(57)【要約】タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤である化合物およびその組成物が開示される。該化合物は眼部の疾患、障害および病状の治療に有用である。該化合物は式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）を有し、ここで、Ｒ＝（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）または（ＸＩＩ）である。2013523846.tif 000032
2013523846.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2013523846.tif 000019
【化２】
2013523846.tif 000020
からなる群より選択される化合物、またはその水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、プロドラッグ、錯体、またはラセミ混合物もしくはスケールミック混合物、ジアステレオマーもしくはエナンチオマー。
【請求項２】
該化合物が
【化３】
2013523846.tif 000021
である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
該化合物が
【化４】
2013523846.tif 000022
である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
該化合物が
【化５】
2013523846.tif 000023
である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
該化合物が
【化６】
2013523846.tif 000024
である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
該化合物が
【化７】
2013523846.tif 000025
である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
該化合物が
【化８】
2013523846.tif 000026
である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
該化合物が
【化９】
2013523846.tif 000027
である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
該化合物が
【化１０】
2013523846.tif 000028
である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
該化合物が
【化１１】
2013523846.tif 000029
である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
該化合物が
【化１２】
2013523846.tif 000030
である請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
該化合物が
【化１３】
2013523846.tif 000031
である請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれかに記載の化合物および医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１４】
治療上の有効量の請求項１から１２のいずれかに記載の化合物またはその組成物を患者に投与することを特徴とする眼部の疾患、病状または障害の治療方法であって、眼部の該疾患、病状または障害が（ａ）脈絡叢の血管新生により引き起こされる疾患、障害または病状、（ｂ）糖尿病網膜症および（ｃ）網膜浮腫からなる群より選択される方法。
【請求項１５】
眼部の疾患、障害または病状が加齢性黄斑変性症である請求項１４に記載の方法.
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は米国仮出願番号第６１／３２４，８０３号（２０１０年４月１６日出願）の利益を主張する。上記出願の全体を引用により本明細書中に取り込む。
【０００２】
本発明はタンパク質チロシンキナーゼ活性の阻害剤に関連する。特に、本発明は、増殖因子受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害することで受容体シグナリングの阻害、例えば、ＶＥＧＦ受容体シグナリングおよびＨＧＦ受容体シグナリングの阻害を引き起こす化合物に関連する。より具体的には、本発明は、眼部の疾患、障害または病状を治療するための化合物、組成物および方法に関連する。
【背景技術】
【０００３】
チロシンキナーゼは増殖因子の受容体（例えば、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲおよびｅｒｂＢ２）、または非受容体（例えば、ｃ−ｓｒｃおよびｂｃｒ−ａｂｌ）キナーゼに分類することができる。受容体型チロシンキナーゼは最大約２０種類の異なるサブファミリーを形成する。非受容体型チロシンキナーゼは数多くのサブファミリーを形成する。これらのチロシンキナーゼは多様な生物学的活性を有する。受容体型チロシンキナーゼは細胞膜に跨る巨大な酵素であり、増殖因子と結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにタンパク質の特異的なチロシン残基をリン酸化するキナーゼとして機能することで細胞増殖に影響を及ぼす細胞内ドメインを有する。異常または不適切なプロテインキナーゼ活性は、このような異常なキナーゼ活性が関連する疾患状態の発症に寄与することがある。
【０００４】
例えば、チロシンキナーゼは、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）および糖尿病網膜症（ＤＲ）といった眼部の疾患、障害および病状の病態に寄与する。かかる疾患による失明は網膜における新血管新生の異常と関連している。新血管の形成はＶＥＧＦおよびＨＧＦといった増殖因子により制御され、それらは受容体型チロシンキナーゼを活性化し、網膜黄斑への血漿漏出を引き起こすシグナリング経路を開始させ、失明へと繋がる。故に、キナーゼは新血管新生が関わる眼疾患の治療における優れた標的である。
【０００５】
故に、眼部における新血管新生を制御するストラテジーおよび眼部疾患の治療ストラテジーの開発が必要とされる。
【０００６】
タンパク質チロシンキナーゼ活性の強力な阻害剤である低分子が本明細書で開示される。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は新規化合物およびその組成物を提供する。本発明はまた、かかる化合物またはその組成物による眼部の疾患、障害または病状の治療方法を提供する。本発明の化合物は、キナーゼ活性、例えば、タンパク質チロシンキナーゼ活性、例えば、増殖因子受容体のタンパク質チロシンキナーゼ活性、または受容体型チロシンキナーゼシグナリングの阻害剤である。
【０００８】
第１の態様において、本発明は、構造：
【化１】
2013523846.tif 000003
【化２】
2013523846.tif 000004
を有する化合物、またはその水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、プロドラッグ、および錯体、ならびにラセミ混合物およびスケールミック（scalemic）混合物、ジアステレオマーおよびエナンチオマーを提供する。
【０００９】
第２の態様において、本発明は、本発明の化合物および医薬的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む組成物を提供する。
【００１０】
第３の態様において、本発明は、治療上の有効量の本発明の化合物または治療上の有効量の本発明の組成物を患者に投与することを特徴とする、眼部の疾患、障害または病状の治療方法を提供する。この態様のいくつかの実施態様において、該疾患は脈絡叢の血管新生により引き起こされるものである。この態様のいくつかの実施態様において、該疾患は加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症または網膜浮腫である。この態様のいくつかの実施態様において、該患者は哺乳類、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。
【００１１】
第４の態様において、本発明は、眼部の疾患、障害または病状の治療のための、またはそれらの治療剤の製造における本発明の化合物の使用を提供する。この態様のいくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は脈絡叢の血管新生により引き起こされるものである。この態様のいくつかの実施態様において、該疾患は加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症または網膜浮腫である。
【００１２】
第５の態様において、本発明は、眼部の疾患、障害または病状の治療のための本発明の化合物または本発明のその使用を提供する。この態様のいくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は脈絡叢の血管新生により引き起こされるものである。この態様のいくつかの実施態様において、該疾患は加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症または網膜浮腫である。
【００１３】
前記は単に本発明のいくつかの態様を総括するものであり、それに本発明を限定すると意図されるものではない。これらおよび他の態様ならびに実施態様はより詳細に以下に記載される。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明は新規化合物およびその組成物を提供する。本発明はまた、かかる化合物またはその組成物による眼部の疾患、障害または病状の治療方法を提供する。本明細書中で引用される特許文献および科学文献は当業者に利用可能な知識を反映するものである。本明細書中で引用される登録された特許、刊行された特許出願および文献は、引用により組み込まれるものとして各個々の文書が具体的及び個別に示されているように、同じ範囲の引用により本明細書に組み込まれる。相違がある場合、本開示が優先される。
【００１５】
用語「キナーゼ阻害剤」および「キナーゼ活性の阻害剤」などは、キナーゼと相互作用し、その酵素活性を阻害することができる化合物の同定に用いられる。
【００１６】
用語「キナーゼ酵素活性の阻害」などは、例えばＡＴＰなどのドナー分子のリン酸基を特異的な標的分子（基質）に転移させるキナーゼの能力を低減させることを意味するために用いられる。例えば、キナーゼ活性の阻害は少なくとも約１０％でもよい。本発明のいくつかの実施態様において、キナーゼ活性のこのような低減は少なくとも約２５％、あるいは少なくとも約５０％、あるいは少なくとも約７５％、あるいは少なくとも約９０％である。別の実施態様において、キナーゼ活性は少なくとも９５％、あるいは少なくとも９９％低減される。ＩＣ５０値は阻害されていない酵素の５０％にキナーゼ活性を低減するキナーゼ阻害剤の濃度である。
【００１７】
用語「ＶＥＧＦ受容体シグナリングの阻害」は、ＶＥＧＦ受容体と相互作用し、ＶＥＧＦ受容体の活性を阻害することができる本明細書中で定義される構造を有する化合物の同定に用いられる。いくつかの実施態様において、キナーゼ活性のこのような低減は少なくとも約５０％、あるいは少なくとも約７５％、あるいは少なくとも約９０％である。別の実施態様において、キナーゼ活性は少なくとも９５％、あるいは少なくとも９９％低減される。
【００１８】
用語「阻害上の有効量」は、キナーゼ活性の阻害を引き起こすに十分な用量の表示を意味する。「阻害上の有効量」を構成する本発明の化合物の量は、化合物、キナーゼなどに依存して異なる。阻害上の有効量は当業者により容易に決定することができる。キナーゼは細胞内のものであってもよく、多細胞生命体のものであってもよい。多細胞生命体は、例えば、動物、例えば哺乳類、例えばヒトであってもよい。
【００１９】
例示的な実施態様において、かかる阻害は特異的である、即ち、キナーゼ阻害剤は、別の無関連な生物学的効果の誘導に必要な阻害剤濃度よりも低い濃度において、ＡＴＰなどのドナー分子のリン酸基を特異的な標的分子（基質）に転移させる能力を低減する。例えば、キナーゼ阻害活性に必要な阻害剤濃度は、無関連な生物学的効果の誘導に必要な阻害剤濃度よりも少なくとも２倍、あるいは少なくとも５倍、あるいは少なくとも１０倍、あるいは少なくとも２０倍低いものである。
【００２０】
故に、本発明は、阻害上の有効量の本発明の化合物または組成物でキナーゼに接触することを特徴とする、キナーゼの酵素活性の阻害方法を提供する。いくつかの実施態様において、キナーゼは生命体におけるものである。故に、本発明は、阻害上の有効量の本発明の化合物または組成物を生命体に投与することを特徴とする、生命体におけるキナーゼ酵素活性の阻害方法を提供する。いくつかの実施態様において、生命体は哺乳類、例えば、家畜である。いくつかの実施態様において、生命体はヒトである。
【００２１】
用語「治療上の有効量」は、本明細書中で用いられるように、患者に投与された場合に目的の治療効果を発揮する本発明の化合物の量を意味する。治療効果は治療対象の疾患および目的とする結果に依存する。従って、治療効果は疾患状態の治療でもよい。さらに、治療効果はキナーゼ活性の阻害であってもよい。「治療上の有効量」を構成する本発明の化合物の量は、化合物、疾患状態およびその重篤度、治療対象の患者の年齢などに依存して異なるであろう。治療上の有効量は当業者が容易に決定することができる。
【００２２】
いくつかの実施態様において、治療効果は眼部の疾患、障害または病状の治療である。成句「眼部の疾患、障害または病状の治療」は、（ａ）脈絡叢の血管新生により引き起こされる疾患、障害または病状、例えば、限定されないが、加齢性黄斑変性症、または（ｂ）糖尿病網膜症または網膜浮腫の本発明の化合物の治療能を意味すると意図される。いくつかの実施態様において、成句「眼部の疾患、障害または病状の治療」は、滲出性および／または炎症性の眼部の疾患、障害または病状、網膜の血管の透過性および／または整合性に関連する障害、局所出血を引き起こす網膜微小血管の破裂に関連する障害、眼後部の疾患、網膜疾患、または前眼部の疾患、または別の眼部の疾患、障害または病状の本発明の化合物の治療能を意味すると意図される。
【００２３】
いくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は、例えば、限定されないが、加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）、滲出性黄斑変性（「ウェット（wet）」または新血管性加齢性黄斑変性症（ｗｅｔ−ＡＭＤ）としても知られる）、黄斑浮腫、老人性円板状黄斑変性症、嚢胞様黄斑浮腫、眼瞼浮腫、網膜浮腫、糖尿病網膜症、急性黄斑神経網膜症、中心性漿液性網膜脈絡膜症、網脈絡膜炎、脈絡叢新血管新生、血管新生黄斑症、新生血管緑内障、動脈閉塞性もしくは静脈閉塞性網膜症（例えば、網膜静脈閉塞症または網膜動脈閉塞症）、網膜中心静脈閉塞症、播種性血管内凝固症候群、網膜分枝静脈閉塞症、高血圧性眼底変化、眼性虚血発作、網膜動脈小動脈瘤、コーツ病、傍中心窩毛細血管拡張症、半側網膜静脈閉塞症、乳頭血管炎、網膜中心動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、頚動脈疾患（ＣＡＤ）、霜状分枝血管炎（Frosted Branch Angitis）、鎌状赤血球網膜症および他のヘモグロビン異常症、網膜色素線条症、疾患を病因とする黄斑浮腫（例えば、糖尿病黄斑浮腫）、眼部の損傷もしくは眼部の外科手術、網膜の虚血もしくは、例えば、損傷によりおき起こされる網膜変性、外傷もしくは腫瘍、ぶどう膜炎、虹彩炎、網膜血管炎、眼内炎、全眼球炎、転移性眼炎、脈絡膜炎、網膜色素上皮炎、結膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、角膜炎、眼瞼炎、滲出性網膜剥離、角膜潰瘍、結膜潰瘍、慢性貨幣状角膜炎、タイゲソン角膜炎、進行性モーレン潰瘍、バクテリアもしくはウィルス感染、または眼部の外科手術により引き起こされる眼部の炎症性疾患、眼部の物理的な損傷により引き起こされる眼部の炎症性疾患、ならびに、掻痒、発赤、浮腫および潰瘍といった眼部の炎症性疾患により引き起こされる症状、紅斑症、多形滲出性紅斑、結節性紅斑、環状紅斑、浮腫性硬化症、皮膚炎、血管神経性浮腫、咽頭水腫、声門水腫、声門下喉頭炎、気管支炎、鼻炎、咽頭炎、副鼻腔炎、喉頭炎または中耳炎である。
【００２４】
いくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は、（ａ）脈絡叢における血管新生により引き起こされる疾患、例えば、限定されないが、加齢性黄斑変性症、または（ｂ）糖尿病網膜症もしくは網膜浮腫である。
【００２５】
いくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は、例えば、限定されないが、加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜浮腫、網膜静脈閉塞症、新生血管緑内障、早産児の網膜症、網膜色素変性、ぶどう膜炎、角膜血管新生または増殖性硝子体網膜症である。
【００２６】
いくつかの実施態様において、眼部の疾患、障害または病状は、加齢性黄斑変性症、糖尿病網膜症または網膜浮腫である。
【００２７】
故に、本発明は、治療上の有効量の本発明の化合物または組成物を動物に投与することを特徴とする、動物における眼部の疾患、障害または病状の治療方法を提供する。いくつかの実施態様において、動物は哺乳類、例えば家畜である。いくつかの実施態様において、動物はヒトである。
【００２８】
いくつかの実施態様において、治療効果は網膜における新血管新生の阻害である。成句「網膜における血管新生の阻害」は、眼部における血管、例えば、網膜の静脈から派生する新たな血管の増殖を遅延させる、例えば、網膜の静脈から派生し網膜の内側（硝子体）の表面に沿って伸張する新たな血管の増殖を遅延させる本発明の化合物の能力を意味すると意図される。
【００２９】
例示的な実施態様において、網膜新血管新生は、非接触血管における網膜新血管新生と比べ、少なくとも２５％、あるいは少なくとも５０％、あるいは少なくとも７５％、あるいは少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％、あるいは少なくとも９９％遅延される。あるいは、網膜血管新生は１００％阻害される（即ち、血管は大きさまたは数において増加しない）。いくつかの実施態様において、成句「網膜新血管新生の阻害」は、非接触血管と比べての血管の大きさまたは数における減縮を包含する。故に、網膜新血管新生を阻害する本発明の化合物は、血管増殖の遅延、血管増殖の停止、または血管増殖の退縮を引き起こし得る。
【００３０】
故に、本発明は、治療上の有効量の本発明の化合物または組成物を動物に投与することを特徴とする、動物における網膜新血管新生の阻害方法を提供する。いくつかの実施態様において、動物は哺乳類、例えば、家畜である。いくつかの実施態様において、動物はヒトである。
【００３１】
用語「患者」は、本明細書中で用いられるように、ヒト、ならびに別の動物、例えば、哺乳類および他の生命体を包含する。故に、本発明の化合物、組成物および方法は、ヒトの治療および脊椎動物の処置に適用可能である。いくつかの実施態様において、患者は哺乳類、例えば、ヒトである。
【００３２】
用語「治療の」、「治療」などは、本明細書中で用いられるように、生命体における疾患状態の治療を包含し、（ｉ）特に疾患状態に罹患しやすいが罹患していると診断されていない動物における疾患状態の発症の予防；（ｉｉ）疾患状態の阻害、即ち、その進行を部分的または完全に停止させること；（ｉｉｉ）疾患状態の軽減、即ち、疾患状態の症状の退縮を引き起こすこと、または疾患の症状を緩和すること；および（ｉｖ）疾患状態の回復または退縮、例えば、疾患の消失または治癒の少なくとも１つを含む。本発明のいくつかの実施態様において、生命体は動物、例えば、哺乳類、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。技術分野で周知であるように、全身性および局所的送達、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬物間相互作用、病状の重篤度に応じた調整が必要であり、当業者により容易に決定することができるであろう。いくつかの実施態様において、用語「治療の」、「治療」などは、本明細書中で用いられるように、生命体における疾患状態の治療を包含し、上記（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）の少なくとも１つを含む。
【００３３】
投与経路の例は、例えば、限定されないが、全身性、眼部周囲、毛細胆管内、硝子体内注射、局所（例えば、点眼剤）、結膜下注射、テノン下、経強膜、前房内、網膜下、エレクトロポレーション、徐放性インプラントによるものである。眼部に適用する場合の他の投与経路、注射部位、または投与形態は当業者に周知のものであるか考慮されるものであり、本発明の範囲に包含されると意図される。
【００３４】
本発明のいくつかの実施態様において、投与経路は、局所、結膜下注射、硝子体内注射、もしくは他の眼用経路、全身性、または眼部の手術後の患者における当業者に周知の方法を含む。
【００３５】
本発明のいくつかの実施態様において、投与経路は、局所、硝子体内、経強膜、眼部周囲、結膜、テノン下、前房内、網膜下、結膜下、眼球後、または毛細胆管内経路を含む。
【００３６】
本発明のいくつかの実施態様において、投与経路は、局所投与（例えば、点眼剤）、全身投与（例えば、経口または静脈内）、結膜下注射、眼周囲注射、硝子体内注射、および局所投与用の外科インプラントを含む。
【００３７】
本発明のいくつかの実施態様において、投与経路は、硝子体内注射、眼周囲注射、および局所投与用の徐放性インプラントを含む。
【００３８】
本発明のいくつかの実施態様において、眼球内注射は、硝子体内部（硝子体内）、結膜の下（結膜下）、眼球の後ろ側（眼球後）、強膜内、テノン嚢下（テノン下）へのもの、または徐放性製剤の形態であってもよい。
【００３９】
本発明のいくつかの実施態様において、投与は局所的、例えば、限定されないが、局所、硝子体内、眼窩周囲、眼球内、および眼部への他の局所投与経路、眼部および／または眼周囲の組織および空隙におけるものであり、限定されないが、送達装置を用いたものである。
【００４０】
塩を形成する本発明の化合物もまた、本明細書中の範囲に包含される。
【００４１】
用語「塩（複数可）」は、本明細書中で用いられるように、無機および／または有機酸および塩基と共に形成される酸性および／または塩基性塩を表す。医薬的に許容される（即ち、無毒（有毒な副作用を最小限にしか、または全く示さない）で、生理的に許容される）塩が好ましいが、他の塩もまた、例えば、製造中に用いられる単離または精製の工程に有用である。本発明の化合物の塩は、例えば、本発明の化合物をある量、例えば、当量の酸または塩基と、塩が析出するような溶媒中において反応させることにより、あるいは水性の溶媒中において反応させ、凍結乾燥することにより、調製することができる。
【００４２】
塩基性部分、例えば、限定されないが、アミンまたはピリジンまたはイミダゾール環を有する本発明の化合物は、様々な有機および無機酸と塩を形成することができる。酸付加塩の例は、例えば、酢酸塩（酢酸またはトリハロ酢酸、例えば、トリフルオロ酢酸と形成されるもの）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、ブタン酸塩、クエン酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩（例えば、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば、２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩（例えば、３−フェニルプロピオン酸塩）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩（硫酸と形成されるものなど）、スルホン酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩などのトルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩などである。
【００４３】
本明細書中で用いられるように、用語「医薬的に許容される塩」は、上記の化合物の所望の生物学的活性を維持し、有毒な副作用を最小限にしか、または全く示さない塩を意味すると意図される。かかる塩の例は、例えば、限定されないが、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）と形成される塩、および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルモ酸（palmoic acid）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびポリガラクツロン酸）と形成される塩である。別の塩は、例えば、当業者に周知の医薬的に許容される４級塩、特に、式−−ＮＲ＋Ｚ−−（Ｒは水素、アルキル、またはベンジルであり、Ｚはカウンターイオン、例えば、クロリド、ブロミド、ヨージド、−−Ｏ−アルキル、トルエンスルホネート、メチルスルホネート、スルホネート、ホスフェート、またはカルボキシレート（例えば、ベンゾエート、スクシネート、アセテート、グリコレート、マレエート、マレート、シトレート、タルタレート、アスコルベート、ベンゾエート、シンナモエート、マンデロエート、ベンジロエート、およびジフェニルアセテート）である）を有する４級アンモニウム塩である。
【００４４】
本発明のいくつかの実施態様において、本発明の化合物の塩はキラルもしくはラセミの酸またはそのジアステレオマーと形成されてもよい。かかる酸の不斉中心はＳまたはＲの立体配置を有し得る。ラセミ体は物理的方法、例えば、分別結晶化、ジアステレオマー誘導体の分離もしくは結晶化、またはキラルカラムクロマトグラフィーによる分離により分割することができる。個々の光学異性体はキラルな前駆体／中間体を出発物質とすることにより、あるいはラセミ体を出発物質とし、任意の適切な方法、例えば、限定されないが、光学活性な酸から塩を調製後、結晶化することにより得ることができる。本発明はまた、本発明で開示される化合物の全ての互変異性体を包含すると意図される。
【００４５】
本発明の別の態様の１つにおいて、本発明の化合物を含む組成物が提供される。例えば、本発明のいくつかの実施態様において、組成物は本発明の化合物またはそのＮ−オキシド、水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、錯体またはプロドラッグを少なくとも約３０％のエナンチオマーまたはジアステレオマーの過剰率で含む。本発明のいくつかの実施態様において、化合物、Ｎ−オキシド、水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、錯体またはプロドラッグは、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％のエナンチオマーまたはジアステレオマーの過剰率において存在する。本発明のいくつかの実施態様において、化合物、Ｎ−オキシド、水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、錯体またはプロドラッグは、少なくとも約９５％、あるいは少なくとも約９８％、あるいは少なくとも約９９％のエナンチオマーまたはジアステレオマーの過剰率において存在する。本発明の別の実施態様において、化合物、Ｎ−オキシド、水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、錯体またはプロドラッグはほぼラセミ混合物に近い状態で存在する。
【００４６】
本発明はまた、本発明の化合物のプロドラッグを包含する。用語「プロドラッグ」は、担体に共有結合した化合物を表すと意図され、プロドラッグは哺乳類の対象に投与されると活性成分を放出することができる。活性成分の放出はインビボで起こる。プロドラッグは当業者に周知の技法により製造することができる。これらの技法は、一般的に、化合物の適当な官能基を修飾するものである。しかしながら、これらの修飾された官能基はルーチンの操作またはインビボにおいて元の官能基に復元される。本発明の化合物のプロドラッグは、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル基または同様の基が修飾された化合物を包含する。プロドラッグの例は、限定されないが、エステル（例えば、アセテート、ホルメート、およびベンゾエート誘導体）、本発明の化合物に存在するヒドロキシまたはアミノ官能基のカルバメート（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニル）、アミド（例えば、トリフルオロアセチルアミノ、アセチルアミノなど）などである。
【００４７】
本発明の化合物は、例えば、そのまま、あるいはプロドラッグとして、例えば、インビボで加水分解可能なエステルまたはインビボで加水分解可能なアミドとして投与されてもよい。カルボキシまたはヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボで加水分解可能なエステルの例は、例えば、ヒトまたは動物の体内で加水分解されて元の酸またはアルコールとなる医薬的に許容されるエステルである。カルボキシの適切な医薬的に許容されるエステルは、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルコキシメチルエステル（例えば、メトキシメチル）、Ｃ１−Ｃ６アルカノイルオキシメチルエステル（例えば、ピバロイルオキシメチル）、フタリジルエステル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルコキシカルボニルオキシ−Ｃ１−Ｃ６アルキルエステル（例えば、１−シクロヘキシルカルボニルオキシエチル）；１，３−ジオキソレン−２−オニルメチルエステル（例えば、５−メチル−１，３−ジオキソレン−２−オニルメチル；およびＣ１−Ｃ６アルコキシカルボニルオキシエチルエステル（例えば、１−メトキシカルボニルオキシエチル）であり、本発明の化合物の任意の適当なカルボキシ基において形成されてもよい。
【００４８】
ヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボで加水分解可能なエステルは、例えば、リン酸エステルなどの無機エステルおよびα−アシルオキシアルキルエーテル、ならびにインビボにおける加水分解の結果、元のヒドロキシ基となる関連化合物である。α−アシルオキシアルキルエーテルの例は、アセトキシメトキシおよび２，２−ジメチルプロピオニルオキシ−メトキシである。ヒドロキシ基のインビボで加水分解可能なエステル形成基の例は、アルカノイル、ベンゾイル、フェニルアセチルならびに置換ベンゾイルおよびフェニルアセチル、アルコキシカルボニル（アルキルカルボネートエステルを生成する）、ジアルキルカルバモイルおよびＮ−（Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノエチル）−Ｎ−アルキルカルバモイル（カルバメートを生成する）、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノアセチルおよびカルボキシアセチルである。ベンゾイルの置換基の例は、環窒素原子からメチレン基を介してベンゾイル環の３または４位に結合したモルホリノおよびピペラジノである。カルボキシ基を含む本発明の化合物のインビボで加水分解可能なアミドの適切な例は、例えば、Ｎ−Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＮ，Ｎ−ジ−Ｃ１−Ｃ６アルキルアミド（Ｎ−メチル、Ｎ−エチル、Ｎ−プロピル、Ｎ，Ｎ−ジメチル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルまたはＮ，Ｎ−ジエチルアミドなど）である。
【００４９】
対象への投与時に、プロドラッグは代謝的または化学的なプロセスにより化学変換を受け、本発明の化合物となる。
【００５０】
本発明はまた、本発明の化合物の溶媒和物および水和物を包含する。用語「溶媒和物」は、化合物と１つまたはそれ以上の溶媒分子の化学量論量または非化学量論量における分子複合体を意味する。化合物または化合物の一部分と溶媒の分子複合体は分子内で働く非共有性の力、例えば、静電力、ファンデルワールス力、または水素結合で安定化され得る。有機化学分野の当業者には、かかる複合体を獲得、製造または合成できるか、または沈殿もしくは結晶化できる溶媒と多くの有機化合物が複合体を形成し得ることが明らかであろう。用語「水和物」は、１つまたはそれ以上の溶媒分子が水である複合体を意味し、一水和物、ヘミ水和物、二水和物、六水和物などを包含する。単語「溶媒和物」および「水和物」の意味は当業者に周知のものである。溶媒和物の製造技法は当該分野で確立されている（例えば、Brittain, Polymorphism in Pharmaceutical solids. Marcel Dekker, New York, 1999；Hilfiker, Polymorphism in the Pharmaceutical Industry, Wiley, Weinheim, Germany, 2006を参照）。
【００５１】
この態様のいくつかの実施態様において、溶媒は無機溶媒（例えば、水）である。この態様のいくつかの実施態様において、溶媒は有機溶媒（例えば、限定されないが、アルコール、例えば、限定されないが、メタノール、エタノール、イソプロパノールなど、酢酸、ケトン、エステルなど）である。いくつかの実施態様において、溶媒は製剤学分野で一般的なものであり、かかる溶媒が投与されるレシピエントに無害であることが知られており（例えば、水、エタノールなど）、好ましい実施態様において、溶質の生物学的活性に干渉しない。
【００５２】
化合物
本発明は、構造：
【化３】
2013523846.tif 000005
【化４】
2013523846.tif 000006
を有する化合物、ならびにその水和物、溶媒和物、医薬的に許容される塩、プロドラッグ、および錯体、およびラセミ混合物およびスケールミック混合物、ジアステレオマーおよびエナンチオマーに関連する。
【００５３】
本発明の化合物は一般的に以下のスキームに従い製造することができる。上記の式の化合物の互変異性体および溶媒和物（例えば、水和物）もまた、本発明の範囲に包含される。水和の方法は技術分野で周知である。かくして、本発明の化合物は遊離、水和物および塩の形態でもよく、以下のスキームで例示される方法により製造することができる。
【００５４】
本発明の製造工程および使用工程を記載する以下の例および製造例は説明を目的とするものであり、限定を目的とするものではない。本明細書中に付属する請求項により定義される本発明の精神および範囲に包含される別の実施態様が存在し得ることは明らかであろう。
【００５５】
本発明の化合物は、限定されないが、以下の実施例に記載されるものを含む。化合物はCambridgesoft（www.Cambridgesoft.com, 100 Cambridge Park Drive, Cambridge, MA 02140）から販売されるChemdraw Ultra（バージョン10.0、10.0.4またはバージョン8.0.3）を用いて命名した。
【００５６】
本明細書中で提供されるデータは本発明のキナーゼ阻害剤の阻害効果を示す。これらのデータにより、本発明の化合物がキナーゼ活性の阻害、タンパク質キナーゼ活性の阻害、またはＶＥＧＦ受容体シグナリングといったその実施態様に有用であることだけでなく、眼部の疾患、障害および病状の治療剤としても有用であることが理解されるであろう。
【００５７】
合成スキームおよび実験方法
本発明の化合物は当業者に周知の方法を用い、以下に記載される反応スキームまたは実施例に従い製造することができる。これらのスキームは本発明の化合物の製造に用いられ得るいくつかの製造方法を例示するものである。別の一般的な合成方法を用いることができることは当業者に自明であろう。本発明の化合物は市販の出発物質から製造することができる。本発明の化合物を得るために当業者に周知の方法による出発物質に対するあらゆる種類の置換を行うことが可能である。
【００５８】
全ての試薬および溶媒は市販のものであり、受領した状態のまま用いた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは示される溶媒中においてＭｅｒｃｕｒｙ Ｐｌｕｓ Ｖａｒｉａｎ ４００ＭＨｚ装置で記録した。低分解能質量分析（ＬＲＭＳ）はＡｇｉｌｅｎｔ ＭＳＤ装置で行った。分析ＨＰＬＣはＡｇｉｌｅｎｔ １１００装置でＺｏｒｂａｘ ３μｍ，ＸＤＢ−Ｃ８，２．１ｘ５０ｍｍカラム；０．１％ギ酸含有メタノール／水、５−９５％メタノール、１５分間のグラジエントを用いて行った。自動化カラムクロマトグラフィーはＢｉｏｔａｇｅ ＳＰ１またはＢｉｏｔａｇｅ ＳＰ４装置でＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰ、ＳｉｌｉａＳｅｐ（登録商標）またはＳｉｌｉａＦｌａｓｈ（登録商標）カートリッジを用いて行った。フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲル（ＳｉｌｉａＦｌａｓｈ Ｆ６０，４０−６３μＭ，孔径６０オングストローム，ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ（登録商標））を用いて行った。プレパラティブカラムクロマトグラフィーはＧｉｌｓｏｎ ２１５装置でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １５μｍ，Ｃ１８（２） １００Ａ，２５０ｘ２１ｍｍを用い、０．０５％ギ酸含有メタノール/水混合物、０−９５％メタノールのグラジエント、最大６０分間で溶出して行った。
【００５９】
特定の例
スキーム１
【化５】
2013523846.tif 000007
実施例１
Ｎ−［３−（（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）］−Ｎ−（１−エチル）−Ｎ−［３−（２−メトキシエチル）］尿素（２）
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（（２−メトキシエチルアミノ）メチル）−ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素(１、１００ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）およびエチルイソシアネート（２５μＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を室温で終夜撹拌（しばらく超音波処理して）した。反応混合物を濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅ(ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ、次いで１０／９０で５ＣＶ）で精製した。目的のフラクションを回収し、濃縮した。残渣をＡｃＯＥｔ（微量のＭｅＯＨを含む）／ヘキサンで共沈し、濾取し、ヘキサンで洗浄し、風乾し、高真空下で乾燥し、表題化合物２（６３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、収率５６％）を白色の綿毛状の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm)：8.73 (s, 1H), 8.52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.78−7.69 (m, 2H), 7.38 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.24−7.17 (m, 1H), 6.64 (bd, J = 5.4 Hz, 1H), 6.62−6.56 (m, 1H), 6.44 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.53 (s, 2H), 3.44−3.34 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 3.12−3.03 (m, 2H), 2.59−2.52 (m, 1H), 1.02 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.72−0.58 (m, 2H), 0.50−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：579.46 (M+H).
【００６０】
スキーム２
【化６】
2013523846.tif 000008
実施例２
Ｎ−（（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）−Ｎ−（２−メトキシエチル）ホルムアミド（６）
無水酢酸（１５０μＬ、１．１７ｍｍｏｌ）のギ酸（２ｍＬ）溶液を室温で２０分間隠し、１（１５０ｍｇ、０．２９６ｍｍｏｌ）を一度に加えた。２時間後、２００μＬの無水酢酸（１．５７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ＭｅＯＨを加えてクエンチし、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ、次いで１０／９０で５ＣＶ）で精製し、表題化合物６（９６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、収率７６％）を灰白色の綿毛状の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：mixture of rotamers, 8.75 (s, 1H), 8.60−8.50 (m, 2H), 8.37 and 8.34 (2s, 1H), 8.32−8.23 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.90−7.77 (m, 1H), 7.73 (dd, J = 13.5, 2.5 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.20 (bd, J = 10.2 Hz, 1H), 6.67−6.58 (m, 2H), 4.60 and 4.56 (2s, 2H), 3.46−3.36 (m, 4H), 3.21 and 3.19 (2s, 3H), 2.59−2.51 (m, 1H), 0.70−0.60 (m, 2H), 0.47−0.38 (m, 2H). MS (m/z)：536.4 (M+H).
【００６１】
スキーム３
【化７】
2013523846.tif 000009
実施例３
Ｎ−（（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２，３−ジフルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−ピリジン−３−イル）メチル）−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド（２６）
工程１．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（４−アミノ−２，３−ジフルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−メトキシエチル）カルバメート（２３）
４−アミノ−２，３−ジフルオロフェノール（１．４７１ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１１．５ｍＬ）撹拌溶液（室温、窒素下）にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．３４５ｇ、１１．９８ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−メトキシエチル）カルバメート（２２， ４．０ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で２．５時間加熱し、室温に冷却した。反応混合物を水（９０ｍＬ）に注ぎ、３０分間撹拌した。飽和塩化ナトリウム水溶液を加え、混合物を室温で３日間撹拌した。固形物を濾取し、水で洗浄し、風乾し、高真空下で乾燥した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ（４０＋Ｍカートリッジ； ＡｃＯＥｔ／ヘキサン：５０／５０で３ＣＶ、５０／５０から１００％ＡｃＯＥｔ、６ＣＶ、次いで１００％ＡｃＯＥｔで８ＣＶ）で精製し、得られた物質をジエチルエーテルでトリチュレートし、表題化合物２３（１．９４ｇ、３．５８ｍｍｏｌ、収率３８％）を灰白色の固形物として得た。
MS (m/z)：543.3 (M+H).
【００６２】
工程２．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２，３−ジフルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］−ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−メトキシエチル）カルバメート（２４）
アニリン２３（５００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．８ｍＬ、４．６１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）撹拌溶液（−２５℃、窒素下）にトリホスゲン（２７３ｍｇ、０．９２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）を滴下して加えた。反応混合物を−２５℃で撹拌し、シクロプロピルアミン（０．３２ｍＬ、４．６１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応混合物を１．５時間かけて室温に昇温し、室温で終夜撹拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔおよび水で分液処理した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、１Ｎ  ＮａＯＨおよびブラインで分液処理し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、表題化合物２４を灰白色の固形物として得た。粗物質をさらに精製することなく次工程に用いた。
MS (m/z)：626.6 (M+H).
【００６３】
工程３．１−シクロプロピル−３−（２，３−ジフルオロ−４−（２−（５−（（２−メトキシエチルアミノ）メチル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２５）
中間体２４（０．９２ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（１０ｍＬ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液を室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、最少量のＭｅＯＨで希釈し、水を加えた。４Ｎ  ＮａＯＨでｐＨを約１２に調整した。微細な懸濁液を１５分間超音波処理し、濾取し、水で洗浄し、高真空下で乾燥し、表題化合物２５（５７８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、収率９８％、ＴＦＡ塩）を淡アイボリー色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：8.78−8.61 (m, 1H), 8.57 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.02 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 7.28 (td, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.16−7.01 (m, 1H), 6.75 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.24 (s, 3H), 2.65 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.61−2.53 (m, 1H), 2.30−2.21 (m, 1H), 0.72−0.58 (m, 2H), 0.49−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：526.6 (M+H).
【００６４】
工程４．Ｎ−（（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２，３−ジフルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−ピリジン−３−イル）メチル）−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド（２６）
化合物２５（１００ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、ＴＦＡ塩）の無水酢酸（１ｍＬ）溶液を室温で２日間撹拌した。メタノールおよび水を加えて反応混合物をクエンチした。微細な懸濁液を濾取し、水、１Ｎ  ＮａＯＨ、水で順に洗浄し、風乾した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ(ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ、次いで１０／９０で５ＣＶ）で精製し、表題化合物２６（３４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、収率３８％）を白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：mixture of rotamers, 8.57−8.44 (m, 3H), 8.38 and 8.34 (2s, 1H), 8.30 and 8.24 (2d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.04 (bt, J = 8.3 Hz, 1H), 7.82−7.75 (m, 1H), 7.32−7.25 (m, 1H), 6.87 (bd, J = 2.7 Hz, 1H), 6.79−6.74 (m, 1H), 4.71 and 4.59 (2s, 2H), 3.54−3.40 (m, 4H), 3.24 and 3.21 (2s, 3H), 2.61−2.53 (m, 1H), 2.13 and 2.05 (2s, 3H), 0.73−0.58 (m, 2H), 0.50−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：568.6 (M+H).
【００６５】
スキーム４
【化８】
2013523846.tif 000010
実施例４
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（（４−（２−ヒドロキシアセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（７４）
工程１．ｔｅｒｔ−ブチル ４−(（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］−ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４８）
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−ホルミルピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（４７, ３ｇ、５．９０ｍｍｏｌ、酢酸塩）、１−ｂｏｃ−ピペラジン（１．６５ｇ、８．８５ｍｍｏｌ）および酢酸（６７５μＬ、１１．８０ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（５０ｍＬ）懸濁液（室温、窒素下）を溶液にするために３時間超音波処理し、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．９５ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３日間撹拌し、水の添加によりクエンチした。４Ｎ  ＮａＯＨでｐＨを１２−１３に調整し、該懸濁液を１時間撹拌、超音波処理した。固形物を濾取し、水で洗浄し、風乾した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ５０ｇ ＫＰ−Ｓｉｌカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：１／９９から１０/９０、２０ＣＶ）で２回精製した。目的のフラクションを回収し、濃縮し、微量のメタノール／ヘキサンを含むＡｃＯＥｔと共沈し、化合物４８（１．５１１ｇ、２．４４ｍｍｏｌ、収率４１％）を白色の綿毛状の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：8.71 (s, 1H), 8.56 (bd, J = 2.0 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.25 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 13.6, 2.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 7.20 (bdd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.57 (bd, J = 2.5 Hz, 1H), 3.57 (s, 2H), 4H are hidden by water’s peak, 2.59−2.51 (m, 1H), 2.42−2.27 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 0.72−0.58 (m, 2H), 0.50−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：619.4 (M+H).
【００６６】
工程２．１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−(ピペラジン−１−イルメチル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］−ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（４９）
４８（１．４５６ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（１５ｍＬ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液を室温で５時間撹拌した。ＤＣＭと共沸することによりＴＦＡを除去し、残渣を水で希釈し、１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨを１２−１３に調整した。得られた懸濁液を１５分間超音波処理した。固形物を濾取し、水で洗浄し、高真空下で乾燥し、化合物４９（１．２２７ｇ、微量のＴＦＡ）を灰白色の綿毛状の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：8.76 (bs, 1H), 8.54 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 13.5, 2.3 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 7.20 (bd, J = 10.2 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.62 (bs, 1H), 3.58−3.48 (m, 2H), 2.73−2.64 (m, 4H), 2.59−2.52 (m, 1H),  2.38−2.25 (m, 4H), 0.69−0.62 (m, 2H), 0.46−0.40 (m, 2H), one NH is missing. MS (m/z)：519.6 (M+H).
【００６７】
工程３．１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（（４−（２−ヒドロキシアセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（７４）
化合物４９（１２２ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ、スキーム１５）、グリコール酸（３６ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１２３μＬ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液（窒素下）にＨＡＴＵ試薬（２２４ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、水および１Ｎ  ＮａＯＨを加えることにより反応混合物をクエンチし、２時間撹拌し、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；２％水酸化アンモニウム含有ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ；次いで、ＳｉｌｉａＦｌａｓｈ ４０ ｇカートリッジ、２％水酸化アンモニウム含有ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ、次いで１０/９０から１５／８５、２０ＣＶ）で２回精製し、得られた物質をＭｅＯＨでトリチュレートし、表題化合物７４（５３ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、収率３９％）を白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：8.77−8.69 (m, 1H), 8.57 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 13.5, 2.3 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 7.20 (bd, J = 9.2 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.63−6.56 (m, 1H), 4.55 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.53−3.43 (m, 2H), 2H are hidden, 2.59−2.51 (m, 1H), 2.45−2.33 (m, 4H), 0.72−0.58 (m, 2H), 0.50−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：577.5 (M+H).
【００６８】
実施例５
工程１．（Ｓ）−２−（４−(（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタノエート（７４−Ａ）
７４（１１７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌ−バリン（１３２ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（４ｍＬ）撹拌溶液（窒素下）にＤＣＣ試薬（２５１ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で分液処理した。分離後、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：１／９９から１０／９０、２０ＣＶ、次いで１０／９０で５ＣＶ）で精製し、目的生成物７４−Ａ（１５１ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ、収率９６％）を無色−白色の粘着性の泡状物質として得た。
MS (m/z)：776.7 (M+H).
【００６９】
工程２．（Ｓ）−２−（４−(（６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエチル ２−アミノ−３−メチルブタノエート（８０）.
Ｂｏｃ−バリンエステル７４−Ａ（１５１ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）の懸濁液およびＨＣｌ（０．４９ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ、４Ｍ／１，４−ジオキサン）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を室温で２．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した。該水溶液を微量のメタノールを含むＤＣＭで抽出した。有機層を合わせて無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（Ｓｉｌｉａ Ｆｌａｓｈ １２ｇカートリッジ；２％水酸化アンモニウム含有ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：１／９９から１５／８５、２０ＣＶ、次いで１５／８５から２０／８０、１０ＣＶ）で精製し、目的生成物８０（８０ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ、収率６０％）を灰白色の粘着性の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm)：mixture of rotamers, 8.73 (s, 1H), 8.58 (bd, J = 1.4 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.26 (dd, J = 8.1, 0.7 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 13.6, 2.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 9.0, 1.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 6.59 (bd, J = 2.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.63−3.58 (m, 2H), 3.50−3.37 (m, 4H), 3.20 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 2.59−2.51 (m, 1H), 2.47−2.33 (m, 4H), 2.00−1.60 (m, 3H), 0.92 (d, J = 6.8 Hz, 3H),  0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.72−0.58 (m, 2H), 0.50−0.36 (m, 2H). MS (m/z)：577.6 and 676.7 (M+H).
【００７０】
スキーム５
【化９】
2013523846.tif 000011
実施例６
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（１００）
工程１．Ｎ−（（６−（７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル）−２−（メチルチオ）エタンアミン（９５）
化合物９４（３００ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）懸濁液に２−（メチルチオ）エチルアミン（１４１μＬ、１．５１８ｍｍｏｌ）および酢酸（８７μｌ）を加えた。室温で２０分間撹拌後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（４８２ｍｇ、２．２７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。次いで、反応混合物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ  ＮａＯＨで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ（Ｓｎａｐ ５０ｇ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から２０／８０、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物９５（３５７ｍｇ、定量的収率）を得た。
MS (m/z)：471.5 (M+H).
【００７１】
工程２．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−（メチルチオ）エチル）カルバメート（９６）
９５（３５７ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−無水物（４１４ｍｇ、１．８９７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（９３ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０６μＬ、０．６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）混合物を室温で週末にかけて撹拌した。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化アンモニウム水溶液で順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ １００ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から２０／８０、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物９６（２２０ｍｇ、０．３８６ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。
MS (m/z)：571.6 (M+H).
【００７２】
工程３．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）カルバメート（９７）
９６（２２０ｍｇ、０．３８６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２９ｍＬ）および水（１０ｍＬ）溶液にオキソン（登録商標）（４８６ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌し、濃縮し、１Ｎ ＮａＨＳＯ３溶液で処理し、水相を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。クルードな９７（２３２ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）をさらに精製することなく次工程に用いた。
MS (m/z)：603.6 (M+H).
【００７３】
工程４．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（４−アミノ−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）カルバメート（９８）
９７（２３２ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１７．５ｍＬ）および水（１．７５ｍＬ）による溶液に塩化アンモニウム（６２ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および鉄粉（２１５ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２時間加熱還流し、室温に冷却した。該懸濁液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濾液を濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から２０／８０、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物９８（２４１ｍｇ、定量的収率）を得た。
MS (m/z)：573.7 (M+H).
【００７４】
工程５．ｔｅｒｔ−ブチル （６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ピリジン−３−イル）メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）カルバメート（９９）
９８（１１５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液（−２５℃）にＤＩＰＥＡ（１４０μＬ、０．８０ｍｍｏｌ）、次いでトリホスゲン（５９．６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−２５℃で１時間撹拌し、次いで、シクロプロピルアミン（７１μＬ、１．００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温に昇温させた。終夜撹拌後、メタノールの添加により反応混合物をクエンチし、濃縮し、ＥｔＯＡｃおよび飽和塩化アンモニウム水溶液で分液処理した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ（Ｓｎａｐ ２５ｇ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から２０／８０、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物９９（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、収率９１％）を得た。
MS (m/z)：656.6 (M+H).
【００７５】
工程６．１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）−ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（１００）
９９（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液にＴＦＡ（５．６ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、濃縮し、酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から２０／８０、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物１００（９０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、収率７２％、ＴＦＡ塩）を灰白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：8.74 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 13.6, 2.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.35−3.25 (m, 2H), 3.05 (s, 3H), 3.02−2.90 (m, 2H), 2.59−2.50 (m, 1H), 0.69−0.62 (m, 2H), 0.46−0.40 (m, 2H). MS (m/z)：556.5 (M+H).
【００７６】
スキーム６
【化１０】
2013523846.tif 000012
実施例７
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（１−（２−（（２−ヒドロキシエチル）(メチル）アミノ）エチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（１５１）
工程１：２−（１−（（１，３−ジオキソラン−２−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン（１４５）
１４４（３．５７ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５０ｍＬ）および水（５ｍＬ）による溶液に１−（（１，３−ジオキソラン−２−イル）メチル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（２ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（３．２５ｇ、２１．４２ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（１．７９９ｇ、３６ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．８２５ｇ、０．７１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を終夜加熱還流した。該混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。有機相を収集し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた固形物をＥｔ２Ｏでトリチュレートし、表題化合物１４５（３ｇ、収率９５％）をベージュ色の固形物として得た。
MS (m/z) = 443.51 (M+H).
【００７７】
工程２：２−（４−(７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセトアルデヒド（１４６）
１４５（９００ｍｇ、２．０３４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に３Ｍ  ＨＣｌ（３０ｍＬ）を加え、反応混合物を２４時間加熱還流した。該混合物を室温に冷却し、濃縮した。残渣の水性の溶液を固体の炭酸水素ナトリウムで処理し、ＤＣＭで抽出した。有機相を回収し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。クルードなアルデヒド１４６（８１０ｍｇ、収率１００％）をさらに精製することなく次工程に用いた。
MS (m/z) = 399.3 (M+H)
【００７８】
工程３：２−（（２−（４−(７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エチル）(メチル）アミノ）エタノール（１４７）
１４６（８１０ｍｇ、２．０３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液にＨＯＡｃ（０．２３３ｍＬ、４．０７ｍｍｏｌ）および２−（メチルアミノ）エタノール（３０５ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．２９３ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。該混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、次いで、固体のＮａＨＣＯ３を加えて酸を中和した。ＤＣＭ層を回収し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、表題化合物１４７（９３０ｍｇ、収率１００％）をさらに精製することなく次工程に用いた。
MS (m/z) = 458.50 (M+H).
【００７９】
工程４：炭酸ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（２−（４−(７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エチル）(メチル）アミノ）エチル（１４８）
１４７（９３０ｍｇ、２．０３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液にＢｏｃ２Ｏ（１．３３１ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４９．７ｍｇ、０．４０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶出液：ＥｔＯＡｃから２０％ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、表題化合物１４８（４２０ｍｇ、収率３７％）を茶色の油状物として得た。
(MS (m/z) = 558.49 (M+H)
【００８０】
工程５：炭酸 ２−（（２−（４−(７−（４−アミノ−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エチル）(メチル）アミノ）エチル ｔｅｒｔ−ブチル（１４９）
１４８（４２０ｍｇ、０．７５３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に塩化アンモニウム（８１ｍｇ、１．５０６ｍｍｏｌ）／水（５ｍＬ）および亜鉛粉末（１９７ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間加熱還流した。該混合物を室温に冷却し、次いで濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＤＣＭに溶解し、水で洗浄した。有機相を回収し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、表題化合物１４９（３９７ｍｇ、収率１００％）を得、さらに精製することなく次工程に用いた。
MS (m/z) = 528.49 (M+H).
【００８１】
工程６：炭酸 ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（２−（４−(７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エチル）(メチル）アミノ）エチル（１５０）
１４９（０．３９７ｍｇ、０．７５２ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．１８３ｍＬ、２．２５7ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）撹拌溶液（０℃、窒素下）にクロロギ酸フェニル（２９５ｍｇ、１．８８１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃で２時間撹拌した。シクロプロピルアミン（２１５ｍｇ、３．７６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５５℃で５時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび飽和炭酸水素ナトリウム溶液で分液処理し、飽和塩化アンモニウム溶液およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃから３０％ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、表題化合物１５０（１５０ｍｇ、収率３３％）を白色の固形物として得た。
MS (m/z) = 611.70 (M+H).
【００８２】
工程７：１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（１−（２−（（２−ヒドロキシエチル）(メチル）アミノ）エチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（１５１）
１５０（１５０ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液にＨＣｌ／ジオキサン（０．３０７ｍＬ、１．１１８ｍｍｏｌ）を加え、白色の沈殿物を室温で２時間撹拌した。該混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、１０分間撹拌し、層を分離した。有機相を回収し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（溶出液：ＥｔＯＡｃから３０％ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、表題化合物１５１（１００ｍｇ、収率８０％）を白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm)：8.43 (d, J = 5.48 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.17 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 6.45 (d, J = 5.48 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.27 (t, J = 6.26 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.08 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 6.26 Hz, 2H), 2.60 (m, 3H), 2.34 (s, 3H), 0.91 (m, 2H), 0.72 (m, 2H). MS (m/z) = 511.60 (M+H).
【００８３】
スキーム７
【化１１】
2013523846.tif 000013
実施例８
Ｎ−（（２−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド（２０９）
工程１：２−（（（２−（７−（２−フルオロ−４−ニトロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）（２−メトキシエチル）アミノ）−２−オキソエチルアセテート（２０６）
１５８（４２３ｍｇ、０．９２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１８ｍＬ）溶液に２−アセトキシ酢酸（１６４ｍｇ、１．３８７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５６５ｍＬ、３．２４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ試薬（１０５５ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を加えた。生じた白色の沈殿物を濾取し、廃棄した。濾液の有機層を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、黄色がかった固形物を得、それをエーテルでトリチュレートし、表題化合物２０６（５７０ｍｇ、収率１１１％、クルード）をさらに精製することなく次工程に用いた。
MS：558 (MH)+.
【００８４】
工程２：２−（（（２−（７−（４−アミノ−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）（２−メトキシエチル）アミノ）−２−オキソエチルアセテート（２０７）
２０６（３００ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（２４．７５ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ）および鉄粉（２５５ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）／エタノール（６ｍＬ）／水（３．０ｍＬ）からなる反応混合物を１時間加熱還流した。反応混合物を温濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０−２０％、ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ）で精製し、表題化合物２０７（１３３ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ、収率４７％）を白色の固形物として得た。
MS：528(MH)+.
【００８５】
工程３：２−（（（２−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）（２−メトキシエチル）アミノ）−２−オキソエチルアセテート（２０８）
２０７（１３０ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液（０℃）にＤＩＰＥＡ（０．１７２ｍＬ、０．９８６ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（４３．９ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、シクロプロピルアミン（７０．３ｍｇ、１．２３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に昇温し、１時間撹拌し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＭｅＯ／ＤＣＭ、０−２０％、ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ）で精製し、表題化合物２０８（１０４ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ、収率６９％）を白色の固形物として得た。
MS：611 (MH)+.
【００８６】
工程４：Ｎ−（（２−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド（２０９）
２０８（１０４ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）溶液にＬｉＯＨ（３２．６ｍｇ、１．３６２ｍｍｏｌ）の水（６ｍＬ）溶液を加え、該混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０−２０％、ＳＮＡＰ ２５ ｇカートリッジ）で精製し、表題化合物２０９（４０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ、収率４１％）を白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) d (ppm)：8.75 (s, 1H), 8.55 (d, 1H, J=5.3Hz), 7.94 (s, 1H), 7.75 (dd, 1H, J1=2.3Hz, J2=13.5Hz), 7.41 (t, 1H, J=9.0Hz), 7.24−7.22 (m, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.70 (d, 1H, J=5.5Hz), 6,60 (m, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.68−4.66 (m,1H), 4.24 (d, 2H, J=5.7Hz), 3.87 (s, 3H), 3.45 (m, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.28 (m, 2H), 2.60−2.57 (m, 1H), 0.71−0.67 (m, 2H), 0.48−0.45 (m, 2H). MS：569.6 (MH)+
【００８７】
【化１２】
2013523846.tif 000014
実施例９
１−（（２−（７−（４−イソプロピルアミノカルボニルアミノ−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）−３−イソプロピル−１−（２−メトキシエチル）尿素（１９２）
化合物１９２は、化合物２０９の合成のスキーム７で用いられたものと同様の方法により、工程１のＤＩＰＥＡおよびＨＡＴＵ試薬の存在下における２−アセトキシ酢酸をトリホスゲン、次いでイソプロピルアミンで、工程３のシクロプロピルアミンをイソプロピルアミンで置き換えることにより得られた。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) d (ppm)：8.67 (s, 1H), 8.49 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.68 (dd, J1=2.6 Hz, J2=13.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J=9.0 Hz, 1H), 7.12−7.09 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.64 (d, J=5.5 Hz, 1H), 6.14−6.09 (m, 2H), 4.55 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.80−3.74 (m, 2H), 3.38−3.27 (m, 4H), 3.21 (s, 3H), 2.06−1.04 (m, 12H). MS (m/z) = 598.6 (M+H).
【００８８】
スキーム８
【化１３】
2013523846.tif 000015
実施例１０
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボニル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２３４）
工程１：６−（７−（４−（３−シクロプロピルウレイド）−２−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）ニコチン酸（２２５）
アルデヒド４７（２００ｍｇ、０．４４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）懸濁液にオキソン（登録商標）（３３０ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）で処理し、室温でさらに１時間撹拌した。生じた沈殿物を濾取し、水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥した。粗生成物をＭｅＯＨでトリチュレートし、表題化合物２２５（１６５ｍｇ、収率８０％）をベージュ色の固形物として得た。
NMR (400 MHz, CD3OD) δ (ppm)：9.66 (bs, 1H), 8.98 (dd, J = 1.9, 0.9 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.22 (dd, J = 8.1, 1.9 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 13.7, 2.5 Hz, 1H), 7.45 (bs, 1H), 7.37 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.9, 1.5 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 2.60−2.52 (m, 1H), 0.69−0.56 (m, 2H), 0.50−0.37 (m, 2H). ［Carboxylic OH is not seen］. MS：465.3 (MH)+
【００８９】
工程２：１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（５−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボニル）ピリジン−２−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２３４）
酸２２５（３００ｍｇ、０．６４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）撹拌溶液（０℃）にＨＯＢＴ（１９８ｍｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２４８ｍｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）および１−メチル−４−（ピペリジン−４−イル）ピペラジン（１１８ｍｇ、０．６４６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、０−５０％、２５ｇカラム）で３回、次いでＧｉｌｓｏｎ［ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５０−９５％、ＨＣＯＯＨ（０．０５％）］で精製し、表題化合物２３４（５０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ、収率１２．２９％）を一ギ酸塩として得た。
NMR (400 MHz, CD3OD) δ (ppm)：8.67 (dd, J1=0.8 Hz, J2=2.1 Hz, 1H,), 8.48 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.19 (dd, J1=0.8 Hz, J2=8.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.97 (dd, J1=2.2Hz, J2=8.2Hz, 1H), 7.65 (dd, J1=2.4Hz, J2=13.1Hz, 1H), 7.29 (t, 1H, J=8.8 Hz, H), 7.20−7.18 (m, 1H), 6.65 (dd, J1=0.8 Hz, J2=5.5 Hz, 1H), 3.83 (br. s, 1H), 3.24 (br s, 1H), 3.01 (br. s, 6H), 2.85 (br. s, 3H), 2.76−2.70 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.61−2.57(m, 1H), 2.02 (br. s, 1H), 1.91−1.85 (br. s, 1H), 1.56−1.49 (br. s, 2H), 0.78−0.74 (m, 2H), 0.55−0.51(m, 2H). MS：630.4 (MH)+
【００９０】
スキーム９
【化１４】
2013523846.tif 000016
実施例１１
１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（１−（２−モルホリノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２６５）
工程１．１−（２，２−ジエトキシエチル）−４−ヨード−１Ｈ−イミダゾール（２６０）
４−ヨードイミダゾール（１０ｇ、５１．６ｍｍｏｌ）およびブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール（９．３１ｍＬ）のＤＭＳＯ（３０ｍＬ）撹拌溶液にＫ２ＣＯ３（１０．６９ｇ、７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１１０℃で１６時間加熱した。室温に冷却後、反応混合物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ８０ ｇカートリッジ；ＡｃＯＥｔ／ヘキサン：０／１００から５０／５０、２０ＣＶ）で精製した。目的のフラクションを回収し、濃縮し、表題化合物２６０（１１．２９ｇ、３６．４ｍｍｏｌ、収率７１％）を黄色の油状物として得た。
MS (m/z)：310.97 (M+H).
【００９１】
工程２．７−クロロ−２−（１−（２，２−ジエトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン（２６１）
７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン（９．２６ｇ、５４．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８８ｍＬ）撹拌溶液（−１５℃）にｎ−ＢｕＬｉ（２１．８４ｍＬ、５４．６ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、０．５Ｍ ＺｎＣｌ２／ＴＨＦ溶液（１０９ｍＬ、５４．６ｍｍｏｌ）を−１５℃で加え、反応混合物を４５分間かけて室温に昇温した。パラジウムテトラキスフェニルホスフィン（０．８４１ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）およびヨージド２６０（１１．２９ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３３ｍＬ）溶液を加え、該混合物を３時間加熱還流し、次いで濃縮した。残渣を水および水酸化アンモニウムで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ８０ ｇカートリッジ； ＡｃＯＥｔ／ヘキサン：０／１００から１００／０、２０ＣＶ）で精製し、得られた物質をＭＴＢＥでトリチュレートし、表題化合物２６１（１．２ｇ、３．４１ｍｍｏｌ、収率９％）を薄茶色の固形物として得た。
MS (m/z)：437.45 (M+H).
【００９２】
工程３．４−（２−（１−（２，２−ジエトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）−３−フルオロアニリン（２６２）
４−アミノ−２−フルオロフェノール 塩酸塩（１．３９ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）撹拌溶液にｔ−ＢｕＯＫ（１．９９ｇ、１７．７６ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、塩化物２６１（２．５ｇ、７．１１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で１時間加熱した。
別のフラスコで４−アミノ−２−フルオロフェノール 塩酸塩（１．３９ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液をｔ−ＢｕＯＫ（１．９９ｇ、１７．７６ｍｍｏｌ）で処理し、得られたフェノレートの溶液を上の反応混合物に１００℃で加えた。３０分後、該混合物を水（３００ｍＬ）に注ぎ、生じた沈殿物を濾取し、高真空下で乾燥し、表題化合物２６２（２．８６ｇ、６．４６ｍｍｏｌ、収率９１％）を薄茶色の固形物として得た。
MS (m/z)：443.44 (M+H).
【００９３】
工程４．１−シクロプロピル−３−（４−（２−（１−（２，２−ジエトキシエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）−３−フルオロフェニル）尿素（２６３）
アミン２６２（２．８６ｇ、６．４６ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．０４ｍＬ、１２．９３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）撹拌溶液（０℃）にクロロギ酸フェニル（９７３μＬ、７．７６ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、シクロプロピルアミン（１．１４ｍＬ、１６．１６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、反応混合物を６０℃で４５分間加熱した。さらなるシクロプロピルアミン（１ｍＬ、１４．１８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６０℃でさらに１０分間加熱した。室温に冷却後、水を加えて反応混合物をクエンチすると沈殿物が生じた。その固形物を濾取し、水で洗浄し、２時間減圧乾燥した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ８０ ｇカートリッジ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１０／９０、２０ＣＶ）で精製した。目的のフラクションを回収し、濃縮し、ＭＴＢＥでトリチュレートし、高真空下で乾燥し、表題化合物２６３（２．９５ｇ、５．６１ｍｍｏｌ、収率８７％）をピンク色の固形物として得た。
MS (m/z)：526.60 (M+H).
【００９４】
工程５．１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（１−（２−オキソエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２６４）
アセタール２６３（２．９５ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（２０／２０ｍＬ）溶液に濃ＨＣｌ（２ｍＬ）を加え、反応混合物を９０℃で１時間加熱した。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、４Ｍ ＮａＯＨでｐＨ１０に調整して生じた沈殿物を濾取し、水で希釈し、減圧乾燥した。次いで、該物質をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ １００ ｇカートリッジ；２％水酸化アンモニウム含有ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１５／８５、２０ＣＶ）で精製し、表題化合物２６４（１．２ｇ、２．６６ｍｍｏｌ、収率４７％）を茶色の固形物として得た。
MS (m/z)：484.51 (M+H).
【００９５】
工程６．１−シクロプロピル−３−（３−フルオロ−４−（２−（１−（２−モルホリノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ）フェニル）尿素（２６５）
２６４（２００ｍｇ、０．４４３ｍｍｏｌ）、モルホリン（４６μＬ、０．５３２ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（５１μＬ、０．８８６ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１０ｍＬ）溶液にナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２８２ｍｇ、１．３２９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。水で反応混合物をクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機抽出物を飽和塩化アンモニウム溶液およびブラインで順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＢｉｏｔａｇｅ（ＳＮＡＰ ４０ ｇカートリッジ；２％水酸化アンモニウム含有ＭｅＯＨ／ＤＣＭ：０／１００から１５／８５、２０ＣＶ）、およびＧｉｌｓｏｎ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ， Ｌｕｎａ １５μ，Ｃ１８（２）１００Ａ，２５０ｘ５０．０ｍｍ，１５μｍ；共に０．０５％ギ酸を含むＭｅＯＨ／水：２０／８０から９５／５、６０分間；流速：３０ｍＬ／分）で精製し、表題化合物２６５（３０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ、収率１３％、ギ酸塩）を白色の固形物として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ (ppm) ：9.52 (bs, 1H), 8.41 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.36 (bs, 1H), 7.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 2.4 and 14.0 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.33 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.32 (bs, 1H), 7.22 (dd, J = 1.6 and 8.8 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.14 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 2.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.58−2.51 (m, 1H), 2.49−2.40 (m, 4H), 0.64−0.59 (m, 2H), 0.43−0.39 (m, 2H). MS (m/z)：523.55 (M+H).
【００９６】
医薬組成物
いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の化合物ならびに医薬的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の組成物は技術分野で周知のいずれの方法により製剤化されてもよく、様々な経路、例えば、局所、硝子体内、眼窩周囲、眼球内、といった経路、ならびに眼球、眼部および／または眼部周囲への別の局所投与方法（送達装置によるものを含む）で投与されるよう製造されてもよい。いくつかの実施態様において、投与は経口経路によるものでもよい。
【００９７】
担体、賦形剤または希釈剤の特性は投与経路に依存するであろう。本明細書中で用いられるように、用語「医薬的に許容される」は、細胞、培養細胞、組織または臓器といった生物学的システムに許容され、活性成分（複数可）の効果に干渉しない無毒な物質を意味する。故に、本発明の組成物は、阻害剤に加え、希釈剤、増量剤、塩類、緩衝剤、安定化剤、溶解剤、および技術分野で周知の別の物質を含んでいてもよい。医薬的に許容される製剤の製造は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990に記載される。
【００９８】
活性化合物は、重篤な副作用を治療対象の患者に引き起こすことなく治療上の有効量を患者に送達することに十分な量において、医薬的に許容される担体、賦形剤または希釈剤に含まれる。医薬的に許容される誘導体の有効な用量範囲は、送達される親化合物の重量に基づき算出することができる。誘導体そのものが活性を示す場合、有効な用量範囲は上記のように該誘導体の重量を用いて概算することができるか、あるいは当業者に周知の別の方法により概算することができる。
【００９９】
アッセイ実施例
ＶＥＧＦ活性の阻害
以下のプロトコルが本発明の化合物のアッセイに用いられた。
【０１００】
アッセイ実施例１
インビトロ受容体型チロシンキナーゼアッセイ（ＶＥＧＦ受容体 ＫＤＲ）
この試験は本発明の化合物のヒト組み換えＶＥＧＦ受容体酵素活性阻害能を評価するものである。
【０１０１】
ＧＳＴタグ付酵素を産生させるため、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）の触媒ドメインに対応する１．６ｋｂのｃＤＮＡ（Genbank accession number AF035121、アミノ酸８０６から１３５６）をｐＤＥＳＴ２０ Ｇａｔｅｗａｙベクター（Invitrogen）のＰｓｔ Ｉサイトにクローニングした。このコンストラクトをＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ（登録商標）（Invitrogen）システムを用いた組み換えバキュロウィルスの作製に用いた。
【０１０２】
組み換えバキュロウィルスコンストラクトを感染させることによりＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６タンパク質をＳｆ９細胞（Spodoptera frugiperda）で発現した。簡単に述べると、懸濁状態で増殖させ、血清不含培地（ゲンタマイシン含有Ｓｆ９００ ＩＩ）中で約２Ｘ１０６細胞／ｍｌの細胞密度で維持したＳｆ９細胞に上記のウィルスを０．１の感染効率（ＭＯＩ）で１２０ｒｐｍ、２７℃において７２時間回転振盪機で振盪しながら感染させた。感染細胞を３９８ｇで１５分間遠心することにより回収した。細胞のペレットは精製まで−８０℃で凍結した。
【０１０３】
細胞の抽出および精製で記載される全ての工程は４℃で行われた。ＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６組み換えバキュロウィルスに感染した凍結Ｓｆ９細胞ペレットを解凍し、細胞１グラムあたり３ｍｌのバッファーＡ（ＰＢＳ ｐＨ７．３、１μｇ／ｍｌペプスタチン、２μｇ／ｍｌアプロチニンおよびロイペプシン、５０μｇ／ｍｌ ＰＭＳＦ、５０μｇ／ｍｌ ＴＬＣＫおよび１０μＭ Ｅ６４ならびに０．５ｍＭ ＤＴＴ含有）を用いて緩やかに再懸濁した。懸濁物をドーンスホモジナイザーでホモジナイズし、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００をホモジネートに加え、２２５００ｇ、４℃で３０分間遠心した。上清（細胞抽出物）をＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６の出発物として用いた。
【０１０４】
上清をＰＢＳ ｐＨ７．３で平衡化したＧＳＴ−アガロースカラム（Sigma）にロードした。４カラム容量（ＣＶ）のＰＢＳ ｐＨ７．３＋１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および４ＣＶのバッファーＢ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０、２０％グリセロールおよび１００ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄後、結合したタンパク質を５ＣＶのバッファーＢ（５ｍＭ ＤＴＴおよび１５ｍＭグルタチオン含有）で段階的に溶出した。ＵＶによる追跡に基づいて、即ちＯ．Ｄ．２８０が高値であるフラクションをこのクロマトグラフィー工程におけるＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６を多く含むフラクションとしてプールした。最終的なＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６タンパク質調製物濃度は約０．７ｍｇ／ｍｌ、約７０％の純度であった。精製したＧＳＴ−ＶＥＧＦＲ２８０６−１３５６タンパク質のストックは分注し、酵素アッセイに使用するまで−８０℃で凍結した。
【０１０５】
ＶＥＧＦＲ／ＫＤＲの阻害はＤＥＬＦＩＡＴＭアッセイ（Perkin Elmer）で評価した。基質であるｐｏｌｙ（Ｇｌｕ４，Ｔｙｒ）を黒色高結合性ポリスチレン９６ウェルプレートに固定化した。コートしたプレートを洗浄し、４℃で保存した。アッセイ中、酵素を阻害剤およびＭｇ−ＡＴＰで氷上においてポリプロピレン９６ウェルプレート中で４分間プレインキュベートし、次いでコートしたプレートに移した。次いでキナーゼ反応を３０℃で１０−３０分間行った。アッセイ中のＡＴＰ濃度はＶＥＧＦＲ／ＫＤＲ（Ｋｍの２Ｘ）では０．６μＭであった。酵素濃度は５ｎＭであった。インキュベート後、キナーゼ反応をＥＤＴＡにより終了させ、プレートを洗浄した。リン酸化産物はユーロピウム標識抗リン酸化チロシンモノクローナル抗体とインキュベートすることにより検出した。プレート洗浄後、結合したモノクローナル抗体をＧｅｍｉｎｉ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ検出器（Molecular Devices）を用いた時間分割蛍光検出により検出した。化合物は異なる濃度範囲で評価され、ＩＣ５０値（酵素活性の５０％阻害に必要な化合物濃度）を決定した。結果を表１に示す。表中、「ａ」はＩＣ５０値が５０ナノモル濃度未満であること；「ｂ」はＩＣ５０値が≧５０であるが≦１００ナノモル濃度であること；「ｃ」はＩＣ５０値が≧１００であるが≦２５０ナノモル濃度であること；「ｄ」はＩＣ５０値が≧２５０ナノモル濃度であることを示す。
【表１】
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【０１０６】
アッセイ実施例２
ＶＥＧＦ依存的Ｅｒｋリン酸化
細胞および増殖因子：ＨＵＶＥＣ細胞をCambrex Bio Science Walkersville, Incから購入し、販売者の説明書に従って培養した。Ｓｆ９におけるバキュロウィルスによる発現用にGateway Cloning Technology (Invitrogen)を用いてＶＥＧＦ１６５の全長をコードする配列をクローニングした。ＮａＣｌｍｐグラジエント溶出を用いたＨｉＴｒａｐヘパリンカラム（GE Healthcare Life Sciences）、次いでイミダゾールグラジエント溶出を用いたＨｉＴｒａｐ Ｃｈｅｌａｔｉｎｇカラム（GE Healthcare Life Sciences）でＶＥＧＦ１６５を培養培地から精製し、０．１％ＢＳＡ含有ＰＢＳバッファー中で保存し、濾過滅菌した。
【０１０７】
細胞アッセイ：細胞を８０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、４８時間増殖させた。次いで、細胞を血清および増殖因子不含倍地中で終夜培養し、化合物希釈物に１．５時間曝露した。培地中で１５分間インキュベート後、ＶＥＧＦ１６５（１５０ｎｇ／ｍｌ）細胞を氷冷溶解バッファー（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０％グリセロール、１ｍＭ ４−（２ アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩、２００μＭ オルトバナジウム酸ナトリウム、１ｍＭ フッ化ナトリウム、１０μg／ｍＬ ロイペプシン、１０μｇ／ｍＬ アプロチニン、１μｇ／ｍＬ ペプスタチンおよび５０μｇ／ｍＬ Ｎａ−ｐ−トシル−Ｌ−リシン クロロメチルケトン塩酸塩含有）で溶解し、抗−リン酸化ＥＲＫ１／２（Ｔ２０２／Ｙ２０４）（Cell Signaling Technologies）で検出するウェスタンブロットを行った。
【０１０８】
ウェスタンブロット解析：１種類の処理細胞の溶解物サンプルを５−２０％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分離し、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ ポリビニリデンジフルオリドメンブレン（Amersham）を用いて製造者の指示に従い免疫ブロットを行った。ブロット物を０．１％Ｔｗｅｅｎ ２０含有Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）で洗浄し、リン酸化Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４−ＥＲＫに対する抗体（Cell signaling technologies）でプローブした。Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ検出（Amersham, ECL plus）を行い、Ｓｔｏｒｍデンシトメーター（GE Healthcare；800 PMT, 100 nM 分解能）でイメージの取り込みおよびデンシトメトリー解析を行った。異なる希釈率の範囲の値を用い、４パラメーターフィットモデルによりＩＣ５０曲線を作成した。これらの曲線はＧｒａＦｉｔ ５．０ソフトウェアを用いて算出した。
【０１０９】
アッセイ実施例３
インビボ脈絡叢新血管新生（ＣＮＶ）モデル
この試験は、化合物のＣＮＶ進行阻害能を評価するものである。ＣＮＶは加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）患者における重篤な失明の主な原因である。
【０１１０】
オスＢｒｏｗｎ−Ｎｏｒｗａｙラット（Japan Clea Co., Ltd.）をこの研究に用いた。
【０１１１】
ペントバルビタールの腹腔内注射によりラットを麻酔し、右側の瞳孔を０．５％トロピカミドおよび０．５％フェニルエフリン塩酸塩で散大させた。グリーンレーザー光凝固装置（Nidex Inc., Japan）のスリットランプデリバリーシステムを用いて右目の網膜血管の間に６箇所のレーザー火傷を負わせ、Ｈｅａｌｏｎ（登録商標）（AMO Inc）を塗布した顕微鏡スライドグラスを接触レンズとして用いた。レーザー強度は１００または２００ｍＷで０．１秒間であり、スポットの直径は１００μｍであった。レーザー火傷の作製時には気泡の発生が観察されたが、これはＣＮＶ開始に重要であるブルッフ膜の破壊を示すものである。
【０１１２】
レーザー照射後（０日目）、ＳＡＳソフトウェア（SAS institute Japan, R8.1）を用いてラットを体重に基づきいくつかの群に分けた。３日目に動物を麻酔後、右目の瞳孔を散大させ（上記）、動物の右目に化合物またはベヒクルを１０または３ｎｍｏｌ／眼の用量において注射により投与した（１０μＬ／眼）。化合物は注射前にＣＢＳ、ＰＢＳ、または他の適当なベヒクルに溶解または懸濁した。
【０１１３】
１０日目、動物をエーテルで麻酔し、高分子量フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−デキストラン（SIGMA、２ｘ１０６ＭＷ）を尾静脈投与した（２０ｍｇ／ラット）。ＦＩＴＣ−デキストラン注射から３０分後、動物をエーテルまたは二酸化炭素で安楽死させ、眼球を取り出し、１０％ホルマリン中性バッファー溶液で固定した。１時間固定後、眼球から角膜、水晶体および網膜を除去することによりＲＰＥ−脈絡膜−強膜平面標本を得た。平面標本を顕微鏡スライドグラス上において５０％グリセロールでマウントし、レーザーで焼いた部分の写真を蛍光顕微鏡（Nikon Corporation、励起フィルター：４６５−４９５ｎｍ、吸光フィルター：５１５−５５５ｎｍ）で撮影した。Ｓｃｉｏｎイメージを用いて写真を解析し、蛍光強度が高い領域の測定によりＣＮＶ領域を決定した。
【０１１４】
６箇所の火傷の平均ＣＮＶ領域をＣＮＶ領域の個々の値として用い、化合物処理群の平均ＣＮＶ領域をベヒクル処理群のものと比較した。いくつかの化合物の結果を表２に、ＣＮＶ進行の阻害％として示す（「Ａ」：６０％以上阻害、「Ｂ」：≧４０％から＜６０％阻害）。
【表２】
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【０１１５】
アッセイ実施例４
ウサギにおけるＶＥＧＦ誘発性網膜血管透過性亢進
資料と方法
この試験は化合物のＶＥＧＦ誘発性網膜血管透過性亢進の阻害能を評価するものである。血管透過性の亢進は加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）患者における重篤な失明の主な原因である。メスダッチウサギ（〜２ｋｇ；Kitayama LABES CO., LTD、長野県、日本）をペントバルビタールで麻酔し、０．４％オキシブプロカイン塩酸塩で局所麻酔した。０．５％トロピカミド点眼液で瞳孔を散大させた後、試験化合物またはベヒクルを硝子体腔に注射した。ヒト組み換えＶＥＧＦ１６５（５００ｎｇ；Sigma−Aldrich Co., St Louis, MO）を硝子体フルオレセイン濃度測定の４８時間前に硝子体内に注射した。ウサギをペントバルビタールで麻酔し、次いで、フルオレセインナトリウム（２ｍｇ／ｋｇ）を耳静脈から注入した。０．５％トロピカミド点眼液で瞳孔を散大させ、フルオレセイン注入の３０分後、眼球のフルオレセイン量をＦＭ−２ Ｆｌｕｏｒｏｔｒｏｎ Ｍａｓｔｅｒ（Ocumetrics, Mountain View, CA）で測定した。硝子体内のフルオレセイン濃度は光軸に沿って後端から０．２５ｍｍ離れたデータポイントにおいて得た。硝子体内のフルオレセイン濃度は網膜血管から漏出したフルオレセインであると見做される。試験化合物処理群における平均フルオレセインピークをベヒクル処理群のものと比較した。化合物２６および７４は、ベヒクル処理群と比べてフルオレセイン漏出の有意な阻害を示した。
【国際調査報告】
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