(57)【要約】  本発明は、アミロイドβサイト切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２若しくはメマプシン２としてもまた知られるβセクレターゼの阻害剤としての新規５−アミノ−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オン誘導体に関する。本発明はまた、こうした化合物を含んでなる製薬学的組成物、こうした化合物および組成物の製造方法、ならびに、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症若しくはβアミロイドと関連する認知症のようなβセクレターゼが関与する障害の予防および処置のためのこうした化合物および組成物の使用にも向けられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2013531644.tif 000051
若しくはその立体異性体［ここで
Ｒ１、Ｒ２は、水素、フルオロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルならびにＣ３−６シクロアルキルよりなる群から独立に選択されるか；若しくは
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合されている炭素原子と一緒になって、Ｃ３−６シクロアルカンジイル環を形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４は、水素、Ｃ１−３アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキル、ホモアリールならびにヘテロアリールよりなる群から独立に選択され；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は独立にＣ（Ｒ５）若しくはＮであるが、但し、それらのせいぜい２個がＮを表し；各Ｒ５は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキル、シアノ、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択され；
Ｌは結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素若しくはＣ１−３アルキルであり；
Ａｒはホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から選択される１、２若しくは３置換基で置換されているフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ、ハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から選択される１、２若しくは３置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリルおよびオキサジアゾリルよりなる群から選択される］；またはその付加塩若しくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が、水素、フルオロ、シアノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から独立に選択されるか；若しくは
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合されている炭素原子と一緒になってＣ３−６シクロアルカンジイル環を形成することができ；
Ｒ３がＣ１−３アルキルであり；
Ｒ４がＣ１−３アルキルであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４が独立にＣ（Ｒ５）であり、ここで各Ｒ５が水素およびハロから選択され；
Ｌが結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒがホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択される１若しくは２置換基で置換されているフェニ
ルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ、ハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択される１若しくは２置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジルおよびピラジルよりなる群から選択される、
請求項１に記載の化合物；または
その付加塩若しくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が、水素、フルオロ、シアノおよびトリフルオロメチルよりなる群から独立に選択されるか；若しくは、Ｒ１およびＲ２が、それらが結合されている炭素原子と一緒になってシクロプロピル環を形成することができ；
Ｒ３がメチルであり；
Ｒ４がメチルであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４がＣＨであり；
Ｌが結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒがホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールが、フェニル、またはクロロおよびシアノから選択される１若しくは２置換基で置換されているフェニルであり；
ヘテロアリールが、それぞれ、クロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシよりなる群から選択される１若しくは２置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジルおよびピラジルよりなる群から選択される、
請求項１に記載の化合物；または
その付加塩若しくは溶媒和物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２が水素であり；
Ｒ３、Ｒ４が独立にメチル若しくはエチルであり；
Ｘ１およびＸ３がＣＨ若しくはＣＦであり；
Ｘ２およびＸ４がＣＨであり；
Ｌが結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒがヘテロアリールであり；
ヘテロアリールが、それぞれ、クロロ、シアノ、メチル、メトキシ若しくはトリフルオロメチルで場合によっては置換されているピリジル、ピリミジニルおよびピラジルよりなる群から選択される、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２が水素であり；
Ｒ３、Ｒ４がメチルであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４がＣＨであり；
Ｌが−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒがヘテロアリールであり；
ヘテロアリールが、クロロ、シアノ、メトキシ若しくはトリフルオロメチルで置換されているピリジル、ピリミジニル、またはメチルで置換されているピラジルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
治療上有効な量の請求項１ないし５のいずれか１つに記載の化合物および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項７】
製薬学的に許容できる担体が、治療上有効な量の請求項１ないし５のいずれか１つに記載の化合物と緊密に混合されることを特徴とする、請求項６に記載の製薬学的組成物の製造方法。
【請求項８】
アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症若しくはβアミロイドと関連する認知症の処置、予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）若しくは予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）での使用のための請求項１ないし５のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項９】
治療上有効な量の請求項１ないし５のいずれか１つに記載の化合物若しくは請求項６に記載の製薬学的組成物をそれの必要な被験体に投与することを含んでなる、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症およびβアミロイドと関連する認知症よりなる群から選択される障害の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβサイト切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２若しくはメマプシン２としてもまた知られるβセクレターゼの阻害剤としての新規５−アミノ−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オン誘導体に関する。本発明はまた、こうした化合物を含んでなる製薬学的組成物、こうした化合物および組成物の製造方法、ならびに、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症若しくはβアミロイドと関連する認知症のようなβセクレターゼが関与する障害の予防および処置のためのこうした化合物および組成物の使用にも向けられる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は加齢と関連する神経変性疾患である。ＡＤ患者は、失認および記憶喪失ならびに不安のような行動障害に苦しめられる。ＡＤに悩まされる者の９０％超が散発型の該障害を有する一方、症例の１０％未満が家族性すなわち遺伝性である。米国において、６５歳の人々の１０人に約１人がＡＤを有する一方、８５歳では２個体ごとに１人がＡＤに苦しめられる。最初の診断からの平均余命は７〜１０年であり、そしてＡＤ患者は、非常に高価である介護付き住宅におけるか若しくは家族によるかのいずれかの広範囲の介護を必要とする。人口中の高齢者の増大する数とともにＡＤは増大する医学上の懸念である。ＡＤのための現在利用可能な治療は該疾患の症状を単に処置し、そして認知特性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤ならびにこの病気に伴う行動障害を制御するための抗不安薬および抗精神病薬を包含する。
【０００３】
ＡＤ患者の脳中の顕著な病理学的特徴は、τタンパク質の過剰リン酸化により生成される神経原線維変化、およびβアミロイド１−４２（Ａβ１−４２）ペプチドの凝集により生じるアミロイド斑である。Ａβ１−４２はオリゴマーおよびその後原線維そして最終的にアミロイド斑を形成する。該オリゴマーおよび原線維はとりわけ神経毒性であると考えられており、そしてＡＤと関連する神経学的損傷の大部分を引き起こしうる。Ａβ１−４２の形成を予防する剤はＡＤの処置のための疾患修飾薬である可能性を有する。Ａβ１−４２は７７０アミノ酸から構成されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生成される。Ａβ１−４２のＮ末端はβセクレターゼ（ＢＡＣＥ）により切断され、そしてその後γセクレターゼがＣ末端を切断する。Ａβ１−４２に加え、γセクレターゼは、優勢な切断生成物であるＡβ１−４０ならびにＡβ１−３８およびＡβ１−４３もまた遊離する。これらのＡβの形態はまた凝集してオリゴマーおよび原線維も形成し得る。従って、ＢＡＣＥの阻害剤は、Ａβ１−４２ならびにＡβ１−４０、Ａβ１−３８およびＡβ１−４３の形成を予防すると期待されることができ、かつ、ＡＤの処置で潜在的治療薬となるとみられる。
【発明の概要】
【０００４】
［発明の要約］
本発明は、式（Ｉ）の５−アミノ−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オン
【０００５】
【化１】
2013531644.tif 000002
【０００６】
およびそれらの立体異性体［ここで
Ｒ１、Ｒ２は、水素、フルオロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルならびにＣ３−６シクロアルキルよりなる群から独立に選択されるか；若しくは
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってＣ３−６シクロアルカンジイル環を形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４は、水素、Ｃ１−３アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキル、ホモアリールならびにヘテロアリールよりなる群から独立に選択され；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は独立にＣ（Ｒ５）若しくはＮであるが、但し、それらのせいぜい２個がＮを表し；各Ｒ５は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル、モノおよびポリハロＣ１−３アルキル、シアノ、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択され；
Ｌは結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素若しくはＣ１−３アルキルであり；
Ａｒはホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から選択される１、２若しくは３置換基で置換されているフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ、ハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から選択される１、２若しくは３置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリルおよびオキサジアゾリルよりなる群から選択され］；ならびにそれらの付加塩および溶媒和物
に向けられる。
【０００７】
製薬学的に許容できる担体および上述された化合物のいずれかを含んでなる製薬学的組成物が本発明を具体的に説明する。上述された化合物のいずれかおよび製薬学的に許容できる担体を混合することにより作成される製薬学的組成物が本発明の具体的一説明である。上述された化合物のいずれかおよび製薬学的に許容できる担体を混合することを含んでなる製薬学的組成物の作成方法が本発明を具体的に説明する。
【０００８】
治療上有効な量の上述された化合物若しくは製薬学的組成物のいずれかをそれの必要な被験体に投与することを含んでなる、βセクレターゼ酵素により媒介される障害の処置方法が本発明を例示している。
【０００９】
治療上有効な量の上述された化合物若しくは製薬学的組成物のいずれかをそれの必要な被験体に投与することを含んでなる、βセクレターゼ酵素の阻害方法が本発明をさらに例示している。
【００１０】
本発明の一例は、治療上有効な量の上述された化合物若しくは製薬学的組成物のいずれ
かをそれの必要な被験体に投与することを含んでなる、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症およびβアミロイドと関連する認知症よりなる群から選択される障害、好ましくはアルツハイマー病の処置方法である。
【００１１】
本発明の別の例は、それの必要な被験体における（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老化、（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体を伴う認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）卒中と関連する認知症、（ｈ）パーキンソン病と関連する認知症、および（ｉ）βアミロイドと関連する認知症の処置における使用のための上述された化合物のいずれかである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
［発明の詳細な記述］
本発明は、上で定義されたところの式（Ｉ）の化合物およびそれらの製薬学的に許容できる塩に向けられる。式（Ｉ）の化合物はβセクレターゼ酵素（βサイト切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２若しくはメマプシン２としてもまた知られる）の阻害剤であり、そして、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化、認知症、卒中と関連する認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、パーキンソン病と関連する認知症およびβアミロイドと関連する認知症、好ましくはアルツハイマー病、軽度認知障害若しくは認知症、より好ましくはアルツハイマー病の処置で有用である。
【００１３】
本発明の一態様において、Ｒ１およびＲ２は、水素、フルオロ、シアノおよびポリハロＣ１−３アルキルよりなる群から独立に選択されるか；若しくは
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってＣ３−６シクロアルカンジイル環を形成することができ；
Ｒ３はＣ１−３アルキルであり；
Ｒ４はＣ１−３アルキルであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は独立にＣ（Ｒ５）であり、ここで各Ｒ５は水素およびハロから選択され；
Ｌは結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒはホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択される１若しくは２置換基で置換されているフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ、ハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシよりなる群から選択される１若しくは２置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジルおよびピラジルよりなる群から選択され；あるいは
その付加塩若しくは溶媒和物。
【００１４】
本発明の別の態様において、Ｒ１およびＲ２は、水素、フルオロ、シアノおよびトリフルオロメチルよりなる群から独立に選択されるか；若しくはＲ１およびＲ２は、それらが結合されている炭素原子と一緒になってシクロプロピル環を形成することができ；
Ｒ３はメチルであり；
Ｒ４はメチルであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４はＣＨであり；
Ｌは結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；
Ａｒはホモアリール若しくはヘテロアリールであり；
ここでホモアリールは、フェニル、またはクロロおよびシアノから選択される１若しくは２置換基で置換されているフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ、クロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシよりな
る群から選択される１若しくは２置換基で場合によっては置換されているピリジル、ピリミジルおよびピラジルよりなる群から選択され；あるいは
その付加塩若しくは溶媒和物。
【００１５】
別の態様において、Ｒ１、Ｒ２は水素であり；Ｒ３、Ｒ４は独立にメチル若しくはエチルであり；Ｘ１およびＸ３はＣＨ若しくはＣＦであり；Ｘ２およびＸ４はＣＨであり；Ｌは結合若しくは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；Ａｒはヘテロアリールであり；ヘテロアリールは、それぞれ、クロロ、シアノ、メチル、メトキシ若しくはトリフルオロメチルで場合によっては置換されているピリジル、ピリミジニルおよびピラジルよりなる群から選択される。
【００１６】
別の態様において、Ｒ１、Ｒ２は水素であり；Ｒ３、Ｒ４はメチルであり；Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４はＣＨであり；Ｌは−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−であり、ここでＲ６は水素であり；Ａｒはヘテロアリールであり；ヘテロアリールは、クロロ、シアノ、メトキシ若しくはトリフルオロメチルで置換されているピリジル、ピリミジニル、またはメチルで置換されているピラジルである。
【００１７】
定義
「ハロ」はフルオロ、クロロおよびブロモを示し；「Ｃ１−３アルキル」は１、２若しくは３個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝状飽和アルキル基例えばメチル、エチル、１−プロピルおよび２−プロピルを示し；「Ｃ１−３アルキルオキシ」は、Ｃ１−３アルキルが前で定義されたとおりであるエーテル基を示し；「モノおよびポリハロＣ１−３アルキル」は、前で否定された（ｄｅｎｉｅｄ）ところの１、２、３若しくは可能な場合はそれ以上のハロ原子で置換されている前で定義されたところのＣ１−３アルキルを示し；「モノおよびポリハロＣ１−３アルキルオキシ」は、モノおよびポリハロＣ１−３アルキルが前で定義されたとおりであるエーテル基を示し；「Ｃ３−６シクロアルキル」はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシを示し；「Ｃ３−６シクロアルカンジイル」は、シクロプロパンジイル、シクロブタンジイル、シクロペンタンジイルおよびシクロヘキサンジイルのような二価の基を示す。
【００１８】
本明細書で使用されるところの「被験体」という用語は、処置、観察若しくは実験の対象である若しくはあった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００１９】
本明細書で使用されるところの「治療上有効な量」という用語は、処置されている疾患若しくは障害の症状の軽減を包含する、研究者、獣医師、医師若しくは他の臨床家により探究されている組織系、動物若しくはヒトにおいて生物学的若しくは医薬的応答を導き出す有効成分若しくは製薬学的剤の量を意味している。
【００２０】
本明細書で使用されるところの「組成物」という用語は、指定された量の指定された成分を含んでなる生成物、ならびに指定された量の指定された成分の組合せから直接若しくは間接的に生じるいかなる生成物も包含することを意図している。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物ならびにそれらの付加塩、水和物および溶媒和物のいくつかは１個若しくはそれ以上のキラリティーの中心を含有することができかつ立体異性体として存在しうることが認識されるであろう。
【００２２】
上および下で、「式（Ｉ）の化合物」という用語はその付加塩、溶媒和物および立体異性体を包含することを意味している。
【００２３】
上若しくは下の「立体異性体」若しくは「立体化学異性体」という用語は互換性に使用
される。
【００２４】
本発明は、純粋な立体異性体または２種若しくはそれ以上の立体異性体の混合物いずれかとしての式（Ｉ）の化合物の全部の立体異性体を包含する。
【００２５】
鏡像異性体は相互の重ね合わせることができない鏡像である立体異性体である。一対の鏡像異性体の１：１混合物はラセミ化合物若しくはラセミ混合物である。ジアステレオマー（すなわちジアステレオ異性体）は鏡像異性体でない立体異性体である。すなわちそれらは鏡像として関係付けられない。ある化合物が１個の二重結合を含有する場合、置換基はＥ若しくはＺ配置にあることができる。化合物が二置換シクロアルキル基を含有する場合、該置換基はシス若しくはトランス配置にあることができる。従って、本発明は、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ化合物、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体およびそれらの混合物を包含する。
【００２６】
絶対配置はカーン・インゴルド・プレローグ系に従って指定される。非対称原子での配置はＲ若しくはＳいずれかにより指定される。その絶対配置が既知でない分割された化合物は、それらが平面偏光を回転する方向に依存して（＋）若しくは（−）により呼称し得る。
【００２７】
特定の一立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が他の異性体を実質的に含まない、すなわち５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、なおより好ましくは５％未満、とりわけ２％未満、および最も好ましくは１％未満の他の異性体を伴うことを意味している。従って、式（Ｉ）のある化合物が例えば（Ｒ）と指定される場合、これは該化合物が（Ｓ）異性体を実質的に含まないことを意味しており；式（Ｉ）のある化合物が例えばＥと指定される場合、これは該化合物がＺ異性体を実質的に含まないことを意味しており；式（Ｉ）のある化合物が例えばシスと指定される場合、これは該化合物がトランス異性体を実質的に含まないことを意味している。
【００２８】
さらに、本発明の化合物の結晶形のいくつかは多形として存在することができ、そしてそれ自体本発明に包含されることを意図している。加えて、本発明の化合物のいくつかは水（すなわち水和物）若しくは普遍的有機溶媒と溶媒和物を形成することができ、そしてこうした溶媒和物もまた本発明の範囲内に包含されることを意図している。
【００２９】
医学での使用のため、本発明の化合物の塩は非毒性の「製薬学的に許容できる塩」を指す。他の塩が、しかしながら、本発明の化合物若しくはそれらの製薬学的に許容できる塩の製造において有用でありうる。該化合物の適する製薬学的に許容できる塩は、例えば、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸若しくはリン酸のような製薬学的に許容できる酸の溶液と該化合物の溶液を混合することにより形成されうる酸付加塩を包含する。さらに、本発明の化合物が酸性部分を運搬する場合、それらの適する製薬学的に許容できる塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム若しくはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム若しくはマグネシウム塩；および適する有機リガンドと形成される塩、例えば四級アンモニウム塩を包含しうる。
【００３０】
製薬学的に許容できる塩の製造で使用しうる代表的な酸は、限定されるものでないが以下すなわち酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−カンファー酸、カンファースルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、サイクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルコロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏ
ｎｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、およびウンデシレン酸を挙げることができる。製薬学的に許容できる塩の製造で使用しうる代表的塩基は、限定されるものでないが以下すなわちアンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミンおよび水酸化亜鉛を挙げることができる。
【００３１】
本発明の化合物の化学名は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅにより合意された命名規則に従って生成された。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物のいくつかはそれらの互変異性体でもまた存在しうる。こうした形態は、上式で明示的に示されないとは言え、本発明の範囲内に包含されることを意図している。
【００３３】
化合物の製造法
実験手順１
式（Ｉ）の最終化合物は、反応スキーム（１）に従って式（ＩＩ）の中間体化合物を例えば塩化アンモニウム若しくは水性アンモニアのようなアンモニアの適切な供給源と反応させること、すなわち、例えば６０℃で反応混合物を例えば６時間加熱することのような熱的条件下で、例えば水若しくはメタノールのような適する反応不活性溶媒中で実施される反応により製造し得る。反応スキーム（１）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義される。
【００３４】
【化２】
2013531644.tif 000003
【００３５】
反応手順２
Ｌが−Ｎ（Ｒ６）ＣＯ−である式（Ｉ−ａ）の最終化合物は、反応スキーム（２）に従って式（ＩＩＩ−ａ）の中間体化合物を式（ＩＶ）の化合物と反応させること、すなわち、例えば１８０℃で反応混合物をマイクロ波照射下例えば１４０分間加熱することのような熱的条件下、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適する反応不活性溶媒中で例えばＫ３ＰＯ４のような適する塩基、例えばＣｕＩのような銅触媒、および例えば（１Ｒ，２Ｒ）−（−）−１，２−ジアミノシクロヘキサンのようなジアミンの存在下で実施
される反応により製造し得る。反応スキーム（２）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、そしてＷはハロである。
【００３６】
【化３】
2013531644.tif 000004
【００３７】
反応手順３
加えて、式（Ｉ−ａ）の最終化合物は、反応スキーム（３）に従って式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物を式（Ｖ）の化合物と反応させること、すなわち、例えば２５℃で反応混合物を例えば２時間加熱することのような熱的条件下で、例えばジクロロメタンのような適する反応不活性溶媒中、例えばトリエチルアミンのような適する塩基の存在下、例えばＯ−（７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩［ＨＡＴＵ、ＣＡＳ  １４８８９３−１０−１］のような縮合剤の存在下に実施される反応により製造し得る。反応スキーム（３）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義される。
【００３８】
【化４】
2013531644.tif 000005
【００３９】
実験手順４
加えて、式（Ｉ−ａ）の最終化合物は、反応スキーム（４）に従って式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物を式（ＶＩ）の化合物と反応させること、すなわち、例えば２５℃で反応混合物を例えば２時間加熱することのような熱的条件下に、例えばジクロロメタンのような適する反応不活性溶媒中、例えばピリジンのような適する塩基の存在下で実施される反応により製造し得る。反応スキーム（４）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、そしてＹはハロである。
【００４０】
【化５】
2013531644.tif 000006
【００４１】
実験手順５
Ｌが結合である式（Ｉ−ｂ）の最終化合物は、反応スキーム（５）に従って式（ＩＩＩ−ａ）の中間体化合物を式（ＶＩＩ）の化合物と反応させること、すなわち、例えば８０℃で反応混合物を例えば４８時間加熱すること、若しくは例えば、１３０℃で反応混合物をマイクロ波照射下例えば１０分間加熱することのような熱的条件下で、例えばエタノールのような適する反応不活性溶媒若しくは例えば１，２−ジメトキシエタン／水／エタノールのような不活性溶媒の混合物中、例えば水性Ｋ３ＰＯ４若しくはＣｓ２ＣＯ３のような適する塩基、例えば［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）［ＣＡＳ  ７２２８７−２６−４］若しくはトランス−（ビスジシクロヘキシルアミン）パラジウム二酢酸塩［ＤＡＰＣｙ、ＣＡＳ  ６２８３３９−９６−８］のようなＰｄ錯体触媒の存在下で実施される反応により製造し得る。反応スキーム（５）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、そしてＷはハロである。Ｒ７およびＲ８は水素若しくはアルキルでありうるか、または一緒になって例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−若しくは−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の二価の基を形成しうる。
【００４２】
【化６】
2013531644.tif 000007
【００４３】
前述の製造法の多数の中間体および出発原料は、前記若しくは類似化合物の技術既知の製造方法論に従って製造しうる既知化合物であり、かつ、いくつかの中間体は新規である。多数のこうした製造法をより詳細に下述するであろう。
【００４４】
実験手順６
式（ＩＩ）の中間体は、反応スキーム（６）に従って、式（ＶＩＩＩ）の中間体化合物を例えば五硫化二リン若しくは２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド［ローソン試薬、ＣＡＳ  １９１７２−４７−５］のようなチオアミドの合成のための適するイオウ供与試薬と反応させること、すなわち、例えば９０℃で反応混合物を例えば１８時間加熱することのような熱的条件下で、例えばテトラヒドロフラン若しくはトルエンのような反応不活性溶媒中、例えばピリジンのような適する塩基の存在下に実施される反応により製造し得る。反応スキーム（６）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義される。
【００４５】
【化７】
2013531644.tif 000008
【００４６】
実験手順７
Ｌが結合である式（ＶＩＩＩ）の中間体は、反応スキーム（７）に従って式（ＩＸ−ａ）の中間体化合物を式（ＶＩＩ）の化合物と反応させること、すなわち、例えば８０℃で反応混合物を例えば２０時間加熱すること、若しくは例えば１５０℃で反応混合物をマイクロ波照射下例えば１５分間加熱することのような熱的条件下、例えば１，４−ジオキサン／水のような不活性溶媒の適する混合物中、例えば水性Ｎａ２ＣＯ３のような適する塩基、例えばテトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［ＣＡＳ  １４２２１−０１−３］のようなＰｄ錯体触媒の存在下に実施される反応により製造し得る。反応スキーム（７）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、そしてＷはハロである。Ｒ７およびＲ８は水素若しくはアルキルでありうるか、または一緒になって例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−若しくは−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の二価の基を形成しうる。
【００４７】
【化８】
2013531644.tif 000009
【００４８】
実験手順８
式（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＩＩ−ｃ）の中間体化合物は一般に、下の反応スキーム（８）および（９）に示される反応段階に従って製造し得る。
【００４９】
【化９】
2013531644.tif 000010
【００５０】
上の反応スキーム（８）の式（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）および（ＩＩＩ−ｃ）の中間体化合物は、技術既知のチオアミドからアミジンへの転化手順（反応段階Ｂ）に従って式（ＸＩ−ａ）、（ＸＩ−ｂ）および（ＸＩ−ｃ）の対応する中間体化合物から、若しくは、あるいは、式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）の中間体化合物については、技術既知のメトキシイミンからアミジンへの転化手順（反応段階Ａ）に従って式（Ｘ−ａ）および（Ｘ−ｃ）の対応する中間体化合物から、製造し得る。前記転化は、例えば７０℃ないし８５℃で反応混合物を例えば６時間ないし１８時間加熱することのような熱的条件下で、例えば水若しくはメタノールなどのような適する反応不活性溶媒中、例えば塩化アンモニウム若しくは水性アンモニアのようなアンモニア供給源での式（ＸＩ−ａ）、（ＸＩ−ｂ）および（ＸＩ−ｃ）若しくは（Ｘ−ａ）および（Ｘ−ｃ）の対応する中間体化合
物の処理により便宜的に実施しうる。
【００５１】
加えて、上の反応スキーム（８）の式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物（ここでＲ６＝Ｈ）は、技術既知のニトロからアミノへの還元手順（反応段階Ｅ）に従って式（ＩＩＩ−ｃ）の対応する中間体化合物から製造し得る。前記還元は、技術既知の触媒的水素化手順に従って便宜的に実施しうる。例えば、前記還元は、水素雰囲気下かつ例えば炭上パラジウム、炭上白金、ラネーニッケルおよび類似の触媒のような適切な触媒の存在下で反応体を攪拌することにより実施しうる。適する溶媒は、例えば水、アルカノール例えばメタノール、エタノールなど、エステル例えば酢酸エチルなどである。前記還元反応の速度を高めるために、反応混合物の温度および／若しくは圧を上昇させることが有利でありうる。反応体および反応生成物中のある種の官能基の望ましくないさらなる水素化は、反応混合物への例えばチオフェンなどのような触媒毒の添加により予防しうる。
【００５２】
上の反応スキーム（８）の式（Ｘ−ａ）および（Ｘ−ｃ）の中間体化合物は、技術既知のアミドからメトキシイミンへの転化手順（反応段階Ｃ）に従って式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）の対応する中間体化合物から製造し得る。前記転化は、例えば２５℃のような中程度に高温で例えば６０時間、例えばジクロロメタンのような適する反応不活性溶媒中での、式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）の対応する中間体化合物の例えばトリメチルオキソニウムテトラフルオロボラートのようなメチル化剤での処理により便宜的に実施しうる。
【００５３】
上の反応スキーム（８）の式（ＸＩ−ａ）、（ＸＩ−ｂ）および（ＸＩ−ｃ）のチオアミド誘導体は、技術既知の硫化手順（反応段階Ｄ）に従って式（ＩＸ−ａ）、（ＩＸ−ｂ）および（ＩＸ−ｃ）のアミド誘導体から製造し得る。前記転化は、例えば９０℃で反応混合物を例えば１８時間加熱することのような熱的条件下で例えばテトラヒドロフラン若しくはトルエンのような反応不活性溶媒中、例えばピリジンのような適する塩基の存在下での例えば五硫化二リン若しくは２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド［ローソン試薬、ＣＡＳ  １９１７２−４７−５］のような硫化剤での前記アミドの処理により便宜的に実施しうる。
【００５４】
【化１０】
2013531644.tif 000011
【００５５】
上の反応スキーム（９）の式（ＩＸ−ｂ）の中間体は、アミンの技術既知のＮ−脱保護手順（反応段階Ｆ）に従って、Ｚが例えばｐ−メトキシベンジル基のようなアミンの保護基である式（ＩＸ−ｄ）の中間体化合物を反応させることにより製造し得る。前記Ｎ−脱保護は、例えば２５℃のような中程度に高温で例えば４時間、例えばアセトニトリル／水のような不活性溶媒の混合物中で例えば硝酸セリウム（ＩＶ）アンモニウムのようなアミン官能性の適する脱保護剤での式（ＩＸ−ｄ）の対応する中間体化合物の処理により便宜的に実施しうる。
【００５６】
上の反応スキーム（９）の式（ＩＸ−ａ）、（ＩＸ−ｃ）および（ＩＸ−ｄ）の中間体は、技術既知の環化手順（反応段階Ｇ）に従って式（ＸＩＩ−ａ）、（ＸＩＩ−ｃ）および（ＸＩＩ−ｄ）の中間体化合物を反応させることにより製造し得る。前記環化は、式（ＸＩＩ−ａ）、（ＸＩＩ−ｃ）および（ＸＩＩ−ｄ）の対応する中間体化合物の式（ＸＩ
ＩＩ）の中間体化合物での処理、すなわち、例えば７０℃で反応混合物を例えば３時間加熱することのような熱的条件下、例えばエタノールのような適する反応不活性溶媒中で実施される反応により便宜的に実施しうる。反応スキーム（９）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、ｈａｌｏはクロロ若しくはブロモであり、そしてＡｌｋはＣ１−３アルキルである。
【００５７】
上の反応スキーム（９）の式（ＸＩＩ−ａ）、（ＸＩＩ−ｃ）および（ＸＩＩ−ｄ）の中間体は、技術既知のＮ−アシル化手順（反応段階Ｈ）に従って式（ＸＩＶ−ａ）、（ＸＩＶ−ｃ）および（ＸＩＶ−ｄ）の中間体化合物を反応させることにより製造し得る。前記Ｎ−アシル化は、式（ＸＩＶ−ａ）、（ＸＩＶ−ｃ）および（ＸＩＶ−ｄ）の対応する中間体化合物の式（ＸＶ）の中間体化合物での処理、すなわち、例えば０℃のような低温で例えば１時間、例えばジクロロメタンのような適する反応不活性溶媒中、例えばトリエチルアミンのような適する塩基の存在下に実施される反応により便宜的に実施しうる。反応スキーム（９）で、全部の変数は式（Ｉ）でのとおり定義され、ｈａｌｏはクロロ若しくはブロモであり、そしてＡｌｋはＣ１−３アルキルである。
【００５８】
Ｚが例えばｐ−メトキシベンジル基のような適するＮ−保護基である式（ＸＩＶ−ａ）、（ＸＩＶ−ｃ）および（ＸＩＶ−ｄ）の中間体化合物は、一般に、技術既知のストレッカー型手順に従って製造し得る。
【００５９】
製薬学的組成物
本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化、認知症、レビー小体を伴う認知症、ダウン症候群、卒中と関連する認知症、パーキンソン病と関連する認知症およびβアミロイドと関連する認知症のような、βセクレターゼの阻害が有益である疾患を予防若しくは処置するための組成物もまた提供する。前記組成物は、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物および製薬学的に許容できる担体若しくは希釈剤を含んでなる。
【００６０】
有効成分が単独で投与されることが可能である一方、それを製薬学的組成物として提示することが好ましい。従って、本発明は、製薬学的に許容できる担体若しくは希釈剤と一緒になって本発明の化合物を含んでなる製薬学的組成物をさらに提供する。該担体若しくは希釈剤は、該組成物の他成分と適合性でありかつその受領体に有害でないという意味において「許容でき」なければならない。
【００６１】
本発明の製薬学的組成物は、薬学の技術分野で公知のいずれかの方法により製造しうる。治療上有効な量の有効成分としての塩基の形態若しくは付加塩の形態の特定の化合物を、投与に望ましい製剤の形態に依存して多様な形態をとりうる製薬学的に許容できる担体と緊密な混合状態で組合せる。これらの製薬学的組成物は、望ましくは、好ましくは経口、経皮若しくは非経口投与のような全身投与；または吸入、鼻スプレー、点眼薬を介する、若しくはクリーム剤、ゲル剤、シャンプー剤などを介するような局所投与に適する単位剤形にある。例えば、経口剤形の組成物の製造において、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤および溶液のような経口液体製剤の場合は例えば水、グリコール、油、アルコールなど；若しくは散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合はデンプン、糖、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などのような固形担体のような、通常の製薬学的媒体のいずれを使用してもよい。投与におけるそれらの容易さのため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口投薬単位形態を表し、この場合は固体の製薬学的担体が明らかに使用される。非経口組成物について、担体は通常少なくとも大部分で滅菌水を含んでなることができるとは言え、例えば溶解性を補助するための他成分を包含しうる。例えば、担体が食塩溶液、ブドウ糖溶液若しくは食塩溶液およびブドウ糖溶液の混合物を含んでなる注入可能な溶液を製造しうる。注入可能な懸濁液もまた製造することができ、この場合は適切な液体担体、懸濁化剤などを使用しうる。経皮投与に適する組成物中で、担体は、少ない比率のいずれかの
性質の適する添加物と場合によっては組合せられる浸透増強剤および／若しくは適する湿潤剤を場合によっては含んでなり、この添加物は皮膚に対するいかなる重大な有害な影響も引き起こさない。前記添加物は皮膚への投与を容易にすることができかつ／若しくは所望の組成物を製造するために役立ちうる。これらの組成物は多様な方法で、例えば経皮貼付剤として、スポットオンとして、若しくは軟膏剤として投与しうる。
【００６２】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のため、前述の製薬学的組成物を投薬単位形態に処方することがとりわけ有利である。本明細および本明細書の請求の範囲で使用されるところの投薬単位形態は、単位投薬量として適する物理的に別個の単位を指し、各単位は必要とされる製薬学的担体とともに所望の治療効果を生じるよう計算された予め決められた量の有効成分を含有する。こうした投薬単位形態の例は、錠剤（割線付き若しくはコーティング錠を包含する）、カプセル剤、丸剤、散剤包、カシェ剤、注入可能な溶液若しくは懸濁剤、茶さじ１杯、テーブルスプーン１杯など、およびそれらの分離された倍数である。
【００６３】
正確な投薬量および投与の頻度は、当業者に公知であるとおり、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、処置されている特定の状態、処置されている状態の重症度、特定の患者の齢、重量、性、障害の程度および全般的な体調、ならびに該個体が服用しているかも知れない他の医薬品に依存する。さらに、前記有効１日量が、処置される被験体の応答に依存してかつ／若しくは本発明の化合物を処方する医師の評価に依存して低下若しくは増大されうることが明らかである。
【００６４】
投与の様式に依存して、該製薬学的組成物は、０．０５から９９重量％まで、好ましくは０．１から７０重量％まで、より好ましくは０．１から５０重量％までの有効成分、および１から９９．９５重量％まで、好ましくは３０から９９．９重量％まで、より好ましくは５０から９９．９重量％までの製薬学的に許容できる担体を含むことができ、全部のパーセンテージは該組成物の総重量に基づく。
【００６５】
本化合物は、経口、経皮若しくは非経口投与のような全身投与；または吸入、鼻スプレー、点眼薬を介する、若しくはクリーム剤、ゲル剤、シャンプー剤などを介するような局所投与に使用し得る。該化合物は好ましくは経口投与される。正確な投薬量および投与の頻度は、当業者に公知であるとおり、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、処置されている特定の状態、処置されている状態の重症度、特定の患者の齢、重量、性、障害の程度および全般的な体調、ならびに該個体が服用しているかも知れない他の医薬品に依存する。さらに、前記有効１日量が、処置される被験体の応答に依存してかつ／若しくは本発明の化合物を処方する医師の評価に依存して低下若しくは増大されうることが明らかである。
【００６６】
単一剤形を製造するため担体物質と組合せ得る式（Ｉ）の化合物の量は、処置される疾患、哺乳動物の種および特定の投与様式に依存して変動することができる。しかしながら、一般的な指針として、本発明の化合物の適する単位用量は、例えば好ましくは０．１ｍｇないし約１０００ｍｇの間の有効成分を含有し得る。好ましい単位用量は１ｍｇないし約５００ｍｇの間である。より好ましい単位用量は１ｍｇないし約３００ｍｇの間である。なおより好ましい単位用量は１ｍｇないし約１００ｍｇの間である。こうした単位用量は、７０ｋｇの成人の総投薬量が投与あたり被験体の体重１ｋｇあたり０．００１ないし約１５ｍｇの範囲にあるように、１日１回以上、例えば１日２、３、４、５若しくは６回、しかし好ましくは１日あたり１若しくは２回投与し得る。好ましい投薬量は投与あたり被験体の体重１ｋｇあたり０．０１ないし約１．５ｍｇであり、そしてこうした治療は多数の週若しくは月およびいくつかの場合には年の間延長し得る。しかしながら、いずれの特定の患者の特定の用量レベルも、当業者により十分に理解されるとおり、使用される特定の化合物の活性；処置されている個体の齢、体重、全般的健康状態、性および食餌；投与の時刻および経路；排泄の速度；以前に投与されていた他の薬物；ならびに治療を受け
る特定の疾患の重症度を包含する多様な因子に依存することができることが理解されるであろう。
【００６７】
典型的な投薬量は、１日１回若しくは１日あたり複数回服用される１個の１ｍｇないし約１００ｍｇ錠剤若しくは１ｍｇないし約３００ｍｇ、または１日１回服用されかつ比例してより高含量の有効成分を含有する１個の徐放カプセル剤若しくは錠剤であり得る。徐放効果は、異なるｐＨ値で溶解するカプセル素材により、浸透圧によりゆっくり放出するカプセルにより、若しくはいずれかの他の既知の徐放手段により得ることができる。
【００６８】
当業者に明らかであろうとおり、いくつかの場合にこれらの範囲外の投薬量を使用することが必要であり得る。さらに、臨床家若しくは処置する医師が、個々の患者の応答とともに治療をどのようにかついつ開始、中断、調節若しくは終了するかを知ることができることが注目される。
【００６９】
上で提供された組成物、方法およびキットについて、当業者は、それぞれで使用のための好ましい化合物が上で好ましいとして示される化合物であることを理解するであろう。組成物、方法およびキットのためのなおさらに好ましい化合物は下の制限しない実施例で提供される化合物である。
【実施例】
【００７０】
実験の部
下で、「ｍ．ｐ．」という用語は融点を意味しており、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味しており、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを意味しており、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味しており、「ＡｃＯＥｔ」は酢酸エチルを意味しており、「ＡｃＯＨ」は酢酸を意味しており、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味しており、「ｒａｃ」はラセミ化合物を意味している。
【００７１】
Ａ．中間体の製造
実施例Ａ１
中間体１：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオニトリルの製造
【００７２】
【化１１】
2013531644.tif 000012
【００７３】
シアン化トリメチルシリル（２５．＋−２ｍＬ、２０１ｍｍｏｌ）をＮＨ３／ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中の３−ブロモ−アセトフェノン（２５ｇ、１２５．６ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（１３．４ｇ、２５１．２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を室温で４日間攪拌した。その後溶媒を真空中で蒸発させかつ残渣をＡｃＯＥｔに溶解した。固形物を濾過分離しかつ溶媒を真空中で蒸発させて中間体１（２６ｇ、９２％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００７４】
実施例Ａ２
中間体２：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸の製造
【００７５】
【化１２】
2013531644.tif 000013
【００７６】
中間体１（２６ｇ、１１５．５ｍｍｏｌ）を６Ｎ  ＨＣｌ（１３９ｍＬ）に溶解し、そして該混合物を１８時間還流した。室温に冷却した後に溶媒を真空中で蒸発させて中間体２（２４ｇ、８５％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００７７】
実施例Ａ３
中間体３：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【００７８】
【化１３】
2013531644.tif 000014
【００７９】
塩化チオニル（８．９７ｍＬ、１２２．９ｍｍｏｌ）を０℃でＭｅＯＨ（１２５ｍＬ）中の中間体２（１０ｇ、４１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に一滴ずつ添加した。その後該混合物を１８時間還流した。溶媒を真空中で蒸発させかつ残渣をＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）とＤＣＭの間で分配した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＡｃＯＥｔ  ０／１００ないし３０／７０）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体３（４．１ｇ、３９％収率）を無色油状物として生じた。
【００８０】
実施例Ａ４
中間体４：２−（３−ブロモ−フェニル）−２−（２−クロロ−アセチルアミノ）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【００８１】
【化１４】
2013531644.tif 000015
【００８２】
塩化クロロアセチル（０．３４ｍＬ、４．２６ｍｍｏｌ）を０℃で窒素下のＤＣＭ（３５ｍＬ）中の中間体３（１ｇ、３．８７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．７４ｍＬ、５．８１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に一滴ずつ添加した。該混合物を０℃で１時間攪拌した。その後該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させて中間体４（１．３ｇ、８９％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００８３】
実施例Ａ５
中間体５：ｒａｃ−３−（３−ブロモ−フェニル）−１，３−ジメチル−ピペラジン−２，５−ジオンの製造
【００８４】
【化１５】
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【００８５】
ＥｔＯＨ中３３％メチルアミン（５．３６ｍＬ、４３．０４ｍｍｏｌ）を室温で封止チューブ中のＥｔＯＨ（５３ｍＬ）中の中間体４（２．４ｇ、７．１７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。その後該混合物を７０℃で３時間攪拌した。溶媒を真空中で蒸発させて中間体５（１．９５ｇ、８８％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００８６】
実施例Ａ６
中間体６：ｒａｃ−１，３−ジメチル−３−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−ピペラジン−２，５−ジオンの製造
【００８７】
【化１６】
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【００８８】
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２３ｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を室温で１，４−ジオキサン（１８ｍＬ）およびＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）（４ｍＬ）中の中間体５（０．３ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）およびピリミジン−５−ボロン酸（０．２５ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。該混合物をマイクロ波照射下１５０℃で１５分間攪拌した。該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし３／９７）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体６（０．２６ｇ、８７％収率）を灰白色固形物として生じた。
【００８９】
実施例Ａ７
中間体７：ｒａｃ−１，３−ジメチル−３−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−５−チオキソ−ピペラジン−２−オンの製造
【００９０】
【化１７】
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【００９１】
ローソン試薬（０．２７ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を室温でトルエン（９ｍＬ）中の中間体６（０．２６ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．０５３ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を９０℃で１８時間攪拌した。溶媒を真空中で蒸発させかつ残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし６／９４）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体７（０．１７ｇ、９１％収率）を白色固形物として生じた。
【００９２】
実施例Ａ８
中間体８：ｒａｃ−３−（３−ブロモ−フェニル）−５−メトキシ−１，３−ジメチル−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【００９３】
【化１８】
2013531644.tif 000019
【００９４】
トリメチルオキソニウムテトラフルオロボラート（０．８７ｇ、５．８９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中の中間体５（０．５ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加し、そして該混合物を室温で６０時間攪拌した。その後該混合物を０℃に冷却し、氷冷ＮａＨＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させて中間体８（０．５１ｇ、７１％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００９５】
実施例Ａ９
中間体９：ｒａｃ−５−アミノ−３−（３−ブロモ−フェニル）−１，３−ジメチル−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【００９６】
【化１９】
2013531644.tif 000020
【００９７】
方法Ａ
塩化アンモニウム（０．４７ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）を室温で封止チューブ中かつ窒素下にＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の中間体８（０．４５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を８５℃で１８時間攪拌した。溶媒を真空中で除去し、そして残渣をＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物を、ＩＳＯＬＵＴＥ（Ｒ）  ＳＣＸ２カートリッジを使用するイオン交換クロマトグラフィー（最初にＭｅＯＨでおよびその後メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液で溶出する）により精製した。メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液で溶出された所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体９（０．１６ｇ、２４％収率）を帯褐色油状物として生じた。
【００９８】
方法Ｂ
３２％水性アンモニア溶液（１５ｍＬ）を中間体１０（０．４８ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）に添加し、そして該混合物を封止チューブ中５０℃で１８時間攪拌した。室温に冷却した後に該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させて中間体９（０．４５ｇ、定量的収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【００９９】
実施例Ａ１０
中間体１０：ｒａｃ−３−（３−ブロモ−フェニル）−１，３−ジメチル−５−チオキソ−ピペラジン−２−オンの製造
【０１００】
【化２０】
2013531644.tif 000021
【０１０１】
ローソン試薬（１．６３ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）を室温でトルエン（３３ｍＬ）中の中間体５（１．０４ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．３０ｍＬ、３．７０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を９０℃で１８時間攪拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、そして残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＭｅＯＨ  ０／１００ないし４／９６）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体１０（０．５ｇ、４７％収率）を無色油状物として生じた。
【０１０２】
実施例Ａ１１
中間体１１：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオニトリルの製造
【０１０３】
【化２１】
2013531644.tif 000022
【０１０４】
中間体１１は実施例Ａ１に記述された同一のアプローチに従い合成した。１−（３−ニトロ−フェニル）−エタノン（１０ｇ、６０．５５ｍｍｏｌ）から出発して、中間体１１
を黄色固形物（１０．２ｇ、８８％収率）として得た。
【０１０５】
実施例Ａ１２
中間体１２：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオン酸の製造
【０１０６】
【化２２】
2013531644.tif 000023
【０１０７】
中間体１１（１０．２ｇ、５３．０７ｍｍｏｌ）を室温で６Ｎ  ＨＣｌ溶液（７９ｍＬ）に添加した。該混合物を還流で２４時間攪拌した。冷却した後に水（３００ｍＬ）およびＡｃＯＥｔ（３００ｍＬ）を添加した。水層を分離し、真空中で部分的に蒸発させ、そして２５％ＮａＯＨ水性溶液を添加することにより中和した。該混合物を氷水浴中で冷却し、そして沈殿物を濾過分離し、冷水次いでＥｔ２Ｏで洗浄しかつ真空中で乾燥して中間体１２（７ｇ、６３％収率）を白色固形物として生じた。
【０１０８】
実施例Ａ１３
中間体１３：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【０１０９】
【化２３】
2013531644.tif 000024
【０１１０】
中間体１３は実施例Ａ３に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体１２（６ｇ、２８．５５ｍｍｏｌ）から出発して、中間体１３を無色油状物（４ｇ、６３％収率）として得た。
【０１１１】
実施例Ａ１４
中間体１４：２−（２−クロロ−アセチルアミノ）−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【０１１２】
【化２４】
2013531644.tif 000025
【０１１３】
中間体１４は実施例Ａ４に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体１３（１．６５ｇ、７．３６ｍｍｏｌ）から出発して中間体１４を得た（２．２ｇ、９９％収率）。
【０１１４】
実施例Ａ１５
中間体１５：ｒａｃ−１，３−ジメチル−３−（３−ニトロ−フェニル）−ピペラジン−２，５−ジオンの製造
【０１１５】
【化２５】
2013531644.tif 000026
【０１１６】
中間体１５は実施例Ａ５に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体１４（２．２ｇ、７．３２ｍｍｏｌ）から出発して中間体１５を得た（１．９２ｇ、定量的収率）。
【０１１７】
実施例Ａ１６
中間体１６：ｒａｃ−１，３−ジメチル−３−（３−ニトロ−フェニル）−チオキソ−ピペラジン−２−オンの製造
【０１１８】
【化２６】
2013531644.tif 000027
【０１１９】
中間体１６は実施例Ａ１０に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体１５（１．９２ｇ、７ｍｍｏｌ）から出発して、中間体１６を無色油状物（０．３１５ｇ、１６％収率）として得た。
【０１２０】
実施例Ａ１７
中間体１７：ｒａｃ−５−アミノ−１，３−ジメチル−３−（３−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【０１２１】
【化２７】
2013531644.tif 000028
【０１２２】
３２％水性アンモニア溶液（３ｍＬ）をメタノール中アンモニアの７Ｍ溶液（３ｍＬ）中の中間体１６（０．３１５ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、そして該混合物を封止チューブ中６７℃で４時間攪拌した。室温に冷却した後に該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＭｅＯＨ  １／９９ないし７／９３）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃
縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ７／９３ないし１０／９０）により再度精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体１７（０．１１ｇ、３７％収率）を生じた。
【０１２３】
実施例Ａ１８
中間体１８：ｒａｃ−５−アミノ−３−（３−アミノ−フェニル）−１，３−ジメチル−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【０１２４】
【化２８】
2013531644.tif 000029
【０１２５】
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）およびＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）中の中間体１７（０．４６ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の溶液をＨ−Ｃｕｂｅ反応器（１ｍＬ／ｍｉｎ、３０ｍｍ  ５％Ｐｄ／Ｃカートリッジ、完全Ｈ２モード、室温、１サイクル）で水素化した。その後溶媒を真空中で蒸発させて中間体１８（０．４１ｇ、定量的収率）を白色固形物として生じた。
【０１２６】
実施例Ａ１９
中間体１９：１−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−エタノンの製造
【０１２７】
【化２９】
2013531644.tif 000030
【０１２８】
１−ブロモ−２，４−ジフルオロ−ベンゼン（１２０ｇ、６２１．７９ｍｍｏｌ）中のＡｌＣｌ３（２００ｇ、１５１５．１ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で１０分間攪拌した。その後、塩化アセチル（７３ｇ、９２９．９ｍｍｏｌ）を４時間にわたり一滴ずつ添加し、そして該混合物を９５℃で６時間攪拌した。該混合物を−１０℃で冷却しかつ氷（３００ｇ）を１時間にわたり添加した。その後ＡｃＯＥｔを添加し（５００ｍＬ）、そして分離された有機層を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘプタン中ＡｃＯＥｔ  １／５０）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体１９（６０ｇ、４１％収率）を生じた。
【０１２９】
実施例Ａ２０
中間体２０：ｒａｃ−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−プロピオニトリルの製造
【０１３０】
【化３０】
2013531644.tif 000031
【０１３１】
中間体２０を実施例Ａ１に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体１９（６０ｇ、２５５．３１ｍｍｏｌ）から出発して中間体２０を得た（３１ｇ、４７％収率）。
【０１３２】
実施例Ａ２１
中間体２１  ｒａｃ−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−プロピオン酸の製造
【０１３３】
【化３１】
2013531644.tif 000032
【０１３４】
ＡｃＯＨ（３００ｍＬ）中の中間体２０（２８ｇ、１０７．６５ｍｍｏｌ）および６Ｎ
ＨＣｌ（３００ｍＬ）の混合物を還流に７２時間加熱した。室温に冷却した後に溶媒を真空中で蒸発させた。ＡｃＯＥｔ（４００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）を添加した。分離された水層をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で洗浄した。水層を分離しかつｐＨ＝７に調節した。その後ＡｃＯＥｔ（２５０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させて中間体２１（２２ｇ、７２％収率）を生じた。
【０１３５】
実施例Ａ２２
中間体２２：ｒａｃ−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【０１３６】
【化３２】
2013531644.tif 000033
【０１３７】
ＭｅＯＨ中４Ｎ  ＨＣｌ（４００ｍＬ）中の中間体２１（２２ｇ、７８．５５ｍｍｏｌ）の混合物を還流に７２時間加熱した。室温に冷却した後に溶媒を真空中で蒸発させた。ＡｃＯＥｔ（４００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）を添加した。分離された水層をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で洗浄した。水層を分離しかつｐＨ＝７に調節した。その後ＡｃＯＥｔ（２５０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶
媒を真空中で蒸発させて中間体２２（２０ｇ、８７％収率）を生じた。
【０１３８】
実施例Ａ２３
中間体２３：ｒａｃ−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−２−（２−クロロ−アセチルアミノ）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【０１３９】
【化３３】
2013531644.tif 000034
【０１４０】
中間体２３は実施例Ａ４に記述された同一のアプローチに従って合成した。中間体２２（４ｇ、１３．６０ｍｍｏｌ）から出発して中間体２３を得た（５ｇ、９９％収率）。
【０１４１】
実施例Ａ２４
中間体２４：ｒａｃ−２−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−２−（２−エチルアミノ−アセチルアミノ）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【０１４２】
【化３４】
2013531644.tif 000035
【０１４３】
ＴＨＦ中２Ｍエチルアミン（４．０５ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）を室温で封止チューブ中ＥｔＯＨ（１２ｍＬ）中の中間体２３（１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。その後該混合物を７０℃で３時間攪拌した。溶媒を真空中で蒸発させて中間体２４（０．５５ｇ、５４％収率）を生じ、これをさらなる精製なしに次の段階で使用した。
【０１４４】
実施例Ａ２５
中間体２５：ｒａｃ−３−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−１−エチル−３−メチル−ピペラジン−２，５−ジオンの製造
【０１４５】
【化３５】
2013531644.tif 000036
【０１４６】
ＡｃＯＨ（０．５ｍＬ）を室温で封止チューブ中ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）中の中間体２４
（０．５５ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を９５℃で１６時間攪拌した。その後該混合物をＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし２／９８）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体２５（０．３３ｇ、６６％収率）を生じた。
【０１４７】
実施例Ａ２６
中間体２６：ｒａｃ−３−［２，４−ジフルオロ−５−（５−メトキシ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−１−エチル−３−メチル−ピペラジン−２，５−ジオンの製造
【０１４８】
【化３６】
2013531644.tif 000037
【０１４９】
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２２ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を、室温で１，４−ジオキサン（１２ｍＬ）およびＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）（４ｍＬ）中の中間体２５（０．３３ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）および３−メトキシ−５−ピリジンボロン酸（０．１９ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。該混合物をマイクロ波照射下１５０℃で１５分間攪拌した。該混合物をＮａＨＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＭｅＯＨ  ０／１００ないし１１／８９）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体２６（０．２６ｇ、７３％収率）を無色油状物として生じた。
【０１５０】
実施例Ａ２７
中間体２７：ｒａｃ−３−［２，４−ジフルオロ−５−（５−メトキシ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−１−エチル−３−メチル−５−チオキソ−ピペラジン−２−オンの製造
【０１５１】
【化３７】
2013531644.tif 000038
【０１５２】
ローソン試薬（０．２３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を室温でトルエン（９ｍＬ）中の中間体２６（０．２６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．０４６ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。該混合物を９０℃で１８時間攪拌した。その後さらなるローソン試薬（０．２３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加しかつ生じる混合物を８５℃で８時間加熱した。その後さらなるローソン試薬（０．３０ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加し、そして生じる混合物を８５℃で１６時間加熱した。該混合物をＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、
濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＭｅＯＨ  ０／１００ないし６／９４）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して中間体２７（０．１４ｇ、７６％収率）を生じた。
【０１５３】
Ｂ．最終化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１：ｒａｃ−５−アミノ−１，３−ジメチル−３−（３−ピリミジン−５−イル−フェニル）−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【０１５４】
【化３８】
2013531644.tif 000039
【０１５５】
３２％水性アンモニア溶液（２ｍＬ）が中間体７（０．１７ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加され、そして該混合物を封止チューブ中６５℃で２時間およびその後７０℃で６時間攪拌した。室温に冷却した後に該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし６／９４）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して化合物１（０．０９ｇ、５６％収率）を白色固形物として生じた。
【０１５６】
実施例Ｂ２
化合物２：ｒａｃ−５−アミノ−３−［３−（５−メトキシ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−１，３−ジメチル−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【０１５７】
【化３９】
2013531644.tif 000040
【０１５８】
ＥｔＯＨ（３ｍＬ）を、中間体９（０．１６ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、トランス−ビスジシクロヘキシルアミン）パラジウム二酢酸塩［ＤＡＰＣｙ、ＣＡＳ  ６２８３３９−９６−８］（０．０２１ｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（０．２２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）および３−メトキシ−５−ピリジン−ボロン酸ピナコールエステル（０．１２ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。該混合物を８０℃で４８時間攪拌した。冷却した後に該混合物を水およびＮａ２ＣＯ３（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し、（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし７／９３）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮し、そして該粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ない７／９３）により再度精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して化合物２（０．０１３ｇ、１１％収率）を生じた。
【０１５９】
実施例Ｂ３
化合物３：ｒａｃ−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−２，４−ジメチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ピラジン−２−イル）−フェニル］−アミドの製造
【０１６０】
【化４０】
2013531644.tif 000041
【０１６１】
方法Ａ
トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン（０．００２ｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を室温で封止チューブ中かつ窒素下のＤＭＦ（１ｍＬ）中の中間体９（０．０５２ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．００２ｇ、０．００９ｍｍｏｌ）、５−クロロ−２−ピリジンカルボキサミド（０．０２８ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）および第三リン酸カリウム（０．０７５ｇ、０．３５１ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。該混合物をマイクロ波照射下１８０℃で１４０分間攪拌した。該混合物をＮＨ４Ｃｌ（水性飽和溶液）で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし１／９９）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して化合物３（０．００４ｇ、６％収率）を生じた。
【０１６２】
方法Ｂ
５−クロロ−２−ピリジンカルボン酸（０．２３４ｇ、１．４８５ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ（１３ｍＬ）中の中間体１８（０．３ｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。その後Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（０．２１ｍＬ、１．６７９ｍｍｏｌ）を添加しかつ室温で５分間攪拌した後にＨＡＴＵ（０．５４ｇ、１．４２１ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌した。該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中メタノール  ０／１００ないし１０／９０）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して化合物３（０．２９４ｇ、６１％収率）を生じた。
【０１６３】
実施例Ｂ４
化合物４：（Ｓ*）−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−２，４−ジメチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ピラジン−２−イル）−フェニル］−アミドおよび化合物５  （Ｒ*）−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−２，４−ジメチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ピラジン−２−イル）−フェニル］−アミドの製造
【０１６４】
【化４１】
2013531644.tif 000042
【０１６５】
化合物３のサンプル（２９４ｍｇ）をＣｈｉｒａｌｃｅｌ（Ｒ）  ＯＤ−Ｈ（５μｍ  ２５０×２０ｍｍ）、移動相（０．３％イソプロピル−アミン、６０％ＣＯ２、４０％ＥｔＯＨ／ｉＰｒＯＨ  ５０／５０  ｖ／ｖの混合物）での調製的ＳＦＣにより対応する鏡像異性体に分離して、化合物４（０．１１ｇ）および化合物５（０．１５ｇ）を生じた。この最後の誘導体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；０．５％ＮＨ４ＯＨ、９５％ＤＣＭ、５％ＥｔＯＨ）により再度精製して純粋な化合物５（０．０９ｇ）を生じた。
【０１６６】
実施例Ｂ５
化合物６：ｒａｃ−５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−２，４−ジメチル−３−オキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−ピラジン−２−イル）−フェニル］−アミドの製造
【０１６７】
【化４２】
2013531644.tif 000043
【０１６８】
５−メチルピラジン−２−カルボン酸（０．０１４ｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）を室温でＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の中間体１８（０．０２１ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。その後、ピリジン（０．０１ｍＬ、０．１１８ｍｍｏｌ）を添加しかつ室温で５分間攪拌した後にＨＡＴＵ（０．０３８ｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を室温で１６時間攪拌した。該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ中ＭｅＯＨ  ０／１００ないし１０／９０）により精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；固体注入；ＤＣＭ中メタノール中アンモニアの７Ｍ溶液  ０／１００ないし２／９８）により再度精製した。所望の画分を収集しかつ真空中で濃縮して化合物６（０．００９ｇ、２８％収率）を生じた。
【０１６９】
実施例Ｂ６
化合物９：ｒａｃ−５−アミノ−３−［２，４−ジフルオロ−５−（５−メトキシ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−１−エチル−３−メチル−３，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピラジン−２−オンの製造
【０１７０】
【化４３】
2013531644.tif 000044
【０１７１】
３２％水性アンモニア溶液（８ｍＬ）をメタノール中アンモニアの７Ｍ溶液（４ｍＬ）中の中間体２７（０．１４ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、そして該混合物を封止チューブ中６５℃で３時間攪拌した。室温に冷却した後に該混合物を水で希釈しかつＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過しかつ溶媒を真空中で蒸発させて化合物９（０．１２ｇ、９０％収率）を白色固形物として生じた。
【０１７２】
【表１】
2013531644.tif 000045
【０１７３】
Ｃ．分析の部
ＬＣＭＳ
本発明の化合物の（ＬＣ）ＭＳ特徴付けに以下の方法を使用した。
【０１７４】
一般的手順Ａ：
ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）測定は、サンプラーオーガナイザー、脱気装置付き二連ポンプ（ｂｉｎａｒｙ  ｐｕｍｐ）、４カラムのオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）およびそれぞれの方法に明記されるところのカラムを含んでなるＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）装置を使用して実施した。ＭＳ検出器はＥＳＣＩデュアルイオン化源（大気圧化学的イオン化と組合せられたエレクトロスプレー）を伴い
構成された。窒素をネブライザーガスとして使用した。イオン化源温度は１４０℃で維持した。データ取得はＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェアを用いて実施した。
【０１７５】
方法１：
一般的手順Ａに加え：逆相ＵＰＬＣは、５０℃でＭＳ検出器への分割を伴わず、１．０ｍｌ／ｍｉｎ．の流速を用い、ＷａｔｅｒｓからのＢＥＨ−Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）で実施した。使用される勾配条件は：９５％Ａ（０．５ｇ／ｌ酢酸アンモニウム溶液＋５％アセトニトリル）、５％Ｂ（アセトニトリル）ないし３．８分で４０％Ａ、６０％Ｂ、ないし４．６分で５％Ａ、９５％Ｂであり、５．０分まで保持する。注入容量２μｌ。低分解能質量スペクトル（シングル四重極、ＳＱＤ検出器）を、０．０８秒のチャンネル間遅延を使用して０．１秒で１００から１０００まで走査することにより取得した。キャピラリー針電圧は３ｋＶであった。コーン電圧は正イオン化モードについて２５Ｖおよび負イオン化モードについて３０Ｖであった。
【０１７６】
一般的手順Ｂ：
ＬＣ測定は、脱気装置付き二連ポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および下のそれぞれの方法に明記されるところのカラムを含んでなるＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）装置を使用して実施し、カラムは４０℃の温度で保持する。カラムからの流れをＭＳ分光計にもたらした。ＭＳ検出器はエレクトロスプレーイオン化源を伴い構成された。キャピラリー針電圧は３ｋＶであり、そしてイオン化源温度はＱｕａｔｔｒｏ（Ｗａｔｅｒｓからのトリプル四重極質量分析計）で１３０℃で維持した。窒素をネブライザーガスとして使用した。データ取得はＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。
【０１７７】
方法２：
一般的手順Ｂに加え：逆相ＵＰＬＣは、０．３４３ｍｌ／ｍｉｎ．の流速を用い、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）フェニル−ヘキシルカラム（１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ）で実施した。２移動相（移動相Ａ：９５％７ｍＭ酢酸アンモニウム／５％アセトニトリル；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル）を使用して、８４．２％Ａおよび１５．８％Ｂ（０．４９分間保持）から２．１８分で１０．５％Ａおよび８９．５％Ｂまで勾配条件を運転し、１．９４ｍｉｎ保持し、そして０．７３ｍｉｎで初期条件に戻り、０．７３分間保持した。２ｍｌの注入容量を使用した。コーン電圧は正および負イオン化モードについて２０Ｖであった。質量スペクトルは、０．１秒の走査間遅延を使用して０．２秒で１００から１０００まで走査することにより取得した。
【０１７８】
融点
値はピーク値若しくは融解範囲のいずれかであり、そしてこの分析方法と普遍的に関連する実験上の不確実性を伴い得られる。
【０１７９】
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置（表２でＦＰ９０により示される）
多数の化合物について、融点はＭｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置で開放キャピラリー管中で測定した。融点は１、３、５若しくは１０℃／分の温度勾配を用いて測定した。最高温度は３００℃であった。融点はディジタル表示から読み取った。
【０１８０】
【表２】
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【０１８１】
ＳＦＣＭＳ
一般的手順
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）および調整剤（ｍｏｄｉｆｉｅｒ）を送達するためのＦＣＭ−１２００二連ポンプ（ｄｕａｌ  ｐｕｍｐ）液体制御モジュール、ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ自動液体サンプラー、室温から８０℃までカラム加熱するためのＴＣＭ−２００００温度制御モジュールを含んでなるＢｅｒｇｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（米国デラウェア州ニューアーク）からの分析的ＳＦＣ装置を使用して実施した。４００ｂａｒまで耐える高圧フローセルを装備されたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＵＶフォトダイオードアレイ検出器を使用した。カラムからの流れをＭＳ分光計に分割した。ＭＳ検出器は大気圧イオン化源を伴い構成された。Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分光光度計の以下のイオン化パラメータは：コロナ：９μａ、イオン化源温度：１４０℃、コーン：３０Ｖ、プローブ温度４５０℃、抽出装置３Ｖ、脱溶媒和ガス４００Ｌ／ｈｒ、コーンガス７０／ｈｒである。窒素をネブライザーガスとして使用した。データ取得はＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムを用いて実施した。
【０１８２】
方法：１
一般的手順に加え：ＳＦＣでのキラル分離は、３５℃で３．０ｍｌ／ｍｉｎ．の流速を用いＣｈｉｒａｌｃｅｌ（Ｒ）  ＯＤ  ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６×２５０ｍｍ）で実施した。移動相は７ｍｉｎ．保持されるＣＯ２、４０％エタノール／イソプロパノール（１／１）（０．３％ｉＰｒＮＨ２を含有する）である。
【０１８３】
【表３】
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【０１８４】
旋光度
旋光度はナトリウムランプを伴うＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で測定し、そして後に続くとおりすなわち［α］λｔ℃（ｃ  ｇ／１００ｍｌ、溶媒）報告した。
【０１８５】
【表４】
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【０１８６】
Ｄ．薬理学的実施例
本発明で提供される化合物はＡＰＰβサイト切断酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。アスパラギン酸プロテアーゼＢＡＣＥ１の阻害はアルツハイマー病（ＡＤ）の処置に適切であると考えられている。βアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からのβアミロイドペプチド（Ａβ）の産生および蓄積はＡＤの発症および進行で重要な役割を演じていると考えられている。Ａβは、それぞれβセクレターゼおよびγセクレターゼによるＡβドメインのＮおよびＣ末端での連続的切断によりアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から産生される。
【０１８７】
式（Ｉ）の化合物は該酵素活性を阻害するそれらの能力のおかげで実質的にＢＡＣＥ１でそれらの効果を有すると期待される。阻害剤を、下述されるところの生化学的蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイおよびＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αＬｉｓａアッセイを使用して試験した。結果を表５および６に示す。
【０１８８】
生化学的ＦＲＥＴに基づくアッセイ
このアッセイは蛍光共鳴エネルギー転移アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイの基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のβセクレターゼ切断部位の「スウェーデン型」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ突然変異を含有するＡＰＰ由来の１３アミノ酸ペプチドである。この基質はまた２個のフルオロフォアも含有する。すなわち、（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は３２０ｎｍの励起波長および４０５ｎｍでの発光を伴う蛍光供与体であり、そして２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）は独占所有権のある消光剤受容体である。それら２基の間の距離は、光励起に際して供与体の蛍光エネルギーが共鳴エネルギー転移により受容体により大きく消光されるように選択されている。ＢＡＣＥ１による切断に際して、フルオロフォアＭｃａは消光基Ｄ
ｎｐから分離され、供与体の完全な蛍光収率を回復する。蛍光の増大はタンパク質分解の速度に直線的に関係する。
【０１８９】
簡潔には、３８４ウェル形式で、１μｇ／ｍｌの最終濃度の組換えＢＡＣＥ１タンパク質を、化合物の非存在若しくは存在下でインキュベーション緩衝液（４０ｍＭクエン酸緩衝液  ｐＨ５．０、０．０４％ＰＥＧ、４％ＤＭＳＯ）中の１０μｍの基質と室温で１２０分間インキュベートする。次にタンパク質分解の量をＴ＝０およびＴ＝１２０での蛍光測定（３２０ｎｍでの励起および４０５ｎｍでの発光）により直接測定する。結果をＴ１２０とＴ０の間の差異としてＲＦＵ（相対蛍光単位）で表す。
【０１９０】
最良当てはめ曲線を、最小平方和法（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｓｕｍ  ｏｆ  ｓｑｕａｒｅｓ
ｍｅｔｈｏｄ）により、化合物濃度に対する％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎのプロットに当てはめる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：酵素を伴わない反応
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：酵素を伴う反応
％Ｅｆｆｅｃｔ＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００］
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（サンプル／ＨＣ）×１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００
【０１９１】
以下の例示される化合物を本質的に上述されたとおり試験し、そして以下の活性を表した。すなわち、
【０１９２】
【表５】
2013531644.tif 000049
【０１９３】
ＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αＬｉｓａアッセイ
２回のαＬｉｓａアッセイで、ヒト神経芽腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地中に産生かつ分泌されるＡβｔｏｔａｌおよびＡβ１−４２のレベルを定量する。該アッセイは野生型アミロイド前駆体タンパク質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽腫ＳＫＮＢＥ２に基づく。化合物を希釈しかつこれらの細胞に添加し、１８時間インキュベートしそしてその後Ａβ１−４２およびＡβｔｏｔａｌの測定を行う。ＡβｔｏｔａｌおよびＡβ１−４２は
サンドイッチαＬｉｓａにより測定する。αＬｉｓａは、それぞれＡβｔｏｔａｌおよびＡβ１−４２の検出に、ストレプトアビジン被覆ビーズに結合されたビオチニル化抗体ＡｂＮ／２５および抗体Ａｂ４Ｇ８若しくはｃＡｂ４２／２６複合アクセプタービーズを使用するサンドイッチアッセイである。Ａβｔｏｔａｌ若しくはＡβ１−４２の存在下で該ビーズは緊密な近接に来る。ドナービーズの励起が、アクセプタービーズでのエネルギー転移のカスケードを誘発する一重項酸素分子の遊離を惹起し、発光をもたらす。発光を１時間のインキュベーション後に測定する（６５０ｎｍでの励起および６１５ｎｍでの発光）。
【０１９４】
最良当てはめ曲線を、最小平方和法により、化合物濃度に対する％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎのプロットに当てはめる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：αｌｉｓａでビオチニル化Ａｂを伴わない、化合物を伴わずプレインキュ
ベートされた細胞
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：化合物を伴わずプレインキュベートされた細胞
％Ｅｆｆｅｃｔ＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００］
％Ｃｏｎｔｒｏｌ＝（サンプル／ＨＣ）×１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００
【０１９５】
以下の例示される化合物は実質的に上述されたとおり試験し、そして以下の活性を表した。すなわち
【０１９６】
【表６】
2013531644.tif 000050
【国際調査報告】
2013531644.tif 000052
2013531644.tif 000053
2013531644.tif 000054