(57)【要約】  この発明は、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）に対する抗体の薬学的製剤、調製方法、及び製剤の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
４．０〜７．０の範囲のｐＨで、
１〜２００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体；
１〜１００ｍＭの緩衝剤；
０．００１〜１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤；
１〜５００ｍＭの少なくとも一の安定剤
を含有する薬学的製剤。
【請求項２】
ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体の濃度が１〜１００ｍｇ／ｍｌの範囲である請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
緩衝剤がヒスチジンバッファー又はアセテートバッファーである請求項１又は２に記載の製剤。
【請求項４】
緩衝剤が１０〜５０ｍＭの濃度である請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
緩衝剤が５．０〜６．０のｐＨをもたらす請求項１から４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
界面活性剤がポリソルベートである請求項１から５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
界面活性剤が０．０１〜０．１％（ｗ／ｖ）の濃度である請求項１から６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
少なくとも一の安定剤が、塩、糖類、及びアミノ酸の群から選択される請求項１から７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項９】
少なくとも一の安定剤が１２０〜３００ｍＭの濃度である請求項１から８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１０】
塩、糖類及びアミノ酸の群から選択される第一の安定剤と、第二の安定剤としてメチオニンを含有する請求項１から９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１１】
第一の安定剤が１２０〜３００ｍＭの濃度であり、第二の安定剤が５〜２５ｍＭの濃度である請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
５．５±０．３のｐＨで、
１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体；
Ｌ-ヒスチジン及び酢酸ナトリウムから選択される１５〜３０ｍＭの緩衝剤；
ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択される０．０２〜０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤；
トレハロース二水和物、スクロース、塩酸アルギニン及び塩化ナトリウムから選択される１２０〜３００ｍＭの少なくとも一の安定剤；
場合によっては、第二の安定剤として、５〜２５ｍＭのメチオニン
を含有する請求項１から１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１３】
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのトレハロース二水和物、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、１５５ｍＭの塩酸アルギニン、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのトレハロース二水和物、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、１０ｍＭのメチオニン；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、１０ｍＭのメチオニン
を含有する請求項１から１２のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１４】
５．５±０．３のｐＨで、
２０〜５０ｍｇ／ｍｌのｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ；
２０ｍＭのＬ-ヒスチジン；
０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；
トレハロース二水和物及びスクロースから選択される糖類である、２４０ｍＭの第一の安定剤；
第二の安定剤として、１０ｍＭのメチオニン
を含有する請求項１から１３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１５】
ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体がヒト化抗体であり、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：１のＣＤＲ１、配列番号：１６のＣＤＲ２、及び配列番号：３１のＣＤＲ３、及び
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：３３のＣＤＲ１、配列番号：３４のＣＤＲ２、及び配列番号：３５のＣＤＲ３
を含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１６】
ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体がｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂである請求項１から１５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１７】
ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体が、糖鎖操作されていない抗体と比較して、そのＦｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように糖鎖操作されている、請求項１から１６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１８】
液体形態、凍結乾燥形態、又は凍結乾燥形態から再構成される液体形態である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１９】
癌の治療に有用な医薬の調製のための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の製剤の使用。
【請求項２０】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本発明は、上皮増殖因子レセプターに対する抗体（抗ＥＧＦＲ抗体）の薬学的製剤、該製剤の調製方法及び製剤の使用に関する。
【０００２】
第１の態様では、本発明は、４．０〜７．０の範囲のｐＨで、
１〜２００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体；
１〜１００ｍＭの緩衝剤；
０．００１〜１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤；
１〜５００ｍＭの少なくとも一の安定剤；
を含有する薬学的製剤に関する。
【０００３】
本発明の製剤は、液体形態、凍結乾燥形態、又は凍結乾燥形態から再構成される液体形態で提供されうる。
以下において別段の定義がない場合は、用語は、当該技術分野で一般的に使用されている通りにここでは使用される。
【０００４】
ここで使用される「ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体」なる用語は、ＨＥＲ-１又はＥｒｂＢ-１（Ullrichら, Nature 309, 418-425 (1984); SwissProt受入#P00533;二次受入番号: O00688、O00732、P06268、Q14225、Q68GS5、Q92795、Q9BZS2、Q9GZX1、Q9H2C9、Q9H3C9、Q9UMD7、Q9UMD8、Q9UMG5）としても知られているヒト上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）を標的とする免疫グロブリンの免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）クラスの抗体、並びにその天然に生じるアイソフォーム及び変異体を含む。
【０００５】
本発明の製剤において有用な例示的なＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体には、セツキシマブ／ＩＭＣ-Ｃ２２５（Goldsteinら, Clin Cancer Res 1, 1311-1318 (1995)に記載されたアービタックス(登録商標)）、パニツムマブ／ＡＢＸ−ＥＧＦ（Yangら, Cancer Res 59, 1236-1243 (1999), Yangら, Critical Reviews Oncology/Hematology 38, 17-23 (2001)に記載されたベクティビックス(登録商標)）、ニモツズマブ／ｈ-Ｒ３（Mateoら, Immunotechnology 3, 71-81 (1997); Crombet-Ramosら, Int J Cancer 101, 567-575 (2002), Boland & Bebb, Expert Opin Biol Ther 9, 1199-1206 (2009)に記載されたセラシム(TheraCim)(登録商標)）、マツズマブ／ＥＭＤ７２０００（Bierら, Cancer Immunol Immunother 46, 167-173 (1998), Kim, Curr Opin Mol Ther 6, 96-103 (2004)に記載）、及びザルツムマブ／２Ｆ８（Bleekerら, J Immunol 173, 4699-4707 (2004), Lammerts van Bueren, PNAS105, 6109-6114 (2008)に記載）が含まれる。
【０００６】
本発明の製剤に有用な好ましいＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体は、その全内容が出典明示によりここに援用される国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されており、ラットモノクローナル抗体ＩＣＲ６２の結合特異性を有するキメラ抗体であり、そのエフェクター機能が改変されたグリコシル化により高められていることを特徴とする抗体を含む。
【０００７】
好ましい抗体は、それらが、ラットＩＣＲ６２抗体の少なくとも１（すなわち、１、２、３、４、５、又は６）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は該ＣＤＲに対する少なくとも特異性決定残基を含むことを特徴とし、又は異種ポリペプチドから得られた配列を含むその変異体又は切断型である。「特異性決定残基」とは、抗原との相互作用に直接関連する残基を意味する。すなわち、好ましい抗体は、（ａ）配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、及び配列番号：１３からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１配列；（ｂ）配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９、及び配列番号：３０からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｃ）配列番号：３１の重鎖ＣＤＲ３配列を含む。好ましい抗体は、（ａ）配列番号：３２及び配列番号：３３から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｂ）配列番号：３４の軽鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｃ）配列番号：３５の軽鎖ＣＤＲ３配列をさらに含む。
【０００８】
より好ましい抗体は、それらがラットＩＣＲ６２抗体の少なくとも３つのＣＤＲを有するものであることを特徴とし、又は該ＣＤＲの少なくとも特異性決定残基を有するその変異体又は切断型である。
【０００９】
最も好ましい抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：１のＣＤＲ１、配列番号：１６のＣＤＲ２、及び配列番号：３１のＣＤＲ３を、また
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：３３のＣＤＲ１、配列番号：３４のＣＤＲ２、及び配列番号：３５のＣＤＲ３を、
含む。
【００１０】
他の好ましい抗体は、配列番号：３６のラットＩＣＲ６２抗体の重鎖可変ドメイン、又はその変異体；及び非マウスポリペプチドを含む。さらに、好ましい抗体は、配列番号：３７のラットＩＣＲ６２抗体の軽鎖可変ドメイン、又はその変異体；及び非マウスポリペプチドを含む。より好ましい抗体は、配列番号：３８の重鎖可変ドメイン、及び配列番号：３９の軽鎖可変ドメインを含む。
【００１１】
好ましい抗体は、霊長類化、又はより好ましくはヒト化抗体である。「ヒト化」抗体は、非ヒト高頻度可変領域（ＨＶＲ）からのアミノ酸残基と、ヒトフレームワーク領域（ＦＲ）からのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を意味する。ヒト化抗体は、実質的には、典型的に２つの可変ドメインを含み、ＨＶＲ（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））の全て又は実質的全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合によっては、ヒト抗体から得られた抗体定常領域の少なくとも一部を含みうる。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を意味する。ヒト化は、限定されるものではないが、（ａ）キメラ抗体を生じるように、ヒト定常領域へ非ヒト可変ドメイン全体をグラフトさせ、（ｂ）重要なフレームワーク残基（例えば、良好な抗原結合親和性又は抗体機能を保持するのに重要なもの）の保持を伴い又は伴わないでヒト（例えば、レシピエント抗体）フレームワーク及び定常領域へ非ヒト（例えば、ドナー抗体）ＣＤＲのみをグラフトさせ、（ｃ）ヒトフレームワーク及び定常領域へ非ヒト特異性決定残基（ＳＤＳ又はＣＤＲ；抗体抗原相互作用に重要な残基）のみをグラフトさせ、又は（ｄ）全非ヒト可変ドメインを移植するが、表面残基の置換によるヒト様切片でそれらを「クローキング」することを含む当該技術分野で知られている様々な方法により達成されうる。
【００１２】
好ましくは、本発明の製剤に有用な抗体はヒトＦｃ領域を含む。より好ましくは、ヒト重鎖定常領域は、配列番号：４０に記載のＩｇガンマ-１であり、すなわち抗体はヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。
【００１３】
好ましい抗体は、Ｆｃ領域に改変されたオリゴ糖構造を有するように糖鎖操作されている。
【００１４】
特に、好ましい抗体は、非糖鎖操作抗体と比較してＦｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加している。好ましくは、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも５０、少なくとも７０％、最も好ましくは少なくとも７５％である。非フコシル化オリゴ糖はハイブリッド又は複合タイプのものであってもよい。
【００１５】
好ましい抗体はまたＦｃ領域におけるバイセクト型（bisected）オリゴ糖の割合が増加している。好ましくは、抗体のＦｃ領域におけるバイセクト型オリゴ糖の割合は、全オリゴ糖の少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、及び最も好ましくは少なくとも９０−９５％である。
【００１６】
特に好ましい抗体は、Ｆｃ領域におけるバイセクト型非フコシル化オリゴ糖の割合が増加している。バイセクト型非フコシル化オリゴ糖はハイブリッド又は複合型の何れであってよい。特に、抗体は、抗体のＦｃ領域におけるオリゴ糖の少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも３５％が、バイセクト型で非フコシル化されているものが好ましい。ここで使用される「糖鎖操作された」なる用語は、天然に生じるか又は組換えのタンパク質、ポリペプチド又はその断片のグリコシル化パターンの任意の操作を含む。糖鎖操作には、それらの細胞で発現される糖タンパク質の改変されたグリコシル化を達成するための、オリゴ糖合成経路の遺伝子操作を含む、細胞のグリコシル化機構の代謝的操作が含まれる。さらに、糖鎖操作には、グリコシル化に対する変異及び細胞環境の影響が含まれる。特に、糖鎖操作により、細胞における改変されたグリコシルトランスフェラーゼ活性、例えば改変されたグルコサミニルトランスフェラーゼ及び／又はフコシルトランスフェラーゼ活性を生じうる。
【００１７】
非フコシル化及び／又は二重特異性の相対量は、ＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ ＭＳによる、Ｎ-グリコシターゼＦ処理タンパク質試料において同定された全ての糖構造に関連した、フコースを欠くか、及び／又はバイセクティングＧｌｃＮＡｃ残基を有する炭水化物構造のパーセンテージである。
【００１８】
また好ましい抗体は、増加したエフェクター機能及び／又は増加したＦｃレセプター結合親和性を有するように糖鎖操作されていることを特徴とする。ここで使用される「エフェクター機能」なる用語は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を意味する。好ましくは、増加したエフェクター機能は、次の一又は複数である：増加したＦｃ媒介性細胞傷害性（増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ））、増加した抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、増加したサイトカイン分泌、抗原提示細胞による増加した免疫複合体媒介性抗原取込、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に対する増加した結合性、マクロファージに対する増加した結合性、アポトーシスを誘導する増加した直接のシグナル伝達、標的結合抗体の増加した架橋、増加した樹状細胞変異、又は増加したＴ細胞プライミング。増加したＦｃレセプター結合親和性は、好ましくはＦｃ活性化レセプターに対する増加した結合性、最も好ましくはＦｃγＲＩＩＩａに対する増加した結合性である。
【００１９】
本発明の製剤に有用な最も好ましいＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号：３８の重鎖可変ドメインと、配列番号：３９の軽鎖可変ドメインを含み、ヒト化されており、配列番号：４０に記載のヒト重鎖定常領域Ｉｇガンマ-１を含むことを特徴とする。この抗体は「ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ」と称される。ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂは、糖鎖操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように、上述のように糖鎖操作がなされていても、又はなされていなくてもよい。
【００２０】
本発明の製剤に有用な抗体は、好ましくは、組換え手段、例えば国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されているものによって、生産される。このような方法は当該技術分野で広く知られており、原核生物又は真核生物細胞におけるタンパク質の発現と、続く抗体ポリペプチドの単離、及び通常は薬学的に許容可能な純度までの精製を含む。タンパク質の発現に対しては、軽鎖及び重鎖又はその断片をコードする核酸が、標準的な方法により適切な発現ベクター中に挿入される。発現は、培養細胞、好ましくは培養された哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３-ＥＢＮＡ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＹＯ骨髄腫細胞、Ｐ３Ｘ６３マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、又はハイブリドーマ細胞、大腸菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞及び植物細胞、さらにはトランスジェニック動物、トランスジェニック植物又は培養された植物又は動物組織内に含まれる細胞を含む、適切な宿主細胞において実施される。好ましい宿主細胞はＣＨＯ細胞である。抗体を発現させるために使用される宿主細胞は、変化したグリコシルパターンを有する抗体を生産するために、グリコシルトランスフェラーゼ活性、例えばグルコサミニルトランスフェラーゼ及び／又はフコシルトランスフェラーゼ活性のレベルが変化するように操作されてもよい。好ましくは、宿主細胞は、β(１,４)-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ(ＧｎＴＩＩＩ)活性を有する一又は複数のポリペプチド、場合によってはマンノシターゼＩＩ(ＭａｎＩＩ)活性を有する一又は複数のポリペプチドを、増加レベルで発現するように操作されている。ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは、ＧｎＴＩＩＩの触媒ドメインと、異種ゴルジ常在ポリペプチドのゴルジ局在化ドメイン、好ましくはマンノシターゼＩＩのゴルジ局在化ドメインを有する融合ポリペプチドでありうる。本発明で有用なＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体で使用可能な糖鎖操作法は、それぞれの全内容が出典明示によりここに援用される国際公開第２００６／０８２５１５号、国際公開第２００８／０１７９６３号、米国特許第６６０２６８４号、欧州特許第１０７１７００号、国際公開第１９９９／５４３４２号、米国特許出願公開第２００４／０２４１８１７号、欧州特許出願公開第１５８７９２１号、国際公開第２００４／０６５５４０号、Umanaら, Nature Biotechnol 17, 176-180 (1999)、及びFerraraら, Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)に記載されている。
【００２１】
抗体は、標準的な技術、例えばプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除（分子ふるい）クロマトグラフィー、及び国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されているような、当該技術分野でよく知られている他のものにより、細胞（可溶化後の細胞又は上清）から回収される。
【００２２】
本発明の製剤に対して、抗体は、約１〜約２００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１〜約１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１０〜約７５ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約２０〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で使用される。
【００２３】
ここで使用される「緩衝剤」なる用語は、薬学的調製物のｐＨを安定にさせる、薬学的に許容可能な賦形剤を意味する。適切なバッファーは当該技術分野でよく知られており、文献に見出すことができる。例えば、クエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩又は乳酸塩、及び／又はそれぞれその遊離の酸又は塩基、並びにその様々な塩及び／又は酸及び塩基の混合物を用いることができる。好ましい薬学的に許容可能なバッファーには、限定されるものではないが、ヒスチジンバッファー、シトレートバッファー、スクシネートバッファー、アセテートバッファー、及びホスフェートバッファーが含まれる。好ましいバッファーはアセテートバッファーであり、最も好ましくは酢酸ナトリウムバッファーである。他の好ましいバッファーはヒスチジンバッファー、すなわち緩衝剤としてヒスチジン、一般的にはＬ-ヒスチジンを有するバッファーである。最も好ましいのは、Ｌ-ヒスチジン、又はＬ-ヒスチジンとＬ-ヒスチジン塩酸塩の混合物を含有し、ｐＨ調節が塩酸により達成される、Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファーである。特に示されなければ、緩衝剤を記述するためにここで使用される「Ｌ-ヒスチジン」なる用語は、Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファーを意味する。Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファーは、適切な量のＬ-ヒスチジンとＬ-ヒスチジン塩酸塩を水に溶解させるか、又は適切な量のＬ-ヒスチジンを水に溶解させ、塩酸を添加することにより所望の値にｐＨを調節することで調製することができる。上述のバッファーは、一般的に約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、より好ましくは約１５〜３０ｍＭ、最も好ましくは２０ｍＭの濃度で使用される。使用されるバッファーにかかわらず、ｐＨは、当該技術分野で知られている酸又は塩基、例えば塩酸、酢酸、リン酸、硫酸及びクエン酸、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムを用い、約４．０〜約７．０、好ましくは約５．０〜約６．０の範囲、最も好ましくは約５．５の範囲の値に調節することができる。
【００２４】
ここで使用される「界面活性剤」なる用語は、薬学的に許容可能な界面活性剤を意味する。好ましくは、非イオン性界面活性剤が使用される。薬学的に許容可能な界面活性剤の例には、限定されるものではないが、ポリオキシエチレン-ソルビタン脂肪酸エステル(Tween)、ポリオキシエチレンアルキルエーテル(Brij)、アルキルフェニルポリオキシ(Triton X)、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマー(Poloxamer, Pluronic)、及びドデシル硫酸ナトリウム(SDS)が含まれる。好ましいポリオキシエチレン-ソルビタン脂肪酸エステルは、ポリソルベート２０(商標トゥイーン(Tween)２０ＴＭで販売されているポリオキシエチレンソルビタンモノラウレアート)、及びポリソルベート８０(商標トゥイーン(Tween)８０ＴＭで販売されているポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート)である。好ましいポリエチレン-ポリプロピレンコポリマーは、名称Ｐｌｕｒｏｎｉｃ(登録商標)Ｆ６８又はＰｏｌｏｘａｍｅｒ１８８ＴＭで販売されているものである。好ましいポリオキシエチレンアルキルエーテルは、商標ＢｒｉｊＴＭで販売されているものである。好ましいアルキルフェニルポリオキシエチレンエーテルは、商標Ｔｒｉｔｏｎ Ｘで販売されており、最も好ましくは、ｐ-tert-オクチルフェノキシポリエトキシエタノール(商標Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ＴＭで販売されている)である。ポリソルベート２０(トゥイーン２０?)及びポリソルベート８０(トゥイーン８０ＴＭ)が使用される場合、それらは、一般的に約０．００１〜約１％、好ましくは約０．０１〜約０．１％、より好ましくは約０．０２％〜約０．０５％の濃度範囲で使用される。本発明の製剤において、界面活性剤の濃度は、重量／体積（ｗ／ｖ）で表されるパーセンテージとして記載される。
【００２５】
ここで使用される場合、「安定剤」なる用語は、製造、保存及び適用中、化学的及び／又は物理的劣化から、薬学的活性成分及び／又は製剤を保護する、薬学的に許容可能な賦形剤を示す。安定剤には、限定されるものではないが、糖類、アミノ酸、ポリオール、例えばマンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストラン、グリセロール、アラビトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、スルホブチルエチル-β-シクロデキストリン、β-シクロデキストリン、ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、アルブミン、例えばヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)、ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、塩類、例えば塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、キレート剤、例えばＥＤＴＡで、以下に定めるものが含まれる。上述したように、安定剤は、約１〜約５００ｍＭの量、好ましくは約１０〜約３００ｍＭの量、より好ましくは約１２０ｍＭ〜約３００ｍＭの量で、製剤に存在可能である。同じ又は異なる群から選択される、一以上の安定剤が、製剤に存在可能である。
【００２６】
ここで使用される場合、「糖類」なる用語には、単糖類及びオリゴ糖が含まれる。単糖類には、単糖及びそれらの誘導体、例えばアミノ糖を含む、酸により加水分解されない単量体炭水化物である。糖類は、通常はＤ型立体構造である。単糖類の例には、グルコース、フラクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、ノイラミン酸が含まれる。オリゴ糖は、分枝状又は直線状の鎖に、グリコシド結合を(類)を介して連結している、１以上の単量体糖類からなる炭水化物である。オリゴ糖内の単量体糖単位は同一でも異なっていてもよい。単量体糖単位の数に応じて、オリゴ糖はジ-、トリ-、テトラ-、ペンタ-等の糖類である。多糖類に対して、単糖類及びオリゴ糖は水に溶解する。オリゴ糖の例には、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、及びラフィノースが含まれる。好ましい糖類はスクロース及びトレハロース(すなわち、α,α-Ｄ-トレハロース)であり、最も好ましいのはスクロースである。トレハロースはトレハロース二水和物として入手可能である。糖類は、約１００〜約５００ｍＭの量、好ましくは約２００〜約３００ｍＭの量、最も好ましくは約２４０ｍＭの量で、製剤に存在可能である。
【００２７】
ここで使用される場合、「アミノ酸」なる用語は、カルボキシル基に対してα位に位置するアミノ部分を有する、薬学的に許容可能な有機分子を示す。アミノ酸の例には、限定されるものではないが、アルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリンが含まれる。使用されるアミノ酸は、それぞれのケースにおいて、好ましくはＬ型である。塩基性アミノ酸、例えばアルギニン、ヒスチジン、又はリジンは、好ましくはそれらの無機塩(有利には、塩酸塩の形態、すなわちアミノ酸塩酸塩)の形態である。好ましいアミノ酸は塩酸アルギニン及びメチオニンである。メチオニンは、好ましくは約１０〜約２５ｍＭ、最も好ましくは約１０ｍＭの濃度で使用される。塩酸アルギニンは、好ましくは約１００〜約２００ｍＭの濃度、最も好ましくは約１５５ｍＭの濃度で使用される。
【００２８】
安定剤のサブグループは凍結保護剤である。「凍結保護剤」なる用語は、凍結乾燥プロセス、後続する保管及び再構成の間の不安定化状況に対して、不安定な活性成分(例えばタンパク質)を保護する、薬学的に許容可能な賦形剤を示す。凍結保護剤には、限定されるものではないが、糖類、ポリオール（例えば糖アルコール）、及びアミノ酸からなる群が含まれる。好ましい凍結保護剤は、糖類、例えばスクロース、トレハロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、ノイラミン酸、アミノ糖、例えばグルコサミン、ガラクトサミン、Ｎ-メチルグルコサミン(「メグルミン」)、ポリオール、例えばマンニトール及びソルビトール、アミノ酸、例えばアルギニン及びグリシン、又はその混合物からなる群が含まれる。凍結保護剤は、一般的に約１０〜５００ｍＭの量、好ましくは約１０〜約３００ｍＭの量、より好ましくは約１００〜約３００ｍＭの量で使用される。
【００２９】
安定剤のサブグループは酸化防止剤である。「酸化防止剤」なる用語は、薬学的活性成分の酸化を防止する、薬学的に許容可能な賦形剤を示す。酸化防止剤には、限定されるものではないが、アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、クエン酸、ＥＤＴＡが含まれる。酸化防止剤は、約０．０１〜約１００ｍＭの量、好ましくは約５〜約５０ｍＭの量、より好ましくは約５〜約２５ｍＭの量で使用可能である。
【００３０】
また本発明の製剤は、一又は複数の等張化剤を含有していてもよい。「等張化剤」なる用語は、製剤の浸透圧を調節するのに使用される、薬学的に許容可能な賦形剤を示す。製剤は高張、等張又は低張であってよい。等張性は、一般的にヒトの血液血清の浸透圧(約２５０-３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ)に対する、溶液の浸透圧に関する。本発明の製剤は高張、等張又は低張であってよいが、好ましくは等張であろう。等張製剤は液状、又は固体状形態、例えば凍結乾燥形態から再構成された液状であり、生理食塩水及び血液血清等、比較されるいくつかの他の溶液と同じ浸透圧を有する溶液を示す。適切な等張化剤には、限定されるものではないが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、及びアミノ酸及び糖の群からの任意の成分、特にグルコースが含まれる。等張化剤は、一般的に約５ｍＭ〜約５００ｍＭの量で使用される。
【００３１】
安定剤及び等張化剤において、双方の方法で機能可能な、すなわち同時に安定剤でも等張化剤でもある得る化合物の群が存在する。その例は、糖類、アミノ酸、ポリオール、シクロデキストリン、ポリエチレングリコール及び塩類の群に見出すことができる。同時に安定剤及び等張化剤とすることができる糖類の例は、トレハロースである。
【００３２】
製剤は、アジュバント、例えば保存料、湿潤剤、乳化剤及び分散剤をさらに含有してもよい。微生物の存在の防止は、滅菌手順、及び種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の包含により確実にすることができる。保存料は、一般的に約０．００１〜約２％（ｗ／ｖ）の量で使用される。保存料には、限定されるものではないが、エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ-クレゾール、ｐ-クロル-ｍ-クレゾール、メチル又はプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウムが含まれる。
【００３３】
第１の態様では、本発明は、４．０〜７．０の範囲のｐＨで、
１〜２００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体；
１〜１００ｍＭの緩衝剤；
０．００１〜１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤；
１〜５００ｍＭの少なくとも一の安定剤；
を含有する薬学的製剤に関する。
【００３４】
好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有されるＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体の濃度は、１〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０〜７５ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは２０〜５０ｍｇ／ｍｌの範囲である。特に好ましくは、２５ｍｇ／ｍｌの濃度である。
【００３５】
他の好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有される緩衝剤はヒスチジンバッファー、好ましくはＬ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファー、又はアセタートバッファー、好ましくは酢酸ナトリウムバッファーである。特に好ましくは、Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファー（すなわち、緩衝剤としてＬ-ヒスチジン）である。
【００３６】
好ましくは、緩衝剤は、１０〜５０ｍＭ、より好ましくは１５〜３０ｍＭ、最も好ましくは２０ｍＭの濃度である。
【００３７】
好ましくは、緩衝剤は５．０〜６．０のｐＨ、より好ましくは５．５±０．３を提供する。
【００３８】
好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有される界面活性剤はポリソルベート、好ましくはポリソルベート２０又はポリソルベート８０、最も好ましくはポリソルベー８０である。
【００３９】
界面活性剤は、好ましくは０．０１〜０．１％、より好ましくは０．０２〜０．０５％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは０．０２〜０．０３％の濃度である。
【００４０】
また、他の好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有される少なくとも一の安定剤は、塩類、好ましくは塩化ナトリウム、糖類、好ましくはトレハロース二水和物又はスクロース、及びアミノ酸、好ましくは塩酸アルギニンの群から選択される。
【００４１】
好ましくは、少なくとも一の安定剤は１２０〜３００ｍＭの濃度である。
【００４２】
好ましい実施態様では、本発明の製剤は、塩類、糖類及びアミノ酸の群から選択される第一の安定剤、及び第二の安定剤としてメチオニンを含有する。
【００４３】
好ましい実施態様では、第一の安定剤は１２０〜３００ｍＭの濃度であり、第二の安定剤メチオニンは５〜２５ｍＭの濃度で存在する。
【００４４】
特に好ましい実施態様では、本発明の製剤は、第一の安定剤として糖類、好ましくはトレハロース二水和物又はスクロース、最も好ましくはスクロース、及び第二の安定剤としてメチオニンを含有する。糖類は、好ましくは約２４０ｍＭの濃度であり、メチオニンは、好ましくは約１０ｍＭの濃度である。
【００４５】
他の好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有されるＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体はヒト化抗体であり、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号：１のＣＤＲ１、配列番号：１６のＣＤＲ２、及び配列番号：３１のＣＤＲ３、及び
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号：３３のＣＤＲ１、配列番号：３４のＣＤＲ２、及び配列番号：３５のＣＤＲ３、
を含む。
【００４６】
特に好ましい実施態様では、本発明の製剤に含有されるＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体は、ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂである。
【００４７】
ある種の実施態様では、本発明の製剤に含有されるＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体は、糖鎖操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように、好ましくは少なくとも２０％、少なくとも５０、又は少なくとも７０％となるように糖鎖操作されている。
【００４８】
好ましい実施態様では、本発明の製剤は、５．５±０．３のｐＨで、
１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体；
Ｌ-ヒスチジン及び酢酸ナトリウムから選択される、１５〜３０ｍＭの緩衝剤
ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択される、０．０２〜０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤；
トレハロース二水和物、スクロース、塩酸アルギニン及び塩化ナトリウムから選択される、１２０〜３００ｍＭの少なくとも一の安定剤；
場合によっては、第二の安定剤として、５〜２５ｍＭのメチオニン
を含有する。
【００４９】
特に好ましい実施態様では、本発明の製剤は、５．５±０．３のｐＨで、
１０〜５０ｍｇ／ｍｌのｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ；
１５〜３０ｍＭのＬ-ヒスチジン；
０．０２〜０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；
トレハロース二水和物、スクロース及び塩酸アルギニンから選択される、１２０〜３００ｍＭの少なくとも一の安定剤；
場合によっては、第二の安定剤として、５〜２５ｍＭのメチオニン
を含有する。
【００５０】
さらに他の好ましい実施態様では、本発明の製剤は、
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのトレハロース二水和物、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、１５５ｍＭの塩酸アルギニン、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのトレハロース二水和物、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、１０ｍＭのメチオニン；又は
ｐＨ  ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；又は
ｐＨ５．５で、１０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、２０ｍＭのＬ-ヒスチジン、２４０ｍＭのスクロース、０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、１０ｍＭのメチオニン
を含有する。
【００５１】
特に好ましい実施態様では、本発明の製剤は、５．５±０．３のｐＨで、
２０〜５０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体、好ましくはｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ；
２０ｍＭのＬ-ヒスチジン；
０．０２〜０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；
トレハロース二水和物及びスクロースから選択される糖類である、２４０ｍＭの第一の安定剤；
第二の安定剤として、１０ｍＭのメチオニン
を含有する。
【００５２】
ある種の実施態様では、本発明の製剤は塩化ナトリウムを含有しない。ある種の実施態様では、製剤は二価のカチオンを含有しない。ある種の実施態様では、製剤はラクトビオン酸を含有しない。ある種の実施態様では、製剤はポリオールを含有しない。ある種の実施態様では、製剤はデキストランを含有しない。
【００５３】
本発明の製剤は、液体形態、凍結乾燥形態、又は凍結乾燥形態から再構成された液体形態とすることができる。ある種の実施態様では、製剤は液体形態である。
【００５４】
本発明の製剤に関連してここで使用される「液体」なる用語は、大気圧下、少なくとも約２〜約８℃の温度で液状である製剤を示す。
【００５５】
本発明の製剤と関連してここで使用される「凍結乾燥された」なる用語は、それ自体、当該技術分野で知られているフリーズドライ法により製造された製剤を示す。溶媒（例えば水）は、凍結、続く真空下での氷の昇華、高温での残留水の脱離により除去される。凍結乾燥体は、通常約０．１〜５％（ｗ／ｗ）の残留水分を有しており、パウダー又は物理的に安定したケーキとして存在している。凍結乾燥体は再構成用媒体の添加後に容易に溶解することを特徴とする。
【００５６】
本発明の製剤に関連してここで使用される場合、「再構成される形態」なる用語は、凍結乾燥され、再構成用媒体の添加により再溶解される製剤を意味する。適切な再構成用媒体には、限定されるものではないが、注射用水（ＷＦＩ）、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば０．９％（ｗ／ｗ）のＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば５％のグルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％のポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）が含まれる。
【００５７】
本発明の製剤には生理学的に良好な耐性があり、容易に調製可能で、正確に調剤可能で、分解生成物に関して安定しており、保管中、繰り返しの凍結及び解凍サイクル中、及び機械的ストレスで凝集する。１年以上の期間、冷蔵温度（２−８℃）で安定している。
【００５８】
本発明は、本発明の製剤を調製するためのプロセスをさらに含む。前記プロセスは、予測されるバッファー組成物を含有するダイアフィルトレーションに対するＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体のバッファー交換、必要であるならば、ダイアフィルトレーションによる抗体の濃縮、続く、抗体溶液への保管溶液としての賦形剤(例えば、トレハロース二水和物、スクロース、アルギニン、塩化ナトリウム、メチオニン)の添加、抗体／賦形剤溶液への保管溶液としての界面活性剤の添加、最後にバッファー溶液を使用する、所望の最終濃度への抗体濃度の調節を含み、ここで最終的な賦形剤及び界面活性剤の濃度に達する。
【００５９】
また、賦形剤は、固形物として、ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体を含有する出発溶液に添加することができる。ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体が固体状形態、例えば凍結乾燥体であるならば、本発明の製剤は、場合によっては一又は複数の賦形剤を含有する、水又はバッファー溶液に抗体をまず溶解させ、続いて保管溶液又は固形物として、さらなる賦形剤を添加することにより調製可能である。ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体は、有利には、全てのさらなる賦形剤を含有する溶液に、直接溶解させることができる。本発明の製剤に存在する一又は複数の賦形剤は、ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体を調製するためのプロセス中又は終わりに、例えば抗体の調製後に実施される精製の最終工程において、１、１以上、好ましくは全ての製剤の賦形剤を含有する溶液に、直接ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体を溶解させることより、既に添加されていてもよい。抗体及び賦形剤を含有する溶液が、まだ所望のｐＨでないならば、酸又は塩基の添加により、好ましくはバッファー系に既に存在している酸又は塩基を使用して調節される。これに滅菌濾過が続く。
【００６０】
本発明は、疾患、特に細胞増殖性疾患の処置に有用な医薬の調製のための、本発明の製剤の使用をさらに含み、ここでＥＧＦＲは、同様の細胞型の正常な組織と比較して、異常に発現(例えば、過剰発現)している。このような疾患には、種々の癌、例えば膀胱、脳、頭部及び頸部、膵臓、肺、乳房、卵巣、結腸、前立腺、皮膚及び腎臓の癌が含まれる。ＥＧＦＲ発現のレベルは、当該技術分野で知られている方法、及び国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されている方法により（例えば、免疫組織化学アッセイ、免疫蛍光アッセイ、免疫酵素アッセイ、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロット、リガンド結合、キナーゼ活性等を介して）測定することができる。
【００６１】
本発明の組成物は、当該技術分野で知られている種々の方法により投与することができる。当業者に理解されているように、投与の経路及び／又は方式は、所望の結果に応じて変えることができる。
【００６２】
ある種の投与経路により、本発明の組成物を投与するためには、希釈剤で組成物を希釈する必要がある場合もある。薬学的に許容可能な希釈液には、生理食塩水、グルコース、リンガー液及びバッファー水溶液が含まれる。
【００６３】
好ましくは、本発明の製剤は、静脈内(i.v.)、皮下(s.c.)、又は製薬の分野で知られている任意の他の非経口投与手段により投与される。
【００６４】
ここで使用される場合、「非経口投与」及び「非経口的に投与した」なる表現は、通常、注射による、腸又は局所投与以外の投与方式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、真皮内、腹膜内、経器官、皮下、皮下組織、関節内、嚢下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入が含まれる。
【００６５】
組成物は滅菌されていなければならず、組成物がシリンジ又は注入システムにより送達可能な程度に流動的でなくてはならない。水に加え、担体は等張な緩衝生理食塩水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液状のポリエチレングリコール等)、及びそれらの適切な混合物とすることができる。
【００６６】
本発明の製剤は、当該技術分野で知られている方法、例えば限外濾過-ダイアフィルトレーション、透析、付加及び混合、凍結乾燥、再構成、及びその組合せにより調製することができる。本発明の製剤の調製例は、以下に見出すことができる。
【００６７】
実施例は本発明をより詳細に説明するものであり、本発明の範囲を限定するものと解してはならない。ここで引用される全ての特許及び科学的文献の開示は、その全体が出典明示により明示的に援用される。
【実施例】
【００６８】
本発明のＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体製剤は、以下に概説する一般的な調製及び分析方法及びアッセイを使用して、以下に提供される実験結果に基づき開発した。
【００６９】
実施例１：製剤のための成分の調製
ＩｇＧクラスの抗ＥＧＦＲ抗体 ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂを、組換えタンパク質の生産で一般に知られている技術によって製造した。この抗体を製造するための技術は、国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されている。簡潔に述べると、国際公開第２００６／０８２５１５号及び国際公開第２００８／０１７９６３号に記載されたようにして調製した遺伝子操作チャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）をマスター細胞バンクからの細胞培養で増殖させた。ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂを、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅＴＭカラム（ＧＥ）におけるプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、続いてＣａｐｔｏ ＳＴＭカラム（ＧＥ）におけるカチオン交換クロマトグラフィー、最後にＣａｐｔｏ ＱＴＭカラム（ＧＥ）におけるアニオン交換クロマトグラフィー工程を使用し、条件細胞培養培地から精製した。Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ(登録商標)Ｐｒｏ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用するナノ濾過によりウイルスを除去し、抗体を濃縮し、ダイアフィルトレーションにより所望のバッファーに移動させた。これらの実施例の製剤を調製するために、ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ抗体を、約６．０のｐＨで、２０ｍＭのヒスチジンバッファー(Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファー)に、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で提供された。
【００７０】
本発明の製剤の賦形剤は、広く実際に使用され、当業者に知られている。従って、それらをここで詳細に説明する必要はない。
【００７１】
本発明の液体医薬品製剤は次のようにして開発した。
【００７２】
実施例２：液体製剤の調製
液体製剤の調製のために、ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂを、予測されたバッファー組成物を含むダイアフィルトレーションバッファーに対してバッファー交換し、必要であれば、約５０−８０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度までダイアフィルトレーションによって濃縮した。ダイアフィルトレーション操作の完了後、賦形剤（例えば、トレハロース、塩化ナトリウム、メチオニン）を原液として抗体溶液に加えた。ついで、界面活性剤を５０から２００倍原液として加えた。最後に、タンパク質濃度を、最終ｈｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ抗体濃度が約２５ｍｇ／ｍｌ又は約５０ｍｇ／ｍｌになるまで、バッファーを用いて調節した。
【００７３】
全ての製剤を０．２２μｍの低タンパク質結合フィルターで滅菌濾過し、ＥＴＦＥ（エチレン・テトラフルオロエチレン共重合体）被覆ゴム栓及びアルミニウムクリンプキャップで閉めた６ｍｌの滅菌ガラスバイアルに無菌的に充填した。充填容量はおよそ２．４ｍｌであった。これらの製剤を、種々のＩＣＨ気候条件（５℃、２５℃及び４０℃）、種々の時間間隔の間、保存し、振盪によるストレス負荷（５℃及び２５℃で、２００分−１の振盪頻度で１週間）及び凍結乾燥ストレス法によってストレスを与えた。次の分析法によってストレス試験を適用する前後に試料を分析した：
１）紫外分光法；
２）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）；
３）イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）；
４）溶液の濁度の測定；
５）可視粒子の検査
【００７４】
タンパク質含有量の決定に使用される紫外線分光法は２４０ｎｍから４００ｎｍの波長範囲でＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ λ３５紫外線分光光度計で実施した。ニートタンパク質試料は対応する製剤バッファーを用いておよそ０．５ｍｇ／ｍｌまで希釈した。タンパク質濃度は式１に従って計算した。
2013515754.tif 000002
【００７５】
２８０ｎｍでの紫外線吸収を３２０ｎｍでの光散乱に対して修正し、ニート試料と希釈バッファーの重み付け質量と密度から決定された希釈係数を乗じた。分子はキュベットの経路長ｄと吸光係数εの積で除した。 
【００７６】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、製剤中の可溶性高分子量種（凝集物）と低分子量加水分解産物（ＬＭＷ）を検出した。該方法はＷａｔｅｒｓ Ｗ２４８７ Ｄｕａｌ Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒを具備しＴｏｓｏＨａａｓ ＴＳＫ Ｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムを備えたＷａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９５ＨＰＬＣ機器で実施した。未変化の単量体、凝集物及び加水分解産物を、２００ｍＭのリン酸ナトリウム，ｐＨ７．０を移動相として使用して定組成溶離プロファイルによって分離し、２８０ｎｍの波長で検出した。
【００７７】
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を実施して、製剤中のｕ-ＩＣＲ６２ ＩｇＧ１ 抗ＥＧＦＲ ｍＡｂの正味荷電を変える化学分解産物を検出した。該方法は、ＵＶ検出器（検出波長２８０ｎｍ）及びＤｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ−１０カラム（４ｍｍ×２５０ｍｍ）を備えた適切なＨＰＬＣ機器を使用した。水中の１０ｍＭのリン酸ナトリウムバッファーｐＨ６．０＋７５０ｍＭのＮａＣｌを１．０ｍＬ／分の流量でそれぞれ移動相Ａ及びＢとして使用した。
【００７８】
濁度の決定に対しては、室温でＨＡＣＨ ２１００ＡＮ濁度計を使用して、ＦＴＵ（濁度単位）で乳白色を測定した。
【００７９】
Ｓｅｉｄｅｎａｄｅｒ Ｖ９０−Ｔ視覚検査機器を使用して試料を可視粒子について分析した。
【００８０】
製剤ＡからＬについての安定性試験の結果を以下に加えた表１に提供する。
その結果は、最大の抗体安定性と粒子のない抗体製剤を得るためには、Ｌ-ヒスチジン／ＨＣｌバッファーの使用が、酢酸ナトリウムバッファーの使用よりも好ましい一方、糖類、例えばトレハロース二水和物及びスクロースが最も好ましい安定剤であり、ポリソルベート８０が最も好ましい界面活性剤であることを示している。
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【配列表】
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【国際調査報告】
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