(57)【要約】  癌を有するヒトを治療する方法であって、少なくとも一つのＲａｓタンパク質もしくは少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、かつ／またはＬＫＢ１／ＳＴＫ１１に少なくとも一つの突然変異、欠失もしくは挿入を有する前記患者に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与することを含んでなる方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与することを含んでなる、癌を有する哺乳動物を治療する方法であって、前記哺乳動物が、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、かつＬＫＢ１／ＳＴＫ１１に少なくとも一つの突然変異、欠失、または挿入を有する、方法。
【請求項２】
前記少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異が、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、またはＨ−ｒａｓにある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする少なくとも一つの遺伝子における突然変異が、エキソン２または３にある、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子が、コドン１２、１３、１４、６０、６１、７４、７６、および１４６から選択されるｒａｓコドンのうち少なくとも一つに突然変異を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｒａｓ突然変異が、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔから選択されるものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記哺乳動物が、アミノ酸変化Ｄ１９４Ｖを引き起こす５８１Ａ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｐ２８１Ｌを引き起こす８４２Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｅ１９９Ｑを引き起こす５９５Ｇ＞Ｃ、アミノ酸変化Ｆ３５４Ｌを引き起こす１０６２Ｃ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｈ１７４Ｒを引き起こす５２１Ａ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｄ１７６Ｙを引き起こす５２６Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｄ１９４Ｙを引き起こす５８０Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｄ１９４Ｎを引き起こす５８０Ｇ＞Ａ、アミノ酸変化Ｇ５６Ｗを引き起こす１６６Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｇ５６Ｖを引き起こす１６７Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｇ１９６Ｙを引き起こす５８７Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｋ７８Ｅを引き起こす２３２Ａ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｇ２４２Ｒを引き起こす７２４Ｇ＞Ｃ、アミノ酸変化Ｇ２４２Ｖを引き起こす７２５Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｄ２３７Ｙを引き起こす７０９Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｒ３０４Ｇを引き起こす９１０Ｃ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｄ２７７Ｙを引き起こす８２９Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｗ３０８Ｌを引き起こす９２３Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｌ２８５Ｑを引き起こす８５４Ｔ＞Ａ、アミノ酸変化Ｒ４０９Ｗを引き起こす１２２５Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｒ８６Ｇを引き起こす２５６Ｃ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｆ３５４Ｌを引き起こす１０６２Ｃ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｙ２７２Ｙを引き起こす８１６Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｇ１６３Ｃを引き起こす４８７Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｑ１２３Ｒを引き起こす３６８Ａ＞Ｇ、およびアミノ酸変化Ｒ４２６Ｗを引き起こす１２７６Ｃ＞Ｔから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つのミスセンス突然変異を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記哺乳動物が、アミノ酸変化Ｑ３７Ｘを引き起こす１０９Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｑ１７０Ｘを引き起こす５０８Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｓ６９Ｘを引き起こす２０６Ｃ＞Ａ、アミノ酸変化Ｅ１２０Ｘを引き起こす３５８Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｙ６０Ｘを引き起こす１８０Ｃ＞Ｇ、アミノ酸変化Ｙ６０Ｘを引き起こす１８０Ｃ＞Ａ、アミノ酸変化Ｅ１９９Ｘを引き起こす５９５Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｑ１３７Ｘを引き起こす４０９Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｅ１６５Ｘを引き起こす４９３Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｋ１９１Ｘを引き起こす５７１Ａ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｑ２２０Ｘを引き起こす６５８Ｃ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｅ６５Ｘを引き起こす１９３Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｋ４４Ｘを引き起こす１３０Ａ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｃ２１０Ｘを引き起こす６３０Ｃ＞Ａ、アミノ酸変化Ｅ２２３Ｘを引き起こす６６７Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｅ７０Ｘを引き起こす２０８Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｗ３３２Ｘを引き起こす９９６Ｇ＞Ａ、アミノ酸変化Ｅ３１７Ｘを引き起こす９４９Ｇ＞Ｔ、アミノ酸変化Ｗ３３２Ｘを引き起こす９９６Ｇ＞Ａ、アミノ酸変化Ｑ２２０Ｘを引き起こす６５８Ｃ＞Ｔ、およびアミノ酸変化Ｑ１５９Ｘを引き起こす４７５Ｃ＞Ｔから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つのナンセンス突然変異を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物が、１２０＿１３０ｄｅｌ１１、１５３ｄｅｌＧ、１２６＿１４９ｄｅｌ２４、２９１＿４６４ｄｅｌ１７４、２９１＿５９７ｄｅｌ３０７、４６５＿５９７ｄｅｌ１３３、８４２ｄｅｌＣ、７３５＿８６２ｄｅｌ１２８、１６６＿１７８ｄｅｌ１３、４３１ｄｅｌＣ、５７９ｄｅｌＣ、１５７ｄｅｌＧ、８１０ｄｅｌＧ、５９８＿１３ｄｅｌ２２、５４４＿５４６ｄｅｌＣＴＧ、８２７ｄｅｌＧ、１６９ｄｅｌＧ、２９１＿３７８ｄｅｌ８８、５９８ｄｅｌＧ、８４２ｄｅｌＣ、４６５＿８６２ｄｅｌ１３９８、６３３ｄｅｌＧ、１３０２ｄｅｌ１３０２、３７９＿４３３ｄｅｌ５５、１２８＿１２９ｄｅｌＣ、１４２＿１４３ｄｅｌＡ、１８０ｄｅｌＣ、２０９ｄｅｌＡ、２２７＿２２８ｄｅｌＣ、４７＿６５１ｄｅｌ６０５、１５３＿５３６ｄｅｌ３８４、エキソン２−３ｄｅｌ、エキソン２−３ｄｅｌ、エキソン２−３ｄｅｌ、エキソン２−４ｄｅｌ、５６２＿５６３ｄｅｌＧ、エキソン４ｄｅｌ、エキソン４ｄｅｌ、エキソン４ｄｅｌ、エキソン４ｄｅｌ、６１０＿６２３ｄｅｌ１４、８３７ｄｅｌＣ、４６４＿４６５ｄｅｌ２ＧＧｉｎｓＴＴＴＧＣＴ、７５＿７６ｄｅｌ２＆ｉｎｓＴ、１２５＿１２７ｉｎｓＧＧ、５８４＿５８５ｉｎｓＴ、７０４＿７０５ｉｎｓＡ、１５２＿１５３ｉｎｓＣＴ、８４２＿８４３ｉｎｓＣ、６４９＿６５０ｉｎｓＧ、１２７＿１２８ｉｎｓＧＧ、９７９＿９８０ｉｎｓＡＧ、１６５＿１６６ｉｎｓＴ、エキソン６ｄｅｌ、１０３９＿１０４０ｉｎｓＧ、７３５−２Ａ＞Ｔ、５９８２ＡＴ、４６５−１Ｇ＞Ａ、４６５−１Ｇ＞Ｔ、２９１−２Ａ＞Ｔ、９２１−１Ｇ＞Ａ、５９７＋１Ｇ＞Ｔ、１４３＿１４４＞Ｔ、８４１＿８４２＞Ｔ、および２７１＿２７２ＧＧ＞ＴＴから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つの欠失、挿入、置換、または複合突然変異を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＬＫＢ１の欠失、挿入、または突然変異が、触媒キナーゼドメイン内にある、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＬＫＢ１の欠失、挿入、または突然変異が、コドン５０〜３３７内にある、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＬＫＢ１の欠失、挿入、または突然変異が、末端切断型ＬＫＢ１タンパク質を生じる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌が固形腫瘍癌である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌が膵臓癌である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＭＥＫ阻害剤が、下記構造（Ｉ）：
【化１】
2013545757.tif 000015
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパマイシン、ラパログ、エベロリムス、デフォロリムス、およびテムシロリムスから選択されるものである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍細胞がまた少なくとも一つのＢｒａｆ突然変異も有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｂｒａｆ突然変異が、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅから選択されるものである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記哺乳動物が、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤に対して完全反応を示す、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
それを必要とする哺乳動物を、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と、少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤とにより治療する方法であって、
前記哺乳動物が、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失、および／または挿入を有するか否かを決定すること、ならびに
前記哺乳動物が、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、かつ、ＬＫＢ１に少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有さない場合には、前記哺乳動物に治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与すること
を含んでなる、方法。
【請求項２２】
ヒト被験体の癌を治療する方法であって、
前記被験体から少なくとも一つの第１のサンプルを得る工程、
前記被験体からの少なくとも一つの第１のサンプルにおいて、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を検出する工程、
場合により、前記被験体から少なくとも一つの第２のサンプルを得る工程、
前記被験体からの少なくとも一つの前記第１のサンプルまたは少なくとも一つの前記任意選択の第２のサンプルから、少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失、および／または挿入を検出する工程、および
前記第１および／または第２のサンプルにおいて少なくとも一つのＲａｓ突然変異および少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失、および／または挿入が検出される場合には、前記被験体を治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤により治療する工程
を含んでなる、方法。
【請求項２３】
前記第１のサンプルおよび前記第２のサンプルが同じサンプルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１のサンプルが腫瘍サンプルである、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１のサンプルが血液サンプルである、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１のサンプルおよび前記第２のサンプルが異なるサンプルである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１のサンプルが腫瘍サンプルであり、前記第２のサンプルが血液サンプルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
被験体が少なくとも一つのＲａｓタンパク質もしくは少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、またはＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失、もしくは挿入を有する場合には、少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤による治療に対する、被験体の高い反応の可能性を相関させる工程をさらに含んでなる、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が固形腫瘍癌である、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌が膵臓癌である、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＭＥＫ阻害剤が下記構造（Ｉ）：
【化２】
2013545757.tif 000016
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる、請求項２２〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ｍＴＯＲ阻害剤がエベロリムスである、請求項２２〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
癌を有するヒトを治療する方法であって、
前記ヒト由来のサンプルから、Ｒａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における、少なくとも一つの突然変異を検出すること、
前記ヒト由来のサンプルから、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入の有無を検出すること、ならびに
少なくともＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異が検出され、かつ、前記ヒト由来のサンプルからＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失、または挿入が検出されない場合には、前記ヒトを、下記構造（Ｉ）：
【化３】
2013545757.tif 000017
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物により治療すること
を含んでなる、方法。
【請求項３５】
少なくとも一つのＢＲＧ１突然変異の有無を検出することをさらに含んでなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒトを治療上有効な量の少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤により治療することをさらに含んでなる、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
構造（Ｉ）がナトリウム塩の形態である、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
構造（Ｉ）がジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトが少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、前記ヒトに、下記構造（Ｉ）：
【化４】
2013545757.tif 000018
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と、少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤とを含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含んでなる、方法。
【請求項４０】
前記Ｒａｓ突然変異が、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔから選択されるものである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ｍＴＯＲ阻害剤がエベロリムスである、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＮＳＣＬＣを有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトが少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、前記ヒトに、下記構造（Ｉ）：
【化５】
2013545757.tif 000019
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と、ドセタキセル、ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ダサチニブ、ＡＫＴ阻害剤、およびエベロリムスの群から選択される少なくとも一つの付加的薬剤とを含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含んでなる、方法。
【請求項４３】
前記ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤が２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＡＫＴ阻害剤が、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−チオフェンカルボキサミド、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物である、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
技術分野
本発明は、哺乳動物において癌を治療する方法に関する。
【０００２】
背景技術
癌を含む過増殖性障害の有効な治療は、腫瘍学分野において継続的な目標であり、未対応の医療需要である。一般に、癌は、とりわけ細胞の分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常なプロセスの調節解除に起因する。このようなプロセスの一つに、アポトーシスおよび細胞表面の増殖因子受容体から核への細胞シグナル伝達のキナーゼ調節が含まれる(Crews and Erikson, Cell, 74:215-17, 1993)。
【０００３】
酵素の一大ファミリーがタンパク質キナーゼ酵素ファミリーである。約５００の異なる既知のタンパク質キナーゼが存在する。タンパク質キナーゼは、ＡＴＰ−Ｍｇ２＋複合体のγ−リン酸基のアミノ酸側鎖への転移によって、種々のタンパク質のアミノ酸側鎖のリン酸化を触媒する働きをする。これらの酵素は細胞内部の大部分のシグナル伝達プロセスを制御し、それにより、タンパク質におけるセリン、トレオニンおよびチロシン残基のヒドロキシル基の可逆的リン酸化を介して細胞の機能、成長、分化およびアポトーシスを支配していると思われる。研究では、タンパク質キナーゼがシグナル伝達、転写調節、細胞運動、および細胞分裂を含む多くの細胞機能を調節することが示されている。また、いくつかの癌遺伝子がタンパク質キナーゼをコードしていることも示されており、キナーゼが発癌に役割を果たしていることが示唆される。
【０００４】
例えば、癌、特に、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、および乳癌などにおけるＲａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路の活性化が見出されている。
【０００５】
ｒａｓファミリーの癌遺伝子（Ｋ−ｒａｓ、Ｈ−ｒａｓ、およびＮ−ｒａｓ）は、ＧＴＰアーゼ活性を有する膜タンパク質をコードしている。これらのタンパク質は細胞シグナル伝達に関与する。通常ｒａｓコドン１２、１３、または６１内の特定の点突然変異はこれらの癌原遺伝子の活性化をもたらし、その後、新生物を生じる(Bos, J. L., 1989, Can. Res. 49:4682-4689)。ｒａｓ突然変異が起こる頻度は、総てが調べられているわけではないが、腫瘍のタイプによって異なる。研究では、結腸癌のおよそ４０〜５０％がｃ−Ｋ−ｒａｓ遺伝子に突然変異を示し、これらの突然変異の８６％がコドン１２および１３に起こっていることが示唆されている(Bos, J. L. et al., 1987, Nature 327: (6120)293-7, Vogelstein B. et al., 1988, N. Engl. J. Med. 319:525-532)。ｒａｓ突然変異は、Ｒａｓタンパク質の内因性ＧＴＰアーゼ活性の低下により、細胞増殖の増大をもたらす。
【０００６】
ＦＫ５０６結合タンパク質１２ラパマイシン関連タンパク質ｑ（ＦＲＡＰ１）としても知られるラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）は、ヒトにおいてＦＲＡＰ１遺伝子によってコードされるタンパク質である。ｍＴＯＲは、細胞成長、細胞増殖、細胞運動、細胞生存、タンパク質合成、および転写を調節するセリン／トレオニンキナーゼである。
【０００７】
現在の研究により、ｍＴＯＲが、インスリン、増殖因子（例えばＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２）、およびマイトジェンを含む複数の上流経路からの入力を統合することが示されている。ｍＴＯＲはまた、細胞栄養およびエネルギーレベルおよび酸化還元状態のセンサーとしても機能する。ｍＴＯＲ経路の調節不全は、種々のヒト疾患プロセス、特に種々の種類の癌の要因に関係がある。ラパマイシンは、その細胞内受容体ＦＫＢＰ１２との会合を介してｍＴＯＲを阻害できる細菌性天然物である。ＦＫＢＰ１２−ラパマイシン複合体は、ｍＴＯＲのＦＫＢＰ１２−ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインに直接結合する。
【０００８】
ｍＴＯＲは、細胞における２つの異なる分子複合体、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の触媒サブユニットとして機能することが示されている。ｍＴＯＲ阻害剤は既に移植拒絶の治療に使用されている。それらはまた、癌の治療に使用され始めている。ｍＴＯＲ阻害剤はまた、いくつかの加齢性疾患の治療にも有用であり得る。
【０００９】
セリン／トレオニンキナーゼ１１（ＳＴＫ１１、ＬＫＢ１とも呼ばれる）における生殖細胞系突然変異は、腸管過誤腫および上皮癌の頻度上昇を特徴とするポイツ−イエーガー症候群をもたらす(Hongbin, et al. Nature (2007) 448:807-810およびHearle, et al,. Clin. Cancer Res. (2006) 12:3209-3215)。体細胞ＬＫＢ１突然変異はいくつかの原発性ヒト肺腺癌で報告されており、Ｋｒａｓ変異肺癌において細胞分化および転移を変調することが示されている(Hongbin, et al.)。
【００１０】
少なくとも一つのＲａｓタンパク質突然変異および／またはＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／もしくは挿入を有する癌を有する個体のための新規な治療方法を提供することが有用となる。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の一実施形態では、哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を前記哺乳動物に投与することを含んでなる、癌を有する哺乳動物を治療する方法であって、前記哺乳動物が、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、かつ、ＬＫＢ１／ＳＴＫ１１に少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入を有する方法が提供される。
【００１２】
本発明の一実施形態では、癌を有するヒトを治療する方法であって、
前記ヒト由来のサンプルから、Ｒａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を検出すること；
前記ヒト由来のサンプルから、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入の有無を検出すること；および
前記ヒト由来のサンプルから、少なくともＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異が検出され、かつ、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入が検出されない場合には、前記ヒトを、下記構造（Ｉ）：
【化１】
2013545757.tif 000002
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療すること
を含んでなる方法が提供される。
【００１３】
本発明の一実施形態では、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトが少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、
前記ヒトに、下記構造（Ｉ）：
【化２】
2013545757.tif 000003
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤とを含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含んでなる方法が提供される。
【発明の具体的説明】
【００１４】
本発明の一実施形態では、哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与することを含んでなる、癌を有する哺乳動物を治療する方法であって、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有し、かつ、ＬＫＢ１／ＳＴＫ１１に少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入を有する方法が提供される。
【００１５】
本発明の一実施形態では、それを必要とする哺乳動物を治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤で治療する方法であって、
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有するか否かを決定すること；および
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有する場合には、前記哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与すること
を含んでなる方法が提供される。
【００１６】
本発明の一実施形態では、哺乳動物の癌を治療する方法であって、
前記哺乳動物から少なくとも一つの第１のサンプルを得る工程；
前記哺乳動物からの少なくとも一つの第１のサンプルにおいて、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を検出する工程；
場合により、前記哺乳動物から少なくとも一つの第２のサンプルを得る工程；
前記哺乳動物からの少なくとも一つの前記第１のサンプルまたは少なくとも一つの前記任意選択の第２のサンプルから、少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失および／または挿入を検出する工程；および
前記第１および／または第２のサンプルにおいて少なくとも一つのＲａｓ突然変異および少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失および／または挿入が検出される場合には、前記哺乳動物を治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤により治療する工程
を含んでなる方法が提供される。
【００１７】
また、それを必要とする哺乳動物に治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与する方法であって、
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有するか否かを決定すること；および
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有する場合には、前記哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与すること
を含んでなる方法も提供される。
【００１８】
本発明の一態様では、哺乳動物はヒトである。
【００１９】
一態様では、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異は、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓまたはＨ−ｒａｓにある。少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする少なくとも一つの遺伝子におけるｒａｓ突然変異は、エキソン２および／または３にある。いくつかの場合では、少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子は、コドン１２、１３、１４、６０、６１、７４、７６、および１４６から選択されるｒａｓコドンのうち少なくとも一つに突然変異を有する。いくつかの態様では、Ｒａｓタンパク質は、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔから選択される突然変異を有する。
【００２０】
Ｋ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、およびＨ−Ｒａｓの野生型タンパク質配列は当技術分野で公知であり、ＳｗｉｓＰｒｏｔデータベースＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：それぞれＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｎｏ．Ｐ０１１１６（Ｋ−ｒａｓ）；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｎｏ．  Ｐ０１１１１（Ｎ−ｒａｓ）、およびＰ０１１１２（Ｈ−Ｒａｓ）を含む種々のデータベースから入手可能である。また、Shimizu, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.), 80 (1983), pp. 2112-2116; Bos, Mutation research, Reviews in Genetic Toxicology 195 (30:255-271 (1988);およびFasano, et al., Mol. Cell. Biol., 4 (1984), pp. 1695-1705も参照。
【００２１】
別の実施形態では、哺乳動物は、アミノ酸変化Ｄ１９４Ｖを引き起こす５８１Ａ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｐ２８１Ｌを引き起こす８４２Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｅ１９９Ｑを引き起こす５９５Ｇ＞Ｃ；アミノ酸変化Ｆ３５４Ｌを引き起こす１０６２Ｃ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｈ１７４Ｒを引き起こす５２１Ａ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｄ１７６Ｙを引き起こす５２６Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｄ１９４Ｙを引き起こす５８０Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｄ１９４Ｎを引き起こす５８０Ｇ＞Ａ；アミノ酸変化Ｇ５６Ｗを引き起こす１６６Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｇ５６Ｖを引き起こす１６７Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｇ１９６Ｙを引き起こす５８７Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｋ７８Ｅを引き起こす２３２Ａ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｇ２４２Ｒを引き起こす７２４Ｇ＞Ｃ；アミノ酸変化Ｇ２４２Ｖを引き起こす７２５Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｄ２３７Ｙを引き起こす７０９Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｒ３０４Ｇを引き起こす９１０Ｃ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｄ２７７Ｙを引き起こす８２９Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｗ３０８Ｌを引き起こす９２３Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｌ２８５Ｑを引き起こす８５４Ｔ＞Ａ；アミノ酸変化Ｒ４０９Ｗを引き起こす１２２５Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｒ８６Ｇを引き起こす２５６Ｃ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｆ３５４Ｌを引き起こす１０６２Ｃ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｙ２７２Ｙを引き起こす８１６Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｇ１６３Ｃを引き起こす４８７Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｑ１２３Ｒを引き起こす３６８Ａ＞Ｇ；および／またはアミノ酸変化Ｒ４２６Ｗを引き起こす１２７６Ｃ＞Ｔから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つのミスセンス突然変異を有する。
【００２２】
別の実施形態では、哺乳動物は、アミノ酸変化Ｑ３７Ｘを引き起こす１０９Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｑ１７０Ｘを引き起こす５０８Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｓ６９Ｘを引き起こす２０６Ｃ＞Ａ；アミノ酸変化Ｅ１２０Ｘを引き起こす３５８Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｙ６０Ｘを引き起こす１８０Ｃ＞Ｇ；アミノ酸変化Ｙ６０Ｘを引き起こす１８０Ｃ＞Ａ；アミノ酸変化Ｅ１９９Ｘを引き起こす５９５Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｑ１３７Ｘを引き起こす４０９Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｅ１６５Ｘを引き起こす４９３Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｋ１９１Ｘを引き起こす５７１Ａ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｑ２２０Ｘを引き起こす６５８Ｃ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｅ６５Ｘを引き起こす１９３Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｋ４４Ｘを引き起こす１３０Ａ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｃ２１０Ｘを引き起こす６３０Ｃ＞Ａ；アミノ酸変化Ｅ２２３Ｘを引き起こす６６７Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｅ７０Ｘを引き起こす２０８Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｗ３３２Ｘを引き起こす９９６Ｇ＞Ａ；アミノ酸変化Ｅ３１７Ｘを引き起こす９４９Ｇ＞Ｔ；アミノ酸変化Ｗ３３２Ｘを引き起こす９９６Ｇ＞Ａ；アミノ酸変化Ｑ２２０Ｘを引き起こす６５８Ｃ＞Ｔ；および／またはアミノ酸変化Ｑ１５９Ｘを引き起こす４７５Ｃ＞Ｔから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つのナンセンス突然変異を有する。
【００２３】
別の実施形態では、哺乳動物は、１２０＿１３０ｄｅｌ１１；１５３ｄｅｌＧ；１２６＿１４９ｄｅｌ２４；２９１＿４６４ｄｅｌ１７４；２９１＿５９７ｄｅｌ３０７；４６５＿５９７ｄｅｌ１３３；８４２ｄｅｌＣ；７３５＿８６２ｄｅｌ１２８；１６６＿１７８ｄｅｌ１３；４３１ｄｅｌＣ；５７９ｄｅｌＣ；１５７ｄｅｌＧ；８１０ｄｅｌＧ；５９８＿１３ｄｅｌ２２；５４４＿５４６ｄｅｌＣＴＧ；８２７ｄｅｌＧ；１６９ｄｅｌＧ；２９１＿３７８ｄｅｌ８８；５９８ｄｅｌＧ；８４２ｄｅｌＣ；４６５＿８６２ｄｅｌ１３９８；６３３ｄｅｌＧ；１３０２ｄｅｌ１３０２；３７９＿４３３ｄｅｌ５５；１２８＿１２９ｄｅｌＣ；１４２＿１４３ｄｅｌＡ；１８０ｄｅｌＣ；２０９ｄｅｌＡ；２２７＿２２８ｄｅｌＣ；４７＿６５１ｄｅｌ６０５；１５３＿５３６ｄｅｌ３８４；エキソン２−３ｄｅｌ；エキソン２−３ｄｅｌ；エキソン２−３ｄｅｌ；エキソン２−４ｄｅｌ；５６２＿５６３ｄｅｌＧ；エキソン４ｄｅｌ；エキソン４ｄｅｌ；エキソン４ｄｅｌ；エキソン４ｄｅｌ；６１０＿６２３ｄｅｌ１４；８３７ｄｅｌＣ；４６４＿４６５ｄｅｌ２ＧＧｉｎｓＴＴＴＧＣＴ；７５＿７６ｄｅｌ２＆ｉｎｓＴ；１２５＿１２７ｉｎｓＧＧ；５８４＿５８５ｉｎｓＴ；７０４＿７０５ｉｎｓＡ；１５２＿１５３ｉｎｓＣＴ；８４２＿８４３ｉｎｓＣ；６４９＿６５０ｉｎｓＧ；１２７＿１２８ｉｎｓＧＧ；９７９＿９８０ｉｎｓＡＧ；１６５＿１６６ｉｎｓＴ；エキソン６ｄｅｌ；１０３９＿１０４０ｉｎｓＧ；７３５−２Ａ＞Ｔ；５９８２ＡＴ；４６５−１Ｇ＞Ａ；４６５−１Ｇ＞Ｔ；２９１−２Ａ＞Ｔ；９２１−１Ｇ＞Ａ；および／または５９７＋１Ｇ＞Ｔ；１４３＿１４４＞Ｔ；８４１＿８４２＞Ｔ；および／または２７１＿２７２ＧＧ＞ＴＴから選択される、ＬＫＢ１における少なくとも一つの欠失、挿入、置換、または複合突然変異を有する。
【００２４】
別の実施形態では、ＬＫＢ１の欠失、挿入または突然変異は、触媒キナーゼドメイン内にある。ＬＫＢ１の欠失、挿入または突然変異は、コドン５０〜３３７内にあり得る。一実施形態では、ＬＫＢ１における突然変異、欠失または挿入は、末端切断型タンパク質を生じる。ＬＫＢ１の野生型ヌクレオチド配列およびタンパク質配列は当技術分野で公知であり、Ｑ１５８３１（ＳＴＫ１１＿ＨＵＭＡＮ）ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔから入手可能である。
【００２５】
一態様では、癌は固形腫瘍癌である。固形腫瘍癌は、限定されるものではないが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、腺癌を含む肺癌、または膵臓癌であり得る。
【００２６】
一実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、下記構造（Ｉ）：
【化３】
2013545757.tif 000004
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物（以下、化合物Ａ）を含んでなる。
【００２７】
一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン、ラパログ、エベロリムス、デフォロリムス、およびテムシロリムスから選択される。ｍＴＯＲ阻害剤は、以下、化合物Ｂとも称することがある。
【００２８】
一実施形態では、腫瘍細胞はまた、少なくとも一つのＢｒａｆ突然変異も有する。Ｂｒａｆ突然変異としては、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅが含まれる。
【００２９】
一実施形態では、哺乳動物は、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤に対して完全反応を示す。
【００３０】
本明細書ではまた、哺乳動物の癌を治療する方法であって、前記哺乳動物からの少なくとも一つの腫瘍細胞において、Ｒａｓタンパク質またはＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異の有無、およびＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失、または挿入の有無と、少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤による治療に対する高い反応の可能性とを相関させることを含んでなる方法も提供される。
【００３１】
別の実施形態では、構造（Ｉ）（Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ(dimethy)−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミドとも称される）、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物（以下、化合物Ａ、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物）は、ナトリウム塩の形態である。別の態様では、化合物Ａはジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。
【００３２】
Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ(dimethy)−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミド、または薬学的に許容可能な塩は、マイトジェン活性化細胞外シグナル調節キナーゼ１（ＭＥＫ１）およびＭＥＫ２の、選択性の高いアロステリック阻害剤である。ＭＥＫタンパク質は、一般に腫瘍細胞において過剰に活性化されている特定の細胞外シグナル関連キナーゼＥＲＫ経路の分岐点である。Ｂ−ｒａｆおよびＲａｓの双方における発癌突然変異は、ＭＥＫ１およびＭＥＫ２を介してシグナルを伝達する。in vitroでは、細胞増殖アッセイにおいて、Ｂ−Ｒａｆの活性化突然変異を有する細胞株の８０％およびＲａｓ変異細胞株の７２％が、Ｎ−｛３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６，８−ジメチ(dimethy)−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル｝アセトアミド、または薬学的に許容可能な塩に対して感受性であり、大多数（急性または慢性骨髄性白血病（それぞれＡＭＬまたはＣＭＬ）由来の造血系癌の８３％）の起源も極めて感受性が高かった。
【００３３】
化合物Ａは、その薬学的に許容可能な塩および溶媒和物とともに、特に癌の治療においてＭＥＫ活性の阻害剤として有用であることが、国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号（国際出願日２００５年６月１０日）；国際公開第ＷＯ２００５／１２１１４２号（国際公開日２００５年１２月２２日）に開示され、特許請求されている。これらの公報の開示内容は、引用することにより、本明細書の開示の一部とされる。化合物Ａは、実施例４−１の化合物である。化合物Ａは、国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号に記載の通りに製造することができる。化合物Ａは、米国特許出願公開第ＵＳ２００６／００１４７６８号（２００６年１月１９日公開）に記載の通りに製造することができる。この公報は引用することにより本明細書の開示の一部とされる。
【００３４】
好適には、化合物Ａはジメチルスルホキシド溶媒和物の形態である。好適には、化合物Ａはナトリウム塩の形態である。好適には、化合物Ａは、水和物、酢酸、エタノール、ニトロメタン、クロロベンゼン、１−ペンタンシ(1-pentanci)、イソプロピルアルコール、エチレングリコールおよび３−メチル−１−ブタノールから選択される溶媒和物の形態である。これらの溶媒和物および塩形態は、当業者ならば、例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０１１０８２号または米国特許出願公開第ＵＳ２００６／００１４７６８号の記載から製造することができる。
【００３５】
本発明の化合物は、１以上のキラル原子を含有してもよく、または２つの鏡像異性体として存在してもよい。従って、本発明の化合物は、鏡像異性体混合物ならびに精製された鏡像異性体または鏡像異性体的に富化された混合物を含む。また、全ての互変異性体および互変異性体混合物が、化合物Ａおよびその薬学的に許容可能な塩、ならびに化合物Ｂおよびその薬学的に許容可能な塩の範囲内に含まれるものと理解される。
【００３６】
本発明の化合物は、溶質（本発明では、化合物Ａもしくはその塩および／または化合物Ｂもしくはその塩）と溶媒により形成される可変化学量論の複合体であると理解される溶媒和物を形成し得る。本発明のためのこのような溶媒は、溶質の生物活性に干渉してはならない。好適な溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、メタノール、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が挙げられる。好適には、使用される溶媒は、薬学的に許容可能な溶媒である。好適な薬学的に許容可能な溶媒の例としては、限定されるものではないが、水、ジメチルスルホキシド、エタノールおよび酢酸が挙げられる。好適には、使用される溶媒は水である。
【００３７】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、当業者によって容易に製造される。
【００３８】
また、化合物Ａもしくはその薬学的に許容可能な塩、および／または化合物Ｂもしくはその薬学的に許容可能な塩がプロドラッグとして投与される、本発明の組合せを使用して癌を治療する方法も本明細書において意図される。本発明の化合物の薬学的に許容可能なプロドラッグは、当業者によって容易に製造される。
【００３９】
本明細書において「治療」およびその派生語は、治療的療法を意味する。特定の症状に関して治療は、（１）その病態の生物学的徴候の１以上の病態を改善または予防すること、（２）（ａ）その病態に至る、もしくはその病態の原因となる生体カスケードの１以上の点、または（ｂ）その病態の生物学的徴候の１以上を妨げること、（３）その病態またはその治療に関連する症状、作用または副作用のうち１以上を緩和すること、あるいは（４）その病態、または病態の生物学的徴候の１以上の進行を遅らせることを意味する。それにより、予防的療法も意図される。当業者ならば、「予防」が絶対的な用語ではないことが分かるであろう。医学では、「予防」は、ある病態またはその生物学的徴候の見込みまたは重篤度を実質的に減らすため、またはそのような病態またはその生物学的徴候の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。予防的療法は、例えば、被験体が癌を発症する高いリスクを持つと考えられる場合、例えば、被験体が癌の強い家族歴を持つ場合、または被験体が発癌物質に曝されていた場合に適当である。
【００４０】
当技術分野で理解されるように、用語「完全緩解」、「完全反応」および「完全退縮」は、治療に反応した癌の検出可能な徴候および／または症状の総ての消失を意味する。これもまた当技術分野で理解されるように、癌の検出可能な徴候または症状は、治療される癌のタイプおよび病期に基づいて定義することができる。例として、ＮＳＣＬＣを有する被験体における治療に対する「完全反応」は、Ｘ線またはＣＡＴスキャンで目に見える肺腫瘍が見られないこととして呈具することができる。いくつかの場合では、臨床反応は、下記のようなＲＥＣＩＳＴ  １．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ、２００９）によって定義することができる。
【００４１】
【表１】
2013545757.tif 000005
【００４２】
本明細書においてＮＳＣＬＣの「臨床有用性反応率」は（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ≧４ｍｏｓ）を意味する。正の臨床反応は、治療を受けた後のＣＲ＋ＰＲを意味し得る。
【００４３】
本明細書において用語「有効量」は、例えば研究者または医師が求める、組織、系、動物またはヒトの生物学的応答または医学的応答を誘発する薬物または医薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容しなかった対応する被験体に比べて、治療の改善、治癒、予防、または疾患、障害もしくは副作用の改善、または疾患もしくは障害の進行の減速をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理機能を促進するのに効果的な量も含む。
【００４４】
本発明において用語「組合せ」およびその派生語は、治療上有効な量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩の同時投与または任意の方式の個別逐次投与のいずれかを意味する。好ましくは、投与が同時ではない場合、化合物は互いに近接した時間に投与される。さらに、これらの化合物が同じ剤形で投与されるか否かは重要ではなく、例えば、ある化合物を局所投与してもよく、他の化合物を経口投与してもよい。好適には、両方の化合物が経口投与される。
【００４５】
本発明において用語「組合せキット」は、本発明による化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を投与するために用いられる一つまたは複数の医薬組成物を意味する。両方の化合物を同時に投与する場合、組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を、錠剤などの単一の医薬組成物中に、または別個の医薬組成物中に含有することができる。これらの化合物を同時に投与しない場合には、組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を別個の医薬組成物中に含有する。組合せキットは、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩および化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を、単一の包装内の別個の医薬組成物中に、または別々の包装内の別々の医薬組成物中に含むことができる。
【００４６】
一態様では、成分：
薬学的に許容可能な担体を伴う、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、および
薬学的に許容可能な担体を伴う、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩
を含んでなる組合せキットが提供される。
【００４７】
本発明の一実施形態では、組合せキットは下記成分：
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、および
薬学的に許容可能な担体を伴う化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩
を含んでなり、これらの成分は逐次投与、個別投与、および／または同時投与に好適な形態で提供される。
【００４８】
一実施形態では、組合せキットは、
化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を薬学的に許容可能な担体とともに含んでなる第１の容器と、
化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を薬学的に許容可能な担体とともに含んでなる第２の容器と、
第１の容器と第２の容器を収容するための容器手段と
を含んでなる。
【００４９】
「組合せキット」はまた、用量および投与説明などの説明書を備えていてもよい。このような用量および投与説明は、例えば薬品ラベルによって医師に提供される種類のものであってもよいし、あるいは患者への説明など、医師によって提供される種類のものであってもよい。
【００５０】
本明細書において用語「化合物Ａ２」は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を意味する。
【００５１】
本明細書において用語「化合物Ｂ２」は、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩を意味する。
【００５２】
好適には、本発明の組合せは「一定期間」内に投与される。
【００５３】
本明細書において用語「一定期間」およびその派生語は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の投与の間の時間間隔を意味する。特に断りのない限り、この一定期間は同時投与を含み得る。特に断りのない限り、この一定期間は単一日の化合物Ａ２および化合物Ｂ２の投与を意味する。
【００５４】
好適には、これらの化合物が「一定期間」内に投与されるが、同時に投与されない場合には、これらの化合物は両方とも互いに約２４時間以内に投与され、この場合、一定期間は約２４時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約１２時間以内に投与され、この場合には、一定期間は約１２時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約１１時間以内に投与され、この場合には、一定期間は約１１時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約１０時間以内に投与され、この場合、一定期間は約１０時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約９時間以内に投与され、この場合、一定期間は約９時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約８時間以内に投与され、この場合、一定期間は約８時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約７時間以内に投与され、この場合、一定期間は約７時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約６時間以内に投与され、この場合、一定期間は約６時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約５時間以内に投与され、この場合、一定期間は約５時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約４時間以内に投与され、この場合、一定期間は約４時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約３時間以内に投与され、この場合、一定期間は約３時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約２時間以内に投与され、この場合、一定期間は約２時間となり；好適には、これらの化合物が両方とも互いに約１時間以内に投与され、この場合、一定期間は約１時間となる。本明細書において、化合物Ａ２と化合物Ｂ２の投与間隔が約４５分未満であれば同時投与とみなされる。
【００５５】
好適には、本発明の組合せが「一定期間」投与される場合、これらの化合物はある「持続時間」併用投与される。
【００５６】
本明細書において用語「持続時間」およびその派生語は、本発明の両化合物が指定の連続日数投与されることを意味する。特に断りのない限り、この連続日数は、治療の開始で始まる、または治療の終了で終わる必要はなく、その連続日数が治療クールのどこかの時点にあればよいに過ぎない。
【００５７】
「一定期間」の投与に関して、
好適には、両化合物が一定期間内に少なくとも１日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも１日間となり；好適には、その治療クールの間、両化合物が一定期間内に少なくとも連続３日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも３日間となり；好適には、その治療クールの間、両化合物が一定期間内に少なくとも連続５日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも５日間となり；好適には、その治療クールの間、両化合物が一定期間内に少なくとも連続７日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも７日間となり；好適には、その治療クールの間、両化合物が一定期間内に少なくとも連続１４日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも１４日間となり；好適には、その治療クールの間、両化合物が一定期間内に少なくとも連続３０日間投与され、この場合、その持続時間は少なくとも３０日間となる。
【００５８】
好適には、これらの化合物が「一定期間」の間に投与されない場合は、逐次投与される。本明細書において「逐次投与」およびその派生語は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が連続２日以上、１日１回投与され、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が引き続き連続２日以上、１日１回投与されることを意味する。また、本明細書では、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方と化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の逐次投与間に設ける休薬日も意図する。本明細書において、休薬日は、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方の連続投与後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方の投与前の、化合物Ａ２も化合物Ｂ２も投与されないある日数である。好適には、休薬日は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、および１４日間から選択される日数である。
【００５９】
逐次投与に関して、
好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が連続２〜３０日間投与され、その後、任意選択の休薬日の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が連続２〜３０日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が連続２〜２１日間投与され、その後、任意選択の休薬日の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が連続２〜２１日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が連続２〜１４日間投与され、その後、１〜１４日間の休薬日の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が連続２〜１４日間投与される。好適には、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の一方が連続３〜７日間投与され、その後、３〜１０日間の休薬日の後、化合物Ａ２および化合物Ｂ２の他方が連続３〜７日間投与される。
【００６０】
好適には、まず化合物Ｂ２が連続投与され、その後、任意選択の休薬日の後、化合物Ａ２が投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、その後、任意選択の休薬日の後、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、その後、１〜１４日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３〜２１日間投与され、その後、３〜１４日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続３〜２１日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続２１日間投与され、その後、任意選択の休薬日の後、化合物Ａ２が連続１４日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続１４日間投与され、その後、１〜１４日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続１４日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続７日間投与され、その後、３〜１０日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続７日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３日間投与され、その後、３〜１４日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続７日間投与される。好適には、化合物Ｂ２が連続３日間投与され、その後、３〜１０日間の休薬日の後、化合物Ａ２が連続３日間投与される。
【００６１】
「一定期間」の投与および「逐次」投与の後に反復投与を行うことができ、または交互投与プロトコールを行うことができ、また、その反復投与または交互投与プロトコールの前に休薬日を設けてもよいと理解される。
【００６２】
好適には、本発明による組合せの一部として投与される化合物Ａ２の量は、約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量であり；好適には、この量は約０．２５ｍｇ〜約９ｍｇから選択され；好適には、この量は約０．２５ｍｇ〜約８から選択され；好適には、この量は約０．５ｍｇ〜約８ｍｇから選択され；好適には、この量は約０．５ｍｇ〜約７ｍｇから選択され；好適には、この量は約１ｍｇ〜約７ｍｇから選択され；好適には、この量は約５ｍｇである。よって、本発明による組合せの一部として投与される化合物Ａの量は、約０．１２５ｍｇ〜約１０ｍｇから選択される量である。例えば、本発明による組合せの一部として投与される化合物Ａ２の量は、０．１２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇであり得る。
【００６３】
好適には、本発明による組合せの一部として投与される化化合物Ｂ２の量は、約７５ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択される量であり；好適には、この量は約１００ｍｇ〜約９００ｍｇから選択され；好適には、この量は約１５０ｍｇ〜約８５０ｍｇから選択され；好適には、この量は約２００ｍｇ〜約８００ｍｇから選択され；好適には、この量は約２５０ｍｇ〜約７５０ｍｇから選択され；好適には、この量は約３００ｍｇ〜約６０００ｍｇから選択され；好適には、この量は約４５０ｍｇである。よって、本発明による組合せの一部として投与される化化合物Ｂ２の量は、約７５ｍｇ〜約１，０００ｍｇから選択される量である。例えば、本発明による組合せの一部として投与される化化合物Ｂ２の量は、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４００ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ、８００ｍｇ、８２５ｍｇ、８５０ｍｇ、８７５ｍｇ、９００ｍｇ、９２５ｍｇ、９５０ｍｇ、９７５ｍｇまたは１，０００ｍｇであり得る。
【００６４】
本明細書において、化合物Ａ２および化合物Ｂ２に関して示される総ての量は、１用量当たりの遊離型または塩および溶媒和物を形成していない化合物の投与量として示される。
【００６５】
本発明の方法はまた、癌治療の他の治療法と併用してもよい。
【００６６】
療法における使用に関して、治療上有効な量の本発明の組合せはそのままの化学物質として投与することもできるが、それらの組合せを１または複数の医薬組成物として提供することが好ましい。よって、本発明はさらに、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２と１以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の組合せは上記の通りである。前記担体は、処方物の他の成分と適合し、医薬処方が可能であり、かつ、そのレシピエントに害がないという点で許容されるものでなければならない。本発明の別の態様によれば、化合物Ａ２および／または化合物Ｂ２を１以上の薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、医薬処方物の製造方法も提供される。上記に示したように、使用される医薬組合せのこのような要素は別個の医薬組成物として提供してもよいし、または一つの医薬処方物として一緒に処方してもよい。
【００６７】
医薬処方物は、単位用量当たりに所定量の有効成分を含有する単位投与形で提供してもよい。当業者に知られているように、１用量当たりの有効成分の量は治療される病態、投与経路、ならびに患者の年齢、体重および状態によって異なる。好ましい単位投与処方物は有効成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適当な分数を含有するものである。さらに、このような医薬処方物は、製薬分野で周知の任意の方法によって製造することができる。
【００６８】
化合物Ａ２および化合物Ｂ２は適当な経路のいずれによって投与してもよい。好適な経路としては、経口、直腸、鼻腔、局所（頬側および舌下）、膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外を含む）が含まれる。当然のことながら、好ましい経路は、例えば、その組合せのレシピエントの状態および治療される癌によって異なり得る。また、当然のことながら、投与する各薬剤は同じ経路によって投与しても異なる経路によって投与してもよく、化合物Ａ２および化合物Ｂ２は混成して医薬組成物／処方物としてもよい。
【００６９】
本発明の化合物または組合せは、カプセル剤、錠剤または注射製剤などの便宜な投与形に配合される。固体または液体の医薬担体が用いられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアガム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸が挙げられる。液体担体としては、シロップ、落花生油、オリーブ油、生理食塩水および水が挙げられる。同様に、担体はモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの持続放出材料を単独で、またはワックスとともに含んでよい。固体担体の量は多様であるが、好ましくは、単位用量当たり約２５ｍｇ〜約１である。液体担体が使用される場合、その製剤は好適には、シロップ、エリキシル剤、エマルション、ゼラチン軟カプセル剤、アンプルなどの無菌注射液、または水性もしくは非水性懸濁液の形態である。
【００７０】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態の経口投与のためには、有効薬物成分を経口用で無毒の薬学的に許容可能な不活性担体、例えば、エタノール、グリセロール、水などと合わせることができる。散剤は、前記化合物を好適な微細なサイズに粉砕し、同様に粉砕した医薬担体、例えば、デンプンまたはマンニトールなどの可食炭水化物と混合することによって製造される。着香剤、保存剤、分散剤および着色剤も存在してよい。
【００７１】
上述の成分に加えて、前記処方物は、対象とする処方物の種類に関して当技術分野で慣例の他の薬剤を含んでもよいと理解されるべきであり、例えば、経口投与に好適なものは着香剤を含み得る。
【００７２】
示されているように、治療上有効な量の本発明の組合せ（化合物Ａ２と化合物Ｂ２の組合せ）がヒトに投与される。一般に、投与される本発明の薬剤の治療上有効な量は、例えば、被験体の齢および体重、治療を必要とする正確な病態、病態の重篤度、処方物の性質、および投与経路を含むいくつかの因子によって異なる。最終的には、治療上有効な量は担当医の裁量下にある。
【００７３】
本発明の組合せは、既知の手順に従い、有効性、有利な特性および相乗作用的特性に関して試験される。好適には、本発明の組合せは、一般に下記の組合せ細胞増殖アッセイに従い、有効性、有利な特性および相乗作用的特性に関して試験される。細胞を、３８４ウェルプレートに、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを添加した、各細胞種に適した培養培地中、５００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートする。細胞を、化合物Ａ２の希釈液（化合物不含、化合物によって１〜２０μＭから始まる２倍希釈系を含む２０の希釈液）で、３８４ウェルプレートの左から右へと格子方式で処理し、また、化合物Ｂ２（化合物不含、化合物によって１〜２０μＭから始まる２倍希釈系を含む２０の希釈液）でも、３８４ウェルプレートの上から下へと格子方式で処理し、さらに７２時間、上記のようにインキュベートする。いくつかの場合では、化合物を互い違いに加え、インキュベーション時間を７日まで延長することができる。細胞増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）試薬を製造者のプロトコールに従って使用して測定し、シグナルは、発光モードに設定したＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）リーダーにて０．５秒刻みで読み取る。以下のようにしてデータを分析する。
【００７４】
結果はｔ＝０値のパーセンテージとして表し、化合物濃度に対してプロットする。ｔ＝０値を１００％として正規化し、添加物添加時に存在する細胞を表す。細胞応答は、各化合物および／または各化合物組合せに関して、マイクロソフトエクセルソフトウエア用のＩＤＢＳ  ＸＬｆｉｔプラグインを用い、濃度に対する細胞生存率の４パラメーターまたは６パラメーター曲線の当てはめ使用して、細胞増殖の５０％阻害に必要とされる濃度（ｇＩＣ５０）を求めることで決定する。バックグラウンド補正は、細胞を含まないウェルから得られた値を差し引くことにより行う。各薬物組合せに関して、組合せ指数（ＣＩ）、Ｅｘｃｅｓｓ  Ｏｖｅｒ  Ｈｉｇｈｅｓｔ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ａｇｅｎｔ（ＥＯＨＳＡ）およびＥｘｃｅｓｓ  Ｏｖｅｒ  Ｂｌｉｓｓ（ＥＯＢｌｉｓｓ）を、Chou and Talalay (1984) Advances in Enzyme Regulation, 22, 37-55;およびBerenbaum, MC (1981) Adv. Cancer Research, 35, 269-335に記載されているものなどの既知の方法に従って計算する。
【００７５】
本発明の組合せは上記のアッセイで有効であることから、それらは癌治療において有利な治療有用性を示す。いくつかの場合では、癌は固形腫瘍癌であり得る。他の場合では、癌は、限定されるものではないが、白血病、骨髄腫、またはリンパ腫などの液性腫瘍であり得る。
【００７６】
好適には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロ病、乳癌、炎症性乳癌、ビルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、結腸癌、頭頚部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉腫、骨の巨大細胞腫瘍、甲状腺、
リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、ヘアリー細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、
悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、
神経芽腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、陰門癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽頭癌、頬癌、口腔癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）および精巣癌
から選択される癌を治療するまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【００７７】
好適には、本発明は、脳腫瘍（神経膠腫）、膠芽腫、バナヤン−ゾナナ症候群、カウデン病、レルミット−デュクロ病、乳癌、結腸癌、頭頚部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫および甲状腺から選択される癌を治療するまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【００７８】
好適には、本発明は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌および前立腺癌から選択される癌を治療するまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【００７９】
好適には、本発明は、限定されるものではないが、非小細胞；非小細胞肺癌；ＮＳＣＬＣ；肺腺癌；および扁平上皮癌を含む肺癌を治療する方法に関する。
【００８０】
好適には、本発明は、白血病および骨髄悪性腫瘍から選択される癌を治療するまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【００８１】
好適には、本発明は、上皮癌を治療するまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【００８２】
本明細書において用語「癌」、「新生物」、および「腫瘍」は互換的に用いられ、単数形または複数形のいずれかで、宿主生物に対して病的となる悪性化を受けた細胞を意味する。原発性癌細胞（すなわち、悪性化部位の近傍から得られた細胞）は、十分確立された技術、特に、組織学的検査によって非癌性細胞から容易に識別することができる。本明細書において癌細胞の定義には、原発性癌細胞を含むだけでなく、癌細胞祖先に由来するいずれの細胞も含む。これには、転移癌細胞、ならびに癌細胞に由来するin vitro培養物および細胞株が含まれる。通常固形腫瘍として顕在化する癌のタイプに関していう場合、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えば、ＣＡＴスキャン、ＭＲ画像、Ｘ線、超音波もしくは触診などの手段により、腫瘍塊に基づいて検出可能なもの、および／または患者から取得可能なサンプルにおける１以上の癌特異的抗原の発現によって検出可能なものである。腫瘍は、液性腫瘍を意味する、造血系腫瘍、例えば、血液細胞などの腫瘍であり得る。このような腫瘍に基づく臨床病態の具体例としては、慢性骨髄球性白血病または急性骨髄球性白血病などの白血病；多発性骨髄腫などの骨髄腫；リンパ腫などが挙げられる。
【００８３】
一般に、治療される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も、本発明の癌治療において同時投与することができる。このような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita and S. Hellman (編), 第6版 (2001年2月15日), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出すことができる。当業者ならば、関与する薬物および癌の特定の特徴に基づき、どの薬剤組合せが有用であるかを認識することができる。本発明で有用な一般的な抗新生物薬としては、限定されるものではないが、抗微小管剤、例えば、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイド；白金錯体；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、オキシアザホスホリン、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、およびトリアゼン；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシン；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、エピポドフィロトキシン；代謝拮抗物質、例えば、プリンおよびピリミジン類似体および葉酸拮抗化合物；トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；受容体チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−トレオニンキナーゼ阻害剤；非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤；血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進薬；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が挙げられる。
【００８４】
本発明はまた、限定されるものではないが、化合物Ｂまたはその薬学的に許容可能な塩および別の抗新生物薬を含むＢｒａｆ阻害剤とともに、または伴わずに、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含んでなる、癌を治療する方法も提供する。
【００８５】
化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と組み合わせて使用される、または同時投与されるさらなる１または複数の有効成分（抗新生物薬）の例は、化学療法薬である。
【００８６】
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞周期特異的薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【００８７】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する周期相特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【００８８】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン生成物であり、注射液ＴＡＸＯＬ（商標）として市販されている。パクリタキセルは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、１９７１年にＷａｎｉら(J. Am. Chem, Soc., 93:2325. 1971)によって初めて単離され、彼が化学法およびＸ線結晶学的方法によってその構造を同定した。その活性の一つの機構は、パクリタキセルの、チューブリンと結合し、それにより癌細胞増殖を阻害する能力に関連している。Schiff et al., Proc. Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。いくつかのパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性に関する総説としては、D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, “New trends in Natural Products Chemistry 1986”, Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne編(Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【００８９】
パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療における臨床使用(Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111:273,1989)および乳癌の治療(Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)に承認されている。パクリタキセルは、皮膚における新生物(Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頚部癌(Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990)の治療のための有望な候補である。またこの化合物は、多発性嚢胞腎疾患(Woo et. al., Nature, 368:750. 1994)、肺癌、およびマラリアの治療にも可能性を示している。パクリタキセルで患者を治療すると、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与期間に関連して(Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)、骨髄抑制が起こる（複数の細胞系譜、Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）。
【００９０】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に用いられる。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出した天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、任意量のパクリタキセルの半合成誘導体である。ドセタキセルの用量制限毒性は好中球減少である。
【００９１】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ由来の細胞周期特異的抗悪性腫瘍剤である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【００９２】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射液としてＶＥＬＢＡＮ（商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として用いられる可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として用いられている。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【００９３】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてＯＮＣＯＶＩＮ（商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に用いられており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用されている。脱毛および神経学的作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、程度は低いが、骨髄抑制および胃腸粘膜炎作用が生じる。
【００９４】
酒石酸ビノレルビンの注射液（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて、種々の固形腫瘍、特に、非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療に用いられている。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【００９５】
白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【００９６】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてＰＬＡＴＩＮＯＬ（商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に用いられている。シスプラチンの主な用量制限副作用は、腎毒性（水分補給と利尿により管理可能）、および耳毒性である。
【００９７】
カルボプラチン、白金ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］は、注射液としてＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行性卵巣癌の第一選択および第二選択治療に用いられている。骨髄抑制がカルボプラチンの用量制限毒性である。
【００９８】
アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロソ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【００９９】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてＣＹＴＯＸＡＮ（商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に用いられている。脱毛、悪心、嘔吐および白血球減少がシクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１００】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてＡＬＫＥＲＡＮ（商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の緩和療法(palliative treatment)に用いられている。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０１】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、ＬＥＵＫＥＲＡＮ（商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病などの悪性リンパ腫の緩和療法に用いられている。骨髄抑制がクロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０２】
ブスルファン、ジメタンスルホン酸１，４−ブタンジオールは、ＭＹＬＥＲＡＮ（商標）ＴＡＢＬＥＴＳとして市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法に用いられている。骨髄抑制がブスルファンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０３】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ＢｉＣＮＵ（商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、緩和療法に用いられている。遅発性骨髄抑制がカルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０４】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、単一バイアルとしてＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合わせてホジキン病の第二選択治療に用いられている。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０５】
抗生物質系抗新生物薬は、非細胞周期特異的薬剤であり、ＤＮＡと結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。一般に、このような作用によって安定なＤＮＡ複合体かまたは鎖の切断が生じ、それにより核酸の通常機能が乱れ、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントロサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０１０６】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でＣＯＳＭＥＧＥＮ（商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に用いられている。悪心、嘔吐および食欲不振症がダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０７】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射液の形態でＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（商標）として、または注射液としてＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に用いられている。骨髄抑制がダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０８】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射液の形態としてＲＵＢＥＸ（商標）またはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ  ＲＤＦ（商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に用いられているが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。骨髄抑制がドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１０９】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物質の混合物は、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の緩和療法に用いられている。肺毒性および皮膚毒性がブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０１１０】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０１１１】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩとＤＮＡとの三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０１１２】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてＶｅＰＥＳＩＤ（商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に用いられている。骨髄抑制がエトポシドの最も一般的な副作用である。白血球減少の発生率の方が、血小板減少症よりも重大となる傾向がある。
【０１１３】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてＶＵＭＯＮ（商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に用いられている。骨髄抑制がテニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少および血小板減少の双方を誘導し得る。
【０１１４】
代謝拮抗性抗新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞周期特異的抗新生物薬である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死をたどる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メカプトプリン(mecaptopurine)、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【０１１５】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸の合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に用いられている。骨髄抑制および粘膜炎が５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０１１６】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に用いられている。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンは、白血球減少、血小板減少、および粘膜炎を誘発する。
【０１１７】
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に用いられている。骨髄抑制および胃腸粘膜炎が、高用量のメルカプトプリンの副作用と予想される。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０１１８】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、ＴＡＢＬＯＩＤ（商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に用いられている。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制がチオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、消化管副作用も起こり、用量制限となり得る。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０１１９】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ＧＥＭＺＡＲ（商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行性非小細胞肺癌の治療に用いられ、また単独で局所進行性膵癌の治療に用いられている。白血球減少、血小板減少、および貧血を含む骨髄抑制が、ゲムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【０１２０】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞周期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭頚部癌、卵巣癌、および膀胱癌の治療に用いられている。骨髄抑制（白血球減少、血小板減少、および貧血）および粘膜炎が、メトトレキサート投与の予想される副作用である。
【０１２１】
カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学形態が挙げられる
【０１２２】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（商標）として市販されている。
【０１２３】
イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に用いられている。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少を含む骨髄抑制、および下痢を含むＧＩ作用である。
【０１２４】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ＨＹＣＡＭＴＩＮ（商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に用いられている。トポテカンＨＣｌの用量規制副作用は、骨髄抑制、主に好中球減少である。
【０１２５】
ＶＯＴＲＩＥＮＴ（商標）として市販されているパゾパニブは、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。パゾパニブは、塩酸塩として提供され、化学名は５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩である。パゾパニブは、進行性腎細胞癌患者の治療に承認されている。
【０１２６】
リツキシマブは、ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）およびＭＡＢＴＨＥＲＡ（商標）として販売されているキメラモノクローナル抗体である。リツキシマブはＢ細胞上のＣＤ２０に結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に承認されている。
【０１２７】
オファツムマブは、ＡＲＺＥＲＲＡ（商標）として販売されている完全ヒトモノクローナル抗体である。オファツムマブはＢ細胞上のＣＤ２０に結合し、フルダラビン（フルダラ）およびアレムツズマブ（キャンパス）による治療に不応の成人の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するために使用されている。
【０１２８】
ｍＴＯＲ阻害剤としては、限定されるものではないが、ラパマイシン（ＦＫ５０６）およびラパログ、ＲＡＤ００１またはエベロリムス（アフィニトール）、ＣＣＩ−７７９またはテムシロリムス、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ−３５４、ＷＹＥ−６００、ＷＹＥ−６８７およびＰｐ１２１が挙げられる。
【０１２９】
エベロリムスはノバルティスによりアフィニトール（商標）として販売され、シロリムスの４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）誘導体であり、ｍＴＯＲ（哺乳動物ラパマイシン標的(mammalian target of rapamycin)）阻害剤としてシロリムスと同様に働く。現在、臓器移植拒絶を防ぐ免疫抑制薬として、また、腎細胞癌の治療に使用されている。また、いくつかの癌で使用するためにエベロリムスおよび他のｍＴＯＲ阻害剤に対して多くの研究が行われている。エベロリムスは以下の下記化学構造（式ＩＩ）および化学名を有する。
【化４】
2013545757.tif 000006
【０１３０】
ジヒドロキシ−１２−［（２Ｒ）−１−［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシシクロヘキシル］プロパン−２−イル］−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−２，３，１０，１４，２０−ペントン
ベキサロテンはターグレチン（商標）として販売され、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を選択的に活性化するレチノイドのサブクラスのメンバーである。これらのレチノイド受容体は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）のものとは異なる生物活性を有する。化学名は４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸である。ベキサロテンは、少なくとも一つの他の薬剤では疾患が上手く治療できなかった患者において皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ、皮膚癌の一種）を治療するために使用される。
【０１３１】
ネクサバール（商標）として市販されているソラフェニブは、マルチキナーゼ阻害剤と呼ばれる薬剤クラスにある。その化学名は４−［４−［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドである。ソラフェニブは、進行性腎細胞癌（腎臓で始まる癌の一種）を治療するために使用される。ソラフェニブはまた、切除不能性肝細胞癌（手術で治療できない肝臓癌の一種）を治療するためにも使用される。
【０１３２】
好適には、本発明は、Ｒａｆが野生型または変異型のいずれかであり、ＰＩ３Ｋ／Ｐｔｅｎが野生型または変異型のいずれかである癌を治療する、またはその重篤度を軽減する方法に関する。これには、ＲａｆおよびＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮの両方またはいずれかが野生型であって、Ｒａｓ変異型でもある患者が含まれる。
【０１３３】
当技術分野で理解されるように用語「野生型」は、遺伝子改変のない天然集団に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。これもまた当技術分野で理解されるように、「突然変異体」は、それぞれ野生型ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに見られる対応するアミノ酸または核酸と比較して、アミノ酸または核酸に少なくとも一つの改変を有するポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列を含む。突然変異体という用語には、最も高頻度に見られる（野生型）核酸鎖に比べて、核酸鎖の配列に塩基対の違いが一つだけ存在する一塩基多型（ＳＮＰ）が含まれる。
【０１３４】
本明細書において被験体の腫瘍細胞を含む細胞（またはＤＮＡもしくは他の生体サンプル）を、ある遺伝子の突然変異または多型対立遺伝子に関して「遺伝子型決定」するとは、その遺伝子または遺伝子発現産物（例えば、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはタンパク質）のどの対立遺伝子型または多型および／または野生型または体細胞突然変異型が被験体（またはサンプル）に存在するか、または存在しないかを検出すること意味する。このような遺伝子から発現された関連するＲＮＡまたはタンパク質も、多型バリエーションの検出に使用可能である。本発明の目的では、「遺伝子型決定」は、サンプルからの体細胞突然変異ならびに遺伝子型突然変異の決定を含む。本明細書において、対立遺伝子は、他の対立遺伝子変異体の可能性が排除された場合に「検出」することができ、例えば、特定の核酸の位置がアデニン（Ａ）でもチミン（Ｔ）でもまたはシトシン（Ｃ）でもないと分かった場合に、その位置にはグアニン（Ｇ）が存在すると結論付けることができる（すなわち、被験体においてＧが「検出」または「診断」される）。配列バリエーションは、直接（例えば、シーケンシング、例えば、ＥＳＴシーケンシングまたは部分的もしくは完全ゲノムシーケンシングによる）、または間接的に（例えば、制限断片長多型分析、または既知配列のプローブのハイブリダイゼーション検出、または参照鎖コンフォメーション多型による）、または他の既知の方法を用いて検出することができる。
【０１３５】
遺伝子もしくはＰＣＲ産物、またはその断片もしくは一部を含む任意の核酸の配列は、当技術分野で公知の任意の方法（例えば、化学的シーケンシングまたは酵素的シーケンシング）によって配列決定することができる。ＤＮＡの「化学的シーケンシング」は、Maxam and Gilbert (1977) (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560)の方法などの方法を表し、この方法では、個々の塩基特異的反応を用いてＤＮＡがランダムに切断される。ＤＮＡの「酵素的シーケンシング」は、Sanger (Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463)の方法などの方法を表し得る。
【０１３６】
従来の分子生物学、微生物学、およびシーケンシング技術を含む組換えＤＮＡ技術は当業者に周知である。このような技術は、文献で十分に説明されている。例えば、Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (本明細書では「Sambrook, et al., 1989」); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (D. N. Glover編 1985);オリゴヌクレオチド合成(M. J. Gait ed. 1984);核酸ハイブリダイゼーション(B. D. Hames & S. J. Higgins編(1985));転写および翻訳(B. D. Hames & S. J. Higgins編(1984));動物細胞培養(R. I. Freshney編(1986));固定化細胞および酵素(IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984) ; F. M. Ausubel, et al. (編), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)参照。
【０１３７】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）親和性アッセイは、従来のハイブリダイゼーションアッセイの派生型である(Nielsen et al., Science 254:1497-1500 (1991); Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. 114:1895-1897 (1992); James et al., Protein Science 3:1347-1350 (1994))。ＰＮＡは、ワトソン−クリックの塩基対形成の法則に従う構造的ＤＮＡミミックであり、標準的ＤＮＡハイブリダイゼーションアッセイで使用される。ＰＮＡ／ＤＮＡのミスマッチはＤＮＡ／ＤＮＡのミスマッチよりも不安定であり、相補的ＰＮＡ／ＤＮＡ鎖は相補的ＤＮＡ／ＤＮＡ鎖よりも強い結合する形成するので、ＰＮＡはハイブリダイゼーションアッセイにおいてより高い特異性を示す。
【０１３８】
ＤＮＡマイクロアレイは、遺伝子バリエーションおよび多型を検出するために開発された(Taton et al., Science 289:1757-60, 2000; Lockhart et al., Nature 405:827-836 (2000); Gerhold et al., Trends in Biochemical Sciences 24:168-73 (1999); Wallace, R. W., Molecular Medicine Today 3:384-89 (1997); Blanchard and Hood, Nature Biotechnology 149:1649 (1996))。ＤＮＡマイクロアレイは、ガラスまたはナイロン基板上に高速ロボットによって形成され、既知の属性を有するＤＮＡ断片（「プローブ」）を含む。マイクロアレイは、既知のＤＮＡ断片とおよび未知のＤＮＡ断片（「標的」）を照合するために使用される。
【０１３９】
ポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子における用語「少なくとも一つの突然変異」およびその派生語は、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、誘導変異体、置換変異体、欠失変異体、末端切断変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、相同分子種、および／または種間同族体のうち１以上を有するポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子を意味する。例として、Ｒａｓタンパク質の少なくとも一つの突然変異は、細胞内で産生される少なくとも一つのＲａｓタンパク質について、Ｒａｓタンパク質をコードするポリペプチドまたは遺伝子の全配列のうち一部がその細胞には存在しないか、または発現されない、Ｒａｓタンパク質を含む。例えば、Ｒａｓタンパク質は、末端切断型で細胞により産生されてもよく、その末端切断型の配列は、その末端切断部の配列について野生型であってよい。欠失は、遺伝子または遺伝子によりコードされているタンパク質の全部または一部が存在しないことを意味し得る。さらに、細胞内で発現される、または細胞によりコードされるタンパク質のうちあるものは突然変異型であり得、同じ細胞内で産生される同じタンパク質の他のコピーは野生型であり得る。別の例として、Ｒａｓタンパク質における突然変異は、同じＲａｓタンパク質の野生型に比べて、そのアミノ酸配列に１以上のアミノ酸の違いを有するＲａｓタンパク質を含む。別の例を挙げれば、突然変異ＬＫＢ１には、限定されるものではないが、野生型ＬＫＢ１に比べて少なくとも一つのアミノ酸の違いを有するＬＫＢ１が含まれる。突然変異は体細胞型であっても生殖細胞型であってもよい。限定されるものではないが、ＬＫＢ１を含む、ポリペプチドにおける突然変異は、末端切断型タンパク質の発現をもたらし得る。
【０１４０】
本明細書において「遺伝子の異常」は、欠失、置換、付加、転座、被験体の細胞の通常の天然核酸含量に比べての増幅などを意味する。
【０１４１】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は互換的に用いられ、本明細書においては、一般用語として天然タンパク質、断片、ペプチド、またはポリペプチド配列の類似体を指して用いられる。従って、天然タンパク質、断片、および類似体はポリペプチド類の種類である。
【０１４２】
ポリペプチド配列の突然変異に関して「Ｘ＃Ｙ」という表記は当技術分野で認知されており、ここで、「＃」は、突然変異の位置をそのポリペプチドのアミノ酸番号で示し、「Ｘ」は、野生型アミノ酸配列においてその位置に見られるアミノ酸を示し、「Ｙ」は、その位置における変異アミノ酸を示す。例えば、Ｋ−ｒａｓポリペプチドに関して「Ｇ１２Ｓ」の表記は、野生型Ｋ−ｒａｓ配列のアミノ酸番号１２にはグリシンが存在し、そのグリシンが変異型Ｋ−ｒａｓ配列ではセリンに置換されていることを示す。
【０１４３】
本明細書において用語「Ｒａｓタンパク質」は、細胞シグナル伝達に関与するＧＴＰアーゼのサブファミリーであるｒａｓサブファミリーに属する任意のタンパク質を意味する。当技術分野で公知のように、Ｒａｓの活性化は、細胞の増殖、分化および生存を引き起こす。Ｒａｓタンパク質には、限定されるものではないが、Ｈ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓが含まれる。
【０１４４】
本明細書において「ＬＫＢ１」は、セリン／トレオニンキナーゼ１１（ＳＴＫ１１）と同義である。ヒトＬＫＢ遺伝子（ｏｆｆｉｃｉａｌ  ＨＵＧＯ  ｓｙｍｂｏｌ、ＳＴＫ１１）は、ポイツ・イエーガー症候群（ＰＪＳ）患者では欠損しているセリン／トレオニンタンパク質キナーゼをコードしている。ＰＪＳは、消化管および皮膚粘膜色素沈着の過誤腫性ポリープ症を特徴とする常染色体優性遺伝性症候群である。これまでに１４５の異なる生殖細胞系ＬＫＢ１突然変異が報告されている。これらの突然変異の大部分は、末端切断型タンパク質産物をもたらす。一つの突然変異多発点が見出されている。コドン２７９〜２８１の間の１ヌクレオチドリピート（Ｃ６リピート、ｃ．８３７〜ｃ．８４２）における１ｂｐの欠失および１ｂｐの挿入がそれぞれ無関連の６家族および７家族で見出されている。しかしながら、これらの突然変異は、ＰＪＳ家族において同定された全突然変異のうちのおよそ７％（１３／１９３）を占めるに過ぎない。文献を検証すると、４１の散在性腫瘍細胞株および７つの癌細胞株における合計４０の異なる体細胞ＬＫＢ１突然変異が示されている。突然変異は特に肺癌および結腸直腸癌で見られる。体細胞ＬＫＢ１突然変異の大部分はタンパク質の末端切断をもたらす。突然変異多発点はＣ６リピートであると思われ、総ての体細胞突然変異（６／４８）の１２．５％を占める。これらの結果は生殖細胞系突然変異スペクトルと一致している。しかしながら、ミスセンス突然変異の割合は、生殖細胞系突然変異間（２１％）よりも体細胞突然変異間（４５％）で高いと思われ、これらの突然変異のうち、突然変異タイプの両方で全く同じであったのは７つだけある。Hum Mutat 26(4), 291-297, 2005. Launonen. Human Mutation. 26(4), 291-297, 2005。
【０１４５】
本明細書において「Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子」とは、任意のＲａｓタンパク質をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドの任意の部分を意味する。この用語の意味の範囲内には、Ｒａｓをコードするエキソンが含まれる。Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子には、限定されるものではないが、Ｈ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓの一部または全部をコードする遺伝子が含まれる。
【０１４６】
用語「変異型Ｋ−ｒａｓタンパク質」、「変異型Ｎ−ｒａｓタンパク質」、「Ｋ−ｒａｓ変異」、および「Ｎ−ｒａｓ変異」は、少なくとも一つの突然変異を有するそれぞれＫ−ｒａｓタンパク質およびＮ−ｒａｓタンパク質を意味する。特定の実施形態では、Ｒａｓ変異としては、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔが含まれる。特定のＮ−ｒａｓ変異としては、限定されるものではないが、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ６０Ｅ  Ｑ６１Ｈ、およびＱ６１Ｋが含まれる。特定のＫ−ｒａｓ変異は、１２、１３、１４、６１、および７６位で起こり得、限定されるものではないが、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６ＱおよびＡ１４６Ｔが含まれる。Ｒａｓタンパク質変異は、アミノ酸１２、１３、１４、５９、６０、６１、７６および／または１４６で起こり得る。特定の例示的変異型Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓポリペプチドとしては、限定されるものではないが、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、誘導変異体、置換変異体、欠失変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、相同分子種、および種間同族体が挙げられる。特定の実施形態では、変異型Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓポリペプチドとは、Ｃ末端またはＮ末端に、限定されるものではないが、リーダー配列残基、ターゲティング残基、アミノ末端メチオニン残基、リシン残基、タグ残基および／または融合タンパク質残基などの付加的残基を含む。
【０１４７】
さらに、変異型Ｒａｓポリペプチドは、そのポリペプチドまたはそのポリペプチドをコードする遺伝子の全長の一部が欠失されている、またはその細胞に存在しないポリペプチドまたはポリペプチドをコードする遺伝子も含む。例えば、Ｒａｓタンパク質は、細胞によって末端切断型で産生される場合がある。欠失とは、遺伝子または遺伝子によりコードされるタンパク質の全部または一部が存在しないことを意味し得る。
【０１４８】
本明細書において用語「増幅」およびその派生語は、染色体相補物に１以上の余分な遺伝子コピーが存在することを意味する。特定の実施形態では、Ｒａｓタンパク質をコードする遺伝子を細胞内で増幅させることができる。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、ある種の癌との相関が見出されている。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、ヒト唾液腺および胃癌由来細胞株、胃および結腸腺癌、ならびに乳腺癌で見出されている。Semba et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:6497-6501 (1985); Yokota et al., Oncogene, 2:283-287 (1988); Zhou et al., Cancer Res., 47:6123-6125 (1987); King et al., Science, 229:974-976 (1985); Kraus et al., EMBO J., 6:605-610 (1987); van de Vijver et al., Mol. Cell. Biol., 7:2019-2023 (1987); Yamamoto et al., Nature, 319:230-234 (1986)。
【０１４９】
本明細書において「過剰発現される」およびタンパク質またはポリペプチドの「過剰発現」ならびにその派生語は、所与の細胞がある特定のタンパク質を正常細胞に比べて多数産生することを意味する。例として、ｒａｓタンパク質は、非腫瘍細胞に比べて腫瘍細胞で過剰発現され得る。さらに、変異型ｒａｓタンパク質は、細胞内で野生型ｒａｓタンパク質に比べて過剰発現され得る。当技術分野で理解されるように、細胞内でのポリペプチドの発現レベルは、アクチンなどのハウスキーピング遺伝子に対して正規化することができる。場合によっては、特定のポリペプチドを、非腫瘍細胞に比べて腫瘍細胞で低発現とすることもできる。
【０１５０】
本明細書において「少なくとも一つの遺伝子産物の発現に必要な核酸」とは、遺伝子の任意の一部をコードする、かつ／または必ずしもコード配列を含まなくても、遺伝子産物をコードする核酸に機能的に連結される核酸配列を意味する。例として、少なくとも一つの遺伝子産物の発現に必要な核酸配列としては、限定されるものではないが、エンハンサー、プロモーター、調節配列、開始コドン、終結コドン、ポリアデニル化配列、および／またはコード配列が含まれる。特定の細胞でのポリペプチドの発現レベルは、限定されるものではないが、細胞ゲノムにおける種々の調節エレメントおよび／または非コード配列の突然変異、欠失および／または置換によって達成され得る。
【０１５１】
用語「変異型Ｂ−ｒａｆタンパク質」は、少なくとも一つの突然変異を含んでなるＢ−ｒａｆポリペプチドを意味する。特定の例示的変異型Ｂ−ｒａｆポリペプチドとしては、限定されるものではないが、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、誘導変異体、置換変異体、欠失変異体、および／または挿入変異体、融合ポリペプチド、相同分子種、および種間同族体が挙げられる。特定の実施形態では、変異型Ｂ−ｒａｆポリペプチドは、Ｃ末端またはＮ末端に、限定されるものではないが、リーダー配列残基、ターゲティング残基、アミノ末端メチオニン残基、リシン残基、タグ残基および／または融合タンパク質残基などの付加的残基を含む。特定のＢ−ｒａｆ変異体としては、限定されるものではないが、Ｒ４６２Ｉ、Ｉ４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｖ、Ｇ４６９Ａ、Ｇ４６９Ｅ、Ｄ５９４Ｖ、Ｆ５９５Ｌ、Ｇ５９６Ｒ、Ｌ５９７Ｖ、Ｌ５９７Ｒ、Ｔ５９９Ｉ、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｒ、Ｔ１１９Ｓ、およびＫ６０１Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を有するＢＲＡＦが挙げられる。例えば、Halilovic and Solvit (2008) Current Opinion in Pharmacology 8:419-26の図２を参照。ＢＲＡＦは、細胞増殖および悪性化キナーゼ経路の活性化に介在するＲＡＳ調節キナーゼをコードする。
【０１５２】
本明細書において用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの改変型である、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの高分子形態を意味する。この用語には、一本鎖型および二本鎖型のＤＮＡが含まれる。
【０１５３】
本明細書において用語「オリゴヌクレオチド」は、天然型および非天然型オリゴヌクレオチド結合によって相互連結された天然型および改変型ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００塩基長以下を含んでなるポリヌクレオチドサブセットである。プライマー用のオリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長であってよく、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基長を含む。オリゴヌクレオチドは、通常一本鎖であるが（例えば、プローブの場合）、オリゴヌクレオチドは二本鎖であってもよい（例えば、遺伝子変異体の構築に用いる場合）。オリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかであり得る。
【０１５４】
オリゴヌクレオチドプローブ、またはプローブは、一般に約８ヌクレオチド長〜数百ヌクレオチド長の範囲の大きさの核酸分子である。このような分子は一般に、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で核酸配列とハイブリダイズすることにより、サンプルにおいてそのような標的核酸配列を同定するために使用される。ハイブリダイゼーション条件は、上記に詳細に記載されている。
【０１５５】
ＰＣＲプライマーは核酸配列でもあるが、ＰＣＲプライマーは一般に、ポリメラーゼ連鎖反応に使用されるかなり短いオリゴヌクレオチドである。ＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブは、当業者ならば、標的配列からの配列情報を用いて、容易に開発および作製することができる（例えば、Sambrook et al., 前掲またはGlick et al., 前掲参照）。
【０１５６】
当技術分野で公知のように、ＲａｓおよびＢｒａｆ変異を検出する上でＰＣＲに使用するためのいくつかのプライマーが知られている。例えば、ＢｒａｆおよびＫ−ｒａｓにおける突然変異を検出するためのプライマーが、限定されるものではないが、Brose, et al. Cancer Research 62:6997-7000 (2002)、Xu, et al. Cancer research 63:4561-4567 (2003)を含むいくつかの研究論文ならびに米国特許第７，７４５，１２８号、およびいくつかの市販のキット（Ｄｘｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、およびＱｕｅｓｔ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ参照）に示されている。
【０１５７】
Ｒａｓ／Ｒａｆが野生型または変異型のいずれかであり、ＰＩ３Ｋ／Ｐｔｅｎが野生型または突然変異体のいずれかである癌は、公知の方法によって同定される。例えば、野生型または変異型Ｒａｓ／ＲａｆまたはＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ腫瘍細胞は、ＤＮＡ増幅とシーケンシング技術、ＤＮＡおよびＲＮＡ検出技術（限定されるものではないが、それぞれノーザンおよびサザンブロットを含む）、および／または種々のバイオチップおよびアレイ技術によって同定することができる。野生型および変異型ポリペプチドは、限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡなどの免疫診断技術、ウエスタンブロットまたは免疫組織化学を含む、種々の技術によって検出することができる。
【０１５８】
本発明の一実施形態では、それを必要とする哺乳動物を治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤で治療する方法であって、
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびにＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有するか否かを決定すること；および
前記哺乳動物が少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を有し、かつ、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失および／または挿入を有していなければ、前記哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤を投与すること
を含んでなる方法が提供される。
【０１５９】
本発明の一実施形態では、ヒトの癌を治療する方法であって、
前記被験者から少なくとも一つの第１のサンプルを得る工程；
前記被験者からの少なくとも一つの第１のサンプルにおいて、少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を検出する工程；
場合により、前記被験者から少なくとも一つの第２のサンプルを得る工程；
前記被験者からの少なくとも一つの前記第１のサンプルまたは少なくとも一つの前記任意選択の第２のサンプルから、少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失および／または挿入を検出する工程；および
前記第１および／または第２のサンプルにおいて少なくとも一つのＲａｓ突然変異および少なくとも一つのＬＫＢ１突然変異、欠失および／または挿入が検出される場合には、前記被験者を治療上有効な量の少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤により治療する工程
を含んでなる方法が提供される。
【０１６０】
一態様では、第１のサンプルおよび第２のサンプルは同じサンプルである。別の態様では、第１のサンプルは腫瘍サンプルである。別の態様では、第１のサンプルは血液サンプルである。さらに別の態様では、第１のサンプルおよび第２のサンプルは異なるサンプルである。第１のサンプルは腫瘍サンプルであってよく、第２のサンプルは血液サンプルであってよい。
【０１６１】
本発明の一実施形態では、被験体が少なくとも一つのＲａｓタンパク質もしくは少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異、ならびに／またはＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入を有する場合には、少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤および少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤による治療に対する、前記被験体の高い反応の可能性または低い反応の可能性を相関させるための方法が提供される。いくつかの場合では、ＬＫＢ１変異は、末端切断型ＬＫＢ１タンパク質の発現をもたらす。
【０１６２】
好適には、癌は固形腫瘍であり得る。いくつかの場合では、癌は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または膵臓癌である。
【０１６３】
本明細書ではまた、癌を有するヒトを治療する方法であって、
前記ヒト由来のサンプルから、Ｒａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異を検出すること；
前記ヒト由来のサンプルから、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入の有無を検出すること；および
少なくともＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異が検出され、かつ、前記ヒト由来のサンプルからＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入が検出されない場合には、前記ヒトを、下記構造（Ｉ）：
【化５】
2013545757.tif 000007
で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤を含んでなる医薬組成物で治療すること
を含んでなる方法が提供される。
【０１６４】
一態様では、これらの方法は、少なくとも一つのＢＲＧ１変異の有無を検出することをさらに含んでなる。
【０１６５】
ＮＳＣＬＣを有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトが少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子において少なくとも一つの突然変異を有し、前記ヒトに、下記構造（Ｉ）：
【化６】
2013545757.tif 000008
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と少なくとも一つのｍＴＯＲ阻害剤とを含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含んでなる方法が提供される。一態様では、Ｒａｓ突然変異は、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ｖ１４Ｉ、Ｇ６０Ｅ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｈ、Ｔ７４Ｐ、Ｅ７６Ｇ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｑ、およびＡ１４６Ｔから選択される。
【０１６６】
ＮＳＣＬＣを有するヒトを治療する方法であって、前記ヒトが少なくとも一つのＲａｓタンパク質または少なくとも一つのＲａｓタンパク質をコードする遺伝子において少なくとも一つの突然変異を有し、前記ヒトに、下記構造（Ｉ）：
【化７】
2013545757.tif 000009
で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含んでなる少なくとも一つのＭＥＫ阻害剤と、ドセタキセル、ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ダサチニブ、ＡＫＴ阻害剤、およびエベロリムスの群から選択される少なくとも一つの付加的薬剤とを含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含んでなる方法が提供される。また、ＮＳＣＬＣを有するヒトを治療する方法であって、ドセタキセル、ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ダサチニブ、ＡＫＴ阻害剤および／またはｍＴＯＲ阻害剤（限定されるものではないが、エベロリムスを含む）と組み合わせた化合物Ａによる治療に対するヒトの反応の可能性と前記ヒトから採取された腫瘍細胞におけるＲＡＳ突然変異の有無を相関させることを含んでなる方法が提供される。
【０１６７】
ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は、その薬学的に許容可能な塩および溶媒和物とともに、ＰＩ３キナーゼの阻害剤として有用であること、ならびにＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤を製造し、特に癌の治療において使用する方法が、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６３８１９号（国際出願日２００８年５月１６日）および国際公開第ＷＯ２００８／１４４４６３号（公開日２００８年１１月２７日）に開示され、特許請求されている。これらの公報の開示内容は、引用することにより、本明細書の開示の一部とされる。本発明で使用されるＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤はＷＯ２００８／１４４４６３の実施例３４５に示され、下記の下記構造：
【化８】
2013545757.tif 000010
２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド
を有する。
【０１６８】
ＡＫＴ阻害剤は、その薬学的に許容可能な塩とともに、特に癌の治療においてＡＫＴ活性の阻害剤として有用であることが、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号（国際出願日２００８年２月７日）；国際公開第ＷＯ２００８／０９８１０４号（国際公開日２００８年８月１４日）、に開示され、特許請求されている。これらの公報の開示内容は、引用することにより、本明細書の開示の一部とされる。本発明で使用されるＡＫＴ阻害剤は実施例９６に記載され、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５３２６９号に記載されているように製造することができ、下式：
【化９】
2013545757.tif 000011
Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−チオフェンカルボキサミド
により示される。
【０１６９】
好適には、Ｎ−｛（１Ｓ）−２−アミノ−１−［（３−フルオロフェニル）メチル］エチル｝−５−クロロ−４−（４−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２−チオフェンカルボキサミドは塩酸塩の形態である。この塩形態は、当業者により、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２２３２３号（国際出願日２０１０年１月２８日）；国際公開第ＷＯ２０１０／０８８３３１号（国際公開日２０１０年８月５日）における記載から製造することができる。これらの公報の開示内容は、引用することにより、本明細書の開示の一部とされる。
【実施例】
【０１７０】
以下の実施例は単に例示を意図し、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【０１７１】
実施例１
構造Ｉを含んでなる少なくとも１用量の医薬組成物と少なくとも１用量のｍＴＯＲ阻害剤を受容したヒト由来のサンプルを、Ｒａｓタンパク質における少なくとも一つの突然変異またはＲａｓタンパク質変異をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異に関して試験する。サンプルはまた、ＬＫＢ１における少なくとも一つの突然変異、欠失または挿入に関して試験する。Ｒａｓタンパク質またはＲａｓタンパク質をコードする遺伝子に少なくとも一つの突然変異を有する患者に関して、構造ＩとｍＴＯＲ阻害剤を含んでなる医薬組成物による治療に対する正の臨床反応（完全反応（ＣＲ）および／または部分反応（ＰＲ）のいずれか）を相関させるためにデータを解析する。解析には、ＮＳＣＬＣおよび膵臓癌を有するヒト由来のサンプルを含む。さらに、Ｒａｓタンパク質またはＲａｓタンパク質をコードする遺伝子における少なくとも一つの突然変異およびＬＫＢ１における少なくとも一つの欠失、挿入または突然変異を有する患者に関して、構造ＩとｍＴＯＲ阻害剤を含んでなる医薬組成物による治療に対する正の臨床反応（完全反応（ＣＲ）および／または部分反応（ＰＲ）のいずれか）を相関させるためにデータを解析する。
【０１７２】
ＲＡＳ変異キット：
ＲＡＳ変異試験は、ＤｘＳ  Ｌｔｄから供給されている市販のＫ−ｒａｓ変異キットを用い、ＣＬＩＡ保証研究室（Ｇｅｎｏｐｔｉｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で行う。ＤｘＳ  Ｋ−ＲＡＳ変異キットは、コドン１２および１３における７つの最も一般的な体細胞突然変異（１２ＡＬＡ、１２ＡＳＰ、１２ＡＲＧ、１２ＣＹＳ、１２ＳＥＲ、１２ＶＡＬまたは１３ＡＳＰ）の検出を目的とする。このキットはＤＮＡサンプルに使用するためのものであり、突然変異の状態の質的評価を提供する。このキットは、リアルタイムＰＣＲ反応において突然変異を検出するためにＡＲＭＳとＳｃｏｒｐｉｏｎｓという２つの技術を組み合わせたものである。各アッセイは、野生型ＤＮＡのバックグラウンドで１％の突然変異を検出することができる。
【０１７３】
ＬＫＢ１／ＳＴＫ１１における突然変異、欠失および／または挿入を検出するための方法
ＬＫＢ１における突然変異、欠失および／または挿入を検出するためには、種々の方法が利用可能である。これらの方法には、限定されるものではないが、下記のものがある。
【０１７４】
・ＤＮＡ塩基配列決定法：ゲノムＤＮＡに対して二段階の「ブースト／ネスト」ＰＣＲ法を行い、ブースト反応で、ネスト反応の鋳型として使用するためのより大きな断片を生成する。ネスト産物を双方向的に配列決定し、ベースコーリングを行い、Wingo et al., 2009. (Wingo et al., 2009. PLoS One. Somatic LKB1 mutations promote cervical cancer progression)に記載されているようにベースコーリングソフトウエアによって、正確な変異体検出を図るために配列出力を目視検査する。
【０１７５】
・多重ライゲーションプローブ増幅(Multiple Ligation Probe Amplification)（ＭＬＰＡ）：エキソンまたは全遺伝子レベルにおけるＬＫＢ１の欠失または増幅および倍加は、Wingo et al., 2009において、限定されるものではないが、ＭＲＣ−Ｈｏｌｌａｎｄを含む販売者で入手可能なＭＬＰＡ  ＬＫＢ１／ＳＴＫ１１キットを用いて検索することができる。
【０１７６】
・ＰＣＲ産物のＳＵＲＶＥＹＯＲ消化および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析：Koivunen et al., 2008 (Koivunen et al., 2008. Br J cancer. Mutations in the LKB1 tumour suppressor are frequently detected in tumors from Caucasian but not Asian lung cancer patients)に記載されているように、ＳＵＲＶＥＹＯＲ出力においてパターンの変化を示す検体を精製し、双方向的に配列決定する。
【０１７７】
・精密欠失マッピング：放射性標識多型サテライトマーカーを用いたＰＣＲ増幅と、その後の８％尿素−ホルムアミド−ポリアクリルアミドゲル上でのＰＣＲ産物画分の分離およびＸ線フィルム露光を含む。Sanchez-Cespedes et al, 2002 (Sanchez-Cespedes et al., 2002. Cancer Research. Inactivation of LKB1/STK11 is a common event in adenocarcinomas of the lung)に記載されているように、対立遺伝子の欠損は、正常ＤＮＡにおける対応する対立遺伝子に比べて腫瘍対立遺伝子における強度低下を視覚的に測定することによって評価する。
【０１７８】
点突然変異のスクリーニング：エキソン１、エキソン２〜３、エキソン４〜５、エキソン６〜７、エキソン８およびエキソン９の対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応。点突然変異のスクリーニングはまた、Sanchez-Cespedes et al, 2002に記載されているようにエキソン１〜９のサイクルシーケンシングを含む。
【０１７９】
同型接合欠失のスクリーニング：Sanchez-Cespedes et al, 2002に記載されているような鎖長多型のＰＣＲ増幅。
【０１８０】
部分欠失／挿入のスクリーニング：Sanchez-Cespedes et al, 2002に記載されているようなエキソン２〜８を含む５Ｋｂ断片の増幅によるロングレンジＰＣＲ(Long-range PCR)法。
【０１８１】
プロモーター過剰メチル化分析：プロモーターのメチル化状態を、Sanchez-Cespedes et al, 2002に記載されているようにメチル化特異的プライマーおよび非メチル化(nonmthylation)プライマーを用いたＰＣＲによりアッセイする。
【０１８２】
ＫＲＡＳ変異型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する被験体における構造Ｉおよびエベロリムスの第ＩＩ相評価
主要な目的は、構造Ｉとエベロリムスの組合せの投与がＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ被験体に有効であるか否かを判定することである。帰無仮説は、組合せ治療に対する客観的反応率（組合せ治療を始めて１６週間以内にＣＲまたはＰＲに達した対象被験体集団のパーセンテージ）が目を引くものではない（≦５％）ということである。対立仮説は、反応率がさらなる開発のために注目されるものである（≧２０％）ということである。記号的としてこれらの仮説（Ｈ）を下記のように表す。
Ｈ（０）：反応率≦５％（Ｐ０）
Ｈ（１）：反応率≧２０％（Ｐ１）
【０１８３】
最終的な分析では、反応率＞５％の場合のベイズの事後確率が、被験体４０例のうち少なくとも５例（５／４０）の反応が見られる場合に相当するかまたはそれより大きければ（決定規則、＞０．９８）、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ被験体における組合せ治療として構造Ｉおよびエベロリムスのさらなる開発を選択するだけの十分な統計学的エビデンスが示された。
【０１８４】
有効性分析
抗腫瘍活性は、臨床エビデンスおよび固形腫瘍用のＲＥＣＩＳＴ  １．１判定基準(Eisenhauer et al. European Journal of Cancer. 2009; 45: 228-247)に基づいて評価するが、これを以下にまとめる。
【０１８５】
【表２】
2013545757.tif 000012
【０１８６】
第ＩＩ相ＮＳＣＬＣの客観的な反応率は、登録して、構造Ｉを含んでなる医薬組成物を少なくとも１用量受容した全被験体のうち、治療の開始から１６週間以内に完全反応または部分反応を示した被験体のーセンテージと定義される。第ＩＩ相ＮＳＣＬＣの臨床の臨床有用性反応率は、完全反応または部分反応を示した被験体と１回目の被験疾患評価から少なくとも４ヶ月間安定疾患を示した被験体を合わせたパーセンテージと定義される。全反応期間は、測定判定基準が完全反応または部分反応を初めて満たした（どちらかが初めて記録された）時から、進行性疾患が他覚的に認められた（試験中に記録された最低測定値を進行性疾患の参照値とする）最初の日までを計測する。
【０１８７】
第Ｉ相では、膵臓癌における抗腫瘍活性を、臨床エビデンスおよび反応判定基準に基づいて評価する。データに根拠があれば、反応データを用量レベルによってまとめる。
【０１８８】
ＮＳＣＬＣにおける第ＩＩ相では、統計分析を行って、ベイズの方法を用い、客観的反応率の事後分布を評価する。反応率には無情報均一（０、１）事前分布を用いる。利用可能なデータと事前分布に基づき、反応率の事後分布を決定する。この分布の平均から反応率の推定値が得られ、分布の対応する２．５および９７．５パーセンタイルから反応率の９５％ベイズ信頼区間が得られる。事後確率、反応率＞５％（Ｐ０）のＰｒ（ＲＲ＞５％｜データ）を計算し、反応率の事後分布グラフを作成する。成功判定基準は、最終段階での反応率の事後分布に基づき、成功（新規治療の受け入れ）、すなわち、Ｐｒ（ＲＲ＞５％）＞０．９８が定義される。これらの判定基準を満たすためには、被験体４０例のうち少なくとも５例の反応が必要とされる。客観的反応率と同様に、臨床有用性反応率（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ≧４ｍｏｓ）を分析する。臨床有用性反応率の事後分布を、無情報事前データおよび観測データを用いて作成する。
【０１８９】
全反応期間を表およびグラフで記述的にまとめる。相関分析を行い、被験体のＣＡ１９−９レベルと、膵臓癌患者用のＲＥＣＩＳＴ  １．１［Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ、２００９］に基づく腫瘍反応の間の関係を調べる。
【０１９０】
実施例２
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）における活性化されたＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ経路を、強力かつ選択的なＭＥＫ１／ＭＥＫ２小分子阻害剤である化合物Ａで標的化することは、ＲＡＳ変異型腫瘍を有する患者の臨床転帰を改善し得る革新的なアプローチである。本試験では、化合物Ａ単独、またはＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋｉ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、もしくはエベロリムス（ｍＴＯＲ阻害剤）との組合せに対するＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ細胞株のin vitro感受性を評価して、反応／耐性のマーカーを同定し、化合物Ａの臨床開発に対する科学的根拠を得た。
【０１９１】
ＲＡＳ変異を有する２４の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株のパネルに対し、ゲノム変化、遺伝子発現プロフィール、ならびにＭＡＰＫおよびＰＩ３Ｋ経路におけるタンパク質リン酸化に関する分析を行った。細胞増殖の阻害およびアポトーシスの誘導は、それぞれ処置７２時間および２４時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）およびカスパーゼ３／７活性化アッセイにより測定した。標的薬剤および化学薬剤（化合物Ａを含む）は、単独および化合物Ａと組み合わせて試験した。
【０１９２】
標的薬剤：エルロチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）；エベロリムス（ｍＴＯＲ阻害剤）、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤
化学薬剤：ドセタキセル、ペメトレキセド(pemetrexted)、ダサチニブ
ベースラインシグナル伝達経路、ゲノム変化および遺伝子発現プロフィールの特性決定を行った。
【０１９３】
ＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ株における化合物Ａ単独または他の薬剤との組合せによる応答率
単剤：
化合物Ａおよびドセタキセルの細胞アポトーシス応答率はそれぞれ２５％および４２％であったが、各薬剤の感受性プロフィールは異なっていた。ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は細胞増殖に強い阻害を示したが、アポトーシスをほとんど生じなかった。ダサチニブ、エベロリムス、ＡＫＴ阻害剤およびエルロチニブ単独は、活性をほとんどまたは全く示さなかった。
【０１９４】
化合物Ａと他の薬剤との組合せ：
化合物Ａと、ドセタキセル、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ダサチニブまたはエベロリムスとの組合せは、単剤に比べて応答率を上昇させた。化合物Ａと、ＰＩ３ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤またはエルロチニブとは、細胞増殖阻害に有用性を示した。化合物Ａとペメトレキセドは、最も活性の高い単剤と同等の活性を示した。
【０１９５】
ＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ細胞株における化合物Ａ単独および他の薬剤との組合せに対する応答率の結果を表１に示す。
【０１９６】
【表３】
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【０１９７】
化合物Ａの反応／耐性に関連するマーカーが同定された
ＮＳＣＬＣにおけるＬＫＢ１およびＢＲＧ１
ＬＫＢ１（９ｐ１３．２）遺伝子およびＢＲＧ１／ＳＭＡＲＣＡ４（１９ｐ１３．３）遺伝子はどちらも腫瘍サプレッサーであり、同じ染色体１９ｐ上に位置し、この位置は肺癌において頻繁に欠失している。ＬＫＢ１（ＳＴＫ１１）はＡＭＰＫファミリーを活性化することにより、ｍＴＯＲシグナル伝達、細胞のエネルギー代謝および細胞極性を調節している。ＬＫＢ１の欠失は、細胞の接着および移動に関するＳＲＣおよびＦＡＫシグナル伝達への依存度を高める。ＬＫＢ１のほとんどの体細胞突然変異はナンセンスまたはフレームシフト突然変異を含み、末端切断型タンパク質を生じる(Launonen, Human Mutation. 26(4):291-297 (2005);およびShaw et al., Science 310:1642-1646 (2005))。低率の体細胞突然変異（１１％）；ＬＯＨおよび同型接合性欠失は合わせてＮＳＣＬＣの約９０％に見られる(Gill et al., Oncogene, 30:3784-3791 (2011))。
【０１９８】
クロマチンリモデリングＳＷＩ／ＳＮＦ複合体のメンバーであるＢＲＧ１（ＳＭＡＲＣＡ４）は、細胞接着（例えば、ＣＤ４４、Strobeck, et al., J Biol Chem. 276(12):9273-8. 2001；ＣＤＨ１、Banine, I Cancer Res 65: 3542-3547 (2005))、および成長停止（例えば、サイクリンＡおよびＥ、Zhang, et al. Cell 101(1):78-89 (2000);ＣＳＦ１、Liu, et al., Cell 106:309-318 (2001)、およびＲＢにより媒介されるｐ２１のアップレギュレーション、Hendricks, et al., Mol. Cell. Biol. 24(1):362-376 (2004);およびBartlett, et al. Journal of Cellular Physiology. 226(8):1989-1997 (2011))を含む遺伝子転写の調節に役割を果たす。ＳＷＩ／ＳＮＦ複合体と、および癌において重要な役割を持つＲＢ、ＬＫＢ１／ＳＴＫ１１、βカテニン、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＢＲＣＡ１、ＣＭＹＣ、ＭＬＬおよびＣＦＯＳなどのタンパク質との間に直接の物理的相互作用が報告されている。ほとんどのＢＲＧ１変化は、末端切断型タンパク質を生じる。１９ｐにおける異型接合性の欠損（ＬＯＨ）およびＳＭＡＲＣＡ４タンパク質の不在が肺腫瘍において報告されている。
【０１９９】
腫瘍サプレッサーＴＰ５３、ＬＫＢ１（ＳＴＫ１１）、ＢＲＧ１（ＳＭＡＲＣＡ４）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６）は、ＫＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣ臨床サンプルにおいて頻繁に変異している。ＢＲＧ１／ＬＫＢ１／ＣＤＫＮ２Ａ変異は頻繁であり、表２の種々のＮＳＣＬＣ細胞株に示されるように化合物Ａに対する耐性に関連することが分かっている。
【０２００】
【表４】
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【０２０１】
結論：これらの結果は、化合物Ａおよびこれらの組合せを臨床で試験するだけの強い根拠を示す。ＢＲＧ１／ＬＫＢ１変異は、ＲＡＳ変異型ＮＳＣＬＣにおいてこれらの薬剤の患者選択を改善するための耐性／反応のマーカーとしてさらに検討すべきである。
【０２０２】
本発明の好ましい実施形態が上記に説明されているが、本発明は本明細書に開示されているその通りの教示に限定されるものではなく、下記の特許請求の範囲内に入る総ての改変に対する権利が保持されると理解するべきである。
【国際調査報告】
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