(57)【要約】【課題】  VLDL分泌抑制作用を有する米糠抽出物、それを含有するVLDL分泌抑制剤を提供する。【解決手段】  アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を含むVLDL分泌抑制剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を含むVLDL分泌抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする肥満の予防又は／及び治療剤。
【請求項３】
請求項１に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする高脂血症の予防又は／及び治療剤。
【請求項４】
請求項１に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする動脈硬化性疾患の予防又は／及び治療剤。
【請求項５】
アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を含む飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、VLDL分泌抑制剤に関する。
【０００２】
高脂血症は、糖尿病、高血圧、喫煙などと共に、虚血性心疾患などの動脈硬化性疾患の危険因子の一つである。近年、食生活の欧米化による過栄養状態に基づく合成亢進型の高脂血症、特に、高トリグリセリド（TG）血症が内臓脂肪蓄積によるmultiple risk factorclustering syndromeの一つとして、動脈硬化性疾患の基盤となることが明らかになりつつある（非特許文献１、２参照）。
【０００３】
高脂血症は幾つかの型に分類される。I型は、血中カイロミクロン（chylomicron）の蓄積とそれに伴う極めて高濃度のTGを特徴とするが、希な症型である。IIa型は、低密度リポタンパク質（LDL）の濃度上昇、従ってコレステロールの濃度上昇を特徴とし、動脈硬化性疾患の危険性が増す。IIb型は、LDLと超低密度リポタンパク質（VLDL）の濃度上昇を特徴とし、動脈硬化性疾患の危険性を増す。III型は、異常リポタンパク質濃度が上昇するが、まれな症型である。IV型は、VLDL濃度の上昇を特徴とし、従ってTG濃度が上昇する。IV型は、VLDLとカイロミクロンが過剰に存在する。
【０００４】
肝臓で合成されるアポB100含有VLDLは、末梢組織への脂肪酸とコレステロールの運搬を主な役割としている。一方、肝臓でのVLDLの過剰産生は、動脈硬化性疾患の危険因子の一つである高脂血症や肥満の原因となるため、VLDL合成を調節、あるいは分泌を抑制する影響因子について精力的な研究が行われている（非特許文献３参照）。
【０００５】
従来、高脂血症の治療には、クロフィブレート（Clofibrate）、ニコチン酸、ホルモン（例、エストエロゲン）などが用いられてきた。しかし、クロフィブレートは筋けいれん、強直等の重大な副作用があり、ニコチン酸は全身紅潮、胃障害、肝障害等をもたらし、ホルモンは、特に男性に対して副作用がある。一般に、高脂血症の治療は長期におよぶことが多いことから、このような副作用の存在は極めて不都合である。
【０００６】
そこで、副作用の無い高脂血症治療剤の開発が精力的に試みられており、例えば、まめ科植物の種子の脱脂物を、酸およびアルカリで抽出した残査として得られる酸・アルカリ不溶解物を有効成分とする、高脂血症治療・予防剤（特許文献１参照）、コンドロシン又は生理学的に許容されるその塩を有効成分として含有することを特徴とする高脂血症改善作用を有する機能性食品又は食品素材（特許文献２参照）、雲南苦丁茶を、水または有機溶剤単独、またはそれらの混合物で抽出処理して得られるポリフェノール成分を主要成分とする組成物（特許文献３参照）、マチコ等の抽出物によるVLDL分泌抑制剤（特許文献４参照）、有色米の脱脂米糠抽出物を用いた肝脂肪蓄積抑制剤（特許文献５参照）などを挙げることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開昭６０−２２８４２０号公報
【特許文献２】特開２００４-３３７０８７号公報
【特許文献３】特開２００４-３１５４０９号公報
【特許文献４】特開２００６−２２５２９７号公報
【特許文献５】特開２００８−１９５６９４号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Patsch J.R. ら, Arterioscler Thromb., 12,1336-1345, 1992
【非特許文献２】Reaven G.M.ら,Diabetes, 37, 1595-1607, 1988
【非特許文献３】柳田 晃良, 化学と生物, 37(8), 502-503, 1999
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、VLDL分泌抑制作用を有する米糠抽出物、それを含有するVLDL分泌抑制剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下の構成である。
（１）アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を含むVLDL分泌抑制剤。
（２）（１）に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする肥満の予防又は／及び治療剤。
（３）（１）に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする高脂血症の予防又は／及び治療剤。
（４）（１）に記載のVLDL分泌抑制剤を含有することを特徴とする動脈硬化性疾患の予防又は／及び治療剤。
（５）アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を含む飲食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、新たなVLDL分泌抑制剤が提供される。本発明のVLDL分泌抑制剤は、肥満の予防や治療、高脂血症の予防や治療、動脈硬化性疾患の予防や治療に使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明のVLDL分泌抑制剤を用いた肝臓細胞に対するVLDL分泌抑制作用試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、米糠から抽出されるアシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する米糠抽出物を有効成分とするVLDL分泌抑制剤に係るものである。
本発明のVLDL分泌抑制剤に含まれるアシル化ステロール配糖体は、通常混合物である。アシル化ステロール配糖体の構成糖は主にグルコースである。また構成ステロールはβ−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール等である。アシル化は主にグルコースの６位が、脂肪酸によってアシル化されており、構成脂肪酸は主にリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸であることが明らかになっている（帯大研報，10，（1977）507〜514）。
【００１４】
本発明のVLDL分泌抑制剤に用いられる米糠抽出物は、アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％含有する。  
【００１５】
本発明のVLDL分泌抑制剤に用いられる米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量の測定は以下の方法により行うことができる。
（１）米糠抽出物を適量秤取し、クロロホルム／メタノール混液（クロロホルム：メタノール＝２：１）を加え、メスフラスコにてメスアップする。
（２）（１）で得られた溶液は成分濃度に応じて適宜希釈し、分析用試料溶液とする。
（３）標品はＥｓｔｅｒｉｆｉｅｄ  Ｓｔｅｒｙｌ  Ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（フナコシ）とし、高速液体クロマトグラフ法によりアシル化ステロール配糖体の濃度を算出する。
（４）高速液体クロマトグラフ法による分析条件
分析装置：ＨＰＬＣ
移動相Ａ：メタノール：水  ＝  ９５：５（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ：クロロホルム  ＝  １００（ｖ／ｖ）
ポンプ：Ｍｏｄｅｌ  ５８２  
ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ
分析カラム：ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ  Ｓｉ６０（５μｍ）
ＨＰＬＣ−Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（ＭＥＲＣＫ）
検出器：荷電化粒子検出器（コロナ  ダイオネクス社）
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  Ｖｏｌｕｍｅ：２０μＬ
カラムオーブン：４０℃（ＦＬＯ社  ｍｏｄｅｌ  ５０２）
分析時間：４０分
脱泡装置：ｕｎｉｆｌｏｗｓ  Ｄｅｇａｓｙｓ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  
ＤＶ３００３
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
グラジェント条件
以下に示すとおり
０−１５分
移動相Ａ：１％    →  ２５％、移動相Ｂ：  ９９％  →  ７５％
１５−２０分
移動相Ａ：２５％  →  ９０％、移動相Ｂ：  ７５％  →  １０％
２０−２５分
移動相Ａ：９０％、            移動相Ｂ：  １０％
２５−３０分
移動相Ａ：９０％  →  １％、  移動相Ｂ：  １０％  →  ９９％
３０−４０分
移動相Ａ：１％、              移動相Ｂ：  ９９％
【００１６】
本発明VLDL分泌抑制剤に用いられる米糠抽出物は、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する。γ−オリザノールは、米糠の脂質に含有されるフェルラ酸とステロールのエステルを意味し、フェルラ酸２４−メチレンシクロアルテニル、フェルラ酸シクロアルテニル、フェルラ酸カンペステリル、フェルラ酸β−シトステリル等の混合物である。
【００１７】
本発明のVLDL分泌抑制剤に用いられる米糠抽出物中のγ−オリザノールの含有量は高速液体クロマトグラフィーにて、逆相カラムを用い、紫外線検出器で検出することができる。
【００１８】
本発明のVLDL分泌抑制剤に用いられる米糠抽出物の抽出方法としては、溶媒抽出法、超臨界抽出法、カラムクロマトグラフィー等が挙げられる。
また、具体的な抽出操作を以下に示す。
【００１９】
＜抽出方法＞
市場に流通している米糠を選別した後に、ノルマルヘキサンなどの溶媒を用いて脱脂する。得られた油、脱脂糠等の粗原料を蒸留装置により脱溶媒し、さらにノルマルヘキサン、アセトン、エタノール、水などの溶媒によって抽出する。かくして得られた抽出液を、脱溶剤装置を用いて再度脱溶剤することで米糠抽出物を得ることができる。
【００２０】
本発明に係る米糠抽出物は、卓越したVLDL分泌抑制作用を有しており、肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患などの予防あるいは治療を目的とした食品又は医薬として使用可能である。
【００２１】
すなわち、本発明に係る米糠抽出物は、VLDLの分泌を阻害し、高脂血症や動脈硬化性疾患の原因である低密度リポタンパク質（LDL）の生成を抑制することができる。つまり、VLDLの増加が原因のひとつとなっている肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患の治療に有用である。
【００２２】
したがって本発明に係る米糠抽出物は、VLDL分泌抑制剤、肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患などに対する治療用医薬とすることができる。さらに、肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患に対する改善作用を有する飲食品とすることができる。
【００２３】
本発明のVLDL分泌抑制剤、肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患などに対する治療剤のような医薬の適用方法としては、経口投与あるいは非経口投与を採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２４】
食品としては、そのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、VLDL分泌抑制剤、肥満、高脂血症あるいは動脈硬化性疾患などに対する治療剤に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、茶、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
【００２５】
本発明のVLDL分泌抑制剤として米糠抽出物を用いる場合は、その有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の病状の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、経口投与の場合、一般に乾燥重量として１日当たり５〜２００ｍｇ/ｋｇ体重程度、好ましくは、１日当たり１０〜１００ｍｇ/ｋｇ体重程度であり、１日に数回に分けて投与してもよい。
【００２６】
本発明に係る米糠抽出物は天然由来であり、その毒性は低く、例えば、本発明の米糠抽出物を毎日１０００ｍｇ/ｋｇ、１００日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【実施例】
【００２７】
以下に、実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２８】
＜実施例１：米糠抽出物の調製（溶媒抽出）＞
市場に流通している米糠を選別し胚乳や異物を除いた米糠を得た。得られた選別済みの米糠１０kgに対して５０Ｌのノルマルヘキサンを用い脱脂した。この脱脂作業を１回繰り返し、脱脂米糠を得た。得られた脱脂米糠から蒸留装置により溶媒を除去した。得られた脱脂米糠８kgに対し、５０Ｌの割合のエタノールによって７０±３℃にて１時間、３回抽出し、得られた抽出液について、脱溶剤装置を用いてエタノールを除去した。
実施例１の米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量は３．４質量％、γ−オリザノールの含有量は１．７質量％であった。
【００２９】
＜比較例１：米糠抽出物の調製（溶媒抽出）＞
市場に流通している米糠を選別し胚乳や異物を除いた米糠を得た。得られた選別済みの米糠１０kgに対して５０Ｌのノルマルヘキサンを用い脱脂した。この脱脂作業を３回繰り返し、脱脂米糠を得た。得られた脱脂米糠から蒸留装置により溶媒を除去した。得られた脱脂米糠８kgに対し、５０Ｌの割合のアセトンによって５０±３℃にて１時間、３回抽出し、得られた抽出液について、脱溶剤装置を用いてアセトンを除去した。比較例１の米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量は３．２質量％、γ−オリザノールの含有量は０．６質量％であった。
【００３０】
米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体、γ−オリザノール、ステアロ・オレオ・レシチン換算のリン脂質の濃度並びに、加水分解前の質量に対する、加水分解後のリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸、植物ステロールの濃度を表１に示す。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
＜VLDL分泌抑制試験＞
VLDL分泌抑制試験は、以下に示す方法にて行った。
【００３３】
すなわち、ヒト肝臓由来培養細胞（Hep G2・ATCC HB-8065  ATCCより購入）を、１２あるいは２４well培養プレート内に播き、３７℃、５％CO2下で培養した。翌日、８０〜９０％コンフルエントになっていることを確認した後、実験に用いた。各プレートの培地を新鮮な培地に交換し、３７℃、５％CO2下で１時間馴化した。その後、各濃度に調製した実施例１、比較例１の米糠抽出物を各ウェル中に添加し、３７℃、５％CO2下で２４時間、インキュベーションした。２４時間後、各ウェル中の培養上清を回収し、この培養上清をVLDLの分泌量の測定に供した。
【００３４】
VLDLの分泌量は、ELISA法により測定した。
【００３５】
すなわち、ELISAプレート（IWAKI製）あるいはEIA/RIAプレート（Corning製）の各ウェルに、キャプチャー抗体としてMoab×LDL Apolipoprotein ApoB Clone12G10（MONOSAN製）を加え、４℃で一晩、インキュベーションした。その後、Zepto Block（ZeptoMetrix Corporation）を用いて、室温で２時間ブロッキングをし、各ウェルをWashing Buffer（０．１％ Tween ２０含有PBS Buffer）を用いて、３回洗浄した。その後、各ウェルに一次抗体（Affinity Purified Anti-ApolipoproteinB, ROCKLAND製）を加え、室温で１時間インキュベーションした。その後、各ウェルをWashing Bufferを用いて３回洗浄し、二次抗体としてDonky Anti-Gout IgG HRP（Promega製）を各ウェルに加え、室温で１時間インキュベーションした。その後、各ウェルをWashing Bufferを用いて５回洗浄し、発色試薬としてTMB Microwell Peroxidase Substrate（フナコシ,KPL社製）を加え、発色させた。その後、反応停止液（１Ｍ リン酸）を加え反応を停止させた後、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。なお、検量線作成のための標準物質としては、市販のヒトVLDL（CHEMICON製）を用いた。
【００３６】
測定結果は、エタノールのみを加えた場合のVLDLの分泌量を１００％とした時の、各米糠抽出物を加えた場合のVLDLの分泌量を算出した。なお、各ウェル間での細胞数のバラツキは、生細胞数を反映する発色評価法（Promega製，Cell Titer 96 Aqueous One Solution Cell proliferation Assay）によって補正してある。
【００３７】
図１に、各米糠抽出物を加えた場合のVLDL分泌抑制作用の結果を示す。なお結果は、平均値±標準偏差で表わしている。
図１から、実施例１の米糠抽出物は、強力なVLDL分泌抑制作用を有することが明らかである。一方、比較例１の米糠抽出物は、実施例１の抽出物と比べて弱いVLDL分泌抑制作用しか示さなかった。
【００３８】
以下に処方例を示す。  
［錠剤の製造］
実施例１の米糠抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
【００３９】
（組 成）           （配合：質量％）
実施例１の米糠抽出物         ２４
乳糖                         ６３
コーンスターチ               １２
グァーガム                     １
【００４０】
［ジュースの製造］
実施例１の米糠抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
【００４１】
（組 成）               （配合：質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁         ５．０
果糖ブドウ糖液糖             １１．０
クエン酸                       ０．２
Ｌ−アスコルビン酸             ０．０２
香料                           ０．２
色素                           ０．１
実施例１の米糠抽出物           ０．２
水                           ８３．２８
【図１】
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