(57)【要約】  本発明は、患者角膜において上皮創傷治癒を促進し、カルボキシメチルセルロースを含有し、有効量のケトロラクを含有する水性点眼液に関する。
2013523829.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．３５−０．４５％ｗ/ｖのケトロラク水溶液を含み、角膜創傷治癒を促進するために使われる組成物。
【請求項２】
前記水溶液が０．４５%ｗ/ｖのケトロラクトロメタミンである請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物がさらにカルボキシメチルセルロースを含み、かつ前記組成物が防腐剤を含まない、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前述のカルボキシメチルセルロースが、中粘度と高粘度のカルボキシメチルセルロースの組み合わせである、請求項２記載の局所用水性点眼液。
【請求項５】
６．８と７.４の間のｐＨを有する、請求項４記載の局所用水性点眼液。
【請求項６】
前述のカルボキシメチルセルロース濃度が０．２ないし２重量パーセントである、請求項４記載の局所用水性点眼液。 
【請求項７】
約６．８のｐＨを有する、請求項５記載の局所用水性点眼液。 
【請求項８】
前記溶液が界面活性剤及びキレート剤を含まない、請求項４記載の局所用水性点眼液。
【請求項９】
さらに中粘度および高粘度のカルボキシメチルセルロース、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、塩酸および精製水の混合物を含む請求項４記載の局所用水溶液。
【請求項１０】
カルボキシメチルセルロースとケトロラクの組合せが、ケトロラクのみを含む水溶液より多く、患者の目における吸収を増加させる、請求項９記載の局所用水溶液。
【請求項１１】
前記ケトロラクトロメタミンが、Ｒ−（＋）とＳ−（−）−のケトロラクトロメタミンのラセミ混合物として存在する、請求項１記載の局所用水溶液。
【請求項１２】
ケトロラクトロメタミンが結晶形混合物で存在する、請求項１記載の局所用水溶液。
【請求項１３】
前述の粘度が１０ないし３０ｃｐｓである請求項４記載の局所用水溶液。
【請求項１４】
前記カルボキシメチルセルロースが０．５％重量パーセントの量で存在する、請求項６記載の局所用水溶液。
【請求項１５】
前記溶液は、上皮細胞成長治癒を促進するために眼科手術の前後で少なくとも１日１回投与することができる、請求項４記載の局所用水溶液。
【請求項１６】
目に投与される前述の溶液が、カルボキシメチルセルロースを全く含まないケトロラク溶液と比較して、術後の目の角膜創傷治癒を加速する、請求項４記載の局所用水溶液。
【請求項１７】
０．４５％ｗ／ｖのケトロラクとカルボキシメチルセルロースを含む組成物を投与することにより、術後の患者における角膜上皮組織の治癒を加速する方法。
【請求項１８】
前述の組成物が局所用水溶液であり、かつ前述の局所用水溶液が患者の目に１日２回点眼されることを特徴とする、請求項１７の記載の方法。
【請求項１９】
前述のカルボキシメチルセルロースが、中粘度と高粘度のカルボキシメチルセルロースの組み合わせである、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
さらに中粘度と高粘度のナトリウムカルボキシメチルセルロース、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、塩酸及び精製水の混合物を含む、請求項１７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１０年４月９日に出願された米国仮出願第61/329,992号、２０１０年４月３０日に出願された米国仮出願第61/322,628号、２０１０年６月１１日に出願された米国仮出願第61/353,723号に関し、米国特許法第１２０条に基づく優先権を主張するものである。前出願の全文は、参照することにより、本明細書に組み入れられたものとする。
本発明は、医薬組成物に関する。より詳細には、本発明は、ケトロラクとして知られる５−ベンゾイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロリザイン−１−カルボン酸を含む局所用点眼液、および、角膜創傷治癒と角膜修復のためのケトロラクの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
非ステロイド性解熱鎮痛剤（ＮＳＡＩＤＳ）は、抗炎症性、 鎮痛性、および、解熱性の特徴を有する。ＮＳＡＩＤＳは、主として、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）抑制剤として働き、アラキドン酸カスケード内での内因性プロスタグランジン（ＰＧｓ）の産生を制限する。局所用ＮＳＡＩＤＳ は、術後炎症の制御、屈折手術後の痛み軽減、術中縮瞳の抑制、および、アレルギー性結膜炎の治療を目的として、眼科学において通常使用される。市販の局所用ＮＳＡＩＤＳは、 その活性薬剤、防腐剤の濃度、ｐＨ、および／または、付加的な界面活性剤の種類と濃度が異なっている可能性がある。局所用ＮＳＡＩＤＳは、びまん性表層角膜炎、角膜上皮下浸潤、上皮欠損、遅延性上皮治癒 、角膜知覚消失、潰瘍形成、および、穿孔を含む角膜合併症に関連付けられてきた。角膜上皮毒性は、局所製剤中の活性薬剤と防腐剤の両方、及び、既存の全身症状に起因しているが、角膜炎、角膜潰瘍形成および穿孔は、すべて防腐剤無添加製剤を使用している患者において報告されてきている。局所用ＮＳＡＩＤＳの角膜毒性は、マトリックス分解酵素（ＭＭＰｓ）の上方制御および、角膜細胞外基質の再形成に関わるエンドペプチダーゼに起因する可能性があることが、動物実験より示唆されている。
【０００３】
局所用ＮＳＡＩＤｓは、周術期設定において通常使用されるので、上皮治癒を阻害せず、実際に上皮創傷治癒を高める製剤を開発することは重要である。局所用ケトロラクは、１９９３年に最初に導入されたが、現在でも最も普通に使用される眼科用ＮＳＡＩＤである。眼科用ケトロラク０．４５％溶液（Acuvail（登録商標）, Allergan, Inc; Irvine, CA）は、耐容性を高めて、投与計画を減少しつつ、以前のケトロラク製剤の効果を維持することを目的に開発された。新規製剤ケトロラク０．４５％における変更は、防腐剤（ＢＡＫ）と界面活性剤 （ｏｃｔｏｘｙｎａｌ  ４０）の除去および、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の添加を含んでいるが、ＣＭＣには目の上での薬剤保持を長くする、眼表面を保護する効果があり、かつ角膜再上皮化をも促進する可能性がある。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、効果的な量のケトロラクを含むが、他の市販のケトロラク製品に比較して、ケトロラクの濃度が最適化されている水性眼科用製剤を提供する。本発明の水性眼科溶液は、カルボキシメチルセルロース、たとえば、カルボキシメチルセルロースナトリウムで、そのｐＨを約６．８から７．４の範囲に持ち患者の目に局所点眼した際に快適であるものを含んでおり、この際に、カルボキシメチルセルロースの濃度と好ましくはそのｐＨが選択されることで、患者の目におけるケトロラクの吸収増を与えるが、これは、カルボキシメチルセルロースを全部あるいは一部に含まない対照ケトロラク溶液と比較される。すなわち、そのケトロラクの吸収は、同じかより高い濃度のケトロラクを有する対照水性ケトロラク眼科溶液に比較して、おそらく１３０％以上である。
【０００５】
より好ましくは、本発明の水性眼科溶液は、そのｐＨを約６．８から７．４の範囲に持ち、特に、６．８に持つ。
【０００６】
より好ましくは、本発明の水性眼科溶液は、カルボキシメチルセルロースの濃度を、重量で約０．１から約２％を含み、さらにより好ましくは、重量で約０．５から約１．５％を含み、そしてもっとも好ましくは、約０．５％ｗ／ｖである。
【０００７】
さらにより好ましくは、本発明の水性眼科溶液は、中間の粘度と高い粘度のカルボキシメチルセルロースナトリウムの混合物を含む。
【０００８】
より好ましくは、本発明の水性眼科溶液は、効果的な量として、重量で０．２５から０．５０％のケトロラクを含み、または、重量で約０．４５％のケトロラクを含む。
【０００９】
より好ましくは、本発明の水性眼科溶液は、５から５０ｃｐｓの粘度を有し、好ましくは、１０から３０ｃｐｓの粘度を有する。
【００１０】
ケトロラクトロメタミンの濃度を最適化すると、臨床効果を維持する際の有害事象の発生を減少させることが、驚くべき事実として発見されている。加えて、最適化された濃度のケトロラクトロメタミンと、カルボキシメチルセルロースを組み合わせることで、製剤に関して驚くべきかつ明らかな利益が提供されること、すなわち製剤に必要とされている防腐剤、キレート剤、界面活性剤を一切用いずに製剤できることが判明している。従って、ケトロラクの吸収を増加させる方法を見つけることは、 最適化されている濃度のケトロラクを含む溶液が使用できる患者にとって、および、より高い濃度のケトロラクを含むケトロラク溶液に比較して、効果の点で類似の結果を得られる患者にとって、利益をもたらすことになる。
【００１１】
従って、本発明は、角膜創傷治癒を目的として、ケトロラクトロメタミンを重量で０．２５から０．５０ ％、より好ましくは０．３５％から０．４５％ｗ／ｖ、さらにもっとも好ましくは重量／体積で約０．４５％含有する水性の局所用点眼用組成物に関する。本発明はまた、媒体と高分子量のカルボキシメチルセルロースよりなる混合物を、０．２〜２％重量／体積で含み、より好ましくは０．５から１．５％重量／体積で含み、さらにもっとも好ましくは約０．５％ｗ／ｖで含む。本発明の他の局面は、手術前のおよび／または手術後の上皮創傷治癒を進める際のヒトの眼の痛み、または、角膜創傷の痛みを治療する方法、または予防する方法であって、患者に対してケトロラクトロメタミンとカルボキシメチルセルロースナトリウムとを含む無菌の組成物およびその混合物を局所投与することを含む方法であり、このときに使用されるケトロラクトロメタミンの濃度が重量／容量で０．２５から０．５０％、より詳細には、重量／容量で０．３５％から０．４５％、または約０．４５％ｗ／ｖであり、カルボキシメチルセルロースナトリウムの濃度が、重量／容量で０．２から２％、好ましくは重量／容量で０．５から１．５％、もっとも好ましくは、重量／容量で０．５％である方法に関する。
【００１２】
本発明の範囲を、いかなる方法においても制限する意図はないが、本発明に関係して特に興味深いのは、眼の痛みの治療、特に角膜屈折矯正手術（ＰＲＫ）手術の患者および白内障手術の患者で術後における眼痛治療で、角膜創傷治癒を改善する治療を目的として、０．４５％（ｗ／ｖ）のケトロラクトロメタミンを含む水性の局所用点眼用組成物の使用である。Ａｃｕｌａｒ（登録商標）製品に比較してより低い濃度のケトロラクが、本発明記載のとおり、臨床効果を維持している間、有害事象の発生を減少させかつ、快適性を高めるのは驚くべきことである。白内障摘出の１２時間前と１時間前に、患者の眼に０．５％ケトロラクトロメタミン点眼液を２滴（０．１ｍＬ）点眼すると、患者の眼９件中８件で、測定可能なレベルを達成した（ケトロラク濃度の中間値９５ｎｇ／ｍＬ眼房水、範囲４０から１７０ｎｇ／ｍＬ）。ケトロラクトロメタミンの眼への投与は、眼房水中のプロスタグランジンＥ2（ＰＧＥ2）レベルを下げる。薬剤を含まない対照点眼液を投与した眼の眼房水中では、ＰＧＥ2の濃度中間値はね８０ｐｇ/ｍＬであるが、０．５％のケトロラクトロメタミンを投与された眼では、２８ｐｇ／ｍＬとなった。
【００１３】
０.４５％ｗ／ｖのケトロラクトロメタミン点眼液を眼に投与すると、０．５％のケトロラクトロメタミンを使用した場合と比較して、ウサギの眼房水中でのケトロラクの生物学的利用率が２００％より大きくなり、かつ、虹彩―毛様体ではほぼ３００％に達する。この強調されたケトロラク生物学的利用率は、０．５％のケトロラクトロメタミン溶液によるＱＩＤ（１日４回）から、０．４５％のケトロラク溶液によるＢＩＤ（１日２回）へと、投薬頻度を下げる効果がある。全臨床データによると、０．４５％ケトロラク溶液の眼投与後の全身暴露レベルは、０．５％ケトロラクトロメタミン点眼液で達成されるレベルに比較できる。
【００１４】
〔発明を実施するための形態〕
本発明の実施様態のいくつかは、以下のとおりである。
【００１５】
１．０．３５−０．４５％ｗ/ｖのケトロラク水溶液含み、角膜創傷治癒を促進するために使われる組成物。
【００１６】
２．前記水溶液が０．４５ｗ/ｖのケトロラクトロメタミンであるパラグラフ１記載の組成物。
【００１７】
３．前記組成物がさらにカルボキシメチルセルロースを含み、かつ前記組成物が防腐剤を含まないことを特徴とするパラグラフ２記載の組成物。
【００１８】
４．前述のカルボキシメチルセルロースが、中粘度と高粘度 のカルボキシメチルセルロースの組み合わせである、パラグラフ２と３記載の局所用水性点眼液。
【００１９】
５．６．８と７．４の間のｐＨを有する、パラグラフ４記載の局所用水性点眼液。
【００２０】
６．前述のカルボキシメチルセルロース濃度が０．２ないし２重量パーセントである、パラグラフ４と５記載の局所用水性点眼液。
【００２１】
７．約６．８のｐＨを有する、パラグラフ５記載の局所用水性点眼液。
【００２２】
８．前記溶液が界面活性剤、防腐剤及びキレート剤を含まない、パラグラフ１、２、３、４、５、６および７記載の局所用水溶液。
【００２３】
９．さらに中粘度および高粘度のカルボキシメチルセルロース、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムニ水和物、水酸化ナトリウム、塩酸および精製水の混合物を含むパラグラフ４、７および８記載の局所用水溶液。
【００２４】
１０）カルボキシメチルセルロースとケトロラクの組合せが、ケトロラクのみを含みカルボキシメチルセルロースを含まない水溶液より多く、患者の目における吸収を増加させる、パラグラフ９記載の局所用水溶液。
【００２５】
１１）前記ケトロラクトロメタミンが、Ｒ−（＋）とＳ−（−）− のケトロラクトロメタミンのラセミ混合物として存在する、パラグラフ１、２、３、４、５、８、９および１０記載の局所用水溶液。
【００２６】
１２）ケトロラクトロメタミンが結晶形混合物で存在する、パラグラフ１、２、３、４、５、８、９、１０および１１記載の局所用水溶液。
【００２７】
１３）前述の粘度が１０ないし３０ｃｐｓであるパラグラフ４記載の局所用水溶液。
【００２８】
１４）前記カルボキシメチルセルロースが０．５％重量パーセントの量で存在する、パラグラフ３、４、６および８記載の局所用水溶液。
【００２９】
１５）前記溶液が、上皮細胞成長治癒を促進するために眼科手術の前後で少なくとも１日１回投与することができる、パラグラフ４と９記載の局所用水溶液。
【００３０】
１６）目への溶液投与が、カルボキシメチルセルロースを全く含まないケトロラク溶液と比較して、術後の目の角膜創傷治癒を、より大きな度合いで加速する、パラグラフ１、２、３、４、９、１０および１３記載の局所用水溶液。
【００３１】
１７）ケトロラクとカルボキシメチルセルロースの組成物を投与せずに行う場合と比較して、患者における角膜上皮組織の治癒が、より早く進行することを特徴とする、０．４５％ｗ／ｖのケトロラクとカルボキシメチルセルロースを含む組成物を投与することにより、眼科手術後の患者における角膜上皮組織の治癒を加速する方法。
【００３２】
１８）前述の組成物が局所用水溶液であり、かつ前述の局所用水溶液が患者の目に少なくとも１日２回点眼される、パラグラフ１７の記載の方法。
【００３３】
１９）前述のカルボキシメチルセルロースが、中粘度と高粘度のカルボキシメチルセルロースの組み合わせである、パラグラフ１７記載の方法。  
【００３４】
２０）前述の眼科手術が、レーザー外科手術、白内障手術、緑内障手術、屈折矯正手術、角膜手術、硝子体網膜手術、眼筋手術、眼形成手術、涙器を含む手術、光屈折手術、からなるグループより選択される、パラグラフ１７記載の方法。  
【００３５】
２０）さらに中粘度と高粘度のナトリウムカルボキシメチルセルロース、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、塩酸及び精製水の混合物を含む、パラグラフ１７記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】０.４５％ｗ／ｖケトロラク溶液の眼房水において、増加したケトロラク曝露および長期のケトロラク曝露に関して、実施例７における眼の薬物動態の結果を、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳ（登録商標）との比較で示している。
【００３７】
【図２】図１の結果を表で示したものであり、最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、曲線下面積（ＡＵＣ）、相対的生物学的利用能％が示されており、これらは、０.４５％ｗ／ｖケトロラク溶液の眼房水相対的生物学的利用能に関して、実施例７における眼の薬物動態の結果を、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳ（登録商標）との比較で示している。
【００３８】
【図３】実施例７における眼の薬物動態の結果を示しており、０.４５％ｗ／ｖケトロラク溶液の虹彩―毛様体における、増加したケトロラク曝露および長期のケトロラク曝露に関して、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳ（登録商標）との比較で示している。
【００３９】
【図４】図３の結果を表で示したものであり、最大血中濃度（Ｃｍａｘ）、曲線下面積（ＡＵＣ）、相対的生物学的利用能％が示されており、これらは、０.４５％ｗ／ｖケトロラク溶液の虹彩―毛様体における、増加したケトロラク曝露および長期のケトロラク曝露に関して、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳ（登録商標）との比較で示している。
【００４０】
【図５】虹彩―毛様体においての、０.４５％ｗ／ｖケトロラク１日２回投与に関する実施例７の多回投与シミュレーションを、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳ（登録商標）１日４回投与の比較で示している。
【００４１】
【図６】ヒト臨床試験における安全性と耐容性の結果を、０.４５％ｗ／ｖケトロラク対ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳの比較で示している。
【００４２】
【図７】最初の創傷がある角膜、および、トリトンＸ１００（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）１％で治療した後の角膜の、代表的画像を示している。
【００４３】
【図８】ケトロラク０.５％、０.４％および０.４５％で治療した角膜の代表的画像を示しており（ａ）、さらに、傷域染色の対応する強度（ｂ）が示されている。
【００４４】
【図９】ネパフェナク０．１％、ブロムフェナク０．０９％、ケトロラク０.４５％で治療した角膜における、残りの上皮傷域を示している。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
〔本発明の詳細な説明〕
アラガン社（Ａｌｌｅｒｇａｎ）が市販しているＡｃｕｌａｒ  ＬＳ（商標登録）製品（０．４０％ｗ／ｖケトロラク）の改良中に、驚くべきことに、０．４５％ケトロラクトロメタミンとカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）を含む試験製剤が、現行市販製品すなわちＡｃｕｌａｒ  ＬＳ（商標登録）に比較し、有意に優れたウサギの角膜吸収を示すということが見出された。さらに驚くべくことに、ケトロラクのある製剤が、角膜上皮創傷治癒を助けることも発見された。
【００４６】
２つの試験溶液の粘度は、事実上理想的であるので、対照製剤に比較して、角膜透過を上昇させる機構は、試験溶液の粘度のみによっては説明できない。事実、それぞれの粘度が１１ｃｐｓと２２ｃｐｓである違い以外は同一の、２つのカルボキシメチルセルロース含有溶液の比較では、眼房水中へのケトロラクの吸収は、似た結果を示した。理論に縛られることを意図しないが、カルボキシメチルセルロースナトリウムとケトロラクとの間に機能的関係があるか、または、カルボキシメチルセルロースナトリウムとケトロラク吸収を促進する角膜表面のある構成要素との間に機能的関係があるものと思われる。
【００４７】
本発明の水性点眼液の全ては、角膜の痛みを治療する、または、予防する際に用いられることを企図している。好ましくは、上述の角膜の痛みが、光学的角膜切除術（ＰＲＫ）または白内障手術の結果である際に、本発明の全溶液は用いられることを企図している。
【００４８】
本発明のひとつの重要な態様は、本発明の溶液が、角膜の痛みを治療する際に臨床的効果を維持しつつ、副作用を軽減するように最適化されている、ケトロラクトロメタミンの濃度を有することである。したがって、本発明に関連する組成物中のケトロラクトロメタミンの濃度は、好ましくは、０．３５％ないし０．４５％であり、より好ましくは、本発明の水性点眼液中のケトロラクトロメタミンの濃度が、容積あたり重量で０．４５％ケトロラクトロメタミンである。
【００４９】
カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）とは、セルロースのカルボキシメチル誘導体であり、セルロースをアルカリおよびクロロ酢酸と反応させることで作られる。上述の反応の結果、セルロースの骨格を形成しているグルコピラノースの水酸基の一部に、カルボキシメチル基が結合する。カルボキシメチルの置換割合は、グルコピラノース単位あたり、約０．６から０．９５の範囲で変動する。ＣＭＣは、通常、粘度を上げるためにナトリウム塩として、水溶液中で用いる。
【００５０】
カルボキシメチルセルロースは、いろいろな分子量のものが入手可能である。低分子量カルボキシメチルセルロースは、およそ９０，０００の平均分子量（Ｍｗ）を有し、その２％溶液は、２５℃において、約１．１ｃＰの粘度を有する。中分子量カルボキシメチルセルロースは、およそ２５０，０００の平均分子量（Ｍｗ）を有する。高分子量カルボキシメチルセルロースは、およそ７００，０００の平均分子量（Ｍｗ）を有し、その２％溶液は、２５℃において、約１２ｃＰの粘度を有する。
【００５１】
本発明の目的のためには、中分子量と高分子量のカルボキシメチルセルロースナトリウムの混合物を用いることが望ましい。例えば、２５/７５から７５/２５の範囲の割合のカルボキシメチルセルロース、好ましくは、３０/７０から７０/３０の範囲で、最も好ましくは、約３５/６５の割合の、中分子量／高分子量である、カルボキシメチルセルロースナトリウムである。
【００５２】
本発明に関係する組成物中のケトロラクトロメタミン濃度が、目の眼房水中へのケトロラクの吸収を、より以上に高めるという事実、およびカルボキシメチルセルロースを含むという事実は、本発明の溶液の、防腐剤、界面活性剤およびキレート剤を全く含まない調製を可能にする。このことは、従来技術に対する大きな利点である。すなわち従来技術では、防腐剤、界面活性剤およびキレート剤を含むケトロラク製剤が、目の炎症を引き起こす可能性があり、従来技術のケトロラク製剤に関する患者の受容状態が低くなり、かつ効果が劣るという結果につながっていた。
【００５３】
防腐剤という用語は、眼科技術において通常に理解される意味を持つ。防腐剤の使用は、複数回使用の眼科用薬剤における細菌汚染を防ぐことを目的としており、制限する意図はないが、例として、塩化ベンザルコニウム、安定化されたオキシクロロ複合体（別名Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標））、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ベンジルアルコール、パラベン、およびチメロサールが含まれる。好ましくは、本発明のケトロラク溶液は、防腐剤を含まない。
【００５４】
本発明中で使用されている界面活性剤という用語は、当該技術において通常に理解される意味を持つ。界面活性剤の使用は、治療効果のある薬剤、または、組成物中の他の不溶成分を安定化させるのを助けることを目的としている。陰イオン性、陽イオン性、両イオン性、双性イオン性、および非イオン性の界面活性剤は、本発明において、全て使用可能である。仮に、ある界面活性剤が、本発明の溶液中に含まれる場合には、好ましくは、非イオン性界面活性剤が用いられる。本発明の範囲を制限する意図はないが、有用な非イオン性界面活性剤の例をいくつか挙げると、ポリソルベート、ポロキサマ、アルコールエトキシレート、エチレングリコール―プロピレングリコール・ブロック共重合体、脂肪酸アミド、およびアルキルフェノールエトキシレート、およびリン脂質などがある。もっとも好ましくは、上述の界面活性剤は、平均４０のエトキシレート基を有するオクチルフェノールエトキシレートである。このタイプの界面活性剤は、またオクトキシノール―４０すなわちＩｇｅｐａｌ  ＣＡ−８９７（登録商標）として知られており、ローヌ・プーラン（Ｒｈoｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ）より、Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ−８９７（登録商標）商品名のもとに購入可能である。好ましくは、本発明のケトロラク溶液は、界面活性剤を含まない。
【００５５】
キレート剤という用語は、金属と複合体を作ることが可能な化合物のことであり、当該化学分野において通常の技術を有するひとによって理解できる。キレート剤は、防腐効果を強めるために、眼科組成物の中で使用される。制限を加える意図はないが、本発明の目的のために有用なキレート剤には、エデト酸二ナトウム、エデト酸カルシウム二ナトウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトウム、エデト酸塩二カリウムのようなエデト酸塩がある。好ましくは、本発明のケトロラク溶液は、キレート剤を含まない。
【００５６】
表面活性剤、防腐剤およびキレート剤に加えて、等張化剤および他の賦形剤が、眼科用組成物においてよく使用される。等張化剤は、眼科用組成物において、溶解された材料の濃度を望ましい等張性範囲に合わせるためによく使用される。等張化剤は、眼科技術分野の技術者によく知られており、制限を加える意図はないが、いくつか例を挙げると、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、および他電解質などがある。好ましくは、上述の等張化剤は塩化ナトリウムである。
【００５７】
本発明のひとつの好ましい実施様態は、０．４％ケトロラクトロメタミンを含み、重量／容量で、０．２から２.０％の範囲のカルボキシメチルセルロースを含む、水性点眼用組成物に関する
【００５８】
本発明のもっとも好ましい実施様態は、０．４５％（ｗ／ｖ）のケトロラクトロメタミンを含み、０．５％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウム、たとえば、中粘度と高粘度のカルボキシメチルセルロースナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、水酸化ナトリウム、塩酸および純粋の混合物を含む、水性点眼用組成物に関する。
【実施例】
【００５９】
実施例１
他に断りがない限り、この手順におけるすべての工程は室温で実施された。次の手順は、以下に示す表１に記載された量に従い行った。精製水を主たるバッチ容器に注入した。
混合を開始し、全ての物質成分を分散及び／又は溶解させるのに十分な渦を発生させるが、過度の曝気や発泡は起こさないようにした。以下の成分を、直接に上述の渦の中へと順に加えて、それぞれの成分が次の成分を加える前に溶解するようにした。投入する成分は順に、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム二水和物、六水和物、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースであるが、カルボキシメチルセルロースに関しては、６５％の中間分子量のカルボキシメチルセルロースと３５％の高分子量のカルボキしメチルセルロースの混合物を含む１パーセントの水溶液として加えた。前記溶液を、１５分かからない時間撹拌した。その後、一定量の１Ｎ水酸化ナトリウムを加えた。
ｐＨ を確認し、必要であれば１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて、７．３に調整した。 次に、ケトロラクトロメタミンを、「現状通りの」検定に基づいて加え、目視検査に基づいて完全に溶解するまで混合した。溶解後、 上記溶液のｐＨを再度確認し、必要であれば、１Ｎの水酸化ナトリウムまたは１Ｎの塩酸を用いて、ｐＨ７．３−７．５（最終目標は７．４）に調整した。 次に、バルク溶液が最終量になるまで精製水を加え、均一性が確認できるまで少なくとも１５分間混合した。次に、使用のため上記溶液を無菌ろ過した。
【００６０】
表１．本発明の０．４％ ケトロラクトロメタミン眼科用液剤
2013523829.tif 000003
【００６１】
実施例２
他に断りがない限り、この手順の全ての工程は室温で実施した。次の手順は、以下に示す表２記載の量に従った。主要なバッチ容器の９０％まで、精製水を満たした。精製水を主たるバッチ容器に注入した。混合を開始し、全ての物質成分を分散及び／又は溶解させるのに十分な渦を発生させるが、過度の曝気や発泡は起こさないようにした。以下の成分を、直接に上述の渦の中へと順に加えて、それぞれの成分が次の成分を加える前に溶解するようにした。投入する成分は順に、塩化ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、オクトキシノール−４０（７０％の保存溶液として）および塩化ベンザルコニウム（１０％の保存溶液として）である。加えた塩化ベンザルコニウムの量は、使用された保存溶液の検定を考慮に入れた。前記溶液を、１５分かからない時間撹拌した。次に、１Ｎの水酸化ナトリウム一定量、すなわち最終バルク製品の１リットルあたり１．８５ｍＬを加えた。ｐＨ を確認し、必要な場合には、１Ｎの水酸化ナトリウムまたは１Ｎの塩酸を用いて、１０．７−１１．０に調整した。次に、ケトロラクトロメタミンを「現状の」検定に基づいて加え、目視検査に基づき完全に溶解するまで撹拌した。溶解後、 溶液ｐＨを再度確認し、必要があれば、１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて、ｐＨ７．３−７．５（最終目標値は７．４）に調整した。次に、精製水を加え、バルク溶液を最終量にし、均一性を確かにするため少なくとも１５分間混合した。次に、使用のため上記溶液を無菌ろ過した。
【００６２】
表２．  ０．４％ ケトロラクトロメタミン眼科用液剤  （比較）
2013523829.tif 000004
【００６３】
実施例３
本実施例は、実施例１の方法に従い調製されたが、ただし、ナトリウムカルボキシメチルセルロースの代わりにヒドロキシプロピルセルロースを用いて、実施例１の組成物の粘度と同等の粘度を与えるのに十分な量で用いた。
【００６４】
実施例４
以下組成物の製造は、容量ベースとし、室温条件で、２つの主要部分から行った。各部分は別々に製造され、次に、制御されたシーケンスの下で混合し、無菌のバルク製品を製造した。最初の部分（部分１）は、カルボキシメチルセルロースナトリウムを水に溶解し、続いてバルクの加熱殺菌をする工程を含む。２番目の部分（部分２）は、ケトロラクトロメタミンと食塩を滅菌ろ過した水に溶解し、０．２ミクロンの膜を通し無菌圧力容器へと無菌濾過かる工程を含む。次に、無菌バルク溶液は、２０ミクロンのポリプロピレン膜フィルタを通すことで清澄ろ過を行い、充填機の貯蔵器へと移される。
【００６５】
無菌で、清澄ろ過後の溶液は、次に、ＵＤ充填機を用いて吹込‐充填‐密閉過程を経由し、着色剤含まず未使用のＬＤＰＥ樹脂を用いているＵＤ試料びんへと入れられる。充填はＩＳＯ５等級の環境において実施される。表示容量は０．４ｍＬであり０．９ｍＬの薬瓶に封入されている。
【００６６】
表３：    ０．４５％ｗ／ｖ ケトロラクトロメタミン眼科用液剤
2013523829.tif 000005
【００６７】
実施例５
眼房水ケトロラク薬物動態 の比較を、様々なｐＨを持つ０．４５％ケトロラクトロメタミン製剤をニュージーランドホワイトウサギに１滴点眼し、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ（登録商標）の場合と比較で実施。
【００６８】
研究の目的：
１）眼房水ケトロラク薬物動態 の比較を、様々なｐＨを持つ０．４５％ケトロラクトロメタミン製剤をニュージーランドホワイトウサギに１滴点眼し、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ（登録商標）の場合と比較で実施する。
２）この実施例は、組成物ｐＨを下げると、ケトロラクの眼への吸収が増すかどうかを測定するよう計画された。
３）さらに、この治験の目的の１つは、組成物の粘度を２２ｃｐｓから１１ｃｐｓへと減らした時の影響を調べるよう計画された。
【００６９】
この研究の詳細は次の通りである：
３種の０．４５％ ケトロラクトロメタミン製剤および Ａｃｕｌａｒ  ＬＳの投与に伴う、ウサギ眼房水のケトロラク濃度
【００７０】
表４
2013523829.tif 000006
【００７１】
前記研究の結果は、以下の表５で報告する。
表５  ＰＫパラメーター
2013523829.tif 000007
【００７２】
結果の要約：
ナトリウム カルボキシメチルセルロースを含む製剤は、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ （登録商標）に比べて、より優れた結果を示し、相対的生物学的利用能が、１３３％（０．４５％Ｋｅｔｏ、２２ｃｐｓ、ｐＨ７．２の場合）から、２０２％  （０．４５％Ｋｅｔｏ、２２ｃｐｓ、ｐＨ６．８の場合）までの範囲となった。しかしながら、明らかなｐＨ効果なく、その理由は０．４５％Ｋｅｔｏ、２２ｃｐｓ、ｐＨ７．４が、１５３％の相対的生物学的利用能を有するためであり、もちろん１つの特異な結果が、この所見を与えている可能性もある。しかし、ｐＨ６．８を有する溶液は、最高の生物学的利用能を示した。
【００７３】
実施例６
多施設共同、無作為化、二重盲検、並行群での研究が、実施例２及び３の、０．４％ ケトロラクトロメタミン製剤を使用して行われる。被験者は、ＰＲＫ手術を片方だけ受けた１５７人の患者（７８−７９／群）から成る。この治験の重要な選択基準は、各被験者が、a) 初診後７日以内で光学的角膜切除術（ＰＲＫ）を片方の眼に受ける候補者である、ｂ）２０／１００又はそれ以上の最良矯正ＥＴＤＲＳ視力がある、ｃ）保護ソフトコンタクトレンズの着用が可能なことである。 重要な選択基準は、眼の屈折矯正手術の履歴、及び治験薬とその賦形剤、Ｔｙｌｅｎｏｌ＃３（登録商標）又は Ｏｃｕｆｌｏｘ（登録商標）にたいする感受性である。患者の人口統計を、表６に示す。合計で１５７人の患者は、２０歳から６６歳の年齢範囲に収まった。治療群間で、著しい人口統計学的差異はない。
【００７４】
表６：患者の人口統計
2013523829.tif 000008
【００７５】
各被験者は、治験薬剤治療の５分前にＯｃｕｆｌｏｘ（登録商標）を受ける。  次に、被治験者は、実施例２又は３のケトロラクトロメタミン０．４％点眼液を受けるが、４日間まで１滴を１日４回点眼する。次に、全ての被験者は、Ｔｙｌｅｎｏｌ＃３（登録商標）を飲むよう指示を受けるが、これは、我慢できない痛みに対して必要である（救急薬剤）患者は日付と時刻印のついた電子手帳を使用し、彼らが体験する眼の痛みを次のうちから１つを選んで記録する：痛みなし、軽度の痛み、中程度の痛み、激しい痛み、耐え難い痛み。
【００７６】
ＰＲＫ後最初の１２時間に実施例２の溶液を受け取った被験者は、実施例３の溶液を処方された被験者と比較すると、痛みの強度がより少ない。特に、ＰＲＫ後最初の１２時間に、実施例２の溶液を処方された被験者群は、実施例３の溶液を受け取った被験者群と比較して、激しい又は耐え難い痛みを感じる患者がより少なかった。特に、実施例２の溶液を処方された被験者群により報告された疼痛強度の中央値は、実施例３の溶液処方された被験者群と比較して１度分少なかった（中程度の痛み  対  激しい痛みを、０の痛みなしから４の耐え難い痛みまでの５ポイントの尺度で表す）。さらに、疼痛強度も、実施例３の溶液を処方された被験者群と比較して、実施例２の溶液を処方された被験者群が少なかった。
【００７７】
この臨床治験により、溶液のケトロラク濃度及び粘度が同じであっても、ナトリウムカルボキシメチルセルロースを含まない溶液に比較すると、本発明の溶液は、ケトラックの吸収度をより高めることがわかった。
【００７８】
要約すると、０．４％ケトロラク製剤はＰＲＫ後の眼の痛みに関して、臨床的に有効である。０.４ ケトロラクトロメタミンで治療を受けた患者−ナトリウムカルボキシメチルセルロースを含む溶液で治療を受けた患者は、ヒドロキシプロピルセルロースを含む溶液で治療を受けた患者と比較して、痛みの軽減が有意に大きくかつ早くなり、また救急薬剤の使用が少なかった。
【００７９】
実施例７
ウサギの眼によるケトロラクトロメタミン０．４５％の薬物動態評価
ＮＺＷウサギ／雌
2013523829.tif 000009
結論：
１）Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ（登録商標）と比較した際の、ケトロラクの相対生物学的利用能における増加。
２）増加したケトロラク濃度は、投与後より長く維持される。 
３）これらのデータは合わせて、投与頻度を１日に４回から１日２回への減少を支持する。
【００８０】
表１２：  安全性および耐容性の結果
2013523829.tif 000010
【００８１】
結果：
半日で５回投与の場合、Ａｃｕｌａｒ０．４５％は安全で良好な耐容性を示し、ＡＣＵＬＡＲ  ＬＳに比較してかなり好ましい結果となった。  
本発明は、例示された実施様態の範囲に制限されるものではなく、例示された実施様態は本発明の特定側面の例示を意図するのみである。最初に提起したように、ここで公表された実施様態に加えて、本発明の様々な修正変更は、請求項を含め、明細書を注意深く読むことにより、当業者には明白であろう。そうした修正変更の全ては、別記請求項の範囲に含まれると考えられる。
【００８２】
実施例８
角膜創傷治癒
治験が報告してきたのは、局所用ＮＳＡＩＤＳの角膜毒性は、マトリックス分解酵素（ＭＭＰｓ）の上方制御、角膜細胞外基質の再形成に関わるエンドペプチダーゼに起因する可能性である。局所用ケトロラクの添加は、いくつかの他の局所用ＮＳＡＩＤＳの添加と同様に、無傷角膜と上皮創傷清拭角膜との両方において、ＭＭＰ−１（コラゲナーゼ）、ＭＭＰ−２（ゼラチナーゼ）およびＭＭＰ−８（コラゲナーゼ）の産生を刺激することが、動物モデルで示されている。局所用ＮＳＡＩＤｓは周術期設定において通常使用されるので、上皮治癒を妨げないような製剤の開発は重要である。
【００８３】
眼科用ブロムフェナク０．０９％（Ｘｉｂｒｏｍ（登録商標）；  ＩＳＴＡ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）6及びネパフェイク０．０１％（Ｎｅｖａｎａｃ（登録商標）；Ａｌｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，Ｆｏｒｔ  Ｗｏｒｔｈ，ＴＸ）7が、他の保存可能な局所用ＮＳＡＩＤｓである。ケトロラク０．４５％製剤にＣＭＣを加えＢＡＫを取り除くことで、以前のケトロラクと比較し、またブロムフェナクやネパフェナクと比較して、角膜上皮創傷治癒が改善されることに繋がるとする仮説が立てられた。この仮説は、豚由来の角膜器官培養モデルを使用して試験されている。
【００８４】
創傷治癒に関する豚の角膜モデルが開発されているが、これは、以前には、角膜再上皮化における細胞増殖因子の役割を評価するのに使用されてきた。ケトロラク製剤の変遷を考慮し、現在の治験は、ケトロラク０．４５％新製剤の創傷治癒に及ぼす影響を、前世代のケトロラク (０．４％および、０．５％)、 ブロムフェイク０．０９％及びネパフェイク０．１％と比較するよう計画された。
眼科用治験薬製剤
2013523829.tif 000011
ＣＭＣ：カルボキシメチルセルロース
ＢＡＫ：塩化ベンザルコニウム.
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸（エデト酸ナトリウム）
【００８５】
この実施例においては、豚の上皮創傷清拭角膜を、ケトロラク分子の種々の製剤曝露した。すなわち、ケトロラク ０．４５％（Ａｃｕｖａｉｌ（登録商標）、Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ）、ケトロラク ０．４％（Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ（登録商標）、Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ）、およびケトロラク０．５％（Ａｃｕｌａｒ（登録商標）、Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｎｃ）である。  簡単に述べると、豚の眼を地元の食肉処理場より入手し、湿室中で氷冷して研究室へと搬送し、同日に角膜培養のための処理を行った。上皮創傷は、５−ｍｍのトレフィン（穿孔器）を用いて中央角膜の一領域の境界を画定した後、小型メスを用いて円内の上皮を除去し、無傷の基底膜を残すことにより作られた。約４ｍｍの輪部結膜の存在を有する角膜−強膜の縁を、切除し、滅菌済みのリン酸緩衝化生理食塩水ですすいだ。切除された角膜は、無菌容器中に上皮側を下にして置いた。
【００８６】
次に、内皮角膜の凹面を、１％濃度のアガロースおよび１ｍｇ／ｍｌ濃度のラット尾腱コラーゲンとを含み４２°Ｃに維持された最少必須培地（ＭＥＭ）で満たした。この混合物をゲル化させた。保護ゼリーを付けたままの角膜を、反転し（内皮側が下になる）、次に３５−ｍｍデッシュへと移した。中央角膜の表面に、培養液（〜２ｍｌ）を輪部結膜が隠れるまで滴下し、上皮細胞は空気に曝された状態とした。 次に、上記角膜を、加湿された５％ＣＯ2培養器に入れて、最少必須培地（ＭＥＭ）中３７℃の条件で２４時間培養し、初期創傷治癒を確実なものとした。基本手順は、以下に示すようにして実施した。
・  ５ｍｍの中央上皮創傷を、トレフィンを用いて、新規分離された豚角膜中に作った。
・  ２４時間後、角膜を次のいずれかの方法で１０分間培養した。；
―  ５０μＬ最少必須培地（ＭＥＭ）(ネガティブコントロール)
―  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００(ポジティブコントロール)
―  ＮＳＡＩＤ（ケトロラク０．４５％、ケトロラク  ０．４％、またはケトロラク０．５％）
・  角膜を３ｍＬ  ＰＢＳで２度すすぎ、２ｍＬの新鮮な最少必須培地（ＭＥＭ）を加えた。
・  角膜を、さらに２４時間をあて創傷治癒を行った後、リチャードソン染色溶液での着色に供した。
・  残された創傷部を撮影し、染色強度をＡｄｏｂｅ（登録商標）Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）を用いて定量し、ピクセルでの面積として表した。
【００８７】
２４時間後、５０−μＬ容量の最少必須培地（ＭＥＭ）、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（１％；Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）、 または、治験薬 （ケトロラク０．４５％、ケトロラク０．４％、ケトロラク０．５％、ネパフェナク０．０１％、  またはブロムフェナク０．０９％）を、 上皮創傷表面に１０分間つけた。ネガティブコントロールとして最少必須培地（ＭＥＭ）のみを使用し、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００をポジティブコントロール)として使用した。角膜は、３ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水で２度すすぎ、さらに２４時間、新鮮な最少必須培地（ＭＥＭ）２ｍＬ中で培養した後、着色に供した。次に、残った創傷部位を、リチャードソン染色溶液で着色し、撮影した。先に記載したように、着色部位をＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）（Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、（ピクセルで）定量した。各治療群のそれぞれにおいて、合計５個の角膜を使用した。  
【００８８】
データは、残存創傷部位の平均値±標準偏差として示した。Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ  ｐｏｓｔｔｅｓｔを含む、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ：analysis of variance）を、を実験群間の統計比較に使用した。Ｐ値＜．０５は、統計的に有意とみなした。
【００８９】
５ｍｍのトレフィンで誘発された元の創傷部位の平均値（ＳＤ）は、 ２００，５０６±４，３６３ピクセルであった。 ４８時間の時点で、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００  １％を用いて治療した角膜の場合、平均値（ＳＤ）として、５９，５０９±４，８５０ピクセル の残留創傷部位があった（表７）。ＭＥＭ（最少必須培地、対照）、ケトロラク０．４５％、ケトロラク０．４％、および、ケトロラク０．５％の、それぞれでの治療後４８時間時点での残留創傷部位の平均値（ＳＤ）は、それぞれ、２，９６９±１６３３ピクセル、５８６±２９９ピクセル、１０，２２８±７，５４１ピクセル、および、  ５０，６７４±３３，４０９ピクセルであった（表８）。ＭＥＭ（最少必須培地、対照）、ケトロラク０．４５％、ケトロラク０．４％、および、ケトロラク０．５％の、それぞれで治療された角膜に比較して、ケトロラク０．４５％で治療された角膜では、残留創傷部位の平均値が有意に小さかった（Ｐ＜．０５）。一方で、ケトロラク０．５％で治療された角膜の残留創傷部位の平均値は、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００  １％で治療されたものに比較して、計統上の違いは見られなかった。
【００９０】
表７と表８に示される結果によって、ＭＥＭ（最少必須培地）ネガティブコントロール（薬剤なし）に比較して、ケトロラク０．４５％で治療した角膜が、より優れた創口閉鎖を示したことがわかる（Ｐ＜．０５）。ケトロラク０．４５％で治療した角膜は、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ポジティブコントロール、および、 今までのケトロラク製剤（Ａｃｕｌａｒ（登録商標）、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ（登録商標））に比較して、より優れた創口閉鎖を示した（Ｐ＜．０５）。
【００９１】
薬剤処方されなかった眼に比較して、ケトロラク０．４５％を用いた治療群では、角膜創傷部位が明らかに減少した（Ｐ＜．０５）ことを、図８は示す。また、従来製剤に比較して、ケトロラク０．４５％を用いた治療群では、創傷面積が有意に減少した（Ｐ＜．０５）。
【００９２】
実施例９
角膜創傷治癒
この実施例では、２つの並行群間比較試験を連続して行なったが、これは、腐処理していないケトロラク０．４５％を用いて治療をした生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）豚角膜における上皮創傷閉鎖を評価することを目的としており、防腐処理されたケトロラク０．４％、ケトロラク ０．５％、および、ケトロラク０．４５％との比較により、さらにブロムフェナク０．０９％、ネパフェナク  ０．１％との比較により実施した。基本手順は次のように行われた。
・  新規調製された豚中央角膜上の部位を、トレフィンを用いて画定することにより、５ｍｍの中央上皮創傷を作った（１群あたり、ｎ＝３−５）。
・  初期創傷回復を確実にするため、角膜は、ＭＥＭ（最少必須培地）中において、エアリフト（送気）条件下で２４時間培養した。
・  ５０−μＬ容量のＭＥＭ（最少必須培地）、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００界面活性剤、または、治験薬を、１０分間上皮創傷表面にのせた。ＭＥＭ（最少必須培地）のみのものをネガティブコントロールとして使用し、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００をポジティブコントロールとして使用した。
・  角膜を、３ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２度洗い、さらに２４時間、新鮮なＭＥＭ（最少必須培地）２ｍＬ中で培養したのち、着色に供した。
・  次に、残存創傷部位をリチャードソン染色液で着色し、撮影した。
・  着色強度は、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  （登録商標）（Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．；Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して数値化し、ピクセルの面積で表した。
【００９３】
動物モデルにおいては、従来のケトロラク製剤に比較して、および、ブロムフェナクとネパフェナクの両薬に比較しても、ケトロラク０．４５％を用いると、より急速創傷治癒につながることが、研究結果により示されている。ＭＥＭ（最少必須培地）ネガティブコントロール（薬剤なし）の場合に比較して、ケトロラク０．４５％で治療した角膜は、同等かまたは有意に優れて、創口閉鎖をもたらした。このモデルにおいては、他の薬剤使用の場合と比較して、ケトロラク０．４５％にさらされた角膜で創口閉鎖がより進むのは、カルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）の添加に起因する可能性があり、さらに、その製剤中にＢＡＫを含まないことに起因する可能性がある。ＣＭＣは、通常使用される粘性強化剤である。細胞培養において、ＣＭＣは上皮細胞移動及び細胞増殖を高める 
【００９４】
実施例９において、ＭＥＭ（最少必須培地）コントロール、ケトロラク０．４５％、ブロムフェナク０．０９％、  および、ネパフェナク０．１％のそれぞれで治療した場合、それぞれの角膜上の残留創傷面積の平均値（ＳＤ）は、４８時間の時点で、それぞれ、５６５±１，２６３ピクセル、  ３２２±２２９ピクセル、２９，０９３±１４，２９５ピクセル、および、４７，３２２±１３，７３６ピクセルであった（表９）。ブロムフェナク０．０９％またはネパフェナク０．１％  で治療した角膜と比較すると、ケトロラク０．４５％を用いて治療した角膜において、残留創傷面積は有意により小さくなった（Ｐ＜．０１）。ブロムフェナク０．０９％で治療した角膜に比較し、ネパフェナク０．１％で治療した角膜は、残留創傷面積の平均値が、有意により大きくなった（Ｐ＜．０１）。ネパフェナク０．１％で治療した角膜の残留創傷面積の平均値は、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００  １％で治療した角膜の残留創傷面積の平均値と統計上の差異はなかった。
【００９５】
表９に示されるように、ブロムフェナク、ネパフェナク、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００にさらされた角膜と比較すると、ケトロラク０．４５％にさらされた角膜では、残留創傷面積の平均値が明らかに減少した（Ｐ＜．０１）。ＭＥＭ（最少必須培地）コントロール（薬剤なし）の場合に比較すると、ブロムフェナク、ネパフェナクおよびＴｒｉｔｏｎＸ−１００のそれぞれで治療した角膜における、残留創傷面積が、有意に大きくなっていた（Ｐ＜．００１）。ネパフェナク及びＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００にさらされた角膜と比較して、ブロムフェナクに曝された角膜の残留創傷面積は有意に減少した（Ｐ＜．０１）。ネパフェナクとＴｒｉｔｏｎＸ−１００とのそれぞれで治療した眼の残留創傷面積の比較では、統計上の差異は全く検出されなかった。
【００９６】
結論
他のＮＳＡＩＤ類および今までのケトロラク製剤と比較すると、ケトロラク０．４５％は、動物モデルにおいて、より急速な上皮創傷治癒を提供した。 創傷治癒における差異は、ケトロラク０．４５％の中の、ＣＭＣの存在に起因すると思われ、および／または、ＢＡＫの欠落に起因すると思われる。今回の研究結果では、動物モデルにおいては、以前のケトロラク製剤に比較して、ケトロラク０．４５％の方がより急速な創傷治癒をもたらすことが示されている。活性薬剤にＣＭＣを添加することで、組織培地単独に比較し、より早い創傷治癒効果が得られた。ケトロラク０．４％で治療した角膜に比較すると、ケトロラク０．４５％で治療した角膜の方に、より急速な上皮細胞治癒が観察された。
【図１】
2013523829.tif 000012
【図２】
2013523829.tif 000013
【図３】
2013523829.tif 000014
【図４】
2013523829.tif 000015
【図５】
2013523829.tif 000016
【図６】
2013523829.tif 000017
【図７】
2013523829.tif 000018
【図８】
2013523829.tif 000019
【図９】
2013523829.tif 000020
【国際調査報告】
2013523829.tif 000021
2013523829.tif 000022
2013523829.tif 000023
2013523829.tif 000024