(57)【要約】本発明の実施形態は、孔形成性毒素への曝露によって生じる状態条件を処置するための組成物およびその組成物を使用する方法に関する。例えば本発明により、孔形成性毒素に関連した疾患または状態を処置するための薬の製造のための亜鉛含有組成物の使用が提供される。本発明によってまた、孔形成性毒素の作用から生じる疾患を患っている哺乳類を処置するための方法であって、該哺乳類に治療的に有効な投与量の炭水化物含有組成物を投与する工程を包含する、方法もまた提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
孔形成性毒素に関連した疾患または状態を処置するための薬の製造のための亜鉛含有組成物の使用。
【請求項２】
前記亜鉛含有化合物はグルコン酸亜鉛である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記疾患または状態が、細菌性敗血症、イルカンジ症候群、心血管虚脱、無脈性電気活動（ＰＥＡ）高カリウム血症、溶血、サイトカインおよびヒスタミンの放出、ならびにカテコールアミンサージからなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記組成物が、治療的に有効な用量の炭水化物をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記炭水化物が、Ｄ−ラクツロースを含む、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
孔形成性毒素と関連した疾患を処置するための薬の製造のための、炭水化物含有組成物の使用。
【請求項７】
孔形成性毒素の作用から生じる疾患または状態を患っている哺乳類を処置するための方法であって、該哺乳類に治療的に有効な投与量の亜鉛含有化合物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項８】
前記亜鉛含有化合物が静脈内投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳類に治療的に有効な用量の炭水化物含有組成物を投与する工程をさらに包含する、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
孔形成性毒素の作用から生じる疾患を患っている哺乳類を処置するための方法であって、該哺乳類に治療的に有効な投与量の炭水化物含有組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
前記炭水化物はＤ−ラクツロースである、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（連邦政府により支援された研究に関する記載）
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された補助金番号Ｕ５４  ＮＳ０３９４０６、米国国立衛生研究所によって授与された補助金番号Ｇ１２  ＲＲ００３０６１−２２、米国国立衛生研究所によって授与された補助金番号Ｒ２１  ＤＡ０２４４４４−０１Ａ１、および米国国立衛生研究所によって授与された補助金番号Ｐ２０  ＲＲ０１６４５３の下で政府支援によって一部支援された。米国政府は、本発明において一定の権利がある。
【０００２】
（発明の分野）
本明細書において開示される本発明は一般に、孔形成性毒素への曝露によって引き起こされる状態を処置するための、組成物およびその組成物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
毎年、何十万人もの海水浴客は刺胞動物により刺される。刺胞動物は、花虫綱動物（イソギンチャク、サンゴ）、ヒドロ虫綱動物、鉢虫綱動物（一般のクラゲ）および箱虫綱動物（ｃｕｂｏｚｏａｎ）（高い罹病率および死亡率をもたらす毒物を有する熱帯立方体様クラゲ）を含む。例えば、致命的なＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉの毒物注入は、オーストラリアの北部クイーンズランドでは毎年１１月から５月に起こる。利用可能な明らかに有効な特異療法がない；現在の「抗毒物」が、臨床での検証なしで使われており、負の結果との関連があった。現在の処置は、症状の軽減に関するものであるか、または、重篤な症例において、毒物注入後の心血管完全性を支えることである。いくつかの現在利用可能な「刺痛軽減」タイプのスプレーは、例えば酢、リドカイン、パパイン、アロエ、ユーカリ油およびメントールのような成分から典型的に構成される。このように、刺胞動物毒物注入に関連した炎症、痛みならびに全身および心臓血管の結果と取り組むことを含む、刺胞動物毒物注入による罹病率および死亡率の結果を減らす有効な治療法が必要とされている。
【０００４】
加えて、孔形成性毒素、すなわちポーリンは、ブドウ球菌、連鎖球菌、炭疽菌、クロストリジウム属および大腸菌を含めた、大部分の病原性細菌の古代のおよび保存された中毒性滲出液を表しており、バチおよび特定のクモの毒物の主要成分である。強力な膜破壊的ポーリンは、細菌感染における宿主ファゴサイトーシスおよび無脊椎動物の毒物注入における急速な餌細胞崩壊の回避を許容する。このように、それらは、感染および餌捕獲のための基本的な機構を構成する。このように、刺胞動物毒物注入の処置のための有効な治療法は、孔形成性毒素と関連したすべての状態への一般的適用性を有する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の概要）
本発明の実施形態は、孔形成性毒素の作用から生じる疾患、病気、症候群または状態を患っている哺乳類を処置する方法であって、この哺乳類に治療的に有効な投与量の亜鉛含有化合物を投与することを含む方法を含む。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、この亜鉛化合物は、経皮パッチにより投与される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、酢酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、リンゴ酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、塩化亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、硫酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、プロピオン酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、酪酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、シュウ酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、マロン亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、コハク酸亜鉛である。いくつかの実施形態では、この亜鉛含有化合物は、グルコン酸亜鉛である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、例えば、細菌性敗血症、イルカンジ（Ｉｒｕｋａｎｄｊｉ）症候群、心血管虚脱、無脈性電気活動（ＰＥＡ）高カリウム血症、溶血、サイトカインおよびヒスタミン放出、カテコールアミンサージ、などであり得る。
【０００８】
いくつかの実施形態では、本方法は、治療的に有効な用量の、炭水化物を含む組成物を哺乳類に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この炭水化物は、Ｄ−ラクツロースを含む。
【０００９】
本発明の実施形態では、孔形成性毒素の作用から生じている疾患を患っている哺乳類を処置するための方法が提供され、この方法は、治療的に有効な投与量の、炭水化物を含む組成物をこの哺乳類に投与することを含む。いくつかの実施形態では、この炭水化物は、Ｄ−ラクツロースである。
【００１０】
本発明の実施形態は、孔形成性毒素と関連した疾患を処置するための薬の製造のための亜鉛含有組成物の使用にも関する。
【００１１】
本発明の実施形態では、孔形成性毒素と関連した疾患を処置するための薬の製造のための、炭水化物を含む組成物の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、グルコン酸亜鉛が、単離された赤血球（２％のＲＢＣ）においてＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物により誘発されるカリウム流出を完全に阻害することを示している用量応答曲線のＸＹ−プロットである。
【００１３】
【図２】図２は、グルコン酸亜鉛が、単離された赤血球（２％のＲＢＣ）においてＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物により誘発されるカリウム流出を完全に阻害することを示している用量応答曲線のＸＹ−プロットである。
【００１４】
【図３】図３は、グルコン酸亜鉛が、全血においてＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物により誘発されるカリウム流出を阻害することを示している用量応答曲線のＸＹ−プロットである。
【００１５】
【図４】図４は、グルコン酸亜鉛が、単離された赤血球（２％のＲＢＣ）においてＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａから精製された溶血素により誘発されるカリウム流出を阻害することを示している用量応答曲線のＸＹ−プロットである。
【００１６】
【図５Ａ】図５Ａは、グルコン酸亜鉛が、単離された赤血球（２％のＲＢＣ）においてＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物への曝露により誘発される溶血を阻害することを示しているプロットチャートである。データは、特定の時点での血漿アリコートの吸光度（４０５ｎｍの波長で）として提供されている。
【００１７】
【図５Ｂ】図５Ｂは、グルコン酸亜鉛の量を増加させることにより、Ｃａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物への曝露の後に単離された赤血球（２％のＲＢＣ）において生じる溶血の半減期が遅延されることを示しているデータの片対数ＸＹプロットである。データは、０．６２  ｍＭから５  ｍＭにわたっている種々の濃度のグルコン酸亜鉛を有するＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物の用量の関数とし、特定の時点に採取された血漿アリコートの吸光度（４０５ｎｍの波長で）として、提供されている。
【００１８】
【図５Ｃ】図５Ｃは、図５Ｂに記載されている反応による溶血を表している代表的な９６穴プレートである。
【００１９】
【図６】図６は、グルコン酸亜鉛が全血においてＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物により誘発される溶血を阻害することを示しているプロットチャートである。
【００２０】
【図７】図７は、グルコン酸亜鉛が、全血において、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物に反応して生じる強力な炎症誘発性サイトカインＰＤＧＦ−ＡＡ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＲＯ、ＩＦＮα２およびＴＮＦαの産生を減らすことを示している棒グラフである。
【００２１】
【図８】図８は、グルコン酸亜鉛が全血カテコールアミンおよびヒスタミン血漿放出（これは、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物に反応して増加する）を減らすことを示している棒グラフである。
【００２２】
【図９】図９は、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物を注入されたマウスについての同時心エコー図／心電図記録の代表的な読み出しである。
【００２３】
【図１０】図１０は、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物を注入されて、グルコン酸亜鉛で処置されたマウスについての同時心エコー図／心電図記録の代表的な読み出しである。
【００２４】
【図１１】図１１は、マウス研究におけるすべてのマウス（未処理およびグルコン酸亜鉛で処理された）についての毒物注入後の生存率および生存期間を例示する、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
（発明の詳細な説明）
孔形成性毒素、すなわちポーリンは、大部分の刺胞動物毒物の古代のおよび保存された中毒性滲出液を表す。刺胞動物科のものの毒物を特徴づけることに加えて、ポーリンは、ブドウ球菌、連鎖球菌、炭疽菌、クロストリジウムおよび大腸菌をはじめとした病原性細菌によって使われる感染ツールでもある。強力な膜破壊的ポーリンは、細菌性感染における宿主ファゴサイトーシスおよび無脊椎動物の毒物注入における急速な餌細胞溶解の回避を許容する。それらは、感染および餌捕獲のための基本的な機構を構成する。
【００２６】
これらの毒素の血漿可溶性でモノマーの形態から、ヒト補体Ｃ９のオリゴマー形態と著しく同等の、モノマーの、または重合してオリゴマーの膜貫通孔を形成する移行を示す陰性染色電子顕微鏡検査および他の生化学技術によって、ポーリン構造および孔形成は特徴づけられている（Ｂｏｒｓｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９６４．  Ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｉｍｍｕｎｅ  ｈａｅｍｏｌｙｓｉｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２０２：２５１−２５２；  Ｂｈａｋｄｉ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｔｒａｎｕｍ−Ｊｅｎｓｅｎ，  Ｊ．  １９８５．  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  ｃｈａｎｎｅｌ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  ａｌｐｈａ−ｔｏｘｉｎ，  ｓｔｒｅｐｔｏｌｙｓｉｎ−Ｏ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃ５ｂ−９  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｓｙｍｐ．  ５０：２２１−２３３（前述の各々は、その全体を本願明細書に参考として援用する）ならびに細胞傷害性Ｔ細胞の細胞溶解性タンパク質であるヒトパーフォリン（Ｙｏｕｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  １９８６．  Ｔｈｅ  ｎｉｎｔｈ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ｐｅｒｆｏｒｉｎ  １）  ｆｒｏｍ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ：    ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ，  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ，  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：１８４−１９０（その全体を本願明細書に参考として援用する）。
【００２７】
ポーリン挿入は、細胞膜の透過性障壁を損ない（Ｂａｓｈｆｏｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．  １９８５．  Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ａｓｃｉｔｅｓ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｓｅｎｄａｉ  ｖｉｒｕｓ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  ８１４：２４７−２５５；  Ｂａｓｈｆｏｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．  １９８６．  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ  ｖｉｒｕｓｅｓ，  ｔｏｘｉｎｓ，  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ，  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．  Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｂｌｏｃｋｅｄ  ｂｙ  ｄｉｖａｌｅｎｔ  ｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６１：  ９３００−９３０８）、孔が一価のイオンの通過を許容すると膜の脱分極をもたらす。具体的には、内外のイオン溶液が急速に平衡になるので、Ｋ＋の流出、Ｎａ＋の流入、Ｃａ２＋の流入およびＣｌ−の流出は、一緒になって細胞の脱分極をもたらす。充分なサイズの孔および開いた時間の持続期間によってもまた、代謝中間体（例えば、ヌクレオチドおよび糖ホスフェート）のようなより大きな分子の拡散損失も、ピロトーシス（ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ）として公知の細胞機能の喪失に結果としてなることができる。最後に、大きなタンパク質（例えば、赤血球（ＲＢＣ）の場合、ヘモグロビン）およびリソソーム酵素が漏れて、溶血および組織壊死がもたらされる。
【００２８】
刺胞動物の各科の箱虫綱メンバーの毒物の体系的生化学特徴付けの研究を実施することにおいて、亜鉛がいくつかのポーリン関連病原性結果（高カリウム血症、溶血、サイトカインおよびヒスタミンの遊離、ならびにカテコールアミンサージが挙げられるがこれらに限定されない）の特異的な急速かつ有効なインヒビターであるということが見い出された。さらにまた、亜鉛は、マウスにＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（オーストラリアの箱クラゲ）毒物の致死用量を与えた後の生存時間を延長させる。
【００２９】
現在までに研究されたすべての箱虫綱動物の毒物のように、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ毒物は、極めて強力な孔形成毒素（ＰＦＴ（ポーリン、細胞溶解素または溶血素としても公知））を含む。死後の臨床症状が致死レベルの溶血を示さなかったように、これらの溶血素は致命的であるとはこれまで考えられなかった。しかしながら、臨床的に測定可能な溶血に、破局的な高カリウム血症状態が先行するということ、そして、さらに、この破局的な高カリウム血症状態が箱虫綱動物の毒物ＰＦＴによって特異的に引き起こされることが見い出された。亜鉛含有化合物（例えばグルコネート）は、溶血および溶血に先行する高カリウム血症を阻害することが見い出された。孔形成性毒素は、一部のカルシウムが、膜貫通孔を形成する重合体化に関係しているように見える一般的な種類の保存された構造的相同性を呈する。このように、一部の二価カチオン（例えば、Ｚｎ２＋およびＭｇ２＋）は、競合的にカルシウム結合部位と結合して、ポーリンタンパク質が自己アセンブリして機能的な重合体孔を形成するのを阻害することが可能である。
【００３０】
したがって、本発明の実施形態では、ポーリン曝露から生じる疾患または状態を処置することにおける亜鉛含有化合物を含む組成物の使用のための方法が提供される。
【００３１】
本発明の実施形態では、刺胞動物毒素中毒によって引き起こされる状態の治療のための方法が提供され、そこにおいて、この方法は、この状態を罹患している被験体へ亜鉛含有化合物を治療的に有効な用量で含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内投与される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、グルコン酸亜鉛である。
【００３３】
（孔形成性毒素への曝露に関連する状態および疾患）
本発明の実施形態では、孔形成性毒素関連の病気および状態は、高カリウム血症、血液量減少、低カルシウム血症、中毒性カルシウム流入、溶血、サイトカインおよびヒスタミンの放出、イルカンジ症候群、カテコールアミンサージ、細菌性敗血症、心血管虚脱、無脈性電気活動（ＰＥＡ）および刺胞動物による毒物注入（心血管虚脱、呼吸困難、炎症および／またはイルカンジ症候群を伴う）を包含し得るが、これらに限定されない。例えば、Ｃａｒｙｂｄｅｉｄａｅ科（刺胞動物門の箱虫綱のメンバー）による重篤な毒物注入はイルカンジ症候群に至ることができ、そして、それは痛み、発汗、急性不安および致命的な心臓血管への影響を含む、「カテコールアミンサージ」および「サイトカイン嵐」タイプの症状を伴う。
【００３４】
更なる状態としては、細菌感染、ウイルス感染、昆虫の刺創およびクモ形類動物咬創に対する反応、ならびに刺胞動物門の生物による刺創に対する反応を含むがそれらに限定されない、ポーリンにより媒介される細胞および組織の損傷と関連する疾患、病気または症候群が挙げられる。
【００３５】
顕著な健康重要性のＰＦＴを生じる例示的な細菌としては、ブドウ球菌属、クロストリジウム属、連鎖球菌属、バチルス属、アエロモナス属、エシェリキア属およびナイセリア属が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
顕著な健康重要性のＰＦＴを生じる例示的なウイルスとしては、レオウイルス科、パラミクソウイルス科およびオルソミクソウイルス科からのウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
顕著な健康重要性のＰＦＴを生じる刺胞動物門のメンバーとしては、箱虫綱動物（すなわち箱クラゲ）、カツオノエボシ属の種（Ｐｈｙｓａｌｉａ  ｓｐ．）、スティンギングネトル（ｓｔｉｎｇｉｎｇ  ｎｅｔｔｌｅｓ）、イソギンチャク（ａｎｅｍｏｎｅｓ）、サンゴ、アナサンゴモドキ（ｆｉｒｅ  ｃｏｒａｌ）および有針ヒドロ虫（ｓｔｉｎｇｉｎｇ  ｈｙｄｒｏｉｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
孔形成毒素関連の病気患および状態は、表１に列挙される典型的な因子によって引き起こされ得る。
【表１】
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【００３９】
孔形成毒素関連の病気および状態は、孔形成性キノコ毒素によって引き起こされることもあり得る。この類の例示的な毒素としては、ファロリシン、フラムトキシン（ｆｌａｍｍｕｔｏｘｉｎ）、骨溶解素（ｏｓｔｒｅｏｌｙｓｉｎ）およびＢｅｒｈｅｉｎｍｅｒ（Ｂｅｒｎｈｅｉｍｅｒ，  Ａ．Ｗ．，  ａｎｄ  Ｂ．  Ｒｕｄｙ．  １９８６．  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ８６４：１２３−１４１（その全体が本願明細書に参考として援用される））において確認された細胞溶解性タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
他の医学的に関連した、ポーリンにより媒介される状態またはポーリン曝露源は、当業者にとって明らかである。
【００４１】
亜鉛含有化合物
本発明の実施形態では、亜鉛含有化合物は、亜鉛にいかなる無毒性対イオンも含むことができる。例えば、対イオンは任意の糖ベースの対イオン（アセテート、マレートまたはＤ−ラクツロースに基づく製剤、グルコースに基づく製剤、ラクトースに基づく製剤、ガラクトースに基づく製剤、スクロースに基づく製剤、ペントースに基づく製剤およびフルクトースに基づく製剤が挙げられるがこれらに限定されない）であり得る。いくつかの実施形態では、対イオンは、塩化物、スルフェート、ホスフェート、アセテート、プロピオネート、ブチレート、オキサレート、マロネート、スクシネートまたは複合ポリアニオンが挙げられるがこれらに限定されないアニオンであることもできる。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、グルコン酸亜鉛であり得る。
【００４２】
いくつかの実施形態では、対イオンは、１）血漿に付加的なイオン負荷をかけることを回避する、および／または２）ポーリンによって媒介される疾患または状態に罹患している被験体の腎臓クリアランス負荷に負担をかけることを回避する、という要求を満たすその特性について選択される任意のイオンであり得る。これらの基準を満たす適用できる対イオンは、当業者にとって明らかである。
【００４３】
投与量
投与される投与量は、周知の要因（例えば、特定の薬剤の薬力学的特徴；レシピエントの年齢、健康状態および体重；症状の性質および程度；併用される処置；処置頻度；および所望される効果）によって、変化する。加えて、亜鉛含有化合物を含む組成物の有効な量は、特定の使用方法、処置される被験体、苦痛の重篤度および組成物の投与様式に、少なくとも依存する。組成物の「治療上有効な量」は、処置される被験体（ホスト）において所望の効果を達成するのに十分な、指定された化合物の量である。例えば、これは、本願明細書において開示されるような孔形成性毒素によって引き起こされる状態を防止するか、阻害するか、減らすかまたは軽減するのに必要な亜鉛含有化合物の量であり得る。
【００４４】
開示された亜鉛含有化合物またはそれを含む医薬組成物の治療上有効な用量は、当業者によって決定され得る。孔形成性毒素と関連した状態の処置または予防において有効である、化合物またはそれを含む医薬組成物の量は、当業者に周知の標準的な臨床技術によって決定され得る。加えて、インビトロであるかまたはインビボでのアッセイは、最適投与量範囲を確認するのを助けるために、必要に応じて使用され得る。当業者は、使用されるべき正確な用量を容易に決定することができる。しかしながら、適切な１日有効投与量の量は、体重１ｋｇあたり約０．００１ｍｇから体重１ｋｇあたり約２５０ｍｇまで、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇから体重１ｋｇあたり約１００ｍｇまで、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから体重１ｋｇあたり約５０ｍｇまで、または、体重１ｋｇあたり約１ｍｇから体重１ｋｇあたり約２５ｍｇに典型的にわたる。本願明細書において記載されている有効な投与量の量とは、投与される亜鉛含有化合物の総量をいう。
【００４５】
いくつかの実施形態では、開示された亜鉛含有化合物またはそれを含む医薬組成物の治療的に有効な用量は、約１ｍＭと約１０ｍＭとの間、約２ｍＭと約８ｍＭとの間、または、約４ｍＭと６ｍＭとの間の循環用量である。いくつかの実施形態では、治療的に有効な用量は、約５ｍＭの循環用量である。
【００４６】
医薬組成物
本発明の実施形態では、治療的処置が提供され、この処置は、本願明細書において開示される亜鉛含有化合物、それまたは薬学的に許容される塩または溶媒和および少なくとも一つの薬学的な薬剤担体または希釈剤を含んでいる医薬組成物または治療剤の使用を含む。化合物または組成物は、前述の疾患または状態の予防および／または処置において、ならびに本願明細書において開示されるような両方において用いられ得る。いくつかの実施形態では、キャリアは、薬学的に許容されるキャリアであり、かつ適合性である、すなわち、組成物中の他の成分に対して悪影響を有しない。キャリアは、固体または液体であることができて、単位用量製剤として（例えば、０．０５〜９５重量％の活性成分を含有し得る錠剤として）製剤化され得る。
【００４７】
いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約０．５重量パーセントから約９０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約１重量パーセントから約８５重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約５重量パーセントから約８０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約１０重量パーセントから約７５重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約１５重量パーセントから約５０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約２５重量パーセントから約３５重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。
【００４８】
いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約２重量パーセントから約２５重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約２重量パーセントから約２０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約２重量パーセントから約１０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約５重量パーセントから約１５重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、医薬組成物の約５重量パーセントから約１０重量パーセントにわたっている量で医薬組成物中に存在する。
【００４９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、溶液である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射可能である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非経口的に投与されることができる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、溶液、スプレー、ローション剤または軟膏によって、局所的に投与されることができる。
【００５３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下に投与されることができる。
【００５４】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与されることができる。
【００５５】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、経口投与されることができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、筋肉内に投与されることができる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腹腔内に投与されることができる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば経皮パッチによって経皮的に投与されることができる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、治療用の亜鉛組成物製剤は、少なくとも一つの追加の因子（キャリア、アジュバント、乳化剤、懸濁剤、甘味料、矯味矯臭剤、香料、結合剤などを包含するがこれらに限定されない）を含み得る。
【００６０】
本明細書において、「薬学的に許容されるキャリア」および「キャリア」とは、任意のタイプの、無毒性で不活性な固体または非不活性な半固体もしくは液体の充填剤、希釈液、封入材または製剤補助剤を一般にいう。薬学的に許容されるキャリアとして役立つことができる材料の若干の非限定的な例は、糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；澱粉（例えば、コーンスターチおよび馬鈴薯澱粉）；セルロースおよびその誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；粉末状のトラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオ脂および坐剤ワックス）；油（例えば、落花生油、綿実油）；サフラワー油；胡麻油；オリーブ油；トウモロコシ油；ククイナッツ油；樟脳油；および大豆油；グリコール；例えばプロピレングリコール；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張生理食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝溶液、ならびに他の無毒性で適合性の滑沢剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）であり、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、矯味矯臭剤、メントールおよび芳香剤、保存剤および抗酸化剤もまた配合者の判断によって組成物中に存在することもできる。
【００６１】
本願明細書において記載される薬学的に許容されるキャリア（例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤または希釈液）は、当業者には周知である。概して、薬学的に許容されるキャリアは、治療剤に対しては化学的に不活性であり、かつ使用条件下では有害な副作用も毒性も有さない。薬学的に許容されるキャリアは、ポリマーおよびポリマーマトリックス、ナノ粒子、微小な泡などを包含し得る。
【００６２】
治療的処置は、水または他の溶媒のような不活性希釈剤、可溶化剤および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステルならびにそれらの混合物）をさらに含むことができる。
【００６３】
投与経路および投与形態
亜鉛含有化合物またはそれを含む治療用組成物は、臨床シナリオに最適化され得る、静脈内で、筋肉内で、局所でおよび経口内が挙げられるがそれらに限定されない、様々な経路により送達され得ることができる。付加的な投与経路の経路としては、舌下、頬、非経口（例えば、皮下で、筋肉内で、動脈内で、腹腔内で、大槽内で、膀胱内で、髄腔内で、または静脈内が挙げられる）、経皮および直腸入口が挙げられる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、亜鉛含有化合物は、経皮的に投与される。概して、化合物はイオン導入法ユニットの薬電極に適用され、そして、薬電極および接地電極は処置を必要とする被験体の皮膚に適用される。それから、化合物を被験体に経皮的に送達するために電圧が印加される。薬電極に適用される典型的な化合物濃度は、約０．１ｍＭから約２５０ｍＭまで、約０．５ｍＭから約２００ｍＭまで、約１ｍＭから約１００ｍＭまで、約２．５ｍＭから約５０ｍＭまで、または、約５ｍＭから約２５ｍＭまでの範囲に及ぶ。被験体の皮膚に印加される典型的電圧は、約０．１ｍＡｍｐ／分から約８０ｍＡｍｐ／分までの範囲に及ぶ。適切な電圧量は、処置される被験体の快適さレベルを維持すると共に、孔形成性毒素への曝露に関連する症状を軽減し、かつ被験体の医学結果を改善するものである。
【００６５】
本発明の処置方法は、その必要のある被験体に与えられる方法を包含する。本明細書において「被験体」とは、任意の生きている生物、概して動物、好ましくは哺乳類およびより好ましくはヒトを言及し得る。
【００６６】
経口投与に適している製剤は、各々が所定量の活性化合物を含む別々の単位（例えば、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、シロップ剤、エリキシル剤、チューインガム、「棒キャンディ」製剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、菓子錠剤またはゲル被覆アンプル）として；粉末または顆粒として；水性または非水性の液体における溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型エマルジョンとして、提供され得る。
【００６７】
例えば、舌下投与または頬投与による、経粘膜方法に適している製剤としては、活性化合物、および概して、風味をつけた基材（例えば糖およびアカシア）またはトラガカントを含む、菓子錠剤、パッチ、錠剤など、ならびに不活性基材（例えばゼラチンおよびグリセリン）またはスクロースアカシアにおいて活性化合物を含む錠剤（ｐａｓｔｉｌｌｅ）が挙げられる。
【００６８】
非経口投与に適している製剤は、所定濃度の亜鉛組成物およびおそらく他の治療剤を含んでいる滅菌水溶液を概して含む；この溶液は好ましくは、意図されたレシピエントの血液と等張である。非経口投与に適している付加的な製剤としては、生理的に適切な共溶媒および／または複合体化剤（例えば界面活性剤およびシクロデキストリン）を含有している製剤が挙げられる。水中油型エマルジョンは、気体が豊富な流体の非経口投与用製剤に適していてもよい。この種の溶液が好ましくは静脈内投与されるにもかかわらず、それらは皮下または筋肉内での注入により投与されることもできる。
【００６９】
薬剤の核酸または送達を増強するための電気泳動的電流を伴うかまたは伴わない経皮パッチによる送達のために、経皮投与に適している製剤を調製できる。経皮投与は、「ナノニードル」を使用するものであることもできる。（Ｅｓｃｏｂａｒ−Ｃｈａ’ｖｅｚ  ＪＪ，  Ｂｏｎｉｌｌａ−Ｍａｒｔｉ’ｎｅｚ  Ｄ，  Ｖｉｌｌｅｇａｓ−Ｇｏｎｚａ’ｌｅｚ  ＭＡ，  Ｒｅｖｉｌｌａ−Ｖａ’ｚｑｕｅｚ  ＡＬ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍ（２００９），を参照のこと、その全体は本明細書中に参考として援用される）。
【００７０】
本発明の製剤は、任意の適切な方法によって、概して、亜鉛含有化合物を、必要な比率で、必要に応じて液体または微細に分割された固体担体またはその両方と一様かつ緊密に混ぜ、次いで、必要に応じて、得られた混合物を所望の形に成形することにより、調製され得る。
【００７１】
例えば、粉末または顆粒の亜鉛含有化合物および一つ以上の必要に応じた成分（例えば、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤または界面活性分散剤）を含む緊密な混合物を圧縮することによって、または、本発明の粉末状の亜鉛含有化合物の緊密な混合物を成型することによって、錠剤を調製できる。
【００７２】
上記に具体的に言及した成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤のタイプを尊重して当業者に公知の他の薬剤を含むことができる。例えば、経口投与に適した製剤は、矯味矯臭剤を含むことができ、鼻腔内投与に適した製剤は、香料を含むことができる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本願明細書において開示される反応、症状または状態を引き起こす薬剤と被験体が接触するよりも前の予防処置として、亜鉛含有化合物が使われる。いくつかの実施形態では、被験体が刺胞動物に遭遇するよりも前の予防処置として、亜鉛含有化合物が使われる。
【００７４】
適切な薬学的担体は、この分野の標準的参考図書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。
【００７５】
併用療法
本発明の実施形態では、本願明細書において開示される方法は、併用療法をさらに含み、ここで、少なくとも一つの付加的な治療剤が患者に投与される。いくつかの実施形態では、この少なくとも一つの付加的な治療剤は、感染を制御するための抗生物質（例えば、ペニシリン、テトラサイクリンおよびトブラマイシン）、Ｄ−ラクツロース、特定のタイプの毒物注入に役立つ特異的ホスホリパーゼインヒビター、ステロイドおよび鎮痛剤／抗炎症剤（例えば、イブプロフェン）からなる群から選択される。
【００７６】
本発明の治療法は、個々の治療剤として、または、治療剤の組合せでのいずれかで、薬学的薬剤との併用において使用するのに利用可能な任意の従来の方法で投与されることができる。
【００７７】
グルコン酸亜鉛を追加的な処置と組み合わせる方法が、以下によって投与されることができることはいうまでもない：（１）共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）中での化合物の組み合わせによって同時に、または（２）別々の医薬組成物において、化合物を交替に、すなわち、続き物として（ｓｅｒｉａｌｌｙ）、逐次的に（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ）、並行に、または同時に送達することによって。交替療法において、第２の、および必要に応じて第３の活性成分の投与のタイミングは、活性成分の組合せのいかなる治療相乗効果の利点の喪失もないようなものである。いくつかの実施形態では、投与（１）または（２）のいずれの方法によっても、組合せは、最も有効な結果を成し遂げるために、好ましくは投与される。いくつかの実施形態では、投与（１）または（２）のいずれの方法によっても、活性成分の各々のピークの血漿濃度を成し遂げるために、組合せは、投与される。
【００７８】
いくつかの実施形態では、Ｄ−ラクツロースは、溶血性毒素を実質的に阻害できる。特に、は、１０ｍＭのＤ−ラクツロースがある場合には、溶血の劇的な欠如が観察された。（Ｃｈｕｎｇ，  Ｊ．Ｊ．，  Ｒａｔｎａｐａｌａ，  Ｌ．Ａ．，  Ｃｏｏｋｅ，  Ｉ．Ｍ．，  Ｙａｎａｇｉｈａｒａ，  Ａ．Ａ．，  Ｔｏｘｉｃｏｎ  ３９  （２００１）  ９８１−９９０、その全体を本願明細書に参考として援用する）。いくつかの実施形態では、亜鉛含有組成物は、Ｄ−ラクツロースと組み合わせて用いられ、ここで、Ｄ−ラクツロースの存在は孔形成性毒素のさらなる抑制をもたらし、従って、罹病率および死亡率を実質的に低下させる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ポーリンにより媒介される状態に罹患した被験体に投与されるＤ−ラクツロースの量は、約１ｍＭと約５０ｍＭの間に、約２ｍＭと約２５ｍＭの間に、約５ｍＭと約１５ｍＭの間に、または、約７．５ｍＭと約１２．５ｍＭの間にある。いくつかの実施形態では、ポーリンにより媒介される状態に罹患した被験体に投与されるＤ−ラクツロースの量は、約１０ｍＭである。
【実施例】
【００８０】
本願明細書において開示される本発明の実施形態をさらに例示するために、以下の非限定的な実施例が提供される。以下の実施例において開示される技術が、本発明の実施において良く機能するとわかったアプローチを表しており、従って、その実施形態の例を構成するとみなされ得ることを当業者は理解すべきである。しかしながら、本開示を考慮して、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態において多くの変更がなされても、依然として同様または類似の結果が得られ得ることを当業者は理解すべきである。
【００８１】
実施例１  亜鉛含有化合物は、全血および単離された赤血球における刺胞動物毒物の効果を阻害する。
濃度勾配によって駆動される一価イオンの流れ、より詳細には、ナトリウム（Ｎａ＋）流入および塩化物イオン（Ｃｌ−）流出の両方が付随する、血漿へのカリウム（Ｋ＋）の流出、ならびに二価カチオン毒性流入（Ｃａ２＋）は、十分に急速な反応速度を有する箱虫綱動物毒物注入において生じ得、そしてこれは、罹患した被験体の腎臓クリアランス速度を超える速度で致死的な血漿高カリウム血症を伴う心臓毒性カルシウム流入をもたらし得る。ヒト全血のエクスビボアッセイにより、根深い高カリウム血症が、致死レベルの遊離血漿カリウム（＞１０ｍＭ）でのＣｈｒｉｏｎｅｘ  ＰＦＴ曝露から生じることが実証された。炭水化物対イオンを含んでいる亜鉛イオン化合物が、箱虫綱動物ＰＦＴ阻害の研究のために使われ、そして、亜鉛阻害効果は、刺胞動物ポーリン関連病原性プロセスについて試験された。
【化１】
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【００８２】
全血またはヒトの洗浄された赤血球（ＲＢＣ）を、Ｃａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ（ＣＡ）もしくはＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）の毒物、またはＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ（ＣＡ）もしくはＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）からの精製されたポーリンに供した。これらの細胞を、５ｍＭの最終濃度を達成する１／２０の総容積用量の１００ｍＭのグルコン酸亜鉛で同時に処理し、そして、カリウム流出の時間をイオン特異的電極で連続的に決定した。
【００８３】
図１および２は、これらの実験の結果を例示する。毒物量はＵ／ｍｌ／％で示されており、ここで、１単位は、１％のＲＢＣ溶液を３７℃で１時間にて溶解する毒物の量に等しい。図１に示すように、グルコン酸亜鉛は、２％のＲＢＣ中のＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物により誘発されるカリウム流出を完全に阻害した。図２に示すように、グルコン酸亜鉛は、２％のＲＢＣ中のＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物により誘発されるカリウム流出を完全に阻害した。図３に示すように、グルコン酸亜鉛は、全血を使用して、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物により誘発されるカリウム流出を阻害した。この結果は、孔形成性毒素への曝露によって引き起こされるイオンの流れに反対に作用することに亜鉛含有化合物が効果的なことを示す。
【００８４】
実施例２  亜鉛含有化合物は、全血および単離された赤血球において、ポーリンにより媒介される溶血を減らす。
全血またはヒトの洗浄された赤血球（ＲＢＣ）を、Ｃａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ（ＣＡ）毒物または精製された溶血素のいずれかに供した。これらの細胞を、５ｍＭの総最終濃度を達成する１／２０の総容積用量の１００ｍＭのグルコン酸亜鉛で同時に処理した。アリコートは各時点で取り出し、そして、血漿分離のためにパルス微量遠心器で回転させた。その後、各時点の血漿ヘモグロビンレベルを、分光測光法により決定した。
【００８５】
図４に示すように、グルコン酸亜鉛は、２％のＲＢＣ中のＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ毒物により誘発される溶血を実質的に阻害した。図５に示すように、グルコン酸亜鉛は、２％のＲＢＣ中のＣａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ溶血素により誘発される溶血を実質的に阻害した。特に、グルコン酸亜鉛は、１０分から４０分という溶解のＴ１／２を示し、１０倍よりも多く毒物用量（６．４Ｕ／ｍｌ）の総溶血能力を減少させた。従って、この結果は、孔形成性毒素への曝露によって引き起こされる溶血の阻害または開始遅延に亜鉛含有化合物が効果的なことを示す。
【００８６】
実施例３  亜鉛含有化合物は、全血のポーリンにより媒介されるサイトカイン反応を改善する。
この実施例では、全血を５ｍＭのグルコン酸亜鉛の存在下または非存在下のＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）毒物に供し、そして、細胞のサイトカイン産生を決定した。
【００８７】
図６に示すように、グルコン酸亜鉛処理細胞は、未処理の細胞と比較して実質的に重篤度がより低い溶血を呈した。図７に示すように、グルコン酸亜鉛は、全血試料中のＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）毒物により誘発されるサイトカイン産生を実質的に変えた。特に、強力な炎症誘発性サイトカインであるＰＤＧＦ−ＡＡ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＲＯ、ＩＦＮα２およびＴＮＦαの産生が低減された。ＣＦ毒物に曝露した血にグルコン酸亜鉛を含めた際のこれらの強力な炎症性化学誘引物質の放出の著しい減少は、イルカンジ症候群の箱虫綱動物毒物注入に関連した「サイトカイン嵐」反応の処置での亜鉛化合物の有用性を示す。
【００８８】
実施例４  亜鉛含有化合物は、全血中のポーリンにより媒介されるカテコールアミンおよびヒスタミン反応を減らす。
全血をＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）毒物に供した。次いで、毒素に曝露された細胞を５ｍＭのグルコン酸亜鉛およびカテコールアミンで同時に処理し、そして、ヒスタミン反応を決定した。
【００８９】
図８に示すように、グルコン酸亜鉛は、全血試料中のＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（ＣＦ）毒物により誘発されるカテコールアミンおよびヒスタミン反応を減らした。従って、この結果は、亜鉛含有化合物が孔形成性毒素への曝露と関連したカテコールアミンおよびヒスタミン反応を改善できることを示す。これらの結果は、ポーリン曝露によって引き起こされる状態を罹患している日桿体にグルコン酸亜鉛が投与される場合に改善された臨床結果を表す。
【００９０】
実施例５  亜鉛含有化合物は、孔形成性毒素に曝露したマウスにおける生存時間を延長させる。
マウス被験体を、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物を毒物注入するのと同時にグルコン酸亜鉛で静脈内で処置した。処置したマウスにおいて、グルコン酸亜鉛は、毒物注入の２分前に、ならびに毒物注入の１分後に、単一ボーラスとして投与した。未処置のマウスは、いかなるグルコン酸亜鉛も受けなかった。すべてのマウスに、触手を含まない非常に精製された鞭毛虫類（ｍａｓｔｉｇｏｐｈｏｒｅ）の単離物（浸透剤刺胞）の総Ｃｈｉｒｏｎｅｘ毒物が毒物注入された。次いで、グルコン酸亜鉛投与の効果を決定するためにマウスを観察した。
【００９１】
表２は、グルコン酸亜鉛を有する、および有さない、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物に対するマウス静脈内尾静脈反応を示す。表２にて図示したように、グルコン酸亜鉛の使用は、マウス被験体の生存時間を１２時間まで延長させた。グルコン酸亜鉛処置がない場合、マウスは、毒物注入後数分以内に死んだ。この結果は、亜鉛含有化合物の投与が孔形成性毒素に曝露された被験体の生存時間を改善できることを示す。
【表２】
2013505943.tif 000005
【００９２】
実施例６  亜鉛含有化合物は、孔形成性毒素に曝露されたマウスにおける心臓血管の異常を改善する。
ヒトでのＣｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ（オーストラリアの猛毒クラゲまたは箱クラゲ）の毒物注入から生じる致命的な心血管虚脱の根本となる機構を研究するために、マウスモデルを開発した。
【００９３】
プロトコル
刺胞単離
【００９４】
Ｃａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ。新たに打ち揚げられた、放卵後のＡｌａｔｉｎａ  ｍｏｓｅｒｉを、各満月の８〜１０日後に発生する、同期した放卵サイクルの間、特定の風下のオアフ（Ｈａｗａｉｉ）の浜辺に沿って早朝の時間に集めた。浜辺で触手を取り除き、５０ｍＬのチューブ中の冷却した１Ｍのシトレート中にほぼ１：４（ｖ：ｖ）ですぐに入れ、そして最高８週間にわたって４℃で攪拌して、高張性中膠組織濃縮および完全な刺胞の脱落のプロセスによってすべての触手状の刺胞を回収した。内容物を（０．５ｍｍのプランクトン篩を使用して）篩にかけて、刺胞を含まない触手から脱落していない刺胞を回収した。
【００９５】
Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉを、オーストラリアの北部クイーンズランドにおいて集めた。浜辺で触手を取り除き、−８０℃で冷凍した。凍結した触手のアリコートを５０ｍＬのチューブ中の１Ｍのシトレート中にほぼ１：２０（ｖ：ｖ）で再懸濁し、そして最高２週間にわたって４℃で攪拌して、高張性中膠組織濃縮および完全な刺胞の脱落のプロセスによってすべての触手状の刺胞を回収した。内容物を（０．５ｍｍのプランクトン篩を使用して）篩にかけて、刺胞を含まない触手から脱落していない刺胞を回収した。
【００９６】
精製された刺胞毒物の調製。篩にかけられた刺胞溶液を４００ｇで２０分間遠心分離した；ペレットを、１Ｍのシトラートに１：２０（ｖ：ｖ）で再懸濁し、そして２５０ｇで２０分間にわたってさらに２回遠心分離した。調製の各段階で血球計数器（ＫＯＶＡ、格子付きグラスチック（ｇｌａｓｓｔｉｃ；ＨＹＣＯＲ  ８７１４４））を使用して刺胞を計数した。最後の回転の後、ペレットをほぼ０℃の脱イオン水で１：０．５（ｖ：ｖ）希釈し、そして予め冷却した（氷水浴）Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｒｅｓｓ  ２０  Ｋプレッシャーセル（ＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ  Ｃａｔ＃  ＦＡ０７８  Ｓｅｒｉａｌ＃９００３４０２）中に直ちに入れた。１０〜１５分間にわたってＨＩＧＨ（合計ほぼ１２０００ｐｓｉになる）に設定して７５０にて、または、ほぼ３０滴／分の流れを用いて細胞を加圧して刺胞を破壊して、このようにして刺胞の総内容物または「全毒物」を回収した。このプロセスを２〜４回のパスにわたって急速に繰り返して、＞９５％の刺胞破裂を達成した。全ての毒物を１．５ｍＬの微量遠心管に小分けし、そして１２，０００ｇで５分間にわたって遠心分離した。上清を（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ０．４５ｍＭのＰＶＤＦフィルター膜を使用して）濾過し、そして１００ｍＬの容量に小分けし、液体窒素中で急速凍結し、次いで−８０℃で保存した。
【００９７】
タンパク質の決定。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）タンパク質濃度標準と比較してＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してＢｒａｄｆｏｒｄ（１９７６）の方法によって、試料タンパク質濃度を決定した。
【００９８】
溶血活性アッセイ。ＨｅｓｓｉｎｇｅｒおよびＬｅｎｈｏｆｆのプロトコルから改変した溶血活性アッセイ（Ｈｅｓｓｉｇｎｅｒ，Ｄ．Ａ．  ａｎｄ  Ｈ．Ｍ．Ｌｅｎｈｏｆｆ．１９７３．Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  １５９：６２９−６３８（その全体が本願明細書に参考として援用される）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（１３６．９ｍＭのＮａＣｌ、２．６８ｍＭのＫＣｌ、１０．１４ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４および１．７６ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ  ７．４）によって３回洗浄した、健常なヒトドナーから採取した２％の血液を使用して、９６穴矢状底マイクロタイタープレートにおいて実施した。洗浄を、４℃で血液の低速遠心分離（５００ｘｇ、１０分間）によって行った。希釈液として食塩水を使用して９６穴プレートの２列を通じて、全毒物の１：１の系列希釈を実施した。その後、１７０ｍＬの２％の血液溶液を２０ｍＬのサンプル穴の各々に加え、そしてプレートを３７℃で６０分間インキュベートした。次いでプレートを遠心分離し（１５００ｇにて１０分間）、そしてウェルの各々からの上清を、４０５ｎｍでＢｉｏｒａｄ  Ｕｌｔｒａｍａｒｋマイクロプレート（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）リーダーを使用して測定される吸光度の決定のために９６穴平底マイクロタイタープレートへ移した。参照サンプルは、１００％の細胞溶解参照として水を、そして０％の参照として２％の血液のみを用い、低張性細胞溶解を使用して用いられた。溶血の定量的測定が示される場合、同じ希釈された血液および同じバッチの単離された毒物を用いた同じ実験において試料をアッセイした。ＨＵ５０単位を、３７℃で１時間において１ｍＬの容積の１％の血液溶液中の赤血球の５０％を溶解するために必要なタンパク質量と定義する。正確な量は毎月のクラゲ捕獲ごとに変化したが、ＨＵ５０単位は約２０ｎｇの総毒物タンパク質を概して表した。
【００９９】
超音波心臓検査／心電図記録試験。ほぼ１７〜２８ｇの重さのＣ５７Ｂｌ／６マウスに、酸素を含むイソフルラン（３％）を２分間用いて麻酔し、そして、内蔵型心電図記録（ＥＣＧ）電極において外科テープにより足を固定して、サーモスタットによって調節された加熱プラットフォーム上に背面側で配置された。体温は３７℃に調節され、そしてイソフルラン（１％）および酸素の流れを、ノーズコーンを介して維持し、そして連続して鎮静された状態であることを確実にするために手順の全体にわたってモニタリングした。左上胴部の毛を除去し、そして、３０ＭＨｚのトランスデューサをＶｅｖｏ  ７７０（Ｖｉｓｕａｌｓｏｎｉｃｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いた経胸腔的の超音波心臓検査（ＥＣＨＯ）のために左の半胸郭に配置した。ＥＣＨＯ  Ｍモードカーソルを大動脈根部上に配置するときに過剰な圧力をかけないように注意し、次いで、トランスデューサを時計回りに３０〜４５°回転させることによって、中央左心室性（ＬＶ）の図を索のレベルに配置した。この図からの画像を用いて、ＬＶの微小な短縮および大動脈収縮を測定した。マウス尾静脈カテーテル（ＳＡＩ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＭＴＶ−０１）を尾静脈に挿入し、そして、最高５回の注入前の読み取りを行って、安静ＥＣＧおよびＬＶ駆出率の基礎を確実にした。亜鉛および／または総毒物の注入容積を動物の体重から算出し、そして２００のμＬ／分の流れで投与し、続いて食塩水（１５０ｍＭのＮａＣｌ）を投与してカテーテルを洗浄し、コントロール容積を維持した。高分解能ＭモードＥＣＨＯおよびＥＣＧデータを、１００ｍｍ／５秒掃引で同時に記録し、そしてデジタル形式で保存した。手順の最初の９０分間の間に、すべての臨床徴候および著しく変わった挙動を密接にモニタニングして記録した。ＥＫＧ活性および呼吸の喪失によって決定した死亡の６０秒間以内、または、ＣＯ２による安楽死の後、心臓血液を２２１／２ゲージで慎重に採血して、添加物を含まない無菌シリンジへ入れ、そして微量遠心管へ移した。全血試料を直ちに遠心分離（６，０００ｇ、２分間、室温）して血漿を分離した。ヘモグロビンおよび電解質レベルを決定するためにさらにアッセイするまで、血漿を−８０℃で保存した。
【０１００】
ヘモグロビンの定量。４０５ｎｍでの吸光度を、モル吸光係数ε２７６０６９およびモル質量（６４，５００グラム／モル）でベールの法則を用いた濃度に変えることによって、上記の通りにプレートリーダー法を使用して、血漿ヘモグロビン濃度を決定した。
【０１０１】
血漿カリウム定量。確認された塩化カリウム（ＫＣｌ）標準を使用して１０ｐｐｍ（０．２６ｍＭ）から１０００ｐｐｍ（２６ｍＭ）まで参照標準曲線を利用し、二重接合イオン特異的電極（Ｄｏｕｂｌｅ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ  ００３Ｎを備えるＥＬＩＴ  ８０３１カリウム電極、Ｎｉｃｏ  ２０００  ＬＴＤ  Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ，ＵＫ）および４チャンネルＩｏｎ  Ａｎａｌｙｓｅｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン７．１．４４ｓａ、２００６）を使用して血漿の３連の系列希釈物において血漿カリウム濃度を決定した。
【０１０２】
データ解析。中心傾向の点推定値および対応する９５％の信頼区間によってＬＶ率短縮を特徴づけた。多変量の対数正規プロットを用いて、根本となる正常性を評価した。適切な場合、正規化変換をデータに適用した。実験群と対照群との間の平均の差の仮説検定を、最小二乗平均の方法によって行った。統計的検定を、逐次Ｈｏｃｈｂｅｒｇ−Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法によって多様性について調整した。０．０５より大きなｐ値を、統計的に有意であるとみなした。予備データに基づいて、ｎ＝６０動物（群当たり５匹）の試料は、有意レベル＝０．０５（多様性を修正した）で１０．１１の平均差を検出する８０％の検出力を有し、そして、５．０以下の平均の標準偏差の差が得られた。すべての統計解析を、ＳＡＳソフトウェアパッケージ（Ｃａｒｙ、ＮＣ）を使用して実行した。生存データを、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）版ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア５．００版（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）を使用して分析した。カイ二乗検定（２群だけを考慮する場合にはカイ二乗検定の代わりにＦｉｓｈｅｒの精度検定を使用した）およびＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ統計（２群だけを考慮する場合にはＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定の代わりにＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用した）を使用して、群間の有意差（ｐ＜０．０５）を決定した。生存曲線をＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法に従って解析し、そして、曲線の間での違いについて、ｐ値をログランク検定により算出した。０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であると受け入れた。
【０１０３】
結果
連続した注射前および注射後での記録を、左心室および足記録されたＥＫＧのＥＣＨＯによって、３０分間実行した。研究過程で、２００匹を超えるマウスを、幅広い範囲の用量について試験した。図９は、用量および生存時間に従って配置された、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ毒物を注入したマウスからの代表的なデータを示す。より高用量（３０００Ｕおよびそれより上）では、総毒物注入は伝導系異常と共に急性心室死をもたらすことが、毒物注入されたマウスにおいて観察された。この種の反応は、合計３０００Ｕ、すなわちヒトの致死刺創（３Ｍ接触）にほぼ等しい用量が注射された図９（マウス２０１０＿３＿２５＿０２）に図示される。２分でのＱＲＳ広域化には、有効な左心室収縮がないことが続く。この無脈性電気活動（ＰＥＡ）は、ＥＫＧ異常に相伴い発生した。死は、８分において発生した。
【０１０４】
グルコン酸亜鉛が予め注入されたマウスもまた心室収縮の深い減少を示したが、グルコン酸亜鉛を注入されたマウスのうち３匹において無脈性電気活動（ＰＥＡ）の期間の後に反跳が頻繁に観察された。例えば、グルコン酸亜鉛を注入したマウスからの代表的なデータを示している図１０（マウス２０１０＿６＿０９＿２）は、心室収縮の停止が１０．５分において終わったが、１１分において復活したことを示す。ＥＫＧも、３０秒以内に復活した。
【０１０５】
図１１は、未処置のマウスおよびグルコン酸亜鉛処置マウスについての毒物注入後の生存率および生存期間の持続期間のまとめである。これらの結果は、グルコン酸亜鉛処置マウスが、未処置のマウスと比較して、より高い生存率ならびにより長い生存持続期間を経験したことを示す。
【０１０６】
表３は、研究の典型的なマウス（未処置およびグルコン酸亜鉛処置の両方）についての生存時間、血漿ヘモグロビンレベルおよびカリウムレベルを例示する。
【表３】
2013505943.tif 000006
【０１０７】
結論
毒物が注入されたマウスのこれらの研究は、高カリウム血症と整合したＥＫＧ所見を有するＰＥＡの顕著な期間を示した。カリウムの定量を伴う血漿ヘモグロビンは、破局的な高カリウム血症状態が臨床的に測定可能な溶血に先行することを証明する。精製された溶血素が注入されたマウスのＥＣＨＯは、ここで示される総粗製毒物への同一の反応を示す。従って、これらの結果は、これらの効果が箱虫綱動物ＰＦＴに特異的に寄与し得ることを示す。
【０１０８】
この結果はまた、箱虫綱動物ＰＦＴにさらされる亜鉛処置動物が有意に改善された生存を示し、より長い期間にわたって通常のＥＫＧ伝導配列を維持したことを示す。他の改善は、回復能力を含んだ。Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物注入後の生存時間は、グルコン酸亜鉛の静脈内投与によって、有意に長くなった（Ｐ＜０．０００１）。これらの著しい所見は、類似のタイプのＰＦＴに対してと同様に、Ｃｈｉｒｏｎｅｘ  ｆｌｅｃｋｅｒｉ毒物注入に曝露された被験体におけるグルコン酸亜鉛の迅速な投与の有用性を示す。
【０１０９】
実施例７  亜鉛含有化合物は、孔形成性毒素に曝露された仔ブタの心臓血管の異常を改善する。
インビボでの孔形成性毒素の生理的効果を決定するために箱虫綱動物ポーリンに曝露される仔ブタに対して実験を行う。この研究を、直接の血圧測定、血液試料採取、ならびに溶液およびミクロスフェアの投与のための動脈線および静脈線にカテーテルが挿入され、尿採取のために膀胱カニューレが設置された１０匹の麻酔下の８ｋｇのブタにおいて、心臓血管の血行力学、肺機能、器官潅流および精製されたポーリンの全身クリアランスを特徴づけるために行う。局所炎症から臨床イルカンジ症候群にわたる範囲に力価測定された用量で、精製されたポーリンを仔ブタに注入する。生理的反応は、ポーリン注入の前および後で測定される。これらは、体温、血圧、心拍数、心拍出量および心電図（ＥＫＧ）、肺圧力容積ループ、血液ガスおよび腎臓排出を含む。組織微小循環性潅流ならびに低酸素血症指数および内分泌反応指数もまた評価される。
【０１１０】
プロトコル
毒物調製。粗製毒物を、新たに捕獲されたハワイの箱クラゲ（Ｃａｒｙｂｄｅａ  ａｌａｔａ）から単離する。精製された毒物ポーリンを、以前に記載された（Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００１．Ｔｏｘｉｃｏｎ  ３９：９８１−９９０（その全体が本願明細書に参考として援用される）ように多次元高圧クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および他の生化学分離技術を用いて、粗製毒物から分離する。新たに採取されたＰＢＭＣまたは血小板に富む血漿から調製される血小板に対する粗製のポーリンまたは精製されたポーリンの影響を調べる。具体的には、用量反応時間経過インキュベーションを、終点遠心分離により単離されて急速凍結された血漿を用いて実行する。次いで、凍結された無細胞血漿試料を、サイトカインパネルアッセイまたは電気化学的検出ベースのカテコールアミンアッセイを使用して試験する。
【０１１１】
インビトロＰＢＭＣおよび血小板アッセイ。記載されているように、ＰＤＧＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦおよびＴＧＦ−βを含む炎症性サイトカインを、以前に記載された（Ｂｊｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００９．  Ｖｅｔ  Ｉｍｍｕｎｏ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ  １３０：５３−５８（その全体が本願明細書に参考として援用される））とおりに合成されるブタの抗体を使用して血漿において測定するか、または、市販のもの（＞７５％より高いブタ交差反応性を有することが確認されたヒトの）を入手する。Ｅｘｐｏｎｅｎｔソフトウェア（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｐａｉｓｌｅｙ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を使用するＬｕｍｉｎｅｘ−２００ＴＭ装置のＬｕｍｉｎｅｘ  Ｉｎｃ（Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）によって供給される多重サイトカイン試薬とともに、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘアレイリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）プラットフォーム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）による多重ミクロスフェアビーズベースのイムノアッセイ（ＭＢＩＡ）を利用して、アッセイを行う。
【０１１２】
仔ブタ研究
【０１１３】
１０匹の８ｋｇのブタの心臓に、カテーテルを挿入する。一旦カテーテルが挿入されると、ブタに、０．１ｍｌ／ｋｇ／分で通常生理食塩水のバックグランド注入液をｉ．ｖ．注入する。ベースラインで決定されるように、適切な水和および中心静脈圧を維持するために実験の全体にわたって容積注入を継続する。血圧および標準血行力学パラメータを連続的にモニタリングし、そして実験の全体にわたって尿を集める。カテーテル処置の後の安定化の最初の６０分間〜９０分間の期間の後、ブタを、ベースラインとして定義される２０分の間にわたって評価する。最高６０分間まで、さらに４つの期間で用量を増加させながらポーリンをゆっくり注入するかまたは定常状態を達成する。当業者に容易に知られている慣用的な新生児静脈内投与プロトコルに従って、亜鉛を投与する。
【０１１４】
血行力学および呼吸の測定。血行力学パラメータを実験の全体にわたってモニタリングする。これらは、心拍数、血圧、中心静脈圧、スワン−ガンツカテーテルを経た肺楔入圧、熱希釈法による心拍出量、尿排出、酸素飽和、動脈血ガスおよび呼吸数を含む。全身血管抵抗、肺血管抵抗、ならびに酸素の送達および消費量を、これらの直接測定値から算出する。動的な肺圧力容積曲線を、各期間について記録する。
【０１１５】
微小循環性血流シフトの評価。脳、心臓、腎臓、肝臓、胃、筋肉および皮膚を含む個々の器官に対する血流量を算出して、体の中での流れの再分布を検討するために比較する。器官血流を決定するために、異なって着色したミクロスフェアを、使用する合計５色についてのための期間の各々で、全身循環に注入する。実験の終わりで採取した器官を、ミクロスフェア配布について分析する。
【０１１６】
血液試料採取。血液（１サンプルにつきほぼ７．０〜８．０ｍＬ）を、凝固評価、カテコールアミン、炎症誘発性サイトカインおよび抗炎症サイトカイン、カテコールアミン、バソプレシン、コルチゾール、副腎皮質刺激ホルモン（ａｄｒｅｎａｌ  ｃｏｒｔｉｃｏｐｔｒｏｐｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅ；ＡＣＴＨ）、アルドステロン、ラクテートおよび電解質のために試料採取する。血漿を分離し、そして、赤血球を、血液量および酸素付加を維持するのを助けるために次の試料採集時に、等しい量の食塩水に入れて戻す。ホルモン分析のための血漿を、ラジオイムノアッセイまたはＥＬＩＳＡで測定する。動脈血液ガスおよび混合された静脈および動脈の酸素飽和を、凝固研究、ホルモン分析、容量オスモル濃度および電解質分析のための血液試料に加えて、各測定セッションで決定する。
【０１１７】
尿試料採取。尿を、尿容量の重量測定および尿流量の算出のために、予め重量測定した管に連続的に集める。尿試料を、容量オスモル濃度、クレアチニン（ＧＦＲの評価のための）および電解質について分析する。
【０１１８】
組織試料採取。安楽死の後、すべての生体器官からの組織を、実験終了後に収集する。以下を含む剖検試料を得て収集される：心臓、脳、肝臓、腎臓、脾臓、腸、肺、皮膚および大腿の筋肉。
【０１１９】
データ分析。各ポーリン投与後の心臓血管、肺および内分泌の機能の評価を、経時的に測定を繰り返して、ＡＮＯＶＡにより、ベースラインでのものと比較する。さらに、サイトカインレベルとカテコールアミンレベルとの間の関係、ならびに呼吸循環機能指数を多重回帰解析により評価する。すべての統計的検定について、ｐ値＜０．０５は、統計的に有意であるとみなされる。
【０１２０】
生存を有意に改善して、箱虫綱動物ポーリンへの曝露に伴う症状の重篤度を軽減するために、グルコン酸亜鉛の投与を観察する。
【０１２１】
実施例８  箱虫綱動物形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための亜鉛含有化合物の使用（静脈内投与）。
この実施例において、箱虫綱動物ポーリンを毒物注入された後に、ヒト被験者をグルコン酸亜鉛の静脈内注射で処理する。ヒト被験者を、数日間にわたって１日当たり２．５〜４ｍｇのグルコン酸亜鉛の静脈内注入によって迅速に処置する。試料を採取して、血清中のカリウム、サイトカイン、ヒスタミンおよびカテコールアミンのレベルをモニタリングする。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、致命的な結果の確率を減少させるのが観察される。
【０１２２】
実施例９  箱虫綱動物孔形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための、亜鉛含有化合物の使用（皮下ボーラス、続いて連続ＩＶ投与）
この実施例においては、箱虫綱動物ポーリンが毒物注入された後に、ヒト被験者を、皮下手段および静脈内手段によって、グルコン酸亜鉛で処置する。ヒト被験者に、最初にグルコン酸亜鉛ボーラス（注入に適切な５ｍＬの１００ｍＭの溶液）で、続いて確立した速度の流体注入で５ｍＭのグルコン酸亜鉛を有する連続静脈内（ＩＶ）点滴で、迅速に皮下注入する。血清中のカリウム、サイトカイン、ヒスタミンおよびカテコールアミンのレベルをモニタリングするために、サンプルを採取する。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、致命的な結果の確率を減少させるのが観察される。
実施例１０  箱虫綱動物孔形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための、亜鉛含有化合物の使用（経皮投与）
この実施例では、箱虫綱動物ポーリンが毒物注入された後に、ヒト被験者を経皮パッチを経てグルコン酸亜鉛で処置する。ポーリン曝露に罹患したヒト被験者に、４０ｍＡｍｐ／分でグルコン酸亜鉛の５ｍＭ溶液を送達するためのイオン導入ユニットセットを使用して、経皮パッチによってグルコン酸亜鉛を迅速に投与する。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、致命的な結果の確率を減少させるのが観察される。
実施例１１  細菌孔形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための、亜鉛含有化合物の使用（静脈内投与）
【０１２３】
この実施例において、細菌性ポーリンに曝露された後に、ヒト被験者をグルコン酸亜鉛で静脈内処置する。ヒト被験者を、数日間にわたって１日当たり２．５〜４ｍｇのグルコン酸亜鉛の静脈内注入で処置する。血清中のカリウム、サイトカイン、ヒスタミンおよびカテコールアミンのレベルをモニタリングするために試料を採取する。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、被験者の健康を増進するのが観察される。
【０１２４】
実施例１２  ウイルス孔形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための、亜鉛含有化合物の使用（静脈内投与）
この実施例において、ウイルス性ポーリンに曝露された後に、ヒト被験者をグルコン酸亜鉛で静脈内処置する。ヒト被験者を、数日間にわたって１日当たり２．５〜４ｍｇのグルコン酸亜鉛の静脈内注入で処置する。血清中のカリウム、サイトカイン、ヒスタミンおよびカテコールアミンのレベルをモニタリングするために試料を採取する。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、被験者の健康を増進するのが観察される。
【０１２５】
実施例１３  キノコ孔形成性毒素に曝露されたヒト被験者を処置するための亜鉛含有化合物の使用（静脈内投与）
この実施例において、キノコ孔形成性毒素に曝露された後に、被験者をグルコン酸亜鉛の静脈内注入で処置する。ヒト被験者を、数日間にわたって１日当たり２．５〜４ｍｇのグルコン酸亜鉛の静脈内注入で処置する。血清中のカリウム、サイトカイン、ヒスタミンおよびカテコールアミンのレベルをモニタリングするために試料を採取する。グルコン酸亜鉛の投与は、毒物中毒に伴う生理的症状の重篤度を軽減して、被験者の健康を増進するのが観察される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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