(57)【要約】本発明は、下記一般式Ｉの構造を有するハロゲン化ジデオキシ糖誘導体を開示し、2013515750.tif 000078式中、ＸおよびＲ１〜Ｒ４の定義は、明細書中の記載を参照する。本発明の実験結果から、化合物１〜１４は、多くの人腫瘍細胞の成長に対して、比較的に強い抑制作用効果を有し、抗癌剤の調製に用いられることが示される。
2013515750.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式Ｉで表す化合物を有することを特徴とする、ハロゲン化ジデオキシ糖誘導体。
【化１】
2013515750.tif 000057
式中、Ｘはハロゲン、
【化２】
2013515750.tif 000058
【化３】
2013515750.tif 000059
または
【化４】
2013515750.tif 000060
であり；
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
Ｒ３、Ｒ４は、それぞれ各々ＯＨまたはＯＡｃである。
【請求項２】
前記の誘導体が、一般式ｂで表す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の誘導体。
【化５】
2013515750.tif 000061
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
前記の一般式ｂで表す化合物は、化合物１、２、３、４を含み、その構造式が下記のとおりである。
【化６】
2013515750.tif 000062
化合物１、２、３、４は、いずれも白色粉末である。
融点：
【表１】
2013515750.tif 000063
旋光：
【表２】
2013515750.tif 000064
【請求項３】
前記の誘導体が、一般式ｃで表す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の誘導体。
【化７】
2013515750.tif 000065
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
前記の一般式ｃで表す化合物は、化合物５、６、７、８を含み、その構造式が下記のとおりである。
【化８】
2013515750.tif 000066
化合物５、６、７、８は、いずれも白色粉末である。
融点：
【表３】
2013515750.tif 000067
旋光：
【表４】
2013515750.tif 000068
【請求項４】
前記の誘導体が、一般式ｄで表す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の誘導体。
【化９】
2013515750.tif 000069
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
前記の一般式ｄで表す化合物は、化合物９、１０、１１、１２を含み、その構造式が下記のとおりである。
【化１０】
2013515750.tif 000070
化合物９、１０、１１、１２は、いずれも白色粉末である。
融点：
【表５】
2013515750.tif 000071
旋光：
【表６】
2013515750.tif 000072
【請求項５】
前記の誘導体が、一般式ｅで表す化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の誘導体。
【化１１】
2013515750.tif 000073
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
前記の一般式ｅで表す化合物は、化合物１３、１４を含み、その構造式が下記のとおりである。
【化１２】
2013515750.tif 000074
化合物１３、１４は、いずれも白色粉末である。
融点：
【表７】
2013515750.tif 000075
旋光：
【表８】
2013515750.tif 000076
【請求項６】
下記の工程を含むことを特徴とする、請求項１に記載のハロゲン化ジデオキシ糖誘導体の調製方法。
【化１３】
2013515750.tif 000077
具体的な工程は、下記のとおりである。
（１）ジデオキシグルコースブロミドｃの調製
２−デオキシグルコースまたは３−デオキシグルコースａを原料にして、無水酢酸とを１５〜３５℃で攪拌しながら２〜５時間反応させ、前記原料と無水酢酸とのモル比を１〜１．５：１５〜２０にし、反応完了後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、次に、無水溶剤クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて、結晶、再結晶を行い、化合物ｂを得る。
モル比が１〜１．５：３．５〜５である化合物ｂとＨＢｒとを、０．５〜１ｋＰａの加圧条件下、２０〜４５℃の反応温度で、攪拌しながら１０〜１８時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水溶剤クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて、結晶、再結晶を行い、化合物ｃを得る。
（２）ジデオキシグルコースブロミドとナイトロジェンマスタード、ポドフィロトキシンとの合成反応
１）ジデオキシグルコースブロミドと［Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−クロロエチル）］−ジアミドりん酸との合成反応
化合物ｃと化合物［Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−クロロエチル）］−ジアミドりん酸を原料にして、前記化合物ｃと化合物［Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−クロロエチル）］−ジアミドりん酸とのモル比を１：１．２〜１．５にして、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用い、Ａｇ２ＣＯ３またはＣｕＳＯ４を触媒として用い、前記触媒と化合物ｃとのモル比を０．０５〜０．１：１にし、反応温度を１５〜３５℃にし、攪拌しながら５〜１０時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水溶剤クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｄを得る。
２）ジデオキシグルコースブロミドとＮ−ビス−クロロエチル−アミドりん酸との合成反応
化合物ｃと化合物Ｎ−ビス−クロロエチル−アミドりん酸を原料にして、前記化合物ｃと化合物Ｎ−ビス−クロロエチル−アミドりん酸とのモル比が１：１．２〜１．５であり、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用い、Ａｇ２ＣＯ３またはＣｕＳＯ４を触媒にし、前記触媒と化合物ｃとのモル比を０．０５〜０．１：１にし、反応温度を２０〜４０℃にし、攪拌しながら５〜１０時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｅを得る。
３）ジ−デオキシグルコースブロミドと４’−脱メチル化体のポドフィロトキシンとの合成反応
化合物ｃと化合物４’−脱メチル化表のポドフィロトキシンを原料にして、前記化合物ｃと４’−脱メチル化体のポドフィロトキシンとのモル比を１：１．８〜２．２にし、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用い、三フッ化ホウ素エーテルを触媒にし、前記の触媒と化合物ｃとのモル比を０．１〜０．１５：１にし、０〜３０℃で攪拌しながら１２〜１５時間に反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフラン、トルエンなどの溶剤の中の一種または混合溶剤を用い、次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｆを得る。
【請求項７】
請求項１に記載のハロゲン化ジデオキシ糖誘導体の抗癌薬の調製における応用。
【請求項８】
請求項２〜５のいずれか１項に記載のハロゲン化ジデオキシ糖誘導体の抗癌薬の調製における応用。
【請求項９】
前記抗癌剤が、悪性黒色腫、膵臓癌、甲状腺未分化癌、転移性骨悪性腫瘍、白血病、リンパ癌、骨腫、軟骨肉腫、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆嚢癌、直腸癌、大腸癌、結腸癌、肺癌、鼻咽腔癌、摂護腺癌、神経系癌、乳腺癌、卵巣癌、子宮頸癌子宮癌などの治療に用いられるものである、請求項７または８に記載の応用。
【請求項１０】
前記抗癌剤が、請求項１に記載のハロゲン化ジデオキシ糖誘導体および薬用賦形剤を用いて調製される経口投与の内服剤形及び非経口投与の注射剤または外用剤形を含む、請求項７または８に記載の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品化学、具体的にハロゲン化ジデオキシ糖誘導体ならびにその調製方法および応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここ３０年間では、糖系物質の多くの生物学的機能は、途切れなく掲示されてきた。現在、多くの糖系が生体免疫力を向上させ、滅菌及び抗癌などの効果を有することが科学者らにより見出された。その中で、２−デオキシグルコースと命名された糖は、環状構造中の２位の−ＯＨがＨ原子、アルキル基、アミノ基などの官能基に置換されていて、抗癌の効果を示す。１９８２年に、Ｇｅｏｒｇｅ  Ｔｉｄｍａｒｓｃｈらは、２−ＤＧ（２−デオキシグルコース）の抗腫瘍効果について特許「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ２−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ」（Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  ＮＯ．６９７９６７５）を出願した。現在、デオキシ糖に関する研究は、多数位のデオキシ化及びその誘導体に発展している。２００９年の最新の特許（ＮＯ．ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４５１５７）において、２位ハロゲン化デオキシグルコースおよびマンノースならびに３位および４位デオキシ化マンノースは開示された。しかしながら、科学者らは、デオキシ糖の作用機構を研究した際に、単なる２−デオキシグルコースは抗腫瘍の効果があまり著しくないことが発見された、したがって、科学者らは、それを改善し、より吸収されやすい、より抗腫瘍効果の高いデオキシ糖誘導体を開発している。
【０００３】
本発明者は、大量の研究をし、デオキシ糖に対してアセチル化及びハロゲン化などの構造上の改造により、当該デオキシ糖がより簡単で、より速く腫瘍細胞に入ることを発見し、また、当該１位の水酸基がハロゲン化され、生成したハロゲン化デオキシ糖の効果が著しく強くなり（普通の腫瘍細胞試験において強い効果を示した）、さらに当該誘導体も調製されやすいことを発見した。これに基づき、本発明者は、さらに研究探索し、アセチル化デオキシ糖が、ナイトロジェンマスタード、ポドフィロトキシンなど抗腫瘍効果のある官能基と結合すると、その治療効果が大きく向上されたことを発見し、また、その抗腫瘍の効果が幅広く、胃癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆嚢癌、直腸癌、大腸癌、結腸癌、肺癌、鼻咽腔癌、摂護腺癌、神経系癌、乳腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌などの普通の癌に対してよい治療効果を示すだけでなく、悪性黒色腫、膵臓癌、甲状腺未分化癌、転移性骨悪性腫瘍、白血病などの高度悪性癌に対しても著しい治療効果を示すことも発見した。その作用機構に対する研究により、このような化合物は、癌細胞に入ると、多種の酵素に作用され、まず脱アセチル化し、ついでグリコシド結合が開裂し、糖、ナイトロジェンマスタード、ポドフィロトキシンなどに分解すると同時に、腫瘍細胞に作用し、二重の抗腫瘍の効果を有することと発見した。
【発明の概要】
【０００４】
発明の内容
本発明が解決しようとする課題は、前述の不足点を克服し、デオキシ糖の構造に対する改造を研究・設計し、二重抗腫瘍の効果を持たせ、治療範囲を更に広くさせ、悪性黒色腫、膵臓癌、甲状腺未分化癌、転移性骨悪性腫瘍、白血病などの高度悪性癌に対して著しい治療効果を示すようにさせることにある。
【０００５】
本発明は、下記一般式Ｉで表す化合物を有するハロゲン化ジデオキシ糖誘導体を提供する。
【０００６】
【化１】
2013515750.tif 000003
【０００７】
式中、Ｘは、ハロゲン、
【０００８】
【化２】
2013515750.tif 000004
【０００９】
【化３】
2013515750.tif 000005
【００１０】
または
【００１１】
【化４】
2013515750.tif 000006
【００１２】
であり；
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
Ｒ３、Ｒ４は、それぞれＯＨまたはＯＡｃである。
【００１３】
本発明は、一般式ｃで表す化合物を提供し、その構造式は、下記である。
【００１４】
【化５】
2013515750.tif 000007
【００１５】
Ｒ１、Ｒ２はそれぞれＨまたはＢｒであり；
一般式ｃで表す化合物は、化合物１、２、３、４を含み、構造式は、下記のとおりである。
【００１６】
【化６】
2013515750.tif 000008
【００１７】
化合物１、２、３、４は、いずれも白色粉末である。
【００１８】
融点：
【００１９】
【表１】
2013515750.tif 000009
【００２０】
旋光
【００２１】
【表２】
2013515750.tif 000010
【００２２】
本発明は、一般式ｄで表す化合物を提供し、その構造式は下記である。
【００２３】
【化７】
2013515750.tif 000011
【００２４】
Ｒ１、Ｒ２は、ぞれぞれＨまたはＢｒであり；
一般式ｄで表す化合物は、化合物５、６、７、８を含み、構造式は、下記のとおりである。
【００２５】
【化８】
2013515750.tif 000012
【００２６】
化合物５、６、７、８は、いずれも白色粉末である。
【００２７】
融点：
【００２８】
【表３】
2013515750.tif 000013
【００２９】
旋光
【００３０】
【表４】
2013515750.tif 000014
【００３１】
本発明は、一般式ｅで表す化合物を提供し、その構造式は下記である。
【００３２】
【化９】
2013515750.tif 000015
【００３３】
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒであり；
一般式ｅで表す化合物は、化合物９、１０、１１、１２を含み、構造式が下記のとおりである。
【００３４】
【化１０】
2013515750.tif 000016
【００３５】
化合物９、１０、１１、１２は、いずれも白色粉末である。
【００３６】
融点：
【００３７】
【表５】
2013515750.tif 000017
【００３８】
旋光：
【００３９】
【表６】
2013515750.tif 000018
【００４０】
本発明は、一般式ｆで表す化合物を提供し、その構造式は下記である。
【００４１】
【化１１】
2013515750.tif 000019
【００４２】
Ｒ１、Ｒ２は、それぞれＨまたはＢｒである。
【００４３】
一般式ｅで表す化合物は、化合物１３、１４を含み、構造式が下記のとおりである。
【００４４】
【化１２】
2013515750.tif 000020
【００４５】
化合物１３、１４は、いずれも白色粉末である。
【００４６】
融点：
【００４７】
【表７】
2013515750.tif 000021
【００４８】
旋光：
【００４９】
【表８】
2013515750.tif 000022
【００５０】
本発明のその他の目的は、ハロゲン化ジデオキシ糖誘導体の調製方法を提供するものであり、当該方法は、下記の工程を含む。
【００５１】
反応式は、下記のとおりである。
【００５２】
【化１３】
2013515750.tif 000023
【００５３】
具体的な工程は、下記のとおりである。
【００５４】
（１）ジデオキシグルコースブロミドｃの調製
２−デオキシグルコースまたは３−デオキシグルコース（ａ）を原料にして、無水酢酸（原料と無水酢酸とのモル比＝１〜１．５：１５〜２０）とを、１５〜３５℃で攪拌しながら２〜５時間反応させる。反応完了後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用いる。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて、結晶、再結晶を行い、化合物ｂを得る。
【００５５】
モル比が１〜１．５：３．５〜５である化合物ｂとＨＢｒとを、０．５〜１ｋＰａの加圧条件下、２０〜５℃の反応温度で、攪拌しながら１０〜１８時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて、結晶、再結晶を行い、化合物ｃを得る。
【００５６】
（２）ジデオキシグルコースブロミドとナイトロジェンマスタード、ポドフィロトキシンとの合成反応
１）ジデオキシグルコースブロミドとＸ１［Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−クロロエチル）］−ジアミドりん酸との合成反応
化合物ｃと化合物Ｘ１［Ｎ’，Ｎ’−ビス−（２−クロロエチル）］−ジアミドりん酸（化合物ｃと化合物Ｘ１とのモル比＝１：１．２〜１．５）を原料にして、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用い、Ａｇ２ＣＯ３またはＣｕＳＯ４を触媒（触媒と化合物ｃとのモル比＝０．０５〜０．１：１）として用い、反応温度を１５〜３５℃にし、攪拌しながら５〜１０時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｄを得る。
【００５７】
２）ジデオキシグルコースブロミドとＸ２Ｎ−ビス−クロロエチル−アミドりん酸との合成反応
化合物ｃと化合物Ｘ２Ｎ−ビス−クロロエチル−アミドりん酸を原料にして（化合物ｃと化合物Ｘ２とのモル比１：１．２〜１．５）、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用い、Ａｇ２ＣＯ３またはＣｕＳＯ４を触媒にし（触媒と化合物ｃとのモル比＝０．０５〜０．１：１）、反応温度を２０〜４０℃にし、攪拌ししながら５〜１０時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフランまたはトルエン溶剤の中の一種または多種の混合溶剤を用い、溶出液の旋光に応じてα、βの２種類の異性体を分離する。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｅを得る。化合物９〜１２は、ｅ一般式で示す化合物に属する。
【００５８】
３）ジデオキシグルコースブロミドとＸ３４’−脱メチル化体のポドフィロトキシンとの合成反応
化合物ｃと化合物Ｘ３４’−脱メチル化体のポドフィロトキシンを原料にして（化合物Ｃと化合物Ｘ３とのモル比＝１：１．８〜２．２）、溶剤として、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルを用いて、三フッ化ホウ素エーテルを触媒（触媒と化合物ｃとのモル比＝０．１〜０．１５：１）にし、０〜３０℃で攪拌しながら１２〜１５時間反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離を行い、カラム体積が１００ｍｌであり、カラムへのチャージ量が１％であり、流速が１〜２ｍｌ／ｍｉｎであり、溶離剤として、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、石油エーテル、テトラヒドロフラン、トルエンなどの溶剤の中の一種または混合溶剤を用いる。次に、無水クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、トルエン、エタノールまたはメタノール溶剤を用いて結晶、再結晶を行い、化合物ｆを得る。
【００５９】
本発明のさらなる目的は、抗癌薬の調製における前記のハロゲン化ジデオキシ糖誘導体の応用を提供するものでもある。
【００６０】
本発明は、具体的に抗癌薬の調製における化合物１〜１４の応用を提供する。
【００６１】
本発明は、下記のとおりに前記の化合物の急性毒性及び抗癌効果に関する実験を行った。
【００６２】
１．化合物１〜１４（実施例１〜８調製）の急性毒性に関する実験（ＬＤ５０）の結果。化合物１〜１４は、比較的に毒性が低い。
【００６３】
２．抗腫瘍生物活性の体外スクリーニング実験
人の黒色腫細胞Ｍ１４の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の膵臓癌細胞ＰＣ−３の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋの成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の鼻咽腔癌母系細胞ＣＮＥ−２Ｚの成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の肺癌細胞Ａ５４９の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の結腸癌細胞ＨＴ−２９の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の肝癌細胞Ｂｅｌ−７４０２の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の胃癌細胞ＢＧＣ−８０３の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の食道癌細胞ＣａＥｓ−１７の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の乳腺癌細胞ＭＣＦ−７の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の卵巣癌細胞Ａ２７８０の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の膀胱癌細胞ＥＪの成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の脳膠質細胞癌細胞の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
人の白血病細胞Ｋ５６２の成長に対する化合物１〜１４の抑制作用：
化合物１〜１４は、上記の種々腫瘍細胞の成長に対する抑制作用に強く効果を示した。
【００６４】
また、本発明の好ましい効果は、ヌードマウス移植腫瘍に対する化合物３、５、７、１０、１２、１４の抑制作用にある。各々のＢ１６悪性黒色腫、ＡｓＰｃ人の膵臓癌、０５−７３２人の骨肉腫、人の甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋ、ＭＸ−１人の乳腺癌及びＭＧＣ人の胃癌に対して抗癌実験を行った。化合物３、５、７、１０、１２、１４は、ヌードマウス移植腫瘍に対して顕著な作用効果を示し、特に、悪性黒色腫、膵臓癌、人の骨肉腫、甲状腺未分化癌、乳腺癌、胃癌に対するの作用効果は著しい。
【００６５】
本発明は、デオキシ糖を原料にして化合物１〜１４を合成する。すべての化合物は、糖環上構造にアセチル化された疏水性のエステル系物質であるため、結晶しやすい。化学上および酵素学において相対的に安定であり、人体に入ってから、受動拡散作用により、エネルギーを消耗する必要がなく、癌細胞に吸収され、癌細胞の内部において、エステル酵素、アシル化酵素及びグリコシド酵素の作用により、抗癌因子として、ジデオキシ糖、ナイトロジェンマスタード及びポドフィロトキシンを生み出し、二重の抗腫瘍効果を達成する。また、本発明者は、化合物を調製する工程において、アセチル化および臭素化されたデオキシ糖化合物が更に吸収されやすく、デオキシ糖より抗腫瘍効果が顕著であることを発見した。また、本発明の化合物は、アセチル基が除去されても抗腫瘍効果が顕著であるが、結晶化され難いため、アセチル化された化合物が好ましい。
【００６６】
本発明による化合物は、適宜な賦形剤と結合してもよく、通常の方法にしたがって、経口投与の内服剤形及び非経口投与の注射剤と外用剤形に調製するものである。例えば、経口投与の錠剤、カプセル剤、顆粒剤、経口液、注射液、粉末噴射剤、テープ剤または霜剤。
【００６７】
本発明による化合物は、悪性黒色腫、膵臓癌、甲状腺未分化癌、転移性骨悪性腫瘍、白血病、リンパ癌、骨腫、軟骨肉腫、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆嚢癌、直腸癌、大腸癌、結腸癌、肺癌、鼻咽腔癌、摂護腺癌、神経系癌、乳腺癌、卵巣癌、子宮頸癌及び子宮癌などの癌治療に用いられる。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
具体的な実施方式
実施例１  化合物１、２の調製
２−デオキシグルコースを１０ｇ、無水酢酸を８５ｍｌ量り取った。まず、反応器中に８５ｍｌの無水酢酸を加え、温度を２０℃に保ち；小分けにして２−デオキシグルコースを加え、温度を３０℃以下に保ち、３時間攪拌し反応させ、クロロホルムで抽出し、結晶することによりテトラアセチル−２−デオキシグルコースの純品を１３．８ｇ得た。
【００６９】
テトラアセチル−２−デオキシグルコースを１０ｇ、ＨＢｒガスを０．０８８ｍｏｌ量り取った。まず、密閉容器中にＣＨ２Ｃｌ２と４−アセチル−２−デオキシグルコースとを加えて、テトラアセチル−２−デオキシグルコースが全部溶解してから、温度を２５℃に保ちながら、ＨＢｒガスを注入し、圧力（０．７ｋＰａ）を加え、１５時間攪拌して反応させ、純化結晶を行い、トリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを８．３ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、ジクロロメタン：メタノール＝８０：２０の溶離剤で溶離し、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離してα体（化合物１）を２．４ｇ、β体（化合物２）を３．２ｇ得た。
【００７０】
化合物１：融点＝８３〜８５℃、旋光＝＋５°。
【００７１】
化合物２：融点＝７８〜８０℃、旋光＝−２６°
元素分析：
【００７２】
【表９】
2013515750.tif 000024
【００７３】
実施例２  化合物３，４の調製
３−デオキシグルコースを１０ｇ、無水酢酸を８５ｍｌ量り取った。まず、反応器中に８５ｍｌの無水酢酸を加え、温度を１５℃に保ち；小分けにして３−デオキシグルコースを加え、温度を２５℃以下に保ち、４時間攪拌して反応させ、ジクロロメタンで抽出し、メタノールで結晶させることによりテトラアセチル−２−デオキシグルコースの純品を１１．３ｇ得た。
【００７４】
テトラアセチル−３−デオキシグルコースを１０ｇ、ＨＢｒガスを０．０８８ｍｏｌ量り取った。まず、密閉容器中にＣＨ２Ｃｌ２とテトラアセチル−３−デオキシグルコースとを加え、テトラアセチル−３−デオキシグルコースが全部溶解してから、温度を２０℃に保ちながら、ＨＢｒガスを注入し、圧力（０．８ｋＰａ）を加え、１５時間攪拌して反応させ、純化結晶を行い、トリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを７．８ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、ジクロロメタン：メタノール＝８０：２０の溶離剤で溶離し、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離して、α体（化合物３）を２．７ｇ、β体（化合物４）を２．３ｇ得た。
【００７５】
化合物３：融点＝８８〜８９℃、旋光＝−２３°
化合物４：融点＝８１〜８３℃、旋光＝−５０°
元素分析
【００７６】
【表１０】
2013515750.tif 000025
【００７７】
実施例３  化合物５、６の調製
トリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ１を１４ｇ量り取った。まず、反応器中にテトラヒドロフランとジクロロメタン（Ｖ／Ｖ＝１：２）とを加え、次に、化合物Ｘ１を加え、それが完全に溶解してから触媒としてＣｕＳＯ４を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを溶解させものを反応器中に滴下し、温度を３０℃に保ち、８時間攪拌してに反応させた。反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶化させることにより純品を４．７ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、酢酸エチル：メタノール＝７０：３０の溶離剤で溶離し、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離してα体（化合物５）を１．５ｇ、β体（化合物６）を２．１ｇ得た。
【００７８】
化合物５：融点＝１１９〜１２０℃、旋光＝＋１４４°
化合物６：融点＝１０８〜１１０℃、旋光＝−１２１°
元素分析：
【００７９】
【表１１】
2013515750.tif 000026
【００８０】
実施例４  化合物７、８の調製
トリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ１を１４ｇ量り取った。まず、反応器中にテトラヒドロフランとジクロロメタン（Ｖ／Ｖ＝１：２）とを加えた。次に、化合物Ｘ１を加え、それが完全に溶解してから、触媒としてＣｕＳＯ４を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを溶解させたものを反応器中に滴下し、温度を１８℃に保ち、８時間攪拌して反応させた。、反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶化させることにより純品を３．８ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、ジクロロメタンで：メタノール＝７５：２５溶離剤で溶離し、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離してα体（化合物７）を１．９ｇ、β体（化合物８）を１．２ｇ得た。
【００８１】
化合物５：融点＝１２３〜１２６℃、旋光＝＋１０６°
化合物６：融点＝１１２〜１１４℃、旋光＝−−１０１°
元素分析：
【００８２】
【表１２】
2013515750.tif 000027
【００８３】
実施例５  化合物９、１０の調製
トリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ２を１５ｇ量り取った。まず、反応器中にトリエチルアミンとジクロロメタン（Ｖ／Ｖ＝１：５）とを加えた。次に、化合物Ｘ２を加え、それが完全に溶解してから、触媒としてＣｕＳＯ４を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを溶解させたものを反応器中に滴下し、温度を２０℃に保ち、攪８時間拌して反応さた。反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶化させることにより純品を５．６ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、ジクロロメタン：メタノール＝７０：３０の溶離剤で溶離し、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離してα体（化合物９）を３．５ｇ、β体（化合物１０）を１．４ｇ得た。
【００８４】
化合物９：融点＝１１６〜１１８℃、旋光＝＋５８°
化合物１０：融点＝１０４〜１０６℃、旋光＝−７８°
元素分析：
【００８５】
【表１３】
2013515750.tif 000028
【００８６】
実施例６  化合物１１、１２の調製
トリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ２を１５ｇ量り取った。まず、反応器中にトリエチルアミンとジクロロメタン（Ｖ／Ｖ＝１：５）とを加えた。次に、化合物Ｘ２を加え、それが完全に溶解してから、触媒としてＣｕＳＯ４を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを溶解させたものを反応器中に滴下し、温度を２４℃に保ち、９時間攪拌して反応させた。反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶化させることで純品を４．６ｇ得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで異性体α、βを分離し、ジクロロメタンで：メタノール＝７５：２５溶離剤で溶離を行い、溶出液の旋光に応じてα、βの二異性体を分離して、α体（化合物１１）を１．８ｇ、β体（化合物１２）を２．２ｇ得た。
【００８７】
化合物１１：融点＝１１７〜１１９℃、旋光＝−５°
化合物１２：融点＝１０６〜１０９℃、旋光＝−１２８°
元素分析：
【００８８】
【表１４】
2013515750.tif 000029
【００８９】
実施例７化合物１３の調製
トリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ３を量り取った。まず反応器中にジクロロメタンを加え、次に、化合物Ｘ３を加え、それが完全に溶解してから、触媒としてＡｇ２ＣＯ３を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−２−デオキシグルコースブロミドを溶解させたものを反応器中に滴下し、温度を２５℃に保ち、８時間攪拌して反応さた。反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶化させることで純品を５．５ｇ得た。
【００９０】
化合物１３：融点＝１０６〜１０８℃、旋光＝−８５°
元素分析：
【００９１】
【表１５】
2013515750.tif 000030
【００９２】
実施例８  化合物１４の調製
トリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを１０ｇ、化合物Ｘ３を量り取った。まず、反応器中にジクロロメタンを加え、次に、化合物Ｘ３を加え、それが完全に溶解してから、触媒としてＡｇ２ＣＯ３を加え、ジクロロメタンでトリアセチル−３−デオキシグルコースブロミドを溶解させたものを反応器中に滴下し、温度を２０℃に保ち、８時間攪拌して反応させた。反応完了後、蒸留水で３〜５回洗浄し、メタノールを用いて結晶させることにより純品を５．８ｇ得た。
【００９３】
化合物１４：融点＝１２０〜１２２℃、旋光＝＋５７°
元素分析：
【００９４】
【表１６】
2013515750.tif 000031
【００９５】
実施例９  化合物１〜１４（実施例１〜８により調製）の急性毒性に関する実験（ＬＤ５０）結果。
【００９６】
１）ヌード・マウスｉｇ投与後の結果：ＬＤ５０（ｍｇ／ｋｇ）
【００９７】
【表１７】
2013515750.tif 000032
【００９８】
【表１８】
2013515750.tif 000033
【００９９】
２）ヌード・マウスｉｐ腹腔注射投与後の結果：ＬＤ５０（ｍｇ／ｋｇ）
【０１００】
【表１９】
2013515750.tif 000034
【０１０１】
【表２０】
2013515750.tif 000035
【０１０２】
３）抗腫瘍生物活性体外スクリーニング実験
スクリーニング方法：テトラゾリウム塩（ＭＴＴ還元法）
スルホローダミンＢ（ＳＲＢタンパク質染色法）
作用時間：７２時間
結果評価：無効：１０−５ｍｏｌ／Ｌ＜８５％；
弱い：１０−５ｍｏｌ／Ｌ≧８５％または１０−６ｍｏｌ／Ｌ＞５０％
強い：１０−６ｍｏｌ／Ｌ≧８５％または１０−７ｍｏｌ／Ｌ＞５０％
実施例１０  抗癌薬の調製における化合物１〜１４の応用
本発明は、下記のとおりに前記で調製した化合物１〜１４の急性毒性及び抗癌効果に関する実験を行った。
【０１０３】
化合物１〜１４は、人の鼻咽腔癌母系細胞ＣＮＥ−２Ｚ、人の肺癌細胞Ａ５４９、人の結腸癌細胞ＨＴ−２９、人の肝癌細胞Ｂｅｌ−７４０２、人の大腸癌細胞ＨＣＥ８６９３、人の胃癌細胞ＢＧＣ−８０３、人の食道癌細胞ＣａＥｓ−１７、人の乳腺癌細胞ＭＣＦ−７、人の卵巣癌細胞Ａ２７８０、人の膵臓癌細胞ＰＣ−３、人の膀胱癌細胞ＥＪ、人の脳膠質細胞癌細胞ＴＧ−９０５、人の白血病細胞Ｋ５６２、人の黒色腫細胞Ｍ１４及び甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋなどの腫瘍細胞の成長に対する抑制作用の結果が下記のとおりである。
【０１０４】
【表２１】
2013515750.tif 000036
【０１０５】
【表２２】
2013515750.tif 000037
【０１０６】
【表２３】
2013515750.tif 000038
【０１０７】
【表２４】
2013515750.tif 000039
【０１０８】
【表２５】
2013515750.tif 000040
【０１０９】
【表２６】
2013515750.tif 000041
【０１１０】
【表２７】
2013515750.tif 000042
【０１１１】
【表２８】
2013515750.tif 000043
【０１１２】
【表２９】
2013515750.tif 000044
【０１１３】
【表３０】
2013515750.tif 000045
【０１１４】
【表３１】
2013515750.tif 000046
【０１１５】
【表３２】
2013515750.tif 000047
【０１１６】
【表３３】
2013515750.tif 000048
【０１１７】
【表３４】
2013515750.tif 000049
【０１１８】
【表３５】
2013515750.tif 000050
【０１１９】
前記の試験結果によると、化合物１〜１４は、人の鼻咽腔癌母系細胞ＣＮＥ−２Ｚ、人の肺癌細胞Ａ５４９、人の結腸癌細胞ＨＴ−２９、人の肝癌細胞Ｂｅｌ−７４０２、人の大腸癌細胞ＨＣＥ８６９３、人の胃癌細胞ＢＧＣ−８０３、人の食道癌細胞ＣａＥｓ−１７、人の乳腺癌細胞ＭＣＦ−７、人の卵巣癌細胞Ａ２７８０、人の膵臓癌細胞ＰＣ−３、人の膀胱癌細胞ＥＪ、人の脳膠質細胞癌細胞ＴＧ−９０５、人の白血病細胞Ｋ５６２、人の黒色腫細胞Ｍ１４、甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋなどの腫瘍細胞の成長に対して、全て強い抑制作用効果を示している。
【０１２０】
実施例１１  ヌードマウス移植腫瘍に対する化合物３、５、７、１０、１２、１４の抑制作用
化合物３、５、７、１０、１２、１４（実施例２、３、４、５、６、８により調製）を、１２５ｍｇ／ｋｇで投与し、ブランク対照群に生理食塩水、陽性対照群ＣＴＸに、投与体積がいずれも０．４ｍｌ／２０ｇのものであった。一日に一回で投与し、計７日間を投与し投与完了２日間後に動物を殺処分した。Ｂ１６悪性黒色腫、ＡｓＰｃ人の膵臓癌、０５−７３２人の骨肉腫、人の甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋ、ＭＸ−１人の乳腺癌及びＭＧＣ人の胃癌に対して、それぞれ抗癌実験を行った。
【０１２１】
実験データは下記のとおりである。
【０１２２】
【表３６】
2013515750.tif 000051
【０１２３】
【表３７】
2013515750.tif 000052
【０１２４】
【表３８】
2013515750.tif 000053
【０１２５】
【表３９】
2013515750.tif 000054
【０１２６】
【表４０】
2013515750.tif 000055
【０１２７】
【表４１】
2013515750.tif 000056
【０１２８】
前記の試験結果によると、濃度が１２５ｍｇ／ｋｇである場合に、化合物３、５、７、１０、１２、１４（実施例２、３、４、５、６、８により調製）は、Ｂ１６悪性黒色腫、ＡｓＰｃ人の膵臓癌、０５−７３２人の骨肉腫、人の甲状腺未分化瘤細胞ＴＡ−Ｋ、ＭＸ−１人の乳腺癌及びＭＧＣ人の胃癌に対する抑制率が良好である。
【国際調査報告】
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