(57)【要約】  本発明は、脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定するためのバイオマーカーの使用を対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法であって、
脆弱Ｘ症候群を患う個体からＲＮＡ試料を単離するステップと、
ＲＮＡ試料においてＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物を検出する分析を行なうステップと、
試料のＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現レベルが対照に比べて減少している場合、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップと
を含む方法。
【請求項２】
分析が、ノーザンブロット解析、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＴ−ＰＣＲ  ＥＬＩＳＡ、ＴａｑＭａｎベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ（プローブベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ）、およびＳＹＢＲグリーンベースの定量ＲＴ−ＰＣＲからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法であって、
脆弱Ｘ症候群を患う個体から試料を単離するステップと、
試料中のＦＭＲ１タンパク質の量を決定する分析を行なうステップと、
試料中のＦＭＲ１タンパク質（ＦＭＲＰ）の量が対照に比べて減少している場合、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップと
を含む方法。
【請求項４】
分析が、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＨＰＬＣ、および質量分析からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法であって、
ＦＸＳを患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、
試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップであって、対照に比べた試料中のメチル化のレベルが、その個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであるかどうかの指標となるステップと
を含む方法。
【請求項６】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法であって、
脆弱Ｘ症候群を患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、
試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップと、
試料中に存在するＦＭＲ１遺伝子領域が完全メチル化されている場合に、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップと
を含む方法。
【請求項７】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬が、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルである、請求項１、３、５、または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
決定が、サザンブロットもしくは定量ＰＣＲ（プローブベースまたはＳＹＢＲグリーンベース）のうちの少なくとも１つと組み合わせたメチル化感受性制限酵素消化、またはメチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）、メチル化特異的定量ＰＣＲ（プローブベースまたはＳＹＢＲグリーンベース）もしくはパイロシーケンシングのうちの少なくとも１つと組み合わせたＤＮＡバイサルファイト修飾から選択される分析を使用して行なうことができる、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法であって、
ＦＸＳを患う個体に由来する試料において、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物、ＦＭＲ１タンパク質、もしくはＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の存在、またはそれらの組合せについて決定するステップと、
試料のＦＭＲ１  ｍＲＮＡのレベルが対照に比べて減少している場合、試料のＦＭＲ１タンパク質の量が対照に比べて減少している場合、または存在しているＦＭＲ１遺伝子領域が完全メチル化されている場合に、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップと
を含む方法。
【請求項１０】
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡおよびＦＭＲ１タンパク質の存在について決定するステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＦＭＲ１遺伝子領域が、配列番号１、配列番号２または配列番号３である、請求項６、８または９のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与するステップをさらに含む、請求項１、３、５、６または９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬が、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体がｍＧｌｕＲ５拮抗薬のレスポンダーであるかどうかを決定するための診断キットであって、
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物、ＦＭＲ１タンパク質レベル、もしくはＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化、またはそれらの任意の組合せを測定するための作用物質と、
使用指示書と
を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、個別化した治療方法に関する。具体的には、本発明は、特定の治療剤を用いた治療に、脆弱Ｘ症候群を患う個体が臨床的に応答するようになるかどうかの予測を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）は、遺伝性精神遅滞の最も多い原因であり、世界的な有病率は男性で１／４０００、女性で１／８０００である。ＦＸＳの発生率は、他のＸ連鎖精神遅滞の１０〜２０倍高い。ＦＸＳは一遺伝子疾患であり、脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子の高メチル化およびサイレンシングの引き金となるＣＧＧ反復の伸長によって主に引き起こされる。ＦＭＲ１タンパク質（ＦＭＲＰ）が存在していないことによって、代謝型グルタミン酸受容体５（ｍＧｌｕＲ５）シグナル伝達により媒介されるタンパク質合成の過剰刺激が起こり、したがってＦＸＳ表現型の多様性を招く恐れがある。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、ｍＧｌｕＲ５シグナル伝達を低下させ、かつ脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質の欠如によって引き起こされる欠陥を正常化する可能性を有する。
【０００３】
ＦＸＳに対する特定の治療法はなく、診療は国によって様々である。ＦＸＳ症状を治療するのに最も多用される医薬品は、刺激薬（すなわち、メチルフェニデート）、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）（例えば、フルオキセチン）、α−アドレナリン受容体作動薬（例えば、クロニジン）、気分安定剤（例えば、カルバマゼピン）、および抗精神病薬（例えば、リスペリドン、オラザピン）である。これら薬物のいずれかの使用は、その有効性の限界および望ましくない副作用をもたらす可能性によって低減される。近年、ｍＧｌｕＲ拮抗薬にとっての役割も示唆されている。
【０００４】
患者の遺伝子プロファイルが、治療上の処置への患者の応答性を決定付けるものであり得ることを示唆する証拠がますます増えている。ＦＸＳを患う個体に役立つ療法が多数あるので、例えば特定の薬物に対する応答に影響を及ぼす遺伝因子を同定することができれば、患者に個別化した治療レジメンを提供することができる。このような個別化した治療レジメンによって、代替治療レジメンに伴う恐れがある関連した副作用を最小限に抑制しながら、患者にとって治療効果が最大になる可能性がもたらされる。したがって、患者が特定の療法に応答する可能性があるかどうかを予測するのに使用することができる因子を同定する必要がある。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、特定のバイオマーカーを使用して、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬（antagonist）を用いた治療に応答する可能性があるＦＸＳを患う個体を選択することができるという発見に基づいている。具体的には、対照と比べた、ＦＸＳを患う個体由来の試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化状態および／またはＦＭＲ１遺伝子発現レベルの減少および／もしくはＦＭＲ１タンパク質（ＦＭＲＰ）の量の減少を利用して、その個体がｍＧｌｕＲ５の治療に応答するようになるかどうかを予測できることが明らかになった。したがって、本発明によれば、治療提供者は、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与する前に、ｍＧｌｕＲ５の治療に対してレスポンダー（responder）であるＦＸＳを患う個体とｍＧｌｕＲ５の治療に対してノンレスポンダーであるＦＸＳを患う個体を特定することが可能になる。
【０００６】
一態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する（determining）方法を包む。この方法は、脆弱Ｘ症候群を患う個体由来の核酸試料を用意する（providing）ステップと、試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定する（determining）ステップと、試料中に存在するＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合に、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定する（assigning）ステップとを含む。ＦＭＲ１プロモーターのメチル化の程度は、サザンブロットまたは定量ＰＣＲ（プローブベースまたはＳＹＢＲグリーンベース）のうちの少なくとも１つと組み合わせたメチル化感受性制限酵素消化、あるいはメチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）、メチル化特異的定量ＰＣＲ（プローブベースまたはＳＹＢＲグリーンベース）またはパイロシーケンシング（pyrosequencing）のうちの少なくとも１つと組み合わせたＤＮＡバイサルファイト（bisulfite）修飾から選択される分析を含めて、当技術分野において公知であるいずれの方法でも決定することができる。一実施例において、メチル化の程度は、ＭＳＰなどの定性分析を用いて決定され、個体は、対象のＦＭＲ１遺伝子領域だけがメチル化されていることが検出された場合、すなわち対象のＦＭＲ１遺伝子領域中に、非メチル化ＦＭＲ１が検出されない場合に、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定される。別の実施例において、メチル化の程度は、定量分析を用いて決定され、個体は、ＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化のレベルが９９．５％以上であると決定された場合に、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定される。定量分析の例は、ｑＰＣＲと組み合わせたメチル化感受性制限酵素消化である。
【０００７】
別の態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、ＦＸＳを患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップであって、試料中に存在するＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合に、その個体はｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定されるステップと、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定された個体に、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与するステップとを含む。
【０００８】
もう１つの態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、ＦＸＳを患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、メチル化感受性分析装置を使用して、試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップであって、試料中に存在するＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合に、その個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定されるステップとを含む。
【０００９】
もう１つの態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、ＦＸＳを患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップであって、全部である場合、あるいはＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化のレベルが９９．５％以上であり、または８以上のΔｃｔを有する場合に、その個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定されるステップと、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると特定された個体に、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与するステップとを含む。
【００１０】
さらにもう１つの態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、ＦＸＳを患う個体由来の核酸試料を用意するステップと、試料における脆弱Ｘ精神遅滞１（ＦＭＲ１）遺伝子領域のメチル化の程度を決定するステップであって、対照と比べた試料中のメチル化のレベルによって、その個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであるかどうかが示唆されるステップとを含む。
【００１１】
別の態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、脆弱Ｘ症候群を患う個体からＲＮＡ試料を単離するステップと、ＲＮＡ試料においてＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物を検出する分析を行なうステップと、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物が検出されない場合または対照に比べてＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現レベルの減少が検出された場合に、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップとを含む。ｍＲＮＡ転写物は、ノーザンブロット解析、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＴ−ＰＣＲ  ＥＬＩＳＡ、ＴａｑＭａｎベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ（プローブベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ）およびＳＹＢＲグリーンベースの定量ＲＴ−ＰＣＲを含めて、当技術分野において公知であるいずれの方法を使用しても検出することができる。
【００１２】
もう１つの態様において、本発明は、ＦＸＳを患う個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を決定する方法を含み、この方法は、脆弱Ｘ症候群を患う個体から試料を単離するステップと、試料においてＦＭＲ１タンパク質を検出する分析を行なうステップと、試料がＦＭＲ１タンパク質（ＦＭＲＰ）の存在を欠如している場合または対照に比べて量が減少している場合に、その個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定するステップとを含む。ＦＭＲＰ検出は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、血液スメア（smear）検査（免疫染色）、ウェスタンブロット、ＨＰＬＣ、および質量分析を含めて、当技術分野において公知であるいずれの方法でも行なうことができる。
【００１３】
本明細書に記載される方法のいずれにおいても、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルとすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＦＭＲ１プロモーターおよび５’ＵＴＲ配列を示す図である。
【図２】Ｆ４０５５−Ｈ０００２３３２−Ｍ０３抗体コンビネーションによるヒトＦＭＲＰタンパク質検出の温度依存性シグナル動態を示す棒グラフである。
【図３】ＭＡＢ２１６０−Ｆ４０５５抗体コンビネーションによるヒトＦＭＲＰタンパク質検出の温度依存性シグナル動態を示す棒グラフである。
【図４】初代ヒト線維芽細胞における内在性ヒトＦＭＲＰタンパク質検出を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ＦＭＲ１遺伝子の転写が停止されている脆弱Ｘ症候群（ＦＸＳ）を患う個体が、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療に応答する可能性があるという発見に一部基づいている。したがって、本発明は、ＦＸＳを患う個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであるかどうかを予測する方法を対象にする。対象の試料におけるＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の程度、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現の欠如、およびＦＭＲ１タンパク質（ＦＭＲＰ）の欠如は、患者のｍＧｌｕＲ５拮抗薬への応答性を予測するためのバイオマーカーとして、個別にまたは組合せで役に立つことができる。
【００１６】
本明細書では、「ｍＧｌｕＲ５のレスポンダー」は、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療上の処置後に、異常行動チェックリスト−コミュニティ版（Aberrant Behavior Checklist−Community Edition）（ＡＢＣ−Ｃ）行動尺度を用いた評価として行動症状の改善を示す可能性がある、ＦＸＳを患う個体である（Bihmら、Am. J. Ment Retard 96:209−211）。ＡＢＣ−Ｃ測定によって、常同行動、多動、不適切な発話（inappropriate speech）、および興味の限定（restricted interest）を含めて、様々な行動が調査される。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療後にＡＢＣ−Ｃスコアの減少を示す個体は、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと分類される。行動症状は、臨床全般印象（ＣＧＩ）尺度、対人応答性尺度（ＳＲＳ）、または反復的行動尺度修正版（ＲＢＳ−Ｒ）などの他の方法によって評価してもよい。これらの検査に従って改善を示す個体も、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると判断されるようになる。
【００１７】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬
本発明を使用して、ＦＸＳを患うどの個体がｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療に応答する可能性があるかを決定することができる。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の例としては、エプチドミメティック（eptidomimetic）、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補が挙げられる。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の一例は、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルである。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬である（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルおよびその製造方法は、米国特許第７，３４８，３５３号に開示され、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれるものとする。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬である（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルは、以下の構造式を有する。
【００１８】
【化１】
2013524840.tif 000002
【００１９】
米国特許第７，３４８，３５３号に開示されているものなど他のｍＧＬＵＲ５拮抗薬も、本発明の方法で使用することが考えられる。
【００２０】
一実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（Ｉ）の化合物
【００２１】
【化２】
2013524840.tif 000003
であり、式中
Ｒ１は、場合によって置換されているアルキルまたは場合によって置換されているベンジルを表し、
Ｒ２は、水素（Ｈ）、場合によって置換されているアルキルまたは場合によって置換されているベンジルを表し、あるいは
Ｒ１とＲ２はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によって置換されている、環原子１４個未満を有するヘテロ環を形成し、
Ｒ３は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノを表し、
Ｒ４は、ヒドロキシ（ＯＨ）、ハロゲン、アルキル、またはアルコキシを表し、
Ｑは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
Ｖは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
Ｗは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
ＸはＣＨまたはＮを表し、
Ｙは、ＣＨ、ＣＲ３、またはＮを表し、
Ｚは、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯを表す、
ただし、ＱとＶとＷは、同時にＮではないことを条件とする。
【００２２】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＩ）の化合物であり、式（ＩＩ）の化合物は、Ｑ、Ｖ、Ｗのうちの少なくとも１つがＮである式（Ｉ）の化合物である。
【００２３】
さらに別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＩＩ）の化合物であり、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＹがＣＲ３である式（ＩＩ）の化合物である。
【００２４】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）、ならびに対応する中間化合物に存在する好ましい置換基、好ましい数値範囲、または好ましい基の範囲を以下に定義する。
【００２５】
Ｘは、好ましくはＣＨを表す。
【００２６】
Ｙは、好ましくはＣＨまたはＣＲ３を表し、Ｒ３は、好ましくはハロゲン、特に好ましくはクロロを表す。
【００２７】
Ｚは、好ましくはＮＨを表す。
【００２８】
Ｒ３は、好ましくはフルオロ、クロロ、Ｃ１〜４アルキル、例えばメチルを表す。
【００２９】
Ｒ３は、特に好ましくはクロロを表す。
【００３０】
Ｒ１とＲ２は、好ましくはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、非置換のまたは置換されている、環原子３〜１１個およびヘテロ原子１〜４個を有するヘテロ環を形成する。ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓからなる群から選択され、置換基は、オキソ（＝Ｏ）、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、シアノ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニルアルキル、Ｃ１〜４ハロゲンアルキル、Ｃ６〜ｉｏアリール、ハロゲン−Ｃ６〜ｉｏアリール、Ｃ６〜ｉｏアリールオキシ、およびＣ６〜ｉｏアリール−Ｃ１〜４アルキルからなる群から選択される。
【００３１】
Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、非置換、一置換または二置換（twofold substituted）の、環原子５〜９個およびヘテロ原子１〜３個を有するヘテロ環を形成する。ヘテロ原子は、ＮおよびＯからなる群から選択される。置換基は、ハロゲンおよびＣ１〜４アルキルからなる群から選択される。
【００３２】
Ｒ１とＲ２は、好ましくはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、
【００３３】
【化３】
2013524840.tif 000004
からなる群から選択される非置換、一置換または二置換ヘテロ環を形成し、置換基は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、トリフルオロメチル、フルオロプロピル、およびジフルオロプロピルからなる群から選択される。
【００３４】
Ｒ１およびＲ２は、好ましくは互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ４ＢＩｋＯＸｙまたはハロゲンで場合によって置換されているＣｉ〜Ｃ４アルキルまたはベンジルを表す。
【００３５】
上記の全般的または好ましい基の定義は、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の最終生成物に適用されるが、それに対応して、それぞれの場合において調製に必要とされる出発材料または中間体にも適用される。これらの基の定義は、相互に随意に組み合わせることができ、すなわち好ましい所与の範囲間での組合せを含むことができる。さらに、個々の定義が適用されることはできない。
【００３６】
本発明によれば、好ましいとして以上に記載した意味の組合せを含む式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が好ましい。
【００３７】
本発明によれば、特に好ましいとして以上に列挙した意味の組合せを含む式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が特に好ましい。
【００３８】
本発明によれば、極めて特に好ましいとして以上に列挙した意味の組合せを含む式（Ｉ）の化合物が極めて特に好ましい。
【００３９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）中、Ｒ２が非置換または置換ヘテロ環を表す、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が好ましい。
【００４０】
以下に示す式（ＩＩａ〜ＩＩｅ）の化合物が特に好ましい：
【００４１】
【化４】
2013524840.tif 000005
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００４２】
【化５】
2013524840.tif 000006
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００４３】
【化６】
2013524840.tif 000007
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００４４】
【化７】
2013524840.tif 000008
（Ｈｄ）
式中、Ｒ４は、Ｃｉ〜Ｃ４アルキル、好ましくはメチルを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００４５】
【化８】
2013524840.tif 000009
式中、Ｒ４は、ハロゲン、好ましくはクロロを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する。
【００４６】
本発明のさらに好ましい化合物は、以下に示す式（ＩＩＩａ〜ＩＩＩｅ）を有する：
【００４７】
【化９】
2013524840.tif 000010
式中、置換基はすべて、本明細書に記載の意味を有する；
【００４８】
【化１０】
2013524840.tif 000011
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００４９】
【化１１】
2013524840.tif 000012
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００５０】
【化１２】
2013524840.tif 000013
（ＩＩＩｄ）
式中、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、好ましくはメチルを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００５１】
【化１３】
2013524840.tif 000014
式中、Ｒ４は、ハロゲン、好ましくはクロロを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する。
【００５２】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の具体的な化合物としては、本明細書に示されている実施例に記載のものが挙げられる。
【００５３】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＶ）の化合物：
【００５４】
【化１４】
2013524840.tif 000015
であり、式中
ｍは０または１であり、
ｎは０または１であり、
Ａはヒドロキシであり、
Ｘは水素であり、
Ｙは水素であり、あるいは
ＡはＸまたはＹと単結合を形成し、
Ｒ０は、水素、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＣＯＯＲ１（式中、Ｒ１は（Ｃ１〜４）アルキルである）、または−ＣＯＲ２（式中、Ｒ２は水素または（Ｃ１〜４）アルキルである）であり、
Ｒは、−ＣＯＲ３、−ＣＯＯＲ３、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、または−ＳＯ２Ｒ６であり、Ｒ３は、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、または場合によって置換されているフェニル、２−ピリジルもしくは２−チエニルであり、Ｒ４およびＲ５は独立して、水素または（Ｃ１〜４）アルキルであり、Ｒ６は、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、または場合によって置換されているフェニルであり、Ｒ’は、水素または（Ｃ＾アルキルであり、
Ｒ”は、水素または（Ｃ１〜４）アルキルであり、あるいは
Ｒ’とＲ”は一緒になって、−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｍ−基を形成し、ｍは０、１または２であり、その場合にｎとｍのうち一方は０と異なる、
ただし、ｎが０であり、Ａがヒドロキシであり、ＸとＹが共に水素であり、ＲがＣＯＯＥｔであり、Ｒ’とＲ”が一緒になって、−’（ＣＨｚ）２−基を形成するとき、Ｒ０は、水素、トリフルオロメチルおよびメトキシと異なることを条件とする。
【００５５】
式（ＩＶ）の化合物の例としては、
（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−フラン−２−イル−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−イル）−メタノン
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−クロロフェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（ＳａＲＳ＾ＳＲＪａＲＳ＾−ヒドロキシ＾−フェニルエチニル−オクタヒドロ−インドール−ｉ−カルボン酸（Ｓ）（テトラヒドロフラン−３−イル）エステル
（ＳａＲＳ＾ＳＲＪａＲＳ＾−ヒドロキシ＾−フェニルエチニル−オクタヒドロ−インドール−ｉ−カルボン酸（Ｒ）（テトラヒドロフラン−３−イル）エステル
（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−ヒドロキシ−４−（３−クロロフェニルエチニル）−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸−（Ｓ）（テトラヒドロフラン−３イル）エステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（４−フルオロ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−クロロフェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−１−メタンスルホニル−オクタヒドロ−インドール
（±）−（３ａＲＳ，７ａＲＳ）−４−フェニルエチニル−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステルおよび
（±）−（ＲＳ）−４−フェニルエチニル−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル（±Ｊ−ＣＳＲＳＪａＲＳＪ＾＾＾−トリフルオロ−ｉ−Ｃ＾フェニルエチニル＾．Ｓ．Ｓａ．ｅｊ．ｙａ−ヘキサヒドロ−インドール−ｉ−イル）−エタノン
（±）−（ＲＳ）−４−ｍ−トリルエチニル−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−ｍ−トリルエチニル−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（４−クロロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（２−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（ＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（ＲＳ）−４−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−フェニルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｐ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−（３−シアノ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±ＨＳａＲＳ＾ＲＳＪａＳＲＭ−ヒドロキシ＾Ｓ−メトキシ−フェニルエチニＯ−オクタヒドロ−イソインドール＾−カルボン酸エチルエステル
（±ＨＳａＲＳ＾ＲＳＪａＳＲＭ−ＣＳ−フルオロ−フェニルエチニル＾−ヒドロキシ−オクタヒドロ−イソインドール＾−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−フェニルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸メチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−フラン−２−イル−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−イル）−メタノン
（±Ｊ＾ＳａＲＳ＾ＲＳ．ｙａＳＲＪ−シクロプロピル＾−ヒドロキシ＾−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール＾−イル）−メタノン
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−イル）−ピリジン−３−イル−メタノン
（±）−（（１ＳＲ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステルおよび
（±）−（（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−／ｎ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（（３−ヒドロキシ−３−／ｎ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−（４−メトキシ−ベンジル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（（３−ヒドロキシ−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−（４−メトキシ−ベンジル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−５，５−ジメチル−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−５，５−ジメチル−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−５，５−ジメチル−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド。
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−アセトアミド。
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｆ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｆ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸メチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸メチルエステル（±）−（３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−２−エニル）−カルバミン酸エチルエステルおよび（±）−３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−３−エニル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−メチル−（３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−３−エニル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−フェニルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−フラン−２−イル−メタノン（±）−［（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−フラン−２−イル−メタノン
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−モルホリン−４−イル−メタノン
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノン
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステルおよび（±）−（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
が挙げられる。
【００５６】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲモジュレーターは、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（Ｖ）の化合物：
【００５７】
【化１５】
2013524840.tif 000016
であり、式中
Ｒ１は水素またはアルキルを表し、
Ｒ２は非置換または置換ヘテロ環を表し、あるいは
Ｒ２は非置換または置換アリールを表し、
Ｒ３はアルキルまたはハロゲンを表し、
Ｘは、単結合、あるいは１個または複数の酸素原子またはカルボニル基もしくはカルボニルオキシ基で場合によって中断されているアルカンジイル基を表す。
【００５８】
式（Ｖ）の化合物の例としては、
フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド
ベンゾ［１，３］ジオキソール−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
キノキサリン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾオキサゾール−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２，５−ジメチル−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
フラン−３−カルボン酸（（１Ｒ．ＳＲＪ−Ｓ−ヒドロキシ−Ｓ−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシＯ−アミド
フラン−３−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  フラン−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ．ＳＲＪ−Ｓ−ヒドロキシ−Ｓ−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシＯ−アミド
フラン−２−カルボン酸（（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−２−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド  Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド  ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド  ベンゾ［１，３］ジオキソール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
イソキサゾール−５−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
イソキサゾール−５−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ５−クロロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｓ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
δ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
δ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ジメチルアミノ−ベンズアミド
１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−フルオロ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−エチル−ブチルアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−４−オキソ−ブチルアミド
２−（２−ベンジルオキシ−エトキシ）−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フェニル−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−（１Ｈ−インドール−４−イル）−プロピオンアミド  ２−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フェノキシ−プロピオンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−フルオロ−フェニル）−アセトアミド
５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−テレフタルアミド酸メチルエステル
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アセトアミド
５−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ヒドロキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド
４−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
４−アミノ−５−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−３−アミノ−４−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
３−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
２−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フルオロ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メタンスルホニル−ベンズアミド
ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３−アミノ−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
４−（４−アミノ−ベンゾイルアミノ）−安息香酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリミジン−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド  ３−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２，３−ジメトキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−オキソ−４−フェニル−ブチルアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
５−ブロモ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド  イソキノリン−１−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３−ベンゾイル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−メチル−ニコチンアミド
キノキサリン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ピリダジン−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−メチルスルファニル−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−トリフルオロメチル−ニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−６−メチル−ニコチンアミド
６−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−６−メチル−イソニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（４，５−ジメトキシ−３−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−１−イル）−アセトアミド
１＾．δ．β−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−Ｓ−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−（１Ｈ−インドール−２−イル）−プロピオンアミド
６−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシルカルバモイル］−ピリジン−２−カルボン酸イソプロピルエステル
キノリン−６−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ベンゾフラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−メトキシ−フェノキシ）−アセトアミド
が挙げられる。
【００５９】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲモジュレーターは、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＶＩ）の化合物
【００６０】
【化１６】
2013524840.tif 000017
であり、式中
Ｒ１は水素またはアルキルを表し、
Ｒ  Ｒ２は非置換（unbubstituted）または置換ヘテロ環を表し、あるいは
Ｒ２は非置換または置換アリールを表し、
Ｒ３はアルキルまたはハロゲンを表す。
【００６１】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の別の例としては、国際公開第２００４／０１４８８１号に定義される式（Ｉ）の化合物および国際公開第２００７／０２１５７５号に定義される式（Ｉ）の化合物が挙げられる。これらの公報の内容は参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００６２】
本発明を使用して、ＦＸＳを患うどの個体がｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療に応答する可能性があるかを決定することができる。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の例としては、エプチドミメティック（eptidomimetic）、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補が挙げられる。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の一例は、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルである。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬である（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルおよびその製造方法は、米国特許第７，３４８，３５３号に開示され、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれるものとする。ｍＧｌｕＲ５拮抗薬である（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルは、以下の構造式を有する。
【００６３】
【化１７】
2013524840.tif 000018
【００６４】
米国特許第７，３４８，３５３号に開示されているものなど他のｍＧＬＵＲ５拮抗薬も、本発明の方法で使用することが考えられる。
【００６５】
一実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（Ｉ）の化合物
【００６６】
【化１８】
2013524840.tif 000019
であり、式中、
Ｒ１は、場合によって置換されているアルキルまたは場合によって置換されているベンジルを表し、
Ｒ２は、水素（Ｈ）、場合によって置換されているアルキルまたは場合によって置換されているベンジルを表し、あるいは
Ｒ１とＲ２はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によって置換されている、環原子１４個未満を有するヘテロ環を形成し、
Ｒ３は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノを表し、
Ｒ４は、ヒドロキシ（ＯＨ）、ハロゲン、アルキル、またはアルコキシを表し、
Ｑは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
Ｖは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
Ｗは、ＣＨ、ＣＲ４、またはＮを表し、
ＸはＣＨまたはＮを表し、
Ｙは、ＣＨ、ＣＲ３、またはＮを表し、
Ｚは、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯを表す、
ただし、ＱとＶとＷは、同時にＮではないことを条件とする。
【００６７】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＩ）の化合物であり、式（ＩＩ）の化合物は、Ｑ、ＶおよびＷのうちの少なくとも１つがＮである式（Ｉ）の化合物である。
【００６８】
さらに別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＩＩ）の化合物であり、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＹがＣＲ３である式（ＩＩ）の化合物である。
【００６９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）、ならびに対応する中間化合物に存在する好ましい置換基、好ましい数値範囲、または好ましい基の範囲を以下に定義する。
【００７０】
Ｘは、好ましくはＣＨを表す。
【００７１】
Ｙは、好ましくはＣＨまたはＣＲ３を表し、Ｒ３は、好ましくはハロゲン、特に好ましくはクロロを表す。
【００７２】
Ｚは、好ましくはＮＨを表す。
【００７３】
Ｒ３は、好ましくはフルオロ、クロロ、Ｃ１〜４アルキル、例えばメチルを表す。
【００７４】
Ｒ３は、特に好ましくはクロロを表す。
【００７５】
Ｒ１とＲ２は、好ましくはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、非置換または置換されている、環原子３〜１１個およびヘテロ原子１〜４個を有するヘテロ環を形成する。ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓからなる群から選択され、置換基は、オキソ（＝Ｏ）、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、シアノ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニルアルキル、Ｃ１〜４ハロゲンアルキル、Ｃ６〜ｉｏアリール、ハロゲン−Ｃ６〜ｉｏアリール、Ｃ６〜ｉｏアリールオキシ、およびＣ６〜ｉｏアリール−Ｃ１〜４アルキルからなる群から選択される。
【００７６】
Ｒ１とＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、環原子５〜９個およびヘテロ原子１〜３個を有する非置換、一置換または二置換ヘテロ環を形成する。ヘテロ原子は、ＮおよびＯからなる群から選択される。置換基は、ハロゲンおよびＣ１〜４アルキルからなる群から選択される。
【００７７】
Ｒ１とＲ２は、好ましくはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、
【００７８】
【化１９】
2013524840.tif 000020
からなる群から選択される非置換、一置換または二置換ヘテロ環を形成し、置換基は、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、トリフルオロメチル、フルオロプロピル、およびジフルオロプロピルからなる群から選択される。
【００７９】
Ｒ１およびＲ２は、好ましくは互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ４ＢＩｋＯＸｙまたはハロゲンで場合によって置換されているＣｉ〜Ｃ４アルキルまたはベンジルを表す。
【００８０】
上記の全般的または好ましい基の定義は、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の最終生成物に適用されるが、それに対応して、それぞれの場合において調製に必要とされる出発材料または中間体にも適用される。これらの基の定義は、相互に随意に組み合わせることができ、すなわち好ましい所与の範囲間での組合せを含むことができる。さらに、個々の定義が適用されることはできない。
【００８１】
本発明によれば、好ましいとして以上に記載した意味の組合せを含む式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が好ましい。
【００８２】
本発明によれば、特に好ましいとして以上に列挙した意味の組合せを含む式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が特に好ましい。
【００８３】
本発明によれば、極めて特に好ましいとして以上に列挙した意味の組合せを含む式（Ｉ）の化合物が極めて特に好ましい。
【００８４】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）中、Ｒ２が非置換または置換ヘテロ環を表す、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物が好ましい。
【００８５】
以下に示す式（ＩＩａ〜ＩＩｅ）の化合物が特に好ましい：
【００８６】
【化２０】
2013524840.tif 000021
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００８７】
【化２１】
2013524840.tif 000022
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００８８】
【化２２】
2013524840.tif 000023
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００８９】
【化２３】
2013524840.tif 000024
（Ｈｄ）
式中、Ｒ４は、Ｃｉ〜Ｃ４アルキル、好ましくはメチルを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００９０】
【化２４】
2013524840.tif 000025
式中、Ｒ４は、ハロゲン、好ましくはクロロを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する。
【００９１】
本発明のさらに好ましい化合物は、以下に示す式（ＩＩＩａ〜ＩＩＩｅ）を有する：
【００９２】
【化２５】
2013524840.tif 000026
式中、置換基はすべて、本明細書に記載の意味を有する；
【００９３】
【化２６】
2013524840.tif 000027
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００９４】
【化２７】
2013524840.tif 000028
式中、置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００９５】
【化２８】
2013524840.tif 000029
（ＩＩＩｄ）
式中、Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、好ましくはメチルを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する；
【００９６】
【化２９】
2013524840.tif 000030
式中、Ｒ４は、ハロゲン、好ましくはクロロを表し、他の置換基は本明細書に記載の意味を有する。
【００９７】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の具体的な化合物としては、本明細書に示されている実施例に記載のものが挙げられる。
【００９８】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬は、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＩＶ）の化合物：
【００９９】
【化３０】
2013524840.tif 000031
であり、式中、
ｍは０または１であり、
ｎは０または１であり、
Ａはヒドロキシであり、
Ｘは水素であり、
Ｙは水素であり、あるいは
ＡはＸまたはＹと単結合を形成し、
Ｒ０は、水素、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ１〜４）アルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＣＯＯＲ１（式中、Ｒ１は（Ｃ１〜４）アルキルである）、または−ＣＯＲ２（式中、Ｒ２は水素または（Ｃ１〜４）アルキルである）であり、
Ｒは、−ＣＯＲ３、−ＣＯＯＲ３、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、または−ＳＯ２Ｒ６であり、Ｒ３は、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、または場合によって置換されているフェニル、２−ピリジルもしくは２−チエニルであり、Ｒ４およびＲ５は独立して、水素または（Ｃ１〜４）アルキルであり、Ｒ６は、（Ｃ１〜４）アルキル、（Ｃ３〜７）シクロアルキル、または場合によって置換されているフェニルであり、Ｒ’は、水素または（Ｃ＾アルキルであり、
Ｒ”は、水素または（Ｃ１〜４）アルキルであり、あるいは
Ｒ’とＲ”は一緒になって、−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｍ−基を形成し、ｍは０、１または２であり、その場合にｎとｍのうち一方は０と異なる、
ただし、ｎが０であり、Ａがヒドロキシであり、ＸとＹが共に水素であり、ＲがＣＯＯＥｔであり、Ｒ’とＲ”が一緒になって、−’（ＣＨｚ）２−基を形成するとき、Ｒ０は、水素、トリフルオロメチルおよびメトキシと異なることを条件とする。
【０１００】
式（ＩＶ）の化合物の例としては、
（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−フラン−２−イル−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−イル）−メタノン
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−クロロフェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（ＳａＲＳ＾ＳＲＪａＲＳ＾−ヒドロキシ＾−フェニルエチニル−オクタヒドロ−インドール−ｉ−カルボン酸（Ｓ）（テトラヒドロフラン−３−イル）エステル
（ＳａＲＳ＾ＳＲＪａＲＳ＾−ヒドロキシ＾−フェニルエチニル−オクタヒドロ−インドール−ｉ−カルボン酸（Ｒ）（テトラヒドロフラン−３−イル）エステル
（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−ヒドロキシ−４−（３−クロロフェニルエチニル）−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸−（Ｓ）（テトラヒドロフラン−３イル）エステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（４−フルオロ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＳＲ，７ａＲＳ）−４−（３−クロロフェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−１−メタンスルホニル−オクタヒドロ−インドール
（±）−（３ａＲＳ，７ａＲＳ）−４−フェニルエチニル−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステルおよび
（±）−（ＲＳ）−４−フェニルエチニル−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル（±Ｊ−ＣＳＲＳＪａＲＳＪ＾＾＾−トリフルオロ−ｉ−Ｃ＾フェニルエチニル＾．Ｓ．Ｓａ．ｅｊ．ｙａ−ヘキサヒドロ−インドール−ｉ−イル）−エタノン
（±）−（ＲＳ）−４−ｍ−トリルエチニル−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−ｍ−トリルエチニル−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（４−クロロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（２−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（ＲＳ）−４−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ＲＳ，７ａＲＳ）−４−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−２，３，３ａ，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（ＲＳ）−４−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−２，３，５，６，７，７ａ−ヘキサヒドロ−インドール−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−フェニルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｐ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−（３−シアノ−フェニルエチニル）−４−ヒドロキシ−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸エチルエステル
（±ＨＳａＲＳ＾ＲＳＪａＳＲＭ−ヒドロキシ＾Ｓ−メトキシ−フェニルエチニＯ−オクタヒドロ−イソインドール＾−カルボン酸エチルエステル
（±ＨＳａＲＳ＾ＲＳＪａＳＲＭ−ＣＳ−フルオロ−フェニルエチニル＾−ヒドロキシ−オクタヒドロ−イソインドール＾−カルボン酸エチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−フェニルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−カルボン酸メチルエステル
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−フラン−２−イル−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−イル）−メタノン
（±Ｊ＾ＳａＲＳ＾ＲＳ．ｙａＳＲＪ−シクロプロピル＾−ヒドロキシ＾−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール＾−イル）−メタノン
（±）−（３ａＲＳ，４ＲＳ，７ａＳＲ）−（４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−イソインドール−２−イル）−ピリジン−３−イル−メタノン
（±）−（（１ＳＲ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステルおよび
（±）−（（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−／ｎ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（（３−ヒドロキシ−３−／ｎ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−（４−メトキシ−ベンジル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（（３−ヒドロキシ−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−（４−メトキシ−ベンジル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−５，５−ジメチル−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−５，５−ジメチル−３−／ｒ７−トリルエチニル−シクロヘキシル）−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−５，５−ジメチル−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＲＳ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル
（±）−［（１ＲＳ，３ＳＲ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−メチル−カルバミン酸メチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド。
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−Ｎ−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−アセトアミド
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−Ｎ−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−アセトアミド。
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｆ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−ヒドロキシ−３−（３−メトキシ−フェニルエチニル）−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｆ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−（３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−（３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−（１ＲＳ，３ＲＳ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸メチルエステル（±）−（１ＲＳ，３ＳＲ）−［３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−カルバミン酸メチルエステル（±）−（３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−２−エニル）−カルバミン酸エチルエステルおよび（±）−３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−３−エニル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−メチル−（３−フェニルエチニル−シクロヘキサ−３−エニル）−カルバミン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−フェニルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−フラン−２−イル−メタノン（±）−［（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−フラン−２−イル−メタノン
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−モルホリン−４−イル−メタノン
（±）−［（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−イル］−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−メタノン
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステルおよび（±）−（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−（３−クロロ−フェニルエチニル）−５−ヒドロキシ−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＳＲ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
（±）−（４ａＲＳ，５ＲＳ，８ａＳＲ）−５−ヒドロキシ−５−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル
が挙げられる。
【０１０１】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲモジュレーターは、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（Ｖ）の化合物：
【０１０２】
【化３１】
2013524840.tif 000032
であり、式中、
Ｒ１は水素またはアルキルを表し、
Ｒ２は非置換または置換ヘテロ環を表し、あるいは
Ｒ２は非置換または置換アリールを表し、
Ｒ３はアルキルまたはハロゲンを表し、
Ｘは、単結合、あるいは１個または複数の酸素原子またはカルボニル基もしくはカルボニルオキシ基で場合によって中断されているアルカンジイル基を表す。
【０１０３】
式（Ｖ）の化合物の例としては、
フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド  ベンゾ［１，３］ジオキソール−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
キノキサリン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾフラン−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ベンゾオキサゾール−２−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２，５−ジメチル−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
フラン−３−カルボン酸（（１Ｒ．ＳＲＪ−Ｓ−ヒドロキシ−Ｓ−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシＯ−アミド
フラン−３−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  フラン−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ．ＳＲＪ−Ｓ−ヒドロキシ−Ｓ−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシＯ−アミド
フラン−２−カルボン酸（（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−２−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（１Ｓ，３Ｓ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド  イソキサゾール−５−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
テトラヒドロ−ピラン−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
（Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸（（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−ｍ−トリルエチニル−シクロヘキシル）−アミド
フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸［（±）−（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−フルオロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド  Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド  ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド  ベンゾ［１，３］ジオキソール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
イソキサゾール−５−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ５−メチル−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２−メチル−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
イソキサゾール−５−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ５−クロロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−フラン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｓ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
（Ｒ）−テトラヒドロ−フラン−３−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３，５−ジフルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ６−メチル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｓ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
δ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
δ−クロロ−ピリジン＾−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−クロロ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ジメチルアミノ−ベンズアミド
１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−フルオロ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−エチル−ブチルアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−４−オキソ−ブチルアミド
２−（２−ベンジルオキシ−エトキシ）−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フェニル−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−（１Ｈ−インドール−４−イル）−プロピオンアミド  ２−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フェノキシ−プロピオンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−フルオロ−フェニル）−アセトアミド
５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−テレフタルアミド酸メチルエステル
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アセトアミド
５−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ヒドロキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド
４−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
４−アミノ−５−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−３−アミノ−４−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
３−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド
２−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−フルオロ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−メタンスルホニル−ベンズアミド
ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３−アミノ−ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
６−アミノ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
４−（４−アミノ−ベンゾイルアミノ）−安息香酸［（１Ｒ，３Ｒ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリミジン−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド  ３−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２，３−ジメトキシ−ベンズアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−オキソ−４−フェニル−ブチルアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
５−ブロモ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド  イソキノリン−１−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ピラジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
３−ベンゾイル−ピリジン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−メチル−ニコチンアミド
キノキサリン−２−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
ピリダジン−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−メチルスルファニル−ニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−４−トリフルオロメチル−ニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−イソニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−６−メチル−ニコチンアミド
６−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−ニコチンアミド
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−６−メチル−イソニコチンアミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（４，５−ジメトキシ−３−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−１−イル）−アセトアミド
１＾．δ．β−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−Ｓ−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−３−（１Ｈ−インドール−２−イル）−プロピオンアミド
６−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシルカルバモイル］−ピリジン−２−カルボン酸イソプロピルエステル
キノリン−６−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
５−メチル−イソオキサゾール−４−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド  ベンゾフラン−３−カルボン酸［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−アミド
Ｎ−［（１Ｓ，３Ｓ）−３−（３−クロロ−フェニルエチニル）−３−ヒドロキシ−シクロヘキシル］−２−（２−メトキシ−フェノキシ）−アセトアミド
が挙げられる。
【０１０４】
別の実施形態において、ｍＧｌｕＲモジュレーターは、遊離塩基または酸付加塩の形態の式（ＶＩ）の化合物
【０１０５】
【化３２】
2013524840.tif 000033
であり、式中、
Ｒ１は水素またはアルキルを表し、
Ｒ  Ｒ２は非置換（unbubstituted）または置換ヘテロ環を表し、あるいは
Ｒ２は非置換または置換アリールを表し、
Ｒ３はアルキルまたはハロゲンを表す。
【０１０６】
ｍＧｌｕＲ５拮抗薬の別の例としては、国際公開第２００４／０１４８８１号に定義される式（Ｉ）の化合物および国際公開第２００７／０２１５７５号に定義される式（Ｉ）の化合物が挙げられる。これらの公報の内容は参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【０１０７】
バイオマーカー
ＦＸＳを患う個体由来の試料におけるＦＭＲ１遺伝子メチル化の程度、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現の存在の欠如、およびＦＭＲ１タンパク質の存在の欠如は、その個体の、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療への応答性を予測するためのバイオマーカーとして、個別にまたは任意の組合せで役に立つことができる。
【０１０８】
これらバイオマーカーの存在については、対象の個体由来の試料において決定することができる。試料は、血液などの流体試料、口腔細胞などの細胞試料、または皮膚もしくは毛嚢などの組織試料を含めて、任意の試料とすることができる。
【０１０９】
本明細書では、「予測すること（predicting）」は、本明細書に記載される方法が、ＦＸＳを患う個体がｍＧｌｕＲ５の治療に応答するようになる可能性を医療提供者が決定できるように情報を提供することを示す。対象の試料において関連する（１種または複数の）バイオマーカーのポジティブな決定に続いて、個体にｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与することになる。
【０１１０】
ＦＭＲ１プロモーター−メチル化分析
ＦＭＲ１遺伝子メチル化の程度は、患者が、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬への治療上の応答を示すようになるかどうかについての指標となるものである。具体的には、個体の対象のＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されていると決定された場合、その個体は、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療に応答するようになる個体であると決定される。
【０１１１】
ＦＭＲ１遺伝子の配列は、当技術分野において公知である（GenBank L29074 L38501）（Nucleic Acids Res. 2002 Jul 15;30（14）:3278−85）（Hum Mol Genet. 2010 Apr 15;19（8）:1618−32. Epub 2010 Jan 29）。図１は、ＦＭＲ１遺伝子のＦＭＲ１プロモーター領域および５’−ＵＴＲを示す。図１には、ＦＭＲ１遺伝子におけるＦＲＥＥ１／２、古典的ＣｐＧアイランドおよびＣＧＧ反復の配列および位置も示す。配列の番号付けは、GenBank L29074 L38501によるものである。５２個のＣｐＧ部位を含む古典的ＣｐＧアイランドは、１３４３９から１３８０９の位置に存在する。ＣＧＧ反復は、１３８３３から１３８９２の位置に存在する。ＦＲＥＥ１は、１３２２７から１３４３９の位置（古典的ＣｐＧアイランドの上流）に存在する。ＦＲＥＥ２は、１３９５１から１４１９９の位置（ＣＧＧ反復の下流）に存在する。
【０１１２】
本発明に従ってそのメチル化状態が分析されるＦＭＲ１遺伝子は、少なくとも１個のＣｐＧ部位を含む限り、任意の長さとすることができる。一実施例において、分析されるＦＭＲ１遺伝子領域は、５２個のＣｐＧ部位を含む、ＦＭＲ１の古典的ＣｐＧアイランドである（図１を参照；図中、この領域は太字で記載されている；配列番号１）。別の実施例において、ＦＭＲ１の古典的ＣｐＧアイランドの上流領域（ＦＲＥＥ１）および／または下流領域（ＦＲＥＥ２）が分析される。ＦＲＥＥ１およびＦＲＥＥ２のメチル化は、ＦＭＲ１の古典的ＣｐＧアイランドと相関関係が高い（Hum Mol Genet. 2010 Apr 15;19（8）:1618−32. Epub 2010 Jan 29.）。
【０１１３】
もう１つの実施例において、ＦＭＲ１遺伝子の５’−ＵＴＲに位置するＣＧＧ反復を、そのメチル化状態について分析し、個体がｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであるかどうかを決定するのに使用することができる。
【０１１４】
別の実施例において、ＦＭＲ１プロモーター領域の一部分を、そのメチル化状態について分析する。特定の実施例において、ＦＭＲ１プロモーター領域は２２個のＣｐＧ部位を含むものであり、配列番号２のヌクレオチド配列を有する（以下に示す；ＣｐＧ部位を太字および下線で示す）。
【数１】
2013524840.tif 000034
【０１１５】
別の実施例において、分析することができるＦＭＲ１プロモーター領域の一部分は、１５個のＣｐＧ部位を有する配列番号３である。
【数２】
2013524840.tif 000035
【０１１６】
ＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の程度は、そのＦＭＲ１遺伝子領域のシトシンにおけるメチル基修飾の存在もしくは非存在、またはレベルを検出することによって決まる。
【０１１７】
様々な方法を使用して、対象の個体のメチル化状態を決定することができる。ＭＳＰなどの定性分析を使用して、生体試料の対象領域においてメチル化ＦＭＲ１しか検出されないとき、個体は、レスポンダーであると決定される。本明細書では、このような患者は、生体試料においてＦＭＲ１遺伝子の「全部」がメチル化している個体または「完全メチル化されている」とも呼ばれる。明確にするため、このような定性分析を使用して、レスポンダーであると指定された個体とは、対象の領域で非メチル化ＦＭＲ１が検出されない個体である。一方、「部分メチル化されている」ＦＭＲ１遺伝子領域を有する個体は、メチル化ＦＭＲ１と非メチル化ＦＭＲ１の両方が対象の遺伝子領域に存在している個体を指し（例えば、遺伝子領域はメチル化のレベルが８０％未満である）、このような個体は、ｍＧｌｕＲ５のノンレスポンダーである。
【０１１８】
本発明の方法において有用である別法は、定量ＰＣＲ、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（matrix−assisted laser desorption/ionization time−to−flight mass spectrometry）（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、リアルタイムＰＣＲ（メチルライト）と組み合わせたメチル化感受性制限酵素消化などの定量分析方法である。個体のＦＭＲ１遺伝子の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合、その個体はｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると決定される。本明細書では、「ほとんど全部」とは、生体試料におけるメチル化ＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化のレベルが、例えば９９．５％以上、例えば９９．６、９９．７、９９．８、または９９．９％を示すとき、あるいは生体試料におけるメチル化ＦＭＲ１遺伝子領域のΔＣｔが８．０以上、例えば８．５を示すときである。本明細書に記載されたような定量分析方法を使用して、対象のＦＭＲ１遺伝子領域の「全部またはほとんど全部」がメチル化されているとき、個体は、対象の「完全メチル化」ＦＭＲ１遺伝子領域を有すると称することもできる。このような個体はｍＧｌｕＲ５のレスポンダーである。
【０１１９】
本発明は、試料におけるＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の程度を評価するのに使用される分析のタイプによって限定されない。実際、遺伝子のメチル化状態を決定するのに使用することができる分析であればいずれでも、本発明の目的のために使用することができる。メチル化パターンを評価するのに使用される分析のタイプの例としては、
（ｉ）ハイブリダイゼーション、定量ＰＣＲ、制限酵素ランドマークゲノムスキャニング（ＲＬＧＳ）、またはアレイベースの基準非依存性メチル化状態プロファイリング（array−based profiling of reference−independent methylation status）（ａＰＲＩＭＥｓ）のうちの少なくとも１つと組み合わせたメチル化感受性制限酵素消化；
（ｉｉ）メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳ−ＰＣＲ）、メチル化特異的定量ＰＣＲ（ｑＭＳ−ＰＣＲ）、プローブベースのメチル化特異的ＰＣＲ、パイロシーケンシング、クローニング／シーケンシング、ＭＳ−ネステッドＰＣＲ、メチル化対立遺伝子の定量分析（ＱＵＡＭＡ）、ヘビーメチル検出（heavy methyl detection）、メチル化感受性高解像能融解（ＭＳ−ＨＲＭ）、メチル結合（ＭＢ）−ＰＣＲ、ＰＣＲおよびデオキシリボヌクレオシド一リン酸（ｄＮＭＰ）分析、またはメチル化依存性断片分離（methylation−dependent fragment separation）（ＭＤＦＳ）のうちの少なくとも１つと組み合わせたＤＮＡバイサルファイト修飾；
（ｉｉｉ）全加水分解と、その後に続く高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）；
（ｉｖ）メチル化ＤＮＡ沈降とメチル化感受性制限酵素の組合せ（ＣＯＭＰＡＲＥ−ＭＳ）；
（ｖ）混合型バイサルファイト制限（combined bisulfite restriction）解析（ＣＯＢＲＡ）；ナノトランジスタまたは他の電子ベースのデバイスでのメチル化ＤＮＡ分子の直接的または間接的検出；および
（ｖｉ）メチル−ＢＥＡＭｉｎｇ（ビーズ、エマルジョン、増幅、および磁性物質）技術
が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０１２０】
一実施例において、メチル化の程度は、メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）を使用して決定することができる。ＭＳＰは、バイサルファイト変換をベースにしたＰＣＲ技法であり、ＤＮＡ  ＣｐＧメチル化を決定するのに使用することができる。ＭＳＰは、ＤＮＡをソディウムバイサルファイトによって初期修飾することを含み、非メチル化シトシンがすべて、ウラシルに変換されるが、メチル化シトシンは変換されない。次いで、メチル化ＤＮＡおよび非メチル化ＤＮＡにそれぞれ特異的な２対のプライマーを用いて、ＤＮＡを増幅し、メチル化状態を決定する。プライマーは、典型的には少なくとも２個のＣｐＧ部位を含む。ＭＳＰ法については、米国特許第５，７８６，１４６号；米国特許第６，０１７，７０４号；米国特許第６，２００，７５６号；および米国特許第６，２６５，１７１号に記載されている。それらはそれぞれ、内容全体が参照により本明細書に組み込まれるものとする。一実施例において、ＭＳＰ分析を使用してＦＭＲ１遺伝子の対象の領域において、メチル化ＦＭＲ１が、メチル化ＤＮＡに特異的なプライマーで検出され、かつ非メチル化ＦＭＲ１が、非メチル化ＤＮＡに特異的なプライマーでは検出されないとき、個体はｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと指定されるはずである。
【０１２１】
別の実施例において、メチル化の程度は、対象のＦＭＲ１遺伝子領域において、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）などの増幅プロセスを含む方法を使用して決定することができる。メチル化を検出する異なる様々なｑＰＣＲ法が当技術分野において公知であり、ＨｅａｖｙＭｅｔｈｙｌまたはＭｅｔｈｙｌｉｇｈｔが挙げられる。ＨｅａｖｙＭｅｔｈｙｌ法を使用して、ＦＭＲ１遺伝子領域が、ソディウムバイサルファイトによって初期修飾される。次いで、このＤＮＡを、伸長不可能なオリゴヌクレオチドブロッカーと接触させる。オリゴヌクレオチドブロッカーは、バイサルファイト処理したＤＮＡにメチル化特異的に結合することによって特異性をもたらす。次いで、ＤＮＡを、伸長不可能なオリゴヌクレオチドブロッカーと重なる結合部位を有するプライマーセットと接触させる。ブロッカーが結合すると、プライマーは結合することができず、したがって増幅産物は生成しない。逆に言えば、ブロッカーが結合していない場合、プライマーが結合し、増幅産物を生成することができる（Cottrellら、Nucleic Acids Res. 2004; 32（1）、2004）。
【０１２２】
Ｍｅｔｈｙｌｉｇｈｔ法を使用して、対象のＦＭＲ１遺伝子領域をソディウムバイサルファイトによって初期修飾する。次いで、ＣｐＧジヌクレオチドを含まない領域とハイブリダイズするＰＣＲプライマーを使用して、遺伝子領域を増幅させる。非メチル化ＤＮＡのバイサルファイト変換によって生ずる配列（あるいは、変換されるメチル化配列）としかハイブリダイズしない蛍光標識プローブを使用することによって、蛍光プローブ検出は、プローブがハイブリダイズする配列のメチル化状態を示唆することができる。
【０１２３】
ＤＮＡをメチル化感受性制限酵素で切断し、引き続いて切断されたＤＮＡもしくは切断されていないＤＮＡを選択的に同定および／または分析することによって、対象の領域のメチル化を検出する方法は、当技術分野において公知である。この方法は、制限酵素消化後に無傷ＤＮＡを増幅するステップを含むことができる。例えば、米国特許出願第１０／９７１，９８６号；第１１／０７１，０１３号；および第１０／９７１，３３９号を参照のこと。
【０１２４】
一実施例において、本発明の方法は、ＦＭＲ１遺伝子プロモーター領域をメチル化感受性制限酵素で消化し、対象の領域を増幅するステップを含む。ＤＮＡのメチル化状態は、増幅可能な生成物の存在を検出することによって決定することができる。制限酵素で切断されなかったＤＮＡしか、増幅されないようになる。メチル化感受性制限酵素は、例えばＭｃｒＢＣとすることができ、その認識部位の一部としてＣＧを含み、Ｃがメチル化されているとき切断することができる。さらに、認識部位の一部としてＣＧを含み、Ｃがメチル化されていないときにしか切断することができない制限酵素と、試料を接触させることができる。消化後に、フォワード／リバースオリゴヌクレオチドおよび検出用プローブを使用して、リアルタイムＰＣＲで、所望のＦＭＲ１プロモーター領域を増幅することができる。核酸配列を検出するプローブは、典型的にはその５’末端および３’末端にそれぞれ共有結合している６−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）やテトラクロロフルオレシン（ＴＥＴ）などの蛍光レポーターまたはフルオロフォア、およびテトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）またはブラックホールクエンチャー（ＢＨＱ）などのクエンチャーを有する。
【０１２５】
この分析で使用することができるプライマーの説明用の例としては、フォワードプライマー（Ｆ１）：ＴＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＴＴＣＴ（配列番号４）；リバースプライマー（Ｒ１）：ＧＴＧＣＣＧＧＧＴＣＧＡＡＡＧＡＣ（配列番号５）、およびプローブ（Ｐ１）：色素−ＣＴＧＡＡＧＧＧＣＧＧＴＧＡＣＡＧＧＴＣＧ（配列番号６）−クエンチャー（例えば、色素−ＦＡＭ；クエンチャー−ＢＨＱ１）が挙げられる。この方法を使用して、ΔＣｔを構成する臨床的カットオフ領域が決定される（ＭｃｒＢＣと無処置チャネル間のＰＣＲサイクル閾値の差）。ΔＣｔ値は、数学的アルゴリズムを使用して、メチル化パーセントとして表すこともできる（例えば、Holemonら、Biotechniques 43:683−693, 2007）。一実施例において、８．０以上のΔＣｔ（メチル化が９９．９５％以上のＦＭＲ１遺伝子領域を有する試料に対応する）は、ＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化しており、したがってｍＧｌｕＲ５のレスポンダーである患者を決定するものである。
【０１２６】
上述の方法は、メチル化分析装置を用いて使用することができる。典型的には、方法は、試料におけるＦＭＲ１メチル化の程度を決定し、結果をコンピュータ可読形式に変換し、数学的アルゴリズムを適用して、結果を分類群、すなわちｍＧｌｕＲ５のレスポンダーに分類するステップを含む。
【０１２７】
典型的には、上述の方法は、完全メチル化試料や部分メチル化試料などの対照試料を含む。脆弱Ｘ症候群患者のＢリンパ球から精製されたＤＮＡ（Ｃａｍｄｅｎ，  ＮＪ）を使用して、適切な対照を作製することができ、または特定のメチル化状態を有することがすでに決定されている臨床試料を使用することができる。典型的には、上述の方法は対照試料を含む。個体から採取された完全メチル化（または９５％超メチル化）試料は、ポジティブコントロールとして機能することができ、部分メチル化試料は、ネガティブコントロールとして機能することができる。このような試料は、当技術分野において容易に入手可能であり、あるいは例えばＡＴＣＣ（米国菌培養収集所（American Type Culture Collection）（ＡＴＣＣ）、英国国立生物基準管理研究所（The National Institute for Biological Standards and Control）（ＮＩＢＳＣ）、またはコーリエル医学研究所（Coriell institute for medical research）から商業的に購入することができる。一実施例において、ポジティブコントロールは、ＮＩＢＳＣ（０７／１７０；Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）からの完全メチル化試料とすることができ、ネガティブコントロールは、ＮＩＢＳＣ（０７／１７４；Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）からの部分メチル化試料とすることができる。対照は、被検試料と同時に実施することができ、または試料のメチル化状態を決定するのに使用される技術に基づいて、所定の値として表すことができる。一実施例において、所定の値は、（本明細書に記載される）定量ＰＣＲを使用して得られるΔＣｔ値である。
【０１２８】
本発明のオリゴヌクレオチドは、その配列の変種、または本発明のオリゴヌクレオチドと実質的に同様である配列も含む。変種は、１個または複数（２、３、４、５、６、７、８、９または１０個など）の塩基によって変化するが、対象のＦＭＲ１プロモーター配列上の特定の位置にやはりアニーリングすることができる配列を含む。「実質的に」という用語は、アニーリングまたはハイブリダイゼーションに関して使用されるとき、オリゴヌクレオチドまたはプローブ核酸配列が、そのそれぞれの核酸とハイブリダイズまたはアニーリングするのに十分に相補的であるべきであるという意味である。本明細書では、「ハイブリダイゼーション」という用語は、一本鎖核酸が相補鎖と結合するプロセスを指す。一実施例において、オリゴヌクレオチドは１４〜３０個の塩基である。別の実施例において、オリゴヌクレオチドは１８〜３０個の塩基であり、配列番号４、配列番号５、もしくは配列番号６、またはそれらの変種の配列を含む。
【０１２９】
オリゴヌクレオチドは、当技術分野において公知である適切な任意の方法を使用して、化学合成により調製してもよく、または例えば制限消化（restriction digestion）による生体試料由来のものでもよい。オリゴヌクレオチドは、放射標識、蛍光標識、酵素標識、タンパク質、ハプテン、抗体、配列タグなどの使用を含めて、当技術分野において公知である任意の技法に従って標識することができる。
【０１３０】
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡによる決定
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡレベルは、個体がｍＧｌｕＲ５に応答性である可能性があるかどうかを決定するための予測マーカーとして使用することもできる。ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物の存在が欠如している、または対照に比べてＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物のレベルが減少している、ＦＸＳを患う個体に由来する試料は、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると決定される。この決定は、単独で個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると分類するのに役立つことができ、あるいは他の分析結果を補完する手段として、ＦＭＲ１遺伝子メチル化状態とＦＭＲ１タンパク質決定のどちらかまたは両方と一緒に使用することができる。
【０１３１】
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡのレベルの測定には、ノーザンブロット解析、ヌクレアーゼプロテクションアッセイ（ＮＰＡ）、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＴ−ＰＣＲ  ＥＬＩＳＡ、ＴａｑＭａｎベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ（プローブベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ）、およびＳＹＢＲグリーンベースの定量ＲＴ−ＰＣＲを含めて、当業者に公知のいくつかの技法のうちいずれかが使用されるが、これらに限定されるものではない。
【０１３２】
本発明の方法を使用して、個体は、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡが試料中に検出されないときｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと分類される。ｍＧｌｕＲ５  ｍＲＮＡ転写物の量が減少または低い個体、例えば対照（健常な個体）に比べて５０％（４、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％）のＦＭＲ１  ｍＲＮＡ転写物しか含まない試料も、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーである。
【０１３３】
一実施例において、ｍＲＮＡレベルの検出は、単離されたｍＲＮＡをオリゴヌクレオチドと接触させるステップを含み、当該オリゴヌクレオチドは、ＦＭＲ１遺伝子によってコードされた検出されるｍＲＮＡとハイブリダイズすることができる。核酸プローブは典型的には、例えば全長ｃＤＮＡまたはその一部分、具体的には少なくとも７、１５、３０、５０または１００個のヌクレオチドの長さを有し、ストリンジェントな条件下にｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするのに十分であるオリゴヌクレオチドなどとすることができる。ｍＲＮＡとプローブとのハイブリダイゼーションは、本マーカーが発現されていることを示唆する。
【０１３４】
一形式では、ｍＲＮＡは、例えば、単離されたｍＲＮＡをアガロースゲルで泳動し、ｍＲＮＡをゲルからニトロセルロースなどのメンブランに転写させることによって、固体表面に固定化され、プローブとの接触が行なわれる。
【０１３５】
別の実施例において、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡのレベルは、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＴ−ＰＣＲ  ＥＬＩＳＡ、ＴａｑＭａｎベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ（プローブベースの定量ＲＴ−ＰＣＲ）、およびＳＹＢＲグリーンベースの定量ＲＴ−ＰＣＲで決定することができる。これらの検出スキームは、核酸分子が極めて少数しか存在していない場合にそのような分子を検出するのに特に有用である。本明細書では、増幅プライマーは、遺伝子の５’領域または３’領域にアニーリングすることができ（それぞれプラス鎖およびマイナス鎖、またはその逆）、その間に短い領域を含む１対の核酸分子であると定義される。一般に、増幅プライマーはヌクレオチド約１０から３０個の長さであり、ヌクレオチド約５０から２００個の長さの領域に隣接する。適切な条件下で適切な試薬を使用すると、このようなプライマーは、プライマーが隣接しているヌクレオチド配列を含む核酸分子の増幅を可能にする。
【０１３６】
タンパク質
ＦＭＲ１タンパク質レベルは、個体がｍＧｌｕＲ５に応答性である可能性があるかどうかを決定するための予測マーカーとして使用することもできる。ＦＭＲ１タンパク質の存在が欠如しているまたは対照に比べてＦＭＲ１タンパク質の量が減少している、ＦＸＳを患う個体に由来する試料は、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると決定される。この決定は、単独で個体をｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであると分類するのに役立つことができ、あるいは他の分析結果を補完する手段として、ＦＭＲ１遺伝子メチル化状態とＦＭＲ１  ｍＲＮＡ決定のどちらかまたは両方と一緒に使用することができる。
【０１３７】
ＦＭＲ１タンパク質の検出は、免疫細胞化学的染色、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、免疫組織化学的検査、分光測定、ＨＰＬＣ、質量分析、および時間分解Ｆｏｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）を含むがこれらに限定されない当技術分野において公知の任意の方法で行なうことができる。
【０１３８】
本発明の方法を使用して、個体は、ＦＭＲ１タンパク質が試料中に検出されないときｍＧｌｕＲ５のレスポンダーと分類される。ｍＧｌｕＲ５タンパク質の量が減少または低い個体、例えば試料中のＦＭＲ１タンパク質の量が対照（健常な個体）に比べて５０％（４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％）にすぎない試料も、ｍＧｌｕＲ５のレスポンダーである。
【０１３９】
試料中のＦＭＲ１タンパク質を検出する１つの方法は、マーカータンパク質と特異的に相互作用することができる結合タンパク質によるものである。好ましくは、標識抗体、その結合部分、または他のＦＭＲ１結合相手を使用することができる。抗体は、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体起源（in origin）とすることができ、または生合成で製造することができる。ＦＭＲ１結合相手も、天然分子とすることができ、または合成することができる。複合体形成ＦＭＲ１タンパク質の量、例えば結合タンパク質と結合しているＦＭＲ１タンパク質の量は、当技術分野において示されている標準タンパク質検出方法を使用して決定される。免疫学的分析の設計、理論およびプロトコルについての詳細な総説は、Practical Immunology, Butt, W. R.ら、Marcel Dekker, New York, 1984を含めて、当技術分野の多数のテキストで見ることができる。
【０１４０】
標識抗体を伴うタンパク質の検出には、種々の分析が利用可能である。１ステップ分析において、ＦＭＲ１分子が存在する場合、それを固定化し、標識抗体とともにインキュベートする。標識抗体は、固定化された標的分子に結合する。洗浄して、非結合分子を除去した後、標識の存在について試料を分析する。
【０１４１】
２ステップ分析において、固定化されたＦＭＲ１分子を非標識抗体とともにインキュベートする。次いで、ＦＭＲ１−非標識抗体複合体が存在する場合、それを非標識抗体に特異的な第２の標識抗体に結合させる。試料を洗浄し、標識の存在について分析する。
【０１４２】
抗体を標識するのに使用するマーカーの選択は、用途に応じて変わるようになる。しかし、マーカーの選択は、当業者には容易に決定可能である。
【０１４３】
抗体は、放射性原子、酵素、発色団または蛍光部分、または比色タグで標識することができる。タギング用標識の選択は、所望の検出限界にも依存するようになる。酵素アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、典型的には酵素標識複合体と酵素基質の相互作用によって形成された着色生成物の検出が可能になる。放射性原子の一部の例としては、３２Ｐ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１４Ｐが挙げられる。酵素の一部の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼが挙げられる。発色団部分の一部の例としては、フルオレセインおよびローダミンが挙げられる。当技術分野において公知である方法で、これらの標識に抗体をコンジュゲートさせることができる。例えば、酵素および発色団分子を、ジアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミドなどのカップリング剤によって、抗体にコンジュゲートさせることができる。あるいは、リガンド−受容体ペアにより、コンジュゲーションが起こり得る。一部の好適なリガンド−受容体ペアとしては、例えばビオチン−アビジンまたは−ストレプトアビジンおよび抗体−抗原が挙げられる。
【０１４４】
一態様において、本発明は、血清および他の生物流体中においてＦＭＲ１タンパク質を検出するサンドイッチ技法の使用を企図するものである。この技法では、対象のタンパク質と結合することができる２つの抗体、例えば、固体支持体に固定化されている抗体と、溶液として遊離しているが、容易に検出可能な何らかの化合物で標識されている抗体とが必要である。第２の抗体に使用することができる化学標識の例としては、反応物質または酵素基質に曝露されると着色生成物または電気化学的に活性な生成物を生じる、放射性同位体、蛍光化合物、および酵素、または他の分子が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＦＭＲ１タンパク質を含有する試料がこの系に配置されると、ＦＭＲ１タンパク質は、固定化抗体と標識抗体との両方に結合する。その結果が、支持体表面上の「サンドイッチ」免疫複合体である。複合体形成タンパク質は、非結合試料成分および過剰の標識抗体を洗い流し、支持体の表面でタンパク質と複合体形成した標識抗体の量を測定することによって検出される。サンドイッチイムノアッセイは高特異的であり、感受性が非常に高い。ただし、良好な検出限界の標識を使用することを条件とする。
【０１４５】
好ましくは、試料中におけるＦＭＲ１の存在は、当技術分野において公知であるラジオイムノアッセイまたは酵素結合イムノアッセイ、競合的結合酵素結合イムノアッセイ（competitive binding enzyme−linked immunoassay）、ドットブロット、ウェスタンブロット、クロマトグラフィー、好ましくは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、または他の分析で検出される。
【０１４６】
ドットブロット法は、抗体をプローブとして使用して、所望のタンパク質を検出するために、当業者によってルーチンで実施される（Promega Protocols and Applications Guide, Second Edition, 1991, Page 263, Promega Corporation）。ドットブロット装置を使用して、試料をメンブランに塗布する。標識されたプローブをメンブランとともにインキュベートし、タンパク質の存在を検出する。
【０１４７】
ウェスタンブロット分析は、当業者に周知である（Sambrookら、Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 1989, Vol. 3, Chapter 18, Cold Spring Harbor Laboratory）。ウェスタンブロットでは、試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離する。ゲルをメンブランに転写する。メンブランを標識抗体とともにインキュベートし、所望のタンパク質を検出する。
【０１４８】
上述の分析は、イムノブロッティング、免疫拡散、免疫電気泳動、または免疫沈降などのステップを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１４９】
別の実施例において、試料中におけるＦＭＲＰの存在は、時間分解共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）を使用して検出される。ＴＲ−ＦＲＥＴを使用して、ｃＡＭＰ（Gabrielら、2003, Assay Drug Dev Technol. 1, 291−303）および変異ポリＱ（polyQ）（国際公開第２０１０／０１５５９２号）を含む多数の様々な分子が検出された。一実施例において、方法は、生体試料を、ランタノイドイオンクリプテート（ユウロピウムまたはテルビウムクリプテートなど）で標識されている第１のＦＭＲＰ特異的抗体、およびＸＬ−６６５（ＣｉｓＢｉｏから入手可能な１０５ｋＤａのフィコビリタンパク質ヘテロ６量体構造）またはＤ２アクセプターなどの適切な蛍光発生分子で標識されている第２のＦＭＲＰ特異的抗体と接触させるステップを含む。本方法において、抗体は、ＦＭＲＰと結合すると、ランタニドクリプテートがエネルギーを放射し、フルオロフォアの近接依存的時間分解ＦＲＥＴ放出が生じるように選択される。試料中のＦＭＲＰの量は、フルオロフォアから放出された蛍光を測定することによって定量化される。Ｆ４０５５（Ｓｉｇｍａ、ＲＴＧＫＤＲＮＱＫＫＥＫＰＤＳＶＤＧ；配列番号７）；２１６０（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＩＴＶＡＦＥＮＮＷＱＰＤＲＱＩＰＦＨＤ；配列番号８）およびＨ００００２３３２−Ｍ０３（Ａｂｎｏｖａ、ＡＴＫＤＴＦＨＫＩＫＬＤＶＰＥＤＬＲＱＭＣＡＫＥＡＡＨＫＤＦＫＫＡＶＧＡＦＳＶＴＹＤＰＥＮＹＱＬＶＩ；配列番号９）など、ＦＭＲＰ特異的抗体であればいずれのものでも使用できる。
【０１５０】
診断分析および予後分析
本明細書に記載される方法は、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬に応答する可能性がある脆弱Ｘ症候群を患う対象を特定する診断分析として利用することができ、または脆弱Ｘ症候群を発症するリスクがある対象およびｍＧｌｕＲ５拮抗薬を受けることによって利益を得ることになる対象を特定する予後分析として使用することができる。予後分析を予測の目的または予防の目的で使用して、ＦＸＳを発症するリスクがある個体を治療することができる。
【０１５１】
本発明の方法はまた、ＦＸＳを患っていると特定された個体だけでなく、ＦＭＲ１遺伝子プロモーターにおいてＣＧＧ反復長の伸長、例えば５５を超える反復を示すいずれの個体にも使用することができる。このような集団はｍＧｌｕＲ５の治療によって利益を得るようになることが予見される。したがって、本発明は、被検試料が、ＦＭＲ１遺伝子プロモーターでＣＧＧ反復長の伸長を示す対象から得られ、ＦＭＲ１遺伝子のサイレンシングが、例えばＦＭＲ１プロモーターのメチル化状態を決定し、ＦＭＲ１タンパク質および／またはＦＭＲ１  ｍＲＮＡの存在を検出することによって決定される方法を提供する。以下のいずれかまたはいずれかの組合せがみられると、対象はｍＧｌｕＲ５のレスポンダーであることが示唆される：ＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合において、試料中におけるＦＭＲ１タンパク質またはｍＲＮＡの欠如、試料中におけるＦＭＲ１タンパク質の欠如またはｍＲＮＡの欠如。
【０１５２】
脆弱Ｘ症候群の発症の予防または脆弱Ｘ症候群の重症度の低減のために、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬を対象に投与すべきかどうかを決定するための予後分析として、本発明の方法を使用することができる。一実施例において、ＣＧＧ反復の検出またはその個体の家族歴の評価など、当技術分野において公知である標準方法のいずれかを使用して、個体にはＦＸＳを発症するリスクがあると決定することができる。ＦＸＳのリスクがあると決定されると、その個体は、以下のバイオマーカーのいずれか１つまたは複数の存在についてさらに評価される：ＦＭＲ１遺伝子領域の全部またはほとんど全部がメチル化されている場合において、試料におけるＦＭＲ１タンパク質またはｍＲＮＡの欠如。本明細書に記載されるバイオマーカーの１つまたは複数が存在していることを利用して、脆弱Ｘ症候群の発症の予防または脆弱Ｘ症候群の重症度の低減のために、その個体にｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与すべきであると示唆することができる。一実施例において、ＦＸＳを発症するリスクがあると決定された新生児については、脆弱Ｘ症候群の発症の予防または脆弱Ｘ症候群の重症度の低減のために、本明細書に記載されるバイオマーカーの１つまたは複数の存在を監視すべきである。本方法を使用して、早期に介入すると、ｍＧｌｕＲ５の治療効果が最大になる。
【０１５３】
本明細書に記載される予後分析はまた、ＦＭＲ１遺伝子でＣＧＧ反復長の伸長を示すいずれの個体においても使用することができる。個体が、本明細書中に記載された方法に基づいて、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬に臨床的に応答するようになる個体であると決定された場合に、その個体にｍＧｌｕＲ５拮抗薬を投与することになる。一般に、その化合物を１日の投与量が約５〜１５００ｍｇ、好ましくは約１０〜約１０００ｍｇの範囲で、ＦＸＳを患う個体に投与することが好都合である。一実施例において、１日の投与量１０ｍｇ、２５ｍｇまたは１００ｍｇをＦＸＳを患う個体に投与することにする。
【０１５４】
キット
本発明は、生体試料（被検試料）におけるＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の状況、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現またはＦＭＲ１タンパク質レベルを検出するためのキットも含む。このようなキットを使用して、ＦＸＳを患う対象がｍＧｌｕＲ５拮抗薬を用いた治療に応答する可能性があるかどうかを決定することができる。例えば、キットは、生体試料においてＦＭＲ１タンパク質またはｍＲＮＡを検出することができる標識化合物または作用物質（agent）、および生体試料においてＦＭＲ１タンパク質の量を決定する手段（例えば、ＦＭＲ１タンパク質をコードするＤＮＡに結合する抗ＦＭＲ１抗体またはオリゴヌクレオチドプローブ）または生体試料においてｍＲＮＡ転写物の量を決定する手段を含むことができる。キットは、上述されたようにＦＭＲ１遺伝子領域のメチル化の程度を決定するのに使用することができるプライマーも含むことができる。さらに、キットは適切な対照試料も含むことができる。
【０１５５】
キットは、例えば緩衝剤、保存剤、またはタンパク質安定剤も含むことができる。キットは、検出可能な作用物質を検出するのに必要な成分（例えば、酵素または基質）も含むことができる。キットは、分析することができ、含まれている被検試料と比較することができる１つの対照試料または一連の対照試料を含むこともできる。キットの各成分は、通常個々の容器内に封入され、その様々な容器はすべて、それを使用するための指示書とともに単一のパッケージ内に入っている。
【０１５６】
次の実施例は、本発明を例示するものであって、限定するものではない。
【実施例】
【０１５７】
実施例１：
（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル処置に応答する患者のサブセットが存在するかどうか識別するための研究の設置
本実施例は、ｍＧｌｕＲ５拮抗薬（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルが、ＦＸＳを患う対象に有益な治療をもたらすことができるかどうかを調査した臨床試験のフォローアップとして行なわれた。本研究は、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル処置に応答する患者のサブセットが存在するかどうかを識別するように設置された。このような（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステル処置に応答する患者のサブセットを識別する試みとして、ＦＭＲ１メチル化／ｍＲＮＡ発現と本研究における（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルの有効性との関係を調査する研究を行なった。
【０１５８】
臨床試料：
臨床試験を完了した患者３０例のうち、２６例から薬理遺伝学的／薬理ゲノム学的評価を行なうことについて同意が得られた。Ｇｅｎｔｒａ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）の指示書に従って、ゲノムＤＮＡを全血から抽出した。Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）の指示書に従って、全ＲＮＡを全血から抽出した。合計２６個のＤＮＡおよび２４個のＲＮＡ試料の抽出および分析に成功した。さらに、正常対照ＤＮＡをＣｏｒｉｅｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｃａｍｄｅｎ，  ＮＪ）から購入した。
【０１５９】
メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）分析：
ゲノムＤＮＡをバイサルファイトで処理した（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）。Ｃｈｅｍｉｃｏｎ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ，  ＣＡ）のＣｐＧ  ＷＩＺ  Ｆｒａｇｉｌｅ  Ｘ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔを製造業者の指示書に従って使用して、ＭＳＰを行なった。合計患者２６例および正常対照４例について分析した。
【０１６０】
定量ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）分析：
ＦＭＲ１  ｍＲＮＡ発現を、ＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲで測定した。プライマーおよびプローブは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ；脆弱Ｘ精神遅滞１  Ｈｓ  ００９２４５４４＿ｍｌ、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素Ｈｓ  ９９９９９９０５＿ｍ１、ユビキチンＣ  Ｈｓ  ００８２４７２３＿ｍ１）で設計した。
【０１６１】
対照遺伝子ＧＡＰＤＨおよびＵＢＣの発現レベルを使用して、試料間のバラツキに合わせて調整した。データを正規化Ｃｔ（サイクル閾値）として示す。Ｃｔ値≧３６は、分析のバックグラウンドであると考えられる。合計患者２４例および正常対照９例について分析した。
【０１６２】
バイサルファイト−シーケンシング：
ゲノムＤＮＡをバイサルファイトで処理した（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）。以下のプライマーを使用して、２２個のＣｐＧ部位を含むＦＭＲ１プロモーターを増幅した：５’−ＧＴＴＡＴＴＧＡＧＴＧＴＡＴＴＴＴＴＧＴＡＧＡＡＡＴＧＧＧ−３’（配列番号１０）；および５’−ＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＡＡＣＣＴＡＡＡＡＡＣ−３’（配列番号１１）。１９６塩基対のＦＭＲ１プロモーターを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）のＴＡクローニングキットを使用してクローニングし、１患者当たり７〜１３個のクローンのシーケンシングを、ＡＢＩ３７３０ＸＬ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）を使用して行なった。より詳細なことについては、ＢＭＤレポートに出ている。合計患者２６例および正常対照４例について分析した。
【０１６３】
結果：
最初のＭＳＰ分析から、患者８例は完全メチル化されており、患者１８例は部分メチル化されていたことが明らかになった。完全メチル化されていた患者は、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現しなかったが、部分メチル化されていた患者は、様々なレベルのｍＲＮＡを発現した。そのデータから、末梢血においてＦＭＲ１メチル化と転写の間には強い相関関係があることが示唆される。さらに重要なことに、完全メチル化されまたはＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現しなかった患者は、プラセボよりも（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルに応答して有意に大きな改善を１９日目に示した（ＡＢＣ−Ｃ：ｐ＜０．００１、ＣＧＩ−有効性指標：ｐ＜０．００１）（表１〜４）。一方、部分メチル化されまたはＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現した患者においては、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルとプラセボの間で有意差はなかった。
【０１６４】
メチル化パターンに関する情報をさらに入手し、ＭＳＰ分析を検証するために、２２個のＣｐＧ部位を含むＦＭＲ１プロモーターのバイサルファイト−シーケンシングを行なった。バイサルファイト−シーケンシングのデータとＭＳＰのデータは、３例の不一致を除いてすべての患者について一致するものであって、当該不一致は少なくともある程度はシーケンシングを行なった１患者当たりのクローン数が限定されていたことによって生じたかもしれない。ＦＭＲ１メチル化が（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルの有効性に及ぼす影響をさらに評価するために、最初のＭＳＰ、バイサルファイト−シーケンシング、およびＭＳＰの追加データを総合的に考慮することによって、不一致のある患者３例のメチル化状態を再分類した。患者３例のうち２例は、合理的に再分類することができた。残りの一例は、現在のデータに基づいて再分類することができず、有効性の分析から除去した。新たな統計分析から、完全メチル化されている患者において、プラセボより（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルへの応答が有意に高いままであることが明らかになった（ＡＢＣ−Ｃ：ｐ＜０．００１、ＣＧＩ−有効性指標：ｐ＜０．００１）（表５〜６）。
【０１６５】
まとめると、データ全体から、ＦＭＲ１メチル化またはｍＲＮＡ発現は、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルで治療されるＦＸＳ患者において、臨床応答の予測バイオマーカーとして機能できることが示唆される。
【０１６６】
【表１】
2013524840.tif 000036
【０１６７】
【表２】
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【０１６８】
【表３】
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【０１６９】
【表４】
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【０１７０】
【表５】
2013524840.tif 000040
【０１７１】
【表６】
2013524840.tif 000041
【０１７２】
実施例２：
ＦＭＲ１プロモーターメチル化を決定するための、制限酵素消化後のＴａｑｍａｎプローブベースのリアルタイムＰＣＲ分析
臨床試料：実施例１において薬理遺伝学的／薬理ゲノム学的評価を行なうことについて同意が得られた患者に由来する２６個の精製ゲノムＤＮＡのうち、１２個についてはプローブベースのメチル化分析により分析するのに十分な量が得られた。
【０１７３】
プローブベースのメチル化分析：
分析は、Ｏｒｉｏｎ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）のＭｅｔｈｙｌＳｃｒｅｅｎ技術に基づくものである。しかし、ＭｅｔｈｙｌＳｃｒｅｅｎの制限酵素ＤＮＡ処理とＴａｑｍａｎ加水分解プローブベースのリアルタイムＰＣＲを組み合わせたものである。簡潔に言えば、ＦＭＲ１プロモーター領域のメチル化状態を評価するために、ＥＤＴＡ−抗凝固血液由来の精製ゲノムＤＮＡを、ＭｃｒＢＣおよびＨｈａＩ（双方ともＮＥＢ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，  ＭＡ）から）で、製造業者の指示書に従って独立にしかも適切に消化し、以下の４つの状態に至る：１）酵素なし消化物(ｎｏ  ｅｎｚｙｍｅ  ｄｉｇｅｓｔ)；２）ＭｃｒＢＣ消化物；３）ＨｈａＩ消化物；および４）ＭｃｒＢＣとＨｈａＩの二重消化物；すべて、３７℃で１６時間インキュベートした後、６５℃で２０分間不活性化する。制限酵素ＭｃｒＢＣはメチル化依存性であり、メチル化ＤＮＡしか切断しないことを意味し、制限酵素ＨｈａＩはメチル化感受性であり、非メチル化ＤＮＡしか切断しないことを意味する。各状態は、リアルタイムＰＣＲ検出用に４００ｎｇと同量のインプットＤＮＡを含み、したがって各消化物状態を酵素なし消化物対照と比較することにより、酵素消化後の増幅可能なＤＮＡの残量を、プライマー対（フォワード５’−ｔｇｃａｇａａａｔｇｇｇｃｇｔｔｃｔ（配列番号４；リバース５’−ｇｔｇｃｃｇｇｇｔｃｇａａａｇａｃ（配列番号５））およびＦＡＭ標識プローブ（プローブ５’ＦＡＭ−ｃｔｇａａｇｇｇｃｇｇｔｇａｃａｇｇｔｃｇ−ＢＨＱ１；（配列番号６））を使用してリアルタイムＰＣＲで定量化することができる。リアルタイムＰＣＲ検出より前に、酵素消化ミックスを、３７℃で制限酵素ＡｌｕＩ処理に１時間、続いて６５℃で不活性化に２０分間かける。ＰＣＲ増幅産物は、対象の領域における１５のＣｐＧアイランドをカバーする。消化物状態と対照の差は、ＰＣＲのサイクル閾値（ΔＣｔ）の変化に反映される。臨床的カットオフ領域は、約５から１４のｄＣｔ（ＰＣＲのサイクル閾値におけるＭｃｒＢＣと無処置チャネルの差）範囲を構成する。これは、９４〜１００％のＣＴＡのメチル化率範囲と相関する。アルゴリズムに従った計算によれば、ＦＭＲ１プロモーター領域におけるメチル化率は、試料ＤＮＡから決定することができる。
【０１７４】
結果：
プローブベースのメチル化分析から、実施例１に記載の元の概念実証研究における患者１２例のうち、患者３例は完全メチル化されており、患者９例は部分メチル化されていたことが明らかになり、ＭＳＰ分析と同様の結果が得られた。完全メチル化されていた患者は、−９．９５〜−１０．２７の範囲のΔＣｔを有し、９９．９〜９９．９２の範囲のメチル化率を有した。部分メチル化されていた患者は、−１．７７〜−７．２９の範囲のΔＣｔおよび７０．６８〜９９．３６の範囲のメチル化率を有した。完全メチル化されていた患者は、ＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現しなかったが、部分メチル化されていた患者は、様々なレベルのｍＲＮＡを発現した。そのデータから、末梢血においてＦＭＲ１メチル化と転写の間には強い相関関係があることが示唆される。さらに重要なことに、完全メチル化されかつ／またはＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現しなかった患者は、プラセボよりも（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルに応答して有意に大きな改善を１９日目に示した（ＡＢＣ−Ｃ：ｐ＜０．００１、ＣＧＩ−有効性指標：ｐ＜０．００１）。一方、部分メチル化されまたはＦＭＲ１  ｍＲＮＡを発現した患者においては、（−）−（３ａＲ，４Ｓ，７ａＲ）−４−ヒドロキシ−４−ｍ−トリルエチニル−オクタヒドロ−インドール−１−カルボン酸メチルエステルとプラセボの間で有意差はなかった。
【０１７５】
実施例３：
時間分解Ｆｏｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）イムノアッセイを使用するＦＭＲＰ決定
ＴＲ−ＦＲＥＴイムノアッセイでは、以下の抗体を使用した：Ｆ４０５５（Ｓｉｇｍａ、ＲＴＧＫＤＲＮＱＫＫＥＫＰＤＳＶＤＧ（配列番号７））；２１６０（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；ＩＴＶＡＦＥＮＮＷＱＰＤＲＱＩＰＦＨＤ；（配列番号８）、およびＨ００００２３３２−Ｍ０３（Ａｂｎｏｖａ；ＡＴＫＤＴＦＨＫＩＫＬＤＶＰＥＤＬＲＱＭＣＡＫＥＡＡＨＫＤＦＫＫＡＶＧＡＦＳＶＴＹＤＰＥＮＹＱＬＶＩ；（配列番号９）。
【０１７６】
Ｆ４０５５−Ｈ００００２３３２−Ｍ０３抗体コンビネーションによるヒトＦＭＲＰタンパク質検出の温度依存性シグナル動態
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ｅＧＦＰプラスミド（模擬）またはヒトＦＭＲＰプラスミド（ＦＭＲＰをトランスフェクト）で一過的にトランスフェクトした。細胞を、Ｍ−ＰＥＲ（Ｐｉｅｒｃｅ）溶解緩衝液（lyis buffer）、１５０ｎＭ  ＮａＣｌおよびプロテアーゼ阻害薬に溶解した。小容量３８４ウェル当たり５μｌ中総タンパク質１μｇおよび１μｌの抗体検出緩衝液を加えた。結果を図２に示す。
【０１７７】
ＭＡＢ２１６０−Ｆ４０５５抗体コンビネーションによるヒトＦＭＲＰタンパク質検出の温度依存性シグナル動態
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ｅＧＦＰプラスミド（模擬）またはヒトＦＭＲＰプラスミド（ＦＲＭＰをトランスフェクト）で一過的にトランスフェクトした。細胞を、Ｍ−ＰＥＲ（Ｐｉｅｒｃｅ）溶解緩衝液（lyis buffer）、１５０ｎＭ  ＮａＣｌおよびプロテアーゼ阻害薬に溶解した。小容量３８４ウェル当たり５μｌ中総タンパク質１μｇおよび１μｌの抗体検出緩衝液を加えた（最終抗体量：０．６ｎｇ／ウェル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭＡＢ２１６０−Ｔｂ）および２０ｎｇ／ウェル（Ｓｉｇｍａ  Ｆ４０５５−ｄ２））。結果を図３に示す。
【０１７８】
内在性ヒトＦＭＲＰタンパク質検出初代ヒト線維芽細胞
健常対照線維芽細胞（ＢＪ１およびＭＧ６３）または脆弱Ｘ症候群患者の完全メチル化線維芽細胞（ＧＭ０５８４８Ｂ、ＧＭ０９４９７Ａ、およびＧＭ０７０７２）を、Ｍ−ＰＥＲ（Ｐｉｅｒｃｅ）溶解緩衝液（lyis buffer）、１５０ｎＭ  ＮａＣｌおよびプロテアーゼ阻害薬に溶解した。総タンパク質濃度を、５μｌ当たり総タンパク質１２．５μｇ（約８０００細胞／１μｌ）に調整した。小容量３８４ウェル当たりに各溶解物のタンパク質濃度希釈物および１μｌの抗体検出緩衝液を加えた（最終抗体量：０．３ｎｇ／ウェル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭＡＢ２１６０−Ｔｂ）および３ｎｇ／ウェル（Ａｂｎｏｖａ  Ｈ００００２３３２−Ｍ０３−ｄ２））。結果を図４に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2013524840.tif 000047
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