(57)【要約】  本発明は、認知症、特にアルツハイマー型の認知症に罹っている患者の治療のための、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび薬学的に許容され得るアジュバントを含む組成物に関する。一実施形態において、Ａβ１−６ペプチドを含有するコンストラクトは、該Ａβ１−６ペプチドに化学的に結合しているＲＮＡバクテリオファージＱβのウイルス様粒子（ＶＬＰ）から成る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）ウイルス様粒子に結合しているＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびｉｉ）薬学的に許容され得るアジュバントを含む組成物。
【請求項２】
５から６００μｇの間の、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
１５０μｇまたは４５０μｇの、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトを含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトが水溶液中にある、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトが、Ａβ１−６ペプチドに化学的に結合しているウイルス様粒子（ＶＬＰ）構造から成る、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
ＶＬＰが、ＲＮＡバクテリオファージＱβ由来であり、Ａβ１−６ペプチドがそのＣ末端でスペーサーＧＧＣに融合しており、ＶＬＰが前記Ａβ１−６ペプチドに２価のリンカーで化学的に結合している、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記請求項のいずれかに記載の組成物を含むワクチン。
【請求項８】
アジュバントが、アルミニウム塩またはＭＦ５９である、請求項７に記載のワクチン。
【請求項９】
アルミニウム塩が、Ａｌ（ＯＨ）３である、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１０】
ワクチン組成物が、１用量あたり約１００μｌから約５００μｌのＭＦ５９を含む、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１１】
ワクチン組成物が、１用量あたり約１２５μｌまたは約２５０μｌのＭＦ５９を含む、請求項１０に記載のワクチン。
【請求項１２】
ワクチン組成物が、１用量あたり約５０μｇから約８５０μｇのアルミニウム塩を含む、請求項８または請求項９に記載のワクチン。
【請求項１３】
ワクチン組成物が、１用量あたり約５０μｇ、約１５０μｇ、約４５０μｇ、約６００μｇまたは約８５０μｇのアルミニウム塩を含む、請求項１２に記載のワクチン。
【請求項１４】
１用量あたり、
（ｉ）約１５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約１５０μｇのアルミニウム塩；
（ｉｉ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約１５０μｇのアルミニウム塩；
（ｉｉｉ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約４５０μｇのアルミニウム塩；
（ｉｖ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約６００μｇのアルミニウム塩；
（ｖ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約８００μｇのアルミニウム塩；
（ｖｉ）約６００μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約６００μｇのアルミニウム塩；
（ｖｉｉ）約６００μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約８００μｇのアルミニウム塩；
（ｖｉｉｉ）約１５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約２５０μｌのＭＦ５９；
（ｉｘ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約１２５μｌのＭＦ５９；または
（ｘ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよび約２５０μｌのＭＦ５９
を含む、請求項７〜９のいずれかに記載のワクチン。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチン、ならびに向知性薬、メマンチン、抗うつ薬、抗精神病薬、抗糖尿病薬、抗酸化薬、抗炎症薬、脂質低下剤、ホルモン置換剤、アミロイド低下薬、凝集阻害剤、キレート剤、および免疫調節薬のリストから選択される少なくとも１つの薬剤を含む組合せ物。
【請求項１６】
療法における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチンまたは請求項１５に記載の組合せ物。
【請求項１７】
認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する障害の治療および／または予防における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチンまたは請求項１５に記載の組合せ物。
【請求項１８】
認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する障害の治療および／または予防のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチン、または請求項１５に記載の組合せ物の使用。
【請求項１９】
認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する障害になるリスクがある対象の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、または請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチン、または請求項１５に記載の組合せ物の使用。
【請求項２０】
組成物、ワクチンまたは組合せ物が、約６から約１２週間の間隔で投与される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
組成物、ワクチンまたは組合せ物が、約６週間の間隔で２回以上、次いで約１２週間の間隔で２回以上投与される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
約６週間の間隔で２回以上、次いで約１２週間の間隔で２回以上投与される、認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する状態の治療における使用のための、Ａβ１−６ペプチドを含む組成物。
【請求項２３】
（ａ）本発明のコンストラクト、（ｂ）アジュバント、および（ｃ）使用に関する説明書を含む、コマーシャルパッケージ。
【請求項２４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、請求項７〜１４のいずれか１項に記載のワクチン、または請求項１５に記載の組合せ物を含有するビン、バイアル、シリンジまたは試験管。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｉ）Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびｉｉ）薬学的に許容され得るアジュバントを含有する新規な組成物（以下、本発明の組成物）およびワクチン、ならびにアルツハイマー病（ＡＤ）に罹っている患者の、特にその疾患の初期での治療のためのかかる組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界中で少なくとも１５００万人の人々が、アルツハイマー病に冒されている。この疾患は、日常生活において機能する患者の能力における進行性の機能障害によって特徴付けられる。大部分の患者は、診断の５から１０年以内に死亡する。
【０００３】
ＡＤにおいて老人アミロイド斑（senile amyloid plaque）の主要構成要素であるβ−アミロイドペプチドが因果的役割を果たすことを示唆する、考慮すべき証拠が蓄積されている。ＡＤの成功的な疾患修飾性治療薬は、脳におけるβ−アミロイドの沈着に影響を及ぼす生成物を含む可能性が高い。免疫系によって能動的に産生されるまたは受動的に投与される、Ａβ特異的抗体が、Ａβ−アミロイドーシスに関する異なるトランスジェニックマウスモデルにおいて、一貫して斑負荷を低減する。しかしながら、ＡＤ患者の免疫系を刺激してＡβ抗体を産生する最初の臨床的な試みは、容認できない副作用のために、保留しなければならなかった（治療患者の６％が髄膜脳炎。Orgogozo JM, Gilman S, Dartigues JF, Laurent B, Puel M, Kirby LC, Jouanny P, Dubois B, Eisner L, Flitman S, Michel BF, Boada M, Frank F, Hock C (2003) Subacute meningoencephalitis in a subset of patients with AD after Aβ42 immunization. Neurology; 61: 46-54。）。この治験において、おそらくＴＨ１リンパ球が活性化されたため、Ａβ反応性の自己免疫性Ｔ細胞が促進されたことが後に結論づけられた。ＴＨ１応答は、ＡＮ１７９２においてＴ細胞エピトープと組み合わせて使用したアジュバント（ＱＳ−２１）の結果であった可能性が高い（Lemere & Masliah, 2010, Nat. Rev. Neurol. 6(2):108-120）。したがって、有用な免疫応答を引き出すと同時にかかる危険な反応を避けるために、免疫原およびアジュバントの注意深い選択が必要である。
【発明の概要】
【０００４】
驚いたことに、Ａβ１−６ペプチドを含有するコンストラクトは、有害な免疫反応も微小出血の発生もそれほど認められない。特に、Ａβ１−６ペプチドに化学的に結合しているＶＬＰから成るコンストラクトは、有害な免疫反応も微小出血の発生率の増加も認められない。
【０００５】
驚いたことに、認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症、またはそれに関連する状態に罹っているヒトに投与する場合、Ａβ１−６ペプチドを含有するコンストラクトは、アジュバントと有利に組み合わせることができることを発見した。
【０００６】
予想外に、Ａβ１−６ペプチドを含有するコンストラクトと一緒にアジュバントを投与することは、そのコンストラクトに対する抗体応答は増加するが炎症促進性の応答を誘発することなく実施可能であることを発見した。これは、老齢患者において特に重要である。
【０００７】
本明細書で定義するように、「本発明の組成物」は、ｉ）Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびｉｉ）薬学的に許容され得るアジュバントを含む組成物を指す。本発明の組成物は、許容され得る医薬担体（carrier）をさらに含むことができる。
【０００８】
本発明によれば、Ａβ１−６ペプチドは、固有の反復組織を有する構造を有するコア粒子、例えば自己組織化したウイルス様粒子（ＶＬＰ）に結合している。かかるＶＬＰは、ＲＮＡバクテリオファージのカプシドタンパク質、例えばＲＮＡバクテリオファージＱβのカプシドタンパク質から成ることができる。
【０００９】
断片Ａβ１−６および本発明において用いられるような断片を含有するコンストラクトは、それ自体既知である。ＣｙｔｏｓおよびＮｏｖａｒｔｉｓへのＷＯ０４／０１６２８２は、Ｑβなどのバクテリオファージの組換えタンパク質を含むＶＬＰ、リンカーおよびＡβ１−６を含み、これらは一緒になって規則的で反復した抗原アレイを形成するコンストラクトを記載している。
【００１０】
本発明において用いられるようなコンストラクトは、ＷＯ０４／０１６２８２において、特に実施例１３において開示されているように調製し、精製することができ、その内容は、参照によって本特許出願に組み込まれている。
【００１１】
本発明によれば、ＶＬＰ構造は、２価のリンカー（bivalent linker）でＡβ１−６ペプチドに化学的に結合していてもよい。かかる２価のリンカーは、ＷＯ０４／０１６２８２、５３ページ、第１段落において記載されているものでもよく、その内容は、参照によって組み込まれている。
【００１２】
一実施形態において、２価のリンカーは、ウイルス様粒子または少なくとも１つのウイルス様粒子サブユニット、例えばそのリジン残基の側鎖アミノ基と反応することができる官能基を含有するヘテロ二官能性クロスリンカーである。２価のリンカーは、Ａβ１−６ペプチドまたは該Ａβ１−６ペプチドに融合したシステイン残基と反応することができる別の官能基を含有することができる。
【００１３】
本発明によれば、ヘテロ二官能性クロスリンカーは、ＳＭＰＨ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、ＳＶＳＢ、ＳＩＡ、例えばＳＰＤＰまたはスルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰから選択することができる。
【００１４】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の組成物を作製するのに適したＡβ１−６ペプチドは、ＶＬＰに結合するためのアミノ酸リンカー、例えばアミノ酸スペーサーで修飾されている。それらのＡβ１−６ペプチドは、スペーサーＧＧＣにＣ末端で融合したＡβ１−６を含むがこれに限定されない。Ａβ１−６断片のＮ末端への融合に適したアミノ酸リンカー、例えばアミノ酸スペーサーは、配列ＣＧＧおよびＣＧＨＧＮＫＳを含むがこれらに限定されない。Ａβ１−６のＣ末端への融合に適したリンカーは、配列ＧＧＣを含むがこれに限定されない。一実施形態において、リンカーが、Ａβ１−６断片のＣ末端に融合している場合、Ｃ末端のシステインはアミド化され、これは、Ｃ末端「−ＣＯＮＨ２」によって示され、かつペプチドのＮ末端が遊離であり、これは「ＮＨ２−」によって示される。特定の実施形態において、第２の付着部位としてシステイン残基を含有するアミノ酸リンカー、例えばアミノ酸スペーサーは、Ａβ１−６ペプチドのＣ末端に融合している。
【００１５】
一実施形態において、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトは、該Ａβ１−６ペプチドに２価のリンカーで化学的に結合しているＲＮＡバクテリオファージＱβのウイルス様粒子（ＶＬＰ）から成り、ここで、Ａβ１−６ペプチドは、アミノ酸スペーサーで修飾されている。
【００１６】
別の特定の実施形態において、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトは、ＲＮＡバクテリオファージＱβのウイルス様粒子（ＶＬＰ）、そのＣ末端でスペーサーＧＧＣに融合したＡβ１−６ペプチドから成り、ここで、ＶＬＰは、該Ａβ１−６ペプチドに２価のリンカーで化学的に結合している；上文で「本発明のコンストラクト」として定義した。
【００１７】
一態様において、本発明は、ｉ）Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびｉｉ）薬学的に許容され得るアジュバントを含む、例えば本発明のコンストラクトおよび薬学的に許容され得るアジュバントを含むワクチン組成物を提供する。
【００１８】
本発明は、治療方法も提供する。したがって、本発明は、療法における使用のための、本発明の組成物または本発明のワクチンを提供する。別の態様において、本発明は、本発明の組成物、または本発明のワクチンを動物、例えばヒトに投与することを含む免疫化の方法を提供する。
【００１９】
アジュバント
本明細書で定義するように、「アジュバント」という用語は、本発明のＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトと共に（例えば組み合わせて）投与した場合、そのコンストラクトへの免疫応答を増強する薬剤を指す。アジュバントは、リンパ球動員、Ｂおよび／もしくはＴ細胞の刺激、ならびに／またはマクロファージの刺激などのいくつかの機構のいずれかによって、免疫応答を増加させることができる。
【００２０】
本発明によれば、アジュバントは、有機の、無機の、油ベースのアジュバントまたはビロソームとすることができるが、これらに限定されない。
【００２１】
無機のアジュバントは、鉱物アジュバント、例えばリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム（本明細書でＡｌ（ＯＨ）３とも呼ばれる）、硫酸カリウムアルミニウム（ミョウバンとも呼ばれる）およびリン酸カルシウムなどのアルミニウム塩またはカルシウム塩を含むがこれらに限定されない。かかるアジュバントは、例えば以下に記載するような他のアジュバントと共にまたは他のアジュバントなしで使用することができる。
【００２２】
有機アジュバントは、スクアレンを含むがこれに限定されない。
【００２３】
本発明によるアジュバントの別の例は、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ））、ＡＳ０３（ＧＳＫによって開発された、Ｐｒｅｐａｎｄｒｉｘ）、ＡＳ０４（ＧＳＫによって開発された；ＭＰＬおよび水酸化アルミニウムの組合せ；Ｆｅｎｄｒｉｘ；Ｃｅｒｖａｒｉｘ）、ＱＳ２１（トリテルペングルコシドを含有する、シャボンノキ（Quillaia saponaria）由来のサポニン精製植物抽出物）、ＡＳ０１（ＧＳＫによって開発された；リポソーム；ＱＳ２１およびＭＰＬ）、ＡＳ０２（ＧＳＫによって開発された；ＱＳ２１およびＭＰＬ）、ＬＴ（大腸菌（E.coli）由来の熱不安定性のエンテロトキシン）、ＣｐＧ（メチル化されていないＣｐＧ配列を含有するオリゴヌクレオチド）、およびＭＦ５９（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ製）を含むがこれらに限定されない。ＭＦ５９は、スクアレン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートおよびソルビタントリオレアート化合物のサブミクロンの水中油型エマルションである。
【００２４】
本発明に特に適したアジュバントは、例えば鉱物アジュバントまたはスクアレンを含有するアジュバント、例えばスクアレンのエマルション、例えばＭＦ５９である。一実施形態において、本発明の組成物は、本発明のコンストラクトおよび（ｉ）ＭＦ５９または（ｉｉ）アルミニウム塩（水酸化アルミニウムなど）のいずれかを含む。
【００２５】
アジュバントの選択は、免疫応答の促進におけるアジュバントの効率、アジュバントを含有する組成物、例えばアジュバントを含有するワクチンの安定性、投与経路、投与計画、ワクチン接種をする種によって決まる。
【００２６】
２つ以上のアジュバントを組み合わせることができる。例えばアルミニウム塩は、ＭＰＬ、ＱＳ２１、および／またはＭＦ５９と組み合わせることができる。
【００２７】
本発明によれば、約５から６００μｇ、例えば約５から５５０μｇ、約５０から５００μｇ、約１００から５００μｇ、例えば約７５から３００μｇ、例えば約５０から１５０μｇ、例えば約１５から１２５μｇ、例えば約２５から１００μｇ、例えば約５０μｇ、７５μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇまたは４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば本発明のコンストラクトは、ヒト患者に投与することができる。したがって、本発明の組成物は、１用量あたり、本発明のコンストラクトのこれらの量の１つを含有することができる。一実施形態において、本発明の組成物は、１用量あたり、約１５０μｇまたは約４５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００２８】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、約１０から６００μｌ／用量のアジュバント、例えば、約５０から５００μｌ／用量のアジュバント、例えば約１００から５００μｌ／用量のアジュバント、例えば約１００から３００μｌ／用量のアジュバント、例えば約１５０から３００μｌ／用量のアジュバント、例えば約１２５から２５０μｌ／用量のアジュバント、例えば約１２５μｌ／用量、または例えば約２５０μｌ／用量または例えば約５００μｌ／用量のアジュバントを含む。かかる量は、ＭＦ５９に特に適している。
【００２９】
一実施形態において、本発明の組成物は、ｉ）約１００から３００μｌ／用量のＭＦ５９、例えば約１２５μｌ／用量、約２５０μｌ／用量または約５００μｌ／用量のＭＦ５９、およびｉｉ）約１５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば１５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。一実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約１２５μｌまたは約２５０μｌのＭＦ５９および（ｉｉ）約１５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３０】
別の実施形態において、本発明の組成物は、ｉ）約１００から５００μｌ／用量のＭＦ５９、例えば約１２５μｌ／用量、２５０μｌ／用量、４５０μｌ／用量または５００μｌ／用量のＭＦ５９、およびｉｉ）約４５０μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば４５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。一実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約１２５μｌまたは約２５０μｌのＭＦ５９および（ｉｉ）約４５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３１】
さらに別の実施形態において、本発明の組成物は、ｉ）約１２５または２５０μｌ／用量のＭＦ５９、およびｉｉ）約５０から５００μｇ、約１００から５００μｇ、約１５０μｇ、例えば約２００μｇのＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば１用量あたり１５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３２】
別の実施形態において、アジュバントを、約０．５：１（ｖ／ｖ）から約４：１（ｖ／ｖ）、例えば約０．８：１（ｖ／ｖ）から約３．５：１（ｖ／ｖ）、例えば約１：１（ｖ／ｖ）から約２：１（ｖ／ｖ）；例えば約１：１（ｖ／ｖ）の比で、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば本発明のコンストラクトと混合する。
【００３３】
別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、約１０から９００μｇ／用量のアジュバント、例えば約５０から８５０μｇ／用量のアジュバント、例えば約１００から８００μｇ／用量のアジュバント、例えば約１２０から６００μｇ／用量のアジュバント、例えば約１００から５５０μｇ／用量のアジュバント、例えば約１５０から４５０μｇ／用量のアジュバント、例えば約５０μｇ／用量、約１００μｇ／用量、約１５０μｇ／用量、または約４５０μｇ／用量のアジュバントを含む。かかる量は、アルミニウム塩、例えばミョウバンまたは水酸化アルミニウムに特に適している。量は、水酸化アルミニウムの場合、元素アルミニウムの重量に基づく。
【００３４】
一実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約５０μｇまたは約１５０μｇの水酸化アルミニウムおよび（ｉｉ）１５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。一実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約１５０μｇまたは約４５０μｇの水酸化アルミニウムおよび（ｉｉ）４５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３５】
別の実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約６００μｇまたは約８５０μｇの水酸化アルミニウムおよび（ｉｉ）約４５０μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３６】
患者の応答が低い場合、より高い用量形態でも使用することができる。したがって、別の実施形態において、組成物は、１用量あたり、（ｉ）約６００μｇまたは約８５０μｇの水酸化アルミニウムおよび（ｉｉ）約６００μｇの本発明のコンストラクトを含む。
【００３７】
アルミニウム塩をアジュバントとして使用する場合、アジュバント対Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトの適した比率は、元素アルミニウムに基づく重量比で１／３、１／２、１／１、２／１、３／１、５／１または６／１を含むがこれらに限定されない。
【００３８】
アジュバントは、単一の組成物としてＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトと共に投与することができるか、またはＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトの投与前、投与と同時、もしくは投与後に投与することができる。
【００３９】
製剤および投与
本発明の組成物は、当技術分野において知られている様々な方法によって、例えば注射、注入、吸入、経口投与、または他の適した物理的方法によって投与することができる。組成物は、代わりに、筋肉内に、静脈内にまたは皮下に投与することができる。特定の実施形態において、本発明の組成物を、非経口的に、例えば筋肉内にまたは皮下に、例えば筋肉内に投与する。
【００４０】
本発明の組成物を含有する製剤は、滅菌水（aqueous）、例えば生理食塩水；または非水溶液および懸濁液を含む。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。担体または密封包帯を使用して、皮膚透過性を増加させ、抗原吸収を増強することができる。
【００４１】
非経口投与に関して、本発明によるＡβ１−６ペプチドを含有するコンストラクトは、水、油、生理食塩水、グリセロールまたはエタノールなどの液体とすることができる、薬学的に許容され得る担体と合わせた生理学的に許容され得る希釈剤中の該コンストラクトの溶液または懸濁液の注射可能な剤形として投与することができる。湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝剤などの追加の成分を含むことができる。他の成分は、石油、または動物油、植物油もしくは合成起源の油、例えばピーナッツ油、ダイズ油および鉱物油を含むことができる。プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールなどのグリコールは、例えば注射可能な溶液に特に適した担体である。
【００４２】
本発明の組成物を投与するための、例えば皮下投与に適した製剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または別の緩衝剤を含有する水溶液である。例えば、本発明の組成物は、約０．１から１ｍｇ／ｍＬの間の本発明のコンストラクト、例えば約０．２５から０．７５ｍｇ／ｍＬの間の本発明のコンストラクト、例えば０．４から０．６ｍｇ／ｍＬの間、例えば０．５ｍｇ／ｍＬの本発明のコンストラクトを含有し、別の添加剤（excipient）を含有しない。一実施形態において、本発明は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または別の緩衝剤および１ｍｇ／ｍＬの本発明のコンストラクトを含む水溶液を提供する。
【００４３】
緩衝剤は、Ｌ−ヒスチジンも含有することができる。
【００４４】
本発明の組成物は、充填剤（bulking agent）、例えばショ糖をさらに含有することができる。塩酸を加えて、ｐＨを適合させることができる。
【００４５】
剤形は、凍結してまたは凍結乾燥物として使用直前まで保持することができる。好ましくは、凍結乾燥物の形の場合、本発明の組成物は、緩衝剤（Ｌ−ヒスチジンなど）および充填剤、例えばショ糖を含有する。投与前、凍結乾燥物を、Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトの望ましい濃度を得るために、適切な希釈剤（例えば水、またはブドウ糖溶液）の適切な体積で元に戻す（reconstituted）。希釈剤の添加に続き、溶液を穏やかに混合し、泡が現れ、溶液が澄み、透明になるまで静止した状態にしておく。次いで元に戻した凍結乾燥物を、適切なアジュバントと混合する。好ましくは、アジュバントと混合した元に戻した凍結乾燥物は、投与前に室温で４時間を超えて保持しない。
【００４６】
適切な希釈剤は、水、例えば蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液、ハンクス液を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、希釈剤は、アジュバントそれ自体とすることができる。一実施形態において、希釈剤は、水酸化アルミニウム溶液である。
【００４７】
剤形は、好ましくは、シリンジを用いた温血動物への、特に腹部中への皮下注射によって投与することができる。一実施形態において、組成物（剤形）は、筋肉内に投与する（すなわち筋肉内投与のために製剤化する）。一実施形態において、組成物（剤形）は、上腕中に注射する。
【００４８】
剤形の解凍のために、剤形は、周囲温度で約１５分から４５分の間、例えば３０分間保持することができる。好ましくは、原体を回収する前に、潜在的な肉眼不可視の粒子の分散のために、バイアルを数回穏やかに反転する。
【００４９】
本発明によるＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば本発明のコンストラクトの適した剤形は、１．０ｍｇ／ｍｌの本発明のコンストラクトの濃度を得るために注射用の水中で元に戻した凍結乾燥物である。この形は、本発明のコンストラクトを、鉱物アジュバントと、例えば水酸化アルミニウムと組み合わせて投与するのに特に適している。かかる剤形は、本発明のコンストラクトの筋肉投与に特に適している。
【００５０】
本発明によるＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば本発明のコンストラクトを、アジュバントＭＦ５９と組み合わせて投与するために、剤形は、ブドウ糖溶液の適合した体積を使用して元に戻した凍結乾燥物である。
【００５１】
本発明の組成物は、注射剤、例えば液剤もしくは懸濁剤；または注射する前に液体ビヒクルに溶解もしくは懸濁するのに適した固形剤として調製することができる。
【００５２】
治療方法
本発明に従って、特にその疾患の初期のアルツハイマー病（ＡＤ）、もしくは軽度から中等度の、もしくは重度のアルツハイマー病（ＡＤ）、またはそれに関連する状態の治療および／または予防のための本発明の組成物の使用を提供する。例えば、認知症、例えばアルツハイマー病に関連する認知症およびアミロイド血管症を有する血管性認知症の治療または予防のためのかかる組成物の使用を提供する。
【００５３】
本発明は、パーキンソン病に関連する認知症またはレビー小体型認知症を有する患者を含むがこれらに限定されない、Ａβレベルが増加した患者の治療のための本発明の組成物の使用も提供する。
【００５４】
本発明は、さらに、軽度の認知機能障害を有する対象、ＡｐｏＥ４などの、ＡＤと関連することが知られている遺伝子型を有する対象、２１番染色体トリソミーを有する対象およびＡＤのリスクを示す代替マーカーを有する対象を含むがこれらに限定されない、ＡＤを発症するリスクがある対象の予防的治療のための本発明の組成物に関する。
【００５５】
「治療」という用語は、本明細書では、特に、疾患進行をもたらしかつ／もしくは兆候となる効果を有する発症プロセスを停止することを目的とする治療、または疾患もしくはそれに関連する兆候を減弱することに関する。
【００５６】
「アルツハイマー型の認知症」（および「アルツハイマー病に関連する認知症」）という用語は、本明細書では、特に、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第４版（ＤＳＭ−ＩＶ）基準に従って定義されたような疾患に関する。
【００５７】
本発明は、ヒト患者における認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する状態の治療の方法であって、本発明の組成物をそれを必要とする患者に投与することを含む方法にも関する。本発明は、さらに、それぞれ、ヒトにおける認知症、アルツハイマー病、アルツハイマー病に関連する認知症またはそれに関連する状態を予防し、治療しかつ／または減弱するための、免疫化およびワクチン接種方法を提供する。
【００５８】
注射の頻度は、患者の応答次第で変わり得る。例えば投与の頻度は、患者の応答および対応する抗体力価次第で、担当医によって変わり得る。例えば、同じ抗体力価を引き出しかつ／または維持するために、低応答者である患者は、頻度がより多い投与を要求することができ、一方で高応答者である患者は、頻度がより少ない投与を要求することができる。
【００５９】
注射の頻度は、１年あたり１から１０回の投与、例えば１年あたり２から８回、例えば１年あたり６回の投与を含むことができるがこれらに限定されない。
【００６０】
一実施形態において、本発明の組成物は、約４から８週間ごとに、好ましくは約５から７週間ごとに、特に約６週間ごとに、それを必要とするヒト患者に投与する。かかる投与計画は、約１２から１６週間、例えば約１２週間まで継続することができる。例えば、本発明の組成物は、０、６、１２週間で投与する。さらに、本発明の組成物の次の投与間の間隔は、延ばすことができる。
【００６１】
したがって、一実施形態において、本発明は、（ａ）約６週間の間隔で２回以上の投与、続いて（ｂ）約１２週間の間隔で２回以上の投与の投与計画を提供する。一実施形態において、本発明は、（ａ）約６週間の間隔で３回の投与（例えば０、６および１２週目で）、続いて（ｂ）約１２週間の間隔で２回以上（例えば３、４、５回以上）の投与（例えば２４、３６、４８および６０週目で）の投与計画を提供する。
【００６２】
かかる投与計画は、認知症、アルツハイマー病またはアルツハイマー病に関連する認知症に罹っている患者を治療するのに特に適している。
【００６３】
上述の疾患の治療における本発明の組成物の有用性は、適した臨床試験、例えば実施例において記載した試験において確認することができる。
【００６４】
適した臨床試験は、特に、アルツハイマー患者における無作為化二重盲検プラセボ対照並行試験または非盲検試験である。
【００６５】
組合せ物（combination）およびキット
Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびアジュバントは、同じ容器（例えばバイアルまたはプレフィルドシリンジ）中に詰め、供給することができるか、または別々の容器（例えばバイアル）中に詰め、使用前に混合することができる。パッケージ、例えば包装は、使用するための説明書を含むことができ、特にＡβ１−６ペプチドを含むコンストラクトおよびアジュバントを別々に詰める場合、パッケージ、例えば包装は、使用前に混合することに関する説明書を典型的に含む。
【００６６】
したがって、本発明は、（ａ）本発明の組成物またはワクチン、および（ｂ）投与に関する説明書を含むコマーシャルパッケージを提供する。本発明は、（ａ）本発明のコンストラクト、（ｂ）アジュバント、および（ｃ）使用に関する説明書を含むコマーシャルパッケージも提供する。かかるパッケージにおいて、コンストラクトは、凍結乾燥されていてよく、アジュバントは、希釈剤として使用することができる。キットは、任意選択で、薬学的に許容され得る希釈剤および／または投与デバイス（シリンジなど）も含むことができる。
【００６７】
本発明は、ａ）Ａβ１−６ペプチドを含むコンストラクト、例えば本発明のコンストラクト、およびｂ）アジュバント、これらと一緒に（ｃ）アルツハイマー病またはそれに関連する障害、特にアルツハイマー病の治療または予防におけるその同時の、別々のまたは連続的な使用に関する説明書を含むコマーシャルパッケージも提供する。
【００６８】
さらなる態様において、本発明は、本発明の組成物および少なくとも１つの向知性薬、好ましくはメマンチンなどの１つのコリンエステラーゼ阻害剤を含む組合せに関する。
【００６９】
「向知性薬」という用語は、本明細書では、向知性植物抽出物、カルシウムアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、ジヒドロエルゴトキシン、ニセルゴリン、ピラセタム、プリン誘導体、ピリチノール、ビンカミンおよびビンポセチンを含むがこれらに限定されない。
【００７０】
「向知性植物抽出物」という用語は、本明細書では、イチョウ（Ginkgo）の葉由来の抽出物を含むがこれに限定されない。「カルシウムアンタゴニスト」という用語は、本明細書では、シンナリジンおよびニモジピンを含むがこれらに限定されない。「コリンエステラーゼ阻害剤」という用語は、本明細書では、ドネペジル塩酸塩、リバスチグミン、メマンチンおよびガランタミン臭化水素酸塩を含むがこれらに限定されない。「プリン誘導体」という用語は、本明細書では、ペンチフィリンを含むがこれに限定されない。
【００７１】
イチョウ（Ginkgo）の葉由来の抽出物は、例えば商標Ｇｉｎｋｏｄｉｌａｔ（商標）の下で添付文書によって提供される情報に従って、例えば、販売されているような形で投与することができる。シンナリジンは、例えば商標Ｃｉｎｎａｒｉｚｉｎ  ｆｏｒｔｅ−ｒａｔｉｏｐｈａｒｍ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ニモジピンは、例えば商標Ｎｉｍｏｔｏｐ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ドネペジル塩酸塩は、例えば商標Ａｒｉｃｅｐｔ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。リバスチグミンは、ＵＳ５，６０２，１７６において開示されているように調製することができる。それは、例えば商標Ｅｘｅｌｏｎ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ガランタミン臭化水素酸塩は、例えば商標Ｒｅｍｉｎｙｌ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ジヒドロエルゴトキシンは、例えば商標Ｈｙｄｅｒｇｉｎ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ニセルゴリンは、例えば商標Ｓｅｒｍｉｏｎ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ピラセタムは、例えば商標Ｃｅｒｅｂｒｏｆｏｒｔｅ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ペンチフィリンは、例えば商標Ｃｏｓａｌｄｏｎ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ピリチノールは、例えば商標Ｅｎｃｅｐｈａｂｏｌ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。ビンポセチンは、例えば商標Ｃａｖｉｎｔｏｎ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。メマンチンは、例えば商標Ａｘｕｒａ（商標）またはＮａｍｅｎｄａ（商標）の下で、例えば、販売されているような形で投与することができる。
【００７２】
コード番号、一般名または商標名によって同定される活性薬剤の構造は、標準概要「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」の現行の版からまたはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えばＩＭＳ  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から得ることができる。その対応する内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００７３】
したがって、本発明は、同時の、別々のまたは連続的な使用のための、特に認知症、アルツハイマー病またはそれに関連する障害を治療する方法における使用のための、本発明の組成物ならびに、活性成分が各場合において、遊離型または薬学的に許容され得る塩の形で存在する、向知性植物抽出物、カルシウムアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、ジヒドロエルゴトキシン、ニセルゴリン、ピラセタム、プリン誘導体、ピリチノール、ビンカミンおよびビンポセチンまたはメマンチンから成る群から選択される少なくとも１つの向知性薬、ならびに任意選択で少なくとも１つの薬学的に許容され得る担体を含む組合せ物にも関する。
【００７４】
かかる組合せ物は、組合せ調製物とすることができる。
【００７５】
本発明の組成物と組み合わせて、他の薬剤、例えば：ＳＳＲＩ、ＳＮＲＩ、ＮＲＩなどの抗うつ薬、リスペリドンなどの抗精神病薬、インスリンまたはメトホルミンなどの抗糖尿病治療薬、セレギリン、ビタミンＥなどの抗酸化治療薬、ＮＳＡＩＤなどの抗炎症治療薬、スタチンなどの脂質低下剤、エストロゲンなどのホルモン置換剤、Ａベータセクレターゼ阻害剤などのアミロイド低下薬（amyloid lowering agent）、ベータ−シートブロッカー（beta-sheet blocker）などの凝集阻害剤、キレート剤、グラチラマー酢酸塩などの免疫調節薬を使用することができる。
【００７６】
「組合せ調製物」という用語は、本明細書では、上述で定義したような活性成分は、独立してまたは成分の識別された量を有する異なる固定された組合せの使用によって、すなわち、同時にまたは異なる時点で投薬することができるという意味で、特に「部分のキット」（kit of parts）を定義する。その場合、キットの部分は、例えば、部分のキットの任意の部分に関して、同時にまたは経時的にずらして、すなわち異なる時点でかつ同じまたは異なる時間間隔で投与することができる。好ましくは、時間間隔は、部分の組み合わせた使用において治療される疾患に及ぼす効果が、活性成分の任意の１つのみの使用によって得られるであろう効果より大きいように選択する。
【００７７】
したがって、本発明は、
・療法における使用のための、本明細書で開示するような組合せ物、
・アルツハイマー病または認知症などのアルツハイマー病に関連する障害、特にアルツハイマー病の、例えばその疾患の初期での予防および／または治療のための医薬の調製のための、本明細書で開示するような組合せ物の使用、
・本明細書で開示するような組合せを、アルツハイマー病または認知症などのアルツハイマー病に関連する障害、特にアルツハイマー病の、例えばその疾患の初期での予防および／または治療における、その同時の、別々のまたは連続的な使用に関する説明書と一緒に含むコマーシャルパッケージ
も提供する。
【００７８】
一実施形態において、本発明は、（ｂ）組合せパートナーと組み合わせた、（ａ）本発明の組成物を提供する。本発明の一実施形態において、組合せパートナー（ｂ）は、コリンエステラーゼ阻害剤、特にリバスチグミン、またはメマンチンである。
【００７９】
組合せパートナーを、別々の剤形として投与する場合、投与用量および投与形態は、添付文書において提供するように適用することができる。特に、組合せパートナー（ｂ）の以下の用量を、患者に投与することができる。シンナリジンは、１日の総用量が約７５から約１５０ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８０】
ニモジピンは、１日の総用量が約６０から約１２０ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８１】
ドネペジル塩酸塩は、１日の総用量が約５ｍｇから１０ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８２】
リバスチグミンは、１日の総用量が約２から約２０ｍｇ、例えば約４から約１８ｍｇ、例えば約６から約１２ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８３】
ガランタミンは、１日の総用量が約１２から２４ｍｇの間で、例えば１２ｍｇを１日２回、患者に投与することができる。
【００８４】
ジヒドロエルゴトキシンは、そのメタンスルホン酸塩の形で、１日の総用量が約４ｍｇから１０ｍｇの間で、例えば約８ｍｇ、患者に投与することができる。
【００８５】
ニセルゴリンは、その酒石酸塩の形で、筋肉内注射によって、１日の総用量が約４ｍｇから８ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８６】
ピラセタムは、１日の総用量が約１２００から５０００ｍｇの間で、例えば４８００ｍｇ／日、患者に投与することができる。
【００８７】
ペンチフィリンは、１日の総用量が約４００から８００ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００８８】
ピリチノールは、その塩酸塩の形で、１日の総用量が約６００ｍｇで、患者に投与することができる。
【００８９】
ビンポセチンは、１日の総用量が約１０から１５ｍｇの間で、患者に投与することができる。
【００９０】
メマンチンは、メマンチン塩酸塩の形で、１日の総用量が約２０ｍｇで、患者に投与することができる。
【００９１】
本発明は、本発明の組成物、ワクチンまたは組合せ物を含有する容器も提供する。容器は、ガラスまたはプラスチック製とすることができる。容器は、滅菌アクセスポート（sterile access port）を有することができる。本発明の範囲内に含まれる、適した容器は、ビン、バイアル、シリンジおよび試験管を含む。
【００９２】
一般
「含む（含有する）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味し、例えばＸを「含む（含有する）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみから成ることもあれば、追加の何か、例えばＸ＋Ｙを含むこともある。
【００９３】
数値ｘに関する「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、例えば、ｘ＋１０％を意味する。
【００９４】
本発明を完全に記載してきたが、本発明を、以下の実施例および特許請求の範囲によってさらに例示するが、これらは例示的であり、さらに限定的であることを意味しない。当業者は、通常の実験のみを使用して、本明細書で記載した特定の手順の多数の均等物を認識するかまたは確かめることができるであろう。かかる均等物は、本発明および特許請求の範囲内である。
実施例
【実施例１】
【００９５】
本発明のコンストラクトおよび水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）またはＭＦ５９を含有する組成物のウサギへの筋肉内注射。
各群９匹の雌性ウサギから成る６群を、１日目（大腿筋の上部、右後肢）、１４日目（大腿筋の上部、左後肢）および２８日目（大腿筋の下部、右後肢）に、後肢における筋肉内注射によって処置する。群１、２および３を、０．０５０ｍｇのＡｌ（ＯＨ）３（群１）、０．１５０ｍｇのＡｌ（ＯＨ）３（群２）または０．４５０ｍｇのＡｌ（ＯＨ）３（群３）と混合した１５０μｇの本発明のコンストラクトで処置する。群４、５および６を、０．１２５ｍＬのＭＦ５９（群４）、０．２５ｍＬのＭＦ５９（群５）または０．５ｍＬのＭＦ５９（群６）と混合した１５０μｇの本発明のコンストラクトで処置する。ＭＦ５９の量には、それぞれ、ＭＦ５９における活性成分である、５、１０．０または２０．０ｍｇのスクアレンを含めた。動物を、最後の投与から１４日後に剖検する（４２日目）。
【００９６】
以下のパラメーターを評価する：死亡率／生存率（１日２回）、注射の筋肉内部位での皮膚反応（投薬から約２４および４８時間後）を含めた臨床徴候（毎日）、体重（毎週）、摂食量（週２回）、血液学的検査および臨床生化学検査（処置前の間に１回および４２日目）、終結時での肉眼検査、器官重量、ならびに注射部位の病理組織診断。血清学的分析のための血液試料を採取する（処置前の間に１回ならびに２０、２６、３４、３９および４２日目）。加えて、血漿の試料（処置前の間に１回および４２日目）および脳脊髄液（４２日目の剖検で）を採取する。
【００９７】
死亡率も、臨床徴候、皮膚観察、体重（増加）、（相対的な）摂食量、血液学的および臨床生化学パラメーター、ならびに剖検所見における毒物学的に関連性のある変化も認められなかった。
【００９８】
免疫原性応答は、すべての処置動物において認められる。すべての群について、試験３４日目、すなわち３回目の注射から６日後に、抗Ａベータおよび抗Ｑ−ベータ（担体への応答）ＩｇＧの最大平均濃度に到達し、３９日目および４２日目に減少した。群６を除いて、群１から５における抗ＡベータＩｇＧ産生は、顕著な動物間差異を示す。抗Ｑベータ免疫応答は、抗Ａベータ免疫応答よりも少ない動物間差異を示す。Ａベータに応答しないかまたは弱く応答する動物は、逆にＱベータによく応答する。試験した両方のアジュバント（すなわちＡｌ（ＯＨ）３またはＭＦ５９）について、抗ＡベータＩｇＧの最大平均濃度は、初回と２回目の投薬の間に増加する。
【００９９】
本発明のコンストラクトおよび水酸化アルミニウムで処置したウサギについて、応答は、いくらかのリンパ球性炎症を有するマクロファージ応答の発生率および重症度の用量依存的な増加から主に成る。応答は、経時的に消散し、最も早い注射（注射１日目）に続いてバックグラウンドレベルに戻る。
【０１００】
本発明のコンストラクトおよびＭＦ５９で処置したウサギ（群４、５および６）について、炎症反応における発生率の用量（時間ではない）依存的な増加があるが、知見の重症度の増加は認められない。
【０１０１】
この試験は、アルビノのニュージーランドホワイト種雌性ウサギにおいて、水酸化アルミニウムまたはＭＦ５９と組み合わせた本発明のコンストラクトの３回の筋肉内注射は、耐容性良好であったことを示している。すべての群において、処置段階の３４日目、すなわち３回目の注射から６日後に、抗Ａベータおよび抗Ｑ−ベータＩｇＧ濃度の最大平均濃度に到達し、３９日目および４２日目に減少する。本発明のコンストラクトおよびＡｌ（ＯＨ）３で処置した本発明のコンストラクト／Ａｌ（ＯＨ）３処置群と比較して、本発明のコンストラクトおよびＭＦ５９の同時投与は、抗Ａベータおよび抗ＱベータＩｇＧの両方についてのわずかに高い免疫原性応答をもたらす。どちらのアジュバントの高用量も、それぞれの中間用量に勝る利点を示さない。
【実施例２】
【０１０２】
本発明のコンストラクトおよび水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）またはＭＦ５９を含有する組成物のサルへの筋肉内注射。
試験の目的は、本発明のコンストラクト単独でのまたは水酸化アルミニウムもしくはＭＦ５９と組み合わせての、少なくとも２６週間にわたる老齢の雌性カニクイザル（cynomolgus monkey）（Macaca fascicularis）への免疫化である。動物は、試験日：１日目、１５日目、４３日目、および１４０日目に投薬される。
【０１０３】
以下の調査を、それぞれの標本について行う：死亡率、臨床的観察（注射部位の投薬後観察を含めて）、体重、神経学的評価、神経行動学的観察、血清学的検査（抗体ＡベータおよびＱベータ力価決定）、Ｔ細胞刺激についてのＰＢＭＣ採取、プロテオミクスおよびメタボロミック（結果−プロテオニクスおよびメタボロニック−別々に報告する）、血液学的検査、臨床化学的検査および尿検査、選択した器官／組織の秤量および組織学的プロセシング（histological processing）、顕微鏡観察（アミロイド斑決定およびＣＳＦ分析のための、脳領域のＩＨＣおよび銀染色を含めて）。
【０１０４】
以下の用量レベルを選択する。
【０１０５】
【表１】
2013523682.tif 000002
【０１０６】
試験の実施中、評価したパラメーターのいずれにおいても、試験項目関連死または試験項目関連知見は観察されない。試験物質投与による、標的器官毒性の肉眼的または病理組織学的証拠はない。
【０１０７】
剖検での所見は、カニクイザル（cynomolgus monkey）における背景病理の予期される範囲と一致する。標的器官毒性を示唆する、異常な肉眼的知見はない。
【０１０８】
病理組織学的知見は、一般に、老齢の雌性カニクイザル（cynomolgus monkey）における予期される背景病理と一致する。水酸化アルミニウムおよびＭＦ５９アジュバントとのならびにアジュバントなしでの本発明のコンストラクトの皮下または筋肉内投与は、老齢期の雌性カニクイザル（cynomolgus monkey）への試験の１、１５、４３、および１４０日目における１５０または４００μｇ／日の用量レベルで、耐容性良好であり、全身性の試験項目毒性の兆候を示さない。試験の実施中、処置または用量レベル関連効果は、観察されない。
【実施例３】
【０１０９】
カニクイザル（cynomolgus monkey）における２６週間の皮下および筋肉内注射
アジュバントと組み合わせた本発明のコンストラクトを用い、かつＡｌ（ＯＨ）３を使用するための皮下（ｓ．ｃ．）および筋肉内（ｉ．ｍ．）経路ならびにＭＦ５９のためのｉ．ｍ．経路による、７つの臨床的免疫化を適用して、試験を行う。
【０１１０】
以下の調査を行う：濃度検査、臨床的観察、体重、神経学的検査、神経行動学的観察、眼の検査、心電図検査、血圧、血清学的検査（抗Ａベータ／Ｑベータ特異的ＩｇＧの分析）、Ｔ細胞刺激についてのＰＢＭＣ採取およびＥＬＩＳＰＯＴ分析、Ａベータ分析、血液学的検査、臨床化学的検査、尿検査、免疫グロブリン決定、ＣＳＦ試料採取、器官重量、剖検での肉眼検査、ならびに病理組織診断。以下の用量レベルを選択する：
【０１１１】
【表２】
2013523682.tif 000003
【０１１２】
本試験の結果は、以下のように要約することができる。群５の動物２４９６５Ｆは、下痢および重度の体重減少のために、試験の９１日目に瀕死状態となり屠殺する。９１日目における血液学的評価は、ヘマトクリット値のわずかな低減および単球のわずかな増加を示す。臨床化学的検査は、血中尿素および不均衡な電解質の中程度の増加ならびに総タンパク質、アルブミン、およびグロブリンの低減を示す。この著しく衰弱した動物の剖検での重要な知見は、盲腸および結腸における赤い粘膜変色と関連する大腸の異常な半流動体の内容物である。
【０１１３】
病理組織学的に、大腸の半流動体の内容物と関連するように、わずか（結腸）および中程度の（盲腸）陰窩微小膿瘍が同定される。これは、回腸の中程度の絨毛萎縮を伴う。いくつかの他の知見は、長期間にわたり食物摂取量が低減した動物の障害された状態を示している。これらの知見は、１匹の動物においてのみ観察されるため、それらは、偶発的であるとみなされ、試験項目／水酸化アルミニウムの組合せでの処置に関連していない。
【０１１４】
皮下注射後、膨張および紅斑を含めた重度の変化が、Ａｌ（ＯＨ）３と組み合わせた本発明のコンストラクト（６００μｇ／注射）を投与した動物（群４）における注射部位で見られる。同様であるが、重度が低い知見が、Ａｌ（ＯＨ）３のみを与える対照群（群１）において見られる。膨張および紅斑は、Ａｌ（ＯＨ）３と組み合わせた本発明のコンストラクト（６００μｇ／注射）の筋肉投与後にも見られるが（群５）、これも重度は低い。
【０１１５】
本発明のコンストラクトまたはアジュバントＭＦ５９もしくはＡｌ（ＯＨ）３または任意の組合せに関連するであろう他の知見は、生きている段階中、観察されない。
【０１１６】
すべての動物は、本発明のコンストラクトで処置後、ＡベータおよびＱベータＩｇＧ抗体応答を実証する。Ａベータ抗体力価は、１つの例外（群３、動物２４８８６、１５２日目：９．３ユニット）を除いて、対照群において観察されない。対照群におけるＱベータ抗体力価は、大部分の場合において、定量化の限界未満である。しかしながら、２５２のうち１２の試料において、ＬＬＯＱを超える値が測定される（群１において６；群２において１；群３において５）。群４および５において、Ｑベータ力価が、１６の投薬前試料のうち４つ（群４において２；群５において２）において測定される。これらのＱベータ値（対照群１から３からまたは投薬前試料（群４から６）からの）の範囲は、群４、５、および６において本発明のコンストラクトで処置後に観察される値（すべての動物は、少なくとも１つの８４１．７ユニット以上の投薬後Ｑベータ力価値を有した）と比較して、非常に低い（範囲：１．０から３．４ユニット）。一般に、抗体力価の大きな増加は、３回目の注射およびその次の注射後に観察される：ＡベータおよびＱベータＩｇＧ特性は、本発明のコンストラクトで処置したすべての群において非常に似ている。水酸化アルミニウムの添加は、ＭＦ５９の添加よりも、わずかに高いＡベータ力価を誘発する。効果は、Ｑベータ力価を考慮した場合、より明白である。本発明のコンストラクト＋水酸化アルミニウムの投与の形態（ｓ．ｃ．またはｉ．ｍ．）は、ＡベータおよびＱベータ免疫応答への影響がほとんどない。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、Ｑベータ特異的Ｔ細胞の誘発された増殖を検出する一方で、データは、Ａベータ特異的Ｔ細胞の増殖がないことを示している。
【０１１７】
群１、２、４、および５（Ａｌ（ＯＨ）３または本発明のコンストラクト／Ａｌ（ＯＨ）３の組合せを施した）の注射部位で病理組織学的に見られる変化は、重度が異なる組織球増殖症および亜急性炎症を含んだ。液化壊死は、群４および５（それぞれ、ｓ．ｃ．およびｉ．ｍ．での本発明のコンストラクト／Ａｌ（ＯＨ）３の組合せ）におけるより大きい組織球蓄積の中心において見られる。似た外見の組織球のクラスターが、群４および５の単一の動物において、流入領域リンパ節（群４において腋、群５において鼠径部）において生じる。群６（本発明のコンストラクト／ＭＦ５９）の注射部位で、３匹の雄において最小から中程度の亜急性炎症ならびに３匹の雌において最小およびわずかな亜急性炎症が観察される。
【０１１８】
結論として、Ａｌ（ＯＨ）３と組み合わせた試験項目（本発明のコンストラクト）の皮下および筋肉内投与は、局所的な膨張および紅斑をもたらす。病理組織学的に、組織球増殖症および亜急性炎症ならびに流入領域リンパ節における液化壊死および組織球のクラスターが観察される。
【０１１９】
アジュバントＡｌ（ＯＨ）３の投与も、注射部位での膨張、紅斑、組織球増殖症および亜急性炎症をもたらすが、重度は低い。したがって、試験項目は、Ａｌ（ＯＨ）３と組み合わせて投与する場合、これらの知見に寄与すると結論づけることができる。
【０１２０】
ＭＦ５９と組み合わせた試験項目の投与は、亜急性炎症のみと関連しており、これは、対応する対照群（群３）において見られなかった。
【実施例４】
【０１２１】
本発明のコンストラクトの頻回の筋肉内注射を用いた、アルツハイマー病を有する患者における、９０週間無作為化二重盲検プラセボ対照試験
患者は、８５歳以下であり、２０から２６（両端を含む）のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）得点によって確認されるような軽度のＡＤを有する。患者は、処置しないか、または臨床評価に先立って、直近４週間にわたり、コリンエステラーゼ阻害剤またはメマンチンを安定的に投薬する。患者を無作為抽出し、アジュバント化した本発明のコンストラクトまたはプラセボの頻回の筋肉内注射を施す。第１の患者のプールは、１５０μｇの本発明のコンストラクトおよび、１５０μｇの水酸化アルミニウム、５０μｇの水酸化アルミニウム、２５０μｌのＭＦ５９、または１２５μｌのＭＦ５９のいずれかの頻回の筋肉内注射を受ける。第２の患者のプールは、４５０μｇの本発明のコンストラクトおよび、１５０μｇの水酸化アルミニウム、４５０μｇの水酸化アルミニウム、１２５μｌのＭＦ５９、または２５０μｌのＭＦ５９のいずれかの頻回の筋肉内注射を受ける。第３の患者のプールは、１５０μｇの水酸化アルミニウム、４５０μｇの水酸化アルミニウム、１２５μｌのＭＦ５９、または２５０μｌのＭＦ５９のいずれかを含有するプラセボの頻回の筋肉内注射を受ける。
【０１２２】
投薬は、０、６、１２週間目、次いで２４、３６、４８および６０週間目に行う。
【０１２３】
水酸化アルミニウムは、バルク懸濁液（１５ｇ／ＬのＡｌ（ＯＨ）３）をＮａＣｌ溶液で希釈することによって製造する。懸濁液の最終組成は、２．７ｍｇ／ｍｌのＡｌ（ＯＨ）３、９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ  ｐＨ５．９（ｐＨ５．５〜７．５）である。均質な懸濁液を、２ｍｌのバイアル中に充填し、ゴム栓で密封し、無菌性のためにオートクレーブし、２℃〜８℃で保管する。
【０１２４】
ＭＦ５９の場合、バルク物質を、無菌的に３ｍｌのバイアル中に充填し、栓で密封し、光から保護して２℃〜８℃で保管する。
【０１２５】
本発明のコンストラクトを、投与に先立って、アジュバントと混合する。
【０１２６】
安全性評価は、一般的な理学的検査、神経学的検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、生命徴候、標準臨床実験室評価（standard clinical laboratory evaluation）（血液学的検査、血液化学的検査、尿検査）、血液および脳脊髄液（ＣＳＦ）における特殊免疫学的実験室評価（special immunological laboratory evaluation）、脳の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ならびに有害事象および重篤有害事象モニタリングを含む。
【０１２７】
Ａβ抗体応答は、ＥＬＩＳＡ法を使用した、血清およびＣＳＦにおけるＡβ抗体力価（ＩｇＧおよびＩｇＭ）の決定によって測定する。血清およびＣＳＦにおけるエキソビボでのＡβ抗体結合特性は、ヒトおよびβ−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）トランスジェニックマウス脳組織における免疫学的方法によって探索する。Ａβに対する免疫応答に関して、血清におけるＶＬＰ抗体力価応答を測定し、担体化合物に対する免疫応答を調査する。
【０１２８】
探索的な薬力学的評価は、以下の評価を含む：１）ＣＳＦ（Ａβペプチドおよびそのアイソフォーム、タウタンパク質およびそのアイソフォーム、リン酸化タウ）および血漿（Ａβペプチドおよびアイソフォーム）における疾患関連マーカーの決定；２）容積測定ＭＲＩ、ならびに３）アルツハイマー病評価スケール（Alzheimers disease Assessment Scale）（ＡＤＡＳ）−認知サブスケール、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）およびアルツハイマー病共同研究−日常生活動作（Alzheimer's disease Cooperative Study-Activities of Daily Living）（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）。
【０１２９】
応答者は、ベースラインを超えたＡβ特異的抗体力価の著しい増加を示す患者として定義する。Ａβ特異的抗体力価は、標準物質としての標準血清と比較して特異的な抗体を検出する、検証された酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）アッセイにおける、定量化の下限値（ＬＬＯＱ）を超えた力価として定義する。
【国際調査報告】
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