(57)【要約】本発明は、低分子量ヒアルロン酸およびその製薬上許容可能な塩に基づく軟部組織充填材、例えば皮膚および皮下充填材、ならびにその製造方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）（ｉ）約０．２０ＭＤａ〜約０．９９ＭＤａの重量平均分子量を有する第一低分子量ヒアルロン酸（ＨＡ）物質、および（ｉｉ）約１．０ＭＤａ〜約４．０ＭＤａの重量平均分子量を有する第二高分子量ＨＡ物質の架橋混合物を含む架橋ＨＡ構成成分を含み、
該第二高分子量ＨＡ物質の重量平均分子量は、該第一低分子量ＨＡ物質の少なくとも２倍であり、
該ＨＡ物質はヒアルロン酸または１種もしくはそれ以上のその塩類であり、
該架橋ＨＡ構成成分は約１５．０ｍｇ／ｇ〜約２０．０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有し、
該架橋は架橋剤の使用により達成され、
（２）ＨＡまたはその塩である非架橋ＨＡ構成成分であって、少なくとも約１．０ＭＤａの重量平均分子量を有し、約５．０％ｗ／ｗ未満の量で存在する非架橋ＨＡ構成成分を含む、軟部組織用充填材組成物。
【請求項２】
該非架橋ＨＡ構成成分が少なくとも約２．０ＭＤａの重量平均分子量を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
該第一低分子量ＨＡ物質の重量平均分子量が少なくとも約５００，０００Ｄａである、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
該第二高分子量ＨＡ物質の重量平均分子量が少なくとも約１．０ＭＤａである、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
該第一低分子量ＨＡ物質の重量平均分子量が約８００，０００Ｄａである、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
該混合物が約５０重量％の該第一低分子量ＨＡ物質を含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
該混合物が少なくとも約７０重量％の該第一低分子量ＨＡ物質を含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
該混合物が約９０重量％の該第一低分子量ＨＡ物質を含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
該架橋剤が、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタン、１，４−ビスグリシジルオキシブタン、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレンおよび１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサン、および１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテルからなる群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
該架橋ＨＡ構成成分が約１５．０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
該架橋ＨＡ構成成分が約１７．５ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
該非架橋ＨＡ構成成分が約１．０％ｗ／ｗ未満の量で存在する、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
該非架橋ＨＡ構成成分が約１０．０ｍｇ／ｇ〜約５０．０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
該架橋ＨＡ構成成分と組み合わされる少なくとも１種の麻酔剤をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
第一低分子量ＨＡ物質および第二高分子量ＨＡ物質の混合物を含む架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）成分であって、該物質はヒアルロン酸またはその塩であって、架橋剤で架橋され、該架橋ＨＡ構成成分は約１５ｍｇ／ｇ〜約２０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有し、該混合物は少なくとも５０重量％の該低分子量ＨＡ物質を含有し、
該第二高分子量ＨＡ物質の重量平均分子量が該第一低分子量ＨＡ物質の重量平均分子量の少なくとも２倍であり、
少なくとも約２．４ＭＤａの重量平均分子量を有し、約１０ｍｇ／ｇ〜約５０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する非架橋ヒアルロン酸成分またはその塩を含み、
該非架橋ＨＡ成分は、約５．０％ｗ／ｗ未満の量で存在し、
該架橋ＨＡ構成成分と組み合わされる少なくとも１種の麻酔剤を含む、軟部組織用充填材組成物。
【請求項１６】
該混合物が少なくとも７０重量％の該第一低分子量ＨＡ物質を含有する、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
該混合物が約９０重量％の該第一低分子量ＨＡ物質を含有する、請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】
軟部組織用充填材組成物の製造方法であって、
第一低分子量ＨＡ物質および第二高分子量ＨＡ物質の混合物を含む架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを調製するステップであって、該第二高分子量ＨＡ物質は該第一低分子量物質の少なくとも２倍の重量平均分子量を有し、該混合物は約５０重量％を超える該第一低分子量ＨＡ物質を含み、該ＨＡ物質はヒアルロン酸または１種もしくはそれ以上のその塩類であるステップと、
該架橋ＨＡゲル中のＨＡ濃度を約１５．０ｍｇ／ｇ〜約２０．０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度に調整するステップと、
少なくとも約１．０ＭＤａ〜約４．０ＭＤａの重量平均分子量を有し、約１０ｍｇ／ｇ〜約５０ｍｇ／ｇの濃度を有する非架橋ＨＡ物質またはその塩を含む溶液を調製するステップと、
該ゲルを該溶液と組み合わせるステップとを包含する、方法。
【請求項１９】
該混合物が約７０重量％を超える該第一低分子量ＨＡ物質を含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
該混合物が約９０重量％を超える該第一低分子量ＨＡ物質を含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１種の麻酔剤を該ゲルと組み合わせるステップをさらに包含する、請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも１種の麻酔剤を該ゲルと組み合わせるステップがゲルと溶液を組み合わせるステップの前に実施される、請求項２１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、注射用軟部組織充填材に関し、より具体的には、改良された特性を有するヒアルロン酸ベースの皮膚および皮下充填材に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、表皮および真皮からなる。これらの層の下に、角皮下層があり、これは通常は皮膚の一層として分類されない。角皮下層は、一般に、皮下脂肪層または皮下組織とも呼ばれる。最外部表皮は、下にある基底膜を伴う層化扁平上皮で構成されている。それは血管を含有せず、真皮からの拡散により栄養を得ている。真皮を構成する細胞の主な種類はケラチノサイトであり、メラノサイトおよびランゲルハンス細胞も存在する。皮膚のこの層は、身体における水分保持に、そして他の有害化学物質および病原体の排除に関与する。
【０００３】
真皮は表皮の下にあり、多数の構造、例えば血管、神経、毛包、平滑筋、腺およびリンパ組織を含有する。真皮（またはｃｏｒｉｕｍ（真皮））は、典型的には、３〜５ｍｍ厚であり、ヒト皮膚の主要成分である。それは、結合組織、主に支持を提供するコラーゲン繊維、ならびに柔軟性を提供する弾性組織の網状構造で構成される。主な細胞型は、繊維芽細胞、脂肪細胞（脂肪貯蔵）およびマクロファージである。
【０００４】
角皮下層は、真皮の下にある。その目的は、皮膚を下にある骨および筋肉と付着させること、ならびにそれに血管および神経を供給することである。それは、疎性結合組織およびエラスチンからなる。主要細胞型は、繊維芽細胞、マクロファージおよび脂肪細胞である。角皮下層は、体脂肪の５０％を含有する。脂肪は、身体のための詰め物および断熱材として役立つ。ヒアルロン酸（ＨＡ）は真皮組成物の一部であり、細胞外マトリックスの主要成分である。
【０００５】
顔面加齢は、いくつかの因子：すなわち、皮膚内の固有の変化、重力の作用、皮膚に作用する顔面筋（動線）、軟部組織損失または移動、ならびに骨損失および組織弾性の損失の結果として起こる。皮膚は、表皮が薄くなり始めると老化して、真皮との連結を生じて、平坦になる。ヒトが年をとるとコラーゲンが減少し、皮膚膨圧を提供するコラーゲンの束が緩み、強度を失う。皮膚が弾性を失うと、引っ張りに耐えることが十分にできなくなる。重力、筋肉の引っ張り及び組織変化が相まって、皮膚は皺を生じ始める。水分損失、ならびに細胞間の結合の破壊も皮膚のバリア機能を低減し、これが皮膚の孔サイズを増大させ得る。
【０００６】
ヒトが年をとると、顔は容積、軟部組織および脂肪を失う。顎の垂れ肉および線の外観は、通常は、顔面組織の下垂、ならびに下にある筋肉が皮膚に付着される領域の褶曲により引き起こされる。軟部組織の低減の一部として、加齢顔面はよりくぼんで見える。
【０００７】
さらに具体的には、種々の顔面領域、例えば額、眼、鼻、顔面中央部および顔面下部において、加齢に関連する変化は十分に実証されている。額領域では、額および眼窩上隆起は経時的に垂れ下がり、これが眉毛を下げて、上眼瞼皮膚に襞（隆起）を生じさせる。眼窩上隆起および眼瞼をこれらの変化と反対に作用するよう上に持ち上げようとすると、額線が現われる。眼はしばしば、加齢の兆候を示す第一の顔面特徴である、ということは周知である。皮膚は眼の周囲ではより薄いため、眼の周囲の皮膚変化は顔面の残りの部分より早く起こる。眼の周囲の皮膚は含有する腺が少なく、絶え間なく瞬きし、眼を細め、眼を擦り、引っ張ることをしがちである。頬が垂れ下がり始めて、鼻唇褶襞を生じると、顔面中央部は老化する。鼻唇褶襞は、鼻の側面から口角に走る線である。これらの褶襞は、顔面充填材で処置されてきた。鼻領域では、加齢によって鼻は長くなる。伸長の一般的原因は、軟部組織が薄くなることならびに弾性の損失であって、これが「先端部の下垂」および骨の露呈を引き起こして、新規の大きな鼻を生じる。顔面下部領域では、顔面が老化すると、顔面組織は下降する。これが、いわゆる「笑い皺」を生じる。
【０００８】
この領域の褶襞および線は、顔面充填材で処置されてきた。さらに顔面上を下がると、口角が垂れ下がり得るし、顎の垂れ肉の下降は、しばしば「マリオネット」ラインと称される褶襞を生じ得る。さらに、顔面筋が下顎骨に付着する下顎に沿った固定点周囲で頬がたるむと、顎の垂れ肉が生じる。顔面筋は、広頸筋と呼ばれるシートとして首の方に下がり続ける。この筋肉は、しばしば、首の中央で隙間を生じて、２つの帯域を作る。
【０００９】
顔面における組織損失を回復するために、種々の注射剤が用いられてきた。従来、注射用コラーゲンは、顔面の皺、線および瘢痕を充填するための軟部組織充填材として用いられてきた。コラーゲンは、身体の種々の部分、例えば皮膚、腱および靭帯を支持する天然タンパク質である。脂肪注入は、容積を付加し、皺、線を充填し、唇を増強するために長年用いられてきた。脂肪注入は、患者の身体の一部（腹部、大腿または臀部）から脂肪を得て、それを顔面皮膚の下に注入することを伴う。
【００１０】
目下、美顔用皮膚充填材の最も一般に用いられる構成成分の１つであるヒアルロン酸（ＨＡ）は、容積を付加し、皺および線を最小限にするために老化中の皮膚に導入される。ヒアルロン酸は、天然の水溶性多糖、具体的にはグリコサミノグリカンであって、これは、細胞外マトリックスの主要成分であり、動物組織中に広範に分布される。すべての種および組織における同一構造のヒアルロン酸が、この多糖を、健康および医療における生体材料として用いるための理想的物質にする。ヒアルロン酸は、ヒト身体中の多数の場所に存在する。それは、皮膚に容積を、眼に形状を、そして関節に弾性を与える。
【００１１】
動物由来のヒアルロン酸とは異なり、非動物由来のヒアルロン酸は動物タンパク質を含まない。このことは、動物ベースの疾患伝染または動物タンパク質に対するアレルギー反応の発症の危険を限定する。
【００１２】
ヒアルロナンとしても公知のＨＡは、優れた生体適合性を有し、コラーゲンとは違って、移植前に如何なる皮膚テストも必要としない。さらに、ＨＡは、多量の水と結合する能力を有しするため、自身を軟部組織の優れた増容積剤とする。
【００１３】
理想的ｉｎ  ｖｉｖｏ特性ならびに理想的外科的使用可能性を示すＨＡベースの充填材の開発は、困難であることが証明されている。例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏで望ましい安定特性を示すＨＡベースの充填材は、高粘性であるので、ファインゲージ針を通した注射は難しい。逆に、ファインゲージ針を通して比較的容易に注入されるＨＡベースの充填材は、しばしば、ｉｎ  ｖｉｖｏで相対的に低い安定特性を有する。
【００１４】
この問題を克服するための一方法は、架橋ＨＡベースの充填材の適切な設計を行うことである。架橋ＨＡは、適切な反応条件下で非架橋ＨＡを架橋剤と反応させることにより形成される。
【００１５】
高粘性を有するＨＡベースの皮膚充填材、例えば高度に架橋され、および／または高分子量ＨＡから作られ、および／または高ＨＡ濃度を有するものは身体中に長く存続する傾向がある、ということが一般的に受け入れられている。逆に、低粘性を有するＨＡベースの皮膚充填材、例えばより軽度に架橋され、および／または低分子量ＨＡから作られ、および／または低ＨＡ濃度を有するものは、身体中でより短い持続期間を有し得る、ということが一般的に受け入れられている。当然、針による高粘性物質の注入は相対的により難しく、一般的に、相対的に低粘性物質の注入より小さいゲージの針（例えば、２１Ｇ、２３Ｇ対２７Ｇ、３０Ｇ）を要する。高ゲージ針（すなわち、細い針）を通して注入することが容易であり、且つ身体中の持続期間延長を示すＨＡベースの組成物を開発することの難しさは、立証されている。驚くことに、本発明の長期持続性の高い注射可能組成物は、相対的に低濃度で高いパーセンテージの相対的低分子量ＨＡを含む。
【００１６】
増強された寿命を有し、微細な針を通して押出可能であり、したがって、注入中に患者にとってより快適で、医者への来診回数が少なくてすむ注射用ＨＡベースの皮膚充填材を提供することにより、本発明はこれらのおよび他の問題を解決する。
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびＨＡの製薬上許容可能な塩、例えばヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）をベースにした軟部組織充填材、例えば皮膚および皮下充填材に関する。本発明のいくつかの態様では、治療的有効量の少なくとも１種の麻酔剤、例えばリドカイン（これに限定されない）を含むＨＡベースの組成物が提供される。
【００１８】
本発明のＨＡベースの組成物は、静止時に相対的に高粘性であるが、しかし高剪断速度下で低粘性を有し、故に細い（すなわち、高ゲージ、例えば２７Ｇ、３０Ｇ、３１Ｇ、３３Ｇ）針を通した場合でさえ注入を助長し、そして身体中での寿命増大を示す。組成物は、例えば組成物が身体中に導入される場所で、種々の因子によって、４ヶ月まで、６ヶ月、１２ヶ月またはそれ以上、存続し得る。このようなＨＡベースの組成物の製造方法も、このような方法により製造される製品と同様に提供される。
【００１９】
本発明の広範な一面において、一般的に架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）成分および非架橋ヒアルロン酸成分を含む軟部組織用充填材組成物が提供される。架橋ＨＡ構成成分それ自体は、第一低分子量ＨＡ物質および第二高分子量ＨＡ物質の混合物を含む。第一分子量ＨＡ物質は、相対的低分子量を有し、第二分子量ＨＡ物質は相対的高分子量を有する。
【００２０】
一般的に、架橋ＨＡ構成成分は、５０重量％を超える、例えば少なくとも７０重量％、例えば約９０重量％の第一低分子量ＨＡを含む。
【００２１】
非架橋ＨＡ構成成分は、相対的高分子量ＨＡ物質、例えば少なくとも約１．０ＭＤａの分子量を有するＨＡであり、約１０％ｗ／ｗ未満、例えば５．０％ｗ／ｗ未満、例えば約２．０％ｗ／ｗ未満、例えば約１．０％ｗ／ｗ未満、例えば約０．９５％ｗ／ｗの量で組成物中に存在し得る。
【００２２】
架橋剤は、任意の好適な架橋剤であり得るが、特定の態様では、架橋剤は、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタン、１，４−ビスグリシジルオキシブタン、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレンおよび１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサン、および１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテルからなる群から選択される。
【００２３】
いくつかの態様では、組成物はさらに、少なくとも活性剤、例えば麻酔剤を上記架橋ＨＡ構成成分と組合せて含む。
【００２４】
架橋ＨＡ構成成分は、少なくとも１０．０ｍｇ／ｇの総ＨＡ濃度を有する。ある具体的態様では、架橋ＨＡ構成成分は、少なくとも１０．０ｍｇ／ｇ、例えば約１５．０ｍｇ／ｇ、約１７．０ｍｇ／ｇ、約１７．５ｍｇ／ｇまたは約２０．０ｍｇ／ｇ、または約２５．０ｍｇ／ｇの総ＨＡ濃度を有する。
【００２５】
軟部組織用充填材組成物の製造方法も提供される。一態様では、軟部組織用充填材組成物の製造方法は、一般的に、第一分子量ＨＡ物質および第二の異なる、例えばより高い分子量のＨＡ物質の混合物を含む架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルを提供するステップ、相対的に高分子量の非架橋ヒアルロン酸の別個の溶液を調製するステップ、そして架橋ゲルを少量の非架橋溶液と合わせるステップを包含する。組成物は、上記架橋ＨＡ構成成分と組合せされる少なくとも１種の麻酔剤を含み得る。架橋ＨＡ構成成分は、少なくとも１０ｍｇ／ｇの総ＨＡ濃度を有する。
【００２６】
麻酔剤を含む本発明の態様では、麻酔剤はリドカインを含み得る。さらなる一態様では、麻酔剤の量は、組成物の約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度で存在する。さらに別の態様では、麻酔剤は、組成物の約０．２重量％〜約１．０重量％の濃度で存在する。一態様では、麻酔剤はリドカインであり、組成物の約０．３重量％の濃度で存在する。
【００２７】
さらに別の態様では、組成物は、例えば２５℃で、円錐／平板形状（４ｃｍ／２°）を用いて、流量計で約５Ｈｚで測定されるとき、約５０Ｐａ＊ｓ〜約４５０Ｐａ＊ｓの複素粘度を有する。
【００２８】
一態様では、ＨＡ構成成分は、ゲル、例えば粘着性水和ゲルである。一態様では、ＨＡ構成成分は、約１０％の非架橋ＨＡに対して約１％以下の架橋ＨＡゲルである。
【００２９】
さらに他の態様では、ＨＡ構成成分は、約１０％を超える、例えば約１５％を超える、例えば約２０％まで、またはそれを超える非架橋ＨＡを含む。
【００３０】
１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）で架橋されるＨＡ構成成分（該ＨＡ構成成分は約５％未満、例えば約２％の架橋度を有する）、ならびに軟部組織用充填材組成物の約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度を有する麻酔剤成分（該麻酔剤はリドカインである）を含む軟部組織用充填材組成物が、本明細書中でさらに記載される。
【００３１】
さらに本明細書中で記載されるのは、軟部組織用充填材組成物の製造方法であって、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタン、１，４−ビスグリシジルオキシブタン、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレンおよび１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサン、および１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテルまたはその組合せからなる群から選択される少なくとも１つの架橋剤で架橋されるＨＡ構成成分を提供するステップ；上記ＨＡ構成成分のｐＨを約７．２より高いｐＨに調整するステップ；そして少なくとも１種の麻酔剤を含有する溶液を、調整ｐＨを有するＨＡ構成成分に加えて、ＨＡベースの充填材組成物を得るステップを包含する方法である。
【００３２】
別の態様では、組成物は、例えばオートクレーブ処理により滅菌されて、滅菌組成物を生成するが、この場合、滅菌組成物は、周囲温度で少なくとも約１２ヶ月、例えば少なくとも１８ヶ月、少なくとも約２４ヶ月またはそれ以上安定である。
【００３３】
さらなる別の態様では、調整ｐＨは、約７．５より高い。別の態様では、当該方法は、少なくとも１種の麻酔剤を含有する溶液を加えるステップの間またはその後に、ＨＡ構成成分を均質化するステップをさらに包含する。さらなる一態様では、均質化のステップは、組成物を制御された剪断を伴う混合に供するステップを包含する。
【００３４】
別の態様では、ＨＡ構成成分を提供するステップは、乾燥ＮａＨＡ物質を提供し、アルカリ性溶液中で乾燥ＮａＨＡ物質を水和して、アルカリ性の非架橋ＮａＨＡゲルを得ることを包含する。さらに別の態様では、アルカリ性ＮａＨＡゲルは、約８．０より高いｐＨを有する。さらに別の態様では、ｐＨは約１０より高い。
【００３５】
さらなる一態様では、ＨＡ構成成分は約２０％未満の非架橋ＨＡを含み、ＨＡ構成成分の架橋部分は、約６％未満または約５％未満の架橋度を有する。
【００３６】
さらに、９０％ｗ／ｗまでの低分子量ＨＡおよび１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）で架橋される約１０％ｗ／ｗ以下の高分子量ＨＡを含む架橋ヒアルロン酸（ＨＡ）構成成分であって（該架橋ＨＡ構成成分は約５％未満の架橋度を有する）、約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度を有するリドカインのような麻酔剤構成成分、ならびに５．０％ｗ／ｗ未満の高分子量ＨＡの非架橋構成成分を含む軟部組織用充填材組成物が、本明細書中で記載される。
【００３７】
本発明はさらに、軟部組織用充填材組成物の製造方法を提供する。いくつかの態様では、乾燥ＮａＨＡ物質を提供するステップ、そしてアルカリ性溶液中で乾燥ＮａＨＡ物質を水和して、アルカリ性の非架橋ＮａＨＡゲルを得るステップ；ＢＤＤＥでＮａＨＡゲルを架橋して、約５％未満の架橋度および約７．２より高いｐＨを有する架橋アルカリ性ＨＡ構成成分を生成するステップ；０．３％リドカインＨＣｌを含有する溶液を調整ｐＨを有するＨＡ構成成分に加えて上記ＨＡベースの充填材組成物を得るステップ；ＨＡベースの充填材組成物を均質化し、それにより均質化ＨＡベースの充填材組成物を生成するステップ；所定量の高分子量ＨＡ非架橋ゲルを組成物に加えるステップ、そして均質化ＨＡベースの充填材組成物を滅菌して、それにより滅菌ＨＡベースの充填材組成物を生成するステップを包含する方法が提供される。
【００３８】
定義
任意の用語は、本明細書中で用いる場合、以下で詳述するような下記の定義を意味するよう意図される。用語の定義が当該用語の一般に用いられる意味から逸脱する場合には、他に別記しない限り、以下で提供される定義を利用することを出願人は意図する。
【００３９】
本明細書で用いられる、オートクレーブ安定性の、またはオートクレーブ処理に対して安定な、とは、効果的なオートクレーブ滅菌後の以下の面の少なくとも１つ、好ましくはそのすべてを当該製品または組成物が保持するような、分解に耐性である製品または組成物を表している：透明な外観、ｐＨ、押出力および／または流動学的特質、ヒアルロン酸（ＨＡ）濃度、滅菌性、浸透性およびリドカイン濃度。
【００４０】
「約」という用語は、数値に関しては、当業者に容易に理解されるであろうし、好ましくは、具体的値が＋／−１０％にまで修正され得る、ということを意味する。範囲の端点に関しては、修飾語「約」は、好ましくは、下方端点が１０％低減され、上方端点が１０％増大され得る、ということを意味する。本明細書に記載される各数値または範囲は絶対値であり得て、すなわち修飾語「約」は削除され得る、ということも意図される。
【００４１】
ＨＡの「分子量」を表す本明細書中の数字はすべて、ダルトンの重量平均分子量（Ｍｗ）を示すと理解されるべきである。
【００４２】
ＨＡの分子量は、以下のＭａｒｋ  Ｈｏｕｗｉｎｋ関係の公式を用いる固有粘度測定から計算される：
固有粘度（ｍ３／ｋｇ）＝９．７８×１０−５×Ｍｗ０．６９０
【００４３】
固有粘度は、欧州薬局方で定義された手法（ＨＡモノグラフ  Ｎ°１４７２，０１／２００９）に従って測定される。
【００４４】
高分子量ＨＡは、本明細書中で用いる場合、少なくとも約１００万ダルトン（ｍｗ≧１０６Ｄａまたは１ＭＤａ）〜約４．０ＭＤａの分子量を有するＨＡ物質を表す。例えば、本発明の組成物中の高分子量ＨＡは、約１．５ＭＤａ〜約３．０ＭＤａの範囲の分子量を有し得るか、あるいは高分子量ＨＡは、約２．０ＭＤａの重量平均分子量を有し得る。別の例では、高分子量ＨＡは、約３．０ＭＤａの分子量を有し得る。
【００４５】
低分子量ＨＡは、本明細書中で用いる場合、約１．０ＭＤａ未満の分子量を有するＨＡ物質を表す。低分子量ＨＡは、約２００，０００Ｄａ（０．２ＭＤａ）〜１．０ＭＤａ未満、例えば約３００，０００Ｄａ（０．３ＭＤａ）〜約７５０，０００Ｄａ（０．７５ＭＤａ）、０．９９ＭＤａまででこれを越えない分子量を有し得る。
【００４６】
好ましくは、低分子量および高分子量ＨＡ物質の分子量分布間に重複は認められない。
【００４７】
好ましくは、低分子量ＨＡおよび高分子量ＨＡの混合物は、二峰性分子量分布を有する。混合物は、多モード分布も有し得る。
【００４８】
本発明の一面において、組成物は、高分子量構成成分および低分子量構成成分を有するＨＡを含み、当該高分子量構成成分は、低分子量構成成分の重量平均分子量の少なくとも２倍の重量平均分子量を有する。
【００４９】
例えば、組成物中の高分子量ＨＡ対低分子量ＨＡの分子量比は、少なくとも２：１である。
【００５０】
例えば、本発明のこの面に従う組成物は、約５００，０００Ｄａの重量平均分子量を有する低分子量構成成分、ならびに約（または少なくとも約）１．０ＭＤａの重量平均分子量を有する高分子量構成成分を含み得る。
【００５１】
別の例では、本発明による組成物は、約８００，０００Ｄａの重量平均分子量を有する低分子量構成成分、ならびに約（または少なくとも約）１．６ＭＤａの重量平均分子量を有する高分子量構成成分を含み得る。
【００５２】
本発明の同様の一面では、ＨＡベースの組成物の製造方法であって、低分子量ＨＡ物質を選択するステップ、ならびに低分子量物質の分子量の少なくとも２倍の大きさの分子量を有する高分子量ＨＡ物質を選択するステップ、これらの高および低分子量物質を組み合わせるステップ、そしてこれらの組合せ物質を好適な架橋剤で架橋するステップを一般的に包含する方法が提供される。
【００５３】
架橋度は、本明細書中で用いる場合、個々のＨＡポリマー分子またはモノマー鎖を恒久的構造に、あるいは本明細書中に開示されるように、軟部組織用充填材組成物に接合する分子間連結を意味する。さらに、本発明の開示の目的のための架橋度はさらに、ＨＡベースの組成物の架橋部分内の架橋剤対ＨＡモノマー単位の重量％比と定義される。それは、架橋剤対ＨＡモノマーの重量比（架橋剤：ＨＡモノマー）により測定される。
【００５４】
非架橋ＨＡは、本明細書中で用いる場合、架橋されないか、または極くわずかに架橋される（極く低度の架橋）個々のＨＡポリマー分子を指す。非架橋ＨＡは、一般的に、水溶性のままである。
【００５５】
本明細書中で用いる「粘着性の」とは、その形状を保持し、圧迫に耐えるＨＡベースの組成物の能力である。本発明のいくつかの態様では、粘着性は、ゲルの小片に分解することなく、その水分量を少なくとも１回吸収するゲルの能力を包含する。粘着性は、他の因子の中でも特に、初期非架橋ＨＡの分子量比、架橋度、架橋後の、または組成物に加えられる残留非架橋ＨＡの量により影響を受ける。
【００５６】
詳細な説明
本発明の開示は、一般的に、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびＨＡの製薬上許容可能な塩、例えばヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）をベースにした軟部組織充填材、例えば注射用皮膚および皮下充填材に関する。一面では、本明細書中に記載されるＨＡベースの組成物は、治療的有効量の少なくとも１種の麻酔剤、例えばリドカインを含む。本発明のＨＡベースの組成物は、少なくとも１種の麻酔剤、例えばリドカインを含み得る。これらの組成物の製造方法も提供される。
【００５７】
本発明の一面において、組成物は、有効オートクレーブ滅菌および／または長期貯蔵後の以下の面のうちの少なくとも１つ、またはそのすべてを保持する：透明な外観、患者に用いるためのｐＨ、押出力および／または流動学的特質、ＨＡ濃度、滅菌性、浸透性およびリドカイン濃度。このようなＨＡベースの組成物を調製する方法または過程も、このような方法または過程により製造される製品と同様に提供される。
【００５８】
本明細書中で用いる「ヒアルロン酸（ＨＡ）」とは、そのヒアルロン酸塩のいずれかを意味し、例としてはヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウムおよびその組合せが挙げられるが、これらに限定されない。ＨＡおよびその製薬上許容可能な塩はともに、本発明に用いられ得る。
【００５９】
一般的に、本明細書中に記載される組成物中のＨＡの濃度は、好ましくは少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、そして約４０ｍｇ／ｍＬまでである。
【００６０】
ある態様では、本発明の組成物の架橋成分中のＨＡ濃度は、約２５ｍｇ／ｇ以下、例えば約２０．０ｍｇ／ｇ、例えば約１８．０ｍｇ／ｇ、約１７．０ｍｇ／ｇ、約１６．０ｍｇ／ｇ、約１５．０ｍｇ／ｇ、約１３．０ｍｇ／ｇ、約１２．０ｍｇ／ｇ、約１１．０ｍｇ／ｇまたは約１０．０ｍｇ／ｇである。一態様では、架橋成分中のＨＡ濃度は、約１７．５ｍｇ／ｇである。別の態様では、架橋成分中のＨＡ濃度は、１５．０ｍｇ／ｇである。別の態様では、架橋成分中のＨＡ濃度は、約２５．５ｍｇ／ｇである。
【００６１】
さらに、麻酔剤を伴う態様では、１種以上の麻酔剤の濃度は、組成物の注入時に経験される疼痛を軽減するのに有効な量である。少なくとも１種の局所麻酔剤は、アムブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタムベン、ブタニリカイン、ブテサミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロニン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、ベータオイカイン、オイプロシン、フェナルコミン、ホルモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチルｐ−アミノベンゾエート、ロイシノカインメシラート、レボキサドール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ナエパイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセタザイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、プソイドコカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミンおよびその塩の群から選択され得る。一態様では、少なくとも１種の麻酔剤はリドカイン、例えばリドカインＨＣｌの形態である。本明細書中に記載される組成物は、組成物の約０．１重量％〜約５重量％、例えば組成物の約０．２重量％〜約１．０重量％のリドカイン濃度を有し得る。一態様では、組成物は、組成物の約０．３重量％（ｗ／ｗ％）のリドカイン濃度を有する。本明細書中に記載される組成物中のリドカインの濃度は、治療的に有効であり、その濃度が患者に害を与えることなく治療的利益を提供するために適切であることを意味する。
【００６２】
さらに、ＨＡベースの組成物の製造方法であって、実質的にｐＨ中性の、架橋ＨＡベースのゲルを含めた前駆体組成物を提供すること、そしてゲルのｐＨを約７．２より高い、例えば約７．５〜約８．０のｐＨに調整することを包含する方法が提供される。当該方法はさらに、ｐＨがそのように調整された後に、リドカインを、例えばリドカインＨＣｌの形態で含有する溶液を、わずかにアルカリ性のゲルと組合せるステップ、そしてオートクレーブ処理に安定であるリドカインを含むＨＡベースの組成物を得るステップを包含する。
【００６３】
有効量のリドカインを含有するＨＡベースの組成物を調製する別の方法は、一般的に、精製ＮａＨＡ物質を、例えば繊維の形態で提供するステップ；その物質を水和するステップ；そして水和物質を適切な架橋剤で架橋して、架橋ＨＡベースのゲルを生成するステップを包含する。当該方法は、さらに、ゲルを中和し、膨潤するステップ、そしてゲルを、リドカイン、好ましくはリドカインクロロハイドレート（chlorhydrate）の酸性塩を含有する溶液に加えて、ＨＡ／リドカインゲルを生成するステップを包含する。さらにまた、当該方法は、ＨＡ／リドカインゲルを均質化すること、そして少量の非架橋ＨＡ溶液を加えることをさらに包含する。次いで、組成物は、分配のために注射器に詰められる。次に注射器は、有効な温度および圧力で、オートクレーブ処理により滅菌される。本発明の記載に従って、詰められ、滅菌されたＨＡ／リドカインゲルは、慣用的方法を用いて製造されるリドカインを含むＨＡベースの組成物に比して、増強された安定性を示す。
【００６４】
本発明の製品および組成物は、少なくとも約１分〜約１５分間のオートクレーブ処理中に少なくとも約１２０℃〜約１３０℃の温度、および／または少なくとも約１２ポンド／平方インチ（ＰＳＩ）〜約２０ＰＳＩの圧力に曝露されると、滅菌されると考えられる。本発明の製品および組成物はさらにまた、室温で長期間保存される場合、安定なままである。好ましくは本発明の組成物は、少なくとも約２ヶ月、または少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約９ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月、または少なくとも約２４ヶ月または少なくとも約３６ヶ月の間、少なくとも約２５℃の温度で依然として安定である。具体的一態様では、組成物は、約４５℃までの温度で少なくとも２ヶ月の間、安定である。
【００６５】
製造過程は、一態様では、乾燥ＨＡ繊維または粉末の形態で、ＨＡ原料を提供するという最初のステップを包含する。ＨＡ原料は、ＨＡ、その塩および／またはその混合物であり得る。好ましい一態様では、ＨＡ物質は、ＮａＨＡの繊維または粉末、例えば細菌を供給源とするＮａＨＡ繊維を含む。本発明の記載のいくつかの面において、ＨＡ物質は、動物由来であり得る。ＨＡ物質は、ＨＡおよび少なくとも１つの他の多糖、例えばグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含めた原料の組合せであり得る。
【００６６】
本発明の広範な一面では、組成物のＨＡ物質は、約５％〜約９５％の低分子量ＨＡを含み、残りのＨＡ物質は高分子量ＨＡを含む。
【００６７】
本発明の一面では、組成物中のＨＡ物質は、ほぼ完全に、低分子量ＨＡを含むかそれからなる。いくつかの態様では、本発明の組成物中のＨＡ物質のほぼ１００％が、上記のような低分子量ＨＡであり得る。他の態様では、組成物中のＨＡ物質は、上記のように相対的高分子量ＨＡおよび相対的低分子量ＨＡの組合せを含む。ある態様では、組成物中のＨＡ物質の少なくとも５０％、例えば少なくとも約７０％、例えば約９０％またはそれ以上が上記のような低分子量ＨＡであり、ＨＡの残りの部分が高分子量ＨＡである。
【００６８】
本発明の一面では、組成物中のＨＡの低分子量対高分子量の比は、少なくとも約２（ｗ／ｗ≧２）であって、低分子量ＨＡは約０．２０ＭＤａ〜約０．９９ＭＤａ以下の分子量を有する。
【００６９】
高分子量および低分子量ＨＡ物質ならびにそれらの相対的パーセンテージまたは比率の選択は、最終ＨＡベースの製品の所望の特質、例えば押出力、弾性係数、粘性係数、ならびに粘性係数と弾性係数の比として表される位相角、粘着性等によって決まる、ということは当業者に理解されるであろう。本明細書の記載のこの面およびその他の面を理解するに際して有用であり得るさらなる情報に関しては、米国特許出願公開番号第２００６／０１９４７５８号（Ｌｅｂｒｅｔｏｎ）（この文献の記載内容の全ては参照により本明細書中に包含される）を参照されたい。
【００７０】
一態様では、精製乾燥ＮａＨＡ繊維は、アルカリ性溶液中で水和されて、非架橋ＮａＨＡゲルを生じる。任意の好適なアルカリ性溶液が、このステップにおいてＮａＨＡを水和するために用いられ、例としては、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）、水酸化リチウム（ＬｉＯＨ）等を含有する水溶液が挙げられるが、これらに限定されない。別の態様では、好適なアルカリ性溶液は、ＮａＯＨを含有する水溶液である。その結果生じるアルカリ性ゲルは、７．５より高いｐＨを有する。その結果生じるアルカリ性ゲルのｐＨは、９より高いｐＨ、または１０より高いｐＨ、または１２より高いｐＨ、または１３より高いｐＨを有し得る。
【００７１】
製造過程における次のステップは、水和アルカリ性ＮａＨＡゲルを好適な架橋剤で架橋するステップを伴う。架橋剤は、それらのヒドロキシル基を介して多糖およびその誘導体を架橋するために適していることが公知の任意の薬剤であり得る。好適な架橋剤としては、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（または１，４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブタンまたは１，４−ビスグリシジルオキシブタン；これらはすべてＢＤＤＥとして一般に既知である）、１，２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エチレンおよび１−（２，３−エポキシプロピル）−２，３−エポキシシクロヘキサンが挙げられるが、これらに限定されない。２種以上の架橋剤または異なる架橋剤の使用は、本発明の開示の範囲から排除されない。本発明の開示の一面では、本明細書中に記載されるＨＡゲルは、ＢＤＤＥを用いて架橋される。
【００７２】
架橋のステップは、当業者に公知の任意の手段を用いて実行され得る。ＨＡの性質によって架橋の条件を最適化する方法、ならびに架橋を最適程度に実行する方法を、当業者は理解している。
【００７３】
別の態様では、ＨＡの架橋は、架橋剤、例えばＢＤＤＥを含有するアルカリ性溶液中で、組合せた高および低分子量繊維を水和することにより、ＨＡ繊維の水和中に成し遂げられる。
【００７４】
本発明の組成物のＨＡ構成成分における架橋度は、少なくとも約１％で、約２０％までのＢＤＤＥ／ＨＡ、例えば約４％〜約１２％、例えば約１０％、例えば約８％、例えば約６％、例えば約５％、例えば約４％である。
【００７５】
水和架橋ＨＡゲルは、所望のＨＡ濃度を得るために膨潤され得る。このステップは、例えば、酸、例えばＨＣｌを含有する水溶液を加えることにより、架橋水和ＨＡゲルを中和することによって成し遂げられ得る。次いで、ゲルは、十分な時間且つ低温で、リン酸塩緩衝生理食塩溶液（ＰＢＳ）中で膨潤される。
【００７６】
ゲルは、ここで、慣用的手段、例えばリン酸塩緩衝液に対する透析、あるいはアルコール沈降により精製されて、架橋物質を回収し、物質のｐＨを安定化して、非反応架橋剤を除去する。さらなる水またはわずかにアルカリ性の水溶液が加えられて、組成物中のＨＡの濃度を所望の濃度にする。いくつかの態様では、組成物の架橋成分のＨＡ濃度は、約１５ｍｇ／ｇ〜約２０ｍｇ／ｇに調整される。例えば組成物の架橋部分のＨＡ濃度は、約１５ｍｇ／ｇ、約１７ｍｇ／ｇまたは約２０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を生じるよう調整され得る。
【００７７】
ゲルが、約７．２より高い、例えば約７．５〜８．０のｐＨを有するよう、精製された、実質的に中性ｐＨの架橋ＨＡゲルのｐＨは、好ましくは、ゲルをわずかにアルカリ性にさせるよう調整される。このステップは、任意の適切な手段により、例えば適量の希ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮａＨＣＯ３またはＬｉＯＨをゲル、あるいは当業者に公知の任意の他のアルカリ性の分子、溶液および／または緩衝組成物に加えることにより成し遂げられ得る。
【００７８】
いくつかの態様では、有効量の局所麻酔剤、例えばリドカイン、例えばリドカインＨＣｌが次に精製ＮａＨＡゲルに加えられる。例えば、いくつかの態様では、リドカインＨＣｌは粉末形態で提供されるが、これは、注射用の水（ＷＦＩ）を用いて可溶化される。最終ＨＡ／リドカイン組成物が所望の、実質的に中性のｐＨを有するために、ゲルは、緩衝液で、あるいは希ＮａＯＨで調整することにより、中性に保持される。好ましくは、リドカインを含む最終的なＨＡベースの充填材組成物は、組成物の少なくとも約０．１重量％〜約５重量％、例えば約２重量％、別の例では約０．３重量％のリドカイン濃度を有する。
【００７９】
リドカインＨＣｌを加えた後、あるいはリドカインＨＣｌを加える最中に、ＨＡ／リドカインゲルまたは組成物は、均質化されて、所望の粘稠性および安定性を有する高均質ＨＡ／リドカインゲルを生じる。好ましくは、均質化ステップは、制御された剪断力でゲルを混合し、撹拌し、または掻き回して、実質的に均質な混合物を得ることを包含する。
【００８０】
本明細書中に記載されるＨＡ／リドカイン組成物は、組成物の特性および少なくとも１種の麻酔剤の存在によって決まる粘度を示す。ＨＡ／リドカイン組成物の粘度は、約５０Ｐａ＊ｓから約４５０Ｐａ＊ｓまでであり得る。他の態様では、粘度は、約１００Ｐａ＊ｓから約４００Ｐａ＊ｓまで、または約１５０Ｐａ＊ｓから約３５０Ｐａ＊ｓまでである。
【００８１】
一態様では、ＨＡ組成物を均質化した後、所定量の非架橋ＨＡ溶液またはゲルを組成物に加える。
【００８２】
本発明のこの面では、加える非架橋ＨＡ溶液は、約１０ｍｇ／ｇ〜約５０ｍｇ／ｇ、例えば、約１０ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する。非架橋溶液中のＨＡは、高分子量ＨＡであって、少なくとも約１．０ＭＤａ、約４．０ＭＤａまでの分子量、例えば、約１．２ＭＤａ、約１．４ＭＤａ、約１．６ＭＤａ、約１．８ＭＤａ、約２．０ＭＤａ、約２．２ＭＤａ、約２．４ＭＤａ、約２．６ＭＤａ、約２．８ＭＤａ、約３．０ＭＤａ、約３．２ＭＤａ、約３．４ＭＤａ、約３．６ＭＤａ、約３．８ＭＤａの分子量を有する。非架橋ＨＡ溶液は、架橋ＨＡ構成成分に加えられて、０．５％〜１０％非架橋ＨＡという最終重量％を有する皮膚充填材組成物を生成する。
【００８３】
例えば、約２．０ＭＤａの分子量を有するＨＡ繊維は、リン酸塩緩衝溶液中で膨潤されて、約２０ｍｇ／ｇのＨＡ濃度を有する非架橋ＨＡゲルを得る。次に、この非架橋ＨＡゲルは、最終混合ステップ中に架橋ＨＡゲル組成物に加えられて、約１．０％ｗ／ｗの非架橋ＨＡゲルを有する皮膚充填材組成物を得る。
【００８４】
架橋ＨＡゲルに非架橋ＨＡゲルを加えた後、組成物は、注射器中に導入されて、滅菌される。本発明の記述による有用な注射器としては、粘性皮膚充填材組成物を送達し得る当該技術分野で公知の任意の注射器が挙げられる。注射器は、一般的に、約０．４ｍＬ〜約３ｍＬ、さらに好ましくは約０．５ｍＬ〜約１．５ｍＬ、あるいは約０．８ｍＬ〜約２．５ｍＬの内部容積を有する。この内部用積は、高粘度皮膚充填材組成物を注入するために必要とされる押出力において重要な役割を果たす注射器の内径と関連する。内径は、一般的には約４ｍｍ〜約９ｍｍ、さらに好ましくは約４．５ｍｍ〜約６．５ｍｍ、または約４．５ｍｍ〜約８．８ｍｍである。さらに、注射器からＨＡ組成物を送達するために必要とされる押出力は、針のゲージによって決まる。一般的に用いられる針のゲージとしては、約１８Ｇ〜約４０Ｇ、さらに好ましくは約２５Ｇ〜約３３Ｇ、または約２５Ｇ〜約３０Ｇのゲージが挙げられる。特定の押出力要件で到達するために必要とされる正しい注射器寸法および針ゲージを、当業者は決定し得る。
【００８５】
上記の針寸法を用いて本明細書中に記載されるＨＡ組成物により示される押出力は、患者にとって快適である注射速度である。患者にとって快適であることは、軟部組織への注入時に患者を傷つけないかまたは患者に過度の痛みを引き起こさない注射の速度を定義するために用いられる。本明細書中で用いる「快適な」とは、患者の快適さだけでなく、ＨＡ組成物を注入する医者または医療技術者の快適さおよび技量も含む、と当業者は理解する。所定の押出力は本発明記載のＨＡ構成成分で達成可能であり得るが、高押出力は注入中の制御の欠如をもたらし得るし、このような制御欠如は患者への付加的疼痛を生じ得る、と当業者は理解する。３０Ｇ１／２の標準針を用いて１．０ｍＬ注射器で１３．５ｍｍ／分で押出される場合、本発明のＨＡ／リドカイン組成物の押出力は約５Ｎ〜約２０Ｎ、さらに好ましくは約８Ｎ〜約１５Ｎであり得る。
【００８６】
滅菌は、本明細書中で用いる場合、好ましくはＨＡ／リドカイン組成物の分解を実質的に変えることなく、伝染性作因を有効に死滅させるかまたは排除するための当該技術分野で公知の任意の方法を含む。
【００８７】
充填済み注射器の滅菌の好ましい一方法は、オートクレーブによる方法である。オートクレーブ処理は、熱、圧力および湿度を混合して滅菌を必要とする試料に適用することにより成し遂げられ得る。多くの異なる滅菌の温度、圧力および周期時間が、このステップのために用いられ得る。例えば、充填済み注射器は、少なくとも約１２０℃〜約１３０℃またはそれ以上の温度で滅菌され得る。水分は、利用されることもされないこともある。適用される圧力は、いくつかの態様では、滅菌過程で用いられる温度によって決まる。滅菌周期は、少なくとも約１分〜約２０分またはそれ以上であり得る。
【００８８】
滅菌の別の方法は、伝染性作因を死滅または排除することが知られているガス種の使用を組入れる。好ましくは、酸化エチレンが滅菌ガスとして用いられ、医療器具および製品を滅菌するのに有用であることが当該技術分野で公知である。
【００８９】
滅菌のさらなる方法は、伝染性作因を死滅させるかまたは排除することが当該技術分野で知られている照射線源の使用を組入れる。照射線は、ＨＡ組成物を含有する注射器を標的にして、エネルギーの波長が望ましくない伝染性作因を死滅させるかまたは排除する。有用な好ましいエネルギーとしては、紫外（ＵＶ）線、ガンマ線、可視光線、マイクロ波、あるいは好ましくはＨＡ組成物の分解を実質的に変えずに望ましくない伝染性作因を死滅させるかまたは排除する任意の他の波長または波長の帯域が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００９０】
実施例１
リドカインを含む本発明の低分子量軟部組織充填材の製造
９０％の低分子量を有するＮａＨＡ繊維または粉末および１０％の高分子量を有するＮａＨＡ繊維または粉末（２：１の高分子量対低分子量の比）を、アルカリ性溶液、例えばＮａＯＨを含有する水溶液中で水和する。混合物を周囲温度（約２３℃）で混合して、実質的に均質なアルカリ性ＨＡゲルを生成する。
【００９１】
架橋剤であるＢＤＤＥを水溶液中で希釈し、アルカリ性ＨＡゲルに加える。混合物を、数分間均質化する。
【００９２】
その結果生じた架橋ＨＡゲル混合物を、次に、約５０℃で約３時間加熱する。当該物質は、ここでは、高架橋ＨＡ／ＢＤＤＥゲル（様相＝固体ゲル）である。次に、この架橋ゲルを、適切な酸性溶液で中和する。次いで、中和ＨＡゲルを、冷温で、例えば約５℃の温度でリン酸塩緩衝液中で膨潤させて、高粘着性ＨＡゲルを得る。この具体例では、リン酸塩緩衝生理食塩溶液は、注射用の水（ＷＦＩ）、リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウムを含有する。中和され、膨潤された場合、架橋ＨＡ構成成分により吸収される水は、少なくとも１：１の重量比であり、ゲルが小片に壊れることはない。
【００９３】
次に、膨潤ＨＡゲルを機械的に撹拌し、透析膜中に充填して、リン酸塩緩衝液に対して透析する。ＨＡゲルを透析膜中に充填し、浴を定期的に取り替えながら数日までの間、リン酸塩緩衝液に対して透析して、非反応架橋剤を除去し、中性に近いｐＨ（ｐＨ＝７．２）を安定化させて、ＨＡゲルの適正な浸透性を保証する。その結果生じるＨＡゲルの浸透圧モル濃度は、約２００ｍＯｓｍｏｌ〜４００ｍＯｓｍｏｌ、最も好ましくは約３００ｍＯｓｍｏｌである。
【００９４】
透析後、その結果生じたＨＡゲルは、実質的に中性のｐＨ、好ましくは約７．２のｐＨを有する。
【００９５】
粉末形態のリドカインクロロハイドレート（リドカインＨＣｌ）を、先ず、ＷＦＩ中で可溶化し、０．２μｍフィルターを通して濾過する。わずかに塩基性のｐＨ（例えば、約７．５〜約８のｐＨ）にするために、希ＮａＯＨ溶液をＨＡゲルに加える。次いで、リドカインＨＣｌ溶液をわずかに塩基性のゲルに加えて、最終所望濃度、例えば約０．３％（ｗ／ｗ）にする。その結果生じるＨＡ／リドカイン混合物のｐＨは約７であり、ＨＡ濃度は約２４ｍｇ／ｍＬである。適切な混合機構を装備した標準反応器中で適正な均質性を得るために、機械的混合を実施する。
【００９６】
所定量の非架橋ＨＡゲルを、ＨＡ／リドカインゲル混合物に加える。具体的には、高分子量ＨＡ繊維をリン酸塩緩衝溶液中で膨潤させて、均質粘弾性ゲルを得る。次に、この非架橋ＨＡゲルを、架橋ＨＡ／リドカインゲルに加える（例えば、約１％ｗ／ｗで）。その結果生じたゲルを、次に、充填可能滅菌注射器中に充填し、少なくとも約１分間、滅菌のために十分な温度および圧力でオートクレーブ処理する。
【００９７】
オートクレーブ処理後、最終ＨＡ／リドカイン製品を包装して、医者に配布する。オートクレーブ処理済みＨＡ／リドカイン製品は、許容可能な粘度、粘着性および押出力を有する。当該製品を数ヶ月間貯蔵した後の製品の試験中に、ＨＡ／リドカインゲル製品の分解は見出されなかった。
【００９８】
実施例２
本発明の低分子量軟部組織充填材（リドカイン無含有）の製造
約０．２ＭＤａの分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）の予備乾燥繊維０．８ｇを、第一容器中に量り分ける。
【００９９】
約２．４ＭＤａの分子量を有するＮａＨＡの予備乾燥繊維０．２ｇを、別の容器に量り分ける。
【０１００】
２つの異なる等級のＮａＨＡを合わせる。
【０１０１】
別個の容器で、選択した架橋剤１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）を、１％水酸化ナトリウム溶液中に希釈する。
【０１０２】
１／１００に希釈された予備調製ＢＤＤＥ溶液６．８ｇを、次に、混合ＮａＨＡ繊維（未だ固体状態）に加えて、混合物をヘラで機械的に均質化する。混合物を、約２０℃で２時間混合して、実質的に均質なアルカリ性ＨＡゲルにする。
【０１０３】
次に、混合物を５０℃の温水浴中に２〜３時間入れて、１５分間液浸後、さらに均質化する。
【０１０４】
その結果生じた架橋ＨＡポリマーを、次に、リン酸塩緩衝液（ＰＢ）中に浸漬して、ｐＨを安定化する。
【０１０５】
次いで、膨潤架橋ＮａＨＡポリマーをリン酸塩緩衝液の異なる浴中での浸漬により精製して、非反応架橋剤およびＨＡを除去する。
【０１０６】
高分子量を有する乾燥ＨＡ物質を１リットルの水中で水和して、非架橋ＨＡゲルを得る。最終組成物中の量に対応する１％のこのＨＡゲルを、架橋ＨＡゲルに混合して、本発明による皮膚充填材組成物を提供する。
【０１０７】
得られたヒドロゲルを、次に機械的に均質化して、最終的均質性を保証し、注射器に詰めて、これをオートクレーブ中で滅菌する。
【０１０８】
得られたゲルは、顔面の鼻唇褶襞線を改善するための微細ゲージ針（例えば、３０ゲージまたは３３ゲージ）を用いる長期存続性注射用組成物である。
【０１０９】
ある程度の特定性を伴って本発明を記載し、例証してきたが、本発明の開示は例として示しただけであって、特許請求の範囲で後述されるような本発明の範囲を逸脱しない限り、当業者は部分的な組合せおよび配列における多数の変更をなし得る、と理解される。
【０１１０】
別記しない限り、本明細書および特許請求の範囲において用いられる、分子量、反応条件等のような成分、特性の量を表す数値はすべて、「約」という用語によって、すべての場合において修飾されるものであると理解されるべきである。したがって、そうでないことが示されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記述される数的パラメーターは、本発明により得られるよう求められる所望の特性によって変化し得る近似値である。最低に見積もっても、そして特許請求の範囲と等価の見解の適用を制限しようとするものではなく、各数的パラメーターは、少なくとも、報告された有効数字の数に鑑みて、そして常套の丸め(四捨五入)技法を適用することにより、意図されるべきである。
【０１１１】
本発明の広範囲で記載される数的範囲およびパラメーターが近似値であるにもかかわらず、具体例で記述される数値は、できるだけ正確に報告される。しかしながら、任意の数値は、そのそれぞれの試験測定値に見出される標準偏差に必然的に起因するある種の誤差を、固有に含有する。本発明の広範囲を記述する数的範囲およびパラメーターが近似値であるにもかかわらず、具体例で記述される数値は、できるだけ正確に報告される。しかしながら、任意の数値は、そのそれぞれの試験測定値に見出される標準偏差に必然的に起因するある種の誤差を、固有に含有する。
【０１１２】
本明細書中に開示される具体的態様は、「〜からなる」または「実質的に〜からなる」という言い回しを用いて、特許請求の範囲でさらに限定され得る。特許請求の範囲で用いられる場合、出願時に記載されていても、補正により付加されていても、「〜からなる」という転換語は、特許請求の範囲に明記されないあらゆる素子、ステップまたは成分を除外する。「実質的に〜からなる」という転換語は、特許請求の範囲を特定物質またはステップに、あるいは基本的および新規の特質（単数または複数）に具体的に影響を及ぼさないものに限定する。そのように特許請求される本発明の態様は、固有にまたは明白に、本明細書中に記載され、実施可能である。
【国際調査報告】
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