(57)【要約】  本発明の開示は一般に、治療用ナノ粒子に関する。本明細書で開示される例示的なナノ粒子は、コルチコステロイド約０．１〜約５０重量％および生体適合性ポリマー約５０〜約９９重量％を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コルチコステロイド約０．１〜約５０重量％、
生体適合性ポリマー約５０〜約９９重量％を含む治療用ナノ粒子であって、
前記生体適合性ポリマーが、
ａ）ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、
ｂ）ジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、
ｃ）ａ）とポリ（乳酸）ホモポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）との組み合わせ、
ｄ）ｂ）とポリ（乳酸）ホモポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）との組み合わせ、
ｅ）１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、
ｆ）ｅ）とポリ（乳酸）ホモポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）との組み合わせからなる群から選択される治療用ナノ粒子。
【請求項２】
前記コルチコステロイドが、ブデソニド、フルオシノニド、トリアムシノロン、モメタゾン、アムシノニド、ハルシノニド、シクレソニド、ベクロメタゾンまたはその医薬的に許容されるから選択される請求項１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３】
前記治療用ナノ粒子の直径が約６０〜約２３０ｎｍである請求項１または２に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４】
前記コルチコステロイドを約１〜約９重量％含む請求項１から３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５】
前記ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約１５〜６０ｋＤａを有するポリ（乳酸）および数平均分子量約４〜約１２ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項６】
前記ジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−グリコール酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約１５〜６０ｋＤａを有すポリ（乳酸）−ｃｏ−グリコール酸および数平均分子量約４〜約１２ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項７】
前記１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約２ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項８】
前記粒子が、３７℃のリン酸緩衝液溶液に入れた場合に１時間未満で前記治療薬の約２０重量％未満を実質的に即時に放出する請求項１から７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項９】
前記生体適合性ポリマーが、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである請求項１から８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１０】
前記治療用ナノ粒子が、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約４０〜約５０重量％およびポリ（乳酸）ホモポリマー約４０〜約４９重量％を含む請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１１】
前記ポリ（乳酸）ホモポリマーが、重量平均分子量約１５〜約１３０ｋＤａを有する請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１２】
前記ポリ（乳酸）ホモポリマーが、インヘレント粘度約０．２〜約０．９を有する請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１３】
前記ポリ（乳酸）ホモポリマーが、インヘレント粘度約０．４を有する請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１４】
前記ポリ（乳酸）ホモポリマーが、重量平均分子量約１２４ｋＤａを有する請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１５】
前記ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約１６ｋＤａを有するポリ（乳酸）および数平均分子量約５ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１６】
前記ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約５０ｋＤａを有するポリ（乳酸）および数平均分子量約５ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１７】
前記ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、数平均分子量約８０ｋＤａを有するポリ（乳酸）および数平均分子量約１０ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１８】
標的化リガンドに二重結合されたジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを約０．２〜約１０重量％さらに含む請求項１から１７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１９】
コルチコステロイドまたはその医薬的に許容される塩およびジブロックポリ（乳酸）−ポリエチレングリコールまたはジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリエチレングリコールポリマー、任意にポリ（乳酸）ホモポリマーを有機溶媒と合わせて、固形分約１０〜約８０％を有する第１有機相を形成し、
前記第１有機相を第１水溶液と合わせて、粗いエマルジョンを形成し、
前記の粗いエマルジョンを乳化して、エマルジョン相を形成し、
前記エマルジョン相をクエンチして、クエンチ相を形成し、
前記クエンチ相に薬物可溶化剤を添加して、未封入治療薬の可溶化相を形成し、
前記可溶化相を濾過してナノ粒子を回収し、それによって、それぞれがコルチコステロイド約３〜約１５重量％を有する治療用ナノ粒子のスラリーを形成することによって製造される多数の治療用ナノ粒子。
【請求項２０】
濾過が、前記可溶化相を濃縮し、ダイアフィルトレートし、最後に濾過することを含む請求項１９に記載の前記の多数の治療用ナノ粒子。
【請求項２１】
喘息、変形性関節症、皮膚炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎またはクローン病を治療する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む有効量の組成物をその必要がある患者に投与することを含む方法。
【請求項２２】
ブデソニド約１〜約１５重量％、
ポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーから選択されるジブロックポリマーを含む放出制御治療用ナノ粒子であって、前記治療薬が放出制御速度で放出される放出制御治療用ナノ粒子。
【請求項２３】
前記治療薬が、患者に投与した場合に少なくとも１日またはそれ以上の期間にわたって放出される請求項２２に記載の放出制御治療用ナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、そのいずれも全体として参照により本明細書に援用される、２００９年１２月１６日出願の米国特許出願第６１／２８６，８３１号、２００９年１２月１５日出願の米国特許出願第６１／２８６，５５９号、２０１０年１０月２２日出願の米国特許出願第６１／４０５，７７８号への優先権を主張する。
【０００２】
特定の薬物（例えば、特定の組織または特定の細胞型に標的化される、または特異的な患部組織には標的化されるが、正常な組織には標的化されない）を患者に送達する、または薬物の放出を制御するシステムは長い間、有益であると認められている。例えば、作用薬を含み、かつ特定の組織または細胞型、例えば特異的な患部組織に位置付けることができる療法は、治療の必要のない体の組織における薬物の量を低減することができる。これは、薬物の細胞毒性用量が、周囲の非癌性組織を死滅させることなく癌細胞に送達されることが望まれる、癌などの状態を治療する場合に特に重要である。さらに、かかる療法は、抗癌療法において一般的な、望ましくなく、時には生命にかかわる副作用を低減するかもしれない。例えば、ナノ粒子療法は、サイズが小さいために、体内での認識を逃れ、例えば有効量の時間、安定に維持しながら、送達を標的化し、制御することが可能となる。
【０００３】
かかる治療および／または放出制御および／または標的療法を提供する療法は、有効量の薬物も送達しなければならない。有利な送達特性を有するのに、ナノ粒子のサイズを十分に小さく維持しながら、各ナノ粒子と結合した適切な量の薬物を有するナノ粒子システムを製造することは難題である。例えば、多量の治療薬をナノ粒子にローディングすることが望まれると同時に、多量すぎる薬物ローディングが用いられたナノ粒子製剤は、実際の治療に使用するにはナノ粒子が大きすぎる。さらに、例えば治療薬の迅速または即時放出を実質的に制限するために、治療用ナノ粒子を安定な状態のままにすることが望ましい。
【０００４】
したがって、癌などの疾患を治療するために、患者の副作用も低減しながら、治療的レベルの薬物を送達することができる、新規なナノ粒子製剤ならびにかかるナノ粒子および組成物を製造する方法が必要とされている。
［概要］
一態様において、本発明は、作用薬または治療薬、例えばブデソニドなどのコルチコステロイドまたはその医薬的に許容される塩、および１、２または３種の生体適合性ポリマーを含む治療用ナノ粒子を提供する。例えば、コルチコステロイド（例えば、ブデソニド）約０．１〜約５０重量％、生体適合性ポリマー約５０〜約９９重量％、例えば生体適合性ポリマー約７０〜約９９重量％を含む治療用ナノ粒子が本明細書において開示される。例えば、生体適合性ポリマーは、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー（例えばＰＬＡ−ＰＥＧ）またはジブロック（ポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸））−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー（例えばＰＬＧＡ−ＰＥＧ）とすることができ、生体適合性ポリマーは２種類以上の異なる生体適合性ポリマーを含んでもよく、治療用ナノ粒子は、ポリ（乳酸）ホモポリマーなどのホモポリマーも含むことができる。例えば、開示の治療用ナノ粒子は、コルチコステロイド約０．１〜約５０重量％、または約１〜約２０重量％；生体適合性ポリマー約５０〜約９９重量％、または約７０〜約９９重量％を含むことができ、生体適合性ポリマーは、ａ）ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ｂ）ジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ｃ）ａ）とポリ（乳酸）ホモポリマーとの組み合わせ；ｄ）ｂ）とポリ（乳酸）ホモポリマーとの組み合わせ；ｅ）１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ｆ）ｅ）とポリ（乳酸）ホモポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−（グリコール酸）との組み合わせ；からなる群から選択される。
【０００５】
開示のナノ粒子の直径は、例えば、約６０〜約２３０ｎｍ、約６０〜約１２０ｎｍ、約７０〜約１２０ｎｍ、約７０〜約１４０ｎｍまたは約８０〜約１３０ｎｍである。
【０００６】
他の実施形態において、室温または３７℃でリン酸緩衝溶液中に入れた場合に、開示の粒子は実質的に、コルチコステロイドを約２０％未満、または約４０％未満、または約５０％未満、またはさらには約６０％未満放出するかもしれない。
【０００７】
コルチコステロイドは、例えば、ブデソニド、フルオシノニド、トリアムシノロン、モメタゾン、アムシノニド、ハルシノニド、シクレソニド、ベクロメタゾン、またはその医薬的に許容される塩を含んでいてもよい。例えば、意図されるナノ粒子は、コルチコステロイド約１〜約１６重量％を含むことができる。他の実施例において、意図されるナノ粒子は、コルチコステロイドを約１〜約９重量％含み、開示の治療用ナノ粒子は、ブデソニドを約１〜約１２重量％含むことができる。
【０００８】
例えば、開示のナノ粒子は、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーである生体適合性ポリマーを含むことができる。開示のナノ粒子の一部を形成することができる、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、数平均分子量約１５〜２０ｋＤａを有するポリ（乳酸）および数平均分子量約４〜約６ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含むことができる。ジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−グリコール酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、数平均分子量約１５〜２０ｋＤａ、例えば、約１６ｋＤａを有するポリ（乳酸）−ｃｏ−グリコール酸、および数平均分子量約４〜約６ｋＤａ、約５ｋＤａを有するポリ（エチレン）グリコールを含むことができる。意図されるジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーのポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）部分は、特定の実施形態において、グリコール酸約５０モル％およびポリ（乳酸）約５０モル％を有していてもよい。
【０００９】
例示的な治療用ナノ粒子は、ジブロックポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約４０〜約５０重量％、ポリ（乳酸）ホモポリマー約４０〜約４９重量％、または約４０〜約６０重量％を含むことができる。かかるポリ（乳酸）ホモポリマーは、例えば、重量平均分子量約１５〜約１３０ｋＤａ、例えば、約１０ｋＤａを有していてもよい。
【００１０】
任意の実施形態において、開示のナノ粒子はさらに、標的化リガンドに共有結合されたジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約０．２〜約１０重量％を含むことができる。
【００１１】
複数種の開示の治療用ナノ粒子と医薬的に許容される賦形剤とを含む医薬的に許容される組成物も本明細書において開示される。例示的な医薬的に許容される賦形剤は、ショ糖などの糖を含んでいてもよい。
【００１２】
有効量の開示のナノ粒子を投与することを含む、喘息、変形性関節症、皮膚炎、炎症性腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎を治療する方法も、本明細書において開示される。
【００１３】
他の実施形態において、コルチコステロイドまたはその医薬的に許容される塩およびジブロックポリ（乳酸）−ポリエチレングリコールまたはジブロックポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリエチレングリコールポリマーおよび任意にホモポリマーを有機溶媒と合わせて、固形分約１０〜約８０％重量％または約２０〜約７０重量％を有する第１有機相を形成し；その第１有機相を第１水溶液と合わせて粗いエマルジョンを形成し；その粗いエマルジョンを乳化してエマルジョン相を形成し；そのエマルジョン相をクエンチして、クエンチ相を形成し；薬物可溶化剤をそのクエンチ相に添加して、未封入治療薬の可溶化相を形成し；可溶化相を濾過してナノ粒子を回収し、それによって、それぞれがコルチコステロイド約０．１〜約５０重量％を有する治療用ナノ粒子のスラリーを形成することによって製造される、多数の治療用ナノ粒子が本明細書で提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】開示のナノ粒子を形成するためのエマルジョンプロセスのフローチャートである。
【図２】開示のエマルジョンプロセスのフローダイヤグラムである。
【図３】クエンチ：エマルジョン（Ｑ：Ｅ）比の関数として、製造されたナノ粒子の薬物ローディングを示す。
【図４】本明細書で開示される種々のナノ粒子のブデソニドの生体外放出を示す。
【図５】本明細書で開示される種々のナノ粒子のブデソニドの生体外放出を示す。
【図６】静脈内単回投与（０．５ｍｇ／ｋｇ）後の、ブデソニドおよびブデソニドナノ粒子の薬物動態学を示す。
【図７】ブデソニド、ブデソニドＰＴＮＰおよびデキサメタゾンで処理した後のＩＢＤのモデルにおけるラットの腸の疾患スコアを示す。
【図８】ブデソニド、ブデソニドＰＴＮＰおよびデキサメタゾンで処理した後のＩＢＤのモデルにおけるラットの腸管重量を示す。
【図９】種々のナノ粒子におけるブデソニドの生体外放出を示す。
【図１０】種々のナノ粒子におけるシクレソニドの生体外放出を示す。
【図１１】種々のナノ粒子におけるジプロピオン酸ベクロメタゾンの生体外放出を示す。
【図１２】種々のナノ粒子におけるフロ酸モメタゾンの生体外放出を示す。
【００１５】
詳細な説明
本発明は一般に、作用薬または治療薬または薬物を含むポリマーナノ粒子、ならびにかかる治療用ナノ粒子を製造かつ使用する方法に関する。一般に、「ナノ粒子」とは、直径１０００ｎｍ未満、例えば約１０ｎｍ〜約２００ｎｍを有する粒子を意味する。開示の治療用ナノ粒子は、直径約６０〜約２３０ｎｍ、または約６０〜約１２０ｎｍ、または約７０〜約１３０ｎｍ、または約６０〜約１４０ｎｍ、または約７０ｎｍ〜約１４０ｎｍを有するナノ粒子を含むことができる。
【００１６】
開示のナノ粒子は、コルチコステロイド、例えばブデソニドなどの作用薬を約０．１〜約５０重量％、約０．２〜約３５重量％、約３〜約４０重量％、約５〜約３０重量％、約１〜約２０重量％、約１０〜約３０重量％、約１５〜２５重量％、またはさらには約４〜約２５重量％含むことができる。
【００１７】
本明細書で開示されるナノ粒子は、１、２、３種またはそれ以上の生体適合性および／または生分解性ポリマーを含む。例えば、意図されるナノ粒子は、生分解性ポリマー（例えば、ポリ（乳酸）およびポリエチレングリコール）を含む１種または複数種のコポリマー（例えば、ジブロックポリマー）などの１、２、３種またはそれ以上の生体適合性ポリマーを約５０〜約９９重量％、任意にホモポリマー、例えばポリ（乳酸）などの生分解性ポリマーを約０〜約５０重量％含むことができる。
【００１８】
ポリマー
一部の実施形態において、開示のナノ粒子は、ポリマーのマトリックスを含む。開示のナノ粒子は、１種または複数種のポリマー、例えばジブロックコポリマーおよび／またはモノポリマーを含むことができる。開示の治療用ナノ粒子は、ポリマーマトリックスの表面と会合し得る、ポリマーマトリックス内に封入される、ポリマーマトリックスによって囲まれる、かつ／またはポリマーマトリックス全体に分散される治療薬を含むことができる。
【００１９】
多種多様なポリマーおよびそれから粒子を形成する方法は、薬物送達の分野で公知である。一部の実施形態において、本開示内容は、少なくとも１種類のポリマー、例えば、コポリマーとすることができる第１ポリマー、例えばジブロックコポリマー、任意に、例えばホモポリマーおすることができるポリマーを有するナノ粒子に関する。
【００２０】
本発明に従って、あらゆるポリマーを使用することができる。ポリマーは天然または非天然（合成）ポリマーとすることができる。ポリマーは、ホモポリマーまたは２種類以上のモノマーを含むコポリマーとすることができる。配列に関しては、コポリマーは、ランダム、ブロックのいずれでもよく、またはランダム配列とブロック配列の組み合わせを含んでいてもよい。意図されるポリマーは生体適合性および／または生分解性とすることができる。
【００２１】
本明細書で使用される「ポリマー」という用語は、当技術分野で使用されるその通常の意味、つまり共有結合によって連結された１つまたは複数の反復単位（モノマー）を含む分子構造を示す。その反復単位はすべて同一であるか、または場合によっては、ポリマー内に存在する複数種の反復単位とすることができる。場合によっては、そのポリマーは、生物学的由来のポリマー、つまりバイオポリマーであってもよい。非制限的な例としては、ペプチドまたはタンパク質が挙げられる。場合によっては、更なる部位、例えば以下に記載の部位などの生物学的部位もポリマー中に存在するかもしれない。ポリマー内に複数種の反復単位が存在する場合、そのポリマーは「コポリマー」であると言われる。ポリマーを用いるあらゆる実施形態において、使用されるポリマーは場合によってはコポリマーであってもよいことを理解されたい。コポリマーを形成する反復単位は、あらゆる様式で配列される。例えば、ランダムな順序で、交互の順序で、またはブロックコポリマーとして、つまり、それぞれが第１反復単位（例えば、第１ブロック）を含む１つまたは複数の領域と、それぞれが第２反復単位（例えば、第２ブロック）を含む１つまたは複数の領域とを含むポリマーとして、反復単位を配列させることができる。ブロックコポリマーは、２つの（ジブロックコポリマー）、３つの（トリブロックコポリマー）、またはそれ以上の数の別々のブロックを有していてもよい。
【００２２】
開示の粒子は、一部の実施形態において、通常２つ以上のポリマーが共に共有結合することによって互いに結合している２種類以上のポリマー（本明細書に記載のポリマーなど）を示すコポリマーを含んでいてもよい。したがって、コポリマーは、互いに結合してブロックコポリマーを形成している、第１ポリマーと第２ポリマーを含み、第１ポリマーは、ブロックコポリマーの第１ブロックであり、第２ポリマーは、ブロックコポリマーの第２ブロックである。当然のことながら、当業者は、ブロックコポリマーは場合によっては、ポリマーの複数のブロックを含有してもよく、かつ本明細書で使用される「ブロックコポリマー」は、１つの第１ブロックと１つの第２ブロックのみを有するブロックコポリマーのみに制限されないことを理解されよう。例えば、ブロックコポリマーは、第１ポリマーを含む第１ブロック、第２ポリマー含む第２ブロックおよび第３ポリマーまたは第１ポリマーを含む第３ブロック等を含んでいてもよい。場合によっては、ブロックコポリマーは、任意の数の第１ポリマーの第１ブロックおよび第２ポリマーの第２ブロック（特定の場合において、第３ブロック、第４ブロック等）を含有していてもよい。さらに、一部の場合には、他のブロックコポリマーからブロックコポリマーを形成することもできることに留意されたい。例えば、第１ブロックコポリマーは、他のポリマー（ホモポリマー、バイオポリマー、他のブロックコポリマー等であってもよい）と結合し、複数種のブロックを含有する新たなブロックコポリマーを形成し、かつ／または他の部位（例えば、非ポリマー部位）に結合することができる。
【００２３】
一部の実施形態において、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、両親媒性であり、つまり親水性部分と疎水性部分、または比較的親水性の部分と比較的疎水性の部分を有する。親水性ポリマーは、一般に水を引き付けるポリマーであるかもしれず、疎水性ポリマーは、一般に水をはじくポリマーであるかもしれない。親水性または疎水性ポリマーは、例えば、ポリマーの試料を作製し、水とのその接触角（通常、ポリマーは６０度未満の接触角を有するのに対して、疎水性ポリマーは６０度を超える接触角を有する）を測定することによって同定することができる。場合によっては、２種類以上のポリマーの親水性は、互いに対して測定することができ、つまり第１ポリマーは、第２ポリマーよりも高い親水性とすることができる。例えば、第１ポリマーは、第２ポリマーよりも小さな接触角を有していてもよい。
【００２４】
一セットの実施形態において、本明細書で意図されるポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）としては、生体適合性ポリマー、つまり、例えばＴ細胞応答を介した免疫システムによる著しい炎症および／またはポリマーの急性拒絶を起こすことなく、生体被検者に挿入または注入した場合に副反応を一般に誘発しないポリマーが挙げられる。したがって、本明細書で意図される治療用粒子は、非免疫原性であってもよい。本明細書で使用される、非免疫原性という用語は、通常、循環抗体、Ｔ細胞または反応性免疫細胞を最小レベルでのみ誘発する、またはそれらを全く誘発せず、かつ個体においてそれ自体に対する免疫応答を通常誘発しない、その天然状態の内因性成長因子を意味する。
【００２５】
生体適合性とは一般に、免疫システムの少なくとも一部分による物質の急性拒絶を意味し、つまり、被検者に埋め込まれた非生体適合性物質は、被検者における免疫応答を誘発し、それは、免疫システムによる物質の拒絶が適切にコントロールできないほど激しく、被験者からその物質を除去しなければならないほどの程度であることが多い。生体適合性を決定する簡単な試験は、生体外で細胞にポリマーを曝露することである。生体適合性ポリマーは、中程度の濃度で、例えば濃度５０マイクログラム／１０6細胞にて、著しい細胞死を通常生じさせないポリマーである。例えば、生体適合性ポリマーは、線維芽細胞または上皮細胞などの細胞に曝露した場合に、かかる細胞によって貪食された、または取り込まれた場合でさえ、約２０％未満の細胞死しか生じさせない。本発明の種々の実施形態において有用となり得る生体適合性ポリマーの非制限的な例としては、ポリジオキサノン（ＰＤＯ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（グリセロールセバケート）、ポリグリコリド、ポリラクチド、ＰＬＧＡ、ポリカプロラクトン、またはこれらのポリマーおよび／または他のポリマーなどのコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。
【００２６】
特定の実施形態において、意図される生体適合性ポリマーは、生分解性であり、つまりそのポリマーは、体内などの生理学的環境内で化学的および／または生物学的に分解することができる。本明細書で使用される「生分解性ポリマー」は、細胞内に導入された場合に、細胞機構（生物学的に分解性）によって、かつ／または加水分解などの化学プロセス（化学的に分解性）によって破壊され、細胞に著しく毒性作用を及ぼすことなく、細胞が再利用または処理することができる成分が形成される、ポリマーである。一実施形態において、生分解性ポリマーおよびその分解副生成物は生体適合性とすることができる。
【００２７】
例えば、意図されるポリマーは、水にさらすと（例えば、被検者内で）同時に加水分解するポリマーであり、そのポリマーは、熱にさらすと（例えば、約３７℃の温度で）分解する。ポリマーの分解は、使用されるポリマーまたはコポリマーに応じて、様々な速度で起こるかもしれない。例えば、ポリマーの半減期（ポリマーの５０％がモノマーおよび／または他の非ポリマー部位へと分解される時点）は、そのポリマーに応じて、およそ数日、数週、数ヶ月、または数年とすることができる。そのポリマーは、例えば、酵素活性または細胞機構によって、場合によっては、例えばリゾチーム（例えば、比較的低いｐＨを有する）への曝露によって生物学的に分解される。場合によっては、ポリマーは、細胞に著しく毒性作用を及ぼすことなく、細胞が再利用または処理することができる、モノマーおよび／または他の非ポリマー部位へと破壊することができる（例えば、ポリラクチドは加水分解されて乳酸を形成し、ポリグリコリドは加水分解されてグリコール酸を形成するなど）。
【００２８】
一部の実施形態において、ポリマーは、本明細書において総称して「ＰＬＧＡ」と呼ばれる、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー、例えばポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、本明細書において「ＰＧＡ」と呼ばれる、グリコール酸単位を含むホモポリマー、および本明細書において総称して「ＰＬＡ」と呼ばれる、乳酸単位を含むホモポリマー、例えばポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドなどのポリエステルとすることができる。一部の実施形態において、例示的なポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸、ＰＥＧ化ポリマーおよびラクチドとグリコリドのコポリマー（例えば、ＰＥＧ化ＰＬＡ、ＰＥＧ化ＰＧＡ、ＰＥＧ化ＰＬＧＡおよびその誘導体）が挙げられる。一部の実施形態において、ポリエステルとしては、例えば、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）ＰＥＧ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ＰＥＧ化ポリ（カプロラクトン）、ポリリジン、ＰＥＧ化ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ＰＥＧ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびその誘導体が挙げられる。
【００２９】
一部の実施形態において、ポリマーはＰＬＧＡとすることができる。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸の生体適合性および生分解性コポリマーであり、ＰＬＧＡの様々な形態は、乳酸：グリコール酸の比によって特徴付けられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸とすることができる。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸−グリコール酸比を変化させることによって調節することができる。一部の実施形態において、本発明に従って使用されるＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５、または約１５：８５の乳酸：グリコール酸モル比によって特徴付けられる。
【００３０】
一部の実施形態において、粒子のポリマー（例えば、ＰＬＧＡブロックコポリマーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）における乳酸：グリコール酸モノマーの比は、水の取込み、治療薬の放出および／またはポリマー分解キネティクスなどの様々なパラメーターについて最適化されるように選択される。
【００３１】
一部の実施形態において、ポリマーは、１種または複数種のアクリルポリマーとすることができる。特定の実施形態において、アクリルポリマーとしては、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸ポリアクリルアミド）、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレート、および上記のポリマーのうちの１種または複数種を含む組み合わせが挙げられる。アクリルポリマーは、低含有率で第４級アンモニウム基を有する、アクリル酸およびメタクリル酸エステルの完全重合コポリマーを含むことができる。
【００３２】
一部の実施形態において、ポリマーはカチオン性ポリマーとすることができる。一般に、カチオン性ポリマーは、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその誘導体）の負に帯電した鎖を縮合および／または保護することができる。一部の実施形態において、ポリ（リジン）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）およびポリ（アミドアミン）デンドリマーなどのアミン含有ポリマーが、開示の粒子で使用されることが意図される。
【００３３】
一部の実施形態において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルとすることができる。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）およびポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）が挙げられる。ポリ（エチレングリコール）反復単位を含有するポリマー（例えば、コポリマー、例えばブロックコポリマー）は、「ＰＥＧ化ポリマー」とも呼ばれる。かかるポリマーは、炎症および／または免疫原性（つまり、免疫応答を誘発する能力）をコントロールし、かつ／またはポリ（エチレングリコール）基が存在するために、細網内皮系（ＲＥＳ）を介した循環系からのクリアランス速度を下げることができる。
【００３４】
場合によっては、例えば、生体部位との相互作用からポリマーを保護する、ポリマー表面の親水性層を形成することによって、ポリマーと生体部位との電荷相互作用を低減するために、ペグ化を用いることができる。場合によっては、ポリ（エチレングリコール）反復単位の付加は、食細胞システムによってポリマーの取込みを低減することによって、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）の血漿中半減期を増加することができ、それと同時に、細胞によるトランスフェクション／取込み効率が低減される。例えば、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）とＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）を使用して、ポリマーをアミンの末端にあるＰＥＧ基に反応させることによる、開環重合技術（ＲＯＭＰ）による等、ポリマーをＰＥＧ化する方法および技術は当業者には公知であろう。
【００３５】
ＰＥＧは、例えばＰＥＧがリガンドに結合していない場合に、末端基を含ことができる。例えば、ＰＥＧは、ヒドロキシル、メトキシまたは他のアルコキシル基、メチルまたは他のアルキル基、アリール基、カルボン酸、アミン、アミド、アセチル基、グアニジノ基またはイミダゾールにおいて末端をなす。他の意図される末端基としては、アジド、アルキン、マレイミド、アルデヒド、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、アルコキシアミン、またはチオール部位が挙げられる。
【００３６】
本明細書で開示される粒子は、ＰＥＧを含有しても、しなくてもよい。さらに、特定の実施形態は、ポリ（エステル−エーテル）を含有するコポリマー、例えばエステル結合（例えば、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ’結合）およびエーテル結合（例えば、Ｒ−Ｏ−Ｒ’結合）によって連結された反復単位を有するポリマーに指向される。本発明の一部の実施形態において、カルボン酸基を含有する加水分解性ポリマーなどの生分解性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）反復単位と結合して、ポリ（エステル−エーテル）を形成することができる。
【００３７】
一実施形態において、ポリマーの分子量は、本明細書に開示されるように有効な治療のために最適化される。例えば、ポリマーの分子量は、粒子の分解速度（生分解性ポリマーの分子量が調節される場合など）、溶解性、水の取込みおよび薬物放出キネティクスに影響を及ぼすかもしれない。ポリマーの分子量は、治療される被検者において粒子が妥当な期間（数時間から、１〜２週、３〜４週、５〜６週、７〜８週等の範囲）内に生分解するように調節される。例えば、開示の粒子は、ＰＬＡとＰＥＧのコポリマーを含み、ＰＥＧは、分子量１，０００〜２０，０００Ｄａ、例えば、５，０００〜２０，０００Ｄａ、例えば１０，０００〜２０，０００Ｄａを有し、ＰＬＡまたはＰＬＡは、分子量５，０００〜１００，０００Ｄａ、例えば２０，０００〜７０，０００Ｄａ、例えば１５，０００〜５０，０００Ｄａを有する。
【００３８】
例えば、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約１０〜約９９重量％またはポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー約２０〜約８０重量％、約４０〜約８０重量％または約３０〜約５０重量％または約７０〜約９０重量％を含む例示的な治療用ナノ粒子が、本明細書で開示される。例示的なポリ（乳酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、ポリ（乳酸）の数平均分子量約１５〜約２０ｋＤａまたは約１０〜約２５ｋＤａおよびポリ（エチレン）グリコールの数平均分子量約４〜約６ｋＤａまたは約２〜約１０ｋＤａを含むことができる。
【００３９】
開示のナノ粒子は任意に、ポリ（乳酸）またはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）（ＰＥＧ、例えばＰＬＡのホモポリマーを含まない）約１〜約５０重量％を含み、または任意に、ポリ（乳酸）またはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）約１〜約５０重量％、または約１０〜約５０重量％または約３０〜約５０重量％を含んでいてもよい。一実施形態において、開示のナノ粒子は、重量比約４０：６０〜約６０：４０、例えば、約５０：５０で２つのポリマー、例えばＰＬＡ−ＰＥＧとＰＬＡを含むことができる。
【００４０】
かかる実質的なホモポリマーのポリ（乳酸）またはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）は、重量平均分子量約１０〜約１３０ｋＤａ、例えば約２０〜約３０ｋＤａ、または約１００〜約１３０ｋＤａを有していてもよい。かかるホモポリマーのＰＬＡは、数平均分子量約５〜約９０ｋＤａ、または約５〜約１２ｋＤａ、約１５〜約３０ｋＤａ、または約６０〜約９０ｋＤａを有していてもよい。例示的なホモポリマーのＰＬＡは、数平均分子量約８０ｋＤａまたは重量平均分子量約１２４ｋＤａを有していてもよい。当技術分野で公知のように、ポリマーの分子量は、インヘレント粘度に関係する。一部の実施形態において、ホモポリマーＰＬＡは、インヘレント粘度約０．２〜約０．４、例えば約０．４を有し；他の実施形態では、ＰＬＡは、インヘレント粘度約０．６〜約０．８を有する。例示的なＰＬＧＡは、数平均分子量約８〜約１２ｋＤａを有していてもよい。
【００４１】
特定の実施形態において、開示のポリマーは、脂質に結合し、例えば末端キャップ化され、脂質末端化ＰＥＧを含んでいてもよい。以下に記述されるように、ポリマーの脂質部分は、他のポリマーとの自己集合に使用され、ナノ粒子の形成が促進される。例えば、親水性ポリマーは、疎水性ポリマーと自己集合する脂質に結合することができる。
【００４２】
例示的な脂質としては、長鎖（例えば、Ｃ8−Ｃ50）置換または非置換炭化水素などの脂肪酸が挙げられる。一部の実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ10−Ｃ20脂肪酸またはその塩とすることができる。一部の実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ15−Ｃ20脂肪酸またはその塩とすることができる。一部の実施形態において、脂肪酸は、不飽和、一価不飽和または多価不飽和とすることができる。例えば、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸のうちの１種または複数種としてもよい。一部の実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸のうちの１種または複数種とすることができる。
特定の実施形態において、その脂質は、式Ｖ：
【００４３】
2013514378.tif 000002
（式中、Ｒはそれぞれ独立してＣ1-30アルキルである）
の脂質およびその塩である。式Ｖの一実施形態において、脂質は、１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、およびその塩、例えば、ナトリウム塩であり、例えば、ＤＳＰＥは、−ＮＨ部位を介してＰＥＧに結合されるかもしれない。
【００４４】
一実施形態において、任意の小分子標的化部位が、ナノ粒子の脂質成分に結合、例えば共有結合される。例えば、治療薬と、官能基化および非官能基化ポリマーを含むポリマーマトリックスと、脂質と、低分子量標的化リガンドとを含むナノ粒子が本明細書において意図され、その標的化リガンドは、ナノ粒子の脂質成分に結合、例えば共有結合される。
【００４５】
標的化部位
任意の標的化部位、つまり生物学的実体、例えば、膜成分、細胞表面受容体、前立腺に特異的な膜抗原等と結合または会合することができる部位を含むことができるナノ粒子が本明細書において提供される。粒子の表面上に存在する標的化部位は、粒子が特定の標的化部位、例えば、腫瘍、患部、組織、臓器、細胞型等に局在化することを可能にする。次に、薬物または他のペイロード（payload）は、場合によっては、その粒子から放出され、特定の標的化部位と局所的に相互作用することが可能となる。
【００４６】
本発明の一実施形態において、標的化部位は、低分子量リガンド、例えば、低分子量ＰＳＭＡリガンドが挙げられる。例えば、標的化部分は、用いられる標的化部位に応じて、被検者の体内の腫瘍、患部、組織、臓器、細胞型等に粒子を局在化させることができる。例えば、低分子量ＰＳＭＡリガンドは、前立腺の癌細胞に局在化するかもしれない。被検者はヒトまたは非ヒト動物であってもよい。被検者の例としては、限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長類、ヒト等の哺乳動物が挙げられる。
【００４７】
意図される標的化部位は小分子を含む。特定の実施形態において、「小分子」という用語は、天然に存在しようと、人工的に作られようと、相対的に低い分子量を有し、かつタンパク質、ポリペプチド、または核酸ではない有機化合物を意味する。小分子は一般に、複数の炭素間結合を有する。特定の実施形態において、小分子は、約２０００ｇ／モル未満のサイズである。一部の実施形態において、小分子は、約１５００ｇ／モル未満または約１０００ｇ／モル未満である。一部の実施形態において、小分子は、約８００ｇ／モル未満または約５００ｇ／モル未満、例えば約１００〜約６００ｇ／モル、または約２００〜約５００ｇ／モルである。例えば、リガンドは、
2013514378.tif 000003
およびその鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオ異性体、またはラセミ化合物などの低分子量ＰＳＭＡリガンドとすることができる。
【００４８】
一部の実施形態において、前立腺癌腫瘍と関連する細胞を標的化するために使用される小分子標的部位としては、ＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤、例えば２−ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ−０３３、フェニルアルキルホスホンアミデートおよび／またはその類似体および誘導体が挙げられる。一部の実施形態において、前立腺癌腫瘍と関連する細胞を標的化するために使用される小分子標的化部位としては、チオールおよびインドールチオール誘導体、例えば２−ＭＰＰＡおよび３−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体が挙げられる。一部の実施形態において、前立腺癌腫瘍と関連する細胞を標的化するために使用される小分子標的化部位としては、ヒドロキサメート誘導体が挙げられる。一部の実施形態において、前立腺癌腫瘍と関連する細胞を標的化するために使用される小分子標的化部位としては、ＰＢＤＡベースおよび尿素ベースの阻害剤、例えばＺＪ４３、ＺＪ１１、ＺＪ１７、ＺＪ３８および／またはその類似体および誘導体、アンドロゲン受容体標的化剤（ＡＲＴＡ）、プトレッシン、スペルミン、およびスペルミジンなどのポリアミン、ＮＡＡＧペプチダーゼまたはＮＡＡＬＡＤａｓｅとしても知られるグルタミン酸カルボキシラーゼ酵素（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤が挙げられる。
【００４９】
本発明の他の実施形態において、標的化部位は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲまたはトール受容体を標的化するリガンドとすることができる。例えば、意図される標的部位としては、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、または脂質が挙げられる。例えば、標的化部位は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部位（例えば、アプタマー、例えば、Ａ１０アプタマー）とすることができる。一般に、アプタマーは、ポリペプチドなどの特定の標的に結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその類似体または誘導体）である。一部の実施形態において、標的化部位は、細胞表面受容体の天然または合成リガンド、例えば、成長因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリン等とすることができる。標的化部位は抗体とすることができ、その用語は、抗体断片、抗体の特徴的部分を含むことが意図され、単鎖標的部位は、例えば、ファージディスプレイなどの手順を用いて同定することができる。標的化部位は、約５０残基までの長さを有する標的化ペプチドまたは標的化ペプチドミメティックとすることができる。例えば、標的部位は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮまたはＡＸＹＬＺＺＬＮ（ＸおよびＺが、可変アミノ酸である）、またはその保存的変異体またはペプチドミメティックを含んでいてもよい。特定の実施形態において、標的化部位は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮまたはＡＸＹＬＺＺＬＮ（ＸおよびＺが、可変アミノ酸である）を含み、かつ２０、５０または１００残基未満の長さを有するペプチドである。コラーゲンＩＶと結合またはコラーゲンＩＶと複合体を形成し、または組織基底膜（例えば、血管の基底膜）を標的化し、標的化部位として使用することができる、ＣＲＥＫＡ（Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ）ペプチドまたはそのペプチドミメティックまたはオクタペプチドＡＸＹＬＺＺＬＮも、標的化部位ならびにペプチドまたはその保存的変異体またはペプチドミメティックとして意図される。
【００５０】
例示的な標的化部位としては、ＩＣＡＭ（細胞間接着分子、例えばＩＣＡＭ−１）を標的化するペプチドが挙げられる。
【００５１】
本明細書で開示される標的化部位は一般に、開示のポリマーまたはコポリマー（例えばＰＬＡ−ＰＥＧ）と結合し、かかるポリマー抱合体は、開示のナノ粒子の一部を形成することができる。例えば、開示の治療用ナノ粒子は任意に、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥを約０．２〜約１０重量％含んでもよく、ＰＥＧは標的化リガンドで官能基化されている。意図される治療用ナノ粒子は、例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンドまたはポリ（乳酸）−ｃｏ−ポリ（グリコール酸）−ＰＥＧ−リガンド約０．２〜約１０モル％を含むことができる。例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンドは、数平均分子量約１０〜約２０ｋＤａのＰＬＡおよび数平均分子量約４，０００〜約８、０００ＤａのＰＥＧを含むことができる。
【００５２】
ナノ粒子
開示のナノ粒子は、実質的に球状（つまり、粒子は一般に、球形であるように見える）または非球状形態を有することができる。例えば、粒子は、膨潤または収縮すると、非球状形態とすることができる。場合によっては、粒子はポリマーブレンドを含んでいてもよい。例えば、ポリマーブレンドは、ポリエチレングリコールを含む第１コポリマーおよび第２ポリマーを含むことができる。
【００５３】
開示のナノ粒子は、約１マイクロメーター未満の特有の寸法を有し、粒子のその特有の寸法は、粒子と同じ体積を有する完全な球体の直径である。例えば、粒子は、約３００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満、約１５０ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、約５０ｎｍ未満、約３０ｎｍ未満、約１０ｎｍ未満、約３ｎｍ未満、または場合によっては約１ｎｍ未満である粒子の特有の直径を有することができる。特定の実施形態において、開示のナノ粒子は、直径約６０〜約２３０ｎｍ、約７０〜約２００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１８０ｎｍ、約８０〜約１３０ｎｍ、または約８０〜約１２０ｎｍを有していてもよい。
【００５４】
一セットの実施形態おいて、粒子は、内部と表面を有し、その表面は、内部と異なる組成を有し、つまり、内部に存在するが、表面には存在しない（または、逆の場合も同様）少なくとも１つの化合物があり、かつ／または少なくとも１つの化合物が、内部および表面に異なる濃度で存在する。例えば、一実施形態において、本発明のポリマー抱合体の標的化部位（つまり低分子量リガンド）などの化合物が、粒子の内部と表面の両方に存在するかもしれないが、粒子の内部よりも表面の濃度が高い場合には、場合によっては、粒子の内部の濃度は本質的にゼロではないかもしれず、つまり粒子の内部に検出可能な量の化合物が存在する。
【００５５】
場合によっては、粒子の内部は、粒子の表面よりも疎水性である。例えば、粒子の内部は、粒子の表面に対して相対的に疎水性であり、薬物または他のペイロードも疎水性であり、粒子の相対的に疎水性の中心と容易に会合する。したがって、薬物または他のペイロードは、粒子の内部に含有されることができ、粒子は、粒子周囲の外部環境からそれを保護する（または、逆の場合も同様）。例えば、被検者に投与された粒子内に含有される薬物または他のペイロードは、被検者の体から保護され、少なくとも一定の時間、体は薬物から実質的に隔離させることができる。
【００５６】
例えば、第１非官能基化ポリマー、任意の第２非官能基化ポリマー、標的化部位を含む任意の官能基化ポリマー、および治療薬を含む治療用ポリマーナノ粒子が本明細書において開示される。特定の実施形態において、第１非官能基化ポリマーは、ＰＬＡ、ＰＬＧＡまたはＰＥＧ、またはそのコポリマー、例えばジブロックコポリマーＰＬＡ−ＰＥＧである。例えば、例示的なナノ粒子は、密度約０．０６５ｇ／ｃｍ3、または約０．０１〜約０．１０ｇ／ｃｍ3を有するＰＥＧコロナを有していてもよい。
【００５７】
開示のナノ粒子は、例えばサッカリド、例えば糖を含有する溶液中で少なくとも約３日間、少なくとも約４日間または少なくとも約５日間、室温または２５℃にて安定である。
【００５８】
一部の実施形態において、開示のナノ粒子は、薬物放出速度を増加する脂肪アルコールを含んでいてもよい。例えば、開示のナノ粒子は、セチルアルコール、オクタノール、ステアリルアルコール、アラキジルアルコール、ドコサノール、またはオクタソナール（octasonal）などのＣ8−Ｃ30アルコールを含むことができる。
【００５９】
ナノ粒子は放出制御特性を有し、例えば、ある量の作用薬を患者に、例えば患者の特異的な部位に、長時間にわたって、例えば１日、１週間、またはそれ以上にわたって送達することができる。一部の実施形態において、例えば、室温および／または３７℃でリン酸緩衝溶液中に入れた場合に、開示のナノ粒子は実質的に即時に、作用薬（例えば、ブデソニド）を約２％未満、または約４％未満、または約５％未満、またはさらには約１０％未満放出するかもしれない（例えば、約１〜約３０分間にわたって）。一実施形態において、３７℃でリン酸緩衝溶液中に入れた場合に、開示のナノ粒子は実質的に即時に、１時間未満で治療薬を約２０％未満放出する。
【００６０】
他の実施形態において、例えば室温または３７℃でリン酸緩衝溶液中に入れた場合に、開示のナノ粒子は、２日間またはそれ以上の間、約２０％未満、約３０％未満、約４０％未満、約５０％未満、または６０％未満（またはそれ以上）を放出することができる。
【００６１】
一実施形態において、本発明は、１）ポリマーマトリックスと、２）ポリマーマトリックスを取り囲む、またはポリマーマトリックス中に分散され、粒子に対して連続または非連続シェルを形成する、両親媒性化合物または層とを含む。両親媒性層は、ナノ粒子中への水の浸透を低減し、それによって、薬物封入効率が高められ、薬物放出が遅くなる。さらに、これらの両親媒性層保護ナノ粒子は、適切な時点で封入薬物およびポリマーを放出することによって治療的利点を提供する。
【００６２】
本明細書で使用される「両親媒性」という用語は、分子が極性部分と非極性部分の両方を有する特性を意味する。両親媒性化合物は、長い疎水性テールに結合した極性ヘッドを有する場合が多い。一部の実施形態において、極性部分は、水に可溶性であるが、非極性部分は水に不溶性である。さらに、極性部分は、形式正電荷または形式負電荷のいずれかを有していてもよい。あるいは、極性部分は、形式正電荷および負電荷の両方を有し、かつ両性イオンまたは分子内塩とすることができる。例示的な両親媒性化合物としては、例えば、以下の：天然由来脂質、界面活性剤または親水性と疎水性部位の両方を有する合成化合物のうちの１種または複数種が挙げられる。
【００６３】
両親媒性化合物の具体的な例としては、限定されないが、０．０１〜６０（脂質（重量）／ポリマー（重量））、最も好ましくは０．１〜３０（脂質（重量）／ポリマー（重量））の比で組み込まれる、１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、およびジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）などのリン脂質が挙げられる。使用することができるリン脂質としては、限定されないが、ホスファチジン酸、飽和脂質と不飽和脂質の両方を有するホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジル誘導体、カルジオリピンおよびβ−アシル−ｙ−アルキルリン脂質が挙げられる。リン脂質の例としては、限定されないが、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、ジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）などのホスファチジルコリン；およびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンまたは１‐ヘキサデシル‐２‐パルミトイルグリセロホスホエタノールアミンなどのホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。不斉アシル鎖を有する合成リン脂質（例えば、炭素６個の一方のアシル鎖と炭素１２個のもう一方のアシル鎖を有する）も使用することができる。
特定の実施形態において、両親媒性成分は、レシチンおよび／または特にホスファチジルコリンを含む。
【００６４】
ナノ粒子の作製
本発明の他の態様は、開示のナノ粒子を製造するシステムおよび方法に関する。一部の実施形態において、２種類以上の異なるポリマー（例えば、ジブロックコポリマーなどのコポリマーおよびホモポリマー）を使用して、粒子の特性をコントロールすることができる。
【００６５】
特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、高い量の封入治療薬を有する、例えばコルチコステロイドを約０．１〜約５０重量％、または約１〜約４０重量％または約１〜約３０重量％、例えば約１０〜約２５重量％または約５〜約２０重量％含むことができるナノ粒子を形成する。
【００６６】
一実施形態において、図１および２に示されるプロセスなどのナノエマルジョンプロセスが提供される。例えば、治療薬、第１ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）および第２ポリマー（例えば、（ＰＬ（Ｇ）ＡまたはＰＬＡ）を有機溶液と合わせて、第１有機相が形成される。かかる第１相は、固形分約５〜約９０重量％、例えば約５〜約８０重量％、または固形分約１０〜約４０重量％、例えば固形分約１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、または８０重量％を含むことができる。固形分は一般に、ポリマー（１種または複数種）と活性物質に対する重量％を意味する。第１有機相を第１水溶液と合わせて、粗いエマルジョンが形成される。有機溶液としては、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０等またはその組み合わせが挙げられる。一実施形態において、有機相は、ベンジルアルコール、酢酸エチルおよびその組み合わせが挙げられる。その粗いエマルジョンは、固形分約１〜６０重量％、例えば、約５〜４０重量％とすることができる。水溶液は、任意に、コール酸ナトリウム、酢酸エチルおよびベンジルアルコールのうちの１種または複数種と組み合わされた水であってもよい。
【００６７】
例えば、油相または有機相に、非溶媒（水）と部分的にのみ混和性である溶媒を使用してもよい。したがって、十分に低い比率で混合した場合、かつ／または有機溶媒で予め飽和された水を使用した場合、油相は液状のままである。油相は、水溶液中に乳化され、例えば、ホモジナイザーまたは超音波処理器などの高エネルギー分散システムを使用して、液滴として、ナノ粒子へと剪断することができる。別名「水相」として知られるエマルジョンの水性部分は、コール酸ナトリウムからなり、かつ酢酸エチルおよびベンジルアルコールで予め飽和されている界面活性剤溶液とすることができる。
【００６８】
エマルジョン相を形成するための粗いエマルジョンの乳化は、１または２つの乳化段階で行われる。例えば、最初のエマルジョンを調製し、次いで乳化し、微細エマルジョンが形成される。その最初のエマルジョンは、例えば、簡単な混合、高圧ホモジナイザー、プローブ超音波処理器、撹拌子またはローターステーター・ホモジナイザーを用いて形成することができる。その最初のエマルジョンは、例えばプローブ超音波処理器または高圧ホモジナイザーを使用して、例えばホモジナイザーを１、２、３回またはそれ以上の回数、操作することによって、微細エマルジョンへと形成することができる。例えば、高圧ホモジナイザーを使用する場合、使用される圧力は、約４０００〜約８０００ｐｓｉまたは約４０００〜約５０００ｐｓｉ、例えば４０００または５０００ｐｓｉとすることができる。
【００６９】
溶媒の抽出を完了し、粒子を固化するために、溶媒の蒸発または希釈のいずれかが必要となる場合がある。抽出のキネティクスをより良くコントロールし、プロセスをさらに拡張可能にするには、水性クエンチによる溶媒希釈を用いることができる。例えば、有機溶媒のすべてを溶解するのに十分な濃度までエマルジョンジョンを冷水中に希釈し、クエンチ相を形成することができる。クエンチは、少なくとも部分的に温度約５℃以下で行われる。例えば、クエンチに使用される水は、室温より低い（例えば、約０〜約１０℃、または約０〜約５℃）温度である。
【００７０】
一部の実施形態において、治療薬のすべてが、この段階で粒子に封入されるわけではなく、薬物可溶化剤がクエンチ相に添加され、可溶化相が形成される。薬物可溶化剤は、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、ドデシル硫酸ナトリウム、またはコール酸ナトリウムである。例えば、Ｔｗｅｅｎ８０をクエンチされたナノ粒子懸濁液に添加して、遊離薬物を可溶化し、薬物結晶の形成を防ぐことができる。一部の実施形態において、薬物可溶化剤と治療薬の比は、約１００：１〜約１０：１である。
【００７１】
可溶化相を濾過して、ナノ粒子を回収してもよい。例えば、限外濾過膜を使用して、ナノ粒子懸濁液を濃縮し、有機溶媒、遊離薬物および他の加工助剤（界面活性剤）をかなり除去することができる。例示的な濾過は、接線フロー濾過システムを用いて行われる。例えば、溶質、ミセル、および有機溶媒を通過させると同時に、ナノ粒子を保持するのに適した孔径を有する膜を使用することによって、ナノ粒子を選択的に分離することができる。分画分子量約３００〜５００ｋＤａ（約５〜２５ｎｍ）を有する例示的な膜を使用することができる。
【００７２】
ダイアフィルトレーションは、一定容積アプローチを用いて行われ、懸濁液から濾液が除去されるのと同じ速度でダイア濾液（diafiltrate）（冷たい脱イオン水、例えば、約０〜約５℃、または０〜約１０℃）が供給懸濁液に添加されることを意味する。一部の実施形態において、濾過は、第１温度約０〜約５℃または０〜約１０℃、および第２温度約２０〜約３０℃または１５〜約３５℃を用いた第１濾過を含むことができる。例えば、濾過は、約０〜約５℃にて約１〜約６のダイア容積（diavolume）を処理すること、および約２０〜約３０℃にて少なくとも１つのダイア容積（例えば、約１〜約３または約１〜２のダイア容積）を処理することを含むことができる。
【００７３】
ナノ粒子懸濁液を精製し、濃縮した後、例えば、約０．２μｍのデプスプレフィルターを用いて、１、２、またはそれ以上の滅菌フィルターおよび／またはデプスフィルターに粒子を通す。
【００７４】
ナノ粒子を製造する例示的な実施形態において、コルチコステロイドとポリマー（ホモポリマー、およびコポリマー）との混合物で構成される有機相が形成される。有機相は、約１：５の比（油相：水相）で水相と混合され、水相は、界面活性剤と、任意に溶解された溶媒とで構成される。単に混合して、またはローターステーター・ホモジナイザーを使用して、２つの相を合わせることによって、最初のエマルジョンが形成される。次いで、高圧ホモジナイザーを使用して、最初のエマルジョンが微細エマルジョンへと形成される。次いで、かかる微細エマルジョンは、混合しながら脱イオン水に添加することによってクエンチされる。クエンチ：エマルジョンの比は約８．５：１である。次いで、Ｔｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）の溶液をクエンチに添加し、全体でＴｗｅｅｎ約２％が達成され、これは、未封入の遊離薬物を溶解する役割を果たす。次いで、遠心分離または限外濾過／ダイアフィルトレーションのいずれかによって、形成されたナノ粒子が単離される。
【００７５】
治療薬
本発明に従って、例えば、治療薬（例えば抗癌剤）、診断剤（例えば造影剤；放射性核種；および蛍光、発光、および磁性部位）、予防薬（例えばワクチン）および／または栄養補助剤（例えばビタミン、ミネラル等）を含むいずれかの作用物質が、開示のナノ粒子によって送達される。本発明に従って送達される例示的な作用物質としては、限定されないが、小分子（例えば細胞毒性剤）、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉおよびｍｉＲＮＡ剤）、タンパク質（例えば、抗体）、ペプチド、脂質、炭水化物、ホルモン、金属、放射性元素および化合物、薬物、ワクチン、免疫剤等および／またはその組み合わせが挙げられる。一部の実施形態において、送達される作用物質は、癌の治療に有用な作用物質（例えば、抗腫瘍薬）である。
【００７６】
特定の実施形態において、その薬物は、放出制御様式で粒子から放出され、特定の患者の部位（例えば、腫瘍）と局所的に相互作用することが可能となる。「放出制御」という用語は一般に、選択された部位での、または制御可能な速度、間隔および／または量での物質（例えば、薬物）の放出を包含することを意味する。放出制御は、必ずしもそれに限定されないが、実質的に連続的な送達、パターン化された送達（例えば、規則的または不規則的な時間間隔によって中断される時間にわたる断続的な送達）および選択物質のボーラス送達（例えば、物質が比較的短時間にわたって（例えば、数秒または数分）投与される場合に所定の、別々の量として）を包含する。
【００７７】
作用薬または薬物は、ブデソニド、フルオシノニド、トリアムシノロン、モメタゾン、アムシノニド、ハルシノニド、シクレソニド、ベクロメタゾンなどのコルチコステロイド、またはその医薬的に許容される塩であってもよい。他の意図されるコルチコステロイドとしては、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオコルトロン、フルプレドニデン、クロベタゾール−１７−プロピオネート、プレドニカルベートまたはその医薬的に許容される塩が挙げられる。
【００７８】
一実施形態において、作用薬は例えば、開示のナノ粒子の一部を形成する開示の疎水性ポリマーに結合してもよく（または、結合しなくてもよい）、例えば作用薬は、ＰＬＡまたはＰＧＬＡに、またはＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧなどのコポリマーのＰＬＡまたはＰＬＧＡ部分部分に結合（例えば、直接、または−ＮＨ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−を含む連結部位などの連結部位を介して、共有結合）することができる。
【００７９】
医薬製剤
本明細書で開示されるナノ粒子を医薬的に許容される担体と合わせて、医薬組成物を形成することができる。当業者には理解されるように、担体は、以下に記載の投与経路、標的組織の位置、送達される薬物、薬物送達の時間経過等に基づいて選択される。
【００８０】
医薬組成物および本明細書で開示される粒子は、経口的経路および非経口的経路などの当技術分野で公知の手段によって患者に投与される。本明細書で使用される「患者」という用語は、ヒトだけではなく、例えば、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、および魚などの非ヒトも意味する。例えば、非ヒトは、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類、またはブタ）が挙げられる。特定の実施形態において、非経口的経路は、消化管で見られる消化酵素との接触が避けられることから望ましい。かかる実施形態に従って、本発明の組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下または筋肉内、腹腔内注射）によって、経直腸、経膣、局所投与（粉末、クリーム、軟膏または点滴剤として）によってまたは吸入（スプレーとして）によって投与することができる。
【００８１】
特定の実施形態において、開示内容のナノ粒子は、その必要がある被検者に、例えば静脈内点滴または注射によって全身投与される。
注射可能な製剤、例えば、注射可能な滅菌水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術に従って製剤化される。注射可能な滅菌製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の注射可能な滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョンであってもよい。用いることができる許容可能な賦形剤および溶媒の中では、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および塩化ナトリウム等張溶液が挙げられる。さらに、滅菌固定油が、溶媒または懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドなどのブランド固定油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射可能な製剤で使用される。一実施形態において、本発明の抱合体は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム１％（ｗ／ｖ）、ＴＷＥＥＮ（商標）８０  ０．１％（ｖ／ｖ）を含む担体液体に懸濁される。注射可能な製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または使用前に滅菌水または他の注射可能な滅菌媒体に溶解または分散することができる滅菌固形組成物の形で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。
【００８２】
経口投与用の固形剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が挙げられる。かかる固形剤形において、封入されたまたは未封入の抱合体を少なくとも１種類の医薬的に許容される不活性賦形剤または担体、例えばクエン酸ナトリウムまたはケイ酸二カルシウムおよび／または（ａ）デンプン、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、ショ糖、およびアカシアなどの結合剤、（ｃ）グリセロールなどの湿潤剤（humectant）、（ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤、（ｆ）第４級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤（wetting agent）、（ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤および（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびその混合物などの滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合には、その剤形は緩衝剤を含んでいてもよい。
【００８３】
開示のナノ粒子は、投薬を容易にするため、かつ投薬量を均一にするために、投薬単位形態で製剤化される。本明細書で使用される「投薬単位形態」という表現は、治療される患者に適したナノ粒子の物理的に別々の単位を意味する。あらゆるナノ粒子に関して、治療上有効な用量が、細胞培養アッセイにおいて、または動物モデル、通常マウス、ウサギ、イヌまたはブタにおいて最初に推定される。動物モデルを使用して、望ましい濃度範囲および投与経路を得ることもできる。次いで、かかる情報を用いて、ヒトに投与するのに有用な用量および経路を決定することができる。ナノ粒子の治療有効性および毒性、例えば、ＥＤ50（この用量は、個体数の５０％に治療上有効である）およびＬＤ50（この用量は、個体数の５０％において致死量である）は、細胞培養または実験動物における標準的製薬手順によって決定することができる。毒性作用と治療効果と用量比が治療指数であり、ＬＤ50／ＥＤ50の比として表される。大きな治療指数を示す医薬組成物が、一部の実施形態において有用である。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータが、ヒトに使用される、ある範囲の投薬量を配合するのに使用される。
【００８４】
例示的な実施形態において、治療薬および医薬的に許容される賦形剤をそれぞれが含む多数のナノ粒子を含む医薬組成物が開示される。
一部の実施形態において、本明細書で開示されるナノ粒子を含む凍結に適した組成物が企図され、凍結に適した溶液、例えば、糖（例えば、ショ糖）溶液がナノ粒子懸濁液に添加される。ショ糖は、例えば、凍結保護物質として作用し、凍結した場合に粒子が凝集するのを防ぐ。例えば、多数の開示のナノ粒子、ショ糖、および水を含むナノ粒子製剤が本明細書で提供され；ナノ粒子／ショ糖／水は約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％（ｗ／ｗ／ｗ）で存在する。
【００８５】
治療方法
一部の実施形態において、本明細書で開示される治療用粒子を用いて、疾患、障害および／または病状の１つもしくは複数の症状もしくは特徴を治療、緩和、寛解、軽減し、発症を遅らせ、進行を抑制し、重症度を軽減し、かつ／または発生率を低下させることができる。例えば、ブデソニドなどのコルチコステロイドを含む開示の治療用粒子を使用して、喘息、変形性関節症、皮膚炎、および炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、および／またはクローン病などの炎症性疾患を治療することができる。結腸癌などの癌の治療も、本明細書において意図される。
【００８６】
炎症性疾患を治療するための開示の方法は、所望の結果を達成するのに必要な量および時間で、その必要のある被検者に、治療有効量の開示の治療用粒子を投与することを含むことができる。本発明の特定の実施形態において、「治療有効量」とは、例えば、治療される炎症性疾患の１つまたは複数の症状もしくは特徴を治療、緩和、寛解、軽減し、発症を遅らせ、進行を抑制し、重症度を軽減し、かつ／または発生率を低下させるのに有効な量である。
【００８７】
健康な個体（つまり、炎症性疾患の症状を示さない被検者）に、治療有効量の開示の治療用粒子を投与することを含む治療プロトコルも本明細書で提供される。例えば、健康な個体；リスクのある個体（例えば、炎症性疾患の発症と関連する１つまたは複数の遺伝的突然変異を保有する患者；炎症性疾患の発症と関連する遺伝的多型を保有する患者）を、癌の発症および／または炎症症状の開始前に、本発明の標的化粒子で免疫化することができる。
【実施例】
【００８８】
ここで、本発明が一般に説明され、本発明の特定の態様および実施形態を単に説明する目的で含まれ、かつ決して本発明を制限することを意図するものではない、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されよう。
【００８９】
実施例１  ＰＬＡ−ＰＥＧの製造
この合成は、マクロ開始剤としてのα−ヒドロキシ−ω−メトキシポリ（エチレングリコール）とＤ，Ｌ−ラクチドとの開環重合によって達成され、以下に示されるように触媒としてスズ（ＩＩ）２−エチルヘキサノエートを使用して高温にて行われる（ＰＥＧ  Ｍｎ約５，０００Ｄａ；ＰＬＡ  Ｍｎ約１６，０００Ｄａ；ＰＥＧ−ＰＬＡ  Ｍｎ約２１，０００Ｄａ）。
2013514378.tif 000004
ポリマーは、ジクロロメタンにポリマーを溶解し、ヘキサンとジエチルエーテルの混合物中でそれを沈殿させることによって精製される。この段階から回収されるポリマーはオーブンで乾燥させるべきである。
【００９０】
実施例２  ナノ粒子の製造
別段の指定がない限り、以下のようにすべてのブデソニドバッチを製造した。薬物およびポリマー（１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ）成分を油相有機溶媒システム、一般に酢酸エチル（ＥＡ）７０％およびベンジルアルコール（ＢＡ）３０％に固形分２０または３０重量％で溶解した。水相は主に、界面活性剤としてのコール酸ナトリウム（ＳＣ）と共に、ベンジルアルコール２％および酢酸エチル４％で予め飽和された水からなる。油相：水相比１：５または１：１０にてローターステーター均質化の下で、油相を水相に加えることによって、粗いＯ／Ｗ型エマルジョンを調製した。１００μｍＺ相互作用チャンバを介して９０００ｐｓｉにてマイクロフルイディクス高圧ホモジナイザー（一般にＭ１１０Ｓ  ｐｎｅｕｍａｔｉｃ）を通して、その粗いエマルジョンを処理することによって、微細エマルジョンを調製した。次いで、クエンチ：エマルジョン比１０：１または５：１にて、エマルジョンを脱イオン水クエンチ中にクエンチした。次いで、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）をプロセス可溶化剤として添加し、未封入薬物を可溶化した。続いて、限外濾過に続いてダイアフィルトレーションでバッチを処理し、溶媒、未封入薬物および可溶化剤を除去した。このプロセスを図１および２に図示する。
【００９１】
Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＤＬＳおよび／またはＨｏｒｉｂａレーザー回折によって、粒径測定を行った。薬物ローディングを決定するために、スラリー試料をＨＰＬＣおよび［固形分］分析にかけた。次いで、凍結前に、スラリー保持物（retain）をショ糖で１０％に希釈した。別段の指定がない限り、記載のすべての比は重量に基づく。
未封入薬物を除去するために、クエンチ後にＴｗｅｅｎ８０を使用してもよい。
【００９２】
実施例３−生体外放出
生体外放出方法を用いて、周囲条件および３７℃条件の両方でナノ粒子からの初期のバースト段階放出を決定する。ＡＰＩのためにナノ粒子を沈降条件に置き、水浴中で混合する。放出薬物および封入薬物は、超遠心機を用いて分離される。
【００９３】
透析システムは以下のとおりである：３００ｋＤａ  ＭＷＣＯ透析装置の内部チューブに、脱イオン水中のブデソニドナノ粒子のスラリー（固形濃度２．５ｍｇ／ｍＬに相当する、ブデソニドＰＬＧＡ／ＰＬＡナノ粒子約２５０μｇ／ｍＬ）３ｍＬをピペットで入れる。ナノ粒子をこの媒体に懸濁する。放出媒体（ＰＢＳ中ヒドロキシルβシクロデキストリン２．５％）１３０ｍｌを含むガラス瓶に、透析装置を入れ、振盪機を使用してそれを１５０ｒｐｍで連続して攪拌し、膜／外部溶液界面での未攪拌の水層の形成を防ぐ。所定の時点で、外部溶液（透析液）から試料のアリコート（１ｍＬ）を取り出し、ＨＰＬＣによってブデソニド濃度を分析した。
【００９４】
代替方法としては、放出薬物および封入薬物は、超遠心機を用いて分離される。
遠心システムを以下のように実施する：放出媒体（１×ＰＢＳ中ヒドロキシルβシクロデキストリン２．５％）１３０ｍｌを含むガラス瓶に、脱イオン水中のブデソニドナノ粒子のスラリー（ブデソニドＰＬＧＡ／ＰＬＡナノ粒子約２５０μｇ／ｍＬ）３ｍＬを入れ、振盪機を使用してそれを１５０ｒｐｍで連続して攪拌する。所定の時点で、試料のアリコート（４ｍＬ）を取り出す。試料を２３６，０００ｇで６０分間遠心分離し、上清をブデソニド含有量についてアッセイし、放出されたブデソニドを測定する。
【００９５】
実施例４  粒径分析
２つの技術、動的光散乱（ＤＬＳ）およびレーザー回折（ＬＤ）によって、粒径を分析する。９０度で散乱される６６０ｎｍレーザーを使用して、希釈水性懸濁液中で２５℃にてＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＺｅｔａＰａｌｓ装置を使用して、ＤＬＳを行う。９０度で散乱される、６３３ｎｍのＨｅＮｅレーザーおよび４０５ｎｍのＬＥＤの両方を使用して、希釈水性懸濁液中でＨｏｒｉｂａ  ＬＳ９５０装置でレーザー回折を行い、Ｍｉｅ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌを使用して解析した。代替方法としては、Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ  ＳＰＯＳを使用して粒径を分析する。
【００９６】
実施例５
以下のパラメーターを変化させることによって、Ｑ：Ｅ比を変化させて（５：１、１５：１および３０：１）、初期ブデソニドを１０％に低減することによって「固形分」を３０％に増加して、界面活性剤を０．５％に低減することによって粒径を増加して、様々な薬物ローディングを有するナノ粒子を作製した。
【００９７】
固形分３０％、薬物１０％で単一のエマルジョンを生成し、Ｑ：Ｅ比５：１、１５：１および３０：１にてエマルジョンを３つの異なるクエンチに分割した。粒径は１３７ｎｍであり、薬物ローディングは３．４％〜４％の範囲であった。図３は、Ｑ：Ｅ比の関数としてナノ粒子の薬物ローディングを示す。薬物ローディングの増加は、［固形分］および粒径の増加によるものであり、Ｑ：Ｅ比の変化は、薬物ローディングに対して有意な影響を及ぼさないように思われた。
【００９８】
実施例２の製剤およびプロセスを用いて、固形分３０％を用いて、スケールアップのために１０ｇバッチを調製し、１０％マイクロフルイディクスＭ１１０ＥＨ電気高圧ホモジナイザーを使用して、２００ｕｍＺチャンバを用いて９００ｐｓｉにてこのバッチを製造した。粒径は１１３ｎｍであり、薬物ローディングは３．８％（バッチ５５−４０，対照）であった。
【００９９】
実施例６  ナノ粒子
実施例２の基本手順および以下のパラメーターを用いて、ナノ粒子の種々のバッチを調製した。
固形分４０％で中ＭＷのＰＬＡ（ＩＶ（インヘレント粘度）＝０．３）を有する１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号５２−１９８
固形分４０％、薬物１０％を有し、酢酸エチル／ベンジルアルコール（６０／４０）を使用した１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号５８−２７−１
固形分４０％、薬物５％を有する１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号５８−２７−２
固形分４０％で高ＭＷのＰＬＡ（ＩＶ＝０．６〜０．８）を有する１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号４１−１７１−Ａ
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２ｋ）を有する高ＭＷのＰＬＡ（ＩＶ＝０．６〜０．８）：バッチ番号４１−１７１−Ｂ＆６１−８−Ｂ
固形分７５％で高ＭＷのＰＬＡ（ＩＶ＝０．６〜０．８）を有する１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号４１−１７６
固形分７５％および５０％でドープされた高ＭＷのＰＬＡ（ＩＶ＝０．６〜０．８）を有する１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号４１−１８３−Ａ＆Ｂ
インヘレント粘度０．３を有する、中ＭＷのＰＬＡは、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ（Ｌａｋｅｓｈｏｒｅ（ＬＳ）としても知られる）から入手した。１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ（バッチ４１−１７６）またはＰｏｌｙｍｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅ（バッチ４１−１８３）から入手した。Ｍn８０ｋＤａ、Ｍw１２４ｋＤａを有する高ＭＷのＰＬＡは、Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓから入手した。
【０１００】
表Ａは、ナノ粒子バッチのサイズおよび薬物ローディングを示す。
【表Ａ】
2013514378.tif 000005
各バッチの生体外放出を図４に示す。注：１時間の時点でのバッチ４１−１７１−Ａは、遠心されていない試料の１つによって生じたアウトライヤーであり、極端に低い読み取り値である。バッチ４１−１７１−Ｂ（脂質製剤）と４１−１８３−Ａ（高ＭＷのＰＬＡ）のどちらも、２時間の時点で５０％以下の薬物放出を示し、他の製剤は２時間以内に７０〜１００％を放出していた。
【０１０１】
実施例７  動物研究用のバッチ
１０ｇバッチを調製し、バッチ４１−１７６および４１−１８３−Ａで見られる薬物ローディングおよび放出を確認しただけでなく、動物研究用の材料も得た。粒径は１８３ｎｍであり、薬物ローディングは５．０３％であった。水相［界面活性剤］を除いては、製剤およびプロセスのパラメーターを直線的に倍率変更した。以下の表Ｂは、バッチ間の主要な差を列挙する。
【表Ｂ】
2013514378.tif 000006
ＰＫ研究のために、１０ｇバッチ、バッチ番号６２−３０を選択し、薬物放出について最初に試験して、図５に示すように、その放出が４１−１７６および４１−１８３−Ａに類似していることを確認した。
【０１０２】
実施例８  ラット研究：薬物動態学
０時点にて、ラット（頚静脈にカニューレが挿入された雄のＳＤラット、約３００ｇ）に、ブデソニドまたはブデソニド封入受動的標的化ナノ粒子（ＰＴＮＰ）（実施例７で製造された）を０．５ｍｇ／ｋｇで単回静脈内投与した。投与後の様々な時点で、頚静脈カニューレから、リチウムヘパリンを含有するチューブに血液試料を採取し、血漿を調製した。血漿からブデソニドを抽出し、続いてＬＣＭＳ分析によって、血漿レベルを決定した。このＰＫ研究からの結果を図６に示す。
【０１０３】
コポリマーナノ粒子にブデソニドを封入することによって、最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が１１倍増加し、半減期（ｔ1/2）が４倍増加し、薬物血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）が３６倍増加した。ブデソニドの封入によって、分布容積（Ｖｚ）も１／９に減少し、血漿クリアランスも１／３７に減少する。これらのパラメーターそれぞれが、ブデソニドのナノ粒子封入によって、ステロイドの組織分布を犠牲にして、ブデソニドの血漿局在化が促進されることを示している。表Ｃは、ブデソニドおよびブデソニドＰＴＮＰの薬物動態学的分析を説明する。
【０１０４】
【表Ｃ】
2013514378.tif 000007
【０１０５】
実施例９  炎症性疾患のラットモデル
炎症の有効性モデルとして炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のモデルでブデソニドおよびブデソニドＰＴＮＰを比較した。このモデルでは、雌のラットに２４時間間隔にてインドメタシン８ｍｇ／ｋｇで２回皮下投与し、小腸においてクローン病で発生する病変と似ている病変を誘発した。インドメタシン処置の１日前（−１日目）に、賦形剤、ブデソニド（０．０２、０．２または２ｍｇ／ｋｇ）またはブデソニドＰＴＮＰ（０．０２、０．２または２ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与による毎日の処置、またはデキサメタゾン（０．１ｍｇ／ｋｇ）の経口投与による毎日の処置を開始し、合計５日間（−１日〜３日）続けた。動物を４日目に安楽死させ、小腸内のリスクのある１０ｃｍ領域に、肉眼での病態についてスコアをつけ、計量した。
【０１０６】
スコア０が正常であり、スコア５がＩＢＤ症状が原因の死を示す、疾患スコアリングシステムを用いた場合、正常なラットは平均スコア０、および平均腸管重量０．４８８ｇを有する。それと異なり、インドメタシン誘発ＩＢＤの賦形剤処理された対照は、平均臨床スコア２．７（図７）、平均腸管重量２．７０２ｇ（図８）を有した。用量０．０２ｍｇ／ｋｇ（５２％減少）、０．２ｍｇ／ｋｇ（５３％減少）および２ｍｇ／ｋｇ（５９％減少；図７）にてブデソニドで処理した後、腸管のスコアは、正常に向かって有意に減少した。同じように、用量０．０２ｍｇ／ｋｇ（５９％減少）、０．２ｍｇ／ｋｇ（９６％減少）および２ｍｇ／ｋｇ（９３％減少；図７）にてブデソニドＰＴＮＰで処理した後、腸管のスコアは、正常に向かって有意に減少した。同用量のブデソニド不含薬物で処理された動物と比較して、ブデソニドＰＴＮＰ０．２ｍｇ／ｋｇ（９４％）、ブデソニドＰＴＮＰ２ｍｇ／ｋｇ（８５％）で処理することによって、小腸のスコアもまた有意に減少した（図７）。
【０１０７】
用量０．０２ｍｇ／ｋｇ（５２％減少）、０．２ｍｇ／ｋｇ（５３％減少）および２ｍｇ／ｋｇ（５９％減少；図８）にてブデソニドで処理した後、小腸重量が正常に向かって有意に減少した。同じように、用量０．０２ｍｇ／ｋｇ（６４％減少）、０．２ｍｇ／ｋｇ（９３％減少）および２ｍｇ／ｋｇ（９０％減少；図８）にてブデソニドＰＴＮＰで処理した後、腸管の重量は、正常に向かって有意に減少した。同用量のブデソニド不含薬物で処理された動物と比較して、ブデソニドＰＴＮＰ０．２ｍｇ／ｋｇ（８６％）またはブデソニドＰＴＮＰ２ｍｇ／ｋｇ（７４％）で処理することによって、小腸の重量もまた有意に減少した（図７）。この研究の結果から、ブデソニドまたはブデソニドＰＴＮＰで毎日、静脈内投与により処置することによって、ラットにおけるインドメタシン誘発炎症性腸疾患と関連する臨床パラメーターが有意に抑制され、ブデソニドＰＴＮＰ処置は、相当する用量レベルでのブデソニド処置と比較して有意に有利な効果を有することが示されている。
【０１０８】
実施例１０−交互コポリマーを有する粒子
実施例２の基本手順に従って、以下のようにＰＬＡ−ＰＥＧコポリマーと共にブデソニドからナノ粒子を形成した。
５０／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ：（ＰＬＡ  Ｍｗ＝５０；ＰＥＧ  Ｍｗ＝５）；バッチ番号５５−１０６−Ａ
５０／５  ＰＬＡ−ＰＥＧおよび高ＭＷ（７５Ｍｎ  ＰＬＡ：バッチ番号５５−１０６−Ｂ
８０／１０  ＰＬＡ−ＰＥＧ：バッチ番号５５−１０６−Ａ
８０／１０  ＰＬＡ−ＰＥＧおよび高ＭＷ  ＰＬＡ：５５−１０６−Ｂ
バッチＢおよびＤは、ポリマー全体の５０％でドープされた高ＭＷの７５Ｍｎ ＰＬＡを有した。表Ｄは薬物ローディング重量％を示す：
【０１０９】
【表Ｄ】
2013514378.tif 000008
薬物放出研究を行い、コポリマーＭＷが変化することによって、薬物放出の速度を遅くするのに影響があるかどうかを確かめた。図９は、バッチ番号５５−１０６−Ｂ、つまり高ＭＷ  ＰＬＡがドープされた５０／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、およびバッチ６２−３０の放出を示す。
【０１１０】
実施例１１  シクレソニドポリマーナノ粒子
別段の指定がない限り、以下のようにすべてのシクレソニドバッチを製造した。薬物およびポリマー（１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ）成分を油相有機溶媒システム、一般に酢酸エチル（ＥＡ）７０％およびベンジルアルコール（ＢＡ）３０％に固形分２０または３０重量％で溶解した。水相は主に、界面活性剤としてのコール酸ナトリウム（ＳＣ）と共に、ベンジルアルコール２％および酢酸エチル４％で予め飽和された水からなる。油相：水相比１：５にてローターステーター均質化の下で、油相を水相に加えることによって、粗いＯ／Ｗ型エマルジョンを調製した。１００μｍＺ相互作用チャンバを介して９０００ｐｓｉにてマイクロフルイディクス高圧ホモジナイザー（一般にＭ１１０Ｓ  ｐｎｅｕｍａｔｉｃ）を通して、その粗いエマルジョンを処理することによって、微細エマルジョンを調製した。次いで、クエンチ：エマルジョン比１０：１にて、エマルジョンを脱イオン水クエンチ中にクエンチした。次いで、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）をプロセス可溶化剤として添加し、Ｔｗｅｅｎ８０：薬物比１００：１にて未封入薬物を可溶化した。続いて、限外濾過に続いてダイアフィルトレーションでバッチを処理し、溶媒、未封入薬物および可溶化剤を除去した。Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＤＬＳによって、粒径測定を行った。薬物ローディングを決定するために、スラリー試料をＨＰＬＣおよび［固形分］分析にかけた。次いで、凍結前に、スラリー保持物（retain）をショ糖で１０％に希釈した。別段の指定がない限り、記載のすべての比は重量に基づく。
【０１１１】
例示的な製剤は、３０％および２０％で初期固形分および薬物濃度をそれぞれ有した。２ｇバッチ２つを調製し、薬物ローディングおよびクエンチ前／後のＴｗｅｅｎ８０（Ｔ８０）（１００×）の効果を評価した。これらのバッチの粒径は８８〜９１ｎｍであり、薬物ローディングは６．１〜７．５％の範囲であった。クエンチ後のＴｗｅｅｎ８０の添加によって、表Ｅに示されるように薬物ローディングが高くなり、薬物結晶の形成を防ぐことができることが確認された。したがって、Ｔｗｅｅｎ８０：シクレソニド比１００：１は、未封入薬物の除去に有効であることが分かった。
【０１１２】
【表Ｅ】
2013514378.tif 000009
他の例示的な製剤を５ｇバッチ２つで調製した。一方のバッチは唯一のポリマー成分として１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有するのに対して、もう一方は、ポリマー全体に対して５０％で８０ｋ  Ｍn ＰＬＡがドープされた１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有した。初期固形分および薬物濃度はそれぞれ、３０％および２０％であった。ＰＬＡがドープされたポリマーバッチが、目的の粒径を得るために４回ホモジナイズされたことを除いては、上記の一般プロセスに記載のようにバッチを製造かつ処理した。Ｔｗｅｅｎ８０：薬物比１００：１でプロセス可溶化剤としてＴｗｅｅｎ８０が使用され、クエンチ後に添加された。表Ｆに示すように、粒子薬物ローディングは８〜１１．４％の範囲であり、粒径は８０．３〜１１３．５ｎｍであった。
【０１１３】
【表Ｆ】
2013514378.tif 000010
実施例３の手順を用いた生体外放出研究に関して、放出媒体へのシクレソニドの放出中の沈降条件の維持について、βシクロデキストリン（ＢＣＤ）を可溶化剤として評価した。１０重量％にて、表Ｇに示すように、必要とされる１００μｇ／ｍＬを超える濃度のシクレソニドを可溶化することができた。
【０１１４】
【表Ｇ】
2013514378.tif 000011
５５−１６０バッチについて３７℃で生体外薬物放出研究を行った。ＢＣＤ１０重量％を生体外可溶化剤として使用した。４０％以下で始まるアセトニトリル勾配をＨＰＬＣアッセイ法に用いた。図１０に示すように、どちらの製剤も２時間以内に約５０〜６０％のシクレソニドを放出し、２４時間以内に約１００％のシクレソニドを放出することが確認された。さらに、ＰＬＡがドープされたバッチとＰＬＡがドープされていないバッチの放出プロファイルは類似していた。
【０１１５】
実施例１２  ジプロピオン酸ベクロメタゾン（ＢＥＣ）ポリマーナノ粒子
別段の指定がない限り、以下のようにすべてのＢＥＣバッチを製造した。薬物およびポリマー（１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ）成分を油相有機溶媒システム、一般に酢酸エチル（ＥＡ）７０％およびベンジルアルコール（ＢＡ）３０％に固形分３０重量％および薬物１０重量％で溶解した。水相は主に、界面活性剤としてのコール酸ナトリウム（ＳＣ）と共に、ベンジルアルコール２％および酢酸エチル４％で予め飽和された水からなる。油相：水相比１：５にてローターステーター均質化の下で、油相を水相に加えることによって、粗いＯ／Ｗ型エマルジョンを調製した。１００μｍＺ相互作用チャンバを介して９０００ｐｓｉにてマイクロフルイディクス高圧ホモジナイザー（一般にＭ１１０Ｓ  ｐｎｅｕｍａｔｉｃ）を通して、その粗いエマルジョンを処理することによって、微細エマルジョンを調製した。次いで、クエンチ：エマルジョン比１０：１にて、エマルジョンを冷たい脱イオン水クエンチ中にクエンチした。次いで、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）をプロセス可溶化剤として添加し、Ｔｗｅｅｎ８０：薬物比１００：１にて未封入薬物を可溶化した。続いて、限外濾過に続いてダイアフィルトレーションでバッチを処理し、溶媒、未封入薬物および可溶化剤を除去した。Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＤＬＳによって、粒径測定を行った。薬物ローディングを決定するために、スラリー試料をＨＰＬＣおよび［固形分］分析にかけた。次いで、凍結前に、スラリー保持物をショ糖でショ糖１０％に希釈した。別段の指定がない限り、記載のすべての比は重量に基づく。
【０１１６】
例示的な製剤は、ポリマーとして１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有し、初期固形分および薬物濃度はそれぞれ３０％および１０％であった。２ｇバッチ２つを調製し、薬物ローディングおよびクエンチ前／後のＴｗｅｅｎ８０（Ｔ８０）（１００×）の効果を評価した。表Ｈに示すように、これらのバッチの粒径は８０〜８２ｎｍであり、薬物ローディングは４．８〜５．６％の範囲であった。クエンチ後のＴｗｅｅｎ８０の添加によって、ローディングがわずかに低くなったが、薬物ローディングは望ましい範囲内であり、薬物結晶の形成を防ぐことができることが確認された。したがって、Ｔｗｅｅｎ８０：ＢＥＣ比１００：１は、未封入薬物の除去に有効であることが分かった。
【０１１７】
【表Ｈ】
2013514378.tif 000012
他の例示的な製剤を５ｇバッチで２つ調製した。一方のバッチは唯一のポリマー成分として１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有するのに対して、もう一方は、ポリマー全体に対して５０％で８０ｋ Ｍn ＰＬＡがドープされた１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有した。初期固形分および薬物濃度はそれぞれ、３０％および１０％であった。上記の一般プロセスに記載のようにバッチを製造かつ処理した。Ｔｗｅｅｎ８０：薬物比１００：１でプロセス可溶化剤としてＴｗｅｅｎ８０が使用され、クエンチ後に添加された。表Ｉに示すように、薬物ローディングは４．９〜６．６％の範囲であり、粒径は７９．５〜５６．５ｎｍであった。
【０１１８】
【表Ｉ】
2013514378.tif 000013
実施例３の手順を用いた生体外放出研究に関して、放出媒体へのシクレソニドの放出中の沈降条件の維持について、βシクロデキストリン（ＢＣＤ）を可溶化剤として評価した。１０重量％にて、表Ｊに示すように、必要とされる沈降条件を超える濃度でシクレソニドを可溶化することができた。
【０１１９】
【表Ｊ】
2013514378.tif 000014
５５−１５５バッチについて３７℃で生体外薬物放出研究を行った。ＢＣＤ１０重量％を生体外可溶化剤として使用した。４０％以下で始まるアセトニトリル勾配をＨＰＬＣアッセイ法に用いた。図１１に示すように、５５−１５５Ａ（ＰＬＡドープなし）製剤は２時間以内に約１００％のＢＥＣを放出し、５５−１５５Ｂ（ＰＬＡドープ）製剤は、２４時間以内に約１００％のＢＥＣを放出することが確認された。
【０１２０】
実施例１３  フロ酸モメタゾン（ＭＯＭ）ポリマーナノ粒子
別段の指定がない限り、以下のようにすべてのＭＯＭバッチを製造した。薬物およびポリマー（１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ）成分を油相有機溶媒システム、一般にジクロロメタン（ＤＣＭ）に固形分３０重量％および薬物１０重量％で溶解した。水相は主に、界面活性剤としてのコール酸ナトリウム（ＳＣ）２重量％と共に水からなる。油相：水相比１：５にてローターステーター均質化の下で、油相を水相に加えることによって、粗いＯ／Ｗ型エマルジョンを調製した。１００μｍＺ相互作用チャンバを介して９０００ｐｓｉにてマイクロフルイディクス高圧ホモジナイザー（一般にＭ１１０Ｓ  ｐｎｅｕｍａｔｉｃ）を６回通して、その粗いエマルジョンを処理することによって、微細エマルジョンを調製した。次いで、クエンチ：エマルジョン比１０：１にて、エマルジョンを冷たい脱イオン水クエンチ中にクエンチした。続いて、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）をプロセス可溶化剤として添加し、２０分間にわたって攪拌し、Ｔｗｅｅｎ８０：薬物比１００：１にて未封入薬物を可溶化した。次に、限外濾過に続いてダイアフィルトレーションでバッチを処理し、溶媒、未封入薬物および可溶化剤を除去した。Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＤＬＳによって、粒径測定を行った。薬物ローディングを決定するために、スラリー試料をＨＰＬＣおよび［固形分］分析にかけた。次いで、凍結前に、スラリー保持物をショ糖でショ糖１０％に希釈した。別段の指定がない限り、記載のすべての比は重量に基づく。
【０１２１】
例示的な製剤を２つの５ｇバッチで調製した。一方のバッチは唯一のポリマー成分として１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有するのに対して、もう一方は、ポリマー全体に対して５０％で８０ｋ Ｍn ＰＬＡがドープされた１６／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを有した。上記の一般プロセスに記載のようにバッチを製造かつ処理した。表Ｋに示すように、薬物ローディングは２．７〜６．３％の範囲であり、粒径は８３．９〜２０８．４ｎｍであった。
【０１２２】
【表Ｋ】
2013514378.tif 000015
実施例３の手順を用いた生体外放出研究に関して、放出媒体へのシクレソニドの放出中の沈降条件の維持について、βシクロデキストリン（ＢＣＤ）を可溶化剤として評価した。１０重量％にて、表Ｌに示すように、必要とされる沈降条件を超える濃度でＭＯＭを可溶化することができた。
【０１２３】
【表Ｌ】
2013514378.tif 000016
５５−１９５バッチについて３７℃で生体外薬物放出研究を行った。ＢＣＤ１０重量％を生体外可溶化剤として使用した。４０％以下で始まるアセトニトリル勾配をＨＰＬＣアッセイ法に用いた。図１２に示すように、５５−１９５Ａ（ＰＬＡドープなし）製剤は２時間以内に約８７％を放出し、５５−１９５Ｂ（ＰＬＡドープ）製剤は、２４時間以内に約８７％を放出することが確認された。
【０１２４】
均等物
当業者であれば、単なる慣例の実験を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの等価物を理解されるであろう、あるいは確かめることができるであろう。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
参照による援用
本明細書に記載のすべての特許、公開特許出願、ウェブサイト、および他の参考文献の内容全体が、参照によりその全体が本明細書に明示的に援用される。
【図１】
2013514378.tif 000017
【図２Ａ】
2013514378.tif 000018
【図２Ｂ】
2013514378.tif 000019
【図３】
2013514378.tif 000020
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2013514378.tif 000024
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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