(57)【要約】  【解決手段】認知機能低下、特にアルツハイマー病、治療用中枢神経系薬剤の候補化合物を提供する。本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩で認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を治療、阻害、軽減する方法も提供する。また、本発明の化合物／組成物を調製する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ−０の化合物、
【化３０】
2013501006.tif 000036
またはその薬学的に許容される塩であって、
【化３１】
2013501006.tif 000037
は単結合または二重結合であり、
Ｒ１はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、または−ＯＣＦ３であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールは、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
Ｒ３はＯＨまたはＮＲ３ａＮＲ３ｂであり、
Ｒ３ａは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
または、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、４−、５−、６−、または７−員ヘテロシクロアルキル基を形成し、当該基は、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであって、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールは、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されているものであり、
ただし、
【化３２】
2013501006.tif 000038
が二重結合であり、Ｒ３がＯＨである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ４のうち少なくとも１つはＨ以外である、化合物。
【請求項２】
請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉの化合物、
【化３３】
2013501006.tif 000039
またはその薬学的に許容される塩である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、またはＩｂの化合物、
【化３４】
2013501006.tif 000040
2013501006.tif 000041
またはその薬学的に許容される塩である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、またはＩａ−２の化合物、
【化３５】
2013501006.tif 000042
2013501006.tif 000043
またはその薬学的に許容される塩である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、Ｉｂ−２の化合物、
【化３６】
2013501006.tif 000044
2013501006.tif 000045
またはその薬学的に許容される塩である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
請求項１〜５記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ１はＨ、ＣＨ３、またはＣＦ３である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
請求項１〜５記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ１はＣＨ３またはＣＦ３である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項１〜５記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ１はＣＨ３である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
請求項１〜５記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ１はＦ、Ｃｌ、またはＢｒである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
請求項１〜９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
請求項１〜９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
請求項１〜９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ２はＨまたはＣ１−６アルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項１〜９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ２はＨまたはメチルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
請求項１〜９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ２はＨである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
請求項１〜３および５〜１４記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、
Ｒ３ａは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、
Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールである、、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
請求項１５記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ３ａは、Ｈであり、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、または、Ｃ３−７シクロアルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
請求項１５記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ３ａは、Ｈであり、Ｒ３ｂは、Ｃ１−６アルキル、または、Ｃ１−６ハロアルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
請求項１５記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ３ａは、Ｈであり、Ｒ３ｂは、Ｃ１−６アルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
請求項１５記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルを形成し、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されているものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
請求項１５記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルを形成し、それぞれ、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、フェニル、およびベンジルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されているものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
請求項１〜２０記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ４はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
請求項１〜２０記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ４はＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
請求項１〜２０記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ４はＨまたはＣ１−６アルキルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
請求項１〜２０記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ４はＨまたはメチルである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２５】
請求項１〜２０記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩において、Ｒ４はＨである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２６】
化合物であって、
２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，５−ジエニル）ヘプト−２−エン−４−オール、
Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプト−２−エン−４−アミン、
Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，５−ジエニル）ヘプト−２−エン−４−アミン、
（６Ｓ）−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，５−ジエニル）ヘプト−２−エン−４−オール、
（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，５−ジエニル）ヘプト−２−エン−４−アミン；および
（６Ｓ）−Ｎ−イソブチル−２−メチル−６−（４−メチルシクロヘキサ−１，５−ジエニル）ヘプト−２−エン−４−アミンから選択されるものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２７】
請求項２６記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物またはその薬学的に許容される塩は、８０重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％を超える純度を有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２８】
プロセスによって形成される化合物または薬学的に許容される塩であって、当該プロセスは、
（ａ）反応性アミノ化条件下でウコン油を４−イソブチルアミンと反応させる工程であって、これにより粗生成物を生成するものであり、４−イソブチルアミンに対する生姜油の重量比率は約３．４：１である、前記反応させる工程と、
（ｂ）化合物またはその薬学的に許容される塩を少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、または９５重量％含む組成物を単離する工程と
を有するものであり、前記化合物は、［Ｍ＋Ｈ＋］で約２７４．３の分析質量スペクトルのピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２９】
請求項２８記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ７．１１、７．０９、５．２３、３．７２、２．９４、２．５１、２．３４、２．３１、１．９２、１．７２、１．７１、１．５８、１．２９、１．２７、および０．９２にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３０】
請求項２８記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ１４４．３、１３５．４、１３５．０、１２９．０、１２６．９、１２６．７、６７．０、４９．３、４６．４、３５．１、３２．５、２５．８、２１．０、２０．７、および１８．４にピークを有するものである化合物。
【請求項３１】
プロセスによって形成される化合物または薬学的に許容される塩であって、当該プロセスは、
（ａ）反応性アミノ化条件下でウコン油を４−イソブチルアミンと反応させる工程であって、これにより粗生成物を生成するものであり、４−イソブチルアミンに対する生姜油の重量比率は約３．４：１である、前記反応させる工程と、
（ｂ）化合物またはその薬学的に許容される塩を少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、または９５重量％含む組成物を単離する工程と
を有するものであり、前記化合物は、［Ｍ＋Ｈ＋］で約２７６．３の分析質量スペクトルのピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３２】
請求項２８記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ７．１１、７．０９、５．２３、３．７２、２．９４、２．５１、２．３４、２．３１１．９２、１．７２、１．７１、１．５８、１．２９、１．２７、および０．９２にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３３】
請求項２８記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ１４４．５、１３５．４、１３１．０、１２７．９、１２６．７、１２０．８、６６．７、４９．３、４６．４、３５．１、３２．５、２５．８、２１．８、２１．７９、２０．７、および１８．４にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３４】
プロセスによって形成される化合物または薬学的に許容される塩であって、当該プロセスは、
（ａ）ウコン油を還元剤と反応させる工程であって、これにより粗生成物を生成するものであり、当該ウコン油に対する還元剤のモル比が１：１を超えるものである、前記反応させる工程と、
（ｂ）化合物またはその薬学的に許容される塩を少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、または９５重量％含む組成物を単離する工程と
を有するものであり、前記化合物は、［Ｍ＋Ｈ＋］で約２１９．２の分析質量スペクトルのピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３５】
請求項３４記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ７．１１、７．０９、５．１７、４．４５、２．３２、２．７６、１．７５、１．５８、１．５２、および１．２６にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３６】
請求項３４記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ１４４．３、１３５．４、１３５．０、１２９．１、１２８．３、１２６．９、６７．１、４２．１、３９．６、２５．８、２３．０、２１．０、および１８．１にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３７】
プロセスによって形成される化合物または薬学的に許容される塩であって、当該プロセスは、
（ａ）ウコン油を還元剤と反応させる工程であって、これにより粗生成物を生成するものであり、当該ウコン油に対する還元剤のモル比が１：１を超えるものである、前記反応させる工程と、
（ｂ）化合物またはその薬学的に許容される塩を少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、または９５重量％含む組成物を単離する工程と
を有するものであり、前記化合物は、［Ｍ＋Ｈ＋］で約２２１．１の分析質量スペクトルのピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３８】
請求項３７記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ６．１８、５．７０、５．５６、５．１７、４．２４、２．３２、２．８０、２．２９、２．１５、１．９５、１．６８、１．７５、１．５８、１．４２、および１．２７にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３９】
請求項３７記載の化合物またはその薬学的に許容される塩において、当該化合物の１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）スペクトルはおよそ以下の化学シフト、δ１４４．１、１３５．０、１３４．１、１２９．６、１２８．３、１２５．３、６６．９、４６．２、４６．２、４１．２、３９．６、３７．１、２５．８、２４．５、２３．０、および１８．１にピークを有するものである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４０】
請求項１〜３９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを有する医薬組成物。
【請求項４１】
患者の認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法であって、当該患者に、２−メチル−６−ｐ−トリルヘプト−２−エン−４−オール、（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプト−２−エン−４−オール、またはその薬学的に許容される塩、または請求項１〜３９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を有するものである、方法。
【請求項４２】
請求項４１記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の、認知機能低下症状を阻害、治療、または軽減する工程を有するものである、方法。
【請求項４３】
請求項４１記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、１若しくはそれ以上の、
（ｉ）長期増強の修復、および／または、
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｉｉｉ）一般的なアミロイドーシスの阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマーの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｖ）ニューロン細胞上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果の阻害、治療、および／または軽減を有するものである、方法。
【請求項４４】
請求項４１記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、アミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン細胞上の１若しくはそれ以上βアミロイド・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイドの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上を阻害、治療、および／または軽減する工程を有するものである、方法。
【請求項４５】
請求項４１記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、１若しくはそれ以上のニューロン細胞上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマーの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上を阻害、治療、および／または軽減する工程を有するものである、方法。
【請求項４６】
患者の認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法であって、当該患者に請求項１〜３９記載のいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を有するものである、方法。
【請求項４７】
請求項４６記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失からなる群から選択される１若しくはそれ以上の認知機能低下症状を阻害、治療、および／または軽減する工程を有するものである、方法。
【請求項４８】
請求項４６記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、１若しくはそれ以上の、
（ｉ）長期増強の修復、および／または、
（ｉｉ）神経変性の阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｉｉｉ）一般的なアミロイドーシスの阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｉｖ）アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイドオリゴマーの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上の阻害、治療、および／または軽減、および／または、
（ｖ）ニューロン細胞上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果の阻害、治療、および／または軽減を有するものである、方法。
【請求項４９】
請求項４６記載の方法において、前記認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、アミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン細胞上の１若しくはそれ以上βアミロイド・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイドの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上を阻害、治療、および／または軽減する工程を有するものである、方法。
【請求項５０】
請求項４６記載の方法において、前記患者の認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法は、ニューロン細胞上の１若しくはそれ以上βアミロイド・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイドの結合、およびアミロイド沈着のうち１若しくはそれ以上を阻害、治療、および／または軽減する工程を有するものである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００９年７月３１日に出願された米国仮出願第６１／２３０，３２６号明細書およびに２０１０年２月２６日に出願された米国仮出願第６１／３０８，６８６号明細書に対して優先権を主張した出願であり、その各内容は本明細書にこの参照によりその全体が組み込まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本発明は、特に、認知機能低下を阻害、治療または軽減するのに有用な化合物およびその調製法を提供する。「化学処理法」（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ"と呼ばれる方法において、本発明の特定の化合物は、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）に存在するような天然化合物から誘導される。本明細書に記載の化学処理法プロセスは、多様な生物の抽出物に適用可能であり、可能性のある創薬候補のスクリーニング用化合物アレイを作成するために使用し得る。さらに、化学処理法によって誘導される化合物は、化学的に安定であり、構造的に多様であって、薬学的活性の薬物スクリーニングに使用するのに良い候補である。いくつかの実施形態では、ウコン油由来の化合物が提供される。本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書に記載の化学処理法プロセスによってウコン油由来の化合物が提供される。別の実施形態において、本発明は、ウコン油から化合物のアレイを調製する方法を提供する。いくつかの他の実施形態では、認知機能低下を抑制、治療、または軽減するのに有用な化合物は化学合成によって調製される。
【０００３】
幾つかの実施形態において、本発明は、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２：の化合物、
【０００４】
【化１】
2013501006.tif 000002
【０００５】
2013501006.tif 000003
【０００６】
2013501006.tif 000004
【０００７】
2013501006.tif 000005
【０００８】
または薬学的に許容される塩を提供し、組成成分は以下に提供する。
【０００９】
本発明は、さらに医薬組成物であって、本発明の化合物（例えば、ウコン油の誘導体または式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２の化合物）、またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はさらに、医薬組成物であって、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む組成を提供する。
【００１０】
本発明はさらに、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２のような本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を用いて、認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および／または軽減する方法を提供する。
【００１１】
本発明はさらに、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２のような本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を用いて認知機能の低下を阻害、治療、および／または軽減する方法を提供する。
【００１２】
本発明はさらに、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２のような本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を用いて、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド結合（例えば、ニューロンのような脳内細胞に）、ニューロン上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果、およびアミロイド沈着（例えば、ニューロン細胞のような脳内細胞上に）のうち、１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減する方法を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２の化合物、またはその薬学的に許容される塩を治療用に提供する。
【００１４】
本発明はさらに、式Ｉ−０、Ｉ、Ｉａ−０、Ｉａ、Ｉｂ−０、Ｉｂ、Ｉａ−１−０、Ｉａ−１、Ｉａ−２−０、Ｉａ−２、Ｉｂ−１−０、Ｉｂ−１、Ｉｂ−２−０、またはＩｂ−２の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を治療用薬剤の製造／調製用に提供する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン（例えば、脳内のニューロンなど）へのアミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の結合を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）し、認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、および軽減するのに有用である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集、アミロイド結合、およびアミロイド沈着の内の１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド結合を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、前記化合物はβ−セクレターゼのアッセイで活性を示し、認知機能低下およびアルツハイマー病の抑制、治療、の軽減のために有用である可能性がある。いくつかの実施形態ではウコン油の誘導体は、精製および単離された形態の化合物である（例えば、純度が８０％、８５％、９０％、９５％、９８重量％、または９９％を超える）。本明細書に記載の化合物および方法は、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失のような認知機能の低下および／またはアルツハイマー病の症状の内の１つまたはそれ以上を治療するために使用してもよい。さらに、本明細書に記載の化合物および方法は、長期増強作用を回復し、および／または神経変性および一般アミロイド症のどちらか、または両者を阻害、治療、または軽減することによって、より具体的には、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド結合、およびアミロイド沈着の内、１若しくはそれ以上を阻害、治療、または軽減することによって、認知機能の低下および／またはアルツハイマー病を阻害、治療、または軽減するのに有用である可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、アミロイド前駆体タンパク質処理物の存在下および非存在下におけるＭＴＴアッセイの結果を示す。
【図２】図２は、ＣＴ０１０９による、アミロイド前駆体タンパク質処理物媒介の膜輸送効果の阻害を示す。
【図３】図３は、ＣＴ０１０９がアミロイド前駆体タンパク質処理物の記憶喪失効果を阻害することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失ような認知機能の低下は、程度は異なるが、人口の多くの割合が高齢化するにつれて発生する。認知機能低下の最も一般的な、重度の不可逆的認知機能の低下が、アルツハイマー病であり、現時点では、常に致命的である。
【００１８】
認知機能低下およびアルツハイマー病の症状は、アミロイド斑と神経原線維タングルの形成に起因すると考えられているが、これらは脳内のニューロン（神経細胞）の劣化と症状のその後の発症に寄与すると考えられている。アミロイドは、体が正常に産生するタンパク質断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）の総称である。β−アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれる別のタンパク質から切り取られたタンパク質の断片である。健常な脳では、β−アミロイドタンパク質断片は、分解され、脱離される。アルツハイマー病および他の形態の認知機能低下の人では、前記断片は、蓄積して堅い、不溶性のプラークを形成する。神経原線維タングル（ｔａｎｇｌｅ）は、脳細胞の中に見出される不溶性のねじれた繊維である。神経原線維タングルに含まれるタンパク質、すなわち、タウ蛋白質は、別の神経細胞の一部分から他の部分へ栄養素およびその他の重要な物質を輸送するのを助ける微小管を形成する。アルツハイマー病においては、タウ蛋白が異常であって、前記微小管の構造が崩壊する。
【００１９】
β−セクレターゼは、ヒトの脳内にある酵素であって、アルツハイマー病脳内の脳のプラークとタングルの形成に関与する病原性物質である、β−アミロイド、の産生に関与している。β−アミロイドとそのオリゴマー（β−アミロイドオリゴマーまたはＡベータオリゴマー）も前アルツハイマー病の脳の初期で認知機能の低下に関与していると考えられる。β−セクレターゼを阻害することは、脳内のβ−アミロイドによる負担を軽減し、その結果、認知機能の低下を遅らせ、アミロイドオリゴマーの形成およびプラークとタングルの産生を阻止し、神経変性を停滞させ、軽度の認知障害およびより深刻なタイプのアルツハイマー病などの認知障害を治療する可能性があることが期待されるであろう。
【００２０】
世界中で数百万の人々が認知機能低下およびアルツハイマー病に冒されている。したがって、認知機能の低下の阻害剤、即ち特にアミロイド（βアミロイドオリゴマーを含む）の産生、アミロイド（βアミロイドオリゴマーを含む）の凝集  および／またはアミロイド（アミロイドβオリゴマーを含む）の沈着（すなわち、プラ−キング  （ｐｌａｑＩｎｇ）を阻害したり、神経変性を阻害したり、および／または長期増強を復元したり、および／またはニューロン上のβアミロイド・オリゴマーの活性／効果を阻害するような方法による、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である化合物を発見する必要性が強い。亦、化学的および生物学的に安定な、認知機能低下阻害剤の必要性もある。
【００２１】
植物は、認知機能低下およびアルツハイマー病の領域における創薬のための可能性のある、貴重な資源として、余り注目を集めていなかった。植物抽出物を使用して薬剤として興味のある化合物の非天然性誘導体を生成することは、一般に使用されていない。したがって、植物抽出物および他の生物源からの抽出物から医薬として興味のある化合物の調製方法の必要性もある。特に、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である植物抽出物由来の化合物を生成し、識別する必要もある。
【００２２】
インドで豊かに生育するウコンは、インドの医学−アーユルヴェーダのシステムで非常に評判の薬草であって、Ｃuｒｃｕｍａ  ｌoｎga  L．Ｓｙｎ．Ｃｕｒｃｕｍａｄｏｍｅｓｔｉｃａ  Ｖａｌｅｔｏｎ（Ｆaｍ．Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ)の根茎である。これは、長い間、食品のスパイスおよび着色剤として使用されてきた。その粉末または抽出物は、傷および炎症を治療するこのに推奨されてきた。ショウガ科のクルクマ属の根茎および葉の脂溶性抽出物は、神経脳血管（ｎｅｕｒｏｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）障害の治療に有用であることが報告されている。ＷＯ  ２００３０５１３８０を参照。ウコン油は、ターメリック（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）から超臨界二酸化炭素で抽出することができる。例えば次を参照：Ｂ.ゴーパランら。"超臨界二酸化炭素によるウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌoｎga）の抽出Ｂ．Ｇｏｐａｌａｎ，eｔ．aｌ，"Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｄｉｏｘｉｄｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｒｍｅｒｉｃ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）"，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２０００，４８（６），ｐｐ  ２１８９−２１９２；次も参照、Ｌ−Ｈ  Ｃｈａｎｇら，"Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｃａｒｂｏｎ  ｄｉｏｘｉｄｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｒｍｅｒｉｃ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌｉｎｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｒｍｅｒｏｎｅｓ"，Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌｕｍｅ  ４７，Ｉｓｓｕｅ  ３，Ｊａｎｕａｒｙ  ２００６，Ｐａｇｅｓ  １１９−１２５．本発明は、一部、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である、ウコン油から誘導された化合物（すなわちウコン油誘導体）の調製および識別に関する。また、本発明は、亦一部、認知機能低下およびアルツハイマー病の治療および軽減に有用である化合物を化学的に合成することに関するものである。
【００２３】
本明細書に記載の化合物、組成物、および方法は、これらのニーズおよびその他の目的に向けられている。
【００２４】
本明細の実施形態は、特に式Ｉ−０の化合物
【００２５】
【化２】
2013501006.tif 000006
【００２６】
またはその薬学的に許容される塩を提供し、
【００２７】
【化３】
2013501006.tif 000007
【００２８】
は単結合または二重結合であり、
Ｒ１はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、または−ＯＣＦ３であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであって前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され;
Ｒ３はＯＨまたはＮＲ３ａＮＲ３ｂであり、
Ｒ３ａは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、
前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
または、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、４−、５−、６−、または７−員ヘテロシクロアルキル基を形成し、当該基は、０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリール、であって、前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリール、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されているものである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、
【００３０】
【化４】
2013501006.tif 000008
【００３１】
が二重結合であり、Ｒ３はＯＨである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ４の少なくとも１つはＨ以外である。いくつかの実施形態においては、式Ｉ−０の化合物は、２−メチル−６−ｐ−トリルヘプト−２−エン−４−オール（２−ｍｅｔｈｙｌ−６−ｐ−ｔｏｌｙｈｅｐｔ−２−ｅｎ−４−ｏｌ）以外である。
【００３２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学上許容される塩の化合物は、式Ｉの化合物である。
【００３３】
【化５】
2013501006.tif 000009
【００３４】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、（６Ｓ）−２−メチル−６−ｐ−トリルヘプト−２−エン−４−オール以外のものである。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉａ−０の化合物、
【００３６】
【化６】
2013501006.tif 000010
【００３７】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００３８】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、式Ｉａの化合物、
【００３９】
【化７】
2013501006.tif 000011
【００４０】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００４１】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂ−０の化合物、
【００４２】
【化８】
2013501006.tif 000012
【００４３】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂの化合物、
【００４５】
【化９】
2013501006.tif 000013
【００４６】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉａ−１−０の化合物、
【００４８】
【化１０】
2013501006.tif 000014
【００４９】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉａ−１の化合物、
【００５１】
【化１１】
2013501006.tif 000015
【００５２】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉａ−２−０の化合物、
【００５４】
【化１２】
2013501006.tif 000016
【００５５】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉａ−２の化合物である。
【００５７】
【化１３】
2013501006.tif 000017
【００５８】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂ−１−０の化合物である。
【００６０】
【化１４】
2013501006.tif 000018
【００６１】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００６２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂ−１の化合物、
【００６３】
【化１５】
2013501006.tif 000019
【００６４】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂ−２−０の化合物、
【００６６】
【化１６】
2013501006.tif 000020
【００６７】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は式Ｉｂ−２の化合物、
【００６９】
【化１７】
2013501006.tif 000021
【００７０】
またはその薬学的に許容される塩である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＨ、ＣＨ３、またはＣＦ３である。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ１はＣＨ３またはＣＦ３である。さらに別の実施形態では、Ｒ１はＣＨ３である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＨまたはＣＨ３である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＦ、Ｃｌ、またはＢｒである。他の実施形態では、Ｒ１はＯＣＦ３である。
【００７４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールである。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨまたはＣ１−６アルキルである。。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ２はＨまたはメチルである。さらに別の実施形態では、Ｒ２はＨである。
【００７６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＨ、ＣＨ３、またはＣＦ３であり、Ｒ２はＨまたはＣ１−６アルキルである。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ１はＣＨ３またはＣＦ３であり、Ｒ２はＨである。さらに別の実施形態では、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＨである。
【００７７】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ３ａは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールである。
【００７８】
いくつかの実施形態では、Ｒ３bは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ３bは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ１−６アリールである。
【００７９】
いくつかの実施形態では、Ｒ３aは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。
【００８０】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。
【００８１】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨ、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨ、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールであり、それぞれ前記Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールは、各０、１、２、３、４、または５個の、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６ハロアルコキシからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。
【００８２】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールである。
【００８３】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールである。
【００８４】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリールアルキル、またはＣ６−１０アリールである。
【００８５】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、または、Ｃ３−７シクロアルキルである。
【００８６】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６ハロアルキルである。
【００８７】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａはＨであり、Ｒ３ｂは、Ｃ１−６アルキルである。
【００８８】
いくつかの実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルを形成し、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからそれぞれ独立して選択される置換基で置換されている。
【００８９】
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、これらが結合しているＮ原子と共に、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルを形成し、各０、１、２、３、４、または５個の、ＯＨ、アミノ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ハロアルコキシ、フェニル、およびベンジルからそれぞれ独立して選ばれる置換基で置換されている。
【００９０】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、またはＣ１−６アリールである。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−７シクロアルキルである。
【００９１】
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−６Ｃ１−６アルキルである。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。さらに別の実施形態では、Ｒ４は、Ｈである。
【００９２】
いくつかの実施形態では、
【００９３】
いくつかの実施形態ではＲ２はＨまたはＣ１−６アルキルであり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−６アルキルである。
【００９４】
いくつかの実施形態ではＲ２はＨまたはメチルであり、Ｒ４は、Ｈまたはメチルである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１はＨ、ＣＨ３、またはＣＦ３であり、Ｒ２はＨまたはＣ１−６アルキルであり、Ｒ４は、ＨまたはＣ１−６アルキルである。さらにいくつかの実施形態では、Ｒ１はＣＨ３またはＣＦ３であり、Ｒ２はＨであり、Ｒ４はＨである。さらなる実施形態では、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＨであり、Ｒ４はＨである。
【００９６】
本明細書中の様々な箇所で、本発明の化合物の置換基は、グループまたは範囲で開示されている。それは具体的には、本発明の実施形態は、それぞれ、そのようなグループと範囲のメンバーのすべての個々のサブコンビネーションを含むよう意図されている。例えば、用語「Ｃ１−６アルキル」は、特定して個別にメチル（Ｃ１アルキル）、エチル（Ｃ２）アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、およびＣ６アルキルを開示するよう意図している。
【００９７】
変数が複数回表示される本発明の化合物については、各変数は、変数を定義するマーカッシュ群から選択された、別の方の部分であり得る。たとえば、ある構造が同一化合物上に同時に存在する２つのＲ基を有すると記載されている場合、この２つのＲ基はＲに定義されたマーカッシュ群から選択された別の方の部分を表すことができる。
【００９８】
さらに、明確にするために、たとえば、別の実施形態の文脈で説明されている、本発明の特定の機能はまた、単一の実施形態の中で組み合わせとして提供することができることが理解されよう。逆に、簡潔にするため、単一の実施形態の文脈で説明されている、本発明の様々な機能が、また個別に、または任意の適切なサブコンビネーションで提供することができる。
【００９９】
ｎが通常整数である合、用語「ｎ−員」は、環を形成する原子の数がｎである部分の環形原子の数を示している。例えば、ピリジンは、６−員環ヘテロ環の一例あり、チオフェンは５−員環ヘテロアリール基の一例である。
【０１００】
本明細書中で用いる場合、用語「アルキル」は直鎖または分枝状飽和炭化水素基を指すことを意味する。アルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ−プロピル、イソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル）、ペンチル基（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）などを含む。アルキル基は、１〜約２０、２〜約２０、１〜約１０、１〜約８、１〜約６、１〜約４、または１〜約３個の炭素原子を含むことができる。本明細書で用いる場合、「ハロアルキル」は、１つまたはそれ以上のハロゲン置換基を有するアルキル基を意味する。ハロアルキル基例は、これらに限定されるものではないが、ＣＦ３、Ｃ２Ｆ５、ＣＨＦ２、ＣＣｌ３、ＣＨＣｌ２、Ｃ２Ｃｌ５、ＣＨ２ＣＦ３などを含む。  本明細書で使用する場合、「アリール」は、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどのような単環式または多環式（例えば、２、３または４個の縮合環を有する）芳香族炭化水素を指す。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜約１０個の炭素原子を有する。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、「シクロアルキル」は、２０以下の炭素原子を含む環形成アルキル、アルケニル、およびアルキニル基を含む非芳香族環状炭化水素を指す。シクロアルキル基は、モノ−、または多環式（例えば、２、３または４個の縮合環を有する）環系ならびにスピロ環系を含むことができる。シクロアルキル基は、３〜約１５、３〜約１０〜、３〜約８、３〜約６、４〜約６、または３〜約５個、または５〜約６個の環形成炭素原子を含むことができる。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、これらに限定されるものではないが、選択的にオキソまたはスルフィドで置換することができる。シクロアルキル基の例は、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカーニル、アダマンチルなどを含む。また、シクロアルキルの定義に含まれ部分は、当該シクロアルキル環に１若しくはそれ以上の芳香環が縮合。（すなわち、共通の結合を有する）したものであり、例えばペンタン、ペンテン、ヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル、または１Ｈ−インデン−２（３Ｈ）−オン−１−イル）である。好ましくは、「シクロアルキル」は２０以下の炭素原子を含む環形成アルキル基を意味する。シクロアルキルの例は好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンチルなどを含む。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」は、２０個以下のの環形成原子および少なくとも１つの、硫黄、酸素、窒素などのヘテロ原子環メンバー（環形成原子）を有する芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、硫黄、酸素、窒素からそれぞれ独立して選ばれる少なくとも１つまたはそれ以上のヘテロ原子の環形成原子を有する。ヘテロアリール基は単環式および多環式（例えば、２、３または４の縮合環を持つ）システムを含む。ヘテロアリール基の例は、限定されるものではないが、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニルなどを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は１〜約２０個の炭素原子を有しており、さらなる実施形態では、約１〜約５、約１〜約４、約１〜約３、約１〜約２個の炭素原子を環形成原子として有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、３〜約１４、３〜約７、または５〜６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１〜約４、１〜約３、または１〜２個のヘテロ原子を含む。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、「ヘテロシクロアルキル」は、１若しくはそれ以上の環形成炭素原子をＯ、ＮまたはＳ原子のようなヘテロ原子で置換された、環化アルキル、アルケニルおよびアルキニル基を含み、２０個以下の環形成原子を有する非芳香族複素環を指す。ヘテロシクロアルキル基は、モノまたは多環式（例えば、縮合およびスピロシステムの両方）であり得る。「ヘテロシクロアルキル」の例は、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、２，３−ジヒドロベンゾフリル、１，３−ベンゾジオキソール、ベンゾ−１，４−ジオキサン、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリ、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、ピロリジン−２−オン−３−イルなどを含む。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子とヘテロ原子はオキソまたはスルフィドで選択的に置換することができる。たとえば、環を形成するＳ原子を１または２個のオキソで置換することができる[すなわち、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２を形成]。別の例として、環を形成するＣ原子がオキソ（すなわち、カルボニル形成）で置換することができる。また、ヘテロシクロアルキルの定義に含まれるのは、１つまたはそれ以上の芳香環が、例えば、ピリジニル、チオフェニル、フタリミジル、ナフタリミジル、およびインドレン、イソインドレン、イソインドリン−１−オン−３−イル、４，５，６，７−テトラヒドロ[２，３−ｃ]ピリジン−５−イル、５，６−ジヒドロチエノ[２，３−ｃ]ピリジン７（４Ｈ）−オン−５−イル、３，４−ジヒドロ−１（２Ｈ）−オン−３ｙｌ基などの複素環のベンゾ誘導体のような非芳香族複素環に縮合（すなわち、前記環と共通の結合を有する）した部分である。環形成炭素原子とヘテロシクロアルキル基のヘテロ原子は、オキソまたはスルフィドで選択的に置換することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は１〜約２０個の炭素原子を、さらなる実施形態では、約３〜約２０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は３〜約１４、３〜約７、または５〜６個の環形成原子３を含む。いくつかの実施形態では、前記ヘテロシクロアルキル基は、１〜約４、１〜３個、または１〜２個のヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜３個の二重結合を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は０〜２個の三重結合を含む。
【０１０４】
本明細書で使用する場合、「ハロ」または、「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを含む。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル基を意味する。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどを含む。
【０１０６】
本明細書中で使用する場合、「ハロアルコキシ」は、−Ｏ−ハロアルキル基を指す。ハロアルコキシ基の例はＯＣＦ３である。本明細書で使用する場合、「トリハロメトキシ」は、３個のハロゲン置換基を有するメトキシ基を意味する。トリハロメトキシ基の例は、これらに限定されるものではないが、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌＦ２、−ＯＣＣｌ３などを含む。
【０１０７】
本明細書で使用する場合「アリールアルキル」はアリールで置換したＣ１−６アルキルを指す。アリールアルキル基の例は、これに限定されるものではないが、Ｃ６−１０アリール基で置換したＣ１−６アルキル（例えば、ベンジル）を含む。
【０１０８】
本明細書で使用する場合、「シクロアルキルアルキル」は、シクロアルキルで置換したＣ１−６アルキルを指す。シクロアルキルアルキル基の例は、これに限定されるものではないが、Ｃ３−１０シクロアルキルまたはＣ３−７シクロアルキル（例えば。シクロプロピルメチル）で置換したＣ１−６アルキルを含む。
【０１０９】
本明細書で使用する場合、「アミノ」はＮＨ２を指す。
【０１１０】
本明細書で使用する場合、用語「選択的に置換した」は、その置換は選択的であり、したがって、非置換および置換の原子および部分の両方を含むことを意味する。「置換した」原子または部分は、指定された原子または部分上の任意の水素が指定された原子または部分の通常の原子価を超えていなく、当該置換が安定な化合物を生ずる限り、指定された置換基から選択で置き換えることができることを示す。例えば、メチル基（すなわち、ＣＨ３）が選択的に置換されている場合、炭素原子上３つの水素原子を置換基で置換することができる。
【０１１１】
本明細書の実施形態に記載の化合物は、非対称（例えば、１つまたはそれ以上の立体中心を有する）であってもよい。特記しない限りエナンチオマーおよびジアステレオマーようなすべての立体異性体が意図されている。非対称置換炭素原子を含む本発明の化合物は、光学活性またはラセミ型で単離することができる。ラセミ混合物の分割または立体選択的合成などによって、光学活性出発材料から光学活性体を調製する方法は、当該分野で公知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体なは本明細書に記載の化合物中に存在することができ、すべてのそのような安定異性体は、本発明で考慮されている。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体は、記載されており、異性体の混合物または分離した異性体として単離することができる。立体異性または幾何異性が可能な化合物が特定のＲ／Ｓまたはシス／トランス配置を参照せずに、その構造または名前で指定されている場合、そのようなすべての異性体が企図されるよう意図されている。
【０１１２】
化合物のラセミ混合物（またはジアステレオ異性体の混合物）の分割は、当技術分野で公知の多数の方法のいずれかによって実施することができる。方法の例は、光学活性な塩を形成する有機酸である、キラル分割用酸を用いた分別再結晶を含む。分別再結晶法に適し分割剤は、例えば、ＤおよびＬ型の、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、またはカンファースルホン酸のような様々な光学活性カンファースルホン酸のなどの光学活性な酸である。分別結晶方法に適した他の分割剤は、立体異性的に純粋な形態のα−メチルベンジルアミン（例えば、ＳおよびＲ型、またはジアステレオマー的に純粋な型）、２−フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ−メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２−ジアミノシクロヘキサン、等を含む。
【０１１３】
ラセミ混合物（またはジアステレオマーの混合物）の分割は、光学活性分割剤（例えば、ｄｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）を充填したカラムで溶出することにより行うことができる。適当な溶出溶媒組成は、当業者によって決定することができる。
【０１１４】
本発明の実施形態の化合物は亦互変異性体形式を含む。互変異性体は、隣接する二重結合と単結合の交換がプロトンの同時移行と共に起こる結果である。互変異性体は、同じ実験式と総電荷を有する、異性体のプロトン化状態である、プロトンによる互変異性体を含む。プロトンによる互変異性体の例えば、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、アミド−イミド酸対、エナミン−イミン対、およびプロトンが、例えば、１Ｈ−と３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−と２Ｈ−イソインドール、および１Ｈと２Ｈ−ピラゾールのように、複素環系の２つ以上の位置を占有することができる環状体を含む。互変異性体は、平衡状態にあるか、または立体的に適切な置換によって１つの形に固定できる。
【０１１５】
本発明の実施形態の化合物は、さらに水和物および溶媒和物、ならびに無水非溶媒和形を含む。
【０１１６】
本明細書で使用する場合、用語「化合物」は、表示した構造のすべての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことを意味する。
【０１１７】
全ての化合物およびその薬学的に許容される塩は調製することができるし、または、水および溶媒（例えば水和物および溶媒和物）のような他の物質と一緒に存在、または分離することができる。  本発明の実施形態の化合物は、また、中間体または最終化合物ニ存在する原子のすべての同位体を含むことができる。同位体は同じ原子番号で異なる質量数を有する原子を含む。例えば、水素の同位体は、トリチウムと重水素を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物またはその塩は実質的に単離される。「実質的に単離された」は、当該化合物が少なくとも部分的にまたは実質的にそれが形成または検出された環境から分離されていることを意味する。部分的な分離は、例えば、本発明の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離は、本発明の化合物またはその塩を、重量で少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％含む組成物を包含することができる。化合物およびその塩を単離する方法は当該技術分野では日常のことである。
【０１１９】
本発明の実施形態の化合物は、安定した構造を持つ化合物を含むことを意図している。明細書中で使用する場合、「安定な化合物」および「安定な構造」は反応混合物から有用な程度の純度に、また、製剤を有効な治療薬に、単離するのにに耐える程十分に堅牢である化合物を示すよう意図されている。
【０１２０】
用語"薬学的に許容される"は、本明細書において、正しい医学的判断の範囲内であり、ヒトおよび動物の組織と接触での使用に適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題および合併症がなく、合理的な利益／危険比に見合った、これらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために採用している。
【０１２１】
式「周辺温度」および「室温」は、本明細書中で使用する場合、当該技術で理解されており、一般に温度、例えば反応温度のことで、反応が行われている部屋の温度、約２０℃〜約３０℃を意味する。
【０１２２】
本発明の実施形態は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用する場合、"薬学的に許容される塩"は開示された化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸または塩基部分をその塩の形に変換することによって改変されるのである。薬学的に許容される塩の例としては、これに限定されるものではないが、アミンなどの塩基性残基のミネラルまたは有機酸塩、およびカルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩等を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性塩を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基型を、水または有機溶媒中で、または２つの混合物中で、適切な塩基または酸の化学量論量反応させることにより調製することができる。エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリル（ＡＣＮ）のような、非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．，１９８５，ｐ．１４１８（米国ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ）およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｑｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に記載されており、これら各々の文献全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
【０１２３】
化学処理法
いくつかの実施形態では、このようなウコン油などの生物抽出物から一連の化合物を調製する方法が提供される。
【０１２４】
「化学処理法」と呼ぶ、本発明の方法は、すべての生物抽出物、特に通常または薬効がある、天然植物抽出物に適用される。例えば米国特許出願号第２００８０１９３５７４号および国際公開第ＷＯ２００８０４２７５５号を参照、また、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。化学処理法が容易に入手できる天然素材から新規の非天然性ドラッグライクな化合物を生成する方法である。一般に、天然抽出物の「化学処理法」は化学処理法した抽出物の前分画と相まって、生化学的アッセイにおける偽の陽性の結果を生成する反応性天然化合物を破壊することによって抽出物の生化学的スクリーニングが好結果を収めるのを助ける。化学処理法は、新規のリードライクでドラッグライクな化合物を生成し、本明細書に記載の還元的アミノ化プロトコルと還元プロトコルで構造的に多様な含窒素、特にリードライクでドラッグライクな製品およびアルコール製品を生産することができる。
【０１２５】
本発明の特定の実施形態では、生物抽出物からの化合物の調製方法は、以下の図式１に例示されている。当該方法によれば、まず、生物抽出物、例えば、植物抽出物が提供され、前記生物抽出物は、１つまたはそれ以上の生物化合物を有し、生物化合物は、各々１つまたはそれ以上の求電子反応基を有する。次に、生物抽出物中の生物化合物をアミンと反応させて、そのアミンを生物化合物に組み入れる。次に、組み入れたアミンを有する生物化合物は、還元剤と反応させ、中間体イミンとエナミン化合物を還元して１つまたはそれ以上の窒素含有化合物を生成する。したがって、得られた窒素含有化合物は、生物抽出物中の生物化合物の誘導体である。
【０１２６】
【化１８】
2013501006.tif 000022
【０１２７】
同様に、本発明の特定の他の実施形態では、生物抽出物からの化合物の調製方法は、以下の図式１ａに例示されている。第二級アミンは、（Ｒ１*Ｒ２*は、それぞれアルキル等でもよく、または、これらが結合しているＮ原子と、ピロリジンのような環状アミンを形成する）処理した抽出物で使用する。
【０１２８】
【化１９】
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【０１２９】
いくつかの実施形態では、化学処理法による抽出物中の化合物は、種々のアミンと、ケトンとアルデヒドを有する化合物との反応生成物である。この反応に次いで前記中間体イミンとエナミンを水素化物還元などで還元し、二級および三級アミンを生ずる。アミンと、ケトン類およびアルデヒド類との反応に次いで生成したイミンとエナミンを還元してアミン類を生成するするのは、当該技術分野で既知である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、化学処理法による抽出化合物は、水素化物還元試薬（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド）のような還元試薬と、ケトンとアルデヒドを有する化合物との反応生成物である。いくつかの実施形態では、ケトンとアルデヒドがアルコールに還元される。いくつかの実施形態では、化学処理法抽出物中の化合物は、水素化物還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、アルミニウムリチウム、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド）のような還元剤の存在下で還元することができる、他の反応性官能基を有する化合物である。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化学処理法による方法は、生物抽出物（例えば、ウコン油など）を採用し、多くの異なる試薬を用いて効率的に一連の窒素含有化合物を生成する。還元的アミノ化工程の原材料として使用するのに多くの低分子量アミンが商業的に容易に入手出来るので、同一天然抽出物から多くの異なる、構造的に多様な中枢神経系ドラッグライク混合物の開発ができるのである。本方法での使用に適したアミンは、第一アミン、第二アミン、環状アミン、ピロリジン、アミノ酸から成る群から選択される。本発明の方法での使用に適した還元剤は、これに限定されるものではないが、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、および水素化リチウムアルミニウムを含む水素化物還元剤の群から選択される。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化学処理法による方法は、生物抽出物（例えば、ウコン油など）を採用し、１若しくはそれ以上の還元剤を使用して効率的に一連のアルコール含有化合物（アルコール誘導体）を生成する。本発明の方法での使用に適した還元剤は、これに限定されるものではないが、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、および水素化リチウムアルミニウムを含む水素化物還元剤の群から選択される。
【０１３３】
前記方法はさらに、反応停止剤（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を用いて前記反応を停止することを含むことができ、その際、当該反応停止剤は、これに限定されるものではないが、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウム１０水和物からなる群から選択される。本方法はまた、１若しくはそれ以上の含窒素化合物を、精製または未精製の形態で、単離することを含めてもよい。得られた窒素含有化学物質は、その後生物学的活性についてスクリーニングまたは試験することができる。
【０１３４】
本明細書に記載の還元または還元的アミノ化による化学処理法のプロセスは、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中にある反応性の求電子体を破壊し、アミンまたはアルコールのような化学的に安定な化合物に変換する。得られた化学処理法による抽出物は、天然化合物および潜在的な薬剤候補である、新規の非天然窒素含有アミン製品またはアルコール製品の両方を含む。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の還元的アミノ化による化学処理法の過程で、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中の反応性求電子剤は、破棄され、ケトン化合物は、アミンなどの他の化合物に変換される。いくつかの他の実施形態において、本明細書に記載の還元による化学処理法の過程で、ウコン油のようにケトン類を含む天然抽出物中の反応性求電子剤は、破棄され、前記ケトン化合物は、アルコールのような他の化合物に変換される。
【０１３５】
ウコン油の抽出物の場合には、当該窒素含有アミン誘導体およびアルコール誘導体は、有望な中枢神経系の薬である。
【０１３６】
本開示の目的では、以下の用語は以下の意味を有する。
【０１３７】
用語「生物化合物」は、本明細書で使用する場合、天然に存在する化合物を指す。
【０１３８】
用語「生物抽出物」は、本明細書で使用する場合、天然に存在する化合物を含有する、植物抽出物のような生物試料由来の抽出物、または有機物由来の他の抽出物を指す。
【０１３９】
用語「反応性求電子基」は、本明細書で使用する場合、求核剤と反応する能力を有する原子または原子のグループを意味する。
【０１４０】
用語「窒素含有誘導体」は、本明細書で使用する場合、窒素原子を含有し、当該窒素原子が親化合物中の酸素のような他の原子を置換する、これらの誘導体を表す。
【０１４１】
用語「アルコール誘導体」は、本明細書で使用する場合、水酸基を含み、当該水酸基は、親化合物（ケトンまたはアルデヒド親化合物）のカルボニル基から還元されている、これらの誘導体を表す。
【０１４２】
１つの実施形態で、化学処理法プロセスの具体例を、以下の図式２に示す。図式２は、ケトン２−１ａおよび２−１ｂを含むウコン油をそれぞれアミン２−４ａと２−４ｂに変換する、前記方法の一実施形態に係るウコン油に実施した二段還元的アミノ化の化学処理法プロトコル（手順）を示す。図式２に示す方法に従って、ウコン油（ケトン２−１ａおよび２−１ｂとウコン中に存在する他の分子とを含む）はアミン  ２−２と反応させ［Ｒ３ｂはアルキル（例えば、イソブチル）などでよい］、それぞれぞれ化合物２−３aおよび２−３bを生成する。次いで、得られた化合物２−３aおよび２−３ｂは、次に水素化ホウ素のような還元剤で還元され、それぞれ窒素含有化合物２−４ａと２−４ｂを生成する（反応粗生成物は、他の化合物も含む）。
【０１４３】
【化２０】
2013501006.tif 000024
【０１４４】
本方法の次のステップでは、抽出物（２段階の還元的アミノ化プロセスの粗反応生成物）からアミン２−４ａと２−４ｂとが単離／精製される。当該処理済み抽出物は、フラッシュクロマトグラフィーによって分画することができる。アミン２−４ａまたは２−４ｂを含む前記画分は、当業者に公知の方法に従ってさらに精製／分離できる。２−４ａまたは２−４ｂアミンを含む画分をさらに次いで単離および特性評価できる。いくつかの実施形態では、アミン２−４ａは、ジアステレオマーのそれぞれを分離するためにさらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）されてもよい。いくつかの実施形態では、アミン２−４ｂは、ジアステレオマーのそれぞれを分離するためにさらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）されてもよい。単離したアミン２−４ａと２−４ｂは、本明細書に記載されている方法などによって、それらの生物活性がテストされる。
【０１４５】
図式２に示す本発明の化学処理法プロセスで使用するアミン２−２のいくつかの例は、メチルアミン、エチルアミン、ｎ−プロピルアミン、イソプロピルアミン、ｎ−ブチルアミン、２−ブチルアミン、イソブチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、フェニルアミン、およびベンジルアミンのようなアルキルアミンを包含する。
【０１４６】
他の実施形態において、化学処理法のプロセスの具体例を以下の図式３に示す。図式３は、前記方法の一実施形態に係るウコン油に実施した還元的化学処理法プロトコル（または還元の化学処理法プロトコル）を示す。ここにおいて、ウコン油は、アルコール３−２ａ及び３−２ｂにそれぞれ還元／変換されるケトン３−１ａ及び３−１ｂを有する。いくつかの実施形態において、アルコール３−２ａは、ジアステレオマーのそれぞれを単離するために、さらに分離（例えば、カラムクロマトグラフィーを使用するなど）されてもよい。アルコール誘導体３−２ａ及び３−２ｂは、本明細書に記載されている方法などによって、それらの生物活性がテストされる。
【０１４７】
【化２１】
2013501006.tif 000025
いくつかの実施形態では、アミン誘導体２−４ａ及び２−４ｂ及びアルコール誘導体３−２ａ及び３−２ｂのようなウコン油の誘導体は、ベータ−セクレターゼ阻害活性を有し、及び／または、アミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のＡベータ・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイド・オリゴマーを含む）結合、またはアミロイド沈着を阻害する。これらの化合物は、認知機能低下、アミロイド産生、神経変性、アルツハイマー病の治療及び予防のために有用な治療薬である。
【０１４８】
この化学処理方によって生成される新規のリード化合物は、本明細書に記載された合成方法によっても調製されることができる。
【０１４９】
合成
本発明の実施形態の化合物にはそれらの塩を含み、既知の有機合成技術を使用して調製されることができ、及び、多数の可能な合成経路のいずれかによって合成されることができる。
【０１５０】
本発明の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者によって直ちに選択されることのできる適当な溶媒中で実行されることができる。適当な溶媒は、反応が行われる温度、例えば、溶媒の凝固点温度から溶媒の沸点温度にわたる温度において、出発物質（反応体）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であることがある。所与の反応は、１つの溶媒中で、または１つ以上の溶媒の混合物中で行われることがある。特定の反応工程によって、特定の反応工程のための適当な溶媒は、当業者によって選択されることができる。
【０１５１】
本発明の化合物の調製は、様々な化学反応基の保護及び脱保護を含む。保護及び脱保護における必要性及び適当な保護基の選択は、当業者によって直ちに決定されることができる。保護基の化学的性質は、例えば、その全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．，  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９９）において見受けられる。
【０１５２】
反応は、当業者に既知の任意の適当な方法に従ってモニターされることができる。例えば、生成物の生成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ−可視）、質量分析法、または、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）または薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ）のようなクロマトグラフィー法によってモニターされることができる。
【０１５３】
本発明の実施形態の化合物は、例えば、以下に記載された反応経路、合成手順及び技術に従って調製されることができる。
【０１５４】
図式４に示したように、ケトン４−１は、１，３−ジエステル  ４−２［ここにおいて各Ｒ１０はそれぞれ独立してアルキル（例えばメチル）などである］と、酸または塩基どちらかの触媒の存在下で（エノラートを経由して）反応し、続いて、酸４−３を生成するために加水分解（例えば酸性条件下）し、及び、ＣＯ２を失う。ＬＡＨのような還元剤と酸４−３（またはメチルエステルのようなそのエステル）の反応、続くデス−マーチンペルヨージナンのような酸化剤による中間体アルコールの酸化が、アルデヒド  ４−４を生成できる。有機リチウム化合物４−５のような有機金属化合物とアルデヒド  ４−４の反応は、アルコール  ４−６を形成できる。アルコール  ４−６の異なるジアステレオマーは、カラムクロマトグラフィー法のような当業者において既知の方法によって分離されることができる。例えば、Ａ．  Ｌｉ，  ｅｔ．  ａｌ，  "Ｔｏｔａｌ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （７Ｓ，９Ｒ）−（＋）−ｂｉｓａｃｕｍｏｌ"，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ  （２００３），  １４（１），  ７５−７８．を参照。ＭｎＯ２のような適当な酸化剤によるアルコール  ４−６の酸化は、ケトン  ４−７を生成できる。水素化ホウ素ナトリウムのような適当な水素化物の存在下での適当なアミンＲ３ｂＮＨ２によるケトン  ４−７の還元的アミノ化は、アミン  ４−８を生成できる。アミン  ４−８の異なるジアステレオマーは、カラムクロマトグラフィー法のような当業者において既知の方法によって分離されることができる。
【０１５５】
【化２２】
2013501006.tif 000026
図式４ａに示したように、芳香族化合物４ａ−０−１は、バーチ還元反応下で、シクロヘキサ−１，４−ジエン  ４ａ−０−２に還元される。例えば、Ｒａｂｉｄｅａｕ，  Ｐ．  Ｗ．，  "Ｔｈｅ  ｍｅｔａｌ−ａｍｍｏｎｉａ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｒｏｍａｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ"，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，  Ｉｓｓｕｅ  ６，  １９８９，  ｐａｇｅｓ  １５７９−１６０３．を参照。酸性条件下（例えば、ＨＣｌまたは酢酸の触媒量の存在下）で、シクロヘキサ−１，４−ジエン  ４ａ−０−２は、熱力学的により安定なシクロヘキサ−１，３−ジエン４ａ−１に転位できる。シクロヘキサ−１，３−ジエン  ４ａ−１は、図式４に記載されたものと類似の方法に従ってアルコール４ａ−６またはアミン４ａ−８に変換されることができる。
【０１５６】
【化２３】
2013501006.tif 000027
図式５に示したように、ＡＤ−ｍｉｘ−αによるスチレン誘導体５−１の処理（例えばＳｈａｒｐｌｅｓｓ，  Ｋ．  Ｂ．；  Ａｍｂｅｒｇ，  Ｗ．；  Ｂｅｎｎａｎｉ，  Ｙ．  Ｌ．；  Ｃｒｉｓｐｉｎｏ，  Ｇ．  Ａ．；  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  １９９２，  ５７，  ２７７１を参照）は、ジオール  ５−２を生成する。Ａ．  Ｌｉ，  ｅｔ．  ａｌ，  "Ｔｏｔａｌ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （７Ｓ，９Ｒ）−（＋）−ｂｉｓａｃｕｍｏｌ"，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ  （２００３），  １４（１），７５−７８．を参照。レネー・ニッケルによるジオール  ５−２のベンジリックＯＨのステレオ選択的還元はアルコール  ５−３を与える。idを参照。塩化メチレンのような適当な溶媒中でのＰＰｈ３及びＣＢｒ４によるアルコール  ５−３の処理は、臭化物５−４を生成する。マグネシウム粉末及びＣＨ３Ｉの存在下での臭化物５−４のグリニャール試薬への変換（金属−ハロゲン交換反応による）、続く３−メチルクロトンアルデヒドによる反応は、アルコール  ５−５を提供する。アルコール５−５の異なるジアステレオマーは、カラムクロマトグラフィー法のような当業者において既知の方法によって分離されることができる。idを参照。アルコール  ５−５は、その対応するアミン化合物５−６に、図式４にその概要を示したものと類似の方法を使用して変換されることができる。
【０１５７】
【化２４】
2013501006.tif 000028
【０１５８】
当業者は、本明細書に記載された全ての図式において、官能（反応）基がＲ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４などのような置換基上に存在する場合、さらなる修飾が、適当及び／または所望の場合に行われることについて認識できるものである。例えば、ＯＨ基は、Ｂｒによってのように、求核置換に適しているメシラートのような良好な脱離基に変換されることができる。このように、官能基を含む置換基を有する化学式Ｉの化合物（例えば、図式４の化合物４−８）は、異なる置換基を有する化学式Ｉの他の化合物に変換されることができる。
【０１５９】
本明細書で使用する場合、用語「反応する」は、化学変化が任意に最初に導入された化合物とは異なる化合物を生成するように、指定された化学反応体を一緒にすることを意味する。反応することは、溶媒の存在または非存在下で起こることができる。
【０１６０】
方法
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド（Ａベータ・オリゴマーを含む）のニューロン（例えば脳内のニューロン）への結合を阻害、治療、及び軽減（部分的に阻害）し、及び、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病の阻害、治療、及び軽減において有用である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集、アミロイド・オリゴマー結合及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のＡベータ・オリゴマーの活性／効果を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）し、及び、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病の阻害、治療、及び軽減において有用である。いくつかの実施形態において、Ａベータ・オリゴマーの破壊、ニューロンへのＡベータ・オリゴマーの結合の阻害、及び／または、Ａベータ・オリゴマーによって開始される作用のシグナル伝達機構の反作用によって、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上のＡベータ・オリゴマーの活性／効果を阻害、治療、または軽減（部分的に阻害）する。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、化合物は、ベータ−セクレターゼアッセイにおいて活性を示し、及び、認知機能低下及びアルツハイマー病の阻害、治療、及び軽減において有用である。いくつかの実施形態において、ショウガ油の誘導体は精製され、及び単離された形態での化合物である（例えば、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％以上の純度である）。本明細書に記載された化合物及び方法は、記憶喪失、混乱、判断力障害、人格変化、見当識障害、および言語能力の喪失のような認知機能の低下および/またはアルツハイマー病の症状の内の１つまたはそれ以上を治療するために使用されることがある。さらに、本明細書に記載された化合物及び方法は、長期増強作用を回復し、及び／または神経変性および一般アミロイド症の１つ、または両方を阻害、治療、または軽減することによって、より具体的には、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド結合、およびアミロイド沈着のうち、１つまたはそれ以上を阻害、治療、または軽減することによって、認知機能の低下および/またはアルツハイマー病を阻害、治療、または軽減するのに有用であることがある。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド産生、アミロイド構築、アミロイド凝集、アミロイド・オリゴマー結合、及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上を阻害、治療または軽減することができる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、長期増強作用を回復し、神経変性及び一般のアミロイド症の１つまたは両方を阻害、治療、または軽減することができる。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド凝集、アミロイド・オリゴマー結合、及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上を阻害、治療または軽減（部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アミロイド沈着を阻害（または部分的に阻害）する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内ニューロン）へのアミロイド（Ａベータ・オリゴマーを含む）の結合を阻害、治療、または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病を阻害、治療、及び軽減するために有用である。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ベータ−セクレターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ベータ−セクレターゼを本明細書に記載された化合物または組成物のいずれか１つまたはそれ以上に接触させることにより、ベータ−セクレターゼの活性を阻害する方法において使用されることができる。
【０１６５】
本発明の他の態様は、本発明の化合物またはそれらの医薬組成物の治療的有効量または服用量を個体に投与することによって、個体（例えば患者）における認知機能低下及び／またはアルツハイマー疾患を治療する方法に関係する。
【０１６６】
本明細書の病気／疾患の治療は、病気／疾患に関連する症状、例えば、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病の症状の１つまたはそれ以上を治療することを含む。
【０１６７】
本明細書で使用する場合、用語「接触する」は、生体外系または生体内系において、示された部分を一緒にすることを意味する。例えば、本発明の化合物とベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞（またはベータ−アミロイド・オリゴマーの１つまたはそれ以上の存在下でのニューロン細胞）を「接触させること」は、例えばヒトのような、ベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞を有する個体または患者に、本発明の化合物を投与することを含み、同様に、例えば、本発明の化合物を、ベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞（またはベータ−アミロイド・オリゴマーの１つまたはそれ以上の存在下でのニューロン細胞）を含む細胞的なまたは生成された調製物を含む試料内に組み入れることを含む。
【０１６８】
本明細書で使用する場合、互換的に使用される用語「個体」または「患者」は、哺乳類、好適にはネズミ、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、及び最も好適にはヒトを含む任意の動物を意味するものである。
【０１６９】
本明細書で使用する場合、「治療的有効量」は、研究者、獣医師、医師、または他の臨床医によって、組織、系、動物、個体またはヒトにおいて探される生物学的または医薬応答を誘発する活性化合物または医薬品の量を意味するものである。
【０１７０】
本明細書で使用する場合、用語「治療する」または「治療」は、（１）病気を予防する、例えば、病気、条件または障害にかかりやすくなっているが、まだ病気の病理または症状を体験していない、または示していない個体において、病気、条件または障害を予防すること、（２）病気を阻害／遅延させる、例えば、病気、条件または障害の病理または症状を体験するまたは示している個体において、病気、条件または障害を阻害／遅延させること、及び、（３）病気を改善する、例えば、病気の重症度を軽減させる、または病気を完全に除去／治すように、病気、条件または障害の病理または症状を体験するまたは示している個体における病気、条件、または障害を改善すること（つまり、病理及び／または症状の逆転）の１つまたはそれ以上を意味する。本明細書で使用する場合、病気を治療することは、さらに、病気に関連した１つまたはそれ以上の病気を治療することを含む。
【０１７１】
併用治療
いくつかの実施形態において、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病の治療のための１つまたはそれ以上の付加的医薬品は、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病のための本発明の化合物と併用して使用されることができる。１つまたはそれ以上の付加的医薬品は、同時に、または経時的に患者に投与されることができる。
【０１７２】
製剤処方及び剤形
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は医薬組成物の形態において投与されることができる。これらの化合物は、製薬技術では周知の方法で調製されることができ、及び、局所または全身治療が要求されるかどうかによって、及び、治療される部位によって、様々な経路で投与されることができる。投与は、局所（経皮、表皮、眼、及び、鼻腔、膣及び直腸を含む粘膜を含む）、肺（例えば、気管内または鼻腔内の噴霧吸入を含む、粉末または噴霧剤の吸入または吹送法）、口腔または非経口であることがある。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹膜内、筋肉内、または、注射または点滴、または、例えば、髄腔内または脳室内投与のような頭蓋内投与を含む。非経口投与は、１回のボーラス投与の形態であることがあり、または、例えば、連続した注入ポンプによることがある。局所投与のための医薬組成物及び製剤は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐剤、スプレー、液剤及び粉末を含むことがある。従来の医薬担体、水性、粉末または油性基剤、増粘剤などが必要である、または望ましい。被覆コンドーム、グローブなどもまた有用である。
【０１７３】
本発明の実施形態は、活性成分として、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と併用して上記の本発明の化合物の１つまたはそれ以上を含む、医薬組成物も含む。本発明の組成物の製造において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈され、または、例えば、カプセル、小袋、紙または他の容器の形態において担体内に封入される。賦形剤が、希釈剤として役立つ場合、それは、個体、半固体、または液剤であることがあり、活性成分における媒体、担体、または媒質として作用する。よって、前記組成物は、錠剤、丸剤、粉剤、トローチ剤、袋剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアゾール剤（個体としてまたは液体媒質中）、例えば、活性化合物の最大１０重量％を含む軟膏、軟及び硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、殺菌した注射可能な溶液、及び、殺菌包装された粉剤であり得る。
【０１７４】
製剤の調製において、活性化合物は、他の成分と結合する前に適当な粒径を提供するために製粉されることができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、それは、２００メッシュ未満の粒径に製粉されることができる。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、製剤において実質的に同一の分布を提供するために、例えば約４０メッシュに製粉によって調整されることができる。
【０１７５】
本発明の化合物は、錠剤及び他の処方タイプに適当な粒径を得るために、湿式ミルのような既知の製粉手順によって製粉されることがある。本発明の化合物の微細に分割された（ナノ微粒子）調製は、当業者において既知の手順によって調製されることができる。例えば、国際特許出願番号ＷＯ２００２／０００１９６を参照。
【０１７６】
適当な賦形剤のいくつかの例は、ラクトース、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンにトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ及びメチルセルロースを含む。製剤は、加えて、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油のような平滑剤、湿潤剤、乳化及び懸濁剤、安息香酸メチル及びヒドロキシ安息香酸プロピルのような保存剤、甘味剤、及び香味剤を含む。本発明の組成物は、当業者に既知の手順によって患者に投与された後、活性成分の放出を早く、継続または遅らせて提供するために処方されることができる。
【０１７７】
前記組成物は、単位剤形において処方され、各投与量は、活性成分の約５〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、さらに通常は、約１００〜５００ｍｇを含む。用語「単位剤形」は、被験者及び他の哺乳類における単位投与量として適当な物理学的に別々の単位を意味するものであり、各単位は、適当な医薬賦形剤に関連して所望の治療的硬貨を生成するために計算された活性材の予め決められた量を含むものである。
【０１７８】
前記活性化合物は、広い投与範囲にわたって効果的であり、一般的に薬学的に効果的な量で投与されることができる。例えば、それらを必要とする患者（例えば成人）の治療において使用される本発明の活性化合物の投与量は、投与の経路や頻度によって、１日あたり０．１〜３０００ｍｇである。この種の投与量は、１日あたり０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇに対応する。いくつかの実施形態では、それらを必要とする患者（例えば成人）の治療において使用される本発明の活性化合物の投与量は、１日あたり１〜２０００ｍｇ、１日あたり１〜１０００ｍｇ、１日あたり１０〜１０００ｍｇ、１日あたり１０〜５００ｍｇの範囲である。しかしながら、実際に投与される化合物の量が、通常、治療される条件、投与の選択された経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答、患者の症状の重症度などを含む関連した状況に従って、医師によって決定されることは、よく理解されている。
【０１７９】
錠剤のような固体組成物を調製するために、主要な活性成分は、本発明の化合物の均質な混合物をふくむ製剤前の固体を形成するため、医薬賦形剤と混合されることができる。これらの処方前組成物を均一なものとするとき、前記組成物が、錠剤、丸剤及びカプセル剤のように等しく有効な単位剤形に直ちに細分できるように、前記活性成分は、典型的には、組成物の全体にわたって均一に分散する。それから、この製剤前の固体は、例えば、本発明の活性成分の約０．１〜１０００ｍｇを含む上記のタイプの単位剤形に細分される。
【０１８０】
本発明の錠剤または丸剤は被覆されることができる、またはそうでなければ、長期にわたる作用の効果を与える剤形を提供するために化合されることができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与量及び外側投与量の成分からなることができ、後者は前者のエンベロープの形態となる。２つの成分は、胃における分解に抵抗し、十二指腸内を完全に通過する、または、放出を遅延させることができる腸溶層によって切り離されることができる。様々な材料がこの種の腸溶層または被覆剤として使われ、このような材料は、数多くの重合酸及びセラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースのような材料と重合酸の混合物を含む。
【０１８１】
経口投与または注射による投与に組み込まれることができる本発明の化合物及び組成物における液体形態は、水溶液、適宜風味をつけたシロップ、水性または油性懸濁液、及び、エリキシル及び類似の薬学的な媒質と同様に、綿実油、胡麻油、ココナッツ油、または落花生油のような食物油で風味づけられたエマルジョンを含む。
【０１８２】
吸入または吹送方における組成物は、薬学的に許容な水溶液または懸濁液、水性または有機溶媒、またはそれらの混合物、及び粉末である。液体または固体組成物は、上記に記載されたような適当な薬学的に許容な賦形剤を含むことがある。いくつかの実施形態では、前記組成物は、局所または全身への効果のために経口または鼻呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスを用いて霧状にされることができる。霧状にされた溶液は、噴霧吸入器から直接吸入されることができる、または、噴霧吸入器は、フェイスマスクテントまたは間欠陽圧呼吸機に取り付けられることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適当な方法で製剤を届ける装置から経口的にまたは経鼻的に投与されることができる。
【０１８３】
患者に投与される化合物または組成物の量は、何が投与されるのか、予防または治療のような投与の目的、患者の状態、投与の方法などによって様々である。治療的適用において、組成物は、疾患の症状及びその複雑化を治癒する、または少なくとも部分的に抑えるために十分な量で、疾患を患っている患者に投与されることができる。有効量は、疾患の重症度、年齢、体重、及び、患者の一般的な条件による主治医の判断によるのと同様に、治療される疾患条件に依存する。
【０１８４】
患者に投与される組成物は、上記の医薬組成物の形態であることができる。これらの疽生物は、従来の殺菌技術によって殺菌されることができる、または、濾過されて無菌であることがある。水溶液は、使用のために包装、または凍結乾燥され、凍結乾燥された調製物は、投与の前に無菌の水性担体と結合される。合成調製物のｐＨは典型的には３〜１１であり、より好適には５〜９、及び最も好適には７〜８である。前述の賦形剤、担体、または安定剤で特定のものの使用は結果として薬学的な塩の形成となることは理解されるであろう。
【０１８５】
本発明の化合物の治療的投与量は、例えば、治療がなされるための特定の使用、化合物の投与の方法、患者の健康及び条件、及び処方医師の判断によって変化することができる。医薬組成物における本発明の化合物の比率または濃度は、投与量、化学的な特徴（例えば疎水性）、及び投与の経路を含む多くの要因によって変化することができる、例えば、本発明の化合物は、非経口投与のための化合物の約０．１〜約１０％ｗ／ｖを含む水性生理的緩衝液において提供されることができる。いくつかの典型的な投与量の範囲は、１日につき体重１ｋｇあたり約１  ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、投与量の範囲は、１日につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。投与量は、疾患または障害の進行のタイプ及び範囲、特定の患者の全体の健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的行こう性、賦形剤の製剤及びその投与の経路のような変数に依存することがある。有効的な投与量は、生体外または動物モデルテスト系に由来する投与量−応答曲線から推定されることができる。
【０１８６】
本発明の組成物は、さらに、上記にその例がリストされた化学療法薬、ステロイド、抗炎症性化合物または免疫抑制薬のような付加的な医薬品の１つまたはそれ以上を含むことができる。
【０１８７】
標識された化合物及びアッセイ方法
本発明の他の態様は、放射性物質を用いた画像撮影法だけでなく、生体内でも生体外でもヒトを含む組織試料における酵素を局所化すること及び数量化するため、及び標識された化合物の結合を阻害することによってリガンドを同定するためのアッセイにおいても役立つ本発明の標識された化合物（放射性標識、蛍光標識など）に関するものである。したがって、本発明は、この種の標識された化合物を含む酵素アッセイを含む。
【０１８８】
本発明の実施形態は、さらに、本発明の同位体標識化合物を含む。「同位体」または「放射性標識された」化合物は、１つまたはそれ以上の原子が、自然において典型的に見受けられる（つまり自然発生の）原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられる、または置換される本発明の化合物である。本発明の化合物に組み込まれることのある適当な放射性核種は、これに限定されないが、２Ｈ（重水素、Ｄとも書く）、３Ｈ（三重水素、Ｔとも書く）、１１Ｃ、１３Ｃ、４Ｃ、３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉを含む。放射性標識された化合物に組み込まれる放射性核種は、放射性標識された化合物の特定の適用に依存する。例えば、生体内受容体標識及び競合アッセイにおいて、３Ｈ、１４Ｃ、８２Ｂｒ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓを組み込む化合物は一般的に最も有用である。放射性物質を用いた画像撮影法への適用において、１１Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒまたは７７Ｂｒは一般的に最も有用である。
【０１８９】
「放射性標識された化合物」は少なくとも１つの放射性核種を組み込まれた化合物である。いくつかの実施形態では、放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３５Ｓ及び８２Ｂｒから選択される。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、本発明の標識された化合物は蛍光標識を含む。
【０１９１】
有機化合物内に放射性同位体及び蛍光標識を組み込むための合成方法は、当業者において周知である。
【０１９２】
本発明の標識された化合物（放射性標識、蛍光標識など）は、化合物を同定／評価するためのスクリーニング・アッセイにおいて使用されることができる。例えば、標識された新規の合成、または同定された化合物（つまりテスト化合物）は、標識化を追うことによりベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞（または１つまたはそれ以上のベータ−アミロイド・オリゴマーの存在下でのニューロン細胞）と接触させたときのその濃度変化をモニターすることによって、ベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞（または１つまたはそれ以上のベータ−アミロイド・オリゴマーの存在下でのニューロン細胞）を結合するための能力において評価されることができる。他の実施例において、（標識された）テスト化合物は、ベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞と結合することが知られている他の化合物（つまり標準化合物）の結合を減らすための能力において評価されることができる。したがって、ベータ−セクレターゼまたはニューロン細胞と直接的に結合するための標準化合物と競合するためのテスト化合物の能力は、その結合親和性に相関する。逆に、いくつかの他のスクリーニング・アッセイにおいては、標準化合物は標識され、テスト化合物は標識されない。したがって、標識された標準化合物の濃度は、標準化合物及びテスト化合物間の競合を評価するためにモニターされ、テスト化合物の相対的結合親和性は、このように確認される。
【０１９３】
キット
本発明の実施形態は、医薬キット、例えば、認知機能低下及び／またはアルツハイマー病の治療または予防に有用な医薬キットも含む。この医薬キットは、本発明の化合物の治療的有効量を有する医薬組成物を含む１つまたはそれ以上の容器を含む。このようなキットは、さらに、必要に応じて、例えば、１つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体、付加的容器などの１つまたはそれ以上の様々な従来の医薬キット成分を含み、このことは当業者において直ちに明らかなものである。指示書、挿入物として、または標識として、投与される成分の量、投与におけるガイドライン、及び／または成分を混合することにおけるガイドラインを示したものはこのキットに含まれることもできる。
【０１９４】
本発明は、実施例においてより詳細に記載されている。以下の実施例は、説明の目的で提供されるものであり、いかなる方法によっても本発明を制限することを目的としない。当業者は、基本的に同じ結果を得るために変えられる、または変更される様々な重要でないパラメータを直ちに認識する。実施例の特定の化合物は、本明細書に提供された１つまたはそれ以上のアッセイに関連するアミロイド産生、アミロイド構築、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド・オリゴマー結合、及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上を阻害、治療、または軽減するとして発見された。さらなるいくつかの実施形態では、実施例の特定の化合物は、本明細書に提供された１つまたはそれ以上のアッセイに関連するニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイド・オリゴマーを含む）結合、及びアミロイド沈着を阻害、治療、または軽減するとして発見された。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイド・オリゴマーを含む）結合、及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上の阻害に関して、１００μＭ、５０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。いくつかの実施形態では、ニューロン（例えば脳内のニューロン）上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果の阻害に関して、１００μＭ、５０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、ニューロン例えば脳内のニューロン）上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果、アミロイド凝集、アミロイド（アミロイド・オリゴマーを含む）結合、及びアミロイド沈着の１つまたはそれ以上を阻害する化合物の阻害割合は、１０ｎＭ〜１００μＭの濃度で測定される。いくつかの実施形態では、測定された阻害割合は、約１％〜約２０％、約２０％〜約５０％、約１％〜約５０％、または、約１％〜約８０％である。
【０１９７】
本発明は、以下の実施例に参照される特定の態様において認められることができ、これらの実施例は、制限のためではなく、実例として提供されるものである。特に明記しない限り、以下の実施例において参照された材料、試薬などは、商業的供給源から得られるものである。
【０１９８】
実施例
材料及び方法
ウコン油
ウコンからの軽油抽出物は、臨界超過ＣＯ２抽出によって得られる。
【０１９９】
実施例１
ウコン油の条件つき抽出（還元的アミノ化）：イソブチルアミンとウコン油の反応、続いて、メタノール中での水素化ホウ素ナトリウムによる還元、続いて、カラムクロマトグラフィーを使用する分画：
ウコン油（１０ｇ）をメタノール（２５０ｍｌ）に溶かし、イソブチルアミン（４．０ｍＬ）を加えた。混合物は、室温で１６時間維持された。この時点で、反応混合物は、アイスバス上で０℃に冷やされた。メタノール（５０ｍｌ）における水素化ホウ素ナトリウム（５ｇ）溶液が、３０分にわたって激しく攪拌しながら少しずつ加えられた。加えた後、結果として生じる混合物は、１６時間の還流において維持された。この時点で、反応混合物は、室温に冷やされ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）に注入された。結果として生じる混合物は、ロータリーエバポレーターによって濃縮され、水性残渣は、水及びクロロホルム間に分けられた。クロロホルム層は、無水硫酸ナトリウムにより乾燥され、その後、濾過され、濃縮された。粗生成物は、それから、１００％クロロホルムからクロロホルム：メタノール（４：１）までの勾配を使用するシリカゲル・カラムクロマトグラフィーを使用して分画された。相対的に非極性から極性までの併せて２０の分画は、集められ、及び、濃縮された。各分画は生物学的テストのために提出された。活性生成物含有分画は、比較的極性の分画であった。
【０２００】
活性生成物含有分画（分画１Ａ）は、さらに、カラムクロマトグラフィーによる分離にさらされ、２つの主な成分である成分１Ａ−１及び成分１Ａ−２に分離された。
【０２０１】
還元的アミノ化で使用したイソブチルアミンに対するウコン油の重量比は約３：１（２〜４：１）である。
【０２０２】
純度測定
１Ａの純度は、ＨＰＬＣによって計測された。２つの主なピーク（２つの成分）のみが存在した。使用したＨＰＬＣ条件は以下のとおりである。
【０２０３】
ＨＰＬＣ条件
移動相Ａ：水中で１３．３ｍＭ  ギ酸アンモニウム／６．７ｍＭ  ギ酸
移動相Ｂ：水／ＣＨ３ＣＮ（１／９，ｖ／ｖ）で６ｍＭ  ギ酸アンモニウム／３ｍＭ  ギ酸
カラム１：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｆｕｓｉｏｎ−ＲＰ  １００Ａ  Ｍｅｒｃｕｒｙ、２×２０ｍｍ、２．５ミクロン（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐａｒｔ  Ｎｏ  ００Ｍ−４４２３−Ｂ０＿ＣＥ）
カラム２：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０、２×５０ｍｍ、４ミクロン（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐａｒｔ  Ｎｏ  ００Ｂ−４３３７−Ｂ０）
【表１】
2013501006.tif 000029
成分１Ａ−１：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１１，７．０９，５．２３，３．７２，２．９４，２．５１，２．３４，２．３１，１．９２，１．７２，１．７１，１．５８，１．２９，１．２７，０．９２。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４４．５０，１３５．３７，１３５．０３，１２９．０３，１２６．８９，１２６．７０，６６．９７，４９．２５，４６．３９，３５．０５，３２．４６，２５．８３，２０．９６，２０．６７，及び１８．３６．−    ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ  ２７４．３。
【０２０４】
分画１Ａの構造、成分１Ａ−１は以下のとおりであると決定される。
【０２０５】
【化２５】
2013501006.tif 000030
【０２０６】
2013501006.tif 000031
成分１Ａ−２：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．７７，５．６５，５．４５，５．２３，３．９６，２．９４，２．９３，２．５１，２．３１，２．３０，２．０５，１．９２，１．７２，１．７１，１．５８，１．２９，１．２７，０．９２。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４４．５０，１３５．３７，１３０．９６，１２７．８６，１２６．７０,１２０．８０，６６．７２，４９．２５，４６．３９，３５．０５，３２．４６，２５．８３，２１．７９，２１．７９，２０．６７，及び１８．３６。    ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ  ２７６．３。
【０２０７】
分画１Ａの構造、成分１Ａ−２は以下のとおりであると決定される。
【０２０８】
【化２６】
2013501006.tif 000032
１Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば、最大０．３ｐｐｍである。１３Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば最大０．６ｐｐｍである。分析質量スペクトルは、＋／−０．４の実験誤差を有することがある。
【０２０９】
実施例２
ウコン油の条件つき抽出（還元）：メタノール中での水素化ホウ素ナトリウムによるウコン油の還元、及びカラムクロマトグラフィーを使用する分画：
ウコン油（１０ｇ）をメタノール（２５０ｍＬ）に溶かした。反応混合物は、アイスバス上で０℃に冷やされた。メタノール（５０ｍＬ）における水素化ホウ素ナトリウム（５ｇ）溶液が、３０分にわたって激しく攪拌しながら少しずつ加えられた。加えた後、混合物は、１６時間の還流において維持された。この時点で、反応混合物は、室温に冷やされ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）に注入された。結果として生じる混合物は、ロータリーエバポレーターによって濃縮され、水性残渣は、水及びクロロホルム間に分けられた。クロロホルム層は、無水硫酸ナトリウムにより乾燥され、その後、濾過され、濃縮された。生成物は、それから、１００％クロロホルムからクロロホルム：メタノール（４：１）までの勾配を使用するシリカゲル・カラムクロマトグラフィーを使用して分画された。相対的に非極性から極性までの併せて２０の分画は、集められ、及び、濃縮された。各分画は生物学的テストのために提出された。活性生成物含有分画は、比較的極性の分画であった。
【０２１０】
アルコールへのケトン及びアルデヒドの還元を確実にするための、ウコン油（その中のケトン及びアルデヒド）に対する水素化ホウ素ナトリウムのモル比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１または６：１以上である。いくつかの実施形態では、ウコン油の水素化ホウ素ナトリウムの重量比は、約０．５：１（０．３：１〜約０．８：１）である。
【０２１１】
活性生成物含有分画（分画２Ａ）は、さらに、カラムクロマトグラフィーによる分離にさらされ、２つの主な成分である成分２Ａ−１及び成分２Ａ−２に分離された。
【０２１２】
成分２Ａ−１：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．１１，７．０９，５．１７，４．４５，２．３２，２．７６，１．７５，１．５８，１．５２，及び１．２６。１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４４．３，１３５．３７，１３５．０３，１２９．１１，１２８．３２，１２６．９０，６７．１０，４２．０５，３９．６４，２５．８１，２３．００，２１．０１，及び１８．１２．    ＭＳ  （Ｍ＋Ｈ＋）  ｍ／ｚ  ２１９．２．
分画２Ａの構造、成分２Ａ−１は以下のとおりであると決定される。
【０２１３】
【化２７】
2013501006.tif 000033
成分２Ａ−２：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．１８，５．７０，５．５６，５．１７，４．２４，２．３２，２．８０，２．２９，２．１５，１．９５，１．６８，１．７５，１．５８，１．４２，１．２７。１３Ｃ  ＮＭＲδ１４４．１０，１３５．００，１３４．１０，１２９．５８，１２８．３２，１２５．３，６６．９０，４６．１８，４１．１７，３９．５５，３７．１４，２５．８１，２４．５０，２３．００，及び１８．１２。    ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ  ２２１．１。
【０２１４】
分画２Ａの構造、成分２Ａ−２は以下のとおりであると決定される。
【０２１５】
【化２８】
2013501006.tif 000034
１Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することがあり、例えば、最大０．３ｐｐｍである。１３Ｈ  ＮＭＲによって測定される化学シフトは変化することができ、例えば、最大０．６ｐｐｍである。分析質量スペクトルは、＋／−０．４の実験誤差を有することがある。
【０２１６】
純度測定
分画２Ａの純度は、ＨＰＬＣによって測定される。２つの主なピーク（２つの成分）のみが存在した。
【０２１７】
実施例ＡＡ：エキソサイトーシスアッセイ／ＭＴＴアッセイ
Ｅ１８スプラーグドーリーラット胚からの一次ニューロンは、ＮＢ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の３８４ウェル・プレートにおいて最適化された濃度で蒔かれる。Ｎ２補助剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によるＮＢ培地の週２回の供給により、ニューロンは三週間培養において維持される。テスト化合物が細胞に加えられ、続いて、媒体またはＡベータ・オリゴマー調製物（１．５μＭ）が加えられ、５％ＣＯ２において３７℃で１〜２４時間保温培養される。ＭＴＴ試薬（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５ジフェニル  テトラゾリウム  ブロミド）（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）は、５ｍｇ／ｍＬまでリン酸緩衝食塩水において再構成される。ＭＴＴ標識試薬の１０μＬが各ウェルに加えられ、３７℃で１時間保温培養され、それから撮像される。
【０２１８】
化合物が各プレート上でＡベータを有する、または有さないでテストされるように、各アッセイ・プレートはフォーマットされる。この設計は、早くからスクリーニングカスケード（第一スクリーニングのレベルで）の毒性または代謝的に活性な化合物を除去する。
【０２１９】
エキソサイトーシスアッセイ／ＭＴＴアッセイにおける類似の手順は、文献においても発見されることができる。例えば、Ｌｉｕ  Ｙ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８−５６；  Ｌｉｕ  Ｙ，  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．  "Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ  （ＭＴＴ）  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．"  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  １９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；  ａｎｄ  Ｌｉｕ  Ｙ，  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．  "Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ"  Ｃｕｒｒ．  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９−３５を参照。
【０２２０】
実験制御
発表された方法に従って作られるＡベータ１−４２オリゴマー［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ"  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００２  Ａｕｇ  ３０；２７７（３５）：３２０４６−５３．  Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；  ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．  "Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ"    Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１−９０；    Ｓｈｒｅｓｔｈａ  ｅｔ．ａｌ，  "Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ"  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４−８２．  Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；  Ｐｕｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ"  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００５  Ｊｕｌ  ２０；２５（２９）：６８８７−９７；  Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  −  ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ"  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４−４７．  Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ３１；  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．  ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８−３０を参照］は、脳由来Ａベータ・オリゴマーと同様（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｎａｔｕｒｅ  （２００２）．  ４１６，  ５３５−５３９；    Ｌｅｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｎａｔｕｒｅ．  ２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２）：３５２−７；  Ｓｈａｎｋａｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒ��ｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７−４２．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ  ２２を参照）に、正の制御を構成する。負の制御は、メマンチンの２８μＭ濃度で処理されたニューロンと同様に、媒体処理されたニューロンを含む。メマンチンは、この投与量でオリゴマー効果の５０％阻害を生じる。各プレート上のこれらの制御は、プレートごとのベースでのアッセイの実行を調整するために正常化の道具として役に立つ。
【０２２１】
第一ニューロン培養
最適細胞密度は、読出しとしてのエキソサイトーシスアッセイを使用するＡベータ・オリゴマーへの細胞応答、及び、培養におけるニューロンに対する神経膠の相対割合の免疫組織化学分析に基づいて決定される。培養は、ニューロンｖｓ．神経膠（神経膠細胞）である培養の割合をモニターするため、免疫組織化学及び画像処理に基づく定量化によって毎週モニターされる。生体外（２１  ＤＩＶ）における２１日のスクリーニング世代で２０％以上の神経膠（ＧＦＡＰにおいて陽性）ｖｓ．ニューロン（ＭＡＰ２に対する抗体による明らかな染色）を含む培養は拒絶される。
【０２２２】
Ａベータ・オリゴマー調製
ヒトアミロイドペプチド１−４２は、品質制御分析の不確かなロット選択によってカリフォルニアペプチドから得られる。オリゴマー調製の品質制御は、オリゴマーサイズ範囲及び相対的濃度を決定するためのウェスタン、及び、毒性のないエキソサイトーシス加速を確認するためのＭＴＴアッセイからなる。毒性は、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって視覚化された核形態学の定量化を経るアッセイに基づく各画像においてモニターされる。断片的な核は、後期アポトーシスにおいてあると考慮される（Ｍａｊｎｏ  ａｎｄ  Ｊｏｒｉｓ’９５）。ニューロン上の標準１．５μＭ濃度で異常ペプチドサイズ範囲または著しい毒性を生成するペプチド・ロットは拒絶される。再フォーマットされたプレートが、媒体及びＡベータ・オリゴマー−処理されたニューロン（ｐ<０．０１、スチューデントｔ検定、不当分散）間で統計的に有意な２−フォールド分離の最小限を成し遂げ、その現在の製菓と等しい時、プレートベースの制御−アッセイ最適化は、完全である。
【０２２３】
統計ソフトウェア及び分析：
データ処理及び分析は、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ画像分析ソフトウェア及びＳＴＯＲＥ自動データベースソフトウェアによって達成される。低いダイナミック範囲及び３週間の培養後のニューロンのウェル−ウェル間（ｗｅｌｌ−ｔｏ−ｗｅｌｌ）可変性のために、統計比較は、Ａベータ単独から化合物＋Ａベータ・オリゴマー間及び媒体から化合物単独間での分離の優位性を決定するために、ペアワイズ  チューキー−クラマー（Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ）分析を介してなされる。これらの統計は、動物行動テストにおいて示されることに、高スループット・スクリーニングで過去２０年において使用されたｚの統計よりも類似している。成熟脳の電気生理学的に伝達されたシグナル伝達ネットワークにより近づけるために成熟した第一ニューロンの能力は、このスクリーニング戦略を正当化する。電力解析は、偽陰性（例えばＮ＝４）を最小化し、投与量−応答確認スクリーニングへの実際のヒットから特徴的な偽陽性の負荷をシフトする多くの反復されたスクリーニング・ウェルに設定される。化合物の等級序列は、化合物構造の作用及び物理化学的な性質の第二アッセイメカニズムを基礎としてなされる。特定のテスト化合物は、Ａベータ・オリゴマーの効果を著しく逆転させるが、ニューロン代謝に影響を及ぼさない。
【０２２４】
分画１ＡはＭＴＴアッセイにおいて投与され、及び、１０．５μＭのＥＣ５０を有するエキソサイトーシスのＡベータ・オリゴマーに誘発された加速をブロックすることを示し、成分１Ａ−１及び成分１Ａ−２の１つまたは両方が、ニューロン細胞上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果をブロック／軽減することを示した。
【０２２５】
分画２ＡはＭＴＴアッセイにおいて投与され、及び、２５．４μＭのＥＣ５０を有するエキソサイトーシスのＡベータ・オリゴマーに誘発された加速をブロックすることを示し、成分２Ａ−１及び成分２Ａ−２の１つまたは両方が、ニューロン細胞上でのＡベータ・オリゴマーの活性／効果をブロック／軽減することを示した。
【０２２６】
実施例ＢＢ  結合アッセイ
各テスト化合物はプレートに加えられ、続いて、Ａベータ１−４２オリゴマーの１つまたはそれ以上を加えた。プレートは、１５分間リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）において３．７％パラホルムアルデヒドによって固定された。プレートは、各５分で３回、ＰＢＳによって洗浄された。プレートは、ＰＢＳ中で５％のヤギ血清及び０．５％のトリトンＸ−１００（ＣＡＳ番号：９００２−９３−１）において１時間、室温でブロックされた。一次抗体（抗−ＭＡＰ  ２  ポリクローナル、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＡＢ５６２２及び抗−ベータ・アミロイド  ６Ｅ１０  モノクローナル、Ｃｏｎｖａｎｃｅ  ＃ＳＩＧ−３９３００）は、ＰＢＳと５％ヤギ血清に１：１０００で希釈された。一次抗体は、４℃で一晩、またはＲＴで１時間保温培養された。プレートは、各５分で３回、ＰＢＳによって洗浄された。二次抗体（Ａｌｅｘ  Ｆｌｏｒ  ４８８  ポリクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ａ１１００８及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｏｒ  ６４７  モノクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃Ａ２１２３５）は、ＰＢＳと５％ヤギ血清に１：１０００で希釈された。二次抗体は、ＲＴで１時間保温培養された。プレートは、ＰＢＳで１回洗浄された。ＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）は、０．０３μｇ／μＬで塗布され、ＲＴで５分間保温培養され、その後、ＰＢＳで洗浄された。画像処理は分析のために行われた。
【０２２７】
結合アッセイにおける類似の手順は、文献においても発見される。例えば、Ｌｏｏｋ  ＧＣ，  ｅｔ．  ａｌ．  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ＡＤＤＬ−−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００７  Ｄｅｃ；４（５）：５６２−７．  Ｒｅｖｉｅｗを参照。
【０２２８】
分画２ＡのＥＣ５０は結合アッセイに従って１４．５μＭとなるように決定された。
【０２２９】
Ａベータ・オリゴマー調製物ヒトアミロイドペプチド１−４２は、品質制御分析の不確かなロット選択によってカリフォルニアペプチドから得られる。発表された方法［例えば、Ｄａｈｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ"  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００２  Ａｕｇ  ３０；２７７（３５）：３２０４６−５３．  Ｅｐｕｂ  ２００２  Ｊｕｎ  １０．；  ＬｅＶｉｎｅ  Ｈ  ３ｒｄ．  "Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ"    Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００４  Ｄｅｃ  １；３３５（１）：８１−９０；    Ｓｈｒｅｓｔｈａ  ｅｔ．ａｌ，  "Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｄｖｅｒｓｅｌｙ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｓｐｉｎｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ"  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００６  Ｎｏｖ；３３（３）：２７４−８２．  Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｓｅｐ  ８；  Ｐｕｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ／ｃＧＭＰ／ｃＡＭＰ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ"  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００５  Ｊｕｌ  ２０；２５（２９）：６８８７−９７；  Ｂａｒｇｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｇｌｏｂｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  −  ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ａｎｄ  ｓｔａｂｌｅ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ"  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００５  Ｎｏｖ；９５（３）：８３４−４７．  Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ３１；  Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２  Ａｒｃｔｉｃ  ａｎｄ  Ａ  ｂｅｔａ  １−４２ｗｔ．  ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２００６  Ｊｕｎ；２  ７３（１２）：２６１８−３０を参照］に従ってつくられたＡベータ１−４２は、脳由来Ａベータ・オリゴマーと同様に（例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｎａｔｕｒｅ  （２００２）．  ４１６，  ５３５−５３９；    Ｌｅｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｎａｔｕｒｅ．  ２００６  Ｍａｒ  １６；４４０（７０８２）：３５２−７；  Ｓｈａｎｋａｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｆｒｏｍ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｂｒａｉｎｓ  ｉｍｐａｉｒ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２００８  Ａｕｇ；１４（８）：８３７−４２．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｎ  ２２を参照）、正の制御として役に立つ。オリゴマー調製の品質制御は、オリゴマーサイズ範囲及び相対的濃度を決定するためのウェスタン、及び、毒性のないエキソサイトーシス加速を確認するためのＭＴＴアッセイからなる。毒性は、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって視覚化された核形態学の定量化を経るアッセイに基づく各画像においてモニターされる。断片的な核は、後期アポトーシスにおいてあると考慮される（Ｍａｊｎｏ  ａｎｄ  Ｊｏｒｉｓ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，  ｏｎｃｏｓｉｓ，  ａｎｄ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ．  Ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９５；１４６：３−１６）。ニューロン上の標準濃度で異常ペプチドサイズ範囲または著しい毒性を生成するペプチド・ロットは拒絶される。
【０２３０】
画像処理
画像は、Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇアルゴリズムを用いて捕捉され、及び、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡プラットフォームによって分析される。統計分析において、不当分散を有するチューキー−クラマー（Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ）ペアワイズ比較が使用された。
【０２３１】
ウェスタンブロット
Ａベータ１−４２を含有する試料は、非還元レーンマーカー試料緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃１８５９５９４）に希釈される（１：５）。３０マイクロリットル（μＬ）の試料は、１８のウェル成型４〜１５％トリス−塩酸ゲル（ＢＩＯＲＡＤ  ＃３４５−００２８）にロードされた。電気泳動は、９０分間１２５ボルト（∨）で、トリス−グリシン緩衝液を使用するＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｃｒｉｔｅｒｉａｎ成型ゲルシステムで行われた。ゲルは、１２０分間３０∨で、トリス−グリシン／１０％メタノール緩衝液内０．２μＭニトロセルロース膜上でブロットされた。前記膜は、ＰＢＳ溶液内で５分間煮沸され、４℃で一晩かけてＴＢＳ／５％乳溶液によりブロックされた。前記膜は、室温で１時間ＴＢＳ／１％入溶液で１０μｇ／ｍＬに希釈された６Ｅ１０−ＨＲＰ  （Ｃｏｖａｎｃｅ  ＃ＳＩＧ−３９３４５）によってプローブされた。膜は、ＴＢＳ／０．０５％  ｔｗｅｅｎ−２０の溶液によって各４０分、３回洗浄され、ＥＣＬ試薬（ＢＩＯ−ＲＡＤ  ＃１６２−０１１２）で５分間発達された。画像獲得は、Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ  ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  Ｑ定量的画像システムで実行され、ＡｌｐｈａＶｉｅｗ  Ｑソフトウェアによって分析された。
【０２３２】
分画１Ａは、（画像処理アルゴリズムを使用する）結合アッセイに従って、３３％ニューロンへのＡベータ・オリゴマーリガンドの結合を部分的に阻害することが示されている。
【０２３３】
分画２Ａは、（画像処理アルゴリズムを使用する）結合アッセイに従って、３５％ニューロンへのＡベータ・オリゴマーリガンドの結合を部分的に阻害することが示されている。
【０２３４】
ＰＫ研究
ＰＫ研究は、その標準的プロトコルに従って、ワシントン州レドモンドのＣＥＲＥＰ  Ｉｎｃで行われる。プラズマ試料はアセトニトリル沈殿を使用して処理され、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析された。ピーク領域は記録され、未知のプラズマ試料における未知のテスト化合物の濃度はそれぞれ校正曲線を使用して決定された。定量下限（ＬＬＱ）に加えて、アッセイの報告可能な線形範囲が決定された。
【０２３５】
ＮＭＲ分光法及び質量分光測定法
活性分画は、１Ｈ  ＮＭＲ（Ｖａｒｉａｎ  ５００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計）によって分析され、及び精製された化合物は、１Ｄ及び２Ｄ、１Ｈ  ＮＭＲ実験及び１３Ｃ  ＮＭＲ実験を併用して特徴付けられた。構造証明は、分子量を決定するための低解像度質量分光測定法、組成物を決定するための高解像度質量分光測定法（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  Ｉｏｎ  ｔｒａｐ）を組み合わせたこれらのＮＭＲ技術を使用して得られた。
【０２３６】
実施例ＣＣ：薬物動態研究
薬物動態研究は、以下のプロトコルに従って実行される：プラズマ試料は、アセトニトリルリンデンを使用して処理され、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳまたはＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析される。ピーク領域は記録され、及び、未知のプラズマ試料におけるテスト化合物の濃度はそれぞれ校正曲線を使用して決定される。定量下限（ＬＬＱ）に加えて、アッセイの報告可能な線形範囲が決定された。例えば、成分１Ａ−１は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットのプラズマにおいて５０分の半減期を有するために決定され、成分１Ａ−２は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットのプラズマにおいて７０分の半減期を有するために決定され、及び、成分２Ａ−１は、１ｍｇ／Ｋｇで静脈内に注入されたときにラットのプラズマにおいて１８０分の半減期を有するために決定された。しかしながら、使用された実験的条件は、成分２Ａ−２における半減期を検知しなかった。
【０２３７】
実施例ＤＤ：Ａベータ・オリゴマー形成阻害アッセイ
Ａベータ４２オリゴマー形成は、マルチウェルフォーマットにおいて直ちに分析されることができ、及び、可溶性高分子量（>２０ｋＤａ）の形成をブロックするためのテスト化合物の能力を決定するために使用されることができる。例えば、Ｈａｒｒｙ  ＬｅＶｉｎｅ  ＩＩＩ，  "Ｂｉｏｔｉｎ−ａｖｉｄｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  β−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ"，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５６  （２００６）  ２６５−２７２．に記載されたアッセイを参照。
【０２３８】
５０ｍＭ  ＮａＰｉ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，及び０．０２％（ｗ／ｖ）ＮａＮ３  ｐＨ  ７．５内のテスト化合物の異なる濃度の１００μＬは、ＤＭＳＯにおいて新たにＨＦＩＰ（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール）−解重合２．５μｇ／ｍｌバイオ−Ａベータ４２を含有し、５０ｎｇ／ｍｌ（１１ｎＭ）ペプチド及び２％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの総濃度を与える９６−ウェル・プレートのウェルに加えられる。室温で３０分後、５０−μＬ一定分量は、ＮＡ／ＳＡ−ＨＲＰ（ニュートラアビジン／二次抗体及びストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ）単一サイトアッセイプレートに転写された。テトラメチルベンジジン／Ｈ２Ｏ２基質溶液の１００μＬが加えられ、及び、プレートは、アッセイ中のバイオ−Ａベータ４２ペプチドの濃度によって、２〜３０分間室温で保温培養される。ＯＤ４５０ｎｍ１％は、（ｖ／ｖ）Ｈ２ＳＯ４の１００μＬとの反応を停止後、Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴ上で決定される。可溶性高分子量（>２０ｋＤａ）オリゴマーの形成をブロックするためのテスト化合物の能力は、形成されたバイオ−Ａベータ４２ペプチドの濃度によって決定される。ｉｄ参照。
【０２３９】
前記アッセイに従うと、分画１ＡはＡベータ・オリゴマーの形成を阻害しない。従って、分画１Ａは、オリゴマー結合を予防するためニューロン受容体に直接作用することによって、または、分解するＡベータ・オリゴマーを生じることによって、ニューロンと結合するＡベータ・オリゴマーを阻害するようである。
【０２４０】
実施例ＥＥ：小分子Ａベータ・オリゴマー阻害剤を検知するための一次ニューロンに基づいた機能的スクリーニング・アッセイ
生体外で少なくとも３週間成長する一次ラットニューロンは、このスクリーニング・アッセイに基づいて選ばれた。これらのニューロンは、成熟した脳においてニューロンの特徴的なシナプスタンパク質の総数を発現し、活性依存性電気シグナリングの複合ネットワークを呈する。このような培養におけるニューロン及び神経膠は、完全な脳回路により優れた記録を呈する分子シグナリングネットワークを有し、この理由において学習及び記憶におけるモデルシステムとして２０年以上使用された（例えば、Ｋａｅｃｈ  Ｓ，  Ｂａｎｋｅｒ  Ｇ．  Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ．  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．  ２００６；１（５）：２４０６−１５．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊａｎ  １１；  Ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｃｒａｉｇ  ＡＭ，  Ｇｒａｆ  ＥＲ，  Ｌｉｎｈｏｆｆ  ＭＷ．  Ｈｏｗ  ｔｏ  ｂｕｉｌｄ  ａ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ：  ｃｌｕｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００６  Ｊａｎ；２９（１）：８−２０．  Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｄｅｃ  ７．  Ｒｅｖｉｅｗ参照）。急性型または器官型の脳スライスのようなより複雑なシステムは非常に有用であるが、高スループットスクリーニングに従わない。不死化または変換されたニューロン細胞株は、高スループットスクリーニングに従うが、一次ニューロン培養の電子生理的状態に依存するシグナリングを繰り返さず、疾患状態の最も初期の症状の間、オリゴマーによって生じるこのシグナリングにおいて微妙な変更をモデル化することがありそうにない（例えば、Ｇｏｒｔｚ  Ｐ，  Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ  Ｗ，  Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ  Ｃ，  Ｏｔｔｏ  Ｆ，  Ｓｉｅｂｌｅｒ  Ｍ．  Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｎｓ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ２００４  Ａｕｇ  ２０；１０１８（１）：１８−２５）。この理由において、一次ニューロン培養は、高スクリーニング使用されるそれらの能力及び生体内で発生することに対する忠実さによって選択された。
【０２４１】
還元されたホルマザンは、細胞内小胞において最初に可視された（図１Ａ）。ニューロンの実施例は、染料のエンドサイトーシス及び不溶性紫生成物への還元の後に標識された小胞によって満たされた（スケールバー＝図１Ａにおいて２０ミクロン）。最終的なホルマザン・エキソサイトーシスは生体外で成熟海馬ニューロンにおいてＡベータ・オリゴマーを経て加速された。ニューロンの実施例顕微鏡写真は、エキソサイトーシスを介して押し出された不溶性紫染料によって覆われた。染料は、培養の水性環境において沈殿し、針状の血症をニューロンの表面上に形成した（図１Ｂ）。エンドサイトーシス率は、Ａベータ・オリゴマーの存在下で変更された。（図１Ｃ）エキソサイトーシス率は、Ａベータ・オリゴマーの存在下で変更された（図１Ｄ）。
【０２４２】
シナプス及び記憶欠損及び広範囲ではない細胞死は、アルツハイマー病の最も初期のステージで優勢であるため、これらの変化を測定するアッセイは、オリゴマー活性の小分子阻害剤を発見するために使用されることができる。ＭＴＴアッセイは培養において毒性の測定として使用されることができる。黄色テトラゾリウム塩は、細胞によってエンドサイトーシスされ、エンドソーム経路において不溶性紫ホルマザンに還元される。紫ホルマザンのレベルは、培養において活発に代謝する細胞の数の反映であり、及び、ホルマザンの数における減少は、培養における細胞死または代謝毒性の測定として受け止められる。顕微鏡で観察される場合、紫ホルマザンは、細胞を満たす細胞内小胞において最初に見えた（図１Ａ）。時間とともに、小胞はエキソサイトーシスされ、不溶性ホルマザンとしてプラズマ膜の外表面に形成された針状結晶として沈殿されたホルマザンは、水性培地環境に曝された（図１Ｂ）。細胞は還元されたホルマザンのエキソサイトーシス率を選択的に加速することでＡベータ・オリゴマーの致死下のレベルに反応し、その一方で、エキソサイトーシス率を影響されないままにする。そして、それは生体外における成熟した一次ニューロンにおいて示されることができ、及び、自動顕微鏡検査及び画像処理を経てこれらの形態的シフトは定量化されることができた。培養ウェルへのテトラゾリウム塩付加に続く与えられた点において、媒質処理された細胞は、図１Ａのそれらの外観を有し、その一方で、Ａベータ・オリゴマー書英された細胞は図１Ｂのそれらの外観を有した。これらの状況下では、還元されたホルマザンの総量において全体の変化はなく、単にその形態におけるシフトがあった。これらの状況下で、これらは減少したホルマザンの総量においてこのアッセイは、細胞死を引き起こさない低レベルのオリゴマーに対して敏感である。
【０２４３】
証拠は、膜輸送によって伝達されるニューロン表層受容体発現においてＡベータ・オリゴマーによって媒介される還元が、シナプス可塑性（ＬＴＰ）及びこのような学習及び記憶の電子生理的計測のオリゴマー阻害の根拠であることを示唆している（Ｋａｍｅｎｅｔｚ  Ｆ，  Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，  Ｈｓｉｅｈ  Ｈ，  Ｓｅａｂｒｏｏｋ  Ｇ，  Ｂｏｒｃｈｅｌｔ  Ｄ，  Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，  Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，  Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．  ＡＰＰ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．    Ｎｅｕｒｏｎ．  ２００３  Ｍａｒ  ２７；３７（６）：９２５−３７；  ａｎｄ  Ｈｓｉｅｈ  Ｈ，  Ｂｏｅｈｍ  Ｊ，  Ｓａｔｏ  Ｃ，  Ｉｗａｔｓｕｂｏ  Ｔ，  Ｔｏｍｉｔａ  Ｔ，  Ｓｉｓｏｄｉａ  Ｓ，  Ｍａｌｉｎｏｗ  Ｒ．  ＡＭＰＡＲ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｕｎｄｅｒｌｉｅｓ  Ａｂｅｔａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｓｐｉｎｅ  ｌｏｓｓ．  Ｎｅｕｒｏｎ．  ２００６  Ｄｅｃ  ７；５２（５）：８３１−４３を参照）。ホルマザン形態的シフトを経てオリゴマーによって誘発される膜輸送率の変化を測定することは、生体内齧歯動物において低Ａベータが一様にする［Ｈｏｎｇ  ＨＳ，  Ｒａｎａ  Ｓ，  Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，  Ｓｈｉ  Ａ，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ，  Ｚｈｏｕ  Ｆ，  Ｊｉｎ  ＬＷ，  Ｈｕａ  ＤＨ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００９  Ｆｅｂ；１０８（４）：１０９７−１１０８］Ａベータ・オリゴマーブロッキング剤を発見するために細胞株において使用された［Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，  Ｈｏｎｇ  ＨＳ，  Ｗｕ  ＨＣ，  Ｂａｔｔｉｎａ  ＳＫ，  Ｒａｎａ  Ｓ，  Ｉｗａｍｏｔｏ  Ｔ，  Ｒａｄｋｅ  ＧＡ，  Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  Ｅ，  Ｍａｒｔｉｎ  ＧＭ，  Ｈｕａ  ＤＨ，  Ｊｉｎ  ＬＷ．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００６  Ｊｕｌ；９８（１）：５７−６７；  Ｌｉｕ  Ｙ，  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ  （ＭＴＴ）  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ＭＴＴ  ｆｏｒｍａｚａｎ  ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  １９９７  Ｄｅｃ；６９（６）：２２８５−９３；  Ｌｉｕ  Ｙ，  Ｄａｒｇｕｓｃｈ  Ｒ，  Ｂａｎｈ  Ｃ，  Ｍｉｌｌｅｒ  ＣＡ，  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ２００４  Ｎｏｖ；９１（３）：６４８−５６；  Ｌｉｕ  Ｙ，  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｄ．  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ  ｐｅｐｔｉｄｅ．  Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００６  Ａｐｒ；３（２）：１２９−３５；  Ｒａｎａ  Ｓ，  Ｈｏｎｇ  ＨＳ，  Ｂａｒｒｉｇａｎ  Ｌ，  Ｊｉｎ  ＬＷ，  Ｈｕａ  ＤＨ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｐｙｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｙｒｉｄｉｎｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｂｅｔａ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ＭＣ６５  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．  Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．  ２００９  Ｆｅｂ  １；１９（３）：６７０−４．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｄｅｃ  ２４；  ａｎｄ  Ｈｏｎｇ  ＨＳ，  Ｍａｅｚａｗａ  Ｉ，  Ｂｕｄａｍａｇｕｎｔａ  Ｍ，  Ｒａｎａ  Ｓ，  Ｓｈｉ  Ａ，  Ｖａｓｓａｒ  Ｒ，  Ｌｉｕ  Ｒ，  Ｌａｍ  ＫＳ，  Ｃｈｅｎｇ  ＲＨ，  Ｈｕａ  ＤＨ，  Ｖｏｓｓ  ＪＣ，  Ｊｉｎ  ＬＷ．  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ａｎｔｉ−Ａｂｅｔａ  ｆｌｕｏｒｅｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．  ２００８  Ｎｏｖ  １８．  （Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）］。
【０２４４】
エキソサイトーシスアッセイは、生体外で３週間成長した成熟一次ニューロン培養の用途に適応された。Ａベータ・オリゴマーは還元された紫ホルマザンによって満たされた細胞内小胞（点）の量における投与量依存性の減少を引き起こし（図２Ａ、正方形；３μＭ投与量は図２Ｃにおける画像に対応する）、それはＣｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＶＴＩ自動顕微鏡システムを使用する画像処理を介して測定された。Ａベータ・オリゴマーの量を増加させることは、結局、明白な毒性に結果としてなった。このように、神経刺激性Ａベータ・オリゴマーの濃度は、細胞死を引き起こすよりもかなり低いものとなった。この減少は、抗Ａベータ・モノクローナル抗体６Ｅ１０（ＩｇＧ）の化学量論的量を、オリゴマーを加える前に培養に加えることによってブロックされることができる（図２Ａ、円；この円は図２Ｄ；単独の抗体［下向き三角形］がニューロンにおいて効果を有さない画像に対応する）。砂糖  アルコール  ｓｃｙｌｌｏ−イノシトール（ＡＺＤ−１０３）、ｎＡＣｈＲアンタゴニストヘキサメソニウム臭化物、及びＮＭＤＡＲアンタゴニストＭＫ−８０１を含む、Ａベータ・オリゴマーの効果をブロックすることが報告された、いくつかの化合物がテストされ、いずれも活性ではなかった（Ｆｅｎｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ’０７，  Ｃａｌａｂｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ’０６，  ＬｅＣｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ’０７）。
【０２４５】
アッセイは、媒質及びＡベータ・オリゴマー処理されたニューロンとの間に統計学的に有意の２−フォールド分離を通常達成すること（スチューデントｔ検定、不当分散）、化合物フォーマティング及びアッセイ・プレート・スタンピングのための自動液体ハンドリングロボットを有する３８４−ウェル・マイクロタイタ・プレートにおける実行のために最適化された。化合物は、まずニューロンに加えられ、それからオリゴマーが加えられた。このように構成されるとき、アッセイは、オリゴマーの破壊、ニューロンへのオリゴマー結合の阻害、または、オリゴマー結合によって阻害される作用のシグナル形質導入メカニズムの反作用を介して作用する化合物を検知することが可能であった。
【０２４６】
化合物は、それらが膜輸送においてＡベータによって媒介される変化を著しくブロックするが、単独で投与されたときに膜輸送に著しく作用しない場合、活性であるとみなされた。一例は図２Ｂに示されており、ＣＴ０１０９は、７μＭのＥＣ５０による膜輸送でのオリゴマー効果を阻害する。
【０２４７】
ＣＴ０１０９は、４−（３−（４−（トリフルオロメチル）ベンジルアミノ）ブチル）−２−メトキシフェノールであり、その構造は、以下のとおりである。
【０２４８】
【化２９】
2013501006.tif 000035
図２Ａは細胞内ホルマザン充填小胞（点）の投与量依存性の減少が、エキソサイトーシス（正方形）のＡベータ４２オリゴマー処理加速によって引き起こされたことを示す。オリゴマー効果は、抗ＡベータＩｇＧ（円及び上向き三角形；円はＩｇＧの化学量論的量、つまり、Ａβの３μＭ及びＩｇＧの１．５μＭに関連する；上向き三角形は準化学量論的ＩｇＧ、つまり、Ａβの３μＭ及びＩｇＧの０．５μＭに関連する）によってブロックされる。ＩｇＧ自体（下向き三角形）は効果を有さない。図２Ｂは膜輸送に作用するオリゴマーを阻害するＣＴ０１０９を示す。図２Ｃは生体外でオリゴマーが膜輸送を行うことを示す２１ＤＩＶ海馬ニューロンの代表的な顕微鏡写真を示し、及び図２Ｄは抗Ａベータ抗体（図２Ａの前記円に対応）による遮断を示す。データは３つの実験の平均である。スケールバー＝図２Ｄにおいて２０ミクロン。
【０２４９】
実施例ＦＦ：恐怖条件付けアッセイ
ＣＴ０１０９は、恐怖条件付けとして知られる記憶依存行動タスクの動物モデルにおいてテストされた。研究プロトコルは、発表されたプロトコルに基づいて設計された（例えば、Ｐｕｚｚｏ  Ｄ，Ｐｒｉｖｉｔｅｒａ  Ｌ，Ｌｅｚｎｉｋ  Ｅ，Ｆａ  Ｍ，Ｓｔａｎｉｓｚｅｗｓｋｉ  Ａ，Ｐａｌｍｅｒｉ  Ａ，Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏ．  Ｐｉｃｏｍｏｌａｒ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８  Ｄｅｃ  ３１；２８（５３）：１４５３７−４５.を参照）。文脈記憶の形成は、海馬のような内側側頭葉構造の完全性に依るものである。このアッセイにおいて、特定の顕著な文脈関係（条件つきの刺激；ＣＳ）が嫌悪する事象に関連すること、この場合においては穏やかな足へのショック（無条件刺激、ＵＳ）を記憶するようにネズミを訓練した。同じ文脈に入れられる時、良好な学習を示す動物は、凍結挙動の増加を示す。この凍結は、新規の文脈においてはないものである。文脈において増加された凍結は、動物における強い海馬依存性記憶形成を示す。恐怖条件付けにおいてテストされた記憶は、可溶性Ａβの上昇に敏感である。図３は、媒体投与（「ｂ」で標識されている棒）と比較して、動物がテストされてから２４時間後に記憶欠損において生じるトレーニングの間のＡベータ・オリゴマーの投与の結果（「ａ」で標識されている棒）を示す。ＣＴ０１０９は、膜輸送に対する効果を伝達するＡベータ・オリゴマーを止めることに対して効果的であった（図３）。Ａベータ・オリゴマー投与の前に動物に投与されると、ＣＴ０１０９は、投与量依存方法において記憶におけるオリゴマー効果をブロックした。化合物は、２ｐｍｏｌ投与量で記憶におけるオリゴマー効果を完全にブロックした（図３、「ｄ」で標識された棒）。この行動有効性は、膜輸送アッセイが、どの化合物がオリゴマーによって生じる行動記憶喪失を治療する際に有効化について予測することが可能なことを証明する。記憶における恐怖条件モデルは本明細書において記載されているように実行された。
【０２５０】
図３は、文脈的恐怖条件付け記憶タスクにおいて、媒体に対してＡベータが記憶形成において著しく欠損を生成することを示している（ｐ<０．０５）。図３は、ＣＴ０１０９＋Ａベータ（２００ｎＭ）の２ｐｍｏｌ投与量が、記憶におけるＡベータの効果を完全にブロックされたことを示す（ｐ<０．０５、一方向分散分析、ボンフェローニ補正を有する事後比較）。化合物単独での効果は観察されなかった（データに示されていない）。逆行動変化はいかなる投与量でも観察されなかった。
【０２５１】
本発明が、その特定の好適なバージョンに関してかなり詳細に記載されているにもかかわらず、他のバージョンも可能である。したがって、本発明の精神と範囲は、本明細書において記載された好適なバージョンの記載に限られてはならない。
【０２５２】
要約及び図面を含む本明細書において開示された全ての特徴、及び、開示された任意の方法または手順における全ての工程は、このような特徴及び／または工程が排他的である少なくともいくつかの場合での組合せを除いて、任意の組合せにおいて組み込まれることがある。要約及び図面を含む本明細書に開示された各特徴は、はっきりと述べられないかぎり、同じであるか、等しいまたは類似の目的にかなっている代わりの特徴と置き換えられることができる。このように、はっきりと述べられない限り、開示される各特徴は、等しいまたは類似の特徴の一般的な一連の１つの実施例のみである。本発明の様々な変更態様は、本明細書に記載されているそれらに加えて、前述の記載から当業者において明らかである。このような変更態様は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
【０２５３】
本出願における各引用文献は、その全体において参照により本明細書に組み込まれている。
【図１】
2013501006.tif 000046
【図２】
2013501006.tif 000047
【図３】
2013501006.tif 000048
【国際調査報告】
2013501006.tif 000049
2013501006.tif 000050