(57)【要約】  本発明は、新規な３'−デオキシ−３'−メチリデン−β−Ｌ−ヌクレオシド、このような化合物を含む医薬組成物、ならびにウイルス感染、とりわけＨＢＶおよび／またはＨＩＶ感染を治療または予防するための方法を包含する。本発明によれば、式（Ｉ）で表される化合物（式中、ＢはＡ１およびＡ２から選択される）が提供される。  【化１】2013514350.tif 000044
2013514350.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2013514350.tif 000040
［式中、
Ｂは、Ａ１およびＡ２：
【化２】
2013514350.tif 000041
から選択され；
Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ2、ハロゲン、（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）ＮＨ、および（Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル）ＮＨから選択され；
Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、およびＣ1〜Ｃ3アルキルから選択され；
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、およびＮＨ2から選択され；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ2から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、独立的に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ3およびＲ4は、独立的に、Ｈ、Ｆ、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ5は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、およびトリホスフェートから選択される］
またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
一般式（Ｉ）で表される請求項１に記載の化合物：
【化３】
2013514350.tif 000042
［式中、
Ｂは、Ａ１およびＡ２：
【化４】
2013514350.tif 000043
から選択され；
Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ2、ハロゲン、（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）ＮＨ、および（Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル）ＮＨから選択され；
Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、およびＣ1〜Ｃ3アルキルから選択され；
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、およびＮＨ2から選択され；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ2から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、独立的に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ3およびＲ4は、独立的に、Ｈ、Ｆ、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ5は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、およびトリホスフェートから選択され；
但し、ＷがＯであり、Ｒ1がＨであり、かつＲ2がＯＨ、ＦまたはＯＣＨ3である場合は、Ｒ3およびＲ4は、同時にＦであることはなく、またはＲ3およびＲ4は、同時にＨであることはなく； 
但し、ＷがＯであり、Ｒ2がＨであり、かつＲ1がＯＨ、ＯＣＨ3またはＦである場合は、Ｒ3およびＲ4は、同時にＦであることはなく、またはＲ3およびＲ4は、同時にＨであることはない］
またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
【請求項３】
ＷがＯである、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ＷがＳまたはＣＨ2である、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1およびＲ2がＨである、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3およびＲ4が、独立的に、ＦおよびＣＨ3から選択され、但し、Ｒ3およびＲ4が同時にＦであることはない、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ3がＨであり、Ｒ4がＦおよびＣＨ3から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ4がＨであり、Ｒ3がＦおよびＣＨ3から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1がＣＨ3である、請求項１から４および請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ2がＣＨ3である、請求項１から４および請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
ＸがＨ、ＯＨおよびＮＨ2から選択され、ＹがＨ、ＦおよびＣＨ3から選択され、ＺがＨおよびＮＨ2から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
ＷがＯであり、Ｒ2がＯＨまたはＯＣＨ3であり、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
ＷがＯであり、Ｒ2がＦであり、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ＷがＯであり、Ｒ2がＣＨ3であり、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ＷがＯであり、Ｒ1がＦであり、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
ＷがＯであり、Ｒ1がＯＨまたはＯＣＨ3であり、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
ＢがＡ１であり、ＸがＮＨ2またはＯＨであり、ＹがＨ、ＦまたはＣＨ3であり、ＷがＯであり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項１９】
ＢがＡ２であり、ＸがＮＨ2、ＯＨまたはＨであり、ＺがＨまたはＮＨ2であり、ＷがＯであり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項２０】
ＸがＯＨである、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
ＸがＮＨ2である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
ＹがＦである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ5がＨである、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ5が、ホスフェート、ジホスフェート、およびトリホスフェートから選択される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）シトシン；
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；
９−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン；
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル；
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン；
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル；
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン；
１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン；
４−アミノ−１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２（１Ｈ）−オン；
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロウラシル；
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；および
９−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン
から選択される、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
【請求項２６】
有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を含む、宿主におけるＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２７】
有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を含む、ＨＢＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスを治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２８】
有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を含む、ＨＩＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスを治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２９】
抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
治療法において使用するための、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
ＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染の治療または予防において使用するための、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
ＨＢＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスの治療または予防において使用するための、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３３】
ＨＩＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスの治療または予防において使用するための、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の使用するための化合物。
【請求項３５】
ＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染の治療または予防のための医薬の製造における、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
ＨＢＶウイルス感染、または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスの治療または予防のための医薬の製造における、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
ＨＩＶウイルス感染、または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスの治療または予防のための医薬の製造における、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３８】
抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、請求項３５から３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
治療的有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染を治療または予防するための方法。
【請求項４０】
治療的有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＨＢＶ感染、または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスを治療または予防するための方法。
【請求項４１】
治療的有効量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＨＩＶ感染、または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスを治療または予防するための方法。
【請求項４２】
抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３'−デオキシ−３'−メチリデン−β−Ｌ−ヌクレオシド、ならびに一般にはウイルス感染および好ましくはＨＢＶおよび／またはＨＩＶ感染の治療および予防のためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ＤＮＡウイルスであり、ヘパドナビリダエ（hepadnaviridae）のファミリーに属する。ＨＢＶは、ヒト肝炎の原因病原体である。２０億を超える人々が、彼らの一生のいくつかの段階でＨＢＶに感染し、今日では３億程の人々が慢性的に感染したままであると見積もられる。ＨＢＶは、感染した血液、体液との、および性交渉による経皮または非経口的接触を介して伝染する。もう１つの主な経路は、血液または母乳を介する母から乳児への周産期伝染である。数百万のＨＢＶ保菌者は、ウイルス移動のための絶えることのない供給源である。感染したＨＢＶのかなりの部分は、肝臓の慢性壊死性炎症によって特徴付けられ、かつ進行性線維症に至る可能性のある、慢性肝炎を発症する。ＨＢＶは、ヒト肝がんの主要原因である。ＨＢＶが、がんを誘導する機序は、まだ確認されていない。ＨＢＶ感染は、腫瘍の発生を直接的にトリガーするか、または慢性炎症、肝硬変、および感染に付随する細胞再生を介して腫瘍の発生を間接的にトリガーすることと仮定する。ＨＢＶ感染は、世界的にすべての肝細胞癌の８０％に達する原因であり、肝不全の主要原因でもある。概して、毎年約百万の患者がＨＢＶに関連する肝疾患で死亡する。
【０００３】
ＨＩＶは、ヒトの生命に対して深刻な脅威を課すもう１つのウイルスである。ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、ＡＩＤＳを引き起こすレトロウイルスファミリーのメンバーである。ＨＩＶは、ヘルパーＴ細胞（特に、ＣＤ４+Ｔ細胞）、マクロファージ、および樹状細胞などのヒト免疫系中の生存細胞に主として感染する。ＨＩＶ感染は、３つの主な機序：第１にはウイルスでの被感染細胞の直接的死滅；第２には被感染細胞のアポトーシス速度の増加；第３には被感染細胞を認識するＣＤ８細胞傷害性リンパ球による被感染ＣＤ４+Ｔ細胞の死滅を介して、低レベルのＣＤ４+Ｔ細胞につながる。ＣＤ４+Ｔ細胞数が臨界レベル未満に低下すると、細胞介在性免疫が失われ、身体は、日和見感染に対して進行的により感受性になる。ＨＩＶに感染したほとんどの人々は、結局、ＡＩＤＳを発症する可能性がある。それらの個体は、日和見感染、または免疫系の進行性不全に付随する悪性病変で死亡する可能性がある。ヒトにおけるＨＩＶ感染は、世界保健機関（ＷＨＯ）によってパンデミックと見なされている。今日、推定で３３００万の人々がＨＩＶを保持して生活し、その中の数百万人は子供である。毎年、ほぼ２５０万人の新たな感染が発生する。２００７年に、２１０万の人々が、ＡＩＤＳに関連する疾病で死亡した。効果的で安全な抗ＨＢＶおよび抗ＨＩＶ治療薬が、該疾患および感染を治療および予防するために、大いに必要とされている。
【０００４】
ＨＢＶおよびＨＩＶは、双方とも、ウイルスゲノムの合成に責任を負うそれら自身のポリメラーゼをコードしている。ＨＢＶポリメラーゼ（ＨＢＶ逆転写酵素とも呼ばれる）およびＨＩＶ逆転写酵素は、多機能性タンパク質であり、それは、逆転写酵素活性、ＤＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性、およびＲＮアーゼＨ活性を有する。該酵素は、ウイルス複製にとって必須であり、それらの活性を遮断すると、ウイルス複製が完全に停止する。ＨＢＶポリメラーゼおよびＨＩＶ逆転写酵素は、抗ウイルス療法のための魅力的な標的として確立されてきた。実際、有効なＨＢＶおよびＨＩＶポリメラーゼ阻害剤を開発することにおいて、実質的な成功がなされてきた。ヌクレオシド／ヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤は、重要な部類のウイルスポリメラーゼ阻害剤である。それらは、プロドラッグと見なされ、ウイルスポリメラーゼに対する阻害剤として機能するそれらのヌクレオシド三リン酸またはヌクレオチド二リン酸に対するリン酸化過程を介するそれらの抗ウイルス効力のための活性化を必要とする。
【０００５】
この２０年間、いくつかのヌクレオシド／ヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤が、ＨＩＶおよびＨＢＶ感染の治療のために開発されてきた。ＨＩＶ感染のための若干の重要な阻害剤としては、ジドブジン、スタブジン、ジダノシン、ラミブジン、エムトリシタビン、テノフォビル、およびアバカビルが挙げられる。ＨＢＶ感染の治療のためには、ラミブジン、アデフォビル、テノフォビル、エンテカビル、およびテルビブジンがある。それらの阻害剤は、ＨＩＶおよびＨＢＶ感染を治療するための方法および手段を提供し、ＨＩＶおよびＨＢＶ療法の不可欠な要素として立証され、受け入れられている。しかし、多くの厳しい有害作用、例えば、骨髄毒性、乳酸性アシドーシス、筋障害、脂肪肝を伴う肝腫大、腎毒性、末梢神経障害、膵炎、脂肪萎縮症、等々が、それらのヌクレオシド／ヌクレオチド阻害剤を使用する治療に付随することが見出されている。ヌクレオシド／ヌクレオチド阻害剤に付随するもう１つの大きな問題が、療法に対する抵抗性の発生である。例えば、ｒｔＭ２０４Ｉ（ＡＴＧからＡＴＡへ）およびｒｔＭ２０４Ｖ（ＡＴＧからＧＴＧへ）のＨＢＶポリメラーゼの突然変異は、ラミブジンに対する感受性をそれぞれ１／５５０および１／１５３に低下させる（Ａｌｌｅｎ，Ｍ．Ｉ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌ．、１９９８年、２７巻、１６７０〜１６７７頁）。ｒｔＭ２０４突然変異の他に、ｒｔＬ１８０Ｍの突然変異が一般的であり、それは、ラミブジンに対する感受性の約１／１８への低下を引き起こすことが見出された（Ｌｅｕｎｇ，Ｎ．、Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．、２０００年、１５巻（増刊）、Ｅ５３〜Ｅ６０）。ｒｔＬ１８０ＭおよびｒｔＭ２０４Ｖを含む二重突然変異体は、ラミブジンに対して約１／１０００への活性低下を付与する（Ｊａｒｖｉｓ，Ｂ．およびＦａｕｌｄ，Ｄ．、Ｄｒｕｇｓ．１９９９年、５８巻、１０１〜１４１頁）。ラミブジンに対して抵抗性の突然変異体も、エンテカビル、テルビブジンに対して交差抵抗性を有することが見出された。ＨＢＶポリメラーゼ中でｒｔＮ２３６Ｔを有する突然変異体株が単離され、アデフォビルに対する感受性の約１／１０までの低下につながった。アデフォビルの約１／３３の活性低下を引き起こす突然変異ｒｔＡ１８１Ｖも見出された（Ａｎｇｕｓ，Ｐ．ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ．２００３年、１２５巻、２９２〜２９７頁）。ＨＩＶの場合、ＨＩＶ逆転写酵素の大きな複製速度および低い忠実度のため、抵抗性は、ＨＩＶ治療において鍵となる問題であった。ＨＩＶ逆転写酵素の種々の残基での突然変異体、例えば、Ｍ４１Ｌ、Ｋ６５Ｒ、Ｄ６７Ｎ、Ｔ６９Ｄ、Ｋ７０Ｒ、Ｌ７４Ｖ、Ｖ７５Ｔ、Ｍ１８４Ｖ、Ｍ１８４Ｉ、Ｌ２１０Ｗ、Ｔ２１５Ｙ、およびＫ２１９Ｅが同定されている。それらの突然変異体は、実質的により低い有効性の治療をもたらし、治療の失敗につながる。
【０００６】
ＨＩＶ感染およびＨＢＶ感染が世界的に流行レベルに到達し、かつ感染患者に対して悲惨な影響を有したことを考えると、それらの疾患を治療するための新規な有効で安全な医薬、とりわけ現在の治療薬に対して抵抗性であるＨＢＶおよびＨＩＶ感染を治療する上で有効である新たな治療薬を提供する強い必要性が依然として存在する。
【発明の開示】
【０００７】
したがって、本発明の目的は、ウイルス、とりわけＨＢＶまたはＨＩＶに感染したヒト患者を治療するための新規な化合物、方法、および組成物を提供することである。
【０００８】
本発明は、新規な３'−デオキシ−３'−メチリデン−β−Ｌ−ヌクレオシド、このような化合物を含む医薬組成物、ならびにウイルス感染とりわけＨＢＶおよび／またはＨＩＶ感染を治療または予防する方法を包含する。本発明によれば、式（Ｉ）で表される化合物が提供される。
【０００９】
したがって、本発明の一態様において、一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2013514350.tif 000003
【００１０】
［式中、
Ｂは、Ａ１およびＡ２：
【化２】
2013514350.tif 000004
【００１１】
から選択され；
Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ2、ハロゲン、（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）ＮＨ、および（Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル）ＮＨから選択され；
Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、およびＣ1〜Ｃ3アルキルから選択され；
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、およびＮＨ2から選択され；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ2から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、独立的に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ3およびＲ4は、独立的に、Ｈ、Ｆ、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ5は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、およびトリホスフェートから選択される］
またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが提供される。
【００１２】
本発明の別の態様において、一般式（Ｉ）の化合物：
【化３】
2013514350.tif 000005
【００１３】
［式中、
Ｂは、Ａ１およびＡ２：
【化４】
2013514350.tif 000006
【００１４】
から選択され；
Ｘは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ2、ハロゲン、（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）ＮＨ、および（Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル）ＮＨから選択され；
Ｙは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、およびＣ1〜Ｃ3アルキルから選択され；
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、およびＮＨ2から選択され；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ2から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、独立的に、Ｈ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ3およびＲ4は、独立的に、Ｈ、Ｆ、およびＣＨ3から選択され；
Ｒ5は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、およびトリホスフェートから選択され；
但し、ＷがＯであり、Ｒ1がＨであり、かつＲ2がＯＨ、ＦまたはＯＣＨ3である場合は、Ｒ3およびＲ4は、同時にＦであることはなく、またはＲ3およびＲ4は、同時にＨであることはなく；かつ
但し、ＷがＯであり、Ｒ2がＨであり、かつＲ1がＯＨ、ＯＣＨ3またはＦである場合は、Ｒ3およびＲ4は、同時にＦであることはなく、またはＲ3およびＲ4は、同時にＨであることはない］
またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが提供される。
【００１５】
本発明の別の態様では、ＷがＯである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１６】
本発明の別の態様では、ＷがＳまたはＣＨ2である、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１７】
本発明の別の態様では、Ｒ1およびＲ2がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１８】
本発明の別の態様では、Ｒ3およびＲ4が、独立的に、ＦおよびＣＨ3から選択され、但し、Ｒ3およびＲ4が同時にＦであることはない、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１９】
本発明の別の態様では、Ｒ3がＨであり；Ｒ4がＦおよびＣＨ3から選択される、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２０】
本発明の別の態様では、Ｒ4がＨであり；Ｒ3がＦおよびＣＨ3から選択される、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２１】
本発明の別の態様では、Ｒ1がＣＨ3である、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２２】
本発明の別の態様では、Ｒ2がＣＨ3である、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２３】
本発明の別の態様では、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２４】
本発明の別の態様では、Ｘが、Ｈ、ＯＨ、およびＮＨ2から選択され；Ｙが、Ｈ、ＦおよびＣＨ3から選択され；Ｚが、ＨおよびＨＮ2から選択される、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２５】
本発明の別の態様では、ＷがＯであり；Ｒ2がＯＨまたはＯＣＨ3であり；Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２６】
本発明の別の態様では、ＷがＯであり；Ｒ2がＦであり、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２７】
本発明の別の態様では、ＷがＯであり；Ｒ2がＣＨ3であり；Ｒ1、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２８】
本発明の別の態様では、ＷがＯであり；Ｒ1がＦであり；Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２９】
本発明の別の態様では、ＷがＯであり；Ｒ1がＯＨまたはＯＣＨ3であり；Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３０】
本発明の別の態様では、ＢがＡ１であり；ＸがＮＨ2またはＯＨであり；ＹがＨ、ＦまたはＣＨ3であり；ＷがＯであり；Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３１】
本発明の別の態様では、ＢがＡ２であり；ＸがＮＨ2、ＯＨまたはＨであり；ＺがＨまたはＮＨ2であり；ＷがＯであり；Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３２】
本発明の別の態様では、ＸがＯＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３３】
本発明の別の態様では、ＸがＮＨ2である、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３４】
本発明の別の態様では、ＹがＦである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３５】
本発明の別の態様では、Ｒ5がＨである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３６】
本発明の別の態様では、Ｒ5が、ホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートである、一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００３７】
本発明の別の態様では、
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）ウラシル；
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）ウラシル；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）ウラシル；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）シトシン；
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；および
９−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン
から選択される一般式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが提供される。
【００３８】
本発明の別の態様では、
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）シトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）シトシン；
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；および
９−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン
から選択される一般式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが提供される。
【００３９】
本発明の別の態様では、
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル；
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン；
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル；
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン；
１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン；
４−アミノ−１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２（１Ｈ）−オン；
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロウラシル；
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；および
９−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン
から選択される一般式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが提供される。
【００４０】
本発明の別の態様では、有効量の一般式（Ｉ）の化合物を含む、宿主におけるＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物が提供される。
【００４１】
本発明の別の態様では、有効量の一般式（Ｉ）の化合物を含む、ＨＢＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスを治療または予防するための医薬組成物が提供される。
【００４２】
本発明の別の態様では、有効量の一般式（Ｉ）の化合物を含む、ＨＩＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスを治療または予防するための医薬組成物が提供される。
【００４３】
本発明の別の態様では、抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、前記の医薬組成物が提供される。このような薬剤は、次の非限定的例：エトラビリン、エファビレンツ、デラビルジン、ネビラピン、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、アバカビル、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、ジダノシン、スタブジン、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトナビル、アムプレナビル、フォサムプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、マラビロク、エンフビルチド、ラルテグラビル、ビクリビロク、エルビテグラビル、ベビリマト（bevirimat）、ラシビル、アプリシタビン、エルブシタビン、ブレカナビル、リルピビリン、ＳＣＨ５３２７０６、Ｓ／ＧＳＫ１２６５７４４、ＩＤＸ８９９、およびＧＳＫ−３６４７３５を含む、抗ＨＩＶ薬剤でよい。このような薬剤は、また、次の非限定的例：エンテカビル、ラミブジン、アデフォビル（またはそのプロドラッグ）、テルビブジン、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、トルシタビン、バルトルシタビン、エムトリシタビン、クレブジン、ペンシクロビル（またはファムシクロビル）、インターフェロンα−２ｂ、およびペグインターフェロンα−２ａを含む、抗ＨＢＶ薬剤を表すことができる。
【００４４】
本発明の別の態様では、治療法において使用するための一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００４５】
本発明の別の態様では、ＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染の治療または予防において使用するための一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００４６】
本発明の別の態様では、ＨＢＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスの治療または予防において使用するための一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００４７】
本発明の別の態様では、ＨＩＶ感染および／または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスの治療または予防において使用するための一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００４８】
本発明の別の態様では、抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、前記の治療または予防において使用するための一般式（Ｉ）の化合物が提供される。このような薬剤は、次の非限定的例：エトラビリン、エファビレンツ、デラビルジン、ネビラピン、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、アバカビル、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、ジダノシン、スタブジン、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトナビル、アムプレナビル、フォサムプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、マラビロク、エンフビルチド、ラルテグラビル、ビクリビロク、エルビテグラビル、ベビリマト（bevirimat）、ラシビル、アプリシタビン、エルブシタビン、ブレカナビル、リルピビリン、ＳＣＨ５３２７０６、Ｓ／ＧＳＫ１２６５７４４、ＩＤＸ８９９、およびＧＳＫ−３６４７３５を含む、抗ＨＩＶ薬剤でよい。このような薬剤は、また、次の非限定的例：エンテカビル、ラミブジン、アデフォビル（またはそのプロドラッグ）、テルビブジン、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、トルシタビン、バルトルシタビン、エムトリシタビン、クレブジン、ペンシクロビル（またはファムシクロビル）、インターフェロンα−２ｂ、およびペグインターフェロンα−２ａを含む、抗ＨＢＶ薬剤を表すことができる。
【００４９】
本発明の別の態様では、ＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、一般式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００５０】
本発明の別の態様では、ＨＢＶウイルス感染または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスを治療または予防するための医薬の製造における、一般式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００５１】
本発明の別の態様では、ＨＩＶウイルス感染または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスを治療または予防するための医薬の製造における、一般式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００５２】
本発明の別の態様では、抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、前記の治療および予防のための医薬の製造における一般式（Ｉ）の化合物の使用が提供される。このような薬剤は、次の非限定的例：エトラビリン、エファビレンツ、デラビルジン、ネビラピン、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、アバカビル、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、ジダノシン、スタブジン、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトナビル、アムプレナビル、フォサムプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、マラビロク、エンフビルチド、ラルテグラビル、ビクリビロク、エルビテグラビル、ベビリマト（bevirimat）、ラシビル、アプリシタビン、エルブシタビン、ブレカナビル、リルピビリン、ＳＣＨ５３２７０６、Ｓ／ＧＳＫ１２６５７４４、ＩＤＸ８９９、およびＧＳＫ−３６４７３５を含む、抗ＨＩＶ薬剤でよい。このような薬剤は、また、次の非限定的例：エンテカビル、ラミブジン、アデフォビル（またはそのプロドラッグ）、テルビブジン、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、トルシタビン、バルトルシタビン、エムトリシタビン、クレブジン、ペンシクロビル（またはファムシクロビル）、インターフェロンα−２ｂ、およびペグインターフェロンα−２ａを含む、抗ＨＢＶ薬剤を表すことができる。
【００５３】
本発明の別の態様では、治療的有効量の一般式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＤＮＡウイルス感染および／またはレトロウイルス感染を治療または予防するための方法が提供される。
【００５４】
本発明の別の態様では、治療的有効量の一般式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＨＢＶ感染、または一以上の他の抗ＨＢＶ薬に対して抵抗性であるＨＢＶウイルスを治療または予防するための方法が提供される。
【００５５】
本発明の別の態様では、治療的有効量の一般式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、それを必要とする対象におけるＨＩＶ感染、または一以上の他の抗ＨＩＶ薬に対して抵抗性であるＨＩＶウイルスを治療または予防するための方法が提供される。
【００５６】
本発明の別の態様では、抗ウイルス効果を有する一以上の追加の薬剤をさらに含む、前記の方法が提供される。このような薬剤は、次の非限定的例：エトラビリン、エファビレンツ、デラビルジン、ネビラピン、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、アバカビル、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、ジダノシン、スタブジン、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトナビル、アムプレナビル、フォサムプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、マラビロク、エンフビルチド、ラルテグラビル、ビクリビロク、エルビテグラビル、ベビリマト（bevirimat）、ラシビル、アプリシタビン、エルブシタビン、ブレカナビル、リルピビリン、ＳＣＨ５３２７０６、Ｓ／ＧＳＫ１２６５７４４、ＩＤＸ８９９、およびＧＳＫ−３６４７３５を含む、抗ＨＩＶ薬剤でよい。このような薬剤は、また、次の非限定的例：エンテカビル、ラミブジン、アデフォビル（またはそのプロドラッグ）、テルビブジン、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、トルシタビン、バルトルシタビン、エムトリシタビン、クレブジン、ペンシクロビル（またはファムシクロビル）、インターフェロンα−２ｂ、およびペグインターフェロンα−２ａを含む、抗ＨBＶ薬剤を表すことができる。
【００５７】
本発明は、さらに、
１−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）シトシン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）チミン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）チミン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；
１−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）−５−フルオロシトシン；
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）−５−フルオロシトシン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン；
９−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）グアニン；
９−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）グアニン；
９−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）アデニン；
９−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）アデニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン；
９−（２−デオキシ−２−（Ｒ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン；および
９−（２−デオキシ−２−（Ｓ）−Ｃ−メチル−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン
またはそれらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。
【００５８】
本発明の別の態様では、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを、一以上の抗ＨＩＶ薬剤、例えば、エトラビリン、エファビレンツ、デラビルジン、ネビラピン、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、アバカビル、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、ジダノシン、スタブジン、チプラナビル、インジナビル、サキナビル、ロピナビル、リトナビル、アムプレナビル、フォサムプレナビル、ダルナビル、アタザナビル、ネルフィナビル、マラビロク、エンフビルチド、ラルテグラビル、ビクリビロク、エルビテグラビル、ベビリマト（bevirimat）、ラシビル、アプリシタビン、エルブシタビン、ブレカナビル、リルピビリン、ＳＣＨ５３２７０６、Ｓ／ＧＳＫ１２６５７４４、ＩＤＸ８９９、およびＧＳＫ−３６４７３５と一緒に投与することを含む、ＨＩＶ感染を治療および／または予防する方法が提供される。
【００５９】
本発明の別の態様では、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを、一以上の抗ＨＢＶ薬剤、例えば、エンテカビル、ラミブジン、アデフォビル（またはそのプロドラッグ）、テルビブジン、テノフォビル（またはそのプロドラッグ）、トルシタビン、バルトシタビン、エムトリシタビン、クレブジン、ペンシクロビル（またはファムシクロビル）、インターフェロンα−２ｂ、およびペグインターフェロンα−２ａと一緒に投与することを含む、ＨＢＶ感染を治療および／または予防する方法が提供される。
【００６０】
このような組合せの個々の成分は、別々の、または組み合わせた医薬製剤として、逐次的または同時に投与することができる。
【００６１】
これまで及びこれから使用する場合はいつでも、用語「式（Ｉ）の化合物」、「発明の化合物」または「本発明の化合物」、あるいは類似の用語は、式（Ｉ）の化合物、それらの薬学的に許容されるプロドラッグ、塩、溶媒和物、第４級アミンおよび金属錯体を包含すると解釈される。
【００６２】
用語「プロドラッグ」は、本文中で使用する場合、インビボで生じるその誘導体の生体内変換産生物が、式（Ｉ）の化合物に関して定義したような活性薬物であるような、エステル、カルバミン酸エステル、炭酸エステル、エーテル、アミドおよびリン酸エステルなどの薬学的に許容される誘導体を意味する。プロドラッグを一般的に解説している参考文献を本明細書に組み込む（GoodmanおよびGilman「The Pharmacological Basis of Therapeutics」第８版、MacGraw-Hill,Int.Ed.1992年、「Biotransformation of Drugs」、１３〜１５頁；H.Bundgaard「Design of Prodrugs」H.Bundgaard編、Elsevier Science Publisher、1985年;M.Taylor、Adv.Drug Delivery、1996年、19巻、131頁;H.Bundgaard、Drugs of Future、1991年、16巻、443頁;A.Simplicio, Molecules、2008年、13巻、519頁;P.Ettmayer、J.Med.Chem.2004年、47巻、239３頁）。とりわけ関連性があるのは、文献（D.Cahardら、Mini-Rev.Med.Chem、2004年、4巻、371頁;C.McGuiganら、J.Med.Chem.、1996年、39巻、1748頁;C.McGuiganら、Antiviral Res.、1997年、35巻、195頁;D.Saboulardら、Mol.Pharmacol.、1999年、56巻、693頁)中に記載のような５’−（Ｏ−アリールホスホルアミデート）プロドラッグを含む、ヌクレオシドまたはヌクレオチドプロドラッグを調製することに関して記載のプロドラッグである(S.Heckerら、J.Med.Chem.、2008年、51巻、2328頁;P.Poijarvi-Virtaら、Current Med.Chem.2006年、13巻、3441頁;N.Gischら、J.Med Chem.2008年、51巻、6752頁;L.Wiebeら、Adv Drug Delivery Rev.1999年、39巻、63頁;J.Cooperwoodら、Nucleoside and Nucleotide Prodrugs,in Recent Advances in Nucleosides:Chemistry and Chemotherapy、C.K.Chu編、Elsevier、2002年、91〜147頁)。プロドラッグは、好ましくは、優れた水溶性、高められたバイオアベイラビリティーを有し、かつインビボで容易に代謝されて式(I)の化合物になる。本発明の化合物のプロドラッグは、その修飾が定型的な操作によって、またはインビボで開裂されて親化合物になるような方式で、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。
【００６３】
好ましいのは、インビボで加水分解性であり、かつヒドロキシおよび／またはアミノおよび／またはホスフェート基を有するそれらの式（Ｉ）の化合物から誘導される、薬学的に許容されるエステル、エーテル、炭酸エステル、ホスホルアミデートまたはカルバミン酸エステル系のプロドラッグである。インビボで加水分解性であるエステル、エーテル、炭酸エステル、ホスホルアミデートまたはカルバミン酸エステルとは、ヒトまたは動物の体内で加水分解されて親のアルコール、アミンまたはリン酸塩を生成するエステル、エーテル、炭酸エステル、ホスホルアミデートまたはカルバミン酸エステルである。本発明の化合物のヒドロキシルに適した薬学的に許容されるエステルとしては、限定はされないが、Ｃ1〜Ｃ18アルカノイルエステル、ベンゾイルエステル、アミノ置換カルボン酸エステル、ヒドロキシル置換カルボン酸エステル、アルコキシ置換カルボン酸エステル、カルボキシル置換カルボン酸エステルが挙げられる。このようなエステルの若干の例には、酢酸エステル、プロパン酸エステル、酪酸エステル、イソ酪酸エステル、ピバリン酸エステル、アラニンエステル、バリンエステル、イソロイシンエステル、乳酸エステル、リンゴ酸エステル、コハク酸エステル、等々が含まれる。
【００６４】
本発明の式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩も提供される。用語「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される無機および有機の酸および塩基から誘導される塩を意味する。本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩は、例えば、十分に塩基性である本発明の化合物の酸付加塩、例えば、無機または有機の酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、メタンスルホン酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、２−メシチレンスルホン酸、クエン酸、酢酸、酒石酸、フマル酸、乳酸、コハク酸、リンゴ酸、マロン酸、マレイン酸、１，２−エタンジスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、エタンスルホン酸、またはニコチン酸との酸付加塩である。さらに、本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩は、例えば、十分に酸性である本発明の化合物の塩基付加塩、例えば、金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、またはアルミニウム塩、アンモニウム塩、第４級アンモニウムイオンを含む生理学的に許容されるカチオンを与える有機塩基、例えば、メチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリメチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、トリエチルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチルアミン、シクロヘキシルエチルアミン、トリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、ヒドロキシエチルジエチルアミン、（ＩＲ，２Ｓ）−２−ヒドロキシインデン−１−アミン、モルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペラジン、メチルピペラジン、アダマンチルアミン、コリンヒドロキシド、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド、トリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンヒドロキシド、Ｌ−アルギニン、Ｎ−メチルＤ−グルカミン、リシン、アルギニンなどを含む有機塩基との塩である。
【００６５】
本発明の特定の化合物は、溶媒和物または水和物として存在することができる。本発明は、すべてのこのような溶媒和物または水和物を包含すると理解されたい。
【００６６】
本発明の化合物は、また、このような化合物を構成する一以上の原子の位置に不自然な比率の原子同位体を含むことができる。例えば、化合物を、例えば、三重水素（3Ｈ）、重水素（2Ｈ）、ヨウ素−１２５（125Ｉ）または炭素−１４（14Ｃ）などの放射性同位体で放射能標識化することができる。本発明の化合物のすべての同位体の変化は、放射性であろうとなかろうと、本発明の範囲に包含されると解釈される。
【００６７】
本発明の化合物に互変異性体が存在する場合、本発明者らは、本発明の個々の特定の実施形態として、すべての個々の互変異性形態およびそれらの組み合わせを開示する。例えば、グアニン、チミンおよびウラシルなどの核酸塩基は、それぞれそれらの６位または４位においてそれらのケトおよびエノール型の平衡として存在することができる。グアニン、チミンおよびウラシルにおいて存在するすべての個々の互変異性形態およびそれらの互変異性体の組合せは本発明に包含されると理解される。
【００６８】
本発明による化合物は、ペントース環の１'位および４'位の双方で規定の立体化学を有する、β−Ｌ−ヌクレオシド配置のコア構造を有する。本発明は、式（Ｉ）で特定される立体化学を有するβ−Ｌ−ヌクレオシドのみに関する。しかし、式（Ｉ）中の変数、例えば、Ｘおよび／またはＹ、ならびに式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、１つまたは複数の非対称的に置換された炭素原子、不斉またはキラル中心を含むことができる。本発明による化合物における１つまたは複数のそれらの不斉中心の存在は、立体化学的異性形態、立体異性体を生じさせることができる。立体化学が、例えばβ−Ｌ−ヌクレオシドのように、または化学構造によって明確に規定されない限り、エナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにそのラセミ混合物を含む混合物を含めて、それぞれの場合に、本発明は、純粋な形態のおよび互いと混合されたすべてのこのような立体異性体に可能性としては拡がると理解すべきである。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物は、金属と結合する、キレートを形成する、または錯体を形成する特性を有することができ、それゆえ、金属錯体または金属キレートとして存在することができると理解される。式（Ｉ）の化合物のこのような金属化誘導体は、本発明の範囲に包含されると解釈される。
【００７０】
これまで及びこれから使用される科学および技術用語および命名法は、当業者によって一般的に理解されていると同様の意味を有し、加えて、そうでないことを具体的に言明しない限り、以下の定義が、明細書および添付の特許請求の範囲を通して適用されるものとする。
【００７１】
用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード基を意味する。
【００７２】
用語「Ｃ1〜Ｃ3アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有する直鎖または分枝の飽和アルキル基を意味する。前記アルキルの例には、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルが含まれる。用語「Ｃ1〜Ｃ6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝の飽和アルキル基を意味する。前記アルキルの例には、限定はされないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、イソペンチルおよびヘキシルが含まれる。用語「Ｃ2〜Ｃ6アルケニル」は、飽和の炭素−炭素結合および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し、かつ２〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルケニル基を意味する。前記アルケニルの例には、限定はされないが、エチニル、１−プロペニル、２−プロペニル、イソプロペニルおよびブテニルが含まれる。
【００７３】
用語「Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル」は、３〜６個の炭素原子を有する飽和単環式環を意味する。前記シクロアルキルの例には、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。
【００７４】
用語「ホスフェート」、「ジホスフェート」および「トリホスフェート」は、次の構造およびそれらの塩を意味する：
【化５】
2013514350.tif 000007
【００７５】
他の表示がない限り、アルキル、アルケニル、アルコキシおよびシクロアルキル（Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル中などの）は、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、オキソ、メルカプト、アミド、シアノ、アジド、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、Ｃ2〜Ｃ4アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシから独立的に選択される一以上の置換基で独立的に、任意に置換される。定義中で使用される任意の分子部分におけるラジカルの位置は、それが化学的に許容されかつ安定である限り、このような部分上のいずれの場所にあってもよいことに留意されたい。
【００７６】
用語「対象」は、ヒトを含む任意の哺乳動物を表す。本発明の一実施形態において、対象はヒトである。
【００７７】
用語「宿主」は、本明細書中で使用する場合、動物および好ましくはヒトを含む、ウイルスが複製できる多細胞生物体を指す。
【００７８】
用語「独立的に」は、変化するものを示すために本明細書中において用いられ、これは、独立的に適用され、適用毎に独立的に変化する。
【００７９】
本発明は、また、本発明の化合物を調製する方法に関する。該化合物は、有機合成の任意の適用可能な方法および技術により調製することができる。多くのこのような方法および技術は、当技術分野で周知であり、既知の方法技術の一部は、１２巻からなる「Compendium of Organic Synthetic Methods」（John Wiley & Sons、ニューヨーク）；「Advanced Organic Chemistry」第５版、M.Smith & J.March(John Wiley & Sons、ニューヨーク、２００１年）；９巻からなる「Comprehensive Organic Synthesis.Selectivity.Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry」Barry M.Trost、主任編集者（Pergamon Press、ニューヨーク、１９９３年）；および「Chemistry of Nucleosides and Nucleotides」Townsend,L.B.編（Plenum Press、ニューヨーク、１９８８年）中に詳述されている。
【００８０】
本発明の化合物を調製するためのいくつかの典型的な方法を、以下で提供する。それらの方法は、このような調製法の本質を例示することを意図するものであり、適用可能な方法の範囲を限定することを意図しない。有機化学に関わる当業者にとって容易に理解できる代替経路を代わりに使用して、本発明の化合物またはそれらの中間体を、後記の概略スキームおよび調製例により例示されるように合成することができる。
【００８１】
式（Ｉ）の化合物の調製に関する後記方法の過程において、望ましくない副反応に加わる傾向のある、出発原料中の官能基、特に、アミノ、アミド、カルボキシ、ヒドロキシ、ホスフェート基、およびメルカプト基は、有機合成において通例的に使用される適切な通常的保護基で保護することができる。それらの保護基は、前駆体中に既に存在していてもよく、それらの保護基は、アシル化、エーテル化、エステル化、アルキル化、酸化、還元、加溶媒分解などの望ましくない副反応に対して当該官能基を保護することを意図している。特定の事例において、保護基は、さらに、反応を選択的に、例えば、レギオ選択的または立体選択的に進行させることができる。保護基を、容易に、すなわち望ましくない副反応を起こさず、例えば、酸処理、フッ化物処理、加溶媒分解、還元によって、または光分解によって除去できることが、保護基の特徴である。このような保護基による官能基の保護、保護基自体、およびそれらを除去するための反応は、例えば、T.W.GreeneおよびP.G.M.Wuts「Protective Groups in Organic Synthesis」John Wiley & Sons,Inc、ニューヨーク、１９９９年などの標準的著作中に記載されている。
【００８２】
本発明の化合物は、スキーム１およびスキーム２で例示されるような２つの一般的経路を介して調製することができる。
【化６】
2013514350.tif 000008
【００８３】
スキーム１では、式（Ｉ）の化合物の一般的調製方法を説明する。適切なＬ−ペントフラノシドまたはＬ−４−チオペントフラノシドまたはシクロペンタン（ここで、ＬＧは脱離基であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＷは式（Ｉ）に関して定義した通りであり、必要ならどこでも適切に保護されていてもよい）を、適切に保護されていてもよい核酸塩基とカップリングさせて、脱保護の後に式（Ｉ）の化合物が得られる。例えば、カップリング反応は、ペルシリル化された核酸塩基を、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、ＴＨＦ、およびトルエンなどの不活性溶媒または不活性溶媒の混合物中、トリフル酸ＴＭＳまたはその他のルイス酸などの触媒下でＬ−ペントフラノシド，Ｌ−４−チオペントフラノシドと反応させるVorbrueggenカップリングの条件下で（H.Vorbrueggen、Acta Biochimica Polonica、１９９６年、４３巻、２６頁）実施することができる。Ｌ−ペントフラノシドまたはＬ−４−チオペントフラノシドの１位の通常的な脱離基としては、アルコキシ、アシル、ハロゲン、とりわけメトキシ、アセチル、塩素または臭素が挙げられる（L.Wilsonら、Synthesis、１９９５年、１４６５頁；J.Secrist IIIら、J Med.Chem. １９９２年、３５巻、５３３頁；M.Dysonら、J Med.Chem．１９９１年、３４巻、２７８２頁；B.Huangら、Nucleosides & Nucleotides、１９９３年、１２巻、１３９頁；M.Yokoyama、Synthesis、２０００年、１６３７頁）。別法として、プリンのナトリウム塩を使用して、脱離基がハライドである式（ＩＩ）の化合物とカップリングさせることができる（G.Revankar、Nucleosides Nucleotides、１９８９年、８巻、７０９頁；C.Hildebrandら、J.Org.Chem.１９９２年、５７巻、１８０８頁）。核酸塩基とシクロペンタンとの間のカップリングの場合、通常的な脱離基としては、トリフレート、トシレート、メシレートまたはハライドが挙げられる。別法として、核酸塩基とヒドロキシルシクロペンタンとのカップリングに光延反応を使用することができる（L.Agrofoglioら、Tetrahedron １９９４年、５０巻、１０６１１頁；S.Schneller、Curr.Topics Med.Chem.、２００２年、２巻、１０８７頁）。
【００８４】
スキーム２では、式（Ｉ）の化合物の別の調製方法を説明する。適切に保護されたβ−Ｌ−リボヌクレオシド、β−Ｌ−４'−チオリボヌクレオシドまたはβ−Ｌ−炭素環式リボヌクレオシド（ＩＩＩ）を、いくつかの反応ステップを介して式（Ｉ）の化合物に変換することができる。２'、３'または５'−ヒドロキシル上の保護基は異なっていてもよく、他の２つの部位の保護に影響を及ぼさないで選択的に脱保護することができる。
【化７】
2013514350.tif 000009
【００８５】
変換は、まず３'−ヒドロキシル基上で実施することができる。選択的保護の後、３'−ヒドロキシル基を、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬、ＣｒＯ3−ピリジン−無水酢酸などの酸化条件を使用してケト基に酸化することができる。該ケト基を、続いて、適用可能なオレフィン化条件、例えば、Nysted試薬、Wittig試薬、Tebbe試薬、等々を使用してメチレン化することができる（A.Matusdaら、Nucleosides & nucleotides １９９２年、１１巻、１９７頁；M.Sharmaら、Tetrahedron Lett.１９９０年、３１巻、５８３９頁；D.Lindegaardら、Nucleosides,Nucleotides & Nucleic Acid、２００３年、２２巻、１１５９頁；Ｐ．Serafinowskiら、Tetrahedron Lett．１９９６年、５２巻、７９２９頁：S.Augusteら、J Chem.Soc.Perkin Trans 1、１９９５年、３９５頁；V.Samanoら、J Org.Chem.１９９１年、５６巻、７１０８頁）。４'−チオヌクレオシドの調製では、脱離反応を介する方法が好ましいことがある。例えば、３'−ヒドロキシメチル−４'−チオヌクレオシドを調製し、鍵中間体として使用することができる。３'−ヒドロキシメチル−４'−チオヌクレオシドは、文献法に類似の方法を使用して合成することができる（E.Ichikawaら、Bioorg.Med.Che.Lett．１９９９年、９巻、１１１３頁；Braanaltら、J.Org.Chem.１９９４年、５９巻、４４３０頁；Moonら、Bioorg.Med.Chem.Lett.２００２年、１０巻、１４９９頁；J.Sangviら、Synthesis、１９９４年、１１６３頁；Sangviら、Tetrahedron Lett.１９９４年、３５巻、４６９７頁；Mouldonら、Bioorg.Med.Chem.１９９８年、６巻、５７７頁；Faulら、Tetrahedron、１９９７年、５３巻、８０８５頁）。３'−メチル上の遊離ヒドロキシル基をスルホニル化し、次いで、それを、３'−メチリデン化合物につながる脱離のための塩基処理に供することができる。別法として、遊離ヒドロキシルを、ヨウ化物に転換し、それを、続いて脱離反応に供することができる。脱離のために使用される塩基としては、ナトリウムｔ−ブトキシド、炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン、ＤＢＵ、ＤＢＮなどを挙げることができる。生じる３'−メチリデン−β−Ｌ−ヌクレオシドを、ヌクレオシド化学の当業者にとって公知の方法を使用して、２'位でさらに修飾して、所望の式（Ｉ）の化合物を得ることができる。（E.Ichikawa、Curr.Med.Chem.、２００１年、８巻、３８５頁；Chemistry of Nucleosides and Nucleotides、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｌ．Ｂ．編、（Plenum Press；ニューヨーク、１９８８年））。別法として、式（III）の化合物を、２'位で修飾して、所望のＲ1およびＲ2を有する中間体を得て、続いて３'−メチリデン基を導入することができる。
【００８６】
式（Ｉ）の一部の化合物を、さらに修飾して、式（Ｉ）で表すこともできる所望の化合物を得ることができると理解される。このような修飾のための方法は、所望される生成物の構造、および出発原料としての式（Ｉ）の化合物の構造によって決まる。このような修飾反応は、脱保護、置換、付加、酸化、還元、および有機合成において一般的であるその他の化学変換を含むことができる。例えば、Ｒ5がＨである式（Ｉ）の化合物を、リン酸化して、Ｒ5がホスフェートまたはトリホスフェートである式（Ｉ）の化合物とすることができる。
【００８７】
本発明の化合物のいくつかの典型的な調製方法を、本明細書中で、例えば後記の実施例中で提供する。それらの方法は、このような調製法の本質を例示することを意図し、適用可能な方法の範囲を限定することを意図しない。本発明の特定の化合物を、本発明の他の化合物を調製するための中間体として使用することができる。
【００８８】
スキーム３では、Ｗが酸素であり、かつＲ3およびＲ4が水素である式（Ｉ）の一部の化合物の調製方法を説明する。テトラアセチル−Ｌ−リボフラノシド（ＩＶ）を、トリフル酸ＴＭＳまたは他のルイス酸の触媒下で、ペルシリル化されたウラシル、チミン、シトシン、アデニン、グアニンなどの核酸塩基、または適切に保護された核酸塩基と縮合して、β−Ｌ−リボヌクレオシド（Ｖ）を得る。生成物を、ナトリウムメトキシド／メタノールなどの塩基性条件下で脱アセチル化する。脱保護されたβ−Ｌ−ヌクレオシドを、５'−ヒドロキシルおよび２'−ヒドロキシルの位置で選択的に保護することができる。５'−および２'−ヒドロキシル基上の保護基は、同一でもよいし、適切な脱保護条件下で選択的に除去できる異なる保護基でもよい。例えば、２'−ヒドロキシルと５'−ヒドロキシルとの双方をＴＢＳ基などのシリル保護基で保護することができる。別法として、５'−ヒドロキシルを、トリチル、４−モノメトキシトリチルまたは４，４'−ジメトキシトリチルなどのトリチル基で最初に保護することができる。５'−位が保護されたヌクレオシドを、次いで、例えばｔ−ブチルジメチルシリル基で２'−ヒドロキシルの位置を選択的に保護することができる。遊離の３'−ヒドロキシル基を、酸化試薬、例えば、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬またはピリジン−酸化クロミウム／無水酢酸を使用する酸化によってケト基に転換する。該ケト化合物（ＶＩＩ）を、続いて、Wittig試薬、Tebbe試薬またはNysted試薬などのオレフィン化試薬で処理し、３'−デオキシ−３'−メチリデン−β−Ｌ−ヌクレオシド（ＶＩＩＩ）をもたらすことができる。式（ＶＩＩＩ）の化合物を、直接的に脱保護して、Ｒ2がヒドロキシルである化合物（ＸＩ）を得ることができる。別法として、２'−ヒドロキシル基を脱保護した後、それらを、多ステップを経由して酸素を除去し、ついで脱保護して、Ｒ1とＲ2の両方が水素である式ＸＩＩの化合物を得ることができる。別法として、化合物ＩＸの２'−ヒドロキシル基を、反転させ、Ｒ1＝ＯＨかつＲ2＝Ｈである式Ｘの化合物をもたらすことができる。ＩＸおよびＸの化合物を、当技術分野で公知の方法を使用して、さらに誘導体化して、Ｒ1および／またはＲ2が、独立的に、Ｈ、Ｆ、ＣＨ3またはＯＣＨ3である化合物を得ることができる。
【化８】
2013514350.tif 000010
【００８９】
いくつかの典型的な反応手順を下記に示す。それらの方法は、このような反応の本質を例示することを意図し、方法の範囲を限定することを意図しない。通常の技術を有する有機化学者にとって容易に理解できる、代替的な手順、プロトコールまたは反応条件を代わりに使用することができる。
【００９０】
一般手順Ａ：Ｂａｒｔｏｎ−ＭｃＣｏｍｂｉｅ脱酸素化
第２級アルコール（３．２７ミリモル）の無水１，２−ジクロロエタン（１０．９ｍＬ）溶液に、チオカルボニルジイミダゾール（６．５３ミリモル）を添加し、生じた黄色溶液を１時間加熱還流し、室温まで冷却し、次いでＨ2Ｏ（７ｍＬ）中に注いだ。相を分離し、有機層を、冷たい１Ｍ  ＨＣｌ、次いでＮａＨＣＯ3飽和水溶液および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、減圧下で濃縮して淡黄色泡状物を得た。これを無水の脱気したトルエン（１６．４ｍＬ）に溶解した。アザシクロヘキシルカルボニトリル（０．３２７ミリモル）および水素化ｎ−トリブチル錫（６．５３ミリモル）を続いて添加し、生じた混合物を２時間加熱還流し、次いで減圧下で濃縮した。
【００９１】
一般手順Ｂ：Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化
Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（２．１０ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）懸濁液に、ｔ−ＢｕＯＨ（２．３１ミリモル）を添加し、生じた混合物を室温で１０分間撹拌した後、第２級アルコール（１．７５ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（６ｍＬ）溶液をカニューレ経由で添加した。反応混合物を、室温で１．５時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｎａ2Ｓ2Ｏ3（１５ｍＬ、１Ｍ水溶液）、食塩水（１０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ3（１０ｍＬ、飽和水溶液）で反応を止めた。二相混合物を激しく１時間撹拌し、次いで相を分離した。水層を、ＥｔＯＡｃで１回抽出し、合わせた有機層を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮し、白色泡状物として純粋なケトンを得た。これを、さらなる精製なしに使用した。
【００９２】
一般手順Ｃ：Ｎｙｓｔｅｄオレフィン化
Ｎｙｓｔｅｄ試薬（２．０７ミリモル、２０ｗｔ％）の無水ＴＨＦ（２．７ｍＬ）懸濁液に、ケトン（１．６４ミリモル）／無水ＣＨ2Ｃｌ2（２．７ｍＬ）を、カニューレを経由して−７８℃で滴加した。次いで、ＴｉＣｌ4（１．６７ミリモル、１．０Ｍ／ＣＨ2Ｃｌ2）を−７８℃で滴加し、反応混合物を１．５時間撹拌した。次いで、温度を一夜で徐々に室温に戻した。次いで、混合物をＮａＨＣＯ3飽和水溶液中に注ぎ、激しく３０分間撹拌し、次いでセライトを通して濾過した。相を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2で２回抽出し、合わせた有機層を、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。
【００９３】
一般手順Ｄ：酸性ＴＢＳ−脱保護
ＴＢＳ−エーテル（０．０６５６ミリモル）のＡｃＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ2Ｏ（２ｍＬ、２：１：１）溶液を、室温で１９時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。
【００９４】
一般手順Ｅ：ウラシル塩基を有するヌクレオシドのシトシン塩基を有するヌクレオシドへの転換
ウラシル塩基を有するヌクレオシド（０．０９６９ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2：ピリジン（１．０ｍＬ、５：１）溶液に、無水トリフル酸（０．２１８ミリモル、１Ｍ／ＣＨ2Ｃｌ2）を０℃で添加した。次いで、反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いでＮＨ3（５．５ｍＬ、７Ｍ／ＭｅＯＨ）を添加した。生じた橙色溶液を１７時間撹拌し、減圧下で濃縮した。
【００９５】
一般手順Ｆ：フッ化物を使用するＴＢＳの脱保護および精製
ＴＢＳ−エーテル（０．０４６８ミリモル）のＭｅＯＨ（２．３ｍＬ）溶液に、ＮＨ4Ｆ（０．４６８ｍＬ、０．５Ｍ／ＭｅＯＨ）を添加した。生じた混合物を、６時間加熱還流し、次いで減圧下で濃縮した。残留物をＣＨ2Ｃｌ2：Ｈ2Ｏ中に溶解し、相を分離した。水層をＣＨ2Ｃｌ2で２回洗浄した。活性炭を水相に、水相がもはやＵＶ活性でなくなるまで（ＴＬＣプレートにスポットして）、小分けして添加した。活性炭の懸濁液をフラッシュカラムに負荷し、Ｈ2Ｏ（５０ｍｌ）、続いてＨ2Ｏ：ＭｅＯＨ（５０ｍＬ、１：１）で溶離した。適切な画分（ＴＬＣプレート上にスポットして）を集め、減圧下で濃縮して純粋な生成物を得た。
【００９６】
治療において使用するのに必要とされる本発明の式（Ｉ）の化合物の量は、選択した特定の化合物のみならず、投与経路、治療を必要とする状態の本質、ならびに患者の年齢、体重および状態で変化し、最終的には掛かり付け医師の裁量にあることを理解されたい。しかし、一般に、適切な投与量は、１日につき約０．００５〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、好ましくは０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあることができる。
【００９７】
所望される投与量は、単回投与で、または適切な間隔で投与される分割投与として、例えば、１日につき２、３、４回またはそれ以上の投与として、好都合には与えられる。治療および／または予防の必要性に応じて、所望される投与量は、例えば、２日毎に１回、３日毎に１回、またはさらには１週間に１回でよい。
【００９８】
化合物は、単位剤形あたり例えば０．５〜１５００ｍｇ、好都合には１〜１０００ｍｇ、最も好都合には５〜７００ｍｇの活性成分を含む、単位剤形で好都合には投与される。
【００９９】
本発明の化合物は、経口、非経口、静脈内、筋内、皮下またはその他の注射可能な方式、頬側、直腸、膣、経皮および／または鼻腔経路、ならびに／または吸入を介して、活性成分またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグもしくは溶媒和物、またはこのような塩の溶媒和物を含む医薬製剤の形態で、薬学的に許容される剤形で通常的には投与される。治療すべき障害および患者、ならびに投与経路に応じて、組成物を様々な投与量で投与することができる。
【０１００】
治療法において使用する場合、本発明の式（Ｉ）の化合物を、そのままの化学物質として投与することもできるが、本発明の一実施形態によれば、活性成分を医薬組成物として提供することが好ましい。したがって、本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを、一以上の薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。担体は、該製剤中の他の成分と適合性があり、かつその需要者に対して有害でないという意味で「許容される」べきである。本発明の一実施形態によれば、医薬製剤としては、限定はされないが、経口、直腸、鼻腔、局所（頬側および舌下を含む）、経皮、膣または非経口（筋内、皮下および静脈内を含む）投与に適した、あるいは吸入または吹込みで投与するのに適した形態のものが挙げられる。製剤は、適切なら、別個の投与単位で好都合には提供され、製薬の技術分野で周知の任意の方法によって調製することができる。この実施形態によるすべての方法は、活性化合物を液体担体または微粉砕された固体担体あるいはその双方と会合させるステップ、次いで必要なら生成物を所望される組成物に成形するステップを包含する。
【０１０１】
経口投与に適した医薬組成物は、それぞれ所定量の活性成分を粉末または顆粒として含むカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの別個の単位として好都合には提供される。別の実施形態において、製剤は、溶液剤、懸濁剤として、または乳剤として提供される。別法として、活性成分は、ボーラス剤、舐剤、またはペースト剤として提供される。
【０１０２】
経口投与のための錠剤およびカプセル剤は、結合剤、フィラー、滑沢剤、崩壊剤、または湿潤化剤などの通常の賦形剤を含むことができる。錠剤を、当技術分野で周知の方法により被覆することができる。経口液体製剤は、例えば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳液、シロップまたはエリキシルの形態で存在することができ、あるいは使用前に水またはその他の適切な媒質を用いて再構成するための乾燥製品として提供することができる。このような液体製剤は、懸濁化剤、乳化剤、非水性媒質（食用油を包含できる）、または保存剤などの通常的な添加物を含むことができる。
【０１０３】
式（Ｉ）の化合物を、非経口投与（例えば、注射、例えばボーラス注入または連続点滴による）用に製剤化することができ、アンプル、事前充填シリンジ、保存剤を添加した少量点滴または多回投与容器の単位投与形態で提供することができる。組成物は、油性または水性媒質中の懸濁剤、溶液剤、または乳剤のような形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの製剤化剤を含むことができる。別法として、活性成分は、使用前に適切な媒質、例えば、無菌でパイロジェンフリーの水を用いて再構成するために、滅菌固体の無菌的単離によって、または溶液からの凍結乾燥によって得られる粉末形態で存在することができる。
【０１０４】
前記製剤は、活性成分の徐放出を提供するように構成される。
【０１０５】
本発明の種々の実施形態を例示するために、以下の実施例を提供するが、該実施例を範囲の限定と見なしてはならない。
【０１０６】
略語
ＤＩＰＥＡ        Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ          ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＰ            Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン
ＤＢＵ            ２，３，４，６，７，８，９，１０−オクタヒドロピリミドール［１，２−ａ］アゼピン
ＥｔＯＡｃ        酢酸エチル
Ｅｔ3Ｎ          トリエチルアミン
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
ＤＭＦ            Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ            ジクロロメタン
ｉＰｒＯＨ        イソプロパノール
ＬＣＭＳ          液体クロマトグラフィー質量分光法
ＭｅＣＮ          アセトニトリル
ＲＴ              室温
ＴＢＳ            ｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＢＳＣｌ        ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＢＡＦ          テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＴＬＣ            薄層クロマトグラフィー
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
ｐ−ＴＳＡ        ｐ−トルエンスルホン酸
ＮＭＰ            Ｎ−メチルピロリドン
Ｒf              保持係数
ＤＡＳＴ          （ジエチルアミノ）三フッ化硫黄
ＭｅＯＨ          メタノール
Ｈｅｘ            ヘキサン
Ｈｅｐ            ヘプタン
ＴＭＳ            トリメチルシリル
ＥｔＯＨ          エタノール
ＡｃＯＨ          酢酸
Ｅｔ2Ｏ          ジエチルエーテル
Ｉｍ              イミダゾール
ｎ−Ｂｕ          ノーマルブチル
ｉ−Ｐｒ          イソプロピル
Ｍｅ              メチル
Ｂｚ              ベンゾイル
Ａｃ              アシル
Ａｃ2Ｏ          無水酢酸
Ｔｆ2Ｏ          無水トリフル酸
ＤＨＰ            ３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン
ＴＨＰ            テトラヒドロピラニル
ＤＭＴｒＣｌ      ４，４'−ジメトキシトリチルクロリド
ＤＭＴｒ          ４，４'−ジメトキシトリチル
ａｐｐ            見かけ上の
ＤＭＥＭ          ダルベッコ改変イーグル培地
ＦＢＳ            ウシ胎児血清
例示する化合物の化学名と対応する当該例の構造との間に何らかの矛盾が存在する場合、当該例の化合物を確定するには、その化学構造を使用するものとする。
【実施例１】
【０１０７】
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）ウラシル（化合物８）
【化９】
2013514350.tif 000011
【化１０】
2013514350.tif 000012
【０１０８】
β−Ｌ−ウリジン（化合物１、１．０２２ｇ、４．１８ミリモル）の無水ピリジン（８．４ｍＬ）溶液に、１，３−ジクロロ−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサン（１．４７３ｍＬ、４．６０ミリモル）を０℃で滴加した。生じた混合物を、室温で２２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物をＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で３回洗浄した。合わせた水層をＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＥｔＯＡｃ  ４：１〜１：１）により、無色の泡状物として化合物２を得た（１．５９０ｇ）。
【０１０９】
化合物２（１．５９０ｇ、３．２７ミリモル）を一般手順Ａにより脱酸素化した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＥｔＯＡｃ  ６：１〜４：１）により、白色泡状物として化合物３を得た（１．１２７ｇ）。
【０１１０】
化合物３（１．１１８ｇ、２．３８ミリモル）のＴＨＦ（７ｍＬ）溶液にＴＢＡＦ（４．７８ｍＬ、４．７８ミリモル、１Ｍ／ＴＨＦ）を０℃で添加した。１０分後に、温度を室温に戻し、混合物を２．５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（１０〜１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、白色泡状物として化合物４を得た（５３６ｍｇ）。
【０１１１】
化合物４（５３６ｍｇ、２．３５ミリモル）の無水ＤＭＦ（２４ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（３７２ｍｇ、２．４７ミリモル）、続いてイミダゾール（４８０ｍｇ、７．０５ミリモル）を室温で添加した。３時間後に、反応混合物をＨ2Ｏ中に注いだ。水層を、ＴＬＣ（Ｒf＝０．６７、ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝１０：１）が水相中に生成物が存在しないことを示すまで、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：３）により、澄明オイルとして化合物５を得た（５９８ｍｇ）。
【０１１２】
化合物５（５９８ｍｇ、１．７５ミリモル）を、一般手順Ｂにより酸化して、化合物６を得た（５６１ｍｇ）。これを、さらに精製することなしに使用した。
【０１１３】
化合物６（５５８ｍｇ、１．６４ミリモル）を一般手順Ｃによりオレフィン化した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、白色固体として化合物７を得た（１６１ｍｇ）。
【０１１４】
化合物７（２２．２ｍｇ、０．０６５６ミリモル）を、一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、白色固体として化合物８を得た（９．５ｍｇ）。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.72 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.23 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.24 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 5.08 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 4.59 (br s, 1H), 3.98 (dd, J = 12.2, 2.7 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 12.2, 3.9 Hz, 1H), 3.13 (m, 1H), 2.70 (ddq, J = 16.6, 6.2, 2.3 Hz, 1H).
【実施例２】
【０１１５】
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）シトシン（化合物１０）
【化１１】
2013514350.tif 000013
【０１１６】
化合物７（３２．８ｍｇ、０．０９６９ミリモル）を、一般手順Ｅによりシトシン類似体（化合物９）に転換した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、淡黄色オイルとして化合物９を得た（２４．８ｍｇ）。
【０１１７】
化合物９（１３．２ｍｇ、０．０３９１ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液にＴＦＡ：Ｈ2Ｏ（１ｍＬ、１：１）を０℃で添加した。１．２５時間後に、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＮａＨＣＯ3水溶液に溶解し、ＣＨ2Ｃｌ2で３回洗浄した。活性炭を水相に、水相がもはやＵＶ活性でなくなるまで（ＴＬＣプレート上にスポットして）小分けして添加した。活性炭の懸濁液をフラッシュカラムに負荷し、Ｈ2Ｏ（５０ｍＬ）続いてＨ2Ｏ：ＭｅＯＨ（５０ｍＬ、１：１）で溶離した。生成物の画分を集め、減圧下で濃縮して、白色固体として化合物１０を得た（５．０ｍｇ）。1H-NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 8.03 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.16 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.19 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 5.09 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 4.56 (br s, 1H), 3.86 (dd, J = 12.2, 3.1 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 12.2, 4.4 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 16.4, 6.2 Hz, 1H), 2.66 (m, 1H).
【実施例３】
【０１１８】
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）ウラシル（化合物１５）
【化１２】
2013514350.tif 000014
【化１３】
2013514350.tif 000015
【０１１９】
β−Ｌ−ウリジン（化合物１、７９６ｍｇ、３．２６ミリモル）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）と無水ピリジン（１．３２０ｍＬ、１６．３ミリモル）との懸濁液にＡｇＮＯ3（１．２２ｇ、７．１７ミリモル）を添加した。室温で５分後、ＴＢＳＣｌ（１．０８０ｇ、７．１７ミリモル）を添加し、生じた不均一混合物を室温で１時間撹拌した。さらなるＡｇＮＯ3（５５４ｍｇ、３．２６ミリモル）およびＴＢＳＣｌ（４９０ｍｇ、３．２６ミリモル）を添加し、反応混合物を室温で１７時間撹拌した。不均一混合物を、セライトを通して濾過し、ＣＨ2Ｃｌ2で希釈した。有機相を、１Ｍ  ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3飽和溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（Ｅｔ2Ｏ：Ｈｅｘ  １：１〜２：１）により、澄明オイルとして化合物１２を得た（１．０９５ｇ）。
【０１２０】
化合物１２（４３８ｍｇ、０．９３ミリモル）を一般手順Ｂにより酸化して、化合物１３を得た。これを、さらなる精製なしに使用した。
【０１２１】
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（９９５ｍｇ、２．７８ミリモル）の無水ＴＨＦ（１４ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．１１ｍＬ、２．７８ミリモル、２．５Ｍ／ヘキサン）を−７８℃で添加した。１時間後に、温度を０℃まで高め、橙色／赤色の溶液を、２０分間撹拌した後、−７８℃まで冷却した。化合物１３（４３６ｍｇ、０．９３ミリモル）の無水ＴＨＦ（９．５ｍＬ）溶液をカニューレ経由で添加した。−７８℃で３０分後、温度を３０分間で０℃まで高め、その後、反応混合物を室温で１５時間撹拌した。次いで、反応混合物を、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で反応を止め、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（Ｅｔ2Ｏ：Ｈｅｘ  １：１）により、澄明オイルとして化合物１４を得た（４１０．５ｍｇ）。
【０１２２】
化合物１４（２４３ｍｇ、０．５１８ミリモル）のＴＨＦ（５．２ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（１．５６ｍＬ、１．５６ミリモル、１Ｍ／ＴＨＦ）を室温で添加した。５時間後に、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（４％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により、白色固体として化合物１５を得た（１２２．５ｍｇ）。
【実施例４】
【０１２３】
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントリボフラノシル）シトシン（化合物１７）
【化１４】
2013514350.tif 000016
【化１５】
2013514350.tif 000017
【０１２４】
化合物１４（５６ｍｇ、０．０１１９ミリモル）を、一般手順Ｅにより化合物１６に転換した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、淡黄色オイルとして化合物１６を得た（５１．６ｍｇ）。
【０１２５】
化合物１６（５１．６ｍｇ、０．１１０ミリモル）を一般手順Ｆにより脱保護した。残留物の活性炭精製（ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ  １：１で溶離）により、白色固体として化合物１７を得た（１５．５ｍｇ）。1H-NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 8.00 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.36 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 5.24 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 12.1, 2.9 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 12.1, 3.6 Hz, 1H).
【実施例５】
【０１２６】
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）ウラシル（化合物２１）
【化１６】
2013514350.tif 000018
【化１７】
2013514350.tif 000019
【０１２７】
化合物１５（１２２．５ｍｇ、０．５１０ミリモル）の無水ＤＭＦ（５．１ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（９２．２ｍｇ、０．６１０ミリモル）およびイミダゾール（１７３．６ｍｇ、２．５５ミリモル）を室温で添加した。５．５時間後に、反応混合物をＥｔ2ＯおよびＨ2Ｏで希釈した。相を分離し、水層をＥｔ2Ｏで抽出した。合わせた有機層を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、白色固体として化合物１８を得た（１１０．５ｍｇ）。
【０１２８】
化合物１８（１１１ｍｇ、０．３１３ミリモル）を一般手順Ｂにより酸化して化合物１９を得た（１１０ｍｇ）。これを、さらなる精製なしに使用した。
【０１２９】
１９（１１０ｍｇ、０．３１３ミリモル）のＭｅＯＨ（３．１ｍＬ）溶液にＣｅＣｌ3ｘ７Ｈ2Ｏ（１１６．３ｍｇ、０．３１３ミリモル）を添加し、溶液を室温で１０分間撹拌した。ＮａＢＨ4（１７．８ｍｇ、０．４７０ミリモル）を一度に添加し、生じた混合物を室温で３時間撹拌し、次いでＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で反応を止め、Ｅｔ2Ｏで希釈した。層を分離し、次いで水層をＥｔ2Ｏで２回抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、白色固体として２０を得た（４２．５ｍｇ）。
【０１３０】
２０（１６．０ｍｇ、０．０４５１ミリモル）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液にＴＢＡＦ（９０μＬ、０．０９０ミリモル、１Ｍ／ＴＨＦ）を添加し、室温で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（４％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により、白色固体として２１を得た（１０．２ｍｇ）。1H-NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.47(t, J = 1.9 Hz, 1H), 5.30 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 4.68 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 3.85 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 12.1, 5.0 Hz, 1H).
【実施例６】
【０１３１】
１−（２，３−ジデオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）チミン（化合物２６）
【化１８】
2013514350.tif 000020
【化１９】
2013514350.tif 000021
【０１３２】
β−Ｌ−チミジン（化合物２２、５００ｍｇ、２．０６ミリモル）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（３４２ｍｇ、２．２７ミリモル）およびイミダゾール（４２１ｍｇ、６．１８ミリモル）を室温で添加した。２０時間後に、反応混合物をＥｔ2ＯおよびＨ2Ｏで希釈した。相を分離し、水層をＥｔ2Ｏで２回抽出した。合わせた有機層を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：３）により、白色固体として化合物２３を得た（６０２．６ｍｇ）。
【０１３３】
化合物２３（６０３ｍｇ、１．６９ミリモル）を、一般手順Ｂにより酸化して、化合物２４を得た（６００ｍｇ）。これを、さらなる精製なしで使用した。
【０１３４】
化合物２４（６００ｍｇ、１．６９ミリモル）を、一般手順Ｃによりオレフィン化した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、白色固体として化合物２５を得た（１６１ｍｇ）。
【０１３５】
化合物２５（３０．２ｍｇ、０．０８５７ミリモル）を、一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、白色固体として化合物２６を得た（１７．３ｍｇ）。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ = 9.29 (br s, 1H), 7.46 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.22 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 5.22 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 5.07 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 4.57 (br s, 1H), 3.96 (dd, J = 12.2, 2.7 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 12.2, 4.2 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 16.6, 6.8 Hz, 1H), 2.71 (ddq, J = 16.5, 6.5, 2.2 Hz, 1H), 1.88 (d, J = 1.1 Hz, 3H).
【実施例７】
【０１３６】
１−（３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−アラビノペントフラノシル）シトシン（化合物２８）
【化２０】
2013514350.tif 000022
【０１３７】
化合物２１（１１．９ｍｇ、０．０４９６ミリモル）の無水ピリジン（２ｍＬ）溶液に、無水酢酸（１ｍＬ）を室温で添加した。生じた混合物を２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物をＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で洗浄した。相を分離し、水相をＣＨ2Ｃｌ2で２回抽出した。合わせた有機相を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、無色の固体として化合物２７を得た（１１．４ｍｇ）。
【０１３８】
化合物２７（１１．４ｍｇ、０．０３５２ミリモル）、トリアゾール（３６．４ｍｇ、０．５２７ミリモル）およびＥｔ3Ｎ（９８μＬ、０．７０４ミリモル）の無水アセトニトリル（１ｍＬ）溶液にＰＯＣｌ3（１３．１μＬ、０．１４１ミリモル）を０℃で添加し、温度を室温に戻した。生じた混合物を１６時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で反応を止めた。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機抽出物を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をジオキサン（２ｍＬ）に溶解し、２５％ＮＨ4ＯＨ（０．５ｍＬ）を添加し、反応混合物を２４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色の固体として化合物２８を得た（５．９ｍｇ）。
【０１３９】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.85 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.47 (dd, J = 1.9, 1.2 Hz, 1H), 5.30 (見かけt, J = 1.4 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.60 - 4.55 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 12.0, 5.2 Hz, 1H).
【実施例８】
【０１４０】
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル（化合物３５）
【化２１】
2013514350.tif 000023
【０１４１】
２，２'−アンヒドロ−Ｌ−ウリジン（３００ｍｇ、１．３３ミリモル）と３，４−ジヒドロピラン（３．２ｍＬ）との無水ＤＭＦ（５．３ｍＬ）溶液にｐ−ＴＳＡ（２５０ｍｇ）を０℃で添加した。反応混合物を、室温で３時間撹拌し、次いでＥｔ3Ｎ（５５０μＬ）で反応を止めた。混合物を、減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮した。粗生成物をヘキサンと共にすり潰し、無色の固体として化合物２９を得た（４１８ｍｇ）。
【０１４２】
化合物２９（４１８ｍｇ、１．０６ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液にＮａＯＨ（１．８ｍＬ、１Ｍ／ＭｅＯＨ）を添加し、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。ＡｃＯＨ（１００μＬ）で反応を止め、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）により、無色のオイルとして化合物３０を得た（４３５ｍｇ）。
【０１４３】
化合物３０（２３１ｍｇ、０．５６ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2：ピリジン（５．６ｍＬ、６：１）溶液にＤＡＳＴ（２３０μＬ、１．７４ミリモル）をＮ2下に０℃で添加した。反応混合物を５時間加熱還流し、次いで室温まで放冷し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で反応を止めた。混合物をＣＨ2Ｃｌ2で２回抽出し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ（５．６ｍＬ）に溶解し、ｐ−ＴＳＡ（１０７ｍｇ、０．５６ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  １０：１）により、無色のオイルとして化合物３１を得た（９１．８ｍｇ）。
【０１４４】
化合物３１（７８．４ｍｇ、０．３１８ミリモル）の無水ＤＭＦ（３．２ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（５０．４ｍｇ、０．３３４ミリモル）およびイミダゾール（６４．９ｍｇ、０．９５４ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物をこの温度で１．５時間撹拌し、次いでＨ2Ｏで反応を止めた。混合物をＥｔ2Ｏで３回抽出し、合わせた有機抽出物を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１）により、固体として化合物３２を得た（８６．７ｍｇ）。
【０１４５】
化合物３２（６４．７ｍｇ、０．１７９ミリモル）を一般手順Ｂにより酸化して、化合物３３を得た（６４．３ｍｇ）。これを、さらなる精製なしに使用した。
【０１４６】
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１９２ｍｇ、０．５３８ミリモル）の無水ＴＨＦ（２．７ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（０．２１５ｍＬ、０．５３８ミリモル、２．５Ｍ／ヘキサン）を−７８℃で添加した。０．５時間後に、温度を０℃まで高め、橙色／赤色の溶液を、２０分間撹拌し、次いで−７８℃まで再冷却した。その後、化合物３３（６４．３ｍｇ、０．１７９ミリモル）の無水ＴＨＦ（１．８ｍＬ）溶液をカニューレ経由で添加した。−７８℃で２時間後、反応混合物を、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で反応を止め、Ｅｔ2Ｏで２回抽出した。合わせた有機層を、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（Ｅｔ2Ｏ：Ｈｅｘ  １：１）により、無色の固体として化合物３４を得た（３６．１ｍｇ）。
【０１４７】
化合物３４（９．５ｍｇ、０．０２６７ミリモル）を、一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色のオイルとして化合物３５を得た（６．５ｍｇ）。
【０１４８】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.07 (dd, J = 16.3, 3.3 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.63 - 5.61 (m, 1H), 5.50 (ddd, J = 54.4, 3.2, 1.5 Hz, 1H), 5.49-5.46 (m, 1H), 4.79 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 12.3, 2.9 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 12.3, 3.8 Hz, 1H).
【実施例９】
【０１４９】
１−［２−デオキシ−２−（Ｓ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン（化合物３７）
【化２２】
2013514350.tif 000024
【化２３】
2013514350.tif 000025
【０１５０】
化合物３４（２５．６ｍｇ、０．０７１８ミリモル）を、一般手順Ｄにより脱保護した。残留物を、ピリジン（２×２ｍＬ）を用いて共沸乾燥し、次いで無水ピリジン（２ｍＬ）に溶解した。生じた溶液に無水酢酸（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、無色のオイルとして化合物３６を得た（１３．７ｍｇ）。
【０１５１】
化合物３６（１３．７ｍｇ、０．０４８２ミリモル）と１，２，４−トリアゾール（５０．０ｍｇ、０．７２３ミリモル）とＥｔ3Ｎ（１３５μＬ、０．９６４ミリモル）との無水ＭｅＣＮ（１ｍＬ）溶液にＰＯＣｌ3（１８．０μＬ、０．１９３ミリモル）を０℃で添加した。生じた混合物を室温で４時間撹拌し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液で反応を止め、ＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出した。合わせた有機抽出物を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をＮＨ3（３ｍＬ、７Ｎ／ＭｅＯＨ）に溶解し、室温で２０時間、続いて５０℃で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物を精製して化合物３７を得た（４．２ｍｇ）。
【０１５２】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.04 (dd, J = 16.5, 3.0 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.63 - 5.59 (m, 1H), 5.47 - 5.45 (m, 1H), 5.44 (ddd, J = 54.4, 2.8, 1.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.77 (m, 1H), 3.92 (dd, J = 12.3, 3.0 Hz, 1H), 3.81 (dd, J = 12.4, 3.9 Hz, 1H).
【実施例１０】
【０１５３】
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］ウラシル（化合物４５）
【化２４】
2013514350.tif 000026
【０１５４】
１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（３．００ｇ、５．９５ミリモル）と臭化アセチル（０．６８ｍＬ、９．２２ミリモル）との無水ＣＨ2Ｃｌ2（１５ｍＬ）溶液に、無水ＭｅＯＨ（０．３６ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物をこの温度で２時間撹拌し、次いでＨ2Ｏ（６ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２時間激しく撹拌した。相を分離し、水相をＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下でほぼ１０〜１５ｍＬまで濃縮した。残留物を０℃まで冷却し、撹拌しながらヘプタン（２０ｍＬ）を添加した。溶液を、ロータリーエバポレーター（水浴なし）で沈殿が発生するまで濃縮した。次いで、混合物を大気圧下に０℃で３０分間撹拌した。沈殿を濾別し、３×３ｍＬ（ヘプタン：ＣＨ2Ｃｌ2 ２：１）で洗浄し、真空で乾燥して、無色の固体として化合物３８を得た（１．２７５ｇ）。
【０１５５】
化合物３８（１．２８ｇ、２．７６ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（１８．４ｍＬ）溶液にＤＡＳＴ（１．０９ｍＬ、８．２７ミリモル）をＮ2下に室温で添加した。反応混合物を１８時間加熱還流し、次いでＤＡＳＴ（０．５０ｍＬ、４．１４ミリモル）を添加し、混合物を還流下に６時間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ3飽和水溶液（１０ｍＬ）で反応を止めた。相を分離し、有機相をＨ2Ｏ、ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色の固体として化合物３９を得た（９２７ｍｇ）。
【０１５６】
化合物３９（９２７ｍｇ、２．００ミリモル）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）溶液にＮ2下でＨＢｒ（１．１６ｍＬ、４．２８ミリモル、３３％／ＡｃＯＨ）を添加した。そして、生じた混合物をＮ2下で１７時間撹拌した。反応混合物を、Ｈ2ＯおよびＮａＨＣＯ3で２回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮して、淡黄色オイルとして粗ブロミド体を得た（８３８ｍｇ）。セパレート型フラスコ中で、ヘキサメチルジシラザン（５．０ｍＬ）中のウラシル（２６９ｍｇ、２．４０ミリモル）および（ＮＨ4）2ＳＯ4（１６ｍｇ）をＮ2下で２２時間加熱還流した。反応混合物を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥して、無色のオイルとして粗ビス−ＴＭＳ−ウラシルを得た。粗ビス−ＴＭＳ−ウラシルに、粗ブロミド体／無水ＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）をＮ2下にカニューレを経由して添加した。生じた混合物をＮ2下で１８時間加熱還流し、次いでＨ2Ｏで反応を止め、室温で３０分間撹拌した。相を分離し、水相をＣＨ2Ｃｌ2で２回抽出した。合わせた有機抽出物を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。ＥｔＯＨから再結晶すると、無色の固体として化合物４０が得られた（５９８ｍｇ）。
【０１５７】
化合物４０（５２７ｍｇ、１．１６ミリモル）のＭｅＯＨ（８．１ｍＬ）溶液に２５％ＮＨ4ＯＨを添加し、生じた混合物を室温で４１時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  １０：１）により、無色の固体として化合物４１を得た（２７５ｍｇ）。
【０１５８】
化合物４１（２８０ｍｇ、１．１４ミリモル）の無水ＤＭＦ（１１．４ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（１８０．２ｍｇ、１．２０ミリモル）およびイミダゾール（２３２ｍｇ、３．４２ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物を徐々に室温に戻し、１６時間撹拌し、次いでＨ2Ｏで反応を止めた。混合物をＥｔ2Ｏで３回抽出し、合わせた有機抽出物を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、無色の固体として化合物４２を得た（３６５）。
【０１５９】
化合物４２（２８１ｍｇ、０．７７８ミリモル）を一般手順Ｂにより酸化した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、次いでＮａ2Ｓ2Ｏ3（１．６５ｇ）／ｐＨ７．４の緩衝液（１１ｍＬ、０．１Ｍ）で反応を止め、懸濁液が澄明になるまで激しく撹拌した。相を分離し、有機相を、ＮａＨＣＯ3（５％水溶液）で洗浄し（１０秒）、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮して、無色の固体として化合物４３を得た（２７９ｍｇ、１００％）。これを、さらなる精製なしで使用した。
【０１６０】
化合物４３（２７９ｍｇ、０．７７８ミリモル）を一般手順Ｃによりオレフィン化した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、無色の固体として化合物４４を得た（１１２ｍｇ）。
【０１６１】
化合物４４（２３．５ｍｇ、０．０６５６ミリモル）を一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色の固体として化合物４５を得た（１３．１ｍｇ）。
【０１６２】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.88 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 6.11 (dd, J = 17.5, 3.4 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 6.5, 2.2 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.56 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.38 (dd, J = 55.7, 3.3 Hz, 1H), 4.65 - 4.60 (m, 1H), 3.84 - 3.75 (m, 2H).
【実施例１１】
【０１６３】
１−［２−デオキシ−２−（Ｒ）−フルオロ−３−デオキシ−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル］シトシン（化合物４７）
【化２５】
2013514350.tif 000027
【０１６４】
化合物４４（８６．７ｍｇ、０．２４３ミリモル）を一般手順Ｅによりシチジン類似体（化合物４６）に転換した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、淡黄色オイルとして化合物４６を得た（６３．９ｍｇ）。
【０１６５】
化合物４６（５４ｍｇ、０．１５２ミリモル）を一般手順Ｆにより脱保護した。残留物を精製して化合物４７を得た（３４．７ｍｇ）。
【０１６６】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.07 (dd, J = 18.1, 2.9 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.75 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.55 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.37 (dd, J = 55.6, 2.5 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.78 (d, J = 5.0 Hz, 2H).
【実施例１２】
【０１６７】
１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（化合物５５）
【化２６】
2013514350.tif 000028
【化２７】
2013514350.tif 000029
【０１６８】
１−｛（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−メチル］−３−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル｝ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（化合物１２Ｂ）（２７４ｍｇ、０．５８０ミリモル）を一般手順Ｂにより酸化して、無色の固体として化合物４８を得た（２７３ｍｇ）。これを、さらなる精製なしに使用した。
【０１６９】
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（６２２ｍｇ、１．７４ミリモル）の無水ＴＨＦ（８．７ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１．０９ｍＬ、０．５４ミリモル、１．６Ｍ／ヘキサン）を−７８℃で添加した。０．５時間後に、温度を０℃まで上昇させ、橙色／赤色の溶液を、２０分間撹拌した後、−７８℃まで再冷却した。その後、化合物４８（６４．３ｍｇ、０．１７９ミリモル）の無水ＴＨＦ（６ｍＬ）溶液をカニューレ経由で添加した。−７８℃で１時間後、温度を室温に戻し、反応混合物をこの温度で２０時間撹拌した。次いで、反応混合物を、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で反応を止め、Ｅｔ2Ｏで２回抽出した。合わせた有機抽出物を、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｅｔ2Ｏ：ヘキサン  １：１）により、無色の固体として化合物４９を得た（７４．６ｍｇ）。
【０１７０】
化合物４９（３００ｍｇ、０．６４０ミリモル）とＰｔＯ2（１４．５ｍｇ、０．０６４０ミリモル）との無水ＥｔＯＨ（１２．８ｍＬ）溶液をＨ2雰囲気下に室温で１時間撹拌した。反応混合物を、ガラスウールを通して濾過し、減圧下で濃縮して、化合物５０を得た（３０１ｍｇ）。これを、さらなる精製なしで使用した。
【０１７１】
化合物５０（３０１ｍｇ、０．６３９ミリモル）のＴＨＦ（４．５ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（１．９ｍＬ、１．９１８ミリモル、１Ｍ／ＴＨＦ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により、無色の固体として化合物５１を得た（１４２．５ｍｇ）。
【０１７２】
化合物５１（５４．５ｍｇ、０．２２５ミリモル）の無水ＤＭＦ（２．３ｍＬ）溶液にＴＢＳＣｌ（３５．６ｍｇ、０．２３６ミリモル）およびイミダゾール（４６．０ｍｇ、０．６７５ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物を徐々に室温に戻し、１８時間撹拌し、次いでＨ2Ｏで反応を止めた。混合物をＥｔ2Ｏで３回抽出し、合わせた有機抽出物を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、無色のオイルとして化合物５２を得た（６７．６ｍｇ）。
【０１７３】
化合物５２（１２４ｍｇ、０．３４８ミリモル）を、一般手順Ｂにより酸化した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、次いでＮａ2Ｓ2Ｏ3（０．７５ｇ）／ｐＨ７．４の緩衝液（５．１ｍＬ、０．１Ｍ）で反応を止め、懸濁液が澄明になるまで激しく撹拌した。相を分離し、有機相を、ＮａＨＣＯ3（５％水溶液）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮して、無色の固体として化合物５３を得た（１２３ｍｇ）。これを、さらなる精製なしで使用した。
【０１７４】
化合物５３（１２３ｍｇ、０．３４８ミリモル）を一般手順Ｃによりオレフィン化した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、無色の固体として化合物５４を得た（３８．５ｍｇ）。
【０１７５】
化合物５４（６．０ｍｇ、０．０１７０ミリモル）を一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色の固体として化合物５５を得た（３．８ｍｇ）。
【０１７６】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.98 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.75 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 2.8, 1.9 Hz, 1H), 5.10 (見かけt, J = 2.4 Hz, 1H), 4.58 - 4.54 (m, 1H), 3.83 (dd, J = 12.0, 2.9 Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 12.0, 3.9 Hz, 1H), 2.85 - 2.76 (m, 1H), 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
【実施例１３】
【０１７７】
４−アミノ−１−［（２Ｓ，３Ｓ，５Ｒ）−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−４−メチレンテトラヒドロフラン−２−イル］ピリミジン−２（１Ｈ）−オン（化合物５７）
【化２８】
2013514350.tif 000030
【０１７８】
化合物５４（１５．０ｍｇ、０．０４２５ミリモル）を、一般手順Ｅによりシチジン類似体（化合物５６）に転換した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、淡黄色オイルとして化合物５６を得た（１１．０ｍｇ）。
【０１７９】
化合物５６（１１．０ｍｇ、０．０３１３ミリモル）を一般手順Ｆにより脱保護した。残留物を精製して化合物５７を得た（５．６ｍｇ）。
【０１８０】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.97 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.94 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 2.8, 1.9 Hz, 1H), 5.09 (見かけt, J = 2.4 Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 3.3, 1.4 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 12.0, 3.0 Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.82 - 2.69 (m, 1H), 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
【実施例１４】
【０１８１】
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロウラシル（化合物６４）
【化２９】
2013514350.tif 000031
【０１８２】
５−フルオロウラシル（９２０ｍｇ、７．０７ミリモル）とＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（３．５ｍＬ、１４．１ミリモル）との無水ＭｅＣＮ（３６ｍＬ）溶液を４０分間加熱還流した。次いで、反応混合物を０℃まで冷却し、化合物５８（１．１４ｇ、３．２０ミリモル）およびＳｎＣｌ4（３２．０ｍＬ、３２．０ミリモル、１Ｍ／ＣＨ2Ｃｌ2）を添加し、生じた混合物をＮ2下に室温で一夜撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、氷冷ＮａＨＣＯ3飽和水溶液中に注いだ。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機抽出物を、食塩水で洗浄し、シリカゲルの詰め物を通して（ＥｔＯＡｃ）濾過し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2:ＥｔＯＡｃ  １：０〜１２：１〜８：１）により、無色のオイルとして化合物５９を得た（４２７ｍｇ）。
【０１８３】
化合物５９（３８４ｍｇ、０．８４５ミリモル）のＮＨ3（１０ｍＬ、７Ｎ／ＭｅＯＨ）溶液を室温で２４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色の泡状物として化合物６０を得た（１９８ｍｇ）。
【０１８４】
化合物６０（２７５ｍｇ、１．１２ミリモル）の無水ＤＭＦ（１１ｍＬ）溶液に、ＴＢＳＣｌ（１７７ｍｇ、１．１７ミリモル）およびイミダゾール（２２９ｍｇ、３．３６ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物を徐々に室温に戻し、１７時間撹拌し、次いでＨ2Ｏで反応を止めた。混合物をＥｔ2Ｏで３回抽出し、合わせた有機抽出物を、Ｈ2Ｏで３回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２）により、無色の固体として化合物６１を得た（２６０ｍｇ）。
【０１８５】
化合物６１（２５９ｍｇ、０．７１９ミリモル）を、一般手順Ｂにより酸化して、無色の固体として化合物６２を得た（２５８ｍｇ）。これを、さらなる精製なしで使用した。
【０１８６】
化合物６２（２５８．０ｍｇ、０．７１９ミリモル）を一般手順Ｃによりオレフィン化した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１）により、無色の固体として化合物６３を得た（４６．０ｍｇ）。
【０１８７】
化合物６３（１８．３ｍｇ、０．０５１３ミリモル）を一般手順Ｄにより脱保護した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、無色のオイルとして化合物６４を得た（９．８ｍｇ）。
【０１８８】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 8.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.17 (td, J = 6.5, 1.8 Hz, 1H), 5.22 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 5.10 (q, J = 2.2 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 3.88 (dd, J = 12.2, 2.8 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 12.2, 3.7 Hz, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 2.77 - 2.69 (m, 1H).
【実施例１５】
【０１８９】
１−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）−５−フルオロシトシン（化合物６６）
【化３０】
2013514350.tif 000032
【０１９０】
化合物６３（２７．５ｍｇ、０．０７７１ミリモル）を一般手順Ｄにより脱保護した。残留物を、ピリジン（２×２ｍＬ）を用いて共沸乾燥し、次いで無水ピリジン（２ｍＬ）に溶解した。生じた溶液に無水酢酸（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１）により、無色の固体として化合物６５を得た（１６．６ｍｇ）。
【０１９１】
化合物６５（１６．６ｍｇ、０．０５８４ミリモル）の無水ピリジン（１．１ｍＬ）溶液に４−クロロフェニルジクロロホスフェート（４７．５μＬ、０．２９２ミリモル）を０℃で添加した。１０分後に、１，２，４−トリアゾール（６０．５ｍｇ、０．８７６ミリモル）を添加し、温度を室温に戻した。１９時間後に、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物をＨ2Ｏに溶解した。水相をＣＨ2Ｃｌ2で２回抽出した。合わせた有機抽出物を、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をＮＨ3（６ｍＬ、０．５Ｍ／ジオキサン）に溶解し、生じた溶液を室温で４８時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物を精製して、無色の固体として化合物６６を得た（３．３ｍｇ）。
【０１９２】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 8.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.12 (tt, J = 18.7, 9.3 Hz, 1H), 5.19 (dd, J = 4.4, 2.2 Hz, 1H), 5.09 (dd, J = 4.5, 2.2 Hz, 1H), 4.55 (m, 1H), 3.89 (dd, J = 12.2, 2.9 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 12.2, 3.9 Hz, 1H), 3.19 - 3.11 (m, 1H), 2.68 - 2.60 (m, 1H).
【実施例１６】
【０１９３】
９−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）アデニン（化合物７１）
【化３１】
2013514350.tif 000033
【０１９４】
５０ｍＬの丸底瓶中で、２'−デオキシ−Ｌ−アデノシン（９００ｍｇ、３．５０ミリモル）を、ピリジン（６×２０ｍＬ）を用いて共沸乾燥した。その後、ＤＭＦ（１５ｍＬ）、イミダゾール（５９０ｍｇ、８．００ミリモル）、およびＴＢＳＣｌ（６００ｍｇ、４．００ミリモル）を添加した。生じた反応混合物を室温で６時間撹拌した後、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加し、混合物をさらに０．５時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、粗材料を、フラッシュクロマトグラフィー（０〜５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で精製して、化合物６７を得た（１．０ｇ）。
【０１９５】
５０ｍＬの丸底瓶中で、化合物６７（５９５ｍｇ、１．６２ミリモル）を、ピリジン（３×２０ｍＬ）を用いて共沸乾燥した。その後、ピリジン（８ｍＬ）およびＤＭＴｒＣｌ（６１０ｍｇ，１．８０ミリモル）を添加した。生じた反応混合物を室温で１８時間撹拌した。さらなるＤＭＴｒＣｌ（３００ｍｇ、０．８８ミリモル）を添加し、生じた混合物をさらに２４時間撹拌した。次いで、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加し、生じた混合物をさらに１０分間撹拌した。次いで、溶媒をトルエンとの共蒸発により除去し、粗材料をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2、０．１％ピリジンを含む）で精製して化合物６８を得た（５２６ｍｇ）。
【０１９６】
２５ｍＬの丸底瓶中で、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（１０２ｍｇ、０．２４ミリモル）を真空下で３０分間乾燥した後、ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍＬ）および２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（１９１ｍｇ、１．０ミリモル）を添加した。次いで、化合物６８（５２６ｍｇ、０．７８９ミリモル）を添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、次いでＮａ2Ｓ2Ｏ3（４００ｍｇ）／リン酸塩緩衝液（１０ｍＬ、ｐＨ７．４）の水溶液中に注いだ。生じた混合物を２分間激しく撹拌した。有機相を、分離し、１％ＮａＨＣＯ3水溶液（１０ｍＬ）で５秒間抽出した。有機相を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。粗ケトンは、次のステップで直ちに使用した。
【０１９７】
粗ケトンの無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液にＴｅｂｂｅ試薬（０．５Ｍ／トルエン、０．６０ｍＬ、０．３０ミリモル）を−７８℃で滴加した。反応混合物を−７８℃で１０分間撹拌し、次いで室温に戻し、反応混合物をさらに１時間撹拌した。次いで、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ（１ｇ）およびＨ2Ｏ（１ｍＬ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。次いで、ＭｇＳＯ4を添加し、固体を濾別した。粗反応混合物を、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（０〜１％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2、０．１％ピリジンを含む）で精製して、化合物６９を得た（４ｍｇ）。
【０１９８】
化合物６９（４ｍｇ、０．００６ミリモル）のＴＨＦ（０．１０ｍＬ）溶液にＴＢＡＦ（１Ｍ／ＴＨＦ、０．０３０ｍＬ）を添加し、生じた反応混合物を室温で撹拌した。２０分後に、ＮＨ4Ｃｌ（０．１ｍＬ）を添加し、粗混合物を、ＣＨ2Ｃｌ2（３×０．３ｍＬ）で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１、０．１％ピリジンを含む）により、化合物７０を得た（２．５ｍｇ）。
【０１９９】
２ｍＬのバイアル瓶中で、化合物７０（２．５ｍｇ、０．００４５ミリモル）をＴＨＦ（０．２０ｍＬ）に溶解し、次いでＡｃＯＨ（０．６０ｍＬ、３０％水溶液）を添加し、生じた反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。その後、溶媒を除去し、粗残留物を２ｍＬのＨ2Ｏに溶解し、ジエチルエーテル（２×２ｍＬ）で抽出した。活性炭を、水相がもはやＵＶ活性を示さなくなるまで（ＴＬＣプレート上にスポットして）、小分けして水相に添加した。活性炭の懸濁液をフラッシュカラムに負荷し、カラムをＨ2Ｏ（５０ｍＬ）で、続いてＨ2Ｏ：ＭｅＯＨ（５０ｍＬ、１：１）で溶離することによって生成物を得た。化合物７１（０．５ｍｇ）。
【０２００】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 8.32 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.33 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 5.29 (dd, J = 4.3, 2.2 Hz, 1H), 5.17 (dd, J = 4.4, 2.2 Hz, 1H), 4.66 (bs, 1H), 3.87 (dd, J = 12.2, 2.9 Hz, 1H), 3.71 (dd, J = 12.2, 4.1 Hz, 1H), 3.26 - 3.24 (m, 1H).
【実施例１７】
【０２０１】
９−（２，３−ジデオキシ１−３−メチリデン−β−Ｌ−ペントフラノシル）グアニン（化合物７５）
【化３２】
2013514350.tif 000034
【化３３】
2013514350.tif 000035
【０２０２】
５０ｍＬのフラスコ中で、２'−デオキシ−Ｌ−グアノシン（１．００ｇ、３．７４ミリモル）を、ピリジン（３×２０ｍＬ）を用いて共沸乾燥し、イミダゾール（６６０ｍｇ、９．７３ミリモル）／ＤＭＦ（２０ｍＬ）をＮ2下で添加した。その後、ＴＢＳＣｌ（７３２ｍｇ、４．８６ミリモル）を添加し、生じた混合物を４０℃で４時間撹拌した。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、反応混合物を４０℃でさらに１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗材料を、フラッシュクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で精製して、化合物７２を得た（１．２３ｇ）
化合物７２（１．５ｇ、３．９３ミリモル）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ2下でジメトキシトリチルクロリド（２．６６ｇ、７．９０ミリモル）を添加し、生じた混合物を室温で５時間撹拌した。次いで、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を添加し、反応混合物を２０分間撹拌した。次いで溶媒を減圧下で除去し、粗材料をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、化合物７３を得た（１．４４ｇ）。
【０２０３】
１０ｍＬのフラスコ中で、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（６１４ｍｇ、１．４５ミリモル）を真空で３０分間乾燥した後、ＣＨ2Ｃｌ2（１２ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（０．１９ｍＬ、２．０ミリモル）を添加し、生じた混合物をＮ2下に４℃で１０分間撹拌した。その後、化合物７３（７６２ｍｇ、１．１１ミリモル）／ＣＨ2Ｃｌ2（８ｍＬ）を添加した。２時間後に、反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2（１５ｍＬ）で希釈し、混合物を抽出ロート中に移送した。次いで、Ｎａ2Ｓ2Ｏ3・５Ｈ2Ｏ（２００ｍｇ）を含む１０％ＮａＨＣＯ3水溶液（１０ｍＬ）を添加し、混合物を１０秒間振盪した。有機相を、分離し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮して、粗ケトンを得た。これを、直ちに使用した。
【０２０４】
粗ケトンの無水ＴＨＦ（６ｍＬ）溶液にＴｅｂｂｅ試薬（２．４ｍＬ、１．２ミリモル、０．５Ｍ／トルエン）をＮ2下に−７８℃で滴加した。反応混合物を−７８℃で１０分間撹拌し、次いで室温に戻した。２時間後に、反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）で希釈し、次いでＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ（１０ｇ）およびＮａＯＨ（１．０Ｍ、１ｍＬ）を添加し、混合物を、ＭｇＳＯ4を添加したあとに発泡が収まるまで撹拌した。混合物を、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（０〜５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により、淡褐色固体として化合物７４を得た（１５９ｍｇ）。
【０２０５】
化合物７４（８０ｍｇ、０．１１８ミリモル）のＴＨＦ（７ｍＬ）溶液にＡｃＯＨ（２８ｍＬ、３０％水溶液）を添加し、生じた混合物を室温で１２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、痕跡量のＡｃＯＨをＨ2Ｏとの共蒸発によって除去した。粗残留物をＨ2Ｏ（２５ｍＬ）に溶解し、次いでジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で抽出した。水相を５ｍＬまで濃縮し、次いで水相に活性炭を、水相がもはやＵＶ活性でなくなるまで（ＴＬＣプレート上にスポットして）小分けして添加した。活性炭の懸濁液をフラッシュカラムに負荷し、カラムをＨ2Ｏ（５０ｍＬ）、続いて５０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏで溶離することによって生成物を得た。化合物７５（８ｍｇ）。
【０２０６】
1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ = 7.93 (s, 1H), 6.16 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 4.6, 2.3 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 4.4, 2.3 Hz, 2H), 3.83 (dd, J = 12.1, 3.2 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 12.1, 4.5 Hz, 1H), 3.24 - 3.21 (m, 1H), 3.19 - 3.16 (m, 1H).
【０２０７】
＜生物学的アッセイ＞
細胞毒性アッセイ
ＨｅｐＧ２細胞における細胞毒性
ＨｅｐＧ２細胞を、９６ウェルのプレートに、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンで補足された１００μＬのＤＭＥＭ中、１×１０4細胞／ウェルの密度で播種した。５％ＣＯ2を用い３７℃で２０時間インキュベートした後、培地を除去し、試験化合物を４．７〜３００μＭの濃度範囲で含む新鮮培地と交換した。細胞を、５％ＣＯ2を用い３７℃で２４時間インキュベートした。培地を除去し、１００μｌ／ウェルのＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ）／ＨＢＳＳ（０．５ｍｇ／ｍＬ）と交換した。３７℃で穏やかに振盪しながら２時間インキュベートした後、ウェルに１００μｌ／ウェルのＭＴＴ溶解緩衝液を添加し、プレートを覆い、一夜放置して、フォルマザンの結晶を溶解した。ＥＬＩＳＡリーダーにおいて５７０〜６３０ｎｍで吸光度を測定した。対照と比較した細胞生存率に基づき細胞毒性を計算した。
【０２０８】
ＭＴ−４細胞における細胞毒性
ＭＴ−４細胞を、９６ウェルのマイクロタイタープレートに、５０μｌ（１×１０5細胞／ｍＬ）の容積で添加した。細胞培地は、０．０１μＭ〜３２μＭの範囲の濃度で試験化合物を含む。細胞を、５％ＣＯ2を用い３７℃でインキュベートした。アッセイの終末時点（６日目）で、ウェル当たり２０〜２５μＬのＭＴＳ試薬を添加し、次いでマイクロタイタープレートを、５％ＣＯ2を用い３７℃で４〜６時間インキュベートした。プレートを分光学的に読取り、細胞生存率を評価した。対照と比較した細胞生存率に基づき細胞毒性を計算した。
【０２０９】
抗ＨＩＶ活性
本発明の化合物をそれらのＨＩＶ阻害活性について分析するために、ＭＴ−４細胞を使用した。アッセイ当日の前に、細胞が感染時に対数増殖期にあることを保証するために、細胞を１：２に分割した。全細胞数およびパーセント生存率の測定は、血球計数器およびトリパンブルー色素排除を使用して実施した。アッセイで利用される予定の細胞の場合、細胞生存率は９５％超でなければならない。細胞を、組織培養培地に１×１０5細胞／ｍＬで再懸濁し、対照または薬物を含む９６ウェルのマイクロタイタープレートに５０μＬの容積で添加した。
【０２１０】
このアッセイに使用されるウイルスは、ＨＩＶ−１IIIBとした。各アッセイにおいて、事前に力価検定済みのウイルスのアリコートを、フリーザー（−８０℃）から取り出し、生物学的安全キャビネット中で室温まで徐々に解凍した。ウイルスを、各ウェルに５０μＬの容積で添加されるウイルス量が、感染後６日目に８５〜９５％の細胞死滅を示すように決定された量であるように、組織培養培地に再懸濁し、希釈した。それらのアッセイの感染多重度は、ほぼ０．０１であり、マイクロタイタープレートのウェルに添加される容積は５０μＬであった。
【０２１１】
アッセイの終末時点（感染後６日目）で、ウェル毎に２０〜２５μＬのＭＴＳ試薬３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ；ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６試薬、Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、マイクロタイタープレートを５％ＣＯ2、３７℃で４〜６時間インキュベートした。粘着性プレートシーラーを蓋の代わりに使用し、密封したプレートを数回反転して可溶性フォルマザン生成物を混合する。プレートを、プレートレーダーを用いて４９０／６５０ｎｍで分光学的に読み取った。抗ＨＩＶ活性を、細胞変性効果の低下（％）に基づいて計算した。
【０２１２】
抵抗性株に対するＨＩＶ活性を、抵抗性ＨＩＶ株に感染した細胞培養アッセイを使用して類似の方法で測定することができる。
【０２１３】
抗ＨＢＶ活性
本発明の化合物をそれらのＨＢＶ阻害活性について分析するために、ＨＢＶを有するヒト肝癌細胞（ＨｅｐＧ２．２．１５細胞）を使用した。ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を、９６ウェルのマイクロタイタープレートに播種した。細胞培養中に観察される「エッジ効果」を低減するために内側のウェルのみ利用し；サンプルの蒸発を最小化するのを助けるために外側のウェルを完全培地で満たした。１６〜２４時間後、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の集密単層を洗浄し、培地を、種々の濃度の試験化合物を三つ組みで含む完全培地と交換した（化合物は６種の濃度で試験）。ラミブジンを陽性対照として使用し、培地のみを陰性対照として細胞に添加した。３日後に、培養培地を、適切に希釈された薬物を含む新鮮な培地と交換した。試験化合物の最初の投与の６日後に、細胞培養上清液を集め、プロナーゼで処理し、次いでリアルタイム定量的ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲアッセイにおいて使用した。ＰＣＲで増幅されたＨＢＶ  ＤＮＡを、増幅されたＨＢＶ  ＤＮＡにハイブリダイズした消光型蛍光プローブ分子のエクソヌクレアーゼ分解に由来する蛍光シグナルの増加を監視することによってリアルタイムで検出した。各ＰＣＲ増幅に関して、精製されたＨＢＶ  ＤＮＡの希釈液を使用して標準曲線を同時に作出した。抗ＨＢＶ活性を、ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの低下から計算した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−９６キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を採用して、同じアッセイで細胞生存率を測定し、阻害がＨｅｐＧ２細胞中での細胞毒性のためではないことを確認した。
【０２１４】
アッセイからの本発明の例示化合物の代表的結果を表１〜４に示す。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【国際調査報告】
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