(57)【要約】少なくとも１つの他の化学療法薬と組み合わせて葉酸-ビンカ複合体を有する上皮性腫瘍を処置するための方法および組成物であって、該腫瘍には卵巣、子宮内膜または非小細胞肺癌腫瘍（プラチナ抵抗性卵巣腫瘍およびプラチナ感受性卵巣腫瘍を含む）が含まれる、該方法および組成物について記載する。
2013542263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
EC145を患者に投与する工程;および、
微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を患者に投与する工程
を含む癌の処置方法であって、該EC145および該さらなる化学療法薬は無菌の容器またはパッケージ中である、該方法。
【請求項２】
該さらなる化学療法薬がタキサンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該さらなる化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
該癌が上皮癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
該上皮癌が、卵巣、子宮内膜、または非小細胞肺癌である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
該上皮癌が卵巣癌である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
該上皮癌が非小細胞肺癌である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
該さらなる化学療法薬を、化学療法薬に対する最大耐量の50〜80％である用量にて投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
該EC145および該化学療法薬を治療上有効な量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
T該有効量が体表面積について約1 μg/m2〜約500 mg/m2の範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
該有効量が体表面積について約1 μg/m2〜約300 mg/m2の範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
該有効量が患者の体重について約10 μg/kg〜約100 μg/kgの範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
該癌がプラチナ抵抗性卵巣癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
該EC145および該さらなる化学療法薬が重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
該EC145および該さらなる化学療法薬をそれらの最大耐量よりも低い用量で投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有するキット。
【請求項２１】
該さらなる化学療法薬がタキサンである、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
該さらなる化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、請求項２２に記載のキット。
【請求項２５】
該EC145および該化学療法薬が治療上有効な量である、請求項２０に記載のキット。
【請求項２６】
該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌の容器またはパッケージ中である、請求項２０に記載のキット。
【請求項２７】
該EC145および該さらなる化学療法薬が重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度である、請求項２０に記載のキット。
【請求項２８】
該EC145および該さらなる化学療法薬が重量パーセントに基づいて少なくとも95％の純度である、請求項２０に記載のキット。
【請求項２９】
該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、請求項２０に記載のキット。
【請求項３０】
該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、請求項２０に記載のキット。
【請求項３１】
用量のEC145を、3週サイクルの療法のうちの1週および2週の間、週に2日、静脈内ボーラス注入で患者に投与する段階;および、
1用量のドセタキセルを、3週サイクルの療法のうちの第1日に1時間にわたって患者に投与する段階
を含む、非小細胞肺癌の処置方法。
【請求項３２】
該EC145の用量が2.5 mgである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
該ドセタキセルの用量が体表面積について75 mg/m2である、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、35 U.S.C. § 119(e)の下において、米国仮出願第61/413,275号の優先権を主張し、引用によりその全般が本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、少なくとも1つのタキサンと組み合わせて葉酸-ビンカ複合体を用いる、癌の処置のための方法および組成物に関する。本発明には、腫瘍（卵巣、子宮内膜もしくは非小細胞肺癌を含む）の処置のための方法および組成物が含まれる。
【背景技術】
【０００３】
（背景および概要）
抗癌テクノロジー（anti-cancer technology）（例えば、放射線療法、化学療法およびホルモン療法）における著しい進展にもかかわらず、米国において、癌は依然として心疾患に次ぐ死因の第2位である。ほとんどの場合、癌は高い効力の薬剤（例えば、マイトマイシン、パクリタキセルおよびカンプトテシン）を用いた化学療法で処置される。多くの場合、これらの化学療法薬は用量反応性の効果を示し、細胞の死滅は薬剤の用量に比例している。従って、新生物を根絶させるためには非常に積極的な投薬が必要とされる。しかしながら、高用量の化学療法は、癌細胞に対する選択性の乏しさおよび正常細胞に対する強い毒性によって妨害される。腫瘍特異的処置の欠如は、現在の化学療法によって克服される必要がある多くのハードルのうちの1つである。
【０００４】
現在の化学療法の制限に対する1つの解決法は、生物学的に有効な濃度の抗癌剤を腫瘍組織に非常に高い特異性で送達させることである。この目標に到達するように、抗癌剤を、ホルモン、抗体、もしくはビタミンのようなリガンドと結合させることによって腫瘍選択的薬剤を開発するための多くの努力がなされている。例えば、低分子量のビタミン化合物である葉酸が、腫瘍-標的薬剤として有用である。
【０００５】
現在の化学療法の制限を克服するための別のアプローチは、腫瘍-標的薬剤と1個以上の化学療法薬を組み合わせたものを送達させることである（ここで、該腫瘍-標的薬剤と該化学療法薬の毒性プロファイルは異なる）。このアプローチのさらなる改変は、腫瘍-標的薬剤および化学療法薬を、腫瘍-標的薬剤もしくは化学療法薬がのみで処置に用いられる場合に典型的に用いられるよりも低い各々の量で組み合わせた療法として用いることである。
【０００６】
葉酸は、ビタミンB群の一員であり、核酸およびアミノ酸の生合成に関与することによって、細胞生存において重要な役割を果たす。この必須ビタミンはまた、葉酸受容体(FR)-陽性癌細胞を標的にすることによって、結合した抗癌剤の選択性を高める、高親和性リガンドでもある。FR（腫瘍関連グリコシルホスファチジルイノシトールアンカー型タンパク質）は、受容体媒介エンドサイトーシスを介して、結合した葉酸および葉酸結合化合物を積極的に内部移行させることができる。90％以上の非粘液性卵巣癌において、FRが上方制御されることが分かっている。FRはまた、腎臓、脳、肺、および乳癌において高〜中レベルで認められる一方、ほとんどの正常組織においては低いレベルで生じる。FR密度はまた、癌のステージがより進行するにつれて増加するようである。
【０００７】
葉酸-標的薬剤が開発されており、癌治療として臨床試験中である。EC145は、葉酸に結合した、高い効力のビンカアルカロイド細胞傷害性化学療法薬であるデスアセチルビンブラスチンヒドラジド(DAVLBH)を含有する。EC145分子は、上皮性腫瘍（非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巣、子宮内膜および腎癌を含む）、およびその他（卵管および原発性腹膜癌を含む）の表面において高レベルで結合した葉酸受容体を標的とする。理論により制限されるものではないが、EC145は葉酸受容体を発現する腫瘍に結合して、正常細胞を避けながら、癌細胞に直接的にビンカ部分を送達すると考えられている。結合すると、EC145はエンドサイトーシスを介して癌細胞に入り、DAVLBHを放出し、細胞分裂に必要な有糸分裂アセンブリーの形成を阻害することにより、細胞死を引き起こす。EC145は、CAS登録番号（Chemical Abstracts Registry Number） 742092-03-1であり、以下の式で表される。
【化１】
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【０００８】
本明細書において用いられる用語EC145は、処置の方法、使用、組成物、医薬組成物、キット、または組み合わせとの関連において、上記で示される通り、化学療法薬またはその医薬的に許容される塩を意味し、該化学療法薬は、液体もしくは懸濁液中に電離型（プロトン化形態を含む）で存在していてよい。EC145は、例えば、PCT/US11/037134（引用により本明細書に援用される）に記載の方法により合成され得る。EC145は、本明細書において用語「複合体」と互換的に用いられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、少なくとも1つのタキサンと組み合わせて葉酸-ビンカ複合体を用いる、癌の処置のための方法および組成物に関する。本発明には、腫瘍（卵巣、子宮内膜もしくは非小細胞肺癌を含む）の処置のための方法および組成物が含まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一実施態様において、癌の処置方法を提供する。該方法は、EC145を、微小管分解阻害または有糸分裂阻害から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせて投与することを含む。
【００１１】
別の実施態様において、該1個以上の化学療法薬がドセタキセル(例えば、タキソテール（商標）)およびパクリタキセル(例えば、タキソール（商標）またはアブラキサン（商標）)からなる群から選択される、前述の方法を記載する。
【００１２】
別の実施態様において、葉酸受容体発現癌細の処置のための、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせたEC145の使用について記載する。
【００１３】
別の実施態様において、該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、上記の使用を提供する。
【００１４】
別の実施態様において、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせた葉酸受容体発現癌細胞の処置のための医薬の製造におけるEC145の使用について記載する。
【００１５】
別の実施態様において、1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、医薬の製造における使用について記載する。
【００１６】
別の実施態様において、EC145、ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する、医薬組成物または組み合わせについて記載する。
【００１７】
別の実施態様において、該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、前述の実施態様に記載される医薬組成物または組み合わせについて記載する。
【００１８】
別の実施態様において、癌を処置するための、EC145ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する組成物について記載する。
【００１９】
別の実施態様において、該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、前述の実施態様に記載される組成物について記載する。
【００２０】
本発明のいくつかの実施態様を、以下に列挙する項により説明する。
1.  EC145を、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせて投与する段階を含む、癌の処置のための方法。
2.  該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第1項に記載の方法。
3.  該化学療法薬がドセタキセルである、第1または2項に記載の方法。
4.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第1または2項に記載の方法。
5.  葉酸受容体発現癌細胞の処置のための、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせた、EC145の使用。
6.  該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第5項に記載の使用。
7.  該化学療法薬がドセタキセルである、第5または6項に記載の使用。
8.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第5または6項に記載の使用。
9.  葉酸受容体発現癌細胞の処置のための、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせた、医薬の製造のためのEC145の使用。
10.  該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第9項に記載の使用。
11.  該化学療法薬がドセタキセルである、第9または10項に記載の使用。
12.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第9または10項に記載の使用。
13.  該葉酸受容体発現細胞が上皮性腫瘍細胞である、前述の項のいずれか1つに記載の方法または使用。
14.  該上皮性腫瘍が、卵巣、子宮内膜もしくは非小細胞肺腫瘍である、第13項に記載の方法または使用。
15.  葉酸受容体発現上皮性腫瘍が、卵巣腫瘍である、第13〜14項のいずれか1つに記載の方法または使用。
16.  該腫瘍が原発性腫瘍である、第13〜15項のいずれか1つに記載の方法または使用。
17.  該腫瘍が転移性腫瘍である、第13〜15項のいずれか1つに記載の方法または使用。
18.  該化学療法薬を、該化学療法薬に対する最大耐量の50〜80％である用量で投与する、前述の項のいずれか1つに記載の方法または使用。
19.  EC145、ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する、医薬組成物。
20.  該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第19項に記載の組成物。
21.  該化学療法薬がドセタキセルである、第19または20項に記載の組成物。
22.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第19または20項に記載の組成物。
23.  癌を処置するための、EC145、ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する、組成物。
24.  該1個以上の化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第23項に記載の組成物。
25.  該化学療法薬がドセタキセルである、第23または24項に記載の組成物。
26.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第23または24項に記載の組成物。
27.  該EC145または該化学療法薬が非経口剤形である、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
28.  該剤形が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内（くも膜下腔内）用からなる群から選択される、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
29.  該EC145または該化学療法薬が組成物であって、該組成物が医薬的に許容される担体をさらに含有する、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
30.  医薬的に許容される担体が液体担体である、第29項に記載の組成物、方法、または使用。
31.  該液体担体が、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第30項に記載の組成物、方法、または使用。
32.  該EC145または該化学療法薬を治療上有効な量で投与する、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
33.  該有効量が、kg体重あたり約1 ng〜約1 mgの範囲である、第32項に記載の組成物、方法、または使用。
34.  該有効量が、kg体重あたり約100 ng〜約500 μgの範囲である、第33項に記載の組成物、方法、または使用。
35.  該有効量が、kg体重あたり約100 ng〜約50 μgの範囲である、第34項に記載の組成物、方法、または使用。
36.  該腫瘍がプラチナ抵抗性卵巣腫瘍である、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
37.  EC145を患者に投与する段階;および、
微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を患者に投与する段階、
を含む、癌の処置のための方法。
38.  葉酸受容体発現癌細胞の処置のための、微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬と組み合わせたEC145の使用。
39.  微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬と組み合わせた、葉酸受容体発現癌細胞の処置のための医薬の製造におけるEC145の使用。
40.  該さらなる化学療法薬がタキサンである、第37〜39項のいずれか1つに記載の方法または使用。
41.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第37〜40項のいずれか1つに記載の方法または使用。
42.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、第37〜41項のいずれか1つに記載の方法または使用。
43.  該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、第37〜41項のいずれか1つに記載の方法または使用。
44.  該葉酸受容体発現細胞が上皮性腫瘍細胞である、第38〜43項のいずれか1つに記載の使用。
45.  該上皮性腫瘍が卵巣、子宮内膜、または非小細胞肺腫瘍である、第44項に記載の使用。
46.  該葉酸受容体発現上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、第45項に記載の使用。
47.  該葉酸受容体発現上皮性腫瘍が非小細胞肺腫瘍である、第45項に記載の使用。
48.  該癌が上皮癌である、第37もしくは40〜43項のいずれか1つに記載の方法。
49.  該上皮癌が卵巣、子宮内膜、または非小細胞肺癌である、第48項に記載の方法。
50.  該上皮癌が卵巣癌である、第49項に記載の方法。
51.  該上皮癌が非小細胞肺癌である、第49項に記載の方法。
52.  該癌もしくは該癌細胞が原発性腫瘍を含む、第37〜51項のいずれか1つに記載の方法または使用。
53.  該癌もしくは該癌細胞が転移性腫瘍細胞を含む、第37〜51項のいずれか1つに記載の方法または使用。
54.  該さらなる化学療法薬を、化学療法薬に対する最大耐量の50〜80％である用量で投与する、第37〜53項のいずれか1つに記載の方法または使用。
55.  該EC145および該さらなる化学療法薬が非経口剤形である、第37〜54項のいずれか1つに記載の方法または使用。
56.  該剤形が、独立して、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内用からなる群から選択される、第55項に記載の方法または使用。
57.  該EC145が組成物であって、該さらなる化学療法薬が組成物であって、そして該組成物が医薬的に許容される担体をさらに含有する、第37〜56項のいずれか1つに記載の方法または使用。
58.  該医薬的に許容される担体が液体担体である、第57項に記載の方法または使用。
59.  該液体担体が、独立して、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第58項に記載の方法または使用。
60.  該EC145および該化学療法薬を治療上有効な量で投与する、第37〜59項のいずれか1つに記載の方法または使用。
61.  該有効量が体表面積について約1 μg/m2〜約500 mg/m2の範囲である、第60項に記載の方法または使用。
62.  該有効量が体表面積について1 μg/m2〜約300 mg/m2の範囲である、第61項に記載の方法または使用。
63.  該有効量が患者に体重について約10 μg/kg〜約100 μg/kgの範囲である、第60項に記載の方法または使用。
64.  該癌がプラチナ抵抗性卵巣癌である、第50項に記載の方法。
65.  該腫瘍がプラチナ抵抗性卵巣腫瘍である、第46項に記載の使用。
66.  該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌の容器またはパッケージ中である、第37〜65項のいずれか1つに記載の方法または使用。
67.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度を有する、第37〜66項のいずれか1つに記載の方法または使用。
68.  該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、第37〜67項のいずれか1つに記載の方法または使用。
69.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、第37〜68項のいずれか1つに記載の方法または使用。
70.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有する組成物または組み合わせ。
71.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有する、癌を処置するための組成物または組み合わせ。
72.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有するキット。
73.  該さらなる化学療法薬がタキサンである、第70〜72項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
74.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第70〜73項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
75.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、第70〜74項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
76.  該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、第70〜74項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
77.  該EC145および該さらなる化学療法薬が非経口剤形である、第70〜76項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
78.  該剤形が、独立して、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内用からなる群から選択される、第77項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
79.  該EC145および該さらなる化学療法薬が医薬組成物であって、該組成物が医薬的に許容される担体をさらに含有する、第70〜78項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
80.  該医薬的に許容される担体が液体担体である、第79項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
81.  該液体担体が、独立して、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第80項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
82.  該EC145および該化学療法薬が治療上有効な量である、第70〜81項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
83.  該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌の容器またはパッケージ中である、第70〜82項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
84.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度を有する、第70〜83項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
85.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも95％の純度を有する、第70〜83項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
86.  該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、第70〜85項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
87.  該EC145およびさらなる化学療法薬が、無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、第70〜86項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
88.  該EC145および/または該さらなる化学療法薬をそれらの最大耐量より低い用量で投与する、第37〜59項のいずれか1つに記載の方法または使用。
89.  3週サイクルの療法の1および2週の間、週に2日、1用量のEC145を静脈内ボーラス注入で患者に投与する段階;および、
3週サイクルの療法の第1日目に1時間にわたって1用量のドセタキセルを患者に投与する段階
を含む、非小細胞肺癌の処置の方法。
90.  EC145の用量が2.5 mgである、第89項に記載の方法。
91.  ドセタキセルの用量が体表面積について75 mg/m2である、第89または90項に記載の方法。
92.  該EC145が凍結乾燥物の形態である、第70〜85項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、もしくはキットまたは第37〜67項のいずれか1つに記載の方法または使用。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】(a)未処置;あるいは、(b)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(144−212 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した、腫瘍体積(各処置群における5動物の平均)。EC145のみで処置した結果は、0 部分奏効、0 完全奏効、および1 治癒であった。ドセタキセルのみで処置した結果は、部分奏効も、完全奏効も、治癒も認められなかった。組み合わせで処置した結果は、5 治癒であった。
【図２】(a)未処置;あるいは、(b)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(144−212 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した重量変化率(各処置群における5動物の平均)。
【図３】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)アブラキサン(すなわち、アルブミン結合形態のパクリタキセル)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋アブラキサン(パクリタキセル相当物)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(103−173 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した腫瘍体積(各処置群における5動物の平均)。EC145のみで処置した結果は、0 部分奏効、0 完全奏効、および0 治癒であった。アブラキサンのみで処置した結果は、1 部分奏効、2 完全奏効、および2 治癒であった。組み合わせで処置した結果は、2 完全奏効および3 治癒であった。
【図４】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)アブラキサン(パクリタキセル相当物)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋アブラキサン(パクリタキセル相当物)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(92−185 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した重量変化率(各処置群における5動物の平均)。
【図５】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)パクリタキセル（20 mg/kgにて, クレモフォール/エタノールにおいてTIWで1週間）か、もしくは(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋クレモフォール/エタノール中のパクリタキセル（20 mg/kgにて, TIWで1週間）か;または(◆)クレモフォール/エタノール ビヒクル単独のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(111−173 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した腫瘍体積(各処置群における5動物の平均)。EC145のみで処置した結果は、0 部分奏効、0 完全奏効、および0 治癒であった。パクリタキセルのみで処置した結果は、2 完全奏効および3 治癒であった。組み合わせで処置した結果は、1 完全奏効および4 治癒であった。
【図６】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)パクリタキセル（20 mg/kgにて, クレモフォール/エタノールにおいてTIWで1週間）か、もしくは(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋クレモフォール/エタノール中のパクリタキセル（20 mg/kgにて, TIWで1週間）か;または(◆)クレモフォール/エタノール ビヒクル単独のいずれかを用いて処置した、KB腫瘍(52−185 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスについて測定した重量変化率(各処置群における5動物の平均)。
【図７】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か;または(▼)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、IGR-OV1(ヒト卵巣)腫瘍を有するマウスについて測定した腫瘍体積(平均)。
【図８】(■)未処置;あるいは、(●)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か;または(▼)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、IGR-OV1(ヒト卵巣)腫瘍を有するマウスについて測定した重量変化率(平均)。
【図９】(a)未処置;あるいは、(b)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、M109腫瘍を有するマウスについて測定した腫瘍体積(平均)。
【図１０】(a)未処置;あるいは、(b)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかを用いて処置した、M109腫瘍を有するマウスについて測定した重量変化率(平均)。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（定義）
本明細書で用いる通り、用語「腫瘍増殖の阻害」とは、腫瘍サイズの減少、腫瘍の完全な消失、あるいはEC145およびさらなる化学療法薬を用いた療法の間において、患者の腫瘍の増殖が30％未満であることを意味する。
【００２３】
本明細書で用いる通り、処置方法、使用、組成物、医薬組成物、キット、または組み合わせの脈絡において、該用語ドセタキセル(例えば、タキソテール（商標）)は、CAS登録番号（Chemical Abstracts registry Number）114977-28-5により同定されている化学療法薬または医薬的に許容されるその塩を含有する組成物を意味し;該化学療法薬(すなわち、ドセタキセル)は溶液または懸濁液中に存在してもよい。
【００２４】
本明細書で用いる通り、処置方法、使用、組成物、医薬組成物、組み合わせ、またはキットの脈絡において、該用語パクリタキセル(例えば、タキソール（商標）またはアブラキサン（商標）)は、CAS登録番号（Chemical Abstracts registry Number）33069-62-4により同定されている化学療法薬または医薬的に許容されるその塩を含有する組成物を意味する。該化学療法薬(すなわち、パクリタキセル)は溶液または懸濁液中に存在してもよい。
【００２５】
（実施態様の詳細な説明）
本発明のいくつかの実施態様は、以下に列挙した項により説明され、本願のこの詳細な説明のセクションに記載の実施態様の各々を、以下の実施態様の各々に適用する。
1.  EC145を、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせて投与する段階を含む、癌の処置方法。
2.  該1個以上の化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第1項に記載の方法。
3.  該化学療法薬がドセタキセルである、第1または2項に記載の方法。
4.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第1または2項に記載の方法。
5.  葉酸受容体発現癌細胞の処置のための、微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせた、EC145の使用。
6.  該1個以上の化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第5項に記載の使用。
7.  該化学療法薬がドセタキセルである、第5または6項に記載の使用。
8.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第5または6項に記載の使用。
9.  微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬と組み合わせた葉酸受容体発現癌細胞の処置のための医薬の製造におけるEC145の使用。
10.  該1個以上の化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第9項に記載の使用。
11.  該化学療法薬がドセタキセルである、第9または10項に記載の使用。
12.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第9または10項に記載の使用。
13.  該葉酸受容体発現細胞が上皮性腫瘍細胞である、前述の項のいずれか1つに記載の方法または使用。
14.  該上皮性腫瘍が卵巣、子宮内膜または非小細胞肺腫瘍である、第13項に記載の方法または使用。
15.  該葉酸受容体発現上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、第13または14項のいずれか1つに記載の方法または使用。
16.  該腫瘍が原発性腫瘍である、第13〜15項のいずれか1つに記載の方法または使用。
17.  該腫瘍が転移性腫瘍である、第13〜15項のいずれか1つに記載の方法または使用。
18.  該化学療法薬を該化学療法薬に対する最大耐量の50-80％である用量で投与する、前述の項のいずれか1つに記載の方法または使用。
19.  EC145、ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する、医薬組成物。
20.  該1個以上の化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第19項に記載の組成物。
21.  該化学療法薬がドセタキセルである、第19または20項に記載の組成物。
22.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第19または20項に記載の組成物。
23.  癌を処置するための、EC145、ならびに微小管分解阻害および有糸分裂阻害からなる群から選択される作用様式を有する1個以上の化学療法薬を含有する組成物。
24.  該1個以上の化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第23項に記載の組成物。
25.  該化学療法薬がドセタキセルである、第23または24項に記載の組成物。
26.  該化学療法薬がパクリタキセルである、第23または24項に記載の組成物。
27.  該EC145または該化学療法薬が非経口剤形である、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
28.  該剤形が、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内からなる群から選択される、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
29.  該EC145または該化学療法薬が組成物であって、該組成物がさらに医薬的に許容される担体を含有する、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
30.  該医薬的に許容される担体が液体担体である、第29項に記載の組成物、方法、または使用。
31.  該液体担体が、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第30項に記載の組成物、方法、または使用。
32.  該EC145または該化学療法薬が治療上有効な量で投与される、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
33.  該有効量が、約1 ng〜約1 mg／kg体重の範囲である、第32項に記載の組成物、方法、または使用。
34.  該有効量が、約100 ng〜約500 μg／kg体重の範囲である、第33項に記載の組成物、方法、または使用。
35.  該有効量が、約100 ng〜約50 μg／kg体重の範囲である、第34項に記載の組成物、方法、または使用。
36.  該腫瘍がプラチナ抵抗性卵巣腫瘍である、前述の項のいずれか1つに記載の組成物、方法、または使用。
37.  EC145を患者に投与する段階;および、
微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を患者に投与する段階
を含む、癌の処置方法。
38.  葉酸受容体発現癌細胞の処置のための、微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬と組み合わせた、EC145の使用。
39.  微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬と組み合わせた、葉酸受容体発現癌細胞のための医薬の製造におけるEC145の使用。
40.  該さらなる化学療法薬がタキサンである、第37〜39項のいずれか1つに記載の方法または使用。
41.  該さらなる化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第37〜40項のいずれか1つに記載の方法または使用。
42.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、第37〜41項のいずれか1つに記載の方法または使用。
43.  該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、第37〜41項のいずれか1つに記載の方法または使用。
44.  該葉酸受容体発現細胞が上皮性腫瘍細胞である、第38〜43項のいずれか1つに記載の使用。
45.  該上皮性腫瘍が卵巣、子宮内膜、または非小細胞肺腫瘍である、第44項に記載の使用。
46.  該葉酸受容体発現上皮性腫瘍が卵巣腫瘍である、第45項に記載の使用。
47.  該葉酸受容体発現上皮性腫瘍が非小細胞肺腫瘍である、第45項に記載の使用。
48.  該癌が上皮癌である、第37または40〜43項のいずれか1つに記載の方法。
49.  該上皮癌が卵巣、子宮内膜、または非小細胞肺癌である、第48項に記載の方法。
50.  該上皮癌が卵巣癌である、第49項に記載の方法。
51.  該上皮癌が非小細胞肺癌である、第49項に記載の方法。
52.  該癌もしくは該癌細胞が原発性腫瘍を含有する、第37〜51項のいずれか1つに記載の方法または使用。
53.  該癌もしくは該癌細胞が転移性腫瘍細胞を含有する、第37〜51項のいずれか1つに記載の方法または使用。
54.  該さらなる化学療法薬を、該化学療法薬に対する最大耐量の50〜80％である用量で投与する、第37〜53項のいずれか1つに記載の方法または使用。
55.  該EC145および該さらなる化学療法薬もしくは剤が、非経口剤形である、第37〜54項のいずれか1つに記載の方法または使用。
56.  該剤形が、独立して、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内用からなる群から選択される、第55項に記載の方法または使用。
57.  該EC145が組成物であって、該さらなる化学療法薬が組成物であり、そして該組成物がさらに医薬的に許容される担体を含有する、第37〜56項のいずれか1つに記載の方法または使用。
58.  該医薬的に許容される担体が液体担体である、第57項に記載の方法または使用。
59.  該液体担体が、独立して、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第58項に記載の方法または使用。
60.  該EC145および該化学療法薬が治療上有効な量で投与される、第37〜59項のいずれか1つに記載の方法または使用。
61.  該有効量が体表面積について約1 μg/m2〜約500 mg/m2の範囲である、第60項に記載の方法または使用。
62.  該有効量が体表面積について約1 μg/m2〜約300 mg/m2の範囲である、第61項に記載の方法または使用。
63.  該有効量が患者の体重について約10 μg/kg〜約100 μg/kgの範囲である、第60項に記載の方法または使用。
64.  該癌がプラチナ抵抗性卵巣癌である、第50項に記載の方法。
65.  該腫瘍がプラチナ抵抗性卵巣腫瘍である、第46項に記載の使用。
66.  該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌の容器またはパッケージ中である、第37〜65項のいずれか1つに記載の方法または使用。
67.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度を有する、第37〜66項のいずれか1つに記載の方法または使用。
68.  該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、第37〜67項のいずれか1つに記載の方法または使用。
69.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、第37〜68項のいずれか1つに記載の方法または使用。
70.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有する組成物または組み合わせ。
71.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有する、癌を処置するための組成物または組み合わせ。
72.  EC145および微小管分解阻害の作用様式を有する1個以上のさらなる化学療法薬を含有するキット。
73.  該さらなる化学療法薬がタキサンである、第70〜72項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
74.  該さらなる化学療法薬が、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、第70〜73項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
75.  該さらなる化学療法薬がドセタキセルである、第70〜74項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
76.  該さらなる化学療法薬がパクリタキセルである、第70〜74項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
77.  該EC145および該さらなる化学療法薬が非経口剤形である、第70〜76項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
78.  該剤形が、独立して、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、およびくも膜下腔内用からなる群から選択される、第77項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
79.  該EC145および該さらなる化学療法薬が医薬組成物であって、該組成物がさらに医薬的に許容される担体を含有する、第70〜78項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
80.  該医薬的に許容される担体が液体担体である、第79項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
81.  該液体担体が、独立して、生理食塩水、グルコース、アルコール、グリコール、エステル、アミド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、第80項に記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
82.  該EC145および該化学療法薬が治療上有効な量である、第70〜81項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
83.  該EC145および該さらなる化学療法薬が無菌の容器またはパッケージ中である、第70〜82項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
84.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも90％の純度を有する、第70〜83項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット
85.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、重量パーセントに基づいて少なくとも95％の純度を有する、第70〜83項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
86.  該EC145が再構成可能な凍結乾燥物の形態である、第70〜85項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
87.  該EC145および該さらなる化学療法薬が、無菌でパイロジェンフリーの水溶液中である、第70〜86項のいずれか1つに記載の組成物、組み合わせ、またはキット。
88.  該EC145および/または該さらなる化学療法薬が、それらの最大耐量より低い用量で投与される、37〜59項のいずれか1つに記載の方法または使用。
89.  3週サイクルの療法の1および2週の間、週に2日、1用量のEC145を静脈内ボーラス注入で患者に投与する段階;および、
3週サイクルの療法の第1日目に1時間にわたって1用量のドセタキセルを患者に投与する段階
を含む、非小細胞肺癌の処置の方法。
90.  EC145の用量が2.5 mgである、第89項に記載の方法。
91.  ドセタキセルの用量が体表面積について75 mg/m2である、第89または90項に記載の方法。
【００２６】
本明細書に記載の様々な実施態様のいずれにおいても、必要に応じて以下の特徴が存在してもよく、本発明のさらなる実施態様を提供する。
【００２７】
全ての実施態様について、いずれの適用可能な実施態様の組み合わせもまた意図される。いずれの適用可能な上記の実施態様の組み合わせは本発明に一致するとみなされる。
【００２８】
本明細書に記載される、方法、使用、組成物、医薬組成物、組み合わせ、またはキットの様々な実施態様において、該EC145は、単独か、または1個以上のタキサン(またはタキサンのいずれの組み合わせ)と組み合わせて投与されうる。本明細書に記載の様々な実施態様において、該他の化学療法薬は、微小管分解阻害剤および/または有糸分裂阻害剤である薬剤から選択されうる。当然のことながら、該他の薬剤は1つ以上の作用様式を有してもよい。一つの例示的な実施態様において、該EC145を、ドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、少なくとも1つの化学療法薬と組み合わせて投与することができる。
【００２９】
本明細書に記載の組成物、方法、使用、医薬組成物、またはキットの他の実施態様において、本明細書に記載の複合体の医薬的に許容される塩を説明する。本明細書に記載の複合体の医薬的に許容される塩には、それらの酸付加塩および塩基性塩が含まれる。
【００３０】
適切な酸付加塩は酸から形成され、それは無毒の塩を形成する。実例としては、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、炭酸水素塩/炭酸塩、硫酸水素塩/硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩（esylate）、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩/クロリド、臭化水素酸塩/ブロミド、ヨウ化水素酸塩/ヨージド、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩（naphthylate）、2-ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩/リン酸水素塩/リン酸二水素塩、サッカラート、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシレートおよびトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。
【００３１】
本明細書に記載の複合体の適切な塩基性塩は、塩基から形成され、無毒の塩を形成する。実例としては、アルギニン塩、ベンザチン塩、カルシウム塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、ジオラミン（diolamine）塩、グリシン塩、リジン塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、オラミン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩および亜鉛塩が挙げられる。酸および塩基のヘミ塩（Hemi-salt）（例えば、ヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩）もまた形成されてよい。
【００３２】
一実施態様において、本明細書に記載の複合体もしくはさらなる化学療法薬は、1個以上の医薬的に許容される担体と一緒になって製剤として投与されうる。担体は賦形剤であり得る。担体の選択は、因子（例えば、具体的な投与様式、溶解性および安定性における担体の影響、ならびに剤形の性質）に大きく依存するであろう。本明細書に記載の複合体もしくはさらなる化学療法薬の送達に適した医薬組成物、およびそれらの製造方法は、当業者には容易に明らかであろう。該組成物およびそれらの製造方法は、例えば、Remington: The Science ＆ Practice of Pharmacy, 21st Edition (Lippincott Williams ＆ Wilkins, 2005)（引用により本明細書に援用される）に見いだされうる。
【００３３】
一つの例示的な態様において、医薬的に許容される担体としては、生理学的に適合性である、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤など、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施態様において、該担体は非経口投与に適している。医薬的に許容される担体としては、無菌の注入可能な溶液もしくは分散液の即時調製のための、無菌の水溶液もしくは分散液、および無菌の粉末が挙げられる。また、補足的な活性化合物を本発明の組成物に組み込むこともできる。
【００３４】
様々な実施態様において、液剤としては濁液および溶液が挙げられうる。そのような製剤は、担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油、ならびに1個以上の乳化剤および/または懸濁剤を含有してよい。液剤はまた、例えばサシェから、固形物の再構成によって製造されてもよい。
【００３５】
一実施態様において、水性懸濁液は、適切な賦形剤と混合された活性物質を含んでよい。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム;分散もしくは湿潤剤（それは、天然のホスファチド、例えば、レシチンであってよい）;アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン;エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール（heptadecaethyleneoxycetanol）;エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート;または、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである。該水性懸濁液はまた、1個以上の保存剤、例えば、アスコルビン酸、エチル、n-プロピル、またはp-ヒドロキシベンゾエート;または、1個以上の着色剤を含んでもよい。
【００３６】
一つの例示的な実施態様において、水の添加による水性懸濁液の製造に適した分散性の粉末および顆粒は、分散もしくは湿潤剤、懸濁剤および1個以上の保存剤と混合された活性成分を提供する。さらなる賦形剤、例えば、着色剤もまた存在しうる。
【００３７】
適切な乳化剤は、天然のガム、例えば、アラビアゴムもしくはトラガカントゴム;天然のホスファチド、例えば、大豆レシチン;ならびに、脂肪酸およびヘキシトール無水物由来の部分エステルを含むエステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、および該部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであってよい。
【００３８】
他の実施態様において、等張剤、例えば、糖、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、または塩化ナトリウムを、組成物中に含むことができる。吸収を遅らせる剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を組成物中に含ませることによって、注入用組成物の持続的吸収が可能になる。
【００３９】
一態様において、本明細書に記載の複合体もしくはさらなる化学療法薬を、血流中、筋肉内または内臓中に、直接投与してもよい。そのような非経口投与のための適切な経路としては、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、硬膜外、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、腫瘍内、筋肉内および皮下送達（delivery）が挙げられる。非経口投与のための適切な手段としては、針(マイクロニードルを含む)注射、無針注射および注入技法が挙げられる。
【００４０】
一つの例示的な態様において、非経口製剤は典型的には、担体もしくは賦形剤（例えば、塩、炭水化物および緩衝剤(好ましくはpH3〜9)）を含みうる水溶液であるが、一部の適用に対しては、それらは無菌の非水溶液としてか、または適切なビヒクル（例えば、無菌のパイロジェンフリーの水）と併せて用いられる乾燥形態として製剤化されるのがより適切でありうる。他の実施態様において、本明細書に記載の液剤のいずれかは、本明細書に記載の複合体またはさらなる化学療法薬の非経口投与に適しうる。無菌条件下における非経口製剤の製造（例えば無菌条件下における凍結乾燥による）は、当業者に周知の標準的な製薬技法を用いて容易に達成されうる。例えば、EC145は、米国特許出願第61/474,428号（引用により本明細書に援用される）に記載の方法により、凍結乾燥され得る。一実施態様において、EC145は再構成可能な凍結乾燥物として存在することができる。一実施態様において、非経口製剤の製造において用いられる複合体もしくはさらなる化学療法薬の溶解性は、適切な製剤技術（例えば、溶解性増強剤（solubility-enhancing agent）の組み込み）の使用によって増大されうる。EC145製剤は、米国特許出願第61/474,428号、PCT/US11/037134、およびWO 2011/014821（各々、引用によりその全般が本明細書に援用される）に記載されている。
【００４１】
様々な実施態様において、非経口投与のための製剤は、即放性製剤および/または放出調節製剤であってよい。一つの例示的な態様において、本発明の活性剤は徐放性製剤の形態（例えば、徐放性ポリマーを含む組成物の形態）で投与されうる。該活性化合物は、該化合物を急速な放出から保護しうる担体を用いて製造され得る（例えば、放出制御製剤（植込錠およびマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む））。生分解性の生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸およびポリ乳酸・ポリグリコール酸共重合体(PGLA)）が用いられ得る。そのような製剤の製造方法は、通常、当業者に公知である。別の実施態様において、本明細書に記載の複合体もしくはさらなる化学療法薬または該複合体もしくはさらなる化学療法薬を含有する組成物は、必要に応じて持続的に投与されうる。
【００４２】
一実施態様において、キットを提供する。活性化合物の組み合わせを投与する場合、2つ以上の医薬組成物は、該組成物の連続的な投与または共投与に適した形態のキット中で組み合わせられうる。そのようなキットは、2つ以上の別個の医薬組成物（そのうちの少なくとも1つは本明細書に記載の複合体を含有する）、ならびに組成物を別個に保持するための手段、例えば、容器、分割ボトル、分割ホイルパケットを含有する。別の実施態様において、複合体処置の使用のための説明を提供するラベルを有する容器中の、本明細書に記載の複合体もしくはさらなる化学療法薬を含有する組成物を提供する。投与されるさらなる化学療法薬（例えば、タキサン）の使用のための説明書も提供する。
【００４３】
一実施態様において、無菌の注射剤は、必要な量の活性剤を上記の成分のうちの1つもしくは組み合わせとともに適切な溶媒中に組み込み、その後、必要に応じて無菌濾過することによって、製造され得る。典型的には、活性化合物を無菌のビヒクルに組み込むことにより、分散液（分散媒および上記からのいずれのさらなる成分を含む）を製造する。無菌注射剤の製造のための無菌粉末の場合、好ましい製造方法は、減圧乾燥および凍結乾燥（それによりその予め無菌濾過した溶液から、粉末の活性成分ならびにいずれのさらなる目的の成分の粉末が得られる）であるか、あるいは、該成分を一緒に無菌濾過してもよい。
【００４４】
該組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤濃度に適した他の秩序構造として製剤化され得る。該担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、など)、およびそれらの適切な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。一実施態様において、例えば、コーティング（例えばレシチン）の使用によって、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。
【００４５】
EC145およびさらなる化学療法薬を投与するためのいずれの効果的なレジメンを用いることができる。例えば、EC145およびさらなる化学療法薬(すなわち、薬剤)を、単一用量として投与することができるか、あるいは分割して一日複数回の用量のレジメンとして投与することができる。さらに、変則的レジメン（staggered regimen）、例えば、毎日の処置の代わりに1週間あたり1〜5日用いることができ、本明細書に記載の方法の目的のために、そのような間欠的もしくは変則的な日々のレジメンは毎日の処置と同等であるとみなされるとともに意図される。一つの例示的な実施態様において、該患者は、腫瘍を除去するために、EC145およびさらなる化学療法薬の複数回注入を用いて処置される。一実施態様において、該患者は、EC145およびさらなる化学療法薬を複数回で(好ましくは約2〜最大約50回)（例えば、12-72時間間隔で、または48-72時間間隔で）注入される。EC145およびさらなる薬剤のさらなる注入を、最初の注入から何日もしくは何ヶ月かの間隔にて患者に与えることができ、このさらなる注入によって癌の再発を防ぐことができる。別の実施態様において、該さらなる化学療法薬についてのレジメンは、EC145に対するものとは異なっている。
【００４６】
一実施態様において、EC145は、2.5 mgの静脈内ボーラス注入として、3週サイクルのうちの1週および2週の間、投与される。別の実施態様において、該タキサン(例えば、ドセタキセル)は、3週サイクルの第1日目に1時間にわたって75 mg/m2で投与される。さらに別の実施態様において、この段落に記載の実施態様を組み合わせることができる。該用量（mg/m2）は、体表面積についてのm2に基づく。
【００４７】
EC145およびさらなる化学療法薬の単位一日用量は、患者の状態、処置する病状、化合物の純度およびその投与経路および組織分布、ならびに他の治療的処置（例えば放射線療法）の共使用の可能性に大きく依存して変化し得る。患者に投与するための有効な量は、体表面積、質量、および患者の状態の医師の判断に基づく。有用な用量は、例えば、約1 ng/kg〜約1 mg/kg、約1 μg/kg〜約500 μg/kg、および約1 μg/kg〜約100 μg/kgの範囲であり得る。これらの用量は平均的な患者の体重 約70 kgに基づいており、該kgは患者の体重(質量)についてのkgである。
【００４８】
EC145およびさらなる化学療法薬は、約1.0 ng/kg〜約1000 μg/kg、約10 ng/kg〜約1000 μg/kg、約50 ng/kg〜約1000 μg/kg、約100 ng/kg〜約1000 μg/kg、約500 ng/kg〜約1000 μg/kg、約1 ng/kg〜約500 μg/kg、約1 ng/kg〜約100 μg/kg、約1 μg/kg〜約50 μg/kg、約1 μg/kg〜約10 μg/kg、約5 μg/kg〜約500 μg/kg、約10 μg/kg〜約100 μg/kg、約20 μg/kg〜約200 μg/kg、約10 μg/kg〜約500 μg/kg、または約50 μg/kg〜約500 μg/kgの用量で各々投与され得る。該総用量は、単回もしくは分割投与で投与されてもよく、そして、医師の裁量にて、本明細書に記載の典型的な範囲から外れていてもよい。これらの用量は平均的な患者の体重 約70 kgに基づいており、該「kg」は患者の体重についてのキログラムである。医師は、重量がこの範囲から外れている対象（例えば、乳幼児および高齢者）に対する用量を容易に決定することができるであろう。
【００４９】
別の実施態様において、EC145およびさらなる化学療法薬は、約1 μg/m2〜約500 mg/m2、約1 μg/m2〜約300 mg/m2、または約100 μg/m2〜約200 mg/m2の用量で各々投与され得る。他の実施態様において、EC145およびさらなる薬剤は、約1 mg/m2〜約500 mg/m2、約1 mg/m2〜約300 mg/m2、約1 mg/m2〜約200 mg/m2、約1 mg/m2〜約100 mg/m2、約1 mg/m2〜約50 mg/m2、または約1 mg/m2〜約600 mg/m2の用量で各々投与され得る。該総用量は、単回もしくは分割投与で投与されてもよく、そして、医師の裁量で本明細書に記載の典型的な範囲から外れていてもよい。これらの用量は体表面積（m2）に基づく。
【００５０】
本明細書に記載の複合体および化学療法薬は、1個以上のキラル中心を含んでいてよいか、あるいは、そうではなく、複数の立体異性体として存在することが可能であってよい。従って、本発明は、純粋な立体異性体ならびに立体異性体の混合物、例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、エナンチオマーもしくはジアステレオマーリッチな混合物を含むと理解される。本明細書に記載の複合体および化学療法薬は、幾何異性体として存在することが可能である。従って、本発明は純粋な幾何異性体または幾何異性体の混合物を含むと理解される。
【００５１】
本明細書に記載の複合体および化学療法薬は、非溶媒和物形態ならびに溶媒和物形態（水和物形態を含む）で存在してもよいと理解されている。一般的に、溶媒和物形態は非溶媒和物形態と同等であり、本発明の範囲内に包含される。本明細書に記載の複合体および化学療法薬は、多様な結晶性もしくはアモルファスな形態で存在してもよい。一般的に、全ての物理的形態は本発明により意図される使用において同等なものであり、本発明の範囲内であると意図される。
【００５２】
別の実施態様において、EC145もしくはさらなる化学療法薬の投与のための組成物および/または剤形は、少なくとも約90％か、約95％か、約96％か、約97％か、約98％か、約99％か、または約99.5％の純度を有する化合物から製造される。別の実施態様において、EC145もしくはさらなる薬剤の投与のための組成物および/または剤形は、少なくとも90％か、95％か、96％か、97％か、98％か、99％か、または99.5％の純度を有する化合物から製造される。
【００５３】
本明細書で用いる通り、純度決定は、重量パーセント、モルパーセントなどに基づいていてよい。加えて、純度決定は、ある特定の所定の成分、例えば、限定はされないが、葉酸、ビンカ薬物を含まないジスルフィド含有成分、酸化生成物、葉酸を含まないジスルフィド成分などの、実質的に非存在または非存在に基づいていてよい。また、該純度決定は本明細書に記載の方法により精製された溶液の化合物および組成物に適用可能であると理解される。そのような場合、純度測定（重量パーセントおよびモルパーセント測定を含む）は、溶媒を除く溶液の成分に関する。別の実施態様において、EC145は無菌の容器またはパッケージで提供される。
【００５４】
EC145またはさらなる薬剤の純度は、様々なクロマトグラフィーまたは分光学的技法（例えば、高圧もしくは高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、核磁気共鳴分光法、TLC、UV吸光分光法、蛍光分光法など）を含むいずれの従来の技法を用いて測定されうる。
【００５５】
表面-発現ビタミン受容体、例えば高親和性葉酸受容体は、癌細胞にて過剰発現される。卵巣、乳腺、結腸、肺、鼻部、咽喉、および脳の上皮癌は全て、葉酸受容体を高レベルで発現すると報告されている。実際に、全てのヒト卵巣腫瘍の90％以上はこの受容体を多量に発現することが知られている。従って、本明細書に記載の組み合わせ療法を用いて、様々な腫瘍細胞のタイプを処置することができる。
【００５６】
本明細書に記載の療法は、ヒトの臨床医学および獣医学的用途の両方のために用いられ得る。従って、病原性細胞集団を有しており、該組み合わせ療法で処置される宿主動物はヒト(すなわち、患者)であり得るか、あるいは、獣医学的用途の場合は、実験動物、家畜、飼育動物、もしくは野生動物であり得る。本明細書に記載の方法は、ヒト、実験動物、例えば、齧歯類(例えば、マウス、ラット、ハムスター、など)、ウサギ、サル、チンパンジー、飼育動物（例えば、イヌ、ネコ、およびウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ）、および飼育下の野生動物（例えば、クマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカ、およびクジラ）に適用され得る。
【００５７】
一態様において、処置に対する応答を、固形癌の治療効果判定のためのガイドライン(RECIST)の規準を用いて特徴付ける。実例として、全ての標的病変についての最長径の測定を考慮して、原本のWHOハンドブック(3)から基準を適用している:完全奏効(CR)−全ての標的病変の消失;部分奏効(PR)−標的病変の長径和において少なくとも30％の減少（ベースライン長径和を基準として）;安定(SD)−PRとするには縮小が十分でなく、PDとするには増大が十分でもない（処置開始以降の最小の長径和を基準として）;進行(PD)−標的病変の長径和において少なくとも20％の増加（処置開始以降に記録された最小の長径和を基準として）、または1つ以上の新しい病変の出現。他の規準としては、全腫瘍奏効率(ORR = CR + PR)、病勢コントロール率(DCR = CR + PR + SD)、および全生存期間(OS)−患者がプロトコールの処置を受けた最初の日から患者の死亡日までの日数として定義される、特定の患者についての死亡までの期間−が挙げられる。
【００５８】
一実施態様において、治療上有効な量のEC145を治療上有効な量のさらなる化学療法薬と組み合わせて投与することを含む、葉酸受容体発現上皮性腫瘍の処置を必要としている患者においてそれを処置する方法を提供する。EC145およびさらなる化学療法薬は、1つもしくは複数の組成物中で同時にかまたは連続して投与され得る。別の実施態様は、患者における葉酸受容体発現上皮性腫瘍の処置のための、さらなる化学療法薬と組み合わせたEC145の使用である。さらなる実施態様は、患者における葉酸受容体発現上皮性腫瘍の処置のための、さらなる化学療法薬と組み合わせた処置のための医薬の製造におけるEC145の使用である。
【００５９】
本明細書に記載の方法、使用、組成物、医薬組成物、組み合わせ、またはキットのいずれかについて、葉酸受容体発現上皮性腫瘍の具体的形態は、卵巣、子宮内膜もしくは非小細胞肺(NSCLC)腫瘍である。NSCLCの処置は、ステージ0、I、II、IIIA、IIIB、もしくはIVを含むいずれのステージにて行うことができる。上記の方法、使用、組成物、医薬組成物、組み合わせ、またはキットいずれかについて、葉酸受容体発現上皮性腫瘍の別の具体的形態は卵巣腫瘍である。該卵巣腫瘍は、プラチナ抵抗性またはプラチナ感受性であり得る。
【００６０】
別の実施態様において、上記の方法、使用、組成物、医薬組成物、組み合わせ、またはキットいずれかについて、該EC145は、式:
【化２】
2013542263.tif 000004
を有する化合物または医薬的に許容されるその塩である。
【００６１】
本明細書で用いる通り、EC145は、イオン化形態（プロトン化形態を含む）で溶液または懸濁液中に存在してよい。
【００６２】
一実施態様において、治療量のEC145を治療量のさらなる化学療法薬と組み合わせて投与することを含む、プラチナ抵抗性卵巣癌の処置が必要な患者においてそれを処置するための方法を提供する。別の実施態様において、患者においてプラチナ抵抗性卵巣癌を処置するための、さらなる化学療法薬と組み合わせたEC145の使用を提供する。別の実施態様において、さらなる化学療法薬と組み合わせた患者におけるプラチナ抵抗性卵巣癌の処置のための医薬の製造におけるEC145の使用を提供する。
【００６３】
さらなる化学療法薬と組み合わせてEC145を用いたプラチナ抵抗性卵巣癌の処置に関する、上記のいずれの方法、使用、医薬組成物、組成物、組み合わせ、またはキットについて、一実施態様は、EC145またはさらなる薬剤の純度が少なくとも90％であるものである。別の実施態様は、EC145またはさらなる化学療法薬が水性の無菌の液剤中に提供されるものである。
【００６４】
別の実施態様において、処置のための患者を選択する方法について記載し、ここで該方法は、PCT/US2010/043992(該EC20構造は、現在はWO 2011/014821として公開されているPCT/US2010/043992に記載されている)（その開示は、引用によりその全般が本明細書に援用される）に記載される通り、テクネチウムの同位体と結合したEC20を含有する組成物を患者に投与する段階を含有し、ここで患者は、彼らが少なくともFR+(すなわち、少なくとも1つの病変が葉酸受容体を発現する)またはFR++(すなわち、全ての病変が葉酸受容体を発現する)のレベルまで葉酸受容体を発現している場合に、療法のために選択される。このイメージング法の一実施態様において、該患者に、0.5 mgの葉酸、その後1〜3分以内に20〜25 mCiの99mTcで標識された0.1 mgのEC20を1〜2 mL注入し、1〜2時間後にイメージングを実施する。一実施態様において、該イメージング方法は、プラナーイメージング、SPECTイメージング、およびSPECT/CTイメージングからなる群から選択される。
【００６５】
別の実施態様において、本明細書に記載の方法、組成物、医薬組成物、組み合わせ、キット、および使用は、以下の実施例を含む。該実施例は、本明細書に記載の本発明の様々な実施態様のさらなる特徴をさらに説明する。しかしながら、実施例は例示のためのものであって、本明細書に記載の本発明の他の実施態様を制限すると解釈されるものではないと理解される。加えて、実施例の他のバリエーションが本明細書に記載の本発明の様々な実施態様に含まれると解される。
【実施例】
【００６６】
（材料）
N10-トリフルオロアセチルプテロイン酸は、Eprova AG, Schaffhausen（スイス）から購入した。ペプチド合成試薬は、NovaBiochemおよびBachemから購入した。セルロースプレートおよびDEAEイオン交換プレートは、J.T. Bakerから購入した。パクリタキセルは、A. K. Scientific (Mountain View, CA)から購入した。タキソテールおよびアサブラキサンは、Purdue Pharmacy(West Lafayette, IN)から購入した。
【００６７】
（方法）
IN VIVO 抗腫瘍実験
4〜6週齢の雌nu/nuマウス(Charles River, Wilmington, MA)か、6〜7週齢の雌Balb/cマウス(Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN)を、標準的な12時間明暗サイクルで維持し、実験期間中、葉酸が欠乏した固形飼料(Harlan diet #TD00434, Harlan Teklad, Madison, WI)を自由に摂食させた。FR陽性ヒト上咽頭KB細胞、およびヒト卵巣IGR-OV1細胞を、葉酸フリーのRPMI培地(FFRPMI)（10％熱失活ウシ胎仔血清(HIFCS)含有）を用いて、37℃で5％CO2/95％の空気-加湿雰囲気において、抗生物質は用いずに、単層として継続的に増殖させた。マウスに移植する数日前に、同系のFR-陽性Madison 109(M109)肺癌細胞を、M109腫瘍から得て、FFRPMI（10％HIFCS含有）中で数日間培養した。100 μL中の、KB細胞(nu/nuマウスについて1x106)、M109細胞(Balb/cマウスについて1x106)、IGROV細胞(nu/nuマウスについて4x106)を、背内側領域の皮下組織に注入した。マウスを5つのグループに分け、試験物質を、直前に調製して、200 μLの量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中、無菌条件下において、外側尾静脈を介して注入した。静脈内(i.v.)処置は、典型的には、腫瘍がおよそ100-200 mm3の体積である時に開始された。対照群のマウスは処置を受けなかった。各s.c.腫瘍が増殖した後、該腫瘍を、処置の期間中は週に3回、その後1500 mm3の体積に達するまでは週に2回、測定した。腫瘍を、ノギスを用いて2つの垂直方向で測定し、それらの体積を、0.5xLxW2（ここで、L=長軸の測定値（mm）、およびW=Lに垂直な軸の測定値（mm））として計算した。毒性の一般的な評価基準として、体重の変化を、腫瘍体積の測定と同一のスケジュールで測定した。動物の生存を、毎日モニターした。瀕死の（または餌もしくは水に辿り着けない)動物を、CO2窒息によって安楽死させた。全てのin vivo研究を、米国実験動物管理公認協会ガイドライン（American Accreditation Association of Laboratory Animal Care guideline）に従って実施した。
【００６８】
個々の腫瘍について、部分奏効(PR)とは、＞50％の体積の退縮（しかし全時点において測定可能な腫瘍(＞2 mm3)が残存している）として定義された。完全奏効(CR)とは、研究の終まりまでのいくつかの時点での測定可能な腫瘍体積の消滅(＜2 mm3)として定義された。治癒は、研究期間内に腫瘍の再増殖を伴わないCRとして定義された。
【００６９】
実施例
EC145とドセタキセルとの組み合わせ療法:
ランダム化した、KB腫瘍(144−212 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスを、(a)処置しないか;あるいは(b)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかで処置した。腫瘍の奏効については図1、および処置期間中の重量変化については図2を参照。ドセタキセルのみで処置した結果は、部分奏効も、完全奏効も、治癒も認められなかった。組み合わせで処置した結果は、5 治癒であった。
【００７０】
実施例
EC145とアブラキサンとの組み合わせ療法: 
ランダム化した、KB腫瘍(103−173 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスを、(■)処置しないか;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)アブラキサン(パクリタキセル相当物)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋アブラキサン(パクリタキセル相当物)（20 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかで処置した。腫瘍の奏効については図3、および処置期間中の重量変化については図4を参照。
【００７１】
実施例
EC145とクレモフォール/エタノール中のパクリタキセルとの組み合わせ療法: 
ランダム化した、KB腫瘍(111−173 mm3の範囲)を有するnu/nuマウスを、(■)処置しないか;あるいは、(●)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)パクリタキセル（20 mg/kgにて, クレモフォール/エタノールにおいてTIWで1週間）か、もしくは(▼)EC145（1 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋クレモフォール/エタノール中のパクリタキセル（20 mg/kgにて, TIWで1週間）;または、(◆)クレモフォール/エタノール ビヒクル単独のいずれかで処置した。腫瘍の奏効については図5、および処置期間中の重量変化については図6を参照。
【００７２】
実施例
IGR-OV1(ヒト卵巣)腫瘍を有するマウスを、(■)処置しないか;あるいは、(●)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(▲)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か;または、(▼)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかで処置した。腫瘍の奏効については図7、および処置期間中の重量変化については図8を参照。
【００７３】
実施例
M109腫瘍を有するマウスを、(a)処置しないか;あるいは、(b)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）か;(d)ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）か、または(c)EC145（2 μmol/kg/注入にて, TIWで2週間）＋ドセタキセル（10 mg/kgにて, TIWで1週間）のいずれかで処置した。腫瘍の奏効については図9、および処置期間中の重量変化については図10を参照。
【００７４】
（化合物実施例）
材料
EC145 API(活性な製剤)は、US 7,601,332またはWO 2011/014821の記載に従ってか、あるいは以下に記載されるとおりに(PCT/US2011/037134)、製造される。
他の物質、装置および機器は商業的供給源（以下:注射用水(WFI);クエン酸三ナトリウム二水和物, EMD 1.06432.0500; クエン酸, JT Baker 0122-01; マンニトール, JT Baker 2553-01; アルゴン; 窒素; フィルター, Pall 12122; 管類; バイアル, Wheaton # 223685 / W008230, 5 mL, 20 mm, Tubing, Type I Glass; ストッパー, (West pharmaceutical  #19700021または19700022) 20 mm, S 10 F451, 4432/50 Gray w/ B2-40 coating (serum stopper); 圧着, Blue (serum stopperを用いる); ストッパー, West 20 mm 4432/50, S-87-J, Gray w/ B2-44 coating (split skirt 凍結乾燥ストッパー); 圧着, Helvoet Pharma 110009704, Brown 6028 (split skirt 凍結乾燥ストッパーを用いる); Milli-Q水, Millipore Direct Q 3 UV System; リン酸一ナトリウム一水和物, Mallinckrodt 7868; リン酸水素二ナトリウム二水和物, Fisher S472-500; 塩化ナトリウム, Mallinckrodt 7581; 塩化カリウム, Fisher P330-500; クエン酸ナトリウム二水和物, Aldrich 39,807-1; スクロース, Sigma S3929-1KG; 水酸化ナトリウム, JT Baker 3278-01; 塩酸, EMD HX0603P-S; 氷酢酸, EMD AX0074-6; 酢酸トリエチルアミン, Fisher, 04885-1; 5 N 水酸化アンモニウム, Acros, AC612570010; アセトニトリル, Sigma-Aldrich 34851-4L; HPLCカラム Waters Symmetry C18, 3.5 μm, 4.6 x 75mm, P/N WAT066224; ガードカラム Waters Symmetry C18, 5 μm, 3.9 x 20 mm, P/N WAT054225.を含む）から得る。
【００７５】
装置および機器
HPLC: Waters 2487 Dual λ 吸光度検出器を備えたWaters Alliance 2695; HPLC: PDA検出器を備えたAgilent 1200; pHメーター, pH-08, Corning 340; オートクレーブ, Hotpack Steam Sterilizer, PE5-004; オーブン, VWR 1370FM; オーブン, Gruenberg dry heat oven; 天秤, Sartorius R300S; 天秤, Sartorius CP34001; ポンプ, Watson Marlow 505S; ピペッタ, Eppendorf Repeater Plus（50 mL Combitipsを用いる）; 凍結乾燥機: FTS LyoStar II（LyoManager II Data Collectionを備えている）; 打栓機, Westcapper NPW-500, 5A-018.
【００７６】
例えば、溶媒、試薬および保護基についての通常用いられる略語が、本明細書で用いられる。カルバモイルジスルフィド中間体(4)を示すためにCDSIを用いる。
【００７７】
実施例においてフラクションおよびサンプルの評価に用いたHPLCメソッドは以下を含む:
EC145-CMC-IP-0001
サンプル調製: 8 M グアニジンHClを用いて約0.5 mg/mLまで物質を希釈する。
カラム: Waters XBridge BEH C18, 3.5 μm, 2.1 x 100 mm.
移動相: A) 500 mM 炭酸水素アンモニウム, pH 9.2; B) 75:25 アセトニトリル-メタノール.
注入量: 10 μL
UV検出:  280 nm
カラム温度:  50℃
サンプル温度: 5℃
2013542263.tif 000005
EC145-CMC-AM-0001 (バージョン2.3)
サンプル調製: リン酸緩衝生理食塩水または1:1 アセトニトリル-水(v/v)を用いて約1 mg/mLまで物質を希釈する。
カラム: Waters Symmetry C18, 3.5 μm, 4.6 x 75 mm.
移動相: A) 10 mMトリエチルアンモニウムアセテート, pH 7.5; B) アセトニトリル.
注入量: 10 μL
UV検出:  280 nm
カラム温度:  25℃
サンプル温度: 5℃
2013542263.tif 000006
【００７８】
実施例
EC119の製造
【化３】
2013542263.tif 000007
EC119を、以下の通り、Fmoc-ベースの固相化学を用いて合成する。
第1カップリング
2-クロロトリチルクロリド樹脂をペプチド合成容器に加える。DMF(10mL/g樹脂)中で膨張させる。DMFを用いて2回洗浄する(10mL/g樹脂)。DCM/DMF中の0.8当量のFmoc-Cys(Trt)-OHを加える。2当量のDIPEAを加える。30分間撹拌する。メタノール(1mL/g樹脂)を加え、10分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。DMFを用いて3回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施してカップリングの完了を確認する。
【００７９】
第2カップリング
DMFを用いて3回洗浄する(10mL/g樹脂)。2当量のFmoc-Asp(OtBu)-OH／DMFを加える。2当量のHOBt／DMFを加える。2当量のDICを加える。1.5-3時間撹拌する。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。MTBEを用いて2回洗浄する。DMFを用いて2回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施する。
【００８０】
第3カップリング
DMFを用いて3回洗浄する。2当量のFmoc-Asp(OtBu)-OH／DMFを加える。2当量のHOBt／DMFを加える。2当量のDICを加える。1.5-3時間撹拌する。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。MTBEを用いて2回洗浄する。DMFを用いて2回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施する。
【００８１】
第4カップリング
DMFを用いて洗浄する。2当量のFmoc-Arg(Pbf)-OH／DMFを加える。2当量のHOBt／DMFを加える。2当量のDICを加える。1.5-3時間撹拌する。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。MTBEを用いて2回洗浄する。DMFを用いて2回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施する。
【００８２】
第5カップリング
DMFを用いて3回洗浄する。2当量のFmoc-Asp(OtBu)-OH／DMFを加える。2当量のHOBt／DMFを加える。2当量のDICを加える。1.5-3時間撹拌する。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。MTBEを用いて2回洗浄する。DMFを用いて2回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施する。
【００８３】
第6カップリング
DMFを用いて3回洗浄する。2当量のFmoc-Glu-OtBu／DMFを加える。2当量のHOBt／DMFを加える。2当量のDICを加える。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。MTBEを用いて2回洗浄する。DMFを用いて2回洗浄する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。0.1M HOBt／DMF中の6％ピペラジンを加え、10-20分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。Kaiserテストを実施する。
【００８４】
第7カップリング
DMFを用いて3回洗浄する。最小量のDMSO中の1.2当量のN10-TFA-Pte-OHを加える。1.2当量のHOBt／DMFを加える。1.2当量のPyBOP／DMFを加える。2.4当量のDIPEAを加える。3-5時間撹拌する。Kaiserテストを用いてカップリングを確認する。DMFを用いて2回洗浄する。MTBEを用いて2回洗浄する。
【００８５】
脱保護-トリフルオロアセチル基の除去
DMFを用いて2回洗浄する。2％ヒドラジン／DMFを加え、5分間撹拌する。2％ヒドラジン／DMFを加え、5分間撹拌する。2％ヒドラジン／DMFを加え、5分間撹拌する。DMFを用いて3回洗浄する。MTBEを用いて3回洗浄する。室温にて減圧下において樹脂を乾燥させる。
【００８６】
樹脂からの切り出し
85％TFA、2.5％トリイソプロピルシラン、2.5％水および10％エタンジチオールを含むcleaving reagent(10mL/g樹脂)を、フラスコに加える。該混合液を氷浴において冷却する。樹脂を加え、2-3時間室温にて反応させる。濾過し、濾液を集める。濾液を冷MTBEに加える(1 mLの濾液あたり10mLのMTBE)。0-5℃で30±10分間撹拌する。中程度の多孔質ガラスフィルターによって、沈殿した生成物を濾過する。該沈殿物を、冷MTBEを用いて3回洗浄する。室温で減圧下において生成物を乾燥させる。窒素下において-20℃で保管する。
【００８７】
精製
クルードなEC119を、プレパラティブHPLCにより、逆相C18カラム(6-インチカラム, 2.8kg, 10 μm, 100Å)を用いて精製する。移動相は0.5％NH4OAc(A)および0.5％NH4OAc/ACN(1:4)(B)である。40gのクルードなEC119を、1-5％TFAに溶解させ、1 μmのグラスファイバーフィルターにより濾過し、6-インチカラムにロードする。画分を集め、HPLC分析のためにサンプリングする。収集直後に、窒素下において50％AcOHを用いて、各画分のpHを3-4に調節して、生成物を沈殿させる。沈殿した生成物を遠心分離処理し、0.1％AcOHで洗浄し、さらなる処理まで、2-8℃で保管する。遠心分離処理中、該容器を窒素で覆い（blanked with 窒素）、酸化の可能性を低下させる。統合判断基準（pool criteria）は、純度≧98％、異性体D-Arg4、D-Glu2およびD-Asp3≦0.25％、他の不純物≦0.5％である。該異性体D-Asp5、D-Asp6およびD-Cysは、Prep-HPLCにより除去できず、合成過程において抑制すべきである。統合判断基準を満たす物質できるだけ早く凍結乾燥させる(該EC119溶液および該湿沈殿物は安定でない)。最終生成物の純度は98％以上である。純粋なEC119の全収率（固相合成および精製を含む）は、約40％である。該生成物を、窒素下において琥珀色ガラス容器に詰め、-20℃で保管する。
【００８８】
実施例
A.硫酸ビンブラスチンからデスアセチルビンブラスチンヒドラジドへの典型的な変換
【化４】
2013542263.tif 000008
材料
硫酸ビンブラスチン: USP; FW = 909.05 g/モル; メタノール: 無水; ヒドラジン: 無水; FW =32 g/mol; 脱イオン水; 酢酸エチル: LC/GCグレード; トルエン: LC/GCグレード; 一塩基性リン酸ナトリウム: ≧99.0％; FW = 120 g/モル; 二塩基性リン酸ナトリウム: ≧99.0％; FW = 142 g/モル;塩化ナトリウム: 試薬グレード; FW = 58.4 g/モル; 硫酸ナトリウム: 無水; 5-ノルボルネン-2-カルボン酸.
【００８９】
方法
反応、抽出ワークアップおよび単離は、窒素下もしくはアルゴン雰囲気下において行われる。加圧フィルターを用いて、硫酸ナトリウムを除去し、生成物を採取する。クエンチおよび洗浄に用いた塩化ナトリウム溶液を、溶存酸素濃度が0.9 ppm以下にまるまで、窒素もしくはアルゴンを用いてスパージする。
硫酸ビンブラスチンおよび無水メタノールをアルゴンでパージした反応器に入れる。5-ノルボルネン-2-カルボン酸および無水ヒドラジンを該反応器に加える。該混合液を撹拌し、固形物が溶解した後、該混合液を60℃前後まで加熱する。HPLC分析により、該反応が完了した後、冷却し、クエンチし、酢酸エチルに抽出する。乾燥させた後、生成物を酢酸エチルおよびトルエンから結晶化させる。該固形物を、室温にて終夜、減圧下において乾燥させる。
緩衝NaClは:10.0 g NaCl、7.10-7.30 g NaH2PO4、4.40-4.60 gのNa2HPO4および90 mLの水を含む。該溶液を、アルゴンもしくは窒素を用いてスパージする(溶存酸素含量＜0.9 ppm)。
典型的な単離収率は、理論上の最大値の50-60％である。
【００９０】
B. EC145プロセスの工程2および3
【化５】
2013542263.tif 000009
工程2および工程3のプロセス
材料
デスアセチルビンブラスチンヒドラジド: FW=768.9 g/mol; 20.5 g, 26.7 mmol; 混合炭酸塩(3): FW=384.9 g/mol; 10.7 g, 27.8 mmol; アセトニトリル: 適量（q.s.）: トリエチルアミン: FW=101.2 g/mol; 2.67 g, 26.4  mmol; Na2PO4・7H2O: 47.84 g; EC119: 29.9 g, 28.6 mmole; 0.5 N HCl: 適量; WFI: 適量
【００９１】
方法
このプロセスに用いられる水は注射用水(WFI)であることに留意する。
適切な容器をアルゴンでパージする。Charge 20.5±0.3 gのデスアセチルビンブラスチンヒドラジドを入れる;この充填量は効力が調整されており、すなわち、効力が90.0％である場合、充填量は22.8 gでありうる。10.7±0.2 gの混合炭酸塩(調整済みの効力)を充填する。800±30 mLのアセトニトリルおよび2.67±0.11gのトリエチルアミンを充填する。アルゴン下において、10-14℃で20-28時間、混合する。HPLC(EC145-CMC-AM-0001, バージョン2.3)のためのサンプルを採取する。期待される結果は、CDSI:ヒドラジドの比が＞25:1である。そうでない場合、アルゴン下において、10-14℃で2-4時間、混合を続け、再度サンプリングする。
【００９２】
780-820 mLの水を、溶存酸素濃度が0.9 ppm未満になるまでアルゴンでスパージする;溶存酸素濃度を記録する。47.8±0.5 gのリン酸水素二ナトリウム七水和物を脱酸素水中に溶解させる。適切な容器に、29.8±0.5 gのEC119を加える;(充填量は効力が調整されている)。リン酸ナトリウム溶液をEC119に加え、アルゴン下において混合する。溶液のpHを測定し、必要に応じて、pHを0.5 N HClで5.8-6.2に調整する。
【００９３】
緩衝されたEC119溶液を該反応混合液に加える。アルゴン下において、20-25℃で60-75分間、混合する。HPLC(EC145-CMC-AM-0001, バージョン2.3)用にサンプルを採取する。EC145:CDSIの比が＞25:1であれば、進める。そうでない場合、アルゴン下において20-25℃で混合を続け、再度サンプリングする。EC145:CDSIの比が＞25:1であれば、進める。そうでない場合、さらなる1 gのEC119を加え、アルゴン下において20-25℃で30分間混合し、再度サンプリングする。
【００９４】
6.9 L-7.1 Lの25 mMリン酸緩衝液, 185-195 mM NaCl、pH 7.2-7.5を、溶存酸素濃度が0.9 ppm未満になるまでアルゴンを用いてスパージした水から製造する。この緩衝液を用いて該反応混合液を希釈する。該混合液がかすかな濁り以上を生じる場合、該生成物溶液を濾過する必要がある(Whatman Polycap TC75またはTC150, 0.45または1.0ミクロン);この濾過は生成物をBiotage カラムにロードしながら行ってもよい。
【００９５】
液体クロマトグラフィー精製
Biotage 150M, C18 カートリッジを用いる。このサイズのカートリッジは、通常記載される2倍の量の反応混合液に適合し得る。
カラム調製:
a.以下を用いてカラムをフラッシュする。
i.  12-13 Lのアセトニトリル
ii.  12-13 Lの80％アセトニトリルおよび20％水(v/v)
iii.  12-13 Lの50％アセトニトリルおよび50％水(v/v)
iv.  12-13 Lの10％アセトニトリルおよび90％水(v/v)
【００９６】
精製:
25 mM リン酸緩衝液, (185-195 mmol) NaCl, pH 7.3-7.5の製造
溶存酸素含量が≦0.9 ppmになるまで、アルゴンを用いて緩衝液をスパージする。
緩衝生理食塩水(v/v)中の41 Lの10％アセトニトリル; 緩衝生理食塩水(v/v)中の13 Lの16％アセトニトリル、緩衝生理食塩水(v/v)中の52 Lの27％アセトニトリルを製造する。
移動相溶液の溶存酸素含量を確認する。溶存酸素含量が0.9 ppm以上である場合、アルゴンもしくは窒素を用いて、溶存酸素濃度が≦0.9 ppmになるまで、移動相をスパージする。
26-27 Lの10％アセトニトリル移動相でカラムをフラッシュする。
カラムに生成物溶液をロードする。
以下の順の移動相を用いて生成物を溶出する:
i.  13-14 Lの10％アセトニトリル移動相
ii.  13 Lの16％アセトニトリル移動相
iii.  51-52 Lの27％アセトニトリル移動相
注: インラインのuv検出器が有用である;15-19 Lの27％アセトニトリル移動相で開始して8-13 Lの帯域幅で生成物が流れ出てくるはずである。
【００９７】
画分評価
i.  HPLCメソッド EC145-CMC-IP-0001
ii.  通過画分 = ≧97.0％EC145および不純物なし≧0.8％
【００９８】
ラン後のカラム処理:
カラムは一回再利用することができる。カラムを2回目のランに用いる場合は、ii-ivを実施する。
i.  12-13 Lの1:1 アセトニトリル-水でカラムをフラッシュする。
ii.  20-22 Lのアセトニトリルでカラムをフラッシュする。
iii.  カラム調製工程ii-ivを繰り返す。
【００９９】
限外濾過
適量の水を、溶存酸素濃度が0.9 ppm未満になるまで、アルゴンまたは窒素を用いてスパージする。通過クロマトグラフィー画分を合わせて、等量のスパージした水で希釈する。1000の公称MWカットオフであるMillipore 再生セルロース膜(cat# CDUF002LA)を用いて限外濾過装置を構築し、9 Lの脱酸素水を用いてそれをすすぐ。生成物溶液の限外濾過を開始する。30-50 psiの背圧を維持する。残余量が2〜3 Lになるまで限外濾過を続ける。11〜12 Lの脱酸素水を加える。残余量が2〜3 Lになるまで限外濾過を続ける。11〜12 Lの脱酸素水を加える。残余量が2〜3 Lになるまで限外濾過を続ける。8〜10 Lの脱酸素水を加える。残余量が2 Lになるまで限外濾過を続ける。限外濾過のエンドポイントは、GCおよび濃度ににより残余中のサンプルの分析することによって決定されなくてはならない。規格は、≦50 μgのアセトニトリル／mg EC145である。達成されない場合、もう1サイクルの限外濾過を実施する。
パッケージされた物質が6〜12 mg/mLであるように、API溶液の濃度を調整しなければならない。限外濾過が完了した時点で、該装置を1リットルの水ですすぐ。よって、必要に応じて、限外濾過を続けるか、または水を加える。生成物溶液を限外濾過装置から外した時点で、限外濾過装置を1 Lの脱酸素水ですすいで、生成物溶液を合わせる。
すすぎ液を生成物溶液と合わせた後、この溶液を0.2ミクロンのアブソリュートフィルタによって濾過しなければならず、そして、この濾過物をパッケージ化する(不活性雰囲気下において実施する)。
単離された生成物の典型的な収率は、理論上の最大値の50-60％である。
【０１００】
実施例
凍結乾燥されたEC145
総量22 mLである2バイアルのEC145の水溶液を周囲温度で解凍し、4つの20 mL 凍結乾燥バイアルに移し入れた。該バイアルを、約1.5時間、冷凍庫に移した。LABCONCO凍結乾燥機を用いて凍結乾燥を行った（-72℃(棚温度)まで予冷した後、サンプルをロードした）。サンプルを、-20℃で〜30分間、その後20℃でさらに38.5時間、凍結乾燥させた。得られた綿毛状の淡黄色の固形物を、さらなるキャラクタリゼーションのために1つのバイアルに合わせた。
【０１０１】
製剤
水性製剤:
1.4 mg/mLのEC145の濃度にてEC145を提供するように用いられうる製剤を以下に提供する。EC145の2.5 mg ボーラス投与を提供するために単一のバイアルを用いる。
【０１０２】
実施例
pH 7.4, リン酸緩衝 EC145 製剤
以下の製剤は、静脈内(IV)投与用のEC145製剤(DP)を、Flurotech（商標）でコーティングされたゴム栓を備えた使い捨ての透明ガラスバイアル中の2.0 mLの水性で無菌の液剤, pH7.4として提供する（それは不活性ガス下において凍結保存される）。各バイアルは1.4 mg/mLのEC145を含む。該製剤の定量的組成は、以下の表に示される。単一のバイアルは、EC145の2.5 mgのボーラス投与を提供するように用いられる。この製剤は、10 mM リン酸緩衝液、pH 7.4; 138 mM 塩化ナトリウム、および2.7 mM 塩化カリウムを提供する。
EC145 製剤成分
【表１】
2013542263.tif 000010
【０１０３】
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145 製剤
以下の製剤は、50 mM クエン酸緩衝 pH 6.2 EC145 溶液である、液剤を提供する。
EC145 製剤成分
【表２】
2013542263.tif 000011
【０１０４】
凍結乾燥用の製剤:
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145製剤（3％マンニトール含有）
以下の製剤は、凍結乾燥および再構築に有用な増量剤として3％マンニトールを含むpH 6.2 クエン酸緩衝 EC145溶液である液剤を提供する。
EC145 製剤成分
【表３】
2013542263.tif 000012
【０１０５】
実施例
pH 6.2 クエン酸緩衝 EC145 製剤（4％マンニトール/1％スクロース含有）
上記の3％マンニトールについてと同一の製剤だが、80 mg マンニトールおよび20 mg スクロースを含む。
【０１０６】
実施例
プラセボのpH 6.2 クエン酸緩衝 製剤（3％マンニトール含有）
以下の製剤は、凍結乾燥および再構築に有用な増量剤として3％マンニトールを含むpH 6.2 クエン酸緩衝溶液である、プラセボ液剤を提供する。
プラセボ生成物成分
【表４】
2013542263.tif 000013
【０１０７】
実施例
凍結乾燥したEC145およびプラセボ医薬組成物の製造
3％マンニトールを含むEC145バイアル、4％マンニトール/1％スクロースを含むEC145バイアル、およびプラセボバイアル(EC145 APIなし)を用いて、凍結乾燥サイクルを行った。プローブをEC145液剤バイアルおよびプラセボバイアル内に設置し、サイクルの間における溶液温度を記録した。最終生成物を空気に曝露させる前に、凍結乾燥機中のバイアルの栓を閉めた状態で、該サイクルの全てをアルゴンで充填し戻した。栓を閉めた直後に、該バイアルを圧着し、ラベルする。
様々なパラメーターの多くの凍結乾燥の実施において、3％マンニトールを含むバイアルと4％マンニトール/1％スクロースを含むバイアルの間に明らかな差違は見うけられなかった。
【０１０８】
実施例
製剤プロセスの説明
大きなフラスコを過剰量のWFIで充填し、不活性ガスで30分間スパージし、酸素含量を＜1.0 ppmまで減らす。製剤を開始する前に、工程内試験を用いて酸素含量を確認する。製剤プロセス全体を通して、製剤溶液上において一定の陽圧不活性ガスブランケットを維持した。
凍結したEC145原体(API)溶液を冷凍庫から取り出し、20℃-25℃に温度制御された循環水浴において解凍する。解凍されたAPI溶液を、製剤化するAPI溶液の量を決定するために風袋の重量を測定した、不活性ガスでパージした容器に加えた。溶液中の密度およびEC145濃度に基づいて、風袋重量を測定した容器に加えた溶液の重量を用いて、1.4 mg EC145/mLで満たすために利用できる総最終溶液を決定する。
撹拌子を有する容器を重量測定し、最終充填量のWFIの総量の62.5％で充填する。マンニトールを加えて、3％マンニトールの最終濃度にする。クエン酸ナトリウムを該容器に加えた後、スパージしたWFIですすぐ。クエン酸を該容器に加えた後、スパージしたWFIですすぐ。スパージした溶液を、全てのクエン酸が溶解するまで混合する。
pHメーターをpH4および7の緩衝標準液（buffer standard）を用いて標準化して、溶液のpHを測定する。該pHが6.0-6.2でない場合、pHを、1.0Mクエン酸または1.0Mクエン酸ナトリウムを用いて調整する。
EC145を遮光するために容器をホイルで覆う。EC145原体溶液を、撹拌および不活性ガスでスパージしながら該製剤化容器に加える。該原体含有容器を、WFI溶液を用いて2回すすぐ。該混合液を、視覚的に均一な混合液が得られるまで、スパージしながら撹拌する。最終目標製剤の重量を測定し、該溶液を目標重量になるまでWFIで充填する。
該溶液を、蠕動ポンプを用いて、0.22ミクロンの無菌フィルター（予め湿らせ、バブルポイント試験を行った）によって濾過する。濾過プロセスの間中ずっと、受け取り容器を不活性ガスでパージし続ける。濾過後、該プロセスの間ずっと効率的な濾過が維持されることを確実なものとするために、バブルポイント試験を繰り返す。
充填ヘッド（fill head）を、2.03 g(2.0 mL, 2.8 mg EC145)のEC145製剤溶液を各バイアルに供給するようにキャリブレーションする。充填プロセスの間、充填量を常にチェックする。
充填プロセスの間、栓をバイアルの中間まで入れる。
凍結乾燥トレーにおいて、熱電対を適当なバイアル中に設置し、該トレーを、規定のサイクルにより凍結乾燥させる。
【０１０９】
実施例
凍結乾燥サイクル
上記の3％マンニトールを含むpH6.2 クエン酸緩衝 EC145溶液(2 mL／5 mLバイアル)を用いた以下の凍結乾燥サイクルによって、良好なケーク状である凍結乾燥されたEC145製剤が得られる（それは、水中で容易に再構成し、高いAPI純度(＞95％)を保持する）。
バイアルを、アルゴンでスパージし、2 mLのEC145製剤を充填し、半分入れた位置においてsplit skirt 凍結乾燥ストッパーで栓をする。トレーを満たして栓をしたらすぐに、それを5℃にて凍結乾燥機に設置する。
1.  凍結乾燥機棚を5℃まで予め冷却する。
2.  満たしたトレーを予め冷却した棚にロードする。
3.  ロードが完了したら凍結乾燥サイクルを開始する。
4.  棚温度を5℃にて30-60分間保持する。
別法として、棚を-50℃〜5℃まで予め冷却することで、満たされたトレーを予め冷却する時間を減らすことができる;工程4は必要ない場合もある。
5.  棚温度を-50℃まで迅速に勾配させる。
6.  該棚温度を50℃にて60〜360分間保持する。
7.  50〜150 mTorrまでチャンバー圧を下げる。
8.  該棚温度を50℃にて180〜1740分間保持する。
9.  該棚温度を73分間にわたって37℃まで勾配させる(0.20℃/分)。
10.  該棚温度を37℃にて60〜720分間保持する。
11.  該棚温度を150分間にわたって20℃まで勾配させる(0.11℃/分)。
12.  該棚温度を20℃にて60〜360分間保持する。
13.  棚温度を60〜360分かけて20℃〜30℃まで勾配させる。
14.  棚温度を20℃〜30℃にて60〜600分間保持する。
15.  チャンバーを、アルゴンまたは窒素を用いて12.5 psia(870 mbar)まで充填し戻す。
16.  棚を畳崩す(バイアルを完全に栓で塞ぐ)。
17.  濾過空気を用いて大気圧まで充填し戻す。
18.  凍結乾燥機から取り出す。
【０１１０】
上記の凍結乾燥サイクルの特定の実施例（最初に5℃で30分間冷却することを含む）が、以下のとおり要約形式で示される:
【表５】
2013542263.tif 000014
その後、バイアルの蓋をして、各バイアル中の良好なケーク状の最終生成物が得られる。
【０１１１】
抗腫瘍実験
腫瘍病変全てが葉酸受容体(FR++)を発現したサブグループは有望な7.1か月の長期無増悪生存期間および10.8か月の全生存期間であったことが、しっかりと前処置したNSCLC患者(化学療法レジメン前の中央値 6)における単剤のEC145の第II相試験において以前に見いだされた。疾患のKBモデルにおけるin-vitroおよびin-vivo研究は、EC145およびタキソテール（商標）間の良好な相乗作用を示した。
腫瘍病変全てが葉酸受容体(FR++)を発現する第2系統のNSCLC患者における、現在の標準的なタキソテール（商標）に対する単剤のEC145の活性を測定する。
第2系統のNSCLC(非小細胞肺癌)患者の2つのサブグループの患者を、EC145＋タキソテール（商標）で処置する:(1)腫瘍病変全てが葉酸受容体(FR++)を発現する患者、および(2)全ての病変ではないが少なくとも1つの病変が葉酸受容体(FR+)を発現する患者。
処置の間、以下の測定値を決定する:無増悪生存期間(PFS); 全腫瘍奏効率(ORR=CR+PR);腫瘍の奏効期間(DOR);病勢コントロール率(DCR=CR+PR+SD);DCRの期間;および全生存期間(OS)。他の試験は、EC145、EC145+タキソテール（商標）、およびタキソテール（商標）単剤を用いた療法の安全性および耐容性、ならびに99mTc-EC20処置の安全性および耐容性である。
患者を、99mTc-EC20を用いた平面および単一光子放射型コンピュータ断層撮影法(SPECT)イメージングによる研究において、取り込みについてスクリーニングする。
適格性基準を満たす患者を3つの処置レジメンのうちの1つにランダム化(1:2:2)する:EC145単独での処置(アーム（Arm）A)、EC145＋タキソテール（商標）の組み合わせでの処置(アームB)、またはタキソテール（商標）単独での処置(アームC)。
患者のランダム化は、最後の化学療法からの時間(＜3か月か、≧3か月か)、最後の化学療法に対する最良の（best）奏効(客観的な腫瘍の奏効/安定か、進行か/不明（unknown）)、ステージ(IIIBか、IVか)、ならびにEGFR阻害剤での前処置(ありか、なしか)、該研究のタキソテール（商標）のアームおよび該研究のタキソテール（商標）＋EC145のアームについてFR+かFR++か、において分類される。
99mTc-EC20投与:EC20イメージング手順の前に、患者に、0.5 mgの葉酸の静脈内(IV)注入を1回、次いで1〜3分以内に20〜25 mCiの99mTcでラベルした0.1 mgのEC20の1〜2 mLの注入を施す。99mTc-EC20注入の1〜2時間後に、患者に平面イメージング(大腿部中央から頭部、後方および前方のイメージ)を実施する。平面イメージを得た後ですぐに、標的病変を有することが分かっている部分のSPECTイメージを得る。SPECTイメージングの前に腫瘍を有する解剖学的領域が同定できない場合、胸部/腹部および腹部/骨盤のSPECT(またはSPECT/コンピュータ断層撮影[CT])イメージを得る。
EC145投与(アームAおよびB):EC145を、3週サイクルのうちの1週および2週の間、月曜および水曜に、2.5 mg IVボーラス注入として、投与する。
タキソテール（商標）投与(アームBおよびC):タキソテールを、3週サイクルのうちの第1日目に1時間にわたって、75 mg/m2 IVにて、投与する。組み合わせのアームBにおける最初の3患者は、安全性について詳細に観察されうる。患者を、2サイクル毎の終わりに、CTを用いて評価する。
アームA: EC145 (n=60 FR++):  2.5 mg IV; M, W Wk 1, 2 q 3 wks.
アームB: EC145＋タキソテール（商標）(n= 60 FR++,  60 FR+) （アームAおよびアームCのスケジュールの通りに）.
アームC: タキソテール（商標） (n=60 FR++, 60 FR+).
処置アームの間の無増悪生存期間(PFS)を決定する。主に関心のもたれる比較は:EC145＋タキソテール（商標）対タキソテール（商標）(FR+およびFR++の別個のサブグループ)およびEC145対タキソテール（商標）(FR++のみ)である。
統計解析:
有意水準は、多重検定について、片側のα=0.10（補正なし）である。
上記の比較各々について、120患者からの94のPFS事象によって約75％の検出力（power）が得られ、0.67に相当するハザード比が検出される。タキソテール（商標）についてのPFS中央値が3か月であると仮定すると、これらのハザード比は試験したアームにおいて4.5か月に相当する（すなわち、PFS中央値において50％向上）。
【０１１２】
本発明の特定の実施態様が上記に記載および/または例示されているが、それらの大きな変形および改変が可能であることが意図される。従って、本発明は本明細書に記載および/または例示された特定の実施態様に限定されるものではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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