(57)【要約】  本発明は、全身性炎症、関節炎、リウマチ疾患、変形性関節症、炎症性腸疾患、炎症性眼疾患、炎症性または不安定性膀胱疾患、乾癬、炎症性物質による皮膚症状、慢性炎症症状、全身性エリテマトーデス(SLE)、筋無力症、リウマチ性関節炎、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群および自己免疫性溶血性貧血、アレルギー症状およびさまざまな形態の過敏症などを含むがこれに限定されない、自己免疫疾患の治療のための二環式ヘテロアリール置換体およびこれを含有する組成物であり、本発明はさらに、急性骨髄性白血病  (AML)  骨髄異形成症候群  (MDS)  骨髄増殖性疾患  (MPD)  慢性骨髄性白血病  (CML)  T細胞急性リンパ性白血病  (  T-ALL)  B細胞急性リンパ性白血病-  (B-ALL)  非ホジキンリンパ腫  (NHL)  B細胞リンパ腫などの白血病および乳癌などの固形腫瘍などを含むがこれに限定されない、p110δ  活性に介在され、依存するかまたは関連する癌の治療方法を可能にする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化１】
2013514989.tif 000082
［式中、
X1  はC(R10)  またはNであり、
YはN(R8)、OまたはSであり、
nは0、1、2または3であり、
R1  は直接結合、炭素数1〜4のアルキル結合、酸素と炭素数1〜2のアルキル結合、炭素数1〜2のアルキル酸素結合または酸素結合した、飽和、部分的に飽和または不飽和の5、6、7員の単環式または8、9、10、11員の二環式の環であって、この環は、窒素、酸素および硫黄から選択された0、1、2、3、4個の原子を含有するが酸素または硫黄原子を2個以上含有せず、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および  -NRaC2-6アルキルORa  からそれぞれ選択された0、1、2または3個の置換基によって置換され、この環の利用可能な炭素原子は0、1、2個のオキソ基またはチオキソ基によって追加的に置換されており、
R2  は水素、ハロゲン、炭素数１〜６のアルキル、炭素数1〜4のハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、-C(=O)Ra、-C(=O)ORa、-C(=O)NRaRa、-C(=NRa)NRaRa、-S(=O)Ra、-S(=O)2Ra、-S(=O)2NRaRa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa  から選択され、
R3  は水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-4アルキル、OC1-4アルキル、OC1-4ハロアルキル、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルまたはC1-4ハロアルキルから選択され、
R4  は独立して、各インスタンスで、ハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-4アルキル、OC1-4アルキル、OC1-4ハロアルキル、NHC1-4アルキル,N(C1-4アルキル)C1-4アルキル、C1-4ハロアルキル、または不飽和の5、6、または7員の単環式の環であり、N、OおよびSから選択された0、1、2、3、4個の原子を含有するが、OまたはSを1個を超えて含まずハロゲン、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、-OC1-4アルキル、-NH2、-NHC1-4アルキル、-N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換され、
R5  は独立して、各インスタンスで、H、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、またはハロゲン、シアノ、OH、OC1-4アルキル、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、OC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された1，2または3個の置換基によって置換されたC1-6アルキルか、または、両R5  基が一緒になって、ハロゲン、シアノ、OH、OC1-4アルキル、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、OC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されたC3-6スピロアルキルを形成し、
R6  はH、ハロゲン、NHR9  またはOHであり、
R7  はH、ハロゲン、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra、-C(=O)ORa、-C(=O)NRaRa、-C(=NRa)NRaRa、-ORa、-OC(=O)Ra、-OC(=O)NRaRa、-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、-OC2-6アルキルNRaRa、-OC2-6アルキルORa、-SRa、-S(=O)Ra、-S(=O)2Ra、-S(=O)2NRaRa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、-NRaRa、-N(Ra)C(=O)Ra、-N(Ra)C(=O)ORa、-N(Ra)C(=O)NRaRa、-N(Ra)C(=NRa)NRaRa、-N(Ra)S(=O)2Ra、-N(Ra)S(=O)2NRaRa、-NRaC2-6アルキルNRaRa、-NRaC2-6アルキルORa  およびC1-6アルキルから選択され、このC1-6アルキルはハロゲン、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORa  から選択された1、2または3個の置換基によって置換され、このC1-6アルキルは、N、OおよびSから選択された0、1、2、3、4個の原子を含有するが、OまたはSを1個を超えて含まない、0または1個の飽和、部分的に飽和または不飽和の5、6、または7員の単環式の環によって追加的に置換され、この場合、この環の利用可能な炭素原子は0、1、2個のオキソ基またはチオキソ基によって追加的に置換され、この環はハロゲン,ニトロ,シアノ,C1-4アルキル,OC1-4アルキル,OC1-4ハロアルキル,NHC1-4アルキル,N(C1-4アルキル)C1-4アルキルおよび  C1-4ハロアルキルから独立して選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されるか、または、R7  とR8  は一緒になって-C=N-  架橋を形成し、炭素原子はH、ハロゲン、シアノまたは飽和、部分的に飽和または不飽和のN、OおよびSから選択された0、1、2、3、4個の原子を含有するが、OまたはSを1個を超えて含まない5、6、7員の単環式の環によって置換され、この場合、この環の利用可能な炭素原子は0、1、2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換され、この環は、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra、-C(=O)ORa、-C(=O)NRaRa、-C(=NRa)NRaRa、-ORa、-OC(=O)Ra、-OC(=O)NRaRa、-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、-OC2-6アルキルNRaRa、-OC2-6アルキルORa、-SRa、-S(=O)Ra、-S(=O)2Ra、-S(=O)2NRaRa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、-NRaRa、-N(Ra)C(=O)Ra、-N(Ra)C(=O)ORa、-N(Ra)C(=O)NRaRa、-N(Ra)C(=NRa)NRaRa、-N(Ra)S(=O)2Ra、-N(Ra)S(=O)2NRaRa、-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORaから選択された0、1、2、3、4個の置換基によって置換されるか、または  R7  とR9  は一緒になって-N=C-架橋を形成し、炭素原子が  H、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、-C(=O)Ra、-C(=O)ORa、-C(=O)NRaRa、-C(=NRa)NRaRa、-S(=O)Ra、-S(=O)2Ra、-S(=O)2NRaRaによって置換され、
R8  はHまたはC1-6アルキルであり、
R9  はH、C1-6アルキルまたはC1-4ハロアルキルであり、
R10  はH、ハロゲン、C1-3アルキル、C1-3ハロアルキルまたはシアノであり、
R11  はH、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra、-C(=O)ORa、-C(=O)NRaRa、-C(=NRa)NRaRa、-ORa、-OC(=O)Ra、-OC(=O)NRaRa、-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、-OC2-6アルキルNRaRa、-OC2-6アルキルORa、-SRa、-S(=O)Ra、-S(=O)2Rb、-S(=O)2NRaRa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、-NRaRa、-N(Ra)C(=O)Ra、-N(Ra)C(=O)ORa、-N(Ra)C(=O)NRaRa、-N(Ra)C(=NRa)NRaRa、-N(Ra)S(=O)2Ra、-N(Ra)S(=O)2NRaRa、-NRaC2-6アルキルNRaRa、-NRaC2-6アルキルORa、-NRaC2-6アルキルSO2Rb、-CH2C(=O)Ra、-CH2C(=O)ORa、-CH2C(=O)NRaRa、-CH2C(=NRa)NRaRa、-CH2ORa、-CH2OC(=O)Ra、-CH2OC(=O)NRaRa、-CH2OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、-CH2OC2-6アルキルNRaRa、-CH2OC2-6アルキルORa、-CH2SRa、-CH2S(=O)Ra、-CH2S(=O)2Rb、-CH2S(=O)2NRaRa、-CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、-CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、-CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、-CH2NRaRa、-CH2N(Ra)C(=O)Ra、-CH2N(Ra)C(=O)ORa、-CH2N(Ra)C(=O)NRaRa、-CH2N(Ra)C(=NRa)NRaRa、-CH2N(Ra)S(=O)2Ra、-CH2N(Ra)S(=O)2NRaRa、-CH2NRaC2-6アルキルNRaRa、-CH2NRaC2-6アルキルORa、-CH2Rc、-C(=O)Rc  および-C(=O)N(Ra)Rcから選択され、
Ra  は独立して、各インスタンスで、HまたはRbであり、
Rb  は独立して、各インスタンスで、フェニル、ベンジルまたは  C1-6アルキルであり、このフェニル、ベンジルおよび  C1-6アルキルは、ハロゲン、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、-OH、-OC1-4アルキル、-NH2、-NHC1-4アルキル、-N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換され、
Rc  は、N、OおよびSから選択された1、2または3個のヘテロ原子を含有する、飽和または部分的に飽和の4、5または6員環であり、この環はハロゲン、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、-OC1-4アルキル、-NH2、-NHC1-4アルキル、-N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換される。］。
【請求項２】
請求項1記載の化合物を投与する段階を含む、関節リウマチ、硬直性脊椎炎、骨関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、炎症性眼疾患、炎症性または不安定性膀胱疾患、炎症性成分による皮膚症状、慢性炎症症状、自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス(SLE)、筋無力症、リウマチ性関節炎、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群および自己免疫性溶血性貧血、アレルギー症状および過敏症の治療方法。
【請求項３】
請求項1記載の化合物を投与する段階を含む、p110δ活性媒介性、依存的または関連性のある癌の治療方法。
【請求項４】
請求項1記載の化合物および医薬的に許容される賦形剤または担体を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、参照により、2009年12月18日に提出した米国特許仮出願第.  61/287,827号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、概して、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ  (PI3K)酵素に関し、より詳細には、PI3K活性の選択的阻害剤およびこのような物質の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
3′-リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナリングは、悪性形質転換、増殖因子シグナリング、炎症および免疫など、さまざまな細胞過程に関与している  (総説は、Ramehら、J.  Biol  Chem,274:8347-8350  (1999)を参照)。このようなリン酸化シグナリング産物であるホスファチジルイノシトール3-キナーゼ  (PI  3-キナーゼ;PI3K)の産生に関与する酵素は、当初はウイルス性腫瘍タンパクに関連し、ホスファチジルイノシトール  (PI)  およびこのイノシトール環の3′-ヒドロキシルにおけるそのリン酸化誘導体をリン酸化する増殖因子受容体チロシンキナーゼに関連する活性を有するものとして同定された  (Panayotouら、Trends  Cell  Biol  2:358-60  (1992))。
【０００４】
PI  3-キナーゼ活性化の一次産物であるホスファチジルイノシトール-3,4,5-三リン酸塩  (PIP3)の濃度は、さまざまな刺激による細胞の処理によって増大する。これには、多数の増殖因子の受容体を介するシグナリングおよび多くの炎症性刺激、ホルモン、神経伝達物質および抗原のほか、PI3Kの代表的な物質の活性化、さほど一般的ではないが、哺乳類の細胞表面受容体の活性化に関連するシグナル伝達事象などが挙げられる  (Cantley、Science  296:1655-1657  (2002);Vanhaesebroeck  ら、Annu.Rev.Biochem,70:  535-602  (2001))。したがって、PI  3-キナーゼ活性化は、細胞増殖、遊走、分化およびアポトーシスを含む広範な細胞シグナリングに関与している  (Parkerら、Current  Biology,5:577-99  (1995);Yaoら、Science,267:2003-05  (1995))。PI  3-キナーゼ活性化に続いて生成されたリン酸化脂質の下流標的は完全に特徴づけられてはいないが、プレクストリン相同  (PH)  ドメイン-および  FYVE-フィンガードメイン-含有タンパクは、種々のホスファチジルイノシトール脂質と結合する際に活性化されることが知られている(Sternmark  ら、J  Cell  Sci,112:4175-83  (1999);Lemmon  ら、Trends  Cell  Biol,7:237-42  (1997))。
【０００５】
PI3Kエフェクターを含有するPH-ドメインの2つのグループ、つまり、TECファミリーのチロシンキナーゼおよびAGCファミリーのセリン／トレオニンキナーゼのメンバーはこれまで、免疫細胞シグナリングとの関連において研究されてきた。PtdIns  (3,4,5)P3  に対する明らかな選択性を有するPHドメインを含有するTecファミリーのメンバーには、Tec、Btk、ItkおよびEtkが含まれる。PHのPIP3  との結合は、Tecファミリーメンバーのチロシンキナーゼ活性にとって重要である  (SchaefferとSchwartzberg、Curr.Opin.Immunol.  12:  282-288  (2000))。PI3Kによって調節されるAGCファミリーメンバーには、ホスホイノシチド-依存性キナーゼ  (PDK1)、AKT  (PKBとも称される)  、プロテインキナーゼC  (PKC)およびS6キナーゼのいくつかのイソフォームが含まれる。AKTには3つのイソフォームがあり、AKTの活性化はPI3K依存性の増殖および生存シグナルと密接に相関している。AKTの活性化はPDK1によるリン酸化に依存し、AKTは3-ホスホイノシチド選択的PHドメインも有することにより、ドメインを細胞膜に誘導し、そこでPDK1はAKTと相互作用する。その他の重要なPDK1基質は、PKC  およびS6キナーゼである(DeaneとFruman、Annu.Rev.Immunol.  22_563-598  (2004))。In  vitroでは、プロテインキナーゼC  (PKC)の一部のイソフォームはPIP3によって直接活性化される  (Burgeringら、Nature,376:599-602  (1995))。
【０００６】
現在、PI  3-キナーゼ酵素ファミリーは、その基質特異性に基づいて3つのクラスに分類されている。クラスI  PI3Kはホスファチジルイノシトール  (PI)、ホスファチジルイノシトール-4-ホスフェートおよびホスファチジルイノシトール-4,5-biホスフェート  (PIP2)  をリン酸化し、ホスファチジルイノシトール-3-ホスフェート  (PIP)、ホスファチジルイノシトール-3,4-biホスフェート、およびホスファチジルイノシトール-3,4,5-三リン酸塩をそれぞれ生成することができる。クラスII  PI3KはPI  およびホスファチジルイノシトール-4-ホスフェートをリン酸化するが、クラスIII  PI3Kがリン酸化できるのはPIのみである。
【０００７】
PI  3-キナーゼの初期精製および分子クローニングから、このキナーゼがp85および110サブユニットから成るヘテロ二量体であることが明らかになった  (Otsuら、Cell,65:91-104  (1991);Hilesら、Cell,70:419-29  (1992))。以後、4種類の異なるクラスI  PI3Kが同定され、それぞれ異なる110  kDa  触媒サブユニットおよび調節サブユニットから成るP  I3K  α、β、δおよびγとして指定された。具体的には、p110α、p110βおよびp110δという3つの触媒サブユニットは、それぞれp85という同じ調節サブユニットと相互作用し、p110γはp101という別の調節サブユニットと相互作用している。以下に記述されているように、ヒトの細胞ならびに組織の3種類のPI3Kそれぞれの発現パターンもまた異なっている。近年、概してPI  3-キナーゼの細胞機能に関する大量の情報が蓄積されてきたものの、個々のイソフォームが担う役割については未だ十分に理解されていない。
【０００８】
ウシp110αのクローニングが記載されている。このタンパクは、液胞タンパクプロセシングに関与するタンパクの1種であるサッカロミセスセレビシエ・タンパク、Vps34pに関連して同定された。また、この組み換えp110α産物もp85αと結合し、移入されたCOS-1細胞でPI3K活性をもたらすことが示された。Hilesら、Cell,70,419-29  (1992)を参照されたい。
【０００９】
p110βと指定された第2のヒトp110イソフォームのクローニングについては、HuらがMol  Cell  Biol,13:7677-88  (1993)で記載している。このイソフォームは細胞のp85と結合すると言われており、p110βmRNAは、多くのヒトおよびマウスの組織中のほか、ヒト臍静脈内皮細胞、ジャーカット・ヒト白血病T細胞白血細胞、293ヒト胎児腎臓細胞、マウス3T3線維芽細胞、HeLa細胞およびNBT2ラット膀胱癌細胞中でもみられるため、普遍的に発現していると言われている。このような広範な発現は、このイソフォームがシグナリング経路で広範に重要であることを示唆している。
【００１０】
PI  3-キナーゼのp110δイソフォームの同定は、ChantryらがJ  Biol  Chem,272:19236-41  (1997)で記載している。これによると、ヒト  p110δイソフォームは、組織限定的に発現することが観察された。このイソフォームは、リンパ球およびリンパ組織で高濃度に発現し、免疫系でのPI  3-キナーゼ介在型シグナリングで重要な役割を担っていることが示されている  (Al-Alwanら、JI  178:  2328-2335  (2007);Okkenhaug  ら、JI,177:  5122-5128  (2006);Leeら、PNAS,103:  1289-1294  (2006))。P110δも乳腺細胞、メラノサイトおよび内皮細胞で、やや低濃度で発現することが示されており  (Vogt  ら、Virology,344:  131-138  (2006)、乳癌細胞に選択的移動性を付与することに関与していることが示唆されている  (Sawyer  ら、Cancer  Res.  63:1667-1675  (2003))。P110δイソフォームに関する詳細については、U.S.  Pat.  Nos.  5,858,753;5,822,910および  5,985,589を参照されたい。また、Vanhaesebroeck  ら、Proc  Nat.  Acad  Sci  USA,94:4330-5  (1997)および国際公開WO  97/46688も参照されたい。
【００１１】
PI3Kα,βおよびδサブタイプのそれぞれで、p85サブユニットはそのSH2ドメインと（適切な配列関係で存在する）リン酸化チロシン残基との相互作用により、標的タンパク中で作用し、PI  3-キナーゼを細胞膜に局在化させる  (Rameh  ら、Cell,83:821-30  (1995))。これまでに、3つの遺伝子によってコードされたp85の5種類のイソフォーム  (p85α,p85β,p55γ,p55αおよびp50α)が同定された。Pik3r1遺伝子の代替転写産物は、p85α,p55αおよびp50α  タンパクをコードする  (DeaneとFruman、Annu.Rev.Immunol.  22:  563-598  (2004))。p85αは普遍的にに発現するが、p85βは主に脳およびリンパ組織にみられる  (Voliniaら、Oncogene,7:789-93  (1992))。p85サブユニットとPI  3-キナーゼp110α、βまたはδ触媒サブユニットとの結合は、このような酵素の触媒活性および安定性に必要であると考えられる。さらに、Rasタンパクの結合も、PI  3-キナーゼ活性を上方調節する。
【００１２】
p110γのクローニングから、PI3Kファミリーの酵素内の複雑性がさらに明らかになった(Stoyanov  ら、Science,269:690-93  (1995))。p110γイソフォーム  はp110αおよびp110βと密接に相関している(  触媒ドメイン中での同一性が45-48%)が、言及されているとおり、p85を標的サブユニットとして利用しない。その代わり、p110γはヘテロ三量体Gタンパクのβγサブユニットにも結合しているp101調節サブユニットを結合する。このPI3Kガンマのp101調節サブユニットは、最初はブタでクローン化され、後に、ヒトのオーソログ（相同分子種）が同定された  (Krugmannら、J  Biol  Chem,274:17152-8  (1999))。p101のN-末端領域とp110γのN-末端領域との間の相互作用は、Gβγを介してPI3Kγを活性化させることが知られている。最近、p110γを結合するp101-相同体、p84または  p87PIKAP  (87  kDaのPI3Kγアダプタータンパク)が同定された  (Voigtら、JBC,281:  9977-9986  (2006),Suireら、Curr.Biol.  15:  566-570  (2005))。p87PIKAP  は、p110γ  とGβγ  が結合する領域におけるp101の相同体であり、G-タンパク-結合受容体下流のp110γの活性化にも介在する。p101とは異なり、p87PIKAP  は、心臓で高濃度に発現していることから、PI3Kγ心機能には必須であると考えられる。
【００１３】
構造的に活性なPI3Kポリペプチドは、国際公開WO  96/25488に記載されている。この公開は、キメラ融合タンパクの調製について発表している。この融合タンパクは、SH2  (iSH2)  領域として知られているp85の102-残基フラグメントがリンカー領域を経てマウスp110のN-末端と融合している。このp85  iSH2  ドメインは、無傷のp85に匹敵する方法でPI3K活性を活性化し得ることが明らかである  (Klippel  ら、Mol  Cell  Biol,14:2675-85  (1994))。
【００１４】
このように、PI  3-キナーゼは、そのアミノ酸相同性または活性によって定義することができる。この増大する遺伝子ファミリーの追加的メンバーには、サッカロミセスセレビシエのVps34  TOR  1およびTOR2  (ならびにFRAPおよびmTORなど、その哺乳類相同体)を含むやや遠い関係の脂質およびプロテインキナーゼ、血管拡張性失調症遺伝子産物  (ATR)およびDNA-依存性プロテインキナーゼ  (DNA-PK)の触媒サブユニットが含まれる。概して、Hunter,Cell,83:1-4  (1995)を参照されたい。
【００１５】
PI  3-キナーゼは、白血球活性化の多くの側面にも関与している。A  p85-関連のPI  3-キナーゼ活性は、抗原に応答したT-細胞活性化のための重要な共刺激分子であるCD28の細胞質ドメインと物理的に結合することが示されている  (Pagesら、Nature,369:327-29  (1994);Rudd,Immunity,4:527-34  (1996))。CD28によるT細胞活性化は、抗原による活性化の閾値を低下させ、増殖応答の規模および持続時間を増大させる。このような作用は、重要なT細胞増殖因子であるインターロイキン-2  (IL2)を含む多くの遺伝子の転写の増大と相関している  (Fraser  ら、Science,251:313-16  (1991))。PI  3-キナーゼと相互反応できないようなCD28の突然変異は、IL2産生の開始に支障をもたらすことから、T細胞活性化におけるPI  3-キナーゼの重要な役割を示唆している。
【００１６】
酵素ファミリーの各メンバーに対する特異的阻害剤は、各酵素の機能解読のための貴重な手段を提供している。LY294002およびウォルトマンニンという2つの化合物は、PI  3-キナーゼ阻害剤として広く使用されている。しかし、このような化合物は非特異的なPI3K阻害剤であり、クラスI  PI  3-キナーゼの4つのメンバーを識別しない。例えば、種々のクラスのI  PI  3-キナーゼに対するウォルトマンニンのIC50  値は1〜10nMの範囲である。同じく、このような各PI  3-キナーゼに対するLY294002のIC50  値は約1μMである  (Fruman  ら、Ann  Rev  Biochem,67:481-507  (1998))。このため、個々のクラスI  PI  3-キナーゼの役割を試験する際には、このような化合物の有用性は限定的である。
【００１７】
ウォルトマンニンを用いた複数の試験に基づき、PI  3-キナーゼ機能は、G-タンパク共役型受容体を介した白血球シグナリングのいくつかの側面においても必要であることのエビデンスがある（Thelenら、Proc  Natl  Acad  Sci  USA,91:4960-64  (1994))。さらに、ウォルトマンニンおよびLY294002が好中球移動およびスーパーオキシド放出を阻害することが示されている。しかし、PI3Kのさまざまなイソフォームの中でこのような化合物を識別できない限り、このような現象のいずれに特定のPI3Kイソフォームまたはイソフォームが関与しているか、また正常組織および疾患組織の両者において、異なったクラスI  PI3K  酵素が概してどの機能を実施するかに関しては不明な点が残っている。最近まで、多くの組織における複数のPI3Kイソフォームの同時発現は、各酵素の活性を分離するための煩雑な努力を強いていた。
【００１８】
種々のPI3Kイソ酵素の活性の分離は、近年、遺伝子操作したマウスの開発によって、イソフォーム特異的ノックアウトマウスおよびキナーゼデッドのノックインインマウスの試験が可能となったほか、異なるイソフォームの一部に対するさらに選択的な阻害剤の開発によって進歩した。P110αおよびp110βノックアウトマウスが作製されたが、両者とも胚性致死であり、このようなマウスからは、p110アルファならびにベータの発現および機能に関する情報はほとんど得られなかった  (Bi  ら、Mamm.Genome,13:169-172  (2002);Bi  ら、J.Biol.Chem.  274:10963-10968  (1999))。最近では、ATP結合ポケットのDFGモチーフに、キナーゼ活性は阻害するが突然変異体  p110α  キナーゼ発現は維持するような単一点突然変異を有するようなp110α  キナーゼデッドのノックインインマウスが作製された  (p110αD933A)。このノックインマウスによるアプローチはノックアウトマウスとは対照的であり、シグナリング複合体の化学量論、足場機能および疑似小分子的アプローチをノックアウトマウスよりも現実的に維持している。p110α  KO  マウスと同じく、p110αD933A  ホモ接合マウスは胚死した。ヘテロ接合マウスには生存能力および繁殖力はあったが、インスリン-受容体基質  (IRS)タンパク、インスリンの主要メディエーター、インスリン様増殖因子-1およびレプチン作用により、シグナリングにいくつかの鈍麻を示した。このようなホルモンに対する反応性の障害は、ヘテロ接合体における高インスリン血症、耐糖能障害、過食症をもたらし、脂肪過多を増大させるほか、全体的な成長を低下させる  (Foukasら、Nature,441:  366-370  (2006))。このような試験からは、IGF-1の中間体としてのインスリンおよびレプチンのシグナリングという、他のイソフォームでは代用できない明確で非重複的なp110αの役割が明らかになった。このイソフォームの機能をさらに理解するには、p110βキナーゼデッドのノックインマウスの記載を待つ必要があると思われる  (マウスは既に作製されているが、未だ発表されていない;Vanhaesebroeck)。
【００１９】
P110γ  ノックアウトおよびキナーゼデッドのノックインマウスは両者ともに作製され、全体的に、先天性の免疫系での細胞遊走における主要な欠陥およびT細胞の胸腺の発生における欠陥のみられる類似かつ軽度の表現型を示した  (Li  ら、Science,287:  1046-1049  (2000),Sasaki  ら、Science,287:  1040、1046  (2000),Patrucco  ら、Cell,118:  375-387  (2004))。
【００２０】
p110γと同じように、PI3Kデルタノックアウトマウスおよびキナーゼデッドのノックインマウスが作製され、このマウスも軽度かつ類似の表現型を有し、生存能力がみられた。p110δD910A  変異ノックインマウスは、辺縁層B細胞およびCD5+  B1細胞がほとんど検出できないB細胞の発達および機能において、また、B細胞ならびにT細胞抗原受容体シグナリングにおいて、デルタの重要な役割を示した  (Claytonら、J.Exp.Med.  196:753-763  (2002);Okkenhaugら、Science,297:  1031-1034  (2002))。このp110δD910A  マウスは広範に試験され、デルタが免疫系で担っている多様な役割を解明した。T細胞依存性ならびにT細胞非依存性免疫応答は、p110δD910A  マウスでは大幅に減衰されるため、TH1  (INF-γ)ならびにTH2サイトカイン(IL-4,IL-5)の分泌が阻害される(Okkenhaug  ら、J.Immunol.  177:  5122-5128  (2006))。最近、p110δ変異のみられるヒト患者も記載されている。以前は原因不明であった原発性B細胞免疫不全および原因不明のガンマ-低グロブリン血症のみられる台湾の男児が、p110δのエクソン24中のコドン1021において、m.3256GからAへと単一塩基対置換を示した。この突然変異は、p110δタンパクの高度に保存された触媒ドメイン内に位置するコドン1021において、ミスセンスアミノ酸置換(EからK)を生じさせた。この患者には、これ以外の同定された突然変異はみられず、この患者の表現型は、これまでの試験ではマウスでのp110δ欠失と一致している  (Jou  ら、Int.J.Immunogenet.  33:  361-369  (2006))。
【００２１】
イソフォーム選択的な小分子化合物が開発されているが、すべてのクラスI  PI3  キナーゼイソフォームに対して効果には差がみられる(Itoら、J.  Pharm.  Exp.  Therapeut.,321:1-8  (2007))。アルファに対する阻害剤は、p110αでの突然変異がいくつかの固形腫瘍において同定されていることから望ましく、例えば、アルファの突然変異は卵巣癌、子宮頸癌、肺癌および乳癌の50%に関連し、活性化突然変異は腸癌の50%超および乳癌の25%で記載されている  (Hennessyら、Nature  Reviews,4:  988-1004  (2005))。山之内製薬は、アルファおよびデルタに対してそれぞれ8倍および28倍選択的であるYM-024を開発した  (Itoら、J.Pharm.Exp.Therapeut.,321:1-8  (2007))。
【００２２】
P110β  は、血栓形成に関与しており  (Jacksonら、Nature  Med.  11:  507-514  (2005))  、このイソフォーム特異的な小分子阻害剤は、後に凝固障害を含む適応症用として考えられる  (TGX-221:  ベータにおいて0.007uM、デルタに対して14倍選択的であり、ガンマおよびアルファに対して500倍超選択的である)  (Ito  ら、J.Pharm.Exp.Therapeut.,321:1-8  (2007))。
【００２３】
p110γに対する選択的な化合物は、いくつかのグループにより、自己免疫疾患用の免疫抑制剤として開発されている  (Rueckleら、.  Nature  Reviews,5:  903-918  (2006))。注目すべきこととして、AS  605240は、関節リウマチのマウスモデルで有効であり  (Campsら、Nature  Medicine,11:  936-943  (2005))、全身性エリテマトーデスのモデルで疾患の発症を遅延させることを示した  (Barberら、Nature  Medicine,11:  933-935  (205))。
【００２４】
デルタ-選択的な阻害剤の最近記載されている。最も選択的な化合物は、キナゾリノンプリン阻害剤  (PIK39およびIC87114)を含む。IC87114は高ナノモル範囲（3桁）のp110δを阻害し、p110αに対して100倍超の選択性を有し、p110βに対して52倍選択的であるが、p110γに対する選択性は低い(約8倍)。この化合物は試験されたいずれのプロテインキナーゼに対しても活性を示さなかった  (Knightら、Cell,125:  733-747  (2006))。デルタ-選択的な化合物または遺伝子操作されたマウス  (p110δD910A)  を用いたところ、デルタは、BおよびT細胞活性化において主要な役割を果たすことに加え、好中球移動および感作された好中球の呼吸バーストにも部分的に関与しており、抗原-IgE介在型マスト細胞脱顆粒の部分的なブロックももたらすことが示された  (Condliffeら、Blood,106:  1432-1440  (2005);Aliら、Nature,431:  1007-1011  (2002))。それ故、p110δは、自己免疫疾患およびアレルギーを含むが、これに限定されない異常な炎症状態に関与することが知られている多くの主要な炎症反応の重要なメディエーターとして出現している。この概念を裏付けるため、遺伝子ツールおよび薬理作用物質の両者を用いた試験に由来するp110δ標的検証データが現在増大しつつある。このように、デルタ-選択的な化合物IC  87114およびp110δD910A  マウスを用いて、Aliら  (Nature,431:  1007-1011  (2002))  は、デルタがアレルギー疾患のマウスモデルで重大な役割を果たすことを実証した。機能的なデルタが存在しない場合、受動的皮膚アナフィラキシー  (PCA)  は有意に減少し、アレルゲン-IgE  i誘発性のマストT細胞活性化および脱顆粒の減少に寄与する可能性がある。さらに、デルタ  with  IC  87114によるデルタの阻害は、オボアルブミン誘発性気道炎症を使用した喘息のマウスモデルにおいて、疾患を有意に寛解させることが示された  (Leeら、.  FASEB,20:  455-465  (2006)。化合物を利用したこのようなデータは、異なるグループによるアレルギー性気道炎症の同じモデルを用いたp110δD910A  突然変異マウスにおいて裏付けられた  (Nashedら、Eur.J.Immunol.  37:416-424  (2007))。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２５】
【特許文献１】米国特許第5,858,753号明細書
【特許文献２】米国特許第5,822,910号明細書
【特許文献３】米国特許第5,985,589号明細書
【特許文献４】国際公開第97/46688号
【非特許文献】
【００２６】
【非特許文献１】Rameh  et  al.,  J.  Biol  Chem,  274:8347-8350  (1999)
【非特許文献２】Panayotou  et  al.,  Trends  Cell  Biol  2:358-60  (1992)
【非特許文献３】Cantley,  Science  296:1655-1657  (2002)
【非特許文献４】Vanhaesebroeck  et  al.  Annu.Rev.Biochem,  70:  535-602  (2001)
【非特許文献５】Parker  et  al.,  Current  Biology,  5:577-99  (1995)
【非特許文献６】Yao  et  al.,  Science,  267:2003-05  (1995)
【非特許文献７】Sternmark  et  al.,  J  Cell  Sci,  112:4175-83  (1999)
【非特許文献８】Lemmon  et  al.,  Trends  Cell  Biol,  7:237-42  (1997)
【非特許文献９】Schaeffer  and  Schwartzberg,  Curr.Opin.Immunol.  12:  282-288  (2000)
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【非特許文献１３】Hiles  et  al.,  Cell,  70:419-29  (1992)
【非特許文献１４】Hu  et  al.,  Mol  Cell  Biol,  13:7677-88  (1993)
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【非特許文献１６】Al-Alwan  etl  al.  JI  178:  2328-2335  (2007)
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【非特許文献３５】Bi  et  al.  Mamm.Genome,  13:169-172  (2002)
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【非特許文献３７】Foukas,  et  al.  Nature,  441:  366-370  (2006)
【非特許文献３８】Li  et  al.  Science,  287:  1046-1049  (2000)
【非特許文献３９】Sasaki  et  al.  Science,  287:  1040-1046  (2000)
【非特許文献４０】Patrucco  et  al.  Cell,  118:  375-387  (2004)
【非特許文献４１】Clayton  et  al.  J.Exp.Med.  196:753-763  (2002)
【非特許文献４２】Okkenhaug  et  al.  Science,  297:  1031-1034  (2002)
【非特許文献４３】Jou  et  al.  Int.J.Immunogenet.  33:  361-369  (2006)
【非特許文献４４】Ito  et  al.  J.  Pharm.  Exp.  Therapeut.,  321:1-8  (2007)
【非特許文献４５】Hennessy  et  al.  Nature  Reviews,  4:  988-1004  (2005)
【非特許文献４６】Jackson  et  al.  Nature  Med.  11:  507-514  (2005)
【非特許文献４７】Rueckle  et  al.  Nature  Reviews,  5:  903-918  (2006)
【非特許文献４８】Camps  et  al.  Nature  Medicine,  11:  936-943  (2005)
【非特許文献４９】Barber  et  al.  Nature  Medicine,  11:  933-935  (205)
【非特許文献５０】Knight  et  al.  Cell,  125:  733-747  (2006)
【非特許文献５１】Condliffe  et  al.  Blood,  106:  1432-1440  (2005)
【非特許文献５２】Ali  et  al.  Nature,  431:  1007-1011  (2002)
【非特許文献５３】Lee  et  al.  FASEB,  20:  455-465  (2006)
【非特許文献５４】Nashed  et  al.  Eur.J.Immunol.  37:416-424  (2007)
【００２７】
炎症および自己免疫状態におけるPI3Kδ機能については、さらに特徴付けが必要である。また、PI3Kδを理解するには、その調節サブユニットおよび細胞中の他のタンパクの両者によるp110δの構造的相互作用のさらなる精密化が必要である。イソ酵素p110アルファ  (インスリンシグナリング)  およびベータ  (血小板活性化)に対する活性に伴う潜在的な毒性を回避するためにはPI3K  デルタのより強力かつ選択的または特異的な阻害剤の必要性も残っている。特に、PI3Kδの選択的または特異的な阻害剤は、このイソ酵素の役割をさらに探求するためにも、イソ酵素の活性を調節するための優れた医薬品の開発のためにも望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
本発明は、ヒトPI3Kδ生物活性を阻害するために有用な、一般式：
【００２９】
【化１】
2013514989.tif 000002
を有する新規クラスの化合物を含む。本発明の別の実施形態は、他のPI3Kイソフォームに対して比較的低い阻害能を有しながらPI3Kδを選択的に阻害する化合物を提供することである。本発明の別の実施形態は、ヒトPI3Kδの機能を特徴付ける方法を提供することである。本発明の別の実施形態は、ヒトPI3Kδ活性を選択的に調節し、これにより、PI3Kδ機能不全によって介在された疾患の医学的治療を促進する方法を提供することである。本発明の他の実施形態および利点は、当業者らには容易に明らかとなる。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明の一実施形態は、以下の構造式を有する化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００３１】
【化２】
2013514989.tif 000003
式中、X1  は、C(R10)  またはNであり、
Yは、N(R8),OまたはSであり、
nは、0、1、2または3であり、
R1  は、直接結合、C1-4アルキル結合、OC1-2アルキル結合、C1-2アルキルO結合またはO結合または酸素結合している飽和、部分飽和または不飽和のによる5、6または7員の単環式環または8、9、10または11員の二環式環であり、N、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有せず、ハロゲン、C1-6アルキルおよびC1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra、,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORa  から独立に選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、追加的に、0、1または2個のオキソまたはチオキソ基によって置換されており、
R2  は、H、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa,NRaRa,-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRaから選択され、
R3  は、H、ハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-4アルキル、OC1-4アルキル、OC1-4ハロアルキル、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルまたはC1-4ハロアルキルから選択され、
R4  は、それぞれの場合において独立に、ハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-4アルキル、OC1-4アルキル、OC1-4ハロアルキル、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキル、C1-4ハロアルキルまたは不飽和の5-、6-または7員の単環式環であり、N、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有せず、ハロゲン、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、-OC1-4アルキル、-NH2、-NHC1-4アルキル、-N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2個の置換基によって置換されており、
R5  は、それぞれの場合において独立に、ハロゲン、シアノ、OH、OC1-4アルキル、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、OC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された1、2または3個の置換基によって置換されたH、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキルまたはC1-6アルキルであるか;または両者のR5基が一緒になって、ハロゲン、シアノ、OH、OC1-4アルキル、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、OC1-4アルキル、NH2、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されているC3-6スピロアルキルを形成し、
R6  は、H、ハロゲン、NHR9  またはOHであり、
R7  は、H、ハロゲン、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa,-NRaC2-6アルキルORa  およびC1-6アルキルから選択され、ここでC1-6アルキルは、ハロゲン、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORaから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換され、このC1-6アルキルは追加的に、0または1個の飽和、部分的に飽和または不飽和の5-、6-または7員の単環式環であり、N、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有しない環によって置換され、この環の利用可能な炭素原子は、追加的に、0、1または2個のオキソまたはチオキソ基によって置換され、この環はハロゲン、ニトロ、シアノ、C1-4アルキル、OC1-4アルキル、OC1-4ハロアルキル、NHC1-4アルキル、N(C1-4アルキル)C1-4アルキルおよびC1-4ハロアルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって独立に置換されているか;または  R7  と  R8  が一緒になって、-C=N-  架橋を形成し、ここにおいて炭素原子が、H、ハロゲン、シアノまたは飽和、部分的に飽和または不飽和の5-,6-  または7-員の単環式環によって置換され、この環はN、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有せず、この環の利用可能な炭素原子は、0、1または2個のオキソまたはチオキソ基によって置換され、この環は、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および  -NRaC2-6アルキルORa  から選択された0、1、2、3または4個の置換基によって置換されているか;またはR7  と  R9  が一緒になって、-N=C-  架橋を形成し、ここにおいて炭素原子はH、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、,NRaRa,-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa  によって置換され;
R8  はHまたはC1-6アルキルであり、
R9  はH、C1-6アルキルまたはC1-4ハロアルキルであり、
R10  はH、ハロゲン、C1-3アルキル、C1-3ハロアルキルまたはシアノであり、
R11  は、H、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Rb,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および  -NRaC2-6アルキルORa  から選択され;
Ra  は、それぞれの場合において独立に、HまたはRbであり、
Rb  は、それぞれの場合において独立に、フェニル、ベンジルまたはC1-6アルキルであり、このフェニル、ベンジルおよびC1-6アルキルは、ハロゲン、C1-4アルキル、C1-3ハロアルキル、-OC1-4アルキル、-NH2、-NHC1-4アルキル、-N(C1-4アルキル)C1-4アルキルから選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されている。
【００３２】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、X1  はNでありである。
【００３３】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、YはN(R8)である。
【００３４】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  は、N、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有しない、直接結合している飽和、部分的に飽和または不飽和の5-、6-または7員の単環式環または8-、9-、10-または11員の二環式環であり、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORa  から選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1または2個のオキソまたはチオキソ基によって追加的に置換されている。
【００３５】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  は、N、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有しない、直接結合している不飽和の6-員の単環式環であり、この環は、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORaから独立に選択された0、1、2または3個の置換基によって置換されている。
【００３６】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  はフェニル、ピリジルまたはピリミジニルであり、このいずれもハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および  -NRaC2-6アルキルORa  から独立に選択された0、1、2  または3個の置換基によって置換されている。
【００３７】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  は、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORaから独立に選択された0、1、2  または  3個の置換基によって置換されているフェニルである。
【００３８】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  は、フェニル、ピリジルまたはピリミジニルであり、このいずれもハロゲン,C1-6アルキルおよびC1-4ハロアルキルから独立に選択された1、2または3個の置換基によって置換されている。
【００３９】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R1  はフェニルであり、このフェニルはハロゲン、C1-6アルキルおよびC1-4ハロアルキルからから独立に選択された1、2または3個の置換基によって置換されている。
【００４０】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R2  はHである。
【００４１】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R3  はHおよびハロゲンから選択されている。
【００４２】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R5  は、それぞれの場合において独立に、H、ハロゲン、C1-6アルキルおよびC1-4ハロアルキルである。
【００４３】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、一方のR5  はHであり、もう一方のR5  はC1-6アルキルである。
【００４４】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、一方のR5  はHであり、もう一方のR5  はメチルである。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、一方のR5  はHであり、もう一方のR5  は  (R)-メチルである。
【００４６】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、一方のR5  はHであり、もう一方のR5  は  (S)-メチルである。
【００４７】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R6  はNHR9である。
【００４８】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R7  はシアノである。
【００４９】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R7  とR8  は一緒になって、-C=N-  架橋を形成し、ここにおいて炭素原子が、H、ハロゲン、シアノまたは飽和、部分的に飽和または不飽和の5-,6-または7-員の単環式環によって置換され、この環はN、OおよびSから選択された0、1、2、3または4個の原子を含有するが1個を超えるOまたはS原子を含有せず、この環の利用可能な炭素原子は、0、1または2個のオキソまたはチオキソ基によって置換され、この環は、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-ORa,-OC(=O)Ra,-OC(=O)NRaRa,-OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra,-OC2-6アルキルNRaRa,-OC2-6アルキルORa,-SRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra,-S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa,-S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa,-NRaRa,-N(Ra)C(=O)Ra,-N(Ra)C(=O)ORa,-N(Ra)C(=O)NRaRa,-N(Ra)C(=NRa)NRaRa,-N(Ra)S(=O)2Ra,-N(Ra)S(=O)2NRaRa,-NRaC2-6アルキルNRaRa  および-NRaC2-6アルキルORa  から選択された0、1、2、3または4個の置換基によって置換されている。
【００５０】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R7  と  R9  は一緒になって-N=C-  架橋を形成し、ここにおいて、炭素原子は、H、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa,NRaRa,-C(=O)Ra,-C(=O)ORa,-C(=O)NRaRa,-C(=NRa)NRaRa,-S(=O)Ra,-S(=O)2Ra,-S(=O)2NRaRa.によって置換されている。
【００５１】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R7  とR9  は一緒になって-N=C-  架橋を形成し、ここにおいて、炭素原子はHまたは  ハロゲンによって置換されている。
【００５２】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R11  はH、ハロゲン、C1-6アルキル、C1-4ハロアルキルおよびシアノから選択されている。
【００５３】
本発明の別の実施形態において、上記または下記の実施形態に関連して、R11  はH、ハロゲンおよびC1-6アルキルから選択されている。
【００５４】
本発明の別の実施形態は、PI3K介在型の症状または障害を治療する方法に関する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、PI3K介在型の症状または障害は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患から選択される。別の実施形態では、PI3K-介在型の症状または障害は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化、高血圧、深部静脈血栓症、脳卒中、心筋梗塞、不安定狭窄症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓崩壊性疾患、急性動脈虚血、末梢血栓塞栓症および冠動脈疾患から選択される。また別の実施形態において、PI3K介在型の症状または障害は、癌、結腸癌、膠芽腫、子宮内膜癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、細胞リンパ腫、リンパ増殖性疾患、小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌、神経膠腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌および白血病から選択される。さらに別の実施形態において、PI3K-介在型の症状または障害はII型糖尿病から選択される。また他の実施形態において、PI3K介在型の症状または障害は、呼吸器疾患、気管支炎、喘息および慢性閉塞性肺疾患から選択される。いくつかの実施形態において、その対象はヒトである。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、上記実施形態のいずれかによる化合物を投与する段階を含む、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患の治療に関する。
【００５７】
本発明の別の実施形態は、上記または下記実施形態のいずれかによる化合物を投与する段階を含む、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患、炎症性腸障害、炎症性眼障害、炎症性または不安定膀胱障害、炎症性成分による皮膚愁訴、慢性炎症状態、自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス(SLE)、重症筋無力症、関節リウマチ、急性散在性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群および自己免疫性溶血性貧血、アレルギー症状ならびに過敏症の治療に関する。
【００５８】
本発明の別の実施形態は、上記または下記実施形態のいずれかによる化合物を投与する段階を含む、p110δ活性媒介型であるか、この活性に依存またはまたは関連する癌治療に関する。
【００５９】
本発明の別の実施形態は、上記または下記実施形態のいずれかによる化合物を投与する段階を含む、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、T細胞急性リンパ性白血病、B細胞急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、B細胞リンパ腫、固形腫瘍および乳癌から選択される癌の治療に関する。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、上記実施形態のいずれかによる化合物およびその医薬的に許容される希釈剤または担体を含む医薬組成物に関する。
【００６１】
本発明の別の実施形態は、上記実施形態のいずれかによる化合物の薬剤としての使用に関する。
【００６２】
本発明の別の実施形態は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患の治療用の薬剤の製造における上記実施形態のいずれかによる化合物の使用に関する。
【００６３】
本発明の化合物は、概していくつかの不斉中心を有することが可能であり、典型的にラセミ混合物の形態で表される。本発明は、ラセミ混合物、部分的ラセミ混合物ならびに別の鏡像異性体およびジアステレオマーを包含することを意図している。
【００６４】
特に規定のない限り、以下の定義は、本明細書および特許請求の範囲においてみられる用語に適用する。
【００６５】
「Cα−βアルキル」は、最少α個および最大β個の炭素原子を分岐状、環状または直鎖状関係のいずれか、またはこの3つの任意の組み合わせで含むアルキル基を意味し、ここではαおよびβは整数を表す。この章に記載されているアルキル基には、1個または2個の二重結合または三重結合も含まれる可能性がある。C1-6アルキルの例は、以下を含むがこれに限定されない。:
【００６６】
【化３】
2013514989.tif 000004
【００６７】
「ベンゾ基」は、単独または組み合わせで、別の環に隣接して結合するとベンゼン様環を形成し、テトラヒドロナフチレン、インドール等を形成する二価の基C4H4=（その1つの表現は-CH=CH-CH=CH-である）などを意味する。
【００６８】
「オキソ」および「チオキソ」という用語は、それぞれ基  =O  (カルボニル中のもの等)  および  =S  (チオカルボニル中のもの等)を示す。
【００６９】
「ハロ」または「ハロゲン」は、F、Cl、BrおよびIから選択されたハロゲン原子を意味する。
【００７０】
「CV-Wハロアルキル」は、上述のとおり、アルキル鎖に結合している任意の数（少なくとも1個）の水素原子が、F、Cl、BrまたはIによって置き換えられているアルキル基を意味する。
【００７１】
「複素環」は少なくとも1個の炭素原ならびにN、OおよびSから選択された少なくとも1個の他の原子を含む環を意味する。特許請求の範囲において見られ得る複素環の例は、以下を含むがこれに限定されない:
【００７２】
【化４】
2013514989.tif 000005
【００７３】
「利用可能な窒素原子」は、複素環の一部であり、例えば、HまたはCH3による置換に利用可能な外部結合を残し、2個の単結合  (ピペリジンなど)によって結合されている窒素原子である。
【００７４】
「医薬的に許容される塩」は、従来の方法で調製された塩を意味し、当業者らによってよく知られている。「医薬的に許容される塩」は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸等を含むがこれに限定されない、無機酸および有機酸の塩基性塩を含む。本発明の化合物がカルボニル基等の酸性機能を含む場合、カルボニル基の適切な医薬的に許容されるカチオン対は当業者らによく知られており、アルカリカチオン、アルカリ土類カチオン、アンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン等を含む。「医薬的に許容される塩」のさらなる例については、Berge  ら、J.  Pharm.  Sci.  66:1  (1977)を参照されたい。
【００７５】
「飽和,部分的に飽和または不飽和の」は、水素で飽和されている置換基、水素で全く飽和されていない置換基および水素で部分的に飽和されている置換基を含む。
【００７６】
「脱離基」は概して、アミン、チオールまたはアルコール求核試薬によって容易に置き換え可能な基を示す。このような脱離基は、当該技術分野においてよく知られている。このような脱離基の例は、N-ヒドロキシコハク酸イミド、N-ヒドロキシベンゾトリアゾール、ハロゲン化物、トリフレート、トシレート等を含むがこれに限定されない。好ましい脱離基は、必要に応じて本明細書に示されている。
【００７７】
「保護基」は、概して、カルボキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト等の選択された反応基を求核、求電子、酸化、還元等の進行中の望ましくない反応から保護するために使用される、当該技術分野においてよく知られている基を指す。好ましい保護基は、必要に応じて本明細書に示されている。アミノ保護基の例は、アラルキル、置換アラルキル、シクロアルケニルアルキルおよび置換シクロアルケニルアルキル、アリル、置換アリル、アシル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、シリル等を含むがこれに限定されない。アラルキルの例は、（ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、アシルアミノ、アシル等で場合によっては置換され得る）ベンジル、オルトメチルベンジル、トリチルおよびベンズヒドリルならびにホスホニウム塩およびアンモニウム塩等の塩を含むがこれに限定されない。アリール基の例は、フェニル、ナフチル、インダニル、アントラセニル、9-(9-フェニルフルオレニル)、フェナントレニル、デュレニル等を含む。シクロアルケニルアルキルまたは置換シクロアルケニルアルキル基（好ましくは6-10個の炭素原子を有する）の例は、シクロヘキセニルメチル等を含むが、これに限定されない。適切なアシル、アルコキシカルボニルおよびアラルコキシカルボニル基は、ベンジルオキシカルボニル,t-ブトキシカルボニル、イソ-ブトキシカルボニル,ベンゾイル、置換ベンゾイル、ブチリル、アセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタロイル等を含む。保護基の混合物は、同じアミノ基を保護するために用いることができ、例えば、第一級アミノ基はアラルキル基およびアラルコキシカルボニル基の両者によって保護され得る。アミノ保護基は、これが結合された窒素と一緒になって複素環を形成し、例えば、1,2-ビス(メチレン)ベンゼン、フタルイミジル、スクシンイミジル、マレイミジル等を形成することができ、この場合、このような複素環基は、隣接するアリールおよびシクロアルキル環も含み得る。加えて、複素環基は、ニトロフタルイミジル等、一置換、二置換または三置換されている可能性がある。アミノ基は、酸化などの望ましくない反応に対し、塩酸塩、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の付加塩の形成によって保護することもできる。アミノ保護基の多くは、カルボキシ、ヒドロキシおよびメルカプト基を保護するのにも適している。例えば、アラルキル基である。アルキル基も、tert-ブチル等、ヒドロキシおよびメルカプトを保護するための適切な基である。
【００７８】
シリル保護基は、1個以上のアルキル、アリールおよびアラルキル基によって、ケイ素原子が場合によって置換されたものである。適切なシリル保護基は、トリメチルシリル,トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、tert-ブチルジメチルシリル,ジメチルフェニルシリル,1,2-ビス(ジメチルシリル)ベンゼン,1,2-ビス(ジメチルシリル)エタンおよびジフェニルメチルシリルを含むが、これに限定されない。アミノ基のシリル化は、モノ-  またはジ-シリルアミノ基をもたらす。アミノアルコール化合物のシリル化は、N,N,O-トリシリル誘導体をもたらし得る。シリルエーテル機能（官能基）からのシリル機能（官能基）の除去は、例えば、不連続の反応段階として、またはアルコール基との反応中にin  situでのいずれかにおいて、金属化合物またはフッ化アンモニウム試薬による処理によって用意に遂行される。適切なシリル化剤は、例えば、塩化トリメチルシリル、tert-ブチル-ジメチルシリルクロリド、塩化フェニルジメチルシリル、塩化ジフェニルメチルシリルまたはこれらのイミダゾールもしくはDMFとの組み合わせ産物である。アミンのシリル化およびシリル保護基の除去法は、当業者らにはよく知られている。このようなアミン誘導体の、対応するアミノ酸、アミノ酸アミドまたはアミノ酸エステルからの調整方法も、アミノ酸/アミノ酸エステルまたはアミノアルコール化学を含む有機化学の当業者らによく知られている。
【００７９】
保護基は、分子の残部に影響を及ぼさない条件下で除去される。このような方法は当該技術分野においてよく知られており、酸加水水素、水素化分解等を含む。好ましい方法は、アルコール、酢酸等またはこれらの混合物等の適切な溶媒系中、パラジウム炭素を利用する水素分解によるベンジルオキシカルボニル基の除去など、保護基の除去を含む。t-ブトキシカルボニル保護基は、ジオキサンまたは塩化メチレンなどの適切な溶媒系中、HClまたはトリフルオロ酢酸等の無機酸または有機酸を利用して除去され得る。ここで得られたアミノ塩は容易に中和され、遊離アミンを得ることができる。メチル、エチル、ベンジル、tert-ブチル、4-メトキシフェニルメチル等のカルボニル保護基は、当業者らによく知られている加水分解および水素化分解条件下で除去され得る。
【００８０】
本発明の化合物は、環式および非環式のアミジンおよびグアニジン基、ヘテロ原子置換ヘテロアリール基  (Y'  =  O,S,NR)  等の互変異性型（以下の例：で図解
【００８１】
【化５】
2013514989.tif 000006
されており、本明細書において1つの形態が命名され、記載、表示され、および/または特許請求されているが、すべての互変異性型は、このような命名、記載、表示され、および/または特許請求の範囲に本質的に含まれることが意図されている）で、存在し得る基を含有し得ることに留意すべきである。
【００８２】
本発明の化合物のプロドラッグも、本発明によって企図されている。プロドラッグは、プロドラッグの患者への投与後に、加水分解、代謝等のin  vivo生理作用によって化学修飾されて本発明の化合物になる活性化合物または不活性化合物である。プロドラッグを作製し、使用することに関与する適合性および技術は、当業者らによく知られている。エステル類を含むプロドラッグの一般的考察については、SvenssonとTunek、Drug  Metabolism  Reviews  165  (1988)  ならびにBundgaard  Design  of  Prodrugs,Elsevier  (1985)を参照されたい。マスクされたカルボニル酸アニオンの例は、アルキル(例えば、メチル、エチル)、シクロアルキル  (例えば、シクロヘキシル)、アラルキル  (例えば、ベンジル、p-メトキシベンジル)およびアルキルカルボニルオキシアルキル  (例えば、ピバロイルオキシメチル)等、多様なエステル類を含む。アミン類は、遊離薬物およびホルムアルデヒドをin  vivo放出するエステラーゼによって開裂されたアリールカルボニルオキシメチ置換誘導体としてマスクされている(Bungaard、J.  Med.  Chem.  2503  (1989))。また、イミダゾール、イミド、インドール等の酸性NH基を含有する薬物は、N-アシルオキシメチル基でマスクされている  (Bundgaard、Design  of  Prodrugs、Elsevier  (1985)).  ヒドロキシ基はエステル類およびエーテル類としてマスクされている。EP  039,051  (SloanとLittle、4/11/81)  は、マンニッヒ系ヒドロキサム酸プロドラッグ、この調製および使用を開示している。
【００８３】
本明細書および特許請求の範囲の範囲は、「  .  .  .  および  .  .  .から選択された」および「は.  .  .  または.  .  .である」(時にマーカッシュグループと称される)を含有する。この言い回しが本出願において使用される場合、特に明記しない限り、このグループ全体またはその任意のメンバーまたはその任意のサブグループを含むことが意図されている。この言い回しの使用は、単に簡略化が目的であり、個々の要素またはサブグループの必要に応じた除外を制限することは意図されていない。
【００８４】
本発明には同位体で標識された化合物も含まれ、この化合物は、本明細書に挙げたものと同一であるが、実際には、1個以上の原子が、通常の天然にみられるものとは異なる原子量または質量数を有する原子によって置き換えられている。本発明の化合物に取り込まれ得る同位体の例には、2H,3H,13C,14C,15N,16O,17O,31P,32P,35S,18Fおよび36Cl  等の水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体が含まれる。
【００８５】
上記の同位体および/または他の原子の他の同位体を包含する本発明の化合物は、本発明の範囲内に含まれる。特定の同位体で標識された本発明の化合物は、例えば、3H  および  14C  として取り込まれた放射性同位体で標識された化合物は、薬剤アッセイおよび/または基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム標識された、つまり、3Hおよび炭素-14である14C、同位体は、アッセイの調製および検出の簡便化には特に好ましい。さらに、重水素、つまり  2H等のより重い同位体は、例えば、in  vivoでの半減期を延長させるかまたは必要な用量の低減をもたらすという治療上の利点を提供でき得るほか、代謝的安定性を増大させるという治療上の利点をもたらす可能性があるため、一部の状況においては、より好ましいと考えられる。同位体で標識された本発明の化合物は、概して、容易に利用可能な同位体で標識された試薬によって、非同位体で標識された試薬の代替をすることにより、調製され得る。
【００８６】
実験
以下の略語を用いる:
aq.  -        水溶液
BINAP  -      2,2’-ビス(ジフェニルホスフィノ)-1,1’-ビナフチル
concd  -      濃縮
DCM  -      ジクロロメタン
DIAD  -      ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
DMF  -    N,N-ジメチルホフムアミド
Et2O  -    ジエチルエーテル
EtOAc  -    酢酸エチル
EtOH  -    エチルアルコール
h  -  時間
min  -    分
MeOH  -    メチルアルコール
MsCl  -                        メタンスルホニルクロリド
rt  -  室温
satd  -    飽和
THF  -    テトラヒドロフラン
【００８７】
一般
以下で使用される試薬および溶媒は、商業的供給源から得ることができる。1H-NMR  スペクトルはBruker  400  MHz  および500  MHz  NMR分光計で記録した。有意なピークは次の順に作表されている：多重度  (s,一重項;d,二重項;t,三重項;q,四重項;m,多重項;br  s,広域一重項)、ヘルツ  (Hz)でのカップリング定数（複数可）およびプロトン数。質量分析結果は質量電荷比、続いて、各イオンの相対存在量として報告されている(括弧内はエレクトロスプレーイオン化  (ESI)  質量分析をAgilent  1100シリーズ  LC/MSD  エレクトロスプレー  質量分析計で実施した。すべての化合物は、アセトニトリル:0.1%  ギ酸を含む水を送達溶媒として用いるポジティブESIモードで分析され得る。逆相分析用  HPLCは、固定相として  Agilent  Eclipse  XDB-C18  5  μm  カラム  (4.6  x  150  mm)上のAgilent  1200  シリーズを用いて実行し、アセトニトリル:0.1%  TFAを含む水で溶離して実行した。逆相半調製用HPLCは、固定相としてPhenomenex  GeminiTM  10  μm  C18  カラム  (250  x  21.20  mm)  上のAgilent  1100  シリーズを用いて実行し、アセトニトリル:0.1%  TFAを含むH2Oで溶離して実行した。
【実施例】
【００８８】
［実施例  1］:  N-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-9H-プリン-6-アミンの調製
2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリル
【００８９】
【化６】
2013514989.tif 000007
【００９０】
3-(3-フルオロフェニル)-3-オキソプロパンニトリル  (0.8991  g,5.511  mmol)  と3-アミノ-2-ピリジンカルバルデヒド  (0.6730  g,5.511  mmol)  の酢酸エチル(16.70  mL,5.511  mmol)  中の混合物に、ピペリジン  (0.04360  mL,0.4409  mmol)  を添加し、混合物を環流させ、攪拌しながら加熱した(浴温  85  ℃)。1時間後、混合物を、室温に冷却して減圧濃縮し、暗茶褐色の固形物を得た。この暗茶褐色の固形物を80  gのRedi-SepTM  カラム上での25分間にわたる0〜50%勾配のヘキサン中  EtOAcを溶離液として使用するシリカゲル・カラムクロマトグラフィー  によって精製した後、25分間にわたる50%  の無勾配のヘキサン中  EtOAcで精製し、茶褐色の固形物の形で、2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリルを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.27  (1  H,d,J=0.8  Hz),9.18  (1  H,dd,J=4.1,1.8  Hz),8.56  -  8.62  (1  H,m),8.01  (1  H,dd,J=8.6,3.9  Hz),7.76  -  7.85  (2  H,m),7.63  -  7.71  (1  H,m),7.44  -  7.52  (1  H,m);LC-MS  (ESI)  m/z  249.9  [M+H]+.
【００９１】
2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド
【００９２】
【化７】
2013514989.tif 000008
【００９３】
ジクロロメタン  (9.93  mL,0.702  mmol)  中の2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリル  (0.175  g,0.702  mmol)  の-78  ℃の溶液に、ジクロロメタン  (1.40  mL,1.40  mmol,2  当量.)中のジイソブチルアルミニウム水素化(1.0  M)を3分間で攪拌しながら滴下添加して、混合物を24時間攪拌して15℃まで温めた。混合物を  -78℃まで冷却した。  冷却した混合物にジクロロメタン  (0.702  mL,0.702  mmol,1  当量.)  中のジイソブチルアルミニウム水素化(1.0  M)を滴下添加し、混合物を  -78℃でさらに2時間攪拌した。26  時間後、混合物を氷水浴で冷却し、追加的に1  N  HCl水溶液  (4.21  mL,4.21  mmol)  を添加して0℃で反応を抑制し、攪拌した。1.5  時間後、混合物に酢酸カリウム  (0.413  g,4.21  mmol)を添加した。この有機層を分離し、水層を  CH2Cl2  (50  mL  x  2)で抽出した。この合わせた有機層を飽和  NaHCO3  (50  mL  x  1)、ブライン  (50  mL  x  1)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、オレンジ色の固形物を得た。このオレンジ色の固形物をヘキサン中で、14分間にわたる0〜100%  勾配のEtOAcを溶離液として使用する40  g  のRedi-SepTM  カラムのシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製した後、5分間にわたる100%  無勾配のEtOAcで  精製し、黄色の固形物の形で2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒドを得た：  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  10.15  (1  H,s),9.17  (1  H,dd,J=4.1,1.8  Hz),8.90  (1  H,d,J=0.8  Hz),8.54  -  8.59  (1  H,m,J=8.6,1.0,0.8,0.8  Hz),7.98  (1  H,dd,J=8.6,4.1  Hz),7.59  -  7.67  (2  H,m),7.53  -  7.58  (1  H,m),7.39  -  7.47  (1  H,m);LC-MS  (ESI)  m/z  252.9  [M+H]+.
【００９４】
1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール
【００９５】
【化８】
2013514989.tif 000009
【００９６】
テトラヒドロフラン  (2.00  mL,0.116  mmol)  中の2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド  (0.0293  g,0.116  mmol)  の攪拌混合物に、ジエチルエーテル  (0.0581  mL,0.174  mmol)  中のメチル臭化マグネシウム  (3M)  を  0  ℃で滴下添加し、混合物を室温になるまで攪拌した。2.5時間後、この反応を飽和  NH4Cl  水溶液(20  mL)で抑制し、EtOAc  (30  mL  x  2)で抽出した。この合わせた有機層をブライン  (30  mL  x  3)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残留物を14分間にわたる0〜100%  勾配のヘキサン中EtOAc  を溶離液として使用する40  gのRedi-SepTM  カラム上でのシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製した後、10分間にわたる100%  無勾配のEtOAcで精製し、無色のシロップの  1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノールを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  268.9  [M+H]+.
【００９７】
2-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン
【００９８】
【化９】
2013514989.tif 000010
【００９９】
1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール  (0.0260  g,0.0969  mmol)、トリフェニルホスフィン  (0.0508  g,0.194  mmol),フタルイミド  (0.0285  g,0.194  mmol)およびテトラヒドロフラン  (1.29  mL,0.0969  mmol)の溶液を室温で5分間攪拌し、すべての反応物質を溶解した。混合物を0  ℃に冷却し、この冷却した均一混合物にジイソプロピルアゾジカルボン酸  (0.0382  mL,0.194  mmol)を  0  ℃で滴下添加した。反応混合物  を室温にし、室温で1.5時間攪拌した。  1.5  時間後、混合物を減圧濃縮し、EtOAc  (50  mL)とブライン  (50  mL)とを分配した。この有機層をNa2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残留物を11分間にわたる0〜100%  勾配のヘキサン中EtOAc  を溶離液として使用する12  gのRedi-SepTM  カラム上でのシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製した後、25  分間にわたる100%  無勾配の  EtOAcで精製し、白色固体として、2-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  397.9  [M+H]+.
【０１００】
1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン
【０１０１】
【化１０】
2013514989.tif 000011
【０１０２】
エタノール  (1.60  mL,0.0798  mmol)中の2-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン  (0.0317  g,0.0798  mmol)  の懸濁液にヒドラジン一水和物  (0.0774  mL,1.60  mmol)を添加し、混合物を環流下で攪拌した。1時間20分後、混合物を室温に冷却した。混合物を減圧濃縮した。残留物をCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)  を溶離液として使用する11分間にわたる0〜100%  勾配の12  gのRedi-SepTM  カラム上でのカラム  クロマトグラフィーで精製した後、CH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)の100%  無勾配で10分間精製し、黄色のシロップの  1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  268.0  [M+H]+.
【０１０３】
N-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-9H-プリン-6-アミン
【０１０４】
【化１１】
2013514989.tif 000012
【０１０５】
1-ブタノール  (0.599  mL,0.0599  mmol)中の6-クロロプリン  (0.00925  g,0.0599  mmol)、1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン  (0.0160  g,0.0599  mmol)およびn,n-ジイソプロピルエチルアミン  (0.0313  mL,0.180  mmol)の混合物を100℃で攪拌した。88.5  時間後、混合物をヒーターから下ろして減圧濃縮した。この残留物を  CH2Cl2  (50  mL)中で溶解した。この有機混合物を水  (30  mL  x  1)  およびブライン  (30  mL  x  1)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。
残留物を、溶離液として、0〜50%  勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)  を14分間、次に50%無勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)  を14分間、次に50〜100%  勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)  を14分間、次に100%無勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)  を14分間使用して、40  gのRedi-SepTM  カラム上でのカラム  クロマトグラフィーで精製した後、茶褐色の固体として望ましい産物を得た。この茶褐色の固体をEtOAc-ヘキサン  (1:1)中で懸濁して濾過し、黄茶褐色の固体として、N-(1-(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-9H-プリン-6-アミンを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  12.92  (1  H,br.  s.),8.96  (1  H,dd,J=3.9,1.6  Hz),8.31  -  8.77  (3  H,m),7.99  -  8.21  (2  H,m),7.52  -  7.81  (4  H,m),7.35  (1  H,td,J=8.5,1.8  Hz),5.60  (1  H,br.  s.),1.47  (3  H,br.  s.);LC-MS  (ESI)  m/z  385.9  [M+H]+.
【０１０６】
［実施例  2］:  4-アミノ-6-((1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,および  4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルの調製
【０１０７】
2-メチル3-ニトロピリジン
【０１０８】
【化１２】
2013514989.tif 000013
【０１０９】
2-クロロ-3-ニトロピリジン  (20  g,126.18  mmol)、メタン  ボロン酸  (9.8  g,164  mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム  (11.66  g,10  mmol)および炭酸カリウム  (51.48  g,378.6  mmol)を1-4  ジオキサン(500  mL)中ですべて混合し、脱気してN2下で100  ℃まで48時間加熱した。反応物を周辺温度まで冷却して作業を実施し、水で急冷してエチルアセテートで抽出した。この水層ををエチルアセテートで逆抽出させた。合わせた有機層を無水Na2SO4  上で乾燥させて減圧濃縮し、固体を得た。この固体をさらに、シリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、6%のヘキサン中エチルアセテートを溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、オフホワイトの固体として、2-メチル3-ニトロピリジンを得た:  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  2.9(s,3H),7.4(m,1H),8.3(d,1H),8.7(d,1H).
【０１１０】
3-ニトロ-2-ピリジンカルバルデヒド
【０１１１】
【化１３】
2013514989.tif 000014
【０１１２】
2-メチル3-ニトロピリジン  (24  g,173.91  mmol)  を1,4-ジオキサン  (500  mL)中に溶解し、混合物に二酸化セレン  (23  g,208.7  mmol)  を添加し、混合物を16時間加熱環流した。反応終了後、混合物を室温に冷却し、CeliteTM  で濾過し、この濾液を減圧濃縮して油状物を得た。この油状物を溶離液として20%のエチルアセテートおよびヘキサンを使用するシリカゲル・カラムクロマトグラフィー  で精製し、オフホワイトの  固体として、3-ニトロ-2-ピリジンカルバルデヒドを得た  :  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  7.7(m,1H),8.3(d,1H),9.0(d,1H),10.3(s,1H).
【０１１３】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ニトロピリジン
【０１１４】
【化１４】
2013514989.tif 000015
【０１１５】
3-ニトロ-2-ピリジンカルバルデヒド  (22  g,144.74  mmol)  をトルエン  (500  mL)中に溶解した。混合物に触媒量の  p-TSA  (2  g)  およびエチレングリコール  (40  mL)  を添加し、このDean-Starkアセンブリを備えた反応フラスコを120℃で12時間環流した。反応終了後、反応混合物を水とエチルアセテートで処理した。有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。この有機層を合わせて、無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、濃厚な油状物を得た。この油状物を  20%のエチルアセテートおよびヘキサンを溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ニトロピリジン:  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  4.2(d,5H),6.5(s,1H),7.5(m,1H),8.3(d,1H),8.9(brs,1H)を得た。
【０１１６】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ピリジンアミン
【０１１７】
【化１５】
2013514989.tif 000016
【０１１８】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ニトロピリジン  (10  g,51  mmol)  をエタノール  (300  mL)  中に懸濁した。混合物に10%  Pd/C  (3  g)を添加した。反応混合物をParr-shaker  水素化アセンブリを用いて、60  psi  で維持した。反応終了後  (6時間)、反応混合物を濾過し、CeliteTM  を通して濾液を減圧濃縮し、オフオレンジの固体として、2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ピリジンアミンを得た  :  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  4.4-  4.0(m,6H),5.8(s,1H),7.2-  6.9(m,2H),8.0(s,1H).
【０１１９】
2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリル
【０１２０】
【化１６】
2013514989.tif 000017
【０１２１】
3-(2-フルオロフェニル)-3-オキソプロパンニトリル  (1.5  g,9.2  mmol)  および  2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ピリジンアミン  (1.68  g,10.12  mmol)  をトルエン  (100  mL)中に溶解した。  混合物に触媒量の  p-TSA  (300  mg)を添加し、このDean-Starkアセンブリを備えた反応フラスコを120℃で4時間加熱した。反応終了後、反応混合物を水とエチルアセテートで処理した。有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。この有機層を合わせて、無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、濃厚な油状物を得た。この油状物を  20%のエチルアセテートおよびヘキサンを溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリルを得た:  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  7.2-  7.0(m,3H),7.8-7.4(m,3H),8.4(d,1H),9.1(s,1H).
【０１２２】
2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド
【０１２３】
【化１７】
2013514989.tif 000018
【０１２４】
DIBAL-H  (シクロヘキサン中1M,16  mL,16  mmol)  を78  ℃のトルエン  (100  mL)中の2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボニトリル  (1  g,4.02  mmol)溶液に滴下添加した。反応混合物を緩徐に0  ℃まで低下させ、3時間攪拌した。反応終了後、反応混合物を飽和  NH4Cl  溶液およびエチルアセテートで急冷し、CeliteTMで濾過した。この有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。合わせた有機層を無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、濃厚な油状物を得た。分析から、アルデヒドの代わりにアルコールが得られたことが明らかになった。
上記の粗製物油状アルコール  (1.2  g)を1,4-ジオキサン  (60  mL)中に溶解し、混合物に二酸化マグネシウム  (MnO2)  (400  mg)を添加して室温で2時間攪拌した。混合物をCeliteTM  で濾過し、この濾液を減圧濃縮し、濃厚な油状物  (アルデヒド誘導体)を得た。この油状物を、30%のエチルアセテートおよびヘキサンを溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色のオイルとして、2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒドを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  252.9  [M+H]+.
【０１２５】
1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール
【０１２６】
【化１８】
2013514989.tif 000019
【０１２７】
メチル臭化マグネシウム  (ジエチルエーテル中2M、2.38  mLおよび4.76mmol)  をTHF  (60  mL)  中の2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボアルデヒド溶液  (600  mg,4.76  mmol)に-0  ℃で滴下添加した。反応終了後、反応混合物を飽和NH4Cl  溶液とエチルアセテートで急冷し、CeliteTMで濾過した。有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。有機層を合わせて無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、油状物を得た。この油状物を、30%のエチルアセテートおよびヘキサンを溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色のオイルとして、1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノールを得た:  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  1.3(s,3H),5.0(brs,1H),7.7-7.2(m,5H),8.4(d,1H),8.8(s,1H),9.0(s,1H).
【０１２８】
2-(1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン
【０１２９】
【化１９】
2013514989.tif 000020
【０１３０】
1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール  (550  mg,2.04  mmol)  およびフタルイミド  (600  mg,4.09  mmol)をTHF  (20  mL)  中に溶解し、混合物を0  ℃に冷却した。冷却した混合物にPPh3  (1.07  g,4.09  mmol)  を添加し、混合物を0  ℃で5〜10分間攪拌した。次に、DIAD  (800  mg,4.09  mmol)  を上記反応混合物に0  ℃で滴下添加し、この反応混合物を緩徐に室温まで戻し、室温で3時間維持した。反応終了後、反応混合物を水とエチルアセテートで急冷した。有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。この有機層を合わせて無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、白色固体として、2-(1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオンを得た:  1H-NMR  (CDCl3)  δ:  1.8(s,3H),5.0(brs,1H),6.4(s,2H),7.7-7.2(m,7H),8.4(d,1H),9.0-8.8  (d,2H).
【０１３１】
TFA塩として、1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン
【０１３２】
【化２０】
2013514989.tif 000021
【０１３３】
NH2NH2.H2O  (4  mL,8  mmol)  を、エタノール  (20  mL)中の溶液  of  2-(1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン  (500  mg,1.26  mmol)溶液に室温で滴下添加した。この反応混合物を室温で18時間攪拌した。反応終了後、反応混合物を希釈HClで酸性化した。次に、エタノールを減圧濃縮し、その残留物をエチルアセテートで洗浄した。混合物を0  ℃の水性NaOH溶液で塩基化し、エチルアセテートで抽出した。この有機層を分離し、水層をエチルアセテートで逆抽出させた。合わせた有機層を無水Na2SO4  上で乾燥させ、減圧濃縮し、白色固体として、産物を得た。この粗製化合物をさらに調製用HPLCによって精製し、TFA塩として、1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンを得た。:  1H-NMR  (DMSO)  δ:  1.6(s,3H),4.3(brs,1H),7.6-  7.4(m,3H),7.9  (m,1H),8.6(d,1H),8.4(brs,2H),8.9(s,1H),9.1  (d,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  268.1  [M+H]+.
【０１３４】
4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド
【０１３５】
【化２１】
2013514989.tif 000022
【０１３６】
DMF  (64  mL)  とPOCl3  (200  mL)の混合物を0℃  で1時間攪拌し、4,6-ピリミジンジオール  (50.0  g,446  mmol)  で処理し、さらに0.5時間室温で攪拌した。次に、この不均一混合物を3時間加熱環流した。揮発物を減圧下で除去し、残留物を氷水中に注ぎ込み、ジエチルエーテルで6回抽出した。有機相を水性NaHCO3  と水で洗浄し、Na2SO4,上で減圧濃縮して結晶化  (EtOAc-石油エーテル)し、4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド  (43.5  g,55%)を得た;LC-MS  (ESI)  m/z  177  [M+H]+.
【０１３７】
4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド  オキシム
【０１３８】
【化２２】
2013514989.tif 000023
【０１３９】
EtOH  (320  mL)  中の4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド  (8.00  g,44.8  mmol)、NaOAc  (3.7g,1.0  当量)  および  NH2OH.HCl  (3.1  g,1.0  当量)  の混合物を室温で2時間攪拌した。反応混合物を濾過して濃縮し、シリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し(乾式ローディング、最初にDCM  次に、DCM/EtOAc、1/9)  、白色固体として、4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド  オキシムを得た。.
【０１４０】
4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１４１】
【化２３】
2013514989.tif 000024
【０１４２】
4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルバルデヒド  オキシム  (8  g)  をCHCl3  (40  mL)中に溶解し、SOCl2  (6  mL)  によって室温で2時間処理した。溶媒を除去し、この残留物をDCM  (5  mL)中に溶解した。この結果得られた固体を濾過し、DCM  (5  mL)で洗浄した。この濾液を減圧濃縮し、DCM-ヘキサン  (3:1)  を用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体として、4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルボニトリルを得た。
【０１４３】
4-アミノ-6-クロロ-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１４４】
【化２４】
2013514989.tif 000025
【０１４５】
4,6-ジクロロ-5-ピリミジンカルボニトリル  (5.82  g,33.5  mmol)  の白色固体を500  mLの丸底フラスコの中でTHF  (66.9  mL)に溶解し、混合物にアンモニアガス  (0.570  g,33.5mmol)を通し、攪拌しながら、50分間の反応時間中10分ごとに3分間発泡させた。アンモニアガスの発泡の直後、白色の試料(塩化アンモニウム)が形成された。50分後、この試料を濾過し、THF  (100  mL)で洗浄した。この濾液にシリカゲルを添加して減圧濃縮した。このシリカゲル上の産物を27分にわたる0〜100%  勾配のヘキサン中EtOAc  を使用する120  gのRedi-SepTM  カラム上でのシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製した後、20分間にわたる100%無勾配のヘキサン中EtOACを溶離液として使用する4-アミノ-6-クロロ-ピリミジン-5-カルボニトリルをオフホワイトの  固体として得た。このオフホワイトの固体をEtOAc-ヘキサン中に懸濁し  (1:1,20  mL)、濾過し、EtOAc-ヘキサン  (1:1,30  mL)で洗浄した後、乾燥させ、白色固体として、4-アミノ-6-クロロ-5-ピリミジンカルボニトリルを得た  :  1H  NMR  (500  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  7.91  -  8.77  (3  H,m);LC-MS  (ESI)  m/z  154.9  [M+H]+.
【０１４６】
4-アミノ-6-((1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１４７】
【化２５】
2013514989.tif 000026
【０１４８】
4-アミノ-6-クロロ-5-ピリミジンカルボニトリル  (0.045  g,0.288  mmol),1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンTFA塩  (0.110  g,0.288  mmol)とブタン-1-ol  (2.88  mL)中n,n-ジイソプロピルエチルアミン  (0.251  mL,1.44  mmol)  の混合物を120℃で攪拌した。5時間後、混合物を火から外し、室温に冷却した。冷却後、混合物を減圧濃縮し、茶褐色のシロップを得た。この残留物に水  (30  mL)  を添加し、混合物を超音波分解した。この結果得た試料を濾過によって収集し、水  (20  mL)で洗浄して乾燥し、黄色の固体として望ましい産物を得た。この固体を14分間にわたる0〜100%勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)を溶離液として使用する40  gのRedi-SepTM  カラム上でのカラム  クロマトグラフィーで精製し、次に、100%  無勾配のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)によって14分間精製し、黄色の固体を得た。  この黄色の固体をEtOAc-ヘキサン(1:1)中に懸濁して濾過し、淡黄色の固体として4-アミノ-6-((1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルを得た。:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.68  (1  H,s),8.41  (1  H,ddd,J=8.6,1.6,0.8  Hz),7.85  (1  H,d,J=7.2  Hz),7.73  -  7.81  (2  H,m),7.58  (1  H,br.  s.),7.45  -  7.53  (1  H,m),7.26  -  7.37  (2  H,m),7.17  (2  H,br.  s.),5.24  -  5.36  (1  H,m),1.52  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  386.0  [M+H]+.
【０１４９】
4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  および4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１５０】
【化２６】
2013514989.tif 000027
ラセミ混合物  (44.13  mg)  をSFCを用いたキラル分離によって2画分に分離した:  2つの異性体の立体化学を、IAカラムで最初に溶離した異性体をR構造、IAカラムで2番目に溶離された異性体をS構造として任意に割り付けたところ、そのPI3Kデルタ生化学的効力に基づき、効力の低い方の異性体がR-異性体であり、効力の高い方の異性体がS-異性体であることが確認された。
【０１５１】
IAカラムでの第1ピークおよびAD-Hカラムでの第2ピーク  :  オフホワイトの固体として、4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.68  (1  H,s),8.41  (1  H,ddd,J=8.6,1.6,0.8  Hz),7.85  (1  H,d,J=7.8  Hz),7.74  -  7.82  (2  H,m),7.58  (1  H,br.  s.),7.46  -  7.53  (1  H,m),7.27  -  7.36  (2  H,m),7.17  (2  H,br.  s.),5.23  -  5.37  (1  H,m),1.52  (3  H,d,J=6.8  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  386.0  [M+H]+.
【０１５２】
IAカラムでの第2ピークおよびAD-Hカラムでの第1ピーク:  オフホワイトの  固体として、4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.68  (1  H,s),8.41  (1  H,ddd,J=8.5,1.5,0.8  Hz),7.85  (1  H,d,J=7.0  Hz),7.74  -  7.81  (2  H,m),7.58  (1  H,br.  s.),7.46  -  7.53  (1  H,m),7.27  -  7.35  (2  H,m),7.17  (2  H,br.  s.),5.24  -  5.36  (1  H,m),1.52  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  386.0  [M+H]+.
【０１５３】
［実施例  3］:  4-アミノ-6-((1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル、および  4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンの調製
【０１５４】
【化２７】
2013514989.tif 000028
【０１５５】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-3-ピリジンアミン  及び  3-(3,5-ジフルオロフェニル)-3-オキソプロパンニトリルを用い、実施例  2の方法に従って調製し、1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  286.0  [M+H]+。
【０１５６】
4-アミノ-6-((1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１５７】
【化２８】
2013514989.tif 000029
4-アミノ-6-クロロ-5-ピリミジンカルボニトリル  (0.125  g,0.807  mmol)、1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン  (0.2303  g,0.807  mmol)と1-ブタノール(8.07  mL)中のn,n-ジイソプロピルエチルアミン  (0.703  mL,4.04  mmol)の混合物を120℃で攪拌した。21時間後、混合物を  火から外し、室温に冷却した。冷却後、混合物を減圧濃縮し、茶褐色のシロップを得た。この残留物をDCM  (50  mL)中に溶解した。この溶液を水  (50  mL  x  1)  およびブライン  (50  mL  x  1)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過して減圧濃縮し、赤色固体を得た。この赤色固体を、14分間にわたる0〜5%勾配のCH2Cl2中のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)を用いる40  gのRedi-SepTMカラム上でのクロマトグラフィーによって精製した後、溶離液として14分間にわたる5%無勾配のCH2Cl2:MeOH:NH4OH  (89:9:1)を用いる精製によって、オフホワイトの固体を得た。このオフホワイトの固体をEtOAc-ヘキサン  (1:4,10  m  L)中に懸濁して濾過し、EtOAc-ヘキサン  (1:4,10  m  L)  で洗浄し、白色固体として、4-アミノ-6-((1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.66  (1  H,s),8.42  (1  H,ddd,J=8.6,1.6,0.8  Hz),7.94  (1  H,d,J=7.2  Hz),7.87  (1  H,s),7.79  (1  H,dd,J=8.6,4.1  Hz),7.30〜  7.44  (3  H,m),7.23  (2  H,br.  s.),5.46  (1  H,クイン,J=7.1  Hz),1.48  (3  H,d,J=6.8  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  404.0  [M+H]+.
【０１５８】
4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルおよび  4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１５９】
【化２９】
2013514989.tif 000030
ラセミ混合物  (117  mg)を、SFCを用いたキラル分離によって分離し、2つの分画を得た:2つの異性体の立体化学を、OJカラムで最初に溶離した異性体をS構造、OJカラムで2番目に溶離された異性体をR構造として任意に割り付けたところ、そのPI3Kデルタ生化学的効力に基づき、効力の高い方の異性体がR-異性体であり、効力の低い方の異性体がS-異性体であることが確認された。
【０１６０】
OJカラムでの第1ピークおよびAD-Hカラムでの第1ピーク  :  オフホワイトの  固体として、4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.66  (1  H,s),8.42  (1  H,ddd,J=8.6,1.6,0.8  Hz),7.94  (1  H,d,J=7.4  Hz),7.87  (1  H,s),7.79  (1  H,dd,J=8.5,4.2  Hz),7.30〜  7.45  (3  H,m),7.23  (2  H,br.  s.),5.46  (1  H,クイン,J=7.1  Hz),1.48  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)]  m/z  404.0  [M+H]+.
【０１６１】
OJカラムでの第2ピークおよびAD-Hカラムでの第2ピーク  :  淡黄色の固体として、4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(3,5-ジフルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.66  (1  H,s),8.42  (1  H,ddd,J=8.5,1.7,0.8  Hz),7.94  (1  H,d,J=7.4  Hz),7.87  (1  H,s),7.79  (1  H,dd,J=8.5,4.2  Hz),7.30〜  7.45  (3  H,m),7.23  (2  H,br.  s.),5.46  (1  H,クイン,J=6.9  Hz),1.48  (3  H,d,J=6.8  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  404.0  [M+H]+.
【０１６２】
［実施例  4］:  4-アミノ-6-((1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,4-アミノ-6-(((1R)-1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル、および  4-アミノ-6-(((1S)-1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル2-エチル-3-フェニル-1,5-ナフチリジンの調製
【０１６３】
【化３０】
2013514989.tif 000031
既知の手順  (WO  2005/100356)に従い、2-クロロ-3-フェニル-1,5-ナフチリジンを作製した。2-クロロ-3-フェニル-1,5-ナフチリジン  (200  mg,0.85  mmol)、ジエチル亜鉛  (0.87  mL,1  M  in  ヘキサン,1.02  当量)、K2CO3  (354  mg,3.0  当量)  およびTHF  (5  mL)中のPdCl2(dppf)2  DCM  錯体  (62.5  mg,0.1  当量)の混合物を、加熱から環流に移る前にN2  で5分間掃流し、6時間後、その反応をNH4Clで急冷し、EtOAcで抽出し、その残留物を、ヘキサン/DCM  (2/3)  を溶離液として用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色の固体を得た。  LC-MS  (ESI)  m/z  235  [M+H]+.
【０１６４】
2-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０１６５】
【化３１】
2013514989.tif 000032
2-エチル-3-フェニル-1,5-ナフチリジン  (112  mg,0.43  mmol)および1,3-ジブロモ-5,5-ジメチルヒダントイン  (85  mg,0.7  当量)  を四塩化炭素  (5  mL)中に懸濁した。  混合物に過酸化ベンゾイル  (10.3  mg,0.1  当量)を添加し、環流で3時間加熱した。混合物に飽和重炭酸ナトリウム水溶液  (3  mL)を添加した。この層を分離し、水層をCH2CH2  (3  mL  x  2)で抽出した。合わせた有機層をブライン  (3  mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させて濾過し、減圧濃縮し、オレンジ色のシロップを得た。この材料を次の段階、LC-MS  (ESI)  m/z  314  [M+H]+で使用する。DMF  (2.0  mL)中の2-(1-臭化エチル)-3-フェニル-1,5-ナフチリジン  (120  mg,0.38  mmol)  の混合物を、フタルイミド  カリウム塩  (142  mg,2.0  当量)により60℃で2時間処理した。LCMS  は完了を示した。この反応混合物を水とEtOAcとの間で分配し、最後に、溶離液としてEtOAc-ヘキサン  (0/1〜  2/1)を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体を得た。  1H  NMR  (500  MHz,CDCl3)  δ  ppm  8.88  (1  H,dd,J=5.0,1.6  Hz),8.31  (1  H,J=10  Hz),8.1  (1  H,s),7.63  -  7.54  (5  H,m),7.27-7.17  (8  H,m),5.88  (1  H,dd,J=10,5.0  Hz),1.76  (3  H,J=10  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  380  [M+H]+.
【０１６６】
1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エタンアミン
【０１６７】
【化３２】
2013514989.tif 000033
2-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオン  (120  mg,0.32  mmol)  を、EtOH  (2  mL)  中に懸濁し、NH2NH2  (0.2  mL)により70℃で30分間処理し、最後に無色のオイル  (92  mg,96%)を得た。  LC-MS  (ESI)  m/z  250  [M+H]+.
【０１６８】
4-アミノ-6-((1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,4-アミノ-6-(((1R)-1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル,および  4-アミノ-6-(((1S)-1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１６９】
【化３３】
2013514989.tif 000034
1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エタンアミン  (46  mg,0.19  mmol),4-アミノ-6-クロロピリミジン-5-カルボニトリル  (28.5  mg,1.0  当量)  およびn-BuOH  (2  mL)中のヒューニッヒ塩基(39  μL,1.2  当量)を130℃で4  時間加熱した。混合物を室温に室温に冷却して濾過し、少量のEtOHで洗浄し、4-アミノ-6-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルアミノ)ピリミジン-5-カルボニトリルとして、白色固体を得た。  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.04  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.44  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.21  (1H,s),7.97  (1H,s),7.84  (1H,dd,J=8.0,4.0  Hz),7.61  -  7.47  (6  H,m),7.30  (1  H,br,s),5.63  (1  H,t,J=8.0  Hz)),1.31  (3  H,d,J=8.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  368  [M+H]+.
このラセミ混合物  (50  mg)を、SFCを用いたキラル分離によって分離し、2つの画分を得た  :  2つの異性体の立体化学を、IAカラムで最初に溶離した異性体をS構造、IAカラムで2番目に溶離された異性体をR構造として任意に割り付けたところ、そのPI3Kデルタ生化学的効力に基づき、効力の低い方の異性体がR-異性体であり、効力の高い方の異性体がS-異性体であることが確認された。
【０１７０】
IAカラムでの第1ピーク:  オフホワイトの固体として、(S)-4-アミノ-6-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルアミノ)ピリミジン-5-カルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.04  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.44  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.21  (1H,s),7.97  (1H,s),7.84  (1H,dd,J=8.0,4.0  Hz),7.61  -  7.47  (6  H,m),7.30  (1  H,br,s),5.63  (1  H,t,J=8.0  Hz)),1.31  (3  H,d,J=8.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  368  [M+H]+.
【０１７１】
IAカラムでの第2ピーク:  オフホワイトの固体として、(R)-4-アミノ-6-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルアミノ)ピリミジン-5-カルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.04  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.44  (1  H,dd,J=8.0,4.0  Hz),8.21  (1H,s),7.97  (1H,s),7.84  (1H,dd,J=8.0,4.0  Hz),7.61  -  7.47  (6  H,m),7.30  (1  H,br,s),5.63  (1  H,t,J=8.0  Hz)),1.31  (3  H,d,J=8.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  368  [M+H]+.
【０１７２】
［実施例  5］:  N-((1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)-9H-プリン-6-アミン
N-(1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチル)-9H-プリン-6-アミンの調製
【０１７３】
【化３４】
2013514989.tif 000035
1-(3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エタンアミン  (46  mg,0.19  mmol)、4-アミノ-6-クロロプリン  (28.5  mg,1.0  当量)およびn-BuOH  (2  mL)  中のヒューニッヒ塩基  (39  μL,1.2  当量)  を130℃で終夜加熱した。混合物を室温に冷却し、濃縮し、逆相HPLC  (MeCN/H2O/0.1%TFA,10%  to  60%)  で精製し、TFA塩として、白色粉末  (50  mg)を得た.  1H  NMR  (400  MHz,CD3OD)  δ  ppm  9.05  (1  H,d,J=4.0  Hz),8.65  (1  H,d,J=8.0  Hz),8.50〜8.47  (2  H,m),8.29  (1H,s),7.90  (1H,dd,J=8.0,4.0  Hz),7.62  -  7.47  (5  H,m),6.12  -6.01  (1  H,m),1.63  (3  H,d,J=8.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  368  [M+H]+.
【０１７４】
［実施例  6］:  4-アミノ-6-((2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メトキシ)-5-ピリミジンカルボニトリル
メチル  3-(3-エトキシ-3-オキソプロパンアミド)ピコリナートの調製
【０１７５】
【化３５】
2013514989.tif 000036
ジクロロエタン  (60  mL)中メチル3-アミノピコリナート  (1.8  mL,13.80  mmol)の攪拌溶液に、エチル  3-クロロ-3-オキソプロパネート  (2.08  g,13.80  mmol)を添加した。この反応を45分間環流加熱した。この時間後、、反応物を室温に冷却し、DCM  (60  mL)  とNaHCO3  (飽和水溶液、30  mL)とを分配した。分離した水層を  DCM  (40  mL)  で抽出し、合わせた有機層をブライン  (20  mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、メチル  3-(3-エトキシ-3-オキソプロパンアミド)ピコリナートを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  267.1  [M+H]+.
【０１７６】
ナトリウム3-(エトキシカルボニル)-1,5-ナフチリジン-2,4-ビス（オラート)
【０１７７】
【化３６】
2013514989.tif 000037
EtOH  (50  mL)  中のメチル  3-(3-エトキシ-3-オキソプロパンアミド)ピコリナート  (3.7  g,14.67  mmol)  の攪拌溶液に、エタノール酸ナトリウム  (6.56  mL,17.60  mmol)を添加した。この反応を室温で1時間攪拌した  。この時間後、、この反応物を真空濃縮し、真空下で終夜乾燥させ、ナトリウム3-(エトキシカルボニル)-1,5-ナフチリジン-2,4-ビス（オラート)を得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  8.14  (1  H,dd,J=4.5,1.6  Hz),7.46  (1  H,dd,J=8.2,1.6  Hz),7.29  (1  H,dd,J=8.2,4.3  Hz),4.08  (2  H,q,J=7.0  Hz),1.13  -  1.24  (3  H,m).
【０１７８】
エチル  2,4-ジクロロ-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸
【０１７９】
【化３７】
2013514989.tif 000038
ナトリウム3-(エトキシカルボニル)-1,5-ナフチリジン-2,4-ビス（オラート)  (4.0  g,14.38  mmol)  および三塩化ホスホリル  (88  g,575  mmol)  の懸濁液を、130℃で48時間加熱した。この時間後、、この反応物を室温に冷却し、、真空蒸発させた。残留物を慎重に氷水中に注ぎ込み  (100  mL)  、これをNa2CO3の飽和水溶液でpH10に塩基化した。この水層をEtOAc(2  x  250  mL)  で抽出し、合わせた有機層を1  M  NaOH  (40  mL)で洗浄した。この有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、エチル  2,4-ジクロロ-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸:  LC-MS  (ESI)  m/z  271.0  [M+H]+を得た。
【０１８０】
エチル  4-クロロ-2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸
【０１８１】
【化３８】
2013514989.tif 000039
アセトニトリル:水  (7  mL:2  mL)中のエチル  2,4-ジクロロ-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸  (1.0  g,3.69  mmol)の攪拌懸濁液にPd  (PPh3)4  (0.426  g,0.369  mmol),3-フルオロフェニルボロン酸  (0.568  g,4.06  mmol)  および炭酸ナトリウム  (0.782  g,7.38  mmol)  を添加し、この反応物を6時間環流加熱した。
この後、この反応物を室温に冷却し、EtOAc  (80  mL)  と水(30  mL)に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。混合物を、ヘキサン:EtOAcが1:0  〜4:1の勾配を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体として、エチル  4-クロロ-2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸を得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  331.0  [M+H]+.
【０１８２】
(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール
【０１８３】
【化３９】
2013514989.tif 000040
トルエン(10  mL)  中のエチル4-クロロ-2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸  (614  mg,1.856  mmol)  の攪拌溶液に、DIBAL-H  (4.1  mL,4.1  mmol)  を0℃で2分間かけて滴下添加した。この時間後、、この反応物を1時間かけて室温まで戻した。この時間後、さらに多くのDIBAL-H  (4.1  mL,4.1  mmol)を添加し、この反応物を室温で終夜攪拌した。この時間後、水素化リチウムアルミニウム  (0.92  mL,3.68  mmol,4.0M  THF中溶液)  を添加し、この反応物を室温で10分間攪拌した。この時間後、この反応物を慎重に水(8  mL)  、NaOH  (5  mL,1.0M  水溶液)  および水  (5  mL)で急冷した。この攪拌混合物に、EtOAc  (50  mL)  およびロシェル塩  (50  mL,飽和水溶液)を添加し、混合物を室温で2時間攪拌した。この時間後、、分離した有機層を水で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。得られた固体をヘキサン:EtOAcが1:0  〜1:2の勾配を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、(2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノールを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  255.1  [M+H]+.
【０１８４】
4-アミノ-6-((2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メトキシ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０１８５】
【化４０】
2013514989.tif 000041
DMF  (1.5  mL)中の  (2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール  (65  mg,0.256  mmol)  の攪拌溶液に、水素化ナトリウム  (12.3  mg,0.31  mmol,60%  油中懸濁液)  を添加し、この反応物を室温で10分間攪拌した。この時間後、、4-アミノ-6-クロロピリミジン-5-カルボニトリル  (39.5  mg,0.256  mmol)  を添加し、この反応物を室温で30分間攪拌した。この時間後、、追加分のNaH  (12.3  mg,0.31  mmol,60%  油中分散液)  を添加し、この反応物を50℃で2時間加熱し、室温で終夜置いた。この時間後、、この反応物を室温に冷却し、EtOAc  (50  mL)  とLiCl  (20  mL,1M  水溶液)に分配した。分離した有機層をLiCl  (20  mL,1M  水溶液)  で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。混合物を逆相HPLC  (10〜60%  水中アセトニトリル)で精製し、白色固体として、4-アミノ-6-((2-(3-フルオロフェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メトキシ)-5-ピリミジンカルボニトリルを得た  :  1H  NMR  (400  MHz,-クロロFORM-d)  δ  ppm  9.04  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.61  -  8.66  (1  H,m),8.44  -  8.51  (1  H,m),8.28  (1  H,s),7.71  (1  H,dd,J=8.6,4.1  Hz),7.36  -  7.56  (3  H,m),7.21  (1  H,tdd,J=8.3,8.3,2.7,1.2  Hz),5.67  (2  H,s),5.62  (2  H,br.  s.):  LC-MS  (ESI)  m/z  373.1  [M+H]+.
【０１８６】
［実施例  7］:  4-アミノ-6-(((1S)-1-(7-フルオロ-2-(2-(methylsulfonyl)-フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルおよび4-アミノ-6-(((1R)-1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
3-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-3-オキソプロパンニトリルの調製
【０１８７】
【化４１】
2013514989.tif 000042
DMSO  (267  mL)  中の3-(2-ブロモフェニル)-3-オキソプロパンニトリル  (15  g,66.94  mmol)  溶液に、25  ℃でメタンスルホン酸のナトリウム塩  (13.6  g,138.89  mmol)、ヨウ化銅  (6.3  g,33.47  mmol)、L-プロリン  (3.8  g,33.47  mmol)  および水酸化ナトリウム  (1.3  g,33.47  mmol)  を添加した。反応混合物を60  ℃で1時間攪拌した。この反応混合物25  ℃で水を添加し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、真空濃縮した。残留物を、0〜45  %勾配の  ヘキサン中EtOAC  を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、3-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-3-オキソプロパンニトリルを得た:  1H  NMR  (400  MHz  ,-クロロFORM-d):  δ  3.183  (S,3H),4.041  (s,2H),7.468  (dd,1H,J=1.2  Hz,J=7.6  Hz),7.699-7.798  (m,2H),8.084  (dd,1H,J=1.2Hz,J=7.6Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  224.0  [M+H]+.
【０１８８】
メチル  3-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-3-オキソプロパネート
【０１８９】
【化４２】
2013514989.tif 000043
メタノール  (100  mL)  中3-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-3-オキソプロパンニトリル  (4.5  g,20.25  mmol)  の溶液に、25  ℃でトリメチル  塩化シリル  (11  mL,100.58  mmol)  を添加した。反応混合物を70  ℃で終夜攪拌した。反応混合物に25  ℃で水を添加し、EtOAc  で抽出した。反応混合物を真空濃縮し、0〜30  %勾配の  ヘキサン中EtOAC  を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、メチル  3-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-3-オキソプロパネートを得た:  1H  NMR  (400  MHz  ,DMSO-d6):  δ  3.294  (S,3H),3.645  (s,3H),4.12  (s,2H),7.762-7.874  (m,3H),7.979-7.984  (m,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  256.9  [M+H]+.
【０１９０】
5-フルオロ-3-ニトロ-2-ビニルピリジン
【０１９１】
【化４３】
2013514989.tif 000044
1,4  ジオキサン  (270  mL)  中の2-ブロモ-5-フルオロ-3-ニトロピリジン  (20  g,90.50  mmol)  溶液に、トリブチル  ビニル  スズ  (34.54  g,108.60  mmol)を添加した。反応混合物を窒素を用いて30分間脱気した。反応混合物にビス-(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)-クロリド  (3.17  g,4.5  mmol)  を添加した。この反応物を110  ℃で16時間攪拌した。これを25  ℃に冷却した。この反応物に水を添加し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、0〜2  %勾配の  ヘキサン中EtOAC  を用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、5-フルオロ-3-ニトロ-2-ビニルピリジンを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6):  δ  5.742  (dd,1H,J=2Hz,10.8Hz),6.45  (dd,1H,J=2Hz,J=16.8Hz),7.11-7.17  (m,1H),8.489-8.516  (m,1H),8.959  (d,1H,J=2.4Hz).
【０１９２】
5-フルオロ-3-ニトロピコリンアルデヒド
【０１９３】
【化４４】
2013514989.tif 000045
THF:  H2O  (2:1)  (517  mL)  中の5-フルオロ-3-ニトロ-2-ビニルピリジン  (14.5  g,86.24  mmol)の溶液に、4-メチルモルホリン-N-オキシド  (15.1  g,129.36  mmol),t-ブタノール  (1  mL)  および四酸化オスミウム  (4%)  (2  mL)を添加した。反応混合物を25  ℃で6時間攪拌し、ジオールを形成した。この反応混合物に過ヨウ素酸ナトリウム  (55.3  g,258.87  mmol)  を添加した。この反応物を25  ℃で8時間攪拌した。反応混合物をCeliteTMで濾過し、EtOAcで洗浄した。この濾液をEtOAcで  抽出した。この有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4.上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、5-フルオロ-3-ニトロピコリンアルデヒドを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6):  δ  8.695-8.722  (m,1H),9.123  (d,1H,J=2.8Hz),10.078  (s,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  171.0  [M+H]+.
【０１９４】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロ-3-ニトロピリジン
【０１９５】
【化４５】
2013514989.tif 000046
トルエン  (220  mL)中の5-フルオロ-3-ニトロピコリンアルデヒド  (12.5  g,73.48  mmol)  溶液に、25  ℃で、p-トルエン  スルホン酸  (698  mg,3.67  mmol)  およびエチレングリコール  (20.7  mL,367.43  mmol)を添加した。反応混合物を終夜、120  ℃  に加熱し、dean-stark  装置を用いて水を除去した。反応物を25  ℃に冷却した。この反応物に水を添加し、EtOAc  で抽出した。有機層を  Na2SO4上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、0〜10  %勾配の  ヘキサン中EtOACを用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロ-3-ニトロピリジンを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6):  δ  4.02  (s,4H),6.22  (s,1H),8.939  (d,1H,J=1.2Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  215.1  [M+H]+.
【０１９６】
2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロピリジン-3-アミン
【０１９７】
【化４６】
2013514989.tif 000047
エタノール中  (140  mL)  2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロ-3-ニトロピリジン  (10  g,46.69  mmol)  の溶液に、窒素空気下でPd/C  (1  g)を添加した。この反応混合物を水素空気下の25  oCで終夜攪拌した。この反応混合物をCeliteTMで濾過し、EtOHで洗浄した。この濾液を真空濃縮し、残留物を  0〜40  %勾配の  ヘキサン中EtOACを用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロピリジン-3-アミンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  185.2  [M+H]+.
【０１９８】
3-アミノ-5-フルオロピコリンアルデヒド
【０１９９】
【化４７】
2013514989.tif 000048
DMSO:  H2O  (1:1)  (162  mL)中の2-(1,3-ジオキソラン-2-イル)-5-フルオロピリジン-3-アミン  (5  g,27.14  mmol)  溶液に塩化リチウム  (6.9  g,162.89  mmol)を添加した。反応混合物を90  ℃に16時間加熱し、dean-stark  装置を使って水を除去した。この反応物に水を添加し、EtOAcで抽出した。有機層をNa2SO4上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、0〜40  %勾配の  ヘキサン中EtOACを用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、3-アミノ-5-フルオロピコリンアルデヒドを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6):  δ  7.003-7.037  (m,1H),7.387  (br  s,2H),7.944  (d,1H,J=2.4Hz),9.853  (s,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  141.0  [M+H]+.
【０２００】
メチル7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸
【０２０１】
【化４８】
2013514989.tif 000049
3-アミノ-5-フルオロピコリンアルデヒド  (930  mg,6.63  mmol)、メチル  3-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-3-オキソプロパネート  (1.7  g,6.63  mmol)  および塩化セリウム七水化物  (435  mg,1.32  mmol)  の混合物を100  ℃で3時間加熱した。残留物をMeOH中に溶解し、0〜30  %勾配のヘキサン中EtOAC  を用いた中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィー  により精製し、メチル  7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸を得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  361.0  [M+H]+.
【０２０２】
(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール
【０２０３】
【化４９】
2013514989.tif 000050
DCM  (27  mL)中の7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸  (1.2  g,3.33  mmol)  の溶液に、-78  ℃で、DIBAL-H  (34  mL,33.3  mmol)を添加した。反応混合物を同じ温度で4時間攪拌した。この反応混合物を塩化アンモニウム溶液で急冷し、EtOAcで抽出した。この有機層を真空濃縮し、メチル  (7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノールを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  333.1  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２０４】
7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド  
【０２０５】
【化５０】
2013514989.tif 000051
溶液に  DCM  (0.5  mL)  中のメチル  (7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール  (50  mg,0.15  mmol)  溶液に、25  ℃で、重クロム酸ピリジニウム  (113  mg,0.3  mmol)  を添加した。この反応混合物を同じ温度で終夜攪拌した。この反応混合物をCeliteTMで濾過した。濾液を真空濃縮し、7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒドを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  331.1  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２０６】
1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)  エタノール
【０２０７】
【化５１】
2013514989.tif 000052
THF  (24  mL)中の7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド  (1.0  g,3.02  mmol)の溶液に、0  ℃で、メチル  臭化マグネシウム  (3  mL,9.08  mmol)を添加した。この反応混合物を同じ温度で2時間攪拌した。この反応混合物を塩化アンモニウム溶液で急冷し、EtOAcで抽出した。この有機層を  Na2SO4上で乾燥させ、真空濃縮した。残留物を、0〜40%勾配の  ヘキサン中EtOACを用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、メチル  1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール  (500  mg)を得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  347.0  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２０８】
2-(1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０２０９】
【化５２】
2013514989.tif 000053
THF  (15  mL)中のメチル  1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール  (500  mg,1.44  mmol)  とフタルイミド  (425  mg,2.88  mmol)  の混合物に、0  ℃でトリフェニルホスフィン  (757  mg,2.88  mmol)  を添加した。この  反応混合物を同じ温度で10分間攪拌した。この反応混合物に、0  ℃でジイソプロピル  アゾジカルボン酸  (0.6  mL,2.88  mmol)  を添加した。反応混合物を0  ℃で終夜攪拌した。この反応混合物に水を添加し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、真空濃縮し、2-(1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)  エチル)  イソインドリン-1,3-ジオンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  476.0  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２１０】
1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン
【０２１１】
【化５３】
2013514989.tif 000054
2-(1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)  エチル)  イソインドリン-1,3-ジオン  (1.2  g,2.52  mmol  in  EtOH  (40  mL)の溶液に、25  ℃でヒドラジン水和物  (0.8  mL,16.4  mmol)  を添加した。この反応混合物を25  ℃で終夜攪拌した。反応混合物を5  N  塩酸で酸性化し、真空濃縮した。  残留物に水を添加し、EtOAcで抽出した。水層を水性NaOH  溶液で塩基化し、EtOAc  で抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、真空濃縮し、1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  345.96  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２１２】
4-アミノ-6-((1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０２１３】
【化５４】
2013514989.tif 000055
n-ブタノール  (5.2  mL)  中の1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン  (300  mg,0.86  mmol)  と  4-アミノ-6-クロロピリミジン-5-カルボニトリル(135  mg,0.86  mmol)の混合物に、25  ℃でジイソプロピルエチル-アミン  (336  mg,2.6  mmol)  を添加した。この反応混合物を110  ℃で終夜攪拌した。反応混合物に水を添加し、EtOAc  で抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、濃縮した。残留物をDCM中の0〜5  %  MeOHを用いた中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィー  により、精製した。これをさらに逆相HPLCで精製し、4-アミノ-6-((1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6):  δ  1.380  (d,3H,J=6.8Hz),3.215  (s,3H),5.240〜5.310  (m,1H),7.256  (br  s,2H),7.718-7.828  (m,2H),7.934-7.950(m,3H),8.123(dd,1H,J=1.2Hz,7.6Hz),8.336(dd,1H,J=2.4Hz,9.6Hz).  8,678(s,1H),9.117(d,1H,J=2.8Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  464.2  [M+H]+.
【０２１４】
4-アミノ-6-(((1S)-1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  および  4-アミノ-6-(((1R)-1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０２１５】
【化５５】
2013514989.tif 000056
このラセミ混合物  (60  mg)  を、SFCを用いて分離した:
画分１：黄褐色の固体として、4-アミノ-6-(((1S)-1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  (0.01993  g,0.043  mmol,33.2  %  yield)  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.12  (1  H,d,J=2.7  Hz),8.68  (1  H,s),8.30〜  8.38  (1  H,m),8.12  (1  H,dd,J=7.7,1.5  Hz),7.88  -  7.97  (3  H,m),7.72  -  7.85  (2  H,m),7.16  -  7.33  (2  H,m),5.28  (1  H,クイン,J=7.0  Hz),1.38  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  464.0  [M+H]+.
画分  2:  茶褐色の固体として、4-アミノ-6-(((1R)-1-(7-フルオロ-2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.12  (1  H,d,J=2.7  Hz),8.68  (1  H,s),8.30〜  8.37  (1  H,m),8.12  (1  H,dd,J=7.7,1.5  Hz),7.88  -  7.97  (3  H,m),7.79  (2  H,dtd,J=19.6,7.5,7.5,1.4  Hz),7.16  -  7.31  (2  H,m),5.28  (1  H,クイン,J=6.9  Hz),1.38  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  464.0  [M+H]+.
【０２１６】
［実施例  8］:  4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  および  4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルの調製
3-ニトロ-2-ビニルピリジン
【０２１７】
【化５６】
2013514989.tif 000057
2-クロロ-3-ニトロピリジン  (20  g,126.15  mmol)  in  1,4  ジオキサン  (378  mL)の溶液にトリブチル  ビニル  スズ  (48  g,151.38  mmol)  を添加した。この反応混合物を窒素を用いて30分間脱気した。ビス-(トリフェニルホスフィン)-パラジウム(II)-クロリド  (4.4  g,6.3  mmol)  を反応混合物に添加した。反応物を110  ℃で終夜  攪拌した。この反応混合物を室温に冷却した。この反応物に水を添加し、EtOAc  で抽出した。有機層をNa2SO4上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、0〜5  %勾配のヘキサン中EtOACを用いたシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、3-ニトロ-2-ビニルピリジンを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  5.741  (dd,J=2.0  Hz,J=10.4  Hz,1H),6.536  (dd,J=2.4  Hz,J=16.8  Hz,1H),7.134-7.202  (m,1H),7.593  (dd,J=4.4  Hz,J=8.4  Hz,1H),8.388  (dd,J=1.6Hz,J=8.4  Hz,1H),  8.857  (dd,J=0.8  Hz,J=4.4  Hz,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  151.1  [M+H]+.
【０２１８】
3-ニトロピコリンアルデヒド
【０２１９】
【化５７】
2013514989.tif 000058
THF:  H2O  (2:1)  (560  mL)  の3-ニトロ-2-ビニルピリジン  (14  g,93.25  mmol)  溶液に、4-メチルモルホリン-N-オキシド  (16.3  g,139.87  mmol)、t-ブタノール  (1  mL)  および四酸化オスミウム  (4%,2  mL)  を添加した。反応混合物を25  ℃で5時間攪拌し、ジオールを形成させた。  この反応混合物に過ヨウ素酸ナトリウム  (64.87  g,279.7  mmol)を添加した。この反応物を25  ℃で8時間攪拌した。反応混合物をセライトフィルターで濾過し、EtOAcで洗浄した。この濾液をEtOAc  で抽出した。有機層をNa2SO4上で乾燥させた。この有機層を真空濃縮し、3-ニトロピコリンアルデヒドを得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  7.931-7.963  (m,1H),8.556  (d,J=8.0  Hz,1H),9.034-9.046  (m,1H),10.147(s,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  153.2  [M+H]+.
【０２２０】
3-アミノピコリンアルデヒド
【０２２１】
【化５８】
2013514989.tif 000059
EtOH  (10  mL)中の3-ニトロピコリンアルデヒド  (500  mg,3.28  mmol)の溶液に、窒素空気下でPd/C  (50  mg)を添加した。反応混合物を水素空気下で終夜攪拌した。この反応混合物をCeliteTMフィルターで濾過し、EtOHで洗浄した。この濾液を真空濃縮し、3-アミノピコリンアルデヒド  (200  mg,50%  yield)を得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  7.132  (br  s,2H),7.217-7.325  (m,2H),7.979  (dd,J=1.6  Hz,J=4.0  Hz,1H),9.899  (s,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  123.0  [M+H]+.
【０２２２】
メチル  2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸
【０２２３】
【化５９】
2013514989.tif 000060
3-アミノピコリンアルデヒド  (1.09  g,8.97  mmol)、メチル  3-(2-(メチルスルホニル)  フェニル)-3-オキソプロパネート  (2.3  g,8.97  mmol)  および塩化セリウム七水化物  (587  mg,1.79  mmol)  の混合物を100  ℃で3時間加熱した。残留物をMeOH中に溶解し、0〜50  %勾配の  ヘキサン中EtOACを用いた中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィー  により精製し、メチル  2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸  (800  mg,26  %  yield)を得た:  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  3.155  (s,3H),3.688  (s,3H),7.486-7.507  (m,1H),7.733-7.816  (m,2H),7.951-7.982  (m,1H),8.059-8.081  (m,1H),8.510  (d,J=8.4  Hz,1H),8.965  (s,1H),9.165-9.178  (m,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  342.9  [M+H]+
【０２２４】
(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール
【０２２５】
【化６０】
2013514989.tif 000061
DCM  (30  mL)  中のメチル  2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルボン酸  (1.2  g,3.5  mmol)  の溶液に、-78  ℃でDIBAL-H  (35  mL,35  mmol)  を添加した。反応混合物を同じ温度で4時間攪拌した。この反応混合物を塩化アンモニウム溶液で急冷し、EtOAcで抽出した。この有機層を真空濃縮し、メチル  (2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノールを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  315.0  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２２６】
2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド
【０２２７】
【化６１】
2013514989.tif 000062
DCM  (10  mL)中のメチル  (2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)メタノール  (1g,3.18  mmol)の粗製物の溶液  に、25  ℃で重クロム酸ピリジニウム  (2.4  g,6.36  mmol)  を添加した。この反応混合物を同じ温度で終夜攪拌した。反応混合物をCeliteTM  で濾過した。この濾液を真空濃縮し、2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-naphthyridine-3-カルバルデヒドを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  313.0  [M+H]+.これは粗製物の形で次の段階へ移した。.
【０２２８】
1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール
【０２２９】
【化６２】
2013514989.tif 000063
THF  (25  mL)中の2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-カルバルデヒド  (1.0  g,3.2  mmol)  の粗製物の溶液に、0  ℃でメチル臭化マグネシウム  (3.2  mL,9.6  mmol)を添加した。反応混合物を同じ温度で2時間攪拌した。この反応混合物を塩化アンモニウム溶液で急冷し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、真空濃縮し、1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノールを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  329.0  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ。
【０２３０】
2-(1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオン
【０２３１】
【化６３】
2013514989.tif 000064
THF  (21  mL)  中の1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタノール  (700  mg,2.13  mmol)  とフタルイミド  (627  mg,4.26  mmol)  の粗製物の混合物に、0  ℃でトリフェニルホスフィン  (1.12  g,4.26  mmol)  を添加した。  この反応混合物を同じ温度で10分間攪拌した。  混合物に0  ℃でジイソプロピル  アゾジカルボン酸  (0.9  mL,4.26  mmol)を添加した。反応混合物を0 ℃で終夜攪拌した。反応混合物に水を添加し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4  上で乾燥させ、真空濃縮し、2-(1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  458.1  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２３２】
1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン
【０２３３】
【化６４】
2013514989.tif 000065
エタノール  (70  mL)中の2-(1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)イソインドリン-1,3-ジオン  (2g,4.37  mmol)の粗製物の溶液に、25  ℃でヒドラジン水和物  (1.5  mL,28.43  mmol)を添加した。反応混合物を25  ℃で終夜攪拌した。反応混合物を5  N  塩酸で酸性化した。  残留物に水を添加し、EtOAcで抽出した。水層を水性NaOH  溶液で塩基化し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4上で乾燥させ、真空濃縮し、1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミンを得た:  LC-MS  (ESI)  m/z  328.0  [M+H]+.  これは粗製物の形で次の段階へ移した。
【０２３４】
4-アミノ-6-((1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０２３５】
【化６５】
2013514989.tif 000066
n-ブタノール  (11  mL)中の1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エタンアミン  (600  mg,1.83  mmol)  と4-アミノ-6-クロロピリミジン-5-カルボニトリル  (283  mg,1.83  mmol)  の粗製物の混合物に、25  ℃でヒューニッヒ塩基  (709  mg,5.49  mmol)  を添加た。反応混合物を110  ℃で終夜攪拌した。反応混合物に水を添加し、EtOAcで抽出した。この有機層をNa2SO4上で乾燥させ、真空濃縮した。残留物を、DCM中の0〜5  %  MeOHを用いた中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィー  により精製した。これを逆相HPLCにより、さらに精製し、4-アミノ-6-((1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリルを得た:  1H  NMR  (DMSO-d6,400  MHz)  δ  1.387  (d,J=6.8  Hz,  3H),5.250〜5.322  (m,1H),7.246  (br  s,2H),7.735-7.843  (m,3H),7.911-7.940  (m,3H),8.110〜8.129  (m,1H),8.395  (d,J=4.4Hz,1H),8.622  (s,1H),9.028-9.074  (m,1H);LC-MS  (ESI)  m/z  446.0  [M+H]+.
【０２３６】
4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  および  4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル
【０２３７】
【化６６】
2013514989.tif 000067
このラセミ混合物  (0.108  g)  を、SFCを用いて分離した:
画分  1:  黄色の固体として、4-アミノ-6-(((1S)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.62  (1  H,s),8.35  -  8.43  (1  H,m),8.12  (1  H,dd,J=7.8,1.4  Hz),7.89  -  7.97  (3  H,m),7.69  -  7.86  (3  H,m),7.24  (2  H,br.  s.),5.28  (1  H,クイン,J=7.1  Hz),1.39  (3  H,d,J=7.0  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  446.0  [M+H]+.
画分  2:  黄色の固体として、4-アミノ-6-(((1R)-1-(2-(2-(メチルスルホニル)フェニル)-1,5-ナフチリジン-3-イル)エチル)アミノ)-5-ピリミジンカルボニトリル  :  1H  NMR  (400  MHz,DMSO-d6)  δ  ppm  9.03  (1  H,dd,J=4.2,1.7  Hz),8.62  (1  H,s),8.39  (1  H,dt,J=8.5,0.8  Hz),8.12  (1  H,dd,J=7.7,1.5  Hz),7.89  -  7.96  (3  H,m),7.69  -  7.84  (3  H,m),7.25  (2  H,br.  s.),5.29  (1  H,クイン,J=7.1  Hz),1.39  (3  H,d,J=6.8  Hz);LC-MS  (ESI)  m/z  446.0  [M+H]+.
【０２３８】
［実施例  9］
(S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-フェニルブタン-2-イルカルバメート
【０２３９】
【化６７】
2013514989.tif 000068
THF  (10  mL)中の  (S)-tert-ブチル  1-(メトキシ(メチル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イルカルバメート溶液  (1.16  g,5  mmol)  を-15℃に冷却し、緩徐にイソプロピル塩化マグネシウム  (2.0M,2.37  mL,0.95  当量)に変化させた。透明な溶液を得た後、ベンジル塩化マグネシウム  (1.0M,4.99  mL,1.0  当量)  を室温で終夜攪拌しながら滴下添加した。この反応混合物をNH4Cl  溶液で急冷し、EtOAc  (10  mL  x2)で抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、濾過する前に硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮し、(S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-フェニルブタン-2-イルカルバメートとして、白色固体を得た。  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  264  (M  +  1).
【０２４０】
(S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-(ピリジン-2-イル)ブタン-2-イルカルバメート
【０２４１】
【化６８】
2013514989.tif 000069
THF  (450  mL)中のtert-ブチル  1-(メトキシ(メチル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イルカルバメート  (50.0  g,215  mmol)  を-40℃  に冷却し(ドライアイス/アセトニトリル)、緩徐にイソプロピル塩化マグネシウム  (2.0M,102.2  mL,0.95  当量)に変化させた。透明な溶液を得た  (20℃で透明になり、-40℃で再び乳白色になった)後、ブロモ(ピリジン-2-イルメチル)マグネシウム  溶液  (調製については下記を参照)をカニューレを用いて、室温に戻るまで終夜、滴下添加した。反応混合物をNH4Cl溶液で急冷し、EtOAcで抽出した  (500  mLx2)。合わせた有機層を  水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、高真空下で濃縮し、黄褐色のオイルとして、(S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-(ピリジン-2-イル)ブタン-2-イルカルバメートを得た。CombiFlash  (EtOAc/ヘキサン、最大  1/3)を用いて、小規模反応を精製し、赤色オイルを得た。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  265  (M  +  1).
【０２４２】
ブロモ(ピリジン-2-イルメチル)マグネシウム
THF  (300  mL)中のピコリン溶液  (31.9  mL,1.5  当量)にMeLi  (202  mL,1.6  M,1.5  当量)  を-40℃の窒素下で滴下添加した。反応混合物を  -20  ℃まで戻し、10分間攪拌し、次に、-40  ℃まで冷却し、3回に分けて臭化マグネシウム  (59.4  g,1.5  当量)  を添加した。この反応混合物を室温まで戻し、30分間  攪拌し、ブロモ(ピリジン-2-イルメチル)マグネシウムを得た。
【０２４３】
エチル  2-(3-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ピリジン-2-イル)-2-オキソアセテート
【０２４４】
【化６９】
2013514989.tif 000070
乾燥THF  (20  mL)中のtert-ブチル  2-ブロモピリジン-3-イルカルバメート溶液  (3.85  g,14  mmol)  (Kowol  ら,J.  Med.  Chem.,2009,52,5032-5043による方法で調製した)  を  -78  ℃に冷却した後、温度が-65  ℃を超えないようにしながら、n-ブチルリチウム  (ヘキサン中の2.5M  溶液,11.2  mL,2.0  当量)の滴下添加によって処理し、得られた混合物を-78  ℃でさらに1時間攪拌した。追加的なシュウ酸ジエチル  (4  mL,29  mmol,2.1  当量)の滴下添加の後、反応混合物を  0  ℃まで加温して1時間維持し、次に、追加的なNH4Cl  (40  mL)によって急冷した。得られた  混合物  をエチルアセテート  (3回  20  mL)で抽出した。合わせた有機層を水  (3回  20  mL)  およびブライン  (20  mL)で洗浄した。乾燥、濾過および蒸発の後、この残留物を、溶離剤にジクロロメタンを用いるシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで精製し、白色固体として、エチル  2-(3-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ピリジン-2-イル)-2-オキソアセテートを得た。.  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  295  (M  +  1).
【０２４５】
2-(1-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)エチル)-3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボン酸
【０２４６】
【化７０】
2013514989.tif 000071
EtOH  (15  mL)中の  (S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-フェニルブタン-2-イルカルバメート  (249  mg,0.95  mmol)、エチル  2-オキソ-2-(2-ピバルアミドピリジン-3-イル)アセテート  (278  mg,1.0  当量)  およびKOH  (212  mg,4.0  当量)の混合物を、88℃に終夜加熱した。室温まで冷却した後、混合物を3M  HClを用いて  pH  3に酸性化した。この結果得た固体を濾過し、水で洗浄し、空気中で乾燥させ、黄色の固体を得た。  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  394  (M  +  1).
【０２４７】
2-(1-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)エチル)-3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-4-カルボン酸
【０２４８】
【化７１】
2013514989.tif 000072
EtOH  (15  mL)中の  (S)-tert-ブチル  3-オキソ-4-(ピリジン-2-イル)ブタン-2-イルカルバメート  (404  mg,1.5  mmol)、エチル  2-オキソ-2-(2-ピバルアミドピリジン-3-イル)アセテート  (450  mg,1.0  当量)  およびKOH  (343  mg,4.0  当量)の混合物を、88℃で終夜加熱した。室温まで冷却した後、混合物を減圧濃縮し、水  (10  mL)  中に溶解し、DCM  (2  x  5mL)で抽出した。この水層を3M  HCl  でpH  2に酸性化し、凍結乾燥によって得られた黄色粉末を、DCM  (30  mL)中の20%  MeOHで抽出した。この抽出物を合わせて濃縮し、粗製酸として黄色の泡沫を得た。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  395  (M  +  1).
【０２４９】
tert-ブチル  1-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルカルバメート
【０２５０】
【化７２】
2013514989.tif 000073
DMF  (5  mL)中の2-(1-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)エチル)-3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボン酸溶液  (205  mg,0.52  mmol)に、pybop  (407  mg,1.5  mmol)、メタンアミン  (0.52  mL,2.0  当量)および  N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン  (0.18  mL,2.0  当量)を添加した。得られた混合物を室温で終夜攪拌した。混合物を水  (10  mL)とEtOAc  (15  mL)に分配した。水層をEtOAc  (5  mLx2)で抽出した。合わせた有機物を水  (10  mLx2)、0.5  N  NaOH  (5mLx2)、水  (5  mL  x2)、ブライン  (5  mL)  で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。シリカゲル・カラムクロマトグラフィー  (EtOAc/ヘキサン、最大  2/1)の実施後に、溶媒を除去し、白色固体を得た。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  407  (M  +  1).
【０２５１】
tert-ブチル  1-(4-(メチルカルバモイル)-3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルカルバメート
【０２５２】
【化７３】
2013514989.tif 000074
Tert-ブチル  1-(4-(メチルカルバモイル)-3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルカルバメートを、上記の実験を類似の方法で調製した。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  408  (M  +  1).
【０２５３】
2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２５４】
【化７４】
2013514989.tif 000075
tert-ブチル  1-(4-(メチルカルバモイル)-3-フェニル-1,5-ナフチリジン-2-イル)エチルカルバメート  (110  mg,0.27  mmol)  に、1,4-ジオキサン  (1  mL,15  当量)中の4N  HClを添加した。得られた混合物を室温で30分間攪拌した。反応混合物をエチルエーテル  (5  mL)で希釈した。この白色固体を濾過し、エチルエーテルで洗浄し、真空下で乾燥させた。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  307  (M  +  1).  DMF  (3  mL)中のこのアミン  HCl塩の溶液に、4-アミノ-6-クロロピリミジン-5-カルボニトリル  (41.8  mg,1.0  当量)  およびDIEA  (0.19  mL,4.0  当量)を添加した。  得られた混合物を105℃で2時間加熱した。室温まで冷却した後、EtOAc  (10  mL)  を添加し、混合物を水  (3回  3  mL)、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残留物を  CombiFlash  (1:20,MeOH/DCM)で精製し、2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミドを得た。キラル  HPLC  分離  (イソプロパノール/  ヘキサン  勾配、AD  カラム)後、白色固体として、(S)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミドおよび(R)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミドを得た。
【０２５５】
(S)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２５６】
【化７５】
2013514989.tif 000076
1H-NMR  (500  Hz,CD3OD)  δ  ppm  1.41  (3H,d,J=5.0  Hz),2.70  (3H,s),5.55  (1H,m),7.45-7.56  (5H,m),7.85  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.95  (1H,s),8.54  (1H,d,J=10  Hz),9.0  (1H,d,J=5.0  Hz).  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  425  (M  +  1).
【０２５７】
(R)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-フェニル-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２５８】
【化７６】
2013514989.tif 000077
1H-NMR  (500  Hz,CD3OD)  δ  ppm  1.41  (3H,d,J=5.0  Hz),2.70  (3H,s),5.55  (1H,m),7.45-7.56  (5H,m),7.85  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.95  (1H,s),8.54  (1H,d,J=10  Hz),9.0  (1H,d,J=5.0  Hz).  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  425  (M  +  1).
【０２５９】
［実施例  10］
2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２６０】
【化７７】
2013514989.tif 000078
2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミドを、上記の実験を類似の方法で調製した。質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  426  (M  +  1).
【０２６１】
(S)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２６２】
【化７８】
2013514989.tif 000079
1H-NMR  (500  Hz,CD3OD)  δ  ppm  1.48  (3H,d,J=5.0  Hz),2.74  (3H,s),5.60  (1H,m),7.51  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.68  (1H,d,J=10  Hz),7.88  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.92  (1H,s),7.98  (1H,t,J=5.0  Hz),8.57  (1H,d,J=10  Hz),8.73  (1H,d,J=5.0  Hz),9.0  (1H,d,J=5.0  Hz).  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  426  (M  +  1).
【０２６３】
(R)-2-(1-(6-アミノ-5-シアノピリミジン-4-イルアミノ)エチル)-N-メチル3-(ピリジン-2-イル)-1,5-ナフチリジン-4-カルボキサミド
【０２６４】
【化７９】
2013514989.tif 000080
1H-NMR  (500  Hz,CD3OD)  δ  ppm  1.48  (3H,d,J=5.0  Hz),2.74  (3H,s),5.60  (1H,m),7.51  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.68  (1H,d,J=10  Hz),7.88  (1H,dd,J=10,5.0  Hz),7.92  (1H,s),7.98  (1H,t,J=5.0  Hz),8.57  (1H,d,J=10  Hz),8.73  (1H,d,J=5.0  Hz),9.0  (1H,d,J=5.0  Hz).  質量スペクトル  (ESI)  m/e  =  426  (M  +  1).
【０２６５】
生物学的アッセイ
PI3Kの組み換え発現
ポリHis標識でN末端標識したPI3kα、βおよびδの完全長p110  サブユニットを、sf9昆虫細胞中で、バキュロウイルス発現ベクターを有するp85と共発現させた。P110/p85  ヘテロ二量体を順次、Ni-NTA,Q-HP,Superdex-100  クロマトグラフィーで精製した。精製されたα,βおよびδイソ酵素を、20mM  トリス、pH  8、0.2M  NaCl、50%  グリセロール、5mM  DTT、2mM  コール酸ナトリウム中、-20℃で保存した。ポリHis標識でN末端標識した切断された  PI3Kγ、残基114-1102を、Hi5  昆虫細胞中、バキュロウイルスと一緒に発現させた。このγイソ酵素を順次、Ni-NTA、Superdex-200、Q-HP  クロマトグラフィーによって精製した。このγイソ酵素を、NaH2PO4、pH  8、0.2M  NaCl、1%  エチレングリコール、2mM  β-メルカプトエタノール中、-80℃で冷凍保存した。
【０２６６】
【表１】
2013514989.tif 000081
【０２６７】
In  vitro  酵素アッセイ.
アッセイは、白色ポリプロプリエンプレート  (Costar  3355)中の上記最終濃度を有する25  μLの成分中で実施した。ホスファチジルイノシトール  ホスホアクセプター、PtdIns(4,5)  P2  P4508は、Echelon  Biosciences製であった。アルファおよびガンマ  イソ酵素のATPアーゼ活性は、このような条件下ではPtdIns(4,5)P2によってあまり刺激されなかったため、このようなイソ酵素のアッセイから省略した。試験化合物をジメチル  スルホキシド中に溶解し、3倍連続希釈で希釈した。DMSO  (1  μL)  中の化合物を、試験ウェルごとに添加し、化合物を含有しない反応物に対する阻害について、酵素あり、酵素なしでそれぞれ測定した。室温でのアッセイ・インキュベーション後、反応を停止させ、残留ATPを、製造業者の取扱説明書による等体積の市販のATP発光キット  (Perkin  Elmer  EasyLite)  の添加によって測定し、AnalystGT  照度計を用いて検出した。
【０２６８】
抗IgMによるヒトB細胞増殖刺激
ヒトB細胞を単離する:
Leukopacからまたはヒト新鮮血からPBMCを単離する。MiltenyiプロトコルおよびB細胞単離キットIIを用いて、ヒトB細胞を単離する。ヒトB細胞は、AutoMacsカラムを使用して精製した。
【０２６９】
ヒトB細胞の活性化
96ウェル平底プレートを用い、B細胞増殖培地  (DMEM  +  5%  FCS、10  mMのHepes、50  μM2-メルカプトエタノール)中の50000/ウェルの精製されたB細胞をプレーティングする;150  μLの培地に250  ng/mL  のCD40L  -LZ  組み換えタンパク  (Amgen)  および  2  μg/mLの抗ヒトIgM抗体  (Jackson  ImmunoReseach  Lab.#109-006-129)を含有させ、PI3K阻害剤を含有する50  μLのB細胞培地と混合し、37℃のインキュベーターで72時間培養する。72時間後、B細胞を0.5-1  uCi  /ウェル  3Hチミジンで終夜約18時間パルス標識し、TOM  ハーベスターを使用して細胞を収穫する。
【０２７０】
IL-4によるヒトB細胞増殖刺激
ヒトB細胞を単離する:
Leukopac  からまたはヒト新鮮血からヒトPBMCを単離する。MiltenyiプロトコルおよびB細胞単離キットを用いて、ヒトB細胞を単離する。ヒトB細胞は、AutoMacsカラムを使用して精製した。
【０２７１】
ヒトB細胞の活性化
96ウェル平底プレートを用い、B細胞増殖培地  (DMEM  +  5%  FCS、10  mMのHepes、50  μM2-メルカプトエタノール)中の50000/ウェルの精製されたB細胞をプレーティングする。培地  (150  μL)  に250  ng/mL  のCD40L  -LZ  組み換えタンパク  (Amgen)  および10  ng/mLのIL-4  (  R&D  system  #  204-IL-025)を含有させ、化合物を含有する50  150  μLB細胞培地と混合し、37℃のインキュベーターで72時間培養する。72時間後、B細胞を0.5-1  uCi  /ウェル3Hチミジンで終夜約18時間パルス標識し、TOM  ハーベスターを使用して細胞を収穫する。
【０２７２】
特異的なT抗原  (破傷風トキソイド)  によって誘発されたヒトPBMC増殖アッセイ
ヒトPBMCは、冷凍ストックから調製するかまたはフィコール勾配を用いてヒト新鮮血から調製する。96ウェル丸底プレートを用い、培養培地  (RPMI1640  +  10%  FCS,50uM  2-メルカプトエタノール,10  mM  Hepes)を用いて、2x105  PBMC/ウェルでプレーティングする。IC50  測定のために、PI3K阻害剤を、10  μM〜0.001  μMまで、半対数単位(  half  log  increments)で3通りに試験した。破傷風トキソイド、T細胞特異的抗原  (  University  of  massachusetts  Lab)  を1  μg/mLで添加し、37℃のインキュベーターで培養した。上清をIL2  ELISAアッセイのために6日後に収集し、その後、細胞に  3H-チミジンを約18時間パルスして増殖を計測した。
【０２７３】
クラスIaおよびクラスIII  PI3Kの阻害を検出するためのGFPアッセイ
AKT1  (PKBa)は、マイトジェン因子(IGF-1、PDGF、インスリン、トロンビン、NGF  等)によって活性化されたクラス  Ia  PI3K  によって、調節される。マイトジェン刺激に応答して、AKT1はサイトゾルから原形質膜に移動する。フォークヘッド  (FKHRL1)はAKT1用の基質である。この基質は、AKTによってリン酸化  (生存/増殖)されると細胞質性になる。  AKTの阻害  (静止/アポトーシス)-  核へのフォークヘッド移動FYVEドメインはPI(3)Pに結合する。大多数はPI3KクラスIIIの構成的作用によって生成される。
【０２７４】
AKT  膜ラッフリングアッセイ  (CHO-IR-AKT1-EGFP  細胞/GE  Healthcare)
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。10  ng/mLのインスリンを添加する。室温で10分後に固定し、撮像する。
【０２７５】
フォークヘッド移動アッセイ  (MDA  MB468  フォークヘッド-DiversaGFP  細胞)
細胞を増殖培地中の化合物で1時間処理する。固定および撮像する。
【０２７６】
クラス  III  PI(3)P  アッセイ  (U2OS  EGFP-2XFYVE  細胞/GE  Healthcare)
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。固定および撮像する。
3つのすべての  アッセイ用の対照は  10uM  ワートマニンである:
AKTは細胞質性である。
フォークヘッドは核性である。
PI(3)P  をエンドソームから枯渇させる。
【０２７７】
バイオマーカー  アッセイ:  CD69またはB7.2  (CD86)  発現のB細胞受容体刺激
ヘパリン化ヒト全血を10  μg/mL  抗IgD  (Southern  Biotech,#9030〜01)によって刺激した。90  μLの刺激された血液を、次に、96-ウェルプレートのウェルごとに分注し、IMDM  +  10%  FBS  (Gibco)中で希釈した10  μLの種々の濃度のブロッキング化合物  (10〜0.0003  μM)  で処理した。試料を一緒に37℃で4時間(CD69  発現の場合)から6時間  (B7.2  発現の場合)  培養した。処理された血液  (50  μL)を、各10  μLのCD45-PerCP  (BD  Biosciences,#347464)、CD19-FITC  (BD  Biosciences,#340719)および  CD69-PE  (BD  Biosciences,#341652)で抗体染色するため、96-ウェル・ディープウェルプレート  (Nunc)に移した。第2の50  μLの処理された血液を、各10μLのCD19-FITC  (BD  Biosciences,#340719)およびCD86-PeCy5  (BD  Biosciences,#555666)で抗体染色するため、第2の96-ウェル・ディープウェルプレートに移した。すべての染色は、暗所、室温で15〜30分間実施した。その後、血液を溶解させ、450  μLのFACS  溶解溶液  (BD  Biosciences,#349202)を用いて室温で15分間固定した。その後、試料をPBS  +  2%  FBS中で2回洗浄した後、FACS  分析した。試料はCD69染色のためにCD45/CD19二重陽性細胞にゲートをかけるかまたはCD86  染色のためにCD19陽性細胞にゲートをかけた。
【０２７８】
ガンマ  カウンタースクリーニング:  ホスホ-AKT  発現のためのヒト単球の刺激
ヒト単球細胞株THP-1を、RPMI  +  10%  FBS  (Gibco)中に維持した。刺激の1日前に、細胞をトリパンブルー排除を用いて血球計上でカウントし、培地1mL当たり1  x  106  細胞の濃度で懸濁させた。次に、100  μLの細胞プラス培地  (1  x  105  細胞)  を4枚の96-ウェル・ディープウェルシャーレの  (Nunc)のウェルごとに分注し、8種類の異なる化合物を試験した。細胞を終夜休ませた後、種々の濃度  (10〜0.0003μM)のブロッキング化合物で処理した。培地  (12  μL)  中で希釈した化合物を37℃で10分間、細胞に添加した。ヒト  MCP-1  (12  μL,R&D  Diagnostics,#279-MC)  を培地中で希釈し、50  ng/mLの最終濃度で各ウェルに添加した。  刺激は室温で2分間継続した。予め加温したFACS  Phosflow  溶解/固定緩衝液  (1  mL、37℃)  (BD  Biosciences,#558049)を各ウェルに添加した。次に、プレートを37℃でさらに10〜15  分間培養した。プレートを1500  rpmで10分間回転させ、上清を吸引除去し、1  mLの氷冷  90%  MEOHを激しく振とうしながら各ウェルに添加した。  次に、プレートを、-70℃で終夜または氷上で30分間保温した後、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS  +  2%  FBS  (Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残った緩衝液中に懸濁した。1:100のウサギ  pAKT  (50  μL,Cell  Signaling,#4058L)  を、室温で1時間振とうしながら各試料に添加した。細胞を洗浄し、1500  rpmで10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残った緩衝液中に懸濁した。二次抗体である1:500のヤギ抗ウサギ  Alexa  647  (50  μL,Invitrogen,#A21245)を、室温で30分間振とうしながら各試料に添加した。細胞を緩衝液中で1回洗浄し、FACS  分析のために、150  μLの緩衝液中に懸濁した。細胞は、フローサイトメーターを操作する前に、ピペッティングによってきわめてよく分散させる必要がある。細胞をLSR  II  (Becton  Dickinson)上で操作し、前方および側方散乱にゲートをかけ、単球集団における  pAKTの発現レベルを測定した。
【０２７９】
ガンマ  カウンタースクリーニング:  マウス骨髄におけるホスホ-AKT  発現のための単球の刺激
マウス大腿骨を5匹の雌BALB/c  マウス  (Charles  River  Labs.)から切除し、RPMI  +  10%  FBS  培地  (Gibco)中に収集した。  マウス骨髄は、大腿骨の端部を切断し、25  ゲージ針を用いて1  mLの培地で洗い流すことで除去した。次に、骨髄を次に、21ゲージ針を用いて培地中に分散させた。培地体積を20  mLまで増大させ、トリパンブルー排除を用いて、細胞を血球計上でカウントした。次に、細胞懸濁液を、培地1  mL当たり7.5  x  106  細胞まで増大させ、100  μL(7.5  x  105  細胞)  を4枚の96ウェル・  ディープウェル  シャーレ  (Nunc)中にウェルごとに分注し、8種類の異なる化合物を試験した。  細胞を37℃で2  時間静止させた後、種々の濃度  (10〜0.0003μM)  のブロッキング化合物で処理した。培地  (12  μL)中で希釈した化合物を37℃で10分間、骨髄細胞に添加した。  マウス  MCP-1  (12  μL,R&D  Diagnostics,#479-JE)を培地中で希釈し、50  ng/mLの最終濃度で各ウェルに添加した。刺激は室温で2時間継続した。37℃で予め加温したFACS  Phosflow  溶解/固定緩衝液  (BD  Biosciences,#558049)  1  mLを各ウェルに添加した。次に、プレートを37℃でさらに10〜15分間培養した。プレートを1500  rpmで10分間回転させた。上清を吸引除去し、1  mLの氷冷  90%  MEOHを激しく振とうしながら各ウェルに添加した。  次に、プレートを  -70℃で終夜または氷上で30分間保温した後、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS  +  2%  FBS  (Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残った緩衝液に懸濁した。次に、Fc  ブロック  (2  μL,BD  Pharmiingen,#553140)を室温で10分間ウェル毎に添加した。ブロック後、緩衝液中で希釈した50  μLの一次抗体;1:50のCD11b-Alexa488  (BD  Biosciences,#557672)、1:50のCD64-PE  (BD  Biosciences,#558455)および1:100のウサギ  pAKT  (Cell  Signaling,#4058L)を、室温で1時間振とうしながら各試料に添加した。洗浄緩衝液を細胞に添加し、1500で10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残った緩衝液に懸濁させた。二次抗体である1:500のヤギ  抗ウサギAlexa  647  (50  μL,Invitrogen,#A21245)を、室温で30分間振とうしながら添加した。  次に、細胞を、緩衝液中で1回洗浄し、FACS  分析のために100  μLの緩衝液に懸濁させた。細胞をLSR  II  (Becton  Dickinson)上で操作し、CD11b/CD64  二重陽性細胞にゲートをかけ、pAKTの発現レベルを測定した。
【０２８０】
pAKT  in  vivo  アッセイ
ビヒクルおよび化合物を  強制飼料  (Oral  Gavage  Needles  Popper  &  Sons,New  Hyde  Park,NY)  によって、マウス  (トランスジェニック系  3751、雌、10〜12  週齢、Amgen  Inc,Thousand  Oaks,CA)に、抗IgM  FITC  (50  ug/マウス)  (Jackson  Immuno  Research,West  Grove,PA)の点滴注射(0.2  mLs)の15分前に、経口投与(0.2  mL)する。45分後、マウスをCO2  チャンバー内で殺処分する。血液を心臓穿刺  (0.3  mL)  (1cc  25  g  Syringes,Sherwood,St.  Louis,MO)によって抜き出し、15  mL円錐バイアル  (Nalge/Nunc  International,Denmark)に移す。  血液を6.0  mLのBD  Phosflow  溶解/固定緩衝液  (BD  Bioscience,San  Jose,CA)によって直ちに固定し、3回反転させ、37℃の水浴に入れる。脾臓の半分を除去し、0.5  mLのPBS  (Invitrogen  Corp,Grand  Island,NY)を含有するエッペンドルフ管に移す。脾臓を組織グラインダー  (Pellet  Pestle,Kimble/Kontes,Vineland,NJ)を用いて破砕し、6.0  mLのBD  Phosflow  溶解/固定緩衝液によって直ちに固定し、3回反転させ、37℃の水浴に入れる。組織が収集されたら、マウスを頸椎脱臼させ、死骸を処分する。15分後、この15  mL円錐バイアルを37℃の水浴から取り出し、組織がさらに処理されるまで氷上に置く。破砕した脾臓を濾過し、70  μm細胞濾過器  (BD  Bioscience,Bedford,MA)を通して別の15  mL  円錐バイアルに濾過し、9  mLのPBSで洗浄する。脾臓細胞および血液を2,000  rpmsで10分間  (冷却)回転させ、緩衝液を吸引する。  細胞を2.0  mLの冷  (-20℃)  90%  メチルアルコール  (Mallinckrodt  Chemicals,Phillipsburg,NJ)に再懸濁させる。  円錐バイアルを急速にボルテックスしながら、MeOHを緩徐に添加する。次に、FACS分析のために細胞が染色できるまで、組織を-20℃で保存する。
【０２８１】
複数回投与TNP  免疫化
血液は、免疫化前0日目に眼窩後出血によって、7〜8週齢のBALB/c  雌  マウス  (Charles  River  Labs.)から収集した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管(Becton  Dickinson)中、10,000  rpmで10分間回転させた。血清を収集し、Matrix  管  (Matrix  Tech.  Corp.)中に分注し、ELISAが実施されるまで-70℃で保存した。免疫化前および分子寿命に基づいてその後の期間、マウスに化合物を経口投与した。次に、マウスを、50  μgのTNP-LPS  (Biosearch  Tech.,#T-5065)、50  μgのTNP-Ficoll  (Biosearch  Tech.,#F-1300)または100μgのTNP-KLH  (Biosearch  Tech.,#T-5060)プラスPBS中の1%  ミョウバン(Brenntag,#3501)のいずれかによって免疫化した。TNP-KLH  プラスミョウバン溶液は、免疫化の1時間前、10分ごとに3〜5回、混合物を静かに反転させることにより、調製した。最後の処置後5日目、マウスをCO2  殺処分し、心臓穿刺した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管中、10,000  rpmで10分間回転させた。血清を収集し、Matrix  管中に分注し、さらなる分析が実施されるまで-70℃で保存した。次に、血清中のTNP-特異的なIgG1,IgG2a,IgG3およびIgM  レベルをELISAによって測定した。TNP-BSA  (Biosearch  Tech.,#T-5050)を用いて、TNP-特異的な抗体を捕捉した。TNP-BSA  (10  μg/mL)を用いて、384-ウェル  ELISA  プレート  (Corning  Costar)を終夜コーティングした。次に、プレートを洗浄し、10%  BSA  ELISAブロック溶液  (KPL)を用いて1時間ブロックした。ブロッキング後、ELISA  プレートを洗浄し、血清試料/標準物質を連続希釈し、プレートに1時間結合させた。プレートを洗浄し、Ig-HRP  共役二次抗体  (ヤギ抗マウス  IgG1,Southern  Biotech  #1070〜05,ヤギ抗マウス  IgG2a,Southern  Biotech  #1080〜05,ヤギ抗マウス  IgM,Southern  Biotech  #1020〜05,ヤギ  抗マウス  IgG3,Southern  Biotech  #1100〜05)を1:5000で希釈し、プレート上で1時間保温した。TMB  ペルオキシダーゼ溶液  (SureBlue  Reserve  TMB  from  KPL)を用い、抗体を可視化した。プレートを洗浄し、試料を、分析されたIgに応じて約5〜20分間、TMB  溶液中で展開させた。反応を2M  硫酸によって停止し、プレートを450  nmのODで読み取った。
【０２８２】
本発明の化合物は、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患等のPI3Kδ介在性の疾患の治療のために、従来の薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する用量単位製剤で、経口的に、非経口的に、吸入噴霧によって、経直腸的にまたは局所的に投与され得る。非経口という用語は、本明細書で使用される場合、皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、注入技術または腹腔内を含む。
【０２８３】
本明細書における疾患および障害の治療は、例えば、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変型関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症疾患および自己免疫疾患等、予防的治療の必要があると考えられている対象  (すなわち、動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒト)への、本発明の化合物、その薬学的な塩またはいずれかの医薬粗製物の予防的投与を含むことも意図されている。
【０２８４】
PI3Kδ介在性の疾患、癌および/または高血糖を治療するための、本発明の組成物による投薬レジメンは、疾患の種類、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、症状の重篤度、投与経路および用いられる特定の化合物を含む多様な要因に基づく。このため、投薬レジメンは広く変動し得るが、標準的方法を用いて慣例的に決定できる。1日当たり体重1キログラムにつき約0.01  mg〜30  mg、好ましくは約0.1  mg〜10  mg/kg、より好ましくは約0.25  mg〜1  mg/kgの用量レベルは、本明細書において開示されているすべての使用方法において有用である。
【０２８５】
本発明の薬学的に活性な化合物は、ヒトおよびその他の哺乳類を含む患者に投与する薬剤を生成するための従来の調剤方法に従って加工できる。
【０２８６】
経口投与の場合、医薬組成物は例えば、カプセル、錠剤、懸濁液または液体の形態であってよい。医薬組成物は、好ましくは、所定量の有効成分を含有する用量単位の形態で作製される。例えば、これらは、約1〜2000  mg、好ましくは約1〜500  mg、より好ましくは約5〜150  mgの量の有効成分を含有し得る。ヒトまたは他の哺乳類のための適切な1日量は、患者の状態および他の要因に応じて広く変動し得るが、やはり、常法を使用して決定できる。
【０２８７】
有効成分は、生理食塩水、ブドウ糖または水を含む適切な担体との組成物として、注射によって投与されてもよい。1日当たりの非経口投薬レジメンは、約  0.1〜約30  mg/全体重kg、好ましくは約  0.1〜約10  mg/kg、より好ましくは約0.25  mg〜1  mg/kgである。
【０２８８】
無菌注射用水性または油性懸濁剤等の注射用製剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用する既知の技術によって配合できる。無菌注射用製剤は、非毒性で非経口的に許容できる希釈剤または溶媒中の無菌注射用の溶液または懸濁液、例えば、1,3-ブタンジオール中溶液であってもよい。許容できるビヒクルおよび溶媒のうち、用いられ得るのは、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウムである。さらに、無菌の固定油は、溶媒または懸濁化媒質として習慣的にも散られる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激固定油が用いられ得る。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が、注射液の調製目的での使用を見いだしている。
【０２８９】
直腸投与用の座薬は、（常温では固体であるが直腸温では液体であるため直腸内で融解して薬物を放出する）ココアバターおよびポリエチレングリコールなどの適切な非刺激性賦形剤と薬物とを混合することにより、調製できる。
【０２９０】
本発明の化合物の有効成分の適切な局所用量は、1日1回〜4回、好ましくは1回または2回、0.1  mg〜150  mg  投与される。局所投与の場合、有効成分は、製剤の0.001%〜10%  w/w、例えば、1%〜2重量%を構成し得るが、有効成分は、製剤の最大10%  w/w、ただし好ましくは5%  w/w以下、より好ましくは0.1%〜1%を構成してもよい。
【０２９１】
局所投与に適した製剤は、皮膚を介する浸透に適した液体または半液体製剤(例えば、リニメント、ローション、軟膏、クリームまたはペースト)および耳または鼻への投与に適した滴剤を含む。
【０２９２】
投与のために、本発明の化合物は、通常、指示された投与経路に適切な1種類以上のアジュバントと組み合わせられる。化合物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル-ピリリジンおよび/またはポリビニルアルコールと混和され得、従来の投与用に錠剤化またはカプセル化し得る。代替として、本発明の化合物は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、ピーナツ油、綿花油、ゴマ油、トラガカントガムおよび/または  種々の緩衝液に溶解され得る。他のアジュバントおよび投与モードは、薬学技術分野においてよく知られている。担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を、単独でまたはロウもしくは当該技術分野においてよく知られている他の材料とともに含み得る。
【０２９３】
医薬組成物は、固体形態(顆粒、粉末または座薬を含む)でまたは液体形態  (例えば、溶液、懸濁液またはエマルジョン)で構築され得る。医薬組成物は、滅菌等の従来の製薬工程に付され得るか、および/または保存料、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液等等の従来のアジュバントを含有してよい。
【０２９４】
経口投与用の固体剤形は、カプセル、錠剤、丸薬、粉末および顆粒を含み得る。このような固体剤形において、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプン等の少なくとも1種類の不活性希釈剤と混和され得る。このような剤形は、通常の実務と同様に、不活性希釈剤以外の追加物質を含んでもよく、例えば、ステアリン酸マグネシウム等の平滑剤を含んでもよい。カプセル、錠剤、丸薬の場合、剤形は緩衝液を含んでもよく、錠剤および丸薬は、腸溶コーディングでさらに調製できる。
【０２９５】
経口投与用の液体剤形は、（水等の当該技術分野において一般に使用される不活性希釈剤を含有する）薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を含み得る。このような組成物は、湿潤剤、甘味料、香料、着香剤などのアジュバントを含んでいてもよい。
【０２９６】
本発明の化合物は、1個以上の不斉炭素原子を有することができ、従って、光学異性体の形態でおよびそのラセミ混合物の形態で存在することができる。光学異性体は、従来の方法によるラセミ混合物の分解によって得られ、例えば、光学的に活性な酸または塩基での処理によるジアステレオ異性体塩の形成によって得られる。適切な酸の例は、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸およびカンファースルホン酸であり、次に、結晶化によるジアステレオ異性体の混合物の分離、続いて、これらの塩からの光学的に活性な塩基の遊離が行われる。光学異性体の分離のための異なる方法は、鏡像異性体の分離を最大化するために最適に選択されたキラル・クロマトグラフィーカラムの使用を含む。また別の利用可能な方法は、本発明の化合物を活性型の光学的に純粋な酸または光学的に純粋なイソシアン酸塩と反応させることによる、共有結合したジアステレオ異性体の合成を含む。合成されたジアステレオ異性体は、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化または昇華等の従来の手段によって分離でき、その後、加水分解されて鏡像異性的に純粋な化合物を送達することができる。本発明の光学活性化合物は、同様に、活性な出発材料を使用することによって得られる。このような異性体は、遊離酸、遊離塩基、エステルまたは塩の形態であってよい。
【０２９７】
同様に、本発明の化合物は、異性体として存在し得る、すなわち、同じ分子式であるが、その中の原子が互いに対して異なって配置されている化合物として存在し得る。特に、本発明の化合物のアルキレン置換基は、通常および好ましくは、左から右へ読まれるこれらの基それぞれの定義において指示されているように、分子中に配置および挿入される。しかしながら、いくつかの場合において、当業者らは、これらの置換基が分子中の他の原子に対して逆の配向にされている本発明の化合物を調製することが可能であると理解する。すなわち、挿入される置換基は、分子中に逆配向で挿入されることを除き、上述のものと同じであってよい。当業者らは、本発明の化合物のこれらの異性体形態が本発明の範囲内に包含されるものとして解釈するべきであることを理解する。
【０２９８】
本発明の化合物は、無機酸または有機酸に由来する塩の形態で使用され得る。この塩は、以下のものを含むがこれらに限定されない:酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳、樟脳スルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホネート、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、2-ナフタレンスルホネート,シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、2-フェニルプロピネート、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、メシル酸塩およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、塩化、臭化、およびヨウ素メチル、塩化、臭化およびヨウ化エチル、塩化、臭化およびヨウ化プロピルならびに塩化、臭化およびヨウ化ブチル等のハロゲン化低級アルキル;硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチルおよび硫酸ジアミルのような硫酸ジアルキル;塩化、臭化およびヨウ化デシル、塩化、臭化およびヨウ化ラウリル、塩化、臭化およびヨウ化ミリスチルならびに塩化、臭化およびヨウ化ステアリル等の長鎖ハロゲン化物;臭化ベンジルおよび臭化フェネチルのようなアルキル化ハロゲン化物などの作用物質で四級化することができる。水溶性または油溶性もしくは分散性の生成物がこれによって得られる。
【０２９９】
薬学的に許容される酸付加塩を形成するために用いられ得る酸の例は、塩酸、硫酸およびリン酸などの無機酸ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸等の有機酸を含む。その他の例は、ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウム等のアルカリ土類金属もしくはアルカリ土類金属との塩または有機塩基との塩を含む。
【０３００】
本発明の範囲に包含されるものには、本発明の化合物の代謝的に不安定なエステルまたはプロドラッグ形態を含む、カルボン酸含有基またはヒドロキシル含有基の薬学的に許容されるエステルもある。代謝的に不安定なエステルは、例えば、血中レベルの上昇を引き起こすことができ、対応する非エステル化形態の化合物の効能を延長することができる。  プロドラッグ形態は、投与される際は活性型の分子ではないが、（代謝、例えば、酵素的または加水分解性開裂等の）何らかの  in  vivo活性または生体内返還後、治療的に活性になる。エステル類を含むプロドラッグの一般的考察については、Svensson  とTunek  Drug  Metabolism  Reviews  165  (1988)ならびに  Bundgaard  Design  of  Prodrugs,Elsevier(1985)を参照されたい。マスクされたカルボン酸アニオンの例は、アルキル(例えば、メチル、エチル)、シクロアルキル  (例えば、シクロヘキシル)、アラルキル(例えば、ベンジル、p-メトキシベンジル)およびアルキルカルボニルオキシアルキル(例えば、ピバロイルオキシメチル)等、多様なエステル類を含む。アミン類は、遊離薬物およびホルムアルデヒドをin  vivo放出するエステラーゼによって開裂されたアリールカルボニルオキソメチル置換誘導体としてマスクされている  (Bungaard  J.  Med.  Chem.  2503(1989))。また、イミダゾール、イミド、インドールなどの酸性NH基を含有する薬物は、N-アシルオキシメチル基でマスクされている  (Bundgaard  Design  of  Prodrugs,Elsevier(1985))。ヒドロキシ基は、エーテル類としてマスクされている。EP  039,051  (SloanとLittle,1981年11月4日)は、マンニッヒ系ヒドロキサム酸プロドラッグ、これらの調製および使用を開示している。本発明の化合物のエステルは、例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステルおよびブチルエステルを含み得、ならびに酸性部分とヒドロキシ含有部分との間に形成された他の適切なエステルを含み得る。代謝的に不安定なエステルは、例えば、メトキシメチル、エトキシメチル、イソプロピルメチル、α-メトキシエチル;α-((C1-C4)アルキルオキシ)エチルの等の基、例えば、メトキシエチル、エトキシエチル、プロピルエチル、イソプロピルエチル等;5-メチル2-オキソ-1、3、ジオキソレン-4-イルメチル等の2-オキソ-1,3-ジオキソレン-4-イルメチル基  ;C1-C3  アルキルチオメチル基、例えば、メチルチオoメチル、エチルチオメチル、イソプロピルチオメチル等.;アシルオキシメチル基、例えば,ピバロイルオキシメチル、α-アセトキシメチル等.;エトキシカルボニル-1-メチル;oまたはα-アシルオキシ-α-置換メチル基、例えばα-アセトキシエチルを含み得る。
【０３０１】
さらに、本発明の化合物は、エタノール、N,N-ジメチル形ホルムアミド、水等の一般的な溶媒から結晶化できる結晶性固体として存在し得る。したがって、本発明の化合物の結晶形態は、親化合物または薬学的に許容されるそれらの塩の多形体、溶媒和物および/または  水和物として存在し得る。このような形態のすべては、同様に、本発明の範囲内に入るものとして解釈されるべきである。
【０３０２】
本発明の化合物は、単独の活性薬剤として投与できるが、これらの化合物は、1種類以上の本発明の化合物または他の作用物質との組み合わせでも使用され得る。組み合わせとして投与する場合、治療剤は同時にもしくは異なった時間に投与される別個の組成物として配合され得るか、または治療剤は単一の組成物として投与され得る。
【０３０３】
前述は、本発明の説明にすぎず、本発明を開示されている化合物に限定することを意図されていない。当業者らに明白は変形および変更は、添付の特許請求の範囲において定義されている本発明の範囲および性質内であることを意図されている。
【０３０４】
前述の記載から、当業者らは、本発明の本質的特徴を容易に把握することができ、その趣旨および範囲から逸脱することなく、本発明を種々の使用法および条件に適合させるために、本発明の種々の変更および修正を行うことができる。
【国際調査報告】
2013514989.tif 000083
2013514989.tif 000084