(57)【要約】  本発明は、被験体におけるモジュレートされたレベルの低酸素状態に基づいて、エレスクロモールによる治療に適した被験体を事前選択する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、モジュレートされたレベルの乳酸脱水素酵素(LDH)に基づいて、エレスクロモールによる治療に適した被験体を事前選択する方法を提供する。また、本発明は、有効量のエレスクロモールを被験体に投与することにより被験体における癌を治療する方法を提供し、ここで、被験体はモジュレートされたレベルの低酸素状態を有する。本発明はさらに、本発明の方法を実施するためのキットを提供する。【選択図】図１ＡＢ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を有する被験体を治療するための組成物であって、該組成物がエレスクロモールを含み、癌が低レベルの低酸素状態の腫瘍を含む、前記組成物。
【請求項２】
癌が固形腫瘍である、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
癌が、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、および難治性悪性腫瘍から選択される、請求項1または2に記載の組成物。
【請求項４】
癌が、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌からなる群より選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項５】
腫瘍における低酸素レベルが被験体サンプルにおいて測定される、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６】
被験体サンプルが、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョン、および痰からなる群より選択される、請求項5に記載の組成物。
【請求項７】
腫瘍組織が、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である、請求項6に記載の組成物。
【請求項８】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項９】
1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルがサンプルにおいてダウンレギュレートされる、請求項8に記載の組成物。
【請求項１０】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出することにより、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１１】
LDHのアイソフォームまたはサブユニットが、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む、請求項10に記載の組成物。
【請求項１２】
HIFのアイソフォームが、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む、請求項10に記載の組成物。
【請求項１３】
VEGFの血管新生促進アイソフォームが、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である、請求項10に記載の組成物。
【請求項１４】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１６】
低レベルの低酸素状態の検出が、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化、または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１７】
低レベルの低酸素状態が、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比が、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される、請求項16に記載の組成物。
【請求項１８】
被験体が以前に別の化学療法剤により治療されている、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１９】
エレスクロモールによる治療に適した被験体を識別するための腫瘍における低酸素レベルの使用であって、被験体からの腫瘍における低酸素レベルを測定することを含み、サンプルにおける低レベルの低酸素状態が、被験体がエレスクロモールによる治療に応答する可能性が高いことを示す、前記使用。
【請求項２０】
腫瘍において高レベルの低酸素状態を有する被験体が、エレスクロモールによる治療に応答する可能性が低い、請求項19に記載の使用。
【請求項２１】
癌が固形癌である、請求項19または20に記載の使用。
【請求項２２】
癌が、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、および難治性悪性腫瘍から選択される、請求項19〜21のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２３】
癌が、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌からなる群より選択される、請求項19〜22のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２４】
腫瘍における低酸素レベルが被験体サンプルにおいて測定される、請求項19〜23のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２５】
被験体サンプルが、腫瘍組織、血液、血清、血漿、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョン、および痰からなる群より選択される、請求項24に記載の使用。
【請求項２６】
被験体サンプルが、被験体内の腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である、請求項24に記載の使用。
【請求項２７】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される、請求項19〜26のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２８】
1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルがサンプルにおいてダウンレギュレートされる、請求項27に記載の使用。
【請求項２９】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出することにより、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定される、請求項19〜28のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３０】
LDHのアイソフォームまたはサブユニットが、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む、請求項29に記載の使用。
【請求項３１】
HIFのアイソフォームが、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および総HIF-2を含む）より選択される、請求項29に記載の使用。
【請求項３２】
VEGFの血管新生促進アイソフォームが、VEGF-Aの任意のアイソフォーム；またはその任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である、請求項29に記載の使用。
【請求項３３】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む、請求項29または30に記載の使用。
【請求項３４】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む、請求項29または30に記載の使用。
【請求項３５】
低レベルの低酸素状態が、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの比または低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの正規化された活性もしくは発現レベルの比における変化である、請求項19〜29のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３６】
低レベルの低酸素状態が、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比が、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される、請求項35に記載の使用。
【請求項３７】
低レベルの低酸素状態を有する被験体が、エレスクロモールを投与される、請求項19〜36のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３８】
被験体が以前に別の化学療法剤により治療されている、請求項19〜37のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３９】
癌治療のためのエレスクロモールを含む治療レジメンを選択するための試験の製造のための低酸素レベルの使用であって、被験体サンプルにおける低酸素レベルを測定するための少なくとも1種の試薬を含み、ここで、低酸素レベルが、エレスクロモールを含む治療レジメンを選択するために使用される、前記使用。
【請求項４０】
低レベルの低酸素状態が、エレスクロモールによる治療レジメンを選択するべきであることを示している、請求項39に記載の使用。
【請求項４１】
高レベルの低酸素状態が、エレスクロモールによる治療レジメンを選択するべきでないことを示している、請求項39に記載の使用。
【請求項４２】
癌が固形腫瘍である、請求項39〜41のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４３】
癌が、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、および難治性悪性腫瘍から選択される、請求項39〜42のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４４】
癌が、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌からなる群より選択される、請求項39〜43のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４５】
腫瘍の低酸素レベルが被験体サンプルにおいて測定される、請求項39〜44のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４６】
被験体サンプルが、腫瘍組織、血液、血清、血漿、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョン、および痰からなる群より選択される、請求項45に記載の使用。
【請求項４７】
被験体サンプルが、被験体内の腫瘍組織または被験体内にない腫瘍組織である、請求項46に記載の使用。
【請求項４８】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される、請求項39〜47のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４９】
1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルがサンプルにおいてダウンレギュレートされる、請求項48に記載の使用。
【請求項５０】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出することにより、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定される、請求項39〜49のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５１】
LDHのアイソフォームまたはサブユニットが、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む、請求項49に記載の使用。
【請求項５２】
HIFのアイソフォームが、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および総HIF-2を含む）より選択される、請求項49に記載の使用。
【請求項５３】
VEGFの血管新生促進アイソフォームが、VEGF-A、またはその任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である、請求項49に記載の使用。
【請求項５４】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む、請求項50または51に記載の使用。
【請求項５５】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む、請求項50または51に記載の使用。
【請求項５６】
低レベルの低酸素状態が、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの正規化されたレベルの比における変化である、請求項39〜55のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５７】
低レベルの低酸素状態が、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比が、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される、請求項56に記載の使用。
【請求項５８】
癌を有する被験体を治療するための医薬の調製のための、エレスクロモールの使用であって、被験体が低レベルの低酸素状態の腫瘍を有する、前記使用。
【請求項５９】
癌が固形腫瘍である、請求項58に記載の使用。
【請求項６０】
癌が、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、および難治性悪性腫瘍から選択される、請求項58または59に記載の方法。
【請求項６１】
癌が、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌からなる群より選択される、請求項58〜60のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６２】
被験体サンプルが、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョン、および痰からなる群より選択される、請求項58〜61のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６３】
腫瘍組織が、被験体内の腫瘍組織または被験体内にない腫瘍組織である、請求項62に記載の使用。
【請求項６４】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルを検出することにより測定される、請求項58〜63のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６５】
1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性または発現レベルがサンプルにおいてダウンレギュレートされる、請求項64に記載の使用。
【請求項６６】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出することにより、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定される、請求項64または65に記載の使用。
【請求項６７】
LDHのアイソフォームまたはサブユニットが、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む、請求項66に記載の使用。
【請求項６８】
HIFのアイソフォームが、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および総HIF-2を含む）より選択される、請求項66に記載の使用。
【請求項６９】
VEGFの血管新生促進アイソフォームが、VEGF-A、またはその任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である、請求項66に記載の使用。
【請求項７０】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む、請求項66または67に記載の使用。
【請求項７１】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む、請求項66または67に記載の使用。
【請求項７２】
低レベルの低酸素状態が、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの比または低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの正規化されたレベルの比における変化である、請求項58〜69のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７３】
低レベルの低酸素状態が、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比が、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される、請求項70または71に記載の使用。
【請求項７４】
被験体が以前に別の化学療法剤により治療されている、請求項58〜73のいずれか1項に記載の使用。
【請求項７５】
医療費を減少させるためのビジネス方法であって、
被験体から得た腫瘍からの生体サンプルにおける低酸素レベルを測定すること；
情報をコンピュータープロセッサに蓄えること；
低酸素レベルに基づいて被験体がエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が高いかどうかを決定すること；
ならびに被験体が治療から利益を得る可能性が高い場合にのみ被験体を治療すること、
それにより医療費を減少させること
を含む、前記方法。
【請求項７６】
癌が固形腫瘍である、請求項75に記載の方法。
【請求項７７】
癌が、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、および難治性悪性腫瘍から選択される、請求項75または76に記載の方法。
【請求項７８】
癌が、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌からなる群より選択される、請求項75〜77のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７９】
腫瘍における低酸素レベルが被験体サンプルにおいて測定される、請求項75〜78のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８０】
被験体サンプルが、腫瘍組織、血液、尿、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョン、および痰からなる群より選択される、請求項79に記載の方法。
【請求項８１】
腫瘍組織が、被験体内の腫瘍組織または被験体内にない腫瘍組織である、請求項79または80に記載の方法。
【請求項８２】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルを検出することにより測定される、請求項75〜81のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８３】
低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドがサンプルにおいてダウンレギュレートされる、請求項82に記載の方法。
【請求項８４】
低酸素レベルが、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出することにより、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定される、請求項82または83に記載の方法。
【請求項８５】
LDHのアイソフォームまたはサブユニットが、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む、請求項84に記載の方法。
【請求項８６】
HIFのアイソフォームが、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および総HIF-2を含む）より選択される、請求項84に記載の方法。
【請求項８７】
VEGFの血管新生促進アイソフォームが、VEGF-A、またはその任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である、請求項84に記載の方法。
【請求項８８】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む、請求項84または85に記載の方法。
【請求項８９】
少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出が、総LDH、LDH5、LDH4；LDH5プラスLDH4；LDH5プラスLDH4プラスLDH3；およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む、請求項84または85に記載の方法。
【請求項９０】
低レベルの低酸素状態が、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの比または低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの正規化されたレベルの比における変化である、請求項77〜89のいずれか1項に記載の方法。
【請求項９１】
低レベルの低酸素状態が、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比が、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される、請求項90に記載の方法。
【請求項９２】
被験体が以前に別の化学療法剤により治療されている、請求項77〜91のいずれか1項に記載の方法。
【請求項９３】
請求項1〜38および57〜92のいずれか1項に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項９４】
請求項39〜56のいずれか1項に記載の使用のためのキット。
【請求項９５】
エレスクロモール、ならびにエレスクロモールを高レベルの低酸素状態の腫瘍を有する被験体に投与するための説明書を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2010年11月18日に出願された米国仮特許出願第61/415,104号の優先権を主張する。この出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
固形腫瘍が成長すると、それらは成長し過ぎてその酸素および栄養の供給が追いつかなくなり、低酸素になる。腫瘍低酸素は、血管新生の誘導と関連しており、また、癌患者におけるより悪い予後および治療への応答の低さと関連していた。低酸素腫瘍細胞は浸潤性および転移性が高く、また、放射線治療および化学療法による死滅に対する抵抗性も高い。それらはまた、遺伝的により不安定であり、アポトーシスに対する抵抗性が高い。腫瘍低酸素は表皮成長因子受容体(EGFR)の発現をアップレギュレートする(Franovic A et al.  PNAS 104: 13092-13097 (2007))。腫瘍細胞上のEGFRの活性化は、受容体のキナーゼドメインにおけるチロシン残渣のリン酸化、およびRas/Maf/MAPKまたはPI3K/Akt/mTOR経路を含むシグナル伝達経路の活性化をもたらす。これらの経路の活性化は、血管新生、細胞増殖、成長、転移、および接着に関係する遺伝子の核での活性化をもたらす(Langer C & Soria J-C.  Clinical Lung Cancer, 11:82-90 (2010))。低酸素誘導因子(HIF)は低酸素に応答してアップレギュレートされ、また、正常酸素圧条件下であっても、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質(mTOR)経路の活性化に応答してアップレギュレートされる（例えば、Melillo G. Cancer Metastasis Rev 26: 341-352 (2007)を参照されたい）。HIFの標的には、解糖経路に関与する遺伝子が含まれる。
【０００３】
エレスクロモール(elesclomol)(STA-4783)は、米国特許第7,795,313号（参照により本明細書に組み入れられる）に開示されており、N-マロニル-ビス (N'-メチル-N'-チオベンゾイルヒドラジド)の名称で表される化合物であり、次の構造を有する。
【化１】
2013545759.tif 000003
【０００４】
エレスクロモールは、癌細胞におけるミトコンドリアエネルギー生産を標的とすることにより癌細胞のアポトーシスのトリガーとなる。注入されると、エレスクロモールは血漿中の銅と結合し、それが立体配座に変化を引き起こし、それにより膜を通した細胞内への取り込みか可能になる。銅はCu(II)の酸化状態でエレスクロモールと結合する。ミトコンドリア内部に入った後、電子伝達系(ETC)との相互作用によりETCからエレスクロモールへの電子移動が起こり、銅がCu(II)からCu(I)に還元される。この過程が酸化還元反応の連鎖反応を引き起こし、酸化ストレスを増大させ、ETCの崩壊を拡大させ、最終的にミトコンドリアの防御反応を圧倒して、ミトコンドリアのアポトーシス経路のトリガーとなる。
【０００５】
転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌、および原発性腹膜癌のエレスクロモールによる治療に関する臨床試験が承認または実施されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、驚くべきことに、被験体における低レベルの低酸素状態を使用して、エレスクロモールによる治療に対して患者が応答するかどうかを予測することができることを証明する。具体的には、本発明は、被験体中の癌細胞における低レベルの低酸素状態に基づいて、エレスクロモールによる治療に適した被験体を事前選択する方法を提供する。一実施形態において、本発明は細胞、例えば癌細胞における低レベルの乳酸脱水素酵素(LDH)に基づいて、エレスクロモールによる治療に適した被験体を事前選択する方法を提供する。また、本発明は、有効量のエレスクロモールを被験体に投与することにより被験体における癌を治療する方法であって、該被験体が低レベルの低酸素状態に基づいて選択された被験体である、前記方法を提供する。本発明はさらに、本発明の方法を実施するためのキットを提供する。
【０００７】
本発明は癌を有する被験体を治療する方法において使用するための組成物を提供し、該組成物は、エレスクロモールを含み、癌は低レベルの低酸素状態の腫瘍を含む。
【０００８】
ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。ある実施形態において、癌は血液腫瘍であり、すなわち、固形腫瘍ではない。癌のタイプとしては、原発癌、転移癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌、胃癌、膵癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、膀胱癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮頚癌、子宮癌、卵巣癌、絨毛癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、前立腺癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、下垂体癌、皮膚癌、血管腫、黒色腫、骨および軟部組織から発生する肉腫、カポジ肉腫、脳癌、神経癌、眼癌、髄膜癌、星細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、網膜芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、髄膜腫、造血器悪性腫瘍から発生する固形腫瘍、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、非小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多形性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、扁平上皮癌、鼻咽頭癌(nasopharageal cancer)、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫；褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、扁平上皮癌、肉腫、黒色腫、子宮内膜癌、頭頚部癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、神経膠肉腫、骨肉腫、難治性悪性腫瘍、進行性の転移癌、固形腫瘍、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、肺癌および原発性腹膜癌などの1種以上の癌のタイプが挙げられるが、これらに限定されない。
【０００９】
ある実施形態において、腫瘍における低酸素レベルは被験体サンプルにおいて測定される。ある実施形態において、被験体サンプルは、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰からなる群から選択される。ある実施形態において、腫瘍組織は、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である。
【００１０】
ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される。ある実施形態において、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルはサンプルにおいてダウンレギュレートされる。ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出すること、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール(pimonidazole)結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法により測定することができるが、これらに限定されない。
【００１１】
ある実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む。ある実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む。ある実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である。
【００１２】
ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む。ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む。
【００１３】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態の検出は、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比は、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される。
【００１４】
ある実施形態において、被験体は以前に別の化学療法剤により治療されている。ある実施形態において、方法はさらに被験体が高レベルの低酸素状態を有することを確認することを含む。
【００１５】
本発明は、エレスクロモールによる治療に適した被験体を識別するための方法および腫瘍における低酸素レベルの使用を提供する。該方法および使用は、被験体からの腫瘍における低酸素レベルを測定することを含み、ここで、サンプルにおける低レベルの低酸素状態が、被験体がエレスクロモールによる治療に応答する可能性が高いことを示す。
【００１６】
ある実施形態において、腫瘍において高レベルの低酸素状態を有する被験体は、エレスクロモールによる治療に応答する可能性が低い。
【００１７】
ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。ある実施形態において、癌は血液腫瘍であり、すなわち、固形腫瘍ではない。癌のタイプとしては、本明細書に記載される癌のタイプの1種以上が挙げられるが、それらに限定されない。
【００１８】
ある実施形態において、腫瘍における低酸素レベルは被験体サンプルにおいて測定される。ある実施形態において、被験体サンプルは、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰からなる群から選択される。ある実施形態において、腫瘍組織は、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である。
【００１９】
ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される。ある実施形態において、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルはサンプルにおいてダウンレギュレートされる。ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出すること、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法により測定することができるが、これらに限定されない。
【００２０】
ある実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む。ある実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む。ある実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である。
【００２１】
ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む。ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む。
【００２２】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態の検出は、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比は、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される。
【００２３】
ある実施形態において、被験体は以前に別の化学療法剤により治療されている。ある実施形態において、該方法は、高レベルの低酸素状態を有する被験体を識別することをさらに含む。
【００２４】
本発明は、エレスクロモールを含む癌治療のための治療レジメンを選択するための、試験、試験方法、および試験の製造のための低酸素レベルの使用を提供する。これは、被験体サンプルにおける低酸素レベルを測定するための少なくとも1種の試薬を含み、ここで、低酸素レベルは、エレスクロモールを含む治療レジメンを選択するために使用される。このような試験に使用される試薬としては、酸素感受性ペプチドのリン酸化状態もしくは他の改変された状態に特異的な抗体を含む、1種以上の酸素感受性ペプチドの発現レベルの検出のための抗体、1種以上の酸素感受性ペプチドの基質、1種以上の酸素感受性ペプチドの発現レベルの検出のための核酸、および既知の量もしくは濃度の酸素感受性ペプチドおよび／または核酸を含有する対照サンプルなどの、被験体における低酸素レベルの検出または低酸素レベルの測定に専用の少なくとも1種の薬剤を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００２５】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、エレスクロモールによる治療レジメンを選択すべきであることを示している。ある実施形態において、高レベルの低酸素状態は、エレスクロモールによる治療レジメンを選択すべきでないことを示している。
【００２６】
ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。ある実施形態において、癌は血液腫瘍であり、すなわち、固形腫瘍ではない。癌のタイプとしては、本明細書に記載される癌のタイプの1種以上が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
ある実施形態において、腫瘍における低酸素レベルは被験体サンプルにおいて測定される。ある実施形態において、被験体サンプルは、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰からなる群から選択される。ある実施形態において、腫瘍組織は、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である。
【００２８】
ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される。ある実施形態において、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルはサンプルにおいてダウンレギュレートされる。ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出すること、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法により測定することができるが、これらに限定されない。
【００２９】
ある実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む。ある実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む。ある実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である。
【００３０】
ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む。ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む。
【００３１】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態の検出は、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比は、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される。
【００３２】
ある実施形態において、被験体は以前に別の化学療法剤により治療されている。ある実施形態において、該方法は、低レベルの低酸素状態を有する被験体を識別することをさらに含む。
【００３３】
本発明は、被験体が低レベルの低酸素状態の腫瘍を有する場合の、癌を有する被験体を治療するための医薬を調製するための方法およびエレスクロモールの使用を提供する。
【００３４】
ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。ある実施形態において、癌は血液腫瘍であり、すなわち、固形腫瘍ではない。癌のタイプとしては、本明細書に記載される癌のタイプの1種以上が挙げられるが、それらに限定されない。
【００３５】
ある実施形態において、腫瘍における低酸素レベルは被験体サンプルにおいて測定される。ある実施形態において、被験体サンプルは、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰からなる群から選択される。ある実施形態において、腫瘍組織は、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である。
【００３６】
ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される。ある実施形態において、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルはサンプルにおいてダウンレギュレートされる。ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出すること、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定することができるが、これらに限定されない。
【００３７】
ある実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む。ある実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む。ある実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である。
【００３８】
ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む。ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む。
【００３９】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態の検出は、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比は、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される。
【００４０】
ある実施形態において、被験体は以前に別の化学療法剤により治療されている。ある実施形態において、該方法は、低レベルの低酸素状態を有する被験体を識別することをさらに含む。
【００４１】
本発明は、医療費を減少させるためのビジネス方法であって、被験体から得た腫瘍からの生体サンプルにおける低酸素レベルを測定すること；情報をコンピュータープロセッサに蓄えること；低酸素レベルに基づいて被験体がエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が高いかどうかを決定すること；ならびに被験体が治療から利益を得る可能性が高い場合にのみ被験体を治療することにより医療費を減少させることによる、前記方法を提供する。
【００４２】
ある実施形態において、癌は固形腫瘍である。ある実施形態において、癌は血液腫瘍であり、すなわち、固形腫瘍ではない。癌のタイプとしては、本明細書に記載される癌のタイプの1種以上が挙げられるが、それらに限定されない。
【００４３】
ある実施形態において、腫瘍における低酸素レベルは被験体サンプルにおいて測定される。ある実施形態において、被験体サンプルは、腫瘍組織、血液、尿、便、リンパ液、脳脊髄液、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰からなる群から選択されるが、これらに限定されない。ある実施形態において、腫瘍組織は、被験体内に存在する腫瘍組織または被験体から取り出された腫瘍組織である。
【００４４】
ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルを検出することにより測定される。ある実施形態において、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルまたは発現レベルはサンプルにおいてダウンレギュレートされる。ある実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの活性レベルもしくは発現レベルを検出すること、または乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、および3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、オルニチン脱炭酸酵素(ODC)、グルコース輸送体1(GLUT-1)、グルコース輸送体2(GLUT-2)の活性もしくは発現の検出、腫瘍の大きさ、血流、EF5結合、ピモニダゾール結合、PETスキャン、および低酸素レベルのプローブ検出からなる群より選択される検出方法を用いることにより測定することができるが、これらに限定されない。
【００４５】
ある実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHAおよびLDHBからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総LDHを含む）を含む。ある実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βからなる群より選択される1種以上；またはそれらの任意の組合せ（総HIF-1および／または総HIF-2を含む）を含む。ある実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、任意のVEGF-Aアイソフォーム、またはVEGF-Aアイソフォームの任意の組合せ（総VEGF-Aを含む）である。
【００４６】
ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが0.8 ULN以下であることを含む。ある実施形態において、少なくとも1種のLDHアイソフォームまたはサブユニットの低レベルの活性または発現の検出は、総LDH、LDH5、LDH4、LDH5プラスLDH4、LDH5プラスLDH4プラスLDH3、およびLDHAからなる群より選択されるLDHのLDH活性または発現レベルを検出すること、およびその結果、該活性レベルまたは発現レベルが1.0 ULN以下であることを含む。
【００４７】
ある実施形態において、低レベルの低酸素状態の検出は、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルの比における変化または正規化されたレベルの比における変化の検出を含む。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、ULNの1.0以下の比または正規化された比を含み、ここで、比または正規化された比は、LDHA対LDHB、LDH5またはLDH4対LDH1、LDH5またはLDH4対総LDH、LDH5およびLDH4対LDH1、LDH5およびLDH4対総LDH、LDH5、LDH4およびLDH3対LDH1、ならびにLDH5、LDH4およびLDH3対総LDHからなる群より選択される。
【００４８】
ある実施形態において、被験体は以前に別の化学療法剤により治療されている。ある実施形態において、該方法は、低レベルの低酸素状態を有する被験体を識別することをさらに含む。
【００４９】
本発明はさらに、診断、治療の方法もしくは使用、または本明細書に記載される他の任意の方法もしくは使用を実施するためのキットを提供する。
【００５０】
ある実施形態において、キットは、エレスクロモール、および低レベルの低酸素状態の腫瘍を有する被験体にエレスクロモールを投与するための説明書を含む。
【００５１】
ある実施形態において、キットは、低酸素レベルを検出するための少なくとも1種の試薬、および低レベルの低酸素状態を有すると確認された癌を有する被験体に少なくとも1種のエレスクロモールを投与するための説明書を含む。キットの構成要素のすべてが単一の包装に入っている必要はないと理解される。
【００５２】
他の実施形態は以下に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１ＡＢ】図1AおよびBは、(A) HCT116腫瘍または(B) 786-O腫瘍を有するヌードマウスから得た血清サンプルにおける総LDH活性のパーセントとしてのLDH5活性を腫瘍体積に対して示す図である。
【図１ＣＤ】図1CおよびDは、(C) HCT116腫瘍または(D) 786-O腫瘍を有するヌードマウスから得た血清サンプルにおける総LDH活性のパーセントとしてのLDH5のタンパク質レベルを腫瘍体積に対して示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
発明の詳細な説明
研究により医師は癌治療の治療法に関してかつてないほど多くの選択肢を与えられた。しかしながら、新規の薬剤が入手可能であるにもかかわらず、単に腫瘍のタイプに基づくのではなく、腫瘍の性質に基づいて特定の患者に合う治療薬を選択する能力が不足している。本発明は、腫瘍における低酸素レベルの1種以上の指標の存在について腫瘍組織内のマーカーを直接見ることまたは被験体からの末梢サンプル（例えば、血液、血清、血漿、リンパ液、尿、脳脊髄液、糞便、循環腫瘍細胞、気管支洗浄液、腹膜灌流液、滲出液、エフュージョンおよび痰などの体液）におけるマーカーを見ることのいずれかにより、腫瘍における低酸素レベルを測定することにより、エレスクロモールによる治療に対して良好に応答する可能性が高い被験体を識別する方法を提供する。
【００５５】
本発明をより容易に理解するために、まずいくつかの用語を定義する。それに加えて、パラメーターの値または値の範囲を記載する場合、記載された値の中間の値および範囲もまた本発明の一部であることが意図されていることに留意すべきである。
【００５６】
I. 定義
本明細書において名詞を記載する場合、これは、それに反して他に明確に指示されない限り、1または1よりも多い（すなわち、少なくとも1）の該名詞の対象を指す。例として、「要素」は1つの要素または1つよりも多い要素を意味する。
【００５７】
本明細書において、用語「を含む」は、「を含むがそれに限定されない」を意味するために使用され、この表現と互換的に使用される。
【００５８】
本明細書において、用語「または」は、文脈が他に明白に指示する場合を除き、「および／または」を意味するために使用され、この用語と互換的に使用される。
【００５９】
本明細書において、用語「などの」は、「などであるが、それらに限定されない」を意味するために使用され、この表現と互換的に使用される。
【００６０】
本明細書において使用される場合、特に記述される場合または文脈から明白である場合を除き、用語「約」は、当該技術分野における一般公差の範囲内、例えば、平均の2標準偏差の範囲内であると理解される。約は、記述された値の10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、または0.01%の範囲内であると理解することができる。文脈から他に明白である場合を除き、本明細書において提供されるすべての数値は用語「約」により修飾することができる。
【００６１】
本明細書において提供される範囲は、範囲内のすべての値の省略表現であると理解される。例えば、1〜50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50からなる群に属する任意の数、数の組合せ、または部分範囲を含むと理解される。
【００６２】
本明細書における可変基の定義における化学基の一覧の列挙は、任意の単一の基または一覧に挙げられた基の組合せとしてのその可変基の定義を含む。本明細書における可変基の実施形態または態様の列挙は、任意の単一の実施形態としての、または任意の他の実施形態もしくはその一部と組合せての、その実施形態を含む。
【００６３】
本明細書に提供される任意の組成物または方法は、本明細書に提供される1以上の任意の他の組成物および方法と組み合わせることができる。
【００６４】
本明細書において使用される場合、用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物（獣医学的被験体を含む）を指す。用語「非ヒト動物」は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物を含む。好ましい実施形態において、被験体はヒトであり、患者と呼ばれ得る。
【００６５】
本明細書において使用される場合、用語「治療する」または「治療」は、好ましくは、検出可能なものおよび検出不可能なものを含めて、疾患または状態の1以上の徴候または症状の軽減または改善、疾患の範囲の縮小、病状の安定（すなわち、悪化しないこと）、病態の改善または緩和、進行速度または無増悪期間の減少、および寛解（部分的または全体的）を含むがこれらに限定されない、有益なまたは望まれる臨床的結果を得るための行為を指す。「治療」は、治療をおこなわない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することをも意味し得る。「治療」は、治癒的である必要はない。
【００６６】
「治療上有効量」は、被験体における疾患を治療するのに十分な量である。治療上有効量は1回またはそれ以上の投与で投与することができる。
【００６７】
本明細書において使用される場合、「診断」等の用語は、疾患、障害または状態の徴候または症状などの少なくとも1種の指標の存在に基づいて、疾患、障害、または状態を有する被験体を識別するための、観察、試験、または環境に基づく被験体の状態の臨床的または他の評価を指す。典型的には、本発明の方法を使用する診断は、本明細書に記載される方法と併せて、疾患、障害または状態の複数の指標に関して被験体を観察することを含む。診断方法は、疾患が存在するかしないかの指標を提供する。典型的には単一の診断試験では試験される被験体の病態に関する決定的な結論は得られない。
【００６８】
用語「投与する」または「投与」は、被験体の全身または被験体の特定の領域（内部または表面上）に医薬組成物または薬剤を送達する任意の方法を含む。本発明のある実施形態において、薬剤は、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、鼻腔内、経口、経皮、または粘膜投与される。好ましい実施形態において、薬剤は静脈内投与される。薬剤の投与は、協力して働く多くの人々により実施され得る。薬剤の投与には、例えば、被験体に投与されるべき薬剤を処方することおよび／または直接または他者を介して、特定の薬剤を、自己送達（例えば、経口送達、皮下送達、中心ラインからの静脈内送達等による）；または訓練された専門家による送達（例えば静脈内送達、筋肉内送達、腫瘍内送達等）のいずれかにより服薬するための指示を提供することが含まれる。
【００６９】
本明細書において使用される場合、用語「生存」は、疾患または状態、例えば癌に対して治療された被験体の生命の継続を指す。生存期間は、臨床試験を始めた時、治療レジメンの完了または失敗または以前の治療レジメンの時、診断の時などの任意の時点からと定義できる。
【００７０】
本明細書において使用される場合、用語「再発」は、腫瘍に対する一次治療をおこなった被験体における腫瘍または癌細胞の再成長を指す。腫瘍は最初の部位または体の別の部分において再発し得る。一実施形態において、再発する腫瘍は被験体が治療された最初の腫瘍と同じタイプのものである。例えば、被験体が卵巣癌腫瘍を有し、治療を受け、後に別の卵巣癌腫瘍を発症した場合、腫瘍が再発したと言う。さらに、癌は、それが最初に生じたものとは別の器官または組織に再発または転移し得る。
【００７１】
本明細書において使用される場合、用語「識別する」または「選択する」は、別のものに優先してそれを選ぶことを指す。言い換えると、被験体を識別することまたは被験体を選択することは、ある群から特定の被験体を選び出し、該被験体の同一性を名前または他の識別できる特徴により確認する能動的段階をおこなうことである。本発明に関して、特定のレベルの低酸素または特定のレベルのLDHを有するものとして被験体を識別することまたは被験体を選択することは、試験をおこなって特定のレベルの低酸素状態を有する被験体を示す結果を観察すること；被験体の試験結果を精査して特定のレベルの低酸素状態を有する被験体を識別すること；被験体が特定のレベルの低酸素状態を有することを述べた被験体に関する文書を精査し、例えば身分証明書、病院ブレスレット、被験体の同一性を確認するために被験体に氏名および／または他の個人情報を尋ねて被験体の同一性を確認することにより、被験体が文書において論じられている者であることを確認することを含むがこれらに限定されない、多くの行為のいずれかを含み得る。
【００７２】
本明細書において使用される場合、用語「利益」は、有利であるか良好であるもの、または利点を指す。同様に、本明細書において使用される場合、用語「有益な」は、改善するか利益になるものを指す。例えば、被験体は、彼らが疾患または状態の少なくとも1つの徴候または症状の減少を示す場合（例えば、腫瘍の縮小、腫瘍量の減少、転移の阻害または減少、生活の質(「QOL」)の改善を示す場合、（腫瘍）無増悪期間(「TTP」)の延長がある場合、全生存期間(「OS」)の増加がある場合等）、または疾患の進行の緩慢化または停止がある場合（例えば、腫瘍の成長もしくは転移の停止、または腫瘍の成長もしくは転移の速度の緩慢化）に、治療から利益を得るであろう。また、利益は、生活の質の改善、または生存期間もしくは無増悪生存期間の増加を含み得る。
【００７３】
用語「癌」または「腫瘍」は当業者に周知であり、例えば被験体における、無制限増殖、不死、転移能、急速な成長および増殖速度、細胞死／アポトーシスの減少、およびある特有の形態学的特徴などの発癌性細胞に典型的な特徴を有する細胞の存在を指す。癌細胞はしばしば固形腫瘍の形態である。しかしながら、癌は非固形腫瘍、例えば血液腫瘍、例えば癌細胞が骨髄に由来する白血病をも含む。本明細書において使用される場合、用語「癌」は、前悪性ならびに悪性癌を含む。癌としては、聴神経腫、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病(単球性、骨髄芽球性、腺癌、血管肉腫、星細胞腫、骨髄単球性および前骨髄球性)、急性T細胞白血病、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、気管支原性癌、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、慢性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、大腸癌、頭蓋咽頭腫、嚢胞腺癌、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、異常増殖的変化（異形成および化生）、胎生期癌、子宮内膜癌、内皮肉腫、上衣腫、上皮性癌、赤白血病、食道癌、エストロゲン受容体陽性乳癌、本態性血小板血症、ユーイング腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、神経膠腫、H鎖病、血管芽腫、肝癌、肝細胞癌、ホルモン非感受性前立腺癌、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管内皮肉腫(lymphagioendotheliosarcoma)、リンパ管肉腫、リンパ芽球性白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、膀胱、乳、結腸、肺、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、および子宮の悪性腫瘍および増殖過剰障害、T細胞またはB細胞起源のリンパ性腫瘍、白血病、リンパ腫、髄様癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄性白血病、骨髄腫、粘液肉腫、神経芽腫、非小細胞肺癌、乏突起膠腫、口腔癌、骨原性肉腫、卵巣癌、膵癌、乳頭状腺癌、乳頭状癌、松果体腫、真性赤血球増加症、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫、脂腺癌、セミノーマ、皮膚癌、小細胞肺癌、固形腫瘍（癌腫および肉腫）、小細胞肺癌、胃癌、扁平上皮癌、滑膜腫、汗腺癌、甲状腺癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、精巣癌、子宮癌、およびウィルムス腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。他の癌としては、原発癌、転移癌、中咽頭癌、下咽頭癌、肝癌、胆嚢癌、胆管癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、脳下垂体腺癌、血管腫、骨および軟部組織から生じる肉腫、カポジ肉腫、神経癌、眼癌、髄膜癌、神経膠芽腫、神経腫、神経芽腫、シュワン腫、白血病などの造血器悪性腫瘍から生じる固形腫瘍、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、胃癌、黒色腫、多型性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌(primary peritoneal serous cancer)、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、非髄様甲状腺癌、再発性多型性膠芽腫、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺癌、粘膜黒色腫、末端黒子型黒色腫、傍神経節腫、褐色細胞腫、進行性の転移癌、固形腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、大腸癌、肉腫、黒色腫、腎癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膠芽腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、および難治性悪性腫瘍が挙げられる。
【００７４】
本明細書において使用される場合、「固形腫瘍」は、三次元を有する異常な成長として、触診または画像診断法を用いて検出することができる病原性腫瘍であると理解される。固形腫瘍は白血病などの血液腫瘍とは区別される。しかしながら、血液腫瘍の細胞は骨髄に由来するので、癌細胞を作り出す組織は低酸素状態になり得る固形組織である。
【００７５】
「腫瘍組織」は、固形腫瘍に関連する細胞、細胞外基質、および他の天然に生じる構成要素であると理解される。
【００７６】
本明細書において使用される場合、用語「単離された」は、そこから調製物を得た組織に関連する他のタンパク質、核酸または化合物を実質的に含まない（例えば、50%、60%、70%、80%、90%またはそれ以上、重量による）調製物を指す。
【００７７】
本明細書において使用される場合、用語「サンプル」は、被験体から単離された類似した液体、細胞または組織の採取物を指す。用語「サンプル」は、被験体から得た任意の体液（例えば、尿、血清、血液、リンパ液、婦人科学的液体、嚢胞液、腹水、眼液、ならびに気管支洗浄および／または腹膜洗浄により採取された液体）、腹水、組織サンプル（例えば、腫瘍サンプル）または細胞を含む。他の被験体サンプルとしては、涙、血清、脳脊髄液、糞便、唾液、および細胞抽出物が挙げられる。一実施形態において、サンプルは被験体から取り出される。特定の実施形態において、サンプルは尿または血清である。別の実施形態において、サンプルは腹水を含まないか、腹水サンプルではない。別の実施形態において、サンプルは腹膜液を含まないか、腹膜液ではない。一実施形態において、サンプルは細胞を含む。別の実施形態において、サンプルは細胞を含まない。ある実施形態において、サンプルは画像化された（例えばPETスキャン、血流を検出するためのMRIなどの機能画像検査法を用いる）、または低酸素レベルを測定するために試験される被験体の一部（例えば、プローブを用いて低酸素レベルをアッセイされる腫瘍組織）であり得る。サンプルは典型的には分析の前に被験体から取り出されるが、腫瘍サンプルは、例えば画像法または他の検出法を用いて被験体中で分析することが可能である。
【００７８】
いくつかの実施形態において、サンプルの一部のみを用いて、本明細書に記載される任意の方法を用いて低酸素レベルまたは腫瘍のレベルを測定するためのアッセイをおこなう。ある実施形態において、低酸素レベルは乳酸脱水素酵素(LDH)のアイソフォームもしくはサブユニットまたはサブユニットもしくはアイソフォームの任意の組合せ（総LDHを含む）のレベルにより示されるか、またはサンプルの種々の部分を用いて種々のアッセイをおこなって低酸素レベルまたはLDHのアイソフォームもしくはサブユニットのレベルを測定する。また、多くの実施形態において、サンプルはアッセイの前に物理的または化学的手段により前処理されてもよい。例えば、サンプル、例えば血液サンプルに対して、サンプルに低酸素またはLDHのレベルのアッセイをおこなう前に、遠心分離、希釈および／または可溶化物質による処理をおこなうことができる。このような技術は、本発明のアッセイの精度、信頼性および再現性を向上させるのに役立つ。
【００７９】
本明細書において使用される場合、用語「対照サンプル」は、例えば、癌にかかっていない健康な被験体から得たサンプル、評価される被験体と比較して重篤度の低いまたはより進行の遅い癌を有する被験体から得たサンプル、別のタイプの癌または疾患を有する被験体から得たサンプル、治療前の被験体から得たサンプル、疾患状態でない組織（例えば、非腫瘍組織）のサンプル、同じ起源で腫瘍部位と近い部分から得たサンプル等を含む、臨床的に適切な比較サンプルを指す。対照サンプルは、1またはそれ以上の被験体に由来するサンプルを含み得る。また、対照サンプルは評価される被験体からより早い時点で作られたサンプルであってもよい。例えば、対照サンプルは、評価される被験体から、癌の発病よりも前、疾患のより早い段階、または治療もしくは治療の一部の開始前に採取されたサンプルであり得る。対照サンプルは、キットにより提供される精製されたサンプル、タンパク質、および／または核酸であり得る。このような対照サンプルは、試験サンプルにおける分析物の定量測定を可能にするために、例えば希釈系列で希釈することができる。また、対照サンプルは、癌の動物モデルまたは動物モデルに由来する組織もしくは細胞系から得たサンプルであってもよい。一群の測定からなる対照サンプルにおける低酸素レベルまたはLDHレベルは、例えば、例えば平均、中央値、モーダル値を含む中心的傾向の測定などの適切な統計的手段に基づいて決定することができる。
【００８０】
用語「対照レベル」は、被験体に由来するサンプルにおける低酸素レベルまたはLDHレベルと比較するために使用される一般に認められたまたは事前に測定された低酸素レベルまたはLDHレベルを指す。例えば、一実施形態において、低酸素対照レベルは進行の遅い疾患を有する被験体（単数または複数）から得たサンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。別の実施形態において、低酸素対照レベルは進行の速い疾患を有する被験体（単数または複数）から得たサンプルにおけるレベルに基づく。別の実施形態において、低酸素対照レベルは、非罹患者、すなわち疾患でない被験体（単数または複数）、すなわち癌を持たない被験体から得たサンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。さらに別の実施形態において、低酸素対照レベルは、癌治療の投与の前の被験体（単数または複数）から得たサンプルにおける低酸素レベルに基づく。別の実施形態において、低酸素対照レベルは、試験化合物と接触していない癌を有する被験体（単数または複数）から得たサンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。別の実施形態において、低酸素対照レベルは、試験化合物と接触した癌を持たない被験体（単数または複数）から得たサンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。一実施形態において、低酸素対照レベルは、癌の動物モデル、癌の動物モデルに由来する細胞または細胞系から得たサンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。別の実施形態において、低酸素対照レベルは図表に一覧が記載されている。
【００８１】
一実施形態において、対照は、例えば、癌を持たない被験体の集団から得た低酸素レベルの平均を用いて事前に決定された対照などの標準化された対照である。本発明のさらに別の実施形態において、低酸素対照レベルは、癌を有する被験体に由来する非癌性サンプル（単数または複数）における低酸素レベルに基づく。例えば、バイオプシーまたは他の医療処置により組織の一部に癌が存在することが明らかになった場合に、低酸素対照レベルは組織の非罹患部分を用いて測定され、この対照レベルを組織の罹患部分における低酸素レベルと比較することができる。同様に、バイオプシーまたは他の医療処置により組織の一部に癌が存在することが明らかになった場合、低酸素対照レベルは組織の非罹患部分を用いて測定され、この対照レベルを組織の罹患部分における低酸素レベルと比較することができる。
【００８２】
本明細書において使用される場合、用語「獲得する」は、製造すること、購入すること、または他の手段により所有するようになることであると理解される。
【００８３】
本明細書において使用される場合、用語「乳酸脱水素酵素」は、NADHとNAD+との相互変換を伴ってピルビン酸と乳酸との相互変換をおこなう酵素を指す。低酸素の条件下では、反応はピルビン酸から乳酸への変換に有利である。酸素正常状態、または低レベルの低酸素条件下では、反応は乳酸からピルビン酸への変換に有利である。機能性乳酸脱水素酵素は、それぞれLDHAおよびLDHB遺伝子によりコードされるMおよびHタンパク質サブユニットから構成されるホモまたはヘテロテトラマーである：LDH-1(4H)は、例えば心臓および赤血球に見いだされる優勢型であり；LDH-2(3H1M)は、例えば細網内皮系に見いだされる優勢型であり；LDH-3(2H2M)は、例えば肺に見いだされる優勢型であり；LDH-4(1H3M)は、例えば腎臓、胎盤および膵臓に見いだされる優勢型であり；かつLDH-5(4M)は、例えば肝臓および横紋筋に見いだされる。典型的には、これらの組織中に多様な形態のLDHが見いだされる。乳酸脱水素酵素は(EC 1.1.1.27)として分類される。試験される特定の比は腫瘍型特異的であり得る。
【００８４】
本明細書において使用される場合、用語「低酸素状態」および「低酸素」は、癌または腫瘍が低酸素の微小環境またはあまり酸素を供給されていない微小環境を有する状態を指す。低酸素状態は腫瘍の成長が新しい血管形成を超過する（上回る）場合に起こり、腫瘍は低酸素環境下での生存および増殖を可能にするために遺伝的および適応的変化を起こさなければならない。腫瘍内低酸素状態の発生は固形腫瘍の一般的な徴候である。腫瘍の微小環境があまり酸素を供給されていない場合、HIF1α経路、VEGF経路、およびmTOR経路を含むがこれらに限定されない酸素感受性経路に対する依存がより大きくなる。これらの経路は、血管新生、解糖、成長因子シグナル伝達、不死化、遺伝的不安定性、組織浸潤および転移、アポトーシス、ならびにpH制御などの重大な適応メカニズムを促進する（例えば、Harris, Nature Reviews, 2:38-47, 2002を参照されたい）。これらの経路は浸潤および転移をも促進する可能性がある。したがって、エレスクロモールによる癌または腫瘍を有する被験体の治療は、被験体がモジュレートされたレベルの低酸素状態、例えば低レベルの低酸素状態を示す腫瘍を有する場合により効果的である。腫瘍における低酸素レベルは腫瘍以外の部位からサンプルを得ることにより測定することができるので、本明細書において使用される場合、モジュレートされたレベルの低酸素状態を示すのが被験体中に存在する腫瘍である場合には、被験体はモジュレートされたレベルの低酸素状態を示すと述べることができる。本明細書において使用される場合、モジュレートされたレベルの低酸素状態を有する被験体は典型的には全身性酸素平衡異常または腫瘍から離れた部位における虚血性疾患に罹っていないと理解される。
【００８５】
本明細書において使用される場合、用語「低酸素レベル」は、低い酸素レベルを示す1種以上のマーカーの量、または例えばワールブルグ効果のために、低い酸素レベルを有する細胞の特徴を有する細胞または低い酸素レベルを有する細胞に特徴的な生物学的経路を使用する細胞の量として理解される。このようなマーカーとしては、乳酸脱水素酵素(LDH)、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームもしくはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、GLUT-1、GLUT-2、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)が挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍の大きさもまた低酸素レベルと相関する。また、低酸素レベルはPETスキャンにより測定することができる。LDHは、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHM（LDHAとしても知られる）およびLDHH（LDHBとしても知られる）などのLDHの1種以上のアイソフォームまたはサブユニットであり得る。別の実施形態において、低酸素レベルは2種以上のLDHの形態の比、例えばLDH5:LDH1の比を測定することにより決定される。一実施形態において、LDHはすべてのLDHのアイソフォームまたはサブユニットのサンプル全体である。「低酸素誘導因子」または「HIF」は細胞環境における利用可能な酸素の変化に応答する転写因子である。HIF1αは、低酸素遺伝子発現および酸素ホメオスタシスの主制御因子である。HIFは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βを含むHIFの1種以上のサブユニットまたはアイソフォームであり得る。VEGFは、血管新生促進性VEGF-Aおよび血管新生抑制性VEGF-Bを含むVEGFの種々のスプライシング型の1種以上であり得る。
【００８６】
本明細書において使用される場合、用語「LDHレベル」は、サンプル中に存在するLDHの量を指し、そのサンプルを得た被験体中の腫瘍における低酸素状態の有無を示すために使用することができる。LDHはピルビン酸の乳酸への変換を可能にし、低酸素条件下での解糖の重要な構成要素である。LDHは、総LDH、またはLDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1、LDHM（LDHAとしても知られる）およびLDHH（LDHBとしても知られる）などのLDHの1種以上のアイソフォームまたはサブユニットであり得る。モジュレートされたレベルのLDHとは、高レベルのLDHまたは低レベルのLDHを指す。一実施形態において、PETスキャンは高レベルのLDHの指標である（好気的解糖が活性である場合に陽性である）。別の実施形態において、PETスキャンは低レベルのLDHの指標である（好気的解糖が不活性である場合に陰性である）。一実施形態において、高レベルのLDHは、正常なレベルのLDHの値の少なくとも1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、4、5、6、7、8、9、または10倍である。別の実施形態において、低レベルのLDHは、正常なレベルのLDHの値の0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、または0.1倍である。正常なレベルのLDHまたは任意の他のマーカーは、正常の範囲内の任意の値、または正常値の上限、または正常値の下限であると定義することができる。サンプルにおけるLDHレベルを測定するためのアッセイは当業者に周知であり、本明細書に記載されている。
【００８７】
別の実施形態において、LDHレベルは、LDHアイソフォームのタンパク質もしくは活性の相対レベルまたはLDHアイソフォームの互いのもしくは総LDHに対する比における変化であると理解することができる。アイソフォームの相対比の変化は低酸素レベルの指標となり得る。例えば、LDHBに対するLDHAのレベルの相対的増大は低酸素状態の増大の指標となり得る。あるいは、LDH1または総LDHのレベルに対するLDH5および／またはLDH4のレベルの相対的増大は、個々にまたは合計でのいずれであっても、低酸素状態の増大の指標となり得る。相対レベルは、正常な被験体、例えば癌または虚血性疾患を持たない被験体から得た適切な対照サンプルにおける相対レベルと比較することができる。正常レベルは正常の上限レベルと正常の下限レベルの間の範囲であるとみなすことができる。ある実施形態において、高レベルのLDHは、LDHBまたはLDH1のそれぞれのレベルに対する、または総LDHに対する、LDHAまたはLDH5および／またはLDH4のレベルの相対的増大であると理解することができ、LDHBまたはLDH1のそれぞれ、または総LDHのレベルに対するLDHAまたはLDH5および／またはLDH4の正常な比の値の、少なくとも1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、4、5、6、7、8、9、または10倍となる。別の実施形態において、低レベルのLDHは、LDHBまたはLDH1のそれぞれのレベルに対するLDHAまたはLDH5および／またはLDH4が、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、または0.1となる。
【００８８】
本明細書において使用される場合、「正規化された比」は、外部標準（例えば集団対照レベル）または内部標準（例えば、正常な組織から得たレベル、より早い時点において得たレベル、1種以上のアイソフォームのレベル）のいずれかの基準と比較した2つの値の比率であると理解され、個体間のサンプルの比較を可能にする。例えば、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの正規化されたレベルの比は、サンプルにおけるLDHの第1のアイソフォームまたはサブユニットのレベルを対照サンプルと比較して第1の正規化されたレベルを与え、LDHの第2のアイソフォームまたはサブユニットまたは総LDHのレベルを対照サンプルと比較して第2の正規化されたレベルを与え、第1の正規化されたレベルと第2の正規化されたレベルとの比を計算してLDHアイソフォームまたはサブユニットの正規化された比を与える（ここで、第1のレベルおよび第2のレベルのうちの少なくとも1つは総LDHではない）ことにより、LDHの2種のアイソフォームもしくはサブユニットまたは総LDHの2つの正規化されたレベルの比を決定することにより決定することができる。ある実施形態において、低レベルの低酸素状態は、LDHAのLDHBに対するULNの正規化された比が1.0以下である場合、またはLDH5および／またはLDH4のLDH1または総LDHに対するULNの正規化された比が1.0以下である場合である。
【００８９】
サンプルにおけるLDHレベルを測定するためのアッセイは当業者に周知である。例えば、米国特許公報第2010/0178283号および第2008/0213744号ならびに米国特許第4,250,255号および第6,242,208号を参照されたい。これらの公報および特許のそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。種々のLDHアイソフォームの核酸およびアミノ酸配列は公知であり、公開データベース（例えば、blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）で入手可能である。
【００９０】
種々のマーカーのレベルは、翻訳後修飾を受けたマーカーのレベルを含み得ると理解される。例えば、HIFのアイソフォームの総量は変わらないが、水酸化された形のHIFの量は増大し得る。さらに、HIFおよび他の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドは、低酸素状態以外の多くの条件、例えば、pHの変化、O2もしくはH2O2のレベルの変化等によりアップレギュレートされ得ることを注意しておきたい。したがって、本明細書において使用される場合、用語「発現のレベル」はすべての低酸素応答因子を包含することを意図するが、それらの発現レベルにおける変化は、実際には腫瘍に利用可能な酸素の量を直接反映する場合と反映しない場合がある。
【００９１】
低酸素マーカーのレベルを検出する方法は当業者に周知である。低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドに対する抗体および該ポリペプチドを検出するためのキットは多くの商業的供給者から購入することができる。あるいは、当業者に公知の通常の方法（例えば、動物の免疫化、ファージディスプレイ等）を用いて、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドまたはそのサブユニットもしくはアイソフォームに対する抗体を作り、特徴づけることが可能である。抗体は、ELISA、RIAまたは他のイムノアッセイ法、好ましくは体液のサンプルまたはホモジナイズされた固体サンプルにおけるタンパク質の定量的検出のための自動化された方法を用いて、低酸素レベルの検出に使用することができる。低酸素状態は、タンパク質の種々のアイソフォームの活性を分解するためのゲルアッセイを含む酵素活性アッセイ（例えば、LDH活性、キナーゼ活性）により検出することができる。あるいは、腫瘍サンプルおよび組織切片に対して免疫組織化学的方法を使用することができる。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素状態を検出するために使用することができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を組織における低酸素状態の指標として使用することができる。腫瘍にセンサーを挿入することにより低酸素状態の直接的測定をおこなうことができる。定性的採点法(Qualitative scoring methods)および染色を検出するスキャン法は当業者に公知である。定性的採点法を使用する場合、2人の独立した、盲検による技術者、病理医、または他の熟練した個人がそれぞれのサンプルを分析し、その際に採点における何らかの有意な不一致を解決するための特定の方法（例えば第三者による組織サンプルの再調査）を有することが好ましい。
【００９２】
あるいは、低酸素レベルを検出するための核酸に基づく方法も当業者に周知である。定量的逆転写リアルタイム(rt)PCRのためのプライマーおよびプローブを設計する方法は当業者に公知である。RNAレベルを検出するためにノーザンブロットをおこなう方法は当業者に公知である。核酸検出法は、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)およびin situ PCRも含み得る。定性的採点法および染色を検出するスキャン法は当業者に公知である。定性的採点法を使用する場合、2人の独立した、盲検による技術者、病理医、または他の熟練した個人がそれぞれのサンプルを分析し、その際に、採点における何らかの有意な不一致を解決するための特定の方法（例えば第三者による組織サンプルの再調査）を有することが好ましい。サンプルにおけるLDHレベルを測定するためのアッセイは当業者に周知である。例えば、米国特許公報第2010/0178283号および第2008/0213744号ならびに米国特許第4,250,255号および第6,242,208号を参照されたい。これらの公報および特許のそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００９３】
「ベースライン」は、患者の研究を開始した時点または治療を開始した時点の低酸素レベルまたはLDHレベルを指し、患者が治療を受けている間または治療後の低酸素レベルまたはLDHレベルと区別するために使用する。
【００９４】
「上昇」または「低下」は、歴史的正常対照サンプルに基づく正常値の上限（「ULN」）または正常値の下限（「LLN」）に対する相対的な患者の値を指す。被験体中に存在する低酸素マーカーのレベルは疾患の結果であって、治療の結果ではなく、典型的には対照ではないため、疾患の発症以前に患者から得られたサンプルを入手できる可能性は低いであろう。異なる研究室は異なる絶対的結果を有し得るので、LDH値はその研究室の正常値の上限(ULN)と比較して提出される。LDHはIU/ml（国際単位/ml）で表すことができる。LDHについて一般に承認されたULNは234 IU/mlであるが、この値はすべてのサンプルにおけるLDHの検出のすべての方法に普遍的に承認されていないし、適用可能でもない。
【００９５】
ULNおよびLLNの特定の値は、例えばアッセイのタイプ（例えば、ELISA、酵素活性、免疫組織化学、画像法）、試験されるサンプル（例えば、血清、腫瘍組織、尿）、および他の当業者に公知の考慮事項にも依存する。ULNまたはLLNは正常と異常の間のカットオフを定義するために使用することができる。例えば、低レベルのマーカー（例えば、LDH）は、そのマーカーのULN以下のマーカーレベルであり、高レベルはULNよりも大きいすべての値であると定義することができる。カットオフはULNの分数の量として定義することも可能である。例えば、低レベルのマーカーは、約0.5 ULN以下、0.6 ULN以下、0.7 ULN以下、0.8 ULN以下、0.9 ULN以下、1.0 ULN以下、1.1 ULN以下、1.2 ULN以下、1.3 ULN以下、1.4 ULN以下、1.5 ULN以下、1.6 ULN以下、1.7 ULN以下、1.8 ULN以下、1.9 ULN以下、2.0 ULN以下、2.5 ULN以下、3.0 ULN以下、または4.0 ULN以下のレベルであり、対応する高レベルのマーカーは低レベルよりも大きい値であると理解することができる。ある実施形態において、上に定義された通りの被験体サンプル中の低レベルのマーカーの存在を、被験体が特定の治療的介入に応答するかしないかの指標とすることができる。ある実施形態において、上に定義された通りの被験体サンプル中の高レベルのマーカーの存在を、被験体が特定の治療的介入に応答するかしないかの指標とすることができる。
【００９６】
マーカーのレベルは、ULN値に基づいて、例えば、低、中間、および高レベルにさらに階層化することができる。例えば、上に定義された通りの被験体サンプル中の低レベルのマーカーの存在を、被験体が特定の治療的介入に応答するかしないかの指標とすることができる。中間レベルのマーカー、例えば、0.5 ULN、0.6 ULN、0.7 ULN、0.8 ULN、0.9 ULN、1.0 ULN、1.1 ULN、1.2 ULN、1.3 ULN、1.4 ULN、1.5 ULN、1.6 ULN、1.7 ULN、1.8 ULN、1.9 ULN、および2.0 ULNの値の中の任意の範囲により括られた範囲を中間の範囲であると見なすことができ、そこでは、マーカーのレベルが中間であり、被験体は特定の治療的介入に応答する場合と応答しない場合がある。中間レベルよりも大きい高レベルは、被験体が特定の治療的介入に応答するかしないかの指標となり得る。
【００９７】
同様に、LDHサブユニットまたはアイソフォームの比のカットオフは、ULN、LLN、または低酸素状態の高レベルと低レベルの間の差の中間値と比較して、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0またはそれ以上の任意の値またはその値により括られる範囲であると定義することができる。
【００９８】
マーカーの発現の「正常」レベルは、癌に冒されていない被験体または患者の細胞におけるマーカーの発現レベルである。一実施形態において、発現の「正常」レベルは、正常酸素圧条件下での、虚血性または血管新生要素を含む疾患または症状に罹患していないまたは罹患していることが知られていない被験体におけるマーカーの発現レベルを指す。
【００９９】
マーカーの「過剰発現」または「高レベルの発現」は、発現を評価するために採用したアッセイの標準誤差よりも大きい試験サンプルにおける発現レベルを指し、好ましくは、対照サンプル（例えば、マーカーに関連する疾患、すなわち癌を持たない健康な被験体から得たサンプル）におけるマーカーの発現レベルの少なくとも1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、4、5、6、7、8、9、または10倍である。一実施形態において、マーカーの発現はいくつかの対照サンプルにおけるマーカーの平均発現レベルと比較される。
【０１００】
マーカーの「低レベルの発現」または「過小発現」は、対照サンプル（例えば、マーカーに関連する疾患、すなわち癌を持たない健康な被験体から得たサンプル）におけるマーカーの発現レベルの0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、または0.1倍よりも小さい試験サンプルにおける発現レベルを指す。一実施形態において、マーカーの発現はいくつかの対照サンプルにおけるマーカーの平均発現レベルと比較される。
【０１０１】
本明細書において用語「同一の」または「同一性」は、アミノ酸および核酸配列に関して使用され、公知の遺伝子またはタンパク質配列と、比較する配列の長さ全体に渡って、少なくとも30%の同一性、より好ましくは40%、50%、60%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、および最も好ましくは95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上の同一性を有する遺伝子またはタンパク質配列を指す。配列全体に渡って高レベルの同一性を有するタンパク質または核酸配列は、相同であると言うことができる。「相同な」タンパク質は、比較するタンパク質の少なくとも1つの生物学的活性を有し得る。一般に、タンパク質に関して、比較する配列の長さは、少なくとも10アミノ酸、好ましくは10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、175、200、250、または少なくとも300アミノ酸またはそれ以上である。核酸に関して、比較する配列の長さは、一般に、少なくとも25、50、100、125、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、または少なくとも850ヌクレオチドまたはそれ以上である。
【０１０２】
「ハイブリッド形成」は、種々のストリンジェンシーの条件下で、相補的なポリヌクレオチド配列、またはその一部の間で対を作って二重らせん分子を形成することを意味する（例えば、Wahl and Berger Methods Enzymol. 152:399, 1987; Kimmel, Methods Enzymol. 152:507, 1987を参照されたい）。例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常約750 mMのNaClおよび75 mMのクエン酸三ナトリウムよりも低い値、好ましくは約500 mMのNaClおよび50 mのクエン酸三ナトリウムよりも低い値、最も好ましくは約250 mMのNaClおよび25 mMのクエン酸三ナトリウムよりも低い値である。低ストリンジェンシーハイブリッド形成は有機溶媒、例えばホルムアミドが存在しない場合に得られる一方で、高ストリンジェンシーハイブリッド形成は少なくとも約35%のホルムアミド、および最も好ましくは少なくとも50%のホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約30℃、より好ましくは少なくとも約37℃、最も好ましくは少なくとも約42℃の温度を含む。ハイブリッド形成時間、界面活性剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム(SDS)）の濃度、および担体DNAを加えるか除くかなどの、さまざまな付加的パラメーターは当業者に周知である。必要に応じてこれらの種々の条件を組み合わせることにより、種々のレベルのストリンジェンシーが達成される。好ましい実施形態において、ハイブリッド形成は30℃で、750 mMのNaCl、75 mMのクエン酸三ナトリウム、および1%のSDS中で起こる。より好ましい実施形態において、ハイブリッド形成は、37℃で、500 mMのNaCl、50 mMのクエン酸三ナトリウム、1%のSDS、35%のホルムアミド、および100μg/mlの変性サケ精子DNA(ssDNA)中で起こる。最も好ましい実施形態において、ハイブリッド形成は、42℃で、250 mMのNaCl、25mMのクエン酸三ナトリウム、1%のSDS、50%のホルムアミド、200μg/mlのssDNA中で起こる。これらの条件に対する有用な変更は当業者には容易に明らかになるであろう。
【０１０３】
本明細書において使用される場合、用語「酸素感受性経路」は、低酸素状態により活性化される細胞シグナル伝達経路である。酸素感受性経路は低酸素状態によりアップレギュレートされ得る。あるいは、酸素感受性経路は低酸素状態によりダウンレギュレートされ得る。酸素感受性経路としては、HIF経路（例えば、HIF1α経路）、VEGF経路、およびmTOR経路が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、用語「低酸素状態によりモジュレートされる遺伝子」または「低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチド」は、低酸素状態によりアップレギュレートまたはダウンレギュレートされる遺伝子またはタンパク質を指す。
【０１０４】
本明細書において使用される場合、用語「HIF経路」および「HIF経路のメンバー」は、HIF-1およびHIF-2により制御されるタンパク質または他のシグナル伝達分子を表す。低酸素誘導因子1(HIF-1)は、低酸素状態に対する細胞の応答において必須の役割を担うことが示されている転写因子である。低酸素刺激により、HIF-1は、それらのプロモーター中の低酸素応答要素(HRE)を含有する遺伝子を活性化し、それにより酸素の利用可能性の低い条件下での細胞の生存を促進する一連の遺伝子産物をアップレギュレートすることが示されている。公知のHIF応答性遺伝子のリストには、解糖酵素（例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)）、エノラーゼ-1(ENO-I)、およびアルドラーゼA、グルコース輸送体(GLUT 1およびGLUT 3)、血管内皮成長因子(VEGF)、誘導型一酸化窒素合成酵素(NOS-2)、およびエリトロポエチン(EPO)が含まれる。細胞の嫌気性解糖への切り替え、およびVEGFによる血管新生のアップレギュレートは、酸素の要求を減少させ、組織への酸素の送達を最大化するために脈管構造を増大させることにより低い酸素分圧の条件下での細胞の生存を最大化する方向に調整する。HIF-1転写複合体は、最近、2つの塩基性ヘリックス-ループ-ヘリックスタンパク質であるHIF-1αおよびHIF-1β（ARNT、アリール炭化水素受容体核トランスロケーターとしても知られる）のヘテロ二量体を含むことが示されている。
【０１０５】
HIF-1αは、塩基性ヘリックス-ループ-ヘリックスPASドメインタンパク質ファミリーのメンバーであり、そのカルボキシ末端側の半分に存在する2つのトランス活性化ドメイン(TAD)および分子のN末端側の半分に位置するDNA結合活性を含むおよそ120 kDaのタンパク質である。HIF-1αは、酸素正常状態の条件下でユビキチンプロテアソーム経路により構成的に分解し、このプロセスはvon Hippel-Lindau(VHL)腫瘍抑制因子タンパク質のHIF-1への結合により促進される。低酸素条件下では、HIF-1の分解は遮断され、活性なHIF-1αが蓄積する。それに続くHIF-1αとARNTとの二量体化により核の中に活性HIF転写複合体が形成され、これがHIF応答遺伝子上のHREに結合し、これを活性化する。
【０１０６】
本明細書において使用される場合、用語「VEGF経路」および「VEGF経路のメンバー」は、VEGFにより制御されるタンパク質および他のシグナル伝達分子を表す。例えば、VEGF経路のメンバーとしては、VEGFR1、2、および3；PECAM-1、LacCerシンターゼ、およびPLA2が挙げられる。
【０１０７】
本明細書において使用される場合、用語「mTOR経路」および「mTOR経路のメンバー」は、mTORにより制御されるタンパク質および他のシグナル伝達分子を表す。例えば、mTOR経路のメンバーとしては、SK6、PDCD4、eIF4B、RPS6、eIF4、4E-BP1、およびeIF4Eが挙げられる。
【０１０８】
「化学療法剤」は、癌治療に使用するための薬物であると理解される。化学療法剤としては、小分子および生物製剤（例えば、抗体、ペプチド薬、核酸薬）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
本明細書において使用される場合、「検出する」および「検出」等は、サンプル中の特定の分析物、例えば、サンプル中の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドまたは低酸素状態によりモジュレートされる遺伝子の識別のためにおこなわれるアッセイであると理解される。サンプル中に検出される分析物または活性の量はゼロであるか、またはアッセイもしくは方法の検出レベル未満である可能性がある。
【０１１０】
用語「モジュレート」または「モジュレーション」は、レベルのアップレギュレート（すなわち、活性化または刺激）、ダウンレギュレート（すなわち、阻害または抑制）、または前記二者（組み合わせたもしくは別々の）を指す。「モジュレーター」は、モジュレートする化合物または分子であり、例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、活性化剤、刺激剤、抑制剤、または阻害剤であり得る。
【０１１１】
本明細書において、用語「発現」は、DNAからポリペプチドが生産される過程を意味するために使用される。該過程は、遺伝子のmRNAへの転写およびこのmRNAのポリペプチドへの翻訳を含む。使用される文脈に依存して、「発現」は、RNA、またはタンパク質、または両者の生産を指す。
【０１１２】
用語「遺伝子の発現のレベル」または「遺伝子発現レベル」は、細胞中の遺伝子によりコードされた、mRNA、ならびにプレmRNA新生転写物、転写プロセシング中間体、成熟mRNAおよび分解生成物のレベル、またはタンパク質のレベルを指す。
【０１１３】
本明細書において使用される場合、「活性のレベル」は、定量的、半定量的、または定性的アッセイにより測定される、タンパク質の活性、典型的には酵素活性の量であると理解される。典型的には、活性は、容易に検出可能な生成物、例えば着色した生成物、蛍光性生成物、放射性生成物を生産する基質を用いるアッセイにおいて生産された生成物の量をモニターすることにより測定される。例えば、サンプル中のLDHのアイソフォームを、ゲル電気泳動を用いて分解することができる。LDH活性を評価するために、乳酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+)、ニトロブルーテトラゾリウム(NBT)、およびフェナジンメトサルフェート(PMS)を加えることができる。LDHは、乳酸をピルビン酸に変換し、NAD+をNADHに還元する。NADHからの水素はPMSによりNBTに伝達され、NBTを紫色のホルマザン色素に還元する。それぞれのLDHイソ酵素活性のパーセンテージならびにそれぞれのアイソフォームの他のアイソフォームもしくは総LDHに対する相対量は、例えば、デンシトメトリーにより測定することができる。
【０１１４】
本明細書において使用される場合、「対照と比較して変化した」サンプルまたは被験体は、正常な、未治療の、または対照サンプルからのサンプルとは統計的に異なるレベルで検出される分析物または診断的もしくは治療的指標（例えば、マーカー）のレベルを有すると理解される。対照サンプルとしては、例えば培養細胞、1以上の実験動物、または1以上のヒト被験体が挙げられる。対照サンプルを選択し、試験する方法は当業者に公知である。分析物は細胞もしくは生物により特徴的に発現または生産される天然の物質（例えば、抗体、タンパク質）またはレポーター構築物により生産される物質（例えば、β-ガラクトシダーゼまたはルシフェラーゼ）であり得る。検出に使用される方法に依存して、変化の量および測定は変化し得る。対照サンプルと比較した変化は、疾患、例えば癌の診断に伴う1以上の徴候または症状の変化も含み得る。統計的有意性の決定方法は当業者に公知であり、例えば、陽性の結果を構成する平均からの標準偏差の数である。
【０１１５】
本明細書において使用される場合、「結合」は、特異的結合パートナーに対して、非特異的結合パートナーと比較して102以上、103以上、好ましくは104以上、好ましくは105以上、好ましくは106以上の選択性を有することであると理解される（例えば、同種の抗体を含むことが知られているサンプルへの抗原の結合）。
【０１１６】
本明細書において使用される場合、「測定」は、ある人または物の状態、例えば、ある状態、バイオマーカー、病状、または生理的状態の有無、レベル、または程度を確認するための、アッセイの実施または診断方法の使用であると理解される。
【０１１７】
本明細書において使用される場合、「処方」とは、被験体に投与するための特定の薬剤（1種または複数種）を示すことであると理解される。
【０１１８】
本明細書において使用される場合、用語「応答する」または「応答」は、治療薬による治療に対して陽性の応答を有することであると理解され、ここで、陽性の応答とは、疾患もしくは状態の少なくとも1つの徴候もしくは症状の減少（例えば、腫瘍の縮小、腫瘍量の減少、転移の阻害または減少、生活の質(「QOL」)の改善、（腫瘍）無増悪期間(「TTP」)の延長、全生存期間(「OS」)の増加等）、または疾患の進行の緩慢化または停止（例えば、腫瘍の成長もしくは転移の停止、または腫瘍の成長もしくは転移の速度の緩慢化）を有することであると理解される。また、応答は、生活の質の改善、または生存期間もしくは無増悪生存期間の増加を含み得る。
【０１１９】
ここで、本発明の好ましい実施形態を詳細に記載する。発明を好ましい実施形態に関連して説明するが、これは本発明をそれらの好ましい実施形態に限定することを意図するものではないことが理解されるであろう。それとは反対に、本発明は代替物、変更、および同等物を、添付する特許請求の範囲により定義される発明の精神および範囲の中に含まれるものとして包含することを意図している。
【０１２０】
エレスクロモール(STA-4783)は、米国特許第7,795,313(参照により本明細書に組み入れられる）に開示され、N-マロニル-ビス(N'-メチル-N'-チオベンゾイルヒドラジド)の名称で表される化合物であり、次の式を有する。
【化２】
2013545759.tif 000004
【０１２１】
エレスクロモールは、転移性黒色腫、前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌および原発性腹膜癌の治療に関する臨床試験が承認または実施されている。ヒトにおけるエレスクロモールの半減期は、単独で投与された場合または別の化学療法剤（例えば、パクリタキセルまたはカルボプラチン）とともに投与された場合、約１時間として測定されている。
【０１２２】
エレスクロモールは、低レベルの低酸素状態を示す癌または腫瘍を有する患者に投与された場合に、疾患、例えば癌の治療における有効性がより高い。別の実施形態において、エレスクロモールは、低レベルのLDHを示す癌または腫瘍を有する患者に投与された場合に、疾患、例えば癌の治療における有効性がより高い。
【０１２３】
I. 投与量および投与方式
投与技術および投与量は、化合物のタイプ（例えば、化学化合物、抗体、アンチセンス、または核酸ベクター）により異なり、当業者に周知であり、容易に決定されるものである。
【０１２４】
本発明の治療化合物は、製薬上許容される希釈剤、担体、または賦形剤と共に、単位剤形として投与することができる。投与は、非経口、静脈内、皮下、経口、または羊水中への直接注入による局所投与であってよい。薬剤の投与は協力して働く多くの人々により実施することができる。薬剤の投与には、例えば、被験体に投与されるべき薬剤を処方することおよび／または直接または他者を介して、特定の薬剤を、自己送達（例えば、経口送達、皮下送達、中心ラインからの静脈内送達等による）；または訓練された専門家による送達（例えば静脈内送達、筋肉内送達、腫瘍内送達等）のいずれかにより服薬するための指示を提供することが含まれる。
【０１２５】
組成物は、経口投与のための丸剤、錠剤、カプセル剤、液剤、もしくは持続放出錠剤；または静脈内、皮下もしくは非経口投与のための液体；または局所投与のためのポリマーもしくは他の持続放出媒体の形態であり得る。
【０１２６】
製剤を製造するための当業者に周知の方法は、例えば、"Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20th ed., ed. A. R. Gennaro, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)に記載されている。非経口投与のための製剤は、例えば、賦形剤、無菌水、生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油、または水素化ナフタレンを含有してもよい。生体適合性、生物分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマーを化合物の放出を制御するために使用してもよい。ナノ粒子製剤（例えば、生物分解性ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）を、化合物の体内分布を制御するために使用してもよい。他の有用であり得る非経口送達系としては、エチレン-酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入システム、およびリポソームが挙げられる。製剤における化合物の濃度は、投与される薬物の投与量および投与経路を含む多くの要因に依存して変化する。
【０１２７】
化合物は、場合により、製薬上許容される塩もしくは脱塩物または遷移金属のキレートもしくは錯体として投与してもよい。米国特許第7,385,084号およびPCT/US2009/61491をそれぞれ参照されたい。。
【０１２８】
経口使用のための製剤としては、無毒の製薬上許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤またはフィラー（例えば、スクロースおよびソルビトール）、平滑剤、滑剤、および粘着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油、またはタルク）であり得る。
【０１２９】
経口使用のための製剤は、咀嚼錠として、または硬ゼラチンカプセル（その中で活性成分が不活性固体希釈剤と混合されている）として、または軟ゼラチンカプセル（その中で活性成分が水または油媒体と混合されている）として提供してもよい。
【０１３０】
化合物を投与する投与量およびタイミングは、被験体の総合的な健康状態および疾患、例えば癌の症状の重篤度を含む種々の臨床的要因に依存する。一般に、腫瘍が検出されると、治療または腫瘍のさらなる進行の防止のためにエレスクロモールの投与を使用する。治療は、1〜100日、より好ましくは1〜60日、最も好ましくは1〜20日の範囲の期間に渡って、または腫瘍の寛解まで続けることができる。多くの化学療法剤、特に長い半減期を有する薬剤は毎日投与されないと理解される。したがって、薬剤は毎日投与しなくても連続的に存在することが可能である。投与量はそれぞれの化合物および状態の重篤度により異なる。投与量は定常状態の血清濃度を達成するように用量設定することができる。投与は用量制限毒性が存在する場合には投与の中断または投与量の減少が可能である。
【０１３１】
II. 本発明の方法
本発明は、腫瘍における低酸素レベルを測定することにより、エレスクロモールによる治療に有利に応答する可能性が高い被験体を識別する方法を提供する。低酸素レベルの測定は、腫瘍における低酸素レベルの1つ以上の指標の存在について、腫瘍組織内のマーカーを直接見ることまたは被験体から得た周辺サンプル（例えば、血液、血清、血漿、リンパ液、尿、脳脊髄液などの体液、または糞便）におけるマーカーを見ることのいずれかによりおこなう。
【０１３２】
分析される具体的な被験体サンプルは、例えば、腫瘍部位に依存する。低酸素状態は腫瘍における血管新生を誘導し、その結果漏出性の血管をもたらし、それが循環におけるマーカーの存在につながる。さらに腫瘍の成長および低酸素状態は典型的には壊死および細胞破壊を伴い、その結果、細胞物質が他の体液または排泄物中にもたらされる。これらの容易に入手できる被験体サンプルにより、治療前および治療の経過中に低酸素マーカーの有無について被験体をモニターすることが可能になる。
【０１３３】
生検は癌の診断の目的で通常おこなわれており、固形癌はさらに化学療法の開始の前に切除されることが多く、これも低酸素レベルを測定するための分析に使用することができる。生検サンプルおよび切除された腫瘍サンプルは、典型的には、少なくともいくらかの腫瘍に隣接する正常組織を含み、これを対照として使用することができる。
【０１３４】
本発明の一実施形態において、低酸素レベルは、低レベルの低酸素状態である。本発明の一実施形態において、LDHのレベルは低レベルのLDHである。
【０１３５】
一実施形態において、低酸素レベルは、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドのレベルを検出すること、または画像法などの1種以上の方法を使用することにより測定する。一実施形態において、低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドは、乳酸脱水素酵素(LDH)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット、低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット、血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、3、ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)である。一実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットは、LDHH、LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1またはLDHM、またはそれらの任意の組合せである。別の実施形態において、LDHのアイソフォームまたはサブユニットはLDH5である。別の実施形態において、HIFのアイソフォームは、HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、およびHIF-2βである。別の実施形態において、VEGFの血管新生促進アイソフォームは、VEGF-Aスプライス変異型の任意の1種またはその組合せである。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素状態を検出するために使用することができる。腫瘍の大きさも低酸素レベルと相関する可能性がある。低酸素レベルはPETスキャンによっても測定することができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を組織における低酸素状態の指標として使用することができる。センサーを腫瘍の中に挿入することによる低酸素状態の直接測定もおこなうことができる。
【０１３６】
低酸素マーカーのタンパク質レベルおよび活性レベル、または低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドを検出する方法は当業者に周知である。低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドに対する抗体および低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドの検出のためのキットは多くの商業的供給者から購入することができる。あるいは、当業者に公知の通常の方法（例えば、動物の免疫化、ファージディスプレイ等）を用いて、1種以上の低酸素状態によりモジュレートされるポリペプチドまたはそのサブユニットもしくはアイソフォームに対する抗体を作り、特徴づけることが可能である。抗体は、ELISA、RIAまたは他のイムノアッセイ法、好ましくは体液のサンプルまたはホモジナイズされた固体サンプルにおけるタンパク質の定量的検出のための自動化された方法を用いて、低酸素レベルの検出のために使用することができる。あるいは、腫瘍サンプルおよび組織切片に対して免疫組織化学的方法を使用することができる。定性的採点法および染色を検出するスキャン法は当業者に公知である。定性的採点法を使用する場合、2人の独立した、盲検による技術者、病理医、または他の熟練した個人がそれぞれのサンプルを分析し、その際に採点における何らかの有意な不一致を解決するための特定の方法（例えば第三者による組織サンプルの再調査）を有することが好ましい。LDHを含む多くの低酸素マーカーは酵素である。酵素活性を、例えばゲルアッセイを用いて、全体としてまたは個々のアイソフォームについてアッセイすることが可能である。
【０１３７】
あるいは、核酸に基づく低酸素レベルの検出方法も当業者に周知である。定量的逆転写リアルタイム(rt)PCRのためのプライマーおよびプローブを設計する方法は当業者に公知である。RNAレベルを検出するためのノーザンブロットをおこなう方法は当業者に公知である。核酸検出法は、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)およびin situ PCRも含み得る。定性的採点法および染色を検出するスキャン法は当業者に公知である。別の態様において、本発明は、被験体が以前に低レベルの低酸素状態を有することを見いだされていた場合の、エレスクロモールによる治療に適した被験体の事前選択の方法を提供する。また、本発明は、被験体から得たサンプルの低レベルの低酸素状態に関する評価の結果を査定することによる、エレスクロモールによる治療に適した被験体の事前選択の方法を提供する。
【０１３８】
このような決定は被験体の腫瘍の低酸素レベルのカルテ審査に基づいておこなうことができる。選択基準は、癌のタイプ、エレスクロモールによる特定の治療レジメン、および癌のタイプにより異なる死に至るまでの治療成績または有意義な追跡調査期間に渡る治療成績（例えば予後不良の転移性または難治性癌は数週間から数か月の追跡調査を必要とするが、予後のより良好な癌は好ましくは数か月から数年の被験体の追跡調査期間を有する）に関する入手可能な情報を含み得る。生存に関する情報に加えて、入手可能な場合には、生活の質、副作用に関する情報、および他の関連する情報を考慮することができる。除外基準には、低酸素状態によりモジュレートされるペプチドのレベルを変化させる可能性がある他の疾患または状態（例えば心臓または血管の虚血性疾患、血行不良、糖尿病、黄斑変性、最近の脳卒中、または他の虚血性事象もしくは状態）の存在が含まれる。他の除外基準は、入手可能なサンプルおよび患者の集団、例えば特定の薬剤による以前の治療に基づいて選択することができる。
【０１３９】
被験体を種々の基準に基づいて群に分類することが可能である。エレスクロモールにより治療されたが低酸素マーカーを測定されなかった被験体を、被験体における低酸素レベルに基づいて選択されていない治療集団におけるエレスクロモールの有効性を理解するための階層化されていない対照群として使用することができる。あるいは、研究において分析された集団を、階層化されていない集団をエレスクロモールへの応答について分析した歴史的対照サンプルと比較することができる。
【０１４０】
低酸素レベルを得た被験体を、高レベルの低酸素状態を有する群および低レベルの低酸素状態を有する群、ならびに被験体の分布に依存して、場合により中レベルの低酸素状態を有する被験体の群の、2以上の群に分割することができる。被験体およびサンプルは、分析のために、他の群、例えば、生存期間、エレスクロモールによる治療レジメン、癌のタイプ、以前の失敗した治療等に分割することも可能であると理解される。好ましくは、被験体のそれぞれにおいて同じ低酸素マーカー、例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)または低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット；血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3；GLUT-1、GLUT-2、ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)を測定する。腫瘍の大きさも低酸素レベルと相関するマーカーとすることができる。低酸素レベルのマーカーはPETスキャンにより測定することも可能である。さらに、同じタイプの被験体サンプル、例えば、血液、血清、リンパ液、腫瘍組織等を、低酸素レベルのマーカーの存在について試験することが好ましい。低酸素レベルは、定量的、半定量的、または定性的免疫組織化学的方法、免疫アッセイ（例えば、ELISAアッセイ）；逆転写PCRアッセイ、特に定量的PCR法、例えば、リアルタイムPCR；ノーザンブロットアッセイ、酵素活性アッセイ（例えば、乳酸脱水素酵素活性について、キナーゼ活性について）；およびin situハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイ）を用いて、腫瘍サンプルにおいて直接測定することができることが理解される。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素状態を検出するためのマーカーとして使用することができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を組織における低酸素マーカーとして使用することができる。低酸素状態の直接測定を実施して、センサーを腫瘍の中に挿入することにより低酸素マーカーを提供することができる。ここでも、特に定量的評価方法を使用する場合には、すべてのサンプルに対して同じ低酸素マーカーのレベルの測定方法を使用することが好ましい。
【０１４１】
低酸素レベルに基づく被験体の治療成績を、2つの群の間で治療成績が異なるかどうかを決定するために分析することができる。治療成績はさらに、エレスクロモールにより治療された階層化されていない群と比較することもできる。統計的分析および統計的有意性の決定の方法は当業者に公知である。治療基準を選択するための適切なカットオフレベルを決定する方法は、当業者の能力の範囲内である。分析により、低レベルの低酸素状態を有する被験体は、高レベルの低酸素状態を有する被験体と比較して、より良好な応答、例えば、失敗までの時間の長さ、より長い生存期間、より良い生活の質、腫瘍の大きさの減少、より良いエレスクロモールの耐容性等のうちの1つ以上を有することが証明されている。
【０１４２】
別の態様において、本発明は、被験体が低レベルの低酸素状態を有することが以前に見いだされている場合の、エレスクロモールによる治療に適した被験体の事前選択の方法を提供する。また、本発明は、被験体から得たサンプルのモジュレートされたレベルの低酸素状態に関する評価の結果を査定することによる、エレスクロモールによる治療に適した被験体の事前選択の方法であって、ここで、被験体が低レベルの低酸素状態を有することが見いだされている、前記方法を提供する。このような決定は歴史的サンプルにおいて観察された低酸素レベルに基づいておこなうことができる。治療中の被験体から採取したサンプルを用いる分析をおこなって、被験体の治療中に評価されたマーカーに基づく腫瘍の低酸素レベルに基づいて、エレスクロモールの癌治療に対する有効性を決定することができる。選択基準は、癌のタイプ、エレスクロモールによる特定の治療レジメン、および癌のタイプにより異なる死に至るまでの治療成績または有意義な追跡調査期間に渡る治療成績（例えば予後不良の転移性または難治性癌は数週間から数か月の追跡調査を必要とするが、予後のより良好な癌は好ましくは数か月から数年の被験体の追跡調査期間を有する）に関する入手可能な情報である。生存に関する情報に加えて、入手可能な場合には、生活の質、副作用に関する情報、および他の関連する情報を考慮する。除外基準には、低酸素状態によりモジュレートされるペプチドのレベルを変化させる可能性がある他の疾患または状態（例えば心臓または血管の虚血性疾患、血行不良、糖尿病、黄斑変性、最近の脳卒中、または他の虚血性事象もしくは状態）の存在が含まれる。他の除外基準は、入手可能なサンプルおよび患者の集団、例えば特定の薬剤による以前の治療に基づいて選択することができる。
【０１４３】
サンプルを低酸素レベルについて分析することができる。好ましくは、すべてのサンプルは同じタイプ（1種または複数種）、例えば、血液、血漿、リンパ液、腫瘍組織である。被験体サンプルの入手可能性に依存して、分析は2種（またはそれ以上）のタイプの被験体サンプル、例えば血清および腫瘍組織を用いておこなうことができる。十分な材料が入手可能である場合には、種々の部分の腫瘍組織、例えば、壊死性コアに隣接する、腫瘍の中心の、腫瘍脈管構造に隣接するまたは腫瘍脈管構造を含む、正常組織に隣接する等の部分を分析することも可能である。それぞれの被験体において1種以上の低酸素マーカー、例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)または低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット；血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3；GLUT-1、GLUT-2、ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)を測定することが可能である。マーカーの酵素的アッセイをおこなうことができる。腫瘍の大きさも低酸素レベルと相関するマーカーとすることができる。低酸素レベルのマーカーはPETスキャンにより測定することも可能である。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素状態を検出するためのマーカーとして使用することができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を、組織における低酸素マーカーとして使用することができる。センサーを腫瘍の中に挿入することにより低酸素状態の直接測定を実施して、低酸素マーカーを提供することができる。
【０１４４】
さらに、同じタイプの被験体サンプル、例えば、血液、血清、リンパ液、腫瘍組織等を、低酸素レベルに関するマーカーの存在について試験することが好ましい。低酸素レベルは、定量的、半定量的、または定性的免疫組織化学的方法、免疫アッセイ（例えば、ELISAアッセイ）；逆転写PCRアッセイ、特に定量的PCR法、例えば、リアルタイムPCR；ノーザンブロットアッセイ、酵素活性アッセイ（例えば、乳酸脱水素酵素活性について、キナーゼ活性について）；およびin situハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイ）を用いて、腫瘍サンプルにおいて直接測定することができることが理解される。ここでも、特に定量的評価方法を使用する場合には、すべてのサンプルに対して同じ低酸素マーカーのレベルの測定方法を使用することが好ましい。
【０１４５】
別の態様において、本発明は低レベルの低酸素状態を有する被験体においてエレスクロモールにより癌を治療する方法を提供する。該方法は、癌を有するか癌に罹りやすく、さらに低レベルの低酸素状態を有する被験体に、癌を治療するためにエレスクロモールを投与することを含む。他の方法は、癌を有するか癌にかかりやすく、低レベルの低酸素状態を有する被験体にエレスクロモールおよび少なくとも1種の化学療法剤を投与することにより癌を治療することを含む。ある実施形態において、被験体は以前に化学療法剤により治療されている。
【０１４６】
他の方法は、被験体が低レベルの低酸素状態を有することが以前に見いだされている場合に、被験体に有効量のエレスクロモールを処方することにより癌を有する被験体を治療する方法を含む。本明細書において使用される場合、用語「処方する」は特定の薬剤（1種または複数種）を被験体に投与するように示すことであると理解される。さらに、本発明は、被験体が低レベルの低酸素状態を有することが以前に見いだされている場合に、被験体に治療上有効量のエレスクロモールを含む組成物を投与することにより癌を有する被験体を効果的に治療する可能性を増大させる方法を含む。
【０１４７】
癌などの複合病の診断および治療は単一の個人、試験、薬剤、または介入によってはおこなわれないことが理解される。例えば、被験体はプライマリーケアの医師に会って懸念を示して腫瘍医を紹介され、この腫瘍医が要求した試験を、放射線医師、放射線医学技術者、物理学者、瀉血専門医、病理医、研究室技術者、ならびに放射線腫瘍医、臨床腫瘍医、および腫瘍外科医を含むがこれらに限定されない多くの個人のいずれかが設計、実施、および分析する。癌と診断された被験体に対する薬剤の選択、投薬、および投与は、放射線医師、放射線医学技術者、物理学者、病理医、点滴をおこなう看護師、薬剤師、ならびに放射線腫瘍医、臨床腫瘍医、および腫瘍外科医を含むがこれらに限定されない多くの個人のいずれかにより実施されるであろう。したがって、本発明の表現の範囲内で、ある被験体が特定のレベルの低酸素状態を有することの確認は、試験の実施および特定のレベルの低酸素状態を有する被験体を示す結果の観察；被験体の試験結果の精査およびその被験体が特定のレベルの低酸素状態を有することの確認；その被験体が特定のレベルの低酸素状態を有することを述べた被験体に関する文書の精査および例えば身分証明書、病院ブレスレット、被験体の同一性を確認するために被験体に氏名および／または他の個人情報を尋ねて被験体の同一性を確認することにより、その被験体が文書において論じられている者であることを確認することを含むがこれらに限定されない、多くの行為のいずれかを含み得ると理解される。
【０１４８】
同様に、薬剤の投与は、協力して働く多くの人々により実施され得る。薬剤の投与には、例えば、被験体に投与されるべき薬剤を処方することおよび／または直接または他者を介して、特定の薬剤を、自己送達（例えば、経口送達、皮下送達、中心ラインからの静脈内送達等による）；または訓練された専門家による送達（例えば、静脈内送達、筋肉内送達、腫瘍内送達等）のいずれかにより服薬するための指示を提供することが含まれる。
【０１４９】
別の態様において本発明は、癌の治療方法を提供する。該方法は、癌を有するか癌に罹りやすく、低レベルの低酸素状態を有する被験体に、エレスクロモールを投与し、それにより癌を治療することを含む。別の方法は、癌を有するか癌に罹りやすい被験体に、エレスクロモールと少なくとも１種の化学療法剤を投与し、それにより癌を治療することを含む。
【０１５０】
本発明の方法を用いて治療または予防し得る癌としては、例えば、聴神経腫、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病(単球性、骨髄芽球性、腺癌、血管肉腫、星細胞腫、骨髄単球性および前骨髄球性)、急性T細胞白血病、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、脳癌、乳癌、気管支原性癌、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、慢性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、大腸癌、頭蓋咽頭腫、嚢胞腺癌、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、異常増殖的変化（異形成および化生）、胎生期癌、子宮内膜癌、内皮肉腫、上衣腫、上皮性癌、赤白血病、食道癌、エストロゲン受容体陽性乳癌、本態性血小板血症、ユーイング腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、神経膠腫、H鎖病、血管芽腫、肝癌、肝細胞癌、ホルモン非感受性前立腺癌、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ芽球性白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、膀胱、乳、結腸、肺、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、および子宮の悪性腫瘍および増殖過剰障害、T細胞またはB細胞起源のリンパ性腫瘍、白血病、リンパ腫、髄様癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄性白血病、骨髄腫、粘液肉腫、神経芽腫、非小細胞肺癌、乏突起膠腫、口腔癌、骨原性肉腫、卵巣癌、膵癌、乳頭状腺癌、乳頭状癌、松果体腫、真性赤血球増加症、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫、脂腺癌、セミノーマ、皮膚癌、小細胞肺癌、固形腫瘍（癌腫および肉腫）、小細胞肺癌、胃癌、扁平上皮癌、滑膜腫、汗腺癌、甲状腺癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、精巣癌、子宮癌、およびウィルムス腫瘍が挙げられる。他の癌としては、原発癌、転移癌、中咽頭癌、下咽頭癌、肝癌、胆嚢癌、小腸癌、尿路癌、腎癌、尿路上皮癌、女性生殖器癌、子宮癌、妊娠性絨毛疾患、男性生殖器癌、精嚢癌、精巣癌、胚細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、甲状腺癌、副腎癌、および脳下垂体腺癌、血管腫、骨および軟部組織から生じる肉腫、カポジ肉腫、神経癌、眼癌、および髄膜癌、神経膠芽腫、神経腫、シュワン腫、白血病などの造血器悪性腫瘍から生じる固形腫瘍、転移性黒色腫、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、消化管間質腫瘍、大腸癌、胃癌、黒色腫、多型性膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺癌、悪性神経膠腫、上皮性卵巣癌、原発性腹膜漿液性癌、転移性肝癌、神経内分泌癌、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳癌、HER2増幅乳癌、頭頚部扁平上皮癌(SCCHN)、鼻咽頭癌、口腔癌、胆道癌、肝細胞癌、非髄様甲状腺癌、再発性多型性膠芽腫、神経線維腫症1型、CNS癌、脂肪肉腫；平滑筋肉腫；唾液腺癌；粘膜黒色腫；末端黒子型黒色腫、傍神経節腫、および褐色細胞腫が挙げられる。
【０１５１】
III. 本発明のキット
本発明はまた、本発明の方法を実施するためのキットを提供する。例えば、キットは、エレスクロモール、およびエレスクロモールを低レベルの低酸素状態を有する癌を有する被験体に投与するための説明書を含むことができる。別の実施形態において、被験体は低レベルの乳酸脱水素酵素(LHD)を示す癌を有する。一実施形態において、説明書はエレスクロモールが第二選択療法であると規定する。別の実施形態において、本発明のキットは被験体から得たサンプルにおけるLDHレベルを測定するための試薬を含んでいてもよく、低レベルの低酸素状態の癌を有する被験体をエレスクロモールで治療するための指示書をさらに含んでいてもよい。
【実施例】
【０１５２】
実施例1 - 低酸素レベルに基づくエレスクロモールによる治療に適した被験体の選択
被験体は、画像法、免疫組織化学、血液学的分析、および身体診察を含む一連の臨床的に認められた診断基準に基づいて癌と診断される。免疫組織化学的分析には、生検サンプルにおける1種以上の低酸素マーカーの存在に関する染色が含まれる。さらに、またはそれに代えて、血清サンプルを1種以上の低酸素マーカーの存在に関して試験する。
【０１５３】
被験体が血清においておよび／または腫瘍において低レベルの低酸素マーカーを有することを確認する。該被験体を、エレスクロモールによる治療に選択する。該被験体をエレスクロモールにより治療して、治療への応答ならびに副作用の存在をモニターする。治療は、被験体、治療する医師、介護者、および／または他の資格のある個人が決定して、十分な耐容性が得られ、被験体に対する利益が観察される限り長く続ける。
【０１５４】
実施例2 - 低酸素レベルに基づくエレスクロモールにより治療すべきでない被験体の選択
被験体は、画像法、免疫組織化学、血液学的分析、および身体診察を含む一連の臨床的に認められた診断基準に基づいて癌と診断される。免疫組織化学的分析には、生検サンプルにおける1種以上の低酸素マーカーの存在に関する染色が含まれる。さらに、またはそれに代えて、血清サンプルを1種以上の低酸素マーカーの存在に関して試験する。
【０１５５】
被験体が血清においておよび／または腫瘍において高レベルの低酸素マーカーを有することを確認する。エレスクロモールを含まない治療レジメンを該被験体に選択する。
【０１５６】
実施例3 - カルテ審査に基づく治療成績の特性評価
被験体の治療中に評価したマーカーに基づく腫瘍の低酸素レベルに基づいて癌治療に対するエレスクロモールの有効性を決定するためにカルテ審査分析をおこなう。選択基準は、癌のタイプ、エレスクロモールによる特定の治療レジメン、および癌のタイプにより異なる有意義な追跡調査期間に渡る治療成績（例えば予後不良の転移性または難治性癌は数週間から数か月の追跡調査（例えば、死まで、腫瘍の進行まで、新しい治療的介入の投与まで）を必要とするが、予後のより良好な癌は好ましくは数か月から数年の被験体の追跡調査期間（例えば、腫瘍の進行まで、新しい治療的介入の投与まで、任意の終了点まで）を有する）に関する入手可能な情報を含み得る。生存に関する情報に加えて、入手可能な場合には、生活の質、副作用に関する情報、および他の関連する情報を考慮する。除外基準には、低酸素状態によりモジュレートされるペプチドのレベルを変化させる可能性がある他の疾患または状態（例えば心臓または血管の虚血性疾患、血行不良、糖尿病、黄斑変性、最近の脳卒中、最近の手術、または他の虚血性事象もしくは状態）の存在が含まれる。他の除外基準は、入手可能なサンプルおよび患者の集団、例えば特定の薬剤による以前の治療に基づいて選択することができる。
【０１５７】
被験体を種々の基準に基づいて群に分類することが可能である。エレスクロモールにより治療されたが低酸素マーカーを測定されなかった被験体を、被験体／腫瘍における低酸素レベルに基づいて選択されていない治療集団におけるエレスクロモールの有効性を理解するための階層化されていない対照群として使用することができる。あるいは、低酸素レベル（例えば、LDHマーカーレベル）に関する研究において分析される集団を、階層化されていない集団をエレスクロモールへの応答について分析した歴史的対照サンプルと比較することができる。
【０１５８】
カルテ記録において低酸素レベルが入手可能である被験体を、高レベルの低酸素状態を有する群および低レベルの低酸素状態を有する群、ならびに被験体の分布に依存して、場合により中レベルの低酸素状態を有する被験体の群の、2以上の群に分割する。被験体およびサンプルは、分析のために、例えば、生存期間、エレスクロモールによる治療レジメン、癌のタイプ、以前の失敗した治療等の他の群に分割することも可能であることが理解される。好ましくは、被験体のそれぞれにおいて同じ低酸素マーカー（単数または複数）、例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)または低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット；血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)を測定する。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素マーカーとなり得る。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を組織における低酸素マーカーとして使用することができる。低酸素状態の直接測定をマーカーとすることができ、これはセンサーを腫瘍の中に挿入することにより実施することができる。腫瘍の大きさも低酸素レベルと相関するマーカーとすることができる。さらに、同じタイプの被験体サンプル、例えば、血液、血清、リンパ液、腫瘍組織等を、低酸素レベルのマーカーの存在について試験することが好ましい。低酸素レベルは、定量的、半定量的、または定性的免疫組織化学的方法、免疫アッセイ（例えば、ELISAアッセイ）；逆転写PCRアッセイ、特に定量的PCR法、例えば、リアルタイムPCR；ノーザンブロットアッセイ、酵素活性アッセイ（例えば、乳酸脱水素酵素活性について、キナーゼ活性について）；およびin situハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイ）を用いて、腫瘍サンプルにおいて直接測定することができることが理解される。ここでも、特に定量的評価方法を使用する場合には、すべてのサンプルに対して同じ低酸素マーカーのレベルの測定方法を使用することが好ましい。
【０１５９】
低酸素レベルに基づいて被験体の治療成績を分析して、2つの群の間で治療成績が異なるかどうかを決定する。治療成績はさらに、エレスクロモールにより治療された階層化されていない群と比較することもできる。統計的方法を使用し、１種以上の低酸素マーカーのレベルに基づいて、エレスクロモールによる治療から利益を得られる可能性が最も高い被験体を識別するための適切なカットオフレベルを選択することができる。統計的分析および統計的有意性の決定の方法は当業者に公知である。分析により、低レベルの低酸素状態を有する被験体が、高レベルの低酸素状態を有する被験体と比較して、より良好な応答、例えば、失敗までの時間の長さ、より長い生存期間、より良い生活の質、腫瘍の大きさの減少、エレスクロモールのより良い耐容性等のうちの1つ以上を有することが証明される。
【０１６０】
実施例4 - 歴史的サンプルに基づく治療成績の特性評価
治療中に被験体から採取したサンプルを用いる分析をおこなって、被験体の治療前および／または治療中に評価されたマーカーに基づく腫瘍の低酸素レベルに基づいて癌治療に対するエレスクロモールの有効性を決定する。選択基準は、癌のタイプ、エレスクロモールによる特定の治療レジメン、および癌のタイプにより異なる有意義な追跡調査期間に渡る治療成績（例えば予後不良の転移性または難治性癌は数週間から数か月の追跡調査（例えば、死まで、腫瘍の進行まで、新しい治療的介入の投与まで）を必要とするが、予後のより良好な癌は好ましくは数か月から数年の被験体の追跡調査（例えば、腫瘍の進行まで、新しい治療的介入の投与まで、任意の終了点まで）を必要とする）に関する入手可能な情報を含み得る。生存に関する情報に加えて、入手可能な場合には、生活の質、副作用に関する情報、および他の関連する情報を考慮する。除外基準には、低酸素状態によりモジュレートされるペプチドのレベルを変化させる可能性がある他の疾患または状態（例えば心臓または血管の虚血性疾患、血行不良、糖尿病、黄斑変性、最近の脳卒中、または他の虚血性事象もしくは状態）の存在が含まれる。他の除外基準は、入手可能なサンプルおよび患者の集団、例えば特定の薬剤による以前の治療に基づいて選択することができる。
【０１６１】
サンプルを、存在するマーカーの量または活性に基づいて、低酸素レベルについて分析する。好ましくは、すべてのサンプルは同じタイプ（1種または複数種）、例えば、血液、血漿、リンパ液、尿、腫瘍組織である。被験体サンプルの入手可能性に依存して、分析は2種（またはそれ以上）のタイプの被験体サンプル、例えば血清および腫瘍組織を用いておこなうことができる。十分な材料が入手可能である場合には、種々の部分の腫瘍組織、例えば、壊死性コアに隣接する、腫瘍の中心の、腫瘍脈管構造に隣接するまたは腫瘍脈管構造を含む、正常組織に隣接する等の部分を分析することも可能である。それぞれの被験体において1種以上の低酸素マーカー、例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)または低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット；血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3、ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)を測定する。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素マーカーとすることができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を、組織における低酸素マーカーとして使用することができる。低酸素状態の直接測定をマーカーとすることができ、これはセンサーを腫瘍の中に挿入することにより実施することができる。腫瘍の大きさも低酸素と相関するマーカーとなり得る。また、同じタイプの被験体サンプル、例えば、血液、血清、リンパ液、尿、腫瘍組織等を、低酸素レベルに関するマーカーの存在について試験することが好ましい。低酸素レベルは、定量的、半定量的、または定性的免疫組織化学的方法、免疫アッセイ（例えば、ELISAアッセイ）；逆転写PCRアッセイ、特に定量的PCR法、例えば、リアルタイムPCR；ノーザンブロットアッセイ、酵素活性アッセイ（例えば、乳酸脱水素酵素活性について、キナーゼ活性について）；およびin situハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)アッセイ）を用いて、腫瘍サンプルにおいて直接測定することができることが理解される。ここでも、特に定量的評価方法を使用する場合には、すべてのサンプルにおいて低酸素マーカーのレベルを測定する同じ方法を使用することが好ましい。
【０１６２】
被験体を、高レベルの低酸素状態を有する群および低レベルの低酸素状態を有する群、ならびに被験体の分布に依存して、場合により中レベルの低酸素状態を有する被験体の群の2以上の群に分割する。被験体およびサンプルは、分析のために、例えば、生存期間、エレスクロモールによる治療レジメン；癌のタイプ、以前の失敗した治療等の他の群に分割することも可能であることが理解される。
【０１６３】
低酸素レベルに基づく被験体の治療成績を、2つの群の間で治療成績が異なるかどうかを決定するために分析する。治療成績はさらに、エレスクロモールにより治療された階層化されていない群、例えば別の研究により提供される歴史的群と比較することができる。統計的方法を使用し、１種以上の低酸素マーカーのレベルに基づいて、エレスクロモールによる治療から利益を得られる可能性が最も高い被験体を識別するための適切なカットオフレベルを選択することができる。統計的分析および統計的有意性の決定の方法は当業者に公知である。分析により、低レベルの低酸素状態を有する被験体が、高レベルの低酸素状態を有する被験体と比較して、より良好な応答、例えば、失敗までの時間の長さ、より長い生存期間、より良い生活の質、腫瘍の大きさの減少、エレスクロモールのより良い耐容性、無増悪期間の遅延等のうちの1つ以上を有することが証明される。この結果は、低レベルの低酸素状態を有する被験体は、エレスクロモールで治療すべきであり、高レベルの低酸素状態をを有する被験体はエレスクロモールで治療すべきでないことを示す。
【０１６４】
実施例5 -高レベルの低酸素状態を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための試験
固形腫瘍と診断された被験体を、固形腫瘍、好ましくは同じ組織起源（例えば、乳、前立腺、肺、肝臓、脳、大腸等）の腫瘍の治療におけるエレスクロモールの有効性を測定するための研究に採用する。選択基準には、固形腫瘍の存在が含まれる。除外基準には、心臓または血管の虚血性疾患、血行不良、糖尿病、黄斑変性、最近の脳卒中、または他の虚血性事象もしくは状態を含む虚血関連疾患または障害の存在；または試験の期間中に計画されている手術が含まれる。血液および腫瘍サンプルを採取して、1種以上の低酸素マーカー、例えば、乳酸脱水素酵素(LDH)または低酸素誘導因子(HIF)の少なくとも1種のアイソフォームまたはサブユニット；血管内皮成長因子(VEGF)の少なくとも1種の血管新生促進型、リン酸化VEGF受容体(pKDR)1、2、または3；ニューロピリン1(NRP-1)、ピルビン酸デヒドロキナーゼ(PDH-K)、およびオルニチン脱炭酸酵素(ODC)の発現レベルまたは活性を測定することにより低酸素レベルを分析する。低酸素領域に局在するプロドラッグ（例えば、EF5、ピモニダゾール等）に対する抗体も低酸素マーカーとして使用することができる。腫瘍における血流を測定する機能的画像法を、組織における低酸素マーカーとして使用することができる。低酸素状態の直接測定は、マーカーであってもよく、センサーを腫瘍の中に挿入することにより実施することができる。腫瘍の大きさも低酸素状態に関連するマーカーとなり得る。腫瘍部位に依存して、同じマーカーをアッセイすることにより、他の被験体サンプル、例えば、大腸癌を有する被験体における糞便、腎癌または膀胱癌を有する被験体における尿、脳癌を有する被験体における脳脊髄液等を採取することができる。分析のための追加サンプルは研究の過程中に採取することができる。それ以外に入手可能でない場合には、全病歴も入手する。
【０１６５】
すべての被験体をエレスクロモールにより、単独または1種以上の追加の化学療法剤との併用のいずれかで治療する。使用されるレジメンの数は研究の大きさ、利用可能な被験体の数、研究の時間枠等に依存するであろう。レジメンの数は、研究が意味のある結果を与えるのに十分な力を有するように選択される。被験体は、試験の期間を通して、試験の終了の時点で、および試験の終了後に一定間隔で、例えば画像法、血液学、および身体診察を含むがこれらに限定されない通常の方法を用いて薬剤に対する応答をモニターされる。応答のない被験体の場合または耐えられない副作用がある場合には治療を中止し得る。好ましくは、被験体は試験の正式な終了の後まで治療成績のモニターを続ける。治療レジメンに陽性の応答を有する被験体ついては、担当の医師の裁量で、その試験の正式な結果を得た後もレジメンを続けることができる。
【０１６６】
治療前および場合により治療中に被験体から採取されたサンプルの分析をおこなって、被験体の治療前および場合により治療中に評価されるマーカーに基づく腫瘍の低酸素レベルに基づいて、エレスクロモールの癌治療に対する有効性を決定する。分析は試験の終了の時点でおこなうことができ、または分析は試験の終了の前に、結果を盲検として、または治療する医師に開示せずにおこなうことができる。好ましくは、低酸素レベルに関する分析は、研究に確証的な結果を提供するのに十分な力を与えるのに十分な数の高い低酸素レベルまたは低い低酸素レベルを有する被験体を研究に登録することを保証するために、試験の経過中に測定する。
【０１６７】
低酸素レベルに基づいて被験体の治療成績を分析して、2つの群の間で治療成績が異なるかどうかを決定する。治療成績はさらにエレスクロモールにより治療された階層化されていない群、例えば別の研究により提供された歴史的群と比較することができる。サンプルを分析して、腫瘍における低酸素レベルと末梢性の採取されたサンプル（例えば、血液、尿、脳脊髄液）における低酸素レベルとの相関を確認することができる。統計的方法を使用し、１種以上の低酸素マーカーのレベルに基づいて、エレスクロモールによる治療から利益を得られる可能性が最も高い被験体を識別するための適切なカットオフレベルを選択することができる。統計的分析および統計的有意性の決定の方法は当業者に公知である。分析により、低レベルの低酸素状態を有する被験体が、高レベルの低酸素状態を有する被験体と比較して、より良好な応答、例えば、より長い失敗までの時間、より長い生存期間、より良い生活の質、腫瘍の大きさの減少、エレスクロモールのより良い耐容性等のうちの1つ以上を有することが証明される。したがって、低レベルの低酸素状態を有する被験体はエレスクロモールで治療するために選択すべきであり、高レベルの低酸素状態をを有する被験体は別の薬剤で治療すべきことを示す。
【０１６８】
実施例6 - 低レベルのLDHを有する肺癌を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための研究
肺癌の治療におけるエレスクロモールの有効性を証明するために複数の臨床試験をおこなった。例えば、パクリタキセルおよびカルボプラチンと併用したエレスクロモールを、パクリタキセルおよびカルボプラチン単独と比較して試験するために、第II相研究をおこなった。以前に治療されていない非小細胞肺癌(NSCLC)および切除不能な局所進行または転移性疾患（IIIB期またはIV期）を有する86例の被験体を、カルボプラチンとエレスクロモールとの併用(CP + E)またはカルボプラチン単独(CP)により治療される治療群に1:1に無作為化した。被験体に200 mg/m2のパクリタキセルおよびAUC = 6のカルボプラチンを、266 mg/m2のエレスクロモールと併用してまたは併用せずに3週間ごとに6サイクル静脈内投与して、投与と投与の間にエレスクロモールの完全なクリアランスがもたらされるようにした。この研究の結果を下に示す。
【表１】
2013545759.tif 000005
【０１６９】
低LDHのNSCLC患者は、エレスクロモールを投与された群では4.6か月のPFS中央値を有し、対照群では3.1か月であったが、高LDHのNSCLC患者のPFS の相対的な大きさは反転しており、PFS中央値は、エレスクロモールを投与された患者および対象の患者でそれぞれ2.8か月および6.3か月であった。これらのデータは、低レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療をおこなうことを選択されるべきであり、高レベルのLDHを有する被験体はエレスクロモールによる治療をおこなわないことを選択されるべきであることを証明している。これらのデータはさらに、低レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が高く、高レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性があまり高くないまたは低いことを証明している。
【０１７０】
実施例7 - 低レベルのLDHを有する黒色腫を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための研究
黒色腫の治療におけるエレスクロモールの有効性を証明するために複数の臨床試験をおこなった。例えば、IV期の転移性黒色腫を有する患者におけるパクリタキセルと併用したエレスクロモールを試験するために第I/II相研究をおこなった。被験体に、80 mg/m2のパクリタキセルを、213 mg/m2のエレスクロモールと併用してまたは併用せずに、最初の3週間は週1回静脈内投与し、次いで1週間休止して（すなわち、28日サイクルで第1、8および14日に投与をおこなう）、投与と投与の間にエレスクロモールの完全なクリアランスがもたらされるようにして、この28日投与サイクルを腫瘍の進行まで繰り返した。研究により、低LDH群において治療および対照の患者のPFS中央値はそれぞれ7.1か月および3.5か月であったが、高LDHの患者ではそれぞれ1.7か月および1.6か月であったことを示した（下の表を参照されたい）。
【表２】
2013545759.tif 000006
【０１７１】
さらに、IV期の転移性黒色腫を有する化学療法を受けたことがない被験体において、パクリタキセルと併用したエレスクロモールをパクリタキセル単独と比較して試験するために第III相研究をおこなった。転移性黒色腫を有する被験体を、治療アーム（エレスクロモール213 mg/m2をパクリタキセル80 mg/m2と併用）または対照アーム（パクリタキセル80 mg/m2単独）のいずれかに1:1の比で無作為化して、最初の3週間は週1回投与をおこない、次いで1週間休止して（すなわち、28日サイクルで第1、8および14日に投与をおこなう）、投与と投与の間にエレスクロモールの完全なクリアランスがもたらされるようにして、この28日投与サイクルを腫瘍の進行まで繰り返した。この研究に登録された集団は、正常上限値(ULN)の2倍に制限されたベースラインLDHレベルを有することとした。この試験の結果を下の表に示す。
【表３】
2013545759.tif 000007
【０１７２】
無増悪生存期間(PFS)の分析の概要
【表４】
2013545759.tif 000008
【０１７３】
ITT集団全体において、主要エンドポイントのPFSは、治療アームと対照アームの間で統計的に有意な差異がなく(HR = 0.89, p = 0.2076)、また、高LDH集団においても差異が存在しなかった(HR = 1.13, p = 0.42)。それに対して、正常および低ベースラインLDHレベルを有する被験体においては、治療群において、対照群と比較してPFSが統計的に有意に改善された(それぞれ、HR = 0.76, p = 0.026およびHR = 0.71, p = 0.0245)。
【０１７４】
下記の表は、ITT集団ならびに高LDH群、正常LDH群、および低LDH群に関するOS分析の概要を表す。全集団において、OS中央値は治療アームおよび対照アームにおいて類似しており(それぞれ10.6か月および11.7か月)、HRが1.21であり、p = 0.0996である。しかしながら、ベースラインLDHごとのOS分析は、パクリタキセルと併用したエレスクロモールによる治療が、異なる集団において異なる治療成績を有することを示している。高ベースラインLDHを有する被験体において、OS中央値は治療アームおよび対照アームでそれぞれ6.0か月および8.1か月であった(HR = 1.41, p = 0.0406)。正常ベースラインLDHを有する被験体において、治療アームおよび対照アームのOS中央値は、13.6か月および14.5か月であった(HR = 1.04, p = 0.7853)。低ベースラインLDHレベルを有する被験体において、OS中央値は、パクリタキセルと併用したエレスクロモールにより治療されたアームおよびパクリタキセル単独で治療されたアームのいずれにおいても未達成であった(HR = 0.96, p = 0.8419)。
【０１７５】
全生存分析 - ITT集団の概要
【表５】
2013545759.tif 000009
【０１７６】
これらのデータは、低レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療をおこなうことを選択されるべきであり、高レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療をおこなわないことを選択されるべきであることを証明している。これらのデータはさらに、低レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が高く、高レベルのLDH（ULN以下）を有する被験体はエレスクロモールによる治療から利益を得る可能性があまり高くないまたは低いことを証明している。
【０１７７】
実施例8 - 低レベルのLDHを有する肺癌または転移性黒色腫を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための治療成績の特性評価
肺癌または黒色腫の治療におけるエレスクロモールの有効性を証明するために臨床研究をおこなった。前立腺癌、固形腫瘍、再発性または持続性の上皮性卵巣癌、卵管癌、および原発性腹膜癌の治療に関するエレスクロモールを使用する臨床研究も計画または実施されている。
【０１７８】
カルテ審査をおこなって、1種以上の低酸素マーカー、特にLDHのレベルが、その被験体に関してエレスクロモールによる治療の前、および場合により治療中に分析されたかどうかを決定する。低酸素マーカーのレベルに関する情報が入手可能でない場合には、その研究の被験体から得た保管された血清サンプルをLDHレベルに関して分析して、LDHレベルを考慮して治療成績を分析する。
【０１７９】
あらかじめ、それぞれの群、または少なくともエレスクロモールにより治療された群に含まれる被験体を、試験をおこなう部位の正常上限値(ULN)に基づいて高LDHレベルおよび低LDHレベルに分割する。ULN以下の値は低いと見なされる。ULNよりも大きい値は高いと見なされる。あるいは、低LDHは0.8 ULN以下のレベルであり、高LDHは0.8 ULNよりも大きいすべての値であると見なすことができる。あるいは、低LDHは1.2または1.5 ULN以下のレベルであり、高LDHはそれぞれ1.2または1.5 ULNよりも大きいすべての値であると見なすことができる。エレスクロモールによる治療に対する被験体の応答の予測におけるLDHレベルの予測力を増大させるために、高ULN群および低ULN群をさらに階層化すること、例えば、ULNの1〜<2倍または1〜<3倍等のLDHレベルを有するものを中程度または少し上昇したLDHレベルを有する群に入れることも可能である。本出願に提供されるものなどの他のカットオフ値も選択することができる。統計的分析を用いて適切なカットオフレベルを選択することができる。分析の結果は、エレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が最も高い被験体を決定するために使用できる。分析の結果は、さらに、ULNレベルに基づいて、被験体にエレスクロモールを含むまたは含まない治療レジメンを選択するために使用される。低レベルのLDHを有する被験体は、エレスクロモールによる治療をおこなうことが選択される。高レベルのLDHを有する被験体は、エレスクロモールによる治療をおこなわないことが選択される。
【０１８０】
実施例9 - 低レベルのLDHを有する肝癌または腎癌を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための試験
被験体が、肺癌または黒色腫のうちの1つを有することを確認する。被験体を、適切な選択または除外基準に基づいてエレスクロモールによる治療の候補として選択する。治療の前に、被験体の病状を特徴づけるために、画像検査、血液学的検査、および身体診察を含むがこれらに限定されない通常の評価をおこなう。さらに、被験体から得たコード化された血清サンプルを試験してLDHレベルを測定する。LDHレベル測定の結果は治療期間の終わりまで被験体と照合しない。しかしながら、研究に十分な力を与えるのに十分な数の低LDHレベルおよび高LDHレベルを有する被験体を採用することが可能となるようにサンプルの試験をおこなうことができる。
【０１８１】
被験体は、エレスクロモールを含む少なくとも１種のレジメンにより、単独または他の薬剤との併用のいずれかで、治療される。利用可能な被験体の数および試験の範囲に依存して、2つのレジメンを比較することも、すべての被験体に1つのレジメンで投与をおこなうことも可能である。被験体は、事前に決められた規則的または不規則な間隔で、全生存期間、無増悪生存期間、無増悪期間、および有害事象を含むがこれらに限定されない特定の治療成績について評価される。治療は、被験体が指定されたレジメンによる治療に陽性に応答し、制限的な有害事象が存在しない限り長く続ける。
【０１８２】
試験の終了の際に、LDHレベル分析の結果を非盲検化し、被験体と照合する。特定の試験方法が利用可能なので、LDHの量を、試験をおこなう部位の正常上限値(ULN)に基づいて低いまたは高いものとして採点する。ULN以下の値は低いと見なされる。ULNよりも大きい値は高いと見なされる。あるいは、低LDHは0.8 ULN以下のレベルであり、高LDHは0.8 ULNよりも大きいすべての値であると見なすことができる。あるいは、低LDHは1.2または1.5 ULN以下のレベルであり、高LDHはそれぞれ1.2または1.5 ULNよりも大きいすべての値であると見なすことができる。エレスクロモールによる治療に対する被験体の応答の予測におけるLDHレベルの予測力を増大させるために、高ULN群および低ULN群をさらに階層化すること、例えば、ULNの1〜<2倍または1〜<3倍等のLDHレベルを有するものを中程度または少し上昇したLDHレベルを有する群に入れることも可能である。本出願に提供されるものなどの他のカットオフ値も選択することができる。統計的方法を用いて適切なカットオフ値を選択することができる。分析の結果は、エレスクロモールによる治療から利益を得る可能性が最も高い被験体を決定するために使用される。さらに、ULNレベルに基づいて、被験体にエレスクロモールを含むまたは含まない治療レジメンを選択するために使用される。低レベルのLDHを有する被験体は、エレスクロモールによる治療をおこなうことが選択される。高レベルのLDHを有する被験体は、エレスクロモールによる治療をおこなわないことが選択される。
【０１８３】
実施例10 - 低レベルのLDHを有する白血病を有する被験体におけるエレスクロモールの改善された有効性を証明するための試験
被験体が再発性または難治性の急性骨髄性白血病(AML)のうちの1つを有することを確認する。被験体を、適切な選択または除外基準に基づいてエレスクロモールによる治療の候補として選択する。治療の前に、被験体の病状を特徴づけるために、画像検査、血液学的検査、および身体診察を含むがこれらに限定されない通常の評価をおこなう。さらに、被験体から得たコード化された血清サンプルを試験してLDHレベルを測定する。
【０１８４】
この試験は、再発性または難治性AMLおよび0.8正常上限値(ULN)以下の総ベースライン血清LDHレベルを有する36例の患者の登録により十分な力を与えられていることが期待される。患者は、エレスクロモールナトリウムにより、週1回のスケジュールで、200 mg/m2の初回用量で、安全性および耐容性に基づいて計画された用量漸増を伴って治療された。主要エンドポイントはエレスクロモールナトリウムの安全性および耐容性を特徴づけること、ならびにこの患者集団におけるエレスクロモールおよびその代謝産物の薬物動態を決定することである。副次的エンドポイントには、AMLの治療における単剤療法としてのエレスクロモールの活性を評価することが含まれる。低レベルの低酸素状態を有する被験体は、LDHのレベルが測定されていない歴史的対照集団または高レベルの（すなわち、0.8 ULNよりも大きい）LDHを有する集団と比較して、エレスクロモールによる治療に対してより良好に応答することが見いだされる。
【０１８５】
実施例11 - サンプルにおけるLDHアイソフォームの活性レベルを評価する方法
ヒト腫瘍細胞系HCT116(ATCC #CRL-247; Schroy PC, et al. Cancer 76: 201-209, 1995)および786-O(ATCC #CRL-1932; Williams RD, et al. In Vitro 12: 623-627, 1976)を、アメリカ培養細胞系統保存機関(American Type Culture Collection)(Manassus, Virginia, USA)より入手し、通常の方法を使用して移植に十分な数の細胞が得られるまで培養した。研究は、移植の時点で7〜12週齡の動物を用いて実施した。HCT116腫瘍細胞をヌードマウスに移植するために、細胞をトリプシン処理し、PBS中で洗浄し、50%のBDマトリゲル(Matrigel)(登録商標)基底膜マトリックス(BD Biosciences(登録商標)、Bedford, Massachusetts, USA)を加えたMcCoy改変培地中に75×106細胞/mlの濃度で再懸濁した。786-O腫瘍細胞をヌードマウスに移植するために、細胞を上記の通りトリプシン処理し、PBS中で洗浄し、50%のBDマトリゲル(登録商標)基底膜マトリックスを加えたRPMI 1640培地に75×106細胞/mlの濃度で再懸濁した。27ゲージの針と1 ccシリンジを用いて、0.1 mlの細胞懸濁液をヌードマウスの脂肪体(corpus adiposum)の中に注入した。corpus adiposumは、腹部の右4分の1区間の腹側腹部内臓(ventral abdominal vicera)の中のos coxae（寛骨）とos femoris（大腿骨）の接合部に位置する脂肪体である。この位置は触診および外部のキャリパーを用いる腫瘍の測定を可能にする。腫瘍の幅(W)、長さ(L)および厚さ(T)のキャリパー測定により、腫瘍体積(V)を次の式：V = 0.5236×(L×W×T)を用いて計算した。動物を、各群の平均腫瘍体積が投与の開始時点で同じになるように処理群に無作為化した。
【０１８６】
適切な時点で腫瘍を有するマウスから血液を採取して血清を調製し、その血清を後の分析のために凍結した。血液の採取と同じ日に、腫瘍の幅(W)、長さ(L)および厚さ(T)のキャリパー測定により腫瘍体積(V)を次の式：V = 0.5236×(L×W×T)を用いて計算した。血清サンプルの採取が終了した後、血清サンプルをゲル電気泳動により分離した。電気泳動の後、ゲル内アッセイを用いて酵素反応により5つのイソ酵素のバンドを可視化した。LDH活性を評価するために、乳酸塩、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+)、ニトロブルーテトラゾリウム(NBT)、およびフェナジンメトサルフェート(PMS)を加えた。LDHは、乳酸塩をピルビン酸塩に変換し、NAD+をNADHに還元する。NADHからの水素がPMSによりNBTに伝達されてこれを還元し、紫色のホルマザン色素を生成する。それぞれのLDHイソ酵素活性のパーセンテージならびにLDH5の相対量をデンシトメトリー(Beckman Appraise densitometer, Beckman Coulter Inc.またはSebia (GELSCAN, Sebia Inc))により測定した。存在する総LDH（すなわち、LDH5、LDH5、LDH3、LDH2、およびLDH1を合わせた量）に対するLDH5タンパク質およびLDH5活性のパーセンテージを計算して、腫瘍体積に対してグラフ化した。結果を図1A〜Dに示す。
【０１８７】
図1Aおよび1Bは、ゲル内アッセイにより測定された総LDH活性のパーセントとしてLDH5活性の量を示す。示される通り、HCT116腫瘍は、786O腫瘍と比較した場合に、実質的により大きい総LDH活性に対するLDH5活性のパーセンテージを有した。図1Cおよび1Dは、観察されるLDH5の相対的活性の差異にもかかわらず、存在するLDH5タンパク質の総LDHと比較した量は、両方の腫瘍タイプにおいてほぼ同じであることを示している。
【０１８８】
同等物
当業者は、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を、認識するであろうし、または日常おこなう程度の実験を用いて確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の特許請求の範囲により包含されることが意図されている。
【０１８９】
参照による組み入れ
この明細書において言及したすべての出版物、特許、特許出願および公開された特許の内容は、参照により組み入れられるものとする。
【図１ＡＢ】
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【図１ＣＤ】
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【国際調査報告】
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