(57)【要約】本明細書中で開示されるのは、ヌクレオシドホスホルアミデートおよびウイルス性疾患の治療薬としてのそれらの使用である。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、そしてほ乳類におけるＣ型肝炎感染の治療のために有用である。【選択図】図１
2013523767.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項２】
（１）約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、および２２．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（２）約：５．０、７．３、９．４、および１８．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（３）約：４．９、６．９、９．８、１９．８、２０．６、２４．７、および２６．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（４）約：６．９、９．８、１９．７、２０．６、および２４．６のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（５）約：５．０、６．８、１９．９、２０．６、２０．９、および２４．９のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（６）約：５．２、６．６、７．１、１５．７、１９．１、および２５．０のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；または
（７）約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）
を有する、結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項３】
（１）約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、および２２．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（２）約：５．０、７．３、９．４、および１８．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；または
（７）約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、請求項２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項４】
（１）約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、および２２．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；
（２）約：５．０、７．３、９．４、および１８．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）；または
（７）約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、請求項２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項５】
約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、および２２．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、請求項２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項６】
約：５．０、７．３、９．４、および１８．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、請求項２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項７】
約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、請求項２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項８】
請求項１記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む組成物。
【請求項９】
請求項１記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび薬剤的に許容される媒体を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
それを必要とする対象者においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療する方法であって：
対象者に、有効量の請求項１記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを投与することを含む、方法。
【請求項１１】
構造式
【化１】
2013523767.tif 000072
（式中、ＬＧ’は脱離基である）
により表される化合物。
【請求項１２】
ＬＧ’が、トシレート、カンファースルホネート、ベンゾ［ｄ］チアゾリド−２（３Ｈ）−チオン、アリールオキシド、または少なくとも１つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
ＬＧ’が、２，４−ジニトロフェノキシド、４−ニトロフェノキシド、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシド、２，４−ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１４】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項１５】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項１６】
請求項１１記載の化合物を調製するためのプロセスであって、
ａ）第１の組成物；
ｂ）第２の脱離基前駆体；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物；
を含む組成物から化合物を結晶化させること、を含み、ここで、第１組成物が、化合物およびその対応するＰベースのジアステレオマーを含む、前記プロセス。
【請求項１７】
化合物のモル量およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量が同一または異なる、請求項１６記載のプロセス。
【請求項１８】
化合物のモル量が、その対応するＰベースのジアステレオマーのモル量よりも多い、請求項１７記載のプロセス。
【請求項１９】
第２の脱離基前駆体が、２，４−ジニトロフェノール、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロフェノール、２，４−ジクロロフェノール、またはペンタフルオロフェノールである、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２０】
ＬＧ’がペンタフルオロフェノキシドである、請求項１９記載のプロセス。
【請求項２１】
第２の脱離基前駆体がペンタフルオロフェノールである、請求項２０記載のプロセス。
【請求項２２】
ペンタフルオロフェノールの量が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲である、請求項２１記載のプロセス。
【請求項２３】
ペンタフルオロフェノールの量が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲である、請求項２１記載のプロセス。
【請求項２４】
結晶化が約−１０℃〜約＋４０℃の範囲の温度で起こる、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２５】
結晶化がほぼ室温で起こる、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２６】
非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、およびそれらの混合物から選択される、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２７】
非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２８】
非求核性塩基が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲の量で存在する、請求項１６記載のプロセス。
【請求項２９】
非求核性塩基が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲の量で存在する、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３０】
化合物の溶解度が、液体組成物中のその対応するＰベースのジアステレオマーの溶解度よりも低い、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３１】
液体組成物が溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３２】
液体組成物が、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３３】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３４】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３５】
液体組成物が、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む、請求項３４記載のプロセス。
【請求項３６】
液体組成物が酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項３４記載のプロセス。
【請求項３７】
液体組成物がｔ−ブチル−メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項３４記載のプロセス。
【請求項３８】
液体組成物の量が、第１組成物１グラムにつき約１ｍＬ〜約１０ｍＬの範囲である、請求項１６記載のプロセス。
【請求項３９】
結晶性化合物を組成物に添加することをさらに含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項４０】
約０．１〜約１重量％の結晶性化合物を第１組成物に添加することをさらに含む、請求項１６記載のプロセス。
【請求項４１】
ａ）ＰｈＯＰ（Ｏ）（ＬＧ）２およびｉＰｒ−Ａｌａ−ＮＨ２・ＨＣｌを第１塩基の存在下で反応させて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得；
ｂ）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を第１の脱離基前駆体（ＬＧ’Ｈ）と第２塩基の存在下で反応させて、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーを含む組成物を得ることをさらに含み；
ここで、ＬＧおよびＬＧ’は、互いに独立して、脱離基であり；
ここで、第１の脱離基前駆体および第２の脱離基前駆体は同一または異なり；そして
第１塩基および第２塩基が同一または異なる、請求項１６記載のプロセス。
【請求項４２】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するプロセスであって:
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物
を含む第２の組成物から結晶化すること、を含み、
ここで、第２の組成物が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む、前記プロセス。
【請求項４３】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量および２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量が同一または異なる、請求項４２記載のプロセス。
【請求項４４】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量が、２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量よりも多い、請求項４２記載のプロセス。
【請求項４５】
ペンタフルオロフェノールの量が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量に対して、約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲である、請求項４３記載のプロセス。
【請求項４６】
結晶化が、約−１０℃〜約＋４０℃の範囲の温度で起こる、請求項４２記載のプロセス。
【請求項４７】
結晶化がほぼ室温で起こる、請求項４２記載のプロセス。
【請求項４８】
非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１−６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１−６−アルキル−ピリジン、およびそれらの混合物から選択される、請求項４２記載のプロセス。
【請求項４９】
非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５０】
非求核性塩基が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総モル量に対して約０．１〜約１モル当量の範囲の量で存在する、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５１】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの溶解度が、２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの液体組成物中の溶解度よりも低い、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５２】
液体組成物が、溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５３】
液体組成物が、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５４】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５５】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項５６】
液体組成物が、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む、請求項５５記載のプロセス。
【請求項５７】
液体組成物が、酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項５５記載のプロセス。
【請求項５８】
液体組成物が、ｔ−ブチル−メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項５５記載のプロセス。
【請求項５９】
１グラムの第１組成物について、液体組成物の量が約１〜約１０ｍＬの範囲である、請求項４２記載のプロセス。
【請求項６０】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを第２の組成物に添加することをさらに含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項６１】
第１組成物中の２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総重量を基準として、約０．１〜約１重量％の結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを添加することをさらに含む、請求項４２記載のプロセス。
【請求項６２】
請求項４２記載のプロセスにより得られる結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項６３】
２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物；
を含む第２の組成物から結晶化させること、を含み、ここで、第１組成物が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む、前記プロセス。
【請求項６４】
２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、ｔ−ブチルマグネシウムハライドと１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンとｔ−ブチルマグネシウムハライドとを反応させることにより得られる生成物と接触させることを含む、前記プロセス。
【請求項６５】
接触を、約０℃〜約４０℃の範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項６４記載のプロセス。
【請求項６６】
接触を、約０℃〜約３０℃の範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項６４記載のプロセス。
【請求項６７】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比が約２〜約２．２の範囲である、請求項６４記載のプロセス。
【請求項６８】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比が約２．１である、請求項６４記載のプロセス。
【請求項６９】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドがｔ−ブチルマグネシウムクロリドである、請求項６４記載のプロセス。
【請求項７０】
実質的に純粋な２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するプロセスであって：
請求項３５記載のプロセスにしたがって、２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを得、そして
そのようにして形成された２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを結晶化させることを含む、前記プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、２０１０年３月３１日付で出願された米国特許出願第６１／３１９，５１３号、２０１０年３月３１日付で出願された米国特許出願第６１／３１９，５４８号、および２０１０年５月２０日付で出願された米国特許出願第１２／７８３，６８０号に対して優先権を主張し、その内容は参照により全体が組み込まれる。
【０００２】
本明細書中で開示するのは、ヌクレオシドホスホルアミデートおよびウイルス性疾患の治療薬としてのそれらの使用である。これらの化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として、ＨＣＶ複製の阻害剤として、およびほ乳類におけるＣ型肝炎感染の治療に有用である。
【背景技術】
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、世界人口の２〜１５％と推定されるかなりの人数の感染者において、慢性肝疾患、例えば肝硬変および肝細胞癌に至る重大な健康問題である。米国疾病管理センターによると、米国だけで、推定４５０万人の感染者がいる。世界保健機構によると、世界中では２億人を越える感染者がおり、毎年少なくとも３００万人〜４００万人が感染している。一旦感染すると、約２０％の人々はウイルスを排除するが、残りは、この先一生ＨＣＶを保菌する可能性がある。慢性的に感染した個体の１０〜２０％は、最終的に、肝臓を破壊する肝硬変またはガンを発症する。ウイルス性疾患は、汚染された血液や血液製剤、汚染された注射針により非経口的に、または性的に、そして感染した母親からまたは保菌者の母親から子孫へと垂直に伝染する。組換えインターフェロンα単独またはヌクレオシドアナログリバビリンとの組み合わせでの免疫療法に限定されているＨＣＶ感染の現行の治療は、臨床上の有益性に限界がある。さらに、ＨＣＶの確立されたワクチンがない。したがって、慢性ＨＣＶ感染に効果的に有効な改善された治療薬が緊急に必要とされている。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３，０１０のアミノ酸のポリタンパク質をコードする約９６００塩基の単一オリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有する、エンベロープを有するプラス鎖のＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子のタンパク質生成物は、構造タンパク質Ｃ、Ｅ１、およびＥ２、ならびに非構造タンパク質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂ、ならびにＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂからなる。非構造（ＮＳ）タンパク質は、ウイルス複製のための触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼは、ポリタンパク質鎖由来のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出する。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶの複製サイクルにおいてテンプレートとしての役割を果たす１本鎖ウイルスＲＮＡからの２本鎖ＲＮＡの合成に必要である。したがって、ＮＳ５Ｂポリメラーゼは、ＨＣＶ複製複合体中の必須成分であると考えられる（K. Ishi, et al, Heptology, 1999, 29:1227-1235; V. Lohmann, et al., Virology, 1998, 249:108-118）。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は、２本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を防止し、したがって、ＨＣＶ特異的抗ウイルス療法開発のための魅力的なアプローチを構成する。
【０００５】
ＨＣＶは、多くの共通の特徴がある、はるかに大きなウイルスファミリーに属する。
【０００６】
フラビウイルス（Flaviviridae）科ウイルス
ウイルスのフラビウイルスファミリーは、少なくとも３つの異なる属：ウシおよびブタで疾患を引き起こすペスチウイルス（pestivirus）；デング熱および黄熱などの疾患の主原因であるフラビウイルス（flavivirus）；ならびにその唯一のメンバーがＨＣＶであるヘパシウイルスを含む。フラビウイルス属は、血清学的相関性に基づいて分類される、６８を越えるメンバーを含む（Calisher et al., J. Gen. Virol, 1993,70,37-43）。臨床症状はさまざまであり、熱、脳炎および出血熱が挙げられる（Fields Virology, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., and Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia,  PA, 1996, Chapter 31, 931-959）。ヒト疾患に関連する世界的懸念のフラビウイルスとしては、デング出血熱ウイルス（ＤＨＦ）、黄熱ウイルス、ショック症候群および日本脳炎ウイルスが挙げられる（Halstead, S. B., Rev. Infect. Dis., 1984, 6, 251-264; Halstead, S. B., Science, 239:476-481, 1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med, 1988, 319, 64 1-643）。
【０００７】
ペスチウイルス属としては、ウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）、豚コレラウイルス（ＣＳＦＶ、トンコレラウイルスとも呼ばれる）およびヒツジのボーダー病ウイルス（ＢＤＶ）が挙げられる（Moennig, V. et al. Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98）。家畜（ウシ、ブタおよびヒツジ）のペスチウイルス感染は、世界的に著しい経済的損失を与える。ＢＶＤＶは、ウシにおいて粘膜疾患を引き起こし、畜産業に対して相当の重要性を有する（Meyers, G. and Thiel, H.J., Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moennig V., et al, Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98）。ヒトペスチウイルスは動物ペスチウイルスとして広く特徴づけられていなかった。しかし、血清学的調査は、ヒトにおいてかなりのペスチウイルス暴露を示す。
【０００８】
ペスチウイルスおよびヘパシウイルスは、フラビウイルス科内の密接に関連するウイルス群である。この科における他の密接に関連するウイルスとしては、ＧＢウイルスＡ、ＧＢウイルスＡ様物質、ＧＢウイルス−ＢおよびＧＢウイルス−Ｃ（Ｇ型肝炎ウイルス、ＨＧＶとも呼ばれる）が挙げられる。ヘパシウイルス群（Ｃ型肝炎ウイルス；ＨＣＶ）は、ヒトに感染する、多くの密接に関連しているが遺伝学的に識別可能なウイルスからなる。少なくとも６つのＨＣＶ遺伝子型および５０を越えるサブタイプがある。ヘパシウイルスが細胞培養で効率的に増殖できないことと併せて、ペスチウイルスおよびヘパシウイルスの間の類似性のために、ウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）は、多くの場合、ＨＣＶウイルスを研究するための代用物として用いられる。
【０００９】
ペスチウイルスおよびヘパシウイルスの遺伝子構成は非常に類似している。これらのプラス鎖のＲＮＡウイルスは、ウイルス複製に必要なすべてのウイルスタンパク質をコードする単一の大きなオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。これらのタンパク質は、細胞性およびウイルスでコードされたプロテイナーゼの両方により翻訳と同時および翻訳後に処理されるポリタンパク質として発現され、成熟ウイルスタンパク質を産生する。ウイルスゲノムＲＮＡの複製に関与するウイルスタンパク質は、ほぼカルボキシ末端に位置する。ＯＲＦの２／３は、非構造（ＮＳ）タンパク質と称される。ペスチウイルスおよびヘパシウイルスのＯＲＦの非構造タンパク質部分の遺伝子構成およびポリタンパク質処理は非常に類似している。ペスチウイルスおよびヘパシウイルスの両方に関して、成熟非構造（ＮＳ）タンパク質は、非構造タンパク質コーディング領域のアミノ末端からＯＲＦのカルボキシ末端へ順にｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂからなる。
【００１０】
ペスチウイルスおよびヘパシウイルスのＮＳタンパク質は、特定のタンパク質機能に特徴的な配列ドメインを共有する。例えば、両群のウイルスのＮＳ３タンパク質は、セリンプロテイナーゼおよびヘリカーゼに特徴的なアミノ酸配列モチーフを有する（Gorbalenya et al., Nature, 1988, 333, 22; Bazan and Fletterick Virology, 1989, 171, 637-639; Gorbalenya et al., Nucleic Acid Res., 1989, 17, 3889-3897）。同様に、ペスチウイルスよびヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼに特徴的なモチーフを有する（Koonin, E.V. and Dolja, V.V., Crir. Rev. Biochem. Molec. Biol. 1993, 28, 375-430）。
【００１１】
ウイルスのライフサイクルにおけるペスチウイルスおよびヘパシウイルスのＮＳタンパク質の実際の役割や機能は直接類似している。どちらの場合も、ＮＳ３セリンプロテイナーゼは、ＯＲＦ中のその位置の下流のポリタンパク質前駆体のすべてのタンパク質分解処理に関与する（Wiskerchen and Collett, Virology, 1991, 184, 341-350; Bartenschlager et al., J Virol. 1993, 67, 3835-3844; Eckart et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. 1993,192, 399-406; Grakoui et al., J. Virol. 1993, 67, 2832-2843; Grakoui et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 1993, 90, 10583-10587; Hijikata et al., J. Virol. 1993, 67, 4665-4675; Tome et al., J. Virol, 1993, 67, 4017-4026）。ＮＳ４Ａタンパク質は、どちらの場合も、ＮＳ３セリンプロテアーゼとともにコファクターとして作用する（Bartenschlager et al., J Virol. 1994, 68, 5045-5055; Failla et al., J. Virol. 1994, 68, 3753-3760; Xu et al., J. Virol., 1997, 71 :53  12-5322）。両ウイルスのＮＳ３タンパク質はさらに、ヘリカーゼとしても機能する（Kim et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 1995, 215, 160-166; Jin and Peterson, Arch. Biochem. Biophys., 1995, 323, 47-53; Warrener and Collett, J. Virol. 1995, 69,1720-1726）。最後に、ペスチウイルスおよびヘパシウイルスのＮＳ５Ｂタンパク質は、予測されるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ活性を有する（Behrens et al., EMBO, 1996, 15, 12-22; Lechmann et al., J. Virol., 1997, 71, 8416-8428; Yuan et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1997, 232, 231-235; Hagedorn, ＰＣＴ国際公開第９７／１２０３３号； Zhong et al, J. Virol., 1998, 72, 9365-9369）。
【００１２】
現在、Ｃ型肝炎ウイルスに感染した個体についての治療オプションは限定されている。現在の承認された治療オプションは、組換えインターフェロンα単独またはヌクレオシドアナログリバビリンとの組み合わせでの免疫療法の使用である。この療法は、その臨床効果が限定され、治療を受けた患者の５０％しか療法に反応しない。したがって、ＨＣＶ感染により課せられる、満たされていない医学的必要性に対処するさらに有効な新規療法の必要性が高い。
【００１３】
抗ＨＣＶ治療薬として直接作用する抗ウイルス剤の薬剤開発のための多くの潜在的な分子標的、例えばこれらに限定されるものではないが、ＮＳ２−ＮＳ３自己プロテアーゼ、Ｎ３プロテアーゼ、Ｎ３ヘリカーゼおよびＮＳ５Ｂポリメラーゼが特定されている。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、１本鎖正センスＲＮＡゲノムの複製に絶対的に必須であり、この酵素は、医薬品化学者の間で大きな興味をひいている。
【００１４】
ＨＣＶ感染の潜在的な治療法としてのＨＣＶ  ＮＳ５Ｂの阻害剤が検討されている： Tan, S.-L., et al., Nature Rev. Drug Discov., 2002, 1, 867-881 ; Walker, M.P. et al., Exp. Opin. Investigational Drugs, 2003, 12, 1269-1280; Ni, Z-J., et al., Current Opinion in Drug Discovery and Development, 2004, 7, 446-459; Beaulieu, P. L., et al., Current Opinion in Investigational Drugs, 2004, 5, 838-850; Wu, J., et al., Current Drug Targets-Infectious Disorders, 2003, 3, 207-219; Griffith, R.C., et al, Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2004, 39, 223-237; Carrol, S., et al., Infectious Disorders-Drug Targets, 2006, 6, 17-29。耐性ＨＣＶ株が出現する可能性および幅広い遺伝子型範囲の薬剤を同定する必要性が、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤として新規かつさらに有効なヌクレオシドを同定する継続努力の必要性を支えている。
【００１５】
ＮＳ５Ｂポリメラーゼのヌクレオシド阻害剤は、鎖停止をもたらす非天然基質として、またはポリメラーゼに結合するヌクレオチドと競合する競合的阻害剤としてのいずれかで作用することができる。鎖ターミネーターとして機能するためには、ヌクレオシドアナログは、細胞によって取り込まれ、インビボでトリホスフェートに変換されて、ポリメラーゼヌクレオチド結合部位について競合しなければならない。トリホスフェートへのこの変換は、通常、潜在的なヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤に対してさらなる構造要件を付与する細胞キナーゼにより媒介される。残念なことに、このことが、インサイチュリン酸化が可能な細胞ベースのアッセイに対するＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接的評価を制限する。
【００１６】
場合によっては、ヌクレオシドの生物活性は、それを活性なトリホスフェート形態に変換するために必要な１以上のキナーゼに関するその不十分な基質特性により妨げられる。ヌクレオシドキナーゼによるモノホスフェートの形成は、一般的に、３つのリン酸化事象の律速段階として見なされている。ヌクレオシドの活性なトリホスフェートアナログへの代謝における初期リン酸化ステップの必要性を回避するために、安定なホスフェートプロドラッグの調製が報告されている。ヌクレオシドホスホルアミデートプロドラッグは、活性なヌクレオシドトリホスフェートの前駆体であり、ウイルス感染した全細胞に投与した場合に、ウイルス複製を阻害することが示されている（McGuigan, C, et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 1748-1753; Valette, G., et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 1981-1990; Balzarini, J., et al., Proc. National Acad Sci USA, 1996, 93, 7295-7299; Siddiqui, A. Q., et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 4122-4128; Eisenberg, E. J., et al., Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 2001, 20, 1091-1098; Lee, W.A., et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2005, 49, 1898)；米国特許第２００６／０２４１０６４号；および国際公開第２００７／０９５２６９号。
【００１７】
さらに、それらの場合によって不十分な物理化学的および薬物動態学的特性も、実行可能な治療薬としてのヌクレオシドの有用性を制限する。これらの不十分な特性は、薬剤の腸吸収を制限する可能性があり、標的組織または細胞中への吸収を制限する可能性がある。それらの特性を改善するために、ヌクレオシドのプロドラッグが用いられてきた。ヌクレオシドホスホルアミデートの調製は、ヌクレオシドの全身吸収を改善し、さらに、これらの「プロヌクレオチド」のホスホルアミデート部分を中性の親油性基でマスキングして、細胞への取り込みおよび輸送を最適化するために好適な分配係数を得、親ヌクレオシド単独の投与に比べて、ヌクレオシドモノホスフェートアナログの細胞内濃度を劇的に増大することが示されている。ホスフェートエステル部分の酵素介在性加水分解によりヌクレオシドモノホスフェートが生成し、この場合、律速的な初期リン酸化は不必要である。この目的で、米国特許出願第１２／０５３，０１５号（国際公開第２００８／１２１６３４号および米国特許第２０１０／００１６２５１号に対応する）は、多くのホスホルアミデートヌクレオシドプロドラッグを開示し、その多くは、ＨＣＶアッセイにおいて活性を示す。米国特許第２０１０／００１６２５１号で開示されるいくつかの化合物を、ＦＤＡにより承認を得るための潜在的な臨床候補として試験した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本明細書中で開示されるのは、式４により表される化合物および式Ｓｐ−４およびＲｐ−４により表されるそのそれぞれのリンベースのジアステレオマーである：
【化１】
2013523767.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２】図２は、Ｒｐ−４の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図３】図３は、Ｓｐ−４（形態１）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図４】図４は、Ｓｐ−４（形態１）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図５】図５は、Ｓｐ−４・ＣＨ２Ｃｌ２（形態２）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図６】図６は、Ｓｐ−４・ＣＨＣｌ３（形態３）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図７】図７は、Ｓｐ−４（形態４）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図８】図８は、Ｓｐ−４（形態５）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図９】図９は、Ｓｐ−４（アモルファス）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１０】図１０は、Ｓｐ−４（形態１）のＸ線結晶構造を示す。
【図１１】図１１は、Ｓｐ−４・ＣＨ２Ｃｌ２（形態２）のＸ線結晶（等方性）構造を示す。
【図１２】図１２は、Ｓｐ−４・ＣＨ２Ｃｌ２（形態２）のＸ線結晶（異方性）構造を示す。
【図１３】図１３は、Ｓｐ−４・ＣＨＣｌ３（形態３）のＸ線結晶構造を示す。
【図１４】図１４は、４のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。
【図１５】図１５は、Ｒｐ−４のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。
【図１６】図１６は、Ｓｐ−４のＦＴ−ＩＲスペクトルを示す。
【図１７】図１７は、４のＴＧＡおよびＤＳＣを示す。
【図１８】図１８は、Ｒｐ−４のＴＧＡおよびＤＳＣ分析を示す。
【図１９】図１９は、Ｒｐ−４のＴＧＡおよびＤＳＣ分析を示す。
【図２０Ａ】図２０Ａは、８（Ｓｐ異性体）（非対称ユニットの分子番号１）のＸ線結晶構造を示す。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、８（Ｓｐ異性体）（非対称ユニットの分子番号２）のＸ線結晶構造を示す。
【図２１】図２１は、Ｓｐ−４（形態６）の高分解能ＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２２Ａ】図２２Ａは、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル（非対称ユニットの分子番号１）のＸ線結晶構造を示す。
【図２２Ｂ】図２２Ｂは、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル（非対称ユニットの分子番号）のＸ線結晶構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本明細書中で用いられる『「a」または「an」実体』という語法は、１以上のその実体を指し；例えば、化合物（a compound）は、１以上の化合物または少なくとも１つの化合物を指す。このように、「a」（または「an」）、「１以上」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書中では交換可能に用いられる。
【００２１】
「任意の」または「場合によって」という用語は、本明細書中で用いられる場合、その後に記載される事象または状況が起こる可能性があるが、起こる必要はないことと、この記載が、その事象または状況が起こる場合と起こらない場合を含むこととを意味する。例えば、「任意の結合」とは、その結合が存在してもよいし、または存在しなくてもよいこと、そしてこの記載が単結合、二重結合、または三重結合を含むことを意味する。
【００２２】
「Ｐ＊」という用語は、リン原子がキラルであり、それらの認められた簡単な意味を有する「Ｒ」または「Ｓ」の対応するカーン・インゴールド・プレログ表示を有することを意味する。
【００２３】
「精製」という用語は、本明細書中で記載される場合、所定の化合物の純度を指す。例えば、化合物は、所定の化合物が組成物の主成分である場合、すなわち、少なくとも５０％ｗ／ｗの純度である場合に、「精製」されている。したがって、「精製」とは、少なくとも５０％ｗ／ｗの純度、少なくとも６つの０％ｗ／ｗの純度、少なくとも７０％の純度、少なくとも８０％の純度、少なくとも８５％の純度、少なくとも９０％の純度、少なくとも９２％の純度、少なくとも９４％の純度、少なくとも９６％の純度、少なくとも９７％の純度、少なくとも９８％の純度、少なくとも９９％の純度、少なくとも９９．５％の純度および少なくとも９９．９％の純度を包含し、この場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも９７％の純度、少なくとも９８％の純度、少なくとも９９％の純度、少なくとも９９．５％の純度、および少なくとも９９．９％の純度を含む。
【００２４】
「代謝物」という用語は、本明細書中で用いられる場合、それを必要とする対象者への投与後にインビボで産生される化合物を指す。
【００２５】
「約」という用語（〜によっても表される）は、記載された数値が標準的な実験誤差内で変化する範囲の一部であることを意味する。
【００２６】
指定されたＸＲＰＤパターン「・・・で実質的に示されるように」という表現は、ＸＲＰＤパターンにおいて示されるピーク位置が、目視検査または選択されたピークリスト（±０．２°２θ）を用いる手段で実質的に同じであることを意味する。当業者は、強度が試料によって変化し得ることを理解する。
【００２７】
「実質的に無水」とは、物質が最大で１０重量％の水、好ましくは最大で１重量％の水、さらに好ましくは最大で０．５重量％の水、そして最も好ましくは最大で０．１重量％の水を含むことを意味する。
【００２８】
溶媒または貧溶媒（反応、結晶化などで用いられるもの、または格子および／もしくは吸着溶媒）としては、少なくとも１つのＣ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、種々の溶媒、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素が挙げられる。
【００２９】
Ｃ１〜Ｃ８アルコールは、そのような数の炭素を有する直線状／分枝および／または環状／非環状アルコールを指す。Ｃ１〜Ｃ８アルコールとしては、これらに限定されるものではないが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール、ヘキサノール、およびシクロヘキサノールが挙げられる。
【００３０】
Ｃ２〜Ｃ８エーテルは、そのような数の炭素を有する直線状／分枝および／または環状／非環状エーテルを指す。Ｃ２〜Ｃ８エーテルとしては、これらに限定されるものではないが、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、メチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、テトラヒドロフラン、およびジオキサンが挙げられる。
【００３１】
Ｃ３〜Ｃ７ケトンは、そのような数の炭素を有する直線状／分枝および／または環状／非環状ケトンを指す。Ｃ３〜Ｃ７ケトンとしては、これらに限定されるものではないが、アセトン、メチルエチルケトン、プロパノン、ブタノン、メチルイソブチルケトン、メチルブチルケトン、およびシクロヘキサノンが挙げられる。
【００３２】
Ｃ３〜Ｃ７エステルは、そのような数の炭素を有する直線状／分枝および／または環状／非環状エステルを指す。Ｃ３〜Ｃ７エステルとしては、これらに限定されるものではないが、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ｎ−ブチルなどが挙げられる。
【００３３】
Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボンは、そのような数の炭素を有するクロロカーボンを指す。Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボンとしては、これらに限定されるものではないが、クロロホルム、塩化メチレン（ＤＣＭ）、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、およびテトラクロロエタンが挙げられる。
【００３４】
Ｃ２〜Ｃ７ニトリルは、そのような数の炭素を有するニトリルを指す。Ｃ２〜Ｃ７ニトリルとしては、これらに限定されるものではないが、アセトニトリル、プロピロニトリルなどが挙げられる。
【００３５】
種々の溶媒は、有機化学で通常用いられる溶媒を指し、これらに限定されるものではないが、ジエチレングリコール、ジグリム（ジエチレングリコールジメチルエーテル）、１，２−ジメトキシ−エタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、グリセリン、ヘキサメチルホスホルアミド、ヘキサメチル亜リン酸トリアム（ｔｒｉａｍｅ）、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、ニトロメタン、ピリジン、トリエチルアミン、および酢酸が挙げられる。
【００３６】
Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素という用語は、直線状／分枝および／または環状／非環状炭化水素を指す。Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素としては、これらに限定されるものではないが、ｎ−ペンタン、石油（リグロイン）、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタン、シクロヘキサン、およびシクロヘプタンが挙げられる。
Ｃ６〜Ｃ１２芳香族という用語は、それらの骨格としてフェニル基を有する置換および非置換炭化水素を指す。好ましい炭化水素としては、ベンゼン、キシレン、トルエン、クロロベンゼン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、キシレン類が挙げられ、トルエンがさらに好ましい。
【００３７】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、本明細書中で用いられる場合、クロロ、ブロモ、ヨードおよびフルオロを包含する。
【００３８】
「ブロッキング基」という用語は、下記特性を示す化学基を指す。「基」は、「保護化合物」から誘導される。ホスホルアミデートの安定性にふさわしい条件下（ｐＨ２〜８）で付加することができる第２ヒドロキシルよりも第１ヒドロキシルについて選択的であり、結果として得られる生成物に対して実質的に異なる物理的特性を付与して、３’−ホスホルアミデート−５’−新規基生成物を未反応の所望の化合物からより容易に分離することを可能にする基。この基は、良好な収率で選択的に反応して、予想される反応に対して安定な、保護された基質をもたらすことができなければならない（Protective Groups in Organic Synthesis, 3nd ed. T. W. Greene and P. G. M. Wuts, John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999を参照のこと）。基の例としては、これらに限定されるものではないが：ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、ＤＭＴ（４，４’−ジメトキシトリチル）、ＭＭＴ（４−モノメトキシトリチル）、トリメトキシトリチル、ピクシル（９−フェニルキサンテン−９−イル）基、チオピクシル（９−フェニルチオキサンテン−９−イル）または９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）など；Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）アリール、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルが挙げられる。アセタール、例えばＭＯＭまたはＴＨＰ等が可能な基と考えられる。フッ素化化合物もまた、それらが化合物に結合することができ、フルオラス（fluorous）固相抽出媒体（ＦｌｕｏｒｏＦｌａｓｈ（登録商標））を通過させることによって選択的に除去することができる限りにおいて、想定される。具体例としては、フッ素化トリチルアナログ、トリチルアナログ１−［４−（１Ｈ，１Ｈ，２Ｈ，２Ｈ−パーフルオロデシル）フェニル）−１，１−ジフェニルメタノールが挙げられる。トリチル、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、ＣＢｚなどの他のフッ素化アナログも想定される。ｐ−トルエンスルホニルクロリドなどのスルホニルクロリドは、５’位置上で選択的に反応することができる。酢酸エステルおよび安息香酸エステルなどのエステルが選択的に形成され得る。無水コハク酸およびその誘導体などの無水ジカルボン酸を用いて、遊離カルボン酸とのエステル結合を精製させることができ、そのような例としては、これらに限定されるものではないが、オキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル、アジピル、ピメリル、スペリル、アゼライル、セバシル、フタリル、イソフタリル、テレフタリルなどが挙げられる。遊離カルボン酸は、極性を劇的に増大させ、また、反応生成物を重炭酸ナトリウム溶液などの弱塩基性水性相中に抽出するための手段として用いることもできる。ホスホルアミデート基は酸性媒体中で比較的安定であり、したがって酸性反応条件を必要とする基、例えばテトラヒドロピラニルも使用できる。
【００３９】
「保護化合物」から誘導される「保護基」という用語は、その簡単で通常の意味を有し、すなわち、少なくとも１つの保護またはブロッキング基が、少なくとも１つの他の官能基の化学的修飾を可能にする少なくとも１つの官能基（例えば、−ΟΗ、−ＮＨ２など）と結合している。保護基の例としては、これらに限定されるものではないが、ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、ＤＭＴ（４，４’−ジメトキシトリチル）、ＭＭＴ（４−モノメトキシトリチル）、トリメトキシトリチル、ピクシル（９−フェニルキサンテン−９−イル）基、チオピクシル（９−フェニルチオキサンテン−９−イル）または９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンチン−９−イル（ＭＯＸ）など；Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｐｈ、Ｃ（Ｏ）アリール、Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキレン）アリール（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、Ｃ（Ｏ）Ｏアリール、ＣＨ２Ｏ−アルキル、ＣＨ２Ｏ−アリール、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、少なくとも１つのケイ素原子を含む保護基、例えば，ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、Ｓｉ（低級アルキル）２ＯＳｉ（低級アルキル）２ＯＨ（例えば、−Ｓｉ（ｉＰｒ）２ＯＳｉ（ｉＰｒ）２ＯＨが挙げられる。
【００４０】
「保護化合物」という用語は、本明細書中で用いられる場合で、特に別段の定義がないかぎり、「保護基」を含有し、保護され得る官能基を含有する化合物と反応することができる化合物を指す。
【００４１】
「脱離基」という用語は、本明細書中で用いられる場合、当業者に対してと同じ意味を有し（Advanced Organic Chemistry: reactions, mechanisms and structure-Fourth Edition by Jerry March, John Wiley and Sons Ed.; 1992 pages 351-357）、基質分子の一部であり、基質分子に結合した基を表し；基質分子が（例えば求核試薬と）置換反応を受ける反応では、脱離基を次いで置換する。脱離基の例としては、これらに限定されるものではないが：ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）、好ましくはＣｌ、Ｂｒ、またはＩ；トシレート、メシレート、トリフレート、アセテート、カンファースルホネート、アリールオキシド、および少なくとも１つの電子吸引基で置換されたアリールオキシド（例えば、ｐ−ニトロフェノキシド、２−クロロフェノキシド、４−クロロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、ペンタフルオロフェノキシドなど）などが挙げられる。「電子吸引基」という用語は、本明細書中のその簡単な意味に一致する。電子吸引基の例としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲン、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）（アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリール）などが挙げられる。
【００４２】
「塩基性試薬」という用語は、本明細書中で用いられる場合、ヒドロキシル基を脱プロトン化することができる化合物を意味する。塩基性試薬の例としては、これらに限定されるものではないが、アルコール性溶媒と組み合わせたオキシド（低級アルコキシド）（（低級アルキル）ＯＭ）が挙げられ、ここで、オキシド（低級アルコキシド）としては、これらに限定されるものではないが、ＭｅＯ−、ＥｔＯ−、ｎＰｒＯ−、ｉＰｒＯ−、ｉＢｕＯ−、ｉＡｍＯ−（イソ−アミルオキシド）などが挙げられ、Ｍは、アルカリ金属カチオン、例えばＬｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋などである。アルコール性溶媒としては、（低級アルキル）ＯＨ、例えば、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、ｎＰｒＯＨ、ｉＰｒＯＨ、ｉＢｕＯＨ、ｉＡｍＯＨなどが挙げられる。非アルコキシ塩基、例えば、水素化ナトリウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、ヘキサメチルジシラザンリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ＤＢＵ、ＤＢＮ、グリニャール試薬、例えば（低級アルキル）Ｍｇ（ハロゲン）（これらに限定されるものではないが、ＭｅＭｇＣｌ、ＭｅＭｇＢｒ、ｉＢｕＭｇＣｌ、ｉＢｕＭｇＢｒなどが挙げられる）も用いることができる。
【００４３】
「塩基」という用語は、「塩基性試薬」という用語を包含し、プロトン含有化合物を脱プロトン化することができる化合物、すなわちブレンステッド塩基であることを意味する。上述の例に加えて、塩基のさらなる例としては、これらに限定されるものではないが、ピリジン、コリジン、２，６−（低級アルキル）−ピリジン、ジメチル−アニリン、イミダゾール、Ｎ−メチル−イミダゾール、ピラゾール、Ｎ−メチル−ピラゾール、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどが挙げられる。
【００４４】
「非求核性塩基」という用語は、ブレンステッド塩基として作用することができるが、低い求核性を有する化合物を意味する。非求核性塩基の例としては、これらに限定されるものではないが、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１−６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１−６−アルキル、−ピリジン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン、および１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンが挙げられる。
【００４５】
「電子吸引基」という用語は、その簡単な意味と一致する。電子吸引基の例としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）（アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（アリール）などが挙げられる。
【００４６】
「共結晶」という用語は、薬剤的に許容される塩を包含する塩と組み合わせられた４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４の共結晶を包含する。
【００４７】
「塩」という用語は、本明細書で用いられる場合、プロトン受容部分のプロトン化および／またはプロトン供与部分の脱プロトン化により産生することができる、カチオンおよびアニオンを含む化合物を指す。プロトン受容部分のプロトン化の結果、カチオン性種が形成され、ここでは、電荷は、生理学的アニオンの存在により釣り合っており、一方、プロトン供与部分の脱プロトン化の結果、アニオン性種が形成され、ここでは、電荷は、生理学的カチオンの存在により釣り合っていることに注目すべきである。
【００４８】
「薬剤的に許容される塩」という語句は、薬剤的に許容されるものである塩を意味する。薬剤的に許容される塩の例としては、これらに限定されるものではないが：（１）例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成されるか；もしくはグリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、サリチル酸、ムコン酸などの有機酸と形成される酸付加塩、または（２）前述の無機酸のいずれかの共役塩基と形成される塩基付加塩であって、ここでは、共役塩基は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、ＮＨｇＲ’”４−ｇ＋（ここで、Ｒ’”はＣ１〜３アルキルであり、ｇは０、１、２、３、または４から選択される数である）から選択されるカチオン性成分を含む。薬剤的に許容される塩についての全ての言及は、同じ酸付加塩の、本明細書中で定義される溶媒付加形態（溶媒和物）または結晶形（多形）を包含することを理解すべきである。
【００４９】
「アルキル」という用語は、１〜３０個の炭素原子を含有する非分枝または分枝鎖、飽和、一価炭化水素残基を指す。「Ｃ１〜Ｍアルキル」という用語は、１〜Ｍ個の炭素原子を含むアルキルを指し、ここで、Ｍは、以下の値：２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０を有する整数である。「Ｃ１〜４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含有するアルキルを指す。「低級アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を含む直線状または分枝鎖炭化水素残基を意味する。「Ｃ１〜２０アルキル」という用語は、本明細書中で用いられる場合、１〜２０個の炭素原子を含むアルキルを指す。「Ｃ１〜１０アルキル」という用語は、本明細書中で用いられる場合、１〜１０個の炭素を含むアルキルを指す。アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルまたはペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、およびオクチルをはじめとする低級アルキル基が挙げられる。（アル）アルキル、または（ヘテロアリール）アルキルという用語は、アルキル基が、場合によって、それぞれアリール、またはヘテロアリール基により置換されていることを示す。
【００５０】
「アルケニル」という用語は、１または２個のオレフィン性二重結合、好ましくは１個のオレフィン性二重結合を有する２〜１０個の炭素原子を有する非置換炭化水素鎖ラジカルを指す。「Ｃ２−Ｎアルケニル」という用語は、２〜Ｎ個の炭素原子を含むアルケニルを指し、ここで、Ｎは、以下の値：３、４、５、６、７、８、９、または１０を有する整数である。「Ｃ２〜１０アルケニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子を含むアルケニルを指す。「Ｃ２〜４アルケニル」という用語は、２〜４個の炭素原子を含むアルケニルを指す。例としては、これらに限定されるものではないが、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）または２−ブテニル（クロチル）が挙げられる。
【００５１】
「アリール」という用語は、本明細書中で用いられる場合、そして特別の定めのない限り、置換または非置換フェニル（Ｐｈ）、ビフェニル、またはナフチルを指し、好ましくは、アリールという用語は、置換または非置換フェニルを指す。アリール基は、当業者には知られているように、保護されていないか、または例えば、T.W. Greene and P.G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis,” 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999で教唆されるように、必要に応じて保護されているかのいずれかの、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートから選択される１以上の部分で置換することができる。
【００５２】
「アリールオキシド」という用語は、本明細書中で用いられる場合、そして特別な定めのない限り、置換または非置換フェノキシド（ＰｈＯ−）、ｐ−フェニル−フェノキシド（ｐ−Ｐｈ−ＰｈＯ−）、またはナフトキシドを指し、好ましくは、アリールオキシドという用語は、置換または非置換フェノキシドを指す。アリールオキシド基は、保護されていないか、または、当業者には知られているように、必要に応じて、例えば、T.W. Greene and P.G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis,” 3rd ed., John Wiley & Sons, 1999で教唆されているように保護されているかのいずれかの、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｃ（Ｏ）（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（低級アルキル）、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートから選択される１以上の部分で置換することができる。
【００５３】
「製剤」または「投与形態」という用語は、活性化合物の固体および液体処方の両方を含むことが意図され、当業者は、活性成分が所望の用量および薬物動態学的パラメータによって異なる製剤中に存在し得ることを理解するであろう。
【００５４】
「賦形剤」という用語は、本明細書中で用いられる場合、一般的に安全で、非毒性かつ、生物学的にもその他でも有害ではない医薬組成物を調製するために用いられる化合物を指し、獣医学的使用ならびにヒト製薬学的使用に許容される賦形剤を含む。
【００５５】
「結晶性」という用語は、Ｘ線粉末回折または単結晶Ｘ線技術により測定される場合、Ｓｐ−４またはＲｐ−４のいずれかの固体試料が結晶性特性を有する状態を指す。
【００５６】
「結晶様」という用語は、Ｓｐ−４またはＲｐ−４のいずれかの固体試料が、ある１つの手段、例えば視覚的に、または光学もしくは偏光顕微鏡法により測定される場合に結晶性特性を有するが、別の手段、例えばＸ線粉末回折により測定される場合は結晶性特性を有さない状態を指す。視覚によるか、または光学もしくは偏光顕微鏡法により、固体試料の結晶性を視覚的に測定する方法は、ＵＳＰ＜６９５＞および＜７７６＞（どちらも参照により本明細書中に組み込まれる）で開示されている。「結晶様」であるＳｐ−４またはＲｐ−４のいずれかの固体試料は、ある条件下で結晶性であり得るが、他の条件に付された場合には非結晶性になる可能性がある。
【００５７】
「アモルファス」という用語は、Ｓｐ−４またはＲｐ−４のいずれかが結晶性でも結晶様でもない状態を指す。
【００５８】
実施形態
第１の実施形態は、式４：
【化２】
2013523767.tif 000004
（式中、Ｐ＊は、キラルなリン原子を表す）により表される化合物に関する。キラルなリン原子のために、式４により表される化合物は、Ｒｐ−４およびＳｐ−４と表される２つのジアステレオマーを含む。式４により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物／水和物の一部であり得る。溶媒和物は４・ｎＳと表され、一方、水和物は４・ｍＨ２Ｏと表され、ここで、Ｓは格子溶媒であり、ｎは約０〜約３の整数または非整数量で変化し、ｍは約０〜約５の整数または非整数量で変化する）と表される。最後に、式４により表される化合物は溶媒和物または水和物として存在しない可能性があるが、ある有利な量の吸着溶媒（Ｓ）または水を有する。その場合、Ｓまたは水の量は、式４により表される化合物の重量を基準として、約０重量％〜約１０重量％で変化し得る。式４により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。
【００５９】
第２の実施形態は、式Ｒｐ−４： 
【化３】
2013523767.tif 000005
により表される化合物に関する。
【００６０】
式Ｒｐ−４により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物／水和物の一部でもあり得る。溶媒和物は、Ｒｐ−４・ｎＳと表示され、一方、水和物は、Ｓｐ−４・ｍΗ２Ｏと表示され、ここで、Ｓは、格子溶媒であり、ｎは約０〜約３の整数または非整数で変化し、ｍは約０〜約５の整数または非整数で変化する。最後に、式Ｒｐ−４により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物／水和物として存在しないが、ある有利な量の吸着溶媒（Ｓ）、水、またはＳおよび水の両方を有する可能性がある。その場合、Ｓまたは水の量は、式Ｒｐ−４により表される化合物の重量を基準として約０重量％〜約１０重量％で変化し得る。式Ｒｐ−４により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。
【００６１】
第２の実施形態の第１の態様は、結晶性Ｒｐ−４に関する。
【００６２】
第２の実施形態の第２の態様は、約：６．６、７．１、９．０、１１．６、１７．９、２０．７、２４．１、２４．４、および２６．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｒｐ−４に関する。
【００６３】
第２の実施形態の第３の態様は、約：６．６、７．１、９．０、１１．０、１１．６、１２．０、１６．０、１７．９、１９．６、２０．７、２１．０、２１．７、２１．９、２２．２、２３．１、２４．１、２４．４、２６．１、２７．３、２７．７、および２８．２のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｒｐ−４に関する。
【００６４】
第２の実施形態の第４の態様は、実質的に図２で示されるようなＸＲＰＤ回折パターンを有する結晶性Ｒｐ−４に関する。
【００６５】
第２の実施形態の第５の態様は、次のＦＴ−ＩＲピーク（ｃｍ−１）：１７４２、１７１３、１６７９、１４６０、１３７７、１２５９、１１５７、および１０７９を有するＲｐ−４に関する。
【００６６】
第２の実施形態の第６の態様は、実質的に図１５で示されるようなＦＴ−ＩＲスペクトルを有するＲｐ−４に関する。
【００６７】
第２の実施形態の第７の態様は、実質的に純粋なＲｐ−４に関する。
【００６８】
第２の実施形態の第８の態様は、実質的に純粋な結晶性Ｒｐ−４に関する。
【００６９】
第２の実施形態の第９の態様は、実質的に純粋なアモルファスなＲｐ−４に関する。
【００７０】
第３の実施形態は、式Ｓｐ−４：
【化４】
2013523767.tif 000006
により表される化合物に関する。
【００７１】
式Ｓｐ−４によって表される化合物はまた、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物／水和物の一部でもあり得る。溶媒和物は、Ｓｐ−４・ｎＳと表され、一方、水和物は、Ｓｐ−４・ｍＨ２Ｏと表され、ここで、Ｓは格子溶媒であり、ｎは、約０〜約３の整数または非整数で変化し、ｍは、約０〜約５の整数または非整数で変化する。最後に、式Ｓｐ−４により表される化合物は、溶媒和物または水和物として存在しないが、ある有利な量の吸着溶媒（Ｓ）または水を有する可能性がある。その場合、Ｓまたは水の量は、式Ｓｐ−４により表される化合物の重量を基準として約０重量％〜約１０重量％で変化し得る。式Ｓｐ−４により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。
【００７２】
第３の実施形態の第１の態様は結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７３】
第３の実施形態の第２の態様は、好ましくは次の単位胞パラメータａ約１２．８８Å、ｂ約６．１７Å、ｃ約１７．７３Å、およびβ約９２．０５°を有する単斜晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７４】
第３の実施形態の第３の態様は、好ましくは次の単位胞パラメータａ約２０．０９Å、ｂ約６．１０Å、ｃ約２３．０１Å、およびβ約１１２．２９°を有する単斜晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７５】
第３の実施形態の第４の態様は、好ましくは、次の単位胞パラメータａ約１２．８３Å、ｂ約６．１５Å、ｃ約１７．６３Å、およびβ約９１．７５°を有する単斜晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７６】
第３の実施形態の第５の態様は、好ましくは、次の単位胞パラメータａ約１２．９３Å、ｂ約６．１８Å、ｃ約１８．０１Å、およびβ約９６．４０°を有する単斜晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７７】
第３の実施形態の第６の態様は、約：５．２、７．５、９．６、１６．７、１８．３、２２．２でＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７８】
第３の実施形態の第７の態様は、約：５．０、７．３、９．４、および１８．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００７９】
第３の実施形態の第８の態様は、約：４．９、６．９、９．８、１９．８、２０．６、２４．７、および２６．１のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８０】
第３の実施形態の第９の態様は、：６．９、９．８、１９．７、２０．６、および２４．６のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８１】
第３の実施形態の第９の態様は、約：５．０、６．８、１９．９、２０．６、２０．９、および２４．９のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８２】
第３の実施形態の第１０の態様は、約：５．２、６．６、７．１、１５．７、１９．１、および２５．０のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８３】
第３の実施形態の第１１の態様は、約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８４】
第３の実施形態の第１２の態様は、実質的に図３、図４、図５、図６、図７、図８、および図２１のいずれか１つで示されるようなＸＲＰＤ回折パターンを有する結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８５】
第３の実施形態の第１３の態様は、約：１７４３、１７１３、１６８８、１４５４、１３７８、１２０８、および１０８２でＦＴ−ＩＲピーク（ｃｍ−１）を有するＳｐ−４に関する。
【００８６】
第３の実施形態の第１４の態様は、実質的に図７で示されるようなＦＴ−ＩＲスペクトルを有するＳｐ−４に関する。
【００８７】
第３の実施形態の第１５の態様は、実質的に純粋なＳｐ−４に関する。
【００８８】
第３の実施形態の第１６の態様は、実質的に純粋な結晶性Ｓｐ−４に関する。
【００８９】
第３の実施形態の第１７の態様は、実質的に純粋なアモルファスＳｐ−４に関する。
【００９０】
用量、投与、および使用
第４の実施形態は、化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のずれかを使用した任意のウイルス性因子の治療および／または予防のための組成物に関する。可能なウイルス性因子としては、これらに限定されるものではないが：Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、日本脳炎ウイルス、またはペスチウイルス、ヘパシウイルス、もしくはフラビウイルスの群に属するウイルスが挙げられる。
【００９１】
この実施形態の態様は、本明細書中で開示される任意のウイルス性因子の治療のための組成物に関し、前記組成物は、賦形剤、担体、希釈剤、および同等の媒体から選択される薬剤的に許容される媒体、ならびに化合物４、Ｒｐ−４、もしくはＳｐ−４のいずれか（その水和物、溶媒和物、および化合物４、Ｒｐ−４、もしくはＳｐ−４のいずれかの任意の結晶性形態またはその水和物およびその溶媒和物を含むことが意図される）を含む。
【００９２】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、様々な経口投与形態および担体で独立して処方することができる。経口投与は、錠剤、コーティング錠、ハードおよびソフトゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、シロップ、または懸濁液の形態であり得る。化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、他の投与経路のうち、坐剤投与により投与される場合に有効である。最も好都合な投与法は、一般的に、疾患の重症度および抗ウイルス剤に対する患者の反応にしたがって調節することができる、好都合な連日投与方式を用いる経口である。
【００９３】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、１以上通常の賦形剤、担体、または希釈剤とあわせて、医薬組成物の形態および単位用量中に入れることができる。医薬組成物および単位投与形態は、さらなる活性化合物の有無にかかわらず通常の割合の通常の成分から構成される可能性があり、単位投与形態は、採用される所望の１日投与量範囲にふさわしい任意の好適な有効量の活性成分を含み得る。医薬組成物は、経口使用のための、固体、例えば錠剤もしくは充填カプセル、半固体、粉末、持続放出性処方、または液体、例えば懸濁液、エマルジョン、または充填カプセル；あるいは直腸または膣投与のための坐剤の形態などとして用いることができる。典型的な製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（複数可）（ｗ／ｗ）を含む。
【００９４】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、単独で投与することができるが、一般的には、所望の投与経路および標準的な製薬法に関して選択される１以上の好適な医薬賦形剤、希釈剤または担体との混合物で投与される。
【００９５】
固体形態製剤としては、例えば、粉末、錠剤、ピル、カプセル、坐剤、および分散可能な顆粒が挙げられる。固体担体はさらに、希釈剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、バインダー、防腐剤、錠剤崩壊剤、または封入材料として作用することができる１以上の物質であり得る。粉末において、担体は、一般的に、微粉活性成分との混合物である微粉固体である。錠剤において、活性成分を、一般的に、好適な割合で必要な結合能力を有する担体と混合し、所望の形状およびサイズに圧縮する。好適な担体としては、これらに限定されるものではないが、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などが挙げられる。固体形態製剤は、活性成分に加えて、着色剤、フレーバー、安定剤、緩衝液、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。固体処方の例は、欧州特許第０５２４５７９号；米国特許第２００２／０１４２０５０号；米国特許第２００４／０２２４９１７号；米国特許第２００５／００４８１１６号；米国特許第２００５／００５８７１０号；米国特許第２００６／００３４９３７号；米国特許第２００６／００５７１９６号；米国特許第２００６／０１８８５７０号；米国特許第２００７／００２６０７３号；米国特許第２００７／００５９３６０号；米国特許第２００７／００７７２９５号；米国特許第２００７／００９９９０２号；米国特許第２００８／００１４２２８号；米国特許第６，２６７，９８５号；米国特許第６，２９４，１９２号；米国特許第６，３８３，４７１号；米国特許第６，３９５，３００号；米国特許第６，５６９，４６３号；米国特許第６，６３５，２７８号；米国特許第６，６４５，５２８号；米国特許第６，９２３，９８８号；米国特許第６，９３２，９８３号；米国特許第７，０６０，２９４号；および米国特許第７，４６２，６０８号（そのそれぞれは参照により本明細書中に組み込まれる）で例示されている。
【００９６】
液体処方もまた、経口投与に好適であり、エマルジョン、シロップ、エリキシルおよび水性懸濁液をはじめとする液体処方を含む。これらとしては、使用直前に液体形態製剤に変換されることが意図される固体形態製剤が挙げられる。液体処方の例は、米国特許第３，９９４，９７４号；第５，６９５，７８４号；および第６，９７７，２５７号で例示されている。エマルジョンは、溶液中、例えば、水性プロピレングリコール溶液中で調製することができるか、またはレシチン、ソルビタンモノオレアート、もしくはアカシアなどの乳化剤を含み得る。水性懸濁液は、微粉活性成分を水中に粘稠性材料、例えば天然または合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁化剤とともに分散させることによって調製することができる。
【００９７】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、坐剤としての投与のために独立して処方することができる。低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物をまず融解させ、そして活性成分を、例えば撹拌により均一に分散させる。溶融した均質混合物を次いで通常のサイズの型中に注ぎ、冷却させ、そして凝固させる。
【００９８】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４を膣投与のために独立して処方することができる。活性成分に加えて、当該技術分野において適切であることが知られている担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォームまたはスプレー。これらの処方のあるものはさらに、殺精子剤を含むかまたは含まないコンドームと併用することもできる。
【００９９】
好適な処方は、医薬担体、希釈剤および賦形剤と合わせて、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania（参照により本明細書中に組み込まれる）で記載されている。熟練した薬剤師は、明細書中の教唆の範囲内で処方を修飾して、本明細書中で想定される化合物を含有する組成物を不安定にすることなく、またはそれらの治療活性を損なうことなく、特定の投与経路について多くの処方を提供することができる。
【０１００】
さらに、精製された化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４は、リポソームまたはミセルとあわせて、独立して処方することができる。リポソームに関しては、米国特許第４，７９７，２８５号；第５，０１３，５５６号；第５，０７７，０５６号；第５，０７７，０５７号；第５，１５４，９３０号；第５，１９２，５４９号；第５，２１３，８０４号；第５，２２５，２１２号；第５，２７７，９１４号；第５，３１６，７７１号；第５，３７６，３８０号；第５，５４９，９１０号；第５，５６７，４３４号；第５，７３６，１５５号；第５，８２７，５３３号；第５，８８２，６７９号；第５，８９１，４６８号；第６，０６０，０８０号；第６，１３２，７６３号；第６，１４３，３２１号；第６，１８０，１３４号；第６，２００，５９８号；第６，２１４，３７５号；第６，２２４，９０３号；第６，２９６，８７０号；第６，６５３，４５５号；第６，６８０，０６８号；第６，７２６，９２５号；第７，０６０，６８９号；および第７，０７０，８０１号（そのそれぞれは、参照により本明細書中に組み込まれる）で開示されているような方法で処方することができると考えられる。ミセルに関しては、精製された化合物を、米国特許第５，１４５，６８４号および第５，０９１，１８８号（どちらも参照により本明細書中に組み込まれる）で開示されているのと同じ方法で処方することができると考えられる。
【０１０１】
第５の実施形態は、以下のウイルス性因子：Ｃ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルスおよび日本脳炎ウイルスのいずれか１つによる感染の結果である任意の状態の治療用医薬における化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかの使用に関する。
【０１０２】
「医薬」という用語は、それを必要とする対象者の治療および／または予防法において用いられる物質を意味し、この物質としては、これらに限定されるものではないが、化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかを含む組成物、処方、投与形態などが挙げられる。本明細書中で開示される抗ウイルス状態のいずれかの治療のための医薬の製造において化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかの、単独または本明細書中で開示される別の化合物との組み合わせた使用が想定される。医薬としては、これらに限定されるものではないが、本明細書中で開示される第４の実施形態により想定される組成物のいずれか１つが挙げられる。
【０１０３】
第６の実施形態は、それを必要とする対象者における治療および／または予防法に関し、前記方法は、治療有効量の任意の化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかを対象者に投与することを含む。
【０１０４】
それを必要とする対象者は、これらに限定されるものではないが、Ｃ型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルスまたは日本脳炎ウイルス、フラビウイルスウイルスもしくはペスチウイルスもしくはヘパシウイルスまたは前記ウイルスのいずれかと等しいかまたは匹敵する症状を引き起こすウイルス性因子を包含する、本明細書中で開示されるウイルス性因子のいずれかによる感染の結果である任意の状態を有する者であることが意図される。
【０１０５】
「対象者」という用語は、これらに限定されるものではないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、シチメンチョウ、バッファロー、ラマ、ダチョウ、イヌ、ネコ、およびヒトを含むほ乳類を意味し、好ましくは、対象者はヒトである。第９の実施形態の対象者を治療する方法において、本明細書中で想定される化合物のいずれかを単独または本明細書中で開示される他の化合物と組み合わせて用いることができると考えられる。
【０１０６】
「治療有効量」という用語は、本明細書中で用いられる場合、個体における疾患の症状を軽減するために必要な量を意味する。用量をそれぞれの特定の場合における個々の要件に対して調節する。その投与量は、治療される疾患の重症度、患者の年齢および全体的な健康状態、患者を治療するために用いられる他の医薬、投与経路および投与形態ならびに関与する医師の好みおよび経験などの多くの因子に応じて広い範囲内で変化し得る。経口投与に関して、１日あたり、約０．００１〜約１０ｇ（中間の全ての値、例えば０．００１、０．００２５、０．００５、０．００７５、０．０１、０．０２５、０．０５０、０．０７５、０．１、０．１２５、０．１５０、０．１７５、０．２、０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、および９．５を含む）の１日投与量が単剤療法および／または併用療法で適切である。特定の１日投与量は、１日あたり約０．０１〜約１ｇ（中間の０．０１ｇ（すなわち、１０ｍｇ）の全ての増分値を含む）であり、好ましい１日投与量は約０．０１〜約０．８ｇ／日であり、さらに好ましくは約０．０１〜約０．６ｇ／日であり、そして最も好ましくは約０．０１〜約０．２５ｇ／日であり、そのそれぞれは、中間の０．０１ｇの全ての増分値を含む。一般的に、治療は、大きな初期「負荷用量」で開始して、ウイルスを迅速に減少または除去し、続いて感染の再発を防止するために十分なレベルまで用量を減少させる。本明細書中で記載される疾患の治療で通常の技術を有する者は、必要以上の実験をすることなく、また知識、経験および本出願の開示に基づいて、所定の疾患および患者に関して本明細書中で開示される化合物の治療有効量を確定することができる。
【０１０７】
治療効果は、これらに限定されるものではないが、血清タンパク質（例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、５’−ヌクレオシダーゼ、γ−グルタミニルトランスペプチダーゼ（glutaminyltranspeptidase）など）などのタンパク質レベル、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成をはじめとする肝機能；これらに限定されるものではないが、炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝をはじめとする肝臓代謝機能の試験から確認することができる。別法として、治療有効性は、ＨＣＶ−ＲＮＡを測定することによってモニタリングすることができる。これらの試験の結果により用量を最適化することが可能になる。
【０１０８】
第６の実施形態の第１の態様は、それを必要とする対象者における治療および／または予防法に関し、前記方法は、対象者に、治療有効量の、化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかにより表される化合物および治療有効量の別の抗ウイルス剤を投与することを含み；ここで、投与は同時または代替的である。代替的投与の時間間隔は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、および２３時間を含む任意の部分範囲を含む、１〜24時間の範囲であり得ると理解される。
【０１０９】
「別の抗ウイルス剤」の例としては、これらに限定されるものではないが：ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤（欧州特許第１８８１００１号、米国特許第２００３１８７０１８号、米国特許第２００５２６７０１８号、国際公開第２００３００６４９０号、国際公開第２００３６４４５６号、国際公開第２００４０９４４５２号、国際公開第２００５０２８５０２号、国際公開第２００５０３７２１４号、国際公開第２００５０９５４０３号、国際公開第２００７０１４９２０号、国際公開第２００７０１４９２１号、国際公開第２００７０１４９２２号、国際公開第２００７０１４９２５号、国際公開第２００７０１４９２６号、国際公開第２００７０１５８２４号、国際公開第２００８０１０９２１号、および国際公開第２００８０１０９２１号を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ阻害剤（米国特許第２００４２２９８４０号、米国特許第２００５１５４０５６号、米国特許第２００５−９８１２５号、米国特許第２００６０１９４７４９号、米国特許第２００６０２４１０６４号、米国特許第２００６０２９３３０６号、米国特許第２００６０４０８９０号、米国特許第２００６０４０９２７号、米国特許第２００６１６６９６４号、米国特許第２００７２７５９４７号、米国特許第６７８４１６６号、米国特許第２００７２７５９３００号、国際公開第２００２０５７２８７号、国際公開第２００２０５７４２５号、国際公開第２００３０１０１４１号、国際公開第２００３０３７８９５号、国際公開第２００３１０５７７０号、国際公開第２００４０００８５８号、国際公開第２００４００２９４０号、国際公開第２００４００２９４４号、国際公開第２００４００２９７７号、国際公開第２００４００３１３８号、国際公開第２００４０４１２０１号、国際公開第２００４０６５３６７号、国際公開第２００４０９６２１０号、国際公開第２００５０２１５６８号、国際公開第２００５１０３０４５号、国際公開第２００５１２３０８７号、国際公開第２００６０１２０７８号、国際公開第２００６０２００８２号、国際公開第２００６０６５３３５号、国際公開第２００６０６５５９０号、国際公開第２００６０９３８０１号、国際公開第２００７０２６０２号、国際公開第２００７０３９１４２号、国際公開第２００７０３９１４５号、国際公開第２００７０７６０３４号、国際公開第２００７０８８１４８号、国際公開第２００７０９２０００号、および国際公開第２００７０９５２６９号を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ４阻害剤（国際公開第２００５０６７９００号および国際公開第２００７０７０５５６号を参照のこと）；ＨＣＶ  ＮＳ５ａ阻害剤（米国特許第２００６２７６５１１号、国際公開第２００６０３５０６１号、国際公開第２００６１００３１０号、国際公開第２００６１２０２５１号、および国際公開第２００６１２０２５２号を参照のこと）；トール様受容体アゴニスト（国際公開第２００７０９３９０１号を参照のこと）；および他の阻害剤（国際公開第２０００００６５２９号、国際公開第２００３１０１９９３号、国際公開第２００４００９０２０号、国際公開第２００４０１４３１３号、国際公開第２００４０１４８５２号、および国際公開第２００４０３５５７１号を参照のこと）���ならびに２００８年３月２１日付で出願された米国特許出願第１２／０５３，０１５号（米国特許第２０１０／００１６２５１号）（その内容は、参照により本明細書中に組み込まれる）で開示されている化合物、インターフェロンα、インターフェロンβ、ペグ化インターフェロンα、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、別のヌクレオシドＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶ非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤またはＨＣＶ融合阻害剤が挙げられる。
【０１１０】
化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれかを、別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与する場合、活性は、親化合物を越えて増加する可能性がある。治療が併用療法である場合、そのような投与は、ヌクレオシド誘導体に関して同時または連続的であり得る。「同時投与」という用語は、本明細書中で用いられる場合、したがって、同じ時間または異なる時間での薬剤の投与を含む。２以上の薬剤の同じ時間での投与は、２以上の活性成分を含有する単一処方によるか、または２以上の投与形態と単一活性剤とを実質的に同時に投与することにより、達成することができる。
【０１１１】
治療についての本明細書中での言及は、既存の状態の予防ならびに治療に及ぶと理解されるであろう。さらに、ＨＣＶ感染の「治療」という用語は、本明細書中で用いられる場合、ＨＣＶ感染に関連するかもしくは媒介される疾患または状態、あるいはその臨床症状の治療または予防も包含する。
【０１１２】
調製
第７の実施形態は、化合物４、Ｒｐ−４、またはＳｐ−４のいずれか１つを調製するためのプロセスに関し、このプロセスは：ａ）イソプロピル−アラネート、Ａ、ジ−ＬＧ−フェニルホスフェート、Ｂ、２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン、３、および塩基を反応させて、少なくとも１つのＳｐ−４およびＲｐ−４を含む第１の混合物を得、
【化５】
2013523767.tif 000007
（ここで、Ｘは、酸の共役塩基であり、ｎは０または１であり、そしてＬＧは脱離基である）；ｂ）第１混合物を保護化合物と反応させて、少なくとも１つの保護されたＳｐ−４および保護されたＲｐ−４を含む第２の混合物を得；そしてｃ）場合によって、４、Ｓｐ−４、またはＲｐ−４を得るために、第２の混合物を、結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に付すこと、を含む。
【０１１３】
第７の実施形態の第１の態様において、イソプロピルアラネートは、その塩酸塩として存在し、これは、好ましくは実質的に無水である。
【０１１４】
第７の実施形態の第２の態様において、塩基はＮ−メチルイミダゾールである。
【０１１５】
第７の実施形態の第３の態様において、Ａ：Ｂ：３のモル比は、約１．６：１．３：１である。
【０１１６】
第７の実施形態の第４の態様において、保護化合物はｔ−ブチル−ジメチル−シリル−クロリドである。
【０１１７】
第８の実施形態は、Ｓｐ−４またはＲｐ−４を調製するためのプロセスに関し、このプロセスは：ａ）イソプロピル−アラネート、Ａ、ジ−ＬＧ−フェニルホスフェート、Ｂ、２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン、３、および塩基を反応させて、少なくとも１つのＳｐ−４およびＲｐ−４を含む第１の混合物を得
【化６】
2013523767.tif 000008
（式中、Ｘは酸の共役塩基であり、ｎは０または１であり、ＬＧは脱離基である）；そしてｂ）場合によって、精製されたＳｐ−４またはＲｐ−４を得るために、第２の混合物を結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に付すこと、を含む。
【０１１８】
Ｒｐ−４を調製するための第８の実施形態の第１の態様は、第２の混合物または精製されたＲｐ−４混合物を溶媒中に溶解または懸濁させることにより、第２の混合物または精製されたＲｐ−４をさらに精製し；場合によって、続いて結晶性Ｒｐ−４を播種し；そして結晶性Ｒｐ−４を得るために十分な貧溶媒を添加することをさらに含む。
【０１１９】
Ｓｐ−４を調製するための第８の実施形態の第２の態様は、ｄ）第２の混合物または精製されたＳｐ−４を溶媒中に溶解または懸濁させ、続いて結晶性Ｓｐ−４をほぼ室温で播種し；その大部分がＳｐ−４を含む第１の固体を集め；第１固体を溶媒中にその還流温度で溶解させ；そして冷却するかまたは貧溶媒を添加して、第２の固体を得ることにより、第２の混合物または精製されたＳｐ−４をさらに精製することをさらに含む。
【０１２０】
Ｓｐ−４を調製するための第８の実施形態の第３の態様は、ｄ）第２の混合物または精製されたＳｐ−４混合物を第１の溶媒中に溶解または懸濁させ、続いて貧溶媒を添加して、第１の組成物を得（ここで、デカントすることにより残存する溶媒／貧溶媒を除去して、残留物を得る）；第１溶媒および貧溶媒を含む溶液で残留物を処理して、第２の組成物を得、圧力を減少させて、第１の固体を得；第２の溶媒を用いて第１固体を溶解または懸濁させて、第３の組成物を得；Ｓｐ−４の種結晶を第３の組成物に添加し；第２の固体を集め；第２の固体を、場合によって第３の溶媒の還流温度まで加熱した第３の溶媒中に溶解または懸濁させて、第４の組成物を得、そして必要ならば、第４の組成物を冷却して、Ｓｐ−４を含む第３の固体を得、これをろ過により集めることにより、Ｓｐ−４をさらに精製することをさらに含む。
【０１２１】
Ｓｐ−４を調製するための第８の実施形態の第４の態様において、第２の混合物または精製されたＳｐ−４により、ｄ）シリカゲルを第２の混合物または精製されたＳｐ−４に添加し、続いて溶媒を蒸発させて、乾燥スラリーを得；乾燥スラリーを第１の溶媒／貧溶媒の組み合わせ中で撹拌して、第１の湿潤スラリーを得；第１溶媒／貧溶媒組み合わせを第１湿潤スラリーからデカントして、第２の湿潤スラリーおよび第１の組成物を得；第２の湿潤スラリーに第２の溶媒／貧溶媒組み合わせを添加し、続いて撹拌し；第２の溶媒／貧溶媒組み合わせを第２の湿潤スラリーからデカントして、第３の湿潤スラリーおよび第２の組成物を得；場合によって第３の湿潤スラリーまたはさらなる湿潤スラリーに関してステップｇ）〜ｈ）を繰り返し；溶媒を第２の組成物および場合によって任意のステップｉ）から得られる任意のさらなる組成物から蒸発させて、第１の固体を得；第３の溶媒および場合によって第４の溶媒を含む溶液中に第１固体を溶解または懸濁させて、第３の組成物を得；場合によってＳｐ−４の種結晶を第３の組成物に添加し；第３の組成物からＳｐ−４を含む第２の固体を得；そして場合によって第３の溶媒を用いて第２の固体を再結晶して、Ｓｐ−４を含む第３の固体を得ることにより、Ｓｐ−４をさらに精製する。
【０１２２】
当業者は、化合物を伝統的な抽出、伝統的な結晶化または伝統的なクロマトグラフィー技術により分離できることを理解するであろう。伝統的なクロマトグラフィー技術としては、これらに限定されるものではないが、シリカゲル上クロマトグラフィー（例えば、３〜５％のＤＣＭ中メタノールまたは４〜６％のＤＣＭ中イソプロパノールを使用）を含み、増大したレベルの１つの異性体（５０〜１００％）を産生し、次いでこれを結晶化する。あるいは、逆相クロマトグラフィー（例えば、１〜３０％のアセトニトリル−水性移動相を使用）を使用することができる。さらに、主溶媒として二酸化炭素および修飾剤としてメタノールなどのアルコールを用い、好ましくは適切なキラル媒体、例えば、Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ  ＩＡを使用する、超臨界流体クロマトグラフィーＳＦＣにより、化合物を単離することができる。別法として、適切なキラル媒体、例えば、Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ  ＩＡを用い、ヘキサン／イソプロパノールなどの溶媒の混合物または酢酸エチルなどの単一溶媒を用いるＳＭＢクロマトグラフィーを採用することができる。
【０１２３】
第９の実施形態は、Ｓｐ−４を調製するためのプロセスであって：ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートを３’−Ｏ−保護または非保護３、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Ｓｐ−４を含む組成物を得ること、を含むプロセスに関し
【化７】
2013523767.tif 000009
ここで、イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートは、次の構造：
【化８】
2013523767.tif 000010
により表されるジアステレオマーの混合物から構成され、ここで、Ｃ：Ｃ’の比は約１：１である。
【０１２４】
第１の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ’の比は、約１：１以上である。
【０１２５】
第２の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ’の比は約１：１を越える。
【０１２６】
第３の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ’の比は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１２７】
第４の態様ＬＧ’は、２，４−ジニトロフェノキシド、４−ニトロフェノキシド、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシド、２，４−ジクロロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドから選択され、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ：Ｃ’の比は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１２８】
Ｓｐ−４を調製するための第５の態様は：ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデート（Ｃ）を３’−Ｏ−保護または非保護３、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Ｓｐ−４を含む組成物を得、
【化９】
2013523767.tif 000011
（式中、Ｚは保護基または水素であり；ＬＧ’は脱離基である）；そしてｂ）場合によって、精製された保護または非保護Ｓｐ−４を得るために、得られた保護または非保護Ｓｐ−４をクロマトグラフィー、抽出、または結晶化に付すことを含む。下位実施形態において、ＬＧ’は、トシレート、カンファースルホネート、または少なくとも１つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドであり；さらに好ましくは、ＬＧ’は、２，４−ジニトロフェノキシド、４−ニトロフェノキシド、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシド、２，４−ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドから選択される。さらなる下位実施形態において、Ｓｐ−４が保護されている場合、すなわち、Ｚが水素でない場合、第９の実施形態のプロセスは、保護されたＳｐ−４の脱保護にさらに関する。さらなる下位実施形態において、反応は、極性非プロトン性溶媒、例えば、テトラヒドロフランまたは別のエーテル系溶媒（単独、または互いと、もしくはＣ２〜Ｃ７ニトリル、例えばアセトニトリルとの組み合わせのいずれか）中で実施される。
【０１２９】
第９の実施形態のプロセスは、１）（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２（ここで、ＬＧは、ＬＧ’から独立して、脱離基である）を（ｉ）イソプロピル−アラネートおよび第１の塩基と反応させて、（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）をフェノールおよび第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得、（ｉｉ）フェノールおよび第１の塩基と反応させて、（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）を得、続いて（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）をイソプロピル−アラネートおよび第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得るか、または（ｉｉｉ）イソプロピル−アラネート、フェノール、および少なくとも１つの塩基を組み合わせて反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得るか；あるいは２）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２（ここで、ＬＧは脱離基である）を（ｉ）イソプロピル−アラネートおよび第１の塩基と反応させて（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を脱離基前駆体（ＬＧ’Ｈ）および第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得
【化１０】
2013523767.tif 000012
そして混合物をクロマトグラフィーに付すかまたは混合物を結晶化してＣを得ること；をさらに含む。第９の実施形態の態様において、イソプロピルアラネートはその塩酸塩として存在し、これは好ましくは実質的に無水である。
【０１３０】
第１０の実施形態は、Ｒｐ−４を調製するためプロセスであって：ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートを３’−Ｏ−保護または非保護３、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Ｒｐ−４を含む組成物を得ること、を含むプロセスに関し、
【化１１】
2013523767.tif 000013
ここで、イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデートは、以下の構造：
【化１２】
2013523767.tif 000014
により表されるジアステレオマーの混合物から構成される
（式中、Ｃ’：Ｃの比は約１：１である）。
【０１３１】
第１の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ’：Ｃの比は約１：１以上である。
【０１３２】
第２の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ’：Ｃの比は約１：１以上である。
【０１３３】
第３の態様において、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ’：Ｃの比は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１３４】
第４の態様ＬＧ’はｐ−ニトロフェノキシドであり、塩基性試薬はｔ−ブチルマグネシウムクロリドであり、Ｃ’：Ｃの比は、少なくとも約１．５：１、約２．３：１、約４：１、約５．７：１、約９：１、約１９：１、約３２．３：１、約４９：１、または約９９：１である。
【０１３５】
Ｒｐ−４を調製するための第５の態様は：ａ）イソプロピル−アラニル−ホスホルアミデート（Ｃ’）を３’−Ｏ−保護または非保護３、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Ｒｐ−４を含む組成物を得
【化１３】
2013523767.tif 000015
（式中、Ｚは保護基または水素であり；ＬＧ’は脱離基である）；そして
ｂ）場合によって、精製された保護または非保護Ｒｐ−４を得るために、得られた保護または非保護Ｒｐ−４をクロマトグラフィー、抽出、または結晶化に付すことを含む。下位実施形態において、ＬＧ’は、トシレート、カンファースルホネート、または少なくとも１つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドであり；さらに好ましくは、ＬＧ’は、ｐ−ニトロフェノキシド、２，４−ジニトロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドから選択される。さらなる下位実施形態において、Ｒｐ−４が保護されている場合、すなわち、Ｚが水素でない場合、第９の実施形態のプロセスは、保護されたＲｐ−４の脱保護にさらに関する。さらなる下位実施形態において、反応は、極性非プロトン性溶媒中、例えば、テトラヒドロフランまたは別のエーテル系溶媒単独または互いともしくはＣ２〜Ｃ７ニトリル、例えばアセトニトリルとの組み合わせのいずれかで行われる。
【０１３６】
第１０の実施形態のプロセスは、１）（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２（ここで、ＬＧは、ＬＧ’と独立して、脱離基である）を（ｉ）イソプロピル−アラネートおよび第１の塩基と反応させて、（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）をフェノールおよび第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得、（ｉｉ）フェノールおよび第１の塩基と反応させて、（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）を得、続いて（ＬＧ’）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＯＰｈ）をイソプロピル−アラネートおよび第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得るか、または（ｉｉｉ）イソプロピル−アラネート、フェノール、および少なくとも１つの塩基を組み合わせて反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得るか；または２）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）２（式中、ＬＧ’は、ＬＧから独立して、脱離基である）を（ｉ）イソプロピル−アラネートおよび第１の塩基と反応させて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得、続いて（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を脱離基前駆体および第２塩基と反応させて、ＣおよびＣ’を含む混合物を得、
【化１４】
2013523767.tif 000016
そして、混合物をクロマトグラフィーに付すかまたは混合物を結晶化して、Ｃ’を得ること、をさらに含む。第９の実施形態の態様において、イソプロピルアラネートは、その塩酸塩として存在し、これは好ましくは実質的に無水である。
【０１３７】
第１１の実施形態は、第７の実施形態、第８の実施形態、第９の実施形態または第１０の実施形態ならびにそれらそれぞれの態様で記載されたプロセスにより得られる組成物に関する。第１１の実施形態の態様は、下記で開示される例示された実施形態のいずれか１つにより得られる組成物に関する。そのようにして得られた組成物は、結晶性、結晶様、アモルファス、またはそれらの組み合わせで有り得る。
【０１３８】
第１２の実施形態は、化合物３
【化１５】
2013523767.tif 000017
（式中、Ｚは保護基または水素である）に関し；これは、Ｒｐ−４またはＳｐ−４の調製に有用である。
【０１３９】
第１２の実施形態の第１の態様は、次の構造
【化１６】
2013523767.tif 000018
を有する化合物から選択される。
【０１４０】
第１３の実施形態は、次の構造
【化１７】
2013523767.tif 000019
（式中、ＬＧ’は、脱離基である）により表される、化合物、その塩、水和物、溶媒和物、またはそれらの組み合わせに関し、これは、Ｒｐ−４またはＳｐ−４の調製に有用である。
【０１４１】
第１３の実施形態の第１の態様では、ＬＧ’は、トシレート、カンファースルホネート、アリールオキシド、または少なくとも１つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドである。
【０１４２】
第１３の実施形態の第２の態様では、ＬＧ’は、２，４−ジニトロフェノキシド、４−ニトロフェノキシド、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシド、２，４−ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドから選択される。
【０１４３】
第１３の実施形態の第３の態様では、ＬＧ’は、ペンタフルオロフェノキシドまたは４−ニトロ−フェノキシドである。
【０１４４】
第１３の実施形態の第４の態様は、ＬＧ’が、２，４−ジニトロフェノキシド、４−ニトロフェノキシド、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシド、２，４−ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドである化合物Ｃに関する。
【０１４５】
第１３の実施形態の第５の態様は、ＬＧ’が、４−ニトロフェノキシドまたはペンタフルオロフェノキシドである化合物Ｃに関する。
【０１４６】
第１３の実施形態の第６の態様は、ＬＧ’が４−ニトロフェノキシドである化合物Ｃに関する。
【０１４７】
第１３の実施形態の第７の態様は、ＬＧ’が４−ニトロフェノキシドである結晶性化合物Ｃに関する。
【０１４８】
第１３の実施形態の第８の態様は、ＬＧ’がペンタフルオロフェノキシドである化合物Ｃに関する。
【０１４９】
第１３の実施形態の第９の態様は、ＬＧ’がペンタフルオロフェノキシドである結晶性化合物Ｃに関する。
【０１５０】
第１４の実施形態は、構造式
【化１８】
2013523767.tif 000020
により表される化合物を調製し、
化合物を、
ａ）第１の組成物；
ｂ）第２の脱離基前駆体；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物
を含む組成物から結晶化するためのプロセスに関し、
ここで、第１組成物は、化合物およびその対応するＰベースのジアステレオマーを含む。
【０１５１】
第１４の実施形態の第１の態様において、化合物のモル量およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量は同一または異なる。
【０１５２】
第１４の実施形態の第２の態様において、化合物のモル量は、その対応するＰベースのジアステレオマーのモル量よりも多いか、またはその逆である。
【０１５３】
第１４の実施形態の第３の態様において、第２の脱離基前駆体は、２，４−ジニトロフェノール、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロフェノール、２，４−ジクロロフェノール、またはペンタフルオロフェノールである。
【０１５４】
第１４の実施形態の第４の態様において、ＬＧ’はペンタフルオロフェノキシドである。第１の下位態様において、第２の脱離基前駆体はペンタフルオロフェノールである。第２の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲およびその中間の全てのモル当量に及ぶ。第３の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲およびその中間の全てのモル当量に及ぶ。
【０１５５】
第１４の実施形態の第５の態様において、結晶化は、約−１０℃〜約＋４０℃の範囲およびその中間の全ての温度値で起こる。第１の下位態様において、結晶化はほぼ室温で起こる。
【０１５６】
第１４の実施形態の第６の態様において、非求核性塩基は、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、ｌ，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、およびそれらの混合物から選択される。第１の下位態様において、非求核性塩基は、トリエチルアミンまたは１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エンである。第２の下位態様において、非求核性塩基はトリエチルアミンである。
【０１５７】
第１４の実施形態の第７の態様において、非求核性塩基は、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して、約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲、およびその中間の全てのモル当量に及ぶ量で存在する。第１の下位態様において、非求核性塩基は、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して、約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲の量、およびその中間の全てのモル当量に及ぶ量で存在する。
【０１５８】
第１４の実施形態の第８の態様において、化合物の溶解度は、液体組成物中のその対応するＰベースのジアステレオマーの溶解度より少ないか、またはその逆である。
【０１５９】
第１４の実施形態の第９の態様において、液体組成物は、溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む。第１の下位態様において、液体組成物は、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む。第２の下位態様において、液体組成物は、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む。第３の下位態様において、液体組成物は、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む。第４の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む。第５の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチルおよびヘキサンを含む。第６の下位態様において、液体組成物は、ｔ−ブチル−メチルエーテルおよびヘキサンを含む。
【０１６０】
第１４の実施形態の第１０の態様において、液体組成物の量は、第１組成物１グラムにつき約１ｍＬ〜約１０ｍＬの範囲およびその中間の全てのｍＬ／ｇ値に及ぶ。
【０１６１】
第１４の実施形態の第１１の態様は、結晶性化合物を組成物に添加することをさらに含む。第１の下位態様は、約０．１〜約１重量％、およびその中間の全ての重量％値の結晶性化合物を第１組成物に添加することをさらに含む。
【０１６２】
第１４の実施形態の第１２の態様は、
ａ）ＰｈＯＰ（Ｏ）（ＬＧ）２およびｉＰｒ−Ａｌａ−ＮＨ２・ＨＣｌを第１塩基の存在下で反応させて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得；
ｂ）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を第１の脱離基前駆体（ＬＧ’Ｈ）と第２塩基の存在下で反応させて、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーを含む組成物を得ることをさらに含み；
ここで、ＬＧおよびＬＧ’は、互いに独立して、脱離基であり；
第１脱離基前駆体および第２の脱離基前駆体は、同一または異なり；そして
第１塩基および第２塩基は、同一または異なる。
【０１６３】
第１５の実施形態は、以下の構造
【化１９】
2013523767.tif 000021
を有する結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物
を含む第２の組成物から結晶化させること、を含むプロセスに関し、
ここで、第２の組成物は、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む。
【０１６４】
第１５の実施形態の第１の態様において、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量および２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量は、同一または異なる。
【０１６５】
第１５の実施形態の第２の態様において、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量は、２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量よりも多い。
【０１６６】
第１５の実施形態の第３の態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの量に対して、約０．０１モル当量〜約１０モル当量（およびその中間の全てのモル当量値）に及ぶ。第１の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量に対して、約０．１モル当量〜約１モル当量（およびその中間の全てのモル当量値）に及ぶ。
【０１６７】
第１５の実施形態の第４の態様において、結晶化は、約−１０℃〜約＋４０℃の範囲の温度およびその中間の全ての温度値で起こる。第１の下位態様において、結晶化はほぼ室温で起こる。
【０１６８】
第１５の実施形態の第５の態様において、非求核性塩基は、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ〜Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、およびそれらの混合物から選択される。第１の下位態様において、非求核性塩基は、トリエチルアミンまたは１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エンである。第２の下位態様において、非求核性塩基はトリエチルアミンである。
【０１６９】
第１５の実施形態の第６の態様において、非求核性塩基は、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総モル量に対して、約０．１〜約１モル当量（およびその中間の全てのモル当量値）の範囲の量で存在する。
【０１７０】
第１５の実施形態の第７の態様において、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの溶解度は、液体組成物中の２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの溶解度よりも低い。
【０１７１】
第１５の実施形態の第８の態様において、液体組成物は、溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む。第１の下位態様において、液体組成物は、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む。第２の下位態様において、液体組成物は、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む。第３の下位態様において、液体組成物は、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む。第４の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む。第５の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、およびヘキサンを含む。第６の下位態様において、液体組成物は、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンを含む。
【０１７２】
第１５の実施形態の第９の態様において、液体組成物の量は、第１組成物１グラムにつき、約１〜約１０ｍＬ（およびその中間の全てのｍＬ／ｇ値）に及ぶ。
【０１７３】
第１５の実施形態の第１０の態様は、結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを第２の組成物に添加することをさらに含む。
【０１７４】
第１５の実施形態の第１１の態様は、第１組成物中の２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総重量を基準として、約０．１〜約１重量％（および中間の全ての重量％値）の結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを添加することをさらに含む。
【０１７５】
第１６の実施形態は、第１５の実施形態のプロセスにより得られる、結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルに関する。
【０１７６】
第１７の実施形態は、２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物
を含む第２の組成物から結晶化すること、を含むプロセスに関し；
ここで、第１組成物は、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む。
【０１７７】
第１７の実施形態の第１の態様は、２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、ｔ−ブチルマグネシウムハライドと１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンとｔ−ブチルマグネシウムハライドとを反応させることにより得られる生成物と接触させること、を含むプロセスに関する。
【０１７８】
第１７の実施形態の第２の態様において、接触は、約０℃〜約４０℃の範囲の温度および中間のすべての温度値を有する媒体中で起こる。
【０１７９】
第１７の実施形態の第３の態様において、接触は、約０℃〜約３０℃の範囲の温度および中間のすべての温度値で起こる。
【０１８０】
第１７の実施形態の第４の態様において、ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比は、約２〜約２．２の範囲に及ぶ。第１の下位態様において、ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比は約２．１である。
【０１８１】
第１７の実施形態の第５の態様において、ｔ−ブチルマグネシウムハライドはｔ−ブチルマグネシウムクロリドである。
【０１８２】
第１８の実施形態は、実質的に純粋な２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
本明細書中で開示される関連する実施形態のいずれかにしたがって２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを得、そして
そのようにして形成された２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを結晶化すること、を含むプロセスに関する。
【０１８３】
第１９の実施形態は、は、Ｒｐ−４またはＳｐ−４の同位体標識されたアナログに関する。「同位体標識された」アナログという用語は、「重水素化アナログ」、「１３Ｃで標識されたアナログ」、または「重水素化／１３Ｃ標識アナログ」であるＲｐ−４またはＳｐ−４のアナログを指す。「重水素化アナログ」という用語は、１Ｈ−同位体、すなわち水素（Ｈ）が、２Ｈ−同位体、すなわち重水素（Ｄ）で置換されている、本明細書中に記載される化合物を意味する。重水素置換は、部分的または完全であり得る。部分重水素置換とは、少なくとも１つの水素が少なくとも１つの重水素により置換されていることを意味する。例えば、Ｒｐ−４またはＳｐ−４について、当業者は、次の部分重水素化アナログ（式中、「ｄｎ」は、ｎ個の重水素原子を表し、例えば、イソプロピル基についてはｎ＝１〜７であり、一方、フェニル基については、ｎ＝１〜５である）、ならびに下記で図示されるものを想定することができる。
【化２０】
2013523767.tif 000022
上記のメチル基は完全に重水素化されたものとして示されているが、部分重水素化形、例えば−ＣＤＨ２および−ＣＤ２Ｈも可能であることが理解されるであろう。フラノースおよび塩基上の同位体標識も想定される。同様に、「１３Ｃで標識されたアナログ」および「重水素化／１３Ｃで標識されたアナログ」という用語は、１３Ｃ同位体を多く含む本明細書中に記載される化合物を指し、約１．１％の通常の天然存在度を超える富化の程度を意味する。
【実施例】
【０１８４】
一例に限定されず、以下の実施例は、本開示のよりよい理解を容易にするのに役立つ。
【０１８５】
合成態様
ウリジンヌクレオシドを調製するために、パイロットプラントスケールですでに効率的に産生された３（下記を参照のこと）のある３’，５’−ジアシル化アナログの合成において高度なトリベンゾイル化シチジン中間体を利用することができる（国際公開第２００６／０３１７２５号または米国特許第２００６／０１２２１４６号（どちらもそれらの全体として参照により組み込まれる）を参照のこと）。下記方法は、スケーラブルであり、かつ費用効果が優れていることが判明した。
【化２１】
2013523767.tif 000023
【０１８６】
３’，５’−Ｏ−ジベンゾイル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチル−Ｎ４−ベンゾイルシチジン（１）は、国際公開第２００６／０３１７２５号および国際公開第２００８／０４５４１９号（どちらも、その全体として参照により本明細書中に組み込まれる）で開示される方法により得られる。１を７０％の水性酢酸で処理して、３’，５’−Ｏ−ジベンゾイル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチル−ウリジン（２）を形成する。ベンゾイルエステルを、多くの方法によって、アルコール性溶媒中アルコキシド、例えばメタノール中ナトリウムメトキシド、メタノールまたはエタノールアナログ中炭酸カリウム、メタノール中メチルアミン、ブチルアミンなどのアルキルアミンなどにより、同様に加水分解することができる。メタノール性アンモニアをより大規模な実験に関して選択した。ウリジン生成物（３）を結晶化により精製して、トリベンゾイル化シチジン（１）から７０％の収率を得ることができる。
【０１８７】
多くの文献の手順が、数倍当量の試薬を用いてホスホルアミデートを作製する異なるための経路および条件を詳細に記載している。例えば、McGuigan et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 3504-3515およびMcGuigan et al. J. Med. Chem. 2006, 49, 7215を参照のこと。製造スケールの実験については、現在知られている例は１例しかなく、これはLehsten et al., Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 819-822 （「Lehsten」）で開示されている。この参考文献では、著者等は、アミノ酸塩酸塩およびフェニルジクロロホスフェートをあわせてＮ−メチルイミダゾールとジクロロメタン中で反応させる、「ワンポット手順」の概念を導入している。後で、ヌクレオシドを添加して、所望の５’−Ｏ−ホスホルアミデート生成物を形成し、これにより、この場合では、式４により表される化合物が生成する。残念ながら、Lehstenの手順には欠点がある。例えば、Lehstenの手順は、必要であるよりはるかに過剰の試薬を用い、これによりクロマトグラフィー精製のコストや困難さが増大した。さらに、Lehstenは、低温の使用やヌクレオシドをゆっくりと添加することにより、参考文献と比較して、３’−ヒドロキシルよりも５’−ヒドロキシルに対する反応の選択性を制御することができることを示唆している。
【化２２】
2013523767.tif 000024
【０１８８】
本明細書中で開示される化合物に関してLehstenの手順を使用して、約１〜５％のモノ置換３’−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマー（５）および約１０〜３０％のビス置換生成物（６）を得た。３’−ジアステレオマーの極性は所望の５’−ジアステレオマー（４）と非常に類似していたので、クロマトグラフ分離は非常に困難であった。プロセスの拡大は、かなりの部分の極性の低い５’−ジアステレオマー（４）を廃棄するかまたは３’−ジアステレオマー（５）の高レベルの汚染を受けることなしにはほぼ不可能であった。最初の５０ｇスケールアップで、結果として得られる生成物は、約３％の３’−ジアステレオマー（５）汚染を含み、これは極性の低い５’−ジアステレオマー（４）と共溶出した。
【０１８９】
本明細書中で開示されるのは、より少ない量の試薬を使用する反応条件、およびより簡単なクロマトグラフ分離で不純物３’−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマー（５）を選択的に除去し、これにより所望の５’−Ｏ−ホスホルアミデートジアステレオマーをはるかに高い純度で得る方法である（４）。
【０１９０】
試薬化学量論に関して、試薬の化学量論を系統的に変更し、結果をLehstenが報告したような粗反応のリンＮＭＲによりモニタリングする研究を行った。より大きな成果をあげた実験において、所望の生成物の単離収率および純度を比較した。第１の５’−ヒドロキシルは、第２の３’−ヒドロキシルよりも速い速度で反応することが観察された。これは、全ての出発ヌクレオシドを消費する反応進行と、５’−および３’−一置換生成物（４および５）を５’，３’−ビス置換生成物（６）に変換する反応進行との間で競合的状況を生み出す。３’−一置換生成物は、５’−一置換生成物よりも速い速度でビス生成物になり、したがって、反応をビス置換生成物側へ進ませることにより３’−ジアステレオマー汚染レベルを減少させることが可能である。しかし、３’−ジアステレオマーを除去するための効果的な方法で、反応を最適化して、ビス置換体（６）に変換される５’−ジアステレオマーの多くを犠牲にすることがなく、より多くの所望の５’−ジアステレオマーを産生することができる。アミノ酸塩酸塩が非常に吸湿性であることも観察された。存在するいかなる水も同量のフェニルジクロロホスフェート試薬を消費するので、配慮してアミノ酸を実質的に無水に保たなければならないか、または使用前に実質的に無水にしなければならない。つまり、Lehstenは、アミノ酸とフェニルジクロロホスフェートとヌクレオシドの最適比がそれぞれ３．５：２．５：１であったことを報告した。約１．６：約１．３：約１のアミノ酸とフェニルジクロロホスフェートとヌクレオシドの最適比は、３’−ジアステレオマーを効率的に除去することができる条件下およびアミノ酸塩酸塩が実質的に無水である場合に最適であることが判明した。より少ない量の試薬を使用することにより、試薬副生成物および低レベルのビスジアステレオマーからの所望の生成物のクロマトグラフ分離の簡素化とあわせて、コスト削減が実現される。
【０１９１】
別の手順において、３の３’−ヒドロキシブロック化誘導体を、２ステップでｔ−ブチルジメチルシリルブロッキング基を用いて調製した。これを次いでその５’−ホスホルアミデート誘導体に変換した。シリル基を次いで除去して、３’異性体（５）または３’，５’−ビスホスホルアミデート（６）は存在しないのが望ましい。類似したアプローチがBorchおよびFries（米国特許第５，２３３，０３１号）により、全収率が低いアルキルホスホルアミデートについて示された。
【０１９２】
別の代替的アプローチは、直接合成を使用し、次いで３’−ジアステレオマー不純物５と所望の５’−ジアステレオマー４とを区別するのを助け、分離に役立つ化学を使用する。所望の５’−Ｏ−ホスホルアミデート４の遊離第２ヒドロキシルよりも、３’−Ｏ−ホスホルアミデート不純物５の遊離第１ヒドロキシルと選択的に反応する基が望まれた。結果として得られる５’−Ｏ−ブロック化３’−Ｏ−ホスホルアミデート生成物の極性を、所望の５’−Ｏ−ホスホルアミデート４から有意に変える保護基も望まれた。所望の５’−ジアステレオマー４は変化しないので、保護基を除去するために余分なステップは必要ない。化学的に改変された３’−ジアステレオマーはしたがって、より容易なクロマトグラフ分離または特殊なスカベンジング支持体もしくは抽出に分離を可能にする。
【０１９３】
特に、ブロッキング基ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ｔＢＤＭＳ）は、これらの基準を満たし、示された最初のものであり、その後、数キログラムのスケールで使用された。溶媒および塩基としてのピリジン中などのある条件下で、ｔＢＤＭＳ基は、３’第２ヒドロキシル位置よりも第１ヒドロキシル位置で高い選択性で反応する。ホスホルアミデート反応は、Ｎ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ）を塩基として使用する。ＮＭＩの存在下で、シリル化は低選択的である。好ましくは、ＮＭＩの量を減少させなければならない。これは、反応溶液を１Ｎの塩酸で洗浄することにより、ホスホルアミデート反応後に容易に達成することができる。ＮＭＩおよび残存するヌクレオシドを除去し、モノおよびビス置換生成物ならびに試薬副生成物の粗混合物が残る。これを次いでピリジン中に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドで処理する。３’−一置換生成物５は数時間以下で５’−Ｏ−ｔＢＤＭＳ−３’−Ｏ−ホスホルアミデート７に変換される。反応の進行はＨＰＬＣによってモニタリングすることができる。シリル化生成物７の極性は、ビス−ホスホルアミデート６よりも低く、クロマトグラフィーにより容易に除去することができる。この方法を用いて、３’−モノホスホルアミデート５のレベルを、シリル処理なしで１〜３％であるのに対して、５’−生成物４の０．１％未満まで減少させることが可能であった。同様に、同じ条件下でジメトキシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＴ−Ｃ１）での処理は、全く同じ働きをした。ＤＭＴ含有分子は加熱または酸への暴露により明橙色に染色するので、ＴＬＣによりＤＭＴ反応生成物を同定することもより容易であった。前述の様に、多くの他の保護基を想定することもできる。
【０１９４】
反応条件および３’−不純物のスカベンジングはどちらも一般的方法であり、３’ヒドロキシルを有するヌクレオシドホスホルアミデートのほとんどに適用することができた。ホスホルアミデート部分は、アミノ酸エステルおよび芳香族アルコールの任意の組み合わせであり得る。ヌクレオシド部分は、５’ホスホルアミデートが５’−モノホスフェートとなり、さらに代謝されて５’−トリホスフェート形となり得る、任意のヌクレオシドであり得る。
【０１９５】
以下のスキームは、２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジンのイソプロピルL−アラネートフェニルホスホルアミデートを作製するために示された主な反応スキームであり、主生成物は所望の５’−Ｏ−ホスホルアミデート（４、２つのジアステレオマー）であり、副生成物は３’−Ｏ−ホスホルアミデート（５、２つのジアステレオマー）および３’，５’−ビス−Ｏ−ホスホルアミデート（６、４つのジアステレオマー）である。試薬を、調製法の部分で記載する様な化学量論比で添加する。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）上でＵＶ視覚化により判定して出発物質の約５％が残存するまで反応を進行させる。また、ＵＰＬＣ／ＭＳは、所望の５’−生成物と比較して、約１０％の３’，５’ビス−ホスホルアミデート６が形成されたことを示した。クエンチングおよび酸性水性仕上げ処理の後、シリル化のために有機層から粗残留物を調製した。記載された反応条件下で、シリル基は優先的に３’−Ｏ−ホスホルアミデートの遊離５’−ヒドロキシルと反応して、７を形成した。３’−Ｏ−ホスホルアミデートがＵＰＬＣ／ＭＳによりもはや検出されなくなるまで、反応を継続した。
【化２３】
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【０１９６】
シリル化反応を完了させた後、所望の生成物をシリカゲル上クロマトグラフィーに付し、ジクロロメタン中メタノール（１〜４％）の勾配で溶出させる。所望の５’−モノホスホルアミデート４は最後に溶出する。
【０１９７】
調製方法
【０１９８】
実施例１．２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（３）の調製
１０Ｌフラスコに、３’，５’−Ｏ−ジベノジル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチル−Ｎ４−ベンゾイルシチジン（５００ｇ、０．８７４ｍｏｌ）及び７０％酢酸水溶液（７．５Ｌ）を加えた。溶液を２０時間加熱還流した（１１０℃）。ＴＬＣは反応の完了を示した（５％メタノールのジクロロメタン（ＤＣＭ)溶液で、Ｒｆ＝０．６）。混合物を雰囲気温度まで冷却し、水（２Ｌ）で希釈した。２時間撹拌した後、生成した沈殿物を濾過して回収し、固体を水（５Ｌ）で洗い、空気中雰囲気温度で１２時間乾燥し、３６０ｇ（８８％）を得た。このジベンゾイルウリジン中間体の全量を、新たに調製したメタノール・アンモニア（５．４Ｌ、約２５％）に０℃で加えて、次の工程で直接使用した。この温度を３時間維持した後、２４時間で１５℃まで昇温させた。ＴＬＣは反応の完了を示した（１０％メタノールのＤＣＭ溶液で、Ｒｆ＝０．４）。反応混合物をセライト層で濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物（２１６ｇ）を得た。粗生成物を酢酸エチル（３２５ｍＬ）と合わせて、雰囲気温度で３時間撹拌した。生成した固体を濾過して回収し、酢酸エチル（２１６ｍＬ）で洗った。固体を真空下、雰囲気温度で４時間乾燥し、所望の産物をＨＰＬＣ純度９８．７％で１６０ｇ（７８％）得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｃ−６Ｈ）、５．９７（ｄ，１Ｈ，Ｃ−１’Ｈ）、５．６４（ｄ，１Ｈ，Ｃ−５Ｈ）、３．８４−３．７７（ｍ，３Ｈ，Ｃ−５’−Ｈａ，Ｃ−３’Ｈ．Ｃ−４’Ｈ）、３．６３−３．６０（ｍ，１Ｈ，Ｃ５’−Ｈｂ）、１．２３（ｄ，３Ｈ，Ｃ−２’−ＣＨ３）。ＥＳ−ＭＳ  Ｍ−１  ２５９。
【０１９９】
実施例２．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸イソプロピルエステル（４）の調製
【０２００】
別名：５’−Ｏ−（イソプロピル−Ｌ−アラナート，フェニルホスホルアミジル）−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチル−ウリジンジアステレオマー混合物
【０２０１】
５Ｌの三口フラスコに、メカニカルスターラー、氷塩浴、内部温度計を取り付け、窒素雰囲気とした。フラスコに、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（８２．０ｇ、０．４９０ｍｏｌｅｓ）、及び無水ジクロロメタン（０．８０Ｌ）を加えた。これを撹拌しながら、ジクロロリン酸フェニル（８５．０ｇ、０．４０ｍｏｌｅｓ）を一度に加えて撹拌した。内部温度を−５〜５℃に保ちながら、Ｎ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ、２５０ｇ、３．０７ｍｏｌｅｓ）のジクロロメタン（２５０ｍＬ）溶液を３０分間かけて加えた。溶液は、この温度範囲で１時間撹拌させた。２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチル−ウリジン（３、８０．０ｇ、０．３０７ｍｏｌｅｓ）を０℃で一度に加え、その後、反応フラスコを塩浴中でゆっくりと昇温させた。１時間経過時点で、内部温度は−２℃に上昇した。１時間経過時点でのＴＬＣ（５％メタノールのＤＣＭ溶液）では、５０％を超えるヌクレオシドが消費されていることが示された。塩浴を取り除き、さらに１時間かけて、反応フラスコを雰囲気温度にした。３時間後、そして全体では５時間経過時点でのＴＬＣでは、開始時のヌクレオシドの９５％が消費されていることが示された。反応混合物は、メタノール（１００ｍＬ）を加えて５分間撹拌することで、反応を停止した。
【０２０２】
反応混合物を１ＮのＨＣｌ（２Ｘ５００ｍＬ）、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２Ｘ５００ｍＬ）で洗った。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥させ、濾過した。溶液を減圧下そしてさらに高真空下で蒸発乾固させ、粗生成物を粘性油状物として得た（１７０ｇ）。粗生成物のＮＭＲ（３１Ｐ及び１Ｈ）を測定した。３１Ｐ−ＮＭＲでは、全リン酸同化の約１％は３’異性体５の存在によるものであることが示された。
【０２０３】
粗生成物に無水ピリジン（１７００ｍＬ）を加えた。粗混合物の含水量を同時蒸発で減らすため、溶媒は減圧下そしてさらに高真空下で蒸発させた。得られた油状物は、無水ピリジン（５００ｍＬ）に再度溶解し、過剰量のｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（９．０ｇ、６０ｍＭ）を加えた。反応物を雰囲気温度で撹拌した。反応の進行は、ＵＰＬＣ／ＭＳで観察した。３時間後、３’不純物５は検出されなくなり、メタノール（５０ｍＬ）を加えて反応を停止した。
【０２０４】
反応物を減圧下で油状物まで蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１．５Ｌ）に溶かし、１ＮのＨＣｌ（２Ｘ５００ｍＬ）、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２Ｘ５００ｍＬ）で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥させ、濾過し、そして減圧下で蒸発させ、粗生成物を淡黄色油状物として得た。
【０２０５】
粗油状物は、同体積のジクロロメタンで希釈し、空気圧１００ｐｓｉで遠心圧縮モジュールの２．５Ｋｇシリカゲルカートリッジに充填した。６０ｐｓｉ、流速４００ｍＬ／ｍｉｎでグラジエントポンプを用い、カートリッジを塩化メチレン（４Ｌ）で洗い、続いて、濃度勾配１〜４％のメタノール・塩化メチレン溶液（４８Ｌ）で洗った。主要な不純物（ジ−（イソプロピルアラニル）フェニルホスフェート，３’，５’−ビスホスホルアミダート（６）、３’−ホスホルアミダート−５’−ＴＢＤＭＳ付加物（７））のほとんどは、〜３％の濃度勾配で溶出した。所望の生成物は、３〜４％のメタノールで溶出した。生成物を含む画分は２つのロットに分別した。第１は少量の上流不純物を含み、第２は純粋な生成物である。第１群の画分は、３’，５’−ビスホスホルアミダートやジ−アラニルフェニルホスフェートなどのより極性の低い不純物（上流不純物）、及び多くの場合Ｒｐジアステレオマーを少量含み、さらにカラム精製を行う必要がある。（相対的な語句である上流と下流は、順相シリカゲルクロマトグラフィーでの溶出を意味し、「上流異性体」とは最初に溶出される異性体を意味する。）第２群の画分は、有意な量の不純物を含んでおらず、わずかな残りのＲＰおよび大部分はＳＰジアステレオマーである。第２群は、その後、カラム精製を２度行った画分と合わせた。溶媒を減圧下で留去し、生成した白色の泡状物をさらに１時間乾燥させ（０．２０ｍｍＨｇ）、４２ｇの非純粋ロット（３１Ｐ−ＮＭＲで、上流異性体対下流異性体＝４：１）と３８ｇの純粋ロット（上流異性体対下流異性体＝１：３）を得た。非純粋ロットは同様の方法で再度カラム精製し、３．８ｇの９７％純粋な上流異性体（取り除く画分）と、３６ｇの純粋生成物を４：１の割合で得た。２つのメインロットはＤＣＭに溶解し、１つにまとめ、減圧下で蒸発させて乾燥し（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４ｈ）、７４ｇ（４５．７％）の純粋生成物４（ジアステレオマー比４８：５１）を白色の泡状物（融点約７５〜８５℃）として得た。
【０２０６】
ジアステレオマー混合物の非結晶固体を作製するため、白色の泡状物７４ｇをｔ−ブチルメチルエーテル（７５０ｍＬ）中で撹拌し、部分溶液と粘質固体残留物を得た。撹拌しながら、ヘプタン（７５０ｍＬ）をゆっくりと加え、粘質物のほとんどが白色固体になるまで、懸濁液をメカニカルスターラーで１時間撹拌した。固体をへらでこすりとり、懸濁したスラリーを濾過した。固体をヘプタン（４Ｘ５０ｍＬ）で洗い、真空下で乾燥させ（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４ｈ）、約７０〜８０℃の広融点範囲を持つ白色の非結晶粉末（６４ｇ）を得た。１Ｈ及び３１Ｐ  ＮＭＲは構造と一致し、ＨＰＬＣで純度９９．８％、ジアステレオマー比４６：５４であることが示された（３１Ｐ  ＮＭＲでも確認された）。
【０２０７】
４の固体混合物を作製する別の方法。クロマトグラフィーの後、残渣を２回、ジクロロメタンで同時蒸発させ（５ｍＬ／ｇ）、３５〜４０℃、３５〜４５ｍＴｏｒｒで２４時間乾燥させた。泡状の残渣を２５０ミクロンのふるいにかけ、残留ジクロロメタンがヘッドスペースＧＣで４００ｐｐｍを下回るまで、同様の条件でさらに乾燥させた。得られたオフホワイト〜白色の非結晶微粉末は、ガラス転移温度の範囲が５３．７〜６３．５℃であった。
【０２０８】
異性体（４）混合物の特性評価：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１０．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ，ＳＰ）、１０．００（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ，ＲＰ）、７．４９（ｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ，ＳＰ）、７．３６（ｍ，５Ｈ，Ｃ６−Ｈ，ＲＰ，芳香族）、７．２３−７．１４（ｍ，６Ｈ，ＲＰ／ＳＰ，芳香族）、６．１８（ｂｒ  ｄ，２Ｈ，Ｃｌ’−Ｈ，ＲＰ／ＳＰ）、５．６３（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ，ＳＰ）、５．５８（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ，ＲＰ）、５．０１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ３）２，ＲＰ／ＳＰ）、４．４６−４．３３（ｍ，８Ｈ，Ｃ−５’−Ｈ２，ａｌａ−ＮＨ，Ｃ３’−ＯＨ，ＲＰ／ＳＰ）、４．１２（ｍ，２Ｈ，ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３，ＲＰ／ＳＰ）、４．０１−３．８５（ｍ，４Ｈ，Ｃ３’−Ｈ，Ｃ４’−Ｈ，ＲＰ／ＳＰ）、１．３９−１．２２（ｍ，１２Ｈ，ａｌｌ  ＣＨ３，ＲＰ／ＳＰ）。
【０２０９】
３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ３．６０（ＲＰ）、３．２０Ｓｐ（トリフェニルホスフェートでは１７．８０ｐｐｍ）。ＥＳ−ＭＳ  Ｍ＋ｌ  ５３０．２。元素分析：計算値％（カールフィッシャー法により測定した０．２９％の水分を含む）Ｃ，４９．７５；Ｈ，５．５４；Ｎ，７．９０；Ｆ，３．５８；Ｐ，５．８４。実測値％：Ｃ，４９．５０；Ｈ，５．４４；Ｎ，７．８５；Ｆ，３．６２；Ｐ，６．０５。
【０２１０】
異性体の分離に関する検討
化合物４は、リンにおけるキラリティーのため、２つのジアステレオマーからなり、それらはＳＰ−４及びＲＰ−４と呼ばれる。立体化学的分析は、ＳＰ−４の単結晶Ｘ線分析に基づいて行った。ＲＰ−４及びＳＰ−４はともに結晶性生成物を生成した。
【０２１１】
結晶化の方法の概略を以下に示す。
【化２４】
2013523767.tif 000026
【０２１２】
実施例３．ＲＰ−４異性体の結晶化
最初に溶出した極性の低いＲＰ−４異性体（３．８ｇ、純度９７％）を含むクロマトグラフィーの画分を、イソプロパノール（３６ｇ）に溶解し、濁りが生じるまでヘプタンで希釈した（７２ｇ）。溶液にシードを入れ、雰囲気温度で５時間撹拌した。生成した固体を減圧濾過で回収し、ヘプタンで洗い（２Ｘ２０ｍＬ）、乾燥させ（５０℃、０．２ｍｍ、２４ｈ）、２．３ｇの微小な白色の針状結晶体（融点１３６．２〜１３７．８℃）を得た。ＨＰＬＣによる生成物質の純度は、９９．０２％であった。
【０２１３】
ＲＰ−４：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．３６（ｍ，２Ｈ，ｏ−芳香族）、７．２６−７．１６（ｍ，４Ｈ，Ｃ６−Ｈ，ｍ，ｐ−芳香族）、６．１６（ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｃｌ’−Ｈ）、５．５８（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ）、５．０１（ｓｅｐｔ，１Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ３）２）、４．５２−４．４７（ｍ，２Ｈ，Ｃ−５’−Ｈ２）、４．１０（ｄ，１Ｈ，Ｃ３’−Ｈ）、４．０２−３．７６（ｍ，４Ｈ，ａｌａ−ＮＨ，Ｃ３’−ＯＨ，Ｃ４’−Ｈ，ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３）、１．３７−１．２０（ｍ，１２Ｈ，ａｌｌ  ＣＨ３）。
【０２１４】
実施例４．ＳＰ−４の調製と結晶化
方法１：粗生成の４からの直接沈殿：撹拌したＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（１０．５ｇ、６１．５ｍｍｏｌ、トルエン５０ｍＬと共沸による乾燥を２回行った）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、ジクロロリン酸フェニル（７．５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を−１０℃まで冷却し、その後、ＮＭＩ（３０．５ｍＬ、３８４．３ｍｍｏｌ）の３０ｍＬジクロロメタン溶液を３０分かけて添加した。添加終了後、混合物を−１０〜−１５℃で１時間撹拌した。上記混合物に、２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（３）（１０ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）を一度に加え、混合物を−１０℃以下で３時間撹拌し、その後、２０℃までゆっくりと昇温させた（６時間）。混合物を同温度で一晩撹拌し（１５時間）、その後、メタノール１０ｍＬで反応を停止した。溶媒を留去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に再度溶解した。ＥｔＯＡｃ層を、水（１００ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（３ｘ７５ｍＬ）、２％ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、及び食塩水（５０ｍＬ）で洗った。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を高真空下で２時間乾燥させ、白色の泡状物（２２ｇ）を得た。
【０２１５】
上記の泡状物を３３ｍＬのＤＣＭに溶解し、次に６５ｍＬのＩＰＥ（イソプロピルエーテル）を加え、飽和溶液とした。溶液を小型のセライトパッドで濾過し、濾液をＳＰ−４シードとともに７２時間、雰囲気温度で撹拌した（約２２℃：懸濁液を０℃に冷却すると粗生成物がオイルアウトしたため、注意が必要である）。白色の固体を濾過し、ＩＰＥ（２０ｍＬ）で洗い、乾燥して、４．５８ｇの白色粉末を得た（３１Ｐ  ＮＭＲの測定で、ＳＰ−４：ＲＰ−４＝〜８５：１５の混合物）。上記固体を２３ｍＬのＤＣＭに懸濁し、３時間還流した。混合物を室温まで冷却し、１５時間撹拌した。白色固体を濾過し、４．５ｍＬの低温のＤＣＭで洗い、高真空下４５℃で乾燥させ、純粋なＳＰ−４（融点９３．９〜１０４．７℃、ＨＰＬＣ純度９９．７４％）を得た（３．１１ｇ、ウリジンヌクレオシドから１５．２％）。
【０２１６】
ＳＰ−４：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｃ６−Ｈ）、７．３０（ｍ，２Ｈ，ｏ−芳香族）、７．２６−７．１８（ｍ，３Ｈ，ｍ，ｐ−芳香族）、６．１８（ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｃｌ’−Ｈ）、５．７０（ｄ，１Ｈ，Ｃ５−Ｈ）、５．０２（ｓｅｐｔ，ＣＨ−（ＣＨ３）２）、４．５３（ｍ，２Ｈ，Ｃ−５’−Ｈ２）、４．１１（ｄ，１Ｈ，Ｃ３’−Ｈ）、３．９７（ｍ，３Ｈ，Ｃ３’−ＯＨ，Ｃ４’−Ｈ，ａｌａ−ＣＨ−ＣＨ３）、３．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ａｌａ−ＮＨ）、１．３９（ｄ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ３）、１．３７（ｄ，３Ｈ，ａｌａ−ＣＨ３）、１．２４（ｄ，６Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ３）２）。
【０２１７】
方法２：粗生成の４からのオイルアウト：撹拌したＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（２０．６ｇ、１２３ｍｍｏｌ、トルエン７５ｍＬと共沸による乾燥を２回行った）のジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液に、ジクロロリン酸フェニル（１４．９ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を−１０℃まで冷却し、その後、ＮＭＩ（６１．３ｍＬ、７６９ｍｍｏｌ）の６０ｍＬジクロロメタン溶液を３０分かけて添加した。添加終了後、混合物を−１０℃〜−１５℃で１時間撹拌した。上記混合物に、２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（３）（２０ｇ、７６．９ｍｍｏｌ）を一度に加え、混合物を−１０℃以下で３時間撹拌し、その後、２０℃までゆっくりと昇温させた（６時間）。混合物を同温度で一晩撹拌し（１５時間）、その後、メタノール１０ｍＬで反応を停止した。溶媒を留去し、残渣をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）に再度溶解した。ＥｔＯＡｃ層を、水（２００ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（３ｘ１００ｍＬ）、２％ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）、及び食塩水（５０ｍＬ）で洗った。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を高真空下で２時間乾燥させ、白色の泡状物（４３ｇ）を得た。上記の泡状物を、メカニカルスターラーを備えた二口丸底フラスコ中で、８６ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解した。撹拌しながら、１００ｍＬのヘプタンをゆっくりと加え、懸濁液を１時間撹拌した。最上層をデカントし、残渣をさらにＥｔＯＡｃ／ヘプタン＝２：３の溶液５０ｍＬとともに１０分間撹拌し、その後デカントした。残渣を高真空下で乾燥させ、白色泡状物（３１ｇ）を得た。
【０２１８】
上記の泡状物を４６ｍＬのＤＣＭに溶解し、次に９５ｍＬのＩＰＥを加え、飽和溶液とした。溶液を小型のセライトパッドで濾過し、濾液をＳＰ−４シードとともに７２時間、雰囲気温度で撹拌した。白色の固体を濾過し、ＩＰＥ（３０ｍＬ）で洗い、乾燥して、７．３３ｇの白色粉末を得た（３１Ｐ  ＮＭＲの測定で、ＳＰ−４：ＲＰ−４＝〜８５：１５の混合物）。上記固体を３６ｍＬのＤＣＭに懸濁し、３時間還流した。混合物を室温まで冷却し、１５時間撹拌した。白色固体を濾過し、７．５ｍＬの低温のＤＣＭで洗い、高真空下４５℃で乾燥させ、＞９９％の純粋なＳＰ−４を得た（４．７８ｇ、ウリジンヌクレオシドから１１．６％）。
【０２１９】
方法３：４粗生成物のシリカゲルへの充填：ジアステレオマー混合物と同様の方法で、約２．５ｇの２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（３）から開始して、カラムクロマトグラフィーの工程の直前まで行い、５．０ｇの４粗生成物を生成した。粗生成物を１０ｍＬのＤＣＭに溶解し、１０ｇのシリカゲルを溶液に加えた。溶媒を留去し、ドライスラリーを得た。スラリーを４０ｍＬの５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンとともに１５分間撹拌し、濾過した。シリカゲルをさらに１０ｍＬの５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗った。次に、シリカゲルを１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗い、別に回収した。溶媒を留去し、高真空下で乾燥させ、４．０ｇの残渣（泡状物）を得た。残渣をＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解し、次に、〜９ｍＬのＩＰＥを加えて飽和溶液とした。その後、混合物を、ＳＰ−４シードとともに、雰囲気温度で緩やかに一晩撹拌した。白色固体を濾過し、ＩＰＥ（５ｍＬ）で洗い、１．２８ｇの生成物を得た。３１Ｐ  ＮＭＲでは、上記生成物は、ＳＰ−４：ＲＰ−４を７７：２３で含むことが示された。これを２０ｍＬのＤＣＭから再結晶化し、＞９９％の純粋なＳＰ−４を０．７５ｇ得た（ウリジンヌクレオシドから約１２％）。このＳＰ−４の調製方法では、混合物で行ったシリル化の工程は不要で、全反応手順が上記に示されている。ＳＰ−４の単結晶及び多形型の特徴は、以下に記載する。
【０２２０】
方法４：４０．０ｇの１：１混合物の４を、９０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。ジイソプロピルエーテル（７０ｍＬ）を上記溶液に加え、飽和溶液とした。（ジイソプロピルエーテルの量は、生成物の純度により異なる場合がある。）溶液に純粋なＳＰ−４（＞９９％）のシードを加え、混合物を室温で２０時間、撹拌子を用いて緩やかに撹拌した（固体の形成は２時間後に観察された）。固体を濾過し、４０ｍＬのジイソプロピルエーテル／ジクロロメタン（１：１）混合液で洗い、乾燥して、白色固体を得た（１６．６ｇ、ＮＭＲ測定純度８９．３５％のＳＰ−４）。この固体を８３ｍＬのジクロロメタンに懸濁し、３時間還流した。懸濁液を室温に冷却し、一晩撹拌した。固体を濾過し、１０ｍＬの低温のＤＣＭで洗った。固体を真空下で乾燥させ、ＳＰ−４（１３．１ｇ、ＨＰＬＣ測定純度９９．４８％）を得た。この固体１１ｇを３３０ｍＬのＤＣＭに高温条件で再度溶解した。溶液を室温まで冷却し、同温度で一晩置いた。結晶生成物を濾過して乾燥させ、１０．５ｇのＳＰ−４（ＨＰＬＣ測定純度９９．７４％）を得た。
【０２２１】
ＳＰ−４及びＲＰ−４化合物は、第９又は第１０番目の実施形態に従って、ヌクレオシド（保護又は無保護）３をイソプロピル−アラニル−ホスホルアミダート（ＣとＣ’の混合物、Ｃ、又はＣ’）と反応させることで、下記式に示すように選択的に調製することができる。
【化２５】
2013523767.tif 000027
または
【０２２２】
P.D. Howes et al. Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids2003, Vol. 22, Nos. 5-8, pp. 687-689（以下「Ｈｏｗｅｓ」）では、ｔ−ブチルマグネシウムクロリドとの反応で２’−及び５’−ホスホルアミダートが得られることが示されている。それによると、３’−デオキシ−シチジンヌクレオシドを、（Ｓ）−２−［クロロ−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸メチルエステルと、１．２当量のｔ−ブチルマグネシウムクロリドの存在下で反応させた場合、２’位の選択的なリン酸化が起きるが、さらに当量のｔ−ブチルマグネシウムクロリドを加えると、５’位の選択的なリン酸化が起きることが示されている。これは、ＨｏｗｅｓのＳｃｈｅｍｅ  １に示される内容と対比する必要がある。
【０２２３】
実施例５−１．（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの調製
【化２６】
2013523767.tif 000028
撹拌した４−ニトロフェニルホスホロジクロリデート（１２．８ｇ、５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、フェノール及びトリエチルアミン（７．７ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液を、−７８℃で２０分かけて加えた。混合物を同温度で３０分撹拌し、その後、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（８．３８ｇ、５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液を入れた別の丸底フラスコに０℃で移した。混合物にさらにトリエチルアミン（１４．６ｍＬ、１０５ｍｍｏｌ）を１５分かけて加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル（１５０ｍＬ）でトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、０〜２０％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約１：１の混合物である生成物を得た（１７ｇ、収率８３％）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−０．３１、−０．４７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．３１−８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．５１−７．３７（ｍ，４Ｈ）、７．２７−７．１９（ｍ，３Ｈ）、６．７０−６．６３（ｍ，１Ｈ）、４．８５−４．７８（ｍ，１Ｈ）、３．９７−３．８６（ｍ，１Ｈ）、１．２１−１．１９（ｍ，３Ｈ）、１．１１−１．０９（ｍ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４０７（Ｍ−１）＋。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−２．０５、−２．１０；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．２２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１−７．３３（ｍ，４Ｈ）、７．２６−７．１８（ｍ，３Ｈ）、５．０５−４．９６（ｍ，１Ｈ）、４．１４−４．０５（ｍ，１Ｈ）、３．９３−３．８８（ｍ，１Ｈ）、１．３８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｄｄ，Ｊ＝６．２＆３．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４０７（Ｍ−１）＋。
【０２２４】
実施例５−２．ＳＰ−４／ＲＰ−４の調製
【化２７】
2013523767.tif 000029
撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１３０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液に、１．０Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリド（１．０５ｍＬ、１．０５ｍｍｏｌ、２．１当量）溶液を、室温で５分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（異性体の１：１混合物、４０８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液を、５分間かけて滴加した。混合物を室温で４８時間撹拌し、その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）で反応を停止した。混合物を、酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）の間で分割した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色の残渣が得られた。残渣を、０〜２％ＭｅＯＨ／ジクロロメタンの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、白色の泡沫状固体を得た（１２５ｍｇ、収率４７％、ＳＰ−４／ＲＰ−４の混合比率約３．０５：１．０）。
【０２２５】
実施例６．（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの調製及びクロマトグラフィー以外による分離
【化２８】
2013523767.tif 000030
Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（３３０ｇ、１．９７ｍｏｌ）を、トルエン（２ｘ４００ｍＬ）と減圧下で同時蒸発して予備乾燥し、真空オーブンで乾燥させた（５０°Ｃ、０．２ｍｍＨｇ、１７ｈ）。撹拌した４−ニトロフェニルホスホロジクロリデート（５００．０ｇ、１．９５３ｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（３．０Ｌ）溶液に、フェノール（１８３．８ｇ、１．９５３ｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３００ｍＬ、２．１５ｍｏｌ）のジクロロメタン（９００ｍＬ）溶液を、内部温度−６０℃で３時間かけて加えた。混合物を同温度でさらに３０分撹拌し、その後、２．５時間で−５℃まで昇温させた。予備乾燥したアミノ酸エステルを、窒素雰囲気下、−５〜０℃で１０分間かけて加えた。フラスコ内に残ったアミノエステル塩の残渣は、ジクロロメタン（２ｘ１００ｍＬ）ですすいで、反応混合物に移した。混合物を０℃で４０分撹拌し、さらにトリエチルアミン（５７１ｍＬ、４．１０ｍｏｌ）を０℃で４０分間かけて加えた。混合物を０〜１０℃で３時間撹拌し、続いて白色固体（トリエチルアミン塩酸塩）を濾過して取り除き、ジクロロメタン（３ｘ３００ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、４Ｌ）でトリチュレートした。これにより形成された付加的な固体の塩は、濾過して取り除き、ＭＴＢＥ（３ｘ１５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、透明な淡褐色の油状物を得た。残渣をヘキサン（２ｘ１４０ｍＬ）で同時蒸発してＭＴＢＥの残留分をすべて取り除き、さらに真空下４０℃で２時間乾燥させた。乾燥した残渣をジイソプロピルエーテル（ＩＰＥ、１．１Ｌ）と混合し、氷水浴中５℃で撹拌した。生成物の所望のＳＰ異性体の種結晶を溶液に少量加え、５℃で２２時間以上撹拌し、中粘度のスラリーを形成した。これをフリーザー（−１０℃）中に４４時間放置した。沈殿した生成物を濾過で回収し、あらかじめ冷却したＩＰＥとヘキサンの混合溶媒（１：１、３ｘ１９０ｍＬ）ですすいだ。固体を真空下（０．５ｍｍＨｇ）、雰囲気温度で恒量になるまで乾燥し、２２７．２３ｇ（収率：２８．５％）の白色粉末固体を得た。２つのジアステレオマーの比率は、３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、δ−０．３１（ＳＰ）、−０．４７）で測定したところ、ＳＰ：ＲＰが９．６５／１であった。生成物は、ＩＰＥ（８４０ｍＬ）に６０℃の浴槽で加熱しながら溶解させて再結晶化させた。上記溶液を室温で１時間撹拌し、その後、Ｓｐ異性体の種結晶を少量加えた。２時間以内に白色粉末固体の形成が見られ、フラスコをフリーザー（−１０℃）中に１６時間置いた。得られた白色の微細な結晶性固体を濾過し、あらかじめ冷却したＩＰＥ（３ｘ５０ｍＬ）で洗い、真空下（雰囲気温度、０．５ｍｍＨｇ）で恒量になるまで乾燥させ、白色で毛羽状の固体が得られた（１７７．７ｇ、全体収率２２％又はＳＰ異性体の理論収率に基づく全体収率４４％）。Ｐ−ＮＭＲによるジアステレオマー比は４８／１で、融点は６２〜６６℃。
【０２２６】
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−０．３１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．３０−８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．２３−７．１９（ｍ，３Ｈ）、６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６−４．７８（ｍ，１Ｈ）、３．９７−３．８６（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．１０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）；
【０２２７】
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−２．０５；（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−０．３１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．２２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１−７．３３（ｍ，４Ｈ）、７．２６−７．１８（ｍ，３Ｈ）、５．０５−４．９６（ｍ，１Ｈ）、４．１４−４．０５（ｍ，１Ｈ）、３．９３−３．８８（ｍ，１Ｈ）、１．３８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｄｄ，Ｊ＝６．２＆３．０Ｈｚ，６Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．３０−８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ）、７．２３−７．１９（ｍ，３Ｈ）、６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６−４．７８（ｍ，１Ｈ）、３．９７−３．８６（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．１０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４０７（Ｍ−１）＋。
【０２２８】
８（ＳＰ−異性体）の立体構造は、単結晶Ｘ線結晶構造解析により確認されている。詳細は下記を参照。
【０２２９】
実施例７．ジアステレオマー混合物（Ｓ）−２−［（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルのＳＦＣによる分離
ＲＰ−異性体を多く含むジアステレオマー混合物の試料（４．８ｇ）を、ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（２ｘ１５ｃｍ）カラムを用いたＳＦＣに供し、二酸化炭素中３５％イソプロパノールを用いて１００ｂａｒで溶出した。４ｍＬのインジェクション量に対して、試料の濃度を１７ｍｇ／ｍＬのメタノール溶液とした。ＲＰ−異性体［（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が先に溶出した。複数回操作して適切な画分を１つにまとめ、減圧下で濃縮し、２．９ｇのＲＰ−異性体［（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が淡黄色の粘性の油状物として得られ、１．９ｇのＳＰ−異性体［（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル］が白色固体として得られた。ＲＰ−異性体の解析データは、上記の結晶化方法により分離した生成物と同様である。
【０２３０】
（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＲＰ−異性体）の解析データ：３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−０．４７；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．３０−８．２７（ｍ，２Ｈ）、７．４６−７．３８（ｍ，４Ｈ）、７．２７−７．２０（ｍ，３Ｈ）、６．６８（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，１０．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６−４．７７（ｍ，１Ｈ）、３．９７−３．８６（ｍ，１Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．１０（ｄｄ，Ｊ＝６．２，２．２Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ４０７（Ｍ−１）＋。
【０２３１】
実施例８−１．２−［（４−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）ラセミ体の調製：
【化２９】
2013523767.tif 000031
撹拌した４−クロロ−フェニルホスホロジクロリデート（２．４５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、フェノール（０．９４ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．５６ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を、−７８℃で２０分間かけて加えた。混合物を同温度で３０分撹拌し、その後、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（１．６７ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液を入れた別の丸底フラスコに０℃で移した。混合物に、さらにトリエチルアミン（２．９２ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）でトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、１０〜２０％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約１：１の混合物である生成物を得た（２．０ｇ、収率５０％）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−１．５８，−１．６２；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．０６−７．５１（ｍ，８Ｈ）、７．１５−７．２８（ｍ，２Ｈ）、７．２９−７．４７（ｍ，２Ｈ）、４．０−４．１０（ｍ，１Ｈ）、３．８２−３．８８（ｍ，３Ｈ）、１．３５−１．３６（ｄｄ，６Ｈ）；１．１９−１．２２（ｍ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ３９８（Ｍ−１）＋。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。
【０２３２】
実施例８−２．（Ｓ）−イソプロピル２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエート（４）の調製
撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）溶液を、室温で１５分間かけて加えた。３０分後、（２−［（４−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルのラセミ体（４．０８ｇ、ｌ０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を、１０分間かけて滴加した。混合物を室温で７２時間撹拌した。ＴＬＣで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ５％の所望の生成物が形成されたことが示された。
【０２３３】
実施例９−１．２−［（２−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）ラセミ体の調製
【化３０】
2013523767.tif 000032
撹拌した２−クロロ−フェニルホスホロジクロリデート（９．８ｇ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）溶液に、フェノール（３．７６ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６．１６ｍＬ、４４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）溶液を、−７８℃で２０分間かけて加えた。混合物を同温度で３０分撹拌し、その後、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（６．７ｇ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）溶液を入れた別の丸底フラスコに０℃で移した。混合物に、さらにトリエチルアミン（１１．６ｍＬ、８４ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）でトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、１０〜２０％酢酸エチル／ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約１：１の混合物である生成物を得た（１１．３ｇ、収率７２％）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−１．５８，−１．６１；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＤＣｌ３）：δ７．０６−７．５１（ｍ，８Ｈ）、５．０２−５．９４（ｍ，１Ｈ）、４．１０−４．１６（ｍ，１Ｈ）、３．３１−３．９４（ｍ，１Ｈ）、１．１８−１．３５（ｍ，３Ｈ）、１．３８−１．４０（ｄｄ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ  ３９８（Ｍ−１）＋。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。
【０２３４】
実施例９−２．（Ｓ）−イソプロピル２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエートの調製
撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）溶液を、室温で１５分間かけて加えた。３０分後、（２−［（２−クロロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（ラセミ体４．０８ｇ、ｌ０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を、１０分間かけて滴加した。混合物を室温で７２時間撹拌した。ＴＬＣで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ５〜１０％の所望の生成物が形成されたことが示された。
【０２３５】
実施例１０−１．２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（±）ラセミ体の調製
【化３１】
2013523767.tif 000033
撹拌したペンタフルオロフェニルホスホロジクロリデート（６．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液に、フェノール及びトリエチルアミン（３．０８ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液を、−７８℃で２０分間かけて加えた。混合物を同温度で３０分撹拌し、その後、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（３．３５ｇ、２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液を入れた別の丸底フラスコに０℃で移した。混合物に、さらにトリエチルアミン（５．８４ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル（６０ｍＬ）でトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、ジアステレオマー比が約１：１の混合物である淡黄色の油状物を得た。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−０．４９，−０．５８。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。
【０２３６】
実施例１０−２．（Ｓ）−２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルのジアステレオマー混合物の調製と、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル単一ジアステレオマーの結晶化誘導動的分解による複数の産物を伴う単離
【化３２】
2013523767.tif 000034
【０２３７】
メカニカルスターラーと低温温度計を備えた２Ｌの三口丸底フラスコに、６０ｇ（２８４ｍｍｏｌ）のジクロロリン酸フェニルと３００ｍＬの無水ジクロロメタンを加えた。溶液を窒素雰囲気下で０℃に冷却し、イソプロピルアラネート塩酸塩（減圧絶乾したもの、４７．７ｇ、２８４ｍｍｏｌ）を固体の状態で素早く加えた。混合物をドライアイス−アセトン浴で撹拌し、−５５℃に冷却した。トリエチルアミン６０．３２ｇ（５９６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン３００ｍＬ溶液を、添加用漏斗を用いて７０分間かけて加えた。白濁した混合物を−５５℃で３０分撹拌し、その後、１．５時間で−５℃までゆっくりと昇温させた。あらかじめ冷却（室温）した、ペンタフルオロフェノール（５２．４２ｇ、２８４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３２．１１ｇ、３１７ｍｍｏｌ）を１８０ｍＬのジクロロメタン中に混合したものを、添加用漏斗を用いて１時間かけて０℃で混合物に加え、得られた混合物を０℃で４時間撹拌した。白色の沈殿物（ＴＥＡ・ＨＣｌ）を濾過して取り除き、ジクロロメタン（３ｘ５０ｍＬ）ですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、白色の固体残渣を８８０ｍＬのｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）中で１時間、室温でトリチュレートした。白色の懸濁液を濾過し、固体をＴＢＭＥ（３ｘ１５０ｍＬ）ですすいだ。固体を酢酸エチル（６００ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）の混合物中に溶解させた。有機層を分離し、水（３ｘ１００ｍＬ）で洗った。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、２９．９２ｇ（６６ｍｍｏｌ）の生成物（Ｘ線結晶構造解析によりＳＰ−異性体と確認された；下記参照）が白色の羽状固体として得られた。
【０２３８】
上記ＴＢＭＥのトリチュレーションの濾液を減圧下で濃縮して白色の固体残渣とし、この固体を４５０ｍｌの酢酸エチル・ヘキサン混合物（２０：８０、ｖ／ｖ）中で７５分間、室温でトリチュレートした。固体（固体１）を濾過して回収し、２０％酢酸エチルのヘキサン溶液（７５ｍＬ、２ｘ３０ｍＬ）ですすいだ。母液を濃縮してオフホワイトの固体を得て、これを２０％酢酸エチルのヘキサン溶液（１８５ｍＬ）中で１７時間、室温でトリチュレートした。白色固体（固体２）を濾過して回収し、２０％酢酸エチルのヘキサン溶液（２ｘ１０ｍＬ）ですすいだ。固体１と固体２を１つにまとめ、１．２Ｌの酢酸エチルに溶解した。溶液を水（３ｘ１５０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、７２．８ｇ（１６１ｍｍｏｌ）の純粋な生成物を得た。生成物の合計は１０２．７２ｇ（２２６ｍｍｏｌ、８０％）となった。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：．７．３８−７．３３（ｍ，２Ｈ）、７．２７−７．２４（ｍ，２Ｈ）、７．２３−７．１９（ｍ，１Ｈ）、５．０４（ｈｅｐｔ，１Ｈ）、４．１８−４．０９（ｍ，１Ｈ）、４．０１−３．９６（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｄ，３Ｈ）、１．２５（ｄｄ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１６２ＭＨｚ）δ；−０．５０。
【０２３９】
実施例１０−３．（Ｓ）−２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルのジアステレオマー混合物の調製と、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル単一ジアステレオマーの結晶化誘導動的分解による単一の産物での単離
低温温度計とメカニカルスターラーを備えた１Ｌの乾燥した三口フラスコに、フェニルホスホロジクロリデート（２５ｇ、１１８．５ｍｍｏｌ）を入れた。無水ジクロロメタン（１２５ｍＬ）を加え、溶液を０℃に冷却した。アラニンエステル塩（絶乾したもの）（１９．８６ｇ、１当量）を窒素雰囲気下で撹拌しながら素早く加えた。溶液を約−５０℃（内部温度）まで冷却した（アセトン−ドライアイス浴、窒素雰囲気中）。トリエチルアミン（２５．２ｇ、２．１当量）のＤＣＭ（１２５ｍＬ）溶液を、添加用漏斗を用いて０．５時間かけて−５０℃で滴加し、得られた白色スラリーを約−５０℃で０．５時間撹拌した。混合物を１．５時間で０℃まで昇温させ、あらかじめ混合して冷却したペンタフルオロフェノール（２１．８２ｇ、１当量）及びＴＥＡ（１３．２ｇ、１．１当量）のＤＣＭ７５ｍＬ溶液を、添加用漏斗を用いて０．５時間かけて０℃で加えた。混合物を０℃でさらに４時間撹拌した。
【０２４０】
混合物をブフナー漏斗で濾過し、回収した固体のトリエチルアミン塩酸塩をＤＣＭ（３ｘ４０ｍＬ）ですすいだ。濾液を３１Ｐ  ＮＭＲで測定し（比率は約１．１４：１でＳＰ−ジアステレオマーが多い−低磁場ピーク）、等重量で２つに分けた。そのうちの一つを減圧下で濃縮した。白色の固体残渣（３１ｇ）を、ＥｔＯＡｃとヘキサンの混合物（１５０ｍＬ、２０：８０、ｖ／ｖ）中、室温で１７時間トリチュレートし、溶解性の低いＳＰ異性体の動的分解の時間をおいた。白色スラリーを濾過し、固体を２０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液（２ｘ２５ｍＬ）ですすいだ。固体（２２．５８ｇ）を１Ｈ−ＮＭＲ及び３１Ｐ−ＮＭＲで測定し、トリエチルアミン塩酸塩が混入した単一異性体としての生成物を含むことが示された。固体を３１０ｍＬのＥｔＯＡｃと１００ｍＬの水に溶解して分離した。有機層を分離した後、水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で逆抽出した。有機層を合わせて、水（３ｘ８０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、その後、高真空下、室温で恒量になるまで乾燥させ、白色固体として１７．３６ｇの生成物を反応物の半分から得た。収率は６４％となった。上記からの母液を濃縮し、３１Ｐ−ＮＭＲの結果、試薬を１：１．２の比率（所望のもの／不要のもの）で含む粘質の残渣（７．８９ｇ）が得られた。
【０２４１】
実施例１０−４．（Ｓ）−２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの調製
ＤＣＭ（１１．５Ｌ）を、洗浄された乾燥したガラス製反応器に入れた。ジクロロリン酸フェニル（２．３ｋｇ、１０．９ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で反応器に加えた。その後、溶液を０℃に冷却した。次に、Ｌ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（１．８３ｋｇ、１０．９ｍｏｌ）を一度に加え、３０分撹拌を続けた。ドライアイス／アセトン浴を用いて、反応物を内部温度−５０℃に冷却した。内部温度を−４０〜−５０℃に保ち、ＴＥＡ（２．１当量、３．１７Ｌ）のＤＣＭ（１１．５Ｌ）混合物を上記反応液に８時間かけてゆっくりと添加した。添加終了後、反応液を同温度範囲に約１時間置いた。混合物を約４時間で０℃まで昇温させた。
【０２４２】
その間に、別の反応器にＤＣＭ（６．９Ｌ）を入れ、次にペンタフルオロフェノール（２．０Ｋｇ、１０．９ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。溶液を０℃に冷却し、その後、ＴＥＡ（１．１当量、１．６５Ｌ）をペンタフルオロフェノール溶液（発熱性）に約２時間かけて加えた。次に、得られた溶液を、ジクロロリン酸フェニルとアミノ酸エステルを含む第１の溶液に、温度を０〜５℃に保ちながら約７時間かけてゆっくりと添加した。添加終了後、同温度範囲で約４時間撹拌を続けた。反応の進行はＨＰＬＣで観察した。残存するペンタフルオロフェノールが５％を下回った時点で反応を停止した。キラルＨＰＬＣでは、この時点での生成物がジアステレオマーの均等な混合物であることが示された。
【０２４３】
反応懸濁液をヌッチェフィルターで濾過し、懸濁したトリエチルアミン塩酸塩の大部分を除去した。芒硝を過剰量のＤＣＭ（９Ｌ）で洗い、洗浄液を主濾液に加えた。濾液を減圧下３５℃で濃縮し、固体残渣を得た。固体残渣をヘキサン（４Ｌ）と同時蒸発させ、残留ＤＣＭレベルをさらに低下させた。この固体残渣に２０％ＭＴＢＥ／ヘキサン６Ｌを加え、懸濁液を雰囲気温度で約１７時間撹拌し、ＨＰＬＣで観察した。溶液のｐＨは、残留ＴＥＡにより塩基性のままであった。この間に動的分解が起こり、沈殿した固体は所望のＳＰ−４異性体であり、上清はＳＰ−４とＲＰ−４の平衡状態で維持された。
【０２４４】
懸濁液をヌッチェフィルターで濾過し、まだＴＥＡ塩酸塩が混入している所望の生成物の固体を、５％ＭＴＢＥ／ヘキサン（１Ｌ）で洗った。固体を酢酸エチル（３５Ｌ）に溶解し、溶液を水（３ｘ３５Ｌ）及び食塩水（１０Ｌ）で洗い、その後、溶液を固体硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、反応器温度を４４℃未満に維持して減圧下で濃縮した。固体残渣をヘキサン（４Ｌ）と同時蒸発させた。反応器を雰囲気温度にし、５％ＭＴＢＥ／ヘキサン（５Ｌ）を加えた。濃い懸濁液を１５分撹拌し、その後、固体を濾過して回収した。回収した固体をヘキサン（２．５Ｌ）で洗い、高真空下、雰囲気温度で恒量になるまで乾燥させ、最終生成物（ＳＰ−４）を白色固体として２．６ｋｇ（５３％）得た；ＨＰＬＣ純度９９．５％、その他ＲＰ−４が０．４％。
【０２４５】
実施例１０−５．（Ｓ）−イソプロピル２−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエートの調製
撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３、２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリド溶液（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）を、室温で１５分間かけて加えた。３０分後、（２−［（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステルの粗生成ラセミ体（４．０８ｇ、ｌ０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を、１０分間かけて滴加した。混合物を室温で７２時間撹拌した。ＴＬＣで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ４０〜５０％の所望の生成物が形成されたことが示された。
【０２４６】
実施例１０−６．（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル及び結晶化のみによる精製を用いた（Ｓ）−イソプロピル２−（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエート（ＳＰ−４）の調製
【化３３】
2013523767.tif 000035
撹拌した３（１０ｇ、３８．４６ｍｍｏｌ、真空下５０℃で２０時間乾燥）の無水ＴＨＦ（１６５ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリドのＴＨＦ溶液（４７．５ｍＬ、８０．７７ｍｍｏｌ）を、フラスコを冷水浴（５℃）に入れたまま、窒素雰囲気下で２０分間かけて加えた。添加終了後、冷浴から取り出し、白色の懸濁液を室温（２０℃）で３０分撹拌した。その後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシ）−フェノキシホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（２０．９ｇ、４６．１１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１６５ｍＬ）溶液を反応混合物に３０分間かけて加えた。混合物を室温（２０℃）で３．５時間撹拌した。さらに撹拌を１．５時間続け、この段階では、＞９５％の変換、及び３’，５’−ビス−ホスホルアミダートの不純物強度に２時間の時点から顕著な変化がないことが、ＴＬＣによって示された。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で反応停止し、その後、溶媒を２５℃で留去した。残渣を酢酸エチル（４００ｍＬ）と飽和塩化アンモニウム（６０ｍＬ）／水（２０ｍＬ）とで分離した。有機層を分離し、飽和塩化アンモニウム（８０ｍＬ）と水（３ｘ６０ｍＬ）で洗った。この時点までの水層を別に取った。有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（３ｘ５０ｍＬ）及び水（２ｘ６０ｍＬ）で洗った。第１の水層をさらに酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出し、水（２ｘ２０ｍＬ）で洗い、その後、炭酸ナトリウム洗浄液から得た水層を同じ酢酸エチル抽出液で抽出した。有機層を水（２ｘ２０ｍＬ）で洗い、主ロットと合わせた。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮し、泡沫状の固体（１９．３２ｇ）を得た。残渣を６０ｍＬのジクロロメタンに溶解し（約５分で白色固体が析出し、固形物が形成された）、その後、２５ｍＬのＩＰＥを加えた。懸濁液を室温で２時間撹拌した。白色固体を濾過し、低温（０℃）のＩＰＥ／ジクロロメタンの１：１混合物（２０ｍＬ）で洗い、乾燥して、１１．７７ｇ（収率５８％）の生成物を非結晶白色固体として得た。上記固体をジクロロメタン（３５０ｍＬ）に再度溶解し、濾過し、大気圧（浴温４５℃）で〜１２０ｍＬまで蒸発させた。溶液を室温（２１℃）で２０時間放置した。白色結晶性固体（ジクロロメタン溶媒和物）を濾過して回収し、低温（０℃）のジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗い、高真空下、雰囲気温度で４時間乾燥させ、純粋な非溶媒和生成物（１０．６２ｇ、収率５２％）を白色の針状物として得た。ＨＰＬＣ純度は９９．８％となった。スペクトル特性は、本明細書に記載する値と一致した。
【０２４７】
実施例１０−７．（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル、異なる反応条件及び検査、並びに結晶化のみによる精製を用いた（Ｓ）−イソプロピル２−（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２イル）メトキシ）（フェノキシ）−ホスホリルアミノ）プロパノエート（ＳＰ−４）の調製
【化３４】
2013523767.tif 000036
撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（３、５．０ｇ、１９．１ｍｍｏｌ、真空下５０℃で２０時間乾燥）の無水ＴＨＦ（７５ｍＬ）懸濁液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ-ブチルマグネシウムクロリドのＴＨＦ溶液（２３．７ｍＬ、４０．３５ｍｍｏｌ）を、添加用漏斗を用いて、３０分間かけて−５℃で加えた。白色の懸濁液を同温度で３０分撹拌し、その後、雰囲気温度（２０℃）に昇温させ、同温度でさらに３０分撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、その後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノキシ）−フェノキシホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（１０．４５ｇ、２３．０６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を３０分間かけて加えた。混合物を５℃で１８時間撹拌し、−５℃に冷却し、その後、２Ｎ  ＨＣｌ（２５ｍＬ）で反応を停止した。トルエン（１００ｍＬ）を混合物に加え、室温に昇温させた。２０分後、層を分離した。有機層を１Ｎ  ＨＣｌ（２ｘ１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、５％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（４ｘ１０ｍＬ）、水（２ｘ１０ｍＬ）、及び食塩水（１０ｍＬ)で洗った。すべての水層をトルエン（２０ｍＬ）で再抽出し、５％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２ｘ５ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、及び食塩水（５ｍＬ)で洗った。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、約２０ｍＬまで蒸発させた。ジクロロメタン（２０ｍＬ）を溶液に加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。固体を濾過し、ＭＴＢＥ／ＤＣＭの１：１混合物（２ｘ１０ｍＬ）で洗い、高真空下で乾燥させ、白色固体（７．７ｇ）を得た。この時点での固体のＨＰＬＣは、ＳＰ−４が９８．２１％、未反応の３が０．１８％、３’，５’−ビス−ホスホルアミダート不純物が０．６７％であった。上記ＳＰ−４の固体をジクロロメタン（７７ｍＬ、圧力容器で５５℃に加熱）に再度溶解し、室温で２０時間放置した。結晶性固体を濾過し、低温のジクロロメタン（５ｍＬ、０℃）で洗い、高真空下で乾燥して、純生成物を白色固体として得た（６．９ｇ、収率６８％、ＨＰＬＣ純度９９．７９％）。
【０２４８】
Ｃ又はＣ’の調製及び精製により、以下の実施例に示すように、ＳＰ−４又はＲＰ−４を直接得ることができる。
【化３５】
2013523767.tif 000037
【０２４９】
実施例１１．ＳＰ−４の調製（３２ｍｇスケール）：撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン３（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１ｍＬ）溶液に、ｔ−ブチルマグネシウムクロリド（０．２６ｍＬ、０．２６ｍｍｏｌ、２．１当量）の１Ｍ溶液を室温で３分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）溶液を３分間かけて滴加した。混合物を室温で４２時間撹拌し、その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で反応を停止した。混合物を酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を、０〜４％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配でクロマトグラフィーに供し、ＳＰ−４を泡沫状の固体として得た（２９ｍｇ、収率４４．５％）。１Ｈ及び３１Ｐ  ＮＭＲは、本明細書に記載するものと一致した。
【０２５０】
実施例１２．ＳＰ−４の調製（２．６ｇスケール、クロマトグラフィーなし）：撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、ｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１２．４ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量）の１．７Ｍ溶液を室温で１５分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体、４．０８ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液を１０分間かけて滴加した。混合物を室温で６０時間撹拌し、その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）で反応を停止した。混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）、続いて１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３ｘ２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧化で濃縮し、淡黄色の残渣（３．８ｇ）を得た。残渣をジクロロメタン（７．６ｍＬ）に溶解させ、その後、室温で２０時間撹拌した。白色固体を濾過し、１：１のＩＰＥ／ジクロロメタン（５ｍＬ）で洗い、真空下で乾燥させ、純生成物を白色固体として得た（１．８５ｇ、収率３５％）。
【０２５１】
実施例１３．ＮａＨＭＤＳを用いたＳＰ−４の調製：撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（７１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２．０ｍＬ）溶液に、２．０Ｍのナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド（ＮａＨＭＤＳ）のＴＨＦ（２７０μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）溶液を−７８℃で２分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体、１１１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を混合物に加えた。反応混合物を同温度で２時間撹拌し、その後、−２０℃に昇温させ、同温度でさらに２０時間撹拌した。ＴＬＣでは、未反応のヌクレオシド出発物質が〜３０％であることが示された。そのため、さらに０．５当量の試薬（５５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）溶液を反応混合物に加え、さらに６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、淡褐色の残渣を得た。粗生成物を、０〜５％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配でカラムクロマトグラフィーに供し、ＳＰ−４（２２ｍｇ、収率１５％）、３’−ホスホルアミダート（５、ＳＰ−異性体、１１．５ｍｇ、収率１６％）、及びビスホスホルアミダート（６、ＳＰ、ＳＰ−異性体、１２．６ｍｇ）を得た。
【０２５２】
実施例１４．ＲＰ−４の調製（２６０ｍｇスケール）：撹拌した１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（２６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．２３ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、２．１当量）の１．７Ｍ溶液を室温で５分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｒ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＲＰ−異性体）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液を３分間かけて滴加した。混合物を室温で９６時間撹拌し、その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で反応を停止した。混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（２ｘ２０ｍＬ）で分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧化で濃縮し、淡黄色の残渣（４９０ｍｇ）を得た。残渣を、０〜５％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配でクロマトグラフィーに供し、白色固体の生成物を得た（１６０ｍｇ、収率３０％）。
【０２５３】
ＳＰ−４又はＲＰ−４の調製は、以下の実施例に示すように、３’−保護化した３を適切な試薬Ｃ又はＣ’、若しくはＣ及びＣ’を含む混合物と反応させることで実施することもできる。
【０２５４】
実施例１５．３ａを合成中間体として用いたＳＰ−４の調製
【化３６】
2013523767.tif 000038
【０２５５】
実施例１５−１．５’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（９）の合成：
撹拌した２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジン（３、８１．１ｇ、３１２ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（７５０ｍＬ）溶液に、ＴＢＤＭＳＣｌ（１０３．１９ｇ、６８５．６ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（５００ｍＬ）溶液を４５分間かけて雰囲気温度で滴加した。反応物を雰囲気温度で２４時間撹拌した。メタノール（８５ｍＬ）を反応混合物に加え、１０分撹拌し、その後、溶媒を減圧化で留去した。温水（４５℃）（１Ｌ）を反応物に加え、混合物を酢酸エチル（２ｘ５００ｍＬ）で抽出し、水（１ｘ５００ｍＬ）で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。酢酸エチルを留去し、得られた残渣をトルエン（２ｘ５００ｍＬ）と同時蒸発させ、粗生成の９を白色の泡状物として得た。収量＝１１６．９ｇ（定量）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ０．１（ｓ，６Ｈ）、０．９１（ｓ，９Ｈ）、１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝２１Ｈｚ）、２．５０（ｓ，２Ｈ）、３．７５−４．０５（ｍ，４Ｈ）、５．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、５．７３（ｓ，１Ｈ）、６．０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８Ｈｚ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、８．５７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）、１１．１（ｓ，１Ｈ）。
【０２５６】
実施例１５−２．５’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシ−２’−フルオロ２’−Ｃ−メチル−ウリジン（１０）の合成：
撹拌したヌクレオシド９（１１６．９ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１Ｌ）溶液に、ＤＭＡＰ（３０．５ｇ、２４９．７ｍｍｏｌ）を加え、これを室温で２０分撹拌した。無水レブリン酸（１３３．６ｇ、６４２．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液を混合物に加え、２４時間撹拌した。混合物のＴＬＣは反応の完了を示した。冷水（５００ｍＬ）を加え、混合物を２０分撹拌した。層を分離し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２ｘ２５０ｍＬ）で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後、溶媒を減圧化で留去し、黄色油状物を得た。粗収量：１９７．６ｇ（１３５％）。この物質をそのまま次の工程に用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ０．１１（ｓ，６Ｈ）、０．９４（ｓ，９Ｈ）、１．３４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝２１Ｈｚ）、２．２２（ｓ，３Ｈ）、２．６−２．８９（ｍ，４Ｈ）、３．７２（ｍ，１Ｈ）、４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、５．３３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５Ｈｚ）、５．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５Ｈｚ）、８．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ）、８．７２（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）。
【０２５７】
実施例１５−３．３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシ−２’−フルオロ２’−Ｃ−メチル−ウリジン（３ａ）の合成：
粗生成の１０（１９７．６ｇ、〜３１２．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、ＴＥＡ．３ＨＦ（５０．３ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）を加え、雰囲気温度で一晩撹拌した。混合物のＴＬＣは、反応の約５０％の完了を示した。さらに当量のＴＥＡ．３ＨＦ（５０．３ｇ、３１２．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６時間撹拌した。この時点でのＴＬＣでは、未反応の出発物質が約１０％であった。さらに０．２５当量のＴＥＡ．３ＨＦ（１２．５ｇ、７８．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、黄色油状物を得た。すべての処理分から得た粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し（０〜２％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液）、１２４．１ｇの３’−レブリン酸塩を白色の泡状固体として得た（２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルウリジンから３工程で精製収率９０％）。１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ１．５５（ｄ，３Ｈ，ＣＨ３，Ｊ＝２０Ｈｚ）、２．３６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．８−３．０３（ｍ，５Ｈ，ＣＨ２ＣＨ３）、３．９１−３．９６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ”）、４．２−４．２５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ’）、４．３４（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ，Ｊ＝８Ｈｚ）、５．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ）、５．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、９．１８（ｓ，１Ｈ）。
【０２５８】
実施例１５−４．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−（４−オキソペンタノイル）−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸（Ｓ）−イソプロピルエステル（１１）の立体選択的合成：
０℃に冷却したヌクレオシド（３ａ、１．００ｍｍｏｌ、３５８ｍｇ）の５ｍＬ無水ＴＨＦ溶液に、ｔＢｕＭｇＣｌ（１．７ＭのＴＨＦ溶液、２当量）を加え、雰囲気温度まで昇温させ、３０分撹拌した。混合物に試薬（キラル純度約９７％）（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体）（４０８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．００当量）を一度に加え、室温で撹拌した。１６時間後、残った出発物質は〜３０％となった。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液１０ｍＬで反応停止し、水相を酢酸エチル（３ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固し、淡黄色泡状物（５００ｍｇ）を得た。これを、２〜５％メタノールの塩化メチレン溶液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、Ｐキラル純度約９７％の白色泡状物の生成物（２７５ｍｇ）と、未反応の出発物質（１６２ｍｇ）を得た。消費された出発物質から、収率は７６％となった。３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１６２ＭＨｚ）：３．７ｐｐｍ；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ１．２２（ｄｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）、１．３７（ｓ，３Ｈ）、１．５８（ｓ，３Ｈ）、２．１８（ｓ，３Ｈ）、２．６３−２．９（ｍ，４Ｈ）、４．０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．２−４．３３（ｍ，１Ｈ）、４．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．９６−５．００（ｓｅｐｔ，１Ｈ）、５．２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、６．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８Ｈｚ）、７．１５−７．３５（ｍ，５Ｈ）、７．５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．２（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）。
【０２５９】
実施例１５−５．（Ｓ）−２−｛［（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−（Ｒ）−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イルメトキシ］−フェノキシ−ホスホリルアミノ｝−プロピオン酸（Ｓ）−イソプロピルエステル（ＳＰ−４）の合成：
Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１．５１ｇ）とＮａ２Ｓ２Ｏ５（０．５７ｇ）を水（２５ｍＬ）に加えて亜硫酸ナトリウム水溶液を調製した。レブリン酸塩（１１、２５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２．５ｍＬ）溶液に、１．０ｍｌの亜硫酸ナトリウム水溶液を加えた。これを室温で４時間撹拌した。反応混合物を水（１５ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ２５ｍＬ）で抽出し、乾燥、蒸発させた。これにより、保護化していないヌクレオシドから直接生成したＳＰ−４の物理的特性及びスペクトル特性と一致する、Ｐキラル純度約９７％の白色固体生成物を定量的に得た。
【０２６０】
実施例１６．３ａからＳＰ−４を調製する別の手法
撹拌した４−オキソ−ペンタン酸（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリミジン−１−イル）−４−フルオロ−２−ヒドロキシメチル−４−メチル−テトラヒドロ−フラン−３−イルエステル（３ａ、２１０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．０７ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ）溶液を室温で２分間かけて加えた。最初に白色沈殿物が観察され、１０分後、反応混合物は暗黄色の溶液に変化した。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８（ＳＰ−異性体）、（３８２ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液を３分間かけて滴加した。混合物を４０℃で５時間加熱し、この時点でのＴＬＣ及び１Ｈ  ＮＭＲでは、未反応の出発物質は２％未満であった。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。合わせた有機層を１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３ｘ１０ｍＬ）、次に水で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た（４１０ｍｇ）。粗生成物をテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）に溶解させ、その後、亜硫酸ナトリウム（３７ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）とメタ重亜硫酸ナトリウム（２２４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の混合物を１ｍＬの水に溶かした水溶液を加えた。混合物を４５℃で２０時間加熱したが、この時点でＴＬＣにより測定した変換率はわずか約１０％であったため、さらに亜硫酸ナトリウム（７４ｍｇ）とメタ重亜硫酸ナトリウム（４４８ｍｇ）を加え、さらに５２時間加熱を続けた。この時点でＴＬＣにより測定した変換率は約４０％であった。反応混合物を水と酢酸エチルで分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た（２１０ｍｇ）。残渣を０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質（８９ｍｇ）とＳＰ−４（５７ｍｇ、収率１８％、回収した出発物質ベースで２４％）を得た。
【０２６１】
実施例１７．３ｃを合成中間体として用いたＳＰ−４の調製
【化３７】
2013523767.tif 000039
【０２６２】
実施例１７−１．１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニロキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン：１２の調製
３（１０．０ｇ、３８．４３ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）溶液に、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えた。溶液を０℃に冷却した。溶液に４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（１４．３２ｇ、４２．２７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃で５時間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）を加えて反応を停止した。溶液を減圧下で濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）で分離した。有機溶液を食塩水（５０ｍＬ）で洗い、乾燥させた（硫酸ナトリウム、４ｇ）。溶媒を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解した。溶液にイミダゾール（７．８３ｇ、１１５ｍｍｏｌ）とｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（８．６８ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を雰囲気温度で１６時間撹拌した。メタノールを加えて反応を停止し（５ｍＬ）、溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）で分離した。有機溶液を乾燥させ（硫酸ナトリウム、４ｇ）、減圧下で蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（１０〜４０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）で精製し、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔＢＤＭＳ中間生成物を得た。これを次に１％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液で処理した。溶液を雰囲気温度で１時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、溶液を雰囲気温度でさらに１時間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）をゆっくりと加え、溶液を雰囲気温度でさらに１時間撹拌した。水酸化アンモニウムを加えて溶液のｐＨを７に調整した。有機溶液を分離し、乾燥させ（硫酸ナトリウム、４ｇ）、減圧下で濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１〜５％メタノールのジクロロメタン溶液）で精製し、１２を７．５ｇの白色固体として、３工程の収率５０％で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１１．４８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．００（ｄ，１Ｈ，Η−１’）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５）、４．０６（ｄｄ，１Ｈ，３’−Ｈ）、３．８５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’ａ，Ｈ−４’）、３．５８（ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｈ−５’ｂ）、１．２７（ｄ，３Ｈ，２−ＣＨ３）、０．８９（ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ３）３）、０．１２（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）２）。
【０２６３】
実施例１７−２．１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニロキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（３ｃ）を用いたＳＰ−４の調製
撹拌した１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラニロキシ）−３−フルオロ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１２、３７４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．８ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）溶液を室温で２分間かけて加えた。最初に白色沈殿物が観察され、１０分後、反応混合物は透明な暗黄色の溶液に変化した。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロフェノキシ）−フェノキシ−ホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体、６５３ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．５ｍＬ）溶液を３分間かけて滴加した。混合物を４０℃で２０時間加熱し、この時点でのＴＬＣ及び１Ｈ  ＮＭＲでは、未反応の出発物質は５％未満であった。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。有機層を１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３ｘ１０ｍＬ）、次に水（２０ｍＬ）で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、３ｃを含む褐色の残渣を得た（８５０ｍｇ）。粗生成物をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させ、０．８ｍＬの８０％ギ酸水溶液を室温で加えた。反応混合物を５０℃で９６時間加熱した。ＴＬＣにより、約７０％の変換が観察された。反応混合物を低温の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、その後、酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た（２２０ｍｇ）。残渣を０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質（２１ｍｇ）とＳＰ−４（７７ｍｇ、収率３５％、回収した出発物質ベースで３９％）を得た。
【０２６４】
実施例１８．３ｄを合成中間体として用いたＳＰ−４の調製
【化３８】
2013523767.tif 000040
【０２６５】
実施例１８−１．３ｄの調製
０℃の撹拌した３のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、ＴＩＰＤＳ−Ｃｌを１５分間かけて滴加した。混合物をゆっくりと室温に昇温させ、同温度で１６時間撹拌した。ピリジンを留去し、残渣をトルエン（５０ｍＬ）と同時蒸発させた。その後、残渣をヘキサンでトリチュレートし、白色沈殿物を、セライトパッドを用いて濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、泡沫状の固体（１２．９７ｇ）を得た。粗生成物（１３）をテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）に再度溶解し、ＴＦＡの水溶液（７５ｍＬ、１：１ＴＦＡ／水）を０℃で２０分間かけて加えた。混合物を同温度で６時間撹拌した。ＴＬＣでは、〜５％の出発物質が観察された。反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液をｐＨ８になるまで加えて反応を停止し、その後、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出液を水で洗い、乾燥させ、濃縮し、白色結晶性固体を得た。固体をさらにヘキサン（３０ｍＬ）でトリチュレートし、得られた白色固体を濾過し、高真空下で乾燥して３ｄを得た（１０．１ｇ、２工程収率８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．８３（ｂｓ，１Ｈ）、７．９４（ｂｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．１０（ｂｄ，Ｊ＝１８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．７１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４３（ｂｓ，１Ｈ）、４．３６（ｄｄ，Ｊ＝２２．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．２７（ｂｓ，１Ｈ）、４．１０（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．０３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．３９（ｄ，Ｊ＝２２．０Ｈｚ，３Ｈ）、１．１１−０．９２（ｍ，２８Ｈ）。
【０２６６】
実施例１８−２．ＳＰ−４の調製
撹拌した３ｄ（５２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（１．８ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ、３．１当量）溶液を室温で１５分間かけて加えた。３０分後、（Ｓ）−２−［（Ｓ）−（４−ニトロ−フェノキシ）−フェノキシホスホリルアミノ］プロピオン酸イソプロピルエステル（８、ＳＰ−異性体、６５３ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を３分間かけて滴加した。混合物を室温で６０時間撹拌した。粗生成試料の１Ｈ及び３１Ｐ  ＮＭＲでは、ジアステレオマーの混合比率がおよそ１：０．７６であった。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）で反応停止した。混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）、次に１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３ｘ２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、淡黄色の残渣を得た（１４、８７８ｍｇ）。
上記化合物１４をテトラヒドロフラン（３ｍＬ）に再度溶解させ、その後、８０％ギ酸水溶液を加えた。混合物を５５℃で２０時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、その後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ７．０）で反応を停止した。その後、反応混合物を酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、５６０ｍｇの残渣を得た。残渣を０〜５％メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質（１４、２４２ｍｇ）とＳＰ−４（８０ｍｇ、収率１５％）を白色固体として得た。
【０２６７】
実施例１９．同位体標識されたＳＰ−４の調製
【化３９】
2013523767.tif 000041
【０２６８】
実施例１９−１．１−（（６ａＲ，８Ｒ，９Ｒ，９ａＳ）−９−ヒドロキシ−２，２，４，４−テトライソプロピルテトラヒドロ−６Ｈ−フロ［３，２−ｆ］［１，３，５，２，４］トリオキサジシロシン−８−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン：１６の調製
ウリジン（１５、１００．０ｇ、４０９．５ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（６００ｍＬ）と同時蒸発して乾固し、無水ピリジン（７００ｍＬ）に再度懸濁した。撹拌した微細粒子懸濁液に、１，３−ジクロロ−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン（１３５．７ｇ、４８２．５ｍｍｏｌ）を雰囲気温度で６０分間かけて加えた。微細粒子懸濁液を雰囲気温度で１７時間撹拌した後、メタノール（２０ｍＬ）を加えて反応を停止し、その後、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（１．５Ｌ）と水（２Ｌ）で分離した。有機層をさらに５％塩酸（２ｘ１Ｌ）、食塩水（５００ｍＬ）で洗い、固体硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物約２５０ｇを得た。残渣を、シリカゲルと酢酸エチルのヘキサン溶液２０〜６５％の濃度勾配を用いた濾過カラムに供した。相同ＴＬＣ（１：１ヘキサン−酢酸エチル溶液でＲｆ＝０．５５）で確認した純生成物の画分を合わせて、減圧下で濃縮し、乾燥させ（４０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４時間）、１６を白色の泡状固体として１４５．５ｇ（７６％）得た。わずかに純粋でない１６の別の画分（３５ｇ）も回収した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１１．３５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−６）、５．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２’−ＯＨ）、５．５０−５．４９（ｍ，２Ｈ，１’−Ｈ及びＨ−５）、４．１４−４．１８（ｍ，３Ｈ，２’，３’，４’−Ｈ）、３．９７−３．８７（ｍ，２Ｈ，５’−Ｈａ及びＨｂ）、１．０２−０．９５（ｍ，２８Η，ＣＨ（ＣＨ３）２）。
【０２６９】
実施例１９−２．１−（（６ａＲ，８Ｒ，９ａＲ）−２，２，４，４−テトライソプロピル−９−オキソテトラヒドロ−６Ｈ−フロ［３，２−ｆ］［１，３，５，２，４］トリオキサジシロシン−８−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン：１７の調製
乾燥した三口丸底フラスコに、無水ＤＣＭ（６００ｍＬ）とＤＭＳＯ（３０．８２ｇ、３９４．５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を窒素雰囲気下、ドライアイス／アセトン浴で−７８℃に冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（無水、７７．７ｇ、３６９．８ｍｍｏｌ）をシリンジで４０分間かけて加え、濁った混合物を得た。混合物に、ウリジン誘導体１６のＤＣＭ（６００ｍＬ）溶液を、添加用漏斗を用いて、−７８℃で７５分間かけて滴加した。この不均一混合物を−７８〜−６５℃で２時間撹拌し、その後、無水トリエチルアミン（９２ｍＬ）をシリンジで素早く加え、透明な淡黄色の溶液を得た。低温で１時間後、反応の完了をＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液）で確認した。冷却浴を取り除き、反応混合物を雰囲気温度まで１時間でゆっくりと昇温させた。飽和ＮＨ４Ｃｌ（１８０ｍＬ）を加えて反応を停止した。水（２００ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層を再度ＤＣＭ（３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（３ｘ４００ｍＬ）、食塩水（１５０ｍＬ）で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を除去し、粘質の褐色残渣を得た。
【０２７０】
粗生成の油状残渣（微量のＤＣＭを含む）をフリーザーに一晩置いた。その後、油中に結晶性固体が一部観察された。油状物を５００ｍＬのヘキサンに雰囲気温度で溶解させた。溶液をフリーザーに２４時間置き、固体がさらに形成された。固体を濾過して回収し、低温の１０％ＤＣＭのヘキサン溶液（１Ｌ）で洗い、オレンジ色がほとんど除かれた。固体（１７）を真空下で２時間乾燥させ、その後、２４時間風乾させた。真空下５０℃で乾燥させた後、固体の重量は２１ｇとなった。濾液を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（１０〜７０％酢酸エチルのヘキサン溶液）で精製し、１７を淡オレンジ色の固体としてさらに３７ｇ得た（合計収率９７％）。
【０２７１】
実施例１９−３．１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン：１８の調製
５％塩酸水溶液で洗い、乾燥（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、２４時間）したマグネシウム（３．５３ｇ、１４７ｍｍｏｌ）を、マグネチックスターラーとコンデンサーを備えた二口丸底フラスコに入れた。フラスコをアルゴンガスで満たし、その後、無水エーテル（８０ｍＬ）を加えた。エーテル中のマグネシウムに、ヨウ化ペルジュウテリオ−１３Ｃメチル（１５．０６ｇ、１１０．３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、発熱反応が起きた。反応混合物が冷めた後、上清を、乾燥した化合物１７（５０℃、０．２ｍｍＨｇ、１５時間）（１０．０ｇ、２０．６３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１Ｌ）溶液に、−５０℃で２０分間かけて移した。温度を−４０℃まで昇温させ、混合物を−４０〜−２５°で４時間撹拌した。反応終了後、混合物をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）により−５０℃で希釈し、その後、食塩水（３００ｍＬ）をゆっくりと加えた。有機層を分離し、その後、飽和塩化アンモニウム水溶液（３００ｍＬｘ２）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過及び減圧下での濃縮後、残渣をＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）に溶解させた。フッ化アンモニウム（１２ｇ）とＴＢＡＦ（４００ｍｇ）を加えた。混合物を９０℃で７時間撹拌し、その後、シリカゲル（２０ｇ）を用いて減圧下で濃縮した。真空で完全乾燥した後、得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２＝１：２０〜１：１０）で精製し、化合物１８（５ｇ、４６％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１１．２６（ｓ，１Η，ΝΗ）、７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６）、５．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５）、５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，ＨＯ−３’）、５．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，ＨＯ−２’）、５．１４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＨＯ−５’）、３．７４−３．５６（ｍ，４Ｈ，Ｈ−３’，４’，５’，５”）。
【０２７２】
実施例１９−４．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−アセトキシ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ジヒドロキシ−４−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルアセテート：１９の調製
化合物１８（５．００ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（１００ｍＬ）溶液に、無水酢酸（３ｍＬ）を雰囲気温度で加えた。得られた混合物を雰囲気温度で１５時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬｘ３）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過及び濃縮後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５％ＭｅＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液）で精製し、化合物１９（４．０ｇ、６８％）を灰色の固体として得た。
【０２７３】
実施例１９−５．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−アセトキシ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−４−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルアセテート：２０の調製
化合物１９（２．３３ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）溶液に、ＤＡＳＴ（１．３３ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）を−７８℃でゆっくりと加えた。得られた混合物を、雰囲気温度にさらした後、３０分撹拌した。同様の方法で、２．３３ｇスケールの２つの反応物と、１．００ｇスケールの１つの反応物をさらに処理した。４つの反応混合物のすべてを合わせ、ＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）で希釈し、氷水（１００ｍＬｘ２）、続いて、低温のＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬｘ２）で洗った。乾燥、濾過、濃縮後、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し（０〜５０％ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液、化合物は４８％前後で確認された）、化合物２０を白色固体として得た（２．０ｇ、合計７．９９ｇの化合物１９から２４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６）、６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，Η−１’）、５．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２，８．４Ｈｚ，Ｈ−５）、５．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６，２１．６Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．４０−４．３１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，５’，５”）、２．１９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．１５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【０２７４】
実施例１９−６．１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン：２１の調製
化合物２０（２ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、ｎ−ブチルアミン（６ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１５時間撹拌し、シリカゲルを用いて真空中で濃縮した。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液）で精製し、化合物２１（１．３ｇ、８５％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）８．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−６）、６．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５）、３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，Ｈ−５’）、３．９７−３．９１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３’，４’）、３．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０，１２．８Ｈｚ，Ｈ−５”）、ＥＳＭＳ（Ｍ＋１）推定２６５、実測２６５。
【化４０】
2013523767.tif 000042
【０２７５】
実施例１９−７．（Ｓ）−イソプロピル２−（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリルアミノ）プロパノエート：２２の調製
保護化されていないヌクレオシド２１（２０７ｍｇ、０．７８３ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルイミダゾール（０．４ｍｌ、５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液に、あらかじめ調製したホスホロクロリデートのＴＨＦ溶液（１．０Ｍ、２．３５ｍｌ、２．３５ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。反応物を１時間かけてゆっくりと雰囲気温度に昇温させ、その後、水（１ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を加えた。有機溶液を飽和一塩基クエン酸ナトリウム水溶液（２ｘ２ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１ｘ２ｍｌ）で洗い、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、０〜５％ｉＰｒＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液を溶出剤として用いたシリカカラムクロマトグラフィーで精製し、ホスホルアミダート２２（２１６ｍｇ、５２％、Ｐ−ジアステレオマーの１：１混合物）を白色固体として得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．５４（ｓ，１Ｈ）、７．５６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０−７．３５（ｍ，２Ｈ）、７．２３−７．１８（ｍ，３Ｈ）、６．１４−５．９６（ｍ，２Ｈ）、５．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２５．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．８５（ｄｑ，Ｊ＝１．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．４４−４．３２（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｍ，１Ｈ）、４．０６−３．９８（ｍ，１Ｈ）、３．８６−３．７０（ｍ，２Ｈ）、１．３０−１．０８（ｍ，９Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．９０、４．７７；ＬＲＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２１１３ＣＨ２７Ｄ３ＦＮ３Ｏ９Ｐの計算値５３４．５、実測値５３４．４。
【０２７６】
実施例１９−８．（２Ｓ）−２−（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−１３Ｃ−ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸：２３の調製
ホスホルアミダート２２（１４７ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）をトリエチルアミン（２ｍＬ）と水（０．５ｍＬ）に懸濁し、６０℃で３０時間加熱した。その後、揮発性成分を減圧下で留去した。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィーにより、５０〜７０％ｉＰｒＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液、次に０〜２０％ＮＨ４ＯＨのｉＰｒＯＨ溶液で溶出させて精製し、２３を白色固体として得た（９５ｍｇ、８３％）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．００（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．９８（ｄ，Ｊ＝１９．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．５２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．０２−３．８１（ｍ，４Ｈ）、１．１０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１２；ＬＲＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１２１３ＣＨ１７Ｄ３ＦＮ３Ｏ９Ｐの計算値４１６．３、実測値４１６．４。
【０２７７】
ＲＰ−４、４、及びＳＰ−４の試料の特性
ＲＰ−４、４、及びＳＰ−４の試料を、Ｘ線粉体回折（ＸＲＰＤ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析法、フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）分光法、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、重量法水蒸気吸着測定（ＧＶＳ）、熱力学的水溶解度、及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。
【０２７８】
実施例２０．Ｘ線粉体回折
ＲＰ−４、４、及びＳＰ−４の試料を、Ｘ線粉体回折（ＸＲＰＤ）により下記の条件で分析した。
【０２７９】
ａ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ／Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００
Ｘ線粉体回折パターンを、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００回折計により、Ｃｕ  Ｋα放射（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θ角度計、Ｖ２０及び受光スリットの発散、グラファイト二次モノクロメーター、並びにシンチレーションカウンターを用いて収集した。本機器を、認証されたコランダム標準（ＮＩＳＴ１９７６）を用いて、性能検査を行う。データ収集用のソフトウェアとして、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＸＲＰＤ  Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ  ｖ２．３．１を用い、データの解析及び提示にはＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ１１．０．０．２又はｖ１３．０．０．２．を用いた。
【０２８０】
環境条件
環境条件下で計測した試料は、受領したままの粉体を用いて、平板試料として調製した。約３５ｍｇの試料を、滑らかなゼロバックグラウンド（５１０）シリコンウエハーに切り込まれた穴に軽く詰めた。分析中、試料はその平面で回転させた。データ収集の詳細は、角度範囲：２〜４２°２θ；ステップサイズ：０．０５°２θ；及び、収集時間：４ｓ．ステップ−１とした。
【０２８１】
ｂ．Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳ
Ｘ線粉体回折パターンを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳ回折計により、Ｃｕ  Ｋα放射（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、自動ＸＹＺステージ、自動サンプル位置決め用レーザービデオ顕微鏡、及びＨｉＳｔａｒ２次元領域検出器を用いて収集した。Ｘ線光学系は、０．３ｍｍのピンホールコリメータに連結された単一のＧｏｂｅｌ多層膜鏡から成る。
【０２８２】
ビーム発散、すなわち試料上のＸ線ビームの有効な大きさは、約４ｍｍであった。θ−θ連続スキャンモードを試料−検出器間距離２０ｃｍで用い、これにより、３．２°〜２９．７°の有効２θ範囲が得られた。通常、試料はＸ線ビームに１２０秒間当てられる。データ収集用のソフトウェアとしてＧＡＤＤＳ  ｆｏｒ  ＷＮＴ  ４．１．１６を用い、データの解析及び提示にはＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ９．０．０．２又はｖ１３．０．０．２を用いた。
【０２８３】
環境条件
環境条件下で計測した試料は、受領したままの粉体を用いて、粉砕を行わず、平板試料として調製した。約１〜２ｇの試料をスライドガラスに軽く押し付け、平面にした。
【０２８４】
Ｘ線粉体回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤにより、４は非結晶であることがわかった（図１参照）。実施例３に従って調製したＲＰ−４の高分解能ＸＲＰＤ分析では、ＳＰ−４（実施例４、方法４に従って調製）のものとは異なる粉体パターンを呈する結晶性固体が確認され、またＳＰ−４も結晶性固体であることが確認された。ＲＰ−４及びＳＰ−４のＸＲＰＤの結果を表１に示す（≦５％（ＲＰ−４）及び≦３％（ＳＰ−４）の強度を示すピークはすべて除く）。
【０２８５】
表１．ＲＰ−４及びＳＰ−４のＸＲＰＤデータ
【表１−１】
2013523767.tif 000043
【表１−２】
2013523767.tif 000044
【０２８６】
ＳＰ−４の試料は、乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、５００μｍと２５０μｍの篩に連続してかけ、微粉末の試料とした。この試料を高分解能ＸＲＰＤで再分析し、形態の変化が起きていないことを確認した。
【０２８７】
実施例２１．ＳＰ−４の結晶化の検討
結晶性のＳＰ−４は多形性を示す。そのため、ある態様は、結晶性ＳＰ−４及びその個々の多形型に向けられている。ＳＰ−４は少なくとも５つの多形型で存在でき、それらを形態１〜５と呼ぶ。さらに、非結晶ＳＰ−４も調製することができる。一般的な結晶化では、約１００ｍｇのＳＰ−４を適切な量の結晶化溶媒（アセトニトリル（５ｖｏｌ）、クロロホルム（５ｖｏｌ）、酢酸ｎ−ブチル（７ｖｏｌ）、ジクロロメタン（５０ｖｏｌ）、アニソール（７ｖｏｌ）、及び１：１ＭＴＢＥ／ヘプタン（５０ｖｏｌ））に溶解し、その後、溶液を５℃で蒸発させる。様々な結晶形が得られるが、濾過及び／又は乾燥により、各結晶形から形態１が得られる。
【０２８８】
形態１、２、及び３は、それぞれ、溶媒和されていない形態、１：１のＤＣＭ溶媒和物、１：１のクロロホルム溶媒和物であり、単結晶Ｘ線及びＸＲＰＤ分析で確認されている。形態４及び５は、ＳＰ−４をそれぞれアセトニトリルとアニソールの溶液から結晶化することで得られる。形態４及び５は、十分な質の単結晶が得られなかったため、溶媒和されていない形態であるか、水和物であるか、又は溶媒和物であるかを決定する十分なデータを収集することができなかった。形態４及び５は、濾過により形態１に変換される。ＳＰ−４を酢酸ｎ−ブチル（ｎＢｕＡｃ）、並びにメチル−ｔブチルエーテル（ＭＴＢＥ）及びヘプタンを含む溶液から結晶化させることで、２つのさらなる結晶形態が得られた；濾過により、これらの結晶形態はともに形態１に変換される。形態２及び３も、単離することで形態１に変換される。形態１は、溶媒和されていない形態であり、幅広い融解吸熱範囲を持ち、開始温度は９４．３℃、ΔＨｆｕｓは２４．０ｋＪｍｏｌ−１である。ＳＰ−４形態１のさらなるＸＲＰＤパターンを図４に示す。
【０２８９】
ＳＰ−４の形態１からＳＰ−４の形態６への変換
形態１は、少なくとも２つの方法で、形態２に変換することができる。
【０２９０】
まず、形態１の微細結晶を大気湿度に数日間さらし、固化したゴム質の外観を呈する形態１の一水和物を生成する。一水和物の固体を粉砕して微粉末にした後も、ＸＲＰＤパターンは形態１と一致したままであった。開放容器に６〜１０週間放置したところ、粉砕した物質はゆっくりと無水固体である形態６に変化した。密閉容器内では、形態１は少なくとも２年間安定である。
【０２９１】
別の方法として、形態１を雰囲気温度で水に５〜５０ｍｇ／ｍＬで懸濁し、数時間で形態６に変換することができる。水変換処理は、水を形態１がさらに溶解する温度まで加熱し、固化したゴム質からＳＰ−４の混合しない部分の流動性を高め、懸濁油状物程度又はそれ以上にすることで、効率を上げることができる。時間が経つと、形態６は５０℃で結晶化し始める。懸濁液をさらに０〜１０℃に冷却すると、固体の回収率を上げることができる。また、水からの結晶化は、極性の微量不純物をより多く取り除くことができ、全体の純度を高めることができる。
【０２９２】
ジクロロメタン又はアセトニトリルなどの有機溶媒に、形態６を再度溶解させ、続いて結晶化させることで、形態６の結晶をシードに用いた場合でも、形態１を生成することができる。
【０２９３】
ゴム隔膜とマグネット撹拌子を備えた、乾燥した１００ｍＬの一口丸底フラスコに、１．０４ｇのＳＰ−４形態１を入れた。ＨＰＬＣ純度９９．７％。４０ｍＬの脱イオン水を加えた。懸濁液を勢いよく撹拌し、５０℃まで加熱した。５０℃に達すると、大部分が均質な溶液を６０分間放置し、その間に固体が溶液から沈殿して薄いスラリーを形成した。スラリーを９０分間かけて２０℃に冷却し、２０℃で１６時間放置し、その後さらに３０分間かけて０〜５℃に冷却し、０〜５℃で２．５時間放置した。スラリーを、中程度の間隙率のガラスフリット付き漏斗で濾過し、１０ｍＬの氷冷水で洗った。湿った固形物を２時間真空乾燥し、その後、真空オーブンで一晩２３時間、５０℃で乾燥させた。０．８８ｇ（回収率８４．６％）のＳＰ−４形態６を単離した。
形態６は、約１２４．５〜１２６℃の実測融点を有する。
【０２９４】
実施例２１−１．ＳＰ−４形態１
表２に、ＳＰ−４形態１のピークのリストを示す。
【表２−１】
2013523767.tif 000045
【表２−２】
2013523767.tif 000046
【０２９５】
実施例２１−２．ＳＰ−４形態２
図５に、ＳＰ−４形態２のＸＲＰＤパターンを示す。
表３に、ＳＰ−４形態２のピークのリストを示す。
【表３】
2013523767.tif 000047
【０２９６】
実施例２１−３．ＳＰ−４形態３
図６に、ＳＰ−４形態３のＸＲＰＤパターンを示す。
表４に、ＳＰ−４形態３のピークのリストを示す。
【表４】
2013523767.tif 000048
【０２９７】
実施例２１−４．ＳＰ−５形態４
図７に、ＳＰ−４形態４のＸＲＰＤパターンを示す。
表５に、ＳＰ−４形態４のピークのリストを示す。
【表５】
2013523767.tif 000049
【０２９８】
実施例２１−５．ＳＰ−４形態５
図８に、ＳＰ−４形態５のＸＲＰＤパターンを示す。
表６に、ＳＰ−４形態５のピークのリストを示す。
【表６】
2013523767.tif 000050
【０２９９】
実施例２１−５．ＳＰ−４形態６
図２１に、ＳＰ−４形態６のＸＲＰＤパターンを示す。
下記表に、ＳＰ−４形態６のピークのリストを示す。
【表７】
2013523767.tif 000051
【０３００】
実施例２１−７．ＳＰ−４（非結晶）
図９に、非結晶ＳＰ−４のＸＲＰＤパターンを示す。
【０３０１】
実施例２２．ＳＰ−４及びその溶媒和物の単結晶Ｘ線結晶構造解析
【０３０２】
実施例２２−１．ＳＰ−４（形態１）の単結晶Ｘ線結晶構造解析
図１０は、ＳＰ−４形態１のＸ線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態１の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。非水素原子の異方性原子変位楕円体は、５０％の確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示されている。
【０３０３】
構造解は、直接的手法、加重ｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０５９２Ｐ）２＋（０．６９５０Ｐ）（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）を用いたＦ２の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．０８７１、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）である７０９０個の反射のＦ値について通常Ｒ１＝０．０３２９、すべてのデータ及び８７０個のパラメーターでＳ＝１．０１６。最終Δ／σ（最大）０．００１、Δ／σ（平均）０．０００。最終差分マップは＋０．５３４〜−０．３６ｅÅ−３。
【０３０４】
表７．形態１の単結晶パラメーター
【表８】
2013523767.tif 000052
【０３０５】
実施例２２−２．ＳＰ−４（形態２）の単結晶Ｘ線結晶構造解析
図１１は、ＳＰ−４形態２のＸ線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態２の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。データが非常に弱いため、ヘテロ原子は等方性で分割している。水素原子は示していない。
【０３０６】
構造解は、直接的手法、加重ｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０９７５Ｐ）２＋（１０．６９６９Ｐ）（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）を用いたＦ２の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．１８８３、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）である２５２５個の反射のＦ値について通常Ｒ１＝０．０７４１、すべてのデータ及び１５８個のパラメーターでＳ＝１．０５。最終Δ／σ（最大）０．０００、Δ／σ（平均）０．０００。最終差分マップ＋１．３８８〜−０．９６７ｅÅ−３。
【０３０７】
表８．形態２の単結晶パラメーター
【表９】
2013523767.tif 000053
【０３０８】
実施例２２−３．ＳＰ−４（形態２）の単結晶Ｘ線結晶構造解析
図１２は、ＳＰ−４（形態２）のＸ線結晶構造（ＯＲＴＥＰ−異方性）を示す。ＳＰ−４（形態２）の塩化メチレン溶媒和物Ｃ２３Ｈ３１Ｎ３ＰＯ９ＦＣｌ２の結晶構造は、単斜晶系空間群Ｐ２１（消滅則０ｋ０：ｋ＝奇数）を生じ、ａ＝１２．８８２２（１４）Å、ｂ＝６．１６９０（７）Å、ｃ＝１７．７３３（２）Å、β＝９２．０４５（３）°、Ｖ＝１４０８．４（３）Å３、Ｚ＝２、ｄ計算値＝１．４４９ｇ／ｃｍ３である。Ｘ線強度データは、Ｒｉｇａｋｕ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ＣＣＤ面検出器により、グラファイトで単色化したＭｏ−Ｋα放射（λ＝０．７１０７３Å）を用いて、温度１４３Ｋで収集した。予備指標化は、照射時間３０秒で一連の１２個の０．５°回転イメージから行った。結晶−検出器間距離３５ｍｍ、２θスイング角−１２°、回転幅０．５°、及び照射３０秒で、合計６４８個の回転イメージを収集した：スキャン番号１は、ω＝１０°、χ＝２０°で３１５°〜５２５°のφ−スキャン；スキャン番号２は、χ＝−９０°、φ＝３１５°で−２０°〜５°のω−スキャン；スキャン番号３は、χ＝−９０°、φ＝１３５°で−２０°〜４°のω−スキャン；スキャン番号４は、χ＝−９０°、φ＝２２５°で−２０°〜５°のω−スキャン；スキャン番号５は、χ＝−９０°、φ＝４５°で−２０°〜２０°のω−スキャン。回転イメージは、ＣｒｙｓｔａｌＣｌｅａｒ（ＣｒｙｓｔａｌＣｌｅａｒ：株式会社リガク、１９９９）を用いて処理し、平均化していないＦ２及びσ（Ｆ２）値のリストを作成し、その後、それらをＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅ：ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅアナリシスパッケージ、株式会社リガク、Ｒｉｇａｋｕ／ＭＳＣ（２００２））プログラムパッケージにより、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ  ＩＩＩコンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。５．４８≦２θ≦５０．０４°、−１４≦ｈ≦１５、−７≦ｋ≦６、−１９≦ｌ≦２１の範囲で、合計７７０７個の反射を測定し、４２５３個の固有反射（Ｒint＝０．０１８０）が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、ＲＥＱＡＢを用いて行った（最小及び最大トランスミッション０．８２４、１．０００）。
【０３０９】
構造は、直接的手法により解明した（ＳＩＲ９７、ＳＩＲ９７：Altomare, A., M. Burla, M. Camalli, G. Cascarano, C. Giacovazzo, A. Guagliardi, A. Moliterni, G. Polidori & R. Spagna (1999). J Appl. Cryst., 32, 115-119）。精密化は、Ｆ２の完全行列最小二乗法を、ＳＨＥＬＸＬ−９７を用いて行った（ＳＨＥＬＸＬ−９７：Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst, A64, 112-122）。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、ｗ＝１／［σ２（Ｆｏ２）＋０．０４７２Ｐ２＋０．４９６０Ｐ］（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子は「ライディング（riding）」モデルを用いて精密化した。精密化は、Ｆ＞４σ（Ｆ）である４０４６個の反射に対してＲ１＝０．０３２８及びｗＲ２＝０．０８１７、全４２５３個の固有の非ゼロ反射及び３５８の変数に対してＲ１＝０．０３４８、ｗＲ２＝０．０８３８、ＧＯＦ＝１．０５６に収束させた（Ｒ１＝Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜；ｗＲ２＝｛Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／Σｗ（Ｆｏ２）２｝１/２；ＧＯＦ＝｛Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／（ｎ−ｐ）｝１/２；ここで、ｎ＝反射の数、ｐ＝精密化するパラメーターの数）。最小二乗の最終サイクルの最大Δ／σは、０．０００で、最終差分フーリエの２つの最も突出したピークは、＋０．３１２と−０．３８９ｅ／Å３であった。フラック（Flack）絶対構造パラメーターは−０．０６（６）に精密化し、これにより表題化合物の立体化学を確認した。
【０３１０】
表１に、セル情報、データ収集パラメーター、及び精密化データを記載する。最終ポジション及び等価の等方性熱パラメーターを表２に示す。異方性熱パラメーターを表３に示す。（"ORTEP-II: A Fortran Thermal Ellipsoid Plot Program for Crystal Structure Illustrations"、C.K. Johnson (1976) ORNL-5138。）確率３０％の熱振動楕円体で分子を示している。
【０３１１】
表９．ＳＰ−４・ＣＨ２Ｃｌ２化合物の構造決定の概要
【表１０】
2013523767.tif 000054
【０３１２】
実施例２２−４．ＳＰ−４（形態３）の単結晶Ｘ線結晶構造解析
図１３は、ＳＰ−４形態３のＸ線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態３の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。非水素原子の異方性原子変位楕円体は、５０％の確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示されている。
【０３１３】
構造解は、直接的手法、加重ｗ−１＝σ２（Ｆｏ２）＋（０．０５１２Ｐ）２＋（０．６８１０Ｐ）（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）を用いたＦ２の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、ＳＣＡＬＥ３  ＡＢＳＰＡＣＫスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終ｗＲ２＝｛Σ［ｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２］／Σ［ｗ（Ｆｏ２）２］１／２｝＝０．０７９６、Ｆｏ＞４σ（Ｆｏ）である２４８６個の反射のＦ値に関して通常Ｒ１＝０．０２９４、すべてのデータ及び３７７個のパラメーターでＳ＝１．０６８。最終Δ／σ（最大）０．００１、Δ／σ（平均）０．０００。最終差分マップは＋０．２１１〜−０．３３４ｅÅ−３。
【０３１４】
表１０．形態３の単結晶パラメーター
【表１１】
2013523767.tif 000055
【０３１５】
実施例２３．高温及び高相対湿度における安定性
ＲＰ−４の試料を４０℃、相対湿度７５％の湿度室に１週間置き、試料をＸＲＰＤで再度分析した。得られたＲＰ−４の粉末パターンは、実験中に実質的な変化が起きていないことを示しており、すなわち固体形状に変化は観察されなかった。これは、４の試料とは対照的で、４の試料では４０℃、相対湿度７５％で保管すると約１６時間以内に潮解が起きた。実際の４の潮解性質を以下に説明する。４の試料を２５０μｍの篩にかけ、その後、試料を４０℃／７５％ＲＨ及び２５℃／５３％相対湿度に置き、目視による観察を一定間隔で行った。結果を表４に示す。
【０３１６】
表１１．高相対湿度に対する４の安定性
【表１２】
2013523767.tif 000056
【０３１７】
ＳＰ−４の試料は、４０℃、相対湿度７５％に置くと、１６時間以内に潮解した。例として、ＳＰ−４の試料を乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、５００μｍと２５０μｍの篩に連続してかけ、微粉末の試料とした。この物質の試料を４０℃、相対湿度７５％、及び２５℃、５３％ＲＨに置き、目視による観察を一定間隔で行った。結果を表５に示す。
【０３１８】
表１２．高相対湿度に対するＳＰ−４の安定性
【表１３】
2013523767.tif 000057
【０３１９】
２５℃、５３％ＲＨに１０４時間置いた試料のＸＲＰＤ分析では、生成されたディフラクトグラムに実質的な変化は見られず、形態の変化は起きていないことが示された。
【０３２０】
実施例２４．フーリエ変換−赤外（ＦＴ−ＩＲ）分光法
汎用減衰全反射（ＡＴＲ）サンプリング付属装置を取り付けたパーキンエルマーＳｐｅｃｔｒｕｍ  Ｏｎｅを用いてデータを収集した。データは、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｖ５．０．１ソフトウェアを用いて収集、解析を行った。
【０３２１】
４、ＲＰ−４、ＳＰ−４の得られたＩＲスペクトルを、それぞれ図５〜７に示す。主要なピークを波長数（ｃｍ−１）で以下に記載する：
４：〜１６８０、〜１４５４、〜１３７６、〜１２０５、〜１０９２、〜１０２３（図１４）；
ＲＰ−４：〜１７４２、〜１７１３、〜１６７９、〜１４６０、〜１３７７、〜１２５９、〜１１５７、〜１０７９（図１５）；及び
ＳＰ−４（形態１）：〜１７４３、〜１７１３、〜１６８８、〜１４５４、〜１３７８、〜１２０８、〜１０８２（図１６）。
【０３２２】
実施例２５．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及び熱重量分析（ＴＧＡ）
ＤＳＣのデータを、５０検体オートサンプラーを備えたＴＡ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＱ２０００で収集した。熱容量の校正はサファイアを用いて行い、エネルギーと温度の校正は認証付きインジウムを用いて行った。
【０３２３】
温度変調ＤＳＣは、通常、各試料０．８〜１．２ｍｇに対して、小さな穴を設けたアルミニウムパンで、底部加熱速度２℃．ｍｉｎ−１、温度変調パラメーター±０．２℃．ｍｉｎ−１及び４０秒によって実施した。試料に対して乾燥窒素のパージを５０ｍｌ．ｍｉｎ−１で維持した。
【０３２４】
機器の制御ソフトウェアは、Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ用Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｖ２．８．０．３９２及びＴｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｖ４．８．３を用い、データ解析はＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ４．３Ａを用いて行った。
【０３２５】
ＤＳＣのデータを、３４検体オートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ  ＤＳＣ８２３ｅで収集した。機器のエネルギーと温度の校正は認証付きインジウムを用いて行った。通常、各試料０．８〜１．２ｍｇを、小さな穴を設けたアルミニウムパン中で、１０℃．ｍｉｎ−１で２５℃から２５０℃まで加熱した。試料に対して乾燥窒素のパージを５０ｍｌ．ｍｉｎ−１で維持した。機器の制御及びデータ解析のソフトウェアには、ＳＴＡＲｅ  ｖ９．２０を用いた。
【０３２６】
ＳＰ−４（形態６）のＤＳＣデータは、ＤＳＣ装置（ＴＡ  Ｑ２０００）を用いて、加熱速度１０℃／ｍｉｎ、乾燥窒素ガスの連続流入下（１００ｍｌ／ｍｉｎ）で収集した。約２．２ｍｇの試料を正確に計量し、密閉されていないゆるい蓋の付いた「Ｔｚｅｒｏ」パン中で加熱した。機器は、インジウム標準物（エンタルピー及び温度）とサファイア標準物（熱容量）で校正を行った。不安定性は、温度で±０．１℃、計測エンタルピーで±５％と推定される。開始温度の測定には、ＴＡ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを用いた。
【０３２７】
ＴＧＡデータは、３４検体オートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ  ＴＧＡ／ＳＤＴＡ８５１ｅで収集した。認証付きインジウムで機器の温度の校正を行った。通常、各試料８〜１２ｍｇを、あらかじめ計量したアルミ製るつぼにのせ、１０℃．ｍｉｎ−１で雰囲気温度から３５０℃まで加熱した。試料に対して窒素のパージを５０ｍｌ．ｍｉｎ−１で維持した。機器の制御及びデータ解析のソフトウェアには、ＳＴＡＲｅ  ｖ９．２０を用いた。
【０３２８】
４のＤＳＣ分析では、５８．７℃から始まる単一の広い吸熱（ΔＨ１４Ｊ．ｇ−１）が、さらなる変調ＤＳＣ分析によるガラス転移中の分子緩和によるものであることが確認された（図１７）。４のＴＧＡ分析では、２４０℃を超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。４のＸＲＰＤ分析で該物質が非晶質であることが確認されたため、ガラス転移点を算出するために変調ＤＳＣ分析を実施し、それが５７℃であることがわかった。
【０３２９】
ＤＳＣ分析では、１３６．２℃から始まる単一の急な吸熱（ΔＨ７６Ｊ．ｇ−１）が高温顕微鏡観察による溶解であることが確認された。図１８参照。ＲＰ−４のＴＧＡ分析では、２４０℃を超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。
【０３３０】
ＳＰ−４のＤＳＣ分析では、９３．９℃から始まる単一の広い吸熱（ΔＨ４３Ｊ．ｇ−１）が高温顕微鏡観察による溶解であることが確認された。図１９参照。ＳＰ−４のＴＧＡ分析では、２４０℃を超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。
【０３３１】
ＳＰ−４（形態６）のＤＳＣ分析では、１２０．７℃から始まる広い吸熱（ΔＨ７９Ｊ．ｇ−１）が見られた。
【０３３２】
実施例２６．重量法水蒸気吸着測定（ＧＶＳ）
ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ
収着等温線は、ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ水分収着等温線分析計を用いて、ＳＭＳ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅソフトウェアで制御を行って得た。試料温度は、機器制御により２５℃に維持した。湿度は、乾燥窒素と湿性窒素の混合流で制御し、合計流量は２００ｍｌ．ｍｉｎ−１とした。相対湿度は、校正済みのＲｏｔｒｏｎｉｃ製プローブ（ダイナミックレンジ１．０〜１００％ＲＨ）を試料の近くに置いて計測した。％ＲＨの作用として、試料の重量変化（質量の緩和）を微量天秤（精度±０．００５ｍｇ）で常に測定した。
【０３３３】
通常、試料５〜２０ｍｇを、環境条件下で、風袋を計量したメッシュのステンレススチール製バスケットに入れた。試料の出し入れは、４０％ＲＨ、２５℃（一般的な室内条件）で行った。水分収着等温線は以下に示す概要で測定した（２回のスキャンで全サイクル１回）。標準等温線は、２５℃、１０％ＲＨ間隔で０．５〜９０％ＲＨの範囲において測定した。
【０３３４】
表１３．ＳＭＳ  ＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ試験の手法のパラメーター
【表１４】
2013523767.tif 000058
【０３３５】
等温線の測定後、試料を回収し、ＸＲＰＤで再度分析した。
【０３３６】
ＧＶＳ分析では、ＲＰ−４は非吸湿性であり、相対湿度０〜９０％で約０．２ｗｔ％の水を可逆的に取り込んでいたことが示された。ＧＶＳ試験後の試料をＸＲＰＤで再度分析したところ、形態に変化は見られなかった。
【０３３７】
ＳＰ−４の試料を乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、５００μｍと２５０μｍの篩に連続してかけて微粉末の試料とし、これを１サイクルに変更した方法で分析した。試料は、標準方法の９０％ではなく、４０％ＲＨ（ほぼ環境条件）から６０％ＲＨで取り、その後、０％まで、そして逆に４０％ＲＨまで測定した。この分析により、ＳＰ−４は、６０％ＲＨまでは非吸湿性であり、０〜６０％ＲＨで〜０．２重量％の水を可逆的に取り込んでいたことが示された。
【０３３８】
実施例２７．熱力学的水溶解度
水溶解度は、十分な量の化合物を水に懸濁し、化合物の親遊離型の≧１０ｍｇ．ｍｌ−１の最大最終濃度を得ることで決定した。懸濁液は、２５℃、２４時間で平衡化し、その後、ｐＨを測定した。その後、懸濁液をガラス繊維Ｃフィルターで濾過し、９６ウェルプレートに入れた。その後、濾液を１０１倍に希釈した。定量はＨＰＬＣで行い、約０．１ｍｇ．ｍｌ−１のＤＭＳＯ溶液を標準液とした。異なる量の標準試料溶液、希釈試料溶液、及び未希釈試料溶液を注入した。溶解度は、標準試料の主要ピークと同じ保持時間にあるピークを積分して求めたピーク面積を用いて算出した。
【０３３９】
表１４．溶解度測定のためのＨＰＬＣの手法のパラメーター
【表１５】
2013523767.tif 000059
【０３４０】
分析は、上記の条件で、ダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００シリーズシステムにより、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎのソフトウェアｖＢ．０２．０１−ＳＲ１を用いて実施した。
【０３４１】
表１５．ＲＰ−４、４、ＳＰ−４の水溶解度の結果
【表１６】
2013523767.tif 000060
【０３４２】
実施例２８．ＨＰＬＣによる化学的純度の決定
本明細書に記載する化合物の化学的純度の決定には、様々なＨＰＬＣの条件を用いることができる。その１つの例が、熱力学的水溶解度の試験に関連して、上記に記載されている。以下に別の例を記載する。
【表１７】
2013523767.tif 000061
【０３４３】
これらの条件で、４、ＲＰ−４、及びＳＰ−４の純度は、それぞれ〜９９．６、〜９９％、及び〜９９．５％と決定された。上記の手法を最適化することで、より高い純度を得ることもできる。
【０３４４】
ＸＲＰＤのディフラクトグラムを検討すると、２つの結晶性単一ジアステレオ異性体は、はっきりと異なるＸＲＰＤパターンを示している。さらに、２つの結晶性ジアステレオ異性体の融点には明確な差があり、ＲＰ−４の開始温度がＳＰ−４よりも大幅に高くなっている（１３６℃対９４℃）。
【０３４５】
実施例２９．その他の分離方法
下記のＳＦＣ分離法（条件は以下に記載）で、ＲＰ−４とＳＰ−４のジアステレオマー混合物が適切に分離された。
【表１８】
2013523767.tif 000062
【０３４６】
下記のＳＦＣ分離法（条件は以下に記載）で、ＲＰ−４とＳＰ−４のジアステレオマー混合物が適切に分離された。
【表１９】
2013523767.tif 000063
【０３４７】
表１６．ＲＰ−４、４、及びＳＰ−４のバッチ特性評価結果のまとめ
【表２０】
2013523767.tif 000064
【０３４８】
実施例３０．８（ＳＰ−異性体）のＸ線結晶構造解析
化合物８（ＳＰ−異性体）Ｃ１８Ｈ２１Ｎ２ＰＯ７は、単斜晶系空間群Ｐ２１（消滅則０ｋ０：ｋ＝奇数）で結晶化し、ａ＝５．３３１２（４）Å、ｂ＝１５．３３８８（８）Å、ｃ＝２３．７８０７（１３）Å、β＝９２．８９１（３）°、Ｖ＝１９４２．２（２）Å３、Ｚ＝４、及びｄ計算値＝１．３９７ｇ／ｃｍ３である。Ｘ線強度データは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩ  ＣＣＤ面検出器により、グラファイトで単色化したＭｏ−Ｋα放射（λ＝０．７１０７３Å）を用いて、温度１００（１）Ｋで収集した。図２０Ａ及び２０Ｂは、非対称ユニットのそれぞれ番号１と番号２の分子を示す。
【０３４９】
予備指標化は、照射時間３０秒で一連の３６個の０．５°回転フレームから行った。結晶−検出器間距離７０．００ｍｍ、回転幅０．５°、及び照射２０秒で、合計３６０８個のフレームを収集した：
【表２１】
2013523767.tif 000065
【０３５０】
回転フレームは、ＳＡＩＮＴ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＡＩＮＴ。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州マディソン）を用いてまとめ、平均化していないＦ２及びσ（Ｆ２）値のリストを作成し、その後、それらをＳＨＥＬＸＴＬ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＨＥＬＸＴＬ。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州マディソン）プログラムパッケージにより、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ４コンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。１．５８≦θ≦２５．０９°、−６≦ｈ≦６、−１８≦ｋ≦１８、−２８≦ｌ≦２８の範囲で、合計６９０９個の反射を測定し、６９０９個の固有反射（Ｒint＝０．０５８１）が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、ＳＡＤＡＢＳ（Sheldrick, G.M. (2007) SADABS. University of Gottingen, Germany）を用いて行った（最小及び最大トランスミッション０．６０９３、０．７４５２）。
【０３５１】
構造は、直接的手法により解明した（ＳＨＥＬＸＳ−９７（Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64,112-122））。精密化は、Ｆ２の完全行列最小二乗法を、ＳＨＥＬＸＬ−９７（Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64, 112-122）を用いて行った。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、ｗ＝１／［σ２（Ｆｏ２）＋（０．００００Ｐ）２＋１４．０７３８Ｐ］（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子はライディングモデルを用いて精密化した。精密化は、Ｆ＞４σ（Ｆ）である６１７３個の観察された反射に対してＲ１＝０．０８４７及びｗＲ２＝０．１８９９、全６９０９個の固有の非ゼロ反射及び５１２の変数に対してＲ１＝０．０９６３、ｗＲ２＝０．１９６３、ＧＯＦ＝１．１１９に収束させた（Ｒ１＝Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜；ｗＲ２＝［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／Σｗ（Ｆｏ２）２］１/２；ＧＯＦ＝［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／（ｎ−ｐ）］１/２；ここで、ｎ＝反射の数、ｐ＝精密化するパラメーターの数）。最小二乗の最終サイクルの最大Δ／σは、０．０００で、最終差分フーリエの２つの最も突出したピークは、＋０．４０２と−０．５５９ｅ／Å３であった。図２０Ａ及び２０Ｂは、非対称ユニットの分子１と分子２のＯＲＴＥＰ（確率３０％の熱振動楕円体）である。
【０３５２】
表１７．化合物８（ＳＰ−異性体）の構造決定のまとめ
【表２２−１】
2013523767.tif 000066
【表２２−２】
2013523767.tif 000067
【０３５３】
実施例３２．（Ｓ）−イソプロピル２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートのＸ線結晶構造解析
（Ｓ）−イソプロピル２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート、Ｃ１８Ｈ１７ＮＰＯ５Ｆ５は、三斜晶系空間群Ｐ１で結晶化し、ａ＝５．２６４１（６）Å、ｂ＝１２．０５４８（１３）Å、ｃ＝１６．４３０７（１５）Å、α＝７４．９６０（４）°、β＝８３．９５９（４）°、γ＝８０．２７５（４）°、Ｖ＝９９０．４０（１８）Å３、Ｚ＝２、及びｄ計算値＝１．５２０ｇ／ｃｍ３である。Ｘ線強度データは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸＩＩ  ＣＣＤ面検出器により、グラファイトで単色化したＭｏ−Ｋα放射（λ＝０．７１０７３Å）を用いて、温度１４３（１）Ｋで収集した。予備指標化は、照射時間２０秒で一連の３６個の０．５°回転フレームから行った。結晶−検出器間距離３７．６００ｍｍ、回転幅０．５°、及び照射２０秒で、合計３５９３個のフレームを収集した：
【表２３】
2013523767.tif 000068
【０３５４】
回転フレームは、ＳＡＩＮＴ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＡＩＮＴ。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州マディソン）を用いてまとめ、平均化していないＦ２及びσ（Ｆ２）値のリストを作成し、その後、それらをＳＨＥＬＸＴＬ（Ｂｒｕｋｅｒ（２００９）ＳＨＥＬＸＴＬ。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．、米国ウィスコンシン州マディソン）プログラムパッケージにより、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ４コンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。１．７７≦θ≧２５．１２°、−６≦ｈ≦６、−１４≦ｋ≦１４、−１９≦ｌ≦１９の範囲で、合計１７８８０個の反射を測定し、６８９７個の固有反射（Ｒint＝０．０２１２）が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、ＳＡＤＡＢＳ（Sheldrick, G.M. (2007) SADABS. University of Gottingen, Germany）を用いて行った（最小及び最大トランスミッション０．６８８７、０．７４５２）。
【０３５５】
構造は、直接的手法により解明した（ＳＨＥＬＸＳ−９７（Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64,112-122））。精密化は、Ｆ２の完全行列最小二乗法を、ＳＨＥＬＸＬ−９７（Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64, 112-122）を用いて行った。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、ｗ＝１／［σ２（Ｆｏ２）＋（０．０３４４Ｐ）２＋０．１１０２Ｐ］（ここで、Ｐ＝（Ｆｏ２＋２Ｆｃ２）／３）。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子はライディングモデルを用いて精密化した。精密化は、Ｆ＞４σ（Ｆ）である６５２７個の観察された反射に対してＲ１＝０．０２５９及びｗＲ２＝０．０６０９、全６８９７個の固有の非ゼロ反射及び５４８の変数に対してＲ１＝０．０２８４、ｗＲ２＝０．０６２１、ＧＯＦ＝１．０４０に収束させた（Ｒ１＝Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜；ｗＲ２＝［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／Σｗ（Ｆｏ２）２］１/２；ＧＯＦ＝［Σｗ（Ｆｏ２−Ｆｃ２）２／（ｎ−ｐ）］１/２；ここで、ｎ＝反射の数、ｐ＝精密化するパラメーターの数）。最小二乗の最終サイクルの最大Δ／σは、０．００１で、最終差分フーリエの２つの最も突出したピークは、＋０．２５４と−０．２３６ｅ／Å３であった。図２２Ａ及び２２Ｂは、非対称ユニットの分子１と分子２のＯＲＴＥＰ（確率３０％の熱振動楕円体）である。
【０３５６】
表１８．（Ｓ）−イソプロピル２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエートの構造決定のまとめ
【表２４−１】
2013523767.tif 000069
【表２４−２】
2013523767.tif 000070
【０３５７】
実施例３３．生物活性
レプリコンを含む細胞を、白色／不透明の９６ウェルプレートに３，０００細胞／ウェル（５０μＬ）、又は白色／不透明の３８４ウェルプレートに１，５００細胞／ウェル（２５μＬ）で播種した。５０μＬの２Ｘ化合物を９６ウェルプレートに加え、又は２５μＬの２Ｘ化合物を３８４ウェルプレートに加えた。プレートを、加湿した５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で４日間培養した。培養後、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ試薬（９６ウェルプレートに５０μＬ、３８４ウェルプレートに２５μＬ）を加え、ＨＣＶの複製をホタルルシフェラーゼレポーターで測定した。阻害率は、薬剤なしの対照と比較して算出した。
【表２５】
2013523767.tif 000071
【０３５８】
ＲＰ−４及びＳＰ−４は、広い遺伝子型範囲を有することが実証されている。例えば、双方ともＣ型肝炎ウイルスの遺伝子型１〜４に対して活性であることが示されている。
【０３５９】
本出願は、２０１０年５月２０日に提出された米国特許出願第１２／７８３，６８０号の一部継続出願であり、該出願は、２００９年５月２０日に提出された米国仮特許出願第６１／１７９，９２３号及び２０１０年３月３１日に提出された第６１／３１９，５１３号に対する優先権を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。
【０３６０】
米国特許出願第１２／７８３，６８０号及び第１２／０５３，０１５号、並びに２００９年５月２０日に提出された米国仮特許出願第６１／１７９，９２３号及び２０１０年３月３１日に提出された第６１／３１９，５１３号の内容は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。引用したすべての文献の内容は、参照により本明細書に取り込まれる。取り込まれる用語の意味が本明細書に定義する用語の意味と矛盾する場合、本明細書における用語の意味が、取り込まれる用語の意味よりも優先される。
【図１】
2013523767.tif 000073
【図２】
2013523767.tif 000074
【図３】
2013523767.tif 000075
【図４】
2013523767.tif 000076
【図５】
2013523767.tif 000077
【図６】
2013523767.tif 000078
【図７】
2013523767.tif 000079
【図８】
2013523767.tif 000080
【図９】
2013523767.tif 000081
【図１０】
2013523767.tif 000082
【図１１】
2013523767.tif 000083
【図１２】
2013523767.tif 000084
【図１３】
2013523767.tif 000085
【図１４】
2013523767.tif 000086
【図１５】
2013523767.tif 000087
【図１６】
2013523767.tif 000088
【図１７】
2013523767.tif 000089
【図１８】
2013523767.tif 000090
【図１９】
2013523767.tif 000091
【図２０Ａ】
2013523767.tif 000092
【図２０Ｂ】
2013523767.tif 000093
【図２１】
2013523767.tif 000094
【図２２Ａ】
2013523767.tif 000095
【図２２Ｂ】
2013523767.tif 000096
【手続補正書】
【提出日】平成24年11月29日(2012.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図２１に実質的に示すＸＲＰＤ回折パターンを有する、結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項２】
約：６．１、８．２、１０．４、１２．７、１７．２、１７．７、１８．０、１８．８、１９．４、１９．８、２０．１、２０．８、２１．８、および２３．３のＸＲＰＤ２θ−反射（°）を有する、結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項３】
請求項１または２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む組成物。
【請求項４】
請求項１または２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび薬剤的に許容される媒体を含む、医薬組成物。
【請求項５】
それを必要とする対象者においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療する医薬組成物であって：
有効量の請求項１または２記載の結晶性２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む、組成物。
【請求項６】
構造式
【化１】
2013523767.tif 000097
（式中、ＬＧ’はベンゾ［ｄ］チアゾリド−２（３Ｈ）−チオン、２−ニトロフェノキシド、２−クロロ−４−ニトロフェノキシドおよび２，４−ジクロロフェノキシドから選択される脱離基である）
により表される化合物。
【請求項７】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項８】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項９】
構造式
【化２】
2013523767.tif 000098
（式中、ＬＧ’は脱離機である）
で示される化合物を調製するためのプロセスであって、
ａ）第１の組成物；
ｂ）第２の脱離基前駆体；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物；
を含む組成物から化合物を結晶化させること、を含み、ここで、第１組成物が、化合物およびその対応するＰベースのジアステレオマーを含む、前記プロセス。
【請求項１０】
化合物のモル量が、その対応するＰベースのジアステレオマーのモル量よりも多い、請求項９記載のプロセス。
【請求項１１】
第２の脱離基前駆体が、２，４−ジニトロフェノール、４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロフェノール、２，４−ジクロロフェノール、またはペンタフルオロフェノールである、請求項９記載のプロセス。
【請求項１２】
第２の脱離基前駆体の量が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲である、請求項９記載のプロセス。
【請求項１３】
第２の脱離基前駆体の量が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーのモル量に対して約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲である、請求項１２記載のプロセス。
【請求項１４】
結晶化が約−１０℃〜約＋４０℃の範囲の温度で起こる、請求項９記載のプロセス。
【請求項１５】
結晶化がほぼ室温で起こる、請求項９記載のプロセス。
【請求項１６】
非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１〜６−アルキル−ピリジン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンおよびそれらの混合物から選択される、請求項９記載のプロセス。
【請求項１７】
非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項９記載のプロセス。
【請求項１８】
非求核性塩基が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲の量で存在する、請求項９記載のプロセス。
【請求項１９】
非求核性塩基が、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーの総モル量に対して約０．１モル当量〜約１モル当量の範囲の量で存在する、請求項９記載のプロセス。
【請求項２０】
化合物の溶解度が、液体組成物中のその対応するＰベースのジアステレオマーの溶解度よりも低い、請求項９記載のプロセス。
【請求項２１】
液体組成物が溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項２２】
液体組成物が、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項２３】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項２４】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項２５】
液体組成物が、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む、請求項２４記載のプロセス。
【請求項２６】
液体組成物が酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項２４記載のプロセス。
【請求項２７】
液体組成物がｔ−ブチル−メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項２４記載のプロセス。
【請求項２８】
液体組成物の量が、第１組成物１グラムにつき約１ｍＬ〜約１０ｍＬの範囲である、請求項９記載のプロセス。
【請求項２９】
結晶性化合物を組成物に添加することをさらに含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項３０】
約０．１〜約１重量％の結晶性化合物を第１組成物に添加することをさらに含む、請求項９記載のプロセス。
【請求項３１】
ａ）ＰｈＯＰ（Ｏ）（ＬＧ）２およびｉＰｒ−Ａｌａ−ＮＨ２・ＨＣｌを第１塩基の存在下で反応させて、（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を得；
ｂ）（ＰｈＯ）Ｐ（Ｏ）（ＬＧ）（ＮＨＡｌａ−ｉＰｒ）を第１の脱離基前駆体（ＬＧ’Ｈ）と第２塩基の存在下で反応させて、化合物およびそのＰベースのジアステレオマーを含む組成物を得ることをさらに含み；
ここで、ＬＧおよびＬＧ’は、互いに独立して、脱離基であり；
ここで、第１の脱離基前駆体および第２の脱離基前駆体は同一または異なり；そして
第１塩基および第２塩基が同一または異なる、請求項９記載のプロセス。
【請求項３２】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するプロセスであって:
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物
を含む第２の組成物から結晶化すること、を含み、
ここで、第１の組成物が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む、前記プロセス。
【請求項３３】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量が、２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量よりも多い、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３４】
ペンタフルオロフェノールの量が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルのモル量に対して、約０．０１モル当量〜約１０モル当量の範囲である、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３５】
結晶化が、約−１０℃〜約＋４０℃の範囲の温度で起こる、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３６】
結晶化がほぼ室温で起こる、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３７】
非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン−１，８−ジアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１，８−ジアザビシクロウンデク−７−エン、４−ジメチルアミノ−ピリジン、ピリジン、２，６−ジ−Ｃ１−６−アルキル−ピリジン、２，４，６−トリ−Ｃ１−６−アルキル−ピリジン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンおよびそれらの混合物から選択される、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３８】
非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項３２記載のプロセス。
【請求項３９】
非求核性塩基が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総モル量に対して約０．１〜約１モル当量の範囲の量で存在する、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４０】
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの溶解度が、２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの液体組成物中の溶解度よりも低い、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４１】
液体組成物が、溶媒および貧溶媒の少なくとも１つを含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４２】
液体組成物が、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７ケトン、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ１〜Ｃ２クロロカーボン、Ｃ２〜Ｃ７ニトリル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４３】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、Ｃ５〜Ｃ１２飽和炭化水素、およびＣ６〜Ｃ１２芳香族炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４４】
液体組成物が、Ｃ２〜Ｃ８エーテル、Ｃ３〜Ｃ７エステル、およびＣ５〜Ｃ１２飽和炭化水素の少なくとも１つを含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４５】
液体組成物が、酢酸エチル、ｔ−ブチル−メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも１つを含む、請求項４４記載のプロセス。
【請求項４６】
液体組成物が、酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項４４記載のプロセス。
【請求項４７】
液体組成物が、ｔ−ブチル−メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項４４記載のプロセス。
【請求項４８】
１グラムの第１組成物について、液体組成物の量が約１〜約１０ｍＬの範囲である、請求項３２記載のプロセス。
【請求項４９】
結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを第２の組成物に添加することをさらに含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項５０】
第１組成物中の２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総重量を基準として、約０．１〜約１重量％の結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを添加することをさらに含む、請求項３２記載のプロセス。
【請求項５１】
請求項３２記載のプロセスにより得られる結晶性２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピル。
【請求項５２】
２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、
ａ）第１の組成物；
ｂ）ペンタフルオロフェノール；
ｃ）非求核性塩基；および
ｄ）液体組成物；
を含む第２の組成物から結晶化させること、を含み、ここで、第１組成物が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを含む、前記プロセス。
【請求項５３】
２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するためのプロセスであって：
２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを、ｔ−ブチルマグネシウムハライドと１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンとを反応させることにより得られる生成物と接触させることを含む、前記プロセス。
【請求項５４】
接触を、約０℃〜約４０℃の範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項５３記載のプロセス。
【請求項５５】
接触を、約０℃〜約３０℃の範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項５３記載のプロセス。
【請求項５６】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比が約２〜約２．２の範囲である、請求項５３記載のプロセス。
【請求項５７】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドの１−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンに対するモル比が約２．１である、請求項５３記載のプロセス。
【請求項５８】
ｔ−ブチルマグネシウムハライドがｔ−ブチルマグネシウムクロリドである、請求項５３記載のプロセス。
【請求項５９】
実質的に純粋な２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを調製するプロセスであって：
請求項５２記載のプロセスにしたがって、２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを得、そして
そのようにして形成された２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルを結晶化させることを含む、前記プロセス。
【請求項６０】
非求核性塩基が、２−（（（Ｓ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルおよび２−（（（Ｒ）−（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸（Ｓ）−イソプロピルの総モル量に対して約０．１〜約１モル当量の範囲の量で存在する、請求項３２記載のプロセス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５４】
実施例１５．３ａを合成中間体として用いたＳＰ−４の調製
【化１】
2013523767.tif 000099
【国際調査報告】
2013523767.tif 000100
2013523767.tif 000101
2013523767.tif 000102
2013523767.tif 000103
2013523767.tif 000104