(57)【要約】  【解決手段】  本発明は、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーを対象としている。前記単一ジアステレオマーを調整する方法も説明し、放射性標識４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーを造影剤として使用する方法についても説明する。  【選択図】      図１
2013501813.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーであって、
【化８１】
2013501813.tif 000085
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有し、
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
ＯＲ４は脱離基であり、 
ｎは０，１、２、３、または４である
単一ジアステレオマー。
【請求項２】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、ジアステレオマー過剰率９０％以上を有するものである、単一ジアステレオマー。
【請求項３】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、ジアステレオマー過剰率９８％以上を有するものである、単一ジアステレオマー。
【請求項４】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８２】
2013501813.tif 000086
【請求項５】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８３】
2013501813.tif 000087
【請求項６】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。 
【化８４】
2013501813.tif 000088
【請求項７】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８５】
2013501813.tif 000089
【請求項８】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ１はＢｏｃである、単一ジアステレオマー。
【請求項９】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ２はｔ−ブチルである、単一ジアステレオマー。 
【請求項１０】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ３は−ＯＣＨ３である、単一ジアステレオマー。
【請求項１１】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、ｎは３である、単一ジアステレオマー。
【請求項１２】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、ＯＲ４は−Ｏトシレートである、単一ジアステレオマー。
【請求項１３】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８６】
2013501813.tif 000090
【請求項１４】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８７】
2013501813.tif 000091
【請求項１５】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８８】
2013501813.tif 000092
【請求項１６】
請求項１記載の単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化８９】
2013501813.tif 000093
【請求項１７】
式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーであって、
【化９０】
2013501813.tif 000094
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有し、
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
ｎは０，１、２、３、または４である
単一ジアステレオマー。
【請求項１８】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ１はＢｏｃである、単一ジアステレオマー。
【請求項１９】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ２はｔ−ブチルである、単一ジアステレオマー。
【請求項２０】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｒ３は−ＯＣＨ３である、単一ジアステレオマー。
【請求項２１】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、ｎは３である、単一ジアステレオマー。
【請求項２２】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、Ｆは１８Ｆである、単一ジアステレオマー。
【請求項２３】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化９１】
2013501813.tif 000095
【請求項２４】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化９２】
2013501813.tif 000096
【請求項２５】
請求項１７記載の単一ジアステレオマーにおいて、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化９３】
2013501813.tif 000097
【請求項２６】
癌を撮像するための診断用組成物であって、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーおよび薬学的に許容される担体又は賦形剤を有するものである、診断用組成物。
【請求項２７】
請求項２６記載の診断用組成物において、前記単一ジアステレオマーは基本的に下記式である、診断用組成物。
【化９４】
2013501813.tif 000098
【請求項２８】
請求項２６記載の診断用組成物において、前記単一ジアステレオマーは基本的に下記式である、診断用組成物。
【化９５】
2013501813.tif 000099
【請求項２９】
請求項２６記載の診断用組成物において、前記単一ジアステレオマーは基本的に下記式である、診断用組成物。
【化９６】
2013501813.tif 000100
【請求項３０】
請求項２６記載の診断用組成物において、前記単一ジアステレオマーは基本的に下記式である、診断用組成物。
【化９７】
2013501813.tif 000101
【請求項３１】
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーを調整する方法であって、
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーとフッ素化剤とを反応させる工程であって、
【化９８】
2013501813.tif 000102
式中、
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
ＯＲ４は脱離基であり、
ｎは０，１、２、３、または４であり、
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーを形成するために効果的な時間および条件で行うものである、前記反応させる工程と、
【化９９】
2013501813.tif 000103
前記４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーを生成させるために効果的な時間および条件下、前記式ＩＩの化合物と酸とを反応させる工程と
を有する方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、前記酸はトリフルオロ酢酸である、方法。
【請求項３３】
請求項３１記載の方法において、Ｒ１はＢｏｃである、方法。
【請求項３４】
請求項３１記載の方法において、Ｒ２はｔ−ブチルである、方法。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法において、各Ｒ３は−ＯＣＨ３である、方法。
【請求項３６】
請求項３１記載の方法において、ｎは３である、方法。
【請求項３７】
請求項３１記載の方法において、ＯＲ４は−Ｏトシレートである、方法。
【請求項３８】
請求項３１記載の方法において、前記式Ｉの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１００】
2013501813.tif 000104
【請求項３９】
請求項３１記載の方法において、前記式Ｉの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０１】
2013501813.tif 000105
【請求項４０】
請求項３１記載の方法において、前記式Ｉの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０２】
2013501813.tif 000106
【請求項４１】
請求項３１記載の方法において、前記式Ｉの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０３】
2013501813.tif 000107
【請求項４２】
請求項３１記載の方法において、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０４】
2013501813.tif 000108
【請求項４３】
請求項３１記載の方法において、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０５】
2013501813.tif 000109
【請求項４４】
請求項３１記載の方法において、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０６】
2013501813.tif 000110
【請求項４５】
請求項３１記載の方法において、前記式ＩＩの化合物は基本的に下記式である、方法。
【化１０７】
2013501813.tif 000111
【請求項４６】
患者において癌を撮像する方法であって、
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーを患者に投与する工程と、
前記４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーから放射されるガンマ線を検出する工程と
を有する方法。
【請求項４７】
請求項４６記載の方法において、前記４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーが基本的に下記式である、方法。
【化１０８】
2013501813.tif 000112
【請求項４８】
請求項４６記載の方法において、前記４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーが基本的に下記式である、方法。
【化１０９】
2013501813.tif 000113
【請求項４９】
請求項４６記載の方法において、前記４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーが基本的に下記式である、方法。
【化１１０】
2013501813.tif 000114
【請求項５０】
請求項４６記載の方法において、前記４−［１８Ｆ］フルオログルタミンの単一ジアステレオマーが基本的に下記式である、方法。
【化１１１】
2013501813.tif 000115
【請求項５１】
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマー。
【請求項５２】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、ジアステレオマー過剰率９０％以上を有するものである、単一ジアステレオマー。
【請求項５３】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、ジアステレオマー過剰率９８％以上を有するものである、単一ジアステレオマー。
【請求項５４】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に４−［１８Ｆ］フルオログルタミンである、単一ジアステレオマー。
【請求項５５】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。 
【化１１２】
2013501813.tif 000116
【請求項５６】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化１１３】
2013501813.tif 000117
【請求項５７】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化１１４】
2013501813.tif 000118
【請求項５８】
請求項５１記載の４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーにおいて、このジアステレオマーは、基本的に下記式である、単一ジアステレオマー。
【化１１５】
2013501813.tif 000119
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願書類の相互参照
本出願書類では、２００９年８月１４日に提出された米国の仮出願番号６１／２３３，８７５の利点を請求し、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願書類は４−フルオログルタミンの改良された調製法に関する。
【背景技術】
【０００３】
フッ素置換されたアミノ酸はペプチド系薬物のデザインおよびタンパク質工学に有用であり、癌の診断を目的としたＰＥＴ画像診断にも有用であることが証明されている。２−［１８Ｆ］フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＦＤＧ）はポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）のトレーサーとしての開発が成功し、ルーティンな癌画像診断に利用されたため、様々な疾患の診断を目的としたフッ素−１８放射性標識薬物のデザインおよび開発は、非常に盛んに研究が行われている分野として浮かび上がった。例えば、Ｍｅｒｃｅｒ，  Ｊ．  Ｒ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｏｔｈｅｒ  ｔｈａｎ  ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ  （ＦＤＧ）：  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  &  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００７，  １０，  （２），  １８０−２０２、Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ，  Ｏ．；  Ｌｕｘｅｎ，  Ａ．；  Ｃｈａｔａｌ，  Ｊ．  −Ｆ．；  Ｖｕｉｌｌｅｚ，  Ｊ．  −Ｐ．；  Ｒｉｇｏ，  Ｐ．；  Ｈｕｓｔｉｎｘ，  Ｒ．，  Ｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ  ｔｒａｃｅｒｓ  ｆｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００４，  ３１，  （８），  １１８２−１２０６．；およびＭｉｌｌｅｒ，  Ｐ．  Ｗ．；  Ｌｏｎｇ，  Ｎ．  Ｊ．；  Ｖｉｌａｒ，  Ｒ．；  Ｇｅｅ，  Ａ．  Ｄ．，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  １１Ｃ，  １８Ｆ，  １５Ｏ，  ａｎｄ  １３Ｎ  ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｓ  ｆｏｒ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００８，  ４７，  （４７），  ８９９８−９０３３を参照。
【０００４】
ＦＤＧによる癌画像診断のメカニズムは、腫瘍細胞のエネルギー源であるグルコースに向かう結合力、すなわち腫瘍細胞の解糖系亢進に基づくものである。最近の報告では、グルタミン（ＮＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＮＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、Ｇｌｎ）もストレス下での細胞の代謝、つまりグルタミノリシスのエネルギー源と考えられることが指摘された。Ｗｉｓｅ，  Ｄ．  Ｒ．；  Ｄｅｂｅｒａｒｄｉｎｉｓ，  Ｒ．  Ｊ．；  Ｍａｎｃｕｓｏ，  Ａ．；  Ｓａｙｅｄ，  Ｎ．；  Ｚｈａｎｇ，  Ｘ．  Ｙ．；  Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，  Ｈ．  Ｋ．；  Ｎｉｓｓｉｍ，  Ｌ；  Ｄａｉｋｈｉｎ，  Ｅ．；  Ｙｕｄｋｏｆｆ，  Ｍ．；  ＭｃＭａｈｏｎ，  Ｓ．  Ｂ．；  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｃ．  Ｂ．，  Ｍｙｃ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｔｈａｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｇｌｕｔａｍｉｎｏｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００８。従って、Ｇｌｎおよびその類似体を腫瘍代謝の亢進を研究するための代謝トレーサーとして開発する必要がある。
【０００５】
１８Ｆ−放射性標識４−フルオロ−Ｌ−グルタミン（４−ＦＧｌｎ）の４つのジアステレオマー（［１８Ｆ］１、２、３、および４）を合成し、さらに、様々なタイプの腫瘍細胞でその生物学的特性を評価することに関心が向けられている。
【０００６】
【化１】
2013501813.tif 000003
【０００７】
しかし、［１８Ｆ］１〜４調製の妥当性を確認するため、非放射性分子、いわゆる「冷標準物質（ｃｏｌｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ）」の実用的合成を最初に達成する必要がある。最近、様々な立体特異的フッ素化α−アミノ酸（Ｆ−α−ＡＡ）を合成する試みが報告された。Ｄａｖｅ，  Ｒ．；  Ｂａｄｅｔ，  Ｂ．；  Ｍｅｆｆｒｅ，  Ｐ．，  ｇａｍｍａ  −Ｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ．  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ２００３，  ２４，  （３），  ２４５−２６１。Ｔｏｌｍａｎ，  Ｖ．；  Ｓｅｄｍｅｒａ，  Ｐ．，  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ４−ｆｌｕｏｒｏｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ．  Ｐａｒｔ  ３．  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ４−ｆｌｕｏｒｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ４−ｆｌｕｏｒｏｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ．  Ａｎ  ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ａｃｃｅｓｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｐｏｄｅｓ  ｏｆ  ４−ａｍｉｎｏ−２−ｆｌｕｏｒｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００，  １０１，  （１），  ５−１０。これらの合成については、以下のスキーム１および２にまとめている。
【０００８】
【化２】
2013501813.tif 000004
【０００９】
【化３】
2013501813.tif 000005
【００１０】
スキーム１で説明した合成順序では、４−フルオログルタミン酸の混合物から開始し、４つのジアステレオマーの混合物として４−フルオログルタミンのみを提供する。４−フルオログルタミン酸のジアステレオマーの調製には、最高１１工程を要する可能性がある。スキーム２で説明した合成順序では、エリスロまたはトレオ４−フルオログルタミン酸いずれかのラセミ混合物から開始する。前記ラセミ化合物は、次にラセミエリスロまたはラセミトレオ４−ＦＧｌｎに変換する。スキーム２の方法では、単一の異性体を調製することはできない。興味深いことに、Ｄａｖｅらは、「４−フルオログルタミン酸の４つのステレオマーすべての調製法が利用できるにもかかわらず、［スキーム２と］同一の変換は、まだ鏡像異性的に純粋な４−フルオログルタミンの合成には応用されていない点に注目すべきである」と述べている。
【００１１】
ＷＯ２００８／０５２７８８では、グリシン含有シッフ塩基と（Ｓ）−２−［Ｎ−（Ｎ−ベンジルプロピル）アミノ］ベンゾフェノン（ＢＰＢ）のニッケル複合体および３−ブロモブタ−３−エン酸メチルエステルを用いた金属触媒合成により調製した、４−フルオロ−Ｌ−グルタミンのジアステレオマー混合物の調製：ＷＯ２００８／−６２７９９の例１および２について説明している。
【００１２】
【化４】
2013501813.tif 000006
【００１３】
それにもかかわらず、４−フルオログルタミンの４つの各ジアステレオマーの単一異性体の合成についてはまだ報告されていない。さらに、最終目的が放射性化合物の合成であることを考えると、スキーム１および２に説明した合成順序と対照的に、合成段階の後半でフッ素原子を導入する合成は、１８Ｆ原子の半減期が短いために有利である（ｔ１／２＝１０９．７分）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明はジアステレオマー過剰率８０％以上の４−フルオログルタミン
【００１５】
【化５】
2013501813.tif 000007
【００１６】
の単一ジアステレオマーおよび４−フルオログルタミンの単一異性体の前駆体を対象としている。
【００１７】
本発明は、４−フルオログルタミンの単一のジアステレオマーを調整する方法も対象とし、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーとフッ素化剤とを反応させる工程であって、
【００１８】
【化６】
2013501813.tif 000008
【００１９】
式中、
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、
ＯＲ４は脱離基であり、
ｎは０，１、２、３、または４であり、
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーを形成するために効果的な時間および条件で行うものである、前記反応させる工程と、
【００２０】
【化７】
2013501813.tif 000009
【００２１】
４−フルオログルタミンの単一のジアステレオマーを作成するために効果的な時間および条件下、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーと酸とを反応させる工程とを有する。
【００２２】
癌を撮像するため、放射性標識４−フルオログルタミンの単一異性体を利用する方法についても報告する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、９Ｌ細胞における化合物１、２、３、および４の取り込みを示す。
【図２】図２は、１のタンパク質１００ｕｇあたりの取り込み率（％）を示している。ｘ軸がタンパク質１００ｕｇあたりの取り込み率（％）である。
【図３】図３は、化合物１を注入したマウスの小動物ダイナミックＰＥＴを示している。
【図４】図４は、マウスにおける化合物１の取り込みを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−フルオログルタミンジアステレオマーの単一ジアステレオマーを対象としている。各単一ジアステレオマーの再取り込みプロフィールは、すでに調製されているジアステレオマー混合物と異なることが発見された。前記４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーは、以下に化合物１〜４と表す。本発明は、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する１８Ｆ−標識４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーも対象としている。４−フルオログルタミンの言及には、非標識フルオログルタミン、および標識、つまり１８Ｆ−標識４−フルオログルタミンの両方を含むことは、当業者に理解されるだろう。
【００２５】
【化８】
2013501813.tif 000010
【００２６】
４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーのジアステレオマー過剰率は１００％であることが好ましい。ただし、本発明の範囲内で、４−フルオログルタミンの他の１、２、または３つのジアステレオマーが４−フルオログルタミンの単一ジアステレオマーと共存することもある。他の実施形態では、前記単一のジアステレオマーはジアステレオマー過剰率８０％以上を有する。他の実施形態では、前記単一のジアステレオマーはジアステレオマー過剰率９０％以上を有する。他の実施形態では、前記単一のジアステレオマーはジアステレオマー過剰率９８％以上を有する。
【００２７】
本明細書に用いるとおり、「ジアステレオマー過剰率」は組成中の残りのジアステレオマーと比較した、望みの単一ジアステレオマーのモル分率の差を指す。ジアステレオマー過剰率は以下のとおり計算される：
（単一ジアステレオマーの量）−（他のジアステレオマーの量）／１
例えば、９０％の１および１０％の２、３、４またはその混合物を含む組成は、ジアステレオマー過剰率８０％［（９０−１０）／１］を有する。９５％の１および５％の２、３、４またはその混合物を含む組成は、ジアステレオマー過剰率９０％［（９５−５）／１］を有する。９９％の１および１％の２、３、４またはその混合物を含む組成は、ジアステレオマー過剰率９８％［（９９−１）／１］を有する。前記ジアステレオマー過剰率は同様に、１、２、３、または４のいずれか１つについて計算することができる。
【００２８】
４−フルオログルタミンの各ジアステレオマーの量を定量する方法は、当該分野で既知である。最も好ましい方法には、好ましくはキラルカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含み、各ジアステレオマーの各ピークの曲線下面積がサンプル中に存在する各ジアステレオマーの量に相当する。
【００２９】
特に興味深いのは、４−フルオロ−Ｌ−グルタミンの単一ジアステレオマー１および２、また対応する１８Ｆ−標識化合物［１８Ｆ］１および［１８Ｆ］２を調製する方法である。
【００３０】
本発明の方法には、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーとフッ素化剤とを反応させる工程であって、
【００３１】
【化９】
2013501813.tif 000011
【００３２】
式中、Ｒ１は酸に不安定な窒素保護基であり、Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルまたはＣ１−６シクロアルキルであり、ＯＲ４は脱離基であり、ｎは０、１、２、３、または４であり、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式ＩＩの化合物の対応する単一ジアステレオマーを形成するために効果的な時間および条件で行うものである、前記反応させる工程と、
【００３３】
【化１０】
2013501813.tif 000012
【００３４】
ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する４−フルオログルタミンの単一のジアステレオマーを作成するために効果的な時間および条件下、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーと酸とを反応させる工程とを有する。１つの典型的な酸はトリフルオロ酢酸である。
【００３５】
好ましくは、式Ｉの化合物が他の３つのジアステレオマーが存在していない単一のジアステレオマーとして提供される。好適な実施形態では、式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率８０％以上を有する。好ましくは、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率９０％以上を有する。最も好ましくは、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率９８％以上を有する。
【００３６】
一部の実施形態では、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式Ｉａである。
【００３７】
【化１１】
2013501813.tif 000013
【００３８】
本発明の範囲内で、「基本的に」とは、ジアステレオマー過剰率９０％以上、より好ましくは９８％以上を有する唯一のジアステレオマーが存在することを指す。
【００３９】
他の実施形態では、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式Ｉｂである。
【００４０】
【化１２】
2013501813.tif 000014
【００４１】
さらに他の実施形態では、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式Ｉｃである。
【００４２】
【化１３】
2013501813.tif 000015
【００４３】
さらに他の実施形態では、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式Ｉｄである。
【００４４】
【化１４】
2013501813.tif 000016
【００４５】
ジアステレオマー過剰率８０％、好ましくは９０％、最も好ましくは９８％以上を有する前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマー、特に化合物Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、およびＩｄも、本発明の範囲内である。
【００４６】
好ましくは、−ＯＲ４は−Ｏトシレート（−ＯＳＯ２Ｃ６Ｈ４−ｐＣＨ３）である。
【００４７】
好ましくは、前記式ＩＩの化合物が他の３つのジアステレオマーが存在していない単一のジアステレオマーとして提供される。ジアステレオマー純度が前記式ＩＩの化合物の構成で保存されていない場合、前記ジアステレオマーは、ＨＰＬＣを含む、当該分野で既知の方法に従って分離し、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有する式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーを提供することができる。好適な実施形態では、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率８０％以上を有する。好ましくは、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率９０％以上を有する。最も好ましくは、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーがジアステレオマー過剰率９８％以上を有する。
【００４８】
一部の実施形態では、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式ＩＩａである。
【００４９】
【化１５】
2013501813.tif 000017
【００５０】
他の実施形態では、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式ＩＩｂである。
【００５１】
【化１６】
2013501813.tif 000018
【００５２】
さらに他の実施形態では、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式ＩＩｃである。
【００５３】
【化１７】
2013501813.tif 000019
【００５４】
さらに他の実施形態では、前記式ＩＩの化合物の単一ジアステレオマーが基本的に下記式ＩＩｄである。
【００５５】
【化１８】
2013501813.tif 000020
【００５６】
本来、フッ素化剤は当該分野で既知であり、適切なフッ素化剤は当業者が特定することができる。特に好ましいフッ素化剤の例には、例えば、テトラブチルアンモニウムジフルオロトリフェニルシリケート（ＴＢＡＴ）、［Ｂｕ４Ｎ］［Ｐｈ３ＳｎＦ２］、ペルフルオロ−１−ブタンスルホニルフルオライド（ＰＢＳＦ）、トリ（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート（ＴＡＳＦ）などの超原子価ケイ酸フッ素化剤（ｈｙｐｅｒｖａｌｅｎｔ  ｓｉｌｉｃａｔｅ  ｆｌｕｏｒｉｎａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）を含む。
【００５７】
フッ素化中、Ｃ（２）位のエピマー化が起こる可能性があり、ジアステレオマー過剰率が低下する。そのような状況では、前記ジアステレオマーは、例えばＨＰＬＣなどの従来の方法により容易に分離することができる。フッ素化試薬の塩基性度を調節すると、エピマー化の量が減少あるいはなくなる可能性があることが発見された。フッ素化剤の塩基性度の調節に使用可能な試薬の例には、２−メシチレンスルホン酸およびＥｔ３Ｎ−（ＨＦ）３を含む。好ましくは、前記フッ素化剤を漸増し、ｐＨを約７〜８に調節する。特に好ましいフッ素化試薬はＴＡＳＦであり、ｐＨはＥｔ３Ｎ（ＨＦ）３により調節する。
【００５８】
フッ素化反応の好ましい溶媒には、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、およびその混合物を含む。
【００５９】
１８Ｆ標識フッ素化試薬を使用すると、式ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、およびＩＩｄの対応する１８Ｆ標識化合物が形成する。
【００６０】
特定のフッ素化反応の条件を利用すると、フッ素を組み込むことに成功しても、ジアステレオマー過剰率が低下する。そのような状況では、前記ジアステレオマーは、例えばＨＰＬＣなどの従来の方法により容易に分離することができる。
【００６１】
本明細書に用いるとおり、「酸に不安定な窒素保護基」は、酸で外れ、−ＮＨ−を提供することのできる、窒素原子の保護基を指す。そのような保護基は当該分野で周知である。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，２００７を参照。特に好ましい酸に不安定な窒素保護基には、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）などのカルボキシを基本とした保護基などがある。
【００６２】
本明細書で用いるとおり、「アルキル」は、１〜３０炭素、好ましくは１〜６炭素を有する、分岐した、または分岐していない飽和炭化水素を指す。好ましいアルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、およびヘキシルを含む。
【００６３】
本明細書で用いるとおり、「シクロアルキル」は、３〜８炭素原子、好ましくは３〜６炭素を有する環状飽和炭化水素を指す。好ましいアルキル基には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。
【００６４】
本明細書で用いるとおり、ＯＲ４は脱離基であり、フッ化物イオンにより求核置換を受ける官能基を指す。特に好ましいのは、ＯＲ４が−Ｏトシレート（−ＯＴｏｓ、−ＯＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ３）である、これらの実施形態である。
【００６５】
本発明の好適な方法では、前記式Ｉの化合物の単一ジアステレオマーが式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの化合物を接触させることで調製され、
【００６６】
【化１９】
2013501813.tif 000021
【００６７】
下記式ＩＶの化合物を用い、
【００６８】
【化２０】
2013501813.tif 000022
【００６９】
クロロ酢酸存在下、式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物を形成させる。
【００７０】
【化２１】
2013501813.tif 000023
【００７１】
出発物質が式ＩＩＩａの化合物間の場合、前記式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物が好ましくは式ＶａおよびＶｂの化合物を有することは、当業者が容易に理解するだろう。
【００７２】
【化２２】
2013501813.tif 000024
【００７３】
同様に、出発物質が式ＩＩＩｂの化合物の場合、前記式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物は、好ましくは式ＶｃおよびＶｄの化合物を有する。
【００７４】
【化２３】
2013501813.tif 000025
【００７５】
式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物は、式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物を形成させるために効果的な時間および条件下で反応させる。
【００７６】
【化２４】
2013501813.tif 000026
【００７７】
前記式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物が式ＶａおよびＶｂの化合物を有する場合、前記式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物が好ましくは式ＶＩａおよびＶＩｂの化合物を有することは、当業者が容易に理解するだろう。
【００７８】
【化２５】
2013501813.tif 000027
【００７９】
同様に、前記式Ｖの化合物のジアステレオマー混合物が式ＶｃおよびＶｄの化合物を有する場合、前記式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物は好ましくは式ＶＩｃおよびＶＩｄの化合物を有する。
【００８０】
【化２６】
2013501813.tif 000028
【００８１】
好適な実施形態では、前記式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物が式ＶＩａおよびＶＩｂの化合物の混合物である。
【００８２】
【化２７】
2013501813.tif 000029
【００８３】
次に、前記式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物は、好ましくは物理的分離により分離する。ジアステレオマーの物理的分離法は当該分野で既知であり、例えばフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーを含む。本発明によれば、前記式ＶＩの化合物のジアステレオマー混合物は分離され、ジアステレオマー過剰率８０％以上を有し、好ましくはジアステレオマー過剰率９０％以上を有し、最も好ましくはジアステレオマー過剰率９８％以上を有する前記式ＶＩの化合物の単一ジアステレオマーを提供する。
【００８４】
好適な実施形態では、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−６アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−６シクロアルキルである。他の実施形態では、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−６アルキルである。好ましくは、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ｔ−ブチルである。
【００８５】
他の実施形態では、Ｒ２はｔ−ブチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。他の実施形態では、ｎは３である。
【００８６】
本発明の放射性標識化合物の単一ジアステレオマーは、好ましくは１８Ｆで標識され、患者の疾患、特に癌を診断するために有用な組成に製剤化することができる。放射性標識化合物１、２、３、または４は本発明の診断用組成に利用することができ、診断用組成において最も好ましいものは化合物１または２を使用したものである。これらの診断用組成は、例えば注射による非経口投与により、当業者に周知の基材および／または希釈剤を用いた組成を製剤化することで、患者への投与を目的として製剤化することができる。
【００８７】
患者に本発明の診断用組成を投与後、前記患者の癌を画像化する方法として、単一ジアステレオマーのγ線を検出することができる。そのような検出の１つの典型的方法は、ポジトロン放射断層法（ＰＥＴ）である。
【００８８】
以下の説明は、請求された発明を説明するものであり、制限する意図はない。
【００８９】
２，４，６−トリメトキシベンジルイソシアニド（Ｔｍｏｂ−ＩＣ）は２，４，６−トリメトキシベンジルアミンから調製された。スキーム４を参照。対応するホルムアミドに変換後、トリホスゲンを処理すると、全収率７０％で望みのイソシアニドが得られた。
【００９０】
【化２８】
2013501813.tif 000030
【００９１】
アルデヒド８の調製については、スキーム５に示す。ＢＦ３触媒下、ｔｅｒｔ−ブチルトリクロロアセトイミデートを用いて部分的に保護されたＬ−アスパラギン酸誘導体Ａをエステル化すると、完全に保護されたＬ−アスパラギン酸誘導体５が９７％得られた。接触水素化によりベンジル基を外した後、２工程を組み合わせた還元により、ホモセリン６が全収率８７％で得られた。その後、デス・マーチン・ペルヨージナン試薬により酸化すると、８６％の収率でアルデヒド８が得られた。
【００９２】
【化２９】
2013501813.tif 000031
【００９３】
Ｔｍｏｂ−ＩＣおよび８両方の中間体を調整後、パッセリーニ反応を行い、グルタミン骨格を組み立て、４−アシルオキシ置換Ｇｌｎ誘導体９を優れた収率で得た。
【００９４】
チオ尿素を用いてクロロアセチル基を外すと化合物１０が得られた。スキーム６。２つのジアステレオ異性体であるアルコール１０’および１０’’（ＨＰＬＣ解析では１：１の比率）は極性が明確に異なることが示され、フラッシュクロマトグラフィーにより分離することができる。スキーム７。これら２つのアルコールの絶対配置はモッシャーエステル解析により決定された。割り当てられた立体配置は両アルコールの物理的性質と同等である。（２Ｓ，４Ｒ）の立体配置を持つアルコール（１０’）は融点が高いことが示されるが（１４３〜１４５℃）、（２Ｓ，４Ｓ）の立体配置を持つアルコール（１０’’）は融点が低いことが示される（５８〜６１℃）。水酸基のトシル化では９６％の収率でトシレート１１が得られた。超原子価ケイ酸フッ素化剤のトリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート（ＴＡＳＦ）を用いたフッ素化では、６０〜７０％の収率で化合物１２（１２’および１２’’）が得られた。ＴＦＡを処理すると、望みの４−フルオログルタミン（１および２）が生成した。
【００９５】
【化３０】
2013501813.tif 000032
【００９６】
【化３１】
2013501813.tif 000033
【００９７】
アルデヒド８の鏡像異性体である化合物８aの調製は、スキーム８に示した合成順序に沿って達成することができ、市販のＤ−アスパラギン酸誘導体Ｂから開始する。
【００９８】
【化３２】
2013501813.tif 000034
【００９９】
次に、パッセリーニ反応の条件下、アルデヒド８ａをイソシアニドおよびクロロ酢酸と反応させた。チオ尿素およびＮａＨＣＯ３を併用した条件を用い、得られた中間体９ａを脱アセチル化した後、慎重にフラッシュクロマトグラフィーを行うと、２つの立体特異的４−ヒドロキシ基置換Ｄ−グルタミン誘導体１０ａ’および１０ａ’’が得られた。スキーム９。トシル化、フッ素化、および酸性脱保護反応を含むさらなる変換を行い、別の２つの４−ＦＧｌｎジアステレオマーであるフッ素化Ｄ−グルタミン類似体３および４が同等の収率で得られた。さらに、低速で留去する方法により、中間体１０ａ’、１２ａ’、および最終生成物３の高品質血漿サンプルが得られた。Ｘ線結晶学的解析では、さらにこれらの化合物の絶対的配置が同定された。
【０１００】
【化３３】
2013501813.tif 000035
【０１０１】
４−フルオログルタミンを調製する方法も本発明の範囲内であり、
【化３４】
2013501813.tif 000036
【０１０２】
式Ｉの化合物において、
【０１０３】
【化３５】
2013501813.tif 000037
【０１０４】
式中
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルであり、
ＯＲ４は脱離基であり、
ｎは０、１、２、３、または４である化合物と、
フッ素化剤を用い、式ＩＩの化合物を形成させるために効果的な時間および条件下反応させる工程と、
【０１０５】
【化３６】
2013501813.tif 000038
【０１０６】
前記式ＩＩの化合物を４−フルオロ−グルタミンを生成させるために効果的な時間および条件下反応させる工程とを有する。
【０１０７】
好ましい方法において、前記式Ｉの化合物は式ＩＩＩの化合物を
【０１０８】
【化３７】
2013501813.tif 000039
【０１０９】
式ＩＶの化合物と
【０１１０】
【化３８】
2013501813.tif 000040
【０１１１】
クロロ酢酸存在下接触させ、式Ｖの化合物を形成させ、
【０１１２】
【化３９】
2013501813.tif 000041
【０１１３】
前記式Ｖの化合物を式ＶＩの化合物を形成させるために効果的な時間および条件下反応させることにより調製される。
【０１１４】
【化４０】
2013501813.tif 000042
【０１１５】
特定の実施形態では、式ＶＩの化合物が下記式ＶＩｙおよびＶＩｚの化合物の混合物である。
【０１１６】
【化４１】
2013501813.tif 000043
【０１１７】
好ましくは、前記式ＶＩｙおよびＶＩｚの化合物が物理的に分離されている。物理的分離の好ましい方法にはクロマトグラフィーを含む。
【０１１８】
好適な実施形態では、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１−６アルキルである。より好ましくは、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ｔ−ブチルである。また好ましいのは、Ｒ２がｔ−ブチルの場合である。いくつかの実施形態では、Ｒ３が−ＯＣＨ３である。さらに他の実施形態では、ＯＲ４がＯトシレートである。さらに他の実施形態では、ｎは３である。
【０１１９】
本発明で使用するために好ましいフッ素化剤は、トリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケートである。好ましくは、前記フッ素化剤が１８Ｆを有する。
【０１２０】
好ましくは、式ＩＩＩの化合物が下記式である。
【０１２１】
【化４２】
2013501813.tif 000044
【０１２２】
好ましくは、前記４−フルオログルタミンが下記式である。
【０１２３】
【化４３】
2013501813.tif 000045
【０１２４】
また好ましいのは、前記４−フルオログルタミンが下記式の場合である。
【０１２５】
【化４４】
2013501813.tif 000046
【０１２６】
また、下記式Ｉの化合物も本発明の範囲内であり、
【０１２７】
【化４５】
2013501813.tif 000047
【０１２８】
式中
Ｒ1は酸に不安定な窒素保護基であり、
Ｒ２はＣ１−６アルキルであり、
各Ｒ３は個別に−ＯＣ１−６アルキルであり、
ＯＲ４は脱離基であり、
ｎは０，１、２、３、または４である。
【０１２９】
好ましくは、前記式Ｉの化合物が
【０１３０】
【化４６】
2013501813.tif 000048
【０１３１】
である。
【実施例】
【０１３２】
当業者は、以下の手順が説明のためのみに示されているものであり、本発明の範囲を制限する意図はないことは容易に理解するだろう。さらに、１つの鏡像異性体またはジアステレオマーまたはジアステレオマーのペアについて手順を示す場合、同様の手順を利用し、他の鏡像異性体またはジアステレオマーまたはジアステレオマーのペアを調製することができる。
【０１３３】
一般情報。使用したすべての試薬は市販の製品であり、他に指示がない限り、それ以上精製せずに使用した。フラッシュクロマトグラフィー（ＦＣ）はシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して行った。各手順について、「標準的な後処理」とは、等量の水を含む分液漏斗に反応混合物を注ぎ、この混合物を等量の指示された有機溶媒で３回抽出し、前記有機層を合わせ、この有機層を食塩水で洗い、硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウムで乾燥させ、固体を濾取し、濾液を減圧下濃縮する工程を指す。融点（ｍｐ）はＭＥＬ−ＴＥＭＰ（非補正）で確認した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは２００ＭＨｚで取得し、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは５０ＭＨｚで記録し、１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルは２８２ＭＨｚで記録した（Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ２００およびＤＭＸ  ３００スペクトロメータ）。化学シフトは、重水素化溶媒に残ったプロトンと比較したδ値（１００万分の１）として記録している。結合定数はヘルツで報告している。多重度は、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（カルテット）、ｐ（ペンテット）、ｂｒ（ブロード）、またはｍ（マルチプレット）で定義する。ＨＰＬＣ分析はＡｇｌｉｅｎｔ  ＬＣ  １１００シリーズで行った。高解像度ＭＳ実験はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＴＯＦ質量分析計を使用し、Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｃｔｉｏｎ，  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａにて行った。旋光度値はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ２４３Ｂ旋光計で測定した。
【０１３４】
２−（イソシアノメチル）−１，３，５−トリメトキシベンゼン  Ｔｍｏｂ−ＩＣ 
Ｎ−（２，４，６−トリメトキシベンジル）ホルムアミド
【０１３５】
【化４７】
2013501813.tif 000049
【０１３６】
ギ酸エチル（７．５ｍＬ、９３ｍｍｏｌ）を２，４，６−トリメトキシベンジルアミン（０．９８５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を含む２５ｍＬ丸底フラスコに加えた。反応混合物は室温で３日間攪拌し、濾過した。濾取した白色固体を回収し、減圧乾燥し、粗生成物を得た（１．０９ｇ、９７％）：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１９（ｓ，０．３Ｈ），８．１４（ｓ，０．７Ｈ），６．１３（ｄ，２Ｈ，Ｊ２＝３．０Ｈｚ），６．００（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，６Ｈ）。 
参考：Ｆ．  Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｐｉｇｇｅ，  Ｊｏｈｎ  Ｊ．  Ｃｏｎｉｇｌｉｏ，  Ｓｈｉｙｕｅ  Ｆａｎｇ．  Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃｓ  ２００２，  ２１，  ４５０４−４５１２
２−（イソシアノメチル）−１，３，５−トリメトキシベンゼン
【０１３７】
【化４８】
2013501813.tif 000050
【０１３８】
事前に調整したホルムアミド（０．６７５ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１ｍＬ）を氷浴で冷却した５ｍＬ  ＣＨ２Ｃｌ２に入れ、攪拌した溶液に、トリホスゲン溶液（０．３５６ｇ、１．２ｍｍｏｌを５ｍＬ  ＣＨ２Ｃｌ２に溶解）を１滴ずつ加えた。追加し、発熱現象が弱くなった後、前記反応混合物を室温で放置し、サンプルをＴＬＣで回収した。前記反応物質のホルムアミドが消費された場合は、前記反応混合物にＣＨ２Ｃｌ２を用いた標準的な後処理を行った。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＦＣ）（ヘキサン溶媒中ＥｔＯＡｃ  ２０％〜２５％）で精製し、淡黄色の結晶固体生成物が得られた（０．４３５ｇ、７０％）：ｍｐ  １０７〜１０９℃；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．１３（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），３．８６（ｓ，６Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６２．２，１５９．２，１５３，１８，１５３．０８，１５２．９８，１０２．６，９０．６，５５．９，５５．５，３４．３，３４．１，３４．０；ＨＲＭＳ  Ｃ１１Ｈ１４ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ）＋の計算値：２０８．０９７４、実測値：２０８．０９６１；Ｃ１１Ｈ１３ＮａＮＯ３（Ｍ＋Ｎａ）＋：２３０．０７９３、実測値：
２３０．０７７８。
参考：Ｓｕｓａｎａ  Ｐ．  Ｇ．  Ｃｏｓｔａ，  Ｈｅｒｎａｎｉ  Ｌ．  Ｓ．  Ｍａｉａ，  Ｓｉｌｖｉａ  Ｍ．  Ｍ．  Ａ．  Ｐｅｒｅｉｒａ−Ｌｉｍａ．  Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００３，  １，  １４７５−１４７９
中間体（Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソブタノエート（８） 
（Ｓ）−４−ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）コハク酸塩（５）
【０１３９】
【化４９】
2013501813.tif 000051
【０１４０】
化合物Ａ（０．９６９ｇ、３．０ｍｍｏｌ）は５０ｍＬ丸底フラスコに入れた１０ｍＬ  ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。この溶液にｔｅｒｔ−ブチル２，２，２−トリクロロアセトアミデート（１．３１ｇ、６ｍｍｏｌ）およびＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ（３７μＬ、０．３ｍｍｏｌ）を追加した。室温で２時間攪拌後、前記反応混合物を氷浴で冷却し、固体ＮａＨＣＯ３（０．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を一度に追加した。この混合物を１０分間攪拌し、シリカプラグ上で濾過した。濾液を減圧留去し、残渣をＦＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１５／８５、ｖｏｌ／ｖｏｌ）で精製すると、白色固体５が得られた（１．１０ｇ、９７％）：ｍｐ  ６３〜６４℃（文献１  ６４〜６５℃、文献２  ６１〜６３℃）；［α］２４Ｄ＝＋２０．０（ｃ＝１．０、ＣＨＣｌ３）および［α］２４Ｄ＝−８．１（ｃ＝２．０、ＭｅＯＨ）［文献２［α］２２Ｄ＝＋１９．６（ｃ＝１．０、ＣＨＣｌ３）；文献３［α］２５Ｄ＝−７．４（ｃ＝２．０、ＭｅＯＨ）］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３５（ｓ，５Ｈ），５．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），５．１３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），４．４６（ペンテット，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．００（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１６．８Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ），２．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１６．８Ｈｚ，Ｊ２＝４．８Ｈｚ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．６，１６９．８，１５５．３，１３５．６，１２８．４，１２８．２，８２．０，７９．６，６６．４，５０．６，３７．０，２８．２，２７．７；ＨＲＭＳ  Ｃ２０Ｈ２９ＮａＮＯ６の計算値（Ｍ＋Ｎａ）＋：４０２．１８９３、実測値：４０２．１８８６。 
参考：ｔｅｒｔ−ブチルのエステル化について：Ａ．  Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，  Ｉ．  Ｂｒａｃｋｅｎｒｉｄｇｅ，  Ｒ．  Ｆ．  Ｗ．  Ｊａｃｋｓｏｎ，  Ｊ．  Ｍ．  Ｋｉｒｋ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  １９８８，  ２９，  ２４８３−２４８６ 
生成物の同定について（融点および旋光度）： 
１．  Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｃ．  Ｂｅｒｇｍｅｉｒ，  Ａｇｕｓｔｉｎ  Ａ．  Ｃｏｂａｓ，  Ｈｅｎｒｙ  Ｒａｐｏｐｏｒｔ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９３，  ５８，  ２３６９−２３７６  
２．  Ｒｏｂｅｒｔ  Ｍ．  Ａｄｌｉｎｇｔｏｎ，  Ｊａｃｋ  Ｅ．  Ｂａｌｄｗｉｎ，  Ｄａｖｉｄ  Ｃａｔｔｅｒｉｃｋ，  Ｇａｒｅｔｈ  Ｊ．  Ｐａｒｅｔｈ  Ｊ．  Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ．  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ，  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．  １，  １９９９，  ８５５−８６６  
３．  Ｍａｄｈｕｐ  Ｋ．  Ｄｈａｏｎ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｋ．  Ｏｌｓｅｎ，  Ｋ．  Ｒａｍａｓａｍｙ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８２，  ４７，  １９６２−１９６５
（Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソブタン酸（６）
【０１４１】
【化５０】
2013501813.tif 000052
【０１４２】
エステル５（１．０４ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）と１０％  Ｐｄ／Ｃ（０．２ｇ）の混合物を無水ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、水素により５０ｐｓｉで３時間振盪した。次にこの混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮し、白色結晶固体６が得られた（０．７９ｇ、１００％）：ｍｐ  ９７〜９９℃（文献１  ９７〜９８℃、文献２  ９８〜１００℃）；［α］２４Ｄ＝−１６．９（ｃ＝１．０、ＥｔＯＨ）および［α］２３．５Ｄ＝−２３．６（ｃ＝１．５、ＭｅＯＨ）［文献２［α］２２Ｄ＝＋１９．６（ｃ＝１．０、ＣＨＣｌ３）；文献３［α］２５Ｄ＝−７．４（ｃ＝２．０、ＭｅＯＨ）］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１０．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），４．４５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１７．０Ｈｚ，Ｊ２＝４．０Ｈｚ），２．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１１１Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ），１．４５（ｂｒ  ｓ，１８Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７５．８，１６９．９，１５５．７，８２．４，８０．２，５０．５，３６．８，２８．３，２７．９；ＨＲＭＳ  Ｃ１３Ｈ２３ＮａＮＯ６の計算値（Ｍ＋Ｎａ）＋：３１２．１４２３、実測値：３１２．１４２０。 
参考：１．  Ｃ．  Ｃ．  Ｙａｎｇ，  Ｒ．  Ｂ．  Ｍｅｒｒｉｆ？ｅｌｄ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９７６，  ４１，  １０３２−１０４１  ２．  Ｒｏｂｅｒｔ  Ｍ．  Ａｄｌｉｎｇｔｏｎ，  Ｊａｃｋ  Ｅ．  Ｂａｌｄｗｉｎ，  Ｄａｖｉｄ  Ｃａｔｔｅｒｉｃｋ，  Ｇａｒｅｔｈ  Ｊ．  Ｐａｒｅｔｈ  Ｊ．  Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ．  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ，  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．  １，  １９９９，  ８５５−８６６
（Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシブタノエート（７）
【０１４３】
【化５１】
2013501813.tif 000053
【０１４４】
酸６（０．７３３ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）を５０ｍＬの丸底フラスコに入れた５ｍＬ  ＴＨＦ中に溶解し、前記溶液を−１０℃に冷却した。この溶液にＥｔ３Ｎ（０．３９ｍＬ、２．７９ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸エチル（０．２７ｍＬ、２．７９ｍｍｏｌ）を１滴ずつ追加した。−１０〜−５℃で３０分間攪拌後、前記反応混合物を濾取した。氷浴で冷却した１００ｍＬの二口フラスコに入れたＮａＢＨ４（０．２０３ｇ、５．３３ｍｍｏｌ）と２ｍＬ  Ｈ２Ｏの混合物に上記濾液をゆっくりと加えた。前記混合物をさらに４時間室温で攪拌した後、氷浴で冷却しながらｐＨ＝２〜３まで１Ｍ  ＨＣｌで酸性化した。有機層を回収し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２０ＭＬ×３）。前記有機層を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗い、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧留去し、残渣をＦＣ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３５／６５〜４５／５５、ｖｏｌ／ｖｏｌ）で精製すると、７が得られた（０．６１８ｇ、８７％）：［α］２５Ｄ＝−３９．９（ｃ＝１．０，ＥｔＯＨ）［文献［α］２５Ｄ＝−３７．５（ｃ＝１．０，ＥｔＯＨ）］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．３５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．７７−３．５７（ｍ，２Ｈ），２．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．２０−２．０５（ｍ，２Ｈ），１，４８（ｓ，９Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．１，１５６．６，８２．３，８０．３，５８．５，５１．３，３６．４４，２８．４，２８．１；ＨＲＭＳ  Ｃ１３Ｈ２５ＮａＮＯ５の計算値（Ｍ＋Ｎａ）＋：２９８．１６３０、実測値：２９８．１６３２。
参考： Ｋ．  Ｒａｍｓａｍｙ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｋ．  Ｏｌｓｅｎ，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｅｍａｒｙ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  １９８２，  ４２−４３
（Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソブタノエート（８）
【０１４５】
【化５２】
2013501813.tif 000054
【０１４６】
アルコール７（０．２８４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に固体ＮａＨＣＯ３（０．８６１ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ）およびデス・マーチン・ペルヨージナン試薬（５．１ｍＬ  ０．３Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２溶液、１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。前記溶液を室温で1時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム溶液（１．０Ｍ、５ｍＬ）を追加し、得られた二相性混合物を５分間激しく攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）を追加した。次に、前記混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮すると、粗生成物が得られた。フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２０／８０、Ｖ／Ｖ）により、白色結晶固体としてアルデヒド８（０．２４３ｇ、８６％）が得られた：ｍｐ  ６１．５〜６３℃（文献１６０〜６２℃；文献２６６〜６７℃）；［α］２３．５Ｄ＝＋１８．６（ｃ＝１．９５，ＣＨ２Ｃｌ２）および［α］２５Ｄ＝−２６．１（ｃ＝１．５，無水ＥｔＯＨ）［文献１［α］２１Ｄ＝＋２０．７（ｃ＝１．９５，ＣＨ２Ｃｌ２）；文献３［α］２５Ｄ＝−２１．６（ｃ＝１．５，ＥｔＯＨ）］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．７３（ｓ，１Ｈ），５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ），４．４７（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１９９．４，１７０．１，１５５．５，８２．８，８０．２，４９．６，４６．５，２８．４，２８．０；ＨＲＭＳ  Ｃ１３Ｈ２３ＮａＮＯ５の計算値（Ｍ＋Ｎａ）＋：２９６．１４７４、実測値：２８６．１４６９。
参考：Ｄ−Ｍ試薬酸化について： Ｄ．  Ｂ．  Ｄｅｓｓ，  Ｊ．  Ｃ．  Ｍａｒｔｉｎ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８３，  ４８，  ４１５５−４１５６
生成物の同定について（融点および旋光度）：
１．  Ｒ．  Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｗｅｒｎｅｒ，  Ｏｒｉ  Ｓｈｏｋｅｋ，  Ｊｅｆｆｅｒｙ  Ｔ．  Ｄａｖｉｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９７，  ６２，  ８２４３−８２４６  
２．  Ｄｏｍｉｎｋ  Ｗｅｒｉｎｉｋ，  Ｊｏｈｎ  Ｄｉｍａｉｏ，  Ｊｕｌｉａｎ  Ａｄａｍｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８９，  ５４，  ４２２４−４２２８  
３．  Ｋ．  Ｒａｍｓａｍｙ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｋ．  Ｏｌｓｅｎ，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｅｍａｒｙ．  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  １９８２，  ４２−４３
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２−クロロアセトキシ）−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（９）
【０１４７】
【化５３】
2013501813.tif 000055
【０１４８】
８（０．３６６ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液を攪拌し、これに２−（イソシアノメチル）−１，３，５−トリメトキシベンゼン（０．３０３ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびクロロ酢酸（０．１３８ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を加えた。前記反応液を室温で２４時間撹拌した。前記溶媒を減圧留去し、残渣のシリカゲルクロマトグラフィーを行うと（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３０／７０〜４０／６０、Ｖ／Ｖ）、ろう状白色固体として９が得られた（０．７２７ｇ、９５％）：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．７９（ｂｒ  ｓ，０．５Ｈ），６．４８（ｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），５．２６−５．０３（ｍ，２Ｈ），４．６５−４．２２（ｍ，３Ｈ），４．１３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ），３．８１（ｓ，９Ｈ），２．５１−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．１，１７１．０，１６８．０，１６７．６，１６６．４，１６６．２，１６１．２，１５９．４，１５５．５，１０６．３，１０６．１，９０．８，８２．６，８２．５，８０．２，７２．５，７１．９，５５．９，５５．５，５１．１，５０．５，４０．９，４０．７，３４．９，３４．７，３２．５，２８．４，２８．１。ＨＲＭＳ  Ｃ２６Ｈ４０ＣｌＮ２Ｏ１０の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：５７５．２３７１、実測値：５７５．２３６０。 
参考：パッセリーニ反応について：Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｄｏｍｌｉｎｇ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．  ２００６，  １０６，  １７−８９およびその中の参考文献
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１０）
【０１４９】
【化５４】
2013501813.tif 000056
【０１５０】
９（０．６７８ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ／ＴＨＦ（５／５  ｍＬ）溶液を攪拌し、これにチオ尿素（０．２６９ｇ、３．５４ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（０．２９７ｇ、３．５４ｍｍｏｌ）を加えた。前記反応混合物を攪拌し、５０℃で１．５時間加熱した。次に前記溶媒を減圧留去し、残渣のシリカゲルＦＣを行い（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、４５／５５〜６０／４０、Ｖ／Ｖ）、ろう状白色固体のＣ（４）ジアステレオマー混合物として１０が得られた（０．５４３ｇ、９１％）：１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），５．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．６３−４．０３（ｍ，５Ｈ），３．８２，３．８１（ｓ，ｓ，合計９Ｈ），２．４３−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｄ，９Ｈ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．４３（ｓ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．６，１７２．０，１７１．５，１７１．３，１６１．０，１５９．５，１５７．３，１５６．１，１０６．７，９０．８，８２．７，８２．４，８０．８，８０．３，６９．６，６８．５，５５．９，５５．４，５２．０，５１．０，３９．１，３８．５，３２．２，３１．９，２８．３，２８．０；ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３９Ｎ２Ｏ９の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：４９９．２６５６、実測値：４９９．２６６９，４９９．２６６２。 
参考： １．  Ｍｉｔｓｕｏ  Ｍａｓａｋｉ，  Ｔａｋｅｓｈｉ  Ｋｉｔａｈａｒａ，  Ｈｉｄｅａｋｉ  Ｋｕｒｉｔａ，  Ｍａｓａｋｉ  Ｏｈｔａ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １９６８，  ９０，  ４５０８−４５０９  
２．  Ｍ．  Ｎａｒｕｔｏ，  Ｋ．  Ｏｈｎｏ，  Ｎ．  Ｎａｒｕｓｅ，  ａｎｄ  Ｈ．  Ｔａｋｅｕｃｈｉ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  １９７９，  ２５１
（２Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１０’）および（２Ｓ，４Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１０’’）
【０１５１】
【化５５】
2013501813.tif 000057
【０１５２】
上記で得られた２つのジアステレオマー混合物１０はＦＣを行い（シリカゲル６０、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３０／７０〜６０／４０、Ｖ／Ｖ）、２つのジアステレオマーであるアルコール１０’および１０’’を提示した。アルコール１０’：白色固体：ｍｐ  １４３〜１４５℃、［α］２６Ｄ＝−２８．７（ｃ＝１．０６，ＭｅＯＨ）；１０’のＨＰＬＣ：>９９％［Ｒｔ＝９．４５分；カラム：Ｌｕｘ  ３ｕセルロース−１（１５０×４．６ｍｍ）、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ）と直列に連結、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、１５％  ２−プロパノールのヘキサン溶液；流速：１．０ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．０９（ｓ，２Ｈ），５．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），４．５４−４．２２（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１１．８Ｈｚ，Ｊ２＝３．６Ｈｚ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），２．２７−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．９，１７１．３，１６１．０，１５９．５，１５７．３，１０６．８，９０．８，８２．６，８０．７，６８．５，５５．９，５５．４，５１．０，３９．１，３１．９，２８．３，２８．０。ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３９Ｎ２Ｏ９の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：４９９．２６５６、実測値：４９９．２６４３。アルコール１０’’：白色固体：ｍｐ  ５８〜６１℃、［α］２６Ｄ＝−１０．５（ｃ＝１．０，ＭｅＯＨ）；１０’’のＨＰＬＣ：>９９％。［Ｒｔ＝９．３６分；カラム：Ｌｕｘ  ３ｕセルロース−１（１５０×４．６ｍｍ）、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ）と直列に連結、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、１５％  ２−プロパノールのヘキサン溶液；流速：１．０ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，２Ｈ），５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），４．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．６Ｈｚ，Ｊ２＝５．８Ｈｚ），４．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．６Ｈｚ，Ｊ２＝５．０Ｈｚ），４，２６−４．１１（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．８１４（ｓ，６Ｈ），３．８０８（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．４Ｈｚ，Ｊ２＝５．０Ｈｚ），１．９１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．４Ｈｚ，Ｊ２＝７．６Ｈｚ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７２．５，１７１．６，１６１．１，１５９．６，１５６．３，１０６．９，９０．９，８２．６，８０．４，６９．８，５６．０，５５．５，５２．２，３８．７，３２．３，２８．４，２８．１。ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３９Ｎ２Ｏ９の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：４９９．２６５６、実測値： ４９９．２６３８。
【０１５３】
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−４−（トシルオキシ）−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１１）
【０１５４】
【化５６】
2013501813.tif 000058
【０１５５】
氷浴で冷却し（０℃）、攪拌した１０（０．５４６ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にＥｔ３Ｎ（０．７６ｍＬ、５．４５ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロライド（ＴｓＣｌ、０．４１６ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．１１ｍｍｏｌ、０．０１３ｇ）を加えた。０℃で１５分間維持した後、氷浴を外し、前記反応液を一晩室温に維持し、ＣＨ２Ｃｌ２を用いた標準的な後処理を行った。粗生成物をＦＣにより精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、４０／６０〜５０／５０、Ｖ／Ｖ）、淡白色の固体１１が得られた（０．６８ｇ、９６％）。１１のＨＰＬＣ：異性体１：５０％、Ｒｔ＝１２．５３分；異性体２：５０％、Ｒｔ＝１８．７２分；［カラム：Ｌｕｘ  ３ｕセルロース−１（１５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、５％  ２−プロパノールのヘキサン溶液；流速：１．０ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ２Ｃｌ２）δ７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２０．６Ｈｚ），６．１５（ｓ，２Ｈ），５．１４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．５０−３．９４（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｓ，６Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），２．２８−２．１１（ｍ，２Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤ２Ｃｌ２）δ１７１．０，１６７．３，１６１．８，１５９．９，１５５．８，１４６．３，１３３．３，１３０．６，１２８．５，１２８．４，１０６．６，１０６．４，９１．３，８２．８，８２．５，８０．２，７８．０，７７．７，５６．４，５６．０，３５．７，３５．３，３２．９，２８．７，２８．３，２２．０。ＨＲＭＳ  Ｃ３１Ｈ４５Ｎ２Ｏ１１Ｓの計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：６５３．２７４４、実測値： ６５３．２７３４、６５３．２７３９。
【０１５６】
（２Ｓ，４Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−４−（トシルオキシ）−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１１’）
【０１５７】
【化５７】
2013501813.tif 000059
【０１５８】
１１の調製手順の後、化合物１１’はアルコール１０’（２．０１０ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）から淡白色の泡状固体として調製した（２．５９９ｇ、収率９９％）：［α］２６Ｄ＝−３０．５（ｃ＝１．０４、ＭｅＯＨ）；１１’のＨＰＬＣ純度：９８．０％、［主要ピーク：Ｒｔ＝１５．９分；微小ピーク：１９．０分および２４．６分；カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤＨ（２５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、５％  ２−プロパノールのヘキサン溶液；流速：１．０ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ２Ｃｌ２）δ７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．７３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１５（ｓ，２Ｈ），５．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．８４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．９Ｈｚ，Ｊ２＝５．７Ｈｚ），４．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．９Ｈｚ，Ｊ２＝５．３Ｈｚ），３．９６（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），３．８２１（ｓ，３Ｈ），３．８１７（ｓ，６Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．４３（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤ２Ｃｌ２）δ１７０．６，１６７．１，１６１．２，１５９．４，１５５．４，１４５．５，１３２．９，１３０．１，１２８．１，１０６．１，９０．９，８２．１，７９．９，７７．５，５６．０，５５．５，５１．６，３４．８，３２．６，２８．４，２８．１，２１．８。ＨＲＭＳ  Ｃ３１Ｈ４５Ｎ２Ｏ１１Ｓの計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：６５３．２７４４、実測値： ６５３．２７４０。
【０１５９】
（２Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−４−（トシルオキシ）−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１１’’）
【０１６０】
【化５８】
2013501813.tif 000060
【０１６１】
１１の調製手順の後、化合物１１’’はアルコール１０’’（１．６９ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）から淡白色の泡状固体として調製した（２．１２ｇ、収率９６％）：［α］２６Ｄ＝＋１４．１（ｃ＝１．０４、ＭｅＯＨ）；１１’’のＨＰＬＣ純度：９７．７％、［主要ピーク：Ｒｔ＝２３．７分；微小ピーク：１６．２分；カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤＨ（２５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、５％  ２−プロパノールのヘキサン溶液；流速：１．０ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．９１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１４（ｓ，２Ｈ），５．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．９４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．０Ｈｚ，Ｊ２＝６．０Ｈｚ），４．３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１４．４Ｈｚ，Ｊ２＝５．２Ｈｚ），４．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，６Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．３２−２．２２（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．７，１６７．１，１６１．２，１５９．５，１５５．５，１４５．５，１３３．１，１３０．１，１２８．２，１０６．３，９０．９，８２．４，７９．９，５６．０，５５．６，５０．８，３５．０，３２．７，２８．５，２８．１，２１．８。ＨＲＭＳ  Ｃ３１Ｈ４５Ｎ２Ｏ１１Ｓの計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：６５３．２７４４、実測値：６５３．２７２９。
【０１６２】
ＴＡＳＦによるフッ素化法：ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）４−フルオロ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１２）の合成
【０１６３】
【化５９】
2013501813.tif 000061
【０１６４】
１１（０．３４０ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を氷浴で冷却した（０℃）ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）に入れ、攪拌した溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に溶解したトリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート（ＴＡＳＦ、０．２８７ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を１滴ずつ追加した。０℃で１時間維持した後、前記氷浴を外し、反応液は室温で１２時間維持した。ＴＡＳＦ試薬の２回目の分（０．２８７ｇ、１．０４ｍｍｏｌ、１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解）を追加し、前記反応液を室温でさらに１２時間維持した。前記反応液は氷冷した水（５ｍＬ）を追加してクエンチした後、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて標準的な後処理を行った。粗生成物をＦＣにより精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３５／６５〜４５／５５、Ｖ／Ｖ）、淡黄色の固体１２が得られた（０．１５８ｇ、６１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１１（ｓ，２Ｈ），５．３４−５．１７（ｍ，１Ｈ），５．１４−５．００（ｍ，０．５Ｈ），４．８９−４．７５（ｍ，０．５Ｈ），４．６３−４．３２（ｍ，３Ｈ），３．８０（ｓ，９Ｈ），２．６３−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．０，１７０．９，１６８．８，１６８．４，１６１．３，１５９．５，１５５．６，１５５．３，１０６．２，１０６．１，９１．１，９１．０，９０．８，８７．４，８７．３，８２．４１，８２．３６，８０．０，７７．４，５５．９，５５．５，５１．１，３６．１，３５．６，３５．２，３２．２，２８．４，２８．１。ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３８ＦＮ２Ｏ８の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：５０１．２６１２、実測値： ５０１．２５９１。
参考： ＲａｊａｎＢａｂｕ，  Ｔ．  Ｖ．；  Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ，  Ｗ．  Ｊ．；  Ｔｏｒｔｏｒｅｌｌｉ，  Ｖ．  Ｊ．，  Ｔｒｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｓｕｌｆｏｎｉｕｍ  Ｄｉｆｌｕｏｒｏｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｉｃａｔｅ．  ｅ−ＥＲＯＳ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２００１．
「中和化」ＴＡＳＦによるフッ素化法：（２Ｓ，４Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−フルオロ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１２’）の合成
【０１６５】
【化６０】
2013501813.tif 000062
【０１６６】
トリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート（ＴＡＳＦ、１．３８ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃ１２／ＴＨＦ（１．５ｍＬ／１．５ｍＬ）溶液を攪拌し、これにＥｔ３Ｎ・（ＨＦ）３（０．２５ｍＬ）を１滴ずつ追加した。この後、トシレート１１’（０．３９１ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）、および上述の「中和化」ＴＡＳＦ（２．７ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を還流冷却器を備えた２５ｍＬ二口フラスコに１つずつ追加した。前記混合物を１０時間油浴で５０℃に加熱し、前記油浴を外し、前記反応混合物はＥｔＯＡｃで希釈し、半飽和ＮａＨＣＯ３、水、食塩水で順次洗った。ＥｔＯＡｃ層を回収し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過、減圧濃縮した。残った残渣をＦＣで精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２５／７５〜４０／６０、Ｖ／Ｖ）、淡白色の泡状固体１２’が得られた（０．２３２ｇ、７７％）、［α］２４Ｄ＝＋１．７０（ｃ＝１．１４、ＭｅＯＨ）；１２’のＨＰＬＣ：［９９％、主要ピーク：Ｒｔ＝２２．８分；１％、微小ピーク：Ｒｔ＝２５．２分；カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、１．５％  ＥｔＯＨのヘキサン溶液；流速：１．２ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．６９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１２（ｓ，２Ｈ），５．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），５．１３（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝３．２Ｈｚ），４．８８（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝８．８Ｈｚ，Ｊ２＝３．２Ｈｚ），４．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１３．６Ｈｚ，Ｊ２＝６．０Ｈｚ），４．４２−４．３４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，９Ｈ），２．６４−２．０６（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．９，１６８．８，１６８．４，１６１．３，１５９．５，１５５．３，１０６．２，９１．２，９０．８，８７．５，８２．５，８０．０，５６．０，５５．６，５１．２，３５．７，３５．３，３２．２，２８．５，２８．１。ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３８ＦＮ２Ｏ８の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：５０１．２６１２、実測値：５０１．２６１３。
Ｘ線結晶構造解析に適した結晶１２’は、１２’のＣＨ２Ｃ１２／ヘキサン溶液を低速で溶媒留去することにより得られた。
【０１６７】
中間体１２’の結晶構造：
【０１６８】
【化６１】
2013501813.tif 000063
【０１６９】
（２Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−フルオロ−５−オキソ−５−（２，４，６−トリメトキシベンジルアミノ）ペンタノエート（１２’’）
【０１７０】
【化６２】
2013501813.tif 000064
【０１７１】
トリス（ジメチルアミノ）スルホニウムジフルオロトリメチルシリケート（ＴＡＳＦ、１．４３ｇ、５．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃ１２／ＴＨＦ（１．５ｍＬ／１．５ｍＬ）溶液を攪拌し、これにＥｔ３Ｎ・（ＨＦ）３（０．２６ｍＬ）を１滴ずつ追加した。この後、トシレート１１’’（０．４３４ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）、および上述の「中和化」ＴＡＳＦ（４．４ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）を還流冷却器を備えた２５ｍＬ二口フラスコに１つずつ追加した。前記混合物を２４時間油浴で４５℃に加熱し、前記油浴を外し、前記反応混合物はＥｔＯＡｃで希釈し、半飽和ＮａＨＣＯ３、水、食塩水で順次洗った。ＥｔＯＡｃ層を回収し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過、減圧濃縮した。残った残渣をＦＣで精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２５／７５〜４０／６０、Ｖ／Ｖ）、淡白色の泡状固体１２’’が得られた（０．１０１ｇ、３０％）、［α］２２Ｄ＝−１８．４（ｃ＝１．１０、ＭｅＯＨ）；１２’’のＨＰＬＣ：［９６．６％、主要ピーク：Ｒｔ＝２０．５分；３．４％、微小ピーク：Ｒｔ＝１９．０分；カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２１０ｎｍ、１．５％  ＥｔＯＨのヘキサン溶液；流速：１．２ｍＬ／分］。１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），６．１４（ｓ，２Ｈ），５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．０６（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝９．２Ｈｚ，Ｊ２＝３．０Ｈｚ），４．８１（ｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．６１−４．３５（ｍ，３Ｈ），３．８３（ｓ，９Ｈ），２．４１−２．１８（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．１，１６８．８，１６８．４，１６１．３，１５９．５，１５５．７，１０６．０，９１．０，９０．７，８７．３，８２．４，８０．０，５６．０，５５．５，５１．０２，３６．２，３５．８，３２．２，２８．４，２８．１。ＨＲＭＳ  Ｃ２４Ｈ３８ＦＮ２Ｏ８の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：５０１．２６１２、実測値：５０１．２６１５。
【０１７２】
（２Ｓ，４Ｒ）−２，５−ジアミノ−４−フルオロ−５−オキソペンタン酸（１）
【０１７３】
【化６３】
2013501813.tif 000065
【０１７４】
１２’（０．１９２ｇ、０．３８４ｍｍｏｌ）とジメチルスルフィド（０．１ｍＬ）の混合物を氷浴で冷却し（０℃）、これにトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５ｍＬ）を１滴ずつ加えた。追加後、前記氷浴を外し、前記反応液を室温で２．５時間維持した。前記溶液を減圧留去し、ほとんどのＴＦＡを取り除いた。残渣はＨ２Ｏ（５ｍＬ）に溶解し、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ×２）で洗った。水層を氷浴で冷却し、氷冷した５％アンモニア水をゆっくりと追加してｐＨ＝７に中和した。中和した溶液はダウエックス５０ＷＸ８−２００（Ｈ＋型、１０ｇ）の小カラムに入れ、水で洗い、さらに５％アンモニア水で溶出した。生成物を含む分画をプール、減圧濃縮し、高真空条件で一晩乾燥させ、白色固体として粗生成物が得られた。ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶によりさらに精製すると、白色固体が得られた（０．０４５ｇ、収率７１％）：ｍｐ  １７５℃（分解）、［α］２５Ｄ＝＋４６．２（ｃ＝０．１６，Ｈ２Ｏ）；１のＨＰＬＣ：［９８．８％、主要ピーク：Ｒｔ＝１．９８分；１．２２％、微小ピーク：Ｒｔ＝９．２９分；カラム：Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（Ｄ）−ペニシラミン（１５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２５４ｎｍ、１．０ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液；流速：１．０ｍＬ／分、カラム温度１０℃］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ５．４１（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝１０．０Ｈｚ，Ｊ２＝３．０Ｈｚ），５．１７（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝１０．０Ｈｚ，Ｊ２＝３．０Ｈｚ），３．９７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．７４−２．２４（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ＋微量のＣＤ３ＯＤ）δ１７５．１，１７４．７，１７４．２，９１．８，８８．２，５３．２，３４．７，３４．３；１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ＋微量のＣＤ３ＯＤ）δ−１８８．２（Ｈ−Ｆデカップリング）；ＨＲＭＳ  Ｃ５Ｈ１０ＦＮ２Ｏ３の計算値（Ｍ＋Ｈ）＋：１６５．０６７５、実測値： １６５．０６８３。
Ｘ線結晶構造解析に適した４−ＦＧｌｎ１の結晶は、１のＨ２Ｏ溶液を低速で溶媒留去することにより得られた。
【０１７５】
最終的な４−ＦＧｌｎ（２Ｓ，４Ｒ）、１の結晶構造：
【０１７６】
【化６４】
2013501813.tif 000066
【０１７７】
参考： Ｖｌａｄｉｍｉｒ  Ｔｏｌｍａｎ，  Ｐｅｔｒ  Ｓｅｄｍｅｒａ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０００，  １０１，  ５−１０
（２Ｓ，４Ｓ）−２，５−ジアミノ−４−フルオロ−５−オキソペンタン酸（２）
【０１７８】
【化６５】
2013501813.tif 000067
【０１７９】
1の調製手順の後、化合物２はフッ化物１２’’（０．０９０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）から白色固体として調製した（０．０１９ｇ、収率６７％）：ｍｐ  １６０℃（分解）、［α］２５Ｄ＝−１４．６（ｃ＝０．１５，Ｈ２Ｏ）；２のＨＰＬＣ：［９４．９％、主要ピーク：Ｒｔ＝１０．８分；５．１％、微小ピーク１：Ｒｔ＝８．４２分；カラム：Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（Ｄ）−ペニシラミン（１５０×４．６ｍｍ）、ＵＶ検出器、２５４ｎｍ、１．０ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液；流速：１．０ｍＬ／分、カラム温度１０℃］；１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）δ５．３６（ｔ，０．５Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），５．１２（ｄｄ，０．５Ｈ，Ｊ１＝７．８Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ），４．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），２．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），２．４９（ペンテット，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ＋微量のＣＤ３ＯＤ）δ１７４．９，１７４．５，１７４．０，９１．４，８８．２，８７．８，５２．８，３４．３，３３．９；１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ＋微量のＣＤ３ＯＤ）δ−１８８．１３（Ｈ−Ｆデカップリング）；ＨＲＭＳ  Ｃ５Ｈ１０ＦＮ２Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）＋：１６５．０６７５、実測値： １６５．０６６４。
【０１８０】
放射性フッ素化法（Ｒａｄｉｏｆｌｕｏｒｉｎａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）。１８Ｆラベリング反応中のラセミ化を回避するため、「激しい」フッ素化反応を行うことを念頭に、弱塩基性試薬である炭酸水素カリウム（ＫＨＣＯ３）と中性相間移動触媒１８−Ｃｒｏｗｎ−６との併用を検討した。トシレートの前駆体を使用し、望みの（２Ｓ，４Ｒ）異性体［１８Ｆ］１２’を主要生成物として作成することに成功し、これに伴い、炭素２の位置がエピ化した（２Ｒ，４Ｒ）ジアステレオマー［１８Ｆ］１２ａ’’が少量生成した。その後、望みの脱保護生成物［１８Ｆ］１は、６０℃で５分間、中間体［１８Ｆ］１２ａ’にＴＦＡ／アニソールを処理することで最終的に調製した。４−ＦＧｌｎは実質的にＵＶ／Ｖｉｓ吸光度を示さないため、ＨＰＬＣで共溶出させることにより［１８Ｆ］１を直接同定することには問題がある。前記生成物は（９−フルオレニルメチル）カルバメートクロライド（Ｆｍｏｃ−Ｃｌ）で処理し、アミノ−Ｆｍｏｃ保護を行った。このさらに誘導体化した放射性化合物のＦｍｏｃ−［１８Ｆ］１は、「冷」Ｆｍｏｃ−４−ＦＧｌｎの標準物質を共溶出させることによりＨＰＬＣプロフィールで同定した。最終的に、キラルカラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｃｈｉｒａｌ  Ｃｈｉｒｅｘ３１２６（Ｄ−ペニシラミン）（１５０×４．６ｍｍ）に１ｍＭ  ＣｕＳＯ４水溶液を溶出剤として使用し（１ｍＬ／分、カラム温度１０℃）、さらに誘導体化する必要もなく、放射性標識４Ｆ−Ｇｌｎの４つすべておよび冷４Ｆ−Ｇｌｎ  １、２、３、および４を分離、同定することができた（Ｃｕ−４−ＦＧｌｎ複合体はＵＶ吸収性である）。［１８Ｆ］１は実際に主要生成物であり、少量のジアステレオマー［１８Ｆ］４が同時に生成した（<５％）。
【０１８１】
４つの放射性標識４Ｆ−Ｇｌｎおよび前記「冷」標準物質すべてのＨＰＬＣプロフィールは、Ｃｈｉｒａｌ  Ｃｈｉｒｅｘ３１２６（Ｄ−ペニシラミン）（１５０×４．６ｍｍ）を使用し、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４、１ｍＬ／分、１０℃で確認することができる。これらの条件では、化合物２が最初に溶出し、続いて化合物１、３、および４が溶出する。
【０１８２】
【化６６】
2013501813.tif 000068
【０１８３】
１１’を出発原料とした［ｌ８Ｆ］１（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ＦＧｌｎ）の放射性合成
【０１８４】
【化６７】
2013501813.tif 000069
【０１８５】
活性化ＳｅｐＰａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ  ＱＭＡ  ＣａｒｂにＦ１８（２０〜４０ｍＣｉ）を充填し、１ｍＬ  １８−ｃ−６／ＫＨＣＯ３（１８．６ｍＬのＡＣＮ中１６０ｍｇ  １８−ｃ−６／３．４ｍＬの水中２９ｍｇ  ＫＨＣＯ３）で溶出した。溶液はアルゴンを吹き付けて乾固し、アルゴン流下８０℃で１ｍＬのアセトニトリルを用い、２回共沸乾燥させた。乾燥させたＦ１８を氷浴で冷却し、５ｍｇの１１’を０．５ｍｌアセトニトリルに溶解し、前記乾燥Ｆ１８に加えた。前記混合物を７０℃の油浴で１５分間加熱した。前記混合物は氷浴中で冷却し、０．５ｍＬのアセトニトリルおよび８ｍＬの水を加えた。前記混合物を活性化Ｏａｓｉｓ（登録商標）ＨＬＢ  ３ｃｃに充填し、押し流し、３ｍＬの水で２回洗った。望みの放射性標識化合物は０．５ｍＬのエタノールで溶出した（全放射能の約２０％）。放射化学的純度は逆相ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）、ＭｅＯＨ／０．１％ギ酸８／２、１ｍＬ／分、保持時間約６分、>９５％）により決定し、立体化学的純度はキラルＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＯＤカラム（２５０×４．６ｍｍ）、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、１．２ｍＬ／分、保持時間約２２分、>９５％）により決定した。
【０１８６】
前記エタノール溶液は吹き付けて乾固し、氷浴で冷却し、５９５μＬ  ＴＦＡ／５μＬアニソール混合物を加えた。前記溶液は５分間６０℃で加熱した。まだ暖かいうちにアルゴン流下ＴＦＡおよびアニソールを除去し、残渣は１ｍＬの水で粉砕し、前記水溶液を０．４５μのフィルターで濾過すると、単離収率約１０％（非崩壊生成物に換算、ＲＣＰ  ９９％、乾燥重量９６％）で望みの放射性［１８Ｆ］１（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ＦＧｌｎ）が得られた。放射化学的純度および立体化学的純度はキラルＨＰＬＣにより決定した（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分、２Ｓ，４Ｒ異性体の保持時間約１１分、２Ｒ，４Ｒ異性体約１８分）。
【０１８７】
【化６８】
2013501813.tif 000070
【０１８８】
中間体１２’の逆相ＨＰＬＣにおけるＨＰＬＣプロフィール（Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）、ＭｅＯＨ／０．１％ギ酸８／２、１ｍＬ／分、保持時間約６分、>９５％。
【０１８９】
【化６９】
2013501813.tif 000071
【０１９０】
中間体１２’のＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＯＤカラム（２５０×４．６ｍｍ）におけるＨＰＬＣプロフィール、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、１．２ｍＬ／分、保持時間約２２分、乾燥重量約９６％）。
【０１９１】
【化７０】
2013501813.tif 000072
【０１９２】
キラルカラムにおける［１８Ｆ］１（（２Ｓ，４Ｒ）−４−ＦＧｌｎ）のＨＰＬＣプロフィール（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分、２Ｓ，４Ｒ異性体の保持時間約１１分、２Ｒ，４Ｒ異性体約１８分）。
【０１９３】
１１ａ’を出発原料とした［ｌ８Ｆ］３（（２Ｒ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎ）の放射性合成
【０１９４】
【化７１】
2013501813.tif 000073
【０１９５】
活性化ＳｅｐＰａｋ（登録商標）Ｌｉｇｈｔ  ＱＭＡ  ＣａｒｂにＦ１８（３９．８ｍＣｉ）を充填し、１ｍＬ  １８−ｃ−６／ＫＨＣＯ３（１８．６ｍＬのＡＣＮ中１６０ｍｇ  １８−ｃ−６／３．４ｍＬの水中２９ｍｇ  ＫＨＣＯ３）で溶出した。前記溶液はアルゴンを吹き付けて乾固し、アルゴン流下８０℃で１ｍＬのアセトニトリルを用い、２回共沸乾燥させた。乾燥させたＦ１８を氷浴で冷却し、５ｍｇの１１ａ’を０．５ｍｌアセトニトリルに溶解し、前記乾燥Ｆ１８に加えた。前記混合物は７０℃の油浴で１５分間加熱した。前記混合物は氷浴中で冷却し、０．５ｍＬのアセトニトリルおよび８ｍＬの水を加えた。前記混合物を活性化Ｏａｓｉｓ（登録商標）ＨＬＢ  ３ｃｃに充填し、押し流し、３ｍＬの水で２回洗った。望みの放射性標識化合物は０．５ｍＬのエタノールで溶出した（全放射能の約２０％）。放射化学的純度は逆相ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）、ＭｅＯＨ／０．１％ギ酸８／２、１ｍＬ／分、保持時間約６分、ＲＣＰ>９５％）により決定し、立体化学的純度はキラルＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＯＤカラム（２５０×４．６ｍｍ）、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、１．２ｍＬ／分、保持時間約２２分、乾燥重量>９０％）により決定した。
【０１９６】
前記エタノール溶液は吹き付け乾固し、氷浴で冷却し、５９５μＬ  ＴＦＡ／５μＬアニソール混合物を加えた。前記溶液は５分間６０℃で加熱した。まだ暖かいうちにアルゴン流下ＴＦＡおよびアニソールを除去し、残渣は１ｍＬの水で粉砕し、前記水溶液を０．４５μのフィルターで濾過すると、単離収率約１０％（非崩壊生成物に換算、ＲＣＰ  ９７％、乾燥重量９０％）で望みの放射性［１８Ｆ］３（（２Ｒ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎ）が得られた。放射化学的純度および立体化学的純度はキラルＨＰＬＣにより決定した（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分、２Ｒ，４Ｓ異性体の保持時間約１５分、２Ｓ，４Ｓ異性体約１０分）。
【０１９７】
【化７２】
2013501813.tif 000074
【０１９８】
中間体１２ａ’の逆相ＨＰＬＣにおけるＨＰＬＣプロフィール（Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ）、ＭｅＯＨ／０．１％ギ酸８／２、１ｍＬ／分、保持時間約６分、>９５％。
【０１９９】
【化７３】
2013501813.tif 000075
【０２００】
中間体１２ａ’のＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＯＤカラム（２５０×４．６ｍｍ）におけるＨＰＬＣプロフィール、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、１．２ｍＬ／分、保持時間約２２分、乾燥重量約９６％）。
【０２０１】
【化７４】
2013501813.tif 000076
【０２０２】
キラルカラムにおける［１８Ｆ］３（（２Ｒ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎ）のＨＰＬＣプロフィール（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分、２Ｒ，４Ｓ異性体の保持時間約１５分、２Ｓ，４Ｓ異性体約１０分）。 
［１８Ｆ］２（（２Ｓ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎ）の放射性合成
【０２０３】
【化７５】
2013501813.tif 000077
【０２０４】
活性化ＳｅｐＰａｋ（登録商標）ＱＭＡにＦ１８（４６．９ｍＣｉ）を充填し、１ｍＬのＫ２２２／Ｋ２ＣＯ３（１８．６ｍＬのアセトニトリル中２２０ｍｇ  Ｋ２２２／３．４ｍＬの水中４０ｍｇ  Ｋ２ＣＯ３）で溶出した（４５．５ｍＣｉ）。溶液はアルゴンを吹き付けて乾固し、アルゴン流下８０℃で１ｍＬのアセトニトリルを用い、２回共沸乾燥させた。乾燥させたＦ１８を氷浴で冷却し、５．３１ｍｇの１１’’を１ｍｌアセトニトリルに溶解し、前記乾燥Ｆ１８に加えた。前記混合物は７０℃の油浴で２０分間加熱した。前記混合物は氷浴中で冷却し、８ｍＬの水を加えた。前記混合物を活性化Ｏａｓｉｓ（登録商標）ＨＬＢ  ３ｃｃに充填し、押し流し、３ｍＬの水で２回洗った。望みの放射性標識化合物は０．５ｍＬのエタノールで溶出した（全放射能の約１４％）。
【０２０５】
エタノール溶液を容積約２００μＬまで濃縮し、５μＬをキラルＨＰＬＣ（ＯＤカラム、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５  １．２ｍＬ／分）に注入し、第２のピーク（約２０分）を単離した。２Ｓ，４Ｓ異性体に対応する第２のピークを単離した（５６μＣｉ）（回収した分画は保持時間２０分前後であった：それぞれ４５／４／５６μＣｉ）。
【０２０６】
【化７６】
2013501813.tif 000078
【０２０７】
キラルＯＤカラム、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、流速１．２ｍＬ／分における放射性ＨＰＬＣトレースのエタノール溶液（［１８Ｆ］１２’’と［１８Ｆ］１２ａ’との混合物）
望みの分画のヘキサン／エタノール溶液を吹き付けて乾固し、２１９μＬ  ＴＦＡ／１μＬアニソールを追加し、６０℃で５分間加熱した。揮発性物質はまだ暖かいうちにアルゴン下で除去した。残渣は０．５ｍＬの水で処理し、新しいバイアルに移し、４６μＣｉ（ＲＣＰ>９９％、Ｅ>９８％）の用量が得られた。
放射化学純度、同一性、ジアステレオマー純度はＨＰＬＣで決定した：
【０２０８】
【化７７】
2013501813.tif 000079
【０２０９】
キラルカラムにおける精製［１８Ｆ］２（（２Ｓ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎのＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分。同一性は冷標準物質と同時に注入することで確定した。
【０２１０】
［１８Ｆ］４（（２Ｒ，４Ｒ）−４−ＦＧｌｎ）の放射性合成
【０２１１】
【化７８】
2013501813.tif 000080
【０２１２】
活性化ＳｅｐＰａｋ（登録商標）ＱＭＡにＦ１８（８２．８ｍＣｉ）を充填し、１ｍＬのＫ２２２／Ｋ２ＣＯ３（１８．６ｍＬのアセトニトリル中２２０ｍｇ  Ｋ２２２／３．４ｍＬの水中４０ｍｇ  Ｋ２ＣＯ３）で溶出した（７８．９ｍＣｉ）。溶液はアルゴンを吹き付けて乾固し、アルゴン流下８０℃で１ｍＬのアセトニトリルを用い、２回共沸乾燥させた。乾燥させたＦ１８を氷浴で冷却し、８．２８ｍｇの１１ａ’’を１ｍｌアセトニトリルに溶解し、前記乾燥Ｆ１８に加えた。前記混合物は７０℃の油浴で２０分間加熱した。前記混合物は氷浴中で冷却し、８ｍＬの水を加えた。前記混合物を活性化Ｏａｓｉｓ（登録商標）ＨＬＢ  ３ｃｃに充填し、押し流し、３ｍＬの水で２回洗った。望みの放射性標識化合物は０．５ｍＬのエタノールで溶出した（全放射能の約１４％）。
【０２１３】
エタノール溶液を容積約２００μＬまで濃縮し、５μＬをキラルＨＰＬＣ（ＯＤカラム、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５  １．２ｍＬ／分）に注入し、第２のピーク（約２４分）を単離した。２Ｒ，４Ｒ異性体に相当する第２のピークを単離した（１０６μＣｉ）。
【０２１４】
【化７９】
2013501813.tif 000081
【０２１５】
キラルＯＤカラム、ヘキサン／ＥｔＯＨ  ９８．５／１．５、流速１．２ｍＬ／分における放射性ＨＰＬＣトレースのエタノール溶液（［１８Ｆ］１２’と［１８Ｆ］１２ａ’’との混合物）
望みの分画のヘキサン／エタノール溶液を吹き付けて乾固し、２１９μＬ  ＴＦＡ／１μＬアニソールを追加し、６０℃で５分間加熱した。揮発性物質はまだ暖かいうちにアルゴン下で除去した。残渣に０．５ｍＬの水を処理し、新しいバイアルに移し、用量１０３μＣｉ（ＲＣＰ>９９％、乾燥重量>９９％）が得られた。
【０２１６】
放射化学純度、同一性、ジアステレオマー純度はＨＰＬＣで決定した：
【０２１７】
【化８０】
2013501813.tif 000082
【０２１８】
キラルカラムにおける精製［１８Ｆ］２（（２Ｓ，４Ｓ）−４−ＦＧｌｎのＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒｅｘ  ３１２６（ｄ）−ペニシラミン、１ｍＭ  ＣｕＳＯ４溶液、１ｍＬ／分。同一性は冷標準物質と同時に注入することで決定した。
【０２１９】
生物学的研究の手順： 
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける細胞取り込みの検討
考えられる４つの異性体の細胞取り込みは、９Ｌ腫瘍細胞株を用いて評価した。細胞取り込みの結果（％用量／μｇタンパク質）は［３Ｈ］グルタミンと比較した。４−フルオロ−グルタミン異性体の取り込みでは、異性体間で際立った差が示された（図４）。天然Ｌグルタミン誘導体の２Ｓ異性体がもっとも高い取り込みを示した。４−ＦＧｌｎ（２Ｓ，４Ｒ）は９Ｌ細胞で高い取り込みを示し、検討した最高時間の２時間、絶えず取り込みを続けた。４−ＦＧｌｎ（２Ｓ，４Ｒ）異性体も（２Ｓ，４Ｒ）異性体と同様に優れた取り込みを示したが、取り込みの値は２時間で急激に落ち込むようであった。非天然型Ｄ−グルタミン異性体の（２Ｒ，４Ｒ）および（２Ｒ，４Ｓ）４−ＦＧｌｎは、すべて（２Ｓ，４Ｒ）および（２Ｓ，４Ｓ）４−ＦＧｌｎ、また前記［３Ｈ］−Ｌ−グルタミンと比較して細胞の取り込みが少ないことが示され、Ｃ−２位置の配置が腫瘍細胞の取り込みにおいて非常に重要であり、グルタミンの２Ｓ配置（一般的にＬ−異性体として知られる）は細胞膜を貫通する輸送において重要であることが示唆された。図１を参照。
【０２２０】
［１８Ｆ］４−ＦＧｌｎの腫瘍細胞における取り込みは非常に選択的なプロセスであり、２種類の天然４−フルオロ−Ｌ−グルタミン誘導体が非天然４−フルオロ−Ｄ−グルタミン誘導体よりも高い取り込みを示した。
【０２２１】
［１８Ｆ］４−ＦＧｌｎ（２Ｓ，４Ｒ）、１異性体は、他の［１８Ｆ］４−ＦＧｌｎ異性体の中で９Ｌ腫瘍細胞に最も多く取り込まれることが示された。この所見のため、我々は、［１８Ｆ］４−ＦＧｌｎの（２Ｓ，４Ｒ）異性体１のみをさらに検討することにした。［１８Ｆ］４−ＦＧｌｎ（２Ｓ，４Ｒ）、１の特異性を検討するため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞取り込み阻害研究は９Ｌ細胞で行った。冷Ｌ−グルタミンおよびＬ−セリンをグルタミン輸送体の陽性対照阻害剤とした。Ｌ−グルタミンはシステムＮトランスポーターを阻害し、Ｌ−セリンはＡＳＣトランスポーターを阻害する。０．５ｍＭ〜５ｍＭの範囲で３種類の濃度を検討した。Ｌ−グルタミンと［１８Ｆ］（２Ｓ，４Ｒ）−４−ＦＧｌｎ、１を同時に３０分間インキュベーションした後、システムＮトランスポーターは明らかに阻害された。結果からは、約９０％阻害されることが示された（対照３．５６％用量／１００ｕｇタンパク質に対し０．４９％用量／１００ｕｇタンパク質が阻害された）。Ｌ−セリンもＡＳＣトランスポーターをかなり阻害することが示された（対照３．５６％用量／１００ｕｇタンパク質に対して１．４１％阻害）。冷ＭｅＡＩＢは陰性対照とし、これはシステムＡトランスポーターを阻害する。５ｍＭの濃度では、システムＡ輸送系にほとんどまたは全く効果がなかった（対照３．５６％用量／１００ｕｇタンパク質に対して３．６９％阻害）。結果は、明らかにＬ−グルタミンおよびＬ−セリンに対して用量依存性の反応を示しており、ＭｅＡＩＢはシステムＡ輸送系に対する阻害作用を示さないことが証明される。図２を参照。
【０２２２】
４つの４−［１８Ｆ］Ｆ−グルタミン異性体（２Ｓ，４Ｒ）、（２Ｓ，４Ｓ）、（２Ｒ，４Ｓ）、および（２Ｒ，４Ｒ）それぞれの細胞取り込みは、（９Ｌ）ラット脳神経膠肉腫細胞で研究した。Ｌ−［３，４−３Ｈ（Ｎ）］−グルタミン、>９７％、２５０μＣｉ（９．２５ＭＢｑ）はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入し、実施した細胞取り込み実験すべての対照として使用した。Ｌ−［３，４−３Ｈ（Ｎ）］−グルタミンの純度はＴＬＣ法により決定した（ＴＬＣシリカゲル６０  Ｆ２５４、溶媒ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＮＨ３：Ｈ２Ｏ（２０：２０：５））。前記Ｌ−［３，４−３Ｈ（Ｎ）］−グルタミンはＲｆ値が０．３〜０．４であることが示された。齧歯類（９Ｌ）細胞はＤｕｌｂｅｃｃｏ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ウシ胎仔血清、および１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンで培養した。リガンドをインキュベートする前に、腫瘍細胞を培地で２４時間播種した（２．０×１０５細胞／ウェル）。実験当日、前記培地を吸引し、前記細胞を１ｍＬの温リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、０．９０ｍＭのＣａ２＋および１．０５ｍＭのＭｇ２＋を含む）で３回洗った。４−［１８Ｆ］Ｆ−グルタミン異性体およびＬ−［３，４−３Ｈ（Ｎ）］−グルタミンの４つすべてをＰＢＳ溶液に溶解し、各ウェルに追加し（約５００，０００ｃｐｍ／ｍＬ／ウェル）、３７℃で５、３０、６０、１２０分間インキュベートした。インキュベーション時間の最後に、前記ウェルを吸引し、残った細胞は１ｍＬの氷冷したＰＢＳ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋）で３回洗った。冷ＰＢＳで洗った後、３５０μＬの１Ｍ  ＮａＯＨを使用し、前記細胞を溶解させた。前記溶解した細胞は濾紙に回収した。前記濾紙をシンチレーションバイアルに入れ、計測用液（７ｍＬエコライト＋）を加え、前記バイアルは１８〜２４時間後にβカウンターで計測した。４−［１８Ｆ］Ｆ−グルタミン異性体およびＬ−［３，４−３Ｈ（Ｎ）］−グルタミンを用いた二重アイソトープ研究では、前記バイアルをまずγカウンターにより計測し、１８Ｆを計測した。次に、１８Ｆが完全に崩壊した１日後、β計測を行った。細胞溶解物１００μＬを用い、Ｌｏｗｒｙ法によりタンパク質濃度を決定した。
【０２２３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける阻害研究：
４−［１８Ｆ］Ｆ−グルタミン（２Ｓ，４Ｒ）異性体の特異性を検討するため、阻害研究は９Ｌ細胞を用いて行った。トレーサーは３７℃で３０分間インキュベートした。細胞は上述の通り処理した。冷Ｌ−グルタミンおよびＬ−セリンをグルタミン輸送体の陽性対照阻害剤とした。Ｌ−グルタミンはシステムＮのトランスポーターを阻害し、Ｌ−セリンはＡＳＣトランスポーターを阻害する。冷ＭｅＡＩＢは陰性対照とし、これはシステムＡトランスポーターを阻害する。０．５ｍＭ〜５ｍＭの範囲で３種類の濃度を検討した。データからは、各阻害剤に用量依存的反応が示され、Ｌ−グルタミンに最も強い阻害作用が示された（［５ｍＭ］で約９０％）。
【０２２４】
ｍｉｃｒｏＰＥＴを利用した小動物の画像化
ダイナミック小動物ＰＥＴ（Ａ−ＰＥＴ）の画像研究は４−［１８Ｆ］Ｆ−グルタミン（２Ｓ，４Ｒ）異性体を用いて行った。すべての撮像は専用の動物ＰＥＴスキャナー（ＰｈｉｌｌｉｐｓのＭｏｓａｉｃ）で行った（Ｓｕｒｔｉ、２００５）。本研究には、Ｍ／ｔｏｍＮＤ自発性ヒト乳腺腫瘍を有するトランスジェニックマウスを用いた。このトランスジェニックマウスモデルを使用する利点は多数ある。ドキシサイクリン感受性プロモーターは、これらのマウスを遺伝的に操作し、ｍｙｃ遺伝子を発現させる。これらの腫瘍は従来の異種移植腫瘍に対して自発的に生じる。飲用水（２ｍｇ／ｋｇ）から前記マウスにドキシサイクリンを投与すると、ｍｙｃ遺伝子の発現はアップレギュレートされる。ドキシサイクリンを除去すると、前記ｍｙｃ遺伝子はダウンレギュレートされる。このモデルを選択したのは、これらの化合物では、真のグルタミン取り込みとｍｙｃ遺伝子の発現レベルとの間で直接的な関係がみられるためであった。 
Ｍ／ｔｏｍＮＤ腫瘍内のグルタミン取り込みは、外側尾静脈から［１８Ｆ］−４Ｆ−グルタミン（２Ｓ，４Ｒ）異性体を約３００μＣｉ注入することにより検討した。トレーサーを注入した直後に画像化を開始し、１２０分間継続した。腫瘍取り込みの画像化と動力学計算からは、前記ｍｙｃ遺伝子がアップレギュレートされていると、前記［１８Ｆ］−４Ｆ−グルタミン（２Ｓ，４Ｒ）（１）が腫瘍部位に取り込まれることが明確に証明された。図３および４を参照。
【０２２５】
マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ体内分布研究
［１８Ｆ］−４Ｆ−グルタミン異性体を新規の腫瘍ＰＥＴ造影剤として検討するため、我々は［１８Ｆ］−４Ｆ−グルタミン（２Ｓ，４Ｒ）（１）を体重２０〜２５グラムの正常ＩＣＲマウスにおいて検討した。体内分布研究では、１群あたり５匹のマウスを用いた。イソフルランを使用してマウスを麻酔し、各異性体２５μＣｉを含む生理食塩水溶液０．１５ｍＬを外側尾静脈から注入した。イソフルラン麻酔下心臓を切除し、注入後２、３０、６０、１２０、および２４０分でマウスを殺処分した。対象臓器を切除し、重量を量り、γカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｃｏｂｒａ）で放射能を計測した。１グラムあたりの％用量は、初期用量の１．０％の計測まで組織の放射能値を比較することで計算した。初期用量は、同率で測定した注入物質を１００倍希釈した分量である。
【０２２６】
【表１】
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【０２２７】
【表２】
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【０２２８】
主要臓器すべてで急速な取り込みが観察され、静脈内注入後にトレーサーが細胞膜を急速に浸透したことが示唆された。心臓では大幅な取り込みがみられ、心臓組織からの消失は比較的ゆっくりであった。腎臓では初期の取り込み値が高く、消失が速いことが明らかであり、尿中排泄が速かった可能性がある。膵臓が最も顕著な取り込みおよび貯留を示した。３０分後に膵臓と肝臓の比が４：１に達し、膵臓では選択時な取り込みおよび貯留が行われていたことが示唆される。膵臓細胞の外分泌細胞では、グルタミンの代謝回転率が高い可能性がある。脳の取り込みは中等度であるが、脳の取り込みは注入後４時間まで一定のままであった。結合剤の取り込みは後になって大幅に増加した。ｉｎ  ｖｉｖｏで脱フッ素化が行われた可能性があり、この場合、循環血液中に遊離フッ化物イオンが形成する。従って、骨の取り込みが増加したことは、このトレーサーのｉｎ  ｖｉｖｏ脱フッ素化を反映しているのかもしれない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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