(57)【要約】  本発明は、創傷の治癒段階を判断するための装置及び方法を提供する。一部の態様では、本発明は、表面と、所望のバイオマーカーに特異的な少なくとも１つの薬剤とを含む創傷診断装置を提供する。別の態様において、本発明は、創傷治癒段階を判断する方法を提供する。さらに他の態様において、本発明は、開示される装置を使用して創傷治癒段階を判断する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のバイオマーカーに特異的な第１の薬剤と第２のバイオマーカーに特異的な第２の薬剤とを含む創傷診断装置において、前記第１のバイオマーカーが好中球分泌因子であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞分泌因子であるか、又は前記第１及び第２のバイオマーカーがＭ１若しくはＭ２マクロファージから分泌されることを特徴とする装置。
【請求項２】
請求項１に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤で被覆された固体表面を含むものとしてさらに定義されることを特徴とする装置。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の装置において、前記固体表面が、好ましくは吸着ろ紙若しくは比色紙を含む吸着表面、又はマイクロアレイであることを特徴とする装置。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか１項に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が共有結合によって前記固体表面に連結することを特徴とする装置。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載の装置において、創傷ドレッシング、好ましくはポリウレタンフィルムドレッシングであることを特徴とする装置。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が、アプタマー、リガンド、抗体、又はペプチド配列であることを特徴とする装置。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが塩基性線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ−２）であることを特徴とする装置。
【請求項８】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーが好中球エラスターゼ（ｎエラスターゼ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする装置。
【請求項９】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする装置。
【請求項１０】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがＴＮＦ−αであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする装置。
【請求項１１】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする装置。
【請求項１２】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、ｎエラスターゼ、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする装置。
【請求項１３】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項１４】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがＴＮＦ−αであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項１５】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項１６】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項１７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする装置。
【請求項１８】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする装置。
【請求項１９】
請求項１乃至１８の何れか１項に記載の装置において、少なくとも、第３のバイオマーカーに特異的な第３の薬剤をさらに含むことを特徴とする装置。
【請求項２０】
ａ）創傷からの試料中における第１のバイオマーカーの量及び第２のバイオマーカーの量を検出するステップと、
ｂ）前記第１のバイオマーカーの量と前記第２のバイオマーカーの量とを比較するステップと
を含む、創傷治癒段階を判断する方法において、
前記第１のバイオマーカーが好中球分泌因子であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞分泌因子であるか、又は前記第１及び第２のバイオマーカーがＭ１若しくはＭ２マクロファージから分泌され、及び前記第１のバイオマーカーの量と前記第２のバイオマーカーの量との間の関係が前記創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーが好中球細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭ１マクロファージ細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＭ２マクロファージ細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２０又は２１に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示され、及び前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２０乃至２３の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少なくとも２倍多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示され、及び前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量の半分以下である場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより多く、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより少ないことが、炎症期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより少なく、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより多いことが、増殖期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが塩基性線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ−２）であることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーが好中球エラスターゼ（ｎエラスターゼ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＴＮＦ−αであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、ｎエラスターゼ、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４であることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＴＮＦ−αであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項２０乃至２４の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項２０乃至３８の何れか１項に記載の方法において、請求項１乃至１９の何れか１項に記載の装置により実施されるものとしてさらに定義されることを特徴とする方法。
【請求項４０】
第１のバイオマーカーに特異的な第１の薬剤と第２のバイオマーカーに特異的な第２の薬剤とを含む創傷診断装置において、前記第１のバイオマーカーが好中球分泌因子であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞分泌因子であるか、又は前記第１及び第２のバイオマーカーがＭ１若しくはＭ２マクロファージから分泌されることを特徴とする装置。
【請求項４１】
請求項４０に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤で被覆された固体表面を含むものとしてさらに定義されることを特徴とする装置。
【請求項４２】
請求項４０に記載の装置において、前記固体表面が吸着表面であることを特徴とする装置。
【請求項４３】
請求項４２に記載の装置において、前記吸着表面が吸着ろ紙を含むことを特徴とする装置。
【請求項４４】
請求項４２に記載の装置において、前記吸着表面が比色紙を含むことを特徴とする装置。
【請求項４５】
請求項４１に記載の装置において、前記固体表面がマイクロアレイを含むことを特徴とする装置。
【請求項４６】
請求項４１に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が共有結合によって前記固体表面に連結することを特徴とする装置。
【請求項４７】
請求項４０に記載の装置において、創傷ドレッシングであることを特徴とする装置。
【請求項４８】
請求項４７に記載の装置において、前記創傷ドレッシングがポリウレタンフィルムドレッシングを含むことを特徴とする装置。
【請求項４９】
請求項４１に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が、アプタマー、リガンド、抗体、又はペプチド配列であることを特徴とする装置。
【請求項５０】
請求項４０に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが塩基性線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ−２）であることを特徴とする装置。
【請求項５１】
請求項４０に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーが好中球エラスターゼ（ｎエラスターゼ）であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする装置。
【請求項５２】
請求項４０に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４又はＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項５３】
請求項４０に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする装置。
【請求項５４】
請求項４０に記載の装置において、少なくとも、第３のバイオマーカーに特異的な第３の薬剤をさらに含むことを特徴とする装置。
【請求項５５】
ａ）創傷からの試料中における第１のバイオマーカーの量及び第２のバイオマーカーの量を検出するステップと、
ｂ）前記第１のバイオマーカーの量と前記第２のバイオマーカーの量とを比較するステップと
を含む、創傷治癒段階を判断する方法において、
前記第１のバイオマーカーが好中球分泌因子であり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞分泌因子であるか、又は前記第１及び第２のバイオマーカーがＭ１若しくはＭ２マクロファージから分泌され、及び前記第１のバイオマーカーの量と前記第２のバイオマーカーの量との間の関係が前記創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項５６】
請求項５５に記載の方法において、前記試料が創傷液であることを特徴とする方法。
【請求項５７】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーが好中球細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項５８】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項５９】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項６０】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＦＧＦ−２であることを特徴とする方法。
【請求項６１】
請求項６０に記載の方法において、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量より少なくとも２倍多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項６２】
請求項６０に記載の方法において、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量の半分以下である場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項６３】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする方法。
【請求項６４】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭ１マクロファージ細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＭ２マクロファージ細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより多く、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより少ないことが、炎症期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項６６】
請求項６４に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより少なく、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより多いことが、増殖期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項６７】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４又はＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項６８】
請求項６７に記載の方法において、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍未満である場合、前記創傷が炎症期の創傷治癒段階にあることを特徴とする方法。
【請求項６９】
請求項６７に記載の方法において、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍以上である場合、前記創傷が増殖期の創傷治癒段階にあることを特徴とする方法。
【請求項７０】
請求項５５に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする方法。
【請求項７１】
請求項７０に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項７２】
請求項７０に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項７３】
請求項５５に記載の方法において、請求項４０に記載の装置により実施されるものとしてさらに定義されることを特徴とする方法。
【請求項７４】
第１のバイオマーカーに特異的な第１の薬剤と第２のバイオマーカーに特異的な第２の薬剤とを有する表面を含む創傷診断装置。
【請求項７５】
請求項７４に記載の装置において、前記表面が、前記第１及び第２の薬剤で被覆された固体表面であることを特徴とする装置。
【請求項７６】
請求項７４又は７５に記載の装置において、前記固体表面が吸着表面であることを特徴とする装置。
【請求項７７】
請求項７４乃至７６の何れか１項に記載の装置において、前記吸着表面が吸着ろ紙を含むことを特徴とする装置。
【請求項７８】
請求項７４乃至７６の何れか１項に記載の装置において、前記吸着表面が比色紙を含むことを特徴とする装置。
【請求項７９】
請求項７４乃至７６の何れか１項に記載の装置において、創傷ドレッシングであることを特徴とする装置。
【請求項８０】
請求項７９に記載の装置において、前記創傷ドレッシングがポリウレタンフィルムドレッシングを含むことを特徴とする装置。
【請求項８１】
請求項７５に記載の装置において、前記固体表面がマイクロアレイを含むことを特徴とする装置。
【請求項８２】
請求項７５に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が共有結合によって前記固体表面に連結することを特徴とする装置。
【請求項８３】
請求項７４乃至８２の何れか１項に記載の装置において、前記第１及び第２の薬剤が、アプタマー、リガンド、抗体、又はペプチド配列であることを特徴とする装置。
【請求項８４】
請求項７４乃至８３の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＦＧＦ−２であることを特徴とする装置。
【請求項８５】
請求項７４乃至８３の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする装置。
【請求項８６】
請求項７４乃至８３の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４又はＣＤ２０６であることを特徴とする装置。
【請求項８７】
請求項７４乃至８３の何れか１項に記載の装置において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする装置。
【請求項８８】
請求項７４乃至８７の何れか１項に記載の装置において、少なくとも、第３のバイオマーカーに特異的な第３の薬剤をさらに含むことを特徴とする装置。
【請求項８９】
ａ）創傷からの試料中における第１のバイオマーカーの量及び第２のバイオマーカーの量を検出するステップと、
ｂ）前記第１のバイオマーカーの量と前記第２のバイオマーカーの量とを比較するステップ
を含む、創傷治癒段階を判断する方法において、前記第１のバイオマーカーの前記第２のバイオマーカーに対する相対量が前記創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項９０】
請求項８９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＦＧＦ−２であることを特徴とする方法。
【請求項９１】
請求項８９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする方法。
【請求項９２】
請求項８９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４又はＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項９３】
請求項８９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする方法。
【請求項９４】
請求項８９乃至９３の何れか１項に記載の方法において、少なくとも、第３のバイオマーカーに特異的な第３の薬剤をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項９５】
請求項８９乃至９４の何れか１項に記載の方法において、前記試料が創傷液であることを特徴とする方法。
【請求項９６】
請求項８９乃至９５の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーが好中球細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項９７】
請求項８９乃至９６の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項９８】
請求項８９乃至９６の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項９９】
請求項８９乃至９６の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭＰＯであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＦＧＦ−２であることを特徴とする方法。
【請求項１００】
請求項９９に記載の方法において、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量より少なくとも２倍多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項１０１】
請求項９９に記載の方法において、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量の半分以下である場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項１０２】
請求項８９乃至９６の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがｎエラスターゼであり、且つ前記第２のバイオマーカーが線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）であることを特徴とする方法。
【請求項１０３】
請求項８９乃至１０２の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがＭ１マクロファージ細胞から分泌されたものであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＭ２マクロファージ細胞から分泌されたものであることを特徴とする方法。
【請求項１０４】
請求項８９乃至１０２の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより多く、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより少ないことが、炎症期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項１０５】
請求項８９乃至１０２の何れか１項に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量がより少なく、且つ前記第２のバイオマーカーの量がより多いことが、増殖期の創傷治癒段階を指示することを特徴とする方法。
【請求項１０６】
請求項１０３に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰであり、且つ前記第２のバイオマーカーがＣＤ２０４又はＣＤ２０６であることを特徴とする方法。
【請求項１０７】
請求項１０６に記載の方法において、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍未満である場合、前記創傷が炎症期の創傷治癒段階にあることを特徴とする方法。
【請求項１０８】
請求項１０６に記載の方法において、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍以上である場合、前記創傷が増殖期の創傷治癒段階にあることを特徴とする方法。
【請求項１０９】
請求項８９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーがプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ前記第２のバイオマーカーがフィブロネクチンであることを特徴とする方法。
【請求項１１０】
請求項１０９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項１１１】
請求項１０９に記載の方法において、前記第１のバイオマーカーの量が前記第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示されることを特徴とする方法。
【請求項１１２】
請求項８９乃至１１１の何れか１項に記載の方法において、請求項７４乃至８８の何れか１項に記載の装置により実施されるものとしてさらに定義されることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して生物学の分野に関する。より具体的には、本発明は、バイオマーカーを用いた創傷の診断及び治療用の装置及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な原因（例えば、静脈性下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍又は褥瘡性潰瘍）による急性及び慢性創傷を治療する病院及び自宅の医療環境では、創傷が治癒しつつあるか、又は治癒が遅延しているかを医療従事者が即座に判断することを可能にする診断ツールは、多大な有益性を有し得る。現在のところ、創傷治癒段階を判断するための高速で簡便な診断装置又は診断方法は市販されていない。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、患者にさらなる損傷を引き起こすことなく、創傷が正常な治癒経過の範囲内にあるかどうかを判断するための、又は正常な治癒経過が止まった段階を特定するための装置及び方法を提供する。
【０００４】
一部の態様では、本発明は、表面と、所望のバイオマーカーに特異的な少なくとも１つの薬剤とを含む創傷診断装置を提供する。一部の実施形態では、本装置は、少なくとも、第１のバイオマーカーに特異的な第１の薬剤と、少なくとも（ａ  ｌｅａｓｔ）、第２のバイオマーカーに特異的な第２の薬剤とを有する固体表面を含む。一部の実施形態では、本装置は、少なくとも、第３のバイオマーカーに特異的な第３の薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、本装置は、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、又はそれ以上のバイオマーカーに特異的な１、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、又はそれ以上の薬剤を含む。
【０００５】
表面は、限定はされないが創傷ドレッシング又はマイクロアレイを含む、所望の薬剤が結合し得る任意の表面であってよい。一部の実施形態では、表面は吸着表面である。一部の実施形態では、吸着表面はろ紙又は比色紙を含む。一部の実施形態では、本装置は創傷ドレッシングである。創傷ドレッシングは、任意の適切な種類の創傷ドレッシングであってよい。一部の実施形態では、創傷ドレッシングはポリウレタンフィルムドレッシングを含む。一部の実施形態では、表面はマイクロアレイである。
【０００６】
薬剤は、所望のバイオマーカーに特異的な任意の適切な薬剤であってよい。一部の実施形態では、薬剤は、アプタマー、リガンド、抗体、又はペプチド配列であってもよい。一部の実施形態では、薬剤は、任意に組み合わされたアプタマー、リガンド、抗体、及び／又はペプチド配列の組み合わせであってもよい。
【０００７】
薬剤は、任意の適切な方法で表面に付着され得る。一部の実施形態では、本装置は、バイオマーカーに結合する薬剤で被覆されるか、又はそのような薬剤が結合される。一部の実施形態では、薬剤は創傷ドレッシングに化学的に（イオン的若しくは共有結合的に）又は物理的に結合され得る。一部の実施形態では、薬剤は、化学的グラフト、高分子バインダー、二官能性化学結合（例えば、シラン又はプルロニック）、親水性結合若しくは電気化学的結合、又はプラズマ被覆により結合される。他の実施形態では、本装置は薬剤で被覆され得る。一部の実施形態では、薬剤は共有結合により固体表面と連結される。
【０００８】
バイオマーカーは、任意の分泌バイオマーカーであってよい。一部の実施形態では、バイオマーカーは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、好中球エラスターゼ（ｎエラスターゼ）、ヒト好中球リポリン（ｌｉｐｏｌｉｎ）（ＨＮＬ）、ラクトフェリン、リゾチーム、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ヒト好中球エラスターゼ抗好中球細胞質抗体（ＨＮＥ  ＡＮＣＡ）、ＭＭＰ９、プロテイナーゼ３、セルピンペプチダーゼ阻害剤クラスＢ及びＤ、活性酸素種（ＲＯＳ）、又は活性窒素種（ＲＮＳ）、又はそれらの任意の組み合わせであってもよい。一部の実施形態では、バイオマーカーは、塩基性線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１）、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ（５Ｂ５）、インスリン成長因子１（ＩＧＦ−１）、テトラネクチン、コラーゲンα１鎖、２鎖、及び３鎖、ＳＥＲＰＩＮＡ１、又は補体成分（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）又はそれらの任意の組み合わせであってもよい。他の実施形態では、バイオマーカーは、カルグラニュリンＡ／Ｂ、シスタチンＡ、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質、ＣＤ１６３、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＡＭ−３Ｋ、ＣＳＦ−１Ｒ（コロニー刺激因子１受容体）、マクロファージの特異的マーカー、ＥＭＲ１（上皮成長因子モジュールを含むムチン様受容体１）、Ｆ４／８０、プロコラーゲン、コラーゲン、又はフィブロネクチン又はそれらの任意の組み合わせであってもよい。これらのバイオマーカーの任意のものを、単独で、又は組み合わせて使用することができる。
【０００９】
一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはＭＰＯであり、且つ第２のバイオマーカーはＦＧＦ−２である。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはｎエラスターゼであり、且つ第２のバイオマーカーはＦＧＦ−１０である。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はｎエラスターゼであり、且つ第２のバイオマーカーはＣＤ２０４又はＣＤ２０６である。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ第２のバイオマーカーはフィブロネクチンである。
【００１０】
別の態様において、本発明は、創傷治癒段階を判断する方法を提供し、この方法は、ａ）創傷からの試料中における第１のバイオマーカーの量及び第２のバイオマーカーの量を検出するステップと；ｂ）第１のバイオマーカーの量と第２のバイオマーカーの量とを比較するステップとを含み、ここで第１のバイオマーカーの量と第２のバイオマーカーの量との間の関係が創傷治癒段階を指示する。
【００１１】
本明細書に開示される装置及び方法により分析される試料は、任意の望ましい供給源由来であってよい。一部の実施形態では、試料は創傷滲出液由来であってよい。一部の実施形態では、試料は創傷液（ｗｏｕｎｄ  ｆｌｕｉｄ）である。一部の実施形態では、試料は他の供給源から収集されてもよい。例えば、バイオマーカーは、ドレッシング材料に（ドレッシングを創傷から剥がし取ったときに）付着している組織か、或いは創傷のデブリードマン中に取り除かれる非壊死組織から抽出されてもよい。
【００１２】
一部の実施形態では、第１のバイオマーカーは好中球細胞から分泌されたもので、且つ第２のバイオマーカーは線維芽細胞から分泌されたものである。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーの量が第２のバイオマーカーの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示される。逆に、第１のバイオマーカーの量が第２のバイオマーカーの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示される。
【００１３】
一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはＭＰＯであり、且つ第２のバイオマーカーはＦＧＦ−２である。一部の実施形態では、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量の少なくとも２倍多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示される。逆に、ＭＰＯの量がＦＧＦ−２の量の半分以下である場合、増殖期の創傷治癒段階が指示される。
【００１４】
一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはｎエラスターゼであり、且つ第２のバイオマーカーは線維芽細胞成長因子１０（ＦＧＦ−１０）である。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはＭ１マクロファージ細胞から分泌されたものであり、且つ第２のバイオマーカーはＭ２マクロファージ細胞から分泌されたものである。一部の実施形態では、Ｍ１マクロファージ細胞から分泌された第１のバイオマーカーの量がより多く、且つＭ２マクロファージ細胞から分泌された第２のバイオマーカーの量がより少ないことが、炎症期の創傷治癒段階を指示する。逆に、Ｍ１マクロファージ細胞から分泌された第１のバイオマーカーの量がより少なく、且つＭ２マクロファージ細胞から分泌された第２のバイオマーカーの量がより多いことが、増殖期の創傷治癒段階を指示する。一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰであり、第２のバイオマーカーはＣＤ２０４又はＣＤ２０６である。一部の実施形態では、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍未満である場合、創傷は炎症期の創傷治癒段階にある。逆に、ＣＤ２０４又はＣＤ２０６の量がカルグラニュリンＡ／Ｂ、ＴＮＦ−α、ＭＰＯ、又はＭＭＰの量の２倍以上である場合、創傷は増殖期の創傷治癒段階にある。
【００１５】
一部の実施形態では、第１のバイオマーカーはプロコラーゲン又はコラーゲンであり、且つ第２のバイオマーカーはフィブロネクチンである。一部の実施形態では、プロコラーゲン又はコラーゲンの量がフィブロネクチンの量より多い場合、炎症期の創傷治癒段階が指示される。逆に、プロコラーゲン又はコラーゲンの量がフィブロネクチンの量より少ない場合、増殖期の創傷治癒段階が指示される。
【００１６】
一部の態様では、本発明は、創傷治癒段階を判断する方法を提供し、この方法は、ａ）創傷からの試料中における第１のバイオマーカー及び第２のバイオマーカーの量を検出するステップであって、第１のバイオマーカーに特異的な第１の薬剤と第２のバイオマーカーに特異的な第２の薬剤とを含む固体表面に試料を接触させることを含むステップと；ｂ）第１のバイオマーカーの量と第２のバイオマーカーの量とを比較するステップとを含み、ここで第１のバイオマーカーの第２のバイオマーカーに対する相対量が創傷治癒段階を指示する。
【００１７】
実施例の節の実施形態は、本発明のあらゆる態様に適用可能な本発明の実施形態であることが理解される。
【００１８】
特許請求の範囲における用語「又は」の使用は、二者択一の選択肢のみを指すことが明確に指示されない限り、又はそれらの選択肢が相互排他的でない限り、「及び／又は」を意味して用いられ、但し本開示は、二者択一の選択肢のみを指し、且つ「及び／又は」を指す定義を支持する。
【００１９】
本出願の全体を通して用語「約」は、ある値が、その値の決定に用いられる装置又は方法の誤差の標準偏差を含むことを示すために用いられる。
【００２０】
長年にわたる特許法に従い、単語「ａ」及び「ａｎ」は、特許請求の範囲又は明細書において単語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と併せて使用されるとき、特に指摘されない限り１つ以上を意味する。
【００２１】
用語「治療上有効である」は、本明細書で使用されるとき、治療されている病態の少なくとも１つの症状が少なくとも寛解するなど、治療効果を実現するために本発明の方法で用いられる細胞及び／又は治療組成物（治療用ポリヌクレオチド及び／又は治療用ポリペプチドなど）の量を指す。
【００２２】
本発明の他の目的、特徴及び利点が、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかしながら、当業者には、本発明の趣旨及び範囲に含まれる様々な変更形態及び改良形態がこの詳細な説明から明らかになるであろうため、詳細な説明及び具体的な例は、本発明の特定の実施形態を示しているものの、例示として提供されるに過ぎないことが理解されなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
以下の図面は本明細書の一部をなし、本発明の特定の態様をさらに示すために含まれる。これらの図面の１つ以上を、本明細書に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせて参照することにより、本発明がより良く理解され得る。
【００２４】
【図１】慢性創傷の診断用検出装置の概略図。
【図２】好中球特異的及び線維芽細胞特異的バイオマーカーのＥＬＩＳＡ分析。
【図３】創傷の状態の迅速検出用デジタル診断装置の概略図。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本開示の装置及び方法は、創傷状態の簡便で迅速なベッドサイド診断を提供する。これは、創傷の治癒状態に情報を提供することにより、臨床医に「次に何をすべきか」に関する決定木を提供する。
【００２６】
ここでは、根源的な創傷組織を破壊することなく、創傷液から１つ以上のバイオマーカーを検出し、それにより、患者にさらなる損傷を引き起こすことなく、創傷が正常な治癒経過の範囲内にあるかどうかを正確に診断する、又は正常な治癒経過が止まった段階を特定するのに有用な装置及び方法が開示される。一般に、（１）分泌バイオマーカーを検出し、（２）試料中におけるそれらのマーカーの比を計測する診断検査が提示される。これらの診断検査は、根源的な損傷組織を破壊することなく、創傷が炎症期で停滞しているか、又は増殖期の創傷治癒段階に進行したかどうかの指標となり得る。
【００２７】
Ａ．創傷治癒段階
創傷治癒過程は３つの段階に細分される：（１）炎症期、（２）増殖期、及び（３）再構築期。治癒過程で創傷に出現する種々の細胞の経時的変化は広範に特徴付けられている。例えば、炎症期は好中球が優勢であるのに対し、増殖期は線維芽細胞が優勢である。創傷に対する初期反応として、体は炎症反応を開始し、この反応は、顆粒球、主に好中球、及び単球−マクロファージ系統の細胞の傷害部位への動員によって特徴付けられる。好中球性炎症は伝統的に正常な急性反応と見なされるが、好中球が存在し続けることは、多くの場合に創傷治癒の遅延及び慢性的に停滞した創傷と関連付けられる。正常な創傷治癒の経過では、活性化マクロファージによって好中球が取り除かれた後に、上皮形成、血管新生及び仮のマトリックス形成が起こる増殖段階が典型的には惹起される。従って、線維芽細胞が、健常な治癒しつつある創傷の増殖段階で見られる優勢な細胞型である。
【００２８】
これらの及び他の治癒段階に特異的な細胞型により分泌される特異的バイオマーカーを検出することにより、創傷組織における優勢な細胞型の間接的な、しかし正確な表現として、創傷治癒進行の正確な判断が可能になるだろう。本明細書に開示される方法では、かかる細胞型により分泌される固有のマーカーが検出され得る。一部の態様では、本発明は、局所的に誘導されるバイオマーカーを包含及び検出する方法を提供し、この方法はポイント・オブ・ケア診断目的で用いられ得る（図１）。
【００２９】
本明細書に開示される装置及び方法により分析される試料は、任意の望ましい供給源由来であってよい。例えば、試料は創傷滲出液から収集されてもよい。一部の実施形態では、試料はシリンジの吸引液から創傷床内に流体を吸引し、収集バイアルに内容物を移すことにより得られ得る。或いは、「陰圧創傷療法」、「減圧療法」、又は「真空療法」の間の創傷滲出液の収集物が、バイオマーカーの検出に用いられてもよい。一部の実施形態では、「陰圧創傷療法」、「減圧療法」、又は「真空療法」の間に少量の創傷滲出液をタイトレーションして取り除く別個の装置内に、吸収ろ紙が置かれてもよい。他の実施形態では、創傷滲出液は創傷ドレッシングに直接収集されてもよい。他の実施形態では、試料は他の供給源から収集されてもよい。例えば、バイオマーカーは、ドレッシング材料に（ドレッシングを創傷から剥がし取ったときに）付着している組織か、或いは創傷のデブリードマン中に取り除かれる非壊死組織から抽出されてもよい。抽出には、バイオマーカーを解離させるための浸漬（溶解）ステップ及び／又は浸漬及び粉砕ステップが伴うものと思われる。
【００３０】
本明細書に開示される方法は、患者の組織にさらなる損傷を与え得る直接的な細胞の計測ではなく、創傷滲出液中への細胞特異的マーカーの分泌により細胞の存在を間接的且つ正確に計測し得る。創傷滲出液は多くの場合、創傷の細胞外環境及びその関連する健康状態を正確に反映したものを提供する。これにより、異なる創傷治癒段階を区別することが可能になる。
【００３１】
Ｂ．バイオマーカー
一部の態様では、本明細書に開示される装置及び方法はバイオマーカーを利用する。バイオマーカーは計測可能な生物学的物質、すなわちシグネチャーであり、正常な又は異常な生物学的過程の特異的な指標として機能し、治療的インターベンションに対する薬理学的反応の評価に有用であることが多い。いくつかのバイオマーカーが、創傷における好中球及び線維芽細胞の検出の基準となり得る。好中球分泌因子及び線維芽細胞分泌因子の検出は、創傷治癒段階を判断するための比に基づく診断の開発用の特異的バイオマーカーとして機能し得る。
【００３２】
本明細書に開示される方法及び装置では、任意の分泌バイオマーカーを用いることができる。一部の態様では、バイオマーカーは好中球（ｎｅｕｔｒｏｆｉｌ）特異的又は線維芽細胞特異的バイオマーカーである。他の態様において、バイオマーカーはＭ１又はＭ２マクロファージから分泌される。他の細胞特異的分泌バイオマーカーが、当業者により認識され得る。
【００３３】
本開示の方法及び装置では、分泌バイオマーカーを任意の望ましい組み合わせで用いることができる。例えば、本方法及び装置は、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、又はそれ以上のバイオマーカーを使用してもよい。一部の態様では、本方法又は装置は、１つ以上の好中球分泌因子を１つ以上の線維芽細胞分泌因子と組み合わせて使用し得る。他の実施形態では、本方法又は装置は、Ｍ１マクロファージから分泌される１つ以上の因子を、Ｍ１マクロファージから分泌される１つ以上の因子と組み合わせて使用し得る。バイオマーカーの他の望ましい組み合わせが、当業者により認識され得る。
【００３４】
１．好中球分泌因子
一部の態様では、本明細書に開示される装置及び方法は、好中球細胞から分泌されるバイオマーカーを利用する。当業者は、様々な好中球特異的分泌バイオマーカーを認識し得る。一部の実施形態では、好中球分泌バイオマーカーは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、好中球エラスターゼ（ｎエラスターゼ）、ヒト好中球リポリン（ｌｉｐｏｌｉｎ）（ＨＮＬ）、ラクトフェリン、リゾチーム、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ヒト好中球エラスターゼ抗好中球細胞質抗体（ＨＮＥ  ＡＮＣＡ）、ＭＭＰ９、プロテイナーゼ３、セルピンペプチダーゼ阻害剤クラスＢ及びＤ、活性酸素種（ＲＯＳ）、又は活性窒素種（ＲＮＳ）である。
【００３５】
２．線維芽細胞分泌因子
一部の態様では、本明細書に開示される装置及び方法は、線維芽細胞から分泌されるバイオマーカーを利用する。当業者は、様々な線維芽細胞特異的分泌バイオマーカーを認識し得る。一部の実施形態では、線維芽細胞分泌バイオマーカーは、ＦＧＦ２、ＦＧＦ１０、線維芽細胞特異的タンパク質１（ＦＳＰ１）、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ（５Ｂ５）、インスリン成長因子１（ＩＧＦ−１）、テトラネクチン、コラーゲンα１鎖、２鎖、及び３鎖、ＳＥＲＰＩＮＡ１、又は補体成分（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）である。
【００３６】
３．他のバイオマーカー
創傷治癒において、Ｍ１マクロファージは炎症反応を誘導する一方、Ｍ２マクロファージは修復及び血管新生を惹起する。Ｍ２マクロファージはＭ１マクロファージと比較して少量の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及び多量の他の検出可能マーカーを産生する。従って、Ｍ１マクロファージ（炎症誘発性サイトカインを産生する）とＭ２マクロファージ（炎症反応を抑制し、且つ血管新生、組織リモデリング及び修復を促進する働きをする）との違いもまた、創傷治癒段階の指標となる。有用なＭ１又はＭ２マクロファージ特異的バイオマーカーの例としては、限定はされないが、カルグラニュリンＡ／Ｂ、シスタチンＡ、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（Ｍ１に特異的）及びＣＤ１６３、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＡＭ−３Ｋ、ＣＳＦ−１Ｒ（コロニー刺激因子１受容体）、マクロファージの特異的マーカー、ＥＭＲ１（上皮成長因子モジュールを含むムチン様受容体１）、又はＦ４／８０（Ｍ２に特異的）が挙げられる。加えて、プロコラーゲン又はコラーゲンのフィブロネクチンに対するレベルの分析もまた、増殖期（コラーゲン）又は炎症期（フィブロネクチン）のいずれかの創傷治癒段階の指標となる。
【００３７】
Ｃ．バイオマーカーの量の間の関係
一部の態様では、本開示の方法及び装置は、バイオマーカーの量又は特定のバイオマーカー間の比を利用して創傷治癒段階を判断する。一部の実施形態では、好中球分泌因子と線維芽細胞分泌因子との間の比が調べられ得る。かかる実施形態では、線維芽細胞分泌因子の量が好中球分泌因子の量より多いことが、試料を収集した創傷が増殖期にあり、又は適切に治癒しつつあることを指示する。一部の実施形態では、線維芽細胞分泌因子の量が好中球分泌因子の量より２倍以上多い場合に、創傷は増殖段階にある。一部の実施形態では、好中球分泌因子の線維芽細胞分泌因子に対する比は、１：１．０、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：３、１：４、１：５、１：１０、又はそれ以上又はその間に導き出せる任意の比である。対照的に、好中球分泌因子の量が線維芽細胞分泌因子の量より多いことは、試料を収集した創傷が炎症期にあり、又は適切に治癒していないことを指示する。一部の実施形態では、好中球分泌因子の量が線維芽細胞分泌因子より２倍以上多い場合に、創傷は炎症段階にある。他の実施形態では、線維芽細胞分泌因子の好中球分泌因子に対する比は、１：１．０、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：３、１：４、１：５、１：１０、又はそれ以上又はその間に導き出せる任意の比である。
【００３８】
一部の実施形態では、Ｍ１分泌因子とＭ２分泌因子との間の比が調べられ得る。かかる実施形態では、Ｍ２分泌因子の量がＭ１分泌因子の量より多いことが、試料を収集した創傷が増殖期にあり、又は適切に治癒しつつあることを指示する。一部の実施形態では、Ｍ２分泌因子の量がＭ１分泌因子より２倍以上多い場合に、創傷は増殖段階にある。一部の実施形態では、Ｍ１分泌因子のＭ２分泌因子に対する比は、１：１．０、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：３、１：４、１：５、１：１０、又はそれ以上又はその間に導き出せる任意の比である。対照的に、Ｍ１分泌因子の量がＭ２分泌因子の量より多いことは、試料を収集した創傷が炎症期にあり、又は適切に治癒していないことを指示する。一部の実施形態では、Ｍ１分泌因子の量がＭ２分泌因子より２倍以上多い場合に、創傷は炎症段階にある。他の実施形態では、Ｍ２分泌因子のＭ１分泌因子に対する比は、１：１．０、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：３、１：４、１：５、１：１０、又はそれ以上又はその間に導き出せる任意の比である。
【００３９】
同様の関係を、炎症期の創傷治癒段階に特異的な細胞型から１つ以上のバイオマーカーが分泌され、且つ増殖期の創傷治癒段階に特異的な細胞型から１つ以上のバイオマーカーが分泌される任意の組み合わせのバイオマーカーに適用することができる。
【００４０】
Ｄ．装置
一部の実施形態では、本発明は、創傷液から１つ以上のバイオマーカーを検出し、及び／又は可視化するのに有用な装置を提供する。このような装置は、表面と、所望のバイオマーカーに特異的な少なくとも１つの薬剤とを含み得る。表面は、限定はされないが創傷ドレッシング又はマイクロアレイを含む、所望の薬剤が結合し得る任意の表面であってよい。
【００４１】
一部の実施形態では、本装置は、例えば妊娠テストと同様の、マイクロ流体装置であってもよい。他の実施形態では、本装置は、「陰圧創傷療法」、「減圧療法」、又は「真空療法」用に設計された装置のチュービング又はチュービングコネクタであってもよい。かかる装置では、過剰の好中球バイオマーカー又は過剰の線維芽細胞マーカーを含む滲出液が存在すると、チュービングの色が変わり得る。他の実施形態では、本装置は、変色するキャニスター又はキャニスターの底面のステッカーの形態であってもよい。さらに他の実施形態では、本装置は、それらのタンパク質のレベルを検出して最終測定値をデジタル表示するようにプログラムされた手持ち型の装置であってもよい（図３）。
【００４２】
バイオマーカーに特異的な薬剤は、所望のバイオマーカーに特異的に結合することのできる任意の薬剤であってよい。例としては、限定はされないが、アプタマー、リガンド、抗体、ペプチド配列又は当業者に公知の他の結合剤が挙げられる。
【００４３】
或いは、バイオマーカーの検出には、「陰圧創傷療法」、「減圧療法」、又は「真空療法」の間の創傷滲出液の収集物が用いられてもよい。アプタマー、リガンド、又は抗体が共有結合的に連結した吸収ろ紙（図１）が、「陰圧創傷療法」、「減圧療法」、又は「真空療法」の間に少量の創傷滲出液をタイトレーションして取り除く別個の装置内に置かれてもよい。
【００４４】
一部の実施形態では、本装置は、バイオマーカーに結合する薬剤で被覆され、又はそのような薬剤が結合される。一部の実施形態では、薬剤は、創傷ドレッシングに化学的に（イオン的若しくは共有結合的に）又は物理的に結合され得る。一部の実施形態では、薬剤は、化学的グラフト、高分子バインダー、二官能性化学結合（例えば、シラン又はプルロニック）、親水性結合若しくは電気化学的結合、又はプラズマ被覆により結合される。他の実施形態では、本装置は薬剤で被覆され得る。
【００４５】
１．創傷ドレッシング
一部の実施形態では、本装置は創傷ドレッシングであってもよい。この創傷ドレッシングは、所望のバイオマーカーに特異的な１つ以上の薬剤を含み得る。本明細書で使用される用語「創傷ドレッシング」は、任意の薬学的に許容可能な創傷被覆材又は支持基材を含むものと解釈される。好適な創傷ドレッシング材の例としては、限定はされないが、以下が挙げられる、すなわち、ａ）ポリウレタン共重合体、ポリウレタンフィルム、アクリルアミド、アクリレート、パラフィン、多糖類、セロファン及びラノリンなどの半透性又は半密封性の性質のものを含むフィルム；ｂ）ゼラチン、ペクチン、並びにアカシアガム、グアーガム及びカラヤを含む複合多糖類のカルボキシメチルセルロースタンパク質成分を含む親水コロイド、これは、軟質発泡体の形態、ポリウレタンに配合された形態、又はポリイソブチレンなどの粘着剤として配合された形態で利用され得る；ｃ）寒天、デンプン又はプロピレングリコールなどの高分子、これは典型的には約８０％〜約９０％の水を含有し、且つ従来、シート、粉末、ペースト及びゲルとして、ポリエチレンオキシド、ポリビニルピロリドン、アクリルアミド、プロピレングリコールなどの架橋ポリマーと共に配合されている；ｄ）親水性開放気泡型接触面と疎水性独立気泡ポリウレタンとからなる多糖などの発泡体；ｅ）パインメッシュガーゼ（ｐｉｎｅ  ｍｅｓｈ  ｇａｕｚｅ）、パラフィン及びラノリンコーティングガーゼ、ポリエチレングリコールコーティングガーゼ、編ビスコース、レーヨン、及びポリエステルを含む含浸物；及びｆ）アルギン酸カルシウムを含むアルギン酸塩などのセルロース様多糖、これは不織布繊維複合材として配合されても紡績によって織物複合材にされてもよい。
【００４６】
２．マイクロアレイ
一部の実施形態では、本装置はマイクロアレイであってもよい。マイクロアレイは、その基板上に配置された、所望のバイオマーカーに特異的な１つ以上の薬剤を有し得る。「アレイ」は、創傷滲出液などの生体試料中の他の分子（すなわち、分析物又はバイオマーカー）の存在及び／又は量を決定するために使用することができる複数の異なるタンパク質、ペプチド、及び／又は核酸種（すなわち、捕捉試薬又は検出試薬）を受け取って固定化するように適合された表面を有する基板、典型的には固体支持体からなる装置を指す。「マイクロアレイ」は、基板上に種々の検出試薬が配置されているアレイを指す。一部の実施形態では、薬剤はマイクロアレイに化学的に（イオン的又は共有結合的に）又は物理的に結合され得る。
【００４７】
Ｅ．検出方法
バイオマーカーの存在の検出は、当業者に公知の任意の方法で実施され得る。一部の実施形態では、バイオマーカーを検出する方法は、使用される装置のタイプに関係し得る。一部の実施形態では、創傷状態のより正確な判断を提供するため、いくつかのバイオマーカーの同時検出が実施され得る。
【００４８】
一部の実施形態では、バイオマーカーは装置上の特定の薬剤に結合する。かかる実施形態において、結合したバイオマーカーは当業者に公知の任意の適切な方法により検出され得る。一部の実施形態では、分泌バイオマーカーの存在が、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光試験、マイクロアレイ、ルミネセンス試験、ブロット、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロット又はドットブロットを用いて検出され得る。一部の実施形態では、分泌バイオマーカーの存在は比色検出法を用いて検出され得る。この方法では、創傷治癒バイオマーカーの存在又は非存在と関係がある可視的な色の変化が生じ得る。一部の実施形態では、分泌バイオマーカーの存在は、質量分析法、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、定量的リアルタイムＰＣＲ、又はノーザンブロットを用いて検出され得る。
【実施例】
【００４９】
以下の例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含めるものである。当業者は、以下の例に開示される技法が、本発明の実施において良好に機能することが本発明者によって見出された技法に相当し、従って本発明を実施する際の好ましい態様をなすものと考えることができることを理解しなければならない。しかしながら、当業者は本開示をふまえて、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、開示される具体的な実施形態に多くの変更を加えることができ、それでもなお同様の又は類似した結果が達成され得ることを理解しなければならない。
【００５０】
実施例１−ＨＬ６０及びＨＤＦａ
当業者による各細胞型に固有のバイオマーカーの評価を可能にし、且つ固有のバイオマーカーのレベルを決定するため、個別的な細胞型の培養物において対象のバイオマーカーの分泌レベルを評価した。使用した２つの細胞型は、ＨＬ６０（ヒト前骨髄球性白血病）細胞及びＨＤＦａ（成人ヒト皮膚線維芽細胞）であった。１．２％ＤＭＳＯを使用してＨＬ６０細胞を好中球様細胞に分化するよう誘導した。同等数の細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で同程度の時間にわたり培養した。ＭＰＯ、ＦＧＦ２及び他の分析物の存在について、従来のＥＬＩＳＡ技法を用いてコンディションドメディウム（各細胞型からの分泌因子を含有する）を評価した（表１）。ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）は、試料中の抗原（典型的にはタンパク質）の存在を検出するために用いられる生化学分析ツールである。簡潔に言えば、試験試料中における未知の量の抗原を表面に特異的又は非特異的に固着させる。次に表面に対して特異抗体を、それが試験抗原に結合できるように加える。この抗体が典型的には酵素に連結し、それが化学基質の添加によって検出可能なシグナル（一般には色の変化）に変換され得る。
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【００５１】
表２は、実験中に個別的な細胞培養培地で計測された分析物の濃度範囲を示す。例えば、ＨＬ−６０コンディションドメディウムでは、６．４〜１６ｎｇ／ｍＬのＭＰＯ濃度が計測された。
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【００５２】
ＭＰＯは、誘導ＨＬ６０好中球培養物から取ったコンディションドメディウムにおいてのみ検出され、培養線維芽細胞から得たコンディションドメディウムでは全く存在しなかった。これは、ＭＰＯが、好中球対線維芽細胞の特異的検出に良好な候補バイオマーカーであることを示している（図２）。
【００５３】
ＨＬ６０細胞を０．５％ＤＭＳＯによっても誘導し、好中球様培養物を得た。次に誘導したＨＬ６０細胞及びＨＤＦａ細胞を、標準的な細胞培養条件を用いて同程度の時間にわたり増殖させた。Ｎエラスターゼ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−β１及びＭＰＯの存在についてコンディションドメディウムを試験した。
【００５４】
ＦＧＦ２は線維芽細胞から取ったコンディションドメディウムにおいてのみ検出され、及びこのバイオマーカーが、培養した誘導ＨＬ６０細胞から得たコンディションドメディウムには概して存在しなかったことから、この分泌バイオマーカーが創傷環境における線維芽細胞を好中球と区別するのに好適であることが示される。この分析には、好中球及び線維芽細胞の双方により分泌される対照タンパク質のＴＧＦ−β１を含め、予想どおり、いずれの細胞型から得たコンディションドメディウムにも見出された（図２）。
【００５５】
実施例２−ヒト創傷液由来のＭＰＯ、ｎエラスターゼ、ＦＧＦ２及びＴＧＦβの定量化
ＨＬ６０及びＨＤＦ細胞株コンディションドメディウムによる上述の分析を補足する（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）ため、他の分析には、外部供給業者のＣｕｒｅｌｉｎｅ，Ｉｎｃ．により供給される様々な種類の創傷から得られたヒト創傷液のＭＰＯ、ｎエラスターゼ、ＦＧＦ２及びＴＧＦβの定量化を含める。具体的には、同意が得られた、以下の種類の創傷を有する患者から、創傷滲出液（１ｍｌ）を収集した、すなわち、臨床感染のエビデンスを有しない糖尿病性足部潰瘍、熱傷、褥瘡性潰瘍、静脈うっ血性潰瘍、及び急性外傷。これらの分析の組入れ基準には以下が含まれる、すなわち、年齢１８歳超の男女、インフォームドコンセントに署名した者。除外基準には以下が含まれる、すなわち、活動性全身感染症、免疫不全疾患、貧血症（ヘマトクリット＜２６）、及び／又はステロイド類、免疫抑制薬、若しくは細胞傷害性薬剤の投与を受けている者。試験試料は、初めに、患者のデモグラフィック情報（例えば、対象者の年齢、性別、人種等）、並びに創傷期間、今後の又は既往の手術日、創傷の種類（急性又は慢性）、及び既往の創傷治療を含む創傷情報を記録することにより収集される。
【００５６】
試験試料は以下のとおり調製される、すなわち、創傷面積を計算するため創傷範囲をトレースし、深さを計測する。創傷面に基づき、添加する生理食塩水の量を計算し、記録する（例えば、４ｃｍ２の創傷面積につき１ｃｃの生理食塩水を添加する）。半密封性ポリウレタンフィルムドレッシング（Ｔｅｇａｄｅｒｍ、３Ｍ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ又は等価物）を創傷に載せ、シリンジに取り付けた滅菌２１ゲージステンレス鋼針でフィルムドレッシングを穿刺し、且つ内容物をポリウレタンフィルムドレッシングと創傷床それ自体との間の創傷床内に吸引し、その後、クライオ支持台付き（ｃｒｙｏ−ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ）ポリプロピレンチューブに移すことによって創傷液を収集する。下層の創傷床組織に損傷を与えることなく、液体のみを収集するよう注意を払う。収集した創傷液の容量及び時間点を記録し、回収した創傷液洗浄液をクライオ支持台付きポリプロピレンチューブにデカントした後、チューブを保管のためスナップ凍結し、分析のためドライアイスに載せて輸送する。
【００５７】
ＭＰＯ、ｎエラスターゼ、ＦＧＦ２、及びＴＧＦβの分析は、上記に記載したとおりＥＬＩＳＡにより実施する。各創傷液に認められるＭＰＯ：ＦＧＦ２比及びｎエラスターゼ：ＦＧＦ２比を決定し、創傷の診断用として使用する。ＦＧＦ２がＭＰＯより２倍以上多い場合、又はＦＧＦ２がｎエラスターゼより２倍以上多い場合、創傷は適切に治癒しつつある。ＭＰＯ又はｎエラスターゼと比べて２倍未満であるＦＧＦ２のレベルは、「進行が阻まれた状態の（ｂｌｏｃｋｅｄ）」又は非治癒性の創傷の指標となる。
【００５８】
本明細書に開示され、且つ特許請求される組成物及び／又は方法は全て、本開示をふまえれば、必要以上に実験を行うことなく作製及び実行することができる。本発明の組成物及び方法については一部の実施形態に関連して説明しているが、当業者には、本明細書に記載される組成物及び方法に対し、並びに方法のステップにおいて又はそのステップの順序において、本発明の概念、趣旨及び範囲から逸脱することなく変形例を適用し得ることは明らかであろう。より具体的には、化学的にも生理学的にも関連性を有する特定の薬剤が、本明細書に記載される薬剤の代わりに用いられてもよく、一方で同じ又は同様の結果が達成され得ることは明らかであろう。当業者に明らかなかかる同様の代替例及び改良例はいずれも、添付の特許請求の範囲により定義されるとおりの本発明の趣旨、範囲及び概念の範囲内にあると見なされる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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