(57)【要約】  本発明は、増殖性疾患、特に固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の患者を治療するための、プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩とインターフェロンの併用療法に関する。特に、本発明は、インターフェロンがペグインターフェロンアルファ-２ａであり、疾患がＶ６００Ｅ ｂ-Ｒａｆ変異を含む黒色腫である治療に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｖ６００変異を有するｂ-Ｒａｆを含む増殖性疾患、特に癌、より具体的には結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の治療に同時又は順次使用される併用調製剤として、（Ａ）活性剤としてプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を含む薬学的製品。
【請求項２】
Ｖ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む増殖性疾患、特に癌、より具体的には結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の治療に同時又は順次使用される、請求項１に記載の薬学的製品。
【請求項３】
Ｖ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む黒色腫の治療に同時又は順次使用される、請求項１に記載の薬学的製品。
【請求項４】
プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩が、約２００ｍｇ／日から約３０００ｍｇ／日の量で投与される、請求項１から３のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項５】
プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩が、約１７００ｍｇ／日から約２１００ｍｇ／日の量で投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項６】
該インターフェロンがペグインターフェロンアルファ-２ａである、請求項１から５のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項７】
該ペグインターフェロンアルファ-２ａが約１μｇ／週から約１０００μｇ／週の量で投与される、請求項６に記載の薬学的製品。
【請求項８】
該ペグインターフェロンアルファ−２ａが、約９０μｇ／週から約６３０μｇ／週の量で投与される、請求項７に記載の薬学的製品。
【請求項９】
プロパン-1-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩が、実質的に非結晶形態である、請求項１から８のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１０】
プロパン-1-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩が、非結晶形態である、請求項１から８のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１１】
プロパン-1-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}又はその薬学的に許容可能な塩が、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートと形成された固体分子複合体に含まれて非結晶形態で固定化される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１２】
該複合体中のプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩のヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートに対する量の比率が約１：９から約５：５である、請求項１１に記載の薬学的製品。
【請求項１３】
該複合体中のプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩のヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートに対する量の比率が約３：７である、請求項１１に記載の薬学的製品。
【請求項１４】
該第１成分（Ａ）が混合体を含み、混合体の約９７重量％が請求項１１による固体分子複合体であり、混合体の約３重量％が二酸化ケイ素である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１５】
該第１成分（Ａ）が、請求項１１による固体分子複合体の懸濁液を薬学的に許容可能な担体中に含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１６】
（Ａ）活性剤としてプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を含むキット。
【請求項１７】
増殖性疾患の治療に使用される、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
増殖性疾患の治療に使用される、請求項１から１５のいずれか一項に記載の薬学的製品。
【請求項１９】
該第１成分（Ａ）が、プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩とＨＰＭＣ-ＡＳの固体分子複合体を含む錠剤を含む、請求項1に記載の製品。
【請求項２０】
該第２成分（Ｂ）がペグインターフェロンアルファ-２ａを含む溶液を含む、請求項１９に記載の製品。
【請求項２１】
プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患の治療への使用。
【請求項２２】
プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロフェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患の治療用医薬の調製への使用。
【請求項２３】
本明細書に実質的に上述した新規製品、方法及び使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、増殖性疾患、特に固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の患者を治療するための併用療法に関し、患者にプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド及びインターフェロンを投与することを含む。
【０００２】
正常に機能するｂ−Ｒａｆは、細胞膜から核へのシグナルリレーに関与するキナーゼであり、このようなシグナルをリレーする必要があるときのみ活性化する。しかし、Ｖ６００Ｅ変異を含む変異体ｂ-Ｒａｆは常に活性状態にあるので、腫瘍発生の一因となる。このような変異体ｂ-Ｒａｆは、様々な腫瘍、例えば結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌に関与している。
【０００３】
プロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル]-２,４-ジフルオロ-フェニル}-アミド（以後「化合物Ｉ」とも呼ぶ）は、ｂ-Ｒａｆキナーゼ阻害剤であり、Ｖ６００Ｅ変異を含む変異体ｂ-Ｒａｆを特異的に標的とする。この化合物は国際公開第２００７／００２３２５号に記載されている。従って、このような阻害剤は、Ｖ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む腫瘍、特に固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の阻害に使用される。
【０００４】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、抗ウイルス、抗増殖及び免疫調節性作用を有する天然のタンパク質である。ＩＦＮαファミリーは、刺激された末梢血白血球及びリンパ芽球様の及び骨髄芽球様の細胞株により産生されるＩＦＮの主要クラスである。インターフェロンは、ｂＦＧＦの発現を下方制御する。これらの薬剤は患者が自分で皮下注射投与することができ、薬物動態も良好である。本明細書の目的では、「インターフェロン」という用語はまた、ペグインターフェロンアルファ-２ａなどの修飾インターフェロン及び／又は組換えにより産生されたインターフェロンも意味する。
【０００５】
ペグインターフェロンアルファ-２ａ（ペガシス（登録商標）として米国サウスサンフランシスコのジェネンテック社が販売）は、組換えアルファ-２ａインターフェロン（分子量およそ２万ダルトン）と一つの分子の分岐ビス-モノメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖（分子量およそ４万ダルトン）が共有結合したコンジュゲートである。ＰＥＧ部分は、リジンとの安定なアミド結合を介して一箇所がインターフェロンアルファ部分に結合している。ペグインターフェロンアルファ-２ａの分子量はおよそ６万ダルトンである。ＰＥＧ部分を含んでいないインターフェロンと比べると、ペグインターフェロンアルファ-２ａは半減期が長く、投与回数が少なくて済む、という利点がある。
【０００６】
本発明は、増殖性疾患患者を治療する方法に関し、患者に（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を投与することを含み、該活性剤の量は、その併用が該増殖性疾患の治療において治療的に効果のある量とされる。
【０００７】
本発明はまた、（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を有するキットに関する。
【０００８】
本発明はさらに、（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を含む組成物に関する。
【０００９】
加えて、本発明は、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患の治療への使用に関する。
【００１０】
本発明のさらに別の態様は、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患の治療用医薬の調製への使用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ併用療法の忍容性を体重変化％で示す。
【図２】化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ併用療法の抗腫瘍作用を腫瘍体積で示す。
【図３】化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ−２ａ ９００μｇ １×／ｗｋ併用療法の生存に及ぼす効果を経時生存マウス百分率で示す。
【図４】化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ併用療法の忍容性を体重変化％で示す。
【図５】化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ併用療法の抗腫瘍作用を腫瘍体積で示す。
【図６】化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ単独療法及び化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ併用療法の生存に及ぼす効果を経時生存マウス百分率で示す。
【発明の概要】
【００１２】
上述したように、「化合物Ｉ」はここではプロパン-１-スルホン酸{３-[５-(４-クロロ-フェニル)-１Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピリジン-３-カルボニル-２,４-ジフルオロ-フェニル]-アミド}を意味する。この化合物は以下の構造を有する。
【化１】
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【００１３】
化合物Ｉはｂ-Ｒａｆキナーゼ阻害剤であり、特異的にｂ-ＲａｆのＶ６００Ｅ変異を標的とする。
【００１４】
ｂ-Ｒａｆの「Ｖ６００Ｅ変異」とは、ここではｂ-Ｒａｆタンパク質の変異を指し、ｂ-Ｒａｆの残基位置６００でバリン残基がグルタミン酸に置き換えられている。
【００１５】
ここでは「薬学的に許容可能な担体」とは、然るべき慎重さを備えた医師が、治療する疾患や症状及び各投与経路を考慮して患者への投与を回避するような特性をもたない担体を意味する。
【００１６】
化合物の「薬学的に許容可能な塩」とは、ここでは、その化合物の生物学的効果及び特性を保持し、適切な非毒性の有機若しくは無機酸又は有機若しくは無機塩基から形成された、任意一般の塩又は塩基付加塩を意味する。
【００１７】
「治療的に効果のある」という用語は、ここでは薬剤又は併用剤若しくは組成物の量を意味し、患者に投与した場合、例えば癌性腫瘍の増殖を食い止めるか又は退縮させる、又は患者の寿命を延ばすなどの所望の治療効果が得られる。
【００１８】
「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」は、ある程度の異常細胞増殖を伴う疾患を意味する。一実施態様では、増殖性疾患は癌である。
【００１９】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には制御されない細胞成長／増殖に特徴づけられる、哺乳動物の生理学的状態を指す。癌の例として、限定ではなく、結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌が挙げられる。
【００２０】
「結腸直腸腫瘍」又は「結腸直腸癌」という用語は、結腸（虫垂から直腸までの大腸）及び直腸を含む大腸の任意の腫瘍又は癌を意味し、例えば腺癌及びより罹患率の低いリンパ腫や扁平上皮癌といった形態も含まれる。
【００２１】
「細胞成長又は増殖を阻害する」とは、細胞成長又は増殖を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％低減させることを意味し、細胞死も含まれる。
【００２２】
「実質的に減少した」又は「実質的に異なる」という語句は、ここでは、２つの数値間（一般に一方はある分子に関し、他方は参考／コンパレーター分子に関する）の差が、当業者が該数値により測定される生物学的特徴のコンテキスト内で２数値間の差が統計学的に有意であるとみなすほど大きいことを意味する。
【００２３】
「腫瘍」という用語は、良性悪性に関わらず全ての腫瘍性細胞成長及び増殖、並びに全ての前癌性及び癌細胞及び組織を意味する。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語はここでは相互に排他的ではない。
【００２４】
腫瘍の「退縮」は、治療後、該腫瘍の体積が減少した場合に生じたとされる。腫瘍は残存するが（腫瘍体積＞０ｍｍ３）体積が治療開始時よりも減少した場合、「部分退縮」（ＰＲ）が生じたとされる。治療後腫瘍が明白に不存在であれば、「完全退縮」（ＣＲ）が生じたとされる。
【００２５】
一実施態様では、本発明は、Ｖ６００変異を有するｂ-Ｒａｆを含む増殖性疾患、特に癌、より具体的には結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌の治療に同時又は順次使用される併用剤として、（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を含む薬学的製品に関する。
【００２６】
増殖性疾患の治療としては、該疾患患者の腫瘍サイズの維持又は減少、腫瘍退縮の誘発（部分的又は完全）、腫瘍成長の阻害及び／又は寿命の延長が挙げられると理解されたい。
【００２７】
本発明はまた、（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロンを含む第２成分を含むキット又は組成物に関する。キット又は組成物は、例えば増殖性疾患の治療に使用されうる。
【００２８】
加えて、本発明、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患の治療への使用を提供する。
【００２９】
本発明はさらに、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩及びインターフェロンの増殖性疾患治療用医薬の調製への使用を提供する。
【００３０】
本発明の一実施態様では、患者はヒトである。
【００３１】
本発明の一実施態様では、増殖性疾患は固形腫瘍である。
【００３２】
本発明の別の実施態様では、増殖性疾患はＶ６００Ｅ ｂ-Ｒａｆ変異を含む腫瘍である。
【００３３】
本発明の別の実施態様では、腫瘍は、結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌からなる群より選ばれる固形腫瘍であり、癌はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む腫瘍を伴う。
【００３４】
本発明のさらに別の実施態様では、増殖性疾患は、固形腫瘍はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む。
【００３５】
本発明のさらに別の実施態様では、腫瘍は、Ｖ６００Ｅ ｂ-Ｒａｆ変異を含む固形腫瘍であり、該腫瘍は結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌からなる群より選ばれる。
【００３６】
本発明のさらに別の実施態様では、腫瘍は黒色腫である。
【００３７】
本発明のさらに別の実施態様では、腫瘍はＶ６００Ｅ ｂ-Ｒａｆ変異を含む黒色腫である。
【００３８】
本発明のさらに別の実施態様では、インターフェロンは、ペグインターフェロンアルファ-２ａ、インターフェロンアルファ-２ａ、ペグインターフェロンアルファ-２ｂ及びインターフェロンアルファ-２ｂからなる群より選ばれる。
【００３９】
本発明のさらに別の実施態様では、インターフェロンはペグインターフェロンアルファ-２ａである。
【００４０】
本発明のさらに別の実施態様では、インターフェロンはインターフェロンアルファ-２ｂである。
【００４１】
本発明のさらに別の実施態様では、本発明は、Ｖ６００Ｅ ｂ-Ｒａｆ変異を含む黒色腫の患者を治療する方法に関し、方法は、患者に（Ａ）活性剤として化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてインターフェロン、好ましくはペグインターフェロンアルファ-２ａを含む第２成分を投与することを含み、該活性剤の量は、その併用が該黒色腫の治療において治療的に効果のある量とされる。
【００４２】
本発明の方法により投与される各組成物の量は、それ自体が効果的な量でありうるが、必ずしもその必要はない。すなわち、本発明は、併用で使用される場合の化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩の量及び／又はインターフェロンの量が、各薬剤が単独療法で投与される場合に治療効果のある量よりも少ない量で併用されることを特に意図している。
【００４３】
化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩は、例えば、経口投与されうる。ペグインターフェロンアルファ-２ａは、例えば、皮下投与されうる。
【００４４】
本発明の第１成分及び第２成分は、その併用量が増殖性疾患の治療に有効な任意の量で任意の期間投与される。
【００４５】
本発明の実施態様では、化合物Ｉは、約２００ｍｇ／日から約３０００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日から約２５００ｍｇ／日、約１４００ｍｇ／日から約２１００ｍｇ／日、約９６０ｍｇ／日、約１４４０ｍｇ／日又は約１９２０ｍｇ／日の１日量で投与される。
【００４６】
本発明の一実施態様では、化合物Ｉの上記量は、１日単回の用量として投与してもよいし、例えば、（必要ではないが）等分して１日２回（ｂｉｄ）投与してもよい。例えば、化合物Ｉは、１日約１００ｍｇから約１５００ｍｇ ｂｉｄ、約４００ｍｇから約１２５０ｍｇ ｂｉｄ、約７００ｍｇから約１０５０ｍｇ ｂｉｄ、約４８０ｍｇ ｂｉｄ、約７２０ｍｇ ｂｉｄ又は約９６０ｍｇ ｂｉｄの用量で投与してよい。
【００４７】
本発明の一実施態様では、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩の投与は、疾患の増悪又は忍容不能な毒性まで行われる。
【００４８】
本発明の一実施態様では、ペグインターフェロンアルファ-２ａは、約１μｇ／週から約１０００μ／週、約５０μｇ／週から約８００μｇ／週又は約９０μｇ／週から約６３０μｇ／週の用量で投与される。さらに別の実施態様では、用量は約１８０μｇ／週である。
【００４９】
本発明の一実施態様では、ペグインターフェロンアルファ-２ａの投与は、疾患の再発、増悪又は忍容不能な毒性まで行われる。別の実施態様では、ペグインターフェロンアルファ-２ａは、上記の投与量で、１２か月まで、２４か月まで、３６か月まで又は６０か月までの期間投与される。
【００５０】
本発明はまた、本明細書ですでに開示した増殖性疾患の治療に使用される医薬製品を提供し、該成分（Ａ）が約２００ｍｇ／日から約３０００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日から約２５００ｍｇ／日、約１４００ｍｇ／日から約２１００ｍｇ／日、約９６０ｍｇ／日、約１４４０ｍｇ／日又は約１９２０ｍｇ／日の量で投与され、該成分（Ｂ）が約１μｇ／週から約１０００μｇ／週、約５０μｇ／週から約８００μｇ／週、約９０μｇ／週から約６３０μｇ／週又は約１８０μｇ／週の量で投与されることに特徴づけられる。本発明のこの実施態様では、増殖性疾患は固形腫瘍であり、特に、疾患は結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌からなる群より選ばれる。より具体的には、増殖性疾患はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む腫瘍を伴う。本発明の別の実施態様では、増殖性疾患はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む黒色腫である。
【００５１】
本発明はまた、増殖性疾患の治療用医薬の製造に関し本明細書で既に開示した任意の薬学的製品の使用を提供し、該成分（Ａ）は約２００ｍｇ／日から約３０００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日から約２５００ｍｇ／日、約１４００ｍｇ／日から約２１００ｍｇ／日、約９６０ｍｇ／日、約１４４０ｍｇ／日又は約１９２０ｍｇ／日の量で投与され、該成分（Ｂ）は約１μｇ／週から約１０００μｇ／週、約５０μｇ／週から約８００μｇ／週、約９０μｇ／週から約６３０μｇ／週又は約１８０μｇ／週の量で投与されることに特徴づけられる。本発明のこの実施態様では、増殖性疾患は固形腫瘍であり、特に、疾患は結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌からなる群より選ばれる。より具体的には、増殖性疾患はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む腫瘍を伴う。本発明の別の実施態様では、増殖性疾患はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む黒色腫である。
【００５２】
本発明はまた、増殖性疾患患者を治療する方法を提供し、患者に、（Ａ）活性剤として化合物Ｉを約２００ｍｇ／日から約３０００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日から約２５００ｍｇ／日、約１４００ｍｇ／日から約２１００ｍｇ／日、約９６０ｍｇ／日、約１４４０ｍｇ／日又は約１９２０ｍｇ／日の量で含む第１成分と、（Ｂ）活性剤としてペグインターフェロンアルファ−２ａを約１μｇ／週から約１０００μｇ／週、約５０μｇ／週から約８００μｇ／週、約９０μｇ／週から約６３０μｇ／週又は約１８０μｇ／週の量で含む第２成分を投与することを含む。本発明の一実施形態では、増殖性疾患は固形腫瘍であり、特に、疾患は結腸直腸癌、黒色腫及び甲状腺癌からなる群より選ばれる。本発明の別の実施態様では、増殖性疾患は、Ｖ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む腫瘍を伴う。本発明の特定の実施態様では、増殖性疾患はＶ６００Ｅ変異を有するｂ-Ｒａｆを含む黒色腫である。
【００５３】
本発明の別の態様では、本明細書に上述した成分は、放射線治療との併用で及び／又は他の活性剤との併用で投与される。
【００５４】
化合物Ｉは、自然な状態では結晶の形態で存在する。しかし、この化合物の非結晶形態は結晶形態と比較して非常に水に溶けやすく溶解速度が速いので、結晶形態よりもバイオアベイラビリティが高い。ゆえに、化合物の非結晶形態が好ましい。したがって、本発明の好ましい実施態様では、化合物Ｉは実質的に非結晶形態であり、より好ましくは非結晶形態である。ここでは、「実質的に非結晶」の物質はせいぜい約１０％の結晶度を有する物質を包含し、「非結晶」の物質は、せいぜい約２％の結晶度を有する物質を包含する。
【００５５】
本発明の一実施態様では、化合物Ｉは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）で形成された、固体の分子複合体に含まれる。ここでは、「固体の分子複合体」とは、ＨＰＭＣ-ＡＳにより形成されたマトリックス内に化合物Ｉがランダムに分布した（「分子的に分散した」）組成物を意味する。特定の実施態様では、化合物Ｉは、細分割の最終状態でこのポリマー中に存在する。特定の実施態様では、化合物Ｉは、ＨＰＭＣ-ＡＳ中に分子的に分散し、非結晶形態で固定化される。「固定化される」とは、化合物Ｉの分子がＨＰＭＣ-ＡＳの分子と相互作用して先述のマトリックス中にこれらの分子が保持され、移動性がないので結晶核形成が阻止されることを意味する。いくつかの実施態様では、このポリマーは分子間の水素結合又は化合物Ｉの２以上の分子間の弱い分散力を阻止しうる。
【００５６】
いくつかの実施態様では、固体分子複合体内の化合物ＩのＨＰＭＣ-ＡＳに対する重量比率は、約１：９から約５：５である。一実施態様では、該比率は約２：８から約４：６である。別の実施態様では、該比率は約３：７である。
【００５７】
本発明の方法とキットの特定の実施態様では、第１成分は、コロイド状二酸化ケイ素と混合された前述の化合物ＩとＨＰＭＣ-ＡＳの固体分子複合体を含む。特定の実施態様では、混合は、少なくとも０．５重量％の二酸化ケイ素である。本発明の一実施態様では、混合は、約９７％の複合体と約３％の二酸化ケイ素である。
【００５８】
別の実施態様では、第１成分は、上述したように二酸化ケイ素と混合したか又はしていない前述の固体分子複合体と、薬学的に許容可能な担体とを有する組成物を含む。特定の実施態様では、前述の複合体又はこれを含む混合体は担体中に懸濁される。担体の一例は、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）である。一実施態様では、ビヒクルは約２重量％のＨＰＣを含む。
【００５９】
各成分は、保存料、溶解剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色料、香味料、浸透圧を変えるための塩、バッファー、コーティング剤及び酸化防止剤などの追加剤を含みうる。
【００６０】
特定の実施態様では、第１成分は、コロイド状二酸化ケイ素、ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン（崩壊剤）、ステアリン酸マグネシウム（錠剤やカプセル化の工程で使用されうる潤滑剤）および／またはクロスカルメロースナトリウム（崩壊剤）と混合された化合物ＩとＨＰＭＣ-ＡＳの固体分子複合体を含みうる。
【００６１】
一実施態様では、第１成分は、コロイド状二酸化ケイ素、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム及びクロスカルメロースナトリウムと混合された化合物ＩとＨＰＭＣ-ＡＳの固体分子複合体を含む硬質ゼラチンカプセルである。
【００６２】
一実施態様では、第１成分は、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩を含む錠剤である。一実施態様では、錠剤は、化合物Ｉ又はその薬学的に許容可能な塩とＨＰＭＣ-ＡＳ固体分子複合体を含む。複合体は、例えば、コロイド状二酸化ケイ素、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸マグネシウム及びクロスカルメロースナトリウムと混合されうる。錠剤は、例えばフィルムコーティングでコーティングされうる。フィルムコーティングは、例えばポリビニルアルコール、二酸化チタン、ポリエチレングリコール３３５０、タルク及び赤色酸化鉄を含みうる。
【００６３】
特定の実施態様では、第２成分はペグインターフェロンアルファ-２ａを注射溶液として含みうる。
【００６４】
ペガシス（登録商標）は、バイアルやプレフィルドシリンジに入った注射溶液として入手可能である。１８０μｇ／１．０ｍｌのバイアル１本には約１．２ｍｌの溶液が収容され、１．０ｍｌの薬剤が送達される。１．０ｍｌの皮下（ｓｃ）投与で１８０μｇの薬剤（インターフェロンアルファ-２ａの量として表される）、８．０ｍｇの塩化ナトリウム、０．０５ｍｇのポリソルベート８０、１０．０ｍｇのベンジルアルコール、２．６２ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物及び０．０４６２ｍｇの酢酸が送達される。溶液は無色から薄い黄色であり、ｐＨは６．０±０．５である。１８０μｇ／０．５ｍｌのプレフィルドシリンジには、０．６ｍｌの溶液が収容され、薬剤０．５ｍｌが送達される。皮下（ｓｃ）投与０．５ｍｌで１８０μｇの薬剤（インターフェロンアルファ-２ａの量として表される）、４．０ｍｇの塩化ナトリウム、０．０２５ｍｇのポリソルベート８０、５．０ｍｇのベンジルアルコール、１．３０８５ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物及び０．０２３１ｍｇの酢酸が送達される。溶液は無色から薄い黄色であり、ｐＨは６．０±０．５である。
【００６５】
出願人らはヒト黒色腫異種移植片を含むマウスを用いて研究を行った。
【００６６】
出願人らは、化合物Ｉを７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを９００μｇ １×／ｗｋの併用では、９００μｇ １×／ｗｋのペグインターフェロンアルファ-２ａ単独療法と比較して、マウスの寿命延長（ＩＬＳ）が相当改良したことを見いだしたが、ＩＬＳの結果は化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法で得られた結果と統計的に同等であった。 
【００６７】
併用療法の効果を明らかにするため、出願人らは、化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで、ペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋで投与する研究を行った。マウスでは、２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄの化合物Ｉで３２１％の寿命延長（ＩＬＳ）が得られ、４５０μｇ １×／ｗｋのペグインターフェロンアルファ-２ａで１１４％のＩＬＳを得た。一方、化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで、ペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋの併用療法をマウスに実施したところ、２８４３％のＩＬＳが得られた。このように、併用療法で得られたＩＬＳは相関的な単独療法よりもｐ＜０．０５で有意に良好である。
【００６８】
特筆すべきは、併用群には毒性増加は見られず、２つの薬剤間に拮抗はなかったことである。
【００６９】
これらの研究は、化合物Ｉとペグインターフェロンアルファ-２ａの併用剤で患者を治療することは、各薬剤の単独治療よりも優れており、２つの薬剤を併用すれば、同等又はより優れた結果を得るのに必要な各薬剤の用量を減ずることが可能であることを示唆している。
【実施例】
【００７０】
本発明は以下の実施例を参照することでさらに理解されよう。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定すると解釈されるものではない。
【００７１】
ここで使用される略語は以下のとおりである：
ｑ．ｓ．  必要なだけ
×        回数
ｐｏ      経口
ｓｃ      皮下
ｂｉｄ    １日２回
ｗｋ      週
ＢＷＬ    体重減
【００７２】
実施例１
この実施例は化合物Ｉを含む懸濁液の作製を記述する。
【００７３】
化合物Ｉとヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）を含む固体分子複合体を最初に作製した。
【００７４】
化合物ＩとＨＰＭＣ-ＡＳをジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中約３：７の割合で溶解させた。この溶液に撹拌しながら非常に冷たい希釈塩酸を加え、化合物ＩとＨＰＭＣ-ＡＳの共沈物を固体分子複合体として得、ここで化合物Ｉはナノ粒子の粒径範囲で存在した。ＤＭＡと酸の比率は１：５から１：１０であった。
【００７５】
次いで共沈物を水で洗ってＤＭＡを除去し、濾過し、水分含有量＜２％まで乾燥させ、＃３０メッシュスクリーンにかけてから評価した。得られた固体分子複合体は３０重量％の化合物Ｉと７０重量％のＨＰＭＣであった。
【００７６】
次いで複合体をコロイド状二酸化ケイ素（Aerosil（登録商標）200として独国エッセンのEvonik Industries AG社より入手可能）と混合し、混合体１００ｇ当たり９７ｇが複合体で３ｇがコロイド状二酸化ケイ素となるようにした。
【００７７】
次に、２％のヒドロキシプロピルセルロース（Klucel（登録商標）LFとして米国デラウェア州ウィルミントンのAqualon社より入手可能）とｐＨ調節のため１ＮのＨＣＬをｐＨ４になるよう適量含む水性ビヒクルを準備した。ビヒクル２３．２ｍＬを室温まで平衡化させ、前述の混合体７７３．２ｍｇ中に静かに移した。次いで、得られた調製物を均一な懸濁液が得られるまで静かに混合した。懸濁液は２〜８℃で遮光保存した。
【００７８】
懸濁液は、化合物Ｉを９．３７５ｍｇ／ｍＬ含有していた。
【００７９】
実施例２
この実施例は、ペグインターフェロンアルファ-２ａの注射溶液を記述する。
成分                            量
ペグインターフェロンアルファ−２ａ    ４．５ｍｇ
ベンジルアルコール                  １０．０ｍｇ
塩化ナトリウム                        ８．００ｍｇ
酢酸ナトリウム三水和物                ２．６１７ｍｇ
氷酢酸                                ０．０４６２ｍｇ
ポリソルベート８０                    ０．０５ｍｇ
酢酸ナトリウム三水和物１０％ｗ／ｖ    ｑ．ｓ．ｐＨ６．０
酢酸１０％ｗ／ｖ                      ｑ．ｓ．ｐＨ６．０
注射用水                              １．０ｍｌまでｑ．ｓ．
溶液は２〜８℃で保存した。
【００８０】
実施例３
マウスにヒトＬＯＸ−ＩＭＶＩ黒色腫細胞の異種移植片を移植した。マウス、使用した細胞株及び移植について以下に記述する。
【００８１】
雌の胸腺欠損Crl:NU-Foxn1nuマウスを有効性試験に使用した（米国マサチューセッツ州ウィルミントンのCharles River社）。マウスは１０〜１２週齢、体重２３〜２５グラムであった。マウスの健康は毎日の観察と、同じシェルフラックのセンチネル動物から採取した血液サンプルの分析により評価した。全動物は、順応と輸送関連のストレスからの回復に１週間が与えられた。オートクレーブ水と照射食（米国インディアナ州リッチモンドのPurina Mills社の5058-ms Pico Labマウスチャウ）を自由に与え、動物を１２時間の明暗サイクルに置いた。ケージ、寝床及び水ボトルは使用前にオートクレーブ処理し、毎週取り替えた。全動物実験は、実験動物の管理及び使用に関する指針（Guide for the Care and Use of Laboratory Animals）、地方条例およびロシュ社AAALAC認可設備のRoche Animal Care and Use Committeeが承認したプロトコールに準拠して実施した。
【００８２】
ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞（ＬＯＸとして知られる、メリーランド州ベセスダ国立癌研究所）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）と１％の２００ｎＭのＬ-グルタミンを加えたＲＰＭＩ−１６４０培地で培養し、スケールアップし、ハーベストし、調製して、各マウスが２×１０６細胞／０．２ｍｌのカルシウムとマグネシウムを含まないリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を受けるようにした。細胞は各マウスの右側腹部に皮下移植した。
【００８３】
ヒト異種移植片を移植されたマウスを腫瘍体積により１０匹ずつの８群に無作為化し、全群が同様の開始平均腫瘍体積を有するようにした。この研究のおよその開始平均腫瘍体積は１３０ｍｍ３であった。
【００８４】
実施例４
化合物Ｉを実施例１に記載のとおり懸濁液として処方した。ペグインターフェロンアルファ-２ａを実施例２に記載のとおり注射溶液として処方した。
【００８５】
治療は細胞移植後５日目に開始し、細胞移植後１８日目に終了した。実施例３で作製したマウス４群を使用した。各群を以下の異なる療法に供した：
（１）化合物Ｉビヒクルｂｉｄ ｐｏとペグインターフェロンアルファ-２ａビヒクル１×／ｗｋ ｓｃで受けるマウス；
（２）化合物Ｉを７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ ｂｉｄ ｐｏで受けるマウス；
（３）ペグインターフェロンアルファ-２ａを９００μｇ １×／ｗｋ ｓｃで受けるマウス；及び
（４）化合物Ｉを７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ ｂｉｄ ｐｏとペグインターフェロンアルファ-２を９００μｇ １×／ｗｋ ｓｃで受けるマウス
【００８６】
化合物Ｉ懸濁液とその対応のビヒクルを無菌１ｃｃシリンジと１８ゲージの給餌針（０．２ｍｌ／動物）を用いて１日２回投与した。ペグインターフェロンアルファ-２ａ溶液とその対応のビヒクルを無菌１ｃｃシリンジと２６ゲージの給餌針（０．２ｍｌ／動物）を用いて週１回、細胞移植後５日目と１２日目の全２回注射した。
【００８７】
腫瘍測定は週１回又は２回行った。全動物を実験の間中個別に追った。
【００８８】
体重減は、以下の式を用いて平均群体重の変化パーセントでグラフ表示した：（（Ｗ−Ｗ０）／Ｗ０）×１００。ここでＷは治療群の特定の日の平均体重を表し、Ｗ０は同じ治療群の治療開始時の平均体重を表す。最高体重減も上記の式を用いて表示し、特定の群の全実験期間の任意の時点で観察された最高体重減が示された。
【００８９】
奏功性データを平均腫瘍体積±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）としてグラフ表示した。加えて、治療群の腫瘍体積を以下の式を用いてコントロール群の腫瘍体積の百分率で示した（％Ｔ／Ｃ）：１００×（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｃ０））。ここでＴは実験期間の特定の日の治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は治療初日の同じ治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｃは実験期間中の特定の日のコントロール群の平均腫瘍体積を表し、Ｃ０は治療初日の同じ治療群の平均腫瘍体積を表した。
【００９０】
腫瘍体積（立方ミリメートル）を楕円体式：（Ｄ×（ｄ２））／２を用いて計算した。ここでＤは腫瘍の大径を表し、ｄは小径を表す。
【００９１】
また、腫瘍退縮及び／又は腫瘍体積のパーセント変化を式：（（Ｔ−Ｔ０）／Ｔ０）×１００を用いて計算した。ここでＴは特定の日の治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は同じ治療群の治療開始時の平均腫瘍体積を表す。
【００９２】
統計学的分析は順位和検定、一元配置分散分析及び事後Bonferroni t検定（SigmaStat, version 2.0, Jandel Scientific社, 米国カリフォルニア州サンフランシスコ）により決定した。群間の差は確率値（ｐ）≦０．０５の場合有意とした。
【００９３】
生存評価では、寿命延長（ＩＬＳ）パーセントを１００×［（治療群の生存日中間値−コントロール群の生存日中間値）／コントロール群の生存日中間値]として計算した。生存の中間値はカプラン・マイヤー生存分析を利用して決定した。治療群の生存をビヒクル群と統計学的に比較し、対数順位検定（Graph Pad Prism, La Jolla社, 米国カリフォルニア州）を使用して群間の生存を比較した。群間の差は確率値（ｐ）≦０．０５の場合有意とした。
【００９４】
毒性
体重変化測定と動物個別の全体的観察による評価では、どの研究のどの用量群にも毒性の兆候は認められなかった。これらの結果を表１と図１に示す。
【表１】
2013545772.tif 000003
【００９５】
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）
化合物Ｉ単独療法を７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで受けた群のＴＧＩは１００％を上回り、完全退縮（ＣＲ）は１０中１０であった。ペグインターフェロンアルファ-２ａ単独療法を９００μｇ１×／ｗｋで受けた群のＴＧＩは９８％であり、１０中部分退縮（ＰＲ）は２でＣＲは３であった。化合物Ｉを７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを９００μｇ１×／ｗｋの併用療法を受けた群のＴＧＩは１００％を上回り、１０中１０がＣＲであった。表２、３と図２を参照されたい。
【表２】
2013545772.tif 000004
【表３】
2013545772.tif 000005
【００９６】
生存評価
化合物Ｉ単独療法を７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで受けた群の延長寿命（ＩＬＳ）は３５００％であった。ペグインターフェロンアルファ-２ａ単独療法を９００μｇ１×／ｗｋで受けた群のＩＬＳは１４３％であった。化合物Ｉを７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを９００μｇ１×／ｗｋの併用療法を受けた群のＩＬＳは３４００％であった。表４と図３を参照されたい。
【表４】
2013545772.tif 000006
【００９７】
統計学的分析
化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ９００μｇ１×／ｗｋ併用療法群のＴＧＩ％は、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ９００μｇ１×／ｗｋ単独療法群よりも統計学的に優れていたが、化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法群とは同等であった。化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ９００μｇ１×／ｗｋ併用療法群のＩＬＳ％は、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ９００μｇ１×／ｗｋ単独療法群よりも統計学的に優れていたが、化合物Ｉ ７５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法群とは同等であった。表５を参照されたい。
【表５】
2013545772.tif 000007
【００９８】
実施例５
化合物Ｉを実施例１に記述のとおり懸濁液として処方した。化合物Ｉビヒクルは、ペグインターフェロンアルファ−２ａ中Ｋｌｕｃｅｌ  ＬＦ２．０グラムが、実施例２に記述のとおり注射溶液として処方された。
【００９９】
治療は細胞移植後６日目に開始し、細胞移植後１９日目に終了した。実施例３で開発したマウス４群を使用した。治療群は以下のとおりであった：
（１）化合物Ｉビヒクルｂｉｄ ｐｏとペグインターフェロンアルファ-２ａビヒクル１×／ｗｋ ｓｃを受けるマウス；
（２）化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ ｐｏで受けるマウス；
（３）ペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋ ｓｃで受けるマウス；及び
（４）化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋで受けるマウス。
【０１００】
化合物Ｉ懸濁液とその対応のビヒクルを無菌１ｃｃシリンジと１８ゲージの給餌針（０．２ｍｌ／動物）を用いて１日２回投与した。ペグインターフェロンアルファ-２ａ溶液とその対応のビヒクルを無菌１ｃｃシリンジと２６ゲージの給餌針（０．２ｍｌ／動物）を用いて週１回、細胞移植後６日目と１３日目の全２回注射した。
【０１０１】
腫瘍測定は週１回又は２回行った。全動物を実験の間中個別に追った。
【０１０２】
体重減は、以下の式を用いて平均群体重の変化パーセントでグラフ表示した：（（Ｗ−Ｗ０）／Ｗ０）×１００。ここでＷは治療群の特定の日の平均体重を表し、Ｗ０は同じ治療群の治療開始時の平均体重を表す。最高体重減も上記の式を用いて表示し、特定の群の全実験期間の任意の時点で観察された最高体重減が示された。
【０１０３】
奏功性データを平均腫瘍体積±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）としてグラフ表示した。加えて、治療群の腫瘍体積を以下の式を用いてコントロール群の腫瘍体積の百分率で示した（％Ｔ／Ｃ）：１００×（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｃ０））。ここでＴは実験期間の特定の日の治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は治療初日の同じ治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｃは実験期間中の特定の日のコントロール群の平均腫瘍体積を表し、Ｃ０は治療初日の同じ治療群の平均腫瘍体積を表した。
【０１０４】
腫瘍体積（立方ミリメートル）を楕円体式：（Ｄ×（ｄ２））／２を用いて計算した。ここでＤは腫瘍の大径を表し、ｄは小径を表す。
【０１０５】
また、腫瘍退縮及び／又は腫瘍体積のパーセント変化を式：（（Ｔ−Ｔ０）／Ｔ０）×１００を用いて計算した。ここでＴは特定の日の治療群の平均腫瘍体積を表し、Ｔ０は同じ治療群の治療開始時の平均腫瘍体積を表す。
【０１０６】
統計学的分析は順位和検定、一元配置分散分析及び事後Bonferroni t検定（SigmaStat, version 2.0, Jandel Scientific社, 米国カリフォルニア州サンフランシスコ）により決定した。群間の差は確率値（ｐ）≦０．０５の場合有意とした。
【０１０７】
生存評価では、寿命延長（ＩＬＳ）パーセントを１００×［（治療群の生存日中間値−コントロール群の生存日中間値）／コントロール群の生存日中間値]として計算した。生存の中間値はカプラン・マイヤー生存分析を利用して決定した。治療群の生存をビヒクル群と統計学的に比較し、対数順位検定（Graph Pad Prism, La Jolla社, 米国カリフォルニア州）を使用して群間の生存を比較した。群間の差は確率値（ｐ）≦０．０５の場合有意とした。
【０１０８】
毒性
体重変化測定と動物個別の全体的観察による評価では、どの研究のどの用量群にも毒性の兆候は認められなかった。これらの結果を表６と図４に示す。
【表６】
2013545772.tif 000008
【０１０９】
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）
化合物Ｉ単独療法を２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで受けた群のＴＧＩは１００％を上回り、１０中１０のＣＲであった。ペグインターフェロンアルファ-２ａ単独療法を４５０μｇ １×／ｗｋで受けた群のＴＧＩは１００％を上回り、１０中ＰＲが６でＣＲが１であった。化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋの併用療法を受けた群のＴＧＩは１００％を上回り、１０中１０が完全退縮（ＣＲ）であった。表７、８及び図５を参照されたい。
【表７】
2013545772.tif 000009
【表８】
2013545772.tif 000010
【０１１０】
生存評価
化合物Ｉ単独療法を２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄで受けた群の寿命延長（ＩＬＳ）は３２１％であった。ペグインターフェロンアルファ-２ａ単独療法を４５０μｇ １×／ｗｋで受けた群のＩＬＳは１１４％であった。化合物Ｉを２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄとペグインターフェロンアルファ-２ａを４５０μｇ １×／ｗｋの併用療法を受けた群のＩＬＳは２８４３％であった。表９と図６を参照されたい。
【表９】
2013545772.tif 000011
【０１１１】
化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ併用療法群のＴＧＩ％は、ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ単独療法群より統計学的に優れていたが、化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ単独療法群とは同等であった。化合物Ｉ ２５ｍｇ／ｋｇ ｂｉｄ／ペグインターフェロンアルファ-２ａ ４５０μｇ １×／ｗｋ併用療法群のＩＬＳ％はいずれの単独療法群よりも優れていた。表１０を参照されたい。
【表１０】
2013545772.tif 000012
【図１】
2013545772.tif 000013
【図２】
2013545772.tif 000014
【図３】
2013545772.tif 000015
【図４】
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【図５】
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【図６】
2013545772.tif 000018
【国際調査報告】
2013545772.tif 000019
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