(57)【要約】      （修正有）【課題】抗腫瘍剤、細胞増殖抑制剤として有用な化合物、及び該化合物を含有する医薬組成物の提供。【解決手段】下式で表わされる化合物、及び該化合物を含有する医薬組成物。2015038061.tif 000027（Ｍは各々独立に、Ｈ、Ｎａ、Ｋからなる群から選ばれる原子、ｎ＝１の場合、少なくとも一つはＨではない；ｎは整数）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（Ｉ）を有する化合物。
2015038061.tif 000026
【請求項２】
ｎが１である、請求項１の化合物。
【請求項３】
すべてのＭがナトリウム原子である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する組成物。
【請求項５】
医薬組成物または試薬組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する細胞増殖抑制剤。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含有する細胞障害剤。
【請求項９】
化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基を有する第２の化合物またはその塩を準備する工程と、
第２の化合物の細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を調べる工程と、
を含む、細胞増殖抑制活性または細胞障害活性の測定方法。
【請求項１０】
細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を有する化合物のスクリーニング方法であって、
化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基を有する複数の第２の化合物またはその塩を準備する工程と、
複数の第２の化合物の細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を調べる工程と、
細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を有する第２の化合物を同定する工程と、
を含む、スクリーニング方法。
【請求項１１】
新規抗腫瘍剤のスクリーニング方法である、請求項１０に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ワカメやモズクなどの天然渇藻類に含まれるフコイダンは、主にＬ−フコースが、α1-2やα1-4結合で数十から数十万個も繋がった化合物であって、グルクロン酸を含むもの、硫酸化フコースを含むもの、ガラクトースを含むものなど、多様な化合物の総称である。フコイダンは、既存の抗腫瘍剤では効果の低い造血器腫瘍に対する強いアポトーシス誘導活性や、悪性腫瘍の転移阻害活性、血管申請阻害活性などの抗腫瘍活性を有するため（例えば、非特許文献１〜３参照）、これを用いた新たな抗腫瘍剤の開発が期待されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Am. J. Hematol. vol.78 p.7, 2005
【非特許文献２】Nutrit. Cancer vol.52 p.189, 2005
【非特許文献３】Int. J. Biol.Macromol. vol.41 p.221, 2007
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、新規抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
天然のフコイダンは、分子量数万〜数十万の巨大分子であり、由来となる渇藻類の種類によって糖鎖構造や分子量が異なり、抽出方法によっても分子量や構造が不均一になってしまう。そのため、純粋で化学構造の明らかなフコイダンの入手は困難であり、どのような構造のものが、どのような生理活性を有するのかについて、これまで全く知られていない。
【０００６】
本発明者らは、Ｌ−フコースが４つ繋がってできる糖鎖構造において、様々な硫酸化パターンを有する硫酸化オリゴフコシドを合成し、ヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７に対する細胞増殖抑制活性及びアポトーシス誘導活性を調べたところ、下記化学式（Ｉ）を有する化合物が、最も高い活性を示すことを見出し、本発明に至った。
【０００７】
本発明の一実施態様は、下記化学式（Ｉ）を有する化合物である。  
2015038061.tif 000002
ここで、ｎが１であってもよい。また、すべてのＭは、ナトリウム原子であってもよい。
【０００８】
本発明の他の一実施態様は、上記化合物を有効成分として含有する医薬組成物や試薬組成物などの組成物、抗腫瘍剤などの医薬、試薬、あるいは細胞増殖抑制剤または細胞障害剤であってもよい。
【０００９】
本発明のさらに他の一実施態様は、化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基を有する第２の化合物またはその塩を準備する工程と、第２の化合物の細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を調べる工程と、を含む、細胞増殖抑制活性または細胞障害活性の測定方法である。  
2015038061.tif 000003
【００１０】
本発明のさらに他の一実施態様は、細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を有する化合物のスクリーニング方法であって、化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基を有する複数の第２の化合物またはその塩を準備する工程と、複数の第２の化合物の細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を調べる工程と、細胞増殖抑制活性または細胞障害活性を有する第２の化合物を同定する工程と、を含む、スクリーニング方法である。このスクリーニング方法は、新規抗腫瘍剤のスクリーニング方法であってもよい。
【００１１】
なお、明細書中で、硫酸基とは、−ＳＯ３Ｈのことをいうものとする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によって、新規抗腫瘍剤を提供することが可能になった。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＭＣＦ−７細胞に対し、化合物９〜１５を投与したときに行ったＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。各化合物において、左から１０、５０、１００、２００、３００μＭの時の結果を示す。
【図２】ＭＣＦ−７細胞に対し、天然のフコイダンまたは化合物１２を投与したときに行ったＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。各化合物において、左から３．３、１０、３３、１００、３３０μg/mLの時の結果を示す。
【図３】ＭＣＦ−７細胞及びＨｅＬａ細胞に対し、化合物９〜１３を投与したときに行ったＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。各化合物において、左から１０、１００、４００、８００μＭの時の結果を示す。
【図４】ＭＣＦ−７細胞及びＨｅＬａ細胞に対し、天然のフコイダン（図ではF.vesiculosusと記載）または化合物１１を投与したときに行ったＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。各化合物において、左から１０、１００、３３０、１０００μg/mLの時の結果を示す。
【図５】ＷＩ−３８細胞、ＭＣＦ−７細胞及びＨｅＬａ細胞に対し、化合物１１を投与したときに行ったＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。各化合物において、左から１０、１００、３３０、１０００μg/mLの時の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。なお、本発明の目的、特徴、利点、および、そのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をこれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００１５】
＝＝化学式（Ｉ）を有する化合物の合成方法＝＝
本発明の一実施態様は、化学式（Ｉ）を有する化合物である。  
2015038061.tif 000004
ここで、Ｍは水素原子及びナトリウム原子からなる群から独立に選ばれる原子であることが好ましく、Ｍが全てナトリウム原子である下記化合物（ＩＩ）であることがより好ましい。  
2015038061.tif 000005
【００１６】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｎは整数であって、特に限定されないが、２０以下が好ましく、１０以下がより好ましく、５以下がさらに好ましく、１が最も好ましい。
【００１７】
以下、化合物（ＩＩ）について合成方法の一例を詳細に述べるが、（Ｉ）に含まれる他の化合物に関しても、本明細書の記載から、当業者であれば容易に合成可能である。なお、反応式中の数値などは、反応条件の一例を示すものであって、実際の合成方法は、これらの反応条件には限定されず、当業者であれば、文章中の記載から容易に理解できる。
【００１８】
（化１）反応式１
2015038061.tif 000006
まず、化合物１及び化合物２の混合物に対し、ジエチルエーテル中で、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム(III)を作用させ、化合物３を合成する。
【００１９】
（化２）反応式２
2015038061.tif 000007
化合物３に対し、水及びアセトニトリルの混合溶媒中で、N-ヨードスクシンイミド及びトリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム(III)作用させ、化合物４を合成する。
【００２０】
（化３）反応式３
2015038061.tif 000008
化合物４に対し、ジクロロメタン中で、ジアザビシクロウンデセン及びトリクロロアセトニトリルを室温で作用させ、化合物５を合成する。
【００２１】
（化４）反応式４
2015038061.tif 000009
化合物５に対し、ジクロロメタン中で、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム(III)及び１−オクタノールを作用させ、化合物５のオクチルグリコシドを合成する、続いて、得られた化合物５のオクチルグリコシドに対し、N,N-ジメチルホルムアミド中で、チオ尿素及び2,6-ルチジンを作用させ、化合物６を合成する。
【００２２】
（化５）反応式５
2015038061.tif 000010
化合物５及び化合物６の混合物に対し、ジエチルエーテル中で、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを作用させ、化合物７を合成する。
【００２３】
（化６）反応式６
2015038061.tif 000011
化合物７に対し、N,N-ジメチルホルムアミド中で、チオ尿素及び2,6-ルチジンを作用させ、化合物８を合成する。
【００２４】
（化７）反応式７
2015038061.tif 000012
化合物８に対し、メタノール中で、ナトリウムメトキシドを作用させ、化合物８からベンゾイル基を脱保護した化合物を合成する。
【００２５】
化合物８のベンゾイル基脱保護体に対し、ジクロロメタン及びリン酸バッファーの混合溶媒中で、2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-p-ベンゾキノンを作用させ、化合物８からベンゾイル基及びp-メトキシベンジル基を脱保護した化合物を合成する。
【００２６】
化合物８のベンゾイル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体に対し、N,N-ジメチルホルムアミド中で、三酸化イオウ・トリエチルアミン錯体を作用させ、水酸化ナトリウム水溶液を加えて反応させ、化合物８において糖鎖結合をしていない3,4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物を合成する。
【００２７】
化合物８において糖鎖結合をしていない3,4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物に対し、Pearlman触媒存在下、メタノール及び水の混合溶媒中で、水素を添加し、3,4-O-硫酸タイプの化合物１１を合成する。
【００２８】
得られた化合物８に対し、反応式５以下を繰りかえすことによって、以下の化学式（Ｉ）を有する化合物（ＩＩ）を合成できる。  
2015038061.tif 000013
【００２９】
＝＝化学式（Ｉ）を有する化合物の利用方法＝＝
化学式（Ｉ）を有する化合物は、組成物として利用することができ、その組成物としては、医薬組成物、または試薬組成物などが挙げられる。これらの組成物は、それぞれ、医薬、試薬などに利用できる。本化合物は、in vitroにおいてもin vivoにおいても、細胞の増殖を抑制し、細胞障害を引き起こす。そこで、本化合物は、細胞の増殖を抑制する細胞増殖抑制剤及び／又は細胞障害を引き起こす細胞障害剤として使用することができる。
【００３０】
従って、化学式（Ｉ）を有する化合物を有効成分として含有する医薬は、抗腫瘍剤として、腫瘍を有する治療対象に対し、有効量の本化合物を投与することによって、その腫瘍を治療できる。治療対象とする腫瘍は特に限定されず、例えば、中枢神経系腫瘍、悪性黒色腫瘍、悪性リンパ腫瘍、咽頭腫瘍、喉頭腫瘍、胃腫瘍、カポジ肉腫、肝臓腫瘍、筋肉腫瘍、結腸腫瘍、血管腫瘍、骨髄腫瘍、甲状腺腫瘍、睾丸腫瘍、膵臓腫瘍、消化器腫瘍、食道腫瘍、大腸腫瘍、上顎腫瘍、舌腫瘍、口唇腫瘍、口腔腫瘍、胆嚢腫瘍、胆管腫瘍、胆道腫瘍、直腸腫瘍、乳腫瘍、尿管腫瘍、肉腫、骨肉腫瘍、白血病、肺腫瘍、神経芽腫瘍、真性多血症、膀胱腫瘍、卵巣腫瘍、子宮腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、基底細胞腫瘍、および皮膚黒色腫などの良性及び悪性腫瘍を例示することができ、原発巣の腫瘍であっても転移した腫瘍であってもかまわない。抗腫瘍剤の剤形は特に限定されず、液剤、経口投与剤、錠剤、粉剤、坐剤、外用剤、軟膏、貼布剤、点眼剤、注射剤、散剤、顆粒剤、糖衣剤、カプセル剤、ピル、懸濁剤、アンプル、注射液などを例示することができるが、この有効成分を原体のまま医薬として使用してもかまわない。この製剤は、薬学的に許容される添加物を含有してもよく、必要に応じて安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、賦形剤、溶剤、界面活性剤、乳化剤、懸濁化剤、分散剤、保存剤、溶解補助剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、保湿剤、結合剤、被覆剤、潤沢剤、崩壊剤、などを含有してもよい。この抗腫瘍剤の投与方法は特に限定されず、経皮吸収、血管投与、皮下注射、腹腔内投与等の全身投与や、カテーテルや注射による腫瘍への直接投与が例示できる。投与量は、症状、年齢、性別、体重、剤形あるいは投与形式により、医療従事者によって適切に選択されることができる。治療対象も特に限定されないが、ヒトまたはヒト以外の哺乳類が好ましく、ヒトの患者が特に好ましい。
【００３１】
また、化学式（Ｉ）を有する化合物を有効成分として含有する試薬は、in vitroで培養された培養細胞や組織・器官などに対して使用できる。培養方法及び試薬の使用方法は、当業者が容易に理解できる。例えば、培地に適量を添加することにより、細胞の増殖を抑制することができる。培養細胞は、初代培養細胞でも樹立培養細胞でもよく、細胞や組織は、正常組織由来でも腫瘍組織由来でもかまわない。
【００３２】
＝＝新規抗腫瘍剤のスクリーニング方法＝＝
本発明者らは、化学式（Ｉ）を有する化合物と同じ骨格を有していても、糖に結合する硫酸基のパターンが異なる化合物は、細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を有さないにもかかわらず、化学式（Ｉ）を有する化合物においては、細胞増殖阻害活性または細胞障害活性が非常に強い場合があることを見出している。そこで、化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基のパターンが異なる様々な第２の化合物またはその塩を準備し、その細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を調べることで、細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を有する化合物を高率に得ることができると考えられる。
【００３３】
そこで、本発明の細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を有する化合物をスクリーニングするためには、化合物（ＩＩＩ）において、糖の水酸基に結合した硫酸基のパターンが異なる複数の第２の化合物またはその塩を準備し、それら第２の化合物の細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を調べ、その中から細胞増殖阻害活性または細胞障害活性を有する化合物を同定すればよい。また、このスクリーニング方法によって、新たな抗腫瘍剤を得ることが可能になる。
【００３４】
ここで、硫酸基が結合する水酸基は、3,4-水酸基であることが好ましい。また、第２の化合物の塩は、少なくとも一つの硫酸基の水素原子が金属原子（ナトリウム原子、カリウム原子など）で置換された塩であることが好ましく、少なくとも一つの硫酸基の水素原子がナトリウム原子で置換されたナトリウム塩であることがより好ましく、全ての硫酸基の水素原子がナトリウム原子で置換されたナトリウム塩であることが最も好ましい。また、第３の化合物は、化合物９、１０、１２、１３でないことが好ましい。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【００３６】
［実施例１］基質の合成
＝＝化合物３の合成方法＝＝
（化１）
2015038061.tif 000014
【００３７】
化合物１（121 mg、0.209 mmol、2.0 eq.）及び化合物２（51.2 mg、0.104 mmol、1.0 eq.）の混合物に対し、MS5A（100wt%）存在下、ジエチルエーテル3.60 mL中で、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム(III)（53.1 mg、85.6 μmol、0.8 eq.）を-60℃で作用させた。反応混合物を-60℃で4時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００３８】
混合物をろ過後、ろ液に水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製を行い、化合物３を得た（94.0 mg、0.103 mmol、収率99%、α体のみ）。なお、ここで得られた1H NMRにおける各ピークの帰属および結合定数の解析の結果、α体であると同定した。さらに、β体の存在は確認されなかった。
【００３９】
＜化合物３の物性＞
White foam;  Rf 0.69 (2/1 hexane/EtOAc); 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.04 (2H, m), 7.63-7.08 (18H, m), 6.80 (2H, m), 5.62 (1H, dd, J = 3.1, 10.6 Hz), 5.55 (1H, br-d, J = 2.3 Hz), 5.09 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.04 & 4.94 (2H, ABq, J = 10.6 Hz), 4.81-4.66 (5H, m), 4.29 (1H, d, J = 9.8 Hz), 4.09 (1H, dd, J = 3.4, 10.6 Hz), 3.91 & 3.88 (2H, ABq, J = 14.9 Hz), 3.77 (5H, m), 3.40 (1H, dd, J = 2.9, 9.5 Hz), 3.28 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 2.56 (6H, s), 1.25 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.93 (3H, d, J = 6.6 Hz).
【００４０】
＝＝化合物４の合成方法＝＝
（化２）
2015038061.tif 000015
【００４１】
化合物３（94.8 mg、 0.103 mmol、 1.0 eq.）に対し、水及びアセトニトリルの混合溶媒（水 18.6 μL及びアセトニトリル 2.06 mL）中で、N-ヨードスクシンイミド（46.4 mg、 0.206 mmol、2.0 eq.）及びトリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム(III)（5.10 mg、 10.3 μmol、0.1 eq.）を-40℃で作用させた。反応混合物を-20℃で3時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００４２】
混合物を、飽和重曹水およびチオ硫酸ナトリウムの水溶液に0℃で加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー精製することによって、化合物４を得た（66.9 mg、84.5 μmol、収率82%、α体：β体＝１：１）。なお、ここで得られた1H NMRにおける各ピークの帰属および結合定数の解析の結果、α体とβ体の混合物であると同定した。さらに、α体およびβ体のピークの積分比から存在比を１：１と決定した
【００４３】
＜化合物４の物性＞
White foam;  Rf0.36 (1/1 hexane-EtOAc); 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.02-7.99 (2H, m), 7.64-7.26 (15H, m), 6.86-6.81 (2H, m), 5.54-5.45 (2H, m), 5.32 (1/2H, dd, J = 2.0, 3.5 Hz), 5.01 (1/2H, d, J = 3.7 Hz), 4.97 & 4.87 (1H, ABq, J = 11.2 Hz), 4.96 (1/2H, d, J = 3.5 Hz), 4.82 & 4.76 (1H, ABq, J = 11.5 Hz), 4.71-4.57 (11/2H, m), 4.10-4.01 (2H, m), 3.95-3.85 (3H, m), 3.78 (3H, s), 3.74 (1/2H, d, J = 2.9 Hz), 3.63 (1/2H, dd, J = 7.5, 9.8 Hz), 3.55 (1/2H, q, J = 6.3 Hz), 3.42 (1/2H, dd, J = 2.9, 9.8 Hz), 3.17 (1/2H, d, J = 7.8 Hz), 3.17 (1/2H, d, J = 1.7 Hz), 1.37-1.32 (3H, m), 0.91-0.87 (3H, m).
【００４４】
＝＝化合物５の合成方法＝＝
（化３）
2015038061.tif 000016
【００４５】
上述の方法で合成した化合物４（0.120 g、0.152 mmol、1.0 eq.）に対し、ジクロロメタン1.80 mL中で、ジアザビシクロウンデセン（6.80 μL、45.5 μmol、0.3 eq.）及びトリクロロアセトニトリル（45.7 μL、0.456 mmol、3.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を室温で15時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００４６】
混合物を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー精製することによって、化合物５を得た（0.108 g、0.116 mmol、収率76%、α体：β体＝６：１）。なお、ここで得られた1H NMRにおける各ピークの帰属および結合定数の解析の結果、α体とβ体の混合物であると同定した。さらに、α体およびβ体のピークの積分比から存在比が6:1と決定した。
【００４７】
＜化合物５の物性＞
White foam;  Rf 0.57, 0.27 (2/1 hexane-EtOAc, 1% NEt3); 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ8.61 (1/7H, s), 8.51 (6/7H, s), 8.01 (2H, m), 7.64-7.22 (15H, m), 6.80 (2H, m), 6.60 (6/7H, d, J = 3.2 Hz), 5.72 (1/7H, d, J = 7.7 Hz), 5.60-5.48 (2H, m), 4.08 (1/7H, br-q, J = 6.6 Hz), 5.00-4.58 (54/7H, m), 4.13 (6/7H, dd, J = 3.2, 10.3 Hz), 4.05 (12/7H, m), 3.95-3.85 (18/7H, m), 3.83 (6/7H, br-d, J = 2.6 Hz), 3.79 (3H, s), 3.66 (1/7H, br-q, J = 6.3 Hz), 3.52 (1/7H, dd, J = 2.6, 10.1 Hz), 1.39 (3/7H, d, J = 6.6 Hz), 1.32 (18/7H, d, J = 6.6 Hz), 0.92 (3/7H, d, J = 6.3 Hz), 0.92 (18/7H, d, J = 6.6 Hz).
【００４８】
＝＝化合物６の合成方法＝＝
（化４）
2015038061.tif 000017
【００４９】
上述の方法で合成した化合物５（α体：β体＝６：１、0.831 g、0.888 mmol、1.0 eq.）及び１−オクタノール（0.418 mL、2.66 mmol、3.0 eq.）の混合物に対し、MS5A（100wt%）存在下、ジクロロメタン中（12.5 mL）で、トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム(III)（0.220 g、0.355 mmol、0.4 eq.）を-40℃で作用させた。反応混合物を-40℃で4.5時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００５０】
混合物をろ過後、ろ液に水を加え、クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物５のオクチルグリコシドを得た（0.714 g、0.790 mmol、収率89%、β体のみ）。なお、ここで得られた1H NMRにおける各ピークの帰属および結合定数の解析の結果、β体であると同定した。さらに、α体の存在は確認されなかった。
【００５１】
＜化合物５のオクチルグリコシドの物性＞
Yellow syrup;  Rf 0.48 (12/1 PhMe-EtOAc); 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ8.02 (2H, m), 7.60-7.25 (15H, m), 6.81 (2H, m), 5.54 (1H, dd, J = 3.5, 10.9 Hz), 5.48 (1H, br-d, J = 3.2 Hz), 5.03 (1H, d, J = 3.8 Hz), 4.97 & 4.80 (2H, ABq, J = 11.2 Hz), 4.73 & 4.61 (2H, ABq, J = 10.9 Hz), 4.67 (2H, s), 4.59 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 4.29 (1H, d, J = 7.8 Hz), 4.04 (1H, dd, J = 3.4, 10.6 Hz), 3.95-3.86 (3H, m), 3.79 (3H, s), 3.68-3.65 (2H, m), 3.49-3.42 (2H, m), 3.37 (1H, dd, J = 2.9, 9.8 Hz), 1.68-1.63 (2H, m), 1.48-1.20 (13H, m), 0.90-0.86 (6H, m).
【００５２】
化合物５のオクチルグリコシド（0.697 g、0.772 mmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド20.9 mL中で、チオ尿素（0.235 g、3.09 mmol、4.0 eq.）及び2,6-ルチジン（0.358 mL、3.09 mol、4.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を70℃で16.5時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００５３】
混合物に水を加え、ヘキサン及び酢酸エチルの混合溶液（1/1）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物６を得た（0.600 g、0.726 mmol、収率94%）。
【００５４】
＜化合物６の物性＞
White foam;  Rf 0.49 (6/1 PhMe-EtOAc); 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.02 (2H, m), 7.60-7.25 (15H, m), 6.81 (2H, m), 5.40 (1H, dd, J = 1.2, 3.2 Hz), 5.03 (1H, d, J = 3.4 Hz), 4.95-4.65 (6H, m), 4.55 (1H, dq, J = 0.9, 6.6 Hz), 4.39 (1H, ddd, J = 3.2, 3.2, 10.1 Hz), 4.30 (1H, d, J = 7.8 Hz), 3.97-3.92 (1H, m), 3.88 (1H, dd, J = 3.5, 10.3 Hz), 3.78 (3H, s), 3.70 (1H, d, J = 0.9 Hz), 3.61 (1H, dd, J = 7.7, 10.0 Hz), 3.51-3.43 (2H, m), 3.38 (1H, dd, J = 2.9, 10.0 Hz), 2.21 (1H, d, J = 3.2 Hz), 1.72-1.59 (2H, m), 1.45-1.20 (13H, m), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.88 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００５５】
＝＝化合物７の合成方法＝＝
（化５）
2015038061.tif 000018
【００５６】
上述の方法で合成した化合物５（α体：β体＝６：１、1.15 g、1.23 mmol、2.0 eq.）及び化合物６（0.500 g、0.605 mmol、1.0 eq.）の混合物に対し、MS5A（100wt%）存在下、ジエチルエーテル17.0 mL中で、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（11.7 μL、64.6 μmol、0.1 eq.）を-80℃で作用させた。反応混合物を-80℃で3.5時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００５７】
混合物をろ過後、ろ液に水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、粗精製の化合物７を得た。得られた粗精製の化合物７は、これ以上精製することなく、次の化合物８の合成に用いた。
【００５８】
＝＝化合物８の合成方法＝＝
（化６）
2015038061.tif 000019
【００５９】
上述の方法で合成した粗精製の化合物７（理論収量：968 mg、0.605 mmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド29.0 mL中で、チオ尿素（0.184 g、2.42 mmol、4.0 eq.）及び2,6-ルチジン（0.280 mL、2.42 mmol、4.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を70℃で16時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００６０】
混合物に水を加え、ヘキサン及び酢酸エチルの混合溶液（1/1）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８を得た（0.746 g、0.490 mmol、化合物５及び化合物６からの２段階収率81%）。
【００６１】
＜化合物８の物性＞
White foam;  Rf 0.42 (10/1 PhMe-acetone); 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ7.98 (4H, m), 7.56-7.15 (30H, m), 6.80 (2H, m), 6.65 (2H, m), 5.57 (1H, br-d, J = 1.7 Hz), 5.39 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.32 (1H, br-d, J = 2.3 Hz), 4.99 (1H, dd, J = 3.2 Hz), 4.95 (1H, d, J = 3.5 Hz), 4.93-4.57 (6H, m), 4.56-4.41 (9H, m), 4.30 (1H, d, J = 7.8 Hz), 4.19 (1H, ddd, J = 3.2, 3.2, 10.1 Hz), 4.55 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 3.98-3.91 (2H, m), 3.86 (1H, dd, J = 3.5, 10.3 Hz), 3.81 (1H, dd, J = 3.5, 10.3 Hz), 3.77-3.73 (4H, m), 3.67 (1H, br-d, J = 3.0 Hz), 3.63-3.57 (5H, m), 3.50 (1H, m), 3.43 (1H, br-q, J = 6.3 Hz), 3.36 (1H, dd, J = 2.6, 10.0 Hz), 2.09 (1H, d, J = 3.2 Hz), 1.70-1.59 (2H, m), 1.45-1.20 (16H, m), 0.90-0.82 (9H, m).
【００６２】
＝＝化合物９の合成方法＝＝
（化７）
2015038061.tif 000020
【００６３】
化合物８（20.4 mg、13.4 μmol、1.0 eq.）に対し、Pearlman触媒（Pd 20%、20.4 mg、100wt%）存在下、メタノール及び酢酸エチルの混合溶媒（メタノール 2.0 mL及び酢酸エチル 2.0 mL）中で、水素を室温で添加した。反応混合物を室温で4時間攪拌した後、反応を停止せた。  
混合物をろ過及び濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー精製することによって、化合物８からベンジル基及びp-メトキシベンジル基を脱保護した化合物を得た（11.0 mg、11.9 μmol、収率88%）。
【００６４】
＜化合物８のベンジル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体の物性＞
White solid;  Rf 0.45 (8/1 CHCl3-MeOH); 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.02 (4H, m), 7.57 (2H, m), 7.45 (4H, m), 5.55 (1H, br-d, J = 2.9 Hz), 5.37 (1H, br-d, J = 3.5 Hz), 5.12 (1H, d, J = 3.9 Hz), 4.99 (1H, d, J = 3.7 Hz), 4.93 (1H, d, J = 4.2 Hz), 4.88-4.73 (2H, m), 4.26-4.19 (2H, m), 4.15 (1H, dd, J = 3.2, 10.3 Hz), 4.06 (1H, dd, J = 3.5, 10.6 Hz), 3.95 (1H, dd, J = 3.7, 10.6 Hz), 3.90-3.83 (2H, m), 3.80-3.67 (5H, m), 3.59-3.52 (2H, m), 3.45 (1H, dd, J = 7.5, 10.0 Hz), 1.65-1.59 (2H, m), 1.40-1.20 (16H, m), 1.08 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.01 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.87 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００６５】
化合物８のベンジル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体（20.2 mg、21.9 μmol、1.0 eq.）に対し、メタノール1.01 mL中で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（6.83 mol/L、12.8 μL、87.6 μmol、4.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を50℃で3時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００６６】
混合物にAmberliteTM IR 120 (H+ form)を加え、中和したのち、ろ過および減圧濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８からベンゾイル基、ベンジル基及びp-メトキシベンジル基を脱保護した、下記式で表される化合物１３を得た（15.2 mg、21.3 μmol、収率97%）。
【００６７】
（化８）
2015038061.tif 000021
【００６８】
＜化合物８のベンゾイル基、ベンジル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体（化合物１３）の物性＞
White solid;  Rf 0.16 (3/1 CHCl3-MeOH); 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 5.01 (1H, d, J = 4.1 Hz), 4.95-4.85 (2H, m), 4.62-4.49 (2H, m), 4.40 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 4.25 (1H, d, J = 7.8 Hz), 3.94 (1H, m), 3.90-3.68 (11H, m), 3.57 (2H, m), 3.43 (1H, dd, J = 7.7, 10.1 Hz), 1.70-1.61 (2H, m), 1.44-1.24 (16H, m), 1.20 (6H, m), 0.90 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００６９】
化合物１３（6.20 mg、8.67 μmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド0.310 mL中で、三酸化イオウ・トリエチルアミン錯体（212 mg、1.17 mmol、135 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を室温で1日攪拌した。引き続き、反応混合物に3M水酸化ナトリウム水溶液（0.850 mL、2.55 mmol、294 eq.）を室温で加え、室温で30分攪拌した後、反応を停止させた。
【００７０】
混合物に水を加え、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーおよびゲルろ過カラムクロマトグラフィー精製することによって、2,3,4-O-硫酸タイプの化合物９を得た（11.5 mg、7.04 μmol、収率81%）。
【００７１】
＜化合物９の物性＞
White solid;  Rf 0.25 (10/10/3 CHCl3-MeOH-H2O); 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 5.31 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.27 (1H, d, J = 3.5 Hz), 5.19 (1H, d, J = 3.7 Hz), 4.88-4.85 (2H, m), 4.80-4.61 (2H, m), 4.56 (1H, dd, J = 2.9, 10.9 Hz), 4.50-4.35 (6H, m), 4.34-4.22 (3H, m), 4.19-4.13 (2H, m), 3.78-3.66 (2H, m), 3.53 (1H, m), 1.52-1.43 (2H, m), 1.32-1.10 (22H, m), 0.72 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００７２】
＝＝化合物１０の合成方法＝＝
（化９）
2015038061.tif 000022
【００７３】
化合物８のベンジル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体（18.0 mg、19.5  μmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド0.900 mL中で、三酸化イオウ・トリエチルアミン錯体（371 mg、2.05 mmol、105 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を室温で1日攪拌した。引き続き、反応混合物に3M水酸化ナトリウム水溶液（0.680 mL、  2.05 mmol、105 eq.）を室温で加え、室温で30分攪拌した後、反応を停止させた。
【００７４】
混合物に水を加え、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーおよびゲルろ過カラムクロマトグラフィーにて精製することによって、2,3-O-硫酸タイプの化合物１０を得た（25.9 mg、18.1 μmol、収率93%）。
【００７５】
＜化合物１０の物性＞
White solid;  Rf 0.66 (10/10/3 CHCl3-MeOH-H2O); 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 5.28 (1H, d, J = 3.7 Hz), 5.18 (2H, m), 4.62 (2H, m), 4.54 (1H, dd, J = 4.0, 10.9 Hz), 4.50-4.40 (4H, m), 4.35 (1H, br-q, J = 6.3 Hz), 4.28-4.21 (3H, m), 4.15-4.06 (4H, m), 3.99 (1H, br-d, J = 2.6 Hz), 3.74 (2H, m), 3.52 (1H, m), 1.54-1.43 (2H, m), 1.30-1.10 (22H, m), 0.72 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００７６】
＝＝化合物１１の合成方法＝＝
（化１０）
2015038061.tif 000023
【００７７】
化合物８（70.9 mg、47.0 μmol、1.0 eq.）に対し、メタノール3.50 mL中で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（6.83 mol/L、27.5 μL、188 μmol、4.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を50℃で3時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００７８】
混合物にAmberliteTM IR 120 (H+ form)を加え、中和したのち、ろ過および減圧濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８からベンゾイル基を脱保護した化合物を得た（49.1 mg、37.4 μmol、収率80%）。
【００７９】
＜化合物８のベンゾイル基脱保護体の物性＞
White foam;  Rf 0.32 (4/1 PhMe-AcOEt); 1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ7.39-7.21 (24H, m), 6.85-6.80 (4H, m), 4.96-4.83 (5H, m), 4.77-4.45 (10H, m), 4.55 (1H, br-q, J = 6.1 Hz), 4.33-4.26 (2H, m), 4.13 (1H, dd, J = 3.2, 10.1 Hz), 3.91 (1H, br-ddd), 3.95-3.75 (11H, m), 3.70 (1H, dd, J = 3.5, 10.1 Hz), 3.68 (1H, br-d), 3.66 (1H, d, J = 2.9 Hz), 3.62 (1H, br-s), 3.59 (1H, dd, J = 7.8, 10.0 Hz), 3.48 (1H, m), 3.40 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 3.34 (1H, dd, J = 2.9, 10.0 Hz), 1.70-1.60 (2H, m), 1.45-1.20 (13H, m), 1.13-1.07 (9H, m), 0.90 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００８０】
化合物８のベンゾイル基脱保護体（26.1 mg、19.8 μmol、1.0 eq.）に対し、ジクロロメタン及びリン酸バッファー（30 mM、pH 7.2）の混合溶媒（ジクロロメタン 1.5 mL及びバッファー 1.5 mL）中で、2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-p-ベンゾキノン（13.4 mg、59.0 μmol、3.0 eq.）を室温で作用させた。その後、反応混合物を室温で21時間攪拌し、反応を停止させた。
【００８１】
混合物に飽和重曹水を加え、クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。芒硝乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８からベンゾイル基及びp-メトキシベンジル基を脱保護した化合物を得た（17.1 mg、15.8 μmol、収率80%）。
【００８２】
＜化合物８のベンゾイル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体の物性＞
White solid;  Rf 0.29 (3/1 PhMe-acetone); 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.43-7.23 (20H, m), 4.93 (1H, d, J = 3.8 Hz), 4.91-4.87 (3H, m), 4.81 (1H, m), 4.81 & 4.63 (2H, ABq, J = 11.7 Hz), 4.65 & 4.49 (2H, ABq, J = 12.0 Hz), 4.58 (2H, s), 4.31 (1H, d, J = 7.8 Hz), 4.13-3.90 (7H, m), 3.85-3.83 (2H, m), 3.75 (1H, dd, J = 3.5, 10.0 Hz), 3.71-3.46 (9H, m), 3.36 (1H, s), 3.22 (1H, dd, J = 7.7, 9.5 Hz), 2.49 (1H, s), 2.38 (1H, s), 1.73-1.63 (2H, m), 1.45-1.18 (19H, m), 1.08 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.88 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００８３】
化合物８のベンゾイル基及びp-メトキシベンジル基脱保護体（13.4 mg、12.5 μmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド0.670 mL中で、三酸化イオウ・トリエチルアミン錯体（169 mg、0.935 mmol、75 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を室温で1日攪拌した。引き続き、反応混合物に3M水酸化ナトリウム水溶液（0.500 mL、1.50 mmol、120 eq.）を室温で加え、室温で30分間攪拌した後、反応を停止させた。
【００８４】
混合物に水を加え、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーおよびゲルろ過カラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８において糖鎖結合をしていない3,4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物を得た（7.10 mg、4.48 μmol、収率36%）。
【００８５】
＜化合物８において糖鎖結合をしていない3,4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物の物性＞
White solid;  Rf 0.55 (10/10/3 CHCl3-MeOH-H2O); 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 7.50-6.90 (20H, m), 5.36 (1H, d, J = 3.4 Hz), 4.80-4.76 (2H, m), 4.73-4.55 (6H, m), 4.51-4.31 (6H, m), 4.03 (1H, dd, J = 2.3, 9.6 Hz), 3.92 (1H, br-q, J = 6.3 Hz), 3.81 (1H, dd, J = 3.4, 10.9 Hz), 3.79-3.70 (5H, m), 3.66 (1H, dd, J = 2.9, 10.9 Hz), 3.61-3.50 (2H, m), 3.42 (1H, m), 3.33-3.20 (3H, m), 1.47-1.41 (2H, m), 1.29-0.93 (22H, m), 0.68 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００８６】
化合物８において糖鎖結合をしていない3,4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物（13.3 mg、8.39 μmol、1.0 eq.）に対し、Pearlman触媒（Pd 20%、14.0 mg、  110 wt%）存在下、メタノール及び水の混合溶媒（メタノール 1.40 mL及び水 1.40 mL）中で、水素を室温で添加した。反応混合物を室温で27時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００８７】
混合物をろ過及び濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー精製することによって、3,4-O-硫酸タイプの化合物１１を得た（7.90 mg、6.45 μmol、収率77%）。
【００８８】
＜化合物１１の物性＞
White solid;  Rf 0.54 (10/10/3 CHCl3-MeOH-H2O); 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 5.05 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.96 (1H, d, J = 3.8 Hz), 4.91 (1H, d, J = 4.3 Hz), 4.77 (1H, br-d, J = 2.9 Hz), 4.68 (1H, m), 4.54-4.46 (3H, m), 4.44-4.37 (2H, m), 4.27 (1H, br-q, J = 6.9 Hz), 4.20 (1H, dd, J = 2.9, 10.3 Hz), 4.08 (1H, br-d, J = 3.2 Hz), 4.02 (1H, br-d, J = 2.9 Hz), 3.95 (1H, dd, J = 2.3, 10.0 Hz), 3.90-3.80 (3H, m), 3.79-3.73 (2H, m), 3.58-3.49 (2H, m), 1.47-1.45 (2H, m), 1.25-1.10 (22H, m), 0.72 (3H, t, J = 6.9 Hz).
【００８９】
＝＝化合物１２の合成方法＝＝
（化１１）
2015038061.tif 000024
【００９０】
化合物８（70.9 mg、47.0 μmol、1.0 eq.）に対し、メタノール3.50 mL中で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（6.83 mol/L、27.5 μL、188 μmol、4.0 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を50℃で3時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００９１】
混合物にAmberliteTM IR 120 (H+ form)を加え、中和したのち、ろ過および減圧濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８からベンゾイル基を脱保護した化合物を得た（49.1 mg、37.4 μmol、収率80%）。
【００９２】
化合物８のベンゾイル基脱保護体（48.0 mg、36.5 μmol、1.0 eq.）に対し、N,N-ジメチルホルムアミド2.40 mL中で、三酸化イオウ・トリエチルアミン錯体（280 mg、1.54 mmol、45 eq.）を室温で作用させた。反応混合物を室温で1日攪拌した。引き続き、反応混合物に3M水酸化ナトリウム水溶液（1.40 mL、4.20 mmol、115 eq.）を室温で加え、室温で1時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００９３】
混合物に水を加え、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、化合物８において遊離の水酸基及び糖鎖結合をしていない4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物を得た（59.0 mg、36.4 μmol、収率:定量的）。
【００９４】
＜化合物８において遊離の水酸基及び糖鎖結合をしていない4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物の物性＞
White solid;  Rf 0.10 (3/1 CHCl3-MeOH); 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.42-7.06 (24H, m), 6.72 (2H, m), 6.62 (2H, m), 5.41 (1H, d, J = 3.2 Hz), 4.91-4.85 (2H, m), 4.82 (1H, d, J = 3.4 Hz), 4.80-4.68 (3H, m), 4.64 (1H, br-d, J = 1.7 Hz), 4.60-4.45 (8H, m), 4.37 & 4.33 (2H, ABq, J = 11.2 Hz), 4.25-4.17 (4H, m), 4.05 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 3.85 (1H, dd, J = 2.9, 10.1 Hz), 3.82-3.74 (4H, m), 3.66 (4H, m), 3.55 (4H, m), 3.46 (1H, dd, J = 7.8, 10.0 Hz), 3.42-3.36 (2H, m), 3.30 (1H, dd, J = 4.1, 10.0 Hz), 1.55-1.46 (2H, m), 1.35-1.10 (16H, m), 0.97 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.85-0.74 (6H, m).
【００９５】
化合物８において遊離の水酸基及び糖鎖結合をしていない4-水酸基に硫酸基のナトリウム塩が結合した化合物（50.5 mg、31.1 μmol、1.0 eq.）に対し、Pearlman触媒（Pd 20%、50.5 mg、100wt%）存在下、メタノール及び水の混合溶媒（メタノール 5.0 mL及び水 5.0 mL）中で、水素を室温で添加した。反応混合物を室温で6時間攪拌した後、反応を停止させた。
【００９６】
混合物をろ過および濃縮後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することによって、4-O-硫酸タイプの化合物１２を得た（26.7 mg、26.2 μmol、収率84%）。
【００９７】
＜化合物１２の物性＞
White solid;  Rf 0.54 (10/10/3 CHCl3-MeOH-H2O); 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 5.02 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.93 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.88 (1H, d, J = 4.3 Hz), 4.79 (1H, d, J = 2.9 Hz), 4.67 (1H, m), 4.60 (1H, br-q, J = 6.3 Hz), 4.58-4.51 (2H, m), 4.30 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.25 (1H, br-q, J = 6.6 Hz), 3.93 (1H, dd, J = 2.9, 10.6 Hz), 3.90-3.85 (2H, m), 3.81-3.67 (6H, m), 3.62 (1H, dd, J = 3.5, 10.3 Hz), 3.55 (1H, m), 3.40 (1H, dd, J = 7.8, 10.3 Hz), 1.52-1.47 (2H, m), 1.30-1.10 (22H, m), 0.75 (3H, t, J = 7.2 Hz).
【００９８】
［実施例２］細胞増殖の阻害  Ｉ
実施例１で合成した各化合物９〜１３、及び下記化合物１４、１５の、ヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７の増殖に対する影響を調べた。
【００９９】
（化１２）
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【０１００】
１ｘ１０３個のＭＣＦ−７細胞を９６ウエルプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２存在下で、２４時間インキュベートした後、培地に１０、５０、１００、２００、３００μＭの各濃度になるように化合物９〜１５を加え、さらに９６時間インキュベートした。その後、細胞の増殖を定量するため、ＭＴＴ溶液を添加し、さらに３時間インキュベートした。そして、プレートリーダーで、５４０ｎｍの吸光度を測定した。結果を図１に示す。
【０１０１】
ＭＴＴアッセイでは、吸光度は、生細胞数と相関があるため、図１のグラフから、化合物１１が、特に強い細胞増殖阻害活性及び細胞障害活性をもつことがわかる。参考のため、天然のフコダインによる細胞増殖阻害活性及び細胞障害活性を同様に測定したところ（図２）、化合物１２とほぼ同等の活性を有していた。
【０１０２】
このように、化合物１１は、腫瘍細胞に対し、強力な細胞増殖阻害活性及び細胞障害活性を有している。
【０１０３】
[実施例３] 細胞増殖の阻害  ＩＩ
化合物の濃度を１０、１００、４００、８００μＭとした以外は、実施例２と同様にして、ＭＣＦ−７細胞及びＨｅＬａ細胞を用いて、化合物９〜１３の細胞増殖に対する影響を調べた。図３に示すように、実施例２と同様、化合物１１が、特に強い細胞増殖阻害活性及び細胞障害活性をもっていた。
【０１０４】
また、化合物の濃度を１０、１００、３３０、１０００μｇ／ｍＬとした以外は、実施例２と同様にして、天然のフコダインによる細胞増殖阻害活性及び細胞障害活性を同様に測定したところ（図４）、ＨｅＬａ細胞では、化合物１１は天然のフコダインより強い活性を有していた。
【０１０５】
[実施例４] 細胞増殖の阻害  ＩＩＩ
化合物の濃度を１０、１００、３３０、１０００μｇ／ｍＬとした以外は、実施例２と同様にして、正常ヒト胎児肺由来の線維芽細胞であるＷＩ−３８細胞を用いて、化合物１１の細胞増殖に対する影響を調べたが、図５に示すように、正常細胞に対しては、細胞増殖阻害活性を持たなかった。このことは、本発明の化合物を医薬として用いた場合に、副作用が発現しにくいということを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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