(57)【要約】  本発明は、特に自己免疫性および炎症性疾患、例えば、アレルギー性喘息および炎症性腸疾患の予防または処置のための、医薬としての使用のための可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質に関する。本発明は、さらに具体的には、２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に、（ｉ）抗体の重鎖定常領域のＮ−末端部分で融合した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および、（ｉｉ）抗体のＣＬ軽鎖定常領域のＮ−末端部分で融合した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質に関する。本発明は、さらに、図１に示されている可溶性ＳＩＲＰα結合抗体様タンパク質に関する。
2013514795.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に、
（ｉ）抗体の重鎖定常領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の軽鎖定常領域に融合した同じ結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質。
【請求項２】
少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に、
（ｉ）抗体のＣＨ１定常重鎖領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体のＣＬ定常軽鎖領域に融合した同じ結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質。
【請求項３】
該哺乳動物結合分子の領域が同じである、請求項１または請求項２に記載の可溶性タンパク質。
【請求項４】
該哺乳動物結合分子が、タンパク質、サイトカイン、成長因子、ホルモン、シグナル伝達タンパク質、炎症性メディエーター、低分子量化合物、リガンド、細胞表面受容体、またはそれらのフラグメントである、請求項１から３のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項５】
該哺乳動物結合分子が、モノマー状またはホモポリマー状細胞表面受容体の細胞外ドメインである、請求項４に記載の可溶性タンパク質。
【請求項６】
該哺乳動物モノマー状またはホモポリマー状細胞表面受容体がＩｇＳＦドメインを含む、請求項５に記載の可溶性タンパク質。
【請求項７】
該哺乳動物モノマー状細胞表面受容体の細胞外ドメインがＣＤ４７の細胞外ドメインである、請求項５または請求項６に記載の可溶性タンパク質。
【請求項８】
２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に、
（ｉ）抗体のＣＨ１定常重鎖領域のＮ−末端部分で融合した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド、および
（ｉｉ）抗体のＣＬ定常軽鎖領域のＮ−末端部分で融合した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質。
【請求項９】
２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に、
（ｉ）抗体の重鎖定常領域に融合した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の軽鎖定常領域に融合した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質。
【請求項１０】
該第１および第２の一価の一本鎖ポリペプチドが、それぞれＣＨ１定常重鎖およびＣＬ定常軽鎖のＮ−末端部分に融合している、請求項１から９のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１１】
該第１および第２のＳＩＲＰα結合ドメインが、互いに少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を共有する、請求項８から１０のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１２】
ＢｉａＣＯＲＥアッセイにおいて測定されるとき、４μＭ以下のＫＤでヒトＳＩＲＰαに結合する、請求項７から１１のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１３】
プレートベースの細胞接着アッセイにおいて測定されるとき、２ｎＭ以下のＥＣ５０でＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進する、請求項８から１２のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１４】
インビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン(Cowan)株粒子刺激放出を阻害する、請求項８から１３のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１５】
樹状細胞サイトカイン放出アッセイにおいて測定されるとき、０．２ｎＭ以下のＩＣ５０でインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害する、請求項１４に記載の可溶性タンパク質。
【請求項１６】
該それぞれのヘテロダイマーの第１および第２の一本鎖ポリペプチドが、ジスルフィド架橋により共有結合している、請求項１から１５のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１７】
それぞれのヘテロダイマーが、ペプチドリンカーの非存在下で、それぞれの定常領域に融合したその第１および第２のＳＩＲＰα結合ドメインを有する、請求項８から１６のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１８】
それぞれのヘテロダイマーが、ペプチドリンカーを介してそれぞれの定常領域に融合したその第１および第２のＳＩＲＰα結合ドメインを有する、請求項８から１６のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項１９】
該ペプチドリンカーが５−２０個のアミノ酸からなる、請求項１８に記載の可溶性タンパク質。
【請求項２０】
該ペプチドリンカーが、グリシンおよびセリンアミノ酸のポリマー、好ましくは（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ｎは１から４のいずれかの整数、好ましくは２である、請求項１８または請求項１９に記載の可溶性タンパク質。
【請求項２１】
本質的に２つのヘテロダイマーからなる請求項１から２０のいずれかに記載の可溶性タンパク質であって、該それぞれのヘテロダイマーの第１の一本鎖ポリペプチドが免疫グロブリン定常部分のヒンジ領域を含み、該少なくとも２つのヘテロダイマーが該ヒンジ領域でジスルフィド架橋により互いに安定に結合している可溶性タンパク質。
【請求項２２】
抗体のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域が、減少したＡＤＣＣエフェクター機能を有するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の対応する領域のサイレント変異体由来である、請求項９から２１のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項２３】
、少なくとも１つのＳＩＲＰα結合ドメインが、
（ｉ）ヒトＣＤ４７の細胞外ドメイン；
（ｉｉ）配列番号：４のポリペプチドまたはＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４のフラグメント；および、
（ｉｉｉ）配列番号：４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有し、ＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４の変異体ポリペプチド
からなる群から選択される、請求項８から２２のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項２４】
全てのＳＩＲＰα結合ドメインが同一のアミノ酸配列を有する、請求項８から２３のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項２５】
該ＳＩＲＰα結合ドメインの同一のアミノ酸配列が、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１および配列番号：２３からなる群から選択される、請求項２４に記載の可溶性タンパク質。
【請求項２６】
２つのヘテロダイマーを含む可溶性タンパク質であって、該ヘテロダイマーが、
（ｉ）配列番号：５の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：６の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号：１８の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：６の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｉｉｉ）配列番号：１９の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：２０の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｉｖ）配列番号：１２の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：１３の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｖ）配列番号：２４の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：２５の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｖｉ）配列番号：３６の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：３７の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｖｉｉ）配列番号：３８の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：３９の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｖｉｉｉ）配列番号：４０の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：４１の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｉｘ）配列番号：４２の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：４３の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘ）配列番号：４４の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：４５の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｉ）配列番号：４６の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：４７の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｉｉ）配列番号：４８の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：４９の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｉｉｉ）配列番号：５０の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：５１の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｉｖ）配列番号：５２の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：５３の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｖ）配列番号：５４の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：５５の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｖｉ）配列番号：５６の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：５７の第２の一本鎖ポリペプチド；
（ｘｖｉｉ）配列番号：５８の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：２０の第２の一本鎖ポリペプチド；または
（ｘｖｉｉｉ）配列番号：２９の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：２０の第２の一本鎖ポリペプチド
のいずれかを含む可溶性タンパク質。
【請求項２７】
請求項２６に記載の可溶性タンパク質の対応する第１および第２の一本鎖ポリペプチドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有する該第１の一本鎖および第２の一本鎖ポリペプチド配列を含む、請求項９から２５のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項２８】
請求項２６に記載の可溶性タンパク質の対応する第１および第２の一本鎖ポリペプチドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有するＳＩＲＰα結合ドメイン配列を含む、請求項９から２５のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項２９】
（ｉ）配列番号：１０のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：１１のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｉｉ）配列番号：５９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｉｉｉ）配列番号：６１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｉｖ）配列番号：６３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｖ）配列番号：６５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｖｉ）配列番号：６７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６８のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｖｉｉ）配列番号：６９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：７０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｖｉｉｉ）配列番号：７１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：７２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｉｘ）配列番号：７３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：７４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘ）配列番号：７５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：７６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｉ）配列番号：７７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：７８のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｉｉ）配列番号：７９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：８０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｉｉｉ）配列番号：８１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：８２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｉｖ）配列番号：８３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：８４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｖ）配列番号：８５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：８６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、
（ｘｖｉ）配列番号：８７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖、または
（ｘｖｉｉ）配列番号：８８のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖；および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖
を含む、請求項１から２８のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項３０】
薬物または診断ツールとしての使用のための、請求項１から２９のいずれかに記載の可溶性タンパク質。
【請求項３１】
自己免疫性ならびに急性および慢性炎症性疾患の処置または診断における使用のための、請求項３０に記載の可溶性タンパク質。
【請求項３２】
Ｔｈ２介在気道炎症、アレルギー性疾患、喘息、炎症性腸疾患および関節炎からなる群から選択される処置における使用のための、請求項３１に記載の可溶性タンパク質。
【請求項３３】
虚血性疾患、白血病または他の癌の処置における使用のための、請求項３０に記載の可溶性タンパク質。
【請求項３４】
必要とする対象における造血幹生着の増加における使用のための、請求項３０に記載の可溶性タンパク質。
【請求項３５】
１つ以上の薬学的に許容されるビヒクルと共に、請求項１−２９のいずれかに記載の可溶性タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項３６】
少なくとも１つの他の活性成分をさらに含む、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
請求項１−２９のいずれかに記載の可溶性タンパク質の１つのヘテロダイマーの少なくとも１つの一本鎖ポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項３８】
配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：７２、配列番号：７３、配列番号：７４、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８０、配列番号：８１、配列番号：８２、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６、配列番号：８７および配列番号：８８からなる群から選択される少なくとも１つの核酸を含むクローニングまたは発現ベクター。
【請求項３９】
該タンパク質の該ヘテロダイマーの該第１および第２の一本鎖ポリペプチドをコードする核酸、および所望により、分泌シグナルを含む、請求項１−２９のいずれかに記載の可溶性タンパク質の生産のために適当な組換え宿主細胞。
【請求項４０】
ゲノム中に安定に組み込まれている、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８、配列番号：６９、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：７２、配列番号：７３、配列番号：７４、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８０、配列番号：８１、配列番号：８２、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６、配列番号：８７および配列番号：８８の核酸を含む、請求項３９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４１】
該宿主が哺乳動物細胞系である、請求項３９または請求項４０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項４２】
該可溶性タンパク質の生産のための適当な条件下で請求項３９から４１のいずれかに記載の宿主細胞を培養すること、および該タンパク質を単離することを含む、請求項１から２９のいずれかに記載の可溶性タンパク質の生産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に自己免疫性および炎症性疾患、例えば、アレルギー性喘息および炎症性腸疾患の予防または処置のための、医薬として使用するための可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質に関する。本発明は、さらに具体的には、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体の重鎖定常領域のＮ−末端部分に融合した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の軽鎖定常領域のＮ−末端部分に融合した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる少なくとも２つの二価ヘテロダイマーの複合体を含む可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質に関する。本発明の１つの特定の態様は、図１によりさらに説明される。
【背景技術】
【０００２】
ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）は、マクロファージ、顆粒球および慣用の樹状細胞（ＤＣ）を含む骨髄細胞系列細胞により、ならびに神経細胞上に発現される免疫受容体である（van den Bergら 2008, Trends in Immunol., 29(5):203-6)。ＳＩＲＰαは、ＣＤ４７に対する低いアフィニティーリガンドであり(Rebresら 2001, J.Biol.Chem.; 276(37):34607-16; Hatherleyら 2007; J.Biol.Chem.; 282(19):14567-75; Hatherleyら 2008; Mol. Cell; 31(2) 266-77）、ＳＩＲＰαのＣＤ４７との相互作用は、免疫および神経系における多数の細胞機能を調節する接着および双方向シグナル伝達制御に基づく細胞情報伝達系を構成する。これらの機能は、骨髄樹状細胞の移動、細胞成熟、マクロファージ食作用およびサイトカイン生産を含む（van den Bergら 2008 Trends in Immunol. 29(5):203-6; Sarfati 2009, Curr. Drug. Targets, 9(10):852-50）。
【０００３】
動物モデルからのデータは、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７相互作用が、いくつかの障害、例えば、自己免疫性、炎症性（Okuzawaら 2008, BBRC; 371(3):561-6; Tomizawaら 2007, J Immunol; 179(2):869-877）；虚血性（Isenbergら 2008, Arter.Thromb Vasc. Biol., 28(4):615-21; Isenberg 2008, Am. J. Pathol., 173(4):1100-12）または腫瘍関連（Chanら 2009, PNAS, 106(33): 14016-14021; Majetiら 2009, Cell, 138(2):286-99）疾患の病因に寄与するか、またはさらにコントロールし得ることを示唆する。したがって、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７経路の調節は、多数の疾患に対する有望な治療選択肢であり得る。
【０００４】
ＣＤ４７、ＳＩＲＰαまたはＣＤ４７由来ＳＩＲＰα結合ポリペプチドに対する抗体の使用は、治療アプローチとして示唆されている（ＷＯ１９９８／４０９４０、ＷＯ２００４／１０８９２３、ＷＯ２００７／１３３８１１、ＷＯ２００９／０４６５４１）。さらに、ＳＩＲＰα結合ＣＤ４７由来融合タンパク質は、疾患、例えば、ＴＮＢＳ大腸炎（Fortinら 2009, J Exp Med., 206(9):1995-2011）、ランゲルハンス細胞移動（J Immunol. 2004, 172: 4091-4099）および関節炎（VLST Inc, 2008, Exp. Opin.Therap. Pat., 18(5): 555-561）の動物モデルにおいて有効であった。
【０００５】
加えて、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７は、食作用のコントロールに関与することが示唆され（van den Bergら 2008, Trends in Immunol., 29(5):203-6）、ＳＩＲＰα結合ポリペプチドによる介入は、ＮＯＤマウス系統においてヒト幹細胞生着を増強させると公言されており（ＷＯ２００９／０４６５４１）、ヒト幹細胞移植における使用のための治療を含むＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の潜在的な利益を示唆する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマーを含む可溶性結合タンパク質であって、それぞれの鎖は抗体定常領域配列に融合した結合部分を含む可溶性結合タンパク質を提供する。該可溶性タンパク質は、治療薬として使用のためのものである。
【０００７】
本発明は、さらに、治療薬としての使用のための改善された可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質を提供する。本発明において定義されるＳＩＲＰα結合抗体様タンパク質は、先行技術のＣＤ４７タンパク質融合物と比較して、標的化ＳＩＲＰα発現細胞に対する親和性を増加させるが、優れた発展性(developability properties)を維持している手段を提供し得る。さらに、理論に縛られることなく、より高い親和性は、より長い薬力学的半減期をもたらすと予期され、したがって増強した治療効果を提供する。これらの新規の知見は、ＳＩＲＰα発現細胞を標的とするための新規治療ツールを提供し、特に多発性自己免疫性および炎症性疾患、癌または幹細胞移植のための、治療学的展望を示す。
【０００８】
したがって、１つの局面において、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体の重鎖定常領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の軽鎖定常領域に融合した同じ結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質を提供する。
【０００９】
別の局面において、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体のＣＨ１定常重鎖領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体のＣＬ定常軽鎖領域に融合した同じ結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチド
からなる可溶性タンパク質を提供する。
【００１０】
好ましい態様において、それぞれの一本鎖ポリペプチドは一価であり、それぞれのヘテロダイマーは二価であり、それぞれの複合体は少なくとも四価である。本発明のヘテロダイマーおよび可溶性タンパク質は、ポリペプチド鎖あたり１つの価数を有する。先行技術の分子と比較して、本発明の可溶性タンパク質は、増加した価数を有する。それぞれの第１および第２の一本鎖ポリペプチドにおける同じ結合分子の取り込みにより、それぞれのヘテロダイマーの価数は２であり、すなわち、ヘテロダイマー内のそれぞれの鎖は、別々の結合パートナー、または同じ結合パートナーに２倍結合することができる。これは、２つのヘテロダイマーの複合体が２の価数を有する限り、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマーの価数が１である（すなわち、両方の鎖が、結合パートナーに結合するために必要である）先行技術分子（例えば、ＷＯ０１／４６２６１に記載されているもの）と対比されるべきである。したがって、本発明の２つの二価ヘテロダイマーの複合体は４の価数（四価）を有し、すなわち、該複合体は、最大４つの結合パートナーに、または同じ結合パートナーに最大４倍で結合することができる。本発明のヘテロダイマーは二価であり、ヘテロダイマーの複合体はｎ×２の価数を有し、ここで、ｎは複合体内に含まれるヘテロダイマーの数である。好ましい態様において、複合体は２つのヘテロダイマーを含み、４の価数を有する。２つ以上のヘテロダイマーを含む複合体は、４、例えば、６、８または１０以上の価数を有する。本発明の可溶性タンパク質の増加した価数は、半減期および有効性における有利な効果であるより高い親和性をもたらす。
【００１１】
したがって、１つの局面において、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む、少なくとも四価性を有する（または少なくとも四価である）可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体の定常領域重鎖に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の定常領域軽鎖に融合した同じ哺乳動物結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる可溶性タンパク質を提供する。
【００１２】
別の局面において、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む、少なくとも四価性を有する可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体のＣＨ１定常重鎖領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体のＣＬ定常軽鎖領域に融合した同じ結合分子の領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる可溶性タンパク質を提供する。
【００１３】
好ましい局面において、結合分子の領域は、同じである。したがって、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む、少なくとも四価性を有する可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体の定常領域重鎖に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の定常領域軽鎖に融合した同じ哺乳動物結合分子の同じ領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる可溶性タンパク質を提供する。
【００１４】
別の局面において、本発明は、少なくとも２つのヘテロダイマーの複合体を含む、少なくとも四価性を有する可溶性タンパク質であって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体のＣＨ１定常重鎖領域に融合した哺乳動物結合分子の領域を含む第１の一価の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体のＣＬ定常軽鎖領域に融合した同じ結合分子の同じ領域を含む第２の一価の一本鎖ポリペプチドからなる可溶性タンパク質を提供する。
【００１５】
好ましい態様において、哺乳動物結合分子の領域は、抗体配列のＮ−末端部分に（すなわちＣＨ１およびＣＬ定常領域に）融合する。
【００１６】
１つの態様において、結合分子は、サイトカイン、成長因子、ホルモン、シグナル伝達タンパク質、低分子量化合物（薬物）、リガンドまたは細胞表面受容体である。好ましくは、結合分子は、哺乳動物モノマー状またはホモポリマー状細胞表面受容体である。結合分子の領域は、生物学的活性を保持している全分子またはそれらの部分もしくはフラグメントであり得る。結合分子の領域は、細胞外領域またはドメインであり得る。１つの態様において、該哺乳動物モノマー状またはホモポリマー状細胞表面受容体は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインを含み、例えば、それは、ＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。
【００１７】
１つの好ましい態様において、可溶性タンパク質は、抗体様タンパク質（Ｆｕｓｏｂｏｄｙとしても称され、以下に定義されている）であり、ここで、抗体の両方のアームの可変領域はＳＩＲＰα結合ドメインにより置換されており、それにより多価可溶性タンパク質を提供する。
【００１８】
このようなＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの１つの例は、図１に示される。
【００１９】
１つの態様において、本発明は、２つの二価ヘテロダイマーの四価複合体を含む単離された可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓであって、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に：
（ｉ）抗体の定常ＣＨ１重鎖領域のＮ−末端部分で融合した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一本鎖ポリペプチド；および
（ｉｉ）抗体の定常ＣＬ軽鎖領域のＮ−末端部分で融合した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一本鎖ポリペプチドからなるものに関する。
【００２０】
好ましい態様において、可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙのそれぞれのヘテロダイマーの該第１の一本鎖ポリペプチドは、ＣＨ１領域に融合した免疫グロブリンのＣＨ２およびＣＨ３領域をさらに含み、それにより抗体の全長定常重鎖を再構成する。該ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域は、サイレントエフェクター機能および／または減少した殺細胞、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣエフェクター機能、例えば、減少したＡＤＣＣエフェクター機能を有するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の対応領域の野生型または変異体由来であり得る。
【００２１】
１つの態様において、該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢｉａＣＯＲＥアッセイにより測定されるとき、１０μＭ以下、例えば、４μＭ以下、例えば、１μＭ以下、０．１μＭ以下のＫＤでヒトＳＩＲＰαに結合する。１つの態様において、可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、０．１から１０μＭの範囲のＫＤでヒトＳＩＲＰαに結合する。
【００２２】
別の態様において、該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、プレートベースの細胞接着アッセイにおいて測定されるとき、２０ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、２００ｐＭから２０ｎＭのＥＣ５０でＳＩＲＰα＋白血球、例えば、ＳＩＲＰα＋Ｕ９３７細胞の接着を促進する。
【００２３】
別の態様において、該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、インビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン(Cowan)株粒子刺激放出を阻害する。
【００２４】
例えば、該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、樹状細胞サイトカイン放出アッセイにおいて測定されるとき、２ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、例えば、２０ｐＭから２ｎＭのＩＣ５０でインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害する。
【００２５】
別の関連の態様において、それぞれのヘテロダイマーの該第１および第２の一本鎖ポリペプチドは、ジスルフィド架橋により、例えば、対応するＣＨ１およびＣＬ領域のシステイン残基間の天然ジスルフィド架橋を使用して共有結合している。
【００２６】
１つの態様において、第１および第２のＳＩＲＰα結合ドメインは、ペプチドリンカーを介してＣＨ１およびＣＬ領域のそれぞれに融合し得る。別の態様において、第１および／または第２のＳＩＲＰα結合ドメインは、ペプチドリンカーの非存在下でそれぞれのＣＨ１およびＣＬ領域に直接融合する。
【００２７】
１つの好ましい態様において、該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、本質的に２つのヘテロダイマーからなり、ここで、それぞれのヘテロダイマーの該第１の一本鎖ポリペプチドは、免疫グロブリン定常部分のヒンジ領域を含み、２つのヘテロダイマーは、ヒンジ領域でのシステイン間のジスルフィド架橋により互いに安定に結合する。
【００２８】
１つの態様において、本発明の可溶性タンパク質は：
（ｉ）ヒトＣＤ４７の細胞外ドメイン；
（ｉｉ）配列番号：４のポリペプチドまたはＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４のフラグメント；および
（ｉｉｉ）配列番号：４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有し、ＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４の変異体ポリペプチド
からなる群から選択される少なくとも１つのＳＩＲＰα結合ドメインを含む。
【００２９】
１つの特定の態様において、全てのＳＩＲＰα結合ドメインは、同一のアミノ酸配列を有する。例えば、全てのＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号：４または配列番号：３または配列番号：２１または配列番号：２３または配列番号：２７からなる。
【００３０】
１つの特定の態様において、本発明の該可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、２つのヘテロダイマーを含み、ここで、それぞれのヘテロダイマーは、本質的に配列番号：５の第１の一本鎖ポリペプチドおよび配列番号：６の第２の一本鎖ポリペプチドからなる。該第１および第２の一本鎖ポリペプチドは、抗体の重鎖および軽鎖と同様に、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して安定に結合する。関連の態様において、可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、２つのヘテロダイマーを含み、ここで、それぞれのヘテロダイマーの第１および第２の一本鎖ポリペプチドは、それぞれ配列番号：５および配列番号：６の対応する第１および第２の一本鎖ポリペプチドと少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有し、上記ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの有利な機能特性を保持する。
【００３１】
特に、１つの特定の態様において、このような可溶性タンパク質またはＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、１０μＭ以下、４μＭ以下または２μＭ以下、例えば、０．１μＭから１０μＭのＫＤでヒトＳＩＲＰαに結合する。
【００３２】
１つの特定の態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの４つのＳＩＲＰα結合ドメインは、配列において同一である。例えば、該ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、それぞれ配列番号：５および配列番号：６の第１および第２の一本鎖ポリペプチドである。
【００３３】
本発明は、さらに、薬物または診断ツールとして、例えば、自己免疫性ならびに急性および慢性炎症性疾患の処置または診断における使用のための、このような可溶性タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、特にＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓに関する。特に、ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、Ｔｈ２介在気道炎症、アレルギー性疾患、喘息、炎症性腸疾患および関節炎からなる群から選択される処置における使用のためのものである。
【００３４】
本発明の可溶性タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓはまた、必要とする対象における、虚血性疾患、白血病または他の癌の処置または診断において、または造血幹生着の増加において使用され得る。
【００３５】
定義
本発明をより容易に理解することができるようにするため、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明を通して記載される。
【００３６】
ＳＩＲＰαなる用語は、ＣＤ４７インテグリン関連タンパク質との接着を示すヒトシグナル調節タンパク質アルファ（ＣＤ１７２ａまたはＳＨＰＳ−１とも称される）を示す。ヒトＳＩＲＰαは、配列番号：１を含むが、例えば、一塩基変異多型（ＳＮＰ）を含む、任意の天然多型、またはヒトＳＩＲＰαのスプライス変異体をさらに含むが、これらに限定されない。ヒトにおいて見出されるＳＩＲＰαヌクレオチド配列におけるスプライス変異体またはＳＮＰの例は、表１に記載されている。
表１：ＳＩＲＰαタンパク質の変異体
【表１】
2013514795.tif 000003
【００３７】
ＣＤ４７なる用語は、細胞表面哺乳動物インテグリン関連タンパク質を示す。ヒトＣＤ４７は、配列番号：２を含むが、例えば、一塩基変異多型（ＳＮＰ）を含む、任意の天然多型、またはヒトＣＤ４７のスプライス変異体も含む。ヒトにおいて見出されるＣＤ４７ヌクレオチド配列におけるスプライス変異体またはＳＮＰの例は、表２に記載される。
表２：ＣＤ４７タンパク質の変異体
【表２】
2013514795.tif 000004
【００３８】
本明細書において使用される「タンパク質」なる用語は、１つ以上の直鎖で配列され、球状形態にフォールディングされたアミノ酸からなるあらゆる有機化合物を示す。ポリマー鎖中のアミノ酸は、連続したアミノ酸残基のカルボキシルおよびアミノ基間のペプチド結合により互いに連結される。「タンパク質」なる用語は、限定はしないが、ペプチド、一本鎖ポリペプチドまたは主にアミノ酸の２つ以上の鎖からなる任意の複合体分子をさらに含む。それは、限定はしないが、糖タンパク質または他の既知の翻訳後修飾をさらに含む。それは、天然タンパク質の既知の天然または人工化学修飾、例えば、限定はしないが、糖鎖工学、ペグ化、ＨＥＳ化(hesylation)など、非天然アミノ酸の取り込み、ならびに別の分子との化学的結合のためのアミノ酸修飾をさらに含む。
【００３９】
本明細書において使用される「複合タンパク質」は、少なくとも２つの一本鎖ポリペプチドからなるタンパク質を示し、該少なくとも２つの一本鎖ポリペプチドは、非共有結合または、例えば、ジスルフィド架橋による共有結合のいずれかを介して、適当な条件下で共に結合される。「ヘテロダイマータンパク質」は、複合タンパク質を形成する２つの一本鎖ポリペプチドからなるタンパク質を示し、該２つの一本鎖ポリペプチドは異なるアミノ酸配列を有し、特に、それらのアミノ酸配列はお互いに９０、８０、７０、６０または５０％以上の同一性を共有しない。それとは反対に、「ホモダイマータンパク質」は、複合タンパク質を形成する２つの同一の、または実質的に同一のポリペプチドからなるタンパク質を示し、該２つの一本鎖ポリペプチドは、１００％同一性または少なくとも９５％または少なくとも９９％同一性を共有し、アミノ酸の違いは、ホモダイマーのもう１つと比較してポリペプチドの機能性および物理的特性に影響しないアミノ酸置換、付加または欠失、例えば、保存的なアミノ酸置換からなる。
【００４０】
任意の膜貫通ドメインまたはポリペプチドを発現する細胞の膜にポリペプチドを固定するか、もしくは組み込むタンパク質ドメインを欠いているとき、本明細書において使用されるタンパク質は「可溶性」である。特に、本発明の可溶性タンパク質は、同様に、ＣＤ４７の膜貫通および細胞内ドメインを排除され得る。本明細書において使用される「抗体」なる用語は、ジスルフィド結合により相互連結される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質を示す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと省略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと省略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存されている領域で分散されている相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域にさらに細分化することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４において配列された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、宿主組織または因子、例えば、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）への免疫グロブリンの結合を介在し得る。
【００４１】
「Ｆｕｓｏｂｏｄｙ」なる用語は、解釈を容易にするため、「抗体」なる用語と同様に本明細書において使用される。本明細書において使用されるとき、「Ｆｕｓｏｂｏｄｙ」なる用語は、２つのヘテロダイマーを含む抗体様可溶性タンパク質を示し、それぞれのヘテロダイマーは、例えば、１つ以上のジスルフィド結合を介して、互いに安定に結合しているアミノ酸の１つの重鎖および１つの軽鎖からなる。それぞれの重鎖または軽鎖は、それぞれＦｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖定常領域と以下で称される抗体の定常領域を含む。重鎖定常領域は、少なくとも抗体のＣＨ１領域を含み、ヒンジ領域を含むＣＨ２およびＣＨ３領域をさらに含み得る。軽鎖定常領域は、抗体のＣＬ領域を含む。Ｆｕｓｏｂｏｄｙにおいて、抗体の可変領域は、異種可溶性結合ドメインにより置換される。「異種」なる用語は、これらのドメインが抗体の定常領域と結合して本来見出されないことを意味する。特に、このような異種結合ドメインは、内部の４個のフレームワーク領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４ならびに３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）からなる抗体可変ドメインの典型的な構造を有さない。したがって、Ｆｕｓｏｂｏｄｙのそれぞれのアームは、抗体の定常ＣＨ１重鎖領域のＮ−末端部分で共有結合された第１の結合ドメインを含む第１の一本鎖ポリペプチド、および抗体の定常ＣＬ軽鎖領域のＮ−末端部分で共有結合された第２の結合ドメインを含む第２の一本鎖ポリペプチドを含む。共有結合は、例えば、ペプチド結合を介して直接的であるか、または、リンカーを介して、例えば、ペプチドリンカーを介して間接的であり得る。Ｆｕｓｏｂｏｄｙの２つのヘテロダイマーは、例えば、抗体構造のように、それらのヒンジ領域で少なくとも１つのジスルフィド架橋により共有結合される。図１は、Ｆｕｓｏｂｏｄｙ分子の例の略図である。Ｆｕｓｏｂｏｄｙ構造を有する分子の例は、Ａｒｔに記載されており、特に、ヘテロダイマー受容体のリガンド結合領域を含むＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓ（例えば、ＷＯ０１／４６２６１参照）である。
【００４２】
好ましい態様において、哺乳動物モノマー状またはホモポリマー状細胞表面受容体の細胞外ドメインまたはリガンド結合活性を保持するこのような細胞外ドメインの変異体もしくは領域は、抗体の重鎖および軽鎖の定常領域に融合される。得られる分子は、治療分子としての使用のための抗体分子の有利な特性を保持する多価タンパク質である。
【００４３】
本明細書において使用される「哺乳動物結合分子」なる用語は、標的分子、細胞、複合体および／または組織に結合することができるあらゆる分子またはそれらの部分もしくはフラグメントであり、可溶性タンパク質、細胞表面タンパク質、細胞表面受容体タンパク質、細胞内タンパク質、炭水化物、核酸、ホルモンまたは低分子量化合物（小分子薬物）、またはそれらのフラグメントからなる群から選択される１つ以上のメンバーに結合する能力を有するタンパク質、核酸、炭水化物、脂質、低分子量化合物およびそれらのフラグメントを含む。哺乳動物結合分子は、タンパク質、サイトカイン、成長因子、ホルモン、シグナル伝達タンパク質、炎症性メディエーター、リガンド、受容体またはそれらのフラグメントであり得る。好ましい態様において、哺乳動物結合分子は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する天然または変異タンパク質；天然ホルモンの天然受容体に結合することができる天然ホルモンまたはその変異体；相補的配列および／または可溶性細胞表面または細胞内核酸／ポリヌクレオチド結合タンパク質に結合することができる核酸またはポリヌクレオチド配列；他の炭水化物結合部分および／または可溶性、細胞表面または細胞内タンパク質に結合することができる炭水化物結合部分；可溶性または細胞表面または細胞内標的タンパク質に結合する低分子量化合物（薬物）である。特に該定義は、以下の分子を含む：
【００４４】
−インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３４、ＩＬ−３５、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＴＳＬＰ、オンコスタチンＭ、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、ＣＮＴＦ、カルジオトロフィン−１、ＮＮＴ−１／ＢＳＦ−３、成長ホルモン、プロラクチン、エリスロポエチン、トロンボポエチン、レプチン、Ｇ−ＣＳＦ、またはそれらの受容体もしくはリガンドからなる群から選択されるサイトカイン；
【００４５】
−ＩＦＮ−ガンマ、ＩＦＮ−アルファおよびＩＦＮ−ベータからなる群から選択されるサイトカインのインターフェロンファミリーのメンバー；
−Ｂ７．１（ＣＤ８０）およびＢ７．２（Ｂ７０）からなる群から選択されるサイトカインの免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー；
−ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、ＬＴ−ベータ、ＣＤ４０リガンド、Ｆａｓリガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ３０リガンドおよび４−１ＢＢＬからなる群から選択されるサイトカインのＴＮＦファミリーのメンバー；
【００４６】
−ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３ａ、ＢＭＰ−３ｂ、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−８ａ、ＢＭＰ−８ｂ、ＢＭＰ−９、ＢＭＰ−１０、ＢＭＰ−１１、ＢＭＰ−１５、ＢＭＰ−１６、子宮内膜出血関連因子（ＥＢＡＦ）、増殖分化因子−１（ＧＤＦ−１）、ＧＤＦ−２、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−７、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−９、ＧＤＦ−１２、ＧＤＦ−１４、ミュラー管抑制物質（ＭＩＳ）、アクチビン−１、アクチビン−２、アクチビン−３、アクチビン−４およびアクチビン−５からなる群から選択されるＴＧＦ−β／ＢＭＰファミリーのメンバー；
【００４７】
−ＣＤ１（ａ−ｃ、１Ａ、１Ｄ、１Ｅ）、ＣＤ２、ＣＤ３（γ、δ、ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８（ａ）、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１（ａ、ｂ、ｃ）、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６（Ａ、Ｂ）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２（Ａ、Ｂ）、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２（ａ、ｂ、ｃ、ｄ）、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６１、ＣＤ６２（Ｅ、Ｌ、Ｐ）、ＣＤ６３、ＣＤ６４（Ａ、Ｂ、Ｃ）、ＣＤ６６（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７８、ＣＤ７９（ａ、ｂ）、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５（ａ、ｄ、ｅ、ｈ、ｊ、ｋ）、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７（ａ、ｂ）、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０（ａ、ｂ）、ＣＤ１２１（ａ、ｂ）、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６（ａ、ｂ、ｃ）、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８（ａ、ｄ、ｅ、ｉ、ｋ）、ＣＤ１５９（ａ、ｃ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７（ａ、ｂ）、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２（ａ、ｂ、ｇ）、ＣＤ１７４、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９（ａ、ｂ）、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１８６、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ１９４、ＣＤ１９５、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤｗ１９８、ＣＤｗ１９９、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤｗ２１０（ａ、ｂ）、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ（１、２）、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８（ａ、ｂ）、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３５（ａ、ｂ）、ＣＤ２３６、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４０ＣＥ、ＣＤ２４１、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４６、ＣＤ２４７−ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７１、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８６、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９２、ＣＤｗ２９３、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７、ＣＤ３０９、ＣＤ３１２、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３２０、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３５、ＣＤ３３６、ＣＤ３３７、ＣＤ３３８、ＣＤ３３９、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３４９、ＣＤ３５０からなる群から選択される分化（ＣＤ）分子のクラスター；
【００４８】
−ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１７、ＡＤＡＭ８、ＡＬＣＡＭ、ＡＲＴ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＢＣＧ２、アルビルセプト・スドトクス(Alvircept sudotox)、未分化リンパ腫キナーゼ、Ｂ３ＧＡＴ１、ＢＣＡＭ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＳＴ１、ＢＴＬＡ、Ｂａｎｄ３、バシギン(Basigin)、Ｃ−Ｃケモカイン受容体６型、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７型、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８（遺伝子）、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ１０９、ＣＤ１１ｃ、組織因子、ＣＤ１５、ＣＤ１５１、ＣＤ１５５、ＣＤ１６、ＣＤ１６０、ＣＤ１６３、ＣＤ１７７、ＣＤ１９、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１Ｅ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２６、ＣＤ２３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４７、ＣＤ２４８、ＣＤ２５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２８、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３２０、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ４、ＣＤ４０（タンパク質）、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４６、ＣＤ４８、ＣＤ５、ＣＤ５（タンパク質）、ＣＤ５３、神経細胞接着分子、ＣＤ５９、ＣＤ６、ＣＤ６３、ＣＤ６４（生物学）、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７８、ＣＤ７９、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８２（遺伝子）、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８Ａ、ＣＤ９０、ＣＤ９３、ＣＤ９６、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤＣＰ１、ＣＤＨ１（遺伝子）、ＣＤＨ２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ８、ＣＬＥＣ４Ｍ、ＣＴＬＡ−４、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ３（遺伝子）、ＣＤ１１、ＣＤ１３４、ＣＤ１４、ＣＤ１５４、ＣＤ３（免疫学）、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ４７、ＣＤ７４、ＣＤ８１、コロニー刺激因子１受容体、補体受容体１、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＤＲ１、ジスコイジンドメイン含有受容体２、ダッフィー抗原系、Ｅ−セレクチン、ＥＭＲ２、ＥＮＴＰＤ１、エンドグリン、内皮タンパク質Ｃ受容体、上皮細胞接着分子、Ｆ１１受容体、ＦＣＡＲ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＣＧＲ３Ｂ、ＦＣＲＬ５、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ４、ＦＺＤ９、Ｆａｓリガンド、ＦＣＧＲ２Ａ、繊維芽細胞成長因子受容体１、繊維芽細胞成長因子受容体２、繊維芽細胞成長因子受容体３、繊維芽細胞成長因子受容体４、ＭＧＩ遺伝子ボックスを使用するＵｓｅｒ：Ｆｒｏｇ２１／Ｃｄ３６(User:Frog21/Cd36 using MGI Gene box)、フコシルトランスフェラーゼ３、ＧＧＴ１、ＧＰ１ＢＡ、ＧＰ１ＢＢ、ＧＰ５、ＧＰＲ４４、ＧＹＰＡ、ＧＹＰＢ、グルタミルアミノペプチダーゼ、グリコホリンＣ、糖タンパク質ＩＸ、顆粒球コロニー刺激因子受容体、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体、グループ１ＣＤ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ヒアルロン酸介在運動受容体、ＩＣＡＭ２、ＩＣＡＭ３、ＩＣＯＳＬＧ、ＩＦＩＴＭ１、ＩＧＬＬ１、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ８、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１７ＲＡ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ４、インスリン受容体、インシュリン様増殖因子１受容体、インシュリン様増殖因子２受容体、インターフェロンガンマ受容体１、インターロイキン１受容体、Ｉ型、インターロイキン１受容体、ＩＩ型、インターロイ���ン１０受容体、アルファサブユニット、インターロイキン１０受容体、ベータサブユニット、インターロイキン１２受容体、ベータ１サブユニット、インターロイキン１３受容体、アルファ１、インターロイキン５受容体アルファサブユニット、インターロイキン８受容体、アルファ、インターロイキン８受容体、ベータ、インターロイキン−１８受容体、インターロイキン−４受容体、インターロイキン−６受容体、インターロイキン−７受容体、インターロイキン−９受容体、ＩＴＧＡ６、ＪＡＧ１、ＪＡＭ２、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＬＲＢ１、ＫＬＲＣ２、ＫＬＲＤ１、ＫＬＲＫ１、Ｋｅｌｌ抗原系、キナーゼインサートドメイン受容体、Ｌ１（タンパク質）、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ１、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＰ３、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＬＲＡ３、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＲＰ１、ＬＹ７５、ＬＹ９、レプチン受容体、白血病阻害因子受容体、低親和性神経成長因子受容体、ＭＦＩ２、ＭＳＲ１、磁気活性化細胞分類、ＭＵＣ１、骨髄増殖性白血病ウイルス癌遺伝子、ＮＣＲ１、ＮＣＲ２、ＮＣＲ３、ＮＫＧ２、ＮＴ５Ｅ、ＯＸ４０Ｌ、Ｐ−糖タンパク質、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＳＧ１（遺伝子）、ＰＴＧＦＲＮ、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＲＮＰ、プログラム細胞死１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＨＡＧ、ＲＨＣＥ（遺伝子）、ＳＥＭＡ４Ｄ、ＳＥＭＡ７Ａ、ＳＩＧＬＥＣ５、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ８、ＳＩＲＰＢ１、ＳＩＲＰＧ、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＣ４４Ａ１、シアロアドヘシン、シグナル調節タンパク質アルファ、ＳｕＰＡＲ、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３エプシロン鎖、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ６、ＴＬＲ８、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＲＡＩＬ、ＴＥＫチロシンキナーゼ、Ｔｅｔｈｅｒｉｎ、ＴＦＲＣ、トロンボモジュリン、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、ウロキナーゼ受容体、ＶＥ−カドヘリン、ＶＰＲＥＢ１からなる群から選択される分子；
【００４９】
−成長ホルモン（ＧＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、プロラクチンホルモン、オキシトシン、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、Ｔｈｙｒｏｘｉｎ、カルシトニン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エピネフリン、Ｎｏｒ−エピネフリン、ミネラルコルチコイド、グルココルチコイド、アンドロゲン、テストステロン、メラトニン、チモシン、チモポエチン、グルカゴン、インスリン、エストロゲンおよびプロゲステロンからなる群から選択されるホルモン；またはそれらのフラグメントもしくは受容体。
【００５０】
「ＩｇＳＦドメイン」なる用語は、細胞の結合、認識または接着プロセスを介在することにより免疫系に関与する細胞表面および可溶性タンパク質の膨大なグループを含むタンパク質を含む免疫グロブリンスーパーファミリードメインを示す。ＩｇＳＦドメイン分子の免疫グロブリンドメインは、免疫グロブリンと構造的類似性を共有する。ＩｇＳＦドメインは約７０−１１０個のアミノ酸を含み、サイズおよび機能にしたがって分類される。Ｉｇドメインは、逆平行ベータストランドの２つのシートにより形成されるサンドイッチ様構造を有する特性Ｉｇフォールドを有する。Ｉｇフォールドは、システイン残基間に形成される高度に保存されているジスルフィド結合ならびにサンドイッチの内部の疎水性アミノ酸間の相互作用により安定化される。Ｉｇドメインの１つの末端は、ＩｇＳＦドメインの特異性のために重要である相補性決定領域と呼ばれる部分を有する。多数のＩｇドメインは、可変（ＩｇＶ）または定常（ＩｇＣ）のいずれかである。１つ以上のＩｇＳＦドメインを提示するタンパク質の例は、細胞表面共刺激分子（ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６）、抗原受容体（ＴＣＲ／ＢＣＲ）共受容体（ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ８）である。他の例は、細胞接着（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１）またはＩｇＳＦドメイン形成サイトカイン結合受容体（ＩＬ１Ｒ、ＩＬ６Ｒ）に関与する分子ならびに細胞内筋肉タンパク質である。多数の例において、細胞環境のすぐ近くの多数のＩｇＳＦドメインの存在は、このようなＩｇＳＦドメインを含む該細胞表面受容体により引き起こされるシグナル伝達の有効性のために必要である。顕著な例は、抗原提示細胞による最適な抗原提示を可能にし、ナイーブＴ細胞のコントロールされた活性化をもたらす微小環境を可能にする免疫学的シナプスにおけるＩｇＳＦドメイン含有分子（ＣＤ２８、ＩＣＡＭ−１、ＣＤ８０およびＣＤ８６）のクラスターである（Dustin, 2009, Immunity）。適当な機能のためのクラスターに必要である他のＩｇＳＦ含有分子に関する他の例は、ＣＤ２（Liら 1996, J. Mol. Biol., 263(2):209-26）およびＩＣＡＭ−１（Junら 2001, J. Biol. Chem.; 276(31):29019-27）である。
【００５１】
したがって、ＩｇＳＦドメインを含むオリゴ価(oligovalent)構造を模倣することにより、いくつかのＩｇＳＦドメインを含む本発明のＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、対応する結合パートナーの活性を調節するために有利に使用され得る。
【００５２】
本明細書において使用されるＳＩＲＰγなる用語は、ＣＤ１７２ｇを示す。ヒトＳＩＲＰγは配列番号：２６を含むが、例えば、一塩基変異多型（ＳＮＰ）を含む、任意の天然多型変異体、またはヒトＳＩＲＰγのスプライス変異体も含む。ヒトにおいて見出されるＳＩＲＰγヌクレオチド配列におけるスプライス変異体またはＳＮＰの例は、表３に記載される。
表３：ＳＩＲＰγタンパク質の変異体
【表３】
2013514795.tif 000005
【００５３】
本明細書において使用される「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」なる用語は、特定のタンパク質−タンパク質相互作用の会合速度を示すことを意図し、ここで、本明細書において使用される「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」なる用語は、特定のタンパク質−タンパク質相互作用の解離速度を示すことを意図する。本明細書において使用される「ＫＤ」なる用語は、Ｋａに対するＫｄの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）にて示される解離定数を示すことを意図する。タンパク質−タンパク質相互作用のためのＫＤ値は、当分野でよく確立された方法を使用して決定することができる。タンパク質／タンパク質相互作用のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、またはバイオセンサーシステム、例えば、ＢｉａＣＯＲＥ（登録商標）システムを使用することによる。ＳＩＲＰαと相互作用する本発明のタンパク質のＫＤを決定するための少なくとも１つのアッセイは、以下の実施例に記載されている。
【００５４】
本明細書において使用される「親和性」は、単一の部位でポリペプチドとその標的との間の相互作用の強さを示す。それぞれの部位内で、ポリペプチドの結合領域は、弱い非共有結合力を介して数多くの部位でその標的と相互作用する。相互作用がより高ければ、親和性はより強くなる。
【００５５】
本明細書において使用される結合ポリペプチドまたはタンパク質についての「高親和性」なる用語は、その標的に対して１μＭ以下のＫＤを有するポリペプチドまたはタンパク質を示す。
【００５６】
本明細書において使用される「白血球を発現するＳＩＲＰαの接着を促進する」タンパク質は、機能性細胞性ＳＩＲＰαへ結合することにより、細胞性ＳＩＲＰαの細胞性ＣＤ４７との相互作用を拮抗するタンパク質を示す。ＳＩＲＰαを発現するヒト白血球（ＳＩＲＰα＋細胞）の組換えＳＩＲＰα結合タンパク質への増強された細胞接着は、拮抗作用についての代用評価として使用することができる。典型的なＳＩＲＰα＋白血球は、炎症性骨髄性白血球または悪性ＳＩＲＰα＋白血球細胞系、例えば、Ｕ９３７、Ｍｏｎｏｍａｃ  ６、ＭＵＴＺ−３、ＫＧ−１、ＴＨＰ−１である。このような接着の改善された促進は、プレートベースの細胞接着アッセイにより測定することができる。ＳＩＲＰα＋Ｕ９３７細胞を使用するこのようなプレートベースの細胞接着アッセイの例は、実施例に記載されている。特定の態様において、「白血球を発現するＳＩＲＰαの接着を促進する」タンパク質は、ＳＩＲＰα  Ｕ９３７細胞の接着を、例えば、実施例に記載されている、プレートベースの細胞結合アッセイにおいて測定されるとき、２０ｎＭ以下、例えば、２ｎＭ以下、例えば、２０ｐＭおよび２００ｐＭおよび２ｎＭのＥＣ５０で促進するタンパク質である。
【００５７】
本明細書において使用される「免疫複合体刺激細胞サイトカイン放出を阻害する」タンパク質は、黄色ブドウ球菌コワン１（Ｐａｎｓｏｒｂｉｎ）または可溶性ＣＤ４０ＬおよびＩＦＮ−γで刺激された末梢血単球、慣用の樹状細胞（ＤＣ）および／または単球由来ＤＣからのサイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２３、ＩＬ−８および／またはＴＮＦ−α）の放出を阻害するタンパク質である。免疫複合体刺激樹状細胞サイトカイン放出アッセイの１つの例は、以下の実施例でさらに詳細に記載されているインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出である。好ましい態様において、「免疫複合体刺激細胞サイトカイン放出を阻害する」タンパク質は、樹状細胞サイトカイン放出アッセイにおいて測定されるとき、２ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、例えば、２ｎＭから２０ｐＭのＩＣ５０でインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害するタンパク質である。
【００５８】
さらに具体的に定義されていない限り、本明細書において使用される機能アッセイに関して「阻害」なる用語は、ネガティブコントロールと比較したとき、測定される機能の任意の統計的に有意な阻害を示す。
【００５９】
ＳＩＲＰαの機能特性における本発明の可溶性タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓの効果を評価するアッセイは、実施例においてさらに詳細に記載されている。
【００６０】
本明細書において使用される「対象」なる用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。
【００６１】
「非ヒト動物」なる用語は、すべての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、鳥類、両生動物、は虫類などを含む。
【００６２】
本明細書において使用される「最適化」なる用語は、ヌクレオチド配列が、生産細胞または生物体、真核細胞、例えば、ピチアまたはサッカロミセスの細胞、トリコデルマの細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）もしくはヒト細胞、または原核細胞、例えば、大腸菌の株のいずれかにおいて好ましいコドンを使用して、アミノ酸配列をコードするするように改変されていることを意味する。
【００６３】
最適化されたヌクレオチド配列は、完全に、または可能な限り多く、「親」配列としても知られている、開始ヌクレオチド配列によって当初コードされるアミノ酸配列を保持するように操作される。本明細書において最適化された配列は、対応する生産細胞または生物体、例えば、哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように操作されているが、しかしながら、他の原核生物または真核細胞においてこれらの配列の最適化された発現がまた、本明細書で想定される。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列もまた最適化されていると称される。
【００６４】
本発明の種々の局面は、以下のサブセクションでさらに詳細に記載されている。
【００６５】
本発明の好ましい態様は、以下に記載されているＳＩＲＰα結合ドメインを含む（Ｆａｂ）様タンパク質、（Ｆａｂ）２様タンパク質、Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓおよびそれらの誘導体からなる群から選択される可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質である。解釈を容易にするため、ＳＩＲＰα結合ドメインを含む（Ｆａｂ）様タンパク質、（Ｆａｂ）２様タンパク質、Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓおよびそれらの誘導体を、本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質として示す。
【００６６】
ＳＩＲＰα結合ドメイン
本明細書において使用される「ＳＩＲＰα結合ドメイン」は、適当な条件下でＳＩＲＰαへの結合のために必要であるあらゆる一本鎖ポリペプチドドメインを示す。ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαとの物理的相互作用に直接関与する全てのアミノ酸残基を含む。ＳＩＲＰαと直接相互作用しないが、ＳＩＲＰαと相互作用するためにＳＩＲＰα結合ドメインの適当な構造に必要である他のアミノ酸をさらに含み得る。ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαに対する結合特性の有意な変化なしに、異種ドメインに融合させてもよい。ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰαへ結合することが知られているタンパク質、例えば、ＣＤ４７タンパク質の結合ドメインの中から選択され得る。ＳＩＲＰα結合ドメインは、さらに、ＳＩＲＰαに対する人工バインダーからなり得る。特に、バインダーは、一本鎖免疫グロブリンスカフォールド、例えば、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）またはラクダ抗体由来であった。１つの態様において、「ＳＩＲＰα結合ドメイン」なる用語は、ＳＩＲＰαに結合する抗体の可変領域、例えば、ＶＨおよびＶＬ領域由来のＳＩＲＰα抗原結合領域を含まない。
【００６７】
１つの好ましい態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、
（ｉ）ヒトＣＤ４７の細胞外ドメイン；
（ｉｉ）配列番号：４のポリペプチドまたはＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４のフラグメント；および、
（ｉｉｉ）配列番号：４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有し、ＳＩＲＰα結合特性を保持する配列番号：４の変異体ポリペプチド
からなる群から選択される。
【００６８】
本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質は、ＳＩＲＰαへ結合する能力を保持すべきである。ＣＤ４７の結合ドメインは、よく特徴付けられており、ヒトＣＤ４７の１つの細胞外ドメインは配列番号：４のポリペプチドである。したがって、配列番号：４のポリペプチドのフラグメントは、ＣＤ４７のＳＩＲＰα結合ドメインを含むフラグメント中から選択することができる。これらのフラグメントは、一般的に、ＣＤ４７の膜貫通および細胞内ドメインを含まない。非限定的で例示的な態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、本質的に配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７からなる。フラグメントは、１から１０個のアミノ酸が、配列番号：４、配列番号：２１または配列番号：３のＣ−末端またはＮ−末端、例えば、配列番号：２３または配列番号：２７から切断されているより短いポリペプチドを含むが、これらに限定されない。ＳＩＲＰα結合ドメインは、天然の配列の変化がＳＩＲＰα結合タンパク質の生物学的活性、特に、そのＳＩＲＰαへの結合特性に実質的に影響しない限り、アミノ酸残基が、アミノ酸欠失、挿入または置換により変異され、配列番号：４と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの同一性を有する配列番号：４の変異体ポリペプチドをさらに含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、それは、わずか１、２、３、４または５個のアミノ酸が、配列番号：４と比較したとき、ＳＩＲＰα結合ドメインにおいてアミノ酸欠失または置換により変異されている変異アミノ酸配列を含む。変異アミノ酸配列の例は、一塩基変異多型に由来する配列が挙げられる（表２参照）。
【００６９】
本明細書において使用される２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数およびそれぞれのギャップの長さを考慮すると、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一の位置の＃／合計の同一の位置の＃×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下に記載される数学アルゴリズムを使用して成し遂げることができる。
【００７０】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラムに組み込まれているE. Myers and W. Miller (Comput. Appl. Biosci. 4:11-17, 1988)のアルゴリズムを使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48:443-453, 1970)アルゴリズムを使用して決定することができる。同一性パーセントを決定するためのさらに別のプログラムは、ｓｔａｎｄ−ａｌｏｎｅプログラムとして、またはウェブサーバー（http://www.clustal.org/参照）を介して利用できるCLUSTAL (M. Larkinら Bioinformatics 23:2947-2948, 2007; first described by D. Higgins and P. Sharp, Gene 73:237-244, 1988)である。
【００７１】
特定の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号：４または配列番号：３への変化を含み、該配列番号：４または配列番号：３への変化は、本質的に保存的なアミノ酸置換からなる。
【００７２】
保存的なアミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族性側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。したがって、配列番号：４または配列番号：３のＳＩＲＰα結合ドメイン内の１つ以上のアミノ酸残基は、同一の側鎖ファミリーから他のアミノ酸残基で置換することができ、新規ポリペプチド変異体は、本明細書に記載されている結合または機能アッセイを使用して、保持された機能について試験することができる。
【００７３】
別の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、非ヒト霊長類ＳＩＲＰα、例えば、カニクイザルまたはアカゲザルのものと交差反応するものから選択される。
【００７４】
別の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、ＳＩＲＰα、例えば、ＳＩＲＰγと密接に関連するヒトタンパク質と交差反応しないものの中から選択される。
【００７５】
いくつかの態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、プレートベースの細胞接着アッセイにおいて測定されるとき、配列番号：４のヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含むＳＩＲＰα結合タンパク質と少なくとも同程度に、ＣＤ４７−Ｆｃ融合物のＳＩＲＰα＋Ｕ９３７細胞への結合を阻害するように、このようなＳＩＲＰα結合ドメインを含むＳＩＲＰα結合タンパク質において能力を保持するものの中から選択される。
【００７６】
他の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、樹状細胞サイトカイン放出アッセイにおいて測定されるとき、配列番号：４のヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含むＳＩＲＰα結合タンパク質と少なくとも同程度に、インビトロで分化した骨髄樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害するように、このようなＳＩＲＰα結合ドメインを含むＳＩＲＰα結合タンパク質において能力を保持するものの中から選択される。
【００７７】
本発明の（Ｆａｂ）様または（Ｆａｂ’）２様ＳＩＲＰα結合タンパク質
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質は、ＳＩＲＰαに結合する（Ｆａｂ）様または（Ｆａｂ’）２様タンパク質である。
【００７８】
抗体のＦａｂフラグメントは、軽鎖のＣＬおよびＶＬ領域ならびに重鎖のＣＨ１およびＶＨ領域からなる抗体の結合領域を含むフラグメントとして知られている。（Ｆａｂ）様タンパク質は、ＶＨおよびＶＬ領域が異種結合ドメイン、例えば、ＳＩＲＰα結合ドメインにより置換されている（Ｆａｂ）フラグメントと類似のタンパク質である。ＳＩＲＰα結合ドメインが同一である態様において、本発明の得られる（Ｆａｂ）様タンパク質は、２つの同一の結合ドメインを含み、したがって、ＳＩＲＰα結合に対して二価であり得る。
【００７９】
（Ｆａｂ’）２様タンパク質は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋を介する２つの（Ｆａｂ）様タンパク質の共有結合を可能にする抗体のヒンジ領域をさらに含む。得られるタンパク質は、４つの結合ドメインを含む。１つの態様において、このような異種結合ドメインは、ＩｇＳＦドメイン由来の結合ドメインである。
【００８０】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質は、（ｉ）抗体の定常ＣＨ１重鎖領域に共有的に連結した第１のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第１の一本鎖ポリペプチド、および（ｉｉ）抗体の定常ＣＬ軽鎖領域に共有的に連結した第２のＳＩＲＰα結合ドメインを含む第２の一本鎖ポリペプチドからなる（Ｆａｂ）様タンパク質である。
【００８１】
ＳＩＲＰα結合ドメインは、インフレームで定常領域に直接、またはポリペプチドリンカー（スペーサー）を介して融合させることができる。このようなスペーサーは、単一のアミノ酸（例えば、グリシン残基）または５−１００個のアミノ酸、例えば、５−２０個のアミノ酸であり得る。リンカーは、ＳＩＲＰαとの結合部位を形成するように、ＳＩＲＰα結合ドメインが適当な空間的配置をとることを可能にすべきである。適当なポリペプチドリンカーは、フレキシブルな(flexible)配置を採用したものの間で選択され得る。このようなリンカーの例は、（限定しないが）グリシンおよびセリン残基を含むリンカー、例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ、ここで、ｎは１−１２、例えば、１から４、例えば２の整数であるものである。
【００８２】
本発明の（Ｆａｂ）様または（Ｆａｂ）２様ＳＩＲＰα結合タンパク質は、互いに接合または融合して、多価タンパク質を形成することができる。
【００８３】
当業者は、さらに、分子の結合価を増加させるように、または特定の使用のために操作された分子の特性を改善もしくは該特性に適合するようにのいずれかで、抗体分子を操作するための開発された背景技術を有利に使用することができる。
【００８４】
別の態様において、本発明の（Ｆａｂ）様または（Ｆａｂ）２様ＳＩＲＰα結合タンパク質は、得られる融合タンパク質の血中の半減期を増加させることができる別の異種タンパク質に融合させることができる。
【００８５】
このような異種タンパク質は、例えば、免疫グロブリン、血清アルブミンおよびそれらのフラグメントであり得る。このような異種タンパク質はまた、対象において投与したとき、得られる分子の半減期を増加させるために、血清アルブミンタンパク質に結合することができるポリペプチドであり得る。このようなアプローチは、例えば、ＥＰ０４８６５２５に記載されている。
【００８６】
あるいは、または加えて、（Ｆａｂ）様または（Ｆａｂ）２様タンパク質は、多重合のためのドメインをさらに含む。
【００８７】
ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ
さらなる局面において、本発明は、上記パラグラフに記載されている少なくとも１つのＳＩＲＰα結合ドメインまたは（Ｆａｂ）様タンパク質を含むＦｕｓｏｂｏｄｙに関する。
【００８８】
Ｆｕｓｏｂｏｄｙの２つのヘテロダイマーは、異なる結合特異性を有する異なる結合ドメインを含み、それにより、二重特異性Ｆｕｓｏｂｏｄｙが得ることができる。例えば、Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ＳＩＲＰα結合ドメインを含む一方のヘテロダイマーおよび別の異種結合ドメインを含むもう一方のヘテロダイマーを含み得る。あるいは、Ｆｕｓｏｂｏｄｙの両方のヘテロダイマーは、ＳＩＲＰα結合ドメインを含む。後者において、このようなＳＩＲＰα結合ドメインの構造またはアミノ酸配列は、同一であっても、異なっていてもよい。１つの好ましい態様において、Ｆｕｓｏｂｏｄｙの両方のヘテロダイマーは、同一のＳＩＲＰα結合ドメインを含む。
【００８９】
１つの特定の態様において、それぞれのヘテロダイマーの重鎖は、抗体構造の類似性によりＦｕｓｏｂｏｄｙのＦｃ部またはＦｃ部分と称される抗体のＣＨ２およびＣＨ３領域を含む。ＦｕｓｏｂｏｄｙのＦｃ部分の詳細な説明は、さらに以下のパラグラフにおいて記載されている。
【００９０】
本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓの特定の例
本発明のＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、実施例における表４に記載されているとおりに構造的に特徴付けられるＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを含むが、これらに限定されない。これらの例において使用されるＳＩＲＰα結合ドメインは、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７において示される。本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓの重鎖アミノ酸配列の特異的な例は、配列番号：５、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２４、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６および配列番号：５８からなる群から選択されるポリペプチド配列である。本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓの軽鎖アミノ酸配列の特定の例は、配列番号：６、配列番号：１３、配列番号：２０、配列番号：２５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５および配列番号：５７からなる群から選択されるポリペプチド配列である。
【００９１】
本発明の他のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、アミノ酸欠失、挿入または置換により変異され、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７の対応するＳＩＲＰα結合ドメインのいずれか１つと少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有するＳＩＲＰα結合ドメインを含む。いくつかの態様において、本発明のＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、わずか１、２、３、４または５個のアミノ酸が、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７の配列のいずれか１つに記載されているＳＩＲＰα結合ドメインと比較したとき、ＳＩＲＰα結合ドメインにおいてアミノ酸欠失または置換により変化されている変異アミノ酸配列を含むＳＩＲＰα結合ドメインを含む。
【００９２】
１つの態様において、実施例＃１として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５の重鎖および配列番号：６の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃２として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１８の重鎖および配列番号：６の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃３として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１９の重鎖および配列番号：２０の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃４として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１２の重鎖および配列番号：１３の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃５として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：２４の重鎖および配列番号：２５の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃６として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：３６の重鎖および配列番号：３７の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃７として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：３８の重鎖および配列番号：３９の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃８として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４０の重鎖および配列番号：４１の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃９として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４２の重鎖および配列番号：４３の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１０として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４４の重鎖および配列番号：４５の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１１として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４６の重鎖および配列番号：４７の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１２として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４８の重鎖および配列番号：４９の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１３として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５０の重鎖および配列番号：５１の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１４として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５２の重鎖および配列番号：５３の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１５として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５４の重鎖および配列番号：５５の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１６として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５６の重鎖および配列番号：５７の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１７として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５８の重鎖および配列番号：２０の軽鎖を含む。
１つの態様において、実施例＃１８として記載されている本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：２９の重鎖および配列番号：２０の軽鎖を含む。
【００９３】
別の局面において、本発明は、配列番号：１０のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：１１のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：５９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃３として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：６１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃４として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：６３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃５として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：６５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃６として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：６７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６８のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃７として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：６９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：７０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃８として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：７１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：７２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃９として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：７３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：７４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１０として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：７５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：７６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１１として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：７７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：７８のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１２として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：７９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：８０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１３として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：８１のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：８２のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１４として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：８３のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：８４のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１５として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：８５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：８６のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１６として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：８７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１７として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
別の局面において、本発明は、配列番号：８８のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖および配列番号：６０のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する実施例＃１８として記載されている本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９４】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３６１で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３ＨＣ＿５４６０＿ＩＤ５９内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３６２で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３ＬＣ＿５４６１＿ＩＤ６０内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９５】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３６３で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ４ＨＣ＿５４４４＿ＩＤ６１内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３６４で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ４ＬＣ＿５４４５＿ＩＤ６２内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９６】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３３０で２０１０年１２月１０日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐＨＣ＿５４６６＿ＩＤ６３内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３６５で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ５ＬＣ＿５４６７＿ＩＤ６４内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９７】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３６６で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ６ＨＣ＿５４４０＿ＩＤ６５内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３６７で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ６ＬＣ＿５４４１＿ＩＤ６６内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９８】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３６８で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ７ＨＣ＿５４５０＿ＩＤ６７内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３６９で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ７ＬＣ＿５４５１＿ＩＤ６８内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【００９９】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３７０で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ８ＨＣ＿５４４２＿ＩＤ６９内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７１で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ８ＬＣ＿５４４３＿ＩＤ７０内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１００】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３３１で２０１０年１２月１０日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ９ＨＣ＿５４５２＿ＩＤ７１内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７２で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ９ＬＣ＿５４５３＿ＩＤ７２内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０１】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３７３で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１０ＨＣ＿５４５４＿ＩＤ７３内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７４で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１０ＬＣ＿５４５５＿ＩＤ７４内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０２】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３７５で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１１ＨＣ＿５４４６＿ＩＤ７５内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７６で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１１ＬＣ＿５４４７＿ＩＤ７６内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０３】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３３２で２０１０年１２月１０日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１２ＨＣ＿５４５６＿ＩＤ７７内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７７で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１２ＬＣ＿５４５７＿ＩＤ７８内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０４】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３７８で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１３ＨＣ＿５４４８＿ＩＤ７９内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３７９で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１３ＬＣ＿５４４９＿ＩＤ８０内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０５】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３８０で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１４ＨＣ＿５４６８＿ＩＤ８１内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３８１で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１４ＬＣ＿５４６９＿ＩＤ８２内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０６】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３３３で２０１０年１２月１０日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１５ＨＣ＿５４５８＿ＩＤ８３内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３８２で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１５ＬＣ＿５４５９＿ＩＤ８４内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０７】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３３４で２０１０年１２月１０日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１６ＨＣ＿５４６４＿ＩＤ８５内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３８３で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ１６ＬＣ＿５４６５＿ＩＤ８６内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０８】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３８４で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３１ＨＣ＿５４７１＿ＩＤ８９内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３８５で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３２ＬＣ＿５４７１＿ＩＤ９０内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１０９】
別の局面において、本発明は、受入番号ＤＳＭ２４３８６で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３４ＨＣ＿５４７２＿ＩＤ９１内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および受入番号ＤＳＭ２４３８７で２０１０年１２月１３日にＤＳＭＺで、Novartis Pharma AG, Novartis Campus, CH-4002 Basel, Switzerlandにより寄託されたプラスミドｐ３５ＬＣ＿５４７３＿ＩＤ９２内に含まれている対応するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を有する本発明の単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１１０】
本発明の他のＳＩＲＰα結合は、ヌクレオチド欠失、挿入または置換により変異され、配列番号：１０または配列番号：１４または配列番号：５９または配列番号：６３または配列番号：６７と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および、ヌクレオチド欠失、挿入または置換により変異され、配列番号：１１または配列番号：１５または配列番号：６０または配列番号：６４または配列番号：６８と少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセントの配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。いくつかの態様において、本発明のＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、わずか１、２、３、４または５個のヌクレオチドが、配列番号：１０または配列番号：１４または配列番号：５９または配列番号：６３または配列番号：６７と比較したとき、ヌクレオチド欠失、挿入または置換により変化されている変異ヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる重鎖、および、わずか１、２、３、４または５個のヌクレオチドが、配列番号：１１または配列番号：１５または配列番号：６０または配列番号：６４または配列番号：６８と比較したとき、ヌクレオチド欠失、挿入または置換により変化されている変異ヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。
【０１１１】
機能性Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ
さらに別の態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、上記パラグラフに記載されている特定のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、特に、表４に記載されている実施例＃１−１８の対応するアミノ酸およびヌクレオチド配列と同種である、重鎖および軽鎖アミノ酸配列；重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列または重鎖および軽鎖定常領域に融合したＳＩＲＰα結合ドメインを有し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、上記パラグラフに記載されている特定のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、特に、表４に記載されている実施例＃１−１８の少なくとも１つの実質的に同じ機能特性を保持する。
【０１１２】
例えば、本発明は、重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙであって、該重鎖が、配列番号：５、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：１９および配列番号：２４、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６または配列番号：５８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有し；該軽鎖が、配列番号：６、配列番号：１３、配列番号：２０、配列番号：２５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５および配列番号：５７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有し；該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、少なくとも１つの以下の機能特性を示し：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、またはインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害する、単離されたＦｕｓｏｂｏｄｙを提供する。
【０１１３】
本明細書において使用される「ＳＩＲＰαに特異的に結合する」Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、例えば、ＢｉａＣＯＲＥアッセイにおいて表面プラズモン共鳴により、実施例に記載されている少なくとも１つの結合親和性アッセイ内で、４μＭ以下、２μＭ以下、４００ｎＭ以下のＫＤで配列番号：１のヒトＳＩＲＰαポリペプチドに結合するＦｕｓｏｂｏｄｙを示すことを意図する。「ＳＩＲＰα以外のポリペプチドと交差反応する」Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、４μＭ以下、２μＭ以下、４００ｎＭ以下のＫＤで他のポリペプチドに結合するＦｕｓｏｂｏｄｙを示すことを意図する。「特定のポリペプチドと交差反応しない」Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、同様の条件下でヒトＳＩＲＰαへの該Ｆｕｓｏｂｏｄｙの結合親和性ＫＤよりも、少なくとも１０倍高い、好ましくは少なくとも１００倍高いＫＤで該ポリペプチドに結合するＦｕｓｏｂｏｄｙを示すことを意図する。１つの態様において、他のポリペプチドと交差反応しないこのようなＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、標準結合アッセイにおいてこれらのタンパク質に対する本質的に検出不可能な結合を示す。
【０１１４】
種々の態様において、Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、１つ以上または全ての上記機能特性を示し得る。
【０１１５】
他の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、「ＳＩＲＰα結合ドメイン」に関連する上記パラグラフに記載されているＳＩＲＰα結合ドメインの特定の配列の少なくとも１つと５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得、限定はしないが、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７を含む。他の態様において、ＳＩＲＰα結合ドメインは、該特定の配列のわずか１、２、３、４または５個のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を除けば、「ＳＩＲＰα結合ドメイン」に関連する上記パラグラフに記載されているＳＩＲＰα結合ドメインの特定の配列の少なくとも１つと同一であり得、限定はしないが、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：２１、配列番号：２３または配列番号：２７を含む。
【０１１６】
具体的に記載されているＳＩＲＰα結合ドメインと高い（すなわち、少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）同一性を有するＳＩＲＰα結合ドメインを有するＦｕｓｏｂｏｄｙは、該特定のＳＩＲＰα結合ドメインをそれぞれコードする核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ介在変異誘発）し、次に本明細書に記載されている機能アッセイを使用して保持される機能（すなわち、上記の機能）に関してコードされ変化されたＦｕｓｏｂｏｄｙを試験することにより得ることができる。
【０１１７】
他の態様において、重鎖および軽鎖アミノ酸配列は、上記の実施例＃１−１８の特異的Ｆｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖と５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得るが、上記ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの機能特性の少なくとも１つを保持する。配列番号：５、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：１９および配列番号：２４、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６または配列番号：５８のいずれかの対応する重鎖；および配列番号：６、配列番号：１３、配列番号：２０、配列番号：２５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５および配列番号：５７のいずれかの対応する軽鎖と、それぞれ、高い（すなわち、少なくとも８０％、９０％、９５％またはそれ以上）同一性を有する重鎖および軽鎖を有するＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５、配列番号：１２、配列番号：１８、配列番号：１９および配列番号：２４、配列番号：２９、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６または配列番号：５８の重鎖；および配列番号：６、配列番号：１３、配列番号：２０、配列番号：２５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５または配列番号：５７の軽鎖をそれぞれコードする核酸分子の変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ介在変異誘発）し、次に本明細書に記載されている機能アッセイを使用して保持される機能（すなわち、上記の機能）に関してコードされ変化されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを試験することにより得ることができる。
【０１１８】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：６と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１１９】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１８と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：６と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃２の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２０】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１９と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：２０と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃３の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２１】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：１２と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：１３と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃４の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２２】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：２４と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：２５と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃５の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、またはインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン株粒子刺激放出を阻害する。
【０１２３】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：３６と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：３７と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃６の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２４】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：３８と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：３９と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃７の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２５】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４０と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：４１と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃８の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２６】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４２と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：４３と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃９の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２７】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４４と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：４５と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１０の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２８】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４６と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：４７と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１１の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１２９】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：４８と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：４９と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１２の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３０】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５０と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：５１と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１３の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３１】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５２と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：５３と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１４の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３２】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５４と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：５５と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１５の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３３】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５６と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：５７と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１６の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３４】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：５８と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：２０と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１７の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３５】
１つの態様において、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、配列番号：２９と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の重鎖および配列番号：２０と少なくとも８０％、９０％、９５％または９９％同一の軽鎖を有する実施例＃１８の変異体であり、該ＦｕｓｏｂｏｄｙはＳＩＲＰαに特異的に結合し、該Ｆｕｓｏｂｏｄｙは少なくとも１つの以下の機能特性を示す：ＳＩＲＰα＋白血球の接着を促進するか、または種々の細菌誘導体、例えば、黄色ブドウ球菌コワン株粒子または他のものにより誘導されるインビトロで産生された単球由来樹状細胞における炎症性サイトカインの放出を阻害する。
【０１３６】
ＦｕｓｏｂｏｄｙのＦｃドメイン
Ｆｃドメインは、少なくとＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。本明細書において使用されるＦｃドメインなる用語は、１、２、３、４または５個のアミノ酸位置でアミノ酸置換、欠失または挿入が抗体の天然Ｆｃフラグメント、例えば、ヒトＦｃフラグメントと比較して導入されたＦｃ変異体をさらに含むが、これらに限定されない。
【０１３７】
ヒトにおける増大したインビボでの半減期を有する可溶性構築物を作製するためのＦｃドメインの使用は、当分野でよく知られており、例えば、Ｃａｐｏｎら（ＵＳ５，４２８，１３０）に記載されている。１つの態様において、Ｆｕｓｏｂｏｄｙ構築物内に同様のＦｃ部分を使用することを提案する。しかしながら、本発明は、「Ｆｃ融合タンパク質」または「イムノアドヘシン」としてときどき称されるＡｒｔの既知のタンパク質に関しないことが認識される。確かに、「Ｆｃ融合タンパク質」または「イムノアドヘシン」なる用語は、ＣＬまたはＣＨ１領域の少なくともいずれかを含まない、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに直接融合した異種結合領域に対してＡｒｔにおいて一般的に示す。得られるタンパク質は、２つの異種結合領域を含む。Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ＣＨ１領域のＮ−末端に融合したＦｃ部分を含み、それにより、通常ＣＨ１およびＣＬジスルフィド結合を介して、軽鎖と相互作用することができる全長定常重鎖を再構成し得る。
【０１３８】
１つの態様において、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が改変、例えば、増加または減少されるように、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質のＣＨ１のヒンジ領域は修飾される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号（Ｂｏｄｍｅｒら）においてさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進するように、または融合ポリペプチドの安定性を増加もしくは減少させるように改変される。
【０１３９】
別の態様において、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質のＦｃ領域は、その生物学的半減期を増加させるために修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、１つ以上の以下の位置、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されている２５２、２５４、２５６で変異することができる。例えば：Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ。
【０１４０】
さらに他の態様において、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質のＦｃ領域は、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することにより改変し、Ｆｃ部分のエフェクター機能を改変する。例えば、Ｆｃ部分がエフェクターリガンドに対する改変された親和性を有するように、１つ以上のアミノ酸が異なるアミノ酸残基で置換することができる。親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１コンポーネントであり得る。このアプローチは、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１および５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。
【０１４１】
別の態様において、アミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸は、得られるＦｃ部分が、改変したＣ１ｑ結合および／または減少したもしくは消失した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基で置換することができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）にさらに詳細に記載されている。
【０１４２】
別の態様において、１つ以上のアミノ酸残基は、補体を固定するＦｃ領域の能力を改変するように改変される。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに記載されている。
【０１４３】
さらに別の態様において、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質のＦｃ領域は、１つ以上のアミノ酸を修飾することにより、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を介在する融合ポリペプチドの能力を増加させる、および／または、Ｆｃγ受容体に対するＦｃ領域の親和性を増加または減少させるように修飾される。このアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ００／４２０７２にさらに記載されている。さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位は、マップされており、改善された結合を有する変異体は、記載されている（Shields, R.L.ら 2001 J. Biol. Chem. 276:6591-6604参照）。
【０１４４】
１つの態様において、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質のＦｃドメインは、ヒト起源であり、免疫グロブリンのクラスのいずれか、例えば、ＩｇＧまたはＩｇＡから、サブタイプのいずれか、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のキメラ由来であり得る。他の態様において、Ｆｃドメインは、非ヒト動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ラクダ、サメ、非ヒト霊長類またはハムスター由来であるが、これらに限定されない。
【０１４５】
１つの態様において、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインは、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質において使用される。いくつかの特定の態様において、ＩｇＧ１  Ｆｃフラグメントの変異体は、例えば、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を介在する、および／またはＦｃγ受容体へ結合する融合ポリペプチドの能力を減少もしくは除去するサイレントＩｇＧ１  Ｆｃを使用される。ＩｇＧ１アイソタイプのサイレント変異体の例は、Hezarehら (J. Virol 2001 Dec;75(24):12161-8）により記載されている、アミノ酸位置２３４および２３５でロイシン残基がアラニン残基により置換されている、いわゆるＬＡＬＡ変異体である。ＩｇＧ１アイソタイプのサイレント変異体の別の例は、Ｄ２６５Ａ変異を含む。１つの態様において、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの位置２９７での残基でグリコシル化、例えば、Ｆｃドメインの位置２９７でのアスパラギン残基のアミノ酸置換を防止する変異体である。このようなアミノ酸置換の例は、グリシンまたはアラニンによるＮ２９７の置換である。
【０１４６】
別の態様において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４由来である。
【０１４７】
１つの態様において、ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはＳＩＲＰα結合タンパク質Ｆｃドメインは、好ましくは、このようなＦｃドメインを含む２つの融合ポリペプチド間の共有ジスルフィド架橋を作ることができるシステインを介する二量化ドメインを含む。
【０１４８】
グリコシル化修飾
さらに別の態様において、本発明の可溶性タンパク質、特にＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓのグリコシル化パターンは、典型的な哺乳動物グリコシル化パターン、例えば、ＣＨＯまたはヒト細胞系において得られるものと比較して改変することができる。例えば、非グリコシル化タンパク質は、グリコシル化を欠くように操作されている宿主細胞または哺乳動物細胞として、原核細胞系を使用することにより行うことができる。炭水化物修飾はまた、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ内の１つ以上のグリコシル化部位を改変することにより達成することができる。
【０１４９】
さらに、またはあるいは、グリコシル化タンパク質は、グリコシル化の改変された型を有するように作製することができる。このような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において本発明の可溶性タンパク質を発現することにより達成することができる、すなわち、可溶性タンパク質のグリコシル化パターンが対応する野生型細胞において観察されるグリコシル化パターンと比較して改変される。改変されたグリコシル化機構を有する細胞は、当分野で説明されており、組換え可溶性タンパク質を発現し、それにより改変されたグリコシル化を有するこのような可溶性タンパク質を生産する宿主細胞として使用することができる。例えば、ＥＰ１，１７６，１９５（Ｈａｎｇら）は、このような細胞系において発現された糖タンパク質が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞系を記載している。ＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）連結炭水化物にフコースを結合させる能力を低下させ、また、宿主細胞内で発現した糖タンパク質の低フコシル化をもたらす変異体ＣＨＯ細胞系、Ｌｅｃｌ３細胞を記載している（Shields, R.Lら 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照）。あるいは、可溶性タンパク質は、哺乳動物様グリコシル化パターンのために設計された、酵母、例えば、メタノール資化酵母、または糸状菌(filamentous fungi)、例えば、トリコデルマリーゼイ(Trichoderma reesei)において生産することができる（例えば、ＥＰ１２９７１７２Ｂ１参照）。これらの糖設計された宿主細胞の利点は、とりわけ、均質なグリコシル化パターンおよび／または高収量を有するポリペプチド組成物を提供することである。
【０１５０】
ペグ化可溶性タンパク質および他の抱合体
本発明により考えられる本明細書の可溶性タンパク質の別の態様は、ペグ化である。本発明の可溶性タンパク質、例えば、ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、ペグ化することができる。ペグ化は、ペグ化なしの同じ生物学的製剤と比較して、得られる生物学的製剤の生物学的（例えば、血清）半減期を増大させることがよく知られている技術である。ポリペプチドをペグ化するために、ポリペプチドは、一般的に、１つ以上のＰＥＧ基がポリペプチドに結合する条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応により実施することができる。本明細書において使用される「ポリエチレングリコール」なる用語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧのあらゆる形式、例えば、モノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを包含することを意図する。タンパク質をペグ化するための方法は、当分野で知られており、本発明の可溶性タンパク質に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ  ０  １５４  ３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ  ０  ４０１  ３８４参照。
【０１５１】
あるいは、抱合体またはポリマー状担体を使用して、特に得られる抱合体の薬物動態学的特性を改善することができる。ポリマー状担体は、少なくとも１つの天然または合成の分岐、直鎖状または樹枝状ポリマーを含み得る。ポリマー状担体は、好ましくは水および体液に可溶性であり、好ましくは薬学的に許容されるポリマーである。水溶性ポリマー部分は、例えば、ポリアルキレングリコールおよびその誘導体、例えば、ＰＥＧ、ＰＥＧホモポリマー、ｍＰＥＧ、ポリプロピレングリコールホモポリマー、プロピレングリコールとエチレングリコールのコポリマー（該ホモポリマーおよびコポリマーは、非置換であるか、または例えばアシル基の１の末端において置換されている）；ポリグリセリンまたはポリシアル酸；炭水化物、多糖類、セルロースおよびセルロース誘導体、例えば、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース；デンプン（例えば、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、とりわけヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）およびデキストリン、およびそれらの誘導体；デキストランおよびデキストラン誘導体、例えば、デキストラン硫酸、架橋デキストリン、およびカルボキシメチルデキストリン；キトサン（直鎖多糖類）、ヘパリンおよびヘパリンのフラグメント；ポリビニルアルコールおよびポリビニルエチルエーテル；ポリビニルピロリドン；アルファ、ベータ−ポリ［（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルトアミド；およびポリオキシ−エチル化ポリオールを含むが、これらに限定されない。
【０１５２】
医薬としてのＳＩＲＰα結合タンパク質の使用
ＳＩＲＰα結合タンパク質、特にＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、特に炎症性および／または自己免疫性応答、特に、対象におけるＳＩＲＰα＋細胞が介在する応答を（統計的に、または生物学的に有意な様式において）減少または抑制するための医薬として使用され得る。細胞毒性剤と接合しているとき、またはＦｃ部分により提供される殺細胞エフェクター機能を有するとき、ＳＩＲＰα結合タンパク質および特にＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓもまた、癌または腫瘍、例えば、特に骨髄リンパ増殖性疾患、例えば、急性骨髄リンパ増殖性（ＡＭＬ）障害または膀胱癌の処置、減少または抑制において有利に使用することができる。
【０１５３】
本発明の可溶性タンパク質をコードする核酸分子
本発明の別の局面は、本発明の可溶性タンパク質をコードする核酸分子に関し、例えば実施例の表４に記載されているＦｕｓｏｂｏｄｙに関連した態様を含むが、これらに限定されない。ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓをコードするヌクレオチド配列の非限定的な例は、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖をそれぞれコードする配列番号：１０および１１を含む。
【０１５４】
核酸は、全細胞において、細胞溶解物において、存在してもよく、または、部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態の核酸であり得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、塩化セシウム結合、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当分野でよく知られている他のものを含む標準技術により、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞の核酸またはタンパク質から精製したとき、「単離された」または「実質的に純粋にされた」ものである。F. Ausubelら ed. 1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York参照。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってよく、イントロン配列を含んでいても含んでいなくてもよい。ある態様において、核酸はｃＤＮＡ分子である。核酸は、ベクター、例えば、ファージディスプレイベクター、または組換えプラスミドベクター中に存在してもよい。
【０１５５】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質をコードするＤＮＡフラグメント、例えば、上記および実施例のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓが得られると、これらのＤＮＡフラグメントは、標準組換えＤＮＡ技術によりさらに操作して、例えば、発現系において適当な分泌のための任意のシグナル配列、さらなる精製工程のための任意の精製タグおよび開裂可能なタグを含むようにできる。これらの操作において、ＤＮＡフラグメントは、別のＤＮＡ分子に、または別のタンパク質をコードするフラグメント、例えば、精製／分泌タグまたはフレキシブルなリンカーに作動可能に連結される。この文脈において使用されるとき「作動可能に連結される」なる用語は、例えば、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がインフレームに維持されるように、またはタンパク質が所望のプロモーターの制御下に発現されるように、２つのＤＮＡフラグメントが機能的な態様で結合されることを意図する。
【０１５６】
ＳＩＲＰα結合タンパク質を生産するトランスフェクトーマの産生
本発明の可溶性タンパク質、例えば、ＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓのＳＩＲＰα結合タンパク質は、例えば、当分野でよく知られている組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション方法の組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて生産することができる。宿主細胞トランスフェクトーマにおいて組換えＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを発現および生産させるために、当業者は、抗体分子または抗体様分子の発現および組換え生産に関連した一般知識を有利に使用することができる。
【０１５７】
例えば、本発明の可溶性タンパク質またはその中間体を発現するために、対応するポリペプチドをコードするＤＮＡは、標準分子生物学技術（例えば、ＰＣＲ増幅または興味あるポリペプチドを発現するハイブリドーマを使用するｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、ＤＮＡは、対応する遺伝子が転写および翻訳コントロール配列に作動可能に連結するように、発現ベクターに挿入することができる。発現ベクターおよび発現コントロール配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。本発明の可溶性タンパク質をコードする遺伝子、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓまたは中間体の重鎖および軽鎖は、標準方法（例えば、遺伝子フラグメントおよびベクター状の相補的制限酵素認識部位のライゲーション、または制限酵素認識部位が存在しないとき平滑末端ライゲーション）により発現ベクターに挿入される。さらに、またはあるいは、組換え発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチド鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。遺伝子は、シグナルペプチドがポリペプチド鎖のアミノ末端にインフレームで連結されるようにベクターにクローニングすることができる。ＳＩＲＰα結合領域のようなＣＤ４７由来配列での特定の態様において、シグナルペプチドは、ＣＤ４７シグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、シグナルペプチドは、ＣＤ４７配列と天然に関連しない）であり得る。
【０１５８】
ポリペプチドをコードする配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。「調節配列」なる用語は、ポリペプチド鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990)において記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの因子に依存し得ることは当業者に理解されよう。哺乳動物宿主細胞発現の調節配列は、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を指向するウイルス要素、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ  ４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、およびポリオーマ(polyoma)由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーを含む。あるいは、非ウイルス調節配列、例えば、ユビキチンプロモーターまたはＰ−グロビンプロモーターを使用され得る。さらに、調節要素は、ＳＶ４０初期プロモーターおよびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の末端反復配列（Takebe, Yら 1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472）を含むＳＲａプロモーター系のような、異なる供給源の配列からなる。
【０１５９】
これに加えて、本発明の組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞においてベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を有し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、全てＡｘｅｌらによる米国特許第４，３９９，２１６、４，６３４，６６５および５，１７９，０１７号参照）。例えば、一般的に、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を与える。選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅と共にｄｈｆｒ−宿主細胞において使用される）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）を含む。
【０１６０】
タンパク質の発現のために、可溶性タンパク質または中間体をコードする発現ベクター、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖配列は、標準技術により宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」なる用語の種々の形態は、原核生物または真核生物宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般的に使用される多種多様の技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することを意図する。原核生物または真核生物宿主細胞のいずれかにおいて本発明の可溶性タンパク質を発現することは、理論的に可能である。真核細胞、特に、哺乳動物宿主細胞における糖タンパク質の発現は、このような真核細胞、特に哺乳動物細胞が、原核細胞よりも適当に折り畳まれ生物学的に活性な糖タンパク質、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓを集合させ分泌させやすいため、議論される。
【０１６１】
Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、抗体分子のために開発されたよく知られている発現系を使用して有利に生産することができる。
【０１６２】
本発明の可溶性タンパク質および中間体、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖を発現するための哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、例えば、（例えば、R.J. Kaufman and P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621に記載されている）ＤＨ  ＦＲ選択可能なマーカーと共に使用されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞（Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されている）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞またはヒト細胞系（例えば、ＰＥＲ−Ｃ６細胞系、ＣｒｕｃｅｌｌまたはＨＥＫ２９３細胞、Yves Durocherら 2002, Nucleic Acids research vol 30, No 2 e9）を含む。ポリペプチドをコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されるとき、本発明の可溶性タンパク質および中間体、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの重鎖および軽鎖は、宿主細胞における組換えポリペプチドの発現または宿主細胞が増殖する培養培地への組換えポリペプチドの分泌を可能にするために十分な期間、宿主細胞を培養することにより生産される。次に、ポリペプチドは、標準タンパク質精製方法を使用して培養培地から回収することができる。
【０１６３】
多価ＳＩＲＰα結合タンパク質
別の局面において、本発明は、少なくとも２つの同一のまたは異なる本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質を含む多価タンパク質を提供する。１つの態様において、多価タンパク質は、少なくとも２つ、３つまたは４つの本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質を含む。可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質は、タンパク質融合または共有もしくは非共有結合を介して互いに連結することができる。本発明の多価タンパク質は、当分野で知られている方法を使用して、構成結合特異性を結合することにより製造することができる。例えば、多価タンパク質のそれぞれの結合特異性は、別々に生成され、互いに結合することができる。
【０１６４】
種々のカップリング剤または架橋剤が、共有結合のために使用することができる。架橋剤の例は、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（ＳＰＤＰ）、およびスルフォスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボン酸（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）（例えば、Karpovskyら 1984 J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MAら 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648参照）を含む。他の方法は、Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132; Brennanら 1985 Science 229:81-83およびGlennieら 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375に記載されているものを含む。共有結合は、２つのシステインの間のジスルフィド架橋、例えば、Ｆｃドメインのシステインのジスルフィド架橋により得ることができる。
【０１６５】
接合ＳＩＲＰα結合タンパク質
別の局面において、本発明は、治療薬部分、例えば、細胞毒素、薬物（例えば、免疫抑制剤）または放射性毒素に接合されたＳＩＲＰα結合タンパク質、特に、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを特徴とする。このような抱合体は、本明細書において「接合ＳＩＲＰα結合タンパク質」と称される。細胞毒素または細胞毒性剤は、細胞に対して有害である（例えば、殺す）あらゆる薬剤を含む。このような薬剤は、抗体の抱合体または免疫抱合体を製造するために使用されている。このような技術は、ＳＩＲＰα結合タンパク質、特に、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙで有利に適用することができる。細胞毒素または細胞毒性剤の例は、タクソン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド(tenoposide)、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ｔ．コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらのアナログまたはホモログを含む。治療剤はまた、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバジン）、アルキル化剤(ablating agents)（例えば、メクロレタミン、チオテパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）を含む。
【０１６６】
本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓに接合することができる治療的細胞毒素の他の例は、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、メイタンシンおよびアウリスタチンならびにそれらの誘導体を含む。
【０１６７】
当分野で利用できるリンカー技術を使用して、毒素を、本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓに接合することができる。本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓへ細胞毒素を接合するために使用されているリンカー型の例は、限定はしないが、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーを含む。例えば、リソソーム区画内で低いｐＨによる開裂に影響されやすいか、または、プロテアーゼ、例えば、腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼ、例えば、カテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）による開裂に影響されやすいリンカーを選択することができる。
【０１６８】
抗体に治療剤を接合するための細胞毒素、リンカーおよび方法の型のさらなる議論のため、Saito, Gら 2003 Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215; Trail, P.Aら 2003 Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Payne, G., 2003 Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. and Kreitman, R. J., 2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J., 2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264も参照。
【０１６９】
本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓはまた、細胞毒性放射性医薬品を産生するために放射性同位体に接合することができる。診断的または治療的使用のための本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓへ接合することができる放射性同位体の例は、限定はしないが、ヨウ素ｌ３１、インジウム１１１、イットリウム９０およびルテチウム１７７を含む。放射性免疫抱合体を製造するための方法は、当分野で確立されている。放射性免疫抱合体の例は、ＺｅｖａｌｉｎＴＭ（ＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＢｅｘｘａｒＴＭ（Ｃｏｒｉｘａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む市販されているものであり、同様の方法は、本発明のＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを使用して放射性医薬品を製造するために使用することができる。さらに、毒素または放射性同位体を抗体に接合するための技術は、よく知られている、例えば、Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pincheraら (eds.), pp. 475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwinら (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985)、およびThorpeら “The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates”, Inmunol. Rev., 62:119-58 (1982)参照。
【０１７０】
医薬組成物
別の局面において、本発明は、薬学的に許容される担体と共に製剤化された、本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓの１つまたは組合せを含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。
【０１７１】
本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｙを含む医薬製剤は、任意の生理学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th edition (2000)）と、所望の純度を有するタンパク質を、水溶液、凍結乾燥、または他の乾燥させた製剤の形態において、混合することにより、保存のために調製され得る。本発明はさらに、少なくとも本発明の可溶性タンパク質、例えば、本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓおよび適当な薬学的に許容される担体を含む凍結乾燥組成物に関する。本発明は、また、少なくとも本発明の可溶性タンパク質、例えば、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、および適当な薬学的に許容される担体を含む液体製剤で予め満たされたシリンジに関する。
【０１７２】
また、併用療法において、すなわち、他の薬剤と組み合わせて、本発明の医薬組成物を投与することもできる。例えば、併用療法は、少なくとも１つの他の抗炎症剤または別の化学療法剤と組み合わせて、本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｙを含むことができる。併用療法で使用することができる治療剤の例は、本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質の使用のセクションで、より詳細に説明されている。
【０１７３】
本明細書において使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性がある任意およびすべての溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）のために適当であるべきである。投与経路に依存して、活性成分は、酸の作用、および該活性成分を不活性化し得る他の自然条件から保護するための材料で被覆され得る。
【０１７４】
本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、何らかの望ましくない毒物学的効果を与えない塩を示す（例えば、Berge, S.Mら 1977 J. Pharm. Sci. 66:1-19参照）。このような塩の例は、酸付加塩および塩基付加塩を含む。酸付加塩は、非毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素、亜リン酸など、ならびに非毒性有機酸、例えば、脂肪族モノ−およびジ−カルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族性スルホン酸などに由来するものを含む。塩基付加塩は、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものを含む。
【０１７５】
本発明の医薬組成物は、また、薬学的に許容される酸化防止剤を含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例は、水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウムなど；油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および金属キレート化剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などを含む。
【０１７６】
本発明の医薬組成物において使用され得る適当な水性および非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適当な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルを含む。適切な流動性は、例えば、被覆材料、例えば、レシチンの使用により、分散媒体の場合、必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持することができる。
【０１７７】
これらの組成物はまた、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含み得る。微生物の存在の防止は、上記滅菌処理、ならびに、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有の両方により保証され得る。また、組成物に、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含めることが望ましいかもしれない。加えて、注射可能な医薬品形態の長期吸収は、吸収を遅延する剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの含有によりもたらされ得る。
【０１７８】
薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射可能溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当分野で知られている。任意の慣用の媒体または薬剤が活性化合物と不適合性である場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が意図される。補助的な活性化合物も、また、組成物に組み込むことができる。
【０１７９】
治療組成物は、一般的に、製造および保存の条件下で滅菌であり、安定でなければならない。組成物は、高薬物濃度に適当な溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含む溶媒または分散媒体、およびそれらの適当な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、被覆剤、例えば、レシチンの使用により、分散媒体の場合には所望の粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことができる。注射可能な組成物の長期吸収は、組成物に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含むことによりもたらすことができる。
【０１８０】
滅菌注射可能溶液は、適当な溶媒中で必要な量の可溶性タンパク質、例えば、ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを上記の列挙された成分の１つまたは組合せと組み合わせて、必要なとき、次に滅菌精密濾過に付すことにより調製することができる。一般的に、分散媒体は、上記の列挙されたものから基本的な分散媒体および必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに活性成分を組み込むことにより調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の方法は、以前にフィルター滅菌された溶液から、活性成分プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０１８１】
単一の投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される対象および特定の投与経路に依存して変化し得る。単一の投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的に、治療効果を生じる組成物の量である。一般的には、１００％のうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、約０．０１％から約９９％の活性成分、約０．１％から約７０％または約１％から約３０％の活性成分の範囲である。
【０１８２】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するために調整される。例えば、単一のボーラスが投与され得、数回に分けられた投与量が時間をかけて投与され得、または投与量が治療状況の緊急性により指示されるように、比例的に減少または増大させられ得る。とりわけ、投与の容易化および投薬量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を製剤化することが有利である。本明細書において使用される投与単位形態は、処置される対象に対して単一投与として適した物理的に別々の単位を示し、それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を必要とされる医薬担体と組み合わせて含む。本発明の投与単位形態のための仕様は、活性化合物の固有の特性およびなし遂げられるべき特定の治療効果、ならびに個体における感受性を処置するためのこのような活性化合物を配合する分野に固有の限界により指示され、それらに直接的に依存する。
【０１８３】
本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓの投与のために、用量は、約０．０００１から１００ｍｇ／ｋｇ、さらに通常０．０１から５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１−３０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。典型的な処置レジメンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１月に１回、３月に１回または３から６月に１回の投与を必要とする。本発明の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓに対する投与レジメンは、静脈内投与による１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を含み、該タンパク質は以下の投与スケジュールの１つを使用して与えられる：４週間ごとに６回投与、次に３月ごと；３週間ごと；３ｍｇ／ｋｇ体重で１回、次に１ｍｇ／ｋｇ体重で３週間ごと。
【０１８４】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、通常、複数回投与される。単一投与間の間隔は、例えば、週ごと、月ごと、３月ごとまたは１年ごとであり得る。間隔は、また、患者における可溶性ポリペプチドの血液レベルを測定することにより示されるとき、不規則であり得る。いくつかの方法において、用量は、約０．１−１０００μｇ／ｍｌおよびいくつかの方法において約５−３００μｇ／ｍｌの血漿ポリペプチド濃度をなし遂げるように調整される。
【０１８５】
あるいは、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、持続放出製剤として投与することができ、その場合、必要な投与の頻度はより少ない。用量および頻度は、患者における可溶性タンパク質の半減期に依存して変化する。投与の用量および頻度は、処置が予防または治療であるかに依存して変化し得る。予防適用において、比較的低い用量が、長期間にわたって、比較的まれな間隔で投与される。一部の患者は、人生の残りのための処置を受け続ける。治療適用において、疾患の進行が低減されるまで、もしくは終了するまで、または、患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い用量が、ときどき必要とされる。その後、該患者は、予防レジメンで投与することができる。
【０１８６】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の用量は、患者に毒性がなく、特定の患者、組成物および投与経路について所望の治療応答をなし遂げるために有効である活性成分の量を得るように変化され得る。選択される投与レベルは、使用される本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、使用される特定の化合物の排出速度、処置の期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／もしくは物質、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態および以前の病歴、ならびに医療分野でよく知られている同様の因子を含む種々の薬物動態学因子に依存する。
【０１８７】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓの「治療有効用量」は、疾患症状の重症度の減少、疾患無症状期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦痛による障害または無力の防止をもたらすことができる。
【０１８８】
本発明の組成物は、当分野で知られている１つ以上の種々の方法を使用して、１つ以上の投与経路により投与することができる。当業者によって理解されるように、投与経路および／または投与様式は、所望の結果に依存して変化し得る。本発明の可溶性タンパク質に対する投与経路は、例えば、注射または注入による、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路を含む。本明細書において使用されるフレーズ「非経口投与」は、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、関節包内、眼窩内、心内、皮内、腹腔内、眼内、経気管、皮下、皮内、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および幹内注射および注入を含むが、これらに限定されない。
【０１８９】
あるいは、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、経口経路、例えば、局所、表皮または粘膜の投与経路により、例えば、鼻腔内的に、経口的に、経膣的に、経直腸的に、舌下的にまたは局所的に投与することができる。
【０１９０】
活性成分は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤のように、タンパク質を迅速な放出に対して保護する担体と共に調製することができる。生分解性生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を使用することができる。このような製剤の製造のための多数の方法は、公開されているか、または一般的に当業者に知られている。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978参照。
【０１９１】
治療組成物は、当分野で知られている医療デバイスで投与することができる。例えば、１つの態様において、本発明の治療組成物は、無針皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３；５，３８３，８５１；５，３１２，３３５；５，０６４，４１３；４，９４１，８８０；４，７９０，８２４または４，５９６，５５６号において示されているデバイスで投与することができる。本発明において有用なよく知られているインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で薬物を分配するための埋め込み型微小注入ポンプを示す米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して薬物を投与するための治療デバイスを示す米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で薬物を輸送するための薬物注入ポンプを示す米国特許第４，４４７，２３３号；連続薬物輸送のための可変流埋め込み型注入デバイスを示す米国特許第４，４４７，２２４号；多チャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬送達系を示す米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬送達系を示す米国特許第４，４７５，１９６号を含む。多数の他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールが、当業者に知られている。
【０１９２】
１つの態様において、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、インビボで適切な分配を確実にするように処方することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性の化合物を除外する。本発明の治療化合物が（所望により）ＢＢＢを越えることを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中で製剤化され得る。リポソームを製造する方法について、例えば、米国特許第４，５２２，８１１；５，３７４，５４８；および５，３９９，３３１号参照。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送され、したがって標的薬物送達を強化する１つ以上の部分を含み得る（例えば、V.V. Ranade, 1989 J. Cline Pharmacol. 29:685参照）。
【０１９３】
本発明の使用および方法
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、インビトロおよびインビボでの診断および治療の有用性を有する。例えば、これらの分子は、種々の障害を処置、予防、または診断するために、培養下の細胞に、例えば、インビトロまたはインビボで、または対象に、例えば、インビボで投与することができる。１つの態様において、可溶性ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、別の方法で拡張を妨げる他の細胞型の存在下で、幹細胞または膵臓ベータ細胞のような他の細胞型のインビトロ拡張において使用することができる。加えて、特に、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、生物体、例えば、ヒトの生物学的サンプル由来の細胞の細胞表面で機能性ＳＩＲＰαの発現をインビトロで弱める、および定量するために使用される。市販のＳＩＲＰα抗体がＳＩＲＰβの種々のアイソフォームと交差反応し、細胞表面上のＳＩＲＰαタンパク質発現を明確に定量することを困難にさせるため、本願は有用である。したがって、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓの定量化は、診断目的のために使用し、例えば、ＳＩＲＰαタンパク質発現量と免疫疾患または癌との相関関係を評価することができ、したがって、例えば、接合ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＳＩＲＰαに対して標的化される抗体ベースの治療での処置について患者の選択（患者層化）を可能にする。
【０１９４】
該方法は、ＳＩＲＰα＋細胞が介在する自己免疫性および炎症性疾患、例えば、アレルギー性喘息または潰瘍性大腸炎を処置、予防、または診断に特に適当である。これらは、急性および慢性炎症状態、アレルギーおよびアレルギー性状態、自己免疫疾患、虚血性疾患、重度の感染症、ならびに非ヒト組織の移植（異種移植）を含む細胞、組織または臓器の移植拒絶反応を含む。該方法は、ＣＤ４７に反応性であり、ＣＤ４７または他のＳＩＲＰαリガンドへの結合を介して機能障害である活性化ＳＩＲＰβ受容体の異常体または変異体を発現する細胞が介在する自己免疫性および炎症性または悪性障害を処置、予防または診断するために特に適当である。
【０１９５】
自己免疫疾患の例は、関節炎（例えば、リウマチ性関節炎、関節炎慢性進行性関節炎および変形性関節炎）およびリウマチ性疾患、例えば、骨量減少を伴う炎症状態およびリウマチ性疾患、炎症性疼痛、脊椎関節症、例えば、強直性脊椎炎、ライター症候群、反応性関節炎、乾癬性関節炎および腸関連関節炎、過敏症（気道過敏症および皮膚過敏症の両方を含む）ならびにアレルギーを含むが、これらに限定されない。自己免疫疾患は、自己免疫性血液学的障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、純粋な赤血球貧血および特発性血小板減少症を含む）、全身性エリテマトーデス、炎症性筋肉障害、多発性軟骨炎、強皮症（スクレオドーマ(sclerodoma)）、ウェゲナー肉芽腫、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブン−ジョンソン症候群、特発性スプルー、内分泌眼症、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ブドウ膜炎（前部および後部）、乾性角結膜炎および春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎（例えば、痛風、ランゲルハンス細胞組織球増加症、特発性ネフローゼ症候群または微小変化型腎症を含むネフローゼ症候群がある、またはない）、腫瘍、多発性硬化症、皮膚および角膜の炎症性疾患、筋炎、骨のインプラントのゆるみ、代謝障害、例えば、アテローム性動脈硬化症、糖尿病および脂質異常症を含む。
【０１９６】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、喘息、気管支炎、塵肺症、肺気腫、および他の気道の閉塞性または炎症性疾患の処置、予防または改善のために有用である。
【０１９７】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、免疫系介在または炎症性筋疾患、例えば、心筋疾患(coronar myopathies)の処置、予防または改善のために有用である。
【０１９８】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、ＳＩＲＰαを発現する内皮または平滑筋系を伴う疾患の処置、予防または改善のために有用である。
【０１９９】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、ＩｇＥ−介在疾患の処置のために有用である。ＩｇＥ介在疾患は、多くの一般的な自然吸入および摂取抗原に対して免疫学的に応答する遺伝的傾向ならびにＩｇＥ抗体の継続的な生産により特徴付けられるアトピー性障害を含む。特定のアトピー性障害は、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性胃腸疾患を含む。
【０２００】
しかしながら、ＩｇＥレベルの上昇と関連する障害は、遺伝的（アトピー）病因を伴うものに限定されない。ＩｇＥ介在のようであり、本願発明の製剤で処置することができるＩｇＥレベルの上昇と関連する他の障害は、過敏症（例えば、アナフィラキシー過敏症）、湿疹、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、寄生虫症、高ＩｇＥ症候群、血管拡張性失調症、ウィスコット−アルドリッチ症候群、胸腺リンパ形成不全症、ＩｇＥ骨髄腫および移植片対宿主反応を含む。
【０２０１】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、炎症性経路が、ＳＩＲＰα＋細胞、例えば、活性化ミクログリア細胞が介在する主要神経系の急性疾患の一次治療として有用である。例えば、特定の適用は、治癒を加速し、リンパ球構造の形成および神経系の一部に対する抗体自己反応性を防止するための、脊髄損傷後の活性化ミクログリア細胞のサイレンシングであり得る。
【０２０２】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、単独の活性成分として、または、例えば、アジュバントと共に、他の薬物、例えば、免疫抑制剤または免疫調節剤または他の抗炎症剤と共に、例えば、上記疾患の処置または予防のために投与され得る。例えば、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、ＤＭＡＲＤ、例えば、金塩、スルファサラジン、抗マラリア剤、メトトレキサート、Ｄ−ペニシラミン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ミノサイクリン、レフルノミド、グルココルチコイド；カルシニューリン阻害剤、例えば、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；リンパ球再循環のモジュレーター、例えば、ＦＴＹ７２０およびＦＴＹ７２０アナログ；ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８、ＡＰ２３５７３またはＴＡＦＡ−９３；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えば、ＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロフォスファミド；アザチオプリン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾルビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスパーガリンまたはその免疫抑制性ホモログ、アナログもしくは誘導体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体；他の免疫調節化合物、例えば、ＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えば、ＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１もしくは−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤、例えば、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラスチン、ドキソルビシンまたは５−フルオロウラシル；抗ＴＮＦ剤、例えば、ＴＮＦに対するモノクローナル抗体、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、ＣＤＰ８７０、またはＴＮＦ−ＲＩもしくはＴＮＦ−ＲＩＩに対する受容体構築物、例えば、エタネルセプト、ＰＥＧ−ＴＮＦ−ＲＩ；炎症性サイトカインのブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー、例えば、アナキンラまたはＩＬ−１トラップ、ＡＡＬ１６０、ＡＣＺ  ８８５、ＩＬ−６ブロッカー；ケモカインブロッカー、例えば、プロテアーゼの阻害剤または活性化剤、例えば、メタロプロテアーゼ、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＩＬ１７抗体、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１２Ｒ抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩＬ２３Ｒ抗体、抗ＩＬ２１抗体、ＮＳＡＩＤ、例えば、アスピリン、イブプロフェン(ibuprophen)、パラセタモール、ナプロキセン、選択的Ｃｏｘ２阻害剤、組み合わせられたＣｏｘ１および２阻害剤様ジクロフェナク、または抗感染因子（一覧は、上記の薬剤に限定されない）と組み合わせて使用され得る。
【０２０３】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、特に閉塞性または炎症性気道疾患、例えば、上記のものの処置における抗炎症薬物または気管支拡張薬物と共に使用するための共治療剤として、例えば、このような薬物の治療活性の増強剤として、またはこのような薬物の必要とする用量もしくは起こりうる副作用を減少させる手段として有用である。本発明の薬剤は、固定医薬組成物中で抗炎症薬物もしくは気管支拡張薬物と混合されてもよく、または抗炎症薬物もしくは気管支拡張薬物と別々に、その前に、同時に、またはその後に投与されてもよい。このような抗炎症薬物は、ステロイド、特にグルココルチコステロイド、例えば、ブデソニド、ベクロメタゾン、フルチカゾンまたはモメタゾン、およびドーパミン受容体アゴニスト、例えば、カベルゴリン、ブロモクリプチンまたはロピニロールを含む。このような気管支拡張薬物は、抗コリンまたは抗ムスカリン性薬剤、特に臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウムおよび臭化チオトロピウムを含む。
【０２０４】
本発明の薬剤およびステロイドの組合せは、例えば、ＣＯＰＤ、または特に喘息の処置において使用され得る。本発明の薬剤および抗コリンもしくは抗ムスカリン剤またはドーパミン受容体アゴニストの組合せは、例えば、または特にＣＯＰＤの処置において使用され得る。
【０２０５】
上記にしたがって、本発明は、また、上記の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを必要とする対象、特にヒト対象に投与することを含む閉塞性または炎症性気道疾患の処置のための方法を提供する。別の局面において、本発明は、閉塞性または炎症性気道疾患の処置のための薬剤の製造における使用のための上記の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを提供する。
【０２０６】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、また、特に、慢性消化器炎症、例えば、炎症性腸疾患、例えば、クローン病および潰瘍性大腸炎の処置、予防または改善のために有用である。
【０２０７】
「慢性消化器炎症」は、比較的長い期間の発症により特徴付けられ、持続し（例えば、数日間、数週間、数ヶ月または数年から、最大で対象の最期まで）、単核細胞の浸潤または流入と関連し、自発的寛解および自発的発生の期間とさらに関連する胃腸管の粘膜の炎症を示す。したがって、慢性消化器炎症を有する対象は、長期間の監視、観察または世話を必要とすると予期され得る。このような慢性炎症を有する「慢性消化器炎症状態」（「慢性消化器炎症性疾患」としても称される）は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、環境障害により引き起こされる大腸炎（例えば、治療レジメン、例えば、化学療法、放射線療法などの投与により引き起こされるか、またはそれらと関連する（例えば、副作用）消化器炎症（例えば、大腸炎））、慢性肉芽腫症のような状態における大腸炎（Schappiら Arch Dis Child. 2001 February;1984(2):147-151）、セリアック疾患、セリアック病（グルテンとして知られるタンパク質の吸入に応答して、腸の内層が炎症を起こす遺伝性疾患）、食物アレルギー、胃炎、感染性胃炎または腸炎（例えば、ヘリコバクターピロリ感染慢性活動性胃炎）および他の感染因子与により引き起こされる消化器炎症の形態および他の同様の状態を含むが、必ずしもこれらに限定されない。
【０２０８】
本明細書において使用される「炎症性腸疾患」または「ＩＢＤ」は、すべてまたは一部の腸の炎症により特徴付けられるあらゆる種々の疾患を示す。炎症性腸疾患の例は、クローン病および潰瘍性大腸炎を含むが、これらに限定されない。本明細書におけるＩＢＤへの言及は、しばしば、明細書において、典型的な消化器炎症状態として言及されるが、限定されることを意図しない。
【０２０９】
上記にしたがって、本発明は、また、上記の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを必要とされる対象、特にヒト対象に投与することを含む、慢性消化器炎症または炎症性腸疾患、例えば、潰瘍性大腸炎の処置のための方法を提供する。別の局面において、本発明は、慢性消化器炎症または炎症性腸疾患の処置のための薬剤の製造における使用のための上記可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓを提供する。
【０２１０】
本発明は、また、白血病または他の癌の処置、予防または改善において有用である。例えば、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、急性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、膀胱癌、ランゲルハンス細胞組織球増加症の悪性形態から選択される癌の処置、予防または改善において使用することができる。
【０２１１】
ＳＩＲＰα−ＣＤ４７相互作用の調節は、造血幹細胞生着を増加させるために使用することができる（例えば、ＣＤ４７−Ｆｃ融合タンパク質の使用に関するＷＯ２００９／０４６５４１参照）。したがって、本発明、および、例えば、可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、ヒト造血幹細胞生着を増加させるために有用である。造血幹細胞生着は、造血障害または遺伝性免疫不全症、自己免疫疾患もしくは造血障害に罹患しているか、または何らかの骨髄機能廃絶処置を受けた患者の症状を処置または減少するために使用することができる。例えば、このような造血障害は、急性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミアメジャー、鎌状細胞貧血、重症複合免疫不全、ウィスコット・オールドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症および先天性代謝異常から選択される。したがって、１つの態様において、本発明は、特に、造血幹細胞生着を改善するために造血幹細胞を含む拡大した細胞集団での処置後の、急性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患ｓ、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコニ貧血、サラセミアメジャー、鎌状細胞貧血、重症複合免疫不全、ウィスコット・オールドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症および先天性代謝異常から選択される造血障害の処置における使用のための可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓに関する。
【０２１２】
また、本発明は、治療有効量の可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、および少なくとも１つの第２の薬物の共投与、例えば、同時に、または連続しての投与を含む上記定義の方法であって、該第２の薬物が、例えば、上記の、免疫抑制／免疫調節、抗炎症性化学療法または抗感染症薬物である方法を包含する。
【０２１３】
または、治療的組み合わせ、例えば、キットは、治療有効量のａ）可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、ならびにｂ）例えば、上記の、免疫抑制／免疫調節、抗炎症性化学療法または抗感染症薬物から選択される少なくとも１つの第２の物質を含む。キットは、投与のための指示書を含み得る。
【０２１４】
可溶性ＳＩＲＰα結合タンパク質またはＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓが、他の免疫抑制／免疫調節、抗炎症性化学療法または抗感染症療法と共に投与されるとき、共投与される組合せ化合物の用量は、もちろん使用される共薬物の型、処置される状態などに依存して変化する。
【０２１５】
本発明は完全に記載されており、以下の実施例および特許請求の範囲によりさらに説明されるが、これは、説明のためであり、さらに限定的であることを意味するものではない。
【図面の簡単な説明】
【０２１６】
【図１】ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの例の略図
【０２１７】
【図２】先行技術の二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）と比較した組換えＳＩＲＰα結合ＦｕｓｏｂｏｄｙのＳＩＲＰα結合活性実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを、２．２の下に記載されている固定化されたＳＩＲＰα−Ｆｃへの二価ビオチン化ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）の結合と競合する能力において、二価ＳＩＲＰα結合タンパク質と比較する。実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（三角）は、二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（黒丸）と比較して、ビオチン化ＣＤ４７−Ｆｃ（５ｎＭで使用）の結合と＞５倍以上で強く競合する。両方の競合相手の単一のＣＤ４７分子の親和性が同一であるため、これらのデータは、先行技術のＣＤ４７−Ｆｃ融合タンパク質を越えるＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの親和性の改良を証明する。
【０２１８】
【図３】細胞性ＳＩＲＰαへの組換えＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの結合活性実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを、ＳＩＲＰα依存性細胞接着を支持する能力について比較する。蛍光標識されたＵ９３７細胞は、種々の濃度の実施例＃４の固定化されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙまたは二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）に、静的条件下で３０分間接着することができる。ゆるい接着または非結合細胞は、流体せん断力により、例えば、２．３に記載されている繰り返される洗浄工程により除去される。データは、実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（三角）が、二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）（黒丸）と比較して、ＳＩＲＰα＋Ｕ９３７細胞の強い付着において＞５倍以上で強く支持する（表５）ことを示す。両方の競合相手の親和性が同一であるため、これらのデータは、先行技術のＣＤ４７−Ｆｃ融合タンパク質を越える細胞結合標的に対するＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの親和性の改良を証明する。
【０２１９】
【図４】全血中のヒトＳＩＲＰα＋単球へのＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（実施例＃４）の特異的結合および非標識ＳＩＲＰα結合タンパク質との競合  実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、例えば、ＣＤ４７を高発現する赤血球の存在下で、全血中のＣＤ１４＋単球に効率的に結合する。結合は、実施例＃４のＡｘ６４７−フルオロクロム標識されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを使用するヒト全血におけるフローサイトメトリーにより定量した（２．４における方法）。結合は、非標識ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（三角）または先行技術のＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）（黒丸）により濃度依存的に妨害される。血液サンプルを２０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰα抗体（クローン１４８）で処理し、実施例＃４のＡｘ６４７−フルオロクロム標識されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙを加えたとき、実施例＃４のＡｘ６４７−フルオロクロム標識されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ＣＤ１４＋単球と相互作用することができなかった。リンパ球ＴまたはＢ細胞への結合は、観察されなかった（示されていない）。全血中のヒトＳＩＲＰα＋単球へのＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの優れた結合は、非標識の先行技術の二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）と弱い競合（得られたＩＣ５０値が約２０−５０倍高い、表５）により表される。コントロールヒトＩｇＧ１（四角）は、ＣＤ１４＋単球へのＡｘ６４７−フルオロクロム標識されたＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙの結合に影響しなかった。
【０２２０】
【図５】実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ｐＭ有効性で、インビトロでエノサイト(onocyte)由来ヒト樹状細胞からのサイトカイン放出をサイレンシングする  ＧＭＳＣＦ／ＩＬ４で分化した単球由来樹状細胞を、実施例＃４のＳＩＲＰα結合ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはコントロールとしてヒトＩｇＧ１の存在下で一晩、ＳＡＣ粒子（黄色ブドウ球菌コワン株、０．０１％）で刺激する。実施例＃４のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙは、ｐＭ有効性で、ＴＮＦα、ＩＬ６およびＩＬ１２の上清へのサイトカイン放出を妨害した。
【０２２１】
【図６】マウス代理出産(surrogates)のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、動物を抗原誘発肺炎症の発症から保護する、ヒトアレルギー性喘息の疾患パラメーターを模倣するモデル  １００μｇ／動物のマウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）（重鎖配列番号：３１、軽鎖配列番号：３２、左グラフ）またはｍＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（重鎖配列番号：３３、軽鎖配列番号：３４、右グラフ）の２回の腹腔内投与でのマウスの処置は、コントロールと比較して、エアロゾル抗原攻撃後のＢＡＬＦ中の全細胞数ならびに好酸球（ｅｏｓ）、好中球（ｎｅｕ）およびリンパ球（ｌｙｍｐ）の数を減少させた。したがって、両方のマウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、アレルギー性喘息の発症からマウスを強力に保護した。ｎ＝グループあたりの使用された動物の数。
【０２２２】
【図７】マウス代理出産のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓは、ＴＮＢＳ−大腸炎の重症度を減少させる、ヒト大腸炎の病理学的局面を模倣するモデル  １００μｇ／動物のマウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）（重鎖配列番号：３１、軽鎖配列番号：３２）の３−４回の腹腔内投与でのマウスの処置は、体重減少により示されるＴＮＢＳにより誘発される炎症性大腸炎の重症度を統計的に有意に減少させた。ＴＮＢＳでの疾患再誘導から７日後、ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ処置動物は、ＰＢＳまたはコントロール  ＩｇＧコントロールを越える体重を維持した。したがって、マウスＳＩＲＰα結合タンパク質（ｍＣＤ４７−Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）の注射は、疾患発症の重症度を能動的に妨害する。データは、試験化合物の３または４のいずれかの連続投与での２つの異なる実験の要約である。ｎ＝グループあたりの使用された動物の数。
【実施例】
【０２２３】
実施例
１．本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓの実施例
以下の表４は、記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列をコードするＤＮＡを使用する組換え方法により生産され得る本発明のＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓの例を提供する。
【０２２４】
重鎖および／または軽鎖をコードするＤＮＡは、ＣＤ４７シグナル配列（例えば、配列番号：１０参照）のコード配列をさらに含み得る。例えば、ＣＤ４７シグナル配列は、生産細胞の外側へのＦｕｓｏｂｏｄｙの分泌を指向するために、重鎖および軽鎖のＮ−末端部分で発現される。
表４：
【表４】
2013514795.tif 000006
【表５】
2013514795.tif 000007
【表６】
2013514795.tif 000008
【表７】
2013514795.tif 000009
【０２２５】
２．親和性決定
２．１．一価のＳＩＲＰαに対する結合アッセイ（ＢｉａＣＯＲＥアッセイ）
一価のヒトモノマー状ＳＩＲＰα−ＡＰＰ  ＣＤ４７の親和性を、例えば、ＢｉａＣＯＲＥ  Ｔ１００装置を使用するＢｉａＣＯＲＥにより測定することができる。ＣＭ５チップは、標準アミン結合手段を使用してタンパク質Ａと固定される。フローセル１を、参照として役立てるためにブランク固定化する。ＳＩＲＰα結合タンパク質は、タンパク質ＡのＦｃ結合特性を介して固定される。一価の、例えば、ＡＰＰタグＳＩＲＰα  Ｖドメインタンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞において発現させる。ＡＰＰ−ＳＩＲＰαを、１：２の係数により１２回連続希釈する。開始濃度は、２５μＭ−０．５μＭである。親和性データは、参照のＡＰＰ−ＳＩＲＰα濃度系列の注入後、フローセルを測定することにより得られる。チップ表面は、５０ｍＭのクエン酸塩溶液によるそれぞれのアナライトの注入後に再生される。
【０２２６】
一価のＳＩＲＰα−ＡＰＰとの相互作用は、報告されたＳＩＲＰα（１−２μＭ、Heatherleyら 2008 Mol Cell.）と一価のＣＤ４７  Ｖドメインとの相互作用と同様の親和性を示す３μＭのＫＤとして測定されるか、または二価ＳＩＲＰα結合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ）を使用して測定される（３μＭ）。
【０２２７】
あるいは、二価組換えＳＩＲＰαへのＳＩＲＰα結合タンパク質の結合は、ＢｉａＣＯＲＥにより特徴付けることができる。該ヒトＳＩＲＰα−Ｆｃ（１０μｇ／ｍＬ、R&D systems, UK）は、それぞれＥＤＣ／ＮＨＳまたはエタノールアミンのような標準手段による表面活性化／不活性化後に、酢酸バッファーｐＨ４．５中でＣＭ５（カルボキシメチルデキストランマトリックス）ＢｉａＣＯＲＥチップ上に固定化することができる。評価は、接触時間１２０秒、解離時間２４０秒および流速５０μｌ／分により行うことができる。それぞれのアナライトの注入後、チップは、Ｇｅｎｔｌｅ溶離バッファー（ThermoScientific）で再生することができる。
【０２２８】
２．２．ＳＩＲＰαへの組換えＣＤ４７融合タンパク質結合での競合アッセイ
試験を、３８４−ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）にて行う。固定化されたヒトＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質（０．５μｇ／ｍＬ、R&D systems, UK）を、ＣＤ４７−ＥＣＤ  ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ、５ｎＭ）またはビオチン化ＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（実施例＃４、１ｎＭ）のいずれか、および種々の濃度（３０ｎＭ−０．００３ｎＭ）の非標識ＳＩＲＰα結合タンパク質または非標識ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓからなるビオチン化ＳＩＲＰα結合タンパク質の混合物とインキュベートする。ＲＴで１８時間複合体形成後、非結合タンパク質を、大規模洗浄により除去する。結合ビオチン化ＣＤ４７−融合タンパク質を、ストレプトアビジン−ユーロピウム（PerkinElmer reagents）を介して検出する。標識Ｅｕ３＋を、ＶＩＣＴＯＲ２リーダー（PerkinElmer）を使用する解離増強時間分解蛍光（ＴＲＦ）を使用して測定する。
【０２２９】
２．３．Ｕ９３７細胞を使用するプレートベースの細胞接着アッセイ
ＳＩＲＰα（ＡＴＣＣ）を発現する組織球性細胞系であるＵ９３７細胞を、標準細胞培養条件下で１０％のウシ胎児血清および抗生物質を補ったＲＰＭＩ１６４０中で増殖させる（全てInvitrogenから）。試験の前日に、細胞を１：１に分ける。細胞を回収し、ウシ血清アルブミン（BSA, SIGMA）を含むリン酸緩衝生理食塩水（PBS, SIGMA）（ＰＢＳ／ＢＳＡ）に再懸濁する。細胞は、５μｇ／ｍＬのＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Invitrogen）または等量のＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭ（Invitrogen）のような色素で２０分３７℃で標識することができる。非結合ＢＣＥＣＦ−ＡＭを洗浄工程により除去する。細胞を数え、数を０．５％のＢＳＡを補ったＲＰＭＩ  １６４０中で１×１０６細胞／ｍＬに調節する。９６ウェルプレートを、０．１ＭのＮａＨＣθ３／Ｎａ２Ｃθ３バッファー中、３μｇ／ｍｌの抗ヒトＦｃヤギＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch Laboratories）をウェル当たり６０μｌで一晩でコーティングする。プレートをＰＢＳで２回洗浄し、３０分間ＰＢＳ中の１．５％のＢＳＡで（２５０μＬ／ウェル）でブロックし、次に、種々の濃度の可溶性ＳＩＲＰα結合ＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓのようなＳＩＲＰα結合タンパク質またはＣＤ４７−ＥＣＤ  ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ、ＣＤ４７  ＥＣＤのＳｅｑ１）（ＣＤ４７−Ｆｃ）（０．０１および３０ｎＭ）とインキュベートする。ＲＴで２時間後、プレートをＰＢＳ／ＢＳＡで２回洗浄し、ＢＣＥＣＦ標識Ｕ９３７細胞（ウェルあたり１０００００細胞）を加える。３７℃で３０分インキュベーション後、Ｕ９３７細胞を、０．５％のＢＳＡを補ったＲＰＭＩ  １６４０を使用する繰返し手動または自動洗浄工程による流体せん断応力に付す。一般的に、４−５回の洗浄工程が、ゆるい接着または非結合細胞を除去するために必要である。残りのＵ９３７接着細胞の蛍光は、ＶＩＣＴＯＲ２  プレートリーダー（PerkinElmer）を使用することにより定量する。
【０２３０】
２．４．全血ヒト細胞結合アッセイ
健常者由来のヒト血液を、倫理ガイドラインを適用してＮａ−ヘパリンコートバキュテナー（BectonDickinison, BD）に回収する。血液を、９６−ウェルディープウェルポリプロピレンプレート（Costar）にアリコートし、氷上で最終０．１％ｗ／ｖのアジ化ナトリウムの存在下で種々の濃度の可溶性ＳＩＲＰα結合ＦｕｓｏｂｏｄｉｅｓのようなＳＩＲＰα結合タンパク質またはＣＤ４７−ＥＣＤ  ＩｇＧ１  Ｆｃ融合タンパク質（ＣＤ４７−Ｆｃ、ＣＤ４７  ＥＣＤのＳｅｑ１）（ＣＤ４７−Ｆｃ）とインキュベートする。フルオロクロム  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＡＸ６４７）を、標識キット（Invitrogen）を使用してＳＩＲＰα結合タンパク質に接合させることができる。ＡＸ６４７接合ＳＩＲＰα結合タンパク質、例えば、実施例＃４に記載されているＦｕｓｏｂｏｄｙを、氷上で３０分１−１０ｎＭの濃度で全血サンプルに加えることができる。最後の１５分間に、表現型細胞表面マーカーに対する濃度最適化抗体を加える：ＣＤ１４−ＰＥ（クローンＭＥＭ１８、Immunotools, Germany）、ＣＤ３  Ｐｅｒｃｐ−Ｃｙ５．５（クローンＳＫ７、BD）、ＣＤ１６  ＦＩＴＣ（クローン３Ｇ８、BD）。全血を、１０×容量のＦＡＣＳＬＹＳＩＮＧ溶液（ＢＤ）の添加およびＲＴで１０分間インキュベーションにより溶解する。サンプルを、０．５％のウシ血清アルブミン（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）を含むリン酸バッファー溶液で２回洗浄する。サンプルを、溶解後２４時間以内にＦａｃｓ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（BD）上で回収する。細胞サブセットを、単球光散乱プロフィールにしたがって、およびＣＤ１４＋およびＣＤ３−  発現によりゲートする。これらの細胞サブセットの蛍光ヒストグラムを作成し、読出した情報として中央蛍光強度を持つと統計的に評価することができる。
【０２３１】
３．炎症性サイトカインの黄色ブドウ球菌コワン１株粒子刺激放出の阻害を測定するための樹状細胞サイトカイン放出アッセイ
末梢血単球（ＣＤ１４＋）ならびに単球由来樹状細胞（ＤＣ）は、（Latourら J of Immunol, 2001: 167:2547）に記載されているとおりに製造される。慣用の（ＤＣ）は、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識抗−ＣＤ１１ｃ（Ｂ−ｌｙ６）、リネッジマーカー、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９およびＣＤ５６に対するＦＩＴＣ標識ｍＡｂおよびＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ４（ＲＰＡ−Ｔ４）の混合物を使用することにより、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ（BD Biosciences）により、ＣＤ１１ｃ＋、リネッジ(lineage)−として単離され、＞９９％の純度を達成する。ＡＰＣを、ＨＢ１０１またはＸ−ＶＩＶＯ１５無血清培地中で種々の濃度のヒトＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ（１から１００００ｐＭ）の存在下で、１／４０．０００（Pansorbin）での黄色ブドウ球菌コワン１粒子で刺激する。サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２３、ＩＬ−８およびＴＮＦ−α）放出は、２４時間または４８時間培養上清中のＥＬＩＳＡにより測定される。
【０２３２】
４．肺炎症を防止するためのＳＩＲＰα結合タンパク質の使用のための炎症性肺疾患（ＯＶＡ−喘息）のマウスモデル
メスＢＡＬＢ／ｃ（６から８週齢）を、特定の病原体未感染条件下で維持されたCharles Riverから購入する。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、０および５日目に、ヒトＩｇＧ１骨格（ｍＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ：重鎖配列番号：３４、軽鎖配列番号：３５、またはｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ：重鎖配列番号：３１、軽鎖配列番号：３２）に融合した、Ｃ１５Ｇ変異有り（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）または該変異無し（ｍＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）のマウスＣＤ４７細胞外ＩｇＳＦドメインを含む１００μｇのマウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ、またはコントロールヒトＩｇＧ１の非存在（ＰＢＳコントロール）または存在下で、１ｍｇのＩｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍ（Pierce）に吸着した１０μｇのＯＶＡの腹腔内（ＩＰ）注射により感作した。１２、１６および２０日目に、マウスを、０．５％のＯＶＡ  エアロゾル（Sigma, Grade V）で３０分間抗原投与する。最後の抗原投与から２４時間後に、マウスを殺す。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を、０．５ｍＬの生理食塩水で４回回収する。モデルの略図は、図６に記載されている。
【０２３３】
ＢＡＬＦ中の全細胞を、抗−ＣＣＲ３、抗−Ｂ２２０（R&D systems）および抗−ＣＤ３（クローン１４５−２Ｃ１１）で染色し、フローサイトメトリーにより分析した。全てのデータをＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩ（BD Biosciences）にて得た。統計分析を、対応のないスチューデントＴ検定およびノンパラメトリックなマン−ホイットニーＵ検定を使用して行った。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５。
【０２３４】
５．ＳＩＲＰα結合タンパク質の使用のための大腸炎のマウス動物モデル
トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）（２または３ｍｇ）を５０％のエタノールに溶解し、３．５Ｆカテーテルを介してオスＢａｌｂ／ｃマウス（ＷＴおよびＣＤ４７  ＫＯ）の大腸に染みこませる。コントロールマウスは、エタノール単独を与える。１．５ｍｇのＴＮＢＳマウスの滴下により、ＴＮＢＳ大腸炎を数匹の動物（図７に示されているとおり）において７日目に再誘発する。マウスを２４時間毎に計量する。マウスを１４日目に殺す。血清、腸間膜リンパ節節および大腸を、さらなる分析のために回収する。大腸を、下痢、接着、腸壁の肥厚および潰瘍の存在を考慮に入れるＷａｌｌａｃｅ基準を使用して肉眼的にスコアリングすることができる。それらは、粘膜下層の肥厚、単核細胞での粘膜下層および固有層の浸潤、粘液枯渇、陰窩構造の喪失および浮腫に基づく採点システムであるＡｍｅｈｏ基準を使用して炎症の顕微鏡的マーカーについて評価することができる（データは示されていない）。組換えマウスＳＩＲＰα結合タンパク質（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）を、ＴＮＢＳ大腸炎誘導の直前およびその後２４時間目および４８時間目および数匹の動物において７２時間目に、腹腔内に（１００μｇ／マウス）投与する。コントロールマウスに、リン酸緩衝生理食塩水単独（ＰＢＳ）またはコントロールＩｇＧ１を与える。
【０２３５】
結果
表４に記載されているＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（実施例＃４）の結合および他の機能特性は、以下の表５に示され、二価ＣＤ４７−Ｆｃ融合の特性と比較する。
表５：
【表８】
2013514795.tif 000010
【０２３６】
本発明の実施例の重鎖の機能特性は、表６に記載されている。
表６：
【表９】
2013514795.tif 000011
＊  ｈｕＣＤ４７−Ｆｕｓｏｂｏｄｙとの競合
【０２３７】
炎症性肺疾患（ＯＶＡ−喘息）のモデルにおけるＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓのインビボ有効性
ヒトおよび齧歯動物ＣＤ４７／ＳＩＲＰαタンパク質間の種間交差反応性が挙げられないため（示されていない）、マウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓを、ヒトＳＩＲＰα結合タンパク質と同様に産生した。野生型（配列番号：３３）またはＣ１５Ｇ変異（配列番号：３０）のいずれかのＣＤ４７部分（ｍＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ：重鎖配列番号：３４、軽鎖配列番号：３５、またはｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ：重鎖配列番号：３１、軽鎖配列番号：３２）を含むＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓを、哺乳動物一時的発現系においてヒトＩｇＧ融合タンパク質として産生し、標準手段により会合体非含有およびエンドトキシン非含有材料を生産するために精製した。
【０２３８】
マウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓ（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  ＦｕｓｏｂｏｄｙまたはｍＣＤ４７  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）でのマウスの処置は、アレルギー性喘息の発症からマウスを強く保護する。図６に示されるとおり、ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓのいずれかの腹腔内への２×１００μｇ／動物でのマウスの処置は、コントロールと比較して、エアロゾル抗原攻撃後の気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）における全細胞数ならびに好酸球、好中球およびリンパ球の数を強力に減少させた。対照的に、不適切な特異性を有するヒトＩｇＧ１またはＰＢＳのいずれかで処置されたコントロールグループにおいて、ＢＡＬＦへの白血球の劇症浸潤を観察した。ＢＡＬＦへのこれらの種々の白血球サブセットの流入は、一般的に、炎症性肺疾患の重症度と強く関連するマーカーと見なされる。このモデルはまた、ヒトアレルギー性喘息において見られる病理学的局面を模倣するために有用であると見なされる。これらのデータは、ａ）Ｆｕｓｏｂｏｄｙタンパク質フォーマットはインビボで活性であること、およびｂ）ＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓはインビボで強い有効性を介在すること、およびｃ）ＣＤ４７のＣ１５、例えば、通常、細胞性ＣＤ４７の膜貫通ループのＣ２３５へのジスルフィド架橋を形成するアミノ酸は（Rebresら Biol Chem 2001）インビボで強力な有効性のために必要でないことを証明する。
【０２３９】
炎症性大腸疾患（ＴＮＢＳ大腸炎）のモデルにおけるＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｉｅｓのインビボでの有効性
１００μｇ／動物のマウスＳＩＲＰα結合Ｆｕｓｏｂｏｄｙ（ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ、重鎖配列番号：３１、軽鎖配列番号：３２）の３−４回の腹腔内投与でのマウスの処置は、統計的に有意に減少した体重減少により示されるＴＮＢＳにより誘発される炎症性大腸炎の重症度を減少させた。ＴＮＢＳでの疾患再誘導から７日後、ｍＣＤ４７  Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ処置動物は、ＰＢＳまたはコントロール  ＩｇＧコントロールを越える体重を維持した。したがって、マウスＳＩＲＰα結合タンパク質（ｍＣＤ４７−Ｃ１５Ｇ  Ｆｕｓｏｂｏｄｙ）の注射は、ＴＮＢＳ大腸炎における疾患発症の重症度を能動的に妨害する。データは、試験化合物の３または４のいずれかの連続投与での２つの異なる実験の要約である。ｎ＝グループあたりの使用された動物の数．
【０２４０】
本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列
表７Ａ：本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列の簡単な説明
【表１０】
2013514795.tif 000012
【表１１】
2013514795.tif 000013
【表１２】
2013514795.tif 000014
【表１３】
2013514795.tif 000015
【表１４】
2013514795.tif 000016
【０２４１】
表７Ｂ：配列表
【表１５】
2013514795.tif 000017
【表１６】
2013514795.tif 000018
【０２４２】
【表１７】
2013514795.tif 000019
【表１８】
2013514795.tif 000020
【０２４３】
【表１９】
2013514795.tif 000021
【表２０】
2013514795.tif 000022
【０２４４】
【表２１】
2013514795.tif 000023
【表２２】
2013514795.tif 000024
【０２４５】
【表２３】
2013514795.tif 000025
【表２４】
2013514795.tif 000026
【０２４６】
【表２５】
2013514795.tif 000027
【表２６】
2013514795.tif 000028
【０２４７】
【表２７】
2013514795.tif 000029
【表２８】
2013514795.tif 000030
【０２４８】
【表２９】
2013514795.tif 000031
【表３０】
2013514795.tif 000032
【０２４９】
【表３１】
2013514795.tif 000033
【表３２】
2013514795.tif 000034
【０２５０】
【表３３】
2013514795.tif 000035
【表３４】
2013514795.tif 000036
【０２５１】
【表３５】
2013514795.tif 000037
【表３６】
2013514795.tif 000038
【０２５２】
【表３７】
2013514795.tif 000039
【表３８】
2013514795.tif 000040
【０２５３】
【表３９】
2013514795.tif 000041
【表４０】
2013514795.tif 000042
【０２５４】
【表４１】
2013514795.tif 000043
【表４２】
2013514795.tif 000044
【０２５５】
【表４３】
2013514795.tif 000045
【表４４】
2013514795.tif 000046
【０２５６】
【表４５】
2013514795.tif 000047
【表４６】
2013514795.tif 000048
【０２５７】
【表４７】
2013514795.tif 000049
【表４８】
2013514795.tif 000050
【０２５８】
【表４９】
2013514795.tif 000051
【図１】
2013514795.tif 000052
【図２】
2013514795.tif 000053
【図３】
2013514795.tif 000054
【図４】
2013514795.tif 000055
【図５】
2013514795.tif 000056
【図６】
2013514795.tif 000057
【図７】
2013514795.tif 000058
【手続補正書】
【提出日】平成24年8月16日(2012.8.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2013514795000001.app
【国際調査報告】
2013514795.tif 000059
2013514795.tif 000060
2013514795.tif 000061
2013514795.tif 000062
2013514795.tif 000063
2013514795.tif 000064
2013514795.tif 000065