(57)【要約】【課題】新たな植物由来の抗酸化剤、及びそれを配合した抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤を提供する。【解決手段】シマヤマヒハツ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、ギンネム抽出物、イジュ抽出物、スダジイ抽出物、モモタマナ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、アメリカハマグルマ抽出物、メヒルギ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有する抗酸化剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シマヤマヒハツ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、ギンネム抽出物、イジュ抽出物、スダジイ抽出物、モモタマナ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、アメリカハマグルマ抽出物、メヒルギ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
前記植物抽出物が水及び／又は低級脂肪族アルコールで抽出されたものである請求項１記載の抗酸化剤。
【請求項３】
前記植物抽出物が、シマヤマヒハツ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、ギンネム抽出物、イジュ抽出物、スダジイ抽出物、モモタマナ抽出物、フクギ抽出物、及びアダン抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上である請求項１又は２記載の抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗酸化剤を含むことを特徴とする抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を含有する抗酸化剤、及びそれを配合した抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素種は、反応性が高いものが多く、体内に侵入する微生物等に対して殺菌作用を示し、生体への感染を防いでいる。活性酸素種としては、還元分子種であるスーパーオキシドアニオンラジカル（Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）および励起分子種である一重項酸素（１Ｏ２）などが知られている。しかしながら、加齢・ストレスに伴う細胞機能の低下等により活性酸素種が過剰に蓄積される結果、活性酸素種が細胞構成成分を攻撃し、様々な疾病の原因となる。
【０００３】
紫外線により活性酸素が発生することは周知である。皮膚は、常時、酸素や紫外線にさらされるため、フリーラジカルによる酸化ストレスのダメージが最も大きな組織である。近年では、紫外線により発生した種々の活性酸素が、皮脂や脂質の過酸化、蛋白変性、酵素阻害等を引き起こし、それが、短期的には皮膚の炎症などを誘発する。また、長期的には、老化やガンなどの原因となると考えられている。
【０００４】
抗酸化剤は、スーパーオキシドアニオンの不均化、過酸化水素の分解、ヒドロキシラジカルの捕捉によって、活性酸素種による酸化反応を抑制することができる。したがって、抗酸化剤を配合した皮膚外用剤は、光酸化ストレスによる皮膚老化（例えば、シミ、しわ、たるみなど）に予防・改善効果が期待できる。また、フリーラジカルが関連する各種皮膚疾患用皮膚外用剤としても、予防・改善効果が期待できる。
【０００５】
従来、植物由来の抗酸化剤についても種々検討されているが（特許文献１〜５）、さらに抗酸化活性が高い新規な抗酸化剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１０−１８０１８９号公報
【特許文献２】特開２０１１−２０７７７０号公報
【特許文献３】特開２０１１−２２５５１５号公報
【特許文献４】特開２００９−２９８７１２号公報
【特許文献５】特開平５−２４６８３７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、新たな植物由来の抗酸化剤、及びそれを配合した抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく検討していく中で、特定の植物から得られた抽出物に優れた抗酸化効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明に係る抗酸化剤は、シマヤマヒハツ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、ギンネム抽出物、イジュ抽出物、スダジイ抽出物、モモタマナ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、アメリカハマグルマ抽出物、メヒルギ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有するものである。
【００１０】
本発明に係る抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤は、該抗酸化剤を含有するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、抗酸化効果に優れた新規の植物由来抗酸化剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施に関連する事項について詳細に説明する。
【００１３】
本実施形態に係る抗酸化剤において、抽出原料となる植物は、シマヤマヒハツ、バンジロウ、ギンネム、イジュ、スダジイ、モモタマナ、フクギ、アダン、アメリカハマグルマ、メヒルギ、オヒルギ、ダイジョ、ツワブキ、ヒジキ、及びモンパノキから選択される少なくとも１種である。
【００１４】
シマヤマヒハツ（学名：Antidesma pentandrum (Blanco) Merr.）は、琉球諸島から台湾、フィリピンにかけて分布するトウダイグサ科ヤマヒハツ属の常緑低木であり、直径５ミリくらいの楕円形の実を房状につける。抽出部位としては、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は実部である。
【００１５】
バンジロウ（学名：Psidium guajava L.）は、フトモモ科バンジロウ属に属する熱帯性の低木であり、グアバとも称される。本実施形態では、バンジロウの茎部（即ち、幹や枝）を抽出部位として使用することを特徴とする。バンジロウ（グアバ）については、上記特許文献５に葉部の抽出物に活性酸素抑制作用があることが記載されているが、茎部の抽出物に抗酸化作用があることは従来知られておらず、本発明者によりはじめて見出されたものである。
【００１６】
ギンネム（学名：Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit）は、中南米を原産とするマメ科ネムノキ亜科ギンゴウカン属の落葉低木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００１７】
イジュ（学名：Schima wallichii (DC.) Korth. subsp. noronhae (Reinw. ex Blume) Bloemb.）は、沖縄、奄美諸島等に分布するツバキ科ヒメツバキ属の常緑高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００１８】
スダジイ（学名：Castanopsis sieboldii (Makino) Hatus. ex T.Yamaz. et Mashiba）は、新潟県以南の地域等に分布するブナ科シイ属の常緑広葉樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は実部である。
【００１９】
モモタマナ（学名：Terminalia catappa L.）は、アジアの亜熱帯や熱帯等の地域に分布するシクンシ科モモタマナ属の半落葉樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２０】
フクギ（学名：Garcinia subelliptica Merr.）は、フィリピンや台湾等に分布するオトギリソウ科（又は、テリハボク科）フクギ属の常緑高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２１】
アダン（学名：Pandanus odoratissimus L.f.）は、亜熱帯から熱帯の海岸沿いに生育するタコノキ科タコノキ属の常緑小高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２２】
アメリカハマグルマ（学名：Wedelia trilobata (L.) Hitchc.）は、中央アメリカを原産地として沖縄にも帰化植物として定着しているキク目キク亜科スファグネティコラ属に分類される多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、花部、茎部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は花部である。
【００２３】
メヒルギ（Kandelia obovata Sheue, H.Y.Liu et W.H.Yong）は、主に熱帯から亜熱帯の河口干潟に生育するヒルギ科メヒルギ属の常緑木本であり、マングローブ樹種のひとつである。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２４】
オヒルギ（Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.）は、熱帯および一部の亜熱帯の河口干潟に生育するヒルギ科オヒルギ属の常緑高木であり、マングローブ樹種のひとつである。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２５】
ダイジョ（学名：Dioscorea alata）は、ヤマノイモ科ヤマノイモ属に属し、アジアやオセアニア等の熱帯地域で広く栽培されるヤムイモの１種である。抽出部位としては、例えば、塊根部、茎部、葉部、地上部等が挙げられ、好ましくは茎部である。
【００２６】
ツワブキ（学名：Farfugium japonicum (L.) Kitam）は、琉球諸島、九州、四国、本州等に分布するキク科ツワブキ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２７】
ヒジキ（学名：Sargassum fusiforme (Harvey) Setchell）は、日本や朝鮮半島などに分布する褐藻類ホンダワラ科ホンダワラ属の海藻であり、抽出部位は全草が好ましい。
【００２８】
モンパノキ（学名：Heliotropium foertherianum Diane et Hilger）は、熱帯から亜熱帯の海岸に生育するムラサキ科キダチルリソウ属の常緑低木ないし小高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２９】
上記植物の他に、以下の植物についても、抗酸化効果を持つ候補植物として検討した。
【００３０】
ホンダワラ（学名：Sargassum fulvellum (Turner) C.Agardh）は、褐藻綱ホンダワラ科ホンダワラ属の海藻であり、本州、四国、九州などに分布する。抽出部位としては、例えば、茎部、葉部、全草等が挙げられる。
【００３１】
オキナワキョウチクトウ（学名：Cerbera manghas L.）は、アジアの熱帯から亜熱帯の地域等に生育するキョウチクトウ科ミフクラギ属の常緑亜高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられる。
【００３２】
ヤエヤマカズラ（学名：Ipomoea batatas L．）は、琉球諸島で栽培されているヒルガオ科のつる性多年草であり、抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられる。
【００３３】
フダンソウ（学名：Beta vulgaris var. cicla (L.) K.Koch）は、アカザ科フダンソウ属の耐寒性一年草−二年草であり、抽出部位としては、例えば、葉部、地上部、全草等が挙げられる。
【００３４】
シマアザミ（学名：Cirsium brevicaule A.Gray）は、トカラ列島から琉球各島に分布するキク科アザミ属の多年生草本である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられる。
【００３５】
ニガナ（学名：Crepidiastrum lanceolatum）は、沖縄等に生育するキク科アゼトウナ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられる。
【００３６】
タンカン（学名：Citrus tankan Hayata）は、中国の広東省を原産地とし沖縄県等で栽培されているミカン科ミカン属の常緑樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、果皮部、枝部等が挙げられる。
【００３７】
パパイヤ（学名：Carica papaya）は、メキシコ南部を原産地とし主に熱帯地域で栽培されているパパイア科パパイア属の常緑小高木である。抽出部位としては、例えば、実部 、葉部、枝部、幹部等が挙げられる。
【００３８】
アナアオサ（学名：Ulva pertusa Kjellman）は、アオサ目アオサ科アオサ属の緑藻であり、抽出部位としては全草が挙げられる。
【００３９】
ドラゴンフルーツ（学名：Hylocereus undatus）は、サボテン科ヒモサボテン属に属するサンカクサボテンのことであり、抽出部位としては、例えば、実部 （即ち、果実全体、果皮部、可食部等）、茎部等が挙げられる。
【００４０】
ミズイモ（学名：Colocasia  esculenta  schott  var. aquatilis  Kitamura）は、主に南西諸島で栽培されているサトイモ科サトイモ属の植物であり、抽出部位としては、例えば、塊茎部、葉部、全草等が挙げられる。
【００４１】
スイゼンジナ（学名：Gynura bicolor）は、熱帯アジア原産のキク科サンシチソウ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、全草等が挙げられる。
【００４２】
シマラッキョウ（学名：Allium chinense）は、主として沖縄で栽培されているユリ目ユリ科ネギ属の多年草であり、抽出部位としては全草が挙げられる。
【００４３】
クビレズタ（学名：Caulerpa lentillifera）は、南西諸島などに分布するイワズタ科イワズタ属に属する海藻であり、抽出部位としては全草が挙げられる。
【００４４】
本実施形態に係る植物抽出物としては、上記の植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００４５】
抽出原料として使用する植物は、粉砕したものが適当である。また、部位によってはヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒を用いた抽出処理を効率よく行うことができる。
【００４６】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用することが好ましい。植物抽出物に含まれる抗酸化効果を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。極性溶媒の具体例としては、水、水溶性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これら極性溶媒のうち、含水水溶性有機溶媒を使用することが好ましい。
【００４７】
抽出溶媒として使用し得る水溶性有機溶媒としては、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ケトン等が挙げられる。低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数１〜５の１価アルコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。低級脂肪族ケトンの具体例としては、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。水溶性有機溶媒としては、例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル、メチルセロソルブ等の中間極性溶媒を使用することもできる。
【００４８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、含水水溶性有機溶媒を使用する場合、一価アルコール、多価アルコール、アセトン等の含有量が５０体積％以上であることが好ましい。
【００４９】
抽出溶媒としては、水及び／又は低級脂肪族アルコールを用いることが好ましく、より好ましくは水と低級脂肪族アルコールの混液であり、更に好ましくは水とエタノールの混液である。水と低級脂肪族アルコールの混液の場合、低級脂肪族アルコールの含有量が５０体積％以上であることが好ましく、より好ましくは５０〜８０体積％である。
【００５０】
抽出処理は、抽出原料である上記植物に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り、特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下において任意の装置を使用することができる。抽出方法としては、例えば、抽出溶媒中に抽出原料を長時間常温で浸漬して抽出する方法、抽出溶媒の沸点以下の温度に加熱し攪拌しながら抽出する方法、抽出溶媒の沸点付近の温度で加熱還流下にて抽出する方法等が挙げられる。
【００５１】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過、遠心分離等の処理を施して抽出残渣を除くことにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができ、これらの処理は、生理活性、すなわち抗酸化効果の低下を招かない範囲で行えばよい。
【００５２】
以上のようにして得られる植物抽出物は、抗酸化効果を有している。すなわち、該植物抽出物は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用および活性酸素吸収能の少なくともいずれか１以上を有しており、この作用を利用して抗酸化剤の有効成分として使用することができる。すなわち、本実施形態に係る抗酸化剤は、上記植物抽出物を有効成分として含有するものである。
【００５３】
上記植物抽出物は、そのままでも抗酸化剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。植物抽出物は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００５４】
本実施形態に係る抗酸化剤は、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適であり、抗老化用皮膚外用剤や抗酸化用皮膚外用剤となる。すなわち、上記抗酸化剤を配合した皮膚外用剤は、肌に塗布することで活性酸素（フリーラジカル）捕捉能などの抗酸化作用を発揮することができるので、光酸化ストレスによる皮膚老化（例えば、シミ、しわ、たるみ等）を予防・改善することができ、抗老化用皮膚外用剤として利用することができる。また、活性酸素（フリーラジカル）が関連する各種皮膚疾患を予防・改善することができ、抗酸化用皮膚外用剤（例えば、ラジカル関連皮膚疾患用皮膚外用剤）として利用することができる。
【００５５】
ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ジェル等が挙げられる。
【００５６】
皮膚外用剤における植物抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や植物抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、乾燥物に換算して通常０．００１〜５質量％、好ましくは０．０１〜１質量％である。配合量を０．００１質量％以上とすることにより、抗酸化効果を十分に発揮しやすくでき、また、配合量を５質量％以下とすることにより、配合量の増加分に見合った抗酸化作用を発揮させることができる。
【００５７】
本実施形態に係る抗老化用又は抗酸化用皮膚外用剤には、上記植物抽出物が有する抗酸化効果を妨げない限り、通常の皮膚外用剤の製造に用いられる主剤、助剤またはその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、清涼剤、乳化剤、増泡剤、増粘剤、消臭・脱臭剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、美白剤、酵素、ホルモン類、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、精製水などを配合することができる。
【実施例】
【００５８】
以下、実施例について説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５９】
［製造例］各植物からの抽出物の製造
イジュの葉を５０℃で一昼夜送風乾燥し、乾燥したイジュの葉５０ｇを５００ｍＬの７０％（v/v）エタノール溶液（エタノール／水の体積比＝７０／３０）に投入し、３日間室温で保った後、ろ過した。ろ液を５０℃で減圧下にて濃縮し、さらに凍結乾燥機で乾燥して粗抽出物（粉末状）を得た。得られた粗抽出物の質量は８．４ｇ（収率＝１６．８質量％）であった。
【００６０】
上記と同様にして、シマヤマヒハツの実、シマヤマヒハツの葉、ホンダワラの全草、バンジロウの枝、ギンネムの葉、スダジイの葉、スダジイの実、モモタマナの葉、フクギの葉、アダンの葉、オキナワキョウチクトウの葉、アメリカハマグルマの花、アメリカハナグルマの葉、メヒルギの葉、オヒルギの葉、ダイジョの茎、ダイジョの葉、ダイジョの塊根、ツワブキの葉、ヤエヤマカズラの葉、フダンソウの葉、シマアザミの葉、ニガナの全草、タンカンの葉、タンカンの果皮、パパイヤの実（果実）、アナアオサの全草、ドラゴンフルーツの茎、ドラゴンフルーツの果皮、ドラゴンフルーツの可食部、ミズイモの塊茎、ミズイモの葉、スイゼンジナの全草、シマラッキョウの全草、クビレズタの全草、ヒジキの全草、及び、モンパノキの葉を抽出原料として、それぞれ抽出処理を行い、粗抽出物を得た。
【００６１】
［精製例］粗抽出物の精製
シマヤマヒハツ実部、スダジイ葉部、モモタマナ葉部、フクギ葉部、及び、アダン葉部の各粗抽出物をそれぞれ水に溶解し、合成吸着剤（「ダイヤイオンＨＰ−２０」三菱化学株式会社製）１００ｍＬを充填したカラムに注入した。その後、水で未吸着物質を洗浄・除去し、エタノールで溶出される画分を分画した。分画物を５０℃で減圧下にて濃縮し、さらに凍結乾燥機で乾燥して精製後の抽出物（粉末状）を得た。
【００６２】
［試験例１］ＤＰＰＨラジカル消去活性試験
植物抽出物のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液（濃度１００μｇ/ｍＬ）を試料溶液とした。９６穴マイクロプレートに、上記試料溶液、エタノールおよび１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）の８００μＭエタノール溶液をそれぞれ５０μＬずつ加えて均一溶液とし、２０分後に吸光度（波長５２０ｎｍ）を測定した。また、ブランクとして上記試料溶液の代わりにエタノールを用いて同様に吸光度を測定した。ＤＰＰＨラジカル消去率（％）は、ブランクの吸光度に対する各サンプルの吸光度の減少割合（％）より算出した。
【００６３】
結果は、表１に示す通りであり、本実施形態に係る植物抽出物はＤＰＰＨラジカル消去活性に基づく抗酸化効果を有していた。粗抽出物のＤＰＰＨラジカル消去活性が比較的低い場合でも、精製することによって消去活性の改善が見られ、これら植物抽出物の抗酸化効果が高いことがわかる。
【００６４】
【表１】
2015086188.tif 000002
【００６５】
［試験例２］過酸化水素消去活性試験
表２に記載の溶媒を用いて植物抽出物の溶液（濃度２ｍｇ/ｍＬ）を調整した。９６穴マイクロプレートに上記植物抽出物溶液４０μＬ、ＰＢＳ（−）ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ＝７．４）４０μＬ、５ｍＭ過酸化水素水８０μＬを入れ、３７℃にて３０分間保持し、試料溶液を調整した。また、上記植物抽出物溶液の代わりにＤＭＳＯおよびエタノールをそれぞれ用いてブランク溶液を作成し、同様の操作を行った。
【００６６】
別の９６穴マイクロプレートに、上記試料溶液またはブランク溶液２５μＬ、４−アミノアンチピリン（３．２ｍＭ、以下４−ＡＰ）の０．０５Ｍトリスヒドロキシメチルアミノメタン／ＨＣｌ緩衝液溶液２５μＬ、フェノール（１６ｍＭ）の０．０５Ｍトリスヒドロキシメチルアミノメタン／ＨＣｌ緩衝液溶液２５μＬおよびhorseradish peroxidade（７．２ｕｎｉｔ／ｍＬ）溶液２５μＬを混合し、３７℃にて１０分間保持し、この溶液の吸光度（波長：４９０ｎｍ）を測定した。過酸化水素の残存量は、下記方法で作成した過酸化水素の検量線を用いて定量し、ブランクの残存量を基準とした場合の過酸化水素の減少割合を過酸化水素消去率（％）として算出した。なお、過酸化水素の検量線は、上記ブランク溶液を用いた場合の過酸化水素濃度を変更したサンプルの吸光度（波長４９０ｎｍ）を測定することによって作成した。
【００６７】
結果は表２に示したように、スダジイ、イジュ、モモタマナ、シマヤマヒハツ、アメリカハマグルマ、メヒルギ、ヒジキが優れた過酸化水素消去活性を示すことがわかった。
【００６８】
【表２】
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【００６９】
［試験例３］ＳＯＤ（スーパーオキサイドジスムターゼ）様活性試験
１ｍｇ／ｍＬのbovine serum albumin（ＢＳＡ）水溶液に、２０ｕｎｉｔ/ｍＬとなるようにキサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）を溶解し、ＸＯＤ溶液を調製した。Hanks’ buffer（塩化ナトリウム８ｇ、塩化カリウム０．４ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物０．１２１ｇ、リン酸二水素カリウム０．０６、グルコース１ｇ、硫酸マグネシウム・７水和物０．２ｇおよび塩化カルシウム０．１４ｇを蒸留水に溶解したものを炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７．４に調整し、さらに、水を加えて２００ｍＬに希釈したもの）に、０．２５ｍＭのニトロテトラゾリウムブルークロライド（ＮＢＴ）、０．１ｍＭのエチレンジアミン４酢酸、１ｍＭのヒポキサンチンを溶解し、反応用緩衝液を得た。
【００７０】
試験試料として表３に記載の溶媒で溶解した植物抽出物の溶液（濃度０．２５ｍｇ／ｍＬ）２５μＬ、ＸＯＤ溶液２５μＬおよび上記調整した反応用緩衝液７５μＬを９６穴マイクロプレートに加え、試料溶液の着色による影響を除くために吸光度（波長５５０ｎｍ）を測定後、さらに３７℃で１０分間保持した後の吸光度（波長５５０ｎｍ）を測定した。また、植物抽出物を用いない以外は同様の方法でブランク溶液を作成し、同様に吸光度を測定した。［（３７℃１０分保持後の各サンプルの吸光度）―（保持前の各サンプルの吸光度）］／（ブランク溶液の吸光度）を算出し、アスコルビン酸（ビタミンＣ、０．２５ｍｇ／ｍＬ）を用いた場合に算出した数値を１とした場合における、各サンプルの数値をＳＯＤ様活性として算出した。
【００７１】
結果は表３に示したとおり、ダイジョ、フクギ、イジュ、バンジロウ、スダジイ、シマヤマヒハツ、ギンネム、アメリカハマグルマ、メヒルギ、モンパノキ、ツワブキ、オヒルギに高いＳＯＤ様活性が得られ、特にダイジョ、フクギ、イジュ、バンジロウ、スダジイ、シマヤマヒハツ、ギンネム、アメリカハマグルマがアスコルビン酸と同等以上の高い活性を示した。
【００７２】
【表３】
2015086188.tif 000004
【００７３】
［試験例４］ＯＲＡＣ（活性酸素吸収能力）法による抗酸化性試験
植物抽出物を、混合溶媒（アセトン／水／酢酸＝７０：２９．５：０．５（容量比））に１００ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、さらに７５ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）で１０倍、２０倍、４０倍および８０倍に希釈した。９６穴マイクロプレートに、この希釈溶液２０μＬと、フルオレセインの７５ｍＭリン酸カリウム緩衝液溶液（濃度９４．４μＭ）２００μＬとを加え、３７℃に保った蛍光プレートリーダーでフルオレセインの蛍光強度を測定した。続いて、２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）ジヒドロクロリド（ＡＡＰＨ）の７５ｍＭリン酸カリウム緩衝液溶液（濃度３１．７ｍＭ）７５μＬを加えて振とう攪拌した。ＡＡＰＨ添加から８分後に蛍光強度を測定し、続いて、２分間隔で９０分間蛍光強度を測定した。続いて、植物抽出物を用いない以外は同様の操作を行い、ブランクの蛍光強度を測定した。
【００７４】
ＯＲＡＣ値は、Ｔｒｏｌｏｘ相当量として下記の方法で算出した。即ち、蛍光強度を経時的に記録したグラフの曲線化面積からブランクの曲線化面積を差し引いた面積を算出した。続いて、後述の方法で作成した６−ヒドロキシ−２,５,７,８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（Ｔｒｏｌｏｘ）の検量線を用いて、上記差し引いた面積に相当するＴｒｏｌｏｘ相当量を算出した。
【００７５】
Ｔｒｏｌｏｘの検量線の作成方法は以下の通りである。上記希釈溶液に代えて、種々の濃度の６−ヒドロキシ−２,５,７,８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（Ｔｒｏｌｏｘ）の７５ｍＭリン酸カリウム緩衝液溶液を用いる以外は同様の操作を行った。続いて、蛍光強度を経時的に記録したグラフの曲線化面積からブランクの曲線化面積を差し引いた面積を算出した。さらに、算出した面積とＴｒｏｌｏｘ濃度とをそれぞれ縦軸および横軸にプロットすることにより、検量線を作成した。
【００７６】
結果は表４に示したとおり、フクギ、アメリカハマグルマ、モモタマナ、スダジイ、イジュ、モンパノキ、メヒルギ、ギンネム、オヒルギが高い抗酸化性を示した。
【００７７】
【表４】
2015086188.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明に係る抗酸化剤は、抗酸化作用に優れるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ジェル等の化粧料、医薬部外品等に用いることができる。