(57)【要約】  個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するための免疫調節剤、Ｔ細胞、組成物、方法及びシステム。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防する方法であって、
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量を、前記個体に投与することを含み、
１つ以上の前記免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分は、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する、
方法。
【請求項２】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号１１、配列番号２５、配列番号４５、配列番号７４、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、配列番号１２９、配列番号１４３、配列番号１４８、配列番号２１０及び配列番号３０１の１つを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号２、配列番号１１、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号１６２及び配列番号２１０の１つを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１４３を有するペプチド及び配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１１を有するペプチド、配列番号２５を有するペプチド及び配列番号７４を有するペプチドを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２を有するペプチドを含む、
請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号４５を有するペプチドを含む、
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記個体は、
ヒトである、
請求項１乃至８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与することは、
１回から３回、少なくとも１ｍｇの用量を投与することによって行われる、
請求項１乃至９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防する方法であって、
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量を、前記個体に投与することを含み、
１つ以上の前記免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分は、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する、
方法。
【請求項１２】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号１１、配列番号２５、配列番号４５、配列番号７４、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、配列番号１２９、配列番号１４３、配列番号１４８、配列番号２１０及び配列番号３０１の１つを含む、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の免疫原性は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号２、配列番号１１、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号１６２及び配列番号２１０の１つを含む、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１４３を有するペプチド及び配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１１を有するペプチド、配列番号２５を有するペプチド及び配列番号７４を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号４５を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記有効量は、
約５００，０００個と約２，０００，０００個の間のＣＤ８陽性Ｔ細胞である、
請求項１１乃至１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与することは、
前記個体に約１，０００，０００個の細胞を投与することによって行われる、
請求項１１乃至１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤の有効量を投与すること、
をさらに含む、
請求項１１乃至２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ａｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分を投与すること、
をさらに含む、
請求項１１乃至２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、
ＣＤ８陽性Ｔ細胞を、配列番号１から配列番号３０２までからなる群から選択される１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分に、当該ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化させる条件下で一定の時間接触させることによって得ることができ、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は前記１つ以上のペプチド又は前記その免疫原性的に活性な部分に特異的である、
請求項１１乃至２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するシステムであって、
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞、及び
ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤、
の少なくとも２つを含む、
システム。
【請求項２５】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するシステムであって、
１つ以上のＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞、及び
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞、
の少なくとも２つを含む、
システム。
【請求項２６】
ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤をさらに含む、
請求項２５に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、免疫調節方法、システム、組成物及びワクチンに関連し、それらは、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状の治療又は予防に特に好適である。
【背景技術】
【０００２】
動脈瘤の形成が影響する人の比率が増加している。動脈瘤の治療は、現在、主にいくつかのタイプの外科的方法で行われる。
【０００３】
例えば、動脈瘤は、典型的には外科的介入で、又は血圧及び他の危険因子をコントロールしながら注意深く待機することで治療される。近年、血管内の又は最小限の侵襲的な技術が多くのタイプの動脈瘤のために開発された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
動脈瘤に対して有効な治療及び／又は予防を提供することは、いまだに困難である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書で提供されるのは、いくつかの実施の形態で個体における動脈瘤の治療及び／又は予防を可能にする方法及びシステムであって、一実施の形態では、それは外科的介入と組み合わせて又はその代わりに用いられ得る。
【０００６】
第１の観点によれば、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するための方法が記載される。当該方法は、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分を個体に投与することを含む。
【０００７】
第２の観点によれば、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するための方法が記載される。当該方法は、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分に特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞を個体に投与することを含む。
【０００８】
第３の観点によれば、個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するためのシステムが記載される。当該システムは、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤の少なくとも２つを含む。特に、いくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤は、本明細書に記載される方法で同時に、組み合わされて又は続けて使用するためにシステムに含まれる。
【０００９】
第４の観点によれば、個体における動脈瘤及び／又は症状を治療及び／又は予防するためのシステムが記載される。当該システムは、ＡｐｏＢ−１００の１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞と、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞とを含む。特に、いくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ−１００の１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な成分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞と、１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞とが、本明細書に記載される方法で同時に、組み合わせて又は続けて使用するためにシステムに含まれる。
【００１０】
本明細書に記載される断片、細胞、組成物、方法及びシステムが、用途に関連して使用され、個体における動脈瘤、動脈瘤のセグメント形成、動脈瘤の破裂の抑制、及び／又は動脈瘤の治療的又は予防的な効果が望まれる。
【００１１】
本開示の１つ以上の実施の形態の詳細が添付した図面及び以下の記載で説明される。他の特徴、目的及び利点が記載及び図面から、そして特許請求の範囲から明らかになる。
【００１２】
本明細書に組み入れられ、本明細書の一部を構成する添付した図面は、本開示の１つ以上の実施の形態を例示し、さらに詳細な説明及び実施例と合わせて本開示の原理と実施とを説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、本明細書に記載される実施の形態による部分的な動脈瘤の平均直径が調べられるセグメントの位置の図を示す。
【図２】図２は、本明細書に記載される実施の形態によるｐ２１０で又はｐ２１０なしで免疫付与されたマウスに関するカプランマイヤー生存曲線を示す。
【図３】図３は、ｐ２１０免疫付与がもたらすアテローム保護効果を示す。（Ａ）天然のｐ２１０での免疫付与は、ＰＢＳ及びｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ群と比較した場合、アテローム性大動脈硬化を有意に抑制した（各群ｎ＝９−１０、各群を代表する図が示されている）。（Ｂ）Ｐ２１０免疫付与は、マクロファージの浸潤を有意に抑制し、ＤＣの存在がＭＯＭＡ−２（各群ｎ＝９−１０）及びＣＤ１１ｃ（各群ｎ＝７−１２）の免疫反応性によって、それぞれ大動脈洞で評価された。
【図４】ＤＣにおけるｐ２１０免疫付与の効果である。最初の免疫から１週間後、免疫付与部位の（Ａ）ＣＤ１１ｃ陽性又は（Ｂ）ＣＤ１１ｃ陽性ＣＤ８６陽性細胞が、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に減少した。各群Ｎ＝１０である。（Ｃ）３回目の免疫付与の１週間後、ｐ２１０で免疫付与されたマウスでは、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較して、リンパ節におけるＣＤ１１ｃ陽性ＣＤ８６陽性細胞が減少した（各群ｎ＝５、分散分析後の多群比較）。
【図５】図５は、ｐ２１０免疫付与前後のｐ２１０に対するＩｇＭ又はＩｇＧ力価を示す。（Ａ）ｐ２１０に対するＩｇＧ力価は、免疫付与前に低く、安楽死の際、ＰＢＳ群では低いままであったが、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群及びｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群では、有意に増加し、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で最も力価が高かった。（Ｂ）ｐ２１０に対するＩｇＭ力価は、免疫付与前は低く、安楽死の際、有意に増加し、マウスの３群間で差はなかった。６−７週の時点に関してはＮ＝５及び２５週の時点に関してはｎ＝９であった。
【図６】図６は、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫付与後の活性化されたリンパ球の集団を示す。（Ａ）リンパ節内のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に多かった。（Ｂ）リンパ節内のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞は、３群間で差がなかった。３群の中ではｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群における脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性Ｔ細胞の集団に有意な増加がみられ（Ｃ）、３群間で脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ１２陽性Ｔ細胞に違いはなかった（Ｄ）。脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性Ｔ細胞の集団は、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に増加したが、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍの免疫付与によって有意に少なくなり（Ｅ）、そして（Ｆ）脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ１２陽性Ｔ細胞は、３群間で違いはなかった。（Ａ）及び（Ｂ）に関しては各群Ｎ＝９−１０；（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）に関しては各群ｎ＝５であった。
【図７】図７は、ｐ２１０で免疫付与されたドナーからのＣＤ８陽性Ｔ細胞の養子移植がｐ２１０免疫付与のアテローム保護効果を再現したが、Ｂ細胞又はＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の移植では再現しなかったことを示す。（Ａ）ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍで免疫付与されたドナー由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞の受容体マウスでは、他の２群由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞の受容体マウスと比較して、アテローム性動脈硬化病変部の広がりが有意に小さかった（各群ｎ＝９−１０）。（Ｂ）ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍのドナー由来のＢ細胞の養子移植は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群の受容体マウスと比較した場合、アテローム性動脈硬化を抑制しなかった（各群ｎ＝９）。２つの異なる投与量（Ｃ．１×１０５細胞／マウス又はＤ．３×１０５細胞／マウス）でＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の受容体マウス（各群ｎ＝９−１３）は、ｐ２１０免疫付与のアテローム抑制効果を再現しなかった。
【図８】図８は、ｐ２１０で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｒｏでの樹状細胞に対する細胞溶解活性の増加を示す。ｐ２１０で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、樹状細胞に対して有意に高い細胞溶解活性を有していた。実験は、毎回、各群５匹のマウスからプールされたＣＤ８陽性Ｔ細胞で４回繰り返された。全体で各群において合計１１のデータ点で、毎回２重又は３重試験が行われた。
【図９】図９は、ｐ２１０で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞が、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、より高濃度のグランザイムＢを含むことを示す。一方、パーフォリンの濃度に違いはなかった。
【図１０】図１０は、ｐ２１０免疫付与後のＫＬＨ又はＴＮＰに対するＩｇＧ力価を示す。ＩｇＧ抗体力価で評価した場合、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較して、（Ａ）先行するｐ２１０での免疫付与は、それに続くＴ細胞に依存する（ＫＬＨ、各群ｎ＝３−６）又は（Ｂ）Ｔ細胞に依存しない（ＴＮＰ、各群ｎ＝４−５）免疫付与の効果に影響しなかった。
【図１１】図１１は、本明細書に記載された実施の形態による、ｐ２１０で免疫付与された又はされなかったマウスに関するカプランマイヤー生存曲線を示す。
【図１２】図１２は、本明細書に記載された実施の形態による、ａｐｏＥ−／−マウスにおけるｐ２１０に対する抗体反応を示す。
【図１３】図１３は、ｐ２１０免疫性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞溶解活性がＣＤ２５陽性細胞の減少によって無効にされることを示す。また、ｐ２１０特異的な溶解活性は、アッセイの培地内に血清の脂質を欠くことで無効にされる。
【図１４】図１４は、本明細書に記載された一実施の形態によるＦＩＴＣ標識されたｐ２１０のＤＣによる細胞内取り込みを示す。
【図１５】図１５は、本明細書に記載された一実施の形態によって増加された活性化ＣＤ２５陽性細胞によって示されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＤ８陽性ＣＤ２５陰性Ｔ細胞に対するＤＣによるペプチドｐ２１０の提示を示す。
【図１６】図１６は、本明細書に記載された実施の形態によるＦＩＴＣ陽性細胞に依存するＣＤ８陽性の溶解活性を示す。ＦＩＴＣ標識されたｐ２１０でロードされたＤＣを用いて、ｐ２１０のワクチンを投与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞によるｐ２１０特異的な溶解活性。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書に記載される方法及びシステムは、いくつかの実施の形態で、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状の治療及び／又は予防を可能にする。
【００１５】
本明細書で用いられる用語“動脈瘤”は、血液で満たされた局所的な血管拡張又はその一部の拡張を示す。特に、動脈瘤は、血管壁の脆弱性のせいで動脈の一部の異常な拡張又は膨張であり、体内のあらゆる血管系で発生し得る。動脈瘤は、血管の内層が血管の外層の外側に隆起することにおいて”真”であり、動脈又は静脈から漏出した血液の堆積であることにおいて”偽”である。動脈瘤は、限定されないが、脳の基底部の動脈又は左心室から血液を運ぶ大動脈の動脈で、通常起こる。特に、大動脈に関して、動脈瘤は、限定されないが、弓の始まり、弓の終わり、心尖、セグメント３と５の間、腎臓以上のセグメント、腎臓以下のセグメント、分岐前、及び腎動脈間を含む動脈の異なるセグメントで起こり得る。動脈瘤の症状は、痛み、末梢塞栓、出血及び当業者によって特定可能な付加的な症状などである。
【００１６】
本明細書で用いられる用語“治療する”又は“治療すること”又は“治療”は、症状を、診療すること又は医学的に又は外科的に処置することに含まれるあらゆる活動を示す。本明細書で用いられる用語“予防すること”又は“予防”は、個体における症状からの死亡及び病的状態の負担を減少させるあらゆる活動を示す。これは一次、二次及び三次レベルで行われる。ここで、ａ）一次予防は、疾患の悪化を避ける。ｂ）二次予防活動は、早期の疾患治療を目的とし、そうすることで、疾患の進展及び症状が現れるのを防ぐために医療介入の機会を増やす。及びｃ）三次予防は、機能回復および疾患関連の合併症を抑制することで、既存の疾患の悪い影響を減らす。
【００１７】
本明細書で用いられる用語“症状”は、完全な肉体的、精神的及び場合によっては社会福祉の状態と関連する個体の身体状況（全身又は１つ以上のその部分）と一致しない個体の体（全身又は１つ以上のその部分）の身体状況を示す。本明細書で記載される症状は、限定されないが、不調及び疾病などであって、ここで、用語“不調”は、体又はその一部の機能的な異常に関連する生体の状態を示し、用語“疾病”は、体又はその一部の通常の機能を損なう生体の状態を示し、典型的には、識別できる兆候及び症状に現れる。例示的な症状は、限定されないが、損傷、身体障害、不調（精神的及び肉体的不調を含む）、症候群、感染、個体の逸脱行動及び個体の体又はその一部の構造及び機能の特殊な変化などである。
【００１８】
本明細書で２つの事項に関連して用いられる表現“関連する”又は“これに関連する”は、第１の事項の発生が第２の事項の発生を伴うような当該２つの事項間の関係性を示し、それは限定されないが、因果関係及び兆候／症状−疾患の関係などである。動脈瘤に関連する例示的な症状は、神経などの近傍の構造体の圧迫を含み、限定されないが、血管が存在する領域の弱さ及び無感覚につながる圧迫に加え、感染、全身疾患及び破裂につながる可能性がある。動脈瘤に関連する付加的な例示の症状は、血管の破裂、その変化において場合によっては多量の出血、結果としての脳卒中、身体障害及び死などである。動脈瘤に関連するさらに例示的な症状は、アテローム性動脈硬化である。付加的な症状は、痛み、末梢塞栓、出血などの動脈瘤の症状及び当業者によって特定可能な付加的な症状などである。
【００１９】
いくつかの実施の形態では、動脈瘤の治療及び／又は予防は、１つ以上のＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はそれらの免疫原性的に活性な部分の有効量を個体に投与することによってもたらされる。
【００２０】
本明細書で用いられる用語“投与する”又は“投与すること”又は“投与”は、限定されないが、本明細書で説明されるような任意の方法で物質を個体に与えるあらゆる方法を意味する。
【００２１】
本明細書で用いられる用語“個体”又は“複数の個体”は、高等動物、並びに特に哺乳類のような脊椎動物、及びさらに詳細にはヒトのようなひとつの生物有機体を示す。いくつかの実施の形態では、個体は、動脈瘤の危険性の高まりに主に関連する症状（例えば、高血圧、アテローム性動脈硬化）の検出に基づいて動脈瘤の危険性が高いとして前もって特定されている。いくつかの実施の形態では、個体は、動脈瘤の危険性が高いとして特定されていない。いくつかの実施の形態では、個体における動脈瘤の危険性に関する検査がなされていない。
【００２２】
本明細書で用いられる用語“免疫原性断片”又は“抗原性断片”は、抗原のように免疫応答を発生させることができる任意の長さのポリペプチドの部分を示す。抗原は、免疫系に認識される分子である。ＡｐｏＢ１００の抗原性断片は、結果的に抗原特性を示すａｐｏＢ−１００の一部である。断片又はその他の分子の免疫応答及び特には細胞性の及び／又は液性の応答を発生させる能力は、当業者によって特定可能な技術及び方法で検出可能である。
【００２３】
本開示における意味において用語“ＡｐｏＢ１００の断片”は、ＡｐｏＢ１００由来の任意の長さの断片のみならず、遺伝子組み換え又は化学合成によって生成されたＡｐｏＢ１００由来の配列を含むペプチドも含む。また、本開示における意味において用語“免疫原性断片”は、変異断片（残基を置換、付加又は欠損された断片など）、酸化物誘導体及び／又はＭＤＡ又は銅で処理されたペプチドのような任意の断片の誘導体をさらに含み、それは、本来の断片の検出可能な抗原特性を維持している（例えば、特異的な液性の及び／又は細胞性の応答）。
【００２４】
本明細書で第１のペプチド（例えば、免疫原性断片）に関連して用いられる用語“誘導体”は、第１のペプチドに構造的に関連し、第１のペプチドにはないが第１のペプチドの機能特性を保持している特徴を導入する修飾によって第１のペプチドから誘導できる第２のペプチドを示す。したがって、免疫原性断片、又はその任意の部分の誘導体ペプチド（例えば、そのエピトープ）は通常、本来のポリペプチド又はその部分にはない付加的な機能に関連するかしないアミノ酸配列の修飾によって、本来の免疫原性断片又はその部分と異なる。しかしながら、免疫原性断片又はその任意の部分の誘導体ペプチドは、免疫原性断片又はその任意の部分に関して本明細書に記載される１つ以上の免疫原性活性を保持する。抗原性特性は、免疫原性断片、並びに当業者にとって特定可能な付加的な方法及びシステムに関して既に記載されたもののような方法及びシステムで確かめることができる。具体的には、免疫原性断片の誘導体は、免疫原性断片の少なくとも１つのエピトープを含む。
【００２５】
本開示における意味において用語“免疫原性的に活性な部分”は、特異的な免疫応答を引き起こすことができる参照抗原の任意の部分を示す。例示的な免疫原性的に活性な部分は、免疫原性断片内の主に５個以上の残基によって形成されるエピトープである。いくつかの実施の形態では、１つ以上の断片内のエピトープは重なり合う。
【００２６】
免疫原性断片は、親和性の又はエピトープのタグとの結合のような組み換え技術、オリゴペプチドの化学合成、キャリアタンパク質との非結合又は結合、あるいはＡｐｏＢ−１００ペプチドを発現させるために本技術分野で既知の任意の方法で発現させることができる。
【００２７】
ＡｐｏＢ１００の例示的な断片は、実施例でさらに詳細に説明される配列番号１から配列番号３０２として配列表に列挙された配列の１つを含む又は本質的にそれのみを含む各ペプチドである。本明細書に記載される意味での免疫原性断片を同定するために好適な方法及びシステムは、参照により本明細書に組み入れられる国際公開第０２／０８０９５４号に記載されている。付加的な方法が実施例に例示される（例えば実施例１参照）。
【００２８】
本明細書で用いられる用語“タンパク質”又は“ポリペプチド”又は“ペプチド”は、２つ以上のアミノ酸単量体及び／又はそれらのアナログで構成される有機ポリマーを示す。用語“ポリペプチド”は、全長タンパク質又はペプチドを含む任意の長さのアミノ酸ポリマーに加え、それらのアナログ及び断片などである。また、３つ以上のアミノ酸のペプチドは、オリゴペプチドと呼ばれる。本明細書で用いられた場合、用語“アミノ酸”、“アミノ酸単量体”又はアミノ酸残基“は、非天然の側鎖を有する合成アミノ酸を含み、Ｄ及びＬ光学異性体を含む２０種のアミノ酸のいずれかを意味する。用語“アミノ酸アナログ”は、１つ以上の個々の原子が、異なる原子、アイソトープ又は異なる官能基のいずれかで置換されるか、そうでなければその天然のアミノ酸アナログと同一のアミノ酸を意味する。
【００２９】
実施の形態においては、動脈瘤の治療に好適なＡｐｏＢ１００の１つ以上の免疫原性断片がアテローム性動脈硬化の抑制に関連する。
【００３０】
アテローム性動脈硬化の抑制に関連する分子を同定するための方法は、当業者によって特定可能で、その全体を参照することで本明細書に組み入れられる国際公開第０２／０８０９５４号に記載された例示的な方法を含む。特に、アテローム性動脈硬化を抑制する分子の能力は、当業者によって特定可能な方法を用いて好適な用量の分子を投与した動物モデルで評価可能である。例えば、本明細書に記載された分子の皮下投与に続けて、アテローム性動脈硬化に対して影響を及ぼす分子の能力が、実施例で説明するようにマウスにおいて評価可能である。本開示を読むことで、当業者は、付加的な方法、投与スケジュール及び用量を決定できる。
【００３１】
例示的な実施例によれば、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する免疫原性分子は、関心のある個体において細胞性の及び／又は液性の応答をもたらすことが可能な免疫原性分子の候補を特定すること、及びアテローム性動脈硬化の抑制に関連する免疫原性分子の候補を選択するために、アテローム性動脈硬化を抑制する能力に関して当該免疫原性分子の候補を評価することで同定される。
【００３２】
特にいくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片は、個体又は動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化の抑制に関連する免疫応答をもたらす免疫原性断片である。いくつかのこれら実施の形態では、アテローム性動脈硬化の抑制の割合は、少なくとも約２０％、又は少なくとも約３０％、約４０％から約６０％まで又は約５０％から約８０％までである。
【００３３】
本開示の実施の形態における実施例が約５７．６％のアテローム性動脈硬化の抑制に関連し、及びアンジオテンシンの注入によって誘導された動脈瘤の部分の数にも関連する免疫原性断片ｐ２１０に関して例示され（実施例２参照）、かつ動脈瘤の破裂からの死亡を抑制することが見込まれることに言及しておく。アテローム性動脈硬化の抑制に関連する付加的な断片が動脈瘤の治療及び／又は予防に有効であることが特に見込まれる（実施例参照）。
【００３４】
いくつかの実施の形態では、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な免疫原性断片は、少なくとも１つのペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ１（配列番号１）、ｐ２（配列番号２）、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ２５（配列番号２５）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ９９（配列番号９９）、ｐ１００（配列番号１００）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１０３（配列番号１０３）、ｐ１０５（配列番号１０５）、ｐ１２９（配列番号１２９）、ｐ１４３（配列番号１４３）、ｐ１４８（配列番号１４８）、ｐ２１０（配列番号２１０）、又はｐ３０１（配列番号３０１）を含む。
【００３５】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ２（配列番号２）、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１４８（配列番号１４８）、又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。
【００３６】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、２つのペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ１４３（配列番号１４３）、又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する１つ以上の免疫原性断片は３つのペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ２５（配列番号２５）、又はｐ７４（配列番号７４）の１つを含む。実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する１つ以上の免疫原性断片は、５つのペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ９９（配列番号９９）、ｐ１００（配列番号１００）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１０３（配列番号１０３）、及びｐ１０５（配列番号１０５）の１つを含む。
【００３７】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は１つ以上のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれ、ｐ２（配列番号２）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ１０２（配列番号１０２）、又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。
【００３８】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の１６−３５番目のアミノ酸を含むペプチドを含む（ｐ２；配列番号２）。
【００３９】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の６６１−６８０番目のアミノ酸を含むペプチドを含む（ｐ４５；配列番号４５）。
【００４０】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の３１３６−３１５５番目のアミノ酸を含むペプチドを含む（ｐ２１０；配列番号２１０）。
【００４１】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の４５０２−４５２１番目のアミノ酸を含むペプチドを含む（ｐ３０１；配列番号３０１）。
【００４２】
実施の形態においては、アテローム性動脈硬化の抑制に関連し、動脈瘤の治療及び／又は予防のために使用するのに好適な１つ以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の１−２０番目のアミノ酸を含むペプチドを含む（ｐ１；配列番号１）。
【００４３】
上記ペプチドのアテローム性動脈硬化との関連を示す例示的なデータが本開示の実施例５及びその全体を参照することにより本明細書に組み入れられる国際公開第０２／０８０９５４号に示されている（特に表１、表２、表Ａ及び表Ｂ参照）。特にいくつかのこれらペプチド又はこれらの組み合わせに関して、６４．６％（ｐ１４３及びｐ２１０）、５９．６％（ｐ１１、ｐ２５及びｐ７４）、５６．８％（ｐ１２９、ｐ１４８及びｐ１６７）、６７．７％（ｐ２）、５７．９％（ｐ２１０）、５５．２％（ｐ３０１）、４７．４％（ｐ４５）、３１％（ｐ１）の減少率が検出された（その全体を参照することにより本明細書に組み入れられる国際公開第０２／０８０９５４号及び特に表Ｂ参照）。
【００４４】
本明細書に記載された任意の配列又はそれらペプチドの免疫原性的に活性な部分を含む免疫原性ペプチドは、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法を用いて当業者によって特定可能である。例えば、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏの方法が、本明細書に記載された任意の配列に基づいてエピトープ又は免疫原性ペプチドを同定するために使用される。例えば、その全体を参照することでそれぞれ本明細書に組み入れられる参考文献４４から５１までに言及しておく。
【００４５】
上記参考文献は、注目の配列又は何らかの関連エピトープを含む免疫原性分子を同定するために使用されるＴｅｐｉｔｏｐｅ（Ｒａｎｄｒｉｚｚａｎｉら、２０００年）、Ａｄｅｐｔ（Ｍａｋｓｕｙｔｏｖら、１９９３年）、ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ（Ｊａｍｅｓｏｎら、１９８８年）及びその他のものなど様々なアルゴリズムを説明する。
【００４６】
ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏのデータを確認及び／又は本明細書に記載された任意の配列又はこれら配列の免疫原性的に活性な部分を含む免疫原性的に活性な分子を同定するために、単独で又はｉｎ  ｓｉｌｉｃｏによる同定と組み合わせて使用される適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏの付加的な試験及び研究室の方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、抗原特異的Ｔ細胞の増殖アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴ、抗体測定）が当業者によって特定可能で、当業者により使用され得る。
【００４７】
したがって、例示的な実施の形態では、本明細書に記載された任意の１つの配列のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ解析によって、ペプチド候補、活性な部分の候補及び／又は誘導体の候補を同定し、前記ペプチド候補、前記活性な部分の候補及び／又は前記誘導体の候補のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏ試験によって、免疫原性ペプチド、免疫原性的に活性な部分及び／又は誘導体を同定することによって、本明細書に記載される免疫原性ペプチド、それらの免疫原性的に活性な部分に加えてそれらの誘導体が同定され得る。特に、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ解析は、分子又はその一部の免疫原性を確認するのに適切なアルゴリズムで候補の配列を解析することによって行われる。同様に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、形成又は退縮を特に検討して、ペプチド候補、活性な部分及び／又は誘導体の候補の免疫原性に加えて動脈瘤へのそれら分子の影響を確認することを目的とする方法を含む。適切な方法及び技術が本開示を読んだ当業者によって特定可能である。
【００４８】
いくつかの実施の形態では、免疫原性ぺプチド、それらの活性な部分及びそれらの誘導体は、少なくとも５個のアミノ酸の配列を、常に、その全体を参照することにより本明細書に組み入れられる国際公開第０２／０８０９５４号に示されるようなエピトープに特有の長さで含むことが期待される。
【００４９】
実施の形態においては、本明細書に記載された１つ以上の免疫原性分子での免疫付与は、実際の大動脈の動脈瘤破裂の発生率を抑制する（例えば、実施例２）。
【００５０】
実施の形態においては、本明細書に記載された１つ以上の免疫原性分子での免疫付与は、大動脈の動脈瘤のセグメントの形成を抑制する。特に、これらのいくつかの実施の形態では、動脈瘤の抑制は、限定されないが弓の始まり、弓の終わり、心尖、セグメント３と５の間、腎臓以上のセグメント、腎臓以下のセグメント、分岐前、及び腎動脈間などの大動脈の異なるセグメントで起こり得る（例えば、実施例３参照）。免疫付与後に見込まれる動脈瘤の抑制は、対照の値と比較した場合、少なくとも約２０％であって、特には約２０−８０％である。
【００５１】
実施の形態においては、本明細書に記載された１つ以上の免疫原性分子が大動脈の動脈瘤破裂に関連する死亡率を抑制する（例えば、実施例４参照）。
【００５２】
本明細書で用いられる用語“有効量”は、抗体特異的な免疫応答を誘導する抗原、例えばｐ２１０の量を表すと解釈される。
【００５３】
動脈瘤を治療及び／又は予防するために本明細書に記載される免疫原性断片及び１つ以上の免疫原性分子の有効量は、活性化が行われる個体に依存し、本開示を読むことで当業者によって特定可能である。例えば、実施の形態においては、Ｔ細胞の活性化は、約１００μｇから約１０００μｇ未満までの免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量で行われる。実施の形態においては、動脈瘤の治療及び／又は予防は、約１から約１００ｍｇの免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量で行われる。付加的な有効量は、活性化が行われる個体及び所望の活性化の観点で当業者によって特定可能である。
【００５４】
実施の形態においては、治療又は予防に関する有効量は、約１００μｇ以上である。特に、１００μｇのｐ２１０での治療は、動脈瘤破裂を予防することが期待される（例えば、実施例２参照）。いくつかの実施の形態では、治療及び／又は予防は、１ｍｇ以上、例えば１００ｍｇまでの量で行われてもよい。
【００５５】
より高い濃度が本開示に例示された必要な効果に応じていくつかの実施の形態で用いられてもよい。例えば、動脈瘤の治療が望まれる実施の形態では、治療は、約２５０μｇ以上で、及び特には５００μｇで行われることが予期される。他の例、動脈瘤の早期段階での検出の場合では、動脈瘤を処置するための有効量は、治療のために用いられる量と比較してより低い濃度であることが予期される（例えば、１００から２５０μｇ）。場合によっては、２５０μｇ又は５００μｇ又はそれを上回る範囲内に入る量が、個体における医薬活性分子に影響を与える他の因子にも依存して有効であることも予期される。
【００５６】
また特に、有効量は、それぞれ特定のワクチンに利用されるペプチドの数と組み合わせと、治療される個体に特有の性質と症状（例えば、免疫系、食習慣並びに普段の健康状態及び当業者によって特定可能な付加的な因子）とに依存して変わることが予期される。より具体的には、決定された範囲内で量を減らしたり増やしたりすることが、体重、年齢、個体の性別に加えて当業者によって特定可能な付加的な因子などの因子に応じて個体において効果的であることが予期される。
【００５７】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載される免疫原性ペプチド又は関連する免疫原性的に活性な部分は、当該ペプチド又はその活性な部分の免疫原性に影響を与える、特に増強させるのに好適なアジュバント又は他のキャリアと組み合わせて投与されてもよい。特に、いくつかの実施の形態では、免疫原性ペプチド又はその活性な部分は、当業者によって特定可能な方法に従って、アジュバント又はキャリアと複合体化される。好適なキャリアは、ＢＳＡ及び特にはカチオン化されたＢＳＡ、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及び特にはカチオン化されたＨＳＡ、リン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムのようなアルミニウム塩及び当業者によって特定可能な付加的なキャリアを含む。
【００５８】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載される免疫原性分子は、重量対重量の比において免疫原性分子対キャリア対アルミニウムの比として約１：２：３５、１：２：２０．６、１：２：７．７、１：２：３．３、１：１：１３．８で投与されてもよい。特に、いくつかの実施の形態では、比は、アルミニウム（アジュバント）の量が最小になるように各キャリア分子に結合したペプチドの数で決められる。特に一実施の形態では、比は２．７ｍｇ複合体／ｍＬまでの濃度になるように決められる。
【００５９】
実施の形態においては、投与は、所望の効果の観点で決定される投与スケジュールに従って行われる。特に、投与は、治療される個体の症状及び所望の効果に基づいて決定される用量及びスケジュールに従って行われることが期待される。例えば、個体の症状に基づく所望の免疫付与を得るために、投与は、間隔をあけて、本明細書に記載された免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の単回投与又は複数回投与（例えば、２回以上の投与で、特には６回までの投与）のいずれかを実行することでなされる。
【００６０】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載された免疫原性分子は、抗原への最初の暴露に対する応答を高めるために、個体の適応免疫系に必要な時間の観点で考えられた投与スケジュールに従って投与されてもよい。具体的には、応答は、暴露後２−３週間で頭打ちになることが予期される。続く暴露が、さらに早い応答をもたらすことが多い。様々な実施の形態では、以下の投与スケジュールと方法、（１）単回投与、（２）２−３週間あけて２回投与、（３）１週間間隔の投与を３回、（４）３週間ごとに１度の投与を６回まで、のスケジュールが続く。ワクチンは、（１）皮下注射；（２）腹腔内注射；（３）経鼻投与；（４）皮下注入によって投与される。
【００６１】
免疫付与の経路は、本明細書に記載された免疫付与の目的に応じて変更することができる。マウスにおいて動脈瘤の成功した予防及び治療は、皮下での浸透圧ポンプ注入によってもたらされた（実施例２、３及び４）。誘発される免疫応答のタイプは、免疫付与の経路によって大体決定される。皮下の、非経口の、及びその他全身を含む様々な経路が用いられる。特に、気道及び腸の粘膜内層がリンパ液の組織を含み、抗原に暴露されたときに抗炎症、免疫抑制応答をもたらす。呼吸器官の、及び腸粘膜の異なる免疫学的特性は、経鼻又は経口によって、抗原に暴露されたときにある程度異なるタイプの防御免疫を誘導する。
【００６２】
実施の形態においては、１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の投与が皮下で又は筋肉注射で行われてもよい。
【００６３】
いくつかの実施の形態では、個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を予防するために方法が提供され、当該方法は、本明細書に記載されたＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に対して特異的に活性化したＣＤ８陽性Ｔ細胞を、当該個体において増加させることを含む。
【００６４】
本明細書で用いられる用語“Ｔ細胞”は、リンパ球として知られる白血球の部類に属し、液性の又は細胞介在性の免疫に関与する。Ｔ細胞は、それらの細胞表面にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のような特別なマーカーが存在するので、Ｂ細胞及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）のような他のリンパ球のタイプと識別できる。Ｔ細胞を同定する付加的なマーカーは、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、又は当業者に理解されるようなＴ細胞の状態及び／又は機能性に関連することがある付加的なマーカーなどである。
【００６５】
用語“ＣＤ８陽性Ｔ細胞”は、その表面にＣＤ８糖タンパク質を発現しているＴ細胞を示し、ＣＤ８（分化のクラスター８）糖タンパク質は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）に関してコレセプターとなる膜貫通糖タンパク質である。ＴＣＲに類似して、ＣＤ８は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合するが、クラスIのＭＨＣタンパク質に特異的である。例示的なＣＤ８  Ｔ細胞は、細胞傷害性メモリーＣＤ８  Ｔ細胞、調節性ＣＤ８  Ｔ細胞、細胞傷害性エフェクターＣＤ８  Ｔ細胞及び当業者によって特定可能な付加的な細胞を含む。タンパク質には２つのアイソフォーム、アルファ及びベータがあり、各々は異なる遺伝子でコードされる。ヒトでは、両方の遺伝子が２番染色体の位置２ｐ１２に存在する。
【００６６】
本明細書で記載される用語“活性化された”及び活性化は、結果としてＴ細胞が免疫系においてあらかじめ定められた免疫学的な役割（例えば、細胞傷害性）を持つようになる条件下で一定の時間、Ｔ細胞が特異的な抗原を提示する抗原提示細胞と相互作用するプロセスを示す。用語“抗原提示細胞”（ＡＰＣ）は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）との抗原複合体を、その表面に提示する細胞を示す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いて、当該複合体を認識する。例示的なＡＰＣは、先天性免疫と獲得免疫とを関連付ける上で重要な役割を果たすことが知られている樹状細胞（ＤＣ）を含み（参考文献３、４参照）、両方の免疫応答がアテローム発生に関与する（参考文献５、６参照）。
【００６７】
Ｔ細胞及び特にはＣＤ８陽性Ｔ細胞の検出は、単独で又はＴＣＲ及び当業者によって特定可能な付加的なマーカーと組み合わせてＣＤ８のようなマーカーの検出によって行われる。活性化されたＣＤ８陽性Ｔ細胞の検出は、Ｔ細胞マーカー、及び特にＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６２及び表面マーカーの検出に好適な方法並びに技術を用いて当業者によって特定可能な付加的なマーカーの検出によって行われてもよい。
【００６８】
本明細書で用いられる用語“検出する”又は“検出”は、限定されないが、試料、反応混合物、分子複合体及び基質を含む空間の限られた部分に分子又は細胞の実在、存在又は事実を決定することを示す。本明細書で用いられる用語“検出する”又は“検出”は、標的の化学的な及び／又は生物学的な性質、限定されないが、他の化合物との相互作用、特には結合する能力、他の化合物を活性化する能力及び本開示を読むことで当業者によって特定可能な付加的な性質などの決定を含むことができる。検出は、定量的又は定性的である。標的又はシグナルの数量又は量の測定に言及し、関連し又は関与する場合には検出は、“定量的”であって（定量とも言われる）、それは限定されないが、標的又はシグナルの量又は比率を決定するために設計された任意の解析を含む。他の標的又はシグナルに対する相対存在量の観点で、検出が性質又は標的若しくはシグナルの種類のようなたぐいのものの同定に言及し、関連し又は関与する場合には、検出は“定性的”であって、これは定量化ではない。
【００６９】
Ｔ細胞マーカーを検出するのに適切な例示的な技術は、検出可能な適切な分子で標識された、好適なモノクローナル又はポリクローナル抗体あるいは抗原特異的ＨＬＡ又はＭＨＣ五量体又は六量体に加えて、当業者によって特定可能な方法及び技術の使用を含む。例示的な方法では、Ｔ細胞マーカーは、実施例に記載されたようにフローサイトメトリー解析によって同定される。Ｔ細胞マーカーの検出に適切な例示的な技術は、検出可能な適切な分子で標識された、好適なモノクローナル又はポリクローナル抗体あるいは抗原特異的ＨＬＡ又はＭＨＣ五量体又は六量体に加えて、当業者によって特定可能な方法及び技術の使用を含む。例示的な方法では、Ｔ細胞マーカーは、実施例に記載されたようにフローサイトメトリー解析によって同定される。
【００７０】
本明細書に記載されたＴ細胞、組成物、方法及びシステムのいくつかの実施の形態では、ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、ＡｐｏＢ１００の１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分を用いて活性化され得る。
【００７１】
特に、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、ｐ１（配列番号１）、ｐ２（配列番号２）、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ２５（配列番号２５）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ９９（配列番号９９）、ｐ１００（配列番号１００）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１０３（配列番号１０３）、ｐ１０５（配列番号１０５）、ｐ１２９（配列番号１２９）、ｐ１４３（配列番号１４３）、ｐ１４８（配列番号１４８）、ｐ２１０（配列番号２１０）又はｐ３０１（配列番号３０１）からなる群から選択される１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分に、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化させる条件下で一定の時間、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を接触させることで得られる。
【００７２】
本明細書に記載される活性化Ｔ細胞は、１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的である。免疫原性応答に関して本明細書で用いられる用語“特異的”、“特異的に”又は“特異性”は、ある抗原に対して免疫学的な活性を指向する、免疫学的な物質の能力であって、実質的には、存在する他の抗原に対して免疫学的な活性が殆どないか、全くないことを意味する。結果として、本明細書におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞は、それらを活性化するために用いられる免疫原性断片又は活性な部分に対して特異的に活性化され、他の抗原に対するものではない。
【００７３】
免疫原性断片に特異的なＣＤ８  Ｔ細胞を同定するために用いられ得る例示的な抗原特性は、実施例で例示されたもののような方法及び技術に加えて、当業者によって特定可能な他の方法及び技術を用いて検出可能な液性の及び／又は細胞性の応答を含む。本開示の意味における抗原特性を検出するための例示的な方法及びシステムは、ＥＬＩＳＡ及び特には血清ＥＬＩＳＡ及び実施例で例示された付加的な方法を含む。
【００７４】
実施の形態においては、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、アテローム性動脈硬化の治療又は予防に関連して、配列番号１から配列番号３０２までの間の任意の１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分に特異的である。いくつかの実施の形態では、免疫原性断片は、配列番号２、配列番号１１、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号２１０の１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分を含む。いくつかの実施の形態では、免疫原性断片は、配列番号２、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号２１０の１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分を含む。さらに具体的には、いくつかの実施の形態では、免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００の３１３６−３１５５番目のアミノ酸（ｐ２１０；配列番号２１０）又はその免疫原性的に活性な部分を含む。一般に、個体における動脈瘤の治療及び／又は予防に関連することが証明された又は予期される免疫原性断片の同じ組み合わせも、個体における動脈瘤の治療及び／又は予防に使用されるためにＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化できることが期待される。特に、Ｔ細胞の活性化は、本明細書に記載され、動脈瘤を治療又は予防するのに適切な量でｉｎ  ｖｉｖｏで投与される任意の分子を用いて行われる（実施例参照）。また、Ｔ細胞の活性化は、参照文献５２に記載されたもののような方法及び手段に加え、当業者によって特定可能な付加的な手段を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。
【００７５】
実施の形態においては、個体において動脈瘤を治療及び／又は予防するためにＣＤ８陽性Ｔ細胞を増加させることは、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量を、当該個体に投与することによって行うことができる。
【００７６】
実施の形態においては、有効量は約５００，０００から２，０００，０００個の間の細胞を含むことが予期される。実施の形態においては、有効量は約７５０，０００から１，５００，０００個の間の細胞を含むことが予期される。実施の形態においては、有効量は約１，０００，０００個の細胞であることが予期される。
【００７７】
特に、実施の形態においては、１，０００，０００個の細胞の投与がアテローム性動脈硬化の治療及び予防の両方の結果をもたらすことが期待され、このため、動脈瘤の治療と予防に有効であることも予期される。投与は、治療される個体の症状及び所望の効果に基づいて決定される用量及びスケジュールに従って行われることが予期される。例えば、予防を目的とする投与では、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量の投与は、個体の症状に基づく所望の免疫付与を得るために、間隔をあけて、本明細書に記載された活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の単回投与又は複数回投与（例えば、３回以上の投与で、特には６回までの投与）のいずれかを実行することでなされる。特に、複数回投与は、免疫効果の延長が求められるときに行われてもよい。
【００７８】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載される活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、それら細胞が毎日（２１日目まで）及び１０日ごとのスケジュール（０、１０、２０日目）で投与される投与スケジュールに従って有効であることが期待される。追加のスケジュールが有効であることが予期され、ＨＩＶ及び／又は癌のような他の疾患の細胞治療に基づいて当業者によって特定可能である。
【００７９】
本明細書に記載されるＣＤ８陽性Ｔ細胞の投与は、個体に免疫付与するために当業者によって特定可能な方法に従って行われる。実施の形態においては、投与は、非経口投与で行われてもよい。非経口投与は、物質が消化管以外の経路で与えられる全身の投与経路であって、限定されないが静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、腹腔内投与、及び膀胱腔内注入などである。特に、実施の形態においては、投与は、静脈内投与によって行われる。
【００８０】
実施の形態においては、投与は、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞を１回、典型的には静脈内経路を介して、必要な免疫付与効果の時間に応じて１回又は複数回投与することによって行われる。
【００８１】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するために提供される方法におけるいくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片に特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量が単独で、又は本明細書に記載される１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量と組み合わせて投与されてもよい。特に、１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分が、動脈瘤の治療及び／又は予防に必要な量と同等かそれより少なく投与される。
【００８２】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するために提供される方法におけるいくつかの実施の形態では、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又はＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量が変化し、それに伴い、本明細書に記載される免疫付与の目的に応じて免疫付与の経路が変えられる。使用可能な様々な経路は、皮下、非経口及びその他全身である。特に、気道及び腸の粘膜内層がリンパ液の組織を含み、細胞に暴露されたときに抗炎症、免疫抑制応答をもたらす。
【００８３】
いくつかの実施の形態において、免疫原性断片及び／又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の投与は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化に係る促進剤と組み合わせて行なってもよい。
【００８４】
用語“促進剤”及び“促進する”は、それがＣＤ８  Ｔ細胞に関連する分子に関係する場合、免疫系の細胞の活性化を促進することで免疫反応を改善する分子の能力を意味する。適切な促進剤の選択は、免疫応答の活性化の制御を可能にする。例示的な促進剤は、ＩＬ１０、ＩＬ−２、ＩＬ１２、ＩＬ−４、ＩＬ−１６のようなサイトカインなどである。本明細書で用いられる用語“サイトカイン”は、免疫調節剤として機能する細胞シグナル分子を意味し、当業者によって特定可能なインターロイキン及びインターフェロンのようなタンパク質を含む。適切なサイトカインの選択は、適切な条件下において液性の又は細胞性の免疫応答の優先的な誘導をもたらす。
【００８５】
実施の形態において、促進剤は、インターロイキン２（ＩＬ２）、インターロイキン１０（ＩＬ１０）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、ＴＧＦ−ベータ（ＴＧＦ−β）、ＩＬ２と抗ＩＬ−２抗体との複合体及び／又は本開示を読んで当業者によって特定可能な付加的な促進剤であってもよい。それぞれその全体が参照により本明細書に組み入れられる２０１０年のＭｉｔｃｈｅｌｌらの参考文献３８、２００８年のＰｅｒｒｅｔらの参考文献３９及び２００７年のＫａｍｉｍｕｒａらの参考文献４０には、Ｔ細胞の活性化に関連する促進剤の例示的な使用が記載されていることに言及しておく。
【００８６】
特に、いくつかの実施の形態では、促進は、個体における樹状細胞によってＣＤ８６の発現及び／又はＩＬ１２分泌を減少させることでもたらされる。
【００８７】
いくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片は、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片に特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量及び場合によっては１つ以上の促進剤とともに、個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するために提供される方法でさらに投与される。
【００８８】
本明細書で記載されたように、本明細書に記載された免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、及び本明細書に記載された促進剤が、動脈瘤又はそれに関連する症状の治療及び／又は予防のためにシステムの一部として提供される。
【００８９】
実施の形態においては、システムは、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片のエピトープを提示する１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞及び活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞を強めることができる１つ以上のサイトカインの少なくとも２つを含む。
【００９０】
実施の形態においては、システムは、１つ以上のａｐｏＢ−１００の免疫原性断片及びＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片に特異的な１つ以上の活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の少なくとも２つを含む。
【００９１】
実施の形態においては、システムは、ａｐｏＢ−１００の１つ以上の免疫原性断片及びＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片のエピトープを提示する１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞の少なくとも２つを含み、さらに、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を強めることができる１つ以上のサイトカインを含む。
【００９２】
システムは、キット（キットオブパーツ）の形態で提供されてもよい。キットでは、本明細書に記載された免疫原性断片、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び本明細書に記載された方法を行うための他の試薬が、キットに個別に含まれる。本明細書に記載されたＣＤ８陽性Ｔ細胞は、１つ以上の組成物に組み入れられることができ、及び本明細書に記載された各ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、適切な媒体とともに組成物とされてもよい。
【００９３】
付加的な組成物は、本明細書に記載されたＣＤ８陽性Ｔ細胞を検出可能な、標識された分子及び特には、標識された抗体、標識、微小流体チップ、参照基準、及び本開示を読んだ当業者によって特定可能な付加的な成分などの促進剤分子を含むことができる。複合体又は分子の成分として本明細書で用いられる用語“標識”及び“標識された分子”は、検出可能な分子を意味し、限定されないが、放射性同位体、蛍光色素分子、化学発光法による染料、発色団、酵素、酵素基質、酵素コファクター、酵素阻害剤、染料、金属イオン、ナノ粒子、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又はハプテン）及び類似物などを含む。用語“蛍光色素分子”は、検出可能な画像に蛍光を示すことができる物質又はその一部を意味する。結果として、本明細書で用いられた場合、用語“標識シグナル”は、標識から放出された当該標識の検出を可能にするシグナルを示し、限定されないが、放射線、蛍光、化学発光、酵素反応の結果としての化合物の生成及び同様のものなどを含む。
【００９４】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載されたＣＤ８陽性Ｔ細胞又は免疫原性断片の検出は、標識された抗体が、完全にではないが小分子染料、タンパク質発色団、量子ドット及び金ナノ粒子などの蛍光色素分子で標識された場合には、蛍光をベースにした読み出しを介して伝えられてもよい。付加的な技術が本開示を読んだ当業者によって特定可能であって、さらに詳細には説明しない。
【００９５】
特に、本明細書に記載された方法を行うために、キットの構成要素が適切な説明及び他の必要な試薬とともに提供されてもよい。当該キットは通常、別個の容器に組成物を格納する。アッセイを実行するための説明、例えば紙あるいはテープ又はＣＤ−ＲＯＭのような電子的な支援における説明書又は音声説明が、通常、当該キットに含まれる。また、キットは、用いられる特定の方法に応じて、その他の梱包された試薬及び物質（例えば、洗浄緩衝液及び同様のもの）を含んでもよい。
【００９６】
いくつかの実施の形態では、本明細書に記載された免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤は、適切な媒体と合わせて、組成物に含まれてもよい。
【００９７】
本明細書で用いられる用語“媒体”は、活性成分として組成物に含まれるＴ細胞のための溶媒、キャリア、結合剤又は希釈剤として通常は機能する任意の様々な媒介物を示す。
【００９８】
いくつかの実施の形態では、組成物が個体に投与される場合、当該組成物は、抗炎症の医薬組成物であってもよく、Ｔ細胞及び医薬的に許容される媒体を含む。
【００９９】
特に、いくつかの実施の形態では、開示されるのが医薬組成物であって、該医薬組成物は、混合可能で医薬的に許容される１つ以上の媒体、及び特には医薬的に許容される希釈剤又は添加剤と組み合わせて、本明細書に記載された免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤の少なくとも１つを、本明細書に記載されたように含む。本明細書に記載されたこれらの医薬組成物、免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤は、個体における症状の治療又は予防のために活性成分として投与されてもよい。
【０１００】
本明細書で用いられた場合、用語“添加剤”は、薬剤の活性成分のためのキャリアとして使用される不活性物質を示す。本明細書に開示された医薬組成物に適切な添加剤は、個体の身体において、本明細書に記載された免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤を吸収する能力を向上させる任意の物質を含む。また、適切な添加剤は、便利で正確な投与を可能にするために、本明細書に記載された免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤を含む製剤の容量を増加させるために使用される任意の物質を含む。１回の投薬量におけるそれらの使用に加えて、添加剤は、本明細書に記載された免疫原性断片、その活性な部分、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及び／又は促進剤を扱いやすくするために、製造プロセスで使用されてもよい。投与経路及び薬剤の形態に応じて、異なる添加剤が用いられる。例示的な添加剤は、限定されないが、抗付着剤、結合剤、被覆剤、崩壊剤、充填剤、香味料（例えば甘味料）及び着色剤、流動促進剤、潤滑油、防腐剤、吸着剤などである。
【０１０１】
本明細書で用いられた場合、用語“希釈剤”は、組成物の活性成分を希釈又は運ぶために与えられる希釈作用物質を示す。適切な希釈剤は、医薬製剤の粘度を抑えることができる任意の物質を含む。
【０１０２】
実施の形態においては、本明細書で記載される組成物は、アジュバントをさらに含むことができる。本明細書で用いられた場合、用語“アジュバント”は、それ自体に特異的な抗原としての効果がなく、免疫系を刺激し、ワクチンに対する応答を向上させる物質を示す。用語“アジュバント”は、ラテン語のａｄｊｕｖａｒｅに由来し、助ける又は支援することを意味する。典型的には、免疫学的なアジュバントは、特定のワクチン抗原と組み合わせて用いられたときに、抗原特異的な免疫応答を促進し、延長し、又は増強するために作用する任意の物質として定義される。
【０１０３】
いくつかの実施の形態では、医薬組成物は、（１）単独で投与される本明細書に記載されたペプチド又は他の免疫原性分子、（２）本明細書に記載されたペプチド又は他の免疫原性分子＋キャリア、（３）本明細書に記載されたペプチド又は他の免疫原性分子＋アジュバント、（４）本明細書に記載されたペプチド又は他の免疫原性分子＋キャリア＋アジュバントを含む。特に、例示的な組成物（１）から（４）それぞれのためのキャリアは、（１）ｃＢＳＡ、（２）ｒＨＳＡ、（３）ＫＬＨ、（４）コレラ毒素サブユニットＢをそれぞれ含み、それぞれは、無機塩ベースである。当業者に既知の他のキャリアが適切であると予期され、さらに当業者によって特定される。これらアジュバントの例は、Ｔｈ２効果を有するアジュバント、アジュバントの特性を備えるキャリア、例えばジフテリアトキソイド、及びキャリアとして機能し得るアジュバント、例えば油−水乳濁液を含む。いくつかの実施の形態では、必要かつ特定の症状で十分な医薬組成物のための成分は、免疫原性ペプチドである。組成物の付加的な成分が当業者によって理解されるように、本明細書に記載されたペプチド又は他の免疫原性分子の免疫学的な影響を調節するために選択されてもよい。
【０１０４】
本開示のさらなる利点及び特性が、実験の項を参照して説明することのみを目的とする次の詳細な開示から以下でより明らかになる。
【実施例】
【０１０５】
本明細書に記載された方法システムがさらに以下の実施例で説明され、当該実施例は、説明の目的で提供され、限定を意図するものではない。
【０１０６】
特に、以下の実施例は、動脈瘤の治療又は予防のために個体に免疫付与するのに例示的な免疫原性断片及び方法、特に断片ｐ２１０を用いた方法を説明する。
【０１０７】
当業者は、以下の部分で詳細に説明される特徴を、本開示の実施の形態にしたがって、皮下投与あるいはｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏの他の投与経路を用いる付加的な免疫原性断片に適合させることの妥当性及び必要になる変更を十分理解する。
【０１０８】
示されない限り、以下の物質及び方法は、以下で説明される実施例で理解される。
【０１０９】
ペプチドの選択と免疫付与のためのそれらの調製
ヒトａｐｏＢ−１００ペプチドの樹立と選別が報告されている（参考文献８）。出願人によるパイロット実験及び先行する報告に基づいて（参考文献９、１０参照）、出願人は、免疫原の候補としてペプチド２１０（ｐ２１０、ＫＴＴＫＱ  ＳＦＤＬＳ  ＶＫＡＱＹ  ＫＫＮＫＨ−配列番号２１０）を選択した。天然のｐ２１０ペプチドが（ユーロ−ディアグノスチカ  ＡＢ、スウェーデン）、以前記載された方法を用いてキャリアとしての陽イオン性ウシ血清アルブミン（ｃＢＳＡ）に結合された（参考文献３、４参照）。Ａｌｕｍは、アジュバントとして使用され、ペプチド／ｃＢＳＡ複合体と１：１の体積比で混合された。ペプチドの複合体化及びａｌｕｍとの混合は、各免疫付与の前に新たに調製された。
【０１１０】
免疫付与の手順
雄のａｐｏＥ（−／−）マウス（ジャクソンラボラトリーズ）が米国動物管理認定協会の認可を受けた動物施設で飼育され、水及び飼料の摂取を制限せずに１２時間の昼／夜周期に維持された。セダーズ−シナイ  メディカル  センターの組織である動物管理及び使用委員会が本実験手順を承認した。パイロット実験では、２５又は５０μｇの投与量と比較して、１００μｇの投与量を用いたｐ２１０免疫付与が最適なアテローム抑制をもたらした。したがって、１００μｇの投与量が以降の全ての実験で用いられた。通常の餌で飼われたマウスが、６−７週齢で背中の肩甲骨の間の領域の皮下に最初の免疫付与を受け、９及び１２週齢で追加免疫を続けられた。最後の追加免疫から１週間後、餌が高コレステロール食（ＴＤ  ８８１３７、ハーラン−テクラッド）に交換され、２５週齢で安楽死させるまで続けられた。同じ免疫付与の時点でＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍを受けたマウスの別個の群が対照として使われた。ｐ２１０に対する免疫応答を評価するために、８又は１３週齢で数匹のマウスが安楽死させられた。
【０１１１】
組織の回収と調製
安楽死の際、心臓が回収され、クリオスタット切片のためにＯＣＴ化合物（ティシューテック）に組み込まれた。コンピュータを利用した組織形態計測でアテローム性動脈硬化の範囲を表面上で評価するために、全動脈が洗浄され、処理され、そしてオイルレッドＯで染色された（参考文献３、４参照）。
【０１１２】
免疫組織化学及び組織形態計測
マクロファージ又は樹状細胞を標準的な方法で免疫組織化学的に同定するために、大動脈洞切片がＭＯＭＡ−２（セロテック）又はＣＤ１１ｃ（イーバイオサイエンス）抗体で染色された。プラークサイズに対するオイル−レッド−Ｏ染色が標準的な方法で行われた。以前記載されたように、組織形態計測を評価するために、コンピュータを利用した形態解析が実行された（参考文献３、４参照）。
【０１１３】
血清ＥＬＩＳＡ
標準的な方法を用いて抗体濃度を評価するために、底が平坦な９６ウェルのポリスチレンプレート（マキシソープ、ドイツ）が４℃で一晩のインキュベーションによって、１００μｌ（２０μｇ／ｍｌ）のｐ２１０、ＫＬＨ、ＴＮＰ−ＫＬＨ（バイオサーチ  テクノロジーズ  Ｔ−５０６０）又はＢＳＡ（ＩｇＧに関して２μｇ／ｍｌ又はＩｇＭに関して１０μｇ／ｍｌ）各々で事前に被覆された。被覆濃度は、当該パイロット実験で最適化された。ヤギ抗マウスＨＲＰ−ＩｇＧ（ピアース  ３１４３７）又はＩｇＭ（サザン  バイオテック）が検出抗体として使用され、基質としてのＡＢＴＳ（サザン  バイオテック）で発色させることで結合抗体が検出され、そして光学密度値が４０５ｎｍで記録された。
【０１１４】
フローサイトメトリー分析
標準的な方法及びＦＡＣＳｃａｎ（ベクトン  ディックィンソン）又はＣｙＡｎ  ＡＤＰ分析装置（ベックマン  コールター）を用いて、以下の表１に列挙された抗体でフローサイトメトリー分析が行われた。細胞内のサイトカインの染色のために、細胞が染色される２時間前にブレフェルジンＡ（３μｇ／ｍｌ）が培養された細胞に加えられた。細胞内の分子を染色するために、細胞膜が透過処理された。
【表１】
2013544243.tif 000003
【０１１５】
養子移植実験
標準の餌で飼育した雄のａｐｏＥ（−／−）マウスが上述のように皮下に免疫付与を受け、ドナーとして１３週齢で安楽死させられた。同一処理の群由来の脾細胞が細胞の単離前に保存された。ドナーのＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞又はＢ細胞が、ダイナビーズ  フローコンプ（インビトロジェン）を使用して、製造者の方法に従って単離された。ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性細胞の陽性選択の前にＣＤ４陽性Ｔ細胞が脾細胞から陰性選択された。Ｂ細胞は陰性で単離され、一方、ＣＤ８陽性Ｔ細胞ははじめに陽性で単離され、ビーズから放出された。保存されたＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞及びＢ細胞の純度は、それぞれ９０％、８０％及び７０％であった。次に、単離されたＣＤ８陽性Ｔ細胞（１×１０６細胞／マウス）、ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞（１×１０５又は３×１０５細胞／マウス）又はＢ細胞（２×１０７細胞／マウス）が、尾静脈注射を介して未感作の６−７週齢の雄のａｐｏＥ（−／−）受容マウスに養子移植された。発行された血管生物学の文献では、養子移植されたリンパ球の集団は、大きく変化した。Ｂ細胞の移植では、２×１０７細胞数／マウスが先行する２つの報告に基づいて（参考文献１１、１２参照）選択された。ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の移植では、発行された文献（参考文献１３、１４、１５）における５×１０４から１×１０６細胞／マウスの範囲の個数の細胞が移植された。このため、我々は、我々の実験において２つの中間用量を選択する。ＣＤ８陽性Ｔ細胞では、１×１０６細胞が自己免疫疾患の分野からの報告に基づいて選択された（参考文献１６参照）。未感作の又は抗原に感作されたＣＤ４陽性Ｔ細胞は、未発達のアテローム生成作用が知られているため（参考文献１７、１８参照）、出願人は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を養子移植しなかった。受容マウスは、餌が高コレステロール食に交換された１３週齢まで通常の餌を摂取し、２５週齢で安楽死させられた。動脈硬化の範囲を評価するために、動脈が回収された。
【０１１６】
ＫＬＨ又はトリニトロフェニル−リポ多糖類（ＴＮＰ−ＬＰＳ）免疫付与
また、出願人は、ｐ２１０免疫付与が後に続く他の抗原による免疫付与の有効性に影響するかを調べた。ＫＬＨは原型的なＴ細胞依存的な抗原として、ＴＮＰはＴ細胞非依存的な抗原として選択された。標準の餌で飼った雄のＣ５７／ＢＬ６マウスが、ａｐｏＥ（−／−）マウスに関して上述されたように、皮下にｐ２１０複合体又はアジュバント対照による免疫付与を受けた。１３及び１５週齢でマウスは、１００μｇのＫＬＨ（アジュバントしてａｌｕｍとともに）でｐ２１０の部位から離れた注射部位に皮下で免疫付与され、又は１００μｇのＴＮＰ−ＬＰＳ（シグマ）を腹腔内に注射された。ＫＬＨ又はＴＮＰ免疫付与は、マウスの独立した群で実施された。安楽死の際（１６週齢）、血液が逆眼窩穿刺を介して収集された。
【０１１７】
ＢＭ由来の樹状細胞（ＢＭＤＣ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ発生
ＧＭ−ＣＳＦでＢＭＤＣを発生させるための方法が、以前の文献（参考文献１９）から変更しつつ適応された。簡単には、雄のａｐｏＥ−／−マウスの大腿骨及び脛骨由来の骨髄細胞が、１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄシステムズ）及び１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４（インビトロジェン）を含む２０ｍｌの完全なＲＰＭＩ−１６４０とともに１０ｃｍ培養皿（ファルコン）に播かれた。細胞が洗浄され、３日目及び５日目に古い培地が除去され、続けてＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を含む新しい培養培地を補充することで培養された。８日目に、未成熟なＤＣが顕微鏡下で非接着性細胞として現れ、強めのピペッティングで回収され、新しい培養皿における１．５ｍｌの培地内で２×１０５のＤＣにより継代培養された。
【０１１８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＤ８陽性Ｔ細胞の単離及び樹状細胞との共培養
ＣＤ８陽性Ｔ細胞のためのドナーマウス［雄のａｐｏＥ（−／−）マウス］が、上記スケジュールに従って、ＰＢＳ、ｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ、又はｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ／Ｐ２１０で免疫付与され、脾細胞が１３週齢で回収された。ＣＤ８セレクションダイナビーズキット（インビトロジェン）を用いて、製造者の方法に従ってＣＤ８陽性Ｔ細胞が陰性で単離された。次に、選択されたＣＤ８陽性Ｔ細胞は、３：１のＣＤ８：ＤＣ比でＤＣと共培養された。一連のパイロット研究は、当該アッセイで最適なＣＤ８：ＤＣ比を決定するために行われた。４時間の共培養後、細胞が収集され、ＬＳＲ  II  フローサイトメータ（ＢＤバイオサイエンシーズ）によるＣＤ１１ｃ及び７−ＡＡＤのフローサイトメトリー定量のために処理され、そしてデータがサミットＶ４．３ソフトウェアで解析された。共培養におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞なしでの樹状細胞の細胞死が基準値として用いられ、細胞の特異的な溶解の割合が以前記載された方法を用いて計算された（参考文献２０参照）。
【０１１９】
統計
データは、平均値±標準偏差で示されている。各群の動物の匹数は、文章又は図面の説明中に記載されている。データは、分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続いて、ニューマン−クルーズの多群比較又はふさわしい場合はｔ−検定で解析された。Ｐ＜０．０５が統計的に有意とし、各図面における水平な線は、群間の統計的に有意な差を示す。
【０１２０】
実施例１：ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片
ＬＤＬで見出された単一のタンパク質、アポリポタンパク質Ｂ−１００（ａｐｏ  Ｂ）に注目することによって、特異的な免疫原性エピトープが特徴付けられた。ヒトａｐｏＢの完全長４５６３個のアミノ酸配列をカバーする、長さがアミノ酸残基２０個である３０２個のペプチドを含むペプチドライブラリが構築された。ペプチドは、全ての配列をカバーするように、切断位置で５個のアミノ酸を重複させて作成された。ペプチドは、以下の表２で示すように、ａｐｏ  ＢのＮ末端から始まる１−３０２の番号が割り振られた。
【表２−１】
2013544243.tif 000004
【表２−２】
2013544243.tif 000005
【表２−３】
2013544243.tif 000006
【表２−４】
2013544243.tif 000007
【表２−５】
2013544243.tif 000008
【表２−６】
2013544243.tif 000009
【表２−７】
2013544243.tif 000010
【表２−８】
2013544243.tif 000011
【表２−９】
2013544243.tif 000012
【表２−１０】
2013544243.tif 000013
【表２−１１】
2013544243.tif 000014
【０１２１】
ＡｐｏＢ１００の配列の完全長は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる参考文献４３（特に図１参照）などの様々な文献で見られる。
【０１２２】
実施例２：ａｐｏＢ−１００の免疫原性断片での免疫付与は大動脈の動脈瘤の破裂を抑制した。
雄のａｐｏＥ  ＫＯマウスが７、１０及び１２週齢で皮下に免疫付与され、群１は、アジュバントとしてａｌｕｍを使用したＰ２１０／ｃＢＳＡ複合体（１００μｇのＰ２１０）；群２は、対照である１００μｇのｃＢＳＡ／ａｌｕｍ（ｃＢＳＡ）；群３は、対照であるＰＢＳ（ＰＢＳ）である。１４匹のＰ２１０、１７匹のｃＢＳＡ、１６匹のＰＢＳ及び８匹の生理食塩水を注射されたマウスが試験された。
【０１２３】
ＡｎｇII（１０００ｎｇ／Ｋｇ／分）が、全ての３つの群で動脈瘤を引き起こすために、皮下に埋め込まれた浸透圧ポンプで１０週齢の時点から４週間投与された。生理食塩水は、対照群に投与された。マウスは１４週齢で安楽死させられた。マウスは、実験の間、通常の餌を摂食した。
【０１２４】
動脈瘤の形成（破裂を含む）と発生率が調べられた。結果は次の表３Ａ及び表３Ｂに示されている。
【表３Ａ】
2013544243.tif 000015
【表３Ｂ】
2013544243.tif 000016
【０１２５】
上記表に示されたように、Ｐ２１０免疫付与は、動脈瘤の破裂に起因する死亡率を減少させた。ペプチドＰ２１０に関連するａｐｏＢ−１００での免疫付与は、アンジオテンシンIIの注入開始後２８日目において、９０．５％の生存可能性を有するが、ｃＢＳＡ群及びＰＢＳ群に関しては、それぞれたった６９．９％又は６４．９％である。
【０１２６】
案内のみを目的とし、限定を意図しない本明細書に記載された作用の考えられる機序は、ｐ２１０免疫付与がＢＰを抑制したことである。ｐ２１０免疫付与の効果は、以下の実施例で説明されるアテローム性動脈硬化の抑制と同じ又は同程度で検出されるＣＤ８によって調節される。したがって、Ｔ細胞応答をもたらす能力は、ｐ２１０に特異的であって（抗原特異性）、他のａｐｏＢ−１００ペプチドは、類似の抗原特異的ＣＤ８効果を示すことが予期される。
【０１２７】
実施例３：ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片での免疫付与は大動脈の動脈瘤のセグメント形成を抑制した。
雄のａｐｏＥ  ＫＯマウスが７、１０及び１２週齢で皮下に免疫付与され、群１は、アジュバントとしてａｌｕｍを使用したＰ２１０／ｃＢＳＡ複合体（１００μｇのＰ２１０）；群２は、対照である１００μｇのｃＢＳＡ／ａｌｕｍ（ｃＢＳＡ）；群３は、対照であるＰＢＳ（ＰＢＳ）である。４２匹のＰ２１０、４６匹のｃＢＳＡ、３７匹のＰＢＳ及び８匹の生理食塩水を注射されたマウスが試験された。
【０１２８】
ＡｎｇII（１０００ｎｇ／Ｋｇ／分）が、全ての３つの群で動脈瘤を引き起こすために、皮下に埋め込まれた浸透圧ポンプで１０週齢の時点から４週間投与された。生理食塩水は、対照群に投与された。マウスは１４週齢で安楽死させられた。雄のａｐｏＥ  ＫＯマウスは、実験の間、通常の餌を摂食した。
【０１２９】
大動脈の測定が８つのセグメント：１）弓の始まり、２）弓の終わり、３）心尖の高さ、４）３と５の間、５）腎臓以上、６）腎臓以下、７）分岐前、及び８）腎動脈間、で行われた（図１の略図参照）。
【０１３０】
図１に示された各セグメントの平均直径が次の表４に記載され、セグメントの動脈瘤は丸く囲まれている。
【表４】
2013544243.tif 000017
【０１３１】
次の表５に示された、表４のデータのさらに詳細は、Ｐ２１０免疫付与が有意に動脈瘤部分の形成を抑制することを示唆している。動脈瘤のセグメント／全体のセグメントの割合は、ｃＢＳＡ対照で２９．６％、ＰＢＳ対照で２３．４％であるところ、Ｐ２１０免疫付与は、動脈瘤のセグメント／全体のセグメントの割合を１４．３％まで減少させた。
【表５】
2013544243.tif 000018
【０１３２】
実施例４：ＡｐｏＢ  １００の免疫原性断片での免疫付与は大動脈の動脈瘤の破裂に関連する死亡率を抑制した。
雄のａｐｏＥ  ＫＯマウスが７、１０及び１２週齢で皮下に免疫付与され、群１は、アジュバントとしてａｌｕｍを使用したＰ２１０／ｃＢＳＡ複合体（１００μｇのＰ２１０）；群２は、対照である１００μｇのｃＢＳＡ／ａｌｕｍ（ｃＢＳＡ）；群３は、対照であるＰＢＳ（ＰＢＳ）である。４２匹のＰ２１０、４６匹のｃＢＳＡ、３７匹のＰＢＳ及び８匹の生理食塩水を注射されたマウスが試験された。
【０１３３】
ＡｎｇII（１０００ｎｇ／Ｋｇ／分）が、全ての３つの群で動脈瘤を引き起こすために、皮下に埋め込まれた浸透圧ポンプで１０週齢の時点から４週間投与された。生理食塩水は、対照群に投与された。マウスは１４週齢で安楽死させられた。４２匹のＰ２１０、４６匹のｃＢＳＡ、３７匹のＰＢＳ及び８匹の生理食塩水を注射されたマウスが試験された。マウスは１４週齢で安楽死させられた。雄のａｐｏＥ  ＫＯマウスは、実験の間、通常の餌を摂食した。
【０１３４】
結果が図２のチャートで示されており、ｐ２１０で処理されたマウスの生存は、対照群を超えたことを示す。図２の比較で示されるように、動脈瘤形成を引き起こすようにアンジオテンシンIIの注入のために浸透圧ポンプを埋め込んでから２８日後において、生存率は、Ｐ２１０で９０．５％、ｃＢＳＡで６９．６％、ＰＢＳで６４．９％、生理食塩水対照で０％であった。
【０１３５】
実施例５：ｐ２１０免疫付与のアテローム保護効果
ワクチン調製物は、以前記載された方法（参考文献３、４）を用いて、キャリアとしての陽イオン性ウシ血清アルブミン（ｃＢＳＡ）に結合されたｐ２１０ペプチド（ユーロ−ディアグノスチカ  ＡＢ、スウェーデン）を含む。Ａｌｕｍがアジュバントとして使用され、ペプチド／ｃＢＳＡ複合体と１：１の体積比で混合された。ペプチドの複合体化は、免疫付与当日に行われ、各免疫付与の直前に新たにａｌｕｍと混合された。通常の餌で飼われたマウスが、６−７週齢で背中の肩甲骨の間の領域の皮下に最初の免疫付与を受け、１０及び１２週齢で追加免疫を続けられた。最後の追加免疫から１週間後、餌が高コレステロール食（ＴＤ  ８８１３７、ハーラン−テクラッド）に交換され、２５週齢で安楽死させるまで続けられた。
【０１３６】
ｐ２１０での免疫付与は、大動脈のアテローム性動脈硬化を、ＰＢＳ及びｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ群と比較して、それぞれ５７％及び５０％まで抑制し（図３Ａ）、血中コレステロール濃度及び体重に影響を与えなかった（表６）。
【表６】
2013544243.tif 000019
【０１３７】
ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群における大動脈洞プラークは、それぞれＭＯＭＡ−２及びＣＤ１１ｃ免疫染色で評価されて有意に少なくなったマクロファージ及びＤＣの免疫反応性を有しており（図３Ｂ）、アテローム性動脈硬化の病変部に差はなかった（ＰＢＳ群  ０．４０±０．１３ｍｍ２、ｎ＝１０；、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群  ０．４２±０．０９ｍｍ２、ｎ＝１０；ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群  ０．４０±０．０８ｍｍ２、ｎ＝９）。
【０１３８】
実施例６：免疫応答を引き起こしたｐ２１０−免疫付与の特徴付け
ＤＣは、細胞性の及び液性の免疫応答両方の上流の主な細胞のタイプであるから、出願人は、これら細胞が免疫戦略によって影響を受けるか確かめた。フローサイトメトリー解析のために、最初の免疫付与の１週間後に皮下の免疫付与部位から細胞が単離された。ＰＢＳ注射を受けたマウスは注射部位に腫れ又は細胞の蓄積が生じなかったので、ＰＢＳ群は当該解析に含まれなかった。
【０１３９】
ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較して、免疫付与部位において、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群ではＣＤ１１ｃ陽性の及びＣＤ１１ｃ陽性ＣＤ８６陽性の細胞が有意に少なかった（図４Ａ及び４Ｂ）。また、３回目の免疫付与から１週間後、ＬＮ細胞に対してフローサイトメトリーが行われたとき、ＣＤ１１ｃ陽性ＣＤ８６陽性の細胞は、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較して、有意に少なかった（図４Ｃ）。
【０１４０】
次に、出願人は、ｐ２１０に対する液性の免疫応答を明確にするために、抗体反応を評価した。免疫付与前、３群すべてのマウスは、ｐ２１０に対して低いレベルのＩｇＧ力価を有していた。安楽死の際、ｐ２１０に対するＩｇＧ力価は、ＰＢＳ群では低いままであったが、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群では、有意に増加していた。ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍでの免疫付与は、ＰＢＳ群と比較してｐ２１０に対するＩｇＧ力価は増加したが、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較して有意に低下した（図５Ａ）。ｐ２１０に対するＩｇＧ応答と対比して、すべての群におけるｐ２１０に対するＩｇＭ力価が有意に増加したことは（図５Ｂ）、ｐ２１０に対する内因性の免疫応答を示唆している。
【０１４１】
ＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）は、明確に定義されたリンパ球活性化マーカーである。したがって、出願人は、Ｔ細胞の免疫応答を評価するために、最初の免疫付与の１週間後におけるマウスの浅頸及び腋窩リンパ節（ＬＮ）からのＣＤ４陽性又はＣＤ８陽性Ｔ細胞でのＣＤ２５の発現を解析した。リンパ節内のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群（図６Ａ）のそれと比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に多く、一方、リンパ節内のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞は、３群間で差はなかった（図６Ｂ）。
【０１４２】
ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群における脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性Ｔ細胞の集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、有意に多く（
図６Ｃ）、脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ１２陽性Ｔ細胞には３群間で差がなかった（図６Ｄ）。脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性Ｔ細胞の集団は、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に増加した。しかし、この増加した応答は、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍの免疫付与によって、有意に弱められた（図６Ｅ）。一方、脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ１２陽性Ｔ細胞は、３群間で差はなかった（図６Ｆ）。
【０１４３】
実施例７：ｐ２１０で免疫付与されたマウスから未感作の受容マウスへのＣＤ８陽性Ｔ細胞の養子移植はｐ２１０免疫付与のアテローム保護効果を再現する。
ドナーであるａｐｏＥ（−／−）マウスが、同じ群、つまりＰＢＳ、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ、又はｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍで同じ免疫付与の方法を受けた。受容マウスである未感作の雄のａｐｏＥ（−／−）マウスは、６−７週齢でドナー細胞を注射され、そして餌が高コレステロール食に交換された１３週齢まで通常の餌を摂食し、２５週齢で安楽死された。
【０１４４】
安楽死の際、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞を注射された受容マウスがＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞を注射された受容マウスと比較して、大動脈におけるアテローム性動脈硬化の病変部が有意に少なくなっていたことは、ワクチンによって誘導されたエフェクターＴ細胞がＣＤ８陽性であって、機序的に関連があることを強く示唆している（図７Ａ）。
【０１４５】
大動脈病変部のこの減少は、脾臓のＣＤ１１ｃ陽性のＤＣの減少と関連しており（ＰＢＳ群：４．３±１．７％；ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群：３．４±０．３％；ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群：１．５±０．３％；各群ｎ＝５、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群に対するｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群の分散分析でｐ＜０．０５）、３群間で総コレステロールの血中濃度に差がなかった（ＰＢＳ群：１０８３±２９６ｍｇ／ｄｌ；ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群：９７５±４０１ｍｇ／ｄｌ；ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群：１０９８±３７９ｍｇ／ｄｌ）。
【０１４６】
ｐ２１０で免疫付与されたドナーマウスの脾臓から単離されたＢ細胞の養子移植は、他のドナー由来のＢ細胞を受けたマウスと比較して、受容マウスにおけるアテローム性動脈硬化に影響しなかった。（図７Ｂ）。これらの所見は、ｐ２１０免疫付与のアテローム保護効果のメディエータとしてのＢ細胞を除外した。
【０１４７】
皮下のｐ２１０免疫付与によって誘導される可能性のあるアテローム保護メディエータとしてのＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞を除外するために、出願人は、ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞を１×１０５細胞／マウスの投与量で未感作の受容ａｐｏＥ−／−マウスに養子移植した。ＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の受容マウスの３群間で病変部の大きさに差はなかった。ＣＤ８陽性Ｔ細胞のプールからのＣＤ２５陽性細胞の減少がｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍの受容マウスで見られたアテローム性動脈硬化の抑制を無効にしたことは、ＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞がアテローム性動脈硬化に対するワクチンの保護効果に機序的に関連するという考えをさらに支持している（図７Ｃ）。３×１０５細胞／マウスという、より多数のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の移植は、受容マウス３群すべてにおいて病変部の大きさを抑制しなかった（図７Ｄ）。
【０１４８】
実施例８：ｐ２１０で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの樹状細胞に対する増加した細胞溶解活性。
ｐ２１０免疫付与が免疫付与の部位及びアテローム性動脈硬化のプラークにおけるＤＣを抑制し、さらにｐ２１０免疫付与されたドナー由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞の養子移植が受容マウスにおける脾臓のＤＣを減少させたという結果が得られたため、出願人は、ＤＣがＣＤ８陽性Ｔ細胞の可能性のある標的となり得ると仮定した。
【０１４９】
これを確かめるために、出願人は、種々の免疫付与された群由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞と、骨髄由来のＤＣとを共培養した。ｐ２１０免疫付与されたマウスからのＣＤ８陽性Ｔ細胞は、ＰＢＳ又はＢＳＡ／ａｌｕｍ群由来のそれと比較した場合、ＤＣの細胞死の割合が有意に増加した（図８）。ＣＤ８陽性Ｔ細胞のこの増加した細胞溶解機能は、パーフォリンではなく、増加したグランザイムＢの発現に関連した（図９）。
【０１５０】
実施例９：ｐ２１０での免疫付与は、他のＴ細胞依存又は非依存の抗原に対する適応免疫反応に影響しなかった。
ｐ２１０免疫付与がＣＤ１１ｃ陽性のＤＣを減少させ、ｐ２１０に対する適応ＩｇＧ応答を抑制したという結果が得られたため、次に出願人は、ｐ２１０によるＤＣの調節が他の抗原に対する宿主免疫応答を変化させるかを調べた。
【０１５１】
まず、出願人は、上述のようにｐ２１０でマウスに免疫付与し、２回に分けて皮下にＫＬＨ免疫付与又はＴＮＰ−ＬＰＳの腹腔内注射を続けた。それぞれの免疫付与の有効性に関する代理としてＫＬＨ−又はＴＮＰ−ＩｇＧ力価を用いて、出願人は、ｐ２１０免疫付与のマウスとＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群のマウスの力価との間で、ＫＬＨ−又はＴＮＰ−ＩｇＧ力価における差がないことを見出した（図１０）。
【０１５２】
実施例１０：ａｐｏＢ−１００免疫原性断片での免疫付与は、アンジオテンシンIIで誘導された大動脈の動脈瘤における高血圧及び死亡率を低下させる。
ＡｐｏＥ（−／−）マウスが７、１０及び１２週齢においてｐ２１０／ｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ（ｐ２１０；１００μｇ）で免疫付与された。ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／Ａｌｕｍ（ｃＢＳＡ）を受けたマウスが対照とされた。１０週齢で、マウスはＡｎｇII（１ｍｇ／Ｋｇ／分）を放出する浸透圧ポンプを皮下に埋め込まれ、４週間後に安楽死された。大動脈、脾臓、及びリンパ節（ＬＮ）が回収された、ｐ２１０ワクチンは、対照と比較して、ＡＡ破裂による死亡率を有意に抑制した（図１１参照）。
【０１５３】
ＬＮと脾臓における樹状細胞（ＤＣ）のフローサイトメトリー解析は、細胞内のＩＦＮ−γの発現がｐ２１０群で上方制御（アップレギュレート）されたことを示した。ｉｎ  ｓｉｔｕジハイドロエチジン法によって測定された大動脈の超酸化物の産生及びウェスタンブロットで測定された大動脈のＡＴ１受容体（ＡＴ１Ｒ）の発現がｐ２１０群で有意に減少した。ｐ２１０ワクチンは、１３週齢での平均動脈圧を有意に減少させた（表７参照）。
【０１５４】
ＡｎｇIIで誘導されたＡＡ破裂による死亡率は、ｐ２１０ワクチンで有意に減少した。この保護効果は、ＤＣにおけるＩＦＮ−γ発現の上方制御、減少した動脈圧、ＡＴ１Ｒ発現及び大動脈における超酸化物の産生に関連した。ワクチンは、ＡＡの非侵襲性の治療として有望である。
【表７】
2013544243.tif 000020
【０１５５】
実施例１１：ａｐｏＢ−１００免疫原性断片で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞溶解活性の増加は、脂質関連抗原に特異的である。
出願人は、ａｐｏＢ−１００関連ペプチドｐ２１０での免疫付与がアテローム性動脈硬化を抑制し、及びａｐｏＥ−／−マウスにおいてプラーク内のＣＤ１１ｃ陽性の樹状細胞（ＤＣ）を減少させることを示した。養子移植実験は、アテローム保護がＣＤ８陽性Ｔ細胞によって調節されることを示した。ａｐｏＢ−１００が血清脂質のＬＤＬ画分に含まれるため、出願人は、ｐ２１０で免疫付与されたマウスにおいて、ＤＣによって提示される脂質関連抗原に特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞溶解活性を評価した。
【０１５６】
ＡｐｏＥ（−／−）マウスが７、９及び１２週齢においてｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ、又はＰＢＳで免疫付与された。３回目の免疫付与から１週間後、マウスは脾臓のＣＤ８陽性Ｔ細胞を収集するために安楽死された。未感作のａｐｏＥ−／−マウスの骨髄由来のＤＣが分化されて標的細胞として使用された。４時間の溶解アッセイが、１０％ＦＢＳを含む培養培地で３：１のＣＤ８対ＤＣ比を用いて行われた。次に細胞が収集され、フローサイトメトリーを使用して細胞溶解を評価するため、及びＤＣと７−ＡＡＤとを同定するためにＣＤ１１ｃに対して染色された。ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ及びＰＢＳと比較して、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍで免疫付与されたマウスでは、ＣＤ８陽性Ｔ細胞による溶解活性が有意に大きかった（表）。アッセイが脱脂されたＦＢＳを含む培地で行われた場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍで免疫付与されたマウスからのＣＤ８陽性Ｔ細胞に特異的な溶解活性が無効になったことは（表８）、培養培地内のＦＢＳの脂質画分が抗原の由来になったことを示唆している。溶解アッセイの２４時間前にＦＩＴＣ標識されたｐ２１０でのＤＣのロードは、抗原の取り込みとｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍで免疫付与されたマウスからのＣＤ８陽性Ｔ細胞の溶解活性に対する特異性を示した（表８参照）。
【０１５７】
これらの結果は、ＤＣを標的とするＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞溶解機能が、脂質関連抗原、具体的にはａｐｏＢ−１００のｐ２１０断片に特異的であることを示し、これがｐ２１０免疫付与の保護効果の原因である。
【表８】
2013544243.tif 000021
【０１５８】
実施例１２：ｐ２１０ワクチンに対する抗体反応
ｐ２１０に対する抗体力価は、免疫付与以前で低かった。２５週齢で安楽死させた際、全群でｐ２１０に対するＩｇＭ力価における有意な増加がみられた（図１２）ことは、自己ペプチドｐ２１０に対する内因性の免疫応答を示唆している。ＰＢＳ群と比較して、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群及びｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ両方でｐ２１０に対するＩｇＧ力価に有意な増加がみられたが、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍにおける力価は、驚くべきことに２つの応答群間でより高かった。ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群及びｐ２１０／ｃＢＳＡａｌｕｍ群にアジュバントとしてａｌｕｍが存在することによってＰＢＳ群では起こらなかったＩｇＭ応答からＩｇＧへのクラス切替が起こる傾向にあった。
【０１５９】
実施例１３：ｐ２１０ワクチンへのＣＤ４陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞応答
Ｔ細胞の免疫応答を評価するために、最初の免疫付与の１週間後におけるマウスの浅頸及び腋窩リンパ節（ＬＮ）からＴ細胞を収集した。リンパ節のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞（表１）は、３群で違いはなかった。脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性Ｔ細胞の集団は、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に増加した。しかし、この増加した応答は、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍの免疫付与によって有意に弱められた（表９）。興味深いことに、脾臓のＣＤ４陽性ＣＤ６２Ｌ陽性Ｔ細胞（表１）の集団は、ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群より少なかった。
【０１６０】
一次免疫の１週間後、リンパ節のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞の集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群のそれと比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に高かった（表２）。ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で、脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性ＩＬ−１０陽性のＴ細胞の集団が有意に多かった（表２）。脾臓のＣＤ８陽性ＣＤ６２Ｌ陽性のＴ細胞の集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群と比較した場合、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群で有意に多かった（表９）。他の時点におけるＴ細胞のプロファイルは、群間で有意な違いはなかった。
【表９】
2013544243.tif 000022
【０１６１】
実施例１４：ＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性のＴ細胞のエフェクターとしての役割は細胞傷害性機能に関連する。
ワクチンがプラーク及びｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍの受容マウスの脾臓に存在するＤＣを減少させた（図３）ことは、免疫付与後のＣＤ８陽性Ｔ細胞のエフェクターとしての役割がプラークにおけるＤＣの減少に現われたことを示唆している。したがって、出願人は、同系の骨髄由来ＤＣに対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞傷害性活性に与えるワクチンの影響を評価した。免疫付与された群のＣＤ８陽性Ｔ細胞が、ＣＤ８セレクションダイナビーズキット（インビトロジェン）を用いて陰性に単離され、続いて１０％ＦＢＳを補ったＲＰＭＩで３：１のＣＤ８：ＤＣ比でＤＣとともに共培養された。４時間後に細胞が回収され、ＣＤ１１ｃ＋及び７−ＡＡＤのフローサイトメトリー決定のために処理された（参考文献２０）。共培養においてＣＤ８陽性Ｔ細胞なしでの樹状細胞の細胞死が基準値として用いられ、細胞の特異的な溶解の割合が以前に記載された方法（参考文献２０）で計算された。
【０１６２】
ｐ２１０免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ａｌｕｍ群のそれと比較した場合、ＤＣ溶解の割合を有意に増加させた（図１３、パネルＡ）。ＣＤ８陽性Ｔ細胞のこの増加した細胞溶解機能は、パーフォリンではなく、増加したグランザイムＢの発現に関連した（図９）。ＣＤ２５陽性細胞の減少がｐ２１０免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞に特異的な増加した細胞溶解活性を無効にしたことは（図１３、パネルＢ）、ＣＤ８陽性ＣＤ２５陽性Ｔ細胞がエフェクター集団であったことを示唆している。また、ｐ２１０で免疫付与されたマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞に特異的な増加した細胞溶解活性が脱脂された血清を補われた培地の使用で消失したことは（図１３、パネルＣ）、ＣＴＬによって認識される標的のＤＣにおける抗原が培地にａｐｏＢ−１００を含む血清ＬＤＬ由来のものであったことを示唆している。
【０１６３】
実施例１５：ｐ２１０ペプチドはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＤＣによってエンドサイトーシス取り込みされる。
ＢＭＤＣにロードしているペプチドがＦＩＴＣ（ピアースのＦＩＴＣコンジュゲイティングキット）で標識されたｐ２１０を使用して明らかにされた。樹状細胞内のＦＩＴＣ蛍光の存在は、樹状細胞によるｐ２１０の取り込みを示した。ＦＩＴＣ標識されたｐ２１０がＤＣによってエンドサイトーシス取り込みされることを示す図１４を特に参照すると、抗原の取り込みが示唆される。
【０１６４】
実施例１６：ｐ２１０ペプチドは、ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対してＤＣによって提示される。
ｐ２１０ペプチドは、ａｐｏＢ−１００分子のプロテオグリカン結合部位を含む。このペプチドは、細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対する交差提示のために、抗原を効率よく輸送できる細胞透過性ペプチドである（参考文献５３）。したがって、出願人は、ｐ２１０をロードしたＤＣと共培養され、ＬＰＳで成熟化されたＣＤ８陽性ＣＤ２５陰性Ｔ細胞の活性化を評価した。ＬＰＳで処理されたｐ２１０をロードしたＤＣとの共培養から４８時間後のＣＤ８陽性ＣＤ２５陰性Ｔ細胞は、未処理、又はＬＰＳのみで処理した共培養と比較して、有意に増加した（図１５）。この結果は、ｐ２１０抗原がＣＤ８陽性Ｔ細胞に対してＤＣによって提示されることを示唆している。
【０１６５】
実施例１７：ｐ２１０をロードしたＤＣは、免疫性ＣＤ８陽性Ｔ細胞によって特異的に標的にされる。
実施例１６において上に示された結果は、ｐ２１０がＣＤ８陽性Ｔ細胞に対してＤＣによって提示されることを支持する。ＤＣに対する溶解活性がｐ２１０抗原に特異的かどうかが不明なままである。したがって、出願人は、ＦＩＴＣ標識されたｐ２１０をロードしたＢＭＤＣを標的として使用して溶解アッセイを再び行った。ＦＩＴＣ陽性ＤＣに対する溶解活性は、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ａｌｕｍのマウス由来のＣＤ８陽性Ｔ細胞で有意に増加したことは（図１６）、抗原特異的な溶解活性を示唆している。
【０１６６】
まとめると、いくつかの実施の形態において、本明細書に記載されたのは、個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状の治療又は予防のための免疫調節剤、Ｔ細胞、組成物、方法及びシステムである。
【０１６７】
上記で説明された実施例は、本開示の分子、組成物、システム及び方法の実施の形態の製造方法及び使用方法の完全な開示と説明とを当業者に与えるために提供され、発明者がそれらの開示としてみなすことの範囲を限定することを目的とするものではない。明細書内で言及された全ての特許及び文献は、本開示に関連する当業者の技術水準を示すものである。
【０１６８】
背景、まとめ、詳細な説明及び実施例において引用された各文献（特許、特許出願、学術論文、要約、研究室説明書、書籍又は他の開示物）の開示全体が参照により本明細書に組み入れられる。本開示で引用されたすべての参照文献は、各参照文献がそれぞれその全体を参照されることで組み入れられたとしても、参照により同じ程度で組み入れられる。しかし、引用された参照文献と本開示との間で何らかの矛盾があれば、本開示が優先される。さらに、テキストファイル“Ｐ６８６−ＰＣＴ−２０１１−１１−１１−Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５”として、２０１１年１１月１１日に作成されて本明細書とともに提出された配列表が、本願の不可欠な一部を形成し、その全体について参照により本明細書に組み入れられる。
【０１６９】
本明細書で使用された用語及び表現は、限定ではなく、説明のための用語として使用され、示された及び記載された特徴又はそれらの一部と同等のものを除外するものとしての用語及び表現の使用を目的としていないが、主張された開示の範囲内で様々な変形が可能であることが認識される。したがって、本開示は好ましい実施の形態、具体例及び付加的な特徴によって具体的に開示されたが、本明細書に開示された概念の変形及び変更が当業者によってなされることが可能であり、その変形及び変更は、添付の特許請求の範囲によって定められるように本開示の範囲内のものとみなされる。
【０１７０】
また、本明細書で使用された専門用語は、特定の実施の形態を記載する目的のためだけに用いられ、限定することを目的としないことが理解される。本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられた場合、単数形の“ａ”、“ａｎ”及び“ｔｈｅ”は、文脈で明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。用語“複数”は、文脈で明確に示さない限り、２つ以上の指示対象を含む。定義されない限り、本明細書で用いられるすべての技術的及び科学的用語は、本開示に関連する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
【０１７１】
マーカッシュ形式の群又は他の群が本明細書内で用いられた場合、群の個々の要素のすべて及びすべての組み合わせ及び群の可能な副結合がそれぞれ独立に本開示に含まれることが意図される。本明細書において記載された又は例示された成分又は物質のあらゆる組み合わせが、言及されない限り、本開示の実施のために用いられ得る。当業者は、具体的に例示されたもの以外に方法、装置要素、及び物質が、必要以上の実験を行うことなく本開示の実施に使用され得ることを理解する。すべての既知の技術と機能的に等価な方法、装置要素及び物質が本開示に含まれることが意図される。範囲、例えば温度範囲、周波数範囲、時間範囲又は組成範囲が具体的に与えられると、すべての中間範囲及びすべての部分的な範囲に加え、与えられたその範囲内のすべての個々の値が本開示に含まれることが意図される。本明細書に開示された範囲又は群の任意の１つ以上の個々の要素が本開示の特許請求の範囲から除外されてもよい。適切に本明細書に具体的に記載された本開示は、本明細書に具体的に開示されなかった任意の要素又は複数の要素、限定又は複数の限定を欠いても実施可能である。
【０１７２】
本開示の多数の実施の形態が記載された。本明細書で提供された具体的な実施の形態は、本開示の有用な実施例であって、本明細書で説明された装置、装置要素、方法のステップの多くの変形を用いて本開示が実行可能であることが当業者に明らかである。当業者に明らかになるように、本方法に有用な方法及び装置は、多数の付加的な組成物及び処理する要素及びステップを含むことができる。
【０１７３】
特に、本開示の精神と範囲から逸脱することなく、様々に変形されることが理解される。したがって、他の実施の形態が特許請求の範囲の範囲内である。
【０１７４】
本出願は、２０１０年１１月１２日に出願された“動脈瘤の治療及び／又は予防のための免疫調節方法及びシステム”という表題が付けられた仮出願番号第６１／４１３，３７２号（整理番号Ｐ６８６−ＵＳＰ）に対する優先権を主張し、それは、その全体を参照することで本明細書に組み入れられる。また、本出願は、２００２年４月５日に出願されたＰＣＴ出願に係る国際公開第０２／０８０９５４号、２０１１年１１月１１日に出願された“高血圧の治療及び／又は予防のための免疫調節方法及びシステム”という表題が付けられたＰＣＴ出願（整理番号Ｐ６９４−ＰＣＴ）及び２０１１年１１月１１日に出願された“Ａｐｏｂ１００の免疫原性断片を含む免疫調節組成物、方法及びシステム”という表題が付けられたＰＣＴ出願（代理人整理番号Ｐ７００−ＰＣＴ）に関連し、その全体を参照することで各々が本明細書に組み入れられる。
【０１７５】
（参考文献）
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４．Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｇ．  Ｎ．，  Ｉ．  Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ，  Ｍ．  Ｌｉｎｄｈｏｌｍ，  Ｐ．  Ｄｉｍａｙｕｇａ，  Ｋ．  Ｙ．  Ｃｈｙｕ，  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ．  ２００３．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ＡｐｏＥ−Ｎｕｌｌ  Ｍｉｃｅ  ｂｙ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＡｐｏＢ−１００  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２３：８７９−８８４
５．Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｇ．  Ｎ．，  Ｌ．  Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，  Ｉ．  Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ，  Ｐ．  Ｄｉｍａｙｕｇａ，  Ｋ．  Ｙ．  Ｃｈｙｕ，  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ．  ２００５．  Ａｔｈｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＭＤＡ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｐｏ  Ｂ−１００  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｈ２  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ
３８：１７１−１７９
６．Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｇ．  Ｎ．，  Ｈ．  Ｂｊｏｒｋｂａｃｋａ，  Ｉ．  Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ，  Ｉ．  Ｌｊｕｎｇｃｒａｎｔｚ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ．  ２００８．  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｐｏ  Ｂ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｐｏ  Ｂ−１００  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｊ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．１−８
７．Ｋｌｉｎｇｅｎｂｅｒｇ，  Ｒ．，  Ｍ．  Ｌｅｂｅｎｓ，  Ａ．  Ｈｅｒｍａｎｓｓｏｎ，  Ｇ．  Ｎ．  Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｄ．  Ｓｔｒｏｄｔｈｏｆｆ，  Ｍ．  Ｒｕｄｌｉｎｇ，  Ｄ．  Ｆ．  Ｋｅｔｅｌｈｕｔｈ，  Ｎ．  Ｇｅｒｄｅｓ，  Ｊ．  Ｈｏｌｍｇｒｅｎ，  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  ２０１０．  Ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  ａｎ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ−１００  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ３０：９４６−９５２
８．Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｇ．  Ｎ．，  Ｂ．  Ｈｅｄｂｌａｄ，  Ｇ．  Ｂｅｒｇｌｕｎｄ，  Ｒ．  Ａｌｍ，  Ｍ．  Ａｒｅｓ，  Ｂ．  Ｃｅｒｃｅｋ，  Ｋ．  Ｙ．  Ｃｈｙｕ，  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ．  ２００３．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｌｄｅｈｙｄｅ−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ＡｐｏＢ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２３：８７２−８７８
９．Ｓｃｈｉｏｐｕ，  Ａ．，  Ｊ．  Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ，  Ｉ．  Ｓｏｄｅｒｂｅｒｇ，  Ｓ．  Ｊａｎｃｉａｕｓｋｉｅｎｅ，  Ｓ．  Ｌｉｎｄｇｒｅｎ，  Ｍ．  Ｐ．  Ａｒｅｓ，  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ，  Ｒ．  Ｃａｒｌｓｓｏｎ，  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｎ．  Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ．  ２００４．  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ａｌｄｅｈｙｄｅ−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ−１００  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００４．  １１０：２０４７−２０５２
１０．Ｓｊｏｇｒｅｎ，  Ｐ．，  Ｇ．  Ｎ．  Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ａ．  Ｓａｍｎｅｇａｒｄ，  Ｃ．  Ｇ．  Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，  Ｊ．  Ｏｈｒｖｉｋ，  Ｒ．  Ｍ．  Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｈａｍｓｔｅｎ．  ２００８．  Ｈｉｇｈ  ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｎａｔｉｖｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ２１０  ｏｆ  ａｐｏＢ−１００  ａｒｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｌｅｓｓ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｌｏｗｅｒ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．  Ｅｕｒ．  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．  ２９：２２１８−２２２６
１１．Ｄｉｍａｙｕｇａ，  Ｐ．，  Ｂ．  Ｃｅｒｃｅｋ，  Ｓ．  Ｏｇｕｃｈｉ，  Ｇ．  Ｎ．  Ｆｒｅｄｒｉｋｓｏｎ，  Ｊ．  Ｙａｎｏ，  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ，  Ｓ．  Ｊｏｖｉｎｇｅ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ．  ２００２．  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｉｎｊｕｒｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｂｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  Ｒａｇ−１  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２２：６４４−６４９
１２．Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，  Ｇ．，  Ａ．  Ｎｉｃｏｌｅｔｔｉ，  Ｂ．  Ｐｏｉｒｉｅｒ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  ２００２．  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｃａｒｒｉｅｄ  ｂｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｍｉｃｅ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０９：７４５−７５３
１３．Ｙａｎｇ，  Ｋ．，  Ｄ．  Ｌｉ，  Ｍ．  Ｌｕｏ，  ａｎｄ  Ｙ．  Ｈｕ．  ２００６．  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＳＰ６０−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４３：９０−９５
１４．Ｍｏｒ，  Ａ．，  Ｄ．  Ｐｌａｎｅｒ，  Ｇ．  Ｌｕｂｏｓｈｉｔｓ，  Ａ．  Ａｆｅｋ，  Ｓ．  Ｍｅｔｚｇｅｒ，  Ｔ．  Ｃｈａｊｅｋ−Ｓｈａｕｌ，  Ｇ．  Ｋｅｒｅｎ，  ａｎｄ  Ｊ．  Ｇｅｏｒｇｅ．  ２００７．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ＣＤ４＋  ＣＤ２５＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２７：８９３−９００
１５．Ａｉｔ−Ｏｕｆｅｌｌａ，  Ｈ．，  Ｂ．  Ｌ．  Ｓａｌｏｍｏｎ，  Ｓ．  Ｐｏｔｔｅａｕｘ，  Ａ．  Ｋ．  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｐ．  Ｇｏｕｒｄｙ，  Ｊ．  Ｚｏｌｌ，  Ｒ．  Ｍｅｒｖａｌ，  Ｂ．  Ｅｓｐｏｓｉｔｏ，  Ｊ．  Ｌ．  Ｃｏｈｅｎ，  Ｓ．  Ｆｉｓｓｏｎ，  Ｒ．  Ａ．  Ｆｌａｖｅｌｌ，  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ，  Ｄ．  Ｋｌａｔｚｍａｎｎ，  Ａ．  Ｔｅｄｇｕｉ，  ａｎｄ  Ｚ．  Ｍａｌｌａｔ．  ２００６．  Ｎａｔｕｒａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  １２：１７８−１８０
１６．Ｙａｎｇ，  Ｇ．  Ｘ．，  Ｚ．  Ｘ．  Ｌｉａｎ，  Ｙ．  Ｈ．  Ｃｈｕａｎｇ，  Ｙ．  Ｍｏｒｉｔｏｋｉ，  Ｒ．  Ｙ．  Ｌａｎ，  Ｋ．  Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ，  Ａ．  Ａ．  Ａｎｓａｒｉ，  Ｒ．  Ａ．  Ｆｌａｖｅｌｌ，  Ｗ．  Ｍ．  Ｒｉｄｇｗａｙ，  Ｒ．  Ｌ．  Ｃｏｐｐｅｌ，  Ｋ．  Ｔｓｕｎｅｙａｍａ，  Ｉ．  Ｒ．  Ｍａｃｋａｙ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｅ．  Ｇｅｒｓｈｗｉｎ．  ２００８．  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  （ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｆｏｒｍ）  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ４７：１９７４−１９８２
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１８．Ｚｈｏｕ，  Ｘ．，  Ａ．  Ｋ．  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｃ．  Ｈｊｅｒｐｅ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  ２００６．  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｔｏ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｇｇｒａｖａｔｅｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２６：８６４−８７０
１９．Ｉｎａｂａ，  Ｋ．，  Ｍ．  Ｉｎａｂａ，  Ｎ．  Ｒｏｍａｎｉ，  Ｈ．  Ａｙａ，  Ｍ．  Ｄｅｇｕｃｈｉ，  Ｓ．  Ｉｋｅｈａｒａ，  Ｓ．  Ｍｕｒａｍａｔｓｕ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｍ．  Ｓｔｅｉｎｍａｎ．  １９９２．  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｎｕｍｂｅｒｓ  ｏｆ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｍｏｕｓｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７６：１６９３−１７０２
２０．Ｌｅｃｏｅｕｒ，  Ｈ．，  Ｍ．  Ｆｅｖｒｉｅｒ，  Ｓ．  Ｇａｒｃｉａ，  Ｙ．  Ｒｉｖｉｅｒｅ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｌ．  Ｇｏｕｇｅｏｎ．  ２００１．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５３：１７７−１８７
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２３．Ｆｒｅｉｇａｎｇ，  Ｓ．，  Ｓ．  Ｈｏｒｋｋｏ，  Ｅ．  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｊ．  Ｌ．  Ｗｉｔｚｔｕｍ，  ａｎｄ  Ｗ．  Ｐａｌｉｎｓｋｉ．  １９９８．  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎｄ  ｎａｔｉｖｅ  ＬＤＬ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｂｙ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｔｈｅｒ  ｔｈａｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｔｉｔｅｒｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｎｅｏｅｐｉｔｏｐｅｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  １８：１９７２−１９８２
２４．Ｇｅｏｒｇｅ，  Ｊ．，  Ａ．  Ａｆｅｋ，  Ｂ．  Ｇｉｌｂｕｒｄ，  Ｈ．  Ｌｅｖｋｏｖｉｔｚ，  Ａ．  Ｓｈａｉｓｈ，  Ｉ．  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，  Ｙ．  Ｋｏｐｏｌｏｖｉｃ，  Ｇ．  Ｗｉｃｋ，  Ｙ．  Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ，  ａｎｄ  Ｄ．  Ｈａｒａｔｓ．  １９９８．  Ｈｙｐｅｒｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏ−Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ  ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｅａｒｌｙ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １３８：１４７−１５２
２５．Ｚｈｏｕ，  Ｘ．，  Ｇ．  Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，  Ａ．  Ｈａｍｓｔｅｎ，  Ａ．  Ｋ．  Ｌｅｆｖｅｒｔ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  ２００１．  ＬＤＬ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２１：１０８−１１４
２６．Ｃｈｙｕ，  Ｋ．  Ｙ．，  Ｏ．  Ｓ．  Ｒｅｙｅｓ，  Ｘ．  Ｚｈａｏ，  Ｊ．  Ｙａｎｏ，  Ｐ．  Ｄｉｍａｙｕｇａ，  Ｊ．  Ｎｉｌｓｓｏｎ，  Ｂ．  Ｃｅｒｃｅｋ，  ａｎｄ  Ｐ．  Ｋ．  Ｓｈａｈ．  ２００４．  Ｔｉｍｉｎｇ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＬＤＬ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｐｏ  Ｅ  （−／−）  ｍｉｃｅ．  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １７６：２７−３５
２７．Ｚｈｏｕ，  Ｘ．，  Ａ．  Ｋ．  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｍ．  Ｒｕｄｌｉｎｇ，  Ｐ．  Ｐａｒｉｎｉ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  ２００５．  Ｌｅｓｉｏｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｒｅｖｅａｌ  ａ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＣＤ４  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．  ９６：４２７−４３４
２８．Ｒｏｓｅｌａａｒ，  Ｓ．  Ｅ．，  Ｐ．  Ｘ．  Ｋａｋｋａｎａｔｈｕ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ．  １９９６．  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｐｏＥ  −／−  ａｎｄ  ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  −／−  ｍｉｃｅ．  Ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  １６：１０１３−１０１８
２９．Ｚｈｏｕ，  Ｘ．，  Ｓ．  Ｓｔｅｍｍｅ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｋ．  Ｈａｎｓｓｏｎ．  １９９６．  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｌｏｃａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １４９：３５９−３６６
３０．Ｆｙｆｅ，  Ａ．  Ｉ．，  Ｊ．  Ｈ．  Ｑｉａｏ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｊ．  Ｌｕｓｉｓ．  １９９４．  Ｉｍｍｕｎｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ｔｙｐｉｃａｌ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｓｔｒｅａｋｓ  ｗｈｅｎ  ｆｅｄ  ａｎ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  ｄｉｅｔ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９４：２５１６−２５２０
３１．Ｂｏｂｒｙｓｈｅｖ，  Ｙ．  Ｖ．，  Ｔ．  Ｔａｋｓｉｒ，  Ｒ．  Ｓ．  Ｌｏｒｄ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｗ．  Ｆｒｅｅｍａｎ．  ２００１．  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｈｉｓｔｏｌ．  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．  １６：８０１−８０８
３２．Ｎｉｅｓｓｎｅｒ，  Ａ．，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｍ．  Ｗｅｙａｎｄ．  ２００９．  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３４：２５−３２
３３．Ｐａｕｌｓｏｎ，  Ｋ．  Ｅ．，  Ｓ．  Ｎ．  Ｚｈｕ，  Ｍ．  Ｃｈｅｎ，  Ｓ．  Ｎｕｒｍｏｈａｍｅｄ，  Ｊ．  Ｊｏｎｇｓｔｒａ−Ｂｉｌｅｎ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｉ．  Ｃｙｂｕｌｓｋｙ．  ２０１０．  Ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ｉｎｔｉｍａｌ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅ  ｌｉｐｉｄ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．  １０６：３８３−３９０
３４．Ｌｉｕ，  Ｐ．，  Ｙ．  Ｒ．  Ｙｕ，  Ｊ．  Ａ．  Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ａ．  Ｅ．  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｃ．  Ｔ．  Ｖａｌｌａｎａｔ，  Ａ．  Ｍ．  Ｆｏｎｇ，  Ｃ．  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｄ．  Ｄ．  Ｐａｔｅｌ．  ２００８．  ＣＸ３ＣＲ１  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｉｎｔｉｍａ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｂｕｒｄｅｎ．  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２８：２４３−２５０
３５．Ｗｕ，  Ｈ．，  Ｒ．  Ｍ．  Ｇｏｗｅｒ，  Ｈ．  Ｗａｎｇ，  Ｘ．  Ｙ．  Ｐｅｒｒａｒｄ，  Ｒ．  Ｍａ，  Ｄ．  Ｃ．  Ｂｕｌｌａｒｄ，  Ａ．  Ｒ．  Ｂｕｒｎｓ，  Ａ．  Ｐａｕｌ，  Ｃ．  Ｗ．  Ｓｍｉｔｈ，  Ｓ．  Ｉ．  Ｓｉｍｏｎ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｍ．  Ｂａｌｌａｎｔｙｎｅ．  ２００９．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ１１ｃ＋  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  １１９：２７０８−２７１７
３６．Ｓａｋａｍｏｔｏ，  Ｎ．，  Ｋ．  Ｔｓｕｊｉ，  Ｌ．  Ｍ．  Ｍｕｕｌ，  Ａ．  Ｍ．  Ｌａｗｌｅｒ，  Ｅ．  Ｆ．  Ｐｅｔｒｉｃｏｉｎ，  Ｆ．  Ｃａｎｄｏｔｔｉ，  Ｊ．  Ａ．  Ｍｅｔｃａｌｆ，  Ｊ．  Ａ．  Ｔａｖｅｌ，  Ｈ．  Ｃ．  Ｌａｎｅ，  Ｗ．  Ｊ．  Ｕｒｂａ，  Ｂ．  Ａ．  Ｆｏｘ，  Ａ．  Ｖａｒｋｉ，  Ｊ．  Ｋ．  Ｌｕｎｎｅｙ，  ａｎｄ  Ａ．  Ｓ．  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．  ２００７．  Ｂｏｖｉｎｅ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ−１００  ｉｓ  ａ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ  ｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｉｎ  ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １１０：５０１−５０８
３７．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｌｚｅｎ，  ｐ．，  Ｓ．  Ｇａｒｇ，  Ｌ．  Ｌｅｏｎ，  Ｍ．  Ｂｒｉｇｌ，  Ｅ．  Ａ．  Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ，  Ｊ．  Ｅ．  Ｇｕｍｐｅｒｚ，  Ｃ．  Ｃ．  Ｄａｓｃｈｅｒ，  Ｔ．  Ｙ．  Ｃｈｅｎｇ，  Ｆ．  Ｍ．  Ｓａｃｋｓ，  Ｐ．  Ａ．  Ｉｌｌａｒｉｏｎｏｖ，  Ｇ．  Ｓ．  Ｂｅｓｒａ，  Ｓ．  Ｃ．  Ｋｅｎｔ，  Ｄ．  Ｂ．  Ｍｏｏｄｙ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｂ．  Ｂｒｅｎｎｅｒ．  ２００５．  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４３７：９０６−９１０
３８．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ＤＭ，  Ｒａｖｋｏｖ  ＥＶ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＭＡ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ＩＬ−２  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ＣＤ８＋  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０  Ｊｕｎ  １５；１８４（１２）：６７１９−３０．  Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ｍａｙ  １４
３９．Ｐｅｒｒｅｔ  Ｒ，  Ｒｏｎｃｈｅｓｅ  Ｆ．  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｏｎｆｅｒ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ａｎｄ  ｌｏｎｇｔｅｒｍ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００８  Ｏｃｔ；３８（１０）：２８８６−９５．
４０．Ｋａｍｉｍｕｒａ  Ｄ，  Ｂｅｖａｎ  ＭＪ．  Ｎａｉｖｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｔｏ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｍｅｍｏｒｙ−ｌｉｋｅ  ｃｅｌｌｓ  ａｆｔｅｒ  ＩＬ−２  ａｎｔｉ  ＩＬ−２  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  ２００７  Ａｕｇ  ６；２０４（８）：１８０３−１２．  Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊｕｌ  ３０．
４１．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００６；１７７：５８６８−５８７７
４２．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００４；１７２：１９９１−１９９５
４３．Ｓａｎ−Ｈｗａｎ  Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｔｅ  ｃＤＮＡ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ１００  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８６  Ｖｏｌ．  ２６１Ｎｏ  ２８，  Ｉｓｓｕｅ  ｏｆ  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ５，  １２９１８−１２９２１
４４．Ｃｈｏｕ  ＰＹ，  Ｆａｓｍａｎ  ＧＯ，  Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  Ｒｅｌａｔ  Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ  ＢｉｏＩ．  １９７８；  ４７：  ４５−１４８．  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅｉｒ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；
４５．Ｍａｒｇａｌｉｔ  Ｈ，  Ｓｐｏｕｇｅ  ＪＬ，  Ｃｏｒｎｅｔｔｅ  ＪＬ，  Ｃｅａｓｅ  ＫＢ，  Ｄｅｌｉｓｉ  Ｃ，  Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ  ＪＡ，  Ｊ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９８７  Ａｐｒ  １；  １３８（７）：２２１３−２９．  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｅｌｐｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｓｉｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；
４６．Ｊａｍｅｓｏｎ  ＢＡ，  Ｗｏｌｆ  Ｈ．，  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｐａｓａｄｅｎａ，  ＣＡ  ９１１２５，  Ｃｏｍｐｕｔ  Ａｐｐｌ  ＢｉｏｓｃＬ  １９８８  Ｍａｒ；４（１）：  １８１−６．  Ｔｈｅ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｉｎｄｅｘ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ；
４７．Ｒｅｙｅｓ  ＶＥ，  Ｌｅｗ  ＲＡ，  Ｌｕ  Ｓ．，  Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ  ＲＥ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １９９１；  ２０２：２２５３８．  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｌｐｈａ  ｈｅｌｉｃｅｓ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｔｒｉｐ−ｏｆｈｅｌｉｘ  ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  （ＳＯＨＨＩ）；
４８．Ｍａｋｓｙｕｔｏｖ  ＡＺ，  Ｚａｇｒｅｂｅｌｎａｙａ  ＥＳ，  Ｃｏｍｐｕｔ  Ａｐｐｌ  ＢｉｏｓｃＬ  １９９３  Ｊｕｎ；  ９（３）：  ２９１−７．  ＡＤＥＰＴ：  ａ  ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ；
４９．Ｐｅｌｌｅｑｕｅｒ  ＪＬ，  Ｗｅｓｔｈｏｆ  Ｅ．，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｇｒａｐｈ．  １９９３  Ｓｅｐ；１１（３）：  ２０４−１０，  １９１２．  ＰＲＥＤＩＴＯＰ：  ａ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ；
５０．Ｌｕ  ｅｔ  ａＩ．，  Ｔｉｂｔｅｃｈ，  ｖｏｌ．  ９，  Ｊｕｌ．  １９９１  ｐｐ．  ２３８−２４２  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｏｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ；  ａｎｄ
５１．Ｌａｕｒａ  Ｒａｄｄｒｉｚｚａｎｉ  ａｎｄ  Ｊｕｅｒｇｅｎ  Ｈａｍｍｅｒ  ＢＲＩＥＦＩＮＧＳ  ＩＮ  ＢＩＯＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ．  ＶＯＬ  Ｉ．  ＮＯ  ２．  １７９−１８９．  ＭＡＹ  ２０００  Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｕｓｉｎｇｖｉｒｔｕａｌ  Ｍａｔｒｉｘ−ｂａｓｅｄ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ
５２．Ｒ．  Ｗｕ，  Ｒ．  Ｇｉｓｃｏｍｂｅ，  Ｇ．  Ｈｏｌｍ  ＆  Ａ．  Ｋ．  Ｌｅｆｖｅｒｔ  “Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｂｙ  Ｏｘｉｄｉｚｅｄ  Ｌｏｗ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ”  Ｓｃａｎｄ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４３，３８１−３８４，  １９９６．
５３．Ｓａｋａｍｏｔｏ，Ｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  ＡＳ．  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎｓ：  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｔｈｅｙ  ａｒｅ  ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｔｈａｔ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｄｅｌｉｖｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｏｒ  ｃｒｏｓｓ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４−１５−２０１１；１８６：５００４−５０１１．
【図１】
2013544243.tif 000023
【図２】
2013544243.tif 000024
【図４】
2013544243.tif 000025
【図５】
2013544243.tif 000026
【図６】
2013544243.tif 000027
【図７】
2013544243.tif 000028
【図８】
2013544243.tif 000029
【図９】
2013544243.tif 000030
【図１０】
2013544243.tif 000031
【図１１】
2013544243.tif 000032
【図１２】
2013544243.tif 000033
【図１３】
2013544243.tif 000034
【図１５】
2013544243.tif 000035
【図１６】
2013544243.tif 000036
【図３】
2013544243.tif 000037
【図１４】
2013544243.tif 000038
【配列表】
2013544243000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年7月31日(2013.7.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防する方法であって、
配列番号１〜３０２の１つを含む１つ以上のＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分の有効量を、前記個体に投与することを含み、
前記１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分は、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する、
方法。
【請求項２】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号１１、配列番号２５、配列番号４５、配列番号７４、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、配列番号１２９、配列番号１４３、配列番号１４８、配列番号２１０及び配列番号３０１の１つを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号２、配列番号１１、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号１６２及び配列番号２１０の１つを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１４３を有するペプチド及び配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１１を有するペプチド、配列番号２５を有するペプチド及び配列番号７４を有するペプチドを含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２を有するペプチドを含む、
請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号４５を有するペプチドを含む、
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１乃至６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記個体は、
ヒトである、
請求項１乃至８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与することは、
１回から３回、少なくとも１ｍｇの用量を投与することによって行われる、
請求項１乃至９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防する方法であって、
配列番号１〜３０２の１つを含む１つ以上のＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞の有効量を、前記個体に投与することを含み、
前記１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分は、アテローム性動脈硬化の抑制に関連する、
方法。
【請求項１２】
前記１つ以上の免疫原性断片は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号１１、配列番号２５、配列番号４５、配列番号７４、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、配列番号１２９、配列番号１４３、配列番号１４８、配列番号２１０及び配列番号３０１の１つを含む、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の免疫原性は、１つ以上のペプチドを含み、
前記ペプチドは、それぞれ配列番号２、配列番号１１、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号１６２及び配列番号２１０の１つを含む、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１４３を有するペプチド及び配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号１１を有するペプチド、配列番号２５を有するペプチド及び配列番号７４を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号４５を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つ以上の免疫原性断片は、
配列番号２１０を有するペプチドを含む、
請求項１１乃至１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記有効量は、
約５００，０００個と約２，０００，０００個の間のＣＤ８陽性Ｔ細胞である、
請求項１１乃至１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与することは、
前記個体に約１，０００，０００個の細胞を投与することによって行われる、
請求項１１乃至１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＬ−１６、ＩＬ−１５、ＴＧＦ−ベータ、及びＩＬ−２と抗ＩＬ２抗体との複合体から選択される、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤の有効量を投与すること、
をさらに含む、
請求項１１乃至２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ａｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分を投与すること、
をさらに含む、
請求項１１乃至２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片に特異的な活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、
ＣＤ８陽性Ｔ細胞を、配列番号１から配列番号３０２までからなる群から選択される１つ以上のペプチド又はその免疫原性的に活性な部分に、当該ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化させる条件下で一定の時間接触させることによって得ることができ、活性化ＣＤ８陽性Ｔ細胞は前記１つ以上のペプチド又は前記その免疫原性的に活性な部分に特異的である、
請求項１１乃至２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するシステムであって、
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞、及び
ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤、
の少なくとも２つを含む、
システム。
【請求項２５】
個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するシステムであって、
１つ以上のＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞、及び
ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞、
の少なくとも２つを含む、
システム。
【請求項２６】
ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＬ−１６、ＩＬ−１５、ＴＧＦ−ベータ、及びＩＬ−２と抗ＩＬ２抗体との複合体から選択される、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤をさらに含む、
請求項２５に記載のシステム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
第１の観点によれば、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するための方法が記載される。当該方法は、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分を個体に投与することを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
第２の観点によれば、動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するための方法が記載される。当該方法は、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞を個体に投与することを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
第３の観点によれば、個体における動脈瘤及び／又はそれに関連する症状を治療及び／又は予防するためのシステムが記載される。当該システムは、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤の少なくとも２つを含む。特に、いくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の１つ以上の促進剤は、本明細書に記載される方法で同時に、組み合わされて又は続けて使用するためにシステムに含まれる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
第４の観点によれば、個体における動脈瘤及び／又は症状を治療及び／又は予防するためのシステムが記載される。当該システムは、ＡｐｏＢ−１００の１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞と、ＡｐｏＢ−１００の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分に特異的な１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞とを含む。特に、いくつかの実施の形態では、ＡｐｏＢ−１００の１つ以上の免疫原性断片又はその免疫原性的に活性な部分及びＣＤ８陽性Ｔ細胞と、１つ以上のＣＤ８陽性Ｔ細胞とが、本明細書に記載される方法で同時に、組み合わせて又は続けて使用するためにシステムに含まれる。
【国際調査報告】
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