(57)【要約】新規のHDL様ポリペプチド、特にApo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドを開示する。また、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドをコードする核酸、並びに、開示する該ポリペプチドを含有する医薬製剤および開示する該核酸を含有する医薬製剤も開示する。更に、哺乳動物（例えばヒト）においてアテローム性動脈硬化症および関連障害を予防、治療、寛解、および診断する方法も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号:1の25-266位のアミノ酸を含有するポリペプチドであり、
77位のVがLに置換、81位のFがVに置換、82位のSがTに置換、88位のLがIに置換、105位のGがVに置換、119位のAがQに置換、136位のMがVに置換、144位のEがAに置換、147位のRがGに置換、151位のQがRに置換、159位のHがQに置換、172位のMがLに置換、178位のAがTに置換、185位のTがAに置換、186位のHがQに置換、196位のQがEに置換、203位のEがQに置換、208位のNがGに置換、212位のRがSに置換、221位のTがSに置換、226位のTがAに置換、253位のFがLに置換、255位のSがAに置換、257位のLがVに置換、258位のEがDに置換、260位のYがAに置換、および266位のTがAに置換から選択される1つまたはそれ以上のアミノ酸置換を更に含有するポリペプチド。
【請求項２】
配列番号:1の1-267位のアミノ酸を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
該ポリペプチドが77位のVからLへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項４】
該ポリペプチドが81位のFからVへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項５】
該ポリペプチドが82位のSからTへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項６】
該ポリペプチドが88位のLからIへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項７】
該ポリペプチドが105位のGからVへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項８】
該ポリペプチドが119位のAからQへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項９】
該ポリペプチドが136位のMからVへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１０】
該ポリペプチドが144位のEからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１１】
該ポリペプチドが147位のRからGへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１２】
該ポリペプチドが151位のQからRへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１３】
該ポリペプチドが159位のHからQへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１４】
該ポリペプチドが172位のMからLへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１５】
該ポリペプチドが178位のAからTへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１６】
該ポリペプチドが185位のTからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１７】
該ポリペプチドが186位のHからQへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１８】
該ポリペプチドが196位のQからEへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１９】
該ポリペプチドが203位のEからQへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２０】
該ポリペプチドが208位のNからGへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２１】
該ポリペプチドが212位のRからSへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２２】
該ポリペプチドが221位のTからSへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２３】
該ポリペプチドが226位のTからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２４】
該ポリペプチドが253位のFからLへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２５】
該ポリペプチドが255位のSからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２６】
該ポリペプチドが257位のLからVへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２７】
該ポリペプチドが258位のEからDへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２８】
該ポリペプチドが260位のYからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項２９】
該ポリペプチドが266位のTからAへのアミノ酸置換を含有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３０】
請求項１記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または請求項１記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの相補体。
【請求項３１】
プロモーター要素を更に含有する、請求項３０記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
アテローム性動脈硬化症または関連疾患に罹患した個体を治療する方法であって、
配列番号:1の25-266位のアミノ酸を含有するポリペプチドであり、77位のVがLに置換、81位のFがVに置換、82位のSがTに置換、88位のLがIに置換、105位のGがVに置換、119位のAがQに置換、136位のMがVに置換、144位のEがAに置換、147位のRがGに置換、151位のQがRに置換、159位のHがQに置換、172位のMがLに置換、178位のAがTに置換、185位のTがAに置換、186位のHがQに置換、196位のQがEに置換、203位のEがQに置換、208位のNがGに置換、212位のRがSに置換、221位のTがSに置換、226位のTがAに置換、253位のFがLに置換、255位のSがAに置換、257位のLがVに置換、258位のEがDに置換、260位のYがAに置換、および266位のTがAに置換から選択される1つまたはそれ以上のアミノ酸置換を更に含有するポリペプチドの治療的有効量を該個体に投与することを含む方法。
【請求項３３】
該ポリペプチドを非経口投与する、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
該ポリペプチドを静脈内投与する、請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
該ポリペプチドを注射によって投与する、請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
医薬組成物であって、
配列番号:1の25-266位のアミノ酸を含有するポリペプチドであり、77位のVがLに置換、81位のFがVに置換、82位のSがTに置換、88位のLがIに置換、105位のGがVに置換、119位のAがQに置換、136位のMがVに置換、144位のEがAに置換、147位のRがGに置換、151位のQがRに置換、159位のHがQに置換、172位のMがLに置換、178位のAがTに置換、185位のTがAに置換、186位のHがQに置換、196位のQがEに置換、203位のEがQに置換、208位のNがGに置換、212位のRがSに置換、221位のTがSに置換、226位のTがAに置換、253位のFがLに置換、255位のSがAに置換、257位のLがVに置換、258位のEがDに置換、260位のYがAに置換、および266位のTがAに置換から選択される1つまたはそれ以上のアミノ酸置換を更に含有するポリペプチドと、
医薬的に許容されるキャリアとを含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、心血管医学および心血管系の細胞生物学の分野に関する。種々の実施態様は、一般に、アテローム性動脈硬化症および関連障害の治療、寛解、診断、または予防のための、新規のアポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien（“A1 CS”）ポリペプチドを伴う方法および組成物に関する。
【発明の概要】
【０００２】
発明の詳細な説明
本発明は、哺乳動物（例えばヒト）におけるアテローム性動脈硬化症および関連障害の予防、治療、寛解、および診断のための方法に使用できる、新規のHDL様ポリペプチド（例えばApo A-1Carnivora/Sapienポリペプチド）をコードする精製され単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。
【０００３】
本発明は更に、Apo A-1Carnivora/SapienおよびApo A-1 Carnivora/Sapien医薬製剤を使用してアテローム性動脈硬化症および関連障害（急性冠症候群、虚血、虚血再灌流傷害、狭心症、および心筋梗塞など）の治療または予防、および、アテローム性動脈硬化プラークの低減または安定化、閉塞血管中のプラークの低減、およびコレステロール流出の促進を行うための、用量および投与計画を包含する。
【０００４】
本発明は更に、Apo A-1Carnivora/Sapien：リン脂質複合体およびApo A-1 Carnivora/Sapien：リン脂質複合体医薬製剤を使用して心血管疾患または関連障害（アテローム性動脈硬化症、急性冠症候群、虚血再灌流傷害、狭心症、および心筋梗塞など）の治療または予防、および、アテローム性動脈硬化プラークの低減または安定化、閉塞血管中のプラークの低減、およびコレステロール流出の促進を行うための、用量および投与計画を包含する。
【０００５】
本発明のある形態では、単離されたDNA分子に対応するポリペプチドを提供する。ある実施態様では、コードされるポリペプチドに対応するアミノ酸配列は、配列番号:2のApo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1で示される。
【０００６】
当業者に容易に理解されるように、本発明は、そのようなポリペプチドの誘導体およびそれらから誘導されるフラグメントで、本明細書に記載する非本質的アミノ酸の付加、欠失、または置換によって得られるものを提供する。
【０００７】
本発明は更に、組換えホスト系において本発明のポリペプチドを作製する方法、および、関連する発現カセット、ベクター、および、形質転換またはトランスフェクトされた細胞を提供する。
【０００８】
本発明は更に、本発明のポリペプチド（そのままの形態であるか、または、送達賦形剤と共に調製されたもの）を用いる治療法および／または予防法、および、関連する医薬組成物を提供する。
【０００９】
本発明の別の実施形態では、そこに含まれる製剤を特定するための添付ラベル、およびアテローム性動脈硬化症の予防または治療を行う上で医療従事者および患者に有用な他の情報（使用説明書、用量、投与間隔、持続時間、効能、禁忌（contradictions）、警告、注意、取り扱いおよび保存に関する説明書などを限定されることなく含む）のような、投与形態となった本発明のポリペプチド、およびそれを哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の予防または治療に使用するための説明書を伴うキットが含まれる。
【００１０】
本発明は更に、組換えアデノ随伴ウイルス（rAAV）ベクターおよび哺乳動物へのrAAVベクターの送達法を提供する。本発明は更に、アポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien（A1 CS）をコードするrAAVベクターの形質導入も包含する。本発明は、A1 CSをコードする精製rAAVベクター、および、rAAV-A1 CSで遺伝子的に改変したホスト細胞を包含する。本発明の別の実施形態では、rAAV-A1 CSベクターを、まず多能性幹細胞に形質導入する。本発明は更に、多能性幹細胞の哺乳動物への移植を包含する。多能性幹細胞は骨髄、臍帯血、またはサイトカイン処理した末梢血細胞であってもよい。
【００１１】
本発明の種々の実施形態では、本発明のrAAVベクター、および、それを哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の予防または治療に使用するための説明書を伴うキットが含まれる。
【００１２】
本明細書では、方法、組成物、および投与計画を提供する。それらには、理論に制限されるものではないが、動脈における脂質プラークからのコレステロールの流出および流動化を迅速に促進する、安全かつ効果的な治療が含まれると信じられ、これらは、内皮機能の改善、内皮機能不全の予防、または、破綻して血栓事象（例えば心筋梗塞）を引き起こしうるアテローム性動脈硬化プラークの改善もしくは予防に関する利益をもたらす。作用機序には、動脈の血流または灌流の向上が包含され、これによって、直接的または間接的に、内皮機能の改善もしくは内皮機能不全の予防がもたらされるか、または、不安定プラークの迅速な低減もしくは安定化がもたらされる。
【００１３】
アテローム性動脈硬化症耐性を示す数種の食肉目動物（例えばイヌ）のアポリポタンパク質A-1ポリペプチドに対応するアミノ酸配列において、コンセンサスアミノ酸が同定されている。更に、これらのコンセンサスアミノ酸は、野生型ヒト・アポリポタンパク質A-1に対応するアミノ酸配列中の同じ位置に存在するアミノ酸との対比からも同定されている。これらの同定された食肉目動物のコンセンサスアミノ酸の1つもしくはそれ以上の置換によって改変した野生型ヒト・アポリポタンパク質A-1に対応するアミノ酸配列を含む合成アポリポタンパク質A-1ポリペプチド（例えばApo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1）を、アテローム性動脈硬化症の予防および治療に使用することができる。
【００１４】
Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1（その242アミノ酸長の配列を配列番号:2に示す）は、約28kDaのサイズのタンパク質である。
【００１５】
野生型ヒトApo A-1タンパク質前駆体のアミノ酸配列を以下の配列番号:1に示す。最初の18個のアミノ酸がシグナルペプチドであり、次の6個のアミノ酸がプロペプチドである。
【００１６】
MKAAVLTLAVLFLTGSQARHFWQQDEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGR
D
YVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEG
LRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQK
LHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQRLAARLEALKENGG
ARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPALEDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNTQ
（配列番号:1）
【００１７】
合成Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1のアミノ酸配列を以下の配列番号:2に示す。
【００１８】
DEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWD
S      VTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQ
KKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVD
ALRTHLAPYSDELRERLAARLEALKENGGARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPAL
EDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNT（配列番号:2）
【００１９】
一貫性を保つために、本明細書に記載する全てのアミノ酸配列において、アミノ酸の位置は、野生型ヒトApo A-1タンパク質前駆体（配列番号:1）に対応する配列中のアミノ酸位置の命名を維持する。従って、配列番号:2の第1のアミノ酸（すなわち「D」）は、同アミノ酸配列中の「25位」であり、例えば、正確に「25位のD」または「Asp25」と記載する。
【００２０】
Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1は、そのアミノ酸置換により、新規の野生型ヒトApo A-1変異体であると見なされる。Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1では、アミノ酸グルタミン（Gln196）が、グルタミン酸（Glu196）で置換されている。より具体的には、野生型ヒトApo A-1タンパク質前駆体アミノ酸配列、すなわちApo A-1（配列番号:1）中の196位のグルタミン（Gln、Q）が、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1アミノ酸配列（配列番号:2）ではグルタミン酸（Glu、E）で（すなわち、196位のQがEで）置換されている。
【００２１】
本発明の第1の側面では、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドに対応するアミノ酸配列をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
【００２２】
本発明の別の形態では、単離されたDNA分子に対応するポリペプチドを提供する。ある種の実施形態では、コードされたポリペプチドに対応するアミノ酸配列は、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1（配列番号:2）である。
【００２３】
ある側面では、本発明はアテローム性動脈硬化症または関連障害の治療のための組成物および方法を提供し、該方法は、合成Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドまたは生物学的に活性なその変異体を含有する組成物を投与することによる。Apo A-1 Carnivora/Sapienは、野生型アポリポタンパク質、Apo A-1の新規の合成変異体である。Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドで治療される被験体には、アテローム性動脈硬化プラークの低減および／またはHDLコレステロールの低下という利益がもたらされる。
【００２４】
アポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドは野生型ヒト・アポリポタンパク質A-1ポリペプチドの新規の変異体であって、以下から成る食肉目動物のコンセンサスアミノ酸置換の群から選択される1つもしくはそれ以上のアミノ酸置換、またはそれらを組み合わせたものを含有する：77位のVがLに、81位のFがVに、82位のSがTに、88位のLがIに、105位のGがVに、119位のAがQに、136位のMがVに、144位のEがAに、147位のRがGに、151位のQがRに、159位のHがQに、172位のMがLに、178位のAがTに、185位のTがAに、186位のHがQに、196位のQがEに、203位のEがQに、208位のNがGに、212位のRがS に、221位のTがSに、226位のTがAに、253位のFがLに、255位のSがAに、257位のLがVに、258位のEがDに、260位のYがAに、および266位のTがAに。
【００２５】
上記の群で、「位」の前の数字はそれぞれ、野生型ヒトApo A-1タンパク質前駆体アミノ酸配列中において置換が特定される特異的なアミノ酸位置を示す。
【００２６】
本発明のある側面に従い、例証として、ある実施態様はApo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドに対応するアミノ酸配列を提供し、該配列は、77位のアミノ酸がバリン（V、Val）ではなくロイシン（L、Leu）である以外は野生型ヒトApo A-1と同一である。
【００２７】
慣例的な合成または組換えによる作製法およびその後の精製法は、Apo A-1ポリペプチドが属する分野で公知であり、Apo A-1Carnivora/Sapienポリペプチドの作製法に容易に適用できる。
【００２８】
A-1 Carnivora/Sapienまたはその変異体をコードするヌクレオチド配列を好適な発現ベクター、すなわち、挿入されたタンパク質コード配列の転写および翻訳に必要な要素を含有するベクターに挿入してもよい。必要な転写および翻訳シグナルは、天然の野生型ヒトA-1遺伝子および／またはその隣接領域から得てもよい。種々のホスト・ベクター系がタンパク質コード配列の発現に使用できる。それらには、限定される訳ではないが、組換えウイルス（例えばワクシニアウイルス、アデノウイルスなど）に感染させた哺乳動物細胞系；組換えウイルス（例えばバキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系；微生物（例えば、酵母ベクターを含有する酵母、または、バクテリオファージ、DNA、プラスミドDNA、もしくはコスミドDNAで形質転換した細菌）が含まれる。ベクターの発現要素の強さおよび特異性は多様である。使用するホスト・ベクター系によって、多くの好適な転写および翻訳要素のうちの任意のものを使用してもよい。
【００２９】
前述の、DNAフラグメントをベクターに挿入するための任意の方法を使用して、好適な転写／翻訳制御シグナルおよびタンパク質コード配列から成るキメラ遺伝子を含有する発現ベクターの構築を行ってもよい。それらの方法には、インビトロの組換えDNA法および合成法が含まれる。A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドをコードする核酸配列の発現を第2の核酸配列によって調節し、組換えDNA分子で形質転換したホスト中でA-1 Carnivora/Sapienを発現させてもよい。例えば、A-1 Carnivora/Sapienの発現を、当該分野で公知の任意のプロモーター／エンハンサー要素で制御してもよい。A-1 Carnivora/Sapienをコードする遺伝子の発現を制御するために使用してもよいプロモーターには、それらに限定される訳ではないが、以下がある：SV40初期プロモーター領域（BernoistおよびChambon, Nature 290:304 -310 (1981)）、ラウス肉腫ウイルスの3’長末端反復配列中に含まれるプロモーター（Yamamotoら, Cell 22:787 -797 (1980)）、ヘルペスチミジンキナーゼ・プロモーター（Wagnerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1981) 78:1441-45）、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Brinsterら Nature (1982) 296:39 -42）；原核生物発現ベクター、例えば3-ラクタマーゼ・プロモーター（Villa-Kamaroffら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1978) 75:3727-31）、またはtatプロモーター（DeBoerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1983) 80:21 -25）。
【００３０】
当業者に認識されるように、cDNA配列、ゲノム配列、および合成配列をクローン化および発現させてもよい。それらの発現を行うためのある方法は、A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドまたはその変異体をコードする核酸を組織培養細胞に転移させることによる。A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドをコードする核酸配列を含有する核酸の転移に加え、転移した核酸は、特定のA-1 Carnivora/Sapienポリペプチドの機能性部分、または、特定のA-1 Carnivora/Sapienポリペプチドの全長にわたって比較した場合に本明細書に記載するA-1 Carnivora/Sapienポリペプチドと少なくとも60％の配列同一性を有するタンパク質、または、A-1 Carnivora/Sapien変異体の全長にわたって比較した場合にA-1 Carnivora/Sapien変異体と少なくとも60％の配列類似性を有するポリペプチドをコードしてもよい。核酸の細胞への導入は、エレクトロポレーション、リポフェクチン、リン酸カルシウムによるトランスフェクション、またはウイルス感染などの方法によって行ってもよい。通常、転移の方法は、細胞への選択可能マーカー（例えば抗生物質耐性遺伝子）の転移を含む。その後、細胞を選択下に配し、転移されたDNAを取り込んでいてこれを発現する細胞を、単離する。
【００３１】
本発明のポリヌクレオチドは、RNAまたはDNA（cDNA、ゲノムDNA、または合成DNA）、またはそれらの改変体、変異体、ホモログ、もしくはフラグメントのいずれかである。DNAは２本鎖または１本鎖であり、１本鎖の場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖のいずれかである。本発明のポリペプチドをコードする配列のいずれか（例えば配列番号:2の配列）が、（ａ）コード配列、（ｂ）（ａ）の転写から誘導されたリボヌクレオチド配列、または、（ｃ）遺伝コードの冗長または縮退を使用して同じポリペプチドをコードするようにしたコード配列であってもよい。「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、長さまたは翻訳後修飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）を問わず、任意のアミノ酸鎖を意味する。本明細書では、両用語を同義に使用する。
【００３２】
本発明の更なる側面では、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのいずれかに相同なアミノ酸配列を提供する。相同なアミノ酸配列は、その全部または一部が、融解温度（Tm）より25-35℃低い温度でApo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドの核酸配列のいずれかの部分とハイブリダイズする核酸配列にコードされる任意のポリペプチドである。相同なアミノ酸配列は、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのいずれかに示されるアミノ酸配列と１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換による相違を有するものである。それらの配列には、軽度の変異体、並びに、欠失または挿入を含有する配列で、ポリペプチドの固有の特性（例えば、アテローム性動脈硬化プラークの低減）を保持するものも包まれる。好ましくは、それらの配列は、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのいずれかと、少なくとも85％、90％、または95％の同一性を有する。
【００３３】
相同なアミノ酸配列には、配列番号:2と同一の、または実質的に同一の配列が含まれる。「実質的に同一のアミノ酸配列」とは、基準となるアミノ酸配列と少なくとも90％の同一性を有し、好ましくは、基準となる配列に対して大多数が保存的アミノ酸置換で相違する配列を意味する。ある主の態様では、アミノ酸配列は基準となるアミノ酸配列（例えば配列番号:2）と95％、97％、または99％の同一性を有してもよい。
【００３４】
保存的アミノ酸置換は、同じ部類のアミノ酸間での置換である。これらの部類には、例えば以下がある：非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、およびチロシン）；塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、およびヒスチジン）；酸性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン酸およびグルタミン酸）；および、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、およびシステイン）。
【００３５】
相同性は、配列解析ソフトウェアを用いて測定してもよい。配列解析ソフトウェアは、当業者に公知である。アミノ酸配列を、同一性が最大となるようにアラインする。適正なアラインメントを得るために、人為的に配列にギャップを導入してもよい。最適なアラインメントが設定されれば、両配列のアミノ酸が同一である全ての位置を、位置の総数との相対で測定することによって、相同性の度合いが確立される。
【００３６】
相同なポリヌクレオチド配列は、同様に定義される。相同配列は、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのアミノ酸配列に対応するコード配列のいずれかと、少なくとも45％の同一性を有するものである。ある種の実施形態では、相同配列は、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのアミノ酸配列に対応するコード配列のいずれかと、60％または85％の同一性を有する。
【００３７】
本発明のある種の側面では、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドのいずれかと配列相同性を有するポリペプチドには、野生型対立遺伝子変異体、並びに、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドの固有の特性を保持している突然変異体または他の非野生型変異体が含まれる。例えば、末端にグルタミン（すなわちGln267）を付加することによって改変した改変型Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド1は、Carnivora/Sapienポリペプチド1（配列番号:2）と相同である。
【００３８】
当該分野で公知のように、対立遺伝子変異体は、ポリペプチドの生物学的機能を変更しない1つまたはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有することを特徴とする、代替型ポリペプチドである。「生物学的機能」とは、自然に起こる細胞内でのポリペプチドの機能を意味し、その機能が細胞の増殖または生存に必要であるか否かは問わない。例えば、Apo A-1の生物学的機能は、血漿コレステリルエステルの生成におけるレシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（LCAT）のコファクターとして作用することである。ポリペプチドは1つ以上の生物学的機能を有しうる。
【００３９】
対立遺伝子変異体は、自然界でよく見られる。例えば人類種は、マイナーな対立遺伝子変異によって互いに異なる多様な集団を成す。事実、種々の異なる集団において同じ生物学的機能を果たすポリペプチドが、そのそれぞれの集団内で同一ではないアミノ酸配列（およびポリヌクレオチド配列）を有する場合もある。
【００４０】
有用な非野生型ホモログおよびそのフラグメントを既知の方法を用いて設計し、アミノ酸配列の変化および／または欠失が許容され、なおも生物学的機能を示すと考えられるポリペプチドの領域を同定する。一例として、異なる種由来の相同ポリペプチドを比較し、保存配列を同定する。高い相違を示す配列ほど、配列変化が許容される可能性が高い。
【００４１】
本発明の他の側面は、標的動物またはヒトにおいてその活性を向上するために改変または処理されたポリペプチド、ホモログ、またはフラグメントであり、ここで、該ポリペプチド、ホモログ、またはフラグメントは、自己免疫疾患または炎症性疾患に対する防御作用をもたらすことを目的とする。それらの改変または処理には以下がある：アミノ酸誘導体（例えば3-メチルヒスチジン、4-ヒドロキシプロリン、5-ヒドロキシリジンなど）でのアミノ酸置換、改変、または欠失で、ポリペプチド、ホモログ、またはフラグメントの調製後に行うもの（例えばアミノ酸の遊離のアミノ、カルボキシル、またはヒドロキシル側鎖の改変）。
【００４２】
配列間の相同性は、相同性検索アルゴリズムを用いて解析してもよい。別の選択肢として、インビトロにおいてポリペプチド内の特定のアミノ酸残基または配列を変異させた後、以下に概説する方法に従って、その変異ポリペプチドを、アテローム性動脈硬化症を予防または治療する能力に関してスクリーニングする。
【００４３】
当業者に容易に理解されるように、本発明のスクリーニング法に従って、Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドの特定のホモログまたはフラグメントがアテローム性動脈硬化症の予防または治療に有用であるか否かを容易に判定できる。ある種の実施形態では、スクリーニング法は以下の段階：
（i）アテローム性動脈硬化症易罹患性であることが予め確認されているモデル動物（好ましくはウサギ、例えばカンジキウサギ（Lepus americanus））を選択し；
（ii）被験ホモログまたは被験フラグメントで該動物を免疫化し；
（iii）免疫化した動物にアテローム性動脈硬化症誘導飼料（例えば1％コレステロール含有飼料）を給餌し；そして、
（iv）アテローム性動脈硬化症に対する防御作用をもたらすホモログまたはフラグメントを選択する
ことを含む。
【００４４】
アテローム性動脈硬化症のモデル動物は当該分野で公知であり、DR Grossによって報告されている（DR Gross, Animal Models in Cardiovascular Research 第3版, Springer (2009) ニューヨーク州ニューヨーク）。
【００４５】
「防御作用を与える」とは、被験ホモログまたは被験フラグメントを供与していないコントロール動物に比較して、疾患の重篤度の低下が見られることを意味する。
【００４６】
「防御」とは、防御される個体が、疾患を完全に回避するか、または疾患の進行停止もしくは回復を示すものと定義される。例えば、アテローム性動脈硬化症から防御された個体は、アテローム性動脈硬化プラークの消滅を示してもよい。防御されていない個体は、発症しやすい可能性がある。
【００４７】
本発明の更なる側面は、アテローム性動脈硬化症の予防または治療に有用な更なるポリペプチド変異体を同定するためのスクリーニング法を提供する。当業者に容易に理解されるように、本発明のスクリーニング法に従うことにより、必要以上の実験を行うことなく、特定のポリペプチド、またはそのホモログもしくはフラグメントがアテローム性動脈硬化症の予防または治療に有用であるか否かが判定される。ある種の実施形態では、スクリーニング法は、以下の段階：
（i）アテローム性動脈硬化症耐性であることが知られている食肉目動物または他の動物のApo A-1ポリペプチドに対応するアミノ酸配列を同定し；
（ii）同配列を、既知の野生型ヒトApo A-1アミノ酸配列、および、アテローム性動脈硬化症耐性であることが知られている既知の他の食肉目動物および／もしくは他の動物のApo A-1のアミノ酸配列とアラインし；
（iii）野生型ヒトApo A-1を除き、アラインした領域間のコンセンサスアミノ酸または部分的コンセンサスアミノ酸を観察し；
（iv）同定されたコンセンサスアミノ酸または部分的コンセンサスアミノ酸を、既知の野生型ヒトApo A-1アミノ酸配列と対比して差異を同定し；
（v）異なったアミノ酸（すなわち、野生型ヒトApo A-1の同じアラインメント位置で、同一でないアミノ酸）を有するコンセンサスアミノ酸または部分的コンセンサスアミノ酸の、大多数を占めるアミノ酸を選択し；
（vi）該異なったアミノ酸が、選択されたアミノ酸による置換で改変された野生型ヒトApo A-1を含む合成被験ポリペプチドを作製し；
（vii）アテローム性動脈硬化症易罹患性であることが予め確認されている動物（好ましくはウサギ、例えばカンジキウサギ（Lepus americanus））を選択し；
（viii）該動物を被験ポリペプチドまたはそのホモログもしくはフラグメントで免疫化し；
（ix）該免疫化した動物にアテローム性動脈硬化症誘導飼料（例えば1％コレステロール含有飼料）を給餌し；そして、
（x）アテローム性動脈硬化症に対する防御作用をもたらすポリペプチドまたはそのホモログもしくはフラグメントを選択する
ことを含む。
【００４８】
上記のスクリーニング法の段階（i）から（v）は、慣例的な配列解析ソフトウェアを用いて実施してもよい。ポリペプチドのデータおよび配列解析ツールは当該分野で公知であり、UniProtおよびそれに関連する機能へのアクセスによって容易に利用できる。UniProは当該分野で公知の包括的タンパク質リソースであり、他のタンパク質リソースを統合することによって作成されたタンパク質データのセントラル・リポジトリであって、欧州バイオインフォマティクス研究所（European Bioinformatics Institute（EBI））、スイス・バイオインフォマティクス研究所（Swiss Institute of Bioinformatics（SIB））、およびタンパク質情報リソース（Protein Information Resource（PIR））で構成されるUniProtコンソーシアム（UniProt Consortium）によって管理されている。EBIは英国ヒンクストンのWellcome Trust Genome Campusに、SIBはスイス、ジュネーブに所在する。PIRはNational Biomedical Research Foundation（NBRF）（Protein Information Resource, Georgetown University Medical Center, 3300 Whitehaven Street NW, Suite 1200, Washington, DC 20007）が主催している。
【００４９】
本発明のポリペプチドはアテローム性動脈硬化症および関連障害の予防および治療に有用であり、従って、有効量のA1 CSポリペプチドおよび／またはA1 CS-rAAVベクターを医薬的に許容される固体または液体の無機または有機キャリアと混合して含有する医薬組成物の製造に有用である。このように、本発明の別の側面は、医薬的に許容される添加剤と組み合わせた、本明細書に記載するアテローム性動脈硬化症および関連障害の予防および治療のための組成物である。
【００５０】
本発明にかかる医薬組成物は、ヒトへの経口、経皮、局所、または非経口（例えば筋肉内または静脈内）投与に好適なものであり、1つまたはそれ以上の本発明のポリペプチドを医薬的に許容されるキャリアと共に含有する。用量は種々の因子、例えば年齢、体重、血管性疾患の重篤度、および医師または他の医療提供者が特定しうる他の因子に依存する。
【００５１】
種々の実施形態では、治療組成物を坐薬によって、または経口送達のための錠剤またはカプセル剤で投与する。経口製剤は通常、一般的に使用される添加物、例えば結合剤、充填剤、キャリア、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝剤、および添加剤（例えば医薬品グレードのマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含有する。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、ピル、カプセル、腸溶剤、徐放剤、粉末などの形態を取る。
【００５２】
遺伝子治療のための経口製剤は当該分野で公知であり、Chenらによって報告されている（Chenら World J. Gastroenterol (2004) 10(1):112 -16）。更に、当業者に認識されるように、他の経口製剤も本発明への使用が企図される。
【００５３】
他の投与様式（経皮および局所投与など）に好適な更なる製剤には、軟膏、チンキ剤、クリーム、ローション、経皮パッチ、移植皮膚、遺伝子工学によって合成された皮膚、ステントコーティング剤、および坐薬がある。軟膏およびクリームでは、慣例的な結合剤、キャリア、および添加剤として、例えばポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドがある。ある種の実施形態では、経皮パッチを使用して治療薬を送達してもよい。例えば、米国特許第4,638,043号参照。遺伝子治療のための経皮および局所製剤は当該分野で公知である。例えばJensen, TG (2004) Expert Opin Biol Ther. 4(5):677-82参照。更に、当業者に認識されるように、他の経皮および局所製剤も本発明への使用が企図される。
【００５４】
個体にペプチドおよびタンパク質を投与するための更なる方法は、例えばAntosovaら (2009) Trends in Biotechnology 27(11):628-35に報告されている。
【００５５】
非経口投与に特に好適な剤形は、水溶性の形態（例えば水溶性塩）を成す本発明のポリペプチドの無菌水溶液、または、粘性を向上するための物質（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストラン）および必要により安定化剤を含有する無菌の注射用懸濁液である。更に、本発明のポリペプチドを、アジュバントと共に、またはアジュバントを伴わずに、凍結乾燥体とし、非経口投与の前に好適な溶媒を添加して溶液としてもよい。
【００５６】
一般的に、本発明の注射用組成物は、そのまま注射できる溶液であるか、または、使用の直前に溶媒と混合するための乾燥可溶性組成物であるか、または、投与前に希釈するための濃縮液であってもよい。注射用組成物の調製にあたっては、刺激を避けるため、浸透圧に細心の注意を払わなければならない。
【００５７】
賦形剤は、通常、治療活性を有さず、非毒性であるが、本発明のポリペプチドを吸収に適した形態で体組織または循環へ送達する。吸収は、一般に、本発明のポリペプチドが水溶液として存在する時に、最も迅速かつ完全に起こる。しかしながら、水混和性液体を用いて賦形剤を改変するか、または水非混和性液体で置換することによって、吸収速度は変化する。皮下注射に適した組成物の調製では、水溶性賦形剤、水混和性賦形剤、および非水性賦形剤を使用してもよい。ある種の水性賦形剤は、一般的に非経口での使用で知られている。
【００５８】
水混和性賦形剤は、本発明の非経口組成物の調製にも有用である。それらの溶媒は、主に、本発明のペプチドの溶解度に影響を与えるために使用される。それらの溶媒には、例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールがある。
【００５９】
更なる物質を本発明の注射用組成物に含有させて、組成物の性質を向上または保護してもよい。添加される物質は、例えば、溶解度に影響を与える、患者の苦痛を和らげる、化学的安定性を向上する、または標品を微生物の増殖から保護するものであってもよい。従って、組成物は、好適な可溶化剤、溶液を等張にする物質、抗酸化剤として作用する物質、および、微生物の増殖を防ぐための保存剤として作用する物質を含有してもよい。それらの物質は、その機能に適した量で含有されるが、本明細書で企図する疾病状態の治療としての組成物の作用に不利な影響を与えない。
【００６０】
一般に、本発明の種々の実施形態に従って哺乳動物に送達するのに好適な、本発明の無菌の非経口注射用組成物および他の治療製剤は、当業者による慣例的な実験によって、容易に調製できる。好適な医薬製剤についての指針は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 第21版 (2005) Lippincott Williams & Wilkins publishersに記載されている。
【００６１】
治療および予防効果は、当該分野における標準的な方法を用いて、例えば、血液灌流および／またはアテローム性動脈硬化プラークのサイズの測定により、例えばモデルマウスを用いて、評価してもよい。当業者に容易に認識されるように、特定のモデルを別のモデル（例えばモデルウサギ）で代替してもよい。例えば、本発明のポリペプチドの効果を、アポリポタンパク質Eノックアウト（Apoe-/-）モデルマウスで評価してもよい。Apoe-/-マウスは、血清アポリポタンパク質Eが低く、マウスに低コレステロール飼料を給餌した場合でも、低年齢で脂質異常およびアテローム性動脈硬化症を示す。
【００６２】
防御については、アテローム性動脈硬化症の程度をコントロール群と比較することによって判定する。コントロール群に比較してアテローム性動脈硬化症が低下すれば、防御されていることを示す。それらの評価は、本発明のポリヌクレオチドについて行ってもよい。
【００６３】
本発明の更なる側面は、更なるアミノ酸置換（天然でヒトApo A-1変異体（ヒトApo A-1 Milanoと記載する）に見られるもの）を含む改変型Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチドを提供し、これは、アテローム性動脈硬化症の発症率を有益に低下させる。改変型ポリペプチドは、更なるアミノ酸置換、すなわち、アルギニン（Arg197）のシステイン（Cys197）での置換を有する。例えば、改変型Apo A-1 Carnivora/Sapienポリペプチド 1（配列番号:2）は、野生型ヒトApo A-1が2つのアミノ酸置換によって改変されたアミノ酸配列を含有する。2つの置換のうち、一方は、グルタミン（Gln196）のグルタミン酸（Glu196）での置換である。他方の置換は、第1の置換に隣接するアミノ酸に見られる、アルギニン（Arg197）のシステイン（Cys197）での置換である。
【００６４】
本発明の更なる側面は、加齢黄斑変性症（ARMD）（滲出型（Wet ARMD）および非滲出型（dry ARMD）を含む）の治療、寛解、または予防に使用するアポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien（A1 CS）またはアポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien-脂質複合体のための、方法および組成物を提供する。ARMDの治療に使用するリポタンパク質-脂質複合体のための脂質組成物、投与方法、および投与計画は当該分野で公知であり（例えば米国特許出願第11/707,809号）、容易に本発明のポリペプチド-脂質複合体に適用できる。
【００６５】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、アポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien（A1 CS）ポリペプチドまたはアポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapien：1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン複合体（A1 CS:POPC複合体）を、約1mgタンパク質／kgから約100mgタンパク質／kgの用量で投与することを含む。
【００６６】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を、約15mg／kgまたは45mg／kgの用量で投与することを含む。
【００６７】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を、約15mg／kgから約45mg／kgの用量で投与することを含む。
【００６８】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該Apo A-1 Carnivora/Sapienは組換えApo A-1 Carnivora/Sapienである。
【００６９】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該Apo A1 CS:POPC複合体は、アポリポタンパク質A-1 Carnivora/Sapienおよび1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンを、タンパク質重量：脂質重量＝約１：１の比率で含有する。
【００７０】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はApo A1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該Apo A1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体は無菌の液体医薬製剤である。
【００７１】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は被験体に約15mg／kgまたは45mg／kgの用量で投与される。
【００７２】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は被験体に週に1回、約6ヶ月間、約5ヶ月間、約4ヶ月間、約3ヶ月間、約2ヶ月間、または約1ヶ月間投与される。
【００７３】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は被験体に約1日に1回、約1ヶ月間投与される。
【００７４】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は被験体に約3日に1回、約1ヶ月間から約6ヶ月間投与される。
【００７５】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は約10日に1回、約1ヶ月間から約6ヶ月間投与される。
【００７６】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は約14日に1回、約1ヶ月間から約6ヶ月間投与される。
【００７７】
更なる態様は、それを必要とする被験体における急性冠症候群または関連障害の治療法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、そして、外科的介入を更に含む。
【００７８】
更なる態様は、それを必要とする被験体における急性冠症候群または関連障害の治療法を提供し、該方法はA1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、そして、外科的介入を更に含み、ここで、該外科的介入は経皮経管冠動脈形成術または冠動脈バイパス術を含む。
【００７９】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、そして、アテローム性動脈硬化症に伴う疾病、障害、症状、または疼痛を治療、予防、または寛解するために別の薬剤を投与することを更に含む。
【００８０】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、被験体の罹患血管中のアテローム体積％が低下する。
【００８１】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、被験体の標的血管中の総アテローム体積が低下する。
【００８２】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、被験体の標的冠状動脈セグメントにおける平均最大アテローム厚が低下する。
【００８３】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、そして、該医薬製剤は静脈内投与される。
【００８４】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は静脈内投与され、そして、該医薬製剤は約1時間にわたって投与される。
【００８５】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は静脈内投与され、そして、該医薬製剤は約3時間にわたって投与される。
【００８６】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤はApo A1 CSポリペプチドまたはA1 CS:POPC複合体、スクロース-マンニトール・キャリア、およびリン酸緩衝剤を含有する。
【００８７】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤はApo A1 CS、POPC、スクロース-マンニトール・キャリア、およびリン酸緩衝剤を含有し、そして、該スクロース-マンニトール・キャリアは約6.0％から約6.4％のスクロースおよび約0.8％から約1％のマンニトールから成る。
【００８８】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤はApo A1 CS、POPC、スクロース-マンニトール・キャリア、およびリン酸緩衝剤を含有し、そして、該スクロース-マンニトール・キャリアは約6.2％のスクロースおよび約0.9％のマンニトールから成る。
【００８９】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、そして、該医薬製剤のpHは約7.0から約7.8である。
【００９０】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、そして、pHは約7.5である。
【００９１】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は約12mg/mlから約18mg/mlのApo A1 CSを含有する。
【００９２】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤は約11mg/mlから約17mg/mlのPOPCを含有する。
【００９３】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤が含有する10μmより大きいサイズの粒子は50mL当たり6,000個未満である。
【００９４】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤が含有する25μmより大きいサイズの粒子は50mL当たり600個未満である。
【００９５】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤のオスモル濃度は約280から約320mOsmである。
【００９６】
更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化症または関連障害を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体を投与することを含み、ここで、該A1 CSポリペプチド製剤またはA1 CS:POPC複合体は無菌の液体であり、該医薬製剤のオスモル濃度は約290mOsmである。
【００９７】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含む。
【００９８】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、ここで、該組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体は週1回、月1回、または年1回投与される。
【００９９】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、ここで、該組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体は週1回、約3-5週間投与される。
【０１００】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、該被験体に15mg/kgの用量の組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを更に含む。
【０１０１】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、該被験体に15mg/kgの用量の組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを更に含み、ここで、該複合体は週1回、月1回、または年1回投与される。
【０１０２】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、ここで、該被験体は急性冠状動脈症候群に伴う疾病、障害、症状、または疼痛を治療、予防、または寛解するために別の薬剤も投与される。
【０１０３】
本発明の更なる態様は、それを必要とする被験体においてアテローム性動脈硬化プラークを低減する方法を提供し、該方法は、該被験体に45mg/kgの組換えA1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を少なくとも1回投与することを含み、ここで、該被験体は急性冠状動脈症候群に伴う疾病、障害、症状、または疼痛を治療、予防、または寛解するために別の薬剤も投与され、ここで、該薬剤はスタチン、β-遮断薬、ACE阻害剤、抗血栓剤、血管拡張剤、またはそれらを組み合わせたものである。
【０１０４】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8である。
【０１０５】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、約6.2％のスクロースを含有する。
【０１０６】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、約0.9％のマンニトールを含有する。
【０１０７】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、該pHは約7.5である。
【０１０８】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、組換えA1 CSまたはその変異体の該バッファー中の濃度は、約12mg/mlから約18mg/mlである。
【０１０９】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、該組換えA1 CSは保存的に置換されたApo A1 CSである。
【０１１０】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CS（またはその変異体）／POPC複合体をバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、該組換えApo A1 CSおよびPOPCは組換えApo A1 CS：POPC＝1:0.95（タンパク質重量／脂質重量）の比率で複合体を成している。
【０１１１】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、10μmより大きいサイズの粒子の含有量は50mL当たり6,000個未満である。
【０１１２】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、25μmより大きいサイズの粒子の含有量は50mL当たり600個未満含有する。
【０１１３】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、オスモル濃度は約280から約320mOsmである。
【０１１４】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、ここで、オスモル濃度は約280から約320mOsmであり、ここで、オスモル濃度は約290mOsmである。
【０１１５】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、該液体製剤は無菌である。
【０１１６】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、凍結されている。
【０１１７】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体を単独で、またはPOPCとの複合体としてバッファー中に含有する液体医薬製剤を提供し、該バッファーは約6.0％
から約6.4％のスクロースを含有し、約0.8％から約1％のマンニトールを更に含有し、該バッファーのpHは約7.0から約7.8であり、該医薬製剤は無菌バイアル、無菌充填済みバッグ、または充填済み注射器に充填されている。
【０１１８】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有する。
【０１１９】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、pHを約7.5とするためのリン酸バッファーを含有する。
【０１２０】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、該組換えApo A1 CSは保存的に置換されたApo A1 CSである。
【０１２１】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体と1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンとの複合体およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、該組換えApo A1 CSおよびPOPCは組換えApo A1 CS：POPC＝1:0.95（タンパク質重量／脂質重量）の比率で複合体を成している。
【０１２２】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、10μmより大きいサイズの粒子の含有量は50mL当たり6,000個未満である。
【０１２３】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、25μmより大きいサイズの粒子の含有量は50mL当たり600個未満である。
【０１２４】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、オスモル濃度は約280から約320mOsmである。
【０１２５】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、オスモル濃度は約290mOsmである。
【０１２６】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、該医薬製剤は無菌である。
【０１２７】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、該医薬製剤は凍結されている。
【０１２８】
本発明の更なる態様は、組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）およびpHが約7.0から約7.8であるリン酸バッファーを含有する医薬製剤を提供し、該バッファーは2％のグルコースおよび4mMのリン酸ナトリウムを含有し、ここで、該医薬製剤は無菌バイアル、無菌充填済みバッグ、または充填済み注射器に充填されている。
【０１２９】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する、凍結乾燥した医薬製剤を提供する。
【０１３０】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、該医薬製剤は約6.2％のスクロースを含有する。
【０１３１】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、該医薬製剤は約0.9％のマンニトールを含有する。
【０１３２】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、該医薬製剤はバッファーを更に含有し、該バッファーのpHは約7.5である。
【０１３３】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、該組換えApo A1 CSは保存的に置換されたApo A1 CSである。
【０１３４】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体と1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンとの複合体；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、該POPCの濃度は約11mg/mlから約17mg/mlである。
【０１３５】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体とPOPCとの複合体；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、組換えApo A1 CSおよびPOPCは組換えApo A1 CS：POPC＝1:0.95（タンパク質重量／脂質重量）の比率で複合体を成している。
【０１３６】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、該医薬製剤が含有する10μmより大きいサイズの粒子は50mL当たり6,000個未満である。
【０１３７】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、該医薬製剤が含有する25μmより大きいサイズの粒子は50mL当たり600個未満である。
【０１３８】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、オスモル濃度は約280から約320mOsmである。
【０１３９】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、ここで、オスモル濃度は約290mOsmである。
【０１４０】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、該医薬製剤は無菌である。
【０１４１】
更なる態様は、以下：（ａ）組換えApo A1 CSまたはその変異体（単独で、またはPOPCとの複合体として）；（ｂ）約6.0％から約6.4％のスクロース；および（ｃ）約0.8から約1％のマンニトールを含有する凍結乾燥した医薬製剤を提供し、該医薬製剤は無菌バイアル、無菌充填済みバッグ、または充填済み注射器に充填されている。
【０１４２】
更なる態様は、それを必要とする被験体において虚血再灌流を治療する方法を提供し、該方法は、A1 CSポリペプチドまたはApo A1 CS:POPC複合体を約15mgタンパク質／kgまたは45mgタンパク質／kgの用量で投与することを含む。
【０１４３】
特に記載しない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の通常の技術者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。SingletonらDictionary of Microbiology and Molecular Biology 第2版, J. Wiley & Sons (ニューヨーク州ニューヨーク 1994)；March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 第4版, J. Wiley & Sons (ニューヨーク州ニューヨーク 1992)；Sambrook and Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press (ニューヨーク州コールドスプリングハーバー 2001)；および米国特許出願第10/599,692号、12/256,822号、11/707,809号、および10/967,061号は、当業者にとって、本出願に使用する多くの用語についての一般的な指針となる。
【実施例】
【０１４４】
本発明について、以下の実施例に関連して更に記載する。実施例は単に例証を目的とするものであり、いかなる意味においても本発明の範囲を制限するものではない。
【０１４５】
背景
標準的なアテローム性動脈硬化症モデル動物（好ましくはapoE欠損モデルマウス）について研究を行い、組換えApo A-1 Carnivora/Sapien-リン脂質複合体（A1 CS-I(m)）の高用量単回投与によって、apoE欠損マウスにおいて組織コレステロールが迅速に流動化され、プラーク脂質およびマクロファージ含量が低下するか否かを試験する。
【０１４６】
方法
高コレステロール食を給餌した26週齢のapoE欠損マウスに、食塩水、1000ミリグラム／キログラム（mg/kg）のジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC）、または400mg/kgの組換えA1 CS-I(m)-DPPC複合体（重量比１：２．７）を、静脈内注射で1回投与する。マウスの血液を、初めの注射の前、1時間後、および48時間後に採取する。大動脈基部のプラークの脂質含量およびマクロファージ含量を、それぞれオイルレッド０および免疫染色処理を行った後に測定する。注射の1時間後、血漿コレステロール流出促進能は、食塩水処理マウスおよびDPPC処理マウスに比較して、組換えA1 CS-I(m)処理マウスで有意に高い。血液サンプリングおよび定量分析を1時間の時点で行う。血液サンプリングおよび定量分析を、48時間の時点で再び行う。
【０１４７】
結果
血清中の遊離コレステロール（組織コレステロール流動化の指標）を、組換えA1 CS-l(m)注射の1時間後にベースライン値と比較し、有意な上昇を認める。48時間後、血清遊離コレステロールは有意に高いままである。組換えA1 CS-I(m)投与マウスは、食塩処理マウスおよびDPPC処理マウスと比較して、そのプラーク中の脂質含量およびマクロファージ含量が有意に低い。マウスにおいて、組換えA1 CS-I(m)の高用量単回投与により、組織コレステロールは迅速に流動化し、プラークの脂質含量およびマクロファージ含量は低下する。ウサギおよびマウスにおいて、組換えA1 CS-I(m)の反復投与により、アテローム性動脈硬化症が低減され、プラークの組成が有益に変化する。
【０１４８】
本発明の多くの改変および変更を、その意図および範囲から逸脱することなく行うことができることは、当業者に明白なところである。本明細書に記載する特定の実施形態は、単に例証のために提供するものである。
【０１４９】
本明細書での引用は全て、個々の文献または特許文書が具体的かつ個別に参照によって組み込まれることが示されるのと同じ程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書における文献または特許文書の引用はいずれも、引用された参考文献が従前技術に関連すると認めることを意図するものではなく、また、参考文献の内容または有効な従前技術の日付に関して、これを承認するものではない。
【配列表】
2013531990000001.app
【国際調査報告】
2013531990.tif 000002
2013531990.tif 000003
2013531990.tif 000004