(57)【要約】  本出願は、ＮＥＡＴドメインを含むＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣまたはＩｓｄＨなどのブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む免疫原性組成物に関する。第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよび第２のＩｓｄタンパク質由来のＮＥＡＴドメインを含む融合タンパク質、ならびに鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質、例えば、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤまたはＳｄｒＥのリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質も開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＥＡＴドメインを含むブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質が黄色ブドウ球菌に由来する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＨおよびＩｓｄＣからなる群から選択される、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＡの５８〜１８８番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＢの１４０〜２６９番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＢの３３７〜４６２番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＢの１４０〜４６２番目のアミノ酸であり、任意に、２６９〜３３７番目のアミノ酸が除去されているか、または置換されている、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
ＩｓｄＢの前記Ｎ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の少なくとも一部、任意に、その全部が存在しない、請求項６または７に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＣの２３〜１５４または２８〜１５４番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＨの１０１〜２３２番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＨの３４１〜４７１番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＨの５３９〜６６４番目のアミノ酸である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記断片が、配列番号２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８および１９、またはそれらの免疫原性断片からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
ラミニン受容体、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、エラスチン結合タンパク質（ＥｂｐＳ）、ＥＦＢ（ＦＩＢ）、ＳＢＩ、自己溶菌酵素、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＨ、リパーゼＧｅｈＤ、ＳａｓＡ、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、Ｃｎａ、ＣｌｆＢ、ＦｂｐＡ、Ｎｐａｓｅ、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ＳｓａＡ、ＥＰＢ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質、フィブリノゲン結合タンパク質、コアグラーゼ、ＦｉｇおよびＭＡＰからなる群から選択されるブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質が、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧもしくはＳｄｒＣまたはその免疫原性断片からなる群から選択される、請求項１４に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質がリガンド結合領域を含む断片である、請求項１４に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
ＣｌｆＡのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
ＣｌｆＢのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
ＳｄｒＣのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
ＳｄｒＤのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
ＳｄｒＥのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
ＳｄｒＧのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
リガンド結合領域を含む前記断片が、配列番号２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３０、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５および４６またはその免疫原性断片からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１４に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片が、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片と共有結合している、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
Ｎ２３ドメインを含むＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥまたはＳｄｒＧの断片を含む免疫原性組成物。
【請求項２６】
追加のブドウ球菌抗原を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記追加のブドウ球菌抗原が、黄色ブドウ球菌の５型および／または８型の莢膜糖を含み、任意にキャリアタンパク質に結合している、請求項２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記追加のブドウ球菌抗原が、キャリアタンパク質に任意に結合しているＰＮＡＧを含む、請求項２６〜２７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記ＰＮＡＧの５０％、４０％、３０％、２０％または１０％未満がＮアセチル化されている、請求項２８に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記追加のブドウ球菌抗原がＩｓｄタンパク質もしくはその免疫原性断片または請求項１〜２４のいずれか１項に記載されている断片である、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢまたはＥｓｘＡとＥｓｘＢの組み合わせを含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
前記ＥｓｘＡまたはＥｓｘＢが糖抗原に結合している、請求項３１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３３】
ＥｓａＣ抗原またはＥｓａＢ抗原を含む、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３４】
鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質。
【請求項３５】
前記ＮＥＡＴドメインが、任意に、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣおよびＩｓｄＨからなる群から選択される、黄色ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質に由来する、請求項３４に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
前記リガンド結合ドメインが、任意に、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤおよびＳｄｒＥからなる群から選択される、黄色ブドウ球菌タンパク質に由来する、請求項３４または３５に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
前記リガンド結合ドメインがＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤまたはＳｄｒＥのＮ２３ドメインからなる、請求項３６に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
前記リガンド結合ドメインがＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤまたはＳｄｒＥのＮ１２３ドメインからなる、請求項３６に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
前記リガンド結合ドメインが表皮ブドウ球菌のタンパク質、任意に、ＳｄｒＧに由来する、請求項３４または３５に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
前記リガンド結合ドメインがＳｄｒＧのＮ２３ドメインからなる、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
前記リガンド結合ドメインがＳｄｒＧのＮ１２３ドメインからなる、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４２】
配列番号４７〜９７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項４３】
第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよび第２のＩｓｄタンパク質由来のＮＥＡＴドメインを含む融合タンパク質。
【請求項４４】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＡである、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＢである、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】
ＩｓｄＢ由来の前記ＮＥＡＴドメインが、（任意に、ＩｓｄＢの３３７〜４６２番目のアミノ酸を含む）Ｃ末端ＮＥＡＴドメインである、請求項４５に記載の融合タンパク質。
【請求項４７】
ＩｓｄＢのＮ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の少なくとも一部、任意に、その全てが前記融合タンパク質に存在しない、請求項４６に記載の融合タンパク質。
【請求項４８】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＣである、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項４９】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＨである、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項５０】
前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＡである、請求項４３または４５〜４９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５１】
前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＢである、請求項４３、４４、４８または４９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５２】
前記第２のＩｓｄタンパク質がＩｓｄＢのＣ末端ＮＥＡＴドメインである、請求項５１に記載の融合タンパク質。
【請求項５３】
ＩｓｄＢのＮ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の少なくとも一部、任意に、その全てが前記融合タンパク質に存在しない、請求項５１または５２に記載の融合タンパク質。
【請求項５４】
前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＣである、請求項４３〜４７または４９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５５】
前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質がＩｓｄＨである、請求項４３〜４８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５６】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質が前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質に対してＮ末端側にある、請求項４３〜５５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５７】
前記第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質が前記第２のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質に対してＣ末端側にある、請求項４３〜５５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５８】
配列番号４７〜９７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項４３〜５６のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項５９】
第１のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインおよび第２のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質。
【請求項６０】
前記第１のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質が、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＣｌｆＡおよびＣｌｆＢからなる群から選択される、請求項５８に記載の融合タンパク質。
【請求項６１】
前記第２のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質が、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＣｌｆＡおよびＣｌｆＢからなる群から選択される、請求項５８または５９に記載の融合タンパク質。
【請求項６２】
前記第１のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質の前記リガンド結合ドメインがＮ２Ｎ３ドメインからなる、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項６３】
前記第２のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質の前記リガンド結合ドメインがＮ２Ｎ３ドメインからなる、請求項５８〜６１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
【請求項６４】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインをコードするポリヌクレオチド配列およびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項６５】
配列番号４７〜８２からなる群から選択されるポリペプチド配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列をコードする、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６６】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、請求項３４〜６２のいずれか１項に記載の融合タンパク質または請求項６３〜６４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、および医薬的に許容される賦形剤を含むワクチン。
【請求項６７】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、請求項３４〜６２のいずれか１項に記載の融合タンパク質または請求項６３〜６４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドに医薬的に許容される賦形剤を添加するステップを含む、請求項６５に記載のワクチンを作製する方法。
【請求項６８】
ブドウ球菌の感染または疾患の治療または予防において使用するための、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６９】
ブドウ球菌疾患の治療または予防のための医薬の調製における、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、請求項３４〜６２のいずれか１項に記載の融合タンパク質または請求項６３〜６４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドの使用。
【請求項７０】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、請求項３４〜６２のいずれか１項に記載の融合タンパク質または請求項６３〜６４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを、それを必要としている患者に投与することを含む、ブドウ球菌疾患を治療または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウ球菌タンパク質抗原、それらをコードする核酸ならびにかかるタンパク質または核酸を含む免疫原性組成物およびワクチンの分野に関する。本発明は、かかる組成物の製造方法および医学におけるそれらの使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄分は、ほとんど全ての生物の必須栄養素および細菌感染における必須栄養素であり、細菌増殖を制限するために宿主の防御機構によって隔離されている。宿主の鉄制限と戦うために、細菌性病原体は、宿主の供給源から鉄を得るための複数の獲得システムを進化させてきた。ヘムはヒトの体における鉄の最も一般的な形態であり、全鉄のほぼ７５％を占める。
【０００３】
Ｉｓｄ（鉄調節表面決定因子（Ｉｒｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ））システムは、ブドウ球菌における主要なヘム獲得経路と同定された。４つの細胞壁結合タンパク質であるＩｓｄＡ（Ｍａｚｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ ２００２,ＰＮＡＳ ９９；２２９３）、ＩｓｄＢ（Ｍａｚｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ ２００２,ＰＮＡＳ ９９；２２９３）、ＩｓｄＣ（ＷＯ０６／５９２４７）およびＩｓｄＨまたはＨａｒＡ（Ｄｒｙｌａ ｅｔ ａｌ Ｍｏｌｅｃ.Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.２００３,４９；３７−５３）は、ヘムの受容体の機能を果たすと考えられている。
【０００４】
Ｉｓｄタンパク質は、ブドウ球菌ワクチンに使用するためのワクチン候補と提唱されている（ＷＯ０１／９８４９９、ＷＯ０２／５９１４８、ＷＯ０３／１１８９９およびＷＯ０６／５９２４７）。
【０００５】
黄色ブドウ球菌感染は抗生物質（最適な薬物はペニシリン）で治療されるが、バンコマイシンはメチシリン耐性分離株に対して使用される。抗生物質に広範な耐性を示すブドウ球菌株の割合は１９８０年代以後増加しており（Ｐａｎｌｉｌｏ ｅｔ ａｌ １９９２,Ｉｎｆｅｃｔ.Ｃｏｎｔｒｏｌ.Ｈｏｓｐ.Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ.１３；５８２）、効果的な抗菌薬治療に対して脅威となっている。さらに、最近のバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌株の出現は、効果的な治療がないメチシリン耐性黄色ブドウ球菌株が出現し、蔓延する恐れを喚起している。
【０００６】
受動免疫療法でブドウ球菌抗原に対する抗体を用いる代替的アプローチが研究されている。ポリクローナル抗血清の投与を含む治療が開発中である（ＷＯ００／１５２３８、ＷＯ００／１２１３２）。
【０００７】
ブドウ球菌疾患を予防するワクチンを開発するニーズが依然としてある。黄色ブドウ球菌の莢膜多糖体（ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）を用いるアプローチは規制認可を獲得することができず（ＷＯ０３／６１５５８）、追加のブドウ球菌成分を含むより複雑なワクチンは、効果的な予防を与えることを要求され得る。
【発明の概要】
【０００８】
したがって、ＮＥＡＴドメインを含む鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む免疫原性組成物を提供する。
【０００９】
本発明のさらなる態様において、リガンド結合ドメイン（例えば、Ｎ２３ドメイン）を含むブドウ球菌Ｓｄｒファミリーメンバー（例えば、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＣｌｆＡまたはＣｌｆＢ）の断片を含む免疫原性組成物を提供する。
【００１０】
本発明のさらなる態様において、鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質およびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメイン（例えば、Ｎ２３ドメイン）を含む融合タンパク質を提供する。
【００１１】
本発明のさらなる態様において、第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよび第２のＩｓｄタンパク質由来のＮＥＡＴドメインを含む融合タンパク質を提供する。
【００１２】
本発明のさらなる態様において、ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインをコードするポリヌクレオチド配列およびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【００１３】
本発明のさらなる態様において、本発明の免疫原性組成物、融合タンパク質またはポリヌクレオチドおよび医薬的に許容される賦形剤を含むワクチンを提供する。
【００１４】
本発明のさらなる態様において、本発明の免疫原性組成物、融合タンパク質またはポリヌクレオチドに、医薬的に許容される賦形剤を添加するステップを含む本発明のワクチンを作製する方法を提供する。
【００１５】
本発明のさらなる態様において、ブドウ球菌の感染または疾患の治療または予防に使用するための本発明の免疫原性組成物を提供する。
【００１６】
本発明のさらなる態様において、ブドウ球菌疾患の治療または予防のための医薬の調製における本発明の免疫原性組成物、融合タンパク質またはポリヌクレオチドの使用を提供する。
【００１７】
本発明のさらなる態様において、本発明の免疫原性組成物、融合タンパク質またはポリヌクレオチドを、それを必要としている患者に投与することを含む、ブドウ球菌疾患を治療または予防する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】天然ＩｓｄＡおよびＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン断片の構造を示す模式図である。
【図２】天然ＩｓｄＢおよびＩｓｄＢ断片を示す模式図である。ＧＧＳは、グリシン、グリシン、セリンのアミノ酸配列を示す。
【図３】ＩｓｄＡ／ＩｓｄＢ融合タンパク質の模式図である。ＧＧＳは、グリシン、グリシン、セリンのアミノ酸配列を示し、ＩｓｄＨリンカーは配列番号９８の配列を示す。
【図４】天然のタンパク質、断片および融合タンパク質でマウスを免疫した後の抗ＩｓｄＡ免疫反応のレベルを測定するＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す棒グラフである。
【図５】天然のタンパク質、断片および融合タンパク質でマウスを免疫した後の抗ＩｓｄＢ免疫反応のレベルを測定するＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す棒グラフである。
【図６】天然のタンパク質、断片および融合タンパク質の３つの接種後に収集したマウス血清中で生じた免疫反応を測定するオプソニン食作用アッセイの結果を示す棒グラフである。
【図７】ＣｌｆＡコーティングプレートへのフィブリノゲン接着を測定する接着アッセイの結果を示すグラフである。ダイヤモンドマークの線はＣｌｆＡ Ｎ１２３の４７４変異体へのフィブリノゲン結合を示し、四角マークの線はＣｌｆＡ Ｎ１２３の野生型へのフィブリノゲン結合を示す。
【図８】フィブリノゲンコーディングプレートへのＣｌｆＡ接着を測定する接着アッセイの結果を示すグラフである。暗いダイヤモンドマークの線はフィブリノゲンへのＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型の結合を示し、明るいダイヤモンドマークの線はフィブリノゲンへのＣｌｆＡ  Ｎ１２３の４７４変異体の結合を示し、四角マークの線は陰性対照を示す。
【図９】ＣｌｆＡ  Ｎ１２３コーティングプレートへのフィブリノゲンの結合を阻害する、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型および４７４変異体に対して作られた抗体の能力を示すグラフである。
【図１０】ＣｌｆＡ  Ｎ１２３コーティングプレートへの黄色ブドウ球菌の結合を阻害する、ＣｌｆＡの野生型および４７４変異体に対して作られた抗体の能力を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、ＮＥＡＴドメインを含み、鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む免疫原性組成物を開示する。
【００２０】
本明細書に記載の全ての断片は、少なくとも１種類のグラム陽性細菌、例えば、黄色ブドウ球菌または表皮ブドウ球菌に特異的な免疫反応を起こすことができる可能性のある免疫原性断片である。これらは、例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００個のアミノ酸を含む。
【００２１】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質は、任意のブドウ球菌細菌、例えば、黄色ブドウ球菌、またはコアグラーゼ陰性ブドウ球菌、例えば、表皮ブドウ球菌に由来し得る。
【００２２】
Ｉｓｄ（鉄調節表面決定因子）タンパク質は鉄獲得に関わるタンパク質ファミリーに属し、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣ、ＩｓｄＨ（またはＨａｒＡ）、ＩｓｄＤ、ＩｓｄＥ、ＩｓｄＦ、ＩｓｄＧおよびＩｓｄＩを含む。
【００２３】
本発明の免疫原性組成物は、ＮＥＡＴドメインを含むブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む（Ｇｒｉｇｇ ｅｔ ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００７,６３；１３９−１４９）。これらのドメインは約１２５個のアミノ酸長であり、鉄輸送タンパク質をコードする遺伝子の近くの染色体位置により命名されている。１〜５つのＮＥＡＴドメインが、細胞壁結合モチーフで終わるいくつかのタンパク質に見られる。ＩｓｄＡおよびＩｓｄＣは１つのＮＥＡＴドメインを含み、ＩｓｄＢは２つのＮＥＡＴドメインを含み、（いずれか一方または両方が本発明の免疫原性組成物中に含まれ得る）ならびにＩｓｄＨは３つのＮＥＡＴドメインを含む（これらのいずれかが本発明の免疫原性組成物中に含まれ得る）。一実施形態において、このＮＥＡＴドメインは完全なＮＥＡＴドメインであるか、または少なくとも１００、１１０、１１５、１２０、１２２、１２３、１２４、１２５、１３０、１３５または１４０個のアミノ酸を含む完全なＮＥＡＴドメインである。この断片は、ＥＬＩＳＡなどのアッセイ、血清殺菌力アッセイ、またはブドウ球菌、例えば、黄色ブドウ球菌の感染による抗原投与に対する防御を示すアッセイで測定した時に、例えば、抗ブドウ球菌免疫反応を起こすことができる免疫原性断片である。
【００２４】
本発明の免疫原性組成物は、４０、４５、５０、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４番目のアミノ酸から始まり、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９５または２００番目のアミノ酸にまで及ぶＩｓｄＡのＮＥＡＴドメインを任意に含む。例として、このＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインは、ＩｓｄＡの５８〜１８８、５９〜１８７、６０〜１８６、６１〜１８５または６２〜１８４番目のアミノ酸であり、配列番号１、２、３、４または５と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するポリペプチド配列を任意に有する。本明細書全体を通して、ＩｓｄＡ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号１に関する。
【００２５】
本発明の免疫原性組成物は、ＩｓｄＢの１つまたは２つのＮＥＡＴドメインを任意に含む。ＩｓｄＢの第１のＮＥＡＴドメインは、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５または１４６番目のアミノ酸から始まり、ＩｓｄＢの２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、または２７２番目のアミノ酸にまで及び、配列番号６、７または８のポリペプチド配列を任意に有する。ＩｓｄＢの第２のＮＥＡＴドメインは、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３または３４４番目のアミノ酸から始まり、ＩｓｄＢの４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５または４６６番目のアミノ酸にまで及び、配列番号６、９または１０のポリペプチド配列を任意に有する。一実施形態において、このＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインは、ＩｓｄＢの１３８〜２７１、１４０〜１６９、１４２〜２６７、３３５〜４６４、３３７〜４６２または３３９〜４６０番目のアミノ酸である。一実施形態において、このＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン断片は、１３８〜４６４、１４０〜４６２または１４２〜４６４番目のアミノ酸に由来する。
【００２６】
２つのＩｓｄＢのＮＥＡＴドメインを含む実施形態において、この２つのＮＥＡＴドメイン間のアミノ酸は保持されるか、除去されるか、かつ／またはリンカーｘで置換されるかのいずれかであり、このリンカーｘは、ペプチド結合、任意の他の共有結合、または２、４、６、８、１０、２０、５０、１００もしくは２００個以上のアミノ酸を含むペプチド鎖からなる。一実施形態において、このリンカーｘは、グリシン−グリシン−セリン（ＧＧＳ）などのトリペプチドを含む。さらなる例において、このリンカーｘは配列番号９８を含む。一実施形態において、２６７〜３３９、２６９〜３４１または２７１〜３４３番目のアミノ酸が除去され、任意にリンカーｘで置換される。一例において、本発明の免疫原性組成物は、２つのＩｓｄＢを含む。ＮＥＡＴドメインおよびこの断片は、４２〜４８６、４２〜４６２、４２〜４６１、８２〜４８６、８２〜４６２または８２〜４６１番目のアミノ酸に由来する。
【００２７】
このＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン（複数可）は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３もしくは８６またはＷＯ０５／０９３７９に開示された配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＩｓｄＢ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号６に関する。
【００２８】
本発明の免疫原性組成物は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０番目のアミノ酸から始まり、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７または１５８番目のアミノ酸にまで及ぶＩｓｄＣのＮＥＡＴドメインを任意に含む。一例において、このＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインは、ＩｓｄＣの２１〜１５６、２２〜１５５、２３〜１５４、２８〜１５４、２４〜１５３または２５〜１５２番目のアミノ酸であり、配列番号１４のポリペプチド配列を任意に有する。このＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインは、配列番号１４または１５と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＩｓｄＣ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号１４に関する。
【００２９】
本発明の免疫原性組成物は、ＩｓｄＨの１、２または３つのＮＥＡＴドメインを任意に含む。ＩｓｄＨの第１のＮＥＡＴドメインは、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４または１０５番目のアミノ酸から始まり、ＩｓｄＨの２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８番目のアミノ酸にまで及ぶ。ＩｓｄＨの第２のＮＥＡＴドメインは、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４または３４５番目のアミノ酸から始まり、ＩｓｄＨの４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４または４７５番目のアミノ酸にまで及ぶ。ＩｓｄＨの第３のＮＥＡＴドメインは、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４または５４５番目のアミノ酸から始まり、ＩｓｄＨの６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９または６７０番目のアミノ酸にまで及ぶ。それぞれの場合において、ＩｓｄＨは、配列番号１６のポリペプチド配列を任意に有する。一例において、このＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメインは、ＩｓｄＨの９９〜２３４、１００〜２３３、１０１〜２３２、１０２〜２３１、１０３〜２３０、３３９〜４７３、３４２〜４７０、３４１〜４７１、３４２〜４７０、３４３〜４６９、５３７〜６６６、５３８〜６６５、５３９〜６６４、５４０〜６６３または５３８〜６６２番目のアミノ酸である。一実施形態において、このＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン断片は、９９〜４７３、１０１〜４７１、１０３〜４６９、９９〜６６６、１０１〜６６４、１０３〜６６２、３３９〜６６６、３４１〜６６４または３４３〜６６２番目のアミノ酸に由来し、２または３つのＮＥＡＴドメイン間のアミノ酸は、任意に除去される、かつ／またはリンカーｘで置換され、このリンカーｘは、ペプチド結合、任意の他の共有結合、または２、４、６、８、１０、２０、５０、１００もしくは２００個以上のアミノ酸を含むペプチド鎖からなる。一実施形態において、このリンカーｘは、グリシン−グリシン−セリン（ＧＧＳ）などのトリペプチドを含む。さらなる例において、このリンカーｘは配列番号９８を含む。例えば、２３０〜３４３、２３２〜３４１、２３４〜３３９、４６９〜５４１、４７１〜５３９または４７３〜５３７番目のアミノ酸が除去される。このＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン（複数可）は、配列番号１６、１７、１８または１９と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＩｓｄＨ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号１６に関する。
【００３０】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＮＥＡＴドメインを含むＩｓｄタンパク質（複数可）の２、３、４、５または６個の断片を含む。例えば、断片は、ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインと１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインと１つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインと３つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメイン；２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメイン；１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと１つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと１つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと３つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインと３つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインと１つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインと３つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、１つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、２つのＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインと２つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインと３つのＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメイン；またはＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＣ  ＮＥＡＴドメインとＩｓｄＨ  ＮＥＡＴドメインを含む。
【００３１】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ラミニン受容体、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、エラスチン結合タンパク質（ＥｂｐＳ）、ＥＦＢ（ＦＩＢ）、ＳＢＩ、自己溶菌酵素、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＨ、タンパク質Ａ、リパーゼＧｅｈＤ、ＳａｓＡ、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、Ｃｎａ、ＣｌｆＢ、ＦｂｐＡ、Ｎｐａｓｅ、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ＳｓａＡ、ＥＰＢ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質、フィブリノゲン結合タンパク質、コアグラーゼ、ＦｉｇおよびＭＡＰ（ＷＯ０６／３２４７５、ＷＯ０６／３２４７２、ＷＯ０６／３２５００）からなる群から選択されるブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片を含む。
【００３２】
一実施形態において、このブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質は、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧもしくはＳｄｒＣまたはそれらの免疫原性断片からなる群から選択される。このタンパク質がＣｌｆＡである場合、野生型またはＹ４７４、Ｄ３２１、Ｐ３３６および／もしくはＹ３３８残基の位置に変異を含むＣｌｆＡのいずれか一方を用いることができる。Ｙ４７４は、異なるアミノ酸、例えば、ヒスチジンで置換され得る。Ｄ３２１は、異なるアミノ酸、例えば、チロシンで置換され得る。Ｐ３３６は、異なるアミノ酸、例えば、セリンで置換され得る。Ｙ３３８は、異なるアミノ酸、例えば、アラニンで置換され得る。
【００３３】
本明細書に記載の全断片は、任意に、免疫原性断片である。免疫原性断片は、ブドウ球菌、任意に、黄色ブドウ球菌株に対する免疫反応、任意に、防御免疫反応を起こすことができる。この免疫原性断片は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７０または１００個の近接アミノ酸を含む。
【００３４】
一実施形態において、このブドウ球菌細胞外結合成分は、リガンド結合領域を含む免疫原性断片である。
【００３５】
リガンド結合領域は、細胞外成分、例えば、フィブリノゲンに結合するドメインである。ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥおよびＳｄｒＧのリガンド結合領域（Ａ領域）は、このポリペプチドのＮ末端側の半分にある（ＭｃＣｒｅａ ｅｔ ａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０００,１４６；１５３５−１５４６）。リガンド結合領域は、２００〜６００個のアミノ酸長であり、Ｎ１ドメイン、Ｎ２ドメインおよびＮ３ドメインを含む（Ｃｌａｒｋｅ ａｎｄ Ｆｏｓｔｅｒ ２００６ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ５１；１８７−２２４； Ｐｅｒｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ ２００１ Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.２７６；４４７２１−４４７２８）。
【００３６】
本発明の免疫原性組成物は、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４または４５番目のアミノ酸から始まり、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１または２２２番目のアミノ酸にまで及ぶＣｌｆＡのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＣｌｆＡ  Ｎ１ドメインは、ＣｌｆＡの３８〜２１９、３９〜２１８、４０〜２１７、４１〜２１６または４２〜２１５番目のアミノ酸であり、配列番号２０のポリペプチド配列を任意に有する。このＣｌｆＡ  ＮＥＡＴドメインは、配列番号２１、２２、２３または２４と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＣｌｆＡ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号２０に関する。
【００３７】
本発明の免疫原性組成物は、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４または５５番目のアミノ酸から始まり、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３または２７４番目のアミノ酸にまで及ぶＣｌｆＢのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＣｌｆＢ  Ｎ１ドメインは、ＣｌｆＢの５３〜２７２、５２〜２７２、５１〜２７２、５０〜２７２または５１〜２７２番目のアミノ酸であり、配列番号２５のポリペプチド配列を任意に有する。このＣｌｆＢ  ＮＥＡＴドメインは、配列番号２６、２７または２８と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＣｌｆＢ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号２５に関する。
【００３８】
本発明の免疫原性組成物は、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４または５５番目のアミノ酸から始まり、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３または２７４番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＧのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＧ  Ｎ１ドメインは、ＳｄｒＧの５３〜２６１、５２〜２６７、５２〜２６１または５３〜２６７番目のアミノ酸であり、配列番号４１または４４のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＧ  Ｎ１ドメインは、配列番号４１、４２、４４または４５と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＳｄｒＧ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は、黄色ブドウ球菌に関しては配列番号４１に関し、表皮ブドウ球菌に関しては配列番号４４に関する。
【００３９】
本発明の免疫原性組成物は、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６または５７番目のアミノ酸から始まり、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５または２３６番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＤのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＤ  Ｎ１ドメインは、ＳｄｒＤの５５〜２３３、５４〜２３３、５３〜２３３、５２〜２３３または５１〜２３３番目のアミノ酸であり、配列番号３５のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＤ  Ｎ１ドメインは、配列番号３５または３６と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＳｄｒＤ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号３５に関する。
【００４０】
本発明の免疫原性組成物は、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６または５７番目のアミノ酸から始まり、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４または２６５番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＥのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＥ  Ｎ１ドメインは、ＳｄｒＥの５５〜２６１、５４〜２６１、５３〜２６１、５２〜２６１または５１〜２６１番目のアミノ酸であり、配列番号３８または３９のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＥ  Ｎ１ドメインは、配列番号３８または３９と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＳｄｒＥ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号３８に関する。
【００４１】
本発明の免疫原性組成物は、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６または５７番目のアミノ酸から始まり、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９または１８０番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＣのＮ１ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＣ  Ｎ１ドメインは、ＳｄｒＣの５１〜１７４、５１〜１７５、５１〜１７６、５１〜１７７または５１〜１７８番目のアミノ酸であり、配列番号２９または３２のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＣ  Ｎ１ドメインは、配列番号２９、３０、３２または３３と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。本明細書全体を通して、ＳｄｒＣ断片の最初と最後に関するアミノ酸番号は配列番号２９に関する。
【００４２】
本発明の免疫原性組成物は、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１または２２２番目のアミノ酸から始まり、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９または５６０番目のアミノ酸にまで及ぶＣｌｆＡのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＣｌｆＡ  Ｎ２３ドメインは、ＣｌｆＡの２１４〜５５９、２１５〜５５９、２１６〜５５９、２１６〜５５８または２１６〜５５７番目のアミノ酸であり、配列番号２０のポリペプチド配列を任意に有する。このＣｌｆＡ  Ｎ２３ドメインは、配列番号２０、２１、２２、２３または２４と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４３】
本発明の免疫原性組成物は、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９または２００番目のアミノ酸から始まり、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４または５４５番目のアミノ酸にまで及ぶＣｌｆＢのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＣｌｆＢ  Ｎ２３ドメインは、ＣｌｆＢの１９７〜５３８、１９７〜５３９、１９７〜５４０、１９７〜５４１または１９７〜５４２番目のアミノ酸であり、配列番号２５のポリペプチド配列を任意に有する。このＣｌｆＢ  Ｎ２３ドメインは、配列番号２５、２６、２７または２８と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４４】
本発明の免疫原性組成物は、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５または２７６番目のアミノ酸から始まり、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＧのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＧ  Ｎ２３ドメインは、ＳｄｒＧの２６７〜５２６、２６８〜５２６、２６２〜５２８、２６８〜５２７または２６８〜５２５番目のアミノ酸であり、配列番号４１または４４のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＧ  Ｎ２３ドメインは、配列番号４１、４２、４３、４４、４５または４６と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４５】
本発明の免疫原性組成物は、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８番目のアミノ酸から始まり、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１または５７２番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＤのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＤ  Ｎ２３ドメインは、ＳｄｒＤの２３４〜５６６、２３４〜５６７、２３４〜５６８、２３４〜５６９または２３４〜５７０番目のアミノ酸であり、配列番号３５のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＤ  Ｎ２３ドメインは、配列番号３５、３６または３７と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４６】
本発明の免疫原性組成物は、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５または２６６番目のアミノ酸から始まり、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８または５９９番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＥのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＥ  Ｎ２３ドメインは、ＳｄｒＥの２６２〜５９２、２６２〜５９３、２６２〜５９４、２６２〜５９５または２６２〜５９６番目のアミノ酸であり、配列番号３８のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＥ  Ｎ２３ドメインは、配列番号３８、３９または４０と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４７】
本発明の免疫原性組成物は、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９または１８０番目のアミノ酸から始まり、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１または４３２番目のアミノ酸にまで及ぶＳｄｒＣのＮ２３ドメインを任意に含む。一例において、このＳｄｒＣ  Ｎ２３ドメインは、ＳｄｒＣの１７６〜４２６、１７６〜４２７、１７６〜４２８、１７６〜４２９または１７６〜４３０番目のアミノ酸であり、配列番号２９または３２のポリペプチド配列を任意に有する。このＳｄｒＣ  Ｎ２３ドメインは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３または３４と８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する配列を任意に含む。
【００４８】
一実施形態において、このリガンド結合領域は、Ｎ２ドメイン、Ｎ３ドメイン、Ｎ１ドメイン、Ｎ２Ｎ３ドメインまたはＮ１Ｎ２Ｎ３ドメイン（複数可）を含むか、またはこれらからなる。
【００４９】
Ｎ２３ドメインを含むＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥまたはＳｄｒＧの断片を含む免疫原性組成物は、本発明のさらなる独立した態様である。この独立した実施形態のＮ２３ドメインは、上記に記載の特徴のいずれかを含み得る。
【００５０】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥまたはＳｄｒＧの１、２、３、４、５または６つのＮ２３ドメインを含む。例えば、この免疫原性組成物は、ＣｌｆＡとＣｌｆＢ、ＣｌｆＡとＳｄｒＣ、ＣｌｆＡとＳｄｒＤ、ＣｌｆＡとＳｄｒＥ、ＣｌｆＡとＳｄｒＧ、ＣｌｆＢとＳｄｒＣ、ＣｌｆＢとＳｄｒＤ、ＣｌｆＢとＳｄｒＥ、ＣｌｆＢとＳｄｒＧ、ＳｄｒＣとＳｄｒＤ、ＳｄｒＣとＳｄｒＥ、ＳｄｒＣとＳｄｒＧ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧまたはＳｄｒＥとＳｄｒＧのＮ２３ドメインを含み得る。
【００５１】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ブドウ球菌細胞外結合成分、例えば、アドヘシンの断片を含み、配列番号２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３０、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５または４６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するリガンド結合領域を含む。この断片は、ＥＬＩＳＡなどのアッセイ、血清殺菌力アッセイ、またはブドウ球菌、例えば、黄色ブドウ球菌の感染による抗原投与に対する防御を示すアッセイで測定した時に、例えば、抗ブドウ球菌免疫反応を起こすことができる免疫原性断片である。
【００５２】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片と共有結合しているブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片を含む。
【００５３】
本発明のさらなる態様は、鉄／ヘム取り込みシステムに関わるブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインおよびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質である。
【００５４】
融合タンパク質は、同一ポリペプチド鎖に共有結合している少なくとも２つの異なるタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。少なくとも２つの異なるタンパク質に由来するアミノ酸配列は、ペプチド結合もしくは任意の他の共有結合によって直接結合され得るか、または、任意に、２、４、６、８、１０、２０、５０、１００もしくは２００個以上のアミノ酸を含むペプチド鎖であるリンカーｘを介して結合され得る。一実施形態において、このリンカーｘは、グリシン−グリシン−セリン（ＧＧＳ）などのトリペプチドを含む。さらなる例において、このリンカーｘは配列番号９８を含む。２つ以上のリンカーｘ配列が３つ以上のタンパク質配列を融合する場合、同一リンカーｘ配列または異なるリンカーｘ配列が用いられ得る。一実施形態において、このリンカーｘが１０個未満のアミノ酸長である場合、同一リンカーが用いられる。このリンカーｘが１０、２０、５０または１００個以上のアミノ酸長である場合、異なるリンカーｘ配列がこの融合タンパク質中に存在する。
【００５５】
一実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣおよびＩｓｄＨからなる群から任意に選択される黄色ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質に由来するＮＥＡＴドメインを含む。
【００５６】
一実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤおよびＳｄｒＥからなら群から任意に選択される黄色ブドウ球菌タンパク質に由来するか、またはＳｄｒＧなどの表皮ブドウ球菌タンパク質に由来するリガンド結合ドメイン（例えば、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ２３またはＮ１２３ドメイン）を含む。
【００５７】
独立した実施形態において、本発明は、第１のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインと第２のＩｓｄタンパク質に由来するＮＥＡＴドメインを含む融合タンパク質、例えば、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ、ＩｓｄＡとＩｓｄＣ、ＩｓｄＡとＩｓｄＨ、ＩｓｄＢとＩｓｄＣ、ＩｓｄＢとＩｓｄＨ、ＩｓｄＣとＩｓｄＨを含む。
【００５８】
一実施形態において、本発明の融合タンパク質は、配列番号４７〜９７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する。これらの配列において、ｘは、共有結合または１〜３、１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜５０、１〜１００、９０〜１２０、１〜２００もしくは１〜５００個のアミノ酸のいずれか一方を意味する。一実施形態において、ｘは３個のアミノ酸を意味し、任意にＧＧＳ配列を有する。一実施形態において、ｘは配列番号９８（ＤＴＮＤＡＶＶＴＮＤＱＳＳＳＶＡＳＮＱＴＮＴＮＴＳＮＱＮＩＳＴＩＮＮＡＮＮＱＰＱＡＴＴＮＭＳＱＰＡＱＰＫＳＳＴＮＡＤＱＡＳＳＱＰＡＨＥＴＮＳＮＧＮＴＮＤＫＴＮＥＳＳＮＱＳＤＶＮＱＱＹＰＰＡＤＥＳＬＱＤＡＩＫＮＰＡＩＩ）の配列を有する１０８個のアミノ酸を意味する。
【００５９】
２つのリンカーｘが表示される場合、これらのリンカーは同一かまたは異なってもよい。例えば、第１および第２のドメインがＧＧＳリンカーによって分けられ得、第２および第３のドメインは、１０８個のアミノ酸の配列番号９８の配列によって分けられる。あるいは、第１および第２のドメインがＧＧＳリンカーによって分けられてもよく、第２および第３のドメインはＧＧＳリンカーによって分けられる。あるいは、第１および第２のドメインが１０８個のアミノ酸の配列番号９８の配列によって分けられてもよく、第２および第３のドメインはＧＧＳリンカーによって分けられる。
【００６０】
独立した実施形態において、本発明は、第１のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインおよび第２のブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質を含む。例えば、この融合タンパク質は、ＳｄｒＣとＳｄｒＤ、ＳｄｒＣとＳｄｒＥ、ＳｄｒＣとＳｄｒＧ、ＳｄｒＣとＣｌｆＡ、ＳｄｒＣとＣｌｆＢ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧ、ＳｄｒＤとＣｌｆＡ、ＳｄｒＤとＣｌｆＢ、ＳｄｒＥとＳｄｒＧ、ＳｄｒＥとＣｌｆＡ、ＳｄｒＥとＣｌｆＢ、ＳｄｒＧとＣｌｆＡ、ＳｄｒＧとＣｌｆＢまたはＣｌｆＡとＣｌｆＢに由来するリガンド結合ドメインを含み得る。このリガンド結合ドメインは、任意に、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ２Ｎ３またはＮ１Ｎ２Ｎ３のドメインからなり、この融合タンパク質は、任意に、それぞれのタンパク質について同一ドメインの種類、例えば、ＳｄｒＣとＳｄｒＤ、ＳｄｒＣとＳｄｒＥ、ＳｄｒＣとＳｄｒＧ、ＳｄｒＣとＣｌｆＡ、ＳｄｒＣとＣｌｆＢ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧ、ＳｄｒＤとＣｌｆＡ、ＳｄｒＤとＣｌｆＢ、ＳｄｒＥとＳｄｒＧ、ＳｄｒＥとＣｌｆＡ、ＳｄｒＥとＣｌｆＢ、ＳｄｒＧとＣｌｆＡ、ＳｄｒＧとＣｌｆＢまたはＣｌｆＡとＣｌｆＢについてはＮ２Ｎ３ドメインを含む。
【００６１】
一実施形態において、この融合タンパク質は、３、４、５または６つのブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質由来のリガンド結合ドメインを含む。例えば、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢとＳｄｒＣ；ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢとＳｄｒＤ、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢとＳｄｒＥ；ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢとＳｄｒＧ；ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣとＳｄｒＧ；ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣとＳｄｒＤ；ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣとＳｄｒＥ、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ；ＣｌｆＡ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧ；ＣｌｆＡ、ＳｄｒＥとＳｄｒＧ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣとＳｄｒＤ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣとＳｄｒＧ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＣとＳｄｒＥ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧ；ＣｌｆＢ、ＳｄｒＥとＳｄｒＧ；ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤとＳｄｒＥ；ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤとＳｄｒＧ；ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥとＳｄｒＧを含む。
【００６２】
本発明の全ての断片または融合タンパク質は、例えば、発現用に用いられる宿主細胞から単離または精製され得る。
【００６３】
それぞれの場合において、ＮＥＡＴドメインまたはリガンド結合ドメインの配列は、任意に、上記に記載した通りである。
【００６４】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は本発明の融合タンパク質を含む。
【００６５】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、さらなるブドウ球菌抗原、例えば、以下に記載の糖を含む。本発明の実施形態において、糖抗原が存在する場合、本発明の断片または融合タンパク質は、任意に、遊離タンパク質または非結合タンパク質として存在する。任意に、これらは、キャリアタンパク質として糖抗原に結合している。
【００６６】
糖
ポリＮ−アセチル化グルコサミン（ＰＮＡＧ）
ＰＮＡＧは多糖細胞間アドヘシンであり、任意に、Ｎ−アセチルおよび／またはＯ−スクシニル構成要素で置換されたβ−（１→６）結合グルコサミンのポリマーで構成される。この多糖は黄色ブドウ球菌および表皮ブドウ球菌の両方に存在し、いずれかの供給源から単離することができる（Ｊｏｙｃｅ ｅｔ ａｌ ２００３,Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３８；９０３；Ｍａｉｒａ−Ｌｉｔｒａｎ ｅｔ ａｌ ２００２,Ｉｎｆｅｃｔ.Ｉｍｕｎ.７０；４４３３）。例えば、ＰＮＡＧは、黄色ブドウ球菌株ＭＮ８ｍから単離され得る（ＷＯ０４／４３４０７）。ｄＰＮＡＧの調製は、ＷＯ０４／４３４０５に記載されている。
【００６７】
以前にポリ−Ｎ−スクシニル−β−（１→６）−グルコサミン（ＰＮＳＧ）として知られた多糖は、Ｎ−スクシニル化の同定が不正確であったため、予想される構造を持たないことが最近示された（Ｍａｉｒａ−Ｌｉｔｒａｎ ｅｔ ａｌ ２００２,Ｉｎｆｅｃｔ.Ｉｍｕｎ.７０；４４３３）。したがって、正式にはＰＮＳＧとして知られ、現在はＰＮＡＧであると判明した多糖も、ＰＮＡＧという用語に包含される。
【００６８】
ＰＮＡＧは、４００ｋＤａ超、７５〜４００ｋＤａ、１０〜７５ｋＤａのサイズから、（任意に、Ｎ−アセチルおよびＯ−スクシニル構成要素で置換されたβ−（１→６）結合グルコサミンの）反復単位を最高で３０個含むオリゴ糖にまで変化する異なるサイズのものであってもよい。任意のサイズのＰＮＡＧ多糖またはオリゴ糖は、本発明の免疫原性組成物に用いられ、例えば、４０ｋＤａ超のサイズを用いることができる。サイズ化は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、顕微溶液化、超音波照射または化学的切断によって達成され得る（ＷＯ０３／５３４６２、ＥＰ４９７５２４、ＥＰ４９７５２５）。
【００６９】
ＰＮＡＧのサイズ範囲は、例えば、４０〜４００ｋＤａ、５０〜３５０ｋＤａ、４０〜３００ｋＤａ、６０〜３００ｋＤａ、５０〜２５０ｋＤａおよび６０〜２００ｋＤａである。
【００７０】
ＰＮＡＧは、アセテート（acetate）によるアミノ基上での置換により、アセチル化の程度が異なり得る。インビトロで生成したＰＮＡＧは、ほぼ完全にアミノ基上で置換されている（９５〜１００％）。あるいは、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％未満のＮ−アセチル化を有する脱アセチル化ＰＮＡＧを用いることができる。脱アセチル化ＰＮＡＧの使用により、グラム陽性細菌、任意に、黄色ブドウ球菌および／または表皮ブドウ球菌（ＷＯ０４／４３４０５）のオプソニン殺傷が可能になる。一実施形態において、このＰＮＡＧは、４０ｋＤａ〜３００ｋＤａの間のサイズを有し、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％未満のアミノ基がＮ−アセチル化されるように脱アセチル化される。
【００７１】
一実施形態において、このＰＮＡＧはＯ−スクシニル化されていないか、または２５、２０、１５、１０、５、２、１または０．１％未満の残基上でＯ−スクシニル化されている。
【００７２】
脱アセチル化ＰＮＡＧ（ｄＰＮＡＧ）という用語は、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％未満のアミノ基がアセチル化されたＰＮＡＧ多糖またはオリゴ糖を表す。
【００７３】
本明細書で使用するＰＮＡＧという用語は、糖のアセチル化形態および脱アセチル化形態の両方を包含する。
【００７４】
一実施形態において、ＰＮＡＧは脱アセチル化され、天然多糖を化学的に処理することによってｄＰＮＡＧを形成する。例えば、天然のＰＮＡＧを、ｐＨが１０以上に上昇するように塩基溶液で処理する。例えば、ＰＮＡＧを、０．１〜５Ｍ、０．２〜４Ｍ、０．３〜３Ｍ、０．５〜２Ｍ、０．７５〜１．５Ｍもしくは１ＭのＮａＯＨ、ＫＯＨまたはＮＨ４ＯＨで処理する。処理は、２０〜１００、２５〜８０、３０〜６０、３０〜５０または３５〜４５℃の温度で、少なくとも１０もしくは３０分間、または１、２、３、４、５、１０、１５もしくは２０時間ある。ｄＰＮＡＧは、ＷＯ０４／４３４０５に記載される通りに調製され得る。
【００７５】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物に含まれる多糖（複数可）は、以下に記載のキャリアタンパク質に結合しているか、あるいは結合してない。
【００７６】
黄色ブドウ球菌由来の５型多糖および８型多糖
ヒトに感染を引き起こす黄色ブドウ球菌のほとんどの株は、５型多糖または８型多糖のいずれか一方を含む。ヒト株の約６０％が８型であり、約３０％が５型である。５型および８型の莢膜多糖抗原の構造については、Ｍｏｒｅａｕ ｅｔ ａｌ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ.２０１；２８５（１９９０）ａｎｄ Ｆｏｕｒｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ Ｉｎｆｅｃｔ.Ｉｍｍｕｎ.４５；８７（１９８４）に記載されている。両方ともそれらの反復単位中にＦｕｃＮＡｃｐおよびＭａｎＮＡｃＡを有し、ＭａｎＮＡｃＡはスルフヒドリル基を導入するために用いることができる。
【００７７】
最近（Ｊｏｎｅｓ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３４０、１０９７−１１０６（２００５）)、ＮＭＲ分光法によりこれらの莢膜多糖の構造が以下のように修正された：
５型
→４）−β−Ｄ−ＭａｎＮＡｃＡ−（１→４）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（３ＯＡｃ）−（１→３）−β−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ−（１→
８型
→３）−β−Ｄ−ＭａｎＮＡｃＡ（４ＯＡｃ）−（１→３）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（１→３）−α−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ（１→
【００７８】
多糖は、例えば、米国特許第６２９４１７７号またはＩｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９０）５８（７）；２３６７に記載の通りに、当業者に公知の方法を用いて、黄色ブドウ球菌の適切な株から抽出され得る。例えば、ＡＴＣＣ１２９０２は５型黄色ブドウ球菌株であり、ＡＴＣＣ１２６０５は、８型黄色ブドウ球菌株である。
【００７９】
多糖は天然サイズのものであるか、あるいは、例えば、顕微溶液化、超音波照射または化学的処理によってサイズ化され得る。本発明は、黄色ブドウ球菌の５型多糖および８型多糖に由来するオリゴ糖も対象とする。
【００８０】
糖の重量平均分子量は、１０００〜２００００００、５０００〜１００００００、１００００〜５０００００、５００００〜４０００００、７５０００〜３０００００、または１０００００〜２０００００であり得る。本明細書に記載の糖の分子量または平均分子量は、結合前に測定された糖の重量平均分子量（Ｍｗ）を表し、ＭＡＬＬＳによって測定される。このＭＡＬＬＳ技術は当該技術分野で公知であり、典型的には、実施例２に記載の通りに実行される。糖のＭＡＬＬＳ分析には、２つのカラム（ＴＳＫＧ６０００および５０００ＰＷｘｌ）を組み合わせて用いることができ、糖を水中に溶出させる。糖を、光散乱検出器（例えば、４８８ｎｍでの１０ｍＷのアルゴンレーザーを備えるＷｙａｔｔ Ｄａｗｎ ＤＳＰ）および干渉屈折計（例えば、Ｐ１００セルおよび４９８ｎｍでの赤色フィルターを備えたＷｙａｔｔ Ｏｔｉｌａｂ ＤＳＰ）を用いて検出する。一実施形態において、糖の多分散性は、１〜１．５、１〜１．３、１〜１．２、１〜１．１または１〜１．０５であり、キャリアタンパク質への結合後には、この複合体の多分散性は、１．０〜２．５、１．０〜２．１．０〜１．５、１．０〜１．２、１．５〜２．５、１．７〜２．２または１．５〜２．０である。全ての多分散性測定はＭＡＬＬＳによる。
【００８１】
本発明の免疫原性組成物中に含まれる５型および／もしくは８型の莢膜多糖またはオリゴ糖は、Ｏ−アセチル化されている。一実施形態において、５型の莢膜多糖またはオリゴ糖のＯ−アセチル化の程度は、１０〜１００％、２０〜１００％、３０〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、６０〜１００％、７０〜１００％、８０〜１００％、９０〜１００％、５０〜９０％、６０〜９０％、７０〜９０％または８０〜９０％である。一実施形態において、８型の莢膜多糖またはオリゴ糖のＯ−アセチル化の程度は、１０〜１００％、２０〜１００％、３０〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、６０〜１００％、７０〜１００％、８０〜１００％、９０〜１００％、５０〜９０％、６０〜９０％、７０〜９０％または８０〜９０％である。一実施形態において、５型および８型の莢膜多糖またはオリゴ糖のＯ−アセチル化の程度は、１０〜１００％、２０〜１００％、３０〜１００％、４０〜１００％、５０〜１００％、６０〜１００％、７０〜１００％、８０〜１００％、９０〜１００％、５０〜９０％、６０〜９０％、７０〜９０％または８０〜９０％である。
【００８２】
この多糖またはオリゴ糖のＯ−アセチル化の程度を、当該技術分野で公知の任意の方法によって、例えば、プロトンＮＭＲ（Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒ ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ １９９６,Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓａｒｃｈ ２９６；８３−９６,Ｊｏｎｅｓ ａｎｄ Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒ ２００２,Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ３０；１２３３−１２４７,ＷＯ０５／０３３１４８またはＷＯ００／５６３５７）によって決定することができる。さらに一般的に用いられる方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ（１９４９）Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.１８０；２４９−２６１に記載される方法である。
【００８３】
Ｏ−アセチル基を加水分解によって、例えば、無水ヒドラジンなどの塩基での処理（Ｋｏｎａｄｕ ｅｔ ａｌ １９９４；Ｉｎｆｅｃｔ.Ｉｍｍｕｎ.６２；５０４８−５０５４）または１〜８時間、０．１ＮのＮａＯＨで処理することによって除去することができる。５型および／もしくは８型の多糖またはオリゴ糖上での高レベルのＯ−アセチル化を維持するために、Ｏ−アセチル基の加水分解をもたらす処理を最小限にする。例えば、極端なｐＨでの処理を最小限にする。
【００８４】
本発明の免疫原性組成物中に含まれる５型および８型の多糖は、任意に、以下に記載のキャリアタンパク質に結合しているか、あるいは結合してない。
【００８５】
あるいは、本発明の免疫原性組成物は、５型多糖または８型多糖のいずれか一方を含む。
【００８６】
黄色ブドウ球菌３３６抗原
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、米国特許第６２９４１７７号に記載の黄色ブドウ球菌３３６抗原を含む。
【００８７】
この３３６抗原はβ結合ヘキソサミンを含み、Ｏ−アセチル基を含まず、ＡＴＣＣ５５８０４の登録番号で寄託された３３６型黄色ブドウ球菌に対する抗体に特異的に結合する。
【００８８】
一実施形態において、この３３６抗原は天然サイズのものであるか、あるいは、例えば、顕微溶液化、超音波照射または化学的処理によってサイズ化され得る多糖である。本発明は、３３６抗原由来のオリゴ糖も対象である。
【００８９】
本発明の免疫原性組成物中に含まれる３３６抗原は、任意に、以下に記載のキャリアタンパク質に結合しているか、あるいは結合してない。
【００９０】
表皮ブドウ球菌のＩ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型多糖
表皮ブドウ球菌のＡＴＣＣ−３１４３２株、ＳＥ−３６０株およびＳＥ−１０株は、それぞれ、Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型の３つの異なる莢膜型の特徴を示す（Ｉｃｈｉｍａｎ ａｎｄ Ｙｏｓｈｉｄａ １９８１,Ｊ.Ａｐｐｌ.Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.５１；２２９）。表皮ブドウ球菌の各血清型から抽出された莢膜多糖は、Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型の多糖を構成する。多糖は、米国特許第４１９７２９０号に記載の方法またはＩｃｈｉｍａｎ ｅｔ ａｌ １９９１,Ｊ.Ａｐｐｌ.Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.７１；１７６に記載の方法を含むいくつかの方法によって抽出され得る。
【００９１】
本発明の一実施形態において、この免疫原性組成物は、表皮ブドウ球菌のＩ型および／もしくはＩＩ型および／もしくはＩＩＩ型の多糖またはオリゴ糖を含む。
【００９２】
多糖は天然サイズのものであるか、あるいは、例えば、顕微溶液化、超音波照射または化学的切断によってサイズ化され得る。本発明は、表皮ブドウ球菌から抽出されたオリゴ糖も対象である。
【００９３】
これらの多糖は結合していないか、または、任意に、以下に記載の通りに結合している。
【００９４】
多糖の結合（コンジュゲート）
ワクチン接種における多糖の使用に関連する問題の中に、多糖それ自体が弱い免疫原であるという事実がある。この免疫原性の欠如を克服するように設計された戦略には、この多糖の巨大タンパク質キャリアへの結合が含まれ、この結合は、バイスタンダーＴ細胞ヘルプ（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ Ｔ−ｃｅｌｌ ｈｅｌｐ）を提供する。一実施形態において、本明細書で利用する多糖をタンパク質キャリアに結合させ、バイスタンダーＴ細胞ヘルプを提供する。多糖またはオリゴ糖の免疫原と結合させるのに用いられ得るこれらのキャリアの例として、ジフテリアおよび破傷風トキソイド（ＤＴ、ＤＴ Ｃｒｍ１９７およびＴＴ）、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、緑膿菌エキソプロテインＡ（ｒＥＰＡ）およびツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）、インフルエンザ菌のプロテインＤ、ニューモリシンまたは上記のいずれかの断片が挙げられる。使用に適する断片には、ヘルパーＴエピトープを包含する断片が含まれる。特に、プロテインＤ断片は、任意に、このタンパク質のＮ末端の１／３を含む。プロテインＤは、インフルエンザ菌のＩｇＤ結合タンパク質である（ＥＰ０ ５９４ ６１０ Ｂ１）。
【００９５】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物に用いられるキャリアタンパク質は、上記に記載のブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の断片、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質の断片または本発明の融合タンパク質の断片を含むか、またはこれらからなる。
【００９６】
一実施形態において、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＥｓａＣまたはＥｓａＢは、結合していないタンパク質または遊離タンパク質として本発明の免疫原性組成物中に存在する（ＷＯ０８／１９１６２、ＷＯ１０／１４３０４）。
【００９７】
これらの多糖は、任意の公知の方法（例えば、Ｌｉｋｈｉｔｅによる米国特許第４，３７２，９４５号、Ａｒｍｏｒらによる米国特許第４，４７４，７５７号、Ｊｅｎｎｉｎｇｓらによる米国特許第４，３５６，１７０号）によって、このキャリアタンパク質（複数可）に結合され得る。任意に、ＣＤＡＰ結合化学が実行される（ＷＯ９５／０８３４８参照）。
【００９８】
ＣＤＡＰにおいて、シアニル化剤の１−シアノ−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）が、任意に、多糖−タンパク質複合体の合成に用いられる。このシアニル化反応を比較的穏やかな条件下で行うことができ、これによって、アルカリ感受性多糖の加水分解を阻止する。この合成により、キャリアタンパク質への直接結合が可能になる。
【００９９】
この多糖を、水溶液または生理食塩水中に可溶化することができる。ＣＤＡＰをアセトニトリルに溶解させ、すぐにこの多糖溶液に添加してもよい。このＣＤＡＰはこの多糖のヒドロキシル基と反応して、シアネートエステルを形成する。活性化ステップ後、このキャリアタンパク質を添加する。リジンのアミノ基がこの活性化多糖と反応して、イソ尿素共有結合を形成する。この結合反応後、過剰のグリシンを添加し、残留活性化官能基をクエンチングする。その後、この生成物をゲル浸透カラムに透過させ、未反応キャリアタンパク質および残留試薬を除去する。
【０１００】
一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、任意に、黄色ブドウ球菌タンパク質または表皮ブドウ球菌タンパク質である、さらなるブドウ球菌タンパク質を含む。一実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、任意に、ＷＯ０６／３２４７５（参照により組込まれる）に記載の配列を有するＷＯ０６／３２４７５に記載のタンパク質の１つ以上
またはそれらの免疫原性断片をさらに含む。これらのタンパク質の多くは、細胞外成分結合タンパク質、トランスポータータンパク質または病原性の毒素および調節因子のカテゴリーに分類される。本発明の免疫原性組成物は、任意に、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質、ブドウ球菌トランスポータータンパク質、またはブドウ球菌の病原性の毒素もしくは調節因子をさらに含む。本発明の免疫原性組成物は、任意に、少なくともまたは正確に、１、２、３、４、５もしくは６つのブドウ球菌タンパク質を含む。
【０１０１】
本発明の好ましい免疫原性組成物は、ブドウ球菌内で異なる機能を有する、少なくとも２つの異なるタンパク質のカテゴリーから選択される多数のタンパク質を含む。タンパク質のかかるカテゴリーの例として、細胞外結合タンパク質、鉄獲得タンパク質などのトランスポータータンパク質、病原性の毒素または調節因子、および他の免疫優性タンパク質が挙げられる。
【０１０２】
好ましい実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、
グループａ）細胞外成分結合タンパク質；
グループｂ）トランスポータータンパク質；
グループｃ）病原性の毒素または調節因子
グループｄ）構造タンパク質
から選択される２、３または４つの異なるグループから選択される２、３、４、５または６以上のいくつかのタンパク質をさらに含む。
【０１０３】
好ましい実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、以下のグループの２、３または４から選択される２、３、４、５または６以上のいくつかのタンパク質をさらに含む：
グループａ）ラミニン受容体、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、エラスチン結合タンパク質（ＥｂｐＳ）、ＥＦＢ（ＦＩＢ）、ＳＢＩ、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＨ、ＳａｓＦ、リパーゼＧｅｈＤ、ＳａｓＡ、ＳａｓＢ、ＳａｓＣ、ＳａｓＤ、ＳａｓＫ、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、Ｃｎａ、ＣｌｆＢ、ＦｂｐＡ、Ｎｐａｓｅ、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ＳｓａＡ、ＥＰＢ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ＨＢＰ、ビトロネクチン結合タンパク質、フィブリノゲン結合タンパク質、コアグラーゼ、ＦｉｇおよびＭＡＰからなる群から選択される少なくとも１つのブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片；
グループｂ）免疫優性ＡＢＣトランスポーター、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＩｓｄＣ、Ｍｇ２＋トランスポーター、ＨａｒＡ、ＳｉｔＣおよびＮｉ ＡＢＣトランスポーターからなる群から選択される少なくとも１つのブドウ球菌トランスポータータンパク質またはその断片；
グループｃ）ＥｓａＣ、ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢ、ＲＮＡ ＩＩＩ活性化タンパク質（ＲＡＰ）、ＥｓａＢからなる群から選択される少なくとも１つのブドウ球菌の病原性の調節因子、毒素またはその断片；
グループｄ）ＭＲＰＩＩおよび自己溶菌酵素からなる群から選択される少なくとも１つのブドウ球菌構造タンパク質またはその免疫原性断片。
【０１０４】
本発明の免疫原性組成物中に存在する任意の組み合わせには、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢとＥｓａＣ；ＳｄｒＣ、ＩｓｄＡとＥｓａＣ；ＩｓｄＡとＥｓｘＡ；ＩｓｄＢとＥｓｘＡ；ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢとＥｓｘＡ；ＳｄｒＣ、ＩｓｄＡとＥｓｘＡ；ＣｌｆＡ、ＩｓｄＡとＥｓｘＢ；ＩｓｄＢとＥｓｘＢ；ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢとＥｓｘＢ；ＳｄｒＣ、ＩｓｄＡとＥｓｘＢ；ＳｄｒＤ、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＳｄｒＣ、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＳｄｒＥ、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＳｄｒＧ、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＣｌｆＢ、ＩｓｄＡとＩｓｄＢ；ＥｓａＣとＩｓｄＡ；ＥｓａＣとＩｓｄＢ；ＥｓａＣとＥｓｘＡ；ＥｓａＣとＥｓｘＢ；ＥｓａＣとＳｄｒＣが含まれる。
【０１０５】
本発明のさらなる態様は、ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質のＮＥＡＴドメインをコードするポリヌクレオチド配列およびブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質のリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドである。一実施形態において、このポリヌクレオチドは、配列番号２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８、１９、２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３０、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５または４６と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するポリペプチドをコードする配列を有する。
【０１０６】
本発明のさらなる態様は、本発明の免疫原性組成物、本発明の融合タンパク質または本発明のポリヌクレオチド、および医薬的に許容される賦形剤を含むワクチンである。
【０１０７】
本発明のワクチンは、特に、高齢者集団における使用だけでなく幼児集団における使用を対象とする時に、アジュバンド化され得る。適切なアジュバントには、水酸化アルミニウムゲルまたはリン酸アルミニウムまたはミョウバンなどのアルミニウム塩が含まれるが、カルシウム、マグネシウム、鉄または亜鉛の塩などの他の金属塩であってもよく、またはアシル化チロシン、もしくはアシル化糖、陽イオン誘導体化糖もしくは陰イオン誘導体化糖、またはポリフォスファゼンの不溶性懸濁液であってもよい。
【０１０８】
ＴＨ１型の反応の優先的な誘導因子であるアジュバントが選択されることが好ましい。かかる高レベルのＴｈ１型サイトカインは、特定の抗原に対して細胞媒介性免疫反応の誘導を助ける傾向があるが、高レベルのＴｈ２型サイトカインは、この抗原に対して体液性免疫反応の誘導を助ける傾向がある。
【０１０９】
Ｔｈ１型およびＴｈ２型の免疫反応の区別は絶対的ではない。実際には、個体が、主にＴｈ１または主にＴｈ２として記載される免疫反応を支持する。しかし、ＭｏｓｍａｎｎおよびＣｏｆｆｍａｎ（Ｍｏｓｍａｎｎ,Ｔ.Ｒ.ａｎｄ Ｃｏｆｆｍａｎ,Ｒ.Ｌ.（１９８９）ＴＨ１ ａｎｄ ＴＨ２ ｃｅｌｌｓ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｌｅａｄ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ.（Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ,７,ｐ１４５−１７３）によりマウスＣＤ４陽性Ｔ細胞クローンについて記載されているような観点から、サイトカインのファミリーを考慮することが好都合である場合がある。伝統的には、Ｔｈ１型反応は、Ｔリンパ球によるＩＮＦ−γサイトカインおよびＩＬ−２サイトカインの産生と関連する。ＩＬ−１２などの、Ｔｈ１型免疫反応の誘導に直接関連する場合が多い他のサイトカインは、Ｔ細胞によって産生されない。対照的に、Ｔｈ２型反応は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の分泌と関連する。主にＴｈ１反応を促進する適切なアジュバント系には、モノホスホリルリピドＡもしくはその誘導体（または、一般に、解毒されたリピドＡ−例えば、ＷＯ２００５１０７７９８参照）、特に、３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）（その調製については、ＧＢ２２２０２１１ Ａ参照）、およびアルミニウム塩（例えば、リン酸アルミニウムもしくは水酸化アルミニウム）または水中油型エマルションのいずれか一方とモノホスホリルリピドＡ、好ましくは３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡとの組み合わせが含まれる。かかる組み合わせにおいて、同一の粒子構造に抗原および３Ｄ−ＭＰＬを含めることにより、抗原シグナルおよび免疫賦活性シグナルのより効率的な送達が可能になる。３Ｄ−ＭＰＬがミョウバン吸着抗原の免疫原性をさらに増強することができることを複数の研究が示している（Ｔｈｏｅｌｅｎ ｅｔ ａｌ.Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９８）１６：７０８−１４；ＥＰ６８９４５４−Ｂ１）。
【０１１０】
増強した系には、モノホスホリルリピドＡとサポニン誘導体の組み合わせ、特に、ＷＯ９４／００１５３に開示されているＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬの組み合わせ、またはＷＯ９６／３３７３９に開示されている、ＱＳ２１がコレステロールでクエンチングされる低反応性組成物が含まれる。水中油型エマルション中のＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬおよびトコフェロールを含む特に効力の高いアジュバント製剤については、ＷＯ９５／１７２１０に記載されている。一実施形態において、この免疫原性組成物は、ＱＳ２１であり得るサポニンをさらに含む。この製剤は、水中油型エマルションおよびトコフェロールも含んでもよい（ＷＯ９５／１７２１０）。非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＷＯ９６／０２５５５）および他の免疫調節オリゴヌクレオチド（ＷＯ０２２６７５７およびＷＯ０３５０７８２２）も、ＴＨ１反応の好ましい誘導因子であり、本発明における使用に適する。
【０１１１】
特定のアジュバントは、金属塩、水中油型エマルション、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、（特に、Ｔｏｌｌ様受容体２アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニストおよびＴｏｌｌ様受容体９アゴニスト）、サポニンまたはそれらの組み合わせのグループから選択されるアジュバントである。
【０１１２】
本発明のワクチン組成物と共に用いることができるアジュバントは、ＷＯ０２／０９７４６に教示されている菌株などのグラム陰性細菌株、特に、Ｎ.ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓのブレブ（bleb）由来のブレブまたは外膜小胞の調製物である。ブレブのアジュバント特性は、（例えば、低濃度の界面活性剤（例えば、０〜０．１％のデオキシコール酸）での抽出を介して）その表面にＬＯＳ（リポオリゴ糖）を保持することによって改善することができる。ＬＯＳは、ＷＯ０２／０９７４６で論じられるｍｓｂＢ（−）またはｈｔｒＢ（−）変異を経て解毒することができる。アジュバント特性は、髄膜炎菌のブレブのＰｏｒＢを保持することによって（および任意に、ＰｏｒＡを除去することによって）も改善することができる。アジュバント特性は、髄膜炎菌のブレブ上のＬＯＳの外核糖構造を切断することによって、例えば、ＷＯ２００４／０１４４１７で論じられるｌｇｔＢ（−）変異によっても改善することができる。あるいは、（例えば、ｍｓｂＢ（−）および／またはｌｇｔＢ（−）株から単離された）前述のＬＯＳを精製し、本発明の組成物中でアジュバントとして用いることができる。
【０１１３】
本発明の組成物と共に用いられ得るさらなるアジュバントは、サポニン、リピドＡもしくはその誘導体、免疫賦活性オリゴヌクレオチド、リン酸アルキルグルコサミニド、水中油型エマルションまたはそれらの組み合わせのグループから選択され得る。さらに好ましいアジュバントは、別のアジュバントと組み合わせた金属塩である。このアジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、特に、Ｔｏｌｌ様受容体２、３、４、７、８もしくは９のアゴニスト、またはサポニン、特に、Ｑｓ２１であることが好ましい。このアジュバント系が、上記のリストのアジュバントを２種類以上含むことがさらに好ましい。特に、これらの組み合わせは、好ましくは、サポニン（特に、Ｑｓ２１）アジュバントおよび／またはＣｐＧ含有免疫賦活性オリゴヌクレオチドなどのＴｏｌｌ様受容体９アゴニストを含む。他の好ましい組み合わせは、サポニン（特に、Ｑｓ２１）とＴｏｌｌ様受容体４アゴニスト、例えば、モノホスホリルリピドＡもしくはその３脱アシル化誘導体３Ｄ−ＭＰＬ、またはサポニン（特に、Ｑｓ２１）とＴｏｌｌ様受容体４リガンド、例えば、リン酸アルキルグルコサミニドを含む。
【０１１４】
特に好ましいアジュバントは、３Ｄ−ＭＰＬとＱＳ２１の組み合わせ（ＥＰ０ ６７１ ９４８ Ｂ１）、３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油型エマルション（ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９８／５６４１４）、または他の担体で製剤化された３Ｄ−ＭＰＬ（ＥＰ０ ６８９ ４５４ Ｂ１）である。他の好ましいアジュバント系には、米国特許第６５５８６７０号、同第６５４４５１８号に記載の３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１とＣｐＧオリゴヌクレオチドの組み合わせが含まれる。
【０１１５】
このアジュバントは水中油型エマルションであってもよく、または他のアジュバントと組み合わせた水中油型エマルションを含んでもよい。このエマルション系の油相は、好ましくは、代謝可能な油を含む。代謝可能な油という用語の意味は当該技術分野で公知である。代謝可能は、「代謝によって変換され得る」と定義することができる（Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ,Ｗ.Ｂ.Ｓａｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ,２５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７４））。この油は、任意の植物油、魚油、動物性油または合成油であってもよく、これは受け手に対して毒性がなく、代謝によって変換され得る。ナッツ、種子、および穀物は一般的な植物油の供給源である。合成油は本発明の一部でもあり、ＮＥＯＢＥＥ（登録商標）などの市販の油などを含むことができる。スクアレン（２，６，１０，１５，１９,２３−ヘキサメチル−２,６,１０,１４,１８,２２−テトラコサヘキサエン）は不飽和油であり、サメの肝油中に大量に見られ、オリーブ油、小麦胚芽油、ぬか油、および酵母中に少量見られ、本発明の使用に特に好ましい油である。スクアレンは、コレステロールの生合成の中間体であるという事実に基づき、代謝可能な油である（Ｍｅｒｃｋ ｉｎｄｅｘ,１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ,ｅｎｔｒｙ ｎｏ.８６１９）。
【０１１６】
トコール類（例えば、ビタミンＥ）は、油エマルションアジュバント中でも用いられる場合が多い（ＥＰ０ ３８２ ２７１ Ｂ１；米国特許第５６６７７８４号；ＷＯ９５／１７２１０）。本発明の油エマルション中で用いられるトコール類（好ましくは、水中油型エマルション）は、これらのトコールが、好ましくは、直径１ミクロン未満の、任意に乳化剤を含むトコール小滴の分散系であり得るという点において、ＥＰ０ ３８２ ２７１ Ｂ１に記載される通りに製剤化され得る。あるいは、これらのトコールを別の油と組み合わせて用い、油エマルションの油相を形成することができる。上記の記載の代謝可能な油などの、トコールと組み合わせて用いられ得る油エマルションの例を本明細書に記載する。
【０１１７】
水中油型エマルションアジュバントそれ自体は、アジュバント組成物として有用であることが示唆されており（ＥＰ０ ３９９ ８４３Ｂ）、水中油型エマルションと他の活性剤の組み合わせもワクチンのアジュバントとして記載されている（ＷＯ９５／１７２１０；ＷＯ９８／５６４１４；ＷＯ９９／１２５６５；ＷＯ９９／１１２４１）。油中水型エマルション（米国特許第５，４２２，１０９号；ＥＰ０ ４８０ ９８２ Ｂ２）および水中油中水型エマルション（米国特許第５，４２４，０６７号；ＥＰ０ ４８０ ９８１ Ｂ）などの他の油エマルションアジュバントについても記載されている。これらの全ては、（特に、トコール類を包含する時）アジュバントおよび本発明の組成物を形成するのに好ましい油エマルション系を形成する。
【０１１８】
最も好ましくは、この油エマルション（例えば、水中油型エマルション）は、ＴＷＥＥＮ ８０などの乳化剤および／またはコレステロールなどのステロールをさらに含む。
【０１１９】
好ましい油エマルション（好ましくは、水中油型エマルション）は、スクアラン、スクアレンなどの代謝可能な無毒の油、またはα−トコフェロールなどのトコフェロール（および、好ましくは、スクアレンおよびα−トコフェロールの両方）ならびに任意に、Ｔｗｅｅｎ ８０などの乳化剤（または界面活性剤）を含む。ステロール（好ましくは、コレステロール）も含まれ得る。
【０１２０】
水中油型エマルションの生成法は当業者に公知である。一般に、この方法は、トコール含有油相と、ＰＢＳ／ＴＷＥＥＮ８０（商標）溶液などの界面活性剤とを混合し、その後、ホモジナイザーを用いて均質化することを含み、この混合物を２回注射針に通すことを含む方法が、少量の液体を均質化するのに適することは当業者には明らかである。同様に、当業者は、顕微溶液化装置による乳化プロセス（Ｍ１１０Ｓ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ ｍａｃｈｉｎｅ、最大５０回通過、６ｂａｒの最大入口圧力で２分間（出口圧力約８５０ｂａｒ））を適合させて、小量または大量のエマルションを生成することができる。この適合は、必要とされる直径の油滴を有する製剤が得られるまで、得られたエマルションの測定を含む通常の実験によって達成することができる。
【０１２１】
水中油型エマルションにおいて、この油および乳化剤は水性担体中に存在するべきである。この水性担体は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水であってもよい。
【０１２２】
安定な水中油型エマルション中に見られる油滴のサイズは、光子相関分光法により測定した場合に、好ましくは、直径が１ミクロン未満であり、実質的に３０〜６００ｎｍ、好ましくは、実質的に約３０〜５００ｎｍ、最も好ましくは、直径が実施的に１５０〜５００ｎｍの範囲、特に、直径が約１５０ｎｍであり得る。この点で、数基準で油滴の８０％は好ましい範囲内にあるべきであり、より好ましくは、数基準で油滴の９０％以上、最も好ましくは、９５％以上が規定のサイズの範囲内にある。本発明の油エマルション中に存在する成分量は、従来的には、スクアレンなどの油が０．５〜２０％または２〜１０％の範囲であり、存在する時、α−トコフェロールが２〜１０％、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどの界面活性剤が０．３〜３％の範囲である。好ましくは、油（好ましくは、スクアレン）：トコール（好ましくは、α−トコフェロール）の比は、これがより安定なエマルションを提供するように１以下である。Ｔｗｅｅｎ８０またはＳｐａｎ８５などの乳化剤も、約１％のレベルで存在してもよい。いくつかの場合において、本発明のワクチンが安定剤をさらに含むことは好都合であり得る。
【０１２３】
好ましいエマルション系の例については、ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９９／１１２４１およびＷＯ９９／１２５６５に記載されており、これらは、任意に、免疫賦活剤ＱＳ２１および／または３Ｄ−ＭＰＬで製剤化された、スクアレン、α−トコフェロールおよびＴＷＥＥＮ ８０に基づくエマルションアジュバントを開示している。したがって、本発明の特に好ましい実施形態において、本発明のアジュバントは、ＬＰＳもしくはその誘導体、および／またはサポニンなどのさらなる免疫賦活剤を追加として含んでもよい。さらなる免疫賦活剤の例については、本明細書および「Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ−Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ」１９９５,Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,Ｖｏｌｕｍｅ ６,Ｅｄｓ.Ｐｏｗｅｌｌ,Ｍ.Ｆ.,ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ,Ｍ.Ｊ.,Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ,Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎ,ＩＳＢＮ ０−３０６−４４８６７−Ｘに記載されている。
【０１２４】
好ましい態様において、アジュバントおよび本発明に係る免疫原性組成物は、上記に記載の油エマルション中に、任意に、ステロール（好ましくは、コレステロール）と共に、サポニン（好ましくは、ＱＳ２１）および／またはＬＰＳ誘導体（好ましくは、３Ｄ−ＭＰＬ）を含む。さらに、この油エマルション（好ましくは、水中油型エマルション）は、ｓｐａｎ８５および／またはレシチンおよび／またはトリカプリリンを含んでもよい。水中油型エマルション、ステロールおよびサポニンを含むアジュバントについてはＷＯ９９／１２５６５に記載されている。
【０１２５】
典型的には、ヒトへの投与には、サポニン（好ましくは、ＱＳ２１）および／またはＬＰＳ誘導体（好ましくは、３Ｄ−ＭＰＬ）は、１用量あたり１μｇ〜２００μｇ、例えば、１０〜１００μｇ、好ましくは、１０μｇ〜５０μｇの範囲の免疫原性組成物のヒト用量中に存在する。典型的には、この油エマルション（好ましくは、水中油型エマルション）は、２〜１０％の代謝可能な油を含む。好ましくは、この油エマルションは、２〜１０％のスクアレン、２〜１０％のα−トコフェロール、および０．３〜３％（好ましくは、０．４〜２％）の乳化剤（好ましくは、ｔｗｅｅｎ ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート））を含む。スクアレンおよびα−トコフェロールの両方が存在する時、好ましくは、スクアレン：α−トコフェロールの比は、これがより安定なエマルションを提供するように１以下である。Ｓｐａｎ ８５（ソルビタントリオレエート）も、本発明に使用するエマルション中に０．５〜１％のレベルで存在してもよい。いくつかの場合において、本発明の免疫原性組成物およびワクチンが、安定剤、例えば、カプリル酸（ｍｅｒｃｋ ｉｎｄｅｘ １０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ,ｅｎｔｒｙ ｎｏ.１７３９）（トリカプリリンが特に好ましい）を含む他の乳化剤／界面活性剤をさらに含むことは好都合であり得る。
【０１２６】
スクアレンおよびサポニン（好ましくは、ＱＳ２１）が含まれる場合、このエマルション中の油の全レベルの減少を可能にするように、この製剤にステロール（好ましくは、コレステロール）も含めることは有益である。これは、製造コストの減少、ワクチン接種の全体的な快適性の改善、また、ＩＦＮ−γ産生の改善などの結果として起こる免疫反応の定性的および定量的な改善ももたらす。したがって、本発明のアジュバント系は、典型的には、２００：１〜３００：１の範囲の代謝可能な油：サポニン（ｗ／ｗ）の比を含み、また本発明は、１：１〜２００：１、好ましくは、２０：１〜１００：１、最も好ましくは、実質的に、４８：１である好ましい範囲の「低油」形態で使用することができ、このワクチンは、全ての成分の有益なアジュバント特性を保持し、反応原性プロファイルは非常に低減されている。したがって、特定の好ましい実施形態は、１：１〜２５０：１の範囲のスクアレン：ＱＳ２１（ｗ／ｗ）の比を有し、好ましい範囲は２０：１〜２００：１、好ましくは２０：１〜１００：１、最も好ましくは、実質的に４８：１である。好ましくは、本明細書に記載のサポニン：ステロールの比で存在するステロール（最も好ましくは、コレステロール）も含まれる。
【０１２７】
本発明のエマルション系は、好ましくは、サブミクロンの範囲の小さい油滴サイズを有する。最も好ましくは、この油滴サイズは、直径が１２０〜７５０ｎｍ、最も好ましくは、１２０〜６００ｎｍの範囲である。
【０１２８】
（本発明の免疫原性組成物におけるＡｌＰＯ４との最高の組み合わせのために、）特定の有力なアジュバント製剤は、ＷＯ９５／１７２１０またはＷＯ９９／１２５６５に記載のサポニン（好ましくは、ＱＳ２１）、ＬＰＳ誘導体（好ましくは、３Ｄ−ＭＰＬ）および油エマルション（好ましくは、水中油型エマルション中のスクアレンおよびαトコフェロール）（特に、実施例２の表１のアジュバント製剤１１）を含む。
【０１２９】
ＴＬＲ２アゴニストの例として、ペプチドグリカンまたはリポタンパク質が挙げられる。イミキモドおよびレシキモドなどのイミダゾキノリンは、既知のＴＬＲ７アゴニストである。一本鎖ＲＮＡも既知のＴＬＲアゴニスト（ヒトにおいてはＴＬＲ８、およびマウスにおいてはＴＬＲ７）であるが、２本鎖ＲＮＡおよびｐｏｌｙ  ＩＣ（ポリイノシン−ポリシチジン酸−ウイルスＲＮＡの市販の合成模倣剤）は、ＴＬＲ３アゴニストの例である。３Ｄ−ＭＰＬはＴＬＲ４アゴニストの例であり、ＣＰＧはＴＬＲ９アゴニストの例である。
【０１３０】
この免疫原性組成物は、金属塩上に吸着される抗原および免疫賦活剤を含んでもよい。抗原および免疫賦活剤３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）が同一粒子上に吸着されているアルミニウムベースのワクチン製剤については、ＥＰ０ ５７６ ４７８ Ｂ１、ＥＰ０ ６８９ ４５４ Ｂ１、およびＥＰ０ ６３３ ７８４ Ｂ１に記載されている。これらの場合において、その後、抗原は、このアルミニウム塩に最初に吸着され、同一のアルミニウム塩粒子上への免疫賦活剤３Ｄ−ＭＰＬの吸着が続く。かかるプロセスは、最初に、これらの粒子が８０〜５００ｎｍの間のサイズに達するまで、水浴中の超音波処理による３Ｄ−ＭＰＬの懸濁を含む。この抗原を、典型的には、撹拌しながら、室温で１時間、アルミニウム塩上に吸着させる。その後、この３Ｄ−ＭＰＬ懸濁液を吸着抗原に添加し、この製剤を室温で１時間インキュベートし、その後、使用するまで４℃で保つ。
【０１３１】
本発明のワクチン製剤を用いて、全身経路または粘膜経路を介して前記ワクチンを投与することによって、感染の影響を受けやすい哺乳類を保護または治療することができる。これらの投与には、筋肉内、腹腔内、皮内もしくは皮下経路による注射、または、口腔／消化管、気管、尿生殖路への粘膜投与による注射が含まれ得る。肺炎または中耳炎の治療には、（肺炎球菌の鼻咽頭保菌をより効果的に防ぎ、その最も早い段階で感染を弱めることができるので、）ワクチンの鼻内投与が好ましい。本発明のワクチンを単回用量として投与することができるが、その成分を同時にまたは異なる時点で同時投与することもできる（例えば、肺炎球菌多糖を、それぞれに対する免疫反応を最適に協調させるために、同時に、またはワクチンの任意の細菌タンパク質成分の投与後１〜２週間目に別々に投与することができる）。同時投与には、任意のＴｈ１アジュバントが、異なる投与のいずれかまたは全てに存在し得る。例えば、Ｔｈ１アジュバントは、このワクチンの細菌タンパク質成分と組み合わせて存在してもよい。単一の投与経路に加えて、２つの異なる投与経路を用いてもよい。例えば、多糖をＩＭ（またはＩＤ）投与し、細菌タンパク質をＩＮ（またはＩＤ）投与してもよい。さらに、本発明のワクチンを、プライミング用量についてはＩＭ投与を、追加免疫用量についてはＩＮ投与してもよい。
【０１３２】
各ワクチン用量中の結合抗原量は、典型的なワクチンにおいて非常に有害な副作用なしに免疫防御反応を引き起こす量として選択される。かかる量は、特定の免疫原が利用されることおよび、どのようにそれが存在するかによって変わる。一般に、各用量は、多糖を０．１〜１００μｇ、典型的には、多糖複合体を０．１〜５０μｇ、０．１〜１０μｇ、１〜１０μｇまたは１〜５μｇ含むことが期待される。
【０１３３】
このワクチン中のタンパク質抗原の含有量は、典型的には、１〜１００μｇ、５〜５０μｇまたは５〜２５μｇの範囲である。最初のワクチン接種後、対象は１回または、適切な間隔をあけて、数回の追加免疫を受けてもよい。
【０１３４】
ワクチン製剤については、一般に、ワクチン設計（「Ｔｈｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈ」（ｅｄｓ Ｐｏｗｅｌｌ Ｍ.Ｆ.＆Ｎｅｗｍａｎ Ｍ.Ｊ.）（１９９５）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓs Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ））に記載されている。リポソーム内へのカプセル化については、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎの米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。
【０１３５】
本発明のワクチンは溶液中で保存されるか、または凍結乾燥されてもよい。任意に、この溶液は、ショ糖、トレハロースまたはラクトースなどの糖の存在下で凍結乾燥される。これらのワクチンは凍結乾燥され、使用前に即座に再構成されることが典型的である。凍結乾燥は、より安定な組成物（ワクチン）をもたらし得る。
【０１３６】
本発明のさらなる態様は、本発明の免疫原性組成物、ＮＥＡＴドメインもしくは他の断片、融合タンパク質またはポリヌクレオチドに医薬的に許容される賦形剤を添加するステップを含む、本発明のワクチンを作製する方法である。
【０１３７】
本発明は、ブドウ球菌感染、特に、院内感染の治療法も包含する。
【０１３８】
本発明の免疫原性組成物またはワクチンは、待機手術の場合に使用するのに特に都合がよい。かかる患者は、あらかじめ手術の日が分かっており、あらかじめ接種され得る。この患者が、黄色ブドウ球菌感染または表皮ブドウ球菌感染に暴露されるか否かは分からないので、上記に記載のように、両方に効く本発明のワクチンを接種することが好ましい。典型的には、待機手術を待つ１６歳以上の成人が、本発明の免疫原性組成物およびワクチンで治療される。あるいは、待機手術を待つ３〜１６歳の子供達が本発明の免疫原性組成物およびワクチンで治療される。
【０１３９】
本発明のワクチンを医療従事者に接種することも可能である。
【０１４０】
本発明のワクチン製剤を用いて、全身経路または粘膜経路を介して前記ワクチンを投与することによって、感染の影響を受けやすい哺乳類を保護または治療することができる。これらの投与には、筋肉内、腹腔内、皮内もしくは皮下経路による注射、または、口腔／消化管、気管、尿生殖路への粘膜投与による注射が含まれ得る。
【０１４１】
各ワクチン用量の抗原量は、典型的なワクチンにおいて非常に有害な副作用なしに免疫防御反応を引き起こす量として選択される。かかる量は、特定の免疫原が利用されることおよび、どのようにそれが存在するかによって変わる。このワクチンのタンパク質含有量は、典型的には、１〜１００μｇ、５〜５０μｇの範囲、典型的には、１０〜２５μｇの範囲である。特定のワクチンの最適量は、対象における適切な免疫反応の観察を含む標準的な試験によって確かめることができる。最初のワクチン接種後、対象は１回または、適切な間隔をあけて、数回の追加免疫を受けてもよい。
【０１４２】
本発明のワクチンはいずれの経路によっても投与できるが、皮膚内（ＩＤ）への記載したワクチンの投与は本発明の一実施形態を形作る。ヒトの皮膚は、角質層と呼ばれる外側の「角質」表皮を含み、これは表皮を覆っている。この表皮の下に、真皮と呼ばれる層があり、この層は、皮下組織を同様に覆っている。研究者らは、皮膚、特に真皮へのワクチン注射が免疫反応を刺激することを示したが、これは多くのさらなる利点も伴い得る。本明細書に記載のワクチンでの皮内ワクチン接種は、本発明の任意の特徴を形作る。
【０１４３】
皮内注射の従来技術、すなわち、「マントウー法」は、皮膚を清浄するステップ、その後、一方の手で引き伸ばすステップ、狭いゲージ針（２６〜３１ゲージ）の斜端を上方に向け、１０〜１５°の間の角度で針を挿入するステップを含む。針の斜端を挿入したら、針のバレルを低くし、わずかに圧力を加えながらさらに進め、皮膚の下でそれを持ち上げる。その後、非常にゆっくりと液体を注入することにより、皮膚表面に水泡又は隆起を形成させた後、針をゆっくりと引き抜く。
【０１４４】
さらに最近になって、皮膚内または皮膚を横断して液体薬剤を投与するように特別に設計されたデバイスについて記載されており、例えば、これらのデバイスは、ＷＯ９９／３４８５０およびＥＰ１０９２４４４に記載され、ジェット式注射デバイスは、例えば、ＷＯ０１／１３９７７、米国特許第５，４８０，３８１号、同第５，５９９，３０２号、同第５，３３４，１４４号、同第５，９９３，４１２号、同第５，６４９，９１２号、同第５，５６９，１８９号、同第５，７０４，９１１号、同第５，３８３，８５１号、同第５，８９３，３９７号、同第５，４６６，２２０号、同第５，３３９，１６３号、同第５，３１２，３３５号、同第５，５０３，６２７号、同第５，０６４，４１３号、同第５，５２０,６３９号、同第４，５９６，５５６号、同第４，７９０，８２４号、同第４，９４１，８８０号、同第４，９４０，４６０、ＷＯ９７／３７７０５およびＷＯ９７／１３５３７に記載されている。ワクチン製剤の皮内投与の別の方法には、従来の注射器と針、または固形ワクチンの弾道的送達（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）用に設計されたデバイス（ＷＯ９９／２７９６１）、経皮パッチ（ＷＯ９７／４８４４０；ＷＯ９８／２８０３７）、または皮膚の表面に適用する方法（経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）もしくは経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）送達（ＷＯ９８／２０７３４；ＷＯ９８／２８０３７）が含まれ得る。
【０１４５】
本発明のワクチンを皮膚、またはより具体的には、真皮に投与する時、このワクチンは、低液量、特に、約０．０５ｍｌ〜０．２ｍｌの間の量である。
【０１４６】
本発明の皮膚ワクチンまたは皮内ワクチンにおける抗原の含有量は、筋内ワクチンに見られる従来の用量（上記参照）と同様であってもよい。しかし、これらの製剤が「低用量」であり得ることが皮膚ワクチンまたは皮内ワクチンの特徴である。従って、「低用量」ワクチンにおけるタンパク質抗原は、任意に、１用量当たり０．１〜１０μｇ、任意に、０．１〜５μｇほどの少量で存在し、これらの（任意に、結合している）多糖抗原は、１用量当たりの多糖が０．０１〜１μｇ、任意に、０．０１〜０．５μｇの間の範囲で存在し得る。
【０１４７】
本明細書で使用する「皮内送達」という用語は、皮膚内の真皮の領域にワクチンを送達することを意味する。しかし、このワクチンは、必ずしも真皮だけに位置づけられるわけではない。真皮は、ヒトの皮膚表面から約１．０〜約２．０ｍｍの間に位置する皮膚の層であるが、個体間や、身体の異なる部分でいくらかの差異がある。一般に、皮膚の表面から１．５ｍｍ下に進むと、真皮に到達することが予想され得る。真皮は、表面の角質層および表皮と、下の皮下層との間に位置する。送達方法によって、このワクチンを最終的に真皮内だけ、または主として真皮内に位置づけてもよく、または最終的に表皮および真皮内に分布させてもよい。
【０１４８】
本発明の実施形態は、ブドウ球菌の感染または疾患を予防または治療する方法であって、本発明の免疫原性組成物またはワクチンを、それを必要としている患者に投与するステップを含む方法である。
【０１４９】
本発明のさらなる実施形態は、ブドウ球菌の感染または疾患、任意に、手術後のブドウ球菌感染の治療または予防のためのワクチンの製造における本発明の免疫原性組成物の使用である。
【０１５０】
「ブドウ球菌感染」という用語は、哺乳類、任意に、ヒトの宿主において、感染を引き起こすことができる黄色ブドウ球菌および／または表皮ブドウ球菌ならびに他のブドウ球菌株によって引き起こされる感染を包含する。
【０１５１】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、本明細書で、全ての場合において、それぞれ、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」という用語と任意に代用可能であると発明者らは意図する。
【０１５２】
本明細書内で引用される全ての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組込まれる。
【０１５３】
本発明がよりよく理解され得るために、以下の実施例を説明する。これらの実施例は、例示のみの目的であり、いかなる方法においても、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１５４】
実施例１  ＩｓｄＡ／ＩｓｄＢコンストラクトおよびマウスにおける免疫原性
本実施例において使用するＩｓｄＡおよびＩｓｄＢのタンパク質、断片および融合タンパク質の詳細を図１〜３に示す。
【０１５５】
１５匹のメスのＢａｌｂ／Ｃマウスのグループを、水中油型エマルション中に３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１を含むアジュバント（ＡＳ０２Ｖ）でアジュバント化した以下のタンパク質のそれぞれを１０μｇ用いて、０、１４および２８日目に筋肉注射で免疫した。対照グループの１０匹のマウスをアジュバントのみで免疫した：
グループ１→全長ＩｓｄＡタンパク質
グループ２→全長ＩｓｄＢタンパク質
グループ３→ＬＶＬ２３０  ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン（６２〜１８４番目のアミノ酸）
グループ４→ＬＶＬ２３１  ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン（５８〜１８８番目のアミノ酸）
グループ５→ＬＶＬ２３５  ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ１ドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）
グループ６→ＬＶＬ２３７  ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ１／２ドメイン（１５５〜４６０番目のアミノ酸）
グループ７→ＬＶＬ２３８  ＮＥＡＴ１−ＮＥＡＴ２  ＩｓｄＢ（１４０〜４６２番目のアミノ酸）
グループ８→ＬＶＬ２９４  ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴ（５８〜１８８）−ＧＧＳ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ１−ＩｓｄＨ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ２
グループ９→ＬＶＬ２９５  ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴ（５８〜１８８）−ＩｓｄＨ−ＩｓｄＢ−ＮＥＡＴ１−ＧＧＳ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ２
グループ１０→ＬＶＬ２９６  ＩｓｄＡ  ＮＥＡＴ（５８〜１８８）−ＧＧＳ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ１−ＧＧＳ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ２
グループ１１→ＬＶＬ３２１  ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ１−ＧＧＳ−ＩｓｄＢ  ＮＥＡＴ２（１４０〜４６２番目のアミノ酸）
グループ１２→アジュバント
ＧＧＳはグリシン、グリシン、セリンのアミノ酸で構成されているリンカーを示す。
【０１５６】
ＩｓｄＨは配列番号９８の配列を示す。
【０１５７】
抗ＩｓｄＢおよび抗ＩｓｄＡ
ＥＬＩＳＡ力価を、４２日目に収集した個体の血清（ｐｏｓｔ  ＩＩＩ）において測定した。ＯＰＡ力価を、収集したｐｏｓｔ  ＩＩＩ血清で測定した。
【０１５８】
抗ＩｓｄＡおよび抗ＩｓｄＢのＥＬＩＳＡ反応
精製したＩｓｄＡまたはＩｓｄＢを、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１μｇ／ｍｌで高結合マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上にコーティングした。これらのプレートを、撹拌しながら室温で３０分間、ＰＢＳ−１％ＢＳＡでブロッキングした。マウス抗血清を１／５００に事前に希釈し、その後、マイクロプレート中でさらに２倍希釈を行い、撹拌しながら室温で３０分間インキュベートした。洗浄後、結合したマウス抗体を、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈したＪａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社のペルオキシダーゼ結合ａｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ｒｅｆ：１１５−０３５−００３）を用いて検出した。この検出抗体を、撹拌しながら室温で３０分間インキュベートした。ｐＨ４．５の０．１Ｍクエン酸緩衝液１０ｍｌあたりＯＰＤ４ｍｇ＋Ｈ２Ｏ２  ５μｌを用いて、暗所で、室温で１５分間発色させた。この反応をＨＣｌ５０μｌで停止させ、光学密度（ＯＤ）を、６２０ｎｍに対する４９０ｎｍで読みとった。
【０１５９】
この血清中に存在する抗ＩｓｄＡ抗体または抗ＩｓｄＢ抗体のレベルを、中点力価で表した。ＧＭＴを１５個の試料について算出した（対照については１０個）。
【０１６０】
オプソニン食作用アッセイ
オプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）を、（６．７ １０ｅ７／ｍｌに調整した）ＨＬ−６０食細胞１５μｌ、黄色ブドウ球菌１５μｌ、試験血清希釈物１５μｌおよび子ブタの補体１５μｌ（最終濃度１％）を用いて、丸底マイクロプレート中で行った。
【０１６１】
最初に、不活化試験血清を、ＭＥＭ−１％ＢＳＡ  ２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳで希釈し（１／２５）、振盪しながら室温で４０分間、（この試験の最後に３００ＣＦＵ／ウェルが得られるように希釈した）黄色ブドウ球菌のＮｅｗｍａｎ Ｄ ｓｐａ株とインキュベートした。希釈前に、前もって、この株を鉄欠乏培地（ＲＰＭＩ １６４０）で一晩増殖させた。
【０１６２】
その後、（６．７  １０ｅ７／ｍｌに調整した）ＨＬ−６０細胞および子ブタの補体を各ウェルに添加した。不活化補体を有する対照も各試験試料用に含めた。
【０１６３】
この反応混合物を、撹拌しながら３７℃で９０分間インキュベートした。１／２０希釈後、この５０μｌ量を平底マイクロプレートに移した。ＭＨ寒天５０μｌ、続いてＰＢＳ−０．９％寒天５０μｌを添加した。３７℃で一晩インキュベートした後、コロニーの自動計数を行った。
【０１６４】
オプソニン食作用活性を、少なくとも５０％が死滅する血清希釈の逆数として表した。
【０１６５】
ＥＬＩＳＡの結果
図４に示す結果は、ＬＶＬ２３０およびＬＶＬ２３１の両方の２つのＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメイン断片が、ＩｓｄＡに対して良好な免疫反応を誘発し、ＥＬＩＳＡ結果は天然タンパク質に対して生じる免疫反応と同じくらい良好であることを示す。同様に、３つのＩｓｄＡ／ＩｓｄＢ融合タンパク質（ＬＶＬ２９４、ＬＶＬ２９５およびＬＶＬ２９６）は、全長ＩｓｄＡによって得られる反応とそれほど異ならない抗ＩｓｄＡ反応を与えた。
【０１６６】
図５に示す結果は、ＩｓｄＢに対する免疫反応において第２のＮＥＡＴドメインが重要であることを示す。Ｎ末端ＮＥＡＴドメインの一部のみとＣ末端ＮＥＡＴドメインの全てを含むＬＶＬ２３７に対して起こる免疫反応（中点力価５３７，６４４）に比べて、ＬＶＬ２３５に存在するＮ末端ＮＥＡＴドメインは、わずかなＥＬＩＳＡ反応（中点力価９，０４３）のみを生じさせた。これは、ＬＶＬ２３５に対する反応が、ＬＶＬ２３７、ＬＶＬ２３８、ＬＶＬ２９４、ＬＶＬ２９５、ＬＶＬ２９６またはＬＶＬ３２１を用いて得られた反応よりも低いことによって証明される。
【０１６７】
オプソニン食作用の結果
オプソニン食作用アッセイで得られた結果を図６に示す。ＬＶＬ２３０およびＬＶＬ２３１の両方を有するＩｓｄＡのＮＥＡＴドメイン断片での免疫後に、非常に良好なオプソニン食作用力価が得られ、全長のＩｓｄＡまたはＩｓｄＢによって得られる結果よりも高い非常に良好な結果が得られた。これらの結果は、Ｎ末端ＮＥＡＴドメインの一部のみとＣ末端ＮＥＡＴドメインの全てを含むＬＶＬ２３７と比較して、ＩｓｄＢのＮ末端ＮＥＡＴドメイン（ＬＶＬ２３５）がより低いオプソニン反応を生じさせたので、ＩｓｄＢのＣ末端ＮＥＡＴドメインの重要性も確証した。ＩｓｄＡＮＥＡＴドメイン、ＩｓｄＢＮＥＡＴドメイン１とＩｓｄＢＮＥＡＴドメイン２の組み合わせを含む融合タンパク質は、さらに高いオプソニン反応を示した（ＬＶＬ２９４、ＬＶＬ２９５、ＬＶＬ２９６）。ＬＶＬ２９４に、２つのＩｓｄＢＮＥＡＴドメイン間のリンカーとして配列番号９８を存在させると、特に良好なオプソニン反応がもたらされた。
【０１６８】
結論
遊離ドメインまたは融合タンパク質の一部のいずれか一方として、６２〜１８４番目および５８〜１８８番目のアミノ酸由来のＩｓｄＡ  ＮＥＡＴドメインの両方は、すばらしい免疫原性の結果を示した。抗ＩｓｄＡ抗体も、抗ＩｓｄＢ抗体よりも高いオプソニン食作用結果を示した。
【０１６９】
ＩｓｄＢのＣ末端ＮＥＡＴドメインは、免疫原性、特にオプソニン活性の発生について、Ｎ末端ＮＥＡＴドメインよりも重要である。
【０１７０】
実施例２  ＣｌｆＡ  Ｎ１２３ドメインの発現および精製
Ｂ２３１２：
黄色ブドウ球菌ＮＣＴＣ８３２５株由来の４０〜５５９番目のアミノ酸をコードするｃｌｆＡ遺伝子断片のコドンを最適化し、ＧｅｎｅＡｒｔ（レーゲンスブルク、ドイツ）によって２つの部分に合成した。この遺伝子断片は、Ｎ１、Ｎ２およびＮ３と同定された３つの構造ドメインをコードし、ＣｌｆＡのフィブリノゲン結合活性を含む。ライゲーションができるようにするために、制限酵素部位のＮｄｅＩおよびＳａｃＩＩを第一の合成遺伝子部分の末端に加え、ＳａｃＩＩおよびＸｈｏＩを第２の合成遺伝子部分に加えた。
【０１７１】
ＰＣＲ反応を用いて、ＸｈｏＩ部位のすぐ前のその３’末端にストップコドンを加え、第２の合成断片中の４７４番目の位置のチロシン残基をヒスチジン残基に置換した。このようにして、これらの２つの断片を、ｒａｐｉｄ ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ,マンハイム、ドイツ）を用いてｐＥＴ２４ｂ（＋）発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングし、それによって、このＤＮＡ断片およびこのプラスミドは同時に構築される。最後に、標準手順に従って、（ｍｕｔ４７４を有する）Ｎ１２３ドメインを含む発現ベクターで大腸菌ＢＬＲ（ＤＥ３）株を形質転換した後に、最終コンストラクトが作られた。
【０１７２】
大腸菌ＢＬＲ（ＤＥ３）株：Ｆ− ｏｍｐＴ ｈｓｄＳＢ（ｒＢ− ｍＢ−）ｇａｌ ｄｃｍ（ＤＥ３）（ｓｒｌ−ｒｅｃＡ）３０６：：Ｔｎ１０（ＴｅｔＲ）（Ｎｏｖａｇｅｎ）
ＢＬＲは、プラスミドモノマーの収率を改善するＢＬ２１のｒｅｃＡ−誘導体であり、反復配列を含む標的プラスミドを安定化するのを助けることができるか、またはその生成物はＤＥ３プロファージの減少をもたらすことができる。この株はテトラサイクリン耐性（１２．５μｇ/ｍｌ）である。
【０１７３】
ＤＥ３は、この宿主がＤＥ３の溶原菌であるので、ｌａｃＵＶ５プロモーターの制御下でＴ７ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子の染色体コピーを保因することを示す。かかる株は、ＩＰＴＧでの誘導により、ｐＥＴベクターにクローニングされた標的遺伝子からタンパク質を産生するのに適する。
【０１７４】
Ｂ２３７８：
鋳型として（ｍｕｔ４７４を有する）Ｎ１２３変異を含む発現ベクターを用いる部位特異的変異誘発（Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ)により、Ｎ１２３ドメインの野生型配列（４７４番目に変異がない４０〜５５９番目のアミノ酸）を回復させた。標準手順に従って、Ｎ１２３ドメイン（野生型配列）を含む発現ベクターで大腸菌ＢＬＲ（ＤＥ３）株を形質転換することにより、最終株が作られた。
【０１７５】
４７４番目のアミノ酸を変異させたＣｌｆＡの精製（Ｂ２３１２株）
培養槽で増殖させた培養物から収集した大腸菌細胞ペーストを、５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡおよび１ｍＭ ＰＭＳＦを含む５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２に懸濁し、ＯＤ６５０ｎｍは１２０に達した。この懸濁液をＰａｎｄａホモジナイザー中で機械的に破砕（２回通過、７５０ｂａｒ）し、５０％酢酸でｐＨ４．０に調整した。４℃で３０分間、１２２００ｇで遠心分離した後、上清を０．４５〜０．２０μｍフィルターで浄化し、その１容積分の０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．１で、続いて、４容積分の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−１２０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ ８．１でｄｉａｆｉｌｔｅｒにより濾過した。残余分を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−１２０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ８．１で平衡化したＣａｐｔｏＱカラム（レジン１ｍｌあたり残余分約１０ｍｌ）上に添加した。平衡用緩衝液で洗浄した後、ＣｌｆＡを、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−２１５ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ８．１で溶出し、さらに、平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ ＨＲ３００カラムで精製して、１０ｍＭ  ホウ酸ナトリウム  ｐＨ９．５で溶出した。ＣｌｆＡを含む画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる純度に基づいて選択し、収集して、０．２２μｍで滅菌濾過した。
【０１７６】
野生型ＣｌｆＡ（Ｂ２３７８株）の精製
振盪フラスコ中の培養物から収集した大腸菌細胞ペーストを、５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡおよび１ｍＭ ＰＭＳＦを含む５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２に懸濁し、ＯＤ６５０ｎｍは１２０に達した。この懸濁液をＰａｎｄａホモジナイザー中で機械的に破砕（２回通過、７５０ｂａｒ）し、５０％酢酸でｐＨ３．８に調整した。４℃で３０分間、１２２００ｇで遠心分離した後、上清を０．４５〜０．２０μｍの濾過により浄化し、平衡化したＳｅｐｈａｃｒｙｌ ＨＲ３００カラムで精製して、１０ｍＭ  ホウ酸ナトリウム  ｐＨ９．５で溶出した。ＣｌｆＡを含む画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる純度に基づいて選択し、収集して、０．２２μｍで滅菌濾過した。
【０１７７】
実施例３  フィブリノゲン結合実験
コーティングしたＣｌｆＡへのフィブリノゲン接着
ＣｌｆＡタンパク質を、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍｌで高結合マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上にコーティングした。これらのプレートを、振盪しながら室温で３０分間、ＰＢＳ−１％ＢＳＡでブロッキングした。
【０１７８】
洗浄後、ヒトフィブリノゲン（ｒｅｆ：ＳＩＧＭＡ Ｆ４８８３−１６）を、１ｍｇ／ｍｌの出発濃度で添加し、その後、マイクロプレート中でさらに２倍希釈し、これを振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。
【０１７９】
洗浄後、この結合したフィブリノゲンを、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈したペルオキシダーゼ結合抗フィブリノゲンヤギポリクローナル抗体（ｒｅｆ：ＡＢＣＡＭ ７５３９−１）を用いて検出した。この検出抗体を、撹拌しながら室温で６０分間インキュベートした。
【０１８０】
ｐＨ４．５の０．１Ｍ  クエン酸緩衝液１０ｍｌあたりＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ）４ｍｇ＋Ｈ２Ｏ２  ５μｌを用いて、暗所で、室温で１５分間発色させた。この反応をＨＣｌ５０μｌで停止させ、光学密度を６２０ｎｍに対する４９０ｎｍで読みとった。
【０１８１】
これらの結果を図７に示し、図７は、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の４７４変異体タンパク質が、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型タンパク質に比べてフィブリノゲンへの結合が弱いことを示す。
【０１８２】
コーティングしたフィブリノゲンへのＣｌｆＡ接着
ヒトフィブリノゲン（ｒｅｆ：ＳＩＧＭＡ Ｆ４８８３−１６）を、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍｌで高結合マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上にコーティングした。これらのプレートを、振盪しながら室温で３０分間、ＰＢＳ−１％ＢＳＡでブロッキングした。
【０１８３】
洗浄後、このＣｌｆＡを５０μｇ／ｍｌの出発濃度で添加し、その後、マイクロプレート中でさらに２倍希釈し、これを振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。
【０１８４】
洗浄後、この結合したＣｌｆＡを、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５００希釈した（ｈｉｓタグ付きＣｌｆＡ  Ｎ１２３で免疫した後に得た）抗ＣｌｆＡウサギポリクローナル（抗体）を用いて検出し、振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。
【０１８５】
洗浄後、結合したウサギ抗体を、ＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈したＪａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社のペルオキシダーゼ結合ａｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ウサギＩｇＧ（ｒｅｆ：１１１−０３５−００３）を用いて検出した。この検出抗体を、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。
【０１８６】
ｐＨ４．５の０．１Ｍ  クエン酸緩衝液１０ｍｌあたりＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ）４ｍｇ＋Ｈ２Ｏ２  ５μｌを用いて、暗所で、室温で１５分間発色させた。この反応をＨＣｌ５０μｌで停止させ、光学密度（ＯＤ）を、６２０ｎｍに対する４９０ｎｍで読みとった。
【０１８７】
図８に示す結果は、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の４７４変異体タンパク質が、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型タンパク質に比べてフィブリノゲンへの結合が弱いことを再度証明する。
【０１８８】
実施例４  コーティングしたＣｌｆＡへのフィブリノゲン接着の阻害アッセイ
２０匹のマウスのグループに、０、１４および２８日目に、アジュバントＡＳ０２Ｖで製剤化したＣｌｆＡ  Ｎ１２３またはＣｌｆＡの４７４変異体１０μｇを筋肉注射により接種した。対照グループにはアジュバントのみを接種した。
【０１８９】
４２日目に、血清をマウスから収集し、各グループから集めた血清を、コーティングしたＣｌｆＡへのフィブリノゲン接着の阻害アッセイで試験した。
【０１９０】
精製したＣｌｆＡを、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍｌで高結合マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上にコーティングした。これらのプレートを、撹拌しながら室温で３０分間、ＰＢＳ−１％ＢＳＡでブロッキングした。洗浄後、マウス抗血清を最初に１０倍希釈で添加し、その後、マイクロプレート中でさらに２倍希釈し、これを振盪しながら室温で１時間インキュベートした。洗浄ステップをせず、ヒトフィブリノゲン（Ｒｅｆ：ＳＩＧＭＡ Ｆ４８８３−１６）を、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ中４００μｇ／ｍｌ濃度で添加し、振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした。
【０１９１】
洗浄後、結合したフィブリノゲンを、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈したペルオキシダーゼ結合抗フィブリノゲンヤギポリクローナル抗体（ｒｅｆ：ＡＢＣＡＭ ７５３９−１）を用いて検出した。この検出抗体を、撹拌しながら室温で６０分間インキュベートした。ｐＨ４．５の０．１Ｍ  クエン酸緩衝液１０ｍｌあたりＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ）４ｍｇ＋Ｈ２Ｏ２  ５μｌを用いて、暗所で、室温で１５分間発色させた。この反応をＨＣｌ５０μｌで停止させ、光学密度を６２０ｎｍに対する４９０ｎｍで読みとった。
【０１９２】
図９に示す結果は、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型および４７４変異体の両方に対する抗体は、ほぼ同じ程度で、ＣｌｆＡ Ｎ１２３コーティングプレートへのフィブリノゲンの結合を阻害することができたことを証明する。
【０１９３】
コーティングフィブリノゲンへの黄色ブドウ球菌接着の阻害アッセイ
２０匹のマウスのグループに、０、１４および２８日目に、アジュバントＡＳ０２Ｖで製剤化したＣｌｆＡ  Ｎ１２３またはＣｌｆＡの４７４変異体１０μｇを筋肉注射により接種した。対照グループにはアジュバントのみを接種した。
【０１９４】
４２日目に、血清をマウスから収集し、各グループから集めた血清を、コーティングしたフィブリノゲンへの黄色ブドウ球菌接着の阻害アッセイで試験した。
【０１９５】
ヒトフィブリノゲン（ｒｅｆ：ＳＩＧＭＡ Ｆ４８８３−１６）を、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１０μｇ／ｍｌで高結合マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上にコーティングした。これらのプレートを、振盪しながら室温で３０分間、ＰＢＳ−１％ＢＳＡでブロッキングした。
【０１９６】
この飽和ステップ中、別のマイクロプレートで、マウス抗血清の連続２倍希釈をＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで行った。その後、熱失活させたＮｅｗｍａｎ Ｄ ｓｐａ 黄色ブドウ球菌（２ １０ｅ６ ＣＦＵ／ウェル）を添加し、これらのマイクロプレートを、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。
【０１９７】
フィブリノゲンコーティングプレートの洗浄後、抗血清−細菌混合物を添加し、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。
【０１９８】
洗浄後、結合した細菌を、ＰＢＳ−０．２％ＢＳＡ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５００００希釈した（死滅させた黄色ブドウ球菌Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎで免疫した後に得た）抗死滅全細胞ウサギポリクローナル（抗体）を用いて検出し、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。
【０１９９】
洗浄後、結合したウサギ抗体を、ＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈したＪａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社のペルオキシダーゼ結合ａｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ウサギＩｇＧ（ｒｅｆ：１１１−０３５−００３）を用いて検出した。この検出抗体を、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。
【０２００】
ｐＨ４．５の０．１Ｍ  クエン酸緩衝液１０ｍｌあたりＯＰＤ（Ｓｉｇｍａ）４ｍｇ＋Ｈ２Ｏ２  ５μｌを用いて、暗所で、室温で１５分間発色させた。この反応をＨＣｌ５０μｌで停止させ、光学密度（ＯＤ）を、６２０ｎｍに対する４９０ｎｍで読みとった。
【０２０１】
図１０に示す結果は、ＣｌｆＡ  Ｎ１２３の野生型および４７４変異体の両方に対する抗体が、ほぼ同じ程度で、フィブリノゲンコーティングプレートへの黄色ブドウ球菌の結合を阻害することができたことを証明する。
【０２０２】
配列：
配列番号１
MTKHYLNSKYQSEQRSSAMKKITMGTASIILGSLVYIGADSQQVNAATEATNATNNQSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKPNNVKPVQPKPAQPKTPTEQTKPVQPKVEKVKPTVTTTSKVEDNHSTKVVSTDTTKDQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
配列番号２
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号３
SQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADA
配列番号４
DSQQVNAATEATNATNNQSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５
SQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLA
配列番号６
MNKQQKEFKSFYSIRKSSLGVASVAISTLLLLMSNGEAQAAAEETGGTNTEAQPKTEAVASPTTTSEKAPETKPVANAVSVSNKEVEAPTSETKEAKEVKEVKAPKETKEVKPAAKATNNTYPILNQELREAIKNPAIKDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSNKKEQQDNSAKKEATPATPSKPTPSPVEKESQKQDSQKDDNKQLPSVEKENDASSESGKDKTPATKPTKGEVESSSTTPTKVVSTTQNVAKPTTASSKTTKDVVQTSAGSSEAKDSAPLQKANIKNTNDGHTQSQNNKNTQENKAKSLPQTGEESNKDMTLPLMALLALSSIVAFVLPRKRKN
配列番号７
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号８
SAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSA
配列番号９
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号１０
KMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANT
配列番号１１
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号１２
SAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANT
配列番号１３
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTKLGGSPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号１４
MKNILKVFNTTILALIIIIATFSNSANAADSGTLNYEVYKYNTNDTSIANDYFNKPAKYIKKNGKLYVQITVNHSHWITGMSIEGHKENIISKNTAKDERTSEFEVSKLNGKIDGKIDVYIDEKVNGKPFKYDHHYNITYKFNGPTDVAGANAPGKDDKNSASGSDKGSDGTTTGQSESNSSNKDKVENPQTNAGTPAYIYAIPVASLALLIAITLFVRKKSKGNVE
配列番号１５
NSANAADSGTLNYEVYKYNTNDTSIANDYFNKPAKYIKKNGKLYVQITVNHSHWITGMSIEGHKENIISKNTAKDERTSEFEVSKLNGKIDGKIDVYIDEKVNGKPFKYDHHYNITYKFNGPTDVAGANAP
配列番号１６
MNKHHPKLRSFYSIRKSTLGVASVIVSTLFLITSQHQAQAAENTNTSDKISENQNNNATTTQPPKDTNQT
QPATQPANTAKNYPAADESLKDAIKDPALENKEHDIGPREQVNFQLLDKNNETQYYHFFSIKDPADVYYTKKKAEVELDINTASTWKKFEVYENNQKLPVRLVSYSPVPEDHAYIRFPVSDGTQELKIVSSTQIDDGEETNYDYTKLVFAKPIYNDPSLVKSDTNDAVVTNDQSSSVASNQTNTNTSNQNISTINNANNQPQATTNMSQPAQPKSSTNADQASSQPAHETNSNGNTNDKTNESSNQSDVNQQYPPADESLQDAIKNPAIIDKEHTADNWR
PIDFQMKNDKGERQFYHYASTVEPATVIFTKTGPIIELGLKTASTWKKFEVYEGDKKLPVELVSYDSDKDYAYIRFPVSNGTREVKIVSSIEYGENIHEDYDYTLMVFAQPITNNPDDYVDEETYNLQKLLAPYHKAKTLERQVYELEKLQEKLPEKYKAEYKKKLDQTRVELADQVKSAVTEFENVTPTNDQLTDLQEAHFVVFESEENSESVMDGFVEHPFYTATLNGQKYVVMKTKDDSYWKDLIVEGKRVTTVSKDPKNNSRTLIFPYIPDKAVYNAIVKVVVANIGYEGQYHVRIINQDINTKDDDTSQNNTSEPLNVQTGQEGKVADTDVAENSSTATNPKDASDKADVIEPESDVVKDADNNIDKDVQHDVDHLSDMSDNNHFDKYDLKEMDTQIAKDTDRNVDKDADNSVGMSSNVDTDKDSNKNKDKVIQLNHIADKNNHTGKAAKLDVVKQNYNNTDKVTDKKTTEHLPSDIHKTVDKTVKTKEKAGTPSKENKLSQSKMLPKTGETTSSQSWWGLYALLGMLALFIPKFRKESK
配列番号１７
NKEHDIGPREQVNFQLLDKNNETQYYHFFSIKDPADVYYTKKKAEVELDINTASTWKKFEVYENNQKLPVRLVSYSPVPEDHAYIRFPVSDGTQELKIVSSTQIDDGEETNYDYTKLVFAKPIYNDPSLVKS
配列番号１８
KEHTADNWRPIDFQMKNDKGERQFYHYASTVEPATVIFTKTGPIIELGLKTASTWKKFEVYEGDKKLPVE
LVSYDSDKDYAYIRFPVSNGTREVKIVSSIEYGENIHEDYDYTLMVFAQPITNNPDDYVD
配列番号１９
TNDQLTDLQEAHFVVFESEENSESVMDGFVEHPFYTATLNGQKYVVMKTKDDSYWKDLIVEGKRVTTVSK
DPKNNSRTLIFPYIPDKAVYNAIVKVVVANIGYEGQYHVRIINQDINTKDDDTSQ
配列番号２０
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSS
SVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTT
TTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTST
EATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPEDSDSDPGSDSGSDSNSDSGSDSGSDSTSDSGSDSASDSDSA
SDSDSASDSDSASDSDSASDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD
SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD
SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSDSDSDSD
SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSGSD
SDSSSDSDSESDSNSDSESVSNNNVVPPNSPKNGTNASNKNEAKDSKEPLPDTGSEDEAN
TSLIWGLLASIGSLLLFRRKKENKDKK
配列番号２１
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSS
SVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTT
TTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTST
EATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号２２
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号２３
GTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号２４
MAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号２５
LKKRIDYLSNKQNKYSIRRFTVGTTSVIVGATILFGIGNHQAQASEQSNDTTQSSKNNAS
ADSEKNNMIETPQLNTTANDTSDISANTNSANVDSTTKPMSTQTSNTTTTEPASTNETPQ
PTAIKNQATAAKMQDQTVPQEANSQVDNKTTNDANSIATNSELKNSQTLDLPQSSPQTIS
NAQGTSKPSVRTRAVRSLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VNPKDPTPGPPVDPEPSPDPEPEPTPDPEPSPDPEPEPSPDPDPDSDSDSDSGSDSDSGS
DSDSESDSDSDSDSDSDSDSDSESDSDSESDSESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSRVTPPNNEQKAPSNPKGEVNHSNKVSKQHKTDALPE
TGDKSENTNATLFGAMMALLGSLLLFRKRKQDHKEKA
配列番号２６
LKKRIDYLSNKQNKYSIRRFTVGTTSVIVGATILFGIGNHQAQASEQSNDTTQSSKNNAS
ADSEKNNMIETPQLNTTANDTSDISANTNSANVDSTTKPMSTQTSNTTTTEPASTNETPQ
PTAIKNQATAAKMQDQTVPQEANSQVDNKTTNDANSIATNSELKNSQTLDLPQSSPQTIS
NAQGTSKPSVRTRAVRSLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VN
配列番号２７
SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VN
配列番号２８
GTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSAVN
配列番号２９
MNNKKTATNRKGMIPNRLNKFSIRKYSVGTASILVGTTLIFGLSGHEAKAAEHTNGELNQSKNETTAPSENKTTEKVDSRQLKDNTQTATADQPKVTMSDSATVKETSSNMQSPQNATASQSTTQTSNVTTNDKSSTTYSNETDKSNLTQAKNVSTTPKTTTIKQRALNRMAVNTVAAPQQGTNVNDKVHFTNIDIAIDKGHVNKTTGNTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSKTNTTTYTFTNYVDQYTNVSGSFEQVAFAKRENATTDKTAYKMEVTLGNDTYSKDVIVDYGNQKGQQLISSTNYINNEDLSRNMTVYVNQPKKTYTKETFVTNLTGYKFNPDAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTGQFDVIYSNDNKTATVDLLNGQSSSDKQYIIQQVAYPDNSSTDNGKIDYTLETQNGKSSWSNSYSNVNGSSTANGDQKKYNLGDYVWEDTNKDGKQDANEKGIKGVYVILKDSNGKELDRTTTDENGKYQFTGLSNGTYSVEFSTPAGYTPTTANAGTDDAVDSDGLTTTGVIKDADNMTLDSGFYKTPKYSLGDYVWYDSNKDGKQDSTEKGIKGVKVTLQNEKGEVIGTTETDENGKYRFDNLDSGKYKVIFEKPAGLTQTGTNTTEDDKDADGGEVDVTITDHDDFTLDNGYYEEETSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDAGKHTPTKPMSTVKDQHKTAKALPETGSENNNSNNGTLFGGLFAALGSLLLFGRRKKQNK
配列番号３０
AEHTNGELNQSKNETTAPSENKTTEKVDSRQLKDNTQTATADQPKVTMSDSATVKETSSNMQSPQNATASQSTTQTSNVTTNDKSSTTYSNETDKSNLTQAKNVSTTPKTTTIKQRALNRMAVNTVAAPQQGTNVNDKVHFTNIDIAIDKGHVNKTTGNTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSKTNTTTYTFTNYVDQYTNVSGSFEQVAFAKRENATTDKTAYKMEVTLGNDTYSKDVIVDYGNQKGQQLISSTNYINNEDLSRNMTVYVNQPKKTYTKETFVTNLTGYKFNPDAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTGQFDVIYSNDN
配列番号３１
VAAPQQGTNVNDKVHFTNIDIAIDKGHVNKTTGNTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSKTNTTTYTFTNYVDQYTNVSGSFEQVAFAKRENATTDKTAYKMEVTLGNDTYSKDVIVDYGNQKGQQLISSTNYINNEDLSRNMTVYVNQPKKTYTKETFVTNLTGYKFNPDAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTGQFDVIYSNDN
配列番号３２
MNNKKTATNRKGMIPNRLNKFSIRKYSVGTASILVGTTLIFGLSGHEAKAAEHTNGELNQ
SKNETTAPSENKTTKKVDSRQLKDNTQTATADQPKVTMSDSATVKETSSNMQSPQNATAN
QSTTKTSNVTTNDKSSTTYSNETDKSNLTQAKDVSTTPKTTTIKPRTLNRMAVNTVAAPQ
QGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTF
KYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQ
VAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMT
AYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQF
DVIYSNDNKTATVDLMKGQTSSNKQYIIQQVAYPDNSSTDNGKIDYTLDTDKTKYSWSNS
YSNVNGSSTANGDQKKYNLGDYVWEDTNKDGKQDANEKGIKGVYVILKDSNGKELDRTTT
DENGKYQFTGLSNGTYSVEFSTPAGYTPTTANVGTDDAVDSDGLTTTGVIKDADNMTLDS
GFYKTPKYSLGDYVWYDSNKDGKQDSTEKGIKGVKVTLQNEKGEVIGTTETDENGKYRFD
NLDSGKYKVIFEKPAGLTQTGTNTTEDDKDADGGEVDVTITDHDDFTLDNGYYEEETSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS
DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDNDSDSDSDSDSDAGKHTPAKPMSTVKDQHKTAKALPE
TGSENNNSNNGTLFGGLFAALGSLLLFGRRKKQNK
配列番号３３
AEHTNGELNQSKNETTAPSENKTTKKVDSRQLKDNTQTATADQPKVTMSDSATVKETSSNMQSPQNATANQSTTKTSNVTTNDKSSTTYSNETDKSNLTQAKDVSTTPKTTTIKPRTLNRMAVNTVAAPQ
QGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
配列番号３４
VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
配列番号３５
MLNRENKTAITRKGMVSNRLNKFSIRKYTVGTASILVGTTLIFGLGNQEAKAAESTNKELNEATTSASDNQSSDKVDMQQLNQEDNTKNDNQKEMVSSQGNETTSNGNKLIEKESVQSTTGNKVEVSTAKSDEQASPKSTNEDLNTKQTISNQEALQPDLQENKSVVNVQPTNEENKKVDAKTESTTLNVKSDAIKSNDETLVDNNSNSNNENNADIILPKSTAPKRLNTRMRIAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQEVYKIGNYVWEDTNKNGVQELGEKGVGNVTVTVFDNNTNTKVGEAVTKEDGSYLIPNLPNGDYRVEFSNLPKGYEVTPSKQGNNEELDSNGLSSVITVNGKDNLSADLGIYKPKYNLGDYVWEDTNKNGIQDQDEKGISGVTVTLKDENGNVLKTVTTDADGKYKFTDLDNGNYKVEFTTPEGYTPTTVTSGSDIEKDSNGLTTTGVINGADNMTLDSGFYKTPKYNLGNYVWEDTNKDGKQDSTEKGISGVTVTLKNENGEVLQTTKTDKDGKYQFTGLENGTYKVEFETPSGYTPTQVGSGTDEGIDSNGTSTTGVIKDKDNDTIDSGFYKPTYNLGDYVWEDTNKNGVQDKDEKGISGVTVTLKDENDKVLKTVTTDENGKYQFTDLNNGTYKVEFETPSGYTPTSVTSGNDTEKDSNGLTTTGVIKDADNMTLDSGFYKTPKYSLGDYVWYDSNKDGKQDSTEKGIKDVKVTLLNEKGEVIGTTKTDENGKYCFDNLDSGKYKVIFEKPAGLTQTVTNTTEDDKDADGGEVDVTITDHDDFTLDNGYFEEDTSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDAGKHTPVKPMSTTKDHHNKAKALPETGSENNGSNNATLFGGLFAALGSLLLFGRRKKQNK
配列番号３６
AESTNKELNEATTSASDNQSSDKVDMQQLNQEDNTKNDNQKEMVSSQGNETTSNGNKLIEKESVQSTTGNKVEVSTAKSDEQASPKSTNEDLNTKQTISNQEALQPDLQENKSVVNVQPTNEENKKVDAKTESTTLNVKSDAIKSNDETLVDNNSNSNNENNADIILPKSTAPKRLNTRMRIAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
配列番号３７
IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
配列番号３８
MINRDNKKAITKKGMISNRLNKFSIRKYTVGTASILVGTTLIFGLGNQEAKAAENTSTENAKQDDATTSDNKEVVSETENNSTTENDSTNPIKKETNTDSQPEAKEESTTSSTQQQQNNVTATTETKPQNIEKENVKPSTDKTATEDTSVILEEKKAPNYTNNDVTTKPSTSEIQTKPTTPQESTNIENSQPQPTPSKVDNQVTDATNPKEPVNVSKEELKNNPEKLKELVRNDNNTDRSTKPVATAPTSVAPKRLNAKMRFAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTVKPEEKLYKIGDYVWEDVDKDGVQGTDSKEKPMANVLVTLTYPDGTTKSVRTDANGHYEFGGLKDGETYTVKFETPAGYLPTKVNGTTDGEKDSNGSSITVKINGKDDMSLDTGFYKEPKYNLGDYVWEDTNKDGIQDANEPGIKDVKVTLKDSTGKVIGTTTTDASGKYKFTDLDNGNYTVEFETPAGYTPTVKNTTAEDKDSNGLTTTGVIKDADNMTLDSGFYKTPKYSLGDYVWYDSNKDGKQDSTEKGIKDVKVTLLNEKGEVIGTTKTDENGKYRFDNLDSGKYKVIFEKPAGLTQTVTNTTEDDKDADGGEVDVTITDHDDFILDNGYFEEDTSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDAGKHTPVKPMSTTKDHHNKAKALPETGSENNGSNNATLFGGLFAALGSLLLFGRRKKQNK
配列番号３９
AENTSTENAKQDDATTSDNKEVVSETENNSTTENDSTNPIKKETNTDSQPEAKEESTTSSTQQQQNNVTATTETKPQNIEKENVKPSTDKTATEDTSVILEEKKAPNYTNNDVTTKPSTSEIQTKPTTPQESTNIENSQPQPTPSKVDNQVTDATNPKEPVNVSKEELKNNPEKLKELVRNDNNTDRSTKPVATAPTSVAPKRLNAKMRFAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
配列番号４０
FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
配列番号４１
MINRDNKKAITKKGMISNRLNKFSIRKYTVGTASILVGTTLIFGLGNQEAKAAENTSTENAKQDDATTSDNKEVVSETENNSTTENDSTNPIKKETNTDSQPEAKEESTTSSTQQQQNNVTATTETKPQNIEKENVKPSTDKTATEDTSVILEEKKAPNYTNNDVTTKPSTSEIQTKPTTPQESTNIENSQPQPTPSKVDNQVTDATNPKEPVNVSKEELKNNPEKLKELVRNDNNTDRSTKPVATAPTSVAPKRLNAKMRFAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTVKPEEKLYKIGDYVWEDVDKDGVQGTDSKEKPMANVLVTLTYPDGTTKSVRTDANGHYEFGGLKDGETYTVKFETPAGYLPTKVNGTTDGEKDSNGSSITVKINGKDDMSLDTGFYKEPKYNLGDYVWEDTNKDGIQDANEPGIKDVKVTLKDSTGKVIGTTTTDASGKYKFTDLDNGNYTVEFETPAGYTPTVKNTTAEDKDSNGLTTTGVIKDADNMTLDSGFYKTPKYSLGDYVWYDSNKDGKQDSTEKGIKDVKVTLLNEKGEVIGTTKTDENGKYRFDNLDSGKYKVIFEKPAGLTQTVTNTTEDDKDADGGEVDVTITDHDDFILDNGYFEEDTSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDAGKHTPVKPMSTTKDHHNKAKALPETGSENNGSNNATLFGGLFAALGSLLLFGRRKKQNK
配列番号４２
AENTSTENAKQDDATTSDNKEVVSETENNSTTENDSTNPIKKETNTDSQPEAKEESTTSSTQQQQNNVTATTETKPQNIEKENVKPSTDKTATEDTSVILEEKKAPNYTNNDVTTKPSTSEIQTKPTTPQESTNIENSQPQPTPSKVDNQVTDATNPKEPVNVSKEELKNNPEKLKELVRNDNNTDRSTKPVATAPTSVAPKRLNAKMRFAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNN
配列番号４３
FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNN
配列番号４４
MINKKNNLLTKKKPIANKSNKYAIRKFTVGTASIVIGATLLFGLGHNEAKAEENSVQDVKDSNTDDELSDSNDQSSDEEKNDVINNNQSINTDDNNQIIKKEETNNYDGIEKRSEDRTESTTNVDENEATFLQKTPQDNTHLTEEEVKESSSVESSNSSIDTAQQPSHTTINREESVQTSDNVEDSHVSDFANSKIKESNTESGKEENTIEQPNKVKEDSTTSQPSGYTNIDEKISNQDELLNLPINEYENKARPLSTTSAQPSIKRVTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNNDVNINFGNIDSPYIIKVISKYDPNKDDYTTIQQTVTMQTTINEYTGEFRTASYDNTIAFSTSSGQGQGDLPPEKTYKIGDYVWEDVDKDGIQNTNDNEKPLSNVLVTLTYPDGTSKSVRTDEDGKYQFDGLKNGLTYKITFETPEGYTPTLKHSGTNPALDSEGNSVWVTINGQDDMTIDSGFYQTPKYSLGNYVWYDTNKDGIQGDDEKGISGVKVTLKDENGNIISTTTTDENGKYQFDNLNSGNYIVHFDKPSGMTQTTTDSGDDDEQDADGEEVHVTITDHDDFSIDNGYYDDESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDNDSDLGNSSDKSTKDKLPDTGANEDYGSKGTLLGTLFAGLGALLLGKRRKNRKNKN
配列番号４５
EENSVQDVKDSNTDDELSDSNDQSSDEEKNDVINNNQSINTDDNNQIIKKEETNNYDGIEKRSEDRTESTTNVDENEATFLQKTPQDNTHLTEEEVKESSSVESSNSSIDTAQQPSHTTINREESVQTSDNVEDSHVSDFANSKIKESNTESGKEENTIEQPNKVKEDSTTSQPSGYTNIDEKISNQDELLNLPINEYENKARPLSTTSAQPSIKRVTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
配列番号４６
VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
以下の配列において、ｘは共有結合または１〜２００個のアミノ酸のいずれかを示す。
【０２０３】
配列番号４７
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号４８
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSAVN
配列番号４９
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
配列番号５０
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
配列番号５１
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
配列番号５２
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
配列番号５３
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５４
SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSAVN
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５５
VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５６
IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５７
FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５８
VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号５９
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号６０
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VN
配列番号６０
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VN
配列番号６１
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
配列番号６２
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
配列番号６３
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
配列番号６４
DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTx VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
配列番号６５
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号６６
SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
SPIAGIDKPNGANISSQIIGVDTASGQNTYKQTVFVNPKQRVLGNTWVYIKGYQDKIEES
SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSAVN
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号６７
VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号６８
IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号６９
FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号７０
VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
xDKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKT
配列番号７１
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
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DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
DQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGID
KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
配列番号７２
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
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SGKVSATDTKLRIFEVNDTSKLSDSYYADPNDSNLKEVTDQFKNRIYYEHPNVASIKFGD
ITKTYVVLVEGHYDNTGKNLKTQVIQENVDPVTNRDYSIFGWNNENVVRYGGGSADGDSA
VN
配列番号７３
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
配列番号７４
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
配列番号７５
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
配列番号７６
PTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKSx VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
配列番号７７
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVT
VGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG
DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT
ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT
DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPD
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KPVVPEQPDEPGEIEPIPE
xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号７８
SLAVAEPVVNAADAKGTNVNDKVTASNFKLEKTTFDPNQSGNTF
MAANFTVTDKVKSGDYFTAKLPDSLTGNGDVDYSNSNNTMPIADIKSTNGDVVAKATYDI
LTKTYTFVFTDYVNNKENINGQFSLPLFTDRAKAPKSGTYDANINIADEMFNNKITYNYS
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xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号７９
VAAPQQGTNVNDKVHFSNIDIAIDKGHVNQTTGKTEFWATSSDVLKLKANYTIDDSVKEGDTFTFKYGQYFRPGSVRLPSQTQNLYNAQGNIIAKGIYDSTTNTTTYTFTNYVDQYTNVRGSFEQVAFAKRKNATTDKTAYKMEVTLGNDTYSEEIIVDYGNKKAQPLISSTNYINNEDLSRNMTAYVNQPKNTYTKQTFVTNLTGYKFNPNAKNFKIYEVTDQNQFVDSFTPDTSKLKDVTDQFDVIYSNDN
xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号８０
IAAVQPSSTEAKNVNDLITSNTTLTVVDADKNNKIVPAQDYLSLKSQITVDDKVKSGDYFTIKYSDTVQVYGLNPEDIKNIGDIKDPNNGETIATAKHDTANNLITYTFTDYVDRFNSVQMGINYSIYMDADTIPVSKNDVEFNVTIGNTTTKTTANIQYPDYVVNEKNSIGSAFTETVSHVGNKENPGYYKQTIYVNPSENSLTNAKLKVQAYHSSYPNNIGQINKDVTDIKIYQVPKGYTLNKGYDVNTKELTDVTNQYLQKITYGDNNSAVIDFGNADSAYVVMVNTKFQYTNSESPTLVQMATLSSTGNKSVSTGNALGFTNNQSGGAGQE
xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号８１
FAVAQPAAVASNNVNDLITVTKQTIKVGDGKDNVAAAHDGKDIEYDTEFTIDNKVKKGDTMTINYDKNVIPSDLTDKNDPIDITDPSGEVIAKGTFDKATKQITYTFTDYVDKYEDIKARLTLYSYIDKQAVPNETSLNLTFATAGKETSQNVSVDYQDPMVHGDSNIQSIFTKLDENKQTIEQQIYVNPLKKTATNTKVDIAGSQVDDYGNIKLGNGSTIIDQNTEIKVYKVNPNQQLPQSNRIYDFSQYEDVTSQFDNKKSFSNNVATLDFGDINSAYIIKVVSKYTPTSDGELDIAQGTSMRTTDKYGYYNYAGYSNFIVTSNDTGGGDGTV
xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号８２
VTVNQLAAEQGSNVNHLIKVTDQSITEGYDDSEGVIKAHDAENLIYDVTFEVDDKVKSGDTMTVDIDKNTVPSDLTDSFTIPKIKDNSGEIIATGTYDNKNKQITYTFTDYVDKYENIKAHLKLTSYIDKSKVPNNNTKLDVEYKTALSSVNKTITVEYQRPNENRTANLQSMFTNIDTKNHTVEQTIYINPLRYSAKETNVNISGNGDEGSTIIDDSTIIKVYKVGDNQNLPDSNRIYDYSEYEDVTNDDYAQLGNNN
xPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号８３
STQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAKx DKDHSAPNSRPIDFEMKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTDKS
配列番号８４
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xSTQVSQATSQPINFQVQKDGSSEKSHMDDYMQHPGKVIKQNNKYYFQTVLNNASFWKEYKFYNANNQELATTVVNDNKKADTRTINVAVEPGYKSLTTKVHIVVPQINYNHRYTTHLEFEKAIPTLADAAK
配列番号８５
DQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
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配列番号８７
DQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESKx MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKAHTD
配列番号８８
MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKAHTD
xDQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
配列番号８９
DQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESKx MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTEEDYKAEKLLAPYKKAKTLERQVYELNKIQDKLPEKLKAEYKKKLEDTKKALDEQVKSAITEFQNVQPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTD
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xDQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
配列番号９１
DQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESKx MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTxPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKAHTD
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MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTxPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKAHTD
xDQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
配列番号９３
DQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESKx MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTxPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTD
配列番号９４
MKKKDGTQQFYHYASSVKPARVIFTDSKPEIELGLQSGQFWRKFEVYEGDKKLPIKLVSYDTVKDYAYIRFSVSNGTKAVKIVSSTHFNNKEEKYDYTLMEFAQPIYNSADKFKTxPTNEKMTDLQDTKYVVYESVENNESMMDTFVKHPIKTGMLNGKKYMVMETTNDDYWKDFMVEGQRVRTISKDAKNNTRTIIFPYVEGKTLYDAIVKVHVKTIDYDGQYHVRIVDKEAFTKANTD
xDQTKTQTAHTVKTAQTAQEQNKVQTPVKDVATAKSESNNQAVSDNKSQQTNKVTKHNETPKQASKAKELPKTGLTSVDNFISTVAFATLALLGSLSLLLFKRKESK
配列番号９５
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配列番号９６
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配列番号９７
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配列番号９８
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【図１】
2013501027.tif 000002
【図２】
2013501027.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
2013501027000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成23年6月6日(2011.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｓｄＢ由来のＮＥＡＴドメインを含み、ＩｓｄＢのＮ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の少なくとも一部が存在しない、ブドウ球菌ＩｓｄＢタンパク質の断片を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ブドウ球菌ＩｓｄＢタンパク質が黄色ブドウ球菌に由来する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＢの３３７〜４６２番目のアミノ酸である、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
ＩｓｄＢの前記Ｎ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の全てが存在しない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記断片が、配列番号２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８および１９からなる群から選択されるアミノ酸配列またはそれらの免疫原性断片と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ラミニン受容体、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、エラスチン結合タンパク質（ＥｂｐＳ）、ＥＦＢ（ＦＩＢ）、ＳＢＩ、自己溶菌酵素、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＨ、リパーゼＧｅｈＤ、ＳａｓＡ、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、Ｃｎａ、ＣｌｆＢ、ＦｂｐＡ、Ｎｐａｓｅ、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ＳｓａＡ、ＥＰＢ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質、フィブリノゲン結合タンパク質、コアグラーゼ、ＦｉｇおよびＭＡＰからなる群から選択されるブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質が、ＣｌｆＡ、ＣｌｆＢ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧもしくはＳｄｒＣまたはその免疫原性断片からなる群から選択される、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質がリガンド結合領域を含む断片である、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
ＣｌｆＡのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
ＣｌｆＢのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ＳｄｒＣのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
ＳｄｒＤのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
ＳｄｒＥのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
ＳｄｒＧのＮ２３ドメインを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
リガンド結合領域を含む前記断片が、配列番号２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３０、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片が、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片と共有結合している、請求項６〜１５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢまたはＥｓｘＡとＥｓｘＢの組み合わせを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
前記ＥｓｘＡまたはＥｓｘＢが糖抗原に結合している、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
ＥｓａＣ抗原またはＥｓａＢ抗原を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物および医薬的に許容される賦形剤を含むワクチン。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物に医薬的に許容される賦形剤を添加するステップを含む、請求項２０に記載のワクチンを作製する方法。
【請求項２２】
ブドウ球菌の感染または疾患の治療または予防において使用するための、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
ブドウ球菌疾患の治療または予防のための医薬の調製における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物の使用。
【請求項２４】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む、ブドウ球菌疾患を治療または予防する方法。
【手続補正書】
【提出日】平成24年4月4日(2012.4.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｓｄＢ由来のＮＥＡＴドメインを含み、ＩｓｄＢのＮ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の少なくとも一部が存在しない、ブドウ球菌ＩｓｄＢタンパク質の断片を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
前記ブドウ球菌ＩｓｄＢタンパク質が黄色ブドウ球菌に由来する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片がＩｓｄＢの３３７〜４６２番目のアミノ酸である、請求項１または２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
ＩｓｄＢの前記Ｎ末端ＮＥＡＴドメイン（１４０〜２６９番目のアミノ酸）の全てが存在しない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記断片が、配列番号２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、１８および１９からなる群から選択されるアミノ酸配列またはそれらの免疫原性断片と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ラミニン受容体、ＳｉｔＣ／ＭｎｔＣ／唾液結合タンパク質、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、エラスチン結合タンパク質（ＥｂｐＳ）、ＥＦＢ（ＦＩＢ）、ＳＢＩ、自己溶菌酵素、ＣｌｆＡ、ＳｄｒＣ、ＳｄｒＤ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＨ、リパーゼＧｅｈＤ、ＳａｓＡ、ＦｎｂＡ、ＦｎｂＢ、Ｃｎａ、ＣｌｆＢ、ＦｂｐＡ、Ｎｐａｓｅ、ＩｓａＡ／ＰｉｓＡ、ＳｓａＡ、ＥＰＢ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質、フィブリノゲン結合タンパク質、コアグラーゼ、ＦｉｇおよびＭＡＰからなる群から選択されるブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質がリガンド結合領域を含む断片である、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
リガンド結合領域を含む前記断片が、配列番号２１、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３０、３１、３３、３４、３６、３７、３９、４０、４２、４３、４５および４６からなる群から選択されるアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
ブドウ球菌Ｉｓｄタンパク質の前記断片が、ブドウ球菌細胞外成分結合タンパク質またはその断片と共有結合している、請求項６〜８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
ＥｓｘＡ、ＥｓｘＢまたはＥｓｘＡとＥｓｘＢの組み合わせを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ＥｓａＣ抗原またはＥｓａＢ抗原を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物および医薬的に許容される賦形剤を含むワクチン。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物に医薬的に許容される賦形剤を添加するステップを含む、請求項１２に記載のワクチンを作製する方法。
【請求項１４】
ブドウ球菌の感染または疾患の治療または予防において使用するための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む、ブドウ球菌疾患を治療または予防する方法。
【国際調査報告】
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