(57)【要約】  本発明は、インビボ及びインビトロで核酸を細胞内に効率的にトランスフェクトすることを可能にする、一般式（Ｉ）の本発明のポリマーキャリア分子及びその変形、核酸と本発明のポリマーキャリア分子とによって形成されたポリマーキャリアカーゴ複合体に関し、更に、こうした本発明のポリマーキャリア分子及び本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の調製法に関する。本発明は、また、様々な疾患の治療用の薬剤として、更にこうした疾患の治療用の医薬組成物の調製において、この本発明のポリマーキャリア分子及び本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体を応用、並びに使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）で表されるポリマーキャリア分子：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
［式中、
Ｐ１及びＰ３は、互いに異なっているか又は同一であり、直鎖又は分枝鎖の親水性ポリマー鎖を表し、Ｐ１及びＰ３はそれぞれ、要素Ｐ２と縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも１個の−ＳＨ部分を提示し、前記直鎖又は分枝鎖の親水性ポリマー鎖は、互いに独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルデンプン、又はポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択され、前記親水性ポリマー鎖は、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量を示し、
Ｐ２は、アミノ酸約３個〜約１００個の長さを有するカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質であるか、又は
約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するカチオン性又はポリカチオン性のポリマーであり、
各Ｐ２は、他の要素Ｐ２、又は要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかと縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示し、
−Ｓ−Ｓ−は、（可逆的）ジスルフィド結合であり、
Ｌは、存在してもしなくてもよい任意のリガンドであり、他方のＬと独立して、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸塩、シグナルペプチド若しくはシグナル配列、局在化シグナル若しくは配列、核局在化シグナル若しくは配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞貫通ペプチド、ＴＡＴ、受容体のリガンド、サイトカイン、ホルモン、成長因子、小分子、炭水化物、マンノース、ガラクトース、合成リガンド、受容体の小分子のアゴニスト、阻害剤若しくはアンタゴニスト、及びＲＧＤペプチド模倣類似体から選択することができ、
ｎは、約１〜５０の範囲から選択され、好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲、より好ましくは約１、２、３若しくは４〜９の範囲にある整数である。］。
【請求項２】
前記ポリマーキャリア分子が更にアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを含み、ｘが約１〜１００の範囲から選択される整数である、請求項１に記載のポリマーキャリア分子。
【請求項３】
前記アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘが、芳香族アミノ酸要素、親水性アミノ酸要素、親油性アミノ酸要素、弱塩基性アミノ酸要素、シグナルペプチド、局在化シグナル若しくは配列、核局在化シグナル若しくは配列、細胞貫通ペプチド、治療活性を有するタンパク質若しくはペプチド、抗原若しくは抗原性エピトープ、腫瘍抗原、病原性抗原（動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原）、自己免疫性抗原若しくは更なる抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質若しくはペプチド、抗原特異的Ｔ細胞受容体、又は、特定の（治療）用途に適した他のタンパク質若しくはペプチドを含む、請求項２に記載のポリマーキャリア分子。
【請求項４】
前記アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘが、混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚとして存在し、ｚが約１〜３０の範囲から選択される整数である、請求項２又は３に記載のポリマーキャリア分子。
【請求項５】
式（Ｉ）が、次式（Ｉａ）：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
［式中、ｘ、ｚ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は上記に定義されたものであり、
ａ＋ｂ＝ｎであり、ただし、
ｎは上記に定義されたものであり、好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲にあり、
ａは、整数ｂとは独立して約１〜５０の範囲から選択される、好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲にある整数であり、
ｂは、整数ａとは独立して約１〜５０の範囲から選択される、好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲にある整数であり、
単一の要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］及び［Ｓ−（ＡＡ）Ｘ−Ｓ］が、前記下位式｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中に任意の順序で存在する。］
で表されるように改変される、請求項２から４のいずれかに記載のポリマーキャリア分子。
【請求項６】
要素Ｐ２が、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン又はスペルミジン、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、ポリアルギニン、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、キメラＣＰＰ、トランスポータン、又はＭＰＧペプチド、ＨＩＶ−結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ−由来ペプチド、オリゴアルギニン、ペネトラチンファミリーのメンバー、ペネトラチン、アンテナペディア由来ペプチド（特にドロソフィラ・アンテナペディア由来のもの）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなど、抗微生物剤由来ＣＰＰ、ブフォリン−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ−由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、高プロリン含量ペプチド、ロリゴマー（Ｌｏｌｉｇｏｍｅｒｅ）、高アルギニン含量ペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ヒストン、ＶＰ２２由来又は類似体ペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ又はタンパク質トランスダクションドメイン（ＰＴＤ）、ＰｐＴ６２０、高プロリン含量ペプチド、高リシン含量ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチドから選択されるカチオン性又はポリカチオン性ペプチドである、請求項１から５のいずれかに記載のポリマーキャリア分子。
【請求項７】
要素Ｐ２の−ＳＨ部分がシステインによって与えられる、請求項１から６のいずれかに記載のポリマーキャリア分子。
【請求項８】
要素Ｐ２が、式（ＩＩｂ）：
Ｃｙｓ｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝Ｃｙｓ
［式中、
ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、且つ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ及びＯｒｎの全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも１０％に相当するものとして、ｌ、ｍ、ｎ又はｏは、互いに独立して０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５から選択される任意の数であってよく、Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ又はＯｒｎを除く天然又は非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であってよく、ｘは、Ｘａａの全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の９０％を越えないものとして、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４から選択される任意の数であってよい。］のカチオン性ペプチドを含むペプチドから選択される、請求項１から７のいずれかに記載のポリマーキャリア分子。
【請求項９】
請求項１から８のいずれかに記載のポリマーキャリア分子と、核酸とから形成されるポリマーキャリアカーゴ複合体。
【請求項１０】
核酸が、本発明のポリマーキャリア分子：核酸のモル比が約５〜１０，０００となるように与えられる、請求項９に記載のポリマーキャリアカーゴ複合体。
【請求項１１】
核酸が、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、コーディング核酸、コーディングＤＮＡ、コーディングＲＮＡ、コーディングｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、免疫賦活性核酸、免疫賦活性ＣｐＧ核酸、又は免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）である、請求項９又は１０に記載のポリマーキャリアカーゴ複合体。
【請求項１２】
核酸が、治療活性を有するタンパク質若しくはペプチド、腫瘍抗原、病原性抗原、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原、自己免疫性抗原を含む抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質若しくはペプチド、又は抗原特異的Ｔ細胞受容体をコードする、請求項９から１１のいずれかに記載のポリマーキャリアカーゴ複合体。
【請求項１３】
請求項１から８のいずれかに記載のポリマーキャリア分子を調製する方法であって、
ａ）本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び請求項１〜８のいずれかに記載の要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーの少なくともいずれかと、場合により少なくとも１種類の他の要素（ＡＡ）ｘとを提供し、これらの要素を、好ましくは塩基性環境中、好ましくは酸素又は穏やかな酸化的条件を与える更なる開始剤の存在下で混合し、これにより、これらの要素を、縮合重合又は重縮合においてジスルフィド結合を介して互いに縮合及び重合することにより、繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はＨ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈを得る工程と、
ｂ）請求項１〜８のいずれかに記載のリガンドＬ及びアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの少なくともいずれかによって場合により修飾される、請求項１〜８のいずれかに記載の親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを提供する工程と、
ｃ）工程ｂ）にしたがって提供された親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを、工程ａ）にしたがって提供された繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はＨ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈと約２：１の比で混合し、通常、これにより縮合重合又は重縮合反応を停止させ、式（Ｉ）又は（Ｉａ）で表される本発明のポリマーキャリア分子を得る工程と、
ｄ）場合により、工程ｃ）にしたがって得られたポリマーキャリア分子を精製する工程と、
ｅ）場合により、本明細書において定義される核酸を、工程ｃ）又はｄ）にしたがって得られたポリマーキャリアに加え、前記核酸を、工程ｃ）又はｄ）にしたがって得られたポリマーキャリアと複合化することによって、請求項９から１２のいずれかに記載のポリマーキャリアカーゴ複合体を得る工程と、を含む方法。
【請求項１４】
請求項９から１２のいずれかに記載のポリマーキャリアカーゴ複合体と、場合により、薬学的に許容される担体及びビヒクルの少なくともいずれかとを含む、医薬組成物又はワクチン。
【請求項１５】
薬剤として使用するための、請求項１から８のいずれかに記載のポリマーキャリア分子、又は請求項９から１２のいずれかに記載のポリマーキャリアカーゴ複合体。
【請求項１６】
癌若しくは腫瘍疾患、感染症、好ましくは（ウイルス、細菌、又は原生動物による）感染症、自己免疫疾患、アレルギー若しくはアレルギー性疾患、単一遺伝子性疾患すなわち（遺伝性）疾患若しくは遺伝子疾患一般、遺伝的背景を有し、定義された遺伝子欠損によって一般に引き起こされ、メンデルの法則にしたがって遺伝する疾患、心血管疾患、神経疾患、呼吸器系の疾患、消化器系の疾患、皮膚の疾患、筋骨格障害、結合組織の疾患、新生物、免疫不全症、内分泌、栄養、及び代謝疾患、眼疾患及び耳疾患から選択される疾患の予防、治療、及び改善の少なくともいずれかにおいて使用するための、請求項９から１２のいずれかに記載の核酸を有する請求項１から８のいずれかに記載のポリマーキャリア分子、又は請求項９から１２のいずれかに記載のポリマーキャリアカーゴ複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボ及びインビトロで核酸を細胞内に効率的にトランスフェクトすることを可能にする、一般式（Ｉ）の本発明のポリマーキャリア分子及びその変形、核酸と本発明のポリマーキャリア分子とによって形成されたポリマーキャリアカーゴ複合体に関し、更に、こうした本発明のポリマーキャリア分子及び本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の調製法に関する。本発明は、また、様々な疾患の治療用の薬剤として、更にこうした疾患の治療用の医薬組成物の調製において、この本発明のポリマーキャリア分子及び本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体を応用、並びに使用する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
今日、様々な疾患がペプチド、タンパク質、及び核酸ベースの薬剤を投与する治療、特に細胞又は組織内への核酸のトランスフェクションを行う治療を必要としている。ペプチド、タンパク質、及び核酸ベースの薬剤の完全な治療上の有効性は、これらの薬剤が哺乳動物細胞の細胞膜を通過する能力が限定されていることによりしばしば制限され、細胞への低い到達性及び不充分な治療効果につながる。今日、このハードルは、多くの生物製剤の生物医学的開発及び商業的成功にとって大きな課題となっている（例えば、非特許文献１を参照）。
【０００３】
特定の疾患及び障害に対し、こうした治療の具体的な形態として遺伝子治療的アプローチが開発されてきた。これらの治療は一般に細胞又は組織内への核酸又は遺伝子のトランスフェクションを利用したものであるが、遺伝子治療的アプローチは更に、例えば、遺伝性疾患などの疾患を治療するためにこれらの核酸又は遺伝子の１以上を患者の細胞及び組織内に挿入するものであり、機能不全の突然変異対立遺伝子が機能する対立遺伝子に置き換えられる。
【０００４】
しかしながら、患者の細胞内への１以上のこれらの核酸又は遺伝子の導入又は挿入は、今日、依然として大きな課題であり、特に遺伝子治療の分野における核酸ベースの薬剤の高い治療効果を確実なものとするうえで必要不可欠である。
【０００５】
患者の細胞内に核酸又は遺伝子を効果的に導入するためには、多くの種々のハードルを通過しなければならない。核酸の輸送は、核酸と細胞膜との結合に続く、エンドソームによる取り込みによって一般的に起こる。エンドソーム内において、導入された核酸は、細胞質基質から分離されている。発現は、細胞質基質中で起こるため、これらの核酸は、細胞質基質から離れなければならない。核酸が細胞質基質からうまく離れられなければ、エンドソームがリソソームと融合してその内容物が分解されるか、あるいはエンドソームが細胞膜と融合してその内容物が細胞外媒質中に戻されてしまう。したがって核酸が効率的に導入されるためには、トランスフェクション自体の効率に加えて、エンドソーム脱出が重要なステップの１つであると考えられる。これまでに、これらの課題を解決する異なるアプローチが存在している。しかしながらいずれのアプローチもあらゆる点において少なくとも効果的と言えるものではなかった。
【０００６】
今日、当該技術分野において使用されているトランスフェクション物質としては、ペプチド、異なるポリマー、脂質に加えて、ナノ及びマイクロ粒子がある（例えば、非特許文献２を参照）。これらのトランスフェクション物質は、インビトロの反応においてのみ効果的に使用されてきた。生きた動物の細胞にインビボで核酸をトランスフェクトする場合には、更なる必要条件が満たされなければならない。一例として、複合体が生理食塩水中で凝集に対して安定的でなければならない。更に、複合体がホストの補体系の一部と反応しないことである。更に、複合体が、普遍的に存在するヌクレアーゼによる早期の細胞外分解から核酸を保護することである。更に、遺伝子治療用途では、キャリアが獲得免疫系によって認識されず（免疫原性）、非特異的なサイトカインストームを誘発しない（急性免疫応答）ことが極めて重要である（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献１を参照）。
【０００７】
非特許文献１は、ペプチド、タンパク質及び核酸ベースの薬剤の治療上の有効性について考察している。著者らの分析によれば、これらの薬剤の完全な治療上の有効性は、これらの薬剤の限定された哺乳動物細胞の細胞膜の通過能力によりしばしば制限され、細胞への低い到達性及び不充分な治療効果につながっている。今日、このハードルは、多くの生物製剤の生物医学的開発及び商業的成功にとって大きな課題となっている。
【０００８】
この文脈において、Ｇａｏら（非特許文献４）は、遺伝子治療の主要な課題は、適当な遺伝子発現が得られる選択された細胞に治療用遺伝子を送達する方法の開発にあるとしている。しかしながら、細胞又は組織内への遺伝子の送達、特に核酸の効果的なトランスフェクションは単純ではなく、一般に多くの因子に依存している。例えば、細胞又は組織内に核酸又は遺伝子を送達する場合に有効な送達を行うためには、多くの障壁を乗り越えなければならない。Ｇａｏら（非特許文献４）によれば、理想的な遺伝子送達法は、（１）細胞内マトリクスにおけるヌクレアーゼによる分解から導入遺伝子を保護しなければならない、（２）導入遺伝子を細胞膜に通過させなければならない、（３）副作用を一切有してはならない、の３つの基準を満たす必要がある。
【０００９】
これらの目標は、異なる化合物又はベクターの組み合わせを用いることによって達成することができる。これらの障壁の少なくとも一部のものを乗り越える特定の化合物又はベクターが存在する点は注目に値する。
【００１０】
最も一般的には、例えば核酸のトランスフェクションは、ウイルス又は非ウイルスベクターを用いて行われる。効果的な送達を行うためには、これらのウイルス又は非ウイルスベクターは、上記に述べた障壁を乗り越えることができるものでなければならない。今日、利用可能な最も有効な遺伝子治療法は、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、及びヘルペスウイルスなどのウイルスベクターの使用に頼ったものである。ウイルスベクターは、高い効率で、長期的な遺伝子発現の可能性のある遺伝子導入を媒介することが可能であり、３つの基準の内、２つを満たすものである。しかしながら、遺伝子治療の臨床試験において明らかとなった、急性免疫応答、免疫原性、及び挿入突然変異誘発性は、一部の一般的に用いられているウイルスベクターについて、深刻な安全上の懸念をもたらしている。
【００１１】
この問題に対する解決策は、非ウイルスベクターの使用に見出すことができる。非ウイルスベクターはウイルスベクターほどには効率的ではないものの、多くの非ウイルスベクターが、遺伝子治療におけるより安全な代替手段を与えるために開発されている。物理的（無キャリア遺伝子送達）及び化学的アプローチ（人工ベクターに基づいた遺伝子送達）を用いた非ウイルス遺伝子送達の方法が模索されている。物理的アプローチには通常、針による注入、電気穿孔法、遺伝子銃、超音波、及び流体力学的送達法が含まれ、細胞膜を透過する物理的な力を利用して、細胞内への遺伝子導入を促進する。化学的アプローチは、一般的に合成又は天然化合物（カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、脂質／ポリマーハイブリッドシステム）を、細胞内に導入遺伝子を送達するキャリアとして使用する。様々な非ウイルス遺伝子送達システムの基礎科学及びその応用において著しい進歩がなされたものの、非ウイルス的なアプローチの大半は、特にインビボでの遺伝子送達ではウイルスベクターよりも依然として大幅に効率が低いものである（例えば、非特許文献４を参照）。
【００１２】
過去１０年にわたって、タンパク質トランスダクションドメイン（ＰＴＤ）とも呼ばれる、いわゆる細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）と核酸との物理的アセンブリ又は化学的連結に起因するとされる、核酸の細胞送達における大幅な改善の魅力的な展望が提唱されている（非特許文献１を参照）。ＣＰＰは、哺乳動物の細胞膜を通過することが可能であり、これにより細胞薬物送達のための先例のない機会を与える可能性がある１０個〜約３０個の短いペプチド配列を表す。これらのペプチドのほとんどすべては、一連のカチオン性アミノ酸と、低いｐＨでα螺旋を形成する特定の配列との組み合わせを有している。インビボでｐＨがプロトンポンプによって連続的に低下すると、ペプチドのコンホメーション変化が通常、速やかに開始される。この螺旋モチーフは、エンドソームの膜内への挿入を媒介し、細胞質中にその内容物が放出される（非特許文献１及び非特許文献５を参照）。これらの利点にもよらず、ＣＰＰにより媒介される薬物送達の主要な障害は、上皮及び内皮の酵素障壁と接触又はこれを通過する際のしばしば急速なペプチドの代謝クリアランスにあるものと考えられる。結論として、ＣＰＰの代謝安定性は、細胞におけるＣＰＰのバイオアベイラビリティーの重要な生物製剤上の因子である。しかしながら、一方で代謝的に切断される前に標的にカーゴを運搬するだけの充分な安定性を有し、他方で、蓄積して有毒なレベルに達する前に組織から除去されうるようなＣＰＰは当該技術分野では存在していない。
【００１３】
例えば遺伝子治療を行うために細胞内にカーゴ分子を送達するための当該技術分野における更なるアプローチの１つにペプチドリガンドがある（Ｍａｒｔｉｎ及びＲｉｃｅ（非特許文献６）を参照）。ペプチドリガンドは、癌細胞を標的化するために用いられるＥＧＦペプチドのように、受容体認識に必要な不可欠なアミノ酸に相当する、より大きなタンパク質から得られる短い配列であってよい。レクチン様酸化ＬＤＬ受容体（ＬＯＸ−１）を標的化するために用いられるリガンドを含む他のペプチドリガンドも特定されている。内皮細胞におけるＬＯＸ−１の発現上昇は、高血圧及びアテローム性動脈硬化などの機能不全状態と関連している。しかしながらこうしたペプチドリガンドは、複合化又は接着によってカーゴ分子と結合させることができず、例えば、細胞内で細胞毒性効果を一般的に示す架橋剤による共有結合を必要とすることから多くの遺伝子治療アプローチには適していない。
【００１４】
例えば遺伝子治療を目的として細胞内にカーゴ分子を送達するために当該技術分野では人工ベクターを使用することもできる。しかしながら、多くの人工ベクターの主要な問題点の１つとして、ウイルスベクターと比較した場合の低いトランスフェクション効率があり、更なる臨床開発を可能とするうえで大幅な改善が求められる。インビトロ及びインビボの両方において核酸の導入を制限する幾つかの障壁が特定されており、こうした障壁として低い細胞内送達性、毒性、及び生理的条件下におけるベクターの不安定性が挙げられる（例えば、非特許文献７を参照）。
【００１５】
遺伝子治療における特定のアプローチの１つに、カチオン性脂質を使用するものがある。しかしながら、多くのカチオン性脂質は細胞培養中では優れたトランスフェクション活性を示すものの、血清の存在下では多くは効果的に機能せず、インビボで活性を示すものはごく少数である。リポプレックスが、血液、上皮被覆粘液、又は組織マトリクス中に存在する、大量の負に帯電したしばしば両親媒性であるタンパク質及び多糖類に曝露されると、サイズ、表面電荷及び脂質の組成に劇的な変化が生じる。リポプレックスはインビボで投与されると負に帯電した血液成分と相互作用し、循環する赤血球細胞の表面に吸着されたり、厚い粘膜層内に捕捉されたり、あるいは微小血管内に塞栓を形成して、末端部位の目標とする標的細胞にリポプレックスが到達することを妨げる大きな凝集体を形成する傾向を有する。更に、リポプレックスによる遺伝子導入に関連した毒性が観察されている。症状としては特に炎症性サイトカインの誘導が挙げられる。ヒトでは、インフルエンザ様の症状を含む様々な程度の有害な炎症反応が、リポプレックスを投与した患者で認められている。したがって、リポプレックスをヒトに実際に安全に使用することが可能であるかについては疑問の余地がある。
【００１６】
遺伝子治療における更に有望なアプローチの１つは、カチオン性ポリマーを使用するものである。カチオン性ポリマーは、負に帯電した核酸を緊密に複合化及び凝縮することができるため、核酸のトランスフェクションにおいて効率的であることが分かっている。このため、多くのカチオン性ポリマーが、インビトロ及びインビボでの遺伝子送達用のキャリアとして模索されている。こうしたカチオン性ポリマーとしては、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリアミドアミン及びポリプロピルアミンのデンドリマー、ポリアリルアミン、カチオン性デキストラン、キトサン、カチオン性タンパク質、及びカチオン性ペプチドがある。多くのカチオン性ポリマーは、ＤＮＡを小粒子に凝縮し、細胞表面上のアニオン性部位との電荷−電荷相互作用によりエンドサイトーシスによる細胞への取り込みを促進する機能を共通して有しているが、それらのトランスフェクション活性及び毒性は大きく異なっている。興味深い点として、カチオン性ポリマーは、負に帯電した核酸カーゴが強力に複合化されるため、分子量が増大するにしたがって高いトランスフェクション効率を示す。しかしながら、分子量が増大するにしたがってカチオン性ポリマーの毒性も高くなる。ＰＥＩは恐らく、遺伝子送達用としては最も活性が高く、且つ最も深く研究されたポリマーであるが、トランスフェクション試薬としてのその主な問題点は、その非生体分解性の性質及び毒性と関連している。更に、高分子量のポリマーによって形成されたポリプレックスは生理的条件下で高い安定性を示すものの、データはこれらのポリマーがベクターのアンパッキングを妨げうることを示している。例えば、１９及び３６残基のポリ（Ｌ−リシン）（ＰＬＬ）残基は、１８０残基のＰＬＬよりもより速やかにＤＮＡから解離することにより、大幅に高い短期の遺伝子発現を示すことが示されている。受容体により媒介される遺伝子発現における活性を有する構造にＤＮＡを圧縮するには最低で６〜８個の長さのカチオン性アミノ酸が必要とされる。しかしながら、短いポリカチオンで形成されたポリプレックスは生理的条件下で不安定であり、通常は生理食塩水中で速やかに凝集する。この負の影響を克服するため、Ｒｅａｄら（非特許文献７及び非特許文献８を参照）は、細胞内環境によって切断されることによって核酸の放出を促進する、ペプチドＣｙｓ−Ｌｙｓ１０−Ｃｙｓの酸化的重縮合によって調製された直鎖状の還元性ポリカチオン（ＲＰＣ）に基づいた新しいタイプの人工ベクターを開発した。Ｒｅａｄらは、ＲＰＣによって形成されたポリプレックスが還元的条件によって不安定化し、ＤＮＡ及びｍＲＮＡの効率的な放出が可能となることを示した。ＲＰＣの切断はまた、ポリカチオンの毒性を低分子量のペプチドと同等のレベルにまで低下させた。Ｒｅａｄら（非特許文献７）のこのアプローチの問題点は、トランスフェクション効率を適当なレベルにまで高めるためにはエンドソーム溶解剤であるクロロキン又はカチオン性の液体であるＤＯＴＡＰを更に必要とする点である。このため、Ｒｅａｄら（非特許文献８）は、エンドソーム緩衝作用を有することが知られるヒスチジン残基をＲＰＣに加えた。Ｒｅａｄらは、高ヒスチジン含量のＲＰＣが細胞内の還元的環境によって切断され、エンドソーム溶解剤であるクロロキンを必要とすることなく、プラスミドＤＮＡ、ｍＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ分子などの広範な核酸の効率的な細胞質への送達を可能とすることを示した。
【００１７】
残念なことに、Ｒｅａｄら（非特許文献８）は高ヒスチジン含量ＲＰＣがインビボでの応用に直接使用可能かどうかについては評価を行っていない。Ｒｅａｄらの実験では、血清タンパク質がポリプレックスと結合することによって細胞による取り込みが制限されることで遺伝子導入を高めるヒスチジン残基の能力がマスキングされないように血清の非存在下で遺伝子導入を行っている。予備実験によって、高ヒスチジン含量ＲＰＣポリプレックスのトランスフェクション特性が血清タンパク質の存在によって影響されることが示され、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）中でＧＦＰ陽性細胞の５０％の低下が観察された。インビボでの応用について、Ｒｅａｄらは、親水性ポリマーであるポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシ−プロピル）メタクリルアミド］による修飾を提案している。残念なことに、Ｒｅａｄら（非特許文献８）は、ポリプレックスの凝集及びポリカチオン性タンパク質の血清タンパク質との結合は防止していない。更に、高いＮ／Ｐ比によって特徴付けられるポリマーの過剰により、核酸を複合化する際に強カチオン性の複合体が形成されるが、これは塩誘導凝集を起こしやすく、血清成分と相互作用しやすい（オプソニン化）ことから、インビボでの使用は限定されている。更にこれらの複合体は、遺伝子治療の目的で使用される場合に急性免疫応答を引き起こす可能性がある。Ｒｅａｄら（非特許文献７）は、文献に示されたＲＰＣに基づく複合体についてのインビボのデータも示していない。これらの強カチオン性のＲＰＣに基づいた複合体は、皮膚内への局所投与後には完全に不活性であることも明らかとなっている。更にＲｅａｄら（非特許文献８）は、ストリンジェントな酸化的条件（３０％ＤＭＳＯ）を用いて、核酸カーゴの完全な複合化を確実に行うために、可能なかぎり長い鎖長を有する高分子量ポリマーの生成（段階成長重合）を誘導している。
【００１８】
Ｒｅａｄらと同様のアプローチにおいて、ＭｃＫｅｎｚｉｅら（非特許文献９、非特許文献１０及び特許文献１）は、高分子量ポリカチオンに観察されるような毒性を低減する目的で、複数のシステインを短い合成ペプチドに挿入することによって遺伝子送達物質としての自己架橋性ペプチドを開発している。ＤＮＡを複合化するため、ＭｃＫｅｎｚｉｅらは、自己架橋性ペプチドをＤＮＡと混合することでＤＮＡカーゴを複合化すると同時にペプチド間にジスルフィド結合を誘導した。インビボでの遺伝子導入アプローチにおいて、ＭｃＫｅｎｚｉｅらは、ペプチドのそれぞれの末端から遠位の部位に作用可能に結合されたステルス化（例えばポリエチレングリコール）又は標的化物質による自己架橋性ペプチドの誘導体化を提案している。更なるアプローチにおいて、同著者らは、ＤＮＡペプチド凝縮体をマスキングし、これにより血液成分との相互作用を低減する目的で、還元性又は非還元性結合による非架橋性カチオン性ペプチドＣＷＫ１８のポリエチレングリコールによる誘導体化を開発している（非特許文献１１）。
【００１９】
上記をまとめると、上記に例示した現在の先行技術は様々な問題点を有している。Ｒｅａｄら（非特許文献７）及びＭｃＫｅｎｚｉｅら（非特許文献９、非特許文献１０及び特許文献１）により述べられるような自己架橋性ペプチドの特定の問題点の１つは、形成された粒子の表面上の高い正電荷に関するものである。高い正電荷のため、これらの粒子をインビボで高い塩濃度に曝露すると粒子は凝集する方向に高い不安定性を示す。しかしながらこのような塩濃度は、インビボで細胞又は細胞外媒質中で一般的に生ずるものである。更に、高い正電荷に帯電した複合体は強いオプソニン化の傾向を示す。これは、マクロファージによる取り込みの増加、及び更には、分解による複合体の速やかな不活性化につながる。特に、免疫系の細胞によるこれらの複合体の取り込みは、一般に、異なるサイトカインの下流刺激を導く。しかしながら、この自然免疫系の非特異的な活性化はこれらのシステムの深刻な問題を表しており、急性免疫応答（サイトカインストーム）が厳密に避けられるべき遺伝子治療の幾つかの側面の目的において特に避けられるべきである。また、生体系においては、正電荷に帯電した複合体は、細胞外マトリックス又は血清の負電荷に帯電した成分により容易に結合又は固定化される。更に、複合体中の核酸が早期に放出され、導入効率が低くなり、インビボでの複合体の半減期が短くなる可能性がある。更に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの、インビボ遺伝子送達において有用であるステルス化剤によるキャリアの可逆的な誘導体化は、ペプチドモノマーでのみ可能であり、自己架橋性ペプチドでは可能ではないが、所定のポリマー鎖長を有するポリマーキャリアでむしろ可能である。特に、このような可逆的な誘導体化は、架橋したカチオン性ペプチドキャリアの末端では可能ではない。更に、従来技術では、長いポリマー鎖を有するかあるいは自己架橋性ペプチドからなる不確定のポリマー鎖長を有する高分子量ポリマーのみについて述べられており、残念なことにこれらによるカーゴの圧縮度では、細胞中でのカーゴの放出は限定されている。このように極端に不確定のポリマー鎖長は、ＲＰＣに基づく薬剤の承認の点で更に問題がある。ある薬剤の承認のための前提条件の１つとして、その薬剤のすべての製剤が常に同じ組成、同じ構造、及び同じ性質を有することがある。この点は、従来技術のＲＰＣに基づいた複合体では確実ではない。更に、従来技術で提供されるＲＰＣに基づいたポリマー又は複合体は、その不確定な構造又はポリマー鎖長のために特性評価が困難である。しかし、薬剤の承認には、得られる複合体又はポリマーキャリアの特性評価が絶対に必要である。
【００２０】
結果として、例えば、自己架橋性ポリマーによる核酸の可逆的複合化と可逆的ステルス化とを組み合わせることによって、高いトランスフェクション活性と、特にインビボにおける核酸カーゴの高い放出性、及び低い毒性又は更には無毒性との組み合わせを示す、遺伝子治療及び他の治療的応用の目的で核酸を圧縮及び安定化することを可能とする実現可能な方法又はキャリアは今日に到るまで提供されていない。したがって、当該技術分野にあっては、一方で代謝的に切断される前にカーゴを標的に運搬するだけの充分な安定性を有し、他方で蓄積により毒性レベルに達する前に組織から除去されうる、遺伝子導入を目的としたキャリアが提供されることが依然、強く望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】米国特許第６，７７０，７４０  Ｂ１号明細書
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  （ｗｗｗ．ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ．ｗｉｌｅｙ．ｃｏｍにてオンライン上で公開）  ２００８，  ９７（１）：  １４４−６２）
【非特許文献２】Ｇａｏ，  Ｘ．，  Ｋ．  Ｓ．  Ｋｉｍ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００７），  Ａａｐｓ  Ｊ  ９（１）：  Ｅ９２−１０４
【非特許文献３】Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．  Ｅ．  ａｎｄ  Ｋ．  Ｇ．  Ｒｉｃｅ  （２００７），  Ａａｐｓ  Ｊ  ９（１）：  Ｅ１８−２９
【非特許文献４】Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；  ９（１）  Ａｒｔｉｃｌｅ  ９
【非特許文献５】Ｖｉｖｅｓ，  Ｅ．，  Ｐ．  Ｂｒｏｄｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）．“Ａ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ＨＩＶ−１  Ｔａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂａｓｉｃ  ｄｏｍａｉｎ  ｒａｐｉｄｌｙ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅｕｓ．”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（２５）：  １６０１０−７
【非特許文献６】Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｒｉｃｅ，  Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；  ９  （１）  Ａｒｔｉｃｌｅ  ３
【非特許文献７】Ｒｅａｄ，  Ｍ．  Ｌ．，  Ｋ．  Ｈ．  Ｂｒｅｍｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）．  “Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．”  Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ  ５（３）：  ２３２−４５
【非特許文献８】Ｒｅａｄ，  Ｍ．  Ｌ．，  Ｓ．  Ｓｉｎｇｈ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）．  “Ａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｂｒｏａｄ  ｒａｎｇｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．”  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３（９）：  ｅ８６
【非特許文献９】ＭｃＫｅｎｚｉｅ，  Ｄ．  Ｌ．，  Ｋ．  Ｙ．  Ｋｗｏｋ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００），  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（１４）：  ９９７０−７．
【非特許文献１０】ＭｃＫｅｎｚｉｅ，  Ｄ．  Ｌ．，  Ｅ．  Ｓｍｉｌｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０００），  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １１（６）：  ９０１−９
【非特許文献１１】Ｋｗｏｋ，  Ｋ．  Ｙ．，  Ｄ．  Ｌ．  ＭｃＫｅｎｚｉｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）．  “Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）−ｐｅｐｔｉｄｅ  ＤＮＡ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅｓ．”  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８８（１０）：  ９９６−１００３．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
したがって、本発明の基礎をなす目的は、遺伝子治療又は他の治療的応用を目的とした、特に核酸のトランスフェクションのためのキャリア又は複合化物質であって、核酸、好ましくはコーディングＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのコーディングＲＮＡを圧縮することが可能であり、インビトロでの異なる細胞株への核酸の効率的なトランスフェクションを可能とするばかりでなく、インビボでのトランスフェクションをも可能とするようなキャリア又は複合化物質を提供することにある。細胞による取り込みがエンドソーム経路を介して起こる際に、こうしたキャリア又は複合化物質は、核酸の効率的な放出を許容する、又は可能とするものでよい。更に、核酸カーゴ及びこうしたキャリア又は複合化物質によって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は、凝集に対して向上した耐性を示すことが好ましい。本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は更に、核酸カーゴに、血清を含む培地に対する高い安定性を与えるものであることが好ましい。最も重要な点としては、インビボ活性が得られることにより、急性免疫応答が少なくとも部分的に抑制されることである。更に、キャリアの再現性のある製造及び特性評価が確実なものとされる必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
この目的は、本発明の主題、好ましくは添付の特許請求の範囲の主題によって解決される。詳細には、本発明の第１の態様に基づけば、上記の目的は、一般式（Ｉ）で表されるポリマーキャリア分子によって解決される。
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
式中、
Ｐ１及びＰ３は、互いに異なっているか又は同一であり、直鎖又は分枝鎖の親水性ポリマー鎖を表し、Ｐ１及びＰ３はそれぞれ、要素Ｐ２と、又は、要素（ＡＡ）Ｘ若しくは［（ＡＡ）Ｘ］ＺがＰ１とＰ２との間、又はＰ３とＰ２との間のリンカーとして用いられる場合には（ＡＡ）Ｘ若しくは［（ＡＡ）Ｘ］Ｚと、及び／又は、他の要素（例えば（ＡＡ）Ｘ、［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ又はＬ）と縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも１個の−ＳＨ部分を提示し、前記直鎖又は分枝鎖の親水性ポリマー鎖が、互いに独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルデンプン、又はポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択され、前記親水性ポリマー鎖は、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、好ましくは約２ｋＤａ〜約２５ｋＤａ、又はより好ましくは約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、例えば約５ｋＤａ〜約２５ｋＤａ、又は約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの分子量を示し、
Ｐ２は、好ましくはアミノ酸約３個〜約１００個の長さを有し、より好ましくはアミノ酸約３個〜約５０個の長さを有し、更により好ましくはアミノ酸約３個〜約２５個の長さ、例えばアミノ酸約３個〜１０個、５個〜１５個、１０個〜２０個、又は１５個〜２５個の長さ、より好ましくは約５個〜約２０個の長さ、更により好ましくは約１０個〜約２０個の長さを有するカチオン性又はポリカチオン性のペプチド又はタンパク質であり、
約１ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、更に好ましくは約１．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの分子量のように約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を一般的に有する、又は、約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、更により好ましくは約１０ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量のように約０．５ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量を有するカチオン性又はポリカチオン性のポリマーであり、
各Ｐ２は、他の要素Ｐ２又は要素Ｐ１及び／又はＰ３と、又は他の要素（例えば（ＡＡ）Ｘ若しくは［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ）と縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示し、
−Ｓ−Ｓ−は、（可逆的）ジスルフィド結合（読みやすさのために括弧は省略する）であり、ただし、Ｓは、（可逆的）ジスルフィド結合を形成した好ましくは硫黄又は−ＳＨを有する部分を表す。（可逆的）ジスルフィド結合は、要素Ｐ１及びＰ２、Ｐ２及びＰ２、又はＰ２及びＰ３のいずれかの、又は場合により本明細書において（例えばＬ、（ＡＡ）Ｘ又は［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ））として定義される他の要素の−ＳＨ部分の縮合によって形成されることが好ましい。−ＳＨ部分は、これらの要素の構造の一部であってもよく、あるいは下記に定義されるような修飾によって付加されてもよい。
Ｌは、存在してもしなくてもよい任意のリガンドであり、他方のＬと独立して、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸塩、シグナルペプチド又はシグナル配列、局在化シグナル又は配列、核局在化シグナル又は配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞貫通ペプチド（例えばＴＡＴＡ又はＫＡＬＡ）、受容体のリガンド（例えばサイトカイン、ホルモン、成長因子など）、小分子（例えばマンノース若しくはガラクトースなどの炭水化物、又は合成リガンド）、受容体の小分子のアゴニスト、阻害剤又はアンタゴニスト（例えばＲＧＤペプチド模倣類似体）などから選択することができる。
ｎは、例えば、約４〜９、４〜１０、３〜２０、４〜２０、５〜２０若しくは１０〜２０の範囲、又は約３〜１５、４〜１５、５〜１５若しくは１０〜１５の範囲、又は約６〜１１若しくは７〜１０の範囲のように、約１〜５０の範囲から、好ましくは約１、２若しくは３〜３０の範囲から、より好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜２５の範囲から、又は約１、２、３、４若しくは５〜２０の範囲から、又は約１、２、３、４若しくは５〜１５の範囲から、又は約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲から一般的には選択される整数である。最も好ましくは、ｎは、約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲、より好ましくは約１、２、３若しくは４〜９の範囲、約１、２、３若しくは４〜８の範囲、又は約１、２、若しくは３〜７の範囲にある。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
一般式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア分子は、新たな合成法によって調製され、ポリマー鎖の長さを規定し、異なる（短い）ポリマーの所望の性質を１つのポリマーに組み合わせることを可能とする有利なものであり、例えば、活性を失うことなく、遺伝子治療又は他の治療上の応用の目的での核酸の効率的なトランスフェクション、特にインビトロでの異なる細胞株への核酸の効率的なトランスフェクションばかりでなく、インビボでのトランスフェクションを行う目的で核酸を効率的に圧縮することを可能とするようなものである。更に本発明のポリマーキャリア分子は、細胞に対する毒性を有さず、その核酸カーゴの効率的な放出を可能とするものである。最後に、本発明のポリマーキャリア分子は、特に一般式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア分子の末端に親水性ポリマー鎖（例えばＰＥＧモノマー）が可逆的に付加することによる凝集に対して高い耐性を示し、これにより血清を含む培地に対する高い安定性が核酸カーゴに更に与えられ、免疫系によってポリマーキャリアカーゴ複合体が認識されることが防止される。
【００２６】
更により有利な点として、一般式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア分子は、例えば要素Ｐ２として同じか又は異なるカチオン性ペプチド、タンパク質またはポリマーを組み込み、場合により例えばアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのような他の要素を繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］内に付加することによって本発明のポリマーキャリアのコアモチーフとして｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝のような改変された繰り返し要素（ただしａ＋ｂ＝ｎ、下記参照）を形成することにより、そのペプチド及びポリマー含量を大幅に変化させ、これによりその生物物理的／生物化学的特性、特に要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎのカチオン特性を極めて容易且つ速やかに調節することを可能とするものである。本発明のポリマーキャリア分子は、極めて小さい無毒性モノマー単位からなるものの、所定の鎖長を有するカチオン性結合配列を形成することにより、核酸カーゴの強力な圧縮性及び複合体の安定性を与えるものである。細胞質基質（例えば細胞質基質ＧＳＨ）の還元的条件下では、複合体はモノマーに速やかに分解され、モノマーは更に分解される（例えばオリゴペプチド）か、又は分泌される（例えばＰＥＧ）。これは、細胞質基質中での核酸カーゴの脱遊離を支持するものである。細胞質基質中で小さなオリゴペプチドに分解されるため、例えば高分子量オリゴアルギニンのような高分子量のオリゴペプチドについて知られるような毒性は認められない。ＰＥＧ−「コーティング」は、ポリマーキャリアをその末端において親水性コーティングによってある意味「コーティング」することを可能とするものであり、これにより塩により媒介される凝集及び血清成分との望ましくない相互作用が防止される。細胞質基質中では、この「コーティング」は細胞の還元的条件下で容易に除去される。また、この効果は細胞質基質中における核酸カーゴの脱遊離を促進する。
【００２７】
上記に述べたように、場合により、リガンド（Ｌ）を、例えば本発明のキャリアポリマー及びその複合化された核酸を特定の細胞内に導入するために、一般式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア分子において使用することができる。リガンド（Ｌ）は、他とは独立して、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸塩、シグナルペプチド又はシグナル配列、局在化シグナル又は配列、核局在化シグナル又は配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞貫通ペプチド（例えばＴＡＴ）、受容体のリガンド（例えばサイトカイン、ホルモン、成長因子など）、小分子（例えばマンノース若しくはガラクトースなどの炭水化物、又は合成リガンド）、受容体の小分子のアゴニスト、阻害剤又はアンタゴニスト（例えばＲＧＤペプチド模倣類似体）などから選択することができる。この文脈において特に好ましいのは細胞膜上にマンノース受容体を有する抗原提示細胞を標的化するためのリガンドとしてのマンノースである。本発明の第１の実施形態の更なる好ましい態様では、肝細胞を標的化するために場合により用いられるリガンドとしてガラクトースを用いることができる。こうしたリガンドは、下記に定義するような可逆的ジスルフィド結合によって、又は、例えばアミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えばマレインイミド部分、α，β不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えばアジド又はアルキン）によって、アルケン／アルキンメタセシス反応（例えばアルケン又はアルキン）によって、イミン若しくはヒドロゾン形成（アルデヒド又はケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合化反応（アビジン、ビオチン、タンパク質Ｇ）、又はＳｎ型の置換反応を可能とする要素（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）又は他の要素の結合に使用することが可能な他の化学部分などの他の任意の可能な化学的結合によって、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかに結合させることができる。
【００２８】
本発明の式（Ｉ）に関連して、要素Ｐ１及びＰ３は、少なくとも１個の−ＳＨ部分を有する直鎖又は分枝鎖の親水性ポリマー鎖を表し、Ｐ１及びＰ３はそれぞれ互いに独立して、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、又はポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択される。Ｐ１及びＰ３は、互いに同じでも異なってもよい。好ましくは、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれは、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、好ましくは約１ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、より好ましくは約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、更により好ましくは約５ｋＤａ〜約２５ｋＤａの分子量を示す。更に、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれは少なくとも１個の−ＳＨ部分を一般的に提示し、ただし該少なくとも１個の−ＳＨ部分は、下記に定義されるようなＰ１とＰ２との間、又はＰ２とＰ３との間のリンカーとして用いられる場合、要素Ｐ２又は要素（ＡＡ）Ｘと、更に、場合により、例えば２個以上の−ＳＨ部分が含まれる場合には例えばＬ及び（ＡＡ）Ｘの少なくともいずれかのような他の要素と縮合してジスルフィド結合を形成することが可能である。上記一般式（Ｉ）の以下の下位式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」及び「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」（読みやすさのために括弧は省略する）（式中、Ｓ、Ｐ１及びＰ３はいずれも本明細書で定義されるもの）は、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の１個の−ＳＨ部分が、上記一般式（Ｉ）の要素Ｐ２の−ＳＨ部分と縮合し、これらの−ＳＨ部分の両方の硫黄原子が本明細書において式（Ｉ）に定義されるようなジスルフィド結合−Ｓ−Ｓ−を形成している特定の状況を典型的に表している。これらの−ＳＨ部分は、例えば内部のシステイン、又は−ＳＨ部分を有する任意の更なる（修飾）アミノ酸又は化合物を介して、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれによって一般的に与えられる。したがって、下位式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」及び「Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ３」は、−ＳＨ部分がシステインによって与えられる場合には、用語Ｃｙｓ−Ｃｙｓがペプチド結合ではなくジスルフィド結合によって結合した２個のシステインを表すものとして「Ｐ１−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２」及び「Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ３」と書き表すこともできる。この場合、これらの式における用語「−Ｓ−Ｓ−」は、「−Ｓ−Ｃｙｓ」として、「−Ｃｙｓ−Ｓ」として、又は「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」として書き表すこともできる。この文脈において、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、ペプチド結合ではなく、ジスルフィド結合を形成するそれぞれの−ＳＨ部分を介した２個のシステインの結合を表す。したがって、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、この特定の場合ではＳがシステインの−ＳＨ部分の硫黄を示すものとして、「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｓ−Ｃｙｓ）−」として一般的に理解することもできる。同様に用語「−Ｓ−Ｃｙｓ」及び「−Ｃｙｓ−Ｓ」は、−ＳＨを有する部分とシステインとの間のジスルフィド結合を示し、「−Ｓ−（Ｓ−Ｃｙｓ）」及び「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−Ｓ」として書き表すこともできる。また、親水性ポリマーＰ１及びＰ３は、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれが少なくとも１個のこうした−ＳＨ部分を有するように好ましくは−ＳＨ部分を有する化合物との化学反応を介して−ＳＨ部分によって修飾されてもよい。−ＳＨ部分を有するこうした化合物は、例えば（更なる）システイン又は、−ＳＨ部分を有する任意の更なる（修飾）アミノ酸であってよい。こうした化合物は、−ＳＨ部分を有するか、あるいは本明細書において定義されるような親水性ポリマーＰ１及びＰ３に−ＳＨ部分を導入することを可能とする任意の非アミノ化合物又は部分であってもよい。こうした非アミノ化合物は、例えば３−チオプロピオン酸又はチオイモランの結合によって、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えばマレインイミド部分、α，β不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えばアジド又はアルキン）によって、アルケン／アルキンメタセシス反応（例えばアルケン又はアルキン）によって、イミン若しくはヒドロゾン形成（アルデヒド又はケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合化反応（アビジン、ビオチン、タンパク質Ｇ）、又はＳｎ型の置換反応を可能とする要素（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）又は他の要素の結合に利用することが可能な他の化学部分などの化学反応又は化合物の結合を介して本発明に基づく式（Ｉ）の親水性ポリマーＰ１及びＰ３に結合させることができる。この文脈において特に好ましいＰＥＧ誘導体は、α−メトキシ−ω−メルカプトポリ（エチレングリコール）である。いずれの場合も、例えばシステインの−ＳＨ部分、又は任意の更なる（修飾）アミノ酸又は化合物の−ＳＨ部分は、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の末端、又は親水性ポリマーＰ１及びＰ３の任意の位置において内部に存在してよい。本明細書において定義されるように、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれは、好ましくは一方の末端に少なくとも１個の−ＳＨ部分を一般的に提示するが、２個又は更にそれよりも多い−ＳＨ部分を有してもよく、これを利用して例えばリガンド、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ、抗体、細胞貫通ペプチド（例えばＴＡＴ）のような、本明細書において定義される他の要素を更に結合させることもできる。
【００２９】
本発明の第１の実施形態の更なる好ましい態様に基づけば、親水性ポリマーＰ１及びＰ３のそれぞれは、例えばリガンド、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘなどの本明細書において定義される他の要素を結合することを可能とする少なくとも１個の更なる官能性部分を有してもよい。このような官能性部分は、例えば、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えばマレインイミド部分、α，β不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えばアジド又はアルキン）によって、アルケン／アルキンメタセシス反応（例えばアルケン又はアルキン）によって、イミン若しくはヒドロゾン形成（アルデヒド又はケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合化反応（アビジン、ビオチン、タンパク質Ｇ）、又はＳｎ型の置換反応を可能とする要素（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）又は他の要素の結合に利用することが可能な他の化学部分などの、例えば本明細書において定義される官能基などの他の要素の結合を可能とする官能基から選択することができる。
【００３０】
本明細書の式（Ｉ）に関連し、要素Ｐ２は、カチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、あるいはカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーを好ましくは表す。各要素Ｐ２は、他の要素Ｐ２、要素Ｐ１及び／又はＰ３、又は例えばアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのような他の要素と縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の−ＳＨ部分を一般的に提示する。要素Ｐ２は、本発明の式（Ｉ）の繰り返し要素［−Ｓ−Ｐ２−Ｓ−］ｎの内部に一般的に存在する。「カチオン性又はポリカチオン性」なる用語は、約１〜９、好ましくは４〜９、５〜８、又は更には６〜８のｐＨの値、より好ましくは９以下、８以下、７以下のｐＨの値、最も好ましくは例えば約７．３〜７．４の生理的ｐＨの値において正に帯電する（カチオン）荷電分子のことを一般的に指す。したがって、本発明に基づく要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、又は要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーは、生理的条件下、特にインビボの細胞の生理的塩条件下で正に帯電する。
【００３１】
本発明の式（Ｉ）の要素Ｐ２がカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質である特定の場合では、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝（下記に定義される）のカチオン特性は、要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体のカチオン性アミノ酸の含有量によって決定されうる。好ましくは、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中のカチオン性アミノ酸の含有量は、少なくとも１０％、２０％若しくは３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％若しくは７０％であり、しかしまた、好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であり、最も好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であり、あるいは、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体の例えばカチオン性、親油性、親水性、芳香族及び更なるアミノ酸などの全アミノ酸の含有量を１００％として、約１０％〜９０％の範囲内、より好ましくは約１５％〜７５％の範囲内、更により好ましくは約２０％〜５０％の範囲内、例えば２０、３０、４０又は５０％、又は、上記の値の任意の２つによって与えられる範囲内である。
【００３２】
本発明の式（Ｉ）の要素Ｐ２がカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーである特定の場合では、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝のカチオン特性は、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝の全体の電荷と比較した場合の要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体のカチオン性電荷の含有量によって決定されうる。好ましくは、本明細書において定義される（生理的）ｐＨにおける要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝のカチオン性電荷の含有量は、少なくとも１０％、２０％若しくは３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％若しくは７０％であり、しかしまた、好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であり、最も好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であり、あるいは、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体の、本明細書において定義されるような（生理的）ｐＨにおける例えば正電荷及び負電荷などの全電荷の含有量を１００％として、約１０％〜９０％の範囲内、より好ましくは約１５％〜７５％の範囲内、更により好ましくは約２０％〜５０％の範囲内、例えば２０、３０、４０又は５０％、又は、上記の値の任意の２つによって与えられる範囲内である。
【００３３】
核酸カーゴと、本明細書において定義される一般式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌに基づく（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の特定の状況においては、負に帯電した核酸カーゴの複合化を可能とするために繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体の全電荷の少なくとも１０％がカチオン性であることが好ましい。
【００３４】
要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、又は要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーは、好ましくは直鎖状分子であるが、要素Ｐ２として分枝鎖状のカチオン性若しくはポリカチオン性ペプチド又はタンパク質、又は要素Ｐ２として分枝鎖状のカチオン性若しくはポリカチオン性ポリマーを用いることもできる。
【００３５】
一般的に、例えば本明細書において定義されるようなカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、又は要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーなどの要素Ｐ２は、例えばＰ１及びＰ３のようなその隣の要素と、及び／又は、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部としての他の要素Ｐ２とジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）を介して、又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝の一部としての（ＡＡ）Ｘ要素と連結される。この文脈において、ジスルフィド結合を与えるのに必要な一般式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌにおいて定義される、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素Ｐ２に隣り合う硫黄原子は、要素Ｐ２自体によって本明細書において定義される−ＳＨ部分により与えられるか、あるいは、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの上記の定義内において−ＳＨ部分を提示するように要素Ｐ２を適宜修飾することによって与えられうる。要素Ｐ２の−ＳＨ部分は、好ましくは要素Ｐ１及びＰ３について本明細書において定義されるものである。上記の意味におけるジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）を形成するために必要とされるこうした−ＳＨ部分が要素Ｐ２自体によって与えられる場合、これは、例えば、要素Ｐ２のアミノ酸配列のいずれかの位置において要素Ｐ２のアミノ酸配列内に既に存在している、−ＳＨ部分を有する少なくとも２個のシステイン、又は更なる（修飾）アミノ酸若しくは化学物質によってなされうる。また、要素Ｐ２は、例えばシステイン又は（遊離）−ＳＨ部分を有する任意の更なる（修飾）アミノ酸又は化学物質などの化学物質によって適宜修飾されてもよい。これにより、要素Ｐ２は、その硫黄原子が本明細書において定義される要素Ｐ１及びＰ３の−ＳＨ部分と縮合する際に、又は第１の要素Ｐ２と他の要素Ｐ２との間などにジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の−ＳＨ部分を好ましくは有することになる。このような−ＳＨ部分は好ましくは本明細書において定義されるものである。好ましくは、前記少なくとも２個の−ＳＨ部分は、要素Ｐ２の末端又は末端付近に配置される。
【００３６】
本発明の第１の実施形態の特定の一態様によれば、上記一般式（Ｉ）の繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ内の要素Ｐ２は−ＳＨ部分としてシステインを有してよい。この文脈において、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは以下のように書き表すことができる。すなわち、
［Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ］ｎ
式中、ｎ及びＰ２は本明細書において定義されるものであり、各Ｃｙｓは、ジスルフィド結合の−ＳＨ部分を与える。Ｃｙｓは、アミノ酸システインを３文字の略号で表したものである（説明上の目的で、本説明文中でジスルフィド結合−Ｓ−Ｓ−を、−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｓ−Ｃｙｓ）−として書き表す場合もあり、その場合、Ｃｙｓ−Ｓは自然に存在する−ＳＨ部分を有するシステインを表し、この−ＳＨ部分は第２のシステインの−ＳＨ部分とジスルフィド結合を形成する。したがって、繰り返し要素［Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ］ｎは、［（Ｓ−Ｃｙｓ）−Ｐ２−（Ｃｙｓ−Ｓ）］ｎとして書き表すことも可能であり、−ＳＨ部分がシステインによって与えられ、システイン自体がジスルフィド結合の硫黄原子を与えることを示す）。
【００３７】
上記の式（Ｉ）全体と関連して、第１の態様のこの特定の態様は以下のように定義することができる。すなわち、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
式中、Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びｎは、本明細書において定義されるようなものであり、Ｓは硫黄原子であり、各Ｃｙｓはジスルフィド結合に１個の−ＳＨ部分を与える。
【００３８】
いずれの場合も、例えば、システイン、又は要素Ｐ２の修飾に用いられる任意の更なる（修飾）アミノ酸又は更なる化合物の−ＳＨ部分は、要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、又はカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーの内部、又はその末端の一方若しくは両方に存在してよく、例えば、カチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質がＮ末端又はＣ末端において要素Ｐ２として用いられる場合には、これらの末端の両方、及び／又は要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質の任意の内部の位置に存在しうる。好ましくは、−ＳＨ部分は、要素Ｐ２の少なくとも一方の末端、より好ましくは両方の末端、例えばＮ末端及びＣ末端の少なくともいずれか、より好ましくは要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質のＮ末端及びＣ末端の両方に存在してよい。
【００３９】
その繰り返し特性のため、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、要素Ｐ２の前記少なくとも２個の−ＳＨ部分の１つが、上記一般式（Ｉ）の他の要素Ｐ２の−ＳＨ部分と縮合し、これらの−ＳＨ部分の両方の硫黄原子が、第１の要素Ｐ２と少なくとも１個の他の要素Ｐ２との間にジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）を形成するという状況を表しうる。
【００４０】
この文脈において、本発明に基づく式（Ｉ）の要素Ｐ２の繰り返しの数は整数ｎによって定義される。ｎは、例えば、約３〜２０、４〜２０、５〜２０若しくは１０〜２０の範囲、又は約３から１５、４〜１５、５〜１５若しくは１０〜１５の範囲、又は約６〜１１若しくは７〜１０の範囲を含む、約１〜５０の範囲、好ましくは約１、２若しくは３〜３０の範囲、より好ましくは１、２、３、４若しくは５〜２５の範囲、又は約１、２、３、４若しくは５〜２０の範囲、又は１、２、３、４若しくは５〜１５の範囲、又は１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲から一般的に選択される整数である。繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎにおいて整数ｎが５である場合、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは好ましくは以下のようになる。すなわち、
［Ｓ−Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ２−Ｓ］
【００４１】
上記の例において、要素Ｐ２は５回繰り返し（好ましくは直線の順序で）、各要素Ｐ２は上記の繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの定義内のジスルフィド結合によって隣り合う要素と連結される。要素Ｐ２のいずれも互いに同じか又は異なっていてよい。
【００４２】
この実施形態の特定の一態様に基づけば、要素Ｐ２は、アミノ酸約３個〜約１００個の長さを有する、より好ましくはアミノ酸約３個〜約５０個の長さを有する、更により好ましくはアミノ酸約３個〜約２５個の長さを有する、例えば、アミノ酸約３個〜１０個、５個〜１５個、１０個〜２０個、又は１５個〜２５個の長さ、より好ましくは約５個〜約２０個の長さ、更により好ましくは約１０個〜約２０個の長さを有するカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質を表す。
【００４３】
要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、この目的に適した、少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示する任意のタンパク質又はペプチドであってよく、特に本発明に基づいて定義される核酸を複合化し、これにより好ましくは核酸を圧縮することが可能な任意のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質であってよい。
【００４４】
少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示する要素Ｐ２として特に好ましいカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン又はスペルミジン、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、ポリアルギニン、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、トランスポータン又はＭＰＧペプチドなどのキメラＣＰＰ、ＨＩＶ−結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ−由来ペプチド、オリゴアルギニン、例えばペネトラチン、アンテナペディア由来ペプチド（特にドロソフィラ・アンテナペディア由来のもの）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなどのペネトラチンファミリーのメンバー、例えばブフォリン−２などの抗微生物剤由来ＣＰＰ、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ−由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、高プロリン含量ペプチド、ロリゴマー（Ｌｏｌｉｇｏｍｅｒｅ）、高アルギニン含量ペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ヒストン、ＶＰ２２由来又は類似体ペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ又はタンパク質トランスダクションドメイン（ＰＴＤ）、ＰｐＴ６２０、高プロリン含量ペプチド、高リシン含量ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチドなどから選択することができる。
【００４５】
本発明の第１の実施形態の特定の好ましい一態様に基づけば、要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、以下の合計式（ＩＩ）を有する以下のカチオン性ペプチドから、好ましくはこれらが更に少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示するものとして、選択される。すなわち、
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝；（式（ＩＩ））
式中、ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５であり、且つ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ及びＯｒｎの全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも１０％に相当するものとして、ｌ、ｍ、ｎ又はｏは、互いに独立して０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５から選択される任意の数であってよく、Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ又はＯｒｎを除く天然（＝自然に存在する）又は非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であってよく、ｘは、Ｘａａの全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の９０％を越えないものとして、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４から選択される任意の数であってよい。アミノ酸Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｏｒｎ及びＸａａの内の任意のものが、ペプチドの任意の位置に位置してよい。この式の特に好ましいペプチドは、例えばＡｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ７、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒなどのオリゴアルギニンである（配列番号１〜９）。
【００４６】
第１の実施形態の特定の好ましい態様によれば、上記に示した実験式（ＩＩ）を有し、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、これらに限定されるものではないが、以下の式のサブ群から選択することができる。
Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ１０、Ａｒｇ１１、Ａｒｇ１２、Ａｒｇ１３、Ａｒｇ１４、Ａｒｇ１５；（配列番号２〜３、１０〜１５）；
Ｌｙｓ８、Ｌｙｓ９、Ｌｙｓ１０、Ｌｙｓ１１、Ｌｙｓ１２、Ｌｙｓ１３、Ｌｙｓ１４、Ｌｙｓ１５；（配列番号１６〜２３）；
Ｈｉｓ８、Ｈｉｓ９、Ｈｉｓ１０、Ｈｉｓ１１、Ｈｉｓ１２、Ｈｉｓ１３、Ｈｉｓ１４、Ｈｉｓ１５；（配列番号２４〜３１）；
Ｏｒｎ８、Ｏｒｎ９、Ｏｒｎ１０、Ｏｒｎ１１、Ｏｒｎ１２、Ｏｒｎ１３、Ｏｒｎ１４、Ｏｒｎ１５；（配列番号３２〜３９）；
【００４７】
第１の実施形態の更なる特定の好ましい態様によれば、上記に示した実験式（ＩＩ）を有し、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、これらに限定されるものではないが、以下の式のサブ群から選択することができる。ただし、以下の各式は（実験式（ＩＩ）と同様）、アミノ酸の順序を特定するものではないが、それぞれのペプチドの要素としてのアミノ酸（の数）を限定的に特定することによって実験式を反映することを目的としたものである。したがって一例として、実験式Ａｒｇ（７−１４）Ｌｙｓ１は、この式に当てはまるペプチドが７個〜１４個のＡｒｇ残基及び１個のＬｙｓ残基を順序に関係なく有することを意味するものである。ペプチドが７個のＡｒｇ残基及び１個のＬｙｓ残基を有する場合、７個のＡｒｇ残基及び１個のＬｙｓ残基を有するすべての変異体が含まれる。したがってこのＬｙｓ残基は、例えば７個のＡｒｇと１個のＬｙｓ残基からなるアミノ酸８個の長さの配列中のどこに位置してもよい。このサブ群は好ましくは以下を含む。すなわち、
Ａｒｇ（７−１４）Ｌｙｓ１、Ａｒｇ（７−１４）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（７−１４）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（７−１４）Ｈｉｓ１、Ｌｙｓ（７−１４）Ｏｒｎ１、Ｈｉｓ（７−１４）Ｏｒｎ１；
Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ２、Ａｒｇ（６−１３）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（６−１３）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ２、Ｌｙｓ（６−１３）Ｏｒｎ２、Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ２；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ３、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（５−１２）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ３、Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ３、Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ３；
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ４、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（４−１１）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ４、Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ４、Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ４；
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ５、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（３−１０）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ５、Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ５、Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ５；
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ６、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ６、Ａｒｇ（２−９）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ６、Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ６、Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ６；
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ７、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ７、Ａｒｇ（１−８）Ｏｒｎ７、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ７、Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ７、Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ７；
【００４８】
Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（６−１３）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（６−１３）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（６−１３）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（６−１３）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（６−１３）、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（６−１３）Ｏｒｎ１；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（５−１２）、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ２；
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（４−１１）、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ３；
【００４９】
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（３−１０）、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ４；
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（２−９）、Ａｒｇ５Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ５；
【００５０】
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ６Ｈｉｓ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ６、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ６Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ６Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ６Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ６、Ａｒｇ６Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ５Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ６Ｈｉｓ（１−８）、Ａｒｇ６Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ６、Ｌｙｓ６Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ６；
Ａｒｇ（５−１２）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（５−１２）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（５−１２）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（５−１２）；
【００５１】
Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（４−１１）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（４−１１）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（４−１１）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（４−１１）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（４−１１）；
Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（３−１０）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（３−１０）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（３−１０）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（３−１０）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（３−１０）；
【００５２】
Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（２−９）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（２−９）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（２−９）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ２Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（２−９）；
【００５３】
Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ（１−８）Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ５Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ５、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ２Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ４Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ１Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ（１−８）Ｈｉｓ３Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ５、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ４、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ２、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ１、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ（１−８）Ｏｒｎ３、Ａｒｇ５Ｌｙｓ１Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ５Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ１Ｈｉｓ５Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ２Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ４Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ２Ｌｙｓ１Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ２Ｈｉｓ４Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ４Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ４Ｌｙｓ１Ｈｉｓ２Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ３Ｈｉｓ１Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ３Ｌｙｓ１Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（１−８）、Ａｒｇ１Ｌｙｓ３Ｈｉｓ３Ｏｒｎ（１−８）；
【００５４】
第１の実施形態の別の特定の好ましい態様によれば、上記に示した実験式（ＩＩ）を有し、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、これらに限定されるものではないが、以下の式から選択することができる。すなわち、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ａｒｇ１０、Ａｒｇ１１、Ａｒｇ１２、Ａｒｇ１３、Ａｒｇ１４、Ａｒｇ１５；Ｌｙｓ８、Ｌｙｓ９、Ｌｙｓ１０、Ｌｙｓ１１、Ｌｙｓ１２、Ｌｙｓ１３、Ｌｙｓ１４、Ｌｙｓ１５；Ｈｉｓ８、Ｈｉｓ９、Ｈｉｓ１０、Ｈｉｓ１１、Ｈｉｓ１２、Ｈｉｓ１３、Ｈｉｓ１４、Ｈｉｓ１５；Ｏｒｎ８、Ｏｒｎ９、Ｏｒｎ１０、Ｏｒｎ１１、Ｏｒｎ１２、Ｏｒｎ１３、Ｏｒｎ１４、Ｏｒｎ１５；（配列番号２〜３、１０〜３９、上記を参照）
【００５５】
第１の実施形態の更なる特定の好ましい態様によれば、上記に示した実験式（ＩＩ）を有し、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、これらに限定されるものではないが、以下の一般式からなるサブ群から選択することができる。すなわち、Ａｒｇ９（Ｒ９とも呼ぶ）、Ａｒｇ９Ｈｉｓ３（Ｒ９Ｈ３とも呼ぶ）、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３（Ｈ３Ｒ９Ｈ３とも呼ぶ）、ＴｙｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ（ＹＳＳＲ９ＳＳＹとも呼ぶ）、Ｈｉｓ３Ａｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒ（Ｈ３Ｒ９ＳＳＹとも呼ぶ）、（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）４（（ＲＫＨ）４とも呼ぶ）、Ｔｙｒ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）２Ａｒｇ（Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒとも呼ぶ）；（配列番号２、５〜９、４０、上記を参照）。更により好ましくはこれらの一般式は以下のように定義される。すなわち、
【００５６】
第１の実施形態の更なる特定の好ましい一態様によれば、要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、上記に示した式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＩ））に基づいて定義され、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する場合に、これらに限定されるものではないが、好ましくは少なくとも１個の−ＳＨ部分がシステイン残基によって与えられるものとして、式（ＩＩａ）から選択することができる。すなわち、
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｃｙｓ）ｘ｝  （式（ＩＩａ））
式中、（Ａｒｇ）ｌ、（Ｌｙｓ）ｍ、（Ｈｉｓ）ｎ、（Ｏｒｎ）ｏ及びｘは本明細書において定義されるものである。
【００５７】
また、要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、上記に示した式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＩ））に基づいて定義され、少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する場合に、これらに限定されるものではないが、好ましくは少なくとも１個の−ＳＨ部分がシステイン残基によって与えられるものとして、式（ＩＩａ）から選択することもできる。すなわち、
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ’）ｘ；（Ｃｙｓ）ｙ｝  （式（ＩＩａ’））
式中、（Ａｒｇ）ｌ、（Ｌｙｓ）ｍ、（Ｈｉｓ）ｎ、（Ｏｒｎ）ｏ及びｘは本明細書において定義されるものであり、Ｘａａ’は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｏｒｎ又はＣｙｓを除く天然（＝自然に存在する）又は非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であり、ｙは、Ａｒｇ（アルギニン）、Ｌｙｓ（リシン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｏｒｎ（オルニチン）の全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも１０％に相当するものとして、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１〜３０、３１〜４０、４１〜５０、５１〜６０、６１〜７０、７１〜８０、及び８１〜９０から選択される任意の数である。
【００５８】
本発明の第１の実施形態のこれらの態様は、要素Ｐ２としてのカチオン性又はポリカチオン性のペプチドが、式（Ｉ）の他の要素とジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも１個のシステインを有するように、上記の意味における−ＳＨ部分としての少なくとも１個のシステインを含むか、又はこれにより修飾された、上記に示されるような実験式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＩ））で表されるカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質から要素Ｐ２が選択される状況に対して適用することができる。
【００５９】
第１の実施形態の別の特定の好ましい態様に基づけば、要素Ｐ２としてのカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質は、上記に示した式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＩＩ））に基づいて定義され、好ましくは少なくとも２個の−ＳＨ部分を更に提示する場合に、これらに限定されるものではないが、好ましくは前記少なくとも２個の−ＳＨ部分が２個の末端システイン残基によって与えられるものとして、式（ＩＩｂ）から選択することができる。
Ｃｙｓ｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝Ｃｙｓ  （式（ＩＩｂ））
式中、（Ａｒｇ）ｌ、（Ｌｙｓ）ｍ、（Ｈｉｓ）ｎ、（Ｏｒｎ）ｏ及び（Ｘａａ）ｘは本明細書において定義されるものであり、（半実験）式（ＩＩ）で表されるアミノ酸のコアを形成する。代表的な例は、２個のＣｙｓによって挟まれた上記の配列の任意のものであり、以下の配列が含まれる。
Ｃｙｓ（Ａｒｇ８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１０）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１１）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１２）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１３）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１４）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１５）Ｃｙｓ；  Ｃｙｓ（Ｌｙｓ８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１０）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１１）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１２）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１３）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１４）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｌｙｓ１５）Ｃｙｓ；  Ｃｙｓ（Ｈｉｓ８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１０）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１１）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１２）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１３）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１４）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｈｉｓ１５）Ｃｙｓ；  Ｃｙｓ（Ｏｒｎ８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１０）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１１）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１２）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１３）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１４）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ｏｒｎ１５）Ｃｙｓ（配列番号４１〜７２）
【００６０】
より好ましくは以下の代表的な配列（配列番号７３〜８４）が含まれる。すなわち、
ＣｙｓＡｒｇ９Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＡｒｇ９Ｈｉｓ３Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＴｙｒＳｅｒＳｅｒＡｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒＣｙｓ：Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ３Ａｒｇ９ＳｅｒＳｅｒＴｙｒＣｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
Ｃｙｓ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）４Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＴｙｒ（ＡｒｇＬｙｓＨｉｓ）２ＡｒｇＣｙｓ：Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ３Ａｒｇ９Ｈｉｓ３Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ６Ａｒｇ９Ｈｉｓ６Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ３Ａｒｇ４Ｈｉｓ３Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＨｉｓ６Ａｒｇ４Ｈｉｓ６Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ
ＣｙｓＡｒｇ１２Ｃｙｓ：Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ
【００６１】
本発明の第１の実施形態のこの態様は、要素Ｐ２が、式（Ｉ）の他の要素とジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の（末端）システインを有するように、要素Ｐ２としてのポリカチオン性のペプチド又はタンパク質が、例えば上記に示されるような実験式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式（ＩＩ））に基づいて定義される場合に、上記の意味における−ＳＨ部分としての少なくとも２個の（末端）システインによって修飾されているような状況に対して適用することができる。
【００６２】
第１の実施形態の別の態様に基づけば、要素Ｐ２は、このカチオン性ポリペプチドが、要素Ｐ２を要素Ｐ１若しくはＰ３と、又は他の要素Ｐ２若しくはアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘと連結するジスルフィド結合を与える少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示するものとして、例えばこの文脈において適当な任意のカチオン性ポリマーから選択されたカチオン性又はポリカチオン性のポリペプチドを表す。したがって、同様に本明細書において定義されるように、要素Ｐ２は、下位式［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ又は｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ／［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝によって表される、本明細書において定義される繰り返し要素として存在し、その場合、前記繰り返し要素内で同じか又は異なるカチオン性又はポリカチオン性のポリマーＰ２を用いることができる。
【００６３】
好ましくは要素Ｐ２は、約０．５ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約７５ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量、又は約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、若しくは約１０ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、好ましくは約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、より好ましくは約１ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、更により好ましくは約１．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの分子量を一般的に示すカチオン性又はポリカチオン性のポリマーを表す。更に、要素Ｐ２としてのカチオン性又はポリカチオン性のポリマーは、本明細書において定義される要素Ｐ１若しくはＰ３と、又は他の要素Ｐ２若しくはアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのいずれかと縮合してジスルフィド結合を形成することが可能な少なくとも２個の−ＳＨ部分を一般的に提示する。
【００６４】
要素Ｐ２がカチオン性又はポリカチオン性のポリマーを表す場合、こうしたポリマーは、アクリレート、ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））などの修飾アクリレート、キトサン、アジリジン、又は２−エチル−２−オキサゾリン（オリゴエチレンイミン又は修飾オリゴエチレンイミンを形成する）、オリゴβアミノエステル又はポリアミドアミンを形成するビスアクリレートとアミンとの反応により得られるポリマー、又は、ポリエステル、ポリカーボネートなどの他のポリマーから選択することができる。これらのカチオン性又はポリカチオン性のポリマーの分子はそれぞれ一般的に少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示し、これら少なくとも２個の−ＳＨ部分は、例えば、イミノチオラン、３−チオプロピオン酸、又はシステイン、メチオニン若しくは任意の更なる（修飾）アミノ酸などの−ＳＨ部分含有アミノ酸の導入を用いた化学修飾によってカチオン性又はポリカチオン性のポリマー内に導入することができる。こうした−ＳＨ部分は、要素Ｐ１、Ｐ２又はＰ３について上記に既に述べたようなものが好ましい。
【００６５】
本発明の式（Ｉ）の要素Ｐ２は、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎとして好ましくは存在する。このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義した要素Ｐ２の同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを使用し、これを−ＳＨ部分を介した縮合重合反応において重合させることによって調製することができる。
【００６６】
第１の実施形態の特定の一態様に基づけば、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質の同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを使用し、これを−ＳＨ部分を介した縮合重合反応において重合させることによって調製することができる。したがって、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質の同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを整数ｎによって決定される所定の数だけ含んでいる。
【００６７】
第１の実施形態の別の特定の態様によれば、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性又はポリカチオン性のポリマーの同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを使用し、これを−ＳＨ部分を介した縮合重合反応において重合させることによって調製することができる。したがって、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性又はポリカチオン性のポリマーの同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを整数ｎによって決定される所定の数だけ含んでいる。
【００６８】
第１の実施形態の更なる特定の態様によれば、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性又はポリカチオン性のポリマーの同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くと、上記に定義したカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質の同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを使用し、これを−ＳＨ部分を介した縮合重合反応において重合させることによって調製することができる。したがって、このような繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎは、上記に定義したカチオン性又はポリカチオン性のポリマーの同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多く、及び上記に定義したカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質の同じものか又は異なるものの内の少なくとも１つ又は更にはそれよりも多くを、共に合わせて整数ｎによって決定される所定の数だけ含んでいる。
【００６９】
第１の実施形態の更なる態様に基づけば、上記の式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアは、少なくとも１個のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを含みうるものであり、ただし、ＡＡは好ましくは以下に定義されるアミノ酸であり、該アミノ酸は、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして存在する場合に、本明細書において定義される式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアの生物物理的／生物化学的特性を（大幅に）改変することを可能とするものである。本発明に基づけば、このようなアミノ酸要素要素（ＡＡ）Ｘ中のアミノ酸数（繰り返し数）は、ｘによって定義される。上記の意味において、ｘは好ましくは整数であり、約１〜１００の範囲から、好ましくは約１〜５０の範囲から、より好ましくは１〜３０から選択され、更により好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５〜３０を含む数から、例えば、約１〜３０の範囲から、約１〜１５の範囲から、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５を含む数から選択するか、あるいは、上記の値の任意の２つによって与えられる範囲から選択することができる。
【００７０】
このような要素（ＡＡ）Ｘは、上記式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアのすべての部分に含まれうるものであり、したがって、式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアのすべての要素に結合させることができる。（ＡＡ）Ｘは、リガンドとして、又は繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部として存在することが特に好ましい。
【００７１】
この文脈において、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、少なくとも１個の−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接する（例えば末端において）ことが好ましく、これにより、この要素（ＡＡ）Ｘをジスルフィド結合を介して本明細書において定義される式（Ｉ）で表されるポリマーキャリア内に導入することが可能となる。この文脈において、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、Ａが例えばシステイン残基などの−ＳＨ含有部分（又はいうまでもなくジスルフィド結合の一方の硫黄原子）であるものとして要素−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−又は−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−として読むこともできる。−ＳＨ含有部分がシステインを表す特定の場合では、Ｃｙｓがシステインを表し、ジスルフィド結合に必要な−ＳＨ部分を与えるものとして、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−又は−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｃｙｓ−として読むこともできる（したがって、−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｃｙｓ−は、−（Ｓ−Ｃｙｓ）−（ＡＡ）ｘ−（Ｃｙｓ−Ｓ）−として書き表すこともでき、−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−は、−（Ｓ−Ｃｙｓ）−（ＡＡ）ｘ−）として書き表すこともできる）。−ＳＨ含有部分は、要素Ｐ１、Ｐ２又はＰ３について上記に示した修飾又は反応のいずれかを用いてアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ内に導入してもよい。アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘが式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアの２個の要素に連結される特定の場合では、（ＡＡ）Ｘは例えば少なくとも２個のシステインなどの少なくとも２個の−ＳＨ部分を、好ましくはその末端に有することが好ましい。これは、（ＡＡ）Ｘが繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部である場合に特に好ましい。
【００７２】
別の例では、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、任意の化学的に可能な付加反応によって、本明細書において定義される式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア内に導入される。したがって、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、少なくとも１個の更なる官能性部分を有し、これにより、例えば要素Ｐ１又はＰ３、Ｐ２、Ｌ又は更なるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘなどの本明細書において定義される他の要素にアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを結合させることが可能となる。このような官能性部分は、例えばアミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えばマレインイミド部分、α，β不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えばアジド又はアルキン）によって、アルケン／アルキンメタセシス反応（例えばアルケン又はアルキン）によって、イミン若しくはヒドロゾン形成（アルデヒド又はケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合化反応（アビジン、ビオチン、タンパク質Ｇ）、又はＳｎ型の置換反応を可能とする要素（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）又は他の要素の結合に使用することが可能な他の化学部分などの、例えば本明細書において定義される官能基のような、他の要素の結合を可能とする官能基から選択することができる。
【００７３】
アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚとして存在してもよく、その場合、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの数は、更にｚによって定義される。この文脈において、ｚは整数であり、約１〜３０の範囲から、好ましくは約１〜１５、より好ましくは１〜１０又は１〜５の範囲から、更により好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４若しくは１５から選択される数から選択するか、あるいは上記の値の任意の２つによって与えられる範囲から選択することができる。このような混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを使用することにより、本明細書において定義される同じか又は異なるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの内の幾つかを本発明のポリマーキャリア中に組み込むことができる。好ましくは、繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ中でアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、少なくとも１個の−ＳＨ含有部分、好ましくは上記に既に定義したような少なくとも２個の−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接して（例えば末端において）よく、これにより、縮重合によりジスルフィド結合を利用して異なるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを結合することが可能となる。上記と同様、混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、Ｓが例えばシステイン残基などの−ＳＨ含有部分を表すものとして、［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚとして読むこともできる。−ＳＨ含有部分がシステインを表す特定の場合では、Ｃｙｓがシステインを表し、ジスルフィド結合に必要な−ＳＨ部分を与えるものとして、混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、［Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｃｙｓ］ｚとして読むこともできる。−ＳＨ含有部分は、要素Ｐ１、Ｐ２又はＰ３について上記に示した修飾又は反応のいずれかを用いてアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ内に導入することもできる。
【００７４】
アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、例えば、式（ＡＡ）Ｘ−ＳＨによって表される形態の少なくとも１個の−ＳＨ部分を有してもよい。これにより、式（ＡＡ）Ｘ−ＳＨに基づく要素（ＡＡ）Ｘ又は式［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ−ＳＨに基づく混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを、要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれか、又は別の要素（ＡＡ）Ｘのいずれかとジスルフィド結合を介して結合させることができる。要素Ｐ１及び要素Ｐ３の少なくともいずれかと結合される場合、要素Ｐ１及び要素Ｐ３の少なくともいずれかは、ジスルフィド結合を形成する−ＳＨ部分を介して要素Ｐ１及び要素Ｐ３の少なくともいずれかと要素Ｐ２との更なる結合を可能とする少なくとも２個の−ＳＨ部分を提示することが好ましい（上記を参照）。式（ＡＡ）Ｘ−ＳＨによって表される形態のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は式［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ−ＳＨに基づく混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、１個の−ＳＨ部分を有することから縮合反応を停止するために使用することもできる。この場合、式（ＡＡ）Ｘ−ＳＨによって表される形態のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかと末端において結合することが好ましい。式（ＡＡ）Ｘ−ＳＨによって表される形態のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は式［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ−ＳＨに基づく混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを用いて、要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれか、又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの更なる内部の−ＳＨ部分を介して要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれか、又は他の要素（ＡＡ）Ｘのいずれかに内部において結合させることもできる。
【００７５】
更に、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、例えば式ＨＳ−（ＡＡ）Ｘ−ＳＨによって表される形態の２個（又は更にはそれよりも多い）の−ＳＨ部分を有してもよい。更に、混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚが、例えば式ＨＳ−［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ−ＳＨによって表される形態の２個（又は更にはそれよりも多い）の−ＳＨ部分を有することにより、例えば、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚが２個の他の要素の間のリンカーとして用いられている場合（例えば、要素ＬとＰ１との間、要素Ｐ１とＰ２との間、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ内若しくはその一部として、要素Ｐ２とＰ３との間、及び／又は、要素Ｐ３とＬとの間のリンカーとして）に、ジスルフィド結合を介した２個の官能基への結合を可能とすることができる。この場合、１個の−ＳＨ部分が当該技術分野では周知の保護基を用いた第１の工程において保護されることが好ましく、これにより、式ＨＳ−（ＡＡ）Ｘ−Ｓ−保護基の混合繰り返しアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを、又は式ＨＳ−［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ−Ｓ−保護基の混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを生じる。次いでアミノ酸（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれかと結合させることにより、保護されていない−ＳＨ部分を介して第１のジスルフィド結合を形成することができる。次いで保護された−ＳＨ部分を通常、脱保護し、他の要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれかの更なる遊離−ＳＨ部分と結合することにより、第２のジスルフィド結合が形成される。アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚが繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部である場合、（ＡＡ）ＸとＰ２との間のジスルフィド結合の形成が、繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの重縮合反応と同時に起こり、したがって前記少なくとも２個の末端−ＳＨ部分の保護が必要ではないことが好ましい。
【００７６】
また、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは要素Ｐ１及びＰ２及びＰ３の少なくともいずれかについて上記に既に述べた他の官能基を有してもよく、これにより、要素Ｐ１、Ｐ２及びＰ３の少なくともいずれか又は（ＡＡ）Ｘ、及び場合により要素Ｌのいずれかに対するアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの結合、又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの結合が可能となる。
【００７７】
したがって本発明に基づけば、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ及び混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの少なくともいずれかを、ジスルフィド結合を用いるか又は用いることなく、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、（ＡＡ）Ｘ及びＬの少なくともいずれかに結合させることができる。ジスルフィド結合を用いない結合は、上記に述べた反応のいずれかにより、好ましくは、本明細書において述べるようなアミド化学を用いたＰ１、Ｐ２、Ｐ３、（ＡＡ）Ｘ及びＬの少なくともいずれかに対するアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの結合によって、実現することができる。望ましい、又は必要な場合に、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの他方の末端、例えばＮ−又はＣ−末端を用いて例えばリガンドＬなどの別の要素を結合することができる。この目的では、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの他方の末端は、例えばクリック化学により他の要素を付加するために用いることができる例えばアルキン種（上記を参照）などの更なる官能基を有するか、又はこうした官能基を有するように修飾されることが好ましい。このような構築体、例えばＬ−（ＡＡ）ｘ−Ｐ１−Ｓ−又はＬ−［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｐ１−Ｓ−を用いて繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの縮合重合反応を停止することができる。リガンドが酸に不安定な結合を介して結合されている場合、この結合をエンドソーム内で切断することが可能であり、本発明のポリマーキャリアはその表面にアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを提示する。
【００７８】
アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、上記の一般式（Ｉ）の他の要素として、例えば、要素Ｐ１若しくはＰ３とＰ２との間のリンカーとして、要素ＬとＰ１若しくはＰ２との間のリンカーとして、又は繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの他の要素として存在してもよい。
【００７９】
第１の代替例によれば、このようなアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、要素Ｐ１又はＰ３とＰ２との間のリンカーとして存在しうる。これは、下式により、式（Ｉ）に基づいた本発明のポリマーキャリア全体と関連して好ましくは表される。すなわち、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ  又は
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
式中、ｎ、ｘ、ｚ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は、好ましくは本明細書において定義されたものである。上記の式中、用語「−Ｓ−Ｓ−」はジスルフィド結合を表し、ジスルフィド結合のこの少なくとも１個の硫黄原子はシステインによって与えられてもよい。この場合、これらの式中の用語「−Ｓ−Ｓ−」は「−Ｓ−Ｃｙｓ」として、「−Ｃｙｓ−Ｓ−」として、又は「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」として書き表すこともできる。この文脈において、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」はペプチド結合を表すものではなく、ジスルフィド結合を形成する２個のシステインの−ＳＨ部分を介した連結を表すものである。したがって、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｓ−Ｃｙｓ）−」として一般的に理解することもでき、この特定の場合ではＳはシステインの−ＳＨ部分の硫黄原子を示す。同様に、用語「−Ｓ−Ｃｙｓ」及び「−Ｃｙｓ−Ｓ」は、−ＳＨ含有部分とシステインとの間のジスルフィド結合を示し、「−Ｓ−（Ｓ−Ｃｙｓ）」及び「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−Ｓ」と書き表すこともできる。
【００８０】
第２の代替例によれば、このようなアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、Ｐ１又はＰ３と要素Ｌとの間のリンカーとして存在してもよい。これは、下式により、式（Ｉ）に基づいた本発明のポリマーキャリア全体と関連して好ましくは表される。すなわち、
Ｌ−（ＡＡ）ｘ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−（ＡＡ）ｘ−Ｌ  又は
Ｌ−［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｌ
あるいは、
Ｌ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｌ  又は
Ｌ−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｌ  又は
Ｌ−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｌ  など
式中、ｎ、ｘ、ｚ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は、好ましくは本明細書において定義されたものである。上記の式中、用語「−Ｓ−Ｓ−」は上記で既に定義されたジスルフィド結合を表す。
【００８１】
第３の代替例によれば、このようなアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかの一部として存在してもよく、ただし、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは更なるリガンドＬなしで要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれか（の例えば末端に）直接結合されうる。この場合、（ＡＡ）Ｘの要素は、上記に定義されたようなリガンドの形態であってよい。これは、下式により、式（Ｉ）に基づいた本発明のポリマーキャリア全体と関連して好ましくは表される。
（ＡＡ）ｘ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−（ＡＡ）ｘ  又は、
［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−［（ＡＡ）ｘ］ｚ  又は、
あるいは、
（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ  又は、
Ｈ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｈ
式中、ｎ、ｘ、ｚ、Ｓ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は、好ましくは本明細書において定義されたものである。上記の式中、用語「−Ｓ−Ｓ−」は上記で既に定義されたジスルフィド結合を表す。最後の式の末端の遊離−ＳＨ部分は、本明細書において定義されるモノチオール化合物を用いて終端されてもよい。
【００８２】
第４の特に好ましい代替例によれば、好ましくはＳ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ又は［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］として書き表されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを用いて要素Ｐ２、特に上記式（Ｉ）の繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素Ｓ−Ｐ２−Ｓの内容を修飾することができる。これは、例えば下式（Ｉａ）により、式（Ｉ）に基づいたポリマーキャリア全体と関連して好ましくは表される。すなわち、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
式中、ｘ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は、好ましくは本明細書において定義されたものである。上記の式（Ｉａ）において、単一の要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］及び［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］のいずれも、下位式｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中に任意の順序で存在しうる。下位式｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中の単一の要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］及び［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］の数は、整数ａ及びｂによって決定され、ただしａ＋ｂ＝ｎである。ｎは整数であり、式（Ｉ）について上記に定義されたものである。
【００８３】
ａは、例えば約３〜２０、４〜２０、５〜２０、又は１０〜２０の範囲を含む、約１〜５０の範囲から、好ましくは約１、２若しくは３〜３０の範囲から、より好ましくは約１、２、３、４若しくは５〜２５の範囲、又は約１、２、３、４若しくは５〜２０の範囲、又は約１、２、３、４若しくは５〜１５の範囲、又は約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲から、又は約６〜１１、又は７〜１０の範囲から選択される整数ｂとは独立して一般的に選択される整数である。最も好ましくは、ａは、約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲、より好ましくは約１、２、３若しくは４〜９の範囲、約１、２、３若しくは４〜８の範囲、又は約１、２若しくは３〜７の範囲にある。
【００８４】
ｂは、例えば約３〜２０、４〜２０、５〜２０、又は１０〜２０の範囲を含む、約０〜５０又は約１〜５０の範囲から、好ましくは約０、１、２若しくは３〜３０の範囲から、より好ましくは約０、１、２、３、４若しくは５〜２５の範囲、又は約０、１、２、３、４若しくは５〜２０の範囲、又は約０、１、２、３、４若しくは５〜１５の範囲、又は約０、１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲から、又は約６〜１１、又は７〜１０の範囲から選択される整数ａとは独立して一般的に選択される整数である。最も好ましくは、ｂは、約１、２、３、４若しくは５〜１０の範囲、より好ましくは約１、２、３若しくは４〜９の範囲、約１、２、３若しくは４〜８の範囲、又は約１、２若しくは３〜７の範囲にある。
【００８５】
上記の式中、用語「−Ｓ−Ｓ−」（読みやすさのために括弧は省略する）は上記で既に定義されたジスルフィド結合を表す。
【００８６】
アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘによって「希釈」することによる要素Ｐ２の修飾、特に繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素Ｓ−Ｐ２−Ｓの修飾は、式（Ｉ）で表されるポリマーキャリア全体の上記の代替例のいずれかと関連して実現することもできる。
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ  又は、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ  又は、
Ｌ−（ＡＡ）ｘ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−（ＡＡ）ｘ−Ｌ  又は、
Ｌ−［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｌ  又は、
Ｌ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｌ  又は、
Ｌ−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｌ  又は、
Ｌ−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｌ  又は、
（ＡＡ）ｘ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−（ＡＡ）ｘ  又は、
［（ＡＡ）ｘ］ｚ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−［（ＡＡ）ｘ］ｚ  又は、
（ＡＡ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−（ＡＡ）ｘ  又は、
Ｈ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｈ
式中、ｎ、ｘ、ｚ、ａ、ｂ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は、好ましくは本明細書において定義されたものである。同様に、用語「−Ｓ−Ｓ−」は、ジスルフィド結合を表し、好ましくは明細書において定義されたものである。
【００８７】
要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］がアミノ酸要素［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］によって好ましくは「希釈」される上記の代替例においては、その比は、整数ａ及びｂによって決定され、ただしａ＋ｂ＝ｎである。好ましくは、整数ａ及びｂは、要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］のカチオン性結合特性が失われずに、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝において最小の程度に維持されるように選択される。これにより、式（Ｉ）の本発明のポリマーキャリアの繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］のカチオン性の結合強度を所望の程度にまで弱める（希釈する）ことが可能である。
【００８８】
この特定の意味において、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝の（所望の）カチオン性結合強度は、異なる方法を用いて決定することができる。
【００８９】
第１の代替例によれば、本発明の式（Ｉ）の要素Ｐ２は、特に好ましくは本明細書において定義されるようなカチオン性又はポリカチオン性のペプチドである。更に、好ましくはＳ−（ＡＡ）ｘ−Ｓとして書き表されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、一般的にペプチド配列と似ている。この特定の場合では、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝のカチオン特性は、下位式／要素全体中のカチオン性アミノ酸の含有量によって決定されうる。好ましくは、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中のカチオン性アミノ酸の含有量は、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体中の例えばカチオン性、親油性、親水性、芳香族、及び更なるアミノ酸のなどの全アミノ酸の含有量を１００％として、少なくとも１０％、２０％若しくは３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％若しくは７０％、更にまた好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、最も好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であるか、あるいは約１０％〜９０％の範囲内、より好ましくは約１５％〜７５％の範囲内、更に好ましくは約２０％〜５０％の範囲内、例えば、２０、３０、４０若しくは５０％、又は上記の値の任意の２つによって与えられる範囲内でよい。
【００９０】
第２の代替例によれば、本発明の式（Ｉ）の要素Ｐ２は、本明細書において定義されるカチオン性又はポリカチオン性のポリマーであることが特に好ましい。Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓとして好ましくは書き表されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、一般的にペプチド配列に似ている。この特定の場合では、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝のカチオン特性は、下位式／要素全体中のカチオン性電荷の含有量によって決定されうる。好ましくは、本明細書において定義される（生理的）ｐＨにおける下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中のカチオン性電荷の含有量は、下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝全体中の例えば正電荷及び負電荷などの全電荷の含有量を１００％として、少なくとも１０％、２０％若しくは３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％若しくは７０％、更にまた好ましくは少なくとも８０％、９０％、又は更には９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、最も好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％であるか、あるいは約１０％〜９０％の範囲内、より好ましくは約１５％〜７５％の範囲内、更に好ましくは約２０％〜５０％の範囲内、例えば、２０、３０、４０若しくは５０％、又は上記の値の任意の２つによって与えられる範囲内でよい。
【００９１】
本発明との関連において、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、以下の代替例から選択することができる。
【００９２】
第１の代替例においては、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘであってよい。本発明の式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア中に芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして芳香族アミノ酸又は配列を組み込むことにより、本発明のポリマーキャリアがポリマーキャリア分子のカチオン性に帯電した配列によってリン酸主鎖と結合する場合と異なり、芳香族アミノ酸と核酸カーゴの塩基との相互作用に基づいた、本発明のポリマーキャリアと核酸との異なる（第２の）結合が可能となる。この相互作用は、例えばインターカレーション又は副溝若しくは主溝への結合によって生じうる。この種の相互作用は、インビボで細胞外マトリクス中に主として見られるアニオン性の複合化パートナー（例えばヘパリン、ヒアルロン酸）による脱コンパクション作用を受けにくく、また、塩効果も受けにくい。
【００９３】
この目的では、芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのアミノ酸ＡＡは、例えばＴｒｐ、Ｔｙｒ、又はＰｈｅから選択される同じか又は異なる芳香族アミノ酸のいずれかから選択することができる。また、アミノ酸ＡＡ（又は芳香族アミノ酸要素の全体（ＡＡ）Ｘ）は、以下のペプチドの組み合わせから選択することができる。すなわち、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、若しくはＴｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、など（配列番号８５〜１１２）、又はこれらの組み合わせ。
【００９４】
更に、芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、この要素を例えばリンカーとして、又はより好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素として、ジスルフィド結合を介して、上記一般式（Ｉ）の更なる部分として導入することを可能とする−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接してよい。このような−ＳＨ含有部分は、本明細書において定義される１つの要素を本明細書において定義される他の要素と結合するのに適した、本明細書において定義される任意の部分であってよい。例として、このような−ＳＨ含有部分はシステインであってよい。したがって例えば芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、例えば以下のペプチドの組み合わせ、すなわち、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、若しくはＣｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓなど（配列番号１１３〜１４５）、又はこれらの組み合わせから選択することができる。上記の各Ｃｙｓを、本明細書において定義される遊離−ＳＨ部分を有する任意の修飾ペプチド又は化学物質によって置き換えてもよい。
【００９５】
更に、芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、芳香族アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ中のＴｒｐ、Ｔｙｒ及びＰｈｅのより長い繰り返し配列の構造切断要素として機能しうる少なくとも１個のプロリン、好ましくは２個、３個、又はそれよりも多いプロリンを有してもよい。
【００９６】
第２の代替例によれば、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘであってよい。本発明の式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア中に親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸又は配列を組み込むことにより、核酸カーゴとのより柔軟性のある結合が可能となる。これにより、核酸カーゴのより効果的なコンパクション、ひいては、ヌクレアーゼ及び不要な脱コンパクションに対するより効果的な保護につながる。また、これにより更に、キャリア全体にわたって、又は好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ内部において低いカチオン性電荷を示す、式（Ｉ）で表される（長い）本発明のポリマーキャリアが提供され、望ましい、又は必要な場合に、より効果的に調節された結合特性につながる。
【００９７】
この目的では、親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ中のアミノ酸Ａは、例えばＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、又はＧｌｎから選択される同じか又は異なる親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸から選択することができる。また、アミノ酸ＡＡ（又は親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素の全体（ＡＡ）Ｘ）は、以下のペプチドの組み合わせから選択することもできる。すなわち、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、若しくはＡｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、（配列番号１４６〜１８１）、又はこれらの組み合わせ。
【００９８】
更に、親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、この要素を例えばリンカーとして、又はより好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素として、ジスルフィド結合を介して上記一般式（Ｉ）の更なる部分として導入することを可能とする−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接してよい。このような−ＳＨ含有部分は、本明細書において定義される１つの要素を本明細書において定義される他の要素と結合するのに適した、本明細書において定義される任意の部分であってよい。例として、このような−ＳＨ含有部分はシステインであってよい。したがって例えば親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、例えば以下のペプチドの組み合わせ、すなわち、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、若しくはＣｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、など（配列番号１８２〜２２３）、又はこれらの組み合わせから選択することができる。上記の各Ｃｙｓを、本明細書において定義される遊離−ＳＨ部分を有する任意の修飾ペプチド又は化学物質によって置き換えてもよい。
【００９９】
更に、親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、親水性（且つ好ましくは非帯電の極性）アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ中のＳｅｒ、Ｔｈｒ及びＡｓｎのより長い繰り返し配列の構造切断要素として機能しうる少なくとも１個のプロリン、好ましくは２個、３個、又はそれよりも多いプロリンを有してもよい。
【０１００】
第３の代替例によれば、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘであってよい。本発明の式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア中に親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして親油性アミノ酸又は配列を組み込むことにより、核酸カーゴ、及び／又は、複合体を形成する場合には式（Ｉ）で表されるポリマーキャリアとその核酸カーゴとのより強力なコンパクションが可能となる。これは特に、好ましくは下位式／要素｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝との関連において本発明のポリマーキャリアの１以上のポリマー鎖、特に親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの親油性部分と、核酸カーゴとの相互作用によるものである。この相互作用は、式（Ｉ）で表されるポリマーキャリアとその核酸カーゴとの複合体に更なる安定性を好ましくは付与するものである。この安定化は、異なるポリマー鎖間のある種の非共有結合架橋とみなすことができる。特に水性環境中においてこの相互作用は一般的に強力であり、顕著な作用をもたらす。
【０１０１】
この目的では、親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのアミノ酸ＡＡは、例えばＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、Ｍｅｔから選択される同じか又は異なる親油性アミノ酸から選択することができる。また、アミノ酸ＡＡ（又は親油性アミノ酸要素の全体（ＡＡ）Ｘ）は、以下のペプチドの組み合わせから選択することができる。すなわち、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、若しくはＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔなど（配列番号２２４〜２５８）、又はこれらの組み合わせ。
【０１０２】
更に、親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、この要素を例えばリンカーとして、又はより好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素として、ジスルフィド結合を介して、上記一般式（Ｉ）の更なる部分として導入することを可能とする−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接してよい。このような−ＳＨ含有部分は、本明細書において定義される１つの要素を本明細書において定義される他の要素と結合するのに適した、本明細書において定義される任意の部分であってよい。例として、このような−ＳＨ含有部分はシステインであってよい。したがって例えば親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、例えば以下のペプチドの組み合わせ、すなわち、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、若しくはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、ｏｒ  Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓなど（配列番号２８９−２９９）、又はこれらの組み合わせから選択することができる。上記の各Ｃｙｓを、本明細書において定義される遊離−ＳＨ部分を有する任意の修飾ペプチド又は化学物質によって置き換えてもよい。
【０１０３】
更に、親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、親油性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ中のＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ及びＭｅｔのより長い繰り返し配列の構造切断要素として機能しうる少なくとも１個のプロリン、好ましくは２個、３個、又はそれよりも多いプロリンを有してもよい。
【０１０４】
第４の代替例によれば、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘであってよい。本発明の式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリア中に弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして弱塩基性アミノ酸又は配列を組み込むことにより、プロトンスポンジとして機能し、エンドソーム脱出（エンドソーム放出とも呼ばれる）（プロトンスポンジ効果）を促進しうる。このような弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの組み込みは、トランスフェクション効率を高めるものであることが好ましい。
【０１０５】
この目的では、弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘのアミノ酸ＡＡは、例えばヒスチジン又はアスパラギン酸塩（アスパラギン酸）から選択される同じか又は異なる弱塩基性アミノ酸から選択することができる。また、弱塩基性アミノ酸ＡＡ（又は弱塩基性アミノ酸要素の全体（ＡＡ）Ｘ）は、以下のペプチドの組み合わせから選択することができる。すなわち、Ａｓｐ−Ｈｉｓ、Ｈｉｓ−Ａｓｐ、Ａｓｐ−Ａｓｐ、Ｈｉｓ−Ｈｉｓ、Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ、Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ、Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ、Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ、Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ、Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ、Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ、若しくはＨｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓなど（配列番号３００−３１１）、又はこれらの組み合わせ。
【０１０６】
更に、弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、この要素を例えばリンカーとして、又はより好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの要素として、ジスルフィド結合を介して、上記一般式（Ｉ）の更なる部分として導入することを可能とする−ＳＨ含有部分を含むか又はこれと隣接してよい。このような−ＳＨ含有部分は、本明細書において定義される１つの要素を本明細書において定義される他の要素と結合するのに適した、本明細書において定義される任意の部分であってよい。例として、このような−ＳＨ含有部分はシステインであってよい。したがって例えば弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、例えば以下のペプチドの組み合わせ、すなわち、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ、若しくはＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓなど（配列番号３１２−３２５）、又はこれらの組み合わせから選択することができる。上記の各Ｃｙｓを、本明細書において定義される遊離−ＳＨ部分を有する任意の修飾ペプチド又は化学物質によって置き換えてもよい。
【０１０７】
更に、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、弱塩基性アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ中のヒスチジン又はアスパラギン酸塩（アスパラギン酸）のより長い繰り返し配列の構造切断要素として機能しうる少なくとも１個のプロリン、好ましくは２個、３個、又はそれよりも多いプロリンを有してもよい。
【０１０８】
更に、上記式（Ｉ）で表される（又はその下位式のいずれかに基づく）本発明ポリマーキャリアは、好ましくはリガンドＬ又はアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして、上記式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアの例えば、細胞内、核内、エンドソームコンパートメント内といった特定の標的への局在化を可能とするシグナルペプチド、局在化シグナル若しくは核局在化シグナル又は配列（ＮＬＳ）、ミトコンドリア基質に対する配列、細胞膜に対する局在化配列、ゴルジ体、核、細胞質及び細胞骨格などに対する局在化配列を有してもよい。このようなシグナルペプチド、局在化シグナル若しくは配列、又は核局在化シグナルは本明細書において定義した核酸のいずれか、好ましくはＲＮＡ又はＤＮＡ、より好ましくはｓｈＲＮＡ又はｐＤＮＡを例えば核内に輸送するために使用することができる。これらに限定されるものではないが、このようなシグナルペプチド、局在化シグナル若しくは配列又は核局在化シグナルは、例えば小胞体に対する局在化配列を有してもよい。特定の局在化シグナル若しくは配列又は核局在化シグナルとしては、例えば、ＫＤＥＬ（配列番号：３２６）、ＤＤＥＬ（配列番号：３２７）、ＤＥＥＬ（配列番号：３２８）、ＱＥＤＬ（配列番号：３２９）、ＲＤＥＬ（配列番号：３３０）、及びＧＱＮＬＳＴＳＮ（配列番号：３３１）、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号：３３２）、ＰＱＫＫＩＫＳ（配列番号：３３３）、ＱＰＫＫＰ（配列番号：３３４）、ＲＫＫＲ（配列番号：３３５）、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＡＨＱ（配列番号：３３６）、ＲＱＡＲＲＮＲＲＲＲＷＲＥＲＱＲ（配列番号：３３７）、ＭＰＬＴＲＲＲＰＡＡＳＱＡＬＡＰＰＴＰ（配列番号：３３８）、ＧＡＡＬＴＩＬＶ（配列番号：３３９）、及びＧＡＡＬＴＬＬＧ（配列番号：３４０）などの核局在化配列、ＭＤＤＱＲＤＬＩＳＮＮＥＱＬＰ（配列番号：３４１）などのエンドソームコンパートメントに対する局在化配列、ＭＬＦＮＬＲＸＸＬＮＮＡＡＦＲＨＧＨＮＦＭＶＲＮＦＲＣＧＱＰＬＸ（配列番号：３４２）などのミトコンドリア基質に対する局在化配列、ＧＣＶＣＳＳＮＰ（配列番号：３４３）、ＧＱＴＶＴＴＰＬ（配列番号：３４４）、ＧＱＥＬＳＱＨＥ（配列番号：３４５）、ＧＮＳＰＳＹＮＰ（配列番号：３４６）、ＧＶＳＧＳＫＧＱ（配列番号：３４７）、ＧＱＴＩＴＴＰＬ（配列番号：３４８）、ＧＱＴＬＴＴＰＬ（配列番号：３４９）、ＧＱＩＦＳＲＳＡ（配列番号：３５０）、ＧＱＩＨＧＬＳＰ（配列番号：３５１）、ＧＡＲＡＳＶＬＳ（配列番号：３５２）、及びＧＣＴＬＳＡＥＥ（配列番号：３５３）などの細胞膜に対する局在化配列、ＧＡＱＶＳＳＱＫ（配列番号：３５４）、及びＧＡＱＬＳＲＮＴ（配列番号：３５５）などの小胞体及び核に対する局在化配列、ＧＮＡＡＡＡＫＫ（配列番号：３５６）などのゴルジ体、核、細胞質、及び細胞骨格に対する局在化配列、ＧＮＥＡＳＹＰＬ（配列番号：３５７）などの細胞質及び細胞骨格に対する局在化配列、ＧＳＳＫＳＫＰＫ（配列番号：３５８）などの細胞膜及び細胞骨格に対する局在化配列などが挙げられる。本明細書において定義される分泌シグナルペプチド配列の例としては、これらに限定されるものではないが、古典的又は非古典的ＭＨＣ分子のシグナル配列（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ＊０２０１などのＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩ分子のシグナル配列）、本明細書において定義されるサイトカイン若しくは免疫グロブリンのシグナル配列、本明細書において定義される免疫グロブリン若しくは抗体の不変鎖のシグナル配列、Ｌａｍｐ１、タパシン、Ｅｒｐ５７、カルレティキュリン、カルネキシン及び更なる膜結合タンパク質のシグナル配列、又は小胞体（ＥＲ）若しくはエンドソーム／リソソームコンパートメントと結合するタンパク質のシグナル配列が挙げられる。特に好ましくは、ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ＊０２０１のシグナル配列を本発明に基づいて使用することができる。最も好ましくはこのような他の要素は、本明細書において定義される要素Ｌとして存在してよい。また、このような他の要素は、例えば本明細書において定義される要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘに、例えば要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの側鎖に、好ましくは要素Ｐ２の側鎖を介して、又は場合により要素ＬとＰ１、又はＰ３とＬとの間のリンカーとして結合されてもよい。要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、又はＰ３のいずれかに対する結合は、酸に不安定な結合を用いて、好ましくは要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、又はＰ３のいずれかの側鎖を介して実現することも可能であり、これにより、より低いｐＨの値、例えば本明細書において定義される生理的ｐＨの値において他の要素を脱離又は放出することが可能となる。
【０１０９】
更に、上記式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）本発明のポリマーキャリアは、好ましくは本発明のポリマーキャリアの機能を適宜調節することが可能なリガンド又はアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして更なる機能性ペプチド又はタンパク質を更に含んでもよい。１つの代替例によれば、このような更なるペプチド又はタンパク質には、輸送のためのいわゆる細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）又はカチオン性ペプチドが含まれうる。特に好ましいのは、エンドソームにｐＨにより媒介されるコンホメーション変化を誘導し、リポソームの脂質層内に挿入されることによりエンドソームからの本発明のポリマーキャリア（核酸との複合体として）の放出を高めるＣＰＰである。輸送のためのいわゆる細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）又はカチオン性ペプチドとしては、これらに限定されるものではないが、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン又はスペルミジン、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、ポリアルギニン、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、トランスポータン又はＭＰＧペプチドなどのキメラＣＰＰ、ＨＩＶ−結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ−由来ペプチド、オリゴアルギニン、例えばペネトラチン、アンテナペディア由来ペプチド（特にドロソフィラ・アンテナペディア由来のもの）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなどのペネトラチンファミリーのメンバー、例えばブフォリン−２などの抗微生物剤由来ＣＰＰ、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ−由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、高プロリン含量ペプチド、ロリゴマー（Ｌｏｌｉｇｏｍｅｒ）、高アルギニン含量ペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ポリ−Ｌ−リシン、ポリ−アルギニン、ヒストン、ＶＰ２２由来又は類似体ペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ又はタンパク質トランスダクションドメイン（ＰＴＤ）、ＰｐＴ６２０、高プロリン含量ペプチド、高アルギニン含量ペプチド、高リシン含量ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチドなどが挙げられる。同様に、このような他の要素は、本明細書において定義される要素Ｌ又は（ＡＡ）Ｘとして存在してもよい。また、このような他の要素は、本明細書において定義される要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘに、例えば要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの側鎖に、好ましくは要素Ｐ２の側鎖を介して、又は場合により要素ＬとＰ１、又はＰ３とＬとの間のリンカーとして結合されてもよい。要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかに対する結合は、酸に不安定な結合を用いて、好ましくは要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの側鎖を介して実現することも可能であり、これにより、より低いｐＨの値、例えば本明細書において定義される生理的ｐＨの値において他の要素を脱離又は放出することが可能となる。この文脈において、この他の要素は、リガンドＬ又は式（Ｉ）の繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎのアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして存在することが特に好ましい。
【０１１０】
最後の代替例の１つによれば、上記式（Ｉ）（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）本発明のポリマーキャリアは、他の要素として、好ましくはアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして、細胞内において任意の好ましい機能を行うことが可能な任意のペプチド又はタンパク質を含んでもよい。特に好ましいのは、治療上の活性を有するタンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチド、例えば腫瘍抗原、病原性抗原（動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原）、自己免疫性抗原若しくは更なる抗原などの抗原から選択されるタンパク質又はペプチド、アレルゲンから選択されるタンパク質又はペプチド、抗体から選択されるタンパク質又はペプチド、免疫賦活性タンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチド、抗原特異的Ｔ細胞受容体から選択されるタンパク質又はペプチド、又は、核酸をコードするための下記に定義される特定の（治療）用途に適した他の任意のタンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチドである。特に好ましいのは、本明細書において定義される抗原からのペプチドエピトープである。同様に、このような他の要素は、好ましくは本明細書において定義される（ＡＡ）Ｘとして存在してもよい。また、このような他の要素は、本明細書において定義される要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘに、例えば要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの側鎖に、好ましくは要素Ｐ２の側鎖を介して、又は場合により要素ＬとＰ１、又はＰ３とＬとの間のリンカーとして結合されてもよい。要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかに対する結合は、酸に不安定な結合を用いて、好ましくは要素Ｌ、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３又は（ＡＡ）Ｘのいずれかの側鎖を介して実現することも可能であり、これにより、より低いｐＨの値、例えば本明細書において定義される生理的ｐＨの値において他の要素を脱離又は放出することが可能となる。この文脈において、この他の要素は、式（Ｉ）の繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎのアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘとして存在することが特に好ましい。
【０１１１】
式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアは、上記に述べたカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド、タンパク質又はポリマー又は例えば（ＡＡ）などの他の要素の少なくとも１つを含んでよく、その際、上記の代替例のいずれかを互いに組み合わせることが可能であり、−ＳＨ部分を介した縮合重合反応においてこれらの要素を重合することによって形成することができる。
【０１１２】
本発明の基礎をなす目的は、本発明の第２の実施形態に基づき、核酸カーゴと本明細書において定義される一般式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌに基づく（又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体によって更に解決される。この複合体は、本発明の応用の目的において「複合化核酸」と呼ぶ場合もある。
【０１１３】
本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体においては、本明細書において定義される一般式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌに基づく（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子及び核酸カーゴは、本発明のポリマーキャリア分子：核酸が、約５〜１０，０００のモル比、好ましくは約５〜５，０００のモル比、より好ましくは約５〜２，５００のモル比、更により好ましくは約５〜２，０００のモル比、最も好ましくは約５〜１，０００のモル比で、又は、本発明のポリマーキャリア分子：核酸が、約５０〜１，０００のモル比、例えば本発明のポリマーキャリア分子：核酸が、約１０〜５，０００のモル比、約２０〜２，５００のモル比、約２５〜２，０００のモル比で一般的に与えられる。
【０１１４】
更に、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体においては、本明細書において定義される一般式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌに基づく（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子及び核酸カーゴは、約０．１〜２０のＮ／Ｐ比、好ましくは約０．２〜１２のＮ／Ｐ比、更により好ましくは約０．４〜１０、又は０．６〜５のＮ／Ｐ比で与えられることが好ましい。この文脈において、Ｎ／Ｐ比は、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体全体の窒素／リン酸比（Ｎ／Ｐ比）として定義される。これは、ペプチドが使用されている場合には、ペプチドの含有量／量を一般的に表しており、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体に結合又は複合化した核酸の含有量／量に特有である。Ｎ／Ｐ比は、例えば、ＲＮＡが統計学的な塩基の分布を示すものとして、１μｇのＲＮＡが約３ｎｍｏｌのリン酸残基を一般的に含むことに基づいて計算することができる。更に、分子量及びその（カチオン性）アミノ酸の数ｘに応じて、１μｇのペプチドは、約ｘ＊１μｇ／Ｍ（ペプチド）ｎｍｏｌの窒素残基を一般的に含む。
【０１１５】
本発明との関連において、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体のこのような核酸カーゴは、例えば任意のＤＮＡから、好ましくはこれらに限定されるものではないが、例えば、ゲノムＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ分子、二本鎖ＤＮＡ分子、コーディングＤＮＡ、ＤＮＡプライマー、ＤＮＡプローブ、ｐＤＮＡ，免疫賦活性ＤＮＡから選択されるか、あるいは、例えば任意のＰＮＡ（ペプチド核酸）から選択されるか、あるいは、例えば任意のＲＮＡから、好ましくはこれらに限定されるものではないが、コーディングＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、又はリボスイッチ、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）リボザイム又はアプタマーなどから選択されうる任意の適当な核酸であってよい。核酸は、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、又はウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）であってもよい。好ましくは、核酸はＲＮＡであり、より好ましくはコーディングＲＮＡである。更により好ましくは、核酸は（直鎖状）一本鎖ＲＮＡであってよく、更により好ましくはｍＲＮＡであってよい。本発明との関連においては、ｍＲＮＡは、一般的に、例えば、場合により用いられる５’−ＵＴＲ領域、上流に位置するリボソーム結合部位に続くコード領域、場合により用いられる３’−ＵＴＲ領域、及びこれに続いてもよいポリＡテール（及び／又はポリＣテール）などの幾つかの構造的要素から構成されるＲＮＡである。ｍＲＮＡは、モノシストロニック、ジシストロニック、又は更にはマルチシストロニックｍＲＮＡ、すなわち、本明細書において定義される１個、２個、又はそれよりも多い（同じか又は異なる）タンパク質又はペプチドのコーディング配列を有するＲＮＡとして存在しうる。ジシストロニック又は更にはマルチシストロニックｍＲＮＡにおけるこのようなコーディング配列は、少なくとも１個のＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）配列によって分離されていてよい。
【０１１６】
更に、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、一本鎖又は二本鎖核酸（分子）（２本の一本鎖核酸（分子）の非共有結合による会合のため、核酸（分子）としてもみなされうる）、又は、少なくとも部分的に自己相補的な、部分二本鎖若しくは部分一本鎖核酸（これらの部分二本鎖若しくは部分一本鎖核酸分子はいずれも、より長い、及びより短い一本鎖核酸分子によって、又はほぼ長さの等しい２本の一本鎖核酸分子によって一般的に形成され、その場合、一方の一本鎖核酸分子は他方の一本鎖核酸分子と部分的に相補的であり、したがって両者はこの領域で二本鎖核酸分子、すなわち部分二本鎖又は部分一本鎖核酸（分子）を形成する）であってよい。好ましくは、核酸（分子）は一本鎖核酸分子であってよい。更に、核酸（分子）は、環状又は直鎖状の核酸分子、好ましくは直鎖状の核酸分子であってよい。
【０１１７】
コーディング核酸
本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子は、これらに限定されるものではないが、例えばアジュバントタンパク質などの治療上の活性を有するタンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチド、例えば腫瘍抗原、病原性抗原（動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原）、自己免疫性抗原若しくは更なる抗原などの抗原から選択されるタンパク質又はペプチド、アレルゲンから選択されるタンパク質又はペプチド、抗体から選択されるタンパク質又はペプチド、免疫賦活性タンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチド、抗原特異的Ｔ細胞受容体から選択されるタンパク質又はペプチド、又は、特定の（治療）用途に適した他の任意のタンパク質又はペプチドから選択されるタンパク質又はペプチドをコードしたものでよい。
【０１１８】
本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子のコーディング領域は、モノシストロニック、ジシストロニック、又は更にはマルチシストロニック核酸、すなわち、１個、２個、又はそれよりも多いタンパク質又はペプチドのコーディング配列を有する核酸として存在してよい。ジシストロニック又は更にはマルチシストロニックｍＲＮＡにおけるこのようなコーディング配列は、少なくとも１個のＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）配列によって、又は複数のタンパク質又はペプチドを含む、得られるポリペプチドの開裂を引き起こすシグナルペプチドによって分離されてもよい。
【０１１９】
特定の好ましい態様においては、コードされたペプチド又はタンパク質は、ヒト、ウイルス、細菌、原生動物のタンパク質又はペプチドから選択される。
【０１２０】
ａ）治療活性を有するタンパク質
本発明との関連において、治療活性を有するタンパク質又はペプチドを、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードすることができる。治療活性を有するタンパク質は、治癒に一定の作用を及ぼし、好ましくは本明細書において定義される疾患を予防若しくは治療するタンパク質であるか、又は患者が必要とするタンパク質として定義される。これらのタンパク質は、当業者には周知の任意の天然若しくは人工的に設計された組換え又は単離タンパク質から選択することができる。これらに限定されるものではないが、治療活性を有するタンパク質には、例えば、サイトカイン、リンフォカイン、モノカイン、成長因子、受容体、シグナル伝達分子、転写因子などの細胞内のシグナル伝達を刺激又は阻害することが可能なタンパク質、抗凝血剤、抗トロンビン、抗アレルギータンパク質、アポトーシス因子又はアポトーシス関連タンパク質、治療活性を有する酵素、及び、あらゆる後天性疾患又はあらゆる遺伝性疾患に関連したあらゆるタンパク質が含まれうる。
【０１２１】
本明細書において定義されるポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされうる治療活性を有するタンパク質は、アジュバントタンパク質であってもよい。この文脈において、アジュバントタンパク質は、本明細書において定義される自然免疫反応を誘発することが可能な任意のタンパク質として好ましくは理解されるべきである。好ましくはこのような自然免疫反応には、例えば、ヒトＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０から選択されるＴｏｌｌ様受容体、又はマウスＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択されるＴｏｌｌ様受容体などのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーから選択される受容体などのパターン認識受容体の活性化が含まれる。より好ましくは、アジュバントタンパク質は、ヒトアジュバントタンパク質から、又は、これらに限定されるものではないが、細菌タンパク質、原生動物タンパク質、ウイルスタンパク質、又は真菌タンパク質からなる群から選択される病原性アジュバントタンパク質、特に細菌アジュバントタンパク質から選択される。更に、アジュバント効果に関与するヒトタンパク質（例えば、パターン認識受容体のリガンド、パターン認識受容体、シグナル伝達経路のタンパク質、転写因子又はサイトカインなど）をコードする核酸も同様に使用することができる。
【０１２２】
ｂ）抗原
本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子は、抗原をコードしてもよい。本発明に基づけば、用語「抗原」は、免疫系によって認識され、例えば、獲得免疫反応の一環として抗体又は抗原特異的Ｔ細胞を形成することによって、抗原特異的免疫反応を誘発することが可能な物質のことを指す。この文脈において、タンパク質の抗原性エピトープ、フラグメント又はペプチドとは、それぞれＢ細胞、抗体又はＴ細胞によって認識されうる、特にＢ細胞及びＴ細胞エピトープのことを意味する。
【０１２３】
本発明との関連において、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗原には、上記の定義にあてはまる任意の抗原、抗原性エピトープ又は抗原性ペプチド、より好ましくは、例えば、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、自己免疫性自己抗原、病原性抗原などのタンパク質及びペプチド抗原が一般的に含まれる。詳細には、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗原は、細胞の外部で産生される抗原、より好ましくはホスト生物（例えばヒト）自体に由来しない（すなわち非自己抗原）、ホスト生物の外部のホスト細胞に由来する抗原、例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、アレルギー性抗原などであってよい。アレルギー性抗原（アレルギー抗原）は一般的に、ヒトにアレルギーを引き起こし、ヒト又は他の供給源に由来しうる抗原である。更に、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗原は更に、細胞、組織又は身体の内部において産生される抗原であってもよい。このような抗原としては、ホスト生物（例えばヒト）自体に由来する抗原、例えば腫瘍抗原、自己免疫自己抗原などの自己抗原又は自家抗原などが含まれるばかりでなく、更に、ホスト生物の外部のホスト細胞に元来由来するものであるが、例えば（プロテアーゼ）分解、代謝などにより、身体、組織又は細胞の内部において断片化又は分解された本明細書において定義される（非自己）抗原が含まれる。
【０１２４】
本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗原の１つのクラスは、腫瘍抗原からなる。「腫瘍抗原」は、（腫瘍）細胞の表面上に好ましくは存在している。腫瘍抗原は、正常細胞と比較して腫瘍細胞において過剰発現されるタンパク質から選択することもできる。更に、腫瘍抗原は、それ自体は（又は元々それ自体は）変性して（されて）いないが、疑われる腫瘍と関連した細胞において発現される抗原も含まれる。腫瘍供給血管又はその（再）形成と関係のある抗原、特に血管新生に関連した抗原、例えばＶＥＧＦ、ｂＦＧＦなどの成長因子も本明細書に含まれる。腫瘍と関係のある抗原には、更に、一般的に腫瘍を包埋した細胞又は組織からの抗原が含まれる。更に、癌疾患を有する患者（自覚又は無自覚の）患者では、特定の物質（通常はタンパク質又はペプチド）が発現しており、これらの物質は患者の体液中に高い濃度で存在する。これらの物質は「腫瘍抗原」とも呼ばれるが、これらは免疫反応誘導物質という厳密な意味においては抗原ではない。この腫瘍抗原のクラスは、更に腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）と腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）とに更に分けることができる。ＴＳＡは腫瘍細胞のみによって提示され、正常な「健康な」細胞によっては提示されない。ＴＳＡは腫瘍特異的突然変異によって生ずる。ＴＡＡはより普通に存在し、腫瘍細胞及び健康な細胞の両方によって提示される。これらの抗原が認識されると、抗原提示細胞が細胞障害性Ｔ細胞によって破壊されうる。更に腫瘍抗原は例えば突然変異した受容体の形態で腫瘍の表面上に存在する場合がある。この場合、腫瘍抗原は抗体によって認識されうる。
【０１２５】
好ましい一態様によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸によってコードされるこうした腫瘍抗原は、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ  ＨＰＧ１、α−５−β−１−インテグリン、α−５−β−６−インテグリン、α−アクチニン−４／ｍ、α−メチルアシル−補酵素Ａラセマーゼ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ｂｃｒ／ａｂｌ，β−カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ−４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７−２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、コアクトシン様タンパク質、コラーゲンＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａｕ−１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未成熟ラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ−ＬＣ−１、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ−Ａ１、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−２／ｍ、マトリックスタンパク質２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシンクラスＩ／ｍ、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＯＡ１、ＯＦＡ−ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１−キナーゼ、Ｐｉｎ−１、Ｐｍｌ／ＰＡＲα、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、及びＷＴ１、又はこれらのフラグメント、変異体、若しくはエピトープからなる群から選択される。エピトープは、通常、５〜１５個、好ましくは５〜１２個、より好ましくは６個〜９個の抗原のアミノ酸を、好ましくはその天然型として有する。
【０１２６】
別の代替例によれば、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗原の更なる１つのクラスは、アレルギー性抗原からなる。このようなアレルギー性抗原は、例えば、動物、植物、真菌、細菌などの異なる供給源に由来する抗原から選択することができる。これに関連したアレルゲンとしては、草、花粉、カビ、薬物、又は多くの環境誘発因子などが挙げられる。アレルギー性抗原は、核酸及びそのフラグメント、タンパク質又はペプチド及びそのフラグメント、炭水化物、多糖類、糖類、脂質、リン脂質などの異なる化合物のクラスに一般的に属している。本発明との関連において特に関心の対象となるものは、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードすることができる抗原、すなわち、タンパク質又はペプチド抗原及びそれらのフラグメント若しくはエピトープ、又は核酸及びそのフラグメント、特に、このようなタンパク質又はペプチド抗原及びそれらのフラグメント若しくはエピトープをコードした核酸及びそのフラグメントである。
【０１２７】
ｃ）抗体
更なる代替例によれば、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子は、抗体又は抗体フラグメントをコードしてもよい。本発明によれば、このような抗体は、例えば当該技術分野では周知の任意の組換えにより作出されたか又は天然の抗体、特に治療、診断若しくは科学的目的に適した抗体、又は特定の癌疾患に関連して同定された抗体などの任意の抗体から選択することができる。ここで言うところの「抗体」なる用語は、その最も広義の意味において用いられ、具体的には、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、及びブロッキング抗体又は中和抗体など）、並びにポリエピトープ特異性を有する抗体種が含まれる。本発明によれば、「抗体」なる用語には、天然の抗体、ホスト生物中で免疫化によって産生される抗体、天然の抗体から単離及び同定された抗体、又はホスト生物中で免疫化によって産生され、当該技術分野では周知の生体分子的方法により組換えによって産生される抗体、及び、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、細胞内抗体、すなわち、細胞内で発現され、場合により特定の細胞コンパートメント内に局在化された抗体、並びに上記の抗体のフラグメント及び変異体などの、当該技術分野では周知の任意の抗体（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥ抗体）が一般的に含まれる。一般に、抗体は、いずれも可変領域及び定常領域を有する軽鎖と重鎖とから構成される。軽鎖は、Ｎ末端の可変領域ＶＬとＣ末端の定常領域ＣＬとから構成される。これに対して、例えばＩｇＧ抗体の重鎖は、Ｎ末端の可変領域ＶＨと、３個の定常領域ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３とから構成される。
【０１２８】
本発明との関連において、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされる抗体は、完全長の抗体、すなわち、上記に述べたような完全な重鎖と完全な軽鎖とからなる抗体を好ましくは含みうる。しかしながら、抗体フラグメント、変異体、付加体などの抗体の誘導体が、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子によってコードされてもよい。抗体フラグメントは、上記の（完全長）抗体のＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｃｂ、ｐＦｃ’、Ｆｄ及びＦｖフラグメントから好ましくは選択される。一般に、抗体フラグメントは当該技術分野では周知のものである。例えば、Ｆａｂ（Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ）フラグメントは、重鎖及び軽鎖のそれぞれの１個の定常領域と１個の可変領域とからなる。これら２個の可変領域が特定の抗原のエピトープに結合する。これら２本の鎖は、ジスルフィド結合によって結合している。例えば、ｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）フラグメントは、軽鎖と重鎖の可変領域で構成される。各ドメインは、人工結合、１５〜２５個のグリシン、プロリン及び／又はセリン残基からなるペプチドなどのポリペプチド結合によって連結されている。
【０１２９】
本発明との関連においては、抗体又は抗体フラグメントの異なる鎖は、マルチシストロニックな核酸分子によってコードされることが好ましい。また、異なる系統の抗体又は抗体フラグメントが複数のモノシストロニック核酸（配列）によってコードされてもよい。
【０１３０】
ｓｉＲＮＡ
更なる代替例によれば、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、ｄｓＲＮＡ、好ましくはｓｉＲＮＡの形態であってよい。ｄｓＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡは、特にＲＮＡ干渉の現象に関連して特に興味深い。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のインビトロでの方法は、遺伝子発現の配列特異的な抑制を誘発する二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）に基づいたものである（Ｚａｍｏｒｅ  （２００１）  Ｎａｔ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ９：  ７４６−７５０；  Ｓｈａｒｐ  （２００１）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  ５：４８５−４９０：  Ｈａｎｎｏｎ  （２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１：  ２４４−２５１）。長いｄｓＲＮＡを哺乳動物細胞にトランスフェクションする際には、タンパク質キナーゼＲ及びＲＮアーゼＬの活性化によって例えばインターフェロン応答のような非特異的な作用が引き起こされる（Ｓｔａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６７：  ２２７−２６４；  Ｈｅ  ａｎｄ  Ｋａｔｚｅ  （２００２）  Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５：  ９５−１１９）。これらの非特異的な作用は、より短い、例えば２１〜２３量体のいわゆるｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）が用いられる場合に防止されるが、これは、非特異的作用は３０ｂｐよりも短いｓｉＲＮＡによっては誘発されないことによる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：  ４９４−４９８）。
したがって、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、１７〜２９、好ましくは１９〜２５の長さを有し、上記において（有効成分として）述べられる（治療上の関連を有する）タンパク質又は抗原の核酸配列の一部、コード部分又は非コード部分、好ましくはコード部分と（ｄｓＲＮＡのヌクレオチドの）少なくとも９０％、より好ましくは９５％、特に１００％相補的である二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であってよい。９０％相補的とは、本明細書において述べられるｄｓＲＮＡの長さが例えば２０ヌクレオチドである場合、ｄｓＲＮＡに含まれる、ｍＲＮＡの対応する部分と対応する相補性を有さないヌクレオチドが２個以下であることを意味する。しかしながら、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸として本発明に基づいて用いられる二本鎖ＲＮＡの配列は、その一般的な構造において、上記に述べた治療上の関連を有するタンパク質又は抗原の核酸の部分と全体的に相補的であることが好ましい。この文脈において、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表されるポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は、一般構造５’−（Ｎ１７〜２９）−３’を有し、好ましくは一般構造５’−（Ｎ１９〜２５）−３’を有し、より好ましくは一般構造５’−（Ｎ１９〜２４）−３’を有し、更により好ましくは一般構造５’−（Ｎ２１〜２３）−３’を有するｄｓＲＮＡであってよく、ただし、各一般構造において、各Ｎは、治療上の関連を有するタンパク質又は抗原のｍＲＮＡの連続した１７〜２９個のヌクレオチドから好ましくは選択され、一般構造５’−（Ｎ１７〜２９）−３’中にその自然の順序で存在する、上記に述べた治療上の関連を有するタンパク質又は抗原のｍＲＮＡの部分の（好ましくは異なる）ヌクレオチドである。原則的には、ｍＲＮＡのコード領域中に存在する１７〜２９、好ましくは１９〜２５塩基対の長さを有するいずれの部分も、本明細書におけるｄｓＲＮＡの標的配列として機能しうる。同様に、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸として用いられるｄｓＲＮＡは、ｍＲＮＡのコード領域内に位置していない、例えば、特に５’末端の非コード領域内の上記に（有効成分として）述べた（治療上の関連を有する）タンパク質又は抗原のヌクレオチド配列を標的とすることも可能であり、したがって、調節機能を有するｍＲＮＡの非コード領域を標的とすることも可能である。したがって、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸として用いられるｄｓＲＮＡの標的配列は、ｍＲＮＡの翻訳領域及び非翻訳領域内に位置してよく、及び／又は、上記に述べたタンパク質又は抗原の調節要素の領域内に位置してもよい。本明細書のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸として用いられるｄｓＲＮＡの標的配列は、非翻訳配列と翻訳配列との重複領域に位置してもよく、詳細には、標的配列はｍＲＮＡのコード領域の開始トリプレットの少なくともヌクレオチド１個上流を含んでよい。
【０１３１】
免疫賦活性核酸
ａ）免疫賦活性ＣｐＧ核酸
別の代替例によれば、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、自然免疫反応を好ましくは誘導する（免疫賦活性）ＣｐＧ核酸、特にＣｐＧ−ＲＮＡ又はＣｐＧ−ＤＮＡの形態であってもよい。本発明に基づいて用いられるＣｐＧ−ＲＮＡ又はＣｐＧ−ＤＮＡは、一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｄｓＣｐＧ−ＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）又は二本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）であってよい。本発明に基づいて用いられるＣｐＧ核酸は、好ましくはＣｐＧ−ＲＮＡの形態であり、より好ましくは一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）の形態である。やはり好ましくは、こうしたＣｐＧ核酸は、上記に述べた所定の長さを有することが好ましい。ＣｐＧモチーフはメチル化されないことが好ましい。
【０１３２】
ｂ）免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）
同様に、更なる代替例に基づけば、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、好ましくは自然免疫反応を誘発する免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）の形態であってもよい。このような免疫賦活性ＲＮＡは、例えば本明細書において定義されるコーディングＲＮＡなどの任意の（二本鎖又は一本鎖の）ＲＮＡであってよい。好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは、一本鎖、二本鎖又は部分二本鎖ＲＮＡ、より好ましくは一本鎖ＲＮＡ及び環状又は直鎖状ＲＮＡの少なくともいずれか、より好ましくは直鎖状ＲＮＡであってよい。より好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは（直鎖状の）一本鎖ＲＮＡであってよい。更により好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは、（長い）（直鎖状の）一本鎖の非コーディングＲＮＡであってよい。この文脈において、ｉｓＲＮＡはインビトロで転写されたＲＮＡにおけるようにその５’−末端に三リン酸を有していることが特に好ましい。免疫賦活性ＲＮＡは、本明細書において定義される短いＲＮＡオリゴヌクレオチドとして存在してもよい。本明細書において使用する免疫賦活性ＲＮＡは、自然に存在する任意のクラスのＲＮＡ分子から更に選択するか、あるいは人工的に調製してもよく、自然免疫反応を誘導するか、抗原によって誘導される適応免疫反応を支持しうるものであってよい。この文脈において、免疫反応は様々な態様で生じうる。好適な（適応）免疫反応の重要な因子の１つとして、異なるＴ細胞亜集団の刺激がある。Ｔリンパ球は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞及びＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞の２つの亜集団に一般的に分けられ、これらにより免疫系は細胞内（Ｔｈ１）及び細胞外（Ｔｈ２）の病原体（例えば抗原）を破壊することが可能である。これら２つのＴｈ細胞集団は、これらの産生するエフェクタータンパク質（サイトカイン）のパターンにおいて異なっている。したがって、Ｔｈ１細胞は、マクロファージ及び細胞障害性Ｔ細胞の活性化によって細胞性免疫反応を助ける。これに対してＴｈ２細胞は、Ｂ細胞を形質細胞へと変換させるように刺激し、抗体（例えば抗原に対する）を形成することによって体液性免疫反応を促進する。したがって、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、適応免疫反応の誘導及び維持において極めて重要である。本発明との関連において、（適応）免疫反応のＴｈ１／Ｔｈ２比は、細胞反応（Ｔｈ１反応）に向かう方向にシフトすることが好ましく、これにより細胞性免疫反応が誘導される。１つの例によれば、適応免疫反応を支持しうる自然免疫系を、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドによって活性化することができる。ＴＬＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、哺乳動物における自然免疫において重要な役割を担う、高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドのファミリーである。現在、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３（Ｔｏｌｌ様受容体：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、又はＴＬＲ１３）と呼ばれる少なくとも１３種類のファミリーのメンバーが特定されている。更に、多くの特異的なＴＬＲリガンドが特定されている。例えば、非メチル化細菌ＤＮＡ及びその合成類似体（ＣｐＧ  ＤＮＡ）は、ＴＬＲ９のリガンドであることが見出されている（Ｈｅｍｍｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−５；  Ｂａｕｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｐｒｏｃ  ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ  ＵＳＡ  ９８，  ９２３７−４２）。更に、特定のＴＬＲのリガンドには特定の核酸分子が含まれ、特定の種類のＲＮＡは、配列とは独立して、又は配列に依存して免疫賦活性を示すことが報告されており、これらの異なる免疫賦活性ＲＮＡは、例えばＴＬＲ３、ＴＬＲ７若しくはＴＬＲ８、又はＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ−５などの細胞内受容体を刺激しうる。例えば、Ｌｉｐｆｏｒｄらは、特定のＧ，Ｕ含有オリゴリボヌクレオチドが、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８を介して作用することにより免疫賦活性を示すことを決定した（国際特許出願公開第ＷＯ０３／０８６２８０号を参照）。Ｌｉｐｆｏｒｄらにより述べられる免疫賦活性のＧ，Ｕ含有オリゴリボヌクレオチドは、リボソームＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、及びウイルスＲＮＡなどのＲＮＡ源より誘導可能であるものと考えられた。
【０１３３】
したがって、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）で表される（又は本明細書におけるその下位式のいずれかに基づく）ポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子として用いられる免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）は、これらに限定されるものではないが、好ましくはヒトファミリーメンバーのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０又はマウスファミリーメンバーのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択される、より好ましくは（ヒト）ファミリーメンバーのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０から選択される、更により好ましくはＴＬＲ７及びＴＬＲ８から選択されるＴＬＲのリガンド、ＲＮＡの細胞内受容体のリガンド（ＲＩＧ−Ｉ又はＭＤＡ−５など）（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，  Ｅ．，  Ｔｓｃｈｏｐｐ，  Ｊ．  （２００６）．  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅｓ：  ｔｗｏ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｗａｙｓ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ２２，  ５６１−５６９を参照）に相当するか、及び／又は該リガンドをコードしたＲＮＡ配列、又は他の任意の免疫賦活性ＲＮＡ配列などの、免疫賦活性を示すことが知られるあらゆるＲＮＡ配列が含まれうる。更に、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子として使用される免疫賦活性ＲＮＡ分子（のクラス）には、免疫反応を誘発することが可能な他の任意のＲＮＡが含まれうる。これらに限定されるものではないが、このような免疫賦活性ＲＮＡには、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）が含まれうる。このような免疫賦活性ＲＮＡは、ヌクレオチド１，０００〜５，０００個、５００〜５，０００個、５〜５，０００個、又は５〜１，０００個、５〜５００個、５〜２５０個、５〜１００個、５〜５０個若しくは５〜３０個の長さを有してよい。
【０１３４】
本発明のこのジスルフィド結合の特に好ましい一態様によれば、このような免疫賦活性核酸配列、特にｉｓＲＮＡは、下記式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の核酸からなるか、又は該核酸を含む。
ＧｌＸｍＧｎ    （式（ＩＩＩ））
［式中、
Ｇは、グアノシン、ウラシル、又はグアノシン若しくはウラシルの類似体であり、
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、又は上記のヌクレオチドの類似体であり、
ｌは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｌ＝１である場合、Ｇはグアノシン又はその類似体であり、
ｌ＞１である場合、ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシン又はその類似体であり、
ｍは、整数且つ少なくとも３であり、
ただし、
ｍ＝３である場合、Ｘはウラシル又はその類似体であり、
ｍ＞３である場合、少なくとも３個の連続したウラシル又はその類似体が存在し、
ｎは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｎ＝１である場合、Ｇはグアノシン又はその類似体であり、
ｎ＞１である場合、ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシン又はその類似体である。］
【０１３５】
ＣｌＸｍＣｎ    （式（ＩＶ））
［式中、
Ｃは、シトシン、ウラシル、又はシトシン若しくはウラシルの類似体であり、
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、又は上記のヌクレオチドの類似体であり、
ｌは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｌ＝１である場合、Ｃはシトシン又はその類似体であり、
ｌ＞１である場合、ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシン又はその類似体であり、
ｍは、整数且つ少なくとも３であり、
ただし、
ｍ＝３である場合、Ｘはウラシル又はその類似体であり、
ｍ＞３である場合、少なくとも３個の連続したウラシル又はその類似体が存在し、
ｎは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｎ＝１である場合、Ｃはシトシン又はその類似体であり、
ｎ＞１である場合、ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシン又はその類似体である。］
【０１３６】
本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸カーゴとして使用することが可能な式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の核酸は、一般的にヌクレオチド約５〜１００個（ただし特定の実施形態では、例えば最大でヌクレオチド２００個など、ヌクレオチド１００個よりも長い）、５〜９０個、又は５〜８０個の長さ、好ましくはヌクレオチド約５〜７０個の長さ、より好ましくは約８〜６０個の長さ、より好ましくはヌクレオチド１５〜６０個、より好ましくは２０〜６０個、最も好ましくはヌクレオチド３０〜６０個の長さを有する比較的短い核酸分子であってよい。本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸が、例えばヌクレオチド１００個の最大の長さを有する場合、ｍは一般的に９８以下である。式（ＩＩＩ）の核酸中のヌクレオチドＧの数はｌ又はｎによって決定される。ｌ及びｎは、互いに独立してそれぞれ１〜４０の整数であり、ただしｌ又はｎ＝１である場合には、Ｇはグアノシン又はその類似体であり、ｌ又はｎ＞１である場合には、ヌクレオチドの少なくとも５０％がグアノシン又はその類似体である。例えば、一切の限定を意味するものではないが、ｌ又はｎ＝４である場合には、Ｇｌ又はＧｎは、例えば、ＧＵＧＵ、ＧＧＵＵ、ＵＧＵＧ、ＵＵＧＧ、ＧＵＵＧ、ＧＧＧＵ、ＧＧＵＧ、ＧＵＧＧ、ＵＧＧＧ、又はＧＧＧＧなどであってよく、ｌ又はｎ＝５である場合には、Ｇｌ又はＧｎは、例えば、ＧＧＧＵＵ、ＧＧＵＧＵ、ＧＵＧＧＵ、ＵＧＧＧＵ、ＵＧＧＵＧ、ＵＧＵＧＧ、ＵＵＧＧＧ、ＧＵＧＵＧ、ＧＧＧＧＵ、ＧＧＧＵＧ、ＧＧＵＧＧ、ＧＵＧＧＧ、ＵＧＧＧＧ、又はＧＧＧＧＧなどであってよい。本発明に基づく式（ＩＩＩ）の核酸中のＸｍに隣り合うヌクレオチドはウラシルではないことが好ましい。同様に、本発明に基づく式（ＩＶ）の核酸中のヌクレオチドＣの数は、ｌ又はｎによって決定される。ｌ及びｎは、互いに独立してそれぞれ１〜４０の整数であり、ただしｌ又はｎ＝１である場合には、Ｃはシトシン又はその類似体であり、ｌ又はｎ＞１である場合には、ヌクレオチドの少なくとも５０％がシトシン又はその類似体である。例えば、一切の限定を意味するものではないが、ｌ又はｎ＝４である場合には、Ｇｌ又はＧｎは、例えば、ＣＵＣＵ、ＣＣＵＵ、ＵＣＵＣ、ＵＵＣＣ、ＣＵＵＣ、ＣＣＣＵ、ＣＣＵＣ、ＣＵＣＣ、ＵＣＣＣ、又はＣＣＣＣなどであってよく、ｌ又はｎが５である場合には、Ｃｌ又はＣｎは、例えば、ＣＣＣＵＵ、ＣＣＵＣＵ、ＣＵＣＣＵ、ＵＣＣＣＵ、ＵＣＣＵＣ、ＵＣＵＣＣ、ＵＵＣＣＣ、ＣＵＣＵＣ、ＣＣＣＣＵ、ＣＣＣＵＣ、ＣＣＵＣＣ、ＣＵＣＣＣ、ＵＣＣＣＣ、又はＣＣＣＣＣなどであってよい。本発明に基づく式（ＩＶ）の核酸中のＸｍに隣り合うヌクレオチドはウラシルではないことが好ましい。好ましくは、式（ＩＩＩ）においてｌ又はｎ＞１である場合、上記に述べたようにヌクレオチドの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％又は更には１００％はグアノシン又はその類似体である。隣接配列Ｇｌ及びＧｎの少なくともいずれかの１００％までの残りのヌクレオチド（グアノシンがヌクレオチドの１００％未満を構成する場合）は、上記に定義したようにウラシル又はその類似体である。更に好ましくは、ｌ及びｎは、互いに独立してそれぞれ２〜３０の整数であり、より好ましくは２〜２０の整数であり、更により好ましくは２〜１５の整数である。ｌ又はｎの下限は必要に応じて変化し、少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは３、４、５、６、７、８、９又は１０である。この定義は式（ＩＶ）にも適宜当てはまる。
【０１３７】
この実施形態の更なる特に好ましい態様に基づけば、このような免疫賦活性核酸配列、特にｉｓＲＮＡは、下記式（Ｖ）又は（ＶＩ）の核酸からなるか、又は該核酸を含む。
（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ    （式（Ｖ））
［式中、
Ｇは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、又はグアノシン（グアニン）若しくはウリジン（ウラシル）の類似体であり、
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、又は上記のヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体であり、
Ｎは、核酸約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは４〜３０個、又は４〜２０個の長さを有する核酸配列であり、Ｎはそれぞれ独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、又はこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体から選択され、
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり、
ｌは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｌ＝１である場合、Ｇはグアノシン（グアニン）又はその類似体であり、
ｌ＞１である場合、ヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）又はその類似体であり、
ｍは、整数且つ少なくとも３であり、
ただし、
ｍ＝３である場合、Ｘはウラシル又はその類似体であり、
ｍ＞３である場合、少なくとも３個の連続したウラシル又はその類似体が存在し、
ｎは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｎ＝１である場合、Ｇはグアノシン（グアニン）又はその類似体であり、
ｎ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）又はその類似体であり、
ｕ、ｖは、互いに独立して０〜５０の整数であり
ただし、好ましくは、
ｕ＝０である場合、ｖ≧１であるか、又は、
ｖ＝０である場合、ｕ≧１であり、
式（Ｖ）の核酸分子は、ヌクレオチド少なくとも５０個、好ましくはヌクレオチド少なくとも１００個、より好ましくは少なくともヌクレオチド１５０個、更により好ましくは少なくともヌクレオチド２００個、最も好ましくは少なくともヌクレオチド２５０個の長さを有する。］
【０１３８】
（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａ        （式（ＶＩ））
［式中、
Ｃは、シチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）、又はシチジン（シトシン）若しくはウリジン（ウラシル）の類似体、好ましくはシチジン（シトシン）又はその類似体であり、
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、又は上記のヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体、好ましくはウリジン（ウラシル）又はその類似体であり、
Ｎはそれぞれ、核酸約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは４〜３０個、又は４〜２０個の長さを有する核酸配列であり、Ｎはそれぞれ独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、又はこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似体から選択され、
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり、
ｌは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｌ＝１である場合、Ｃはシチジン（シトシン）又はその類似体であり、
ｌ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がシチジン（シトシン）又はその類似体であり、
ｍは、整数且つ少なくとも３であり、
ただし、
ｍ＝３である場合、Ｘはウリジン（ウラシル）又はその類似体であり、
ｍ＞３である場合、少なくとも３個の連続したウリジン（ウラシル）又はウリジン（ウラシル）の類似体が存在し、
ｎは、１〜４０の整数であり、
ただし、
ｎ＝１である場合、Ｃはシチジン（シトシン）又はその類似体であり、
ｎ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がシチジン（シトシン）又はその類似体であり、
ｕ、ｖは、互いに独立して０〜５０の整数であり
ただし、好ましくは、
ｕ＝０である場合、ｖ≧１であるか、又は、
ｖ＝０である場合、ｕ≧１であり、
本発明に基づく式（ＶＩ）の核酸分子は、ヌクレオチド少なくとも５０個、好ましくはヌクレオチド少なくとも１００個、より好ましくは少なくともヌクレオチド１５０個、更により好ましくは少なくともヌクレオチド２００個、最も好ましくは少なくともヌクレオチド２５０個の長さを有する。］
【０１３９】
式（ＶＩ）において、要素Ｎ（すなわちＮＵ及びＮＶ）及びＸ（Ｘｍ）、特に上記に定義されたコア構造について、並びに整数ａ、ｌ、ｍ、ｎ、ｕ及びｖについて上記に与えられた定義はいずれも、式（Ｖ）の要素に対応して同様に当てはまり、ただし、式（ＶＩ）中、コア構造は、ＣｌＸｍＣｎによって定義される。境界の要素ＮＵ及びＮＶの定義は、ＮＵ及びＮＶについて上記に与えられた定義と同じである。
【０１４０】
この実施形態の特に詳細な好ましい態様によれば、式（Ｖ）で表される本発明の核酸分子は、例えば以下の配列のいずれかから選択することができる。すなわち、
ＵＡＧＣＧＡＡＧＣＵＣＵＵＧＧＡＣＣＵＡＧＧＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＧＧＵＧＣＧＵＵＣＣＵＡＧＡＡＧＵＡＣＡＣＧ  （配列番号３５９）ＵＡＧＣＧＡＡＧＣＵＣＵＵＧＧＡＣＣＵＡＧＧＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＧＧＵＧＣＧＵＵＣＣＵＡＧＡＡＧＵＡＣＡＣＧＡＵＣＧＣＵＵＣＧＡＧＡＡＣＣＵＧＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＣＧＣＡＡＧＧＡＵＣＵＵＣＡＵＧＵＧＣ  （配列番号３６０）
【０１４１】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＧＧＡＧＣＡＡＵＧＣＣＣＧＣＡＣＡＵＵＧＡＧＧＡＡＡＣＣＧＡＧＵＵＧＣＡＵＡＵＣＵＣＡＧＡＧＵＡＵＵＧＧＣＣＣＣＣＧＵＧＵＡＧＧＵＵＡＵＵＣＵＵＧＡＣＡＧＡＣＡＧＵＧＧＡＧＣＵＵＡＵＵＣＡＣＵＣＣＣＡＧＧＡＵＣＣＧＡＧＵＣＧＣＡＵＡＣＵＡＣＧＧＵＡＣＵＧＧＵＧＡＣＡＧＡＣＣＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＧＵＵＧＡＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＡＣＵＡＧＡＣＧＵＧＡＧＵＣＣＧＵＣＡＡＡＧＣＡＧＵＵＡＧＡＵＧＵＵＡＣＡＣＵＣＵＡＵＵＡＧＡＵＣ  （配列番号３６１）
【０１４２】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＧＧＡＧＣＡＡＵＧＣＣＣＧＣＡＣＡＵＵＧＡＧＧＡＡＡＣＣＧＡＧＵＵＧＣＡＵＡＵＣＵＣＡＧＡＧＵＡＵＵＧＧＣＣＣＣＣＧＵＧＵＡＧＧＵＵＡＵＵＣＵＵＧＡＣＡＧＡＣＡＧＵＧＧＡＧＣＵＵＡＵＵＣＡＣＵＣＣＣＡＧＧＡＵＣＣＧＡＧＵＣＧＣＡＵＡＣＵＡＣＧＧＵＡＣＵＧＧＵＧＡＣＡＧＡＣＣＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＧＵＵＧＡＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＡＣＵＡＧＡＣＧＵＧＡＧＵＣＣＧＵＣＡＡＡＧＣＡＧＵＵＡＧＡＵＧＵＵＡＣＡＣＵＣＵＡＵＵＡＧＡＵＣＵＣＧＧＡＵＵＡＣＡＧＣＵＧＧＡＡＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＵＡＧＵＧＵＵＣＵＵＧＣＵＣＵＡＡＧＵＡＣＣＧＡＧＵＧＵＧＣＣＣＡＡＵＡＣＣＣＧＡＵＣＡＧＣＵＵＡＵＵＡＡＣＧＡＡＣＧＧＣＵＣＣＵＣＣＵＣＵＵＡＧＡＣＵＧＣＡＧＣＧＵＡＡＧＵＧＣＧＧＡＡＵＣＵＧＧＧＧＡＵＣＡＡＡＵＵＡＣＵＧＡＣＵＧＣＣＵＧＧＡＵＵＡＣＣＣＵＣＧＧＡＣＡＵＡＵＡＡＣＣＵＵＧＵＡＧＣＡＣＧＣＵＧＵＵＧＣＵＧＵＡＵＡＧＧＵＧＡＣＣＡＡＣＧＣＣＣＡＣＵＣＧＡＧＵＡＧＡＣＣＡＧＣＵＣＵＣＵＵＡＧＵＣＣＧＧＡＣＡＡＵＧＡＵＡＧＧＡＧＧＣＧＣＧＧＵＣＡＡＵＣＵＡＣＵＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＵＡＡＧＡＡＵＡＧＧＣＵＧＣＡＣＣＧＡＣＣＵＣＵＡＵＡＡＧＵＡＧＣＧＵＧＵＣＣＵＣＵＡＧ  （配列番号３６２）
【０１４３】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＧＧＡＧＣＡＡＵＧＣＣＣＧＣＡＣＡＵＵＧＡＧＧＡＡＡＣＣＧＡＧＵＵＧＣＡＵＡＵＣＵＣＡＧＡＧＵＡＵＵＧＧＣＣＣＣＣＧＵＧＵＡＧＧＵＵＡＵＵＣＵＵＧＡＣＡＧＡＣＡＧＵＧＧＡＧＣＵＵＡＵＵＣＡＣＵＣＣＣＡＧＧＡＵＣＣＧＡＧＵＣＧＣＡＵＡＣＵＡＣＧＧＵＡＣＵＧＧＵＧＡＣＡＧＡＣＣＵＡＧＧＵＣＧＵＣＡＧＵＵＧＡＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＡＣＵＡＧＡＣＧＵＧＡＧＵＣＣＧＵＣＡＡＡＧＣＡＧＵＵＡＧＡＵＧＵＵＡＣＡＣＵＣＵＡＵＵＡＧＡＵＣＵＣＧＧＡＵＵＡＣＡＧＣＵＧＧＡＡＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＵＡＧＵＧＵＵＣＵＵＧＣＵＣＵＡＡＧＵＡＣＣＧＡＧＵＧＵＧＣＣＣＡＡＵＡＣＣＣＧＡＵＣＡＧＣＵＵＡＵＵＡＡＣＧＡＡＣＧＧＣＵＣＣＵＣＣＵＣＵＵＡＧＡＣＵＧＣＡＧＣＧＵＡＡＧＵＧＣＧＧＡＡＵＣＵＧＧＧＧＡＵＣＡＡＡＵＵＡＣＵＧＡＣＵＧＣＣＵＧＧＡＵＵＡＣＣＣＵＣＧＧＡＣＡＵＡＵＡＡＣＣＵＵＧＵＡＧＣＡＣＧＣＵＧＵＵＧＣＵＧＵＡＵＡＧＧＵＧＡＣＣＡＡＣＧＣＣＣＡＣＵＣＧＡＧＵＡＧＡＣＣＡＧＣＵＣＵＣＵＵＡＧＵＣＣＧＧＡＣＡＡＵＧＡＵＡＧＧＡＧＧＣＧＣＧＧＵＣＡＡＵＣＵＡＣＵＵＣＵＧＧＣＵＡＧＵＵＡＡＧＡＡＵＡＧＧＣＵＧＣＡＣＣＧＡＣＣＵＣＵＡＵＡＡＧＵＡＧＣＧＵＧＵＣＣＵＣＵＡＧＡＧＣＵＡＣＧＣＡＧＧＵＵＣＧＣＡＡＵＡＡＡＡＧＣＧＵＵＧＡＵＵＡＧＵＧＵＧＣＡＵＡＧＡＡＣＡＧＡＣＣＵＣＵＵＡＵＵＣＧＧＵＧＡＡＡＣＧＣＣＡＧＡＡＵＧＣＵＡＡＡＵＵＣＣＡＡＵＡＡＣＵＣＵＵＣＣＣＡＡＡＡＣＧＣＧＵＡＣＧＧＣＣＧＡＡＧＡＣＧＣＧＣＧＣＵＵＡＵＣＵＵＧＵＧＵＡＣＧＵＵＣＵＣＧＣＡＣＡＵＧＧＡＡＧＡＡＵＣＡＧＣＧＧＧＣＡＵＧＧＵＧＧＵＡＧＧＧＣＡＡＵＡＧＧＧＧＡＧＣＵＧＧＧＵＡＧＣＡＧＣＧＡＡＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＵＧＣＧＣＡＣＧＵＡＧＣＵＵＣＧＣＵＧＵＵＣＧＵＣＵＧＡＡＡＣＡＡＣＣＣＧＧＣＡＵＣＣＧＵＵＧＵＡＧＣＧＡＵＣＣＣＧＵＵＡＵＣＡＧＵＧＵＵＡＵＵＣＵＵＧＵＧＣＧＣＡＣＵＡＡＧＡＵＵＣＡＵＧＧＵＧＵＡＧＵＣＧＡＣＡＡＵＡＡＣＡＧＣＧＵＣＵＵＧＧＣＡＧＡＵＵＣＵＧＧＵＣＡＣＧＵＧＣＣＣＵＡＵＧＣＣＣＧＧＧＣＵＵＧＵＧＣＣＵＣＵＣＡＧＧＵＧＣＡＣＡＧＣＧＡＵＡＣＵＵＡＡＡＧＣＣＵＵＣＡＡＧＧＵＡＣＵＣＧＡＣＧＵＧＧＧＵＡＣＣＧＡＵＵＣＧＵＧＡＣＡＣＵＵＣＣＵＡＡＧＡＵＵＡＵＵＣＣＡＣＵＧＵＧＵＵＡＧＣＣＣＣＧＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＣＵＡＡＡＣＵＧＧＵＣＣＡＡＵＧＵＡＵＡＣＧＣＡＵＵＣＧＣＵＧＡＧＣＧＧＡＵＣＧＡＵＡＡＵＡＡＡＡＧＣＵＵＧＡＡＵＵ  （配列番号３６３）
【０１４４】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＡＵＣＣＡＡＧＵＡＧＧＣＵＧＧＵＣＡＣＣＵＧＵＡＣＡＡＣＧＵＡＧＣＣＧＧＵＡＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＡＣＣＧＵＣＵＣＡＡＧＧＵＣＣＡＡＧＵＵＡＧＵＣＵＧＣＣＵＡＵＡＡＡＧＧＵＧＣＧＧＡＵＣＣＡＣＡＧＣＵＧＡＵＧＡＡＡＧＡＣＵＵＧＵＧＣＧＧＵＡＣＧＧＵＵＡＡＵＣＵＣＣＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＡＧＵＡＡＡＵＧＣＧＵＣＵＡＣＵＧＡＡＵＣＣＡＧＣＧＡＵＧＡＵＧＣＵＧＧＣＣＣＡＧＡＵＣ  （配列番号３６４）
【０１４５】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＡＵＣＣＡＡＧＵＡＧＧＣＵＧＧＵＣＡＣＣＵＧＵＡＣＡＡＣＧＵＡＧＣＣＧＧＵＡＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＡＣＣＧＵＣＵＣＡＡＧＧＵＣＣＡＡＧＵＵＡＧＵＣＵＧＣＣＵＡＵＡＡＡＧＧＵＧＣＧＧＡＵＣＣＡＣＡＧＣＵＧＡＵＧＡＡＡＧＡＣＵＵＧＵＧＣＧＧＵＡＣＧＧＵＵＡＡＵＣＵＣＣＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＡＧＵＡＡＡＵＧＣＧＵＣＵＡＣＵＧＡＡＵＣＣＡＧＣＧＡＵＧＡＵＧＣＵＧＧＣＣＣＡＧＡＵＣＵＵＣＧＡＣＣＡＣＡＡＧＵＧＣＡＵＡＵＡＧＵＡＧＵＣＡＵＣＧＡＧＧＧＵＣＧＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＧＣＣＣＡＧＵＵＣＵＧＡＧＡＣＵＵＣＧＣＵＡＧＡＧＡＣＵＡＣＡＧＵＵＡＣＡＧＣＵＧＣＡＧＵＡＧＵＡＡＣＣＡＣＵＧＣＧＧＣＵＡＵＵＧＣＡＧＧＡＡＡＵＣＣＣＧＵＵＣＡＧＧＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＧＣＵＣＡＣＵＡＵＧＡＵＵＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＵＧＧＡＧＵＧＵＣＡＣＵＧＣＵＣＵＣＧＡＧＧＵＣＵＣＡＣＧＡＧＡＧＣＧＣＵＣＧＡＵＡＣＡＧＵＣＣＵＵＧＧＡＡＧＡＡＵＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＵＧＣＧＡＣＧＡＵＣＡＣＡＧＡＧＡＡＣＵＵＣＵＡＵＵＣＡＵＧＣＡＧＧＵＣＵＧＣＵＣＵＡ  （Ｒ７２２  配列番号３６５）
【０１４６】
ＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＵＣＡＡＧＣＵＵＡＵＣＣＡＡＧＵＡＧＧＣＵＧＧＵＣＡＣＣＵＧＵＡＣＡＡＣＧＵＡＧＣＣＧＧＵＡＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＡＣＣＧＵＣＵＣＡＡＧＧＵＣＣＡＡＧＵＵＡＧＵＣＵＧＣＣＵＡＵＡＡＡＧＧＵＧＣＧＧＡＵＣＣＡＣＡＧＣＵＧＡＵＧＡＡＡＧＡＣＵＵＧＵＧＣＧＧＵＡＣＧＧＵＵＡＡＵＣＵＣＣＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＡＧＵＡＡＡＵＧＣＧＵＣＵＡＣＵＧＡＡＵＣＣＡＧＣＧＡＵＧＡＵＧＣＵＧＧＣＣＣＡＧＡＵＣＵＵＣＧＡＣＣＡＣＡＡＧＵＧＣＡＵＡＵＡＧＵＡＧＵＣＡＵＣＧＡＧＧＧＵＣＧＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＧＣＣＣＡＧＵＵＣＵＧＡＧＡＣＵＵＣＧＣＵＡＧＡＧＡＣＵＡＣＡＧＵＵＡＣＡＧＣＵＧＣＡＧＵＡＧＵＡＡＣＣＡＣＵＧＣＧＧＣＵＡＵＵＧＣＡＧＧＡＡＡＵＣＣＣＧＵＵＣＡＧＧＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＧＣＵＣＡＣＵＡＵＧＡＵＵＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＵＧＧＡＧＵＧＵＣＡＣＵＧＣＵＣＵＣＧＡＧＧＵＣＵＣＡＣＧＡＧＡＧＣＧＣＵＣＧＡＵＡＣＡＧＵＣＣＵＵＧＧＡＡＧＡＡＵＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＵＧＣＧＡＣＧＡＵＣＡＣＡＧＡＧＡＡＣＵＵＣＵＡＵＵＣＡＵＧＣＡＧＧＵＣＵＧＣＵＣＵＡＧＡＡＣＧＡＡＣＵＧＡＣＣＵＧＡＣＧＣＣＵＧＡＡＣＵＵＡＵＧＡＧＣＧＵＧＣＧＵＡＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＵＣＣＣＡＡＣＡＡＡＵＧＵＣＧＡＵＣＡＡＵＡＧＣＵＧＧＧＣＵＧＵＵＧＧＡＧＡＣＧＣＧＵＣＡＧＣＡＡＡＵＧＣＣＧＵＧＧＣＵＣＣＡＵＡＧＧＡＣＧＵＧＵＡＧＡＣＵＵＣＵＡＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＣＧＧＧＡＣＣＡＣＡＡＡＵＡＡＵＡＵＵＣＵＵＧＣＵＵＧＧＵＵＧＧＧＣＧＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＧＵＡＵＣＡＧＧＵＣＡＵＡＡＡＣＧＧＧＵＡＣＡＵＧＵＵＧＣＡＣＡＧＧＣＵＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＧＣＵＧＡＧＵＵＡＵＵＣＣＧＧＵＣＵＣＡＡＡＡＧＡＣＧＧＣＡＧＡＣＧＵＣＡＧＵＣＧＡＣＡＡＣＡＣＧＧＵＣＵＡＡＡＧＣＡＧＵＧＣＵＡＣＡＡＵＣＵＧＣＣＧＵＧＵＵＣＧＵＧＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＧＵＧＡＡＣＣＵＡＣＡＣＧＧＣＧＵＧＣＡＣＵＧＵＡＧＵＵＣＧＣＡＡＵＵＣＡＵＡＧＧＧＵＡＣＣＧＧＣＵＣＡＧＡＧＵＵＡＵＧＣＣＵＵＧＧＵＵＧＡＡＡＡＣＵＧＣＣＣＡＧＣＡＵＡＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＡＵＡＵＵＣＣＣＡＵＧＣＵＡＡＧＣＡＡＧＧＧＡＵＧＣＣＧＣＧＡＧＵＣＡＵＧＵＵＡＡＧＣＵＵＧＡＡＵＵ  （配列番号３６６）
【０１４７】
別の特に詳細な好ましい実施形態によれば、式（ＶＩ）で表される本発明の核酸分子は、例えば以下の配列のいずれかから選択することができる。すなわち、
ＵＡＧＣＧＡＡＧＣＵＣＵＵＧＧＡＣＣＵＡＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＣＵＧＣＧＵＵＣＣＵＡＧＡＡＧＵＡＣＡＣＧ  （配列番号３６７）又は、ＵＡＧＣＧＡＡＧＣＵＣＵＵＧＧＡＣＣＵＡＣＣＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＣＣＣＵＧＣＧＵＵＣＣＵＡＧＡＡＧＵＡＣＡＣＧＡＵＣＧＣＵＵＣＧＡＧＡＡＣＣＵＧＧＡＵＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＧＧＡＣＧＣＡＡＧＧＡＵＣＵＵＣＡＵＧＵＧＣ  （配列番号３６８）
【０１４８】
更なる好ましい実施形態では、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子は、修飾された核酸の形態で存在してもよい。
【０１４９】
更なる態様によれば、本明細書に定義されるポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、「安定化核酸」として、好ましくは安定化ＲＮＡ又はＤＮＡとして、より好ましくはインビボでの分解（例えばエキソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼによる）に基本的に耐性を有するＲＮＡとして与えることができる。
【０１５０】
この文脈において、本明細書において定義されるポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子は、骨格修飾、糖修飾、又は塩基修飾を有してよい。本発明との関連における骨格修飾とは、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子に含まれるヌクレオチドの骨格のリン酸が化学的に修飾される修飾である。本発明との関連における糖修飾とは、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子のヌクレオチドの糖の化学修飾である。更に、本発明との関連における塩基修飾とは、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子のヌクレオチドの塩基部分の化学修飾である。
【０１５１】
更なる態様によれば、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子が脂質修飾を有しうる。
【０１５２】
本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、修飾された核酸の形態であってもよく、その場合、本明細書において定義される任意の修飾を核酸に導入することができる。本明細書において定義される修飾により、更に安定化された核酸が得られることが好ましい。
【０１５３】
このため、一態様によれば、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、「安定化核酸」として、好ましくは安定化ｍＲＮＡとして、より好ましくはインビボでの分解（例えばエキソヌクレアーゼ又はエンドヌクレアーゼによる）に基本的に耐性を有するｍＲＮＡとして与えることができる。このような安定化は、例えば、核酸に含まれるヌクレオチドの骨格のリン酸が化学的に修飾された修飾リン酸によって行うことができる。本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、上記に加えるか又は上記に代えて更に糖又は塩基修飾を有してもよい。本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、特にｍＲＮＡとして与えられる場合、いわゆる「５’キャップ」構造の付加によってＲＮアーゼによる分解に対して安定化させてもよい。この文脈において、特に好ましいのは、５’キャップ構造としてのｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’（Ａ，Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、又はＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇである。更なる態様によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合には、一般的にアデノシンヌクレオチド約１０〜２００個、好ましくはアデノシンヌクレオチド約１０〜１００個、より好ましくはアデノシンヌクレオチド約２０〜１００個、又は更に好ましくはアデノシンヌクレオチド約４０〜８０個のポリＡテールを３’末端に有してもよい。更なる態様によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合には、一般的にシトシンヌクレオチド約１０〜２００個、好ましくはシトシンヌクレオチド約１０〜１００個、より好ましくはシトシンヌクレオチド約２０〜７０個、又は更に好ましくはシトシンヌクレオチド約２０〜６０個、又は更には１０〜４０個のポリＣテールを３’末端に有してもよい。別の態様によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、特に核酸がｍＲＮＡである場合に、核酸、特にｍＲＮＡ、好ましくはそのコード領域のＧ／Ｃ含量を改変することによって、改変、ひいては安定化することができる。
【０１５４】
本発明の特定の好ましい態様では、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸のコード領域のＧ／Ｃ含量を、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合に、その特定の野生型ｍＲＮＡ、すなわち非改変ｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量と比較して、改変、特に増大させる。前記少なくとも１つのｍＲＮＡのコードされたアミノ酸配列は、特定の野生型ｍＲＮＡのコードされたアミノ酸配列と比較して改変されないことが好ましい。本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸のコード領域のＧ／Ｃ含量を、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合に、本明細書において定義される抗原、抗原性タンパク質若しくは抗原性ペプチド、又はそのフラグメント若しくは変異体をコードする野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量と比較して、好ましくは少なくとも７％、より好ましくは少なくとも１５％、特に好ましくは少なくとも２０％増大させる。特定の実施形態によれば、本明細書において定義されるタンパク質若しくはペプチド、又はそのフラグメント若しくは変異体をコードした領域、又は野生型ｍＲＮＡ配列の全体の配列の置換可能なコドンの少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、より好ましくは少なくとも７０％、更により好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％、又は更には１００％を置換し、これにより前記配列のＧ／Ｃ含量を増大させる。この文脈において、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸のコード領域のＧ／Ｃ含量を、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合に、野生型配列と比較して、特にタンパク質をコードした領域において最大（すなわち置換可能なコドンの１００％）にまで増大させることが特に好ましい。本発明によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸の更に好ましい改変では、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合、細胞内において比較的希なｔＲＮＡをコードする野生型配列の少なくとも１つのコドンが、細胞内において比較的高頻度で存在し、比較的希なｔＲＮＡと同じアミノ酸を有するｔＲＮＡをコードするコドンと交換されるように、アジュバントタンパク質をコードする領域を野生型ｍＲＮＡの対応する領域と比較して改変する。この改変により、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合、核酸の配列は、高頻度で存在するｔＲＮＡが利用可能なコドンが挿入されるように改変される。換言すれば、本発明によれば、この改変により、細胞内において比較的希なｔＲＮＡをコードする野生型配列のすべてのコドンを、それぞれの場合に、細胞内において比較的高頻度で存在し、それぞれの場合に比較的希なｔＲＮＡと同じアミノ酸を有するｔＲＮＡをコードするコドンと交換することが可能である。
【０１５５】
どのｔＲＮＡが細胞内に比較的高頻度で存在し、これに対して、どのｔＲＮＡが比較的希に存在するかは、当業者には知られている（例えばＡｋａｓｈｉ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖ．  ２００１，  １１（６）：  ６６０−６６６を参照）。特定のアミノ酸に対して最も高頻度で存在するｔＲＮＡを使用するコドン、例えば（ヒト）細胞において最も高頻度で存在するｔＲＮＡを使用するＧｌｙコドンが特に好ましい。
【０１５６】
本明細書において定義される、本発明に基づいて使用される核酸分子は、例えば固相合成法のような合成法、及びインビトロ転写反応などのインビトロの方法、又は細菌内におけるＤＮＡプラスミドのインビボ増殖などのインビボ反応などの当該技術分野では周知のいずれの方法を用いて調製することもできる。
【０１５７】
別の特に好ましい実施形態によれば、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、特に核酸がコーディング核酸、好ましくはｍＲＮＡの形態である場合に、上記に加えるか又は上記に代えて分泌シグナルペプチドをコードしてもよい。このようなシグナルペプチドは、これに限定されるものではないが、一般的にアミノ酸約１５〜３０個の長さを有し、コードされたペプチドのＮ末端に好ましくは位置するものである。本明細書において定義されるシグナルペプチドは、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合に、本発明の核酸によってコードされるタンパク質又はペプチドの、所定の細胞コンパートメント、好ましくは細胞表面、小胞体（ＥＲ）又はエンドソーム／リソソームコンパートメント内への輸送を好ましくは可能とするものである。
【０１５８】
上記の改変のいずれかを、特に核酸がｍＲＮＡの形態である場合に、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸に、更に、本発明との関連において使用される任意の核酸に適用することが可能であり、そのような改変の組み合わせがそれぞれの核酸において互いに干渉しない限りにおいて、適当又は必要な場合に、任意の組み合わせで互いに組み合わせることができる。当業者であれば適宜、独自の選択を行うことが可能であろう。
【０１５９】
本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸によってコードされるタンパク質又はペプチドには、これらの配列のフラグメント又は変異体が含まれうる。更に、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸には、これらのコード配列のフラグメント又は変異体が含まれうる。このようなフラグメント又は変異体には、上記に述べたタンパク質若しくはペプチド、又はそれらをコードする核酸配列の内の１つの配列との配列相同性が、野生型配列全体に対して核酸レベル又はアミノ酸レベルで、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％，好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、同様により好ましくは少なくとも８５％、更により好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％又は更には９７％であるような配列が一般的に含まれうる。
【０１６０】
本発明との関連におけるタンパク質又はペプチドの「フラグメント」には、そのアミノ酸配列（又はそのコードされた核酸配列）に関して、最初の（天然）タンパク質（又はそのコードされた核酸配列）に対して、Ｎ末端側、Ｃ末端側、及び配列の内部の少なくともいずれかにおいて切り詰められた、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドの配列が含まれうる。このような切り詰めは、アミノ酸レベルで、又は対応する核酸レベルで起こりうる。したがって、本明細書において定義されるこのようなフラグメントに関して配列相同性とは、好ましくは本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドの全体を指すか、あるいは、このようなタンパク質又はペプチドの（コーディング）核酸配列の全体を指しうる。同じことは核酸についても適宜当てはまる。
【０１６１】
本発明との関連におけるタンパク質又はペプチドのこのようなフラグメントには更に、例えばＭＨＣクラスＩ分子によって処理及び提示されるフラグメントのような、アミノ酸約６〜約２０個又は更にそれよりも多い長さを有する、好ましくは、アミノ酸約８〜１０個、例えば８、９、又は１０個（又は更にはアミノ酸６、７、１１、又は１２個）の長さを有する、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドの配列、又はＭＨＣクラスＩＩ分子によって処理及び提示されるような、好ましくはアミノ酸約１３個、又はそれよりも多い、例えばアミノ酸１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、又は更にはそれよりも多い長さを有するフラグメントが含まれうるものであり、ただし、これらのフラグメントは、アミノ酸配列の任意の部分から選択することができる。これらのフラグメントは通常、ペプチドフラグメントとＭＨＣ分子とからなる複合体としてＴ細胞によって認識される。すなわち、フラグメントはその天然の形態では通常は認識されない。
【０１６２】
本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドのフラグメントには、これらのタンパク質又はペプチドのエピトープが含まれうる。本発明との関連におけるエピトープ（「抗原決定基」とも呼ばれる）とは一般的に、本明細書において定義される（天然）タンパク質又はペプチドの外表面に存在し、好ましくは５〜１５個のアミノ酸を有する、より好ましくは５〜１２個のアミノ酸を有する、更により好ましくは６〜９個のアミノ酸を有する、すなわちその天然形態で抗体又はＢ細胞受容体によって認識されうるフラグメントである。このようなタンパク質又はペプチドのエピトープは、本明細書において述べるこうしたタンパク質又はペプチドの変異体のいずれかから更に選択することができる。この文脈において、抗原決定基は、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドのアミノ酸配列において不連続であるが、単一のポリペプチド鎖からなる３次元構造又は連続的若しくは直鎖状エピトープとして一体とされる、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドのセグメントからなるコンホメーショナル又は不連続的エピトープであってよい。
【０１６３】
本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドの「変異体」は、本明細書において定義されるタンパク質又はペプチドをコードした核酸のヌクレオチドが交換された、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸によってコードすることができる。これにより、１個以上のアミノ酸の置換、挿入及び／又は欠失のような１以上の突然変異において、最初の配列と異なるアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチドが生成されうる。これらのフラグメント及び／又は変異体は、完全長の天然タンパク質と比較して同じ生物学的機能又は特異的活性、例えばその特異的抗原性などを有することが好ましい。
【０１６４】
本発明は、本明細書において定義される式（Ｉ）Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌに基づく、あるいは本明細書において定義されるその下位式のいずれか（例えば（Ｉａ）など）で表される本発明のポリマーキャリア分子を調製する方法を更に提供する。本発明は更に、このような本発明の方法によって得られる、又は得ることが可能な生成物を提供する（プロダクト・バイ・プロセス）。本方法は、好ましくは以下の工程を含む。すなわち、
ａ）本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマー、及び場合により少なくとも１種類の他の要素（例えば（ＡＡ）Ｘ、［（ＡＡ）Ｘ］Ｚなど）を、好ましくは式（Ｉ）により上記に示した比で提供し、これらの要素を、好ましくは本明細書において定義される塩基性環境中、好ましくは酸素又は穏やかな酸化的条件を与える本明細書において定義される更なる開始剤の存在下で、好ましくは本明細書において定義されるｐＨ、温度、及び時間で混合し、これにより、これらの要素を、ジスルフィド結合を介して互いに縮合ひいては重合する（縮合重合又は重縮合）ことにより、繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はＨ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈなどを得る工程と、
ｂ）本明細書において定義されるリガンドＬ及びアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの少なくともいずれかによって場合により修飾される、本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを提供する工程と、
ｃ）工程ｂ）にしたがって提供された親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを、工程ａ）にしたがって提供された繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はＨ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈなどと、通常、約２：１の比で混合し（通常、これにより縮合重合又は重縮合反応を停止させる）、好ましくは本明細書において定義される式（Ｉ）に基づいた、あるいは本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づいた本発明のポリマーキャリアを得る工程と、
ｄ）場合により、工程ｃ）にしたがって得られた本発明のポリマーキャリアを、好ましくは本明細書において定義される方法を用いて精製する工程と、
ｅ）場合により、本明細書において定義される核酸を、工程ｃ）又はｄ）にしたがって得られた本発明のポリマーキャリアに、好ましくは上記に述べた比で加え、前記核酸を、前記工程ｃ）又はｄ）にしたがって得られた本発明のポリマーキャリアと複合化することによって、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体を得る工程と、である。
【０１６５】
本明細書において定義される式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法は、例えば本明細書において定義される要素Ｐ２、他の要素Ｐ１及び／又はＰ３、及び場合により他の要素（ＡＡ）Ｘなどの遊離体の−ＳＨ部分を介した多工程の縮合重合又は重縮合反応を意味する。縮合重合又は重縮合反応は、好ましくは、１種類の要素がジスルフィド結合によって連結された縮合ポリマーとしての本発明のポリマーキャリアを生じる。この縮合重合は式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアを生じ、縮合重合の第１の工程ａ）において、本発明のポリマーキャリアのある種の「コア」又は「中心モチーフ」として、本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はその変異体を調製する。第２の工程ｂ）では、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかが提供され、工程ａ）にしたがって得られた縮合物に、本明細書において定義される要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれか（場合により、本明細書において定義されるリガンドＬ及びアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘの少なくともいずれかによって修飾される）を加えることによって、工程ｃ）において本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はその変異体を終端する又はある意味「コーティング」することが可能となる。これに続く工程ｄ）では、この生成物を精製し、これを更に用いて本明細書において定義される核酸カーゴを複合化することによって本発明の複合体を得る。
【０１６６】
本発明の方法は、工程ａ）、（ｂ））及びｃ）における穏やかな酸化的条件下での平衡反応に基づいたものである点を理解することは重要であり、この平衡反応により、平衡状態が達成されると、選択された要素を所望のモル比で含んだ上記式（Ｉ）で表される、あるいはその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリアを得ることが可能となる。この目的のため、工程ａ）、（ｂ））及びｃ）において平衡状態を達成するために長い反応時間とすることが考えられる。例えば、縮合重合を、工程ａ）において要素Ｐ２のモル比を５として行う場合、平衡は、充分な時間、好ましくは例えば１２時間後に、約５のポリマー長で驚くほど安定する。しかしながら、平衡のため、ポリマー長（ｎにより定義される）は、例えば５などの特定の値には固定されず、平衡反応内で相応に変化しうる。したがって、約５とは、約４〜６、又は更には約３〜７を意味しうる。好ましくはポリマー長、したがって整数ｎ（したがって、ａ、ｂ及びａ＋ｂ）は、約±１、又は±２の限界値内で変化する。
【０１６７】
本明細書において定義されるように、式（Ｉ）で表される本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の工程ａ）では、本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は、本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーが、好ましくは式（Ｉ）によって上記に示される比で与えられる。これらの要素は、好ましくは本明細書において定義される塩基性環境中で、好ましくは酸素又は穏やかな酸化的条件を与える本明細書において定義される更なる開始剤の存在下で、好ましくは本明細書において定義されるｐＨ、温度、及び時間で混合され、これにより、これらの要素を、ジスルフィド結合を介して互いに縮合ひいては重合する（縮合重合又は重縮合において）ことにより、繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又はＨ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈが得られる。
【０１６８】
代替例によれば、本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の工程ａ）では、少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーが提供されて本明細書において定義される要素Ｐ２として使用され、更に、本明細書において定義される少なくとも１種類のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘが提供され、要素Ｐ２及び（ＡＡ）Ｘが工程ａ）にしたがって縮合重合又は重縮合に使用される。好ましくは、これらの要素はいずれも、式（Ｉａ）によって上記に示された比で与えられ、好ましくは本明細書において定義される塩基性環境中で、好ましくは酸素又は穏やかな酸化的条件を与える本明細書において定義される更なる開始剤の存在下で、好ましくは本明細書において定義されるｐＨ、温度、及び時間で混合される。反応を混合及び開始すると、各要素は、ジスルフィド結合を介して互いに縮合ひいては重合（縮合重合又は重縮合において）して、繰り返し要素Ｈ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝Ｈが得られる。
【０１６９】
上記の代替例の両方において、異なる要素Ｐ２、特に要素Ｐ２としての異なるペプチド及び異なるポリマーの少なくともいずれかを、上記に示した縮合重合において選択することができる。この文脈において、異なる要素Ｐ２の選択は、最終的な本発明のポリマーキャリアの所望の特性、及び最終的な本発明のポリマーキャリア又はその中心コアモチーフの所望のカチオン性強度によって一般的に決まる。したがって、例えば本明細書において定義されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘを好ましくは上記に定義した比で導入することにより、工程ａ）の上記の代替例において繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎを更に「希釈」又は修飾することができる。これにより、修飾された中心コアモチーフ｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝を得ることができ、その際、（非修飾の）繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎのカチオン特性は、本明細書において定義される限界内に一般的に留まる。このため、最終的な本明細書のポリマーキャリアの性質は、本明細書において定義されるアミノ酸（ＡＡ）Ｘを工程ａ）、ｂ）及びｃ）の少なくともいずれかにおいて挿入することにより、要素（ＡＡ）Ｘの性質とともに、望み通りに調節することができる。
【０１７０】
いずれの場合も、工程ａ）は、穏やかな酸化的条件下での平衡反応に基づいたものであり、この平衡反応により、平衡状態が達成されると、本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ、又は本発明の繰り返し要素Ｈ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｈを所望のモル比で得ることが可能である。平衡状態では、ｎは好ましくは１、２、３、４又は５〜１０、より好ましくは４〜９であり、且つａ＋ｂ＝ｎは上記に定義したとおりであり、好ましくはａ＋ｂ＝１、２、３、４又は５〜１０、より好ましくは４〜９である。この目的のため、工程ａ）において平衡状態を達成するために長い反応時間、最も好ましくは例えば１２時間よりも長い時間とすることが考えられる。したがって、ポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の工程ａ）は、少なくとも約５時間、更により好ましくは少なくとも約７．５時間若しくは更には１０時間、最も好ましくは少なくとも約１２時間、例えば約１２〜６０時間の反応時間、約１２〜４８時間の反応時間、約１２〜３６時間の反応時間、又は約１２〜２４時間の反応時間などを一般的に要し、ただし、後者の範囲の１２時間という下限は、１０、７．５、又は更には５時間に調節してもよい。平衡状態は本発明の方法を用いて達成できる点は有利である。
【０１７１】
工程ａ）では、本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマー、及び場合により本明細書において定義される少なくとも１種類のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘは、式（Ｉ）（又は例えば（Ｉａ）のようなその下位式のいずれか）で表される本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の工程ａ）において塩基性環境中におかれることが好ましい。このような塩基性環境は、一般的には約６〜約１２のｐＨ範囲、好ましくは約７〜約１０のｐＨ範囲、より好ましくは約８〜約１０のｐＨ範囲、例えば８、８．５、９、９．５若しくは１０、又はこれら若しくは上記に述べた値の任意の２つから選択される任意の範囲を示す。
【０１７２】
更に、工程ａ）における溶液の温度は、好ましくは約５℃〜約６０℃の範囲、より好ましくは約１５℃〜約４０℃の範囲、更により好ましくは約２０℃〜約３０℃の範囲、最も好ましくは約２０℃〜約２５℃の範囲、例えば約２５℃である。
【０１７３】
本明細書において定義される式（Ｉ）（又は例えば（Ｉａ）のようなその下位式のいずれか）で表される本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の工程ａ）では、緩衝液を適宜使用することができる。好ましい緩衝液は、これらに限定されるものではないが、緩衝剤として、炭酸塩緩衝液、ホウ酸塩緩衝液、ビシン緩衝液、ＣＨＥＳ緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液、エタノールアミン含有緩衝液、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ緩衝液、リン酸緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、トリシン緩衝液、ＴＡＰＳ緩衝液、及び／又はＴＥＳ緩衝液を含みうる。炭酸塩緩衝液が特に好ましい。
【０１７４】
各要素を、好ましくは酸素の存在下、好ましくは本明細書において定義される塩基性環境の存在下で混合すると、縮合重合又は重縮合反応が開始される。この目的のため、工程ａ）において混合物を酸素に曝露することが好ましく、あるいは、例えばＤＭＳＯのような触媒量の酸化剤などの更なる開始剤を使用して開始することができる。所望のポリマー鎖長を決定するには、縮合反応は、穏やかな酸化的条件下で、好ましくは３０％未満のＤＭＳＯの存在下、より好ましくは２０％未満のＤＭＳＯの存在下、最も好ましくは１０％未満のＤＭＳＯの存在下で行わなければならない。縮合重合又は重縮合反応が開始されると、要素Ｐ２としての前記少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマー、及び、場合により本明細書において定義される少なくとも１種類のアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘが、ジスルフィド結合を介して互いに縮合ひいては重合される（縮合重合又は重縮合）。この反応工程ａ）では、少なくとも２個の反応性−ＳＨ部分を有するモノマー、すなわちそれぞれの要素Ｐ２が本明細書において定義される少なくとも２個の遊離−ＳＨ部分を例えばその末端において提示する、本明細書において定義される要素Ｐ２としての少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のペプチド又はタンパク質、及び／又は少なくとも１種類のカチオン性若しくはポリカチオン性のポリマーを用いて直鎖状ポリマーが好ましくは形成される。しかしながら、２個よりも多い遊離−ＳＨ部分を有する要素Ｐ２を使用することも可能であり、これにより分枝鎖ポリマーが生じうる。
【０１７５】
別の特定の実施形態によれば、工程ａ）にしたがって得られた縮合物は、例えば工程ａ）の縮合物の末端に、本明細書において定義されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを付加することによって修飾することができる（例えば工程ａ１）において）。これは、例えば−ＳＨ部分のような本明細書において定義される任意の官能基、又は本明細書において定義される更なる任意の官能基、好ましくは−ＳＨ部分を介して行うことができる。この目的のため、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、例えば式Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ＸＨ、又はＨ［Ｓ−（ＡＡ）Ｘ−Ｓ］ＺＨによって表される形で、２個（又は更にそれよりも多い）−ＳＨ部分を有してもよい。これにより、工程ａ）の生成物、すなわち、本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ、又は本発明の繰り返し要素Ｈ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｈを用いて重縮合反応を行うことが可能であり、これにより以下の中間要素を生じる。すなわち、
Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘＨ  又は、
Ｈ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚＨ  又は、
Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘＨ  又は、
Ｈ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚＨ
【０１７６】
工程ａ）にしたがって得られたこれらの中間要素又は本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ又は本発明の繰り返し要素Ｈ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｈのいずれか１つ又はすべてを、本発明の方法の工程ｂ）において与えられるポリマーと結合させるために用いることができる。
【０１７７】
本明細書において定義される式（Ｉ）で表される（又はその下位式のいずれかに基づく）本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の第２の工程ｂ）によれば、本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを、工程ａ）にしたがって得られた縮合物に加える。この文脈において、本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかが、本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及び／又はＰ３１個当たり、好ましくは少なくとも１個の−ＳＨ部分、より好ましくは１個のみの−ＳＨ部分を提示することにより、工程ａ）にしたがう縮合重合又は重縮合を工程ｃ）において末端で停止する。本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及び／又はＰ３は同じであっても異なってもよく、これらのポリマーは、所望の特性に基づいて選択することができる。一般的に、親水性ポリマーＰ１及び／又はＰ３は、全体として、工程ａ）にしたがって得られた縮合物に、親水性ポリマーＰ１及び／又はＰ３：工程ａ）にしたがって得られた縮合物の比が約２：１となるように加えることができる。
【０１７８】
一代替例によれば、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを、本明細書において定義される要素Ｌ（リガンド）、又は本明細書において定義される要素（ＡＡ）Ｘ若しくは要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚ、又は本明細書において定義される要素Ｌ（リガンド）と本明細書において定義される要素（ＡＡ）Ｘ若しくは［（ＡＡ）Ｘ］Ｚとの両方によって更に修飾することができる。
【０１７９】
第１の例によれば、工程ｂ）で要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかが提供されるのに先立って、例えば−ＳＨ部分のような本明細書において定義される任意の官能基を介して、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかに要素Ｌとしてリガンドを結合させる。このリガンドは、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかに、これらのポリマーの一方の末端において結合されることが好ましい。この結合が−ＳＨ結合を介して行われる場合、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかが、２個（又は更に多くの）−ＳＨ部分を、例えば式ＨＳ−Ｐ１−ＳＨ、又はＨＳ−Ｐ３−ＳＨによって表される形で有することが好ましい。リガンドＬは１個のみの−ＳＨ部分を有することが好ましい。この場合、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかの１個の−ＳＨ部分が、第１の工程において当該技術分野で周知の保護基を用いて保護されることが好ましい。次いで、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかを要素Ｌと結合させて、保護されていない−ＳＨ部分を介したジスルフィド結合を形成することができる。次いで、一般的には、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかの保護された−ＳＨ部分を更なる反応のために脱保護する。これにより好ましくは以下の中間要素を生ずる。すなわち、
Ｌ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−ＳＨ  又は
ＨＳ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−Ｌ
【０１８０】
また、上記の中間要素は、遊離−ＳＨ部分をブロックすることなく同様に与えることもできる。これらの中間要素は、例えば、工程ａ）にしたがって得られた本発明の繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈ若しくは本発明の繰り返し要素Ｈ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｈ、又は例えば工程ａ１）に基づくその修飾物のいずれかと第２のジスルフィド結合を形成するように、工程ａ）にしたがって得られた縮合物と結合させるために工程ｃ）において使用することができる。この結合が他の部分を介して行われる場合、本明細書において定義される反応のいずれかを適宜用いることができる。
【０１８１】
更なる例によれば、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかが提供されるのに先立って、例えば−ＳＨ部分のような本明細書において定義される任意の官能基を介して、本明細書において定義されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかに結合させる。アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかに、これらのポリマーの内部の任意の位置において、又はこれらのポリマーの一方若しくは両方の末端において結合させることができる。１つの特定の場合では、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚは、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかと、上記工程ａ）にしたがって得られた縮合物との間のリンカーとして、又は、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかと、例えばリンカーＬのような他の要素との間のリンカーとして、又は、別の代替例によれば、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかの一方の末端における終端要素として与えることができる。これらの場合のいずれにおいても、結合は好ましくは−ＳＨ結合を介して行うことが可能であり、その場合、親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれかが２個（又は更に多くの）−ＳＨ部分を、例えば式ＨＳ−Ｐ１−ＳＨ、又はＨＳ−Ｐ３−ＳＨによって表される形で有することが好ましく、これらの−ＳＨ部分の１つが、例えば式ＨＳ−Ｐ１−Ｓ−保護基、又は保護基−Ｓ−Ｐ３−ＳＨによって表される形で保護されることが好ましい。更に、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚが、２個（又は更に多くの）−ＳＨ部分を、例えば式Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ＸＨ、又はＨ［Ｓ−（ＡＡ）Ｘ−Ｓ］ＺＨによって表される形で好ましくは有し、その場合、これらの−ＳＨ部分の１つが、例えば式、保護基−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−ＳＨ、又はＨ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−保護基によって表される形で保護されることが好ましい。次いで、重縮合反応をポリマーＨＳ−Ｐ１−Ｓ−保護基、又は保護基−Ｓ−Ｐ３−ＳＨを用いて行うことにより、以下の中間要素を生ずる。すなわち、
保護基−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−Ｓ−保護基、
保護基−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−保護基、
保護基−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−保護基、又は
保護基−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−保護基
【０１８２】
次いでこれらの中間要素のいずれか１つ又はすべてを、工程ａ）に基づく縮合物と結合させるために本発明の方法の工程ｃ）において用いることができる。
【０１８３】
この目的のため、それぞれの中間化合物の少なくとも一方又は両方の保護基（最終的なキャリア中の要素の所望の方向に基づいて選択される）を、これらが工程ｂ）において提供されるのに先立って脱保護することによって、以下の中間要素を生ずる。すなわち、
ＨＳ−Ｐ１−Ｓ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−ＳＨ、
Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−ＳＨ、
ＨＳ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚＨ、又は、
Ｈ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−ＳＨ
【０１８４】
また、上記の中間要素は、遊離−ＳＨ部分をブロックすることなく同様に与えることもできる。これらの中間要素のいずれか１つ又はすべてを、工程ａ）に基づく縮合物と結合させるために本発明の方法の工程ｂ）において与えることができる。
【０１８５】
上記の中間要素のいずれかが、工程ｂ）において与えられる場合、この縮合反応は、１個の−ＳＨ部分を有する本明細書において定義されるリンカー要素（例えばＬ−ＳＨ）、又は例えば本明細書において定義される１個の−ＳＨ部分を有する任意の他の要素を加えることによって、工程ｃ）において停止することができる。１つの更なる特定の場合では、アミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを、他の要素をアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚに加えることなく、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかの一方の末端において末端要素として用いることができる。
【０１８６】
更なる例によれば、本明細書において定義されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを、工程ｃ）に先立って要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかに結合させてもよく、その場合、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかはリンカーによって予め修飾されたものである。この目的のため、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかは、本明細書において定義される（少なくとも）２個の−ＳＨ部分を有することが好ましく、その場合、重縮合は、例えば１個の−ＳＨ部分を有するリンカーを用いて行われる。この反応は、本明細書において定義される保護基を用いることによって行うか、あるいは好ましくは保護基を用いずに行うことができる。また、−ＳＨ部分以外の本明細書において定義される任意の更なる官能基を結合に用いることもできる。次いで、要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかの第２の−ＳＨ部分を用いて、本明細書において定義されるアミノ酸要素（ＡＡ）Ｘ又は混合繰り返しアミノ酸要素［（ＡＡ）Ｘ］Ｚを、−ＳＨ部分を介して、例えば式Ｈ（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ＸＨ、又はＨ［Ｓ−（ＡＡ）Ｘ−Ｓ］ＺＨによって表される形で結合させることができる。この反応により、好ましくは以下の中間化合物を生ずる。すなわち、
Ｌ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−ＳＨ、
Ｌ−Ｓ−Ｓ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚＨ、又は、
ＨＳ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−Ｌ、又は、
ＨＳ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−Ｓ−Ｓ−Ｌ
又は、要素Ｌがジスルフィド結合を用いずに結合されている場合には、以下の中間生成物を生ずる。すなわち、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−ＳＨ、
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚＨ、又は、
ＨＳ−（Ｓ−ＡＡ−Ｓ）ｘ−Ｓ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ、又は、
ＨＳ−［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｚ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
【０１８７】
工程ｃ）では、本明細書において定義される親水性ポリマーＰ１及びＰ３の少なくともいずれか（又は、工程ｂ）にしたがって与えられる中間要素のいずれか）を提供し、繰り返し要素Ｈ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｈと、混合繰り返し要素Ｈ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｈと、又は、工程ａ）にしたがって得られた中間要素のいずれかと、一般的には約２：１の比で混合する。反応は、通常、工程ａ）について上記に既に述べた条件下（ｐＨ、温度、反応時間、緩衝液など）で開始及び行うことができる。工程ｃ）は、縮合重合又は重縮合反応を停止させ、式（Ｉ）又は（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア、好ましくは式（Ｉ）：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
又は式（Ｉａ）：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
に基づく本発明のポリマーキャリアを得ることを可能とする。
【０１８８】
本明細書において定義される式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の更なる工程ｄ）によれば、工程ｃ）にしたがって得られた本発明のポリマーキャリアを場合により精製する。精製は、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ、ＧＰＳ、透析などのクロマトグラフィー的方法を用いて行うことができる。
【０１８９】
本明細書において定義される式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法の最後の工程ｅ）によれば、本明細書において定義される核酸を、工程ｃ）又はｄ）にしたがって得られた本発明のポリマーキャリアに、好ましくは上記に述べた比で場合により加える。一般的に本発明の複合体においては、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子、及び本明細書において定義される核酸は、約５〜１０，０００のポリマーキャリア：核酸のモル比、好ましくは約５〜５，０００のモル比、より好ましくは約５〜２，５００のモル比、更により好ましくは約５〜１，０００のモル比、例えば、約１０〜１０，０００のポリマーキャリア：核酸のモル比、約１０〜５，０００のモル比、約２５〜２，５００のモル比、又は約５０〜１０，０００のモル比で与えられる。Ｎ／Ｐ比は、好ましくは上記に示したとおりである。
【０１９０】
本明細書において定義される式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又はその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリアを調製するための本発明の方法は、その要素Ｐ２、Ｌ、（ＡＡ）Ｘ又は［（ＡＡ）Ｘ］Ｚの特定の選択により、所望の本発明のポリマーキャリアの化学的性質を適合させるうえで特に適しており、これによりインビボでの凝集及び毒性が防止される。
【０１９１】
更に、当業者は、本発明の方法にしたがって得られるポリマーは、平衡反応の一般的法則のために、連結がジスルフィド結合によって形成された、モノマー要素Ｐ１及びＰ３の少なくともいずれかと隣接した要素Ｐ２のモノマー状の成分を生ずるものと常に予想していたであろうから、上記の本発明の方法を用いて本発明のポリマーキャリアを得るということは当業者には予想しえなかった点である。これに対して、本発明者らは、本明細書において定義される特定のポリマーの比及び方法の工程、特に重合反応の際に穏やかな酸化的条件を用いた場合に、遊離−ＳＨ部分をブロックすることなく、ポリマーの所望の分布及び所望の平均長さ、並びに一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく所望の本発明のポリマーキャリアが特に得られるように縮合重合を方向付けることが可能であることを期せずして実証しえたものである。これは当業者により予想されなかったことである。
【０１９２】
更なる実施形態によれば、本発明は更に、本明細書において定義される核酸カーゴと、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、及び場合により薬学的に許容される担体及びビヒクルの少なくともいずれかを含む医薬組成物を提供する。
【０１９３】
第１の成分として、本発明の医薬組成物は、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体を含む。
【０１９４】
第２の成分として、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの更なる医薬活性成分を含む。この文脈において、医薬活性成分とは、特定の適応症、好ましくは癌性疾患、自己免疫疾患、アレルギー、又は感染症を治癒、緩和、又は予防する治療効果を有する化合物である。このような化合物としては、一切の限定を意味するものではないが、ペプチド又はタンパク質、好ましくはコーディング核酸について本明細書において定義されるペプチド又はタンパク質、核酸、好ましくは本明細書において定義される核酸、（治療活性を有する）低分子量の有機又は無機化合物（分子量５，０００未満、好ましくは１，０００未満）、糖類、抗原又は抗体、好ましくは本明細書において定義される抗原又は抗体、従来技術において既に知られる治療薬、抗原性細胞、抗原性細胞フラグメント、細胞分画、細胞壁成分（例えば多糖類）、改変、弱毒化、又は不活化（例えば化学的又は放射線照射により）された病原体（ウイルス、細菌など）、アジュバント、好ましくは本明細書において定義されるアジュバントなどが挙げられる。
【０１９５】
更に、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体及びビヒクルの少なくともいずれかを含んでもよい。本発明との関連において、薬学的に許容される担体には、一般的に本発明の医薬組成物の液体又は非液体の基剤が含まれる。本発明の医薬組成物が液体の形態で与えられる場合には、担体は、一般的に発熱源を含まない水、等張食塩水又は例えばリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液などの緩衝（水）溶液である。特に、本発明の医薬組成物の注射用には、ナトリウム塩、好ましくは少なくとも５０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは少なくとも０．０１ｍＭのカルシウム塩、及び場合によりカリウム塩、好ましくは少なくとも３ｍＭのカリウム塩を含む、水又は好ましくは緩衝液、より好ましくは水性緩衝液を使用することができる。好ましい実施形態によれば、前記ナトリウム、カルシウム及び場合によりカリウム塩は、それらのハロゲン化物、例えば、塩化物、ヨウ化物、又は臭化物として、それらの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、又は硫酸塩として存在しうる。これらに限定されるものではないが、ナトリウム塩の例としては、例えば、ＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＯ４が挙げられ、場合により用いられるカリウム塩の例としては、例えば、ＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＳＯ４が挙げられ、カルシウム塩の例としては、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＩ２、ＣａＢｒ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２が挙げられる。更に、上記のカチオンの有機アニオンが緩衝液に含まれてもよい。より好ましい実施形態によれば、本明細書において定義される注射目的に適した緩衝液は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、及び場合により塩化カリウム（ＫＣｌ）を含んでよく、その際、塩化物以外に更なるアニオンが存在してもよい。ＣａＣｌ２は、ＫＣｌなどの別の塩に置き換えてもよい。一般的に、注射緩衝液中の塩は、少なくとも５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、少なくとも３ｍＭの塩化カリウム（ＫＣｌ）、及び少なくとも０．０１ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）の濃度で存在する。注射緩衝液は、特定の参照媒体を基準として、高張、等張、又は低張であってよい。すなわち緩衝液は、特定の参照媒体を基準として、より高いか、同じか、又はより低い塩の含量を有してよく、その際、好ましくは、浸透圧又は他の濃度効果によって細胞に障害を与えないような上記の塩の濃度が用いられる。参照媒体は、例えば、血液、リンパ液、細胞質基質液、若しくは他の体液などの「インビボ」の方法において存在する液体、又は、一般的な緩衝液若しくは液体などの「インビトロ」の方法において参照媒体として使用することが可能な液体である。このような一般的な緩衝液又は液体は当業者には周知のものである。乳酸リンゲル液が液体基剤として特に好ましい。
【０１９６】
別の態様によれば、本発明の医薬組成物はアジュバントを含んでもよい。この文脈において、アジュバントとは、自然免疫系の免疫反応、すなわち非特異的な免疫反応を開始又は増大させるのに適したあらゆる化合物として理解することができる。換言すれば、一般的に、本発明の医薬組成物が投与されると場合により医薬組成物に含まれるアジュバントのために自然免疫反応を誘発する。このようなアジュバントは、当業者には周知の、本発明の例、すなわち哺乳動物における自然免疫反応の誘導を支持することに適した任意のアジュバントから選択することができる。
【０１９７】
本発明の医薬組成物は、経口的、非経口的に、吸入スプレーにより、局所投与、直腸内投与、鼻腔内投与、頬側投与、膣内投与、又は移植リザーバを介して投与することができる。本明細書において用いるところの非経口なる用語には、皮下、静脈内、筋内、関節内、間節滑液嚢内、胸骨内、鞘内、肝内、病変内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心内、動脈内、及び舌下注射又は注入法が含まれる。
【０１９８】
本発明の医薬組成物は、ヒトの医療及び獣医学の目的で、好ましくはヒトの医療目的で、一般的な医薬組成物として、又はワクチンとして使用することができる。
【０１９９】
特に好ましい態様によれば、本発明の医薬組成物（又は本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体）は、免疫賦活剤として提供又は使用することができる。この文脈において、本発明の医薬組成物は好ましくは上記に定義したようなものである。より好ましくは、医薬組成物中に好ましくは含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、一般的には、例えばＣｐＧ−ＤＮＡ又は免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）などの本明細書において定義される免疫賦活性核酸である。これに代えるか又はこれに加えて、医薬組成物に好ましくは含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、本明細書において定義されるコーディング核酸、好ましくはｃＤＮＡ又はｍＲＮＡ、より好ましくは本明細書において好ましくは定義されるアジュバントタンパク質をコードしたｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。
【０２００】
これと関連したこの実施形態の特定の態様では、アジュバントタンパク質は、ポリマーキャリアの要素、好ましくは（ＡＡ）Ｘとしての要素であることが好ましい。
【０２０１】
更により好ましい態様によれば、本発明の医薬組成物（又は本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体）は、アジュバントとして提供又は使用することができる。この文脈において、アジュバントは上記の本発明の医薬組成物として好ましくは定義される。より好ましくは、アジュバントに好ましくは含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、一般的には、例えばＣｐＧ−ＤＮＡ又は免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）などの本明細書において定義される免疫賦活性核酸である。これに代えるか又はこれに加えて、アジュバントに好ましくは含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、本明細書において定義されるコーディング核酸、好ましくはｃＤＮＡ又はｍＲＮＡ、より好ましくは本明細書において好ましくは定義されるアジュバントタンパク質をコードしたｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。アジュバントに好ましくは含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は、一般的に、治療しようとする患者において自然免疫反応を誘発する。このようなアジュバントは、任意の公知のワクチン又は任意の更なる（公知の）治療薬による任意の不随する療法において、好ましくは主療法の投与の前、同時、又その後に、更なる（公知の）ワクチン又は（公知の）更なる治療薬の投与の前、同時、又はその後に用いることができる。
【０２０２】
アジュバントとして提供又は使用される、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体又は本発明の医薬組成物は、非抗原特異的（自然）免疫反応（自然免疫系によって与えられるような）を、好ましくは免疫賦活作用を示すように誘発することが可能なものであることが好ましい。免疫反応は、一般的に様々な態様で引き起こされる。適当な免疫反応の重要な因子の１つとして、異なるＴ細胞亜集団の刺激がある。Ｔリンパ球は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞及びＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞の２つの亜集団に一般的に分けられ、これらにより免疫系は細胞内（Ｔｈ１）及び細胞外（Ｔｈ２）の病原体（例えば抗原）を破壊することが可能である。これら２つのＴｈ細胞集団は、これらの産生するエフェクタータンパク質（サイトカイン）のパターンにおいて異なっている。したがって、Ｔｈ１細胞は、マクロファージ及び細胞障害性Ｔ細胞の活性化によって細胞性免疫反応を助ける。これに対してＴｈ２細胞は、Ｂ細胞を形質細胞へと変換させるように刺激し、抗体（例えば抗原に対する）を形成することによって体液性免疫反応を促進する。したがって、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、免疫反応の誘導及び維持において極めて重要である。本発明との関連において、免疫反応のＴｈ１／Ｔｈ２比は、免疫賦活剤、すなわち本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体によって、細胞性反応、つまりＴｈ１反応に向かう方向に動かされることが好ましく、これにより主として細胞性免疫反応が誘導される。上記に定義されるように、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は、それ自体で非特異的な自然免疫反応を引き起こすものであり、このため本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体は例えば免疫賦活剤として（別の医薬活性成分を加えることなく）使用することが可能である。別の医薬活性成分、好ましくは特異的免疫原性成分、好ましくは抗原とともに投与される場合、本発明の核酸は、例えば抗原のような他の医薬活性成分によって引き起こされる特異的な適応免疫反応を支持するアジュバントとして機能する。
【０２０３】
別の特に好ましい実施形態によれば、本発明の医薬組成物（又は本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体）は、ワクチンとして提供又は使用することができる。
【０２０４】
このような本発明のワクチンは、一般的に本発明の医薬組成物のと同様に構成され、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子としてＲＮＡ又はｍＲＮＡが使用される場合、治療しようとする患者の免疫系の免疫反応、例えば自然免疫反応を支持又は誘発することが好ましい。更に、又はこれに代わるものとして、本発明のワクチンは、好ましくは、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸分子が、適応免疫反応を誘発する上記に述べた抗原又は抗体のいずれかをコードする場合に、適応免疫反応を誘発することができる。
【０２０５】
この文脈において、本ワクチンは、上記に開示されるアジュバント又は本発明の医薬組成物として好ましくは定義される。より好ましくは、このようなワクチンに含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、上記に定義される核酸のいずれか、好ましくは、例えばＣｐＧ−ＤＮＡ又は免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）のような本明細書において定義される免疫賦活性核酸であってよい。これに代えるか又はこれに加えて、好ましくはワクチンに含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、本明細書において定義されるコーディング核酸であり、好ましくはｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであり、より好ましくは、好ましくは本明細書において定義されるアジュバントタンパク質をコードしたｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。これに代えるか又はこれに加えて、好ましくはワクチンに含まれる本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸は、本明細書において定義されるコーディング核酸であり、好ましくはｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであり、より好ましくは、好ましくは本明細書において定義される抗原をコードしたｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。更に詳細には、本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の核酸が抗原をコードしていない場合、本発明のワクチンは、好ましくは上記に定義された抗原を、タンパク質若しくはペプチドとして、又は核酸にコードされたものとして含むか、あるいは抗原性細胞、抗原性細胞フラグメント、細胞分画、細胞壁成分（例えば多糖類）、改変、弱毒化、又は不活化（例えば化学的又は放射線照射により）された病原体（ウイルス、細菌など）を含みうる。
【０２０６】
更なる態様によれば、本発明のワクチンは、ペプチド又はタンパク質抗原を、本明細書において定義される本発明のポリマーキャリアの（ＡＡ）Ｘとして、好ましくは繰り返し要素［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部として含みうる。
【０２０７】
本発明のワクチンは、本発明の医薬組成物について本明細書において定義される、薬学的に許容される担体、アジュバント、及びビヒクルの少なくともいずれかを更に含んでもよい。
【０２０８】
本発明のワクチンは、必要に応じてその免疫原性を高めるために１以上の補助的物質を更に含んでもよい。これにより、核酸カーゴと、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づくポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体と、本明細書において定義される本発明のワクチンに場合に応じて含まれうる補助的物質との相乗作用が好ましくは得られる。この点に関して、補助的物質の異なる種類に応じて、異なる機序が考えられる。例えばリポ多糖類、ＴＮＦ−α、又はＣＤ４０リガンドなどの、樹状細胞（ＤＣ）を成熟させる化合物は好適な補助的物質の第１のクラスを構成する。一般的に、「危険シグナル」（ＬＰＳ、ＧＰ９６など）又は、ＧＭ−ＣＦＳなどのサイトカインのようにして免疫系に影響を及ぼすあらゆる物質を補助的物質として使用することが可能であり、これにより所望の要領で免疫反応を増強し、及び／又は免疫反応に影響を及ぼすことが可能である。特に好ましい補助的物質は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−β、又はＴＮＦ−α、ｈＧＨなどの成長因子のような、自然免疫反応を更に促進するモノカイン、リンフォカイン、インターロイキン、又はケモカインなどのサイトカインである。
【０２０９】
本発明のワクチンに加えることができる更なる添加剤としては、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）などの乳化剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤、着色剤、味覚付与剤、医薬担体、錠剤形成剤、安定化剤、酸化防止剤、防腐剤がある。
【０２１０】
本発明のワクチンは、上記に加えるか又は上記に代わるものとして、ヒトＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０に対するその結合親和性（リガンドとして）により、又はマウスＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２若しくはＴＬＲ１３に対するその結合親和性（リガンドとして）により、免疫賦活性を示すことが知られている任意の更なる化合物を含んでもよい。
【０２１１】
この文脈において、本発明のワクチンに加えることができる別のクラスの化合物として、ＣｐＧ核酸、詳細にはＣｐＧ−ＲＮＡ又はＣｐＧ−ＤＮＡがある。ＣｐＧ−ＲＮＡ又はＣｐＧ−ＤＮＡは、一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）又は二本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｄｓＣｐＧ−ＲＮＡ）であってよい。ＣｐＧ核酸は、ＣｐＧ−ＲＮＡの形であることが好ましく、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓＣｐＧ−ＲＮＡ）の形であることがより好ましい。ＣｐＧ核酸は、好ましくは少なくとも１個又はそれよりも多い（有糸分裂促進性の）システイン／グアニンジヌクレオチド配列（ＣｐＧモチーフ）を含んでいる。第１の好ましい代替例によれば、これらの配列に含まれる少なくとも１個のＣｐＧモチーフ、すなわち、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）及びＧ（グアニン）は、メチル化されていない。これらの配列に場合によって含まれるすべての更なるシトシン又はグアニンは、メチル化されていてもメチル化されていなくてもよい。しかしながら、更なる好ましい代替例によれば、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）及びＧ（グアニン）は、メチル化された形態で存在してもよい。
【０２１２】
本発明のワクチンは更に、上記に加えて又は上記に代わるものとして、（自然）免疫反応を誘発又は増大させる、免疫賦活性ＲＮＡ、すなわち免疫賦活性ＲＮＡに由来するＲＮＡを含みうる。好ましくは、このようなＲＮＡは、一般的にＲＮＡについて本明細書において定義されるものであってよい。この文脈において、自然免疫反応を誘導しうるＲＮＡ分子のクラスは、例えばＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドから、特に、好ましくはヒトファミリーメンバーのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０又はマウスファミリーメンバーのＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３、より好ましくはＴＬＲ７及びＴＬＲ８から選択されるＴＬＲのリガンドに相当するか、及び／又は該ＴＬＲのリガンドをコードしたＲＮＡ配列から、ＲＮＡの細胞内受容体のリガンド（ＲＩＧ−Ｉ又はＭＤＡ−５など）（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，  Ｅ．，  Ｔｓｃｈｏｐｐ，  Ｊ．  （２００６）．  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅｓ：  ｔｗｏ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｗａｙｓ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ２２，  ５６１−５６９を参照）、又は他の任意の免疫賦活性ＲＮＡ配列から選択することができる。このような免疫賦活性ＲＮＡは、ヌクレオチド１，０００〜５，０００個、５００〜５，０００個、５〜５，０００個、又は５〜１，０００個、５〜５００個、５〜２５０個、５〜１００個、５〜５０個、若しくは５〜３０個の長さを有してよい。
【０２１３】
本発明は更に、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成された本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、上記を含む医薬組成物又は上記を含むキットの幾つかの応用及び使用を提供するものである。
【０２１４】
一実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成された本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、又は上記を含むキットの、好ましくは本明細書において定義される疾患の遺伝子治療又は治療のための薬剤としての第１の医療上の使用に関する。当該薬剤は、医薬組成物の形、又は、医薬組成物の特定の形態としてのアジュバント又はワクチンの形であってよい。本発明との関連における医薬組成物は、一般的には、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子、又は核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成された本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、場合により例えば本発明の核酸について本明細書において定義される更なる成分、及び場合により好ましくは本明細書において定義される薬学的に許容される担体及び／又はビヒクルを含む。
【０２１５】
更なる一実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子の、好ましくは本明細書において定義される核酸カーゴとの使用、又は、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の、本明細書において定義される疾患の予防、治療、及び改善の少なくともいずれかにおける使用に関する。好ましくは、本明細書において述べられる疾患は、癌若しくは腫瘍疾患、感染症、好ましくは（ウイルス、細菌、又は原生動物による）感染症、自己免疫疾患、アレルギー若しくはアレルギー性疾患、単一遺伝子性疾患すなわち（遺伝性）疾患若しくは遺伝子疾患一般、遺伝的背景を有し、定義された遺伝子欠損によって一般に引き起こされ、メンデルの法則にしたがって遺伝する疾患、心血管疾患、神経疾患、呼吸器系の疾患、消化器系の疾患、皮膚の疾患、筋骨格障害、結合組織の疾患、新生物、免疫不全症、内分泌、栄養、及び代謝疾患、眼疾患、耳疾患、及び本発明によって影響されうるあらゆる疾患から選択される。
【０２１６】
別の実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子、又は、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成された本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の、本明細書において定義される疾患の治療における第２の医療上の使用に関し、好ましくは、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子、又は核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成された本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、上記を含む医薬組成物、又は上記を含むキットの、本明細書において定義される様々な疾患の予防、治療及び改善の少なくともいずれかを行うための薬剤の調製における使用に関する。
【０２１７】
更なる一実施形態によれば、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子の、好ましくは本明細書において定義される核酸カーゴとの使用、又は、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体の、免疫療法、遺伝子治療、ワクチン接種における使用、又はアジュバントとしてのその使用に関する。
【０２１８】
更なる実施形態によれば、本発明は、核酸カードと一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく本発明のポリマーキャリア分子とによって形成される本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、又は本発明の医薬組成物若しくは本明細書において定義されるワクチンを、これを必要とする患者に好ましくは使用又は投与することによる、本明細書において定義される疾患の治療、特に、本明細書において定義される様々な疾患の予防、治療及び改善の少なくともいずれかに関する。
【０２１９】
本発明は更に、遺伝されない、又は上記のカテゴリーの下に要約することのできない疾患の治療も可能とする。このような疾患には、例えば、上記に述べたような特定の治療活性を有するタンパク質のような特定のタンパク質因子を必要とする患者の治療が含まれる。これには例えば透析患者、例えば（定期的な）腎臓又は腎透析を行っており、例えばエリスロポエチン（ＥＰＯ）などの本明細書において定義される特定の治療活性を有するタンパク質を必要としうる患者が含まれる。
【０２２０】
最後の実施形態によれば、本発明は更にキット、特に、構成要素単独として、又は更なる成分と組み合わせて、一般式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）で表される、又は本明細書において定義されるその下位式のいずれかに基づく少なくとも１種類の本発明のポリマーキャリア分子、核酸カーゴと本発明のポリマーキャリア分子とによって形成される少なくとも１種類の本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体、本明細書において定義される少なくとも１種類の核酸、上記を含む少なくとも１種類の医薬組成物、及び／又は上記を含むキット、並びに、場合に応じて、本発明のポリマーキャリア分子、核酸、本発明のポリマーキャリア複合体、及び本発明の医薬組成物の少なくともいずれかの投与及び用量についての情報を有する技術的指示を含む部材のキットを提供する。このようなキット、好ましくは部材のキットは、例えば上記に述べた応用又は用途のいずれにも適用することが可能である。このようなキットは、部材のキットとして与えられる場合、各構成要素をキットの異なる部材中に更に含んでもよい。
【０２２１】
以下の図面は、本発明を更に説明することを目的としたものである。これらの図面は発明の主題をこうした図面に限定することを目的としたものではない。
【図面の簡単な説明】
【０２２２】
【図１】図１は、非還元的条件下でＳＤＳ  ＰＡＧＥゲル電気泳動による反応において生成された生成物を示す。ゲルの左部分は、ペプチド成分を着色するクマシープロトコルにしたがって染色し、右部分は、ＰＥＧ成分を着色する塩化バリウム／ヨウ素溶液によって染色した。ＰＥＧ及びペプチドを含む生成物は、想定した質量の範囲内に１種類のみ生成されたことが容易に見て取れる。
【図２】図２は、１：５００のモル比で本発明のポリマーキャリアＰＢ１９と複合化した蛍光標識ＲＮＡをトランスフェクトした５分後のＬ９２９細胞の共焦点顕微鏡法の結果を示す。その結果、５分後に既に細胞内に複数の複合体が検出され、高いトランスフェクション率を示した。
【図３】図３は、１：５００のモル比で本発明のポリマーキャリアＰＢ１９と複合化した蛍光標識ＲＮＡをトランスフェクトした１時間後のＬ９２９細胞の共焦点顕微鏡法の結果を示す。その結果、粒子の大部分がトランスフェクションの１時間後に細胞に取り込まれ、高いトランスフェクション率を示した。
【図４】図４は、結合した核酸の複合体からの静電置換による安定性実験を示す。図に見られるように、アニオン性ポリマーであるヘパリンを添加したところ、ゲル中でヘパリンが依然移動したことから、ヘパリン添加によりＲＮＡは複合体から置換されなかった。このことは、複合体の結合が非常に強く、競合的複合パートナーが複合体からＲＮＡを置換できないことを示している。
【図５】図５は、複合体結合の強さを調べるためのゲルシフトアッセイを示す。アニオン性ポリマーであるヘパリン又は還元剤であるＤＴＴを単独で添加した場合、本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９）との複合体からＲＮＡは置換されないことが示された。これらは共に添加された場合のみ、複合体からＲＮＡを置換することができた（レーン７）。このことは、複合体の結合が非常に強く、競合的複合パートナー及び還元剤のいずれも複合体からＲＮＡを置換できないことを示している。
【図６】図６は、複合体結合の強さを調べるためのゲルシフトアッセイを示す。図に見られるように、アニオン性ポリマーであるヘパリンを単独で添加した場合、本発明に基づくポリマー（ＰＢ２２）との複合体からＲＮＡは置換されなかった。これに対して、ｍＲＮＡは、ＰＥＩ複合体からヘパリンによって容易に置換された。
【図７】図７は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡのＨｅＬａ細胞中での発現実験の結果である。図に見られるように、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とＰＢ１９ポリマーとの配合物（ＲＮＡ：ＰＢ１９のモル比＝１：１，０００、１：５００、１：１００）では、血清含有培地の存在とは無関係にルシフェラーゼの発現が見られた。一般に血清含有培地は、トランスフェクション効率の低下につながることからこれらの結果は予想外であった。
【図８】図８は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡのＨｅＬａ細胞中での発現実験の結果である。図に見られるように、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とＰＢ８３ポリマーとの配合物（ＲＮＡ：ＰＢ８３のモル比＝１：５０）では、遊離ペプチドをＲＮＡと１：５０のモル比で組み合わせた場合（例、テンプレート補助によるインサイチュー重合（Ｒｉｃｅ  ｅｔ．  ａｌ．））、ＰＥＧなしの非ＰＥＧ化重合物ＰＢ８３を１：５０のモル比で組み合わせた場合（例、ＲＰＣコンフォーム）、ペプチド成分を加えないＰＢ８３重合物（例、二量体化ＰＥＧ−ＳＳ−ＰＥＧ）、及び重合反応をマレイミド含有ＰＥＧにより停止させることによって合成されたＰＢ８３誘導体の不可逆的ＰＥＧ化物と比較して、大幅に高いルシフェラーゼの発現が見られた。
【図９】図９Ａは、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡの皮内注射後のＢＡＬＢ／ｃマウスでの発現実験の結果を示す。その結果、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とＰＢ１９ポリマーとの配合物では、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの真皮においてルシフェラーゼの発現が見られた。当該技術分野において知られる他のトランスフェクション試薬（ＰＥＩ及びリポフェクタミン２０００）では、ルシフェラーゼタンパク質の発現は一切認められなかった。図９Ｂは、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡの筋内注射後のＢＡＬＢ／ｃマウスでの発現実験の結果を示す。その結果、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とＰＢ１９ポリマーとの配合物では、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの脛骨筋においてルシフェラーゼの発現が見られた。当該技術分野において知られる他のトランスフェクション試薬（ＰＥＩ及びリポフェクタミン２０００）では、ルシフェラーゼタンパク質の発現は一切認められなかった。
【図１０】図１０は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、本発明に基づく２種類の異なるポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ４８）との異なる配合物を皮内注射した後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現を示す。配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、本発明に基づく２種類の異なるポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ４８）とのこれらの配合物により、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの真皮においてルシフェラーゼの発現が見られた。モル比２５００：１のＲＰＣ  ＣＨ６Ｒ４Ｈ６Ｃ（ＰＥＧ化なし）で表されるペプチドと、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とによって形成されたポリマーキャリアカーゴ複合体は、複合化ｍＲＮＡの皮内注射後にルシフェラーゼの発現を示さなかった。
【図１１】図１１は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、本発明に基づく３種類の異なるポリマー（ＰＢ１２４、ＰＢ１１７及びＰＢ８３）との異なる配合物を皮内注射した後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現を示す。これらの配合物のいずれにおいても、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの真皮においてルシフェラーゼの発現が見られた。
【図１２】図１２は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡを用いたＣＨＯ細胞中での発現実験の結果を示す。図に見られるように、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、本発明に基づく異なるポリマーとの配合物（ＲＮＡ：ＰＢのモル比＝１：２５０）のいずれにおいても、血清含有培地中でルシフェラーゼの高い発現レベルが認められた。更に、親水性要素（ＡＡ）Ｘ（この場合、ポリマー中のペプチドＣＡＳ３ＰＳ３ＡＣ）の有利な効果も容易に認められる。
【図１３】図１３は、ｈＰＢＭＣにおけるｈＩＬ−６サイトカインの分泌を示す。本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ２２）と配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とからなる複合体は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とカチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とからなる複合体、又は、カチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とＰＥＧ化カチオン性ペプチド（一般に、予め形成された核酸縮合物の親水性コーティングを後で付与する）との組み合わせとは異なり、ｈＰＢＭＣにおいてサイトカインの分泌を誘導しないことが示された。使用したポリマーは以下の通り。Ｅ９−ＰＥＧ５ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＲ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＰＢ１９：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨＰＢ２２：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
【図１４】図１４は、ｈＰＢＭＣにおけるｈＴＮＦαサイトカインの分泌を示す。本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ２２）と配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とからなる複合体は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とカチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とからなる複合体、又は、こうした複合体をＰＥＧ化ペプチド（一般に、予め形成された核酸縮合物の親水性コーティングを後で付与する）によってコーティングしたものと異なり、ｈＰＢＭＣにおいてサイトカインの分泌を誘導しないことが示された。使用したポリマーは以下の通り。Ｅ９−ＰＥＧ５ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＲ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＰＢ１９：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨＰＢ２２：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
【図１５】図１５は、ｈＰＢＭＣにおけるｈＴＮＦαサイトカインの分泌を示す。配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９）とからなる複合体は、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）とリポフェクタミン２０００などの最新のトランスフェクション試薬とからなる複合体と異なり、ｈＰＢＭＣにおいてサイトカインの分泌を誘導しないことが示された。
【図１６】図１６は、ヌクレオチド１８５７個の長さを有するｍＲＮＡコンストラクトｐＣＶ１９−Ｐｐ  ｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０内のＰｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ配列（配列番号３６９）を示す。このｍＲＮＡ配列は以下の配列要素を含んでいる。すなわち、・Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼをコードしたコード配列、・αグロビン−３’−ＵＴＲから誘導された安定化配列（ｍｕａｇ（突然変異αグロビン−３’−ＵＴＲ））、・３’末端の７０個のアデノシン（ポリＡテール）、・３’末端の３０個のシトシン（ポリＣテール）。  ＯＲＦは斜体の文字で示し、ｍｕａｇ（突然変異αグロビン−３’−ＵＴＲ）は点線で示し、ポリＡテールは１本線の下線で示し、ポリＣテールは２本線の下線で示している。
【実施例】
【０２２３】
以下の実施例は、本発明を更に説明することを目的としたものである。これらの実施例は発明の主題をこうした実施例に限定することを目的としたものではない。
【０２２４】
１．  Ｐｐルシフェラーゼ（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ）をコードしたＤＮＡ及びｍＲＮＡコンストラクトの調製
この実施例のため、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼをコードしたＤＮＡ配列を調製し、後のインビトロ転写反応において使用した。
【０２２５】
第１の調製法にしたがって、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼのコード配列に相当するｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０と称されるＤＮＡ配列を調製した。このコンストラクトは、コドンの高い利用率及び安定化を目的としたＧＣ最適化配列、αグロビン−３’−ＵＴＲから誘導された安定化配列（ｍｕａｇ（突然変異αグロビン−３’−ＵＴＲ））、３’末端のアデノシン７０個の部分（ポリＡテール）、及び３’末端のシトシン３０個の部分（ポリＣテール）を導入することによって、野生型のＰｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼをコードしたＤＮＡ配列を改変することによって調製し、配列番号３６９を得た（図１６を参照）。最終的なＤＮＡコンストラクトの配列は、ヌクレオチド１８５７個の長さを有し、これをｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０と命名した。配列番号３６９（図１６を参照）に、対応するｍＲＮＡの配列を示す。
【０２２６】
この配列は以下の配列要素を含む。すなわち、
・Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼをコードしたコード配列、
・αグロビン−３’−ＵＴＲから誘導された安定化配列（ｍｕａｇ（突然変異αグロビン−３’−ＵＴＲ））、
・３’末端の７０個のアデノシン（ポリＡテール）、
・３’末端の３０個のシトシン（ポリＣテール）。
【０２２７】
２．  インビトロ転写
実施例１に基づいて調製したそれぞれのＤＮＡプラスミドを、Ｔ７ポリメラーゼを使用してインビトロで転写した。次いで、ＰｕｒｅＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）（キュアバク社（ＣｕｒｅＶａｃ）、テュービンゲン、ドイツ）を使用してｍＲＮＡを精製した。
【０２２８】
３．  試薬
ペプチド：本実験において使用したペプチドは以下の通り。すなわち、
ＰＢ１９：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ（ＰＥＧ化ＣＨ３Ｒ４Ｈ３Ｃペプチドポリマー）
ＰＢ２２：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ（ＰＥＧ化ＣＨ６Ｒ４Ｈ６Ｃペプチドポリマー）
ＰＢ４８：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）３−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ８３：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ−）７−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ８６：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ−）５（Ｓ−ＣＡＳ３ＰＳ３ＡＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ１１７：ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＫＫＫＫＫＫＨＣ−Ｓ−）７−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ１２４：ＨＯ−ＰＥＧ２０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ−）７−Ｓ−ＰＥＧ２０００−ＯＨ
ＰＢ８３遊離ペプチド  ＨＳ−（ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ）−ＳＨ  配合に先立って水に新しく溶解する。
無ペプチドのＰＢ８３：ＰＥＧ−ＳＳ−ＰＥＧ
無ＰＥＧのＰＢ８３：ＨＳ−（ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ）ｎ−ＳＨ
ＰＢ８３ｍａｌＰＥＧ：ＰＥＧ−ｍａｌ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ−）ｘ−ｍａｌ−ＰＥＧ
Ｈ３Ｒ９Ｈ３：ＨＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲＨＨＨ
ＣＨ６Ｒ４Ｈ６Ｃ：Ｈ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｈ
以下の試薬を更に使用した。すなわち、
リポフェクタミン２０００（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））
ＰＥＩ  ２５ｋＤａ（分枝鎖）（アルドリッチ社（Ａｌｄｒｉｃｈ））
【０２２９】
４．  本発明のポリマーキャリアの合成
計算された量のペプチド（要素Ｐ２）を必要に応じて５％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した（穏やかな酸化的条件であることから平衡が確立される）ｐＨ８．５の緩衝水溶液の混合物に溶解し、室温で１８時間攪拌することによって縮合反応を行った。この後、計算された量のチオール基含有ＰＥＧ誘導体（α−メトキシ−ω−メルカプトポリ（エチレングリコール））（要素Ｐ１）（水に溶解したもの）を加え、得られた溶液を更に１８時間攪拌した。この後、凍結乾燥及び精製を行って所望のポリマーを得た。ＰＥＧ要素Ｐ１とペプチド要素Ｐ２との比によってＰ２ポリマーの鎖長が決まる。
【０２３０】
この反応環境中での縮合反応は可逆であるため、ポリマーの鎖長は、重合反応を停止させるモノチオール化合物の量によって決まる。要約すると、ポリマー鎖の長さはオリゴペプチドとモノチオール要素との比によって決まる。この反応は、選択された穏やかな酸化的条件によって支持される。よりストリンジェントな酸化的条件（３０％ＤＭＳＯ）では、高分子量（長鎖）のポリマーの生成が誘導される。
【０２３１】
４．１．  １．工程：代表的な重合反応：
ｎ×ＨＳ−ＣＨＨＨＲＲＲＨＨＨＣ−ＳＨ    ――＞    Ｈ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）ｎ−Ｈ
４．２．  ２．工程：代表的な停止反応：
Ｈ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）ｎ−Ｈ  ＋  ２ＰＥＧ−ＳＨ  ――＞  ＰＥＧ−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）ｎ−Ｓ−ＰＥＧ
４．３．  代表的な合成反応：
工程１）
５×ＨＳ−ＣＨＨＨＲＲＲＨＨＨＣ−ＳＨ    ――＞  Ｈ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｈ
工程２）
Ｈ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｈ  ＋２×ＰＥＧ５０００−ＳＨ  ――＞  ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００
ポリマー長＝５（ｎ＝５）を得るため、ペプチド：ＰＥＧのモル比＝５：２を用いた。
ＰＥＧ鎖の影響、及びＰＥＧ鎖の可逆的付加の影響を示すために合成反応の幾つかの変形例を行った。
【０２３２】
４．４．  ＰＥＧ鎖のないポリマーキャリアの合成反応
スルフヒドリル含有ＰＥＧ誘導体を添加する工程を行わない、又は省略した以外は上記に述べたのと同じ反応条件とした。
４．５．  不可逆的に付加されたＰＥＧ鎖の合成反応
スルフヒドリル含有ＰＥＧ誘導体の代わりにマレイミド含有ＰＥＧ誘導体を使用した以外は上記に述べたのと同じ反応条件とした。マレイミド部分は遊離スルフヒドリル基と速やかに反応して共有結合を形成する。したがって、重合反応の停止は、スルフヒドリル含有ＰＥＧ誘導体の場合のような動的平衡条件下ではなく、不可逆的条件下で起こり、これにより多分散度の高い「フリーズした」重合パターンとなり、動的平衡反応の規定の反応生成物は得られない。
【０２３３】
５．  ＲＮＡの複合化
上記実施例１において定義され、実施例２にしたがって調製されたｍＲＮＡコンストラクトを、本発明の目的のため（複数の）ポリマーと、好ましくは実施例４において定義されるポリマーと複合化した。したがって、配列番号８５に基づくルシフェラーゼｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）をコードした４μｇのＲＮＡを、本発明のポリマーキャリア（式Ｉに基づく）又はコントロールと、示されるモル比で混合することによって複合体を形成した。この後、得られた溶液を水で５０μｌの最終容量に調整し、室温で３０分間インキュベートした。
【０２３４】
この実験で使用した異なる本発明のポリマーキャリア、及び、ポリマーキャリア／ＲＮＡの異なる比を表１に示す。
【０２３５】
【表１】
2013515674.tif 000002
【０２３６】
比＝ＲＮＡ：ペプチドのモル比
カチオン性ＡＳ＝生理的ｐＨにおいて正に帯電するカチオン性アミノ酸（すなわちヒスチジン（Ｈ）ではなく、例えばアルギニン（Ｒ））。ＰＢ８３及びＰＢ８６が、ＰＢ１９と比較して２倍のサイズのカチオン性インサートを有しているため２倍多くのカチオン性アミノ酸残基を有しているのに対して、ＰＢ４８はＰＢ１９と比較して短いカチオン性インサートを有しているためにポリマー分子１個当たりのカチオン性アミノ酸残基はより少ない。
Ｎ／Ｐ＝核酸中のリン酸残基に対するポリマーキャリア中の塩基性窒素原子の比であり、窒素原子が正電荷を与え、核酸のリン酸骨格のリン酸が負電荷を与えることを考慮したものである。複合体の形成は生理的ｐＨで行われるためにイミダゾール残基は帯電しないのでヒスチジン残基は中性とみなす。
Ｎ／Ｐは下式によって計算される。
Ｎ／Ｐ＝（ｐｍｏｌ［ＲＮＡ］×比×カチオン性ＡＳ）／（μｇＲＮＡ×３×１，０００）
計算を行うため、分子量６６０ｋＤａの、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）をコードしたＲＮＡを使用した。したがって、１μｇの配列番号３６９に基づくｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０のＲＮＡは、１．６７ｐｍｏｌの配列番号３６９に基づくｐＣＶ１９−Ｐｐｌｕｃ（ＧＣ）−ｍｕａｇ−Ａ７０−Ｃ３０のＲＮＡに相当する。
【０２３７】
６．  サイズ及びゼータ電位測定
上記で調製したポリプレックスの流体力学的直径をマルバーン社（Ｍａｌｖｅｒｎ）によって供給される標準操作手順（ＳＯＰ）にしたがい、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ（マルバーン・インスツルメンツ社（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、マルバーン、英国）を使用して動的光散乱法によって測定した。測定は、累積法によって分析した特定の緩衝液中、２５℃で行ってポリプレックスの流体力学的直径及び多分散度指数を得た。
【０２３８】
ポリプレックスのゼータ電位を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ（マルバーン・インスツルメンツ社（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、マルバーン、英国）を使用してレーザードップラー電気泳動によて評価した。測定は２５℃で行い、１７３°の散乱角を用いた。
【０２３９】
７．  ゲルシフトアッセイ
更に、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）をコードしたｍＲＮＡと、ポリマーとを示したように配合し、一定分量をヘパリン（１００μｇ）又はジチオスレイトール（ＤＴＴ）と１５分間、３７℃でインキュベートした。この後、アガロースゲル上で電気泳動を行い、エチジウムブロマイド染色によって核酸を可視化した。
【０２４０】
８．  共焦点レーザー走査顕微鏡法
Ｐｌａｎ−Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔ６３ｘ／開口数１．４のレンズを使用し、倒立型ＬＳＭ５１０レーザー走査顕微鏡（カール・ツァイス社（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）、ドイツ）により共焦点レーザー走査顕微鏡法を行った。すべての分析は、８穴チャンバ型カバースライド（ヌンク社（Ｎｕｎｃ）、ドイツ）中で増殖させた生きた非固定細胞で行った。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７標識したｍＲＮＡを検出するため、ＵＶ／４８８／５４３／６３３ビームスプリッターにより導光した６３３ｎｍのヘリウムネオンレーザーの光のみをＬＰ６５０ロングパスフィルターと組み合わせて使用した。生細胞顕微鏡法を室温で行った。
【０２４１】
この目的では、Ｌ９２９細胞（２５×１０３個／ウェル）をトランスフェクションの１日前に２４穴マイクロタイタープレート上に播種し、トランスフェクションを行う時点で７０％コンフルエンスとした。顕微鏡実験を行う直前に２μｇのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７標識したｍＲＮＡを含む配合物を、８穴チャンバ型スライド中で細胞にトランスフェクトした。
【０２４２】
８．  ｈＰＢＭＣにおけるサイトカイン刺激
Ｆｉｃｏｌｌ勾配を用いて健康なドナーの末梢血からｈＰＢＭＣ細胞を単離してから１×ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で洗浄した。次いで細胞を９６穴マイクロタイタープレート上に播種した（２００×１０３個／ウェル）。ｈＰＢＭＣ細胞を、Ｘ−ＶＩＶＯ１５培地（バイオ・ウィッタカー社（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ））中で１０μｌのＲＮＡ／キャリア複合体と２４時間インキュベートした。ＲＮＡとして配列番号３６９を使用した。キャリアは、上記一般式（Ｉ）に示されるものを用いた。サイトカイン産生（インターロイキン６、腫瘍壊死因子α、インターフェロンα）を検出することによってｈＰＢＭＣ細胞に対する免疫賦活効果を測定した。したがって、ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｂ）を、特異的サイトカイン抗体を更に含む結合緩衝液（０．０２％ＮａＮ３、１５ｍＭ  Ｎａ２ＣＯ３、１５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９，７）と一晩（ｏ／ｎ）インキュベートした。この後、細胞を、１％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を含む１×ＰＢＳでブロッキングした。細胞上清を加え、３７℃で４時間インキュベートした。この後、マイクロタイタープレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１×ＰＢＳで洗浄してから、ビオチン標識した二次抗体（ビー・ディー・ファーミンゲン社（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ハイデルベルグ、ドイツ）とインキュベートした。ストレプトアビジン結合西洋ワサビペルオキシダーゼをプレートに加えた。次いでプレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１×ＰＢＳで再び洗浄し、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンズチアゾリン−６−スルホン酸）を基質として加えた。サイトカインの量を、テカン社（Ｔｅｃａｎ）（クライルスハイム、ドイツ）より販売されるＳｕｎｒｉｓｅ  ＥＬＩＳＡ−Ｒｅａｄｅｒにより、組換えサイトカイン（ビー・ディー・ファーミンゲン社（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ハイデルベルグ、ドイツ）による標準曲線を用いて４０５ｎｍの吸光度（ＯＤ４０５）を測定することによって決定した。
【０２４３】
９．  ＨｅＬａ細胞のトランスフェクション
配列番号８５に基づく４μｇのＲＮＡ安定化ルシフェラーゼｍＲＮＡ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）を各ポリマー（式Ｉに基づく）と、示したモル比で混合することにより、複合体を形成した。この後、得られた溶液を水で５０μｌの最終容量に調整し、室温で３０分間インキュベートした。用いた比は、上記表１に示される。
【０２４４】
ＨｅＬａ細胞（１５０×１０３／ウェル）をトランスフェクションの１日前に２４穴マイクロタイタープレート上に播種し、トランスフェクションを行う時点で７０％コンフルエンスとした。トランスフェクションを行うため、５０μｌのＲＮＡ／キャリア複合体溶液を、２５０μｌの無血清又はＦＣＳ含有培地と混合し（与えられた表に示されるように）、細胞に加えた（最終ＲＮＡ濃度：１３μｇ／ｍｌ）。無血清トランスフェクション溶液を加えるのに先立って、ＨｅＬａ細胞を各ウェル当たり１ｍＬのＯｐｔｉｍｅｎ（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））で２回、静かに丁寧に洗った。次いでトランスフェクション溶液（各ウェル当たり３００μｌ）を細胞に加え、細胞を３７℃で４時間インキュベートした。この後、１０％ＦＣＳを含む３００μｌのＲＰＭＩ培地（キャンプレクス社（Ｃａｍｐｒｅｘ））を各ウェルに加え、細胞を３７℃で更に２０時間インキュベートした。トランスフェクションの２４時間後にトランスフェクション溶液を吸引除去し、細胞を３００μｌの溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＰＯ４、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０％グリセロール、１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、２ｍＭ  ＤＴＴ）中で溶解した。次いで上清をルシフェリン緩衝液（２５ｍＭグリシルグリシン、１５ｍＭ  ＭｇＳＯ４、５ｍＭ  ＡＴＰ、６２．５μＭルシフェリン）と混合し、ルミノメーター（Ｌｕｍａｔ  ＬＢ９５０７（ベルトールド・テクノロジーズ社（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、バートヴィルトバート、ドイツ）を用いて発光を検出した。
【０２４５】
１０．  ルシフェラーゼのインビボ発現
配列番号３６９に基づくルシフェラーゼ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）をコードした１０μｇのｍＲＮＡを、各キャリア（式Ｉに基づく）と１：２５０（ＲＮＡ：ポリマーキャリア）のモル比で混合することにより、複合体を形成した。この後、得られた溶液を乳酸リンゲル液で１００μｌの最終容量に調整し、室温で３０分間インキュベートして、０．１ｇ／ｌの濃度の複合化ＲＮＡの溶液を得た。
【０２４６】
１００μｌ（２０μｌ）のこの溶液を７週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに皮内（耳介又は背中）又は筋内（脛骨筋）投与した。２４時間後にマウスを屠殺し、試料（耳介、背中からの皮膚、又は筋肉）を採取し、−７８℃で凍結し、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｌｙｓｅｒ（キアゲン社（Ｑｉａｇｅｎ）、ヒルデン、ドイツ）中で最高速度で３分間溶解した。この後、６００μｌの溶解緩衝液を加え、得られた溶液を最高速度でＴｉｓｓｕｅ  Ｌｙｓｅｒに更に６分間かけた。４℃、１３５００ｒｐｍで１０分間遠心した後、上清をルシフェリン緩衝液（２５ｍＭグリシルグリシン、１５ｍＭ  ＭｇＳＯ４、５ｍＭ  ＡＴＰ、６２．５μＭルシフェリン）と混合し、ルミノメーター（Ｌｕｍａｔ  ＬＢ９５０７（ベルトールド・テクノロジーズ社（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、バートヴィルトバート、ドイツ）を用いて発光を検出した。
【０２４７】
１１．  結果
１１．１  ＤＬＳ／ゼータサイザーの決定
本発明に基づくポリマーキャリアカーゴ複合体のサイズ及びζ電位を、動的光散乱法（ＤＬＳ）及びレーザードップラー電気泳動により３重に評価し、当該技術分野では周知の異なるポリマーキャリアカーゴ複合体と比較した。表２に、各ポリマーキャリアカーゴ複合体の累積直径及びζ電位をまとめて示す。
【０２４８】
【表２】
2013515674.tif 000003
【０２４９】
本発明に基づくポリマーと、配列番号３６９に基づくルシフェラーゼ（Ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）をコードしたｍＲＮＡとによって形成されたポリマーキャリアカーゴ複合体の累積直径は、小径の均一なフラグメントが形成されたことを示すものであった。これらの複合体は、塩を含む緩衝液中における凝集に対して安定であり、１００ｎｍ未満のサイズである。これに対して、ＲＰＣ法に基づくポリマーキャリアカーゴ複合体は、塩を含む緩衝液中で不安定であり、大きな凝集体を形成する。本発明に基づくポリマーキャリアカーゴ複合体はまた、ζ電位の低い複合体を形成する。低いζ電位では、血清の成分を結合する傾向は低くなり、オプソニン化の傾向は低くなる。
【０２５０】
１１．２  共焦点顕微鏡法
Ｌ９２９細胞に、本発明のポリマーＰＢ１９と複合化したＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７アミノアリル標識ＲＮＡをトランスフェクトした５分後には、既に細胞内に検出可能な複合体が見られた。この結果を図２及び３に示す。図２に見られるように、１：５００のモル比で本発明のポリマーＰＢ１９と複合化した蛍光標識ＲＮＡ（配列番号３６９）をトランスフェクトした５分後のＬ９２９細胞を共焦点顕微鏡法で観察したところ、トランスフェクションの５分後には既に細胞内に複数の複合体が検出可能であることが示された。１：５００のモル比で本発明のポリマーＰＢ１９と複合化した蛍光標識ＲＮＡをトランスフェクトした１時間後のＬ９２９細胞を共焦点顕微鏡法で観察したところ、トランスフェクション後に粒子の大部分が細胞内に取り込まれたことが明らかとなった（図３を参照）。
【０２５１】
１１．３  静電置換に対する安定性
本発明の複合体、特に式（Ｉ）で表されるポリマーは、その組成及びその表面電荷に関して特有であることから、ゲルシフトアッセイにおいて予想外の結果が観察された。通常は、ポリマーが核酸を凝縮することで、核酸が電場内で移動することが防止されるか否かが判定される。核酸よりもカチオン性ポリマーに対してより強い親和性を示す複合パートナーを添加した場合、核酸は複合体から置換され、再び電場内を移動することができるようになる。この目的のため、核酸と極めて強力な複合体を形成することが知られるＰＥＩを使用することができる。
【０２５２】
複合体の結合の強さを調べるためのゲルシフトアッセイにおいて（図４を参照）、アニオン性ポリマーであるヘパリンを添加したところ、ゲル中でヘパリンが依然移動したことから、ヘパリン添加によりＲＮＡは複合体から置換されないことが示された。このことは、複合体の結合が非常に強く、競合的複合パートナーが本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体からＲＮＡを置換できないことを示している。
【０２５３】
複合体の結合の強さを調べるための更なるゲルシフトアッセイにおいて（図５を参照）、アニオン性ポリマーであるヘパリン又は還元剤であるＤＴＴを単独で添加した場合、本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９）との複合体からＲＮＡは置換されないことが示された。これらは共に添加された場合のみ、複合体からＲＮＡを置換することができた（レーン７）。このことは、複合体の結合が非常に強く、競合的複合パートナー及び還元剤のいずれも本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体からＲＮＡを置換できないことを示している。
【０２５４】
ＰＥＩ複合体とは異なり、ＲＮＡは、ヘパリンを添加した際に本発明のポリマーキャリアカーゴ複合体から放出されない。ヘパリンとＤＴＴとの組み合わせのみがＲＮＡを放出させる。ＤＴＴはジスルフィド結合を還元することでコンジュゲートを破壊することに留意されたい。これは、細胞内の還元的条件によって複合体からＲＮＡが放出されるインビボ条件と似た状態である。
【０２５５】
これと比較して、複合体結合の強さを調べるためのＰＥＩ複合体を用いたゲルシフトアッセイでは、アニオン性ポリマーであるヘパリンを単独で添加した場合、本発明に基づいて使用されるポリマー（ＰＢ２２）との複合体からＲＮＡは置換されないことが示された。これに対して、ｍＲＮＡは、ＰＥＩ複合体からヘパリンによって容易に置換された（図６を参照）。
【０２５６】
１１．４  ＨｅＬａ細胞でのルシフェラーゼの発現
本明細書における式（Ｉ）で表されるポリマーと、配列番号３６９に基づくｍＲＮＡとの複合体（ルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、ＰＢ１９キャリアとの複合体（ＲＮＡ：ＰＢ１９のモル比＝１：１，０００、１：５００、１：１００））を用いてＨｅＬａ細胞におけるルシフェラーゼの発現を調べた。ルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）と、ＰＢ１９ポリマーとのこれらの配合物（ＲＮＡ：ＰＢ１９のモル比＝１：１，０００、１：５００、１：１００）により、血清含有培地の存在とは無関係にルシフェラーゼの発現が見られた。一般に血清含有培地は、トランスフェクション効率の低下につながることからこれらの結果は予想外であった。
【０２５７】
１１．５  ルシフェラーゼのインビボ発現
皮内注射後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現を調べた。図９ａに見られるように、ルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）（配列番号３６９）と、ＰＢ１９ポリマーとの配合物により、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの真皮においてルシフェラーゼの発現が見られた。当該技術分野において知られる他のトランスフェクション試薬（ＰＥＩ及びリポフェクタミン２０００）では、ルシフェラーゼタンパク質の発現は一切認められなかった。
【０２５８】
更に、筋内注射後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現を調べた。その結果（図９Ｂを参照）、ルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）（配列番号３６９）と、ＰＢ１９ポリマーとの配合物により、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの脛骨筋においてルシフェラーゼの発現が見られた。当該技術分野において知られる他のトランスフェクション試薬（ＰＥＩ及びリポフェクタミン２０００）では、ルシフェラーゼタンパク質の発現は一切認められなかった。
【０２５９】
更に、異なる配合物の皮内注射後のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるルシフェラーゼの発現を調べた。その結果（図１０を参照）、ルシフェラーゼをコードしたｍＲＮＡ（ｌｕｃ−ＲＮＡｃｔｉｖｅ）（配列番号３６９）と、本発明に基づく２種類の異なるポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ４８）との配合物により、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスの真皮においてルシフェラーゼの発現が見られた。モル比２５００：１のＲＰＣ  ＣＨ６Ｒ４Ｈ６Ｃ（ＰＥＧ化なし）で表されるペプチドとｍＲＮＡとによって形成されたポリマーキャリアカーゴ複合体は、複合化ｍＲＮＡの皮内注射後にルシフェラーゼの発現を示さなかった。
【０２６０】
１１．６  ｈＰＢＭＣにおけるサイトカイン刺激
サイトカイン刺激、特にｈＰＢＭＣにおけるｈＩＬ−６サイトカインの分泌を測定した。その結果（図１３を参照）、ＲＮＡ（配列番号３６９）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ２２）とからなる複合体は、ＲＮＡ（配列番号３６９）とカチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とからなる複合体、又は、カチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とＰＥＧ化カチオン性ペプチド（Ｅ９又はＲ９）（一般に、予め形成された核酸縮合物の親水性コーティングを後で付与する）との組み合わせとは異なり、ｈＰＢＭＣにおいてｈＩＬ−６の分泌を誘導しないことが示された。
Ｅ９−ＰＥＧ５ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥ
Ｅ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥ
Ｒ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＰＢ１９：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ２２：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
【０２６１】
更に、ｈＰＢＭＣにおけるｈＴＮＦαサイトカインの分泌を測定した。その結果（図１４を参照）は、ＲＮＡ（配列番号３６９）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９及びＰＢ２２）とからなる複合体は、ＲＮＡ（配列番号３６９）とカチオン性ペプチド（Ｈ３Ｒ９Ｈ３）とからなる複合体、又は、こうした複合体をＰＥＧ化ペプチド（Ｅ９又はＲ９）（一般に、予め形成された核酸縮合物の親水性コーティングを後で付与する）によってコーティングしたものと異なり、ｈＰＢＭＣにおいてｈＴＮＦαの分泌を誘導しないことを示している。
Ｅ９−ＰＥＧ５ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥ
Ｅ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＥＥＥＥＥＥＥＥＥ
Ｒ９−ＰＥＧ３ｋ：  ＨＯ−ＰＥＧ３０００−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＰＢ１９：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
ＰＢ２２：  ＨＯ−ＰＥＧ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ）５−Ｓ−ＰＥＧ５０００−ＯＨ
【０２６２】
更に、ＲＮＡ（配列番号３６９）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９）とからなる本発明に基づく複合体のサイトカイン刺激特性を、リポフェクタミン２０００又はＰＥＩなどの最新のトランスフェクション試薬と比較するうえで、ｈＰＢＭＣにおけるｈＩＦＮαサイトカインの分泌を調べた。その結果、リポフェクタミン２０００及びＰＥＩとの複合化ではいずれも大量のｈＩＦＮαが分泌されたのに対して、ＲＮＡ（配列番号３６９）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９  ５００）とからなる本発明に基づく複合体ではｈＩＦＮαは分泌されなかった。
【０２６３】
更に、ＲＮＡ（配列番号３６９）と本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９）とからなる本発明に基づく複合体のサイトカイン刺激特性を、リポフェクタミン２０００又はＰＥＩなどの最新のトランスフェクション試薬と比較するうえで、ｈＰＢＭＣにおけるｈＴＮＦαサイトカインの分泌を調べた。その結果（図１５を参照）、リポフェクタミン２０００との複合化では大量のｈＴＮＦαが分泌されたのに対して、ＰＥＩ又は本発明に基づくポリマー（ＰＢ１９  ５００）との複合化ではｈＴＮＦαは分泌されなかった。
【図１】
2013515674.tif 000004
【図４】
2013515674.tif 000005
【図５】
2013515674.tif 000006
【図６】
2013515674.tif 000007
【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2013515674.tif 000012
【図１２】
2013515674.tif 000013
【図１３】
2013515674.tif 000014
【図１４】
2013515674.tif 000015
【図１５】
2013515674.tif 000016
【図２】
2013515674.tif 000017
【図３】
2013515674.tif 000018
【図１６】
2013515674.tif 000019
【配列表】
2013515674000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年8月27日(2012.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【国際調査報告】
2013515674.tif 000020
2013515674.tif 000021
2013515674.tif 000022
2013515674.tif 000023