(57)【要約】  本発明は、末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）のイメージングに関し、既知のかかるＰＥＴトレーサーに比べて改善された性質を有するＰＥＴトレーサーを提供する。本発明はまた、本発明のＰＥＴトレーサーの製造において有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物及び前記ＰＥＴトレーサーの製造方法も提供する。本発明によれば、本発明のＰＥＴトレーサーを含む放射性医薬組成物も提供される。また、ＰＥＴトレーサー及び放射性医薬組成物の使用方法も提供される。【選択図】図２
2013523621.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学構造を有する陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）トレーサー。
【化１】
2013523621.tif 000027
【請求項２】
請求項１記載のＰＥＴトレーサーを製造するための前駆体化合物であって、下記の式Ｉを有する前駆体化合物。
【化２】
2013523621.tif 000028
（式中、Ｒ1はヒドロキシル又は脱離基である。）
【請求項３】
前記脱離基がメシレート、トシレート及びトリフレートから選択される、請求項２記載の前駆体化合物。
【請求項４】
前記脱離基がメシレートである、請求項３記載の前駆体化合物。
【請求項５】
請求項２乃至請求項４のいずれか１項記載の式Ｉの前駆体化合物を製造するための第１の方法であって、
（ｉ）前記式Ｉの前駆体化合物と下記の式ＩＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、並びに
【化３】
2013523621.tif 000029
（式中、Ｒ2は請求項２乃至請求項４のいずれか１項でＲ1に関して定義した通りであり、Ｒ1及びＲ2は同一である。）
（ｉｉ）前記式Ｉの前駆体化合物を前記式ＩＩの化合物から分離する段階
を含んでなる方法。
【請求項６】
前記分離段階が、高速液体クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー又は模擬ベッドクロマトグラフィーを含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
請求項２乃至請求項４のいずれか１項記載の式Ｉの前駆体化合物を製造するための第２の方法であって、当該方法は
（ｉ）下記の式ＩＩＩの化合物を用意する段階、
【化４】
2013523621.tif 000030
（式中、ＰＧ1はヒドロキシル保護基である。）
（ｉｉ）前記式ＩＩＩの化合物をその対応する酸塩化物に転化させる段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）で得られた酸塩化物をジエチルアミドと反応させて下記の式ＩＶの化合物を得る段階、
【化５】
2013523621.tif 000031
（式中、ＰＧ2はヒドロキシル保護基であり、ＰＧ1と同一である。）
（ｉｖ）段階（ｉｉｉ）で得られた式ＩＶの化合物を脱保護してヒドロキシル誘導体を得る段階、及び
（ｖ）請求項２乃至請求項４のいずれか１項で式Ｉに関して定義した脱離基を任意に付加する段階
を含んでなり、式Ｉの前駆体化合物が段階（ｉｖ）又は段階（ｖ）から得られる、方法。
【請求項８】
前記式ＩＩＩの化合物を用意する前記段階（ｉ）が、
（ａ）下記の式Ｖの化合物と下記の式ＶＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、
【化６】
2013523621.tif 000032
（式中、Ｒ1はキラルアルコールであり、ＰＧ3及びＰＧ4は同一であり、各々がヒドロキシル保護基である。）
（ｂ）式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物から分離する段階、及び
（ｃ）酸性条件を用いて分離された式Ｖの化合物からＲ1を除去し、それによって前記式ＩＩＩの化合物を得る段階
を含む、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記式ＩＩＩの化合物を用意する前記段階（ｉ）が、
（ａ）前記式ＩＩＩの化合物と下記の式ＶＩＩＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、及び
【化７】
2013523621.tif 000033
（式中、ＰＧ5はヒドロキシル保護基であり、請求項７で定義したＰＧ1と同一である。）
（ｂ）段階（ａ）に記載した混合物を光学活性アミンと反応させることで、前記式ＩＩＩの化合物を前記式ＶＩＩＩの化合物から分離する段階
を含む、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記光学活性アミンが、Ｓ−α−メチルベンジルアミン、Ｒ−（＋）−Ｎ−（１−ナフチルメチル）−α−ベンジルアミン、Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチル−α−メチルベンジルアミン及び１−（Ｐ−トリル）エチルアミンから選択される、求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記式ＩＩＩの化合物を用意する前記段階（ｉ）が、
（ａ）下記の式ＩＸの化合物と下記の式Ｘの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、及び
【化８】
2013523621.tif 000034
（式中、ＰＧ6及びＰＧ7は同一であり、各々がヒドロキシル保護基である。）
（ｂ）段階（ａ）に記載した混合物を立体選択性酵素と反応させることで、前記立体選択性酵素により式ＩＸの化合物をエステル加水分解して前記式ＩＩＩの化合物を得る段階
を含む、請求項７記載の方法。
【請求項１２】
前記立体選択性酵素が、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢ、ブタ肝臓エステラーゼ及びブタ膵臓リパーゼから選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１記載のＰＥＴトレーサーを製造するための方法であって、請求項２乃至請求項４のいずれか１項記載の式Ｉの前駆体化合物を18Ｆの適当な供給源と反応させる段階を含んでなる方法。
【請求項１４】
前記式Ｉの前駆体化合物に関してはＲ1が脱離基であり、前記18Ｆの適当な供給源が18Ｆ−フッ化物イオン及びカチオン性対イオンを含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記カチオン性対イオンが、ルビジウム、セシウム、クリプタンドと錯体化したカリウム、及びテトラアルキルアンモニウム塩から選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
自動化される、請求項１３乃至請求項１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
請求項１６記載の方法を実施するためのカセットであって、
（ｉ）請求項２乃至請求項４のいずれか１項記載の前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）請求項１３乃至請求項１５のいずれか１項記載の18Ｆの適当な供給源を用いて段階（ｉ）の容器を溶出するための手段
を含んでなるカセット。
【請求項１８】
さらに、（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジを含む、請求項１７記載のカセット。
【請求項１９】
請求項１記載のＰＥＴトレーサーを、哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項２０】
被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのＰＥＴイメージング方法であって、
（ｉ）請求項１記載のＰＥＴトレーサーを前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記ＰＥＴトレーサーを前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記結合ＰＥＴトレーサー中に含まれる18Ｆから放出される信号を検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるＰＥＴイメージング方法。
【請求項２１】
前記ＰＥＴトレーサーが請求項１９記載の放射性医薬組成物として投与される、請求項２０記載のＰＥＴイメージング方法。
【請求項２２】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項２０又は請求項２１記載のＰＥＴイメージング方法であって、前記治療計画がＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含むＰＥＴイメージング方法。
【請求項２３】
ＰＢＲがアップレギュレートされた状態の診断方法であって、請求項２０又は請求項２１記載のＰＥＴイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）と共に含んでなる診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビボイメージング、特に末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）の陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに関する。高い親和性をもってＰＢＲに結合し、投与後には脳内への良好な取込みを示し、ＰＢＲへの優れた選択的結合性を有するインドール系ＰＥＴトレーサーが提供される。本発明はまた、本発明のＰＥＴトレーサーの合成において有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物の合成方法も提供する。本発明の他の態様は、本発明の前駆体化合物の使用を含む本発明のイＰＥＴトレーサーの合成方法、前記方法を実施するためのキット、及び前記方法の自動化バージョンを実施するためのカセットを包含する。加えて本発明は、本発明のＰＥＴトレーサーを含む放射性医薬組成物並びに前記ＰＥＴトレーサーの使用方法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）は、主として末梢組織及びグリア細胞に局在することが知られているが、それの生理学的機能はまだ明確には解明されていない。ＰＢＲは、トランスロケータータンパク質（ＴＳＰＯ）ともいわれる。細胞レベル以下では、ＰＢＲはミトコンドリア外膜上に局在することが知られていて、これはミトコンドリア機能の調節及び免疫系において役割を果たす可能性を表している。さらに、ＰＢＲが細胞増殖、ステロイド生成、カルシウム流れ及び細胞呼吸に関係することも仮定されてきた。
【０００３】
異常なＰＢＲ発現は、多発性硬化症（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ ２００１ Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ；１２（１６）：３４３９−４２；Ｄｅｂｒｕｙｎｅ ｅｔ ａｌ ２００２ Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｌ Ｂｅｌｇ；１０２（３）：１２７−３５）、ラスムッセン脳炎（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ １９９９ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；５３（９）：２１９９−２０３）、大脳脈管炎（Ｇｏｅｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ ２００１ Ａｍ Ｊ Ｒｏｅｎｔｇｅｎｏｌ；１７６（４）：１０１６−８）、ヘルペス脳炎（Ｃａｇｎｉｎ ｅｔ ａｌ ２００１ Ｂｒａｉｎ；１２４（Ｐｔ １０）：２０１４−２７）及びＡＩＤＳ関連痴呆（Ｈａｍｍｏｕｄ ｅｔ ａｌ ２００５ Ｊ Ｎｅｕｒｏｖｉｒｏｌ；１１（４）：３４６−５５）をはじめとする中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性病態と関連づけられてきた。
【０００４】
ＣＮＳではまた、ＰＢＲとの連関が、パーキンソン病（Ｇｅｒｈａｒｄ ｅｔ ａｌ ２００６ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ；２１（２）：４０４−１２；Ｏｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ ２００５ Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ；５７（２）：１６１−２）、皮質基底変性（Ｇｅｒｈａｒｄ ｅｔ ａｌ ２００４Ｍｏｖ Ｄｉｓｏｒｄ；１９（１０）：１２２１−６）、進行性核上性麻痺（Ｇｅｒｈａｒｄ ｅｔ ａｌ ２００６ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ；２１（２）：４０４−１２）、多発性系萎縮症（Ｇｅｒｈａｒｄ ｅｔ ａｌ ２００３ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；６１（５）：６８６−９）、ハンチントン病（Ｐａｖｅｓｅ ｅｔ ａｌ ２００６ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；６６（１１）：１６３８−４３；Ｔａｉ ｅｔ ａｌ ２００７ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ；７２（２−３）：１４８−５１）、筋萎縮性側硬化症（Ｔｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ ２００４ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ；１５（３）：６０１−９）及びアルツハイマー病（Ｃａｇｎｉｎ ｅｔ ａｌ ２００１ Ｌａｎｃｅｔ；３５８（９２８３）：７６６；Ｙａｓｕｎｏ ｅｔ ａｌ ２００８ Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ；６４（１０）：８３５−４１）のような変性疾患において文書化されている。
【０００５】
虚血発作（Ｇｅｒｈａｒｄ ｅｔ ａｌ ２００５ Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ；２４（２）：５９１−５）、末梢神経損傷（Ｂａｎａｔｉ ｅｔ ａｌ ２００１ Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ；１２（Ｉ６）：３４３９−４２）及びてんかん（Ｓａｕｖａｇｅａｕ ２００２ Ｍｅｔａｂ Ｂｒａｉｎ Ｄｉｓ；１７（１）：３−１１；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ ２００８ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｕｒｏｌ；３８（６））をはじめとする若干のＣＮＳ虚血状態が、ＰＢＲの異常発現と関係することが示されている。ＰＢＲは外傷性脳損傷における傷害の程度を決定するためのバイオマーカーと見なされていて（Ｔｏｙａｍａ ｅｔ ａｌ ２００８ Ａｎｎ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ；２２（５）：４１７−２４）、外傷性脳損傷の動物モデルにおいてＰＢＲ発現の増加が報告されている（Ｖｅｎｎｅｔｉ ｅｔ ａｌ ２００７ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ；２０７（１）：１１８−２７）。興味深いことには、急性ストレスは脳におけるＰＢＲ発現の増加と相関しているのに対し、慢性ストレスはＰＢＲのダウンレギュレーションと相関している（Ｌｅｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ １９９９ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ；８５１（１−２）：１４１−７）。［11Ｃ］ＰＫ１１１９５を用いてＰＢＲをイメージングすれば、神経膠腫縁の輪郭描写が可能であることが報告されている（Ｊｕｎｃｋ ｅｔ ａｌ １９８９ Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ；２６（６）：７５２−８）。ＰＢＲはまた、ニューロパシー性疼痛にも関連する可能性があり、Ｔｓｕｄａ ｅｔ ａｌはニューロパシー性疼痛をもった被験者で小グリア細胞の活性化を観察している（２００５ ＴＩＮＳ ２８（２）ｐｐ １０１−７）。
【０００６】
末梢では、ＰＢＲの発現は、肺炎症（Ｂｒａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２００８ Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ；３５（８）：９０１−９）、慢性閉塞性肺疾患及び喘息（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ ２００３ Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ；２１（４）：５６７−７３）、炎症性腸疾患（Ｏｓｔｕｎｉ ｅｔ ａｌ ２０１０ Ｉｎｆｌａｍｍ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ；１６（９）：１４７６−１４８７）、慢性関節リウマチ（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌａｋｅｎ ｅｔ ａｌ ２００８ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ；５８（１１）：３３５０−５）、原発性線維筋痛（Ｆａｇｇｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ ２００４ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ；４３（１０）：１２２４−１２２５）、神経損傷（Ｄｕｒｒｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ ２００４ Ｊ Ｐｅｒｉｐｈｅｒ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ；９（１）：１５−２５）、アテローム性動脈硬化症（Ｆｕｊｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ ２００８ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；２０１（１）：１０８−１１１）、結腸癌、前立腺癌及び乳癌（Ｄｅａｎｅ ｅｔ ａｌ ２００７ Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；５（４）：３４１−９；Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ １９９５ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；５５（１２）：２６９１−５；Ｈａｎ ｅｔ ａｌ ２００３ Ｊ Ｒｅｃｅｐｔ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ Ｒｅｓ；２３（２−３）：２２５−３８）、腎炎症（Ｔａｍ ｅｔ ａｌ １９９９ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ；１４（７）：１６５８−６６；Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ １９９９ Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ；５５（４）：１３１９−２６）並びに虚血−再灌流損傷（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ ２００６ Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｓｕｒｇ；２０３（３）：３５３−６４）と連関している。
【０００７】
ＰＢＲ選択性リガンド(Ｒ)−[11Ｃ]ＰＫ１１１９５を用いる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングは、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症の包括的指標を提供する。しかし、(Ｒ)−[11Ｃ]ＰＫ１１１９５は高いタンパク質結合性及び低特異的乃至非特異的結合性を有することが知られている。さらに、その放射性標識代謝産物の役割は知られておらず、結合の定量化には複雑なモデル化が要求される。その結果として、これらの問題に悩まされないＰＢＲ用のインビボイメージング剤を開発するための努力が行われてきた。かかるインビボイメージング剤の１つは、国際公開第２０１０／１０９００７号に記載されている三環式インドール誘導体である。これはＰＢＲに対する良好な親和性、優れた脳取込み、及びＰＢＲに対する特異性を有し、注射後６０分における高率の脳内放射能が母体インビボイメージング剤を表している。国際公開第２０１０／１０９００７号には、特に好ましいインビボイメージング剤は下記の18Ｆ標識化合物であることが開示されている。
【０００８】
【化１】
2013523621.tif 000003
ＰＢＲをイメージングするためのインビボイメージング剤に関しては、なお一層改良する余地が存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
国際公開第００／４４７５１号パンフレット
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、既知の三環式インドール系ＰＥＴトレーサーの有利な性質を保持しながら、幾つかの改善された性質も有するＰＥＴトレーサーを提供する。既知の三環式ＰＥＴトレーサーに比べて、本発明のＰＥＴトレーサーは、ＰＢＲに対する改善された結合親和性、注射後６０分における高率の放射能が脳内放射能を表すわずかに改善された代謝プロファイル、及びＰＢＲ発現組織に対する顕著に改善された特異的結合性を有することが実証された。本発明はまた、本発明のＰＥＴトレーサーの製造において有用な前駆体化合物、並びに前記前駆体化合物及び前記ＰＥＴトレーサーの製造方法も提供する。本発明によれば、本発明のＰＥＴトレーサーを含む放射性医薬組成物も提供される。また、ＰＥＴトレーサー及び放射性医薬組成物の使用方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーに関する半分取法を用いて得られた放射性（上図）及びＵＶ（下図）ＨＰＬＣトレースを示している。
【図２】図２は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーに関する分析的アキラル法を用いて得られたＨＰＬＣトレースを示している。
【図３】図３は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーに関するキラルＨＰＬＣ法を用いて得られたＨＰＬＣトレースを示している。
【図４】図４は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーの他方の鏡像異性体に関する半分取法を用いて得られた放射性（上図）及びＵＶ（下図）ＨＰＬＣトレースを示している。
【図５】図５は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーの他方の鏡像異性体に関する分析的アキラル法を用いて得られたＨＰＬＣトレースを示している。
【図６】図６は実施例４に関係し、本発明のＰＥＴトレーサーの他方の鏡像異性体に関するキラルＨＰＬＣ法を用いて得られたＨＰＬＣトレースを示している。
【図７】図７は実施例８に関係し、０．１ｍｇ／ｍＬの濃度でアセトニトリルに溶解したＰＥＴトレーサー及び他方の鏡像異性体のオーバーレイクロマトグラムを示している。
【図８ａ】図８ａは実施例８に関係し、０．１ｍｇ／ｍＬの濃度でアセトニトリルに溶解したＰＥＴトレーサーのクロマトグラムを示している。
【図８ｂ】図８ｂは実施例８に関係し、インキュベーション前にヒト血漿に添加して抽出したＰＥＴトレーサー（０．１ｍｇ／ｍＬ）のクロマトグラムを示している。
【図８ｃ】図８ｃは実施例８に関係し、ヒト血漿と共にインキュベートして抽出したＰＥＴトレーサー（０．１ｍｇ／ｍＬ）のクロマトグラムを示している。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
ＰＥＴトレーサー
一態様は、本発明は下記の化学構造を有する陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）トレーサーを提供する。
【００１３】
【化２】
2013523621.tif 000004
式中、キラル中心は（Ｓ）配置を有する。
【００１４】
「ＰＥＴトレーサー」とは、陽電子放出同位体を含む化合物であって、生体系における特定の生理学的又は病態生理学的状態を標的化するように設計された化合物である。陽電子放出同位体の存在は、生体系への投与後にＰＥＴトレーサーを検出し、それによって特定の生理学的又は病態生理学的状態の検出を容易にすることを可能にする。
【００１５】
本発明のＰＥＴトレーサーは、その他方の鏡像異性体よりほぼ５倍高く、ラセミ混合物よりほぼ２倍高い親和性を有している。また、本発明のＰＥＴトレーサーはその他方の鏡像異性体に比べてインビボで一層良好に機能することも判明した。本発明のＰＥＴトレーサーはまた、前記ＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体を含むラセミ混合物に比べてインビボで一層良好に機能する。
【００１６】
本発明のＰＥＴトレーサーの他方の鏡像異性体は、下記の構造を有している。
【００１７】
【化３】
2013523621.tif 000005
式中、キラル中心は（Ｒ）配置を有する。
【００１８】
本発明で使用する「鏡像異性体」という用語は、エナンチオピュアな化合物、即ち光学活性分子の２つの鏡像形態の一方をいう。したがって、鏡像異性体はただ１つのキラリティーを有する化合物である。ここで「キラリティ」という用語は、化合物が内部対称面をもたず、重ね合わせることができない鏡像を有するという化合物の性質を意味する。化合物において最もしばしばキラリティーの原因となる特徴は、不斉炭素原子の存在である。１対の鏡像異性体の等モル混合物は、本明細書中では「ラセメート」又は「ラセミ混合物」といわれる。
【００１９】
実施例９に記載した体内分布実験では、本発明のＰＥＴトレーサーがその他方の鏡像異性体及びラセミ混合物の両方に比べて脳内のＰＢＲに富む組織（即ち、嗅球）に対する改善された結合を有することが示されている。実施例１１に記載したインビボブロッキング実験の結果は、この所見を確認している。実施例１０に記載した実験の結果は、母体化合物に原因する６０分での脳内活性が、本発明のＰＥＴトレーサーに関してはＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体のラセミ混合物に比べて改善されていることを実証している。さらに、実施例１２に記載したオートラジオグラフィー実験では、本発明のＰＥＴトレーサーが前記ＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体を含むラセミ混合物に比べて神経炎症領域に対する高い選択的結合を有することが実証された。また、下記実施例８に記載されるように、本発明のＰＥＴトレーサーは長時間にわたるヒト血漿又はラットＳ９画分中でのインキュベーション後にラセミ化しないことも見出された。
【００２０】
前駆体化合物
本発明のＰＥＴトレーサーは、適当な前駆体化合物を介して製造することができる。したがって別の態様では、本発明は、本発明のＰＥＴトレーサーを製造するための前駆体化合物であって、下記の式Ｉを有する前駆体化合物を提供する。
【００２１】
【化４】
2013523621.tif 000006
式中、Ｒ1はヒドロキシル又は脱離基である。
【００２２】
「前駆体化合物」は、好都合な化学形態の18Ｆとの化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）本発明のＰＥＴトレーサーが得られるように設計された、本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性誘導体からなる。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。
【００２３】
本発明の文脈中における「脱離基」とは、置換又は置換え放射性フッ素化反応中に安定な化学種として置き換えられる原子又は原子団をいう。好適な脱離基の例には、ハロゲンであるクロロ、ブロモ及びヨード、並びにスルホン酸エステルであるメシレート、トシレート、ノシレート及びトリフレートがある。好ましくは、前記脱離基はメシレート、トシレート及びトリフレートから選択され、最も好ましくはメシレートである。脱離基がメシレートである場合、前駆体化合物は本明細書中では「前駆体化合物１」といわれる。
【００２４】
前駆体化合物の製造
本発明の前駆体化合物は各種の異なる経路で得ることができ、これらの経路の各々は本発明の独立した態様をなしている。
【００２５】
したがって本発明は、本明細書中に記載した式Ｉの前駆体化合物を製造するための第１の方法であって、
（ｉ）本明細書中に記載した前記式Ｉの前駆体化合物と下記の式ＩＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、並びに
【００２６】
【化５】
2013523621.tif 000007
（式中、Ｒ2はＲ1に関して上記に定義した通りであり、Ｒ1及びＲ2は同一である。）
（ｉｉ）前記式Ｉの前駆体化合物を前記式ＩＩの化合物から分離する段階
を含んでなる方法を提供する。
【００２７】
前記式Ｉの前駆体化合物を前記式ＩＩの化合物から「分離する」段階は、鏡像異性体分離技法によって実施される。好適な鏡像異性体分離技法には、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）及び模擬ベッドクロマトグラフィー（ＳＢＣ）がある。鏡像異性体分離のために適用できる各種技法の詳細な評価は、“Ｃｈｉｒａｌ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”（２００７ Ｗｉｌｅｙ；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ，Ｅｄ．）中に見出すことができる。
【００２８】
【化６】
2013523621.tif 000008
上記スキームＩは、式Ｉの前駆体化合物と式ＩＩの化合物とのラセミ混合物を得るための１つの方法を例示している。スキーム１中では、ＰＧはヒドロキシル保護基を表し、ＬＧは本明細書中に定義した脱離基を表し、ＯＴｓは脱離基トシレートを表し、ＩＰＡはイソプロピルアルコールを表す。化合物ｇは、Ｒ1がヒドロキシルである本発明の前駆体化合物である。好適なヒドロキシル保護基は当技術分野で公知であり、アセチル、ベンジル、ベンゾイル、シリルエーテル、アルキルエーテル及びアルコキシメチルエーテルを含んでいる。保護基は、Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓによって“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，２００７）中に一層詳しく記載されている。本発明の文脈中では、好ましいヒドロキシル保護基はベンジルである。上記スキーム１は、Ｎａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２００５；４８：８０４５−５４）及びＤａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９９８；４１：４５１−４６７）によって記載された類似化合物を得るための方法に基づいている。
【００２９】
【化７】
2013523621.tif 000009
式Ｉの前駆体化合物と式ＩＩの化合物とのラセミ混合物を得るための別の方法が、上記スキーム２に例示されている。スキーム２中では、ＰＧは上記に定義したヒドロキシル保護基であり、ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、ＫＨＭＤＳはカリウムビス（トリメチルシリル）アミドである。化合物ｆからは、スキーム２はスキーム１中に化合物ｆから示されるように継続し、結果としてラセミ混合物が得られる。スキーム２は、国際公開第２００３／０１４０８２号に開示された方法に基づいている。この合成経路では、左側の環の底部位置にある塩素が、ただ１つの方向だけに環化を起こさせる。しかし、本発明者らが式Ｉの前駆体化合物と式ＩＩの化合物とのラセミ混合物を得るために国際公開第２００３／０１４０８２号の教示を直接適用したところ、収率は低かった。この問題は、環化段階のために使用する溶媒系を変更することで克服された。国際公開第２００３／０１４０８２号では、環化段階はトルエン中で実施されるのに対し、本発明者らはトルエンの代わりにジエチルエーテルを使用した場合に最適の収率が得られることを見出した。環化段階の生成物はジエチルエーテルに溶解するのに対し、未環化の出発化合物は溶解しない。したがって、未環化の出発化合物はＺｎＣｌ2と共に反応器の底部に留まり、環化生成物は反応器の上部のジエチルエーテル中に移動する。
【００３０】
式Ｉの前駆体化合物を得るための第２の方法は、
（ｉ）下記の式ＩＩＩの化合物を用意する段階、
【００３１】
【化８】
2013523621.tif 000010
（式中、ＰＧ1はヒドロキシル保護基である。）
（ｉｉ）前記式ＩＩＩの化合物をその対応する酸塩化物に転化させる段階、
（ｉｉｉ）段階（ｉｉ）で得られた酸塩化物をジエチルアミドと反応させて下記の式ＩＶの化合物を得る段階、
【００３２】
【化９】
2013523621.tif 000011
（式中、ＰＧ2はヒドロキシル保護基であり、ＰＧ1と同一である。）
（ｉｖ）段階（ｉｉｉ）で得られた式ＩＶの化合物を脱保護してヒドロキシル誘導体を得る段階、及び
（ｖ）本明細書中に定義した脱離基を任意に付加する段階
を含んでいる。
【００３３】
段階（ｉｖ）及び段階（ｖ）はいずれも本明細書中に記載した式Ｉの前駆体化合物を生じるが、段階（ｉｖ）では式ＩのＲ1はヒドロキシルであり、段階（ｖ）では式ＩのＲ1は脱離基である。
【００３４】
前記式ＩＩＩの化合物を酸塩化物に「転化させる」段階（ｉｉ）は、塩化オキサリル、塩化チオニル、三塩化リン及び五塩化リンから選択される試薬を用いて実施できる。塩化オキサリルが好ましい。
【００３５】
「脱保護する」段階はヒドロキシル保護基の除去をいい、当業者にとって公知の手段によって実施できる。ヒドロキシル保護基ＰＧは、スキーム１中のＰＧに関して上記に定義した通りである。使用する方法は、個々のヒドロキシル保護基に合わせて調整される。ヒドロキシル保護基を除去するための典型的な方策には、水素化分解及び酸又は塩基での処理がある。
【００３６】
脱離基を「付加する」段階は、上記スキーム１の化合物ｇを適当な反応条件下で所望脱離基のハロゲン化物誘導体と反応させることで実施できる。例えば、メシレートを付加するためには、上記スキーム１中の化合物ｇを塩基（例えば、トリエチルアミンのようなアミン塩基）の存在下でメタンスルホニルクロリドと反応させればよい。
【００３７】
式Ｉの前駆体化合物を得るための前記第２の方法の段階（ｉ）では、式ＩＩＩの化合物は様々な経路で用意することができる。例えば、
（ａ）下記の式Ｖの化合物と下記の式ＶＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、
【００３８】
【化１０】
2013523621.tif 000012
（式中、Ｒ1はキラルアルコールであり、ＰＧ3及びＰＧ4は同一であり、各々がヒドロキシル保護基である。）
（ｂ）式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物から分離する段階、及び
（ｃ）酸性条件を用いて分離された式Ｖの化合物からＲ1を除去し、それによって前記式ＩＩＩの化合物を得る段階
を含む方法が使用できる。
【００３９】
「ラセミ混合物」という用語は、本明細書中で前記に定義した通りである。「キラルアルコール」という用語は光学活性アルコールの鏡像異性体をいい、「鏡像異性体」という用語は本明細書中で前記に定義した通りである。「アルコール」という用語は、炭素原子に結合したヒドロキシル基を含む有機化合物をいう。上述の方法で使用するための好ましいキラルアルコールは、メントール及びボルネオールである。
【００４０】
キラルアルコールは、酸加水分解によって分離された式Ｖの化合物から開裂される。この段階で使用するのに適した酸には、塩酸及び硫酸、好ましくは２モルの塩酸及び１モルの硫酸がある。
【００４１】
別の態様では、前記式ＩＩＩの化合物は、
（ａ）前記式ＩＩＩの化合物と下記の式ＶＩＩＩの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、及び
【００４２】
【化１１】
2013523621.tif 000013
（式中、ＰＧ5はヒドロキシル保護基であり、式ＩＩＩに関して上記に定義したＰＧ1と同一である。）
（ｂ）段階（ａ）に記載した混合物を光学活性アミンと反応させることで、前記式ＩＩＩの化合物を前記式ＶＩＩＩの化合物から分離する段階
を含む方法を用いて用意できる。
【００４３】
前記式ＩＩＩの化合物と前記式ＶＩＩＩの化合物とのラセミ混合物は、上記スキーム２に示された方法に従って得ることができる。この場合、所望のラセミ混合物はそこに示された化合物ｐである。
【００４４】
上述の方法で使用するのに適した光学活性アミンは、Ｓ−α−メチルベンジルアミン、Ｒ−（＋）−Ｎ−（１−ナフチルメチル）−α−ベンジルアミン、Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチル−α−メチルベンジルアミン及び１−（Ｐ−トリル）エチルアミンから選択できる。上記の方法で使用するのに適した他の光学活性アミンは、例えばＡｌｄｒｉｃｈ化学会社から商業的に容易に入手できる。
【００４５】
段階（ａ）の混合物を光学活性アミンと反応させることで、前記式ＩＩＩの化合物を前記式ＩＶの化合物から分離する段階（ｂ）は、最初に２種のジアステレオマー塩を生成する。これらのジアステレオマー塩は、適当な溶媒（例えば、アセトン又は酢酸エチル）からの結晶化によって分離される。分離された塩を２Ｎ塩酸又は１Ｍ硫酸のような鉱酸で処理することで、前記式ＶＩＩＩの化合物から分離された前記式ＩＩＩの化合物を再生する。次いで、式ＩＩＩの化合物を酢酸エチル中に回収し、水性層から分離し、真空中で濃縮して式ＩＩＩの鏡像異性体を得る。
【００４６】
さらなる別法では、前記式ＩＩＩの化合物は、
（ａ）下記の式ＩＸの化合物と下記の式Ｘの化合物とのラセミ混合物を用意する段階、及び
【００４７】
【化１２】
2013523621.tif 000014
（式中、ＰＧ6及びＰＧ7は同一であり、各々がヒドロキシル保護基である。）
（ｂ）段階（ａ）に記載した混合物を立体選択性酵素と反応させることで、前記立体選択性酵素により式ＩＸの化合物をエステル加水分解して前記式ＩＩＩの化合物を得る段階
を含む方法を用いて得ることができる。
【００４８】
前記式ＩＸの化合物と前記式Ｘの化合物とのラセミ混合物は、上記スキーム２に示された方法に従って得ることができる。この場合、所望のラセミ混合物はそこに示された化合物ｏである。
【００４９】
上述の方法で使用するのに適した立体選択性酵素は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢ、ブタ肝臓エステラーゼ、ブタ膵臓リパーゼ、及び同様に作用する他の公知立体選択性酵素から選択できる。
【００５０】
ＰＥＴトレーサーの製造
さらに別の態様では、本発明は、本発明のＰＥＴトレーサーを製造するための方法であって、式Ｉの前駆体化合物を18Ｆの適当な供給源と反応させる段階を含んでなる方法を提供する。18Ｆとの反応は、式Ｉの前駆体化合物のＲ1位置に存在する脱離基の求核置換によって達成できる。前駆体化合物は、［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）の適当な供給源との反応により、一段階で標識できる。かかる［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）は、通常は核反応18Ｏ(ｐ，ｎ)18Ｆから水溶液として得られ、カチオン性対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる。好適なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒中において、18Ｆ-の溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。したがって、使用されてきた対イオンには、ルビジウム又はセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウム、及びテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を高めることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。18Ｆはまた、前駆体化合物中のＲ1位置のヒドロキシル基を18Ｆ(ＣＨ2)3−ＬＧ（式中、ＬＧは上記に定義した脱離基を表す。）でＯ−アルキル化することによっても導入できる。
【００５１】
公知の18Ｆ標識技法に関する一層詳細な議論は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”（２００３；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ：Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ，Ｅｄｓ．）の第６章に見出すことができる。
【００５２】
好ましい実施形態では、本発明のＰＥＴトレーサーを製造するための方法は自動化される。［18Ｆ］−ラジオトレーサーは、自動化放射合成装置により、自動化方法で簡便に製造できる。かかる装置には、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（いずれもＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）をはじめとする幾つかの市販例が存在している。かかる装置は通常、放射化学を実施するための（しばしば使い捨ての）「カセット」を含んでいて、これは放射合成を実施するため装置に取り付けられる。このカセットは、普通、流体通路、反応器、及び試薬バイアルを受け入れるためのポート並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを含んでいる。
【００５３】
したがって本発明は、別の態様では、本明細書中に記載したＰＥＴトレーサーの自動化合成のためのカセットであって、
（ｉ）本明細書中に記載した式Ｉの前駆体化合物を含む容器、及び
（ｉｉ）本明細書中に記載した18Ｆの適当な供給源を用いて段階（ｉ）の容器を溶出するための手段
を含んでなるカセットを提供する。
【００５４】
本発明のカセットに関しては、式Ｉの前駆体化合物及び18Ｆの適当な供給源の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、本明細書中で前記に記載した通りである。
【００５５】
カセットはさらに、（ｉｉｉ）過剰の18Ｆを除去するためのイオン交換カートリッジを含み得る。
【００５６】
放射性医薬組成物
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に記載したＰＥＴトレーサーを、哺乳動物への投与に適した生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物を提供する。
【００５７】
「生体適合性キャリヤー」は、放射性医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（例えば、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）本発明のＰＥＴトレーサーを懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００５８】
かかる放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、エタノール、アスコルビン酸、ゲンチジン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明のＰＥＴトレーサーが放射性医薬組成物として提供される場合、前記ＰＥＴトレーサーの製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口的投与のためには、放射性医薬組成物が無菌性かつ無発熱原性であることを保証するための手段を講じることも必要である。かかる手段は当業者にとって公知である。
【００５９】
ＰＥＴイメージング方法
本発明のＰＥＴトレーサーは、被験体におけるＰＢＲレセプター発現のインビボ検出のために有用である。したがって別の態様では、本発明は、被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び／又は程度を決定するためのＰＥＴイメージング方法であって、
（ｉ）本明細書中に記載したＰＥＴトレーサーを前記被験体に投与する段階、
（ｉｉ）前記ＰＥＴトレーサーを前記被験体内のＰＢＲに結合させる段階、
（ｉｉｉ）前記結合ＰＥＴトレーサー中に含まれる18Ｆから放出される信号を検出する段階、
（ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｖ）前記被験体におけるＰＢＲ発現の分布及び程度を決定する段階であって、前記発現は前記信号と直接に相関している段階
を含んでなるＰＥＴイメージング方法を提供する。
【００６０】
ＰＥＴトレーサーを「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、ＰＥＴトレーサーを被験体の身体全域に送達するため、したがって血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って前記被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）で発現されたＰＢＲに接触させるための最も効率的な方法である。静脈内投与は、被験体に対して実質的な物理的介入も実質的な健康リスクももたらさない。本発明のＰＥＴトレーサーは、好ましくは本明細書中に記載した本発明の放射性医薬組成物として投与される。投与段階は、本発明のＰＥＴイメージング方法の完全な定義のためには必要でない。したがって、本発明のＰＥＴイメージング方法は上述の段階（ｉｉ）〜（ｖ）を含むものとして理解することもできる。この場合、段階（ｉｉ）の前記被験体は、本発明のＰＥＴトレーサーを予め投与した被験体である。
【００６１】
投与段階後かつ検出段階前に、ＰＥＴトレーサーをＰＢＲに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、ＰＥＴトレーサーは哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびＰＥＴトレーサーがＰＢＲに接触すれば、特異的な相互作用が起こる結果、ＰＢＲをもった組織からのＰＥＴトレーサーのクリアランスは、ＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＰＢＲをもった組織に結合したＰＥＴトレーサーとＰＢＲをもたない組織又はＰＢＲの少ない組織に結合したＰＥＴトレーサーとの比の結果として、ＰＢＲに特異的に結合したＰＥＴトレーサーの検出が可能となる。
【００６２】
本発明の方法の「検出」段階は、ＰＥＴトレーサーに含まれる18Ｆから放出される信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器（即ち、ＰＥＴカメラ）によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。
【００６３】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、18Ｆから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＰＢＲの発現と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【００６４】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、健常被験体或いはＰＢＲの異常発現に関連する病的状態（以後は「ＰＢＲ状態」）を有することが知られ又は疑われる被験体においてＰＢＲを検査するために使用できる。好ましくは、前記方法はＰＢＲ状態を有することが知られ又は疑われる被験体のインビボイメージングに関し、したがって前記状態の診断方法において有用である。
【００６５】
インビボイメージングが役に立つかかるＰＢＲ状態の例には、多発性硬化症、ラスムッセン脳炎、大脳脈管炎、ヘルペス脳炎、ＡＩＤＳ関連痴呆、パーキンソン病、皮質基底変性、進行性核上性麻痺、多発性系萎縮症、ハンチントン病、筋萎縮性側硬化症、アルツハイマー病、虚血発作、末梢神経損傷、てんかん、外傷性脳損傷、急性ストレス、慢性ストレス、ニューロパシー性疼痛、肺炎症、慢性閉塞性肺疾患、喘息、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、原発性線維筋痛、神経損傷、アテローム性動脈硬化症、腎炎症、虚血−再灌流損傷及び癌（特に、結腸、前立腺又は乳房の癌）がある。
【００６６】
別の実施形態では、本発明のＰＥＴイメージング方法は前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＰＢＲ状態と戦うための薬物の投与を含んでいる。例えば、本発明のＰＥＴイメージング方法は、ＰＢＲ状態と戦うための薬物による治療前、治療中及び治療後に実施できる。このようにすれば、前記治療の効果を経時的にモニターすることができる。この用途のためにはＰＥＴが特に適している。ＰＥＴは優れた感度及び分解能を有する結果、病変部における比較的小さい変化でも経時的に観察でき、これは治療モニタリングのため特に有利だからである。
【００６７】
さらに別の態様では、本発明は、ＰＢＲがアップレギュレートされた状態の診断方法であって、上記に記載したＰＥＴイメージング方法を、ＰＢＲ発現の分布及び程度を特定の臨床像に帰因させる追加段階（ｖｉ）と共に含んでなる診断方法を提供する。
【００６８】
別の態様では、本発明は、上述のＰＥＴイメージング方法及び上述の診断方法で使用するための、本明細書中に記載したＰＥＴトレーサーを提供する。本発明はまた、上述のＰＥＴイメージング方法及び上述の診断方法で使用するための本明細書中に記載した放射性医薬組成物の製造で使用するための、本明細書中に記載したＰＥＴトレーサーも提供する。
【００６９】
本発明の複数の態様中に存在する任意の特徴に関する好適な態様及び好ましい態様は、本明細書中に前記特徴を記載した第１の態様で前記特徴に関して定義した通りである。
【実施例】
【００７０】
以下、一連の非限定的な実施例によって本発明を例示する。
【００７１】
実施例の簡単な説明
実施例１は、式Ｉの前駆体化合物及び式ＩＩの鏡像異性体を含むラセミ混合物の合成法を記載している。
【００７２】
実施例２は、本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性類似体をその他方の鏡像異性体と共に含む非放射性ラセミ混合物の合成法を記載している。
【００７３】
実施例３は、前駆体化合物１／活性鏡像異性体の合成法を記載している。
【００７４】
実施例４は、イメージング剤１／活性鏡像異性体の合成法を記載している。
【００７５】
実施例５は、非放射性イメージング剤１／活性鏡像異性体の合成法を記載している。
【００７６】
実施例６は、絶対立体化学を決定するために使用した方法を記載している。
【００７７】
実施例７は、非放射性ラセメート１及びその２つの鏡像異性体の結合を評価するために使用したインビトロアッセイを記載している。
【００７８】
実施例８は、本発明のＰＥＴトレーサーのキラル安定性をインビトロで調べるために使用した方法を記載している。
【００７９】
実施例９は、本発明のＰＥＴトレーサー。その他方の鏡像異性体及び二者のラセミ混合物のインビボ体内分布を評価するために使用した方法を記載している。
【００８０】
実施例１０は、本発明のＰＥＴトレーサー並びに前記ＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体を含むラセミ混合物の代謝を評価するための実験を記載している。
【００８１】
実施例１１は、本発明のＰＥＴトレーサー並びに前記ＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体を含むラセミ混合物を評価するために使用したインビボブロッキングアッセイを記載している。
【００８２】
実施例１２は、本発明のＰＥＴトレーサー並びに前記ＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体を含むラセミ混合物を評価するために使用した炎症の動物モデルを記載している。
【００８３】
実施例中で使用される略語のリスト
ＡＵＦＳ    吸光度単位フルスケール
ａｑ        水性
ＤＣＭ      ジクロロメタン
ＤＦＴ      密度機能理論
ＤＭＡＰ    ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ      ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ      １−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩
ＥＯＳ      合成終了時
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＦＮＡ      顔面神経軸索切断
ＩＰＡ      イソプロピルアルコール
ＩＲ        赤外
ＬＣ−ＭＳ  液体クロマトグラフィー質量分析法
ＭｅＣＮ    アセトニトリル
ＭｅＯＨ    メタノール
ＮＭＲ      核磁気共鳴
ＯＢｎ      ベンジルオキシ
ＯＭｓ      メシレート
ＯＴｃ      トシレート
ＰＥＴ      陽電子放出断層撮影
ＱＭＡ      第四級メチルアンモニウム
ＲＴ        室温
ＳＦＣ      超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＰＥ      固相抽出
ＴＬＣ      薄層クロマトグラフィー
Ｔｏｌ      トルエン
ＶＣＤ      振動円偏光二色性
【実施例１】
【００８４】
実施例１：本発明のメシレート前駆体化合物（「前駆体化合物１」）及びその他方の鏡像異性体のラセミ混合物の合成
実施例１(ａ)：ベンジルオキシアセチルクロリド（１）
ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のベンジルオキシ酢酸（１０．０ｇ、６０．０ｍｍｏｌ、８．６ｍＬ）に、塩化オキサリル（９．１ｇ、７２．０ｍｍｏｌ、６．０ｍＬ）及びＤＭＦ（３０．０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、３２．０μＬ）を添加し、ＲＴで３時間撹拌した。最初、反応の進行に伴って急速なガス発生が起こったが、反応が完了すると発生は止まった。ジクロロメタン溶液を真空中で濃縮してガムを得た。ガムを追加の塩化オキサリル（４．５ｇ、３５．７ｍｍｏｌ、３．０ｍＬ）、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び１滴のＤＭＦで処理した。急速なガス発生が起こり、反応物をさらに２時間撹拌した。次いで、反応物を真空中で濃縮することで、１１．０ｇ（定量的）のベンジルオキシアセチルクロリド（１）をガムとして得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δC ７３．６，７４．８，１２８．１，１２８．４，１２８．６，１３０．０及び１７１．９によって確認された。
【００８５】
実施例１(ｂ)：２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アセトアミド（２）
０℃のジクロロメタン（１００ｍＬ）中のベンジルオキシアセチルクロリド（１）（１１．０ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）及び２−クロロ−５−メトキシアニリン塩酸塩（１１．７ｇ、６０．２ｍｍｏｌ）を撹拌し、トリエチルアミン（１３．０ｇ、１２６．０ｍｍｏｌ、１８．０ｍＬ）を１５分かけてゆっくりと添加した。撹拌反応物を１８時間かけてＲＴまで放温した。トリエチルアミン塩酸塩の多量の沈殿が生じた。ジクロロメタン溶液を１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、１８．９ｇ（定量的）の２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アセトアミド（２）をガムとして得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC ５５．６，６９．６，７３．６，１０６．２，１１１．１，１１４．１，１２７．７，１２８．３，１２８．６，１２９．２，１３４．６，１３６．５，１５８．９及び１６７．７によって確認された。
【００８６】
実施例１(ｃ)：（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミン（３）
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の２−ベンジルオキシ−Ｎ−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アセトアミド（２）（１８．９ｇ、６２．０ｍｍｏｌ）を撹拌し、水素化リチウムアルミニウム（４．９ｇ、１３０．０ｍｍｏｌ）を１５分かけてゆっくりと添加した。最初の水素化リチウムアルミニウムを添加すると急速な水素ガス発生が起こった。次いで、反応物を４時間加熱還流し、週末中ＲＴで放置した。次いで、撹拌溶液に水（５０ｍＬ）を滴下することで反応物を脱活した。激しい水素発生が起こって反応混合物を還流させた。次いで、反応物を真空中で濃縮してスラリーにした。水（２００ｍＬ）及び酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加し、混合物を激しく振盪した。次いで、反応物をセライトで濾過して沈殿した水酸化アルミニウムを除去し、酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、１８．４ｇ（定量的）の（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミン（３）をガムとして得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δC ４３．３，５５．３，６８．２，７３．０，９８．１，１０１．８，１１１．６，１２７．６，１２７．７，１２８．４，１２９．３，１３７．９，１４４．８及び１５９．５によって確認された。
【００８７】
実施例１(ｄ)：３−ブロモ−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（４）
２−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチル（３０ｇ、１７６ｍｍｏｌ、２８ｍＬ）をジエチルエーテル（３０ｍＬ）に溶解し、窒素下で０℃の冷却した。臭素（２８ｇ、１７６ｍｍｏｌ、９．０ｍＬ）を１５分かけて滴下し、反応混合物を９０分かけてＲＴまで放温した。混合物を氷冷飽和炭酸カリウム水溶液（２５０ｍＬ）中にゆっくりと注ぎ込み、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮し、真空ライン上で１８時間乾燥することで、４１．４ｇ（９４％）の３−ブロモ−２−ヒドロキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（４）を黄色油状物として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １４．１，１７．７，２１．８，３２．０，６０．０，６０．８，９９．７，１６６．３及び１７２．８によって確認された。
【００８８】
実施例１(ｅ)：３−［（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（５）
（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミン（３）（１０．０ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中において窒素下−４０℃で撹拌し、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．５Ｍトルエン溶液の１４３．０ｍＬ、７２．０ｍｍｏｌ）を３０分かけて添加した。次いで、乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３−ブロモ−２−ヒドロキシシクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（４）（８．５ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を添加し、１．５時間かけてＲＴまで放温した。酢酸（１０．０ｇ、１６６ｍｍｏｌ、１０．０ｍＬ）を添加し、真空中で濃縮してＴＨＦを除去した。酢酸エチル（２００ｍＬ）及び１０％炭酸カリウム水溶液（１００ｍＬ）を添加し、混合物を激しく振盪した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、１６．５ｇ（定量的）の３−［（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（５）をガムとして得、これを次の段階で粗のまま使用した。粗反応混合物のＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ １５０×４．６ｍｍ，２０分で５０〜９５％メタノール／水）、１８．９分（３８％）、１９．２分（２５％）、２３．１分（２８％）。
【００８９】
反応物の一成分を単離した。13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δC １４．３，２０．６，２１．８，２６．４，３８．６，４３．０，５５．８，６０．５，６８．７，７３．３，９３，４，１０６．３，１０８．２，１１９．３，１２１．５，１２７．５，１２７．６，１２８．３，１３５．７，１３７．０，１３７．９，１５５．７及び１７５．０。
【００９０】
実施例１(ｆ)：９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６）
乾燥ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）中の３−［（２−ベンジルオキシ−エチル）−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（５）（８．０ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）に、塩化（７．１ｇ、５２．０ｍｍｏｌ）を窒素下で添加し、５．５時間加熱還流した。反応物を還流させると、反応物中に濃密な褐色油状物が生じた。次いで、反応物を冷却し、上澄みのジエチルエーテルをデカントで除去し、酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加し、２Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）及び１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。ジエチルエーテル層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮して油状物（２．０ｇ）を得た。粗物質をペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１０〜４０％（Ｂ）、３４０ｇ、３２ＣＶ、１５０ｍＬ／分）によって精製することで、１．８ｇの９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６）を得た。濃密な褐色層を酢酸エチル（１００ｍＬ）及び２Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）で処理した。酢酸エチル溶液を分離し、１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮して油状物（５．２ｇ）を得た。ジエチルエーテル（１００ｍＬ）及び無水塩化亜鉛（７．０ｇ）を添加した。混合物をさらに５日間加熱還流した。エーテル層を暗色のガムからデカントで除去し、２Ｎ ＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム（２．８ｇ）を得た。このガムをペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５〜３５％（Ｂ）、３４０ｇ、１５０ｍＬ／分）によって精製することで、２．１ｇの９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６）を得た。得られた全物質は、４．１ｇ（５０％）の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６）であった。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １４．４，２０．５，２２．３，２７．５，４０．２，４３．９，５５．０，６０．２，７０．７，７３．３，１００．２，１０７．５，１０８．４，１２０．１，１２２．８，１２７．４，１２７．５，１２８．２，１３２．０，１３７．４，１３８．１，１５２．６及び１７５．８によって確認された。
【００９１】
実施例１(ｇ)：９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（７）
エタノール（５０ｍＬ）中の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（６）（２．０ｇ、４．１ｍｍｏｌ）に、水酸化ナトリウム（１．１ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）及び水（５ｍＬ）を添加し、８０℃で１８時間加熱した。次いで、エタノールを真空中での蒸発によって除去し、残留物をジエチルエーテル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間に分配した。ジエチルエーテル層を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム（７１．０ｍｇ）を得た。水性層を２Ｎ ＨＣｌ（２０ｍＬ）でｐＨ１に酸性化し、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。ジクロロメタン層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、１．６ｇ（８７％）の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（７）を泡状物として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC ２０．２，２２．２，２７．１，３９．７，４４．０，５５．１，７０．７，７３．３，１００．６，１０６．３，１０８．９，１２３．０，１２７．４，１２７．５，１２８．３，１３２．０，１３８．０及び１５２．０によって確認された。
【００９２】
実施例１(ｈ)：９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリド（８）
９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（７）（１．５ｇ、３．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、塩化オキサリル（７００ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ、４７０μＬ）及びＤＭＦ（１滴）を添加し、反応物を２０℃で２時間撹拌した。反応の進行に伴って、約３０分間の穏やかなガス発生が起こった。次いで、反応物を真空中で濃縮することで、９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリド（８）をガムとして得、これを精製せずに次の段階で使用した。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC ２０．８，２２．１，２６．４，４４．２，５１．８，５５．１，７０．７，７３．３，１００．７，１０６．０，１０８．６，１１９．５，１２３．４，１２７．３，１２７．７，１２８．３，１３１．９，１３８．０，１３８．２，１５２．０及び１７６．３によって確認された。
【００９３】
実施例１(ｉ)：９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド（９）
次いで、９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリド（８）（１．６ｇ、３．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、撹拌し、ジエチルアミン（８１０ｍｇ、１１．０ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）を滴下した。反応物を１８時間かけて室温まで放温した。次いで、反応混合物を１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガムを得た。粗物質をジエチルエーテルから結晶化することで、１．２ｇ（７１％）の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド（９）を白色結晶質固体として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC １３．０，１４．５，１９．８，２２．２，２７．９，３６．４，４０．４，４１．９，４３．８，５５．０，７０．８，７３．３，１００．２，１０８．５，１０８．６，１１９．９，１２２．５，１２７．４，１２７．５，１２８．３，１３１．５，１３７．８，１３８．２，１５２．４及び１７４．５によって確認された。
【００９４】
実施例１(ｊ)：９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１０）
メタノール（１００ｍｌ）中の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−８−クロロ−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド（９）（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を、水素ガス雰囲気下において、木炭上１０％パラジウム（１．０ｇ）及びトリエチルアミン（２．９ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ、４μＬ）と共に５５℃で１８時間振盪した。次いで、反応物をセライトパッドで濾過し、濾液を真空中で濃縮してガム（９０８ｍｇ）を得た。次いで、ガムをジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解し、５％炭酸カリウム水溶液（５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ジクロロメタン溶液を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガムを得た。次いで、ガムをジエチルエーテル（５０ｍｌ）から結晶化し、結晶を濾過によって回収することで、５２３ｍｇ（５７％）の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１０）を得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC １３．１，１４．６，２０．１，２２．０，２８．１，３６．４，４０．５，４２．０，４３．０，５４．７，６８．８，７３．３，９９．４，１０２．４，１０７．８，１１６．４，１２１．２，１２７．６，１２７．６，１２８．３，１３５．６，１３７．８，１３８．０，１５３．６及び１７５．０によって確認された。
【００９５】
実施例１(ｋ)：９−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１１）
メタノール（５０ｍｌ）中の９−（２−ベンジルオキシ−エチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１０）（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を、木炭上１０％パラジウム（３００ｍｇ）及び過剰の水素ガスと共に５５℃で１８時間振盪した。次いで、反応物をセライトパッドで濾過し、濾液を真空中で濃縮することで、５７８ｍｇ（１００％）の９−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１１）を泡状物として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC １３．０，１４．４，２０．０，２２．０，２８．０，３６．４，４０．６，４２．０，５４．７，６０．６，９９．２，１０２．６，１０７．０，１１６．７，１２１．１，１３６．１，１３７．５，１３８．０，１５３．５及び１７５．７によって確認された。
【００９６】
実施例１(ｌ)：メタンスルホン酸２−（４−ジエチルカルバミル−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−カルバゾール−９−イル）エチルエステル
ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の９−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミン（１１）（４７８ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（４７７ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ、３２４μＬ）及びトリエチルアミン（４２０ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ、５７８μＬ）を添加し、一晩かけてＲＴまで放温した。反応物を５％炭酸カリウム水溶液で洗浄した。層を分離した。合わせた有機物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮してガム（６９６ｍｇ）を得た。粗物質をペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（７５〜１００％Ｂ、２２ＣＶ、１２０ｇ、８５ｍＬ／分）によって精製することで、メタンスルホン酸２−（４−ジエチルカルバミル−５−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−カルバゾール−９−イル）エチルエステルをガムとして得、これをジエチルエーテルから結晶化して３４６ｍｇ（５９％）の無色固体を得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC １３．１，１４．５，２０．０，２１．９，２８．０，３６．３，３６．７，４０．３，４１．８，４１．９，５４．７，６８．１，１００．０，１０２．０，１０９．０，１１６．４，１２２．０，１３５．１，１３７．３，１５３．８及び１７４．６によって確認された。
【実施例２】
【００９７】
実施例２：本発明の非放射性ＰＥＴトレーサーとその他方の鏡像異性体とのラセミ混合物の合成
実施例２(ａ)：フルオロエチルトシレート（１２）
２−フルオロエタノール（６４０ｍｇ、１０ｍｍｏｌ、０．６ｍＬ）を窒素下でピリジン（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃で撹拌し、温度を５℃未満に保ちながら、塩化トシル（４．２ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）を３０分かけて少しずつ溶液に添加した。反応物を０℃で３時間撹拌した。氷をゆっくりと添加し、続いて水（２０ｍＬ）を添加した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、水で洗浄した。水性層が酸性になるまで１Ｎ ＨＣｌ溶液で洗浄することで、過剰のピリジンを除去した。１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液で洗浄することで、過剰の塩化とシルを除去した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、２．１ｇ（９８％）のフルオロエチルトシレート（１２）を無色油状物として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC ２１．６（ＣＣＨ3），６８．５（ｄ，ＪCF＝１７３Ｈｚ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ），８０．６（ｄ，ＪCF＝１７３Ｈｚ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｆ），１２８．０，１２９．９，１３２．６及び１４５．１によって確認された。
【００９８】
実施例２(ｂ)：２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）（２−フルオロエチル）アミン（１３）
２−クロロ−５−メトキシアニリン塩酸塩（５．０ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（２．３ｇ、油中６０％、５７．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を窒素下においてＲＴで３０分間撹拌した。ＤＭＦ（５ｍＬ）中のフルオロエチルトシレート（１２）（６．７ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応物をＲＴで２時間撹拌した。次いで、反応物を１００℃で１８時間加熱した。反応物を放冷し、溶媒を減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を回収し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮して褐色油状物を得、これをペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５〜３０％（Ｂ）、３３０ｇ、１８．１ＣＶ、１２０ｍＬ／分）によって精製することで、１．３ｇ（２５％）の２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）（２−フルオロエチル）アミン（１３）を黄色油状物として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）：δC ４３．８（ｄ，ＪCF＝２３Ｈｚ），５５．３，８２．０（ｄ，ＪCF＝１６５Ｈｚ），９８．１，１０２．２，１１１．６，１２９．５，１４４．１及び１５９．５によって確認された。
【００９９】
実施例２(ｃ)：３−［（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−（２−フルオロエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシル−１−エンカルボン酸エチルエステル（１４）
ＴＨＦ（１７０ｍＬ）中における２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）（２−フルオロエチル）アミン（１３）（６．１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）の溶液を−４０℃に冷却した。カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．５Ｍトルエン溶液の１２６．０ｍＬ、６３．０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応物を−４０℃で３０分間撹拌した。ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の３−ブロモ−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（４、実施例１(ｄ)に従って製造）（７．４ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を−４０℃で滴下した。冷却浴を取り除き、反応物をＲＴで４時間撹拌した。反応物をブライン（３００ｍＬ）で脱活し、酢酸エチル（２×４００ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、１２．０ｇ（定量的）の３−［（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−（２−フルオロエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシル−１−エンカルボン酸エチルエステル（１４）を褐色油状物として得、これを次の段階で粗のまま使用した。異性体の混合物としての構造は、1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δΗ １．０８（０．８Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＯ2ＣＨ2ＣＨ3），１．２２−１．３３（２．２Ｈ，ｍ，ＣＯ2ＣＨ2ＣＨ3），１．４０−２．６０（７Ｈ，ｍ，４−，５−及び６−ＣＨ2，ＣＨＮ），３．２０−４．５０（１０Ｈ，ｍ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，ＯＣＨ3，ＣＨＣＯ2ＣＨ2ＣＨ3），６．５０−６．７０（ｌＨ，ｍ，ＣＨＣ（ＯＣＨ3）ＣＨＣＨ），６．９５（０．５Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３及び６Ｈｚ，ＣＨＣ（ＯＣＨ3）ＣＨＣＨ），７．０８（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，ＣＨＣ（ＯＣＨ3）ＣＨＣＨ）及び７．２０−７．３０（ｌＨ，ｍ，ＣＨＣ（ＯＣＨ3）ＣＨＣＨ）によって確認された。
【０１００】
実施例２(ｄ)：８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１５）
８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１５）の合成は、最初は国際公開第２００３／０１４０８２号に記載された条件を用いて試みた。乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中における２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）（２−フルオロエチル）アミン（１３、実施例２(ｂ)に従って製造）（６００ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で冷却し、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．５Ｍトルエン溶液の１６ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）で処理した。３０分後、ＴＨＦ（４ｍＬ）中の３−ブロモ−２−ヒドロキシ−シクロヘキシ−１−エンカルボン酸エチルエステル（４、実施例１(ｄ)に従って製造）（１．０４ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間かけてＲＴまで放温した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液で脱活し、エーテルで２回抽出した。抽出液を水及びブラインで洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮した。粗物質をペトロール（Ａ）及び酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２．５〜５０％Ｂ、５０ｇ、２５ＣＶ、４０ｍＬ／分）によって精製した。主スポットは３種の成分の混合物であった。この混合物を乾燥塩化亜鉛（１．７ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）と共にトルエン（２０ｍＬ）中で一晩還流させた。反応物を真空中で濃縮し、残留物を１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍＬ）と酢酸エチル（２５ｍＬ）との間に分配し、次いで酢酸エチルでもう１回抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥し、真空中で濃縮して褐色油状物を得た。1Ｈ ＮＭＲは、それが数種の成分の混合物であることを示した。一連の溶媒中におけるシリカ上でのＴＬＣでは、この混合物を別々のスポットに分離することができなかった。混合物の1Ｈ ＮＭＲを基準試料と比較したところ、混合物は推定２５％の８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１５）を含むことがわかった。
【０１０１】
次いで、変法を実施した。３−［（２−クロロ−５−メトキシ−フェニル）−（２−フルオロエチル）アミノ］−２−ヒドロキシ−シクロヘキシル−１−エンカルボン酸エチルエステル（１４）（１２．２ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（２５０ｍＬ）に溶解し、塩化亜鉛（１６．４ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１６時間加熱還流した。酢酸エチル（５００ｍＬ）を添加してすべてを溶解し、２Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）及び１０％炭酸カリウム（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。粗物質をペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５〜２０％Ｂ、１２ＣＶ、１０ｇ、１００ｍＬ／分）によって精製することで、５．３ｇ（２段階にわたって５０％）の８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１５）を黄色固体として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １４．４，２０．４，２２．２，２７．４，４０．１，４４．２（ｄ，ＪCF＝２３Ｈｚ），５５．１，６０．２，８３．９（ｄ，ＪCF＝１７３Ｈｚ），１００．６，１０７．９，１０８．２，１１９．８，１２３．１，１３１．９，１３７．２，１５２．７及び１７５．７によって確認された。
【０１０２】
実施例２(ｅ)：９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１６）
８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１５）（５．３ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１８０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１．８ｇ、１８．０ｍｍｏｌ、２．５ｍＬ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（メタノール（２０ｍＬ）中２ｇ）を添加した。混合物をＰａｒｒ水素添加装置上に置き、水素雰囲気下で１８時間振盪した。反応物をセライトパッドで濾過し、メタノールで洗浄し、溶媒を真空中で除去した。残留物を酢酸エチル（３００ｍＬ）に溶解し、１０％炭酸カリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、４．２ｇ（８８％）の９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１６）を淡褐色固体として得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １４．３，２０．６，２１．８，２７．６，４０．３，４３．３（ｄ，ＪCF=２３Ｈｚ），５４．９，６０．１，８２．０（ｄ，ＪCF＝１６５Ｈｚ），９９．８，１０２．１，１０７．３，１１７．２，１２１．８，１３４．９，１３７．６，１５３．８及び１７６．０によって確認された。
【０１０３】
ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ １５０×４．６ｍｍ，２０分で５０〜９５％メタノール／水）、１３．６分（９４％）。
【０１０４】
実施例２(ｆ)：９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（１７）
８−クロロ−９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１６）（３８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）に溶解した。水酸化ナトリウム（５８０ｍｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を６ｍＬの水に溶解した溶液を添加した。反応混合物を一晩加熱還流した。溶媒を真空中で除去し、粗混合物を水で希釈し、酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌで酸性化し、ジクロロメタンで洗浄した。有機物を合わせ、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮することで、３４７ｍｇ（定量的）の９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（１７）をオフホワイトの固体として得、これを次の段階で粗のまま使用した。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌｇ）：δC ２０．４，２１．９，２７．２，３９．９，４３．３（ｄ，ＪCF＝２３Ｈｚ），５５．１，８１．９（ｄ，ＪCF＝１７３Ｈｚ），１００．３，１０２．８，１０６．２，１１７．１，１２２．２，１３５．６，１３７．８，１５３．３及び１８０．８によって確認された。
【０１０５】
実施例２(ｇ)：９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリド（１８）
乾燥ジクロロメタン（２ｍＬ）中における９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸（１７）（３４７ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下で撹拌した。塩化オキサリル（４５３ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ、３００μＬ）を添加し、続いて１滴のＤＭＦを添加した。反応混合物を窒素下においてＲＴで２時間撹拌し、次いで真空中で蒸発させることで、３７１ｍｇ（定量的）の９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリドをガムとして得、これを精製せずに次の段階で使用した。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC ２０．２，２１．７，２６．４，４３．３（ｄ，ＪCF＝２３Ｈｚ），５４．９，８０．５，８３．１，１００．２，１０２．２，１０５．８，１１６．７，１２２．４，１３５．５，１３７．４，１５３．５及び１７６．６によって確認された。
【０１０６】
実施例２(ｈ)：９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミド
９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボニルクロリド（１８）（３７１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、ジエチルアミン（１７７ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、２５０μＬ）を添加し、反応物をＲＴで一晩撹拌した。反応物を１０％炭酸カリウム水溶液（２ｍＬ）で脱活した。ジクロロメタン層を相分離によって回収し、次いで真空中で濃縮した。粗物質をペトロール（Ａ）：酢酸エチル（Ｂ）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（５０〜１００％（Ｂ）、５０ｇ、３５．２ＣＶ、４０ｍＬ／分）によって精製することで、淡黄色固体を得た。次に、この固体を最小量のジエチルエーテルでトリチュレートすることで、２４０ｍｇ（５８％）の９−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−４−カルボン酸ジエチルアミドを得た。構造は、13Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δC １３．０，１４．６，１９．９，２１．９，２８．０，３６．３，４０．５，４１．９，４３．１（ｄ，ＪCF＝２３Ｈｚ），５４．７，８２．０（ｄ，ＪCF＝１７３Ｈｚ），９９．７，１０２．１，１０８．３，１１７．０，１２１．５，１３５．３，１３７．４，１５３．３及び１７４．８によって確認された。
【実施例３】
【０１０７】
実施例３：前駆体化合物１及びその他方の鏡像異性体の合成
【０１０８】
【化１３】
2013523621.tif 000015
６分の実行時間にわたり４０℃の３０％ＩＰＡを１３ｍｌ／分で使用するＫｒｏｍａｓｉｌ Ａｍｙｃｏａｔ，２５０×１０ｍｍ，５μｍ，１００Åカラム上でのキラル超臨界流体（ＣＯ2）クロマトグラフィーを用いて、（実施例１に記載したようにして得られた）前駆体化合物１とその他方の鏡像異性体とのラセミ混合物をその鏡像異性体に分離した。６０ｍｇのラセメートを１，４−ジオキサン（２ｍｌ）に溶解し、各回の溶出に関して一度に最大２００μｌを注入した。２種の鏡像異性体間の基線分離が達成された。Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＩＣ上での分析ＨＰＬＣ（２５０×４．６ｍｍ、５μＭ、イソクラティック溶出、０．５ｍｌ／分及び室温の８０：２０−ＭｅＯＨ：ＩＰＡ）によって２種の分離された鏡像異性体の鏡像異性体純度を測定したところ、各々の鏡像異性体は９９．５％の鏡像異性体純度を有することがわかった。
【実施例４】
【０１０９】
実施例４：本発明のＰＥＴトレーサー及びその他方の鏡像異性体の合成
実施例３に従って得られた前駆体化合物１及びその鏡像異性体を、ＦＡＳＴＬａｂ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カセットを用いて18Ｆで標識した。
【０１１０】
ＧＥ ＰＥＴｒａｃｅサイクロトロン上においてＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社から供給源される［18Ｆ］−フッ化物イオンをＱＭＡカートリッジ上に捕捉した。Ｋ２２２（８ｍｇ）、ＫＨＣＯ3（２００μｌ、０．１Ｍ水溶液）及びＭｅＣＮ（１ｍｌ）を溶離剤バイアル１に添加した。溶離剤バイアル１からの溶離剤０．６ｍｌを用いてＱＭＡカートリッジを溶出した。18Ｆ溶出液の乾燥を１００℃で２０分間実施し、続いて８６℃に冷却してから前駆体を添加した。
【０１１１】
３ｍｇの各前駆体化合物を１．６ｍｌのＣＨ3ＣＮに溶解した。この溶液１ｍｌを反応器に添加した。反応器を１００℃で１５分間加熱した。次いで、反応器を２ｍｌの水ですすいだ。
【０１１２】
半分取ＨＰＬＣを下記のようにして実施した。
【０１１３】
【表１】
2013523621.tif 000016
分析用アキラルＨＰＬＣを下記のようにして実施した。
【０１１４】
【表２】
2013523621.tif 000017
分析用キラルＨＰＬＣを下記のようにして実施した。
【０１１５】
【表３】
2013523621.tif 000018
ＥＯＳ収率は、本発明のＰＥＴトレーサーに関しては３２％であり、その鏡像異性体に関しては１９％であった。
【実施例５】
【０１１６】
実施例５：本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性類似体及びその他方の鏡像異性体の合成
【０１１７】
【化１４】
2013523621.tif 000019
６分の実行時間にわたり４０℃の２０％ＩＰＡを１４ｍｌ／分で使用するＫｒｏｍａｓｉｌ Ａｍｙｃｏａｔ，２５０×１０ｍｍ，５μｍ，１００Åカラム上でのキラル超臨界流体（ＣＯ2）クロマトグラフィー（ＳＦＣ）を用いて、（実施例２に記載したようにして得られた）本発明の非放射性ＰＥＴトレーサーとその他方の鏡像異性体とのラセミ混合物をその鏡像異性体に分離した。１００ｍｇのラセミ混合物を１，４−ジオキサン（２．５ｍｌ）に溶解し、各回の溶出に関して一度に最大２００μｌを注入した。混合画分が捕集されないことを保証するため、画分を時間でカットした。Ｃｈｉｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＩＣ上での分析ＨＰＬＣ（２５０×４．６ｍｍ、５μＭ、イソクラティック溶出、０．５ｍｌ／分及び室温の８０：２０−ＭｅＯＨ：ＩＰＡ）によって２種の分離された鏡像異性体の鏡像異性体純度を測定したところ、各々の鏡像異性体は９９．５％の鏡像異性体純度を有することがわかった。
【実施例６】
【０１１８】
実施例６：振動円偏光二色性による絶対立体化学の決定
本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性類似体及びその鏡像異性体、並びに前駆体化合物１及びその鏡像異性体を試験した。各試験化合物をＣＤＣｌ3に溶解し（ＰＥＴトレーサー及びその鏡像異性体については５ｍｇ／０．１２ｍＬ、前駆体化合物１及びその鏡像異性体については５ｍｇ／０．１５ｍＬ）、ＢａＦ2窓を有する光路長１００μｍのセル内に入れた。ＤｕａｌＰＥＭを備えたＣｈｉｒａｌＩＲＴＭ ＶＣＤ分光計（ＢｉｏＴｏｏｌｓ Ｉｎｃ．）上において、４ｃｍ-1の分解能、各試料について１１時間の収集、及び１４００ｃｍ-1で最適化した計器を用いてＩＲ及びＶＣＤスペクトルを記録した。１５０回のスキャンに関して溶媒のＩＲを収集した。溶媒を差し引いたＩＲスペクトル及び鏡像異性体を差し引いたＶＣＤスペクトルを収集した。５９０ｎｍ及び２５℃でＪａｓｃｏ ＤＩＰ−３７０ Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒを用いて、各試験化合物の旋光度（ＯＲ）を測定した。
【０１１９】
【表４】
2013523621.tif 000020
Ｈｙｐｅｒｃｈｅｍ（Ｈｙｐｅｒｃｕｂｅ，Ｉｎｃ．、ゲインズビル、米国フロリダ州）を用いて、各々の場合における（Ｒ）配置を構築した。分子力学レベルでの全体構造に関し、Ｈｙｐｅｒｃｈｅｍを用いてコンフォメーションサーチを実施した。Ｇａｕｓｓｉａｎ ０９（Ｇａｕｓｓｉａｎ Ｉｎｃ．、ウォーリングフォード、米国コネティカット州）を用いて、幾何学的形状、振動数並びにＩＲ及びＶＣＤ強度計算をＤＦＴレベル（Ｂ３ＬＹＰ汎関数／６−３１Ｇ（ｄ）基底系）で行った。実験との比較のため、計算された振動数は０．９７でスケーリングし、ＩＲおよびＶＣＤ強度は６ｃｍ-1の半幅値をもつローレンツ型バンドに変換した。
【０１２０】
ＰＥＴトレーサー及びその鏡像異性体に関しては、３６のコンフォーマーのガウス計算の結果、最低エネルギーコンフォーマーから１ｋｃａｌ／ｍｏｌ以内のエネルギーを有する１０のコンフォーマーが得られた。（Ｒ）配置に関して計算された４つの最低エネルギーコンフォーマーの最適化幾何学的形状を計算し、観測されたＶＣＤ及びＩＲスペクトルを１０の最低エネルギー計算コンフォーマーのものと比較した。観測されたスペクトル及び１０の最低エネルギーコンフォーマーの計算スペクトルのボルツマン和に関するＶＣＤパターンの総合的一致に基づけば、本発明のＰＥＴトレーサーの絶対配置は（Ｓ）と決定され、その鏡像異性体は（Ｒ）と決定される。かかる決定をＣｏｍｐａｒｅＶＯＡプログラム（Ｂｉｏｔｏｏｌｓ社）によって評価したところ、様々なキラル構造に関する８９の以前の正しい決定例を含む現行のデータベースに基づけば、決定の信頼レベルは１００％である。
【０１２１】
前駆体化合物１及びその鏡像異性体に関しては、３６のコンフォーマーのガウス計算の結果、最低エネルギーコンフォーマーから１ｋｃａｌ／ｍｏｌ以内のエネルギーを有する９のコンフォーマーが得られた。観測されたスペクトル及び９の最低エネルギーコンフォーマーの計算スペクトルのボルツマン和に関するＶＣＤパターンの総合的一致に基づけば、前駆体化合物１の絶対配置は（Ｓ）と決定され、その鏡像異性体は（Ｒ）と決定される。かかる決定をＣｏｍｐａｒｅＶＯＡプログラムによって評価したところ、様々なキラル構造に関する８９の以前の正しい決定例を含む現行のデータベースに基づけば、決定の信頼レベルは９６％である。この決定は、本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性類似体の立体配置の決定と一致している。
【実施例７】
【０１２２】
実施例７：インビトロ効力アッセイ
Ｌｅ Ｆｕｒ ｅｔ ａｌ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９８３；ＵＳＡ ３３：４４９−５７）の方法を改変した方法を用いて、ＰＢＲに対する親和性のスクリーニングを行った。本発明のＰＥＴトレーサーの非放射性類似体及び関連するラセメートを試験した。（１％ＤＭＳＯを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，１０ｍＭ ＭｇＣｌ2に溶解した）各試験化合物を、Ｗｉｓｔａｒラット心臓ＰＢＲ又はヒトＰＢＲとの結合に関して０．３ｎＭ［3Ｈ］ＰＫ−１１１９５と競合させた。反応は５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，１０ｍＭ ＭｇＣｌ2中において２５℃で１５分間実施した。各試験化合物のスクリーニングは、推定Ｋiの周辺の３００倍の濃度範囲にわたる６種の濃度で行った。下記のデータが得られた。
【０１２３】
【表５】
2013523621.tif 000021
【実施例８】
【０１２４】
実施例８：インビトロキラル安定性アッセイ
実施例２に従って得られた本発明の非放射性ＰＥＴトレーサーをヒト血漿又はラット肝臓Ｓ９画分中で最大４時間インキュベートした（３７℃）。鏡像異性体をタンパク質の沈殿によって生物学的材料から抽出した。固体沈殿物を液相から分離し、液相を蒸発乾固した。乾燥残留物をアセトニトリルに溶解した。
【０１２５】
この試験では、２台のポンプ（マイクロポンプＬＰＧ−３０００及びＵｌｔｉｍａｔｅ ３０００ポンプ）、ＵＶ／可視検出器、オートサンプラー及び２つの切換え弁からなるＤｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００ ＨＰＬＣシステムを適用した。一方の切換え弁は、２台のポンプとオートサンプラーとを連結していた。このような構成は、いずれかのポンプを用いてカラムに注入することを可能にした。注入のために使用するポンプはＳＰＥカラムのみに連結した。注入及び溶出後、ＳＰＥカラムは注入ポンプを用いて洗浄した。システムは、キラル分析の信号中に新しい注入のための準備を行った。
【０１２６】
他方の切換え弁は、分析カラムとＳＰＥカラムとを連結していた。物質をＳＰＥカラム上に保持した後、弁を切り換え、分析ポンプが物質をＳＰＥカラムから分析キラルカラム中に溶出した。溶出の流れ方向を保持の流れ方向に逆転させた。分析ポンプを分析システムのみに連結し、溶出の開始まで検体を待った。ＳＰＥカラム上での溶出の実行時間及びこのカラムからの溶出時間はいずれも、二段階プロセスを最適化するように変化させた。
【０１２７】
分析カラム：同じ材料のプレカラム０．４×１ｃｍを有するＣｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ ０．４６×２５ｃｍ。
【０１２８】
ＳＰＥカラム：ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ ＡＤＳ ＲＰ−４ ２５×４ｍｍ（ＲＡＭカラム）、２５μｍ粒子。ＭＷカットオフ：１５ｋＤａ（Ｍｅｒｃｋ社）。
【０１２９】
移動相：Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム，ｐＨ７、Ｂ：１：１ ＭｅＣＮ：ＭｅＯＨ。流量は３００μＬ／分であった。
【０１３０】
検出：２３０ｎｍでのＵＶ検出。
【０１３１】
ＳＰＥカラム上への保持：検体をＳＰＥカラム上に保持する場合、５０ｍＭ酢酸アンモニウム中の１０％ＭｅＣＮを用いるイソクラティックモードを適用した。保持は４分間続け、次いで弁を切り換えた。
【０１３２】
ＳＰＥカラムからの溶出及び分離：１０％のＭｅＣＮと９０％の１０ｍＭ酢酸アンモニウムとの移動相混合物を用いて溶出を開始した。５分後、弁をＳＰＥカラムに戻し、これを緩衝液中の９０％ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨで洗浄した。分離カラム上の勾配を緩衝液中６５％有機相から開始し、２６．５分で緩衝液中８５％有機相まで変化させた。７０％ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨを用いて分析カラムを３分間洗浄し、次いで１０％ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨで安定化することで、次の注入のために分離システムを準備した。全実行時間は４０分であった。
【０１３３】
ＰＥＴトレーサーは、４時間のインキュベーション後にいかなるクロマトグラフィー変化も示さなかった。クロマトグラフィー結果を、血漿中の非インキュベート試料及び本発明のＰＥＴトレーサーの参照溶液と比較した。いかなるラセミ化も認められなかった。
【０１３４】
ラット肝臓Ｓ９画分中における本発明のＰＥＴトレーサーは、４時間のインキュベーション後にラセミ化しなかった。
【実施例９】
【０１３５】
実施例９：インビボ体内分布
本発明のＰＥＴトレーサー、その他方の鏡像異性体及び二者のラセミ混合物をインビボ体内分布モデルで試験した。
【０１３６】
雄Ｗｉｓｔａｒラット成体（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して１〜３ＭＢｑの試験化合物を注射した。注射から２分後、１０分後、３０分後又は６０分後（ｎ＝３）に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定のために組織又は体液の試料を採取した。
【０１３７】
下記の注目すべきデータが観測された。
【０１３８】
【表６】
2013523621.tif 000022
【実施例１０】
【０１３９】
実施例１０：インビボ代謝試験
投与から最大１時間後までに、母体試験化合物に原因する脳又は血漿内放射能の量を試験した。本発明のＰＥＴトレーサー及びその関連するラセメートが試験化合物であった。
【０１４０】
雄Ｗｉｓｔａｒラット成体（１５０〜２００ｇ）に約２０ＭＢｑの試験化合物を注射した。注射から１０分後、３０分後及び６０分後に、脳及び血漿試料をＨＰＬＣによって分析した。下記のＨＰＬＣ条件を使用した。
【０１４１】
【表７】
2013523621.tif 000023
下記の注目すべきデータが観測された（表中の「ｐｉ」は注射後を意味する）。
【０１４２】
【表８】
2013523621.tif 000024
【実施例１１】
【０１４３】
実施例１１：インビボブロッキングアッセイ
関連するラセメートと比較した本発明のＰＥＴトレーサーのインビボ体内分布を、それぞれの非放射性類似体の予備投与後又は既知のＰＢＲ特異的リガンドＰＫ１１１９５の予備投与後に試験した。
【０１４４】
雄Ｗｉｓｔａｒラット成体（２００〜３００ｇ）に、側尾静脈を通して約３〜４ＭＢｑの試験化合物を注射した。放射性標識試験化合物の５分前に、ＰＫ１１１９５又は非放射性類似体（いずれも３ｍｇ／ｋｇ）を投与した。注射から３０分後に、ラットを安楽死させ、γ線カウンター上での放射能測定のために組織又は体液の試料を採取した。
【０１４５】
下記の注目すべきデータが観測された。
【０１４６】
【表９】
2013523621.tif 000025
【実施例１２】
【０１４７】
実施例１２：炎症の顔面神経軸索切断モデル
神経炎症の病巣部位への結合をオートラジオグラフィーによって試験した。試験化合物は本発明のＰＥＴトレーサー及びその関連するラセメートであった。
【０１４８】
雄Ｗｉｓｔａｒラット成体（２００〜３００ｇ）を未処置のままで使用するか、或いはＧｒａｅｂｅｒ ａｎｄ Ｋｒｅｕｔｚｂｅｒｇ（Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ １９８６；１５：３６３−３７３）によって記載された方法に従って顔面神経軸索切断術を施した。脳幹及び嗅球を含む各種の組織を動物から取り出し、イソペンタン中で迅速に凍結し、次いで使用時まで−７０℃で貯蔵した。組織を切片化（１２μｍ）し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓスライド上にら融解マウントした。スライドを使用時まで−７０℃で貯蔵した。
【０１４９】
スライドを風乾した後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（１７０ｍＭ、ｐＨ７．４）中において室温で５分間予備インキュベートした。１０００倍過剰の非放射性ＰＫ１１１９５（１μＭ）又は本発明の非放射性ＰＥＴトレーサー（１μＭ）を添加した後、８ＧＢｑ／ｍｌの試験化合物を含むＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（１７０ｍＭ、ｐＨ７．４）と共に６０分間インキュベートした。次いで、切片を氷冷緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１７０ｍＭ、ｐＨ７．４）中で５分間ずつ２回すすぐことで反応を停止させ、次いでスライドを蒸留水中に短時間浸してすすいだ。次に、スライドを空気中で乾燥し、Ｘ線フィルムに露光した。Ｘ線フィルムへの露光時には、参照標準も含めた。インビトロオートラジオグラフィーのためには、溶液から参照試料（２０μ）を採取し、（ガラスにテープで留めた）濾紙上に置き、切片と共に露光させた。フィルムを２４時間露光させ、参照試料に合わせた較正曲線として密度勾配スケールを使用するＭＣＩＤソフトウェアを用いて特定の解剖学的構造の周辺及びブロックド試料の周辺の検査対象領域、参照領域並びにバックグラウンドを描画することでデータを分析した。
【０１５０】
下記の注目すべきデータが観測された。
【０１５１】
【表１０】
2013523621.tif 000026
【図１】
2013523621.tif 000035
【図２】
2013523621.tif 000036
【図３】
2013523621.tif 000037
【図４】
2013523621.tif 000038
【図５】
2013523621.tif 000039
【図６】
2013523621.tif 000040
【図７】
2013523621.tif 000041
【図８ａ】
2013523621.tif 000042
【図８ｂ】
2013523621.tif 000043
【図８ｃ】
2013523621.tif 000044
【国際調査報告】
2013523621.tif 000045
2013523621.tif 000046
2013523621.tif 000047
2013523621.tif 000048