(57)【要約】疼痛を治療または予防するための以下の式の化合物：2013523740.tif 000045および医薬組成物。
2013523740.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
2013523740.tif 000044
（式中、
Ｒ１は、ＣｌまたはＣＨ３であり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈであるか、またはＲ４と結合して縮合ピロリジン−２−オンを形成し、
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ１−Ｃ２フルオロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３またはＣＯ２ＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＯＣＨ３であり、
Ｒ６は、Ｈ、ＣＨ３であるか、またはＲ５と結合してシクロプロパン環を形成し、
ｎは、０または１である）
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１がＣｌである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ２がＯＨまたはＣＨ２ＯＨである、請求項１もしくは２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ３がＨであり、Ｒ４がメチル、エチル、２−フルオロエチルまたはＣ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ３がＨであり、Ｒ４がメチルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ５およびＲ６が、ＨおよびＣＨ３から独立して選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ５がＨであり、Ｒ６がＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
ｎが０である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
２−［８−（２−クロロ−フェニル）−２−メチル−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プリン−９−イル］−プロパン−１−オールである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オールである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１３】
１種以上の治療成分をさらに含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
疼痛の治療または予防に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
疼痛の治療に使用するための、請求項１５に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
骨関節炎疼痛の治療における、請求項１６に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
化学療法誘発性疼痛の治療または予防における、請求項１５に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
有効量の請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それらを必要とするヒトまたは動物に投与することを含む、疼痛を治療または予防するための方法。
【請求項２０】
疼痛を治療するための請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
骨関節炎疼痛を治療するための請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
化学療法誘発性疼痛を治療または予防するための請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プリン化合物に関する。
【０００２】
カンナビノイド受容体ＣＢ１およびＣＢ２は、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）のクラスに属する。ＣＢ１受容体は中枢および末梢の両方で発現される一方で、ＣＢ２受容体は主として末梢で、主に免疫細胞および組織で発現される。
【０００３】
ＣＢ２受容体の薬理学的および治療上の潜在性が、最近概説され（非特許文献１）、これはＣＢ２を疼痛、特に炎症性疼痛および神経因性疼痛の治療のための治療標的として同定している。
【０００４】
ＣＢ２アゴニスト、特にＣＢ２選択的アゴニストは、限定的な中枢で媒介される副作用で、疼痛を治療するための標的を提供する。
【０００５】
特許文献１は、プリン化合物およびカンナビノイド受容体リガンドとしての、特にＣＢ１受容体アンタゴニストとしてのその使用に関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００４／０３７８２３号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００８）１５３、３１９−３３４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
現在の経口薬剤に関連する副作用の結果として、疼痛を治療するための代替治療を開発する必要があり続ける。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下の式の化合物：
【化１】
2013523740.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、ＣｌまたはＣＨ３であり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＣＨ３であり、
Ｒ３は、Ｈであるか、またはＲ４と結合して縮合ピロリジン−２−オンを形成し、
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ１−Ｃ２フルオロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３またはＣＯ２ＣＨ３であり、
Ｒ５は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＯＣＨ３であり、
Ｒ６は、Ｈ、ＣＨ３であるか、またはＲ５と結合してシクロプロパン環を形成し、
ｎは、０または１である）
またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
本発明の化合物は、インビトロにおいてＣＢ２受容体のアゴニストであることが見出されている。本発明の特定の化合物は、既存のＣＢ２アゴニストより高い有効性を示す。本発明の特定の化合物はＣＢ２選択的アゴニストである。本発明の特定の化合物は既存のＣＢ２アゴニストより高いＣＢ２選択性を示す。本発明の特定の化合物は、ヒトにおいて許容される副作用プロファイルに関する潜在性を示す。
【００１１】
本発明は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体とを含む、医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、薬学的に許容される希釈剤もしくは担体と、任意に１種以上の他の治療成分と一緒に、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物を提供する。
【００１２】
本発明は、治療に使用するための、化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、疼痛、特に骨関節炎疼痛の治療に使用するための化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明の別の態様において、疼痛、特に骨関節炎疼痛を治療するための薬剤を製造するための、化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様において、疼痛、特に化学療法誘発性疼痛を治療または予防するための薬剤を製造するための、化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【００１４】
本発明は、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それらを必要とするヒトまたは動物に投与することを含む、疼痛を治療するための方法を提供する。本発明は、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それらを必要とするヒトまたは動物に投与することを含む、疼痛を治療または予防するための方法を提供する。本発明はまた、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それらを必要とするヒトまたは動物に投与することを含む、骨関節炎疼痛を治療するための方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、それらを必要とするヒトまたは動物に投与することを含む、化学療法誘発性疼痛を治療または予防するための方法を提供する。
【００１６】
本発明の化合物は、疼痛、特に炎症性疼痛、より特には関節痛、最も特には骨関節炎疼痛の治療に使用されることが好ましい。
【００１７】
本発明の化合物は、疼痛、特に化学療法誘発性疼痛の治療または予防に使用されることが好ましい。
【００１８】
ＣＢ２受容体アゴニストはまた、多発性硬化症の治療において治療可能性を有すると識別されている（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００８）１５３，２１６−２２５およびＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００８）２８３，１３３２０−１３３２９）。さらに、ＣＢ２受容体アゴニストは、癌誘発性骨痛の治療のための可能性を有すると識別されている（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８６（２０１０）６４６−６５３）。
【００１９】
本発明の好ましい種は、以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：
【化２】
2013523740.tif 000004
（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびｎは本明細書に定義される通りである）
である。
【００２０】
本発明の好ましい種は、以下の式の化合物またはその薬学的に許容される塩：
【化３】
2013523740.tif 000005
（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は本明細書に定義される通りである）
である。
【００２１】
式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物の特定のクラスが好ましい。以下の列挙した選択がこのような好ましいクラスを記載している：
１）Ｒ１はＣｌであり、
２）Ｒ２はＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、
３）Ｒ２はＣＨ２ＯＨであり、
４）Ｒ３はＨであり、
５）Ｒ４はＣ１−Ｃ２アルキル、Ｃ１−Ｃ２フルオロアルキルまたはＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、
６）Ｒ４はメチル、エチル、２−フルオロエチルまたはＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、
７）Ｒ４はメチルまたはエチルであり、
８）Ｒ５はＨまたはＣＨ３であり、
９）Ｒ５はＨであり、
１０）Ｒ６はＨまたはＣＨ３であり、
１１）Ｒ６はＣＨ３であり、
１２）ｎは０であり、
１３）Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＨ３であり、
１４）Ｒ２はＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、Ｒ４はメチル、エチル、２−フルオロエチルまたはＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、
１５）Ｒ２はＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、Ｒ４はメチルまたはエチルであり、
１６）Ｒ２はＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、Ｒ４はメチルであり、
１７）Ｒ２はＣＨ２ＯＨであり、Ｒ４はメチル、エチル、２−フロオロエチルまたはＣ（Ｏ）ＣＨ３であり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＣＨ３である。
【００２２】
本発明の化合物の各々の薬学的に許容される塩は本出願の範囲内に意図される。
【００２３】
本明細書全体を通して用いられる場合、基が「本明細書中で定義される（ｄｅｆｉｎｅｄ  ｈｅｒｅｉｎ）」または「本明細書中で定義される（ｈｅｒｅｉｎ  ｄｅｆｉｎｅｄ）」によって修飾される場合、その基は第１に思い浮かぶ定義および最も広義の定義、ならびにその基の特定の定義の各々およびすべてを包含するということが理解されるべきである。
【００２４】
上記でおよび本発明の説明全体を通して用いられる場合、以下の用語は、特段の記載がない限り、以下の意味を有する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、Ｃ１〜Ｃ２アルキルという用語はメチルまたはエチルを意味する。
【００２６】
本明細書で使用する場合、Ｃ１〜Ｃ２フルオロアルキルという用語は、１以上の水素がフッ素で置換されている、本明細書中で定義されるＣ１〜Ｃ２アルキル基を意味し、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチルおよび２，２，２トリフルオロエチルが挙げられる。好ましいＣ１〜Ｃ２フルオロアルキル基は２−フルオロエチルである。本明細書で使用する場合、「異性体１」および「異性体２」という用語は、最終化合物または中間体の特定の鏡像異性体に関連し、「異性体１」は記載されるクロマトグラフプロセスから溶出する第１の化合物に関連し、「異性体２」は第２の化合物に関連する。「異性体１」または「異性体２」という用語が最初に中間体の性質である場合、その用語は最終化合物まで保持される
【００２７】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、生命体に対して実質的に無毒である本発明の化合物の塩を意味する。このような塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は当該技術分野で周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；およびＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６、２−１９（１９７７）を参照のこと。好ましい薬学的に許容される塩は塩酸塩およびシュウ酸塩である。
【００２８】
本発明の実施形態は本明細書に提示される例を包含し、そして提示される例は１つのキラル形態または立体配座形態、またはそれらの塩であり得るが、本発明のさらなる実施形態は、記載されたその例のすべての他の立体異性形態および／または立体配座形態、ならびにその薬学的に許容される塩を包含する。
【００２９】
本明細書で使用する場合、「ＣＢ２選択的アゴニスト」または「ＣＢ２選択性」という用語は、ＣＢ１よりもＣＢ２に対してより大きい効力を有する化合物を意味する。好ましくは、本発明の化合物は≧１００倍のＣＢ２選択性を示す。より好ましくは、本発明の化合物は≧５００倍のＣＢ２選択性を示す。最も好ましくは、本発明の化合物は≧１０００倍のＣＢ２選択性を示す。
【００３０】
本発明の化合物は、好ましくは、様々な経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。好ましくは、このような組成物は、経口投与用である。このような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは、当該技術分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ，Ｇｅｎｎａｒｏら編、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９９５）を参照のこと。
【００３１】
本発明の化合物のＸ線回折（ＸＲＤ）パターンは、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ（登録商標）Ｘ線粉末回折計で得られ得る。試料を、２θにおいて０．００９°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、ならびに０．６ｍｍの発散、５．２８の固定アンチスキャッター（ａｎｔｉ−ｓｃａｔｔｅｒ）、および９．５ｍｍの検出器スリットで、２θにおいて４〜４０°の間で走査する。２θにおける±０．２のピーク位置の変動性は、示した結晶形の明確な識別を妨げず電位変化を考慮に入れる。
【００３２】
本発明の好ましい化合物は、２−［８−（２−クロロ−フェニル）−２−メチル−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プリン−９−イル］−プロパン−１−オールであり、より好ましい化合物は、（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オールである。（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オールの好ましい形態は、１９．６８、１４．８１、および１３．２０±０．２°から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて８．２６にて回折ピーク（２−θ）を有する、好ましくは１４．８１および１３．２０±０．２°から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて８．２６、および１９．６８における回折ピークを有する、ＸＲＤにより特徴付けられる。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下のスキーム、調製例および実施例は、本発明の実施をよりよく説明するために提供される。これらのスキーム、調製例および実施例の工程についての適切な反応条件は当該技術分野で周知であり、溶媒および補助試薬の置換を含む反応条件の適切な修飾は当業者の能力の範囲内である。
【００３４】
さらに、当業者は、いくつかの例では、部分が導入される順序は重要ではないということを理解する。式Ｉの化合物を生成するために必要とされる工程の特定の順序は、化学の当業者によって十分理解されるように、合成しようとする特定の化合物、出発化合物、およびその置換部分の相対的不安定性に依存する。当業者は、すべての置換基がすべての反応条件と適合するというわけではないということを理解する。これらの化合物は、合成の好都合な時点で当該技術分野における周知の方法によって保護または修飾され得る。
【００３５】
適切な保護基としては、本明細書中で以降「Ｇｒｅｅｎｅ」と呼ばれるＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９９１に記載される保護基が挙げられる。Ｇｒｅｅｎｅは、当業者によって使用されるべき適切な保護基の「保護」および「脱保護」についての適切な条件を示す。
【００３６】
本発明の中間体および最終生成物は、所望に応じて、再結晶またはシリカゲルもしくはアルミナなどの固体支持体上でのクロマトグラフィーなどの一般的な技術によってさらに精製され得る。
【００３７】
本発明の化合物名は、ＩＵＰＡＣ命名機能を有するＳｙｍｙｘ  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．１．ＮＥＴを使用して生成される。
【００３８】
本明細書で使用される略語は以下の通りに定義される。「ブライン」は飽和塩化ナトリウム水溶液を意味し；「ＢＳＡ」はウシ血清アルブミンを意味し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し；「ＤＤＱ」は２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンを意味し；「ＤＭＡＣ」はＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを意味し；「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し；「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を意味し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味し；「ＧＤＰ」はグアノシン二リン酸を意味し；「ＨＥＰＥＳ」は４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を意味し；「ＩＰＡ」は２−プロパノールを意味し；「ＩＰＡｍ」は２−プロピルアミンを意味し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し；「ＳＣＸ」は使い捨てカートリッジまたは機器のシリカベースの強カチオン交換樹脂カラムを意味し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを意味し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し；「ｔＢＯＣ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを意味する。
【００３９】
【化４】
2013523740.tif 000006
式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に示しているような反応に従って調製できる。
【００４０】
工程１において、４，６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イルアミンを、置換反応においてアミン（１）と反応させてジアミノピリミジン（２）を得る。反応は、好ましくは密閉管中で、約１００〜１６０℃などの高温にて、イソプロパノールなどの適切な溶媒中で、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で進行し得る。あるいは、反応はマイクロ波照射を用いて達成できる。
【００４１】
工程２において、イミンは、シリカ上の塩化第二鉄、またはｐ−トルエンスルホン酸などの酸触媒の存在下で、ジアミノピリミジン（２）およびベンズアルデヒド（３）から形成される。反応は、約７０℃〜１１０℃などの高温にて、１，４−ジオキサンまたはトルエンなどの適切な溶媒中で生じる。シリカの非存在下で、分子篩を加えて反応から水を除去してもよい。濾過により固体を取り除いた後、濃縮し、イミンの酸化的環化を、約−３０〜４０℃などの適切な温度にて、ＤＤＱなどのオキシデートの存在下で、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中で達成して、式（４）の６−クロロプリンを得ることができる。
【００４２】
工程３において、６−クロロプリン（４）をピペラジン（５）での置換反応に供して、式（Ｉ）のピペラジニルプリンを得る。この反応は、約５０〜１００℃などの高温にて、メタノール、エタノール、またはイソプロパノールなどの溶媒中で、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で進行し得る。あるいは、この反応は、マイクロ波照射を用いて達成できる。
【００４３】
ピペラジニル部分に存在するアミン官能基は、ｔＢＯＣなどの適切な保護基で保護できることは当業者により理解されるだろう。工程３における置換の後、続いて保護基を除去して、アミンをアシル化するか、またはアルキル化して、式（Ｉ）のさらなる化合物を作製できる。
【００４４】
【化５】
2013523740.tif 000007
スキーム２において、式（Ｉ）の化合物を得るための代替の方法が示されている。
【００４５】
ジアミノピリミジン（２）を、ニトロベンゼンまたは酢酸などの適切な酸化剤の存在下でベンズアルデヒド（３）およびピペラジン（５）と一緒に結合する。この反応は、大気に解放した状態で約１２０〜１５０℃などの高温にて、メトキシベンゼンなどの適切な溶媒中で実施して、式（Ｉ）の化合物を得る。
【００４６】
【化６】
2013523740.tif 000008
スキーム３において、式（Ｉ）の化合物を作製するための別の代替法が示されている。工程１において、６−クロロ−２−メチル−４，５−ピリミジンアミンをベンズアルデヒド（３）と反応させて、上記のスキーム１、工程２に実質的に記載されている、６−クロロプリン（６）を得る。工程２において、６−クロロプリン（６）をピペラジン（５）と反応させて、上記のスキーム１、工程３に実質的に記載されている、ピペラジニルプリン（７）を得る。
【００４７】
工程３において、ピペラジニルプリン（７）をハロアルカン（８）（ここでＸ＝ＢｒまたはＩ）とアルキル化して式（Ｉ）の化合物を得る。このようなアルキル化を達成する様々な方法が存在することは当業者により理解されるだろう。例えば、ピペラジニルプリン（７）は、水素化ナトリウム、水素化カリウム、炭酸セシウムまたは炭酸カリウム、あるいはナトリウムまたはカリウムビス（トリメチルシリル）アミドなどの適切な塩基で処理できる。適切な溶媒としては、ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＦ、ＤＭＡＣまたはＮ−メチル−２−ピロリジノンなどの不活性溶媒が挙げられる。好ましい条件として、約−７０〜５０℃などの適切な温度にて、ＴＨＦ中の水素化ナトリウムを使用して、式（Ｉ）の化合物を得る。式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ２は末端アルコールを含有する）は、適切な保護基を使用し、続いて保護基を除去することによってアルキル化工程の間に保護できることは当業者により理解されるだろう。
【００４８】
【化７】
2013523740.tif 000009
スキーム４において、式（Ｉ）の化合物を作製するためのさらに別の代替法が示されている。
【００４９】
工程１において、５−アミノ−４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジンを、塩化ベンゾイル（９）でアシル化し、続いてアミン（１）で置換して、アミノアミドピリミジン（１０）を得る。その反応を、塩化ベンゾイル（９）の存在下で、６０〜１００℃などの高温にて、ジメチルアセトアミドまたはＮ−メチル−２−ピロリドンなどの不活性溶媒中で達成する。水を加え、加熱を継続し、その後、ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンなどの適切な有機塩基を加える。この後、加熱を継続しながらアミン（１）を加える。
【００５０】
工程２において、アミノアミドピリミジン（１０）を密閉容器中でピペラジン（５）と合わせて、式（Ｉ）の化合物を得る。その反応は、ジイソプロピルエチルアミンなどの適切な有機塩基の存在下で、１４０〜１８０℃などの高温にて、イソプロパノールなどの適切な溶媒中で生じる。
【実施例】
【００５１】
調製例１
６−クロロ−Ｎ４−（２−メトキシエチル）−２−メチルピリミジン−４，５−ジアミン
【化８】
2013523740.tif 000010
イソプロパノール（７０ｍＬ）中の４，６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イルアミン（５．０ｇ，０．０２ｍｏｌ）、２−メトキシエチルアミン（２．３２ｇ，０．０３ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（３．９ｇ，０．０３ｍｏｌ）の溶液を、密閉チューブ内で１６時間、１５０℃にて加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、イソプロパノールを減圧下で除去して残留物を得た。残留物をジクロロメタン中に溶解し、水およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物を、メタノール：ジクロロメタン（４：９６）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、標題化合物（５．０ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ２１７（Ｍ＋１）．
【００５２】
以下の表中のジアミノピリミジンを、適切なアミンおよび４，６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イルアミンを用いて、調製例１に記載した手順に基本的に従って調製した。調製例３、調製例４および調製例７を、酢酸エチル／ヘキサンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製した。調製例９を、アセトン／ヘキサンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製した。調製例１０を、溶出液としてＭｅＯＨ中のＮＨ３７Ｍで、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＳＣＸ−２（スルホン酸プロピル官能化シリカ）を用いて精製した。
【００５３】
【表１−１】
2013523740.tif 000011
【表１−２】
2013523740.tif 000012
【００５４】
調製例１１
６−クロロ−８−（２−クロロフェニル）−９−（２−メトキシエチル）−２−メチル−プリン
【化９】
2013523740.tif 000013
１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）中の６−クロロ−Ｎ４−（２−メトキシエチル）−２−メチルピリミジン−４，５−ジアミン（５．０ｇ，０．０２３ｍｏｌ）、２−クロロベンズアルデヒド（４．８ｇ，０．０３ｍｏｌ）、ＳｉＯ２（２０ｇ）上の１５％ＦｅＣｌ３の溶液を、１６時間１００℃まで加熱した。シリカを珪藻土で濾過して除去し、濾過物を減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物を乾燥ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中に溶解し、ＤＤＱ（５．２ｇ，０．０２２ｍｏｌ）を０℃にて加え、反応混合物を室温にて２時間攪拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液、水、およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、残留物を得た。残留物を、酢酸エチル：ｎ−ヘキサン（４０：６０）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、標題化合物（２．９ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋１）．
【００５５】
以下の表中のフェニルプリンを、適切なジアミノピリミジンおよび２−クロロベンズアルデヒドまたは２−メチルベンズアルデヒドを用いて、調製例１１に記載した手順に基本的に従って調製した。調製例１７を、溶出液としてアセトン／ヘキサンで、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製した。
【００５６】
【表２】
2013523740.tif 000014
【００５７】
調製例１８
１−（６−クロロ−８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−プリン−９−イル）−２−メチル−プロパン−２−オール
【化１０】
2013523740.tif 000015
トルエン（２５ｍＬ）中の１−（５−アミノ−６−クロロ−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ）−２−メチルプロパン−２−オール（０．５ｇ，０．００２ｍｏｌ）、２−クロロベンズアルデヒド（０．６ｇ，０．００４ｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸（０．１ｇ）および分子篩（１．０ｇ）の混合物を、１３０℃まで１６時間加熱した。分子篩を珪藻土で濾過して除去し、濾過物を減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）中に溶解し、ＤＤＱ（０．４７ｇ，０．００２ｍｏｌ）を０℃にて加えた。反応混合物を室温にて２時間攪拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液、水、およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、残留物を得た。残留物を、メタノール：ジクロロメタン（２：９８）で溶出するシリカゲルカラム上で精製して、標題化合物（０．４ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５１（Ｍ＋１）．
【００５８】
以下の表中のフェニルプリンを、３−［（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）アミノ］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オールおよび２−クロロベンズアルデヒドを用いて、調製例１８に記載した手順に基本的に従って調製した。
【００５９】
【表３】
2013523740.tif 000016
【００６０】
調製例２０
１−（２−フルオロエチル）ピペラジン二塩酸塩
【化１１】
2013523740.tif 000017
反応槽を、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン（１．６００ｇ，８．５９０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３．５６ｇ，２５．７７ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（触媒）（１０ｍｇ，６６．７μｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）、および１−ブロモ−２−フルオロエタン（７０４．０μＬ，９．４５ｍｍｏｌ）で満たした。混合物を還流温度にて一晩攪拌しながら加熱した。反応完了後、室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物を酢酸エチルおよび水で分けた。有機層を分け、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、純４−（２−フルオロ−エチル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＧＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２３２  （Ｍ）．
【００６１】
１，４−ジオキサン（２１．５２ｍＬ，８６．１ｍｍｏｌ）中の４Ｎ  ＨＣｌを、乾燥ジクロロメタン（６０ｍＬ）中の４−（２−フルオロ−エチル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．００ｇ，８．６１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、室温にて窒素下で加えた。窒素下で一晩攪拌した。反応物を減圧下で濃縮して、標題化合物（１．７８ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  １３３  （Ｍ＋１）．
【００６２】
調製例２１
８−（２−クロロフェニル）−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン塩酸塩
【化１２】
2013523740.tif 000018
エタノール（１０ｍＬ）中の６−クロロ−８−（２−クロロ−フェニル）−２−メチル−９Ｈ−プリン（０．５ｇ，０．００１７ｍｏｌ）、Ｎ−エチルピペラジン（０．２２ｇ，０．００１９ｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．２２ｇ，０．００２２ｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて８時間加熱した。あるいは、反応物をマイクロ波照射で加熱した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物を乾燥ジクロロメタン中に溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液、水、およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物を、溶出液としてＭｅＯＨ：ＤＣＭ（２：９８）を用いてシリカゲルカラム上で精製して、８−（２−クロロフェニル）−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン（０．２５ｇ）を得た。ＨＣｌ（エタノール中の２Ｍ溶液）（１．０当量）を、乾燥エーテル（２．５ｍＬ）中の８−（２−クロロフェニル）−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン（０．２５ｇ，０．０００７ｍｏｌ）の混合物中に０℃にて加え、１時間室温にて攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルおよびＤＣＭで洗浄した。真空下で乾燥させて、標題化合物（０．２７５ｇ）を白色固体として得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５７（Ｍ＋１）．
【００６３】
あるいは、アセトン中の遊離塩基を、１：１アセトニトリル：水、または別の適切な有機溶媒中に溶解して、ＨＣｌ塩を調製し、次いでＨＣｌ水溶液またはＨＣｌエーテル溶液を攪拌して加えた。次いで凍結乾燥して、塩酸塩を得た。
【００６４】
以下の表中のフェニルピペラジニルプリンを、適切に置換されたピペラジンおよび適切に置換された６−クロロプリンを用いて、調製例２１に記載した手順に基本的に従って調製した。他に記載されない限り、純粋な遊離塩基生成物を、溶出液としてアセトン／ヘキサンまたはＭｅＯＨ／ＤＣＭで、順相シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製した。
【００６５】
【表４−１】
2013523740.tif 000019
【表４−２】
2013523740.tif 000020
【表４−３】
2013523740.tif 000021
【表４−４】
2013523740.tif 000022
【表４−５】
2013523740.tif 000023
ａ逆相分取ＨＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ｘｂｒｉｄｇｅ、溶出液：９〜１００％アセトニトリル／水ｐＨ１０（ＮＨ４ＣＯ３）。
ｂキラル分離により精製：Ｄｉａｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ  ＳＦＣ、溶出液：１２％ＭｅＯＨ（０．２％ＩＰＡｍ）／ＣＯ２。異性体１（１００％ｅｅ）および異性体２（９１．１％ｅｅ）。
ｃキラル分離により精製：Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ−Ｈ  ＳＦＣ、溶出液：１０％ＩＰＡ（０．２％ジエチルメチルアミン）／ＣＯ２。異性体１（１００％ｅｅ）および異性体２（１００％ｅｅ）。
【００６６】
調製例２３
（２Ｒ）−２−［（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）アミノ］プロパン−１−オール
【化１３】
2013523740.tif 000024
４，６−ジクロロ−２−メチル−ピリミジン−５−イルアミン（３０７ｇ，１．７２モル）を、オーバーヘッドスターラー、還流コイル冷却器、温度計、および添加漏斗が備え付けられた、イソマントルが取り付けられた１０Ｌフランジフラスコ中に満たした。次いでイソプロピルアルコール（３．４５Ｌ）をフラスコに加え、攪拌して、透明淡黄色溶液を得た。トリエチルアミン（４５６．７ｍＬ，３．２８ｍｏｌ）をフラスコに、５０℃にて攪拌し温めながら一度に加えた。（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−プロパノール（１９４．３０ｇ，２０２．１０ｍＬ，２．５９ｍｏｌ）を、添加漏斗から３０分にわたってゆっくり加えた。最後の添加の後、反応混合物を３６時間加熱し還流させた。反応混合物を冷却した。追加の（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−プロパノール（６４．７７ｇ，６７．３７ｍＬ，８６２．２６ｍｍｏｌ，０．５当量）およびトリエチルアミン（１７４．５１ｇ，２４０．３７ｍＬ，１．７２モル，１．０当量）を反応混合物に加え、１８時間還流させた。反応混合物を冷却した。追加の（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−プロパノール（３２．３８ｇ，３３．６８ｍＬ，４３１．１３ｍｍｏｌ，０．２５当量）およびトリエチルアミン（８７．２５ｇ，１２０．１８ｍＬ，８６２．２６ｍｍｏｌ，０．５当量）を反応混合物に加え、６時間加熱し還流させた。４８時間周囲温度で攪拌しながら冷却した。
【００６７】
回転蒸発により溶媒を除去して、オフホワイト半固体を得た。水（５００ｍＬ）を加え、残ったイソ−プロパノールを得られた白色スラリーから回転蒸発により除去した。白色固体を濾過により回収し、水（１×２００ｍＬ，１×１３０ｍＬ）で洗浄した。白色固体を真空オーブン内にて固体の水酸化カリウム上で５０℃にて乾燥させて、標題化合物（２２２．６ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ２１７（Ｍ＋１）．
【００６８】
実施例２０
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール；シュウ酸
【化１４】
2013523740.tif 000025
開けさらしの１０Ｌジャケット付きリアクター内にて、（２Ｒ）−２−［（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）アミノ］プロパン−１−オール（２２８ｇ，１．０５ｍｏｌ）および１−メチルピペラジン（２１０．８０ｇ，２３３．９ｍＬ，２．１）をジメチルスルホキシド（３．１６Ｌ）中に溶解した。２−クロロベンズアルデヒド（２２１．８８ｇ，１．５８ｍｏｌ．）をフラスコに加え、その後、トリエチルアミン（１２７．７８ｇ，１７６ｍＬ，１．２６ｍｏｌ）およびニトロベンゼン（１２９．５５ｇ，１．０５ｍｏｌ）を加えた。混合物を１４０℃まで３．５時間加熱し、次いで冷却した。室温にて１８時間攪拌した。
【００６９】
反応混合物を、水（７．５Ｌ）を含有する２０Ｌフラスコ内に攪拌しながら注いだ。３０分後、濃茶色油をジクロロメタン（１×７．５Ｌ，１×５Ｌ）で抽出し、有機層を分けた。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、油を得た。油をテトラヒドロフラン（３．２Ｌ）中に溶解し、迅速に攪拌しながらテトラヒドロフラン（２．１Ｌ）中のシュウ酸（９４．７４ｇ，１．０５ｍｏｌ，１当量）の溶液で処理した。反応混合物を４５℃まで１５分温め、次いで熱い混合物を重力濾過で濾過した。濾過ケーキを、酢酸エチル−テトラヒドロフラン（１：１）で数回洗浄し、最終的にエーテルで洗浄した。その間、固体を手動でかき回していた。固体を真空オーブン内で蒸発させて、標題化合物を明茶色固体（３２９．４ｇ）として得た。［α］Ｄ＠２０°Ｃ＝−６，Ｃｏｎｃ＝０．１０１ｇ／１００ｍＬ（ＭｅＯＨ）．
【００７０】
実施例２０ａ
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール
【化１５】
2013523740.tif 000026
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オールシュウ酸塩（３３０．３ｇ，６７４．１７ｍｍｏｌ）を、迅速に攪拌した２Ｍ水酸化ナトリウム（１．０１Ｌ，２．０２ｍｏｌ）水溶液に加えた。２０分攪拌し、次いでジクロロメタン（５Ｌ，次いで２．５Ｌ）で抽出し、水（２．５Ｌ）で洗浄し、次いでブライン（１．５Ｌ）で洗浄した。追加の遊離塩基物質（１５．３ｇ）（基本的に上述したようにパイロット反応で生成した）をジクロロメタン溶液に加えた。ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、金色結晶固体を得た。固体を真空下で乾燥させて、標題化合物（２６４．５ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１．２（Ｍ＋１）．［α］２０Ｄ−４．１（ｃ１，ＭｅＯＨ）．
【００７１】
実施例２０ｂ
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール塩酸塩
【化１６】
2013523740.tif 000027
窒素入口を装着した２５０ｍＬ丸底フラスコ内にて、（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール（１５．２９ｇ，３８．１４ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（１１４ｍＬ）中に溶解し、ジオキサン（９．５３ｍＬ，３８．１４ｍｍｏｌ）中の４Ｎ塩化水素で処理した。室温にて２．５時間攪拌し、次いで固体を真空濾過により回収した。ジエチルエーテル（３００ｍＬ）で洗浄し、次いで真空下で乾燥させて、標題化合物（１２．１ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１．２（Ｍ＋１−ＨＣｌ）．
【００７２】
実施例２０ｃ
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール
【化１７】
2013523740.tif 000028
２Ｌフラスコ内で、（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール（２０２．１ｇ，５０４．１０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１．２６Ｌ）で処理し、室温にて３０分攪拌した。固体を濾過により回収し、アセトニトリル（２５０ｍＬ）で洗浄し、空気乾燥させ、次いで真空下で４０℃にて乾燥させて、純標題化合物（１３４．１ｇ）を得た。光学純度をキラルＳＦＣにより決定して、単一の鏡像異性体を示した。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１．２（Ｍ＋１）。キラルＨＰＬＣ条件：Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ−Ｈ，１０％ＩＰＡ，０．２％イソプロピルアミン  ８９．８％超臨界二酸化炭素，ＵＶ（２２０ｎｍ），ＴＲ＝４．２２分，１００％ｅｅ．
【００７３】
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オールへの代替経路
調製例２３ａ
２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−６−［［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル］アミノ］−２−メチル−ピリミジン−５−イル］ベンズアミド
【化１８】
2013523740.tif 000029
２−クロロベンゾイルクロライド（１０．４４ｇ，５７．８６ｍｍｏｌ）、５−アミノ−４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジン（１０ｇ，５６．１７ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルピロリドン（４４ｍＬ）を、還流冷却器、スターラーバー、窒素入口／出口が備えられた、２５０ｍＬの三つ首丸底フラスコ内にて合わせ、８０℃にて５時間加熱した。水（５０６μＬ）を加え、２０分加熱条件下で攪拌し続け、その後、ジイソプロピルエチルアミン（２９．４ｍＬ，１６８．５２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで（Ｒ）−（−）−２−アミノ−１−プロパノール（６．２３ｍＬ，７９．７７ｍｍｏｌ）を一度に加え、その後Ｎ−メチルピロリドン（１０ｍＬ）でリンスした。８０℃にて１７時間加熱し続けた。反応溶液を室温まで冷却し、次いで水（１１２ｍＬ）を、添加漏斗を介して１０分にわたって滴下して加えた。室温にて３５分攪拌し続け、次いで酢酸エチル（３００ｍＬ）内に注いだ。相を分け、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で水相を抽出した。合わせた有機部分を水（２００ｍＬ）で洗浄し、次いでブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、オレンジ色油を得た。これをｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで粉砕して、白色固体を得て、回収後濾過した。固体をフィルター上で０．５時間乾燥させ、次いで真空オーブン内で５０℃にて乾燥させて、標題化合物（１５．１ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５５．０／３５７．０（Ｍ＋１）．
【００７４】
実施例２０ｄ
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール
【化１９】
2013523740.tif 000030
機械的スターラーを備えた３００ｍＬ  Ｐａｒｒオートクレーブ内にて、Ｎ−メチルピペラジン（７．１ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（７．０ｍＬ）を、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−６−［［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル］アミノ］−２−メチル−ピリミジン−５−イル］ベンズアミド（１３．０ｇ）、ＩＰＡ（１１ｍＬ）と合わせた。反応層を密閉し、１６０℃にて２４時間加熱した。全ての揮発性物質を蒸発させ、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中に溶解して、暗色溶液を得た。水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、疎水性フリットを用いて乾燥させ、減圧下で全ての溶媒を洗浄させた。得られた固体を取り、アセトニトリル（８５ｍＬ）中に溶解し、攪拌した。１．５時間後、固体を濾過により回収し、空気乾燥させ、その後、真空下で乾燥させて、標題化合物（１０．７３ｇ）を得た。光学純度をキラルＳＦＣにより決定して、単一の鏡像異性体を示した。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１．２（Ｍ＋１）。キラルＨＰＬＣ条件：Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ−Ｈ，１０％ＩＰＡ，０．２％イソプロピルアミン，８９．８％超臨界二酸化炭素，ＵＶ（２２０ｎｍ），ＴＲ＝４．２２分，１００％ｅｅ．
【００７５】
実施例２０ｅ
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール
【化２０】
2013523740.tif 000031
（２Ｒ）−２−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）プリン−９−イル］プロパン−１−オール（８００ｍｇ，実施例２０ａ）をアセトニトリル（５ｍＬ）と混合した。得られた透明濃茶色溶液を５００ｒｐｍで室温にて攪拌し、１分攪拌後、白色固体が沈殿し始めた。サンプルを１０分攪拌して、溶液から沈殿物を得られるだけ沈殿させた。白色固体を真空濾過により単離させ、１ｍＬのアセトニトリルでリンスした。物質を真空オーブン内で８５℃にて１時間乾燥させて、５０５ｍｇを回収した。ＣｕＫａ放射を供給源（λ＝１．５４０６０Å）として使用するＸＲＤ回析ピークを、以下に表中に示した。
【００７６】
【表５】
2013523740.tif 000032
【００７７】
実施例２１
｛１−［８−（２−クロロ−フェニル）−２−メチル−６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−プリン−９−イル］−シクロプロピル｝メタノール塩酸塩
【化２１】
2013523740.tif 000033
開けさらしのフラスコを用いて、メトキシベンゼン（１５．２８ｍＬ）中の１−（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イルアミノ）−シクロプロピル］−メタノール（１．１６５ｇ，５．０９ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルピペラジン（６２２．７０μＬ，５．６０ｍｍｏｌ）の溶液を攪拌した。２−クロロベンズアルデヒド（８６０．０３μＬ，７．６４ｍｍｏｌ）を一度に加え、その後、ニトロベンゼン（５２２．２２μＬ，５．０９ｍｍｏｌ）を加え、温度を１４０℃まで上昇させた。反応物を１４０℃にて１０時間攪拌した。反応物を回転蒸発器に移し、揮発物を除去した。２Ｎ塩酸（５００ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を捨て、酸分画を濃水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ＝１４まで処理した。生成物をジクロロメタンで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、茶色油を得た。
【００７８】
粗物質を標準相ＳＦＣ（Ｄｉｎｔｒｏｐｈｅｎｙｌカラム，２０％ＭｅＯＨ（０．２％ジエチルメチルアミン），８０％ＣＯ２）を用いて精製した。遊離塩基を、水：アセトニトリル（２：１）または別の適切な有機溶媒中に溶解して、ＨＣｌ塩を調製し、次いでＨＣｌ水溶液またはＨＣｌエーテル溶液を攪拌して加えた。凍結乾燥して、標題化合物（３９０ｍｇ）の塩酸塩を固体として得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１３（Ｍ＋１）．
【００７９】
以下の表中のフェニルピペラジニルプリンを、適切に置換されたジアミノピリミジン、２−クロロベンズアルデヒド、およびＮ−メチルまたはＮ−エチルピペラジンを用いて、実施例２１に記載した手順に基本的に従って調製した。
【００８０】
【表６】
2013523740.tif 000034
ａ分取逆相ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ（登録商標）により精製。５ミクロンＣ−１８カラム；溶出液：０．１％ＴＦＡを含む水中の１０〜１００％アセトニトリル。
ｂ順相シリカゲルクロマトグラフィーにより精製。溶出液：ＭｅＯＨ／ＤＣＭ中の０−１０％７Ｍ  ＮＨ３
【００８１】
調製例２４
１−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−プリン−９−イル］−２−メチル−プロパン−２−オール
【化２２】
2013523740.tif 000035
トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−２−メチル−プリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１．９ｇ，０．００３８ｍｏｌ）の溶液に０℃にて加え、２時間室温にて撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．５ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１（Ｍ＋１）．
【００８２】
実施例２４
メチル４−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−２−メチル−プリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボンキシレート塩酸塩
【化２３】
2013523740.tif 000036
クロロギ酸メチル（０．２９ｇ，０．００３１ｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（３ｍＬ）中の１−［８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−プリン−９−イル］−２−メチル−プロパン−２−オール（０．００１ｍｏｌ，０．５ｇ）およびピリジン（２．０ｍＬ）の溶液に、０℃にて加え、２時間室温にて撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、残留物を得た。残留物を、メタノール：ジクロロメタン（３：９７）を溶出液として用いるシリカゲルカラム上で精製して、メチル４−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−２−メチル−プリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４５９（Ｍ＋１）．
【００８３】
ＨＣｌ（エーテル中の２．０Ｍ溶液）（０．０２３ｇ，０．０００６ｍｏｌ）を、エーテル（４ｍＬ）中のメチル４−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピル）−２−メチル−プリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボンキシレート（０．３ｇ，０．０００６ｍｏｌ）の溶液に、０℃にて加え、２時間室温にて撹拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、標題化合物（０．２４ｇ）を白色固体として得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４５９（Ｍ＋１）．
【００８４】
実施例２５
８−（２−クロロフェニル）−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−９−（メトキシメチル）−２−メチル−プリン
【化２４】
2013523740.tif 000037
水素化ナトリウム（０．０３１ｇ，０．００１３ｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の８−（２−クロロフェニル）−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン（０．２３３ｇ，０．０００６５ｍｏｌ）の溶液に、０℃にて加えた。反応混合物を１５分撹拌し、次いで−３０℃まで冷却し、ブロモメチルメチルエーテル（０．０８１ｇ，０．０００６５ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温まで温め、１時間撹拌した。反応混合物を水でクエンチし、テトラヒドロフランを蒸発により除去し、次いで反応混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、残留物を得た。残留物を分取逆相ＨＰＬＣ（Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅカラム，５ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ／アセトニトリル）を介して精製して、標題化合物（０．０２９ｇ）を得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１（Ｍ＋１）．
【００８５】
調製例２５
２−［（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）アミノ］エタノール
【化２５】
2013523740.tif 000038
１Ｌオートクレーブを、５−アミノ−４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジン（５０．０ｇ，０．２８１ｍｏｌ）、２−アミノエタノール（１８．８ｇ，０．３０９ｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（５４．５ｇ，０．４２１ｍｏｌ）、およびＩＰＡ（５００ｍＬ）で満たした。混合物を、２４〜３０時間撹拌しながら１４５〜１５５℃まで加熱した。反応物を２５〜３０℃まで冷却した。反応混合物を濃縮し、溶媒を真空下で５０℃以下にて除去した。ＤＣＭ（５００ｍＬ）を混合物に入れ、１０〜２５℃にて２時間撹拌した。混合物を濾過し、ケーキをオーブン内で４５〜５０℃にて乾燥させて、生成物を淡黄色固体（３５．０ｇ）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）：δ６．７６（ｓ，１Ｈ）；４．７９（ｓ，３Ｈ）；３．５３−３．３７（ｍ，４Ｈ）；２．０９（ｓ，３Ｈ）．
【００８６】
調製例２６
２−［６−クロロ−８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−プリン−９−イル］エタノール
【化２６】
2013523740.tif 000039
５００ｍＬの三つ首丸底フラスコを、２−［（５−アミノ−６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）アミノ］エタノール（１３．０ｇ，０．０６４ｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（３００ｍＬ）で満たした。２−クロロベンズアルデヒド（１３．５ｇ，０．０９６ｍｏｌ）を加え、その後シリカゲル（３７．５ｇ）上の塩化鉄（ＩＩＩ）、５ｗｔ％を一度に加えた。混合物を１００〜１０５℃まで４８時間加熱した。２０〜３５℃まで冷却し、濾過し、ケーキを１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）でリンスした。濾過物を合わせ、真空下で濃縮した。残留物をジクロロメタン（２６０ｍＬ，２０ｍＬ／ｇ）で溶解し、０〜５℃まで冷却した。２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（１４．５ｇ，０．０６４ｍｏｌ）を０℃にて加え、混合物を１０〜２５℃まで温め、２時間撹拌した。濾過し、ケーキをエタノール（１００ｍＬ）でリンスし、濾過物を合わせた。濾過物を真空下で濃縮して、暗色残留物を得た。残留物をジクロロメタン（３００ｍＬ）で再溶解し、この溶液を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１０〜１１まで洗浄し、その後水（２×６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮して、粗物質を得た。粗物質を、ジクロロメタン／メタノール（５０：１）で溶出する４００ｇシリカゲル上で精製して、黄色固体（６．５ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）：δ７．７３−７．５６（ｍ，４Ｈ）；４．８３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ）；３．６１（ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ）；２．７３（ｓ，３Ｈ）．
【００８７】
調製例２７
（±）−２−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−プリン−６−イル］−１，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン
【化２７】
2013523740.tif 000040
５００ｍＬの三つ首丸底フラスコを、２−［６−クロロ−８−（２−クロロフェニル）−２−メチル−プリン−９−イル］エタノール（１３．３ｇ，０．０４１２ｍｍｏｌ）およびエタノール（２００ｍＬ）で満たし、その後、２，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン（６．３６５ｇ，０．０４５３ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．８ｍＬ，３．５当量）で満たした。混合物を８０〜８５℃まで２４時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、真空下で濃縮して、黄色固体を粗生成物として得た。粗物質を、ジクロロメタン／メタノール（５０：１）で溶出し、４００ｇのシリカゲルを用いる、カラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物を黄色固体（１３．３ｇ）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ｄｍｓｏ−ｄ６）：δ７．５５−７．４１（ｍ，４Ｈ）；５．７２（ｂｓ，２Ｈ）；４．１６−３．９２（ｍ，３Ｈ）；３．７１（ｓ，２Ｈ）；３．７１−３．６８（ｍ，１Ｈ）；３．０２−２．９３（ｍ，２Ｈ）；２．７４（ｍ，１Ｈ）；２．７０（ｓ，３Ｈ）；２．４４（ｍ，２Ｈ）；２．３２−２．２９（ｍ，１Ｈ）；１．７６−１．６９（ｍ，１Ｈ）．
【００８８】
実施例２６
２−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−プリン−６−イル］−１，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン，異性体２
【化２８】
2013523740.tif 000041
（±）−２−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−プリン−６−イル］−１，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン（１９．０ｇ）をメタノール（４００ｍＬ）中に溶解した。鏡像異性体を超臨界流体クロマトグラフィー（ＡＤ−Ｈカラム，２５０×３０ｍｍ，５μｍ）；移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２；Ｂ：ＭｅＯＨ０．０５％ジエチルアミン，８５ｍＬ／分にてＡ：Ｂ＝７５：２５）を用いて分けた。検出波長は、２５４ｎｍであった。溶媒を蒸発させて、ピーク２の黄色固体を得た。ジクロロメタン（１００ｍＬ）中に溶解し、水（２×３０ｍＬ）で洗浄し、デカントし、有機溶液を真空下で５０℃以下にて濃縮して、７．２ｇ（９９．８％ｅｅ）の異性体２を白色固体として得た。
【００８９】
実施例２７
２−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−メトキシエチル）−２−メチル−プリン−６−イル］−１，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン塩酸塩，異性体２
【化２９】
2013523740.tif 000042
１００ｍＬフラスコを、２−［８−（２−クロロフェニル）−９−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−プリン−６−イル］−１，３，４，７，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジン−６−オン，異性体−２［Ｃ０９１１１０７０−Ｅ］（３．３ｇ，７．７３ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３５ｍＬ）で満たし、その後ヨウ化メチル（１．２４ｇ，８．５０ｍｍｏｌ）で満たした。６０％ＮａＨ（０．５９ｇ，１３．９ｍｍｏｌ）を少量ずつ１０〜２５℃にて加え、２時間撹拌した。混合物を攪拌しながら水（１００ｍＬ）に注ぎ、溶液を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で濃縮して、油を得た。粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール（５０：１）で溶出する、シリカゲル（１００ｇ）カラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体を得た。固体を酢酸エチル（４０ｍＬ）中に再溶解し、酢酸エチル中の１Ｎ  ＨＣｌの溶液を、固体が沈殿するまでゆっくり加えた。室温にて２時間攪拌し、ケーキを濾過し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。ケーキを真空下で乾燥させて、２．８ｇの標題化合物をオフホワイト固体（９８．０％ｅｅ）として得た。ＥＳ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４１．３（Ｍ＋１）．
【００９０】
ＣＢ１およびＣＢ２のインビトロ機能アッセイ
例示した化合物は、ＳＰＡベースのＧＴＰ−γ−３５Ｓ結合アッセイを使用して、アゴニスト様式で試験される。すべてのアッセイ成分は、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、（室温でｐＨ  ７．４）から構成されるアッセイ緩衝液中で調製される。半対数の化合物希釈を、ＢＳＡ（最終０．１２５％）を含有するアッセイ緩衝液中で行う。ＧＴＰ−γ３５−Ｓ結合は、ＣＢ１アッセイについて全膜捕捉技術およびＣＢ２アッセイについてこれまでに記載された抗体捕捉技術（ＤｅＬａｐｐら  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ２８９：９４６−９５５、１９９９）の修飾を使用して、９６ウェルフォーマットで測定される。すべてのインキュベーションを室温で行う。
【００９１】
ＣＢ１：
ｈＣＢ１−ＣＨＯ膜、ＧＤＰ（最終１ｕＭ）、およびサポニン（最終１０ｕｇ／ｍＬ）をアッセイ緩衝液に加え、ホモジナイズする。希釈した化合物、ＧＴＰ−γ−３５Ｓ（最終５００ｎＭ）および膜をアッセイプレートに加え、３０分間インキュベートする。次いで１ｍｇ／ウェルのＷｈｅａｔｇｅｒｍ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ  ＳＰＡビーズを加え、プレートを密閉し、ボルテックスにかけ、さらに１時間インキュベートする。次いでプレートを７００×ｇで１０分間遠心分離し、シンチレーションカウンタを使用して１ウェルあたり１分間計数する。
【００９２】
ＣＢ２−Ｓｆ９：
ｈＣＢ２−Ｓｆ９膜およびＧＤＰ（最終１ｕＭ）をアッセイ緩衝液に加え、ホモジナイズする。希釈した化合物および膜をアッセイプレートに加え、１５分間プレインキュベーショトする。この後、ＧＴＰ−γ−３５Ｓ（最終５００ｎＭ）を加え、さらに３５分間インキュベートする。次に、Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０洗浄剤（最終０．２％）、抗Ｇｉ抗体（１：３６２の最終希釈）、および１．２５ｍｇの抗ウサギ抗体シンチレーション近接アッセイビーズを含有する混合物を加える。次いでこのプレートを密閉し、ボルテックスにかけ、さらに２時間インキュベートし、この後、遠心分離し、ＣＢ１について計数する。
【００９３】
データを分析するために、最初にすべてのウェルからバックグラウンドを差し引く。アゴニスト／逆アゴニスト用量反応データを完全アゴニスト（メタンアンダミド（ｍｅｔｈａｎａｎｄａｍｉｄｅ））反応に対して正規化することにより、アゴニスト有効性パーセントを決定する。Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ＢａｓｅおよびＸＬＦｉｔ３を用いた４パラメーターのロジスティック換算フィット（ｌｏｇｉｓｔｉｃ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｆｉｔ）を使用して、データを分析する。
【００９４】
例示した化合物のすべてを基本的に上記のとおりに試験し、各々が≦１００ｎＭのＣＢ２についての相対的ＥＣ５０値を有することを見出した。実施例６は、ＣＢ２について２．７ｎＭの相対的ＥＣ５０値およびＣＢ１について＞１０００００ｎＭの相対的ＥＣ５０値を有する。実施例１９は、ＣＢ２について２２．４ｎＭ、およびＣＢ１について＞１０００００ｎＭの相対的ＥＣ５０値を有する。
【００９５】
このように、本発明の化合物はＣＢ２インビトロ活性を示す。さらに、本発明の化合物はＣＢ１よりもＣＢ２に対して選択性を示し、そのため中枢で媒介される副作用について限定的な潜在性をもたらす。
【００９６】
ヒトおよびラットのＣＢ２受容体からの３Ｈ−ＣＰ５５９４０の置換
Ｆｅｌｄｅｒらの方法（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｏｃｏｌ．４８：４４３−４５０、１９９５）を、わずかの修飾を加えて利用した。具体的にいうと、ヒトまたはラットのＣＢ２受容体を安定にまたは一過性に発現する細胞由来の膜ホモジネートを遠心分離によって洗浄し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ  ７．４）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．１％  ＢＳＡ緩衝液中で希釈した。３Ｈ−ＣＰ５５９４０の特異的結合を１μＭ  ＣＰ５５９４０を用いて定義した。特異的な３Ｈ−ＣＰ５５９４０結合を置き換えるための化合物の能力を、３００μｌの量で室温で９０分間インキュベートすることによって、１％ジメチルスルホキシドの存在下で、Ｔｒｉｓ、ＭｇＣｌ２、ＥＤＴＡ、ＢＳＡ緩衝液中で、ある濃度範囲にわたって試験した。水中の０．５％ポリビニルピロリドン、０．１％ポリソルベート２０で前処理したＵｎｉｆｉｌｔｅｒ９６ウェルマイクロプレートを冷Ｔｒｉｓ緩衝液で３回洗浄した。次いで反応混合物をフィルタープレートに移し、その直後に急速濾過および冷Ｔｒｉｓ緩衝液を用いる３回の２００μｌの洗浄によってインキュベートを停止した。フィルタープレートを乾燥した後、ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０を各ウェルに加え、プレートを密閉し、毎分崩壊の測定のために計数した。置換曲線をグラフ化し、得られたＫｉ値をＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを利用して決定した。
【００９７】
実施例８は、１４２ｎＭのヒト受容体Ｋｉ値および３７．５ｎＭのラット受容体Ｋｉ値を有する。実施例１３は、６５．２ｎＭのヒト受容体Ｋｉ値および２１５ｎＭのラット受容体Ｋｉ値を有する。
【００９８】
このように、本発明の化合物は、ヒトおよびラットのＣＢ２受容体の両方に対してインビトロで結合することが示される。
【００９９】
モノヨードアセテート（ＭＩＡ）モデル
すべての研究について、ＭＩＡモデルにおいて疼痛を測定するために、ＭＩＡ注入時およそ８週齢の雄性のＬｅｗｉｓラットを使用する。このラットを１ケージあたり２または３匹の群で収容し、一定温度および１２時間明／１２時間暗のサイクルで維持する。動物は、データ収集の間を除いていつでも餌および水をとることができる。
【０１００】
標準的なＭＩＡモデルでは、各ラットの右膝に５０ｕｌの生理食塩水中の０．３ｍｇ  ＭＩＡを、および左膝に５０ｕｌの生理食塩水を注射する。疼痛を、ＭＩＡ注射後様々な時間で（通常、ＭＩＡ注射後１０日より前ではない）、インキャパシタンス試験（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ  ｔｅｓｔｉｎｇ）を使用して測定する。これは、ＭＩＡを注射した膝と生理食塩水を注射した膝との間の後足の体重支持の差を測定し、そして各測定は、各々１秒にわたって測定した３つの別個の測定の平均である。
【０１０１】
ＣＢ２アゴニストを用いた研究のために、ラットを用量群（ｎ＝５または６）に無作為化し、次いで検討中の化合物で１回投薬する。投薬は各ラットに対して１５分間だけずらし、用量後の所定の時間（通常２時間）に、疼痛をインキャパシタンス試験を使用して測定する。研究は、通常は、４つの群、ビヒクル（０．２５％ポリソルベート８０を加えた水中の１％カルボキシメチルセルロース）、および単一用量での単一化合物であるか３つの用量の同じ化合物のいずれかであり得る３つの化合物群で行う。結果を、生理食塩水を注射した膝とＭＩＡを注射した膝との間の体重支持の差として報告し、ビヒクルで処置した動物と化合物で処置した動物との間で統計比較を行い、このモデルにおける膝の疼痛に対する化合物の効果を評価する。
【０１０２】
実施例１９を基本的に上記のとおりに試験し、０．３および１ｍｇ／ｋｇの用量で、ビヒクルより疼痛を軽減することが見出された。実施例１８を基本的に上記のとおりに試験し、０．３ｍｇ／ｋｇの用量でビヒクルより疼痛を軽減することが見出された。
【０１０３】
このように、本発明の化合物は疼痛、特に関節痛の治療において有用であることが示される。
【０１０４】
化学療法誘発性疼痛アッセイ
雄のＨａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット１５０〜２００グラムを７日間、生態動物圏に慣らす。その動物を一定の温度で、１２時間の明／１２時間の暗サイクルに維持し、水および食物を自由に得られる状態で３〜４匹の群で収容する。研究の１日目にビヒクルで開始して、１日に２回、１０ｍｇ／ｋｇ（経口）にて化合物、５ｍｇ／ｋｇにてモルホリンを投与し、研究の期間（１８日）、継続する。化学療法誘発性末梢神経障害を誘発させるために、１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）にてパクリタキセルを、４ｍｇ／ｋｇの累積投与のために、２、４、６および８日目に投与する。
【０１０５】
ラットを、後足を手にとることができるように、金網のプラットフォーム底を備える個々のプレキシガラスチャンバに入れる。１５分〜１時間の順化期間後、後足の足底中央（ｍｉｄ−ｐｌａｎｔａｒ）を坐骨神経分布内で評価する。剛性が対数増加する、一連の８つのフォンフレイヘア（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｈａｉｒ）（０．４１、０．７０、１．２０、２．００、３．６３、５．５０、８．５０および１５．１０ｇ）を後足に適用する。フォンフレイヘアをわずかに屈伸させるのに十分な力で足底面に対して垂直に与える。刺激を数秒の間隔で与える。足が激しく引き下がる場合、またはヘアを除去すると即座に後ろに下がることが観察される場合、陽性反応を記録する。研究の日に、行動のエンドポイントを投与の１時間後に評価する。ディクソンアップダウン（Ｄｉｘｏｎ  ｕｐ−ｄｏｗｎ）法を用いてスコアパターンを評価し、反応閾値に変換する（１９８０、Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ２０：４４１−４６２）。最大付与力は１５．１０グラムである。最初の行動評価を研究の１０日目に行い、その後の測定を研究の１２、１５および１８日目にする。
【０１０６】
結果を、１２匹／群のｎ匹について標準誤差と共に平均値（平均±ＳＥ）として表す。全ての統計的評価を、一元（ｏｎｅ−ｗａｙ）ＡＮＯＶＡ、続いてダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）法による対照群との比較を利用して実施する。ｐ＜０．０５である場合、統計的有意性を評価する。ＪＭＰ統計的分析ソフトウェア（ＳＡＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，バージョン６．０．２）を用いて統計的分析を実施する。
【０１０７】
【表７】
2013523740.tif 000043
＊は統計的有意性を示す
【０１０８】
標準誤差と共に平均足引っ張り潜伏時間を、上記の表において実施例１９、モルホリン、およびビヒクルについて示す。ビヒクルおよびモルホリンで処置した動物の両方と比較して、実施例１９で処置した動物は研究の期間にわたって異痛をほとんど発症しなかった。このように、本発明の実施例１９は、疼痛、特に化学療法誘発性末梢神経障害などの化学療法誘発性疼痛の予防において有用であることが示される。
【０１０９】
ビーグル犬における投与量毒性試験
１匹の雄および１匹の雌のビーグル犬を使用して、ＣＢ２アゴニストの単回強制経口投与後の急性毒性を評価する。そのイヌを個々に収容し、一定の温度および１２時間の明／１２時間の暗サイクルで維持する。ＣＢ２アゴニストをビヒクル（精製水中の１％ヒドロキシエチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ａｎｔｉｆｏａｍ  １５１０−ＵＳ）中で調製し、２ｍＬ／ｋｇの用量体積で経口強制投与する。イヌを死亡率および臨床的観察について観察する（投与前、２時間の投与後、その後、午後に１日１回）。残っている食物の毎日の視覚的評価により食料消費を評価する。投与前および投与の４８時間後、血液を回収して、血液学および臨床化学パラメーターに対する効果を評価する。投与の０．５、１、２、４、８および２４時間後に血液を回収して、濃縮の間に血漿の毒物動態を評価する。
【０１１０】
実施例１９を３０ｍｇ／ｋｇの単回経口投与にて上記のように実質的に試験した。投与後の臨床的観察は嘔吐および拡張した瞳孔に限定した。投与後、１９分、３９分および２時間において雌の犬においてのみ嘔吐を記録した。投与後、２〜４時間に雄および雌のイヌにおいて拡張した瞳孔を記録した。雌のイヌにおいて減少した糞および最小量の減少した食料消費も記録した。血液学に対する効果は、雌のイヌにおける網状赤血球数のわずかな減少（投与前と比べて３９％の変化）に限定した。３０ｍｇ／ｋｇにおける０〜２４時間の平均曲線下面積（ＡＵＣ０−２４ｈｒ）は４４４５１ｎｇ・ｈｒ／ｍＬであった。３０ｍｇ／ｋｇにおける平均最大濃度（Ｃｍａｘ）は７５３７ｎｇ／ｍＬであった。
【０１１１】
このように、本発明の特定の化合物は、３０ｍｇ／ｋｇにてイヌにおいて制限された毒性を有し、その結果として、ヒトにおいて許容される副作用プロファイルについての可能性が示される。
【国際調査報告】
2013523740.tif 000046
2013523740.tif 000047