(57)【要約】本発明は可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの治療的使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
高リン血症または石灰沈着症を治療または予防する可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項２】
慢性腎疾患または慢性腎不全を治療または予防する可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項３】
組織および血管石灰化を治療または予防する可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項４】
アルブミン尿およびタンパク尿を治療または予防する可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項５】
血圧および石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低減させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項６】
血清リン酸塩レベルを低下させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項７】
ＦＧＦ２３を増加させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用。
【請求項８】
前記可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏが、配列番号１１、配列番号５、配列番号７、および配列番号９からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏが、配列番号５である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
α−Ｋｌｏｔｈｏ（ａｋａ  Ｋｌｏｔｈｏ）は腎臓で主に発現するが、副甲状腺および脳の脈絡叢を含む他の組織においても低レベルで発現する１１４ｋＤａのタンパク質である。膜貫通型、血清中で循環する細胞外ドメインからなる可溶性型、および少なくとも１つの可溶性スプライス変異を含む、Ｋｌｏｔｈｏの種々の内因的形態が存在する。Ｋｌｏｔｈｏは、結合およびその同種ＦＧＦ受容体を介するシグナル伝達の両方の点でＦＧＦ２３の必須のパートナーであるが、ＦＧＦ２３独立性活性が報告されている。ＦＧＦ２３はリン酸塩恒常性の重要な調節因子である。
【０００３】
Ｋｌｏｔｈｏノックアウトマウスは、組織石灰化、血管石灰化、および骨減少症を含む、様々な腎臓および年齢に関連した疾患を発生する。Ｋｌｏｔｈｏノックアウトマウスにおける完全長Ｋｌｏｔｈｏタンパク質の異所性発現はこれらの表現型の多くを反転できる。腎疾患の種々のマウスモデルにおける膜貫通Ｋｌｏｔｈｏのアデノウイルス過剰発現は有益な効果を生じる。腎臓Ｋｌｏｔｈｏ発現は慢性腎疾患を有する患者で低下する。
【０００４】
高レベルの血清Ｋｌｏｔｈｏを生じる男性におけるＫｌｏｔｈｏ転座は、低リン血症、増加した血清ＦＧＦ２３およびＰＴＨレベル、ならびにくる病に関連している。男性における低形質のＫｌｏｔｈｏ変異は、高リン血症、増加した血清ＦＧＦ２３レベル、および腫瘍性石灰沈着症に関連した。これは、慢性腎疾患および恐らく他の年齢に関連する疾患がＫｌｏｔｈｏ欠乏の状態を表し得るという仮説を導く。インビトロにおいてＫｌｏｔｈｏの細胞外ドメインの抗アポトーシス／増殖活性が報告されているが、これまで、カリウム排泄について最近報告されている作用を除いて、インビボにおいて可溶性形態のＫｌｏｔｈｏの活性を証明したという報告はされていない。
【０００５】
ヒトおよびマウスα−Ｋｌｏｔｈｏポリペプチドは特許文献１に開示されている。特許文献２は、Ｋｌｏｔｈｏタンパク質および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）を含むＫｌｏｔｈｏ融合ポリペプチドを用いて年齢に関連した病態または代謝異常を予防または治療するための組成物を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６，５７９，８５０号明細書
【特許文献２】国際公開第２００９／０９５３７２号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、柔軟性を有する簡単な治療パラダイムを提供し、投薬に関して管理し、外因性薬物間相互作用の機会を減少させることである。慢性腎疾患などの高リン血症の多くの状態は増加したＦＧＦ２３レベルと関連する。従って、外因性ＦＧＦ２３（単独または融合形態で）の投与は特定の状況において有害であり得る可能性がある。可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの送達は利点があり得る。本発明は、インビボにおいて発現した可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏが低リン酸血症性であり、さらにインビボでのその低リン酸血症性活性に関して外因性ＦＧＦ２３（そのまままたはＫｌｏｔｈｏと融合した）を必要とせず、内因性ＦＧＦ２３レベル（可溶性Ｋｌｏｔｈｏと比較して何倍もの過剰なモル濃度）の上方調節を生じるという驚くべき観察に由来し、インビボにおいて正確に均衡のとれたＦＧＦ２３−Ｋｌｏｔｈｏレベルを維持することが重要であり得ることを示唆する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
従って、本発明は、患者における高リン血症または石灰沈着症、高リン血症および石灰沈着症、慢性腎疾患または慢性腎不全、慢性腎疾患および慢性腎不全、組織または血管石灰化、組織および血管石灰化、アルブミン尿またはタンパク尿、あるいはアルブミン尿およびタンパク尿を治療または予防する方法であって、患者に有効量の可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏを投与することを含む、方法を提供する。
【０００９】
本発明は、内因性Ｋｌｏｔｈｏが不十分であり、および／またはＦＧＦ２３レベルが正常から不安定になる場合の治療アプローチとして有用である。これらの病態には、腎疾患、組織および血管石灰化、高リン血症、骨減少症（特に皮質骨のＢＭＤの喪失）、および動脈硬化、不妊症、短い寿命、肺気腫、皮膚萎縮、貧血、胸腺萎縮、腎臓および血管系のものを含む異所性石灰化、腎間質マトリクスの蓄積、糸球体硬化、および神経変性を含む、Ｋｌｏｔｈｏノックアウトマウスによって示される疾患または病態が含まれる。
【００１０】
可能性のあるＫｌｏｔｈｏ欠乏のさらなる例としては、癌、糖尿病、心疾患、血管疾患、肺疾患、骨疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、悪液質、筋ジストロフィーが挙げられる。
【００１１】
本発明はまた、患者における血圧または石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積（ｃａｌｃｉｆｉｃ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅ  ｂｕｒｄｅｎ）を低下させる方法、あるいは血圧および石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低下させる方法であって、有効量の可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏを患者に投与することを含む、方法；患者における血清リン酸塩レベルを低下させる方法であって、有効量の可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏを患者に投与することを含む、方法；患者におけるＦＧＦ２３を増加させる方法であって、有効量の可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏを患者に投与することを含む、方法；高リン血症または石灰沈着症、高リン血症および石灰沈着症、慢性腎疾患または慢性腎不全、慢性腎疾患および慢性腎不全、組織または血管石灰化、組織および血管石灰化、アルブミン尿またはタンパク尿、あるいはアルブミン尿およびタンパク尿を治療または予防するための医薬の製造における可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；血圧または石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低下させるための医薬、あるいは血圧および石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低下させるための医薬の製造における可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；血清リン酸塩レベルを低下させるための医薬の製造における可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；ＦＧＦ２３を増加させるための医薬の製造における可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；高リン血症または石灰沈着症、高リン血症および石灰沈着症、慢性腎疾患または慢性腎不全、慢性腎疾患および慢性腎不全、組織または血管石灰化、組織および血管石灰化、アルブミン尿またはタンパク尿、あるいはアルブミン尿およびタンパク尿の治療または予防における可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；血圧または石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低下させる、あるいは血圧および石灰性アテローム動脈硬化プラーク断面積を低下させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；血清リン酸塩レベルを低下させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用；ならびにＦＧＦ２３を増加させる可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの使用を提供する。
【００１２】
可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏは、配列番号１１、配列番号５、配列番号７、および配列番号９、最も好ましくは配列番号５からなる群より選択される。
【００１３】
本明細書で使用する場合、用語「可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏ」は、可溶性ヒトＫｌｏｔｈｏ（配列番号４）、可溶性ラットＫｌｏｔｈｏ（配列番号６）、可溶性マウスＫｌｏｔｈｏ（配列番号１）、可溶性サルＫｌｏｔｈｏ（配列番号８）、ヒトＫｌｏｔｈｏ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号５）、ラットＫｌｏｔｈｏＥＣＤ（配列番号７）、マウスＫｌｏｔｈｏＥＣＤ（配列番号１１）、およびサルＫｌｏｔｈｏＥＣＤ（配列番号９）を含む、Ｋｌｏｔｈｏの可溶性の活性フラグメントまたはＫｌｏｔｈｏの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を指す。
【００１４】
用語「治療している」（または「治療する」または「治療」）は、症状、障害、病態、または疾患の進行または重症度を遅延、停止、低減、または反転することを意味する。
【００１５】
用語「予防している」（または「予防する」または「予防」）は、被験体における症状、障害、病態、もしくは疾患の発生の減少、あるいは症状、障害、病態、もしくは疾患またはそれらに伴う症状を獲得する危険性の減少を指す。
【００１６】
「患者」は哺乳動物、好ましくはヒトである。
【００１７】
用語「有効量」は、患者に対する単回または複数回用量の投与時に所望の治療を提供する可溶性α−Ｋｌｏｔｈｏの量または用量を指す。
【実施例】
【００１８】
正常マウスにおけるＡＡＶ８により媒介される可溶性Ｋｌｏｔｈｏ過剰発現の効果
血清中の増加した可溶性Ｋｌｏｔｈｏレベルのインビボでの効果を以下の研究において評価する。Ｋｌｏｔｈｏの過剰発現を、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によってマウス血清Ｋｌｏｔｈｏレベルを直接測定することによって確認する。血清リン酸塩、カルシウム、ＦＧＦ２３およびＰＴＨに対するＫｌｏｔｈｏ過剰発現の効果を試験する。
【００１９】
血清Ｋｌｏｔｈｏレベルの増加を誘発するために、アデノウイルス系を利用する。ＣＤ３３  Ｎ末端シグナル配列（配列番号２）を有するマウスＫｌｏｔｈｏタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を、組換えハイブリッドアデノ随伴ウイルスベクター２／８（ＡＡＶ８）内にパッケージ化する。Ｋｌｏｔｈｏの発現を、肝臓特異的チロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーターにより駆動する。
【００２０】
正常なオスのＣ５７Ｂｌ６マウスを８〜９週齢でこの研究に使用する。ビヒクル、またはウイルス（ＣＤ３３  Ｎ末端シグナル配列（配列番号２）またはＬａｃＺコントロール（配列番号３）を有するマウスＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ）の単回の眼窩後注射をマウスに与える。Ｋｌｏｔｈｏ  ＥＣＤについてのウイルス用量範囲は、１匹のマウスにつき１×１０１０〜１×１０１１ゲノムコピーである。２、４および８週に血清をマウスから得る。マウスの小集団を２週で屠殺する。残っているマウスを４週および屠殺時（８週）に出血させる。
【００２１】
マウスＫｌｏｔｈｏ  ＥＬＩＳＡ
マウス血清中のマウスＫｌｏｔｈｏタンパク質を、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいて測定する。そのアッセイにおいて、マウスＫｌｏｔｈｏをプレート上でコーティングした抗体で捕捉し、次いで捕捉したＫｌｏｔｈｏを、標識した二次抗体を用いて測定する。
【００２２】
９６ウェルプレートの各ウェルを、７０μＬのヤギ抗マウスＫｌｏｔｈｏポリクローナル捕捉抗体（炭酸塩バッファー中のＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＦ１８１９、２μｇ／ｍＬ、ｐＨ９．６）でコーティングする。標準曲線を３連で実施し、一方、サンプルを２連で実施する。プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートする。ウェルを吸引し、自動プレート洗浄器を用いて、洗浄バッファー（２０ｍＭ  トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０）で２回洗浄する。プレートを、室温にて１〜４時間、２００μＬのブロッキングバッファー／ウェル（上記の洗浄バッファー中の５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｓｔａｎｔミルク）でブロックする。
【００２３】
マウス血清サンプルを、１：２希釈にてＳｅｒａＳｕｂ（登録商標）（ＣＳＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で希釈する。標準物を、５０％のＳｅｒａＳｕｂ（登録商標）、５０％のプールしたマウス血清（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ、カタログ番号ＭＳＥＳＲＭ）に希釈した、マウスＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ（配列番号１０）を用いて調製し、それにより、標準曲線希釈物は、サンプルとしてＳｅｒａＳｕｂ（登録商標）と同じ割合のマウス血清を含有する。次に、５０μＬの各サンプルを、２連（または標準物の場合、３連）にて抗体でコーティングしたウェルに加える。プレートを室温にて１．５時間インキュベートする。次いでウェルを洗浄バッファーで３回洗浄する。
【００２４】
ビオチン化抗Ｋｌｏｔｈｏ抗体（ブロッキングバッファー中で２μｇ／ｍＬに希釈した、５０μＬのビオチン化ヤギ抗マウスＫｌｏｔｈｏポリクローナル）を各ウェルに加え、室温にて４５分間インキュベートする。次いでウェルを洗浄バッファーで３回洗浄する。次いで、５０μＬのペルオキシダーゼ抱合ストレプトアビジンをウェルに加え、プレートを室温にて３０分間インキュベートする。次に、５０μＬの発色基質（すなわち、ＯＰＤ基質、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ−６９１２）を各ウェルに加え、室温にて２〜４分間発現させる。各ウェルに１００μＬの１Ｎ  ＨＣｌを加えることによって反応を停止する。ウェルの吸光度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０プレートリーダーで４９０ｎｍにて読み取る。２連のウェルからの平均吸光度を測定し、希釈物についての逆算を作成し、得られた値を以下の表１に記載する。
【００２５】
インタクトなＦＧＦ２３  ＥＬＩＳＡ
市販のヒトのインタクトなＦＧＦ２３  ＥＬＩＳＡキット（Ｋａｉｎｏｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号ＣＹ−４０００）を用いてインタクトなＦＧＦ２３レベルを測定する。製造業社の指示書に従う。値が定量化のための標準曲線の範囲内であるように、血清を種々の濃度で希釈する。標準曲線は３〜８００ｐｇ／ｍＬの範囲である。ＥＬＩＳＡがマウスＫｌｏｔｈｏに対して１００％交差反応を有するという仮定が生じる。二連のウェルからの平均吸光度を測定し、希釈物についての逆算を作成し、得られた値を以下の表１に記載する。
【００２６】
インタクトなＰＴＨ  ＥＬＩＳＡ
市販のマウスのインタクトなＰＴＨ  ＥＬＩＳＡキット（Ｉｍｍｕｔｏｐｉｃｓ、カタログ番号６０−２３００）を用いてインタクトなＰＴＨレベルを測定する。１回のみの反復を測定することを除いて、製造業社の指示書に従う。標準曲線は３６〜３５００ｐｇ／ｍＬの範囲である。結果を以下の表１に示す。
【００２７】
血清リン酸塩およびカルシウム測定
血清を収集し、カルシウムおよび無機リンについて分析する。カルシウムレベルを、ｏ−クレゾールフタレインコンプレクソンを、アルカリ性ｐＨにてサンプル中のカルシウムと反応させて、カルシウム−ｏ−クレゾールフタレイン錯体を形成させる、比色分析法によって測定する。カルシウム濃度はこの錯体の色の強度に直接比例し、自動化学分析器を用いて測光法で測定する。無機リンを、酸性条件下でモリブデン酸アンモニウムと合わせて、モリブデン酸アンモニウム錯体を形成する。この錯体の濃度もまた、測光法で測定する。この分析のために、Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｌｃｉｕｍ  ａｎｄ  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ試薬キット、およびＨｉｔａｃｈｉ９１２またはＨｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ分析器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のいずれかを利用する。結果を以下の表１に示す。
【００２８】
【表１】
2013514366.tif 000002
【００２９】
この研究においてビヒクルで処置したマウスのＫｌｏｔｈｏの血清レベル（ＥＬＩＳＡにより測定した）は文献［Ｋｕｒｏｓｕら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５］に報告されているものの範囲である。ビヒクルで処置したマウスにおける血清Ｋｌｏｔｈｏレベルと比べて、ＡＡＶ２／８系の使用により、可溶性Ｋｌｏｔｈｏの過剰発現が達成される。Ｋｌｏｔｈｏの血清レベルの増加の振幅は時間とともに減少するように見えるが、この研究全体にわたってビヒクルと比べてレベルは高いままである。この研究において測定したＫｌｏｔｈｏ血清レベルの最大増加はビヒクルより約２４倍高かった。ＦＧＦ２３の血清レベルは、増加した血清Ｋｌｏｔｈｏレベルを有し、マウスにおいて統計的に有意に増加する（約８０７倍の最大増加）。この研究全体にわたって血清ＦＧＦ２３の増加が持続する。ＰＴＨレベルは、可溶性Ｋｌｏｔｈｏを過剰発現するマウスにおいて２週および８週の両方の時点（４週は試験していない）で高い。血清リン酸塩レベルは、ビヒクルから約５６％の最大減少を有し、全ての時点で統計的に有意であり、用量反応的に減少する。これらのデータは、増加した可溶性Ｋｌｏｔｈｏ血清レベルが血清リン酸塩レベルの低下を導くことを実証する。血清カルシウムはわずかではあるが、ビヒクルと比べて初期に最も低い用量（２週）で統計的に有意に増加し、次いで血清可溶性Ｋｌｏｔｈｏを過剰発現するマウスにおいて４週および８週で減少する（約８％の最大減少）。
【００３０】
同様の設計の反復研究により、ＡＡＶ２／８（１匹のマウスにつき１×１０９〜３×１０１１ゲノムコピーの範囲のウイルス用量）による可溶性Ｋｌｏｔｈｏの投与が、血清Ｋｌｏｔｈｏレベルの増加（８００ｎｇ／ｍＬ程度の高さのレベル）、血清ＦＧＦ２３レベルの増加、ならびに血清リン酸塩およびカルシウムの低下を生じることを確認した。ＰＴＨは１０週および１２週でのみ測定し、その時点で有意な変化は観察されなかった。
【００３１】
マウスＫｌｏｔｈｏ（配列番号１）
MLARAPPRRPPRLVLLRLLLLHLLLLALRARCLSAEPGQGAQTWARFARAPAPEAAGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHSGAAPSDSPIVVAPSGAPSPPLSSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGRVSIALSSHWINPRRMTDYNIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKRLIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPNMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEYNHPPIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIEDNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYVQVDTTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNHTVLHFYRCMISELVHANITPVVALWQPAAPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFKELGHWVNLWITMNEPNTRNMTYRAGHHLLRAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQADWIEPACPFSQNDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPRVMRDWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLVRGSFDFLAVSHYTTILVDWEKEDPMKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLRFKYGDLPMYVTANGIDDDPHAEQDSLRIYYIKNYVNEALKAYVLDDINLCGYFAYSLSDRSAPKSGFYRYAANQFEPKPSMKHYRRIIDSNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTECGFFQTRKSLLVFISF LVFTFIISLA LIFHYSKKGQRSYK
【００３２】
マウスＫｌｏｔｈｏ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）−ＣＤ３３  Ｎ末端シグナル配列（配列番号２）
MPLLLLLPLLWAGALAMAEPGQGAQTWARFARAPAPEAAGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHSGAAPSDSPIVVAPSGAPSPPLSSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGRVSIALSSHWINPRRMTDYNIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKRLIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPNMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEYNHPPIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIEDNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYVQVDTTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNHTVLHFYRCMISELVHANITPVVALWQPAAPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFKELGHWVNLWITMNEPNTRNMTYRAGHHLLRAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQADWIEPACPFSQNDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPRVMRDWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLVRGSFDFLAVSHYTTILVDWEKEDPMKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLRFKYGDLPMYVTANGIDDDPHAEQDSLRIYYIKNYVNEALKAYVLDDINLCGYFAYSLSDRSAPKSGFYRYAANQFEPKPSMKHYRKIIDSNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTECGFFQTRKS
【００３３】
ＬａｃＺコントロール（配列番号３）
MTMITDSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRFAWFPAPEAVPESWLECDLPEADTVVVPSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPPFVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRIIFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRLPSEFDLSAFLRAGENRLAVMVLWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSLLHKPTTQISDFHVATRFNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVTVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRVTLRLNVENPKLWSAEIPNLYRAVVELHTADGTLIEAEACDVGFREVRIENGLLLLNGKPLLIRGVNRHEHHPLHGQVMDEQTMVQDILLMKQNNFNAVRCSHYPNHPLWYTLCDRYGLYVVDEANIETHGMVPMNRLTDDPRWLPAMSERVTRMVQRDRNHPSVIIWSLGNESGHGANHDALYRWIKSVDPSRPVQYEGGGADTTATDIICPMYARVDEDQPFPAVPKWSIKKWLSLPGETRPLILCEYAHAMGNSLGGFAKYWQAFRQYPRLQGGFVWDWVDQSLIKYDENGNPWSAYGGDFGDTPNDRQFCMNGLVFADRTPHPALTEAKHQQQFFQFRLSGQTIEVTSEYLFRHSDNELLHWMVALDGKPLASGEVPLDVAPQGKQLIELPELPQPESAGQLWLTVRVVQPNATAWSEAGHISAWQQWRLAENLSVTLPAASHAIPHLTTSEMDFCIELGNKRWQFNRQSGFLSQMWIGDKKQLLTPLRDQFTRAPLDNDIGVSEATRIDPNAWVERWKAAGHYQAEAALLQCTADTLADAVLITTAHAWQHQGKTLFISRKTYRIDGSGQMAITVDVEVASDTPHPARIGLNCQLAQVAERVNWLGLGPQENYPDRLTAACFDRWDLPLSDMYTPYVFPSENGLRCGTRELNYGPHQWRGDFQFNISRYSQQQLMETSHRHLLHAEEGTWLNIDGFHMGIGGDDSWSPSVSAEFQLSAGRYHYQLVWCQK
【００３４】
ヒトＫｌｏｔｈｏ（配列番号４）
MPASAPPRRPRPPPPSLSLLLVLLGLGGRRLRAEPGDGAQTWARVSRPPAPEAAGLFQGTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWQQHGKGASIWDTFTHPLAPPGDSRNASLPLGAPSPLQPATGDVASDSYNNVFRDTEALRELGVTHYRFSISWARVLPNGSAGVPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWLPQRLQDAYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGIRGSPRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGQVSIALSSHWINPRRMTDHSIKECQKSLDFVLGWFAKPVFIDGDYPESMKNNLSSILPDFTESEKKFIKGTADFFALCFGPTLSFQLLDPHMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEFNHPQIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIKLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKMLLPKSSALFYQKLIEKNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYIQVDTTLSQFTDLNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVTKKRKSYCVDFAAIQPQIALLQEMHVTHFRFSLDWALILPLGNQSQVNHTILQYYRCMASELVRVNITPVVALWQPMAPNQGLPRLLARQGAWENPYTALAFAEYARLCFQELGHHVKLWITMNEPYTRNMTYSAGHNLLKAHALAWHVYNEKFRHAQNGKISIALQADWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPWVMRDWLNQRNNFLLPYFTEDEKKLIQGTFDFLALSHYTTILVDSEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLKFKYGDLPMYIISNGIDDGLHAEDDQLRVYYMQNYINEALKAHILDGINLCGYFAYSFNDRTAPRFGLYRYAADQFEPKASMKHYRKIIDSNGFPGPETLERFCPEEFTVCTECSFFHTRKSLLAFIAFLFFASIISLSLIFYYSKKGRRSYK
【００３５】
ヒトＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ（配列番号５）
MPASAPPRRPRPPPPSLSLLLVLLGLGGRRLRAEPGDGAQTWARVSRPPAPEAAGLFQGTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWQQHGKGASIWDTFTHHPLAPPGDSRNASLPLGAPSPLQPATGDVASDSYNNVFRDTEALRELGVTHYRFSISWARVLPNGSAGVPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDAYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGIRGSPRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGQVSIALSSHWINPRRMTDHSIKECQKSLDFVLGWFAKPVFIDGDYPESMKNNLSSILPDFTESEKKFIKGTADFFALCFGPTLSFQLLDPHMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEFNHPQIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIKLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKMLLPKSSALFYQKLIEKNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYIQVDTTLSQFTDLNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVTKKRKSYCVDFAAIQPQIALLQEMHVTHFRFSLDWALILPLGNQSQVNHTILQYYRCMASELVRVNITPVVALWQPMAPNQGLPRLLARQGAWENPYTALAFAEYARLCFQELGHHVKLWITMNEPYTRNMTYSAGHNLLKAHALAWHVYNEKFRHAQNGKISIALQADWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPWVMRDWLNQRNNFLLPYFTEDEKKLIQGTFDFLALSHYTTILVDSEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLKFKYGDLPMYIISNGIDDGLHAEDDQLRVYYMQNYINEALKAHILDGINLCGYFAYSFNDRTAPRFGLYRYAADQFEPKASMKHYRKIIDSNGFPGPETLERFCPEEFTVCTECSFFHTRKS
【００３６】
ラットＫｌｏｔｈｏ（配列番号６）
MPARAPPRRLPRLLLLRLLSLHLLLLTLRARCLSAEPGQGAQTWARFARPPVPEASGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHPRAIPEDSPIVMAPSGAPLPPLPSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWRLYNTSFRPTQGGRVSIALGSHWITPRRMTDYHIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPKSMKNNLSSLLPDFTESEKRFIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPSMKFRQLESPSLRQLLSWIDLEYNHPQIFIVENGWFVSGTTRRDDAKYMYYLKKFIMESLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIENNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYIQVDPTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNRTVLHFYRCMVSELVHANITPVVALWQPATPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFEELGHWVKFWITINEPNSRNMTYRAGHHLLKAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQVDWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDVGWLAEPIFGSGDYPHVMREWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLIRGSFDFLALSHYTTILVDWEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPNQVAVVPWGLRKALNWLRFKYGDLPMFVTANGIDDDPHAEQDSLRMYYIKNYVNEALKAYVLDGINLCGYFAYSLSDRSVPKSGFYRYAANQFEPKPSIKHYRKIIDNNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTGCGFFQTRKSLLAFISFLVFAFVTSLALIYYYSKKGRRRYK
【００３７】
ラットＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ（配列番号７）
MPARAPPRRLPRLLLLRLLSLHLLLLTLRARCLSAEPGQGAQTWARFARPPVPEASGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHPRAIPEDSPIVMAPSGAPLPPLPSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWRLYNTSFRPTQGGRVSIALGSHWITPRRMTDYHIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPKSMKNNLSSLLPDFTESEKRFIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPSMKFRQLESPSLRQLLSWIDLEYNHPQIFIVENGWFVSGTTRRDDAKYMYYLKKFIMESLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIENNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYIQVDPTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNRTVLHFYRCMVSELVHANITPVVALWQPATPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFEELGHWVKFWITINEPNSRNMTYRAGHHLLKAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQVDWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDVGWLAEPIFGSGDYPHVMREWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLIRGSFDFLALSHYTTILVDWEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPNQVAVVPWGLRKALNWLRFKYGDLPMFVTANGIDDDPHAEQDSLRMYYIKNYVNEALKAYVLDGINLCGYFAYSLSDRSVPKSGFYRYAANQFEPKPSIKHYRKIIDNNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTGCGFFQTRKS
【００３８】
サルＫｌｏｔｈｏ（配列番号８）
MPASAPPRRPRPPPPSLSLSLLLVLLGLAGRRLRAEPGDGAQTWARFARPPAPEAAGLFQGTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWQQHGKGASIWDTFTHHPLAPPGDSRIANVPSGAPSPLQPATGDVASDSYNNVFRDTEALRELGVTHYRFSISWARVLPNGSAGVPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDAYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGIRGSPRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGQVSIALSSHWINPRRMDHSIKECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKKFIKGTADFFALSFGPTLSFQLLDPHMKFRQLESPSLRQLLSWIDLEYNHPQIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIKLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQEKTLLPKSSALFYQKLIEKNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGIVDNYIQVDTTLSQFTDLNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVTKKRKSYCVDFAAIQPQITLLQEMHVTHFRFSLDWALILPLGNQSQVNHTILQYYRCMVSELVRVNITPVVALWQPVAPNQGLPRLLARQGAWENPYTALAFAEYARLCFQELGHHVKLWITMNEPYTRNMTYSAGHNLLKAHALAWHVYNEKFRHAQNGKISIALQADWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPWVMRDWLNQRNNFLLPYFTEDEKKLIQGTFDFLALSHYTTILVDSEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLKFKYGDLPMYIISNGIDDGLHAEDDQLRVYYMQNYINEALKAHILDGINLCGYFAYSFNDRTAPRFGLYRFAADQFEPKPSMKHYRKIIDSNGFPGPETLEKFCPEEFTVCTECSFFHTRKPLVAFIAFLFFAFIVSLSLIFYYSKKGRRRYQ
【００３９】
サルＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ（配列番号９）
MPASAPPRRPRPPPPSLSLSLLLVLLGLAGRRLRAEPGDGAQTWARFARPPAPEAAGLFQGTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWQQHGKGASIWDTFTHHPLAPPGDSRIANVPSGAPSPLQPATGDVASDSYNNVFRDTEALRELGVTHYRFSISWARVLPNGSAGVPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDAYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGIRGSPRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGQVSIALSSHWINPRRMTDHSIKECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKKFIKGTADFFALSFGPTLSFQLLDPHMKFRQLESPSLRQLLSWIDLEYNHPQIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIKLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQEKTLLPKSSALFYQKLIEKNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGIVDNYIQVDTTLSQFTDLNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVTKKRKSYCVDFAAIQPQITLLQEMHVTHFRFSLDWALILPLGNQSQVNHTILQYYRCMVSELVRVNITPVVALWQPVAPNQGLPRLLARQGAWENPYTALAFAEYARLCFQELGHHVKLWITMNEPYTRNMTYSAGHNLLKAHALAWHVYNEKFRHAQNGKISIALQADWIEPACPFSQKDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPWVMRDWLNQRNNFLLPYFTEDEKKLIQGTFDFLALSHYTTILVDSEKEDPIKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLKFKYGDLPMYIISNGIDDGLHAEDDQLRVYYMQNYINEALKAHILDGINLCGYFAYSFNDRTAPRFGLYRFAADQFEPKPSMKHYRKIIDSNGFPGPETLEKFCPEEFTVCTECSFFHTRKP
【００４０】
マウスＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ−Ｈｉｓ標識化：３６〜９８３（配列番号１０）
EPGQGAQTWARFARAPAPEAAGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHSGAAPSDSPIVVAPSGAPSPPLSSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGRVSIALSSHWINPRRMTDYNIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKRLIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPNMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEYNHPPIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIEDNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYVQVDTTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNHTVLHFYRCMISELVHANITPVVALWQPAAPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFKELGHWVNLWITMNEPNTRNMTYRAGHHLLRAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQADWIEPACPFSQNDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPRVMRDWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLVRGSFDFLAVSHYTTILVDWEKEDPMKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLRFKYGDLPMYVTANGIDDDPHAEQDSLRIYYIKNYVNEALKAYVLDDINLCGYFAYSLSDRSAPKSGFYRYAANQFEPKPSMKHYRRIIDSNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTECGFFQTRKSHHHHHH
【００４１】
マウスＫｌｏｔｈｏ  ＥＣＤ（配列番号１１）
EPGQGAQTWARFARAPAPEAAGLLHDTFPDGFLWAVGSAAYQTEGGWRQHGKGASIWDTFTHHSGAAPSDSPIVVAPSGAPSPPLSSTGDVASDSYNNVYRDTEGLRELGVTHYRFSISWARVLPNGTAGTPNREGLRYYRRLLERLRELGVQPVVTLYHWDLPQRLQDTYGGWANRALADHFRDYAELCFRHFGGQVKYWITIDNPYVVAWHGYATGRLAPGVRGSSRLGYLVAHNLLLAHAKVWHLYNTSFRPTQGGRVSIALSSHWINPRRMTDYNIRECQKSLDFVLGWFAKPIFIDGDYPESMKNNLSSLLPDFTESEKRLIRGTADFFALSFGPTLSFQLLDPNMKFRQLESPNLRQLLSWIDLEYNHPPIFIVENGWFVSGTTKRDDAKYMYYLKKFIMETLKAIRLDGVDVIGYTAWSLMDGFEWHRGYSIRRGLFYVDFLSQDKELLPKSSALFYQKLIEDNGFPPLPENQPLEGTFPCDFAWGVVDNYVQVDTTLSQFTDPNVYLWDVHHSKRLIKVDGVVAKKRKPYCVDFSAIRPQITLLREMRVTHFRFSLDWALILPLGNQTQVNHTVLHFYRCMISELVHANITPVVALWQPAAPHQGLPHALAKHGAWENPHTALAFADYANLCFKELGHWVNLWITMNEPNTRNMTYRAGHHLLRAHALAWHLYDDKFRAAQKGKISIALQADWIEPACPFSQNDKEVAERVLEFDIGWLAEPIFGSGDYPRVMRDWLNQKNNFLLPYFTEDEKKLVRGSFDFLAVSHYTTILVDWEKEDPMKYNDYLEVQEMTDITWLNSPSQVAVVPWGLRKVLNWLRFKYGDLPMYVTANGIDDDPHAEQDSLRIYYIKNYVNEALKAYVLDDINLCGYFAYSLSDRSAPKSGFYRYAANQFEPKPSMKHYRKIIDSNGFLGSGTLGRFCPEEYTVCTECGFFQTRKS
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年6月8日(2012.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2013514366000001.app
【国際調査報告】
2013514366.tif 000009
2013514366.tif 000010
2013514366.tif 000011