(57)【要約】【課題】本発明は、被験物質本来の性質のより正確な測定を可能とする変異原性試験、特に代謝活性化系での変異原性試験方法を提供することを目的とする。【解決手段】被験物質を、胆汁酸またはその塩の水溶液に溶解または分散させて被験溶液を調製し、細胞を含む培地に、前記被験溶液を添加して、さらに培養を行って前記被験物質の変異原性を試験することを特徴とする変異原性試験方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験物質を、胆汁酸またはその塩の水溶液に溶解または分散させて被験溶液を調製し、
細胞を含む培地に、前記被験溶液を添加して、さらに培養を行って前記被験物質の変異原性を試験すること
を特徴とする変異原性試験方法。
【請求項２】
前記被験物質が、脂溶性の化学物質であることを特徴とする請求項１に記載の変異原性試験方法。
【請求項３】
前記被験溶液の添加時またはその前後において、前記細胞を含む培地に代謝活性化物質を添加することを特徴とする請求項１または２に記載の変異原性試験方法。
【請求項４】
前記胆汁酸またはその塩が、コール酸、ケノデオキシコール酸、ヒオコール酸、５α-シプリノール、グリココール酸、およびタウロコール酸並びにこれらの塩からなる群より選ばれる１種または２種以上の組み合わせであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異原性試験方法。
【請求項５】
前記胆汁酸またはその塩の水溶液の胆汁酸またはその塩の濃度が、２重量％〜１０重量％であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異原性試験方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異原性試験方法に使用される試験キットであって、
胆汁酸またはその塩を含むパックと培地成分を含むパックとを備えた変異原性試験用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、より信頼性の高い変異原性試験方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学物質の変異原性の有無を測定する変異原性試験法としては、サルモネラ菌等の微生物を用いるエームス試験やほ乳類の細胞を用いる染色体異常試験が知られている。
【０００３】
例えば、染色体異常試験は、細胞内の染色体に対して、被験物質の遺伝毒性を調べるものである。被験物質の作用として、染色体の切断や誤融合といった「構造異常」と染色体の本数の変化を引き起こす「数的異常」を観察し、それらを記録する。「構造異常」・「数的異常」いずれかに所定の異常が観察されると、その被験物質は、生物に対して発がんおよび遺伝影響作用の可能性があると判定される。
【０００４】
生体内に摂取された化学物質は、様々な酵素により代謝反応を受ける。一般に、化学物質は、代謝反応により解毒化されるが、代謝により変異原性物質に変化する化学物質も多い。このため、ラット肝臓抽出物を加えた代謝活性化系での染色体異常試験も実施されている。
【０００５】
被験物質は、物性に応じて適切な媒体に溶解／分散して投与するが、媒体自体が細胞に影響する虞があるため、媒体の選択は慎重に実施しなければならない。被験物質が脂溶性物質の場合、しばしばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）が使用される。例えば、特許文献１（特開２０００−１２５８９７号公報）には、ベンツピレンの染色体異常試験を行うに際して、ＤＭＳＯに溶解した検体溶液を用いる方法を開示している。しかし、ＤＭＳＯを媒体として使用する場合、ＤＭＳＯ自体が培養細胞や代謝系に影響を与える問題があり、被験物質の本来の性質を正確に判断できない場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０００−１２５８９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、被験物質本来の性質のより正確な測定を可能とする変異原性試験、特に代謝活性化系での変異原性試験方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の事項に関する。
【０００９】
１．被験物質を、胆汁酸またはその塩の水溶液に溶解または分散させて被験溶液を調製し、
細胞を含む培地に、前記被験溶液を添加して、さらに培養を行って前記被験物質の変異原性を試験すること
を特徴とする変異原性試験方法。
【００１０】
２．前記被験物質が、脂溶性の化学物質であることを特徴とする上記１に記載の変異原性試験方法。
【００１１】
３．前記被験溶液の添加時またはその前後において、前記細胞を含む培地に代謝活性化物質を添加することを特徴とする上記１または２に記載の変異原性試験方法。
【００１２】
４．前記胆汁酸またはその塩が、コール酸、ケノデオキシコール酸、ヒオコール酸、５α-シプリノール、グリココール酸、およびタウロコール酸並びにこれらの塩からなる群より選ばれる１種または２種以上の組み合わせであることを特徴とする上記１〜３のいずれか１項に記載の変異原性試験方法。
【００１３】
５．前記胆汁酸またはその塩の水溶液の胆汁酸またはその塩の濃度が、２重量％〜１０重量％であることを特徴とする上記１〜４のいずれか１項に記載の変異原性試験方法。
【００１４】
６．上記１〜５のいずれか１項に記載の変異原性試験方法に使用される試験キットであって、
胆汁酸またはその塩を含むパックと培地成分を含むパックとを備えた変異原性試験用キット。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、被験物質本来の性質のより正確な測定を可能とする変異原性試験、特に代謝活性化系での変異原性試験方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】１，２−ジクロロエタンの代謝分解試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の変異原性試験方法において、胆汁酸またはその塩の水溶液に、被験物質を溶解または分散させることで被験物質を含有する被験溶液を調製する。以下、胆汁酸またはその塩を、「胆汁酸（塩）」と表記する。同様に、胆汁酸の具体的化合物に関して、例えばタウロコール酸またはその塩を、「タウロコール酸（塩）」のように表記する。
【００１８】
胆汁酸は、消化管内で食物脂肪等の脂溶性物質を乳化し生体吸収を促進する働きを有することが知られている。本発明者は、胆汁酸のこのような働きに注目し、脂溶性（疎水性）の被験物質の変異原性試験を行う際の媒体として検討した結果、従来から使用されていたＤＭＳＯに変わるものとして有用であることを見いだし、本発明を完成した。
【００１９】
胆汁酸としては、肝臓で生合成される一次胆汁酸、および一次胆汁酸が腸管で微生物による変換をうけて生成される二次胆汁酸、さらにこれらがタウリンと抱合（アミド結合）したタウリン抱合型胆汁酸の形態、またグリシンと抱合（ペプチド結合）したグリシン抱合型胆汁酸の形態が含まれる。
【００２０】
具体的にはコール酸、ケノデオキシコール酸、ヒオコール酸、５α-シプリノール、グリココール酸、およびタウロコール酸等の一次胆汁酸、デオキシコール酸、リトコール酸、ヒオデオキシコール酸、およびウルソデオキシコール酸等の二次胆汁酸を挙げることができる。細胞毒性の点から、好ましくは一次胆汁酸、即ちコール酸、ケノデオキシコール酸、ヒオコール酸、５α-シプリノール、グリココール酸、およびタウロコール酸から選ばれる胆汁酸が好ましく、より好ましくは抱合胆汁酸、即ちグリココール酸およびタウロコール酸から選ばれる胆汁酸が好ましい。
【００２１】
胆汁酸は、水に溶解可能な塩の形態であってもよく、例えばカリウムやナトリウム等のアルカリ金属との塩、またはカルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩が挙げられる。特に、ナトリウム塩、カリウム塩およびマグネシウム塩が好ましい。
【００２２】
胆汁酸（塩）は、親水性部分と疎水性部分を有するため、本発明において、胆汁酸（塩）を使用することで、被験物質が、水に対する溶解性の低い脂溶性物質であっても、水溶液中で被験物質を乳化して溶解／分散することができる。
【００２３】
胆汁酸（塩）水溶液の濃度は、特に限定されないが、例えば１〜５０質量％、好ましくは２〜２０質量％、より好ましくは２〜１０重量である。
【００２４】
胆汁酸（塩）水溶液または被験溶液には、必要によりその他の添加剤、例えば塩、緩衝剤成分、培養液成分等を添加してもよい。
【００２５】
上記のようにして被験溶液を調製した後、細胞を含む培地に、被験溶液を添加して、公知の方法に従って変異原性試験を実施する。代謝活性化系の試験では、通常、被験溶液の添加時またはその前後において、細胞を含む培地に、代謝活性化物質を添加する。
【００２６】
本発明が適用可能な変異原性試験法として、細胞を用いて検体の変異原性を試験する方法であれば特に限定されないが、例えば、染色体異常試験、エームス試験、ｕｍｕ試験、マウスリンフォーマ試験（ＭＬＡ）等が挙げられる。
【００２７】
被験物質は、特に限定されないが、好ましくは水に対する溶解度の小さな脂溶性物質（疎水性物質）である。本発明は、特に、水に溶けにくい物質（例えば、水に対する溶解度が１質量％以下程度）や水にほとんど溶けない物質（例えば、水に対する溶解度が０．０１質量％以下程度）の評価に適している。
【００２８】
使用できる「細胞」は、特に限定されず、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、細菌、酵母、放線菌等が広く使用できる。本発明でいう細胞は、採用する変異原性試験法により異なるが、染色体異常試験では、ＣＨＬ（チャイニーズハムスター雌新生仔肺由来の細胞株）、ＣＨＯ−Ｋ１（チャイニーズハムスター卵巣の細胞株）、Ｖ７９（チャイニーズハムスター雄肺由来の細胞株）、ヒト末梢血リンパ球等が使用できる。また、エイムス試験ではサルモネラ菌変異株、大腸菌等が使用され、ＭＬＡではマウスＬ５１７８Ｙ細胞等が使用され、ｕｍｕ試験ではネズミチフス菌ＮＭ２００９株等が使用される。これらは、一例であって、試験にあわせて最適な細胞を適宜使用することが好ましい。
【００２９】
「培地（培養液）」は、変異原性試験に使用されるものであれば特に限定されず、採用する変異原性試験法および培養される細胞の種類に応じて適宜選択することができる。例えば、染色体異常試験方法については、例えばイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）、およびその成分の一部を変えたり、成分を追加した変法の培地などを使用することができる。また、細胞としてリンパ腫細胞を使用する場合は、ＲＰＭＩ培地等も用いられる。また、必要に応じて、ウシ、ウマ等の血清を添加してもよい。
【００３０】
代謝活性化系の試験に使用される代謝活性化物質としては、特に限定されないが、一般に、誘導剤で処理されたラット肝ホモジネートの遠心上清であるＳ−９に、補酵素などを加えたＳ−９ｍｉｘ等が用いられる。
【００３１】
染色体異常試験、エームス試験、ｕｍｕ試験、マウスリンフォーマ試験（ＭＬＡ）等の変異原性試験法はいずれも公知であり、文献に従って実施することができる。例えば特開２０００−１２５８９７号に記載されているように、一般に、（１）細胞と被験溶液とを接触させる第１工程、（２）被験溶液と接触させた後の細胞を培養する第２工程、および（３）細胞数または細胞増殖率および細胞の異常を検査する第３工程を有する。
【００３２】
より具体的に染色体異常試験方法を例にとると、例えば以下の３工程で試験を実施することができる。
【００３３】
（１）培地を入れたシャーレにＣＨＬ細胞を播種した後、３日間培養する。次いで、種々の被験物質の濃度となるように、被験溶液を添加し、さらに培養する。ブランクとして、被験物質を添加しないシャーレも同様に培養する。代謝活性化法では、検体溶液と同時にＳ−９ｍｉｘも添加する。被験溶液とＳ−９ｍｉｘを添加して培養した後、Ｓ−９ｍｉｘを含まない新鮮な培地と交換し、さらに培養する。
【００３４】
（２）培養後、コルセミド処理、トリプシン処理を行って細胞をシャーレから剥がし、遠心処理により細胞を回収する。
【００３５】
（３）所定の方法で、生細胞数をカウントし、また、染色体標本を作製して染色体異常を検査する。
【００３６】
変異原性試験法の手順自体は、公知であるので、定型化された手順に従って、あるいは必要により一部を変更して、当業者が実施することができる。
【００３７】
さらに、本発明は、上述の本発明の試験方法を簡便に実施するためのキットにも関する。胆汁酸（塩）を収納したパックを、例えば培地成分を収納したパックと共に、キットとして提供することにより、試験の迅速化を図ることができる。また、培地成分のパックに代えて、あるいは加えて他の試験用部材と共にキットとしてもよい。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例により本発明を説明する。
【００３９】
＜染色体異常試験＞
・細胞
平成８年１２月１１日（ロット番号１１３０９２）にヒューマンサイエンス研究資源バンク（現：医薬基盤研究所・ＪＣＲＢ生物資源バンク）から購入したＣＨＬ／ＩＵ（チャイニーズハムスター肺由来繊維芽細胞株）の３０継代以内を使用した。
【００４０】
・培養液
仔牛血清を１０％添加したイーグルＭＥＭ培地を用いた。
【００４１】
・被験物質（販売元、グレード）
ジクロロメタン：和光純薬工業、残留農薬用
クロロホルム：和光純薬工業、試薬特級
１，２−ジクロロエタン：和光純薬工業、試薬特級
１，２−ジクロロプロパン：和光純薬工業、和光特級
【００４２】
・媒体
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）：和光純薬、生化学用
１０％タウロコール酸ナトリウム溶液：タウロコール酸ナトリウム（和光純薬工業製、和光特級）を注射蒸留水（大塚製薬工業製）に１０ｗ／ｖ％で溶解して調製した。
【００４３】
・被験溶液の調製
（１）媒体がＤＭＳＯの場合、培養液に添加可能な最大量は、０．５％であるため、培養液中の濃度の２００倍濃度の被験物質溶液を調製した。
【００４４】
（２）媒体が１０％タウロコール酸ナトリウム水溶液の場合は、培養液に添加可能な最大量は１０．０％であるため、培養液中の濃度の１０倍濃度の被験物質溶液を調製した。
【００４５】
また、被験溶液は、用時に調製し２時間以内に使用した。
【００４６】
＜ｕｍｕ試験＞
株式会社蛋白精製工業製の変異原性試験キット「ウムラックＡＴ」を使用した。即ち、ネズミチフス菌ＮＭ２００９株を用い、変異原によるＤＮＡへの損傷をβ-galactosidaseの酵素活性の強弱により、すなわち発色基質（Ｘ−Ｇａｌ）の青色発色の強弱（吸光度）で測定する。
【００４７】
・被験溶液の調製
媒体がＤＭＳＯの場合、菌液に対する試験溶液の添加量が１％となるように試験溶液を調製した。タウロコール酸ナトリウム溶液は、７％（７ｗ／ｖ％）とし、菌液に対する試験溶液の添加量が１０％となるように試験溶液を調製した。
【００４８】
・被験物質（販売元、グレード）
３，４−ベンゾピレン（略号：Ｂ（ａ）Ｐ）：関東化学製
３−アミノ−１−メチル−５Ｈ−ピリド［４，３−Ｂ］インドール（略号：Ｔｒｐ−Ｐ−２）：和光純薬製
【００４９】
＜実施例１＞
染色体異常試験及び細胞生存率測定の操作
被験溶液として、１０％タウロコール酸ナトリウム水溶液中に、表１に示す被験物質濃度の１０倍の濃度で各被験物質を含む溶液を調製した。
【００５０】
培地を入れたシャーレに、ＣＨＬ／ＩＵをシャーレ当り２０，０００個播種し、３日間培養した。培地に対して１／１０の量の被験溶液と、Ｓ−９ｍｉｘを添加し（Ｓ−９として５％量添加）、培養を続け、６時間後に被験溶液とＳ−９ｍｉｘを除去して、新鮮培地に交換してさらに培養を続けた。１８時間後に細胞を回収した。回収２時間前にコルセミドを添加し分裂中期像の蓄積を図った。回収した細胞は、一部をトリパンブルー染色法で生細胞をカウントして細胞生存率を求め、残りの細胞を所定の方法で染色体標本を作製した。標本はギムザ染色して対物レンズ６０倍（総合倍率６００倍）で用量当り１００個の細胞について染色体像を検鏡し染色体異常の有無と異常の種類を記録した。結果を表１に示す。
【００５１】
＜比較例１＞
被験溶液として、ＤＭＳＯ中に、表１に示す被験物質濃度の２００倍の濃度で各被験物質を含む溶液を調製した。被験溶液の添加時に、培地に対して１／２００の量で被験溶液を添加した以外は、実施例１と同様にして試験を行った。結果を表１に示す。
【００５２】
＜実施例２＞
１，２−ジクロロエタンの代謝活性化による分解試験
１，２−ジクロロエタンの２００ｍｇ／ｍＬ溶液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）と１０％タウロコール酸ナトリウム溶液の２種類の媒体で調製した。次に培地９.８８ｍＬとＳ−９ｍｉｘを２ｍＬを混合し０．９９ｍＬずつ試験管に分注し、それぞれに被験物質溶液０．０１ｍＬ添加混合して０．３７℃のインキュベータに置いた。０時間、０．５時間、１時間、２時間および３時間後に、ＤＭＦを試験管当り９ｍＬ添加してＳ−９を失活させた。液を孔径０．４５μｍのディスクフィルターでろ過し、ガスクロマトグラフ装置にて、１，２−ジクロロエタンの量を測定した。結果を表２および図１に示す。
【００５３】
【表１】
2015012832.tif 000002
【００５４】
【表２】
2015012832.tif 000003
【００５５】
表１の結果より、被験物質の媒体による差異は、クロロホルムについては特に認められなかったが、ジクロロメタンの濃度５．００ｍｇ／ｍＬにおいて、媒体が１０％タウロコール酸ナトリウムの方が高い細胞毒性を示した。一方、１，２−ジクロロエタンは、逆に媒体がＤＭＳＯの方がやや高い細胞毒性を示した。さらに１，２−ジクロロプロパンは媒体がＤＭＳＯの方が明らかに高い細胞毒性を示した。
【００５６】
また、１，２−ジクロロエタンの染色体異常の出現頻度は、媒体による明らかな相違が認められた。これは１０％タウロコール酸ナトリウムを媒体として使用すると、代謝反応により１，２−ジクロロエタンが解毒化されたものと考えられる。
【００５７】
表２および図１の結果より、１，２−ジクロロエタンの分解試験の結果、媒体が１０％タウロコール酸ナトリウムの方が、ＤＭＳＯに比べて速やかに分解され、３時間後の減少率は約４倍の開きがあった。
【００５８】
ＤＭＳＯは、代謝活性化酵素であるシトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）の活性の一部を阻害することが知られている。一方、胆汁酸成分であるタウロコール酸は、ＣＹＰを阻害しないと考えられる。実際、表２および図１に示されるように、タウロコール酸（塩）水溶液を媒体とする本発明では、１，２−ジクロロエタンの代謝はほとんど阻害されていないと考えられる。細胞毒性と染色体異常の差異は媒体によるＣＹＰの阻害の有無と代謝分解のし易さや代謝速度の違いによるものと推定される。
【００５９】
以上より、胆汁酸（塩）水溶液は、変異原性試験において、特に脂溶性の被験物質の汎用媒体として有用であり、特に代謝活性化系の試験において被験物質本来の性質をより正確に測定することが可能であることが示された。
【００６０】
＜実施例３＞
ｕｍｕ試験の操作
被験溶液として、７％タウロコール酸ナトリウム水溶液中に、表３および４に示す被験物質濃度の１０倍の濃度で各被験物質を含む溶液を調製した。
【００６１】
テスト菌（ＮＭ２００９凍結乾燥品）に培養液１ｍＬを添加して混合後、３７℃で１時間静置後、培養液１０ｍＬを添加して混合後、３７℃で２時間静置した。この菌液１００μｌに対して、被験溶液を１０μｌ（菌液に対して１／１０の量）と、Ｓ−９ｍｉｘを添加し（Ｓ−９として１０％量添加）して混合後、３７℃で２時間静置した。次に発色基質液１００μｌを添加し混合し、３７℃にて１時間振とうし、次いで反応停止液１００μｌを添加した。発色操作の前後で、６２０ｎｍにて吸光度を測定した。
【００６２】
表３および４に結果を示す。表中、「発色前」は、菌濁度に相当し、テスト菌に対する毒性が強い場合は値が小さくなる。「発色後」は、β-galactosidaseの酵素活性を示し、吸光度が大きい方が、変異原性が強いことを示す。但し、細胞毒が強い場合には発色が小さくなるので、相対β-galactosidase活性（ＲＧＡ＝発色後／発色前）により変異原性を評価する。
【００６３】
＜比較例２＞
被験溶液として、ＤＭＳＯ中に、表３および４に示す被験物質濃度の１００倍の濃度で各被験物質を含む溶液を調製した。被験溶液の添加時に、菌液に対して１／１００の量の被験溶液を添加した以外は、実施例３と同様にして試験を行った。表３および４に結果を示す。
【００６４】
実施例３および比較例２の結果から次の事項がわかる。
【００６５】
３，４−ベンゾピレン（Ｂ（ａ）Ｐ）について、ＤＭＳＯ媒体では、発色前の吸光度（菌濁度に相当）が５μｇ／ｍＬ以上から増加しており、検体の析出により、菌濁度が正確に測れなかった。つまり、ＤＭＳＯ媒体は析出の影響で思うように測定できていない。一方、媒体が７％タウロコール酸ナトリウム溶液では析出の影響なく、濃度依存的に発色前の吸光度が減少傾向を示しており、正しく菌の生育阻害を反映していた。また細胞毒性を考慮したβ-galactosidase活性であるＲＧＡは濃度依存的に上昇傾向を示した。
【００６６】
Ｔｒｐ−Ｐ−２について、ＲＧＡの値は、ＤＭＳＯ媒体では２．５μｇ／ｍＬ以上で低下し、７％タウロコール酸ナトリウム溶液媒体では１０μｇ／ｍＬ以上で低下した。検体の代謝活性化酵素であるＳ９ｍｉｘの活性の差が媒体によって現れたと推定された。７％タウロコール酸ナトリウム溶液媒体は、酵素活性の阻害作用がないため、検体が高濃度でも変異原性を検出しやすかったと考えられる。
【００６７】
ｕｍｕ陽性判定基準は、溶媒対照（検体濃度０）の２倍以上の吸光度の上昇を示すことである。Ｔｒｐ−Ｐ−２では２倍以上を示したが、Ｂ（ａ）Ｐでは２倍以上を示さず、ｕｍｕ試験では検出し難い検体と考えられるが、タウロコール酸ナトリウム溶液を媒体とした場合には、被験物質濃度に対して、ＲＧＡが上昇傾向を示し、変異原性を示唆する結果が得られた。また、本発明は、Ｂ（ａ）Ｐなどの析出しやすいものに有効であり、さらに、Ｔｒｐ−Ｐ−２のように高濃度で細胞毒性を示すものにも有効であることがわかった。
【００６８】
【表３】
2015012832.tif 000004
【００６９】
【表４】
2015012832.tif 000005
【００７０】
＜実施例４＞
胆汁酸の細胞毒性
ＣＨＬ／ＩＵ細胞（チャイニーズハムスター肺繊維芽由来細胞株）について、培地に表５に示す用量でタウロコール酸ナトリムを添加して、３７℃で、２４時間増殖を行った結果を表５に示す。タウロコール酸はナトリム塩で５．００ｍｇ／ｍＬまで細胞毒性が低かった。
【００７１】
次に、Ｌ５１７８Ｙ（マウスリンパ球由来細胞株、詳しくはＬ５１７８Ｙ  ｔｋ＋／−−３．７．２ｃ、国立医薬品食品衛生研究所から分与）を用いて、胆汁酸として、タウロコール酸ナトリム、デオキシコール酸ナトリウムおよびコール酸ナトリウムをそれぞれ培地に添加して、３７℃で、２４時間増殖を行った結果を表６に示す。Ｌ５１７８Ｙについては、タウロコール酸は、ナトリウム塩で１ｍｇ／ｍＬ程度まで使用可能と考えられる。１次胆汁酸であるコール酸は、タウロコール酸より細胞毒性が強く、さらに二次胆汁酸であるデオキシコール酸ナトリウムは、さらに細胞毒性が強く、細胞の種類によっては、例えばＬ５１７８Ｙを試験細胞として用いる試験においては、二次胆汁酸を用いることが困難な場合があると考えられる。
【００７２】
【表５】
2015012832.tif 000006
【００７３】
【表６】
2015012832.tif 000007
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明は、化学物質の変異原性の有無を測定する変異原性試験法として有用である。
【図１】
2015012832.tif 000008