(57)【要約】  腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体及びそれらの腫瘍に関連する処置を検出及び評価する方法を記載する。更に、患者の腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体を同定することによる、葉酸−ビンカコンジュゲートを用いた治療に卵巣癌及び肺癌の患者を選択する方法を記載する。更に、白金製剤耐性卵巣腫瘍及び白金製剤感受性卵巣腫瘍を含む卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌腫瘍を含む葉酸受容体発現上皮性腫瘍を、ペグ化リポソームドキソルビシン等のドキソルビシンと葉酸−ビンカコンジュゲートを併用して処置する方法及び組成物を記載する。更に、患者の腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体を同定することにより患者を選択して、又は選択せずに、葉酸標的薬物を用いて白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法を記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、
前記患者の前記腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定するステップを含み、前記腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在する場合に前記腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法。
【請求項２】
前記機能的に活性な葉酸受容体を検出するために前記患者にＥＣ２０を投与するステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＥＣ２０の投与前に前記患者に非標識葉酸を投与するステップを更に含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べて前記腫瘍に結合した後の前記ＥＣ２０により生じる放射性シグナルが前記患者の臨床的ベネフィットを示す場合に前記腫瘍患者の処置に前記ＥＣ１４５が適応される、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記臨床的ベネフィットが前記患者の無増悪生存期間である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記臨床的ベネフィットが腫瘍成長の阻害である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記臨床的ベネフィットが、安定、部分奏功、及び完全奏功からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記バックグラウンド放射性シグナルに対する前記ＥＣにより生じる放射性シグナルである腫瘍／バックグラウンド比に基づいて前記機能的に活性な葉酸受容体の発現レベルが定量される、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．２である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．３である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．４である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記腫瘍が肺腫瘍である、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
前記腫瘍が肺非小細胞癌である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＥＣ１４５若しくは前記ＥＣ２０のいずれか又は両方が非経口製剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項１７】
前記製剤が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、及びくも膜下腔内用の製剤からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＥＣ１４５が組成物中に含まれ、前記組成物が薬学的に許容されるキャリアを更に含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＥＣ２０を含む組成物が、薬学的に許容されるキャリアを更に含む、請求項４に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＥＣ１４５が治療有効量投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＥＣ２０が治療有効量投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者にドキソルビシンを投与するステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、
前記患者にＥＣ２０を含む組成物を投与するステップ
を含み、ＥＣ２０を用いて検出可能である機能的に活性な葉酸受容体を前記患者が前記腫瘍上に有する場合に前記腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法。
【請求項２５】
前記ＥＣ２０の投与前に前記患者に非標識葉酸を投与するステップを更に含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者にドキソルビシンを投与するステップを更に含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＥＣ１４５を用いた治療に対する患者の卵巣腫瘍又は肺腫瘍の反応を予測する方法であって、
ａ）前記患者に、放射性シグナルを生じるＥＣ２０を投与するステップ；
ｂ）前記腫瘍に結合した後の前記ＥＣ２０により生じる放射性シグナルを定量するステップ；
ｃ）前記ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルを定量するステップ；
ｄ）前記腫瘍に前記ＥＣ２０が結合した後に生じる放射性シグナルと前記バックグラウンド放射性シグナルを比較するステップ；
ｅ）前記比較に基づいて、前記治療への前記腫瘍の反応を予測するステップ
を含む、方法。
【請求項２９】
前記ＥＣ１４５が１５ｍｇ／月投与される、請求項１、２４、及び２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法。
【請求項３１】
患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用。
【請求項３２】
ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための医薬の製造におけるＥＣ１４５の使用。
【請求項３３】
それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌の処置において治療量のペグ化リポソームドキソルビシンを用いた処置よりも大きな臨床的ベネフィットを得る方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、方法。
【請求項３４】
前記臨床的ベネフィットが無増悪生存期間である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記臨床的ベネフィットが全生存期間である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＣ１４５の純度が少なくとも９０％である、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３７】
前記ＥＣ１４５が水性無菌液剤中に用意され、前記液剤の成分に、第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム及び注射用水が含まれる、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３８】
前記処置が腸レジメンを更に含む、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３９】
前記ＥＣ１４５が、約１０〜２０秒間かけてボーラス投与される、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４０】
処置前に前記患者にＥＣ２０を投与し、前記患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを更に含む、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項４１】
処置前に患者にＥＣ２０を投与し、前記患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを含む、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の処置に患者を選択する方法。
【請求項４２】
ＥＣ１４５を水性無菌液剤中に含み、前記液剤の成分に、第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び注射用水が含まれる、医薬組成物。
【請求項４３】
１．４ｍｇ／ｍＬのＥＣ１４５を含む、ｐＨ７．４の水性無菌液剤２．０ｍＬとしての、静脈内投与用ＥＣ１４５医薬品を含む投与単位。
【請求項４４】
アンプル、密封バイアル、又は予め充填されたシリンジである、請求項４３に記載の投与単位。
【請求項４５】
密封バイアルである、請求項４４に記載の投与単位。
【請求項４６】
腫瘍を有する患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体があるかどうかを決定する方法であって、前記機能的に活性な葉酸受容体を検出するために前記患者に有効量のＥＣ２０を投与するステップを含む、方法。
【請求項４７】
前記腫瘍が卵巣腫瘍又は肺腫瘍である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記腫瘍が原発性腫瘍又は転移性腫瘍である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記機能的に活性な葉酸受容体が視覚的に検出される、請求項１〜３、２４〜２５、又は４６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記機能的に活性な葉酸受容体の視覚的検出を用いて、前記患者の葉酸受容体状態が決定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記患者の前記葉酸受容体状態が、ＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、及びＥＣ２０−からなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記葉酸受容体状態がＥＣ２０＋＋である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＥＣ１４５を用いた処置が適応される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＥＣ２０＋＋状態が前記患者に対する臨床的ベネフィットと相関する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記臨床的ベネフィットが病勢コントロール率である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記臨床的ベネフィットが全奏効率である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記臨床的ベネフィットが全生存期間である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
治療量のドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者において葉酸受容体発現上皮性腫瘍を処置する方法。
【請求項５９】
患者の葉酸受容体発現上皮性腫瘍を処置するための、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用。
【請求項６０】
ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて患者の葉酸受容体発現上皮性腫瘍を処置するための医薬の製造におけるＥＣ１４５の使用。
【請求項６１】
治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者の葉酸受容体発現上皮性腫瘍の処置において臨床的ベネフィットを得る方法。
【請求項６２】
前記臨床的ベネフィットが無増悪生存期間である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記臨床的ベネフィットが全生存期間である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項６５】
前記葉酸受容体発現上皮性腫瘍が、卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍である、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項６６】
前記葉酸受容体発現上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項６５に記載の方法又は使用。
【請求項６７】
前記葉酸受容体発現上皮性腫瘍が、卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍である、請求項６４に記載の方法又は使用。
【請求項６８】
前記葉酸受容体発現上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項６７に記載の方法又は使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００９年７月３１日付で提出された米国仮特許出願第６１／２３０，５９５号；２０１０年５月１９日付で提出された同第６１／３４６，４４４号；及び２０１０年６月３日付で提出された同第６１／３５１，０２２号の利益を主張するものであり、これらそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
本発明は、腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体及びそれらの腫瘍に関連する処置を検出及び評価するための方法及び組成物に関する。本発明は更に、患者の腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体を同定することによる、葉酸−ビンカコンジュゲートを用いた治療に卵巣癌及び肺癌の患者を選択するための方法及び組成物に関する。本発明は更に、ペグ化リポソームドキソルビシン等のドキソルビシンと葉酸−ビンカコンジュゲートを併用して、葉酸受容体発現上皮性腫瘍を処置するための方法及び組成物に関し、そのような腫瘍には、卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌腫瘍が含まれ、白金製剤耐性卵巣腫瘍及び白金製剤感受性卵巣腫瘍も含まれる。本発明は更に、患者の腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体を同定することにより患者を選択して又は選択せずに、葉酸標的薬物を用いて白金製剤耐性卵巣癌を処置するための方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
標的薬物療法では、問題の分子標的の有無についての情報を提供する診断テストを一緒に開発することが大きな補助となる。例えば、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）を用いた治療への選択はそのような診断テストであるＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（登録商標）に基づき、このテストは、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）の発現を測定することによりハーセプチン（登録商標）を用いた処置への患者の選択を支援する半定量的免疫組織化学的（ＩＨＣ）アッセイである。
【発明の概要】
【０００４】
しかし、ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（登録商標）は、上皮成長因子受容体に対する抗体を用いて固定組織上に存在する上皮成長因子受容体を検出するものであり、これらの受容体が上皮成長因子に結合する能力を検出するものではないため、機能的に活性な上皮成長因子受容体（すなわち、上皮成長因子に結合する受容体）を検出しない。
【０００５】
卵巣癌患者の腫瘍上の葉酸受容体を検出するために、１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ−葉酸を用いた研究の後、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）をベースとする葉酸連結型放射性医薬品を開発するための研究を開始した。テクネチウムベースの薬剤の利点としては、１）モリブデン／テクネチウム−９９ｍジェネレーターの入手し易さ、２）γ線計数器での検出に最適なエネルギー（１４０ｋｅＶ）、及び３）短い半減期が含まれる。この関連で、式
2013501224.tif 000002
で表される９９ｍＴｃ−ＥＣ２０（ＥＣ２０）を開発した。テクネチウム−９９ｍ標識ＥＣ２０（９９ｍＴｃ−ＥＣ２０）を用いることで、葉酸に結合できる葉酸受容体を発現している組織を非侵襲的にリアルタイムで検出することができる。
【０００６】
ＥＣ２０という用語は、一般的には、放射性核種を欠く非放射性試薬
2013501224.tif 000003
を指して使用される。
【０００７】
しかし、ＥＣ２０は、患者に投与される物質である放射性原薬（ｄｒｕｇ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を指しても一般に使用される（以下の実施例２及び３参照）。葉酸に結合できる葉酸受容体を発現する組織を検出及び評価するための患者への投与において、本発明では、ＥＣ２０は放射性原薬９９ｍＴｃ−ＥＣ２０又はその薬学的に許容される塩を指して使用される。原薬は、溶液又は懸濁液中に脱プロトン化体等のイオン体で存在し得ると理解される。
【０００８】
葉酸標的薬物を開発し、癌治療薬としての臨床試験を行っている。ＥＣ１４５は、葉酸にコンジュゲートした、非常に強力なビンカアルカロイド細胞毒性化合物であるデスアセチルビンブラスチンヒドラジド（ＤＡＶＬＢＨ）を含む。ＥＣ１４５分子は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、子宮内膜癌、腎癌等の上皮性腫瘍（卵管癌及び原発性腹膜癌を含む）の表面上に高レベルで見られる葉酸受容体を標的とする。理論により限定されるものではないが、ＥＣ１４５は、葉酸受容体を発現している腫瘍に結合して、正常組織を避けて癌細胞に直接ビンカ部分を送達すると考えられる。結合後、ＥＣ１４５はエンドサイトーシスを介して癌細胞に入り、ＤＡＶＬＢＨを放出し、細胞分裂に必要な有糸分裂の集合体形成を阻害することにより、細胞死を引き起こす。ＥＣ１４５のケミカルアブストラクツ登録番号は７４２０９２−０３−１であり、以下の式で表される。
2013501224.tif 000004
【０００９】
本発明では、処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の文脈において、ＥＣ１４５という用語は、前述の化合物又はその薬学的に許容される塩を意味し、化合物は、溶液又は懸濁液中にプロトン化体等のイオン体で存在し得る。
【００１０】
本願出願人らは、葉酸受容体に結合できる葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲートが放射性核種を卵巣腫瘍等の腫瘍又は肺腫瘍に標的化するため及び更に腫瘍中に放射性核種を濃縮させるために使用することができることを実証した。驚くべきことに、本出願人らは、閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体の存在が患者の臨床的ベネフィットを示し得ることを見出した。したがって、本発明に従い、患者の腫瘍上における活性な葉酸受容体の存在を決定する方法が本明細書中に記載される。更に、ＥＣ１４５を用いた治療に患者を選択する方法であって、患者の腫瘍上で閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体を検出することで予測される患者の臨床的ベネフィットに基づいて、治療に患者を選択することができる、方法が記載される。患者の臨床的ベネフィットとしては、患者の無増悪生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けられること、腫瘍成長の阻害、安定（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）、腫瘍に対する治療の部分奏功、及び／又は腫瘍に対する治療の完全奏功が含まれる。したがって、機能的に活性な葉酸受容体の検出（限定されるものではないが、機能的に活性な葉酸受容体の閾値レベルの発現の決定を含み得る）は、卵巣癌又は肺癌の患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかの決定に利用することができる。この非侵襲的方法は、関連する機能的に活性な葉酸受容体分子標的を有する卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者を葉酸−薬物コンジュゲートを用いた治療に選択する補助として、医療関係者が使用することができる。
【００１１】
本出願人らは更に、ＥＣ１４５とペグ化リポソームドキソルビシンの併用による、患者における転移性腫瘍を含む白金製剤耐性卵巣腫瘍の処置を実証した。本出願人らは、この併用療法が、ＥＣ１４５なしでペグ化リポソームドキソルビシンを用いた患者の処置より有益であることを実証した。この処置と組み合わせてＥＣ２０を使用してもよく、使用しなくてもよい。
【００１２】
本発明の一態様では、腫瘍を有する患者において機能的に活性な葉酸受容体を検出する方法が提供される。
【００１３】
本発明の別の態様では、ＥＣ２０を含む組成物を患者に投与するステップを含む、患者の卵巣腫瘍や肺腫瘍等の腫瘍（原発性及び転移性の腫瘍を含む）上の機能的に活性な葉酸受容体の存在を決定する方法が提供される。
【００１４】
本発明の別の態様では、卵巣腫瘍、肺腫瘍等の腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定するステップを含み、原発性及び転移性の腫瘍を含む腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在する場合に腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法が提供される。
【００１５】
別の態様では、卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、患者にＥＣ２０を投与するステップを含み、患者の腫瘍が機能的に活性な葉酸受容体を有する場合に腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応され、機能的に活性な葉酸受容体がＥＣ２０を用いて検出可能である、方法が提供される。
【００１６】
本発明の別の態様では、卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、患者にＥＣ２０を投与するステップを含み、ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べて腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じた放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法が提供される。
【００１７】
本発明の別の態様では、ＥＣ１４５を用いた治療に対する患者の卵巣腫瘍又は肺腫瘍の反応を予測する方法であって、
ａ）放射性シグナルを生じるＥＣ２０を患者に投与するステップ；
ｂ）ＥＣ２０が腫瘍に結合した後にＥＣ２０により生じる放射性シグナルを定量するステップ；
ｃ）ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルを定量するステップ；
ｄ）ＥＣ２０が腫瘍に結合した後に生じた放射性シグナルをバックグラウンド放射性シグナルと比較するステップ；及び
ｅ）比較に基づいて、治療に対する腫瘍の反応を予測するステップ
を含む方法が提供される。
【００１８】
本発明の更なる態様では、治療量のドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置する方法が提供される。
【００１９】
本発明の更なる態様では、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置する方法が提供される。
【００２０】
本発明の更なる態様では、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法が提供される。
【００２１】
本発明の別の態様では、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者の白金製剤感受性卵巣癌を処置する方法が提供される。
【００２２】
本発明の別の態様では、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌の処置において治療量のペグ化リポソームドキソルビシンを用いた処置よりも大きな臨床的ベネフィットを得る方法が提供される。
【００２３】
別の態様では、腫瘍を有する患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定する方法が提供される。この方法は、機能的に活性な葉酸受容体を検出するために患者に有効量のＥＣ２０を投与するステップを含む。更に別の態様では、腫瘍は卵巣腫瘍又は肺腫瘍である。別の例示的態様では、腫瘍は原発性腫瘍又は転移性腫瘍である。別の実施形態では、機能的に活性な葉酸受容体は視覚的に検出される。更に別の態様では、機能的に活性な葉酸受容体の視覚的検出により患者の葉酸受容体の状態が決定される。例えば、患者の葉酸受容体の状態は、ＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、及びＥＣ２０−からなる群から選択される。この例示的態様では、葉酸受容体の状態はＥＣ２０＋＋であり得、ＥＣ１４５を用いた処置が適応される。別の態様では、ＥＣ２０＋＋状態は患者の臨床的ベネフィットに関連し、臨床的ベネフィットは、病勢コントロール率又は全奏効率であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】９９ｍＴｃ−ＥＣ２０−葉酸投与後の患者の平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順を行う前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射する。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射した約１〜２時間後、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を取得する。矢印は腫瘍（病変）のおおよその位置を示す。この例では、葉酸受容体陽性腫瘍を含む２つの領域が示されている。
【図２】９９ｍＴｃ−ＥＣ２０−葉酸投与後の患者の平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順を行う前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射する。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射した約１〜２時間後、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を取得する。矢印は腫瘍（病変）のおおよその位置を示す。この例では、葉酸受容体陽性腫瘍を含む２つの領域が示されている。
【図３】９９ｍＴｃ−ＥＣ２０−葉酸投与後の患者の平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順を行う前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射する。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射した約１〜２時間後、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を取得する。矢印は腫瘍（病変）のおおよその位置を示す。この例では、葉酸受容体陽性腫瘍を含む２つの領域が示されている。
【図４】９９ｍＴｃ−ＥＣ２０−葉酸投与後の患者の平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順を行う前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射する。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射した約１〜２時間後、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を取得する。矢印は腫瘍（病変）のおおよその位置を示す。この例では、葉酸受容体陽性腫瘍を含む１つの領域が示されている。
【図５】９９ｍＴｃ−ＥＣ２０−葉酸投与後の患者の平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順を行う前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射する。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射した約１〜２時間後、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を取得する。矢印は腫瘍（病変）のおおよその位置を示す。この例では、葉酸受容体陽性腫瘍を含む６つの領域が示されている。
【図６】図５の平面画像と同じ患者のＣＴスキャン画像である。関心領域（腫瘍病変内の強度の強い画像領域）を２つの楕円で示す。ＥＣ１４５を用いた処置を開始する前に画像の測定を行ったところ、腫瘍のサイズはそれぞれ１〜３４ｍｍ及び２〜２５ｍｍであった。
【図７】図５の平面画像と同じ患者のＣＴスキャン画像である。関心領域（腫瘍病変内の強度の強い画像領域）を２つの楕円で示す。ＥＣ１４５を用いた処置の８週間（２サイクル）後に画像を測定したところ、腫瘍サイズ（サイズ変化率）はそれぞれ１〜１５ｍｍ（−５６％）及び２〜１０ｍｍ（−６０％）であった。
【図８】例示的なＥＣ１４５を用いた１６週間の治療レジメンを示す図である。
【図９】処置に対する非小細胞肺癌及び卵巣癌の腫瘍の反応を示す図である。実施例１６に記載の方法に従い、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０投与後のイメージング結果に基づき、葉酸受容体陽性及び葉酸受容体陰性の２グループに腫瘍を分類した（図中、垂直な点線で分けられている）。実施例１８又は実施例１９の方法による処置後の各腫瘍のサイズ変化をグラフ中の個々のバーで示す。実施例２１に記載されているように、実施例１６に記載の方法に基づく葉酸受容体陽性であった全腫瘍の平均的サイズ増加は、葉酸受容体陰性であった全腫瘍の平均的サイズ増加よりも有意に小さく、それぞれ７％対３３％であった。
【図１０】標的病変中へのＥＣ２０の取込みを示すＳＰＥＣＴ及び平面画像である。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を用いることで、医師は受容体発現のリアルタイムな評価を得ることができる。パネルＡ、Ｂ、及びＣは、卵巣癌患者（患者０３５、研究ＥＣ−ＦＶ−０２）のＣＴ画像、ＳＰＥＣＴ画像、及び平面画像を比較したものであり、腹部腫瘤における９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の取込みを示している（白矢印）。パネルＡ：ＣＴスキャン；パネルＢ：９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の取込みを示すＳＰＥＣＴ画像；パネルＢ：９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の取込みを示す平面画像。
【図１１】ペグ化リポソームドキソルビシンとＥＣ１４５を組み合わせて処置した患者（ＥＣ１４５＋ＰＬＤ）及びペグ化リポソームドキソルビシンのみで処置した患者（ＰＬＤ単独）の、研究ＥＣ−ＦＶ−０４における中間解析時の無増悪生存期間（ＰＦＳ）のカプラン・マイヤー曲線を示す図である。
【図１２】白金製剤耐性卵巣癌を有する女性の進行中の第２相試験である研究ＥＣ−ＦＶ−０４における中間解析時の無増悪生存期間（ＰＦＳ）のカプラン・マイヤー曲線を示す図である。対象は、研究処置前にＥＣ２０でスキャンして研究処置（ＥＣ１４５とＰＬＤの併用対ＰＬＤ単独）前にＥＣ２０陽性（ＥＣ２０＋＋状態）であると評価され、核イメージング可能な施設で登録された対象である。
【図１３】進行卵巣癌及び進行子宮内膜癌を有する女性の治験である研究ＥＣ−ＦＶ−０２において、研究処置前にＥＣ２０でスキャンして研究処置前に評価したＥＣ２０陽性（ＥＣ２０＋＋状態）の女性をＥＣ２０＋状態又はＥＣ２０−状態の女性と比較した、全生存期間（ＯＳ）のカプラン・マイヤー曲線を示す図である。この曲線は、非常に難治性の卵巣癌患者において単独ＥＣ１４５薬剤の恩恵を受ける患者を選択することの有用性を示している。
【図１４】白金製剤耐性卵巣癌を有する女性の進行中の第２相試験である研究ＥＣ−ＦＶ−０４における中間解析時の、ペグ化リポソームドキソルビシンとＥＣ１４５を組み合わせて処置した患者（ＥＣ１４５＋ＰＬＤ）及びペグ化リポソームドキソルビシンのみで処置した患者（ＰＬＤ単独）の全生存期間（ＯＳ）のカプラン・マイヤー曲線を示す図である。
【図１５】実施例７に示すインビボでのＫＢ腫瘍細胞の成長阻害におけるＥＣ１４５とドキソルビシンの相乗的関係を示す図である。線より下のデータポイントが相乗作用を表す。
【図１６】以下のグループについて実施例８に記載されているＭ１０９腫瘍を有するマウスでの研究から得られた、腫瘍成長に対する影響及び反応（ＰＲ＝部分奏功、ＣＲ＝完全奏功、治癒）を示す図である：（ａ）Ｍ１０９対照；（ｂ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ；（ｃ）ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｄ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｅ）ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ；及び（ｆ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ。
【図１７】以下のグループについて実施例８に記載されているＭ１０９腫瘍を有するマウスでの研究から得られた、体重変化に対する影響を示す図である：（ａ）Ｍ１０９対照；（ｂ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ；（ｃ）ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｄ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｅ）ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ；及び（ｆ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
定義
本発明において、「機能的に活性な葉酸受容体」とは、少なくとも約１．２以上の腫瘍／バックグランド比で卵巣腫瘍又は肺腫瘍上に発現している葉酸受容体を意味する。この用語は、視覚的に検出可能な腫瘍からのシグナルを意味して使用することもある（例えば、後述するようにＥＣ２０＋＋の患者を指して使用される）。「機能的に活性な葉酸受容体」の存在（すなわち、腫瘍／バックグランド比が少なくとも約１．２以上又は視覚的に検出される腫瘍からのシグナル）は、ＥＣ１４５を用いた治療に選択される患者の臨床的ベネフィットに関連し、臨床的ベネフィットには、患者の無増悪生存期間、患者の全生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けることができること、腫瘍成長の阻害、安定、部分奏功、及び／又は完全奏功が含まれる。
【００２６】
本発明において、「腫瘍／バックグラウンド比」とは、患者における、葉酸−放射性イメージング剤により生じるバックグラウンドの放射性シグナルと比較した、腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルの比率を意味する。
【００２７】
本発明において、「臨床的ベネフィット」とは、ＥＣ１４５を用いた処置に対する患者の反応を意味し、そのような反応には、患者の無増悪生存期間、患者の全生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けることができること（例えば４週間の治療）、腫瘍成長の阻害、安定、部分奏功、及び／又は完全奏功が含まれる。
【００２８】
本発明において、「腫瘍成長の阻害」とは、腫瘍サイズの減少、腫瘍の完全な消失、又はＥＣ１４５を用いた治療の経過中における患者の腫瘍の成長が３０％未満であることを意味する。
【００２９】
本発明において、「安定（ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」とは、ＥＣ１４５を用いた治療の経過中に患者の疾患に大きな進行がないことを意味する。
【００３０】
本発明において、「部分奏功（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、ＥＣ１４５で処置された患者における３０％以上の腫瘍サイズの減少を意味する。
【００３１】
本発明において、「完全奏功（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、ＥＣ１４５で処置された患者における検出可能な疾患の消失を意味する。
【００３２】
例示的実施形態の詳細な説明
上記の種々の開示のいずれにおいても、適用可能な場合に以下の構成が存在してもよく、これらは本発明の更なる実施形態を提供する。
【００３３】
別の実施形態では、方法は、放射性核種との錯体の形態でＥＣ２０を投与する前に、葉酸又はその塩等の非標識葉酸を患者に投与するステップを更に含む。
【００３４】
別の実施形態では、ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べて腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、腫瘍患者の処置にＥＣ１４５が適応される。
【００３５】
別の実施形態では、臨床的ベネフィットは患者の無増悪生存期間である。
【００３６】
別の実施形態では、臨床的ベネフィットは腫瘍成長の阻害である。
【００３７】
別の実施形態では、臨床的ベネフィットは、安定、部分奏功、及び完全奏功からなる群から選択される。
【００３８】
別の実施形態では、バックグラウンド放射性シグナルに対するＥＣ２０により生じる放射性シグナルである腫瘍／バックグラウンド比に基づいて、機能的に活性な葉酸受容体の発現レベルが定量される。
【００３９】
別の実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は少なくとも約１．２である。
【００４０】
別の実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は少なくとも約１．３である。
【００４１】
別の実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は少なくとも約１．４である。
【００４２】
別の実施形態では、腫瘍は卵巣腫瘍である。
【００４３】
別の実施形態では、腫瘍は金耐性卵巣腫瘍である。
【００４４】
別の実施形態では、腫瘍は肺腫瘍である。
【００４５】
別の実施形態では、腫瘍は肺非小細胞癌である。
【００４６】
別の実施形態では、ＥＣ１４５若しくはＥＣ２０のいずれか又は両方が非経口製剤に含まれる。
【００４７】
別の実施形態では、製剤は、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、及びくも膜下腔内用の製剤からなる群から選択される。
【００４８】
別の実施形態では、ＥＣ１４５は組成物中に含まれ、組成物は、薬学的に許容されるキャリアを更に含む。
【００４９】
別の実施形態では、ＥＣ２０を含む組成物は薬学的に許容されるキャリアを更に含む。
【００５０】
別の実施形態では、薬学的に許容されるキャリアは液体キャリアである。
【００５１】
別の実施形態では、液体キャリアは、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、及びこれらの組合せからなる群から選択される。
【００５２】
別の実施形態では、ＥＣ１４５は治療有効量で投与される。
【００５３】
別の実施形態では、ＥＣ２０は治療有効量で投与される。ＥＣ２０の場合、治療有効量とは、診断に有効な量を意味する。
【００５４】
別の実施形態では、有効量は、体重１キログラム当たり約１ｎｇ〜約１ｍｇである。
【００５５】
別の実施形態では、有効量は、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５００μｇである。
【００５６】
別の実施形態では、有効量は、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５０μｇである。
【００５７】
別の実施形態では、腫瘍は原発性腫瘍である。
【００５８】
別の実施形態では、腫瘍は転移した腫瘍である。
【００５９】
別の実施形態では、ＥＣ２０は、キレート剤及び還元剤を用いて放射標識されている。
【００６０】
別の実施形態では、キレート剤はα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウムである。
【００６１】
別の実施形態では、還元剤は塩化スズ（ＩＩ）二水和物である。
【００６２】
別の実施形態では、患者にドキソルビシンを投与するステップを更に含む。一実施形態では、ドキソルビシンはペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）の形態である。
【００６３】
ＥＣ２０又はその薬学的に許容される塩について本明細書に記載されている任意の方法又は使用において、代替的な実施形態は、ガリウム、インジウム、銅、テクネチウム、及びレニウムのアイソトープからなる群から選択される放射性核種の陽イオンを錯体化された放射性核種として有する、葉酸−放射性イメージングコンジュゲートである。
【００６４】
全ての実施形態について、実施形態のあらゆる適切な組合せが想定される。上記実施形態のあらゆる適切な組合せが本発明に含まれると見なされる。
【００６５】
本発明では、放射性核種を卵巣腫瘍又は肺腫瘍に標的化し、更に腫瘍中に放射性核種を濃縮させて腫瘍上の機能的に活性な葉酸受容体の検出に使用するために、ＥＣ２０を使用することができる。驚くべきことに、本出願人らは、腫瘍上での葉酸受容体の閾値レベルの発現（すなわち、腫瘍上での機能的に活性な葉酸受容体の存在）が、ＥＣ１４５を用いた治療に選択される患者の臨床的ベネフィットに関連することを見出した。そこで、本発明では、患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定する方法を本明細書中に記載する。更に、ＥＣ１４５を用いた治療に患者を選択するための方法であって、患者腫瘍上の閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体を検出することにより予測される臨床的ベネフィットに基づいて患者を治療に選択することができる方法を提供する。患者の臨床的ベネフィットとしては、患者の無増悪生存期間、患者の全生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けることができること、腫瘍成長の阻害、安定、腫瘍に対する治療の部分奏功、及び／又は腫瘍に対する治療の完全奏功が含まれる。葉酸受容体発現の閾値レベルは、例えば、腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．２、少なくとも約１．３、又は少なくとも約１．４であること又は視覚的に検出できること（例えば、後述するＥＣ２０＋＋患者を同定するために使用される視覚的検出）であり得る。したがって、機能的に活性な葉酸受容体の検出（すなわち、例えば、腫瘍／バックグラウンド比として検出される又は視覚的に検出される、閾値レベルの葉酸受容体発現）を用いて、卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定することができる。
【００６６】
一実施形態では、方法は、卵巣腫瘍又は肺腫瘍等の機能的に活性な葉酸受容体を有する種類の腫瘍に応用可能である。別の例示的実施形態では、方法は白金製剤耐性卵巣腫瘍に応用可能である。更に別の実施形態では、方法は非小細胞肺癌に応用可能である。別の例示的実施形態では、腫瘍は原発性腫瘍であり得る。別の実施形態では、腫瘍は転移した腫瘍であり得る。
【００６７】
一実施形態では、本明細書に記載されている方法を用いて機能的に活性な葉酸受容体を定量する。
【００６８】
別の実施形態では、本明細書に記載されている方法を用いて、機能的に活性な葉酸受容体を定量し、卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する。一実施形態では、患者に、必要に応じて非標識葉酸を予め注射し、その後、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を注射し、腫瘍／バックグラウンド比を決定することができる。この実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は、患者において葉酸−放射性イメージング剤により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比較した、腫瘍に結合した後の９９ｍＴｃ−ＥＣ２０により生じる放射性シグナル（例えばＳＰＥＣＴ／ＣＴ又はＳＰＥＣＴイメージング）の比率である。この実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は、例えば少なくとも約１．２であり得る。あるいは、閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体の存在は、例えば後述するようにＥＣ２０＋＋患者を同定することにより視覚的に決定され得る。
【００６９】
機能的に活性な葉酸受容体の閾値レベルの発現は、患者の臨床的ベネフィットに関連し得る。臨床的ベネフィットとしては、患者の無増悪生存期間、患者の全生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けることができること、腫瘍成長の阻害、安定、腫瘍に対する治療の部分奏功、及び／又は腫瘍に対する治療の完全奏功が含まれ得る。機能的に活性な葉酸受容体の検出（例えば、腫瘍／バックグラウンド比１．２に反映される閾値レベルの葉酸受容体発現又は視覚的に、例えば後述するＥＣ２０＋＋患者の同定に用いられる視覚的検出により検出される、閾値レベルの葉酸受容体発現）を用いて、卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定することができる。
【００７０】
上記実施形態では、腫瘍／バックグラウンド比は、例えば、１．２、１．３、又は１．４であり得、あるいは視覚的に検出され得る。別の例示的実施形態では、閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体の決定は、例えば所定の領域のＳＰＥＣＴ／ＣＴ又はＳＰＥＣＴ画像を視覚的に検査し、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の取込みを例えば取込みなし、軽度の取込み、又は顕著な取込みとしてコード化し、軽度の取込み又は顕著な取込みの患者を治療に選択することによりなされ得る。
【００７１】
更に別の実施形態では、ビンカ化合物に連結した葉酸を含むコンジュゲートを用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者を選択する方法が記載される。方法は、患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定するステップを含み、腫瘍上で機能的に活性な葉酸受容体が検出される場合に、葉酸−ビンカ化合物コンジュゲートを用いた治療に患者が選択される。
【００７２】
別の実施形態では、ビンカ化合物に連結した葉酸を含むコンジュゲートを用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者を選択する方法が記載される。方法は、放射性イメージング剤に連結された葉酸を含む組成物を患者に投与するステップを含み、患者の腫瘍が機能的に活性な葉酸受容体を有する場合に、ビンカ化合物に連結された葉酸を含むコンジュゲートを用いた治療に患者が選択され、機能的に活性な葉酸受容体はＥＣ２０を用いて検出可能である。
【００７３】
別の実施形態では、ビンカ化合物に連結した葉酸を含むコンジュゲートを用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍の患者を選択する方法が記載される。方法は、放射性イメージング剤に連結した葉酸を含むコンジュゲートを患者に投与するステップを含み、ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比較した腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、治療に患者が選択される。
【００７４】
本発明の一実施形態では、ＥＣ２０を非標識葉酸と組み合わせて患者に投与してもよい。「組み合わせて」とは、画像の品質を向上させるために、この非標識ビタミンを、ＥＣ２０と共投与してもよく、ＥＣ２０投与前に予め注射してもよいことを意味する。例えば、ＥＣ２０は、患者の平均体重を約７０ｋｇとして、体重１ｋｇ当たり約０．５ｎｇ〜約１００ｍｇの非標識葉酸、体重１ｋｇ当たり約１μｇ〜約１００ｍｇの非標識葉酸、体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜約１００ｍｇの非標識葉酸、又は体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜約７００μｇの非標識葉酸と組み合わせて投与することができる。
【００７５】
別の実施形態は、腫瘍を有する患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定する方法である。一実施形態では、腫瘍は卵巣腫瘍又は肺腫瘍である。別の実施形態では、腫瘍は原発性腫瘍又は転移性腫瘍である。別の実施形態では、方法は、機能的に活性な葉酸受容体を検出するために有効量のＴｃ−ＥＣ２０を患者に投与することを含む。
【００７６】
本明細書に記載の方法の別の実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲートの薬学的に許容される塩が記載される。本明細書に記載のコンジュゲートの薬学的に許容される塩には、酸付加塩及びその塩基塩が含まれる。
【００７７】
好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。説明のための例としては、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩（ｅｓｙｌａｔｅ）、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物塩、臭化水素酸塩／臭化物塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／水素リン酸塩／二水素リン酸塩、サッカラート、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル化物塩、及びトリフルオロ酢酸塩が含まれる。
【００７８】
本明細書に記載のコンジュゲートの好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。説明のための例としては、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リジン、マグネシウム、メグルミン、オーラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、及び亜鉛の塩が含まれる。酸と塩基のヘミ塩（ｈｅｍｉｓａｌｔ）、例えばヘミ硫酸塩及びヘミカルシウム塩も形成され得る。
【００７９】
本明細書に記載の方法の種々の実施形態において、ＥＣ１４５は、単独で又は１若しくは複数の他の薬物と組み合わせて（又はその任意の組合せで）投与され得る。例示的な一実施形態では、ＥＣ１４５をドキソルビシンと組み合わせて投与してよい。例示的な一実施形態では、実施例２０に記載されているように、ＥＣ１４５はペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて投与される。
【００８０】
一実施形態では、本明細書に記載されているコンジュゲートは、１又は複数の薬学的に許容されるキャリアと合わせた製剤として投与され得る。キャリアは補形剤であり得る。キャリアの選択は、特定の投与形態、溶解性及び安定性へのキャリアの影響、剤形の性質等の要因に大きく依存する。本明細書に記載のコンジュゲートの送達に適した医薬組成物及びその調製方法を当業者は容易に知ることができる。そのような組成物及びその調製方法は、例えば参照により本明細書に援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５）に記載されている。
【００８１】
例示的な一態様では、薬学的に許容されるキャリアとしては、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤等、及びその組合せが含まれる。いくつかの実施形態では、キャリアは非経口投与に適している。薬学的に許容されるキャリアとしては、無菌注射用の溶液又は分散液を即時調製するための、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の粉末が含まれる。補助的な活性化合物を本発明の組成物中に含めることもできる。
【００８２】
種々の実施形態において、液剤には懸濁液及び溶液が含まれ得る。そのような製剤は、キャリア、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、又は好適な油、並びに１又は複数の乳化剤及び／若しくは懸濁剤を含み得る。液剤は、例えば小袋から、固体を再構成することにより調製され得る。
【００８３】
一実施形態では、水性懸濁液は、適切な補形剤と混合された活性物質を含み得る。そのような補形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴム；レシチンを初めとする天然のホスファチドであり得る分散剤又は湿潤剤；酸化アルキレンと脂肪酸の縮合物、例えばステアリン酸ポリオキシエチレン；エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール；エチレンオキシドとヘキシトール及び脂肪酸に由来する部分エステルとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート；又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートである。水性懸濁液は更に、１又は複数の保存剤、例えば、アスコルビン酸、エチル、ｎ−プロピル、又はｐ−ヒドロキシ安息香酸；又は１若しくは複数の着色剤を含んでもよい。
【００８４】
例示的な一実施形態では、水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性の粉末及び顆粒が、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤、及び１又は複数の保存剤と混合された活性成分を提供する。更なる補形剤、例えば着色剤が存在してもよい。
【００８５】
好適な乳化剤は、天然のゴム、例えばアラビアゴム又はトラガカントゴム；天然のホスファチド、例えば大豆レシチン；並びに脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルを含むエステル、例えば、ソルビタンモノオレアート、及び前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートであり得る。
【００８６】
別の実施形態では、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、又は塩化ナトリウムが組成物中に含まれてもよい。吸収を遅らせる薬剤、例えば一ステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることで、注射可能な組成物の持続的吸収が可能になる。
【００８７】
一態様では、本明細書に記載のコンジュゲートは、血流中、筋肉中、又は内臓中に直接投与され得る。そのような非経口投与に適した経路としては、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、硬膜外、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、腫瘍内、筋肉内、及び皮下送達が含まれる。非経口投与に適した手段としては、針（マイクロニードルを含む）注射、無針注射、及び注入技術が含まれる。
【００８８】
例示的な一態様では、非経口製剤は通常、キャリア又は補形剤、例えば塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくはｐＨ３〜９）を含み得る水溶液であるが、一部の応用例では、これらは、無菌の非水性溶液として又は発熱性物質を除去した無菌水等の好適な賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）と併せて使用される乾燥形態として処方される方が好ましいことがある。別の実施形態では、本明細書に記載の任意の液剤を、本明細書に記載のコンジュゲートの非経口投与に適合させてもよい。無菌条件下での非経口製剤の調製、例えば無菌条件下での凍結乾燥は、当業者に周知の標準的な薬学的技術を用いて容易に実現することができる。一実施形態では、溶解度向上剤を含める等の適当な製剤化技術を用いることにより、非経口製剤の調製に使用されるコンジュゲートの溶解性を高めてもよい。
【００８９】
種々の実施形態において、非経口投与用の製剤は、即放性製剤及び／又は放出制御製剤へと製剤化される。例示的な一態様では、本発明の活性薬剤は、徐放性製剤の形態、例えば徐放性ポリマーを含む組成物の形態で投与され得る。活性化合物を、放出制御製剤のように、化合物を急速な放出から保護するキャリアと共に調製してもよい（インプラント及びマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む）。生分解性の生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びポリ乳酸・ポリグリコール酸共重合体（ＰＧＬＡ）を使用してもよい。そのような製剤の調製方法は一般的に当業者に公知である。別の実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲート又はコンジュゲートを含む組成物を、適切な場合に、連続的に投与してもよい。
【００９０】
一実施形態では、キットが提供される。活性化合物の組合せが投与される場合、２種以上の医薬組成物を、組成物の逐次投与又は共投与に適したキットの形態で組み合わせてもよい。そのようなキットは、本明細書に記載のコンジュゲートを少なくとも１つが含む２種以上の別個の医薬組成物と、組成物を別々に保持する手段、例えば容器、分けられたボトル、又は分けられたホイルパケットとを含む。別の実施形態では、患者の選択及び／又は処置にコンジュゲートを使用するための指示を提供するラベルを有する容器中にある、本明細書に記載の１又は複数のコンジュゲートを含む組成物が提供される。
【００９１】
一実施形態では、必要に応じて前述の材料の１つ又は組合せと共に、必要な量の活性薬剤を適切な溶媒に含め、その後、ろ過滅菌することにより、無菌注射液を調製することができる。通常、分散液の調製は、分散媒及び任意の更なる前述の成分を含む無菌賦形剤中に活性化合物を含めることによりなされる。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌ろ過した溶液から活性成分の粉末及び任意の更なる所望の成分を生じる真空乾燥及び凍結乾燥であり、あるいは、成分を一緒に滅菌ろ過してもよい。
【００９２】
組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化され得る。キャリアは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びその好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。一実施形態では、例えばレシチン等のコーティングの使用により、分散系の場合は要求される粒子サイズを維持することにより、及び界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。
【００９３】
ＥＣ１４５を投与するための任意の効果的なレジメンを使用することができる。例えば、ＥＣ１４５は、単一用量として投与することができ、あるいは、分割して１日に複数回投与のレジメンとして投与することもできる。更に、毎日処置する代わりに、変則的レジメン（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ  ｒｅｇｉｍｅｎ）（例えば１週間に１〜５日）を用いることもでき、本明細書に記載の方法では、そのような日々の断続的又は変則的なレジメンは、毎日の処置と同等であるとみなされ、想定範囲内である。説明のための一実施形態では、腫瘍を除去するためにＥＣ１４５の複数回注射により患者を処置する。一実施形態では、患者にＥＣ１４５を複数回（好ましくは約２回から約５０回まで）、例えば１２〜７２時間間隔又は４８〜７２時間間隔で注射する。最初の注射から何日又は何ヶ月か置いて、患者に更にＥＣ１４５を注射してもよく、この更なる注射は癌の再発を防止し得る。
【００９４】
任意の好適なクールのＥＣ１４５を用いた治療が使用され得る。一実施形態では、１ヶ月の間に投与される合計投与量が約１５ｍｇとなるように個々の投与量及び投与計画が選択される。説明のための一例では、ＥＣ１４５は、４週間のサイクルのそれぞれの第１週、第２週、及び第３週に、週５日、１日１回投与され、第４週には投与されない。代替的な例では、ＥＣ１４５は、４週間のサイクルのそれぞれの第１週、及び第３週に、週３日、１日１回投与され、第２週及び第４週には投与されない。
【００９５】
ＥＣ１４５の１日の単位用量は、患者の状態、処置されている疾患の状態、ＥＣ１４５の分子量、その投与経路及び組織分布、並びに他の治療処置（例えば放射線療法又は併用療法における更なる薬物）が併用される可能性に応じて非常に大きく変わり得る。患者に投与される有効量は、体の表面積、質量、及び医師による患者の状態の評価に基づく。効果的な投与量は、例えば約１ｎｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約１〜約５００μｇ／ｋｇ、及び約１〜約１００μｇ／ｋｇであり得る。これらの投与量は、平均的な患者の体重約７０ｋｇに基づく。
【００９６】
本明細書に記載のコンジュゲートは、約１．０ｎｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、約１０ｎｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、約５０ｎｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、約５００ｎｇ／ｋｇ〜約１０００μｇ／ｋｇ、約１ｎｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ、約１ｎｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１０μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ〜約２００μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ、又は約５０μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇの投与量で投与され得る。合計投与量は単回投与で投与されてもよく、分割投与で投与されてもよく、医師の裁量で、本明細書に記載した典型的な範囲から外れてもよい。これらの用量は、平均的な患者の体重約７０ｋｇに基づく。医師は、体重がこの範囲外の対象、例えば乳幼児及び高齢者について投与量を容易に決定することができる。
【００９７】
本明細書に記載のコンジュゲートは、１又は複数のキラル中心を含み得、すなわち、複数の立体異性体として存在することが可能であり得る。したがって、本発明は純粋な立体異性体及び立体異性体の混合物、例えばエナンチオマー、ジアステレオマー、及びエナンチオマー的又はジアステレオマー的に濃縮された混合物を含むと理解されるべきである。本明細書に記載のコンジュゲートは、幾何異性体として存在することができ得る。したがって、本発明は純粋な幾何異性体又は幾何異性体の混合物を含むと理解されるべきである。
【００９８】
本明細書に記載のコンジュゲートは非溶媒和物形態及び溶媒和物形態、例えば水和物形態で存在し得ると理解される。一般的に、溶媒和物形態は非溶媒和物形態と同等であり、本発明の範囲に含まれる。本明細書に記載のコンジュゲートは、多様な結晶形又は非晶形で存在し得る。一般的に、全ての物理的形態は、本発明が想定する使用について等価であり、本発明の範囲内であることが意図される。
【００９９】
別の実施形態では、ＥＣ１４５投与のための組成物及び／又は製剤は、純度が少なくとも約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９．５％のＥＣ１４５から調製される。別の実施形態では、ＥＣ１４５投与のための組成物及び／又は製剤は、純度が少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％のＥＣ１４５から調製される。
【０１００】
別の実施形態では、ＥＣ２０投与のための組成物及び／又は製剤は、純度が少なくとも約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９．５％のＥＣ２０から調製される。別の実施形態では、ＥＣ２０投与のための組成物及び／又は製剤は、純度が少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％のＥＣ２０から調製される。
【０１０１】
別の実施形態では、放射標識ＥＣ２０投与のための組成物及び／又は製剤は、放射化学的純度が少なくとも約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９．５％のＥＣ２０から調製される。別の実施形態では、ＥＣ２０投与のための組成物及び／又は製剤は、純度が少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％のＥＣ２０から調製される。
【０１０２】
本発明において、純度決定は、重量百分率、モル百分率等に基づき得る。更に、純度決定は、特定の所定の成分が存在しない又は実質的に存在しないことに基づき得、そのような成分としては、限定されるものではないが葉酸、ビンカ薬物を含まないジスルフィド含有成分、酸化生成物、葉酸を含まないジスルフィド成分等が挙げられる。更に、純度決定は、本明細書に記載の方法により精製された化合物及び組成物の溶液に適用可能であると理解される。その場合、純度測定値、例えば重量百分率及びモル百分率の測定値は、溶媒を除いた溶液成分に関連する。
【０１０３】
ＥＣ１４５又はＥＣ２０の純度は、種々のクロマトグラフィー又は分光学的技術、例えば高圧又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、核磁気共鳴分光法、ＴＬＣ、紫外吸収分光法、蛍光分光法を含む任意の従来技術を用いて測定され得る。
【０１０４】
一態様では、処置に対する患者の反応を、固形がんの治療効果判定のためのガイドライン（ＲＥＣＩＳＴ）の基準を用いて特徴付けた。例えば、基準は、全標的病変の最も長い直径の測定値を考慮して、原本のＷＨＯハンドブック（３）から適応させた：完全奏功（ＣＲ）−全標的病変の消失；部分奏功（ＰＲ）−標的病変の最長径（ｌｏｎｇｅｓｔ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）の和の少なくとも３０％の減少（ベースラインでの最長径の和を基準とする）；安定（ＳＤ）−部分奏功と認めるのに十分な縮小がなく、進行として認めるのに十分な増加もない（処置開始からの最小の最長径和を基準とする）；進行（ＰＤ）−標的病変の最長径の和が少なくとも２０％増大（処置開始からの記録された最小の最長径の和を基準とする）又は１若しくは複数の新規病変の出現。全奏効率（Ｏｖｅｒａｌｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｒａｔｅ：ＯＲＲ）は、最良効果にＣＲ又はＰＲを達成した患者のパーセントとして計算される。全病勢コントロール率（ＤＣＲ）は、最良効果にＣＲ、ＰＲ、又はＳＤを達成した患者のパーセントとして計算される。
【０１０５】
別の実施形態では、ＥＣ１４５を無菌の容器又はパッケージ中に用意する。別の実施形態では、ＥＣ２０を無菌の容器又はパッケージ中に用意する。
【０１０６】
一実施形態では、１若しくは複数の卵巣腫瘍又は１若しくは複数の肺腫瘍の患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、卵巣癌患者の葉酸受容体状態を決定するステップを含み、患者の葉酸受容体状態が陽性である場合に患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法が提供される。
【０１０７】
本発明において、患者で使用される場合、「ＥＣ２０」という用語は、９９ｍＴｃと錯体を形成している、ＥＣ２０、プテロイル−γ−Ｄ−グルタミル−β−Ｌ−２，３−ジアミノプロピオニル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−システイン、又はプテロイル−γ−Ｄ−グルタミル−β−Ｌ−２，３−ジアミノプロピオニル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−システインを意味し；例えば、「９９ｍＴｃ−ＥＣ２０」という用語は放射性９９ｍＴｃを含む錯体を明示的に意味している。
【０１０８】
患者の１又は複数の腫瘍がＥＣ２０に結合できる葉酸受容体を有する場合又は患者の全ての腫瘍がＥＣ２０に結合できる場合、患者の葉酸受容体の状態は陽性である。説明のための一例では、葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲートは９９ｍＴｃ−ＥＣ２０である。以下の実施例２５に記載されている中間解析の時点では、ＥＣ２０でスキャンした全卵巣癌患者の９１．３％が「陽性」（ＥＣ２０に結合する少なくとも１つの腫瘍病変／領域を有することにより示される）であり、一方、８．７％の患者が完全にＥＣ２０「陰性」であった。
【０１０９】
一実施形態では、１若しくは複数の卵巣腫瘍又は１若しくは複数の肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを評価する方法が提供される。方法は、患者の葉酸受容体の状態（例えば、ＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、又はＥＣ２０−）を視覚的に決定するステップを含み、葉酸受容体の状態は、患者の葉酸受容体陽性であると評価された腫瘍の百分率測定値に基づき、患者の葉酸受容体の状態がＥＣ２０＋＋である場合に患者の処置にＥＣ１４５が適応される。例示的な実施形態では、ＥＣ２０＋＋状態は、評価した患者の腫瘍のうち、葉酸受容体陽性であるものの百分率が約１００％であることを意味する。別の例示的な態様では、ＥＣ２０＋＋状態は、評価した患者の腫瘍のうち、葉酸受容体陽性であるものの百分率が約９０％、約８０％、又は約７０％であることを意味する。別の態様では、ＥＣ２０は半定量的イメージング剤である。
【０１１０】
この視覚的評価の実施形態（視覚的検出）では、病変を視覚的に評価して、患者の臨床的ベネフィットを示す閾値レベルの機能的に活性な葉酸受容体を患者が有するかを決定する。一態様では、各患者の分析される病変（すなわち腫瘍）は、ＲＥＣＩＳＴ（ｖ１．０）の基準に従って放射線科医により選択される。その後、核医学医師（すなわちリーダー）が、評価可能な各標的病変について視覚的にＥＣ２０の取込みを評価し、取込みを「ＥＣ２０陽性」（顕著な取込み／軽度の取込み）又は「ＥＣ２０陰性」（取込みなし）に分類する。説明のための一例では、葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲートは９９ｍＴｃ−ＥＣ２０である。「取込みなし」という用語は、標的病変を近くの組織と比べる視覚的検査により、標的病変におけるＥＣ２０の取込みと近くの組織におけるＥＣ２０の取込みが区別できないことを意味する。「軽度の取込み」という用語は、標的病変を近くの組織と比べる視覚的検査により、標的病変におけるＥＣ２０の取込みと近くの組織におけるＥＣ２０の取込みが区別可能であることを意味する。「顕著な取込み」という用語は、標的病変を近くの組織と比べる視覚的検査により、標的病変におけるＥＣ２０の取込みと近くの組織におけるＥＣ２０の取込みが明確に区別可能であることを意味する。
【０１１１】
この実施形態では、病変は評価可能であることもあり、評価不能であることもある。一実施形態では、最長径（ｌｏｎｇｅｓｔ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ：ＬＤ）が１．５ｃｍ未満の病変は「評価不能」と見なされるが、核医学のリーダーによりそれらが明確にＥＣ２０を取り込んでいると同定される場合には「陽性」と特徴付けられる。更に、特定の臓器（例えば、肝臓、脾臓、膀胱、及び腎臓）は元々ＥＣ２０の取込みが多い。これらの臓器にある標的病変は「評価不能」と見なされる。
【０１１２】
別の実施形態では、ＥＣ２０評価不能病変は、以下の基準の１つに当てはまる：１）９９ｍＴｃ−ＥＣ２０のＳＰＥＣＴによる標的病変評価において「ｎｏｔ  ｉｍａｇｅｄ」又は「ｎｏｔ  ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ」として定義される；２）ＥＣ２０の取込みが陰性であり且つ直径が１５ｍｍ未満である；又は３）肝臓、腎臓／副腎、脾臓、又は膀胱に位置する病変である。ＥＣ２０評価可能病変は以下の基準の１つに当てはまる：１）ＥＣ２０の取込みが陽性として定義される；２）ＥＣ２０の取込みが陰性として定義され且つ直径が１５ｍｍ以上である。
【０１１３】
一実施形態では、患者は、患者のＥＣ２０陽性病変、ＥＣ２０陰性病変、及び／又は評価不能病変の観察に基づいてグループに割り当てられる（すなわち状態が割り当てられる）。各患者におけるＥＣ２０陽性である病変のパーセンテージは以下のように計算される：％ＥＣ２０陽性病変＝（ＥＣ２０陽性病変の数／ＥＣ２０陰性病変の数＋評価不能病変の数）。説明のための一例では、患者は、ＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、及びＥＣ２０−の３つのグループに割り当てられ、ＥＣ２０＋＋グループに割り当てられた患者は病変の約１００％がＥＣ２０陽性であり、；ＥＣ２０＋グループに割り当てられた患者は病変の約１〜約９９％がＥＣ２０陽性であり；ＥＣ２０−グループに割り当てられた患者は病変の約０％がＥＣ２０陽性である。説明のための別の例では、患者はＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、及びＥＣ２０−の３グループに割り当てられ、ＥＣ２０＋＋グループに割り当てられた患者は病変の約９０％がＥＣ２０陽性であり、ＥＣ２０＋グループに割り当てられた患者は病変の約１１〜約８９％がＥＣ２０陽性であり；ＥＣ２０−グループに割り当てられた患者は病変の約０〜約１０％がＥＣ２０陽性である。
【０１１４】
上記実施形態において、患者がＥＣ２０＋＋グループに割り当てられた場合、ＥＣ１４５処置の臨床的ベネフィットが示される。患者の臨床的ベネフィットとしては、患者の無増悪生存期間、患者の全生存期間、ＥＣ１４５を用いた治療を４サイクル以上受けることができること、腫瘍成長の阻害、安定、患者への治療の部分奏功、患者への治療の完全奏功、病勢コントロール（すなわち、最良効果が完全奏功、部分奏功、又は安定である）、及び／又は全奏功（すなわち、最良効果が完全奏功又は部分奏功である）が含まれる。説明的な一例では、非小細胞肺癌の処置を受けている患者の臨床的ベネフィットは、処置開始から４ヶ月後に決定される。説明のための別の例では、卵巣癌の処置を受けている患者の臨床的ベネフィットは、処置開始から６ヶ月後に決定される。
【０１１５】
説明のための一例では、全生存期間は、患者がプロトコール処置を受けた最初の日（Ｃ１Ｄ１）から患者の死亡日までの日数として定義される、所定の患者の死亡までの時間である。患者が被験薬を受けている間に事象が生じたか患者が被験薬を中止した後に事象が生じたかに関わらず、全死亡事象を含めることができる。患者が死亡していない場合、研究で最後に訪れた日、最後に接触した日、又は患者の生存が分かっている最後の日のいずれかの長い方でデータを打ち切ることができる。
【０１１６】
以下の実施例７に記載するインビトロ実験は、ＥＢ１４５及びドキソルビシンがヒト癌ＫＢ腫瘍細胞の成長を相乗的に阻害することを示している。
【０１１７】
以下の実施例８に記載されている、化学療法に比較的耐性のある葉酸受容体（ＦＲ）を（過剰）発現する上皮性腫瘍であるマディソン１０９肺癌（Ｍ１０９）を有するマウスの実験において、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）（商標名はＤｏｘｉｌ（登録商標）及びＣａｅｌｙｘ（登録商標））と組み合わせたＥＣ１４５が優れた抗腫瘍効果及び治癒率を示し、体重減少が軽度であることが示された。したがって、一実施形態では、それを必要とする患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置する方法であって、治療量のドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法が提供される。別の実施形態は、患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置するための、ドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用である。別の実施形態は、患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍をドキソルビシンと組み合わせて処置するための医薬の製造における、ＥＣ１４５の使用である。
【０１１８】
別の実施形態は、それを必要とする患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍の処置における臨床的ベネフィットを達成する方法であって、治療量のドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法である。一実施形態では、臨床的ベネフィットは無増悪生存期間である。別の実施形態では、臨床的ベネフィットは全生存期間である。
【０１１９】
上記の任意の方法又は使用において、一実施形態では、ドキソルビシンはペグ化リポソームドキソルビシンの形態である。
【０１２０】
上記の任意の方法又は使用において、葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍の実施形態は卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍である。上記の任意の方法又は使用において、葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍の別の実施形態は卵巣腫瘍である。
【０１２１】
初回の白金含有全身療法に反応するが６ヶ月未満の無処置期間の後に疾患が進行してしまう卵巣癌患者は、従来、白金製剤耐性疾患を有すると見なされる。これらの患者は、初回の白金治療が奏功しなかったと見なされる。患者の別のグループは、初回の白金含有全身治療に反応し、治療後６ヶ月を過ぎてから進行が起こり得る。これらの患者は更なる白金含有治療を受けることがあるが、２回目の白金療法中、すなわち治療を受けた６ヶ月以内に、進行が起こり得る。これらの患者も白金製剤耐性と見なされ、２回目の白金治療が奏功しなかったと見なされる。
【０１２２】
白金製剤耐性疾患を有する患者は、治療選択肢の数が限定され、多くの場合、トポテカン、ゲムシタビン、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）等の薬剤を投与される。後者は、白金を用いた化学療法後に疾患が進行した又は再発した卵巣癌患者の処置に対して米国ではＤｏｘｉｌ（登録商標）、別の場所ではＣａｅｌｙｘ（登録商標）の商標で承認されている。実際、白金製剤耐性卵巣癌の再発患者の処置としてＰＬＤはしばしば使用されている。ＰＬＤは、アントラサイクリントポイソメラーゼ阻害剤であるドキソルビシンのポリエチレングリコールリポソーム封入体であり、幅広い抗腫瘍活性を有することが知られている。リポソーム封入体では、循環半減期が延長される等、薬物動態が親化合物から変化される（Ｄｏｘｉｌ（登録商標）の添付文書参照）。
【０１２３】
一実施形態では、それを必要とする患者において白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法が提供される。別の実施形態は、患者において白金製剤耐性卵巣癌を処置するためのペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用である。別の実施形態は、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための医薬を製造するためのＥＣ１４５の使用である。
【０１２４】
別の実施形態は、それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌の処置において臨床的ベネフィットを達成する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法である。一実施形態では、臨床的ベネフィットは無増悪生存期間である。別の実施形態では、臨床的ベネフィットは全生存期間である。
【０１２５】
本発明の別の実施形態では、それを必要とする患者の白金製剤感受性卵巣癌を処置する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシン又はペグ化リポソーム形態でないドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法が提供される。別の実施形態は、ペグ化リポソームドキソルビシン又はペグ化リポソーム形態でないドキソルビシンと組み合わせて患者の白金製剤感受性卵巣癌を処置するための医薬を製造するためのＥＣ１４５の使用である。
【０１２６】
別の実施形態は、治療量のＥＣ１４５及び治療量のペグ化リポソームドキソルビシンを別個の容器に含むキットである。
【０１２７】
任意の方法、使用、又はキットについての別の実施形態では、ＥＣ１４５は式
2013501224.tif 000005
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【０１２８】
本発明において、ＥＣ１４５は、溶液中又は懸濁液中にプロトン化体等のイオン化体で存在し得る。
【０１２９】
一実施形態では、それを必要とする患者において白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法が提供される。別の実施形態では、患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用が提供される。別の実施形態では、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置する医薬を製造するための、ＥＣ１４５の使用が提供される。
【０１３０】
別の実施形態では、それを必要とする患者の白金製剤耐性卵巣癌の処置において、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンを用いた処置よりも大きな臨床的ベネフィットを得る方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、臨床的ベネフィットは無増悪生存期間である。別の実施形態では、臨床的ベネフィットは全生存期間である。
【０１３１】
白金製剤耐性卵巣癌の処置におけるペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の有用性は、以下の実施例及び図中の臨床試験結果に示されている。
【０１３２】
ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせてＥＣ１４５を用いた白金製剤耐性卵巣癌の処置に関する上記の任意の方法又は使用において、一実施形態では、ＥＣ１４５の純度は少なくとも９０％である。別の実施形態では、ＥＣ１４５は水性無菌液剤の形態で用意され、その成分には、第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム（ｄｉｂａｓｉｃ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び注射用水が含まれる。
【０１３３】
別の実施形態では、処置は、腸レジメン（ｂｏｗｅｌ  ｒｅｇｉｍｅｎ）を更に含む。示唆される漸進的な腸レジメンは、Ｃａｒｎｅｙ  ＭＴ，Ｍｅｉｅｒ  ＤＥ．Ｐａｌｌｉａｔｉｖｅ  ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｅｎｄ−ｏｆ−ｌｉｆｅ  ｉｓｓｕｅｓ．Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２０００；１８：１８３を改変したものであり得る。
【０１３４】
一実施形態では、腸レジメンは、ドキュセート（１００ｍｇ、１日２回（ｂ．ｉ．ｄ））及びセンナ（１錠、１日１回（ｑ．ｄ．）又はｂ．ｉ．ｄ．）を投与することを含む。
【０１３５】
一実施形態では、腸レジメンは、ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（２錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（１〜２個、朝食後）を投与することを含む。
【０１３６】
一実施形態では、腸レジメンは、ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（３錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）を投与することを含む。
【０１３７】
一実施形態では、腸レジメンは、ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（１５ｍＬ、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）を投与することを含む。
【０１３８】
一実施形態では、腸レジメンはドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（３０ｍｌ、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）を投与することを含む。
【０１３９】
一実施形態では、腸レジメンはドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（３０ｍｌ、ｑ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）を投与することを含む。
【０１４０】
ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせてＥＣ１４５を用いる白金製剤耐性卵巣癌の処置に関する前述の任意の方法又は使用において、別の実施形態は、処置の前に患者にＥＣ２０を投与すること及び患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを更に含む。
【０１４１】
別の実施形態では、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせてＥＣ１４５を用いる白金製剤耐性卵巣癌の処置に関する前述の任意の方法又は使用に記載されている処置に患者を選択する方法であって、処置の前に患者にＥＣ２０を投与すること及び患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを含む方法が提供される。
【０１４２】
別の実施形態では、成分に第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び注射用水を含む水性無菌液剤中にＥＣ１４５を含む医薬組成物が提供される。
【０１４３】
別の実施形態では、２．０ｍＬの水性無菌液剤（ｐＨ７．４）として静脈内投与用のＥＣ１４５医薬品を含む投与単位（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ）が提供され、投与単位は１．４ｍｇ／ｍｌのＥＣ１４５を含む。一実施形態では、上記投与単位は、アンプル、密封バイアル、又は予め充填されたバイアルである。別の実施形態では、上記投与単位は密封バイアルである。
【０１４４】
以下に列挙する項目により本発明の実施形態を更に説明する。
【０１４５】
１．卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定するステップを含み、腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在する場合に腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法。
２．機能的に活性な葉酸受容体を検出するために患者にＥＣ２０を投与するステップを更に含む、第１項に記載の方法。
３．ＥＣ２０の投与前に非標識葉酸を患者に投与するステップを更に含む、第２項に記載の方法。
４．ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べて腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応される、第２項又は第３項に記載の方法。
５．臨床的ベネフィットが患者の無増悪生存期間である、第４項に記載の方法。
６．臨床的ベネフィットが腫瘍成長の阻害である、第４項に記載の方法。
７．臨床的ベネフィットが、安定、部分奏功、及び完全奏功からなる群から選択される、第４項に記載の方法。
８．バックグラウンド放射性シグナルに対するＥＣ２０により生じる放射性シグナルである腫瘍／バックグラウンド比に基づいて、機能的に活性な葉酸受容体の発現レベルが定量される、第４項に記載の方法。
９．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．２である、第８項に記載の方法。
１０．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．３である、第８項に記載の方法。
１１．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．４である、第８項に記載の方法。
１２．腫瘍が卵巣腫瘍である、第１〜１１項のいずれか一項に記載の方法。
１３．腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、第１２項に記載の方法。
１４．腫瘍が肺腫瘍である、第１〜１１項のいずれか一項に記載の方法。
１５．腫瘍が肺非小細胞癌である、第１４項に記載の方法。
１６．ＥＣ１４５若しくはＥＣ２０のいずれか又は両方が非経口製剤の形態である、第１〜１５項のいずれか一項に記載の方法。
１７．製剤が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、及びくも膜下腔内用の製剤からなる群から選択される、第１６項に記載の方法。
１８．ＥＣ１４５が組成物中に含まれ、組成物が、薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第１〜１７項のいずれか一項に記載の方法。
１９．ＥＣ２０を含む組成物が、薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第２〜１８項のいずれか一項に記載の方法。
１９ａ．薬学的に許容されるキャリアが液体キャリアである、第１８項又は第１９項に記載の方法。
１９ｂ．液体キャリアが、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、及びこれらの組合せからなる群から選択される、第１９ａ項に記載の方法。
２０．ＥＣ１４５が治療有効量投与される、第１〜１９ｂ項のいずれか一項に記載の方法。
２１．ＥＣ２０が治療有効量投与される、第２〜２０項のいずれか一項に記載の方法。
２１ａ．有効量が、体重１キログラム当たり約１ｎｇ〜約１ｍｇである、第２０項又は第２１項に記載の方法。
２１ｂ．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５００μｇである、第２１ａ項に記載の方法。
２１ｃ．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５０μｇである、第２１ｂ項に記載の方法。
２１ｄ．腫瘍が原発性腫瘍である、第１〜２１ｃ項のいずれか一項に記載の方法。
２１ｅ．腫瘍が転移した腫瘍である、第１〜２１ｃ項のいずれか一項に記載の方法。
２１ｆ．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートとしてのＥＣ２０を、式
2013501224.tif 000006
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩（式中、Ｍは放射性核種の陽イオンである）で置き換えた、第１〜２１ｅ項又は第２４〜２５ｙ項のいずれか一項に記載の方法。
２１ｇ．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートが、式
2013501224.tif 000007
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である、第２１ｆ項に記載の方法。
２１ｈ．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートが、式
2013501224.tif 000008
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である、第２１ｆ項に記載の方法。
２１ｉ．Ｍが、ガリウム、インジウム、銅、テクネチウム、及びレニウムのアイソトープからなる群から選択される、第２１ｆ項又は第２１ｈ項に記載の方法。
２１ｊ．Ｍが、テクネチウムのアイソトープである、第２１ｉ項に記載の方法。
２１ｋ．葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲートが、キレート剤及び還元剤を用いて放射標識されている、第２１ｇ項又は第２１ｈ項に記載の方法。
２１ｌ．キレート剤がα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウムである、第２１ｋ項に記載の方法。
２１ｍ．還元剤が塩化スズ（ＩＩ）二水和物である、第２１ｋ項又は第２１ｌ項に記載の方法。
２１ｎ．ペグ化リポソームドキソルビシンを患者に投与するステップを更に含む、第１〜２１ｍ項又は第２４〜２５ｙ項のいずれか一項に記載の方法。
２２．ドキソルビシンを患者に投与するステップを更に含む、第１〜２１ｎ項のいずれか一項に記載の方法。
２３．ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、第２２項に記載の方法。
２４．卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応されるかどうかを決定する方法であって、ＥＣ２０を含む組成物を患者に投与するステップを含み、患者の腫瘍が機能的に活性な葉酸受容体を有する場合に、腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応され、機能的に活性な葉酸受容体がＥＣ２０を用いて検出可能である、方法。
２５．ＥＣ２０投与前に非標識葉酸を患者に投与するステップを更に含む、第２４項に記載の方法。
２５ａ．ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べて腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応される、第２５項に記載の方法。
２５ｂ．臨床的ベネフィットが患者の無増悪生存期間である、第２５ａ項に記載の方法。２５ｃ．臨床的ベネフィットが腫瘍成長の阻害である、第２５ａ項に記載の方法。
２５ｄ．臨床的ベネフィットが、安定、部分奏功、及び完全奏功からなる群から選択される、第２５ａ項に記載の方法。
２５ｅ．バックグラウンド放射性シグナルに対するＥＣ２０により生じる放射性シグナルである腫瘍／バックグラウンド比に基づいて、機能的に活性な葉酸受容体の発現レベルが定量される、第２５ａ項に記載の方法。
２５ｆ．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．２である、第２５ｅ項に記載の方法。
２５ｇ．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．３である、第２５ｅ項に記載の方法。
２５ｈ．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．４である、第２５ｅ項に記載の方法。
２５ｉ．腫瘍が卵巣腫瘍である、第２４〜２５ｈ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｊ．腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、第２５ｉ項に記載の方法。
２５ｋ．腫瘍が肺腫瘍である、第２４〜２５ｈ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｌ．腫瘍が肺非小細胞癌である、第２４〜２５ｉ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｍ．ＥＣ１４５若しくはＥＣ２０のいずれか又は両方が非経口製剤の形態である、第２４〜２５ｌ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｎ．製剤が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、及びくも膜下腔内用の製剤からなる群から選択される、第２５ｍ項に記載の方法。
２５ｏ．ＥＣ１４５が組成物中に含まれ、組成物が、薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第２４〜２５ｎ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｐ．ＥＣ２０が薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第２４〜２５ｏ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｑ．薬学的に許容されるキャリアが液体キャリアである、第２５ｏ項又は第２５ｐ項に記載の方法。
２５ｒ．液体キャリアが、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、及びこれらの組合せからなる群から選択される、第２５ｑ項に記載の方法。
２５ｓ．ＥＣ１４５が治療有効量投与される、第２４〜２５ｒ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｔ．ＥＣ２０が治療有効量投与される、第２４〜２５ｓ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｕ．有効量が、体重１キログラム当たり約１ｎｇ〜約１ｍｇである、第２５ｓ項又は第２５ｔ項に記載の方法。
２５ｖ．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５００μｇである、第２５ｕ項に記載の方法。
２５ｗ．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５０μｇである、第２５ｖ項に記載の方法。
２５ｘ．腫瘍が、原発性腫瘍である、第２４〜２５ｗ項のいずれか一項に記載の方法。
２５ｙ．腫瘍が、転移した腫瘍である、第２４〜２５ｗ項のいずれか一項に記載の方法。
２６．ドキソルビシンを患者に投与するステップを更に含む、第２４項又は第２５項に記載の方法。
２７．ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、第２６項に記載の方法。
２８．ＥＣ１４５を用いた治療に対する患者の卵巣腫瘍又は肺腫瘍の反応を予測する方法であって、ａ）放射性シグナルを生じるＥＣ２０を患者に投与するステップ；ｂ）ＥＣ２０が腫瘍に結合した後にＥＣ２０から生じる放射性シグナルを定量するステップ；ｃ）ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルを定量するステップ；ｄ）腫瘍へのＥＣ２０の結合により生じる放射性シグナルをバックグラウンド放射性シグナルと比較するステップ；及びｅ）比較に基づいて、治療に対する腫瘍の反応を予測するステップ、を含む方法。
２９．１５ｍｇ／月のＥＣ１４５が投与される、第１〜２８項のいずれか一項に記載の方法。
３０．それを必要とする患者において白金製剤耐性卵巣癌を処置する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む、方法。
３１．患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用。
３２．ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて患者の白金製剤耐性卵巣癌を処置するための医薬を製造するためのＥＣ１４５の使用。
３３．それを必要とする患者における白金製剤耐性卵巣癌の処置において、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンを用いた処置と比較した臨床的ベネフィットを得る方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法。
３４．臨床的ベネフィットが無増悪生存期間である、第３３項に記載の方法。
３５．臨床的ベネフィットが全生存期間である、第３３項に記載の方法。
３６．ＥＣ１４５の純度が少なくとも９０％である、第３０〜３５項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
３７．ＥＣ１４５が、水性無菌液剤の形態で用意され、その成分に、第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び注射用水が含まれる、第３０〜３５項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
３８．処置が腸レジメンを更に含む、第３０〜３５項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
３９．ＥＣ１４５が約１０〜２０秒間かけてボーラス投与される、第３０〜３８項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
４０．処置の前にＥＣ２０を患者に投与すること及び患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを更に含む、第３０〜３９項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
４１．処置の前にＥＣ２０を患者に投与すること及び患者がＥＣ２０＋＋状態を有することを評価することを含む、第３０〜３９項のいずれか一項に記載されている処置に患者を選択する方法。
４２．水性無菌液剤中にＥＣ１４５を含む医薬組成物であって、その成分に第一リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸二ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び注射用水が含まれる、医薬組成物。
４３．２．０ｍＬの水性無菌液剤（ｐＨ７．４）として静脈内投与用のＥＣ１４５医薬品を含む投与単位であって、１．４ｍｇ／ｍＬのＥＣ１４５を含む、投与単位。
４４．アンプル、密封バイアル、又は予め充填されたシリンジである、第４３項に記載の投与単位。
４５．密封バイアルである、第４４項に記載の投与単位。
４６．腫瘍を有する患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するかどうかを決定する方法であって、機能的に活性な葉酸受容体を検出するために患者に有効量のＥＣ２０を投与するステップを含む方法。
４７．腫瘍が卵巣腫瘍又は肺腫瘍である、第４６項に記載の方法。
４８．腫瘍が原発性腫瘍又は転移性腫瘍である、第４６項に記載の方法。
４９．機能的に活性な葉酸受容体が視覚的に検出される、第１〜３項、第２４〜２７項、又は第４６〜４８項のいずれか一項に記載の方法。
５０．機能的に活性な葉酸受容体の視覚的検出を用いて患者の葉酸受容体状態が決定される、第４９項に記載の方法。
５１．患者の葉酸受容体状態が、ＥＣ２０＋＋、ＥＣ２０＋、及びＥＣ２０−からなる群から選択される、第５０項に記載の方法。
５２．葉酸受容体状態がＥＣ２０＋＋である、第５１項に記載の方法。
５３．ＥＣ１４５を用いた処置が適応される、第５２項に記載の方法。
５４．ＥＣ２０＋＋状態が患者の臨床的ベネフィットに関連する、第５２項に記載の方法。
５５．臨床的ベネフィットが病勢コントロール率である、第５４項に記載の方法。
５６．臨床的ベネフィットが全奏効率である、第５４項に記載の方法。
５７．臨床的ベネフィットが全生存期間である、第５４項に記載の方法。
５８．それを必要とする患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置する方法であって、治療量のドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法。
５９．患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍を処置するための、ペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５の使用。
６０．患者において葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍をペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて処置するための医薬を製造するためのＥＣ１４５の使用。
６１．それを必要とする患者の葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍の処置において臨床的ベネフィットを達成する方法であって、治療量のペグ化リポソームドキソルビシンと組み合わせて治療量のＥＣ１４５を投与することを含む方法。
６２．臨床的ベネフィットが無増悪生存期間である、第６１項に記載の方法。
６３．臨床的ベネフィットが全生存期間である、第６１項に記載の方法。
６４．ドキソルビシンがペグ化リポソームドキソルビシンの形態である、第５８〜６３項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
６５．葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍が、卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍である、第５８〜６４項のいずれか一項に記載の方法又は使用。
６６．葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、第６５項に記載の方法又は使用。
６７．葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍が、卵巣腫瘍、子宮内膜腫瘍、又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍である、第６４項に記載の方法又は使用。
６８．葉酸受容体を発現する上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、第６７項に記載の方法又は使用。
８０Ａ．ＥＣ１４５又はその薬学的に許容される塩が卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者の処置に適応されるかどうかを決定する方法であって、ＥＣ２０を含む組成物を患者に投与するステップを含み、ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性活性と比較した腫瘍結合後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応される、方法。
８０Ｂ．ＥＣ１４５を用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者を選択する方法であって、患者の腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が存在するか決定するステップを含み、腫瘍上に機能的に活性な葉酸受容体が検出された場合に、ＥＣ１４５を用いた治療に患者が選択される、方法。
８０Ｃ．ＥＣ１４５を用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者を選択する方法であって、ＥＣ２０を含む組成物を患者に投与するステップを含み、患者の腫瘍が機能的に活性な葉酸受容体を有する場合にＥＣ１４５を用いた治療に患者が選択され、機能的に活性な葉酸受容体がＥＣ２０を用いて検出可能である、方法。
８０Ｄ．ＥＣ１４５を用いた治療に卵巣腫瘍又は肺腫瘍を有する患者を選択する方法であって、患者にＥＣ２０を投与するステップを含み、ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比べた腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、患者が治療に選択される、方法。
８１．葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲート投与前に非標識葉酸を患者に投与するステップを更に含む、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、又は第８０Ｄ項に記載の方法。
８２．ＥＣ２０により生じるバックグラウンド放射性シグナルと比較した腫瘍に結合した後のＥＣ２０により生じる放射性シグナルが患者の臨床的ベネフィットを示す場合に、腫瘍を有する患者の処置にＥＣ１４５が適応される、第８１項に記載の方法。
８３．臨床的ベネフィットが患者の無増悪生存期間である、第８２項に記載の方法。
８４．臨床的ベネフィットが腫瘍成長の阻害である、第８２項に記載の方法。
８５．臨床的ベネフィットが、安定、部分奏功、及び完全奏功からなる群から選択される、第８２項に記載の方法。
８６．バックグラウンド放射性シグナルに対するＥＣ２０により生じる放射性シグナルである腫瘍／バックグラウンド比に基づいて機能的に活性な葉酸受容体の発現レベルが定量される、第８２項に記載の方法。
８７．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．２である、第８６項に記載の方法。
８８．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．３である、第８６項に記載の方法。
８９．腫瘍／バックグラウンド比が少なくとも約１．４である、第８６項に記載の方法。９０．腫瘍が卵巣腫瘍である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜８９項のいずれか一項に記載の方法。
９１．腫瘍が白金製剤耐性卵巣腫瘍である、第９０項に記載の方法。
９２．腫瘍が肺腫瘍である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜８９項のいずれか一項に記載の方法。
９３．腫瘍が肺非小細胞癌である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜８９項のいずれか一項に記載の方法。
９４．ＥＣ１４５若しくはＥＣ２０のいずれか又は両方が非経口製剤の形態である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜９３項のいずれか一項に記載の方法。
９５．製剤が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、及びくも膜下腔内用の製剤からなる群から選択される、第９４項に記載の方法。
９６．ＥＣ１４５が組成物中に含まれ、組成物が薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜９５項のいずれか一項に記載の方法。
９７．ＥＣ２０を含む組成物が、薬学的に許容されるキャリアを更に含む、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜９６項のいずれか一項に記載の方法。
９８．薬学的に許容されるキャリアが液体キャリアである、第９６項又は第９７項に記載の方法。
９９．液体キャリアが、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、及びこれらの組合せからなる群から選択される、第９８項に記載の方法。
１００．ＥＣ１４５が治療有効量投与される、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜第９９項のいずれか一項に記載の方法。
１０１．ＥＣ２０が治療有効量投与される、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１００項のいずれか一項に記載の方法。
１０２．有効量が、体重１キログラム当たり約１ｎｇ〜約１ｍｇである、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１０１項のいずれか一項に記載の方法。
１０３．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５００μｇである、第１０２項に記載の方法。
１０４．有効量が、体重１キログラム当たり約１００ｎｇ〜約５０μｇである、第１０２項に記載の方法。
１０５．腫瘍が、原発性腫瘍である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１０４項のいずれか一項に記載の方法。
１０６．腫瘍が、転移した腫瘍である、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１０４項のいずれか一項に記載の方法。
１１０．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートとしてのＥＣ２０を、式
2013501224.tif 000009
（式中、Ｍは放射性核種の陽イオンである）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩で置き換えられた、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１０９項のいずれか一項に記載の方法。
１１１．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートが、式
2013501224.tif 000010
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である、第１１０項に記載の方法。
１１２．葉酸−放射性イメージングコンジュゲートが、式
2013501224.tif 000011
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である、第１１０項に記載の方法。
１１３．Ｍが、ガリウム、インジウム、銅、テクネチウム、及びレニウムのアイソトープからなる群から選択される、第１１０項又は第１１２項に記載の方法。
１１４．Ｍがテクネチウムのアイソトープである、第１１３項に記載の方法。
１１５．葉酸−放射性イメージング剤コンジュゲートが、キレート剤及び還元剤を用いて放射標識されている、第１１１項又は第１１２項に記載の方法。
１１６．キレート剤がα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウムである、第１１５項に記載の方法。
１１７．還元剤が塩化スズ（ＩＩ）二水和物である、第１１５項又は第１１６項に記載の方法。
１１８．ペグ化リポソームドキソルビシンを患者に投与するステップを更に含む、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１１７項のいずれか一項に記載の方法。
１１９．１５ｍｇ／月の葉酸−ビンカコンジュゲートが投与される、第８０Ａ項、第８０Ｂ項、第８０Ｃ項、第８０Ｄ〜１１８項のいずれか一項に記載の方法。
【０１４６】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法は以下の実施例を含む。本明細書に記載の本発明の種々の実施形態の更なる構成を実施例を用いて更に説明する。しかし、実施例は説明のためのものであり、本明細書に記載されている他の実施形態を限定するものではないと解釈されるべきである。更に、実施例のその他の種々のバリエーションも本明細書に記載されている本発明の種々の実施形態に含まれると考えられる。
【０１４７】
［実施例１］
材料
Ｎ１０−トリフルオロアセチルプテロイン酸はスイス、シャフハウゼンのエプロバＡＧ社（Ｅｐｒｏｖａ  ＡＧ）から購入した。ペプチド合成試薬はノバビオケム社（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）及びバッケム社（Ｂａｃｈｅｍ）から購入した。９９ｍＴｃ過テクネチウム酸ナトリウムはシンコール社（Ｓｙｎｃｏｒ）から供給された。［ＲｅＯ２（ｅｎ）２］Ｃ１はＲｏｕｓｃｈｉａｓ（Ｒｏｕｓｃｈｉａｓ，Ｇ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，７４：５３１（１９７４））に従って調製した。セルロースプレート及びＤＥＡＥイオン交換プレートはＪ．Ｔ．ベーカー社（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）から購入した。ＤＯＸＩＬ（登録商標）は、ニュージャージー州ラリタンのオーソ・バイオテック・プロダクツ・エルピー社（Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＬＰ）から入手した。
【０１４８】
［実施例２］
ＥＣ２０の調製
Ｆ−ｍｏｃ戦略を用いた高分子担持逐次的アプローチによりＥＣ２０を調製した（Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル；Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニル；Ｄａｐ＝ジアミノプロピオン酸；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン）。ＥＣ２０は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを充填した酸感受性のＷａｎｇ樹脂上で合成した。ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）を活性化試薬として添加して、低当量のアミノ酸を用いた効率的なカップリングが確実になされるようにした。各カップリングステップの後に標準的な条件（２０％ピペリジンを含むＤＭＦ）下でＦｍｏｃ保護基を除去した。カップリング反応：ｉ．）Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ；ｉｉ）Ｂｏｃ−Ｄａｐ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ、ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ；ｉｉｉ）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ；ｉｖ）Ｎ１０−ＴＦＡ−Ｐｔｅ−ＯＨ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＳＯ。最後の構築ステップの後、２．５％のエタンジチオール、２．５％のトリイソプロピルシラン、及び２．５％の脱イオン水を含む９２．５％のトリフルオロ酢酸を用いた処理により、ペプチドを高分子支持体から切り離した。この反応により、ｔ−Ｂｕ、Ｂｏｃ、及びトリチル保護基も同時に除去した。最後に、水酸化アンモニウム水溶液中でトリフルオロアセチル部分を除去してＥＣ２０を得た。
【０１４９】
以下を用いたＨＰＣＬでＥＣ２０生成物を精製した：Ｘｔｅｒｒａ  ＲＰ１８  ３０×３００ｍｍ、７μｍカラム（ウォーターズ社（Ｗａｔｅｒｓ）製）；移動相：３２ｍＭ  ＨＣｌ（Ａ）、ＭｅＯＨ（Ｂ）；グラジエント条件：９９％Ａ及び１％Ｂで開始して８９％Ａ及び１１％Ｂへと流量２０ｍＬ／分で３７分かけて到達。これらの条件下で、ＥＣ２０モノマーは典型的には１４．３８分に溶出し、ＥＣ２０二硫化物二量体（微量混入物）は１６．８３分に溶出する。ＥＣ２０をエレクトロスプレー質量分析により分析した。主な陽性イオンピーク（ｍ／ｚ、相対強度）：７４６．１、１００；７４７．１、４４；５５６．８、３２；５７０．８、１６。
【０１５０】
［実施例３］
非放射性試薬バイアル及び９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の調製
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０放射性原薬の調製にはＥＣ２０キットを用いた。各キットは、０．１ｍｇのＥＣ２０と、８０ｍｇのα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウムと、８０ｍｇの塩化スズ（ＩＩ）二水和物と、凍結乾燥前にｐＨを６．８±０．２に調整するのに十分な水酸化ナトリウム又は塩酸との、無菌で非発熱性の凍結乾燥混合物を含む。凍結乾燥粉末をアルゴン雰囲気下で５ｍＬのバイアル中に密封した。次いで、キットを−２０℃で凍結して、使用時まで又は有効期限（現在の有効期間は２年超）まで保存した。塩化スズ（ＩＩ）成分は、添加する９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸を還元するために存在し、α−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウム成分は、最後にキレート化してＥＣ２０化合物にする前に、還元された９９ｍＴｃを安定化するために存在する。
【０１５１】
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０は以下のように調製した（すなわち、ＥＣ２０への９９ｍＴｃのキレート化）。最初に、一部を浸漬した鉛のバイアルシールドを含む沸騰水浴を用意した。ＥＣ２０バイアルの上部を７０％エタノールで消毒して表面を衛生化し、バイアルを好適な遮蔽容器中に置いた。２７ゲージの針を備えた遮蔽されたシリンジを用いて、１ｍＬの無菌過テクネチウム酸９９ｍＴｃナトリウム（１５〜２０ｍＣｉ）の０．９％塩化ナトリウム注射液を、遮蔽されたバイアル中に注入した。バイアルからシリンジを外す前に、バイアルの内側の圧力を標準化するために、添加された過テクネチウム酸の体積と等しい体積の気体をバイアルから取った。バイアルを穏やかに３０秒間回し、凍結乾燥粉末を確実に完全に溶解させた。次いで、沸騰水浴中に立てた鉛シールド中にバイアルを置いた。溶液を約１８分間加熱した後、室温で最低１５分間冷却した。この溶液は、光から保護して室温（１５〜２５℃）で保存することができるが、調製から６時間以内に使用すべきである。
【０１５２】
［実施例４］
ＥＣ０１１９の調製
2013501224.tif 000012
Ｗａｎｇ樹脂に結合した４−メトキシトリチル（ＭＴＴ）で保護されたＣｙｓ−ＮＨ２を以下の順序で反応させた：１）ａ．Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％のピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％のピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％のピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％のピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％のピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０−ＴＦＡ−プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ。ＭＴＴ、ｔＢｕ、及びＰｂｆ保護基は、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）を用いて除去し、ＴＦＡ保護基はｐＨ９．３のＮＨ４ＯＨ水溶液を用いて除去した。選択された１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）  ８．６８（ｓ、ＩＨ、ＦＡ  Ｈ−７）、７．５７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、ＦＡ  Ｈ−１２＆１６）、６．６７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝９Ｈｚ、ＦＡ  Ｈ−１３＆１５）、４．４０〜４．７５（ｍ、５Ｈ）、４．３５（ｍ、２Ｈ）、４．１６（ｍ、ＩＨ）、３．０２（ｍ、２Ｈ）、２．５５〜２．９５（ｍ、８Ｈ）、２．４２（ｍ、２Ｈ）、２．００〜２．３０（ｍ、２Ｈ）、１．５５〜１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ、ｍ＋Ｈ＋）１０４６。
【０１５３】
［実施例５］
2013501224.tif 000013
２−［（ベンゾトリアゾール−１−イル−（オキシカルボニルオキシ）−エチルジスルファニル］−ピリジンＨＣｌ（６０１ｍｇ）及び３７８μＬのＤＩＰＥＡをデスアセチルビンブラスチンヒドラジド（６６８ｍｇ）（Ｂａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２１：８８−９６（１９７８）に従って調製；上記文献の開示全体を参照により本明細書に援用する。更に、本明細書中に引用する刊行物それぞれの開示全体を参照により本明細書に援用する。）のＤＣＭ溶液５ｍＬに０℃で順次添加した。反応液を室温にし、３時間撹拌した。ＴＬＣ（１５％  ＭｅＯＨを含むＤＣＭ）は完全な変換を示した。混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１：９）により精製した。合わせた画分を蒸発させ、ＤＣＭに再度溶解させ、１０％Ｎａ２ＣＯ３、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて５５０ｍｇ（８０％）を得た：ＨＰＬＣ−ＲＴ  １２．６５１分、純度９１％、１Ｈ  ＨＭＲスペクトルは帰属された構造と一致。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：９８４．３、９８３．３、９８２．４、４９２．４、４９１．９、１４１．８。
【０１５４】
［実施例６］
ＥＣ１４５の調製
2013501224.tif 000014
ペプチド断片Ｐｔｅ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＯＨ（実施例４）を含むＴＨＦを、チオスルホナート又はピリジルジチオで活性化されたビンブラスチン（実施例５）の黄色の液体で処理し、アルゴン下で０．１ＭのＮａＨＣＯ３（ｐＨ＞６．５）に溶解させた。凍結乾燥及びＨＰＬＣによる収率は７０％であった。選択された１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ  ８．６７（ｓ、ＩＨ、ＦＡ  Ｈ−７）、７．５０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−１１’）、７．３０−７．４０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−１４’）、７．３５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、ＦＡ  Ｈ−１２＆１６）、７．２５（ｍ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−１３’）、７．０５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−１２’）、６．５１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、ＦＡ  Ｈ−１３＆１５）、６．４（ｓ、２Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−１４＆１７）、５．７（ｍ、１Ｈ、ＶＬＢ  オレフィン）、５．６５（ｍ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−７）、５．５（ｄ、１Ｈ、ＶＬＢ  オレフィン）、５．５（ｍ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−６）、４．１５（ｍ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−８’）、３．８２（ｓ、３Ｈ、ＶＬＢ  Ｃ１８’−ＣＯ２ＣＨ３）、３．６９（ｓ、３Ｈ、ＶＬＢ  Ｃ１６−ＯＣＨ３）、２．８（ｓ、３Ｈ、ＶＬＢ  Ｎ−ＣＨ３）、１．３５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、ＶＬＢ  Ｈ−３’）、１．１５（ｍ、ＩＨ、ＶＬＢ  Ｈ−２’）、０．９（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ、ＶＬＢ  Ｈ−２１’）、０．５５（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、ＶＬＢ  Ｈ−２１）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ、ｍ＋Ｈ＋）１９１８。
【０１５５】
［実施例７］
ＥＣ１４５及びドキソルビシンを用いたインビトロでの薬物−薬物併用アッセイ
１日目に、ＫＢ腫瘍細胞をトリプシン処理し、葉酸欠乏ＲＰＭＩ（ＦＤＲＰＭＩ）＋５％ウシ胎児血清に懸濁し、血球計を用いて計測した。この細胞懸濁液を終濃度０．５×１０５細胞／ｍＬに希釈し、希釈した懸濁液を６個の２４ウェルプレートに１ウェル当たり１ｍＬ添加した。次いで、ウェルを１サンプルにつき４複製分（ｆｏｕｒ  ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）、試験グループに分け、３７℃、５％ＣＯ２で一晩プレートに付着させた。
【０１５６】
２日目に、ＥＣ１４５及びドキソルビシンの濃縮液をそれぞれ０．７３１ｍＭ及び２．９ｍＭの無菌ストック溶液から２×の終濃度で調製し、その後、対応するウェル中でＦＤＲＰＭＩ又は交互な薬物のいずれかと最終体積５００μＬにて混合した。各ウェルのＥＣ１４５の終濃度は０ｎＭ、２ｎＭ、４ｎＭ、８ｎＭ、１６ｎＭ、又は３２ｎＭであった。各ウェルのドキソルビシンの終濃度は０ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、又は２００ｎＭであった。ＥＣ１４５濃度及びドキソルビシン濃度の３６通りの組合せのそれぞれについて４複製分試験した。ＥＣ１４５を含むサンプルを２時間インキュベートし、ＦＤＲＰＭＩ又は適切な濃度のドキソルビシンに交換し、その後、合計７２時間インキュベートした。ドキソルビシンのみのサンプルは中断することなく７２時間インキュベートした。その後、各ウェルの使用済インキュベーション培地を、１μＣｉ／ｍＬの３Ｈ−チミジンを含むＦＤＲＰＭＩ５００μＬに交換し、細胞を更に４時間インキュベートした。インキュベーション後、標識溶液を吸引し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。次いで、５００μＬの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を各ウェルに添加し、プレートを次の処理まで４℃で保存した。
【０１５７】
ＴＣＡを吸引し、５００μＬの０．２５Ｍ  ＮａＯＨを添加することで細胞を処理した。次いで、各ウェルから４５０μＬのサンプルを個々のラベルされた液体シンチレーションバイアルに移し、３ｍＬのＥｃｏｌｉｔｅカクテルと共にボルテックスし、その後、液体シンチレーションカウンターで計測した。次いで、ＣＰＭの結果を表にし、対照に対するパーセントを計算した。
【０１５８】
アイソボログラム−薬物相乗作用法
薬物相乗作用をアイソボログラム法により決定した。この方法では、対照値パーセントからＩＣ６０値が予測される。これらのデータは、各単独薬剤のＩＣ６０を１とし、全組合せのＩＣ６０をそれに対する割合として、ｎＭ値又は当量でグラフ化することができる。線上にある組合せのデータポイントは相加的な薬物−薬物相互作用を表し、線の下又は上のデータポイントはそれぞれ相乗作用又は拮抗作用を表す。図１５のグラフに示されるように、ＥＣ１４５／ドキソルビシンの組合せのＩＣ６０値は線よりはるかに下にあるので、ＥＣ１４５及びドキソルビシンがＫＢ細胞中で強力な相乗作用の関係にあることが示唆される。
【０１５９】
［実施例８］
葉酸欠乏食に維持した皮下Ｍ１０９腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおけるＥＣ１４５及びＤＯＸＩＬ（登録商標）（ＰＤＬ）の単独又は併用の研究
ハーラン社（Ｈａｒｌａｎ；インディアナ州インディアナポリス）から購入した雌のＢａｌｂ／ｃマウスを、ｓａｎｉ−ｃｈｉｐ床及びワイヤートップを備えた標準的なポリカーボナート製の靴箱ケージに収容した（５頭／ケージ）。ケージは２週間毎にきれいなケージと交換した。動物は、実験期間中、環境制御された部屋に収容した。室温設定は７０〜７４°Ｆであった。部屋の相対湿度は３０〜７０％であった。光周期が１２時間明期／１２時間暗期となるように光源のタイマーを設定した。健康について動物の観察を行った。
【０１６０】
動物は最初に、ハーラン・テックラッド社（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ；ウィスコンシン州マディソン）製のＴｅｓｔ  Ｄｉｅｔ＃００４３４を与えられた。投薬の１週間後から、ＰＭＩラボダイエット社（ＰＭＩ  Ｌａｂｄｉｅｔ；インディアナ州リッチモンド）製のＳｔａｎｄａｒｄ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ＰＭＩ  ５０００に変更した。動物用飼料及び飲用水は実験期間中を通して常に（ａｄ  ｌｉｂｉｔｕｍ）供給された。
【０１６１】
腫瘍移植
Ｍ１０９（マディソン−１０９肺癌細胞）腫瘍細胞を、５％ＦＢＳを添加した葉酸欠乏ＲＰＭＩ  １６４０中にて、３７℃、５％ＣＯ２、加湿環境で成長させた。葉酸欠乏食を開始した９日後にＭ１０９腫瘍細胞（動物１頭当たり１×１０６細胞）を皮下接種した。腫瘍が７０〜１００ｍｍ３に達した後、マウスに投薬した。
【０１６２】
投薬薬物溶液の調製及び投薬
各化合物を適切な量計量し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に再構成／溶解し、０．２２μｍのＰＶＤＦシリンジフィルターを用いて薬物溶液を滅菌ろ過し、投薬用に１日分ずつ小分けにして−２０℃で凍結することにより、投薬溶液を調製した。投薬は、体積２００μＬのｉ．ｖ．投与により行った。
【０１６３】
評価
週に３回、腫瘍サイズをモニタリングし、体重を測定した。肉眼で分かる動物の形態及び挙動に注意を払った。マウスの体重が２０％超減少した場合又は腫瘍が１５００ｍｍ３のサイズに達した時には安楽死を行った。マウスが短期間に多くの体重を失った場合又はマウスが瀕死の状態に近づいた時にも研究者の裁量で安楽死を行った。
【０１６４】
結果及び結論
以下のグループについて、それぞれ、腫瘍に対する効果及び反応（ＰＲ＝部分奏功、ＣＲ＝完全奏功、治癒）を図１６に示し、体重変化に対する効果を図１７に示す：（ａ）Ｍ１０９対照；（ｂ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ；（ｃ）ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｄ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、７ｍｇ／ｋｇ；（ｅ）ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ；及び（ｆ）ＥＣ１４５、２μｍｏｌ／ｋｇ＋ＤＯＸＩＬ、４ｍｇ／ｋｇ。各グループについての結果を以下に更に記載する：
（ｂ）ＥＣ０１４５（２μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２）投与は、良好な抗腫瘍効果を示し、３〜５マウスで目に見える腫瘍が治癒された。このグループのマウスは、投薬期間中に体重減少がなかった。
（ｃ）Ｄｏｘｉｌ（７ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄ×２）投与は顕著な抗腫瘍効果を示し、５頭中４頭が治癒された。このグループのマウスは、投薬期間中にわずかに減少が減少した（２〜８％）。
（ｄ）ＥＣ０１４５（２μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２）とＤｏｘｉｌ（７ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄ×２）の併用投与でも、良好な抗腫瘍効果が示され、５頭中３頭が治癒された。このグループのマウスは、投薬期間中にわずかに体重が減少した（１〜６％）。５回目の投薬期間中に動物１頭が原因不明で死亡した。この動物はその時点で部分奏功を示していた。
（ｅ）Ｄｏｘｉｌ（４ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄ×３）投与は顕著な抗腫瘍効果を示し、１／５が完全奏功、３／５が治癒であった。このグループのマウス３頭も、投薬完了後、長期にわたり体重が減少した（２〜１０％）が、最終的には体重が戻った。
（ｆ）ＥＣ０１４５（２μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２）とＤｏｘｉｌ（４ｍｇ／ｋｇ、ｑ７ｄ×３）の併用投与は優れた抗腫瘍効果を示し、５頭中５頭が治癒された。このグループのマウスは、投薬期間の最中及び後に０〜５％の軽度の体重減少を示した。
【０１６５】
［実施例１４］
進行した卵巣癌及び子宮内膜癌の患者におけるＥＣ１４５の研究
この研究（ＥＣ−ＦＶ−０２）のプロトコールは、参照により本明細書に援用するｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００５０７７４１？ｔｅｒｍ＝Ｅｎｄｏｃｙｔｅ＆ｒａｎｋ＝３に要約されている。
【０１６６】
［実施例１５］
進行性肺腺癌患者におけるＥＣ１４５の研究
この研究（ＥＣ−ＦＶ−０３）のプロトコールは、参照により本明細書に援用するｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００５１１４８５？ｔｅｒｍ＝Ｅｎｄｏｃｙｔｅ＆ｒａｎｋ＝７に要約されている。
【０１６７】
［実施例１６］
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を用いた腫瘍イメージングプロトコール
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の投薬及びイメージングは、ＥＣ１４５処置開始の２１日前から７日前までに行った。
【０１６８】
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の投与
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０イメージング手順の前に、患者に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、その後１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０（１〜２ｍＬ）を静注した。可能な場合には、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０投与の１週間以内に葉酸の補充を中止した。
【０１６９】
葉酸は、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を投与する約１〜３分前に静注投与した。葉酸は、上肢静脈（例えば前肘窩）中の流動が自由なＩＶ用留置カテーテル又は適切な留置ＩＶアクセスを介して、ＩＶプッシュにより徐々に投与し、次いで、５〜１０ｍＬの通常生理食塩水を投与した。
【０１７０】
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０は、流動が自由なＩＶ留置カテーテルを介して約１〜２ｍＬの体積で投与した。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０は葉酸と同じラインで投与してよい。９９ｍＴｃ−ＥＣ２０は約３０秒間かけて投与され、その後、通常生理食塩水を５〜１０ｍＬ注射した。注射された放射線量は２０〜２５ｍＣｉである。
【０１７１】
画像取得
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を投与した約１〜２時間後に、中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を得た。平面画像を取得した後すぐに、患者の従来の画像により特定された腫瘍を含むことが分かっている解剖学的領域のＳＰＥＣＴ（又はＳＰＥＣＴ／ＣＴ）画像を取得した。腫瘍を含む解剖学的領域が以前に特定されていない場合、胸部／腹部及び腹部／骨盤のＳＰＥＣＴ（又はＳＰＥＣＴ／ＣＴ）画像を取得した。
【０１７２】
平面イメージング
中大腿部から頭部にかけての前側及び後側の平面画像を以下の取得パラメータで取得した：１．）イメージング領域：中大腿部から頭部、２．）カメラ：２検出器又は３検出器、広視野（ＦＯＶ）、ＬＥＨＲ平行孔コリメータ、３．）マトリックス：最低２５６×１０２４、４．）エネルギーウィンドウ：１５〜２０％、５．）エネルギー（ｋｅＶ）：１４０、及び６．）スキャン速度：８〜１０ｃｍ／分。
【０１７３】
代表的な平面画像を図１、２、３、４、及び５に示す。画像に足した矢印が腫瘍の位置を示す。
【０１７４】
ＳＰＥＣＴイメージング
体の好適なイメージングのために、患者が耐えられる場合、腕を頭の上に上げさせた。頭部及び頸部の最適なイメージングのためには、腕を側部に沿わせた。平面画像を取得した直後に、患者の従来の画像による特定で標的病変を含むことが分かっている領域の画像を得た。
【０１７５】
最初の画像取得のＦＯＶ中に全標的病変がない場合、更にイメージングを行い、全標的病変の画像を得た。ただのＳＰＥＣＴの代わりに、以下に記載する減弱補正パラメータでＳＰＥＣＴ／ＣＴを用いてもよい。データは、反復再構成（最低６回の反復が推奨される）を用いて最も高いピクセル解像度で再構成した。ＳＰＥＣＴを直交３平面、すなわち横断面、矢状断面、及び冠状断面に再構成した。
【０１７６】
標的病変を含むことが分かっている領域の画像を以下の必要なパラメータで取得した：１．）カメラ：２検出器又は３検出器、広ＦＯＶ、ＬＥＨＲ平行孔コリメータ；２．）全プロジェクション数：１２０〜１２８；３．）マトリックス：１２８×１２８；４．）軌道の種類：円軌道又は楕円軌道５．）軌道：２検出器カメラでは１台につき１８０°、３検出器カメラでは１台につき１２０°；６．）各停止時間：停止１回当たり４０秒；７．）停止総数：２検出器カメラの場合、１台当たり６０〜６４プロジェクション、３検出器カメラの場合、１台当たり４０〜４３プロジェクション；８．）エネルギーウィンドウ：１５〜２０％；９．）エネルギー（ｋｅＶ）：１４０。
【０１７７】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ設備を用いたＣＴ画像の取得はＳｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ＳＰＥＣＴ／ＣＴ  Ｉｍａｇｉｎｇに従った。
【０１７８】
利用可能な専用の診断用ＣＴ設備に適う又はそれを超える画像品質及び解像度の診断画像が複合ＳＰＥＣＴ／ＣＴシステムのＣＴ構成要素から得られなかった場合、減弱補正／解剖学的位置決定（ＡＣ／ＡＬ）のみを目的としてＣＴ画像を取得した。
【０１７９】
ＣＴ画像の取得は、正常（周期性）呼吸中に、最低２５６×２５６のマトリックス、最大７．５ｍｍのスライス厚、螺旋スキャン、１４０ｋＶｐ、及び８０ｍＡで行った。ＡＣ／ＡＬ  ＣＴサイノグラムを全ＦＯＶでフィルター逆投影により再構成した。フィルター逆投影は、螺旋ＣＴデータの適切な部分を軸面及び傾斜面に集約した後の２次元のものであるか、全次元のものであった。減弱補正には標準的なカーネルを用いた。ＣＴを直交３平面、すなわち横断面、矢状断面、及び冠状断面に再編成してもよい（図６及び７参照）。
【０１８０】
［実施例１７］
腫瘍／バックグラウンド測定
ＥＣ２０の３段階評価
平面画像及びＳＰＥＣＴ／ＣＴ又はＳＰＥＣＴ画像の両方について、核医学医師が、各標的病変について取込み強度をコード化した（例えばＴ１、Ｔ２、Ｔ３）。ＳＰＥＣＴ領域に病変がない場合、画像化なしとコード化した。
１．取込みなし：バックグラウンドと比較して取込みなし。
２．軽度の取込み：バックグラウンドと比較してわずかに高い取込み。
３．顕著な取込み：バックグラウンドと比較して顕著に多い取込み。
【０１８１】
放射線学的異常に相当する、臓器を含む取込みを示す全ての領域について、核医学医師が位置を記述し、同じ３段階評価を用いて取込みの強度をコード化した。
【０１８２】
腫瘍／バックグラウンド比
腫瘍／バックグラウンド（Ｔ／Ｂ）比を用いてＳＰＥＣＴ画像を半定量的に解析した。各標的病変（例えばＴ１、Ｔ２、Ｔ３）について、放射線学的異常に相当する病変内で活性が最大の領域から関心領域（ＲＯＩ）を抜き出した。この領域を用いて腫瘍の測定を行った。各標的病変について、見た目の正常な反対側の領域中で利用可能な対応する鏡像的位置のＲＯＩを抜き出した。この領域が取込みを示す場合、病変に隣接する正常組織のＲＯＩを抜き出した。この領域をバックグラウンド測定に用いた。
【０１８３】
放射線学的異常に相当しない、臓器を含む取込みを示す全領域について、位置を記述し、取込み領域内で活性が最大の領域からＲＯＩを抜き出した。見た目の正常な反対側の解剖学的部位で利用可能な対応する鏡像的位置のＲＯＩを抜き出した。反対側の部位が取込みを示す領域である場合、病変に隣接する正常組織のＲＯＩを抜き出した。
【０１８４】
各病変の腫瘍／正常組織バックグラウンド（Ｔ／Ｂ）比を各ＲＯＩ対に由来する測定値から計算した。
【０１８５】
［実施例１８］
患者の選択及びＥＣ１４５を用いた治療レジメン（肺腫瘍）
患者選択基準
患者は、進行した進行性肺腺癌を有し、２種以上の細胞毒性薬剤を含む化学療法レジメンを以前に受けたことがあり、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）の尺度で一般状態が０〜２であり、前回の治療から少なくとも４週間経っており、関連する急性毒性から（ベースラインまで）回復した患者である。患者は更に、測定可能な疾患及び「ＥＣ２０陽性」（すなわち、腫瘍／バックグラウンド比≧１．２）として同定された２以上の腫瘍領域の放射線学的証拠を有する。
【０１８６】
治療レジメン
各４週間サイクルの第１週〜第３週中の月曜日（Ｍ）、火曜日（Ｔ）水曜日（Ｗ）、木曜日（Ｔｈ）、及び金曜日（Ｆ）にＥＣ１４５（１ｍｇ／注射）をボーラス注射で静脈内投与した。第４週には処置を行わなかった（患者への総投与量は１５ｍｇ／月）。このサイクルを導入期に２回繰り返した。導入期の後は維持期であり、維持期は、４週間サイクルの第１週及び第３週の月曜日、水曜日、金曜日に２．５ｍｇ／注射の静脈内ボーラス投与からなる。第２週及び第４週には処置を行わなかった（患者への総投与量は１５ｍｇ／月）。投薬スケジュールのグラフによる記述は図８を参照されたい。
【０１８７】
［実施例１９］
９９ｍＴｃ−ＥＣ２０モニタリングとＥＣ１４５を併せて用いた患者処置
実施例１６に記載の方法を用いてＥＣ１４５の投与開始前に患者をスクリーニングした。実施例１８に記載のレジメンに従って患者にＥＣ１４５を投与した。
【０１８８】
2013501224.tif 000015
【０１８９】
表１は、ＥＣ１４５で処置された患者の２０％超で臨床的ベネフィット（治療を４サイクル以上受けられることとして定義される）が得られたこと、すなわち本研究の主要エンドポイントが達成されたことを示している。
・ＲＥＣＩＳＴ、完全奏功（ＣＲ）：全標的病変の消失。
・ＲＥＣＩＳＴ、部分奏功（ＰＲ）：標的病変の最長径（ＬＤ）の和がベースラインのＬＤ和を基準として少なくとも３０％減少。
・ＲＥＣＩＳＴ、安定（ＳＤ）：処置開始からのＬＤの最小和を基準として、ＰＲと認めるのに十分な縮小がなく且つＰＤと認めるのに十分な増加もない。
・ＲＥＣＩＳＴ、進行（ＰＤ）：処置開始から記録されたＬＤの最小和を基準として標的病変のＬＤの和が少なくとも２０％増加するか、１又は複数の新規な病変が出現。
【０１９０】
2013501224.tif 000016
【０１９１】
主要エンドポイントの基準は、奏効率≧２０％である。
【０１９２】
第３選択治療又は第４選択治療としてＥＣ１４５を投与された患者のサブセット解析は、４０％の臨床的ベネフィットを示している。
【０１９３】
全ての腫瘍でＥＣ２０が取り込まれた（ＦＲの発現を示す）患者では、臨床的ベネフィットの割合は４５％に上昇する。
【０１９４】
2013501224.tif 000017
【０１９５】
主要エンドポイントの基準は、奏効率≧２０％である。
【０１９６】
［実施例２０］
ＥＣ１４５及びＤＯＸＩＬ（登録商標）（ＰＤＬ）を用いた治療レジメン（卵巣癌）
治療レジメン（ＥＣ１４５及びＰＬＤ）
ＥＣ１４５及びペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）を対象に投与した日、ＰＬＤを投与する少なくとも４５分前にＥＣ１４５を投与した。ＥＣ１４５を投与した後、静注ハブ（ＩＶ  ｈｕｂ）をフラッシュし、少なくとも４５分経過した時に、ＥＣ１４５の投与に用いたのと同じ静注ハブを用いてＰＬＤを投与した。
【０１９７】
ＥＣ１４５
静脈ライン（末梢カテーテル又は留置カテーテルが許容される）を介してＥＣ１４５を約１０〜２０秒間かけてボーラス注射により投与した。ＥＣ１４５は、投与中、他の如何なる薬物溶液とも混合せず、ＥＣ１４５を投与する前及び直後に静注ハブを約１０ｃｃの無菌通常生理食塩水（又は施設のケアの標準に従うフラッシュ量）でフラッシュした。ＥＣ１４５（２．５ｍｇ）は各４週間サイクルの第１週及び第３週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与した。第２週及び第４週には如何なる治療も行わなかった。サイクル１に続く各サイクルのスケジュールは最初のサイクルと同じである。
【０１９８】
ＰＬＤ投与量の計算及び送達
ＰＬＤは５０ｍｇ／ｍ２で静脈内投与された。測定した体重が理想体重より重い対象では、理想体重（ＩＢＷ）に基づいてＰＬＤの投与量を計算した。対象の身長をセンチメートル単位で測定した後、ＩＢＷを以下のように計算した：
ＩＢＷ＝４５．５ｋｇ＋１５２ｃｍを超えた分１センチメートルにつき０．９ｋｇ
次いで、平方メートルで表した体表面積（ＢＳＡ）を以下のように計算した：
ＢＳＡ（ｍ２）＝（［高さ（ｃｍ）×ＩＢＷ（ｋｇ）］／３６００）１／２、
あるいは、
ＢＳＡ（ｍ２）＝（［高さ（ｃｍ）×ＩＢＷ（ｋｇ）］／３６００）の平方根。
【０１９９】
インフュージョンリアクションのリスクを最小限に抑えるために１ｍｇ／分の速度でＰＬＤを投与した。注入に関連する有害反応が観察されなかった場合、注入速度を速めて薬物の投与を１時間かけて完了させる。ドキソルビシンの蓄積量と共に心毒性のリスクが上昇した。従来のドキソルビシンの推奨される生涯最大用量は以下の通りであった：
・成人＜５５０ｍｇ／ｍ２
・７０歳を超える成人は蓄積量が３００ｍｇ／ｍ２を超えないように配慮する
（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｗａｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｗｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ（Ｃ） Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｕｔａｈ，Ａｕｇｕｓｔ  ２００６）
【０２００】
対象が疾患の進行を示さず、心毒性の証拠を示さず、処置に耐えられ続ける限り、許容可能な最大蓄積量５５０ｍｇ／ｍ２に達するまで、２８日に１回、（推奨される最低４クールの間）１日目にＰＬＤを対象に投与した。
【０２０１】
本研究に使用したペグ化リポソームドキソルビシンは、ドキソルビシン又はその塩を含有するリポソームを含む混合物であり、リポソームはポリエチレングリコール修飾表面を含む。説明のための実施例では、ペグ化リポソームドキソルビシンはＤＯＸＩＬ（登録商標）であった。ＤＯＸＩＬ（登録商標）は、ＳＴＥＡＬＴＨ（登録商標）リポソームキャリアにカプセル化されたドキソルビシンＨＣｌである。ＳＴＥＡＬＴＨ（登録商標）リポソームキャリアは、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンナトリウム塩（ＭＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、３．１９ｍｇ／ｍＬ；完全水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、９．５８ｍｇ／ｍＬ；及びコレステロール、３．１９ｍｇ／ｍＬで構成されたものであった。更に、１ｍＬ当たり、硫酸アンモニウム、約２ｍｇ；バッファーとしてのヒスチジン；ｐＨ調整のための塩酸及び／又は水酸化ナトリウム；及び等張性を維持するためのスクロースを含んでいた。薬物の９０％超がＳＴＥＡＬＴＨ（登録商標）リポソームにカプセル化された。
【０２０２】
［実施例２１］
ＮＳＣＬＣ及び卵巣癌の評価可能病変における腫瘍の反応
実施例１６に記載のイメージング法を用いて、実施例１８又は実施例１９に記載の処置中に腫瘍を画像化した。画像化した各腫瘍のサイズ変化のパーセンテージを図９に示す。このデータは、葉酸受容体陰性腫瘍（病変）ではサイズの平均増加が３３％であるのに対し、葉酸受容体陽性腫瘍（本明細書に記載されている９９ｍＴｃ−Ｅ２０イメージング法の使用に基づいて選択された）のサイズの平均増加がたった７％であることを示している。
【０２０３】
本発明の特定の実施形態を上記に記載及び／又は例示したが、これらの多数のバリエーション及び変更例も可能であると考えられる。したがって、本発明は本明細書に記載及び／又は例示されている特定の実施形態に限定されない。
【０２０４】
［実施例２２］
注射用ＥＣ１４５（ＥＣ１４５医薬品）の規格及び代表的結果
2013501224.tif 000018
【０２０５】
［実施例２３］
静脈内（ＩＶ）投与用のＩＣ１４５医薬品（ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ：ＤＰ）を、２．０ｍＬの水性無菌液剤（ｐＨ７．４）として、Ｆｌｕｒｏｔｅｃｈ（商標）コーティングされたゴム栓を備えた使い捨ての透明ガラスバイアル中に用意し、アルゴン下で凍結保存した。各バイアルは、１．４ｍｇ／ｍＬのＥＣ１４５を含む。医薬品の量的組成を以下の表に示す。１個のバイアルで２．５ｍｇのＥＣ１４５のボーラス投与が可能である。
2013501224.tif 000019
【０２０６】
［実施例２４］
便秘の処置／防止のための代表的腸レジメン
ＥＣ１４５の第Ｉ相試験において、特にオピオイド鎮痛を同時に投与された対象において、潜在的重篤有害事象として便秘／イレウスが記載されている。
【０２０７】
ＥＣ１４５を用いた治療を受ける患者のための示唆される漸進的な腸レジメン（Ｃａｒｎｅｙ  ＭＴ，  Ｍｅｉｅｒ  ＤＥ．Ｐａｌｌｉａｔｉｖｅ  ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｅｎｄ−ｏｆ−ｌｉｆｅ  ｉｓｓｕｅｓ．  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ２０００；１８：１８３から改変）は、オピオイド療法を受けている対象に使用されるものに対応すべきであり、医師は効果的なレジメンが見つかるまでステップを進めることができる：
ステップ１：ドキュセート（１００ｍｇ、１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．））及びセンナ（１錠、１日１回（ｑ．ｄ．）又はｂ．ｉ．ｄ）。
ステップ２：ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（２錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（１〜２個、朝食後）。
ステップ３：ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（３錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）。
ステップ４：ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（１５ｍＬ、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）。
ステップ５：ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（３０ｍｌ、ｂ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）。
ステップ６：ドキュセート（１００ｍｇ、ｂ．ｉ．ｄ．）、センナ（４錠、ｂ．ｉ．ｄ．）、ラクツロース又はソルビトール（３０ｍｌ、ｑ．ｉ．ｄ．）、及びビサコジル直腸坐剤（３〜４個、朝食後）。
【０２０８】
［実施例２５］
先例：白金製剤耐性卵巣癌を有する患者においてＥＣ１４５とペグ化リポソームドキソルビシン（ＰＬＤ）の併用とＰＬＤ単独を比較するランダム化第ＩＩ相試験（ＥＣ−ＦＶ−０４）
【０２０９】
背景：葉酸とデスアセチルビンブラスチンヒドラジドとのコンジュゲートであるＥＣ１４５は、上皮性卵巣癌の９０％超で見られる葉酸受容体（ＦＲ）に高い親和性で結合する。本実施例は、白金製剤耐性卵巣癌の女性患者においてＰＬＤ単独と比較したＥＣ１４５＋ＰＬＤの国際的ランダム化第２相試験の中間データを報告するものである。独立したデータ安全性モニタリング委員会（Ｄａｔａ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｂｏａｒｄ：ＤＳＭＢ）により、予め規定したＰＦＳ及び安全性に関する中間解析が行われた。結果を本明細書中で報告する。
【０２１０】
方法：ＥＣＯＧのＰＳが０〜２であり且つ全身性細胞毒性レジメン歴が２回未満の１８歳以上の女性を無作為化し、ＥＣ１４５（２．５ｍｇ、ＩＶ、第１週及び第３週）＋ＰＬＤ（５０ｍｇ／ｍ２、ＩＢＷ、ＩＶ、２８日に１回）又はＰＬＤ（５０ｍｇ／ｍ２、ＩＢＷ、ＩＶ、２８日に１回）単独を、進行又は死亡まで投与した。
【０２１１】
結果：研究で予定されている合計９５例の進行例及び死亡例のうち、４６回目の事象の後に中間解析を行った。年齢、癌の種類、減量手術後の残存腫瘍、治療歴、ＣＡ−１２５、診断からの時間等のスクリーニング時の人口統計的特性を群間で調整した。ＲＥＣＩＳＴの平均腫瘍長和は併用群で長かった（１２２．７ｍｍ対８１．３ｍｍ）。総有害事象、重篤有害事象、又は中止につながる少なくとも１つの治療中に発生する薬物関連重篤有害事象を報告した対象の数に関して、試験群の間で統計的な差はなかった。以下の表にＰＦＳの中間解析の結果を示す。カプラン・マイヤー曲線を図１１に示す。
2013501224.tif 000020
中間解析では、併用群が全生存期間におけるベネフィットの傾向を示し、ＨＲ＝０．４２５である（ｐ値は０．０６４）。
【０２１２】
結論：結果は、ＥＣ１４５及びＰＬＤを投与された白金製剤耐性卵巣癌の女性患者の中央値ＰＦＳが、ＰＬＤのみを投与された患者の２倍超であることを示している。これらの中間データは、ＥＣ１４５及びＰＬＤが白金製剤耐性卵巣癌の女性患者において標準的治療法に対して無増悪生存期間の統計的に有意な延長を示す最初の組合せであることを示唆している。
【０２１３】
白金製剤耐性卵巣癌を有する女性患者を用いた進行中の第２相試験での中間解析時における無増悪生存期間のカプラン・マイヤー曲線を図１２に示す。対象は、研究処置前にＥＣ２０でスキャンして研究処置（ＥＣ１４５とＰＬＤの併用対ＰＬＤ単独）前にＥＣ２０陽性（ＥＣ２０＋＋状態）のスコアをつけられた対象であり、核イメージング可能な施設で登録された。
【０２１４】
ＲＥＣＩＳＴ（バージョン１．０）による中間解析時での治療に対する反応を以下の表に示す。スキャン頻度及び評価のタイミング（２４週間は６週間毎、その後、残りの研究参加期間は８週間毎）は各群で等しかった。
2013501224.tif 000021
【０２１５】
図１４は、ＥＣ１４５とＰＬＤを併用して処置した患者対ＰＬＤ単独で処置した患者の全生存期間（ＯＳ）のカプラン・マイヤーグラフを示す図である。予め規定した中間解析の時点において、全生存期間の中央値は、統計的有意性の傾向があり、ハザード比は０．４２５であった（詳細はチャート）。
【０２１６】
この試験のプロトコールは、参照により本明細書に援用するｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００７２２５９２？ｔｅｒｍ＝ｐｌａｔｉｎｕｍ＋ｒｅｓｉｓｔａｎｔ＋ｏｖａｒｉａｎ＋ｃａｎｃｅｒ＆ｒａｎｋ＝２に要約されている。
【０２１７】
［実施例２６］
進行した卵巣癌及び子宮内膜癌を有する女性患者で、研究処置前にＥＣ２０でスキャンしてＥＣ２０陽性（ＥＣ２０＋＋状態）と評価された患者を研究処置前にＥＣ２０＋状態又はＥＣ２０−状態と評価された患者と比較した試験である研究ＥＣ−ＦＶ−０２における全生存期間のカプラン・マイヤー曲線を図１３に示す。この曲線は、非常に難治性の卵巣癌患者においてＥＣ１４５単独薬剤が有益である患者を選択することの有用性を調べている。
【０２１８】
［実施例２７］
ＥＣ２０患者のスキャン手順
スクリーニング手順及び適格性の確認が完了した後、全対象に０．５ｍｇの葉酸を１回静注投与し、次いで１〜３分以内に、２０〜２５ｍＣｉのテクネチウム−９９ｍで標識された０．１ｍｇのＥＣ２０を１〜２ｍＬ注射した。次いで、ＥＣ２０の注射から１〜２時間後に患者にＳＰＥＣＴイメージングを行った（中大腿部〜頭部、後側及び前側）。ＲＥＣＩＳＴ（ｖ１．０）の基準に従って放射線科医が標的病変を選択した。その後、核医学医師が、各標的病変のＥＣ２０の取込みを視覚的に評価し、取込みを「陽性」（顕著な取込み／軽度の取込み）又は「陰性」（取込みなし）に分類した。
【０２１９】
［実施例２８］
ＥＣ２０病変のスコア化手順
最長径（ＬＤ）が１．５ｃｍ未満の病変は「評価不能」と見なした。但し、核医学リーダーが明確なＥＣ２０の取込みがあると識別した場合には「陽性」とした。特定の臓器（すなわち、肝臓、脾臓、膀胱、及び腎臓）は元々ＥＣ２０の取込みが多いため、これらの臓器に位置する標的病変は「評価不能」と見なした。
【０２２０】
評価可能な全病変を２つの相互排他的なグループに分類した：１）ＥＣ２０＋（ＥＣ２０の取込みあり）及び２）ＥＣ２０−（ｎｅｇ）（ＥＣ２０の取込みなし）。分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて２グループ間で病変サイズの変化を比較した。各病変について、処置に対する反応を決定した。サイズが少なくとも２０％減少した病変をレスポンダー（ｍＰＲ）に分類し、サイズが少なくとも２０％増加した病変を進行（ＰＤ）に分類した。ｍＰＲ又はＰＤのいずれの基準にも該当しない病変を安定（ＳＤ）に分類した。ｍＰＲ、ＳＤ、及びＰＤの病変の百分率をＥＣ２０＋グループとＥＣ２０−（ｎｅｇ）グループの間でフィッシャー直接検定を用いて比較した。ピアソン相関係数を用いて、腫瘍サイズの定量的変化率を測定した。
【０２２１】
［実施例２９］
ＥＣ２０患者のスコア化手順
ＥＣ２０＋病変の総数を病変（評価可能及び評価不能）の総数で割ることにより対象のスコアを算出した。相互排他的な３つのグループに患者を分類した：
グループ１：ＥＣ２０＋＋（ＥＣ２０陽性標的病変１００％）
グループ２：ＥＣ２０＋（ＥＣ２０陽性標的病変１〜９９％）
グループ３：ＥＣ２０−（ｎｅｇ）（ＥＣ２０陽性標的病変０％又はなし）。
【０２２２】
例えば、１個のＥＣ２０＋病変及び２個のＥＣ２０−（ｎｅｇ）病変（合計３個の標的病変）を有する対象の「対象スコア」は３３％であり（３分の１の病変が陽性）、対象はＥＣ２０＋グループになる。全標的病変がＥＣ２０陽性である対象はＥＣ２０＋＋に分類される（３分の３の病変が陽性）。
【０２２３】
ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．０（Ｔｈｅｒａｓｓｅ，２０００）を用いて、各対象について最良総合効果を決定した。ＲＥＣＩＳＴの全奏効率（ＯＲＲ）及び病勢コントロール率（ＣＲ／ＰＲ／ＳＤ）を３集団それぞれについて計算した。これらの解析で、評価前に研究から外れた対象はノンレスポンダーと見なした。カプラン・マイヤーの手法及びコックス比例ハザードモデルを用いて全生存期間を解析した（Ｋａｐｌａｎ，１９５８；Ｍａｎｔｅｌ，１９６６）。サンプルサイズを考慮して、ＥＣ２０＋及びＥＣ２０−（ｎｅｇ）を生存分析にプールした。
【０２２４】
ＯＲＲ及びＤＣＲのサンプルセットには、全評価可能対象（ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ）及び第３選択までの治療が奏功しなかった対象のサブセットを含めた。サンプルサイズの制限のため、ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）だけを生存分析に含めた。
【０２２５】
［実施例３０］
患者の人口統計的データ
４５名の卵巣癌対象を評価した。主な人口統計学的特性及び疾患特性を以下の表に示す。全体的に、ＥＣ−ＦＶ−０２研究に入る前の治療歴が多く、化学療法レジメン歴の数の中央値は４である（１〜１４レジメン）。対象の８０パーセントがＬＤの和で５ｃｍを超える腫瘍量（ｔｕｍｏｒ  ｂｕｒｄｅｎ）を有していた。
2013501224.tif 000022
【０２２６】
［実施例３１］
病変評価
プロトコールに適格な対象４５名、ＲＥＣＩＳＴで定義される標的腫瘍（すなわち病変）合計２１６個を、本レトロスペクティブ解析に含めた（以下の表）。病変の１４５個（１４５／２１６；６７％）がＥＣ２０「評価可能」と見なされた。これらのうち、１１１個（７７％）がＥＣ２０「陽性」の取込みであった。「評価不能」と見なされた７１個の病変のうち、４５個の病変はバックグラウンドの取込みが高い臓器に存在し、１５個の病変は解釈に十分なＳＰＥＣＴデータがなく、サイズが１．５ｃｍより小さい１１個の病変は取込み「なし」とコード化された。
【０２２７】
以下の表に示されるように、１４５個の病変は明確なＥＣ２０取込み「陽性」又は「陰性」に分類された。これらの病変を病変解析に含めた。１１１個の病変がＥＣ２０＋であり、３４個の病変がＥＣ２０−（ｎｅｇ）であった。
2013501224.tif 000023
【０２２８】
対象の８７パーセントで、少なくとも１個の標的病変中にＥＣ２０の取込みが視覚的に観察された。ＥＣ２０−（ｎｅｇ）病変はＥＣ２０＋病変よりもサイズがわずかに大きかった（それぞれ２．８ｃｍ対２．４ｃｍ（ｐ＝０．０１））。
【０２２９】
［実施例３２］
ＥＣ２０病変のスコア化解析
以下の表に示すように、ＥＣ２０＋病変は５９％（ｎ＝６５）が安定（ＳＤ）又は改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）部分奏功（ＰＲ）を示し、ＥＣ２０−（ｎｅｇ）集団ではＳＤの割合は２７％であった。これらの発見は、ＥＣ２０取込みが、ＥＣ１４５曝露後に改変ＰＲ又はＳＤを示した病変と最高でもＳＤしか示さない病変との間で区別されることを示している（ｐ＝０．００２２）。改変ＰＲグループの病変は全てＥＣ２０＋であった。
2013501224.tif 000024
【０２３０】
［実施例３３］
ＥＣ２０患者のスコア化解析
ＥＣ２０の状態を考慮しない評価可能な全対象のＤＣＲは４２．２％であった（以下の表）。ＤＣＲはＥＣ２０陽性度と共に上昇した。ＤＣＲが最も高いのはＥＣ２０＋＋対象であり、ＥＣ２０＋対象、ＥＣ２０−（ｎｅｇ）対象が続き、それぞれ、５７％、３６％、及び３３％であった。全対象でのＯＲＲは５％であった。ＤＣＲ解析と一致して、ＯＲＲはＥＣ２０＋＋サブグルーブで最も高く１４％であり、残り２グループでは０％であった。治療失敗歴が３回以下である、他の対象ほど治療を受けていない対象のサブグループでは、ＤＣＲは、ＥＣ２０＋＋グループで８６％、ＥＣ２０＋グループで５０％、ＥＣ２０−（ｎｅｇ）グループで０％であった。
2013501224.tif 000025
【０２３１】
このＥＣ１４５を用いて処置した対象の試験的研究の結果、１００％陽性病変のグループにおいて生存期間が長い傾向が示された。これらの対象における全生存期間の中央値は６３．４週間であり、陽性腫瘍が１００％未満の対象では２３．１週間であった（ハザード比＝０．４６、ｐ＝０．０７１）。
【０２３２】
［実施例３４］
ＥＣ２０：化学物質の製造及び管理
製造
前述した及び以下のダイアグラムに示す標準的なＦｍｏｃベースの固相ペプチド合成法によりＥＣ２０を合成した。樹脂結合システインで開始し、保護基を除去した後、標準的な試薬を用いてアミノ酸残基をカップリングさせる。最後のカップリングステップ及び脱保護の後、ペプチドを樹脂から切断する。粗生成物を沈殿させ、ろ過により単離する。粗ＥＣ２０の純度は約９０％である。
【０２３３】
粗ＥＣ２０を分取カラムクロマトグラフィーで精製する。ＥＣ２０を沈殿させ、ろ過により単離する。最終原薬の純度は９７％以上である。
【０２３４】
2013501224.tif 000026
【０２３５】
特徴解析
ＥＣ２０原薬を、１Ｈ及び１３ＣＮＭＲ分析、エレクトロスプレー質量分析、アミノ酸分析、及びペプチド含有量により特徴解析した。全ての方法で、上記の構造が確認された。
【０２３６】
プロセス関連不純物
ＥＣ２０をカラムクロマトグラフィーで精製して、ＥＣ２０の製造に用いた出発原料又は試薬がＥＣ２０原薬中に存在しないようにする。単離した原薬のＧＣ分析により残留溶媒レベルを評価する。
【０２３７】
ＥＣ２０原薬の規格を以下の表に示す。
2013501224.tif 000027
【０２３８】
ＥＣ２０原薬はブチルゴム栓の付いた黄褐色のガラスボトル中に−２０℃で保存する。安定性データは、原薬がこれらの条件下で２４ヶ月を超えて安定であることを示している。
【０２３９】
［実施例３５］
治験医薬品の説明及び組成
この医薬品は、９９ｍＴｃ−ＥＣ２０を調製するためのキットである。製品は、凍結乾燥された、無菌、淡黄色の固体である。
2013501224.tif 000028
最終製剤である注射用９９ｍＴｃ−ＥＣ２０の調製は、９９ｍＴｃをベースにした診断薬の標準的な実務に従って臨床試験現場で行われる。
【０２４０】
ＥＣ２０医薬品は、滅菌過テクネチウム酸ナトリウムを添加することにより効果的なイメージング剤を調製するのに必要な全ての成分を含む使い捨てバイアルである。原薬は、以下の表に示す量の塩化スズ（ＩＩ）及びα−Ｄ−グルコヘプトン酸ナトリウムと共に処方される。この処方は、放射能源として準安定テクネチウムを利用する薬剤に典型的である。ＥＣ２０医薬品はテクネチウムをキレートし、新たに調製した準安定テクネチウム水溶液を用いてＥＣ２０を再構成した時にテクネチウムがキレートされてイメージング剤が形成される。
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【０２４１】
バッチ処方
典型的な２０００バイアルバッチのＥＣ２０医薬品のバッチ処方を以下の表に示す。
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【０２４２】
ＥＣ２０医薬品充填プロセス
この製造プロセスは窒素又はアルゴン雰囲気下で行う。
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【０２４３】
グルコヘプトナート溶液の調製：空の調合容器（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｖｅｓｓｅｌ）を好適なスターラーバーと共に計量する。この予め計量した調合容器に脱酸素化ＳＷＦＩを添加する。ガラス製漏斗を用いて調合容器にグルコヘプトナートを添加する。計量容器及び漏斗を脱酸素化ＳＷＦＩですすぎ、すすぎ水を製剤溶液（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）に加える。
【０２４４】
ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ溶液の調製：ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏを計量して適切なサイズのフラスコに入れる。ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏを、脱酸素化した０．２ＭのＨＣｌに溶解させる。
【０２４５】
ＥＣ２０溶液の調製：調製したグルコヘプトナート溶液に、連続撹拌しながら、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ溶液をゆっくりと移す。適切な量のＥＣ２０（既知のペプチド含有量から計算）をグルコヘプトナート／ＳｎＣｌ２溶液に移す。ｐＨが６．８±０．２になるまで１．０ＭのＮａＯＨ及び／又は０．２ＭのＨＣｌをゆっくりと添加する。脱酸素化ＳＷＦＩで所望の標的重量±０．２５％に溶液を希釈し、最低５分間撹拌する。無菌的技術を用いて調合容器からろ過前のバイオバーデンサンプルを取り、無菌容器中に置いて無菌キャップで閉じる。ろ過装置（２つの直列の滅菌フィルター）及び受け容器を組み立て、ＥＣ２０製剤溶液を、蠕動ポンプを用いて０．２２ミクロンの滅菌フィルターに通して、適切な受け容器で受ける。ろ過後のフィルター完全性試験を行う。記録された圧力が不合格である場合、試験をもう一回繰り返す。２回目も不合格である場合、新しいフィルターを取り付け、プロセスを繰り返すことができる。
【０２４６】
充填及び打栓：充填及び打栓をＣｌａｓｓ  １００の充填領域で無菌的に行う。製品又は製品になる成分に接触する全ての容器、混合デバイス、及び道具は適切に清浄化及び滅菌又は発熱原除去（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｅ）されている。計算された密度に基づいて、重力測定により、組立て及び充填のチェックを行う。バイアルに充填し、打栓する。バイアルをワークステーションから取り出す前に、栓を凍結乾燥位置にする（半分乗せる（ｈａｌｆ  ｓｅａｔｅｄ））。凍結乾燥器トレイをチャンバーの棚に置いた後、−４５℃±３℃に冷却する。製品を凍結させた後、真空ポンプでチャンバーを排気する。棚の温度を３０〜３５℃で１０時間以上維持した後、真空ポンプのバルブを閉じることにより、乾燥サイクルを手動で終わらせる。フィルターを通した窒素でチャンバーを７〜１０ｍｍＨｇにパージした後、棚の打栓機構を作動させる。全てのバイアルが打栓された後、フィルターを通した窒素をチャンバーにバックフィルして大気圧にし、製品トレイをチャンバーから取り、アルミニウムシールでキャップする。キャッピングの後、バイアルをラベリングし、−２０℃±５℃で保存する。
【０２４７】
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【０２４８】
［実施例３６］
デスアセチルビンブラスチンヒドラジドへの硫酸ビンブラスチンの典型的な変換
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【０２４９】
原料
硫酸ビンブラスチン：ＵＳＰ；ＦＷ＝９０９．０５ｇ／モル；メタノール：無水物；ヒドラジン：無水物；ＦＷ＝３２ｇ／ｍｏｌ；脱イオン水；酢酸エチル：ＬＣ／ＧＣグレード；トルエン：ＬＣ／ＧＣグレード；第一リン酸ナトリウム：≧９９．０％；ＦＷ＝１２０ｇ／モル；第二リン酸ナトリウム：≧９９．０％；ＦＷ＝１４２ｇ／モル；塩化ナトリウム：試薬グレード；ＦＷ＝５８．４ｇ／モル；硫酸ナトリウム：無水物；５−ノルボルネン−２−カルボン酸。
【０２５０】
手順
反応、抽出処理、及び単離は窒素又はアルゴン雰囲気下で行う。圧力フィルターを用いて硫酸ナトリウムを除去し、生成物を捕捉する。反応停止及び洗浄に用いる塩化ナトリウム溶液は溶存酸素レベルが０．９ｐｐｍ以下になるまで窒素又はアルゴンでスパージする。
【０２５１】
硫酸ビンブラスチン及び無水メタノールを、アルゴンでパージされた反応器に投入する。５−ノルボルネン−２−カルボン酸及び無水ヒドラジンを反応器に添加する。混合物を撹拌し、固体が溶解した後、混合物を約６０℃に加熱する。ＨＰＬＣ分析により、反応が完了していれば、冷却して反応停止し（ｑｕｅｎｃｈ）、酢酸エチルで抽出する。乾燥後、生成物を酢酸エチル及びトルエンから結晶化する。固体を減圧下、室温で一晩乾燥させる。
【０２５２】
緩衝ＮａＣｌは以下を含む：１０．０ｇのＮａＣｌ、７．１０〜７．３０ｇのＮａＨ２ＰＯ４、４．４０〜４．６０ｇのＮａ２ＨＰＯ４、及び９０ｍＬの水。この溶液をアルゴン又は窒素でスパージする（溶存酸素量０．９ｐｐｍ未満）。
【０２５３】
典型的な単離収率の理論的最大値は５０〜６０％である。
【０２５４】
［実施例３６］
ＥＣ１４５プロセスのステップ２及び３
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【０２５５】
原料
デスアセチルビンブラスチンヒドラジド：ＦＷ＝７６８．９ｇ／ｍｏｌ；２０．５ｇ、２６．７ｍｍｏｌ；混合炭酸塩（３）：ＦＷ＝３８４．９ｇ／ｍｏｌ；１０．７ｇ、２７．８ｍｍｏｌ；アセトニトリル：十分量（ｑ．ｓ．）：トリエチルアミン：ＦＷ＝１０１．２ｇ／ｍｏｌ；２．６７ｇ、２６．４ｍｍｏｌ；Ｎａ２ＰＯ４・７Ｈ２Ｏ：４７．８４ｇ；ＥＣ１１９：２９．９ｇ  ２８．６ミリモル；０．５Ｎ  ＨＣｌ：ｑ．ｓ．；ＷＦＩ：ｑ．ｓ．。
【０２５６】
手順
このプロセスで使用する水は全てＷＦＩである。
【０２５７】
適当な容器をアルゴンでパージする。２０．５±０．３ｇのデスアセチルビンブラスチンヒドラジドを投入する；この投入は効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）で調整され、すなわち、効力が９０．０％の場合、２２．８ｇを投入する。１０．７±０．２ｇの混合炭酸塩を投入する（効力で調整）。８００±３０ｍＬのアセトニトリル及び２．６７±０．１１ｇのトリエチルアミンを投入する。アルゴン下、１０〜１４℃で２０〜２８時間混合する。ＨＰＬＣ（ＥＣ１４５−ＣＭＣ−ＡＭ−０００１、バージョン２．３）用にサンプルを取る。期待される結果は、ＣＤＳＩ：ヒドラジド≧２５：１である。そうでない場合、アルゴン下、１０〜１４℃で２〜４時間混合を続け、再度サンプルを取る。
【０２５８】
溶存酸素レベルが０．９ｐｐｍ未満になるまで７８０〜８２０ｍＬの水をアルゴンでスパージし、溶存酸素レベルを記録する。４７．８±０．５ｇの第二リン酸ナトリウム七水和物を脱酸素化水に溶解させる。好適な容器に、２９．８±０．５ｇのＥＣ１１９を添加する（投入は抗力で調整）。ＥＣ１１９にリン酸ナトリウム溶液を添加し、アルゴン下で混合する。溶液のｐＨを測定し、必要ならば０．５ＮのＨＣｌを用いてｐＨを５．８〜６．２に調整する。
【０２５９】
反応混合物に緩衝ＥＣ１１９溶液を添加する。アルゴン下、２０〜２５℃で６０〜７５分間混合する。ＨＰＬＣ（ＥＣ１４５−ＣＭＣ−ＡＭ−０００１、バージョン２．３）用にサンプルを取る。ＥＣ１４５：ＣＤＳＩ≧２５：１であれば、次に進む。そうでない場合、アルゴン下、２０〜２５℃で混合を続け、再度サンプルを取る。ＥＣ１４５：ＣＤＳＩ≧２５：１であれば、次に進む。そうでない場合、更に１ｇのＥＣ１１９を添加し、アルゴン下、２０〜２５℃で３０分分間混合し、再度サンプルを取る。
【０２６０】
溶存酸素レベルが０．９ｐｐｍ未満になるまでアルゴンでスパージした水から６．９〜７．１Ｌの２５ｍＭリン酸バッファー（１８５〜１９５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．２〜７．５）を調製する。反応混合物をこのバッファーで希釈する。混合物からかすかな濁り以上が現れた場合、生成物溶液をろ過する必要がある（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｐｏｌｙｃａｐ  ＴＣ７５又はＴＣ１５０、０．４５又は１．０ミクロン）。このろ過は、バイオタージ社（Ｂｉｏｔａｇｅ）製カラムに生成物をローディングしながら行ってもよい。
【０２６１】
液体クロマトグラフィー精製
バイオタージ社製の１５０Ｍ、Ｃ１８カートリッジを使用する。このサイズのカートリッジには、現在記載している反応混合物のサイズの２倍の反応混合物が入れられる。
【０２６２】
カラム準備：
ａ．カラムを以下でフラッシュする：
ｉ．アセトニトリル、１２〜１３Ｌ
ｉｉ．８０％アセトニトリル及び２０％水（ｖ／ｖ）、１２〜１３Ｌ
ｉｉｉ．５０％アセトニトリル及び５０％水（ｖ／ｖ）、１２〜１３Ｌ
ｉｖ．１０％アセトニトリル及び９０％水（ｖ／ｖ）、１２〜１３Ｌ。
【０２６３】
精製：
２５ｍＭのリン酸バッファー（１８５〜１９５ｍｍｏｌ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．３〜７．５）を調製する。
溶存酸素量が０．９ｐｐｍ以下になるまでバッファーをアルゴンでスパージする。
１０％アセトニトリルを含む緩衝食塩水（ｖ／ｖ）４１Ｌ；１６％アセトニトリルを含む緩衝食塩水（ｖ／ｖ）１３Ｌ；２７％アセトニトリルを含む緩衝生理食塩水（ｖ／ｖ）５２Ｌを調製する。
移動相溶液の溶存酸素量をチェックする。溶存酸素量が０．９ｐｐｍより多い場合、溶存酸素量が０．９以下になるまで移動相をアルゴン又は窒素でスパージする。
２６〜２７Ｌの１０％アセトニトリル移動相でカラムをフラッシュする。
生成物溶液をカラムにローディングする。
以下の順番で移動相を用いて生成物を溶出する：
ｉ．１０％アセトニトリル移動相、１３〜４Ｌ
ｉｉ．１６％アセトニトリル移動相、１３Ｌ
ｉｉｉ．２７％アセトニトリル移動相、５１〜５２Ｌ。
注：インラインＵＶ検出器が有用である；生成物は２７％アセトニトリル移動相の１５〜１９Ｌで出始め、バンド幅は８〜１３Ｌである。
【０２６４】
画分評価
ｉ．ＨＰＬＣ法ＥＣ１４５−ＣＭＣ−ＩＰ−０００１
ｉｉ．通過画分（ｐａｓｓｉｎｇ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）＝ＥＣ１４５が９７．０％以上、０．８％を超える不純物なし
【０２６５】
ラン後のカラム処理：
カラムは１回再利用できる。カラムを２回目のランに使用する場合、ｉｉ〜ｉｖを行う。
ｉ．１２〜１３Ｌのアセトニトリル：水＝１：１でカラムをフラッシュする
ｉｉ．２０〜２２Ｌのアセトニトリルでカラムをフラッシュする
ｉｉｉ．カラム準備ステップｉｉ〜ｉｖを繰り返す。
【０２６６】
限外ろ過
溶存酸素レベルが０．９ｐｐｍ未満になるまで、十分量の（ｑ．ｓ．）水をアルゴン又は窒素でパージする。通過するクロマトグラフィー画分を合わせ、同体積のスパージした水で希釈する。カットオフ分子量が１０００のミリポア社の再生セルロースメンブレン（カタログ番号ＣＤＵＦ００２ＬＡ）を用いて限外ろ過装置を組み立て、９Ｌの脱酸素化水ですすぐ。生成物溶液の限外ろ過を開始する。背圧を３０〜５０ｐｓｉに維持する。保持液の体積が２〜３Ｌになるまで限外ろ過を続ける。１１〜１２Ｌの脱酸素化水を添加する。保持液の体積が２〜３Ｌになるまで限外ろ過を続ける。１１〜１２Ｌの脱酸素化水を添加する。保持液の体積が２〜３Ｌになるまで限外ろ過を続ける。８〜１０Ｌの脱酸素化水を添加する。保持液の体積が２Ｌになるまで限外ろ過を続ける。限外ろ過の終点は、ＧＣ及び濃度で保持液サンプルを解析することにより決定する必要がある。規格では、１ミリグラムのＥＣ１４５当たりアセトニトリルは５０マイクログラム以下である。達成されない場合、限外ろ過を更に１サイクル行う。
【０２６７】
ＡＰＩ溶液の濃度は、パッケージ化された成分が６〜１２ｍｇ／ｍＬとなるように調整されなければならない。限外ろ過完了後、装置を１リットルの水ですすぐ。したがって、必要に応じて、限外ろ過を続けるか水を添加する。生成物溶液が限外ろ過装置から出た後、限外ろ過装置を１Ｌの脱酸素化水ですすぎ、生成物溶液をまとめる。
【０２６８】
すすぎ水と生成物溶液を合わせた後、この溶液を、０．２ミクロンのアブソリュートフィルターでろ過する必要があり、このろ液をパッケージ化する（不活性雰囲気下で行う）。
【０２６９】
単離された生成物の理論的な最大収率は５０〜６０％である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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