ＰＫＡ；Promega Corp. Madison, WI）を添加することによってΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化した。チャネル活性が安定化された後、重力駆動微小潅流システムを使用してパッチを洗い流した。流入液をパッチに隣接して置き、１〜２秒以内に溶液を完全に交換した。急速な洗い流し中にΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性を維持するために、非特異的ホスファターゼ阻害剤Ｆ−（１０ｍＭ ＮａＦ）を浴溶液に添加した。これらの記録条件下で、チャネル活性は、パッチ記録の期間（最高６０分間）を通して一定のままであった。細胞内液から細胞外液に移動する陽電荷（反対方向に移動する陰イオン）によって生成される電流を正電流として示す。ピペット電位（Ｖｐ）を８０ｍＶで維持した。
【０３２０】
２個以下の活性チャネルを含む膜パッチからチャネル活性を分析した。最高同時開口数によって、実験過程中の活性チャネル数を決定した。単一チャネルの電流振幅を測定するために、１２０秒のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」でフィルターし、次いでそれを使用して、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（Bio−Logic Comp.France）を用いてマルチガウシアン関数に当てはめられた全点振幅（all−point amplitude）ヒストグラムを構築した。合計の微小電流および開口率（Ｐｏ）を、１２０秒のチャネル活性から決定した。Ｐｏを、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）｛式中、Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、およびＮ＝パッチ中の活性チャネル数である。｝から決定した。
【０３２１】
１２．溶液
細胞外液（ｍＭ）：ＮＭＤＧ（１５０）、アスパラギン酸（１５０）、ＣａＣｌ２（５）、ＭｇＣｌ２（２）およびＨＥＰＥＳ（１０）（Ｔｒｉｓ塩基を用いてｐＨ７．３５に調節した）。
細胞内液（ｍＭ）：ＮＭＤＧ−Ｃｌ（１５０）、ＭｇＣｌ２（２）、ＥＧＴＡ（５）、ＴＥＳ（１０）およびＴｒｉｓ塩基（１４）（ＨＣｌを用いてｐＨ７．３５に調節した）。
【０３２２】
１３．細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切り出された膜のパッチクランプ記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ中の２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したダルベッコの改変イーグル培地中で３７℃、５％ＣＯ２および湿度９０％で該細胞を維持する。単一チャネル記録の場合、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リシンでコートしたカバーガラス上に播き、使用前に２７℃で２４〜４８時間培養した。
【０３２３】
上記の方法を用いて、化合物１の活性、すなわちＥＣ５０を測定し、表１８に示した。
【表３２】
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【０３２４】
他の態様
本明細書中で言及される全ての文献および特許文献は、個々の文献または特許文献がそれぞれ、具体的におよび個別に引用により本明細書中に包含されることを意図されるのと同程度まで、引用により本明細書中に包含される。引用により本明細書中に包含される特許文献または文献のいずれかにおける用語の意味が、本明細書で用いる用語の意味と矛盾するとき、本明細書における用語の意味は、制限されることが意図されるべきである。さらに、上記の詳細な説明は、本発明の単なる例示的態様を開示および記載している。当業者は、種々の変更、修飾および改変が、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の精神および範囲から逸脱しないで行われ得ることを、かかる開示および添付の図面および特許請求の範囲から容易に認識し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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