(57)【要約】  ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与するための方法（投与計画）であって、（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、前記第２用量は、前記第１用量を上回る方法に関する。本発明の方法（および同様に本発明の投与計画）は、ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するため、または、ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を連続的に投与することにより仲介される医学的状態を改善および／または防止するためにも適している。さらに、本発明は、その先行する請求項のいずれか１項に定義されるような方法において使用される医薬組成物を製剤するためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の使用に関する。また、本発明の方法／投与計画において定義されるような第１用量および第２用量を含む医薬パッケージまたはキットを開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞の治療方法において使用するためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体であって、前記方法は、
（ａ）第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用を上回る、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２】
ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の連続的（治療的）投与によって仲介される医学的状態、好ましくは有害反応を改善および／または防止するための方法において使用するためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体であって、前記方法は、
（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用を上回る、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項３】
前記ヒト患者は、ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を有している、または、有していると推定される、請求項１または２に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項４】
工程（ａ）における投与の経路および／または工程（ｂ）における投与の経路は、静脈内である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項５】
前記医学的状態、好ましくは前記有害反応は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇を特徴とする、請求項２に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項６】
前記第２期間は、前記第１期間を上回る、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項７】
前記第１期間は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７日（またはそれ以上）であり、好ましくは７日である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項８】
前記第１期間は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード３または４へ上昇することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項９】
前記第１期間は、前記肝臓酵素の上昇した血清中濃度がグレード２へ低下するまで持続する、請求項８に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１０】
前記第１期間は、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード２以下であることを前提として、４日である、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの肝臓酵素は、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴであり、任意にはＧＧＴおよび／またはＡＰでもある、請求項５〜１０のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１２】
前記第２期間は、少なくとも前記患者のＣＤ８＋Ｔ細胞が活性化されるまで持続する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１３】
前記活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも２０％のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型を特徴とする、請求項１２に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１４】
前記第２期間は、少なくとも２、３、４、５または６週間であり、好ましくは３週間である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１５】
前記第２期間は、少なくとも１９日である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１６】
前記第１期間は１日〜１０日であり、第２期間は少なくとも１９日である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１７】
前記第１期間は７日〜９日であり、第２期間は１９日〜２１日である、請求項１６に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１８】
前記第１期間は７日であり、第２期間は２１日である、請求項１７に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項１９】
前記第２用量は、治療効果のある用量である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２０】
前記第２用量の治療効果は、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞を特徴とする、請求項１９に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２１】
前記活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の（第２期間以前のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型と比べて）少なくとも２０％のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型を特徴とする、請求項２０に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２２】
前記第１用量は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度が前記第１期間内にグレード３または４の血清中濃度へ上昇し、グレード２の血清中濃度へ再び低下するような用量である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの肝臓酵素は、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴであり、任意にはＧＧＴおよび／またはＡＰでもある、請求項２２に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２４】
前記第１用量は、１μｇ／ｄ〜６μｇ／ｄであり、好ましくは１μｇ／ｄ〜３μｇ／ｄである、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２５】
前記第２用量は、１０μｇ／ｄ〜１２０μｇ／ｄ（または、治療上必要であればそれ以上）である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２６】
前記第１用量は１μｇ／ｄ〜３μｇ／ｄであり、第２用量は２０μｇ／ｄ〜９０μｇ／ｄである、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２７】
単鎖抗体である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２８】
ＭＴ１１０である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項２９】
グルココルチコイドの（併用）投与をさらに特徴とする、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項３０】
前記グルココルチコイドは、プレドニゾン、プレドニソロンおよび／またはメチルプレドニソロンである、請求項２９に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項３１】
前記ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞は、胃腸および／または肺の癌細胞である、請求項１または３に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項３２】
前記胃腸癌は、胃癌、結腸直腸癌、またはその転移性変種であり、前記肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、またはその転移性変種である、請求項３１に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項３３】
（ｉ）ヒト患者に対してＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与する、または、
（ｉｉ）ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療する、または、
（ｉｉｉ）ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与により仲介される医学的状態を改善または防止する
ための方法であって、
（ａ）少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード４またはそれ以下（好ましくはグレード３）へ上昇し、その後、グレード２へ低下するようにＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）前記抗体を治療効果が出るように投与する工程とを含む方法。
【請求項３４】
（ｉ）ヒト患者に対してＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与する、または、
（ｉｉ）ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療する、または、
（ｉｉｉ）ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与により仲介される医学的状態を改善または防止する
ためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体であって、
請求項１〜３３のいずれか１項に定義されるような投与計画に従って投与される抗体。
【請求項３５】
（ｉ）ヒト患者に対してＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与する、または、
（ｉｉ）ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療する、または、
（ｉｉｉ）ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与により仲介される医学的状態を改善または防止する
ためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体であって、
請求項１〜３４のいずれか１項に定義されるような方法に従って投与される抗体。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか１項に定義されるような方法において使用される医薬組成物の製剤のためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の使用。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか１項に定義されるような前記第１用量および前記第２用量を含む医薬パッケージまたはキット。
【請求項３８】
患者に前記第１および／または第２用量を投与するための手段をさらに含む、請求項３７に記載の医薬パッケージまたはキット。
【請求項３９】
前記第１および／または第２用量は、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法に従った投与／投与計画に適しているように準備されている請求項３７および３８に記載の医薬パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与するための方法（投与計画）であって、（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、前記第２用量は、前記第１用量を上回る方法に関する。本発明の方法（および同様に本発明の投与計画）は、ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するため、または、ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を連続的に投与することにより仲介される医学的状態を改善および／または防止するためにも適している。さらに、本発明は、その先行する請求項のいずれか１項に定義されるような方法において使用される医薬組成物を製剤するためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の使用に関する。また、本発明の方法／投与計画において定義されるような第１用量および第２用量を含む医薬パッケージまたはキットを開示する。
【背景技術】
【０００２】
抗体ベースの癌治療法は、活性であるために癌細胞の表面にしっかりと結合される標的抗原を必要とする。表面標的との結合により、抗体は、致死信号を癌細胞へ送達することができる。理想的な治療計画では、標的抗原は、各癌細胞には多数存在して到達可能であり、正常細胞には存在せず、遮蔽され、または、それほど多数ではない。この状況は、抗体ベースの治療法の規定量が癌細胞を効果的に攻撃するが正常細胞は攻撃しない治療域についての基準を規定する。
【０００３】
ＥｐＣＡＭは、結腸直腸、乳房、肺、胃、膀胱、前立腺、卵巣、および膵臓に発生する癌を含むほとんどのヒト腺癌に見つかる。例えば、結腸直腸癌では、９８％を上回る患者は、原発腫瘍における癌細胞にＥｐＣＡＭの強く頻繁な発現を示す（非特許文献１）。癌細胞が脱分化し、転移期に進行すると、ＥｐＣＡＭは、癌細胞から消滅しない。乳癌、卵巣癌、および一部の扁平上皮癌などのいくつかの癌では、ＥｐＣＡＭ発現は、デノボ発現であるか、または、正常上皮組織に比べて高度に発現誘導されている。ＥｐＣＡＭ発現が癌細胞においてアンチセンスまたはｓｉＲＮＡによって抑制される場合、細胞は、軟寒天中での増殖、移動、および、侵襲性成長を停止する。逆に、静止細胞におけるＥｐＣＡＭの異所発現は、これらの性質を与え、静止細胞の血清成長因子からは独立した成長につながる（非特許文献２）。ＥｐＣＡＭは、現在、癌幹細胞マーカーのリストに加えられている（非特許文献３）。癌幹細胞は、腫瘍を一定に再増殖させ、化学療法抵抗性および腫瘍再発の原因になると考えられる。ＥｐＣＡＭ発現は、乳房、結腸、前立腺、肝臓、および膵臓の腫瘍に由来する癌幹細胞に見出されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】P. Went etal., Br. J. Cancer 94: 128 (2006)
【非特許文献２】M. Munz et al., Oncogene 23: 5748 (2004)
【非特許文献３】J. E. Visvader および G. J. Lindeman, Nat. Rev.Cancer 8: 755 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＥｐＣＡＭは、現在、複数の抗体ベースの治療的アプローチの対象となっており、これらのアプローチは、臨床開発の様々な段階にある。これらのＥｐＣＡＭ抗体によって患者を治療した際に、以下の有害事象が報告されている。
【０００６】
カツマキソマブ：
発熱、心頻拍を引き起こす全身的サイトカイン放出
リンパ球の減少
デキサメタゾンが少ない状態で高用量の抗体を用いるとトランスアミナーゼにより肝臓パラメータが最高Ｇｒａｄｅ４まで上昇
ＶＢ４−８４５
微熱、悪心、嘔吐
トランスアミナーゼの上昇
ＭＴ１１０は、上皮に発生するほとんどの固形癌に発現した上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）およびＴ細胞のＣＤ３に結合する二重特異性単鎖抗体作成物（ＢｉＴＥ）である。ＭＴ１１０は、ヒト結腸直腸癌（ＣＲＣ）異種移植を含む様々な前臨床モデルにおいて、高い抗腫瘍活性を示した。ＢｉＴＥ抗体についての概念は、Ｂ細胞リンパ腫を有する患者（ｐｔｓ）におけるブリナツモマブ（ＣＤ１９ｘＣＤ３ＢｉＴＥ）によって臨床により実証された（Bargou R et al. (2008)Science 321: 9741）。ＭＴ１１０は、（転移性）胃腸癌および肺癌の患者による用量増加第１相試験において現在研究中である。抗ＥｐＣＡＭｘ抗ＣＤ３二重特異性単鎖抗体の安全性および許容度を評価するために、化合物を、長期持続輸液によって投与した。輸液の開始後、熱、悪寒、または他の輸液反応を示した患者はいなかった。実質的な全身性サイトカインレベルは見出せなかった。しかしながら、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体の輸液の開始時に、肝臓酵素の一時的上昇が観察された。
【０００７】
治療される患者の肝臓酵素などの肝臓パラメータに影響を及ぼさない抗ＥｐＣＡＭ抗体ベースの治療法を設計することは、明らかに困難である。
【０００８】
よって、本発明の技術的課題は、上記問題を解決する方法を提供することであった。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、この必要性に対応するものであり、したがって、ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与するための方法および投与計画に関する実施形態を提供する。
【００１０】
これらの実施形態は、本明細書に特性が示され且つ説明されており、請求項に反映されている。
【００１１】
なお、本明細書では、単数形の「ある（ａ、ａｎ）」「前記（ｔｈｅ）」は、文脈が明示しない限り複数を指すことも含む。したがって、例えば、「ある試薬」は、１つ以上のこのような異なる試薬を含み、「前記方法」は、本明細書で説明した方法に変更または置換することのできる当業者の知る同等のステップおよび方法への言及を含む。
【００１２】
本開示において引用される全ての発行物および特許は、参照によりその全内容がここに引用される。参照により引用される材料が本明細書と矛盾する、または、整合しない場合には、このような材料よりも本明細書が優先される。特記しない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の各要素を指すものとする。当業者は、本明細書に記載された発明の具体的実施形態の多くの均等物を、ルーチン実験だけで認識するであろう、または、確認することができるであろう。このような均等物は、本発明に含まれるものとする。
【００１３】
本明細書、および、続く請求項を通して、文脈上必要でない限り、「含む」という用語、および、「含み」「含んでいる」などの変化形は、表記された値、ステップ、または、値若しくはステップのグループを含むことを意味し、その他の値、ステップ、または、値若しくはステップのグループを除外しないものとする。
【００１４】
本明細書の文中にいくつかの文献が引用されている。ここに引用した各文献（全ての特許、特許出願、科学出版物、製造業者の仕様書、指示書などを含む）は、本明細書の前後を問わず、参照によりその全内容がここに引用される。これらにおける何れも、先行発明により本発明がこのような開示に先行しない、ということを認めているものとして解釈されるべきではない。
【００１５】
有害事象、特に、ＥｐＣＡＭ特異性抗体で観察されるＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＰなど（「ＡＰ、ＡＬＴおよびＡＳＴなど」という用語は本明細書の他の部分において説明される）の肝臓パラメータの驚異的な増加を考慮すると、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体を本明細書に提供したような投与計画に従って投与すれば患者が許容するように投与できる、という発見は、確かに注目に値する。
【００１６】
具体的には、本願発明者らは、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体などのＥｐＣＡＭ特異性抗体によって治療される患者にとって追加の負担になるかもしれない不都合な程度まで肝臓酵素の血清中濃度が著しく上昇することを観察した。しかしながら、驚くことに、本明細書に記載のような方法／投与計画に従って抗体を投与したことを前提とすると、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体に対する再暴露においてトランスアミナーゼの増加は起こらなかった。つまり、本願発明者らは、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体による治療前にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体に患者を「適応」させておくことは不都合な有害反応（特に、肝臓パラメータの不都合な上昇）を回避するために有効だ、ということを見出した。
【００１７】
したがって、本発明は、第１観点によると、ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与するための方法（投与計画）であって、
（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用量を上回る方法に関する。
【００１８】
本発明に関しては、ヒト患者がＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を有している、または、有していると推定されることが好ましい。
【００１９】
本発明に関しては、「方法」という用語は、本発明の方法において使用される「投与計画」を含むものとする。
【００２０】
本発明に関しては、「ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与」または「ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与すること」、または、その他の文法形式は、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３抗体が薬剤的に許容可能な仲介物を任意に含む医薬組成物の形態である、ということを意味している。したがって、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を含む医薬組成物がヒト患者に投与されるものとする。
【００２１】
本発明に関しては、「患者」という用語は、ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞の治療を必要とする被検者、または、個人を意味する。患者は、哺乳類であり、好ましくはヒトである。
【００２２】
「投与」という用語は、その全ての文法形式において、（医薬組成物の形態の）ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を単独の治療薬として、または、別の治療薬と組み合わせて投与することを意味している。
【００２３】
したがって、本発明の医薬組成物は、併用療法アプローチにおいて、すなわち、他の薬剤または薬物、例えば、患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するための他の薬剤、および／または、グルココルチコイド、および／または、本発明の方法に関して有用であろう他の治療薬との同時投与において採用される、ということが想定される。
【００２４】
本明細書における医薬組成物の投与は、静脈内投与であることが好ましい。これは、本発明の方法において工程（ａ）における投与の経路、および／または、工程（ｂ）における投与の経路が静脈内であることを意味する。
【００２５】
ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の（例えば、医薬組成物の形態での）投与は、連続的に、または本明細書においても使用されるように持続的に行われてもよい。連続的な投与は、実質的に中断のない投与を指す。「実質的に中断が無い」とは、通常はフローまたは空間的広がりの中断を伴う連続的な投与を含む。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態では、第２用量は、治療効果がある。有効量は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化することが好ましい。活性化されたＣＤ８＋細胞は、ＣＤ２５および／またはＣＤ６９表現型によって特徴付けられることが好ましい。「活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞」および「ＣＤ２５および／またはＣＤ６９表現型」という用語は、本明細書の他の部分において説明される。
【００２７】
「治療効果のある量」または「治療効果がある」とは、投与されたものに対して治療効果を生じるＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の用量を意味する。
【００２８】
正確な用量は、治療の目的に応じて決まり、周知の技術を用いる当業者によって確定可能になるであろう。当技術分野において周知のように、且つ、上述の通り、年齢、体重、一般的健康、性別、治療食、薬物相互作用および状態の深刻度に対する調整は必要であろうし、当業者によるルーチン実験によって確定可能になるであろう。「治療効果がある」とは、本発明に関しては、治療的アプローチの前提条件であるＣＤ８＋Ｔ細胞の上記活性化を少なくとも含む。本発明の各方法または方法工程の治療効果は、治療効果を示すであろう全ての確立された方法およびアプローチによって更に検出可能である。例えば、治療効果は患部組織／臓器を外科的切除または生検し、続いて免疫組織化学的（ＩＨＣ）または同等の免疫学的方法による分析を行うことで検出される、ということが想定される。あるいは、患者の血清中の腫瘍マーカー（存在していれば）を治療的アプローチが既に有効かどうかを診断するために検出する、ということも想定される。さらに、または、代替として、当業者が治療効果が既にあるかどうかを評価するのを助けるであろう患者の一般的外見（フィットネス、ウェルビーイング、腫瘍により仲介された病気の減少など）を評価することも可能である。本発明の化合物の治療効果を観察できるようにする多くの他の方法は、当業者には周知である。
【００２９】
更なる観点によれば、本発明は、ヒト患者におけるＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するための方法であって、
（ａ）第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用量を上回る方法に関する。
【００３０】
更なる観点において、本発明は、ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の連続的（治療的）投与によって仲介される医学的状態、好ましくは有害反応を改善および／または防止するための方法であって、
（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用量を上回る方法に関する。前記ヒト患者は、ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を有する、または、有していると推定されることが好ましい。
【００３１】
ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与によって仲介される医学的状態、好ましくは有害反応を改善または防止するための方法の好ましい形態では、前記医学的状態は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇により特徴付けられる。
【００３２】
前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇は、本明細書の以下で更に説明する有害事象共通用語規準ｖ３．０（ＣＴＣＡＥ）によると、その最高値はグレード４である。したがって、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇は、グレード４が最高値であるが、グレード１、２、または３までの場合もある。
【００３３】
上昇は、一過性のものであることが好ましい。「一過性」は、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇に関して使用される場合、上昇が永久的ではなく治療の停止後または輸液さらに継続して行っているうちに解消する、ということを意味している。肝臓酵素の血清中濃度の一過性の上昇は肝臓の画像での病理所見、実質的組織損傷、または合成パラメータ障害を必ずしも伴っていない、ということも想定される。このことは、ＭＴ１１０、すなわち本発明の抗体によって治療された患者の肝実質を映す図７に例示されている。図に示すように、肝実質は、肝トランスアミナーゼのピークにおいて実質的細胞損傷（ＨＥ染色）のサインを示していない。
【００３４】
概説すると、肝臓酵素の活性度は、肝臓のコンディション／状態についての指針を示すので、肝臓の「窓」として一般的に使用される。例えば、肝臓がアルコール若しくは他の薬剤によって損傷されている、または、他の何らかの理由によって異常機能を有している場合、肝臓酵素が血液へ漏れ出す。なお、肝臓酵素は、通常は血中に存在しない。
【００３５】
したがって、肝臓酵素の血清中濃度は、肝臓酵素の活性度によって測定できる。一般的に許容される基準値を上回る（すなわち、上昇したまたは高まった）肝臓酵素の活性度は、通常、肝臓の潜在的な異常機能および／または損傷の指標となっている。
【００３６】
したがって、肝臓酵素の活性度は、肝臓機能検査（ＬＦＴまたはＬＦ）、すなわち、患者の肝臓の状態についての情報を提供するために設計された臨床生化学検査室血液分析によって測定可能である。肝臓酵素について、基準値（正常値）は知られており、一般的に受け入れられている。基準値は、一連の医学的検査結果を解釈するために医療従事者によって使用される価値体系である。基準値は、通常、９５パーセントの正規母集団が当てはまる、または、平均からの２標準偏差以内の価値体系として定義される。基準値は、多数の臨床検査からデータを集めることによって決定される。
【００３７】
肝臓酵素では、基準値は、国際単位（ＩＵ）として与えられている。国際単位は、測定された生物学的活性度または影響に基づいている。
【００３８】
肝臓酵素の血清中濃度の（好ましくは一過性の）上昇は、正常上限（ＵＬＮ）の倍数で測定される。ＵＬＮの倍数は、ＮＣＩ有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）ｖ３．０（出版日：２００３年１２月１２日）に従って、グレードに分類される。Ｇｒａｄｅは、有害反応の重症度を意味する。ＣＴＣＡＥｖ３．０は、グレード１から５を、各有害反応の重症度の独自の臨床記述で記載している。
Ｇｒａｄｅ１：軽度の有害反応
Ｇｒａｄｅ２：中等度の有害反応
Ｇｒａｄｅ３：高度の有害反応
Ｇｒａｄｅ４：生命を脅かすまたは活動不能とする有害反応
Ｇｒａｄｅ５：患者の死亡
アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）などの肝トランスアミナーゼは、肝臓の細胞完全性の状態を示すものである。なぜなら、肝臓が損傷している、または、機能不全である場合は、これらの酵素は、損傷した、または、機能不全の肝臓細胞から血液へ漏れ出るからである。
【００３９】
したがって、本発明の方法に関しては、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴは、好ましい肝臓酵素（肝臓マーカー）である。いくつかの好ましい実施形態では、前記少なくとも１つの肝臓酵素は、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴと、任意でＧＧＴおよび／またはＡＰとを含む。
【００４０】
血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＳＧＯＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＡＴ）とも呼ばれるアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）は、肝実質細胞に関連する他の酵素である、という点でアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）に類似している。この酵素は、急性肝臓障害において発生するが、赤血球、心筋、および骨格筋にも存在し、したがって、肝臓に特有のものではない。ＡＳＴのＡＬＴに対する比率は、肝臓障害の原因を差別化する際に有効なこともある。上昇したＡＳＴレベルは、肝臓障害に特有のものではない。ＡＳＴについての通常の基準値は、１０〜５０ＩＵ／Ｉである。
【００４１】
有害事象共通用語規準ｖ３．０によると、ＡＳＴのグレーディングは以下の通りである。
表１
2013505223.tif 000002
【００４２】
血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）またはアラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＡＴ）とも呼ばれるアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）は、肝実質細胞（肝細胞）に存在する酵素である。細胞が損傷を受けたら、細胞はこの酵素を血液へ漏らし、血液中で酵素が測定される。
【００４３】
ＡＬＴは、ウイルス性肝炎またはパラセタモール（アセトアミノフェン）服用量過多などの急性肝臓障害において急激に上昇する。ＡＬＴについての通常の基準値は、５〜５０ＩＵ／Ｉである。
【００４４】
有害事象共通用語規準ｖ３．０によると、ＡＬＴについてのグレーディングは、以下の通りである。
表２
2013505223.tif 000003
【００４５】
ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）またはアルカリホスファターゼ（ＡＰ）などの他の肝臓酵素は、胆道に関連するコンディションを示す。
【００４６】
したがって、本発明に関しては、さらなる肝臓酵素としてアルカリホスファターゼ（ＡＰまたはＡＬＰ）をそれぞれ増加または減少について測定できる、ということも想定される。ＡＰは、肝臓の胆管を裏打ちする細胞における酵素である。血漿中のＡＰレベルは、肝臓の大胆管閉塞症、肝内性胆汁鬱滞,
または浸潤性疾患により上昇する。ＡＰは、骨および胎盤組織にも存在し、成長期の子供（骨が再造詣されるため）、および、高齢のパジェット病患者において高い。ＡＰについての通常の基準値は、３０〜１２０ＩＵ／Ｉである。
【００４７】
有害事象共通用語規準ｖ３．０によると、ＡＰのグレーディングは以下のとおりである。
表３
2013505223.tif 000004
【００４８】
本発明に関しては、それぞれ増加または減少について測定できる他の肝臓酵素は、ガンマグルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）である。この酵素は、些細な、無症状レベルの肝機能不全によってさえ上昇されることが知られている。この酵素は、ＡＬＰの孤立上昇の原因を特定する際に有用でもある。ＧＧＴについての通常の基準値は、０〜５１ＩＵ／Ｉである。
【００４９】
有害事象共通用語規準ｖ３．０によると、ＧＧＴについてのグレーディングは以下のとおりである。
表４
2013505223.tif 000005
【００５０】
本発明の方法の一観点では、前記第２期間は、前記第１期間を上回る。「上回る」という用語は、第２期間が第１期間よりも長く、好ましくは少なくとも１日長いということを意味する。本発明の方法／投与計画の他の観点によると、前記第１期間は、前記第２期間を上回る、または、第２期間と同じである。
【００５１】
第１期間および第２期間は第３期間によって中断される（すなわち、第１期間と第２期間との間に休止期間がある）、ということも想定される。第３期間は、できる限り短いほうが好ましい（なぜなら、ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌がその間に成長するかもしれないからである）。しかしながら、第３期間は、１日以上であってもよいし、状況によっては１週間、２週間、またはそれ以上でもよい。中断の目的は、それが必要だとすれば、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇から患者が回復するためのレクリエーションフェーズとみなされるはずである。好ましい実施形態では、（第１期間と第２期間との間の）前記第３期間は、２週間以下であり、１週間以下がより好ましい。
【００５２】
本発明の他の観点では、前記第１期間は少なくとも１、２、３、４、５、６、７日間である、と想定され、これにより、８、９、１０、１１、１２、１３または１４日といったより長い期間も除外されない。この場合、「より長い」は、最小時間単位として全（１）日に限定されない、すなわち、１／２日、または完全に時間であることも考えられる。しかしながら、最小時間単位は丸一日であることが好ましい。添付の例に示す結果を考慮すると、第１期間は理想的には７〜９日の間（７、８、９日）であり、７日が好ましいことが分かる。前記ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード４またはそれ以下（好ましくはグレード３）へ上昇し、その後、グレード２へ低下するように、この第１期間に投与されることが好ましい。肝臓酵素のこの上昇および低下は、本明細書の他の部分において説明されている。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、「Ｘ〜Ｙ（Ｘ ｔｏ Ｙ）」と定義される時間間隔は、「Ｘ〜Ｙの間（ｂｅｔｗｅｅｎＸ ａｎｄ Ｙ）」と定義される時間間隔と同じである。両時間間隔は、具体的には、上限と下限とを含む。このことは、例えば、時間間隔「１日〜４日」または「１日〜４日」の間は、１、２、３、および／または４日の期間を含む。
【００５４】
本明細書において言及するように、発明者らは、ヒト患者を第１期間中にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体による治療に「適応」させることで、第２期間に増加した第２用量の抗体でヒト患者を治療することができ、これにより、有害反応（少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇）をよりよくコントロールすることができる、すなわち、回避、または、少なくとも、ＣＴＣＡＥにおける許容可能なグレード内に収めることができる、ということを観察した。
【００５５】
しかしながら、この改善を達成するためには、ヒト患者を、第１期間に第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与することにより該抗体に「適応」させる必要がある（ただし、第１用量は、続く（第２）用量よりも少ない）。
【００５６】
第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体をヒト患者に対して連続的に投与する第１期間は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度が最大でグレード３または４へ上昇する（したがって、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード１または２へ上昇することを含む）ことによって特徴付けられることが好ましい。上昇は、第１期間の開始時の前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度と比較して分かる。
【００５７】
「適応」フェーズ（第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を連続的にヒト患者に投与する第１期間を含む）は、前記少なくとも１つの肝臓酵素の上昇した血清中濃度が、好ましくはグレード２へ、または、グレード１にまで低下するまで持続することが好ましい。前記適応フェーズは、（上述の第３期間が採用される場合は）この第３期間も含んでいてもよく、この第３期間は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇から（必要であれば）患者を回復させるためのレクリエーション的な休止のことである。
【００５８】
つまり、第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体をヒト患者に連続的に投与する第１期間は、以前に説明したように、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇、および、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の低下によって特徴付けられる。この低下は、第３期間が採用される場合は、第３期間中にも起こる。したがって、この上昇および低下は、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体が投与されるヒト患者の適応フェーズを特徴付け、これにより、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度を過度に上昇させることなく第２用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を第２期間に連続的に投与することができる。
【００５９】
したがって、第１期間（または、第１および第３期間）は、上昇および低下に必要な時間によって決まり、したがって、患者毎に様々である。しかしながら、本発明の示唆を適用することにより当業者は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇を、血清中濃度を測定し、測定したものを、「適応フェーズ」の開始時、すなわち、第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体をヒト患者に連続的に投与する第１期間（および採用した場合は第３期間）の開始時の血清中濃度と比較することによって決定することができる。
【００６０】
同様に、当業者は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の低下を、血清中濃度が最高グレード４に達した後にその血清中濃度を測定して血清中濃度が低下したかどうかを評価することによって決定することができる。
【００６１】
本発明の方法の特に好ましい実施形態では、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体をヒト患者に連続的に投与する第１期間は、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度が前記期間中にグレード２を上回って上昇しないことを前提として、４日以下（例えば、３日）である。
【００６２】
第１期間の継続期間同様に、第２期間の継続期間および第３期間の継続期間は、ヒト患者の年齢、性別、体重などに応じて可変であってもよい。
【００６３】
第２期間は、前記患者のＣＤ８＋Ｔ細胞が活性化されるまで持続することが好ましい。
【００６４】
ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＣＤ８用の抗体を適用してＣＤ８＋Ｔ細胞を分別することによる、および／または、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化の指標となる細胞表面マーカーに対して特定の抗体を適用することによるＦＡＣＳ分析などの当分野において知られている手段および方法によって決定できる。
【００６５】
したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型が少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれ以上増加することによって特徴付けられることが好ましい。ＣＤ８＋Ｔ細胞の合計数は、当分野において知られている手段および方法、例えば、前記患者の抹消血のサンプルのＦＡＣＳ分析によって決定することができる。第２期間中の前記上昇は、第１期間に先行する、または、第２期間に先行する患者のＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型と比較して分かる。したがって、利用可能な基準値を得るために第１期間に先行して、または、第２期間に先行して患者のＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型を測定する、ということが想定される。
【００６６】
本発明の方法の他の実施形態では、前記第２期間は、少なくとも２週間、すなわち、２、３、４、５、６、７、８週間またはそれ以上であり、３週間であることが好ましい。「１週間」という用語は、丸７日を意味するものとする。
【００６７】
好ましい実施形態において、前記第２期間は、少なくとも１９日、すなわち、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日またはそれ以上である。前記第２期間は、治療効果が検出されるまで持続することが好ましい。「治療効果」は、本発明に関しては、ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも上記の活性化を含み、このことは、いずれの治療効果に対しても前提条件である。
【００６８】
本明細書の方法／投与計画のより好ましい実施形態では、前記第１期間は、１日〜１０日であり、第２期間は、少なくとも１９日である。
【００６９】
さらに好ましい実施形態では、前記第１期間は７〜９日であり、第２期間は１９日〜２１日である。第１期間は７日であり、第２期間は２１日であることが特に好ましい。別の特に好ましい実施形態では、前記第１期間は１週間であり、前記第２期間は少なくとも３週間であり、第３期間は１週間または２週間である。
【００７０】
いくつかの実施形態においては、前記第１用量は、治療効果が無い。「治療効果が無い」とは、この文脈においては、上述のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化が好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型の増加が２０％以下であることによって特徴付けられる、ということを意味する。ＣＤ８＋Ｔ細胞の合計数は、当分野において知られている手段および方法、例えば、前記患者の抹消血のサンプルをＦＡＣＳ分析することによって決定できる。前記上昇は、第１期間に先行する患者のＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型と比較して分かる。したがって、利用可能な基準値を得るために第１期間に先行して患者のＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型を測定する、ということが想定される。
【００７１】
第２用量は治療効果がある、ということが想定される。前記第２用量の治療効果は、本明細書の他の部分で説明されるように、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞によって特徴付けられる。前記活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型の増加が（第２期間に先行するＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型に比較して）２０％を上回ることによって特徴付けられる。
【００７２】
本発明の方法の他の実施形態において、前記第１用量は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度が、第１期間内に、グレード３または４の血清中濃度に上昇し、グレード２の血清中濃度に再び低下する用量である。「肝臓酵素」、「グレード」などの用語は、本明細書の他の部分において説明されている。
【００７３】
本発明の方法／投与計画の更なる観点において、前記第１用量は、１〜６μｇ／ｄ、すなわち、１、２、３、４、５、または６μｇ／ｄである（１〜３μｇ／ｄ、すなわち、１、２、または３μｇ／ｄが好ましい）。なお「ｄ」は１日を示す。例えば、１μｇ／ｄの用量とは、１μｇのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体が１日に亘って均等または連続的に投与されることを意味する。「１日に亘って連続的に」とは、中断なく恒久的に行える輸液のことを指す。第１用量を前記第１期間中に徐々に増加し（すなわち、第１期間を、用量の増加により特徴付けられる複数の段階に分割し）、前記第２用量未満の用量で増加を終わる、ということも想定される。第１期間内のこの段階的な増加は、日単位でもよいし、または、週単位で行ってもよい（例えば、図８参照）。したがって、第１期間を治療に対する患者の段階的な適応により特徴付けられる「用量増加」治療／投与計画（例えば、１週間は３μｇ／日、続いて、１週間は６μｇ／日または１２μｇ／日）で始める、ということが想定される。
【００７４】
本発明の方法／投与計画の更なる観点では、前記第２用量は、１０〜１２０μｇ／ｄ、すなわち、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、または１２０μｇ／ｄ、またはそれ以上である。
【００７５】
「μｇ」という用語は、「μｇのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体製剤」を含む。不正確に折り畳まれるのは前記ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体製剤の多くとも１０％であることが好ましい。したがって、好ましい実施形態では、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体が正しく折り畳まれる。抗体製剤は、例えば、溶解防止剤、界面活性剤、増量剤、結着剤、および／または、増量剤などの更なる配合剤を任意で含んでいてもよい、ということも考えられる。このような更なる配合剤の量は、本発明の「用量」および／または、方法に関して使用されているような「μｇ」に含まれないことが好ましい。
【００７６】
好ましい実施形態では、前記第１用量は１μｇ／ｄ〜３μｇ／ｄ（すなわち、１、２、または３）であり、第２用量は、２０μｇ／ｄ〜９０μｇ／ｄ（すなわち、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０）である。
【００７７】
本明細書における範囲は１０の増加量で示されているものとする。しかしながら、これらの範囲は、比較的小さな増加量、例えば１によって例示される増加量（１０から３０は、例えば、１０、１１、１２、１３、１４など３０まで含む）、または、さらに小さな増加量、例えば、小数点以下の値も含む。
【００７８】
好ましい実施形態では、前記投与計画は、図８に示すようなものである。これら投与計画についての更なる詳細は、本発明の実施形態を含む実施例４および５に示されている。
【００７９】
本明細書の上記に記載のように、本発明は、ヒトＣＤ３イプシロン鎖の抗原決定基に結合可能な第１結合ドメインと、ヒトＥｐＣＡＭに結合可能な第２結合ドメインとを含むＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を採用する治療／投与計画の方法に関する。本発明の方法に係る二重特異性分子の例は、国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に詳しく記載されており、参照によりその全内容がここに引用される。これに開示された全ての具体的なＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体は、その変種、断片、同等物などを含めて本発明の特に好ましいＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体である。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、「ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体」は、２つの結合ドメインを有する一本鎖ポリペプチドを指す。このような単鎖抗体は、本発明の方法／投与計画に関して好ましいものである。各結合ドメインは、抗体重鎖からの少なくとも１つの可変領域（「ＶＨまたはＨ領域」）を備え、第１結合ドメインのＶＨ領域は、ＣＤ３イプシロン分子と特異的に結合し、第２結合ドメインのＶＨ領域は、ＥｐＣＡＭと特異的に結合する。２つの結合ドメインは、短ポリペプチドスペーサーによって任意に互いに連結されている。ポリペプチドスペーサーの限定されていない例は、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｓ）およびその反復である。各結合ドメインは、抗体軽鎖からの１つの可変領域（「ＶＬまたはＬ領域」）をさらに含んでいてもよく、第１および第２結合ドメインの各々の範囲内におけるＶＨ領域およびＶＬ領域は、例えば、欧州特許第６２３６７９号明細書に開示され権利請求されたような種類のポリペプチドリンカーを介して互いに連結されているが、いずれの場合にも、第１結合ドメインのＶＨ領域およびＶＬ領域と第２結合ドメインのＶＨ領域およびＶＬ領域とが共に各第１および第２結合ドメインに特異性結合できるように互いに対になれるように十分に長い。このようなＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体は、国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に詳細に説明されており、参照によりその全内容をここに引用する。
【００８１】
「結合ドメイン」という用語は、本発明では、任意の標的構造／抗原／抗原決定基と特異的に結合／相互作用するポリペプチドのドメインを特徴付けるものである。したがって、結合ドメインは、「抗原−相互作用部位」である。「抗原−相互作用部位」という用語は、本発明によれば、特定の抗原または抗原の特定のグループ、例えば、異なる種属における同一抗原と特異的に相互作用することのできるポリペプチドのモチーフを定義する。上記結合／相互作用は、「特異的認識」を定義するとも理解される。「特異的に認識する」という用語は、本発明では、抗体分子は抗原、例えば、本明細書において定義されるようなヒトＣＤ３抗原の少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、特に好ましくは少なくとも４つのアミノ酸と特異的に相互作用、および／または、結合することができる、ということを意味する。このような結合は、「鍵と鍵穴原理」の特異性によって例証されてもよい。したがって、結合ドメインのアミノ酸配列の特異性モチーフと抗原とは、これらの一次、二次、または三次構造の結果として、且つ、前記構造の二次修飾の結果として、互いに結合する。また、抗原−相互作用部位とその特定の抗原との特異性相互作用は、抗原に対する前記部位の単純な結合となってもよい。あるいは、結合ドメイン／抗原−相互作用部位とその特定の抗原との特異性相互作用は、例えば、抗原の配座の変化、抗原のオリゴマー化などの誘発により、信号発生という結果になってもよい。本発明に一致する結合ドメインの好ましい例は、抗体である。結合ドメインは、モノクローナルまたはポリクローナルの抗体でもよいし、またはモノクローナルまたはポリクローナルの抗体に由来するものでもよい。
【００８２】
「抗体」という用語は、誘導体または結合特異性を依然として維持しているその機能的な断片を含む。抗体を産生するための技術は、当技術分野において周知であり、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ「Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988、ならびに、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ「Using Antibodies: A Laboratory Manual」Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999に記載されている。「抗体」という用語は、異なるクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）およびサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）の免疫グロブリン（Ｉｇ’ｓ）も含む。
【００８３】
「抗体」という用語の定義は、とりわけＦａｂ断片のような抗体断片だけではなく、キメラ抗体、単鎖抗体、およびヒト化抗体などの形態も含む。抗体断片または誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ断片、または、単一ドメイン抗体、単一可変ドメイン抗体、もしくは他のＶ領域またはドメインからは独立して抗原または抗原決定基と特異性結合する、ＶＨまたはＶＬでもよい、可変ドメインを１つだけ備える免疫グロブリン単一可変ドメインを更に含む。例えば、上記で引用したＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）および（１９９９）を参照。このような免疫グロブリン単一可変ドメインは、分離された抗体単一可変ドメインポリペプチドだけではなく、抗体単一可変ドメインポリペプチド配列の１つ以上のモノマーを含むより大きなポリペプチドも含む。
【００８４】
本明細書中で使用される場合、ＣＤ３イプシロンは、Ｔ細胞受容体の一部として表される分子を指し、従来技術においてその典型とされるような意味を有している。ヒトにおいて、それは、個別に、または、独立して組み合わされた形態で、全ての知られているＣＤサブユニット、例えば、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３アルファ、およびＣＤ３ベータを含む。ヒトＣＤ３イプシロンは、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）受入番号ＮＭ＿０００７３３に記載されている。
【００８５】
ヒトＥｐＣＡＭは、ジェンバンク受入番号Ｎ＿００２３５４に記載されている。
【００８６】
本発明の方法／投与計画の好ましい実施形態では、二重特異性単鎖抗体作成物は、ＥｐＣＡＭＶＬ−ＥｐＣＡＭＶＨ−ＣＤ３ＶＨ−ＣＤ３ＶＬ二重特異性単鎖抗体作成物である。
【００８７】
本発明の方法／投与計画のより好ましい実施形態では、二重特異性単鎖抗体作成物は、国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に開示された配列番号８８（ＣＤＲＨ１）、配列番号９２（ＣＤＲＨ２）、および配列番号９６（ＣＤＲＨ３）に記載のＣＤＲＨ１−３と、国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に開示された配列番号１００（ＣＤＲＬ１）、配列番号１０２（ＣＤＲＬ２）、および配列番号１０４（ＣＤＲＬ３）に記載のＣＤＲＬ１−３とを、すなわち、ＭＴ１１０を特徴付けるＣＤＲを含んでいる。
【００８８】
前記配列番号を、以下の表にも記載する。
表５
2013505223.tif 000006
【００８９】
本発明の方法のよりいっそう好ましい実施形態では、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体作成物は、国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に開示され且つ以下に記載の配列番号６３に定義されるようなアミノ酸配列、または、前記配列番号６３に少なくとも９０％、好ましくは９５％の一致性を有する（本明細書でも以下に記載の）アミノ酸配列を含むか、または、これらからなる。この配列により特徴付けられるＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体作成物は、ＭＴ１１０である。
【００９０】
ＭＴ１１０のアミノ酸配列
2013505223.tif 000007
【００９１】
2013505223.tif 000008
【００９２】
2013505223.tif 000009
【００９３】
したがって、本発明の方法／投与計画の最も好ましい実施形態では、前記ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体は、上記のアミノ酸配列によって特徴付けられるようなＭＴ１１０である。
【００９４】
本発明は、上記（または国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６））の配列番号６３に記載のようなアミノ酸配列、および、前記アミノ酸配列に少なくとも９０％、または好ましくは９５％、最も好ましくは少なくとも９６、９７、９８、または９９％の一致性を有するアミノ酸配列を含むＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体分子を記載している。配列一致性は、アミノ酸配列全体に亘って決定されるものとする。配列アライメントのために、例えば、ＧａｐまたはＢｅｓｔＦｉｔというプログラムを使用することができ（Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48 (1970),443-453; Smith and Waterman, Adv. Appl. Math 2 (1981), 482-489）、このプログラムは、ＧＣＧソフトウエアパッケージに含まれている（Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711 (1991）。本明細書に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体（好ましくはＭＴ１１０）のアミノ酸配列に対して例えば、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列一致性を有するアミノ酸配列を決定し特定することは、当業者にとっては慣例の方法である。例えば、Ｃｒｉｃｋのゆらぎ仮説によると、アンチコドンの５’塩基は、他の２つの塩基ほど空間的に制限されておらず、それゆえ、非標準的な塩基対を有することができるであろう。言い換えれば、コドントリプレットにおける第３位置は、該第３位置の異なる２つのトリプレットが同じアミノ酸残基を符号化してもよいように変化するかもしれない。この仮説は、当業者には周知である（例えば、http://en.wikipedia.org/wiki/Wobble_Hypothesis; Crick, J Mol Biol 19 (1966): 548-55参照）。さらに、本明細書に記載のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対して例えば９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列一致性を有するこのようなアミノ酸配列の細胞障害性活性度を決定することは、当業者にとっては慣例の手順である。ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体、または、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体のアミノ酸配列に対して例えば９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列一致性を有する抗体作成物の細胞障害性活性度は、例えば国際公開第２００５／０４０２２０号（ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１６４６）に記載のような方法によって検出することができる。
【００９５】
本発明の方法は、グルココルチコイドの好ましくは併用の投与によりさらに特徴付けられる、ということも想定される。
【００９６】
添付の実施例２に示すように、グルココルチコイドは、本発明の治療の方法の過程において肝臓酵素の上述の増加を多少緩和することが分かった。したがって、本発明の方法（および、本発明の投与計画）は少なくとも１つのグルココルチコイドの任意の投与によってさらに特徴付けられる、ということが想定される。前記投与は、本明細書に定義したような第１および／または第２期間に並行して行われることが好ましい。グルココルチコイド（ＧＣ）は、人を含むほぼ全ての脊椎動物の細胞に存在するグルココルチコイド受容体（ＧＲ）に結合するクラスのステロイドホルモンである。これらの化合物は、炎症の原因を問わず有力な抗炎症剤である。グルココルチコイドは、とりわけ、細胞によって仲介される免疫性を、サイトカインＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＦＮ−γをコードする遺伝子を阻害することによって抑制する。
【００９７】
本明細書では、「グルココルチコイド」という用語は、少なくともコルチゾン、コルチゾル、クロプレドノール、プレドニゾン、プレドニソロン、メチルプレドニソロン、デフラザコルト、フルオコルトロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、およびベタメタゾンを含む。なお、プレドニゾン、プレドニソロンおよび／またはメチルプレドニソロンが好ましい。
【００９８】
ＥｐＣＡＭは、ほぼ全ての癌腫の（基底外側）細胞表面に発現する全上皮分化抗原である。この場合、癌腫は、上皮細胞から生じる任意の悪性癌を意味している。癌腫は、周囲組織および臓器へ侵入し、リンパ節および他の部位へ転移または拡張することがある。したがって、「ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞」という用語は、本明細書において使用される場合は、全種類の癌腫を指し、その細胞表面にＥｐＣＡＭを発現する癌腫瘍の単細胞または転移細胞を含む。ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌（細胞）の例としては、胃腸癌（細胞）、肺癌（細胞）、前立腺癌（細胞）および卵巣癌（細胞）が挙げられる。「胃腸」は、例えば、食道、腹（胃）、小腸および大腸、膀胱、胆嚢、肝臓、および膵臓を含む。肺癌の主な種類は、小細胞肺腫および非小細胞肺癌腫である。
【００９９】
癌細胞は、原発腫瘍から離脱、漏出、または、流出し、リンパ管および血管に入り、血流中を循環し、体の他の部分において正常細胞内に堆積され得る。ほとんどの悪性腫瘍および他の悪性新生物は、程度は違っても、転移する可能性がある。これらの転移癌細胞は、「転移性変種」または「転移」と呼ばれることもある。転移癌細胞は、明確に本発明の範囲に含まれる。
【０１００】
本発明の方法の好ましい実施形態において、前記胃腸癌は、胃癌、結腸直腸癌、またはその転移性変種であり、前記肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、またはその転移性変種である。
【０１０１】
肺腺癌、胃食道接合部腺癌、耐ホルモン性前立腺癌、卵巣癌および乳房癌なども好ましい。
【０１０２】
本発明の方法の他の好ましい実施形態では、方法は、（転移性）ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を有する患者における微小残存病変（ＭＲＤ）を治療、改善、または、除去するためのものである。「ＭＲＤ」は、治療中または患者が寛解している場合（すなわち、患者が疾患の症状またはサインを示さない場合）は治療後に患者に残る少数の癌細胞に付けられた名称である。ＭＲＤは、上皮癌および白血病における再発の主な原因である。
【０１０３】
更なる実施形態では、本発明は、
（ｉ）ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与する、または、
（ｉｉ）ヒト患者におけるＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療する、または、
（ｉｉｉ）ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与により仲介される医学的状態を改善または防止する
ための方法であって、
（ａ）ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード４またはそれ以下（好ましくはグレード３）へ上昇し、その後、グレード２へ低下するように連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）前記抗体を治療効果が出るように投与する工程とを含む方法に関する。
【０１０４】
本発明の方法の更なる実施形態では、（第１および第２期間を含み、任意で第３期間も含む）１つの治療サイクルは、無治療間隔の後に１回以上のサイクルで繰り返される。本発明の方法の好ましい実施形態では、（第１および第２期間を含み、任意で第３期間も含む）１つの治療サイクルは、４〜８週間の持続輸液であり、２〜６週間の無治療の間隔をあけた後にサイクルが繰り返される。前記第２治療サイクルは、第１治療サイクル（「第１治療サイクル」は、本明細書では、「第２治療サイクル」の直前の治療サイクルのことを指している）とは、第１治療サイクルと比較した場合に第１期間および／または前記第２サイクルの用量が異なる、および／または、第２期間および／または用量が異なる、という点で相違しているということも想定される。同様に、第３期間（第１治療サイクルに設けられている場合）が第２サイクルとは異なる、または、第２サイクルには設けられていない（または、その逆、すなわち、第３期間は第２サイクルに設けられているが第１サイクルには設けられてない）ということもあり得る。第２治療サイクルが第２期間のみからなるということも想定される。すなわち、第２治療サイクルを治療効果のある用量で直接開始し、本明細書において説明された第１期間（第３期間が設けられている場合は第３期間も含む）の第１用量により特徴付けられる適応フェーズを省略するということが明確に想定される。第２治療サイクルの前記治療効果のある用量は、第１治療サイクルの第２期間において使用された用量と同じであってもよいし、または、それとは異なっていてもよい（それを上回っていることが好ましい）。図８に示すような、または、添付の実施例に例示したような投与計画が特に好ましい。
【０１０５】
さらに、本発明は、
（ｉ）ヒト患者にＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与する、または、
（ｉｉ）ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療する、または、
（ｉｉｉ）ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与によって仲介される医学的状態を改善または防止する
ためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体であって、本発明の方法または投与計画に従って投与される抗体に関する。
【０１０６】
また、本発明は、その先行する請求項のいずれか１項に定義されたような方法において使用される医薬組成物の製剤／製造のためのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の使用に関する。本発明の医薬組成物は、医薬担体を任意に含んでいてもよい。適切な医薬担体の例は、当分野において周知であり、リン酸緩衝生理食塩水溶液、無菌液などを含む。静脈内ビヒクルは、液体および栄養補液、電解質補液（例えば、ブドウ糖リンゲル液をベースとするもの）などを含む。防腐剤および他の添加物は、例えば、抗菌薬、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどとして存在していてもよい。さらに、本発明の医薬組成物は、本明細書の他の部分でも説明したようなグルココルチコイドなどの更なる薬剤を含んでいてもよい。
【０１０７】
更なる観点では、本発明は、本明細書に定義したような第１用量および第２用量を含む（製薬）キットまたは医薬パッケージに関する。したがって、前記第１および第２用量は、まとめて１つの密閉された医薬パッケージまたはキット中にパッケージ化されている。「第１用量」および「第２用量」は、本明細書においては、任意の期間（第１または第２期間）に使用される各数の１回量を含む。このことは、例えば、本発明の医薬パッケージまたはキットに含まれる「第１用量」または「第２用量」は例えば、別々の７個の１日量を含む、ということを意味する。したがって、パッケージ化された１日量の数は、目的とされる期間を反映している（例えば、前記期間がＸ日であれば、Ｘ個の１日量、期間がＹ日であればＹ個の１日量）。これらの実施形態では、（製薬）キットまたは医薬パッケージは、別々の容器に入った複数の１日量が単一のパッケージに入れられているものである。本明細書の他の部分で説明されているように、前記別々の容器には異なる用量が入っていてもよく、例えば、本明細書に記載したような第１または第２期間中に用量を増加させる場合には、第１容器には３μｇ／日（を例えば７倍した分量）が含まれ、その一方で、他の容器には１２μｇ／日（を例えば７倍した分量）が含まれていてもよいが、これらの全ての容器は依然として「第１用量」の一部である。
【０１０８】
あるいは、目的とした第１用量、および／または、第２用量は、各数の１日量に分けられていないが、全部または一部が１つの単一容器（例えば、輸液バッグ）に含まれており、この単一容器は、第１、および／または、第２期間のいずれかの必要用量を一部（例えば、１日〜３日）または全部（すなわち、第１または第２期間）含む、ということも考えられる。このことは、１つの単一容器が例えば第１期間に使用される「第１用量」のための７個の１日量を含む、ということを意味する。
【０１０９】
本発明の（製薬）キットまたは医薬パッケージは、各期間に必要とされるような事実上の１日量を（分けて、または、分けずに）含んでいてもよいものとする。あるいは、（製薬）キットまたは医薬パッケージは、本明細書に定義されたような第１および第２期間に必要な数の１日量を（分けて、または、分けずに）、すなわち、「第１用量」および「第２用量」を１つの単一パッケージに含むように調製されている。このようなパッケージは、（第１および第２期間を含む）患者の１回の完全な治療のために十分なものであることが理想的である。本発明のキットおよびパッケージの一部は、バイアルもしくはボトルに別々に、または、容器もしくはマルチコンテナユニットに組み合わせてパッケージ化されていてもよい。キットの製造は、当業者の周知の標準手順に従っていることが好ましい。
【０１１０】
さらに、本発明は、活性成分として以上に記載のような第１用量および第２用量を含む医薬パッケージまたはキット、および、本発明の方法に係るその逐次使用のための説明書に関する。前記医薬パッケージまたはキットは、ヒト患者におけるＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するため、または、ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の投与によって仲介される医学的状態を改善または防止するために内容物を使用できる、ということを示すラベルまたは印をさらに含んでいてもよい。
【０１１１】
本発明の医薬パッケージまたはキットは、第１、および／または、第２用量を患者に投与する手段、および／または、治療薬の輸液のために通常使用される緩衝装置、バイアル、テフロン（登録商標）バッグまたは輸液バッグをさらに含む、ということも想定される。したがって、「手段」は、本発明の各用量および輸液の製剤において当業者を助けるシリンジ、皮下針、カニューレ、カテーテル、経静脈投与のための輸液バッグ、静脈内ビヒクル、バイアル、緩衝装置、安定剤、説明書からなる群より選択される１つ以上の品物を含む。
【０１１２】
発明の医薬パッケージまたはキットがさらにグルココルチコイドを含む、ということも想定される。
【０１１３】
更なる観点では、本発明は、医薬パッケージまたはキットに関するものであり、前記第１および／または前記第２用量がその先行する請求項のいずれか１項の方法に従った投与／投与計画に適しているように準備されている。「ように準備されている」は、複数の１日量がそれぞれ分けてまたはまとめてパッケージ化されている、および／または、第１および／または第２用量が全体でまたは組み合わせてパッケージ化されている、ということを含む。
【０１１４】
本発明は、以下の項目にも関する。
【０１１５】
１．ヒト患者に対してＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を投与するための方法（投与計画）であって、
（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用を上回る方法。
【０１１６】
２．ヒト患者のＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を治療するための方法であって、
（ａ）第１用量のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用を上回る方法。
【０１１７】
３．ヒト患者に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性抗体の連続的（治療的）投与によって仲介される医学的状態、好ましくは有害反応を改善および／または防止するための方法であって、
（ａ）第１用量の前記抗体を第１期間に連続的に投与する工程と、続いて、
（ｂ）第２用量の前記抗体を第２期間に連続的に投与する工程とを含み、
前記第２用量は、前記第１用を上回る方法。
【０１１８】
４．項目１、２、または３に記載の方法であって、前記ヒト患者は、ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞を有している、または、有していると推定される方法。
【０１１９】
５．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、工程（ａ）における投与の経路および／または工程（ｂ）における投与の経路は、静脈内である方法。
【０１２０】
６．項目３に記載の方法であって、前記医学的状態、好ましくは前記有害反応は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度の上昇を特徴とする方法。
【０１２１】
７．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２期間は、前記第１期間を上回る方法。
【０１２２】
８．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１期間は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７日（またはそれ以上）であり、好ましくは７日である方法。
【０１２３】
９．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１期間は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード３または４へ上昇することを特徴とする方法。
【０１２４】
１０．項目９に記載の方法であって、前記第１期間は、前記肝臓酵素の上昇した血清中濃度がグレード２へ低下するまで持続する方法。
【０１２５】
１１．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１期間は、前記少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度がグレード２以下であることを前提として、４日である方法。
【０１２６】
１２．項目６〜１１のいずれか１つに記載の方法であって、前記少なくとも１つの肝臓酵素は、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴであり、任意にはＧＧＴおよび／またはＡＰでもある方法。
【０１２７】
１３．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２期間は、少なくとも前記患者のＣＤ８＋Ｔ細胞が活性化されるまで持続する方法。
【０１２８】
１４．項目１３に記載の方法であって、前記活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも２０％のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型を特徴とする方法。
【０１２９】
１５．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２期間は、少なくとも２、３、４、５または６週間であり、好ましくは３週間である方法。
【０１３０】
１６．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２期間は、少なくとも１９日である方法。
【０１３１】
１７．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１期間は１〜１０日であり、第２期間は少なくとも１９日である方法。
【０１３２】
１８．項目１７に記載の方法であって、前記第１期間は７〜９日であり、第２期間は１９〜２１日である方法。
【０１３３】
１９．項目１８に記載の方法であって、前記第１期間は７日であり、第２期間は２１日である方法。
【０１３４】
２０．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２用量は、治療効果のある用量である方法。
【０１３５】
２１．項目２０に記載の方法であって、前記第２用量の治療効果は、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞を特徴とする方法。
【０１３６】
２２．項目２１に記載の方法であって、前記活性化は、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の（第２期間以前のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型と比べて）少なくとも２０％のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の陽性表現型を特徴とする方法。
【０１３７】
２３．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１用量は、少なくとも１つの肝臓酵素の血清中濃度が前記第１期間内にグレード３または４の血清中濃度へ上昇し、グレード２の血清中濃度へ再び低下するような用量である方法。
【０１３８】
２４．項目２３に記載の方法であって、前記少なくとも１つの肝臓酵素は、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴであり、任意にはＧＧＴおよび／またはＡＰでもある方法。
【０１３９】
２５．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１用量は１μｇ／ｄ〜６μｇ／ｄであり、好ましくは１μｇ／ｄ〜３μｇ／ｄである方法。
【０１４０】
２６．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第２用量は、１０μｇ／ｄ〜１２０μｇ／ｄ（または、治療上必要であればそれ以上）である方法。
【０１４１】
２７．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記第１用量は１μｇ／ｄ〜３μｇ／ｄであり、第２用量は２０μｇ／ｄ〜９０μｇ／ｄである方法。
【０１４２】
２８．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記二重特異性抗体は、単鎖抗体である方法。
【０１４３】
２９．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、前記抗体は、ＭＴ１１０である方法。
【０１４４】
３０．前記項目のいずれか１つに記載の方法であって、グルココルチコイドの（併用）投与をさらに特徴とする方法。
【０１４５】
３１．項目３０に記載の方法であって、前記グルココルチコイドは、プレドニゾン、プレドニソロンおよび／またはメチルプレドニソロンである方法。
【０１４６】
３２．項目１または４に記載の方法であって、前記ＥｐＣＡＭ陽性上皮癌細胞は、胃腸および／または肺の癌細胞である方法。
【０１４７】
３３．項目３２に記載の方法であって、前記胃腸癌は、胃癌、結腸直腸癌、またはその転移性変種であり、前記肺癌は、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、またはその転移性変種である方法。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】実施例１に係るＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体のＴ細胞活性化特性を示す図である。
【図２】実施例２に係る典型的投与計画を示す図である。
【図３】ＭＴ１１０の生成および作用形態を示す図である。
【図４】スケジュールＡ、Ｂ、またはＣでＭＴ１１０の維持量１０μｇ／日または１２μｇ／日によって治療した患者のＭＴ１１０血清中濃度を比較プロファイルで示す図である。
【図５Ａ】患者１１４−０１２（コホートＢ２：３μｇ／日→１２μｇ／日）において、ＭＴ１１０輸液の開始後、且つ、７日目の用量増加後に観察されたリンパ球再分布を示す図である。
【図５Ｂ】患者１１４−０１２（コホートＢ２：３μｇ／日→１２μｇ／日）において、ＭＴ１１０輸液の開始後、且つ、７日目の用量増加後に観察されたＴ細胞活性化を示す図である。
【図６Ａ】切除された肺病巣であり、多数のＣＤ３陽性リンパ球（赤矢印）、壊死組織（緑矢印）、腫瘍細胞（橙矢印）を示す図である。
【図６Ｂ】切除された肺病巣であり、ＣＤ８陽性リンパ球の浸潤（赤矢印）を示す図である。
【図７】トランスアミナーゼのピーク時の肝実質を示す図である。
【図８】本発明の具体的な投与計画を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１４９】
実施例
以下の実施例は、本発明を説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。実施例は、説明を目的とするものであり、本発明は、請求項のみによって限定される。
【０１５０】
実施例１
ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体は、Ｔ細胞に特有の細胞障害性をＥｐＣＡＭ陽性標的細胞へ仲介し、それにより、サイトカインの放出およびＴ細胞表面マーカーの発現誘導により測定可能なＴ細胞の活性化が起こる。このプロセスは、用量に厳密に依存しており、ＥｐＣＡＭ陽性標的細胞の存在に完全に頼るものである。ヒトＴ細胞に対するＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体ＭＴ１１０のストリンジェントな生体影響を、インビトロで以下のように分析した。
【０１５１】
無作為の健康なドナーのヒトＰＢＭＣを指示濃度のＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体と共に、ＫａｔｏＩＩＩ細胞が無い状態で、または、０．２％、２％、または１０％のＫａｔｏＩＩＩ細胞の存在下で培養して自然にＥｐＣＡＭを発現させた。加湿したインキュベータ内で４０時間３７℃で培養した後に、細胞をＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５に対する蛍光標識抗体によって染色してエフェクター細胞（ＣＤ４またはＣＤ８の陽性）およびその活性状態（ＣＤ２５のデノボ発現）をフローサイトメトリーによって特定した。ＣＤ２５＋Ｔ細胞のパーセンテージを、Ｐｒｉｓｍソフトウエア（Graph Pad Software Inc., version 4.02）を用いてＢｉＴＥ濃度の対数に対してプロットした。得られた用量反応曲線を、特定の生物活性についての指標として半数効果濃度（ＥＣ５０）も計算する集積４パラメータ非線形フィットモデルによって分析した。１００ｎｇ／ｍｌのＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体を含む上澄液を、ヒトＴｈ１／Ｔｈ２サイトメトリックビードアレイ（ＣＢＡ）キット（BD Bioscience）を用いて、製造者の説明書に従って、サイトカイン含有量について分析した。
【０１５２】
ＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体のＴ細胞活性化特性を図１に示す。１０％のＥｐＣＡＭ＋細胞をヒトＰＢＭＣに添加することにより、約９５％のＣＤ８＋および８５％のＣＤ４＋Ｔ細胞が抗体用量に依存して４０時間以内に活性化された。２％のＥｐＣＡＭ＋細胞を添加することで、約５０％のＣＤ８＋および２５％のＣＤ４＋Ｔ細胞が中程度活性化されたが、たった０．２％のＥｐＣＡＭ＋細胞の添加では、エフェクター細胞におけるＣＤ２５発現は、試験したどの濃度のＢｉＴＥについてもほとんど誘発されなかった。ＥＣ５０値は、存在する標的細胞の量が減少するにつれて上昇し、１０％、２％、および０．２％のＫａｔｏｌｌｌ細胞が存在するそれぞれの場合において、ＣＤ８＋Ｔリンパ球についてのＥＣ５０値は、０．２６、０．９９、および５．９８ｎｇ／ｍｌであり、ＣＤ４＋Ｔリンパ球についてのＥＣ５０値は０．８、２．３５、および３．５０ｎｇ／ｍｌであった。ＢｉＴＥにより仲介されたＣＤ２５の発現誘発は、ヒトＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１０の放出を伴い、その強度は、存在するＥｐＣＡＭ陽性標的細胞のパーセンテージにはっきりと相関していた。ＥｐＣＡＭ＋標的細胞が不在の場合は、評価したどのＢｉＴＥ濃度でもサイトカイン放出、または、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＣＤ２５の発現誘発は検出されなかった。これは、ＥｐＣＡＭの多い腫瘍環境におけるＥｐＣＡＭｘＣＤ３二重特異性単鎖抗体の高い作用効力、および、ＥｐＣＡＭがＴ細胞に直接到達できない組織における並行して良好な許容度を示すものであろう。
【０１５３】
実施例２
転移性の結腸直腸癌、胃癌または肺癌を有する患者におけるＥｐＣＡＭ／ＣＤ３二重特異性ＢｉＴＥ抗体ＭＴ１１０の安全性および薬理学
１．１  研究デザイン
第一次目的：安全性および許容度を評価すること
第二次目的：ＭＴ１１０の薬物動態学（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）および抗腫瘍活性を評価すること
患者：ＥｐＣＡＭを広く発現すると知られている局所進行性、再発性、または転移性の固形癌
−肺腺癌
−小細胞肺癌
−胃癌
−結腸直腸癌
他の主要適格条件：
標準的な治療可能性は試し尽くされた、または、拒絶された
少なくとも１コースの以前行われた化学療法
ＥＣＯＧパフォーマンスステータス≦２
患者情報およびインフォームドコンセント用紙を理解する能力
ベースラインＣＴまたはＭＲＩスキャンでＣＮＳ転移の兆候が無い、または、ＣＮＳ病変の他の履歴が無い
好中球数＜１，５００／ｍｍ３（＝１．５×１０９／ｌ）
血小板数＜１００，０００／ｍｍ３（＝１００×１０９／ｌ）
ＷＢＣ＜３ｘ１０９／ｌ；ヘモグロビン＜９．０ｇ／ｄｌ
異常な腎機能または肝機能無し
＜９２％のＯ２飽和度無し（室内空気条件下）
姑息的放射線治療以外の並行する抗腫瘍治療無し
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）存在無し
１．２  ＭＴ１１０治療および用量増加
ＭＴ１１０：持続的静注第１〜２８日、疾患進行まで２〜４週間の治療休止を入れた反復サイクル
用量コホート：ＭＴ１１０を１日当り１／３／６／１０／１２／２４（現在継続中）μｇで、コホートＢ／Ｃでは更なる用量増加が計画されている（図２参照）。
【０１５４】
ＤＬＴの発生に応じた３＋３デザイン、各コホートの各患者の第１サイクル完了後に用量増加についての決定
スケジュールＡ、ＢまたはＣで行われる治療
ＤＬＴ条件：患者を十分に管理したにもかかわらず所定よりも長く持続するグレード３または４に関連する何らかのＡＥ
併用薬：ＭＴ１１０輸液または用量増加以前にコルチコステロイド、抗ヒスタミン剤、制酸剤、他の支持薬剤も許可
１．３  評価
安全性：安全性パラメータ（ＣＴＣＡＥ第３．０版に従った有害事象（ＡＥ）報告）、検査値を第１週および第２週の１日目および２日目は少なくとも１日２回、３日目および５日目は１日に１回、その後は週に２回、持続的に評価
抗腫瘍活性：（測定可能な病変の場合はＲＥＣＩＳＴ１．０版に従った）各治療サイクル後の評価
ＰＫ／ＰＤ：ＰＫの分析のためのサンプル、サイトカイン、リンパ球亜集団、循環腫瘍細胞および免疫原性は、所定の時点で収集される
ＥｐＣＡＭ発現は、パラフィン包埋した腫瘍組織において分析される
２．  結果
２．１  患者およびＭＴ１１０治療
本明細書に提示されるデータは、２００９年９月１０日のものであり、研究は継続中である。
【０１５５】
・２２人の患者はＭＴ１１０治療を開始し、中間評価は以下を含む。
【０１５６】
−２０人の患者の個体群統計学データ
−２０人の患者の安全性および薬力学的データ
表６    用量コホート毎の患者個体群統計
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【０１５７】
２．２  安全性および許容度
有害事象概要
・２０人の患者のうち、１７人は、少なくとも１サイクルの４週間ＭＴ１１０静注を完了することができた。
【０１５８】
・観察された臨床有害事象のほとんどは基礎疾患に関連するものであった
・ＭＴ１１０に関連する非血液臨床有害事象は、少数の患者の軽い発熱および疲労、発熱は第１輸液反応とは関係がなかった。
【０１５９】
・主に輸液の最初の週または用量増加後に起きたＭＴ１１０に関連する臨床検査値の変化は、短期間であり、多くの場合は輸液の過程で解消した。肝臓パラメータの変化も、一過性且つ無症状であり、肝臓の画像での病理所見、実質的な組織損傷、または合成パラメータ障害は伴わなかった。
【０１６０】
表７    ≧３人の患者に起きる関連性に関係のないＡＥの発生率
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【０１６１】
表８    ＞１人の患者に起きるＭＴ１１０関連の有害事象の発生率
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【０１６２】
表９    報告された用量を制限する中毒性
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【０１６３】
２．３  薬動学的プロファイル
ＰＫパラメータの概要
・ＭＴ１１０に対する血清半減期は、３．５〜６．８時間で決定された。
【０１６４】
・用量および体重の正常化の後にそれまでテストした用量レベルについての線量直線性を推定することができる
２．４  薬力学的マーカー
・患者は、著しい全身性サイトカイン放出を誰も示さなかった。低ＩＬ−６レベルは、様々な時点で測定可能であり、単一測定可能レベルのＩＦＮγおよびＩＬ−１０は、数人の患者に見られた。
【０１６５】
・リンパ球の再分布は、ＭＴ１１０輸液の開始後、および、用量増加後に全ての患者において観察された（図５Ａ）。
【０１６６】
・Ｔ細胞活性化の第１サインは、第１サイクル後に臨床的利点と共に観察された（図５Ｂ）。
【０１６７】
・ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ法による循環腫瘍細胞の第１分析は、ＣＲＣ患者のサンプル７．５ｍｌにつき最多で６細胞を明らかにした。
【０１６８】
２．５  患者予後
ＲＥＣＩＳＴ条件に従った腫瘍評価
・疾患安定化は、９１日の平均期間（２９＋〜１５０日の範囲）での第１サイクル後に、１８人の評価可能患者のうち７人において観察された
事例報告：生物学的抗腫瘍活性の証拠
・患者（女性、８５歳）は、試験開始時にＣＲＣの転移性病巣を肺に有していた。
【０１６９】
・１μｇ／ｄのＭＴ１１０によって２８日間治療
・患者は、ＭＴ１１０の開始から８０日後に肺病巣の外科的切除を受けた。病理学は以下のことを明らかにした。
【０１７０】
−この病巣における＞７０％の壊死組織（図６Ａ）
−腫瘍組織内および周囲におけるＣＤ８陽性細胞を含む多数の浸潤Ｔリンパ球（図６Ｂ）
３．  概要
２０人の適格患者は、５つの用量コホートに分けて治療され、これまでに合計で２５回のＭＴ１１０サイクルを受けた。
【０１７１】
・２８日に亘るＭＴ１１０静注は臨床的に非常によく許容された：
−軽い発熱および疲労が少数の患者に起こり、治験薬に関連していた。
【０１７２】
−関連する全身性サイトカイン放出のサインは観察されなかった
−初期の一過性リンパ球減少の他に、最高でグレード３／４の肝臓酵素の一過性の無症状の増加が最も頻繁な検査所見の異常であった。
【０１７３】
・生物学的活性度の第１サイン
−ＭＴ１１０は、輸液の開始の直後にリンパ球の急速な再分布を引き起こした。細胞増殖／活性化のサインは、４週間後に臨床的利点を伴って患者に見られた。
【０１７４】
−ＲＥＣＩＳＴに従った疾患安定化は、１８人の患者のうち７人において確認され、平均で９１日持続した。
【０１７５】
−１人の患者において、ＭＴ１１０治療の開始から１１週間後に肺転移を切除した。免疫組織化学は、ＭＴ１１０活性の有力な証拠として腫瘍細胞壊死および大量のＴ細胞浸潤を明らかにした。
【０１７６】
・ＭＴ１１０に対する抗体が生じた患者はいなかった。
【０１７７】
４．  結論
・ＭＴ１１０は、進行性ＥｐＣＡＭ発現固形癌を有する患者に対して安全に経静脈投与できる。
【０１７８】
・生物学的活性度の第１サインは、臨床的に良好に許容される用量で観察された。
【０１７９】
・用量増加するＢｉＴＥ抗体ＭＴ１１０の評価は現在継続中である。
【０１８０】
実施例３
治験ＭＴ１１０−１０１においてＭＴ１１０によって治療された第１患者コホートにおける肝臓パラメータの変化の比較
以下の表では、ピーク血中濃度（表１０）および平均血中濃度値（表１１）の平均振幅によって示されている肝臓パラメータの上昇が、ＭＴ１１０用量、治療スケジュール、およびコルチコステロイド治療に応じて各患者グループについて分析されている。アミノトランスフェラーゼＡＳＴおよびＡＬＴは、ＭＴ１１０輸液によって主に影響を受けた肝臓パラメータである。
【０１８１】
各肝臓パラメータのピーク血中濃度の振幅は、スクリーニング検査で測定したベースライン値をこのグループの各患者に対する各用量でのＭＴ１１０輸液の第１週に測定したピークレベルからから引き算することによって計算された。あるグループの各患者について得られた振幅値を使用してそれぞれのグループについての平均を計算した。
【０１８２】
各肝臓パラメータの平均血液値の振幅は、スクリーニング検査で測定したベースライン値をこのグループの各患者に対する各用量でのＭＴ１１０輸液の第１週の全ての測定値から計算された平均レベルからから引き算することによって計算された。あるグループの各患者について得られた振幅値を使用してそれぞれのグループについての平均を計算した。
【０１８３】
異なるグループの比較は、以下のようにまとめられる。
【０１８４】
−追加の併用コルチコステロイド治療は、１μｇ／ｄのＭＴ１１０で治療される患者について肝臓パラメータ（主にＡＳＴおよびＡＬＴ）の増加を低減できる（グループＩと比較したグループＩＩ）。
【０１８５】
−ＭＴ１１０用量を増加する場合は、併用コルチコステロイド治療をしても、肝臓パラメータのピークおよび平均の血中濃度の値は上昇する（グループＩＩと比較したグループＶおよびＩＩＩ）。
【０１８６】
結論：肝臓パラメータの上昇は、併用コルチコステロイド治療によって防止できない。
【０１８７】
−用量を増加する場合は、コルチコステロイドの用量をさらに増加しても、肝臓パラメータの上昇を防止できない（グループＩＩＩと比較したグループＩＶ）。
【０１８８】
−第１週は低用量でＭＴ１１０治療を開始し、比較的高用量で第２週を始めると、第２週は肝臓酵素の増加が軽度になる（グループＶと比較したグループＶＩＩ）。
【０１８９】
結論：ＭＴ１１０開始用量を輸液の第１週は低くすると、更なる用量増加が可能である。
【０１９０】
表１０：標準偏差の無い任意の用量での治療第１週におけるピーク値とスクリーニング値との間の振幅の平均
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【０１９１】
表１１：標準偏差の無い任意の用量での治療第１週における平均値とスクリーニング値との間の振幅の平均
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【０１９２】
実施例４
表１２
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【０１９３】
表１３
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【０１９４】
実施例５：
表１４
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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