(57)【要約】本発明は、ヒトに投与した場合に、ヒトにおいて低レベルの免疫原性を示す、遺伝子工学的に操作された抗体に関する。本発明はまた、前記抗体を作製する方法にも関する。前記遺伝子工学的に操作された抗体は、例えば、非ヒト（例えば、マウス）ドナー抗体から、またはキメラ抗体もしくはヒト化抗体から（これらは、ヒトに長期投与した場合に、ヒトにおいて中和抗抗体応答を惹起することが公知であるか、予測されるか、または予期される）、誘導することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
【請求項２】
ＬＦＲ４が、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する前記軽鎖可変領域から得られる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ＣＤＲのうちの１つが、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する前記軽鎖可変領域に由来する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記ＣＤＲのうちの２つが、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する前記軽鎖可変領域に由来する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、請求項１から３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、請求項１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、請求項１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７または９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
ＬＦＲ２が配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７、９または１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７または９から１１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７または９から１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７または９から１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から７または９から１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
ＬＦＲ１が配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６または８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
ＬＦＲ２が配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６、８または１６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
ＬＦＲ３が配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６、８、１６または１７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６、８または１６から１８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６、８または１６から１９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から６、８または１６から１９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
【請求項２５】
ＬＦＲ４が、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する前記重鎖可変領域から得られる、請求項２４に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
前記ＣＤＲのうちの１つが、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する前記重鎖可変領域に由来する、請求項２４または２５に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記ＣＤＲのうちの２つが、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する前記重鎖可変領域に由来する、請求項２４または２５に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、請求項２４から２６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、請求項２４または２５に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０、３２または３３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２から３４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２から３５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９または３１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
ＨＦＲ２が配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９、３１または４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
ＨＦＲ３が配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９、３１、４０または４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
ＨＦＲ４が配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９、３１または４０から４２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４４】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９、３１または４０から４３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４から２９、３１または４０から４３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４６】
免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、請求項２４から４５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４７】
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４８】
前記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域が、ＩｇＧ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＡ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＥ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＤ重鎖ポリペプチド定常領域またはＩｇＭ重鎖ポリペプチド定常領域である、請求項４６に記載のポリペプチド。
【請求項４９】
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該軽鎖ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該重鎖ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、
遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５０】
前記軽鎖フレームワーク領域、前記重鎖フレームワーク領域、前記軽鎖ＣＤＲ、および前記重鎖ＣＤＲが、Ｋａｂａｔの定義に従って定義される、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５１】
前記軽鎖フレームワーク領域、前記重鎖フレームワーク領域、前記軽鎖ＣＤＲ、および前記重鎖ＣＤＲが、Ｃｈｏｔｈｉａの定義に従って定義される、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５２】
前記軽鎖フレームワーク領域、前記重鎖フレームワーク領域、前記軽鎖ＣＤＲ、および前記重鎖ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５３】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５４】
ＬＦＲ２が配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０、５２または５３のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５５】
ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から５４のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５６】
ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から５５のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５７】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から５６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５８】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から５６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項５９】
ＬＦＲ１が配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９または５１に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６０】
ＬＦＲ２が配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１または５９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６１】
ＬＦＲ３が配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５９または６０のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６２】
ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１または５９から６１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６３】
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１または５９から６２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６４】
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１または５９から６３のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６５】
前記軽鎖ポリペプチドが免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、請求項４９から６４のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６６】
前記軽鎖ポリペプチド定常領域がヒトアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６７】
前記軽鎖定常領域がλ軽鎖定常領域またはκ軽鎖定常領域である、請求項６５または６６に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６８】
配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６５から６７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項６９】
ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から６８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７０】
ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から６９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７１】
ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から７０のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７２】
ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から７１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７３】
ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７４】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７５】
ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７６】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１または５３から６８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７７】
ＨＦＲ２が配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５３から６８または７６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７８】
ＨＦＲ３が配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５３から６８、７６または７７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項７９】
ＨＦＲ４が配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５３から６８または７６から７８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８０】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５３から６８または７６から７９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８１】
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９、５１、５３から６８または７６から７９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８２】
前記重鎖ポリペプチドが免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、請求項４９から８１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８３】
前記重鎖ポリペプチド定常領域がヒトアミノ酸配列を含む、請求項８２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８４】
前記重鎖ポリペプチドが免疫グロブリン分子のＦｃ部分を含む、請求項８２または８３に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８５】
Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ２免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ３免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ４免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＡ免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＭ免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＥ免疫グロブリンＦｃ領域またはＩｇＤ免疫グロブリンＦｃ領域である、請求項８４に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８６】
前記重鎖ポリペプチドが配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９から８５のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８７】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８８】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項８９】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９０】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９１】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９２】
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９３】
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９４】
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９５】
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９６】
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９７】
表５に記載の重鎖フレームワーク領域と軽鎖フレームワーク領域との対のセットを含む、請求項４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９８】
Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片である、請求項４９から６４、６９から８２、または８７から９７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項９９】
前記軽鎖ポリペプチドおよび前記重鎖ポリペプチドが互いに共有結合している、請求項４９から９７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１００】
補体成分タンパク質に結合する、請求項４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０１】
前記補体成分タンパク質が、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、プロパージン、補体因子Ｄ、補体因子Ｂ、ＭＢＬ、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２およびＭＡＳＰ３からなる群より選択される、請求項１００に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０２】
細胞表面受容体に結合する、請求項４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０３】
前記細胞表面受容体がＧタンパク質共役受容体である、請求項１０２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０４】
前記細胞表面受容体がケモカイン受容体またはサイトカイン受容体である、請求項１０２または１０３に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０５】
前記細胞表面受容体が受容体チロシンキナーゼである、請求項１０２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０６】
（ｉ）細胞死受容体、または（ｉｉ）細胞死受容体のリガンドに結合する、請求項４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０７】
増殖因子、ケモカイン、またはサイトカインに結合する、請求項４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０８】
免疫グロブリン分子に結合する、請求項４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１０９】
前記免疫グロブリン分子がＩｇＥ分子である、請求項１０８に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１１０】
請求項１から４８のいずれか一項に記載のポリペプチド；または
請求項４９から１０９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体
をコードする核酸。
【請求項１１１】
請求項１１０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１１２】
前記核酸が発現制御配列に作動可能に連結されている、請求項１１１に記載のベクター。
【請求項１１３】
請求項１１１または１１２に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１１４】
ポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された抗体を産生させるための方法であって、請求項１１３に記載の細胞を、該ポリペプチドまたは該遺伝子工学的に操作された抗体の発現を可能にするのに好適な条件下で培養する工程を含む、方法。
【請求項１１５】
前記培養された細胞から、または該細胞を培養した培地から、前記ポリペプチドまたは前記遺伝子工学的に操作された抗体を単離する工程をさらに含む、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
請求項１１４または１１５に記載の方法により産生された、単離されたポリペプチドまたは単離された遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１１７】
ドナー軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域は、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない、方法。
【請求項１１８】
前記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域と相補的な重鎖抗体可変領域または重鎖抗体可変領域をコードする核酸を取得して、遺伝子工学的に操作された抗体を作製する工程をさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
誘導選択を用いて前記重鎖抗体可変領域を取得する、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記重鎖抗体可変領域が遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域である、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２１】
前記遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域の作製が、
（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された抗体可変領域が、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された抗体可変領域は、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない、方法。
【請求項１２３】
前記遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域と相補的な軽鎖抗体可変領域を取得し、遺伝子工学的に操作された抗体を作製する工程をさらに含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
誘導選択を用いて、前記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を取得する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記軽鎖抗体可変領域が、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域である、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２６】
前記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域の作製が、
（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域が、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔの定義に従って定義される、請求項１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａの定義に従って定義される、請求項１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域を産生させる工程をさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１３１】
前記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域を細胞中で産生させる、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記遺伝子工学的に操作された抗体重鎖可変領域を産生させる工程をさらに含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１３３】
前記遺伝子工学的に操作された抗体重鎖可変領域を細胞中で産生させる、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記細胞から、または該細胞を培養した培地から、前記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域または前記遺伝子工学的に操作された重鎖可変領域を単離する工程をさらに含む、請求項１３０から１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記遺伝子工学的に操作された抗体を産生させる工程をさらに含む、請求項１１８または１２３に記載の方法。
【請求項１３６】
前記遺伝子工学的に操作された抗体を細胞中で産生させる、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記細胞から、または該細胞を培養した培地から、前記遺伝子工学的に操作された抗体を単離する工程をさらに含む、請求項１３５または１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記遺伝子工学的に操作された抗体が前記ドナー抗体と同じ抗原に結合するか否かを決定する工程をさらに含む、請求項１３５から１３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記遺伝子工学的に操作された抗体が、同じ抗原に対する前記ドナー抗体の親和性と比較して標的抗原に対するより高い親和性を有する、請求項１３５から１３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４０】
前記遺伝子工学的に操作された抗体に結合する抗体が、該遺伝子工学的に操作された抗体をヒトに投与した後に産生されるか否かを決定する工程をさらに含む、請求項１３５から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記遺伝子工学的に操作された抗体を作り変える工程をさらに含む、請求項１３５から１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記作り変えが、フレームワーク領域の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記作り変えが、フレームワーク領域の少なくとも２つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１または１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記作り変えが、少なくとも２つの異なるフレームワーク領域中の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記作り変えが、フレームワーク領域中の１つまたは複数のアミノ酸を置換する工程を含まない、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
前記作り変えが、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１または１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
前記作り変えが、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも２つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１、１４５または１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記作り変えが、ＣＤＲの少なくとも１つのアミノ酸位置を置換する工程を含み、該ＣＤＲが、Ｋａｂａｔの定義またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項１４６または１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記作り変えが、前記重鎖可変領域の位置２８および３０（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の一方または両方のアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記作り変えが、少なくとも２つの異なるＣＤＲ中の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１または１４５から１４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５１】
前記作り変えが、前記重鎖可変領域の位置２７、２８、３０、７１または７８（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１から１４４または１４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５２】
前記作り変えが、前記遺伝子工学的に操作された抗体の前記重鎖可変領域の位置２７、２８または３０（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、請求項１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５３】
前記作り変えが、少なくとも１つのスペーサーアミノ酸配列を、前記遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域の一方または両方に導入する工程を含む、請求項１４１から１５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５４】
フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、前記交換前に置換する、請求項１４１から１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５５】
フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、前記交換後に置換する、請求項１４１から１５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５６】
前記アクセプター抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列が請求項１に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項１１７から１２２または１２６から１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
前記アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列が請求項２４に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項１２１から１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記アクセプター抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列が請求項１に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含み、前記アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列が請求項２４に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、請求項１１７から１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、
ここで、ＬＦＲ１は、配列番号９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は、配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＬＣＤＲ１はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該軽鎖ポリペプチドは配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、
ここで、ＨＦＲ１は、配列番号１３、１７または１９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該重鎖ポリペプチドは配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含まず、
該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低く、該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と同じ抗原に結合する、遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１６０】
請求項１５９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体であって、
（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が単一のドナー抗体に由来する、ならびに
（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が単一のドナー抗体に由来する、
のうち一方または両方を満たす、遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項１６１】
前記軽鎖ＣＤＲおよび前記重鎖ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、請求項１５９または１６０に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２０１０年４月３０日に出願された米国仮出願第６１／３３０，２６１号の利益を主張する。上記米国仮出願の全教示は、参考として本明細書に援用される。
【０００２】
（配列表）
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂによって提出され、その全容が参考として本明細書に援用される、配列表を含む。２０１１年４月２９日に作成されたＡＳＣＩＩコピーには、ＡＬＸＮ１５５Ｗ．ｔｘｔとの名前が付けられており、サイズは２９，９０８バイトである。
【０００３】
（技術分野）
本発明の分野は、医学、免疫学、分子生物学、およびタンパク質化学である。
【背景技術】
【０００４】
ヒトへのげっ歯類抗体（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）の投与は一般に、抗げっ歯類免疫グロブリン抗体のヒトにおける産生をもたらす。抗げっ歯類抗体は、治療抗体の任意の潜在的な治療的利益を中和し得る。ヒトに投与された他の種類の非ヒト抗体（例えば、サル抗体）についても同じプロセスが起こる。この問題を克服するために、非ヒト抗体を、例えば、キメラヒト抗体またはＣＤＲ移植ヒト抗体として再度遺伝子工学的に操作することができる。ヒトキメラ抗体においては、可変領域は非ヒト起源（例えば、マウス起源）のものであり、定常領域はヒト起源のものである。ヒト化抗体とも呼ばれることが多いＣＤＲ移植抗体の作製は、完全なヒトアクセプター抗体のＣＤＲが非ヒトドナー抗体のＣＤＲで交換されるより複雑なプロセスである。しかしながら、ヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）応答は、これらの再度遺伝子工学的に操作された抗体変異体のそれぞれについて依然として報告されている。例えば、非特許文献１は、ヒト化抗Ａ３３抗体が、ヒト結腸癌患者に投与した場合、７３％の患者においてＨＡＨＡ応答を惹起したと記載している。別の例では、キメラ抗ＴＮＦ抗体Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）は、単剤療法の慢性関節リウマチ患者の最大５３％において、メトトレキサートとの組合せ療法で投与した場合には、患者の１５％においてＨＡＨＡ応答を誘発することが示された（例えば、非特許文献２を参照されたい）。強直性脊椎炎を有する患者の２６％もが、薬剤の反復投与の際にＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）に対する抗体を生じることがわかった。非特許文献３は、完全ヒト化抗体であるアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））を受ける患者において、ヒト抗アダリムマブ抗体の発生率は約６％であると報告した。Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）と同様、アダリムマブに対するＨＡＨＡ応答のより少ない発生が、抗体をメトトレキサートと共に投与した場合に観察された（非特許文献２、上掲）。しかしながら、Ａａｒｄｅｎらは、アダリムマブに対するＨＡＨＡ応答のほぼ２０％が中和していることを見出した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｗｅｌｔら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２００３年）９巻：１３３８〜１３４６頁
【非特許文献２】Ａａｒｄｅｎら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００８年）２０巻：４３１〜４３５頁
【非特許文献３】Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｅｍｉｎ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ（２００５年）３４巻：１９〜２２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
かくして、ヒト患者における免疫原性を低下させるための治療抗体、特に、長期投与される治療抗体をヒト化するための改善された方法の必要性が明らかに依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、少なくとも部分的には、ヒト化抗Ｃ５抗体エクリズマブがヒトにおいて非常に低レベルの免疫原性を示すという本発明者らによる発見に基づく。添付の実施例に詳述されるように、１３０を超える治療用量のエクリズマブを、数年間の経過にわたって発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）を有する個々の患者に投与した。この患者にメトトレキサートなどの免疫抑制剤を同時投与しなかった。血液試料を患者から取得し、試料がエクリズマブに結合する抗体を含有するか否かを決定するために分析した。そのような抗体の存在は、エクリズマブに対するヒト抗ヒト抗体応答を示唆する。わずか１．２％の患者（１６１人中２人）が、低いが、検出可能なレベルの、エクリズマブに結合する抗体を有することがわかった。しかしながら、さらなる分析により、２つの血液試料はいずれもエクリズマブの治療効果を中和することができる抗体を含有しないことが確認された。かくして、本発明者らは、ヒトにおいて低レベルの免疫原性も示すさらなる治療抗体を作製するための足場として、エクリズマブを用いることができると判断した。従って、本開示は、免疫原性が低下したアクセプター抗体足場上に移植されたドナー抗体のＣＤＲを含み、ヒトにおけるドナー抗体の免疫原性と比較して、ヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された抗体を特徴とする。遺伝子工学的に操作された抗体は、特にそれらを長期投与する場合、ヒトにおける中和抗抗体応答を惹起することが公知であり、予測される、または予期されるドナー抗体に由来するものであってよい。本明細書に記載されるように、ドナー抗体は、例えば、非ヒト抗体（例えば、げっ歯類抗体もしくは非ヒト霊長類抗体）またはヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）応答（例えば、ヒトにおけるドナー抗体の治療効果を中和するＨＡＨＡ応答）を生成することがわかっているヒト化抗体もしくは完全ヒト抗体であってよい。ドナー抗体および／または得られる遺伝子工学的に操作された抗体は、限定されるものではないが、癌、感染、代謝障害、炎症状態、自己免疫疾患、神経障害、血液障害、および心血管障害などのヒト被験者における任意の様々な疾患の治療または診断にとって有用である抗体であってよい。
【０００８】
実施例に考察されるように、エクリズマブはＩ．２３  Ｉｇ軽鎖分子から誘導された軽鎖フレームワーク領域のセットと、Ｈ２０Ｃ３  Ｉｇ重鎖分子から誘導された重鎖フレームワーク領域のセットとを有するヒト化抗体である。Ｈ２０Ｃ３重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｗｅｎｇら（１９９２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４９巻（７号）：２５１８〜２５２９頁に提供されており、ＮＣＢＩ受託番号ＡＡＡ５２９８５の下でも入手可能である。Ｈ２０Ｃ３をコードする核酸配列は、対応するヒト生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子と約９８％類似する。Ｉ．２３軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｋｌｅｉｎら（１９９３年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３巻（１２号）：３２４８〜３２６２頁に部分的に記載されており、完全な配列はＮＣＢＩ受託番号ＣＡＡ５１１４５．１の下でも公共的に入手可能である。Ｉ．２３コード配列はヒト生殖細胞系列ＶκおよびＪκ遺伝子から誘導されたものであり、位置３８に生殖細胞系列配列からのただ１個のアミノ酸変化を含む。従って、エクリズマブ、Ｉ．２３および／またはＨ２０Ｃ３に由来するフレームワーク領域（エクリズマブの軽鎖または重鎖可変領域）を、ヒトにおいて低レベルの免疫原性を示す遺伝子工学的に操作された抗体の作製において用いることができる。実施例は、エクリズマブに由来する軽鎖フレームワーク領域１〜３および重鎖フレームワーク領域１〜３を含む、さらなる機能的ヒト化抗体の構築を記載する。いくつかの実施形態では、エクリズマブ、Ｉ．２３および／またはＨ２０Ｃ３の、全部ではないが、１つまたは複数のＣＤＲを、遺伝子工学的に操作された抗体の作製において用いることもできる。
【０００９】
一態様では、本開示は、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含むポリペプチド（例えば、軽鎖ポリペプチド）を特徴とする。軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られるが、但し、前記ポリペプチドは配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得ることができる。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの１つは、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来するものであってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの２つは、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来するものであってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの少なくとも２つは、同じドナー抗体に由来するものであってよい。いくつかの実施形態においては、ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来するものであってよい。
【００１１】
いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＫａｂａｔに従って定義される。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａに従って定義される。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ２は、配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ３は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ２は配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ２は配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は、配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ２は、配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ３は、配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ２は配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ３は配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ２は配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ３は配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記ポリペプチド（例えば、軽鎖ポリペプチド）は、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、例えば、前記ポリペプチドは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド定常領域は、ヒトアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域は、λ軽鎖定常領域またはκ軽鎖定常領域である。
【００１９】
別の態様では、本開示は、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含むか、またはそれからなるポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド）を特徴とする。重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から取得することができるか、もしくは取得され、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数はドナー抗体から取得されるが、但し、前記ポリペプチドは配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得ることができる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの１つは、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来するものであってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの２つは、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来するものであってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来するものであってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来するものであってよい。
【００２１】
いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＫａｂａｔに従って定義される。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａに従って定義される。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域およびＣＤＲはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は、配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ３は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ４は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ２は、配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ３は、配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＦＲ４は、配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ２は配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ３は配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ４は配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる；ＨＦＲ２は配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる；ＨＦＲ３は配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、ＨＦＲ４は配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、前記ポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド）は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、例えば、前記ポリペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの実施形態では、前記ポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド）は、免疫グロブリン分子のＦｃ部分を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭ重鎖ポリペプチド定常領域である。
【００３０】
別の態様では、本開示は、（ｉ）軽鎖ポリペプチドおよび（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、軽鎖ポリペプチドが以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３が配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数がドナー抗体から得られるが、但し、軽鎖ポリペプチドは配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、前記抗体を特徴とする。重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、ここで重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３は配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数はドナー抗体から得られるが、但し、重鎖ポリペプチドは配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない。
【００３１】
いくつかの実施形態では、軽鎖フレームワーク領域、重鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、および重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔの定義に従って定義される。いくつかの実施形態では、軽鎖フレームワーク領域、重鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、および重鎖ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａの定義に従って定義される。いくつかの実施形態では、軽鎖フレームワーク領域、重鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、および重鎖ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１は配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、表５に記載の重鎖フレームワーク領域と軽鎖フレームワーク領域との対のセットを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、例えば、抗体断片、例えば、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片であってもよい。
【００４４】
本明細書に記載の任意の遺伝子工学的に操作された抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドは互いに共有結合していてもよい。
【００４５】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は補体成分タンパク質に結合する。補体成分タンパク質は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、プロパージン、補体因子Ｄ、補体因子Ｂ、ＭＢＬ、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２、およびＭＡＳＰ３からなる群より選択されるものであってもよい。
【００４６】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は細胞表面受容体、例えば、Ｇタンパク質共役受容体、ケモカイン受容体、サイトカイン受容体、または受容体チロシンキナーゼに結合する。
【００４７】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、（ｉ）細胞死受容体（ｄｅａｔｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）または（ｉｉ）細胞死受容体のリガンドに結合する。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、増殖因子、ケモカイン、またはサイトカインに結合する。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、免疫グロブリン分子、例えば、ＩｇＥ分子に結合する。
【００４８】
さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載のポリペプチドのいずれか一つ（例えば、軽鎖ポリペプチドもしくは重鎖ポリペプチド）または（ｉｉ）本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体のいずれかをコードする核酸を特徴とする。また、前記核酸を含むベクターも特徴とする。ベクターは、発現ベクターであってよい。さらに、本開示は、前記核酸またはベクターを含む細胞を特徴とする。別の態様では、本開示は、ポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された抗体を産生させる方法を特徴とする。この方法は、前記ベクターを含有する上記細胞を、前記ベクター内に含まれた核酸によりコードされるポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された抗体の前記細胞による発現を可能にするのに好適な条件下で培養することを含む。前記方法はまた、培養された細胞から、または細胞を培養した培地から前記ポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された抗体を単離することを含んでもよい。また、前記方法により産生された、単離されたポリペプチドまたは単離された遺伝子工学的に操作された抗体も特徴とする。
【００４９】
別の態様では、本開示は、ドナー軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を作製する方法を特徴とする。この方法は、（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列または（ｉｉ）アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、（ｉｉｉ）少なくとも１個のドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列または（ｉｖ）ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、それによってドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製することとを含むが、但し、前記遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域が配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない。前記方法は、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域と相補的である、重鎖抗体可変領域、または重鎖抗体可変領域をコードする核酸を取得することにより、遺伝子工学的に操作された抗体を作製することを含んでもよい。
【００５０】
前記方法のいくつかの実施形態では、誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）を用いて、重鎖抗体可変領域を取得する。
【００５１】
前記方法のいくつかの実施形態では、重鎖抗体可変領域は、遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域である。
【００５２】
前記方法のいくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域の作製は、（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列または（ｉｉ）アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、（ｉｉｉ）少なくとも１個のドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列または（ｉｖ）ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、それによってドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製することとを含むが、但し、前記遺伝子工学的に操作された抗体可変領域が配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない。
【００５３】
さらに別の態様では、本開示は、ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する方法を特徴とする。この方法は、（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列または（ｉｉ）アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、（ｉｉｉ）少なくとも１個のドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列または（ｉｖ）ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、それによってドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製することとを含むが、但し、前記遺伝子工学的に操作された抗体可変領域が配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない。前記方法は、遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域と相補的な軽鎖抗体可変領域を取得することにより、遺伝子工学的に操作された抗体を作製することを含んでもよい。
【００５４】
前記方法のいくつかの実施形態では、誘導選択を用いて、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を取得する。
【００５５】
前記方法のいくつかの実施形態では、軽鎖抗体可変領域は、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域である。
【００５６】
前記方法のいくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域の作製は、（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列または（ｉｉ）アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、（ｉｉｉ）少なくとも１個のドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列または（ｉｖ）ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供することと、アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、それによってドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製することとを含むが、但し、前記遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域が配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない。
【００５７】
いくつかの実施形態では、前記方法は、遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域および／または遺伝子工学的に操作された抗体重鎖可変領域を産生させることを含む（軽鎖および重鎖可変領域は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の定常領域を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域を、細胞中で、または無細胞系を用いて産生させる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、前記方法は、前記細胞または前記細胞を培養した培地から、遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域および／または遺伝子工学的に操作された重鎖可変領域を単離することを含む。
【００５９】
いくつかの実施形態では、前記方法は、遺伝子工学的に操作された抗体を産生させることを含む。遺伝子工学的に操作された抗体を、細胞中で、または無細胞系を用いて産生させることができる。いくつかの実施形態では、前記方法は、前記細胞または前記細胞を培養した培地から、遺伝子工学的に操作された抗体を単離することを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、前記方法は、遺伝子工学的に操作された抗体がドナー抗体と同じ抗原に結合するか否かを決定することを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、同じ抗原に対するドナー抗体の親和性と比較して標的抗原に対してより高い親和性を有してもよい。
【００６１】
いくつかの実施形態では、前記方法は、遺伝子工学的に操作された抗体がヒトに投与された後に、遺伝子工学的に操作された抗体に結合する抗体が産生されるか否かを決定することを含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、前記方法は、遺伝子工学的に操作された抗体を作り変えることを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、フレームワーク領域の少なくとも１個のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、フレームワーク領域の少なくとも２個のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、少なくとも２個の異なるフレームワーク領域中の少なくとも１個のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、フレームワーク領域中の１つまたは複数のアミノ酸を置換することを含まない。
【００６３】
いくつかの実施形態では、作り変えは、少なくとも１個のＣＤＲの少なくとも１個のアミノ酸を置換することを含む。作り変えは、いくつかの実施形態では、少なくとも１個のＣＤＲの少なくとも２個のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、Ｋａｂａｔの定義またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義されるＣＤＲの少なくとも１個のアミノ酸位置で置換することを含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、作り変えは、重鎖可変領域の位置２８および３０（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の一方または両方のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、少なくとも２個の異なるＣＤＲ中の少なくとも１個のアミノ酸を置換することを含む。いくつかの実施形態では、作り変えは、重鎖可変領域の位置２７、２８、３０、７１または７８（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の少なくとも１個のアミノ酸を置換することを含む。
【００６５】
いくつかの実施形態では、作り変えは、少なくとも１個のスペーサーアミノ酸配列を、遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域の一方または両方に導入することを含む。
【００６６】
前記方法のいくつかの実施形態では、フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、交換前に置換する。いくつかの実施形態では、フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、交換後に置換する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、アクセプター抗体軽鎖可変領域は、本明細書に記載の軽鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列は、本明細書に記載の重鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含む。前記方法のいくつかの実施形態では、アクセプター抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列は、本明細書に記載の軽鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含み、アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列は、本明細書に記載の重鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含む。
【００６８】
さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）軽鎖ポリペプチドおよび（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、軽鎖ポリペプチドが以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含む、前記抗体を特徴とする。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１は配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し、ＬＦＲ２は配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し、ＬＦＲ３は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し、ＬＦＲ４は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し、ＬＣＤＲ１はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。前記軽鎖ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、前記重鎖ポリペプチドは、ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し；ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し；ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し；およびＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むが、０〜３個のアミノ酸置換を有し、ＨＣＤＲ１がドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２がドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３がドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含む。前記重鎖ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含まない。遺伝子工学的に操作された抗体は、ドナー抗体または複数のドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低く、遺伝子工学的に操作された抗体はドナー抗体または複数のドナー抗体と同じ抗原に結合する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は単一のドナー抗体に由来する、ならびに（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は単一のドナー抗体に由来する、のうちの一方または両方である。いくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する。
【００７０】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。相反する場合、定義を含む本明細書が制御するものとする。好ましい方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載のものと類似するか、または等価である方法および材料を、本明細書に開示される方法および組成物の実施または試験において用いることもできる。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により組入れられるものとする。
【００７１】
本開示の他の特徴および利点、例えば、ヒトにおける免疫原性を低下させた治療抗体を作製する方法は、以下の説明、実施例、および特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、エクリズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列（「Ｅｃｕ」）（配列番号２）と、Ｉ．２３免疫グロブリン軽鎖可変領域のアミノ酸配列（「Ｉ．２３」）（配列番号８）とのアラインメントを示す。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義に従って定義された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）−ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３をブラケットで同定する。軽鎖可変領域フレームワーク領域も示す。エクリズマブ配列に関するアミノ酸位置（Ｋａｂａｔの番号付けにより定義される）を、整列された配列の上に示す。
【図２】図２は、エクリズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列（「Ｅｃｕ」）（配列番号５）と、Ｈ２０Ｃ３免疫グロブリン重鎖可変領域のアミノ酸配列（「Ｈ２０Ｃ３」）（配列番号７）とのアラインメントを示す。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義に従って定義された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）−ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３をブラケットで同定する。重鎖可変領域フレームワーク領域も示す。エクリズマブ配列に関するアミノ酸位置（Ｋａｂａｔの番号付けにより定義される）を、整列された配列の上に示す。位置５２ａ、８２ａ、８２ｂ、８２ｃ、１００ａ、１００ｂ、１００ｃ、１００ｄ、および１００ｅも具体的に同定する。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
本開示は、遺伝子工学的に操作された抗体が誘導されたそれぞれのドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおいて低い免疫原性を示す遺伝子工学的に操作された抗体を提供する。いかなる意味でも限定を意図するものではないが、例示的組成物、ならびにその調製および使用のための方法を以下に詳述する。
【００７４】
（遺伝子工学的に操作された抗体）
本明細書で用いられる「遺伝子工学的に操作された抗体」は、アクセプター抗体足場の可変領域上に移植されたドナー抗体の１つまたは複数（例えば、２、３、４、５または６）のＣＤＲを含む抗体であり、その遺伝子工学的に操作された抗体はヒトにおけるドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い。遺伝子工学的に操作された抗体の構造は、以下の通りである。
【００７５】
遺伝子工学的に操作された抗体は、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含むか、またはそれからなる配列を有する軽鎖ポリペプチドを含む。ＬＦＲ１は軽鎖可変領域のフレームワーク１（ＦＲ１）のアミノ酸配列に対応し、ＬＦＲ２は軽鎖可変領域のフレームワーク２（ＦＲ２）のアミノ酸配列に対応し、ＬＦＲ３は軽鎖可変領域のフレームワーク３（ＦＲ３）のアミノ酸配列に対応し、ＬＦＲ４は軽鎖可変領域のフレームワーク４（ＦＲ４）のアミノ酸配列に対応する。ＬＣＤＲ１は軽鎖可変領域の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列に対応し、ＬＣＤＲ２は軽鎖可変領域の相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列に対応し、ＬＣＤＲ３は軽鎖可変領域の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列に対応する。遺伝子工学的に操作された抗体のＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３およびＬＦＲ４アミノ酸配列のうちの１つまたは複数（例えば、１個、２個、３個または４個全部）が、アクセプター抗体により寄与される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、またはＬＦＲ３のみがアクセプター抗体により寄与される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１およびＬＦＲ２がアクセプター抗体により寄与される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３がアクセプター抗体により寄与される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１およびＬＦＲ３がアクセプター抗体により寄与される。いくつかの実施形態では、ＬＦＲ４はアクセプター抗体により寄与されない。ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つまたは複数が、少なくとも１個（例えば、１個、２個または３個）のドナー抗体から寄与される。例えば、軽鎖ＣＤＲを、単一のドナー抗体から取得するか、またはいくつかの実施形態では、ＣＤＲを２個以上の異なるドナー抗体（例えば、同じ抗原に結合するが、異なる軽鎖ＣＤＲ配列を有する２個の抗体）から取得することができる。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲの少なくとも１個（例えば、１個、２個、または３個全部でさえ）を、アクセプター抗体から取得する。例えば、遺伝子工学的に操作された抗体は、ドナー抗体に由来するＬＣＤＲ３ならびにアクセプター抗体に由来するＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ２を有してもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、ドナー抗体に由来するＬＣＤＲ２ならびにアクセプター抗体に由来するＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ３を有してもよい。好適なアクセプター抗体およびドナー抗体は本明細書で詳述される。
【００７６】
ＣＤＲとフレームワーク領域との正確な境界は、様々な方法に従って異なるように定義されてきた。いくつかの実施形態では、軽鎖または重鎖可変ドメイン内のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置は、Ｋａｂａｔら［（１９９１年）「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、９１〜３２４２番、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ］により定義された通りであってよい。そのような場合、ＣＤＲは「ＫａｂａｔのＣＤＲ」（例えば、「ＫａｂａｔのＬＣＤＲ２」または「ＫａｂａｔのＨＣＤＲ１」）と呼ぶことができ、フレームワーク領域は「Ｋａｂａｔのフレームワーク領域」（例えば、「ＫａｂａｔのＬＦＲ１」または「ＫａｂａｔのＨＦＲ３」）と呼ぶことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖または重鎖可変領域のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置は、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ３４２巻：８７７〜８８３頁により定義された通りであってよい。従って、これらの領域は、それぞれ、「ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ」（例えば、「ＣｈｏｔｈｉａのＬＣＤＲ２」もしくは「ＣｈｏｔｈｉａのＨＣＤＲ３」）または「Ｃｈｏｔｈｉａのフレームワーク領域」（例えば、「ＣｈｏｔｈｉａのＬＦＲ１」もしくは「ＣｈｏｔｈｉａのＬＦＲ３」）と呼ぶことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖および重鎖可変領域のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置は、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義により定義された通りであってよい。そのような実施形態においては、これらの領域は、それぞれ、「Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せのＣＤＲ」または「Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せのフレームワーク領域」と呼ぶことができる。Ｔｈｏｍａｓら［（１９９６年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３３巻（１７／１８号）：１３８９〜１４０１頁］は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義に従うＣＤＲとフレームワーク領域との境界の同定を例示する。３つの前記定義のそれぞれを用いるＣＤＲおよびフレームワークの同定は、図１および２にも示される。
【００７７】
いくつかの実施形態では、軽鎖または重鎖可変ドメインを含むＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域の位置は、ＨｏｎｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｍ［（２００１年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９巻：６５７〜６７０頁］により定義された通りであってよい。
【００７８】
本明細書に記載され、実施例に例示されるように、マウス抗Ｃ５抗体のＬＣＤＲをＩ．２３  Ｉｇカッパ軽鎖分子のフレームワーク領域足場上に移植することにより、エクリズマブの軽鎖可変領域を作製した。エクリズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
【００７９】
【化１】
2013531476.tif 000002
Ｉ．２３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
【００８０】
【化２】
2013531476.tif 000003
エクリズマブのＬＦＲ２アミノ酸配列は、１個のアミノ酸：アルギニンの代わりに位置３８のグルタミンにより対応するＩ．２３  ＬＦＲ２のアミノ酸配列と異なる。
【００８１】
いかなる特定の理論または作用機構にも束縛されるものではないが、エクリズマブまたはＩ．２３に由来する軽鎖フレームワーク領域配列（すなわち、ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３および／またはＬＦＲ４）は、ドナー抗体の免疫原性のレベルと比較してヒトにおいて低下したレベルの免疫原性を示す遺伝子工学的に操作された抗体の調製において有用であると考えられる。かくして、いくつかの実施形態では、ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３および／またはＬＦＲ４は、エクリズマブおよび／またはＩ．２３から誘導された対応する軽鎖フレームワーク領域であってよい。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａにより定義された、エクリズマブおよびＩ．２３軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列を、表１に記載する。
【００８２】
【表１−１】
2013531476.tif 000004
【００８３】
【表１−２】
2013531476.tif 000005
かくして、いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ１エレメント；配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ２エレメント；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ３エレメント；および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ１エレメント；配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ２エレメント；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ３エレメント；および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００８５】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ１エレメント；配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ２エレメント；配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ３エレメント；および配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ１エレメント；配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ２エレメント；配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ３エレメント；および配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＬＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含まないか、またはそれからならない。
【００８８】
軽鎖ポリペプチドは、定常領域を含んでもよい。例えば、軽鎖定常領域は、λ軽鎖ポリペプチド定常領域またはκ軽鎖定常領域であってもよい。いくつかのヒトλおよびκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列は当業界で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）；上掲に記載されている。遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含んでもよい：
【００８９】
【化３】
2013531476.tif 000006
配列番号３は、エクリズマブの軽鎖の定常領域である。
【００９０】
本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体はまた、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含むか、またはそれからなるアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチドを含んでもよい。ＨＦＲ１は重鎖可変領域のフレームワーク１（ＦＲ１）のアミノ酸配列に対応し、ＨＦＲ２は重鎖可変領域のフレームワーク２（ＦＲ２）のアミノ酸配列に対応し、ＨＦＲ３は重鎖可変領域のフレームワーク３（ＦＲ３）のアミノ酸配列に対応し、ＨＦＲ４は重鎖可変領域のフレームワーク４（ＦＲ４）のアミノ酸配列に対応する。ＨＣＤＲ１は重鎖可変領域の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）のアミノ酸配列に対応し、ＨＣＤＲ２は重鎖可変領域の相補性決定領域２（ＣＤＲ２）のアミノ酸配列に対応し、ＨＣＤＲ３は重鎖可変領域の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）のアミノ酸配列に対応する。ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４アミノ酸配列は、アクセプター抗体から寄与されるが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列は少なくとも１個（例えば、１個、２個、または３個）のドナー抗体から寄与されるものであってよい。例えば、重鎖ＣＤＲを単一のドナー抗体から取得するか、またはいくつかの実施形態では、ＣＤＲを２個以上の異なるドナー抗体（例えば、同じ抗原に結合するが、異なる重鎖ＣＤＲ配列を有する２個の抗体）から取得することができる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲの少なくとも１個は、アクセプター抗体から保持される（または寄与される）。例えば、ＨＣＤＲ３は、ドナー抗体に由来するものであってよく（例えば、ＨＣＤＲ３が、ドナー抗体が結合する抗原の多くの結合エネルギーをドナー抗体に寄与することが決定された場合）、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２はアクセプター抗体から保持されるものであってよい。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３はそれぞれ、単一のドナー抗体から寄与される。好適なアクセプター抗体およびドナー抗体は、本明細書で詳述される。
【００９１】
本明細書に記載され、実施例に例示されるように、マウス抗Ｃ５抗体のＨＣＤＲを、Ｈ２０Ｃ３  Ｉｇ分子の重鎖フレームワーク領域足場上に移植することにより、エクリズマブの重鎖可変領域を作製した。エクリズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
【００９２】
【化４】
2013531476.tif 000007
Ｈ２０Ｃ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は以下の通りである：
【００９３】
【化５】
2013531476.tif 000008
Ｋａｂａｔにより定義されたように、エクリズマブのＨＦＲ１のアミノ酸配列は、２個のアミノ酸によりＨ２０Ｃ３のＨＦＲ１の対応するアミノ酸配列と異なる。具体的には、Ｈ２０Ｃ３  ＶＨ領域（ＫａｂａｔのＦＲ１）の位置２８のトレオニンおよび位置３０のトレオニンは、エクリズマブのＫａｂａｔのＦＲ１配列中では、それぞれ、イソロイシンおよびセリンである。残りのフレームワーク領域（ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４）は、Ｋａｂａｔの定義の下ではエクリズマブとＨ２０Ｃ３の間で同一である。Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義の下では、任意のフレームワーク領域について、エクリズマブのアミノ酸配列と、Ｈ２０Ｃ３のアミノ酸配列との間に差異はない（図２を参照されたい）。
【００９４】
いかなる特定の理論または作用機構にも束縛されるものではないが、エクリズマブまたはＨ２０Ｃ３に由来する重鎖フレームワーク領域配列は、ドナー抗体の免疫原性のレベルと比較して、ヒトにおいて低下したレベルの免疫原性を示す遺伝子工学的に操作された抗体の調製において有用であると考えられる。かくして、いくつかの実施形態では、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３および／またはＨＦＲ４は、エクリズマブおよび／またはＨ２０Ｃ３から誘導された対応する重鎖フレームワーク領域であってよい。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａにより定義された、エクリズマブおよびＨ２０Ｃ３重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列を、表２に記載する。
【００９５】
【表２−１】
2013531476.tif 000009
【００９６】
【表２−２】
2013531476.tif 000010
かくして、いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体のＨＦＲ１は、例えば、配列番号１３、１７または１９に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれであってもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体のＨＦＲ２は、例えば、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれであってもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体のＨＦＲ３は、例えば、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれであってもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体のＨＦＲ４は、例えば、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、またはそれであってもよい。
【００９７】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ１エレメント；配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ２エレメント；配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ３エレメント；および配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ１エレメント；配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ２エレメント；配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ３エレメント；および配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ１エレメント；配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ２エレメント；配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ３エレメント；および配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ１エレメント；配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ２エレメント；配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ３エレメント；および配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の重鎖ポリペプチドは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ１エレメント；配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ２エレメント；配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ３エレメント；および配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むか、もしくはそれからなるＨＦＲ４エレメントを含むか、またはそれからなる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、重鎖ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含まないか、またはそれからならない。
【０１０３】
重鎖ポリペプチドは、定常領域（例えば、重鎖定常領域１（ＣＨ１）、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、重鎖定常領域３（ＣＨ３）、重鎖定常領域４（ＣＨ４）、または前記のいずれかの組合せ）を含んでもよい。重鎖ポリペプチドは、免疫グロブリン分子のＦｃ部分を含んでもよい。Ｆｃ領域は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ免疫グロブリン分子に由来するＦｃ領域またはこれらのそれぞれの部分の組合せであってよい。いくつかのヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列は、当業界で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、上掲に記載されている。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、重鎖ポリペプチドは、ハイブリッド定常領域、またはその一部、例えば、Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域を含んでもよい（例えば、Ｂｕｒｔｏｎら（１９９２年）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎ．  ５１巻：１〜１８頁；Ｃａｎｆｉｅｌｄら（１９９１年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３巻：１４８３〜１４９１頁；およびＭｕｅｌｌｅｒら（１９９７年）Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３４巻（６号）：４４１〜４５２頁を参照されたい）。例えば（およびＫａｂａｔの番号付けによれば）、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４定常領域はＧ２４９Ｇ２５０残基を含むが、ＩｇＧ２定常領域は残基２４９を含まないが、Ｇ２５０を含む。２４９〜２５０の領域がＧ２配列に由来するＧ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域では、定常領域をさらに改変して、位置２４９にグリシン残基を導入して、Ｇ２４９／Ｇ２５０を有するＧ２／Ｇ４融合物を作製することができる。Ｇ２４９／Ｇ２５０を含む他の定常ドメインハイブリッドはまた、本開示に従う遺伝子工学的に操作された抗体の一部であってよい。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる定常領域を含む：
【０１０６】
【化６】
2013531476.tif 000011
配列番号６は、エクリズマブの重鎖定常領域のアミノ酸配列を示す。
【０１０７】
本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体は、いくつかの実施形態では、軽鎖フレームワーク領域と重鎖フレームワーク領域との特定の例示的対を含む。例えば、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体は、エクリズマブから誘導された「Ｋａｂａｔ」軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖ポリペプチドと、エクリズマブから誘導された「Ｋａｂａｔ」重鎖フレームワーク領域を含む重鎖ポリペプチドとを含んでもよい。別の例では、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体は、Ｉ．２３軽鎖から誘導された「Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ」軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖ポリペプチドと、Ｈ２０Ｃ３重鎖から誘導された「Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ」重鎖フレームワーク領域を含む重鎖ポリペプチドとを含んでもよい。さらに別の例では、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体は、Ｉ．２３軽鎖から誘導された「Ｋａｂａｔ」軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖ポリペプチドと、エクリズマブから誘導された「Ｋａｂａｔ」重鎖フレームワーク領域を含む重鎖ポリペプチドとを含んでもよい。遺伝子工学的に操作された抗体の調製における使用のための、軽鎖および重鎖フレームワーク領域の例示的な対、Ｋａｂａｔの定義またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義の下で定義される領域を表３に記載する。
【０１０８】
【表３】
2013531476.tif 000012
遺伝子工学的に操作された抗体の調製における使用のための、軽鎖および重鎖フレームワーク領域の例示的な対、Ｃｈｏｔｈｉａの下で定義される領域を表４に記載する。
【０１０９】
【表４】
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遺伝子工学的に操作された抗体の調製における使用のための、軽鎖および重鎖フレームワーク領域の対のさらなる例、Ｃｈｏｔｈｉａの下で定義される領域を表５に記載する。
【０１１０】
【表５−１】
2013531476.tif 000014
【０１１１】
【表５−２】
2013531476.tif 000015
【０１１２】
【表５−３】
2013531476.tif 000016
【０１１３】
【表５−４】
2013531476.tif 000017
【０１１４】
【表５−５】
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【０１１５】
【表５−６】
2013531476.tif 000019
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の上記フレームワーク領域の１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つ全部）を、１つまたは複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上）のアミノ酸置換を含むように変化させることができる。これらの１個以上の置換を含む遺伝子工学的に操作された抗体は、「遺伝子工学的に操作された抗体の変異体」と呼ばれることもある。例えば、遺伝子工学的に操作された抗体が抗原に対するドナー抗体の親和性と比較して低い親和性でドナー抗体により認識される抗原に結合する場合、そのような置換を導入することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体の変異体のフレームワーク領域の１つまたは複数は、１０個より少ない（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個より少ない）置換を含む。いくつかの実施形態では、ただ１つのフレームワーク領域が、１個のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、２つ以上のフレームワーク領域が、１個のアミノ酸置換を含む。必要とされることの全部は、得られる遺伝子工学的に操作された抗体が、ヒトに投与した場合、ヒトにおいて対応するドナー抗体よりも免疫原性が低いことである。いくつかの実施形態では、上記フレームワーク領域アミノ酸配列は置換されない。
【０１１６】
アミノ酸置換は保存的置換であっても、非保存的置換であってもよい。保存的置換は、典型的には以下の基内の置換を含む：グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシンおよびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリンおよびトレオニン；リシン、ヒスチジンおよびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。
【０１１７】
軽鎖および重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は、様々なセグメントの間（例えば、遺伝子工学的に操作された抗体のドナーＣＤＲとアクセプターフレームワーク領域との間）に「スペーサー」として挿入された１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上）のアミノ酸を含んでもよい。スペーサー配列の挿入は、例えば、ＣＤＲ移植プロセス中に失われた可能性がある抗原結合親和性を回復させるのに有用であり得る（下記を参照されたい）。例えば、ＭａｙｎａｒｄおよびＧｅｏｒｇｉｏｕ（２００１年）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ２巻：３３９〜３７６頁を参照されたい。例えば、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＦＲ１とＬＣＤＲ１との間に挿入することができる。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＣＤＲ１とＬＦＲ２との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＦＲ２とＬＣＤＲ２との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＣＤＲ２とＬＦＲ３との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＦＲ３とＬＣＤＲ３との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＬＣＤＲ３とＬＦＲ４との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＦＲ１とＨＣＤＲ１との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＣＤＲ１とＨＦＲ２との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＦＲ２とＨＣＤＲ２との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＣＤＲ２とＨＦＲ３の間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＦＲ３とＨＣＤＲ３との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサーアミノ酸配列を、ＨＣＤＲ３とＨＦＲ４との間に挿入する。いくつかの実施形態では、スペーサー配列を、軽鎖ポリペプチドのセグメントの全部および／または重鎖ポリペプチドのセグメントの全部の間に挿入する。いくつかの実施形態では、軽鎖または重鎖可変領域の構成エレメントのいずれの間にもスペーサーを導入しない。１つまたは複数のスペーサー配列を含む遺伝子工学的に操作された抗体に必要とされることの全部は、抗体が（ａ）ドナー抗体と同じ抗原に結合する能力を保持すること、および（ｂ）ヒトにおけるドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低いことである。
【０１１８】
本明細書で用いられる用語「抗体」とは、全抗体分子もしくは無傷の抗体分子（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥ）またはその任意の抗原結合断片を指す。用語抗体としては、例えば、キメラ化抗体またはキメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、および完全ヒト抗体が挙げられる。抗体の抗原結合断片としては、例えば、一本鎖抗体、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、またはＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。ｓｃＦｖ断片は、ｓｃＦｖが誘導される抗体の重鎖および軽鎖可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。さらに、イントラボディ、ミニボディ、トリアボディおよびダイアボディ（例えば、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら（２００１年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８巻（１号）：４７〜６６頁；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１巻（１号）：１７７〜１８９頁；Ｐｏｌｊａｋ（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２巻（１２号）：１１２１〜１１２３頁；ＲｏｎｄｏｎおよびＭａｒａｓｃｏ（１９９７年）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５１巻：２５７〜２８３頁（それぞれの開示はその全体が参照により本明細書に組入れられるものとする）を参照されたい）も、抗体の定義に含まれ、本明細書に記載の方法における使用と適合する。二特異的抗体も、用語「抗体」により包含される。二特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナルの、好ましくはヒトまたはヒト化抗体である。
【０１１９】
本開示はまた、Ｗｕら（２００７年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５巻（１１号）：１２９０〜１２９７頁に記載の四価二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子などの変異形態の二特異的抗体も包含する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体に由来する２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技術によって直接に、または短いリンカーを介して、直列に連結され、次いで、軽鎖定常ドメインに連結されるように設計される。２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製する方法は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０８／０２４１８８号および同第ＷＯ０７／０２４７１５号（それぞれの開示はその全体が参照により本明細書に組入れられるものとする）にさらに記載されている。
【０１２０】
本明細書で用いられる「ドナー抗体」は、実務者が本明細書に記載の方法を用いて、（ｉ）ドナー抗体と同じ抗原に結合し、（ｉｉ）ドナー抗体と比較して１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６もしくは７つ以上）の改善された特性を有する（特に、ドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性のレベルが低下した）抗体の変異体（遺伝子工学的に操作された抗体）を取得することを望む抗体である。ドナー抗体は、任意の様々な種、例えば、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、マカク、キツネザル、類人猿、オランウータン、ゴリラもしくはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラットおよびマウスなどの哺乳動物中で作製するか、またはそれから誘導することができる。いくつかの例では、ドナー抗体は、ヒトに投与した場合、ヒトにおける中和ＨＡＨＡ応答を惹起するヒト化抗体または完全ヒト抗体であってよい。ヒト化抗体は、１つまたは複数の非ヒト生殖細胞系列フレームワーク領域を含む変化した抗体であってよい。完全ヒト抗体は、１つまたは複数の非生殖細胞系列ヒトフレームワーク領域を含むものであってよい。例えば、ヒトドナー抗体は、体細胞超変異にかけられ、かくして、もはや生殖細胞系列自体ではなくなった１つまたは複数のフレームワーク領域を含んでもよい（例えば、Ａｂｂａｓ、ＬｉｃｈｔｍａｎおよびＰｏｂｅｒ（２０００年）「Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、第４版、Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ＩＳＢＮ：０７２１６８２３３２）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、ヒト化抗体でも、完全ヒト抗体でもない。
【０１２１】
遺伝子工学的に操作された抗体は、抗原に特異的に結合する任意のドナー抗体から誘導することができ、その抗原へのそのようなドナー抗体の結合は、ヒトにおける治療効果をもたらすか、またはもたらすと予期される。例えば、ドナー抗体は微生物病原体（例えば、ウイルス、細菌、原生動物、または寄生虫）タンパク質、例えば、破傷風毒素；ジフテリア毒素；または任意の様々なウイルス表面タンパク質（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）糖タンパク質Ｂ、ＨおよびｇＣＩＩＩ；ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１）エンベロープ糖タンパク質；ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）エンベロープ糖タンパク質；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）エンベロープ糖タンパク質；エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）エンベロープ糖タンパク質；水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）エンベロープ糖タンパク質；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）エンベロープ糖タンパク質；インフルエンザウイルス糖タンパク質；および肝炎ウイルスファミリー表面抗原）に結合することができる。そのようなドナー抗体から産生された遺伝子工学的に操作された抗体は、ヒトにおける微生物感染を治療するのに有用であると予期される。いくつかの実施形態では、前記抗体は、限定されるものではないが、プロテアーゼ耐性タンパク質（ＰｒＰＳｃ）などの感染性タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、増殖因子、サイトカイン、またはケモカインに結合することができる。増殖因子としては、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）；ニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦまたはＦＧＦ２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、およびニューレグリン（例えば、ＮＲＧ１、ＮＲＧ２、ＮＲＧ３、またはＮＲＧ４）が挙げられ得る。サイトカインとしては、例えば、インターフェロン（例えば、ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦαまたはＴＮＦβ）、およびインターロイキン（例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−３３（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３またはＩＬ−１５））が挙げられる。ケモカインとしては、例えば、Ｉ−３０９、ＴＣＡ−３、ＭＣＰ−Ｉ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、Ｃ１０、ＭＲＰ−２、ＭＡＲＣ、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−２、ＭＲＰ−２、ＣＣＦ１８、エオタキシン、ＭＣＰ−５、ＭＣＰ−４、ＮＣＣ−Ｉ、ＨＣＣ−Ｉ、ロイコタクチン−１、ＬＥＣ、ＮＣＣ−４、ＣＣＬ２１、ＴＡＲＣ、ＰＡＲＣまたはエオタキシン−２が挙げられる。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、例えば、Ｃ１、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８��Ｃ９、プロパージン、補体因子Ｂ、補体因子Ｄ、ＭＢＬ、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２、またはＭＡＳＰ３などのヒト補体タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥのＦｃ部分などの抗体のＦｃ部分に結合する。ドナー抗体は、細胞表面タンパク質に結合することができる。細胞表面タンパク質としては、例えば、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、ケモカイン受容体、サイトカイン受容体、または受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が挙げられる。ケモカイン受容体は、例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、またはＣＣＸ−ＣＫＲ２であってよい。サイトカイン受容体としては、例えば、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＴＮＦβＲ１、ＴＮＦβＲ２、ｃ−ｋｉｔ受容体、インターフェロン（ＩＦＮαまたはＩＦＮβ）受容体、ＩＦＮガンマ受容体、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）受容体、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）受容体、およびプロラクチン受容体が挙げられる。ＲＴＫとしては、例えば、ＥＧＦ受容体、インスリン受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、およびＨＧＦ受容体が挙げられる。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ／ＥｒｂＢ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４に結合する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、限定されるものではないが、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、ＦＡＰ、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＡＰ−Ｉ、ＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ＡＭＬＩ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、ＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、
【０１２３】
【化７】
2013531476.tif 000020
などの癌抗原（例えば、癌抗原の変異形態）に結合する。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ドナー抗体は、
【０１２５】
【化８】
2013531476.tif 000021
；補体成分Ｃ３；補体成分Ｃ３ａ；補体成分Ｃ３ｂ；補体成分Ｃ４ａ；補体成分Ｃ４ｂ；補体成分Ｃ５；補体成分Ｃ５ａ；補体成分Ｃ５ｂ；補体成分Ｃ６；補体成分Ｃ７；補体成分Ｃ８；補体成分Ｃ９；補体因子Ｄ；補体因子Ｂ；
【０１２６】
【化９】
2013531476.tif 000022
【０１２７】
【化１０】
2013531476.tif 000023
【０１２８】
【化１１】
2013531476.tif 000024
からなる群より選択されるヒトタンパク質に結合することができる。
【０１２９】
好適なドナー抗体はまた、臨床試験における、または臨床使用のための開発における使用のために認可される様々な治療抗体も含む。そのような抗体としては、例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、非ホジキンリンパ腫を治療するために認可されたキメラ抗ＣＤ２０抗体；ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂにより現在開発中の抗ＣＤ２０；ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）；ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、Ｉｎｃ．）；ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）；ＰＲＯ７０７６９（国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６号）；トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、乳癌を治療するために認可されたヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより現在開発中のペルツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４、Ｏｍｎｉｔａｒｇ（登録商標））；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎにより現在開発中のＡＢＸ−ＥＧＦ；Ｇｅｎｍａｂにより現在開発中のＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ；４２５、ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００、およびＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）（米国特許第５，５５８，８６４号；Ｍｕｒｔｈｙら（１９８７年）Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ２５２巻（２号）：５４９〜６０頁；Ｒｏｄｅｃｋら（１９８７年）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３５巻（４号）：３１５〜２０頁；およびＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ４巻（７号）：７７３〜８３頁を参照されたい）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（国際特許出願第ＷＯ９５／２００４５号；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら（１９９３年）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  ２２巻（１〜３号）：１２９〜４６頁；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら（１９９３年）  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ６７巻（２号）：２４７〜５３頁；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら（１９９６年）  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７３巻（２号）：２２８〜３５頁；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉら（２００３年）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １０５巻（２号）：２７３〜８０頁）；ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈＲ３（ＹＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｎａｄａ  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、Ｃｕｂａ）（米国特許第５，８９１，９９６号；米国特許第６，５０６，８８３号；Ｍａｔｅｏら（１９９７年）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３巻（１号）：７１〜８１頁））；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈら（２００３年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００巻（２号）：６３９〜４４頁）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲ１−Ｉ（ＩＶＡＸ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ  ＷＯ０１６２９３１Ａ２）；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病の治療のために現在認可されているヒト化モノクローナル抗体であるアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）；Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎにより開発された抗ＣＤ３抗体であるムロモナブ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３（登録商標））；ＩＤＥＣ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧにより開発された抗ＣＤ２０抗体であるイブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈにより開発された抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体であるゲムツズマブオゾガミシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；Ｂｉｏｇｅｎにより開発された抗ＬＦＡ−３  Ｆｃ融合物であるアレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標））；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙにより開発されたアブシキシマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））；Ｎｏｖａｒｔｉｓにより開発されたバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅにより開発されたパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））；Ｃｅｎｔｏｃｏｒにより開発された抗ＴＮＦα抗体であるインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））；Ａｂｂｏｔｔにより開発された抗ＴＮＦα抗体であるアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））；Ｃｅｌｌｔｅｃｈにより開発された抗ＴＮＦα抗体であるＨｕｍｉｃａｄｅ（登録商標）；Ｃｅｎｔｏｃｏｒにより開発された完全ヒト抗ＴＮＦ抗体であるゴリムマブ（ＣＮＴＯ−１４８）；Ａｂｇｅｎｉｘにより開発されている抗ＣＤ１４７抗体；Ａｂｇｅｎｉｘにより開発されている抗ＩＬ８抗体であるＡＢＸ−ＩＬ８；Ａｂｇｅｎｉｘにより開発されている抗ＭＵＣ１８抗体であるＡＢＸ−ＭＡ１；Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発中の抗ＭＵＣ１であるペムツモマブ（Ｒｌ  ５４９、９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧｌ）；Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されている抗ＭＵＣ１抗体であるＴｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５Ｏ）；Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されているＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）；Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されているＨｕＢＣ−Ｉ；Ａｎｔｉｓｏｍａにより開発されているＴｈｉｏｐｌａｔｉｎ（ＡＳ１４０７）；Ｂｉｏｇｅｎ  ＩｄｅｃおよびＥｌａｎにより開発されているＡｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）（ナタリズマブ）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発されている抗ＴＧＦ−β２抗体であるＣＡＴ−１５２；Ａｂｂｏｔｔにより開発されている抗ＩＬ−１２  ｐ４０抗体であるＡＢＴ  ８７４（Ｊ６９５）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＧｅｎｚｙｍｅにより開発されている抗ＴＧＦβ１抗体であるＣＡＴ−１９２；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにより開発されている抗エオタキシン１抗体であるＣＡＴ−２１３；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．により開発されている抗Ｂｌｙｓ抗体であるＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（登録商標）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙおよびＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．により開発されている抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体であるＴＲＡＩＬ−ＲＩ  ｍＡｂ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによ��開発されている抗ＶＥＧＦ抗体であるＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発されている抗ＩｇＥ抗体であるＸｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）；ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＸｏｍａにより開発されている抗ＣＤ１１ａ抗体であるＲａｐｔｉｖａ（登録商標）（エファリズマブ）；ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されているＭＬＮ−０２抗体（以前はＬＤＰ−０２）；Ｇｅｎｍａｂにより開発されている抗ＣＤ４抗体であるＨｕＭａｘ  ＣＤ４；ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎにより開発されている抗ＩＬ−１５抗体であるＨｕＭａｘ−ＥＬ１５；ＧｅｎｍａｂおよびＭｅｄａｒｅｘ、ＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒにより開発されているＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ；ＧｅｎｍａｂおよびＡｍｇｅｎにより開発されているＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ；Ｇｅｎｍａｂにより開発されているＨｕＭａｘ−ＴＡＣ；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されている抗ＣＤ４０Ｌ抗体であるＤＤＥＣ−１３１；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されている抗ＣＤ４抗体であるＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されている抗ＣＤ８０抗体であるＢＤＥＣ−１１４；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓにより開発されている抗ＣＤ２３であるＩＤＥＣ−１５２；Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発されている抗イディオタイプ抗体であるＢＥＣ２；Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発されている抗ＫＤＲ抗体であるＩＭＣ−１Ｃｌ１；Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発されている抗ｆｌｋ−１抗体であるＤＣｌ０１；Ｉｍｃｌｏｎｅにより開発されている抗ＶＥカドヘリン抗体；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されている抗癌胎児抗原（ＣＥＡ）抗体であるＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（登録商標）（ラベツズマブ）；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されている抗ＣＤ２２抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標）（エプラツズマブ）；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されているＡＦＰ−Ｃｉｄｅ；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されているＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されているＬｋｏＣｉｄｅ；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓにより開発されているＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ；Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されている抗ＣＴＬＡ４抗体であるＭＤＸ−０１０；Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されている抗ＣＤ３０抗体であるＭＤＸ−０６０；Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されているＭＤＸ−０７０；Ｍｅｄａｒｅｘにより開発されているＭＤＸ−０１８；ＭｅｄａｒｅｘおよびＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓにより開発されている抗Ｈｅｒ２抗体であるＯｓｉｄｅｍ（登録商標）（ＩＤＭ−Ｉ）；ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂにより開発されている抗ＣＤ４抗体であるＨｕＭａｘ（登録商標）−ＣＤ４；ＭｅｄａｒｅｘおよびＧｅｎｍａｂにより開発されている抗ＥＬ１５抗体であるＨｕＭａｘ−ＩＬ１５；ＭｅｄａｒｅｘおよびＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎにより開発されている抗ＴＮＦα抗体であるＣＮＴＯ１４８；Ｃｅ���ｔｏｃｏｒ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎにより開発されている抗サイトカイン抗体であるＣＮＴＯ１２７５；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発されている抗細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−Ｉ）（ＣＤ５４）抗体であるＭＯＲ１０１およびＭＯＲ１０２；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓにより開発されている抗線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体であるＭＯＲ２０１；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発されている抗ＣＤ３抗体であるＮｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビシリズマブ）；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発されている抗ガンマインターフェロン抗体であるＨｕＺＡＦ（登録商標）；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓにより開発されている抗α５β１インテグリン抗体；Ｘｏｍａにより開発されている抗ＥｐＣＡＭ抗体であるＩＮＧ−Ｉ；ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＮｏｖａｒｔｉｓにより開発されたヒト化抗ＩｇＥ抗体であるＸｏｌａｉｒ（登録商標）（オマリズマブ）；ならびにＸｏｍａにより開発されている抗β２インテグリン抗体であるＭＬＮＯ１が挙げられる。
【０１３０】
ドナー抗体およびその対応する遺伝子工学的に操作された抗体の形態は同じであっても、または異なっていてもよいことが理解される。例えば、いくつかの実施形態では、ドナー抗体およびその対応する遺伝子工学的に操作された抗体は、全抗体である。いくつかの実施形態では、ドナー抗体は抗体断片（例えば、抗体のＦａｂまたはｓｃＦｖ断片）であり、その対応する遺伝子工学的に操作された抗体もまた抗体断片（例えば、抗体のＦａｂまたはｓｃＦｖ断片）である。しかしながら、いくつかの実施形態では、ドナー抗体が全抗体であり、その対応する遺伝子工学的に操作された抗体が抗体の断片であるか、またはその逆である。
【０１３１】
遺伝子工学的に操作された抗体を作製する方法は以下に記載される。
【０１３２】
（遺伝子工学的に操作された抗体を作製する方法）
遺伝子工学的に操作された抗体を作製する方法には、ドナー抗体のＣＤＲアミノ酸配列およびアクセプター抗体の少なくとも可変領域フレームワーク領域が必要である。上記のように、必要に応じて、遺伝子工学的に操作された抗体は１つまたは複数の定常領域（例えば、配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列のＦｃ領域などのアクセプター抗体の定常領域）を含んでもよい。アクセプター抗体は、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を有する軽鎖可変ドメインを含んでもよい。ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３およびＬＦＲ４は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインから取得されたフレームワーク領域であってもよい。軽鎖フレームワーク領域の例示的なアミノ酸配列ならびにフレームワーク領域の例示的なセットは本明細書に記載される（例えば、表１および表３〜５を参照されたい）。
【０１３３】
アクセプター抗体重鎖可変ドメインは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を有してもよい。ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域ポリペプチドから取得されたフレームワーク領域であってよい。重鎖フレームワーク領域の例示的なアミノ酸配列ならびにフレームワーク領域の例示的なセットは本明細書に記載される（例えば、表２〜５を参照されたい）。
【０１３４】
前記方法は、アクセプター抗体のＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）をドナー抗体に由来するＣＤＲのセットで交換することを含む。抗体遺伝子工学の当業者であれば、ドナー抗体およびアクセプター抗体のそれぞれにおけるＣＤＲおよびフレームワーク領域の位置およびアミノ酸配列を容易に決定することができる。上記のように、抗体のＣＤＲおよびフレームワーク領域は、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）上掲、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）、上掲、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義を参照することにより図示することができる。Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義およびＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義の下での抗体のＣＤＲおよびフレームワーク領域の同定は、図１および図２ならびにＴｈｏｍａｓら（１９９６年、上掲）にも例示される。
【０１３５】
ドナー抗体に由来するＣＤＲ配列をアクセプター抗体のフレームワーク領域に移植する方法は当業界で周知であり、例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻（４８４７号）：１５３４〜１５３６頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｑｕｅｅｎら（１９８９年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６巻：１００２９〜１００３３頁；ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／０１１２３７号；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ４巻：７７３〜７８３頁；Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（２００４年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （ＩＳＢＮ：１５８８２９０９２１）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ」、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  ＮＹ；およびＢｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９５年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、第２版、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。例えば、ドナー抗体に由来するＣＤＲを、例えば、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら（１９９１年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １９巻（９号）：２４７１〜２４７６頁；Ｒｏｇｕｓｋａら（１９９６年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９巻（１０号）：８９５〜９０４頁；およびＹａｚａｋｉら（２００４年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １７巻（５号）：４８１〜４８９頁に記載の重複伸長ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて、アクセプター抗体のフレームワーク領域上に移植することができる。ドナーＣＤＲのセットをアクセプター抗体に移植するための好適な方法は、Ｔｈｏｍａｓら（１９９６年）、上掲にも記載されている。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、選択されたＣＤＲアミノ酸配列が短い配列（例えば、１０〜１５アミノ酸長未満）である場合、ＣＤＲをコードする核酸を、例えば、Ｓｈｉｒａｉｓｈｉら（２００７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５１巻（１号）：１２９〜１３０頁および米国特許第６，９９５，２５９号に記載のように化学的に合成することができる。アクセプター抗体をコードする所与の核酸配列について、ＣＤＲをコードする核酸配列の領域を、標準的な分子生物学の技術を用いて、化学的に合成された核酸と交換することができる。化学的に合成された核酸の５’および３’末端を、ドナー抗体の可変領域をコードする核酸中に前記核酸をクローニングするのに使用するための付着末端制限酵素部位を含むように合成することができる。遺伝子工学的に操作された抗体を発現させ、精製する方法は当業界で公知であり、本明細書に記載される。
【０１３７】
ＣＤＲを移植し、遺伝子工学的に操作された抗体を発現させた後（下記参照）、遺伝子工学的に操作された抗体を、ドナー抗体と同じ抗原に結合するその能力についてアッセイすることができる。抗体がタンパク質に結合するか否かを決定するための好適な方法は当業界で公知である。例えば、抗体のタンパク質抗原への結合を、限定されるものではないが、ウェスタンブロット、ドットブロット、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）、Ｏｃｔｅｔ、または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの様々な技術を用いて検出および／または定量することができる。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体とその同種抗原との結合親和性を決定することができる。タンパク質抗原に対する遺伝子工学的に操作された抗体の親和性を決定するための方法は当業界で公知である。例えば、タンパク質抗原への抗体の結合を、限定されるものではないが、ウェスタンブロット、ドットブロット、ＳＰＲ、ＯｃｔｅｔまたはＥＬＩＳＡ技術などの様々な技術を用いて定量することができる。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）、上掲；Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（２００４年）、上掲；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２年）、上掲；Ｊｏｈｎｅら（１９９３年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  １６０巻：１９１〜１９８頁；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９３年）Ａｎｎ  Ｂｉｏｌ  Ｃｌｉｎ  ５１巻：１９〜２６頁；およびＪｏｎｓｓｏｎら（１９９１年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１巻：６２０〜６２７頁を参照されたい。
【０１３９】
好ましくは、遺伝子工学的に操作された抗体はドナー抗体と同じ抗原に特異的に結合する。抗原への抗体の結合は、結合定数（Ｋａ）が１０６Ｍ−１より高い場合、特異的であると考えられる。かくして、抗体は、少なくとも１０６（またはそれより高い）（例えば、少なくとも１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４もしくは１０１５以上またはそれより高い）Ｍ−１のＫａを有するタンパク質に特異的に結合することができる。
【０１４０】
ＣＤＲ移植は、遺伝子工学的に操作された抗体が同じ抗原に対するドナー抗体の親和性と比較して、抗原に対するほぼ同じ親和性を有するように実施することができることが多い。例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）、上掲；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）、上掲；およびＹａｚａｋｉら（２００４年）、上掲を参照されたい。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、抗原に対するドナー抗体の親和性と比較して抗原に対する改善された親和性を有する。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体は、同じ抗原に対するドナー抗体の親和性と比較して抗原に対するより低い親和性を有してもよい。そのような場合、失われた親和性を、例えば、Ｇｒａｍら（１９９２年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９巻（８号）：３５７６〜３５８０頁；米国特許第７，４３２，０６３号；ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０３６７３８号およびＷＯ０４／０５５１８２号に記載されたＣＤＲ配列の親和性成熟を用いて部分的または完全に回復させることができる。
【０１４２】
また、失われた親和性を、例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４巻（７号）：７７３〜７８３頁；Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９１年）ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌ  ９巻：２６６〜２７１頁；Ｈａｌｅら（１９８８年）Ｌａｎｃｅｔ  ２巻：１３９４〜１３９９頁；およびＧｏｒｍａｎら（１９９１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８巻：４１８１〜４１８５頁に記載された抗体作り変え技術を用いて部分的または完全に回復させることができる（またはさらには上回せることもある）。抗体作り変えのためのコンピュータによる方法は、例えば、Ｐａｄｌａｎ（１９９１年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８巻：４８９〜４９８頁に記載されている。１個の重鎖可変フレームワーク残基、位置７１（Ｋａｂａｔらにより定義されたもの）が、抗原結合にとって重要であると同定されている。例えば、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら（１９９０年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５巻：１７５〜１８２頁を参照されたい。一連の免疫グロブリン分子に由来する構造データを用いて、著者らは、ＣＤＲ２のコンフォメーションが、部分的には、残基７１とのその相互作用に依存することを観察した。残基７１の保持は、作り変えられた抗ＥＧＦ受容体抗体における許容可能な親和性を得るのに重要であることが示された（Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１年）、上掲およびＫｒａｕｓｓら（２００４年）Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９０巻：１８６３〜１８７０頁）。重鎖可変領域フレームワーク残基４８、６６および６７（Ｋａｂａｔらにより定義されたもの）も、ＣＤＲ移植および作り変えの間の抗体親和性の保持にとって重要であることが示されている（同上）。さらに、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年；上掲）は、ＣＤＲ移植された抗ＣＡＭＰＡＴＨ−１抗体の親和性を修復させるための重鎖可変領域フレームワーク残基２７および３０（Ｋａｂａｔらにより定義されたもの）の寄与を開示する。Ｓａｌｄａｎｈａら（（１９９９年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３６巻（１１〜１２号）：７０９〜７１９頁）は、ヒトカッパＩＶ軽鎖ＦＲ１の位置９に導入された復帰突然変異が、以前はヒト化に失敗した抗体の結合親和性を修復させたことを示し、その突然変異がＣＯＳ細胞中での前記抗体の分泌レベルも増加させることを見出した。Ｔｈｏｍａｓら（１９９６年）、上掲は、ヒト抗体の機能の維持に関するＶＨフレームワーク領域位置７８の重要性を考察している。また、例えば、ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２４巻：４８７〜４９９頁も参照されたい。実施例およびＴｈｏｍａｓら（１９９６年）、上掲に記載のように、ＶＨ位置２８および３０は、抗体の安定性および機能にとっても重要であり得る。従って、遺伝子工学的に操作された抗体がヒトにおける元のドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおいて低い免疫原性を保持する限り、前記改変のいずれかを、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体に対して行うことができるか、または前記改変のいずれかが前記遺伝子工学的に操作された抗体中に存在してもよいことが理解される。
【０１４３】
抗体の作り変えの間に失われた抗原結合親和性を回復させるための好適な方法は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号；第６，３５０，８６１号；および第５，６９３，７６２号（それぞれの開示は参照によりその全体が本明細書に組入れられるものとする）にも記載されている。例えば、米国特許第６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎらに対して発行された）は、遺伝子工学的に操作された抗体可変領域（例えば、遺伝子工学的に操作された抗体フレームワーク領域）の少なくとも１個（例えば、１、２、３、４、５、または６個以上）のアミノ酸を、ドナー抗体可変領域中に存在する対応するアミノ酸と交換することによって遺伝子工学的に操作された抗体の親和性を修復する方法（いわゆる「復帰突然変異」）を記載している。この方法は、例えば、遺伝子工学的に操作された抗体のフレームワーク領域と、ドナー抗体中の対応するフレームワーク領域とを比較すること（整列させること）ならびに（ａ）その位置について稀である、（ｂ）ＣＤＲに隣接する、および／または（ｃ）三次元空間においてＣＤＲの約３Å以内にあると予測されるアミノ酸（複数可）を同定することを含む。同定されたアミノ酸は、遺伝子工学的に操作された抗体の失われた親和性を修復するための復帰突然変異の影響を特に受けやすいものであってよい。１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５もしくは６個以上）の復帰突然変異を、遺伝子工学的に操作された抗体の単一のフレームワーク領域に、または遺伝子工学的に操作された抗体の２個以上（例えば、２、３、４、５、６、７、もしくは８個）のフレームワーク領域に導入することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体フレームワーク領域を、対応するドナー抗体フレームワーク領域と６５％を超えて（例えば、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５％以上）同一にするのに十分な数で復帰突然変異を導入することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体可変領域（例えば、軽鎖可変領域もしくは重鎖可変領域）を、ドナー抗体の対応する可変領域と６５％を超えて（例えば、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５％以上）同一にするのに十分な数で１つまたは複数の復帰突然変異を導入することができる。復帰突然変異（複数可）を含有する遺伝子工学的に操作された抗体に必要とされることの全ては、遺伝子工学的に操作された抗体がヒトにおけるドナー抗体の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低いことである。
【０１４４】
上記で考察したように、作り変えまたは親和性成熟技術を用いて、１つまたは複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上）のアミノ酸置換（例えば、保存的または非保存的置換）を、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個全部）の遺伝子工学的に操作された抗体フレームワーク領域（例えば、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、ＨＦＲ４、ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３またはＬＦＲ４）中に導入することができる。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域は、合計で１０個未満（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２または１個未満）の置換を含む。いくつかの実施形態では、ただ１個のフレームワーク領域を、作り変えプロセス（例えば、前記領域中に１つまたは複数のアミノ酸置換を導入するための）の間に変化させる。いくつかの実施形態では、２個以上（例えば、２、３、４、５または６個全部）のフレームワーク領域を、１つまたは複数のアミノ酸置換を含むように変化させる。必要とされることの全ては、得られた遺伝子工学的に操作された抗体が、ヒトに投与した場合、ヒトにおいて対応するドナー抗体よりも免疫原性が低いことである。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換を行った後に、移植プロセスを行う。いくつかの実施形態では、移植プロセスを行った後に、アミノ酸置換を行う。
【０１４５】
上記で考察されたように、当業者であれば、可変ドメインＣＤＲとフレームワーク領域の正確な境界が、それらをどのように定義するかに応じて変化し得ることを認識できる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａの定義またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義の下では、ＶＨ位置２８および３０は重鎖ＣＤＲ１領域内にある。かくして、いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を、遺伝子工学的に操作された抗体のフレームワーク領域中ではなく、該抗体のＶＨ領域および／またはＶＬ領域のＣＤＲ中に導入することができる。そのような置換は、抗体作り変えまたは親和性成熟に影響し得る。従って、いくつかの実施形態では、抗体作り変えまたは成熟技術は、１つまたは複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上）のアミノ酸置換（例えば、保存的または非保存的置換）を、例えば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義により定義されるような、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、または６個全部）の遺伝子工学的に操作された抗体のＣＤＲ領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３）中に導入することを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは合計で１０個未満（例えば、９、８、７、６、５、４、３、２または１個未満）の置換を含む。いくつかの実施形態では、ドナーＣＤＲはいずれも、アクセプター足場にＣＤＲを移植する前、または後にアミノ酸置換にかけられない。前記置換に必要とされることの全ては、（ａ）得られた遺伝子工学的に操作された抗体が、ヒトに投与した場合、ヒトにおいて対応するドナー抗体よりも免疫原性が低いこと；および（ｂ）前記置換が、該置換を行う前の標的抗原に対する遺伝子工学的に操作された抗体の親和性と比較して該抗原に対する遺伝子工学的に操作された抗体の親和性を改善することである。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された軽鎖ポリペプチドおよび遺伝子工学的に操作された重鎖ポリペプチドを、本明細書に記載の方法を用いて作製することができる。いくつかの実施形態では、実務者であれば、遺伝子工学的に操作された軽鎖ポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された重鎖ポリペプチドだけを作製することを選択し、例えば、誘導選択を用いて相補的ポリペプチド鎖（軽鎖または重鎖ポリペプチド）を同定することによって、ヒトにおける免疫原性が低下した遺伝子工学的に操作された抗体を作ることができる。例えば、遺伝子工学的に操作された軽鎖ポリペプチドを作製した実務者であれば、誘導選択技術を用いて、同種のヒト重鎖ポリペプチド配列を同定することによって、ドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された抗体を作製することができる。誘導選択技術は、例えば、米国特許第５，５６５，３３２号（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍらに対して発行された）、Ｇｕｏ−ＱｉａｎｇおよびＸｉａｎ−Ｌｉ（２００９年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ５６２巻：１３３〜１４２頁、Ｋｌｉｍｋａら（２０００年）Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８３巻（２号）：２５２〜２６０頁、ならびにＢｅｉｂｏｅｒら（２０００年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６巻（３号）：８３３〜８４９頁に詳細に記載されている。簡単に述べると、誘導選択は、対象の抗体軽鎖ポリペプチドまたは抗体重鎖ポリペプチドを、ヒト相補的（軽鎖または重鎖）可変ドメインのレパートリーと対形成させることを含む。例えば、ファージ展示技術を用いて、ハイブリッド対を調べる。対象の抗原に対する親和性を保持する特定のハイブリッド対を選択することができる。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト化方法は、例えば、米国特許第７，０８７，４０９号；Ｒａｄｅｒら（１９９８年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５巻：８９１０〜８９１５頁；およびＳｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら（２０００年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５巻（４６号）：３６０７３〜３６０７８頁に記載の多様なヒト可変領域のライブラリーまたはヒト可変領域の一部を調べることを含んでもよい。例えば、実務者であれば、エクリズマブ軽鎖可変領域のＦＲ３およびＦＲ４と、ドナー抗体のＣＤＲ３とを含む遺伝子工学的に操作された軽鎖ポリペプチドカセット中間体を作製することができる（出発カセットは、連続するフレームワーク領域およびＣＤＲ配列の任意の組合せ、例えば、
【０１４８】
【化１２】
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などであってよいことが理解される）。次いで、実務者であれば、前記のＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４カセットがヒトＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２カセットのライブラリーに連結される遺伝子工学的に操作された軽鎖ポリペプチド中間体の多様なライブラリーを作製することができる。軽鎖ポリペプチド中間体のライブラリーを、遺伝子工学的に操作された抗体重鎖ポリペプチド、例えば、本明細書に記載の少なくとも１個のフレームワーク領域と、ドナー抗体に由来する１つまたは複数のＣＤＲとを含有する遺伝子工学的に操作された抗体と対形成させることができる。ハイブリッド対を調べて（例えば、ファージ展示技術を用いて）、ドナー抗体と同じ抗原に結合する能力を保持する１つまたは複数の個々のハイブリッド対を同定し、ドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低下したことを証明することができる。本明細書に記載の方法に従って抗体をヒト化するために交換カセットを用いるためのさらなる方法は、例えば、米国特許出願公開第２００６０１３４０９８号および第２００５０２５５５５２号に記載されている。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＰＣＲによる部位特異的突然変異誘発を用いて、遺伝子工学的に操作された抗体のフレームワーク領域中に無作為突然変異を導入することによって、遺伝子工学的に操作された抗体の変異体のライブラリーを作製することができる。いくつかの実施形態においては、遺伝子工学的に操作された抗体の変異体のライブラリーを、標的化突然変異が遺伝子工学的に操作された抗体の１つまたは複数のフレームワーク領域中に導入されるＰＣＲを用いて製造することができる。遺伝子工学的に操作された抗体の変異体のライブラリーの少なくとも一部をスクリーニングして、ドナー抗体と比較して、抗原に対する改善された親和性ならびに／またはヒトにおける低下した、もしくはさらに低下した免疫原性などの１つまたは複数の所望の特性を有する遺伝子工学的に操作された抗体の変異体を同定することができる。抗体ライブラリーをスクリーニングする方法は、抗体遺伝子工学の分野で周知であり、例えば、ファージ展示、細菌展示、酵母表面展示、真核ウイルス展示、哺乳動物細胞展示、および無細胞（例えば、リボソーム展示）抗体スクリーニング技術が挙げられる（例えば、Ｅｔｚら（２００１年）Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １８３巻：６９２４〜６９３５頁；Ｃｏｒｎｅｌｉｓ（２０００年）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１巻：４５０〜４５４頁；Ｋｌｅｍｍら（２０００年）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １４６巻：３０２５〜３０３２頁；Ｋｉｅｋｅら（１９９７年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １０巻：１３０３〜１３１０頁；Ｙｅｕｎｇら（２００２年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｐｒｏｇ．  １８巻：２１２〜２２０頁；Ｂｏｄｅｒら（２０００年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ３２８巻：４３０〜４４４頁；Ｇｒａｂｈｅｒｒら（２００１年）Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  ４巻：１８５〜１９２頁；Ｍｉｃｈａｅｌら（１９９５年）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２巻：６６０〜６６８頁；Ｐｅｒｅｂｏｅｖら（２００１年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５巻：７１０７〜７１１３頁；Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１巻：１１９〜１３５頁；およびＨａｎｅｓら（２０００年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １８巻：１２８７〜１２９２頁を参照されたい）。ファージ展示抗体スクリーニングは、ファージ（例えば、Ｍ１３繊維状ファージまたはλ、Ｔ４もしくはＴ７ファージ）表面上に展示された抗体タンパク質を発現させることを含む。例えば、Ｓｉｄｈｕ（２００１年）Ｂｉｏｍｏｌ  Ｅｎｇ  １８巻：５７〜６３頁；Ｍａｒｕｙａｍａら（１９９４年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１巻：８２７３〜８２７７頁；ＲｅｎおよびＢｌａｃｋ（１９９８年）Ｇｅｎｅ  ２１５巻：４３９〜４４４頁；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（１９９６年）ＩｎＮｏｖａｔｉｏｎｓ  ６巻：１〜６頁；ならびにＣａｓｔａｇｎｏｌｉら（２００１年）Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  ４巻：１２１〜１３３頁を参照されたい。簡単に述べると、それぞれ、バクテリオファージ外被タンパク質（例えば、Ｍ１３ファージのｐＩＩＩもしくはｐＶＩＩＩ）お��び様々な遺伝子工学的に操作された抗体の融合タンパク質をコードする複数のファージミドベクターを、標準的な分子生物学技術を用いて製造した後、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）の集団中に導入する。細菌中でのバクテリオファージの発現には、いくつかの実施形態では、ヘルパーファージの使用が必要である。いくつかの実施形態では、ヘルパーファージは必要ない（例えば、Ｃｈａｓｔｅｅｎら（２００６年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３４巻（２１号）：ｅ１４５頁を参照されたい）。細菌から産生されたファージを回収した後、例えば、固相支持体に結合した標的抗原に接触させる。固相支持体を洗浄することにより、未結合のファージを除去する。次いで、洗浄工程の後、結合したファージを、例えば、遊離標的抗原競合剤を用いて固相支持体から溶出させる。一般に、溶出したファージは、標的抗原に結合する抗体（またはその断片）を含むと考えることができる。例えば、ウェルあたり１個のファージの感染多重度でマルチウェルアッセイプレートのウェル中で増殖させた細菌を感染させることにより、集団の個々のファージを単離することができる。
【０１５０】
標的抗原に対するより高い親和性を有する抗体を含むファージ粒子に関してファージ集団を濃縮するために（抗原に非特異的に結合し得るファージの割合を低下させながら）、溶出したファージ（上記）を用いて細菌宿主細胞の集団に再感染させることができる。次いで、発現されたファージを細菌から取得し、固相支持体（例えば、ビーズまたはカラムの表面）に結合した標的抗原に再度接触させる。固相支持体を洗浄することにより、未結合のファージを除去する。次いで、洗浄工程の後、例えば、遊離標的抗原競合剤を用いて、固相支持体から結合したファージを溶出させる。ファージ粒子がかけられる感染−結合−溶出サイクルの数は一般に、標的抗原に対するより高い親和性を有する抗体を含むファージの濃縮レベルと相関する。
【０１５１】
抗体ファージ展示のための方法は、例えば、Ｏ’ＢｒｉｅｎおよびＡｉｔｋｅｎ（２００２年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ  ０８９６０３７１１８）；Ｂａｒｂａｓら（２００４年）「Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：０８７９６９７４０７）；ならびにＦｉｇｉｎｉら（１９９８年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８巻：９９１〜９９６頁（それぞれの開示は参照によりその全体が本明細書に組入れられるものとする）にも記載されている。高効率スクリーニングキャンペーン（ｃａｍｐａｉｇｎ）における使用のための抗体ファージ展示の様々な工程を自動化する方法は、例えば、ＫｏｎｔｈｕｒおよびＷａｌｔｅｒ（２００２年）ＴＡＲＧＥＴＳ  １巻（１号）：３０〜３６頁に記載されている。
【０１５２】
ドナー抗体と同じ抗原に結合する遺伝子工学的に操作された抗体を同定するためのさらなるスクリーニング方法が利用可能である。例えば、前記方法の実務者であれば、例えば、分泌された抗体断片を膜上に捕捉した後、可溶性標的抗原と接触させる様々なフィルタースクリーニング方法のいずれかを用いることができる。例えば、Ｓｋｅｒｒａら（１９９１年）Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９６巻：１５１〜５頁を参照されたい。この場合、細菌ペリプラズム中へのＦａｂ断片の分泌を指令するプラスミドベクターを担持する細菌を、膜またはフィルター上で増殖させる。分泌された断片を、該抗体断片に結合することができる抗体で被覆された第２の「捕捉」膜（例えば、抗免疫グロブリン抗血清）に拡散させ、捕捉フィルターを特異的抗原で精査する。抗体−酵素コンジュゲートを用いて、捕捉膜上の抗原結合抗体断片を着色スポットとして検出することができる。第１の膜上でコロニーを増殖させ、所望の抗体断片を発現するクローンを回収する。
【０１５３】
前記方法の実務者であれば、ＥＬＩＳＡ技術を用いて、ドナー抗体と同じ抗原に結合する遺伝子工学的に操作された抗体をスクリーニングすることもできる。単一のクローンから発現された個々の遺伝子工学的に操作された抗体、または複数のクローンにより産生された複数の遺伝子工学的に操作された抗体のプールを、例えば、Ｗａｔｋｉｎｓら（１９９７年）Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２５３巻：３７〜４５頁に記載のようにアッセイすることができる。実務者であれば、抗体を抗原で被覆された膜上に直接拡散させるコロニーリフト結合アッセイを用いることもできる。そのような方法は、例えば、Ｇｉｏｖａｎｎｏｎｉら（２００１年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２９巻（５号）：ｅ２７頁に記載されている。
【０１５４】
遺伝子工学的に操作された抗体がヒトにおいて免疫原性であるか否かを決定するための方法は、当業界で周知である。例えば、遺伝子工学的に操作された抗体を、第０相臨床試験の一部としてヒト被験者に投与することができる。例えば、Ｋｉｎｄｅｒｓら（２００７年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ  ７巻：３２５〜３３４頁を参照されたい。遺伝子工学的に操作された抗体を、経口的もしくは経皮的に投与するか、または静脈内的、皮下的、筋肉内的、腹腔内的、直腸内的、膣内的、鼻内的、胃内的、気管内的、もしくは肺内的に注入（もしくは輸液）することができる。前記抗体を、好適なリンパ組織（例えば、脾臓、リンパ節、または粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ））に直接送達することができる。必要に応じて、追加免疫を、様々な時点で（例えば、１週間間隔）、１回または数回（例えば、２、３、４、８もしくは１２回）与えてもよい。次いで、遺伝子工学的に操作された抗体に特異的な抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭまたはＩｇＡ）応答を、そのような抗体の存在について、当業者にはよく知られたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて、全身的に（例えば、血清中で）、または例えば、様々な粘膜部位で（例えば、唾液もしくは胃洗浄液および気管支肺胞洗浄液中）試験することにより測定することができる。市販のＥＬＩＳＡに基づくキットが利用可能であり、例えば、ＨＡＨＡ  ＥＬＩＳＡ  ＥＬＰＣＯ（商標）免疫アッセイ（ＡＬＰＣＯ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｓａｌｅｍ、ＮＨ）が挙げられる。治療抗体に結合し、その活性を阻害する中和抗体の被験体（例えば、ヒト被験者）による産生を検出するための好適な方法（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＳＰＲ法）は当業界で公知であり、実施例に例示される。好適な方法は、例えば、Ｗｅｌｔら（２００３年）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ９巻（４号）：１３３８〜４６頁；Ａａｒｄｅｎら（２００８年）、上掲；Ｓｚｏｌａｒら（２００６年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ  ４１巻（４号）：１３４７〜１３５３頁；Ｌｏｆｇｒｅｎら（２００７年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７８巻（１１号）：７４６７〜７４７２頁；Ｒｉｔｔｅｒら（２００１年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１巻：６８５１〜６８５９頁；およびＢｕｉｓｔら（１９９５年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ４０巻（１号）：２４〜３０頁にも記載されている。あるいは、またはさらに、一般にＣＤ４＋Ｔ細胞応答が抗体応答に必要とされるため、遺伝子工学的に操作された抗体に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＤ４＋Ｔ細胞応答を、当業界で公知の方法を用いて測定することができる。そのような方法としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖またはリンホカイン（例えば、インターロイキン−２、インターロイキン−４、もしくはインターフェロン−γ）産生アッセイが挙げられる。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ドナー抗体（例えば、ヒト化ドナー抗体）が、ヒトにおいて免疫原性である可能性があるか、またはそうであると予想されるか否かを決定することを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトにおける遺伝子工学的に操作された抗体の潜在的な免疫原性をｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで決定することを含んでもよい。所与の抗体または抗体可変領域の潜在的な免疫原性を予測するための好適なコンピュータに基づく方法／アルゴリズムは当業界で公知であり、例えば、限定されるものではないが、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ、ＴＥＰＩＴＯＰＥ、ＢＥＰＩＴＯＰＥ、ＲＡＮＫＰＥＰ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＭＭＰｒｅｄ、ＰＲＥＤＩＣＴ、ＭＨＣＢｅｎｃｈ、およびＡＢＣｐｒｅｄが挙げられる。Ｒａｍｍｅｎｓｅｅら（１９９９年）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０巻：２１３頁；ＳａｈａおよびＲａｇｈａｖａ（２００７年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４０９巻：３８７〜３９４頁；Ｅｌ−Ｍａｎｚａｌａｗｙら（２００８年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ  ２１巻（４号）：２４３〜２５５頁；Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏら（１９９９年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７巻：５５５頁；ＢｈａｓｉｎおよびＲａｇｈａｖａ（２００４年）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２０巻（３号）：４２１〜４２３頁；ならびにｖａｎ  ｄｅ  ＷｅｅｒｔおよびＭｏｌｌｅｒ（２００８年）、「Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓの第８巻、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ（「Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｔｏｏｌｓ，  ｄａｔａｂａｓｅｓ  ａｎｄ  ｄａｔａ  ｓｅｔｓ」の表題のＴａｂｌｅ  ４．２を参照されたい）を参照されたい。ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでの決定を、遺伝子工学的に操作された抗体の作製（例えば、１もしくは複数のドナー抗体の評価）の前に、および／または遺伝子工学的に操作された抗体の作製の後に（例えば、遺伝子工学的に操作された抗体をヒトに投与する前に）行うことができる。いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでの決定を、遺伝子工学的に操作された抗体を作り変えした（例えば、遺伝子工学的に操作された抗体に１つまたは複数の復帰突然変異を導入した）後に行うことができる。いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでの方法を用いて、どの作り変え技術を遺伝子工学的に操作された抗体に対して用いるかを決定する際に実務者を誘導することができる。例えば、実務者が２つの比較可能な作り変え技術の間で選択肢を有する場合（例えば、フレームワーク領域中の２つの異なるアミノ酸位置の１つでの復帰突然変異）、実務者は上記のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでの方法を開始して、２つの技術のどちらがヒトにおける免疫原性の最少の可能性を有する遺伝子工学的に操作された抗体をもたらすかを決定することができる。
【０１５６】
（遺伝子工学的に操作された抗体を発現させる方法）
遺伝子工学的に操作された抗体をコードする核酸（複数可）を、例えば、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始および停止配列、翻訳開始および停止配列、転写ターミネーターシグナル、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーまたはアクチベーター配列などの転写および翻訳調節配列を含む発現ベクター中に挿入することができる。調節配列は、プロモーターならびに転写開始および停止配列を含む。さらに、発現ベクターは、それを２つの異なる生物、例えば、発現のためには哺乳動物細胞または昆虫細胞において、ならびにクローニングおよび増幅のためには原核宿主において維持することができるように２つ以上の複製系を含んでもよい。
【０１５７】
哺乳動物細胞中の核酸からのクローニングされた遺伝子工学的に操作された抗体重鎖および／または軽鎖ポリペプチドの発現のためのいくつかの可能なベクター系が利用可能である。あるクラスのベクターは、宿主細胞ゲノム中への所望の遺伝子配列の組込みに依存する。安定に組込まれたＤＮＡを有する細胞を、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ（１９８１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８巻：２０７２頁）またはＴｎ５  ｎｅｏ（ＳｏｕｔｈｅｒｎおよびＢｅｒｇ（１９８２年）Ｍｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｇｅｎｅｔ  １巻：３２７頁）などの薬剤耐性遺伝子を同時に導入することにより選択することができる。選択マーカー遺伝子を、発現させようとするＤＮＡ遺伝子配列に連結するか、または同時トランスフェクション（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９年）Ｃｅｌｌ  １６巻：７７頁）により同じ細胞中に導入することができる。第２のクラスのベクターは、染色体外プラスミドに自己複製能力を付与するＤＮＡエレメントを用いる。これらのベクターを、ウシパピローマウイルス（Ｓａｒｖｅｒら（１９８２年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７９巻：７１４７頁）、ポリオーマウイルス（Ｄｅａｎｓら（１９８４年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１巻：１２９２頁）、またはＳＶ４０ウイルス（ＬｕｓｋｙおよびＢｏｔｃｈａｎ（１９８１年）Ｎａｔｕｒｅ  ２９３巻：７９頁）などの動物ウイルスから誘導することができる。
【０１５８】
発現ベクターを、核酸のその後の発現にとって好適な様式で細胞中に導入することができる。導入の方法は、以下に考察するように、標的となる細胞型によって大きく影響される。例示的方法としては、ＣａＰＯ４沈降、リポソーム融合、リポフェクチン（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）、エレクトロポレーション、ウイルス感染、デキストラン媒介性トランスフェクション、ポリブレン媒介性トランスフェクション、および直接マイクロインジェクションが挙げられる。
【０１５９】
遺伝子工学的に操作された抗体の発現のための好適な宿主細胞としては、例えば、酵母、細菌、昆虫、および哺乳動物細胞が挙げられる。特に対象となるのは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓなどの菌類、ＳＦ９などの昆虫細胞、哺乳動物細胞株（例えば、ヒト細胞株）、ならびに初代細胞株である。抗体の発現のために選択される宿主細胞の種類は、発現させようとする特定の種類の抗体ならびに発現される抗体の意図される使用に一部依存する。例えば、当業者であれば、一本鎖抗体または抗体のＦａｂ断片を発現させるために細菌宿主を選択することができるが、当業者であれば、全抗体の発現のためには哺乳動物細胞宿主を選択することができる。
【０１６０】
遺伝子工学的に操作された抗体の発現を可能にするのに十分な条件下で、および時間量で、該抗体をコードする核酸を含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養することにより、前記抗体を細胞から産生させる。タンパク質発現のためのそのような条件は、発現ベクターおよび宿主細胞の選択によって変化し、当業者であれば日常的な実験を通じて容易に確認することができる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現された遺伝子工学的に操作された抗体を、封入体から再度折畳ませることができる（例えば、Ｈｏｕら（１９９８年）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １０巻：３１９〜３０頁を参照されたい）。細菌発現系およびその使用方法は当業界で周知である。コドンの選択、好適な発現ベクターおよび好適な宿主細胞はいくつかの因子に応じて変化し、必要に応じて容易に最適化することができる。遺伝子工学的に操作された抗体を哺乳動物細胞または限定されるものではないが、酵母、バキュロウイルスなどの他の発現系、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系中で発現させることができる（例えば、Ｋａｓｚｕｂｓｋａら（２０００年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  １８巻：２１３〜２２０頁を参照されたい）。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体を、トランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）中で発現させ、それから精製することができる。例えば、遺伝子工学的に操作された抗体をトランスジェニック非ヒト哺乳動物（例えば、げっ歯類）中で産生させ、例えば、Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ（２００２年）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １３巻（６号）：６２５〜６２９頁；ｖａｎ  Ｋｕｉｋ−Ｒｏｍｅｉｊｎら（２０００年）Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓ  ９巻（２号）：１５５〜１５９頁；およびＰｏｌｌｏｃｋら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１巻（１〜２号）：１４７〜１５７頁に記載のようにミルクから単離することができる。
【０１６２】
好適な抗体発現方法は、Ｔｈｏｍａｓら（１９９６年）、上掲にも記載されている。
【０１６３】
発現させた後、遺伝子工学的に操作された抗体を単離することができる。本明細書に記載のポリペプチド（例えば、遺伝子工学的に操作された抗体）のいずれかに適用される用語「単離された」または「精製された」とは、ポリペプチドに天然に付随する成分（例えば、タンパク質または他の天然の生物分子もしくは有機分子）、例えば、他のタンパク質、脂質、および該タンパク質を発現する原核生物中の核酸から分離または精製されたポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドは、それが試料中の総タンパク質の少なくとも６０（例えば、少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９７、または９９）重量％である場合、精製されている。
【０１６４】
他に何の成分が試料中に存在するかに応じて、当業者には公知の様々な方法で遺伝子工学的に操作された抗体を単離または精製することができる。標準的な精製方法としては、電気泳動技術、分子技術、免疫学的技術、およびクロマトグラフィー技術、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィーおよび逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーが挙げられる。例えば、遺伝子工学的に操作された抗体を、標準的な抗抗体カラム（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧカラム）を用いて精製することができる。タンパク質濃縮と共に、限外濾過および透析濾過技術もまた有用である。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ（１９９４年）「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、第３版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｃｉｔｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。精製の程度は所望の使用に応じて必ず変化する。いくつかの例においては、発現された遺伝子工学的に操作された抗体の精製は必要ではない。
【０１６５】
単離された遺伝子工学的に操作された抗体の収率または純度を決定するための方法は当業界で公知であり、例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ、ＵＶ分光法、Ｂｉｕｒｅｔタンパク質アッセイ、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ、アミドブラックタンパク質アッセイ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析（ＭＳ）、およびゲル電気泳動法（例えば、クマシーブルーまたは銀コロイド染色などのタンパク質染色を用いる）が挙げられる。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、発現された遺伝子工学的に操作された抗体から、エンドトキシンを除去することができる。タンパク質試料からエンドトキシンを除去するための方法は当業界で公知である。例えば、限定されるものではないが、ＰｒｏｔｅｏＳｐｉｎ（商標）Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔｓ（Ｎｏｒｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｄｅｔｏｘｉ−Ｇｅｌ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｇｅｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ＭｉｒａＣＬＥＡＮ（登録商標）Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔ（Ｍｉｒｕｓ）、またはＡｃｒｏｄｉｓｃ（商標）−Ｍｕｓｔａｎｇ（登録商標）Ｅ膜（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）などの様々な市販の試薬を用いて、タンパク質試料からエンドトキシンを除去することができる。
【０１６７】
試料中に存在するエンドトキシンを検出する、および／またはその量を測定する方法（精製の前後の両方）は当業界で公知であり、市販のキットが利用可能である。例えば、タンパク質試料中のエンドトキシンの濃度を、ＱＣＬ−１０００発色キット（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）、Ｐｙｒｏｔｅｌｌ（登録商標）、Ｐｙｒｏｔｅｌｌ（登録商標）−Ｔ、Ｐｙｒｏｃｈｒｏｍｅ（登録商標）、Ｃｈｒｏｍｏ−ＬＡＬなどのカブドガニ血球抽出成分（ＬＡＬ）に基づくキット、およびＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｏｆ  Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄから入手可能なＣＳＥキットを用いて決定することができる。
【０１６８】
（医薬組成物）
本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体を含む組成物を、医薬組成物として製剤化することができる。医薬組成物は一般に、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で用いられる「薬学的に許容される担体」とは、生理学的に適合する任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを指し、それらを含む。前記組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含んでもよい（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６６巻：１〜１９頁を参照されたい）。
【０１６９】
前記組成物を、標準的な方法に従って製剤化することができる。医薬製剤は十分確立されている技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００年）「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら（１９９９年）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；およびＫｉｂｂｅ（２０００年）「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ」、第３版（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載されている。いくつかの実施形態では、例えば、好適な濃度および２〜８℃（例えば、４℃）での保存にとって好適な緩衝化溶液として、組成物を製剤化することができる。いくつかの実施形態では、０℃以下の温度（例えば、−２０℃または−８０℃）での保存のために組成物を製剤化することができる。いくつかの実施形態では、２〜８℃（例えば、４℃）で最大で２年間（例えば、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１年、１年半、または２年）の保存のために組成物を製剤化することができる。かくして、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、２〜８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間の保存において安定である。
【０１７０】
前記医薬組成物は、様々な形態にあってよい。これらの形態としては、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液）、分散物または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソームおよび坐剤が挙げられる。好ましい形態は、投与の意図される様式および治療的適応に一部依存する。例えば、全身または局所送達を意図される抗体または断片を含む組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態にあってもよい。従って、前記組成物を、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）による投与のために製剤化することができる。本明細書で用いられる「非経口投与」、「非経口投与された」および他の文法的に等価な語句は、通常は注射による腸内投与および局所投与以外の投与様式を指し、限定されるものではないが、静脈内、鼻内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、大脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内注射および輸液が挙げられる（下記を参照されたい）。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体を、ヒトへの肺内投与（例えば、噴霧器または吸入器による投与）にとって好適な組成物中で製剤化することができる。そのような組成物を調製するための方法は当業界で周知であり、例えば、米国特許出願公開第２００８０２０２５１３号；米国特許第７，１１２，３４１号および第６，０１９，９６８号；ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ００／０６１１７８号および第ＷＯ０６／１２２２５７号（それぞれの開示は参照によりその全体が本明細書に組入れられるものとする）に記載されている。乾燥粉末吸入器製剤および該製剤の投与のための好適な系は、例えば、米国特許出願公開第２００７０２３５０２９号、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／６９８８７号および米国特許第５，９９７，８４８号に記載されている。
【０１７２】
前記組成物を、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、または高濃度での安定な保存にとって好適なその他の規則的構造として製剤化することができる。滅菌注射用溶液を、必要な量の本明細書に記載の抗体（または該抗体の断片）を、好適な溶媒中に、上記で列挙された成分の１つまたはその組合せと共に組入れた後、必要に応じて、濾過滅菌することにより調製することができる。一般的には、基本分散媒体および上記で列挙されたものからの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクル中に、本明細書に記載の抗体または断片を組入れることにより、分散物を調製する。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体の粉末と、予め滅菌濾過されたその溶液に由来する任意のさらなる所望の成分（下記を参照されたい）とをもたらす減圧乾燥および凍結乾燥を含む。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散物の場合、必要な粒子経の維持および界面活性剤の使用により、溶液の適切な流動性を維持することができる。注射用組成物の吸収の延長を、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを前記組成物中に含有させることによりもたらすことができる。
【０１７３】
特定の実施形態では、遺伝子工学的に操作された抗体を、インプラントおよびマイクロカプセル化された送達系などの制御放出製剤などの、急速な放出に対して化合物を保護する担体と共に調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。そのような製剤の調製のための多くの方法が当業界で公知である。例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８年）「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０１７４】
遺伝子工学的に操作された抗体をコードする核酸を、細胞内で薬剤を発現および産生させるのに用いることができる核酸を送達するための遺伝子治療プロトコールの一部として用いられる遺伝子構築物中に組み入れることができる（下記を参照されたい）。そのような成分の発現構築物を、任意の治療上有効な担体、例えば、前記成分の遺伝子を細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで効率的に送達することができる任意の製剤または組成物中で投与することができる。手法としては、組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、レンチウイルス、および単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−１）などのウイルスベクター、または組換え細菌プラスミドもしくは真核プラスミドへの対象遺伝子の挿入が挙げられる。ウイルスベクターは細胞を直接トランスフェクトすることができる；プラスミドＤＮＡは、例えば、陽イオン性リポソーム（リポフェクチン）、または誘導体化された（例えば、抗体コンジュゲート）、ポリリシンコンジュゲート、グラミシジンＳ、人工ウイルスエンベロープもしくは他のそのような細胞内担体を援用して送達することができ、ならびに遺伝子構築物の直接注入またはＣａＰＯ４沈降（例えば、ＷＯ０４／０６０４０７を参照されたい）をｉｎ  ｖｉｖｏで実行することができる（以下の「Ｅｘ  ｖｉｖｏでの手法」も参照されたい）。好適なレトロウイルスの例としては、ｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥおよびｐＥＭが挙げられ、これらは当業者には公知である（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓら（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０巻：１３９５〜１３９８頁；ＤａｎｏｓおよびＭｕｌｌｉｇａｎ（１９８８年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５巻：６４６０〜６４６４頁；Ｗｉｌｓｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５巻：３０１４〜３０１８頁；Ａｒｍｅｎｔａｎｏら（１９９０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８７巻：６１４１〜６１４５頁；Ｈｕｂｅｒら（１９９１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８巻：８０３９〜８０４３頁；Ｆｅｒｒｙら（１９９１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８巻：８３７７〜８３８１頁；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙら（１９９１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４巻：１８０２〜１８０５頁；ｖａｎ  Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍら（１９９２年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９巻：７６４０〜７６４４頁；Ｋａｙら（１９９２年）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ３巻：６４１〜６４７頁；Ｄａｉら（１９９２年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９巻：１０８９２〜１０８９５頁；Ｈｗｕら（１９９３年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５０巻：４１０４〜４１１５頁；米国特許第４，８６８，１１６号および第４，９８０，２８６号；ＰＣＴ公開第ＷＯ８９／０７１３６号、第ＷＯ８９／０２４６８号、第ＷＯ８９／０５３４５号および第ＷＯ９２／０７５７３号を参照されたい）。別のウイルス遺伝子送達系は、アデノウイルス由来ベクターを用いるものである（例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒら（１９８８年）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６巻：６１６頁；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２巻：４３１〜４３４頁；およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９２年）Ｃｅｌｌ  ６８巻：１４３〜１５５頁を参照されたい）。アデノウイルス株Ａｄ  ５型ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）から誘導された好適なアデノウイルスベクターは当業者には公知である。対象遺伝子の送達にとって有用なさらに別のウイルスベクター系は、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅら（１９９２年）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ７巻：３４９〜３５６頁；Ｓａｍｕｌｓｋｉら（１９８９年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ６３巻：３８２２〜３８２８頁；およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９８９年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ６２巻：１９６３〜１９７３頁を参照されたい。
【０１７５】
（適応）
上記で記載されたように、本明細書に記載の遺伝子工学的に操作された抗体は、特に、それが誘導されたドナー抗体の免疫原性と比較して、ヒトにおいて低下した免疫原性を有することを特徴とする。従って、前記遺伝子工学的に操作された抗体を、例えば、遺伝子工学的に操作された抗体をヒトに長期投与しようとする場合、様々な診断および／または治療的適応において用いることができる。いかなる意味でも限定を意図するものではないが、遺伝子工学的に操作された抗体を作製および／または使用することができるいくつかの適応例を、以下に列挙する。
【０１７６】
（抗ＴＮＦα治療抗体）
ヒト患者に長期投与される治療用のヒト化抗ＴＮＦα抗体は、全ての治療された患者の大部分においてヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）応答を惹起することが医師により見出されている。さらに、これらの患者において生成された抗体は、抗ＴＮＦα抗体の治療活性を実質的に中和する。かくして、これらの患者への抗ＴＮＦα抗体の継続的投与は治療的利益をほとんど提供しないか、または全く提供しないと決定されている。前記患者は、慢性関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、および強直性脊椎炎などの様々な重篤な自己免疫障害を有し、彼らはその疾患を有効に管理するために抗ＴＮＦα抗体に依存している。
【０１７７】
ドナー抗ＴＮＦα抗体のＣＤＲを、本明細書に記載の免疫原性が低下した抗体アクセプター足場に移植する。新しく遺伝子工学的に操作された抗ＴＮＦα抗体を、ＴＮＦαに結合するその能力について試験すれば、ドナー抗ＴＮＦα抗体とほぼ同じＴＮＦαに対する親和性を有することがわかる。第０相試験では、遺伝子工学的に操作された抗体を、６カ月間、１カ月毎に１回ヒト患者のコホートに投与する。血液試料をそれぞれの患者から取得した直後に、毎月投与し、その試料を用いて、患者が遺伝子工学的に操作された抗体に対する抗体を生成するか否かを決定する。遺伝子工学的に操作された抗体で治療された実質的により低い百分率の患者が、元のヒト化抗ＴＮＦα抗体で治療された患者の百分率と比較した場合、ＨＡＨＡ応答を生じると予想される。従って、遺伝子工学的に操作された抗体は、元のヒト化抗ＴＮＦα抗体と比較して、より多数の患者において重篤な自己免疫障害の長期治療にとって有効であることも予期される。
【０１７８】
（抗ＶＥＧＦ治療抗体）
ヒト患者に２回以上投与された治療用のヒト化抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体は、治療された患者の大部分において中和ＨＡＨＡ応答を惹起することが医師によって見出されている。前記患者は結腸直腸癌を有し、それぞれ、彼らはその癌を管理するために抗ＶＥＧＦ療法に依存している。
【０１７９】
ドナー抗ＶＥＧＦ抗体のＣＤＲを、本明細書に記載の免疫原性が低下したアクセプター抗体足場に移植する。新しく遺伝子工学的に操作された抗ＶＥＧＦ抗体を、ＶＥＧＦに結合するその能力について試験すれば、ドナー抗ＶＥＧＦ抗体とほぼ同じＶＥＧＦに対する親和性を有することがわかる。第０相試験では、遺伝子工学的に操作された抗体を、２カ月間、２週間毎に１回ヒト患者のコホートに投与する。血液試料をそれぞれの患者から取得した直後、それぞれ投与し、その試料を用いて、患者が遺伝子工学的に操作された抗体に対する抗体を生成するか否かを決定する。遺伝子工学的に操作された抗体で治療された実質的により少ない百分率の患者が、元のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体で治療された患者の百分率と比較した場合、ＨＡＨＡ応答を生じると予想される。また、遺伝子工学的に操作された抗体は元のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体と比較してより多数の患者において結腸直腸癌の治療にとって有効であることも予期される。
【０１８０】
（抗ＣＤ２０治療抗体）
ヒト患者に２回以上静脈内投与された治療用ヒト化抗ＣＤ２０抗体は、治療された患者の大部分において中和ＨＡＨＡ応答を惹起することが多くの医師によって見出されている。前記患者は非ホジキンリンパ腫を有し、それぞれの場合、患者はその症状の治療を助けるために抗ＣＤ２０療法に依存している。
【０１８１】
ドナー抗ＣＤ２０抗体のＣＤＲを、本明細書に記載の免疫原性が低下したアクセプター抗体足場に移植する。新しく遺伝子工学的に操作された抗ＣＤ２０抗体をＣＤ２０に結合するその能力について試験すれば、ＣＤ２０タンパク質に対するドナー抗ＣＤ２０抗体の親和性と比較してＣＤ２０に対する低下した親和性を有することがわかる。この抗体を作り変え技術にかけて、ＣＤ２０に対する改善された親和性を有する遺伝子工学的に操作された抗ＣＤ２０抗体の変異体を同定する。２つの重鎖可変領域フレームワークアミノ酸残基２７および３０（Ｋａｂａｔらにより定義されたもの；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）、上掲を参照されたい）に置換突然変異を導入する。遺伝子工学的に操作された抗ＣＤ２０抗体の変異体をＣＤ２０に対するその親和性について再試験すれば、ＣＤ２０タンパク質に対するドナー抗ＣＤ２０抗体の親和性と少なくとも等価であるＣＤ２０に対する改善された親和性を有することがわかる。
【０１８２】
第０相試験では、遺伝子工学的に操作された抗体の変異体を、２カ月間、週に１回ヒト患者のコホートに投与する。血液試料をそれぞれの患者から取得した直後、それぞれ投与し、その試料を用いて、患者が遺伝子工学的に操作された抗体の変異体に対する抗体を生成するか否かを決定する。遺伝子工学的に操作された抗体の変異体で治療された実質的により低い百分率の患者が、元のヒト化抗ＣＤ２０抗体で治療された患者の百分率と比較してＨＡＨＡ応答を生じると予想される。また、遺伝子工学的に操作された抗体の変異体が、元のヒト化抗ＣＤ２０抗体と比較してより多数の患者において非ホジキンリンパ腫の治療にとって有効であることも予想される。
【０１８３】
（抗ＩｇＥ治療抗体）
肺内投与によりヒト患者に２回以上送達された治療用ヒト化抗ＩｇＥ抗体は、治療された患者の大部分において中和ＨＡＨＡ応答を惹起することが医師により見出されている。前記患者は喘息を有する（中程度から高い重篤度まで）。
【０１８４】
ドナー抗ＩｇＥ抗体のＣＤＲを、本明細書に記載の免疫原性が低下したアクセプター抗体足場に移植する。新しく遺伝子工学的に操作された抗ＩｇＥ抗体を、ＩｇＥ重鎖定常領域に結合するその能力について試験すれば、ドナー抗ＩｇＥ抗体とほぼ同じＩｇＥに対する親和性を有することがわかる。第０相試験では、遺伝子工学的に操作された抗体を、２カ月間、２週間毎に１回ヒト患者のコホートに噴霧器により投与する。血液および唾液試料をそれぞれの患者から取得した直後に、それぞれ投与する。この試料を用いて、患者が遺伝子工学的に操作された抗体に対する抗体を生成するか否かを決定する。遺伝子工学的に操作された抗体で治療された実質的により低い百分率の患者が、元のヒト化抗ＩｇＥ抗体で治療された患者の百分率と比較してＨＡＨＡ応答を生じると予想される。また、遺伝子工学的に操作された抗体が、元のヒト化抗ＩｇＥ抗体と比較してより多数の患者において喘息の治療にとって有効であることも予想される。
【０１８５】
以下の実施例は、本発明を例示することを意図するものであり、限定を意図するものではない。
【実施例】
【０１８６】
（実施例１）
低い免疫原性を有するヒト化アクセプター抗体の作製
ヒト補体成分Ｃ５に特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（「ｍαＣ５抗体」）を以下のようにヒト化して、エクリズマブとして公知の抗体を作製した。ｍαＣ５抗体のＣＤＲを、ｍαＣ５抗体のフレームワークに対する高い程度の配列相同性を有するヒトフレームワーク領域上に移植した。ｍαＣ５抗体のＣＤＲのためのアクセプター配列として選択されたヒト可変領域を、問い合わせ配列としてマウス可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）配列を用いて、プログラムＴＦＡＳＴＡ（ＮＣＢＩ）を用いてＧｅｎｂａｎｋサブディレクトリＧＢ−ＰＲを走査することにより選択した。検索から同定されたヒトＶＨ領域は、クローンＨ２０Ｃ３Ｈ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ｌｏｃｕｓ番号ＨＵＭＩＧＨＲＬ；受託番号Ｌ０２３２５）であった。例えば、Ｗｅｎｇら（１９９２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４９巻（７号）：２５１８〜２５２９頁を参照されたい。このヒトＶＨ領域は、ヒトゲノムＶＨ遺伝子ＨＧ３およびヒトゲノムＪＨ５遺伝子から誘導されたものであり、これらのゲノム遺伝子からのフレームワーク領域に変化を含まない。検索から同定されたヒトＶＬ領域は、クローンＩ．２３（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｘ７２４７７）であった。例えば、Ｋｌｅｉｎら（１９９３年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３巻：３２４８〜３２７１頁を参照されたい。このヒトＶＬ領域は、ヒトゲノムＶκ遺伝子０１２およびゲノムＪκ１遺伝子から誘導されたものであり、０１２ゲノム遺伝子中のコードされたグルタミン（Ｑ）残基と比較して、成熟可変領域の位置３８でフレームワーク領域２（ＦＲ２）中にアルギニン（Ｒ）残基を導入したものである。Ｈ２０Ｃ３  ＶＨおよびＩ．２３  ＶＬ配列のアミノ酸配列は、本明細書でそれぞれ配列番号７および８として記載されている。ＣＤＲ−フレームワーク移植（Ｋａｂａｔにより定義されたＣＤＲに基づく）を、重複伸長ＰＣＲ技術を用いて実施した。アミノ酸置換を、位置２８および３０でＨ２０Ｃ３  ＶＨ配列に導入した。具体的には、位置２８のトレオニンおよび位置３０のトレオニンを、それぞれ、イソロイシンおよびセリンで置換した。位置２８のイソロイシンおよび位置３０のセリンが、エクリズマブのＣＤＲが得られたマウス抗Ｃ５抗体配列中に存在した。エクリズマブの軽鎖可変領域およびＩ．２３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を、図１に示す。エクリズマブの重鎖可変領域およびＨ２０Ｃ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列を、図２に示す。エクリズマブの完全な軽鎖のアミノ酸配列を、配列番号１に示す。エクリズマブの完全な重鎖のアミノ酸配列を、配列番号４に示す。位置２８および３０はＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ内にあり、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せＣＤＲを移植した場合、位置２８および３０に置換を行う必要がなく、同じ最終的な結果が得られたことがわかる。
【０１８７】
（実施例２）
ヒト抗エクリズマブ抗体を検出するためのアッセイ
以下のアッセイを用いて、エクリズマブで治療された患者から得た生物学的試料中のヒト抗エクリズマブ抗体の存在を検出した。このアッセイは、２つの段階：スクリーニング段階および確認段階を含む。スクリーニング段階のアッセイは、陰性対照（正常なヒト血清；対照試料）および陽性対照参考標準に照らした患者の血液試料（試験試料）の評価を含んでいた。エクリズマブで治療された患者から得た２５μＬの血清の２％溶液（ｖ／ｖ）を、９６穴丸底プロピレンアッセイプレートのウェルに添加することにより、患者の血清または試験試料を評価した。陰性対照試料のために、この場合、２５μＬの２％（ｖ／ｖ）正常ヒト血清（ＮＨＳ）プールを、プレートのウェルに添加した。一連の陽性対照標準試料も調製し、この標準はエクリズマブに対して生じた様々な所定の量（４００、１００、５０、２５、１０、５、２および０ｎｇ／ｍＬ）の抗体を含む。２５μＬの標準試料を、プレートのウェルのセットに添加した。それぞれの試験試料、対照試料および標準試料を、３回評価した。
【０１８８】
次に、それぞれ、（ｉ）ビオチンにコンジュゲートさせたエクリズマブおよび（ｉｉ）ルテニウム（ＴＡＧ）にコンジュゲートさせたエクリズマブを２μｇ／ｍＬ含む２５μＬの溶液を、プレートの各ウェルに添加した。添加後、プレートを密封し、光から保護し、室温で１８時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、ストレプトアビジンでコーティングされたＤｙｎａＢｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の０．５ｍｇ／ｍＬ溶液の２５μＬアリコートを、プレートの各ウェルに添加した。プレートを再度密封し、光から保護し、室温で３時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、リン酸緩衝生理食塩水中に１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１５０ｍＬのバッファーを、各ウェルに添加した。プレートの各ウェルから生成された光の量（光放射）を、ＢｉｏＶｅｒｉｓ  Ｍ−３８４  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて測定した。
【０１８９】
試料が陽性であったか、および確認段階におけるさらなる試験に進めるべきかを決定するために、以下のスクリーニングアッセイを行った。試験試料を含むウェルから生成された平均光放射を、対応する対照試料を含むウェルから生成された平均光放射で除算した。得られた数が１．２以下であった場合、試験試料は陰性であると考えた。得られた数が１．２より大きかった場合、試験試料はスクリーニングアッセイ陽性であると考え、確認アッセイ段階に進めた。
【０１９０】
確認アッセイは、薬剤投与後の試験試料（エクリズマブで治療された患者から得られた血液）と、エクリズマブの投与前に患者から得られた対応する血液試料（以後、「薬剤投与前試料」とする）との直接比較を含んでいた。薬剤投与後の試験試料中に存在するエクリズマブの量を決定した。次いで、その決定された濃度のエクリズマブを薬剤投与前試料に添加して、「薬剤投与前＋ｅｃ試料」を作製した。薬剤投与前試料へのエクリズマブの添加は、未標識の薬剤干渉に起因する血清マトリックス効果の程度を正常化した。さらに、確認アッセイはまた、アッセイシグナル阻害剤としての過剰量のエクリズマブの存在下での薬剤投与後試験試料および薬剤投与前＋ｅｃ試料（本明細書では「試験＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ」および「薬剤投与前＋ｅｃ＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ」試料と呼ぶ）の評価も含んでいた。過剰のエクリズマブの添加は、アッセイシグナルが薬剤特異的であるか否かを評価するためのものである。
【０１９１】
２５μＬの試験試料（２％ｖ／ｖ）を、９６穴アッセイプレートの６個のウェルに添加した。同様に、２５μＬの薬剤投与前＋ｅｃ試料（２％ｖ／ｖ）を、アッセイプレートの別の６個のウェルに添加した。試験＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ条件を作製するために、２５μＬの５０μｇ／ｍＬのエクリズマブ溶液を、試験試料を含む６個のウェルのうちの３個に添加した。同様に、薬剤投与前＋ｅｃ＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ条件を作製するために、２５μＬの５０μｇ／ｍＬのエクリズマブ溶液を、薬剤投与前＋ｅｃ試料を含む６個のウェルのうちの３個に添加した。次いで、上記のように、それぞれ、（ｉ）ビオチンにコンジュゲートさせたエクリズマブおよび（ｉｉ）エクリズマブ−ＴＡＧを２μｇ／ｍＬ含有する２５μＬの溶液を、プレートの各ウェルに添加した。添加後、プレートを密封し、光から保護し、室温で１８時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、ストレプトアビジンでコーティングされたＤｙｎａＢｅａｄｓの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液の２５μＬアリコートを、プレートの各ウェルに添加した。プレートを再度密封し、光から保護し、室温で３時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、リン酸緩衝生理食塩水中に１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する１５０μＬのバッファーを、各ウェルに添加した。プレートの各ウェルからの光放射を、ＢｉｏＶｅｒｉｓ  Ｍ−３８４  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて測定した。
【０１９２】
試験試料が陽性である（すなわち、試料がヒト抗エクリズマブ抗体を含有する）か否かを決定するために、それぞれのウェル群からの平均光放射を以下のように評価した。まず、薬剤投与前＋ｅｃ＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ試料を含有するウェルから生成された平均光放射により除算した、薬剤投与前＋ｅｃ試料を含有するウェルから生成された平均光放射として、比Ａを決定した。比Ａは、阻害剤の存在下で減少したバックグラウンド血清の非特異的シグナル変化を示す。
【０１９３】
次に、試験＋ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ試料を含有するウェルから生成された平均光放射により除算した、試験試料を含有するウェルから生成された平均光放射として、比Ｂを算出した。比Ｂは、阻害剤の存在下で減少した試験試料における任意の光放出の変化を反映する。
【０１９４】
比Ａにより除算した比Ｂとして、第３の比である比Ｃを決定した。かくして、比Ｃは、存在する場合、試験試料が得られた患者におけるヒト抗エクリズマブ抗体応答の生成の結果得られた光放出の増加を反映する。比Ｃが１．３未満であった場合、試験試料は確認アッセイにおいて陰性であると考えた。比Ｃが１．３より大きかった場合、試験試料はヒト抗エクリズマブ抗体の存在の可能性について陽性であると考えた。
【０１９５】
（実施例３）
中和ヒト抗エクリズマブ抗体を検出するためのアッセイ
次いで、スクリーニングアッセイおよび確認アッセイの両方において陽性であると考えられた試験試料（ＨＡＨＡ陽性試験試料）を、試験試料中に存在するヒト抗エクリズマブ抗体がエクリズマブを中和することができるか否かを決定するために分析した。
【０１９６】
アッセイのための試料を調製するために、薬剤投与前試料およびＨＡＨＡ陽性試験試料中の補体成分Ｃ５の量も決定した。その結果を用いて、薬剤投与前またはＨＡＨＡ陽性試験試料に添加されるＣ５の量を、そのＣ５濃度が同一となるように決定した。ＨＡＨＡ陽性試験試料中のエクリズマブの量を決定した。決定された量のエクリズマブを、対応する正規化された薬剤投与前試料に添加して、薬剤投与前＋ｅｃ試料を作製した。
【０１９７】
アッセイプレートを調製するために、１５０μＬのブロッキングバッファー［リン酸緩衝生理食塩水中の３％ＢＳＡ］を、ストレプトアビジンでコーティングされた９６穴アッセイプレートの各ウェルに添加した。プレートを密封し、室温で１時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、各ウェルの内容物を除去し、１５０μＬの洗浄バッファー［リン酸緩衝生理食塩水中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０］で３回、ウェルを洗浄した。最後の洗浄の後、バッファーを除去し、ビオチンにコンジュゲートされたエクリズマブを含有する１μｇ／ｍＬ溶液の２５μＬを各ウェルに添加した。プレートを密封し、暗室中、３７℃で３時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、ウェルの内容物を除去し、洗浄バッファーで３回、ウェルを洗浄した。
【０１９８】
ウェルを洗浄した後、２５μＬの試験試料（２％ｖ／ｖ）を、プレートの３個のウェルに添加した。同様に、２５μＬの薬剤投与前＋ｅｃ試料（２％ｖ／ｖ）を、アッセイプレートの３個のウェルに添加した。さらに、一連の陽性対照標準溶液も調製し、エクリズマブに結合し、これを中和することが公知の様々な所定の量（５０、２５、１０、５、２および０ｎｇ／ｍＬ）の抗体を含有する、２５μＬの標準物をプレートのウェルのセットに添加した。プレートを再度密封し、暗室中、３７℃で１時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、ウェルの内容物を除去し、洗浄せずに、ルテニウムにコンジュゲートさせたＣ５の２５０ｎｇ／ｍＬ溶液の２５μＬを各ウェルに添加した。次いで、プレートを被覆し、室温で１時間、振とうしながらインキュベートした。インキュベーション後、プレートを１５０μＬの洗浄バッファーで３回洗浄した。次に、１５０μＬの２Ｘ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔ（界面活性剤；ＭＳＤ（登録商標）、カタログ番号Ｒ９２ＴＣ−１を含有する）を各ウェルに添加した。アッセイプレートの各ウェルから生成された光放射を、ＭＳＤ（登録商標）Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いるＭＳＤ（登録商標）Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００を用いて決定した。
【０１９９】
データを分析するために、以下の計算を行った。薬剤投与前＋ｅｃ試料を含有するウェルからの平均光放射を、ＨＡＨＡ陽性試験試料を含有するウェルから生成された平均光放射で除算した。得られた数値が１．３未満である場合、試験試料中のＨＡＨＡ応答が非中和的であることを示すと考えた。１．３より大きかった数値は、ＨＡＨＡ陽性試験試料が中和抗エクリズマブ抗体を含有し得ることを示していた。ＨＡＨＡ陽性試験試料に関するデータをさらに分析して、患者の試料中の存在する抗エクリズマブ抗体により、中和の程度、またはエクリズマブ結合活性の「抑制率（％）」を決定した。抑制率（％）は、１００％−［（抗エクリズマブ抗体が存在しない試料を用いてＮａｂアッセイにおいて得られたシグナル）／（１つまたは複数の抗エクリズマブ抗体を含有する確認アッセイ陽性試料を用いてＮａｂアッセイにおいて得られたシグナル）］×１００と計算された。この分析において有意なシグナル抑制率（％）を表すものに等しいか、またはそれより上であるカットオフ値は２３％である。
【０２００】
（実施例４）
ヒト患者におけるエクリズマブの低レベルの免疫原性
臨床試験において、エクリズマブをヒト患者に４週間にわたって毎週６００ｍｇ、１週間後に９００ｍｇ、次いで、その後２週間毎に９００ｍｇの用量を維持して静脈内投与した。各患者は、２年半にわたって少なくとも６８治療用量のエクリズマブを受けた。多くの患者は、少なくとも５年にわたって（１３０用量にわたって）治療濃度のエクリズマブを受けた。１６１人の患者から得た合計７９３の血清試料を試験して、ヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）応答が患者において生じたか否かを決定した。４９の血清試料が上記スクリーニングアッセイにおいて陽性であると決定された。４９の試料のうち、２０はエクリズマブを投与する前に得られた患者試料（薬剤投与前試料）であり、２９の試料はエクリズマブを投与した後の患者から得られたものであった（薬剤投与後試料）。薬剤投与後試料に対してのみ、確認アッセイを行った。試験した２９の薬剤投与後試料のうちの７は、上記の確認アッセイを用いて陽性であったが（確認アッセイ陽性試料）、これは抗エクリズマブ抗体が７の試料中に存在し得ることを示唆していた。
【０２０１】
確認アッセイ陽性試料を、確認アッセイ陽性試料に対応する薬剤投与前試料と共に上記の中和抗体アッセイ（Ｎａｂアッセイ）にかけた。上記のように、薬剤投与前試料に、薬剤投与後対応試料中で測定された濃度までエクリズマブおよび補体成分Ｃ５を補給した。
【０２０２】
Ｎａｂアッセイにおいて、３つの確認アッセイ陽性試料のみが、カットオフ値よりわずかに高い「抑制率（％）」の値を有すると決定された（３つの試料のうちの１つは第１の患者から得られたものであり、他の２つの試料は第２の患者から得られたものであった）。３つの試料に関する「抑制率（％）」の値は、それぞれ、２５．７％、２７．５％および３６．２％であると決定された。注目すべきことに、前記抗体の薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）特性は、試料中に存在する低レベルの抗エクリズマブ抗体によって影響されなかった。
【０２０３】
これらのデータは、エクリズマブ抗体が、治療用量でヒト患者に長期投与した場合、一般的には免疫原性が低く、抗エクリズマブ抗体応答が免疫原性試験において検出可能であった少数の患者（１６１人の患者のうち２人）において、その応答は前記抗体の治療効果を中和しなかったことを示している。
【０２０４】
（実施例５）
新規ヒト化治療抗体を作製するための本明細書に記載の足場の使用
マウス抗ヒトＣ５ａ抗体の可変領域を、ヒト化にかけた。マウス軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列を、以下の表６に示す。
【０２０５】
【表６】
2013531476.tif 000026
日常的な分子生物学的方法を用いて、ヒト生殖細胞系列フレームワーク足場上にマウス抗体ＣＤＲを移植した。重鎖のＣＤＲ２中のセリン残基をアスパラギンと交換して、それによって潜在的なグリコシル化部位を除去することにより、さらなるヒト化を行った。ヒト化抗ヒトＣ５ａ抗体のアミノ酸配列を、表７に示す。
【０２０６】
【表７】
2013531476.tif 000027
表７に示されるように、ヒト化抗Ｃ５ａ抗体は、エクリズマブ抗体の軽鎖フレームワーク領域１（配列番号９）、２（配列番号１０）および３（配列番号１１）ならびにエクリズマブ抗体の重鎖フレームワーク領域１（配列番号１７）、２（配列番号１４）および３（配列番号１５）（全てＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの定義の下で定義される）を含む。上記の表１および２を参照されたい。軽鎖フレームワーク４（ＬＦＲ４）は、１個のアミノ酸（上記の表７において太字で示される）によりエクリズマブのＬＦＲ４と異なる。同様に、重鎖フレームワーク４（ＨＦＲ４）は、１個のアミノ酸（これも上記の表７において太字で示される）によりエクリズマブのＨＦＲ４と異なる。
【０２０７】
ヒト化抗体をＢＩＡｃｏｒｅ分析にかけて、ヒトＣ５ａに対するその親和性を定量し、部分的に、ヒト化がその抗原に対する抗体の結合親和性に影響したか否かを決定した。例えば、ＫａｒｌｓｓｏｎおよびＬａｒｓｓｏｎ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８巻：３８９〜４１５頁を参照されたい。簡単に述べると、捕捉技術を用いてヒト化抗体を３〜４つの濃度のヒトＣ５ａ（抗原）を用いてスクリーニングした。センサーチップ表面上を通過させた０．６ｎＭ〜５．９ｎＭの範囲の様々な濃度のヒトＣ５ａを用いてＣＭ５センサーチップ上に直接固定された抗Ｆｃ（ヒト）抗体により、抗体を捕捉した。各サイクルの後に２０ｍＭ  ＨＣｌ、０．０２％Ｐ２０を用いて表面を再生して、結合した抗体および抗原を除去した。１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を用いるＢｉａｃｏｒｅ  ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを用いて、データを評価した。ｋａ（結合速度定数）、ｋｄ（解離速度定数）、およびＫＤ（平衡解離定数）などの動力学情報を、適合から得た。分析の結果は以下の通りである：ｋａ≒１．９３×１０６Ｍ−１ｓ−１；ｋｄ≒５．７６×１０−４ｓ−１；およびＫＤ≒２．９８×１０−１０Ｍ。同様の条件下で、ヒトＣ５ａに結合したマウス抗Ｃ５ａ抗体対応物は以下のパラメータを有する：ｋａ≒２．７６×１０６Ｍ−１ｓ−１；ｋｄ≒１．４１×１０−４ｓ−１；およびＫＤ≒５．１２×１０−１０Ｍ。これらのデータは、マウス抗体のヒト化がヒトＣ５ａに対する抗体の結合親和性を改善することを示唆していた（５．１２×１０−１０Ｍ〜２．９８×１０−１０ＭのＫＤ）。ドナー抗体と比較して、ヒトにおける低下した免疫原性についてヒト化抗体を試験するための方法は当業界で公知であり、本明細書に記載される。
【０２０８】
少なくとも、これらの結果は、本明細書に記載のエクリズマブフレームワーク領域を用いて、その同種抗原に対する抗体の親和性に有害に影響することなく他の非ヒト抗体をヒト化することができることを示唆している。
【０２０９】
本開示をその特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者であれば、本開示の真の精神および範囲を逸脱することなく、様々な変更を行い、均等物と置換することができることを理解すべきである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップまたは複数のステップに適合させるために、本開示の対象、精神および範囲に対して多くの改変を行うことができる。そのような改変は全て、本開示の範囲内にあると意図される。
【図１】
2013531476.tif 000028
【図２】
2013531476.tif 000029
【配列表】
2013531476000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年1月10日(2013.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
【請求項２】
ＬＦＲ４が、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する前記軽鎖可変領域から得られる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、請求項１から３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
ＬＦＲ１が配列番号９、配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ＬＦＲ２が配列番号１０、配列番号１８、配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
ＬＦＲ３が配列番号１１、配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ＬＦＲ４が配列番号１２または配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１から４のいずれか一項に記載のポリペプチドであって、
（ｉ）ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉｉ）ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むか；または
（ｉｖ）ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、
ポリペプチド。
【請求項１２】
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
【請求項１３】
ＬＦＲ４が、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する前記重鎖可変領域から得られる、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、請求項１２または１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、請求項１２から１４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記フレームワーク領域および前記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
ＨＦＲ２が配列番号１４、配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
ＨＦＲ３が配列番号１５、配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
ＨＦＲ４が配列番号１６、配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１２から１５のいずれか一項に記載のポリペプチドであって、
（ｉ）ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉｉ）ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｖ）ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むか；または
（ｖ）ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、
ポリペプチド。
【請求項２４】
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該軽鎖ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該重鎖ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、
遺伝子工学的に操作された抗体。
【請求項２５】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のポリペプチド；または
請求項２４に記載の遺伝子工学的に操作された抗体
をコードする核酸。
【請求項２６】
ドナー軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域は、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない、方法。
【請求項２７】
ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された抗体可変領域は、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない、方法。
【請求項２８】
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、
ここで、ＬＦＲ１は、配列番号９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は、配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＬＣＤＲ１はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該軽鎖ポリペプチドは配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、
ここで、ＨＦＲ１は、配列番号１３、１７または１９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該重鎖ポリペプチドは配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含まず、
該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低く、該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と同じ抗原に結合する、遺伝子工学的に操作された抗体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
本開示の他の特徴および利点、例えば、ヒトにおける免疫原性を低下させた治療抗体を作製する方法は、以下の説明、実施例、および特許請求の範囲から明らかとなる。
したがって本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
（項目２）
ＬＦＲ４が、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する上記軽鎖可変領域から得られる、項目１に記載のポリペプチド。
（項目３）
上記ＣＤＲのうちの１つが、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する上記軽鎖可変領域に由来する、項目１または２に記載のポリペプチド。
（項目４）
上記ＣＤＲのうちの２つが、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する上記軽鎖可変領域に由来する、項目１または２に記載のポリペプチド。
（項目５）
上記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、項目１から３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目６）
上記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、項目１または２に記載のポリペプチド。
（項目７）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、項目１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目８）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、項目１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目９）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、項目１から６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１０）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７または９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１１）
ＬＦＲ２が配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７、９または１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１２）
ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７または９から１１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１３）
ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７または９から１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１４）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７または９から１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１５）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から７または９から１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１６）
ＬＦＲ１が配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６または８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１７）
ＬＦＲ２が配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６、８または１６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１８）
ＬＦＲ３が配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６、８、１６または１７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目１９）
ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６、８または１６から１８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目２０）
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６、８または１６から１９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目２１）
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６、８または１６から１９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目２２）
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目２３）
配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、項目２２に記載のポリペプチド。
（項目２４）
以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含むポリペプチドであって、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３のうちの１つまたは複数は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。
（項目２５）
ＬＦＲ４が、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する上記重鎖可変領域から得られる、項目２４に記載のポリペプチド。
（項目２６）
上記ＣＤＲのうちの１つが、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する上記重鎖可変領域に由来する、項目２４または２５に記載のポリペプチド。
（項目２７）
上記ＣＤＲのうちの２つが、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する上記重鎖可変領域に由来する、項目２４または２５に記載のポリペプチド。
（項目２８）
上記ＣＤＲのうちの少なくとも２つが、同じドナー抗体に由来する、項目２４から２６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目２９）
上記ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、項目２４または２５に記載のポリペプチド。
（項目３０）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される、項目２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３１）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａに従って定義される、項目２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３２）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、項目２４から２９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３３）
ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３４）
ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０、３２または３３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３５）
ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２から３４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３６）
ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２から３５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３７）
ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３８）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目３９）
ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から３０または３２から３６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４０）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９または３１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４１）
ＨＦＲ２が配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９、３１または４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４２）
ＨＦＲ３が配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９、３１、４０または４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４３）
ＨＦＲ４が配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９、３１または４０から４２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４４）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９、３１または４０から４３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４５）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目２４から２９、３１または４０から４３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４６）
免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、項目２４から４５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（項目４７）
配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４６に記載のポリペプチド。
（項目４８）
上記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域が、ＩｇＧ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＡ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＥ重鎖ポリペプチド定常領域、ＩｇＤ重鎖ポリペプチド定常領域またはＩｇＭ重鎖ポリペプチド定常領域である、項目４６に記載のポリペプチド。
（項目４９）
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、ここで、軽鎖フレームワーク領域ＬＦＲ１、ＬＦＲ２およびＬＦＲ３は、配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域から得られ、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該軽鎖ポリペプチドは、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、ここで、重鎖フレームワーク領域ＨＦＲ１、ＨＦＲ２およびＨＦＲ３は、配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域から得られ、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうちの１つまたは複数は、ドナー抗体から得られ、ここで、該重鎖ポリペプチドは、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含まない、
遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５０）
上記軽鎖フレームワーク領域、上記重鎖フレームワーク領域、上記軽鎖ＣＤＲ、および上記重鎖ＣＤＲが、Ｋａｂａｔの定義に従って定義される、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５１）
上記軽鎖フレームワーク領域、上記重鎖フレームワーク領域、上記軽鎖ＣＤＲ、および上記重鎖ＣＤＲが、Ｃｈｏｔｈｉａの定義に従って定義される、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５２）
上記軽鎖フレームワーク領域、上記重鎖フレームワーク領域、上記軽鎖ＣＤＲ、および上記重鎖ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５３）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５４）
ＬＦＲ２が配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０、５２または５３のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５５）
ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から５４のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５６）
ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から５５のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５７）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から５６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５８）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から５６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目５９）
ＬＦＲ１が配列番号２０または配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９または５１に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６０）
ＬＦＲ２が配列番号２１または配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１または５９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６１）
ＬＦＲ３が配列番号２２または配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５９または６０のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６２）
ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１または５９から６１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６３）
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１または５９から６２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６４）
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１または５９から６３のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６５）
上記軽鎖ポリペプチドが免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、項目４９から６４のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６６）
上記軽鎖ポリペプチド定常領域がヒトアミノ酸配列を含む、項目６５に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６７）
上記軽鎖定常領域がλ軽鎖定常領域またはκ軽鎖定常領域である、項目６５または６６に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６８）
配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む、項目６５から６７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目６９）
ＨＦＲ１が配列番号１３、１７または１９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から６８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７０）
ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から６９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７１）
ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から７０のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７２）
ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から７１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７３）
ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７４）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７５）
ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５０または５２から７２のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７６）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１または５３から６８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７７）
ＨＦＲ２が配列番号２７または配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５３から６８または７６のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７８）
ＨＦＲ３が配列番号２８または配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５３から６８、７６または７７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目７９）
ＨＦＲ４が配列番号２９または配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５３から６８または７６から７８のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８０）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５３から６８または７６から７９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８１）
ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９、５１、５３から６８または７６から７９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８２）
上記重鎖ポリペプチドが免疫グロブリン重鎖ポリペプチド定常領域の全部または一部を含む、項目４９から８１のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８３）
上記重鎖ポリペプチド定常領域がヒトアミノ酸配列を含む、項目８２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８４）
上記重鎖ポリペプチドが免疫グロブリン分子のＦｃ部分を含む、項目８２または８３に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８５）
Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ２免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ３免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＧ４免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＡ免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＭ免疫グロブリンＦｃ領域、ＩｇＥ免疫グロブリンＦｃ領域またはＩｇＤ免疫グロブリンＦｃ領域である、項目８４に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８６）
上記重鎖ポリペプチドが配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９から８５のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８７）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８８）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目８９）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９０）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９１）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９２）
ＬＦＲ１が配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９３）
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９４）
ＬＦＲ１が配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９５）
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９６）
ＬＦＲ１が配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２が配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３が配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４が配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ１が配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２が配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３が配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４が配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９７）
表５に記載の重鎖フレームワーク領域と軽鎖フレームワーク領域との対のセットを含む、項目４９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９８）
Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片である、項目４９から６４、６９から８２、または８７から９７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目９９）
上記軽鎖ポリペプチドおよび上記重鎖ポリペプチドが互いに共有結合している、項目４９から９７のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１００）
補体成分タンパク質に結合する、項目４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０１）
上記補体成分タンパク質が、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ２、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、プロパージン、補体因子Ｄ、補体因子Ｂ、ＭＢＬ、ＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２およびＭＡＳＰ３からなる群より選択される、項目１００に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０２）
細胞表面受容体に結合する、項目４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０３）
上記細胞表面受容体がＧタンパク質共役受容体である、項目１０２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０４）
上記細胞表面受容体がケモカイン受容体またはサイトカイン受容体である、項目１０２または１０３に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０５）
上記細胞表面受容体が受容体チロシンキナーゼである、項目１０２に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０６）
（ｉ）細胞死受容体、または（ｉｉ）細胞死受容体のリガンドに結合する、項目４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０７）
増殖因子、ケモカイン、またはサイトカインに結合する、項目４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０８）
免疫グロブリン分子に結合する、項目４９から９９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１０９）
上記免疫グロブリン分子がＩｇＥ分子である、項目１０８に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１１０）
項目１から４８のいずれか一項に記載のポリペプチド；または
項目４９から１０９のいずれか一項に記載の遺伝子工学的に操作された抗体
をコードする核酸。
（項目１１１）
項目１１０に記載の核酸を含むベクター。
（項目１１２）
上記核酸が発現制御配列に作動可能に連結されている、項目１１１に記載のベクター。
（項目１１３）
項目１１１または１１２に記載のベクターを含む細胞。
（項目１１４）
ポリペプチドまたは遺伝子工学的に操作された抗体を産生させるための方法であって、項目１１３に記載の細胞を、該ポリペプチドまたは該遺伝子工学的に操作された抗体の発現を可能にするのに好適な条件下で培養する工程を含む、方法。
（項目１１５）
上記培養された細胞から、または該細胞を培養した培地から、上記ポリペプチドまたは上記遺伝子工学的に操作された抗体を単離する工程をさらに含む、項目１１４に記載の方法。
（項目１１６）
項目１１４または１１５に記載の方法により産生された、単離されたポリペプチドまたは単離された遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１１７）
ドナー軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域は、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない、方法。
（項目１１８）
上記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域と相補的な重鎖抗体可変領域または重鎖抗体可変領域をコードする核酸を取得して、遺伝子工学的に操作された抗体を作製する工程をさらに含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
誘導選択を用いて上記重鎖抗体可変領域を取得する、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
上記重鎖抗体可変領域が遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域である、項目１１８に記載の方法。
（項目１２１）
上記遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域の作製が、
（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された抗体可変領域が、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない、項目１２０に記載の方法。
（項目１２２）
ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製するための方法であって、
（ｉ）配列番号５もしくは配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター重鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター重鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体重鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体重鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された抗体可変領域は、配列番号５または配列番号７に記載の完全なアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド可変領域を含まない、方法。
（項目１２３）
上記遺伝子工学的に操作された重鎖抗体可変領域と相補的な軽鎖抗体可変領域を取得し、遺伝子工学的に操作された抗体を作製する工程をさらに含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
誘導選択を用いて、上記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域を取得する、項目１２３に記載の方法。
（項目１２５）
上記軽鎖抗体可変領域が、遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域である、項目１２３に記載の方法。
（項目１２６）
上記遺伝子工学的に操作された軽鎖抗体可変領域の作製が、
（ｉ）配列番号２もしくは配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むアクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列、または（ｉｉ）該アクセプター軽鎖抗体可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
（ｉｉｉ）少なくとも１つのドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｉｖ）該ドナー抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む情報を提供する工程と、
該アクセプター軽鎖抗体可変領域の１つまたは複数のＣＤＲを、該ドナー抗体軽鎖可変領域に由来する１つまたは複数のＣＤＲと交換して、該ドナー抗体軽鎖可変領域の免疫原性と比較してヒトにおける免疫原性が低い遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域を作製する工程と
を含み、ここで、該遺伝子工学的に操作された軽鎖可変領域が、配列番号２または配列番号８に記載の完全なアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含まない、項目１２５に記載の方法。
（項目１２７）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔの定義に従って定義される、項目１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２８）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＣｈｏｔｈｉａの定義に従って定義される、項目１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２９）
上記フレームワーク領域および上記ＣＤＲがＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、項目１１７から１２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３０）
上記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域を産生させる工程をさらに含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１３１）
上記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域を細胞中で産生させる、項目１３０に記載の方法。
（項目１３２）
上記遺伝子工学的に操作された抗体重鎖可変領域を産生させる工程をさらに含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１３３）
上記遺伝子工学的に操作された抗体重鎖可変領域を細胞中で産生させる、項目１３２に記載の方法。
（項目１３４）
上記細胞から、または該細胞を培養した培地から、上記遺伝子工学的に操作された抗体軽鎖可変領域または上記遺伝子工学的に操作された重鎖可変領域を単離する工程をさらに含む、項目１３０から１３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３５）
上記遺伝子工学的に操作された抗体を産生させる工程をさらに含む、項目１１８または１２３に記載の方法。
（項目１３６）
上記遺伝子工学的に操作された抗体を細胞中で産生させる、項目１３５に記載の方法。
（項目１３７）
上記細胞から、または該細胞を培養した培地から、上記遺伝子工学的に操作された抗体を単離する工程をさらに含む、項目１３５または１３６に記載の方法。
（項目１３８）
上記遺伝子工学的に操作された抗体が上記ドナー抗体と同じ抗原に結合するか否かを決定する工程をさらに含む、項目１３５から１３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３９）
上記遺伝子工学的に操作された抗体が、同じ抗原に対する上記ドナー抗体の親和性と比較して標的抗原に対するより高い親和性を有する、項目１３５から１３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４０）
上記遺伝子工学的に操作された抗体に結合する抗体が、該遺伝子工学的に操作された抗体をヒトに投与した後に産生されるか否かを決定する工程をさらに含む、項目１３５から１３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４１）
上記遺伝子工学的に操作された抗体を作り変える工程をさらに含む、項目１３５から１４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４２）
上記作り変えが、フレームワーク領域の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１に記載の方法。
（項目１４３）
上記作り変えが、フレームワーク領域の少なくとも２つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１または１４２に記載の方法。
（項目１４４）
上記作り変えが、少なくとも２つの異なるフレームワーク領域中の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４５）
上記作り変えが、フレームワーク領域中の１つまたは複数のアミノ酸を置換する工程を含まない、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
上記作り変えが、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１または１４５に記載の方法。
（項目１４７）
上記作り変えが、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも２つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１、１４５または１４６に記載の方法。
（項目１４８）
上記作り変えが、ＣＤＲの少なくとも１つのアミノ酸位置を置換する工程を含み、該ＣＤＲが、Ｋａｂａｔの定義またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａの組合せ定義に従って定義される、項目１４６または１４７に記載の方法。
（項目１４９）
上記作り変えが、上記重鎖可変領域の位置２８および３０（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の一方または両方のアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５０）
上記作り変えが、少なくとも２つの異なるＣＤＲ中の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１または１４５から１４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５１）
上記作り変えが、上記重鎖可変領域の位置２７、２８、３０、７１または７８（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１から１４４または１４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５２）
上記作り変えが、上記遺伝子工学的に操作された抗体の上記重鎖可変領域の位置２７、２８または３０（Ｋａｂａｔの番号付けによる）の少なくとも１つのアミノ酸を置換する工程を含む、項目１４１から１４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５３）
上記作り変えが、少なくとも１つのスペーサーアミノ酸配列を、上記遺伝子工学的に操作された抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域の一方または両方に導入する工程を含む、項目１４１から１５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５４）
フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、上記交換前に置換する、項目１４１から１５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５５）
フレームワークまたはＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸を、上記交換後に置換する、項目１４１から１５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５６）
上記アクセプター抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列が項目１に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、項目１１７から１２２または１２６から１５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５７）
上記アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列が項目２４に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、項目１２１から１５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５８）
上記アクセプター抗体軽鎖可変領域アミノ酸配列が項目１に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含み、上記アクセプター抗体重鎖可変領域アミノ酸配列が項目２４に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を含む、項目１１７から１５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５９）
（ｉ）軽鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）重鎖ポリペプチドを含む遺伝子工学的に操作された抗体であって、
該軽鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＬＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＬＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＬＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＬＦＲ４を含み、
ここで、ＬＦＲ１は、配列番号９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ２は、配列番号１０または配列番号１８に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ３は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＬＦＲ４は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＬＣＤＲ１はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３はドナー抗体に由来する軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該軽鎖ポリペプチドは配列番号２または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含まず、
該重鎖ポリペプチドは、以下の順序のアミノ酸配列セグメント：ＨＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＨＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＨＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＨＦＲ４を含み、
ここで、ＨＦＲ１は、配列番号１３、１７または１９に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ２は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ３は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、ＨＦＲ４は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列であって、０から３つのアミノ酸置換を含む、アミノ酸配列を含み、
ここで、ＨＣＤＲ１はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３はドナー抗体に由来する重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、
ここで、該重鎖ポリペプチドは配列番号５または配列番号７に記載のアミノ酸配列を含まず、
該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と比較してヒトにおける免疫原性が低く、該遺伝子工学的に操作された抗体は、該ドナー抗体と同じ抗原に結合する、遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１６０）
項目１５９に記載の遺伝子工学的に操作された抗体であって、
（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が単一のドナー抗体に由来する、ならびに
（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３が単一のドナー抗体に由来する、
のうち一方または両方を満たす、遺伝子工学的に操作された抗体。
（項目１６１）
上記軽鎖ＣＤＲおよび上記重鎖ＣＤＲの全部が同じドナー抗体に由来する、項目１５９または１６０に記載の遺伝子工学的に操作された抗体。
【国際調査報告】
2013531476.tif 000030
2013531476.tif 000031