(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、下記工程を含むことを特徴とする、一般式１のオリゴ糖又はその塩を精製、分離、及び／又は単離する方法に関する。2013531049.tif 000020（式中、Ｒ１はフコシル又はＨを表し、  Ｒ２はフコシル又はＨを表し、  Ｒ３はＨ、シアリル基、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基を有してもよく、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、  Ｒ４はＨ、又はシアリル基及びＮ−アセチル−ラクトサミニル基から選択され、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されており、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、  前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨとは異なる）  ａ）Ｒ−Ｘの存在下、１以上の一般式１の化合物に対してアノマーＯ−アルキル化反応を行い、１以上の一般式２の化合物を含む混合物又はその塩を得る工程、2013531049.tif 000021  （式中、Ｘはハロゲン、アルキル−又はアリールスルホニルオキシ等の脱離基であり、Ｒは水素化分解によって除去可能な基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は上記規定の通りであり、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨと異なる）  ｂ）前記工程ａ）で得た１以上の一般式２の化合物を含む混合物に対してクロマトグラフィー及び／又は結晶化を行い、それぞれが実質的に高い純度を有する１以上の一般式２の個別化合物を得る工程、  ｃ）前記工程ｂ）で得たそれぞれが実質的に高い純度を有する一般式２の個別化合物に対して接触水素化分解を行い、一般式１の化合物を得る工程。【選択図】なし
2013531049.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含むことを特徴とする、一般式１のオリゴ糖又はその塩を精製、分離、及び／又は単離する方法。
【化１】
2013531049.tif 000014
（式中、Ｒ１はフコシル又はＨを表し、
Ｒ２はフコシル又はＨを表し、
Ｒ３はＨ、シアリル基、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基を有してもよく、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４はＨ、シアリル基及びＮ−アセチル−ラクトサミニル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されており、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨとは異なる）
ａ）Ｒ−Ｘの存在下、１以上の一般式１の化合物に対してアノマーＯ−アルキル化反応を行い、１以上の一般式２の化合物を含む混合物又はその塩を得る工程、
【化２】
2013531049.tif 000015
（式中、Ｘはハロゲン、アルキル−又はアリールスルホニルオキシから選択される脱離基であり、Ｒは水素化分解によって除去可能な基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は上記規定の通りであり、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨと異なる）
ｂ）前記工程ａ）で得た１以上の一般式２の化合物を含む混合物に対してクロマトグラフィー及び／又は結晶化を行い、それぞれが実質的に高い純度を有する１以上の一般式２の個別化合物を得る工程、
ｃ）前記工程ｂ）で得たそれぞれが実質的に高い純度を有する一般式２の個別化合物に対して接触水素化分解を行い、一般式１の化合物を得る工程。
【請求項２】
前記Ｒ−Ｘ化合物及び一般式２の化合物のＲ基が、フェニル、アルキル又はハロゲンから選択される１以上の基で任意に置換されたベンジル又は１−若しくは２−ナフチルメチルであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記クロマトグラフィーが、逆相又はサイズ排除クロマトグラフィーであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記一般式１の化合物が、一般式１ａ、１ｂ又は１ｃで表され、前記一般式２の化合物が一般式２ａ、２ｂ又は２ｃで表されることを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の方法。
【化３】
2013531049.tif 000016
【化４】
2013531049.tif 000017
（式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は請求項１に規定されているものと同様であり、
Ｒ３ａは、１つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４ａはＨ又は任意にラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ３ｂは任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−ビオシル基であり、
Ｒ４ｂはＨ又は任意に１又は２つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基は１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ５は独立してＨ又はシアリルであり、
前記Ｒ１、Ｒ２又はＲ５のうち少なくとも１つはＨと異なる）
【請求項５】
前記一般式１ａ又は２ａの化合物が、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース及びラクト−Ｎ−ネオオクタオースの誘導体又はそれらの塩からなる群より選択され、該誘導体は任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されており、一般式１ｂ又は２ｂの化合物が、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース及びラクト−Ｎ−ネオデカオースの誘導体又はそれらの塩からなる群より選択され、該誘導体は任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されていることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記一般式１ａ、１ｂ、１ｃ、２ａ、２ｂ又は２ｃの化合物が、一般式１ａ、１ｂ又は１ｃについては２’−Ｏ−フコシルラクトース、３−Ｏ−フコシルラクトース、２’，３−ジ−Ｏ−フコシルラクトース、３’−Ｏ−シアリルラクトース、６’−Ｏ−シアリルラクトース、３’−Ｏ−シアリル−３−Ｏ−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-I）、Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-II）、Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-III）、Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-4）Glc（LNFP-V）、Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-a）、Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-b）、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-c）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FLST-a）、Fucα1-2Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FLST-b）、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（FLST-c）、Fucα1-2Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-I）、Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-II）、Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-III）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（DS-LNT）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FDS-LNT I）及びNeu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（FDS-LNT II）又はそれらの塩、一般式２ａ、２ｂ又は２ｃについてはそれらのＲ−配糖体又はそれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４及び５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
一般式２’で表される化合物及びその塩。
【化５】
2013531049.tif 000018
（式中、Ｒは水素化分解により除去可能な基であり、
Ｒ１はフコシル又はＨであり、
Ｒ２はフコシル又はＨであり、
Ｒ３はＨ、シアリル基、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基を有してもよく、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４はＨ、シアリル基及びＮ−アセチル−ラクトサミニル基から選択され、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されており、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨと異なる。但し、以下の化合物を除く：ＬＮｎＴ、１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴのＲ−配糖体、６’−Ｏ−シアリル−ラクトース及びその塩、１−Ｏ−β−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩、１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩のＲ−配糖体）。
【請求項８】
前記一般式２’で表される化合物が、一般式２’ａ、２’ｂ又は２’ｃ又はその塩であることを特徴とする、請求項７に記載の化合物。
【化６】
2013531049.tif 000019
（式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は請求項７に規定されているものと同様であり、
Ｒ３ａは１つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４ａはＨ又は任意にラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ３ｂは任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−ビオシル基であり、
Ｒ４ｂはＨ又は任意に１又は２つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ５は独立してＨ又はシアリルであり、
前記Ｒ１、Ｒ２又はＲ５のうち少なくとも１つはＨとは異なる）
【請求項９】
前記一般式２’ａが、任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース及びラクト−Ｎ−ネオオクタオースのＲ−配糖体又はそれらの塩からなる群より選択された化合物を表し、前記一般式２’ｂが、任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース及びラクト−Ｎ−ネオデカオースのＲ−配糖体又はそれらの塩からなる群より選択された化合物を表すことを特徴とする、請求項７又は８に記載の化合物。
【請求項１０】
２’−Ｏ−フコシルラクトース、３−Ｏ−フコシルラクトース、２’，３−ジ−Ｏ−フコシルラクトース、３’−Ｏ−シアリルラクトース、６’−Ｏ−シアリルラクトース、３’−Ｏ−シアリル−３−Ｏ−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-I）、Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-II）、Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LNFP-III）、Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-4）Glc（LNFP-V）、Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-a）、Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-b）、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（LST-c）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FLST-a）、Fucα1-2Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FLST-b）、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（FLST-c）、Fucα1-2Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-I）、Galβ1-3（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-II）、Galβ1-4（Fucα1-3）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（LNDFH-III）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（DS-LNT）、Neu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）（Fucα1-4）GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc（FDS-LNT I）及びNeu5Acα2-3Galβ1-3（Neu5Acα2-6）GlcNAcβ1-3Galβ1-4（Fucα1-3）Glc（FDS-LNT II）、又はその塩からなる群より選択された化合物のＲ−配糖体であることを特徴とする、請求項７乃至９のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
近年、分泌オリゴ糖を含む複合糖質の製造と商業化が著しく増加している。これは、生体内で生じる多くの生物学的プロセスにおいて、分泌オリゴ糖が果たすその役割によるものである。ヒト乳オリゴ糖（ヒト乳オリゴ糖）などの分泌オリゴ糖は、近年多くの関心を集めている糖質であり、栄養・治療産業にとって重要な商業的目的となりつつある。とりわけ、これらヒト乳オリゴ糖の合成が著しく増加しているが、これは人体で生じる多くの生物学的プロセスにおいてヒト乳オリゴ糖が果たすその役割によるものである。ヒト乳オリゴ糖の重要性はそのユニークな生物学的活性と結びついており、例えば、抗菌活性、抗ウイルス活性、免疫系及び認知発達促進の活性等が挙げられる。ヒト乳オリゴ糖はヒトの腸内システムでプレバイオティクスとして働き、腸内細菌叢の成長と維持を助けることが分かっている。さらに、それらはまた抗炎症性であると証明されており、その結果、栄養産業において、これらの化合物は、合成して作られた化合物、天然由来の化合物、およびそれらの塩のいずれもが、乳児用粉ミルク、乳児用シリアル、乳児用臨床栄養製品、幼児用粉ミルク等の生産において、あるいは、子供・成人・老人又は授乳中の女性用の栄養補助食品や健康機能食品として、魅力的な成分である。同様に、これらの化合物は、免疫促進剤としての予後的使用の見地から、医薬産業においても各種治療法を開発する上で関心を集めている。しかし、これらオリゴ糖とその中間体の合成と精製は、科学的にはいまだに困難な作業である。
【背景技術】
【０００２】
これまで、単離、バイオテクノロジー及び合成法を用いて大量のヒト乳オリゴ糖を得ることは不可能であった。
【０００３】
天然源から天然由来のシアル化ヒト乳オリゴ糖を得ることには限りがある。ヒトの成熟乳は最も高い濃度の乳オリゴ糖（１２〜１４ｇ／ｌ）を含む天然乳源であり、その他の乳源には牛の乳（０．０１ｇ／ｌ）、山羊の乳及びその他の哺乳類の乳がある。マイクロチップ液体クロマトグラフィー質量分析法（HPLC Chip/MS）及びマトリックス支援レーザー脱離イオン化フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析法（MALDI-FT ICR MS）等の技術を組み合わせることにより、これまでに約２００のヒト乳オリゴ糖がヒト乳から発見されており（非特許文献１）、これまでに少なくとも１１５のオリゴ糖の構造が判明している（非特許文献２）。これらのヒト乳オリゴ糖は１３のコアユニットに分けることができる（表１）。多くの類似のヒト乳オリゴ糖が存在し、それらは哺乳類の乳において濃度が低いため、たとえミリグラム単位であったとしても、ヒト乳オリゴ糖の単離は困難な作業である。これまでに、天然源から何種かのヒト乳オリゴ糖を単離するために開発されてきたのは、唯一ＨＰＬＣ分析法のみである。そのため、食品、特にヒト乳オリゴ糖の全スペクトルの少なくとも一部を示す乳児用粉ミルクにおける適切なヒト乳オリゴ糖の代替品を得ることは困難であった。
【０００４】
【表１】
2013531049.tif 000003
【０００５】
ヒト乳オリゴ糖の化学合成、特にシアリルヒト乳オリゴ糖の製造は、グリコシルドナーの性質により、炭水化物化学において最も困難な分野の１つである。各種合成方法においては、グリコシルドナーとアクセプターの組み合わせ、動的効果及び溶媒効果を慎重に選択することが常に求められる。これらの合成方法は、実際には多くの合成工程や保護基の操作、そしてクロマトグラフィー精製を含むが、その収量は少なく、ミリグラム単位のヒト乳オリゴ糖が得られるのみである。そのため、これらの方法は大規模な調製にとって魅力ある技術を供するまでにはいかない。
【０００６】
ヒト乳オリゴ糖の酵素生成の場合、好んで用いられる酵素はグリコシルトランスフェラーゼとグリコシダーゼである。これらの複合酵素システムを用いた手法は大規模製造を非常に高価なものとする。グリコシダーゼの使用にはしばしば、少ない収量及び、やっかいな精製問題を引き起こす恐れのある適度なレギオ選択性及び／又は立体選択性といった問題がある。これが、産業規模の技術開発におけるグリコシダーゼの使用を阻んでいる。グリコシルトランスフェラーゼはヌクレオチド型グリコシルドナーを必要とするが、このドナーの入手にも限界がある。
【０００７】
いくつかのバイオテクノロジー的手法は、遺伝子組み換え細菌、酵母菌またはその他の微生物を用いることが知られている。そのような手法には規制プロセスにおける深刻な欠点がある。
【０００８】
端的にいえば、ヒト乳には数多くのオリゴ糖が存在するため、これまでは大量のヒト乳オリゴ糖が単離技術によってもたらされることはなかった。加えて、非常によく似た構造を有するレギオ異性体の存在がヒト乳オリゴ糖の分離を更に困難なものにした。酵素を用いた手法では、酵素の入手性の低さ、糖ヌクレオチドドナーの価格の高さ、及び遺伝子組み換え微生物で産生された酵素を用いることによる規制上の困難さといった問題点がある。バイオテクノロジーを用いたヒト乳オリゴ糖の調製には、異常なグリコシル化生成物産生の可能性があることから、多くの規制上の障壁がある。ヒト乳オリゴ糖合成のためこれまでに開発された化学的手法には、わずか数グラムの量の調製をも困難とするいくつかの障害がある。化学的アプローチにおいて最も深刻な障害は、低コストの精製手法を容易にし、製造機会を拡大・増加させる結晶性中間物の設計が欠けていることである。
【０００９】
調製の簡素化と、従来の手法に見られる精製問題の克服や回避を可能とする新しい手法はいまだ必要とされており、加えて、当該技術分野には、ヒト乳中の多様な複合オリゴ糖と多くの共通点を持つ、または、その代わりとなる複合オリゴ糖とその混合物の提供に対する切迫した必要性がある。
【００１０】
本発明は一般的な誘導体化の方法を提供するものであり、その結果、当該技術分野が持つ単離及び又は精製問題を克服する長所を持つヒト乳オリゴ糖誘導体をもたらすものである。
【００１１】
後述する発明方法で得られるいくつかのヒト乳オリゴ糖誘導体は従来技術において知られている：１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮｎＴ（非特許文献３）、１−Ｏ−β−（４−ヒドロキシメチルベンジル）−ＬＮｎＴ（非特許文献４）、１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴ（非特許文献５及び６）、１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩（非特許文献７）、１−Ｏ−β−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩（非特許文献７、特許文献１）、１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩（非特許文献８）。
【００１２】
オリゴ糖の合成または単離にどのようなルートをとったとしても、最終目的物の非保護オリゴ糖は水にしか溶解せず、これは合成の後の工程又は単離/分離/精製方法における課題となる。合成製造過程で通常用いられる有機溶媒は、オリゴ糖合成の最終段階における反応には適しておらず、天然由来の又は酵素触媒合成等で得た多くの類似化合物の存在は、見つけることが難しい極性水性環境を伴う強力なクロマトグラフシステムを必要とする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ９６／３２４９２Ａ２
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ninonuevo et al. J. Agric. Food Chem. 54， 7471 (2006)
【非特許文献２】Urashima et al.: Milk oligosaccharides， Nova Medical Books， NY， 2011
【非特許文献３】Ponpipom et al. Tetrahedron Lett. 20， 1717 (1978)
【非特許文献４】Yan et al. Carbohydr. Res. 328， 3 (2000)
【非特許文献５】Malleron et al. Carbohydr. Res. 341， 29 (2006)
【非特許文献６】Liu et al. Bioorg. Med. Chem. 17， 4910 (2009)
【非特許文献７】Rencurosi et al. Carbohydr. Res. 337， 473 (2002)
【非特許文献８】Cohen et al. J. Org. Chem. 65， 6145 (2000)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明はヒト乳オリゴ糖の誘導体化に適した手法を提供するものである。本発明は選択的アノマーアルキル化反応におけるアノマーＯ−ベンジル／置換Ｏ−ベンジル誘導体の形成に基づいている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
従って、本発明は、以下の工程を含むことを特徴とする、一般式１のオリゴ糖又はその塩を精製、分離、及び／又は単離する方法に関する。
【００１７】
【化１】
2013531049.tif 000004
【００１８】
（式中、Ｒ１はフコシル又はＨを表し、
Ｒ２はフコシル又はＨを表し、
Ｒ３はＨ、シアリル基、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基を有してもよく、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４はＨ、又はシアリル基及びＮ−アセチル−ラクトサミニル基から選択され、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されており、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨとは異なる）
ａ）Ｒ−Ｘの存在下、１以上の一般式１の化合物に対してアノマーＯ−アルキル化反応を行い、１以上の一般式２の化合物を含む混合物又はその塩を得る工程、
【００１９】
【化２】
2013531049.tif 000005
【００２０】
（式中、Ｘはハロゲン、アルキル−又はアリールスルホニルオキシ等の脱離基であり、Ｒは水素化分解によって除去可能な基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は上記規定の通りであり、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨと異なる）
ｂ）前記工程ａ）で得た１以上の一般式２の化合物を含む前記混合物に対してクロマトグラフィー及び／又は結晶化を行い、それぞれが実質的に高い純度を有する１以上の一般式２の個別化合物を得る工程、
ｃ）前記工程ｂ）で得た、それぞれが実質的に高い純度を有する一般式２の個別化合物に対して接触水素化分解を行い、一般式１の化合物を得る工程。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本願において、用語「水素化分解によって除去可能な保護基」又は「水素化分解によって除去可能な基」は、水素を触媒量のパラジウム、ラネーニッケル、又は水素化分解で用いられるその他の適切な金属触媒の存在下で添加することにより、１−酸素と結合した炭素−酸素結合が切断でき、その結果ＯＨ基を再生できる基を意味する。そのような保護基は当業者によく知られており、「Protective Groups in Organic Synthesis， PGM Wuts and TW Greene， John Wiley & Sons 2007」において述べられている。好ましい保護基としてはベンジル、ジフェニルメチル（ベンズヒドリル）、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル又はトリフェニルメチル（トリチル）基が挙げられ、それらは、アルキル、アルコキシ、フェニル、アミノ、アシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル、アジド、ハロゲンアルキル又はハロゲンから選択される１以上の基で任意に置換されてもよい。そのような置換基が存在する場合、１または複数の芳香環上にあることが好ましい。特に好ましい保護基は、任意にフェニル、アルキル又はハロゲンから選択された１以上の基で置換されたベンジル又は１−若しくは２−ナフチルメチル基である。更に、該保護基は非置換ベンジル、非置換１−ナフチルメチル、非置換２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル、４−メチルベンジル及び４−ニトロベンジルから選択されることがより好ましい。
【００２２】
一般式２の化合物を指す場合、「実質的に高い純度を有する化合物」は該化合物が５重量／重量％（w/w%）未満の不純物を含むことを意味し、好ましくは３重量／重量％未満の不純物であり、より好ましくは１重量／重量％未満の不純物であり、最も好ましくは０．５重量／重量％未満の不純物であり、特に０．１重量／重量％未満の不純物を含むことを意味する。この場合、「不純物」は該化合物とは異なるあらゆる物理的実体を指し、例えば、一般式２の化合物合成から残った未反応の中間体、副生成物、分解産物、無機塩、及び／又は有機溶媒及び／又は水以外のその他の混入物質等があげられる。
【００２３】
本明細書において、用語「アルキル」は炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル等が挙げられる。
【００２４】
用語「アリール」はホモ芳香族基を指し、フェニル又はナフチル等が挙げられる。
【００２５】
本明細書において、用語「アシル」はＲ’−Ｃ（＝Ｏ）−基であって、Ｒ’がＨ、アルキル（上記参照）又はアリール（上記参照）であるものを意味する（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ピバロイル、ベンゾイル等）。前記アルキル又はアリール残基は非置換でも、あるいは、アルキル（アリール残基のみ）、ハロゲン、ニトロ、アリール、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル、アジド、ハロゲンアルキル又はヒドロキシアルキルから選択される１以上の基で置換されていてもよい。これらの基はクロロアセチル、トリクロロアセチル、４−クロロベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、４−フェニルベンゾイル、４−ベンズアミドベンゾイル、４−（フェニルカルバモイル）−ベンゾイル等のアシル基を生じる。
【００２６】
用語「アルキルオキシ」又は「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したアルキル基（上記参照）を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ等が挙げられる。
【００２７】
「ハロゲン」はフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
【００２８】
「アミノ」は−ＮＨ２基を指す。
【００２９】
「アルキルアミノ」は、−ＮＨ−基を介して親分子部分に結合したアルキル基（上記参照）を意味し、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ等が挙げられる。
【００３０】
「ジアルキルアミノ」は、窒素原子を介して親分子部分に結合した同一の又は異なる二つのアルキル基（上記参照）を意味し、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等が挙げられる。
【００３１】
「アシルアミノ」は、−ＮＨ−基を介して親分子部分に結合したアシル基（上記参照）を指し、例えば、アセチルアミノ（アセトアミド）、ベンゾイルアミノ（ベンズアミド）等が挙げられる。
【００３２】
「カルボキシル」は−ＣＯＯＨ基を意味する。
【００３３】
「アルキルオキシカルボニル」は、−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して、親分子部分に結合したアルキルオキシ基（上記参照）を意味し、例えば、メトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００３４】
「カルバモイル」はＨ２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−基である。
【００３５】
「Ｎ−アルキルカルバモイル」は、−ＨＮ−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して親分子部分に結合したアルキル基（上記参照）を意味し、例えば、Ｎ−メチルカルバモイル等が挙げられる。
【００３６】
「Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル」は、＞Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して親分子部分に結合した同一の又は異なる二つのアルキル基（上記参照）を意味し、例えば、Ｎ，Ｎ−メチルカルバモイル等が挙げられる。
【００３７】
本明細書において、少なくとも１つのシアリル残基を含んだ一般式１及び２の化合物に関連した「塩」の用語は、化学量論比にある負電荷を有する酸残基及び１以上のカチオンからなる結合イオン対を意味し、この比はいかなる化学量論比であってもよい。本明細書の文脈で用いられているカチオンは、正電荷を有する原子又は分子である。該カチオンは無機カチオンでも有機カチオンでもよい。好ましい無機カチオンにはアンモニウムイオン、アルカリ金属、アルカリ土類金属及び遷移金属イオンがある。より好ましくはＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｂａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋及びＣｕ２＋であり、最も好ましくはＫ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｂａ２＋、Ｆｅ２＋及びＺｎ２＋である。正に帯電した塩基性有機化合物は関連性のある有機カチオンであってもよい。このような正電荷を帯びたカウンターパートは、好ましくはジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、イミダゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ベンジルアミン、エチレンジアミン、メグルミン、ピロリジン、コリン、トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン又はＬ−リジン単位を有するオリゴペプチド、又はＮ末端上に遊離アミノ基を有するオリゴペプチド等が挙げられ、これらはすべてプロトン化されたものである。このような塩の形成は安定性、添加剤との適合性、溶解性及び結晶形性能等の複合分子全般の性質の改変に用いることができる。
【００３８】
さらに、本発明中の用語「フコシル」については、α−グリコシド間結合でコアオリゴ糖に結合しているＬ−フコピラノシル基を意味する。
【００３９】
【化３】
2013531049.tif 000006
【００４０】
本発明中の「Ｎ−アセチル−ラクトサミニル」基は、β結合で結合したＮ−アセチル−ラクトサミン（LacNAc、Galpβ1-4GlcNAcp）のグリコシル残基を意味する。
【００４１】
【化４】
2013531049.tif 000007
【００４２】
さらに、本発明中の用語「ラクト−Ｎ−ビオシル」は、β結合で結合したラクト−Ｎ−二炭糖（LNB、Galpβ1-3GlcNAcp）のグリコシル残基を意味する。
【００４３】
【化５】
2013531049.tif 000008
【００４４】
本発明中の用語「シアリル」は、α結合で結合したシアル酸（Ｎ−アセチル−ノイラミン酸、Neu5Ac）のグリコシル残基を意味する。
【００４５】
【化６】
2013531049.tif 000009
【００４６】
さらに、本発明中の用語「１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル単位を含むグリコシル残基」は、好ましくはグリコシド間結合で互いに結合した前記単位を含む直鎖又は分岐鎖構造を意味する。
【００４７】
本発明中の用語「アノマーＯ−アルキル化」は、出発化合物が有する非保護の第１級及び第２級ＯＨの存在下で、アノマーＯＨ基を選択的にアルキル化することを意味する。具体的には、本発明で用いられるアノマーＯ−アルキル化に関し、二つの基本的方法が挙げられる。一般式１の化合物がいかなるシアリル残基（中性オリゴ糖）も有していない場合、アルキル化反応は、強塩基及びＲ−Ｘの存在下（Ｘはハロゲン、メシルやトリフリル等のアルキルスルホニルオキシ、並びにベンゼンスルホニルやトシル等のアリールスルホニルから選択された脱離基である）、双極性非プロトン性溶媒中（ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルホスホアミド（ＨＭＰＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルヘキサヒドロピリミジン−２−オン（ＤＭＰＵ）、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル等、又はその混合物）で行われる。
【００４８】
好ましいアルキル化剤は、フェニル、アルキル又はハロゲンから選択される１以上の基で任意に置換されたベンジル又は１−若しくは２−ナフチルメチルハロゲン化物である。前記強塩基は、そのより酸性な性質から、同等量の又はやや多い量（１〜１．５当量）の塩基が用いられた場合、前記アノマーＯＨを化学選択的に脱プロトン化することが可能である。一般的に、アノマーＯＨの活性化に適した強塩基は、アルカリ金属水素化物又はアルカリ土類金属水素化物、又はアルカリ金属アルコキシド又はアルカリ土類金属アルコキシドからなる群より選択され、例えば、ＮａＨ、ＫＨ、ＣａＨ２、ＮａＯＭｅ、ＮａＯｔＢｕ、ＫＯｔＢｕ、無機水酸化物、炭酸カリウム等が挙げられる。アルキル化剤は同等量で又はやや多い量（１〜１．５当量）で添加する。反応は−１０〜８０℃で実施し、反応の全過程中は低い温度、又は試薬／反応剤の添加中は低い温度、及び反応の後半では昇温して反応を行うことが好ましい。一般式２の中性のオリゴ糖ベンジル／置換ベンジル配糖体は通常の工程後に得ることができる。酸性オリゴ糖の場合、すなわち、少なくとも１つのシアリル残基が存在する場合は、出発物質のセシウム塩（酸性化合物を炭酸セシウムで処理して予め形成したもの）は、アノマーＯ−アルキル化以前にメチルエステル状態のカルボキシレート基をマスキングするのに用いられる。
【００４９】
メチルエステルの形成には、セシウム塩を双極性非プロトン性溶媒に溶解する。該溶媒としては、例えば、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルホスホアミド（ＨＭＰＡ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルヘキサヒドロピリミジン−２−オン（ＤＭＰＵ）、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル等、又はその混合物が挙げられる。そして、前記セシウム塩に対し、メチル化剤（ヨウ化メチル、メチルトリフレート又は硫酸ジメチル等）を同等量またはやや多い量（１〜１．５当量）添加する。一般的に、反応は４〜２４時間続く。続いて、得られたメチルエステル化合物に上記のアノマーＯ−アルキル化を行う。反応の最後に、塩基性水性条件下で、混合物を水で希釈する。該条件の下において、メチルエステルは切断され、一般式２の酸性オリゴ糖ベンジル／置換ベンジル配糖体が形成される。
【００５０】
前記工程ａ）において、一般式１の化合物は、通常、粗生成物として得られ、該粗生成物は未反応前駆体、試薬、副生成物、及び、化学合成、酵素合成又は化学酵素合成に由来するその他の不純物を伴う。一般式１の化合物が天然源から得られたものである場合、該化合物に、例えば、アミノ酸、オリゴ−及びポリペプチド、脂質、ラクトース、単糖類、ビタミン類等の有機分子が混入している場合がある。その混入は一般式１の化合物を得た天然プールに起因したものである場合がある。
【００５１】
工程ｂ）において、前記工程ａ）で得られた１以上の一般式２の化合物を含み、上記不純物及びその誘導体ならびにアノマーＯ−アルキル化で用いられた試薬の痕跡を伴う前記粗混合物は、クロマトグラフィー及び／又は結晶化により分離され、それぞれが実質的に高い純度を有する１以上の一般式２の個別化合物が得られる。すなわち、工程ｂ）で１よりも多くの一般式２の化合物を得た場合、それらの化合物はそれぞれ、同ステップで得られたその他の一般式２の化合物のいずれとも別々に且つ実質的にそれらを含有せずに得られる。クロマトグラフの手段は、適切とされるいかなる分離技術でもよく、例えば、炭水化物の分離、単離及び／又は精製に一般的に用いられる、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、逆相クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー又はイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。
【００５２】
前記工程ｃ）において、「接触水素化分解」とは、通常、プロトン性溶媒又はプロトン性溶媒の混合物中に発生する、Ｒ基の除去を意味する。工程ｃ）は、前記工程ｂ）で得られた一般式２の単一化合物に対して行われる。プロトン性溶媒は、水、酢酸またはＣ１−Ｃ６アルコールからなる群より選択することができる。１以上のプロトン性溶媒と、該プロトン性溶媒と部分的あるいは完全な混和性を有する１以上の適切な非プロトン性有機溶媒の混合液も使用することができる（例えば、ＴＨＦ、ジオキサン、酢酸エチル、アセトン等）。水、１以上のＣ１−Ｃ６アルコール、又はそれらの混合液は、溶媒系として好ましく用いられる。炭水化物誘導体を含有する溶液は適切ないかなる濃度であってもよく、炭水化物誘導体と選択した溶媒との懸濁液もまた使用することができる。反応混合液は１０〜１００℃の温度範囲内、好ましくは２０〜７０℃で、１〜５０バールの水素雰囲気下、触媒の存在下で反応が完了するまで撹拌する。該触媒としては、例えば、パラジウム、ラネーニッケル、又はその他の適切な金属触媒が挙げられ、好ましくはチャコール担持パラジウム又はパラジウムブラックが挙げられる。通常、触媒金属濃度は炭水化物の重量に対して０．１％〜１０％の範囲である。好ましくは、触媒濃度は０．１５％〜５％の範囲であり、より好ましくは０．２５％〜２．２５％の範囲である。
【００５３】
また、水素がシクロヘキサン、シクロヘキサジエン、ギ酸又はギ酸アンモニウムからその場（in situ）で発生する場合は、水素移動反応も行うことができる。また、有機又は無機塩基又は酸及び／又は塩基性又は酸性イオン交換樹脂を添加し、水素化分解の速度を向上することも可能である。ハロゲン置換基が前駆体の置換ベンジル部分上に存在する場合、塩基性物質を用いることが特に好ましい。好ましい有機塩基としてはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、アンモニア、カルバミン酸アンモニウム、ジエチルアミン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましい有機／無機酸としてはギ酸、酢酸、プロピオン酸、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、ＨＣｌ、ＨＢｒ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。上記条件は、溶媒の簡単、便利且つ精巧な除去を可能にし、これにより一般式１の純度の高い化合物を得るものである。一般式１の化合物は、結晶状、非晶質固体状、シロップ状又は濃縮された水溶液において従来の作業工程を行うことで、反応混合液から単離することができる。
【００５４】
強調点としては、一般式２の化合物の単離、分離及び／又は精製に対し、Ｒ基の導入が、一般式２の化合物に数多くの有利な特徴をもたらすことが挙げられる。最初に挙げられる点は、非極性部分としてのＲ基が分子全体の極性を変え、これにより、最善の結果を得るための最も適切な条件の選択のために当業者が有するカラムパッキング及び溶出系のレパートリーを拡大することである。例えば、存在する化合物のより異なる極性ゆえに、水を使えば逆相クロマトグラフ分離を容易に行うことができる。これは、一般式２の化合物が、反応混合物中に存在する非常に極性の大きい化合物よりはるかにゆっくりと移動し、それにより、該極性化合物が円滑に溶出できるからである。その後、カラムから一般式２の化合物は、例えばアルコールで洗浄することができる。二番目に挙げられる点は、Ｒ基が芳香族部分であるため、発色団として機能し、目的物の特定を容易にする紫外線検出の可能性を提供する点である。
【００５５】
三番目に挙げられる点は、Ｒ基の選択を慎重に行うことで、一般式２の結晶性物質が得られる可能性があることである。結晶化又は再結晶化は反応混合液から生成物を単離し、それを不純物から分離し、純物質を得るのに最も簡単且つ安価な方法の１つである。結晶化を用いた単離又は精製は、技術プロセス全体を頑健かつ費用対効果に優れたものとするため、他の手順と比べて有利かつ魅力的なものとなる。四番目に挙げられる点は、一般式２の化合物からのＲ基の除去が、デリケートな状況下で、副生成物形成の恐れが無く、ほぼ定量的に行われる点である。ベンジル／置換ベンジル保護基等のＲ基は、水素化分解条件下で、トルエン／置換トルエンのみに変換され、蒸発及び／又は抽出工程を経て、水溶性オリゴ糖産物から、数トンの規模で容易に除去することができる。その結果、一般式１の化合物の化学的／立体化学的純度は一般式２の化合物のそれと直結するものとなる。
【００５６】
好ましい方法において、１以上の一般式１ａ、１ｂ又は１ｃの化合物又はその塩（これらは全て一般式１の化合物の範囲に包含されるものである）を含む粗混合物は、
【００５７】
【化７】
2013531049.tif 000010
【００５８】
前記工程ａ）において誘導体化され、１以上の一般式２ａ、２ｂ又は２ｃの化合物又はその塩（これらは全てそれぞれ一般式２の化合物の範囲に包含されるものである）を含む粗混合物を生じ、
【００５９】
【化８】
2013531049.tif 000011
【００６０】
（式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は上記に記載の通りであり、
Ｒ３ａは、１つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４ａはＨ又は任意にラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基と置換されてもよく、
Ｒ３ｂは任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−ビオシル基であり、
Ｒ４ｂはＨ又は任意に１又は２つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基は１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ５は独立してＨ又はシアリルであり、
前記Ｒ１、Ｒ２又はＲ５のうち少なくとも１つはＨとは異なる）
一般式２ａ、２ｂ又は２ｃの個別化合物を、前記工程ｂ）でクロマトグラフィー及び／又は結晶化を行うことで、実質的に高い純度を有するものとして単離し、前記工程ｃ）において、一般式２ａ、２ｂ又は２ｃの個別化合物を、一般式１ａ、１ｂ又は１ｃの個別化合物に変換する。
【００６１】
特に好ましくは、上記本発明の方法に基づいて使用及び得られた化合物は、その結合及び修飾で特徴づけられる。一般式１ａ、１ｂ、２ａ又は２ｂで定義される、本発明の方法の工程ａ）で使用及び得られた化合物、ならびに工程ｃ）で得られた化合物が以下の特徴を有することが好ましい。
・一般式１ａ又は２ａのＲ３ａのグリコシル残基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基が、１−３グリコシド間結合で、その他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している、
・一般式１ａ又は２ａのＲ３ａのグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１ａ又は２ａのＲ４ａのグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１ｂ又は２ｂのＲ４ｂのグリコシル残基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基が、１−３又は１−６グリコシド間結合で、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１ｂ又は２ｂのＲ４ｂのグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している。
【００６２】
本発明の方法に関わる化合物においては、以下を特徴とすることが好ましい。一般式１ａ又は２ａはラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース誘導体（任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換される）及びそれらの塩を表し、一般式１ｂ又は２ｂはラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース及びラクト−Ｎ−ネオデカオース誘導体（任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換される）又はそれらの塩を表す。
【００６３】
上記本発明の方法に関与した化合物は以下の特徴を有することがより好ましい。
・Ｎ−アセチル−ラクトサミニル及び／又はラクト−Ｎ−ビオシル基に結合しているフコシル残基は、
・１−２グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のガラクトースに結合、及び／又は
・１−４グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合、及び／又は
・１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合。
・Ｎ−アセチル−ラクトサミニル及び／又はラクト−Ｎ−ビオシル基に結合しているシアリル残基は、
・２−３グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のガラクトースに結合、及び／又は
・２−６グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合、及び／又は
・２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースに結合。
【００６４】
また、以下のヒト乳オリゴ糖を本発明の方法で誘導体化できることが最も好ましい。２’−Ｏ−フコシルラクトース、３−Ｏ−フコシルラクトース、２’，３−ジ−Ｏ−フコシルラクトース、３’−Ｏ−シアリルラクトース、６’−Ｏ−シアリルラクトース、３’−Ｏ−シアリル−３−Ｏ−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-I)、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-II)、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-III)、Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-4)Glc(LNFP-V)、Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-a)、Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-b)、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-c)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FLST-a)、Fucα1-2Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FLST-b)、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(FLST-c)、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-I)、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-II)、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-III)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(DS-LNT)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FDS-LNT I)及びNeu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(FDS-LNT II)、又はその塩。Ｒ配糖体はα−又はβ−アノマーであってもよい。該Ｒ配糖体はβ−アノマーであることが好ましい。
【００６５】
本発明の第二のアスペクトは、ヒト乳オリゴ糖又は類似体のベンジル又は置換ベンジル配糖体を提供するものである。これらは上記本発明の方法の工程ａ）に基づき、一般式１で表される１以上のヒト乳オリゴ糖又はその類似体を含む粗反応混合物から調製することができる。そして、本発明は一般式２’の化合物又はその塩を提供する。
【００６６】
【化９】
2013531049.tif 000012
【００６７】
（式中、Ｒは水素化分解により除去可能な基であり、
Ｒ１はフコシル又はＨであり、
Ｒ２はフコシル又はＨであり、
Ｒ３はＨ、シアリル基、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基から選択され、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基は、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基を有してもよく、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４はＨ、シアリル基及びＮ−アセチル−ラクトサミニル基から選択され、１以上のＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１以上のラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で任意に置換されており、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４基のうち少なくとも１つはＨと異なる。但し、以下の化合物を除く：ＬＮｎＴ、１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴのＲ−配糖体、６’−Ｏ−シアリル−ラクトース及びその塩、１−Ｏ−β−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩、１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩のＲ−配糖体）。
【００６８】
好ましい実施形態においては、一般式２’の化合物は一般式２’ａ、２’ｂ又は２’ｃ又はその塩であることを特徴とする。
【００６９】
【化１０】
2013531049.tif 000013
【００７０】
（式中、Ｒ、Ｒ１及びＲ２は上記に記載の通りであり、
Ｒ３ａは任意に１つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基を含むグリコシル残基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ４ａはＨ又は任意にラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ３ｂは任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されたラクト−Ｎ−ビオシル基であり、
Ｒ４ｂはＨ又は任意に１又は２つのＮ−アセチル−ラクトサミニル基及び／又は１つのラクト−Ｎ−ビオシル基で置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、該Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基及びラクト−Ｎ−ビオシル基はそれぞれ１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されてもよく、
Ｒ５は独立してＨ又はシアリルであり、
前記Ｒ１、Ｒ２又はＲ５のうち少なくとも１つはＨとは異なる）
【００７１】
上記一般式２’ａ又は２’ｂの化合物は、さらに、その結合ならびに修飾を特徴とすることが特に好ましい。一般式２’ａ又は２’ｂの化合物は以下の特徴を有することが好ましい。
・一般式１’ａ又は２’ａのＲ３ａのグリコシル残基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基が、１−３グリコシド間結合で、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１’ａ又は２’ａのＲ３ａのグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１’ａ又は２’ａのＲ４ａのグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１’ａ又は１’ｂのＲ４ｂのグリコシル残基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基が、１−３又は１−６グリコシド間結合で、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している、
・一般式１’ａ又は１’ｂのＲ４ｂグリコシル残基におけるラクト−Ｎ−ビオシル基が、１−３グリコシド間結合で、Ｎ−アセチル−ラクトサミニル基に結合している。
【００７２】
本発明の方法に関わる化合物においては、以下を特徴とすることが好ましい。一般式２’ａはラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース及びラクト−Ｎ−ネオオクタオースのＲ−配糖体又はそれらの塩を表し、該Ｒ−配糖体は任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されており、一般式２’ｂは、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース及びラクト−Ｎ−ネオデカオースのＲ−配糖体又はそれらの塩を表し、該Ｒ−配糖体は任意に１以上のシアリル残基及び／又はフコシル残基で置換されている。
【００７３】
上記関与した化合物は、さらに、以下の特徴を有することがより好ましい。
・Ｎ−アセチル−ラクトサミニル及び／又はラクト−Ｎ−ビオシル基に結合するフコシル残基は、
・１−２グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のガラクトースに結合、及び／又は
・１−４グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合、及び／又は
・１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合。
・Ｎ−アセチル−ラクトサミニル及び／又はラクト−Ｎ−ビオシル基に結合するシアリル残基は、
・２−３グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のガラクトースに結合、及び／又は
・２−６グリコシド間結合でラクト−Ｎ−ビオシル基のＮ−アセチル−グルコサミンに結合、及び／又は
・２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースに結合。
【００７４】
また、以下のヒト乳オリゴ糖のＲ−配糖体を得ることが最も好ましい。２’−Ｏ−フコシルラクトース、３−Ｏ−フコシルラクトース、２’，３−ジ−Ｏ−フコシルラクトース、３’−Ｏ−シアリルラクトース、６’−Ｏ−シアリルラクトース、３’−Ｏ−シアリル−３−Ｏ−フコシルラクトース、ラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-I)、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-II)、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LNFP-III)、Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-4)Glc(LNFP-V)、Neu5Acα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-a)、Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-b)、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(LST-c)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FLST-a)、Fucα1-2Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FLST-b)、Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(FLST-c)、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-I)、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-II)、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(LNDFH-III)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(DS-LNT)、Neu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc(FDS-LNT I)及びNeu5Acα2-3Galβ1-3(Neu5Acα2-6)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc(FDS-LNT II)、又はその塩。
【００７５】
強調されるべき点は、一般式２’の化合物が単一の化学物質であるとみなすことができることであり、該化学物質としては、例えば、α又はβアノマーのいずれか、又はα及びβアイソマー（異性体）のアノマー混合物も挙げることができる。好ましくはβ−アノマーである。一般式２’の化合物は、結晶性固体、オイル、シロップ状、沈降非晶質物質又は噴霧乾燥物であってもよい。結晶性の場合、一般式２’の化合物は、１又は複数の水の分子をその結晶構造に組み込むことで、無水または含水結晶状態のうちいずれかの状態で存在することができる。同様に、一般式２’の化合物は、その結晶構造にリガンドを組み入れた結晶性物質として存在することができ、該リガンドとしては、例えば、有機分子及び／又はイオンが挙げられる。
【００７６】
本発明のその他の特徴は、以下実施例の説明において明らかにされるものである。該実施例は例証のみを目的としているものであり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００７７】
１．一般式２の化合物の調製の一般的な手順
【００７８】
ａ）中性ヒト乳オリゴ糖ベンジル／置換ベンジル配糖体の調製の一般的な手順
選んだ中性ヒト乳オリゴ糖（１当量）を１〜１０の体積（volume）（ｇ／ｍＬ）のＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はその混合物に溶解／懸濁させた。得られた反応混合液を０℃に冷却し、臭化ベンジル／置換臭化ベンジル（１．２〜１．４当量）を加えた。強塩基（１．２〜１．４当量）を０〜４０℃で添加した。強塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシドが挙げられる。反応混合液を０〜６０℃で６〜２４時間撹拌した。続いて、水を加え、過剰な塩基を急冷し、反応混合液を室温で３０分間撹拌した。その結果得られた反応混合液を濃縮し、逆相クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー等で精製するか、又は結晶化し、目的のベンジル化／置換ベンジル化中性ヒト乳オリゴ糖化合物を得た。収率は７０〜８０％であった。
【００７９】
ｂ）酸性ヒト乳オリゴ糖ベンジル／置換ベンジル配糖体の調製の一般的な手順
選んだ酸性ヒト乳オリゴ糖を水に溶解し、Ｈ＋型の酸性イオン交換樹脂で処理して酸性ヒト乳オリゴ糖が塩の形態にならないようにした。該酸性イオン交換樹脂としては、例えば、Amberlite IR-120やDowex IL50等が挙げられる。このイオン交換樹脂を濾過して取り出し、炭酸セシウムを塩基性ｐＨになるまで、好ましくはｐＨ９〜１０になるまで加えた。得られた溶液を凍結乾燥し、１〜１０体積（volume）（ｇ／ｍＬ）のＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はその混合物に溶解／懸濁させた。炭酸セシウムの使用に関連した量（０．２〜０．５当量過剰）のメチル化剤を添加し、得られた反応混合物を０〜６０℃で４〜２４時間撹拌した。該メチル化剤としては、例えば、ヨウ化メチルやメチルトリフレート等が挙げられる。反応混合物を０℃に冷却し、必要量（１．２〜１．５当量）の臭化ベンジル／置換臭化ベンジルを加えた。使用したベンジル化／置換ベンジル化剤と同等量の強塩基を０〜４０℃で添加した。該強塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド等が挙げられる。反応混合物を０〜６０℃で６〜２４時間撹拌した。続いて、水を加えて有機溶媒と水の比（有機溶媒：水）を１：１０から２：５とし、反応混合物を２０〜８０℃で４〜２４時間撹拌した。その結果得られた反応混合物を濃縮し、逆相クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー等で精製するか、又は結晶化するか、又は任意に塩の形態に変換し、目的のベンジル化／置換ベンジル化酸性ヒト乳オリゴ糖化合物を得た。収率は６０〜７０％であった。
【００８０】
ｃ）少なくとも１種類の酸性ヒト乳オリゴ糖を含む混合物からの、ヒト乳オリゴ糖ベンジル／置換ベンジル配糖体の混合物の調製の一般的な手順
複数のヒト乳オリゴ糖混合物の化学組成をＬＣ−ＭＳ又はその他の適切な定量的分析法で分析した。続いて、このヒト乳オリゴ糖混合物を水に溶解し、Ｈ＋型の酸性イオン交換樹脂で処理して酸性ヒト乳オリゴ糖が塩の形態にならないようにした。該酸性イオン交換樹脂としては、Amberlite IR-120やDowex IL50等が挙げられる。このイオン交換樹脂を濾過して取り出し、炭酸セシウムを塩基性ｐＨになるまで、好ましくはｐＨ９〜１０になるまで加えた。得られた溶液を凍結乾燥し、１〜１０体積（volume）（ｇ／ｍＬ）のＤＭＦ、ＤＭＳＯ又はその混合物に溶解／懸濁させた。炭酸セシウムの使用に関連した量（０．２〜０．５当量過剰）のメチル化剤を添加し、得られた反応混合液を０〜６０℃で４〜２４時間撹拌した。該メチル化剤としては、例えば、ヨウ化メチルやメチルトリフレート等が挙げられる。反応混合液を０℃に冷却し、必要量の臭化ベンジル／置換臭化ベンジル（０．２〜０．５当量過剰のヒト乳オリゴ糖混合物のＬＣ−ＭＳ組成に基づいて計算）を加えた。使用したベンジル化／置換ベンジル化剤と同等量の強塩基を０〜４０℃で添加した。該強塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド等が挙げられる。反応混合液を０〜６０℃で６〜２４時間撹拌した。続いて、水を加えて有機溶媒と水の比（有機溶媒：水）を１：１０から２：５とし、反応混合液を２０〜８０℃で４〜２４時間撹拌した。その結果得られた反応混合液を濃縮し、逆相クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー等で精製し、個別ベンジル化／置換ベンジル化合物を得た。収率はそれぞれ６０〜７０％であった。
【００８１】
１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮｎＴ
13C NMR (D2O) Δ（小文字のデルタを表わす、以下同様）: 105.6， 105.5， 105.4， 103.6（アノマー炭素）.
融点：２８４〜２８６℃
【００８２】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−ＬＮｎＴ
1H NMR (D2O): 7.3 (dd， 4H)， 4.88 (d， 1H)， 4.7 (m)， 4.54 (d， 1H)， 4.48 (d， 1H)， 4.42 (d， 1H)， 4.34 (d)， 4.0-3.5 (m)， 3.34 (dd， 1H).
13C NMR (D2O): 184.2， 177.6， 173.7， 141.5， 136.1， 131.9， 131.4， 105.6， 105.5， 105.4， 103.6， 93.2， 84.7， 81.5， 81.0， 80.8， 78.0， 77.6， 77.4， 77.1， 75.5， 75.2， 74.8， 74.0， 73.6， 72.9， 63.7， 62.8， 58.9， 56.4， 25.9， 22.9.
【００８３】
１−Ｏ−β−（４−クロロベンジル）−ＬＮｎＴ
1H NMR (D2O): 7.4 (s， 4H)， 4.9 (d， 1H)， 4.72 (m)， 4.52 (d， 1H)， 4.8 (d， 1H)， 4.42 (d， 1H)， 4.16 (d， 1H)， 4.0-3.52 (m).
13C NMR (D2O): 138.9， 177.6， 138.3， 137.9， 136.2， 131.3， 105.6， 105.5， 105.4， 103.7， 93.2， 86.1， 84.7， 81.5， 81.0， 80.8， 78.0， 77.5， 77.4， 77.2， 77.1， 75.5， 75.2， 74.9， 63.7， 58.9， 57.8， 56.4， 24.8.
【００８４】
１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴ
1H-NMR (D2O， 400 MHz) Δ 2.03 (s， 3H， CH3CONH)， 3.35 (dd， 1H， J = 8.1 8.5 Hz， H-2)， 3.49 (m， 1H， H-5’’)， 3.53 (m， H-2’’’)， 3.65 (m， 1H， H-3’’’)， 3.57 (dd， 1H， J = 8.1 9.0 Hz， H-4’’)， 3.58 (m， 1H， H-5)， 3.59 (dd， 1H， J = 7.7 10.0 Hz， H-2’)， 3.62 (m， 1H， H-3)， 3.63 (m， 1H， H-4)， 3.71 (m， 1H， H-5’)， 3.71 (m， 1H， H-5’’’)， 3.73 (dd， 1H， J = 3.3 10.0 Hz， H-3’)， 3.76 (m， 2H， H-6ab’’’)， 3.76(m， 2H， H-6ab’)， 3.80 (m， 1H， H-6a’’)， 3.80 (dd， 1H， J = 5.0 12.2 Hz， H-6a)， 3.82 (dd， 1H， J = 8.1 10.5 Hz， H-3’’)， 3.90 (m， 1H， H-6b’’)， 3.90 (dd， 1H， J = 8.4 10.5 Hz， H-2’’)， 3.92 (d， 1H， J = 3.3 Hz， H-4’’’)， 3.98 (dd， 1H， J = 1.6 12.2 Hz， H-6b)， 4.15 (d， 1H， J = 3.3 Hz， H-4’)， 4.44 (d， 1H， J = 7.7 Hz， H-1’)， 4.45 (d， 1H， J = 7.7 Hz， H-1’’’)， 4.56 (d， 1H， J = 8.1 Hz， H-1)， 4.73 (d， 1H， J = 8.4 Hz， H-1’’)， 4.76 (d， 1H， J = 11.7 Hz， CH2Ph)， 4.94 (d， 1H， J = 11.7 Hz， CH2Ph)， 7.40-7.50 (m， 5H， Ph). 
13C-NMR (D2O， 100 MHz) Δ 24.9 (CH3CONH)， 57.4 (C-2’’)， 62.8 (C-6)， 63.2 (C-6’’)， 63.7 (C-6’’’)， 63.7 (C-6’)， 71.0 (C-4’)， 71.2 (C-4’’’)， 71.3 (C-4’’)， 72.7 (C-2’)， 73.4 (C-2’’’)， 74.2 (CH2Ph)， 75.2 (C-3’’’)， 75.5 (C-2)， 77.1 (C-3)， 77.5 (C-5’)， 77.6 (C-5’’’)， 77.9 (C-5)， 78.0 (C-5’’)， 81.1 (C-4)， 84.7 (C-3’)， 84.8 (C-3’’)， 103.7 (C-1)， 105.3 (C-1’’)， 105.6 (C-1’)， 106.2 (C-1’’’)， 131.1 (Ph)， 131.4 (2C， Ph)， 131.5 (2C， Ph)， 139.2 (Ph)， 177.7 (CH3CONH).
融点：２４５℃（分解）
[α]D22 = -10.3 (c = 1， H2O).
【００８５】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−ＬＮＴ
1H-NMR (D2O， 300 MHz) Δ 1.97 (s， 3H)， 2.29 (s， 3H)， 3.27 (dd， 1H， J = 8.1 8.5 Hz)， 3.39-3.87 (m， 21H)， 3.92 (dd， 1H， J = 1.8 12.3 Hz)， 4.09 (d， 1H， J = 3.3 Hz)， 4.37 (d， 1H， J = 8.1Hz)， 4.38 (d， 1H， J = 7.8 Hz)， 4.47 (d， 1H， J = 8.1 Hz)， 4.65 (d， 1H， J = 11.7 Hz)， 4.67 (d， 1H， J = 8.1 Hz)， 4.83 (d， 1H， J= 11.7 Hz)， 7.22 (d， 2H， J= 8.1 Hz)， 7.30 (d， 2H， J = 8.1 Hz).
13C-NMR (D2O， 75.4 MHz) Δ 23.1， 25.0， 57.7， 62.8， 63.2， 63.7， 63.8， 71.0， 71.1， 71.3， 72.7， 73.4， 74.1， 75.2， 75.5， 77.1， 77.5， 77.6， 77.9， 78.0， 81.1， 84.7， 84.8， 103.6， 105.3， 105.7， 106.2， 131.7 (2C)， 132.0 (2C)， 136.2， 141.5， 177.7.
【００８６】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (t， 1H， J=11.9Hz); 2.00 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m， 4H); 3.50-3.79 (m， 9H); 3.80-3.97 (m， 5H); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m， 3H); 7.38-7.46 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.55， 41.26， 52.70， 60.81， 63.21， 63.42， 68.56， 69.01， 69.30， 70.66， 71.15， 72.12， 73.08， 73.55， 73.78， 74.47， 75.28， 75.32， 80.03， 100.29， 101.89， 103.36， 127.36， 127.87， 128.01， 128.12， 137.72， 173.36， 173.88.
【００８７】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースナトリウム塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (t， 1H， J=11.9Hz); 2.02 (s， 3H); 2.82 (m， 1H); 3.33-3.45 (m， 4H); 3.46-3.61 (m， 5H); 3.62-3.97 (m， 12H); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.37 (m， 2H); 4.66 (d， 1H， J=11.9Hz); 7.31 (m， 3H); 7.41 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.10， 40.60， 52.04， 60.22， 62.78， 67.90， 68.51， 68.69， 70.11， 70.61， 70.64， 71.44， 72.44， 72.83， 73.17， 73.92， 74.50， 74.70， 79.82， 99.76， 101.23， 103.52， 127.00， 127.44， 127.56， 137.21， 172.68， 173.28.
【００８８】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース亜鉛塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.71 (t， 1H， J=11.1Hz); 2.00 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m， 4H); 3.50-3.79 (m， 9H); 3.80-3.97 (m， 5H); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m， 3H); 7.38-7.46 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.77， 41.09， 52.78， 60.87， 61.32， 63.06， 63.64， 63.21， 68.26， 69.11， 70.67， 71.22， 71.36， 72.01， 73.00， 73.37， 73.58， 73.66， 74.39， 75.19， 75.32， 75.87， 79.40， 80.35， 99.92， 101.86， 101.94， 103.86， 104.00， 127.55， 127.99， 128.13， 137.83， 174.03， 174.08.
【００８９】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースエタノールアンモニウム塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (dd， 1H， J=11.7Hz， J=12.2Hz); 2.00 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 2.92 (m， 4H); 3.33-3.47 (m， 2H); 3.46-3.57 (m， 5H); 3.58-3.78 (m， 9H); 3.78-3.90 (m， 5H); 3.93 (dd， 1H， J=2.5， J=11.7Hz); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m， 3H); 7.38-7.46 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.55， 41.26， 44.83， 52.70， 58.85， 60.81， 63.21， 63.42， 68.56， 69.01， 69.30， 70.66， 71.15， 72.12， 73.08， 73.55， 73.78， 74.47， 75.28， 75.32， 80.03， 99.98， 100.89， 102.36， 127.36， 127.87， 128.01， 128.12， 137.72， 173.36， 173.88.
【００９０】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース  トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアンモニウム塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (dd， 1H， J=11.9Hz， J=12.1Hz); 2.00 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.33-3.48 (m， 2H); 3.48-3.79 (m， 19H); 3.93 (dd， 1H， J=2.5， J=11.8Hz); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.22-7.37 (m， 3H); 7.38-7.46 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.60， 41.22， 52.71， 59.62， 60.89， 61.38， 63.23， 63.39， 68.64， 68.97， 69.25， 70.64， 71.26， 73.68， 75.24， 75.27， 80.16， 100.39， 101.87， 103.94， 127.52， 127.97， 128.00， 128.11， 137.85， 173.40， 173.90.
【００９１】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースジエチルアンモニウム塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.28 (t， 6H， J=11.8Hz); 1.65 (dd， 1H， J=11.9Hz， J=12.1Hz); 2.00 (s， 3H); 2.79 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.00 (q， 4H); 3.33-3.57 (m， 7H); 3.57-3.77 (m， 5H); 3.78-3.89 (m， 4H); 3.93 (dd， 1H， J=11.9Hz， J=2.4Hz); 4.00 (dd， 1H， J=7.1Hz， J=9.7Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.8Hz); 7.22-7.37 (m， 3H); 7.38-7.46 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 10.64， 21.57， 41.29， 42.29， 52.74， 60.89， 63.23， 63.43， 68.63， 68.95， 69.30， 70.62， 71.25， 72.04， 73.06， 73.41， 73.73， 74.47， 75.26， 75.28， 80.15， 100.41， 101.90， 103.95， 127.51， 127.97， 127.99， 128.10， 137.88， 173.35， 173.85.
【００９２】
１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースコリン塩
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (dd， 1H， J=11.9Hz， J=12.1Hz); 1.98 (s， 3H); 2.80 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.19 (s， 9H); 3.33-3.56 (m， 8H); 3.56-3.77 (m， 7H); 3.78-3.94 (m， 5H); 3.95-4.04 (m， 4H); 4.34 (m， 1H); 4.39 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.8Hz); 7.22-7.36 (m， 3H); 7.40 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.56， 40.95， 41.34， 52.75， 53.48， 53.53， 53.59， 55.92， 60.96， 63.15， 63.50， 63.84， 67.85， 68.65， 68.90， 69.31， 69.47， 70.61， 71.28， 72.05， 73.05， 73.41， 73.72， 74.45， 75.29， 76.89， 80.17， 100.42， 101.92， 103.97， 109.98 127.52， 127.97， 128.11， 137.90， 138.29， 173.26， 173.85.
【００９３】
１−Ｏ−β−（４−クロロベンジル）−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.62 (t， 1H， J=12Hz); 2.00 (s， 3H); 2.77 (dd， 1H， J=4.7Hz， J=12.1Hz); 3.28-3.49 (m， 4H); 3.50-3.79 (m， 9H); 3.80-3.97 (m， 5H); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.24 (m， 2H); 7.32 (m， 2H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 21.52， 41.23， 52.72， 60.79， 63.23， 63.42， 68.61， 69.03， 69.31， 70.56， 71.14， 72.13， 73.11， 73.56， 73.79， 74.48， 75.23， 75.31， 80.09， 100.17， 101.91， 103.21， 127.36， 127.89， 133.01， 136.76， 173.29， 173.78.
【００９４】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 1.63 (t， 1H， J=11.9Hz); 2.00 (s， 3H); 2.32 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m， 4H); 3.50-3.79 (m， 9H); 3.80-3.97 (m， 5H); 4.02 (dd， 1H， J=7.5Hz， J=10Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.66 (d， 1H， J=11.7Hz); 7.21 (m， 4H).
13C-NMR (CD3OD) Δ (ppm): 20.02， 21.55， 41.26， 52.70， 60.81， 63.21， 63.42， 68.56， 69.01， 69.30， 70.66， 71.15， 72.12， 73.08， 73.55， 73.78， 74.47， 75.28， 75.32， 80.03， 99.98， 100.89， 102.36， 127.36， 127.87， 128.01， 128.12， 133.26， 137.72， 173.36， 173.88.
【００９５】
１−Ｏ−β−（１−ナフチルメチル）−６’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H (CD3OD) Δ (ppm): 1.62 (t， 1H， J=11.8Hz); 2.00 (s， 3H); 2.78 (dd， 1H， J=4.5Hz， J=12.2Hz); 3.28-3.49 (m， 4H); 3.50-3.79 (m， 9H); 3.80-3.97 (m， 5H); 4.02 (dd， 1H， J=7.6Hz， J=10.1Hz); 4.35 (m， 1H); 4.42 (d， 1H， J=7.8Hz); 4.68 (d， 1H， J=11.8Hz); 7.32-7.54 (m， 4H); 7.7 (m， 2H); 7.95 (m，1H).
13C (CD3OD) Δ (ppm): 21.54， 41.28， 52.72， 60.81， 63.20， 63.44， 68.53， 69.06， 69.38， 70.64， 71.12， 72.14， 73.05， 73.54， 73.65， 74.45， 75.24， 75.33， 80.02， 100.25， 101.87， 103.21， 122.91， 124.82， 125.25， 125.93， 127.06， 128.72， 129.16， 132.80， 133.12， 135.97， 136.88， 173.36， 173.88.
【００９６】
１−Ｏ−β−ベンジル−３’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (500 MHz， D2O):Δ[ppm] = 7.46-7.42 (m， 4H， H(a/b)arom); 4.91 (d， 1H， CH2a-Bn); 4.74 (d， 1H， CH2b-Bn); 4.55-4.52 (m， 2H， H-1/H-1’); 4.11 (dd， 1H， H-3’); 2.76 (dd， 1H， H-3’’eq); 2.04 (s， 3H， COCH3); 1.81 (dd， 1H， H-3’’ax).
J(a，b)-Bn = 11.8; J2’，3’ = 9.9; J3’，4’ = 2.9; J3’’ax，3’’eq = 12.4; J3’’ax，4’’ = 12.1; J3’’eq，4’’ = 4.5 Hz.
13C-NMR (126 MHz， D2O):Δ[ppm] = 135.2， 133.5 (quart. Carom); 130.2 (CHa-arom); 128.6 (CHb-arom); 102.6 (C-1’); 101.1 (C-1); 51.7 (C-5’’); 39.6 (C-3’’); 22.0 (COCH3).
【００９７】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−３’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (500 MHz， D2O):Δ[ppm] = 7.36 (d， 2H， H-aarom); 7.28 (d， 2H， H-barom); 4.89 (d， 1H， CH2a-Bn); 4.72 (d， 1H， CH2b-Bn); 4.54-4.52 (m， 2H， H-1/H-1’); 4.12 (dd， 1H， H-3’); 2.76 (dd， 1H， H-3’’eq); 2.35 (s， 3H， CH3-Tol); 2.04 (s， 3H， COCH3)， 1.81 (dd， 1H， H-3’’ax).
J(a，b)arom = 7.9; J(a，b)-Bn = 11.5; J2’，3’ = 9.9; J3’，4’ = 3.0; J3’’ax，3’’eq = 12.5; J3’’，4’’ = 12.2; J3’’eq，4’’=4.6 Hz.
13C-NMR (126 MHz， D2O):Δ[ppm] = 138.8， 133.4 (quart. Carom); 129.3 (CHa-arom); 129.0 (CHb-arom); 102.6 (C-1’); 100.9 (C-1); 99.8 (C-2’’)， 51.7 (C-5’’); 39.6 (C-3’’); 22.0 (COCH3); 20.2 (CH3-Tol).
【００９８】
１−Ｏ−β−（２−ナフチルメチル）−３’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (500 MHz， D2O):Δ[ppm] = 7.99-7.97 (m， 4H， H-arom); 7.62-7.59 (m， 3H， H-arom); 5.10 (d， 1H， CH2a-Bn); 4.95 (d， 1H， CH2b-Bn); 4.60 (d， 1H， H-1); 4.53 (d， 1H， H-1’); 4.12 (dd， 1H， H-3’); 2.77 (dd， 1H， H-3’’eq); 2.04 (s， 3H， COCH3); 1.81 (dd， 1H， H-3’’ax).
J(a，b)-Bn = 11.9; J1，2 = 8.0; J1’，2’ = 7.9; J2’，3’ = 9.9; J3’，4’ = 3.0; J3’’ax，3’’eq = 12.5; J3’’ax， 4’’ = 12.1; J3’’eq， 4’’ = 4.6 Hz.
13C-NMR (126 MHz， D2O):Δ[ppm] = 128.3， 127.9， 127.7， 127.6， 126.6， 126.5 (CHarom); 102.6 (C-1’); 101.1 (C-1); 51.7 (C-5’’); 22.0 (COCH3).
【００９９】
１−Ｏ−β−（３−フェニルベンジル）−３’−Ｏ−シアリル−ラクトース
1H-NMR (400 MHz， D2O):Δ[ppm] = 7.75-7.44 (m， 9H， H-arom); 4.99 (d， 1H， CH2a-Bn); 4.82 (d， 1H， CH2b-Bn); 4.57 (d， 1H， H-1); 4.53 (d， 1H， H-1’); 4.13 (dd， 1H， H-3’); 2.78 (dd， 1H， H-3’’eq); 2.05 (s， 3H， COCH3); 1.82 (dd， 1H， H-3’’ax).
J(a，b)-Bn = 11.8; J1，2 = 8.0; J1’，2’ = 7.9; J2’，3’ = 9.9; J3’，4’ = 3.1; J3’’ax，3’’eq = 12.5; J3’’ax，4’’ = 12.0; J3’’eq，4’’ = 4.6 Hz.
13C-NMR (100 MHz， D2O):Δ[ppm] = 140.9， 140.3， 137.5 (quart. Carom); 129.4， 129.2， 127.9， 127.8， 127.1， 127.0， 126.9， (CHarom); 102.7 (C-1’); 101.2 (C-1); 99.6 (C-2’’); 51.8 (C-5’’); 39.7 (C-3’’); 22.1 (COCH3).
【０１００】
１−Ｏ−β−ベンジル−２’−Ｏ−フコシル−ラクトース
特徴的な1H NMRピーク(DMSO-d6)Δ: 7.41-7.25 (m， 5 H， 芳香族)， 5.20 (d， 1 H， J1’’，2’’= 2 Hz， H-1’’)， 4.82及び4.59 (ABq， 2H， Jgem= 12.3 Hz， -CH2Ph)， 4.32 (d， 1 H， J1’，2’= 7.31 Hz， H-1’)， 4.28 (d， 1 H， J1，2= 7.79 Hz， H-1)， 1.05 (d， 1 H， J5’’，6’’= 6.43 Hz， H-6’’).
13C NMR (DMSO-d6)Δ: 137.97， 128.15， 128.15， 127.58， 127.58 及び 127.43 (芳香族)， 101.86， 100.94及び100.20 (C-1， C-1’及びC-1’’)， 77.68， 76.78， 75.36， 75.33， 74.70， 73.79， 73.45， 71.60， 69.72， 69.69， 68.74， 68.20， 66.38， 60.23及び59.81 (C-2， C-3， C-4， C-5， C-6， C-2’， C-3’， C-4’， C-5’， C-6’， C-2’’， C-3’’， C-4’’， C-5’’及びCH2Ph)， 16.47 (C-6’’).
【０１０１】
１−Ｏ−β−（４−ニトロベンジル）−２’−Ｏ−フコシル−ラクトース
特徴的な1H-NMRピーク(DMSO-d6)Δ: 8.20及び7.68 (各d， 4 H，芳香族)， 5.04 (d， 1 H， J1’’，2’’= 2 Hz， H-1’’)， 4.97及び4.76 (ABq， 2H， Jgem= 12.3 Hz， -CH2Ph)， 4.40 (d， 1 H， J1’，2’= 9.53 Hz， H-1’)， 4.32 (d， 1 H， J1，2= 8.04 Hz， H-1)， 1.04 (d， 1 H， J5’’，6’’= 6.43 Hz， H-6’’).
13C-NMR (DMSO-d6)Δ：162.38， 147.68， 127.95， 127.95， 123.33及び123.33 (芳香族)， 102.18， 100.95及び100.18 (C-1， C-1’及びC-1’’)， 77.62， 76.74， 75.36， 75.36， 74.61， 73.78， 73.45， 71.59， 69.67， 68.74， 68.67， 68.21， 66.38， 60.22及び59.77 (C-2， C-3， C-4， C-5， C-6， C-2’， C-3’， C-4’， C-5’， C-6’， C-2’’， C-3’’， C-4’’， C-5’’及びCH2Ph)， 16.45 (C-6’’).
【０１０２】
２．一般式２の化合物の水素化分解
【０１０３】
ａ）４０ｇ（５０．１ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮｎＴを２００ｍｌの水に溶解し、１．６のＰｄ−Ｃと４００μｌの酢酸を加えた。得られた混合物をＨ２雰囲気下（約４０バール）、室温で２日間撹拌した。触媒を濾過して取り除き、濾塊を水で洗浄し、ろ液を１．６Ｌのアセトンに滴下し、冷やし、その後濾過した。回収した固形物を真空乾燥し、収量が３１．５ｇのＬＮｎＴの白い粉末を得た（４４．５ｍｍｏｌ、８９％）。
【０１０４】
ｂ）１−Ｏ−ベンジル−β−ＬＮＴ（５ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）を水（２０ｍＬ）に懸濁させ、１ＭのＨＣｌ水溶液を加えてそのｐＨを５．８に調整した。チャコール担持パラジウム（０．５ｇ、１０％）を加えて反応フラスコを真空排気し、次にＨ２（４バール）で飽和した。反応温度は５０℃とした。１．５時間撹拌した後、温度を室温にし、触媒を濾過して取り除き、水で洗浄した（１０ｍＬ）。ろ液を濃縮乾固し、３．４６ｇ（７８％）の白い固形ＬＮＴを得た。
【０１０５】
ｃ）メタノールと水（２５０ｍＬ＋３００ｍＬ）の混合液中の４０ｇの１−Ｏ−β−ベンジル−６’−Ｏ−シアリル−ラクトースの溶液に、４ｇのＰｄ／Ｃ（１０％）を加えた。得られた反応混合液をＨ２圧力下（バルーン）、室温で２日間撹拌した。その後、この混合液をセライトパッドで濾過し、溶媒を真空で蒸発させた。残留物を８０ｍＬのＨ２Ｏに溶解し、１２００ｍＬのＥｔＯＨに滴下した。得られたスラリーを濾過して得た固形物をＥｔＯＨ、アセトン、そしてアセトン／Ｅｔ２Ｏ混合液（アセトン／Ｅｔ２Ｏ＝１／１）で洗浄した。得られた固形物を乾燥して３５ｇの６’−Ｏ−シアリルラクトースを得た。
【０１０６】
ｄ）１−Ｏ−β−ベンジル−２’−Ｏ−フコシル−ラクトース（５．０ｇ）のメタノール（５０ｍｌ）溶液に、１００ｍｇの１０％パラジウム担持チャコールを加えた。得られた懸濁液を水素雰囲気下、室温で４時間撹拌した。触媒を濾過して取り出し、水で洗浄した。ろ液を蒸発させ、２’−Ｏ−フコシル−ラクトース（非晶質白色固体、４．２ｇ）を得た。
【国際調査報告】
2013531049.tif 000022
2013531049.tif 000023
2013531049.tif 000024