(57)【要約】本発明は、患者に、薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を投与することにより、皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させるための方法に関する。さらに、本発明は、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物にも関する。【選択図】図１７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させるための方法であって、患者に、薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼおよび／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は皮膚白色化剤である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコフェロール、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコフェロール、アシル化されたトコトリエノール、アシル化されたトコモノエノールおよびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、少なくとも１つのトコフェロールおよび少なくとも１つのトコトリエノールの混合物であるか、または少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールおよび少なくとも１つのアシル化されたトコトリエノールの混合物である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アシル化されたトコモノエノールはトコモノエノール酢酸エステルである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つのアシル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノール成分は、アセチル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノールである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記トコトリエノールは、α（アルファ）−トコトリエノール、β（ベータ）−トコトリエノール、（ガンマ）γ−トコトリエノール、δ（デルタ）−トコトリエノールおよびこれらのトコトリエノールの混合物からなる群から選択される、請求項４から請求項７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記トコフェロールは、α−トコフェロール、β（ベータ）−トコフェロール、γ（ガンマ）−トコフェロール、δ（デルタ）−トコフェロールおよびこれらのトコフェロールの混合物からなる群から選択される、請求項４から請求項７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記トコモノエノールは、α−トコモノエノール、β（ベータ）−トコモノエノール、γ（ガンマ）−トコモノエノール、δ（デルタ）−トコモノエノールおよびこれらのトコモノエノールの混合物からなる群から選択される、請求項４から請求項７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記α−トコモノエノールは、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールまたは３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１２−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、（ガンマ）γ−トコトリエノール、もしくはδ（デルタ）−トコトリエノール、もしくはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、もしくはアシル化されたγ−トコトリエノール、もしくはアシル化されたδ−トコトリエノールもしくはアシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物である、請求項１から請求項１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記アシル化されたγ−トコトリエノール、またはアシル化されたδ−トコトリエノールまたはアシル化されたＴＲＦは、アセチル化されたγ−トコトリエノール、またはアセチル化されたδ−トコトリエノールまたはアセチル化されたＴＲＦである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記皮膚の状態は皮膚の障害である、請求項１から請求項１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記皮膚の障害は、メラニンの増加によって引き起こされる皮膚の黒ずみ、皮膚色素沈着過度、皮膚炎症、皮膚の尋常性ざ瘡、癒傷、皮膚の光加齢、皮膚の皺、喫煙者の黒皮症、肝斑、黒色表皮腫、クッシング病、アジソン病、黒線、水銀中毒からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ビタミンＡ、ビタミンＡ誘導体、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、キノン類、ヒドロキノン、乳酸塩、コウジ酸、コウジ酸誘導体、αヒドロキシ酸、アルブチン、グリコール酸、ヒドロキノン、グルタチオン、Ｌ−グルタチオン、アゼライン酸、グルココルチコイド類、桑の実エキス、ミトラカーパススケーバーエキス、キュウリエキス、カンゾウエキス、ザクロエキス、ウワウルシ（クマコケモモ）エキス、ヘキサメチレンビスアセトアミド、酪酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、合成ヒドロキシル置換フェニルナフタレンおよび誘導体、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−エチルフェノールなどのモノフェノール；ならびに４，４’−メチレンビス（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）、２，２’−メチレンビス（４−エチル−６−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）などのジフェノール、レチノイン酸、ツニカマイシン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ヒアルロン酸、トラネキサム酸、胎盤抽出物、エラグ酸、ＥＤＴＡ、フィチン酸、オレオシン、チオクト酸、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ２）および大豆トリプシン阻害剤からなる群から選択される、請求項１から請求項１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記乳酸塩は、乳酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸マグネシウム、乳酸アンモニウムおよび乳酸カルシウムからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、乳酸ナトリウム、ヒドロキノン、Ｌ−グルタチオン、コウジ酸、アルブチンおよびレチノイン酸からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡからなる群から選択される抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤である、請求項１から請求項１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｍｉＲＮＡはｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉＲＮＡである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物は約１ｍｇ〜約１０００ｍｇまたは約１０ｍｇ〜５００ｍｇの量で投与される、請求項１から請求項２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物は、前記患者の血液中で、約１〜３０μΜまたは約１０〜３０μΜの血清レベル濃度を得るための量で投与される、請求項１から請求項２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者は動物である、請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記動物は哺乳動物である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物はヒト、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ウシ、イヌおよびネコからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物は、ナノ粒子形態または封入された形態の、ソフトゲル、硬カプセル剤、錠剤、ゲル、糖衣錠、持続放出配合物、軟膏剤、クリーム、保湿クリーム、洗顔料、アイスティック、注射用配合物として投与される、請求項１から請求項２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物は水溶性の形態で投与される、請求項１から請求項２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記組成物は、経口投与または局所投与される、請求項１から請求項２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む、請求項１から請求項２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は強化配合物の中に含まれ、前記強化配合物は、前記強化配合物の総重量に基づき、０．１重量％超の特定のビタミンＥ成分を含む、請求項１から請求項２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記強化配合物は、前記強化配合物の総重量に基づき０．１重量％、０．５重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９２重量％、９４重量％、９６重量％、９７重量％および９８重量％の全ビタミンＥ成分含有量からなる群から選択される量の前記特定のビタミンＥ成分を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記組成物は紫外線遮断剤をさらに含む、請求項１から請求項３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記紫外線遮断剤は、酸化亜鉛、酸化チタン、オキシベンゾン、アゾベンゾンおよびアボベンゾンからなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物であって、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの混合物からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の医薬組成物を含む軟膏剤またはクリーム。
【請求項３６】
アシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールを含むかまたはアシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールからなる製品。
【請求項３７】
３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールはアセチル化されている、請求項３６に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１０年４月１６日出願の、米国仮出願第６１／３２５，０１１号の優先権の利益を主張する。その内容は、参照によりその全体をあらゆる目的のために本願明細書に援用したものとする。
【０００２】
本発明は、分子生物学および生化学の分野、特に皮膚の状態に関する生化学および分子生物学の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
皮膚の色素沈着は、有害な紫外線に対する重要な保護機構である。例えば、疾病または損傷の場合には、ヒトの皮膚は色が変化し、より暗い皮膚の色調または色を生じることができる（色素沈着過度）。色素沈着過度のほとんどの形態は、体内のメラニン、色に関与する物質（色素）、の過剰産生によって引き起こされる。体内においては、色素メラニンの形成は、皮膚のメラノサイト（メラニン細胞）のメラノソーム内で起こる（非特許文献１；非特許文献２）。このプロセスは、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質１／２（ＴＲＰ１／２）などのメラニン生成酵素によって制御される（非特許文献３）。具体的に言えば、これらのタンパク質は、メラニン生合成における律速的な、二部反応：３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）へのＬ−チロシンのヒドロキシル化およびその後のドパキノンへの酸化を触媒する（非特許文献４）。それゆえ、チロシナーゼ活性の調節は、皮膚の色素沈着の制御のための鍵となるプロセスを代表する（非特許文献４）。加えて、皮膚の色素沈着（メラニン生成プロセス）は黒色腫疾患の顕著な特徴（特質）であるので、チロシナーゼ活性のコントロールは、このタイプの癌を抱える患者を処置するための基礎を提供する可能性がある。
【０００４】
色素沈着過度に関連する状態などの皮膚の状態は、特に皮膚が黒ずんだ個体または他の皮膚関連の障害では処置することが困難である。多くの有効な治療手段が利用できるが、現在利用できる薬物に関連する顕著な副作用の潜在的可能性がある。皮膚の状態を処置するための一般的な薬物としては、ヒドロキノン、すなわち酵素チロシナーゼを阻害して、これによりＤＯＰＡのメラニンへの転化を低下させるヒドロキシフェノール系化学物質が挙げられる。これに関して、他の可能な作用機序のうちのいくつかとしては、メラノサイトの破壊、メラノソームの分解、ならびにＤＮＡおよびＲＮＡの合成の阻害を挙げることができる。他のフェノール系の薬剤、例えば現在研究開発中であるＮアセチル−４−シスタミニルフェノール（ＮＣＡＰ）がある。トレチノイン、アダパレン、局所用コルチコステロイド剤、アゼライン酸、アルブチン、コウジ酸、およびカンゾウ（リコリス）エキスが挙げられる非フェノール系薬剤も、皮膚科障害を処置するために使用される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍａｓｏｎ，Ｈ．Ｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、１９４９年、第１８１巻、８０３−１２頁
【非特許文献２】Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｔ．Ｂ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９５０年、第１１２巻、２２３−５頁
【非特許文献３】ＣｈｅｎおよびＣｈａｖｉｎ，Ｗ．、Ｎａｔｕｒｅ、１９６６年、第２１０巻、３５−７頁
【非特許文献４】Ｋｏｒｎｅｒ，Ａ．およびＰａｗｅｌｅｋ，Ｊ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８２年、第２１７巻、１１６３−５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
皮膚の状態を処置する公知の方法のほとんどは、患者に対して重篤な副作用を有する。それゆえ、皮膚の状態を処置するさらなる方法を探索することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
１つの態様では、本発明は、皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させるための方法を提供する。この方法は、患者に、薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、当該ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を投与することを含む。
【０００８】
別の態様では、本発明は、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、当該ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物を提供する。このビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの混合物からなる群から選択される。
【０００９】
さらに別の態様では、本発明は、上で明記された医薬組成物を含む軟膏剤またはクリームを提供する。
【００１０】
さらなる態様では、本発明は、アシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールを含むかまたはアシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールからなる製品を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本発明は、非限定的な実施例および添付の図面と併用して考察するとき、詳細な説明を参照してよりよく理解されるであろう。
【００１２】
【図１】β−トコトリエノール（ベータ  Ｔ３）、γ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、δ−トコトリエノール（デルタ  Ｔ３）、コウジ酸およびアルファアルブチンを用いたＢ１６黒色腫細胞の処置が、それぞれ、高濃度でＢ１６黒色腫細胞生存率を阻害するということを示す実験結果を図示する。Ｂ１６黒色腫細胞中のＡ）それぞれα−トコトリエノール（アルファ  Ｔ３）およびβ−トコトリエノール（ベータ  Ｔ３）、Ｂ）それぞれγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）およびδ−トコトリエノール（デルタ  Ｔ３）、Ｃ）それぞれコウジ酸および乳酸ナトリウム、ならびにＤ）アルファアルブチンの抗増殖効果を、２４時間の処置後、ＭＴＴ細胞生存率アッセイによって測定した。
【図２】Ａ）それぞれδ−トコトリエノール（δＴ３）およびγ−トコトリエノール（γΤ３）、Ｂ）それぞれβ−トコトリエノール（βＴ３）、コウジ酸およびアルファアルブチンを用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるアポトーシス分子のウエスタンブロット結果を図示する。それぞれのβ−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、δ−トコトリエノール、コウジ酸およびアルファ−アルブチンを用いたＢ１６黒色腫細胞の処置は、非常に重要なアポトーシス分子（切断型のカスパーゼ３およびＰＡＲＰ）を用量依存的に誘導したことに注目されたい。
【図３】それぞれα−トコフェロール（αＴＰ）、α−トコトリエノール（αＴ３）、β−トコトリエノール（βＴ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）、γ−トコトリエノール（γΤ３）、乳酸ナトリウムおよびコウジ酸を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼの活性を示す実験結果を図示する。Ａ）それぞれδ−トコトリエノールおよびγ−トコトリエノール、乳酸ナトリウム、コウジ酸、α−トコフェロール（αＴＰ）を用いたＢ１６黒色腫細胞の処置後には、チロシナーゼｍＲＮＡの変化は観察されなかった。Ｂ）それぞれα−トコフェロール（αＴＰ）、α−トコトリエノール（αＴ３）、β−トコトリエノール（βΤ３）、γ−トコトリエノール（γΤ３）およびδ−トコトリエノール（δΤ３）を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現のウエスタンブロット結果。２０μΜのγΤ３およびδΤ３を用いたＢ１６黒色腫細胞の処置は、チロシナーゼタンパク質の発現を抑制する。δΤ３は、チロシナーゼタンパク質の最も強力な阻害剤であることに注目されたい。
【図４Ａ】それぞれのパームトコトリエノールリッチ画分（パームＴＲＦ）、およびパームＴＲＦ酢酸エステルを用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼの活性を示すウエスタンブロット結果を図示する。それぞれ２０μΜのパームＴＲＦおよびパームＴＲＦ酢酸エステルを用いたＢ１６細胞の処置は、チロシナーゼタンパク質の発現を抑制する。
【図４Ｂ】それぞれのコウジ酸および乳酸ナトリウム、γ−トコトリエノール（γΤ３）、およびδ−トコトリエノール（δΤ３）を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼの活性を示すウエスタンブロット結果を図示する。それぞれ２０μΜのコウジ酸および乳酸ナトリウムを用いたＢ１６黒色腫細胞の処置は、チロシナーゼタンパク質の発現を抑制しない。チロシナーゼの抑制は、それぞれコウジ酸および乳酸ナトリウムのはるかにより高濃度の処置においてのみ観察される。
【図４Ｃ】それぞれのγ−トコトリエノール酢酸エステル（γΤ３酢酸エステル）およびδ−トコトリエノール酢酸エステル（δΤ３酢酸エステル）を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼの活性を示すウエスタンブロット結果を図示する。２０μΜのそれぞれγΤ３酢酸エステルおよびδＴ３酢酸エステルを用いたＢ１６黒色腫細胞の処置はチロシナーゼタンパク質の発現を抑制する。
【図５】種々の濃度のコウジ酸、乳酸ナトリウム、アルファ−アルブチンおよびγ−トコトリエノールコハク酸エステル（γΤ３コハク酸エステル）を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシンの活性を示すウエスタンブロット結果を図示する。Ａ）それぞれ１００μΜまでのコウジ酸および乳酸ナトリウムを用いたＢ１６細胞の処置はチロシナーゼタンパク質の発現を抑制しない。Ｂ）それぞれ６０μΜまでのアルブチンおよびγΤ３コハク酸エステルを用いたＢ１６細胞の処置はチロシナーゼタンパク質の発現を抑制しない。Ｃ）アルファアルブチンによるチロシナーゼの抑制は、はるかにより高濃度の処置（１ｍＭ）でのみ観察される。
【図６】それぞれδ−トコトリエノール（δΤ３）、γ−トコトリエノール（γΤ３）、乳酸ナトリウム、コウジ酸、α−トコフェロール（αＴＰ）およびパームトコトリエノールリッチ画分（パームＴＲＦ）を用いて、２４時間および４８時間を超えて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシンの活性を示すウエスタンブロット結果を図示する。Ｂ１６細胞におけるγΤ３およびδΤ３によるチロシナーゼの抑制は、４８時間のインキュベーション期間の後に高められる。逆に、乳酸ナトリウムおよびコウジ酸の抗チロシナーゼ活性は４８時間後に弱まった。留意すべきことは、２０μΜのパームＴＲＦは、γΤ３およびδΤ３と比べて低い抗チロシナーゼ活性を有する一方で、αＴＰは、チロシナーゼの抑制に対して影響を与えない。
【図７】（Ａ）それぞれ２０μΜのパームトコトリエノールリッチ画分（パームＴＲＦ）、２０μΜのγ−トコトリエノール（ガンマ−Ｔ３）および２０μΜのδ−トコトリエノール（デルタ−Ｔ３）を用いた処置後の４日目および１５日目に測定した、Ｂ１６黒色腫細胞の時間依存的なチロシナーゼ活性を図示する。棒グラフ、３つのアッセイ測定値についての平均；バー、標準偏差。（Ｂ）それぞれ２０μΜのγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、２０μΜのδ−トコトリエノール（デルタ−Ｔ３）、２０μΜのα−トコフェロール（アルファ  ＴＰ）、３．５ｍＭのコウジ酸、および４．５ｍＭの乳酸ナトリウムを用いた処置後の５日目および９日目に測定したＢ１６黒色腫細胞の時間依存的なチロシナーゼ活性を図示する。ガンマ  Ｔ３は、９日目にチロシナーゼの活性を有意に抑制したことに注目されたい。（Ｃ）それぞれ２０μΜのγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、２０μΜのδ−トコトリエノール（デルタ  Ｔ３）、２０μΜのα−トコフェロール（アルファ  ＴＰ）、３．５ｍＭのコウジ酸、および４．５ｍＭの乳酸ナトリウムを用いた処置後の５日目および９日目に測定したＢ１６黒色腫細胞におけるメラニン合成の時間依存的な抑制を図示する。ガンマ  Ｔ３は９日目までのメラニン含有量を有意に抑制することに注目されたい。
【図８】（Ａ）それぞれ２０μΜのγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、２０μΜのδ−トコトリエノール（デルタ−Ｔ３）、２０μΜのトコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、３．５ｍＭのコウジ酸、４．５ｍＭの乳酸ナトリウムおよび１ｍＭ  アルブチンを用いた処置後の５日目に測定したＢ１６黒色腫細胞のチロシナーゼ活性を図示する。（Ｂ）それぞれ２０μΜのγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、２０μΜのδ−トコトリエノール（デルタ−Ｔ３）、２０μΜのトコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、３．５ｍＭのコウジ酸、４．５ｍＭの乳酸ナトリウムおよび１ｍＭ  アルブチンを用いた処置後の５日目に測定したＢ１６黒色腫細胞のメラニン含有量を図示する。
【図９】それぞれγ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）、δ−トコトリエノール（デルタ−Ｔ３）、α−トコフェロール（α−ＴＰ）、トコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、コウジ酸および乳酸ナトリウムを用いた処置後のＢ１６黒色腫細胞における色素沈着防止効果を図示する。Ｂ１６細胞は、前処置され、ガンマ−Ｔ３およびデルタ  Ｔ３、アルファ  ＴＰ、トコトリエノールリッチ画分９２％、コウジ酸、および乳酸ナトリウムについて処置され、次いで回収された。細胞ペレットの写真が撮影された。２０μΜのガンマ−Ｔ３およびデルタ−Ｔ３、Ｔ９２、および３．５ｍＭ  コウジ酸を用いたＢ１６細胞の処置がより薄い細胞色素沈着を導いたことに注目されたい。逆に、２０μΜのアルファ  ＴＰ、コウジ酸、および乳酸ナトリウムは、対照と同等の色素沈着レベルを有する細胞ペレットを生成した。
【図１０】それぞれα−トコフェロール（α−ＴＰ）、γ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）、トコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、およびアルブチンを用いた処置後のＢ１６黒色腫細胞における色素沈着防止効果を図示する。Ｂ１６細胞は、前処置され、ガンマ  Ｔ３およびデルタ  Ｔ３、アルファ  ＴＰ、トコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、アルファアルブチンについて処置され、次いで回収された。細胞ペレットの写真が撮影された。２０μΜのガンマ−Ｔ３およびデルタ−Ｔ３、Ｔ９２、および１ｍＭ  アルファアルブチンを用いたＢ１６細胞の処置がより薄い細胞色素沈着を導いたことに注目されたい。逆に、２０μΜのアルファ  ＴＰ、アルファアルブチンは、対照と同等の色素沈着レベルを有する細胞ペレットを生成した。
【図１１】前処置されたＢ１６黒色腫細胞が脇腹に異種移植されたヌードマウスの色素沈着防止効果および腫瘍収縮を図示する。２０μΜのγ−トコトリエノール（γΤ３）を用いて１週間、前処置した５×１０５  Ｂ１６細胞がヌードマウスの脇腹に異種移植された。これに続いて、５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でγΤ３の補給を２週間行った。固形腫瘍の写真が２週間の処置の最後に撮影された。
【図１２】前処置されたＢ１６黒色腫細胞が脇腹へと異種移植されたヌードマウスの色素沈着防止効果および腫瘍収縮を図示する。それぞれ２０μΜのδ−トコトリエノール（δΤ３）およびパームトコトリエノールリッチ画分９２％  （Ｔ９２）を用いて１週間、前処置した５×１０５  Ｂ１６細胞がヌードマウスの脇腹に異種移植された。これに続いて、５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量のそれぞれのδΤ３およびＴ９２の補給を２週間行った。固形腫瘍の写真が２週間の処置の最後に撮影された。
【図１３】それぞれγ−トコトリエノール（ガンマＴ３）、δ−トコトリエノール（ガンマ  Ｔ３）およびパームトコトリエノールリッチ画分（パームＴＲＦ）を用いて処置したヌードマウスの腫瘍サイズ（腫瘍量）を図示する。腫瘍サイズは、この実験の開始および最後に測定された。
【図１４】ヒトでの試験で試験されたパームトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）の色素脱失特性を図示する。２％  パームＴＲＦを含有するＫｏｓｅ  Ｐｒｉｍｅクリームを使用した１ヶ月の処置の前後での、１人の被験者の顔上の加齢による斑点（しみ）（ａｇｅｄ  ｓｐｏｔ）の写真。対照被験者は、年齢によるしみの改善を示さなかった（ｎ＝１３）。
【図１５】（Ａ）パームトコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、γ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）およびＴ９２酢酸エステル（Ｔ９２Ａｃ）を用いて前処置し、その後に１０分間の紫外線曝露（短波長および長波長の紫外線）を行ったＢ１６黒色腫細胞のチロシナーゼ活性に対する紫外線の効果を図示する。棒グラフ、３つのアッセイ測定値についての平均；バー、標準偏差。（Ｂ）パームトコトリエノールリッチ画分９２％（Ｔ９２）、γ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）およびＴ９２酢酸エステル（Ｔ９２Ａｃ）を用いて前処置し、その後に１０分間紫外線曝露（短波長および長波長の紫外線）を行ったＢ１６細胞のメラニン含有量に対する紫外線の効果を図示する。棒グラフ、３つのアッセイ測定値についての平均；バー、標準偏差。γΤ３、δΤ３およびＴ９２は、メラニン含有量を有意に抑制したことに注目されたい。棒グラフ、３つのアッセイ測定値についての平均；バー、標準偏差。
【図１６】（Ａ）異なる期間におけるＢ１６黒色腫細胞の生存率を示す実験結果を図示する。６０分間を超える紫外線曝露は、Ｂ１６細胞においてアポトーシスを誘導した。（Ｂ）１０分間、６０分間および１２時間紫外線に曝露された後のＢ１６黒色腫細胞におけるアポトーシス分子のウエスタンブロット結果を図示する。１２時間紫外線に曝露されたＢ１６黒色腫細胞は非常に重要なアポトーシス分子（切断型のカスパーゼ３およびＰＡＲＰ）を誘導したことに注目されたい。（Ｃ〜Ｅ）γ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）、パームトコトリエノールリッチ画分９２％（パームＴＲＦ）およびパームトコトリエノールリッチ画分酢酸エステル（パームＴＲＦ酢酸エステル）を用いて処置したＢ１６細胞が、１分間、１０分間、３０分間および６０分間紫外線に曝露された後の、チロシナーゼタンパク質の発現の効果を図示する。γΤ３、δＴ３およびパームＴＲＦは、紫外線に曝露されたＢ１６細胞のチロシナーゼタンパク質の発現を有意に抑制した。
【図１７】（Ａ）パームトコトリエノールリッチ画分９２％（パームＴＲＦ）およびコウジ酸を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞のチロシナーゼ活性およびメラニン含有量の相乗効果を、いずれの薬剤単独と比べて図示する。Ｂ１６細胞は、２０μΜのパームトコトリエノールリッチ画分９２％（パームＴＲＦ）および０．０５％の、乳酸ナトリウム（４．５ｍＭ）またはコウジ酸（３．５ｍＭ）のいずれかを用いて２４時間処置された。同時処置後のチロシナーゼ活性およびメラニン含有量の抑制は、いずれの薬剤を単独で用いて処置した細胞よりも有意に高かった。（Ｂ）γ−トコトリエノール（γΤ３）およびコウジ酸または乳酸ナトリウムを用いて処置されたときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現の相乗効果を、いずれの薬剤単独と比べて示すウエスタンブロット結果を図示する。この結果によれば、５μΜのγΤ３と、１ｍＭの、乳酸ナトリウムまたはコウジ酸のいずれかを用いた同時処置は、チロシナーゼタンパク質の抑制の向上を生じた。（Ｃ）δ−トコトリエノール（δＴ３）およびコウジ酸または乳酸ナトリウムを用いて同時処置したときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現の相乗効果を示すウエスタンブロット結果を、いずれの薬剤単独と比べて図示する。この結果によれば、５μΜのδΤ３と、１ｍＭの、乳酸ナトリウムまたはコウジ酸のいずれかを用いた同時処置は、チロシナーゼタンパク質の抑制の向上を生じた。
【図１８Ａ】γ−トコトリエノール（γΤ３）（１０μΜ）およびアルファアルブチン（５０μΜ）を用いて同時処置したときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現の相乗効果を示すウエスタンブロット結果を、いずれかの薬剤単独と比較して図示する。
【図１８Ｂ】γ−トコトリエノール（γΤ３）（１０μΜ）およびヒドロキノン（２０μΜ）を用いて同時処置したときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現の相乗効果を示すウエスタンブロット結果を、いずれかの薬剤単独と比較して図示する。
【図１８Ｃ】γ−トコトリエノール（γΤ３）（１０μΜ）およびＬ−グルタチオン（１０μΜ）を用いて同時処置したときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現の相乗効果を示すウエスタンブロット結果を、いずれかの薬剤単独と比較して図示する。
【図１８Ｄ】ｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉｃｒｏＲＮＡを用いてトランスフェクションし、γ−トコトリエノール（γΤ３）を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼタンパク質の発現を、トランスフェクションしていないＢ１６細胞と比べて示すウエスタンブロット結果を図示する。
【図１８Ｅ】γ−トコトリエノール（γΤ３）（１０μΜ）およびレチノイン酸（２ｎＭ）を用いて同時処置したときのＢ１６黒色腫細胞におけるチロシナーゼ発現を示すウエスタンブロット結果を、いずれかの成分単独と比べて図示する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
第１の態様では、本発明は、患者に、薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、当該ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を投与することにより、皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させる方法に関する。
【００１４】
例えばγ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）またはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）などの少なくとも１つのビタミン成分を含む組成物が、チロシナーゼタンパク質の構成的活性化を抑制する結果として、Ｂ１６黒色腫細胞などの細胞における構成的メラニン合成を抑制するということが実証された。γ−トコトリエノール（γΤ３）またはδ−トコトリエノール（δΤ３）などの本発明に係るビタミンＥ成分が、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分、例えば乳酸ナトリウム、コウジ酸またはレチノイン酸（これらに限定されない）との相乗的な相互作用を有するということも実証された。これらの知見は、本発明に係る実験結果から認められるとおりのインビトロおよびインビボのデータによって支持される。本発明のこの態様の一般原理は、少なくとも１つのビタミンＥ成分、例えば、γ−トコトリエノール（γΤ３）、δ−トコトリエノール（δΤ３）を、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有するビタミンＥ成分とは異なる別の成分、例えば乳酸ナトリウム、コウジ酸、アルファアルブチン、ヒドロキノン、Ｌ−グルタチオン、またはｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子、とともに含む組成物が、いずれかの成分を単独で使用することと比べて、有意なチロシナーゼタンパク質の抑制を実証した例に基づいた、図１７および図１８にも図示されうる。
【００１５】
本願明細書で使用する用語「処置する」または「処置すること」は、弱まった状態および／もしくは不健康な状態の発生を予防的に防止するように作用するのに十分な薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／もしくは抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を提供すること；ならびに／または、病状／障害および／もしくは病状／障害の症候ならびに弱まった状態および／もしくは不健康な状態を緩和もしくは解消するように、被験者または患者に、十分な量の上記組成物またはその医薬を提供することを指すことが意図されている。
【００１６】
「皮膚の状態が発生するのを防止すること」は、皮膚の状態を防止するか、または皮膚の状態が発生するのを妨げる行為を指す。本発明の場合では、本発明に係る組成物を投与することは、この皮膚の状態が患者または動物の体の中で発生することはできないという効果を有する。防止は、本発明に係る組成物が患者または動物の体の中にすでに存在する皮膚の状態を処置するために使用されることになる、または換言すればすでに皮膚の状態を抱えている患者または動物の体の処置のためのものであることになる「処置」とは区別されるべきである。
【００１７】
一般に、「皮膚の状態」は、皮膚、ファー（ｆａｒ）、毛髪、爪、咽頭膜および生殖器膜および腺に関連する癌、美容上の状態および加齢による状態など、あらゆる状態、障害または疾患を指すと考えられる。皮膚科障害は、目に見える病変、発症前の病変（ｐｒｅ−ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、疼痛、接触に対する感応性（ｓｅｎｓｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｔｏｕｃｈ）、刺激作用、炎症、などの形態で顕在化する可能性がある。皮膚科障害としては、皮膚のおよび毛嚢脂腺単位の障害または角質形成のプロセスが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、皮膚科障害は、表皮または真皮、または毛嚢脂腺単位（これは表皮、真皮、皮下層の内部に位置する）内およびこれを取り囲む部分の障害、またはこれらの組み合わせであることができる。皮膚科障害の例としては、ざ瘡、脱毛症、乾癬、脂漏症、内方発育毛および鬚毛部仮性毛包炎（ｐｓｅｕｄｏｆｏｌｌｉｃｕｌｉｔｉｓ  ｂａｒｂａｅ）、色素過剰の皮膚、皮膚感染、扁平苔癬、グラハム−リトル症候群、開口周辺部の皮膚炎（ｐｅｒｉｏｒｉｆｉｃｉａｌ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、酒さ、化膿性汗腺炎、解離性蜂巣炎、全身性紅斑性狼瘡、円板状紅斑性狼瘡などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本発明に係る組成物を使用して処置または防止ることができる皮膚科障害のタイプとしては、例えば皮膚の障害を挙げることができる。この皮膚の障害としては、いくらかだけを例に挙げるならば、例えば、メラニンの増加によって引き起こされる皮膚の黒ずみ、皮膚色素沈着過度、皮膚炎症、皮膚の尋常性ざ瘡、癒傷、皮膚の光加齢、皮膚の皺、喫煙者の黒皮症、肝斑、黒色表皮腫、クッシング病、アジソン病、黒線、水銀中毒を挙げることができる。
【００１９】
「皮膚の色素沈着を変性させること」は、皮膚の自然の色（色素）の変化を指す。この用語によって、皮膚の色素沈着のレベルまたは量の減少が意図されることがある。いくつかの実施形態では、本発明に係る組成物を投与することで、黒ずんだ色という現実の皮膚機能障害を低減することができるし、または、例えば皮膚の黒ずんだ領域が拡大するのを防止または停止することができる。現実の皮膚機能障害は、例えば年齢、過剰な太陽への曝露、または黒ずんだ皮膚領域を導く疾患もしくは障害によって引き起こされる可能性がある。これらの疾患としては、例えば、本願明細書中で言及される皮膚科障害のうちのいずれを挙げることもできる。他の実施形態では、本発明に係る組成物を投与することで、知覚する黒ずんだ色という皮膚機能障害を低減することができる。これは、ある個人が、現実の皮膚機能障害を有しているとは限らないが、皮膚の色合いを薄くしたいという（美容上の）熱望を有していれば、その個人によって、皮膚の色合いが黒ずんでいるとして、皮膚機能障害が知覚されうるということを意味する。
【００２０】
本願明細書に記載されるように、皮膚の状態の処置または皮膚の状態が発生するのを防止することまたは皮膚の色素沈着の変性のために、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物が使用される。ビタミンＥは、２つの主要成分  −  トコフェロール（Ｔ）およびトコトリエノール（Ｔ３）から構成される。トコトリエノール（Ｔ３）は、主にパーム油の中で見出される。トコフェロール（Ｔ）と一緒に、トコトリエノール（Ｔ３）は、すべての生きている細胞に顕著な抗酸化活性の源を与える。この共通の抗酸化特質は、それらの構造上の側鎖（トコトリエノールについてはファルネシル、またはトコフェロールについては飽和フィチル側鎖を含有するだけが異なる、トコトリエノールおよびトコフェロールの化学構造の類似性を反映する。クロマノール環上のヒドロキシル基からの共通の水素原子が、連鎖を伝搬するペルオキシルフリーラジカルを捕捉除去する作用をする。そのクロマノール環上のメチル基の位置に応じて、トコフェロールおよびトコトリエノールは、４つの異性体：アルファ（α）、ベータ（β）、ガンマ（γ）、およびデルタ（δ）に区別することができる。
【００２１】
異なるトコフェロールおよびトコトリエノールのアイソフォームが存在する（式ＩおよびＩＩを参照）。トコフェロールは、それぞれホモゲンチセート（ＨＧＡ）および二リン酸フィチルから誘導される、クロマノール環および１５炭素の尾部からなる。他方、トコトリエノールは、炭化水素尾部に３つのｔｒａｎｓ二重結合が存在することだけが、トコフェロールとは構造的に異なる。式Ｉおよび式ＩＩならびにそのあとの記載は、トコフェロール（Ｔ）およびトコトリエノール（Ｔ３）の公知のアイソフォームについての概説を与える。
【化１】
2013527155.tif 000003
【００２２】
式Ｉ（Ａ）：α（アルファ）−トコフェロールとしても知られるＲ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｍｅ（ＣＨ３）は、α−トコフェロールまたは５，７，８−トリメチルトコールと称され；β（ベータ）−トコフェロールとして知られるＲ１＝Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ２＝Ｈはβ−トコフェロールまたは５，８−ジメチルトコールと称され；γ（ガンマ）−トコフェロールとして知られるＲ１＝Ｈ；Ｒ２＝Ｒ３＝Ｍｅはγ−トコフェロールまたは７，８−ジメチルトコールと称され；δ（デルタ）−トコフェロールとして知られるＲ１＝Ｒ２＝Ｈ；Ｒ３＝Ｍｅはδ−トコフェロールまたは８−メチルトコールと称される。式ＩＩ（Ｂ）：Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ、２−メチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）クロマン−６−オールはトコトリエノールと称され；これまではζ１またはζ２−トコフェロールとして知られていたＲ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｍｅは、５，７，８−トリメチルトコトリエノールまたはα（アルファ）−トコトリエノールと称される。化合物名トコクロマノール−３も使用されている；ε−トコフェロールとして知られていたＲ１＝Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ２＝Ｈは、５，８−ジメチルトコトリエノールまたはβ（ベータ）−トコトリエノールと称され；γ−トコフェロールとして知られていたＲ１＝Ｈ；Ｒ２＝Ｒ３＝Ｍｅは７，８−ジメチルトコトリエノールまたは（ガンマ）γ−トコトリエノールと称される。化合物名プラストクロマノール−３も使用されている；Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ；Ｒ３＝Ｍｅは８−メチルトコトリエノールまたはδ（デルタ）−トコトリエノールと称される。
【００２３】
別のビタミンＥ成分は、異なる異性体で存在するα−トコモノエノール、およびδ−トコモノエノールである。α−トコモノエノールのうちの１つの異性体、つまり３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールは、例えば、ギニアアブラヤシ（Ｅｌａｅｉｓ  ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ  ｊａｃｑ．）などのパーム油の木から単離することができる。α−トコモノエノールの別の異性体、つまり３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１２−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールは、例えば、太平洋サケ（ｐａｃｉｆｉｃ  ｓａｌｍｏｎ）（サケ、Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ  ｋｅｔａ）から単離することができる（Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｙ．ら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．、１９９９年、第６２巻、１６８５−１６８７頁）。δ−トコモノエノールは、アクティニディア・チネンシス（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）（キーウィフルーツ）果実から単離することができる（Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏ  Ａら、Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００９年、第１１５巻、１８７−１９２頁）。δ−トコモノエノールの構造は、２，８−ジメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−１１−エニル）クロマン−６−オールとしても解明されている。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明に係るビタミンＥ成分は、アシル化されたビタミンＥ成分であることができる。アシル化されたビタミンＥ成分は、アセチル化されたビタミンＥ成分であることができる。アシル化は、アシル基を化合物に付加するプロセスを一般に指す。いくつかの実施形態では、アシル化反応は、アシル化剤、例えば酸無水物またはアシルハロゲン化物を使用して実施することができる。例えば、ビタミンＥ成分のアシル化は、例えばトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノールに含まれるフェノール系ヒドロキシル基のエステル化を導き、トコフェロールアシレート、トコトリエニルアシレートまたはトコモノエノールアシレートを生じる。いくつかの実施形態では、アシル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノールは、アセチル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノールであることができる。
【００２５】
本発明に係るアシル化剤のいずれのものの中のアシル基も、脂肪族カルボン酸、例えば、直鎖状もしくは分枝鎖状のアルカン酸、例えばＣ１−Ｃ７アルカン酸（酢酸、プロピオン酸、酪酸およびピバル酸など）に、または２０個までの炭素原子の高級アルカン酸（脂肪酸）（パルミチン酸など）に、または芳香族カルボン酸（安息香酸など）に由来することができる。この実施形態に関しては、カルボン酸無水物は、いくらかを挙げるならば、無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、無水マレイン酸、無水クロロ酢酸、無水コハク酸、無水フタル酸および無水シトラコン酸から選択される１つであることができる。
【００２６】
アシルハロゲン化物の例としては、直鎖状もしくは分枝鎖状のアルカノイル塩化物、例えば塩化アセチル、プロピオニル塩化物およびブチリル塩化物、および芳香族ハロゲン化物、例えばベンゾイル塩化物を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００２７】
本発明に係る少なくとも１つのビタミンＥ成分のアシル化は、触媒、例えば酸性触媒または塩基触媒の存在下で実施することができる。当該ビタミンＥ成分のアシル化で使用される酸触媒または塩基触媒は、触媒がアシル化反応においてその所望の機能を発揮する限り、いずれのそれぞれのルイス塩基または酸触媒を指すことができる。塩基性触媒は、酸化状態３のＮ、Ｐ、Ａｓ、ＳｂおよびＢｉの以下の化合物、酸化状態２のＯ、Ｓ、ＳｅおよびＴｅの化合物、例えばエーテル、ケトンまたはスルホキシド、または一酸化炭素のうちのいずれか１つであることができる。これに関して、ルイス塩基触媒は、いくらか挙げるならば、ピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−メチルイミダゾール、３−（１−メチル−２−ピロリジニル）ピリジン、または４−ピロリジノピリジン（ＰＰＹ）から選択されるものであることができる。酸触媒としては、ＮＨ３、Ｂ２Ｈ６、ＢＦ３、Ａｌ２Ｃｌ６、ＡｌＦ３、ＳｉＦ４、ＰＣｌ５、ＳＦ４、溶媒和物を形成する金属イオン、例えば［Ｍｇ（Ｈ２Ｏ）６］２＋または［Ａｌ（Ｈ２Ｏ）６］３＋、（１−Ｈ−３−メチル−イミダゾリウム硫酸水素塩）、１−ヘキシル−３−メチル−イミダゾリウム硫酸水素塩（［ｈｍｉｍ］［ＨＳＯ４］）、１−ブチル−３−メチルイミダゾリウム二水素リン酸塩（［ｂｍｉｍ］［Ｈ２ＰＯ４］）、１−［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）エチル］−３−メチル−イミダゾリウム硫酸水素塩（［ｈｅｅｍｉｍ］［ＨＳＯ４］）、１−ブチル−３−メチル−イミダゾリウムクロロアルミン酸塩（［ｂｍｉｍ］Ｃｌ  ２ＡｌＣｌ３）および１−ブチル−３−メチル−イミダゾリウム硫酸水素塩（［ｂｍｉｍ］［ＨＳＯ４］）を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００２８】
１つの実施形態では、このアシル化剤は、アシル化反応において、トコトリエノールおよび／またはトコフェロールと比較して、過剰に使用することができる（例えばビタミンＥ成分に対して３〜１０倍のモル比）。
【００２９】
１つの実施形態では、本発明に係る少なくとも１つのビタミンＥ成分のアシル化は、例えば、大気圧を超える圧力でのトコトリエノールの触媒されたアシル化反応を実施することを挙げることができる。これに関して、圧力は、少なくとも２ｂａｒまたは少なくとも５ｂａｒ、または約２ｂａｒ〜約１２ｂａｒ、または約５ｂａｒ〜１０ｂａｒの範囲であることができる。いくつかの実施形態では、このアシル化反応は、不活性雰囲気下で実施することができる。この実施形態に関しては、不活性な雰囲気は、窒素またはハロゲニド、例えばアルゴンであることができる。
【００３０】
１つの実施形態では、少なくとも１つのビタミンＥ成分のアシル化は、常温で、ビタミンＥ成分、例えばトコトリエノールの触媒されたアシル化反応を実施することを含むことができる。一般に常温は、約１５℃〜約３５℃の範囲の温度であると理解される。１つの実施形態では、常温は、約２０℃〜約３０℃または２５℃〜約３０℃の温度である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本発明に係るビタミンＥ成分のアシル化反応は、約１０分間〜約６０分間、または１０分間〜約１８０分間実施することができる。他の実施形態では、このアシル化反応は、約１５分間〜約３０分間実施することができる。
【００３２】
本発明に係るビタミンＥ成分をアシル化するための他の方法は、当業者の知識の範囲内であり、米国特許第７，１６９，９７３号明細書、米国特許第６，２３９，２９４号明細書、米国特許第７，１３５，５８０号明細書、および米国特許第５，５２３，４２０号明細書にも記載されている。非限定的な例として、トコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）などのビタミンＥ成分をカルボン酸無水物、例えば無水酢酸と混合して、ピリジンなどの触媒の存在下で、Ｎ２下、室温で所定の時間、例えば約２時間、撹拌することができる（Ｏ’Ｂｙｒｎｅ，Ｄ．ら、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００２年、第２９巻、８３４−４５頁も参照）。過剰の無水物およびその対応する酸ならびに触媒は、（例えば真空蒸留が挙げられる）当該技術分野で公知の蒸留手順によって除去することができる。残留するＴＲＦ酢酸エステルは、いくらかを挙げるならば、例えば、カラムクロマトグラフィー、蒸留などの当該技術分野で公知の分離方法によってさらに精製することができる。
【００３３】
本発明に係る組成物で使用される少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコフェロール、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコフェロール、アシル化されたトコトリエノールおよびアシル化されたトコモノエノールのうちの少なくとも１つを含むかまたはこれらからなることができる。このビタミンＥ成分は、トコフェロール、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコフェロール、アシル化されたトコトリエノールおよびアシル化されたトコモノエノールの混合物を含むかまたはこれらからなることもできる。いくつかの実施形態では、本発明で使用される少なくとも１つのビタミンＥ成分は、少なくとも１つのトコフェロールおよび少なくとも１つのトコトリエノールの混合物または少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールおよび少なくとも１つのアシル化されたトコトリエノールの混合物であることができる。この少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）またはアシル化されたＴＲＦ、例えばＴＲＦ酢酸エステルであることができる。トコトリエノールリッチ画分は、典型的には、トコトリエノールおよびトコフェロール、例えば、α−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、およびδ−トコトリエノールの異なる異性体の混合物を指す。トコトリエノールリッチ画分は、いくらかを挙げるならば植物の植物ステロール、カロテノイドおよびスクアレンなどの他の成分をさらに含むことができる。トコトリエノールリッチ画分は、例えば、パーム油、米ぬか、またはブドウ種子から得ることができる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本発明に係る組成物で使用される少なくとも１つのビタミンＥ成分は、γ−トコトリエノール、δ−トコトリエノール、トコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、アシル化されたγ−トコトリエノール、アシル化されたδ−トコトリエノール、アシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物を含むことができる。
【００３５】
当該ビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分は、成分が抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する限り、任意の成分を指すことができる。このさらなる成分は、いくらかを挙げるならば、例えば、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの成分のうちのいずれかの混合物であることができる。
【００３６】
「抗メラニン生成活性」は、一般に、細胞の中でのメラニンの合成を防止または阻害する能力を有する成分を指す。このさらなる成分は、例えば、メラニン生成を調節、またはメラニン生成を阻害またはメラニン生成と干渉する薬剤であることができる。これに関して、本発明に係るビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分は、抗メラニン生成活性を有することができるが、必ずしも抗チロシナーゼ活性を有しない。どの理論にも結び付けられたくはないが、抗メラニン生成活性を有するこのようなさらなる成分は、例えば、チロシナーゼ活性を調節する機構以外の機構に関することができる。このような機構としては、いくらかを挙げるならば、例えば、メラノサイトから角化細胞へのメラニン移動を防止すること；またはメラニン関連代謝産物を、色を呈しない形態へと還元することを挙げることができる。当該ビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分は、抗チロシナーゼ活性および抗メラニン生成活性の両方を有することもできる。
【００３７】
抗チロシナーゼペプチドは、典型的には、例えばシグナル配列の結果として、小胞体（ＥＲ）、分泌小胞、細胞区画、または細胞外間隙へと導かれることができるポリペプチドまたはタンパク質を含めて、タンパク質前駆体またはプロタンパク質または成熟タンパク質を挙げてもよいが、しかしながら、必ずしもシグナル配列を持たないで細胞外間隙へと放出されるタンパク質も包含される。一般に、このポリペプチドは、プロセシング、例えば、シグナル配列の切断、修飾、フォールディングなどを受けて、成熟した形態を生じる。抗チロシナーゼペプチドが細胞外間隙へと放出されれば、それは、細胞外でのプロセシングを受けて、「成熟した」タンパク質を産生することができる。細胞外間隙への放出は、例えば、開口分泌（エキソサイトーシス）、およびタンパク質分解性の切断を含めて、多くの機構によって発生しうる。
【００３８】
抗チロシナーゼペプチドは「変性され」て、「変異」を生じてもよく、サイレントな変化をもたらし機能的に等価なタンパク質を生じるアミノ酸残基の欠失、挿入、または置換を含んでもよい。抗チロシナーゼポリペプチドの生物学的活性または免疫学的活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒性の類似性に基づいて、計画的なアミノ酸置換が行われてもよい。例えば、負に帯電したアミノ酸としてはアスパラギン酸およびグルタミン酸を挙げてもよく、正に帯電したアミノ酸としてはリジンおよびアルギニンを挙げてもよい。類似の親水性値を有する電荷を帯びていない極性の側鎖を持つアミノ酸としては、アスパラギンおよびグルタミン；ならびにセリンおよびトレオニンを挙げてもよい。類似の親水性値を有する電荷を帯びていない側鎖を持つアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、およびバリン；グリシンおよびアラニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシンを挙げてもよい。
【００３９】
抗チロシナーゼペプチドは、当該技術分野で公知のいずれのやり方で調製することもできる。例えば、天然に存在する抗チロシナーゼペプチドは、単離することができ、組み換え的に製造することができ、合成的に製造することができ、またはこれらの方法のいずれかの組み合わせによって製造することができる。例えば、抗チロシナーゼペプチド（分泌されたポリペプチドを含む）の組み換え的に製造されたバージョンは、本願明細書に記載される技法または当該技術分野で公知の他の技法を使用して精製することができる。Ｍａｒｔｉｎ  ＦＨら、「Ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ  ＤＮＡｓ」、Ｃｅｌｌ、第６３巻、２０３頁、１９９０年。抗チロシナーゼペプチドは、例えば抗チロシナーゼペプチドに対する抗体または抗チロシナーゼペプチドに融合されたペプチド配列を使用して、天然のソース、合成のソースもしくは組み換えソースまたは当該技術分野で公知の他のソースから精製されてもよい。例えば、米国特許第６，７５９，２１５号明細書または米国特許第６，２０７，４１７号明細書を参照。非限定的な例として、当該抗チロシナーゼペプチドは、グルタチオン、Ｌ−グルタチオン（当業者に公知のそれらの誘導体を含む）を含むことができる。
【００４０】
チロシナーゼ阻害剤は、天然または合成のソースのいずれからでも得ることができる。チロシナーゼは、メラニン合成の反応を触媒する銅含有酵素である。理論に結び付けられることは望まないが、チロシナーゼ阻害剤は、何らかの直接の阻害剤／酵素相互作用があるか否かにかかわらず、メラニンの合成に干渉することにより主に作用する。コウジ酸などの一般のチロシナーゼ阻害剤のほかにも、チロシナーゼ阻害剤は、化学構造または阻害機構のいずれかに基づいて、一般に５つの主要なクラスに分類することができる：ａ）ポリフェノール、ｂ）ベンズアルデヒドおよび安息香酸エステル誘導体、ｃ）長鎖脂質およびステロイド、ｄ）他の天然または合成の阻害剤、ならびにｅ）不可逆的な失活剤。
【００４１】
ポリフェノールは、複数のフェノール性官能基を含有する多様な群の化合物を表し、天然に広く分布している。ポリフェノールの１つの例としてはヒドロキノンが挙げられる。ポリフェノールの別の例としては、フェノール環およびピレン環からなるベンゾ−γ−ピロン誘導体であるフラボノイドが挙げられる。フラボノイドは、フラボン類、フラボノール類、フラバノン類、フラバノール類、イソフラボノイド類、カルコン類、およびカテキン類を含む７つの主な群にさらに分類することができる。異なるクラスのフラボノイドは、さらなる酸素複素環式環によって、Ｂ環の位置の違いによって、ならびにその環の周りに異なるパターンで分布するヒドロキシル、メチル、イソプレノイド、およびメトキシ基によって、区別される。理論に結び付けられることは望まないが、フラボノイドの構造は、チロシナーゼの基質および（おそらくは競合的）阻害剤の両方の役割と適合する。フラボノイドに加えて、チロシナーゼ阻害剤として使用することができる他のポリフェノールは、スチルベン類およびクマリン誘導体を含有する。ポリフェノールの誘導体は、本発明に係るチロシナーゼ阻害剤として使用することができる。このようなポリフェノール誘導体としては、（フェノール系の）グリコシド、例えば、ヒドロキノングリコシドを挙げることができる。ヒドロキノングリコシドの非限定的な例としては、アルファアルブチンが挙げられる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本発明に係るビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、いくらかを挙げるならば、ビタミンＡ、ビタミンＡ誘導体、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、キノン類、ヒドロキノン、乳酸塩、コウジ酸、コウジ酸誘導体、αヒドロキシ酸、アルブチン、グリコール酸、ヒドロキノン、グルタチオン、Ｌ−グルタチオン、アゼライン酸、グルココルチコイド類、桑の実エキス、ミトラカーパススケーバー（ｍｉｔｒａｃａｒｐｕｓ  ｓｃａｂｅｒ）エキス、キュウリエキス、カンゾウエキス、ザクロエキス、ウワウルシ（クマコケモモ）エキス、ヘキサメチレンビスアセトアミド、酪酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、合成ヒドロキシル置換フェニルナフタレンおよび誘導体、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−エチルフェノールなどのモノフェノール；ならびに４，４’−メチレンビス（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）、２，２’−メチレンビス（４−エチル−６−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）などのジフェノール、レチノイン酸、ツニカマイシン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ヒアルロン酸、トラネキサム酸、胎盤抽出物、エラグ酸、ＥＤＴＡ、フィチン酸、オレオシン（ａｌｅｏｓｉｎ）、チオクト酸、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ２）および大豆トリプシン阻害剤からなる群から選択されるものであることができる。これに関して、所望の場合、いずれのラクテートまたは乳酸塩も、それが抗チロシナーゼ活性を有する限り、ビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分として使用することができる。ラクテートまたは乳酸塩の例としては、乳酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸マグネシウム、乳酸アンモニウムおよび乳酸カルシウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
他の実施形態では、本発明に係るビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分としては、いくらかを挙げるならば、例えば、乳酸ナトリウム、ヒドロキノン、Ｌ−グルタチオン、コウジ酸、アルブチン、レチノイン酸（これらの誘導体を含む）のうちの１つを挙げることができる。これに関して、当業者に公知の好適なコウジ酸誘導体を使用することができる。このようなコウジ酸誘導体の例としては、コウジ酸ジパルミテート（米国特許第５，８２４，３２７号明細書）、コウジ酸エステル（米国特許第４，２７８６５６号明細書）、コウジ酸およびシクロデキストリン（米国特許第４，８４７，０７４号明細書）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
いくつかの実施形態では、このビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分としては、皮膚白色化剤を挙げることができる。本願明細書で使用する「皮膚白色化剤」は、その薬剤が抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する限り、皮膚の色素を変性させる効果を有することができる任意の化合物または物質を指す。この皮膚白色化剤は、例えば、黒ずんだ色の現実の皮膚機能障害を低減するために、本願明細書に記載される組成物で使用することができる。所望に応じて、この皮膚白色化剤は、例えば、個人が知覚する黒ずんだ色という皮膚機能障害を低減させるために、本願明細書に記載される組成物で使用することもできる。これは、その個人が、現実の皮膚機能障害を有しているとは限らないが、皮膚の色合いを明るくしたいという熱望を有するということを意味する。本発明に係る組成物で使用することができる皮膚白色化剤の例としては、上で言及した例示的なさらなる成分のうちのいずれかを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００４５】
いくつかの実施形態では、当該ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤（ａｎｔｉ−ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ａｇｅｎｔ）を含むことができる。抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤（例えば、干渉性リボ核酸）は、チロシナーゼをコードする核酸の活性を調節する任意の化合物を指すことができる。これに関して、用語「核酸」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド分子」または「オリゴヌクレオチド」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、およびリボ核酸（ＲＮＡ）などのポリヌクレオチドを指す。この用語は、記載されている実施形態に当てはまる場合、一本鎖（例えば、センスまたはアンチセンス）および二本鎖のポリヌクレオチドを含むとも理解されるべきである。リボースまたはデオキシリボースのほかにも、ヌクレオチドサブユニットの糖基は、それらの修飾された誘導体、例えば２’−Ｏ−メチルリボースであってもよい。オリゴヌクレオチドのヌクレオチドサブユニットは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、またはオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを妨げない他の稀なもしくは非天然の結合によって連結されていてもよい。さらには、オリゴヌクレオチドは、一般的でないヌクレオチドまたは非ヌクレオチド部分を有してもよい。
【００４６】
この抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤としては、例えば、干渉ＲＮＡ、短鎖ヘアピンＲＮＡおよびマイクロＲＮＡを挙げることができる。これらの抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤は、特定の遺伝子を「ノックダウン」するための強力なツールになっている。ＲＮＡｉ方法論は、転写後のレベルで起こりｍＲＮＡの分解を伴う、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を通しての遺伝子サイレンシング（遺伝子発現抑制）または遺伝子抑圧（ｇｅｎｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）を利用する。ＲＮＡ干渉は、ゲノムを保護する細胞機序を表す。ｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡと複数の酵素複合体とが会合してＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれるものを形成することによって、そのｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ分子の相補的なＲＮＡの分解を媒介する。ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡは、ＲＩＳＣの一部となり、相補的なＲＮＡ種の標的となり、この相補的なＲＮＡ種が切断される。ｓｉＲＮＡは、対応する相補的鎖（ストランド）と完全に塩基対合しているのに対して、ｍｉＲＮＡ二本鎖は、不完全に対合している。ＲＩＳＣの活性化は、それぞれの遺伝子の発現の喪失を導く。干渉性リボ核酸は、長さが約１００ｎｔを超えなくてもよく、典型的には約７５ｎｔの長さを超えない。干渉性リボ核酸が、互いにハイブリダイズした２つの別個のリボ核酸の二本鎖構造、例えば、ｓｉＲＮＡである場合、この二本鎖構造の長さは、典型的には約１５〜３０ｂｐ、通常は約１５〜２９ｂｐの範囲である。ＲＮＡｉ剤が、ヘアピン形成部に存在する単独のリボ核酸の二本鎖構造、すなわちｓｈＲＮＡである場合、このヘアピンのハイブリダイズした部分の長さは、典型的には、ｓｉＲＮＡタイプの剤について上で提示したものと同じかまたは４〜８ヌクレオチドだけ長い。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡはｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉＲＮＡである（Ｗｕ  Ｄａｖｉｄ  Ｔ．Ｓ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２００８年、第１巻、１９−３５頁を参照）。
【００４７】
当該抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤は、アンチセンスＲＮＡであることもできる。本願明細書で使用する「アンチセンスＲＮＡ」は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の中の塩基の配列に相補的な一本鎖ＲＮＡ配列を指す。「相補的（な）」は、２つの一本鎖の核酸の類似の領域、または同じ一本鎖の核酸の異なる領域のヌクレオチド配列が、それらの一本鎖が安定な二本鎖の水素結合した領域として一緒にハイブリダイズすることを可能にする、ヌクレオチド塩基組成を有するということを意味する。１つの一本鎖領域のヌクレオチドの近接配列（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が、ＡがＵと対合するかまたはＴおよびＣがＧと対合するように、他方の一本鎖領域のヌクレオチドの類似の配列と一連の「正準の」水素結合した塩基対を形成することができるとき、このヌクレオチド配列は「完全に」相補的である。アンチセンスＲＮＡが細胞、例えば本発明で使用されるＢ１６細胞の中に導入されるとき、アンチセンスＲＮＡは、当該チロシナーゼタンパク質をコードする相補的なｍＲＮＡの翻訳を阻害することができる。アンチセンスＲＮＡとｍＲＮＡ配列との間の相補的な塩基対合によって、翻訳経路は、妨害されうる。
【００４８】
語句「核酸ハイブリダイゼーション」は、完全にまたは部分的に相補的なヌクレオチド配列を有する２つの核酸鎖（ストランド）が所定の反応条件下で一緒になり、特異的な水素結合を有する安定な、二本鎖ハイブリッドを形成するプロセスを意味する。いずれかの核酸鎖は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、またはこれらの核酸のうちの一方の類似体であってもよい；従って、ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッド、またはＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドを伴うことができる。
【００４９】
哺乳類の標的細胞がインビボである場合、本発明の方法で使用される抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤は、当業者に公知のいずれかの簡便なプロトコルを使用してその哺乳類宿主に投与することができる。以下の考察は、用いられてもよい代表的な核酸、例えばｓｉＲＮＡ、の投与プロトコルの概説を提供する。この核酸は、ウイルス感染、微量注入（マイクロインジェクション）、または小胞の融合を含めた、いずれの数の経路によって、組織または宿主細胞へと導入されてもよい。
【００５０】
また、Ｆｕｒｔｈ，Ｐ．Ａ．、Ｓｈａｍａｙ，Ａ．ら（１９９２年）「Ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎｔｏ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｂｙ  ｊｅｔ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ」、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、第２０５巻、３６５−３６８頁によって記載されているように、皮下噴射器が、筋肉内投与のために使用されてもよい。核酸は、金微小粒子上にコーティングされて、文献（例えば、Ｔａｎｇ，Ｄ．Ｃ．、Ｄｅ  Ｖｉｔ，Ｍ．ら、（１９９２年）「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｓ  ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｅｌｉｃｉｔｉｎｇ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ」、Ｎａｔｕｒｅ、第３５６巻、１５２−１５４を参照）に記載されているように微粒子銃デバイスまたは「遺伝子銃」によって皮内に送達されてもよい。この場合、金微小粒子はＤＮＡでコーティングされ、次いで皮膚細胞へと衝突させられる。ｓｉＲＮＡを送達するためのナノ粒子の使用は、細胞特異的標的指向化のための別の好適なアプローチである。この方法は、例えばＷｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．、Ｋｅｌｌｙ，Ｋ．ら（２００５年）「Ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｂｙ  ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、第２３巻、１４１８−１４２３頁によって記載されている。
【００５１】
抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、を選択された細胞へインビボで送達することの１つの具体例は、それを、重鎖抗体断片（Ｆａｂ）および核酸結合タンパク質プロタミンの融合タンパク質へ共有結合によらないで結合することである（Ｓｏｎｇ，Ｅ．、Ｚｈｕ，Ｐ．ら（２００５年）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｖｉａ  ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、第２３巻、７０９−７１７頁）。ｓｉＲＮＡ分子を選択された細胞へインビボで送達することの別の具体例は、それをリポソームの中へと封入することである。Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｄ．、Ｌｏｃｋｒｉｄｇｅ，Ｊ．ら、「Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ａｎｔｉ−ＨＢＶ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｓｉＲＮＡｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００５年）、第２３巻、１００２−１００７頁は、例えば、ポリエチレングリコール−脂質接合体でコーティングされた安定な核酸−脂質−粒子を使用して、静脈内投与のためのリポソームを形成する。
【００５２】
ＲＮＡｉ剤を選択された悪性標的細胞に送達することのなおさらなる例は、それぞれの核酸分子を含む細菌またはウイルス（例えばアデノウイルス）などの生物媒体（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｖｅｈｉｃｌｅ）の使用である。Ｘｉａｎｇ，Ｓ．、Ｆｒｕｅｈａｕｆ，Ｊ．ら（２００６年）「Ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ｅｌｉｃｉｔ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、第２４巻、６９７−７０２頁は、例えば、細菌である大腸菌を投与することにより、このアプローチを使用した。この大腸菌は、プラスミドから、とりわけｓｈＲＮＡおよびインベイシンの両方を転写し、このようにして、哺乳類細胞への侵入およびそのあとの哺乳類細胞の中での遺伝子サイレンシングを可能にした。
【００５３】
ｓｉＲＮＡを所望の細胞の中へと導入するために、発現ベクターが使用されてもよい。加えて、このオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子、チロシナーゼコード遺伝子を含有する宿主生物の中へ、直接供給、注入することができる。ｓｉＲＮＡは、その細胞の中へと直接（すなわち、細胞内に）導入されてもよい；または空洞、間質腔、生物の循環の中へと細胞外に導入されてもよいし、経口により導入されてもよい、など。経口導入のための方法としては、ＲＮＡを生物の食餌と直接混合することが挙げられる。核酸を導入する物理的な方法としては、細胞の中へと直接注入すること、またはＲＮＡ溶液をその生物へと細胞外注入することが挙げられる。この薬剤は、１細胞あたり少なくとも１つのコピーの送達を可能にする量で導入されてもよい。より高い用量（例えば、１細胞あたり少なくとも５コピー、１０コピー、１００コピー、５００コピーまたは１０００コピー）の薬剤はより有効な阻害をもたらす可能性がある；より低い用量も特定の応用例にとって有用である可能性がある。
【００５４】
１つの実施形態では、当該少なくとも１つのビタミンＥ成分は、強化配合物の中に含まれてもよい。「強化」は、少なくとも１つのビタミンＥ成分が、すべての他のビタミンＥ成分を含む通常の混合物よりも高い量で含まれることを意味する。例えば、パーム油から単離されたトコトリエノールは、その油分の総重量に基づき、１０重量％未満の量でγ−トコトリエノールおよびσ−トコトリエノールを含む。従って、本発明の実施形態に関しては、「強化」配合物は、特定のビタミンＥ成分、例えば、γ−トコトリエノールもしくはσ−トコトリエノールまたはγ−トコトリエノールおよびσ−トコトリエノールの混合物を、この配合物（または組成物）の総重量に基づき０．１％を超える量のそれぞれのビタミンＥ成分で、含む任意の配合物を意味する。
【００５５】
別の実施形態では、この強化配合物は、当該強化配合物の総重量に基づき、約０．１重量％、０．５重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９２重量％、９４重量％、９６重量％、９７重量％または９８重量％の全ビタミンＥ成分含有量の量の特定のビタミンＥ成分を含むことができる。
【００５６】
１つの実施形態では、本発明に係る組成物は、紫外線遮断剤（紫外線ブロック剤）をさらに含むことができる。この実施形態に関しては、紫外線遮断剤は、それ自体が紫外線を遮断するように作用する任意の化合物または物質、例えば酸化亜鉛、酸化チタン、オキシベンゾン（ｏｘｙｂｅｎｚｏｎｅ）、アゾベンゾン（ａｚｏｂｅｎｚｏｎｅ）およびアボベンゾン（ａｖｏｂｅｎｚｏｎｅ）などを指す。
【００５７】
本発明に係る組成物の量は、当該組成物が意図された所望の効果をもたらし、かつ患者にとって副作用を引き起こさない限り、任意の適切な濃度で患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、患者に投与される組成物の量は、約１ｍｇ〜約１５００ｍｇ；約１ｍｇ〜約１２００ｍｇ；約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ；約１ｍｇ〜約８００ｍｇ；約１ｍｇ〜約５００ｍｇ；約１０ｍｇ〜約１５００ｍｇ；約２５ｍｇ〜約１５００ｍｇ；約３０ｍｇ〜約１５００ｍｇ；約３０ｍｇ〜約１０００ｍｇ；約４０ｍｇ〜約１０００ｍｇ；約１０ｍｇ〜約８００ｍｇ；または約１０ｍｇ〜約５００ｍｇであることができる。別の実施形態では、当該組成物は、患者の血液中で、約０．５μΜ〜約５０μΜ；約０．５μΜ〜約５０μΜ；約１μΜ〜３０μΜまたは約１０μΜ〜３０μΜの血清レベル濃度を得るための量で投与することができる。この実施形態に関しては、本発明に係る組成物で使用されるビタミンＥ成分の量は、約０．５μΜ〜約８０μΜ；約１μΜ〜約６０μΜ；約２．５μΜ〜約５０μΜ；約４μΜ〜約８０μΜ；約５μΜ〜約５０μΜ；約５μΜ；約１０μΜ；約１５μΜ；約２０μΜ；約３０μΜ；または約５０μΜであることができる。本発明に係る組成物で使用される、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有するビタミンＥ成分とは異なるさらなる成分の量は、約１μΜ〜約５０００μΜ；約１μΜ〜約４５００μΜ；約１μΜ〜約３５００μΜ；約１μΜ〜約３０００μΜ；約１μΜ〜約２０００μΜ；約１μΜ〜約１０００μΜ；約１μΜ〜約５００μΜ；約１μΜ〜約２５０μΜ；約５μΜ〜約５０００μΜ；約１０μΜ〜約５０００μΜ；約２０μΜ〜約５０００μΜ；約５０μΜ〜約５０００μΜ；約１００μΜ〜約５０００μΜ；約２００μΜ〜約５０００μΜ；約３００μΜ〜約５０００μΜ；約１０μΜ；約２０μΜ；約５０μΜ；約６０μΜ；約１０００μΜ；約３５００μΜ；または約４５００μΜであることができる。１つの実施形態では、患者は動物である。この動物は、例えば、ヒト、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ウシ、イヌまたはネコなど（これらに限定されない）の哺乳動物であることができる。
【００５８】
１つの実施形態では、当該組成物は、ナノ粒子形態またはナノ粒子のエマルションまたは封入された形態の、ソフトゲル、アイスティック（ｅｙｅｓｔｉｃｋ）、硬カプセル剤、錠剤、ゲル、糖衣錠、持続放出配合物、ローション剤、軟膏剤、ゲル、スプレー、薄い液体、ボディースプラッシュ、マスク、血清、固形の美容用スティック（ｓｏｌｉｄ  ｃｏｓｍｅｔｉｃ  ｓｔｉｃｋ）、リップクリーム、洗髪剤、液体石鹸、浴剤（バスオイル）、コロン、ヘア・コンディショナー（リンス）、クリーム（保湿クリームなど）；洗顔料、注射用配合物として投与することができる。さらなる実施形態では、本発明に係る組成物は、市販の皮膚科組成物において使用することができ、この市販の皮膚科組成物は、いくらかを挙げるならば皮膚白色化クリーム、保湿であるが、これらに限定されない。
【００５９】
１つの実施形態では、当該組成物は、水溶性の形態で投与することができる。従って、所望に応じて、本発明に係る組成物は、特定の化合物の添加によって、水に可溶化することができる。本発明に係る組成物の水に可溶化された形態は、例えば、本発明に係る組成物を固体分散物へと配合することにより得ることができる。水分散性または水溶性のトコトリエノール形態を配合する他の方法は、例えば、米国特許第５，８６９，７０４号明細書に開示されている。
【００６０】
用語「固体分散物」は、少なくとも２成分を含む固体状態（液体または気体の状態とは異なる）の系であって、１つの成分が他方の成分（複数可）全体にわたって分散している系と定義される。例えば、当該組成物の成分は、薬学的に許容できる水溶性ポリマー（複数可）および薬学的に許容できる界面活性剤（複数可）から構成されるマトリクスの中に分散させることができる。
【００６１】
用語「固体分散物」は、１つの相の小さい粒子が別の相の中に分散している系を包含する。これらの粒子は、典型的には、サイズが４００μｍ未満、例えばサイズが１００μｍ、１０μｍ、または１μｍ未満のものである。当該成分の分散が、その系が、全体にわたって化学的におよび物理的に均一または均質であるようなもの、または１つの相からなる（熱力学において規定されるとおり）ようなものであるとき、このような固体分散物は「固溶体」または「ガラス状溶液」と呼ばれることになろう。ガラス状溶液は、溶質がガラス状の溶媒に溶解されている均一な、ガラス状の系である。
【００６２】
このような固体分散物は、様々な経路を介して投与することができる。例えば、経口投与された固体剤形としては、カプセル、糖衣錠、顆粒、丸剤、粉末、および錠剤が挙げられるが、これらに限定されない。このような剤形を配合するために一般に使用される賦形剤としては、封入材料、または配合物添加剤、例えば吸収促進剤、抗酸化物質、結合剤、バッファー、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、矯味矯臭剤、湿潤剤、潤滑剤、防腐剤、噴霧剤、離型剤、殺菌剤、甘味料、可溶化剤、およびこれらの混合物が挙げられる。
【００６３】
固体剤形で経口投与される化合物のための賦形剤としては、寒天、アルギン酸、水酸化物アルミニウム、安息香酸ベンジル、１，３−ブチレングリコール、ヒマシ油、セルロース、酢酸セルロース、カカオバター、トウモロコシデンプン、トウモロコシ油、綿実油、エタノール、酢酸エチル、炭酸エチル、エチルセルロース、ラウリン酸エチル、オレイン酸エチル、ゼラチン、胚芽油、グルコース、グリセロール、落花生油、イソプロパノール、等張生理食塩水、ラクトース、水酸化マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、麦芽、オリーブ油、落花生油、リン酸カリウム塩、ジャガイモデンプン、プロピレングリコール、タルク、トラガント、水、サフラワー油、ゴマ油、セサミン、セサモール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム塩、大豆油、スクロース、テトラヒドロフルフリルアルコール、およびこれらの混合物を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００６４】
１つの実施形態では、剤形は、マトリクス中に、少なくとも１つのビタミンＥ成分ならびに抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分の固溶体または固体分散物を含むことができる。このマトリクスは、少なくとも１つの薬学的に許容できる水溶性ポリマーおよび少なくとも１つの薬学的に許容できる界面活性剤を含むことができる。好適な薬学的に許容できる水溶性ポリマーとしては、少なくとも５０℃、または少なくとも６０℃、または約８０℃〜約１８０℃のガラス転移温度（Ｔｇ）を有する水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
上で定義されたとおりのＴｇを有する水溶性ポリマーは、固溶体または固体分散物を、さらなる加工なしに剤形として使用することができるか、またはごく少量の錠剤化助剤（ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  ａｉｄｓ）とともに錠剤へと押し固めることができるほどに、機械的に安定で、かつ通常の温度範囲内で、十分に温度安定性がある固溶体または固体分散物の調製を可能にする。
【００６６】
本発明に係る剤形に含まれる水溶性ポリマーは、２０℃で、２％（ｗ／ｖ）で水溶液の中に溶解されたときに、１〜５０００ｍＰａ・ｓ、または１〜７００ｍＰａ・ｓ、または５ｍＰａ・ｓ〜１００ｍＰａ・ｓの見かけ粘度を有することができるポリマーである。
【００６７】
本発明に係る剤形での使用に好適な水溶性ポリマーとしては、Ｎ−ビニルラクタム類のホモポリマーおよびコポリマー、とりわけＮ−ビニルピロリドンのホモポリマーおよびコポリマー、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、Ｎ−ビニルピロリドンおよび酢酸ビニルもしくはプロピオン酸ビニルのコポリマー；セルロースエステルおよびセルロースエーテル、特にメチルセルロースおよびエチルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、特にヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシアルキルアルキルセルロース、特にヒドロキシプロピルメチルセルロース、セルロースフタレートまたはセルローススクシネート、特にセルロースアセテートフタレートおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート；ポリエチレンオキシドおよびポリプロピレンオキシドおよびエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのコポリマーなどの高分子量ポリアルキレンオキシド；メタクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、メタクリル酸／メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸ブチル／メタクリル酸２−ジメチルアミノエチルコポリマー、ポリ（アクリル酸ヒドロキシアルキル）、ポリ（メタクリル酸ヒドロキシアルキル）などのポリアクリレートおよびポリメタクリレート；ポリアクリルアミド、酢酸ビニルおよびクロトン酸のコポリマー、部分的に加水分解したポリ酢酸ビニル（部分的に鹸化された「ポリビニルアルコール」とも呼ばれる）、ポリビニルアルコールなどの酢酸ビニルポリマー；カラギーナン、ガラクトマンナンおよびキサンタンガムなどのオリゴ糖および多糖、またはこれらのうちの１以上の混合物を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００６８】
本願明細書で使用する用語「薬学的に許容できる界面活性剤」は、薬学的に許容できる非イオン性界面活性剤を指す。本発明に係る剤形は、１２〜１８、または１３〜１７、または１４〜１６の親水性親油性バランス（ＨＬＢ）値を有する少なくとも１つの界面活性剤を含む。ＨＬＢ系は、数値を界面活性剤に起因するととらえ、親油性物質はより低いＨＬＢ値を受け、親水性物質はより高いＨＬＢ値を受ける。
【００６９】
１つの実施形態では、本発明に係る剤形は、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、例えばポリオキシエチレングリセロールトリリシノレートもしくはポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）  ＥＬ）もしくはポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、例えばポリエチレングリコール４０  硬化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）  ＲＨ  ４０、ポリオキシル４０  硬化ヒマシ油またはマクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートとしても知られる）もしくはポリエチレングリコール６０  硬化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）  ＲＨ  ６０）；またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンのモノ脂肪酸エステル、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ４０）、またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ２０）から選択される１以上の薬学的に許容できる界面活性剤を含む。１８超または１２未満のＨＬＢ値を有する界面活性剤を含めた他の界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体またはポリオキシエチレンポリプロピレングリコールとしても知られる、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロック共重合体、例えばＰｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）  １２４、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）  １８８、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）  ２３７、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）  ３８８、またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）  ４０７も使用されてもよい。
【００７０】
２以上の界面活性剤が使用される場合、１２〜１８のＨＬＢ値を有する界面活性剤は、好ましくは、使用される界面活性剤の全量の少なくとも５０重量％、より好ましくは少なくとも６０重量％を占める。
【００７１】
本発明に係る剤形は、流動調整剤、潤滑剤、増量剤（充填剤）および崩壊剤などのさらなる賦形剤または添加剤を含むこともできる。このようなさらなる賦形剤は、全剤形の０％〜１５重量％を構成してもよいが、これに限定されない。
【００７２】
本発明に係る剤形は、いくつかの層からなる剤形、例えば積層された錠剤または多層錠剤として提供することができる。それらは、開放型または閉鎖型であってもよい。「閉鎖型剤形」は、１つの層が、少なくとも１つの他の層によって完全に取り囲まれている剤形である。多層型は、互いに非相溶性である２つの有効成分を加工することができる、または有効成分（複数可）の放出特性を制御することができる、という利点を有する。例えば、外側の層のうちの１つに有効成分を含めることにより初期用量を提供し、内側の層（複数可）の中に有効成分を含めることにより維持量を提供することが可能である。多層錠剤のタイプは、２以上の層の顆粒を圧縮することにより製造されてもよい。
【００７３】
さらには、錠剤上の膜コーティングが、錠剤の飲み込みやすさに寄与する可能性がある。膜コーティングは、味をも向上させ、上品な外観をも与える。所望に応じて、この膜コーティングは、腸溶性コーティングであってもよい。膜コーティングは、通常、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびアクリレートまたはメタクリレートコポリマーなどのポリマーの膜形成物質を含む。膜形成ポリマーのほかにも、当該膜コーティングは、可塑剤、例えばポリエチレングリコール、界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）  タイプ、および任意に色素、例えば二酸化チタンまたは酸化鉄をさらに含んでもよい。当該膜コーティングは、タルクをも粘着防止剤としてを含んでもよい。当該膜コーティングは、通常、当該剤形の５重量％未満を占める。
【００７４】
本発明に係る組成物を配合する他の特定の形態としては、トコトリエノールの未変性の油性液体、例えばパーム油（これは、ソフトゲルの製造のために使用することができる）、水溶性エマルション液体形態（これは、ソフトドリンクの製造のために使用することができる）、冷水分散性粉末（これは、軟カプセル剤および錠剤の製造のために使用することができる）、または小ビーズ（これは、硬カプセル剤の製造のために使用することができる）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
水溶性エマルション液体の形態の本発明に係る組成物の製造のために、トコトリエノール液体が出発物質として使用されて、これにグリセリンと、乳化剤のブレンドとが加えられる。このあと、この混合物は、エマルションへと均質化される。
【００７６】
水溶性エマルション液体の配合のために使用することができる乳化剤の例としては、グリセリン脂肪酸エステル、モノグリセリドの酢酸エステル、モノグリセリドの乳酸エステル、モノグリセリドのクエン酸エステル、モノグリセリドのコハク酸エステル、モノグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、脂肪酸のポリグリセロールエステル、ポリリシノール酸ポリグリセロール、脂肪酸のソルビタンエステル、脂肪酸のプロピレングリコールエステル、デンプン誘導体、界面活性剤、脂肪酸のスクロースエステル、ステアロイル乳酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｔｅａｒｏｙｌ  ｄｉ  ｌａｃｔａｔｅ）、レシチン、または酵素で消化したレシチン／酵素で処理したレシチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
本発明に係る組成物の冷水分散性粉末は、トコトリエノール油性液体を出発物質として準備することにより製造することができる。乳化剤、例えば加工トウモロコシデンプン、マルトデキストリン、シクロデキストリン類またはトウモロコシデンプンが、トコトリエノール油分に加えられる。そのあと、この混合物は、乾燥粉末へと噴霧乾燥することができる。
【００７８】
本発明に係る組成物を含む小ビーズは、トコトリエノール油性液体を出発物質として準備することにより得ることができる。１つの実施形態では、そのあと、ゼラチン、トウモロコシデンプン、スクロースおよびパルミチン酸アスコルビルが、このトコトリエノール油分に加えられる。この混合物は、乾燥した小ビーズへと噴霧乾燥される。
【００７９】
上記の組成物を、皮下注射、筋肉内注射または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を介して、動物の体の循環系の中へと正確に計算された投与量で導入および送達することを可能にする注射用配合物。プロピレングリコールは、このような配合物に対して一般に使用される溶媒である。別の実施形態では、この組成物は油中水型配合物として配合される。
【００８０】
本発明に係る組成物は、意図された治療効果または美容効果が成し遂げられる限り、任意の好適な手段を介して、患者の中へと投与することができる。いくつかの実施形態では、当該組成物は、例えば、局所投与または眼内投与または全身投与または経口投与、または直腸投与または経粘膜投与、または腸内投与または筋肉内投与、または皮下投与、または髄内投与、または髄腔内投与、または直接心室内投与、または静脈内投与、または硝子体内投与、または腹腔内投与、または鼻腔内投与を介して、患者の中へと投与することができる。
【００８１】
当該医薬組成物は、薬学的に許容できる担体または賦形剤をさらに含む。この「担体」または「賦形剤」は、担体が配合物の他の成分と相溶し、かつ患者にとって傷害性ではない限り、いずれの薬学的に許容できる担体をも含むことができる。従って、本発明に係る使用のための医薬組成物は、活性化合物を薬学的に使用することができる調剤へと加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む１以上の生理的に許容できる担体を使用して従来の様式で配合されてもよい。適正な配合物は、選ばれる投与経路に依存する。この薬学的に許容できる担体または賦形剤は、セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）ジェランガム、ポリアルコール、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）ポリマー、ポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ポリ（オキシエチレン）およびポリ（オキシプロピレン）ならびにこれらのブロック共重合体、ポリエチレンオキシド、ポリカルボフィル、キトサン、シクロデキストリン、リポソーム、ナノ粒子、微小粒子（ミクロスフェアおよびナノスフェアを含む）、ニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅ）、ファーマコソーム（ｐｈａｒｍａｃｏｓｏｍｅ）、コラーゲンシールド、眼用フィルム（ｏｃｕｌａｒ  ｆｉｌｍ）またはこれらの組み合わせのいずれかであることができる。
【００８２】
本発明の別の態様では、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、このビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物であって、このビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの混合物からなる群から選択される医薬組成物、が提供される。
【００８３】
本発明のさらに別の態様では、本願明細書に記載されるとおりの医薬組成物を含む軟膏剤またはクリームが提供される。
【００８４】
本発明のさらに別の態様では、アシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールを含むかまたはアシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールからなる製品が提供される。１つの実施形態では、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールはアセチル化されていてもよい。
【００８５】
例証として本願明細書に記載される発明は、本願明細書に具体的に開示されていないいずれの要素、限定の不存在下で、好適に実施されうる。従って、例えば、用語「含む」、「包含する」、「含有する」などは、拡張的に、そして限定せずに読まれるものとする。加えて、本願明細書中で用いられる用語および表現は、説明の用語として使用されており、限定のための用語としては使用されておらず、そしてこのような用語および表現の使用においては、示され説明された特徴またはその一部分のいずれの均等物をも排除する意図はなく、逆に特許請求の範囲に係る本発明の範囲内で種々の改変が可能であるということが認識される。従って、本発明は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されたが、本願明細書に開示される、好ましい実施形態および任意の特徴の中で具現化される発明の改変およびバリエーションが、当業者によって再構成されてもよく、そして、そのような改変およびバリエーションは本発明の範囲内にあると考えられるということを理解されたい。
【００８６】
本発明が、本願明細書中に広範にかつ一般的に記載されてきた。当該一般的な開示に属する、より狭い種（ｓｐｅｃｉｅｓ）および下位概念の系列の各々も、本発明の一部を形成する。これは、除かれた素材が具体的に本願明細書に記述されているか否かによらず、属（ｇｅｎｕｓ）からのいずれかの主題を除外する但書きまたは負の限定を伴う本発明の一般的記載を包含する。
【００８７】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲および非限定的な実施例内に含まれる。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュ群によって記載されているところでは、当業者は、これにより、本発明は、そのマーカッシュ群のいずれかの個々の要素または要素の部分群によっても記載されているということを認識するであろう。
【実施例】
【００８８】
実施例１：材料および方法
Ｂ１６マウス黒色腫細胞は、ＡＴＣＣ（米国、バージニア州、マナッサス（Ｍａｎａｓｓａｓ））から購入した。この細胞株についての基本培地は、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）であった。完全増殖培地を作製するために、ウシ胎仔血清（最終濃度、１０％）を基本培地に加えた。トコトリエノール（Ｔ３）およびトコフェロール（ＴＰ）異性体およびパームトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）は、分子蒸留およびＮｏｖａｓｅｐ（登録商標）装置（ノヴァセップ（Ｎｏｖａｓｅｐ）、フランス、ポンペ（Ｐｏｍｐｅｙ））を使用して、パーム脂肪酸留出分（ＰＦＡＤ）から精製した。この抽出設備は、シンガポール、ツアス（Ｔｕａｓ）にある。ＰＦＡＤ供給物は、クアラルンプール・ケポン株式会社（Ｋｕａｌａ  Ｌｕｍｐｕｒ  Ｋｅｐｏｎｇ  Ｂｅｒｈａｄ）（マレーシア、クアラルンプール）から購入した。ビタミンＥ異性体の純度は、ＨＰＬＣおよびガスクロマトグラフィー（ＧＣ）のピーク面積百分率によって確認した。
【００８９】
実施例２：パームビタミンＥ酢酸エステルの合成
１０ｇのパームＶＥを２０〜５０ｍｌのアルコールまたはアルコール／水混合物（溶媒）に溶解させ、−２０℃〜−４０℃に冷却して、スクアレン、および遊離脂肪酸（ＦＦＡ）などの不純物を除去した。溶媒を除去した後、この精製したパームＶＥを３０〜１００ｍｌの無水酢酸と混合し、０．１〜０．３ｇのトリメチルアミンを加えた。この混合物を、ピリジン触媒の存在下、Ｎ２下で、５０℃〜１００℃の温度サイクルで、１〜９時間撹拌した（Ｏ’Ｂｙｒｎｅら、「Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ＬＤＬ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａｌｐｈａ−，ｇａｍｍａ，ｏｒ  ｄｅｌｔａ−ｔｏｃｏｔｒｉｅｎｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｈｕｍａｎｓ」、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２９巻、８３４−４５頁、２０００年）。過剰の無水酢酸およびその対応する酸ならびに触媒を、６０℃〜１００℃の範囲の真空蒸留によって除去した。残渣を２０ｍｌのヘキサンに溶解させ、２０ｍｌの希ＮａＨＣＯ３水溶液、次いで２０ｍｌの水によって洗浄した。得られた有機層を減圧下で乾燥し、暗黄色油状物を得た。これらの残留するＶＥ酢酸エステルを、米国特許第４，５１７，０５７号明細書に記載されているように、０．０１ｍｂａｒ未満での、１６０℃〜２４０℃でショートパス蒸留（ＳＰＤ）によってさらに精製した。ＶＥ酢酸エステル内容物を伴う透明な黄色油状物が得られ、遊離のＶＥは検出されなかった。全収率はおよそ８５％であった。
【００９０】
実施例３：紫外線分光測光およびエミッタ
フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）を具えるＡｇｉｌｅｎｔ  ８４５３紫外線−可視分光光度計（アジレント・テクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、米国、カリフォルニア州、サンタクララ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ））を、１ｃｍキュベットを使用して、２００〜５００ｎｍの範囲の紫外線スペクトルの研究のために使用した。細胞照射のためのＵＶＢ源を、ＵＶＰ  ＵＶＭ−５７手持ち式紫外線ランプ（ユーブイピー社（ＵＶＰ  Ｉｎｃ）、米国、カリフォルニア州、アップランド（Ｕｐｌａｎｄ））を使用して準備した。
【００９１】
実施例４：細胞生存率の検討および時間的経過実験
細胞生存率の検討のために、１００μｌの培地に再懸濁した５×１０３細胞を、９６穴プレートの各ウェルにプレーティングした。次いで、この細胞を、異なる濃度のビタミンＥ異性体を用いて２４時間処置した。処置後、２０μｌのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中で１ｍｇ／ｍｌ；シグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、米国、ミズーリ州、セントルイス）を、各ウェルに加え、この細胞を３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、ホルマザン結晶を２００μｌのＤＭＳＯに再懸濁し、５９５ｎｍにおける強度を測定した。各実験を三連のウェルで３回繰り返し、成長曲線が平均および標準偏差を示した。
【００９２】
実施例５：ウエスタンブロット法
詳細なプロトコルは、Ｃｈｕら、「Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇａｒｌｉｃ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅ−ｃａｄｈｅｒｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、２００６年、第２７巻、２１８０−９頁に、これまでに記載されている。手短に言えば、溶解バッファー（５０ｍｍｏｌ／ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ  ８．０］、１５０ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＣｌ、１％  ＮＰ４０、０．５％  デオキシコール酸塩、０．１％  ＳＤＳ、１ｍｇ／ｍｌ  アプロチニン、１μｇ／ｍｌ  ロイペプチン、および１ｍｍｏｌ／ｌ  フェニルメチルスルホニルフルオリド）に細胞ペレットを懸濁させることにより、細胞可溶化物を調製した。ＤＣ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキット（バイオ・ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、米国、カリフォルニア州、ハーキュリーズ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ））を使用して、タンパク質濃度を測定した。等しい量のタンパク質（３０μｇ）を電気泳動のための１０％  ＳＤＳポリアクリルアミドゲルにロードし、次いでポリビニリデンジフルオリド膜（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、米国、ニュージャージー州、ピスカタウェイ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ））にトランスファーした。次に、この膜を、一次抗体とともに室温で１時間、チロシナーゼ、Ｉｄ１、およびβアクチン（サンタクルーズ・バイオテクノロジー（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、米国、カリフォルニア州、サンタクルーズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ））に対して、インキュベーションした。適切な二次抗体を用いたインキュベーションの後、シグナルをＥＣＬウエスタンブロッティングシステム（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））によって可視化した。β−アクチンの発現を、全細胞可溶化物に対する内部負荷対照として評価した。
【００９３】
実施例６：逆転写酵素ＰＣＲ
製造業者のプロトコル（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、米国、カリフォルニア州、カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ））に従ってトリゾール試薬を使用して、全ＲＮＡを単離した。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、米国、カリフォルニア州、カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ））を使用してｃＤＮＡを合成し、次いでこれを、チロシナーゼ特異的プライマー（順方向プライマー、チロシナーゼ−Ｓ、５’−ＴＴＣＡＡＣＣＣＴＴＴＴＣＴＡＴＧＴＣＣ−３’［−２２３６／−２２１７］（配列番号１）および逆方向プライマー、チロシナーゼ−ＡＳ、５’−ＴＣＡＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡΑ−３’［＋６３／＋４２］）（配列番号２）およびＧＡＰＤＨ特異的プライマー：５’−３’Ｆ  ＡＴＧＡＣＡＴＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧ（配列番号３）；５’−３’Ｒ  ＣＡＴＡＣＣＡＧＧＡＡＡＴＧＡＧＣＴＴＧ（配列番号４）を用いて、ＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲサイクルプロトコルは以下のとおりであった：９５℃で１０分間、９５℃で３０秒間、５５℃で３０秒間、７２℃で１分間、および７２℃で１０分間を３０サイクル。グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）を内部対照として増幅した。ＰＣＲ産物を２％  アガロースゲル上で電気泳動にかけ、ゲルドキュメンテーションシステム（ｇｅｌ  ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用して分析した。
【００９４】
実施例７：メラニン形成アッセイ
Ｂ１６黒色腫細胞（５×１０６細胞／ウェル）を、６穴プレートの中で少なくとも１６時間インキュベーションし、その後、種々の処置期間、化合物処置（２０μΜのγΤ３およびδΤ３；それぞれ０．０５％、０．５％、および１％のパームＴＲＦ、乳酸ナトリウム、およびコウジ酸；および０．０５〜５ｎｇ／ｍｌのレチノイン酸；シグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））にかけた。異なる時間点で、トリプシン（ｔｒｙｓｉｎ）−ＥＤＴＡを使用して細胞を回収し、細胞ペレットを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて１回洗浄した。各化合物処置群からの試料量を２つの等しい部分に分割した。次いで、これらの細胞ペレットをチロシナーゼ活性およびメラニン含有量の測定まで−８０℃で保存した。
【００９５】
実施例８：チロシナーゼ活性
回収した細胞ペレットを、プロテアーゼ阻害剤とともに、ＲＩＰＡバッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ  ７．５］、１％  ＮＰ−４０、０．１％  デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、および１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中でホモジナイズし、３０分間、氷上に置いた。１５，０００ｇで、４℃で３０分間、試料を遠心分離した後に上清を集めた。上清１００μｌごとに、２００μｌの０．３％  Ｌ−ＤＯＰＡ（シグマ・アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））を加えた。ＲＩＰＡバッファーおよび０．３％  Ｌ−ＤＯＰＡのブランク対照を含めてすべての試料を、３７℃で２０分間インキュベーションした。次いで、各試料からのドパクロム形成を４７５ｎｍで測定した。未処置の対照と比較した処置群の吸光度百分率値を、ＤＣタンパク質アッセイ（バイオ・ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、米国、カリフォルニア州、ハーキュリーズ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ））を使用して測定した全タンパク質含有量１μｇあたりに対して算出した。
【００９６】
実施例９：メラニン含有量
回収した細胞ペレットを１ｍｌの１Ｎ  水酸化ナトリウムに溶解させ、その後、８０℃でインキュベーションした。次いで、メラニン含有量を、直後に４２０ｎｍで測定した。未処置の対照と比較した処置群の吸光度百分率値を、測定した全タンパク質含有量１μｇあたりに対して算出した。
【００９７】
実施例１０：Ｂ１６異種移植モデルの確立
実験プロトコルは、バイオポリス（Ｂｉｏｐｏｌｉｓ）のΑ−ＳＴＡＲ生物資源センター（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ、ＢＲＣ）のＩＡＣＵＣ委員会（ＩＡＣＵＣ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された（ＩＡＣＵＣ番号０８０３０２）。雄のＢＡＬＢ／ｃ胸腺欠損ヌードマウス（４〜５週齢、１８〜２２ｇ）をザ・ジャクソン・ラボラトリー（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（米国、メイン州、バー・ハーバー（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ））から購入した。マウスを、生物資源センター（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ）（シンガポール、バイオポリス（Ｂｉｏｐｏｌｉｓ））の部門（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ）１で、標準条件下（２０．８±２℃、５５±１％  相対湿度、１２時間の明／暗サイクル）で、齧歯動物用の餌（ハーランラボラトリーズ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、米国、インディアナ州、インディアナポリス）および病原体なしの環境で供給した塩素添加逆浸透水（ｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｏｓｍｏｓｉｓ  ｗａｔｅｒ）を用いて飼育した。手短に言えば、Ｂ１６細胞を、２０μΜのγ−Τ３およびδ−Τ３、またはパームＴＲＦを用いて１週間、前処置した。次いで、１００μｌの無血清ＤＭＥＭ中の５×１０５の前処置したＢ１６細胞を、２６ゲージ針（ベクトン・ディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、ニュージャージー州、フランクリン・レイクス（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ））付きの１ｍｌシリンジを使用して、ヌードマウスの脇腹に皮下注射した。これに続いて、１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で２週間のγ−Τ３およびδ−Τ３、またはパームＴＲＦの経口補給を行った。全部で、４つの実験群がある：Ｇ１、ビヒクル対照；Ｇ２、γΤ３（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；Ｇ３、δＴ３（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）；およびＧ４、全スペクトルのパームＴＲＦ（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）。これらのマウスを毎日秤量し、接種後５日目および１４日目に、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｆｉｂｅｒ  Ｃａｌｉｐｅｒ（フィッシャー・サイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、米国、ペンシルベニア州、ピッツバーグ）を使用して腫瘍を測定した。処置から１４日後、ＣＯ２吸入によりマウスを安楽死させた。２６ゲージ針を使用して、心臓出血によって血液試料を集めた。血液試料を室温で３０分間インキュベーションし、そのあと４４００ｒｐｍで、４℃で３０分間遠心分離した。上清としての血清を血漿から分離し、−８０℃で保存した。腫瘍、肝臓、腎臓、脾臓、肺、心臓、および皮膚を回収した。
【００９８】
１．１  Ｔ３異性体およびチロシナーゼ阻害剤の抗増殖効果
Ｂ１６黒色腫細胞を、投与量を増やしながら、α−トコトリエノール（α−Ｔ３）、β−トコトリエノール（β−Ｔ３）、γ−トコトリエノール（γ−Τ３）、δ−トコトリエノール（δ−Τ３）、および乳酸ナトリウム、コウジ酸およびアルファアルブチンを用いて２４時間処置した。β−トコトリエノール、γ−トコトリエノールおよびδ−トコトリエノールは、Ｂ１６黒色腫細胞の増殖速度を用量依存的に阻害する（図１Α〜図１Ｂ）ということが実証された。検討したチロシナーゼ阻害剤の中で、コウジ酸が０．５％以上の濃度で抗増殖効果を有することが示された（図１Ｃ）。ウエスタンブロット法を使用するさらなる研究により、切断型のカスパーゼ３およびＰＡＲＰの活性化から明らかなように、β−Τ３、γ−Τ３、およびδ−Τ３、およびコウジ酸が細胞のアポトーシスを誘導することが明らかになった（図２Ａおよび図Ｂ）。
【００９９】
１．２  Ｔ３異性体およびチロシナーゼ阻害剤の抗チロシナーゼ効果
Ｂ１６黒色腫細胞を、αΤΡ、γ−Τ３およびδ−Τ３異性体および２つのチロシナーゼ阻害剤（コウジ酸および乳酸ナトリウム）を用いて処置した。ＲＴ−ＰＣＲの結果は、チロシナーゼ遺伝子のｍＲＮＡ転写物は検討した処置のすべてによって影響を受けないということを示した（図３Ａ）。しかしながら、ウエスタンブロット法の結果は、２０μΜのγ−Τ３およびδ−Τ３による処置が、Ｂ１６黒色腫細胞においてチロシナーゼタンパク質の発現の顕著な抑制を生じるということを示した。チロシナーゼタンパク質の発現の抑制は、γΤ３についてはより大きい（図３Ｂおよび４Ｂ）。対照的に、コウジ酸および乳酸ナトリウムを用いた２０μΜ処置は、チロシナーゼタンパク質レベルの認められる下方制御を生じなかった。しかしながら、より高い用量のコウジ酸および乳酸ナトリウム（０．０５％以上）を使用すると、チロシナーゼタンパク質の発現の有意な阻害が導かれた（図４Ｂ）。
【０１００】
パームＴＲＦのすべての成分によるチロシナーゼ抑制の用量反応を検討するために、Ｂ１６黒色腫細胞を、αＴＰを含めてすべてのパームＴＲＦ異性体の増加する投与量を用いて処置した。図３Ｂに示すように、γ−Τ３およびδ−Τ３だけが、チロシナーゼの有意な抑制を用量依存的に誘導した。加えて、２０μΜのパームＴＲＦ混合物およびその酢酸エステルを用いたＢ１６黒色腫細胞の処置も、チロシナーゼタンパク質の発現の一貫性のある抑制を生じた（図４Ａ）。パームＴＲＦによる抑制のレベルは、γ−Τ３およびδ−Τ３異性体単独を使用する抑制のレベルと同等であった。
【０１０１】
γ−Τ３およびδ−Τ３、αΤΡ、およびチロシナーゼ阻害剤によるチロシナーゼ抑制の時間応答を研究するために、Ｂ１６黒色腫細胞を、４８時間までの、γ−Τ３およびδ−Τ３異性体、αＴＰ、乳酸ナトリウム、およびコウジ酸の単回投与を用いて処置した。γ−Τ３およびδ−Τ３異性体によるチロシナーゼタンパク質の発現の抑制は、処置期間を２４時間から４８時間へと延ばすことにより高められることが示された（図６）。しかしながら、乳酸ナトリウムおよびコウジ酸についての処置期間が２４時間から４８時間へと延ばされたとき、反対の観察結果が認められ、これは、これら２つの薬剤による阻害は短寿命である可能性があるということを示唆する。
【０１０２】
１．３  Ｔ３異性体およびチロシナーゼ阻害剤を用いて処置した細胞中のチロシナーゼ活性およびメラニン含有量
１つの細胞あたりのメラニン合成速度および全メラニン含有量を、対照培地（ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳ）中、および処置した培地中で測定した。メラニン合成速度は、チロシナーゼ活性アッセイによって表される。代表的な実験の結果を図７および図８に提示する。全活性を細胞数で除算することにより、チロシナーゼ活性を、細胞成長の差について正規化するとき、γ−Τ３およびδ−Τ３ならびにパームＴＲＦを用いて処置したＢ１６黒色腫細胞は、対照におけるチロシナーゼ活性の４５％未満を有していた。チロシナーゼ活性の阻害は、処置後１５日目まで残っていた（図７Ａ）。１５日目に、γΤ３を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞は、対照と比べて１５％未満のチロシナーゼ活性を有していた。図７Ｂは、γΤ３処置の後の９日目のチロシナーゼ活性は、０．０５％コウジ酸を用いて処置したときのチロシナーゼ活性と同等であったことを示す。低いγΤ３処置濃度（０．０５％のコウジ酸および乳酸ナトリウムは、それぞれ３．５２ｍＭおよび４．４６ｍＭと等価である）に起因して、γ−Τ３およびδ−Τ３によるチロシナーゼ活性の阻害は、コウジ酸および乳酸ナトリウムよりも少なくとも１５０倍強力であった。γ−Τ３およびδ−Τ３を用いて処置したＢ１６黒色腫細胞培養物のメラニン含有量は、５日目および９日目では、対照よりも、それぞれ４５％および３０％低かった（図７Ｃ）。γΤ３処置後のＢ１６黒色腫細胞のメラニン含有量は、０．０５％  乳酸ナトリウムおよびコウジ酸を使用した処置試料よりもわずかに低かった（図７Ｃ）。
【０１０３】
１．４  γ−Τ３およびδ−Τ３の抗メラニン生成特性を示唆するインビトロおよびインビボでのエビデンス
この研究は、γ−Τ３およびδ−Τ３、パームＴＲＦ、およびチロシン阻害剤の、Ｂ１６黒色腫細胞においてメラニン生成の誘導を阻害する能力を報告した。易感染性のマウスにおける、細胞ペレットおよび異種移植された固形腫瘍の色素沈着レベルを調べた。この実験の結果を図９に示す。図９では、色素の量は、ブランク（対照）、δΤ３、γΤ３、αΤΡ、パームＴＲＦ、２０μΜ  乳酸ナトリウム、２０μΜ  コウジ酸、０．０５％  乳酸ナトリウム、および０．０５％  コウジ酸（左から右へのパネル）を用いて処置した細胞ペレットの写真によって直接例証される。γΤ３、δΤ３、パームＴＲＦ、０．０５％  乳酸ナトリウム、および０．０５％  コウジ酸を用いて処置した試料では、より薄い色素沈着を観察した。図１１では、Ｔ３補給の１４日後の固形腫瘍の色素沈着は対照と比べて色が薄かっただけでなく、腫瘍サイズもγΤ３およびδΤ３群については有意により小さかった（図１１）。
【０１０４】
１．５  γ／δΤ３とコウジ酸および乳酸ナトリウムとの相乗的相互作用
γ−Τ３およびδ−Τ３の単独の、またはコウジ酸、乳酸ナトリウム、およびレチノイン酸との組み合わせたγ−Τ３およびδ−Τ３の効果を試験した。図１７に示すように、γ−Τ３およびδ−Τ３、コウジ酸、ならびに乳酸ナトリウムを用いた同時処置後の１細胞あたりのチロシナーゼ活性は、γ−Τ３およびδ−Τ３、コウジ酸、または乳酸ナトリウム単独を用いて処置したものよりも有意に低い。ウエスタンブロット法（図１７Ｂ〜図１７Ｃ）を使用して、γ−Τ３およびδ−Τ３、ならびにコウジ酸の共処置は、γ−Τ３もしくはδ−Τ３、またはコウジ酸処置単独と比べて、チロシナーゼタンパク質の発現の抑制を高めるということが実証された。
【０１０５】
１．６  γ−Τ３およびδ−Τ３は紫外によって誘導されるメラニン生成を遮断する
Ｔ３の、Ｂ１６黒色腫細胞において、ＵＶＢによって誘導されるメラニン生成をも遮断する能力を試験した。適切なＵＶＢ照射線量を導き出すために、異なる線量のＵＶＢ曝露後のＭＴＴ細胞増殖速度を比較した。図１６Α〜図１６Ｂに示すとおり、非常に重要なアポトーシス分子（切断型のカスパーゼ３およびＰＡＲＰ）の活性化から明らかなように、１２時間以上曝露された細胞は、低下した細胞増殖速度を有する。それゆえ、アポトーシス応答からの干渉を回避するために、細胞のＵＶＢ曝露は、１２時間未満に限定した。図１６Ｃ〜図１６Ｄは、ＵＶＢによって誘導されるチロシナーゼタンパク質の過剰発現の時間依存的な抑制を示す。δＴ３は、短期間（１０分未満）のＵＶＢによって誘導されるチロシナーゼ活性化を抑制する上でγΤ３よりも強力であったが、それらの長期の阻害効果は同等であった。驚くべきことに、ＴＲＦ酢酸エステル（図１６Ｃ〜図１６Ｄ）およびαＴＰ（図１６Ｅ）は、試験したすべての時間点で、チロシナーゼのＵＶＢによって誘導される活性化を遮断することはできなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
2013527155.tif 000022
【図１８Ａ】
2013527155.tif 000023
【図１８Ｂ】
2013527155.tif 000024
【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年6月20日(2012.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させるための方法であって、患者に、薬学的有効量の、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼおよび／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を投与することを含み、
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、アシル化されたトコモノエノール、これらの混合物；少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物；ならびに少なくとも１つのトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物、からなる群から選択され、
前記トコトリエノールは、（ガンマ）γ−トコトリエノール、もしくはδ（デルタ）−トコトリエノール、もしくはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、もしくはアシル化されたγ−トコトリエノール、もしくはアシル化されたδ−トコトリエノールもしくはアシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物である、方法。
【請求項２】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、またはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は皮膚白色化剤である、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、少なくとも１つのトコフェロールおよび少なくとも１つのトコトリエノールの混合物であるか、または少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールおよびアシル化されたトコトリエノールの混合物である、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記アシル化されたトコモノエノールはトコモノエノール酢酸エステルである、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１つのアシル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノール成分は、アセチル化されたトコフェロール、トコトリエノールまたはトコモノエノールである、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記トコフェロールは、α−トコフェロール、β（ベータ）−トコフェロール、γ（ガンマ）−トコフェロール、δ（デルタ）−トコフェロールおよびこれらのトコフェロールの混合物からなる群から選択される、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記トコモノエノールは、α−トコモノエノール、β（ベータ）−トコモノエノール、γ（ガンマ）−トコモノエノール、δ（デルタ）−トコモノエノールおよびこれらのトコモノエノールの混合物からなる群から選択される、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記α−トコモノエノールは、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールまたは３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１２−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アシル化されたγ−トコトリエノール、またはアシル化されたδ−トコトリエノールまたはアシル化されたＴＲＦは、アセチル化されたγ−トコトリエノール、またはアセチル化されたδ−トコトリエノールまたはアセチル化されたＴＲＦである、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記皮膚の状態は皮膚の障害である、請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記皮膚の障害は、メラニンの増加によって引き起こされる皮膚の黒ずみ、皮膚色素沈着過度、皮膚炎症、皮膚の尋常性ざ瘡、癒傷、皮膚の光加齢、皮膚の皺、喫煙者の黒皮症、肝斑、黒色表皮腫、クッシング病、アジソン病、黒線、水銀中毒からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ビタミンＡ、ビタミンＡ誘導体、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、キノン類、ヒドロキノン、乳酸塩、コウジ酸、コウジ酸誘導体、αヒドロキシ酸、アルブチン、グリコール酸、ヒドロキノン、グルタチオン、Ｌ−グルタチオン、アゼライン酸、グルココルチコイド類、桑の実エキス、ミトラカーパススケーバーエキス、キュウリエキス、カンゾウエキス、ザクロエキス、ウワウルシ（クマコケモモ）エキス、ヘキサメチレンビスアセトアミド、酪酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、合成ヒドロキシル置換フェニルナフタレンおよび誘導体、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−エチルフェノールなどのモノフェノール；ならびに４，４’−メチレンビス（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）、２，２’−メチレンビス（４−エチル−６−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）などのジフェノール、レチノイン酸、ツニカマイシン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ヒアルロン酸、トラネキサム酸、胎盤抽出物、エラグ酸、ＥＤＴＡ、フィチン酸、オレオシン、チオクト酸、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ２）および大豆トリプシン阻害剤からなる群から選択される、請求項１から請求項１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記乳酸塩は、乳酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸マグネシウム、乳酸アンモニウムおよび乳酸カルシウムからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、乳酸ナトリウム、ヒドロキノン、Ｌ−グルタチオン、コウジ酸、アルブチンおよびレチノイン酸からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡからなる群から選択される抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤である、請求項１から請求項１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｍｉＲＮＡはｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉＲＮＡである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物は約１ｍｇ〜約１０００ｍｇまたは約１０ｍｇ〜５００ｍｇの量で投与される、請求項１から請求項１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物は、前記患者の血液中で、約１〜３０μΜまたは約１０〜３０μΜの血清レベル濃度を得るための量で投与される、請求項１から請求項１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者は動物である、請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記動物は哺乳動物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記哺乳動物はヒト、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ウシ、イヌおよびネコからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物は、ナノ粒子形態または封入された形態の、ソフトゲル、硬カプセル剤、錠剤、ゲル、糖衣錠、持続放出配合物、軟膏剤、クリーム、保湿クリーム、洗顔料、アイスティック、注射用配合物として投与される、請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物は水溶性の形態で投与される、請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物は、経口投与または局所投与される、請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む、請求項１から請求項２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は強化配合物の中に含まれ、前記強化配合物は、前記強化配合物の総重量に基づき、０．１重量％超の特定のビタミンＥ成分を含む、請求項１から請求項２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記強化配合物は、前記強化配合物の総重量に基づき０．１重量％、０．５重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９２重量％、９４重量％、９６重量％、９７重量％および９８重量％の全ビタミンＥ成分含有量からなる群から選択される量の前記特定のビタミンＥ成分を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物は紫外線遮断剤をさらに含む、請求項１から請求項２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記紫外線遮断剤は、酸化亜鉛、酸化チタン、オキシベンゾン、アゾベンゾンおよびアボベンゾンからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物であって、
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、アシル化されたトコモノエノール、これらの混合物；少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物；ならびに少なくとも１つのトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物、からなる群から選択され、
前記トコトリエノールは、（ガンマ）γ−トコトリエノール、もしくはδ（デルタ）−トコトリエノール、もしくはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、もしくはアシル化されたγ−トコトリエノール、もしくはアシル化されたδ−トコトリエノールもしくはアシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物である、医薬組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の医薬組成物を含む軟膏剤またはクリーム。
【請求項３３】
少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物を含む製品であって、
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、アシル化されたトコモノエノール、これらの混合物；少なくとも１つのアシル化されたトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物；ならびに少なくとも１つのトコフェロールと、トコトリエノール、トコモノエノール、アシル化されたトコトリエノール、およびアシル化されたトコモノエノールからなる群から選択される少なくともいずれか１つとの混合物、からなる群から選択され、
前記トコトリエノールは、（ガンマ）γ−トコトリエノール、もしくはδ（デルタ）−トコトリエノール、もしくはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、もしくはアシル化されたγ−トコトリエノール、もしくはアシル化されたδ−トコトリエノールもしくはアシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物である、製品。
【請求項３４】
前記トコモノエノールは、アシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールを含むかまたはアシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールからなる、請求項３３に記載の製品。
【請求項３５】
アシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールを含むかまたはアシル化された３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールからなる製品。
【請求項３６】
３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−１１−トリデセニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オールはアセチル化されている、請求項３４または請求項３５に記載の製品。
【手続補正書】
【提出日】平成25年4月24日(2013.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の状態を処置するかまたは皮膚の状態が発生するのを防止するか、または皮膚の色素沈着を変性させることにおいて使用するための、少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼおよび／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む組成物であって、前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は、（ガンマ）γ−トコトリエノール、もしくはδ（デルタ）−トコトリエノール、もしくはトコトリエノールリッチ画分（ＴＲＦ）、もしくはアシル化されたγ−トコトリエノール、もしくはアシル化されたδ−トコトリエノールもしくはアシル化されたＴＲＦまたはこれらの混合物である、組成物。
【請求項２】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は皮膚白色化剤である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アシル化されたγ−トコトリエノール、またはアシル化されたδ−トコトリエノールまたはアシル化されたＴＲＦは、アセチル化されたγ−トコトリエノール、またはアセチル化されたδ−トコトリエノールまたはアセチル化されたＴＲＦである、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記皮膚の状態は皮膚の障害である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記皮膚の障害は、メラニンの増加によって引き起こされる皮膚の黒ずみ、皮膚色素沈着過度、皮膚炎症、皮膚の尋常性ざ瘡、癒傷、皮膚の光加齢、皮膚の皺、喫煙者の黒皮症、肝斑、黒色表皮腫、クッシング病、アジソン病、黒線、水銀中毒からなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ビタミンＡ、ビタミンＡ誘導体、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、キノン類、ヒドロキノン、乳酸塩、コウジ酸、コウジ酸誘導体、αヒドロキシ酸、アルブチン、グリコール酸、ヒドロキノン、グルタチオン、Ｌ−グルタチオン、アゼライン酸、グルココルチコイド類、桑の実エキス、ミトラカーパススケーバーエキス、キュウリエキス、カンゾウエキス、ザクロエキス、ウワウルシ（クマコケモモ）エキス、ヘキサメチレンビスアセトアミド、酪酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、合成ヒドロキシル置換フェニルナフタレンおよび誘導体、モノフェノール、ジフェノール、レチノイン酸、ツニカマイシン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ヒアルロン酸、トラネキサム酸、胎盤抽出物、エラグ酸、ＥＤＴＡ、フィチン酸、オレオシン、チオクト酸、プロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ２）および大豆トリプシン阻害剤からなる群から選択され、前記モノフェノールは２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノールおよび２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−エチルフェノールからなる群から選択され、前記ジノフェノールは４，４’−メチレンビス（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）および２，２’−メチレンビス（４−エチル−６−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）からなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記乳酸塩は、乳酸カリウム、乳酸ナトリウム、乳酸マグネシウム、乳酸アンモニウムおよび乳酸カルシウムからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、乳酸ナトリウム、ヒドロキノン、Ｌ−グルタチオン、コウジ酸、アルブチンおよびレチノイン酸からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡからなる群から選択される抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ｍｉＲＮＡはｍｉ４３４−５Ｐ  ｍｉＲＮＡである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物は約１ｍｇ〜約１０００ｍｇまたは約１０ｍｇ〜５００ｍｇの量で投与される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物は、患者の血液中で、約１〜３０μΜまたは約１０〜３０μΜの血清レベル濃度を得るための量で投与される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記患者は動物である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物は、水溶性の形態で、または経口的に、または局所的に、またはソフトゲル、硬カプセル剤、錠剤、ゲル、糖衣錠、持続放出配合物、軟膏剤、クリーム、保湿クリーム、洗顔料、アイスティック、注射用配合物として、ナノ粒子形態で、または封入された形態で投与される、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１６】
薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのビタミンＥ成分は強化配合物の中に含まれ、前記強化配合物は、前記強化配合物の総重量に基づき、０．１重量％超の特定のビタミンＥ成分を含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１８】
紫外線遮断剤をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項１９】
前記紫外線遮断剤は、酸化亜鉛、酸化チタン、オキシベンゾン、アゾベンゾンおよびアボベンゾンからなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
少なくとも１つのビタミンＥ成分と、抗チロシナーゼ活性および／または抗メラニン生成活性を有する、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分とを含む医薬組成物であって、前記ビタミンＥ成分とは異なる少なくとも１つのさらなる成分は、抗酸化物質、チロシナーゼ阻害剤、ポリフェノール、ビタミン、抗チロシナーゼＲＮＡ干渉剤、抗チロシナーゼペプチド、およびこれらの混合物からなる群から選択される、医薬組成物。
【国際調査報告】
2013527155.tif 000028
2013527155.tif 000029
2013527155.tif 000030
2013527155.tif 000031
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