(57)【要約】【課題】検体中におけるタンパク質を優れた検出感度で検出することができるバイオチップを提供すること。【解決手段】本発明のバイオチップ１は、検体中に含まれるタンパク質を検出するために用いられるものであり、基材１０と、この基材１０のタンパク質を担持する底面（担持面）２１に固定化された特異抗体（認識物質）４１とを有し、基材１０は、底面２１にミクロンオーダー以下の凹凸を有している。また、前記凹凸の凸部は、その中心間距離が１μｍ以上、３００μｍ以下であることが好ましい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中に含まれるタンパク質を検出するために用いられるバイオチップであって、
基材と、該基材の前記タンパク質を担持する担持面に固定化された認識物質とを有し、
前記基材は、前記担持面にミクロンオーダー以下の凹凸を有することを特徴とするバイオチップ。
【請求項２】
前記凹凸の凸部は、その中心間距離が１μｍ以上、３００μｍ以下である請求項１に記載のバイオチップ。
【請求項３】
前記凹凸の凸部は、その幅が１μｍ以上、３００μｍ以下である請求項１または２に記載のバイオチップ。
【請求項４】
前記凹凸の凸部は、その平面視形状が凸条をなしている請求項１ないし３のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【請求項５】
前記凹凸は、ナノインプリント法を用いて形成されたものである請求項１ないし４のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【請求項６】
前記基材は、直鎖状ポリオレフィン系樹脂、環状ポリオレフィン系樹脂およびフッ素系樹脂のうちの少なくとも１種を主材料として構成される請求項１ないし５のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【請求項７】
前記認識物質は、前記認識物質と反応性を有する官能基を備えるポリマーを介して前記担持面に担持されている請求項１ないし６のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【請求項８】
前記認識物質は、前記タンパク質を特異的に認識する特異抗体である請求項１ないし７のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオチップに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、検体中のタンパク質を検出するための手法として、例えば、バイオチップを用いた検出方法が提案されている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
バイオチップは、通常、ウェルを有する基材と、このウェルの底面（担持面）に固定化された認識物質とを備える構成のものである。かかるバイオチップのウェルに検体を供給することで、認識物質によってタンパク質を認識させることにより、認識物質を介してウェルの底面にタンパク質を担持させた後、この担持されたタンパク質を観察することで、検体中におけるタンパク質の有無の判定、さらには検体中のタンパク質の定量がなされる。
【０００４】
そのため、かかる構成のバイオチップを用いた検出方法において、検体中におけるタンパク質の検出感度を向上させるには、ウェルの底面に担持される認識物質の担持量を増大させることが求められる。しかしながら、現在、提案されているバイオチップでは、ウェルの底面に担持される認識物質の担持量が充分であるとは言えなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平７−１２８３３６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、検体中におけるタンパク質を優れた検出感度で検出することができるバイオチップを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
このような目的は、下記（１）〜（８）に記載の本発明により達成される。
（１）  検体中に含まれるタンパク質を検出するために用いられるバイオチップであって、
基材と、該基材の前記タンパク質を担持する担持面に固定化された認識物質とを有し、
前記基材は、前記担持面にミクロンオーダー以下の凹凸を有することを特徴とするバイオチップ。
【０００８】
（２）  前記凹凸の凸部は、その中心間距離が１μｍ以上、３００μｍ以下である上記（１）に記載のバイオチップ。
【０００９】
（３）  前記凹凸の凸部は、その幅が１μｍ以上、３００μｍ以下である上記（１）または（２）に記載のバイオチップ。
【００１０】
（４）  前記凹凸の凸部は、その平面視形状が凸条をなしている上記（１）ないし（３）のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【００１１】
（５）  前記凹凸は、ナノインプリント法を用いて形成されたものである上記（１）ないし（４）のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【００１２】
（６）  前記基材は、直鎖状ポリオレフィン系樹脂、環状ポリオレフィン系樹脂およびフッ素系樹脂のうちの少なくとも１種を主材料として構成される上記（１）ないし（５）のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【００１３】
（７）  前記認識物質は、前記認識物質と反応性を有する官能基を備えるポリマーを介して前記担持面に担持されている上記（１）ないし（６）のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【００１４】
（８）  前記認識物質は、前記タンパク質を特異的に認識する特異抗体である上記（１）ないし（７）のいずれか１項に記載のバイオチップ。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、バイオチップが備える基材の担持面に、固定化されている認識物質の担持量を増大させることができる。そのため、検体中におけるタンパク質を優れた検出感度で検出することができるようになる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明のバイオチップの第１実施形態を示す図である。
【図２】本発明のバイオチップの第２実施形態を示す図である。
【図３】本発明のバイオチップの第３実施形態を示す図である。
【図４】抗原を検出する検出方法に用いられるバイオチップの一例を示す図である。
【図５】抗原を検出する検出方法の一例を説明するための縦断面図である。
【図６】各実施例および比較例のバイオチップで測定された吸光度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明のバイオチップについて、好適実施形態に基づいて詳細に説明する。
なお、以下では、本発明のバイオチップを説明するのに先立って、検体中に含まれる抗原（タンパク質）を検出する検出方法の一例について説明する。
【００１８】
＜検出方法＞
図４は、抗原を検出する検出方法に用いられるバイオチップの一例を示す図（図４（ａ）は斜視図、図４（ｂ）は部分縦断面図）、図５は、抗原を検出する検出方法の一例を説明するための縦断面図である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図４、５中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【００１９】
本実施形態で説明する検出方法（検査方法）は、検体中に含まれる特定の抗原（タンパク質）を検出する検出方法であって、［１］バイオチップを用意する工程と、［２］検出すべき抗原を含有する検体を用意する工程と、［３］検体を穴部内に供給する工程と、［４］穴部内を洗浄する工程と、［５］抗原を特異的に認識し、かつ標識化された標識化特異抗体を含有する処理液を穴部内に供給する工程と、［６］穴部内を洗浄する工程と、［７］標識化特異抗体が備える標識部位を観察する工程とを有する。
【００２０】
以下、各工程について、順次説明する。
［１］  まず、図４に示すような、バイオチップ（検出容器）１００を用意する（第１の工程）。
【００２１】
このバイオチップ１００は、検体中に含まれる特定の抗原を検出するために用いられるものであり、検体を貯留するための複数（本実施形態では９６個）の穴部（ウェル）１１を備える基材（マルチウェルプレート）１０と、抗原を特異的に認識する特異抗体４１と、穴部の内面に吸着した（固定化された）ポリマー３１とを有するもので構成される。
【００２２】
［２］  次に、検出すべき抗原５１を含有する検体５０を用意する（第２の工程）。
検体５０としては、上述したバイオチップ１００が有する特異抗体４１が特異的に認識する抗原５１が含まれているか否かを判定すべきものが用意され、例えば、血液、リンパ液、唾液、尿等の体液、または当該体液に対して希釈や、遠心分離による固体物の除去等の処理が施されたものの他、角層（角質層）および毛髪等を溶媒または分散媒中に溶解または分散させたものが用いられる。
【００２３】
溶媒または分散媒としては、特に限定されないが、例えば、等張液を用いることができる。なお、本明細書中において、「等張液」とは、細胞内液の浸透圧とほぼ等しい浸透圧の液体のことを言うこととする。これにより、溶媒または分散媒が抗原に接触した際に、細胞内に存在するのと同様の浸透圧を維持することができるため、抗原の破壊を防止することができる。
【００２４】
この等張液には、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ液（ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水）、Ｌｏｃｋｅ液、Ｒｉｎｇｅｒ液、Ｔｙｒｏｄｅ液、Ｅａｒｌｅ液、Ｋｒｅｂｓ液、生理食塩水等を用いることができる。
また、この等張液には、必要に応じて、各種界面活性剤が添加されていても良い。
【００２５】
界面活性剤としては、例えば、ｎ−デシル−α−Ｄ−グルコピラノシドのようなアルキルグルコシド系非イオン界面活性剤、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビンタン（Ｔｗｅｅｎ２０）のようなポリオキシエチレン系非イオン性界面活性剤が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２６】
［３］次に、図５（ａ）に示すように、検体５０を、バイオチップ１００が備える穴部１１内に供給する（第３の工程）。
【００２７】
これにより、特異抗体４１に検体５０が接触する。このとき、検体５０中に、抗原５１が含まれていると、特異抗体（一次抗体）４１に抗原５１が特異的に認識される。
【００２８】
なお、検体５０中には、この抗原５１以外の抗原（図５（ａ）中の●や★）が含まれているが、特異抗体４１は、抗原５１を特異的に認識する。そのため、この抗原５１以外の抗原が検体５０中に含まれていたとしても、特異抗体４１は、他の抗原を認識することなく、抗原５１を選択的に認識する。
【００２９】
その結果、穴部１１の底面２１に、検体５０中に含まれる抗原５１が、ポリマー３１および特異抗体４１を介して選択的に担持（吸着）される。
【００３０】
また、検体５０のｐＨは、特に限定されないが、５〜１０程度とするのが好ましく、６〜８程度とするのがより好ましい。
【００３１】
［４］次に、穴部１１内を洗浄する（第４の工程）。
具体的には、穴部１１内に洗浄液を供給した後、この洗浄液を除去して廃棄することで、穴部１１内を洗浄する。
【００３２】
本工程で用いる洗浄液としては、特に限定されないが、特異抗体４１および抗原５１に変性・変質が生じるのを防止するために、等張液が好ましく用いられる。この等張液には、前記工程［１］で説明したのと同様のものが挙げられる。
【００３３】
また、本工程は、必要に応じて、複数回繰り返して行うようにしてもよい。これにより、穴部１１に担持されなかった抗原５１をより確実に除去することができる。
【００３４】
この場合、用いる洗浄液は、各回において、同一のものを用いてもよく、異なる種類（条件）のものを用いるようにしてもよい。
【００３５】
［５］次に、標識化特異抗体６１を含有する処理液６０を穴部１１内に供給する（第５の工程）。
【００３６】
この標識化特異抗体６１は、特異抗体４１と同様に、抗原５１を特異的（選択的）に認識するとともに、標識部位により標識化された二次抗体として機能するものである。
【００３７】
かかる標識化特異抗体６１を含む処理液６０を穴部１１内に供給することにより、標識化特異抗体６１は、図５（ｂ）に示すように、抗原５１を認識する。
【００３８】
その結果、ポリマー３１と、特異抗体４１と抗原５１とを介して、穴部１１の底面に標識化特異抗体６１が担持（吸着）される。
【００３９】
なお、抗原５１が認識（吸着）されていない特異抗体４１には、当然、標識化特異抗体６１が特異抗体４１を認識することができないため、標識化特異抗体６１が担持されることはない。
【００４０】
また、標識化特異抗体６１を標識化するための標識部位としては、特に限定されないが、酵素、蛍光物質および吸光物質等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４１】
このように標識化特異抗体６１を用いて、抗原５１を標識化すれば、後工程［７］において、標識化特異抗体６１が有する標識部位を観察することにより、特異抗体４１に担持された抗原（マーカー）５１の有無の判定（陽性、陰性の判定）、さらには検体５０中の抗原５１の量を定量することが可能となる。
【００４２】
また、処理液６０としては、標識化特異抗体６１を含有すればよく、特に限定されるものではないが、標識化特異抗体６１を等張液中に溶解したものが好適に用いられる。
さらに、等張液としては、前記工程［１］で説明したのと同様のものが挙げられる。
【００４３】
［６］次に、穴部１１内を洗浄する（第６の工程）。
これにより、処理液６０中に含まれる標識化特異抗体６１のうち、抗原５１を認識しなかった標識化特異抗体６１が、穴部１１外に廃棄される。
【００４４】
穴部１１内を洗浄する方法としては、前記工程［４］で説明したのと同様の方法が用いられる。
【００４５】
［７］次に、穴部１１内に担持された標識化特異抗体６１が備える標識部位を観察する（第７の工程）。
【００４６】
例えば、標識部位がペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）のような酵素である場合、この酵素との反応により、発色または吸光する基質７１を穴部１１内に供給し、その反応に伴う発色または吸光を観察することにより、抗原５１の有無の判定（陽性、陰性の判定）、さらには検体５０中の抗原５１の定量を間接的に行うことが可能となる（図５（ｃ）参照。）。
【００４７】
また、標識部位が蛍光物質または吸光物質である場合、穴部１１に光を照射し、この光照射に伴う標識部位の蛍光（発色）または吸光を観察することにより、抗原５１の有無の判定（陽性、陰性の判定）、さらには検体５０中の抗原５１の定量を間接的に行うことが可能となる。
【００４８】
以上のようにして、穴部１１において、検体５０中における抗原５１を観察すること、すなわち、抗原５１の有無の判定（陽性、陰性の判定）、さらには検体５０中の抗原５１の定量を行うことができる。
【００４９】
さて、このようなバイオチップ１００を用いた検出方法においては、前述したように、穴部１１の底面２１にポリマー３１を介して特異抗体（認識物質）４１が担持されており、この特異抗体４１によって検体５０中に含まれる抗原（タンパク質）５１が認識される。そして、この特異抗体４１により認識された抗原５１を、標識化特異抗体６１で認識させることにより、標識化特異抗体６１を、底面２１に、ポリマー３１、特異抗体４１および抗原５１を介して担持させ、この担持された標識化特異抗体６１が有する標識部位を観察することにより、検体５０中における抗原５１の有無の判定（陽性、陰性の判定）、さらには検体５０中の抗原５１の定量がなされる。
【００５０】
よって、かかる構成の検出方法において、検体５０中における抗原５１の検出感度を向上させるには、底面２１にポリマー３１を介して担持される特異抗体４１の担持量を増大させることが求められる。しかしながら、前述のような、バイオチップ１００では、底面２１が平坦面で構成されるため、底面２１に担持される特異抗体４１の担持量が充分であるとは言えなかった。
本発明のバイオチップは、かかる問題を解消するために用いられるものである。
【００５１】
＜バイオチップ＞
以下、本発明のバイオチップについて詳述する。
【００５２】
＜＜第１実施形態＞＞
図１は、本発明のバイオチップの第１実施形態を示す図（（図１（ａ）は斜視図、図１（ｂ）は部分平面図、図１（ｃ）は図１（ｂ）のＡ−Ａ線断面図）である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図１（ａ）、（ｃ）中の上側および図１（ｂ）中の紙面手前側を「上」、図１（ａ）、（ｃ）中の下側および図１（ｂ）中の紙面奥側を「下」と言う。なお、本明細書で参照する図面は、構成の一部を誇張して示したものであり、実際の寸法等を正確に反映したものではない。
【００５３】
バイオチップ（検出容器）１は、検体を貯留するための複数（本実施形態では９６個）の穴部（ウェル）１１を備える基材（マルチウェルプレート）１０と、抗原を特異的に認識する特異抗体４１と、穴部１１の底面２１に吸着した（固定化された）ポリマー３１とを有している。
【００５４】
基材１０は、全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、底面２１を有する穴部１１を複数備えており、これらの穴部１１に供給（収納）された検体（液体）がその内部に貯留される。
【００５５】
この基材１０の構成材料としては、特に限定されず、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂のようなポリスチレン系樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体のような直鎖状ポリオレフィン系樹脂、環状ポリオレフィン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂のようなメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレンのようなフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂およびポリアクリロニトリルのようなアクリル系樹脂等の樹脂材料が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの中でも、直鎖状ポリオレフィン系樹脂、環状ポリオレフィン系樹脂およびフッ素系樹脂のうちの少なくとも１種であるのが好ましい。これらの樹脂材料で構成される基材１０は、蛍光発生量が少ないものとなることから、蛍光（発色）または吸光を観察することにより、抗原５１の有無の判定、さらには検体５０中の抗原５１の定量を行う際に、ノイズの発生を的確に抑制または防止することができる。そのため、抗原５１の有無の判定、さらには検体５０中の抗原５１の定量の検出精度の向上を図ることができる。
【００５６】
ポリマー（高分子物質）３１は、各穴部１１の底面（内面）２１に吸着し（担持され）ており、このものを介して、底面２１に特異抗体４１を固定化（担持）させるものである。
【００５７】
このようなポリマー３１は、特異抗体４１と反応性を有する官能基を備えており、この官能基が特異抗体４１と反応することで、ポリマー３１と特異抗体４１とが連結し、その結果、底面２１に特異抗体４１が固定化される。
【００５８】
この官能基としては、特に限定されないが、例えば、カルボキシル基、アミノ基、アルデヒド基、活性エステル基、水酸基、エポキシ基、ビニルスルホン基、ビオチン、チオール基、イソシアネート基、イソチオシアネート基、ヒドロキシル基、アクリレート基、マレイミド基、ヒドラジド基、アジド基、アミド基、スルホネート基、ストレプトアビジン、金属キレート等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００５９】
また、ポリマー３１の骨格としては、その少なくとも一部が炭化水素鎖およびエチレングリコール鎖のうちの少なくとも１種で構成されるものが挙げられる。
【００６０】
また、ポリマー３１の底面２１への吸着は、例えば、有機溶媒にポリマー３１を溶解した溶液を調製し、浸漬、吹きつけ等の公知の方法で基材の表面に、この溶液を塗布した後、室温下ないしは加温下において乾燥させることにより行うことができる。
【００６１】
特異抗体（認識物質）４１は、検体中に含まれる検出すべき抗原を特異的に認識するものであり、ポリマー３１を介して、底面２１に固定化（担持）されている。
【００６２】
この特異抗体４１としては、検体中に含まれる検出すべき抗原の種類に応じて、かかる抗原を特異的に認識し得るものが選択される。
【００６３】
また、このような特異抗体４１のポリマー３１への固定化は、例えば、特異抗体４１を溶解または分散させた液体を、ポリマー３１が吸着した穴部１１の底面２１に、点着し、その後、静置することにより行うことができる。
【００６４】
さて、かかる構成のバイオチップ１において、本実施形態では、平面視で、一直線状に伸びる複数の凸条２２が底面２１にほぼ一定の間隔で離間して同一の方向に向かって形成されている。このような凸条２２を形成することで、底面（担持面）２１は、凹凸を有するものとなり、本発明では、この凹凸がミクロンオーダー以下のものとなっている。
【００６５】
このようなミクロンオーダー以下の凹凸を底面２１が有することにより、底面２１の表面積を、底面が平坦面で構成される場合と比較して大きくすることができる。そのため、底面２１にポリマー３１を介して担持される特異抗体４１の担持量を容易に増大させることができることから、検体５０中における抗原５１の検出感度を確実に向上させることができる。すなわち、検体５０中における抗原５１を優れた検出感度で検出することができる。
【００６６】
このような凸条（凸部）２２において、その中心間距離（ピッチ）は、１００ｎｍ以上、３００μｍ以下、であるのが好ましく、１μｍ以上、３００μｍ以下であるのがより好ましく、３μｍ以上、１５０μｍ以下であるのがさらに好ましい。
【００６７】
また、凸条２２の幅は、１００ｎｍ以上、３００μｍ以下、であるのが好ましく、１μｍ以上、３００μｍ以下であるのがより好ましく、３μｍ以上、１５０μｍ以下であるのがさらに好ましい。
【００６８】
さらに、凸条２２の高さは、１００ｎｍ以上、３００μｍ以下、であるのが好ましく、１μｍ以上、３００μｍ以下であるのがより好ましく、３μｍ以上、１５０μｍ以下であるのがさらに好ましい。
【００６９】
凸条２２すなわち凹凸のサイズ（ピッチ、幅および高さ）を前記範囲内に設定することにより、底面２１の表面積をより確実に大きくすることができる。
【００７０】
なお、かかる構成の凸条２２は、いかなる方法を用いて形成されたものであってもよいが、ナノインプリント法を用いて形成されたものであるのが好ましい。ナノインプリント法は、凸条２２の形状に対応した凹条（凹部）を有する金型を用意し、この金型を溶融状態とした底面２１に押し当て、その後、底面２１を固化させた後に、金型を取り除くことにより、底面２１に凸条２２を形成する方法であり、かかる方法によれば、寸法精度に優れたミクロンオーダー以下の凸条２２を容易かつ確実に形成することができる。
【００７１】
＜＜第２実施形態＞＞
図２は、本発明のバイオチップの第２実施形態を示す図（（図２（ａ）は斜視図、図２（ｂ）は部分平面図、図２（ｃ）は図２（ｂ）のＡ−Ａ線断面図）である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図２（ａ）、（ｃ）中の上側および図２（ｂ）中の紙面手前側を「上」、図２（ａ）、（ｃ）中の下側および図２（ｂ）中の紙面奥側を「下」と言う。なお、本明細書で参照する図面は、構成の一部を誇張して示したものであり、実際の寸法等を正確に反映したものではない。
【００７２】
以下、第２実施形態のバイオチップ１について、前記第１実施形態のバイオチップ１との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【００７３】
図２に示すバイオチップ１は、底面２１が備える凹凸の構成が異なること以外は、図１に示すバイオチップ１と同様である。
【００７４】
すなわち、第２実施形態のバイオチップ１では、凸条２２の他に、さらに、凸条２２とほぼ直交するように、一直線状に伸びる複数の凸条（リブ）２３が底面２１にほぼ一定の間隔で離間して形成されている。
【００７５】
このような第２実施形態のバイオチップ１によっても、前記第１実施形態と同様の効果が得られる。
なお、各部の寸法は、前記第１実施形態のバイオチップ１と同様である。
【００７６】
＜＜第３実施形態＞＞
図３は、本発明のバイオチップの第３実施形態を示す図（（図３（ａ）は斜視図、図３（ｂ）は部分平面図、図３（ｃ）は図３（ｂ）のＡ−Ａ線断面図）である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図３（ａ）、（ｃ）中の上側および図３（ｂ）中の紙面手前側を「上」、図３（ａ）、（ｃ）中の下側および図３（ｂ）中の紙面奥側を「下」と言う。なお、本明細書で参照する図面は、構成の一部を誇張して示したものであり、実際の寸法等を正確に反映したものではない。
【００７７】
以下、第３実施形態のバイオチップ１について、前記第１実施形態のバイオチップ１との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【００７８】
図３に示すバイオチップ１は、底面２１が備える凹凸の構成が異なること以外は、図１に示すバイオチップ１と同様である。
【００７９】
すなわち、第３実施形態のバイオチップ１では、平面視で、凸条２２が、その途中で分断されるように、線分状に形成され、複数の線分が同一の方向に向かって一定の間隔で形成されている。
【００８０】
このような第３実施形態のバイオチップ１によっても、前記第１実施形態と同様の効果が得られる。
なお、各部の寸法は、前記第１実施形態のバイオチップ１と同様である。
【００８１】
以上、本発明のバイオチップを、図示の実施形態に基づいて説明したが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８２】
例えば、本発明のバイオチップは、同様の機能を発揮し得る任意のものと置換することができ、あるいは、任意の構成のものを付加することができる。
【００８３】
また、前記実施形態では、特異抗体がポリマーを介して底面に担持されている場合について説明したが、この場合に限定されず、特異抗体は、ポリマーを介することなく、底面に直接担持されていてもよい。なお、この場合、基材としては、例えば、水酸基のような官能基を底面の表面に備えるもの、疎水的相互作用により特異抗体を担持（吸着）させ得るもの等が用いられる。
【００８４】
さらに、前記実施形態では、検体中に含まれる抗原（タンパク質）を特異抗体が認識する場合、すなわち、認識物質が特異抗体である場合について説明したが、これに限定されず、例えば、認識物質として糖鎖を用い、この糖鎖と特異的に結合するタンパク質を検体中から検出するようにしてもよい。
【実施例】
【００８５】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。
１．バイオチップの作製
【００８６】
［実施例１］
（１）まず、実施例１のバイオチップを作製するために、以下の部材および原材料等を用意した。
【００８７】
＜１＞  基材：９６つの穴部を備えるポリエチレン樹脂基板を用意し、これら穴部の底面に、ナノインプリント法を用いて中心間距離が１５０μｍの凸条を形成することにより、底面に凹凸を有するものとした。
【００８８】
＜２＞  標識化特異抗体：ストレプトアビジンＨＲＰ（ＣＳＴジャパン社製、「３９９９Ｓ」）を用意した。
＜３＞  洗浄液：０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳを用意した。
【００８９】
（２）次に、特異抗体の１μｇ／ｍＬ  リン酸バッファー溶液を調製し、これを穴部に点着したのち、室温下で一晩静置した。
【００９０】
（３）次に、洗浄液を用いて穴部に対して３回洗浄を行った。
以上の工程を経ることで、実施例１のバイオチップを得た。
【００９１】
［実施例２］
基材として、底面に、中心間距離が５μｍの凸条が形成されているものを用意したこと以外は、前記実施例１と同様にして、実施例２のバイオチップを作製した。
【００９２】
［比較例］
基材へのナノインプリント法を用いた凸条の形成を省略したこと以外は、前記実施例１と同様にして、比較例のバイオチップを作製した。
【００９３】
２．標識化特異抗体の検出
各実施例および比較例のバイオチップが備える穴部の底面に担持させた標識化特異抗体を以下のようにして観察した。
【００９４】
すなわち、３，３’，５，５’−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ(ＴＭＢ)のＰＢＳ溶液（０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０）を調製し、これを、各実施例および比較例のバイオチップが備える穴部に供給したのち、これらの穴部について、それぞれ、吸光測定（測定波長：４５０ｎｍ）を行った。
【００９５】
以上のようにして測定された各実施例および比較例のバイオチップにおける吸光度を図６に示す。
【００９６】
図６に示したように、各実施例のバイオチップでは、比較例のバイオチップと比較して、底面にミクロンオーダー以下の凹凸が形成されていることに起因して、測定される吸光度が増強された結果が得られた。
【符号の説明】
【００９７】
１、１００    バイオチップ
１０          基材
１１          穴部
２１          底面
２２、２３    凸条
３１          ポリマー
４１          特異抗体
５０          検体
５１          抗原
６０          処理液
６１          標識化特異抗体
７１          基質
【図１】
2015049162.tif 000003
【図２】
2015049162.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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