(57)【要約】  本発明は、鉄キレート化、神経保護、神経回復、アポトーシス、および／またはＭＡＯ−ＡＢ阻害活性を示す８−ヒドロキシ−キノリン誘導体および８−エーテル類、８−エステル類、８−炭酸塩類、８−アシルオキシメチル、８−リン酸塩類、（ホスホリルオキシ）メチル、およびその８−カルバミン酸類誘導体を記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物およびその薬剤的に許容される塩であって、
【化１】
2013536190.tif 000033
式中、Ｒ１は以下から選択され、
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）ヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、シアノ、カルボキシ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）アミノカルボニル、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、またはＣ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシから選択される1つ以上の基によって置換されるＣ１-Ｃ８アルキルであり、
（ｉｉｉ）−ＣＯＲ８であって、Ｒ８はＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル基は、以下の1つ以上の基によって任意に置換され、以下、ハロゲン原子、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、メルカプト、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、カルボキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）スルホニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）アミノカルボニル、またはジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニル、またはＣ１-Ｃ５アルキル基はＣＯ基に対してα位にあるアミノ基によって置換され、およびヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、またはイミダゾリルから選択される基によってさらに置換され得、
（ｉｖ）-ＣＯＯＲ９であって、Ｒ９はＣ１-Ｃ８アルキル、ハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、ニトロ、ヒドロキシ、カルボキシ、またはＣ３-Ｃ６シクロアルキルによって任意に置換されるフェニル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、Ｃ５-Ｃ７シクロアルキル、またはハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、またはＣ１-Ｃ８アルコキシによって任意に置換されるフェニルであり、
（ｖ）-ＣＨ２-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０、または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０であって、Ｒ１０はハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルコキシによって任意に置換されるＣ１-Ｃ８アルキルであり、フェニルによって任意に置換されるＣ２-Ｃ４アルケニルであり、Ｃ３-Ｃ６シクロアルキルであり、Ｃ１-Ｃ８アルコキシによって任意に置換されるフェニルであり、またはフリル、チエニル、イソオキサゾリル、またはハロゲンまたはＣ１-Ｃ８アルキルによって任意に置換されるピリジルから選択されるヘテロアリールであり、
（ｖｉ）-ＰＯ（ＯＲ１１）２、-ＣＨ２-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２であって、Ｒ１１はＨ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、またはヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、またはＣ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシによって任意に置換されるＣ１-Ｃ８アルキルであり、
（ｖｉｉ）-ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であって、Ｒ１２およびＲ１３はＨ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルから独立して選択され、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキル基は、以下の1つ以上の基により任意に置換され、以下、ハロゲン原子、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、メルカプト、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、カルボキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）スルホニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）アミノカルボニル、およびジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニル、またはＣ１-Ｃ５アルキル基はＯＣＯＮ基に対してα位にあるカルボキシ基によって置換され、およびヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、およびイミダゾリルから選択される基によってさらに置換され得、またはＲ１２およびＲ１３はそれらが結合するＮ原子と一緒になって、任意にＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子をさらに含む５〜７員の飽和環を形成し、Ｃ１-Ｃ８アルキルによって任意に置換され、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ハロゲン、またはハロ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルであり、
Ｒ４はＨまたはＣ１-Ｃ８アルキルであり、およびＲ５はプロパルギル、アリル、シクロブチル、またはシクロプロピルであり、
Ｒ６はＨ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、メルカプト、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノまたはオキソ、チオキソ、イミノ、または環の２位または４位でのＣ１-Ｃ８アルキルイミノであり、
Ｒ７はＨ、ハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ペルハロＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルスルホニル、Ｃ１-Ｃ８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルカルボニル（Ｃ１-Ｃ８）アミノ、またはＣ１-Ｃ８アルキルスルホニル（Ｃ１-Ｃ８）アミノであり、
点線はそれぞれ、単結合または二重結合を示し、および
ｎは０〜８であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、ｎが０であり、Ｒ４がＨまたはＣＨ３であり、およびＲ５がプロパルギル、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、ｎが１、およびＲ５がプロパルギルである化合物を除外する、上記化合物及びその薬剤的に許容される塩。
【請求項２】
式Ｉａ
【化２】
2013536190.tif 000034
式中、Ｒ１〜Ｒ７は請求項１中の定義に同じ
で表される請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式ＩＩ
【化３】
2013536190.tif 000035
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ７は請求項１中の定義に同じであり、Ｒ６はＨおよびnは０〜２である
で表される請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ６はＨであり、ｎは０、およびＲ７はＣＨ３またはＦであり、本明細書では化合物１および２として特定される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびＲ７はＨであり、ｎは０、およびＲ３はＣＨ３またはＣＦ３である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ２およびＲ３はＦである、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１はヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピルのようなヒドロキシによって置換されるＣ１-Ｃ３アルキルであり、シアノメチルのようなシアノであり、カルボキシメチルのようなカルボキシであり、またはメトキシプロピル、メトキシエチルまたはプロポキシメチルのようなＣ１-Ｃ３アルコキシである、請求項３に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１は−ＣＯＲ８であり、Ｒ８は、例えばメトキシメチル、メトキシカルボニルメチル、メチルカルボニルオキシメチル、クロロメチルまたはトリフルオロメチルのように、メトキシ、メトキシカルボニル、メチルカルボニルオキシまたは1つ以上のＣｌまたはＦ原子によって任意に置換されるメチル、エトキシによって任意に置換されるエチル、イソブチルまたはｓｅｃ-ペンチルのようなＣ１-Ｃ５アルキルであり、例えば２-フェニルビニル、１-メチルビニル、２-メチルビニル、２，２-ジメチルビニル、またはｂｕｔ-３-エン-ｌ-イルのように、フェニルによって任意に置換されるビニルのようなＣ２-Ｃ４アルケニルであり、シクロプロピルまたはシクロペンチルのようなＣ３-Ｃ５シクロアルキルであり、メトキシによって任意に置換されるフェニルのようなアリールであり、２-チエニル、２-フリル、５-イソオキサゾリルまたはＣｌによって任意に置換されるピリジルのようなヘテロアリールであり、または４-モルホリニルのようなヘテロシクリルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１は−ＣＯＲ８であり、Ｒ８はＣＯ基に対してα位にあるアミノによって置換される直鎖または分岐鎖Ｃ１-Ｃ５アルキルであり、当該アルキルはさらに、ヒドロキシ、アミノ、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、カルボキシ、アミノカルボニル、フェニル、４-ヒドロキシフェニル、２-インドリルまたは５-イミダゾリルによって、異なる位置で任意に置換され、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、リシン、アルギニン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはヒスチジンに由来するアミノ酸残基を形成し、またはアミノ基およびアルキル鎖は５員の環を形成し、プロリン残基を形成する、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１は-ＣＯＯＲ９であり、Ｒ９は、Ｃｌ、４-ニトロフェニルまたはＣ６シクロアルキルによって任意に置換されるメチル、２-メトキシエチルのようにメトキシによって、または、１-クロロエチル、２-クロロエチル、２-フルオロエチル、２，２，２-トリクロロエチル、または２，２，２-トリフルオロエチルのように1つ以上のＣｌまたはＦ原子によって任意に置換されるエチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、またはオクチルのようなＣ１-Ｃ８アルキルであり、ビニル、１-メチルビニルまたはアリルのようなＣ２-Ｃ３アルケニルであり、プロパルギルまたはｂｕｔ-３-イン-イルのようなＣ３-Ｃ４アルキニルであり、シクロペンチルまたはシクロヘキシルのようなＣ５-Ｃ６シクロアルキルであり、または４-ニトロフェニル、４-フルオロフェニル、４-メトキシフェニル、または４-メチルフェニルのようなニトロ、フルオロ、メトキシまたはメチルによって任意に置換されるフェニルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１は-ＣＨ２-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０であり、Ｒ１０は、例えばトリフルオロメチルのクロロメチル、エトキシ、イソブチル、または１-メチルブチルによって任意に置換されるエチルのように、メトキシ、メトキシカルボニル、メチルカルボニルオキシ、または１つ以上のＣｌまたはＦ原子によって任意に置換されるメチルのようなＣ１-Ｃ５アルキルであり、２-フェニルビニル、１-メチルビニル、２-メチルビニル、３-ブテン-ｌ-イル、または２，２-ジメチルビニルのようなフェニルによって任意に置換されるビニルのようなＣ２-Ｃ４アルケニル、シクロプロピルまたはシクロペンチルのようなＣ３-Ｃ５シクロアルキル、４-メトキシフェニルのようなメトキシによって任意に置換されるフェニル、または２-フリル、２-チエニル、５-イソオキサゾリル、または２-クロロ-ピリド-５-イルのようなハロゲンによって任意に置換されるピリジルのようなヘテロアリールである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨ、Ｒ４はＣＨ３、Ｒ５はプロパルギル、および複素環式環の中の２つの点線は単結合を示す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨ、Ｒ４はＣＨ３、Ｒ５はプロパルギル、および炭素環式環の中の２つの点線は単結合を示す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨ、ｎは１であり、本明細書では化合物３として特定される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ６はＨ、Ｒ７はシクロプロピル、およびｎは１であり、本明細書では化合物７として特定される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ６はＨ、Ｒ７はＦ、およびｎは１であり、本明細書では化合物８として特定される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨ、およびｎは２であり、本明細書では化合物４として特定される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬剤的に許容される塩、および薬剤的に許容される担体、を含む医薬組成物。
【請求項１９】
鉄キレート療法および／または神経保護および神経回復、アポトーシス作用、および／または選択的ＭＡＯ-ＡＢ阻害によって予防および／または治療することのできる状態、障害または疾患を予防および／または治療するのに用いる、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物または請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ヘモクロマトーシスおよびサラセミアの鉄過剰症のような鉄過剰および酸化ストレスを原因とする疾患、障害および状態；パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ＮＢＩＡ、てんかんおよび神経外傷のような神経変性または脳血管性の疾患または障害；ヘモクロマトーシス；サラセミア；心血管疾患（特に再灌流傷害のフリーラジカルの産生を原因とする損傷を予防するため）；糖尿病；炎症性障害、例えば関節炎障害、特に関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、および乾癬；アントラサイクリン心毒性；任意に抗ウイルス薬と組み合わせるＨＩＶ-１を含むレトロウイルス感染のようなウイルス感染；熱帯熱マラリア原虫を原因とするマラリアのような原虫感染；またはカンジダ・アルビカンス感染のような酵母菌感染；神経変性疾患、障害または状態のような加齢に関係する疾患、障害または状態を予防することによる加齢の遅延；加齢性黄斑変性および緑内障を含む目の疾患の治療および／または予防、ならびに皮膚老化の予防および／または治療ならびに日光および／または紫外線に対する肌の保護における使用のための、請求項１９に記載の化合物または医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、および化粧用に許容される担体を含む化粧用組成物。
【請求項２２】
加齢および／または日光および／または紫外線に曝されることを原因とする肌の加齢および／または肌の損傷の予防および／または治療における使用のための局所的な適用のための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物または請求項２１に記載の化粧用組成物。
【請求項２３】
鉄キレート療法および／または神経保護および神経回復、および／またはアポトーシス活性、および／または選択的ＭＡＯ-ＡＢ阻害によって予防および／または治療することのできる状態、障害または疾患を予防および／または治療する方法であって、予防および／または治療を必要とする対象に有効量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物または請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項２４】
式ＩＩＩの化合物。
【化４】
2013536190.tif 000036
【請求項２５】
請求項２４に記載の化合物、またはその薬剤的に許容される塩、および薬剤的に許容される担体、を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な多機能性の神経保護化合物に関し、より詳細には、鉄キレート剤機能、ならびに抗アポトーシス機能および神経保護機能を与える残基、ならびに脳のＭＡＯ阻害（肝臓および小腸におけるＭＡＯ阻害は、わずかであるか全くないことが好ましい）を有するキノリン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は、高反応性かつ有毒なヒドロキシルラジカルの生成を増加させ、それにより酸化障害を促進することが知られている。ヒトは過剰な鉄を除去する生理的手段を持たないため、鉄はいくつかの疾患、障害、および状態と関連づけられている。そのような疾患、障害、および状態の例としては、遺伝性ヘモクロマトーシスおよびサラセミアが挙げられ、これらは当初、１９６０年代初期に導入された天然のシデロホアである、デフェロキサミン（ＤＦＯ）により治療されていたが、その後、経口的に活性な鉄キレート剤、デフェリプロン（ＬＩ）が、最近では経口的に活性な薬剤、デフェラシロクスが、代わりに用いられている。
【０００３】
神経変性疾患、たとえばパーキンソン病（ＰＤ）およびアルツハイマー病（ＡＤ）は、現在、治療法が存在しない、神経変性症候群である。両疾患は、最も汎発な神経変性障害であり、５０歳以上の人口の、それぞれ約０．５％および４〜８％が発症しており、社会の経済的負担が増加しつつある。
【０００４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、および関連する動物モデルを含む多くの研究が、ヒドロキシルおよび酸素フリーラジカルの生成と、神経変性疾患および障害、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、および脳卒中、ならびにＡＬＳ、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、脳の鉄蓄積疾患を伴う神経変性（ＮＢＩＡ）疾患、てんかん、および神経外傷との間の関連を示している。この理由により、８−ヒドロキシキノリンおよびヒドロキシピリジノンが、抗酸化型の薬剤として、鉄結合のために提案されている。神経変性疾患における鉄蓄積は共通の特徴であるため、神経変性（Youdim, 1988）および加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）（Hahn P, Milam AH, Dunaief JL, 2003）のプロセスにおいて、鉄蓄積が中心的な役割を果たすことが、先に示されている。加齢性黄斑変性に冒された黄斑では、網膜色素上皮のキレート化可能な鉄が増加している。Cuajungcoら（2000）、およびSayreら（2000）を含む、GassenおよびYoudim（1999）らは、何度か、アルツハイマー病およびパーキンソン病のための治療薬としての、ならびに加齢黄斑変性の治療のための、鉄キレート剤の開発を示唆している。
【０００５】
パーキンソン病においては、酸素フリーラジカルの形成に対する脳の防御機能に欠陥がある。パーキンソン病患者の脳の黒質には、抗酸化酵素の活性に減少がみられる。さらに、パーキンソン患者の黒質緻密部およびメラニン化したドーパミンニューロン内部において、鉄の濃度は、有意に増加している。最近の研究はまた、白質路および脳全体のニューロンにおいて有意な鉄の蓄積がみられるが、特に黒質緻密部におけるものが、神経変性および運動障害の徴候の発症に先行していることを示している。実際に、神経変性部位における鉄の蓄積は、神経変性疾患のミステリーの１つである。なぜなら、鉄は血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しないからである。
【０００６】
アルツハイマー病（ＡＤ）の病因、およびコリン作動性ニューロン変性のメカニズムは、不明のままである。それにもかかわらず、ＡＤの化学的病理は、パーキンソン病との多くの類似点を示し、以下はその一部である：鉄の増加、チトクロムＣの放出、αシヌクレイン凝集の増加、酸化ストレス、組織還元型グルタチオン（ＧＳＨ、過酸化水素の除去における必須要素）の損失、ミトコンドリア複合体Ｉの活性の減少、脂質過酸化の増加、およびカルシウム結合タンパク質、２８−ｋＤａカルビンジンの損失の関与。これらの類似点には、疾患の進行性の性質、瀕死のニューロン周辺および先端の反応性ミクログリアの増殖、酸化ストレスの発現、および炎症性プロセスも含まれる。
【０００７】
酸素フリーラジカルは、タンパク質変性、酵素不活性化、およびＤＮＡ損傷と関連しており、結果として細胞膜の脂質過酸化をもたらし、最終的には、神経変性疾患における細胞死をもたらすことが示されている。神経変性疾患の重大な側面のうちの１つは、神経変性部位における、有意な量の鉄の蓄積および沈着である。ＡＤにおいて、鉄は、ミクログリア内部およびニューロン内部、ならびにプラークおよび濃縮体中に蓄積する。最新の報告は、ＡＤの発病が、鉄などの金属との異常相互座用により媒介される、特徴的な新皮質のβアミロイド蓄積と関連しているという証拠を提供している。実際に、鉄は、βアミロイドタンパク質のみならず、αシヌクレインの凝集の原因でもあり、より高い神経毒性を促進すると考えられている。これにより、ニューロンのアポトーシスを引き起こす酸化ストレスおよび炎症性プロセスの誘導において、キレート化可能な遊離鉄が、中心的な役割を有し得るという考えがもたらされた。鉄およびラジカル酸素種は、ＡＤ患者の脳で増加し、ＡＤの病理のひとつの特徴である、細胞傷害性炎症性サイトカイン、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの促進に関与すると考えられている炎症誘発性転写因子、ＮＦＫＢを活性化する。遷移金属である鉄は、過酸化水素とのフェントン化学反応に関与し、全てのラジカル酸素種の中で最も反応性の高い、反応性ヒドロキシルラジカルを生成するため、このことは論理的であると考えられている。このラジカルは、細胞死の病理ならびに多数の毒素および神経毒（ＡＤの６−ヒドロキシドーパミン、ＭＰＴＰ、カイナイト、ストレプトゴジン（streptocozin）モデル）の作用メカニズムに、関連があるとされている。さらに、このような毒素は、神経変性疾患（ＡＤ、パーキンソン病、およびハンチントン舞踏病）の病理の多くを模倣し、その一つの特徴は、神経変性部位における鉄の蓄積であるが、他の金属の蓄積はない。
【０００８】
ラットにおける鉄誘発性の「パーキンソニズム」および鉄キレート剤デスフェロキサミンの黒質内投与が、黒質線条体ドーパミンニューロンの６−ＯＨＤＡ誘発性の損傷からラットを保護した、本願発明者らの先の研究（Ben-Shachar et al., 1991）で証明されたとおり、鉄単独、またはその結合部位から神経毒、例えば、ドーパミン作動性神経毒、６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）により非区分化された鉄は、酸化ストレスおよび神経変性を引き起こし得る。このように、黒質におけるドーパミン作動性神経変性の治療またはプロセスの遅延は、ウィルソン病の治療に使用される銅キレート剤、Ｄ−ペニシラミンに類似した様式で血液脳関門を越えることが出来る、鉄キレート剤の影響を受け得るということが示唆されている。パーキンソン病治療のためのこの治療方法は、他の、金属に関連した神経障害、例えば、遅発性ジスキネジア、アルツハイマー病およびＮＢＩＡに適用することが出来る。
【０００９】
脳卒中は、現在、心疾患およびがんに次ぐ、西欧諸国における死亡の第三の主な原因である。脳卒中の全体的な有病率は、人口の０.５〜０.８％である。脳卒中は、脳血管損傷を原因とする神経障害、例えば四肢の麻痺、発話および記憶障害、視覚および聴覚の欠陥等の突然の発症を特徴とする。
【００１０】
出血および虚血は、脳卒中の２つの主要な原因である。脳への正常な血液供給の障害は、呼吸およびエネルギー代謝の障害、ラクトアシドーシス、細胞のカルシウム恒常性の障害、興奮性神経伝達物質の放出、酸化ストレスの上昇、フリーラジカルの形成等を含む、正常な細胞代謝への急速な損傷と関連している。最終的に、これらの事象は、脳の細胞死および神経学的機能不全を引き起こす。
【００１１】
脳卒中の治療は、主に外科的である。損傷領域における正常な血液灌流を回復することが出来る薬剤、および細胞損傷に伴う上述の有害な事象を克服するために設計された薬剤の研究において、より侵襲性の低い治療的介入に対する多くの努力がなされている。
【００１２】
酸化ストレスおよびフリーラジカル形成は、組織損傷および細胞死において、重要な役割を果たす。これらのプロセスは、遷移金属イオン、主に鉄および銅によって触媒される。脳卒中の場合は、脈管損傷を伴うため、鉄は、フリーラジカル形成のために利用可能であり、このプロセスは鉄キレート剤で予防し得る。実際に、公知のフリーラジカルスカベンジャーであるラザロイド（lazaroide）（２１−アミノステロイド）の使用により、動物において誘発された局所的および全体的な虚血損傷の、有意な改善が達成されている。
【００１３】
鉄キレート剤およびラジカルスカベンジャーは、神経変性の動物モデルにおいて、強力な神経保護活性を有することが示されている。しかしながら、このような化合物の重要な問題点は、これらの化合物がＢＢＢを通過しないということである。プロトタイプの鉄キレート剤デスフェラール（デスフェリオキサミン）は、パーキンソン病の動物モデルにおいて、高度に強力な神経保護剤であることが、M. Youdimにより最初に示された（Ben-Schachar et al., 1991）。しかしながら、デスフェラールはＢＢＢを通過せず、中枢に注射する必要がある。デスフェラールはまた、糖尿病のストレプトゾシンモデルに対しても、効果がある。
【００１４】
生きた生物中のフリーラジカルは、遷移金属イオン（特に銅および鉄）と、高反応種、例えばＨ２Ｏ２、［Ｏ２］、チオール、および過酸化脂質の反応により、生成されると信じられている。抗酸化金属キレート剤は、遊離金属イオン（特に銅および鉄）または防御システムの酵素の活性中心由来の金属イオンと結合することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏの酸化剤／抗酸化剤のバランスに影響を与え得、それによりドーパミン作用性およびコリン作用性の神経変性プロセスに影響を与え、かつ神経変性疾患に対する大きな治療可能性を有し得る。
【００１５】
加齢における鉄蓄積およびその結果の酸化ストレスは、加齢および加齢性の神経変性障害における、可能性のある原因因子であることが示唆されている（Butterfield et al., 2001）。反応性酸素種が加齢プロセスにおいて中心的な役割を果たし、身体の最も外側のバリアである皮膚は、多様な外因性の酸化ストレス源、特に紫外線照射に暴露される、という証拠は増加してきている。これらは、光老化と呼ばれる、外因型の皮膚老化の原因であると信じられている（Podda et al., 2001）。このように、鉄キレート剤は、一般に首尾よい加齢に有利であり、局所的に適用された場合、首尾よい皮膚老化に有利であることが示唆されている（Polla et al., 2003）。
【００１６】
鉄は、酸素ラジカル生成におけるその関与により、明らかに、加齢だけでなく、皮膚の光損傷における要因である。ある特定の局所的鉄キレート剤は、光防護性であることがわかっている（Bisset and McBride, 1996; Kitazawa et al., 1999）。皮膚線維芽細胞中の脂質およびタンパク質に対するＵＶＡ誘発性酸化障害は、鉄および一重項酸素に依存することが示されている（Vile and Tyrrel, 1995）。従って、鉄キレート剤を、化粧用および非化粧用製剤において、所望により日焼け止め組成物とともに使用することにより、紫外線暴露に対する保護を提供することが出来る。
【００１７】
鉄過剰に伴う他の疾患、障害、または状態としては、以下が挙げられる：（i）ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳを含むウイルス感染（酸化ストレスおよび鉄は、ＨＩＶ−１の活性化および鉄キレート化において重要であると記載されており、抗ウイルス薬と組み合わせた場合、ウイルス性疾患、特にＨＩＶ疾患治療の改善を増加し得る）（van Asbeck et al., 2001）；（ii）原虫、例えばマラリアの感染；（iii）酵母菌、例えばカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）の感染；（iv）がん（いくつかの鉄キレート剤は、抗腫瘍活性を呈することが示されており、がん治療のために、単独または他の抗がん療法と組み合わせて使用することが出来る）（Buss et al., 2003）；（v）鉄キレート剤は、アントラサイクリン腫瘍薬により誘発される心毒性を予防し得る（Hershko et al., 1996）；（vi）炎症性障害（鉄および酸化ストレスは、炎症性関節疾患、例えば関節リウマチと関連していることが示されている）（Andrews et al., 1987; Hewitt et al., 1989; Ostrakhovitch et al., 2001）；（vii）糖尿病（鉄キレート剤は、糖尿病モデルのラットにおいて、糖尿病を遅延させることが示されている）（Roza et al., 1994）；（viii）鉄キレート剤は、心血管疾患の治療、例えば再灌流傷害におけるフリーラジカル生成に伴う損傷を予防するための治療のための、可能性のある候補であると記載されている（Hershko, 1994; Flaherty et al., 1991）；（ix）鉄キレート剤は、移植用の臓器、例えば心臓、肺、またはは腎臓の保存のために、ｅｘ−ｖｉｖｏで有用であり得る（Hershko, 1994）。
【００１８】
キレート剤の抗酸化型薬剤としての使用における主な問題のうちの１つは、これらのリガンドまたはそれらの金属錯体の、細胞膜または他の生物学的バリアを介する限定的な輸送である。
【００１９】
脳を作用部位とする薬剤は、一般的に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏ生物活性を達成するために、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過可能であるべきである。最も確立された鉄キレート剤であるデスフェラールの、神経変性疾患における有効性は、無効な輸送特性ならびに高い脳毒性および眼毒性により限定されている。
【００２０】
８−ヒドロキシキノリンは、鉄に対する強力なキレート剤であり、フリーラジカルをそれら自体が除去する２つの芳香環を含む。米国特許第６，８５５，７１１号において、種々の鉄キレート剤が開示され、パーキンソン病予防におけるそれらの作用が示されている。リード化合物である、５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−ｌ−イルメチル］−８−ヒドロキシキノリンは、ＢＢＢを通過することができ、パーキンソン病の動物モデルにおいて、６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）に対して活性であることが示された。
【００２１】
ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００４／０４１１５１号は、パーキンソン病を予防することが示された種々の鉄キレート剤および多機能性化合物を開示している。リード化合物、Ｍ３０は、ＢＢＢを通過することができ、パーキンソン病の動物モデルにおいて、６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）に対して活性であることが示された。
【００２２】
神経保護活性、血液脳関門を含む細胞膜を介する良好な輸送特性、最適な経口摂取および最適または十分な経口摂取、ならびに臨床開発における薬剤候補としてそれらを適格とするＰＫ挙動をも示す、新規な鉄キレート剤を提供することが、大変望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本願発明者らは、国際公開第２００４／０４１１５１号に開示される８−ヒドロキシキノリン、特にＭ３０と表される化合物を、環中ならびに／または位置５および８、またはその両方で修飾することにより、親油性培地において良好な輸送特性を有し、血液脳関門を含む細胞膜を通過することができ、最適または十分な経口摂取、および臨床開発における薬剤候補としてそれらを適格とする薬物動態的（ＰＫ）挙動を有する、多機能性化合物誘導体を得ることが出来ることを発見した。
【００２４】
従って本発明は、一態様において、以下に記載される式Ｉの化合物およびその薬剤的に許容される塩に関する。１つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、本明細書の式ＩＩで表されるものである。
【００２５】
式Ｉの化合物は、鉄キレート剤機能、ならびに抗アポトーシス機能および神経保護機能の両方を化合物に与える残基、ならびに脳のＭＡＯ阻害機能（肝臓および小腸におけるＭＡＯ阻害はわずかまたは無いことが好ましい）を含む、多機能性化合物である。
【００２６】
鉄キレート剤機能は、鉄を特異的にキレート化することがまだ可能な位置８で、８−ヒドロキシキノリン残基または他のラジカルにより提供されることが好ましく、複合した抗アポトーシス機能および神経保護機能は、プロパルギル基により提供されることが好ましい。
【００２７】
本発明の化合物は、鉄過剰および酸化ストレス関連の疾患、障害および状態の治療および／または予防のため；加齢を遅らせるため；ならびに、皮膚老化ならびに／または日光および／もしくは紫外線への暴露に伴う皮膚老化ならびに／または皮膚損傷の予防および／または治療のために有用であり、前記鉄過剰および酸化ストレス関連の疾患、障害および状態としては、例えば、限定されないが、神経変性および脳血管疾患および障害、腫瘍性疾患、ヘモクロマトーシス、サラセミア、心血管疾患、糖尿病、炎症性疾患、アントラサイクリン心毒性、ウイルス、原虫および酵母菌感染が挙げられる。
【００２８】
本発明の化合物で治療することができる疾患、状態、および障害としては、限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、脳の鉄蓄積を伴う神経変性（ＮＢＩＡ）、てんかん、神経外傷、加齢性黄斑変性、緑内障、ヘモクロマトーシスおよびサラセミアが挙げられる。
【００２９】
さらなる態様において、本発明は、薬剤的に許容される担体および本発明の多機能性化合物またはその薬剤的に許容される塩を含む、医薬組成物を提供する。
【００３０】
さらなる別の態様において、本発明は、本発明の多機能性化合物を含む、化粧用組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、インビトロにおける、化合物３（菱形）、化合物４（正方形）、およびＭ３０（三角形）として本明細書で同定された、化合物によるラット脳ＭＡＯ‐Ａの阻害を示す。
【図２】図２は、インビトロにおける、化合物３（菱形）、化合物４（正方形）、およびＭ３０（三角形）によるラット脳ＭＡＯ‐Ｂの阻害を示す。
【図３】図３は、化合物３またはＭ３０のいずれか一方の単回腹腔内注射をしたマウスの脳線条体におけるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂレベルの阻害を示す。
【図４】図４は、化合物３またはＭ３０のいずれか一方の単回腹腔内注射をしたマウスの腸におけるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害を示す。
【図５Ａ】図５Ａから５Ｂは、ＨｅｐＧ２細胞における化合物３（菱形）、およびタモキシフェン（三角形）の細胞毒性を示すグラフである。図５Ａは、生存可能なＨｅｐＧ２の割合であり、図５Ｂは、細胞死したＨｅｐＧ２の割合である。
【図５Ｂ】同上。
【図６Ａ】図６Ａから６Ｂは、ＳＨＳＹ‐５Ｙ細胞における化合物３（菱形）、およびタモキシフェン（三角形）の細胞毒性を示すグラフである。図６Ａは、生存可能なＳＨＳＹ‐５Ｙの割合であり、図６Ｂは、細胞死したＳＨＳＹ‐５Ｙの割合である。
【図６Ｂ】同上。
【図７】図７は、２０μΜの外因性鉄(exogenous iron)の存在下、またはこれがない状態におけるＳＨＳＹ‐５Ｙ細胞での化合物３の細胞毒性を示す。
【図８】図８は、２０μΜの外因性鉄の存在下、またはこれがない状態におけるＨｅｐＧ２細胞での化合物３の細胞毒性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、米国特許第２００６／０２３４９２７号および国際公開第２００４／０４１１５１号に記載の５-（Ｎ-プロパルギル-Ｎ-メチルアミノメチル）-８-ヒドロキシキノリン（本明細書ではＭ３０と特定されることもある）としても知られる化合物５-［（メチル-２-プロピン-ｌ-イルアミノ）メチル］-８-キノリノールの誘導体または類似体である化合物を提供し、以下の式である。
【化１】
2013536190.tif 000002
【００３３】
したがって、１つの態様では、本発明は式Ｉの化合物およびその薬剤的に許容される塩に関するものであり、
【化２】
2013536190.tif 000003
式中、Ｒ１は以下から選択され、
（ｉ）Ｈ、
（ｉｉ）ヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、シアノ、カルボキシ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）アミノカルボニル、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、またはＣ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシから選択される1つ以上の基によって置換されるＣ１-Ｃ８アルキル、
（ｉｉｉ）-ＣＯＲ８であって、Ｒ８はＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリル基は、1つ以上の以下の基：ハロゲン原子、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、メルカプト、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、カルボキシ、Ｃ１-Ｃ８(アルコキシ)カルボニル、Ｃ１-Ｃ８(アルキル)カルボニルオキシ、Ｃ１-Ｃ８(アルキル)スルホニル、Ｃ１-Ｃ８(アルキル)カルボニルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８(アルキル)アミノカルボニル、またはジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニルによって任意に置換され、またはＣ１-Ｃ５アルキル基はＣＯ基に対してα位にあるアミノ基によって置換され、ヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、およびイミダゾリルから選択される基によってさらに置換されてもよく、
（ｉｖ）-ＣＯＯＲ９であって、Ｒ９は、ハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、ニトロ、ヒドロキシ、カルボキシ、またはＣ３-Ｃ６シクロアルキルによって任意に置換されるフェニルによって任意に置換されるＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ２-Ｃ４アルキニル、Ｃ５-Ｃ７シクロアルキル、またはハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、またはＣ１-Ｃ８アルコキシによって任意に置換されるフェニルであり、
（ｖ）-ＣＨ２-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０、または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０であって、Ｒ１０は、ハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルコキシによって任意に置換されるＣ１-Ｃ８アルキル、フェニルによって任意に置換されるＣ２-Ｃ４アルケニル、Ｃ３-Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシに任意に置換されるフェニル、またはハロゲンまたはＣ１-Ｃ８アルキルによって任意に置換されるフリル、チエニル、イソオキサゾリル、またはピリジルから選択されるヘテロアリールであり、
（ｖｉ）-ＰＯ（ＯＲ１１）２、-ＣＨ２-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２であり、Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、またはヒドロキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、またはＣ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシによって任意に置換されるＣ１-Ｃ８アルキルから独立して選択され、および
（ｖｉｉ）-ＣＯＮＲ１２Ｒ１３であって、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、Ｃ２-Ｃ８アルケニル、Ｃ２-Ｃ８アルキニル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルから独立して選択され、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキル基は1つ以上の以下の基：ハロゲン原子、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、メルカプト、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、カルボキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルコキシ）カルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルオキシ、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）スルホニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）カルボニルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８（アルキル）アミノカルボニル、およびジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノカルボニルによって任意に置換され、Ｃ１-Ｃ５アルキル基はＯＣＯＮ基に対してα位でカルボキシ基によって置換され、ヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、およびイミダゾリルから選択される基によってさらに置換されてもよく、またはＲ１２およびＲ１３は、それらが結合するＮ原子と一緒になって、任意にＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子をさらに含む５〜７員の飽和環を形成し、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、Ｃ１-Ｃ８アルコキシカルボニル、Ｃ１-Ｃ８アミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノカルボニル、Ｃ１-Ｃ８ジアルキルアミノカルボニル、またはＣ１-Ｃ８アルコキシによって、環で任意に置換され、
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立してＨ、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ハロゲン、またはハロ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルであり、
Ｒ４はＨまたはＣ１-Ｃ８アルキルであり、Ｒ５はプロパルギル、アリル、シクロブチル、またはシクロプロピルであり、
Ｒ６はＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノまたはオキソ、チオキソ、イミノ、または環の２位または４位のＣ１-Ｃ８アルキルイミノであり、
Ｒ７はＨ、ハロゲン、Ｃ１-Ｃ８アルキル、ペルハロＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、ジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノ、シアノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルスルホニル、Ｃ１-Ｃ８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルカルボニル（Ｃ１-Ｃ８）アミノ、またはＣ１-Ｃ８アルキルスルホニル（Ｃ１-Ｃ８）アミノであり、
点線はそれぞれ、単結合または二重結合を示し、および
ｎは０〜８であり、
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、ｎが０であり、Ｒ４がＨまたはＣＨ３であり、およびＲ５がプロパルギル、またはＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、ｎが１、およびＲ５がプロパルギルである化合物を除外する。
【００３４】
特定の実施形態では、本発明の化合物は以下の構造である式Ｉａの化合物であり、
【化３】
2013536190.tif 000004
式中、Ｒ１〜Ｒ７は、上述の通りである。
【００３５】
特定の好ましい実施形態では、本発明の化合物は式ＩＩの化合物であり、
【化４】
2013536190.tif 000005
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ７は上述の通りであり、Ｒ６はＨであり、ｎは０〜２である。
【００３６】
用語「ハロゲン」は、本明細書に使用するとき、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードであり、好ましくはＣｌまたはＦである。基には1つ以上のハロゲン原子を含んでもよく、特定の実施形態では、ＣＦ３である。
【００３７】
用語「Ｃ１-Ｃ８アルキル」は単独でまたはアルキル基を含む基の一部として、一般的には１〜８個、好ましくは１〜６、５、４、３、２または１個の炭素原子を持つ直鎖基または分岐鎖基を意味し、限定されないが、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、ｓｅｃ-ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ-ブチル、ｎ-ペンチル、１-メチルブチル、２，２-ジメチルプロピル、ｎ-ヘキシル、ｎ-ヘプチル、ｎ-オクチル等を含む。アルキル基は、限定されないが、1つ以上のＯＨ、ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、シクロアルキル（例えば、アルキルによって任意に置換されるシクロヘキシル）、アリール（例えば、ＮＯ２によって任意に置換されるフェニル）、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、およびヘテロアリールまたはヘテロシクリル （例えば、フリル、チエニル、ピペリジノ）によって置換され得る。用語「ハロ（Ｃ１-Ｃ８）アルキル」は、Ｃ１-Ｃ８アルキル、好ましくは1つ以上のＦ原子または1つ以上のＦおよびＣｌ原子によって置換されるＣ１-Ｃ５アルキルを意味する。特定の実施形態では、ハロアルキルはペンタフルオロペンチルである。特定の実施形態では、ハロアルキルは１〜３個のＦ原子または-ＣＨ２Ｆ、-ＣＨＦ２、-ＣＦ３、または-ＣＣ１Ｆ２のようなＦおよびＣｌによって置換されるメチルである。
【００３８】
用語「Ｃ２-Ｃ８アルケニル」および「Ｃ２-Ｃ８アルキニル」は２〜８個、好ましくは２、３または４個の炭素原子および一重、二重、または三重結合である直鎖または分岐鎖基を一般的に意味し、それぞれ、限定されないが、ビニル、アリル、プロプ-ｌ-エン-ｌ-イル、プロプ-２-エン-ｌ-イル、ｂｕｔ-３-エン-ｌ-イル、２，２-ジメチルビニル、２-エテンイルブチル、ｏｃｔ-３-エン-ｌ-イル等、およびエチニル、プロパルギル、ｂｕｔ-３-イン-ｌ-イル、ペンテン-３-イン-ｌ-イル等を含む。アルケニル基は、例えば、アリール（例、フェニル）によって置換され得る。
【００３９】
用語「Ｃ１-Ｃ８アルコキシ」および「Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ」は、本明細書に用いるとき、１〜８個、好ましくは１、２、または３個の炭素原子を持つ直鎖または分岐鎖基を一般的に意味し、好ましくはアルキル、フェニルまたはヘテロアリール基の置換基である。アルコキシの例としてメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ペントキシ等が挙げられ、アルキルチオの例としてメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ等が挙げられる。
【００４０】
用語「Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル等のような単環式または二環式飽和ヒドロカルビル基を本明細書では意味し、例えば1つ以上のアルキル基によって置換され得る。
【００４１】
用語「アリール」は、Ｃ６-Ｃ１４アリールを意味し、すなわち、限定されないが、フェニル、ナフチル、カルバゾリル、フェナントリル、およびビフェニルのような共有結合によって縮合または結合される単環または複数の環からなる６〜１４個の炭素原子を持つ芳香族炭素環基を意味する。いくつかの好ましい実施形態では、アリール基はハロゲン（例えばＦ）、アルキル（例えばメチル）、アルコキシ（例えばメトキシ）、およびニトロによって任意に置換されるフェニルである。
【００４２】
用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯおよびＳからなる基から選択される１〜３個のヘテロ原子を含む単環式または多環式複素芳香族環に由来する基を意味する。ヘテロアリールが単環式の環であるとき、好ましくは、限定されないが、ピロリル、フリル、チエニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、１，３，４-トリアジニル、１，２，３-トリアジニル、および１，３，４-トリアジニルのような５〜６員の環の基である。多環式ヘテロアリール基は、好ましくは、限定されないが、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、イミダゾ［１，２-ａ］ピリジル、ベンゾイミダゾリル、ベンズチアゾリルおよびベンゾオキサゾリルのような２つの環からなる。多環式複素芳香族環が置換されるとき、置換は炭素環式および／または複素環式環のいずれにもある。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、ピリジル（Ｃｌによって任意に置換される）、インドリル、またはイミダゾリルである。
【００４３】
用語「ヘテロシクリル」は、Ｎ、ＯおよびＳからなる基から選択される１〜３個のヘテロ原子を含む単環式または多環式非芳香族環に由来する基を意味する。このような基の例に、限定されないが、ピペリジニル、４-モルホリニル、またはピロリジニルがある。
【００４４】
「ｎ」は本明細書に用いるとき０〜８であり、好ましくは０〜５である。特定の実施形態では、ｎは１または２である。
【００４５】
特定の実施形態では、上記式ＩおよびＩＩの本発明の化合物は、５-［（メチル-２-プロピン-ｌ-イルアミノ）メチル］-８-キノリノール（Ｍ３０）の誘導体または類似体であし、キノリン環の８-ヒドロキシ基は鉄キレート化機能を依然として保持するような方法で修飾される。
【００４６】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-エーテル類であり、Ｒ１は上述の（ｉｉ）に定義され、好ましくはヒドロキシまたはＣ１-Ｃ３アルコキシによって置換されるＣ１-Ｃ３アルキルであり、より好ましくは、Ｒ１はヒドロキシプロピル、メトキシプロピルまたはプロポキシメチルである。特定の実施形態では、Ｒ１が−ＣＯＲ８であるとき、Ｒ８はＣＯ基に対してα位でアミノ基によって置換されるＣ１-Ｃ５アルキルであり、さらに、ヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、４-ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、およびイミダゾリルから選択される基によって任意に置換される。Ｒ８が２-ピロリジニルからなるヘテロシクリルとして定義されるとき、プロリンの残基は形成される。
【００４７】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-エステル類であり、Ｒ１は上述の（ｉｉｉ）に定義される−ＣＯＲ８である。特定の実施形態では、Ｒ８はＣ１-Ｃ５アルキルであり、例えば、メトキシ、メトキシカルボニル、カルボキシ、メチルカルボニルオキシまたは1つ以上のＣｌまたはＦ原子、例えば、メトキシメチル、メトキシカルボニルメチル、メチルカルボニルオキシメチル、クロロメチルまたは トリフルオロメチル、またはエトキシ、イソブチル、またはｓｅｃ-ペンチルによって任意に置換されるエチルによって任意に置換されるメチルである。特定の実施形態では、Ｒ８はＣ２-Ｃ４アルケニルであり、好ましくは、フェニル（例、２-フェニルビニル）、１-メチルビニル、２-メチルビニル、２，２-ジメチルビニル、またはｂｕｔ-３-エン-ｌ-イルによって任意に置換されるビニルである。特定の実施形態では、Ｒ８は、シクロプロピルまたはシクロペンチルのようなＣ３-Ｃ５シクロアルキル、好ましくは４位でメトキシによって任意に置換されるフェニルのようなアリール、２-チエニル、２-フリル、５-イソオキサゾリルまたはＣｌによって任意に置換されるピリジルのようなヘテロアリール、または４-モルホリニルのようなヘテロシクリルである。
【００４８】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-炭酸塩類であり、Ｒ１は、上述の（ｉｖ）に定義される-ＣＯＯＲ９である。特定の実施形態では、Ｒ９は、Ｃｌ、４-ニトロフェニルまたはＣ６シクロアルキルによって任意に置換されるメチル、または例えば２-メトキシエチルといったメトキシによって、もしくは例えば１-クロロエチル、２-クロロエチル、２-フルオロエチル、２，２，２-トリクロロエチル、、２，２，２-トリフルオロエチルといった1つ以上のＣｌまたはＦ原子によって任意に置換されるエチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、またはオクチルのようなＣ１-Ｃ８アルキルであり、ビニル、１-メチルビニルまたはアリルのようなＣ２-Ｃ３アルケニルであり、プロパルギルまたはｂｕｔ-３-イン-イルのようなＣ３-Ｃ４アルキニルであり、シクロペンチルまたはシクロヘキシルのようなＣ５-Ｃ６シクロアルキルであり、または４-ニトロフェニル、４-フルオロフェニル、４-メトキシフェニル、または４-メチルフェニルのようなニトロ、フルオロ、メトキシまたはメチルによって任意に置換されるフェニルである。
【００４９】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-アシルオキシメチル誘導体であり、Ｒ１は、上述の（ｖ）に定義される-ＣＨ２-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０、または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＣＯ-Ｒ１０である。特定の実施形態では、Ｒ１０は、メトキシによって任意に置換されるメチル、メトキシカルボニル、メチルカルボニルオキシ、または例えばトリフルオロメチルのクロロメチル、エトキシ、イソブチル、または１-メチルブチルによって任意に置換されるエチルといった1つ以上のＣｌまたはＦ原子のようなＣ１-Ｃ５アルキルであり、例えば２-フェニルビニル、１-メチルビニル、２-メチルビニル、３-ブテン-ｌ-イル、または２，２-ジメチルビニルといったフェニルによって任意に置換されるビニルのようなＣ２-Ｃ４アルケニルであり、シクロプロピルまたはシクロペンチルのようなＣ３-Ｃ５シクロアルキルであり、４-メトキシフェニルのようなメトキシによって任意に置換されるフェニルであり、または、２-フリル、２-チエニル、５-イソオキサゾリル、または２-クロロ-ピリド-５-イルのようなハロゲンによって任意に置換されるピリジルのようなヘテロアリールである。
【００５０】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-リン酸塩類または（ホスホリルオキシ）メチル誘導体であり、Ｒ１は、上述の（ｖｉ）に定義される-ＰＯ（ＯＲ１１）２、-ＣＨ２-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２または-ＣＨ（ＣＨ３）-Ｏ-ＰＯ（ＯＲ１１）２である。
【００５１】
特定の実施形態では、誘導体はＭ３０の８-カルバマート誘導体であり、Ｒ１は、上述の（ｖｉｉ）に定義される-ＣＯＮＲ１２Ｒ１３である。Ｒ１２またはＲ１３が、-ＣＯＮ-基に対してα位でカルボキシ基によって置換され、およびヒドロキシ、メチルチオ、メルカプト、フェニル、４-ヒドロキシフェニル、インドリル、アミノカルボニル、カルボキシ、アミノ、グアニジノ、およびイミダゾリルから選択される基によってさらに置換されるＣ１-Ｃ５アルキルであるとき、形成される基はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、リシン、バリン、フェニルアラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、セリン、チロシン、メチオニン、トレオニン、およびトリプトファンを含むタンパク質類の中に一般的に発生する天然のアミノ酸の残基である。Ｒ１２またはＲ１３の1つが２‐ピロリジニルからなるヘテロシクリルとして定義されるとき、プロリンの残基は形成される。
【００５２】
特定の実施形態では、本発明の化合物はキノリン環で修飾されるＭ３０の誘導体または類似体である。特定の実施形態では、上述の式Ｉの点線よって示されるようにキノリン構造の炭素環式または複素環式環のひとつまたは両方は、水素化されてもよい。このような化合物の例として、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はＣＨ３であり、Ｒ５はプロパルギルであり、ｎは０であり、および複素環または炭素環式環中の２つの点線はそれぞれ単結合を示す。特定の実施形態では、キノリン環は環のいずれかで置換されてもよく、例えばハロゲン、好ましくはＦであり得るＲ７、Ｃ１-Ｃ８、好ましくはＣ１-Ｃ３アルキル、より好ましくはメチル、エチルおよびイソプロピル、またはＣ３-Ｃ８シクロアルキル、好ましくはシクロプロピルよって、７位であっても、またはＣ１-Ｃ８アルキル、Ｃ１-Ｃ８アルコキシ、Ｃ１-Ｃ８アルキルチオ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、Ｃ１-Ｃ８アルキルアミノ、またはジ（Ｃ１-Ｃ８）アルキルアミノであり得るＲ６により２、３または４位のいずれであっても置換されてよい。複素環式環が部分的に水素化するとき、Ｒ６はオキソ、チオキソ、イミノ、またはＣ１-Ｃ８アルキルイミノであってもよい。７位で置換される式ＩＩの化合物の例には、化合物１および２として本明細書に特定される化合物を含み、それぞれ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ６はＨであり、ｎは０であり、およびＲ７はＣＨ３またはＦである。
【００５３】
特定の実施形態では、Ｍ３０の誘導体または類似体は、メチレン基で、５位で置換され、すなわちＲ２および／またはＲ３はＣ１-Ｃ８、好ましくはＣ１-Ｃ３アルキル、より好ましくはメチルであっても、ハロゲン、好ましくはＦであっても、または-ＣＦ３であってもよい。このような化合物の例として、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびＲ７はＨであり、ｎは０であり、およびＲ３はＣＨ３またはＣＦ３である式ＩＩの化合物、およびＲ１、Ｒ６およびＲ７はＨであり、およびＲ２およびＲ３はそれぞれＦである化合物が挙げられる。特定の実施形態では、Ｍ３０の誘導体または類似体、５位でのメチレン基は、ジメチレンまたはトリメチレン基によって置き換えられ、すなわち、ｎは１または２である。このような化合物の例として、（ｉ）ｎは１であり、それぞれ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ６はＨであり、およびＲ７はＨ、シクロプロピル、またはＦである化合物３、７および８として本明細書に特定される式ＩＩの化合物、（ｉｉ）Ｒ１は-ＣＨ３であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はそれぞれＨである化合物［Ｏ-メチル-化合物３］、（ｉｉｉ）ｎは２であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびＲ７はＨである化合物４として本明細書に特定される式ＩＩの化合物が挙げられる。
【００５４】
本発明はさらに、例えば塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等の無機酸由来の塩；ならびに、例えば脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニルで置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸等の有機酸由来の塩を含む、化合物の薬剤的に許容される塩にも関する。従ってそのような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩等が含まれる。アミノ酸の塩、例えばアルギン酸塩等、およびグルコン酸塩またはガラクツロン酸塩もまた、意図されている（例えば、Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use, Stahl, P. H. and Wermuth, C. G., Eds; VHCA and Wiley- VCH: Zurich and Weinheim, 2002を参照のこと）。
【００５５】
本発明はさらに、本明細書においてＯ−メチル−Ｍ３０と呼ばれる、Ｍ３０の８−メチルエーテルである、式ＩＩＩの化合物にも関する。強力な鉄キレート剤ではないが、この化合物は、以下の実施例において、ＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂ阻害剤として、興味深い生物活性を示す：
【化５】
2013536190.tif 000006
【００５６】
本発明の式Ｉの化合物は、細胞内の結合していない鉄に結合するのに好適な、特異的な鉄キレート剤である。トランスフェリンに結合していない鉄は、鉄の有毒な形態である。本発明の鉄キレート剤は、良好な輸送特性を有し、細胞膜を通過し、それにより細胞内の、結合していない過剰な鉄をキレート化する。それらの鉄との錯体は、細胞から自由に出てゆき、迅速に排出されることが期待される。化合物、または少なくとも化合物の主要な部分は、ＢＢＢを通過することができ、従って、神経変性疾患、障害、および状態の治療のための好適な候補となることが、さらに期待される。
【００５７】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を、薬剤的に許容される担体との組み合わせで含む、医薬組成物に関する。
【００５８】
本発明の化合物は、鉄キレート療法、ならびに／または神経保護および神経修復、アポトーシス活性、ならびに／または選択的ＭＡＯ−ＡＢ阻害により、予防および／または治療することが出来る状態、障害または疾患の予防および／または治療において有用である。
【００５９】
ある実施形態において、化合物は、神経変性および脳血管疾患、状態、および障害、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症、フリードライヒ失調症、ＮＢＩＡ、てんかん、および神経外傷の予防ならびに／または治療における使用のためのものである。化合物はまた、神経再生、神経修復の促進、または、例えば以下のような一次的な神経系傷害に続いて起こり得る二次的変性を、予防または阻害するためにも有用である：閉鎖性頭部外傷および鈍的外傷、例えば、危険なスポーツへの参加が原因であるもの；鋭的外傷、例えば、銃創；出血性卒中；虚血性脳卒中；緑内障；脳虚血；または手術、例えば腫瘍切除を原因とする損傷。
【００６０】
ある実施形態において、本発明の化合物は、パーキンソン病の治療における使用のためのものである。ある実施形態において、化合物は、アルツハイマー病の治療のためのものである。ある実施形態において、医薬組成物は、脳血管障害、とくに脳卒中の治療のためのものである。パーキンソン病およびアルツハイマー病などの疾患における、本発明の鉄キレート剤の使用の「予防」の側面は、さらなる神経変性および疾患のさらなる進行の予防を含む。
【００６１】
ある実施形態において、本発明の化合物は、以下の疾患または障害の予防および／または治療のために使用することが出来る：加齢黄斑変性；緑内障；糖尿病；ヘモクロマトーシスおよびサラセミアにおける鉄過剰；心血管疾患（例えば、再灌流傷害におけるフリーラジカル生成に関連した損傷を予防するため）；炎症性疾患、例えば関節炎障害、特に関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、および乾癬；アントラサイクリン心毒性（アントラサイクリン腫瘍薬の治療を受けているがん患者の場合）；原虫感染、例えば熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）を原因とするマラリア感染；酵母菌感染、例えばカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）感染；ウイルス感染、例えば、ＨＩＶ−１などのレトロウイルス感染（ＡＩＤＳの治療のためには、所望により、１つまたは複数の抗ウイルス薬、例えば：アバカビル、アタザナビル、コンビビル、ダルナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、ネルフィナビル、ラルテグラビル、リトナビル、サキナビル、テノホビル、チプラナビル、トリジビル、またはジドブジンとの組み合わせで）。
【００６２】
ある実施形態において、化合物は、加齢性疾患、障害、または状態、例えば神経変性疾患、障害、または状態を予防することにより、加齢の遅延および／または加齢プロセスの改善のために使用することができ；ならびに、加齢ならびに／または日光および／もしくは紫外線への暴露に伴う皮膚老化ならびに／または皮膚損傷の予防および／または治療のために使用することができる。
【００６３】
ある実施形態において、本発明は、加齢ならびに／または日光および／もしくは紫外線への暴露に伴う皮膚老化ならびに／または皮膚損傷の予防および／または治療のための、局所的な適用において有用な化粧用組成物、および薬用化粧品用に許容される担体を提供する。化粧用組成物は、ローションまたはクリームの形態であってもよく、および皮膚治療のための他の物質とともに投与されてもよい。
【００６４】
ある実施形態において、鉄キレート剤は、移植用の臓器、例えば、心臓、肺、または腎臓の保存のためのｅｘ−ｖｉｖｏでの使用のためのものである。
【００６５】
さらなる別の態様において、本発明は、鉄キレート療法のための方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００６６】
ある実施形態において、本発明は、神経変性疾患、状態または障害の予防および／または治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００６７】
ある実施形態において、本発明は、がんの治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。ある実施形態において、本発明の鉄キレート剤は、１つまたは複数の化学療法薬の投与の前、同時、または後に投与される。
【００６８】
ある実施形態において、本発明は、ヘモクロマトーシスまたはサラセミア患者における鉄過剰の予防および／または治療方法であって、前記患者に有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００６９】
ある実施形態において、本発明は、心血管疾患の予防および／または治療方法、例えば、再灌流傷害におけるフリーラジカル生成に伴う損傷を予防するための方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００７０】
ある実施形態において、本発明は、糖尿病の予防および／または治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００７１】
ある実施形態において、本発明は、炎症性疾患の予防および／または治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。１つの好ましい実施形態において、炎症性障害は、関節炎障害、とくに関節リウマチである。別の好ましい実施形態において、炎症性障害は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。さらなる好ましい実施形態において、炎症性障害は乾癬である。
【００７２】
ある実施形態において、本発明は、アントラサイクリン心毒性の予防および／または治療方法であって、アントラサイクリン腫瘍薬の治療を受けている個人に、有効量の本発明の化合物または、その薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【００７３】
ある実施形態において、本発明は、ウイルス、原虫、または酵母菌感染の予防および／または治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を、単独または抗ウイルス薬、抗原虫薬、もしくは抗真菌薬との組み合わせで投与することを含む、方法を提供する。ある実施形態において、ウイルス感染は、レトロウイルス感染、例えばＨＩＶ−１であり、および化合物は、ＡＩＤＳの治療において、所望により抗ウイルス薬との組み合わせで使用される。ある実施形態において、原虫感染は、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）を原因とするマラリアである。ある実施形態において、酵母菌感染はカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）の感染である。
【００７４】
ある実施形態において、本発明は、加齢性疾患、障害、または状態を予防することにより、加齢の遅延および／または加齢プロセスを改善する方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。必要としている個人は、健康な個人であっても、加齢性疾患、例えば、神経変性疾患、障害、または状態を患う個人であってもよい。
【００７５】
ある実施形態において、本発明は、加齢ならびに／または日光および／もしくは紫外線への暴露に伴う皮膚老化ならびに／または皮膚損傷の予防および／または治療方法であって、それを必要とする個人に、有効量の本発明の化合物またはその薬剤的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。化合物は、医薬用または化粧用製剤で、局所的に投与されることが、最も好ましい。
【００７６】
本発明の医薬組成物を調製するために、当技術分野で公知の方法を使用することが出来る。固体または液体のどちらかである、不活性な、薬剤的に許容される担体を使用することが出来る。固体形態の製剤としては、散剤、錠剤、分散性の粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および坐薬が挙げられる。
【００７７】
固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤、または錠剤崩壊剤としても作用し得る１つまたは複数の物質であってよく；また、カプセル化材料であってもよい。
【００７８】
液体医薬組成物には、溶液、懸濁液、および乳乳濁液が含まれる。一例としては、非経口注射用の水または水−プロピレングリコール溶液を挙げることができる。液体製剤は、水性のポリ（エチレングリコール）溶液中の溶液として製剤化することもできる。経口使用のための水溶液は、活性成分またはその薬剤的に許容される塩を水中に溶解し、所望により、好適な着色料、着香剤、安定剤、および増粘剤を添加することにより、調製することが出来る。経口使用のための水性懸濁液は、粘着性材料、すなわち天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および他の公知の懸濁化剤とともに、細かく分割した活性成分を水中に分散させることにより、調製することが出来る。
【００７９】
医薬組成物は、単位剤形であることが好ましい。そのような形態において、製剤は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位剤形は、パッケージされた製剤、個別の量の製剤を含有するパッケージ、例えば、パケット化錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤であってもよい。単位剤形はまた、カプセル剤、カシェ剤、または錠剤自体であってもよく、適切な数の、これらのパッケージされた形態のうちのいずれかであってもよい。
【００８０】
パーキンソン病の治療のための治療的使用において、本発明の製薬方法に利用される化合物は、１日当たり、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの投与量レベルで、患者に投与してもよい。
【００８１】
脳卒中の治療のための治療的使用において、約１００ｍｇ／ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重の、１つまたは複数の投与量を、発症後可能な限り早く患者に投与してもよい。
【００８２】
しかしながら、投与量は、患者の必要条件、治療される状態の重症度、および使用される化合物に応じて変化し得る。特定の状況における最適な投与量の決定は、当業者の技能範囲内である。
【００８３】
以下の例は、本発明に従って、化合物を調製する特定の方法を例示する。これらの例は、本発明の範囲の例示として意図されるものであり、限定を意図するものではない。
【００８４】
本発明に従って、Ｍ３０の新たな誘導体および類似体を合成し、続いて以下について試験した：
（１）経口有効性、（２）ＰＫ挙動、および（３）投与後にＢＢＢを通過し、脳組織により取り込まれる能力。これらのカテゴリーにおける最小レベルの性能を満たす誘導体を、上述の４つの特徴の保持について試験した：（１）鉄キレート化、（２）選択的ＭＡＯ−Ａ／Ｂ阻害、（３）抗アポトーシス活性、および（４）神経保護。
【００８５】
最小の構造変化をもたらし、結果として親化合物の多くの望ましい特性を保持する、単純な最初の手段は、フェノール性８−ヒドロキシル基において、化合物を修飾することである。化合物の各々の生物学的利用率およびＰＫを強化するための、プロドラッグの適合性を評価するための１つの方法は、エステラーゼ加水分解における因子として、立体容積を計測する単純なエステルを調製することである。得られたプロドラッグエステル誘導体は、血漿エステラーゼにより触媒されることが知られている、血漿エステル分解の動態に応じて、より良い吸収およびより長い循環ｔ１／２の両方を提供することが期待される。さらに、腸および血液脳関門を越えるアミノ酸の能動輸送により、アミノ酸とのエステル化が補助となり得る。Ｌ−バリンは、いくつかの薬剤の生物学的利用率を改善することが知られている。別の方法は、８−ヒドロキシル基のエーテル化であり、それによりエーテル誘導体プロドラッグに、水環境における長期の安定性を提供する。さらなる方法は、より容易にアルコール脱離基をエステラーゼに暴露し、かつ加水分解時に自然発生的にＣＯ２を生成するであろう炭酸塩を調製することである。化合物の算出されたＬｏｇＰ値は、理想的な範囲である２．５〜３．５に近い多くの値を提供し、Ｍ３０については、値２．１８よりも、典型的により高い。
【００８６】
ある実施形態において、本発明の化合物は、本明細書の実施例において記載される化合物である。これらの化合物は修飾され、血液脳関門を含む細胞膜を介する改善された輸送特性および／または最適もしくは十分な経口採取および／または臨床開発における薬剤候補としてそれらを適格とするために最適もしくは十分なＰＫ挙動を有し、かつ、複合した抗アポトーシス機能および神経保護機能を与えるプロパルギル部分である残基を含むことが期待される。
【００８７】
前述のとおり、脳を作用部位とする薬剤は、一般的に、最大のｉｎ  ｖｉｖｏ生物活性を達成するために、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過可能であるべきである。いくつかの神経変性疾患において脳に蓄積する鉄に結合しかつ除去するために、脳に鉄キレート剤を運ぶことを意図する場合、可能な解決策のうちの１つは、両親媒性の挙動に関与する特異的な基を有する、鉄キレート化分子を設計することである。そのような両親媒性基は、親油性および親水性中心を有する。両中心のサイズと構造が、全分子の全体的な親油性を制御し、それゆえに、輸送特性をも制御する。
【実施例】
【００８８】
次に示す実施例は、本発明の化合物の構造（化学物質の項）、およびこれらの生物活性（生物学の節）について説明する。これらの実施例は、本発明の範囲の限定ではなく、実例であることを意図する。
【００８９】
Ｉ．化学物質の項
実施例１．
５‐［（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）メチル］‐８‐キノリノール（Ｍ３０）の合成
Ｍ３０の合成を、下記のように本明細書で説明される：
【００９０】
【化６】
2013536190.tif 000007
【００９１】
試薬：（ａ）ＨＣｌ（３２％）、ＨＣＨＯ（３７％）、０→室温；（ｂ）Ｎ‐メチルプロパルギルアミン（Ｍｅ２ＣＨ）２ＮＥｔ、ＣＨＣｌ３、室温。
【００９２】
１４．６ｇ（０．１ｍｏｌ）の８‐キノリノール、水中１６ｍＬの３２％ＨＣｌ、および０℃の水中１６ｍＬ（０．１ｍＬ）の３７％ホルムアルデヒドの混合物を、６時間、塩化水素ガスによって処理した。撹拌せずに、２時間室温でこの溶液を放置させた。得られた黄色の固形物をフィルタに収集し、９０％アルコールによって洗浄し、真空下で乾燥し、５‐クロロメチル‐８‐キノリノール塩酸塩Ａ（１９．０ｇ、９８％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ,ＣＤＣ１３，δ）５．３２（ｓ，２Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｍ，１Ｈ），９．１２（ｍ，１Ｈ），９．２８（ｍ，１Ｈ)。
【００９３】
０℃の５０ｍＬ ＣＨＣｌ３中５‐クロロメチル‐８‐キノリノール塩酸塩Ａ（２．７０７ｇ、１１．８ ｍｍｏｌ）と、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；２．１ｍＬ、２０．４ ｍｍｏｌ、２等量）の混合物に、Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギルアミン（１０．２ ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。この混合物を、室温で２４時間撹拌した。ＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）を加え、得られた溶液を、５％ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍＬ）、ブライン（２×５０ｍＬ）によって洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶液をろ過し、蒸発させて乾燥した。残渣を、ベンゼン‐ヘキサン（１：１）の混合物から結晶化して、Ｍ３０（８０％の収率）を得た：融点２３２℃から２３３℃（塩酸塩）；１Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣ１３，δ）２．３０（ｄｄ，Ｊ＝２．１５，２．１４ Ｈｚ,１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），３．２７（ｄ，Ｊ＝２．２０Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．７２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝７．７３Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．５２ ４．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．５２， １．４７ Ｈｚ，１Ｈ），８．７６（ｄｄ，Ｊ＝４．０１，１．５０ Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ中塩酸塩，δ）４２．４６，４７．５４，５６．３５，７４．１８，８３．７７，１１８．２２，１１９．１７，１２５．８３，１３１．６３，１３２．０６，１３８．９６，１４５．４６，１４５．９７，１５２．２０；質量スペクトル：Ｃ１４Ｈ１４Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２４９．２７，実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２４９．２３。
【００９４】
実施例２．Ｍ３０のエステルの合成
Ｍ３０のエステルの合成は、下記のように本明細書で説明される：
【００９５】
【化７】
2013536190.tif 000008
【００９６】
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中１等量のＭ３０および１．１等量のトリエチルアミン（ＴＥＡ）の溶液を、窒素雰囲気下で、ＴＨＦ中対応する酸塩化物（例えば、Ｒ＝‐ＣＨ３、塩化アセチル）の１等量の溶液に、滴下することによって処理する。終了（ＴＬＣまたはＨＰＬＣ分析）後、この混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、酢酸エチルと水の間で分配する。有機相を、硫酸マグネシウムによって乾燥し、減圧下で蒸発させる。粗生成物を、結晶化またはカラムクロマトグラフィによって精製する。
【００９７】
このようにして、次に示すエステルを、次に示す群を８位に有して調製することができる：‐ＯＣＯＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＯＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＯＣＨ２ＯＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＣ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ３）、‐ＯＣＯＣＨ＝ＣＨＰｈ、‐ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＯＣＦ３、‐ＯＣＯＣＨ２ＣＯ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ２Ｏ２ＣＣＨ３、‐ＯＣＯ（４‐メトキシフェニル）、‐ＯＣＯ（２‐チエニル）、‐ＯＣＯ（２‐フリル）、‐ＯＣＯシクロプロピル、‐ＯＣＯシクロペンチル、‐ＯＣＯ（５‐メチルイソオキサゾリル）、‐ＯＣＯ（２‐クロロピリド‐５‐イル）、および‐ＯＣＯ（４‐モルホリニル）。
【００９８】
実施例３．Ｍ３０のアミノ酸エステルの合成
Ｍ３０のアミノ酸エステルの合成は、下記のように本明細書で説明される：
【００９９】
【化８】
2013536190.tif 000009
【０１００】
Songら（J. Med. Chem., 2005, 48, 1274-1277）の手順を用いて、ｔ‐ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護アミノ酸（５等量）、Ｎ，Ｎ’‐ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ；５等量）、および４‐ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；０．５等量）を、２４時間室温で、乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でＭ３０（１等量）と反応させる。この反応物をろ過し、ＤＭＦを減圧下で除去する。残渣を酢酸エチル中に溶解し、水およびブラインによって洗浄する。有機質層を、硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下で濃縮する。精製を、カラムクロマトグラフィによって行う。アスパラギン酸およびグルタミン酸の場合、ｔ‐ブチル保護ベータおよびガンマカルボキシル酸をそれぞれ利用する。精製された生成物を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：ジクロロメタン（ＤＣＭ）［１：１］によって処理する。４時間後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を水によって再構成し、凍結乾燥する。
【０１０１】
このようにして、次に示すＭ３０のアミノ酸エステルを、次に示す群を８位に有して調製することができる：‐ＯＣＯＣＨ２（ＮＨ２）、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＯＨ、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＳＨ、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＯＮＨ２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２Ｐｈ、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（４‐ＯＨＰｈ）、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２‐ＣＯ２Ｈ、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（３‐インドリル）、‐ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２（４‐イミダゾリル）、および‐ＯＣＯ（２‐ピロリジニル）。
【０１０２】
実施例４．Ｍ３０のエーテルの合成
Ｍ３０のエーテル誘導体の合成は、下記のように本明細書で説明される：
【０１０３】
【化９】
2013536190.tif 000010
無水エタノール中Ｍ３０の溶液を、１．１等量のナトリウムメトキシドによって処理する。１０分後、エタノール中対応するアルキルヨウ化物１．２等量を加える。この溶液を１時間還流する。この溶液を冷却させ、水を加え、また、得られた溶液を氷浴で冷却する。得られた結晶生成物をろ過によって収集する。
【０１０４】
このようにして、次に示すＭ３０のエーテルを、次に示す群を８位に有して調製することができる：‐ＯＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＮ、‐ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＨ２ＣＯ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＯ２Ｈ、‐ＯＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、‐ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＨ３、および‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ2ＯＨ。
【０１０５】
実施例５．Ｏ‐メチルＭ３０の合成
Ｏ‐メチルＭ３０（Ｍ３０のエーテル誘導体）塩酸塩の合成は、下記のように本明細書で説明される：
【０１０６】
【化１０】
2013536190.tif 000011
【０１０７】
トリメチルシリル（ＴＭＳ）ジアゾメタン（４．２ｍＬ、８．４ ｍｍｏｌ、５等量）を、Ｍ３０（５００ｍｇ、１．７ ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．０ｍＬ、５．９ ｍｍｏｌ、３．５等量）、無水アセトニトリル（ＡＣＮ；１８ｍＬ）、および無水ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）の溶液に加えた。この反応物を、室温で一晩撹拌した。揮発物を蒸発させ、得られた残渣を、ヘキサン（異性体の混合物）中５０％から１００％の酢酸エチルによってシリカゲル上で精製した。生成物画分をプールし、濃縮して、黄色の油を得、これをジクロロメタン（ＤＣＭ）中に溶解し、ジオキサン（０．４ｍＬ）中４Ｍ ＨＣｌによって処理した。この溶液を濃縮し、室温、真空下で、乾燥した：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，δ）９．３２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），９．１３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．８および５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），４．２３（ｓ，３Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２６（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１５Ｈ１６Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１３，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１。
【０１０８】
実施例６．Ｍ３０の炭酸塩の合成
Ｍ３０の炭酸塩の合成は、下記のように本明細書で説明される：
【０１０９】
【化１１】
2013536190.tif 000012
【０１１０】
ＴＨＦ中１等量のＭ３０および１．１等量のＴＥＡの溶液を、窒素雰囲気下で、ＴＨＦ中対応するクロロギ酸（例えば、Ｒ＝ＣＨ３、クロロギ酸メチル）の１等量の溶液に、滴下することによって処理する。得られた溶液を、水性重炭酸ナトリウムによって洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させる。粗生成物を、結晶化またはカラムクロマトグラフィによって精製する。
【０１１１】
このようにして、次に示すＭ３０の炭酸塩を、次に示す群を８位に有して調製することができる：‐ＣＯＯＣＨ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＯＯ（ＣＨ２）３ＣＨ３、‐ＯＣＯＯ（ＣＨ２）４ＣＨ３、‐ＯＣＯＯ（ＣＨ２）７ＣＨ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＯＯＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＯＯＣＨＣｌＣＨ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＣｌ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＦ３、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、‐ＯＣＯＯＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＯＯＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、‐ＯＣＯＯＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、‐ＯＣＯＯシクロペンチル、‐ＯＣＯＯシクロヘキシル、‐ＯＣＯＯ（４‐トルイル）、‐ＯＣＯＯ（４‐メトキシフェニル）、‐ＯＣＯＯ（４‐フルオロフェニル）、‐ＯＣＯＯ（４‐ニトロフェニル）、‐ＯＣＯＯ（４‐ニトロベンジル）、および‐ＯＣＯＯ（２‐イソプロピル‐５‐メチルシクロヘキシルメチル）。
【０１１２】
実施例７．Ｍ３０のアシルオキシメチル誘導体の合成
Ｍ３０のアシルオキシメチル誘導体の合成は、下記のように本明細書で説明される：
【０１１３】
【化１２】
2013536190.tif 000013
【０１１４】
SkjaeretとBenneche（ARKIVOC, 2001, 16-25）の手順を用いて、ＤＭＦ中Ｍ３０を、Ｎ２下、０℃で、１．１等量の水素化ナトリウム、および１等量のヨウ化ナトリウムに加える。１５分間撹拌後、１．３等量のクロロメチルメチルスルフィドを滴下する。この混合物を常温で１０時間撹拌し、氷／水を加え、生成物をジエチルエーテルによって抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させる。粗生成物Ｂ（上に示す）を、蒸留、再結晶化、またはフラッシュクロマトグラフィによって精製し、化合物ＢをＤＣＭ中に溶解し、Ｎ２下、０℃まで冷却し、ＤＣＭ中１等量の塩化スルフリルの滴下によって処理する。この混合物を１０分間撹拌した後、減圧下で蒸発させる。次いで、粗生成物Ｃ（上に示す）をＴＨＦ中に溶解し、ＴＨＦ中適切なカルボン酸のナトリウム塩（１．１等量）によって処理する。３時間後、この混合物を氷水に注ぎ、この混合物を酢酸エチルによって抽出し、合わせた抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発させる。粗アシルオキシメチル化合物を、蒸留、再結晶化、またはフラッシュクロマトグラフィによって精製する。
【０１１５】
このようにして、次に示すＭ３０のアシルオキシメチル誘導体を、次に示す群を８位に有して調製することができる：‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＯＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ＝ＣＨＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ＝ＣＨＰｈ、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＦ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯＣＨ２ＣＯ２ＣＨ３、‐ＯＣＨ２ＯＣＯ（４‐メトキシフェニル）、‐ＯＣＨ２ＯＣＯ（２‐チエニル）、‐ＯＣＨ２ＯＣＯ（２‐フリル）、‐ＯＣＨ２ＯＣＯシクロプロピル、‐ＯＣＨ２ＯＣＯシクロペンチル、‐ＯＣＨ２ＯＣＯ（５‐メチルイソオキサゾリル）、および‐ＯＣＨ２ＯＣＯ（２‐クロロピリド‐５イル）。
【０１１６】
実施例８．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノ）メチル］‐７‐メチル‐キノリン‐８‐オール（本明細書において、化合物１と称する）としても知られている、７‐メチル‐５‐［（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）メチル]‐８‐キノリノールの合成
【０１１７】
【化１３】
2013536190.tif 000014
【０１１８】
この合成は、出発物質として８‐キノリノールの代わりに、７‐メチル‐８‐キノリノールを使用するＭ３０の合成についての実施例１に説明するものと同一である。
【０１１９】
実施例９．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノ）メチル］‐７‐フルオロ‐キノリン‐８‐オール（本明細書において、化合物２と称する）としても知られている、７‐フルオロ‐５‐［（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）メチル]‐８‐キノリノールの合成
【０１２０】
【化１４】
2013536190.tif 000015
【０１２１】
この合成は、出発物質として８‐キノリノールの代わりに、７‐フルオロ‐８‐キノリノールを使用するＭ３０の合成についての実施例１に説明するものと同一である。
【０１２２】
実施例１０．
５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノエチル）］‐キノリン‐８‐オールジヒドロクロリド（本明細書において、化合物３のジヒドロクロリドと称する）としても知られている、５‐［２‐(メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールジヒドロクロリドの合成
【０１２３】
【化１５】
2013536190.tif 000016
【０１２４】
塩化水素ガスを、撹拌しながら、０℃で６時間、８‐キノリノール（２０ｇ、１３８ ｍｍｏｌ）、水性ホルムアルデヒド（３７％、２５ｍＬ）、および濃塩酸（３７％、２５ｍＬ）の混合物によって泡立たせた。撹拌を停止し、反応混合物を室温で一晩置いた。得られた固形物をろ過し、室温、真空下で乾燥して、黄色の固形物の化合物Ａを得た。
【０１２５】
９０℃の無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；１７ｍＬ）中化合物Ａ（１．５ｇ、６．６ ｍｍｏｌ、５等量）の溶液を、９５℃の無水ＤＭＳＯ（２５ｍＬ）中シアン化ナトリウム（ＮａＣＮ；１．６ｇ、３３ ｍｍｏｌ）の溶液に徐々に注いだ。この反応物を１時間、アルゴン下で、９０℃で撹拌し、次いで、室温まで冷却させた。この反応物を、濃塩酸の滴下、その後の水性水酸化ナトリウムによる中和によって、酸性化した。この混合物を０℃に冷却し、得られた沈殿物をろ過し、水によって洗浄し、乾燥した。得られた固形物を、ベンゼンから再結晶化し、ヘキサンによって洗浄し、真空下で乾燥して、褐色の固形物の化合物Ｂを得た。
【０１２６】
濃塩酸（３７％、２０ｍＬ）中化合物Ｂ（１．０ｇ、５．４ ｍｍｏｌ）の懸濁液を、３時間撹拌しながら、１００℃に加熱した。揮発物を蒸発させ、得られた固形物（化合物Ｃ）を、室温、真空下で一晩乾燥した。
【０１２７】
ボラン‐ＴＨＦ複合体（ＴＨＦ中１Ｍ、２０ｍＬ）を、アルゴン下で撹拌しながら、０℃で、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中化合物Ｃ（１．１ｇ、４．０７ ｍｍｏｌ）の懸濁液に徐々に加えた。この反応物を、室温まで一晩加温させ、その後、０℃に冷却し、水（１０ｍＬ）によって急冷し、重炭酸ナトリウム水溶液によってわずかに塩基性にした。揮発物を蒸発させ、得られた固形物を、ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨによって粉砕した。この混合物をろ過し、ろ液を濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン中２０％から８０％の酢酸エチルによってシリカゲル上で精製した。化合物ＤのＬＣ／ＭＳによる精製画分を、プールし、濃縮し、室温、真空下で一晩乾燥した。
【０１２８】
塩化チオニルを、無水ＤＣＭ（３ｍＬ）中化合物Ｄ（１００ｍｇ、０．５３ ｍｍｏｌ）の溶液に加え、この混合物を、３時間撹拌しながら、６０℃に加熱した。この混合物を蒸発させて乾燥し、得られた固形物を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。ヨウ化ナトリウム（７９ｍｇ、０．５３ ｍｍｏｌ、１等量）、ＤＩＰＥＡ（０．９２ｍＬ、５．３ ｍｍｏｌ、１０等量）、およびＮ‐メチルプロパルギルアミン（１．３２ｍＬ、１６ ｍｍｏｌ、３０等量）を加えた。この反応混合物を９５℃まで４時間加熱し、その後、室温まで冷却させた。揮発物を蒸発させ、得られた残渣を、ＤＣＭ中０％から１０％ＭｅＯＨによってシリカゲル上で精製した。生成物画分を濃縮して、黄色の油を得、これをＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解し、ジオキサン（１ｍＬ）中４Ｍ ＨＣｌによって処理した。沈殿物をろ過し、６０℃、真空下で乾燥し、５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノール（本明細書において、化合物３のジヒドロクロリドと称する）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，δ）９．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．８および１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．０９（ｄｄ，Ｊ＝５．２および１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．８および５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ）,４．３０（ｓ，２Ｈ），３．５７（ｍ，４Ｈ），３．４６（ａｐｐ ｔ，Ｊ＝２．８および２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１５Ｈ１６Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１３，測定値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１。
【０１２９】
実施例１１．５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノール（化合物３）、および５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールクエン酸塩（化合物３のクエン酸塩）の代替的合成
【０１３０】
【化１６】
2013536190.tif 000017
【０１３１】
ニトロベンゼン（４６０ｍＬ）中８‐キノリノール（９７．０ｇ、０．６７ｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下、０℃で、クロロアセチルクロリド（５５．８ ｍＬ、０．７０１ｍｏｌ）を加えた（懸濁液が形成した）。塩化アルミニウム（１６０ｇ、１．２０ｍｏｌ）を数部加え、懸濁液が透明になった。この反応混合物を１００℃で３５時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、６Ｎ ＨＣｌ（４５０ｍＬ）、氷（６００ｇ）、およびメチルｔ‐ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、８００ｍＬ）の氷冷混合物に注いだ。黄色の沈殿物をろ過し、ＭＴＢＥ（〜５００ｍＬ）によって洗浄し、乾燥した。得られた固形物（アルミニウム複合体）を、１２Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）に加え、室温で３日間撹拌した。この混合物をろ過し、得られた固形物を酢酸エチルによって洗浄し、次いで、１０％ＮａＯＡｃ水溶液（ｐＨ＝６、〜２Ｌを製造するのに十分な）と撹拌し、緑色の懸濁液を得、これをろ過した。得られた緑色の固形物を、ジクロロメタン（ＤＣＭ、１．８Ｌ）中に溶解し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過した。容積を〜５００ｍＬまで減少させ、黄色の固形物を得、これをろ過し、ＭＴＢＥによって洗浄し、乾燥し、黄色の固形物の５８．５ｇ（３８．５％）の化合物Ａを得た。
【０１３２】
０℃に冷却したアルゴン下で、化合物Ａ（２７．３ｇ、０．１２３ｍｏｌ）に、トリフルオロ酢酸（２７０ｇ）を加え、その後、トリエチルシラン（１９６ｍＬ、１．２３ｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温まで加温し、その後、６０℃で２２時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、濃縮し、減圧下、３４℃から４０℃で、乾燥した。透明な油を暗色の生成物から移し、エーテルによって粉砕した。得られた固形物をろ過し、エーテルによって洗浄し、乾燥し、黄色の固形物の３４．２ｇ（８６．４％）の化合物Ｂを得た。
【０１３３】
密封可能な反応チューブ中の無水アセトニトリル（１３０ｍＬ)中化合物Ｂ（１２．０ｇ、３７．３ ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＫＩ（６．１０ｇ、３７．３ ｍｍｏｌ）、およびＮ‐メチルプロパルギルアミン（１５ｇ、２２０ ｍｍｏｌ）を加えた。チューブを密封し、混合物を１００℃で３６時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３（２５０ｍＬ）の間で分配した。水層を、ＤＣＭによって２回抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインによって洗浄し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、クロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン１％中ＮＨ４ＯＨ、５０％から１００％）によって精製し、黄色の固形物の化合物３（４．４ｇ、５０％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６，δ）９．５４（ｓ，１Ｈ），８．８４（ｄｄ，Ｊ＝４．０および１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．４および１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．４および４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，１Ｈ），３．１０（ｍ，２Ｈ），２．６１（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ）。
【０１３４】
透明な溶液が達成される（〜１時間）まで、ＥｔＯＨ（７ｍＬ）中化合物３（３．００ｇ、１２．５ ｍｍｏｌ）とクエン酸（２．４０ｇ、１２．５ ｍｍｏｌ）の混合物を、６５℃から７５℃で加熱した。この反応混合物を、水浴を使用して、室温まで徐々に冷却し、塩を徐々に形成させた。溶媒を移し、固形物を真空下で乾燥して、薄褐色の固形物の５．１６ｇ（９５％）の化合物３のクエン酸塩（１：１）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６，δ）９．５８（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄｄ，Ｊ＝４．０および１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．４および１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝８．４および４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｍ，２Ｈ），２．７５（オーバーラップｄおよびｍ，４Ｈ），２．６３（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１５Ｈ１６Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１３，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１。
【０１３５】
実施例１２．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノプロピル）］‐キノリン‐８‐オール（化合物４）ジヒドロクロリドとしても知られている、５‐［３‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）プロピル］‐８‐キノリノール塩酸塩の合成
【０１３６】
【化１７】
2013536190.tif 000018
【０１３７】
塩化水素ガスを、撹拌しながら、０℃で６時間、８‐キノリノール（化合物ａ；２０ｇ、１３８ ｍｍｏｌ）、水性ホルムアルデヒド（２５ｍＬ）、および濃塩酸（３７％、２５ｍＬ）の混合物によって泡立たせた。撹拌を停止し、反応混合物を室温で一晩置いた。得られた黄色の固形物をろ過し、室温、真空下で乾燥して、化合物ｂを得た。
【０１３８】
マロン酸ジエチル（１０ｍＬ、６６ ｍｍｏｌ、５等量）を、撹拌しながら、０℃で、無水ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中ナトリウムエトキシド（２１重量％、３９ ｍｍｏｌ、３等量（１４．７ｍＬ））の溶液に滴下した。化合物ｂ（３．０ｇ、１３ ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を２時間、室温まで加温させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた残渣を水および酢酸エチルによって溶解した。層を分離し、水層を酢酸エチルによって２回抽出した。合わせた有機層を水によって２回、ブラインによって１回洗浄し、減圧下で濃縮した。物質を、ヘキサン中１０％から３０％の酢酸エチルを用いて、シリカゲル上のクロマトグラフィによって精製した。生成物画分をプールし、減圧下で濃縮し、得られた白色の固形物を乾燥し、化合物ｃを得た。
【０１３９】
水（１５ｍＬ）中水酸化カリウム（９．３ｇ）の溶液を化合物ｃ（３．０ｇ、９．４６ ｍｍｏｌ）に加え、この反応混合物を、週末の間、室温で撹拌した。濃ＨＣｌによって、反応物のｐＨを４から５に調整し、水（２０ｍＬ）で希釈した。得られた黄色の沈殿物をろ過し、水によって洗浄し、真空下で乾燥し、化合物ｄを得た。
【０１４０】
化合物ｄを１８０℃に加熱し、バブラーに１時間放出させ、次いで、アルゴン下で、室温まで冷却させ、化合物ｅを得た。
【０１４１】
塩化チオニル（９．０ｍＬ）中化合物ｅ（１．０ｇ、４．６ ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で０．５時間撹拌し、次いで、揮発物を減圧下で蒸発させた。得られた黄色の固形物を、０℃で無水ＤＣＭ（５ｍＬ）と撹拌し、次いで、無水ＥｔＯＨ（９ｍＬ）中水素化ホウ素ナトリウム（０．５２ｇ、１４ ｍｍｏｌ、３等量）の溶液を加えた。反応混合物を室温まで１時間加温させ、その後、水によって急冷した。水性混合物を、ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨによって３回抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインによって洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。物質を、ヘキサン中２０％から６０％の酢酸エチルを用いて、シリカゲル上のクロマトグラフィによって精製した。生成物画分を減圧下で濃縮し、得られた白色の固形物を真空下で乾燥し、化合物ｆを得た。
【０１４２】
塩化チオニル（３ｍＬ）を、化合物ｆ（１００ｍｇ、０．４９ ｍｍｏｌ）に加え、この懸濁液を、４時間撹拌しながら、４０℃から５０℃に加熱した。この混合物を減圧下で蒸発させ、得られた固形物を無水ＡＣＮ（２．５ｍＬ）と撹拌した。ヨウ化ナトリウム（７４ｍｇ、０．４９ ｍｍｏｌ、１等量）、ＴＥＡ（０．６９ｍＬ、４．９ ｍｍｏｌ、１０等量）、およびＮ‐メチルプロパルギルアミン（１．２３ｍＬ、１５ ｍｍｏｌ、３０等量）を加えた。この反応混合物を、７０℃まで一晩加熱し、次いで、室温まで冷却させた。揮発物を減圧下で蒸発させ、得られた残渣を、ＤＣＭ中０％から１０％のＭｅＯＨによってシリカゲル上で精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、黄色の油を得、これをＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解し、ジオキサン（０．５ｍＬ）中４Ｍ ＨＣｌによって処理した。沈殿物をろ過し、ＤＣＭによって洗浄し、室温、真空下で乾燥し、５‐［３‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）プロピル］‐８‐キノリノールジヒドロクロリド（本明細書において、化合物４のジヒドロクロリドと称する）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，δ）９．３９（ｄｄ，Ｊ＝８．８および１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．６および１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．８および５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ）,７．４３（ｄ,Ｊ＝８．０Ｈｚ,１Ｈ）,４．１５（ｂｒ ｍ，２Ｈ），３．４４‐３．３５（ｂｒ ｍ，２Ｈ），３．３９（ａｐｐ ｔ，Ｊ＝２．８および２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ａｐｐ ｔ，Ｊ＝８．０および７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｍ，２Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５５．１５，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５５．１。
【０１４３】
実施例１３．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（１‐アミノエチル）］‐８‐キノリノール（化合物５）ジヒドロクロリドとしても知られている、５‐［１‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノール塩酸塩の合成
【０１４４】
【化１８】
2013536190.tif 000019
【０１４５】
メタノール（４５０ｍＬ）中８‐キノリノール（１５ｇ、１０３ ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１５．５ｇ、１０３ ｍｍｏｌ、１等量）、および水酸化ナトリウム（４．１ｇ、１０３ ｍｍｏｌ、１等量）の溶液を、３０分間、窒素でパージし、次いで、−３０℃に冷却した。次亜塩素酸ナトリウム（水中５％）（１４９ｍＬ）を、５０分間滴下し、この反応混合物を、−３０℃でさらに１時間撹拌した。冷水浴を除去し、反応物を１０％水性塩化水素によって中和した。得られた固形物をろ過し、水によって洗浄し、乾燥し、固形物を得、メタノールおよび水から再結晶化し、化合物ｂを得た。
【０１４６】
アルゴン下で、無水ジクロロメタン（ＤＣＭ）中化合物ｂ（７．５ｇ、２８ ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（３．０ｇ、４４ ｍｍｏｌ、１．５等量）、およびｔｅｒｔ‐ブチルジメチルシリル塩化物（ＴＢＳＣ１；６．９ｇ、４６ ｍｍｏｌ、１．６等量）を加えた。この反応混合物を室温で３日間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭで希釈し、有機物を飽和水性塩化アンモニウム、水、ブラインによって洗浄し、次いで、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液をろ過し、濃縮した。得られた残渣を、ヘキサン中０％から３％の酢酸エチルによってシリカゲル上で精製した。化合物ｃの精製画分をプールし、濃縮し、室温、真空下で乾燥した。
【０１４７】
無水トルエン中化合物ｃ（６．２ｇ、１６ ｍｍｏｌ）、およびトリブチル（１‐エトキシビニル）スズ（６．５ｍＬ、１９ ｍｍｏｌ、１．２等量）の溶液を、５分間、アルゴンでパージした。テトラキス‐（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．９３ｇ、０．８０ ｍｍｏｌ、０．０５等量）を加え、この反応混合物を、密封チューブに２日間、１０５℃から１１２℃に加熱した。この反応混合物をセライトによってろ過し、トルエンによって洗浄し、濃縮した。得られた残渣を、ＴＨＦ（５０ｍＬ）および３Ｎ ＨＣ１（３６ｍＬ）中でとり、室温で一晩撹拌した。この反応物を、固体重炭酸ナトリウムによってｐＨ＝８に調整し、ＤＣＭによって３回抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過し、濃縮した。物質を、ＤＣＭ中０％から３％のＭｅＯＨを用いて、シリカゲル上のクロマトグラフィによって精製した。クロマトグラフィに使用したＭｅＯＨは、２％の水性水酸化アンモニウムを含んでいた。生成物画分を濃縮し、得られた固形物ｄを真空下で乾燥した。
【０１４８】
０℃、アルゴン下で、無水ＭｅＯＨ中化合物ｄ（３００ｍｇ、１．６ ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（３０３ｍｇ、８．０ ｍｍｏｌ、５等量）を加えた。この反応混合物を室温まで加温させ、０．５時間撹拌した。この反応混合物を水によって急冷し、ｐＨを７から８に調整し、揮発物を蒸発させた。得られた残渣を、ＤＣＭ中２０％ＭｅＯＨによって粉砕し、固形物をろ過し、次いで、ろ液を濃縮し、真空下で乾燥した。得られた固形物を、５５℃で１．５時間、塩化チオニル（５ｍＬ）と撹拌し、次いで、揮発物を蒸発させた。得られた固形物を、０℃で、無水クロロホルム（１２ｍＬ）と撹拌した。Ｎ‐メチルプロパルギルアミン（１．１ｍＬ、１６ ｍｍｏｌ、１０等量）を滴下し、この反応混合物を、室温、アルゴン下で一晩撹拌した。揮発物を蒸発させ、得られた残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）によって粉砕した。沈殿物をろ過し、ろ液を無水硫酸ナトリウムで脱水した。ＤＣＭ溶液をろ過し、ジオキサン（０．６ｍＬ）中４Ｍ ＨＣｌによって処理した。沈殿物をろ過し、真空下で乾燥し、固形物を得、これを、トルエン、ＡＣＮ、およびクロロホルムで粉砕した。固形物をろ過し、真空下で一晩乾燥し、５‐［１‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールジヒドロクロリドを得た（本明細書において、化合物５のジヒドロクロリドと称する）：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，δ）９．４０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），９．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．２および１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．８および５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６５，（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｍ，１Ｈ），３．１９（ａｐｐ ｔ，Ｊ＝２．８および２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｂｓ ｓ，３Ｈ），１．９０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１５Ｈ１６Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１３，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４１．１。
【０１４９】
実施例１４．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノエチル）］‐７‐メチル‐８‐キノリノール（化合物６）としても知られている、７‐メチル‐５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールの合成
７位で置換された化合物３の同族体を生成する合成法が開発されている。フルオロ類似体を除いて、類似体はすべて、一般的な中間体を介して利用可能になり得る。これらの類似体への合成経路を、下記のスキームに示す。
【０１５０】
【化１９】
2013536190.tif 000020
【０１５１】
【化２０】
2013536190.tif 000021
【０１５２】
合成は、容易に利用可能な５，７‐ジブロモ‐８‐メトキシキノリン（ａ）と、メチルブロモアセタート由来のレフォルマトスキー試薬とのパラジウムに触媒されたカップリングで開始する。少なくともアリールボロン酸とａのSuzukiのカップリングのための５位酢酸塩ｂ対７位の形成についての先行文献がある（J. Heterocyclic Chem., 1995, 32, 1261-1267）。官能基操作によって、一般的なｔ‐Ｂｏｃ保護中間体アミンｅが生じる。エテニル基（ｆ、Ｒ＝ＣＨ＝ＣＨ２）、２‐プロペニル基（ｆ、Ｒ＝Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、およびシクロプロピル基（ｆ、ｃ‐Ｃ３Ｈ５）を、適切なボロン酸とｅのSuzukiのカップリングによって導入し、トリメチルアルミニウムに触媒されたカップリングは、メチル類似体f、Ｒ＝ＣＨ３を提供する（Advanced Synthesis and Catalysts, 2006, 348, 686-690）。２つのオレフィン類似体の還元は、エチル（ｇ、Ｒ＝ＣＨ２‐ＣＨ３）、およびイソプロピル（ｇ、Ｒ＝ＣＨ（ＣＨ３）２）類似体を提供する。ｔ‐Ｂｏｃ基の除去、プロパルギルブロミドによるアルキル化、およびメチルエーテルの除去によって、合成が終了する。
【０１５３】
同様の方法で、７‐フルオロ類似体の合成は、７‐フルオロ‐８‐キノリノールのＮＢＳ臭素化、およびメチル化によって利用可能な５‐ブロモ‐７‐フルオロ‐８‐メトキシキノリン（ｊ）から開始する（J. Med. Chem., 1972, 15, 987-989と、その引用文献）。また、この経路を使用して、Ｒが‐ＣＨ３、‐ＣＨ２ＣＨ３、‐ＣＨ（ＣＨ３）２、‐ｃ‐Ｃ３Ｈ５、または５‐ブロモ‐８‐メトキシキノリン（ｊ、Ｒ＝Ｈ）から開始する‐Ｆである化合物を調製することもできる。
【０１５４】
【化２１】
2013536190.tif 000022
【０１５５】
【化２２】
2013536190.tif 000023
【０１５６】
実施例１５．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノエチル）］‐７‐シクロプロピル‐８‐キノリノール（化合物７）としても知られている、７‐シクロプロピル‐５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールの合成
【０１５７】
【化２３】
2013536190.tif 000024
【０１５８】
室温のＤＣＭ（６ｍＬ）中化合物Ａ（実施例１１に提供する手順によって調製した、６４２ｍｇ、２．０ ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、トリエチルアミン（０．６０ｍＬ、４．０ ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ‐ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、４１６ｍｇ、２．４ ｍｍｏｌ）を１部加えた。得られた褐色の懸濁液を、室温で２時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインによって洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、残渣を、１０％から３０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の４４０ｍｇ（７６．９％）の化合物Ｂを得た。
【０１５９】
室温のＤＣＭ（５ｍＬ）中化合物Ｂ（２５０ｍｇ、０．８７ ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（１７８ｍｇ、２．６２ ｍｍｏｌ）、およびｔ‐ブチルジメチルシリル塩化物（ＴＢＳＣ１、１９６ｍｇ、１．３１ ｍｍｏｌ）を加えた。
室温で１６時間撹拌後、この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、ブラインによって洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、０％から１０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の３００ｍｇ（８６．５％）の化合物Ｃを得た。
【０１６０】
化合物Ｃ（２２０ｍｇ、０．５５ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（３７ｍｇ、０．１０ ｍｍｏｌ）、および２‐ジシクロヘキシルホスフィノ‐２’，６’‐ジメトキシビフェニル（ＳＰｈｏｓ、４５ｍｇ、０．２０ ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、乾燥バイアルに加えた。バイアルに、ＴＨＦ（３．３０ｍＬ、１．６５ ｍｍｏｌ）中シクロプロピル亜鉛ブロミド(cyclopropyl zinc bromide)の０．５Ｍ溶液を充填した。この反応混合物を、５分間、アルゴンによって脱気し、密封し、その後、６０℃で２時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、ブラインによって洗浄した。有機層を減圧下で濃縮した。得られた残渣を、０％から１０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の化合物Ｄ（１７８ｍｇ、９０．８％）を得た。
【０１６１】
密封可能なバイアル中の化合物Ｄ（２４０ｍｇ、０．６６ ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（２．５ｍＬ）の懸濁液に、Ｎ‐メチルプロパルギルアミン（３６５ｍｇ、５．３ ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、１００℃で３０時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮し、得られた残渣を、３０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の化合物Ｅ（１８０ｍｇ（６９．２％））を得た。
【０１６２】
無水ＴＨＦ（４ｍＬ）中化合物Ｅ（１８０ｍｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（２．５ｍＬ、２．５ ｍｍｏｌ）中１．０Ｍテトラ‐ｎ‐ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）を加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、減圧下でシロップ状になるまで濃縮し、５０％の酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の化合物７（４７ｍｇ、３３．５％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣ１３，δ）８．７４（ｄｄ，Ｊ＝４．０および１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝８．４および４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），３．４８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．１１（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｓ，１Ｈ），１．０６（ｍ，２Ｈ），０．８３（ｍ，２Ｈ）；質量スペクトル，Ｃ１８Ｈ２１Ｎ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８１．１６，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８１．０。
【０１６３】
実施例１６．５‐［Ｎ‐メチル‐Ｎ‐プロパルギル（アミノエチル）］‐７‐フルオロ‐８‐キノリノール（化合物８）、および７‐フルオロ‐５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールジヒドロクロリド（化合物８の２ＨＣｌ）としても知られている、７‐フルオロ‐５‐［２‐（メチル‐２‐プロピン‐１‐イルアミノ）エチル］‐８‐キノリノールの合成
【０１６４】
【化２４】
2013536190.tif 000025
【０１６５】
密封可能な反応容器中の２‐アミノ‐６‐フルオロフェノール（４．０ｇ、３１．６ ｍｍｏｌ）およびニトロベンゼン（２０ｍＬ）の溶液に、硫酸（４．０ｍＬ）を数部加えた。グリセロール（１２．０ｇ、１２６ ｍｍｏｌ）を１部加え、溶液は暗褐色に変化した。容器を窒素によって洗浄し、密封し、１４０℃まで６時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、３０ｍＬの氷/水混合物で希釈し、メチルｔ‐ブチルエーテル（ほとんどのニトロベンゼンを除去する）によって３回洗浄した。水相を、６Ｎ ＮａＯＨを徐々に添加することによって、ｐＨ＝６から７に中和した。得られた黒色沈殿物を収集し、水溶液を酢酸エチルによって３回抽出した。有機抽出物を黒色沈殿物と合わせ、減圧下で濃縮し、０％から１０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭによってシリカゲルカラム上で精製し、灰白色の固形物の２．６７ｇ（５１．７％）の７‐フルオロ‐８‐キノリノールを得た。
【０１６６】
室温の酢酸（１０ｍＬ）中臭素（２．３４ｇ、１４．７ ｍｍｏｌ）の溶液を、酢酸（３０ｍＬ）中７‐フルオロ‐８‐キノリノール（２．０ｇ、１２．２ ｍｍｏｌ）の溶液に徐々に加えた。褐色の反応混合物を、室温で１６時間撹拌し、その後、この混合物を飽和重亜硫酸ナトリウムによって急冷した。得られた混合物を、メチルｔ‐ブチルエーテルによって３回抽出した。合わせた有機相を、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインによって洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮して乾燥し、緑色の固形物の３．０ｇ（９７．０％）の５‐ブロモ‐７‐フルオロ‐８‐キノリノールを得た。
【０１６７】
室温のＤＣＭ（２０ｍＬ）中５‐ブロモ‐７‐フルオロ‐８‐キノリノール（１．１２ｇ、４．６０ ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（６８０ｍｇ、１０．０ ｍｍｏｌ）、およびＴＢＳＣ１（９００ｍｇ、６．０ ｍｍｏｌ）を添加した。２時間後、室温で、反応混合物をＤＣＭ（６０ｍＬ）で希釈し、ブラインによって洗浄し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、０％から１０％の酢酸エチル／ヘキサンによってシリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の１．５０ｇ（９１．５％）の化合物Ａを得た。
【０１６８】
化合物Ａ（１．１２ｇ、３．１４ ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（２０８ｍｇ、０．６２ ｍｍｏｌ）、およびＳＰｈｏｓ（２５４ｍｇ、０．６２ ｍｍｏｌ）を、窒素下で、乾燥バイアルに充填した。このバイアルに、ＴＨＦ中０．５Ｍの（１，３‐ジオキソラン‐２‐イルメチル）亜鉛ブロミド((l,3-dioxolan-2-ylmethyl)zinc bromide)（１０．５ｍＬ、６．２８ ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、５分間、窒素によって脱気した。得られた暗褐色の混合物を６０℃で２時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチル（４０ｍＬ）で希釈し、ブラインによって洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、０％から５０％の酢酸エチル／ヘキサンによってシリカゲルカラム上で精製して、白色の固形物の１．１０ｇ（９５．８％）の化合物Ｂを得た。
【０１６９】
ＴＨＦ（５ｍＬ）中化合物Ｂ（１．１０ｇ、３．０ ｍｍｏｌ）の溶液に、３．０Ｍ ＨＣｌ（２５ｍＬ）を加えた。３時間後、室温で、反応混合物を、メチルｔ‐ブチルエーテルによって３回洗浄した。酸性水相をｐＨ〜７に中和し、ＤＣＭによって３回抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮して乾燥し、黄色の固形物の５７０ｍｇ（９２．６％）の化合物Ｃを得た。
【０１７０】
メタノール（３．０ｍＬ）中化合物Ｃ（１０２ｍｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）に、Ｎ‐メチルプロパルギルアミン（８２．５ｍｇ、１．５０ ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（６２．８ｍｇ、１．５０ ｍｍｏｌ)を１部加え、室温で３時間撹拌した。この反応混合物を、飽和アンモニウム塩酸塩によって急冷し、ＤＣＭによって３回抽出した。合わせた有機抽出物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を、５０％から１００％の酢酸エチル／ヘキサンによってシリカゲルカラム上で精製し、淡黄色の固形物の化合物８（４１ｍｇ、３２％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣ１３，δ）８．７２（ｄｄ，Ｊ=４．０および１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．４および４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，ＪＨＦ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．０８（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｂｒ ｓ，３Ｈ），２．２７（ｂｒ ｓ，１Ｈ）；質量スペクトル， Ｃ１５Ｈ１５ＦＮ２Ｏｍ／ｚの計算値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５９．１２，実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５９．０。
【０１７１】
エーテルのＨＣｌ（２．０Ｍ、０．２ｍＬ、０．４ ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）中化合物８（３４ｍｇ、０．１３ ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。３０分後、室温で、混合物を減圧下で濃縮して乾燥し、緑色の固形物の化合物８のジヒドロクロリド（４２ｍｇ、９６％）を得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ，δ）９．１３（ｄ，Ｊ＝８．４ｈｚ，１Ｈ），９．０６（ｄ，Ｊ＝５．２ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄｄ，Ｊ＝８．４および５．２ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，ＪＨＦ＝１１．６ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝２．４ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｂｒ ｓ，４Ｈ），３．１６（ｔ，Ｊ＝２．４ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ)。
【０１７２】
実施例１７．水溶液におけるＭ３０および誘導体の安定性
Ｍ３０は、特有の神経薬理特性を有するが、化合物は、水溶液において不安定でもある。Ｍ３０のこの水溶液での不安定性は、Ｎ‐メチルプロパルギルアミン部分のフェノールヒドロキシル支援ソルボリシス型の喪失によるものであると考えられた。この反応は、一般酸／一般塩基に触媒され、これは、Ｍ３０の不安定性が、すべてのｐＨにわたってみられることを示唆する。この可能性の正確性は、Ｍ３０、化合物３、化合物４、および、本明細書で［Ｏ‐メチル‐化合物３］と同定され、水溶液において安定性があると予想された、８‐メトキシ‐Ｎ‐メチル‐Ｎ‐２‐プロピン‐１‐イル‐５‐キノリンエタンアミン、ならびに、４番目に安定性があると予想され、Ｍ３０のベンジルメチレンでメチル基の追加が含まれ、Ｍ３０自体ほど安定性がないと予想された、Ｍ３０誘導体、５‐（１‐（メチル（プロパ‐２‐イニル）アミノ）エチル）キノリン‐８‐オールに関する水溶液での安定性の試験結果に強く支持される。試験結果は、各化合物の予想結果と正確に一致した（下の表１）。
【０１７３】
化合物３、４、および［Ｏ‐メチル‐化合物３］の水溶液での安定性を、確認し、表１に示した。高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を使用して、それぞれの試験化合物の安定性を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）および／または０．８５％食塩水（塩化ナトリウム）のいずれか一方において、経時的にそれぞれの化学的性質を追跡することによって決定した。各事例において、ＰＢＳまたは食塩水中０．５ｍＭ試験化合物を、２５℃または３７℃で２０時間、一部の事例において、最大２日（４８時間）インキュベートした。
【０１７４】
表１．水溶液におけるＭ３０および誘導体の安定性
【表１】
2013536190.tif 000026
【０１７５】
化合物３および４、ならびに［Ｏ‐メチル‐化合物３］は、ＰＢＳおよび食塩水中で、室温で、少なくとも２日間、化学的に非常に安定していた。また、［Ｏ‐メチル‐化合物３］も、ＰＢＳ中で、３７℃で、少なくとも２日間、安定していた。Ｍ３０は、ＰＢＳおよび食塩水で共に分解した。５‐（１‐（メチル（プロパ‐２‐イニル）アミノ）エチル）キノリン‐８‐オールは、２５℃で、ＰＢＳ中ですぐに分解した。したがって、Ｍ３０における安定性の増加は、特許請求の範囲を支持する。
【０１７６】
さらに、追跡試験で、Ｍ３０の不安定性と、化合物３、７および８の安定性も、ＰＢＳ中で、３７℃で確認した（下の表２）。
【０１７７】
表２．Ｍ３０と化合物３、７および８の安定性
【表２】
2013536190.tif 000027
【０１７８】
ＩＩ  生物学の節：
方法
（ａ）金属結合特性
８‐キノリノールが鉄の強いキレート剤であり、銅における鉄の高い選択性を有することが知られている。脳中の過剰な鉄蓄積およびフリーラジカルの鉄媒介発生が、神経変性疾患に関係すると考えられるので、これは、抗酸化型薬剤の重要な必須条件である。したがって、銅における鉄の高い選択性を有するキレート剤のみが、銅の代わりに、鉄をキレート化し、潜在的な神経保護効果を有すると予想される。抗酸化能を有する、８‐キノリノールとその誘導体のキレート化特性間の考えられる相関性、および、抗酸化能を有する、該その誘導体と、最良に確立された鉄キレート剤（デスフェラル）の間の相関性について論じるために、新規に合成された化合物の安定化定数の信頼できる測定が必要である。分光光度法を、化合物の鉄錯体安定化定数の測定に用いる。
【０１７９】
（ｂ）ミトコンドリアの単離
雄のスプレーグドーリーラット（３００ｇ〜３５０ｇ）の首を切断し、脳をすぐに単離し、０．２５Ｍスクロース、２ｍＭ ＥＤＴＡ、および脂肪酸を含まない２％ウシ血清アルブミンを含む、氷冷等張１０ｍＭトリス‐ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５）（単離バッファー）中で冷却し、１：１０（ｗ／ｖ）の比の単離バッファー中で、モーター（ハイドルフ(Heidolf)社製、ドイツ）を備えた５０ｍＬガラス‐テフロン（登録商標）ホモジナイザーによって、２００ｒｐｍでホモジェネートする。ホモジェネートを、１０，０００ｇで１０分間遠心分離し、次いで、上清を、１０００ｇで１０分間遠心分離する。ペレットを、１０ｍＭトリス‐ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロースによって洗浄し、１０，０００ｇで１０分間遠心分離する。その後、この工程をさらに３回繰り返す。ペレットを１０ｍＭトリス‐ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．２５Ｍスクロース中で、１ｍＬ当たり５０ｍｇから６０ｍｇのタンパク質の最終濃度で、再懸濁させる。試料を、使用するまで、−１８℃で保存する。
【０１８０】
（ｃ）脂質過酸化の阻害
式Ｉの化合物のラジカル捕捉特性／抗酸化特性を、脂質過酸化アッセイによって決定することができる。この系を用いて、抗酸化剤が、フリーラジカル損傷から生体脂質を保護する能力について測定した。
【０１８１】
鉄およびアスコビル酸塩によって生じる、脂質過酸化を阻害する化合物の能力を、マロンアルデヒド手法（Gassenらの文献：1996, Eur. J. Pharmacol. 308(2): 219-25；Ben-Shacharらの文献：1991, J Neurochem, 56: 1441-1444）を用いて、脳ミトコンドリア調製物で検討する。
【０１８２】
試験を３回行う。７．５μΜのミトコンドリア調製物（０．２５ｍｇのタンパク質）を、２５ｐＭアスコルビン酸を含む、７５０μΜの２５ｍＭトリス‐ＨＣｌ（ｐＨ７．４）中で懸濁させる。試験する薬剤の試料を、水またはエタノール中に溶解し、これを懸濁液に加えた。この反応を、２．５μΜまたは５μΜのＦｅＳＯ４（１ｍＭ原液からのもの）の添加、および室温で２時間のインキュベーションによって、開始する。反応を、７５０μＬの２０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）の添加によって停止する。試料を、１２，０００ｇで１０分間、遠心分離する。５００μＬの上清を、５００μＬの０．５％（ｗ／ｖ）ＴＢＡと混合し、９５℃まで３０分間加熱する。ＴＢＡ誘導体の吸収を、λ＝５３２ｎｍにて測光器で測定する。ブランクの分析は、ミトコンドリアもしくはＦｅＳＯ４の放出、またはインキュベーション後の薬剤の添加に基づく。
【０１８３】
（ｄ）神経保護効果
鉄キレート剤の神経保護効果を、インビボ系とインビトロ系の両方で決定する。
【０１８４】
インビトロ試験において、ラット褐色細胞腫型１２（ＰＣ１２）細胞、およびヒト神経芽腫ＳＨ‐ＳＹ５Ｙ細胞を使用して、鉄およびベータ‐アミロイド毒性に応じるキレート剤の神経保護作用を検討する。細胞生存率を、２，５‐ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）試験、および乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）試験で試験し、また、これらの細胞が、ドーパミンおよびコリン作動性ニューロンのモデルとして使用されるので、ＨＰＬＣによって、ドーパミンおよびチロシンヒドロキシラーゼを測定し、ウエスタンによって、アルファ‐アミロイド（可溶性）の放出を測定する。
【０１８５】
インビボでの保護を、線条体ドーパミン、およびチロシンヒドロキシラーゼ（ドーパミンニューロンのマーカー）を測定することによって、１‐メチル‐４‐フェニル‐１，２，３，６‐テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）パーキンソン病（ＰＤ）動物モデル（神経変性の非常に生存可能で確立されたモデル）で試験する。
【０１８６】
（ｅ）ＰＣ１２細胞培養
ラット褐色細胞腫由来のラットＰＣ１２細胞を、３７℃、湿度５％、ＣＯ２９５％の大気環境で、グルコース（１ ｍｇ／ｍＬ）、５％ウシ胎仔血清、１０％ウマ血清、および１％のストレプトマイシン／ペニシリンの混合物を添加した、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、GIBCO、BRL社製）を含む増殖培地で、増殖させる。集密状態において、培養物を取り出し、細胞を激しい洗浄によって分離し、２００ｇで５分間、遠心分離し、十分な血清含量のＤＭＥＭ中で再懸濁させる。１ウエル当たり０．５×１０４細胞を、コラーゲンを予めコーティングしたマイクロプレート（９６穴）に入れる。
【０１８７】
（ｆ）細胞生存率のためのＭＴＴ試験
（ｆ）に説明するように、ＰＣ１２細胞接着２４時間後に、培地を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＤＭＥＭに代える。試験化合物を、１時間のインキュベーション後に細胞に加える。２４時間のインキュベーション後、細胞を、過去に説明されていたように（Gassenらの文献：1998, Movement Disorders 13:242-248）、ＭＴＴ試験に供する。吸収を、バックグランドの読取りの自動減算後に、λ＝５７０／６５０ｎｍにて、パーキン‐エルマー２重波長イライザ‐リーダー(Perkin-Elmer Dual Wavelength Eliza-Reader)で決定する。結果を、未処理の対照の割合として表す。
【０１８８】
（ｇ）スクリーニングアッセイ
第１段階‐経口利用可能性：スクリーニングアッセイのうち、式Ｉの各化合物の経口利用可能性を、例えば、げっ歯動物の迅速な経口評価を用いて行う。各試験物質、および、場合により、特定の代謝物質において、簡単な抽出、およびＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ（ＡＰＩ４０００）の分析法を、血漿安定性を評価する簡単な試験によって、開発する。試験物質を、水、食塩水、トゥイーン、ＰＥＧ、または、類似する一般的なビヒクルのいずれかで調製する。一方の性別の健康な３匹のラットに、経口強制給飼によって、所定レベル（１０ ｍｇ／ｋｇから２０ ｍｇ／ｋｇの範囲と考えられる）で、同時に投与する。その後、血液を、４つの時間点（１、２、４および８時間）で、または、必要に応じて、これより多く採取する。血漿試料（試験物質当たり１２）を調製し、ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳによって分析する。ＰＫパラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（ファルサイト(Pharsight)社製）を使用して評価する。
【０１８９】
第２段階‐ＰＫパラメーター：式Ｉの化合物（または活性代謝物質）が、経口で利用可能である（少なくとも１５％の吸収）ことが分かったら、ＰＫパラメーターを、各誘導体、およびＭ３０自体のＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ法（上述のとおり）を用い、式Ｉの選択した化合物（および活性代謝物質）について、ラットで評価する。ＰＫ試験は、試験物質当たり６匹の一方の性別のカニューレを挿入したラットを使用し、これらのうちの３匹は、１回のみ静脈内に投与し、経口強制給飼によって３回投与する。投与後、血液を、各ラットにつき７つの時間点（０．５、１、２、４、６、８および１２時間）、および、静注経路（５、１５および３０分、ならびに１、２、４、６、８および１２時間）によって処置した各ラットにつき９つの時間点で採取する。血漿を調製し、経口利用可能性スクリーニングにおけるように、分析を行う。ＰＫパラメーター（Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、Ｖｄ、ＡＵＣ、およびバイオアベイラビリティ）を、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（ファルサイト(Pharsight)社製）を使用し、非コンパートメント解析を用いて、個々の動物で決定する。
【０１９０】
（ｈ）局所光防御
本発明の鉄キレート剤によって提供される局所光防御のレベルを決定するために、モルモットを、試験化合物によって局所的に処置し、次いで、種々の量のＵＶ放射に曝露させて、日焼け止指数（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物によって局所的に処置し、次いで、紅斑線量未満(suberythemal dose)のＵＶ放射に長期間曝露させる。マウスを、皮膚のしわ発生および皮膚腫瘍について評価する。
【０１９１】
別の試験において、モルモットを、試験化合物、日焼け止め、およびこれらの２つの組合せによって局所的に処置し、次いで種々の量のＵＶ放射に曝露させて、日焼け止指数（ＳＰＦ）を決定する。無毛マウスを、試験化合物、日焼け止め、およびこれらの２つの組合せによって局所的に処置し、次いで、紅斑線量未満のＵＶ放射に長期間曝露させる。マウスを、皮膚のしわ発生および皮膚腫瘍について評価する。
【０１９２】
実施例１８．インビトロにおけるＭＡＯ阻害活性の決定
脳ＭＡＯの調製
ラットの首を切断し、脳を、秤量した氷冷スクロースバッファー（０．３２Ｍ）中に、迅速に採取し、これらの重量を測定した。その後の手順をすべて０℃で行う。脳を、テフロン（登録商標）ガラスホモジナイザーで、０．３２Ｍスクロース中（２０部のスクロースに対して１部の組織）でホモジェネートし、その後、１０％の最終濃度のホモジェネートとなるまで、スクロースバッファーを加える。ホモジェネートを、６００ｇで１５分間、遠心分離する。上清画分を取り出し、４５００ｇで３０分間、遠心分離し、ペレットを０．３２Ｍスクロースバッファーで希釈し、その後のＭＡＯの分析のために、凍結したままにする。タンパク濃度を、標準にＢＳＡを使用して、λ＝５９５ｎｍにて、ブラッドフォード試薬によって決定する。
【０１９３】
鉄キレート剤によるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害
ＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの活性を、種々の濃度の試験化合物とのインキュベーション後のラット脳ホモジェネートにおいて、インビトロで決定する。
【０１９４】
化合物のインビトロでの阻害活性を、ラット脳ＭＡＯ‐Ｂに対して試験する。試験化合物を、１０−７Ｍクロルギリンを含むバッファーに加え、３７℃で３０分または６０分間、組織ホモジェネートとインキュベートし、その後、１４Ｃ‐ＰＥＡを加える。
【０１９５】
ＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの活性を、TiptonとYoudimの適応法（Tipton K F, O'Sullivan J, Youdim M B, 1983、「神経科学専門事典(Encyclopedia of Neuroscience)」, 2004, G. AdelmanおよびB. H. Smith, Elsevier）によって決定した。試験化合物を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中酵素調製物（ＭＡＯ‐Ｂアッセイで７０μｇのタンパク質、およびＭＡＯ‐Ａアッセイで１５０μｇのタンパク質）の適切な希釈液に加えた。この混合物を、０．０５Ｍデプレニル／セレギリン（ＭＡＯ‐Ｂの特異的な阻害剤）（ＭＡＯ‐Ａ決定用）、または０．０５Ｍクロルギリン（ＭＡＯ‐Ａの特異的な阻害剤）（ＭＡＯ‐Ｂ決定用）と共にインキュベートした。インキュベーションを、３７℃で０．５時間または１時間行い、その後、ＭＡＯ‐Ａの決定のために、１４Ｃ‐５‐ヒドロキシトリプタミンビノキサレート(14C-5-hydroxytryptamine binoxalate)（５‐ＨＴ）（１００μＭもしくは４００μΜ）、またはＭＡＯ‐Ｂの決定のために、１４Ｃ‐フェニルエチルアミン（１４Ｃ‐ＰＥＡ）（１００μＭもしくは４００μΜ）を加え、それぞれ、３０分もしくは２０分間、インキュベーションを継続した。反応を、２Ｍ氷冷クエン酸によって停止し、代謝物質を抽出し、ｃｐｍ単位で液体‐シンチレーション計数によって決定した。
【０１９６】
実施例１９．Ｏ‐メチル‐Ｍ３０によるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害
Ｏ‐メチル‐Ｍ３０のＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害能を、ＭＡＯ‐Ｂの強力で特異的な公知の阻害剤である、ラサギリンと比較した。ラサギリン（アジレクト（Azilect）（登録商標）；アギレクト（Agilect）（登録商標））は、パーキンソン病の治療に使用する認可された薬剤である。パーキンソン病患者の近年の大規模な臨床研究では、ラサギリンは、疾患改善の可能性を有することが分かった。Ｏ‐メチル‐Ｍ３０および対照ラサギリンの試料を、ラット脳抽出物と共にインキュベートした。線条体モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）活性を、Grunblattら（2001, J Neurochem., 77: 146-56）に過去に説明されていたように、ＭＡＯ‐Bの基質として１４Ｃ‐ＰＥＡを使用して決定した。具体的には、ＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの活性を、次に示す改良を伴う、TiptonおよびYoudim（2004,「神経科学専門事典(Encyclopedia of Neuroscience)」, G. AdelmanおよびB. H. Smith, Elsevier）に従って、評価した：ラット脳領域、肝臓および小腸の１５０μｇまたは７０μｇのタンパク質ホモジェネートの３通りを、ＭＡＯ‐Ａの基質として、１４Ｃ‐５ＨＴ（１００μΜ）と共に、３０分間、（最終濃度１００μΜ）、または、ＭＡＯ‐Ｂの基質として、１４Ｃ‐フェニルエチルアミンと共に、２０分間、（最終濃度１０μΜ）、それぞれ、インキュベートした。ＭＡＯ‐ＡまたはＭＡＯ‐Ｂの決定において、脳ホモジェネートを、基質添加前に、３７℃で１時間、７５ｎＭ １‐デプレニルまたは７５ｎＭクロルギリンと共にそれぞれ、プレインキュベートした。反応を、２Ｍ氷冷クエン酸で停止し、代謝物質を酢酸エチルによって抽出し、放射能のレベルを、ＣＰＭ単位で液体‐シンチレーション計数によって決定した。すべてのアッセイを、少なくとも２回行い、結果を平均±ＳＥＭとして表した。データを、スチューデントのｔ検定によって分析した。偏差は、０．０５のｐ値で統計的に有意であると考えられた。結果を表３に示す。
【０１９７】
表３．Ｏ‐メチル‐Ｍ３０によるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害
【表３】
2013536190.tif 000028
【０１９８】
Ｏ‐メチル‐Ｍ３０が、明らかに同様のレベルに、脳ＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂを共に阻害することは明らかである。この阻害活性は、親Ｍ３０の活性と一致している。対照的に、ラサギリンは、ＭＡＯ‐Ｂを非常に強く阻害するが、ＭＡＯ‐Ａは、予想どおり、弱い阻害である。
【０１９９】
実施例２０．Ｏ‐メチル‐Ｍ３０、化合物３および４によるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの阻害
ＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの活性を、放射性基質を使用して測定した。ＭＡＯ‐Ａの基質は５ＨＴであり、ＭＡＯ‐Ｂの基質はＰＥＡであった。ＭＡＯ‐Ａの活性を測定する場合、ＭＡＯ‐Ｂ活性は、デプレニルによって阻害され、また、ＭＡＯ‐Ｂの活性を測定する場合、ＭＡＯ‐Ａの活性は、クロルギリンによって阻害された。ブランクの試料を、ＴＣＰを使用して作製し、両酵素を抑制した。代謝物質をトルエンによって抽出し、β‐カウンターで読み取った。結果を相対活性で表し、組織中のタンパク質の量に正常化する。図１および２は、種々の濃度（１０−５から１０−８）の化合物３、４およびＯ‐メチル‐Ｍ３０のＭＡＯ‐Ａ／ＭＡＯ‐Ｂ活性を示す。図１および２に示すように、化合物３、４、およびＯ‐メチル‐Ｍ３０がすべて、ラット脳から抽出されたＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂの強力な阻害剤であり、化合物３が、明らかに、３つの化合物の中で最も強力な阻害剤であったことを理解することができる。
【０２００】
図１のデータ（ｌｏｇ規模を想定）から、化合物３のＭＡＯ‐Ａ ＩＣ５０は、約７０ｎＭから９０ｎＭか、またはこれより良好であり、化合物４のＭＡＯ‐Ａ ＩＣ５０は、約２００ｎＭであり、また、Ｏ‐メチル‐M３０のＭＡＯ‐Ａ ＩＣ５０は、約２５０ｎＭから３００ｎＭであると推定することができる。比較において、Ｍ３０のＭＡＯ‐Ａ ＩＣ５０は、３７ｎＭであり、ラサギリン（アジレクト(Azilect)（登録商標））のＭＡＯ‐Ａ ＩＣ５０は、４１０ｎＭである。
【０２０１】
化合物３、４、Ｏ‐メチル‐Ｍ３０、Ｍ３０、およびラサギリンのＩＣ５０データを、表４に概説する。
【０２０２】
表４．インビトロでのＭＡＯ阻害データ
【表４】
2013536190.tif 000029
【０２０３】
実施例２１．化合物３によるＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂのインビトロでの阻害
ＭＡＯ‐Ａ阻害試験において、マウス（各群において６匹のマウス）に、５ ｍｇ／ｋｇまたは１０ ｍｇ／ｋｇの用量で化合物３、または、１０ ｍｇ／ｋｇの用量でＭ３０を腹腔内に(i.p.)注射した。対照マウスに食塩水（０．１ｍＬ）を腹腔内に注射した。１時間後、マウスを頸部脱臼によって屠殺し、線条体および小腸を迅速に取り出し、詳細な分析のために液体窒素で凍結した。図３および４は、Ｍ３０の活性と比較した、化合物３のＭＡＯ‐Ａ／ＭＡＯ‐Ｂのインビボ活性を示す。図３は、線条体におけるＭＡＯ阻害を示し、図４は、腸におけるＭＡＯ阻害を示す。阻害率を、対照動物との比較に基づいて算出した。
【０２０４】
化合物３の単回投与後、処置した動物の脳のＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂが共に、用量反応的に阻害され、該化合物が、脳組織に浸透することができ、標的酵素を阻害できたことを示すことを理解することができる。さらに、１０ ｍｇ／ｋｇの阻害のレベルは、Ｍ３０を動物に投与する場合にみられたものとほぼ同一であった。参照において、神経毒性の試みに関連する、種々の生化学および挙動パラメーターの顕著な改善を、１ ｍｇ／ｋｇの低い用量のＭ３０を経口または腹腔内で投与した動物でみることができることが報告されている。さらに、線条体に加えて、Ｍ３０は、脳の海馬および皮質中のＭＡＯアイソザイムレベルを阻害することが報告されている。ドーパミン、セロトニン、および他の神経伝達物質のレベルの増加を提供するので、両ＭＡＯアイソザイムの阻害能は、重要な結果である。
【０２０５】
また、ＭＡＯアイソザイムの腸の阻害も、化合物３およびＭ３０を共に使用して測定した（図４）。線条体組織に対する腸組織の阻害の低減が、化合物３およびＭ３０で共にみられた。さらに、化合物３の結果は、１０ ｍｇ／ｋｇの用量でＭ３０結果と再度一致した。これらの分析から、脳から採取した化合物３も、Ｍ３０およびＯ‐メチル‐Ｍ３０の知見と一致し、脳において、臨床的に適切であるのに十分なレベルのＭＡＯ‐ＡおよびＭＡＯ‐Ｂを共に阻害できることを、結論付けることができる。
【０２０６】
実施例２２．インビトロでの化合物３の血漿安定性
化合物３の安定性をヒト血漿で評価した。ヒト血漿を、商用源（バイオレクラメーション(Bioreclamation)社、イーストメドウ、ニューヨーク州）から購入した。血漿を、抗凝血剤としてフッ化ナトリウム／シュウ酸カリウムを使用して収集された血液から調製した。血漿を、使用前に−２０℃で保存した。血漿を使用するために解凍したら、〜４０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、新しいチューブに移し、沈殿物を除去した。血漿のｐＨを７．４に調整した。化合物３を血漿試料に加えて、１０μΜの最終濃度を達成し、水浴での〜３７℃のインキュベーションのために、必要な少数の維持チューブ（各時間点で３通りのチューブ）に分配した。インキュベーションを、冷却したアセトニトリルを３容量添加することによって、０、１および６時間で終了した。遠心分離後、上清を、ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ分析に供した。試験物質の安定性を、１時間および６時間のピーク面積と０時間のピーク面積とを比較することによって、評価した。結果を表５に示す。表５によれば、化合物３の投与後６時間は、血漿（９３％）が依然として含まれ、この化合物が、血漿において安定していることを示唆した。
【０２０７】
表５．ヒト血漿における化合物３の安定性
【表５】
2013536190.tif 000030
【０２０８】
実施例２３．化合物３のインビトロ細胞毒性(cytoxicity)
式Ｉの複数の選択された化合物の各々の急性インビトロ細胞毒性を決定する。細胞毒性を、関連化合物（例えば、ＤＦＯ）の細胞毒性と比較する。
【０２０９】
化合物３の細胞毒性を、２つの標準細胞系統（ヒト肝細胞癌由来のＨｅｐＧ２、およびヒト神経芽腫由来のＳＨ‐ＳＹ５Ｙ）を使用して、超過鉄の存在下、およびこれがない状態で、インビトロで評価した。
【０２１０】
ＨｅｐＧ２細胞を、１０％ウシ胎仔血清と、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、２ｍＭ Ｌ‐グルタミン、およびペニシリン／ストレプトマイシンとを添加した、最小必須培地（ＭＥＭ）で、〜５％ＣＯ２、３７℃で、９５％の相対湿度で維持した。ＳＨ‐ＳＹ５Ｙ細胞を、１０％ウシ胎仔血清と、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、２ｍＭ Ｌ‐グルタミン、およびペニシリン／ストレプトマイシンとを添加した、最小必須培地（ＭＥＭ）とＦＫ１２Ｋ培地の混合物（１：１、ｖ：ｖ）で、〜５％ＣＯ２、３７℃で、９５％の相対湿度で維持した。細胞を２日から３日ごとに二次培養し、１×１０４の細胞／ウエルの密度で、組織培養処理乳白色９６穴プレートに入れ、分析開始前に、〜５％ＣＯ２、３７℃で、９５％の相対湿度で一晩、インキュベートした。
【０２１１】
１００倍の最終濃度の試験物質の一連のＤＭＳＯ原液を、新しい培地で１：１００に希釈した（ＤＭＳＯの最終濃度は１％であった）。平板培養した細胞から培地を除去し、試験物質またはタモキシフェンを最終濃度０．０１μＭから１０００μΜ含む１００μＬの培地と３回交換した。細胞を含まないウエルを、バックグランド対照として使用した。タモキシフェンを公知の正の対照として使用し、ＤＭＳＯ単独をビヒクル対照として使用した。細胞を、〜５％ＣＯ２、３７℃で、９５％の相対湿度で４時間、インキュベートした。
【０２１２】
細胞生存率を、ルミネセンスによってＡＴＰレベルを決定するために、市販キットを使用して、決定した。簡潔には、キットのバッファーおよび凍結乾燥基質を、室温に平衡に維持した。バッファーを使用して、細胞プレートのウエルへの添加（ウエル当たり１００μＬ）直前に、基質を再構成した。プレートを、テカンインフィニット(Tecan Infinite)Ｍ２００プレートリーダーに入れ、１０分間撹拌し、１０分間の待機後、減衰させずに、０．５秒の積分時間を用いて読み取った。
【０２１３】
平均ベースライン対照（細胞なしのウエル）を、全ルミネセンスから減じて、正味ルミネセンスを得た。試験物質によって処理した細胞の平均ルミネセンスを、ＤＭＳＯ単独によって処理したものと比較した。ＬＣ５０を、ビヒクル対照によって処理した細胞と比較して、ルミネセンスシグナルを５０％減少させる、化合物３の濃度と定義した。
【０２１４】
また、遊離鉄の存在下で有毒である化合物３の潜在能も、試験した。鉄の錯化法は、一部の改良を伴う、LeandersonとTagessonの方法（Carcinogenesis, 17, 545-550, 1996）に基づいた。鉄（III）を、無菌蒸留水中８０ｍＭクエン酸鉄アンモニウム（シグマ(Sigma)社製、F5879）から調製した。化合物３を、ＤＭＳＯ中で、２００ｍＭの濃度で調製した。各試験前に、新しく調製した鉄（III）溶液を、ＰＢＳＩＩ（０．９０ｍＭ Ｃａ２＋および０．４９ｍＭ Ｍｇ２＋を含むＰＢＳ）中で、０．４ｍＭに希釈した。化合物３原液を、ＰＢＳＩＩによって、２ｍＭ、０．２ｍＭ、および０．０２ｍＭに希釈した。０．４ｍＭ鉄（ＩＩＩ）溶液および化合物３溶液の等量を共に加えて、１ｍＭ、０．１ｍＭ、および０．０１ｍＭの化合物３、および０．２ｍＭ鉄（ＩＩＩ）を含む、鉄／試験物質複合溶液を調製した。化合物３ＤＭＳＯ原液を、１ｍＭ、０．１ｍＭまたは０．０１ｍＭで、ＰＢＳＩＩ中で希釈し、鉄のない状態の化合物３対照として使用した。０．４ｍＭ鉄（III）溶液の等量を、ＰＢＳＩＩ中で希釈して、鉄のみを含む対照を調製した。
【０２１５】
培地を、平板培養した細胞（両方の細胞系統）から除去し、新しい培地（９０μＬ）と代えた。鉄／化合物３複合物、または鉄を含まないＰＢＳＩＩ中化合物３を、化合物３の最終濃度が１００μＭ、１０μＭ、および１μΜ、および鉄（ＩＩＩ）の最終濃度が２０μＭとなるように、３通り（１０μＬ）、細胞に加えた。細胞を含まないウエルをバックグランド対照として使用した。ＰＢＳＩＩをビヒクル対照として使用した。鉄のみを、２０μΜの最終濃度で使用した。細胞を、５％のＣＯ２、３７℃で、９５％の相対湿度で４時間、インキュベートした。
【０２１６】
上述するように、細胞生存率を決定し、細胞毒性を、鉄錯化と鉄錯化なしの処理間で比較した。
【０２１７】
図５Ｂおよび６Ｂは、ＨｅｐＧ２およびＳＨ‐ＳＹ５Ｙにおける、化合物３の細胞毒性を開示する。ＳＨＳＹ‐５ＹおよびＨｅｐＧ２細胞における化合物３のＬＣ５０は、タモキシフェン対照の約５０μΜの各細胞系統のＬＣ５０と比較して、それぞれ、８６５μΜ、および１，０００μΜ超であった。
【０２１８】
また、ＨｅｐＧ２およびＳＨＳＹ‐５Ｙ細胞における化合物３と遊離鉄の組合せの細胞毒性も、２０μΜの外因性鉄濃度を用いて評価した。参照において、種々の細胞種の細胞質ゾルまたはミトコンドリア中の遊離鉄またはキレート性鉄の濃度が、４μＭから１２μΜであることが報告されている。試験において、２０μＭの外因性鉄は、細胞毒性がなく、化合物３単独でも細胞毒性はなかった。鉄の存在下で、非常に高い濃度の化合物３（１００μΜ）でのみ、観察された相当の細胞毒性であった（図７および８を参照）。化合物３の濃度が１μΜでの外因性鉄の存在下で、死んだＨｅｐＧ２細胞の画分は、４．８％のみであり、ＳＨＳＹ‐５Ｙ細胞は１００％生存していた。
【０２１９】
結論として、化合物３は、処置に適切な濃度において細胞毒性ではない。さらに、細胞毒性試験の結果は、Ｍ３０による過去に行われたものと比較して、非常に優れている。方法は同一ではなかったが、それにもかかわらず、化合物３単独のＬＣ５０レベルが、Ｍ３０のものに非常に類似し、鉄の存在下で、化合物３の結果が、Ｍ３０のものよりも良好であったこと（表６および７）に留意することは有益である。
【０２２０】
表６．Ｍ３０と化合物３の細胞毒性の比較
【表６】
2013536190.tif 000031
【０２２１】
表７．外因性鉄の存在下、およびこれがない状態におけるＭ３０および化合物３の細胞毒性
【表７】
2013536190.tif 000032
【０２２２】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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