(57)【要約】【課題】新たな植物由来のヒアルロニダーゼ活性阻害剤、及びそれを配合した保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤を提供する。【解決手段】アメリカハマグルマ抽出物、アナアオサ抽出物、イジュ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、モモタマナ抽出物、メヒルギ抽出物、ホンダワラ抽出物、シマヤマヒハツ抽出物、ギンネム抽出物、スダジイ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、オキナワキョウチクトウ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヤエヤマカズラ抽出物、フダンソウ抽出物、シマアザミ抽出物、ニガナ抽出物、タンカン抽出物、パパイヤ抽出物、ドラゴンフルーツ抽出物、ミズイモ抽出物、スイゼンジナ抽出物、シマラッキョウ抽出物、クビレズタ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有するヒアルロニダーゼ活性阻害剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アメリカハマグルマ抽出物、アナアオサ抽出物、イジュ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、モモタマナ抽出物、メヒルギ抽出物、ホンダワラ抽出物、シマヤマヒハツ抽出物、ギンネム抽出物、スダジイ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、オキナワキョウチクトウ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヤエヤマカズラ抽出物、フダンソウ抽出物、シマアザミ抽出物、ニガナ抽出物、タンカン抽出物、パパイヤ抽出物、ドラゴンフルーツ抽出物、ミズイモ抽出物、スイゼンジナ抽出物、シマラッキョウ抽出物、クビレズタ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項２】
前記植物抽出物が水及び／又は低級脂肪族アルコールで抽出されたものである請求項１記載のヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
前記植物抽出物が、アメリカハマグルマ抽出物、アナアオサ抽出物、イジュ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、モモタマナ抽出物、メヒルギ抽出物、及びホンダワラ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上である請求項１又は２記載のヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のヒアルロニダーゼ活性阻害剤を含むことを特徴とする保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を含有するヒアルロニダーゼ活性阻害剤、及びそれを配合した保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロン酸は、皮膚、関節液、硝子体、靭帯など生体に広く分布しており、皮膚において、細胞の接着、細胞の保護、皮膚組織の形成、組織の水分保持、柔軟性の維持などを担っている。生体内でヒアルロン酸を分解する酵素としてヒアルロニダーゼが知られているが、これによってヒアルロン酸が分解されその量が減少すると、皮膚の潤い、ハリがなくなり、皮膚の老化現象であるシワやたるみが起こるといわれている。
【０００３】
一方、ヒアルロニダーゼは炎症部位で活性の亢進が確認されているため起炎酵素としても知られている。よってヒアルロニダーゼの阻害剤は、ヒアルロン酸が過剰に分解されることを防ぐことでヒアルロン酸の減少を抑制し、老化に伴うしわやたるみを改善、予防することができるとともに、炎症の抑制の面でも期待されている。
【０００４】
そのため、皮膚外用剤や各種化粧料に、皮膚の老化防止やしわ防止作用等を期待してヒアルロニダーゼの活性を阻害する物質を配合することが提案され、従来、様々な植物由来のヒアルロニダーゼ活性阻害剤が開発されているが（特許文献１〜５）、さらに新規のヒアルロニダーゼ活性阻害剤が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−３１４５５３号公報
【特許文献２】特開２０１１−２１９３６５号公報
【特許文献３】特開２０１２−０１２３６７号公報
【特許文献４】特開２００３−３４２１８４号公報
【特許文献５】特開平５−２４６８３７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、新たな植物由来のヒアルロニダーゼ活性阻害剤、及びそれを配合した保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく検討していく中で、特定の植物から得られた抽出物に優れたヒアルロニダーゼ活性阻害効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明に係るヒアルロニダーゼ活性阻害剤は、アメリカハマグルマ抽出物、アナアオサ抽出物、イジュ抽出物、バンジロウ茎部抽出物、モモタマナ抽出物、メヒルギ抽出物、ホンダワラ抽出物、シマヤマヒハツ抽出物、ギンネム抽出物、スダジイ抽出物、フクギ抽出物、アダン抽出物、オキナワキョウチクトウ抽出物、オヒルギ抽出物、ダイジョ抽出物、ツワブキ抽出物、ヤエヤマカズラ抽出物、フダンソウ抽出物、シマアザミ抽出物、ニガナ抽出物、タンカン抽出物、パパイヤ抽出物、ドラゴンフルーツ抽出物、ミズイモ抽出物、スイゼンジナ抽出物、シマラッキョウ抽出物、クビレズタ抽出物、ヒジキ抽出物、及びモンパノキ抽出物からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物抽出物を含有するものである。
【０００９】
本発明に係る保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤は、該ヒアルロニダーゼ活性阻害剤を含有するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、上記植物抽出物がヒアルロニダーゼの活性を阻害することから、ヒアルロン酸の減少を抑制し、皮膚に潤いを保って、しわやたるみを改善、予防するとともに、炎症を抑制するヒアルロニダーゼ活性阻害剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施に関連する事項について詳細に説明する。
【００１２】
本実施形態に係るヒアルロニダーゼ活性阻害剤において、抽出原料となる植物は、アメリカハマグルマ、アナアオサ、イジュ、バンジロウ、モモタマナ、メヒルギ、ホンダワラ、シマヤマヒハツ、ギンネム、スダジイ、フクギ、アダン、オキナワキョウチクトウ、オヒルギ、ダイジョ、ツワブキ、ヤエヤマカズラ、フダンソウ、シマアザミ、ニガナ、タンカン、パパイヤ、ドラゴンフルーツ、ミズイモ、スイゼンジナ、シマラッキョウ、クビレズタ、ヒジキ、及びモンパノキから選択される少なくとも１種である。
【００１３】
アメリカハマグルマ（学名：Wedelia trilobata (L.) Hitchc.）は、中央アメリカを原産地として沖縄にも帰化植物として定着しているキク目キク亜科スファグネティコラ属に分類される多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、花部、茎部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は花部である。
【００１４】
アナアオサ（学名：Ulva pertusa Kjellman）は、アオサ目アオサ科アオサ属の緑藻であり、抽出部位は全草が好ましい。
【００１５】
イジュ（学名：Schima wallichii (DC.) Korth. subsp. noronhae (Reinw. ex Blume) Bloemb.）は、沖縄、奄美諸島等に分布するツバキ科ヒメツバキ属の常緑高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００１６】
バンジロウ（学名：Psidium guajava L.）は、フトモモ科バンジロウ属に属する熱帯性の低木であり、グアバとも称される。本実施形態では、バンジロウの茎部（即ち、幹や枝）を抽出部位として使用することを特徴とする。バンジロウ（グアバ）については、上記特許文献５に葉部の抽出物にヒアルロニダーゼ活性阻害作用があることが記載されているが、茎部の抽出物にヒアルロニダーゼ活性阻害作用があることは従来知られておらず、本発明者によりはじめて見出されたものである。
【００１７】
モモタマナ（学名：Terminalia catappa L.）は、アジアの亜熱帯や熱帯等の地域に分布するシクンシ科モモタマナ属の半落葉樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００１８】
メヒルギ（Kandelia obovata Sheue, H.Y.Liu et W.H.Yong）は、主に熱帯から亜熱帯の河口干潟に生育するヒルギ科メヒルギ属の常緑木本であり、マングローブ樹種のひとつである。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００１９】
ホンダワラ（学名：Sargassum fulvellum (Turner) C.Agardh）は、褐藻綱ホンダワラ科ホンダワラ属の海藻であり、本州、四国、九州などに分布する。抽出部位としては、例えば、茎部、葉部、全草等が挙げられ、好ましくは全草である。
【００２０】
シマヤマヒハツ（学名：Antidesma pentandrum (Blanco) Merr.）は、琉球諸島から台湾、フィリピンにかけて分布するトウダイグサ科ヤマヒハツ属の常緑低木であり、直径５ミリくらいの楕円形の実を房状につける。抽出部位としては、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は実部である。
【００２１】
ギンネム（学名：Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit）は、中南米を原産とするマメ科ネムノキ亜科ギンゴウカン属の落葉低木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２２】
スダジイ（学名：Castanopsis sieboldii (Makino) Hatus. ex T.Yamaz. et Mashiba）は、新潟県以南の地域等に分布するブナ科シイ属の常緑広葉樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は実部である。
【００２３】
フクギ（学名：Garcinia subelliptica Merr.）は、フィリピンや台湾等に分布するオトギリソウ科（又は、テリハボク科）フクギ属の常緑高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２４】
アダン（学名：Pandanus odoratissimus L.f.）は、亜熱帯から熱帯の海岸沿いに生育するタコノキ科タコノキ属の常緑小高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、実部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２５】
オキナワキョウチクトウ（学名：Cerbera manghas L.）は、アジアの熱帯から亜熱帯の地域等に生育するキョウチクトウ科ミフクラギ属の常緑亜高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２６】
オヒルギ（Bruguiera gymnorrhiza (L.) Lam.）は、熱帯および一部の亜熱帯の河口干潟に生育するヒルギ科オヒルギ属の常緑高木であり、マングローブ樹種のひとつである。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２７】
ダイジョ（学名：Dioscorea alata）は、ヤマノイモ科ヤマノイモ属に属し、アジアやオセアニア等の熱帯地域で広く栽培されるヤムイモの１種である。抽出部位としては、例えば、塊根部、茎部、葉部、地上部等が挙げられ、好ましくは塊根部である。
【００２８】
ツワブキ（学名：Farfugium japonicum (L.) Kitam）は、琉球諸島、九州、四国、本州等に分布するキク科ツワブキ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００２９】
ヤエヤマカズラ（学名：Ipomoea batatas L．）は、琉球諸島で栽培されているヒルガオ科のつる性多年草であり、抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００３０】
フダンソウ（学名：Beta vulgaris var. cicla (L.) K.Koch）は、アカザ科フダンソウ属の耐寒性一年草−二年草であり、抽出部位としては、例えば、葉部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００３１】
シマアザミ（学名：Cirsium brevicaule A.Gray）は、トカラ列島から琉球各島に分布するキク科アザミ属の多年生草本である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００３２】
ニガナ（学名：Crepidiastrum lanceolatum）は、沖縄等に生育するキク科アゼトウナ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、地上部、全草等が挙げられ、好ましくは全草である。
【００３３】
タンカン（学名：Citrus tankan Hayata）は、中国の広東省を原産地とし沖縄県等で栽培されているミカン科ミカン属の常緑樹である。抽出部位としては、例えば、葉部、果皮部、枝部等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は果皮部である。
【００３４】
パパイヤ（学名：Carica papaya）は、メキシコ南部を原産地とし主に熱帯地域で栽培されているパパイア科パパイア属の常緑小高木である。抽出部位としては、例えば、実部、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは実部である。
【００３５】
ドラゴンフルーツ（学名：Hylocereus undatus）は、サボテン科ヒモサボテン属に属するサンカクサボテンの果実であり、抽出部位としては、例えば、果実全体、果皮部、可食部等が挙げられる。
【００３６】
ミズイモ（学名：Colocasia  esculenta  schott  var. aquatilis  Kitamura）は、主に南西諸島で栽培されているサトイモ科サトイモ属の植物であり、抽出部位としては、例えば、塊茎部、葉部、全草等が挙げられ、好ましくは葉部及び／又は塊茎部である。
【００３７】
スイゼンジナ（学名：Gynura bicolor）は、熱帯アジア原産のキク科サンシチソウ属の多年草である。抽出部位としては、例えば、葉部、茎部、全草等が挙げられ、好ましくは全草である。
【００３８】
シマラッキョウ（学名：Allium chinense）は、主として沖縄で栽培されているユリ目ユリ科ネギ属の多年草であり、抽出部位は全草が好ましい。
【００３９】
クビレズタ（学名：Caulerpa lentillifera）は、南西諸島などに分布するイワズタ科イワズタ属に属する海藻であり、抽出部位は全草が好ましい。
【００４０】
ヒジキ（学名：Sargassum fusiforme (Harvey) Setchell）は、日本や朝鮮半島などに分布する褐藻類ホンダワラ科ホンダワラ属の海藻であり、抽出部位は全草が好ましい。
【００４１】
モンパノキ（学名：Heliotropium foertherianum Diane et Hilger）は、熱帯から亜熱帯の海岸に生育するムラサキ科キダチルリソウ属の常緑低木ないし小高木である。抽出部位としては、例えば、葉部、枝部、幹部等が挙げられ、好ましくは葉部である。
【００４２】
本実施形態に係る植物抽出物としては、これらの植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００４３】
抽出原料として使用する植物は、粉砕したものが適当である。また、部位によってはヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒を用いた抽出処理を効率よく行うことができる。
【００４４】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用することが好ましい。植物抽出物に含まれるヒアルロニダーゼ活性阻害効果を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。極性溶媒の具体例としては、水、水溶性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これら極性溶媒のうち、含水水溶性有機溶媒を使用することが好ましい。
【００４５】
抽出溶媒として使用し得る水溶性有機溶媒としては、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ケトン等が挙げられる。低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の炭素数１〜５の１価アルコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。低級脂肪族ケトンの具体例としては、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。水溶性有機溶媒としては、例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル、メチルセロソルブ等の中間極性溶媒を使用することもできる。
【００４６】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、含水水溶性有機溶媒を使用する場合、一価アルコール、多価アルコール、アセトン等の含有量が５０体積％以上であることが好ましい。
【００４７】
抽出溶媒としては、水及び／又は低級脂肪族アルコールを用いることが好ましく、より好ましくは水と低級脂肪族アルコールの混液であり、更に好ましくは水とエタノールの混液である。水と低級脂肪族アルコールの混液の場合、低級脂肪族アルコールの含有量が５０体積％以上であることが好ましく、より好ましくは５０〜８０体積％である。
【００４８】
抽出処理は、抽出原料である上記植物に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り、特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下において任意の装置を使用することができる。抽出方法としては、例えば、抽出溶媒中に抽出原料を長時間常温で浸漬して抽出する方法、抽出溶媒の沸点以下の温度に加熱し攪拌しながら抽出する方法、抽出溶媒の沸点付近の温度で加熱還流下にて抽出する方法等が挙げられる。
【００４９】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過、遠心分離等の処理を施して抽出残渣を除くことにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができ、これらの処理は、生理活性、すなわちヒアルロニダーゼ活性阻害効果の低下を招かない範囲で行えばよい。
【００５０】
以上のようにして得られる植物抽出物は、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果を有しており、この作用を利用してヒアルロニダーゼ活性阻害剤の有効成分として使用することができる。すなわち、本実施形態に係るヒアルロニダーゼ活性阻害剤は、上記植物抽出物を有効成分として含有するものである。また、該植物抽出物は、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果を通じて保湿作用、抗老化作用、抗炎症作用を発揮し得るので、保湿剤、抗老化剤、抗炎症剤として使用することもできる。
【００５１】
上記植物抽出物は、そのままでもヒアルロニダーゼ活性阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。植物抽出物は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００５２】
本実施形態に係るヒアルロニダーゼ活性阻害剤は、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適であり、保湿用皮膚外用剤や抗老化用皮膚外用剤、抗炎症用皮膚外用剤となる。すなわち、上記ヒアルロニダーゼ活性阻害剤を配合した皮膚外用剤は、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果を通じてヒアルロン酸の分解を抑えることができるので、ヒアルロン酸による水分保持機能を発揮させて皮膚の保湿効果を高めることができ、保湿用皮膚外用剤として利用することができる。また、ヒアルロン酸の分解を抑えることにより、皮膚のはりやつやの減少を抑えることができ、老化に伴うしわやたるみを改善、予防することができ、抗老化用皮膚外用剤として利用することができる。また、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果を通じてヒアルロニダーゼの過剰な分解を抑えることで、炎症性の皮膚疾患（例えば、湿疹、掻痒、肌荒れ等）を改善することができ、抗炎症用皮膚外用剤として利用することができる。
【００５３】
ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ジェル等が挙げられる。
【００５４】
皮膚外用剤における植物抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や植物抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、乾燥物に換算して通常０．００１〜５質量％、好ましくは０．０１〜１質量％である。配合量を０．００１質量％以上とすることにより、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果による保湿作用や抗老化作用、抗炎症作用を十分に発揮しやすくでき、また、配合量を５質量％以下とすることにより、配合量の増加分に見合ったヒアルロニダーゼ活性阻害効果を発揮させることができる。
【００５５】
本実施形態に係る保湿用、抗老化用又は抗炎症用皮膚外用剤には、上記植物抽出物が有するヒアルロニダーゼ活性阻害効果を妨げない限り、通常の皮膚外用剤の製造に用いられる主剤、助剤またはその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、清涼剤、乳化剤、増泡剤、増粘剤、消臭・脱臭剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗アレルギー剤、美白剤、酵素、ホルモン類、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、精製水などを配合することができる。
【実施例】
【００５６】
以下、実施例について説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５７】
［製造例］各植物からの抽出物の製造
イジュの葉を５０℃で一昼夜送風乾燥し、乾燥したイジュの葉５０ｇを５００ｍＬの７０％（v/v）エタノール溶液（エタノール／水の体積比＝７０／３０）に投入し、３日間室温で保った後、ろ過した。ろ液を５０℃で減圧下にて濃縮し、さらに凍結乾燥機で乾燥して粗抽出物（粉末状）を得た。得られた粗抽出物の質量は８．４ｇ（収率＝１６．８質量％）であった。
【００５８】
上記と同様にして、アメリカハマグルマの花、アメリカハナグルマの葉、アナアオサの全草、バンジロウの枝、モモタマナの葉、メヒルギの葉、ホンダワラの全草、シマヤマヒハツの実、シマヤマヒハツの葉、ギンネムの葉、スダジイの葉、スダジイの実、フクギの葉、アダンの葉、アダンの実、オキナワキョウチクトウの葉、オヒルギの葉、ダイジョの茎、ダイジョの葉、ダイジョの塊根、ツワブキの葉、ヤエヤマカズラの葉、フダンソウの葉、シマアザミの葉、ニガナの全草、タンカンの葉、タンカンの果皮、パパイヤの実（果実）、ドラゴンフルーツの可食部、ドラゴンフルーツの果皮、ミズイモの塊茎、ミズイモの葉、スイゼンジナの全草、シマラッキョウの全草、クビレズタの全草、ヒジキの全草、及び、モンパノキの葉を抽出原料として、それぞれ抽出処理を行い、粗抽出物を得た。
【００５９】
［精製例］粗抽出物の精製
粗抽出物を水に溶解し、合成吸着剤（「ダイヤイオンＨＰ−２０」三菱化学株式会社製）１００ｍＬを充填したカラムに注入した。その後、水で未吸着物質を洗浄・除去し、エタノールで溶出される画分を分画した。分画物を５０℃で減圧下にて濃縮し、さらに凍結乾燥機で乾燥して精製後の抽出物（粉末状）を得た。
【００６０】
［試験例１］ヒアルロニダーゼ活性阻害効果試験
上記で得られた沖縄産植物抽出物（粗抽出物）について、ヒアルロニダーゼ活性阻害効果を、次のようにして測定した。
【００６１】
「試薬の調製」
１．酵素溶液：ヒアルロニダーゼ（シグマ−アルドリッチ社製）８ｍｇを０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）（以下、酢酸緩衝液と略す）２ｍＬに溶解して調製した。 
２．酵素活性化液：Compound48/80（シグマ−アルドリッチ社製）２ｍｇと塩化カルシウム２水和物１５ｍｇを酢酸緩衝液４ｍＬに溶解して調製した。 
３．基質溶液：ヒアルロン酸カリウム（シグマ−アルドリッチ社製）８ｍｇを酢酸緩衝液に溶解し最終濃度を０．８ｍｇ／ｍＬに調整した。 
４．ホウ酸カリウム溶液：０．８Ｍホウ酸水溶液１００ｍＬに水酸化カリウム２．２４ｇを加えて溶解して調製した。 
５．ｐ−ＤＡＢ溶液：ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド５ｇを氷酢酸４４ｍＬ、１０Ｎ塩酸６ｍＬに溶解して調製した。使用時に氷酢酸で１０倍希釈して用いた。 
６．サンプル溶液：植物抽出物にＤＭＳＯ溶液を加えて溶解し、酢酸緩衝液にて適宜希釈後、サンプル濃度を５ｍｇ／ｍＬと１０ｍｇ／ｍＬになるように調製した。サンプル溶液中のＤＭＳＯ終濃度は１．２５質量％に統一した。
【００６２】
「酵素反応及び吸光度の測定」
サンプル溶液２０μＬに酵素溶液１０μＬを加えて３７℃で２０分間加温した。この溶液に酵素活性化液２０μＬを加えて３７℃で２０分間加温した。更に基質溶液５０μＬを加えて３７℃で４０分間加温した。４０分後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム溶液２０μＬ、ホウ酸カリウム溶液２０μＬ を加えて振盪攪拌後、沸騰水浴中で３分間反応を停止した。反応を停止した液を冷却後、５０μＬをマイクロプレートに移し、ｐ−ＤＡＢ溶液２００μＬを加えてよく混合し、３７℃で２０分間加温したものを被験溶液とし、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６３】
コントロールとして、酵素溶液の代わりに酢酸緩衝液１０μＬを加えた以外は、被験溶液と同様の操作を行って被験溶液ブランクを調製し、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、サンプル溶液の代わりに酢酸緩衝液２０μＬを用いた以外は、被験溶液と同様の操作を行って対照溶液を調製し、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。更に、酵素溶液の代わりに酢酸緩衝液１０μＬを加えた以外は、対照溶液と同様の操作を行って対照溶液ブランクを調製し、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６４】
また、ポジティブコントロールとしてはグリチルリチン酸二カリウム１２５μｇ／ｍＬ溶液を用いた。
【００６５】
ヒアルロニダーゼ活性阻害効果は、次式に従って算出される阻害率で表した。 
阻害率（％）＝１００−［（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）］×１００
Ａ：被験溶液の吸光度
Ｂ：被験溶液ブランクの吸光度
Ｃ：対照溶液の吸光度
Ｄ：対照溶液ブランクの吸光度。
【００６６】
結果は、表１に示す通りであり、本実施形態に係る植物抽出物はヒアルロニダーゼ活性阻害効果を有していた。特に、アメリカハマグルマの花、アナアオサの２試料は、５ｍｇ／ｍＬの濃度でポジティブコントロールであるグリチルリチンサン二カリウムのヒアルロニダーゼ阻害活性に近い活性を示しており、顕著な効果が認められた。なお、グリチルリチンサン二カリウムのヒアルロニダーゼ阻害活性率は６６％であった（但し、１２５μｇ／ｍＬ）。また、１０ｍｇ／ｍＬにおいては、イジュ、モモタマナ、メヒルギ、ホンダワラ、アナアオサ等が６０％以上のヒアルロニダーゼ阻害を示しており、高い阻害効果が認められた。
【００６７】
【表１】
2015086189.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明に係るヒアルロニダーゼ活性阻害剤は、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を発揮することができるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ジェル等の化粧料、医薬部外品等に用いることができる。