(57)【要約】連結基および／またはスペーサーを介して治療剤に結合されたＤＲ５結合部分を有するリガンド薬物結合体が、提供され、種々のがんの処置において有効である。本発明は、とりわけ、ＤＲ５発現細胞への薬物の標的化された送達のためのリガンド薬物結合体を提供する。本発明者らは、広範囲な実験を行い、細胞においてアポトーシスを誘導し得る抗体を含む抗体−薬物結合体が、このような抗体単独よりも、がんに対してより顕著な治療効果を有することを見いだした。本発明に従って上記抗体−薬物結合体を使用することによって、上記抗体自体は、アポトーシス誘導効果を示し、上記抗体に結合体化した薬物はまた、治療効果を示す。
2013505944.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞傷害剤に共有結合されたＤＲ５結合剤を含む、リガンド薬物結合体。
【請求項２】
式（Ｉ）：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ              （Ｉ）
を有し、ＤＲ５を発現する標的細胞に対して特異性を有する、リガンド薬物結合体またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで
Ｌは、ＤＲ５結合剤であるリガンドユニットであり；そして
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで
ＬＵは、リンカーユニットであり、そして
Ｄは、該標的細胞に対して細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；そして
下付き文字ｐは、１〜２０の整数である、
リガンド薬物結合体。
【請求項３】
前記薬物ユニットは、式ＤＥもしくはＤＦ：
【化３８】
2013505944.tif 000040
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し；
ここで各位置において独立して：
波線は、前記リガンド薬物結合体の残りへの結合点を示し；
Ｒ２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ５は、−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであるか；
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒に炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｓ−を有し、ここでＲａおよびＲｂは、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、または−炭素環であり、そしてｓは、２、３、４、５または６であり、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
各Ｒ８は、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）、または−炭素環であり；
Ｒ９は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１９は、−アリール、−複素環、または−炭素環であり；
Ｒ２０は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）、またはＯＲ１８であり、ここでＲ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；
Ｒ２１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、または−炭素環であり；
Ｒ１０は、−アリール、または−複素環であり；
Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−であり、ここでＲ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり；
ｍは、０〜１０００の範囲に及ぶ整数であり；
Ｒ１３は、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり；
Ｒ１４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１５の各存在は、独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１６の各存在は、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；そして
ｎは、０〜６の範囲に及ぶ整数であり；ここで該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環、および複素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、場合に応じて置換されている、
請求項２に記載のリガンド−薬物結合体。
【請求項４】
前記薬物ユニットは、式ＤＥまたはその薬学的に受容可能な塩形態を有する、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項５】
前記薬物ユニットは、式：
【化３９】
2013505944.tif 000041
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し；前記ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介して前記リンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；該リンカーユニットは、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−部分を含み；そして前記下付き文字ｐは、１〜８の整数である、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項６】
前記薬物ユニットは、式：
【化４０】
2013505944.tif 000042
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し；前記ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介して前記リンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；該リンカーユニットは、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−部分を含み；そして前記下付き文字ｐは、１〜８の整数である、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項７】
前記薬物ユニットは、式：
【化４１】
2013505944.tif 000043
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し；前記ＤＲ５結合剤は、抗体の硫黄原子を介して前記リンカーユニットに結合した抗ＤＲ５抗体であり；該リンカーユニットは、−スクシンイミド−カプロン酸−部分を含み；そして前記下付き文字ｐは、１〜８の整数である、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項８】
ＬＵは、式：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し、ここで
−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり；
下付き文字ａは、０または１であり；
各Ｗは、独立して、アミノ酸ユニットであり；
下付き文字ｗは、０〜１２の整数であり；
−Ｙ−は、スペーサーユニットであり；そして
下付き文字ｙは、０、１または２である、請求項２に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項９】
式：
【化４２】
2013505944.tif 000044
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し、ここで
Ｒ１７は、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）−、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−アリーレン、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン、ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−からなる群より選択されるメンバーであり、ここでｒは、１〜１０の整数であり、そして該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環、カルボシクロ、ヘテロシクロ、およびアリーレン基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換されている、
請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１０】
式：
【化４３】
2013505944.tif 000045
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し、ここでＳは、リガンドユニット（Ｌ）によって提供される硫黄原子である、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１１】
式：
【化４４】
2013505944.tif 000046
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有し、ここでＳは、リガンドユニット（Ｌ）によって提供される硫黄原子である、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１２】
式：
【化４５】
2013505944.tif 000047
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有する、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１３】
式：
【化４６】
2013505944.tif 000048
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有する、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１４】
式：
【化４７】
2013505944.tif 000049
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有する、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１５】
ｗは、２〜１２の範囲に及ぶ整数であり、そしてｙは、１または２である、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１６】
ｗは２であり、そしてｙは、１または２である、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１７】
Ｗｗは、−バリン−シトルリン−であり、そしてｙは、１または２である、請求項８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項１８】
式：
【化４８】
2013505944.tif 000050
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有するリガンド薬物結合体であって、ここでｍＡｂは、抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、そしてｐは、１〜８の整数である、リガンド薬物結合体。
【請求項１９】
式：
【化４９】
2013505944.tif 000051
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有するリガンド薬物結合体であって；ここでｍＡｂは、抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、そしてｐは、１〜８の整数である、リガンド薬物結合体。
【請求項２０】
式：
【化５０】
2013505944.tif 000052
またはその薬学的に受容可能な塩形態を有するリガンド薬物結合体であって、ここでｍＡｂは、抗ＤＲ５抗体であり、Ｓは、該抗体の硫黄原子であり、そしてｐは、１〜８の整数である、リガンド薬物結合体。
【請求項２１】
Ｄは、ＤＥである、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２２】
Ｄは、ＤＦである、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２３】
Ｌは、抗ＤＲ５抗体である、請求項３に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２４】
前記抗ＤＲ５抗体は、（ａ）配列番号３のアミノ残酸基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸残基１〜１０からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリン；ならびに（ｂ）配列番号６のアミノ酸残基１〜１１からなるＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号８のアミノ酸残基１〜８からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンを含む、請求項１８、１９、または２０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２５】
前記抗ＤＲ５抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１〜１１８を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸残基１〜１０７を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１８、１９、または２０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２６】
前記抗ＤＲ５抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１〜４４９からなる重鎖、および配列番号２のアミノ酸残基１〜２１３からなる軽鎖を含む、請求項１８、１９、または２０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２７】
ｐは、３〜５である、請求項１８に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２８】
ｐは、１〜３である、請求項１９に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項２９】
ｐは、３〜５である、請求項１９に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項３０】
ｐは、３〜５である、請求項２０に記載のリガンド薬物結合体。
【請求項３１】
薬学的に受容可能な賦形剤と混合した状態にある請求項１〜３０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体を含む、薬学的組成物。
【請求項３２】
有効成分として請求項１〜３０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体を含む、抗腫瘍剤。
【請求項３３】
有効量の請求項１〜３０のうちのいずれかに記載のリガンド薬物結合体を、がんの処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する、がんを処置する方法。
【請求項３４】
前記がんは、メラノーマ、結腸直腸がん、非小細胞肺癌、子宮がん、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、および血液のがんからなる群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記がんは、膵臓がんである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記がんは、メラノーマである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記がんは、乳がんである、請求項３３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００９年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／２４５，４６２号の利益を主張し、この出願の内容はすべての目的のためにその全体が本明細書において参照として援用される。
【０００２】
（資金援助された研究および開発の下でなされた発明に対する権利に関する陳述）
適用なし。
【０００３】
（コンパクトディスクで提出された付表を列挙する「配列表」、表またはコンピュータープログラムに対する言及）
適用なし
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
アポトーシス誘導に関与する細胞表面レセプター（例えば、デスドメイン（ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ）含有レセプター）は、リガンド結合に起因して、細胞膜上でマルチマー化し、上記細胞におけるアポトーシスシグナルの誘導を生物学的に引き起こす（非特許文献１）。このような細胞表面レセプターの例としては、腫瘍壊死因子（本明細書中以降、ＴＮＦといわれる）関連アポトーシス誘導リガンド（本明細書中以降、ＴＲＡＩＬといわれる）レセプターファミリーが挙げられる。ＴＲＡＩＬは、タンパク質のＴＮＦファミリーのメンバーであり、上記ファミリーは、ＦａｓリガンドおよびＴＮＦ−aを含む（非特許文献２）。これらタンパク質は、強力なアポトーシス誘導因子である。
【０００５】
上記タンパク質のＴＮＦファミリーのレセプターは、細胞外ドメインにおけるシステインリッチ反復配列によって特徴付けられる。これらの中で、Ｆａｓ（Ｆａｓリガンドのレセプター）およびＴＮＦレセプターＩ（本明細書中以降、ＴＮＦＲＩといわれる）、ＴＮＦ−aのレセプターは、まとめて、デスドメイン含有レセプターといわれる。これらレセプターは、デスドメインといわれ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ自殺遺伝子であるｒｅａｐｅｒに対して相同であるアポトーシスシグナル伝達に必須の細胞内ドメインを有する（非特許文献３、非特許文献４）。
【０００６】
５個のＴＲＡＩＬレセプターが、同定されており、そのうちの２個（ＤＲ４［ＴＲＡＩＬ−Ｒ１］およびＤＲ５［ＴＲＡＩＬ−Ｒ２］）は、アポトーシスシグナル伝達を誘導し得る一方で、他の３個（ＤｃＲ１［ＴＲＡＩＬ−Ｒ３］、ＤｃＲ２［ＴＲＡＩＬ−Ｒ４］、およびオステオプロテゲリン［ＯＰＧ］）は、アポトーシスシグナル伝達を誘導しない。ＦａｓおよびＴＮＦＲＩのように、ＤＲ４およびＤＲ５の両方の細胞内セグメントは、デスドメインを含み、Ｆａｓ関連デスドメインタンパク質（本明細書中以降、ＦＡＤＤといわれる）およびカスパーゼ−８を含む経路によって、アポトーシスシグナル伝達を誘導する（非特許文献５；非特許文献６）。
【０００７】
上記Ｆａｓに関して、ＴＮＦＲＩ、ＤＲ４、およびＤＲ５、これら分子に対してそれぞれ結合するアゴニスト抗体（ａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）は、表面に標的分子を有する細胞に対してアポトーシス誘導活性を有する（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。これらアゴニスト抗体の有効性は、２次抗体またはエフェクター細胞との架橋によって増強される（非特許文献１１；非特許文献１２）。
【０００８】
アポトーシス誘導に関与する細胞表面レセプターに結合する能力を有する抗ＤＲ５抗体は、現在、治療剤として臨床開発中であり、治療効果が明らかになり、特異的かつアゴニスト的様式においてレセプターを発現する細胞（がん細胞および免疫疾患関連細胞）を死滅させることが期待されている。この抗体の作用機構は、抗体分子を一緒に架橋して、レセプターへの上記抗体の結合の前または後にマルチマーを形成することによって媒介されると提唱されている。上記抗体のこのようなマルチマー化は、その後、抗原レセプターのマルチマー化（すなわち、アポトース誘導）を引き起こす。インビトロ実験で、上記抗体に対する２次抗体の添加による人工的な架橋が、上記抗体の活性を増強させるために必要とされ、そしてインビボでは、免疫エフェクター細胞上のＦｃレセプターによる架橋が、上記抗体の活性を生じるために必要とされる作用機構であるようである。近年になって、抗体の構造を変化させることによって、上記抗体の本来の機能をさらに増強させようとする試みが為されてきた。例えば、抗体上の特異的炭水化物構造の除去が、Ｆｃレセプターに対する親和性を改善すると報告されている。このような作用機構は、細胞表面レセプターに対して内部移行しない抗体が好ましいことを示唆する。
【０００９】
しかし、ＤＲ５発現がんを処置する方法は、未だに必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，１０：６６−７５（２００３）
【非特許文献２】Ｗｉｌｅｙ  ＳＲら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５  Ｄｅｃ；３（６）：６７３−８２
【非特許文献３】Ｇｏｌｓｔｅｉｎ，Ｐ．ら，（１９９５）Ｃｅｌｌ．８１，１８５−１８６
【非特許文献４】Ｗｈｉｔｅ，Ｋら，（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，６７７−６８３
【非特許文献５】Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ＰＭら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８２１−３０
【非特許文献６】Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｐら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７  Ｄｅｃ；７（６）：８３１−３６
【非特許文献７】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０９：１０２１−１０２８（２００６）
【非特許文献８】Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ａｐｌ；２１（４）：８０５−８１２（２００７）
【非特許文献９】Ｂｌｏｏｄ，９９：１６６６−１６７５（２００２）
【非特許文献１０】Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊａｎ；１５３（１）：１８４−１９３（１９９４）
【非特許文献１１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４９：３１６６−３１７３（１９９２）
【非特許文献１２】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔ；２３（１０）：２６７６−２６８１（１９９３）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、とりわけ、ＤＲ５発現細胞への薬物の標的化された送達のためのリガンド薬物結合体を提供する。本発明者らは、広範囲な実験を行い、細胞においてアポトーシスを誘導し得る抗体を含む抗体−薬物結合体が、このような抗体単独よりも、がんに対してより顕著な治療効果を有することを見いだした。本発明に従って上記抗体−薬物結合体を使用することによって、上記抗体自体は、アポトーシス誘導効果を示し、上記抗体に結合体化した薬物はまた、治療効果を示す。これらの理由で、上記抗体−薬物結合体は、上記抗体単独では効率的に処置できない患者に対して有効な治療効果を有する。本明細書に記載されるリガンド薬物結合体は、ＤＲ５を発現する細胞（例えば、ＤＲ５発現がん細胞）に対して、強力な細胞傷害活性および／または細胞増殖抑制活性を有する。いくつかの実施形態において、上記リガンド薬物結合体は、式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ          （Ｉ）
を有し、ここでＬは、リガンドユニットであり、ＬＵは、リンカーユニットであり、そしてＤは、薬物ユニット（または細胞傷害剤）である。上記下付き文字ｐは、１〜２０の整数である。よって、上記リガンド薬物結合体は、少なくとも１個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。上記薬物ユニットは、直接、またはリンカーユニット（−ＬＵ−）を介して共有結合され得る。上記リガンドユニット（以下により十分に記載される）は、ＤＲ５結合剤（例えば、抗ＤＲ５抗体）である。よって、本発明はまた、例えば、種々のがんの処置のための方法を提供する。これら方法は、リガンド薬物結合体の使用を包含し、ここで上記リガンドユニットは、ＤＲ５に特異的に結合する抗ＤＲ５結合剤である。上記ＤＲ５結合剤は、例えば、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ５抗原結合フラグメント、あるいはヒト化抗体重鎖および／もしくは軽鎖の可変領域、またはその誘導体のアミノ酸配列を含む他のＤＲ５結合剤であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図２】図２は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図３】図３は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図４】図４は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図５】図５は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図６】図６は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図７】図７は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図８】図８は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図９】図９は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図１０】図１０は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図１１】図１１は、本発明のｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体で評価した細胞系の結果を提供する。
【図１２】図１２は、ヒトＤＲ５に対するｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体の結合活性を、ｈＴＲＡ−８（非結合体化形態にある）のものと比較して図示する。
【図１３】図１３は、ｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体が、ｈＴＲＡ−８と比較して、初代ヒト肝細胞に対する細胞傷害性を示さないことを図示する。
【図１４】図１４は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図１５】図１５は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図１６】図１６は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図１７】図１７は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図１８】図１８は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図１９】図１９は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２０】図２０は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２１】図２１は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２２】図２２は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２３】図２３は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２４】図２４は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２５】図２５は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２６】図２６は、本発明のリガンド薬物結合体のインビボ結果を提供する。
【図２７】図２７は、Ａ３７５異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体の抗腫瘍活性の競合を図示する。
【図２８】図２８は、ＨＣＴ１１６異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体の抗腫瘍活性の競合を図示する。
【図２９】図２９は、ＪＩＭＴ−１異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ抗腫瘍効力を図示する。
【図３０】図３０は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ抗腫瘍効力を図示する。
【図３１】図３１は、Ａ２７８０異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ抗腫瘍効力を図示する。
【図３２】図３２は、ＳＫ−ＯＶ−３異種移植片モデルにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ抗腫瘍効力を図示する。
【図３３】図３３は、Ｕ−９３７を接種したマウスにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ寿命延長効力を図示する。
【図３４】図３４は、ＭＯＬＴ−４を接種したマウスにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ寿命延長効力を図示する。
【図３５】図３５は、ＭＯＬＭ−１４を接種したマウスにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ寿命延長効力を図示する。
【図３６】図３６は、ＭＶ−４−１１を接種したマウスにおけるｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体のインビボ寿命延長効力を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（発明の詳細な説明）
（定義および略語）
商標名が本明細書で使用される場合、上記商標名への言及は、別段文脈によって示されなければ、製品処方、ジェネリック薬、および上記商標の製品の活性な薬学的成分（単数または複数）に言及する。
【００１４】
用語「ＤＲ５結合剤」および「抗ＤＲ５結合剤」とは、本明細書で使用される場合、ＤＲ５に特異的に結合する分子（例えば、タンパク質）に言及する。例としては、全長の抗ＤＲ５抗体、全長の抗ＤＲ５抗体のフラグメント、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖の可変領域、ならびにその誘導体を含む他の薬剤が挙げられ得る。
【００１５】
用語「阻害する」または「〜の阻害」とは、本明細書で使用される場合、測定可能な量を低下させる、または完全に妨げることを意味する。
【００１６】
用語「激減させる（ｄｅｐｌｅｔｅ）」とは、ＤＲ５発現細胞に対するＤＲ５結合剤の効果の文脈において、ＤＲ５発現細胞のメンバーの減少またはＤＲ５発現細胞の排除に言及する。
【００１７】
用語「化合物」とは、化学化合物自体に言及しかつこれを包含し、ならびに明示されていようとそうでなかろうと、以下が排除されることを文脈が明らかにしていなければ、以下に言及しかつこれを包含する：上記化合物のアモルファスおよび結晶形態（同質異像形態を含み、ここでこれら形態は、混合物の一部であり得るかまたは単離された状態であり得る）；上記化合物の遊離酸または遊離塩基の形態（これは、代表的には、本明細書で提供される構造で示される形態である）；上記化合物の異性体（これは、光学異性体、および互変異性体に言及し、ここで光学異性体は、エナンチオマーおよびジアステレオマー、キラル異性体および非キラル異性体を含み、上記光学異性体は、単離された光学異性体、および光学異性体の混合物（ラセミ混合物および非ラセミ混合物を含む）を含む）；ここで異性体は、単離された形態にあってもよいし、１種以上の他の異性体との混合物の状態にあってもよく；上記化合物の同位体（ジュウテリウム含有化合物またはトリチウム含有化合物を含み、放射性同位元素（治療上および診断上有効な放射性同位元素）を含む化合物を含む）；上記化合物のマルチマー形態（ダイマー形態、トリマー形態などを含む）；上記化合物の塩（好ましくは、薬学的に受容可能な塩（酸付加塩および塩基付加塩を含み、有機対イオンおよび無機対イオンを有する塩を含み、双極性イオン形態を含み、ここで化合物が２種以上の対イオンと会合させられる場合、上記２種以上の対イオンは、同じであっても異なっていてもよい）；ならびに上記化合物の溶媒和物（半溶媒和物、一溶媒和物、二溶媒和物などを含み、有機溶媒和物および無機溶媒和物を含み、上記無機溶媒和物は、水和物を含み；ここで化合物が２個以上の溶媒分子と会合させられる場合、上記２個以上の溶媒分子は、同じであってもよいし、異なっていてもよい）。いくつかの場合において、本発明の化合物に対して本明細書でなされる言及は、上記の形態（例えば、塩および／または溶媒和物）のうちの１つ以上に対する明確な言及を含むが、この言及は、強調のために過ぎず、上記で同定されるように、上記形態の他のものを排除すると解釈されるべきではない。
【００１８】
別段示されなければ、用語「アルキル」とは、約１〜約２０個の炭素原子を有する飽和の直鎖または分枝状の炭化水素（ならびにその中の炭素原子の範囲および特定の数の全ての組み合わせおよび下位の組み合わせ（ｓｕｂｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ））に言及し、約１〜約８個の炭素原子が好ましい。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル−３−ペンチル、２−メチル−３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチル、および３，３−ジメチル−２−ブチルである。
【００１９】
アルキル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、「置換された」として言及され得る。置換されたアルキル基は、１個以上の基、好ましくは、１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意の置換基）（これらとしては、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない）で置換されるアルキル基であり、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択され、上記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、および−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の基で必要に応じてさらに置換され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択される。
【００２０】
別段示されなければ、用語「アルケニル」および「アルキニル」とは、約２〜約２０個の炭素原子（およびその中の炭素原子の範囲および特定の数の全ての組み合わせおよび下位組み合わせ）を有する直鎖および分枝状の炭素鎖に言及し、約２〜約８個の炭素原子が好ましい。アルケニル鎖は、上記鎖の中に少なくとも１個の二重結合を有し、そしてアルキニル鎖は、上記鎖の中に少なくとも１個の三重結合を有する。アルケニル基の例としては、エチレン、またはビニル、アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、および−２，３−ジメチル−２−ブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基の例としては、アセチレニック（ａｃｅｔｙｌｅｎｉｃ）、プロパルギル、アセチレニル、プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、および−３−メチル−１  ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
アルキル基と同様に、アルケニルおよびアルキニル基は、置換され得る。「置換された」アルケニル、またはアルキニル基は、１個以上の基、好ましくは、１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で置換されたものであり、これら基としては、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されず、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル（ａｌｋｙｅｎｌ）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、またはアリールから独立して選択され、上記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、および−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の置換基で必要に応じてさらに置換され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択される。
【００２２】
別段示されなければ、用語「アルキレン」とは、約１〜約２０個の炭素原子（ならびにその中の炭素原子の範囲および特定の数の全ての組み合わせおよび下位組み合わせ）を有する飽和の分枝鎖または直鎖の炭化水素基に言及し、約１〜約８個の炭素原子が好ましく、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる２個の１価の基中心（ｒａｄｉｃａｌ  ｃｅｎｔｅｒ）を有する。代表的なアルキレンとしては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デカレン、および１，４−シクロヘキシレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキレン基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、１個以上の基、好ましくは、１〜３個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる基）で必要に応じて置換され得、上記基としては、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されず、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択され、上記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、および−Ｃ２−Ｃ８アルキニル基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、―ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の置換基で必要に応じてさらに選択され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択される。
【００２３】
別段示されなければ、用語「アルケニレン」とは、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含む必要に応じて置換されたアルキレン基に言及する。例示的なアルケニレン基としては、例えば、エテニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）およびプロペニレン（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−）が挙げられる。
【００２４】
別段示されなければ、用語「アルキニレン」とは、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を含む必要に応じて置換されたアルキレン基に言及する。例示的なアルキニレン基としては、例えば、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ−）が挙げられる。
【００２５】
別段示されなければ、用語「アリール」とは、親芳香族環系の単一の炭素原子から１個の炭素原子を除去することによって得られる６〜２０個の炭素原子（ならびにその中の炭素原子の範囲および特定の数の全ての組み合わせおよび下位組み合わせ）の１価の芳香族炭化水素基に言及する。いくつかのアリール基は、「Ａｒ」として例示的構造で表される。代表的なアリール基としては、ベンゼン、置換されたベンゼン、フェニル、ナフタレン、アントラセン、およびビフェニルなどから得られる基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
アリール基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、１個以上の（好ましくは、１〜５個、またはさらに１〜２個の）基で必要に応じて置換され得、上記基としては、−ハロゲン、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されず、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、またはアリールから独立して選択され、上記−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、および−アリール基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるがこれらに限定されない１個以上の置換基でさらに必要に応じて置換され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択される。
【００２７】
別段示されなければ、用語「アリーレン」とは、二価（すなわち、親芳香族環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる）であり、以下の構造（例示的アリール基としてフェニル）において示されるように、オルト、メタ、またはパラの配置にあり得る必要に応じて置換されたアリール基に言及する：
【００２８】
【化１】
2013505944.tif 000003
。
【００２９】
代表的な「−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）アリール」、「−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）アリール」および「−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）アリール」基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
別段示されなければ、用語「複素環」とは、３〜１４個の環原子（環員ともいわれる）を有し、少なくとも１個の環の中の少なくとも１個の環原子が、Ｎ、Ｏ、Ｐ、またはＳから選択されるヘテロ原子（ならびにその中の炭素原子およびヘテロ原子の範囲および数の全ての組み合わせおよび下位組み合わせ）である単環式、二環式、または多環式の環系に言及する。上記複素環は、Ｎ、Ｏ、Ｐ、またはＳから独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有し得る。複素環の中の１個以上のＮ、Ｃ、またはＳ原子は、酸化され得る。単環式複素環は、好ましくは、３〜７個の環員（例えば、２〜６個の炭素原子およびＮ、Ｏ、Ｐ、またはＳから独立して選択される１〜３個のヘテロ原子）を有し、二環式複素環は、好ましくは、５〜１０個の環員（例えば、４〜９個の炭素原子およびＮ、Ｏ、Ｐ、またはＳから独立して選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する。上記ヘテロ原子を含む上記環は、芳香族であってもよいし、芳香族でなくてもよい。別段示されなければ、上記複素環は、安定な構造を生じる任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に結合される。
【００３１】
複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）に、特に、第１章、第３章、第４章、第６章、第７章および第９章に；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜最新版）に、特に、第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、および第２８巻に；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８２：５５６６（１９６０）に記載されている。
【００３２】
別段示されなければ、用語「ヘテロシクロ」とは、二価である（すなわち、親複素環式環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる）上記に定義される必要に応じて置換された複素環基に言及する。
【００３３】
「複素環」基の例としては、例えば、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４Ｈ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル（β−ｃａｒｂｏｌｉｎｙｌ）、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾオキサゾリニル、およびイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい「複素環」基としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
複素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、１個以上の基（好ましくは、１〜２個の基）で必要に応じて置換され得、上記基としては、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されず、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択され、上記−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、および−アリール基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の置換基で必要に応じてさらに置換され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、またはアリールから独立して選択される。
【００３５】
例示であって限定ではなく、炭素結合した複素環は、以下の位置で結合され得る：ピリジンの２位、３位、４位、５位もしくは６位；ピリダジンの３位、４位、５位、もしくは６位；ピリミジンの２位、４位、５位、もしくは６位；ピラジンの２位、３位、５位、もしくは６位；フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの２位、３位、４位、もしくは５位；オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの２位、４位、もしくは５位；イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３位、４位、もしくは５位；アジリジンの２位もしくは３位；アゼチジンの２位、３位、もしくは４位；キノリンの２位、３位、４位、５位、６位、７位、もしくは８位；またはイソキノリンの１位、３位、４位、５位、６位、７位、もしくは８位。さらにより代表的には、炭素結合した複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが挙げられる。
【００３６】
例示であって限定ではなく、窒素結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、または１Ｈ−インダゾールの１位；イソインドール、またはイソインドリンの２位；モルホリンの４位；およびカルバゾール、またはβ−カルボリンの９位において結合され得る。さらにより代表的には、窒素結合した複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル（ａｚｅｔｅｄｙｌ）、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、および１−ピペリジニルが挙げられる。
【００３７】
別段示されなければ、用語「炭素環」とは、３〜１４個の環原子（ならびにその中の炭素原子の範囲および特定の数の全ての組み合わせおよび下位組み合わせ）を有し、ここで上記環原子の全てが炭素原子である飽和または不飽和の非芳香族の単環式、二環式、または多環式の環系に言及する。単環式炭素環は、好ましくは、３〜６個の環原子、なおより好ましくは、５個または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、好ましくは、７〜１２個の環原子（例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］もしくは［６，６］系として配置される）、または９個もしくは１０個の環原子（ビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として配置される）を有する。用語「炭素環」は、例えば、アリール環に縮合された単環式炭素環（例えば、ベンゼン環に縮合された単環式炭素環）を含む。炭素環は、好ましくは、３〜８個の炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）原子を有する。
【００３８】
炭素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、例えば、１個以上の基（好ましくは、１個または２個の基（およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で必要に応じて置換され得、上記基としては、−ハロゲン、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、＝Ｏ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されず、ここで各Ｒ’は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択され、上記−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、および−アリール基は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−ハロゲン、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ”、−ＳＲ”、−ＳＯ３Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ”、−Ｓ（Ｏ）Ｒ”、−ＯＨ、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ”）２および−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の置換基でさらに必要に応じて置換され得、ここで各Ｒ”は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、または−アリールから独立して選択される。
【００３９】
単環式の炭素環式置換基の例としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−１−シクロペンタ−１−エニル、−１−シクロペンタ−２−エニル、−１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、−１−シクロヘキサ−１−エニル、−１−シクロヘキサ−２−エニル、−１−シクロヘキサ−３−エニル、−シクロヘプチル、−シクロオクチル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、および−シクロオクタジエニルが挙げられる。
【００４０】
「カルボシクロ」とは、単独で使用されようと、別の基の一部として使用されようと、二価である（すなわち、親炭素環式環系の同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる）、上記で定義される必要に応じて置換された炭素環基に言及する。
【００４１】
別段文脈によって示されなければ、ハイフン（−）は、ペンダント分子への結合点を示す。よって、用語「−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）アリール」または「−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（アリール）」とは、本明細書で定義されるＣ１−Ｃ８アルキレン基であって、上記アルキレン基が、上記アルキレン基の炭素原子のうちのいずれかにおいて上記ペンダント分子に結合され、上記アルキレン基の炭素原子に結合された水素原子のうちの１つが、本明細書で定義されるアリール基で置換されるものをいう。
【００４２】
特定の基が、「置換されている」場合、その基は、置換基のリストから独立して選択される１個以上の置換基（好ましくは、１〜５個の置換基、より好ましくは、１〜３個の置換基、最も好ましくは、１〜２個の置換基）を有し得る。しかし、上記基は、一般に、ハロゲンから選択される任意の数の置換基を有し得る。置換される基は、そのように示される。
【００４３】
ある分子の特定の位置における任意の置換基または変数の定義は、その分子における他の場所でその定義とは無関係であることが意図される。本発明の化合物上の置換基および置換パターンが、化学的に安定でありかつ当該分野で公知の技術ならびに本明細書に記載されるそれらの方法によって容易に合成され得る化合物を提供するように、当業者によって選択され得ることが理解される。
【００４４】
保護基は、本明細書で使用される場合、多官能性化合物における１つの反応性部位を、一時的にまたは永久に、選択的にブロックする基をいう。本発明において使用するために適切なヒドロキシ保護基は、薬学的に受容可能であり、上記化合物が活性であるために、被験体への投与後に親化合物から切断される必要があってもよいし、その必要がなくてもよい。切断は、身体内の通常の代謝プロセスを介するものである。ヒドロキシ保護基は、当該分野で周知である。Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．ＷｕｔｓによるＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  ｓｏｎｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）（その全体が、および全ての目的のために、本明細書に参考として援用される）を参照のこと。上記ヒドロキシ保護基としては、例えば、エーテル（例えば、アルキルエーテルおよびシリルエーテル（例えば、ジアルキルシリルエーテル、トリアルキルシリル、ジアルキルアルコキシシリルエーテル））、エステル、カーボネート、カルバメート、スルホネート、およびホスホネート保護基が挙げられる。ヒドロキシ保護基の例としては、メチルエーテル；メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、ｏ−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、（４−メトキシフェノキシ）メチルエーテル、グアヤコールメチルエーテル（ｇｕａｉａｃｏｌｍｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、ｔ−ブトキシメチルエーテル、４−ペンテニルオキシメチルエーテル、シロキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、２，２，２−トリクロロエトキシメチルエーテル、ビス（２−クロロエトキシ）メチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルエーテル、メトキシ（ｍｅｎｔｈｏｘｙ）メチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、１−メトキシシクロヘキシル（ｃｙｌｃｏｈｅｘｙｌ）エーテル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテル  Ｓ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ（ｃｈｏｒｏ）−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イルエーテル、１−（２−フルオロフェニル（２−ｆｌｕｏｒｏｐｈｎｅｙｌ））−４−メトキシピペリジン−４−イルエーテル、１，４−ジオキサン−２−イルエーテル、テトラヒドロフラニルエーテル、テトラヒドロチオフラニルエーテル；置換されたエチルエーテル（例えば、１−エトキシエチルエーテル、１−（２−クロロエトキシ）エチルエーテル、１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチルエーテル、１−メチル−１−メトキシエチルエーテル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチルエーテル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチルエーテル、１−メチル−１フェノキシエチルエーテル、２−トリメチルシリルエーテル、ｔ−ブチルエーテル、アリルエーテル、プロパルギルエーテル、ｐ−クロロフェニルエーテル、ｐ−メトキシフェニルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル���３，４−ジメトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリプロピルシリルエーテル、ジメチルイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテル、ジメチルヘキシルシリルエーテル、ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、ジフェニルメチルシリルエーテル、ベンゾイルホルメートエステル、アセテートエステル、クロロアセテートエステル、ジクロロアセテートエステル、トリクロロアセテートエステル、トリフルオロアセテートエステル、メトキシアセテートエステル、トリフェニルメトキシアセテートエステル、フェニルアセテートエステル、ベンゾエートエステル、アルキルメチルカーボネート、アルキル  ９−フルオレニルメチルカーボネート、アルキルエチルカーボネート、アルキル  ２，２，２，−トリクロロエチルカーボネート、１，１，−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカーボネート、アルキルスルホネート、メタンスルホネート、ベンジルスルホネート、トシレート、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、およびｔ−ブチルメチリデンケタール）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい保護基は、式−Ｒ、−Ｓｉ（Ｒ）（Ｒ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＲによって表され、ここでＲは、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環、および複素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換される。
【００４５】
略語「ＡＦＰ」とは、ジメチルバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニン−ｐ−フェニレンジアミン（以下の式ＸＶＩＩＩを参照のこと）をいう。
【００４６】
略語「ＭＭＡＥ」とは、モノメチルオーリスタチンＥ（以下の式ＸＩＩＩを参照のこと）をいう。
【００４７】
略語「ＡＥＢ」とは、オーリスタチンＥと、パラアセチル安息香酸とを反応させることによって生成されるエステル（以下の式ＸＸＩＩを参照のこと）をいう。
【００４８】
略語「ＡＥＶＢ」とは、オーリスタチンＥと、ベンゾイル吉草酸とを反応させることによって生成されるエステル（以下の式ＸＸＩＩＩを参照のこと）をいう。
【００４９】
略語「ＭＭＡＦ」とは、ドバリン（ｄｏｖａｌｉｎｅ）−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニン（以下の式ＸＸＩを参照のこと）をいう。
【００５０】
用語「薬学的に受容可能な」とは、動物において、およびより詳細には、ヒトにおける使用について、連邦政府もしくは州政府の規制当局による承認を意味するか、または米国局方もしくは他の一般に認められた局方において列挙されることを意味する。用語「薬学的に適合性の成分」とは、薬学的に受容可能な希釈剤、アジュバント、賦形剤、または媒体であって、これとともに上記抗体または抗体誘導体が投与されるものをいう。
【００５１】
用語「動物」とは、ヒト、非ヒト哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、およびシカなど）および非哺乳動物（例えば、トリなど）をいう。
【００５２】
（全般）
本明細書に記載される方法は、上記リガンドユニットが、ＤＲ５に特異的に結合する抗ＤＲ５結合剤である、リガンド薬物結合体の使用を包含する。上記ＤＲ５結合剤は、例えば、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ５抗原結合フラグメント、あるいはヒト化抗体重鎖および／もしくは軽鎖の可変領域、またはその誘導体のアミノ酸配列を含む他のＤＲ５結合剤であり得る。
【００５３】
（リガンド薬物結合体）
本発明は、とりわけ、薬物の標的化された送達のためのリガンド薬物結合体を提供する。本発明者らは、上記リガンド薬物結合体が、ＤＲ５を発現する細胞に対して強力な細胞傷害活性および／または細胞増殖抑制活性を有することを発見した。上記リガンド薬物結合体は、少なくとも１個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。上記薬物ユニットは、直接、またはリンカーユニット（−ＬＵ−）を介して共有結合され得る。
【００５４】
いくつかの実施形態において、上記リガンド薬物結合体は、以下の式：
Ｌ−（ＬＵ−Ｄ）ｐ                （Ｉ）
またはその薬学的に受容可能な塩を有し；ここで：
Ｌは、上記リガンドユニット（すなわち、本発明のＤＲ５結合剤）であり、そして
（ＬＵ−Ｄ）は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで：
ＬＵ−は、リンカーユニットであり、そして
−Ｄは、標的細胞に対して細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；そして
ｐは、１〜２０である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２の範囲に及ぶ。いくつかの実施形態において、ｐは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３の範囲に及ぶ。他の実施形態において、ｐは、１、２、３、４、５または６である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、上記リガンド薬物結合体は、以下の式：
Ｌ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐ          （ＩＩ）
またはその薬学的に受容可能な塩を有し；
ここで：
Ｌは、上記リガンドユニット（すなわち、ＤＲ５結合剤）であり；そして
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−は、リンカーユニット（ＬＵ）であり、ここで：
−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり、
ａは、０または１であり、
各−Ｗ−は、独立して、アミノ酸ユニットであり、
ｗは、０〜１２の範囲に及ぶ整数であり、
−Ｙ−は、自己犠牲（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）スペーサーユニットであり、
ｙは、０、１または２であり；
−Ｄは、上記標的細胞に対して細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり；そして
ｐは、１〜２０である。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、そしてｙは、０、１または２である。いくつかの実施形態において、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、そしてｙは、０または１である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２の範囲に及ぶ。いくつかの実施形態において、ｐは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３の範囲に及ぶ。他の実施形態において、ｐは、１、２、３、４、５または６である。いくつかの実施形態において、ｗが０でないとき、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態において、ｗが１〜１２であるとき、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態において、ｗは、２〜１２であり、そしてｙは、１または２である。いくつかの実施形態において、ａは、１であり、そしてｗおよびｙは、０である。
【００５８】
複数のリガンド薬物結合体を含む組成物において、ｐは、薬物分子／リガンドの平均数（平均薬物負荷ともいわれる）である。平均薬物負荷は、１〜約２０薬物（Ｄ）／リガンドの範囲に及び得る。いくつかの実施形態において、ｐが平均薬物負荷を表す場合、ｐは、約１、約２、約３、約４、約５または約６である。結合体化反応の準備における薬物／リガンドの平均数は、従来の手段（例えば、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣ）によって特徴付けられ得る。ｐに関してリガンド薬物結合体の量的分布も決定され得る。いくつかの場合において、ｐが、他の薬物負荷を有するリガンド薬物結合体からの特定の値である均質なリガンド薬物結合体の分離、精製、および特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段によって達成され得る。例示的実施形態において、ｐは、２〜約８である。
【００５９】
リガンド薬物結合体の生成は、当業者に公知の任意の技術によって達成され得る。簡潔には、上記リガンド薬物結合体は、上記リガンドユニットとしてのＤＲ５結合剤、薬物、および必要に応じて、上記薬物と上記結合剤を連結するリンカーを含む。多くの様々な反応が、結合剤への薬物および／またはリンカーの共有結合に利用可能である。これは、しばしば、上記結合剤（例えば、抗体分子）のアミノ酸残基（リジンのアミン基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、および芳香族アミノ酸の種々の部分を含む）の反応によって、達成される。共有結合の最も一般に使用される非特異的方法のうちの１つは、化合物のカルボキシ（またはアミノ）基を、上記抗体のアミノ（またはカルボキシ）基に連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、二官能性薬剤（例えば、ジアルデヒドまたはイミドエステル）は、化合物のアミノ基を、抗体分子のアミノ基に連結するために使用されてきた。シッフ塩基反応は、結合剤への薬物の結合にも利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシル基を含む薬物の過ヨウ素酸酸化、従って、アルデヒドの形成を含み、上記アルデヒドは、次いで、上記結合剤と反応させられる。結合は、上記結合剤のアミノ基とのシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、上記結合剤に薬物を共有結合させるためのカップリング剤として使用され得る。他の技術は、当業者に公知であり、本発明の範囲内である。
【００６０】
特定の実施形態において、中間体（これが、上記リンカーの前駆物質である）は、適切な条件下で上記薬物と反応させられる。特定の実施形態において、反応性の基は、上記薬物および／または上記中間体に対して使用される。上記薬物と上記中間体との間の反応の生成物、または上記誘導体化薬物は、その後、適切な条件下で、上記ＤＲ５結合剤と反応させられる。
【００６１】
上記リガンド薬物結合体の特定のユニットの各々は、本明細書中でより詳細に記載される。例示的なリンカーユニット、ストレッチャーユニット、アミノ酸ユニット、自己犠牲スペーサーユニット、および薬物ユニットの合成および構造はまた、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、同第２００５−０２３８６４９号、同第２００５−０００９７５１号、同第２００６−００７４００８号、および同第２００９−００１０９４５号（これらの各々は、それらの全体が、および全ての目的のために、本明細書に参考として援用される）に記載される。
【００６２】
（リンカーユニット）
代表的には、上記リガンド薬物結合体は、上記薬物ユニットと上記リガンドユニットとの間にリンカー領域を含む。いくつかの実施形態において、上記リンカーは、上記リンカーの切断が、細胞内環境において上記リガンドから上記薬物ユニットを放出するように、細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態において、上記リンカーユニットは、切断可能でなく、そして、上記薬物は、例えば、抗体分解によって放出される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、上記リンカーは、上記細胞内環境中に（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａ）内）に存在する切断剤によって切断可能である。上記リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素（リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼが挙げられるが、これらに限定されない）によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態において、上記ペプチジルリンカーは、少なくとも２アミノ酸長または少なくとも３アミノ酸長である。切断剤としては、カテプシンＢおよびカテプシンＤならびにプラスミンが挙げられ得、これらの全ては、標的細胞内の活性薬物の放出を生じるジペプチド薬物誘導体を加水分解することが公知である（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３を参照のこと）。ＤＲ５発現細胞に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーが、最も代表的である。例えば、チオール依存性プロテアーゼである、がん組織において高度に発現されるカテプシン−Ｂによって切断可能であるペプチジルリンカーが、使用され得る（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙリンカー（配列番号＿＿））。このようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号（その全体が、および全ての目的のために、本明細書に参考として援用される）において記載される。特定の実施形態において、細胞内プロテアーゼによって切断可能な上記ペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ−Ｌｙｓリンカー（例えば、米国特許第６，２１４，３４５号（これは、上記ｖａｌ−ｃｉｔリンカーでのドキソルビシンの合成を記載する）を参照のこと）である。上記治療剤の細胞内タンパク質分解性放出を使用するという１つの利点は、上記薬剤が、代表的には、結合体化される場合に減弱され、上記結合体の血清安定性が、代表的には高いことである。
【００６４】
他の実施形態において、上記切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性（すなわち、特定のｐＨ値での加水分解に感受性）である。代表的には、上記ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームにおいて加水分解可能である酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、およびケタールなど）が、使用され得る（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号；同第５，６２２，９２９号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３；Ｎｅｖｉｌｌｅら，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１を参照のこと）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件（例えば、血液中の条件）下で比較的安定であるが、ｐＨ５．５または５．０未満（リソソームのｐＨに近い）では不安定である。特定の実施形態において、加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療剤に結合したチオエーテル）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照のこと）。
【００６５】
なお他の実施形態において、上記リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。種々のジスルフィドリンカーが当該分野で公知であり、これらとしては例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成され得るものが挙げられる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅら，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋら，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照のこと。米国特許第４，８８０，９３５号もまた参照のこと）。
【００６６】
さらに他の特定の実施形態において、上記リンカーは、マロネートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎら，１９９５，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕら，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）、または３’−Ｎ−アミドアナログ（Ｌａｕら，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１３０５−１２）である。
【００６７】
さらに他の実施形態において、上記リンカーユニットは、切断可能ではなく、そして上記薬物は、抗体分解によって放出される（例えば、米国公開第２００５０２３８６４９号（その全体が、および全ての目的のために本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
【００６８】
代表的には、上記リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーの文脈において「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」とは、リガンド薬物結合体のサンプルにおいて、上記リンカーのうちの約２０％以下、代表的には、約１５％以下、より代表的には、約１０％以下、およびさらにより代表的には、約５％以下、約３％以下、または約１％以下が、上記リガンド薬物結合体が細胞外環境に（例えば、血漿中に）存在する場合に切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性でないかは、例えば、血漿とともに、上記リガンド薬物結合体を所定の期間（例えば、２時間、４時間、８時間、１６時間、または２４時間）にわたってインキュベートし、次いで、上記血漿中に存在する遊離薬物の量を定量することによって、決定され得る。
【００６９】
他の相互に排他的ではない実施形態において、上記リンカーは、細胞内部移行を促進する。特定の実施形態において、上記リンカーは、上記治療剤に結合された場合に（すなわち、本明細書に記載されるように、上記リガンド薬物結合体の上記リンカー−治療剤部分の環境において）細胞内部移行を促進する。さらに他の実施形態において、上記リンカーは、オーリスタチン化合物および抗ＤＲ５抗体の両方に結合体化された場合に、細胞内部移行を促進する。
【００７０】
本発明の組成物および方法とともに使用され得る種々の例示的リンカーは、ＷＯ  ２００４−０１０９５７、米国公報第２００６００７４００８号、同第２００５０２３８６４９号、および同第２００６００２４３１７号（これらの各々は、その全体が、および全ての目的のために本明細書に参考として援用される）に記載される。
【００７１】
「リンカーユニット」（ＬＵ）は、薬物ユニットおよびリガンドユニットを連結して、リガンド薬物結合体を形成するために使用され得る二官能性化合物である。いくつかの実施形態において、上記リンカーユニットは、以下の式を有する：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
ここで：−Ａ−は、ストレッチャーユニットであり、
ａは、０または１であり、
各−Ｗ−は、独立して、アミノ酸ユニットであり、
ｗは、０〜１２の範囲に及ぶ整数であり、
−Ｙ−は、自己犠牲スペーサーユニットであり、そして
ｙは、０、１または２である。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、そしてｙは、０、１または２である。いくつかの実施形態において、ａは、０または１であり、ｗは、０または１であり、そしてｙは、０または１である。いくつかの実施形態において、ｗが１〜１２である場合、ｙは、１または２である。いくつかの実施形態において、ｗは、２〜１２であり、そしてｙは、１または２である。いくつかの実施形態において、ａは、１であり、そしてｗおよびｙは、０である。
【００７３】
（ストレッチャーユニット）
上記ストレッチャーユニット（Ａ）は、存在する場合、リガンドユニットを、アミノ酸ユニット（−Ｗ−）（存在する場合）に；スペーサーユニット（−Ｙ−）（存在する場合）に；または薬物ユニット（−Ｄ）に、連結し得る。ＤＲ５結合剤上に存在し得る有用な官能基（天然にまたは化学的操作を介するかのいずれか）としては、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルが挙げられるが、これらに限定されない。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。一例において、スルフヒドリル基は、抗ＤＲ５抗体の分子内ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。別の例において、スルフヒドリル基は、抗ＤＲ５抗体のリジン部分のアミノ基と、２−イミノチオラン（トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ））または他のスルフヒドリル生成試薬との反応によって生成され得る。特定の実施形態において、上記抗ＤＲ５抗体は、組換え抗体であり、１個以上のリジンを有するように操作される。他の実施形態において、上記組換え抗ＤＲ５抗体は、さらなるスルフヒドリル基（例えば、さらなるシステイン）を有するように操作される。
【００７４】
一実施形態において、上記ストレッチャーユニットは、上記リガンドユニットの硫黄原子と結合を形成する。上記硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基に由来し得る。この実施形態の代表的ストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａおよび式ＩＩＩｂの大括弧内に示され、ここでＬ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上記に定義されるとおりであり、Ｒａは、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニレン）−、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−アリーレン、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−アリーレン−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（カルボシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（カルボシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン、ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−（ヘテロシクロ）−、−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルケニレン−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ２−Ｃ１０アルキニレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され、ｒは、１〜１０の範囲に及ぶ整数であり、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、カルボシクロ、ヘテロシクロ、およびアリーレン基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換される。いくつかの実施形態において、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、カルボシクロ、ヘテロシクロ、およびアリーレン基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、置換されていない。いくつかの実施形態において、Ｒａは、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）−、−アリーレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（カルボシクロ）−、−（カルボシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−（ヘテロシクロ）−、−（ヘテロシクロ）−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−、および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；ｒは、１〜１０の範囲に及ぶ整数であり、ここで上記アルキレン基は置換されておらず、上記基の残りは、必要に応じて置換される。
【００７５】
明らかに示されていないとしても、１〜２０個の薬物部分が、リガンドに連結され得る（ｐ＝１〜２０）ことは、上記例示的実施形態全てから理解されるべきである。
【００７６】
【化２】
2013505944.tif 000004
例示的ストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａのものであり、ここでＲａは、−（ＣＨ２）５−である：
【００７７】
【化３】
2013505944.tif 000005
。
【００７８】
別の例示的ストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａのものであり、ここでＲａは、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であり；そしてｒは、２である：
【００７９】
【化４】
2013505944.tif 000006
。
【００８０】
例示的ストレッチャーユニットは、式ＩＩＩａのものであり、ここでＲａは、−アリーレン−またはアリーレン−Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−である。いくつかの実施形態において、上記アリール基は、置換されていないフェニル基である。
【００８１】
さらに別の例示的ストレッチャーユニットは、式ＩＩＩｂのものであり、ここでＲａは、−（ＣＨ２）５−である：
【００８２】
【化５】
2013505944.tif 000007
。
【００８３】
特定の実施形態において、上記ストレッチャーユニットは、上記リガンドユニットの硫黄原子と、上記ストレッチャーユニットの硫黄原子との間のジスルフィド結合を介して、上記リガンドユニットに連結される。この実施形態の代表的ストレッチャーユニットは、式ＩＶの大括弧内に示され、ここでＲａ、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上記で定義されるとおりである。
【００８４】
【化６】
2013505944.tif 000008
。
【００８５】
本願全体を通して、以下の式におけるＳ部分は、別段文脈によって示されなければ、上記リガンドユニットの硫黄原子に言及することに注意すべきである：
【００８６】
【化７】
2013505944.tif 000009
。
【００８７】
さらに他の実施形態において、上記ストレッチャーは、Ｌに結合する前に、上記リガンドの一級アミノ基または二級アミノ基と結合を形成し得る反応性部位を含む。これら反応性部位の例としては、活性化エステル（例えば、スクシンイミドエステル、４  ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、酸無水物、酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネートおよびイソチオシアネートが挙げられるが、これらに限定されない。この実施形態の代表的ストレッチャーユニットは、式Ｖａおよび式Ｖｂの大括弧内に示され、ここで−Ｒａ−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上記に定義されるとおりである；
【００８８】
【化８】
2013505944.tif 000010
。
【００８９】
いくつかの実施形態において、上記ストレッチャーは、リガンド上に存在し得る改変された炭水化物の（−ＣＨＯ）基に対して反応性である反応性部位を含む。例えば、炭水化物は、過ヨウ素酸ナトリウムのような試薬を使用して穏やかに酸化され得、酸化された炭水化物の得られた（−ＣＨＯ）ユニットは、官能基（例えば、ヒドラジド、オキシム、一級アミンまたは二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジド（例えば、Ｋａｎｅｋｏら，１９９１，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２：１３３−４１によって記載されるもの））を含むストレッチャーと縮合され得る。この実施形態の代表的ストレッチャーユニットは、式ＶＩａ、式ＶＩｂ、および式ＶＩｃの大括弧内に示され、ここで−Ｒａ−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは、上記に定義されるとおりである：
【００９０】
【化９】
2013505944.tif 000011
。
【００９１】
（アミノ酸ユニット）
上記アミノ酸ユニット（−Ｗ−）は、存在する場合、上記ストレッチャーユニットを上記スペーサーユニット（上記スペーサーユニットが存在する場合）に連結し、上記ストレッチャーユニットを上記薬物部分（上記スペーサーユニットが存在する場合）に連結し、そして上記リガンドユニットを上記薬物ユニット（上記ストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが存在する場合）に連結する。
【００９２】
Ｗｗ−は、例えば、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチド、またはドデカペプチドユニットであり得る。各−Ｗ−ユニットは、独立して、大括弧の中で以下に示される式を有し、そしてｗは、０〜１２の範囲に及ぶ整数であり：
【００９３】
【化１０】
2013505944.tif 000012
ここでＲｂは、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、
【００９４】
【化１１】
2013505944.tif 000013
である。
【００９５】
いくつかの実施形態において、上記アミノ酸ユニットは、１種以上の酵素（がんまたは腫瘍関連プロテアーゼが挙げられる）によって酵素的に切断されて、上記薬物ユニット（−Ｄ）を遊離し得、これは、一実施形態において、薬物（Ｄ）を提供するために、放出の際にインビボでプロトン化される。
【００９６】
特定の実施形態において、上記アミノ酸ユニットは、天然アミノ酸を含み得る。他の実施形態において、上記アミノ酸ユニットは、非天然アミノ酸を含み得る。例示的Ｗｗユニットは、式（ＶＩＩ）〜（ＩＸ）によって表される：
【００９７】
【化１２】
2013505944.tif 000014
ここでＲｃおよびＲｄは、以下のとおりである：
【００９８】
【化１３】
2013505944.tif 000015
【００９９】
【化１４】
2013505944.tif 000016
ここでＲｃ、ＲｄおよびＲｅは、以下のとおりである：
【０１００】
【化１５】
2013505944.tif 000017
【０１０１】
【化１６】
2013505944.tif 000018
ここでＲｃ、Ｒｄ、ＲｅおよびＲｆは、以下のとおりである：
【０１０２】
【化１７】
2013505944.tif 000019
例示的アミノ酸ユニットとしては、式ＶＩＩのユニット（ここでＲｃは、ベンジルであり、そしてＲｄは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２であるか；Ｒｃは、イソプロピルであり、そしてＲｄは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２であるか；またはＲｃはイソプロピルであり、そしてＲｄは、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である）が挙げられるが、これらに限定されない。別の例示的アミノ酸ユニットは、式ＶＩＩＩのユニットであり、ここでＲｃは、ベンジルであり、Ｒｄは、ベンジルであり、そしてＲｅは、−（ＣＨ２）４ＮＨ２である。
【０１０３】
有用な−Ｗｗ−ユニットが設計され得、特定の酵素（例えば、腫瘍関連プロテアーゼ）による酵素的切断に対するそれらの選択性が最適化され得る。一実施形態において、−Ｗｗ−ユニットは、その切断が、カテプシンＢ、カテプシンＣおよびカテプシンＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒される。
【０１０４】
一実施形態において、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが水素以外である場合、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが結合される上記炭素原子は、キラルである。
【０１０５】
Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、ＲｅまたはＲｆが結合される各炭素原子は、独立して、（Ｓ）配置または（Ｒ）配置にある。
【０１０６】
上記アミノ酸ユニットの一局面において、上記アミノ酸ユニットは、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）である。別の局面において、上記アミノ酸ユニットは、フェニルアラニン−リジン（すなわち、ｆｋ）である。上記アミノ酸ユニットのさらに別の局面において、上記アミノ酸ユニットは、Ｎ−メチルバリン−シトルリンである。さらに別の局面において、上記アミノ酸ユニットは、５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニン  リジン、テトライソキノリンカルボキシレート  リジン、シクロヘキシルアラニン  リジン、イソニペコチン酸（ｉｓｏｎｅｐｅｃｏｔｉｃ  ａｃｉｄ）リジン、β−アラニン  リジン、グリシン  セリン  バリン  グルタミンおよびイソニペコチン酸である。
【０１０７】
（スペーサーユニット）
上記スペーサーユニット（−Ｙ−）は、存在する場合、アミノ酸ユニットを上記薬物ユニット（アミノ酸ユニットが存在する場合）へ連結する。あるいは、上記スペーサーユニットは、上記ストレッチャーユニットを上記薬物ユニットに（上記アミノ酸ユニットが存在しない場合）連結する。上記スペーサーユニットはまた、上記薬物ユニットを上記リガンドユニットに（上記アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニットの両方が存在しない場合）連結する。
【０１０８】
スペーサーユニットは、２つの一般的なタイプのものである：非自己犠牲または自己犠牲。非自己犠牲スペーサーユニットは、上記スペーサーユニットの一部または全てが、上記リガンド−薬物結合体からアミノ酸ユニットを切断（特に、酵素によって切断）した後に、上記薬物部分に結合したままであるものである。非自己犠牲スペーサーユニットの例としては、（グリシン−グリシン）スペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニット（ともにスキーム１に示される）（以下）が挙げられるが、これらに限定されない。グリシン−グリシンスペーサーユニットまたはグリシンスペーサーユニットを含む結合体が、酵素（例えば、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、がん細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼ）を介して酵素的切断を受ける場合、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分は、Ｌ−Ａａ−Ｗｗ−から切断される。一実施形態において、独立した加水分解反応が、標的細胞内で起こり、上記グリシン−薬物部分結合を切断し、上記薬物を遊離する。
【０１０９】
【化１８】
2013505944.tif 000020
いくつかの実施形態において、非自己犠牲スペーサーユニット（−Ｙ−）は、−Ｇｌｙ−である。いくつかの実施形態において、非自己犠牲スペーサーユニット（−Ｙ−）は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。
【０１１０】
一実施形態において、ここでは、上記スペーサーユニットが存在しない（ｙ＝０）薬物−リンカー結合体またはその薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１１１】
あるいは、自己犠牲スペーサーユニットを含む結合体は、−Ｄを放出し得る。本明細書で使用される場合、用語「自己犠牲スペーサー」とは、２個の間隔の空いた化学部分を安定な３つの部分からなる分子へと一緒に共有結合し得る二官能性化学部分をいう。それは、第１の部分への結合が切断される場合、第２の化学部分から自発的に分離する。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、−Ｙｙ−は、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）ユニット（スキーム２およびスキーム３を参照のこと）であり、そのフェニレン部分は、Ｑｍで置換されており、ここでＱは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；そしてｍは、０〜４の範囲に及ぶ整数である。上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換され得る。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、−Ｙ−は、ＰＡＢ基であり、上記ＰＡＢ基は、上記ＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介して−Ｗｗ−に連結され、カーボネート、カルバメートまたはエーテル基を介して−Ｄに直接接続される。いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム２は、Ｔｏｋｉら，２００２，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２によって記載されるように、カルバメートまたはカーボネート基を介して−Ｄに直接結合されるＰＡＢ基の薬物放出の考えられる機構を示す。
【０１１４】
【化１９】
2013505944.tif 000021
スキーム２において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲に及ぶ整数であり；ｐは、１〜約２０の範囲に及ぶ。上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換され得る。
【０１１５】
いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム３は、エーテルまたはアミン結合を介して、−Ｄに直接結合されるＰＡＢ基の薬物放出の考えられる機構を示し、ここでＤは、上記薬物ユニットの一部である酸素基または窒素基を含む：
【０１１６】
【化２０】
2013505944.tif 000022
スキーム３において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲に及ぶ整数であり；そしてｐは、１〜約２０の範囲に及ぶ。上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換され得る。
【０１１７】
自己犠牲スペーサーの他の例としては、上記ＰＡＢ基に電子的に類似している芳香族化合物（例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Ｈａｙら，１９９９，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。スペーサーが使用され得、これは、アミド結合加水分解の際に環化を受ける（例えば、置換されたおよび置換されていない４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら，１９９５，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍら，１９７２，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら，１９９０，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７））。グリシンのα位で置換されているアミン含有薬物の脱離（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら，１９８４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）はまた、自己犠牲スペーサーの例である。
【０１１８】
一実施形態において、上記スペーサーユニットは、スキーム４に示されるように、分枝状のビス（ヒドロキシメチル）−スチレン（ＢＨＭＳ）ユニットであり、これは、複数の薬物を組み込みかつ放出するために使用され得る：
【０１１９】
【化２１】
2013505944.tif 000023
。
【０１２０】
スキーム４において、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは、０〜４の範囲に及ぶ整数であり；ｎは、０または１であり；そしてｐは、１〜約２０の整数である。上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換され得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、上記−Ｄ部分は、同じである。さらに別の実施形態において、上記−Ｄ部分は、異なる。
【０１２２】
一局面において、スペーサーユニット（−Ｙｙ−）は、式（Ｘ）〜（ＸＩＩ）によって表される：
【０１２３】
【化２２】
2013505944.tif 000024
ここでＱは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ８アルキニル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；そしてｍは、０〜４の範囲に及ぶ整数である。上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換され得る。
【０１２４】
【化２３】
2013505944.tif 000025
。
【０１２５】
選択された実施形態の群において、式Ｉおよび式ＩＩの結合体は、以下である：
【０１２６】
【化２４】
2013505944.tif 000026
ここでｗおよびｙは、各々、０、１または２であり、および
【０１２７】
【化２５】
2013505944.tif 000027
ここでｗおよびｙは、各々０であり、
【０１２８】
【化２６】
2013505944.tif 000028
【０１２９】
【化２７】
2013505944.tif 000029
ここでＡａ、Ｗｗ、Ｙｙ、ＤおよびＬは、上記で提供される意味を有する。
【０１３０】
（薬物ユニット）
上記薬物部分（Ｄ）は、任意の細胞傷害剤もしくは薬物、細胞増殖抑制剤もしくは薬物、または免疫調節（例えば、免疫抑制）剤もしくは薬物であり得る。Ｄは、スペーサーユニットと、上記アミノ酸ユニットと、上記ストレッチャーユニットと、または上記リガンドユニットと結合を形成し得る原子を有する薬物ユニット（部分）である。いくつかの実施形態において、上記薬物ユニットＤは、上記スペーサーユニットと結合を形成し得る窒素原子を有する。本明細書で使用される場合、用語「薬物ユニット」および「薬物部分」とは、同義であり、交換可能に使用される。
【０１３１】
細胞傷害剤または免疫調節剤の有用なクラスとしては、例えば、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製インヒビター、およびアルキル化剤が挙げられる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、上記薬物は、オーリスタチン（例えば、オーリスタチンＥ（当該分野でドラスタチン−１０の誘導体として公知）またはその誘導体である。上記オーリスタチンは、例えば、オーリスタチンＥとケト酸との間に形成されたエステルであり得る。例えば、オーリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させられて、それぞれ、ＡＥＢおよびＡＥＶＢを生じ得る。他の代表的オーリスタチンとしては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥが挙げられる。例示的オーリスタチンの合成および構造は、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、同第２００５−０２３８６４９号および同第２００５−０００９７５１号；国際特許公開第ＷＯ  ０４／０１０９５７、同第ＷＯ  ０２／０８８１７２、および米国特許第６，３２３，３１５号；同第６，２３９，１０４号；同第６，０３４，０６５号；同第５，７８０，５８８号；同第５，６６５，８６０号；同第５，６６３，１４９号；同第５，６３５，４８３号；同第５，５９９，９０２号；同第５，５５４，７２５号；同第５，５３０，０９７号；同第５，５２１，２８４号；同第５，５０４，１９１号；同第５，４１０，０２４号；同第５，１３８，０３６号；同第５，０７６，９７３号；同第４，９８６，９８８号；同第４，９７８，７４４号；同第４，８７９，２７８号；同第４，８１６，４４４号；および同第４，４８６，４１４号（これらの各々は、その全体が、および全ての目的のために本明細書に参考として援用される）に記載されている。
【０１３３】
オーリスタチンは、微小管ダイナミクスならびに核分裂および細胞分裂に干渉し、抗がん活性を有することが示されてきている。本発明のオーリスタチンは、チューブリンに結合し、ＤＲ５発現細胞系に対して細胞傷害効果または細胞増殖抑制効果を発揮し得る。当該分野で公知の多くの様々なアッセイが存在し、これらは、オーリスタチンまたは得られた抗体−薬物結合体が、所望の細胞系に対して細胞増殖抑制効果または細胞傷害効果を発揮するか否かを決定するために使用され得る。
【０１３４】
化合物がチューブリンを結合するか否かを決定するための方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｍｕｌｌｅｒら，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ  ２００６，７８，４３９０−４３９７；Ｈａｍｅｌら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９５  ４７：９６５−９７６；およびＨａｍｅｌら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０  ２６５：２８，１７１４１−１７１４９を参照のこと。本発明の目的のために、チューブリンに対する化合物の相対的親和性が、決定され得る。いくつかの好ましい本発明のオーリスタチンは、チューブリンに対するＭＭＡＥの結合親和性より１０倍低い（より弱い親和性）から、チューブリンに対するＭＭＡＥの結合親和性より１０倍、２０倍またはさらに１００倍高い（より高い親和性）までの範囲に及ぶ親和性で、チューブリンに結合する。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、−Ｄは、式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチン：
【０１３６】
【化２８】
2013505944.tif 000030
またはその薬学的に受容可能な塩形態であり；ここで、各位置で独立して：
波線は、結合を示し；
Ｒ２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
Ｒ５は、−Ｈまたは−Ｃ１−Ｃ８アルキルであるか；
またはＲ４およびＲ５は一緒になって、炭素環式環を形成し、および式−（ＣＲａＲｂ）ｓ−を有し、ここでＲａおよびＲｂは、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、または−炭素環であり、そしてｓは、２、３、４、５または６であり、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（炭素環）、−アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（アリール）、複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）であり；
各Ｒ８は、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキニル）、または−炭素環であり；
Ｒ９は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１９は、−アリール、−複素環、または−炭素環であり；
Ｒ２０は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−炭素環、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）、またはＯＲ１８であり、ここでＲ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；
Ｒ２１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、または−炭素環であり；
Ｒ１０は、−アリールまたは−複素環であり；
Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−であり、ここでＲ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり；
ｍは、１〜１０００の範囲に及ぶ整数であり；
Ｒ１３は、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり；
Ｒ１４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１５の各存在は、独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；
Ｒ１６の各存在は、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；そして
ｎは、０〜６の範囲に及ぶ整数であり；ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、および複素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換されている。
【０１３７】
式ＤＥのオーリスタチンは、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、および複素環基が置換されていないものを含む。
【０１３８】
式ＤＥのオーリスタチンは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の基が置換されておらずかつＲ１９、Ｒ２０およびＲ２１の基が本明細書に記載されるように必要に応じて置換されているものを含む。
【０１３９】
式ＤＥのオーリスタチンは、以下であるものまたはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）から独立して選択され；ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環、アリール、および複素環基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５は、−水素であり；
Ｒ６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ８は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）、−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルケニル）、または−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ２０アルキニル）から独立して選択され、ここで上記アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ９は、−水素または−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９は、必要に応じて置換されたフェニルであり；
Ｒ２０は、ＯＲ１８であり；ここでＲ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；
Ｒ２１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、または−炭素環から選択され；ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル、および炭素環基は、必要に応じて置換されている。
【０１４０】
式ＤＥのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルであり；
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであり、ここで上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ８アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ１−Ｃ８アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ８アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ８アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）であり；ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、および炭素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換されており；
Ｒ５は、Ｈであり；
Ｒ６は、メチルであり；
Ｒ７は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｃ２−Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２−Ｃ８アルキニルであり；
各Ｒ８は、メトキシであり；
Ｒ９は、−水素または−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９は、フェニルであり；
Ｒ２０は、ＯＲ１８であり；ここでＲ１８は、−Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合、ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；
Ｒ２１は、メチルである。
【０１４１】
式ＤＥのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、メチルであり；Ｒ７は、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８は、メトキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１９は、フェニルであり；Ｒ２０は、ＯＲ１８であり；ここでＲ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合、ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；そしてＲ２１は、メチルである。
【０１４２】
式ＤＥのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１９は、フェニルであり；Ｒ２０は、ＯＲ１８であり；ここでＲ１８は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、または直接結合であり、その場合、ＯＲ１８は、＝Ｏを表し；そしてＲ２１は、Ｃ１−Ｃ３アルキルである。
【０１４３】
式ＤＦのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルであり；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ７は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（単環式Ｃ３−Ｃ６炭素環）、−Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−複素環、−Ｃ１−Ｃ２０アルキレン（複素環）、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン（複素環）、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレン（複素環）から独立して選択され；ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環、アリール、および複素環基は、単独であろうと、別の基の一部としてであろうと、必要に応じて置換されており；
Ｒ５は、−Ｈであり；
Ｒ６は、メチルであり；
各Ｒ８は、メトキシであり；
Ｒ９は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり；ここで上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ１０は、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換された複素環であり；
Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−ＮＲ１２−であり、ここでＲ１２は、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、これらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ１１は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニル、−アリール、−複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここで上記アルキル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｙｎｙ）、アリール、および複素環基は、必要に応じて置換されており；
ｍは、１〜１０００の範囲に及ぶ整数であり；
Ｒ１３は、−Ｃ２−Ｃ２０アルキレン、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニレン、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニレンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されており；
Ｒ１４は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、ここで上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ１５の各存在は、独立して、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルであり、ここで上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
Ｒ１６の各存在は、独立して、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ２０アルキル、−Ｃ２−Ｃ２０アルケニル、−Ｃ２−Ｃ２０アルキニルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、ここで上記アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、必要に応じて置換されており；
ｎは、０〜６の範囲に及ぶ整数である。
【０１４４】
これら実施形態の特定のものにおいて、Ｒ１０は、必要に応じて置換されたフェニルである。
【０１４５】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９の基が置換されておらずかつＲ１０およびＲ１１の基が本明細書で記載されるとおりであるものを含む。
【０１４６】
式ＤＦのオーリスタチンは、上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｋｌｅｎｅ）、アリール、炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｌｅ）、および複素環基が置換されていないものを含む。
【０１４７】
式ＤＦのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１０は、必要に応じて置換されたフェニルであり；Ｚは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり；そしてＲ１１は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１４８】
式ＤＦのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、メチルであり；Ｒ７は、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８は、メトキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１０は、必要に応じて置換されたフェニルであり；Ｚは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり；そしてＲ１１は、本明細書で定義されるとおりである。
【０１４９】
式ＤＦのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、メチルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、メチルであり；Ｒ７は、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ８は、メトキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０は、フェニルであり；そしてＺは、ＯまたはＮＨであり、そしてＲ１１は、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは、水素である。
【０１５０】
式ＤＦのオーリスタチンは、以下であるもの、またはその薬学的に受容可能な塩形態を含む：
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ３は、ＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ５は、Ｈであり；Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ３アルキルであり；Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ５アルキルであり；Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ３アルコキシであり；Ｒ９は、水素またはＣ１−Ｃ８アルキルであり；Ｒ１０は、フェニルであり；そしてＺは、ＯまたはＮＨであり、そしてＲ１１は、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは、水素である。
【０１５１】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が、独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５が−Ｈであるものを含む。例示的実施形態において、Ｒ３およびＲ４は、各々イソプロピルであり、Ｒ５は、Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルである。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５２】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ２およびＲ６が各々メチルであり、そしてＲ９がＨであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５３】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ８の各存在が−ＯＣＨ３であるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５４】
式ＤＥまたは式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ３およびＲ４が各々イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６が各々メチルであり、Ｒ５がＨであり、Ｒ７がｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各存在が−ＯＣＨ３であり、そしてＲ９がＨであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５５】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−Ｏ−または−ＮＨ−であるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５６】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ１０がアリールであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５７】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｒ１０が−フェニルであるモノを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５８】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−Ｏ−であり、そしてＲ１１がＨ、メチルまたはｔ−ブチルであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１５９】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１が、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここでＲ１５が、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、そしてＲ１６が、−Ｃ１−Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６０】
式ＤＦのオーリスタチンは、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１が−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここでＲ１５が−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈであるものを含む。上記置換基の残りは、本明細書で定義されるとおりである。
【０１６１】
好ましい実施形態において、Ｄが式ＤＥのオーリスタチンである場合、ｗは、１〜１２、好ましくは、２〜１２の範囲に及ぶ整数であり、ｙは、１または２であり、そしてａは、好ましくは、１である。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、Ｄが式ＤＥのオーリスタチンである場合、ａは１であり、そしてｗおよびｙは、０である。
【０１６３】
例示的薬物ユニット（−Ｄ）は、以下の構造を有する上記薬物ユニットまたはその薬学的に受容可能な塩またはその溶媒和物を含む：
【０１６４】
【化２９】
2013505944.tif 000031
【０１６５】
【化３０】
2013505944.tif 000032
【０１６６】
【化３１】
2013505944.tif 000033
。
【０１６７】
一局面において、親水性基（例えば、トリエチレングリコールエステル（ＴＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない）は、Ｒ１１において上記薬物ユニットに結合され得る。理論によって拘束されないが、上記親水性基は、上記薬物ユニットの内部移行および非凝集形成を補助する。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、上記薬物ユニットは、ＴＺＴ−１０２７ではない。いくつかの実施形態において、上記薬物ユニットは、オーリスタチンＥでも、ドラスタチン１０でも、オーリスタチンＰＥでもない。
【０１６９】
例示的リガンド薬物結合体は、「ｍＡｂ」が抗ＤＲ５抗体を表し、Ｓが、上記抗体の硫黄原子である以下の構造またはその薬学的に受容可能な塩を有し、上記下付き文字ｐは、１〜約２０の整数であり、そして好ましくは、１〜約５である：
【０１７０】
【化３２】
2013505944.tif 000034
。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、上記薬物ユニットは、カリチアマイシン、カンプトテシン、マイタンシノイド、またはアントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、上記薬物は、タキサン、トポイソメラーゼインヒビター、またはビンカアルカロイドなどである。
【０１７２】
いくつかの代表的実施形態において、適切な細胞傷害剤としては、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトリプシン、ＣＢＩ化合物；米国特許第６，１３０，２３７号もまた参照のこと）、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシン、およびビンカアルカロイドを含む。他の細胞傷害剤としては、例えば、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エリュテロビン、およびミトキサントロンが挙げられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、上記薬物は、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例としては、オーリスタチン、タキサン（例えば、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、タキソテール（登録商標）（ドセタキセル））、Ｔ６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）およびビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）が挙げられる。他の抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサンアナログ（例えば、エポチロンＡおよびエポチロンＢ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルセミド（ｃｏｌｃｉｍｉｄ）、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリド、およびエリュテロビンが挙げられる。
【０１７４】
特定の実施形態において、上記細胞傷害剤は、マイタンシノイド（別の群の抗チューブリン剤）である。例えば、具体的実施形態において、上記マイタンシノイドは、マイタンシンまたはＤＭ−１（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１もまた参照のこと）である。
【０１７５】
特定の実施形態において、上記細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ドラスタチンである。特定の実施形態において、上記細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、上記オーリスタチンクラスのものである。従って、具体的実施形態において、上記細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ＭＭＡＥ（式ＸＩＩＩ）である。別の具体的実施形態において、上記細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ＡＦＰ（式ＸＶＩＩＩ）である。
【０１７６】
【化３３】
2013505944.tif 000035
特定の実施形態において、上記細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、式ＸＩＩ〜ＸＸＩの化合物またはその薬学的に受容可能な塩形態である：
【０１７７】
【化３４】
2013505944.tif 000036
【０１７８】
【化３５】
2013505944.tif 000037
【０１７９】
【化３６】
2013505944.tif 000038
【０１８０】
【化３７】
2013505944.tif 000039
。
【０１８１】
（リガンドユニット）
本発明において、上記リガンド薬物結合体における上記リガンドユニット（例えば、抗体）は、ＤＲ５に特異的に結合し、内部移行を介して細胞傷害活性を発揮する。上記リガンド薬物結合体は、上記リガンドユニット（例えば、抗体）がその標的として特異的に結合する、ＤＲ５を発現するがん組織に達する。結果として、上記抗体に結合体化する上記薬物ユニットは、上記標的細胞に対して選択的に作用することを可能にし得る。従って、上記抗体−薬物結合体の効力は、上記抗体単独のものより大いに増強され得る。デスドメイン含有レセプターに結合する抗体（特に、抗ＤＲ５抗体）は、本発明に従って、上記抗体−薬物結合体に含まれ得る抗体として選択され得る。
【０１８２】
（ＤＲ５に結合する抗体）
（１）ＤＲ５遺伝子
ヒトデスレセプター５（ＤＲ５）遺伝子のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＧＩ：２２５４７１１８（受託番号ＮＭ＿１４７１８７）として登録された。１個以上のアミノ酸で、ＤＲ５のアミノ酸配列において置換、欠失または付加されたアミノ酸配列をコードし、ＤＲ５の生物活性に匹敵する生物活性を有するヌクレオチド配列はまた、上記ＤＲ５遺伝子のヌクレオチド配列に含まれる。さらに、ＤＲ５のアミノ酸配列において１個以上のアミノ酸が置換、欠失または付加されたアミノ酸配列からなり、ＤＲ５の生物活性に匹敵する生物活性を有するタンパク質はまた、ＤＲ５に含まれる。
【０１８３】
（２）ＤＲ５に対する抗体
本発明に従うＤＲ５に対する抗体は、動物を、ＤＲ５またはＤＲ５のアミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドで免疫することによって、通常の方法で得られ得る。生体において産生されるこのような抗体は、集められかつ精製され得る。
【０１８４】
さらに、モノクローナル抗体はまた、ＤＲ５に対する抗体を産生する抗体産生細胞を、公知の方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６，ｐ．４９５−４９７；Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｐ．３６５−３６７，Ｐｒｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８０））に従って骨髄腫細胞と融合することによって樹立されたハイブリドーマから得られ得る。
【０１８５】
上記抗原としてのＤＲ５は、上記ＤＲ５遺伝子を発現する遺伝子操作された宿主細胞から得られ得る。
【０１８６】
より具体的には、ＤＲ５は、上記ＤＲ５遺伝子を発現し得るベクターを調製し、上記ベクターを宿主細胞に導入して、上記遺伝子を発現させ、上記発現されるＤＲ５を精製することによって、得られ得る。
【０１８７】
さらに、ＤＲ５の細胞外領域を抗体の定常領域と融合する人工遺伝子が構築された後に、上記遺伝子の適切な発現系において調製されるタンパク質はまた、免疫原として使用され得る。
【０１８８】
（３）他の抗体
上記ＤＲ５に対するモノクローナル抗体に加えて、本発明に従う抗体は、ヒトに対する異種の抗原性を低下させるように人工的に改変された組換え抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体）を含む。これら抗体は、公知の方法によって産生され得る。
【０１８９】
このようなキメラ抗体としては、可変領域および定常領域が、互いに対して異種である抗体が挙げられ、その例は、マウスに由来する抗体の可変領域遺伝子を、ヒト定常領域遺伝子に結合することによって作製されるキメラ抗体である（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，６８５１−６８５５，（１９８４））。
【０１９０】
このようなヒト化抗体の例としては、相補性決定領域（ＣＤＲ）のみがヒト抗体へと移入される抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２−５２５）およびＣＤＲ配列およびフレームワークの一部におけるアミノ酸残基が、ＣＤＲグラフト化によってヒト抗体へとグラフト化される抗体（国際公開番号ＷＯ９０／０７８６１）が挙げられる。
【０１９１】
さらに、ヒト抗体がある。用語ヒト抗ＤＲ５抗体とは、ヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列をのみを有するヒト抗体をいう。上記抗ヒトＤＲ５抗体産生マウスを使用する方法によって得られ得る（Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）１６，ｐ．１３３−１４３；Ｋｕｒｏｉｗａ，Ｙ．ら，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（１９９８）２６，ｐ．３４４７−３４４８；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．ら，Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｖｏｌ．１０，ｐ．６９−７３（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．，Ｍａｔｕｄａ，Ｔ．ａｎｄ  Ｉｉｊｉｍａ，Ｓ．ｅｄｓ．），Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９９；Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７，ｐ．７２２−７２７）。
【０１９２】
このようなトランスジェニック動物、またはより具体的には、非ヒト哺乳動物における内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が破壊されかつ代わりにヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が、酵母人工染色体（ＹＡＣ）ベクターなどを介してこのノックアウト動物に導入される遺伝子改変動物は、上記のようにノックアウト動物およびトランスジェニック動物を調製し、これら動物を交配することによって生産することができる。
【０１９３】
上記抗体はまた、ｃＤＮＡ（好ましくは、上記ヒト化抗体重鎖および軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡを含むベクター）で真核生物細胞を組換えＤＮＡ技術によって形質転換し、組換えヒトモノクローナル抗体を産生する上記形質転換した細胞を培養することによって産生する培養上清から、得られ得る。
【０１９４】
ここで、宿主として使用され得る細胞の例としては、真核生物細胞（好ましくは、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、リンパ球、および骨髄腫））が挙げられる。
【０１９５】
さらに、ヒト抗体ライブラリーからスクリーニングされたファージディスプレイ由来のヒト抗体を得る方法（Ｗｏｒｍｓｔｏｎｅ，Ｉ．Ｍ．ら，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００２）４３（７），ｐ．２３０１−２３０８；Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ら，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９−２０３；Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ら，Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）  １０９（３），ｐ．４２７−４３１）もまた、公知である。
【０１９６】
例えば、ヒト抗体重鎖および軽鎖の可変領域は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面にディスプレイされ、次いで、抗原結合ファージが選択される（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５−１１１６）。
【０１９７】
抗原結合ヒト抗体可変領域をコードするＤＮＡ配列は、抗原結合によって選択される上記ファージの遺伝子を分析することによって決定され得る。
【０１９８】
いったん、上記抗原結合ｓｃＦＶのＤＮＡ配列が明らかになると、ヒト抗体は、上記配列を有する発現ベクターを調製し、上記ベクターを適切な発現用宿主に導入することによって得られ得る（ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９３／０６２１３、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９３／１９１７２、ＷＯ９５／０１４３８、ＷＯ９５／１５３８８；Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３−４５５；Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５−１１１６）。
【０１９９】
上記抗体遺伝子がいったん単離され、次いで、適切な宿主に導入されて、上記抗体が調製される場合、宿主および発現ベクターの適切な組み合わせが使用され得る。
【０２００】
真核生物細胞が宿主として使用される場合、動物細胞、植物細胞、または真核微生物が使用され得る。
【０２０１】
このような動物細胞の例としては、シミアンＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．，Ｃｅｌｌ（１９８１）２３，ｐ．１７５−１８２，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５０）、マウス線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ−１６５８）、およびチャイニーズハムスター卵巣細胞のジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株（ＣＨＯ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−６１）（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８０）７７，ｐ．４２１６−４２２０）が挙げられる。
【０２０２】
使用され得る原核生物細胞の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓが挙げられる。
【０２０３】
上記抗体は、上記目的の抗体遺伝子を、形質転換によりこれら細胞に導入し、上記形質転換された細胞をインビトロで培養することによって得られ得る。
【０２０４】
本発明に従う抗体のアイソタイプは限定されず、その例としては、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ＩｇＤ、およびＩｇＥが挙げられるが、ＩｇＧおよびＩｇＭが好ましい。
【０２０５】
さらに、本発明に従う抗体は、上記抗体の抗原結合部位を有する抗体のフラグメントまたはそれが抗原結合を維持する場合にはそれの改変バージョンであり得る。
【０２０６】
このような抗体の機能的フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２を還元することによって得られる一価可変領域フラグメントＦａｂ’、Ｆｖ、適切なリンカーによって重鎖および軽鎖Ｆｖを結合することによって得られる一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、線状の抗体、および抗体フラグメントから形成される多特異的（ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体が挙げられるが、上記抗体フラグメントは、それらが抗原結合を維持するのであれば、上記フラグメントに限定されない。上記抗体フラグメントは、全長抗体分子を、酵素（例えば、パパインまたはペプシン）で処理することによって得られ得る。上記抗体フラグメントはまた、上記抗体フラグメントの重鎖および軽鎖をコードする核酸を使用して、適切な遺伝子発現系が対応するタンパク質を生成することを可能にすることによって、得られ得る。
【０２０７】
これら抗体フラグメントは、上記と同じ方法で上記遺伝子を得、発現して、その対応するタンパク質を宿主に産生させることによって、生産することができる。
【０２０８】
本発明に従う抗体は、ポリクローナル抗体、異なるアミノ酸配列を有するいくつかの抗ＤＲ５抗体の混合物であり得る。このようなポリクローナル抗体の例は、異なるＣＤＲを有するいくつかの抗体の混合物である。このようなポリクローナル抗体として、異なる抗体を産生する細胞の混合物を培養し、上記培養物を精製することによって得られる抗体が、使用され得る（ＷＯ２００４／０６１１０４）。
【０２０９】
上記得られた抗体は、均一に精製され得る。上記抗体の分離および精製は、通常のタンパク質のために使用される分離方法および精製方法によって行なってもよい。
【０２１０】
例えば、上記抗体は、クロマトグラフィカラム、フィルタ、限外濾過、塩析、透析、分取用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などを適切に選択し、組み合わせることによって分離および精製され得る（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋら  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８））が、上記分離方法および精製方法は、これらに限定されない。
【０２１１】
クロマトグラフィの例としては、アフィニティクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性クロマトグラフィ、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィ、および吸着クロマトグラフィが挙げられる。これらタイプのクロマトグラフィは、液相クロマトグラフィ（例えば、ＨＰＬＣおよびＦＰＬＣ）を使用することによって行われ得る。
【０２１２】
アフィニティクロマトグラフィにおいて使用されるカラムの例としては、プロテインＡカラムおよびプロテインＧカラムが挙げられる。
【０２１３】
上記プロテインＡカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆ．Ｆ．（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）が挙げられる。
【０２１４】
さらに、上記抗体はまた、キャリア上に固定化された抗原へのその結合によって、精製され得る。
【０２１５】
（４）抗ＤＲ５抗体の例
例えば、国際公開番号ＷＯ９８／５１７９３、ＷＯ２００１／８３５６０、ＷＯ２００２／９４８８０、ＷＯ２００３／５４２１６、ＷＯ２００４／５０８９５、ＷＯ２００６／８３９７１、およびＷＯ２００７／２２１５７において記載されるＤＲ５発現細胞でアポトーシスを誘導する抗ＤＲ５抗体は、本発明に従う抗体−薬物結合体の成分として使用され得る。さらに、Ｌｅｘａｔｕｍｕｍａｂ、ＨＧＳ−ＴＲ２Ｊ、Ａｐｏｍａｂ、Ａｐｏｍａｂ７．３、Ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ、ならびにＬＢＹ１３５といわれる抗ＤＲ５抗体およびその改変体はまた、本発明に従う抗体−薬物結合体の成分として使用され得る。しかし、このような成分として使用され得る抗体は、このような抗体が、ＤＲ５タンパク質に結合する能力を有するのであれば、上記例に限定されない。
【０２１６】
本発明のリガンドユニットは、代表的には、ＤＲ５結合剤である。１群の実施形態において、上記リガンドユニットは、ヒト化ＴＲＡ−８に対応する重鎖アミノ酸配列（配列番号１）を含む。ヒト化ＴＲＡ−８は、本明細書においてｈＴＲＡ−８と略記される。別の群の実施形態において、リガンドユニットは、ヒト化ＴＲＡ−８に対応する軽鎖アミノ酸配列（配列番号２）を含む。さらに別の実施形態において、上記リガンドユニットは、配列番号１および配列番号２の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列の両方を含む。この実施形態においてリガンドユニットとして使用される上記抗ＤＲ５抗体は、国際一般名であるＴｉｇａｔｕｚｕｍａｂを有する。さらに別の実施形態において、上記リガンドユニットは、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基１〜５からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸残基１〜１７からなるＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸残基１〜１０からなるＣＤＲ３を有する重鎖免疫グロブリン；ならびに（ｂ）配列番号６のアミノ酸残基１〜１１からなるＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸残基１〜７からなるＣＤＲ２、および配列番号８のアミノ酸残基１〜８からなるＣＤＲ３を有する軽鎖免疫グロブリンを含む。別の実施形態において、上記リガンドユニットは、配列番号１のアミノ酸残基１〜１１８を含むｈＴＲＡ−８の重鎖可変領域および配列番号２のアミノ酸残基１〜１０７を含むｈＴＲＡ−８の軽鎖可変領域を含む。
【０２１７】
さらに、上記リガンドユニット（Ｌ）は、リンカーユニットの官能基と結合を形成し得る少なくとも１個の官能基を有する。天然に、または化学的操作を介するか、もしくは工学的作製（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を介するかのいずれかで、リガンドユニットに存在し得る有用な官能基は、スルフヒドリル（−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭水化物のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リガンドユニット官能基は、スルフヒドリル基である。上記スルフヒドリル基は、代表的には、溶媒が接近可能なスルフヒドリル基（例えば、システイン残基上の溶媒が接近可能なスルフヒドリル基）である。スルフヒドリル基は、リガンドの分子内ジスルフィド結合または分子間ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。スルフヒドリル基はまた、２−イミノチオラン（トラウト試薬）または別のスルフヒドリル生成試薬を使用して、リガンドのリジン部分のアミノ基の反応によって生成され得る。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、１個以上のスルフヒドリル基は、リガンドユニットへ、例えば、アミノ酸置換によって、工学的に作製される。例えば、スルフヒドリル基は、リガンドユニットへ導入され得る。いくつかの実施形態において、スルフヒドリル基は、システイン残基へのセリンもしくはスレオニンのアミノ酸置換によって、および／またはリガンドユニットへのシステイン残基の付加（工学的に作製されたシステイン残基）によって導入される。いくつかの実施形態において、上記システイン残基は、内部システイン残基であり、すなわち、リガンド部分のＮ末端にもＣ末端にも位置しない。
【０２１９】
例示的実施形態において、システイン残基は、抗体重鎖可変領域または抗体軽鎖可変領域（例えば、抗体フラグメント（例えば、ダイアボディ）の）へと、アミノ酸置換によって工学的に作製され得る。上記アミノ酸置換は、代表的には、フレームワーク領域に導入され、上記可変領域のエピトープ結合面に対して遠位に位置する。例えば、上記アミノ酸置換は、上記エピトープ結合面またはそのＣＤＲから少なくとも１０Å、少なくとも２０Åまたは少なくとも２５Åであり得る。システイン残基の置換に適切な位置は、抗体可変領域の既知のまたは推定される三次元構造物に基づいて決定され得る（一般には、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１２６−１１３６を参照のこと）。例示的実施形態において、セリンからシステインへのアミノ酸置換は、ＶＨ領域のアミノ酸８４位および／またはＶＬ領域のアミノ酸１４位（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＮＩＨ）１９９１の番号付けシステムに従う）において導入される。
【０２２０】
リガンドユニットに結合される薬物またはリンカーユニット−薬物ユニットの数を制御するために、１個以上のシステイン残基が、アミノ酸置換によって排除され得る。例えば、免疫グロブリンヒンジ領域における溶媒が接近可能なシステイン残基の数は、システイン残基からセリン残基へのアミノ酸置換によって減少させられ得る。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、リガンドユニットは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個の、溶媒が接近可能なシステイン残基を含む。いくつかの実施形態において、リガンドユニットは、２個または４個の、溶媒が接近可能なシステイン残基を含む。
【０２２２】
（アッセイ）
薬物またはリガンド薬物結合体が、細胞に対して細胞増殖抑制効果および／または細胞傷害効果を発揮するか否かを決定するための方法は、公知である。一般に、リガンド薬物結合体の上記細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、以下によって測定され得る：上記リガンド薬物結合体の標的タンパク質を発現する哺乳動物細胞を、細胞培養培地中に曝すこと；上記細胞を、約６時間〜約５日間の期間にわたって培養すること；および細胞生存率を測定すること。細胞ベースのインビトロアッセイは、上記リガンド薬物結合体に関する生存率（増殖）、細胞傷害性、およびアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定するために使用され得る。
【０２２３】
リガンド薬物結合体が細胞増殖抑制効果を発揮するか否かを決定するために、チミジン組み込みアッセイを使用してもよい。例えば、９６ウェルプレートの５，０００細胞／ウェルの密度において標的抗原を発現するがん細胞が、７２時間の期間にわたって培養され得、上記７２時間の期間のうちの最後の８時間の間に、０．５μＣｉの３Ｈ−チミジンに曝される。上記培養物の細胞への３Ｈ−チミジンの組み込みは、上記リガンド薬物結合体の存在または非存在下で測定される。
【０２２４】
細胞傷害性を決定するために、壊死またはアポトーシス（プログラムされた細胞死）が、測定され得る。壊死には、代表的には、形質膜の増大した透過性；細胞の膨張、および上記形質膜の破壊が付随する。アポトーシスは、代表的には、膜泡形成（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｂｌｅｂｂｉｎｇ）、細胞質の凝集、および内因性エンドヌクレアーゼの活性化によって特徴付けられる。がん細胞に対するこれら効果のうちのいずれかの決定は、リガンド薬物結合体が、がんの処置に有用であることを示す。
【０２２５】
細胞生存率は、色素（例えば、ニュートラルレッド、トリパンブルー、またはアラマーＴＭブルー）の細胞における取り込みを決定することによって測定され得る（例えば、Ｐａｇｅら，１９９３，Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３：４７３−４７６を参照のこと）。このようなアッセイにおいて、上記細胞は、上記色素を含む培地中でインキュベートされ、上記細胞は洗浄され（残っている色素は、上記色素の細胞取り込みを示す）、分光測光法で測定される。タンパク質結合色素であるスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）はまた、細胞傷害性を測定するために使用され得る（Ｓｋｅｈａｎら，１９９０，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７−１２）。
【０２２６】
あるいは、テトラゾリウム塩（例えば、ＭＴＴ）は、生細胞（しかし、死細胞ではない）を検出することによって、哺乳動物細胞の生存および増殖についての定量的比色アッセイにおいて使用される（例えば、Ｍｏｓｍａｎｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３を参照のこと）。
【０２２７】
アポトーシスは、例えば、ＤＮＡフラグメント化を測定することによって、定量され得る。ＤＮＡフラグメント化の定量的インビトロ決定のための市販の測光法は、利用可能である。このようなアッセイの例（ＴＵＮＥＬ（フラグメント化されたＤＮＡにおける標識されたヌクレオチドの取り込みを検出する）およびＥＬＩＳＡベースのアッセイが挙げられる）は、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ，１９９９，ｎｏ．２，ｐｐ．３４−３７（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に記載される。
【０２２８】
アポトーシスはまた、細胞における形態的変化を測定することによって決定され得る。例えば、壊死と同様に、形質膜完全性の喪失は、特定の色素（例えば、蛍光色素（例えば、アクリジンオレンジまたはエチジウムブロミドなど））の取り込みを測定することによって決定され得る。アポトーシス細胞数を決定するための方法は、Ｄｕｋｅ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｃｏｌｉｇａｎら  ｅｄｓ．，１９９２，ｐｐ．３．１７．１−３．１７．１６）によって記載されてきた。細胞はまた、ＤＮＡ色素（例えば、アクリジンオレンジ、エチジウムブロミド、またはヨウ化プロピジウム）で標識され得、上記細胞は、核内膜に沿ったクロマチン凝縮およびクロマチン凝縮および辺縁化（ｍａｒｇｉｎａｔｉｏｎ）が観察される。アポトーシスを決定するために測定され得る他の形態的変化としては、例えば、細胞質凝集、膜泡形成の増大、および細胞収縮が挙げられる。
【０２２９】
アポトーシス細胞の存在は、上記培養物の結合した区画および「浮動している」区画の両方が測定され得る。例えば、両方の区画が、上清を除去し、結合した細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄工程（例えば、２０００ｒｐｍにおいて１０分間）後に調製物を合わせ、アポトーシスを検出する（例えば、ＤＮＡフラグメント化を測定することによって）ことによって、集められ得る（例えば、Ｐｉａｚｚａら，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３１１０−１６を参照のこと）。
【０２３０】
リガンド薬物結合体の効果は、動物モデルにおいて試験または確認され得る。がんの多くの確立された動物モデルは、当業者に公知であり、これらのうちのいずれも、リガンド薬物結合体の効力をアッセイするために使用され得る。このようなモデルの非限定的例としては、以下に記載される。さらに、リガンド薬物結合体のインビボ効力を試験するための小動物モデルは、ヒト腫瘍細胞系を適切な免疫欠損齧歯類系統（例えば、無胸腺ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウス）へと移植することによって作製し得る。
【０２３１】
（組成物および投与方法）
種々の送達システムが公知であり、上記リガンド−薬物結合体を投与するために使用され得る。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、および皮下の経路が挙げられるが、これらに限定されない。投与は、例えば、注入またはボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態において、上記リガンド薬物結合体の投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
【０２３２】
上記リガンド薬物結合体は、１種以上の薬学的に適合性の成分を含む薬学的組成物として投与され得る。例えば、上記薬学的組成物は、代表的には、１種以上の薬学的キャリア（例えば、滅菌した液体（例えば、水および油（石油、動物、植物、または合成起源の油（例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む））を含む。水は、上記薬学的組成物が静脈内投与される場合に、より代表的なキャリアである。食塩水溶液、ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液もまた、液体キャリアとして、特に、注射用溶液のために使用され得る。適切な薬学的賦形剤は、当該分野で公知である。上記組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤を含み得る。適切な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載される。その処方は、投与の態様に対応する。
【０２３３】
代表的実施形態において、上記薬学的組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合したた薬学的組成物として、常習的手順に従って処方される。代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌の等張性の水性緩衝液中の溶液である。必要である場合、上記医薬はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）を含み得る。一般に、上記成分は、（例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封してシールされた容器中の乾燥凍結乾燥粉末または無水の濃縮物として、別個に、または単位剤形中で一緒に混合して、のいずれかで供給される。上記医薬が注入によって投与される予定である場合、それは、例えば、滅菌の製薬グレードの水または食塩水を含む注入ボトルで投薬され得る。上記医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または食塩水のアンプルは、例えば、上記成分が投与前に混合され得るように、提供され得る。
【０２３４】
特定の障害または状態の処置において有効な化合物の量は、上記障害または状態の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイまたはインビボアッセイは、必要に応じて、最適な投与量範囲を同定する一助となるように使用され得る。上記組成物中で使用されるべき正確な用量はまた、投与経路、および上記疾患または障害の重篤度に依存し、開業医の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。
【０２３５】
上記組成物は、適切な投与量が得られるように、有効量の化合物を含む。代表的には、この量は、上記組成物の重量に対して少なくとも約０．０１％の化合物である。
【０２３６】
静脈内投与のために、上記組成物は、上記動物の体重１ｋｇあたり約０．０１〜約１００ｍｇの化合物を含み得る。一局面において、上記組成物は、上記動物の体重１ｋｇあたり約１〜約１００ｍｇの化合物を含み得る。別の局面において、上記投与される量は、約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の化合物の範囲にある。
【０２３７】
一般に、患者に投与される化合物の投与量は、代表的には、上記被験体の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇである。いくつかの実施形態において、患者に投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約１５ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、患者に投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約１５ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、患者に投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約５ｍｇまたは約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜約１５ｍｇの間である。いくつかの実施形態において、投与される投与量は、上記被験体の体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜約１０ｍｇの間である。
【０２３８】
上記薬学的組成物は、一般に、滅菌の、実質的に等張性として処方され、米国食品医薬品局の全ての医薬品の製造管理及び品質管理に関する基準（ＧＭＰ）の規制に完全に従っている。
【０２３９】
（リガンド薬物結合体を使用する治療法）
上記リガンド薬物結合体は、腫瘍細胞またはがん細胞の増殖を阻害するために、または動物におけるがんを処置するために、有用である。上記リガンド薬物結合体は、動物のがんの処置のための種々の状況に応じて使用され得る。
【０２４０】
上記リガンド薬物結合体で処置されうる特定のタイプのがんとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）充実性腫瘍（線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜性腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、結腸直腸がん、腎臓がん、膵臓がん、骨がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、食道がん、胃がん、口腔がん、鼻がん、咽喉がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚がん、子宮がん、精巣がん、小細胞肺癌、膀胱癌、肺がん、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、多形性星細胞腫（ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ  ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ）、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、皮膚がん、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽腫が挙げられるが、これらに限定されない）；（２）血液由来のがん（急性リンパ芽球性白血病「ＡＬＬ」、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病「ＡＭＬ」、急性前骨髄球性白血病「ＡＰＬ」、急性単芽球性白血病、急性赤白血病性白血病（ａｃｕｔｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化型白血病（ａｃｕｔｅ  ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性骨髄性白血病「ＣＭＬ」、慢性リンパ性白血病「ＣＬＬ」、ヘアリー細胞白血病、多発性骨髄腫、急性および慢性の白血病（例えば、リンパ芽球性骨髄性白血病およびリンパ性骨髄性白血病）が挙げられるが、これらに限定されない）；ならびに（３）リンパ腫（例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症）、重鎖病、および真性多血症）。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、本発明は、がんを処置する方法を提供し、上記方法は、がんの処置が必要な被験体に、細胞傷害剤に共有結合させたＤＲ５結合剤を含む、有効量のリガンド薬物結合体またはその薬学的組成物を投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記リガンド薬物結合体は、上記に提供するような式Ｉを含む。有効量のリガンド薬物結合体は、処置される被験体、苦痛の重篤度、および投与様式に依存する。有効量の決定は、特に、本明細書に提供される詳細な開示に鑑みれば、当業者の能力の十分範囲内である。一般に、効果的なまたは有効な量のリガンド薬物結合体は、第１に、低用量または少量を投与し、次いで、最小の毒性の副作用または全く毒性の副作用なしで、処置される被験体に所望の治療効果が観察されるようになるまで、投与される用量または投与量を徐々に増加させることによって、決定される。本発明の投与のための適切な用量および投与スケジュールを決定するための適用可能な方法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ  Ｅｄ．，Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｌａｚｏ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（２００６）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３）（これらはともに本明細書に参考として援用される）に記載される。
【実施例】
【０２４２】
（ＤＲ５抗体薬物結合体についての結合体化）
ｈＴＲＡ−８抗体薬物結合体を、以下のように調製した。配列番号１のアミノ酸配列に対応する重鎖を含み、配列番号２のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むｈＴＲＡ−８抗体を、上記リガンドユニットとして使用した。このｈＴＲＡ−８抗体を、Ｔｉｇａｔｕｚｕｍａｂとして言及する。７．６ｍｇ／ｍＬのｈＴＲＡ−８抗体の溶液を、３７℃で予備平衡化し、次いで、１５％体積の５００ｍＭ  ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．０）を添加して、ｐＨを７．５〜８．０に上昇させる。上記溶液はまた、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含む。上記抗体を、抗体１モルあたり２．６当量のＴＣＥＰを添加し、３７℃で攪拌することによって、部分的に還元する。２８分後、還元した抗体の溶液を、氷上に置き、次いで、ＤＭＳＯ中の２０．５ｍＭ溶液として、４．８〜４．９モル当量（抗体に対して）の薬物リンカー（例えば、ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦまたはｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥまたはｍｃ−ＭＭＡＦ）で迅速に処理する。さらなるＤＭＳＯを、上記混合物に、体積で１０％  ＤＭＳＯになるように導入する。上記反応混合物を、約９０分間にわたって氷上で攪拌し、その後、５倍モル過剰のＮ−アセチルシステイン（ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦに対して）で処理する。上記結合体を、タンジェンシャルフロー濾過（最初に、約１０ｍｇ／ｍＬまで濃縮され、次いで、約１０ダイアフィルトレーション容量（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）のＰＢＳでダイアフィルトレーションする）によって単離する。得られた抗体薬物結合体は、１抗体あたり約４薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有した。添付の図面および本明細書において、以下の略語が使用される：ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦで結合体化したｈＴＲＡ−８の抗体薬物結合体については、ｈＴＲＡ−８−ｖｃ−ＭＭＡＦ；ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＥで結合体化したｈＴＲＡ−８の抗体薬物結合体については、ｈＴＲＡ−８−ｖｃ−ＭＭＡＥ；およびｍｃ−ＭＭＡＦで結合体化したｈＴＲＡ−８の抗体薬物結合体については、ｈＴＲＡ−８−ｍｃ−ＭＭＡＦ。
【０２４３】
１抗体あたり約２薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有する抗体薬物結合体を調製するために、プロトコル（上記）を、５０％までＴＣＥＰの量を減らすことによって改変した。薬物リンカーの量も、５０％まで減らした。対応する抗体薬物結合体は、ｈＴＲＡ−８−ｖｃ−ＭＭＡＦ（２）と略記される。
【０２４４】
（いくつかのヒト腫瘍細胞系に対するインビトロでのｈＴＲＡ−８  ＡＤＣの細胞傷害性）
ｈＴＲＡ−８およびｈＴＲＡ−８抗体薬物結合体を、１μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体溶液（ＭＰ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、２０００ｎｇ／ｍＬへと希釈した。これら溶液を、培養培地で１０倍連続希釈した。これら溶液の各濃度の５０μｌアリコートを、９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に添加した。上記細胞懸濁物を、１．０×１０５  生細胞／ｍＬ培養培地に調整し、上記ウェルに５０μＬ／ウェルで添加した。上記細胞を、ブランクのウェルには播種しなかった。上記プレートを、７２時間にわたってＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした後、ＡＴＰ検出アッセイを、製造業者の説明書に従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して行った。発光を、マイクロプレートリーダー（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ９４０，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって測定した。上記アッセイを、三連で行い、各ウェルの細胞生存率を、以下に示す式に従って計算した：
生存率（％）＝１００×（試験ウェルの発光−ブランクウェルの平均発光）／（未処理細胞を有するウェルの平均発光−ブランクウェルの平均発光）。
【０２４５】
図１〜１１は、本発明のｈＴＲＡ−８  リガンド薬物結合体で評価した１１細胞系についての結果を提供する。図が示すように、これら抗体薬物結合体は、試験した１１細胞系の中で６細胞系においてｈＴＲＡ−８（結合体化していない形態にある）より有効に細胞死を誘導した。
【０２４６】
（ｈＴＲＡ−８  ＡＤＣのＤＲ５結合活性）
平底９６ウェルマイクロプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を、４℃において一晩、５０ｍＭ  ＮａＨＣＯ３（ｐＨ９．５）中の０．２５μｇ／ｍＬのヒトＤＲ５−Ｆｃでコーティングした。上記ウェルを０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）２００μＬで洗浄した後、上記プレートを、１００μＬの１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ希釈した）で、室温において１．５時間にわたってブロッキングした。ｈＴＲＡ−８およびｈＴＲＡ−８  ＡＤＣを、２０μｇ／ｍＬから０．１６μｇ／ｍＬまでＰＢＳで２倍連続希釈した。上記ウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、ｈＴＲＡ−８およびｈＴＲＡ−８  ＡＤＣの５０μＬの連続希釈物を、５０μＬのビオチン標識ｈＴＲＡ−８の存在下の上記ウェルに添加した。上記プレートを、室温で２時間インキュベートした。上記ウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、１００μＬのストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体（ＰＢＳ中で１／５０００希釈，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を上記ウェルに添加し、室温で１時間にわたってインキュベートした。上記ウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、呈色反応を、室温において５０μＬのＨＲＰ基質溶液（Ｓｕｍｉｌｏｎ）に曝すことによって起こさせ、その吸光度を、マイクロプレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ  Ｍ５；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４９０ｎｍにおいて測定した。上記アッセイを、三連で行った。その結果を、図１２に示す。
【０２４７】
図１２において、ヒトＤＲ５へのｈＴＲＡ−８  リガンド薬物結合体の結合活性は、ｈＴＲＡ−８（非結合体化形態にある）のものと比較して認められる。
【０２４８】
（ヒト初代肝細胞に対するｈＴＲＡ−８  ＡＤＣの細胞傷害性）
初代ヒト肝細胞の調製については、融解培地、播種培地およびインキュベーション培地からなる培地セット（Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用した。凍結した肝細胞のバイアルを、融解し、上記融解培地で洗浄した。上記細胞を、上記播種培地中に再懸濁し、コラーゲンコーティングした９６ウェルプレート（ＩＷＡＫＩ）において３．５×１０４生細胞／ウェルで播種した。ブランクウェルには、上記細胞を播種しなかった。上記細胞を、ＣＯ２インキュベーター中で培養した。４時間のインキュベーション後、上記培養上清を吸引し、１００μＬの上記インキュベーション培地を各ウェルに添加した。一晩のインキュベーション後、上記培養上清を吸引した。ｈＴＲＡ−８およびｈＴＲＡ−８抗体薬物結合体を０．５μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体溶液（ＭＰ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、１０００ｎｇ／ｍＬへと希釈した。これら溶液を、１００ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬへと上記培養培地で連続希釈した。ＴＲＡＩＬ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、１０００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬへと上記インキュベーション培地で希釈した。これら溶液の各濃度の１００μＬアリコートを、上記肝細胞のプレートに添加した。上記肝細胞を、ＣＯ２インキュベーター中で６時間にわたってインキュベートした後、ＡＴＰ検出アッセイを、製造業者の使用説明書に従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して行った。発光を、マイクロプレートリーダー（Ｍｉｔｈｒａｓ  ＬＢ９４０，Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって測定した。上記アッセイを、三連で行い、各ウェルの細胞生存率を、以下に示す式に従って計算した：
生存率（％）＝１００×（試験ウェルの発光−ブランクウェルの平均発光）／（未処理細胞を有するウェルの平均発光−ブランクウェルの平均発光）。
【０２４９】
図１３に図示されるように、ｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体は、初代ヒト肝細胞に対して細胞傷害性を示さなかった（結果は、ｈＴＲＡ−８単独でも同様）。
【０２５０】
（結合体のインビボ活性−方法）
特定病原体フリーの６〜８週齢のＢａｌｂ／ｃＡ  Ｊｃｌ  ｎｕ／ｎｕヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．）を、研究で使用する前に、順応させるために５日間にわたって特定病原体フリーの条件で維持した。マウスを、滅菌したケージ中に収容し、それを、クリーンな層空気流ラック（ｌａｍｉｎａｒ  ａｉｒｆｌｏｗ  ｒａｃｋ）に入れた。マウスに、滅菌した固形飼料（ＦＲ−２，Ｆｕｎａｂａｓｈｉ  Ｆａｒｍｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を給餌し、滅菌した水道水（５〜１５ｐｐｍ  次亜塩素酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）溶液を添加して調製）を与えた。
【０２５１】
全ての研究において、腫瘍体積（ｍｍ３）を、腫瘍の長さおよび腫瘍の幅を電子式デジタルカリパー（ＣＤ−１５Ｃ，Ｍｉｔｕｔｏｙｏ  Ｃｏｒｐ．）で１週間に２回測定することによって計算した。腫瘍体積の計算を、以下の式のように行った：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×腫瘍の長さ（ｍｍ）×｛腫瘍の幅（ｍｍ）｝２
ｈＴＲＡ−８および薬物結合体化ｈＴＲＡ−８を、生理食塩水で希釈し、マウス体重１ｋｇあたり１０ｍＬの体積で腫瘍を有するヌードマウスに投与した。
【０２５２】
各ヒト腫瘍異種移植片研究の詳細な手順を、以下のように記載した：
（ＣＯＬＯ２０５）
ヒト結腸直腸腺癌細胞系ＣＯＬＯ２０５を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から購入した。２×１０６細胞を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。７日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。実験１（図１４）において、３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、７日目、１４日目および２１日目に行った。実験２（図１５）において、ｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦ（２）、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、７日目、１４日目および２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与した。
【０２５３】
（Ａ３７５）
ヒトメラノーマ細胞系Ａ３７５を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。２×１０６細胞を、０日目に雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１０日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを実験群へと無作為化した。実験１（図１６）において、３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１０日目、１７日目、２４日目および３１日目に行った。実験２（図１７）において、ｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦ（２）、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、１０日目、１７日目、２４日目および３１日目に、３ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与した。
【０２５４】
（Ａ５４９）
ヒト肺腺癌細胞系Ａ５４９を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。５×１０６細胞を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１４日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１４日目、２１日目、２８日目および３５日目に行った。結果を図１８に示す。
【０２５５】
（Ａ２０５８）
ヒトメラノーマ細胞系Ａ２０５８を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。１×１０６細胞を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１４日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１４日目、２１日目および２８日目に行った。結果を図１９に示す。
【０２５６】
（ＡＮ３ＣＡ）
ヒト子宮腺癌細胞系ＡＮ３ＣＡを、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。ヌードマウスにおいて維持した充実性腫瘍片（３×３×３ｍｍ３サイズ）を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。７日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、７日目、１４日目および２１日目に行った。結果を図２０に示す。
【０２５７】
（ＢｘＰＣ−３）
ヒト膵臓腺癌細胞系ＢｘＰＣ−３を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。１×１０７細胞を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。７日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、７日目、１４日目、２１日目および２８日目に行った。結果を図２１に示す。
【０２５８】
（ＮＣＩ−Ｈ２１２２）
ヒト肺腺癌細胞系ＮＣＩ−Ｈ２１２２を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。２×１０６細胞を、０日目に雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１１日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１１日目、１８日目、２５日目および３２日目に行った。結果を図２２に示す。
【０２５９】
（ＭＩＡ  ＰａＣａ−２）
ヒト膵臓腺癌細胞系ＭＩＡ  ＰａＣａ−２を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。ヌードマウスにおいて維持した充実性腫瘍片（５×５×５ｍｍ３サイズ）を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１０日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＥ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１０日目、１７日目および２４日目に行った。結果を図２３に示す。
【０２６０】
（ＰＣ−３）
ヒト前立腺腺癌細胞系ＰＣ−３を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。２×１０６細胞を、０日目に、雄性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。３５日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、３５日目、４２日目および４９日目に行った。結果を図２４に示す。
【０２６１】
（ＨＣＴ−１１６）
ヒト結腸直腸腺癌細胞系ＨＣＴ−１１６を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。１×１０７細胞を、０日目に、雌性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１０日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇでのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、１０日目、１７日目、２４日目および３１日目に行った。結果を図２５に示す。
【０２６２】
（ＤＵ１４５）
ヒト前立腺腺癌細胞系ＤＵ１４５を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。ヌードマウスへ皮下移植することで維持した充実性腫瘍片（５×５×５ｍｍ３サイズ）を、０日目に、雄性ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。９日目に、腫瘍を有する全てのヌードマウスを、実験群へと無作為化した。３ｍｇ／ｋｇの用量でのｈＴＲＡ−８、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの静脈内投与を、９日目、１６日目、２３日目および３０日目に行った。結果を図２６に示す。
【０２６３】
（結合体のインビボ活性−結果）
試験した１１の腫瘍細胞系の中で、Ａ３７５、Ａ５４９、Ａ２０５８、ＡＮ３ＣＡ、ＢＸＰＣ−３、ＰＣ−３、ＨＣＴ−１１６およびＤＵ１４５は、ｈＴＲＡ−８に耐性であることが示された。これら８種の腫瘍細胞系の中で、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの両方は、Ａ３７５、ＰＣ−３およびＨＣＴ−１１６に対する抗腫瘍効力を示した。さらに、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦはまた、Ａ２０５８、ＢＸＰＣ−３およびＤＵ１４５に対する抗腫瘍効力を示した。ｈＴＲＡ−８は、ＮＣＩ−Ｈ２１２２に対して中程度の抗腫瘍効力を示した一方で、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、ｈＴＲＡ−８より強力な抗腫瘍効力を実証した。他方で、上記薬物結合体化ｈＴＲＡ−８の全ては、３ｍｇ／ｋｇの用量で、ＣＯＬＯ２０５に対し、ｈＴＲＡ−８より強力ではない抗腫瘍効力を示した。投与用量を１０ｍｇ／ｋｇへ増大した場合、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、ｈＴＲＡ−８に匹敵する効力を示した。Ａ５４９およびＡＮ３ＣＡは、ｈＴＲＡ−８および薬物結合体化ｈＴＲＡ−８に耐性であった。これらの結果から、ｈＴＲＡ−８リガンド薬物結合体が、ｈＴＲＡ−８より強力な抗腫瘍効力を有することが示され、そして、ｈＴＲＡ−８耐性腫瘍に対する効力を実証することが示された。
【０２６４】
（インビボ競合研究−方法）
特定病原体フリーの４〜６週齢の雌性ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊマウス（ヌードマウス）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．から購入し、それらが５〜８週齢に達したときに使用した。５〜６匹のマウスを、滅菌したケージの中に一緒に収容し、特定病原体フリーの条件下で維持した。実験室において、上記環境条件を、１２時間（８：００〜２０：００）の人工照明とともに、２３℃の温度および５５％の湿度で設定した。上記マウスに、ＦＲ−２飼料（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ  Ｆａｒｍ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を給餌し、塩素入り（５〜１５ｐｐｍ）の水を自由に摂取させた。
【０２６５】
全ての研究において、腫瘍を有するマウスを選択し、腫瘍体積に基づいて実験群に分けた。ヌードマウスで腫瘍を確立した後、腫瘍を有する全てのマウスにおける腫瘍の長さおよび幅（ｍｍ）を、デジタルカリパー（ＣＤ１５−Ｃ，Ｍｉｔｕｙｏ  Ｃｏｒｐ．）で小数第二位まで測定した。上記データを、動物実験データのためのＳａｎｋｙｏマネジメントシステム（ＳＭＡＤ，ＪＭＡＣ  Ｃｏｒｐ．）において自動的に記録した。各マウスの腫瘍体積は、以下の式に従ってＳＭＡＤにおいて自動的に計算した：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×腫瘍の長さ（ｍｍ）×｛腫瘍の幅（ｍｍ）｝２
組換えヒトＤＲ５−Ｆｃ（ｒｈＤＲ５−Ｆｃ）、ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）、薬物結合体化ｈＩｇＧおよび薬物結合体化ｈＴＲＡ−８を、生理食塩水で希釈し、マウス体重１ｋｇあたり１０ｍＬの体積で、腫瘍を有するヌードマウスに投与した。各ヒト腫瘍異種移植片研究の詳細な手順は、以下のとおりに記載される。
【０２６６】
（Ａ３７５）
ヒトメラノーマ細胞系Ａ３７５を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、２×１０６細胞を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。腫瘍を有する全てのマウスを、１０日目に実験群に分けた。ＡＤＣの投与の直前に、ｒｈＤＲ５−ＦｃおよびｈＩｇＧを、３ｍｇ／ｋｇの用量で上記マウスに静脈内投与した。次いで、ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＦ（ｍｃ−ｖｃ−ＭＭＡＦで結合体化したｈＩｇＧ）およびｈＩｇＧ−ｍｃＭＭＡＦ（ｍｃ−ＭＭＡＦで結合体化したｈＩｇＧ）を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で上記マウスに投与し、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、３ｍｇ／ｋｇの用量で上記マウスに投与した。１１〜１４日目および１７〜２１日目に、１ｍｇ／ｋｇのｒｈＤＲ５−ＦｃおよびｈＩｇＧを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図２７に示す。
【０２６７】
（ＨＣＴ  １１６）
ヒト結腸直腸癌細胞系ＨＣＴ  １１６を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、１×１０７細胞を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。腫瘍を有する全てのマウスを、１０日目に実験群に分けた。ＡＤＣの投与の直前に、６ｍｇ／ｋｇのｒｈＤＲ５−Ｆｃおよび１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧを、上記マウスに静脈内投与した。次いで、ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＦ、ｈＩｇＧ−ｍｃＭＭＡＦ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦ、およびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、１０ｍｇ／ｋｇの用量で上記マウスに投与した。１１〜１４日目および１７〜２１日目に、１ｍｇ／ｋｇのｒｈＤＲ５−Ｆｃおよび２ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図２８に示す。
【０２６８】
（インビボ競合研究−結果）
両方の異種移植片モデルにおいて、ｒｈＤＲ５−Ｆｃは、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの抗腫瘍効力を完全に阻害した。しかし、ｈＩｇＧは、ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＦ、ｈＩｇＧ−ｍｃＭＭＡＦ、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦ、およびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの抗腫瘍効力を阻害しなかった。これら結果は、ｈＴＲＡ−８−ｖｃＭＭＡＦおよびｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦの抗腫瘍効力が、ｈＤＲ５に特異的であることを示す。
【０２６９】
（乳がんおよび卵巣がんに対するインビボ活性−方法）
特定病原体フリーの４〜６週齢の雌性ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊマウス（ヌードマウス）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．から購入し、それらが５〜８週齢に達したときに使用した。５〜６匹のマウスを、滅菌したケージの中に一緒に収容し、特定病原体フリーの条件下で維持した。実験室において、上記環境条件を、１２時間（８：００〜２０：００）の人工照明とともに、２３℃の温度および５５％の湿度で設定した。上記マウスに、ＦＲ−２飼料（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ  Ｆａｒｍ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を給餌し、塩素入り（５〜１５ｐｐｍ）の水を自由に摂取させた。
【０２７０】
全ての研究において、腫瘍を有するマウスを選択し、腫瘍体積に基づいて実験群に分けた。ヌードマウスで腫瘍を確立した後、腫瘍を有する全てのマウスにおける腫瘍の長さおよび幅（ｍｍ）を、デジタルカリパー（ＣＤ１５−Ｃ，Ｍｉｔｕｙｏ  Ｃｏｒｐ．）で小数第二位まで測定した。上記データを、動物実験データのためのＳａｎｋｙｏマネジメントシステム（ＳＭＡＤ，ＪＭＡＣ  Ｃｏｒｐ．）において自動的に記録した。各マウスの腫瘍体積は、以下の式に従ってＳＭＡＤにおいて自動的に計算した：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×腫瘍の長さ（ｍｍ）×｛腫瘍の幅（ｍｍ）｝２
ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、生理食塩水で希釈し、マウス体重１ｋｇあたり１０ｍＬの体積で、腫瘍を有するヌードマウスに静脈内投与した。各ヒト腫瘍異種移植片研究の詳細な手順は、以下のとおりに記載される。
【０２７１】
（ＪＩＭＴ−１）
ヒト乳癌細胞系ＪＩＭＴ−１を、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ，Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）から購入した。０日目に、６×１０６細胞を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。腫瘍を有する全てのマウスを、１０日目に実験群に分けた。１０日目、１７日目、および２４日目に、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図２９に示す。
【０２７２】
（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）
ヒト乳腺腺癌細胞系ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、ヌードマウスにおいて維持した充実性腫瘍片（１辺約５ｍｍ）を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１０日目、１７日目、および２４日目に、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３０に示す。
【０２７３】
（Ａ２７８０）
ヒト卵巣腺癌細胞系Ａ２７８０を、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６細胞を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。腫瘍を有する全てのマウスを、１０日目に実験群に分けた。１０日目、１７日目、および２４日目に、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３１に示す。
【０２７４】
（ＳＫ−ＯＶ−３）
ヒト卵巣腺癌細胞系ＳＫ−ＯＶ−３を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、ヌードマウスにおいて維持した充実性腫瘍片（１辺約５ｍｍ）を、ヌードマウスの右側腹部に皮下接種した。１７日目、２４日目、および３１日目に、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３２に示す。
【０２７５】
（乳がんおよび卵巣がんに対するインビボ活性−結果）
ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、ＪＩＭＴ−１、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、Ａ２７８０、およびＳＫ−ＯＶ−３の異種移植片マウスにおいて抗腫瘍効力を示した。これらの結果から、ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、乳がんおよび卵巣がんに対して強力な抗腫瘍活性を有することが示された。
【０２７６】
（血液系のがんに対するインビボ活性−方法）
特定病原体フリーの４〜６週齢の雌性ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊマウス（ＮＯＤ−ｓｃｉｄマウス）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．から購入し、それらが５〜８週齢に達したときに使用した。５〜６匹のマウスを、滅菌したケージの中に一緒に収容し、特定病原体フリーの条件下で維持した。実験室において、上記環境条件を、１２時間（８：００〜２０：００）の人工照明とともに、２３℃の温度および５５％の湿度で設定した。上記マウスに、ＦＲ−２飼料（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ  Ｆａｒｍ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を給餌し、塩素入り（５〜１５ｐｐｍ）の水を自由に摂取させた。
【０２７７】
全ての研究において、全てのマウスを、７日目に実験群へと無作為に分けた。次いで、ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、生理食塩水で希釈し、マウス体重１ｋｇあたり１０ｍＬの体積で、上記マウスに静脈内投与した。各ヒト腫瘍異種移植片研究の詳細な手順は、以下のとおりに記載される。
【０２７８】
（Ｕ−９３７）
ヒト組織球性リンパ腫細胞系Ｕ−９３７を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、１×１０７細胞を、上記マウスに静脈内接種した。７日目、１４日目、および２１日目に、３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３３に示す。
【０２７９】
（ＭＯＬＴ−４）
ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞系ＭＯＬＴ−４を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６細胞を、上記マウスに静脈内接種した。上記マウスには、−２日目および−１日目に、１５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの静脈内投与で予め処置しておいた。７日目、１４日目、２１日目、および２８日目に、３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３４に示す。
【０２８０】
（ＭＯＬＭ−１４）
ヒト急性単球性白血病細胞系ＭＯＬＭ−１４を、Ｈａｙａｓｈｉｂａｒａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．から得た。０日目に、５×１０６細胞を、上記マウスに静脈内接種した。上記マウスには、−２日目および−１日目に、１５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの静脈内投与で予め処置しておいた。７日目、１４日目、および２１日目に、３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３５に示す。
【０２８１】
（ＭＶ−４−１１）
ヒト骨髄単球性白血病細胞系ＭＶ−４−１１を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目に、５×１０６細胞を、上記マウスに静脈内接種した。７日目、１４日目、２１日目、２８日目、３５日目、４２日目、および４９日目に、３０ｍｇ／ｋｇのｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦを、上記マウスに静脈内投与した。結果を図３６に示す。
【０２８２】
（血液系のがんに対するインビボ活性−結果）
ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、上記血液系のがんであるＭＯＬＭ−１４、Ｕ−９３７、ＭＶ−４−１１、およびＭＯＬＴ−４を静脈内接種したマウスの寿命を延ばした。これらの結果から、ｈＴＲＡ−８−ｍｃＭＭＡＦは、血液系のがんに対して強力な抗腫瘍活性を有することが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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