(57)【要約】本発明は、一般的には白血病の有効な治療に関し、具体的には、メニンのＭＬＬおよびＭＬＬ融合腫瘍性タンパク質との相互作用を阻害する組成物および方法、さらに、このような組成物をスクリーニングによって得るシステムおよび方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式で表わされる構造を有する化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩を含有する薬剤：
【化１】
2013503906.tif 000026
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立的に、Ｈ、置換型もしくは非置換型アルキル、置換型もしくは非置換型アルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、置換型もしくは非置換型アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、チエノピリミジン環系に縮合される、あるいは付加される炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有し；ＺはＳ、Ｏ、ＮＨ、または、ＣＨ−ＣＨであり；Ｗは存在または非存在であって、かつ、ＮＨ、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、Ｏ、または、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）であり；ＸおよびＹはそれぞれ独立的にＮまたはＣであり；ｍは０〜３である。
【請求項２】
上記構造が化合物１である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
上記構造が化合物４である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項４】
上記構造が、化合物２〜３、化合物５〜３１、および化合物６０〜８３からなる群より選択される、請求項１に記載の薬剤。
【請求項５】
上記構造が、組成物１〜３１および６０〜８３の任意の構造的類似体である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項６】
次式で表わされる構造を有する化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩を含有する薬剤：
【化２】
2013503906.tif 000027
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および、Ｒ４は、それぞれ独立的に、Ｈ、置換型もしくは非置換型アルキル、置換型もしくは非置換型アルコキシ、ハロゲン、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、ベンゾジアゼピン環系に縮合した炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有する。
【請求項７】
上記構造が化合物３２である、請求項６に記載の薬剤。
【請求項８】
上記構造が化合物３３である、請求項６に記載の薬剤。
【請求項９】
上記構造が化合物３４である、請求項６に記載の薬剤。
【請求項１０】
上記構造が、化合物３５〜４１からなる群より選択される、請求項６に記載の薬剤。
【請求項１１】
上記構造が、化合物８４〜８６からなる群より選択される、請求項６に記載の薬剤。
【請求項１２】
上記構造が、組成物３５〜４１および８４〜８６の任意の構造的類似体である、請求項６に記載の薬剤。
【請求項１３】
化合物４２〜５９の構造を有する化合物を含有する薬剤。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物を被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
上記被験体がヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記被験体が非ヒトの動物である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
上記ヒトが白血病を患っている、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
上記白血病がＡＭＬまたはＡＬＬを包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項６に記載の組成物を被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
上記被験体がヒトである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
上記被験体が非ヒトの動物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
上記ヒトが白血病を患っている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
上記白血病がＡＭＬまたはＡＬＬを包含する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ａ）ｉ）ＭＬＬまたはＭＬＬ融合タンパク質とメニンとを含有するサンプル、および、
ｉｉ）チエノピリミジン・クラスの化合物またはベンゾジアゼピン・クラスの化合物を含有し、ＭＬＬまたはＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害するように構成された組成物を準備し、
ｂ）上記組成物を上記サンプルに投与し、
ｃ）上記ＭＬＬと上記メニンとの相互作用、または、上記ＭＬＬ融合タンパク質と上記メニンとの相互作用を阻害することを含む、ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する方法。
【請求項２５】
上記組成物が、化合物１〜８６からなる群より選択される化合物を含有する、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願は、米国特許仮出願第６１／２４０，１０２号（出願日２００９年９月４日）に基づいて優先権を主張し、該特許仮出願の開示内容は全て参照によってここに引用されるものとする。
【０００２】
〔技術分野〕
本発明は、一般的には白血病の治療に関し、具体的には、メニンとＭＬＬおよびＭＬＬ融合腫瘍性タンパク質との相互作用を阻害する組成物、並びに方法、さらに、このような組成物をスクリーニングによって得るシステムおよび方法を提供する。
【０００３】
〔背景技術〕
プロト癌遺伝子であるＭｉｘｅｄ  Ｌｉｎｅａｇｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＭＬＬ）に影響を与える染色体転座は、高悪性度のヒトの急性白血病において、子供においても成人においても発生する（Sorensen et al., J Clin Invest., 1994.93(1): p. 429-37., Cox, et al., Am J Clin PathoI., 2004. 122(2): p. 298-306.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。この染色体転座は、急性骨髄芽球性白血病（“ＡＭＬ”：  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）および急性リンパ性白血病（“ＡＬＬ”：  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）に罹患している乳児において特によく見られ、全ての乳児の急性白血病の症例の８０％を占める。ＭＬＬと６０個の相手遺伝子のうちの１つとの融合により、ＨＯＸ遺伝子を上方制御するキメラ癌遺伝子が形成され、その結果、血液細胞の分化がブロックされて、最終的に急性白血病となる（Eguchi et al. Int J Hematol., 2003. 78(5): p. 390-401.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。ＭＬＬ転座を有する白血病患者は予後が非常に悪く（５年間の生存率は３５％）、新規な治療方針が、これらの白血病を治療するために緊急に必要とされていることは明白である（Slany. Hematol OncoI., 2005. 23(1): p. 1-9.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。メニンは、ＭＬＬに関連する白血病においてクリティカルな補助因子である。メニンは、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ（ＭＥＮ）遺伝子によってコード化される腫瘍抑制因子タンパク質である。メニンは、遍在的に発現する核タンパク質であり、転写因子、クロマチン修飾タンパク質、ならびに、ＤＮＡプロセッシングおよび修復タンパク質のコホートとの相互作用に関与する（Agarwal et al. Horm Metab Res., 2005. 37(6): p. 369-74.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。メニンの生物学的機能は依然不明なままであり、状況によって変わる。メニンは、内分泌器官においては腫瘍抑制因子として機能する（Marx. Nat Rev Cancer., 2005. 5(5): p. 367-75.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）が、骨髄系細胞においては発癌性の役割を有する（Yokoyama et al., Cell., 2005.123(2): p. 207-18.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。メニンが発癌性のＭＬＬ融合タンパク質と会合すると、ＨＯＸ遺伝子の発現が構成的に上方制御され、造血細胞の増殖分化が損なわれ、白血病の発生を引き起こす。発癌性のＭＬＬ−ＡＦ９融合タンパク質が形質転換された骨髄系細胞は、効率的に増殖するためにメニンを必要とする（Chen et al., Proc Natl Acad Sci USA., 2006.103(4): p. 1018-23.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。メニンは、ＭＬＬ−ＥＮＬ、ＭＬＬ−ＧＡＳ７、および、ＭＬＬ−ＡＦ６を含む、他のＭＬＬ転座によって誘発される癌化を維持するためにも必要である（Yokoyama et al., Cell., 2005.123(2): p. 207-18.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。これは、メニンが、ＭＬＬに関連する白血病において一般的な発癌性補助因子として機能することを実証し、かつ、メニンとＭＬＬ融合物との相互作用が、分子治療にとって貴重な標的であることを暗示している。ＭＬＬ融合腫瘍性タンパク質の白血病誘発活性は��メニンとの会合に依存する。したがって、この相互作用を選択的に標的とすることによって、ＭＬＬに関連する白血病の新規な薬を開発するための魅力的な治療方法を提供できる可能性がある。
【０００４】
〔発明の概要〕
いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの結合、および／または、ＭＬＬ野生型とメニンとの結合を阻害する、白血病を治療するための組成物を提供する。また、いくつかの実施形態では、上記組成物はチエノピリミジン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記チエノピリミジン・クラスの化合物は、次の一般式で表わされる化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩である。
【０００５】
【化１】
2013503906.tif 000002
【０００６】
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立的に、Ｈ、置換されていても置換されていなくてもよいアルキル（例えばメチル、エチル等）、置換されていても置換されていなくてもよいアルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、チエノピリミジン環系に付加される、あるいは縮合される炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有し、ＺはＳ、Ｏ、ＮＨ、または、ＣＨ−ＣＨであり、Ｗは存在または非存在であって、かつ、ＮＨ、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、Ｏ、または、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）であり、ＸおよびＹはそれぞれ独立的にＮまたはＣであり；ｍは０〜３である（ｍ＝０のとき、Ｒ７は存在しない）。一部の実施形態では、本発明は、メニンのＭＬＬおよび／またはＭＬＬ融合タンパク質との相互作用を阻害し、白血病を治療または予防するために使用可能な化合物を生成することができる任意の置換基を包含する。
【０００７】
一部の実施形態では、上記チエノピリミジン・クラスの化合物は、次の一般式で表わされる化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩である。
【０００８】
【化２】
2013503906.tif 000003
【０００９】
一部の実施形態では、上記チエノピリミジン・クラスの化合物は、次式で表わされる構造を有する。
【００１０】
【化３】
2013503906.tif 000004
【００１１】
一部の実施形態では、上記チエノピリミジン・クラスの化合物は、化合物１〜３１および６０〜８３から選択される。
【００１２】
一部の実施形態では、上記組成物は、組成物１〜３１および６０〜８３の任意の構造的類似体を含有する。
【００１３】
一部の実施形態では、上記組成物は、ベンゾジアゼピン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記ベンゾジアゼピン・クラスの化合物は、次の一般式で表わされる化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩である。
【００１４】
【化４】
2013503906.tif 000005
【００１５】
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および、Ｒ４は、独立的に、Ｈ、置換されていても置換されていなくてもよいアルキル、アセチル、アルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、ベンゾジアゼピン環系に縮合された、あるいは付加された炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環または複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有する。一部の実施形態では、本発明は、メニンのＭＬＬおよび／またはＭＬＬ融合タンパク質との相互作用を阻害し、白血病を治療または予防するために使用可能な化合物を生成することができる任意の置換基を包含する。
【００１６】
一部の実施形態では、上記ベンゾジアゼピン・クラスの化合物は、次式で表わされる構造を有する。
【００１７】
【化５】
2013503906.tif 000006
【００１８】
一部の実施形態では、上記ベンゾジアゼピン・クラスの化合物は、化合物３２〜４１および８４〜８６から選択される。
【００１９】
一部の実施形態では、上記組成物は、化合物４２〜５９またはその誘導体の構造を有する。
【００２０】
一部の実施形態では、上記組成物は、組成物３５〜４１および８４〜８６の任意の構造的類似体を含有する。
【００２１】
上記組成物は、上記いずれかの化合物同士の組み合わせ、または、上記いずれかの化合物と注目している他の化合物との組み合わせを含有する。さらに上記化合物の立体異性体、塩、および、誘導体についても考えられる。
【００２２】
一部の実施形態では、本発明は、白血病を治療するための組成物（例えば、１つ以上のＭＬＬ融合タンパク質のメニンとの結合、または、ＭＬＬ野生型のメニンとの結合を阻害する組成物）を、白血病を患う被験体に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、上記白血病は、ＡＭＬまたはＡＬＬを包含する。一部の実施形態では、上記組成物は、チエノピリミジン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記組成物は、ベンゾジアゼピン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記組成物は、化合物４２〜５９およびその類似体を含有する。
【００２３】
一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する化合物を探すために１つ以上の化合物に対してアッセイを実施することを含む、白血病の治療において有効な化合物をスクリーニングする方法を提供する。一部の実施形態では、上記スクリーニングはインビトロで実施される。一部の実施形態では、上記スクリーニングは、インビボで実施される。一部の実施形態では、上記アッセイは、蛍光偏光アッセイを含む。一部の実施形態では、上記アッセイは、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動アッセイを含む。一部の実施形態では、上記アッセイは、核磁気共鳴アッセイを含む。一部の実施形態では、上記アッセイは、細胞アッセイおよびマウス研究を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、本発明は、（ａ）（ｉ）ＭＬＬとメニンとを含有するサンプル、および、（ｉｉ）ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害するように構成された組成物を準備し、（ｂ）上記組成物を上記サンプルに投与し、（ｃ）ＭＬＬおよび／またはメニンを上記組成物と接触させ、（ｄ）ＭＬＬとメニンとの相互作用、および、ＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害することを含む、ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する方法を提供する。一部の実施形態では、上記サンプルは、白血病を患う被験体から得られる細胞を含有する。一部の実施形態では、上記被験体は、ヒトまたはヒト患者である。一部の実施形態では、上記細胞は、白血病を患う被験体内に存在する。一部の実施形態では、上記組成物は、チエノピリミジン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記組成物は、ベンゾジアゼピン・クラスの化合物を含有する。一部の実施形態では、上記組成物は、化合物４２〜５９およびその類似体を含有する。
【００２５】
一部の実施形態では、本発明は、化合物１〜８６の任意の構造的類似体を含有する。
【００２６】
〔図面の簡単な説明〕
ここに提供する記載は添付の図面を参照しながら読めばより良好に理解できる。ただし、これらの図面は例として含めるのであって、限定を加えるものではない。
【００２７】
図１Ａは、化合物１（ＣＣＧ２１３９７、チエノピリミジン・クラス）のメニンとの結合を、８０μＭの化合物１および２．５μＭのメニンの場合について測定したＳＴＤ（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ、飽和移動差）実験によって示している。参照１Ｄスペクトル（黒色）は、芳香族性および脂肪族性を有する別々の領域を示している。ＳＴＤスペクトル（赤色）は、化合物１がメニンに結合することを示している。競合（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）ＳＴＤスペクトル（青色）は、２５μＭのＭＬＬペプチドの存在下ではＳＴＤ効果が減少することを示し、これによって、化合物１がメニンと特異的に結合することが確認できる。スペクトル上に示したリガンドからのＨシグナルおよびＣＨ３シグナルを、構造上に符号をつけて示す。図１Ｂは、化合物３３（ＣＣＧ２３６６８、ベンゾジアゼピン・クラス）のメニンとの結合を、１００μＭの化合物３３および２．５μＭのメニンの場合について測定したＳＴＤ実験によって示している。参照１Ｄスペクトル（黒色）は、該化合物の脂肪族性を有する領域の場合である。ＳＴＤスペクトル（赤色）からは、メニンに結合することが確認できる。競合ＳＴＤスペクトル（青色）は、２５μＭのＭＬＬペプチドの存在下ではＳＴＤ効果が減少することを示し、これによって、化合物３３がメニンと特異的に結合することが確認できる。リガンドのメチル基からのシグナルを、Ｍ１、Ｍ２、および、Ｍ１’、Ｍ２’として示す（２組のピークは、互いに異なる立体異性体から得られたピークである）。不純物（アステリスクをつけて示す）に対応するピークの強度は、ＭＬＬを加えても影響されない。
【００２８】
図２Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４）およびベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３３）で処理し２４時間インキュベーションした後の、Ｆｌａｇ−ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞における共免疫沈降実験を示している。図２Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−４−０２０＝化合物６７、および、ＡＳ−１−１９＝化合物７０）で処理し６時間インキュベーションした後の、Ｆｌａｇ−ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞における、共免疫沈降実験を示している。
【００２９】
図３は、ヒト肝臓（ＨｅｐＧ２）株化細胞およびヒト腎臓（ＨＫ−２）株化細胞における、ベンゾジアゼピン（ＣＣＧ−２１１９６＝化合物３３）化合物およびチエノピリミジン（ＣＣＧ−２１３９７＝化合物１、および、ＣＣＧ−２１３９７−２５＝化合物４）化合物のＭＴＴ生存率アッセイを示している。なお、該株化細胞は、これらの化合物に対して目立った毒性を有する徴候を示していない。
【００３０】
図４Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４、および、ＭＩ−１−２５＝化合物４）で処理した、異なるＭＬＬ転座（ＭＶ４；１１―ＭＬＬ−ＡＦ４；ＭＬ−２―ＭＬＬ−ＡＦ６；ＫＯＮＰ８―ＭＬＬ−ＥＮＬ；Ｋａｒｐａｓ４５―ＭＬＬ−ＡＦＸ）を有するヒト白血病株化細胞における、ＡＴＰに基づく発光細胞生存率アッセイを示している。このアッセイから、ＭＬＬ白血病細胞の増殖が大きく抑制されることが分かる。図４Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（ＡＳ−１−１９＝化合物７０）を使用した場合の、複数のＭＬＬ転座（ＭＬＬ−ＡＦ４融合タンパク質を有するＭＶ４；１１、および、ＭＬＬ−ＡＦ９融合タンパク質を有するＭｏｎｏＭａｃ６）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【００３１】
図５Ａは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２、および、ＭＩ−８＝化合物３９）で処理した、異なるＭＬＬ転座（ＭＶ４；１１―ＭＬＬ−ＡＦ４；ＫＯＮＰ８―ＭＬＬ−ＥＮＬ；ＴＨＰ−１―ＭＬＬ−ＡＦ９）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。このアッセイから、ＭＬＬ白血病細胞の増殖が化合物３２によって大きく抑制されるが、化合物３９の場合には効果がないことがわかる。これらの結果は、これらの化合物のインビトロＩＣ５０値と非常に良好に相関する。図５Ｂは、最も強力なベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２−１２＝化合物８６）を用いた場合の、複数のＭＬＬ転座（ＭＬＬ−ＡＦ４融合タンパク質を有するＭＶ４；１１、および、ＭＬＬ−ＡＦ９融合タンパク質を有するＭｏｎｏＭａｃ６）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【００３２】
図６Ａは、チエノピリミジン化合物（化合物６４＝ＭＩ−１、化合物４＝ＭＩ−１−２５、および、化合物６３＝ＭＩ−１−７２）を用いた、ＭＬＬではない白血病株化細胞（ＡＭＬ１−ＥＴＯ融合タンパク質を有するＫａｓｕｍｉ−１、および、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質を有するＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。効果は一切観察されないか、あるいは、観察されても非常に限定されている。これによって、これらの化合物がＭＬＬ白血病株化細胞に対して選択性を有することが確認できる。図６Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（化合物７０＝ＡＳ−１−１９）を用いた場合の、ＭＬＬではない白血病株化細胞（ＡＭＬ１−ＥＴＯ融合タンパク質を有するＫａｓｕｍｉ−１、および、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質を有するＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。細胞増殖に対する効果は一切見られない。これによって、この化合物がＭＬＬ白血病細胞に対して選択性を有することが示される。図６Ｃは、最も強力なベンゾジアゼピン化合物（化合物８６＝ＭＩ−２−１２）を用いた場合の、ＭＬＬではない白血病株化細胞（Ｋａｓｕｍｉ−１、および、ＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。細胞増殖に対する効果は一切観察されないか、または、観察されても非常に限定されている。
【００３３】
図７は、チエノピリミジン化合物（化合物７０＝ＡＳ−１−１９）を用いた場合の、ＭＬＬ−ＡＦ９、ＭＬＬ−ＥＮＬ、および、Ｅ２Ａ−ＨＬＦ（ｐｒｏ−Ｂ細胞白血病、これを負のコントロールとして使用する）を形質導入したマウス骨髄における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。これによって、ＭＬＬ融合導入マウス骨髄の成長阻害に選択性があることが示される。
【００３４】
図８は、チエノピリミジン化合物（化合物６４＝ＭＩ−１、化合物４＝ＭＩ−１−２５）およびベンゾジアゼピン化合物（化合物３２＝ＭＩ−２）を用いた、ＭＬＬ融合白血病株化細胞（ＭＬＬ−ＡＦ４を有するＭＶ４；１１およびＭＬＬ−ＡＦ９を有するＴＨＰ−１）における、アネキシンＶ／ＰＩフローサイトメトリー実験を示している。全ての化合物が、２５μＭおよび５０μＭの濃度において、高率のアポトーシスおよび細胞死を誘発する。
【００３５】
図９は、ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞において実施し、プロモーターＨｏｘａ９のトランス活性化で化合物の効果を示すルシフェラーゼ・レポーターアッセイを示している。図９Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４、ＲＪＳ−３−０８０をネガティブコントロールとして使用した）によるプロモーターＨｏｘａ９のトランス活性化の阻害を示している。図９Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２は投与量に依存して阻害する。ＭＩ−８＝化合物３９を負のコントロールとして使用した）を用いた場合の効果を示している。
【００３６】
図１０は、ｑＲＴ−ＰＣＲ実験によって測定した、ＭＬＬ下流標的（ＴＨＰ−１白血病細胞におけるＨｏｘａ９およびＭｅｉｓ１）の発現レベルに対する各化合物の効果を示している。図１０Ａは、チエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−３−０８２＝化合物６５、ＡＳ−１−１９＝化合物７０、ＭＩ−１−７２＝化合物６３）による、Ｈｏｘａ９の発現の下方制御を示している。図１０Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２−１２＝化合物８６）による、Ｈｏｘａ９およびＭｅｉｓ１の発現の下方制御を示している。
【００３７】
図１１は、フローサイトメトリー法を用いてＣＤ１１ｂの発現レベルによって測定した、ＴＨＰ−１白血病細胞の分化を示している。図１１Ａは、チエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−４−０２０＝化合物６７、ＡＳ−１−１９＝化合物７０）を用いた場合の効果である。図１１Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２）を用いた場合の効果である。
〔定義〕
「システム」という用語は、所望の目的を実現するためのネットワークを形成する一群の物体、化合物、方法、および／または、装置を指す。
【００３８】
ここでは、「サンプル」とは、ここで提供される組成物の作用を受けることができる任意のもの、および、ここで提供される方法を実施する対象となることができる任意のものを指す。サンプルはインビトロであっても、インビボであってもかまわない。一部の実施形態では、サンプルは、複数の被験体または単一の被験体から得られる“混合物”のサンプルである。一部の実施形態では、ここで提供される方法は、サンプルを精製または単離することを含む。一部の実施形態では、サンプルは、精製タンパク質または非精製タンパク質である。一部の実施形態では、サンプルは、臨床現場または研究現場から得られてもよい。一部の実施形態では、サンプルは、細胞、流体（例えば、血液、尿、細胞質など）、組織、器官、溶解細胞、生物全体などを含有してもよい。一部の実施形態では、サンプルは、被験体に由来してもかまわない。一部の実施形態では、サンプルは、１以上の被験体全体またはその一部を含有してもかまわない。
【００３９】
ここでは、「被験体」という用語は、昆虫、ヒト、非ヒトの霊長類、脊椎動物、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、齧歯類（例えば、マウス）などを含めた任意の動物を指すが、これらの例に限定されるものではない。「被験体」および「患者」という用語は互換的に使用し、「患者」という用語は一般的に、臨床医または医療提供者から治療または予防策を受けようとしている、または、受けている被験体を指す。被験体は、生命の任意の段階（例えば胚、胎児、乳児、新生児、子供、成人、生存、死亡など）にあってかまわない。
【００４０】
ここでは、「癌を発生させるリスクを有する被験体」という用語は、ある特定の癌を発生させる１つ以上の危険因子を有する被験体を指す。危険因子としては、性別、年齢、遺伝的素因、環境曝露、さらに、癌の罹患歴、癌以外の疾患の既往歴、および、生活様式などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。
【００４１】
ここでは、「被験体において癌の特性を同定する」という用語は、被験体において癌サンプルの１つ以上の特性を特定することを指し、この特性としては、良性、事前癌性、または、癌性の組織または細胞の存在、および、癌の段階などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。癌は、本発明の組成物および方法を用いて癌細胞を特定することによって特性を同定してもよい。
【００４２】
「試験化合物」および「候補化合物」という用語は、身体機能の疾患、疾病、病的状態、または、障害（例えば、癌）を治療または予防するために使用する候補である、任意の化学的実体、医薬品、薬、などを指す。試験化合物は、公知の治療用化合物も、治療用化合物となる可能性のあるものも包含する。試験化合物は、本発明のスクリーニング法を用いたスクリーニングによって、治療上の効果があると判定することができる。
【００４３】
ここでは、「有効量」という用語は、有益または所望の結果を実現するために十分な、化合物（例えば、ここで上述または他で提示する構造を有する化合物）の量を指す。有効量は、１回以上の投与、塗布、または、服用で投与することも可能であるが、特定の処方または投与経路に限定されるものでも、限定されることを意図したものでもない。
【００４４】
ここでは、「併用投与」という用語は、少なくとも２つの薬剤（例えば、ここで上述または他で提示する構造を有する化合物）を被験体に投与すること、または、少なくとも２つの治療法を被験体に対して実施することを指す。一部の実施形態では、２つ以上の薬剤／治療法の併用投与は、同時に行われる。別の実施形態では、第１の薬剤／治療法が、第２の薬剤／治療法に先立って投与される。当業者であれば、使用する各種薬剤／治療法の投与の処方および／または経路が一定でなくてもかまわないことが理解できるはずである。併用投与に用いる適切な投与量は、当業者によって容易に決定可能である。一部の実施形態では、薬剤／治療法を併用投与する場合、各薬剤／治療法は、単独で投与する場合に適切な投与量より少ない量で投与される。したがって、併用投与は、薬剤／治療法を併用投与することによって、公知の潜在的に有害な（例えば、有毒な）薬剤の必要な投与量が抑制される実施形態において、特に望ましい。
【００４５】
ここでは、「薬学的組成物」という用語は、活性薬剤と、該組成物をインビボ、インビボ、または、エキソビボでの診断用途または治療用途に特に適したものにする担体（活性を有していても有していなくてもよい）との組み合わせを指す。
【００４６】
ここでは、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、任意の標準的な医薬的担体（例えば、リン酸緩衝食塩水溶液、水、乳濁液（例えば、油／水の乳濁液、または、水／油の乳濁液）、各種タイプの湿潤剤など）を指す。該組成物は、安定剤および保存剤を含有してもかまわない。担体、安定剤、および、免疫賦活剤の例については、例えば、Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975] を参照せよ。
【００４７】
ここでは、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、被験体に投与すると、本発明の化合物または該化合物の活性代謝物もしくは活性残基を提供することができる、本発明の化合物の任意の薬学的に許容可能な塩（例えば、酸または塩基）を指す。当業者であれば理解できるように、本発明の化合物の「塩」は、無機酸または有機酸および無機塩基または有機塩基に由来してもかまわない。酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、蟻酸、ベンゾイック酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。これ以外の、例えばシュウ酸などの酸は、これ自身が薬学的に許容可能ではないものの、塩の調製において利用することはでき、本発明の化合物および該化合物の薬学的に許容可能な酸を付加した塩を得る際の中間体として有用である。
【００４８】
塩基の例としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）の水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の水酸化物、アンモニア、および、化学式ＮＷ４＋で表わされる化合物（ただし、式中で、Ｗは炭素数が１〜４のアルキルである）などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。
【００４９】
塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、半硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレート、ウンデカン酸塩などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。これ以外の塩の例としては、例えばＮａ＋、ＮＨ４＋、および、ＮＷ４＋（ただし、式中で、Ｗは炭素数が１〜４のアルキル基である）などの適切な陽イオンと配合した、本発明の化合物の陰イオンなどが挙げられる。
【００５０】
治療用途に用いる場合、本発明の化合物の塩は薬学的に許容可能であるとみなされる。ただし、酸と塩基とからなる薬学的には許容不可能な塩も、例えば、薬学的に許容可能な化合物の調製または精製において使用できる場合がある。
【００５１】
ここでは、「化合物を被験体に投与するための指示」という用語、および、該用語の文法的に等価の表現としては、ウイルス感染を特徴とする症状を治療するためのキットに同梱される、組成物の使用指示（例えば、投薬方法、投与経路、治療にあたる医師が患者に特異的な特徴を治療手順と関連付けるための決定木などを記した指示）などがある。本発明の化合物（例えば、ここで上述または他で提示する構造を有する化合物）はキットに同梱されてもよく、該キットは化合物を被験体に投与するための指示を含んでもよい。
【００５２】
〔詳細な説明〕
一部の実施形態では、本発明は、白血病（例えば、ＭＬＬに関連する白血病などの急性白血病）を予防および／または治療するための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、メニンとＭＬＬ融合タンパク質とのタンパク質間相互作用、および／または、メニンとＭＬＬ野生型タンパク質とのタンパク質間相互作用を阻害するための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、組成物および方法は、ＭＬＬ融合の潜在的発癌（例えば、白血病誘発）能力にとって重要な相互作用を阻害する。一部の実施形態では、本発明は、メニンとＭＬＬ融合タンパク質との間、および／または、メニンとＭＬＬ野生型タンパク質との間の相互作用を阻害する、小分子の阻害剤を提供する。一部の実施形態では、組成物および方法は、ＭＬＬ融合の潜在的発癌（例えば、白血病誘発）能力を無効化（例えば、阻害、抑制、根絶など）する。一部の実施形態では、組成物は、対象とする治療（例えば、抗白血病薬剤）において有用である。一部の実施形態では、化合物は、メニンとＭＬＬとの相互作用を妨害する。
【００５３】
一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質やＭＬＬ野生型）とメニンとの相互作用を阻害する組成物を提供する。一部の実施形態では、上記ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する任意の化合物（小分子（例えば、医薬品、薬、薬状の分子など）、巨大分子（例えば、ペプチドや核酸）、および／または、巨大分子複合体）が、本発明において有用である。一部の実施形態では、本発明は、ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する小分子の化合物を提供する。一部の実施形態では、本発明の組成物は、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質）に対するメニンの親和性、および／または、メニンに対するＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ野生型タンパク質）の親和性を低下させる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、結合（例えば、水素結合、イオン結合、共有結合など）、分子の相互作用（例えば、疎水性相互作用、静電性相互作用、ファンデルワールス相互作用など）、形状認識、および／または、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質またはＭＬＬ野生型タンパク質）とメニンとの間の分子認識を攪乱する。ただし、作用機構の理解は、本発明の実施には不要であり、本発明は、いかなる特定の作用機構にも限定されるものではない。
【００５４】
本発明は、ＭＬＬとメニンとの相互作用を攪乱、標的、もしくは、阻害し、および／または、白血病を治療／予防する任意の小分子、または小分子のクラスを提供する。一部の実施形態では、小分子は、ＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用、または、ＭＬＬ野生型タンパク質とメニンとの相互作用の阻害において有効である。特定の実施形態において、本発明は、チエノピリミジン・クラスおよびベンゾジアゼピン・クラスの小分子を提供する。一部の実施形態では、チエノピリミジンの小分子およびベンゾジアゼピン小分子は、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質またはＭＬＬ野生型）とメニンとの相互作用を阻害する。一部の実施形態では、チエノピリミジンの小分子およびベンゾジアゼピンの小分子は、ＭＬＬ融合タンパク質の発癌（例えば、白血病誘発）作用、および／または、ＭＬＬとメニンとの相互作用およびＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害する。一部の実施形態では、チエノピリミジンの小分子およびベンゾジアゼピンの小分子は、白血病（例えば、ＭＬＬ依存白血病、ＭＬＬに関連する白血病、または、高レベルのＨｏｘ遺伝子発現を伴う、および、高レベルのＨｏｘ遺伝子発現を伴わない、その他の白血病など）を治療および／または予防する。
【００５５】
一部の実施形態では、チエノピリミジン・クラスの小分子は、次式で表わされる一般構造、または、該構造物の薬学的に許容可能な塩もしくは水和物を有する。
【００５６】
【化６】
2013503906.tif 000007
【００５７】
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２は、Ｈ、置換されていても置換されていなくてもよいアルキル、置換されていても置換されていなくてもよいアルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、炭素環式芳香族環、炭素数が６の炭素環式芳香族環、炭素環式非芳香族環、炭素数が３〜６の炭素環式非芳香族環、複素環式芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／または、硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の複素環式芳香族環、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていない、あるいは置換されている任意の芳香族環もしくは非芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員複素環式非芳香族環、上記チエノピリミジン環系に縮合した炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環、上記チエノピリミジン環系に縮合した５員もしくは６員の炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環、チエノピリミジン環系に縮合し、アルキル、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている任意の芳香族環系もしくは非芳香族環系、または、置換型もしくは非置換型の別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合し、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員または６員の炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環である。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は互いに共有結合している（例えば、環上に存在している）。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、および、Ｒ８は、Ｈ、置換型または非置換型アルキル、アルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、炭素数が６の炭素環式芳香族環、炭素数が３〜６の炭素環式非芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の複素環式芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の複素環式非芳香族環、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、または、水素結合受容体で置換されていない、あるいは置換されている任意の芳香族環もしくは非芳香族環、または、別の芳香族環、水素結合供与体、水素結合受容体などに縮合し、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは、硫黄とを環員原子として有する５員または６員の炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環である。ＺはＳ、Ｏ、ＮＨ、または、ＣＨ−ＣＨである。Ｗは存在または非存在であって、かつ、ＮＨ、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、Ｏ、または、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）である。ＸおよびＹはそれぞれ独立的にＮまたはＣである。また、ｍは０〜３である（ｍ＝０の場合には、Ｒ７は非存在である）。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および、Ｒ４は、ＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害する、および／または、白血病を治療または予防する化合物を生成することができる任意の置換基を含有する。
【００５８】
一部の実施形態では、チエノピリミジン・クラスの小分子は、表１および表２の組成物、または、該組成物の誘導体、組み合わせ、薬学的に許容可能な塩、および／または、水和物を含有する。一部の実施形態では、チエノピリミジン・クラスの小分子は、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質）とメニンとの相互作用を阻害する。一部の実施形態では、チエノピリミジン・クラスの小分子は、ＭＬＬ融合タンパク質の発癌（例えば、白血病誘発）作用、および／または、ＭＬＬとメニンとの相互作用およびＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を無効化および／または阻害する。一部の実施形態では、チエノピリミジン・クラスの小分子は、白血病を予防または治療する。
【００５９】
一部の実施形態では、ベンゾジアゼピン・クラスの小分子は、次式で表わされる一般構造、または、該一般構造の薬学的に許容可能な塩もしくは水和物を有する。
【００６０】
【化７】
2013503906.tif 000008
【００６１】
ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はＨ、アルキル、アセチル、アルコキシ、ケトン、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、炭素環式芳香族環、炭素数が６の炭素環式芳香族環、炭素環式非芳香族環、炭素数が３〜６の炭素環式非芳香族環、複素環式芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の複素環式芳香族環、複素環式非芳香族環、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の複素環式非芳香族環、アルキル、アルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔなど）、水素結合供与体、水素結合受容体、もしくは別の芳香族環もしくは非芳香族環に縮合し、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員の炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環、または、別の芳香族環、水素結合供与体、水素結合受容体などに縮合し、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する５員もしくは６員複素環式非芳香族環である。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および、Ｒ４は、ＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害する、および／または、白血病を治療または予防する化合物を生成することができる任意の置換基を含有する。
【００６２】
一部の実施形態では、ベンゾジアゼピン・クラスの小分子は、表３の組成物、または、該組成物の誘導体、組み合わせ、薬学的に許容可能な塩、および／または、水和物を包含する。一部の実施形態では、ベンゾジアゼピン・クラスの小分子は、ＭＬＬ（例えば、ＭＬＬ融合タンパク質またはＭＬＬ野生型）とメニンとの相互作用を阻害する。一部の実施形態では、ベンゾジアゼピン・クラスの小分子は、ＭＬＬ、ＭＬＬ融合タンパク質、および／または、ＭＬＬとメニンとの相互作用の発癌（例えば、白血病誘発）作用を無効化および／または阻害する。一部の実施形態では、ベンゾジアゼピン・クラスの小分子は、白血病を予防または治療する。
【００６３】
一部の実施形態では、上記化合物は化合物４２〜５９またはその誘導体の構造を有する。
【００６４】
一部の実施形態では、本発明は、疾患（例えば、癌、白血病、ＭＬＬに関連する白血病など）を治療または予防するために、本発明の組成物の被験体（例えば、白血病患者）への投与を提供する。一部の実施形態では、本発明は、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病、リンパ性白血病、リンパ性白血病、骨髄性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞の前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、ＭＬＬ陽性白血病、ＭＬＬ誘発白血病など）を治療または予防するための組成物の投与を提供する。
【００６５】
一部の実施形態では、上記化合物のいずれかが併用投与、または、公知の治療薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、抗体療法など）と組み合わせて使用される。
【００６６】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、医薬品および／または治療用組成物として提供される。本発明の医薬品および／または治療用組成物は、局所的な治療が所望されるのか、または、全身的な治療が所望されるのか、および、治療対象の面積に応じて複数の方法で投与可能である。投与は、局所的な投与（眼や経腟送達および経直腸送達を含めた粘膜への投与）であっても、肺への投与（例えば、噴霧器の使用を含めた、粉末またはエアロゾルの吸入またはガス注入による投与、気管、鼻腔、上皮性を通じた投与、および、経皮投与など）であっても、経口投与または非経口的投与であってもかまわない。非経口投与の例としては、静脈内注射または注入、動脈内注射または注入、皮下注射または注入、腹腔内注射または注入、または、筋肉内注射または注入、さらに、頭蓋内投与（例えば、くも膜下腔内投与や心室内投与）などが挙げられる。局所投与される組成物および処方方法の例としては、経皮性パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐薬、噴霧、液体、および、粉末などが挙げられる。従来の担体（水性でも、粉末でも、油性塩基でもよい）や増粘剤の使用が必要であっても、望ましくてもかまわない。経口投与される組成物および処方方法の例としては、粉末または顆粒、水性または非水系培地性の懸濁液または水性溶液、カプセル、小袋、錠剤などが挙げられる。増粘剤、調味料、希釈液、乳化剤、分散補助剤、または、結合剤が望ましくてもかまわない。非経口投与、くも膜下腔内投与、または、心室内投与される組成物および処方方法の例としては、バッファ液、希釈液、および、例えば、透過促進剤や担体化合物などの薬学的に許容可能な担体または賦形剤（ただし、これらの例に限定されるものではない）などの、その他の適した添加剤をも含有し得る無菌水溶液などが挙げられる。本発明の医薬品および／または治療用組成物としては、溶液、乳濁液、および、リポソーム含有処方物などが挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。これらの組成物は、例えば予備処方された液体、自己乳化固体、および、自己乳化半固体などの種々の成分から生成可能であるが、これらの例に限定されるものではない。
【００６７】
一回の服用単位で便利に提供される、本発明の医薬品および／または治療用処方物は、医薬品／栄養薬品産業において周知の従来の手法で調製可能である。このような手法は、上記有効成分を医薬的担体または賦形剤と会合させるステップを含む。一般に、上記処方物は、上記有効成分を液体担体と微細に分割された固体の担体とのいずれか一方または両方に一様におよび密接に会合させ、さらに、必要であれば、生成物を整形することによって調製される。本発明の組成物は、例えば、錠剤、カプセル、液体シロップ、軟質ゲル、坐薬、浣腸などの多数の可能な剤形のうちのいずれかを形成するように処方可能であるが、これらの例に限定されるものではない。さらに、本発明の組成物は、水性、非水系、油系、または、混合培地性の懸濁液として処方可能である。さらに、懸濁液は、上記懸濁液の粘性を増加させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロース・ナトリウム、ソルビトール、および／または、デキストランなど）を含有してもかまわない。さらに、上記懸濁液は安定剤を含有してもかまわない。本発明の一実施形態では、上記薬学的組成物は、発泡剤として処方および使用可能である。医薬的発泡剤の例としては、例えば、乳濁液、マイクロ乳濁液、クリーム、ゼリー、リポソームなどの処方物が挙げられるが、これらの例に限定されるものではない。これらの各処方物は、基本的には特性が類似しているが、成分および最終産物の一貫性という点では異なる。
【００６８】
投画および投与計画は、望ましい治療効果のレベル、および、実際に得られる治療効果のレベル（ただし、これらの例に限定されるものではない）を含めた周知の薬理学上および治療上の判断事項に基づいて、臨床医または薬理学的分野の当業者によって調整される。一般的に、化学療法薬を投与するための周知の薬理学的な原理に従うことが薦められる（例えば、一般的に、３〜４の薬剤半減期を超えない程度で、一度に５０％を超える服用量の変更はしないことが薦められる）。用量に関連する毒性について考慮すべきことが比較的少ない、または、全くない組成物の場合であって、かつ、最大効力が所望されるのであれば、必要とされる平均投与量を超える投与量は珍しくない。投薬法に対するこの手法は、一般に”極量”戦略と称される。ある一部の実施形態では、上記化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの投与量で被験体に投与される。ここに記載する化合物が別の薬剤（例えば、感作剤として）とともに併用投与される場合、有効量は、該薬剤が単独で使用される場合の量より少なくてもよい。投薬は、１日以上の連続する日にわたって、一日当たり１回または一日当たり複数回であってもよい。
【００６９】
〔実験〕
化合物１〜３および５〜８は、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社から市販されている。化合物９は、Ａｓｉｎｅｘ社から市販されている。化合物１０は、ＩｎｔｅｒｂｉｏＳｃｒｅｅｎ  Ｌｔｄ．社から市販されている。化合物１１および３２〜４１は、Ｃｈｅｍｄｉｖ  Ｉｎｃ．社から市販されている。化合物１２〜２７および３１は、Ｅｎａｍｉｎｅ社市販されている。化合物４は、Ｌａｂｏｔｅｓｔ社（ＬＴ００１６０５６９）から市販されている。化合物２８〜３０は、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社から市販されている。残りの化合物は、下記の商業ソースから入手、または、合成した。化合物２、４、６〜８、２６、２７、６４〜７２、および、７５〜７６は、ＨＣｌ塩として使用した。
【００７０】
〔実施例１〕
〔化合物のスクリーニング〕
〔蛍光偏光アッセイ〕
ＭＬＬのメニンへの結合の阻害をモニタリングする際に有効なアッセイを、本発明の実施形態の開発時に実施した実験において開発した。高親和性メニン結合モチーフを有するＭＬＬに由来する、フルオレセインで標識済みの１２個のアミノ酸からなるペプチドを生成した（Yokoyama et al., Cell., 2005.123(2): p. 207-18.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。ペプチド（１．７ｋＤａ）がこれより非常に大きなメニン（−６７ｋＤａ）に結合すると、フルオロフォア（Ｎ終端に位置するフルオレセインで標識済みのペプチド）の回転相関時間が大幅に変化し、したがって、蛍光偏光および蛍光異方性の測定結果が大きく増加する（５００ｎｍにおいて励起、５２５ｎｍにおいて蛍光）。蛍光偏光法（ＦＰ）アッセイを使用し、メニンと５０ｎＭのフルオレセインで標識済みのＭＬＬペプチドとの連続希釈物を用いて、メニンとＭＬＬペプチドとの結合のＫｄを決定した。滴定曲線は、メニンとＭＬＬとの相互作用のナノモル親和性（Ｋｄ＝５６ｎＭ）を示す。
【００７１】
メニンとＭＬＬとの相互作用における化合物の有効性（ＩＣ５０値）を、ＦＰ競合実験において判定した。上記相互作用を阻害する化合物は、化合物のスクリーニングおよびＩＣ５０の決定を行うための読み取り値として使用している蛍光異方性を低下させる。上記ＦＰアッセイを検証するために、（フルオレセインを付加していない）未標識のＭＬＬペプチドを用いたコントロール競合実験を実施した。未標識のＭＬＬペプチドによる、メニンから得られる、フルオレセインで標識済みのＭＬＬペプチドの競争的置換をモニターした。このアッセイを用いて、メニンと結合しているＭＬＬペプチドのＩＣ５０値を求めるとＩＣ５０＝０．２３μＭであった。本発明の一部の実施形態では、同じ競合ＦＰアッセイを使用して、メニンを標的とし、メニンとＭＬＬとの相互作用を阻害する化合物をスクリーニングする。
【００７２】
〔ＨＴＲＦアッセイ〕
上記ＦＰアッセイが有する１つの潜在的な限界は、ＦＰアッセイに干渉する可能性を有する化合物を選択し、いわゆる”偽陽性”を作り出してしまうリスクである。したがって、本発明の実施形態の開発時には、ＣＩＳ−ＢＩＯ社によって均一時間分解蛍光（“ＨＴＲＦ”：  ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｔｉｍｅ−ｒｅｓｏｌｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）アッセイとして市販されている時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイを、二次アッセイとして（例えば、結果を確認するために）使用した。一部の実施形態では、ＨＴＲＦアッセイを一次アッセイとして使用し、ＦＰアッセイを二次アッセイとして使用して、結果を確認してもかまわない。ＨＴＲＦは、ユーロピウム・クリプテート（Ｅｕ３＋クリプテート）供与体からアロフィコシアニン（ＸＬ６６５）受容体への、長時間蛍光の非蛍光エネルギー移動をベースとして、時間分解検出法と組み合わせた方法である。これらの２つのフルオロフォアが生体分子の相互作用によって結合すると、３３７ｎｍでの励起の間にＥｕ３＋クリプテートによって捕捉されたエネルギーの一部が、供与体の６２０ｎｍでの蛍光放射によって放出される一方で、残存エネルギーがＸＬ６６５受容体に移動し、６６５ｎｍで特異的蛍光として放出される。本発明およびその実施形態の開発において使用されるＨＴＲＦでは、Ｅｕ３＋クリプテート供与体がマウスの抗６Ｈｉｓ単クローン抗体と接合し、この抗体がＨｉｓ標識メニンに結合する。また、ＸＬ６６５受容体はストレプトアビジン（ＳＡ−ＸＬ６６５）に接合し、このストレプトアビジンがビオチン化ＭＬＬペプチドに結合する。メニンとＭＬＬペプチドとの相互作用によって、供与体と受容体とが結合し、その結果、受容体へのエネルギー移動が起き、このエネルギー移動が６６５ｎｍでの蛍光放射の増加、および、ＨＴＲＦ比（６６５ｎｍにおける放射強度／６２０ｎｍにおける放射強度）の増加に反映される。メニンとＭＬＬとの相互作用を競合者が阻害することによって、供与体は受容体から分離され、その結果、６６５ｎｍにおける放射が減少し、ＨＴＲＦ比が減少する。未標識のＭＬＬペプチドを用いて滴定実験を実施することによって、上記アッセイを検証したところ、ＩＣ５０＝２．３μＭとなり、ＦＰデータと良好に一致したままであった。
【００７３】
〔リード化合物のＮＭＲ分光による検証〕
本発明の実施形態において、および、その開発時に、飽和移動差（ＳＴＤ）実験、競合ＳＴＤ実験、および、ＷａｔｅｒＬＯＧＳＹ実験によってＮＭＲ分光を実施して、化合物のメニンに対する結合を検証した。ＳＴＤは、（例えば、製薬会社が）薬物スクリーニングのためによく使う蛍光法と大きく異なる原理に基づいて、信頼できる方法を提供する。ＳＴＤ実験の原理は、タンパク質から小分子への磁化の移動に基づいている。このような移動は、リガンドとタンパク質との接触が直接的である場合にだけ発生し、リガンドが結合状態と非結合状態との間で高速で入れ替わっている場合に検出可能である（Mayer & Meyer. J Am Chern Soc., 2001. 123(25): p. 6108-17.、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。タンパク質が飽和している状態とタンパク質が飽和していない状態とで記録されるリガンドの差スペクトルを分析する。化合物のメニンへの結合を検出するために、２．５μＭのメニンの存在下における化合物のＳＴＤスペクトルを測定する。実験の感度は、有意なサイズのメニン（−７０ｋＤａ）が存在しているので高い。
【００７４】
〔ライブラリースクリーニング〕
本発明の実施形態の開発時に、メニンとＭＬＬとの相互作用を標的とする化合物を特定するために、２０μＭでテストした６５，０００種類の化合物のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を実施した。一次スクリーニングをＦＰで実施した。約１４００種類の化合物が、阻害できることを一次スクリーニングにおいて示した。これらのうち、２４０種類を再確認した。用量反応曲線（ＤＲＣ）を決定するために、ＦＰと大きく干渉しない（これは非ＦＰアッセイで確認した）１８０種類の化合物を選択した。用量反応曲線の決定は、独立した２つのＦＰアッセイ（フルオロフォアはＦＬＳＮ＿ＭＬＬおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ＿ＭＬＬ）によって実施した（ＴＲ＿ＭＬＬを使用して、フルオレセインに干渉する”偽陽性”を除外した）。ＤＲＣによって、４０種類の化合物がどちらのＦＰアッセイにおいても活性を有することが示された。詳細にわたる分析をした後に、さらに分析する対象として、１６種類の化合物を選択した。これらの化合物を、ＦＰ（両方のフルオロフォアを用いた）およびＨＴＲＦでテストした結果、５種類の化合物のＩＣ５０値が１００μＭ未満であった。もっとも強力な化合物は、化合物１であり、ＩＣ５０値が１．９μＭであった。非常に強力な化合物を構造上２つのグループに分類することができ、これは２つのクラス（チエノピリミジン・クラスおよびベンゾジアゼピン・クラス）が存在することを示唆している。各グループの化合物をＮＭＲによってテストし、各化合物がメニンに結合すること、および、結合するためにＭＬＬと競合することを確認した。これは、該化合物の、抗白血病薬剤としての有用性を示唆している。
【００７５】
〔実施例２〕
〔チエノピリミジン・クラスの化合物に関する詳細な調査〕
化合物１が、本発明の実施形態の開発時に実施したスクリーニングで、もっとも有効な阻害性化合物であった。化合物１（独立した商業ソースから得られる）について、メニンとＭＬＬとの相互作用の阻害性をＦＰおよびＨＴＲＦで再テストすると、同じＩＣ５０値（１．９μＭ）が得られた（表１）。同じスクリーニングにおいて、構造的に関連する２つの化合物をさらに特定した（化合物２および化合物３、表１）。また、化合物１の４１種類の類似体を商業ソースから購入し、１０種類の類似体を合成し、メニンとＭＬＬとの相互作用の阻害性についてＦＰアッセイでテストした。その結果、複数の活性化合物が見つかった（表１および表２）。化合物４は、親化合物に匹敵するインビトロＩＣ５０を示す上に溶解度が向上しているので、細胞研究にはより適している。化合物１をＨＣｌ塩に転化すると、溶解度が向上した化合物６４が得られた。合成化合物６５、６６、６７、および、７０は、インビトロＦＰアッセイにおいてさらに強力な活性を示し（表２）、最も強力な化合物は化合物７０であった（ＩＣ５０＝０．４３μＭ）。表１および表２は、チエノピリミジン・クラスの複数の活性化合物のＩＣ５０に関するデータを一覧表にしたものである。
【００７６】
【表１】
2013503906.tif 000009
【００７７】
【表２】
2013503906.tif 000010
【００７８】
【表３】
2013503906.tif 000011
【００７９】
【表４】
2013503906.tif 000012
【００８０】
【表５】
2013503906.tif 000013
【００８１】
【表６】
2013503906.tif 000014
【００８２】
【表７】
2013503906.tif 000015
【００８３】
【表８】
2013503906.tif 000016
【００８４】
【表９】
2013503906.tif 000017
【００８５】
〔ＮＭＲによって測定した、チエノピリミジン化合物のメニンへの結合〕
ＦＰアッセイおよびＨＴＲＦアッセイにおいて、メニンに対するＭＬＬの結合の阻害において活性を有するチエノピリミジン化合物をＮＭＲ実験においてテストして、ＭＬＬがメニンに直接結合していることを確認し、（例えば、凝集、タンパク質の変性、沈殿などによって引き起こされる）一切の無差別な阻害を除外した。ＮＭＲリガンド検出方法（例えば、ＳＴＤ、競合ＳＴＤ、ＷａｔｅｒＬＯＧＳＹなど）を使用して、ＭＬＬがメニンに結合していることを確認した（化合物１の代表的なスペクトルについては図１Ａを参照せよ）。
【００８６】
〔チエノピリミジン化合物の合成〕
合成スキーム１にしたがって、化合物６５〜７２を合成した。トリエチルアミンを塩基として用いて、エチルシアノアセテート２および硫黄元素でアルデヒド１を縮合して、チオフェン３を得た（Ｇｅｗａｌｄ反応）。加熱条件（１２０℃）下で化合物３をホルムアミド４で処理し、チエノピリミジン５を形成した。塩化オキサリル中で化合物５を還流させることによって塩素化を達成し、化合物６を産生した。６をピペラジン７で求核置換すると、化合物８が得られた。この化合物８を、次に、ＨＣｌ塩９に転化した。
【００８７】
【化８】
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【００８８】
〔実施例３〕
〔ベンゾジアゼピン・クラスの化合物に関する詳細な調査〕
化合物３２は、ＨＴＳによって特定されたベンゾジアゼピン・クラスの化合物の中では最も有効な阻害を示した。化合物３２を、メニンとＭＬＬとの相互作用の阻害性について、ＦＰおよびＨＴＲＦによって再テストすると、ＩＣ５０＝１３μＭであった（表３）。一次スクリーニングにおいて特定された構造的に関連する２つの化合物も再テストした（化合物３３および化合物３４、表３）。さらに、化合物３２に対する類似度が８５％である、ライブラリーから得られる化合物（一次スクリーニングでは、ヒットとして見つけられなかった）について、メニンとＭＬＬとの相互作用の阻害性を、用量反応曲線において再テストすると、複数の活性化合物が得られた（表３）。表３は、ベンゾジアゼピン・クラスの複数の活性化合物のＩＣ５０に関するデータを一覧表にしたものである。化合物３２の１２種類の市販の類似体を注文し、テストを実施した結果、もとの化合物よりも良好なＩＣ５０値を有する化合物が１つ見つかった（化合物８６、ＩＣ５０＝７．４μＭ）。各活性化合物を表３に示す。
【００８９】
【表１０】
2013503906.tif 000019
【００９０】
【表１１】
2013503906.tif 000020
【００９１】
【表１２】
2013503906.tif 000021
【００９２】
〔ＮＭＲによって測定した、ベンゾジアゼピン化合物のメニンへの結合〕
ＦＰアッセイおよびＨＴＲＦアッセイにおいて、メニンに対するＭＬＬの結合の阻害において活性を有するベンゾジアゼピン化合物をＮＭＲ実験においてテストして、ＭＬＬがメニンに直接結合していることを確認し、（例えば、凝集、タンパク質の変性、沈殿などの非特異的な作用によって引き起こされる）一切の無差別な阻害を除外した。ＮＭＲリガンド検出方法（例えば、ＳＴＤ、競合ＳＴＤ、ＷａｔｅｒＬＯＧＳＹなど）を使用して、ＭＬＬがメニンに結合していることを確認した（化合物３３の代表的なスペクトルについては図１Ｂを参照せよ）。
【００９３】
〔実施例４〕
〔インビボ化合物テスト〕
〔ヒト細胞におけるメニンとＭＬＬとの相互作用の阻害〕
チエノピリミジン（化合物６４（ＭＩ−１）、化合物６７（ＲＪＳ−４−０２０）、化合物７０（ＡＳ−１−１９））化合物およびベンゾジアゼピン（化合物３２（ＭＩ−２またはＣＣＧ−２１１９６））化合物について、Ｆｌａｇ−ＭＬＬ−ＡＦ９を移入したＨＥＫ２９３細胞において免疫共沈降実験を適用してメニンとＭＬＬとの相互作用の阻害性をテストした（図２を参照せよ）。どちらのクラスの化合物も、ＤＭＳＯコントロールと比較して、この相互作用を、５０μＭおよび２５μＭの化合物濃度でヒト細胞において有効に阻害することができる。これは、薬物の候補としてさらに開発を進め得る潜在的能力を示している。
【００９４】
〔腎臓株化細胞および肝臓株化細胞におけるチエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物の作用〕
チエノピリミジン・クラスおよびベンゾジアゼピン・クラスの化合物の有効性を、ヒト株化細胞においてテストした。ＭＴＴ生存率アッセイによって、細胞増殖に対する効果を調べた（Mosmann. Immunol Methods., 1983; 65(1-2):55-63,、本文献は全て参照によってここに引用されるものとする）。Ｈｅｐ−Ｇ２（肝臓）株化細胞およびＨＫ−２（腎臓）株化細胞を用いた生存率アッセイ（ＭＩＴ）を実施した結果、どちらのクラスの化合物の場合にも顕著な毒性の徴候が見られなかった（図３を参照せよ。化合物１（ＣＣＧ＿２１３９７）、化合物４（ＣＣＧ＿２１３９７＿２５）、化合物３２（ＣＣＧ＿２１１９６））。
【００９５】
〔ＭＬＬ転座を有するヒト白血病株化細胞の増殖抑制に対する、チエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物の作用〕
ヒト白血病株化細胞における生存率アッセイを、チエノピリミジン・クラスおよびベンゾジアゼピン・クラスの代表的な化合物を用いて実施した。異なるＭＬＬ転座を有するＭＶ４；１１株化細胞、ＭＬ−２株化細胞、ＫＯＰＮ−８株化細胞、Ｋａｒｐａｓ４５株化細胞、ＭｏｎｏＭａｃ６株化細胞を含めた複数の株化細胞をテストして、ヒト白血病株化細胞の成長の阻害における、化合物の有効性を評価した。ヒト白血病株化細胞の増殖の非常に有効な抑制が、数マイクロモルから数十マイクロモルのＧＩ５０値（７μＭ〜２５μＭ）を有するチエノピリミジン・クラスの化合物（具体的には、化合物６４（ＣＣＧ＿２１３９７またはＭＩ−１）、化合物４（ＣＣＧ＿２１３９７＿２５またはＭＩ−１−２５）（図４Ａを参照せよ））の場合（図４Ｂを参照せよ）、および、インビトロＦＰ実験においてチエノピリミジン・クラスの中でもっとも強力な化合物である化合物７０（ＡＳ−１−１９）の場合（表１および表２）に観察された。
【００９６】
化合物３２（ＣＣＧ＿２１１９６またはＭＩ−２）および化合物８６（ＭＩ−２−１２）を含めたベンゾジアゼピン化合物も、ＭＬＬ白血病細胞の成長を強力に阻害した（図５を参照せよ）。その一方で、負のコントロールとして使用した化合物３９（ＭＩ−８）は、ＭＬＬ白血病細胞の増殖抑制を一切示さなかった。これは、この化合物のインビトロＩＣ５０値と非常に良好に相関している。
【００９７】
〔ＭＬＬ白血病細胞に対するチエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物の特異性〕
チエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物をＭＴＴ生存率アッセイにおいてテストし、ＭＬＬ転座を有しない他の白血病株化細胞の成長に対する効果を評価した。どちらのクラスの化合物の場合にも限定的な効果しか観察されなかったか、あるいは、そのような効果が一切観察されなかった（図６を参照せよ）。これは、ＭＬＬ融合株化細胞の成長阻害における選択性を示している。
【００９８】
〔ＭＬＬ−ＡＦ９およびＭＬＬ−ＥＮＬを導入したマウス骨髄に対する、チエノピリミジン化合物の効果〕
チエノピリミジン化合物（化合物７０、ＡＳ−１−１９）は、ＭＴＴ細胞生存率アッセイによる測定結果によれば、ＭＬＬ−ＡＦ９およびＭＬＬ−ＥＮＬ融合タンパク質を導入済みのマウス骨髄において、細胞増殖の高い阻害性を示す（図７を参照せよ）。その一方で、Ｅ２Ａ−ＨＬＦ（ｐｒｏ−Ｂ−細胞白血病）を導入したマウス骨髄においては、この化合物の場合、細胞増殖の有意な阻害性が一切観察されなかった。これも、ＭＬＬ転座を有する細胞の成長を、チエノピリミジン化合物が特異的に阻害することを示している。
【００９９】
〔チエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物は、ＭＬＬ白血病細胞においてアポトーシスを誘発する〕
アネキシンＶ／ＰＩ染色フローサイトメトリー実験によって、両方のクラスの化合物を、ＭＬＬ白血病株化細胞（ＭＶ４；１１およびＴＨＰ−１）におけるアポトーシス誘発能力について評価した（図８を参照せよ）。どちらのクラスの化合物も、ＭＬＬ融合株化細胞において、数十マイクロモルの濃度（２５μＭ〜５０μＭ）でアポトーシスおよび細胞死を有効に誘発ことができる。この効果は、ＭＬＬ−ＡＦ４細胞ではより顕著である（化合物６４（ＭＩ−１および化合物３２（ＭＩ−２）が２５μＭであれば、アポトーシス細胞が２０％を超え、同じ実験条件での死細胞は２０％を超える）。ＴＨＰ−１  ＭＬＬ白血病細胞では、ベンゾジアゼピン・クラスの化合物の場合に、さらに顕著な効果が観察された。具体的には、化合物３２（ＭＩ−２）で処理すると、５０μＭの化合物濃度において、アポトーシス細胞は約２０％、死細胞は４０％を超えた。チエノピリミジン化合物６４（ＭＩ−１）で処理すると、効果はそれほど顕著でなかったが、ＤＭＳＯコントロールに比較すればアポトーシスおよび細胞死が誘発された（図８を参照せよ）。
【０１００】
〔ＭＬＬ融合下流標的Ｈｏｘａ９およびＭｅｉｓ１に対する、チエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物の効果〕
ＭＬＬ融合下流標的の発現に対する両方のクラスの化合物の効果を、ルシフェラーゼ・レポーターアッセイ（図９を参照せよ）において、および、ＲＴ−ＰＣＲ（図１０を参照せよ）によって評価した。どちらのクラスの化合物（化合物６４（ＭＩ−１）および化合物３２（ＭＩ−２））も、ＭＬＬ−ＡＦ９を移入したＨＥＫ２９３細胞におけるルシフェラーゼ・レポーターアッセイにおいて、プロモーターＨｏｘａ９のトランス活性化を有効に阻害することができる。負のコントロール化合物（ＲＪＳ−３−０８０、および、化合物３９（ＭＩ−８））の場合には、効果が一切観察されなかった。これは、インビトロのＩＣ５０値と良好に相関している。さらに、Ｈｏｘａ９の発現の下方制御も、どちらのクラスの化合物の場合にも、ＴＨＰ−１細胞において実施したＲＴ−ＰＣＲ実験において観察され（図１０を参照せよ）、化合物とともに７日間インキュベーションを行った後により顕著な効果が観察された。これらの化合物によって、ＭＬＬのもう１つの下流標的であるＭｅｉｓ１の発現レベルも低下した（図１０ｂを参照せよ）。
【０１０１】
〔チエノピリミジン化合物およびベンゾジアゼピン化合物が、ＭＬＬ白血病細胞の分化を誘発する〕
チエノピリミジン（化合物６７（ＲＪＳ−４−０２０）および化合物７０（ＡＳ−１−１９））およびベンゾジアゼピン（化合物３２（ＭＩ−２））を用いてＴＨＰ−１白血病細胞を処理すると、細胞表面におけるＣＤ１１ｂの発現が増加した（図１１を参照せよ）。これは、化合物を用いた処理に応答して、これらの細胞が分化したことを示唆している。
【０１０２】
〔実施例５〕
〔さらに別の化合物〕
ＦＰアッセイを用いてＭａｙｂｒｉｄｇｅ断片ライブラリー（ＭＦＬ）（多様な分子骨格、薬物としての特性、および、３００Ｄａ未満の分子量を有する５００種類の化合物）のサブセットをスクリーニングするために、実験を実施した。ＦＰによるフルオレセインで標識済みのＭＬＬペプチドの、メニンからの競争的置換について、ＭＦＬをスクリーニングした。
【０１０３】
ＭＦＬのスクリーニングの結果、５００μＭの濃度において、ＭＬＬペプチドのメニンへの結合の阻害率が２５％を超える、２０種類の化合物が得られた。次に、これらの化合物を投与量に依存する形式でテストして、ＩＣ５０値を決定した。アッセイと干渉した化合物（沈殿や自家蛍光）を偽陽性であると見なして、その後の分析から除外した。最後には、２ｍＭ未満のＩＣ５０値でメニンとＭＬＬとの相互作用を阻害する、多様な分子骨格を有する１１種類の化合物が得られた。ＮＭＲ分光法を適用することによって、４種類の化合物（化合物４２（４Ｈ８）、化合物４３（６Ｇ１０）、化合物４４（１Ｆ４）、および、化合物４５（４Ａ６））について、メニンへの結合を確認した。最も強力な化合物は化合物４２であった（ＩＣ５０＝５０μＭ）。
【０１０４】
【化９】
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【０１０５】
化合物４３の類似体を、メニンとＭＬＬとの相互作用の阻害におけるその効力を改善するために評価した。１５種類の化合物をテストした。もっとも活性の高い化合物（６Ｇ１０＿３）は、もとのヒットの約４倍の活性を有していた（表４）。
【０１０６】
【表１３】
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【０１０７】
【表１４】
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【０１０８】
【表１５】
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【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】Ａは、化合物１（ＣＣＧ２１３９７、チエノピリミジン・クラス）のメニンとの結合を、８０μＭの化合物１および２．５μＭのメニンの場合について測定したＳＴＤ（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ、飽和移動差）実験によって示している。参照１Ｄスペクトル（黒色）は、芳香族性および脂肪族性を有する別々の領域を示している。ＳＴＤスペクトル（赤色）は、化合物１がメニンに結合することを示している。競合（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）ＳＴＤスペクトル（青色）は、２５μＭのＭＬＬペプチドの存在下ではＳＴＤ効果が減少することを示し、これによって、化合物１がメニンと特異的に結合することが確認できる。スペクトル上に示したリガンドからのＨシグナルおよびＣＨ３シグナルを、構造上に符号をつけて示す。Ｂは、化合物３３（ＣＣＧ２３６６８、ベンゾジアゼピン・クラス）のメニンとの結合を、１００μＭの化合物３３および２．５μＭのメニンの場合について測定したＳＴＤ実験によって示している。参照１Ｄスペクトル（黒色）は、該化合物の脂肪族性を有する領域の場合である。ＳＴＤスペクトル（赤色）からは、メニンに結合することが確認できる。競合ＳＴＤスペクトル（青色）は、２５μＭのＭＬＬペプチドの存在下ではＳＴＤ効果が減少することを示し、これによって、化合物３３がメニンと特異的に結合することが確認できる。リガンドのメチル基からのシグナルを、Ｍ１、Ｍ２、および、Ｍ１’、Ｍ２’として示す（２組のピークは、互いに異なる立体異性体から得られたピークである）。不純物（アステリスクをつけて示す）に対応するピークの強度は、ＭＬＬを加えても影響されない。
【図２】Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４）およびベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３３）で処理し２４時間インキュベーションした後の、Ｆｌａｇ−ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞における共免疫沈降実験を示している。Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−４−０２０＝化合物６７、および、ＡＳ−１−１９＝化合物７０）で処理し６時間インキュベーションした後の、Ｆｌａｇ−ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞における、共免疫沈降実験を示している。
【図３】ヒト肝臓（ＨｅｐＧ２）株化細胞およびヒト腎臓（ＨＫ−２）株化細胞における、ベンゾジアゼピン（ＣＣＧ−２１１９６＝化合物３３）化合物およびチエノピリミジン（ＣＣＧ−２１３９７＝化合物１、および、ＣＣＧ−２１３９７−２５＝化合物４）化合物のＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【図４】Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４、および、ＭＩ−１−２５＝化合物４）で処理した、異なるＭＬＬ転座（ＭＶ４；１１―ＭＬＬ−ＡＦ４；ＭＬ−２―ＭＬＬ−ＡＦ６；ＫＯＮＰ８―ＭＬＬ−ＥＮＬ；Ｋａｒｐａｓ４５―ＭＬＬ−ＡＦＸ）を有するヒト白血病株化細胞における、ＡＴＰに基づく発光細胞生存率アッセイを示している。Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（ＡＳ−１−１９＝化合物７０）を使用した場合の、複数のＭＬＬ転座（ＭＬＬ−ＡＦ４融合タンパク質を有するＭＶ４；１１、および、ＭＬＬ−ＡＦ９融合タンパク質を有するＭｏｎｏＭａｃ６）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【図５】Ａは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２、および、ＭＩ−８＝化合物３９）で処理した、異なるＭＬＬ転座（ＭＶ４；１１―ＭＬＬ−ＡＦ４；ＫＯＮＰ８―ＭＬＬ−ＥＮＬ；ＴＨＰ−１―ＭＬＬ−ＡＦ９）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。Ｂは、最も強力なベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２−１２＝化合物８６）を用いた場合の、複数のＭＬＬ転座（ＭＬＬ−ＡＦ４融合タンパク質を有するＭＶ４；１１、および、ＭＬＬ−ＡＦ９融合タンパク質を有するＭｏｎｏＭａｃ６）を有するヒト白血病株化細胞における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【図６】Ａは、チエノピリミジン化合物（化合物６４＝ＭＩ−１、化合物４＝ＭＩ−１−２５、および、化合物６３＝ＭＩ−１−７２）を用いた、ＭＬＬではない白血病株化細胞（ＡＭＬ１−ＥＴＯ融合タンパク質を有するＫａｓｕｍｉ−１、および、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質を有するＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。Ｂは、最も強力なチエノピリミジン化合物（化合物７０＝ＡＳ−１−１９）を用いた場合の、ＭＬＬではない白血病株化細胞（ＡＭＬ１−ＥＴＯ融合タンパク質を有するＫａｓｕｍｉ−１、および、ＣＢＦβ−ＳＭＭＨＣ融合タンパク質を有するＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。Ｃは、最も強力なベンゾジアゼピン化合物（化合物８６＝ＭＩ−２−１２）を用いた場合の、ＭＬＬではない白血病株化細胞（Ｋａｓｕｍｉ−１、および、ＭＥ−１）における、ＭＴＴ細胞生存率アッセイを示している。
【図７】チエノピリミジン化合物（化合物７０＝ＡＳ−１−１９）を用いた場合の、ＭＬＬ−ＡＦ９、ＭＬＬ−ＥＮＬ、および、Ｅ２Ａ−ＨＬＦ（ｐｒｏ−Ｂ細胞白血病、これを負のコントロールとして使用する）を形質導入したマウス骨髄における、ＭＴＴ生存率アッセイを示している。
【図８】チエノピリミジン化合物（化合物６４＝ＭＩ−１、化合物４＝ＭＩ−１−２５）およびベンゾジアゼピン化合物（化合物３２＝ＭＩ−２）を用いた、ＭＬＬ融合白血病株化細胞（ＭＬＬ−ＡＦ４を有するＭＶ４；１１およびＭＬＬ−ＡＦ９を有するＴＨＰ−１）における、アネキシンＶ／ＰＩフローサイトメトリー実験を示している。
【図９】ＭＬＬ−ＡＦ９を形質移入したＨＥＫ２９３細胞において実施したルシフェラーゼ・レポーターアッセイを示し、Ａは、チエノピリミジン化合物（ＭＩ−１＝化合物６４、ＲＪＳ−３−０８０をネガティブコントロールとして使用した）によるプロモーターＨｏｘａ９のトランス活性化の阻害を示している。Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２は投与量に依存して阻害する。ＭＩ−８＝化合物３９を負のコントロールとして使用した）を用いた場合の効果を示している。
【図１０】ｑＲＴ−ＰＣＲ実験によって測定した、ＭＬＬ下流標的（ＴＨＰ−１白血病細胞におけるＨｏｘａ９およびＭｅｉｓ１）の発現レベルに対する各化合物の効果を示し、Ａは、チエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−３−０８２＝化合物６５、ＡＳ−１−１９＝化合物７０、ＭＩ−１−７２＝化合物６３）による、Ｈｏｘａ９の発現の下方制御を示している。Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２−１２＝化合物８６）による、Ｈｏｘａ９およびＭｅｉｓ１の発現の下方制御を示している。
【図１１】フローサイトメトリー法を用いてＣＤ１１ｂの発現レベルによって測定した、ＴＨＰ−１白血病細胞の分化を示し、Ａは、チエノピリミジン化合物（ＲＪＳ−４−０２０＝化合物６７、ＡＳ−１−１９＝化合物７０）を用いた場合の効果である。Ｂは、ベンゾジアゼピン化合物（ＭＩ−２＝化合物３２）を用いた場合の効果である。
【図１】
2013503906.tif 000028
【図２】
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【図３】
2013503906.tif 000030
【図４】
2013503906.tif 000031
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2013503906.tif 000036
【図１０】
2013503906.tif 000037
【図１１】
2013503906.tif 000038
【手続補正書】
【提出日】平成24年5月8日(2012.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）次式で表わされる構造を有する化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩
【化１】
2013503906.tif 000039
（ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立的に、Ｈ、置換型もしくは非置換型アルキル、置換型もしくは非置換型アルコキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ａｔ）、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、置換型もしくは非置換型アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、チエノピリミジン環系に縮合される、あるいは付加される炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有し；ＺはＳ、Ｏ、ＮＨ、または、ＣＨ−ＣＨであり；Ｗは存在または非存在であって、かつ、ＮＨ、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）、Ｏ、または、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ（ｎ＝０〜１０）であり；ＸおよびＹはそれぞれ独立的にＮまたはＣであり；ｍは０〜３である）
または、
（ｂ）次式で表わされる構造を有する化合物または該化合物の薬学的に許容可能な塩
【化２】
2013503906.tif 000040
（ただし、式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、および、Ｒ４は、それぞれ独立的に、Ｈ、置換型もしくは非置換型アルキル、置換型もしくは非置換型アルコキシ、ハロゲン、ケトン、環状炭素、芳香族環、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、炭素と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する複素環式非芳香族環（該環員原子は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体で置換されていなくても置換されていてもよい）、ベンゾジアゼピン環系に縮合した炭素環式芳香族環もしくは炭素環式非芳香族環（上記チエノピリミジン環系は、アルキル、アリール、ハロゲン、水素結合供与体、もしくは、水素結合受容体で置換されていない、あるいは、置換されている）、または、炭素原子と１つ以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄とを環員原子として有する炭素環式芳香族環もしくは複素環式芳香族環（該環員原子は、別の芳香族環、水素結合供与体、もしくは水素結合受容体に縮合している）を含有する）、
を含有する、薬剤。
【請求項２】
上記構造が、化合物１〜８６からなる群より選択される、あるいは、これらの化合物の任意の構造的類似体である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
白血病の治療のために、請求項１または２に記載の組成物を被験体に投与することを含む、方法。
【請求項４】
請求項１または２に記載の化合物の使用方法。
【請求項５】
請求項１または２に記載の化合物を、白血病の治療の用途に用いる使用方法。
【請求項６】
上記被験体がヒトである、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
上記被験体が非ヒトの動物である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
上記白血病がＡＭＬまたはＡＬＬを包含する、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ａ）ｉ）ＭＬＬまたはＭＬＬ融合タンパク質とメニンとを含有するサンプル、および、
ｉｉ）請求項１に記載の薬剤を含有し、ＭＬＬまたはＭＬＬ融合タンパク質とメニンとの相互作用を阻害するように構成された組成物を準備し、
ｂ）上記組成物を上記サンプルに投与し、
ｃ）上記ＭＬＬと上記メニンとの相互作用、または、上記ＭＬＬ融合タンパク質と上記メニンとの相互作用を阻害することを含む、ＭＬＬとメニンとの相互作用を阻害する方法。
【請求項１０】
上記組成物が、化合物１〜８６からなる群より選択される化合物を含有する、請求項９に記載の方法。
【国際調査報告】
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