(57)【要約】  本発明は、経上皮抵抗の改善、より具体的には便秘および/または過敏性腸疾患の治療および/または予防に用いるための乳酸菌の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腸上皮細胞の経上皮電気抵抗(TEER)の増大に用いるための、ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウムからなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物であって、前記の株がDN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される、組成物。
【請求項２】
- 腸の疾患の治療および/または予防、好ましくは腸透過性の異常の治療および/または予防、または
- IBS、IBDおよび腸管感染症からなる群より選択される疾患の治療および/または予防、または
- 老人、乳児または肥満の人に見られる疾患の治療および/または予防
に用いるための、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物。
【請求項３】
IBDおよびIBSからなる群より選択される疾患を患う患者への投与に用いるための、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物。
【請求項４】
腸透過性の低減に用いるための、請求項１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される乳酸菌株。
【請求項６】
少なくとも１つの請求項５に記載の株を含む組成物。
【請求項７】
乳製品、好ましくは発酵乳製品である、請求項１〜４のいずれか１つまたは請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも105 cfu/g乾燥重量、好ましくは少なくとも106 cfu/g乾燥重量の、ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウムからなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む、請求項１〜４のいずれか１つまたは請求項６もしくは７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経上皮抵抗の改善に用いるための乳酸菌株を含む組成物に関する。このような組成物は、便秘および/または過敏性腸疾患を治療および/または予防するのに特に適している。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群(IBS)または痙攣性結腸は、臓器に検出可能な如何なる原因も存在せずに、慢性的な腹部の痛み、不快感、膨満および腸の習性の変更によって特徴付けられる機能性腸疾患である。下痢または便秘(それぞれIBS-D、IBS-Cと分類される)が優勢であり得るか、またはそれらは交互に起こり得る。IBSは、感染(感染後、IBS-PI)、ストレスとなる生活上の出来事または成熟の開始後に、その他の如何なる医学的指標もなく開始し得る。IBSにおいては、特定の刺激、例えばバルーン通気検査に対して腸がより敏感になっていることがあるが、ルーチンの臨床検査での異常は何ら生じない。
【０００３】
IBSは、任意のある時点において、人口のおよそ15％が罹患する非常にありふれた病状である。この病状を有する女性は、男性よりも約２倍多い。IBSは、慢性的な疼痛、疲労感およびその他症状の根源であり、患者の医療費を増大し、常習欠勤の一因となる。研究者らは、IBSの高い罹患率が、増大するコストと連係して、高い社会的コストを有する疾患を生み出すと報告している。また、それは慢性的な病気と見做されており、患者のクオリティオブライフに劇的に影響し得る。
【０００４】
IBSの治療法は現在のところないが、食事調整、投薬および心理学的介入を含む、症状を緩和しようとする療法はある。
プロバイオティクス、特に乳酸菌株は、IBSの治療および/または予防に有益であると報告されている。このような開示の例は、WO 2007/036230、WO 03/010297およびWO 2009/080800である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
腸粘膜バリアの崩壊が起こると、水および血漿タンパク質が内腔に漏洩し、腸内細菌が全身循環に転移する。典型的には、これらの要因が局所的な炎症の発症、更に悪いことには全身性敗血症に寄与する。細菌のリポポリ多糖(LPS)は、インビボで粘膜超透過性の原因となることが知られている。LPSは、酸化機構を介して腸バリア機能障害を促進し、透過性(これは単分子層の頂端側および基底側から観測される電位差(経上皮電気抵抗(TEER)と呼ばれる)を測定することにより評価できる)の増大をもたらすことが見出された。増えゆく証拠は、いくつかのプロバイオティクスおよび共生細菌が、インビトロ(Resta-LenertおよびBarrett, 2006; Miyauchiら, 2008)およびインビボで腸バリア損傷を改善(透過性を低減)し、IBSおよびIBD症状の緩和を助長することを示唆している。この特性について、(TEER評価によって)ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウムを分析した。この研究から、TEERにより測定されたバリア抵抗の増大が株依存的であることが明らかとなっている。典型的にはTEER評価を証拠として、バリア完全性に好ましい、および/または透過性を低減する更なる株が求められている。このような特性が改善された株が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、腸上皮細胞の経上皮電気抵抗(TEER)の増大に用いるための、ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウムからなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物であって、前記の株がDN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される、組成物を提供することにより、上記の要求の少なくとも１つに対処する。
【０００７】
また、本発明は、
- 腸の疾患、好ましくは腸透過性の異常の治療および/または予防、または
- IBS、IBDおよび腸管感染症からなる群より選択される疾患の治療および/または予防、または
- 老人、乳児または肥満の人に見られる疾患の治療および/または予防
に用いるための、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物に関する。
【０００８】
また、本発明は、IBDおよびIBSからなる群より選択される疾患を患う患者への投与に用いるための、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物に関する。
また、本発明は、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択される乳酸菌株に関する。また、本発明は、このような株を含む組成物に関する。
１つの態様によれば、本発明は、腸透過性の低減に用いるための上記の組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【０００９】
定義
本願において、化合物または組成物の使用とは、任意に関連ある意図を伴う使用自体だけでなく、商業的または法的結果を伴う当該化合物または組成物に関する全ての情報、例えば組成物の包装上の広告、指示または推奨；例えば、安全目的、有効性目的または消費者保護のための、例えば欧州におけるEFSAのような行政機関における規制目的の登録を補助するために提出された商業的に支持するもの、例えばリーフレット、冊子、ポスター、書類上の指示または推奨を包含することを意図する。
本願において、用語「または」は排他的でない。
【００１０】
細菌株
本発明の細菌株は、DN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)からなる群より選択されるラクトバシラスまたはビフィドバクテリウムである。
ここで言及される全ての細菌株は、ブダペスト条約に従って、国際寄託機関としてのCNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, Paris)に寄託されている。
【００１１】
また、本発明は、上記の株の使用だけでなく、親株のいずれか１つに由来し、依然としてVIPに対する活性を有し、ChAT神経に影響する変異体株または形質転換株の使用もまた包含する。これらの変異体または形質転換株は、例えばいくつかの代謝特性(例えば、糖発酵能力、酸耐性、胃腸管内に輸送するための生存能力、後酸性化または代謝物質産生)を改変するように親株の１またはそれより多い内生遺伝子が変異している株であり得る。また、それらは、例えば上記の株に更なる生理学的特徴を付与するために、または上記の株を介して投与されることが望まれる、治療用またはワクチン用の興味あるタンパク質の上記の株による発現を可能にするために、１またはそれより多い興味ある遺伝子の親株による形質転換から得られる株であり得る。
【００１２】
組成物
本発明の組成物において、前記の株は、生存していてもよいか、または生存していなくてもよい細菌全体の形態で用いることができる。あるいは、それらは、細菌溶解物の形態または細菌フラクションの形態で用いることができる。この用途に適した細菌フラクションは、例えばTEERに関する特性を検査することにより選抜することができる。好ましくは、細菌細胞は、生存中の、生存可能な細胞として存在する。
【００１３】
本発明の組成物は、投与、特に経口投与に適した任意の形態にあり得る。これは、例えば、固体、半固体、液体および粉体を含む。一般的に、液体組成物は、より容易な投与、例えば飲用に好ましい。
例えば、組成物は、少なくとも105 cfu/g乾燥重量、好ましくは少なくとも1x106 cfu/g乾燥重量の少なくとも１つの細菌株、好ましくは上記の細菌株を含み得る。好ましくは、これらは、ラクトバシラスおよびビフィドバクテリウムからなる群より選択される。
【００１４】
細菌が生存中の細菌の形態にあるとき、典型的には、組成物は、105〜1013コロニー形成単位(cfu)、好ましくは少なくとも106 cfu、より好ましくは少なくとも107 cfu、より一層好ましくは少なくとも108 cfu、最も好ましくは少なくとも109 cfu/g乾燥重量組成物を含み得る。液体組成物の場合、一般的に、これは、104〜1012コロニー形成単位(cfu)、好ましくは少なくとも105 cfu、より好ましくは少なくとも106 cfu、より一層好ましくは少なくとも107 cfu、最も好ましくは少なくとも109 cfu/mlに相当する。
【００１５】
本発明の組成物の例は、食品、特に乳製品を含む栄養組成物である。
組成物は、例えば乳製品、好ましくは発酵乳製品であり得る。発酵乳製品の形態での投与は、低ラクトースレベルの更なる利点を有し、これはIBSに更に有益である。任意に、その他の乳酸菌株が存在していてもよい。発酵製品は、液体の形態で存在していてもよいし、発酵した液体を乾燥することにより得られる乾燥粉体の形態で存在していてもよい。好ましくは、発酵製品は、生鮮製品である。激しい熱処理工程を行っていない生鮮製品は、存在する細菌株が生存中の形態であるという利点を有している。好ましくは、発酵製品は、乳製品、より好ましくは発酵した乳および/または発酵した乳清である。好ましくは、栄養組成物は、ヨーグルトまたは固めたか、撹拌したか、もしくは飲み物の形態にある発酵した乳である。好ましくは、発酵製品は、チーズである。好ましくは、発酵製品は、発酵した野菜、例えば固めたか、撹拌したか、もしくは飲み物の形態にある発酵した大豆、穀類および/または果実である。
好ましくは、本発明の栄養組成物は、ベビーフード、乳児用調整乳(infant milk formula)または乳幼児用調整品(infant follow-on formula)である。好ましくは、本発明の組成物は、栄養補助食品または医薬品、栄養サプリメントまたは医療食である。
【００１６】
また、本発明の栄養組成物は、食物サプリメントおよび機能性食品を含む。「食物サプリメント」とは、食料に通常用いられる化合物から作られる製品であって、錠剤、散剤、カプセル、頓服水剤(potion)の形態にあるか、または栄養物に通常関連しないその他任意の形態にあり、かつある人の健康に有益な効果を有するものを指す。「機能性食品」とは、栄養物であって、ある人の健康に有益な効果を有するものである。特に、食物サプリメントおよび機能性食品は、疾患に対する、例えば慢性疾患に対する生理学的(保護または治療)効果を有していてもよい。
【実施例】
【００１７】
実施例１：いくつかの細菌株のTEER評価
PBSを用いて細胞懸濁液を洗浄した。続いて、T84細胞単分子層の頂端側に細菌(100 cfu/細胞)を加えた。ビフィドバクテリウム64株およびラクトバシラス32株を含む96株をアッセイにおいて検査した。2hのインキュベーション後、LPS (L4516, - EPEC - 0127: B8)を、頂端側に40 ng/mlで加えたか、または加えなかった。次いで、2hおよび4hインキュベーション後、TEER値を測定し、上皮バリア機能を評価した。全ての実験は、LPSの存在下および非存在下で、独立して、および３連で(in triplicate)、３回行った。t=0におけるT84値を100 %に設定した。LPSの非存在下において、TEERは、T4において98.7 %であり、T6において100.2 %であった。LPSの存在下において、T4におけるコントロールT84は、t=0と比較して、56.2%であった；T6において、T84コントロールは46.7 %であった。
【００１８】
結果は、ダメージを与えるLPSの存在下および非存在下の両方においてTEERにより測定された上皮の完全性が著しく増大している株が非常に珍しいことを示した。ラクトバシラス  ラムノサス(L. rhamnosus)の１株であるDN_116_0044 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4316)およびビフィドバクテリウム  ビフィダム(B. bifidum)の１株であるDN_154_0062 (2010年5月19日に提出されたCNCM I-4319)がTEER特性の改善を示すものとして同定された。NCC2705およびBB536のようなベンチマークは、顕著な改善を示さなかった。
【００１９】
【表１】
2013527194.tif 000002
【００２０】
【表２】
2013527194.tif 000003
【国際調査報告】
2013527194.tif 000004
2013527194.tif 000005