(57)【要約】本発明は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油と、必要に応じてｐＨ調整剤と、エタノール、イソプロパノール、およびこれらの混合物からなる群から選択される粘度改変剤とを含む透明デポーであって、デポー中に存在する水は、デポーの総重量と比べて、約（４）ｗｔ％以下であり、デポーは、約（３）〜約（６）の間のｐＨを有する、透明デポー、これを作製および投与する方法を提供する。
2013534244.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
デポーを作製するための方法であって、
（１）リン脂質と、油と、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩またはこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水とを含む水中油型エマルジョンを形成するステップと、
（２）該エマルジョンをホモジナイズして、一次エマルジョンを得るステップと、
（３）該一次エマルジョンを微小流動化して、単相溶液を得るステップと、
（４）該一次エマルジョンおよび／または該単相溶液のｐＨが、必要に応じてｐＨを調整することによって、約３〜約６の間であることを確実にするステップと、
（５）所望のｐＨの該単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを得るステップと、
（６）得られる粘度改変済み溶液の総重量の約２５ｗｔ％以上の量で粘度改変剤を該乾燥ペーストに添加するステップと、
（７）該粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによって、デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％の該粘度改変剤を有するデポーを得るステップと、
（８）該デポーを滅菌するステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記デポーが透明である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記デポーが超透明である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記水中油型エマルジョンを形成する前記ステップが、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される前記少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤を水に溶解させて水溶液を得ることと、前記水溶液を前記リン脂質および前記油と混合することとを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記デポー中の前記粘度改変剤の量が、前記デポーの総重量と比べて、約２ｗｔ％〜約１８ｗｔ％である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記粘度改変剤の量が、前記デポーの総重量と比べて、約５ｗｔ％〜約６．５％である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの前記薬学的に許容される塩が、酢酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、および硫酸塩からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤が、バンコマイシン塩酸塩およびゲンタマイシン硫酸塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
水中の前記バンコマイシン塩酸塩の初期薬物濃度が、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
水中のバンコマイシン塩酸塩の前記初期薬物濃度が、約５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
水中の前記ゲンタマイシン硫酸塩の初期薬物濃度が、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
水中の前記ゲンタマイシン硫酸塩の前記初期薬物濃度が、約５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記エマルジョン、前記一次エマルジョン、および／または前記単相溶液に安定化剤および／またはｐＨ調整剤を必要に応じて必要に応じて添加するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記安定化剤が、ＥＤＴＡ二ナトリウム、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、α−トコフェロール、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記一次エマルジョンを作り出す前の前記エマルジョン中の前記水の量が、前記エマルジョンの総重量と比べて、約６０ｗｔ％〜約８０ｗｔ％である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記単相溶液の液滴が、約１２０ｎｍ未満の平均直径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記単相溶液のｐＨが、約３〜約５に調整される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記粘度改変剤が、エタノール、イソプロパノール、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記粘度改変剤がエタノールである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記エタノールが無水エタノールである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
添加される前記粘度改変剤の量が、前記粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約２５ｗｔ％以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記粘度改変済み溶液の粘度が、約１０〜約２００センチポアズである、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記粘度改変済み溶液の粘度が、約２０〜約５０センチポアズである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記デポーの粘度が、約１００センチポアズ〜約５０００センチポアズである、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記デポーの粘度が、約２００センチポアズ〜約２０００センチポアズである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記デポーの粘度が、約３００センチポアズ〜約１５００センチポアズである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記デポーのｐＨが約３〜約６である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記デポー中に存在する前記水の量が、前記デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記量が、前記デポーの総重量と比べて、約２ｗｔ％以下である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記量が、前記デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％以下である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記量が、前記デポーの総重量と比べて、約０．５ｗｔ％以下である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記粘度改変剤の少なくとも一部を除去する前記ステップの前に、前記粘度改変済み溶液を前濾過して濾過溶液を得るステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
シリンジ、バイアル、前記デポーを貯蔵し、かつ／または処置部位もしくは創傷部に前記デポーを送達する任意の他の適切なデバイス中に前記デポーを無菌的に充填するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
デポーを作製するための方法であって、
（１）リン脂質と、油と、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水とを含む水中油型エマルジョンを形成するステップと、
（２）前記エマルジョンを、約３〜約６の間のｐＨを有する単相溶液に変換するステップと、
（３）該単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを得るステップと、
（４）粘度改変済み溶液を得るのに十分な量で、粘度改変剤を前記乾燥ペーストに添加するステップと、
（５）該粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによって、デポーを得るステップと、
（６）該デポーを滅菌するステップであって、前記デポーは透明であるステップと
を含む方法。
【請求項３５】
前記粘度改変剤がエタノールである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記デポー中に存在する前記水の量が、前記デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
粘度改変済み溶液を得るために添加される前記粘度改変剤の量が、前記粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約２５ｗｔ％以上である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記デポー中に存在する前記粘度改変剤の量が、前記デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１に記載の方法によって生成されるデポー。
【請求項４０】
バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油と、必要に応じてｐＨ調整剤と、エタノール、イソプロパノール、およびこれらの混合物からなる群から選択される粘度改変剤とを含むデポーであって、該デポー中に存在する該水は、該デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下であり、該デポーは、約３〜約６の間のｐＨを有する、デポー。
【請求項４１】
前記デポー中に存在する前記粘度改変剤の量が、前記デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％である、請求項３９に記載のデポー。
【請求項４２】
前記デポーの前記粘度が、約１００センチポアズ〜約５０００センチポアズである、請求項３９に記載のデポー。
【請求項４３】
バンコマイシン塩酸塩およびゲンタマイシン硫酸塩、水、リン脂質、油、必要に応じてｐＨ調整剤、ならびにエタノールを含む透明デポーであって、該デポー中に存在する該水は、該デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下であり、該デポーは、約３〜約６の間のｐＨを有する、透明デポー。
【請求項４４】
前記デポー中に存在する前記粘度改変剤の量が、前記デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％である、請求項４３に記載のデポー。
【請求項４５】
前記デポーの粘度が、約１００センチポアズ〜約５０００センチポアズである、請求項４３に記載のデポー。
【請求項４６】
請求項３９、請求項４０、または請求項４３に記載のデポーを、それを必要とする患者に、皮内、切開部内、筋肉内、皮下、点滴注入を介して、または局所的に投与する方法であって、該デポーは、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬの投与体積で、少なくとも約１日の期間にわたって、前記医薬活性剤を放出するのに十分である方法。
【請求項４７】
請求項３９、請求項４０、または請求項４３に記載のデポーを導入することによって手術部位感染を処置する方法であって、該デポーは、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬの投与体積で、少なくとも約１日の期間にわたって、前記医薬活性剤を放出するのに十分である方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、２０１０年８月２０日に出願した米国仮特許出願第６１／３７５，５０２号の出願日の利益を主張する。米国仮特許出願第６１／３７５，５０２号の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
デポーは、全身作用または局所作用のために、患者の体内に活性成分を投与する方策である。これは一般に、皮下注射もしくは筋肉内注射、または他の体組織、血管、もしくは腔内への点滴注入によって投与される。デポーは、創傷部が止血され、縫われ、包帯をされ、または他の方法で閉じられる前に、創傷部に適用することもできる。除去可能なデポーと異なり、生分解性デポーは、典型的には封入された医薬品有効成分が送達された後、所定の時間内に崩壊または分解する。他の構成体では、生分解性注射可能デポーは、その段階的な分解とほぼ同時に、またはこの分解の関数として、その医薬品有効成分を放出する。ある特定の生分解性送達デポーの重要な利点は、作用の意図された部位に直接薬剤を送達し、全身レベルと比較した場合、薬剤の局所濃度の上昇をもたらすその能力である。
【０００３】
デポーは、薬剤の送達を調節することによって、様々な放出プロファイルを可能にすることもできる。放出プロファイルは、即時放出（バースト）とその後の定常状態とすることができ、とりわけ、「ゼロ次」もしくは一定割合の送達とすることができ、定常状態まで遅い上昇をもたらすことができ、またはさらには遅延放出をもたらすことができる。さらに、デポーは、１回の投与で長時間にわたる放出を可能にする利点を有する。血中濃度は、例えば、患者コンプライアンス問題によって損なわれない。
【０００４】
デポーは、微粒子システム、例えば、微小球ベースデポーおよびナノスフェアベースデポーなどから構成することができ、または可溶性マトリックスフォーマー（ポリマー、脂質、炭水化物）、ならびに有機溶媒もしくは水混和性溶媒および水非混和性溶媒の混合物から典型的には作製される生分解性（biodegrable）ゲルから構成することもできる。
【０００５】
リン脂質が親油性薬理学的活性剤を含むデポーを調製するのに使用されている。リン脂質は、油中または有機溶媒中で可溶性であるが、水中で不溶性である。デポーを形成するために、高濃度のデポー形成リン脂質が必要とされることが多い。このことは、得られるデポーの体積および粘度にインパクトを与える場合があり、したがって、現在入手可能なリン脂質デポーは、慣例的な針またはシリンジを通じて注射することが非常に困難である場合がある。リン脂質ベース製剤を説明している参考文献には、特許文献１、特許文献２、ＥＰ０２８２４０５、および特許文献３、特許文献５、特許文献６、特許文献７、および非特許文献１が含まれる。
【０００６】
バンコマイシンは、グラム陽性菌によって引き起こされる感染症の予防および処置において使用される糖ペプチド抗生物質である。これは、一般に、薬物アレルギーまたは薬剤耐性のためにβ−ラクタムを使用することができない場合の、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、凝固酵素陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓｅ、β溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ群ＪＫ、ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、またはｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉによって引き起こされる深刻な感染症および心内膜炎にとって最適な薬物である。バンコマイシンは、とりわけ、メチシリン耐性凝固酵素陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ人工弁心内膜炎、および腸球菌性心内膜炎を処置する際に、他の抗菌剤と併用することができる。これは、ペニシリン感受性が低減した系統によって引き起こされる肺炎球菌髄膜炎のための代替薬剤としても使用されている。バンコマイシンは、術後感染症を防止するために、心臓手術および血管手術において使用されている。非特許文献２を参照。
【０００７】
ゲンタマイシンは、多くのタイプの細菌感染症、特に、感受性グラム陰性菌によって引き起こされるものを処置するのに使用されるアミノグリコシド抗生物質である。これは、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｏｇｉｎｏｓａおよびｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの病原体に対して作用するので、外科的状況において使用されている。ゲンタマイシンは、他の外科的（surgicial）用途においても使用されている（例えば、整形状況において骨セメントと配合される）。生分解性コラーゲンインプラント（スポンジ）に含浸されたゲンタマイシンは、現在、手術部位感染（ＳＳＩ）を予防するために、米国以外のいくつかの市場で使用されている。しかし、２つの大きな中心的なフェーズＩＩＩ試験は、ゲンタマイシンスポンジ（結腸直腸手術）を受けている患者において、ＳＳＩのより高い発病率を示し、標準処置（心胸郭手術）に対してＳＳＩの発病率の差異をまったく示さなかった。一般に、非特許文献３；および非特許文献４を参照。
【０００８】
バンコマイシンおよびゲンタマイシンはともに、非常に親水性の抗生物質である。これらはまた、ともに、リン脂質または油中に自由に可溶性でないので、リン脂質に基づく注射可能デポーまたは他の高油相含量製剤に製剤化することが困難である。
【０００９】
さらに、一連の安定性試験を行うことによって、バンコマイシンおよびゲンタマイシンは、異なる機構によって分解することが今では見出されている。バンコマイシンは、加水分解を通じてその安定性を失い、一方、ゲンタマイシンは、酸化または付加体形成のために分解する。したがって、活性剤のいずれか１つを含有する製剤は、これらの条件に一般に敏感である。さらに、バンコマイシンおよびゲンタマイシンはともに、熱感受性であり、オートクレービングまたはγ放射線などの加熱によって滅菌することができない。
【００１０】
したがって、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方を含むデポーをリン脂質および油とともに製剤化する試みは、多くの実用上の課題をもたらす。１つのこのような特質には、製剤は、約０．２ミクロン以下の孔を有するものなどの滅菌膜を通じた濾過によって滅菌されなければならないので、高粘度を特徴として備えるべきでないことが含まれる。ある特定の二分する問題も残っている。例えば、これらの２つの特定の活性剤は、リン脂質との適合性問題を有し、これは、粘度と同様に、リン脂質含量を低く保つ必要性を示唆する。しかし、まとまった凝集性のゲル形成および適切な放出特性の必要性は、正反対のことを示唆する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第８９／０００７７号
【特許文献２】国際公開第０２／３２３９５号
【特許文献３】米国特許第５，８６３，５４９号明細書
【特許文献４】米国特許第４，２５２，７９３号明細書
【特許文献５】米国特許第５，６６０，８５４号明細書
【特許文献６】米国特許第５，６９３，３３７号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Wangら、Lyophilizaiton  Of  Water-In-Oil  Emulsions  To  Prepare  Phospholipid-Based  Anhydrous  Reverse  Micelles  For  Oral  Petide  Delivery、European  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences、３９巻、３７３〜７９頁（２０１０年）
【非特許文献２】Rybakら、Vancomycin  Therapeutic  Guidelines:  A  Summary  of  Consensus  Recommendations  from  The  Infectious  Diseases  Society  of  America、The  American  Society  Of  Health-System  Pharmacists、およびThe  Society  Of  Infectious  Disease  Pharmacists、CID  ２００９年：４９巻（８月１日）、３２５頁
【非特許文献３】E.  Bennett-Guerrero、NEJM、２０１０年、１〜１０頁
【非特許文献４】E.  Bennett-Guerrero、JAMA、２０１０年８月１８日、７５５〜７６２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって、皮下注射あるいは筋肉内注射によって、切開部内注射、あるいは外科的な創傷部、または他の体組織、血管、もしくは腔内への配置によって投与することができる、バンコマイシン、ゲンタマイシン、これらの医薬用塩、あるいはこれらの混合物を含有する貯蔵安定なリン脂質デポーについての長年にわたる必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の簡単な概要
本発明の一態様は、少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤を含むデポーを作製するためのプロセスであって、（１）バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油とを混合することによって、水中油型「エマルジョン」を形成するステップと、（２）エマルジョンをホモジナイズして、「一次エマルジョン」を得るステップと、（３）一次エマルジョンを微小流動化して、「単相溶液」を得るステップと、（４）一次エマルジョンおよび／または単相溶液のｐＨが、必要に応じてｐＨを調整することによって、約３〜約６の間、一実施形態では、約３〜約５、別の実施形態では、約３〜約４であることを確実にするステップと、（５）所望のｐＨの単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを得るステップと、（６）透明溶液を得るのに十分な量で粘度改変剤を乾燥ペーストに添加するステップと、（７）透明溶液から粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによって、デポーの総重量と比べて、約５．５ｗｔ％〜約７．５ｗｔ％の粘度改変剤を有するデポーを得るステップと、（８）濾過によってデポーを滅菌するステップとを含むプロセスを提供する。
【００１５】
一実施形態では、エマルジョンおよび一次エマルジョンを形成するステップは、得られる生成物が一次エマルジョンである限り、１つのステップとして合わせることができる。別の実施形態では、一次エマルジョンおよび単相溶液を形成するステップは、得られる生成物が単相溶液である限り、１つのステップとして合わせることができる。さらに別の実施形態では、エマルジョン、一次エマルジョン、および単相溶液を形成するステップは、１つのステップとして合わせ、それによって単相溶液に直接進むことができる。
【００１６】
一実施形態では、デポー中に存在する水は、デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下である。別の実施形態では、デポーの含水量は、約２ｗｔ％以下、さらに別の実施形態では、約１ｗｔ％以下である。なおさらなる実施形態では、デポーの総重量と比べて、約０．５ｗｔ％以下の水が存在する。他の実施形態では、医薬活性剤は、バンコマイシン塩酸塩およびゲンタマイシン硫酸塩である。他の実施形態では、デポーは透明であり、さらに他の実施形態では、デポーは超透明である。
【００１７】
本発明の別の態様は、少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤を含む透明デポーを作製するためのプロセスであって、（１）バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤を水に溶解させて水溶液を形成するステップと、（２）リン脂質、油、および水溶液を含む水中油型エマルジョンを形成するステップと、（３）エマルジョンをホモジナイズして、一次エマルジョンを得るステップと、（４）一次エマルジョンを微小流動化して、単相溶液を得るステップと、（５）エマルジョン、一次エマルジョンおよび／または単相溶液のｐＨを、必要に応じて約３〜約６の間、別の実施形態では、約３〜約５、さらに別の実施形態では、約３〜約４に調整するステップと、（６）所望のｐＨの単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを得るステップと、（７）所望の粘度および／または所望の透明度を得るのに十分な量で粘度改変剤を乾燥ペーストに添加するステップと、（８）粘度改変済み溶液を前濾過して透明溶液を得るステップと、（９）透明溶液から粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによって、デポーの総重量と比べて、約５．５ｗｔ％〜約７．５ｗｔ％の粘度改変剤を有するデポーを得るステップと、（１０）実質的な加熱を用いずにデポーを滅菌するステップとを含むプロセスを提供する。このような滅菌手順は、他の方法の中で、濾過によって行うことができる。別の実施形態では、前濾過するステップおよび粘度改変剤を除去するステップは、必要に応じてのステップである。一実施形態では、少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩、およびこれらの混合物である。
【００１８】
本発明のさらに別の態様は、デポーを作製するための方法であって、（１）リン脂質と、油と、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩またはこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水とを含む水中油型エマルジョンを形成するステップと、（２）エマルジョンを、約３〜約６の間のｐＨを有する単相溶液に変換するステップと、（３）単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを得るステップと、（４）粘度改変済み溶液を得るのに十分な量で粘度改変剤を乾燥ペーストに添加するステップと、（５）粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによってデポーを得るステップと、（６）デポーを滅菌するステップであって、デポーは透明であるステップとを含む方法を提供する。
【００１９】
一実施形態では、この方法は、シリンジ、バイアル、あるいはデポーを貯蔵し、かつ／またはデポーを処置部位もしくは創傷部に送達することができる任意の他の適切なデバイス中にデポーを無菌的に充填するステップをさらに含む。
【００２０】
本発明の別の態様によれば、安定化剤が、薬学的に許容される成分（複数可）とともに水に必要に応じて溶解される。本発明のさらに別の態様では、安定化剤は、薬学的に許容される成分（複数可）、水、リン脂質、および油とともに必要に応じて混合される。安定化剤の例には、それだけに限らないが、ＥＤＴＡ二ナトリウム、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン（mithionine）、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、α−トコフェロール、およびこれらの混合物が含まれる。本発明のさらに別の態様では、デポーは、安定化剤を含まない。
【００２１】
一実施形態では、水中油型エマルジョンを形成するステップにおいて、添加される水の量は、得られるエマルジョンの総重量と比べて、約６０ｗｔ％〜約８０ｗｔ％である。別の実施形態では、水中油型エマルジョンを形成するステップにおけるエマルジョン中の水の量は、エマルジョンの重量の約２倍である。
【００２２】
さらに別の実施形態では、「ナノエマルジョン」とも本明細書で呼ばれる単相溶液をもたらす、一次エマルジョンを微小流動化するステップの後に、ナノエマルジョン液滴のサイズは、約１２０ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、または約８０ｎｍ未満の平均直径を有する。
【００２３】
ナノエマルジョン／単相溶液の液滴サイズの平均直径を低減すると、限定することなく、得られる単相溶液の粘度を低減し、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの安定性に影響し得るオートクレービングまたはγ放射線滅菌などの加熱に基づく滅菌システムを使用することによってではなく、フィルターを通じた滅菌を可能にすると考えられる。
【００２４】
微小流動化のステップの前では、一次エマルジョンは、一般に、白色、不透明で濃厚なヨーグルト様の塊である。微小流動化の後、得られる単相溶液は、一般に、透明、透光性で、粘度および流動特性において水様である。
【００２５】
本発明は、作用のいずれの特定の理論によっても限定されないが、非常に親水性のバンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩、またはこれらの混合物は、リン脂質と配合されることによって本明細書で定義される単相溶液を形成し、望ましい特性を有する貯蔵安定なデポーをもたらすことができると考えられる。微小流動化の間にもたらされる極めて小さいナノエマルジョン液滴は、関わり得る他の要因の中で、生成されるデポーの最終特性に貢献するものとなり得ると考えられる。
【００２６】
本発明の別の実施形態によれば、エマルジョン、一次エマルジョン、および／または単相溶液のｐＨは、約３〜約６、約３〜約５、または約３〜約４である。そうでない場合、ｐＨが所望の範囲に入るようにこれを調整することができる。
【００２７】
本発明のさらに別の実施形態によれば、デポー、最終生成物のｐＨは、約３〜約６、約３〜約５、別の実施形態では、約３〜約４である。
【００２８】
本発明の別の態様は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油、必要に応じてｐＨ調整剤、および粘度改変剤のうちの１つまたは複数とを含むデポーであり、ここで、デポー中に存在する水は、デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下、約２ｗｔ％以下、約１ｗｔ％以下、または約０．５ｗｔ％以下の水である。別の実施形態では、デポーは、シリンジ注入可能である。
【００２９】
本発明の一実施形態では、デポーは、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの両方を含む。別の実施形態では、デポーは、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの１つまたは両方の医薬用塩を含む。別の実施形態では、デポーは、バンコマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかを含む。さらに別の実施形態では、デポーは、バンコマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかの医薬用塩を含む。
【００３０】
本発明によるデポーは、一実施形態では、「透明」である。これは、封入された空気、異質な物体などを見ることができることによって、これらが体内に意図されずに導入されるのを防止することにおいて利点をもたらす。興味深いことに、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの両方がデポー中に存在するとき、本発明のデポーは、デポーがバンコマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかを単独で含有する場合より透明であることも発見された。バンコマイシンおよびゲンタマイシンの両方がデポー中に存在する実施形態では、そのようなデポーの透明度は、本明細書で定義されるように「超透明」である。デポーがバンコマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかを含む一実施形態では、そのようなデポーの透明度は、本明細書で定義されるように「透光性」または「透明」である。
【００３１】
一実施形態では、粘度改変剤はエタノールであり、ここで、デポー中に存在するエタノールの量は、約３ｗｔ％〜約２５．０ｗｔ％、約４ｗｔ％〜約１０ｗｔ％である。さらに別の実施形態では、存在するエタノールの量は、デポーの総重量と比べて、約５ｗｔ％〜約６．５ｗｔ％の間の範囲である。さらに別の実施形態では、粘度改変剤は無水エタノールである。
【００３２】
一実施形態では、粘度改変剤は、粘度改変剤の量が、粘度改変済み溶液の約７５ｗｔ％以上になるまで乾燥ペーストに添加することができる。他の実施形態では、粘度改変剤の量は、約５０ｗｔ％以上であり、さらに別の実施形態では、約３０ｗｔ％以上である。最後に、粘度改変剤の量は、粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約２５ｗｔ％以上である。
【００３３】
さらに別の実施形態では、デポー中に存在するリン脂質の量は、デポーの総重量と比べて、約５ｗｔ％〜約９５ｗｔ％であり、別の実施形態では、約２５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％である。別の実施形態では、リン脂質の量は、デポーの総重量と比べて、約３５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の範囲である。
【００３４】
本発明の別の実施形態によれば、デポー中に存在する油の量は、デポーの総重量と比べて、約５ｗｔ％〜約９５ｗｔ％であり、別の実施形態では、約２５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％である。さらに別の実施形態では、油の量は、デポーの総重量と比べて、約３５ｗｔ％〜約６０ｗｔ％の範囲である。
【００３５】
本発明の一実施形態によれば、媒質として脱イオン水５００ｍｌを使用してＵＳＰ法Ｉに従って測定される場合、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンのうちの約８０％以下が２時間で放出される。別の実施形態では、媒質として脱イオン水５００ｍｌを使用してＵＳＰ法Ｉに従って測定される場合、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンのうちの約５０％以下、さらに別の実施形態では、約２０％以下が２時間で放出される。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、デポーは、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方の安定性を改善するために安定化剤を必要に応じて含む。安定化剤の例には、それだけに限らないが、ＥＤＴＡ（エデト酸二ナトリウム（disodium  edentate））、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、α−トコフェロール、およびこれらの混合物が含まれる。本発明のさらに別の態様によれば、デポーは、安定化剤を含有しない。さらに別の実施形態では、使用される安定化剤の量は、もしあったとしても、デポー中の各活性剤、バンコマイシンまたはゲンタマイシンの安定性に悪い影響は与えない。
【００３７】
本発明の別の態様では、本明細書に記載されるデポーは、アプリケーター、シリンジ、バイアル、あるいはデポーを貯蔵し、かつ／または処置部位、デポー部位もしくは創傷部にデポーを送達することができる任意の他のデバイスで提供される。
【００３８】
本発明の別の態様は、皮内、筋肉内、切開部内、皮下、点滴注入を介して、または局所的に、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩またはこれらの混合物からなる群から選択される親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油と、必要に応じてｐＨ調整剤と、粘度改変剤とを含む本発明のデポーを、それを必要とする患者に投与する方法である。
【００３９】
本発明のさらに別の態様は、本発明のデポーを導入することによって、術後感染症を予防および／または処置する方法である。
【００４０】
本発明の別の態様は、感染症を予防および／または処置する方法であって、腎臓および／または他の臓器に対する毒性を伴うことなく、かつ細菌の薬物耐性系統の出現の一因となることなく、局所的な部位で感染症を処置および／または予防するのに十分高い局部組織濃度を達成する本発明のデポーを投与するステップを含む方法である。
【００４１】
別の態様では、創傷部に本発明のデポーを投与することによって、局所組織が病原性微生物を維持することをできなくさせる方法がある。
【００４２】
本発明のさらに別の態様は、腎臓および他の臓器に対して毒性を引き起こすことなく、かつ細菌の薬物耐性系統の出現を引き起こすことなく、本発明のデポーを投与することによって、局所組織が病原性微生物を維持することをできなくさせる方法である。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、本発明の一態様によって本発明の組成物を作製する方法の一実施形態のプロセスフローダイヤグラムである。
【図２】図２は、オートクレーブ処理後の実施例１の製剤のバンコマイシンおよびゲンタマイシンのアッセイ回収率を示す。
【図３】図３は、ＵＳＰ法Ｉを使用する、実施例６の製剤のゲンタマイシンおよびバンコマイシンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイルである。
【図４】図４は、ウサギにおける実施例１の製剤のバンコマイシンの血漿濃度を例示する。
【図５】図５は、ウサギにおける実施例１の製剤のバンコマイシンの組織濃度を例示する。
【図６】図６は、ウサギにおける実施例１の製剤のゲンタマイシンの血漿濃度を例示する。
【図７】図７は、ウサギにおける実施例１の製剤のゲンタマイシンの組織濃度を例示する。
【図８】図８は、実施例６の製剤をＳＣで創傷部に１回点滴注入した後の、ウサギにおける平均バンコマイシン血漿濃度を例示する。
【図９】図９は、ウサギにおける実施例６の製剤のゲンタマイシンの平均総血漿濃度を例示する。
【図１０】図１０は、上位の手術部位感染（ＳＳＩ）病原体についてのＭＩＣ９０に対する、本発明のデポーを切開部内に投与した場合のブタにおける組織濃度を例示する。
【図１１】図１１は、ヒトにおける治療剤のＩＶ投与対ブタにおける本発明による製剤の切開部内投与後のバンコマイシン血漿濃度の比較を例示する。
【図１２】図１２は、実施例１０Ａ〜１０Ｆの小角Ｘ線回折（ＳＡＸＳ）パターンを例示する。
【図１３】図１３は、実施例１０Ａおよび１０Ｄの熱重量分析を例示する。
【図１４】図１４は、実施例１０Ａおよび１０Ｄの示差走査熱量測定（differential  scanning  calometry）（ＤＳＣ）を例示する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
詳細な説明
本発明を以下により詳細に説明する。
【００４５】
本明細書は、特に、本発明を指摘し、明確に主張する特許請求の範囲で締めくくるが、本発明は、以下の説明からより良好に理解されることになると考えられる。本明細書で使用されるすべての百分率および比は、総組成物の重量によるものであり、行われたすべての測定は、別段の指定のない限り２５℃および標準圧でのものである。すべての温度は、別段の指定のない限りセ氏温度におけるものである。本発明は、本発明の成分（components）、ならびに本明細書で記載される他の成分（ingredients）または要素を含み（制約なし）、またはこれらから本質的になることができる。本明細書において、「含む（comprising）」は、列挙された要素、または構造もしくは機能におけるこれらの均等物と、列挙されていない任意の他の１つまたは複数の要素を意味する。用語「有する」、「含む（including）」、および「から構成される」も、脈絡による別段の示唆のない限り、制約がないものとして解釈されるべきである。本明細書において、「から本質的になる」は、本発明が、請求項に列挙した成分に加えて成分を含むことができるが、追加の成分が主張した発明の基本特性および新規特性を実質的に変更しない場合のみであることを意味する。一般に、このような追加物は、まったく存在しないか、または微量でのみ存在する場合がある。しかし、これは、化合物の有用性（有用性の程度ではなく）が維持される限り、本発明の基本特性および新規特性を実質的に変更し得る、最大約１０重量％の材料を含むことが可能である場合がある。本明細書で列挙されるすべての範囲は、２つの値の「間の」範囲を列挙するものを含めて、終点を含む。「約」、「一般に」、「実質的に」などの用語は、用語または値が絶対的なものでないように、用語または値を修飾するものとして解釈されるべきである。このような用語は、これらが修飾する状況および用語によって、こうした用語が当業者によって理解されるように定義されることになる。これは、値を測定するのに使用される所与の技法について予期される実験誤差、技法誤差、および機器誤差の程度を最低限含む。
【００４６】
本明細書および特許請求の範囲は、最終生成物、例えば、本発明のデポーまたは他の剤形を、例えば、中間体状態でのｐＨを含有するものとして言及することができるが、記述したことが満たされるかどうかを最終的な剤形から判断することが困難な場合があることに留意されたい。しかし、このような記述は、最終的な生成の前に使用される材料がその記述したことにかなう場合、満たされ得る。同様に、例えば、エマルジョン中に導入される成分の量は、重量によるものとして記述される場合、最終的なデポーなどにおける生成のいくつかの他の段階での生成物の重量と比べて変化する場合があり、これは、より重く、またはより軽くなり得る。こうした重量パーセンテージが、生成の任意のステップおよび／または任意の中間体において正確であったことで十分である。実際に、剤形から直接確認することができない最終生成物の任意の特性または特徴に関して、最終生成ステップの直前に列挙される成分中にその特性があれば十分である。
【００４７】
本明細書で使用する用語「エマルジョン」は、２つの不混和性の液相の系である。２つの相のうちの１つ（内相、不連続相（discontinuous  phase）、または不連続相（discrete  phase））は、第２の相（外相または連続相）を通じて液滴／小球として分布している。本明細書において、エマルジョンには、油と一般に呼ばれる極性のより低い液体が内相中にある水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、および水性または他の相対的に極性の液体が内相中にある油中水型エマルジョン（Ｗ／Ｏ）が含まれる。
【００４８】
本明細書で使用する用語「一次エマルジョン」は、例えば、高せん断ミキサーを使用することができるホモジナイゼーションステップの得られる生成物を指す。
【００４９】
用語「単相溶液」および「ナノエマルジョン」は、本明細書で互換的に使用される。用語「単相溶液」中の「溶液」は、これが２つ以上の物質の均質な混合物であることを意味しないが、これが、例えば、高圧微小流動化装置を使用することができる微小流動化ステップの得られる生成物であることを意味することが留意される。
【００５０】
用語「単相」、「一相」、および「一相様」は、得られる生成物が、Ｈｅｒａｅｕｓ製の遠心分離機であるＭｏｄｅｌ  Ｂｉｏｆｕｇｅ  Ｆｒｅｓｃｏまたは任意の均等物を使用して、１ｇの試料量で、２５℃で１０分間、６０００ｇの遠心分離をした後でさえ、相の分離または沈殿を伴わずに一相として残ることを意味するのに使用される。
【００５１】
用語「粘性の」は、本明細書において、組成物の粘度が、約１センチポアズ〜約５０００センチポアズ、約２００センチポアズ〜約２０００センチポアズ、または約３００センチポアズ〜約１５００センチポアズであることを意味する。
【００５２】
用語「シリンジ注入可能な」は、本明細書において、組成物をシリンジもしくはカテーテルで投与し、またはバイアルからシリンジ中に引き抜くことができることを意味する。しかしこれは、特定の記述または脈絡がその意味を示唆しない限り、本発明の組成物が、実際にシリンジ内にあり、またはシリンジを使用して投与されなければならないことを意味しない。
【００５３】
用語「透光性の」および「透明な」は、最終的なデポーまたは中間ステップの組成物のいずれか、例えば、溶液、エマルジョン、一次エマルジョン、ナノエマルジョン、および／もしくはゲルなどが濁っておらず、または不透明でなく、これが、視覚的に懸濁した粒子を含まないことを意味するのに本明細書で互換的に使用される。これは、気泡も含まないはずである。さらに、透光性とは、デポーならびに／または中間体組成物のいずれか、例えば、溶液、エマルジョン、一次エマルジョン、ナノエマルジョン、および／もしくはゲルなどが、視覚的に懸濁した粒子を含んでおらず、気泡も含まないはずであることを意味する。さらに、「透光性の」または「透明な」とは、本発明のデポーならびに／または中間体組成物のいずれか、例えば、溶液、エマルジョン、一次エマルジョン、ナノエマルジョン、および／もしくはゲルなどが、Ｐｈａｒｍａｃｉａ製のものであるＭｏｄｅｌ  Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ  ＩＩＩなどのＵＶ−可視分光光度計によって測定されるとき、ブランクとしてアルコールを使用して、１ｃｍパスの石英キュベット内で、８００ｎｍで測定すると（Ｔ８００）、約９０％超の光線透過率を有することも意味する。
【００５４】
「濁った」または「不透明な」とは、デポーのＴ８００値が約９０％未満であることを意味する。
【００５５】
「超透明な」とは、デポーのＴ８００値が約９２％超、または９５％超であることを意味する。
【００５６】
用語「安定な」は、本明細書において、（１）製剤が２５℃で少なくとも１年間透明なままであり、または（２）製剤が１週間、４０℃に曝露される場合、製剤は、遠心分離後に透明なままであり、分離または沈殿しないことを意味する。
【００５７】
用語「ゲル」および「デポー」は、本明細書で互換的に使用される。
【００５８】
プロセスの説明
図１に示すように、本発明の一態様は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される親水性水溶性医薬活性剤を含むデポーを作製するためのプロセスであって、（１）バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油とを混合することによって、水中油型エマルジョンを形成するステップと（図１、ステップ１を参照）、（３）エマルジョンをホモジナイズして、一次エマルジョンを得るステップと（図１、ステップ２を参照）、（４）一次エマルジョンを微小流動化して、本明細書および図１でナノエマルジョンとも呼ばれる単相溶液を得るステップと（図１、ステップ３を参照）、（４）一次エマルジョンおよび／または単相溶液のｐＨが、必要に応じてｐＨを調整することによって、約３〜約６の間、約３〜約５の範囲、または約３〜約４の範囲であることを確実にするステップと（図１、ステップ４を参照）、（５）所望のｐＨの単相溶液を凍結乾燥して、乾燥ペーストを形成するステップと（図１、ステップ５を参照）、（６）透明溶液を得るのに十分な量で粘度改変剤を乾燥ペーストに添加するステップと（図１、ステップ６を参照）、（７）透明溶液から粘度改変剤の少なくとも一部を除去することによって、デポーの総重量と比べて、約５．５ｗｔ％〜約７．５ｗｔ％の粘度改変剤を有するデポーを得るステップと（図１、ステップ７を参照）、（８）デポーを加熱することなくデポーを滅菌するステップと（図１、ステップ８を参照）を含むプロセスを提供する。
【００５９】
本発明の一実施形態では、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油とを混合することによって水中油型エマルジョンを形成するステップは、（１）水にバンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩、およびこれらの混合物を溶解させることによって水溶液を形成することと、（２）リン脂質と、油と、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩またはこれらの混合物からなる群から選択される親水性水溶性の薬学的に許容される成分（複数可）を含む水溶液とを含むエマルジョンを形成することとを含む。
【００６０】
代替の実施形態では、粘度改変剤が、所望の粘度を得るのに十分な量で乾燥ペーストに添加され、次いで、粘度改変された溶液は、透明溶液を得るために前濾過される。
【００６１】
一実施形態では、デポー中に存在する水は、デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下、約２ｗｔ％以下、約１ｗｔ％以下、または約０．５ｗｔ％以下の水である。他の実施形態では、医薬活性剤は、バンコマイシン塩酸塩およびゲンタマイシン硫酸塩である。他の実施形態では、デポーは透明であり、さらに別の実施形態では、デポーは超透明である。
【００６２】
水中油型エマルジョンの形成
バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油とが混合されることによって、水中油型エマルジョンが形成される。
【００６３】
別の実施形態では、最初に、バンコマイシン塩酸塩、ゲンタマイシン硫酸塩、または両方が水に溶解されることによって、水溶液が形成される。
【００６４】
水中のバンコマイシン塩酸塩の初期薬物濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、または約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌであり、水中のゲンタマイシン硫酸塩の初期薬物濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７５ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである。
【００６５】
次いで、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの水溶液と、リン脂質と、油と、必要に応じてｐＨ調整剤と、必要に応じて安定化剤とが混合されることによって、水中油型エマルジョンが形成される。
【００６６】
一次エマルジョンを得るためのホモジナイジング
引き続いて、高せん断ミキサー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ  Ｍｏｄｅｌ  Ｌ５Ｍミキサーなど）を使用してエマルジョンをホモジナイズして、一次エマルジョンを形成することができる。
【００６７】
単相溶液を得るための微小流動化
次いで、例えば、高圧微小流動化装置を使用して一次エマルジョンを微量流動化することによって、ナノエマルジョン／単相溶液を得た。得られるナノエマルジョン／単相溶液は、単相溶液／ナノエマルジョンを形成するように１２０ｎｍ未満、１００ｎｍ未満、および／または８０ｎｍ未満の平均直径を有する。１８０ｎｍ超の液滴サイズは、曇った溶液をもたらす場合があることが判明した。
【００６８】
ナノエマルジョン液滴の平均直径を低減すると、限定することなく、得られる単相溶液の粘度を低減し、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの安定性に影響し得るオートクレービングまたはγ放射線滅菌などの加熱に基づく滅菌システムを使用することによってではなく、フィルターを通じた滅菌を可能にすると考えられる。
【００６９】
微小流動化のステップの前では、一次エマルジョンは、一般に、白色、不透明で濃厚なヨーグルト様の塊である。微小流動化の後、得られる単相溶液は、一般に、透明、透光性で、粘度および流動特性において水様である。
【００７０】
透明単相溶液を生成するために、水中油型エマルジョンは、有利には、水中油型エマルジョンの総重量と比べて、約１０％〜約８０％の水、約３０％〜約８０％の水、または約６０％〜８０％の水を含有することによって、微小流動化装置などの高圧ホモジナイザーで処理されるように所望の流動特性を有する。
【００７１】
ｐＨの調整
エマルジョン、一次エマルジョン、または単相溶液のｐＨは、エマルジョン、一次エマルジョン、または単相溶液のｐＨが、約３〜約６、約３〜約５の範囲、または約３〜約４の範囲であるように、ｐＨ調整剤を添加することによって調整することができる。
【００７２】
別の実施形態では、このステップは、適切な量のｐＨ調整剤をエマルジョンに添加し、その後高せん断混合ホモジナイゼーションステップを約１分間行うことによって実施される。次いで、ホモジナイゼーションステップの後、組成物のｐＨが確認され、必要であれば、再び調整することができる。
【００７３】
凍結乾燥、昇華、または蒸発
水を除去することによって、ゲンタマイシンおよび／またはバンコマイシンは、リン脂質（phosphlipid）／油ビヒクル中に均一に分散した状態になる。次いで水は、凍結乾燥、昇華および／または蒸発によって単相溶液から除去され、その結果、得られる乾燥ペーストまたは最終的なシリンジ注入可能な透明デポー中に残留する水の量は、乾燥ペーストまたは粘性透明デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％未満、約２ｗｔ％未満、または約０．５ｗｔ％未満の水である。
【００７４】
別の実施形態では、単相溶液は、トレイ凍結乾燥器を使用して凍結乾燥される。さらに別の実施形態では、凍結乾燥器のトレイは、ステンレス鋼である。
【００７５】
さらに別の実施形態では、ステンレス鋼凍結乾燥トレイ中での液体充填高は、約３ｃｍ以下である。一実施形態では、凍結乾燥のステップ後、乾燥ペーストである得られる生成物は、乾燥ペーストの総重量と比べて、１ｗｔ％以下の水を有する。
【００７６】
粘度改変剤の添加
粘度改変剤は、乾燥ペーストが完全に溶解されるまで、乾燥ペーストに添加される。粘度改変剤は、粘度改変剤の量が、粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約７５ｗｔ％以上、約５０ｗｔ％以上、約３０ｗｔ％以上、または約２５ｗｔ％以上になるまで、乾燥ペーストに添加することができる。一実施形態では、粘度改変剤および乾燥ペーストは、約１０℃〜約８０℃、または約２５℃〜約６０℃の温度で混合することができる。
【００７７】
前濾過
これは、必要に応じてのステップであり、本発明のある特定の実施形態については必要とされない。粘度改変剤を添加した後に得られる粘度改変済み溶液が濁っている場合、粘度改変済み溶液を、例えば、０．６５ミクロンのフィルターを使用して濾過することによって、透明溶液を形成することができる。前濾過ステップによって除去される濁った成分は、バンコマイシン（約２％の目標のアッセイ）およびゲンタマイシン（３〜４％の目標のアッセイ）の小画分からなる。この損失は、初期の装填量を上方調整し、またはアッセイ目標を下げることによって補償することができる。これは、必要に応じてのステップであり、本発明のある特定の実施形態については必要とされない。
【００７８】
粘度改変剤の除去
引き続いて、乾燥ペーストを溶解させるために添加された粘度改変剤が除去される。粘度改変剤の除去は、デポー中に存在する場合のある残留粘度改変剤の量が、デポーの総重量と比べて、約１％〜約５０％、約２％〜約１８％、または約５％〜約６．５％になるまで行うことができる。
【００７９】
過剰に乾燥された場合、必要に応じて、粘度改変剤を添加し戻すことができる。粘度改変剤の除去は、ロータリーエバポレーターを使用して、または窒素ガスまたは空気を送風することによって行うことができる。デポーを形成するために透明溶液から除去された粘度改変剤の量を測定するのに、熱重量分析（ＴＧＡ）を使用することができる。
【００８０】
本発明によって得られるデポーの粘度は、約１００センチポアズ〜約５０００センチポアズ、約２００センチポアズ〜約２０００センチポアズ、または約３００センチポアズ〜約１５００センチポアズである。粘度測定は、Ｓｐｉｎｄｌｅ  Ｎｏ．ＳＰ−４０を伴ったＭｏｄｅｌ  Ｎｏ．ＤＶ−ＩＩＩを有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒの使用を含めた、任意の従来方法を使用して実施することができる。これは、必要に応じてのステップであり、本発明のある特定の実施形態については必要とされない。
【００８１】
滅菌濾過
次いでデポーは、約０．２ミクロン以下の孔を有するものなどの滅菌膜を通じた濾過によって滅菌される。
【００８２】
デポー
本発明の別の態様は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と、水と、リン脂質と、油と、ｐＨ調整剤と、粘度改変剤とを含むデポーであって、デポー中に存在する水は、デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％以下、約２ｗｔ％以下、または約０．５ｗｔ％以下の水であるデポーを提供する。
【００８３】
本発明の別の態様によれば、デポーは、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方の安定性を改善するために安定化剤を必要に応じて含む。本発明の別の態様では、このデポーは、シリンジ、バイアル、または処置部位、デポー部位もしくは創傷部にデポーを送達することができる任意の他のデバイスで提供される。
【００８４】
医薬活性成分
本発明による医薬活性成分は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩、またはこれらの混合物である。一実施形態では、本発明による医薬活性成分は、バンコマイシン塩酸塩、ゲンタマイシン硫酸塩、またはこれらの混合物である。別の実施形態では、本発明による医薬活性成分は、バンコマイシン塩酸塩およびゲンタマイシン硫酸塩である。さらに別の実施形態では、本発明による医薬活性成分は、バンコマイシン塩酸塩またはゲンタマイシン硫酸塩のいずれかである。
【００８５】
薬学的に許容される塩の例として、それだけに限らないが、バンコマイシンまたはゲンタマイシンと塩を形成することができる任意の酸、例えば、酢酸、塩酸、臭化水素酸、クエン酸、ギ酸、乳酸、コハク酸、硫酸などが挙げられる。
【００８６】
デポー中に存在することができる医薬活性成分の量は、意図される総用量のサイズ、投与の継続時間、デポーのサイズ、ならびにこれが投与されることになる場所および方法、投与される活性剤のタイプ、投与のパターン（例えば、連続的、遅延など）などを含めたいくつかのパラメータによって変化し得る。しかし、一般に、薬学的に許容される成分の総量は、デポーの総重量と比べて、約０．００１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約０．０１ｗｔ％〜約１０ｗｔ％、または約０．１ｗｔ％〜約５ｗｔ％とすることができる。
【００８７】
油
本発明による油は、例えば、天然油、例えば、植物油、動物油、ビタミンＥ、ビタミンＥエステルなど、および／または合成油もしくは半合成油、あるいはこれらの混合物とすることができる。
【００８８】
植物油は、植物種子または木の実に由来する油を指す。植物油の例として、それだけに限らないが、扁桃油、ルリヂサ油、クロフサスグリ種子油、ヒマシ油、サフラワー油、ダイズ油、ゴマ油、綿実油、ブドウ種子油、ヒマワリ油、キャノーラ油、ヤシ油、パーム油、オレンジ油、トウモロコシ油、オリーブ油などが挙げられる。
【００８９】
動物油は、動物源に由来するトリグリセリド油を指す。動物油の例は、魚油、またはタロウ、ラードなどの他の源に由来するものとすることができる。
【００９０】
合成油または半合成油の例は、酸成分がＣ６〜Ｃ２０の飽和脂肪酸および／または不飽和脂肪酸であるモノグリセリド、ジグリセリド、またはトリグリセリド、ＣＡＰＴＥＸ（登録商標）（様々なグレードのプロピレングリコールジデカノエートなどのプロピレングリコールエステル、およびグリセリルトリカプリレート／カプレートなどのグリセロールエステル）；ＭＩＧＬＹＯＬ（登録商標）（カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド；またはカプリル酸／カプリン酸／リノール酸トリグリセリド；またはカプリル酸／カプリン酸／コハク酸トリグリセリド（triglcerides）；またはカプリル酸／カプリン酸のプロピレングリコールジエステル、および他の作用物質との混合物）；ＣＡＰＭＵＬ（登録商標）（様々なグレードで入手可能、例えば、Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）である。これは主に、グリセロールおよびプロピレングリコールのモノエステルおよびジエステル、例えば、グリセリルモノオレエートおよびプロピレングリコールモノカプリレートなどである。別のグレードは、ポリエチレングリコール、モノステアリン酸グリセリルからなる。一実施形態では、本発明によって使用される油は、ゴマ油である。
【００９１】
デポー中に存在することができる油の量は、デポーの総重量と比べて、約５ｗｔ％〜約９５ｗｔ％、約２５ｗｔ％〜約７５ｗｔ％、または約３５％〜約６０％とすることができる。
【００９２】
ある特定の実施形態では、デポー中の油とリン脂質の比は、重量で約２０：１〜約１：２０、約３：１〜約１：３、または約１：２〜約１：１の範囲内とすることができる。
【００９３】
リン脂質
本発明によるリン脂質は、グリセロール（ホスホグリセリド、グリセロリン脂質）またはスフィンゴシン（spingosine）（スフィンゴ脂質）に由来するものを含めた１つまたは複数のホスフェート基を含有する脂質分子を指す。
【００９４】
いくつかの実施形態では、リン脂質は、１つの脂肪酸がホスフェート基およびいくつかの窒素含有分子のうちの１つによって置き換えられたトリグリセリド誘導体である。脂肪酸鎖は、疎水性であり、ホスフェート基およびアミノ基上の電荷は、分子のその部分を親水性にする。結果は、両親媒性分子である。
【００９５】
米国薬局方（ＵＳＰ）によれば、レシチンは、アセトン不溶性リン脂質の複合混合物を記述する非専売名であり、これは、トリグリセリド、脂肪酸、および炭水化物などの様々な量の他の物質と組み合わさった、ホスファチジルコリン（phosphotidylcholine）、ホスファチジルエタノールアミン（phosphotidylethanolamine）、ホスファチジルセリン（phosphotidylserine）、およびホスファチジルイノシトール（phosphotidylinositol）を主に構成する。レシチンの組成、およびしたがってその物理的性質は、レシチンおよびリン脂質組成物の源、例えば、ホスファチジルコリン含量等に応じて変化する。
【００９６】
本発明の一実施形態によれば、本明細書で使用されるレシチンは、卵またはダイズに由来する医薬品グレードのレシチンであり、これらは、非経口製品において使用されており、刺激性、アレルギー性、炎症性の作用物質、または他の有害な生物学的反応を引き起こす作用物質を実質的に含まない。
【００９７】
本発明の実施によれば、デポーを調製するためのリン脂質の選択は、リン脂質の、（１）バンコマイシン、ゲンタマイシン、およびこれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの親水性水溶性医薬活性剤と化学的に相溶性であり、（２）単相溶液を形成し、製造プロセスを通じて、かつ貯蔵の間に小液滴サイズを維持し、（３）所望のデポーをもたらし、医薬活性剤の所望の放出をもたらす能力に基づいて決定される。
【００９８】
リン脂質の例には、それだけに限らないが、スフィンゴシンおよび誘導体の形態でのスフィンゴ脂質（ダイズ、卵、脳、および乳から得られる）、ガングリオシド、ならびにフィトスフィンゴシンおよび誘導体（酵母から得られる）が含まれる。
【００９９】
リン脂質は、合成することもでき、一般的な合成リン脂質の例として、それだけに限らないが、ジグリセロール、例えば、１，２−ジラウロイル（diauroyl）−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）など；ホスファチジン酸、例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸，ナトリウム塩（ＤＭＰＡ，Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸，ナトリウム塩（ＤＰＰＡ，Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸，ナトリウム塩（ＤＳＰＡ，Ｎａ）など；ホスホコリン、例えば、１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＤＰＣ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジリノレオイル−−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＯＰＣ）、１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、１，２−ジエイコサペンタエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＥＰＡ−ＰＣ）、１，２−ジドコサヘキサエニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＡ−ＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＭＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイル（palmitoy）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル（oleoy）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）；ホスホエタノールアミン、例えば、水素化ダイズホスホエタノールアミン（ＨＳＰＥ）、非水素化卵ホスホエタノールアミン（ＥＰＥ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬｏＰＥ）；１，２−ジエルシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１，２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）；ホスホグリセロール、例えば、水素化ダイズホスファチジルグリセロール，ナトリウム塩（ＨＳＰＧ，Ｎａ）、非水素化卵ホスファチジルグリセロール，ナトリウム塩（ＥＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＬＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＭＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール，アンモニウム塩（ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ，ＮＨ４）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＰＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＳＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール，ナトリウム塩（ＤＳＰ−ｓｎ−１Ｇ，Ｎａ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＯＰＧ，Ｎａ）、１，２−ジエルシル（dierucyl）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＤＥＰＧ，Ｎａ）、１，２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，ナトリウム塩（ＰＯＰＧ，Ｎａ）など；ホスファチジルセリン、例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−シン（sine），ナトリウム塩（ＤＭＰＳ，Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−シン，ナトリウム塩（ＤＰＰＳ，Ｎａ）、１，２−ジステアリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−シン，ナトリウム塩（ＤＳＰＳ，Ｎａ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−シン，ナトリウム塩（ＤＯＰＳ，Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−シン，ナトリウム塩（ＰＯＰＳ，Ｎａ）など；混合鎖リン脂質、例えば、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（phospoglycerol），ナトリウム塩（ＰＯＰＧ，Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール，アンモニウム塩（ＰＯＰＧ，ＮＨ４）；リゾリン脂質、例えば、１−ミリストイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）、１−パルミトイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）、１−ステアロイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）など；およびペグ化リン脂質、例えば、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ，１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ，１−２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノー���アミン，ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ，１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール７５０）−ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ，１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ，１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩などが挙げられる。
【０１００】
デポー中に存在することができるリン脂質の量は、最終的な製剤の粘度、投与の継続時間、デポーのサイズ、ならびにこれが投与されることになる場所および方法、投与される活性剤のタイプ、投与のパターン（例えば、連続的、遅延など）などを含めたいくつかのパラメータによって変化し得る。しかし、一般に、デポー中に存在することができるリン脂質の量は、組成物の総重量と比べて、約５％〜約９５％、または組成物の総重量と比べて、約３５％〜約６０％とすることができる。
【０１０１】
水
本発明によって使用することができる水には、それだけに限らないが、蒸留脱イオン水、または親水性水溶性バンコマイシンおよび／もしくはゲンタマイシンを溶解させることができ、凍結乾燥ステップの間に昇華／蒸発することができる任意の他の液体が含まれる。
【０１０２】
例えば、高圧微小流動化装置を使用することによって単相溶液を得るために、水中油型エマルジョンは、水中油型エマルジョンの総重量と比べて、約５０％〜約９０％の水、約６０％〜約８０％の水、または約７０％〜８０％の水を含有することによって、微小流動化装置などのホモジナイザーで処理されるように所望の流動特性を有することができる。
【０１０３】
しかし、単相溶液が得られた後、水のほとんどは、例えば、凍結乾燥、昇華および／または蒸発によって除去することができる。
【０１０４】
バンコマイシンは、加水分解によって分解するので、最終的なデポー中に残留する水の量は、バンコマイシンの長期安定性に影響を与える。バンコマイシンが沈殿すると、本明細書の実施例２に示したように、デポーは、透光性から濁った状態に変わり、または２つの相に分離する。
【０１０５】
したがって、本発明によれば、貯蔵の間、バンコマイシンを安定に維持するために、残留水の量は、粘性透明デポーの総重量と比べて、約４ｗｔ％未満、約２ｗｔ％未満、または約０．５ｗｔ％未満に維持されなければならない。
【０１０６】
ｐＨ調整剤
本発明によるｐＨ調整剤は、任意の無毒性の酸、塩基、または塩である。ｐＨ調整剤の例には、それだけに限らないが、塩酸、酢酸、硫酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、リシン、アルギニンなどが含まれる。
【０１０７】
上述したように、ゲンタマイシンは、酸化または付加体形成のために分解する。以下の実施例４に示したように、ｐＨは、ゲンタマイシンの長期安定性に影響を与え、ゲンタマイシンが沈殿すると、デポーは、透光性から濁った状態に変わる。
【０１０８】
したがって、デポーのｐＨは、約３〜約６、約３〜約５の範囲、または約３〜約４の範囲とすることができる。
【０１０９】
安定化剤
本発明による安定化剤は、酸化、加水分解、もしくは他の分解反応に対する金属イオンの触媒効果を低減し、かつ／または親水性水溶性医薬活性剤の安定性を増大させる材料である。このような安定化剤の例には、それだけに限らないが、ＥＤＴＡ（エデト酸二ナトリウム）、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、α−トコフェロール、およびこれらの混合物が含まれる。ある特定の実施形態では、デポー中に存在する安定化剤の量は、組成物の総重量と比べて、約０．００１％〜約５．０％、または組成物の総重量と比べて、約０．０１％〜約１．０％である。別の実施形態では、デポーは、安定化剤を含有しない。
【０１１０】
粘度改変剤
本発明による粘度改変剤は、凍結乾燥、昇華および／または蒸発後に形成される乾燥ペーストを溶解させることができる水性または非水性（混入物レベルの水を有する以外）液体である。
【０１１１】
粘度改変剤の例には、限定することなく、エタノール、イソプロパノール、およびこれらの混合物が含まれる。一実施形態では、粘度改変剤は、実質的に非水性である。別の実施形態では、粘度改変剤はエタノールである。
【０１１２】
粘度改変剤は、乾燥ペーストが作用物質中に完全に溶解されるまで、乾燥ペーストに添加される。得られる粘度改変済み溶液は、「濁った」状態になる場合がある。一実施形態では、粘度改変剤および乾燥ペーストは、約１０℃〜約８０℃、または約５０℃〜約７０℃の範囲、または約２５℃〜約６０℃の範囲の温度で混合される。
【０１１３】
粘度改変剤は、粘度改変剤の量が、得られる溶液の総重量と比べて、約１０ｗｔ％、２０ｗｔ％、２５ｗｔ％、または３０ｗｔ％になるまで、乾燥ペーストに添加される。溶液の得られる粘度は、約１０〜約２００センチポアズ、約１５〜約１００センチポアズ、または約２０センチポアズ〜約５０センチポアズとなり得る。
【０１１４】
粘度は、ＳＰ−４０スピンドルを有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄデジタルプログラマブルレオメータまたは任意の他の等価なレオメータを使用して求めることができる。より具体的には、レオメータの開始ＲＰＭは、０．１〜１．０とすることができ、次いで、３０秒毎に０．１ＲＭＰ刻みで０．１にＲＰＭを低減する。粘度測定は、約３０℃の周囲温度で、０．８ＲＭＰで記録することができる。
【０１１５】
引き続いて、乾燥ペーストを溶解させるのに使用された粘度改変剤の一部の量を除去することができる。粘度改変剤の除去は、デポー中に存在する場合のある粘度改変剤の残留量が、デポーの総重量と比べて、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％、約２ｗｔ％〜約１８ｗｔ％、または約５ｗｔ％〜約６．５ｗｔ％になるまで行うことができる。過剰に乾燥された場合、必要に応じて、粘度改変剤を添加し戻すことができる。
【０１１６】
本発明によって得られるデポーの粘度は、約１００センチポアズ〜約５０００センチポアズ、約２００センチポアズ〜約２０００センチポアズ、または約３００センチポアズ〜約１５００センチポアズである。
【０１１７】
処置方法
本発明の別の態様は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、薬学的に許容されるこれらの塩またはこれらの混合物と、水と、リン脂質と、油と、必要に応じてｐＨ調整剤と、粘度改変剤とを含む本発明のデポーを、皮内、筋肉内、切開部内、皮下、点滴注入を介して、または局所的に投与する方法である。デポーは、様々な投与量を使用して、望ましい部位に、必要に応じて様々な投与間隔で投与することができる。すなわち、デポーは、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬの投与体積で、少なくとも約１日の期間にわたって、医薬活性剤を放出するのに十分であるべきである。例えば、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬの投与体積で、１日１回、１日おきに１回、３日毎に１回、１週間に１回、または１カ月に１回の投与間隔を使用することができる。典型的には、デポーは、１回の適用で使用することができ、一般に、創傷部位を縫合する前に、創傷部位に注入される。
【０１１８】
本発明の別の態様は、限定することなく、手術部位感染を含めた感染症を予防および／または処置する方法であって、局所部位で感染症を処置および／または予防するのに十分高い組織濃度を達成するが、腎臓および／または他の臓器に対して毒性を引き起こさず、また、細菌の薬物耐性系統の出現を引き起こさず、かつ／またはこの出現の一因とならない、本発明のデポーを投与するステップを含む方法である。
【０１１９】
別の態様では、創傷部に本発明のデポーを投与することによって、局所組織が病原性微生物を維持することをできなくさせる方法が提供される。
【０１２０】
別の実施形態では、これは、腎臓および／または他の臓器に対して毒性を引き起こさず、細菌の薬物耐性系統の出現を引き起こさず、かつ／またはこの出現の一因とならずに達成される。
【０１２１】
前述の方法のそれぞれにおいて、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方の用量は、デポーから放出される場合、局所組織が、少なくとも２４時間、別の実施形態では、少なくとも４８時間、病原性細菌を維持することができないようであるべきである。さらに別の実施形態では、局所組織は、少なくとも３日間、少なくとも１週間、または１カ月の期間、病原性細菌を維持することができない。
【０１２２】
図１０に示したように、かつ公開データによれば、周知の手術部位感染（ＳＳＩ）病原体、例えば、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、凝固酵素陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどについての生物の９０％の増殖を阻害するのに必要とされる最小阻害濃度（ＭＩＣ９０（ｍｃｇ／ｍｌ））は、１〜４ｍｃｇ／ｍｌの範囲内である。一般に、M.  J.  Rybakら、Vancomycin  Therapeutic  Guidelines、CID  ２００９年：４９巻（８月１日）、３２５〜３２７頁；およびA.  I.  Hidronら、Infection  and  Hospital  Epidemiology、２００８年１１月、２９巻、１１号、９９６〜１０１１頁を参照。これらは、例示したように、個々にバンコマイシンおよびゲンタマイシンの使用に基づく。バンコマイシン（４．３７ｍｇ／ｋｇ）およびゲンタマイシン（３．８９ｍｇ／ｋｇ）を含む本発明のデポーがブタに投与されたとき、本発明のデポーによって達成されたバンコマイシンの局部的なブタ組織濃度は、４８時間で１９ｍｃｇ／ｍｌ超であった。これは、上記に特定したＳＳＩ病原体についてのＭＩＣ９０より科学的に高い。同様に、本発明のデポーを投与することによって達成されたゲンタマイシンのブタ組織濃度は、４８時間で約１２ｍｃｇ／ｍｌであった。
【０１２３】
このために、本発明者らは、上記に特定したＳＳＩ病原体をブタに播種し、次いで局所部位にデポーを投与することによって本発明の効力を判定しなかったことが留意される。それにもかかわらず、上記に特定したＳＳＩ病原体についての公開されたＭＩＣ９０データ、ならびにバンコマイシンおよびゲンタマイシンを含む本発明の製剤の達成可能な組織濃度は、本発明のデポーを使用すると、局所組織が病原性微生物を維持することをできなくさせることによって、感染症を処置および／または予防するのに有効な局部的薬物レベルをもたらすことにおいて高度に有効であることを実証する。
【０１２４】
図１１は、本発明のデポーは、ブタの切開部内に投与すると、両活性剤、すなわち、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの高い局部組織濃度、ならびに低い全身濃度（血漿）をもたらすことを例示する。ゲンタマイシンの毒性（腎臓および聴器毒性）は、１０ｍｇ／Ｌ超の血漿濃度に関連づけられることが公知であるので、本発明のデポーを使用して観察されたゲンタマイシンの低い全身濃度は、かなりの安全域をもたらす。一般に、D.  S.  Reeves、Infection  ８巻（１９８０年）補遺３、Ｓ３１３〜Ｓ３２０頁を参照。
【０１２５】
バンコマイシンの腎毒性は、過剰な薬物曝露にも関連づけられるが、特定のピーク濃度に容易に相関づけることはできない。しかし、本発明のデポー投与を使用して観察された低い全身濃度は、いずれの薬物についてもブタモデルにおいて全身毒性をまったく示さず、明らかにゲンタマイシンについての公開値の十分下である。
【０１２６】
バンコマイシンに対する第２の懸念は、細菌耐性の発生である。バンコマイシン耐性は、細菌をコロニー化する標的組織または付随的組織が、無効濃度のバンコマイシンにかなりの時間曝露されると発生し得る。バンコマイシン単独を全身投与した後、定常状態における所望の最小血漿濃度は、少なくとも１０ｍｇ／Ｌであり、または約１５〜２０ｍｇ／Ｌの範囲内であり得る。血液からの組織によるバンコマイシンの取込みが少ないことを考慮すると、これらの濃度は、治療有効濃度を組織内に押しやり、治療効果を達成するのに十分である。血液濃度は、標的組織についてのサロゲートマーカーとしての役割を果たし、ここで目標は、約４００〜約３００，０００の血漿ＡＵＣ０−ｔ／ＭＩＣ９０比、または４００超のＡＵＣ０−ｔ／ＭＩＣ９０比、または１６００超のＡＵＣ０−ｔ／ＭＩＣ９０比を達成することである。この比は、トラフレベルが上記に言及されたレベルで維持されるとき達成される。
【０１２７】
本発明のデポーでは、図１０に示したように、非常に低い濃度のバンコマイシンが循環血漿中で観察され、一方、ゲルが投与された切開部位において、治療濃度を超えた濃度が存在する。血漿から組織へのバンコマイシンの取込みレベルが低いことを考慮すると、低い全身濃度のバンコマイシンでは、切開部位から遠位の組織内でのバンコマイシンのレベルは無視できることになる。輸送のための唯一の機構は、血漿を介してであり、血漿からの組織による取込み量は低い。したがって、切開部から遠位の部位において発生するバンコマイシン耐性の確率は、非常に低いはずである。
【０１２８】
したがって、本発明の別の態様では、患者を処置する方法であって、４００超の血漿ＡＵＣ０−ｔ／ＭＩＣ９０比がバンコマイシンについて達成される結果、ｓ．ａｕｒｅｕｓにおける耐性の出現を防止するように、治療有効量のバンコマイシンを単独で、またはゲンタマイシンもしくは薬学的に許容されるその塩と組み合わせて前記患者に投与するステップを含む方法が提供される。本発明のさらに別の態様では、上記に言及された投与を受けている患者は、１／１０の定常状態トラフ血清濃度を示し、その結果、従来方法によるバンコマイシンの高用量投与によって示されるいずれの腎毒性も回避する。一般に、M.  J.  Rybak、Vancomycin  Therapeutic  Guidelines、CID  ２００９年：４９巻（８月１日）、３２５〜３２７頁を参照。
【実施例】
【０１２９】
（実施例１）
本発明によるデポー
【０１３０】
【表１】
2013534244.tif 000003
最初に、５００ｍＬのビーカーに、ゲンタマイシン硫酸塩０．３６ｇ、バンコマイシン塩酸塩０．２４ｇ、ＰＬ９０Ｇ  ５３．３ｇ、ゴマ油４０ｇ、およびＬ−ヒスチジン０．１ｇを装填した。次いでこれに注射用水（ＷＦＩ）を添加し、混合物を高せん断ミキサーによって、５０００ＲＰＭで１５分間ホモジナイズした。得られた単相溶液を凍結乾燥して水を除去することによって、残留水分が０．２％未満である乾燥ペーストを得た。
【０１３１】
（実施例２）
実施例１の外観に対する含水量の効果
この乾燥ペーストを水および／またはエタノールと混合することによって、粘度改変済み溶液を形成し、以下に示す実施例２〜実施例５を含めた試験のいくつかにおいて使用した。
【０１３２】
様々な量の水（１．１ｗｔ％〜４．１ｗｔ％）およびエタノール（６ｗｔ％）を実施例１の乾燥ペースト中に添加することによって、いくつかの試料を生成した。試料をＢｅａｄＢｅａｔｅｒミキサーによって十分混合し、遠心分離して気泡を除去し、次いで初期外観（「初期試料」）を観察した。また、試料を０．４５μｍのフィルターに通過させ、濾液を２〜８℃で貯蔵してさらに外観観察を行った（「濾過試料」）。表２は、製剤の外観に対する含水量の効果を示す。含水量は、製剤の外観に、有意に影響を与えることが判明した。
【０１３３】
【表２】
2013534244.tif 000004
【０１３４】
（実施例３）
ゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性に対する含水量の効果
実施例１の製剤のゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性に対する残留含水量の効果を、６０分のオートクレーブ処理によって評価した。以下の表３に要約したように、バンコマイシンは、より高い残留水レベルで、回収率または純度に関して安定性が低減したことが判明した。ゲンタマイシンの安定性に対する水の有意な効果は、同じ範囲内でまったく観察されなかった。
【０１３５】
【表３】
2013534244.tif 000005
【０１３６】
（実施例４）
実施例１の製剤中のゲンタマイシンおよびバンコマイシンのｐＨ−安定性プロファイルおよびｐＨ−溶解度プロファイル
実施例１のｐＨ調整済み製剤を、２〜８℃に置いて外観を調査した。（以下の表４を参照）。
【０１３７】
【表４】
2013534244.tif 000006
ｐＨ−安定性プロファイルを、６０分のオートクレーブ処理で実施例１からの試料を加熱することによって生成した。（以下の表５を参照）。
【０１３８】
【表５】
2013534244.tif 000007
結果は以下のことを示した：
（１）ｐＨは、実施例１の製剤の外観に影響を与えた。製剤は、ｐＨ３．２で透明であった。
（２）ｐＨは、製剤中のゲンタマイシンの安定性に影響を与えた。低ｐＨ（例えば、３〜４のｐＨ）が、ゲンタマイシンの安定性にとって好適である。
（３）ｐＨは、バンコマイシンの安定性に、有意に影響を与えなかった。
【０１３９】
（実施例５）
３．０〜５．５のｐＨの間での実施例１の製剤中のゲンタマイシンのｐＨ安定性プロファイル
３．０〜５．５の間の３つの異なるｐＨレベルの実施例１の製剤の試料を調製した。さらに、実施例１の製剤の安定性に対するＬ−ヒスチジンの効果も、Ｌ−ヒスチジンを含有する製剤を、Ｌ−ヒスチジンを含有しない製剤と比較して試験した。ゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性は、実施例３に示したのと同様に評価した。以下のことが判明した。
（１）製剤中のゲンタマイシンの安定性は、ｐＨ依存性である（ゲンタマイシンは、低ｐＨ（例えば、３〜４のｐＨ）が好適であった）。
（２）製剤中のバンコマイシンの安定性は、試験したｐＨ範囲内で、ｐＨに感受性がより低い。
（３）Ｌ−ヒスチジンは、試験したｐＨ範囲内で、ゲンタマイシンの安定性を増大させた。
（４）Ｌ−ヒスチジンは、試験したｐＨ範囲内で、バンコマイシンの安定性を減少させた。
【０１４０】
図２は、オートクレーブ処理後のアッセイ回収率を示す。
【０１４１】
（実施例６）
本発明による別のデポー、および製剤を作製するプロセス
【０１４２】
【表６】
2013534244.tif 000008
３．３のｐＨを有する０．５ｗｔ％未満の残留水を含有した透明黄色滅菌デポー（バッチサイズ：１５００ｇ）を、（１）乳化、（２）ホモジナイゼーション／微小流動化、（３）凍結乾燥、（４）エタノール希釈、（５）前濾過、（６）エタノール除去、および（７）濾過のステップに従う多段階プロセスによって調製した。上記に列挙した成分のすべてを単純に混合すると、透明デポーを形成しない。
【０１４３】
上記に言及したステップのそれぞれについての詳細な手順は、以下の通りである。最初に、ゲンタマイシン硫酸塩、バンコマイシン塩酸塩に水を添加することによって、ゲンタマイシン硫酸塩およびバンコマイシン塩酸塩を完全に溶解させた。次いで、ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮ（登録商標）９０Ｇ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ製）およびゴマ油を添加し、その後、５０００ｒｐｍで６０分間、高せん断混合することによって、均一な一次エマルジョンを得た。次いで、１ＮのＨＣｌを添加することによって、一次エマルジョンのｐＨを３．３±０．２に調整した。これは、適切な量の１ＮのＨＣｌをエマルジョンに添加し、その後１分間、高せん断混合することによって行った。次いで、ｐＨの測定を行って、一次エマルジョンのｐＨが３．３±０．２であることを確実にした。
【０１４４】
引き続いて、一次エマルジョンを微小流動化装置内に置いて、単相溶液を生成した。単相溶液の液滴の平均直径を、レーザー光散乱デバイスを使用して測定した。
【０１４５】
次いで、単相溶液を凍結乾燥して水を除去することによって、残留水が０．５％未満である乾燥ペーストを得た。次いで、乾燥ペーストを無水アルコールと混合した。次いで、透明溶液（粘度改変済み）が得られるまで、６０〜７０℃の水浴中で混合物を超音波処理した。次いで、溶液を室温に冷却し、０．６５ミクロンの滅菌フィルターに通して前濾過した。
【０１４６】
次いで、窒素ガスを送風することによって、無水アルコールの残留量が６．５ｗｔ％〜７ｗｔ％になって粘性の透明なゲルを得るまで、溶液からアルコールを除去した。過剰乾燥された場合、必要に応じて無水アルコールを添加し戻した。
【０１４７】
バイオセーフティフード内で、４０ｐｓｉのアルゴンガスを適用して、デポーを０．２ミクロンのフィルターに通して濾過することによって、製剤を滅菌した。次いで、バイオセーフティフード内で、濾過したデポーをガラスバイアル中に充填した。
【０１４８】
（実施例７）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイル
ゲンタマイシンおよびバンコマイシンを含有する実施例６の製剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイルを、ＵＳＰ方法Ｉを使用して、バスケット装置（３７℃で１００ｒｐｍ）を使用して測定した。実施例６の製剤１．３６ｇを０００サイズのカプセル内に充填し、充填したカプセルを、バッフルを有する４０メッシュのバスケット内に置いた。図３は、ＵＳＰ方法Ｉを使用する、実施例６の製剤のゲンタマイシンおよびバンコマイシンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイルを示す。
【０１４９】
（実施例８）
ウサギにおける薬物動態学的試験
ニュージーランド白ウサギを使用して薬物動態学的（「ＰＫ」）試験を行うことによって、本発明によって作製した製剤の送達を評価した。２つの製剤を、それぞれ実施例１および実施例６に示した手順に従って作製し、外科創傷部または皮下ポケット内に投与した。以下の表７は、ウサギＰＫ試験設計をより詳細に示す。
【０１５０】
【表７】
2013534244.tif 000009
第１の実験において、２匹のニュージーランド白ウサギを試験した。実施例１の製剤を創傷部に点滴注入した後、バンコマイシンおよびゲンタマイシンは、１〜２時間の血漿Ｔｍａｘを伴って急速に吸収された。血漿Ｃｍａｘ濃度は、マウスにおいて観察されたものと同様であった。血漿濃度は、３６時間までに定量化の限界付近まで減少した。図４および図５に示したように、バンコマイシンの組織濃度は、７２時間でピークとなり、１６８時間を通じて最小阻害濃度（ＭＩＣ）より上であった。
【０１５１】
図６および図７に示したように、ゲンタマイシンの組織濃度は、７２時間でピークとなり、１６８時間を通じてＭＩＣ以下であった。
【０１５２】
血漿および組織分析を液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）分析によって実施し、実施例１の製剤の薬物動態学的（ＰＫ）結果を、それぞれ以下の表８および表９に要約した。
【０１５３】
【表８】
2013534244.tif 000010
【０１５４】
【表９】
2013534244.tif 000011
第２の実験において、６匹のニュージーランドウサギ（群Ｉ）を、１２．６ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンおよび１１．４６ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンの用量を含有する実施例６の製剤を創傷部に点滴注入することによって試験し、６匹の追加のニュージーランドウサギ（群ＩＩ）を、２５．２ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンおよび２２．９ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンの用量を含有する実施例６の製剤を創傷部に点滴注入することによって試験した。
【０１５５】
より低い濃度（群Ｉ）のゲルは、創傷部位における合計でバンコマイシンおよびゲンタマイシンの両方について４μｇ／ｇの平均となり、一方、より高い濃度のゲル（群ＩＩ）は、バンコマイシンおよびゲンタマイシンについて、それぞれ２６μｇ／ｇおよび１９  ４μｇ／ｇの平均となり、これらは、ＭＩＣ（最小阻害濃度）値の４倍超である。実施例６の製剤のＭＰＩ試験からのバンコマイシンおよびゲンタマイシンの血漿濃度は、両用量で、４００超のバンコマイシンのＡＵＣ／ＭＩＣ（濃度曲線下面積／最小阻害濃度）比、および両用量で８００超のゲンタマイシンのＣｍａｘ／ＭＩＣ（最大濃度／最小阻害濃度）比を示した。
【０１５６】
図８は、創傷部の皮下（ＳＣ）に１回点滴注入した後の、ウサギにおける平均バンコマイシン血漿濃度を例示し、図９は、ウサギにおける平均総ゲンタマイシン血漿濃度を例示する。
【０１５７】
血漿および組織分析をＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって実施した。実施例６の製剤のＰＫ結果を、以下の表１０に要約する。
【０１５８】
【表１０】
2013534244.tif 000012
実施例６の製剤（高強度）と実施例１の製剤（より低い強度）との間の重要な差異は、マウスなどの小動物におけるこれらの２つの製剤のＰＫプロファイルは同様であったが、ウサギなどのより大きい動物で試験したとき、性能のより大きい差異があったことであり、その理由は、実施例１の製剤の組織濃度は、ＭＩＣ値の４倍をより早く下回り、したがって、ＭＩＣより４倍費やされる時間／面積に対して、より低い濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を表したためである。
【０１５９】
（比較例１）
【０１６０】
【表１２】
2013534244.tif 000013
比較例１は、ホモジナイゼーション、エタノール除去、および／または前濾過のステップを実施しなかったことを除いて、実施例１または実施例６と同じ方法を使用して生成した。
【０１６１】
比較例１は、凍結乾燥後に不透明な硬いペーストを形成し、粘度改変剤（エタノール）を添加した後、透明でなく、濾過できなかった。
【０１６２】
（実施例９）
この実施例は、本発明のデポー製剤を作製するためのプロセスをさらに例示する。
【０１６３】
【表１１】
2013534244.tif 000014
ゲンタマイシン硫酸塩、バンコマイシン塩酸塩、ＰＬ９０Ｇ、およびゴマ油、および水をビーカーに添加し、５００ＲＰＭで３０分間、高せん断ミキサーにより混合およびホモジナイズして、一次エマルジョンを得た。次いで一次エマルジョンのｐＨを、１ＮのＨＣｌによって３．３に調整した。
【０１６４】
微小流動化装置（Ｍ−１１０ＥＨ、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｃｏｒｐ）にかけることによって、一次エマルジョンの液滴サイズを低減した。運転圧を２５０００ｐｓｉに設定した。６回通した後、単相溶液の液滴サイズ（Ｚ−Ａｖｅ）は、レーザー光散乱散乱装置（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）によって８０ｎｍ未満であった。単相溶液のｐＨを確認し、必要に応じて３．３に調整した。
【０１６５】
単相溶液を、３ｃｍ未満の充填高でステンレス鋼容器に移し、次いで凍結乾燥して残留水が１％未満になるまで（Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒ滴定による）水を除去することによって、乾燥ペーストを得た。凍結乾燥後、乾燥ペーストを２Ｌのビーカー中に収集した。無水アルコールをペースト中に添加して最終の２５％（ｗ／ｗ）にした。室温で攪拌することによって混合物を溶解させて、透明黄色溶液を形成した。
【０１６６】
窒素ガスを送風することにより透明溶液を蒸発させてアルコール含量を低減することによって、６％のアルコール（ｗ／ｗ）を含む粘性透明デポーを得た。次いでこのデポーを、２つの０．２μｍのＳＡＲＴＯＰＯＲＥ（登録商標）２フィルターに通過させることによって滅菌した。
【０１６７】
（比較例２）
微小流動化ステップ無しで作製した製剤。
【０１６８】
一次エマルジョンを、実施例９で説明したように調製した。この一次エマルジョンを一晩さらに振盪し、または５０００ＲＰＭで２時間の追加の高せん断混合でホモジナイズし、次いで実施例９で説明したように凍結乾燥した。この例については、微小流動化ステップは使用しなかった。凍結乾燥後、無水アルコールの量が約２５％（ｗ／ｗ）であるように、無水アルコールをペーストに添加した。得られた混合物は、長時間攪拌または加熱した後でさえ透明でなかった。透明溶液または濾過できる溶液が得られなかったので、このプロセスを継続することができなかった。
【０１６９】
（比較例３）
凍結乾燥に非ステンレス鋼容器を使用して作製した製剤。
【０１７０】
一次エマルジョンおよび単相溶液を、実施例９で説明したように調製した。ステンレス鋼容器の代わりにガラス容器を使用したことを除いて、実施例９で説明したようにナノエマルジョンを凍結乾燥した。凍結乾燥後、無水アルコールの量が、得られる粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約２５％（ｗ／ｗ）であるように、無水アルコールを乾燥ペーストに添加した。得られた混合物は、長時間攪拌または加熱した後でさえ透明でなかった。透明溶液または濾過できる溶液が得られなかったので、このプロセスを継続することができなかった。
【０１７１】
（比較例４）
約２５％（ｗ／ｗ）まで無水アルコールを添加することなく作製した製剤。
【０１７２】
一次エマルジョン、単相溶液、および乾燥ペーストを、実施例９で説明したように調製した。凍結乾燥後、無水アルコールの量が、得られる粘度改変済み溶液の総重量と比べて、約６％（ｗ／ｗ）であり、２５％ｗ／ｗでないように、無水アルコールを乾燥ペーストに添加した。得られた混合物は、長時間攪拌または加熱した後でさえ濁っており、透明でなかった。
【０１７３】
上述したように、溶液の透明さは、例えば、視覚的に懸濁した粒子を含んでおらず、中間溶液が、Ｐｈａｒｍａｃｉａ製のものであるＭｏｄｅｌ  Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ  ＩＩＩなどのＵＶ−可視分光光度計で測定されるとき、１ｃｍパスの石英キュベットおよびブランクとしてのアルコールで、８００ｎｍで測定すると（Ｔ８００）、約９０％超の光線透過率を有する、外観によって測定される。
【０１７４】
（実施例１０Ａ〜１０Ｆ）
【０１７５】
【表１３】
2013534244.tif 000015
上記に特定した実施例１０Ａを、本発明の方法によって調製した。
【０１７６】
上記に特定した実施例１０Ｂも、本発明の方法によって調製した。
【０１７７】
上記に特定した実施例１０Ｃを、いずれの親水性水溶性医薬活性剤も含有させることなく、本発明の方法によって調製した。
【０１７８】
実施例１０Ｄは、実施例１０Ｃの製剤をゲンタマイシン硫酸塩およびバンコマイシン塩酸塩と混合することによって調製した。したがって、実施例１０Ｄは、本発明の方法によって調製しなかった。
【０１７９】
実施例１０Ｅは、実施例１０Ｃの製剤をゲンタマイシン硫酸塩のみと混合することによって調製した。したがって、実施例１０Ｅは、本発明によって調製しなかった。
【０１８０】
実施例１０Ｆは、微小流動化ステップを用いずに調製した。したがって、実施例１０Ｆも、本発明によって調製しなかった。流動化ステップを除外すると、デポー中に沈殿をもたらした。したがって、得られたデポーは、透明でなかった。
【０１８１】
（実施例１１）
実施例１０Ａ〜１０Ｆの小角Ｘ線回折（ＳＡＸＳ）による構造キャラクタリゼーション
手順：５０ｋＶおよび５０ｍＡで動作し、ピンホールコリメータを使用してコリメートされたＣｕＫα（λ＝１．５４１８３８Å）放射線ビームを供給するＢｒｕｋｅｒ  Ｍ１８ＸＨＦ２２回転陽極発生器を使用して、ヘリウムチャンバー内で、小角Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）データを収集した。Κβ放射線は、Ｎｉフィルターを用いて除去した。Ｈｉｇｈｓｔａｒマルチワイヤー検出器を使用してデータを収集した。試料を、改変することなく０．９ｍｍのホウケイ酸ガラスキャピラリー中に装填し、エポキシで密閉した。６４．５５ｃｍの試料と検出器の距離で、自動ゴニオメーター上のＨｅチャンバー内に試料をマウントした。空気からの散乱を防止するために、Ｈｅガスをチャンバー内に１時間パージし、次いで各試料を７２００秒間収集した。０．１度幅および０．０２度幅で、０．８°の２θから４．７°の２θまで３６０°のχサークルにわたって、データを平滑化および積算した。パターンを比較し、０．１度幅の積分を使用してピーク位置を微調整した。
【０１８２】
結果：図１２は、実施例１０Ａ〜１０Ｆの小角Ｘ線回折（ＳＡＸＳ）パターンを例示する。２つの明確な回折ピークが観察された。実施例１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｆは、約２θ（度）において、回折ピークを低角度で示し、２つの物理的な混合物（実施例１０Ｄおよび実施例１０Ｅ）、ならびにいずれの活性剤も含まないデポービヒクル（実施例１０Ｃ）は、約２．５θ（度）において、はるかに広い回折ピークを示した。
【０１８３】
本発明の方法を使用して生成した製剤（実施例１０Ａおよび１０Ｂ）は、約２θ（度）で形成されたユニークなＳＡＸＳ回折ピークを有し、これは、実施例１０Ｃ、または同じ薬物とのデポービヒクルの物理的混合物（実施例１０Ｄおよび１０Ｅ）において見出されなかった。実施例１０Ｃは、実施例１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｆより小さい格子間隔を有する。
【０１８４】
ゲンタマイシンおよびバンコマイシンが本発明によるデポー中に組み込まれると、格子間隔が約８〜９Å増加して計算され、そのようなユニークな構造（「２θ構造」と本明細書で呼ばれる）を形成している。
【０１８５】
２つの物理的な混合物（実施例１０Ｄおよび１０Ｅ）は、デポービヒクル（実施例１０Ｃ）と一致した一次回折ピークの格子間隔を示し、デポービヒクルをゲンタマイシンおよびバンコマイシンと物理的に混合しても、ビヒクルの構造を変化させないことを示した。
【０１８６】
２θ構造が形成されるのは、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンが、本発明のプロセスを使用してデポービヒクル中に組み込まれる後だけである。
【０１８７】
これは、本発明の組成物がユニークな２θ構造を有し、このような構造は、本発明の調製方法を使用してのみ、得ることができることを明らかに示す。
【０１８８】
実施例１０Ｆについて観察された２θ（度）での回折強度の低減は、微小流動化ステップを用いずに調製される組成物中に「２θ構造」が部分的に存在することを示唆する。
【０１８９】
結論：本発明の組成物である実施例１０Ａおよび１０Ｂは、ユニークに異なる２θ構造を含有する。
【０１９０】
（実施例１２）
実施例１０Ａおよび１０Ｄの熱重量分析（Thermal  Gavimetric  Analysis）（ＴＧＡ）による構造キャラクタリゼーション
手順：ＴＧＡ実験は、Ｓｅｉｋｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＴＧ／ＤＴＡ２２０ユニット（nit）で進めた。温度およびエンタルピーを、インジウム標準物質およびスズ標準物質を使用して較正した。スキャンは、オープンパン内で８０ｍｌ／分の窒素パージ速度とともに２５〜３００℃で１０℃／分の速度、および５〜１０ｍｇの間のサイズの試料を使用して完了した。
【０１９１】
結果：図１３に示したように、ＴＧＡ結果は、本発明の方法によって調製した実施例１０Ａと、本発明の方法によって調製しなかった実施例１０Ｄとの間で、重量損失プロファイルの小さな差異を示した。
【０１９２】
（実施例１３）
実施例１０Ａおよび１０Ｄの示差走査熱量測定（Differentiating  Scanning  Calorimetry）（ＤＳＣ）による構造キャラクタリゼーション
手順：ＤＳＣ実験は、ＲＳＣ（冷蔵冷却）ユニットを有するＳｅｉｋｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ  １２０  ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ＤＳＣを使用して進めた。インジウム標準物質を使用することによって、温度およびセル定数についてＤＳＣを較正した。スキャンは、各試料について５〜１０ｍｇの間の重量を使用して、４０ｍｌ／分の窒素パージ速度とともに密閉パン内で、１０℃／分の速度で、通常のＤＳＣモードで実行した。スキャンは、２５〜３００℃で実行した。
【０１９３】
結果：図１４に示したように、両試料（実施例１０Ａおよび１０Ｄ）のＤＳＣプロファイルは、最大約１００℃まで主要な吸熱事象を特徴とし、これは、おそらく試料の脱溶媒和に関連づけられる。しかし、実施例１０Ｄは、おそらく固体薬物、すなわち、ゲンタマイシン硫酸塩および／またはバンコマイシン塩酸塩の溶融による、約８０℃での追加の吸熱ピークを示した。
【０１９４】
本明細書で本発明を、特定の実施形態を参照して説明してきたが、これらの実施形態は、本発明の原理および用途の単に例示的なものであることが理解されるべきである。したがって、多数の改変を例示的な実施形態に対して行うことができ、添付の特許請求の範囲に定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、他のアレンジメントを工夫することができることが理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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