(57)【要約】  本発明は、対象が治療されるように、本明細書に記載される、（１）ある量の化学式（Ｉ）の化合物、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、（２）ある量のデキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを、対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法に関する。別の態様において、対象が治療されるように、（１）ある量の化学式（Ｉ）の化合物と、（２）ある量のデキサメタゾンとを対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法、多発性骨髄腫の治療のための前記組み合わせを含む薬学的製剤、及びその組成物が、本明細書に提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記対象が治療されるように、（１）ある量の５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、
（２）ある量のデキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを前記対象に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
対象における多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記対象が治療されるように、（１）ある量の５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンと、
（２）ある量のデキサメタゾンを前記対象に投与することを含むことを特徴とする治療方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記治療が、前記量の（１）と、前記量の（２）とを併用投与することを含むことを特徴とする治療方法。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記量の（１）及び前記量の（２）が、単一の製剤又は単位投与形態中にあることを特徴とする治療方法。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記量の（１）及び前記量の（２）が、別々の製剤又は単位投与形態中にあることを特徴とする治療方法。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記治療が、前記量の（１）と前記量の（２）とを実質的に同時に投与することを含むことを特徴とする治療方法。
【請求項７】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記治療が、前記量の（１）と前記量の（２）とを異なる時間に投与することを含むことを特徴とする治療方法。
【請求項８】
請求項１又は２に記載の多発性骨髄腫の治療方法であって、
前記量の（１）及び／又は前記量の（２）が、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効でないが、
それらの量を組み合わせた場合に有効である投与量で投与されることを特徴とする治療方法。
【請求項９】
薬学的製剤であって、
（１）ある量の５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、
（２）ある量のデキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを含む薬学的製剤であって、
（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効であることを特徴とする薬学的製剤。
【請求項１０】
薬学的製剤であって、
（１）ある量の５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンと、
（２）ある量のデキサメタゾンとを含む薬学的製剤であって、
（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効であることを特徴とする薬学的製剤。
【請求項１１】
請求項９又は１０に記載の薬学的製剤であって、
前記量の（１）と前記量の（２）が、単一の製剤又は単位投与形態中にあることを特徴とする薬学的製剤。
【請求項１２】
請求項９又は１０に記載の薬学的製剤であって、
前記製剤又は単位投与形態が、経口製剤又は単位投与形態であることを特徴とする薬学的製剤。
【請求項１３】
請求項９又は１０に記載の薬学的製剤であって、
前記量の（１）及び／又は前記量の（２）が、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効でないが、
それらの量を組み合わせた場合に有効であることを特徴とする薬学的製剤。
【請求項１４】
５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン及びデキサメタゾンを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１５】
多発性骨髄腫の治療のための併用療法であって、
５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン及びデキサメタゾンの処置を含むことを特徴とする併用療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、「併用療法（ＣＯＭＢＩＮＡＴＩＯＮ  ＴＨＥＲＡＰＹ）」と題する２０１０年１１月１２日に出願された米国仮出願第６１／４１３，２６０号、代理人整理番号ＮＶＴ−１８３−１を基礎とする優先権を主張する。本出願はまた、「併用療法（ＣＯＭＢＩＮＡＴＩＯＮ  ＴＨＥＲＡＰＹ）」と題する２０１０年１２月６日に出願された米国仮出願第６１／４２０，０８９号、代理人整理番号ＮＶＴ−１８３−２を基礎とする優先権も主張する。本明細書を通して引用されるいずれの特許、特許出願、及び参照文献も、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、細胞代謝において中心的役割を果たす。ＰＩ３Ｋは、成長因子、サイトカイン及びそれらの受容体と関連する他の刺激因子によって活性化される。活性化されたＰＩ３Ｋは、さらに、Ａｋｔ−ｍＴＯＲへのシグナル伝達を開始し、細胞の成長、増殖、及びアポトーシスの調節をもたらす。この経路の異常調節は、多発性骨髄腫（ＭＭ）を含む、様々な種類のヒト癌に広く見られる。したがって、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ阻害は、広範な抗ＭＭ活性を発揮することが期待されている。化合物５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン（化合物Ａ）は、汎ＰＩ３Ｋ阻害剤である。この化合物は、様々な腫瘍細胞株において顕著な細胞の増殖阻害及びアポトーシスの誘導を示している。化合物Ａは、現在、固形腫瘍患者における第Ｉ相臨床試験が実施されている。
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、骨髄中の形質細胞の増殖によって特徴付けられる悪性Ｂ細胞腫瘍である（非特許文献１）。ＭＭは、溶解性骨病変、単一クローン性免疫グロブリン（Ｉｇ）の高レベルの産生、及び正常なＩｇ産生及び造血の抑制を伴う（非特許文献２）。化学療法は、ＭＭ患者に対する最も従来的な治療法である（非特許文献３）。しかしながら、化学療法の改善及び新薬物の導入にもかかわらず、ＭＭは未だに不治の病である。米国において、ＭＭは、悪性血液腫瘍に起因する死亡のほぼ１０％を占める（非特許文献４）。したがって、新たな化学療法剤の開発が、ＭＭ研究において継続的に試みられている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Kyle RA, Rajkumar SV. Multiple myeloma.N Engl J Med. 2004;351(18):1860-1873
【非特許文献２】Dvorak C. Common complaints, difficult diagnosis: multiple myeloma. J Am Acad Nurse Pract. 2006;18(5):190-194
【非特許文献３】Jagannath S, Kyle RA, Palumbo A, Siegel DS, Cunningham S, Berenson J. The current status and future of multiple myeloma in the clinic.Clin Lymphoma Myeloma Leuk;10(1):28-43
【非特許文献４】Jemal A, Siegel R, Ward E, Hao Y, Xu J, Thun MJ. Cancer statistics, 2009.CA Cancer J Clin.2009;59(4):225-249
【非特許文献５】Sasaki T, Takasuga S, Sasaki J, et al. Mammalian phosphoinositide kinases and phosphatases. Prog Lipid Res. 2009;48(6):307-343
【非特許文献６】Di Paolo G, De Camilli P. Phosphoinositides in cell regulation and membrane dynamics.Nature.2006;443(7112):651-657
【非特許文献７】Engelman JA, Luo J, Cantley LC. The evolution of phosphatidylinositol 3-kinases as regulators of growth and metabolism. Nat Rev Genet.2006;7(8):606-619
【非特許文献８】Bunney TD, Katan M. Phosphoinositide signalling in cancer: beyond PI3K and PTEN. Nat Rev Cancer;10(5):342-352
【非特許文献９】Engelman JA.Targeting PI3K signalling in cancer: opportunities, challenges and limitations. Nat Rev Cancer. 2009; 9(8):550-562
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【非特許文献１２】Hideshima T, Nakamura N, Chauhan D, Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in multiple myeloma. Oncogene.2001;20(42):5991-6000
【非特許文献１３】Descamps G, Pellat-Deceunynck C,Szpak Y,Bataille R,Robillard N,Amiot M.The magnitude of Akt/phosphatidylinositol 3’-kinase proliferating signaling is related to CD45 expression in human myeloma cells. J Immunol.2004;173(8):4953-4959
【非特許文献１４】Harvey RD, Lonial S. PI3 kinase/AKT pathway as a therapeutic target in multiple myeloma. Future Oncol.2007;3(6):639-647
【非特許文献１５】Martindale: The Complete Drug Reference,37th Edition, published by Pharmaceutical Press
【非特許文献１６】Holford, N.H.G. and Scheiner, L.B., Clin. Pharmacokinet. 6:429-453 (1981)
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【非特許文献１８】Chou,T.C. and Talalay,P., Adv. Enzyme Regul. 22:27-55(1984)
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【非特許文献２０】Zheng Y, Cai Z,Wang S,et al. Macrophages are an abundant component of myeloma microenvironment and protect myeloma cells from chemotherapy drug-induced apoptosis.Blood.2009;114(17):3625-3628
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【非特許文献２５】Mitsiades CS, McMillin DW,Klippel S,et al. The role of the bone marrow microenvironment in the pathophysiology of myeloma and its significance in the development of more effective therapies. Hematol Oncol Clin North Am.2007;21(6):1007-1034,vii-viii
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【非特許文献３０】Minn AJ, Kettlun CS, Liang H,et al. Bcl-xL regulates apoptosis by heterodimerization-dependent and -independent mechanisms. EMBO J.1999;18(3):632-643
【非特許文献３１】Kumar SK, Rajkumar SV, Dispenzieri A, et al. Improved survival in multiple myeloma and the impact of novel therapies. Blood.2008;111(5):2516-2520
【非特許文献３２】Pene F, Claessens YE, Muller O,et al. Role of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt and mTOR/P70S6-kinase pathways in the proliferation and apoptosis in multiple myeloma. Oncogene. 2002; 21(43): 6587-6597
【非特許文献３３】Hideshima T, Nakamura N, Chauhan D,Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in multiple myeloma. Oncogene.2001; 20(42):5991-6000
【非特許文献３４】Mitsiades CS,Mitsiades NS,McMullan CJ,et al. Inhibition of the insulin-like growth factor receptor-1 tyrosine kinase activity as a therapeutic strategy for multiple myeloma,other hematologic malignancies,and solid tumors. Cancer Cell.2004;5(3):221-230
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【非特許文献３７】Cirstea D,Hideshima T,Rodig S,et al. Dual inhibition of akt/mammalian target of rapamycin pathway by nanoparticle albumin-bound-rapamycin and perifosine induces antitumor activity in multiple myeloma. Mol Cancer Ther;9(4):963-975
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【非特許文献３９】Dalton WS. Drug resistance and drug development in multiple myeloma. Semin Oncol.2002;29(6 Suppl 17):21-25
【非特許文献４０】Hideshima T,Nakamura N,Chauhan D,Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in multiple myeloma.Oncogene.2001;20(42):5991-6000
【非特許文献４１】Kastritis E,Palumbo A,Dimopoulos MA.Treatment of relapsed/refractory multiple myeloma. Semin Hematol.2009;46(2):143-157
【非特許文献４２】Sasaki T,Takasuga S,Sasaki J,et al.Mammalian phosphoinositide kinases and phosphatases. Prog Lipid Res. 2009; 48(6):307-343
【非特許文献４３】Di Paolo G,De Camilli P.Phosphoinositides in cell regulation and membrane dynamics. Nature.2006;443(7112):651-657
【非特許文献４４】Ludwig H, Beksac M,Blade J,et al. Current multiple myeloma treatment strategies with novel agents:a European perspective. Oncologist;15(1):6-25
【発明の概要】
【０００５】
多発性骨髄腫に対する新たな化学療法治療の必要がある。
【０００６】
したがって、本明細書では、一態様において、対象が治療されるように、ある量の（１）化学式（Ｉ）の化合物、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、ある量の（２）デキサメタゾン、及び／又は薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法が提供される。別の態様において、本明細書では、対象が治療されるように、ある量の（１）化学式（Ｉ）の化合物とある量の（２）デキサメタゾンとを対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法が提供される。
【０００７】
本方法の一実施形態において、対象は、ヒトである。別の実施形態において、本治療は、該量の（１）と該量の（２）とを併用投与することを含む。なお別の実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、単一の製剤又は単位投与形態中にある。さらに別の実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、別々の製剤又は単位投与形態中にある。
【０００８】
別の実施形態において、本治療は、該量の（１）と該量の（２）とを実質的に同時に投与することを含む。なお別の実施形態において、本治療は、該量の（１）と該量の（２）とを異なる時間に投与することを含む。さらに別の実施形態において、該量の（１）及び／又は該量の（２）は、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効でないが、それらの量を組み合わせた場合に有効である投与量で投与される。
【０００９】
別の態様において、本明細書では、ある量の（１）化学式（Ｉ）の化合物、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、ある量の（２）デキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを含む薬学的製剤であって、（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効である、薬学的製剤が提供される。また、別の態様において、本明細書では、ある量の（１）化学式（Ｉ）の化合物とある量の（２）デキサメタゾンとを含む薬学的製剤であって、（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効である、薬学的製剤が提供される。
【００１０】
薬学的製剤の一実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、単一の薬剤又は単位投与形態中にある。別の実施形態において、この製剤又は単位投与形態は、経口製剤又は単位投与形態である。なお別の実施形態において、該量の（１）及び／又は該量の（２）は、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効ではないが、それらの量を組み合わせた場合に有効である。
【００１１】
別の態様において、（１）化学式（Ｉ）の化合物と（２）デキサメタゾンとを含む組成物が、本明細書で提供される。さらに別の態様において、化学式（Ｉ）の化合物とデキサメタゾンとからなる併用療法が、本明細書では提供される。併用療法の一実施形態において、併用療法は、多発性骨髄腫の治療のためのものである。
【００１２】
別の態様において、本明細書では、対象が治療されるように、ある量の（１）５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、ある量の（２）デキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法が提供される。なお、別の態様において、対象が治療されるように、ある量の（１）５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンと、ある量の（２）デキサメタゾンとを対象に投与することを含む、対象における多発性骨髄腫の治療方法が提供される。
【００１３】
本方法の一実施形態において、対象は、ヒトである。別の実施形態において、本治療法は、該量の（１）と該量の（２）とを併用投与することを含む。なお別の実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、単一の製剤又は単位投与形態中にある。さらに別の実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、別々の製剤又は単位投与形態中にある。
【００１４】
別の実施形態において、本治療法は、該量の（１）と該量の（２）とを実質的に同時に投与することを含む。別の実施形態において、本治療法は、該量の（１）と該量の（２）とを異なる時間に投与することを含む。さらに別の実施形態において、該量の（１）及び／又は該量の（２）は、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効でないが、それらの量を組み合わせた場合に有効である投与量で投与される。
【００１５】
別の態様において、ある量の（１）５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、ある量の（２）デキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、もしくはラセミ化合物とを含む薬学的製剤であって、（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効である、薬学的製剤が、本明細書では提供される。
【００１６】
なお別の態様において、ある量の（１）５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンとある量の（２）デキサメタゾンとを含む薬学的製剤であって、（１）と（２）とを組み合わせた量が、多発性骨髄腫の治療に有効である、薬学的製剤が、本明細書では提供される。
【００１７】
薬学的製剤の一実施形態において、該量の（１）と該量の（２）は、単一の製剤又は単位投与形態中にある。別の実施形態において、この製剤又は単位投与形態は、経口製剤又は単位投与形態である。なお別の実施形態において、該量の（１）及び／又は該量の（２）は、（１）及び（２）の一方又は両方が単独で投与される場合には有効でないが、それらの量を組み合わせた場合に有効である。
【００１８】
別の態様において、５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン及びデキサメタゾンを含む組成物が、本明細書に提供される。
【００１９】
さらに別の態様において、５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン及びデキサメタゾンを含む併用療法が、本明細書に提供される。併用療法の一実施形態において、組み合わせ療法は、多発性骨髄腫の治療のためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１Ａ】化合物ＡがＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスを誘導するが、正常なＰＢＭＣに対しては細胞毒性が限定的であることを示す。
【図１Ｂ】化合物ＡがＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスを誘導するが、正常なＰＢＭＣに対しては細胞毒性が限定的であることを示す。
【図１Ｃ】化合物ＡがＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスを誘導するが、正常なＰＢＭＣに対しては細胞毒性が限定的であることを示す。
【図１Ｄ】化合物ＡがＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスを誘導するが、正常なＰＢＭＣに対しては細胞毒性が限定的であることを示す。
【図１Ｅ】化合物ＡがＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスを誘導するが、正常なＰＢＭＣに対しては細胞毒性が限定的であることを示す。
【図２Ａ】ＢＭＳＣ又はＩＬ−６の存在は、化合物Ａによって誘導されるＭＭ細胞のアポトーシスを減衰しないことを示す。
【図２Ｂ】ＢＭＳＣ又はＩＬ−６の存在は、化合物Ａによって誘導されるＭＭ細胞のアポトーシスを減衰しないことを示す。
【図３Ａ】化合物Ａによる治療がＧ１期で細胞周期停止を引き起こすことを示す。
【図３Ｂ】化合物Ａによる治療がＧ１期で細胞周期停止を引き起こすことを示す。
【図４Ａ】化合物Ａが、ＭＭ細胞中の細胞内シグナリング及びカスパーゼ活性化を誘導したことを示す。
【図４Ｂ】化合物Ａが、ＭＭ細胞中の細胞内シグナリング及びカスパーゼ活性化を誘導したことを示す。
【図４Ｃ】化合物Ａが、ＭＭ細胞中の細胞内シグナリング及びカスパーゼ活性化を誘導したことを示す。
【図５Ａ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図５Ｂ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図５Ｃ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図５Ｄ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図５Ｅ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図５Ｆ】化合物Ａ及びデキサメタゾンが、相乗的な抗ＭＭ活性を有することを示す。
【図６Ａ】ＳＣＩＤマウスにおいて確立されているＭＭモデルにおける化合物Ａのインビボ治療効果を示す。
【図６Ｂ】ＳＣＩＤマウスにおいて確立されているＭＭモデルにおける化合物Ａのインビボ治療効果を示す。
【図６Ｃ】ＳＣＩＤマウスにおいて確立されているＭＭモデルにおける化合物Ａのインビボ治療効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
化学式（Ｉ）の化合物とデキサメタゾンの投与の併用は、対象における多発性骨髄腫の治療に対して驚くべき相乗的な効果を提供することが発見されている。化学式（Ｉ）の化合物の立体異性体、互変異性体、又は薬学的に許容される塩、及びデキサメタゾンの薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、又はラセミ化合物はまた、本明細書に開示される併用療法において使用することもできる。そのようなアプローチ（２つの種類の薬剤の組み合わせ又は併用投与）は、現在利用可能な療法に対して応答しないか、又はそれに対して耐性がある多発性骨髄腫を患っている個体を治療するのに特に有用であり、また、そのような療法に対して応答する個体に対する現在利用可能な多発性骨髄腫の療法の有効性を改善及び／又はその副作用を軽減するのに有用である。
【００２２】
本明細書に使用される特定の用語は、以下に説明されている。本発明の化合物は、正式名称を用いて説明されている。特に定義されない限り、本明細書に使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野における当業者により一般的に理解されるものと同一の意味を有する。
【００２３】
多発性骨髄腫を治療するための、治療剤の併用及び薬剤の併用投与方法が、本明細書で提供される。本明細書に使用されるように、「薬剤の併用」及び同様の用語は、２つの種類の薬剤、つまり、（１）化学式（Ｉ）の化合物及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、（２）デキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩との併用を指す。個々の薬剤の異性体又はラセミ混合物の使用もまた、提供される。デキサメタゾンの薬理学的に活性な代謝産物には、それ自体は不活性であるが、投与後の体内で薬理学的に活性のある形態に変換されるものが含まれる。
【００２４】
国際公開第０７／０８４７８６号には、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）等の脂質キナーゼの活性を阻害することが見出されている、ピリミジン誘導体が記載されている。本発明に適している特定のピリミジン誘導体、それらの調製物、及び同様の好適な薬学的製剤が、国際公開第０７／０８４７８６号において記載されている、式（Ｉ）の化合物
【００２５】
【化１】
2013542262.tif 000002
【００２６】
又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩を含み、式中、ＷはＣＲｗ又はＮであり、
Ｒｗは、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ハロゲン、
（４）メチル、
（５）トリフルオロメチル、
（６）スルホンアミドからなる群から選択され、
Ｒ１は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）置換及び非置換アルキル、
（６）置換及び非置換アルケニル、
（７）置換及び非置換アルキニル、
（８）置換及び非置換アリール、
（９）置換及び非置換ヘテロアリール、
（１０）置換及び非置換ヘテロシクリル、
（１１）置換及び非置換シクロアルキル、
（１２）−ＣＯＲ１ａ、
（１３）−ＣＯ２Ｒ１ａ、
（１４）−ＣＯＮＲ１ａＲ１ｂ、
（１５）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、
（１６）−ＮＲ１ａＣＯＲ１ｂ、
（１７）−ＮＲ１ａＳＯ２Ｒ１ｂ、
（１８）−ＯＣＯＲ１ａ、
（１９）−ＯＲ１ａ、
（２０）−ＳＲ１ａ、
（２１）−ＳＯＲ１ａ、
（２３）−ＳＯ２ＮＲ１ａＲ１ｂからなる群から選択され、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは独立して、
（ａ）水素、
（ｂ）置換又は非置換アルキル、
（ｃ）置換及び非置換アリール、
（ｄ）置換及び非置換ヘテロアリール、
（ｅ）置換及び非置換ヘテロシクリル、ならびに
（ｆ）置換及び非置換シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）ヒドロキシ、
（６）アミノ、
（７）置換及び非置換アルキル、
（８）−ＣＯＲ２ａ、ならびに
（９）−ＮＲ２ａＣＯＲ２ｂからなる群から選択され、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂは独立して、
（ａ）水素、ならびに
（ｂ）置換又は非置換アルキルからなる群から選択され、
Ｒ３は、
（１）水素、
（２）シアノ、
（３）ニトロ、
（４）ハロゲン、
（５）置換及び非置換アルキル、
（６）置換及び非置換アルケニル、
（７）置換及び非置換アルキニル、
（８）置換及び非置換アリール、
（９）置換及び非置換ヘテロアリール、
（１０）置換及び非置換ヘテロシクリル、
（１１）置換及び非置換シクロアルキル、
（１２）−ＣＯＲ３ａ、
（１４）−ＮＲ３ａＲ３ｂ、
（１３）−ＮＲ３ａＣＯＲ３ｂ、
（１５）−ＮＲ３ａＳＯ２Ｒ３ｂ、
（１６）−ＯＲ３ａ、
（１７）−ＳＲ３ａ、
（１８）−ＳＯＲ３ａ、
（１９）−ＳＯ２Ｒ３ａからなる群から選択され、
Ｒ３ａ及びＲ３ｂは独立して、
（ａ）水素、
（ｂ）置換又は非置換アルキル、
（ｃ）置換及び非置換アリール、
（ｄ）置換及び非置換ヘテロアリール、
（ｅ）置換及び非置換ヘテロシクリル、ならびに
（ｆ）置換及び非置換シクロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ４は、
（１）水素、及び
（２）ハロゲンからなる群から選択される。
【００２７】
本明細書に使用される「アルキル」という用語は、ヘテロ原子を含有しないアルキル基を指す。したがって、この語句は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル等の直鎖アルキル基を含む。この語句はまた、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を含み、例として提供されるものには、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）等が含まれるが、これらに限定されない。したがって、「アルキル基」という語句は、第１級アルキル基、第２級アルキル基、及び第３級アルキル基を含む。好ましいアルキル基は、１〜１２個の炭素原子又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝鎖アルキル基を含む。
【００２８】
「アルケニル」という用語は、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有することを除いては、上で定義されたアルキル基について記載されたもののような、２〜約２０個の炭素原子の直鎖、分枝、又は環状基を指す。例としては、ビニル、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）２、−Ｃ（ＣＨ３）＝Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、及びヘキサジエニル等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアルケニル基は、２〜１２個の炭素原子又は２〜６個の炭素原子を有する直鎖や分枝アルケニル基、ならびに環状アルケニル基を含む。
【００２９】
「アルキニル」という用語は、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有することを除いては、上で定義されたアルキル基について記載されたもののような、２〜約２０個の炭素原子の直鎖、分枝、又は環状基を指す。例としては、−Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｈ２）Ｃ≡Ｃ（Ｈ）、−Ｃ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、及びＣ（Ｈ）２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアルキニル基は、２〜１２個の炭素原子又は２〜６個の炭素原子を有する直鎖及び分枝アルキニル基を含む。
【００３０】
アルキル基、アルケニル基、及びアルキニル基は、置換されてもよい。「置換アルキル」とは、炭素又は水素との１つ以上の結合を非水素及び非炭素原子との結合によって置き換えられる、上記で定義されたアルキル基を指し、これには、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩ等のハロゲン原子；ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、及びエステル基のような基内の酸素原子；チオール基、アルキル及びアリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基及びスルホキシド基のような基内の硫黄原子；アミン、アミド、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミド、及びエナミンのような基内の窒素原子；トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、及びトリアリールシリル基のような基内のケイ素原子；ならびに種々の他の基内の他のヘテロ原子等が挙げられるが、これらに限定されない。置換アルキル基はまた、炭素原子又は水素原子との１つ以上の結合を、オキソ基、カルボニル基、カルボキシル基、及びエステル基内の酸素；イミン、オキシム、ヒドラゾン、及びニトリルのような基内の窒素等のヘテロ原子との高次結合（例えば、二重結合又は三重結合）で置き換えられる基を含む。置換アルキル基は、炭素又は水素原子との１つ以上の結合が、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基、又はシクロアルキル基と結合によって置き換えられるアルキル基をさらに含む。好ましい置換アルキル基には、とりわけ、炭素又は水素原子との１つ以上の結合が、フルオロ基、クロロ基、又はブロモ基との１つ以上の結合によって置き換えられるアルキル基が含まれる。別の好ましい置換アルキル基は、トリフルオロメチル基及びトリフルオロメチル基を含有する他のアルキル基である。他の好ましい置換アルキル基には、炭素又は水素原子との１つ以上の結合が、置換アルキル基がヒドロキシル基、アルコキシ基、又はアリールオキシ基を含有するような酸素原子との結合によって置き換えられるものが含まれる。他の好ましい置換アルキル基には、アミンを有するアルキル基、又は置換もしくは非置換アルキルアミン基、ジアルキルアミン基、アリールアミン基、（アルキル）（アリール）アミン基、ジアリールアミン基、ヘテロシクリルアミン基、ジヘテロシクリルアミン基、（アルキル）（ヘテロシクリル）アミン基、もしくは（アリール）（ヘテロシクリル）アミン基が含まれる。なお他の好ましい置換アルキル基には、炭素又は水素原子との１つ以上の結合が、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロシクリル基、又はシクロアルキル基との結合によって置き換えられるものが含まれる。置換アルキルの例は、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ３）、−（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＮＨ２、−ＣＯ２Ｈである。置換アルキルの置換基の例は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２，−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨＣＯＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−ＮＨＳＯ−２ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＳＯ２ＮＨ２、ハロである。
【００３１】
「置換アルケニル」という用語は、置換アルキル基が非置換アルキル基に関して有していた意味と同じ意味をアルケニル基に関して有する。置換アルケニル基は、非炭素又は非水素原子が別の炭素に二重結合している炭素に結合しているアルケニル基、及び非炭素又は非水素原子のうちの１つが別の炭素との二重結合に関与していない炭素に結合しているものを含む。
【００３２】
「置換アルキニル」という用語は、置換アルキル基が非置換アルキル基に関して有していた意味と同じ意味をアルキニル基に関して有する。置換アルキニル基は、非炭素又は非水素原子が別の炭素に三重結合している炭素に結合しているアルキニル基、及び非炭素又は非水素原子が別の炭素との三重結合に関与していない炭素に結合しているものを含む。
【００３３】
「アルコキシ」という用語は、ＲがアルキルであるＲＯ−を指す。アルコキシ基の代表例には、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシ等が挙げられる。
【００３４】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、クロロ、ブロモ、フルオロ、及びヨード基を指す。「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子で置換されるアルキルラジカルを指す。「ハロアルコキシ」という用語は、１つ以上のハロゲン原子で置換されるアルコキシラジカルを指す。
【００３５】
「アルコキシアルキル」という用語は、−ａｌｋ１−Ｏ−ａｌｋ２基を指し、ａｌｋ１はアルキル又はアルケニルであり、ａｌｋ２はアルキル又はアルケニルである。「アリールオキシアルキル」という用語は、−アルキルＯ−アリール基を指す。「アラルコキシアルキル」という用語は、−アルキルエニル−Ｏ−アラルキル基を指す。
【００３６】
「カルボニル」という用語は、二価基−Ｃ（Ｏ）−を指す。
【００３７】
「シクロアルキル」という用語は、単環式もしくは多環式の複素環式又は炭素環式アルキル置換基を指す。代表的なシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが含まれ、そのような環は、上記で定義されるような、直鎖及び分枝鎖アルキル基で置換される。典型的なシクロアルキル置換基は、３〜８個の骨格（即ち、環）原子を有し、それぞれの骨格原子は、炭素原子又はヘテロ原子のいずれかである。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、本明細書では、環状構造に、１〜５個、さらに典型的には、１〜４個のヘテロ原子を有するシクロアルキル置換基を指す。本発明の化合物で使用される好適なヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄である。代表的なヘテロシクロアルキル部分には、例えば、モルホリノ、ピペラジニル（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）、ピペラジニル（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｙｌ）等が含まれる。カルボシクロアルキル基は、すべての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。シクロアルキル置換基と関連して使用されるとき、「多環式」という用語は、本明細書では、縮合及び非縮合アルキル環式構造を指す。
【００３８】
「アリール」という用語は、３〜１４個の骨格炭素又はヘテロ原子を有する任意に置換される単環式及び多環式の芳香族基を指し、炭素環式アリール基及び複素環式アリール基の両方を含む。この用語は、例として、フェニル、ビフェニル、アントラセニル、ナフテニル等の基を指すが、これらに限定されない。炭素環式アリール基は、芳香環中のすべての環原子が炭素であるアリール基である。「ヘテロアリール」という用語は、本明細書では、芳香環中の環原子として１〜４個のヘテロ原子を有するアリール基を指し、その環原子の残りは炭素原子である。
【００３９】
「非置換アリール」という用語は、ナフタレン等の縮合環を含有する基を含む。トリル等のアリール基は、下に記載される置換アリール基であると本明細書において見なされるため、環員のうちの１つに結合しているアルキル基又はハロ基等の他の基を有するアリール基を含まない。好ましい非置換アリール基は、フェニルである。しかしながら、非置換アリール基は、親化合物の１つ以上の炭素原子、酸素原子、窒素原子、及び／又は硫黄原子に結合してもよい。
【００４０】
「置換アリール基」という用語は、置換アルキル基が非置換アルキル基に関して有していた意味と同じ意味を非置換アリール基に関して有する。しかしながら、置換アリール基はまた、芳香族炭素のうちの１つが上述の非炭素又は非水素原子のうちの１つに結合しているアリール基を含み、また、アリール基の１つ以上の芳香族炭素が、本明細書に定義される置換及び／又は非置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基に結合しているアリール基も含む。これには、縮合環系（例えばジヒドロナフチル又はテトラヒドロナフチル）を定義するためにアリール基の２個の炭素原子がアルキル基、アルケニル基、又はアルキニル基の２個の原子に結合している結合配置が含まれる。したがって、「置換アリール」という語句には、とりわけ、トリル及びヒドロキシフェニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
本明細書で使用される「置換ヘテロアリール」という用語は、本明細書に定義されたヘテロアリール基であって、それらが独立に１個、２個、又は３個の水素原子と、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、−ＯＨ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ、又はアリール、ハロアルキル、チオアルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、メルカプト、ニトロ、カルボアルデヒド、カルボキシ、アルコキシカルボニル、及びカルボキサミドで置換されたＣ１−Ｃ６−アルコキシとによって置換される、ヘテロアリール基を指す。加えて、いずれの置換基も、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクロアルキル基であってもよい。
【００４２】
本明細書に使用される「置換複素環」、「複素環式基」、「複素環」、又は「ヘテロシクリル」という用語は、窒素、酸素、硫黄から選択されるヘテロ原子を含有する任意の３もしくは４員環、又は窒素、酸素、硫黄からなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５もしくは６員環を指し、５員環は０〜２個の二重結合を有し、６員環は、０〜３個の二重結合を有し、窒素及び硫黄原子は、任意に酸化されてもよく、窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意に四級化されてもよく、上記複素環式環のいずれかがベンゼン環又は上記で定義された別の５もしくは６員の複素環式環に独立して縮合される、二環式基を含む。ヘテロシクリル基の例としては、限定されないが：ピロリル、ジヒドロピリジル、ピリニジル、ピラジニル、テトラゾリル、（例えば、１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈ−テトラゾリル）のような１〜４個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環；これらに限定されないが、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、キノリル、インダゾリルのような１〜４個の窒素原子を含有する縮合された不飽和の複素環式基；これらに限定されないが、オキサジアゾリル（例えば、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル）のような、１〜２個の酸素原子及び１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環；これに限定されないがモルホリニルのような、１〜２個の酸素原子及び１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員環；例えば、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル（例えば、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニル）等の１〜２個の酸素原子及び１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の縮合複素環式基；これらに限定されないが、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，−チアジアゾリル）のような、１〜３個の硫黄原子及び１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の３〜８員環；これに限定されないが、チアゾロジニルのような、１〜２個の硫黄原子及び１〜３個の窒素原子を含有する飽和の３〜８員環；これらに限定されないが、ジヒドロジチエニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピランのような、１〜２個の硫黄原子を含有する飽和及び不飽和の３〜８員環；これらに限定されないが、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル（例えば、２Ｈ−１，４−ベンゾチアジニル）、ジヒドロベンゾチアジニル（例えば、２Ｈ−３，４−ジヒドロベンゾチアジニル）のような、１〜２個の硫黄原子及び１〜３個の窒素原子を含有する不飽和の縮合複素環式環、これに限定されないフリルのような、１個の酸素原子を含有する不飽和の３〜８員環；ベンゾジオキソイル（例えば、１，３−ベンゾジオキソイル）等の、１〜２個の酸素原子を含有する不飽和の縮合複素環式環；これに限定されないが、ジヒドロオキサチエニル等の、１個の酸素原子及び１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和の３〜８員環；１，４−オキサチアン等の１〜２個の酸素原子及び１〜２個の硫黄原子を含有する飽和の３〜８員環；ベンゾジチエニル等の１〜２個の硫黄原子を含有する不飽和の縮合環；ベンゾオキサチエニル等の１個の酸素原子及び１〜２個の酸素原子を含有する不飽和の縮合複素環式環が挙げられる。好ましい複素環には、例えば、ジアザピニル、ピリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾイル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、Ｎ−メチルピペラジニル、アゼチジニル、Ｎ−メチルアゼチジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、フリル、チエニル、トリアゾリル、及びベンゾチエニルが含まれる。ヘテロシクリル基はまた、環中の１つ以上のＳ原子が、１個又は２個の酸素原子（スルホキシド及びスルホン）に二重結合している、上述のものも含む。例えば、ヘテロシクリル基には、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェンオキシド、及びテトラヒドロチオフェン１，１−ジオキシドが含まれる。好ましいヘテロシクリル基は、５又は６個の環員を含有する。より好ましいヘテロシクリル基には、ピペラジン、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、テトラゾール、チオモルホリン、ホモピペラジン、オキサゾリジン−２−オン、ピロリジン−２−オン、キヌクリジン、及びテトラヒドロフランが含まれる。
【００４３】
複素環式部分は、非置換であることができるし、あるいはヒドロキシ、ハロ、オキソ（Ｃ＝Ｏ）、アルキルイミノ（ＲＮ＝、Ｒはアルキル又はアルコキシ基である）、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノアルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、ポリアルコキシ、アルキル、シクロアルキル、又はハロアルキルから独立して選択される様々な置換基で単置換又は二置換することができる。「非置換ヘテロシクリル」には、ベンゾイミダゾリル等の縮合された複素環式環が含まれ、２−メチルベンゾイミダゾリル等の化合物が置換ヘテロシクリル基であるような、環員のうちの１つに結合しているアルキル又はハロ基等の他の基を有するヘテロシクリル基を含まない。
【００４４】
複素環式基は、本明細書の開示に関連して有機化学及び医薬品化学分野の当業者には明らかなように様々な位置で結合されてもよい。複素環式基の非制限的例はまた、以下のものも含み、
【化２】
2013542262.tif 000003
式中、Ｒは、Ｈ又は本明細書に記載されるような複素環式置換基である。
【００４５】
代表的な複素環には、例えば、イミダゾリル、ピリジル、ピペラジニル、アゼチジニル、チアゾリル、フラニル、トリアゾリル  ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、インドリル、ナフトピリジニル、インダゾリル、及びキノリジニルが含まれる。
【００４６】
「任意に置換される」又は「置換される」という用語は、１つ以上の一価又は二価ラジカルによる水素の置き換えを指す。好適な置換基には、例えば、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、スルホニル、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキサミジノ、メトキサミジノ、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、アルキル、置換アルキル、ハロアルキル、アルキルアミノ、ハロアルキルアミノ、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシ−アルキル、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキル−カルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキル、アリール、ベンジル、ピリジル、ピラゾリル、ピロール、チオフェン、イミダゾリル等が含まれる。
【００４７】
置換基は、それ自体、置換され得る。置換基上に置換される基は、カルボキシル、ハロ、ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒ、又はシクロアルキルであり得、Ｒは、典型的には、水素、ヒドロキシル、又はアルキルである。
【００４８】
置換された置換基が直鎖の基を含むとき、置換は、その鎖内で起こり得る（例えば、２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチル等）か、又は鎖の末端で起こり得る（例えば、２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピル等）。置換された置換基は、共有結合した炭素又はヘテロ原子の直鎖、分枝、又は環状の配置であることができる。
【００４９】
代表的な置換アミノカルボニル基には、例えば、以下に示されるものが含まれる。これらは、本明細書の開示に関連して有機化学及び医薬品化学分野の当業者には明らかなようにヘテロシクリル基及びヘテロアリール基によってさらに置換されることができる。好ましいアミノカルボニル基には、Ｎ−（２−シアノエチル）カルボキサミド、Ｎ−（３−メトキシプロピル）カルボキサミド、Ｎ−シクロプロピルカルボキサミド、Ｎ−（２−ヒドロキシ−イソプロピル）カルボキサミド、メチル２−カルボニルアミノ−３−ヒドロキシプロパン酸塩、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）カルボキサミド、Ｎ−（２−ヒドロキシ−イソプロピル）カルボキサミド、Ｎ−［２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エチル］カルボキサミド、Ｎ−（２−カルボニルアミノエチル）アセトアミド、Ｎ−（２−（２−ピリジル）エチル）カルボキサミド、Ｎ−（２−ピリジルメチル）カルボキサミド、Ｎ−（オキソラン−２−イルメチル）−カルボキサミド、Ｎ−（４−ヒドロキシピロリジン−２−イル）カルボキサミド、Ｎ−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル］−カルボキサミド、Ｎ−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）カルボキサミド、Ｎ−［２−（２−オキソ−４−イミダゾリニル）エチル］−カルボキサミド、Ｎ−（カルボニルアミノメチル）アセトアミド、Ｎ−（３−ピロリジニルプロピル）カルボキサミド、Ｎ−［１−（カルボニルアミノメチル）ピロリジン−３−イル］アセトアミド、Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−カルボキサミド、Ｎ−［３−（２−オキソピロリジニル）プロピル］カルボキサミド、４−メチル−２−オキソピペラジンカルバルデヒド、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ピロリジニルプロピル）カルボキサミド、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イルプロピル）カルボキサミド、Ｎ−｛２−［（５−シアノ−２−ピリジル）アミノ］エチル｝カルボキサミド、３−（ジメチル−アミノ）ピロリジンカルバルデヒド、Ｎ−［（５−メチルピラジン−２−イル）メチル］カルボキサミド、２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−（１−ホルミルピロリジン−３−イル）アセトアミド、
【化３】
2013542262.tif 000004
が含まれる。
【００５０】
代表的な置換アルコキシカルボニル基には、例えば、以下に示されるものが含まれる。これらのアルコキシカルボニル基は、本明細書の開示に関連して有機化学及び医薬品化学分野の当業者には明らかなようにさらに置換することができる。
【００５１】
代表的な置換アルコキシカルボニル基には、例えば、以下に示されるものが含まれる。これらのアルコキシカルボニル基は、本明細書の開示に関連して有機化学及び医薬品化学分野の当業者には明らかなようにさらに置換することができる。
【００５２】
【化４】
2013542262.tif 000005
【００５３】
「アミノ」という用語は、本明細書では、−ＮＨ２基を指す。「アルキルアミノ」という用語は、本明細書では、−ＮＲＲ’基を指し、ここで、Ｒはアルキルであり、Ｒ’は水素又はアルキルである。「アリールアミノ」という用語は、本明細書では、−ＮＲＲ’基を指し、ここで、はアルキルであり、Ｒ’は水素、アルキル、又はアリールである。「アラルキルアミノ」という用語は、本明細書では、−ＮＲＲ’基を指し、ここで、Ｒはアラルキルであり、Ｒ’は水素、アルキル、アリール、又はアラルキルである。
【００５４】
「アルコキシアルキルアミノ」という用語は、本明細書では、−ＮＲ−（アルコキシアルキル）基を指し、ここで、Ｒは、典型的には、水素、アラルキル、又はアルキルである。
【００５５】
「アミノカルボニル」という用語は、本明細書では、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２基を指す。「置換アミノカルボニル」という用語は、本明細書では、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’基を指し、ここで、Ｒはアルキルであり、Ｒ’は水素又はアルキルである。「アリールアミノカルボニル」という用語は、本明細書では、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’基を指し、ここで、Ｒはアリールであり、Ｒ’は水素、アルキル、又はアリールである。「アラルキルアミノカルボニル」という用語は、本明細書では、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’基を指し、ここで、Ｒはアラルキルであり、Ｒ’は水素、アルキル、アリール、又はアラルキルである。
【００５６】
「アミジノ」という用語は、Ｒ−Ｃ（＝Ｎ）−ＮＲ’−部分（このラジカルは「Ｎ１」窒素で存在する）及びＲ（ＮＲ’）Ｃ＝Ｎ−部分（このラジカルは「Ｎ２」窒素で存在する）を指し、ここで、Ｒ及びＲ’は、水素、アルキル、アリール、又はアラルキルであり得る。
【００５７】
好ましい実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物は、汎ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン（以下、「化合物Ａ」）である。
【００５８】
【化５】
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【００５９】
化合物Ａの合成は、国際公開第２００７／０８４７８６号の実施例１０において説明されており、これらの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００６０】
ＰＩ３Ｋは、細胞代謝において中心的役割を果たす（非特許文献５、６）。ＰＩ３Ｋは、成長因子、サイトカイン及びそれらの受容体と関連する他の刺激因子によって活性化される。活性化されたＰＩ３Ｋは、さらに、Ａｋｔ−ｍＴＯＲへのシグナリング伝達を開始し、細胞成長、増殖、及びアポトーシスの調節をもたらす（非特許文献７）。経路の異常調節は、様々な種類のヒト癌に広く見られる（非特許文献８，９）。特に、多発性骨髄腫（ＭＭ）において、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）及びインターロイキン−６（ＩＬ６）等の多くの骨髄腫増殖因子は、ＭＭ細胞上でそれらの受容体との相互作用時、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路を活性化し、ＭＭの増殖、生存、及び薬物耐性を促進する（非特許文献１０−１３）。したがって、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ阻害は、広範な抗ＭＭ活性を発揮することが期待されており、いくつかのＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ阻害化合物は、前臨床試験又は第Ｉ相及び第ＩＩ相試験下にある（非特許文献１４）。化合物Ａは、様々な腫瘍細胞株において顕著な細胞の増殖阻害及びアポトーシスの誘導を示し、現在、固形腫瘍患者において第Ｉ相臨床試験の研究がなされている。
【００６１】
デキサメタゾンは、（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）−９−フルオロ−１１，１７−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３，１６−トリメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オンと示される。それは、抗炎症及び免疫抑制活性を有する強力な合成グルココルチコイドステロイド薬物である。デキサメタゾンを使用して、リウマチ性関節炎等のある特定の炎症及び自己免疫状態を治療する。また、それを使用して、抗腫瘍治療から生じるある特定の副作用の影響を弱め、ある特定の血液学的悪性腫瘍においては化学療法剤としても使用される。例えば、非特許文献１５を参照のこと。
【００６２】
併用投与（例えば、化学式（Ｉ）の化合物とデキサメタゾンの併用、例えば、化合物Ａとデキサメタゾンの併用）は、単一の製剤又は単位投与形態中の併用投与、個々の薬剤の同時ではあるが別々の併用投与、あるいはいずれかの好適な経路による個々の薬剤の逐次的併用投与が含まれる。個々の薬剤の併用投与量は、併用する他の薬剤と比較して、複数の薬剤のうちの１つのより頻繁な投与を必要とする場合がある。したがって、適切な投与を可能にするために、梱包された製剤は、併用する薬剤を含有する１つ以上の投与形態、及び併用する薬剤のうちの１つを含有するが、併用する他の薬剤を含有しない１つ以上の投与形態を含有し得る。
【００６３】
薬剤は、化合物が異なる立体異性体の形態で存在することができるように、立体中心又は立体軸等の１つ以上の非対称要素、例えば、非対称炭素原子を含有してもよい。これらの化合物は、例えば、ラセミ化合物又は光学活性形態であり得る。２つ以上の非対称要素を持つ化合物については、これらの化合物はさらに、ジアステレオマーの混合物であり得る。非対称中心を有する化合物については、すべての光学異性体及びその混合物が包含されることが理解されるべきである。加えて、炭素−炭素二重結合を持つ化合物は、Ｚ型及びＥ型になることがあり、化合物のすべての異性体型は、本発明に含まれる。これらの状況においては、単一のエナンチオマー（光学活性体）は、非対称合成、光学的に純粋な前駆体からの合成、又はラセミ化合物の分解によって得ることができる。ラセミ化合物の分解はまた、例えば、分割剤の存在下での結晶化等の従来の方法、又は例えば、キラルＨＰＬＣカラムを用いたクロマトグラフィーによっても達成することができる。
【００６４】
他に特定されない限り、又は文脈で明らかに示されていない限り、本発明の併用療法に有用な化合物への言及は、本化合物の遊離塩基及び本化合物のすべての薬学的に許容される塩の両方が含まれる。
【００６５】
本明細書に使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明のピリミジン化合物の非毒性酸又はアルカリ土類金属塩を指す。これらの塩は、ピリミジン化合物の最終的な単離及び精製中にその場で調製することができるか、又はその塩基性もしくは酸性官能基を好適な有機もしくは無機の酸もしくは塩基と別々に反応させることによってその場で調製することができる。代表的な塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシルスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びウンデカン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、塩基性窒素含有基は、ハロゲン化アルキル、例えば塩化、臭化、及びヨウ化されたメチル、エチル、プロピル、及びブチル；硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、及び硫酸ジアミルのような硫酸ジアルキル、長鎖ハロゲン化物、例えば塩化、臭化、及びヨウ化されたデシル、ラウリル、ミリスチル、及びステアリル、臭化ベンジル及びフェネチルのようなハロゲン化アラルキル等の薬剤で四級化することができる。それにより、水溶性又は油溶性あるいは分散性の生成物が得られる。
【００６６】
薬学的に許容される酸付加塩を形成するのに使用され得る酸の例には、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸、及びリン酸のような無機酸、ならびにギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、及びアスパラギン酸及びグルタミン酸等の酸性アミノ酸のような有機酸が含まれる。
【００６７】
塩基付加塩は、ピリミジン化合物の最終的な単離及び精製中にその場で調製することができるか、あるいは薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは重炭酸塩等の好適な塩基、又はアンモニア、又は有機第１級、第２級、もしくは第３級アミンと、カルボン酸部分とを反応させることによって別々に調製することができる。薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属又はアルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアルミニウム塩等をベースとするカチオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等の無毒性のアンモニウム、第四級アンモニア、及びアミンカチオンが挙げられるが、これらに限定されない。塩基付加塩の形成において有用な他の代表的な有機アミンは、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ピリジン、ピコリン、トリエタノールアミン等、ならびにアルギニン、リジン、及びオルニチン等の塩基アミノ酸を含む。
【００６８】
本明細書に使用される「単一の製剤」という用語は、患者に対して有効量の治療剤の両方を送達するように配合された単一の担体又はビヒクルを指す。単一のビヒクルは、任意の薬学的に許容される担体又は賦形剤とともに有効量のそれぞれの薬剤を送達するように設計される。いくつかの実施形態において、ビヒクルは、錠剤、カプセル、丸薬、又はパッチである。他の実施形態において、ビヒクルは、溶液又は懸濁液である。
【００６９】
「単位用量」という用語は、本明細書では治療される患者への、ある投与形態中で両方の薬剤を一緒に同時投与する意味で使用される。いくつかの実施形態において、単位用量は、単一の製剤である。他の実施形態において、単位用量は、それぞれのビヒクルが薬学的に許容される担体及び賦形剤とともに有効量の少なくとも１つの薬剤を含むような１つ以上のビヒクルを含む。いくつかの実施形態において、単位用量は、同時に患者に投与される１つ以上の錠剤、カプセル、丸薬、又はパッチである。
【００７０】
本明細書に使用される「用量範囲」という用語は、特定される薬剤の量の許用量の上限及び下限を指す。典型的には、特定された範囲内の任意の量の薬剤の用量を、治療を受けている患者に投与することができる。
【００７１】
「治療」という用語は、対象において疾患の少なくとも１つの症状を和らげる、軽減する、又は緩和することを意味で本明細書では使用される。本発明の意味の範囲内で、「治療」という用語はまた、発病（即ち、疾患又は疾患の症状の臨床兆候前の期間）を停止する、遅延させる、及び／又は疾患の症状を発症もしくは悪化させる危険性を軽減することを意味する。
【００７２】
「対象」という用語は、動物を含むことが意図される。対象の例には、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びトランスジェニック非ヒト動物が含まれる。ある実施形態において、対象は、ヒト、例えば、多発性骨髄腫を患っている、患う危険性がある、又は潜在的に患うことが可能性のあるヒトである。
【００７３】
「約」又は「およそ」という用語は、通常、所与の値又は範囲の２０％以内、より好ましくは、１０％以内、さらに最も好ましくは５％以内を意味する。あるいは、特に生物系では「約」という用語は、おおよそ対数（即ち、大きさの次数）の範囲内、好ましくは所与の値の２倍以内を意味する。
【００７４】
本明細書に使用される「相乗的な効果」という用語は、例えば、多発性骨髄腫又はその症状の症候性進行を遅延させる効果であって、単独で投与されるそれぞれの薬物の単純な相加的な効果よりも大きい効果をもたらす、例えば、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａ、及びデキサメタゾン等の２つの薬剤の作用を指す。相乗的な効果は、好適な方法、例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ方程式（非特許文献１６）、Ｌｏｅｗｅ  ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙの方程式（非特許文献１７）、及びｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ方程式（非特許文献１８）を用いて計算することができる。上記のそれぞれの方程式を実験データに適用し、薬物の併用効果の評価に役立つ対応グラフを作成することができる。上記の方程式と関連する対応グラフは、それぞれ、濃度効果曲線、イソボログラム曲線、及び組み合わせ指数曲線である。
【００７５】
薬剤の組み合わせ（例えば、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａ、及びデキサメタゾン）の「有効量」は、併用により治療された抑うつ障害の臨床的に観察可能な基準値の兆候及び症状を超えた、観察可能な改善をもたらすのに十分な量である。
「経口投与形態」は、経口投与用に処方される、又は意図される単位投与形態を含む。
【００７６】
（治療方法）
本発明は、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａとデキサメタゾンとの組み合わせを個体に投与することによって、個体における多発性骨髄腫の治療方法を提供する。
【００７７】
本発明は、多発性骨髄腫の治療方法に関する。本明細書に使用される「骨髄腫」という用語は、骨髄中に通常見られる種類の細胞からなる腫瘍に関する。本明細書に使用される「多発性骨髄腫」という用語は、多発性骨髄腫瘍巣及びＭ成分（モノクローナル免疫グロブリンフラグメント）の分泌によって特徴付けられる血漿細胞の拡散性悪性新生物を意味し、これは骨疼痛、病的骨折、高カルシウム血症、及び正色素性正球性貧血をもたらす広範囲の溶骨性病変に関連する。多発性骨髄腫は、従来の高用量化学療法の使用によっては治癒しない。
【００７８】
いくつかの実施形態において、治療される対象（例えば、ヒト）は、１つ以上の多発性骨髄腫療法に対して非応答性又は耐性であると判断される。
【００７９】
多発性骨髄腫に罹患している個体に、有効量の化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａ、及びデキサメタゾンを投与することによって多発性骨髄腫を治療する方法が、本明細書に提供される。薬剤の併用量は、多発性骨髄腫を治療するのに有効である。薬剤の併用の相乗的な効果に留意することが重要であり、特定の投与量で単独で投与された１つ以上の薬剤が有効でない場合でさえ、それぞれの薬剤の同じ投与量で、組み合わせて投与されるときには、治療が有効である。したがって、併用における１つ以上の薬剤の用量は、ＦＤＡで承認されたそれぞれの薬剤の用量よりも少ないものであり得る。
【００８０】
（投与量）
多発性骨髄腫の治療のための薬剤の組み合わせの最適用量は、既知の方法を用いてそれぞれの個体に対して経験的に決定され得、それは、これらに限定されない、様々な要因によって異なるが、個々の疾患の進行の程度、年齢、体重、総合的な健康状態、性別、及び食事、投与時間、投与経路、ならびに個体が服用している他の医薬が挙げられる。最適投与量は、当該技術分野において公知である慣用的な試験及び手順を用いて確立され得る。例えば、デキサメタゾンの１日投与量は、０．２５ｍｇ〜９ｍｇ（例えば、０．２５、０．５、０．６、０．７５、２、又は４ｍｇ）であり得る。化学式（Ｉ）の化合物の１日投与量は、１０ｍｇ〜約２０００ｍｇであり得る。
【００８１】
単一の投与形態を生じるために担体材料と組み合わせてもよい薬剤の組み合わせの量は、治療される個体及び特定の投与の様式によって異なる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される薬剤の組み合わせを含む単位投与形態は、薬剤が単独で投与されるとき、一般的に投与される該量のそれぞれの薬剤の組み合わせを含む。
【００８２】
投与頻度は、使用される化合物及び治療又は予防されるべき特定の状態によって異なり得る。一般に、効果的な療法をもたらすのに十分である最小投与量の使用が、好ましい。当業者によく知られている治療又は予防されるべき状態に適しているアッセイを用いて、患者は治療有効性について全体的にモニタリングされてもよい。
【００８３】
投与形態は、薬物製剤の化学における当業者に容易に明らかである多様な従来の混合、粉砕、及び製造技術により調製することができる。
【００８４】
薬物の組み合わせ又は薬剤の組み合わせの個々の薬剤を含む経口投与形態は、カプセル、例えば、ゼラチンカプセル中に封入されたマイクロタブレットの形態であってもよい。このために、薬学的製剤に使用されるゼラチンカプセルは、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＣＡＰＳＵＧＥＬとして公知の硬質ゼラチンカプセル等を使用することができる。
【００８５】
本明細書において有用な経口投与形態の多くが、薬剤の組み合わせ又は薬剤の組み合わせの個々の薬剤を粒子の形態で含む。そのような粒子は、錠剤に圧縮されても、味覚遮蔽された投与形態、圧縮コーティングされた投与形態、もしくは腸溶性コーティングされた投与形態等のコーティングされた投与形態のコアエレメント中に存在しても、又はカプセル、浸透圧ポンプ投与形態、もしくは他の投与形態中に含有されてもよい。
【００８６】
本発明の薬物化合物（例えば、化学式（Ｉ）の化合物、特に化合物Ａ、及びデキサメタゾン）は、１００：１〜１：１００、より好ましくは１：１〜１：１００、及びなおより好ましくは１：１０〜１：１００の範囲の比で、本明細書に開示される組み合わせ、投与形態、薬学的組成物、及び薬学的製剤で存在する。
【００８７】
毒性がなく、有効性をもたらす薬物化合物の最適比、個々及び組み合わせた投与量、ならびに濃度は、標的部位に対する活性成分の有用性の反応速度論に基づき、当業者に既知の方法を用いて決定される。
【００８８】
（薬学的組成物）
本明細書に提供される薬学的組成物又は組み合わせ（例えば、化学式（Ｉ）の化合物、特に化合物Ａ、及びデキサメタゾン）は、臨床試験において試験され得る。好適な臨床試験は、例えば、増殖性疾患に罹患している患者における、非盲検用量漸増研究であり得る。そのような研究により、特に、本発明の組み合わせの活性成分についての相乗的効果が立証される。増殖性疾患に対する有効な効果は、当業者に既知の上記のこれらの研究の結果を通じて直接判定され得る。そのような研究は、特に、本発明の活性成分及び組み合わせを用いた単剤療法の効果と比較することが適切であり得る。一実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａの用量は、最大許容用量に達するまで漸増させ、デキサメタゾンを固定用量で投与する。あるいは、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａを固定用量で投与してもよく、デキサメタゾンを漸増させてもよい。それぞれの患者は、毎日又は間欠的のいずれかで、化学式（Ｉ）の化合物、例えば化合物Ａの投与を受けてもよい。そのような研究における治療の有効性は、例えば、１２、１８、又は２４週間後、６週間ごとに症状スコアを評価することによって判定することができる。
【００８９】
本発明の薬学的組み合わせの投与は、本発明の組み合わせに用いられる薬学的に活性な成分を１つのみ適用する単剤療法と比較して、例えば、症状の軽減、進行遅延、又は抑制に関する、相乗的な治療効果等の有効な効果だけでなく、例えば、副作用の減少、生活の質の改善、又は罹患率の低減等のさらに驚くべき有効な効果をもたらす可能性もある。
【００９０】
更なる利点は、本発明の組み合わせは低用量の活性成分を使用し得る可能性があり、例えば、これは、投与量の必要性を少なくするだけでなく、頻度を減らして適用することもでき、これにより、副作用の発生又は重症度が低減される場合がある。これは、治療される患者の希望及び要件によって決まる。
【００９１】
多発性骨髄腫をターゲッティング又は予防する点において、両方で治療的に有効であり得る量を含む薬学的組成物を提供することは、本発明の１つの目標である。この組成物では、化学式（Ｉ）の化合物及びデキサメタゾンは、一緒に、順々に、又は個別に、１つの組み合わせ単位投与形態又は２つの個々の単位投与形態で投与されてもよい。単位投与形態はまた、固定された組み合わせであってもよい。
【００９２】
両方の化合物の個別の投与のための、又は固定された組み合わせの投与のための、即ち、両方の化合物を含む単一の生薬（ｇａｌｅｎｉｃａｌ）組成物としての投与のための本発明による薬学的組成物は、それ自体が周知である方法で調製することができ、ヒトを含む哺乳動物（温血動物）への、経口又は直腸内等の経腸及び非経口投与に適切なものであり、治療有効量の、例えば、上記のような少なくとも１つの薬理的に活性な組み合わせパートナーを単独で、又は特に経腸又は非経口用途に適切な１つ以上の薬学的に許容される担体又は希釈剤と組み合わせて含む。
【００９３】
（製剤）
一実施形態において、薬学的組成物が本明細書に提供され、これは、対象が治療されるように、（１）化学式（Ｉ）の化合物、特に、化合物Ａ、及び／又はその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容される塩と、（２）デキサメタゾン及び／又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、代謝産物、又はラセミ化合物とを含み、成分（１）及び（２）のそれぞれが、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合して配合される。
【００９４】
本明細書に提供される薬物組み合わせは、薬学的製剤分野の当業者には明らかな様々な方法によって配合され得る。上記の様々な放出特性は、様々な異なる方法において達成され得る。好適な製剤は、例えば、錠剤、カプセル、圧縮コーティングされた製剤、及び他の容易に投与される製剤を含む。
【００９５】
好適な薬学的製剤は、例えば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の１つ又は複数の活性成分を含有してもよい。腸内又は非経口投与のための併用療法における薬学的製剤は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル、もしくは坐薬、又はアンプル等の単位投与形態中にあるものである。他に示されない場合、これらは、例えば、従来の混合、造粒、糖衣、溶解、又は凍結乾燥プロセスによって、それ自体が既知である様式において調製される。必要な有効量は、複数の投与量単位の投与によって達成されるため、それぞれの投与形態の個々の用量に含有される組み合わせパートナーの単位含量は、それ自体で有効量である必要はないことを理解されよう。
【００９６】
特に、治療有効量の、本発明の組み合わせのそれぞれの併用パートナーは、同時に又は順次任意の順序で投与されてもよく、これらの成分は、別々に又は固定された組み合わせとして投与されてもよい。例えば、本発明による多発性骨髄腫の治療方法は、同時に又は順次任意の順序で、両方で治療有効量、好ましくは相乗的に有効な量、例えば、毎日又は間欠的に本明細書に記載の量に対応した投与量での、（ｉ）遊離型又は薬学的に許容される塩の形態の第１の薬剤（ａ）の投与及び（ｉｉ）遊離型又は薬学的に許容される塩の形態の薬剤（ｂ）の投与を含んでもよい。本発明の組み合わせの個々の組み合わせパートナーは、分割された、又は単一の組み合わせ形態で治療過程の異なる時点で個別に又は同時に投与されてもよい。さらに、投与するという用語はまた、インビボで組み合わせパートナーそれ自体に変化する、組み合わせパートナーのプロドラッグの使用も包含する。したがって、本発明は、同時又は交互の治療のそのようなすべてのレジメンを包含するものとして理解されるべきであり、「投与する」という用語は、それに応じて解釈されるべきである。
【００９７】
本発明の組み合わせに使用される組み合わせパートナーのそれぞれの有効な投与量は、使用される特定の化合物又は薬学的組成物、投与様式、治療される状態、治療される状態の重症度に応じて変えてもよい。したがって、本発明の組み合わせの投与レジメンは、投与経路ならびに患者の腎機能及び肝機能を含む、様々な要因に従って選択される。通常の臨床医又は医師は、状態の進行を軽減、逆行、又は停止するのに必要とされる単一の活性成分の有効量を容易に決定及び処方することができる。
【００９８】
(実施例)
本発明は、以下の実施例によってさらに例示される。実施例は、更なる制限をするものと解釈されるべきではない。
【００９９】
（材料及び方法）
細胞株、原発性骨髄腫細胞、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、抗体、及び試薬
ＭＭ細胞株ＡＲＰ１、ＡＲＫ、ＭＭ．１Ｓ、ＭＭ．１Ｒ、及びＵ２６６は、３７℃及び５％  ＣＯ２で、１０％  胎仔血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中に維持された。初代ＭＭ細胞及びＭＭ  ＢＭＳＣは、骨髄腫患者の骨髄穿刺液から単離された。ＰＢＭＣは、健常な志願者から得られた。本研究は、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒで施設内治験審査委員会により承認された。抗カスパーゼ−３、カスパーゼ−９、ＰＡＲＰ、Ｂｉｍ、ＸＩＡＰ、サイクリンＤ１、ｐｐ７０Ｓ６Ｋ（Ｔｈｒ３８９）、及びｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇから購入された。抗−ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ａｋｔ、ｐＡｋｔ（Ｔｈｒ３０８）、ｐＡｋｔ（Ｓｅｒ４７３）、ｐ７０Ｓ６Ｋ、及びβ−アクチン抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚから購入された。化合物Ａは、貯蔵液として、１０ｍＭでＤＭＳＯ中に溶解された。デキサメタゾン及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入された。組み換えヒトＩＬ６は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入された。ＦＩＴＣ標識アネキシンＶは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得られた。
（５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミン（化合物Ａ）の調製）
ＮＭＰ（１４ｍＬ）中の２−モルホリノ−４，６−ジクロロピリミジン（２．０ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）のスラリーに、トリエチルアミン（１．４３ｍＬ、１０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。不均質混合物を１５分間撹拌し、次いで、モルホリン（０．７５ｍＬ、８．５４ｍｍｏｌ）を用いて処理した。アルゴン下で、８５℃で２時間還流時に、溶液を冷却し、次いで、ＥｔＯＡｃ（１６０ｍＬ）に添加した。有機溶液を２５ｍＬのＮａＨＣＯ３（飽和）（２回）、水（２回）、及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗材料を２００ｍＬのＥｔＯＡｃ中に溶解し、ＳｉＯ２パッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃでさらに溶出し、オフホワイトの固体として、２．２ｇ（９３％）の２，４−ジモルホリノ−６−クロロピリミジンを得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５．０（ＭＨ＋），１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ５．８６（ｓ，ＩＨ），３．７１−３．７６（ｍ，１２Ｈ），３．５２−３．５６（ｍ，４Ｈ）。
【０１００】
アルゴンガスを、１，２−ジメトキシエタン及び２Ｍ  Ｎａ２Ｃθ３（３：１）中の２，４−ジモルホリノ−６−クロロピリミジン（４．１ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）及び４−（トリフルオロメチル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリドム−２−アミン（１６．５ｇ、５７．３ｍｍｏｌ）の不均質混合物を通して、２０分間泡立てた。１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリド（２９２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を含有する高圧ガラス容器を密閉した。次いで、反応混合物を９０℃で１５時間加熱し、冷却し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈した。有機溶液を３００ｍＬの水：Ｎａ２ＣＯ３（飽和）：ＮＨ４ＯＨ（濃縮）＝５：４：１の混合物、次いで、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）、及びブライン（２回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗材料をＳｉＯ２クロマトグラフィー（０．１％  ＴＥＡを含む５０〜９０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、オフホワイトの固体として、５．６２ｇ（９５％）の５−（２，６−ジ−モルホリン−４−イル−ピリミジン−４−イル）−４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミンを得た。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．３（ＭＨ＋）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ８．２７（ｓ，ＩＨ），６．７８（ｓ，ＩＨ），５．９７（ｓ，ＩＨ），４．７７（ｂｓ，２Ｈ），３．５９−３．８０（ｍ，１２Ｈ），３．５８−３．６１（ｍ，４Ｈ）。
【０１０１】
（細胞増殖アッセイ）
多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株に対する化合物Ａの増殖阻害効果は、製造業者のプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従いＭＴＳアッセイによって評価された。要するに、ＭＭ細胞を、９６ウェルプレート中で１ウェル当たり５，０００細胞／１００μＬの培地の濃度で播種し、０〜１ｍＭの化合物Ａの最終濃度で２４又は７２時間処理した。アッセイの終了まで、２０μＬのＭＴＳ／ＰＭＳ溶液をそれぞれのウェル中の培養培地に添加した。次いで、プレートを、３７℃及び５％  ＣＯ２で４時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて、４９０ｎｍにおける吸光度を記録した。すべての実験を三回で行った。
【０１０２】
（アポトーシスアッセイ）
化合物Ａによって誘導された細胞のアポトーシスを、前述のように、アネキシンＶ結合アッセイによって検出した（非特許文献１９）。簡潔に言えば、ＭＭ細胞を、２４ウェルプレート中に培養し、０〜１ｍＭの化合物Ａの最終濃度で、２４又は７２時間処理した。細胞を冷却したＰＢＳで２回洗浄し、アネキシンＶ結合緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に再懸濁した。ＭＭ細胞は、室温で１５分間、ＦＩＴＣ標識アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した。アポトーシス細胞を、アネキシンＶ陽性細胞として判定した。
【０１０３】
（細胞周期分析）
ＭＭ細胞株ＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、１μＭの化合物Ａを用いて又は用いずに２４時間培養した。次いで、細胞を採取し、４℃で一晩、７０％  エタノール中で浸透処理し、５０μｇ／ｍＬのＰＩ及び２０μｇ／ｍＬのＲＮａｓｅ  Ａで１５分間インキュベートした。ＤＮＡ含有量を、フローサイトメトリー及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析した。
【０１０４】
（確立された多発性骨髄腫における化合物Ａのインビボ効果）
６〜８週齢の雌ＳＣＩＤマウスをＭＤ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒの動物研究施設に収容し、モニタリングした。すべての実験手順及びプロトコルは、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒにおける動物の飼育と使用に関する委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されている。ＳＣＩＤマウスは、５０μＬのＰＢＳ中に懸濁された１００万のＡＲＰ１細胞を右下腹部皮下に接種された。触診可能な腫瘍が発生した（腫瘍直径≧５ｍｍ）後、マウスはＰＢＳ又は化合物Ａ（５μｍｏｌ／ｋｇ／日）の腹腔内注入で毎日処置された。腫瘍の大きさは、５日ごとに測定され、血液試料は、同じ期間採取された。全身腫瘍組織量は、腫瘍の大きさを測定し、循環するヒトカッパ鎖を検出することによって評価された。
【０１０５】
（ＥＬＩＳＡ）
マウス血清中のヒトカッパ鎖のレベルは、定量ＥＬＩＳＡ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）によって製造供給元のプロトコルに従い測定された。
【０１０６】
（統計的分析）
すべてのデータを、平均±標準偏差として示す。スチューデントｔ検定を使用して、様々な実験群を比較した。Ｐ＜０．０５のとき、有意性があると決定された。
【０１０７】
（結果）
化合物Ａは、ＭＭ細胞株の増殖を阻害し、細胞のアポトーシスを誘導する。
骨髄腫細胞における化合物Ａの効果を評価するために、ＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＡＲＫ、ＭＭ．１Ｓ、ＭＭ．１Ｒ、及びＵ２６６は、異なる用量の化合物Ａを用いて２４時間又は７２時間処理された。化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスは、「材料及び方法」に記載されるように測定された。図１Ａに示されるように、化合物Ａは、用量依存的及び時間依存的の両方においてＭＭ細胞のアポトーシスを誘導した。異なるＭＭ細胞株は、化合物Ａに対して異なる感受性を有していた。Ｕ２６６は、他のＭＭ細胞株と比較して化合物Ａに対する感受性が低かった。１０μＭ以上の濃度での化合物Ａは、すべての試験したＭＭ細胞株において、２４時間でアポトーシスを有意に誘導した（Ｐ＜０．０５、対照との比較）。したがって、１０μＭの化合物Ａでの２４時間処理を、以下の実験において使用した。
【０１０８】
ＭＭ細胞増殖における化合物Ａの効果を、ＭＴＳアッセイによって試験した。図１Ｂに示されるように、化合物Ａでの処理は、すべての試験したＭＭ細胞株において用量依存的な増殖阻害をもたらした。化合物ＡのＩＣ５０（５０％  阻害する濃度）は、試験したＭＭ細胞において異なった。２４時間の処理で、ＡＲＰ１、ＡＲＫ、及びＭＭ．１Ｒに対するＩＣ５０は、１μＭ〜１０μＭであったが、ＭＭ．１Ｓに対するＩＣ５０は、１μＭ未満であり、Ｕ２６６に対するＩＣ５０は、１０μＭ〜１００μＭであった。要約すると、これらの所見は、化合物Ａの処理が、化合物Ａの用量依存的に、ＭＭ細胞に増殖阻害及びアポトーシスをもたらしたことを示す。
【０１０９】
（化合物Ａは、エクスビボで初代培養ＭＭ細胞のアポトーシスを誘導する。）
初代培養ＭＭ細胞中の化合物Ａ機能を評価するために、本研究は、骨髄腫患者から新たに単離されたＣＤ１３８＋初代培養ＭＭ細胞まで拡大された。これまでの知見によれば、初代培養ＭＭ細胞は、細胞がＢＭＳＣと共培養されない限り、エクスビボでアポトーシスを起こす（非特許文献２０）。したがって、ＣＤ１３８＋初代培養ＭＭ細胞を、ＭＭ骨髄穿刺から単離したＣＤ１３８−ＢＭＳＣを用いて、１：１の比で共培養した。細胞を、０〜１ｍＭの異なる用量の化合物Ａを用いて２４時間処理した。初代培養ＭＭ細胞及びＢＭＳＣは、ＡＰＣ−ＣＤ１３８染色によって分離された。調べられた３人の患者のうちの１人からの骨髄腫細胞及びＢＭＳＣから得た代表的なデータによって示されるように（図１Ｃ）、化合物Ａは、用量依存的に、初代培養ＭＭ細胞（ＣＤ１３８＋）のアポトーシスを誘導した。１０μＭの化合物Ａは、７０％を超える初代培養ＭＭ細胞のアポトーシスを誘導した。興味深いことに、化合物Ａは、ＣＤ１３８−間質細胞に対して有意に低い細胞毒性を示した。図１Ｄは、化合物Ａが３人の異なるＭＭ患者由来の初代培養ＭＭ細胞のアポトーシスを誘導したことを示す。合わせて考慮すると、これらのデータは、化合物Ａが初代培養ＭＭ細胞のアポトーシスを誘導するが、非腫瘍ＢＭＳＣに対しては低毒性を有することを示す。
【０１１０】
（化合物Ａは、健常な志願者の正常な血液細胞に対して低毒性を有する。）
化合物Ａが正常なＰＢＭＣにアポトーシスを誘導するかどうかを調べるために、異なる健常な志願者からの正常なＰＢＭＣを、０〜１ｍＭの化合物Ａを用いて２４時間インキュベートした。細胞のアポトーシス率は、上記のように測定された。図１Ｅに示されるように、化合物Ａは、正常なＰＢＭＣに対しては同等に低毒性を有した。ＭＭ細胞に対して有効な化合物Ａの濃度の１０μＭ又は１００μＭは、４０％未満のＰＢＭＣのアポトーシスをもたらしさなかった。したがって、これらの所見は、化合物Ａが休止中のＰＢＭＣに対して低毒性を有することを示す。
【０１１１】
（図１の説明）
（Ａ）０〜１ｍＭの化合物Ａの存在下で培養された５つのＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＡＲＫ、ＭＭ．１Ｓ、ＭＭ．１Ｒ、及びＵ２６６。細胞を、処理から１日又は３日後に採取した。化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスは、「材料及び方法」に記載されるように、アネキシンＶ染色によって測定された。（Ｂ）同じＭＭ細胞株は、０〜１ｍＭの化合物Ａを用いて１日又は３日間処理された。細胞増殖は、ＭＴＳアッセイによって評価された。（Ｃ）化合物Ａを用いて処理されたＭＭ初代培養細胞の代表的なヒストグラム。（Ｄ）３人の患者から新たに単離された初代培養ＭＭ細胞中のアポトーシスの用量依存的な誘導を示すデータ。細胞は、異なる用量の化合物Ａを用いて１日間処理された。（Ｅ）３人の健常な志願者から単離されたＰＢＭＣは、化合物Ａを用いて１日間処理された。
【０１１２】
（ＩＬ−６の添加又はＢＭＳＣの存在は、化合物Ａによって誘導されたアポトーシスからＭＭ細胞を保護しない。）
ＩＬ−６は、ＭＭにとって重要な生存サイトカインである（非特許文献２１、２２）。先行研究は、ＩＬ−６が化学療法剤のデキサメタゾン処理下でＭＭ細胞の生存を促進することを示している（非特許文献２３）。したがって、化合物Ａにより誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスのＩＬ６の添加による減衰が調べられた。この目的のために、異なるＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒが、組み換えｈＩＬ−６（最終濃度５μｇ／ｍＬ）を用いて又は用いずに培養され、１０μＭの化合物Ａを用いて又は用いずに２日間処理された。陽性対照として、ＭＭ．１Ｓ細胞が、同じ期間中、ｈＩＬ−６を添加する又は添加しない４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾンを用いて処理された。図２Ａに示されるように、ＩＬ６の添加は、化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスに影響を及ぼさなかったが、デキサメタゾン処理下でのＭＭ．１Ｓ細胞の生存を促進した。
【０１１３】
骨髄腫の腫瘍床における骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）が、腫瘍促進の微環境を提供し、化学療法薬によって誘導されるアポトーシスからＭＭ細胞を保護することを示す証拠が増大している（非特許文献２４、２５）。したがって、ＭＭ患者の骨髄からのＢＭＳＣが、化合物Ａによって誘導される細胞のアポトーシスからＭＭ細胞を保護することが可能であるかどうかについても検討された。この目的のために、ＭＭ患者から単離されたＢＭＳＣが、ＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒと共培養された。細胞は、１０μＭの化合物Ａを用いて又は用いずに２４時間処理された。陽性対照として、ＭＭ．１Ｓ細胞は、ＢＭＳＣと又はＢＭＳＣなしで共培養され、４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾンを用いて又は用いずに２４時間処理された。処理後、ＭＭ細胞は、ＡＰＣ−ＣＤ１３８染色によってＣＤ１３８＋細胞として特定された。図２Ｂに示されるように、ＢＭＳＣは、化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスを保護しなかったが、デキサメタゾンによって誘導される細胞のアポトーシスからＭＭ．１Ｓ細胞を保護した。
【０１１４】
（図２の説明）
（Ａ）ＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、１０μＭの化合物Ａを用いて３日間培養された。ｒｈＩＬ−６を、５ｎｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。陽性対照として、ＭＭ．１Ｓ細胞は、５ｎｇ／ｍＬのｒｈＩＬ６の存在下で、同じ時間、４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾンを用いて処理された。細胞のアポトーシス率は、アネキシンＶ染色によって測定された。（Ｂ）同じＭＭ細胞は、ＭＭのＢＭＳＣと又はＭＭのＢＭＳＣなしで共培養され、１０μＭの化合物Ａを用いて１日間処理された。陽性対照として、ＭＭ．１Ｓ細胞は、ＢＭＳＣと又はＢＭＳＣなしで共培養され、４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾンを用いて１日間処理された。ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞のアポトーシス率は、アネキシンＶ染色によって測定された。
【０１１５】
（化合物ＡはＧ１期における細胞周期停止を引き起こす）
化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞の増殖阻害及びアポトーシスの機構を研究するために、化合物Ａの処理がＭＭ細胞周期に影響を及ぼすかどうかを調べられた。図３Ａに示されるように、ＡＲＰ１細胞が、１μＭの化合物Ａを用いて又は用いずに２４時間培養された。化合物Ａの処理は、Ｇ１期細胞の増加及びＳ期細胞の減少をもたらした。同様の所見が、他のＭＭ細胞株のＭＭ．１Ｓ及びＭＭ．１Ｒにおいて観察された（図３Ｂ）。
【０１１６】
（図３の説明）
（Ａ）１μＭの化合物Ａを用いて１日間処理されたＡＲＰ１の代表的なヒストグラム。（Ｂ）ＭＭ細胞であるＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、１μＭの化合物Ａを用いて１日間処理された。細胞周期は、記載のように試験された。
【０１１７】
（化合物Ａは、カスパーゼの活性化によってＭＭ細胞のアポトーシスを引き起こす）
化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスを解明するために、化合物Ａを用いて又は用いずに２４時間処理されたＭＭ細胞株のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、ウェスタンブロット分析によって評価された。この結果は、カスパーゼ３及びカスパーゼ９の切断を示した（図４Ａ）。
【０１１８】
ＰＡＲＡ切断はまた、化合物Ａでの処理後の試験したすべての細胞株において検出された。概して、これらの所見は、化合物Ａでの処理がカスパーゼ活性化を介してＭＭ細胞のアポトーシスを誘導することを示す。
【０１１９】
（化合物Ａの曝露は、ＢｉｍＳの上方調節及びＸＩＡＰの下方調節をもたらす。）
ＭＭ細胞における化合物Ａの曝露によって影響を受けたシグナル経路をさらに分析するために、他の細胞シグナル分子にまで免疫ブロット法を拡大適用した。第１に、ＭＭ細胞中のＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路における化合物Ａの阻害効果が試験された。図４Ｂに示されるように、Ｔｈｒ４７３及びＳｅｒ３０８の両方でｐ−Ａｋｔが、化合物Ａでの処理後、下方調節された。全Ａｋｔレベルはまた、化合物Ａでの処理後、ＡＲＰ１及びＭＭ．１Ｒ細胞において減少した（図４Ｃ）。これは、恐らく、化合物Ａでの処理後、アポトーシス細胞が増加したためである。ｐ−Ｐ７０Ｓ６Ｋレベルはまた、化合物Ａでの処理後、試験したＭＭ細胞株において減少したが、全Ｐ７０Ｓ６Ｋの発現は、一定のままであった。そのような所見は、化合物ＡがＭＭ細胞においてＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路を阻害することを示す。
【０１２０】
第２に、化合物Ａでの処理がＧ１期において細胞周期停止を引き起こしたため、細胞周期調節因子の発現が試験された。図４Ｂに示されるように、細胞周期のリプレッサーｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質発現は、化合物Ａでの処理後、上方調節されたが、一方、サイクリンＤ１の発現は、下方調節された。
【０１２１】
次に、アポトーシス調節因子の発現が試験された。データは、細胞毒性を有するＢｉｍの小さいアイソフォーム、ＢｉｍＳが、化合物Ａでの処理後、上方調節されたことを示した。Ｂｉｍは、Ｂｃｌ−２ファミリーに属するプロアポトーシス因子である（非特許文献２６）。Ｂｉｍは、選択的スプライシングにより生成されるＢｉｍＥＬ、ＢｉｍＬ、及びＢｉｍＳの、３つの主なアイソフォームを有する。最も短いＢｉｍＳは、最も細胞毒性のあるアイソフォームである（非特許文献２７）。先行研究は、Ｂｉｍの転写が、ＰＩ３Ｋの下流エフェクターのフォークヘッド転写因子ＦＫＨＲ−Ｌ１によって調節されることを示している（非特許文献２８）。Ｂｉｍに加えて、ＸＩＡＰ及びＢｃｌ−ＸＬの両方は、抗アポトーシスタンパク質であり（非特許文献２９、３０）、発現は、化合物Ａでの処理後、下方調節された。したがって、化合物Ａによって誘導されたＭＭ細胞のアポトーシスは、細胞毒性のあるＢｉｍＳの上方調節、ならびに抗アポトーシスなＸＩＡＰ及びＢｃｌ−ＸＬの下方調節によって引き起こされ得る。
【０１２２】
（図４の説明）
（Ａ）ＭＭ細胞のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、１０μＭの化合物Ａを用いて又は用いずに１日間処理された。化合物Ａによって誘導されたカスパーゼ−３、カスパーゼ−９、及びＰＡＲＰの活性化及び切断を示す。（Ｂ）１０μＭの化合物Ａを用いて処理された同じＭＭ細胞が、ウェスタンブロット法のために溶解された。（Ｃ）ＲＰ１細胞は、１０μＭの化合物Ａを用いて１、６、１２、及び２４時間処理された。
【０１２３】
（ＭＭ細胞における化合物Ａ及びデキサメタゾンを併用処理の相乗的な細胞毒性）
化合物Ａが他のＭＭ化学療法剤との相乗的効果／相加的効果を有するかどうかを試験するために、ＡＲＰ１細胞は、メルファラン、デキサメタゾン、レナリドミド、及びボルテゾミブと組み合わせて化合物Ａを用いて処理された。図５Ａに示されるように、化合物Ａ及びデキサメタゾンを組み合わせた治療は、ＡＲＰ１細胞において、相乗的／相加的な細胞毒性を有した。次に、実験は、他のＭＭ細胞株まで拡大適用され、低い化合物Ａ（１μＭ）及びデキサメタゾン（４０μｇ／ｍＬ）を用いて処理された。図５Ｂに示されるように、低用量の化合物Ａ又はデキサメタゾンの単独では、限定的な細胞毒性のみを有したが、組み合わせた二重薬物治療は、デキサメタゾンに感受性がある細胞株のＡＲＰ１及びＭＭ．１Ｓにおいて、有意に細胞アポトーシスを誘導し、デキサメタゾンに耐性がある細胞ＭＭ．１Ｒにおいては、誘導しなかった。細胞増殖試験はまた、化合物Ａ及びデキサメタゾンがＭＭ．１Ｓ細胞の増殖を相乗的に阻害したことも示した（図５Ｃ）。
【０１２４】
相乗的な効果に対するそれぞれの薬物の最小用量を調べるために、ＭＭ．１Ｓ細胞は、異なる用量の化合物Ａ及びデキサメタゾンを用いて２４時間処理された。図５Ｄに示されるように、１μＭの化合物Ａが、相乗的な効果のために必要であったが、一方、わずか４０ｎｇ／ｍＬのデキサメタゾンで、細胞のアポトーシスを相乗的に刺激するのには十分であった。デキサメタゾンの投与量の増加は、細胞死亡率を増加させなかった。
【０１２５】
ＭＭ．１Ｓ細胞における相乗的な効果についての化合物Ａ及びデキサメタゾンの役割を解明するために、細胞は、順次薬物を用いて処理された。具体的には、ＭＭ．１Ｓ細胞は、１日目にデキサメタゾンを用いて処理され、２日目に化合物Ａでの処理に切り替えられるか、又はその逆で処理された。細胞のアポトーシス率は、２日目に、測定された。図５Ｅに示されるように、デキサメタゾンに続く化合物Ａの処理は、いかなる他の種類の処理よりも高いアポトーシス率をもたらした。
【０１２６】
最後に、相乗的な効果が免疫ブロット法によって試験された。図５Ｆに示されるように、化合物Ａ及びデキサメタゾンの共処理は、ＰＡＲＰの切断、Ｂｃｌ−２の切断、及びカスパーゼ３の活性化の増加をもたらした。これらの所見は、二重薬物での処理後、アポトーシスが増強されたことを示す。ＢｉｍＳの発現は、組み合わせ処理において上方調節され、これが相乗的な効果の原因であり得る。要約すると、これらの所見は、化合物Ａとデキサメタゾンとの組み合わせは、デキサメタゾンに感受性があるＭＭ細胞において相乗的な細胞毒性を有することを示す。
【０１２７】
（図５の説明）
（Ａ）ＡＲＰ１細胞は、１０μＭの化合物Ａ（ＢＫ）、１５ｎＭのメルファラン（Ｍｅ）、４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾン（Ｄｅ）、１００μＭのレナリドミド（Ｌｅ）、１０μＭのボルテゾミブ（ＢＴ）、又はそれらの組み合わせを用いて１日間処理された。細胞のアポトーシスが、記載のように測定された。（Ｂ）ＭＭ細胞のＡＲＰ１、ＭＭ．１Ｓ、及びＭＭ．１Ｒは、１μＭの化合物Ａ、４０μｇ／ｍＬのデキサメタゾン、又はそれらの組み合わせを用いて１日間処理された。細胞のアポトーシスが測定された。（Ｃ）同じＭＭ細胞株は、化合物Ａを用いて１日間処理され、細胞増殖は、ＭＴＳによって測定された。（Ｄ）ＭＭ．１Ｓ細胞は、異なる用量の化合物Ａ（１０ｎＭ、１００ｎＭ、及び１０００ｎＭ）、デキサメタゾン（４０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、及び４０００ｎｇ／ｍＬ）、又はそれらの組み合わせを用いて１日間処理された。細胞のアポトーシスが、アネキシンＶ染色によって測定された。（Ｅ）ＭＭ．１Ｓ細胞は、１μＭの化合物Ａ又は４μｇ／ｍＬのデキサメタゾンを用いて１日間処理された。次いで、細胞は、いったんＰＢＳを用いて洗浄され、１μＭの化合物Ａ又は４μｇ／ｍＬのデキサメタゾンのいずれかを含む第２の馴化培地にさらに２４時間切り替えられる。細胞のアポトーシス率が、アネキシンＶ染色によって測定された。（Ｆ）ＭＭ．１Ｓ細胞は、デキサメタゾン（４ｕｇ／ｍＬ）、化合物Ａ（１μＭ）、又は両方を用いて２４時間処理された。
【０１２８】
（確立されたＭＭにおける化合物Ａのインビボ効果）
インビボでの化合物Ａの抗ＭＭ効果を調べるために、ＳＣＩＤマウスにおけるヒトＭＭモデルが、「材料及び方法」に記載されるように確立された。触診可能な腫瘍（直径５ｍｍ以上）に成長したとき、マウス（群当たり１０匹）が、化合物Ａ（５μｍｏｌ／ｋｇ／日）又はビヒクル対照ＰＢＳの腹腔内投与を毎日受けた。図６Ａ及び６Ｂに示されるように、化合物Ａでの処理を受けたマウスは、対照マウスと比較して、有意に小さい腫瘍を有した。これは腫瘍体積（図６Ａ、Ｐ＜０．０５）及び循環するヒトカッパ鎖のレベル（図６Ｂ、Ｐ＜０．０５）によって測定された。加えて、化合物Ａでの処理は、担腫瘍マウスの生存を有意に延長した（図６Ｃ）。したがって、これらのデータは、インビボでの化合物Ａの抗ＭＭ能力を示す。
【０１２９】
（図６の説明）
ＳＣＩＤマウスは、１×１０６ＡＲＰ１細胞を用いて右下腹部皮下に接種した。触診可能な腫瘍（直径５ｍｍ以上）が成長してから３〜４週間後、マウス（群当たり１０匹）は、ＰＢＳ又は化合物Ａ（１００ｎｍｏｌ／マウス／日）の腹腔内投与により毎日処理された。腫瘍組織量は、（Ａ）腫瘍体積及び（Ｂ）ＥＬＳＡによって検出されたＳＣＩＤマウス血清中の循環するヒトカッパ鎖のレベル、ならびに（Ｃ）担腫瘍マウスの生存率として測定された。
【０１３０】
（考察）
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、未だに、わずか約５年の平均生存期間の不治の病である（非特許文献３１）。それゆえに、新たな治療剤がＭＭ治療において必要とされる。ＭＭにおけるＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路の過剰活性化が報告されている（非特許文献３２）。ＭＭにおける２つの主な増殖因子のＩＧＦ−１及びＩＬ６は、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ経路を活性化することによって、骨髄腫細胞の増殖及び薬物耐性を促進する（非特許文献３３、３４）。ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路の阻害剤のパネルは、インビトロ及びインビボの両方で抗ＭＭ活性を示すことが明らかにされている（非特許文献３５−３７）。それゆえに、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路標的療法は、ＭＭを治療する有望な方法である。
【０１３１】
本研究において、化合物Ａ、汎ＰＩ３Ｋ阻害剤の抗ＭＭ活性が示されている。化合物Ａでの処理は、用量依存的に、試験したすべてのＭＭ細胞株及び初代培養ＭＭ細胞において、細胞の増殖阻害及びアポトーシスの誘導をもたらす（図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、及び２Ａ）。化合物Ａは、正常なＰＢＭＣ又は非悪性ＢＭＳＣに対しては限定的な細胞毒性のみを有する（図１Ｃ、１Ｅ）。加えて、化合物Ａは、ＳＣＩＤマウスのＭＭモデルにおいてインビボで抗ＭＭ活性を示す。化合物Ａで処理したＭＭを担持するマウスは、腫瘍増殖が抑制され、生存が延長された（図６Ａ、６Ｂ、及び６Ｃ）。重要なことには、化合物Ａが誘導したＭＭの細胞毒性は、ＢＭＳＣ又はＩＬ−６の存在によってもたらされた薬物耐性を克服する（図２Ａ、２Ｂ）。先行研究は、ＭＭ骨髄中のＢＭＳＣがＭＭ薬物耐性において重要な役割を果たすことを示している（非特許文献３８、３９）。ＢＭＳＣを介した薬物耐性の一つのメカニズムは、ＢＭＳＣが薬物耐性因子ＩＬ−６を分泌し、化学療法によって誘導されたアポトーシスからＭＭ細胞を保護することである（非特許文献４０）。結果として、ＭＭ患者は、通常、治療中に、従来の化学療法剤に対して薬物耐性を生じ、薬物に対してさらに耐性がある再発性腫瘍を有する（非特許文献４１）。したがって、これらの所見は、化合物Ａが強力な抗ＭＭ活性を有し、従来の化学療法薬に対して耐性があるこれらのＭＭ患者に有効であることを示す。
【０１３２】
ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路のシグナル伝達及び下流エフェクターが、異なる癌細胞モデルにおいて研究されている。概して、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔの阻害は、細胞周期停止、細胞の増殖抑制及びアポトーシスをもたらす（非特許文献４２、４３）。
【０１３３】
開示される実験において、ＭＭ細胞株中のＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路における化合物Ａの阻害効果が示されている（図３Ｂ及び３Ｃ）。化合物Ａは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の上方調節及びサイクリンＤ１の下方調節によって、Ｇ１期でＭＭ細胞の細胞周期停止を引き起こす（図３Ａ、３Ｂ、及び４Ｂ）。加えて、化合物Ａの曝露は、アポトーシスＢｉｍＳ発現の上方調節及び抗アポトーシスＸＩＡＰ発現の下方調節をもたらし、これらの両方が、ＭＭ細胞のアポトーシスを引き起こし得る。
【０１３４】
これらの所見は、化合物Ａとデキサメタゾンとの組み合わせの相乗的な抗ＭＭ活性を示す（図５Ａ、５Ｂ）。この相乗的な効果は、デキサメタゾンに感受性がある細胞にのみあり、デキサメタゾンに耐性がある細胞にはない。さらに重要なことには、化合物Ａとデキサメタゾンとの併用は、低用量のそれぞれの薬物を用いるときでさえ、相乗的な効果を示す（図５Ｂ、５Ｄ）。加えて、デキサメタゾンの曝露後の化合物Ａでの治療の組み合わせは、デキサメタゾン又は化合物Ａのみでの治療と比較して、増強した抗ＭＭ活性も示す（図５Ｅ）。デキサメタゾンは、一般に単独で、又は他の化学療法薬と一緒に、ＭＭの治療において使用される（非特許文献４４）。デキサメタゾン使用の一般的なルールは、良好な反応を得る又は副作用を最小限に抑えるために必要とされる最小用量を与えることである。したがって、これらの所見は、化合物Ａとデキサメタゾンを組み合わせた治療が、ＭＭを治療するために有効、かつ毒性のより少ない方法であることを示す。デキサメタゾン治療を受けているＭＭ患者はまた、化合物Ａに切り替え後、利益を得る場合がある。これらの所見は、比較的低い投与量の化合物Ａ及びデキサメタゾンを用いた組み合わせ治療が、ＭＭを治療するために有用な方法であることを示す。
【０１３５】
要約すると、本開示は、インビトロ及びインビボで化合物Ａの抗ＭＭ活性を示す。化合物Ａの単独、又は他のＭＭ化学療法薬、特にデキサメタゾンとの併用は、ＭＭに対する有効な治療である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【国際調査報告】
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