(57)【要約】  本発明は、新規な２−ピペラジン−１−イル−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体に関し、また、バクテリアによって引き起こされる哺乳類の感染症、特に、密接に関連したマイコバクテリアの感染の結果引き起こされる結核（ＴＢ）、ブルーリ潰瘍、およびハンセン病等の病気の治療におけるその使用に関する。【選択図】図１
2013542980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2013542980.tif 000036
［式中、
Ｒ１は、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＯＲ４、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、またはＣＨＯであり、
Ｒ２は、ハロゲン、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、または、トリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、３−１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和であり、ハロゲン化または非ハロゲン化された、直鎖型、分岐型、または環状型のアルキルであって、メチレン基が存在する場合、１つまたは２つのメチレン基がＯ、Ｓ、ＮＲ４、または
【化２】
2013542980.tif 000037
で置換されていてもよく、
Ｘは、１−６個の炭素原子を有する、飽和または不飽和の直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカルであり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
Ｚは、１−３個の炭素原子を有する、直鎖型または分岐型の直接結合脂肪族ラジカルであり、
Ｑは、フェニル、ナフチル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、ピラゾリル、トリアジニル、イミダゾリル、フラニル、または、チエニルであって、１−３個の水素原子がＲ７基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−３アルキルであって、ｎ＝０、１、２、３、または４であり、
Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、ＯＣ１−４アルキル、ハロゲン、ＣＯＯＲ５、ＣＯＮＲ６Ｒ７、ＯＣＦ３、ＣＦ３、またはＣＮから、互いに独立に選択され、
Ｒ７は、ハロゲン、１−３個の炭素原子を有する飽和または不飽和であって直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカル、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、またはフェニルである］
で表される化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
前記化合物は２−（４−Ｒ３−ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンである請求項１に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
前記化合物は２−（４−アルキル−ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−Ｒ２−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンであり、Ｒ２がハロゲンである請求項１に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
前記化合物は２−［４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンである請求項２に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
前記化合物は２−｛４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンである請求項１に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
前記化合物は２−（４−ヘプチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンである請求項２に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか１項に記載の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩を含む薬剤組成物。
【請求項８】
薬学的に許容される担体および／または添加剤をさらに含む請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項９】
病気の治療および／または予防的治療に使用される請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
前記病気は、細菌感染によって引き起こされる病気である請求項９に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１１】
細菌感染によって引き起こされる前記病気は、結核、ハンセン病、またはブルーリ潰瘍を含むグループから選択される請求項９または１０に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１２】
前記細菌感染は、マイコバクテリウム属、コリネバクテリウム属、またはノカルジア属に属するバクテリアによって引き起こされる請求項１０に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１３】
細菌感染によって引き起こされる病気に対する治療および／または予防的治療が必要な患者に対する治療法および／または予防的治療法であって、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩、もしくは、請求項７または８に記載の薬剤組成物を治療に有効な量投与することを含む方法。
【請求項１４】
請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物および／または薬学的に許容されるその塩、もしくは、請求項７または８に記載の薬剤組成物を治療に有効な量投与することを含む、細菌感染の抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な２−ピペラジン−１−イル−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体に関し、また、バクテリアによって引き起こされる哺乳類の感染症、特に、密接に関連したマイコバクテリアの感染の結果引き起こされる結核（ＴＢ）、ブルーリ潰瘍、およびハンセン病等の病気の治療および／または予防的治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
マイコバクテリアは、結核（ＴＢ）、ハンセン病、およびブルーリ潰瘍等の深刻な病気を引き起こすことで、数千年にわたって人類を苦しめてきている。病気の負担および死亡率の観点からすると、ＴＢは人間の健康にとって明らかに最も重要、且つ、困難な脅威であり、その理由の一部は、現在の医薬品に対する初回耐性が次第に広がってきていることである。従って、新規な作用機構を有する新しい化合物に対する必要性が増大している（Balganesh, T. S., P. M. Alzari, and S. T. Cole, Trends Pharmacol Sci. 2008. 29(11): p. 576-81）。これらの化合物は、その他のマイコバクテリア症の治療にも応用されるであろう。ハンセン病は、世界保健機関によって実施された抑制対策のおかげで、公衆衛生問題としては根絶に近付いている（Britton, W. J. and D. N. Lockwood. Lancet, 2004. 363(9416): p. 1209-19）。一方、ブルーリ潰瘍のような新興の症状への関心が高まっている（Demangel, C., T. P. Stinear, and S. T. Cole. Nat Rev. Microbiol, 2009. 7(1): p. 50-60）。
【０００３】
過去２０年間、薬物耐性結核が、警戒すべき新たな局面にあるとされてきた。１９９０年代の懸念の１つとして、主要な最先端の医薬品であるイソニアジドおよびリファンピシンに対して、ヒト型結核菌が耐性を獲得してきた多剤耐性（ＭＤＲ）種があった。世界中で推定５００，０００件、そのうちヨーロッパにおいて〜７０，０００件のＭＤＲ−ＴＢが発生している（Zignol, M. et al., J Infect Dis., 2006. 194: 479-485; Fears, R., S. Kaufmann, V. Ter. Meulen & A. Zumla. Tuberculosis (Edinb) 2010. 90: 182-187）。
【０００４】
この１０年間、ヒト型結核菌のＭＤＲ株が、第二選択薬に対する付加的な耐性突然変異を獲得することによって、超多剤耐性（ＸＤＲ）症が発生している。ヒト型結核菌のＸＤＲ株は、イソニアジドおよびリファンピシンに加えて、フルオロキノンおよび注射可能なアミノグリコシドに対しても耐性を有する（Jassal, M. & W. R. Bishai. Lancet Infect Dis. 2009. 9: 19-30）。今や５０カ国以上がＸＤＲ−ＴＢを報告している。これは、薬剤感受性および薬剤耐性ＴＢを治療するための新たな薬剤を見出す必要性および重要性を明確に示している。新たな作用機構に加えて、新規なＴＢ薬剤に要求される望ましい特徴として、治療期間が短縮できるように高い有効性を有すること、腸内微生物叢の破壊を含め、望ましくない副作用を避けるための高い特異性を有すること、および、経口投与性などが挙げられる。
【０００５】
２−アミノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンは、人間および哺乳類のマイコバクテリア症の治療薬として使用することができる。現在までに入手可能な最も活性の高い化合物は、２−［（２Ｓ）−２−メチル−１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカ−８−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（ＢＴＺ０４３）である（V. Makarov et al. Science, 2009, 324, 801; M. R. Pasca, et al. Antimicrob. Agents Chemother., 2010, 54, 1616）。
【０００６】
特定の２−アミノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンは、例えば、国際公開第２００７／１３４６２５号、および国際公開第２００９／０１０１６３号に記載されている。
【０００７】
こうした背景を考慮して、マイコバクテリアに対する高い活性を有するのみでなく、上記した１，３−ベンゾチアジン−４−オンよりも良好な薬剤としての特性を示す、新規な２−ピペラジノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンを製造することが強く望まれている。本発明は、新たなＴＢ治療薬としての可能性を持ち、マイコバクテリアに対する活性を有し、２−アミノ置換基がＮ−置換ピペラジンで表される１，３−ベンゾチアジン−４−オンの新たな生成を開示する。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は、下記一般式（１）で表される化合物および／または薬学的に許容されるその塩に関する。
【化１】
2013542980.tif 000003
ここで、
Ｒ１は、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＯＲ４、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、またはＣＨＯであり、
Ｒ２は、ハロゲン、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、または、トリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、３−１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和であり、ハロゲン化または非ハロゲン化された、直鎖型、分岐型、または環状型のアルキルであって、メチレン基が存在する場合、１つまたは２つのメチレン基がＯ、Ｓ、ＮＲ４、または
【化２】
2013542980.tif 000004
で置換されていてもよく、
ここで、
Ｘは、１−６個の炭素原子を有する、飽和または不飽和の直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカルであり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
Ｚは、１−３個の炭素原子を有する、直鎖型または分岐型の直接結合脂肪族ラジカルであり、
Ｑは、フェニル、ナフチル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、ピラゾリル、トリアジニル、イミダゾリル、フラニル、または、チエニルであって、１−３個の水素原子がＲ７基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−３アルキルであって、ｎ＝０、１、２、３、または４であり、
Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、ＯＣ１−４アルキル、ハロゲン、ＣＯＯＲ５、ＣＯＮＲ６Ｒ７、ＯＣＦ３、ＣＦ３、またはＣＮから、互いに独立に選択され、
Ｒ７基は、ハロゲン、１−３個の炭素原子を有する飽和または不飽和であって直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカル、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、またはフェニルである。
【０００９】
また、本発明の一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩を含む薬剤組成物が開示される。
【００１０】
また、病気の治療および／または予防的治療に対する、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩の使用が開示される。
【００１１】
さらに、病気の治療および／または予防的治療に対する、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩を含む薬剤組成物の使用が開示される。
【００１２】
さらに本発明は、細菌感染によって引き起こされる病気に対する治療および／または予防的治療が必要な患者に対する治療法および／または予防的治療法を提供する。これは、治療に有効な量の化合物または薬剤組成物を投与することを含む。
【００１３】
さらに、治療に有効な量の化合物または薬学組成物を投与することを含んだ細菌感染を抑制する方法が開示される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】慢性ＴＢマウスモデルにおいて、ＢＴＺ０４３による治療と比較した場合の、肺および脾臓におけるＣＦＵ量の削減に関する化合物２および８の効果を示す図および統計結果である。Ｄ０は治療開始時のＣＦＵ量、ＮＴは２８日目の非治療動物、ＩＮＨはイソニアジド、４３はＢＴＺ０４３、１６９は化合物２を示すＰＢＴＺ１６９、１３４は化合物８を示すＰＢＴＺ１３４である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
前述した２−アミノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体の不利な点の１つは、水に対する溶解性の低さである。このため、胃や消化管でのその吸収が制限される。例えば、１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体に親水性部分を付加することにより、このような化合物を水により溶解し易くするための努力が成されて来た。しかし、このような化合物は、抗マイコバクテリア活性が非常に低い。
【００１６】
従って、一方では、親水性部分によって、水により溶解し易い化合物であることが好ましく、他方では、この化合物は、非常に疎水性の高いマイコバクテリア細胞壁を透過できるように親油性を保持しなくてはならない。
【００１７】
本発明においては、その１つが１，３−ベンゾチアジン−４−オンである２つの大きな親油性部分の間に、小さな親水性部分（ピペラジン）が"隠された"化合物を提供することによって、この問題が解決された。
【化３】
2013542980.tif 000005
【００１８】
第１の側面によれば、本発明は、一般式（１）で示される化合物および／または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【化１】
2013542980.tif 000006
ここで、
Ｒ１は、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＨＯＲ４、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、またはＣＨＯであり、
Ｒ２は、ハロゲン、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、または、トリフルオロメチルであり、
Ｒ３は、３−１２個の炭素原子を有する、飽和または不飽和であり、ハロゲン化または非ハロゲン化された、直鎖型、分岐型、または環状型のアルキルであって、メチレン基が存在する場合、１つまたは２つのメチレン基がＯ、Ｓ、ＮＲ４、または
【化２】
2013542980.tif 000007
で置換されていてもよく、
ここで、
Ｘは、１−６個の炭素原子を有する、飽和または不飽和の直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカルであり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
Ｚは、１−３個の炭素原子を有する、直鎖型または分岐型の直接結合脂肪族ラジカルであり、
Ｑは、フェニル、ナフチル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、ピラゾリル、トリアジニル、イミダゾリル、フラニル、または、チエニルであって、１−３個の水素原子がＲ７基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、ＨまたはＣ１−３アルキルであって、ｎ＝０、１、２、３、または４であり、
Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、ＯＣ１−４アルキル、ハロゲン、ＣＯＯＲ５、ＣＯＮＲ６Ｒ７、ＯＣＦ３、ＣＦ３、またはＣＮから、互いに独立に選択され、
Ｒ７基は、ハロゲン、１−３個の炭素原子を有する飽和または不飽和であって直鎖型または分岐型の脂肪族ラジカル、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、低級アルコキシ、ＣＯＯＲ４、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＣＨＯ、ＯＣＦ３、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、またはフェニルである。
【００１９】
"備える"または"備えている"という用語は、含む／含んだという意味で一般的に使用される。つまり、１つ以上の特徴または構成要素の存在を認めることである。さらに、"備えている"という用語は、"から成る"という用語も包含するものである。
【００２０】
明細書および特許請求の範囲において使用される場合、"１つの"等の単数形は、そうでないと明確に文中に記載するのでない限り、複数形を含むものである。
【００２１】
ここで使用される"少なくとも１つ"とは、"１つまたはそれ以上"を意味する。
【００２２】
好ましい実施形態においては、本発明は、２−（４−Ｒ３−ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−（４−Ｒ３−ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−Ｒ２−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−（４−Ｒ３−ピペラジン−１−イル）−８−Ｒ１−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジン−１−イル］−８−Ｒ１−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−Ｒ２−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［２−（４−ハロゲンフェノキシ）エチル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［２−（３−ハロゲンフェノキシ）エチル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［３−（４−ハロゲンフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［３−（３−ハロゲンフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−（４−｛２−［（４−ハロゲンベンジル）オキシ］エチル｝ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、からなるグループから選択される一般式（１）の化合物に関する。ここでＲ１、Ｒ２、およびＲ３は上述のものと同じ定義である。
【００２３】
さらに具体的に本発明は、２−（４−ヘキシルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−（４−ヘプチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（２−シクロヘキシルエチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−（４−ブチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（３−メチルブチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（２−メチルブチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−［４−（２−エトキシエチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エチル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン、２−｛４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンからなるグループから選択される少なくとも１つの化合物に関する。
【００２４】
さらに本発明は、一般式（１）の化合物の薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、等に関する。
【００２５】
一般式（１）の化合物は、従来技術に記載される以下の方法の１つにより合成することができる。これらの方法には、以下のものが含まれる。
１）２−クロロベンジルクロロ無水物とのチオシアン酸塩の反応と、これに続く、対応するアミンによる反応塊の処理（例えば、Coll. Czech. Chem. Commun., 1982, 47, 3268-3282; Coll. Czech. Chem. Commun., 1983, 48, 3315-3328; Coll. Czech. Chem. Commun., 1983, 48, 3427-3432参照）。
２）３，４−二置換−６−メルカプト安息香酸と適当なシアナミドとの縮合反応（米国特許第３，５２２，２４７号明細書参照）。
３）適切なアミンによる２−ハロゲン−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンの転換（米国特許第３，４７０，１６８号明細書参照）。
４）２−アミノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンを調製する２つの方法であって、国際公開第２００７／１３４６２５号および国際公開第２００９／０１０１６３号に記載される以下のプロセス。
【化４】
2013542980.tif 000008
５）国際公開第２００９／０１０１６３号に記載される以下のプロセス。
【化５】
2013542980.tif 000009
６）最近発見された非常に有用なプロセスであって、２−アルキルメルカプト−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンの初期合成と、それに続く、対応するピペラジン誘導体との縮合を含む、２−アミノ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体の調製。
【化６】
2013542980.tif 000010
上述の６つの方法は全て、一般式（１）で表される化合物の合成に使用することができる。好ましくは、方法６が使用される。
【００２６】
一般式（１）の化合物は、対応する酸を従来既知の適当な溶媒中で処理することによって、水に溶解し、且つ薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、あるいは酢酸塩に容易に転換することができる。
【００２７】
本発明の一般式（１）の選択された化合物について、ＳＯＳクロモ試験（P. Quillardet, O. Huisman, R. D'Ari, M. Hofnung, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 79, 5971-5）を用いて変位原性の可能性を試験したところ、スポット当り２５−５０μｇにおいて変位原性が無く、ネズミチフス菌株ＴＡ９８、ＴＡ１００、およびＴＡ１５３５に対するＡＭＥＳ試験（D. M. Maron and B. N. Ames, Mutation Res., 1983, 113, 173-215）により、５μｇ／ｍｌにおいて陰性であることが見出された。
【００２８】
ＢＴＺ０４３によるマイコバクテリア中の主要なターゲットは、必須酵素デカプレニルホスホリル−β−Ｄ−リボース ２'−エピメラーゼ、および、対応する遺伝子のミスセンス変異に由来するＢＴＺ耐性のｄｐｒＥ１である。スメグマ菌またはウシ型結核菌ＢＣＧ（Makarov, V. et al. Science 2009. 324: 801-804）のＢＴＺ耐性突然変異体について、選択された一般式（１）の化合物に対する感受性を試験したところ、そうした化合物に対する交差耐性が見られた。これは、２−ピペラジノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンが、１，３−ベンゾチアジン−４−オンと同じターゲットを共有することを示している。
【００２９】
ＢＴＺ０４３に対する第２の耐性機構は、スメグマ菌におけるニトロ還元酵素ＮｆｎＢの過剰生産に起因するものと説明されてきている（Manina, G., et al. Mol Microbiol 2010. epub 2010/07/14）。選択された２−ピペラジノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンに対するＮｆｎＢ過剰生産突然変異体ＭＮ３９の感受性を試験したところ、ＭＩＣは、野生型親株のＭＩＣと同等であることがわかった。これに反して、ＭＮ３９は、ＢＴＺ０４３に対するＭＩＣにおいて６倍の増加を示した。これは、ピペラジノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンは、１，３−ベンゾチアジン−４−オン誘導体に比べて、望ましくない源からのニトロ還元を受けにくいことを示唆している。
【００３０】
選択されたピペラジノ置換１，３−ベンゾチアジン−４−オンとＢＴＺ０４３との相対的な細胞毒性を比較するために、２つの異なるヒト細胞株を用いてＩＣ９０を決定した。レザズリン還元分析により測定したところ、どちらの系統の化合物も、肺細胞株Ａ５４９に対して１２．５−１００μｇ／ｍｌの範囲のＩＣ９０を示した。同じ方法を用いた結果、ヒト肝がん細胞株Ｈｕｈ７に対するＩＣ９０は６．２５−１２．５μｇ／ｍｌの範囲であった。
【００３１】
本発明の第２の側面によれば、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩は、特に、細菌感染によって引き起こされる病気、さらに言えば、結核や他のマイコバクテリア感染、あるいは、ジフテリアのような、ヒトおよび動物におけるその他のアクチノバクテリア感染の治療および／または予防的治療に対して有用である。
【００３２】
驚くべきことに発明者達は、肺および脾臓におけるコロニー形成単位の減少レベルに基づいて、慢性ＴＢマウスモデルにおいて、選択された本発明の化合物には治療効果があることを示した。ある化合物の活性度は、陽性対照として使用された主要なＴＢ薬剤であるＩＮＨの活性度よりも優れている。さらに、実施例２４に示されるように、１，３−ベンゾチアジン−４−オンの新規なピペラジノ誘導体のいくつかは、ＢＴＺ０４３で例示される２−アミノ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンよりも、このモデルにおいて著しく活性度が高い。
【００３３】
本発明の化合物は、２０００ｍｇ／ｋｇまでにおよぶ経口ドーズ量の投与後でも毒性を示さない。化合物は、導入後最初の２４時間において、動物による良好な耐容性を示した。７日間の調査の間、化合物（２）および（１８）は、マウスの一般的症状および行動における変化を生じさせず、運動活動および反射活動、活動状態と落ち着いた状態のサイクル、グルーミング、または、摂餌量に対する影響も示さなかった。動物が死に至る事例は無かった。化合物（２）および（１８）に対するＬＤ５０は２０００ｍｇ／ｋｇよりも大きい。
【００３４】
１つの実施形態においては、本発明の化合物および／または薬学的に許容されるその塩は、病気の治療および／または予防的治療に有用である。好ましくは、その病気とは、結核、ハンセン病、またはブルーリ潰瘍からなるグループから選択されるものである。
【００３５】
細菌感染は、通常、コリネバクテリウム属、ノカルジア属、またはマイコバクテリウム属に属するバクテリアによって引き起こされる。
【００３６】
ノカルジアアステロイデスは、最も頻繁に人間に感染するノカルジア種であり、大抵の場合は、免疫不全の患者に日和見感染として発生する。医学的に興味のあるその他の種は、ノカルジアブラジリエンシスおよびノカルジアキャビエである。ヒトノカルジア症の最もよく見られる形態は、緩徐進行性の肺炎である。
【００３７】
コリネバクテリウム属は、ジフテリアを引き起こす原因となるバクテリア桿菌を含む。
【００３８】
マイコバクテリウムは、独自の科、つまりマイコバクテリウム科を与えられたアクチノバクテリア属である。この属は、結核（ヒト型結核菌）およびハンセン病（ハンセン菌）を含め、動物に重病を引き起こすことが知られている病原体を含んでいる。
【００３９】
従って、本発明の第２の側面は、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩を含んだ薬剤組成物に関する。
【００４０】
１つの実施形態においては、薬剤組成物は、薬学的に許容される担体および／または添加剤をさらに含む。
【００４１】
薬学的に許容される添加剤は薬学分野において良く知られており、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)に記載されている。薬学的添加剤は、所望の投与経路および標準的な薬学的慣習に応じて選択することができる。添加剤は、その受容者にとって有害でないという意味において許容されねばならない。
【００４２】
ここで、"薬学的に許容される担体および／または添加剤"という用語は、例えば、賦形剤、希釈剤、溶媒を指し、例えば、エタノールおよびイソプロパノールのような一価アルコール、グリコールのような多価アルコール、大豆油、ココナツ油、オリーブ油、サフラワー油、綿実油のような食用油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルのような油状のエステル、結合剤、補助剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、崩壊剤、流動促進剤、平滑剤、緩衝剤、乳化剤、湿潤剤、懸濁化剤、甘味剤、着色剤、香味料、コーティング剤、保存料、酸化防止剤、加工剤、薬物伝達修飾剤、リン酸カルシウムのようなエンハンサー、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖類、二糖類、でんぷん、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、および、イオン交換樹脂等である。
【００４３】
第３の側面によれば、本発明は、細菌感染によって引き起こされる病気の治療法に関し、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩、または薬剤組成物を、治療が必要な患者に対して、治療に有効な量投与することを含む。
【００４４】
ここで"治療に有効な量"とは、症状を改善するまたは防ぐために有効となる量である。
【００４５】
ここで、"治療が必要な患者"とは、細菌感染によって引き起こされた病気の治療が必要な患者を指す。本発明の１つの側面によれば、"治療が必要な患者"とは、細菌感染しているかもしれない患者、あるいは、細菌感染する危険性のあるあらゆる患者を指す。好ましくは、治療が必要な患者とは、動物を指し、より好ましくは哺乳類、さらに好ましくは人間を指す。
【００４６】
本発明において"投与する"とは、好ましくは動物、より好ましくは哺乳類、さらに好ましくは人間である患者に対して、通常、治療に有効な量の形式で、一般式（１）の化合物、および／または薬学的に許容されるその塩、もしくは薬剤組成物が接触することを指す。
【００４７】
本発明の化合物は、静脈注射、皮下注射、または筋肉注射による局所投与または非経口投与、あるいは鼻腔内投与での使用向けに、薬学的に許容される水媒体、有機媒体、または水性有機媒体中で希釈溶液または懸濁液を調製することによって調合されるか、あるいは、経口投与用または座薬として、従来の添加剤と共に、錠剤、カプセル、または水溶性懸濁液の形態で調合される。
【００４８】
本発明の化合物は、単独で投与されてよく、あるいは、これらに限定されるものではないが、以下のもののうち１つ以上の薬学的に許容される担体とともに投与されてもよい。すなわち、経口（例えば錠剤、カプセル、または摂取可能な溶液として）、局所粘膜（例えば鼻腔用スプレーまたは吸入用噴霧器として）、非経口（例えば、注射剤型）、胃腸用、髄腔内、腹腔内、筋肉内、静脈内、子宮内、眼球内、皮内、頭蓋内、気管内、膣内、脳室内、大脳内、皮下、眼科（硝子体内または眼房内を含む）、経皮的、直腸、口腔、硬膜外、および舌下用の担体である。
【００４９】
より詳しく言うと、本発明の新規な化合物は、様々な異なる投薬形態で投与することができる。すなわち、錠剤、カプセル、薬用キャンディ、トローチ、あめ玉、粉末、スプレー、クリーム、軟膏、座薬、ゼリー、ペースト、ローション、軟膏、水性懸濁液、注射剤、エリキシル剤、シロップ等の形態の薬学的に不活性な様々な担体と組み合わせることができる。そのような担体は、固体希釈剤、または充填剤、無菌水性媒体、および様々な非毒性有機溶媒等を含む。さらに、経口用の薬剤組成物は、適当に甘味を加えられる、および／または味付けされてもよい。
【００５０】
さらに本発明は、哺乳類のバクテリア感染に対する治療法または予防的治療法に対する、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩の使用に関する。そのような方法での使用に対して好ましい一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩は、特に上述したものである。
【００５１】
さらなる側面においては、本発明は、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩、または、一般式（１）の化合物および／または薬学的に許容されるその塩を含む薬剤組成物を、薬学的に有効な量投与することを含む、細菌感染を抑制する方法に関する。
【００５２】
本発明の一般式（１）の化合物は、ヒト型結核菌Ｈ３７Ｒｖに対して０．１９〜１５ｎｇ／ｍｌの範囲の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を有しており、特にマイコバクテリアに対して強い抗菌活性を示すので、細菌感染を抑制する方法に用いることができる。
【００５３】
驚くべきことに発明者達は、本発明の化合物が、マイコバクテリアおよび関連するアクチノバクテリアに対する高いレベルの選択性を示すことを見出した。これによって有害な副作用が低減される。レザズリン還元法（J.C. Palomino, A. Martin, M. Camacho, H. Guerra, J. Swings, F. Portaels, Antimicrob. Agents Chemother., 2002, 46, 2720-2）によって決定された典型的な結果を、実施例２２に示す。
【００５４】
化合物は、体重当り０．００１−１０００ｍｇ／ｋｇの投薬量で使用することができる。
【００５５】
以下の実験部分で続けて示す例は、本発明を説明する役割を果たすものであるが、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００５６】
本発明の化合物の構造は、合成手段および元素分析法、並びに、核磁気共鳴スペクトルおよび質量スペクトルによって確定された。
【００５７】
実施例
化学薬品および溶媒は、Alfa-Aesar（イギリス）またはAldrich Co.（Sigma-Aldrich社、セントルイス、アメリカ）から購入した。これらは、追加精製することなく使用した。
【００５８】
融点は、ＢＰ手順に従って決定し、補正は行っていない（Electrothermal 9001、イギリス）。
【００５９】
分析が元素の記号のみで示されている場合は、分析結果は、理論値の±０．３％以内である（Carlo-Erba 5500、イタリア）。
【００６０】
Varian Unity Plus 300（アメリカ）を用いてＮＭＲスペクトルを決定した。１Ｈ  ＮＭＲのシフトは、ＴＭＳから低磁場側へのｐｐｍ（δ）として報告されている。
【００６１】
直接注入を用いたFinnigan SSQ-700（アメリカ）装置を使用して質量スペクトルを取得した。
【００６２】
化合物の反応および純度は、シリカゲル６０  Ｆ２５４アルミニウムシート（Merck社、ドイツ）を用いたＴＬＣにより制御した。
【００６３】
実施例１
２−（４−シクロヘキシルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１）
【化７】
2013542980.tif 000011
水酸化ナトリウム（０．９ｇ；粉末）を１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、温度１０−１５℃で２．１ｍＬの二硫化炭素を加えた。３．０ｇの２−クロロ−３−ニトロ−５−トリフルオロメチルベンズアミドを、温度１０℃で小分けにして溶液に加えた。１５分後、温度１０−２０℃で０．７ｍＬのＭｅＩを加えた。３０分間反応を続行させ、続いて１００ｍＬの水を加えた。その結果生じた２−メチルチオ−８−ニトロ−６−トリフルオロメチル−４Ｈ−１，３ベンゾチアジン−４−オンの黄色い固体を、ろ過により分離した。
収率：４７％、
ｍｐ：２００−２０３℃（酢酸エチル）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．９５および８．８１（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、２．７３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１０Ｈ５Ｆ３Ｎ２Ｏ３Ｓ２の分析：
計算値：Ｃ、３７．２８；Ｈ、１．５６；Ｎ、８．６９；Ｓ、１９．９０、
実測値：Ｃ、３７．２１；Ｈ、１．５４；Ｎ、８．６４；Ｓ、２０．０３。
【００６４】
３．０ｇの２−メチルチオ−８−ニトロ−６−トリフルオロメチル−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンのエタノール１５ｍＬ中懸濁液を、室温において、１．５ｇの４−シクロヘキシルピペラジンで処理した。反応混合物を５０−６０℃で２０分間加熱した。冷却後、１００ｍＬの水を加えた。その結果生じた２−（４−シクロヘキシルピペラジン１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンの淡黄色の固体を、ろ過により分離した。
収率：７４％、
ｍｐ：１８９−１９１℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８７および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．８９（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．６６（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３２（１Ｈ，ブロード  ｍ，１ＣＨ）、１．７９，１．５８，および１．２０（１０Ｈ，３つのブロード  ｍ，Ｃ５Ｈ１０）ｐｐｍ、
Ｃ１９Ｈ２１Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５１．５８；Ｈ、４．７８；Ｎ、１２．６６、
実測値：Ｃ、５１．５６；Ｈ、４．７２；Ｎ、１２．８１。
【００６５】
実施例２
２−［４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物２）
【化８】
2013542980.tif 000012
アミンとして４−（シクロヘキシルメチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物２を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：７１％、
ｍｐ：１８４−１８６℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８６および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．１３（２Ｈ，ｄ，ＣＨ２）、１．５３（１Ｈ，ブロード  ｍ，１ＣＨ）、１．７０、１．２０、および０．８５（１０Ｈ，３つのブロード  ｍ，Ｃ５Ｈ１０）ｐｐｍ、
Ｃ２０Ｈ２３Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５２．６２；Ｈ、５．０８；Ｎ、１２．２７、
実測値：Ｃ、５２．６０；Ｈ、５．０１；Ｎ、１２．３４。
【００６６】
実施例３
２−（４−ブチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物３）
【化９】
2013542980.tif 000013
アミンとして４−ブチルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物３を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６９％、
ｍｐ：１１９−１２０℃（ｎ−ヘキサン）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１６（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．４６および１．３３（４Ｈ，２  ｍ，２ＣＨ２）、０．９１（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、４９．０３；Ｈ、４．６０；Ｎ、１３．４５、
実測値：Ｃ、４８．９４；Ｈ、４．６７；Ｎ、１３．３８。
【００６７】
実施例４
２−（４−イソブチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物４）
【化１０】
2013542980.tif 000014
アミンとして４−イソブチルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物４を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：７７％、
ｍｐ：１５０−１５３℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１６（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．１１（２Ｈ，ｄ，ＣＨ２）、１．７９（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、０．８８（６Ｈ，ｄ，２ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、４９．０３；Ｈ、４．６０；Ｎ、１３．４５、
実測値：Ｃ、４９．１２；Ｈ、４．６３；Ｎ、１３．４３。
【００６８】
実施例５
２−（４−ｓｅｃ−ブチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物５）
【化１１】
2013542980.tif 000015
アミンとして４−ｓｅｃ−ブチルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物５を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６２％、
ｍｐ：１２７−１２８℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１６（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．６７（Ｈ，ブロード  ｓ，ＣＨ）、２．５０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、１．４１（２Ｈ，ｄ  ｍ，ＣＨ２）、０．８５（６Ｈ，ｍ，２ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、４９．０３；Ｈ、４．６０；Ｎ、１３．４５、
実測値：Ｃ、４９．１０；Ｈ、４．５１；Ｎ、１３．３７。
【００６９】
実施例６
２−［４−（２−シクロヘキシルエチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物６）
【化１２】
2013542980.tif 000016
アミンとして４−（２−シクロヘキシルエチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物６を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６２％、
ｍｐ：１７５−１７７℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７０（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８６および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．７０−０．８５（１３Ｈ，４つのブロード  ｍ，ＣＨ２−ＣＨ（Ｃ５Ｈ１０））ｐｐｍ、
Ｃ２１Ｈ２５Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５３．６１；Ｈ、５．３６；Ｎ、１１．９１、
実測値：Ｃ、５３．５２；Ｈ、５．４３；Ｎ、１１．８１。
【００７０】
実施例７
２−［４−（１−メチルブチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物７）
【化１３】
2013542980.tif 000017
アミンとして４−（１−メチルブチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物７を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：５５％、
ｍｐ：１３２−１３３℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７１（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．６５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５４（Ｈ，ブロード  ｓ，ＣＨ）、１．４７および１．３２（４Ｈ，２つのｍ，２ＣＨ２）、０．８４（６Ｈ，ｍ，２ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１８Ｈ２１Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５０．２３；Ｈ、４．９２；Ｎ、１３．０２、
実測値：Ｃ、５０．２１；Ｈ、５．０６；Ｎ、１３．１３。
【００７１】
実施例８
２−（４−ヘプチルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物８）
【化１４】
2013542980.tif 000018
アミンとして４−ヘプチルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物８を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６８％、
ｍｐ：１２５−１２７℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５２（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３３（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．４３（２Ｈ，ブロード  ｍ，ＣＨ２）、１．２８（８Ｈ，ブロード  ｍ，４ＣＨ２）、０．８６（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ２０Ｈ２５Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５０．２３；Ｈ、４．９２；Ｎ、１３．０２、
実測値：Ｃ、５０．２１；Ｈ、５．０６；Ｎ、１３．１３。
【００７２】
実施例９
８−ニトロ−２−［４−（ピリジン−４−イルメチル）ピペラジン−１−イル］−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物９）
【化１５】
2013542980.tif 000019
アミンとして４−（ピリジン−４−イルメチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物９を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６４％、
ｍｐ：２００−２０２℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５１（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、８．５２（２Ｈ，ｄ，Ｎ（ＣＨ）２）、７．３７（２Ｈ，ｄ，２ＣＨ）、３．９５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、３．６３（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、２．５８（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）ｐｐｍ、
Ｃ１９Ｈ１６Ｆ３Ｎ５Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５０．５５；Ｈ、３．５７；Ｎ、１５．５１、
実測値：Ｃ、５０．５８；Ｈ、３．５６；Ｎ、１５．４３。
【００７３】
実施例１０
８−ニトロ−２−［４−（４−フェノキシブチル）ピペラジン−１−イル］−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１０）
【化１６】
2013542980.tif 000020
アミンとして４−（４−フェノキシブチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１０を調製し、淡黄色の結晶性固体を得た。
収率：４４％、
ｍｐ：２５６−２５８℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０８（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．９１および８．８０（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、７．２９（２Ｈ，ｔ，２ＣＨ）、６．９３（３Ｈ，ｄ，３ＣＨ）、４．０３（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ２）、３．６５（２Ｈ，ｄ，２ＣＨ）、３．１９（４Ｈ，ブロード  ｍ，Ｎ（ＣＨ２）２）、１．９４および１．７９（４Ｈ，２つのブロード  ｍ，２ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２３Ｈ２３Ｆ３Ｎ４Ｏ４Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５４．３２；Ｈ、４．５６；Ｎ、１１．０２、
実測値：Ｃ、５４．３６；Ｈ、４．６７；Ｎ、１１．０７。
【００７４】
実施例１１
２−［４−（３−メトキシプロピル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１１）
【化１７】
2013542980.tif 000021
アミンとして４−（３−メトキシプロピル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１１を調製し、淡黄色の結晶性固体を得た。
収率：３７％、
ｍｐ：１３３−１３４℃（ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、３．４１（２Ｈ，ｄ，ＯＣＨ２）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．５５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３４（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ２）、１．６８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ１７Ｈ１９Ｆ３Ｎ４Ｏ４Ｓの分析：
計算値：Ｃ、４７．２２；Ｈ、４．４３；Ｎ、１２．９６、
実測値：Ｃ、４７．１９；Ｈ、４．５４；Ｎ、１３．０８。
【００７５】
実施例１２
８−ニトロ−２−（４−ペンチルピペラジン−１−イル）−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１２）
【化１８】
2013542980.tif 000022
アミンとして４−ペンチルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１２を調製し、淡黄色の結晶性固体を得た。
収率：７１％、
ｍｐ：１３３−１３４℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３０（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．４８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、１．２６（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ２）、０．８８（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１８Ｈ２１Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５０．２３；Ｈ、４．９２；Ｎ、１３．０２、
実測値：Ｃ、５０．２９；Ｈ、４．８５；Ｎ、１３．１０。
【００７６】
実施例１３
２−［４−（１−エチルプロピル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１３）
【化１９】
2013542980.tif 000023
アミンとして４−（１−エチルプロピル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１３を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：７９％、
ｍｐ：１５２−１５３℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３０（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．６２（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．２３（Ｈ，ｑ，ＣＨ）、１．４７（４Ｈ，ｄ  ｑ，２ＣＨ２）、１．２６（４Ｈ，ｍ，２ＣＨ２）、０．９０（６Ｈ，ｔ，２ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１８Ｈ２１Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５０．２３；Ｈ、４．９２；Ｎ、１３．０２、
実測値：Ｃ、５０．１４；Ｈ、５．０３；Ｎ、１２．９２。
【００７７】
実施例１４
２−［４−（３−シクロヘキシルプロピル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１４）
【化２０】
2013542980.tif 000024
アミンとして４−（３−シクロヘキシルプロピル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１４を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６３％、
ｍｐ：１４５−１４７℃（ｎ−ヘキサン）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８４（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．６２（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．２３（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．５６、１．４９、１．２０、および０．８７（１５Ｈ，４つのｍ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２）５）ｐｐｍ、
Ｃ２２Ｈ２７Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５４．５３；Ｈ、５．６２；Ｎ、１１．５６、
実測値：Ｃ、５４．４８；Ｈ、５．５３；Ｎ、１１．７１。
【００７８】
実施例１５
２−［４−（１−アダマンチル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１５）
【化２１】
2013542980.tif 000025
アミンとして４−（１−アダマンチル）ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１５を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：７７％、
ｍｐ：２３６−２３８℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９４（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．７４（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．０８（３Ｈ，ｍ，３ＣＨ）、１．６３（１２Ｈ，ブロード  ｍ，６ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２３Ｈ２５Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５５．８６；Ｈ、５．１０；Ｎ、１１．５３、
実測値：Ｃ、５５．７８；Ｈ、５．１７；Ｎ、１１．５２。
【００７９】
実施例１６
２−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エチル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１６）
【化２２】
2013542980.tif 000026
アミンとして４−［２−（ベンジルオキシ）エチル］ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１６を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６４％、
ｍｐ：１１７−１１９℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９４（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、７．３３（５Ｈ，ｍ，Ｃ６Ｈ５）、４．４９（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、３．６０（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｏ）、３．４１（２Ｈ，ｄ，ＯＣＨ２）、３．２０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．５５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．４９（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２２Ｈ２１Ｆ３Ｎ４Ｏ４Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５３．４４；Ｈ、４．２８；Ｎ、１１．３３、
実測値：Ｃ、５３．３０；Ｈ、４．１１；Ｎ、１１．３９。
【００８０】
実施例１７
２−（４−｛３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロピル｝ピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１７）
【化２３】
2013542980.tif 000027
アミンとして４−｛３−［２−（４−フルオロフェニル）−１，３−ジオキソラン−２−イル］プロピル｝ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１７を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：７１％、
ｍｐ：１５２−１５４℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６８（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、７．４５（２Ｈ，ｍ，２ＣＨ）、７．１９（２Ｈ，ｔ，２ＣＨ）、４．０１および３．６６（４Ｈ，２つのｍ，ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、３．９１（１Ｈ，ｄ，ＣＨ）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．４２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．８２（１Ｈ，ｄ，ＣＨ）、１．４２（２Ｈ，ブロード  ｍ，ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２５Ｈ２４Ｆ４Ｎ４Ｏ５Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５２．８１；Ｈ、４．２５；Ｎ、９．８５、
実測値：Ｃ、５２．９３；Ｈ、４．２４；Ｎ、９．８４。
【００８１】
実施例１８
２−｛４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１８）
【化２４】
2013542980.tif 000028
アミンとして４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１８を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：３７％、
ｍｐ：１６５−１６７℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、７．１１（２Ｈ，ｔ，２ＣＨ）、６．９４（２Ｈ，ｍ，２ＣＨ）、４．１２（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ２）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５２（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．４８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、１．８３（２Ｈ，ｑ，ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２２Ｈ２０Ｆ４Ｎ４Ｏ４Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５１．５６；Ｈ、３．９３；Ｎ、１０．９３、
実測値：Ｃ、５１．６７；Ｈ、４．０２；Ｎ、１０．８８。
【００８２】
実施例１９
２−（４−プロピルピペラジン−１−イル）−８−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物１９）
【化２５】
2013542980.tif 000029
アミンとして４−プロピルピペラジンを用いた他は、実施例１と同様に化合物１９を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６９％、
ｍｐ：１３０−１３２℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８５および８．７６（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５１（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．３２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．４８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、０．９０（３Ｈ，ｔ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ１６Ｈ１７Ｆ３Ｎ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、４７．７６；Ｈ、４．２６；Ｎ、１３．９２、
実測値：Ｃ、４７．８１；Ｈ、４．２０；Ｎ、１３．８７。
【００８３】
実施例２０
６−クロロ−２−｛４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物２０）
【化２６】
2013542980.tif 000030
水酸化ナトリウム（１．０ｇ；粉末）を１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、温度１０−１５℃で２．４ｍＬの二硫化炭素を加えた。３．０ｇの２，５−ジクロロ−３−ニトロベンズアミドを、温度１０℃で小分けにして溶液に加えた。１５分後、温度１０−２０℃で０．９ｍＬのＭｅＩを加えた。３０分間反応を続行させ、続いて１００ｍＬの水を加えた。その結果生じた６−クロロ−２−メチルチオ−８−ニトロメチル−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンの黄色い固体を、ろ過により分離した。
収率：４７％、
ｍｐ：２００−２０３℃（酢酸エチル）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．５４および８．４０（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、２．７１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）ｐｐｍ、
Ｃ９Ｈ５ＣｌＮ２Ｏ３Ｓ２の分析：
計算値：Ｃ、３７．４４；Ｈ、１．７５；Ｎ、９．７９、
実測値：Ｃ、３７．４０；Ｈ、１．７１；Ｎ、９．８７４。
【００８４】
１．５ｇの６−クロロ−２−メチルチオ−８−ニトロメチル−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンのエタノール１０ｍＬ中懸濁液を、室温において、０．８ｇの４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジンで処理した。反応混合物を５０−６０℃で２０分間加熱した。冷却後、１００ｍＬの水を加えた。その結果生じた６−クロロ−２−｛４−［３−（４−フルオロフェノキシ）プロピル］ピペラジン−１−イル｝−８−ニトロ−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンの淡黄色の固体を、ろ過により分離した。
収率：６８％、
ｍｐ：１９２−１９４℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７８（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．６４および８．５３（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、７．１１および６．９４（４Ｈ，２つのｍ，Ｃ６Ｈ４Ｆ）、４．１２（２Ｈ，ｔ，ＯＣＨ２）、３．８５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５５（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、１．８３（２Ｈ，ｑ，ＣＨ２）ｐｐｍ、
Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＦＮ４Ｏ４Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５２．６６；Ｈ、４．２１；Ｎ、１１．７０、
実測値：Ｃ、５２．５３；Ｈ、４．１４；Ｎ、１１．６９。
【００８５】
実施例２１
６−クロロ−２−［４−（３−シクロヘキシルプロピル）ピペラジン−１−イル］−８−ニトロ−４Ｈ−１，３−ベンゾチアジン−４−オン（化合物２１）
【化２７】
2013542980.tif 000031
アミンとして４−（３−シクロヘキシルプロピル）ピペラジンを用いた他は、実施例２０と同様に化合物２１を調製し、黄色い結晶性固体を得た。
収率：６８％、
ｍｐ：１９４−１９５℃（エタノール）、
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５０（Ｍ＋）、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．６４および８．５３（２つの１Ｈ，２つのｓ，２ＣＨ）、３．９０（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．５２（４Ｈ，ブロード  ｓ，Ｎ（ＣＨ２）２）、２．２６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２）、１．６７、１．４７、１．１９、および０．８５（１５Ｈ，４つのｍ，ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２）５）ｐｐｍ、
Ｃ２１Ｈ２７ＣｌＮ４Ｏ３Ｓの分析：
計算値：Ｃ、５５．９３；Ｈ、６．０３；Ｎ、１２．４２、
実測値：Ｃ、５６．０２；Ｈ、６．１４；Ｎ、１２．４９。
【００８６】
実施例２２
マイコバクテリアに対する、本発明の化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害活性の決定。
【００８７】
スメグマ菌およびヒト型結核菌Ｈ３７Ｒｖに対する活性度をレザズリン還元分析（ＭＩＣ９９）により決定した。その方法は、J. C. Palomino, A. Martin, M. Camacho, H. Guerra, J. Swings, F. Portaels, Antimicrob. Agents Chemother., 2002, 46, 2720-2に詳細に記載されている。結果を表１に示す。
【表１】
2013542980.tif 000032
【００８８】
実施例２３
急性マウスＴＢモデルにおけるヒト型結核菌に対する一般式（１）の化合物（２）および（１９）のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の決定。
【００８９】
物質および方法
体重２２−２３ｇのオスのＢＡＬＢ／ｃ／Ｃｉｔマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ条件で、特定の抗結核活性を決定した。５×１０６ＣＦＵのヒト型結核菌株Ｈ３７Ｒｖを尾静脈側面に静脈注射してマウスに感染させた。ヒト型結核菌は、State Institution Central Research Institute of Tuberculosis, Russian Academy of Medical Sciencesの免疫遺伝学実験室で調合量で培養され、分注された。分注サンプル（１ｍｌ）を−７０℃で保存した。マウスに感染させるため、分注サンプルを溶かし、Ｔｗｅｅｎ８０の０．０２５％リン酸緩衝液に分散させ、５×１０６ＣＦＵ／ｍｏｕｓｅに調節した。全ての実験動物を、それぞれ１０匹づつからなる１０グループのマウスに分けた。感染後２日目から始めて、４週間わたって動物を治療した。週末を除く毎日（一週間に５回）、胃内に化合物が投与された。投与量は０．５ｍＬ／ｍｏｕｓｅであった。次いで、細菌試験のために、頚椎脱臼によって動物を犠死させた。各化学療法的投薬計画の有効性を決定するため、動物の実質臓器における肉眼的変化、および、病的検体からのヒト型結核菌の単離を考慮した。感染させたマウスの肺中のヒト型結核菌ＣＦＵを決定するため、２ｍＬの生理食塩水中で肺を均質化し、次いで、一連の生理食塩水１０倍希釈物を調製し、デュボス寒天によってそれぞれの希釈物５０μＬを希釈平板化した。肺細胞の懸濁液をともなうプレートを３７℃で２１日間培養し、次いで、コロニーの数を計測し、肺中のＣＦＵ量を決定した。
【００９０】
化合物および溶液の調製
化合物（２）および（１９）の正確な量（２００ｍｇ）をガラス製薬瓶に入れ、０．５ｍｌの酢酸を加えた。化合物は直ちに溶解され、この溶液に９９．５ｍｌの水を加えた。このようにして調製された調査対象化合物の溶液を４週間にわたって使用した。化合物（２）および（１９）は、ドーズ量５０ｍｇ／ｋｇで使用し、イソニアジド（ＩＮＨ）はドーズ量２５ｍｇ／ｋｇで使用した。
【００９１】
調査結果
陰性対象群の動物の場合、感染後１９−２０日で病気の最初の兆候が現れた。すなわち、体重が減少し、マウスは、かごの中を活発に歩き回るよりも群を形成する方が多くなり、"脊椎後湾症（gibbosity）"が現れたが、液状便は見られなかった。感染後２６−２９日で対象群での死亡が発生した。この群で死亡したマウスの内臓器官を肉眼検査したところ、結核が進行した病巣、融合した大きな病巣が見られた。脾臓は３倍に拡張していた。化合物（２）および（１９）、ＢＴＺ０４３およびＩＮＨで規定の時間治療した結果、著しい改善があった。肺の状態は正常に近かった。つまり、酸素が供給されてピンク色であり、目視可能な結核感染の病巣は無かった。感染から２６日後、肺中のＣＦＵを決定するために、対象群から生き残っていた３匹のマウスを犠死させた。調査プログラムに従って、治療を始めてから４週間後に、ＣＦＵを決定するべく、１−４匹のマウスの群から肺を抽出した。調査結果を表２にまとめる。
【表２】
2013542980.tif 000033
【００９２】
この実施例は、（２）および（１９）の実施例で表される新規な２−ピペラジノ−１，３−ベンゾチアジン−４−オンが、上述の１，３−ベンゾチアジン−４−オンと同等か、あるいはそれ以上に活性であることを明白に示している。
【００９３】
実施例２４
慢性マウスＴＢモデルにおける、ヒト型結核菌に対する一般式（１）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の決定。
【００９４】
物質および方法
生後４から６週間（２０−２５ｇ）のＢＡＬＢ／ｃマウス（Charles River Laboratories、フランス）を、噴霧器投与法によって株Ｈ３７Ｒｖ（〜１００ＣＦＵ）に感染させた。感染後４週間で治療（各グループあたり５匹のマウス）を始め、１日１回、１週間に６回、４週間にわたり摂食によって化合物を投与した。薬剤を次の濃度（ｍｇ／ｋｇ）で使用した。ＢＴＺ０４３は５０ｍｇ／ｋｇ、ＩＮＨは２５ｍｇ／ｋｇ、本発明の化合物２および８は、ともに５０ｍｇ／ｋｇ。ＩＮＨは水に溶解させ、一方、ＢＴＺ０４３ならびに化合物２および８は０．５％カルボキシメチルセルロース中にて調製した。対象および治療マウスを犠死させ、生存細菌の計数（ＣＦＵカウント）のために、肺および脾臓を７Ｈ１０プレート上で均質化および希釈平板化した。
【００９５】
統計解析
解析前に、肺ＣＦＵをｌｏｇ１０（ｘ＋１）に変換した。ここで、ｘは絶対ＣＦＵ計測数である。対象投薬計画および実験投薬計画間でのグループ当たりの平均ＣＦＵの差異を、GraphPad v5.0を用いた一元配置分散分析により比較した。
【００９６】
調査結果
実験の結果を図１に示す。肺および脾臓中のＣＦＵ量の削減において、ＢＴＺ０４３による治療よりも、化合物２および８による治療の方が、著しく効果が高いことが図１からわかる。化合物２および８による治療は、ＩＮＨよりもわずかに劣るＢＴＺ０４３に対して、統計的に有意な差を示している。慢性ＴＢマウスモデルによるこれらの結果は、本発明の化合物が、有望な抗結核剤として期待できることを示している。
【００９７】
実施例２５
マウスに見られた、ＢＴＺ０４３と比較した場合のＰＢＴＺ１６９（化合物２）による改善された有効性が人間に対しても期待できるかどうかを予測するため、一連のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＭＥ／Ｔ比較実験を行った。まず、濃度５μＭのＰＢＴＺ１６９の擬似胃液中における化学的安定性を測定した。６０分後には化合物の６７％が残存し、５μＭでのヒト血漿中の半減期は６０分よりも長いことがわかった。次に、固有クリアランスを測定するために、ＰＢＴＺ１６９およびＢＴＺ０４３を、濃度１μｇ／ｍＬにおいて、０．１ｍｇのヒトまたはマウス肝臓ミクロソーム（Invitrogen）で培養した。時間経過後に残存する最初の化合物の相対量をＨＰＬＣによって決定した。カルバマゼピンおよびニフェジピンを、それぞれ、低および高固有クリアランス対象として使用した。その結果、ヒトおよびマウス肝臓ミクロソームのいずれにおいても、ＢＴＺ０４３およびＰＢＴＺ１６９はどちらも中程度のクリアランス化合物（９＜Ｃｌｉｎｔ＜４７μＬ／ｍｉｎ／ｍｇタンパク質）であり、ＰＢＴＺ１６９の方が固有クリアランスがわずかに増加することが示された（表３）。ニフェジピンおよびカルバマゼピンはどちらも、期待される高および低固有クリアランスを示した。
【表３】
2013542980.tif 000034
【００９８】
化合物の選択指数（ＳＩ）は、薬剤候補の潜在的な認容性についての良い指標を与える。ＳＩは、そのＭＩＣで割った５０％に細胞毒性効果（ＴＣ５０）を引き起こす化合物濃度である。様々な量の化合物を７２時間培養した後、レザズリン還元分析によって、２つのヒト細胞株である肝細胞株ＨｅｐＧ２および肺細胞株Ａ５４９を用い、ＰＢＴＺ１６９およびＢＴＺ０４３のＴＣ５０を確定した。ＨｅｐＧ２細胞に対するＰＢＴＺ１６９およびＢＴＺ０４３のＴＣ５０は、それぞれ６６．７および６．３μｇ／ｍｌであった。Ａ５４９細胞に対するＰＢＴＺ１６９およびＢＴＺ０４３のＴＣ５０は、それぞれ７３．２および１６．３μｇ／ｍｌであった。ＰＢＴＺ１６９およびＢＴＺ０４３に対し、それぞれのＭＩＣは１および２ｎｇ／ｍｌであった。従って、どちらの場合においても、ＰＢＴＺ１６９についてはかなり低い細胞毒性が観測され、そのＳＩはＢＴＺ０４３のＳＩに比べてはるかに優れている（表４）。臨床的観点から言えば、ＰＢＴＺ１６９は、ＢＴＺ０４３よりも安全で、より認容性が高い。
【表４】
2013542980.tif 000035
【図１】
2013542980.tif 000038
【国際調査報告】
2013542980.tif 000039
2013542980.tif 000040
2013542980.tif 000041