(57)【要約】本発明は、スチラキスリグノリドＡまたはそのアグリコンを有効成分として含む喘息の予防または治療用薬学的組成物に関する。具体的に前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、エゴノキの幹及び皮から分離されたものであり、前記スチラキスリグノリドＡ、またはそのアグリコンであり安全性を増加させたものであるホモエゴノールは、喘息誘導マウスモデルで体重減少及び気道過敏性を軽減させ、気道内活性酸素発生量を抑制させ、血清及び気管支肺胞洗浄液内ＩｇＥ、ＴＧＦ−β１及びＩＬ−１７の生成を抑制するだけでなく、気管支内炎症細胞浸潤を抑制して、粘液栓形成及び上皮下線維化を抑制する効果を示す。したがって、前記スチラキスリグノリドまたはホモエゴノールは、気道リモデリングが進行した気管支喘息の予防または治療のための薬学的組成物の有効成分として有用に用いることができる。2013544252.tif 000025
2013544252.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スチラキスリグノリド（Styraxlignolide）Ａ化合物、そのアグリコン（aglycone）、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、喘息予防及び治療用薬学的組成物。
【請求項２】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物が、下記の化学式１で表されることを特徴とする、請求項１に記載の喘息予防及び治療用薬学的組成物
[化１]
2013544252.tif 000021
。
【請求項３】
前記アグリコンが、下記の化学式２で表されるホモエゴノール（homoegonol）であることを特徴とする、請求項１に記載の喘息予防及び治療用薬学的組成物
[化２]
2013544252.tif 000022
。
【請求項４】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物が、エゴノキ（Styrax japonica）から分離されることを特徴とする、請求項１に記載の喘息予防及び治療用薬学的組成物。
【請求項５】
前記喘息が、気道リモデリングが進行した喘息であることを特徴とする、請求項１に記載の喘息予防及び治療用薬学的組成物。
【請求項６】
スチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、喘息予防及び改善用健康食品用組成物。
【請求項７】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物が、下記の化学式１で表されることを特徴とする、請求項６に記載の喘息予防及び改善用健康食品用組成物
[化１]
2013544252.tif 000023
。
【請求項８】
前記アグリコンが、下記の化学式２で表されるホモエゴノールであることを特徴とする、請求項６に記載の喘息予防及び改善用健康食品用組成物
[化２]
2013544252.tif 000024
。
【請求項９】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物が、エゴノキから分離されることを特徴とする、請求項６に記載の喘息予防及び改善用健康食品用組成物。
【請求項１０】
前記喘息が、気道リモデリングが進行した喘息であることを特徴とする、請求項６に記載の喘息予防及び改善用健康食品用組成物。
【請求項１１】
薬学的に有効な量のスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む薬学的組成物を個体に投与する工程を含む、喘息の予防方法。
【請求項１２】
薬学的に有効な量のスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む薬学的組成物を個体に投与する工程を含む、喘息の治療方法。
【請求項１３】
喘息予防及び治療用薬学的組成物に用いるためのスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１４】
喘息予防及び改善用健康食品用組成物に用いるためのスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スチラキスリグノリドＡまたはそのアグリコンを有効成分として含む喘息の予防または治療用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
全世界的にその発病率が増加しているアレルギー性疾患には、過敏症、アレルギー性鼻炎、及び喘息、アトピー性皮膚炎及び蕁麻疹がある（Wuthrich B. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol.,1989年,第90巻,p.3-10）（非特許文献１）。
【０００３】
このようなアレルギー性疾患の中で喘息は、韓国の人口の中で約３００万人が苦しんでいると推定され、咳とともに息の音がゼーゼーと聞こえる喘鳴、息が詰まったり胸が息苦しかったりする症状を特徴とする慢性炎症性呼吸器疾患であり、最近になって大気汚染の深刻化と食生活の西欧化によって患者が急増している。喘息は、米国、英国等の先進国では最も一般的な疾患であり全人口の２０〜３０％、韓国では小学校学童期児童の１６％、成人の場合約５％、総４００万人以上の患者がいると推定されていて、幼小児から高齢者まですべての年齢層で見られる疾病で、総人口の１０％が病んでいる疾病である。その原因としては、家族内のアレルギー性向を誘発するアトピー体質が基本的に作用することが明らかにされ、気道過敏性と気道の好酸球炎症、及びＴｈ２免疫反応の亢進が喘息を起こす基本的要因として報告された。喘息によって、呼吸困難、ひどい咳、喘鳴音（呼吸時にゼーゼーという音が聞こえる）が起こり、２０００年度のＷＨＯの特別報告書によると、全世界的に１億５千万人の患者が喘息で苦しんでいて、１年に１８万人が気管支喘息で命を失うとされている。同時に、疾患の有病率と重症度が継続して増加する傾向にあり、喘息による医療、社会的費用は肺結核とエイズの費用を合わせたものよりさらに大きいとＷＨＯの特別報告では言及している。
【０００４】
韓国の場合にも、８０年代初頭には３〜４％に過ぎなかった小児喘息の有病率が、２倍以上に増加した。去る１９９８年に発表された「ＩＳＡＡＣ（International Study of Asthma and Allergy in Childhood）」研究によると、韓国の小児喘息有病率は６〜７歳は１３．３％、１３〜１４歳は７．７％と示された。小児全体で見ると、１００人中１０人が喘息を病んでいてその中の５０％にあたる５人は一生涯喘息を病んでいる。さらに大きな問題は、疾患の有病率だけではなく疾患の程度もさらに深刻化しているというところに問題の深刻性がある。
【０００５】
一般的に喘息は、ＴＨ２タイプ免疫細胞が生成するインターロイキン−４、５、１３によって炎症細胞が増殖、分化及び活性化して気道及び気道周辺組織に移動、浸潤して現れる慢性炎症疾患として認識されている（Elias JA,ら,J. Clin. Invest.,2003 年,第111巻,p.291-297）（非特許文献２）。この場合、活性化した好酸球、肥満細胞、肺胞大食細胞などの炎症細胞が、多様な炎症媒介因子（システインロイコトリエン、プロスタグランジンなど）を分泌しながら強力な気管支収縮作用の過程で重要な役割をする（Maggi E.,Immunotechnology,1998 年,第3巻,p.233-244（非特許文献３）; Pawankar R.,Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol.,2001 年,第1巻,p.3-6（非特許文献４）; Barnes PJ,ら,Pharmacol Rev.,1998 年,第50巻,p.515-596（非特許文献５））。
【０００６】
したがって、炎症細胞活性化に関与するＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等のサイトカイン及び免疫グロブリンＥの生産とそれらの作用で好酸球など炎症細胞から分泌するシステインロイコトリエン生合成などは、炎症及びアレルギー反応とそれによる喘息を誘発する主要原因なので、それらの生産を抑制するための薬物を開発しようと多くの研究が進行されている。
【０００７】
現在多様な治療剤が常用されているが、かなり多数の治療剤は無視できない副作用のため使用時に注意を要している。吸入型コルチコステロイド（corticosteroid）製剤は今も最も重要な治療剤であり優れた効果を示すが長期的に用いる場合、用量と使用時間に比例して副腎抑制、骨密度減少、成長障害、目と皮膚の合併症などを誘発することが知られている。また、コルチコステロイドはむしろコラーゲンの合成を増加させることができるという報告もある（Warshmana GS,ら,Am J Physiol,1998 年,第274巻,p.499-507）（非特許文献６）。したがって、慢性持続性喘息患者に対する数年間のコルチコステロイド治療によっても、気道過敏性が正常化する喘息患者は稀である。ベータ−２作用物質（agonist）の長期間投与も気道リモデリングを抑制することができないことが知られていて（Jeffery PK,ら,Am Rev Respir Dis,1992 年,第145巻,p.890-0）（非特許文献７）、サルメテロール（salmeterol）及びホルメテロール（formeterol）のような持続性ベータ−２作用物質は、喘息発作を予防しながら逆に喘息患者を死亡させ得るという事実も警告されたことがある。このような多様な副作用が報告されているが、喘息症状を緩和する効果が副作用の危険より大きいという判断の下に継続して処方されている。しかし、副作用に敏感な子供の喘息患者の成長率を測定した結果、経口用ロイコトリエン拮抗剤（leukotriene antagonist,montelukast）を服用した子供喘息患者の成長率が、吸入型コルチコステロイド剤を使用した場合より１年で最高１ｃｍまで優れていることが示された（Garcia Garcia ML,ら,Pediatrics,2005 年,第116(2)巻,p.360-9）（非特許文献８）。成長期に喘息が制御されなければ、肺はもちろん身体全般の成長が阻害され得るので、たゆまない治療によって正常な肺機能を維持することが成長に必須ではあるが、持続的な治療に安全な薬物を用い、気道の炎症をよく管理することが何より重要であるということが明らかにされたことから、治療剤選択において喘息緩和効果とともに副作用に対する慎重な考慮が必要である。しかし、ロイコトリエン拮抗剤は、副作用の頻度が低いことが知られていて喘息の予防及び持続的な治療に新たに使用されているが、他の薬物と比較して喘息緩和効果が弱く患者の三分の一でしか顕著な効果を見せていない。したがって、毒性がなくて安全かつ薬物耐性を防止することができる新規な喘息治療剤の開発が求められている。
【０００８】
エゴノキ（Styrax japonica）は、ツツジ目エゴノキ科の木で、韓国、中国、日本が原産の落葉小高木である。１０〜１５ｍほどに育ち、寒さや公害に非常に強い。樹皮は暗い茶色で、葉は互生でたまご形や長い楕円形で先端がとがっている。実は核果で９月に熟して楕円形で、熟すと皮が不規則に割れる。エゴノキの成分は、実皮に約１０％のエゴサポニンがあり、種子には多くの種類のグリセリドと脂肪油、エゴノールが入っていて、花にはサポニン成分が含まれている。エゴノキは、買麻藤、
2013544252.tif 000003
と呼ばれ薬用に用い、漢方では駆虫、殺虫、興奮性除痰、喉頭炎、防腐剤などに用いて、清化、風通し、除湿の効能があって喉痛、牙痛、歯痛、風湿関節炎、四肢痛などを治療すると知られている。
【０００９】
それで、本発明者らは生体内副作用及び安全性などを考慮して生薬に対する関心を持ち、その中でも長期的な使用が可能で気道リモデリング抑制効果がある喘息治療剤を開発するために研究を進め、エゴノキから分離したスチラキスリグノリド（Styraxlignolide）Ａまたはそのアグリコンであるホモエゴノール（homoegonol）が喘息誘導モデルにおいて、現在喘息治療剤として広く使用されている薬物より優れた気道過敏反応抑制効果、気管支内炎症細胞浸潤抑制効果及び気道リモデリング（気管支上皮細胞肥厚、粘液分泌細胞の過増殖、線維化進行）進行の抑制効果を有することを確認して、前記スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールが、喘息予防または治療用組成物の有効成分として用いることができることを明らかにして本発明を完成した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Wuthrich B. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol.,1989年,第90巻,p.3-10
【非特許文献２】Elias JA,ら,J. Clin. Invest.,2003 年,第111巻,p.291-297
【非特許文献３】Maggi E.,Immunotechnology,1998 年,第3巻,p.233-244
【非特許文献４】Pawankar R.,Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol.,2001 年,第1巻,p.3-6
【非特許文献５】Barnes PJ,ら,Pharmacol Rev.,1998 年,第50巻,p.515-596
【非特許文献６】Warshmana GS,ら,Am J Physiol,1998 年,第274巻,p.499-507
【非特許文献７】Jeffery PK,ら,Am Rev Respir Dis,1992 年,第145巻,p.890-0
【非特許文献８】Garcia Garcia ML,ら,Pediatrics,2005 年,第116(2)巻,p.360-9
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、スチラキスリグノリドＡ、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む喘息の予防または治療用薬学的組成物を提供するためのものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記目的を達成するために、本発明は下記化学式１で表されるスチラキスリグノリドＡ化合物、下記化学式２で表されるそのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む喘息予防及び治療用薬学的組成物を提供する。
【００１３】
[化１]
2013544252.tif 000004
【００１４】
[化２]
2013544252.tif 000005
【００１５】
同時に、本発明は前記化学式１で表されるスチラキスリグノリドＡ化合物、前記化学式２で表されるそのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む喘息予防及び改善用健康食品用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明は、従来の技術で明かされていないスチラキスリグノリドＡ化合物またはそのアグリコンであるホモエゴノールの喘息での新規な効果を明らかにしたもので、本発明のスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールは、喘息誘導モデルにおいて、現在喘息治療剤に広く使用されている薬物であるデキサメタゾンまたはモンテルカストより優れた気道過敏反応抑制効果、気管支内炎症細胞浸潤抑制効果及び気道リモデリング（気管支上皮細胞肥厚、粘液分泌細胞の過増殖、線維化進行）進行の抑制効果を有すること、本発明のスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールは毒性が低いことを確認したので、ステロイドに耐性を示す場合、気道リモデリングが進行された場合、または長期的な喘息治療剤の使用が求められる場合のような気管支喘息の予防または治療に有用に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】正常対照群（ＮＣ）、喘息誘導群（ＯＶＡ）、デキサメタゾンが投与された喘息誘導群（ＤＥＸＡ）、モンテルカストが投与された喘息誘導群（Ｍｏｎｔｅ）及びスチラキスリグノリドＡが投与された喘息誘導群（スチラキスリグノリドＡ）に対する体重測定結果を示したグラフである（以下、＃：正常対照群（ＮＣ）と比べて統計的有意性が認められた場合（ｐ＜０．０５）、＊：喘息誘導群（ＯＶＡ）と比べて統計的有意性が認められた場合（ｐ＜０．０５））。
【図２】それぞれの実験群に対する気道過敏性有無を気道抵抗程度であるＰｅｎｈ（enhanced pause）数値で示したグラフである。
【図３】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内の炎症細胞数を示したグラフである。
【図４】それぞれの実験群に対する血清内または気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的ＩｇＥの濃度を示したグラフである。
【図５】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内の活性酸素発生量を示したグラフである。
【図６】それぞれの実験群において、肝臓に対する毒性を測定したグラフである（以下、＊＊：デキサメタゾン投与群（ＤＥＸＡ）と比べて統計的有意性が認められた場合  （ｐ＜０．０５））。
【図７】それぞれの実験群に対する気道粘膜内炎症細胞浸潤及び炎症指数を示した図である。
【図８】それぞれの実験群に対する杯状細胞の比率を示した図である。
【図９】それぞれの実験群に対する上皮下線維化部位を示した図である。
【図１０】正常対照群（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、喘息誘導群（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、デキサメタゾンが投与された喘息誘導群（ＯＶＡ＋Ｄｅｘ）、モンテルカストが投与された喘息誘導群（ＯＶＡ＋Ｍ）及び７．５ｍｇ／ｋｇのホモエゴノールが投与された喘息誘導群（ＯＶＡ＋ｈＥ７．５）、１５ｍｇ／ｋｇのホモエゴノールが投与された喘息誘導群（ＯＶＡ＋ｈＥ１５）及び３０ｍｇ／ｋｇのホモエゴノールが投与された喘息誘導群（ＯＶＡ＋ｈＥ３０）に対する体重測定結果を示したグラフである。
【図１１】それぞれの実験群に対する気道過敏性有無を気道抵抗程度であるＰｅｎｈ（enhanced pause）数値で示したグラフである。
【図１２】それぞれの実験群に対する血清内卵白アルブミン特異的ＩｇＥの濃度を示したグラフである。
【図１３】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的ＩｇＥの濃度を示したグラフである。
【図１４】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内の炎症細胞の数を示したグラフである。
【図１５】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内のＴＧＦ−β１の濃度を示したグラフである。
【図１６】それぞれの実験群に対する気管支肺胞洗浄液内のＩＬ−１７の濃度を示したグラフである。
【図１７】それぞれの実験群に対する気道粘膜内炎症細胞浸潤及び炎症指数を示した図である。
【図１８】それぞれの実験群に対する杯状細胞の比率を示した図である。
【図１９】それぞれの実験群に対する上皮下線維化部位を示した図である。
【図２０】ホモエゴノールの製造過程を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明で使用する用語を説明する。
【００１９】
本発明で使用する用語「抽出物」は、当業界で粗抽出物（crude extract）で通用する意味を有するが、広義的には下記の画分も含む。
【００２０】
本発明で使用する用語「画分」は、抽出時に用いた溶媒とは異なる溶媒を用いて本発明で目的とする活性を分画して得た活性画分（fraction）を意味する。
【００２１】
本発明で使用する用語「予防」は、本発明の組成物の投与で喘息を抑制したり進行を遅延させたりするすべての行為を意味する。
【００２２】
本発明で使用する用語「治療」及び「改善」は、本発明の組成物の投与で喘息の症状が好転または有利に変わるすべての行為を意味する。
【００２３】
本発明で使用する用語「投与」は、所定の本発明の組成物を任意の適切な方法で個体に提供することを意味する。
【００２４】
本発明で使用する用語「個体」は、本発明の組成物を投与して喘息の症状が好転し得る疾患を有した人間、猿、犬、ヤギ、豚またはネズミなどすべての動物を意味する。
【００２５】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００２６】
本発明は、スチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、喘息予防及び治療用薬学的組成物を提供する。
【００２７】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、下記の化学式１で表されることが好ましいがそれに限定されない。
【００２８】
[化１]
2013544252.tif 000006
【００２９】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物のアグリコンは、下記の化学式２で表されることが好ましいがそれに限定されない。
【００３０】
[化２]
2013544252.tif 000007
【００３１】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、エゴノキから分離したものを用いることが好ましいがそれに限定されず、化学的に合成したものを用いることができる。
【００３２】
前記エゴノキは、全草を用いることができ、幹及び樹皮を用いることがさらに好ましいがそれに限定されない。
【００３３】
前記喘息は、気道リモデリングが進行した喘息であることが好ましいがそれに限定されない。
【００３４】
本発明は、前記化学式１で表される化合物、前記化学式２で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩だけではなく、それから製造され得る溶媒和物、水和物をすべて含む。
【００３５】
本発明の前記化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態で用いることができ、塩としては薬学的に許容可能な遊離酸によって形成された酸付加塩が有用である。酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜硝酸または亜リン酸のような無機酸類と脂肪族モノ及びジカルボキシレート、フェニル置換されたアルカノエート、ヒドロキシアルカノエート及びアルカンジオエート、芳香族酸類、脂肪族及び芳香族スルホン酸類のような無毒性有機酸から得られる。このような薬学的に無毒な塩類としては、スルファート、ピロスルファート、バイスルファート、サルファイト、バイサルファイト、ニトラート、ホスフェート、モノホスフェート、ジヒドロホスフェート、メタホスフェート、ピロホスフェート、クロライド、ブロマイド、アイオダイド、フルオライド、アセタート、プロピオネート、デカノエート、カプリレート、アクリレート、ホルマート、イソブチレート、カプレート、ヘプタノエート、プロピオネート、オキサレート、マロネート、スクシネート、スベラート、セバケート、フマレート、マリエート、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキサン−１，６−ジオエート、ベンゾエート、クロロベンゾエート、メチルベンゾエート、ジニトロベンゾエート、ヒドロキシベンゾエート、メトキシベンゾエート、フタレート、テレフタレート、ベンゼンスルホナート、トルエンスルホナート、クロロベンゼンスルホナート、キシレンスルホナート、フェニルアセテート、フェニルプロピオネート、フェニルブチレート、シトラート、ラクタート、β−ヒドロキシブチレート、グリコレート、マレート、タルタラート、メタンスルホナート、プロパンスルホナート、ナフタレン−１−スルホナート、ナフタレン−２−スルホナートまたはマンデル酸を含む。
【００３６】
本発明による酸付加塩は通常の方法、例えば、本発明の前記化合物を過量の酸水溶液の中に溶解させて、その塩を水混和性有機溶媒、例えばメタノール、エチルアルコール、アセトンまたはアセトニトリルを用いて沈澱させて製造することができる。
【００３７】
同量の化学式１または２で表される前記化合物及び酸またはアルコールを水中で加熱して、つづいてその混合物を蒸発させて乾燥させるかまたは析出した塩を吸引ろ過させて製造することもできる。
【００３８】
また、塩基を用いて薬学的に許容可能な金属塩を作ることができる。アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩は、例えば化合物を過量のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水和物溶液中に溶解して、非溶解化合物塩をろ過して、余液を蒸発、乾燥させて得る。ここで、金属塩としては、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩を製造することが製薬上相応しい。また、それに対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例、硝酸銀）と反応させて得る。
【００３９】
前記化学式１で表されるスチラキスリグノリドＡ化合物は、下記のような方法で分離することが好ましいが、それに限定されない。
１）エゴノキを水、Ｃ１〜Ｃ２の低級アルコールまたはそれらの混合溶媒で抽出する工程、
２）前記工程１）の抽出物を、追加でヘキサン及びエチルアセテートを順に加えて系統分画する工程、及び
３）前記工程２）でエチルアセテート層を分離して残りの水溶液層にカラムクロマトグラフィーを遂行して前記化学式１で表される化合物を得る工程
を含む方法で製造することができるが、それに限定されない。
【００４０】
以下、本発明の前記製造方法を工程別に説明する。
【００４１】
まず、工程１）は、エゴノキを水、Ｃ１〜Ｃ２の低級アルコールまたはそれらの混合溶媒で抽出する工程である。
【００４２】
本発明による製造方法において、前記エゴノキは、栽培したもの、採取したもの、または市販のものなどを、限定なしに用いることができる。前記エゴノキは、幹及び樹皮を用いることが好ましいがそれに限定されない。
【００４３】
本発明による製造方法において、前記抽出溶媒は水、アルコール、またはそれらの混合物、好ましくはＣ１〜Ｃ２の低級アルコールまたはそれらの混合溶媒から選択された溶媒を用いるのが好ましく、前記Ｃ１〜Ｃ２の低級アルコールはエチルアルコールまたはメタノールであることがさらに好ましく、メタノールであることが最も好ましいがそれに限定されない。
【００４４】
前記抽出溶媒の量は、非乾燥重量の１ないし５０倍であることが好ましいが、これに限定されない。前記抽出方法は、熱水抽出、浸漬抽出、還流冷却抽出及び超音波抽出など当業界の一般的な抽出方法は、すべて使用することができ、１回ないし５回抽出することができる。抽出時の温度は、１０℃ないし１００℃であることが好ましく、常温であることがさらに好ましいがそれに限定されない。前記抽出時間は、１日ないし７日が好ましく、３日がさらに好ましいがそれに限定されない。
【００４５】
本発明による製造方法において、前記エゴノキ抽出物を製造する方法は、超臨界抽出、亜臨界抽出、高温抽出、高圧抽出または超音波抽出法などの抽出装置を用いた方法またはＸＡＤ及びＨＰ−２０を含む吸着樹脂を用いる方法など当業界の一般的な抽出方法を用いることができ、加温して還流抽出または常温で抽出することが好ましいが、これに限定されない。前記抽出回数は、１ないし５回であることが好ましく、４回繰り返し抽出することがさらに好ましいがそれに限定されない。
【００４６】
本発明による製造方法において、得られた抽出液の濃縮は、減圧濃縮の真空回転蒸発機を用いることが好ましいがそれに限定されない。また、乾燥は減圧乾燥、真空乾燥、沸騰乾燥、噴霧乾燥、常温乾燥または凍結乾燥することが好ましいがそれに限定されない。
【００４７】
次に、工程２）は、工程１）で得た抽出物に有機溶媒を加えて水画分を得する工程である。
【００４８】
本発明による製造方法において、前記有機溶媒は、ヘキサンまたはエチルアセテートであることが好ましいがそれに限定されない。前記画分は、エゴノキ抽出物を水に懸濁させた後、ヘキサン、エチルアセテートで順次に系統分画して得たヘキサン画分、エチルアセテート画分、または水画分中のうちのいずれかひとつであることが好ましく、水画分であることが最も好ましいが、これに限定されない。前記画分は、前記エゴノキ抽出物から分画過程を１ないし５回、好ましくは３回繰り返して得ることができ、分画後に減圧濃縮することが好ましいがそれに限定されない。
【００４９】
次に、工程３）は、工程２）でエチルアセテート層を分離して残った水溶液層にＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィー及びＲＰ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィーを順に行なって、前記化学式１のスチラキスリグノリドＡ化合物を得る工程である。
【００５０】
本発明による製造方法において、前記クロマトグラフィーはメタノール溶媒を用いて行なうことが好ましいがそれに限定されない。
【００５１】
本発明の組成物の治療的に有効な量は、多くの要素、例えば投与方法、目的部位、患者の状態などによって変わり得る。したがって、人体に使用時の投与量は安全性及び効率性をともに考慮して適正量を決定しなければならない。動物実験を通じて決定した有効量からヒトに使用する量を推定することも可能である。有効な量の決定時に考慮するこのような事項は、例えば、Hardman and Limbird,eds.,Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,10th ed.(2001),Pergamon Press;及びE.W. Martin ed.,Remington's Pharmaceutical Sciences,18th ed.(1990),Mack Publishing Co.に記述されている。
【００５２】
本発明の組成物はまた生物学的製剤に一般的に使用する担体、希釈剤、賦形剤またはふたつ以上のそれらの組み合わせを含むことができる。薬剤学的に許容可能な担体は、組成物の生体内送達に相応しいものなら特別に制限されず、例えば、Merck Index, 13th ed.,Merck & Co. Inc.に記載された化合物、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エチルアルコール及びそれら成分の中で１成分以上を混合して用いることができ、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など他の通常の添加剤を添加することができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び滑剤を付加的に添加して水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。さらに当分野の適正な方法としてRemington's Pharmaceutical Science(Mack Publishing Company,Easton PA,18th,1990 年)に開示されている方法を用いて各疾患に応じてまたは成分に応じて好ましく製剤化することができる。
【００５３】
本発明の組成物に追加で同一または類似の機能を示す有効成分を１種以上含むことができる。本発明の組成物は、組成物総重量に対して前記化合物を０．０００１ないし１０重量％、好ましくは０．００１ないし１重量％を含むことができる。
【００５４】
本発明の組成物は、目的とする方法によって非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）するか経口投与することができ、投与量は患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度によってその範囲が多様である。本発明による組成物の一日投与量は、０．０００１〜１０ｍｇ／ｍｌであって、好ましくは０．０００１〜５ｍｇ／ｍｌであって、一日に１回ないし数回に分けて投与することがさらに好ましい。
【００５５】
本発明では、エゴノキ（S.japonica Sieb. Et Zucc）の幹及び樹皮部位を１００％メタノールで抽出して、エゴノキメタノール抽出物を製造した。これを追加的に水に懸濁した後、ヘキサンを加えてヘキサン層を分離し、残った水層に再びエチルアセテートを加えてエチルアセテート層を分画し、残った水層をカラムクロマトグラフィーを用いて活性画分を溶出して本発明のスチラキスリグノリドＡを分離した。その後、前記スチラキスリグノリドＡから糖類が除去されたアグリコンであるホモエゴノールを製造した（図２０参照）。
【００５６】
本発明者らは、前記分離したスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールの喘息誘導マウスに対する体重減少抑制効果を確認するために、正常対照群、喘息誘導群、喘息誘導群の喘息治療薬物投与群（デキサメタゾンまたはモンテルカスト）、及びスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群の体重変化を測定した。その結果、スチラキスリグノリドＡを経口投与した喘息誘導群（２１．０４±０．３４ｇ）、及びホモエゴノールを経口投与した喘息誘導群｛２２．１０±０．１３ｇ（７．５ｍｇ／ｋｇ）、２１．２３±０．４３ｇ（１５ｍｇ／ｋｇ）、及び２１．９８±０．４７ｇ（３０ｍｇ／ｋｇ）｝の場合、喘息や気管支炎症治療に主に使用する合成ステロイド剤であるデキサメタゾン（ＤＥＸＡ）投与群、及び既存の喘息治療剤としてよく使用されているモンテルカスト（montelukast; Ｍｏｎｔｅ）投与群と同様に正常対照群に近い体重回復効果を示すことから、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールは、喘息による体重減少を効果的に抑制することを確認した（図１及び図１０参照）。
【００５７】
本発明者らは、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与後の、喘息発生による気道過敏性の有無を確認するために、気道抵抗程度であるＰｅｎｈ（enhanced pause）数値を測定した。その結果、正常対照群ではメタコリン濃度増加による穏やかなＰｅｎｈ数値の増加を確認することができたのに対して、喘息誘導群では有意に急激に増加したＰｅｎｈ数値を確認し、デキサメタゾン投与群とモンテルカスト投与群では喘息誘導群に比べて有意に減少したＰｅｎｈ数値が示されたが、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群ではすべての濃度のメタコリン処理において、前記比較薬物群より顕著に減少したＰｅｎｈ数値を確認することができた（図２、表１及び図１１参照）。
【００５８】
本発明者らは、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与による気管支肺胞洗浄液内の炎症細胞数を分析した結果、好酸球の数は喘息誘導群に比べて薬物投与群のすべてで有意に減少したが、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群で最も強力に好酸球浸潤を抑制することを確認した。それ以外の炎症細胞数を含むすべての炎症細胞の数も喘息誘導群に比べて薬物投与群ですべて有意に減少した（図３、表４及び図１４参照）。また、血清または気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的ＩｇＥの濃度を測定した結果、血清内総ＩｇＥ濃度は喘息誘導群に比べてホモエゴノール投与群で有意に減少し（表２及び図１２参照）、気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ濃度は喘息誘導群に比べてスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群で有意に減少した（図４、表３及び図１３参照）。気管支肺胞洗浄液内のＴＧＦ−β１及びＩＬ−１７の生成も、ホモエゴノール投与群で有意に抑制された（表５、図１５及び図１６参照）。同時に、本発明者らは、気管支肺胞洗浄液から活性酸素の発生量を測定した結果、スチラキスリグノリドＡ投与群での活性酸素発生量は喘息誘導群より２７．９０％減少し、これはデキサメタゾンまたはモンテルカスト投与群より顕著に優れた活性酸素生成抑制効果を示すものだった（図５参照）。
【００５９】
本発明者らは、前記スチラキスリグノリドＡの肝臓に対する毒性を評価するため、血清内アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を測定した。その結果、血清ＡＬＴ及びＡＳＴの濃度は、喘息誘導群よりデキサメタゾン投与群で顕著に増加し、スチラキスリグノリドＡ投与群ではデキサメタゾン投与群より顕著に低い濃度を示した（図６参照）。
【００６０】
本発明者らは、気道リモデリングが進行した喘息に対するスチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールの効果を調べるために、Ｈ＆Ｅ染色及び組織切片の炎症指数を測定して粘膜内炎症細胞浸潤、杯状細胞、上皮下線維化を確認した。その結果、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群で最も強力に炎症細胞浸潤を抑制することを確認し（図７、表６及び図１７参照）、杯状細胞の比率が最大幅で減少することが示されることから、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールは最も強力に粘液分泌を抑制することが分かった（図８、表７及び図１８参照）。また、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノール投与群で最も顕著に上皮下線維化が減少して強力に気道リモデリングを抑制することが分かった（図９、表８及び図１９参照）。
【００６１】
したがって、スチラキスリグノリドＡまたはホモエゴノールは、卵白アルブミンによる喘息誘導動物モデルにおいて、現在喘息治療剤として広く使用されているデキサメタゾン（dexamethasone）より優れた気道過敏反応抑制効果を示し、気管支内炎症細胞の浸潤を抑制して、気道リモデリング（気管支上皮細胞肥厚、粘液分泌細胞の過増殖及び線維化）の進行を顕著に抑制したが、肝臓に及ぼす毒性はデキサメタゾンよりずっと低いので、スチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコンであるホモエゴノールまたはその薬学的に許容可能な塩は、喘息予防及び治療用薬学的組成物の有効成分として有用に用いることができる。
【００６２】
また、本発明は薬学的に有効な量のスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む薬学的組成物を個体に投与する工程を含む喘息の予防方法を提供する。
【００６３】
また、本発明は薬学的に有効な量のスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む薬学的組成物を喘息にかかった個体に投与する工程を含む喘息の治療方法を提供する。
【００６４】
前記薬学的に有効な量というのは、０．００００１ないし１０ｍｇ／ｋｇで、好ましくは０．０００１ないし１ｍｇ／ｋｇであるがこれに限定されない。投与量は、特定患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与期間、投与方法、除去率、疾患の重症度によって変化し得る。
【００６５】
前記個体は脊椎動物であり、好ましくは哺乳動物であって、それより好ましくはネズミ、ウサギ、モルモット、ハムスター、犬、猫のような実験動物で、最も好ましいのはチンパンジー、ゴリラのような類人猿類動物である。
【００６６】
前記投与方法は、経口または非経口投与することができ、非経口投与時は、腹腔内注射、直腸内注射、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、子宮内硬膜注射、脳血管内（intracerebroventricular）注射または胸部内注射によって投与することができる。
【００６７】
前記喘息は、気道リモデリングが進行した喘息であることが好ましいが、それに限定されない。
【００６８】
本発明のスチラキスリグノリドＡまたはそのアグリコンであるホモエゴノールは、喘息誘導マウスモデルで体重減少及び気道過敏性を軽減させ、気道内活性酸素発生量及び気管支内炎症細胞の浸潤を抑制し、粘膜内炎症細胞浸潤、杯状細胞の比率及び上皮下線維化（subepithelialfibrosis）を抑制する効果を示す一方、肝臓に対する毒性は既存の喘息治療剤より顕著に低いことを確認したので、喘息の予防または治療に有用に用いることができる。
【００６９】
同時に、本発明はスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、喘息予防及び改善用健康食品用組成物を提供する。
【００７０】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、下記の化学式１で表されることが好ましいが、それに限定されない。
【００７１】
[化１]
2013544252.tif 000008
【００７２】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物のアグリコンは、下記の化学式２で表されることが好ましいが、それに限定されない。
【００７３】
[化２]
2013544252.tif 000009
【００７４】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、エゴノキから分離したものを用いることが好ましいがそれに限定されず、化学的に合成したものを用いることができる。
【００７５】
前記エゴノキは、全草を用いることができ、幹及び樹皮を用いることがさらに好ましいがそれに限定されない。
【００７６】
前記喘息は、気道リモデリングが進行した喘息であることが好ましいがそれに限定されない。
【００７７】
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物またはそのアグリコンをそのまま加えるか、他の食品または食品成分とともに使用することができ、一般的な方法によって適切に使用することができる。
【００７８】
本発明の健康食品用組成物は、食品製造時に一般的に添加される成分を含み、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素及び調味料を含む。
【００７９】
前記食品の種類には特別な制限はない。前記スチラキスリグノリドＡ化合物、またはそのアグリコンを添加することができる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料、茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などがあり、一般的な意味での健康食品をすべて含む。
【００８０】
本発明の健康飲料用組成物は、通常の飲料のようにさまざまな香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含むことができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のような単糖、マルトース、スクロースのような二糖、及びデキストリン、シクロデキストリンのような多糖、キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。甘味料としては、タウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味料や、サッカリン、アスパルテームのような合成甘味料などを用いることができる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍｌ当たり一般的に約０．０１〜０．０４ｇ、好ましくは約０．０２〜０．０３ｇである。
【００８１】
前記の他に本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物またはそのアグリコンは、さまざまな栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用する炭酸化剤などを含むことができる。その他に、本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物またはそのアグリコンは、天然果汁、果汁飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含むことができる。このような成分は単独でまたは混合して用いることができる。このような添加剤の比率はそれほど重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１〜０．１重量部の範囲で選択することが一般的である。
【００８２】
本発明のスチラキスリグノリドＡまたはそのアグリコンであるホモエゴノールは、喘息誘導マウスモデルで体重減少及び気道過敏性を軽減させ、気道内活性酸素発生量及び気管支内炎症細胞の浸潤を抑制し、粘膜内炎症細胞浸潤、杯状細胞の比率及び上皮下線維化を抑制する効果を示し、肝臓に対する毒性は既存の喘息治療剤より顕著に低いことを確認したので、喘息の予防または改善のための健康食品用組成物の有効成分として有用に用いることができる。
【００８３】
また、本発明は喘息予防及び治療用薬学的組成物に用いるためのスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００８４】
同時に、本発明は喘息予防及び改善用健康食品用組成物に用いるためのスチラキスリグノリドＡ化合物、そのアグリコン、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００８５】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物は、下記の化学式１で表されることが好ましいがそれに限定されない。
【００８６】
[化１]
2013544252.tif 000010
【００８７】
前記スチラキスリグノリドＡ化合物のアグリコンは、下記の化学式２で表されることが好ましいがそれに限定されない。
【００８８】
[化２]
2013544252.tif 000011
【００８９】
本発明のスチラキスリグノリドＡまたはそのアグリコンであるホモエゴノールは、喘息誘導マウスモデルで体重減少及び気道過敏性を軽減させ、気道内活性酸素発生量及び気管支内炎症細胞の浸潤を抑制し、粘膜内炎症細胞浸潤、杯状細胞の比率及び上皮下線維化を抑制する効果を示し、肝臓に対する毒性は既存の喘息治療剤より顕著に低いことを確認したので、喘息の予防または改善のための健康食品用組成物の有効成分として有用に用いることができる。
【実施例】
【００９０】
以下、本発明を下記の実施例及び製造例によってさらに詳細に説明する。
【００９１】
但し、下記の実施例及び製造例は、本発明の内容を例示するだけのものであって、発明の範囲が実施例及び製造例によって限定されるのではない。
【００９２】
＜実施例１＞スチラキスリグノリドＡの製造
エゴノキ（S.japonica Sieb. Et Zucc.,Styracaceae）の幹及び樹皮１２０ｋｇを採取して（済州、韓国）、５Ｌのメタノール（ＭｅＯＨ）で４回抽出した。抽出液を得て蒸留水に懸濁した後、再びヘキサンを加えてヘキサン層を分離し、残った水層に再びエチルアセテートを加えてエチルアセテート層を分離し、残った水層をＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０カラムに通過させて蒸留水８Ｌ、５０％ＭｅＯＨ及び１００％ＭｅＯＨに溶解して分離した。得られたメタノール溶解性画分（MeOH-soluble fraction）は、ＲＰ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィーを経て５０％ＭｅＯＨ、２５％ＭｅＯＨ、１００％ＭｅＯＨで溶解してスチラキスリグノリドＡを分離した。
【００９３】
＜実施例２＞スチラキスリグノリドＡからのホモエゴノールの製造
ホモエゴノールの合成は、既存の報告された方法（Xue Fei Yang and Ling Yi Kong,Chinese Chemical Letters,2007年,第18巻,ｐ.380-382参照）を活用するが、新規な工程（工程３）を追加する合成経路を通じて製造した。まず、工程１で中間体４を合成し、工程２で中間体４と８を縮合した後、トリメトキシエゴノール前駆体である化合物１０を製造した。最後に、工程３で中間体１０のカルボン酸エステルをアルコールで還元して所望する最終化合物１１（ホモエゴノール）を得た（図２０）。
【００９４】
＜実施例３＞気管支喘息誘導実験動物の製作及び化合物の処理
気管支喘息誘導実験動物を製作するために、平均体重２０ｇ内外の６週齢Ｂａｌｂ／ｃメスのマウスを用いた。１週間の適応期間を有した後、基本的な身体検査上で異常が観察されない個体を対象にした。２週間間隔で水酸化アルミニウム（A8222,Sigma,St. Louis,MO）２ｍｇ及び卵白アルブミン２０μｇ（A5503,Sigma,St. Louis,MO）を懸濁したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）２００μｌを腹腔に注入して感作させた。最初の卵白アルブミン腹腔投与後２８日目から３０日目まで、１％卵白アルブミンを超音波噴霧器を用いて３０分間吸入させた。最後の抗原投与２４時間後に、気道過敏性を測定し、４８時間後に致死量のペントバルビタール（エントバル（登録商標）、翰林製薬株式会社）を投与した後、体重を測定して気管支切開を実施して総１．２ｍｌの生理食塩水で気管支肺胞洗浄を実施した後、検体を回収した。正常対照群（ＮＣ）では、卵白アルブミンを投与及び吸入しない群、喘息誘導群（ＯＶＡ）では卵白アルブミンを投与及び吸入して気管支喘息を誘導した群、比較群１（ＤＥＸＡ）では卵白アルブミン吸入１時間前にデキサメタゾン（３ｍｇ／ｋｇ,PO:D4902,Sigma,St. Louis,MO）を経口投与した群、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）では卵白アルブミン吸入１時間前にモンテルカスト（montelukast）（３０ｍｇ／ｋｇ,ＰＯ）を経口投与した群、スチラキスリグノリドＡに対する実験群では卵白アルブミン吸入１時間前にスチラキスリグノイドＡ（３０ｍｇ／ｍｌ,ＰＯ）を経口投与した群で実験を進行し、各群当たり８匹のマウスを用い、ホモエゴノールに対する実験群では卵白アルブミン吸入１時間前にホモエゴノールを７．５ｍｇ／ｋｇを経口投与した群（ｈＥ７．５）、１５ｍｇ／ｋｇを経口投与した群（ｈＥ１５）、３０ｍｇ／ｋｇを経口投与した群（ｈＥ３０）で実験を進行し、各群当たり５匹のマウスを用いた。
【００９５】
＜実験例１＞スチラキスリグノリドＡの、喘息誘導マウスに対する体重減少抑制効果
スチラキスリグノリドＡの、喘息誘導マウス体重減少に及ぼす効果を確認するために、前記＜実施例２＞で製作したそれぞれのマウスに対する体重を測定した。以下、すべての測定値の統計分析については、いくつかの変数による平均値と標準誤差（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．）を計算し、各集団間の比較は、ＳＰＳＳ１０．０を用いてマン・ホイットニーのＵ検定を行なって分析した。統計的にｐ値が０．０５未満の場合に有意な差があると判定した。
【００９６】
その結果、図１に示したように、正常対照群（ＮＣ）の体重は２１．２２±０．３１ｇだったが、喘息誘導群（ＯＶＡ）は１９．５９±０．２７ｇで顕著な体重減少を示すのに比べて、デキサメタゾン投与群である比較群１（ＤＥＸＡ）は２０．４９±０．２９ｇ、モンテルカスト投与群である比較群２（Ｍｏｎｔｅ）は２１．０４±０．３０ｇ、スチラキスリグノリドＡ投与群は２１．０４±０．３４ｇと測定され、スチラキスリグノリドＡ投与群は既存の抗喘息用薬物投与群と類似の体重回復効果を確認することができた（図１）。
【００９７】
＜実験例２＞スチラキスリグノリドＡの、喘息発生による気道過敏性の抑制効果
スチラキスリグノリドＡの、喘息発生による気道過敏性に対する効果の有無は、単一チャンバー体積変動測定機（one chamber plethysmography,All Medicus,ソウル）を用いた気道抵抗測定で確認し、気道抵抗の程度はＰｅｎｈ数値を測定して評価した。Ｐｅｎｈ数値の測定は、正常呼吸状態で基底値を測定した後、ＰＢＳを超音波噴霧器を用いて３分間吸入させた後に３分間測定した。以後、気管支喘息を診断する一般的な方法として使用されるヒスタミン剤メタコリン（A2251,Sigma,St,Louis,MO）を１２、２５、５０ｍｇ／ｍｌの濃度で徐々に増加させながら吸入させた後、Ｐｅｎｈ数値を測定し、結果として得られるＰｅｎｈ数値は下記の数式１で示し、結果として得られる数値は各濃度のメタコリン吸入後のＰｅｎｈの増加百分率で表現し、基底Ｐｅｎｈ（生理食塩水投与）は１００％で表示した。
【００９８】
【数１】
2013544252.tif 000012
Ｔｅ：呼気時間（秒）
吸気から次の吸気まで
ＲＴ：弛緩時間
呼気間の呼気量が、一回の呼吸量の３０％残る時までかかる時間
ＰＥＦ：最大呼気率
ＰＩＦ：最大吸気率
【００９９】
その結果、図２に示したように、正常対照群（ＮＣ）ではメタコリン濃度増加による緩やかなＰｅｎｈ数値の増加を示したが、喘息誘導群（ＯＶＡ）では有意に急激に増加するＰｅｎｈ数値を確認することができた。比較群１（ＤＥＸＡ）及び比較群２（Ｍｏｎｔｅ）でも喘息誘導群に比べて有意に減少したＰｅｎｈ数値を確認したが、スチラキスリグノリドＡ投与群ではメタコリン１２．５、２５または５０ｍｇ／ｍｌの濃度すべてで比較群より減少したＰｅｎｈ数値を確認することができた（図２）。
【０１００】
＜実験例３＞スチラキスリグノリドＡの、気管支肺胞洗浄液内の炎症細胞抑制効果
前記＜実施例２＞の各実験群の個体から気管支肺胞洗浄液を回収して、回収後直ちにトリパンブルーで染色して死滅細胞を除いた総細胞数を血球計数器を用いて計算した後、サイトスピン（Cytospin）IIで標本塗抹後ディフ・クイック染色（Sysmex、Switzerland）を実施して好酸球とそれ以外の炎症細胞を鑑別計算した。
【０１０１】
その結果、図３に示したように、好酸球の数は正常対照群（ＮＣ）で０±０、喘息誘導群（ＯＶＡ）で６２２．５５±７４．１８、比較群１（ＤＥＸＡ）で４１．８８±９．０８、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）で６０．６７±６．５８、スチラキスリグノリドＡ投与群で２０．７７±２．３４と測定され、喘息誘導群に比べて薬物投与群で好酸球数はすべて有意に減少したが、特に、スチラキスリグノリドＡ投与群で最も強力に好酸球浸潤を抑制することが示された。それ以外の炎症細胞数を含んだ総炎症細胞の数は、正常対照群で１０．１５±２．０５、喘息誘導群で１２３８．６５±１０１．０１、比較群１で１５３．４８±１９．６９、比較群２で１９３．２９±１９．９９、スチラキスリグノリドＡ投与群で１４７．８３±１２．６１と測定され、喘息誘導群に比べて薬物投与群すべてで有意に減少した（図３）。
【０１０２】
＜実験例４＞スチラキスリグノリドＡの、気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抑制効果
スチラキスリグノリドＡ投与による血清及び気管支肺胞洗浄液の卵白アルブミン特異的ＩｇＥの濃度を測定するために、免疫酵素法を用いた。卵白アルブミンを２０μｇ／ｍｌ／の濃度でｐＨ８．３の０．１Ｍ  ＮＡＨＣＯ３緩衝液に溶解してこれを９６ウェルフラットボトムＥＬＩＳＡプレートに入れて４℃で一晩中コーティングさせた後、１％ウシ血清アルブミンを含有したＰＢＳで非特異的反応を抑制させて、血清検体を１：４００に希釈して室温で２時間反応させた。その後、それをよく洗浄した後、抗マウスＩｇＥ単一クローン抗体を３００倍に希釈して２時間反応させた。そうして、ペルオキシダーゼが結合されたＨＲＰ結合されたヤギ抗ラットＩｇＧポリクローナル抗体を４０００倍に希釈して室温で１時間反応させた後に洗浄した。発色は、3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン基質で反応させた後、６５０ｎｍで分光吸光度を測定した。
【０１０３】
その結果、図４に示したように、血清内卵白アルブミン特異的ＩｇＥ濃度は、喘息誘導群（４６２±７９．８２ｎｇ／ｍｌ）に比べてスチラキスリグノリドＡ投与群（３８２±６０．６０ｎｇ／ｍｌ）で減少したものの有意ではなかったが、気管支肺胞洗浄液内の卵白アルブミン特異的濃度は、喘息誘導群（２６．５±２．９６ｎｇ／ｍｌ）に比べてスチラキスリグノリドＡ投与群（１５．４±２．１８ｎｇ／ｍｌ）で有意に減少した（図４）。
【０１０４】
＜実験例５＞スチラキスリグノリドＡの、活性酸素発生量抑制効果
スチラキスリグノリドＡの投与による反応性酸素生成量を測定するために、前記＜実施例２＞の各個体の一部気管支肺胞洗浄液をＰＢＳで洗浄した後、１０μＭ  2,7-ジクロロフルオレセインジアセテート（35845,Sigma,,St.Louis,MO）を添加して１０分間常温暗室に放置した後、分光蛍光計で測定した（Ｅｘ＝４８０ｎｍ,Ｅｍ＝５２２ｎｍ）。
【０１０５】
その結果、図５に示したように、スチラキスリグノリドＡ投与群での活性酸素発生量は喘息誘導群より２７．９０％減少し、デキサメタゾン比較群１及び２より優れた活性酸素発生量抑制効果を示した（図５）。
【０１０６】
＜実験例６＞スチラキスリグノリドＡの、肝臓に対する毒性評価
スチラキスリグノリドＡの肝毒性を確認するために、市販のＥＬＩＳＡキット（BECKMAN Coulter,Inc.,Fullerton,CA,米国）を用いて、血清内アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を測定した。
【０１０７】
その結果、図６に示したように、血清ＡＬＴ及びＡＳＴ濃度は喘息誘導群（ＡＬＴ：１３２±１９．２５ＩＵ／ｌ、ＡＳＴ：２３５．３３±２２．４０ＩＵ／ｌ）より比較群１（ＤＥＸＡ）（ＡＬＴ：２７４．６７±１２．１２ＩＵ／ｌ、ＡＳＴ：３６９．３３±３１．２７ＩＵ／ｌ）で顕著に増加した。一方、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）（ＡＬＴ：１２２．５０±１４．９４ＩＵ／ｌ、ＡＳＴ：２０５．００±２７．１７ＩＵ／ｌ）及びスチラキスリグノリドＡ投与群（ＡＬＴ：１６８．６７±１５．５６ＩＵ／ｌ、ＡＳＴ：２４５．３３±１２．８７ＩＵ／ｌ）では、比較群１より有意に低い濃度数値を確認することができた（図６）。
【０１０８】
＜実験例７＞スチラキスリグノリドＡの気道リモデリング抑制効果
＜７−１＞気道粘膜内炎症細胞浸潤抑制
それぞれの個体から摘出された肺は、一般的なホルマリン固定とパラフィン包埋を経て４μｍの厚さで永久組織切片を製作して、ヘマトキシリンとエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色を実施した。Ｈ＆Ｅ染色後、各個体の組織切片当たり無作為に５ヶ所部位の炎症指数を測定して平均を出した。炎症指数０は気管支周辺に炎症細胞が発見されない場合、炎症指数１は間欠的に炎症細胞が観察される場合、炎症指数２は大部分の気管支周辺に一層から二〜三層の間の薄い炎症細胞層が観察される場合、炎症指数３は大部分の気管支周辺に二〜三層から五層以下の炎症細胞層が観察される場合、炎症指数４は大部分の気管支周辺に五層以上の厚い炎症細胞層が観察される場合として評価した。
【０１０９】
その結果、図７に示したように、喘息誘導群では細気管支周辺に好酸球をはじめ多くの炎症細胞が浸潤されていて、過形成した上皮細胞と肥厚した気管支平滑筋も確認することができた。一方、薬物を投与した群では炎症細胞の浸潤が顕著に減少していて、これを数値化した時、喘息誘導群は細気管支周辺の炎症指数が４．００±０．００だったが、比較群１（ＤＥＸＡ）は１．４６±０．２６、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）は２．００±０．２３、スチラキスリグノリドＡ投与群は１．１７±０．２で、すべて喘息誘導群に比べて有意に減少したが、スチラキスリグノリドＡ投与群で最も強力に炎症細胞浸潤を抑制することを確認することができた（図７）。
【０１１０】
＜７−２＞杯状細胞(goblet cell)抑制
それぞれの個体から摘出された肺は、一般的なホルマリン固定とパラフィン包埋を経て４μｍの厚さで永久組織切片を製作して、過ヨウ素酸シッフ（PAS）染色を通じて鑑別された杯状細胞が気管支上皮細胞で占める比率を測定して、杯状細胞増殖程度を評価した。
【０１１１】
その結果、図８に示したように、正常対照群において、杯状細胞は細気管支上皮細胞で占める比率が０．６５±０．９１％だったが、喘息誘導群では５７．５２±６．１９％に増加し、これは比較群１（ＤＥＸＡ）（３４．９６±６．８６％）、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）（３７．０５±７．１９％）、スチラキスリグノリドＡ投与群（２９．５２±８．０２％）で有意に減少したが、スチラキスリグノリドＡ投与群で最大の減少幅を示し、強力に粘液分泌を抑制することを確認することができた（図８）。
【０１１２】
＜７−３＞気管支下部の線維化抑制
気管支下部の線維化程度を測定するために、それぞれの個体から摘出された肺は一般的なホルマリン固定とパラフィン包埋を経て４μｍの厚さで永久組織切片を製作してマッソントリクローム染色を実施して上皮下に染色される細胞外基質部位の面積を測定した後、基底膜周囲の長さ１００μｍ当たりの線維化染色部位の面積を計算した。すべての測定には、コンピューター化された画像解析プログラムを用いた。
【０１１３】
その結果、図９に示したように、基底膜周囲の長さ１００μｍ当たりの線維化染色部位の面積は、正常対照群で３７１．２５±１００．３９μｍ２で、喘息誘導群では２１７３．８８±２７５．２７μｍ２で正常の７倍ほど増加した。線維化は、比較群１（ＤＥＸＡ）（６３９．５９±１０６．９６μｍ２）、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）（９９１．７５±１０８．３５μｍ２）、スチラキスリグノリドＡ投与群（４９５．６９±９８．６２μｍ２）で、すべて有意に減少したが、スチラキスリグノリドＡ投与群で最も多く減少して強力に気道リモデリングを抑制することを確認することができた（図９）。
【０１１４】
＜実験例８＞ホモエゴノールの、喘息誘導マウスに対する体重減少抑制効果
ホモエゴノールの、喘息誘導マウス体重減少に及ぼす効果を確認するために、前記＜実施例２＞で製作したそれぞれのマウスに対する体重を測定した。以下、すべての測定値の統計分析については、いくつかの変数による平均値と標準誤差（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．）を計算し、各集団間の比較はＳＰＳＳ１０．０を用いて、マン・ホイットニーのＵ検定を行なって分析した。統計的に、ｐ値が０．０５未満の場合に有意な差があると判定した。
【０１１５】
その結果、図１０に示したように、正常対照群の体重は２１．９６±０．２５ｇであったが、喘息誘導群は１８．５２±０．４５ｇで顕著な体重減少を示すのに比べて、比較群１（ＤＥＸＡ）（１９．９８±０．３９  ｇ）、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）（２１．０８±０．５７ｇ）、ホモエゴノールを７．５ｍｇ／ｋｇ経口投与した群（２２．１０±０．１３ｇ）、１５ｍｇ／ｋｇ経口投与した群（２１．２３±０．４３ｇ）、３０ｍｇ／ｋｇ経口投与した群（２１．９８±０．４７ｇ）で、比較群１（ＤＥＸＡ）を除いた薬物投与群は、すべて正常対照群に近い体重回復を確認することができた（図１０）。
【０１１６】
＜実験例９＞ホモエゴノールの、喘息発生による気道過敏性の抑制効果
ホモエゴノールの喘息発生による気道過敏性有無を確認するために、前記＜実験例２＞の方法でＰｅｎｈ値を測定した。
【０１１７】
その結果、表１及び図１１に示したように、正常対照群ではメタコリン濃度増加による穏やかなＰｅｎｈ数値増加を確認したが、喘息誘導群では有意に急激なＰｅｎｈ数値の増加を確認することができた。一方、比較群１（ＤＥＸＡ）、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）及びホモエゴノール投与群（ｈＥ７．５、ｈＥ１５及びｈＥ３０）では、メタコリン濃度にかかわらず喘息誘導群より有意に減少し、ホモエゴノールの処理濃度が増加するにつれてさらに減少する様相を確認することができた。また、このような差異は、低濃度のメタコリンよりは高濃度のメタコリンを吸入させた時にさらに明確な差を示した。
【０１１８】
【表１】
2013544252.tif 000013
【０１１９】
＜実験例１０＞血清及び気管支肺胞洗浄液内のホモエゴノール誘導ＩｇＥ測定
ホモエゴノールの喘息に対する効果を調べるために、喘息の重症度と係わり合いがあるＩｇＥ濃度を測定するために、前記＜実験例４＞の方法によって血清及び気管支肺胞洗浄液内のＩｇＥを測定した。
【０１２０】
その結果、下記の表２及び図１２に示したように、血清内のＩｇＥ抗体の濃度を測定した結果、血清内ＩｇＥ抗体濃度は、喘息誘導群（ＯＶＡ）（１１．８５±２．６９９４μｇ／ｍｌ）に比べて、本発明のホモエゴノールを投与した群では、１９．２２±４．９２８７μｇ／ｍｌ（ｈＥ７．５）、１０．７４±３．４６１２μｇ／ｍｌ（ｈＥ１５）、及び８．１４±５．９６８２μｇ／ｍｌ（ｈＥ３０）と測定され、ホモエゴノールの濃度によって有意に血清内ＩｇＥ抗体が減少することが示された。また、下記の表３及び図１３に示したように、気管支肺胞洗浄液内のＩｇＥ抗体濃度は、喘息誘導群（１４６．５７４５±１８．７５６０ｎｇ／ｍｌ）に比べてホモエゴノールを投与した群では６５．５９５７±１１．６６５６ｎｇ／ｍｌ（ｈＥ７．５）、４８．４８９４±４．１９２６ｎｇ／ｍｌ（ｈＥ１５）、及び２３．８０８５±３．３５１５ｎｇ／ｍｌ（ｈＥ３０）と測定され、ホモエゴノール濃度によって気管支肺胞洗浄液内のＩｇＥ抗体が有意に減少することが示された。
【０１２１】
【表２】
2013544252.tif 000014
【０１２２】
【表３】
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【０１２３】
＜実験例１１＞ホモエゴノールの、気管支肺胞洗浄液内の炎症細胞抑制効果
ホモエゴノールの喘息に対する効果を調べるために、前記＜実験例３＞の方法によって喘息と関連がある炎症細胞数の増減を測定した。
【０１２４】
その結果、下記の表４及び図１４に示したように、総炎症細胞の数は正常対照群で６．６８±０．７６２６、喘息誘導群で２２５．００±２３．６３２３、比較群１（ＤＥＸＡ）で２０．０４±４．７７４４、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）で６７．９６±１５．０５３２、ホモエゴノール投与群でそれぞれ４２．８０±７．２０６０（ｈＥ７．５）、３９．７２±４．４４００（ｈＥ１５）及び３３．８８±８．１５８９（ｈＥ３０）と測定され、喘息誘導群に比べてホモエゴノール投与群すべてで炎症細胞が有意に減少した。特に、組織に浸潤して細胞性媒介免疫に主に関与し、細胞、脾臓及び呼吸器などに渡って広がっていて、炎症性タンパク質を含み、喘息発病に重要な役割をすることが知られている好酸球の数は、正常対照群で０．００±０．００、喘息誘導群で１０８．８８±１４．０９、比較群１で１．３２±０．４９、比較群２は１９．１２±９．１７、ホモエゴノール投与群でそれぞれ１２．８０±２．５０（ｈＥ７．５）、６．３２±０．８６  （ｈＥ１５）、及び５．４８±２．０２（ｈＥ３０）と測定され、喘息誘導群に比べてホモエゴノール投与群すべてで有意に減少した。
【０１２５】
【表４】
2013544252.tif 000016
【０１２６】
＜実験例１２＞ホモエゴノールの、気管支肺胞洗浄液内のＴＧＦ−β１及びＩＬ−１７抑制効果
ホモエゴノールの気道リモデリングに対する効果を調べるために、気管支肺胞洗浄液内ＴＧＦ−β１及びＩＬ−１７生成を測定した。
【０１２７】
その結果、下記の表５、図１５及び図１６に示したように、ホモエゴノール投与群は喘息誘導群に比べて気管支肺胞洗浄液内のＴＧＦ−β１及びＩＬ−１７を有意に抑制した。
【０１２８】
【表５】
2013544252.tif 000017
【０１２９】
＜実験例１２＞ホモエゴノール投与による組織病理学的分析
ホモエゴノールの喘息に対する効果を調べるために、気管支肺胞洗浄を行なっていない肺を分離して、前記実験例＜７−１＞の方法によって組織病理学的検査を行なった。ここで、抗原が惹起された気管支では好酸球、好中球及び大食細胞からなる炎症性細胞の浸潤が観察されるので、これを検出しようとした。
【０１３０】
その結果、喘息誘導群では細気管支周辺に好酸球を含む多くの炎症細胞が浸潤されていて、過形成した上皮細胞と肥厚した気管支平滑筋も確認された。一方、表６、及び図１７に示したように、薬物を投与した群では炎症細胞の浸潤が顕著に減少し、これを数値化した時、喘息誘導群は細気管支周辺の炎症指数が２．７５±０．１０８３だったが、比較群１（ＤＥＸＡ）は０．７８±０．１３１５、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）は１．７０±０．２４７０、及びホモエゴノール投与群はそれぞれ１．６７±０．１４９１（ｈＥ７．５）、１．４０±０．１５４９（ｈＥ１５）、及び１．００±０．２４４９（ｈＥ３０）で、すべて喘息誘導群に比べて有意に減少することが示された。また、血管周辺の炎症指数は、喘息誘導群で３２．８１±０．０９７６と示されたが、比較群１（ＤＥＸＡ）は０．４４±０．１５７１、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）は２．２０±０．１８９７、及びホモエゴノール投与群は１．８９±０．１７９１（ｈＥ７．５）、１．７０±０．１４４９（ｈＥ１５）、及び１．３０±０．２０２５（ｈＥ３０）で、すべて喘息誘導群に比べて有意に減少することが示された。
【０１３１】
【表６】
2013544252.tif 000018
【０１３２】
＜実験例１３＞ホモエゴノールの杯状細胞抑制効果
前記実験例＜７−２＞の方法によって、過ヨウ素酸シッフ染色を通じて鑑別された杯状細胞（goblet cell）が気管支上皮細胞で占める比率を測定して、杯状細胞増殖程度を評価した。
【０１３３】
その結果、表７及び図１８に示したように、正常対照群で杯状細胞が細気管支上皮細胞で占める比率は２．７７４１±０．７３８１％であったが、喘息誘導群では５５．５１９６±１．３７０６％に増加し、これは比較群１（ＤＥＸＡ）では１８．７８２８±５．９３９７％、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）では３４．６４７６±１１．５４９２％に減少し、ホモエゴノール投与群は３６．５６００±１１．５６１３％（ｈＥ７．５）、３２．４１０９±１０．８０３７％（ｈＥ１５）、及び２５．０９５６±３．４０３３％（ｈＥ３０）で、すべて喘息誘導群に比べて有意に減少することが示された。
【０１３４】
【表７】
2013544252.tif 000019
【０１３５】
＜実験例１４＞ホモエゴノールの、気管支下部の線維化抑制効果
前記実験例＜７−３＞の方法によって、気管支下部の線維化程度を測定するためにマッソントリクローム染色を行なって、上皮下に染色される細胞外基質部位の面積を測定した後、基底膜周囲の長さ１００μｍ当たりの線維化染色部位の面積を計算した。
【０１３６】
その結果、表８及び図１９に示したように、基底膜周囲の長さ１００μｍ当たりの線維化染色部位の面積は、正常対照群で１９５．９５±１９．０４６４μｍ２で、喘息誘導群では１９０７．３４±８５．３２８７μｍ２に正常の１０倍ほど増加した。線維化は、比較群１（ＤＥＸＡ）で３０８．７７±４９．０２６６μｍ２、比較群２（Ｍｏｎｔｅ）で５３７．９８±７２．４５８１μｍ２、ホモエゴノール投与群はそれぞれ５２７．２５±７１．３９５３μｍ２（ｈＥ７．５）、４２５．６４±６４．６７９８μｍ２（ｈＥ１５）、及び３２０．９９±４６．２２３６μｍ２（ｈＥ７．５）と測定され、すべて喘息誘導群に比べて線維化が有意に減少することが示された。
【０１３７】
【表８】
2013544252.tif 000020
【０１３８】
＜製造例１＞薬学的製剤の製造
＜１−１＞散剤の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物                ２ｍｇ
乳糖                                                １ｇ
前記の成分を混合して気密包に充填して散剤を製造した。
【０１３９】
＜１−２＞錠剤の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物             １００ｍｇ
コーンスターチ                                   １００ｍｇ
乳糖                                             １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                             ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法にしたがって打錠して錠剤を製造した。
【０１４０】
＜１−３＞カプセル剤の製造
本発明のホモエゴノール化合物                      １００ｍｇ
コーンスターチ                                    １００ｍｇ
乳糖                                              １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                              ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法にしたがってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【０１４１】
＜１−４＞丸薬の製造
本発明のホモエゴノール化合物                          １ｍｇ
乳糖                                              １．５ｇ
グリセリン                                            １ｇ
キシリトール                                      ０．５ｇ
前記の成分を混合した後、通常の方法によって１丸薬当たり４ｇになるように製造した。
【０１４２】
＜１−５＞顆粒の製造
本発明のホモエゴノール化合物                       １５０ｍｇ
大豆抽出物                                           ５０ｍｇ
ブドウ糖                                           ２００ｍｇ
澱粉                                               ６００ｍｇ
前記の成分を混合した後、３０％エチルアルコール１００ｍｇを添加して摂氏６０℃で乾燥して顆粒を形成した後、包みに充填した。
【０１４３】
＜製造例２＞食品の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物を含む食品を下記のように製造した。
【０１４４】
＜２−１＞小麦粉食品の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物０．５〜５．０重量部を小麦粉に添加して、その混合物を用いてパン、ケーキ、クッキー、クラッカー及び麺類を製造した。
【０１４５】
＜２−２＞スープ及び肉汁（gravy）の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物０．１〜５．０重量部をスープ及び肉汁に添加して健康増進用肉加工製品、麺類のスープ及び肉汁を製造した。
【０１４６】
＜２−３＞牛ひき肉（ground beef）の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物１０重量部を牛ひき肉に添加して健康増進用牛ひき肉を製造した。
【０１４７】
＜２−４＞乳製品の製造
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物５〜１０重量部を牛乳に添加して、前記牛乳を用いてバター及びアイスクリームのような多様な乳製品を製造した。
【０１４８】
＜２−５＞禅食（穀物粉）の製造
玄米、麦、もち米、鳩麦を公知の方法でアルファ化させて乾燥させたものを焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの粉末に製造した。
【０１４９】
黒豆、黒ごま、えごまも公知の方法で蒸して乾燥させたものを焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの粉末に製造した。
【０１５０】
本発明のスチラキスリグノリドＡ化合物を真空濃縮機で減圧濃縮して、熱風乾燥器で噴霧乾燥して得た乾燥物を粉砕機で粒度６０メッシュに粉砕して乾燥粉末を得た。
【０１５１】
前記で製造した穀物類、種実類及びスチラキスリグノリドＡ化合物を次の比率で配合して製造した。
【０１５２】
穀物類（玄米３０重量部、鳩麦１５重量部、麦２０重量部）、
種実類（えごま７重量部、黒豆８重量部、黒ごま７重量部）、
スチラキスリグノリドＡ化合物（３重量部）、
霊芝（０．５重量部）、
地黄（０．５重量部）。
【０１５３】
＜製造例３＞飲料の製造
＜３−１＞健康飲料の製造
液状果糖（０．５％）、オリゴ糖（２％）、砂糖（２％）、食塩（０．５％）、水（７５％）などの副材料と本発明のホモエゴノール５ｍｇを均質に配合して瞬間殺菌をした後、それをガラス瓶、ペットボトルなど小包装容器に包装して製造した。
【０１５４】
＜３−２＞野菜ジュースの製造
本発明のホモエゴノール化合物５ｍｇをトマトまたはにんじんジュース１，０００ｍｌに加えて野菜ジュースを製造した。
【０１５５】
＜３−３＞果物ジュースの製造
本発明のホモエゴノール化合物１ｍｇをリンゴまたはブドウジュース１，０００ｍｌに加えて果物ジュースを製造した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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