(57)【要約】  本発明は、肺機能の低下が典型的な症状である喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の症状又は悪化の治療、緩和、予防又は低減に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
喘息の症状の治療又は緩和のための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項２】
前記医薬が、ＨＲＶ感染を有する対象における喘息の症状の治療又は緩和のためのものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＣＯＰＤの症状の治療又は緩和のための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項４】
前記医薬が、ＨＲＶ感染を有する対象におけるＣＯＰＤの症状の治療又は緩和のためのものである、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
喘息の悪化の発生率を低下し、又は喘息の悪化を予防するための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項６】
前記医薬が、ＨＲＶ感染の危険性のある対象において喘息の悪化の発生率を低下し、又は喘息の悪化を予防するためのものである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下し、又はＣＯＰＤの悪化を予防するための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項８】
前記医薬が、ＨＲＶ感染の危険性のある対象におけるＣＯＰＤの悪化の発生率を低下し、又はＣＯＰＤの悪化を予防するためのものある、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬が経口投与のために製剤化されている、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記経口投与が経口経腸投与である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記経口投与される３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩が、固体形態又は液体形態である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
前記固体形態が錠剤又はカプセルである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記医薬が、鼻腔内投与又は吸入若しくは吹送による投与のために製剤化されている、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
前記医薬が静脈内投与のために製剤化されている、請求項１から８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記医薬が、少なくとも１種の喘息治療薬と組み合わせて、別々に、同時に、又は逐次的に投与するために製剤化されている、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、喘息の症状を治療又は緩和するための方法。
【請求項１７】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、ＣＯＰＤの症状を治療又は緩和するための方法。
【請求項１８】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、その危険性のある対象に投与するステップを含む、喘息の悪化の発生率を低下させる又は喘息の悪化を予防するための方法。
【請求項１９】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、その危険性のある対象に投与するステップを含む、ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下させる又はＣＯＰＤの悪化を予防するための方法。
【請求項２０】
喘息の症状の治療又は緩和において使用するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２１】
ＣＯＰＤの症状の治療又は緩和において使用するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２２】
喘息の悪化の発生率を低下し、又は喘息の悪化を予防するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２３】
ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下し、又はＣＯＰＤの悪化を予防するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項２４】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩及び少なくとも１種の喘息治療薬を含む薬剤の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺機能の低下が典型的な症状である喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の症状又は悪化の治療、緩和、予防又は低減に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、気管支の気道における慢性疾患である。世界中で少なくとも３億人が喘息に罹患していると考えられている。喘息の症状は、気道の炎症及び可逆的な狭窄によって引き起こされ、喘鳴、息切れから生命を危うくする喘息発作まで多岐にわたる。
【０００３】
喘息の有病率は、過去３０年間で２倍になったと考えられている。この疾患の経済的影響の例としては、学校又は職場の欠席及び医療制度への依存度の増加が挙げられる。喘息は、年齢及び民族を問わず発症するが、小児が罹患する最も一般的な慢性疾患であると考えられている。２０００年には、米国のみで喘息に罹患した１８歳未満の小児は５３０万人を上回り、５歳未満の小児における喘息の割合は過去１５年間で１６０％増加したと推定された。将来この傾向が減少することを期待させる根拠は現在のところなく、治療のために数多くの治験が進行中である。
【０００４】
喘息の病理発生の基礎を成す機構は、徹底的な究明が行われているが、複雑であまりよくわかっていない。気道の炎症、気道の反応性亢進及び気道のリモデリングが喘息の一般的な基礎を成す病理学的特徴であると考え得るかもしれない。喘息のより具体的な病理学的特徴は、現在以下のものを含むと理解されている：ＩｇＥの産生、気道平滑筋（ＡＳＭ）及び杯細胞肥大／過形成、粘液分泌過多、好酸球、好中球及び単核細胞の気道粘膜下層への浸潤、肥満細胞及びマクロファージの活性化、気道上皮細胞の脱落並びに粘膜上皮内壁に損傷を与え、過剰な修復応答を促進する一連のメディエーターのＴｈ２細胞及び活性化炎症細胞からの放出（Ｈａｎｓｂｒｏ，Ｎ．Ｇ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８）１１７：３１３〜３５３）。
【０００５】
喘息の治療法はない。しかし、喘息、特にその基礎を成す病態又は先在する病態の症状及び悪化に対処する点で罹患者を援助するために利用可能な薬物療法は存在する。現在利用可能な薬物療法には、テオフィリンなどの気管支拡張薬、抗コリン薬（例えば、イプラトロピウム）、短時間作用型β２アドレナリン受容体選択的作動薬（例えば、レバルブテロール、ピルブテロール及び、サルブタモールとしても知られているアルブテロール）、吸入される長時間作用型β２アドレナリン受容体作動薬（ＬＡＢＡ）（例えば、サルメテロール及びホルモテロール）、ロイコトリエン修飾薬又はロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ、例えば、モンテルカスト、プランルカスト、ザフィルルカスト及びジロートン）、吸入コルチコステロイド（例えば、フルチカゾン、ブデソニド、トリアムシノロン（ｔｒｉｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、フルニソリド、ベクロメタゾン、モメタゾン及びシクレソニド）並びに重篤な副作用による重篤な喘息エピソードを治療するために用いられる経口／経静脈コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン及びメチルプレドニゾロン）が含まれる。吸入コルチコステロイドは、長時間作用型βアドレナリン受容体作動薬又は短時間作用型βアドレナリン受容体作動薬と併用することができる。抗ＩｇＥモノクローナル抗体であるオマリズマブは、吸入コルチコステロイド、長時間作用型βアドレナリン受容体作動薬及びロイコトリエン修飾薬では効果がない場合、又は副作用のため回避されなければならない場合に皮下投与することができる。しかし、オマリズマブは、相対的に費用が高い治療となる（Ｆａｎｔａ，Ｃ．Ｈ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ（２００９）３６０（１０）：１００２〜１０１４）。
【０００６】
さらに、これらの喘息治療薬の送達様式は重要で、例えば、コルチコステロイドの吸入又はエアロゾルによる送達は、経口治療と比較したとき、肺での薬物の局所的効果を最大限にし、全身の副作用を最小限に抑えることができるので、好ましい（Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｈ．，Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ＆  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２００９）３（３）：２３２〜２３９及びＦａｎｔａ，Ｃ．Ｈ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ（２００９）３６０（１０）：１００２〜１０１４）。
【０００７】
しかし、喘息治療薬に対する応答は、罹患者によって様々である。これらの種類の治療薬の１種又は複数は、喘息患者の最大で５０％に対して治療上有効ではない。種々の喘息治療薬はまた、重篤な副作用を伴う（Ｄｕａｎ，Ｑ．Ｌ．ａｎｄ  Ｔａｎｔｉｓｉｒａ，Ｋ．Ｇ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ（２００９）１５（３２）：３７４２〜３７５３）。
【０００８】
慢性気管支炎又は肺気腫としても知られている慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、治療法のない不可逆的な肺の病態である。世界中で２億１千万の人がＣＯＰＤを抱え、ＣＯＰＤに関連した死は今後１０年間で３０％以上増加すると推定されている。この病態の特徴は、肺からの気流が持続的に遮断されることであり、生命に関わる。ＣＯＰＤの症状は現在、気管支拡張薬などの肺への気流の遮断を緩和する喘息医薬によって対処されている。
【０００９】
現在のところ、喘息又はＣＯＰＤの治療薬はないので、罹患者は症状を悪化させる誘発因子に成り得る特定の事象又は危険因子を回避することによって、これらの基礎をなす又は先在する病態に対処することが推奨されている。喘息エピソードの誘引物質は様々で、運動、冷気、汚染物質、刺激物質、食品アレルギー、アレルゲン並びに細菌性及びウイルス性呼吸器感染が含まれる。タバコの煙は、ＣＯＰＤの主要な原因と考えられているが、他の危険因子には大気汚染、粉塵及び化学物質の蒸気、刺激物質及び煙霧並びに小児期における頻繁な下気道感染が含まれる。
【００１０】
食品アレルギー、煙などの刺激物質及びアレルゲンなどのある種の誘因物質への曝露は、罹患者の意識及び／又は生活様式の変化によって最小限に抑えることができる。しかし、細菌性又はウイルス性呼吸器感染などの他の誘因事象は、集団において容易に伝染し得ることを考慮すると、回避することはより困難である。
【００１１】
いくつかの呼吸器ウイルス感染が喘息に関して研究されてきた。ウイルス感染の場合、いくつかの重要な因子が上皮より放出されると考えられており、以下のものが挙げられる：サイトカイン（インターフェロン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ）、インターロイキン（ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１６）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α））；ケモカイン（ＩＬ−８、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４）、マクロファージ阻害タンパク質（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−３α、ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ（ＲＡＮＴＥＳ）及びエオタキシン（１、２、上皮好中球活性化ペプチド−７８（ＥＮＡ−７８）、ＩＦＮ−γ誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０））；主要組織適合（ＭＨＣ）分子（細胞接着分子（ＭＨＣ  Ｉ、ＭＨＣ  ＩＩ））；接着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、Ｅｐ−ＣＡＭ）；インテグリン（α１〜６、８、９）；パターン認識受容体（Ｔｏｌｌ様受容体（ｂ１、４〜６、８、ＴＬＲ  １〜１０））；脂質メディエーター（プロスタグランディン（ＣＤ１４、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２ｘ）、ロイコトリエン（トロンボキサンＢ２、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４））；増殖因子（上皮ＧＦ、血小板由来ＧＦ、形質転換ＧＦ（ＴＧＦ）−α、β）、塩基性繊維芽細胞ＧＦ（ｂＦＧＦ）、インスリン様ＧＦ）及びコロニー刺激因子（顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ））；抗菌ペプチド（デフェンシン（α、β、リゾチーム）、コレクチン（ラクトフェリン、サーファクタントタンパク質−Ａ、Ｄ）；神経ペプチド（エンドセリン（サブスタンスＰ））；ムチン（カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ））；活性酸素；並びにガス（一酸化窒素）（Ｄａｋｈａｍａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（２００５）２４  Ｓ１５９〜Ｓ１６９及びＨａｎｓｂｒｏ，Ｎ．Ｇ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８）１１７：３１３〜３５３）。
【００１２】
喘息に関して研究されてきた呼吸器ウイルス感染の中には、ライノウイルス感染又はヒトライノウイルス（ＨＲＶ）がある。ＨＲＶは、感冒の発症において推定３０〜３５％の病原体と考えられており、米国だけでも感冒の発症は年間１０億も起こっていると推定されている。しかし、現在のところ、ライノウイルス感染を治療するために承認された治療法はない。２つの有望なＨＲＶ治療薬候補、すなわち吸入ピロダビル及び経口プレコナリルは、有益性の実証を欠き、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）が安全性を懸念したことから、臨床は進まなかった（Ｒｏｈｄｅ，Ｇ．，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ（２００９）９：１２６〜１３２）。最近、ＷＯ２０１０／００９２８８で公表されたように、「プレコナリルの経口投与は、喘息の悪化に対して効果がない」ことが言及された。喘息におけるプレコナリル鼻腔噴霧の効果を評価するために臨床試験が実施されたが、現在のところ、この治験の結果は報告されていない（米国政府の臨床試験識別番号ＮＣＴ／００３９４９１４、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００３９４９１４／を参照のこと）。
【００１３】
したがって、喘息罹患者は、感冒などの事象が引き金となって重篤な喘息を発症する危険性が非常に高い。ＣＯＰＤ罹患者はまた、ＨＲＶ感染の影響を受け易い。したがって、喘息及びＣＯＰＤの症状又は悪化を緩和、予防、又は低減させるために効果的な医薬が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【００１４】
ＨＲＶに対して効果的な特定の化合物が喘息又はＣＯＰＤの症状又は悪化の治療、緩和、予防又は低減に有用であることを今回発見した。
【００１５】
したがって、一態様では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、喘息の症状を治療又は緩和するための方法を提供する。
【００１６】
別の態様では、喘息の症状の治療又は緩和のための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【００１７】
他の態様では、喘息の症状の治療又は緩和において使用するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００１８】
一態様では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、その危険性のある対象に投与するステップを含む、喘息の悪化の発生率を低下させる又は喘息の悪化を予防するための方法を提供する。
【００１９】
別の態様では、喘息の悪化の発生率を低下又は喘息の悪化を予防するための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【００２０】
他の態様では、喘息の悪化の発生率を低下又は喘息の悪化を予防するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２１】
一態様では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、ＣＯＰＤの症状を治療又は緩和するための方法を提供する。
【００２２】
別の態様では、ＣＯＰＤの症状を治療又は緩和するための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【００２３】
他の態様では、ＣＯＰＤの症状の治療又は緩和において使用するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２４】
一態様では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、その危険性のある対象に投与するステップを含む、ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下させる又はＣＯＰＤの悪化を予防するための方法を提供する。
【００２５】
別の態様では、ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下又はＣＯＰＤの悪化を予防するための医薬の調製における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【００２６】
他の態様では、ＣＯＰＤの悪化の発生率を低下又はＣＯＰＤの悪化を予防するための３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２７】
一実施形態では、喘息又はＣＯＰＤの罹患者は、ＨＲＶに感染しているか、又はＨＲＶ感染の危険性がある。
【００２８】
別の実施形態では、投与は、経口投与、経鼻投与、吸入、吹送又は静脈内投与である。経口投与が特に好ましい。他の実施形態では、経口投与は経口経腸投与である。さらに別の実施形態では、経口投与される３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、固体形態又は液体形態である。さらに他の実施形態では、固体形態は錠剤又はカプセルである。
【００２９】
別の実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、１日当たり１ｍｇから８００ｍｇの投薬量で投与される。
【００３０】
さらに別の実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、少なくとも１種の喘息治療薬と組み合わせて、別々に、同時に、又は逐次的に投与される。
【００３１】
一態様では、本発明は、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１種の喘息治療薬とを含む薬剤の組み合わせを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】プラセボと比較して、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール２５ｍｇ、１００ｍｇ及び４００ｍｇについて、ＩＴＴ集団（±９０及び９５％信頼区間）において培養することによって測定したＨＲＶ  ＡＵＣウイルス負荷を示した、棒グラフである。
【図２】正常ドナー、喘息ドナー及びＣＯＰＤドナー由来の組織について、ヒト呼吸器の上皮組織用のヒト細胞由来組織培養モデル（ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システム）における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール遊離塩基の予備試験結果（ｎ＝１）を示した棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールは、ＷＯ０２／５００４５（その全内容を参照により本明細書に組み込む）に開示されており、以下の構造を有する。
【化１】
2013523844.tif 000002
【００３４】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールは、インビトロにおいて抗ＨＲＶ活性を有することが示された（ＨＲＶ２株に対してはＩＣ５０  ０．００１μｇ/ｍｌであり、ＨＲＶ１４株に対してはＩＣ５０  ０．００５μｇ／ｍｌである）。
【００３５】
今回、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール及び薬学的に許容されるその塩は、喘息又はＣＯＰＤの症状又は悪化の治療、緩和、予防又は低減に有効であるとを示すことができる。理論に拘束されることは望まないが、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール及び薬学的に許容されるその塩は、喘息又はＣＯＰＤの症状又は悪化の誘因ウイルスを効果的に標的とすると考えられ、このウイルス誘因に対して現在までに承認された治療法はない。
【００３６】
喘息罹患者は、成人（≧１８歳）又は小児（＜１８歳）であり得る。小児の喘息罹患者の場合、喘息は通常、小児喘息と呼ばれる。罹患者は、軽度、中程度又は重度の喘息（喘息管理の国際指針「ＧＩＮＡ」を使用して評価）であり得る。
【００３７】
喘息及びＣＯＰＤなどの呼吸器異常及び疾患の複雑な性質のために、効果的な治療及び対処戦略が今なお求められている。したがって、代替戦略が、呼吸器異常及び疾患の罹患者、例えば、喘息罹患者（特に小児）及びＣＯＰＤ罹患者の症状に対処又は予防するために現在処方されている治療活性剤（及び医薬）を補完するものとして想定されている。
【００３８】
このような一戦略では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を、少なくとも１種の喘息治療薬と組み合わせて投与することを伴うであろう。このような組み合わせにおいて、投与様式は、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１種の喘息治療薬とを、同じ又は別個の投与形態で、同じ又は異なる投与経路によって、別々に、同時に、又は逐次的に投与することを含み得る。
【００３９】
したがって、一実施形態は、少なくとも１種の喘息治療薬と組み合わせて、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を投与することを提供する。
【００４０】
他の態様では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１種の喘息治療薬とを含む薬剤の組み合わせも提供する。通常、この薬剤の組み合わせは、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体も含む。
【００４１】
喘息治療薬には、例えば、テオフィリン、抗コリン薬（例えば、イプラトロピウム）、短時間作用型β２アドレナリン受容体選択的作動薬（例えば、レバルブテロール、ピルブテロール及び、サルブタモールとしても知られているアルブテロール）、吸入される長時間作用型β２アドレナリン受容体作動薬（ＬＡＢＡ）（例えば、サルメテロール及びホルモテロール）、ロイコトリエン修飾薬又はロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ、例えば、モンテルカスト、プランルカスト、ザフィルルカスト及びジロートン）、吸入コルチコステロイド（例えば、フルチカゾン、ブデソニド、トリアムシノロン（ｔｒｉｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、フルニソリド、ベクロメタゾン、モメタゾン及びシクレソニド）並びに経口／経静脈コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン及びメチルプレドニゾロン）が含まれる。気管支拡張薬及びコルチコステロイドが特に好ましい。
【００４２】
いくつかの実施形態では、薬剤の組み合わせは、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１種の喘息薬とを混合した医薬組成物である。通常、この医薬組成物は、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体も含む。
【００４３】
他の実施形態では、薬剤の組み合わせは、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、他の喘息薬とのキットとして提供される。これらの実施形態では、キットの各成分は、他の成分と併用して投与するために適した形態で提供される。この点において、キットの２つの成分は、（ｉ）別々の製剤（すなわち、互いに独立している）として供給され、その後併用療法において組合せて使用するために一緒にしてもよく、又は（ｉｉ）併用療法において組合せて使用するために、組合せパックの別々の成分として一緒に包装して提供されてもよい。通常、このような薬剤の組合せにおける各成分は、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体も含む。
【００４４】
本発明では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、経口、経鼻、静脈内又は吸入若しくは吹送を含む任意の手段によって投与することができる。いくつかの実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、経鼻投与、静脈内投与、吸入又は吹送のために製剤化されている。経口投与が好ましく、したがって、いくつかの実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、経口送達のために製剤化されている。
【００４５】
医薬製剤には、経口（経口経腸投与を含む）、直腸、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、膣内又は非経口（筋肉内、皮下及び静脈内投与を含む）に適した製剤、又は吸入若しくは吹送による投与に適した形態の製剤が含まれる。好ましくは、組成物は、経口若しくは経鼻投与又は吸入若しくは吹送又は静脈内注射に適した形態で提供される。液体は静脈内投与に好ましい。いくつかの実施形態では、組成物は鼻腔内送達、吸入又は吹送による投与に適している。液体及び粉末は一般的に鼻腔内投与にとって好ましい。いくつかの実施形態では、組成物は経口投与に適している。経口組成物又は製剤が特に好ましく、これは液体形態でも固体形態でもよい。このような形態には、例えば、錠剤、カプセル、懸濁液、エマルジョン及びシロップが含まれる。錠剤及びカプセルなどの固体形態が特に好ましい。
【００４６】
適切な固体形態調製物には、経口投与用に、使用直前に液体形態調製物に変換されることが意図されている調製物も含まれる。
【００４７】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、１種又は複数の薬剤として許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤と一緒に製剤化することができる。
【００４８】
担体及び／又は希釈剤には、ありとあらゆる溶媒（水和物などの溶媒和物を形成するために使用する場合を含む）、分散媒、コーティング物質、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。薬学的な活性物質にこのような媒体及び薬剤を使用することは、当技術分野では周知である。担体及び賦形剤は、「薬学的に許容される」ことが理想で、これは、組成物又は製剤の他の成分と実質的に適合し、対象に対して実質的に有害ではないことを意味する。活性成分は、例えば、従来の固体又は液体ビヒクル又は希釈剤、並びに所望の投与様式に適切な種類の医薬添加物（例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定化剤、香料など）を使用して、医薬製剤の業界で周知の技術などに従って製剤化することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，２００５，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓを参照）。適切な担体の例は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などである。
【００４９】
適切な液体形態調製物には、溶液、懸濁液及びエマルジョン、例えば、水又は水−プロピレングリコール溶液が含まれる。経口使用に適した水性溶液は、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を水に溶解し、必要に応じて適切な着色剤、香料、安定化剤及び増粘剤を添加することによって調製することができる。経口使用に適した水性懸濁液は、微粉化された活性成分を、粘稠な物質、例えば、天然ゴム又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又は他の周知の懸濁剤と共に、水に分散させることによって作製することができる。
【００５０】
固体形態調製物には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ剤、トローチ剤、座剤及び分配可能な顆粒が含まれる。「調製物」という用語は、担体としてカプセル化材料を含み、それによって、担体を含む、又は含まない活性成分が担体によって囲まれているカプセルを形成する、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の製剤を含むものとする。乾燥粉末の形態では、調製物は、例えば、適切な粉末基剤、例えば、グルコース、乳糖、デンプン、デンプン誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）中に当該化合物を含む混合物であってもよい。乳糖は好ましい粉末基剤である。粉末状の化合物又は組成物は、単位投与形態中に存在させることができる。粉末では、担体は、微粉化された活性成分との混合物中に存在する微粉化された固体である。錠剤では、活性成分は、必要な結合能を有する担体と適切な割合で混合し、所望する形状及び大きさに圧縮する。経口投与用の好ましい固体形態調製物は、錠剤、丸剤、トローチ剤及びカプセルであり、錠剤及びカプセルが特に好ましい。
【００５１】
単位投与形態では、調製物は、適切な量の３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を含有する単位用量に再分配され、このような形態では、固体、例えば、錠剤若しくは充填カプセル、又は液体、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシール若しくはこれらを充填したカプセルとして、いずれも経口使用で、直腸投与用の座剤の形態で、又は非経口（皮下を含む）使用のための滅菌注射溶液の形態で使用することができる。単位投与形態は、包装された調製物であってもよく、この包装物では、例えば、個別の量の錠剤、カプセル及び粉末などの調製物をバイアル又はアンプルに含有する。単位投与形態はまた、単一のカプセル、錠剤、カシェ剤又はトローチ剤自体であってもよく、又はこれらのいずれかを適切な数含む包装形態であってもよい。このような単位投与形態は、使用する所定の１日用量の範囲に対応する任意の適切な有効量の活性成分を含有することができる。投与形態当たり０．１から１０００ミリグラムの活性成分を含有する製剤が代表的な単位投与形態である。いくつかの実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩は、１日当たり１ｍｇから８００ｍｇ、１日当たり１ｍｇから６００ｍｇ、１日当たり１ｍｇから４００ｍｇ、１日当たり１ｍｇから２００ｍｇ又は１日当たり１ｍｇから１００ｍｇの投薬量で投与される。投与形態には、活性成分として、本発明の化合物又は本発明の化合物の薬学的に許容される塩のいずれかを含むことができる。治療上有用な組成物中における活性化合物の量は、適切な投薬量が得られるのに十分であるべきである。
【００５２】
鼻腔内製剤を含む呼吸器への投与を目的とした製剤では、化合物は一般的に小さな粒径となる。このような粒径は、噴霧乾燥又は微粒子化などの当技術分野で公知の手段によって得ることができる。呼吸器への投与は、従来の手段、例えば、点滴器、ピペット又は噴霧器を使用する手段によって鼻腔に直接溶液又は懸濁液を適用することによって実現することができる。製剤は、単回投与形態又は多数投与形態で形成してもよい。これは、例えば、ヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）噴射剤などの適切な噴射剤を使用する圧縮定量吸入器又は圧縮封入器によって活性成分が供給されるエアロゾル製剤によって実現することができる。噴射剤を使用しない乾燥粉末吸入器及び噴霧器も使用することができる。
【００５３】
注射使用に適した医薬形態には、滅菌注射溶液又は分散液、及び滅菌注射溶液を即時調製するための滅菌粉末が含まれる。これらは、製造及び保存の条件下に安定なはずであり、酸化、及び微生物、例えば細菌又は真菌の汚染作用から保護することができる。注射使用に適した医薬形態は、静脈内、筋肉内、脳内、髄腔内、硬膜外の注射又は注入を含む任意の適切な経路によって送達することができる。
【００５４】
望ましい場合には、活性成分の徐放をもたらすように適合された製剤を採用することができる。
【００５５】
薬学的に許容される塩の例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びアルキルアンモニウムなどの薬学的に許容される陽イオンの塩；塩化水素、オルトリン酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸及び臭化水素酸などの薬学的に許容される無機酸の酸付加塩；又は酢酸、プロピオン酸、ブチル酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トリハロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸、吉草酸及びオロチン酸などの薬学的に許容される有機酸の塩が含まれる。アミン基の塩はまた、アミノ窒素原子が適切な有機基、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル又はアラルキル部分を有する四級アンモニウム塩を含むことができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールを、ＷＯ２００９／１４３５７１（その全内容を参照により本明細書に組み込む）で開示されたように、そのビス−２水素リン酸塩及び／又は硫酸塩として製剤化することが好ましいかもしれない。
【００５７】
いくつかの実施形態では、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩を含む本発明の医薬及び薬剤の組み合わせは、医薬又は薬剤の組み合わせを使用するための指示書と共に提供することができる。いくつかの実施形態では、本発明の方法及び記述した用途での３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩の使用は、指示書の使用をさらに含むことができる。
【００５８】
これらの実施形態では、指示書は、患者又は医師に、例えば、医薬、組み合わせ又は方法を目的の用途にどのように適用させるかを指示するために、特定の投与計画、投与様式又は他の点を示すことができる。例えば、指示書は、喘息又はＣＯＰＤの前段階で見られる又は基礎を成す症状の治療又は軽減において、どのように医薬若しくは組み合わせを使用し、又は方法を実施するかを示すことができる。指示書は、前段階で見られる又は基礎を成す喘息又はＣＯＰＤの症状の悪化の発生率の低下又は悪化の予防において、どのように医薬若しくは組み合わせを使用し、又は方法を実施するかを示すことができる。このような指示書は、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール又は薬学的に許容されるその塩と、別の医薬、例えば喘息治療薬を、別々に、同時に又は逐次的に投与することを示すことができる。
【００５９】
本明細書で使用する際、「対象」という用語は、任意の対象、好ましくは脊椎動物対象、さらに好ましくは症状又は悪化の治療、緩和、予防又は低減が望まれる哺乳類対象を意味する。通常、対象は喘息若しくはＣＯＰＤの素因を有する、又喘息若しくはＣＯＰＤを既に有しているヒトである。
【００６０】
本明細書で使用する際、喘息又はＣＯＰＤの「症状」とは、肺機能の低下（肺気量の低下を含む）、咳、喘鳴、息切れ及び気道壊死などの症状を意味する。
【００６１】
本明細書で使用する際、症状の「緩和」とは、症状の重症度又は頻度又はその両方を低減することを意味する。
【００６２】
本明細書で使用する際、喘息又はＣＯＰＤの「悪化」とは、刺激が、その刺激がなければ生じないであろう、異常又は疾患に対して有する影響を意味する。このような悪化の例は、より頻繁な発症及び強い発症、例えば、より重篤な症状である。
【実施例】
【００６３】
本発明を、以下の実施例を参照して、限定することなく以下に説明する。
【００６４】
（例１）
ライノウイルスチャレンジ実験モデルにおける経口３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールの予防効果を測定するための第２相二重盲検プラセボ比較試験
試験のデザインは、プラセボ比較二重盲検無作為化パラレルグループ臨床試験であった。試験の目的は、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール２５ｍｇ、１００ｍｇ又は４００ｍｇのいずれかを１日２回１０日間投与して、効能、安全性及び薬物動態を測定することであった。具体的には、実験的ＨＲＶ感染（ウイルスチャレンジデザイン）の予防について、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールの効果を評価した。
【００６５】
健康な男性のボランティア４１人を試験に組み入れた。活性物質の用量レベルは、２５ｍｇ、１００ｍｇ及び４００ｍｇであり、この用量は２５ｍｇ、１００ｍｇ及び２００ｍｇの経口カプセルで投与された。２日目から６日目まで、活性物質又はプラセボを１日２回投与し、次いで７日目の午前中に１回投与した。０日目の夕方の投与の約１から２時間後に、対象にチャレンジウイルス（ＨＲＶ３９）を接種した。
【００６６】
ウイルス負荷を評価するために鼻洗浄試料を採取した。上気道疾病の症状について対象自身及び医師が評価を行った。血液試料を採取して、抗ＨＲＶ抗体を測定し、血清及び血漿中の活性物質及び代謝物の血漿濃度を分析した。鼻分泌物の粘液重量を測定した。感染の発生率は、フィッシャーの正確確率検定を使用して、プラセボと活性物質の各用量レベルとの間で比較した。治療の固定効果の分散分析モデルを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）及び培養データから得られた効果のパラメータを、プラセボと活性物質の各用量レベルの間で比較した。この試験は、予防的に使用したとき、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールは、対象におけるＨＲＶ３９感染の発生率を用量依存的に低下させたことを示している。１日目から６日目の間に、ＨＲＶウイルス負荷（ＡＵＣｃｕｌｔｕｒｅ及びＡＵＣＰＣＲ）及びピークウイルス負荷においてプラセボに対して用量依存的な差があった。これらの差は、４００ｍｇ  １日２回用量レベルでは、プラセボと比較して統計学的に有意であった。培養結果は図１に示す。
【００６７】
（例２）
ヒト呼吸器の上皮組織のヒト細胞由来組織培養モデル（ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システム）
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システム（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）は、ヒト細胞由来の完全に分化した分泌性３次元組織培養モデルである。ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムは、インビトロにおいて、微小孔性膜上で培養した非不死化ヒト由来気管／気管支上皮細胞から構成される。１次細胞は、ヒト呼吸器の上皮組織によく似た、偽重層化高度分化型組織培養モデルを形成する。培養された組織の組織学的横断面によって、正常なヒト気管支梢に類似した偽重層化粘液毛様体表現型であることが示される（Ｓｈｅａｓｇｒｅｅｎ，Ｊ．Ｋ．Ｍ，ｅｔ．ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｓｔ（１９９９）４８（１−Ｓ）：Ａｓｔｒａｃｔ＃５９４）。上皮は高度に分化しており、頂端面に機能的繊毛を有する。ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムはまた、機能的な密着接合によってもたらされる経上皮電気抵抗の発生を含む、天然の気管／気管支上皮に類似したバリア特性を示す。
【００６８】
ＭａｔＴｅｋのＥｐｉＡｉｒｗａｙ、インビトロにおけるヒト気管／気管支組織同等物は、疾患のある個体の気道上皮から作製することができる（Ｈａｙｄｅｎ，Ｐ．Ｊ．，Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｊｒ．，Ｇ．Ｒ．，Ｂｏｌｍａｒｃｉｃｈ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｋｌａｕｓｎｅｒ，Ｍ．ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ．Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｙ（２００９））。これらの組織は、ヒトの個体変動及び遺伝的要因に対応する能力を含む、動物モデルでは実現することができなかった重要且つ特有な特質を提供する喘息及びＣＯＰＤの優れたヒトのインビトロモデルであり、喘息及びＣＯＰＤの増悪をヒトウイルスが誘発する機構を測定する手段である。
【００６９】
１次細胞を培養する微小孔性膜は、細胞培養プレートのウェルの内側に置かれた挿入物上に存在していてもよい。重層化した細胞は、気液界面（ＡＬＩ）で膜上において増殖する。細胞増殖は、アッセイ培地をウェルに添加することによって維持される。培養過程の特定の時点で、全液体を組織の頂端（上）面から除去し、次に基底（下）面からのみ供給し、ＭａｔＴｅｋの専売のアッセイ培地との接触を維持させる。したがって、組織は部分的に空気に曝露される。ライノウイルスは、呼吸器全体の上皮細胞に付着することによって感染を開始するので、空気を介した呼吸器のＨＲＶ曝露を模倣するように、ウイルスは組織の頂端面に添加することができる。化合物の抗ウイルス活性は、組織の基底面と接触するアッセイ培地に添加することによって評価することができる。
【００７０】
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムを使用して実施した収量低下アッセイ（ｙｉｅｌｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムにおけるＨＲＶ血清型１４に対する３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール遊離塩基の抗ウイルス活性は、ウイルス力価の５０％低下を生じる試験化合物の濃度（ＥＣ５０）を測定するウイルス収量低下アッセイを使用して測定した。
【００７１】
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムの９６ウェルプレート（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ；カタログ番号ＡＩＲ−１９６−ＨＴＳ）を、製造元のプロトコール（ＥｐｉＡｉｒｗａｙ  ＨＴＳ−９６使用プロトコール）に従って平衡化した。簡単に説明すると、ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）無血清培地（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号ＡＩＲ−１００−ＭＭ−ＡＳＹ）２５０μＬを、培地が組織の基底面と接触するようにしたフィーダートレイに添加した。５％ＣＯ２を含む湿潤な雰囲気中において（Ｓａｎｙｏ  ＭＣＯ−１７ＡＩＣインキュベーター；Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍｉｌｔｏｎ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、３７℃で少なくとも１８時間このプレートをインキュベートした。その後、アッセイ培地を各ウェルから除去した。３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール遊離塩基の０．０９ｎｇ／ｍＬから１．１４μｇ／ｍＬ（０．２４ｎＭから２．９８μＭ）の範囲の９種類の濃度を、アッセイ培地で連続希釈することによって準備し、次に、各２５０μＬを各ウェル中の膜の基底面に別々に添加した。陰性対照（アッセイ培地２５０μＬ）を陰性対照ウェルのそれぞれに添加した。５％ＣＯ２を含む湿潤な雰囲気中でアッセイプレートを３３℃で一晩インキュベートした。
【００７２】
次に、ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムの組織の頂端面に、ＨＲＶ１４をウェル（１５０μｌ）当たり１．８×１０５ｐｆｕ接種した。５％ＣＯ２を含む湿潤な雰囲気中でアッセイプレートを３３℃で８時間インキュベートし、その後媒体１２５μＬを各ウェルの組織の頂端面から除去した。試料は、ウイルス収量低下アッセイによって定量する前に−８０℃で保存した。
【００７３】
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムからのウイルス力価の定量
ＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；カタログ番号３５９５）中でウェル当たり１．０×１０４細胞の濃度でアッセイ培地２００μＬに接種し、５％ＣＯ２を含む湿潤な雰囲気中で３７℃で一晩インキュベートした。このインキュベーション時間後、細胞は約５０％コンフルエントであった。
【００７４】
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ（商標）システムの各ウェルの組織の頂端面から収穫したウイルス試料から、それぞれ１０μＬをアッセイ培地で１：１００に希釈した。それぞれの希釈液の１００μＬの量を新たなアッセイプレートの７個のウェルそれぞれに添加し、次にこれらをプレート上で３倍に連続希釈し、全部で１２種類の異なるウイルス試料濃度を得た。１２個のウェルはアッセイ培地のみのもの（すなわち、ウイルスなし）を含有し、対照として使用した。プレートは５％ＣＯ２を含む湿潤な雰囲気中で３３℃で５日間インキュベートし、その間に細胞変性効果（ＣＰＥ）を生じさせた。
【００７５】
単層細胞のウイルス誘発性ＣＰＥを視覚的に採点し、ウイルス懸濁液のＴＣＩＤ５０は、Ｒｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈの方法（Ｒｅｅｄ，Ｌ．Ｊ．ａｎｄ  Ｍｕｅｎｃｈ，Ｈ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｙｇ．（１９３８）２７：４９３〜７）を使用して測定した。
【００７６】
３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール遊離塩基の得られたＴＣＩＤ５０値は、陰性対照ＴＣＩＤ５０値のパーセントとして表した。
【００７７】
図２は、正常なドナーから得られた組織（５７０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ）及び喘息ドナー（１０００ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ）及びＣＯＰＤドナー（１０００ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ）から得られた組織において、３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール遊離塩基が２００〜１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で感染ウイルス力価を低下させることができることを示す予備試験結果（ｎ＝１）を示す。ＥＣ５０測定は進行中で、値は陰性対照値結果のパーセントから非線形回帰によって算出される。
【００７８】
（例３）
症候性ヒトライノウイルス感染を有する喘息成人における３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールの２用量レベルの第２相多施設無作為化二重盲検プラセボ対照パラレル試験
試験集団は、スクリーニングの少なくとも２年前に軽度から中程度の安定した喘息が既に診断されており、登録前９０日以内に予備スクリーニングを行い、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）と推定される症状を表している１８〜７０歳の男女２２９〜４００人である。対象は、プラセボ又は３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールの２用量のうち１つを投与するために無作為化する（１：１：１）。
【００７９】
喘息が確認され、予備スクリーニングされた患者を、ＨＲＶ感染と推定される症状が発症してから２４時間以内に来院させる。適格な対象を、プラセボ又は１日全投薬量８００ｍｇ（４００ｍｇを１日２回）の活性成分による６日間の治療のために無作為化し、２８日後に再度来院させる。
【００８０】
この試験では、主要エンドポイント及び理論的根拠は、３日目のプラセボと３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールの間のウィスコンシン上気道症状調査２１（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｕｐｐｅｒ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｓｕｒｖｅｙ−２１（ＷＵＲＳＳ−２１）重症度スコア（Ｗａｌｔｅｒ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐ  Ｊ（２００８）３２：１５４８〜１５５４）の平均差に基づく。対象は全員、１４日間毎日ＷＵＲＳＳ−２１の感冒症状の評価を記入する。患者は通常の指示に従って喘息治療薬の維持を継続し、総ての投薬の用量及び時間などの治療の詳細を日誌カードに記録する。日誌カードはまた、短時間作用型ベータ作動薬などの喘息発作治療の使用を記録するために使用する。
【００８１】
セカンダリーエンドポイントには、限定はしないが、以下のいずれかの１つ又は複数を含めることができる：（１）ウイルスによって誘発された喘息の悪化について、肺機能の計測として、１日目から１４日目までの最大呼気流量（ＰＥＦ）の最大平均低下率、（２）ウイルスによって誘発された喘息の悪化について、肺機能の計測として、来院時に記録された１秒間の強制呼気容量（ＦＥＶ１）、及び（３）基本的な喘息の管理の程度の計測として、喘息管理質問票（ＡＣＱ−５）及び生活の質に対する現在の喘息レベルの影響についての喘息ＱＯＬ質問票（ＡＱＬＱＳ）スコア。
【００８２】
ウイルス研究のために対象全てから鼻腔スワブを採取した。重要なウイルス学的エンドポイントには、任意の時点におけるＨＲＶのＰＣＲ陽性試料の出現率、２〜４日にわたるウイルス培養陽性の出現率及び鼻腔スワブのＡＵＣウイルス負荷が含まれる。３−エトキシ−６−｛２−［１−（６−メチル−ピリダジン−３−イル）−ピペリジン−４−イル］−エトキシ｝−ベンゾ［ｄ］イソオキサゾールについてのチャレンジ試験では、ウイルス負荷に対する明白な用量反応が示された。
【００８３】
（例４）
【表１】
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【００８４】
本明細書及び以下の特許請求の範囲を通じて、文脈で特に必要とされない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、記述された整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を含むが、いかなる他の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群も排除しないことを意味するものと理解される。
【００８５】
本明細書における、いかなる先行刊行物、又は先行刊行物から得られる情報、又は公知のいかなる事項の参照も、先行刊行物又は先行刊行物から得られる情報又は公知の事項が、本明細書が関与する開発分野において一般的常識の一部を構成するということを認識又は承認、又はいずれかの形態の示唆するものと捉えられるものではなく、且つ捉えられるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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