(57)【要約】  本発明は、相補的活性で化合物を阻害する第１のＲｈｏ結合キナーゼ（ＲＯＣＫ）と、第２の医薬的に活性の化合物とを含む合成二官能化合物に関し；前述の第１および第２の化合物は、生物学的に不安定な結合によって共有結合される。本発明は、そのような化合物を作製する方法にも関する。また、本発明は、細胞骨格の完全性または再配列を変えることによって影響されるまたは補助されることができる疾患もしくは状態の予防もしくは治療においてそのような二官能化合物を使用する方法に関する。具体的には、本発明は、眼圧が上昇する障害、例えば原発性開放隅角緑内障などの眼の疾患を、該二官能化合物を用いることで治療する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩＩの化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和化合物であって、
【化１】
2013531063.tif 000053
［式中
Ｑは、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ2または（ＣＲ4Ｒ5）n3であり；
ｎ1は、１、２または３であり；
ｎ2は、１または２であり；
ｎ3は、０、１、２または３であり；
【化２】
2013531063.tif 000054
によって表される環は、アルキル、ハロ、オキソ、ＯＲ6、ＮＲ6Ｒ7またはＳＲ6によって随意に置換され；
Ｒ2は、以下のヘテロアリール系から選択され、随意に置換され；
【化３】
2013531063.tif 000055
Ｒ3〜Ｒ7は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、またはシクロアルキルアルキニルであり、随意に置換され;
Ａｒは、単環式アリール、二環式アリール、単環式ヘテロアリール、または二環式ヘテロアリールであり;
Ｘ2およびＸ3は、Ａｒ上で不在または置換基のいずれかであり、かつ独立して、Ｙ2−Ｚ2およびＹ3−Ｚ3の形態であり、Ｚ2およびＺ3はＡｒに付着され；
Ｙ1は、Ｏ、ＣＯ2、ＮＲ8、ＳＯ2ＮＲ8、ＮＲ8ＳＯ2、ＮＲ8ＣＯまたはＮ含有ヘテロアリールであり；
Ｙ2およびＹ3は、独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ8、ＮＲ8Ｒ9、ＮＯ2、ＳＲ8、ＳＯＲ8、ＳＯ2Ｒ8、ＳＯ2ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8ＳＯ2Ｒ9、ＯＣＦ3、ＣＯ2Ｒ8、ＣＯＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ9Ｒ10、Ｎ含有複素環およびＮ含有ヘテロアリールからなる群から選択され;
Ｚ1、Ｚ2およびＺ3は、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、複素環、（複素環）アルキル、（複素環）アルケニル、（複素環）アルキニル、および不在からなる群から選択され；
Ｒ8〜Ｒ10は、独立して、不在、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、複素環、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、（複素環）アルキル、（複素環）アルケニル、（複素環）アルキニルまたは複素環からなる群から選択され；随意にＯＲ11、ＣＯＯＲ11、ＮＲ11Ｒ12、ＮＯ2、ＳＲ11、ＳＯＲ11、ＳＯ2Ｒ11、ＳＯ2ＮＲ11Ｒ12、ＮＲ11ＳＯ2Ｒ12、ＯＣＦ3、ＣＯＮＲ11Ｒ12、ＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）Ｒ12、ＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ12、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ11Ｒ12およびＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ12Ｒ13によって置換され；
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ2−、および−ＮＲ11−の結合からなる群から選択されるリンクと、随意に連結するＲ8、Ｒ9およびＲ10の基のうちのいずれか２つと環を形成し；
Ｒ11〜Ｒ13は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、（複素環）アルキル、（複素環）アルケニル、（複素環）アルキニル、複素環および不在からなる群から選択され；
Ｌｉｎｋは、
【化４】
2013531063.tif 000056
からなる群から選択され；
式中、Ａ1およびＡ2は、独立して、水素、アルキル、またはアリールアルキルであり、随意に置換され；かつ
Ａ1およびＡ2は、随意に連結されて、直接結合を介して、または窒素原子、酸素原子もしくは硫黄原子との結合を介して、環を形成し；
Ｄは、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、複素環、（複素環）アルキルまたは（複素環）アルケニルであり、随意に置換され；
Ｄｒｕｇ2は、Ｄｒｕｇ2−１またはＤｒｕｇ2−２であり、
【化５】
2013531063.tif 000057
式中、Ａ4は、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルまたはアリールアルキルであり、およびＤｒｕｇ2−２のＷは、Ｗ−１、Ｗ−２、Ｗ−３、Ｗ−４、またはＷ−５である］、
【化６】
2013531063.tif 000058
式ＩＩＩの化合物、またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和化合物。
【請求項２】
Ｒ2がＲ2−１またはＲ2−１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎ1＝ｎ2＝１、またはｎ1＝２およびｎ2＝１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｄｒｕｇ2がＤｒｕｇ2−１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｄｒｕｇ2がＤｒｕｇ2−２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ａ1およびＡ2が独立して、水素、メチル、またはエチルであり；Ｄがフェニル、ピリジル、（ＣＨ2）iＣＨＡ3（ＣＨ2）jまたは（ＣＨ2）iＣ6Ｈ4（ＣＨ2）jであり、ここでｉおよびｊは独立して０〜４であり、およびＡ3が水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記ＬｉｎｋがＬｉｎｋ−２であり、およびＤがＣＨ2またはＣＨＣＨ3である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記ＬｉｎｋがＬｉｎｋ−３であり、およびＤがＣＨ2またはＣＨ（ＣＨ3）、（ＣＨ2）3、（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5または（ＣＨ2）2ＣＨＣＨ3である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記ＬｉｎｋがＬｉｎｋ−４であり、Ａ1が水素であり、およびＡ2が水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｑが（ＣＲ4Ｒ5）n3であり；およびｎ3が１〜３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ3、Ｒ4およびＲ5がＨであり、およびＲ8がＨ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルまたは複素環である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物であって、（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１；（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−４−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）ブタ−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物２；（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（３−オキソデシル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物３；（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｅ）−３，３−ジフルオロ−４−フェノキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物４；（５Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｓ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物５；（Ｚ）−３−（２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物６；（Ｚ）−３−（２−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物７；（Ｚ）−１−（Ｎ−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェニル）エチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物８；（Ｚ）−１−（Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェニル）メチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物９；（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１０；（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１１；（Ｚ）−１−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）ベンジルカルバモイルオキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１２；および（２Ｓ，３Ｒ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル２−エチル−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−３−（プロピオニルオキシメチル）ブタノエート、化合物１３からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
被験者において眼圧を下げる方法であって、
それを必要とする被験者を特定するステップと；
前記被験者の眼圧を下げるために、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の有効量を前記被験者に投与するステップとを含む、方法。
【請求項１４】
被験者においてアレルギー結膜炎、黄斑浮腫、黄斑変性症または眼瞼炎を治療する方法であって、
それを必要とする被験者を特定するステップと；
前記被験者の眼圧を下げるために、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の有効量を前記被験者に投与するステップとを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的に不安定な結合によって阻害する化合物である第１のＲｈｏ結合キナーゼ（ＲＯＣＫ）と、それに共有結合した第２の医薬的活性化合物とを含む合成二官能化合物に関する。第２の活性な化合物は、ピロカルピン、プロスタグランジンまたはその誘導体である。また、本発明は、例えば原発開放隅角緑内障のように眼圧が上昇する障害などの眼の疾患を治療するためにそのような二官能化合物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｒｈｏファミリーの低分子量ＧＴＰ結合タンパク質は、増殖因子、ホルモンおよび機械的ストレスなどのいくつかの細胞外刺激によって活性化され、不活性ＧＤＰ結合型と活性ＧＴＰ結合型との間を循環することによって分子シグナルスイッチとして機能して、細胞応答を引き起こすことができる。Ｒｈｏキナーゼ（ＲＯＣＫ）は、Ｒｈｏの重要な下流メディエーターとして機能し、かつ普遍的に発現する２種類のアイソフォーム（ＲＯＣＫ１およびＲＯＣＫ２）として存在する。ＲＯＣＫは、セリン／スレオニンキナーゼであり、アデュシン、モエシン、Ｎａ+−Ｈ+交換体１（ＮＨＥ１）、ＬＩＭ−キナーゼおよびビメンチンなどの細胞骨格タンパク質；ミオシン軽鎖ホスファターゼ結合サブユニット（ＭＹＰＹ−１）、ＣＰＩ−１７、ミオシン軽鎖およびカルポニンなどの収縮タンパク質；ＴａｕおよびＭＡＰ−２などの微小管結合タンパク質；ＣＲＭＰ−２などの神経成長円錐結合タンパク質；ＰＴＥＮなどのシグナルタンパク質；ならびに血清応答因子などの転写制御因子を含むいくつかの物質の機能を調節する（Ｌｏｉｒａｎｄら、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ９８：３２２−３３４（２００６））。ＲＯＣＫは、ＲｈｏＡによって誘導される細胞形質転換にも必要とされる。複数のシグナル経路の重要な中間体として、ＲＯＣＫは、細胞骨格再配列、アクチンストレスファイバー形成、増殖、化学走性、細胞質分裂、サイトカインとケモカインの分泌、内皮細胞間結合または上皮細胞間結合の完全性、アポトーシス、転写活性化および平滑筋収縮を含む、種々の一連の細胞現象を調節する。これらの細胞作用の結果、ＲＯＣＫは、血管収縮、気管支収縮、組織リモデリング、炎症、浮腫、血小板凝集および増殖性障害などの多くの生理的プロセスを調節する。
【０００３】
ＲＯＣＫ活性について文書で十分に立証されている一例は、平滑筋収縮である。平滑筋細胞において、ＲＯＣＫはカルシウム感受性および平滑筋収縮を媒介する。受容体に結合したＧタンパク質に結合するアゴニスト（ノルアドレナリン、アセチルコリン、エンドセリンなど）は、収縮装置の細胞質Ｃａ2+収縮とＣａ2+感受性の両方を増加させることによって収縮をもたらす。平滑筋収縮剤のＣａ2+感作効果は、ミオシン軽鎖ホスファターゼ（ＭＬＣＰ）の調節サブユニットであるＭＹＰＴ−１のＲＯＣＫ媒介リン酸化に起因するとされており、ＭＬＣＰの活性が阻害されると、ミオシン軽鎖のリン酸化の促進および平滑筋収縮が生じる（国際公開ＷＯ第２００５／００３１０１Ａ２号、同ＷＯ第２００５／０３４８６６Ａ２号）。
【０００４】
ＲＯＣＫ阻害剤は、多くの障害の治療に有用である。一例は、緑内障、アレルギー結膜炎、黄斑浮腫と黄斑変性、および眼瞼炎などの眼の疾患の治療である。
【０００５】
緑内障は、不可逆的な視力障害を引き起こす眼の疾患である。緑内障は、米国において失明の４番目に多い原因であり、視力障害の２番目に多い原因であり、アフリカ系アメリカ人において不可逆的な視力障害の最も多い原因である。一般的に言えば、この疾患は、少なくとも部分的には、眼圧の上昇に起因する悪影響によって起こる進行性視神経症を特徴とする。正常な個人では、眼圧は１２〜２０ｍｍＨｇにわたり、平均すると約１６ｍｍＨｇになる。しかしながら、原発性開放隅角緑内障を患っている個人では、眼圧は一般に２２ｍｍＨｇを超えて３０ｍｍＨｇまで上昇する。閉塞隅角緑内障または急性緑内障では、眼圧は、７０ｍｍＨｇもの高さに達し、わずか数日内に失明にいたることもある。緑内障の典型的な治療には、眼圧（ＩＯＰ）を低下させる種々の医薬アプローチが含まれるが、各々欠点がある。β遮断薬および炭酸脱水酵素阻害剤は、無血管水晶体および角膜内皮細胞に栄養を与えるために必要な房水の生成を減少させる。プロスタグランジンは、全房水流出率のわずかに１０％を占めるぶどう膜強膜路に影響を及ぼす。房水流出に対する抵抗性の増大がＩＯＰ上昇の原因になる場合、房水流出の部位である線維柱帯網に直接的に作用する商業的に承認された治療薬が今のところない。
【０００６】
最も多いアレルギー性眼疾患である、アレルギー結膜炎（ＡＣ）は、急性、季節性および通年性に細分することができる。これら３種類のすべては、古典的Ｉ型ＩｇＥ媒介性過敏症に起因する（Ａｂｅｌｓｏｎ，ＭＢ．ら，Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ；３８（Ｓ）：１１５，１９９３）。アレルギー結膜炎は、若年成人（発症平均年齢２０歳）の比較的良性の眼疾患であり、視力が脅かされることはないが、かなり苦痛であり、かつ医療資源を使用することになる。眼アレルギーは、年間ベースで人口の２０パーセントに影響を及ぼすと推定され、その発生率は増加している（Ａｂｅｌｓｏｎ，ＭＢら，Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，３８（Ｓ）：１１５，１９９３）。ＡＣは生産性に影響を与え、かつＡＣの治療には種々の薬剤が利用可能であるが、多数の患者は依然として症状を十分に制御することがかなわず、望ましくない副作用に耐えている患者もいる。調査によると、ＡＣの患者の２０％は、使用するＡＣ薬物に十分に満足しておらず、ほぼ５０％が医師から十分な手当を受けていないと感じている（Ｍａｈｒ，ら，Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｐｒｏｃ，２８（４）：４０４−９，２００７）。
【０００７】
黄斑浮腫は、傷害した（または新しく形成された）血管から、視力のための網膜の重要な部分である網膜黄斑に体液が漏れた場合に起こり、それが膨らんで、視力をぼやけさせる状態である。黄斑浮腫は、網膜の血管損傷によって浮腫が起きる糖尿病性網膜症の一般的な問題である。浮腫は、新しく形成された血管から黄斑および／または硝子体のいずれか、または両方に体液が漏れる、糖尿病性網膜症の増殖期にも生じる。黄斑浮腫は、新しく形成された毛細血管（血管新生）からは黄斑に体液が漏れる、加齢黄斑変性（滲出型）でも通常、問題になる。加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、１０００万人ものアメリカ人に影響を及ぼしている進行性の眼状態である。ＡＭＤは、米国において６０歳以上の成人の視力喪失および法的盲の第一の原因である。人口が熟成し、「ベビーブーム世代」が６０代そして７０代と進むにつれて、ＡＭＤの仮想流行は高頻度に見られることになる。この疾患は、最もはっきりとした中心視野が生じる眼の黄斑に影響を及ぼす。この疾患は、結果として完全な失明になることはまれではあるが、最外部、すなわち周辺視野以外のすべてを個人から奪い、視野の中心にぼんやりした像またはブラックホールだけを残す。
【０００８】
眼瞼縁症（Lid Margin Disease （ＬＭＤ））としても知られている眼瞼炎は、眼瞼の非感染性炎症であり、睫毛の周りがぼろぼろのうろこ状になり、皮脂が過剰に生成されて油状のうろこ状の分泌物、粘膿性の分泌物が固まり、睫毛の周りがかさぶたで覆われる症状が現れる。睫毛および眼瞼縁の上にかさぶた、分泌物または細片が蓄積すると、眼瞼の皮膚では自然に見られるブドウ球菌が過剰増殖する格好の環境が作られ、感染症、アレルギー反応および涙液の破綻の機会が増加することになる。眼瞼炎は、全ての涙が蒸発する原因となる涙膜の重要な外脂質層の生成を妨げ、結果としてドライアイを生じる。涙量が減少すると、バクテリアおよび刺激物を適切に希釈せず、または睫毛および眼瞼縁から炎症産物を押し流すこともないので、該産物が蓄積して、さらなる炎症を引き起こし、疾患の循環を悪化させて、眼瞼炎、マイボーム腺機能不全およびドライアイが互いに長引くことになる。
【０００９】
眼の疾患を管理するためには複数の医薬品を使用する必要があるので、簡便で、良好な耐容性を示す剤形で、ＲＯＣＫ阻害と補助薬理活性とを組み合わせる単剤が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、プロスタグランジンまたはピロカルピン、もしくはその誘導体に共有結合したＲｈｏキナーゼ阻害剤を含む、式ＩＩＩの化合物に関する。該共有結合は、代謝的に不安定であり、そのため前述の化合物は被験者に投与されるとその構成部分に分離することが可能になり、したがって各構成部分の相加効果または相乗効果をもたらす。本発明は、そのような化合物と医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物にも関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、細胞弛緩および／または細胞−基層接着の変化に関連した眼の疾患または状態を予防または治療する方法にさらに関する。本発明は、具体的には、原発性開放隅角緑内障などの緑内障を治療することを含む、眼圧を低下させる方法を提供する。該方法は、疾患の治療を必要とする被験者を特定するステップと、該被験者に式ＩＩＩの化合物を、該疾患を治療するのに有効な量で投与するステップとを含む。
【００１２】
該活性化合物は、全身投与または局所投与によって被験者に送達される。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
以下の用語を提示する場合、特に明記しない限り、通常以下のように定義されるが、これらに限定されるものではない：
【００１４】
ハロ置換基は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される。
【００１５】
「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を含む直鎖型または分岐型のいずれかの基であり、より好ましくは１〜８個の炭素原子を含み、最も好ましくは１〜６個の炭素原子を含む。
【００１６】
「アルケニル」は、２〜１２個の炭素原子を含む直鎖型または分岐型のいずれかの基であり、少なくとも１つの二重結合を含むが、随意に２以上の二重結合を含む。
【００１７】
「アルキニル」は、２〜１２個の炭素原子を含む直鎖型または分岐型のいずれかの基であり、少なくとも１つの三重結合を含むが、随意に２以上の三重結合を含み、かつさらに随意に１つまたは複数の三重結合部分を含む。
【００１８】
「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基であり、該アルキル基は上で定義された基であり、同じく上で定義された置換アルキル基を随意に含む。
【００１９】
「アルケノキシ」は、アルケニル−Ｏ−基であり、該アルケニル基は上で定義された基であり、同じく上で定義された置換アルケニル基を随意に含む。
【００２０】
「アルキノキシ」は、アルキニル−Ｏ−基であり、該アルキニル基は上で定義された基であり、同じく上で定義された置換アルキニル基を随意に含む。
【００２１】
「アリール」は、単環（例えば、フェニル）または多重縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子を含む不飽和芳香族炭素環基である。好ましいアリールは、フェニル、ナフチルなどを含む。
【００２２】
「アリールアルキル」は、アリール−アルキル基であり、好ましくは、そのアルキル部分に１〜６個の炭素原子を含み、かつそのアリール部分に６〜１０個の炭素原子を有する。そのようなアリールアルキル基は、ベンジル、フェネチルなどによって例示される。
【００２３】
「アリールアルケニル」は、アリール−アルケニル基であり、好ましくは、そのアルケニル部分に２〜６個の炭素原子を有し、かつそのアリール部分に６〜１０個の炭素原子を含む。
【００２４】
「アリールアルキニル」は、アリール−アルキニル基であり、好ましくは、そのアルキニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつそのアリール部分に６〜１０個の炭素原子を含む。
【００２５】
「シクロアルキル」は、３〜１２個の炭素原子を含む環状アルキル基であり、１〜３個のアルキル基と随意に置換され得る単環状環または多重縮合環を有する。そのようなシクロアルキル基は、例としてシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、１−メチルシクロプロピル、２−メチルシクロペンチル、２−メチルシクロオクチルなどの単環構造、またはアダマンチルなどの多重環構造が挙げられる。
【００２６】
「シクロアルケニル」は、４〜１２個の炭素原子を含む環状アルケニル基であり、１〜３個のアルキル基と随意に置換され得る単環状環または多重縮合環を有し、および内部に不飽和点を少なくとも１つ有する。好適なシクロアルケニル基の例としては、例えば、シクロブタ−２−エニル、シクロペンチル−３−エニル、シクロオクト−３−エニルなどが挙げられる。
【００２７】
「シクロアルキルアルキル」は、シクロアルキル−アルキル基であり、好ましくは、そのアルキル部分に１〜６個の炭素原子を含み、かつそのシクロアルキル部分に６〜１０個の炭素原子を含む。そのようなシクロアルキルアルキル基は、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルエチルなどによって例示される。
【００２８】
「シクロアルキルアルケニル」は、シクロアルキル−アルケニル基であり、好ましくは、そのアルケニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつそのシクロアルキル部分に６〜１０個の炭素原子を含む。そのようなシクロアルキルアルケニル基は、シクロヘキシルエテニルなどによって例示される。
【００２９】
「シクロアルキルアルキニル」は、シクロアルキル−アルキニル基であり、好ましくは、そのアルキニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつそのシクロアルキル部分に６〜１０個の炭素原子を含む。そのようなシクロアルキルアルキニル基は、シクロプロピルエチニルなどによって例示される。
【００３０】
「ヘテロアリール」は、一価芳香族複素環基であり、１〜１０個の炭素原子を含み、かつその環内に酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む。そのようなヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルもしくはフリル）または多重縮合環（例えば、インドリジニルもしくはベンゾチエニル）を有し得る。
【００３１】
「ヘテロアリールアルキル」は、ヘテロアリール−アルキル基であり、好ましくは、そのアルキル部分に１〜６個の炭素原子を含み、かつそのヘテロアリール部分に６〜１０個の原子を含む。そのようなヘテロアリールアルキル基は、ピリジルメチルなどによって例示される。
【００３２】
「ヘテロアリールアルケニル」は、ヘテロアリール−アルケニル基であり、好ましくはそのアルケニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつそのヘテロアリール部分に６〜１０個の原子を含む。
【００３３】
「ヘテロアリールアルキニル」は、ヘテロアリール−アルキニル基であり、好ましくは、そのアルキニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつそのヘテロアリール部分に６〜１０個の原子を含む。
【００３４】
「複素環」は、単環または多重縮合環を有する飽和基または不飽和基であり、１〜８個の炭素原子を含み、かつその環内に窒素、硫黄または酸素から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む。そのような複素環基は、単環（例えば、ピペリジニルもしくはテトラヒドロフリル）または多重縮合環（例えば、インドリニル、ジヒドロベンゾフランもしくはキヌクリニジル）を有し得る。好ましい複素環としては、ピペリジニル、ピロリジニルおよびテトラヒドロフリルが挙げられる。
【００３５】
「複素環アルキル」は、複素環−アルキル基であり、好ましくは、そのアルキル部分に１〜６個の炭素原子を含み、かつその複素環部分に６〜１０個の原子を含む。そのような複素環アルキル基は、モルホリノエチル、ピロリジニルメチルなどによって例示される。
【００３６】
「複素環アルケニル」は、複素環−アルケニル基であり、好ましくは、そのアルケニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつその複素環部分に６〜１０個の原子を含む。
【００３７】
「複素環アルキニル」は、複素環−アルキニル基であり、好ましくは、そのアルキニル部分に２〜６個の炭素原子を含み、かつその複素環部分に６〜１０個の原子を含む。
【００３８】
複素環およびヘテロアリールの例としては、これらに限定されるものではないが、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、インドリンなどが挙げられる。
【００３９】
特に明記しない限り、前述の群で水素が占める位置は、これらに限定されるものではないが、以下によって例示される置換基で、さらに置換されることができる：ヒドロキシ、オキソ、ニトロ、メトキシ、エトキシ、アルコキシル、置換アルコキシ、トリフルオロメトキシ、ハロアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブローモ、ヨード、ハロ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、トリフルオロメチル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、チオ、アルキルチオ、アシル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルアミノ、スルホンアミド、置換スルホンアミド、シアノ、アミノ、置換アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アシルアミノ、アミジノ、アミドキシム、ヒドロキサモイル、フェニル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ピリジル、イミダゾリル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリノ、複素環、（複素環）オキシ、および（複素環）アルキル、かつ好ましいヘテロ原子は、酸素、窒素と硫黄である。空きの価数が、これらの置換基上に存在する場合、それらの価数は、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基および／または複素環基とさらに置換されることができ、これらの空きの価数が炭素上に存在する場合、それらの価数は、ハロゲンによって、および酸素結合置換基、窒素結合置換基、または硫黄結合置換基によってさらに置換されることができ、およびそのような空きの価数が複数存在する場合、これらの基は、結合を直接形成することによって、または新しいヘテロ原子、好ましくは酸素、窒素または硫黄との結合を形成することによってのいずれかで、環を形成するために連結され得ると、理解される。水素を置換基と置き換えても、許容できない不安定性を本発明の分子に導入しないならば、さもなければ化学的に適切であるならば、上記の置換を行うことができると、さらに理解される。
【００４０】
用語「ヘテロ原子含有置換基」とは、少なくとも１つの非ハロゲンヘテロ原子を含む置換基をいう。そのような置換基の例としては、これらに限定されるものではないが、ヒドロキシ、オキソ、ニトロ、メトキシ、エトキシ、アルコキシ、置換アルコキシ、トリフルオロメトキシ、ハロアルコキシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、チオ、アルキルチオ、アシル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニルアミノ、スルホンアミド、置換スルホンアミド、シアノ、アミノ、置換アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アシルアミノ、アミジノ、アミドキシム、ヒドロキサモイル、アリールオキシ、ピリジル、イミダゾリル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、シクロアルキルオキシ、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリノ、複素環、（複素環）オキシ、および（複素環）アルキルが挙げられ、かつ好ましいヘテロ原子は、酸素、窒素および硫黄である。空きの価数が、これらの置換基上に存在する場合、それらの価数は、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基および／または複素環基とさらに置換されることができ、これらの空きの価数が炭素上に存在する場合、それらの価数は、ハロゲンによって、および酸素結合置換基、窒素結合置換基、または硫黄結合置換基によってさらに置換されることができ、およびそのような空きの価数が複数存在する場合、これらの基は、結合を直接形成することによって、または新しいヘテロ原子、好ましくは酸素、窒素または硫黄との結合を形成することによってのいずれかで、環を形成するために連結され得ると、理解される。水素を置換基と置き換えても、許容できない不安定性を本発明の分子に導入しないならば、さもなければ化学的に適切であるならば、上記の置換を行うことができると、さらに理解される。
【００４１】
「医薬的に許容される塩類」とは、親化合物の望ましい生物活性を保持し、かつ望ましくない毒物学的効果を与えない塩類である。医薬的に許容される塩の形態は、酸添加または塩基添加に由来する、多形ならびに非晶形の異なる塩類が挙げられる。酸添加塩は、無機酸または有機酸で形成されることができる。そのような酸の制限的な例ではないが説明例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ナフトエ酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、アジピン酸、乳酸、酒石酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、カンファースルホン酸、およびエタンスルホン酸が挙げられる。医薬的に許容される塩基添加塩は、金属対イオンまたは有機対イオンで形成されることができ、これらに限定されるものではないが、ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属塩；マグネシウムまたはカルシウムなどのアルカリ土類金属塩；および例えば、ＮＸ4+（ＸはＣ1-4である）のアンモニウム塩またはテトラアルキルアンモニウム塩が挙げられる。
【００４２】
「互変異性体」とは、互変異性型と呼ばれる、１つまたは複数の型で存在することができる化合物であり、該化合物中の隣接する二重結合の位置で再配列を伴う、１つまたは複数の水素原子の移動によって相互転換することができる。これらの互変異性型は、互いに平衡状態にあり、およびこの平衡点は、その化合物の物理状態の正確な性質に依存することになる。互変異性型が可能な場合、本発明はすべての可能な互変異性型に関すると、理解される。
【００４３】
「溶媒和化合物」とは、本発明の化合物が、ある一定比率で医薬的に許容される共溶媒と結合される添加複合体である。共溶媒としては、これらに限定されるものではないが、水、メタノール、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、イソブタノール、ターシャル−ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチレングリコール、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、Ｎ−メチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルアセトアミド、ピリジン、ジオキサン、およびジエチルエーテルが挙げられる。水和物とは、共溶媒が水である溶媒和化合物である。本発明の化合物の定義は、規定された活性を有する、すべての可能な水和物および溶媒和化合物をいずれの比率でも包含すると、理解されるのもとする。
【００４４】
「有効量」とは、病的状態を寛解させる、または疾患の症状を弱めることによって疾患を治療するために有効な量である。「有効量」は、疾患の測定に関連するパラメータの少なくとも1つを改善するために有効な量である。
【００４５】
二官能基Ｒｈｏキナーゼ阻害化合物
本発明は、Ｒｈｏキナーゼ阻害化合物が、第２の医薬的活性化合物に共有結合される、二官能化合物に関する。ＲＯＣＫ阻害化合物および第２の医薬的活性化合物は、相補的活性を有し、かつ同様の必要投与量を有する。共有結合は、代謝的に不安定であり、そのため、前述の化合物は被験者に投与されると、ＲＯＣＫ阻害化合物と第２の化合物に分離することが可能になり、したがって各活性薬剤の相加効果または相乗効果をもたらすことが多い。２種類の薬剤（Ｒｈｏキナーゼ阻害剤および第２の薬物）の同時送達が有利な場合、二官能化合物は有用である。
【００４６】
緑内障などの眼の疾患を管理するためには複数の医薬品を使用する必要があるので、複数の機構的アプローチの効果を単剤で達成する療法を有することは、有利である。単剤の治療薬は、患者コンプライアンスをより良好にすることが可能となる。
【００４７】
本発明に有用な二官能基Ｒｈｏキナーゼ阻害化合物は、一般式Ｉの化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩類、溶媒和化合物および／またはその水和物を含む。
【００４８】
式Ｉの化合物は以下の通りである：
【００４９】
【化１】
2013531063.tif 000002
【００５０】
式中、Ｄｒｕｇ1（ＦＧ1）は、官能基ＦＧ1を含有するＲｈｏキナーゼ阻害化合物であり；
Ｄｒｕｇ2（ＦＧ2）は、官能基ＦＧ2を含有する第２の薬物である。Ｄｒｕｇ2は、プロスタグランジンＦ2αアゴニストおよびムスカリンアゴニストのピロカルピンの誘導体から選択される。
【００５１】
ＦＧ1およびＦＧ2は、それぞれ、独立してＤｒｕｇ1およびＤｒｕｇ2上の官能基である。ＦＧ1は、生物学的に不安定な結合の形成に関与することができる官能基であり、ヒドロキシル、カルボン酸、一級アミン、二級アミン、三級アミン、複素環式窒素、ヘテロアリール窒素、および第一級スルホンアミドまたは第二級スルホンアミドが挙げられる。
ＦＧ2は、カルボン酸またはエステル、−ＯＣ（Ｏ）−である。
【００５２】
Ｌｉｎｋは、結合ユニットであり、ＦＧ1およびＦＧ2と生物学的に不安定な結合を形成する。Ｌｉｎｋは、以下の特定の基から選択される：
【００５３】
【化２】
2013531063.tif 000003
【００５４】
式中、Ａ1およびＡ2は、独立して、水素、低級アルキル（Ｃ1-6アルキル）またはアリールアルキルであり、随意に置換され、かつＡ1およびＡ2は、随意に連結して、直接結合を介して、または窒素原子、酸素原子もしくは硫黄原子との結合を介して環を形成する；
Ｄは、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、複素環、（複素環）アルキルまたは（複素環）アルケニルであり、随意に置換される。
【００５５】
当業者は、リンク基１〜４と、官能基ＦＧ1およびＦＧ2との一部の特定の組み合わせが、生物学的に不安定な結合を形成する際に他の組み合わせよりも有用であることを認識するであろう。好ましい組み合わせは、ＦＧ2がカルボン酸であり、かつＦＧ1がアルコールであり、１つまたは複数のエステル結合の形成を可能にする場合、Ｌｉｎｋ−１またはＬｉｎｋ−２を使用することである。
【００５６】
さらなる好ましい組み合わせは、ＦＧ1およびＦＧ2が双方ともカルボン酸であり、２つのエステル結合の形成を可能にする場合、またはＦＧ1が三級アミンであり、ＦＧ2がカルボン酸であり、エステル−メチレン−アンモニウム結合の形成を可能にする場合、Ｌｉｎｋ−３を使用することである。ＦＧ1が、イミダゾール、ピラゾールもしくはテトラゾールなどのように、複素環もしくはヘテロアリール環に水素を有する非塩基もしくは弱塩基窒素である場合、またはＦＧ1が、アシルスルホンアミドもしくはスルホニルアニリンなどのように、やや酸性の水素を有する窒素を含む官能基である場合、Ｌｉｎｋ−３も有用である。
【００５７】
さらに好ましい組み合わせは、ＦＧ1が一級アミンまたは二級アミンである場合、Ｌｉｎｋ−４を使用することである。
【００５８】
Ａ1、Ａ2およびＤの基は、式Ｉの結果として生じる化合物の医薬的特性を最適化するような方法で選択されることができる。具体的には、これらの基の修飾を行って、式Ｉ化合物の親油性、親水性、結晶化度および他の特性を変えることができる。これらの変化を用いて、化合物の溶解性、送達のための製剤または呼吸域粒子への転換を最適化することができる。さらに、これらの変化を用いて、標的生体組織に関してこれらの化合物の透過性を調節することができる。さらに、化合物がその２つの成分、すなわち治療的に活性の２つのサブユニットにｉｎ  ｖｉｖｏで転換される速度を最適化するような方法で構造変化がなされることができる。これらの構造変化の一適用では、Ａ1、Ａ2、およびＤの基は、成分のサブユニットの放出を遅らせる方法として製剤化された式Ｉの化合物を含有するミセルまたはベシクルの形成を促進するような方法で選択されることができる。上述の構造変化は、成分のサブユニットの基本的な治療的価値を変えることなくなされることができる。
【００５９】
好ましいＡ1およびＡ2は、独立して水素、メチル、およびエチルである。好ましいＤは、フェニル、ピリジル、（ＣＨ2）iＣＨＡ3（ＣＨ2）j、および（ＣＨ2）iＣ6Ｈ4（ＣＨ2）jを含み、ここで、ｉおよびｊは、独立して、０〜４を含み、Ａ3は、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルである。
【００６０】
具体的には、Ｌｉｎｋ−２の基では、最も好ましいＤは、ＣＨ2またはＣＨＣＨ3である。Ｌｉｎｋ−３の場合、最も好ましいＤは、ＣＨ2、ＣＨ（ＣＨ3）、（ＣＨ2）3、（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5および（ＣＨ2）2ＣＨＣＨ3である。Ｌｉｎｋ−４の場合、最も好ましいＡ1は、水素であり、および最も好ましいＡ2は、水素とメチルである。
【００６１】
本発明の好ましい実施形態では、式ＩのＤｒｕｇ1（ＦＧ1）は、米国特許第２００８／０２１４６１４Ａ１号に記載の式ＩＩに開示されたＲｈｏキナーゼ阻害化合物である。具体的には、この実施形態では、Ｄｒｕｇ1（ＦＧ1）は、式ＩＩの化合物である：
【００６２】
【化３】
2013531063.tif 000004
【００６３】
［式中、
Ｑは、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ2または（ＣＲ4Ｒ5）n3であり；
ｎ1は、１、２または３であり；
ｎ2は、１または２であり；
ｎ3は、０、１、２または３であり；
式中、以下：
【００６４】
【化４】
2013531063.tif 000005
【００６５】
によって表される環は、アルキル、ハロ、オキソ、ＯＲ6、ＮＲ6Ｒ7またはＳＲ6によって随意に置換され；
Ｒ2は、以下のヘテロアリール系から選択され、随意に置換され；
【００６６】
【化５】
2013531063.tif 000006
【００６７】
Ｒ2−１およびＲ2−１が好ましく；
Ｒ3〜Ｒ7は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニルまたはシクロアルキルアルキニルであり、随意に置換される。
【００６８】
Ａｒは、フェニルまたはナフチルなどの単環式アリールまたは二環式アリールであり；
Ｘは、Ａｒ上の１〜３の置換基であり、それぞれ独立してＹ−Ｚの形態であり、ＺはＡｒに付着しており；
Ｙは、Ｚ上の１つまたは複数の置換基であり、かつ各々独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＲ8、ＮＲ8Ｒ9、ＮＯ2、ＳＲ8、ＳＯＲ8、ＳＯ2Ｒ8、ＳＯ2ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8ＳＯ2Ｒ9、ＯＣＦ3、ＣＯ2Ｒ8、ＣＯＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ9Ｒ10、Ｎ−含有複素環、またはＮ−含有ヘテロアリール（インダゾールおよびピラゾールなど）から選択され；
Ｚの各例は、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、複素環、（複素環）アルキル、（複素環）アルケニル、（複素環）アルキニルから選択されるか、または不在であり；
Ｒ8〜Ｒ10は、独立して、不在、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、複素環、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、（複素環）アルキル、（複素環）アケニル、（複素環）アルキニルまたは複素環であり；これらに限定されるものではないが、ＯＲ11、ＣＯＯＲ11、ＮＲ11Ｒ12、ＮＯ2、ＳＲ11、ＳＯＲ11、ＳＯ2Ｒ11、ＳＯ2ＮＲ11Ｒ12、ＮＲ11ＳＯ2Ｒ12、ＯＣＦ3、ＣＯＮＲ11Ｒ12、ＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）Ｒ12、ＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ12、ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ11Ｒ12もしくはＮＲ11Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ12Ｒ13を含む置換基を含有する、１つまたは複数のヘテロ原子またはハロゲンによって随意に置換され；
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、ＳＯ2−、および−ＮＲ11−の結合からなる群から選択されるＬｉｎｋと、随意に連結するＲ8、Ｒ9およびＲ10の基のうちのいずれか２つと環を形成し；および
Ｒ11〜Ｒ13は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、シクロアルキルアルキニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、（複素環）アルキル、（複素環）アルケニル、（複素環）アルキニル、複素環または不在である。
好ましいＺは、アルキルまたは不在である。
好ましいＱは、（ＣＲ4Ｒ5）n3であり、およびn3は１〜３である。より好ましいＱは、ＣＨ2である。
好ましいＲ3、Ｒ4およびＲ5は、Ｈである。
好ましいＲ8〜Ｒ10は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニル、複素環（ＯＲ11、ＣＯＯＲ11、ＮＲ11Ｒ12、ＳＯ2ＮＲ11Ｒ12、ＮＲ11ＳＯ2Ｒ12によって随意に置換される）、または不在であり；より好ましいＲ8は、Ｈ、アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルまたは複素環である。
好ましいＲ11〜Ｒ13は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルケニルまたは複素環である。］
【００６９】
式Ｉの特定の実施形態は、式ＩＩＩの化合物である：
【００７０】
【化６】
2013531063.tif 000007
【００７１】
［式中、式ＩＩに関して上記で定義したように、Ｘ2およびＸ3は、Ｘと同じであり、かつＺ1は、Ｚと同じである。Ｙ1は、−Ｏ−、ＣＯ2、−ＮＲ8−、−ＳＯ2ＮＲ8−（Ｎは、Ｚ1に連結される）、−ＮＲ8ＳＯ2−（Ｓは、Ｚ1に連結される）、−ＮＲ8ＣＯ−（Ｃは、Ｚ1に連結される）またはＮ含有ヘテロアリールである。］
【００７２】
式ＩＩの好ましい化合物は、以下の表Ｉに示す。以下の構造では、簡単化のために、水素を図面で省略する。描かれた互変異性体は、可能な限りのすべての互変異性体を表す。構造は、好ましい立体化学を示すために描かれており；立体異性体がこれらの化合物で生成され得る場合、構造は、いずれの可能な立体異性体の単独、またはいずれの比率での立体異性体の混成を意味するものとする。
【００７３】
【表１】
2013531063.tif 000008
【００７４】
【表２】
2013531063.tif 000009
【００７５】
【表３】
2013531063.tif 000010
【００７６】
【表４】
2013531063.tif 000011
【００７７】
【表５】
2013531063.tif 000012
【００７８】
【表６】
2013531063.tif 000013
【００７９】
【表７】
2013531063.tif 000014
【００８０】
【表８】
2013531063.tif 000015
【００８１】
【表９】
2013531063.tif 000016
【００８２】
本発明の化合物は、具体的に式ＩおよびＩＩＩの化合物に向けられる。該化合物では、Ｄｒｕｇ2は、ムスカリンアゴニストのピロカルピン（Ｄｒｕｇ2−１）の誘導体またはプロスタグランジンＦ2α（Ｄｒｕｇ2−２）から選択され、およびＦＧ2は、カルボン酸であり、ＣＯＯ−を介してＬｉｎｋに連結される。
【００８３】
【化７】
2013531063.tif 000017
【００８４】
Ｄｒｕｇ2−２の好ましい基Ｗは、Ｗ−１、Ｗ−２、Ｗ−３、Ｗ−４およびＷ−５であり、以下に示す。
【００８５】
【化８】
2013531063.tif 000018
【００８６】
これらの化合物において、Ａ4は、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルまたはアリールアルキルであり、およびＷは、プロスタグランジンＦ2α受容体アゴニストの文献でよく知られている官能性を表す。
【００８７】
ピロカルピン（Ｄｒｕｇ2−１）は、ピロカルプス（Ｐｉｌｏｃａｒｐｕｓ）属の熱帯アメリカ低木の葉から得られるムスカリンアルカロイドである。ピロカルピンは、緑内障の治療のために最も広く使用されているコリン作動薬であり、毛様筋のムスカリン受容体を刺激することで作用し、それによって前房隅角を広げ、線維柱帯網を通して房水の流出を増加させる。
【００８８】
プロスタグランジン（Ｄｒｕｇ2−２）は、低用量での炎症のメディエーターとして知られおり；プロスタグランジンは、ＩＯＰを減少させることが示されている。エイコサノイドとして知られている降圧性脂質としては、プロスタグランジン類似体のラタノプロスト、トラボプロストおよびビマトプロストが挙げられる。一例として、プロスタグランジンＦ2α類似体のエステルプロドラッグ類似体であるラタノプロストは、選択的プロスタノイドＦＰ受容体アゴニストである。ラタノプロストは、ブドウ膜強膜経路を通して眼からの房水流出を増加させることによって、ＩＯＰを低下させる。これがどのように起こるかはわかっていないが、ラタノプロストは、毛様体の受容体に結合して、メタロプロテイナーゼをアップレギュレートすると思われる。これらの酵素は、細胞外基質を再構築して、房水に対して該領域の浸透性を高め、それによって流出を増加させる。
【００８９】
表２．式ＩＩＩの例示化合物
【００９０】
【化９】
2013531063.tif 000019
【００９１】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１
【００９２】
【化１０】
2013531063.tif 000020
【００９３】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−４−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）ブタ−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物２
【００９４】
【化１１】
2013531063.tif 000021
【００９５】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（３−オキソデシル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物３
【００９６】
【化１２】
2013531063.tif 000022
【００９７】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｅ）−３，３−ジフルオロ−４−フェノキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物４
【００９８】
【化１３】
2013531063.tif 000023
【００９９】
（５Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｓ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物５
【０１００】
【化１４】
2013531063.tif 000024
【０１０１】
（Ｚ）−３−（２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物６
【０１０２】
【化１５】
2013531063.tif 000025
【０１０３】
（Ｚ）−３−（２−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物７
【０１０４】
【化１６】
2013531063.tif 000026
【０１０５】
（Ｚ）−１−（Ｎ−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェニル）エチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物８
【０１０６】
【化１７】
2013531063.tif 000027
【０１０７】
（Ｚ）−１−（Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェニル）メチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物９
【０１０８】
【化１８】
2013531063.tif 000028
【０１０９】
（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドールｌ−１−イル）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１０
【０１１０】
【化１９】
2013531063.tif 000029
【０１１１】
（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドールｌ−１−イル）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１１
【０１１２】
【化２０】
2013531063.tif 000030
【０１１３】
（Ｚ）−１−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）ベンジルカルバモイルオキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート、化合物１２
【０１１４】
【化２１】
2013531063.tif 000031
【０１１５】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル２−エチル−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−３−（プロピオニルオキシメチル）ブタノエート、化合物１３
【０１１６】
式Ｉおよび式ＩＩＩの化合物の調製
本発明は、さらに、式Ｉの化合物を調製するための方法に関する。式の化合物、具体的には、式ＩＩＩによって記述される化合物の調製のための一般的なアプローチは、スキーム１に記述する。当業者は、出発物質を変えることもあり得、かつさらなるステップを用いて本発明が包含する化合物を生成することもできることを認識するであろう。場合によっては、上記の一部の変換を達成するために、特定の反応官能基を保護することも必要であり得る。概して、そのような保護基の必要性およびそのような基を付着させ、かつ除去するのに必要な条件は、有機合成分野の当業者にとって明らかであろう。
【０１１７】
本発明の医薬的に許容される化合物の無毒のプロドラッグ、例えばアシル化プロドラッグ、を調製するために使用されることができる種々の合成法を当業者は認識するであろう。
【０１１８】
【化２２】
2013531063.tif 000032
【０１１９】
中間体１の一般形態の化合物は、文献に十分に記述されている。適切な活性型の結合機能性を有するこれらの中間体の反応は、中間体２の形態の化合物をもたらす。次いで、これらの中間体の化合物は、Ｄｒｕｇ2（ＦＧ2）と反応して、中間の化合物中間体３を与え得る。場合によっては、適切な活性型の中間体３のさらなる反応は、中間体４で活性な形態をもたらすためにＱで官能基の活性化を必要とすることになる。次いで、この中間体は、分子の残部と結合して、式ＩＩＩの化合物をもたらす。
【０１２０】
以下に示すように、一部の合成操作は、Ｄｒｕｇ2−２の官能性を保護することから恩恵を受け、かつ適切な保護基（ＰＧ）の性質と選択肢が明らかになることを当業者は認識するであろう。
【０１２１】
【化２３】
2013531063.tif 000033
【０１２２】
特定の一実施形態では、ＲＯＣＫ阻害部分のＤｒｕｇ1は、ＦＧ1に対してヒドロキシル基を有する。これらの場合には、Ｌｉｎｋ−１およびＬｉｎｋ−２の形態の結合基が好ましい。この種類の化合物を調製する一般的方法は、スキーム２に示す。
【０１２３】
【化２４】
2013531063.tif 000034
【０１２４】
結合基が不在のＬｉｎｋ−１の場合、アルコール中間体５がＤｒｕｇ2とカルボン酸塩と直接結合することにより、結合生成物である中間体７をもたらす。この結合を達成する方法は、当業者にとって周知であり、直接エステル化、カルボジイミドなどの結合剤によって媒介されるエステル化、または例えば、酸ハロゲン化物としてのカルボン酸の活性化、およびそれに続く結合が挙げられる。あるいは、アルコールパートナーは、例えば、Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ反応を用いて、典型的には塩基触媒の存在下で、中間体６に示される臭化物などのハロゲン化合物、またはメシラートもしくはトシラートなどの他の活性化形態、およびカルボン酸塩によって置換されるこれらの活性化中間体への変換によって活性化されることができる。これらの方法の一部は、これが分子内のキラル中心である場合、アルコールの中心で立体化学的配置の反転をもたらすことになる。当業者は、所望の生成物を得るためにこれらの位置の発生およびその化学を調整する方法を認識するであろう。スキーム１の目的で記述した中間体７をさらに合成すると、式ＩＩＩの所望の化合物をもたらす。
【０１２５】
上記の調製のバリエーションでは、中間体８の形態で結合ユニットを上述の中間体５または中間体６のいずれかと結合することによって結合基Ｌｉｎｋ−２を組み込み、中間体９をもたらすことができる。次いで、この中間体を前述のＤｒｕｇ2のカルボン酸塩に結合させて、中間体１０を与えることができる。中間体１０は、中間体７について記述されたものに類似している様式で、その結合基がＬｉｎｋ−２である式ＩＩＩの所望の化合物に変換される。
【０１２６】
本発明の別の特定の実施形態では、ＲＯＣＫ阻害部分のＤｒｕｇ1は、ＦＧ1に対してカルボン酸基を有する。これらの場合、Ｌｉｎｋ−３の形態での結合基が好ましい。この種類の化合物を調製する一般的方法は、スキーム３に示す。
【０１２７】
【化２５】
2013531063.tif 000035
【０１２８】
この場合、Ｄｒｕｇ1のカルボン酸ＦＧ1を有する中間体１１を中間体１２でエステル化して、中間体１３をもたらす。スキーム２においてＬｉｎｋ−１についての上述のいずれのエステル化の方法を、この変換で用いることができる。続いて、ハロゲン化物の求核置換においてＤｒｕｇ2のカルボン酸塩が中間体１３と反応すると、ジエステル中間体１４をもたらす。スキーム１の目的で記述した中間体１４をさらに合成すると、式ＩＩＩの所望の化合物をもたらす。中間体１４においてジエステを調製するために用いられる結合方法のステップの順および性質では、多くのバリエーションが可能であり、そのいくつかは、スキーム２の場合には、上述されており、これらの方法は、この種類の中間体の調製においてすべて有用であると認識されるであろう。
【０１２９】
本発明の別の特定の実施形態では、ＲＯＣＫ阻害部分のＤｒｕｇ1は、ＦＧ1として比較的酸性の水素を有する窒素を含有する。そのような官能基の例としては、スルホンアミド窒素原子、具体的には、アリールアミンスルホンアミド、およびインドールまたはベンズイミダゾルなどの多くの窒素含有複素環系の窒素原子が挙げられる。これらの場合、Ｌｉｎｋ−３の形態の結合基が好ましい。この種類の化合物を調製する一般的方法は、スキーム４に示す。
【０１３０】
【化２６】
2013531063.tif 000036
【０１３１】
この場合、典型的には塩基触媒の下、Ｄｒｕｇ2のカルボン酸塩を中間体１５などのジハロカーボンと反応させると、ハロアルキルエステル中間体１６をもたらす。ＦＧ1の窒素を有する比較的酸性の水素を（ＮＨ）として模式的に表した中間体１８において、塩基触媒したハロゲンの窒素との求核置換によって、結合中間体１８をもたらす。スキーム１の目的で記述した中間体１８をさらに合成すると、式ＩＩＩの所望の化合物をもたらす。ブロモクロロカーボン中間体１５を本明細書では例として用いる。中間体１６の調製のために、多数の有用な代替物が存在することを認識するであろう。
【０１３２】
本発明の別の特定の実施形態では、Ｒｏｃｋ阻害部分のＤｒｕｇ1は、ＦＧ1に対して一級アミンまたは二級アミンなどの求核窒素を含有する官能基を有する。これらの場合、Ｌｉｎｋ−４の形態の結合基が好ましい。この種類の化合物を調製する一般的方法は、スキーム５に示す。
【０１３３】
【化２７】
2013531063.tif 000037
【０１３４】
Ｌｉｎｋ４の場合、本明細書では例示目的で一級アミンとして本明細書に示す、Ｄｒｕｇ1の求核窒素ＦＧ1を有する中間体１９を、典型的には塩基の存在下で、ハロアルキルクロロホルメート中間体２０でアシル化し、カルバミン酸塩の生成物として中間体２１をもたらす。中間体２１において、これも典型的には塩基の存在下で、Ｄｒｕｇ2のカルボン酸塩によるハロゲンの求核置換によって、カルバミン酸エステルアセタールの中間体２２をもたらす。スキーム１の目的で記述した中間体２２をさらに合成すると、式ＩＩＩの所望の化合物をもたらす。
【０１３５】
医薬組成物およびその使用
本発明は、医薬的に許容される担体、式ＩＩＩの１つまたは複数の化合物、医薬的に許容される塩、溶媒和化合物および／またはその水和物を含む医薬組成物を提供する。医薬的に許容される担体は、従来の基準を用いて当業者が選択することができる。医薬的に許容される担体は、これらに限定されるものではないが、水性ベースおよび非水性ベースの溶液、懸濁剤、乳濁液、マイクロエマルジョン、ミセル溶液、ゲル類、および軟膏類が挙げられる。また、医薬的に許容される担体は、これらに限定されるものではないが、生理食塩水および電解質水溶液；塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセロールおよびブドウ糖などのイオン性浸透圧剤および非イオン性浸透圧剤；水酸化物、ヒドロニウム、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩およびトロメタミンの塩類などのｐＨ調整剤および緩衝剤；亜硫酸水素塩、亜硫酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ亜硫酸塩、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、グルタチオン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、トコフェロールおよびパルミチン酸アスコルビンの塩類、酸類および／または塩基類などの抗酸化剤；リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルイノシトール）、ポロキサマーとポロキサミン、ポリソルベート（ポリソルベート８０、ポリソルベート６０およびポリソルベート２０など）、ポリエーテル（ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールなど）などの表面活性物質；ポリビニルアルコールおよびポビドンなどのポリビニル；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体とそれらの塩類；ミネラルオイルおよび白色ワセリンなどの石油誘導体；ラノリン、落花生油、パーム油、大豆油などの脂肪類；モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド；カルボキシポリメチレンのゲルなどのアクリル酸のポリマー、およびデキストランなどの多糖類、およびヒアルロン酸ナトリウムなどのグリコサミノグリカンを含む成分を含有することもある。そのような医薬的に許容される担体は、周知の保存料を用いることで細菌汚染に対して保存され得る。これらの保存料としては、これらに限定されるものではないが、ベンザルコニウムクロリド、エチレンジアミン四酢酸とその塩類、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、メチルパラベン、チメロサール、およびフェニルエチルアルコールが挙げられ、または単回使用用もしくは複数回使用用のいずれかの非保存製剤として製剤化され得る。
【０１３６】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、約３〜９、好ましくは４〜８のｐＨ値を有する局所用の眼科用薬剤として製剤化される。本発明の化合物は、通常、少なくとも０．００１重量％の量で、例えば、０．００１重量％〜５重量％、好ましくは約０．００３重量％〜約２重量％、最も好ましくは約０．０２重量％〜約１重量％の量でこれらの製剤に含有される。局所投与のために、熟練した臨床医のルーチンの自由裁量によって１日１〜４回、これらの製剤を１〜２滴、眼の表面に送達する。
【０１３７】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は、０．００１〜２ｗ／ｖ％の量の式ＩＩＩの少なくとも１種類の化合物と、２００〜４００ｍＯｓｍ／ｋＧの範囲で浸透圧を維持するための等張化剤とを含み、該製剤のｐＨ値が３〜９である水性医薬製剤として製剤化される。
【０１３８】
さらに別の実施形態では、該水性医薬製剤は、０．００１〜２ｗ／ｖ％の量の式ＩＩＩの少なくとも１種類の化合物と、１または複数の錯化剤および／または可溶化剤と、０．０１〜０．５％の保存料と、０．０１〜１％のキレート化剤と、２００〜４００ｍＯｓｍ／ｋＧの範囲で浸透圧を維持するための等張化剤とを含み、該製剤のｐＨ値が４〜８である。該化合物の好ましい量は、０．０１〜１ｗ／ｖ％である。
【０１３９】
そのような眼科用薬剤の送達は、単一単位用量バイアルを使用して行われてもよく、保存料の含有物を除外してもよい。あるいは、眼科用薬剤を、複数回使用を目的とする眼科用点滴器に含有してもよい。そのような場合、複数回使用用の製品容器は、特に、製剤が自己保存である場合、保存料を含有しても、含有しなくてもよい。さらに、該点滴器は、各滴下の製品製剤をある一定量で送達するように設計される。そのような眼科用薬剤の典型的な滴下量は、２０〜６０μＬ、好ましくは２５〜５５μＬ、より好ましくは３０〜５０μＬ、最も好ましくは３５〜５０μＬにわたるであろう。
【０１４０】
緑内障は、不可逆的な視力障害を引き起こす眼の疾患である。原発性開放隅角緑内障は、眼から体液（房水）の排出に対する異常に高い抵抗を特徴とする。線維柱帯網における細胞の収縮性ならびに細胞間および細胞と線維柱帯との間の接着の変化は、流れに対する抵抗の主要な決定要因である。本発明の化合物は、主にアクトミオシン結合細胞骨格構造の破損および／または膜との細胞骨格の相互作用の調節を介して、細胞の収縮性および細胞接着の両方に一過性の薬理学的摂動を引き起こす。線維柱帯網細胞の収縮性を変えることで、排出面の膨張を引き起こす。細胞間の接着、細胞と線維柱帯との間の接着が喪失すると、シュレム管を横切る傍細胞の流体の流れに影響を及ぼすことがあり得、または線維柱帯網の近傍小管の組織を通る流体の流れの経路を変え得る。両方の機序は、流体の流れに対する線維柱帯網の抵抗を下げ、それによって治療状有用な方法で眼圧を低下させるようである。
【０１４１】
アクチン細胞骨格の調節は、流体輸送の調節において重要である。有糸分裂阻害剤は、抗利尿反応に顕著に干渉し、細胞骨格の完全性がこの機能に不可欠であることを強く暗示している。上皮輸送を制御する際の細胞骨格のこの役割は、粒子凝集体を含有する水チャネルの転位において、および頂端膜へのそれらの送達において必要なステップである。細胞骨格の浸透圧依存再構成および特定のストレスタンパク質の発現は、浸透圧ストレスに対する髄質細胞の適応に関与する調節系の重要な構成要素である。本発明の化合物は、上皮機能を指示する際に、および流体輸送を調節する際に、特に眼表面の流体輸送を調節する際に、有用である。
【０１４２】
Ｒｈｏ結合プロテインキナーゼ阻害剤は、平滑筋収縮を調節するために、血管攣縮、具体的には、網膜血管攣縮の治療に有用である。網膜血管系の弛緩により、灌流速度が上昇し、それによって緑内障、高眼圧症、加齢黄斑変性症または網膜色素変性症などの網膜疾患および網膜症において神経保護機序をもたらす（アポトーシスおよび壊死の減少）。さらに、これらのキナーゼ阻害剤は、血管内皮透過性を調節し、およびそのようなものとして種々のアテローム生成剤に対して血管保護の役割を果たすことができる。
【０１４３】
本発明は、原発性開放隅角緑内障などの緑内障を治療することを含む眼圧を低下させる方法；視野の収縮を治療する方法；眼表面の流体輸送を調節する方法；血管攣縮を制御する方法；組織灌流を増加させる方法；およびアテローム生成剤に対する血管保護の方法を提供する。該方法は、治療を必要とする被験者を特定するステップと、アクトミオシン相互作用を阻害することなどによって、アクチン細胞骨格を変えるために有効な量で式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物を該被験者に投与するステップとを含む。
【０１４４】
本発明は、過剰な炎症、増殖、リモデリング、神経突起退縮、角膜神経変性、血管透過性および浮腫を伴う眼疾患を予防または治療する方法にも関する。具体的には、本発明は、アレルギー結膜炎、黄斑浮腫、黄斑変性症および眼瞼炎などの眼疾患を治療する方法に関する。該方法は、治療を必要とする被験者を特定することと、疾患を治療するために有効量の式ＩＩＩの化合物を該被験者に投与することとを含む。被験者は、哺乳類の被験者であり、好ましくはヒト被験者である。
【０１４５】
一実施形態では、本発明の医薬組成物は、眼科用製剤の形態で眼に局所的に（例えば、局所的に、前房内に、硝子体内に、網膜下に、結膜下に、眼球後に、または移植片を介して）投与される。
【０１４６】
本発明の化合物は、本発明の組成物を形成するために、眼科的に許容される保存料、表面活性物質、粘度エンハンサー、浸透エンハンサー、生体接着物質、抗酸化剤、緩衝剤、塩化ナトリウムおよび水と組み合わせて、水性もしくは非水性剤、無菌の眼科用懸濁液剤、乳濁液剤、マイクロエマルジョン剤、ゲル剤または溶液剤を形成することができる。
【０１４７】
本明細書に開示される活性化合物は、任意の好適な方法で、患者の眼に投与されることができるが、点滴剤、スプレー剤またはゲル剤の形態で、該活性化合物の液体またはゲル乳濁液が投与されることが好ましい。あるいは、該活性化合物は、リポソームによって眼に適用されることができる。さらに、該活性化合物は、ポンプ−カテーテルシステムによって涙膜に注入されることができる。本発明の別の実施形態は、例えば、これに限定されるものではないが、Ｏｃｕｓｅｒｔ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）で使用され、例えば、膜などの持続的放出装置内または選択的放出装置内に含有される活性化合物を含む。さらなる実施形態として、該活性化合物は、眼に装着されるコンタクトレンズ内に含有される、コンタクトレンズによって保有される、またはコンタクトレンズに付着されることができる。本発明の別の実施形態は、眼表面に適用されることができるスワブまたはスポンジ内に含有される活性化合物を含む。本発明の別の実施形態は、眼表面に適用されることができる液体スプレー内に含有される活性化合物を含む。本発明の別の実施形態は、涙腺組織中に、または眼表面への直接的な活性化合物の注射を含む。
【０１４８】
本発明の化合物は、眼への該化合物の局所投与に加えて、上述の目的で使用する場合、当業者にとって既知の任意の方法で系統的に投与されることができる。
【０１４９】
本発明を以下の実施例でさらに説明するが、本発明の範囲がこれらの実施例に記述する特定の方法に限定されると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１５０】
実施例１
【０１５１】
【化２８】
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【０１５２】
３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒド
ジクロロメタン中３−（２−ヒドロキシエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドの溶液を、５℃まで冷却して、２．２当量のピリジンおよび１．１当量の塩化パロトルエンスルホニルを添加した。該混合物を室温まで温め、ＨＬＣ分析によって判断して、反応が終了するまで撹拌した。該混合物をさらにジクロロメタンで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄して、次いで蒸発させて残基を得た。
【０１５３】
上で得た粗トシラートをアセトンで溶解して、温めながら過剰なヨウ化ナトリウムで処理した。ＨＬＣによる分析が、ヨウ化物への変換が終了したことを示すまで、この反応を継続させた。変換終了後、該混合物を濾過し、蒸発させて残基を得た。シリカゲル上でのクロマトグラフィーによって、純粋な表題のヨウ化物を得た。
【０１５４】
実施例２
【０１５５】
【化２９】
2013531063.tif 000039
【０１５６】
（Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１５７】
ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドおよび２当量のＤＢＵで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題のエステルを得た。
【０１５８】
実施例３
【０１５９】
【化３０】
2013531063.tif 000040
【０１６０】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１６１】
ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の（Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートの溶液を、等モル量の氷酢酸とナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１６２】
実施例４
【０１６３】
【化３１】
2013531063.tif 000041
【０１６４】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−４−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）ブタ−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１６５】
ＤＭＦ中（５Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｒ，Ｅ）−４−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−３−ヒドロキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（５Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｒ，Ｅ）−４−（３−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−３−ヒドロキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−２）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１６６】
実施例５
【０１６７】
【化３２】
2013531063.tif 000042
【０１６８】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（３−オキソデシル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１６９】
ＤＭＦ中（５Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（３−オキソデシル）シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（５Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（３−オキソデシル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−４）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１７０】
実施例６
【０１７１】
【化３３】
2013531063.tif 000043
【０１７２】
（Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｅ）−３，３−ジフルオロ−４−フェノキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１７３】
ＤＭＦ中（５Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｅ）−３，３−ジフルオロ−４−フェノキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（５Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−２−（（Ｅ）−３，３−ジフルオロ−４−フェノキシブタ−１−エニル）−３，５−ジヒドロキシシクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−３）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１７４】
実施例７
【０１７５】
【化３４】
2013531063.tif 000044
【０１７６】
（５Ｚ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｓ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１７７】
ＤＭＦ中（５Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｓ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（５Ｚ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｓ，Ｅ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル−１−エニル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−５）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１７８】
実施例８
【０１７９】
【化３５】
2013531063.tif 000045
【０１８０】
（Ｚ）−３−（２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１８１】
ＤＭＦ中２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）酢酸の溶液を、１．５当量のジシクロヘキシルカルボジイミドと、２当量の３−ブロモプロパノールと、触媒量の４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノとで、０℃で処理し、次いで５０℃まで温めた。ブロモエステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体臭化物である、３−ブロモプロピル２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）アセテートを得た。ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸を、２当量の中間体臭化物と、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（Ｚ）−３−（２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）アセトイルオキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−２）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１８２】
実施例９
【０１８３】
【化３６】
2013531063.tif 000046
【０１８４】
（Ｚ）−３−（２−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェノキシ）アセトキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１８５】
ＤＭＦ中２−（３−ホミルフェノキシ）酢酸を、１．５当量のジシクロヘキシルカルボジイミドと、２当量の３−ブロモプロパノールと、触媒量の４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンとで、０℃で処理し、次いで５０℃まで温めた。ブロモエステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体臭化物である、３−ブロモプロピル２−（３−ホルミルフェノキシ）アセテートを得た。ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の中間体臭化物と、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該化合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、中間体ホルミルエステルである、（Ｚ）−３−（２−（３−ホルミルフェノキシ）アセトイルオキシ）プロピル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。ＴＨＦ中Ｎ−（（Ｒ）−ピペリジン−３−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−２）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１８６】
実施例１０
【０１８７】
【化３７】
2013531063.tif 000047
【０１８８】
（Ｚ）−１−（Ｎ−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェニル）エチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１８９】
ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の１−ヨード−１−ブロモエタンと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体エステルである、（Ｚ）−１−ブロモエチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。トルエン中（Ｒ）−Ｎ−（３−（（３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−６−メチルフェニル）メタンスルホンアミド（国際公開ＷＯ第２００８／０７７０５７号によって調製した）の溶液を、２当量の中間体エステルと、２当量の炭酸カリウムとで処理した。該混合物を還流させて、出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−３）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１９０】
実施例１１
【０１９１】
【化３８】
2013531063.tif 000048
【０１９２】
（Ｚ）−１−（Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェニル）メチルスルホンアミド）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１９３】
ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の１−ヨード−１−ブロモエタンと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体エステルである、（Ｚ）−１−ブロモエチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。トルエン中Ｎ−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）フェニル）メチルスルホンアミド（国際公開ＷＯ第２００８／０７７０５７号によって調製した）の溶液を、２当量の中間体エステルと、２当量の炭酸カリウムとで処理した。該混合物を還流させて、出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−３）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１９４】
実施例１２
【０１９５】
【化３９】
2013531063.tif 000049
【０１９６】
（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０１９７】
ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の１−ヨード−１−ブロモエタンと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体エステルである、（Ｚ）−１−ブロモエチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。トルエン中６−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール（国際公開ＷＯ第２００８／０７７０５７号によって調製した）の溶液を、２当量の中間体エステルと、２当量の炭酸カリウムとで処理した。該混合物を還流させて、出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させる。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−３）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０１９８】
実施例１３
【０１９９】
【化４０】
2013531063.tif 000050
【０２００】
（Ｚ）−１−（６−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール−１−ｙｌ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０２０１】
ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の１−ヨード−１−ブロモエタンと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体エステルである、（Ｚ）−１−ブロモエチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエートを得た。トルエン中６−（（（Ｒ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−インドール（国際公開ＷＯ第２００８／０７７０５７号によって調製した）の溶液を、２当量の中間体エステルと、２当量の炭酸カリウムとで処理した。該混合物を還流させて、出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−３）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０２０２】
実施例１４
【０２０３】
【化４１】
2013531063.tif 000051
【０２０４】
（Ｚ）−１−（３−（（（Ｓ）−３−（１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピペリジン−１−イル）メチル）ベンジルカルバモイルオキシ）エチル７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノエート
【０２０５】
ピリジン中３−（アミノメチル）ベンズアルデヒドの溶解を、２当量のクロロ蟻酸１−クロロエチルで処理した。カルバミン酸塩に変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体カルバメートである、１−クロロエチル３−ホルミルベンジルカルバメートを得た。ＤＭＦ中（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）−シクロペンチル）ヘプト−５−エン酸の溶液を、２当量の中間体カルバメートと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。カルバミン酸エステルアセタールに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体カルバミン酸エステルアセタールである、１−（（Ｚ）−７−（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンチル）シクロペンチル）ヘプト−５−エノイルオキシ）エチル３−ホルミルベンジルカルバメートを得た。ＴＨＦ中Ｎ−（（Ｒ）−ピペリジン−３−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミンと、等モル量の中間体カルバミン酸エステルアセタールとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させる。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−２）−（Ｗ−１）−（Ｌｉｎｋ−４）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０２０６】
実施例１５
【０２０７】
【化４２】
2013531063.tif 000052
【０２０８】
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（５−（（（Ｒ）−３−（イソキノリン−５−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）メチル）−２−メチルフェノキシ）エチル２−エチル−４−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−３−（プロピオニルオキシメチル）ブタノエート  ＤＭＦ中（２Ｓ，３Ｒ）−２−エチル−３−（（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−４−（プロピオニルオキシ）ブタン酸の溶液を、２当量の３−（２−ヨードエトキシ）−４−メチルベンズアルデヒドと、２当量のＤＢＵとで処理し、次いで該混合物を５０℃まで温めた。エステルに変換する反応をＨＰＬＣでモニターした。反応が終了すると、該反応物を冷却し、ジエチルエーテルで希釈して、希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして中間体ホルミルエステルである、（２Ｓ，３Ｒ）−２−（５−ホルミル−２−メチルフェノキシ）エチル２−エチル−３−（（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−４−（プロピオニルオキシ）ブタノエートを得た。ＴＨＦ中（Ｒ）−Ｎ−（ピロリジン−３−イル）イソキノリン−５−アミンと、等モル量の中間体ホルミルエステルとの溶液を、等モル量の氷酢酸と、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドとで処理した。出発物質が反応産物に完全に変換するのをＨＰＬＣでモニターし、反応が終了すると、該産物を希釈水性ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3および鹹水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ4上で乾燥させた。蒸発させて得た残基を、シリカゲル上でクロマトグラフして、表題の化合物を得て、式１内で（Ｄｒｕｇ2−１）−（Ｌｉｎｋ−１）−（Ｄｒｕｇ1）として表した。
【０２０９】
Ｒｈｏキナーゼ阻害アッセイ
ＲＯＣＫ２活性の阻害を、ＩＭＡＰ（商標）Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ製品番号＃８０７３）を用いて決定する。ＲＯＣＫ２キナーゼ（ＵｐｓｔａｔｅＣｈｅｍｉｃｏｎ  ＃１４−４５１）およびフルオレセイン標識した基質ペプチドＦｌ−ＡＫＲＲＲＬＳＳＬＲＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ製品番号Ｒ７１８４）を、試験化合物とともに１０ｍＭのＴｒｉ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、および０．１％ＢＳＡを含む緩衝液中で５分間プレインキュベートする。このプレインキュベーションの後、１０μＭのＡＴＰを添加して、反応を開始させる。室温で６０分後に、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＩＭＡＰ（商標)結合溶液を添加して、リン酸化した基質を結合させる。ＩＭＡＰ（商標）ビーズの存在下でのインキュベーションから３０分後、蛍光偏光を読み取り、その比率をｍＰとして記録するＩＣ50の結果をＧｒａｐｈｐａｄ製のＰｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出する。
【０２１０】
このアッセイは、単離された酵素を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ設定で、ＲＯＣＫ２を阻害する化合物の能力を示す。約２μＭまたはそれ以下で、ＲＯＣＫ２のＩＣ50値を有する化合物は、本出願で記述した疾患プロセスのｉｎ  ｖｉｖｏモデルで、具体的には眼圧上昇および緑内障のモデルを用いた多数の研究で、効力を有することが示されている。Ｔｉａｎら，Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１６  ６３３−６４３，１９９８；Ｔｉａｎら，Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．４０  ２３９−２４２，１９９９；Ｔｉａｎ，ら，Ｅｘｐ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．６８：６４９−６５５；１９９９；Ｓａｂａｎａｙ，ら，Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１８：９５５−９６２，２０００；Ｖｏｌｂｅｒｇ，ら，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｔｉｌ．  Ｃｙｔｏｓｋｅｌ．２９：３２１−３３８，１９９４；Ｔｉａｎ，ら，Ｅｘｐ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．７１  ５５１−５６６，２０００；Ｔｏｋｕｓｈｉｇｅ，ら，Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．．４８：３２１６−３２２２，２００７；Ｈｏｎｊｏ，ら，Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．４２：１３７−１４４，２００１を参照されたい。
【０２１１】
ＮＩＨ／３Ｔ３細胞形態アッセイ
ＮＩＨ／３Ｔ３細胞をグルタミンと、１０％のＣｏｌｏｒａｄｏウシ血清とを含むＤＭＥＭ−Ｈで増殖させる。細胞は、コンフルエンスに達する前に、規則的に継代する。実験の１８〜２４時間前に、ポリ−Ｌ−リジンを被覆した、ガラス底の２４穴プレートに該細胞を播種する。実験当日、細胞培地を除去して、該試験化合物を１０ｎＭ〜２５μＭを含む同じ培地に交換して、該細胞を３７℃で、６０分間インキュベートする。次いで、培地を除去して、温めたＰＢＳで該細胞を洗浄して、温めた４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定する。該細胞を０．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘで透過処理して、ＴＲＩＴＣコンジュゲート型ファロイジンで染色して、ＮＩｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｅ６００落射蛍光顕微鏡を用いて撮像し、アクチン破壊の程度を測定する。結果は、試験濃度でアクチン細胞骨格の破壊の観察される程度を示す、０（効果なし）から４（完全破壊）に及ぶ数値スコアで表し、少なくとも２測定の平均値である。
【０２１２】
このアッセイは、化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＲＯＣＫ阻害活性が、アクト−ミオシン駆動細胞収縮の阻害をもたらす、アクチンストレス線維分解およびインタクトな細胞における接着点の変化などの形態の変化で明らかになり得ることを示す。これらの形態変化は、本出願に記述する疾患プロセスの設定で求めた有益な薬理効果、具体的には、線維柱帯網を通る流出を増加させることによって高血圧の眼におけるＩＯＰの上昇を低下させることの基礎を提供すると思われる。
【０２１３】
眼科薬物動態アッセイ
関心の試験化合物を含む製剤の、角膜および前眼房の薬物動態を決定するために、眼内液（房水）をＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅウサギから採取する。各動物に、２×１０μＬの２５ｍＭの各試験化合物（１０ｍＭの酢酸緩衝食鹹水中、０．０１％の塩化ベンザルコニウム、０．０５％のＥＤＴＡ（ｐＨ４．５））、またはビヒクルを左右対称に投与する。点滴注入の間、上下の眼瞼を固定して、化合物を眼球の上面に投与し、該化合物が眼表面を流れるようにする。点滴注入後、３０秒間、まばたきをさせない。局所点滴注入から３０分〜８時間後、３０ゲージ針を用いて角膜の強膜縁の近位に挿入して、房水を採取する。続いて、３０μＬの房水を、３００μＬのシリンジを用いて吸引する。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイシステムを用いて、試験化合物の濃度について房水試料を分析する。すべての実験は、”ＡＲＶＯ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｎｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”に従って、かつ米国国立衛生研究所に従って行う。
【０２１４】
この薬物動態アッセイは、局所投与した場合、本発明の化合物が眼に浸透して、作用部位でかなりのＲＯＣＫ阻害をもたらすのに適している房水の濃度、すなわち、問題の化合物のＲＯＣＫ  ＩＣ50の濃度またはそれを超える濃度に達することができることを示す。さらに、このアッセイは、これらの化合物が眼局所投与について異なる薬物動態プロフィールを示すことができることを示す。
【０２１５】
当業者が本発明を作製して使用することを可能にするために、本発明およびそれを作製して使用する方法とプロセスは、明確で、簡潔かつ正確な用語で、本明細書に十分に記述されている。前述のものは、本発明の好ましい実施形態を記述しており、および請求項に記載する本発明の範囲から逸脱することなく、修飾がその中でなされ得ることを理解すべきである。発明と見なされる主題を具体的に指摘し、かつ明確に主張するために、以下の請求項を本明細書の結論とする。
【国際調査報告】
2013531063.tif 000059