(57)【要約】本発明は、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（Ｉ）で表される化合物に関する。
2013514338.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（Ｉ）：
【化６５】
2013514338.tif 000074
[式中、
【化６６】
2013514338.tif 000075
は、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）又は（Ｉｄ）：
【化６７】
2013514338.tif 000076
から選択され、
−  Ｒ１及びＲ１’は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ１９、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＯＳｉＲ１５Ｒ１６Ｒ１７及びＮＲ１８Ｃ（＝Ｏ）Ａｒから選択されるか、又はこれらが結合する炭素原子と一緒になって、＝Ｏ又は５〜７員ヘテロシクリルを形成し；
但し、
【化６８】
2013514338.tif 000077
が（Ｉｄ）である場合、Ｒ１は、＝Ｏであることはできず；
−  Ｒ２は、Ｈであり；
−  Ｒ３及びＲ３’は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、（ＣＨ２）ｍＯＲ８、ＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒ及びＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＡｒから選択され、前記Ａｒ基は、場合により、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２及びＮ（ＣＨ３）２から選択される１〜３個の基により置換されており；
−  Ｒ４は、Ｈ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ又はＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）ｔＲ８であり；
−  Ｒ５は、Ｈ、ＯＲ９、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８又はＯＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒ基は、場合により、１〜３個のＮＯ２により置換されており；
−  Ｒ６及びＲ７は、互いに独立して、Ｈ、ＣＲ１０Ｒ１１Ｒ１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３及びＯＲ１４から選択され；
−  Ｒ８は、５〜７員ヘテロシクリル、（ＣＨ２）ｓＣＮ又は（ＣＨ２）ｓＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒは、場合により、ＮＯ２、Ｎ３又はＯＨから選択される１〜３個の基により置換されており；
−  Ｒ９は、５〜７員ヘテロシクリル又は（ＣＨ２）ｐＯＡｌｋであり；
−  Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＯＳｉＲ１５Ｒ１６Ｒ１７、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、（ＣＨ２）ｑＯＡｌｋ及び（ＣＨ２）ｑＣ（＝Ｏ）ＯＡｌｋから選択されるか、又はＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２の２つが、これらが結合する炭素原子と一緒になって、５〜７員ヘテロシクリルを形成し；
−  Ｒ１３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｒＯＨｅｔ、（ＣＨ２）ｒＳＡｒ又は（ＣＨ２）ｒＳａｌｋであり；
−  Ｒ１４は、Ｈ、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、５〜７員ヘテロシクリル又はＣ（＝Ｏ）Ａｒであり；
−  Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、互いに独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択され；
−  Ｒ１８は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
−  Ｒ１９は、Ｈ、５〜７員ヘテロシクリル又は（ＣＨ２）ｓＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒは、場合により、ＮＯ２、Ｎ３又はＯＨから選択される１〜３個の基により置換されており；そして
−  ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ及びｔは、互いに独立して、１、２、３又は４から選択され；
但し：
−  Ｒ６がＨ以外であり、Ｒ７がＨである場合、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外であり、そして
−  Ｒ６がＣＯＣＨ３であり、Ｒ７がＯＨである場合、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である]
で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つが、Ｈ以外である、請求項１に記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項３】
癌において、又は細菌、真菌もしくは寄生虫感染症において、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、請求項１又は２の化合物。
【請求項４】
化合物が抗腫瘍医薬と一緒に投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の使用のための式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（ＩＩ）：
【化６９】
2013514338.tif 000078
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりである]
で表される化合物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（ＩＩＩ）：
【化７０】
2013514338.tif 000079
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりである]
で表される化合物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（ＩＶ）：
【化７１】
2013514338.tif 000080
[式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、請求項１に定義されるとおりである]
で表される化合物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（Ｖ）：
【化７２】
2013514338.tif 000081
[式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、請求項１に定義されるとおりであり、そして、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２基の１つは、（ＣＨ２）ｑＯＡｌｋ又は（ＣＨ２）ｑＣ（＝Ｏ）ＯＡｌｋである]
で表される化合物。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（ＶＩ）：
【化７３】
2013514338.tif 000082
[式中、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりであり、そして、Ｈ以外である]
で表される化合物。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれかに記載の使用のための、式（ＶＩＩ）：
【化７４】
2013514338.tif 000083
[Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、請求項１に定義されるとおりであり、Ｒ５は、Ｈではない]
で表される化合物。
【請求項１１】
下記式：
【化７５】
2013514338.tif 000084
を有する式（Ｉ）で表される化合物を除く、式（Ｉ）：
【化７６】
2013514338.tif 000085
[式中、
【化７７】
2013514338.tif 000086
、及びＲ１〜Ｒ７は、請求項１〜４のいずれかに定義されるとおりである]
で表される化合物を１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物。
【請求項１２】
下記式：
【化７８】
2013514338.tif 000087
のＲ／Ｓ混合物を除く、式（ＩＩ）：
【化７９】
2013514338.tif 000088
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりである]
を有する化合物。
【請求項１３】
下記式：
【化８０】
2013514338.tif 000089
を除く、式（ＩＩＩ）：
【化８１】
2013514338.tif 000090
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりである] 
で表される化合物。
【請求項１４】
下記式：
【化８２】
2013514338.tif 000091
を除く、式（Ｖ）：
【化８３】
2013514338.tif 000092
[式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、請求項１に定義されるとおりである]
で表される化合物。
【請求項１５】
式（ＶＩ）：
【化８４】
2013514338.tif 000093
[式中、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、請求項１に定義されるとおりであり、そして、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、Ｈではない]
で表される化合物。
【請求項１６】
下記式：
【化８５】
2013514338.tif 000094
を除く、式（ＶＩＩ）：
【化８６】
2013514338.tif 000095
[式中、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、請求項１に定義されるとおりであり、そして、Ｒ５は、Ｈではない]
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多剤耐性を抑制するための使用のためのＰｇｐの新規ステロイド阻害剤に関する。
【０００２】
多剤耐性表現型（ＭＤＲ表現型）の逆転は、基礎研究及び産業分野において、いまだ多くの癌研究グループのとっての主要な目標となっている。様々な種類の分子についてＭＤＲ表現型を逆転する能力が試験されてきた。最初の試行として、主に疎水性を共通して有する多種多様な化学物質だけでなく、他の医学的適応で既に使用されている薬剤（ベラパミル又はシクロスポリンなど）についても試験した。これらの化合物及びその逆転活性の比較から、抑制効果を増加させる構造的特徴が明らかになった（J. Robert and C. Jarry, Multidrug resistance reversal agents, J Med Chem 46 (2003) 4805-4817）。数多くの活性構造が公開されているにも関わらず、効果的な薬物の開発を可能にするための副作用を十分低下させる重要な改善がいまだ達成されていない。
【０００３】
これらのモジュレータの主なターゲットは、細胞毒性薬で処理した多くの腫瘍細胞で過剰発現している膜貫通タンパク質のＰｇｐである。しかしながら、薬物排出の強力な阻害剤を開発するための制限が多いことから、排出メカニズムについての知識が不足したままである。薬物結合、光親和性標識及び突然変異誘発実験により、Ｐｇｐにおける基質の局在化及び阻害剤結合部位についての情報がいくらか得られた（M. Peer et al., Mini Rev in Med Chem 5 (2005) 165-172）。また、アンチセンスポリヌクレオチドを設計して、腫瘍細胞内のＰｇｐ遺伝子をダウンレギュレーションすることにより薬物排出の阻害を試みたが、これをin vivoにおいて癌細胞へ安全に輸送することがいまだ困難である。
【０００４】
天然ホルモン（プロゲステロン及びメドロキシプロゲステロン）（K.M. Barnes et al. Biochemistry 35 (1996) 4820-4827）、ステロイド薬（RU38486）（D.J. Gruol et al., Cancer Res 54 (1994) 3088-3091）又は合成ステロイド（RU49953）（F.J. Perez-Victoria et al., Cell Mol Life Sci 60 (2003) 526-535）などの様々な種類のステロイド構造について、その修飾作用が記載されている。その重要な生理学的又は薬理学的活性のため、これらの分子ファミリーが精力的に研究されており、その生理学的、薬理学的及び代謝特性は、その毒性、その生物学的ターゲットの構造及びその輸送メカニズムとともによく知られている。さらに、ステロイドは多機能分子であり、これは、薬理学的活性を最適化するための擬似コンビナトリアル構造修飾を容易にもたらすことができる十分確立された多機能化の化学を与える。
【０００５】
細胞のin vitroモデルにおいて、ＭＤＲ表現型の逆転に作用する多数の誘導体がこれまでに記載されている。最も効果的なモジュレータを、構造的に異なる種類に分類することができた（E. Teodori et al., Il Farmaco 57 (2002) 385-415）。これらの中で、ベラパミル、ジルチアゼム又はニフェジピンなどのカルシウム遮断剤及びシクロスポリンなどの免疫抑制剤でＰｇｐを阻害することが見出された。しかしながら、臨床試験で用いられた場合、これらは非常に低い阻害活性を示し、高用量で毒性であることが証明された。
【０００６】
Ｐｇｐ阻害剤を開発する際に、ｉ）他のタンパク質に対する特異性の欠如；ｉｉ）固有の薬理活性；ｉｉｉ）in vivoでのＰｇｐ結合部位への近接性の低さ；ｉｖ）血液脳関門又は肝臓及び腎臓などの正常組織に存在するＰｇｐの生理学的役割への強い介入（毒物又は薬物の排出）；ｖ）毒性副作用（J. Robert, Expert Opin Investig Drugs 7 (1998) 929-939）などの様々な問題に直面した。
【０００７】
本発明の目的は、毒性副作用のない固有の薬理活性を有する新規Ｐｇｐ阻害剤を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、Ｐｇｐ結合部位に対して強力なin vivo親和性を有する新規Ｐｇｐ阻害剤を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、多剤耐性表現型を逆転させることができる化合物を提供することである。
【００１０】
本発明は、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（Ｉ）：
【化１】
2013514338.tif 000003
[式中、
【化２】
2013514338.tif 000004
（Ａ）は、下記（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）又は（Ｉｄ）：
【化３】
2013514338.tif 000005
から選択され、
−  Ｒ１及びＲ１’は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ１９、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＯＳｉＲ１５Ｒ１６Ｒ１７及びＮＲ１８Ｃ（＝Ｏ）Ａｒから選択されるか、又はこれらが結合する炭素原子と一緒になって、＝Ｏ又は５〜７員ヘテロシクリルを形成し；
但し、（Ａ）が（Ｉｄ）である場合、Ｒ１は、＝Ｏであることができず；
−  Ｒ２は、Ｈであり；
−  Ｒ３及びＲ３’は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、（ＣＨ２）ｍＯＲ８、ＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒ及びＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＡｒから選択され、前記Ａｒ基は、場合により、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２及びＮ（ＣＨ３）２から選択される１〜３個の基により置換されており；
−Ｒ４は、Ｈ、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ又はＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）ｔＲ８であり；
−  Ｒ５は、Ｈ、ＯＲ９、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８又はＯＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒ基は、場合により、１〜３個のＮＯ２により置換されており；
−  Ｒ６及びＲ７は、互いに独立して、Ｈ、ＣＲ１０Ｒ１１Ｒ１２、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３及びＯＲ１４から選択され；
−  Ｒ８は、５〜７員ヘテロシクリル、（ＣＨ２）ｓＣＮ又は（ＣＨ２）ｓＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒは、場合により、ＮＯ２、Ｎ３又はＯＨから選択される１〜３個の基により置換されており；
−  Ｒ９は、５〜７員ヘテロシクリル又は（ＣＨ２）ｐＯＡｌｋであり；
−  Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒ、ＯＳｉＲ１５Ｒ１６Ｒ１７、（ＣＨ２）ｑＯＡｌｋ及び（ＣＨ２）ｑＣ（＝Ｏ）ＯＡｌｋから選択されるか、又はＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２の２つが、これらが結合する炭素原子と一緒になって、５〜７員ヘテロシクリルを形成し；
−  Ｒ１３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｒＯＨｅｔ、（ＣＨ２）ｒＳＡｒ又は（ＣＨ２）ｒＳＡｌｋであり、
−  Ｒ１４は、Ｈ、（（ＯＣＨ２）２）ｍＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２）ｍＯＲ８、５〜７員ヘテロシクリル又はＣ（＝Ｏ）Ａｒであり；
−  Ｒ１５、Ｒ１６及びＲ１７は、互いに独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択され；
−  Ｒ１８は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
−  Ｒ１９は、Ｈ、５〜７員ヘテロシクリル又は（ＣＨ２）ｓＮＨＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、前記Ａｒは、場合により、ＮＯ２、Ｎ３又はＯＨから選択される１〜３個の基により置換されており；そして
−  ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ及びｔは、互いに独立して、１、２、３又は４から選択される]
で表される化合物、あるいはその薬学的に許容しうる塩、水和物もしくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ化合物、ジアステレオマーもしくはエナンチオマーに関する。
【００１１】
好ましくは、式（Ｉ）において、Ｒ６がＨ以外であり、Ｒ７がＨである場合、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外であり、そして、Ｒ６がＣＯＣＨ３であり、Ｒ７がＯＨである場合、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００１２】
多剤耐性（ＭＤＲ）は、癌の化学療法治療において主要な制限となっている。主なＭＤＲ機序は、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーに属するエネルギー依存トランスポーターによる能動的な薬物排出により、継続的に細胞毒性薬の蓄積を低下させることである。その主な寄与は、ＭＤＲ１遺伝子にコードされるＰ糖タンパク質（Ｐｇｐ又はＡＢＣＢ１）に由来し、これは、異物ならびに多種多様な細胞毒性薬を細胞外へ輸送し（E. Teodori et al., Current Drug Targets 7 (2006) 896-909）、耐性腫瘍で過剰発現していることがしばしば見出される。他の２つのタンパク質のＭＲＰ１（多剤耐性タンパク質１、ＡＢＣＣ１）及びＢＣＲＰ（乳癌耐性タンパク質、ＡＢＣＧ１）もまた、程度は低いが薬物排出にしばしば寄与している可能性がある。
【００１３】
Ｐｇｐは、６０残基のリンカー領域により連結した６１０アミノ酸の２つのドメインで構築された１２８０アミノ酸の糖タンパク質である。それぞれのドメインは、親水性ループで分離された６回膜貫通領域、ならびにＡＴＰ結合部位を特徴づけるよく保存されたWalker Ａ及びＢ配列モチーフを含有する細胞質の親水性ヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）を含有する（M.M. Gottesman et al., Nat Rev Cancer 21 (2002) 48-58）。光親和性標識及び突然変異誘発実験から、薬物結合ドメインが、タンパク質の両端（both halves）にある膜貫通ドメイン内に位置していることが示唆された（E.P. Bruggemann et al., J Biol Chem 264 (1989) 15483-15488; L.M. Greenberger, J Biol Chem, 268 (1993) 11417-11425; and B. Isenberg et al., Eur. J. Biochem. 268 (2001) 2629-2634）。一方、突然変異及び架橋実験により、薬物結合部位が４〜６及び１０〜１２回膜貫通へリックスを包含することが示され、この領域内の共通結合部位に属するアミノ酸が同定された（T.W. Loo and D.M. Clarke, J Biol Chem 276 (2001) 36877-36880）。突然変異誘発、システインスキャニング及びアミノ酸架橋に基づく実験より、「水性孔（aqueous pore）」モデル（E. Teodori et al., Current Drug Targets 7 (2006) 896-909）よりむしろ、薬物結合部位のハイブリッドモデル（「バキュームクリーナー」＋「フリッパーゼ」）が導き出された（T.W. Loo et al., Biochemistry 43 (2004) 12081-12089）。最近、マウスのＰｇｐの３Ｄ  Ｘ線構造（S.G. Aller et al., Science 323 (2009) 1718-1722）から、２つのヌクレオチド結合ドメインが３０Å間隔である６０００Å３の内部空洞が明らかとなった。さらに、環状ペプチド阻害剤の内部空洞への結合が、疎水性、芳香族相互作用及び立体特異性に基づいて異なる結合部位で起こることが示された。ａｐｏと薬物結合Ｐｇｐの両方の構造が、細胞質と脂質二重層の内部膜に薬物侵入の開口部を有しており、これがハイブリッドモデル仮説を裏付けている（T.W. Loo et al., Biochemistry 43 (2004) 12081-12089）。
【００１４】
用語「アルキル」（又は、Ａｌｋ）は、１〜６個の炭素原子を鎖内に有する直鎖又は分岐鎖であってもよい、飽和又は不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。「分岐鎖」は、メチル、エチル又はプロピルなどの１つ又は複数の低級アルキル基が直鎖アルキル鎖に結合しいていることを意味する。「低級アルキル」は、直鎖又は分岐鎖であってもよく、１〜４個の炭素原子を鎖内に有することを意味する。アルキルは、同一又は異なっていてもよく、例えば、ハロ、シクロアルキル、ヒドロキシ（ＯＨ）、アルコシキ、アミノ（ＮＨ２）、アシルアミノ（ＮＨＣＯＡｌｋ）、アロイルアミノ（ＮＨＣＯＡｒ）、カルボキシ（ＣＯＯＨ）を含むことができる１つ以上の「アルキル基置換基」で置換されていてもよい。
【００１５】
用語「アルコシキ」は、−Ｏ−アルキル基を指す。
【００１６】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、３〜１２個の炭素を有する飽和環式、二環式、三環式又は多環式炭化水素基を含み、ここで、任意の置換可能な環原子は、置換基により置換されていてもよい。シクロアルキル部分の例は、シクロヘキシル及びアダマンチルを含むが、これらに限定されない。
【００１７】
用語「ハロ」は、周期表の１７属の原子（ハロゲン）を指し、特に、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子を含む。
【００１８】
用語「アリール」（又は、Ａｒ）は、芳香族単環式、二環式又は三環式炭化水素環系を指し、ここで、任意の置換可能な環原子は、置換基により置換されていてもよい。アリール部分の例は、フェニル、ナフチル及びアントラセニルを含むが、これらに限定されない。用語「アリール」は、また、単環式の場合１〜３個のヘテロ原子、二環式の場合１〜６個のヘテロ原子、又は三環式の場合１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員単環式、８〜１２員二環式又は１１〜１４員三環式環系を指す「ヘテロアリール」を含み、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ又はＳから選択され（例えば、単環式、二環式又は三環式の場合、それぞれ、炭素原子と１〜３、１〜６又は１〜９個のヘテロ原子（Ｎ、Ｏ又はＳ））、ここで、任意の置換可能な環原子は、置換基により置換されていてもよい．
【００１９】
用語「ヘテロシクリル」（又は、Ｈｅｔ）は、１〜３個のヘテロ原子を有する非芳香族５〜７員単環式の環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ又はＳから選択され（例えば、炭素原子とＮ、Ｏ又はＳの１〜３個のヘテロ原子）、ここで、任意の置換可能な環原子は、置換基により置換されていてもよい。
【００２０】
用語「置換基」は、アルキル、ヘテロシクリル又はアリール基上のその基の任意の原子で「置換されている」基を指す。適切な置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコシキ、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、ＳＯ３Ｈ、スルフェート、ホスフェート、ペルフルオロアルキル、ペルフルオロアルコシキ、メチレンジオキシ、エチレンジオキシ、カルボキシル、オキソ、チオキソ、イミノ（アルキル、アリール、アラルキル）、Ｓ（Ｏ）ｎアルキル（式中、ｎは、０〜２である）、Ｓ（Ｏ）ｎアリール（式中、ｎは、０〜２である）、Ｓ（Ｏ）ｎヘテロアリール（式中、ｎは、０〜２である）、Ｓ（Ｏ）ｎヘテロシクリル（式中、ｎは、０〜２である）、アミン（モノ−、ジ−、アルキル、シクロアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル及びその組み合わせ）、エステル（アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル）、アミド（モノ−、ジ−、アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル及びその組み合わせ）、スルホンアミド（モノ−、ジ−、アルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル及びその組み合わせ）、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、非置換ヘテロシクリル、及び非置換シクロアルキルを含むが、これらに限定されない。
【００２１】
用語「アシル」は、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロシクリルカルボニル又はヘテロアリールカルボニル置換基を指し、そのいずれかは、置換基によりさらに置換されていてもよい。
【００２２】
用語「オキソ」は、炭素に結合する場合、カルボニルを、窒素に結合する場合、Ｎ−オキシドを、そして、硫黄に結合する場合、スルホキシド又はスルホンを形成する、酸素原子を指す。
【００２３】
本明細書で用いられる用語「アルケニル」は、２〜１２個の炭素、好ましくは、２〜６個の炭素を有する、部分不飽和の非芳香族炭化水素基を指す。
【００２４】
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有してもよい。不斉置換された原子を含有する本発明の化合物は、光学活性又はラセミ形態で単離することができる。例えば、ラセミ形態の分割によるか、又は光学活性な出発物質から合成することによる、光学活性形態の調製方法は当技術分野でよく知られている。立体化学又は異性体を特に指示しない限り、化合物の全てのキラル、ジアステレオマー、ラセミ形態及び全ての幾何異性体が意図される。
【００２５】
「薬学的に許容しうる」は、適正な医学的判断の範囲内で、ヒト及び下等動物の細胞との接触における使用に適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などがなく、妥当な利益／リスク比に相当することを意味する。
【００２６】
用語「薬学的に許容しうる塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的にも、他の面でも望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、本発明の化合物には、アミノ及び／もしくはカルボキシル基又はそれによく似た基が存在するため、酸塩及び／又は塩基塩を形成することができる。薬学的に許容しうる酸付加塩は、無機及び有機酸から調製することができ、一方、薬学的に許容しうる塩基付加塩は、無機又は有機塩基から調製することができる。薬学的に許容しうる塩に関しては、Berge等のJ. Pharm. Sd, vol. 66, 1 (1977) を参照されたい。表現「非毒性の薬学的に許容しうる塩」は、非毒性の、薬学的に許容しうる無機もしくは有機酸又は無機もしくは有機塩基とから形成された非毒性の塩を指す。例えば、塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導された塩、ならびに酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、フマル酸、メタンスルホン酸及びトルエンスルホン酸などの有機酸から調製された塩が挙げられる。
【００２７】
本発明の内容において、本明細書で使用される用語「処置する（treating）」又は「処置（treatment）」は、そのような用語が用いられたときに障害又は状態、あるいは、そのような障害又は状態の１つ以上の症状の進行を停止、緩和、抑制又は予防することを意味する。
【００２８】
式（Ｉ）を有する本発明の化合物を単独で投与することは可能であるが、それらを医薬組成物として提供することが好ましい。本発明の動物及びヒト使用の両方に有用な医薬組成物は、上記で定義された式（Ｉ）を有する少なくとも１つの化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる担体、場合により、他の治療有効成分と一緒に含む。
【００２９】
特定の好ましい実施態様においては、併用療法で必要な活性成分は、同時投与のために単一の医薬組成物中に組み合せることができる。
【００３０】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容しうる」及びその文法上の変形は、組成物、担体、希釈剤及び試薬を指す場合、互換的に使用され、そして、その物質を動物に投与することができ、また投与した際に嘔吐、眩暈、異常亢進などの望まない生理作用が生じることがないことを表す。
【００３１】
活性成分が溶解又は分散した薬理学的組成物の調製は、当技術分野でよく知られており、製剤化に応じて制限する必要はない。典型的には、そのような組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかの注射剤として調製されるが、使用前に液体にする、液剤又は懸濁剤に適する固体形態も調製することができる。また、その調製物は乳化してもよい。特に、医薬組成物は、固体投与剤形、例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤、糖衣剤又は顆粒剤に製剤化してもよい。
【００３２】
溶剤の選択及び溶剤における活性物質の含有量は、一般的に、活性化合物の溶解性及び化学特性、特定の投与方法ならびに薬務で順守される規定に応じて決定される。例えば、賦形剤、例えば、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、崩壊剤、例えば、デンプン、アルギン酸及び特定の複合ケイ酸塩は、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクなどの潤滑剤とともに、錠剤の調製に使用することができる。カプセル剤を調製するために、ラクトース及び高分子量のポリエチレングリコールを使用することが有利である。水性懸濁剤が使用される場合、これらは、乳化剤又は懸濁を容易にする薬剤を含有することができる。スクロース、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール及びクロロホルム又はその混合物などの希釈剤も使用することができる。
【００３３】
医薬組成物は、適切な剤形でヒト及び動物に、経口、直腸、経鼻、口腔（バッカル）、眼内、舌下、経皮、直腸、局所、膣内、非経口（皮下、動脈内、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）、嚢内及び腹腔内を含む、局所又は全身投与により投与することができる。好ましい経路を、例えば、被験者の状態により変更してもよいことが理解されるであろう。
【００３４】
製剤は、薬学分野でよく知られた任意の方法により単位投与剤形で調製することができる。そのような方法は、活性成分を１つ以上の補助成分を構成する担体と接触させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体又はその両方に、均一かつ密接に接触させ、必要であれば、次に、製品を成形することにより製造される。
【００３５】
単位又は分割剤形で対象に投与される本発明の化合物の総１日投与量は、例えば、１日あたり、約０．００１〜約１００mg/kg体重であり、好ましくは、０．０１〜１０mg/kg/日の量である。投与単位組成物は、１日用量を作製するために使用される、そのような量のその約数量（submultiple）を含有することができる。しかしながら、任意の特定患者に対する特定の投与量レベルが、体重、全体の健康、性別、食生活、投与期間及び経路、吸収及び排出速度、他の薬物との併用ならびに処置される特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存していることを理解されたい。
【００３６】
有利な実施態様によれば、上記式（Ｉ）で表される化合物は、癌において、又は細菌、真菌もしくは寄生虫感染症において、多剤耐性を逆転又は抑制するために使用される。
【００３７】
好ましくは、本発明は、癌において、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための上記で定義される式（Ｉ）で表される化合物に関する。
【００３８】
特定の実施態様によれば、前記式（Ｉ）で表される化合物は、抗腫瘍医薬と一緒に投与される。
【００３９】
上記で定義される式（Ｉ）において、好ましくは、（Ａ）は、上記で定義される（Ｉｂ）である。
【００４０】
好ましくは、式（Ｉ）において、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００４１】
好ましくは、Ｒ１及びＲ１’は、互いに独立して、Ｈ、ＯＣ（＝Ｏ）Ａｒから選択されるか、又はこれらが結合する炭素原子と一緒になって、＝Ｏ基を形成する。
【００４２】
好ましくは、Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ８又はＯＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、最も好ましくは、Ｈ、２−オキシテトラヒドロピラニル又はＯＣ（＝Ｏ）Ａｒであり、特に、ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈである。
【００４３】
好ましくは、Ｒ４は、Ｈ、ＯＲ８又はＯＣ（＝Ｏ）Ａｒである。より好ましくは、Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ又は２−オキシテトラヒドロピラニルである。
【００４４】
好ましくは、Ｒ５は、Ｈ又はＯＲ９であり、より好ましくは、Ｈ又は２−オキシテトラヒドロピラニルである。
【００４５】
好ましくは、Ｒ６、Ｒ７の１つは、Ｈ又はＣ（＝Ｏ）Ｒ１３であり、特に、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【００４６】
好ましくは、Ｒ６は、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり、特に、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【００４７】
好ましくは、Ｒ６、Ｒ７は、Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、２−オキシテトラヒドロピラニル、ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ又はＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２ＣＯ２ＣＨ３から選択される。
【００４８】
Ｒ８は、好ましくは、１つ以上の環炭素原子が、少なくとも１つのヘテロ原子−Ｏ−に置き換わっている５〜７員シクロアルキル基である。より好ましくは、Ｒ８は、２−テトラヒドロピラニルである。
【００４９】
好ましくは、Ｒ３及び／又はＲ４は、Ｈとは異なる。
【００５０】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＩＩ）：
【化４】
2013514338.tif 000006
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物に関する。
【００５１】
好ましい式（ＩＩ）で表される化合物としては、下記式（ＩＩ−１）：
【化５】
2013514338.tif 000007
[式中、Ｒ３、Ｒ６及びＲ７は、上記式（ＩＩ）で定義されるとおりである]
を有する化合物を挙げることができる。
【００５２】
好ましくは、式（ＩＩ）又は（ＩＩ−１）において、Ｒ３は、Ｈである。
【００５３】
有利な実施態様によれば、式（ＩＩ）又は（ＩＩ−１）において、Ｒ３は、Ｈ以外である。好ましくは、Ｒ３は、ＯＨ又はＯＲ８であり、Ｒ８は、上記で定義され、好ましくは、ヘテロシクリル（テトラヒドロピラニルなど）である。
【００５４】
好ましくは、式（ＩＩ）又は（ＩＩ−１）において、Ｒ６及びＲ７は、互いに独立して、Ｈ、ＣＯＲ１３及びＯＲ１４から選択され、Ｒ１３は、好ましくは、アルキルであり、Ｒ１４は、好ましくは、複素環である。
【００５５】
本発明は、また、上述した使用のための、下記式（ＩＩＩ’）：
【化６】
2013514338.tif 000008
[式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
を有する化合物に関する。
【００５６】
ここで、基−ＯＣＯＡｒが、分子面の上又は下のいずれかにあることを言及する。従って、
【化７】
2013514338.tif 000009
により表される結合「ａ」は、
【化８】
2013514338.tif 000010
又は
【化９】
2013514338.tif 000011
のいずれであってもよい。
【００５７】
好ましくは、式（ＩＩＩ’）において、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００５８】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2013514338.tif 000012
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物に関する。
【００５９】
好ましくは、式（ＩＩＩ）において、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００６０】
好ましくは、式（ＩＩＩ）において、Ｒ３は、−ＯＣＯＰｈ、２−オキシテトラヒドロピラニル又はＯＲ８であり、Ｒ８は、好ましくは、複素環基である。
【００６１】
式（ＩＩＩ）中のドットは、Ｈの位置（式（Ｉ）のＲ２）を指す。式（ＩＩＩ）で表される化合物は、５β−Ｈ誘導体である。
【００６２】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＩＩＩ−１）：
【化１１】
2013514338.tif 000013
[式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物に関する。
【００６３】
好ましくは、式（ＩＩＩ−１）において、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００６４】
好ましくは、式（ＩＩＩ−１）において、Ｒ３は、ＯＲ８（Ｒ８は、好ましくは、ヘテロシクリル基である）、ＯＣＯＡｒ及びＨから選択される。
【００６５】
好ましくは、式（ＩＩＩ−１）において、Ｒ６は、ＣＯＲ１３である。
【００６６】
好ましくは、式（ＩＩＩ−１）において、Ｒ４は、ＯＲ８（Ｒ８は、特に、ヘテロシクリル基である）である。
【００６７】
従って、本発明の化合物の好ましい群は、下記式（ＩＩＩ−２）：
【化１２】
2013514338.tif 000014
[Ｒ３、Ｒ８及びＲ１３は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、Ｒ３は、好ましくは、ＯＲ８（Ｒ８は、好ましくは、ヘテロシクリル基である）、ＯＣＯＡｒ及びＨから選択される]
を有する化合物からなる。
【００６８】
従って、本発明の化合物の好ましい群は、下記式（ＩＩＩ−３）：
【化１３】
2013514338.tif 000015
[Ｒ３、Ｒ８及びＲ１３は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、Ｒ３は、好ましくは、ＯＲ８（Ｒ８は、好ましくは、ヘテロシクリル基である）、ＯＣＯＡｒ及びＨから選択される]
を有する化合物からなる。
【００６９】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＩＶ）：
【化１４】
2013514338.tif 000016
[式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ６は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物に関する。
【００７０】
好ましくは、式（ＩＶ）において、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００７１】
式（ＩＶ）で表される化合物は、５β−Ｈ誘導体である。
【００７２】
好ましくは、式（ＩＶ）において、Ｒ３は、ＯＣＯＡｒである。
【００７３】
好ましくは、式（ＩＶ）において、Ｒ６は、ＣＯＲ１３である。
【００７４】
好ましくは、式（ＩＶ）において、Ｒ４は、Ｈである。
【００７５】
結合
【化１５】
2013514338.tif 000017
は、
【化１６】
2013514338.tif 000018
又は
【化１７】
2013514338.tif 000019
のいずれであってもよい。
【００７６】
従って、本発明の化合物の好ましい群は、下記式（ＩＶ−１）：
【化１８】
2013514338.tif 000020
[Ｒ１３は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、好ましくは、アルキルである]
を有する化合物からなる。
【００７７】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（Ｖ）：
【化１９】
2013514338.tif 000021
[式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２基の１つは、（ＣＨ２）ｑＯＡｌｋ又は（ＣＨ２）ｑＣ（＝Ｏ）ＯＡｌｋである]
で表される化合物に関する。
【００７８】
好ましくは、式（Ｖ）において、Ｒ３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００７９】
従って、本発明の化合物の好ましい群は、下記式（Ｖ−１）又は（Ｖ−２）：
【化２０】
2013514338.tif 000022
[Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
を有する化合物からなる。
【００８０】
好ましくは、式（Ｖ−１）又は（Ｖ−２）において、Ｒ３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００８１】
好ましくは、式（Ｖ−１）及び（Ｖ−２）において、Ｒ４は、Ｈである。
【００８２】
好ましくは、式（Ｖ−１）及び（Ｖ−２）において、Ｒ３及びＲ４は、ＯＲ８及びＯＣＯＡｒから選択され、Ｒ８は、好ましくは、複素環（２−テトラヒドロピラニルなど）である。
【００８３】
好ましくは、式（Ｖ−１）及び（Ｖ−２）において、Ｒ４は、Ｈであり、Ｒ３及びＲ４は、ＯＲ８及びＯＣＯＡｒから選択され、Ｒ８は、好ましくは、複素環である。
【００８４】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＶＩ）：
【化２１】
2013514338.tif 000023
[式中、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、
そして、Ｒ４、Ｒ６及びＲ７は、Ｈではない]
で表される化合物に関する。
【００８５】
本発明は、また、多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための、式（ＶＩＩ）：
【化２２】
2013514338.tif 000024
[式中、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、Ｒ５は、Ｈではない]
で表される化合物に関する。
【００８６】
本発明は、また、下記式：
【化２３】
2013514338.tif 000025
を有する式（Ｉ）で表される化合物を除く、上記で定義される式（Ｉ）で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００８７】
上述される化合物１０３（Ｒ＋Ｓ）CAS[492453-63-1]及び９（Ｒ＋Ｓ）CAS[29371-92-4]は、ラセミ混合物の形態である。
【００８８】
本発明は、また、式（ＶＩＩＩ）：
【化２４】
2013514338.tif 000026
[式中、Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００８９】
式（ＶＩＩＩ）で表される化合物は、５β−誘導体である。
【００９０】
好ましくは、式（ＶＩＩＩ）において、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００９１】
本発明は、また、上述される化合物１０３（Ｒ＋Ｓ）CAS[492453-63-1]及び９（Ｒ＋Ｓ）CAS[29371-92-4]を除く、上記で定義される式（ＩＩ）で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９２】
本発明は、また、上述される化合物１０３（Ｒ＋Ｓ）CAS[492453-63-1]及び９（Ｒ＋Ｓ）CAS[29371-92-4]を除く、上記で定義される式（ＩＩ−１）で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９３】
本発明は、また、Ｒ３が、Ｈ以外である、上記で定義される式（Ｉ）で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９４】
本発明は、また、式（ＩＸ）：
【化２５】
2013514338.tif 000027
[式中、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりである]
で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９５】
式（ＩＸ）において、５位の水素原子は、α−又はβ−位のいずれかである。
【００９６】
好ましくは、式（ＩＸ）において、Ｒ３、Ｒ’３、Ｒ４及び／又はＲ５の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
【００９７】
本発明は、また、上記で定義される式（ＩＩＩ’）で表される化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９８】
本発明は、また、上記で定義される式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−１）、（ＩＩＩ−２）、（ＩＶ）、（ＩＶ−１）、（Ｖ）、（Ｖ−１）、（Ｖ−２）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩ）の１つを有する化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる賦形剤との混合物で含む医薬組成物に関する。
【００９９】
本発明は、また、上述される９（Ｒ＋Ｓ）CAS[29371-92-4]及び１３８CAS[40212-36-0]のＲ／Ｓ混合物を除く、上記で定義される式（ＩＩ）を有する化合物に関する。
【０１００】
本発明は、また、式（ＩＩ−１）：
【化２６】
2013514338.tif 000028
[Ｒ３、Ｒ６及びＲ７は、上記式（Ｉ）で定義されるとおりであり、
そして、Ｒ３は、Ｈ以外である]
を有する化合物に関する。
【０１０１】
本発明は、また、
【化２７】
2013514338.tif 000029
のＲ／Ｓ混合物を除き、そして
【化２８】
2013514338.tif 000030
を除く、上記で定義される式（ＩＩＩ）を有する化合物に関する。
【０１０２】
本発明は、また、
【化２９】
2013514338.tif 000031
を除く、上記で定義される式（ＩＶ）を有する化合物に関する。
【０１０３】
本発明は、また、上記で定義される式（ＩＶ−１）、（Ｖ−１）又は（ＶＩ）を有する化合物に関する。
【０１０４】
本発明は、また、
【化３０】
2013514338.tif 000032
を除く、上記で定義される式（Ｖ）又は（Ｖ−２）を有する化合物に関する。
【０１０５】
本発明は、また、
【化３１】
2013514338.tif 000033
を除く、上記で定義される式（ＶＩＩ）を有する化合物に関する。
【０１０６】
本発明は、また、下記の好ましい化合物に関する：
【化３２】
2013514338.tif 000034
2013514338.tif 000035
2013514338.tif 000036
【０１０７】
本発明は、また、前記好ましい化合物の１つを、少なくとも１つの薬学的に許容しうる賦形剤と併せて含む医薬組成物、ならびに多剤耐性を逆転又は抑制するための使用のための前記化合物に関する。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】図１は、［３Ｈ］チミジン取り込みにより評価される、生存Ｈ２９５Ｒ及びＲ７細胞を０．００１μM〜１００μMの種々の濃度の様々な細胞毒性物質（cytotoxics）で２４時間処理することで得られる効果を表す。これらは、いくつかの細胞毒性薬の濃度（μM）の関数としての、生存細胞（１：Ｋ５６２／Ｒ７及び２：Ｈ２９５Ｒ細胞）の［３Ｈ］チミジン取り込み率（％）を表す。黒丸の曲線は、ドキソルビシンに関し；白丸の曲線は、ビノレルビンに関し；黒三角形の曲線は、タキソールに関し；白三角形の曲線は、ビンブラスチンに関し；黒四角形の曲線は、ミトキサントロンに関し、そして、白四角形の曲線は、コルヒチンに関する。
【図２】図２は、［３Ｈ］チミジン取り込みにより評価される、生存Ｈ２９５Ｒ及びＲ７細胞を０．００１μM〜１００μMの種々の濃度の様々な細胞毒性物質（cytotoxics）で２４時間処理することで得られる効果を表す。これらは、いくつかの細胞毒性薬の濃度（μM）の関数としての、生存細胞（１：Ｋ５６２／Ｒ７及び２：Ｈ２９５Ｒ細胞）の［３Ｈ］チミジン取り込み率（％）を表す。黒丸の曲線は、ドキソルビシンに関し；白丸の曲線は、ビノレルビンに関し；黒三角形の曲線は、タキソールに関し；白三角形の曲線は、ビンブラスチンに関し；黒四角形の曲線は、ミトキサントロンに関し、そして、白四角形の曲線は、コルヒチンに関する。
【図３】図３は、［３Ｈ］チミジン取り込みにより評価される、本発明の化合物（ステロイドモジュレータ）の、ドキソルビシン（ＤＯＸＯ）に耐性のＲ７細胞の化学増感に及ぼす効果を表す。耐性Ｒ７細胞を、前記ステロイドモジュレータの非存在（○）又は存在下で、増加濃度のドキソルビシニンと２４時間インキュベートした。コントロールとして、感受性Ｋ５６２細胞を、同じ濃度のドキソルビシンとインキュベートした（●）。図３では、黒三角形（▼）の曲線は、３μMのプロゲステロンに関し；白ひし形（◇）の曲線は、０．４μMの化合物（３０）に関し；黒四角形（■）の曲線は、０．４μMの化合物（３３）に関し；白四角形（□）の曲線は、０．５μMの化合物（４１）に関し；黒ひし形（◆）の曲線は、０．５μMの化合物（５１）に関し；黒三角形（▲）の曲線は、０．４μMのシクロスポリンＡに関する。
【図４】図４は、［３Ｈ］チミジン取り込みにより評価される、本発明の化合物（ステロイドモジュレータ）の、ドキソルビシン（ＤＯＸＯ）に耐性のＲ７細胞の化学増感に及ぼす効果を表す。耐性Ｒ７細胞を、前記ステロイドモジュレータの非存在（○）又は存在下で、増加濃度のドキソルビシニンと２４時間インキュベートした。コントロールとして、感受性Ｋ５６２細胞を、同じ濃度のドキソルビシンとインキュベートした（●）。図４では、黒三角形（▼）の曲線は、０．５μMの化合物（７３）に関し；黒四角形（■）の曲線は、０．５μMの化合物（７１）に関し；そして、白三角形（△）の曲線は、０．４μMのシクロスポリンＡに関する。
【図５】図５は、プロゲステロン受容体に対する本発明の化合物の競合結合アッセイを表す。比Ｂ／Ｂ0は、試験化合物の濃度（μM）の関数として表される。黒ひし形（◆）の曲線は、ＯＲＧ２０５４に関し；黒四角形（■）の曲線は、化合物（３０）に関し；黒丸（●）の曲線は、化合物（３３）に関し；黒星（★）の曲線は、化合物（４１）に関し；黒三角形（▲）の曲線は、化合物（５３）に関し、そして、白三角形（△）の曲線は、化合物（５９）＋（６２）に関する。
【図６】図６は、ＳＲ６（合成コレステロール降下薬）をポジティブコントロール（四角形の曲線）（■）として使用した、本発明の化合物によるｈＰＸＲ受容体の活性を表す。試験化合物は、
【数１】
2013514338.tif 000037
である。ルシフェラーゼ活性（ＲＬＵ）は、該化合物の濃度（Ｍ）の関数として表される。
【図７】図７は、溶剤（●）、ドキソルビシン（○）、化合物（３３）単独（▼）、及び化合物（３３）とドキソルビシン（△）で処理したマウスの腫瘍体積を表す。腫瘍体積は、日数の関数として示される。図７は、Ｈ２９５Ｒ細胞を異種移植したマウスに関し、図８は、Ｒ７細胞を異種移植したマウスに関する（矢印は、マウスの処理の開始を示す）。
【図８】図８は、溶剤（●）、ドキソルビシン（○）、化合物（３３）単独（▼）、及び化合物（３３）とドキソルビシン（△）で処理したマウスの腫瘍体積を表す。腫瘍体積は、日数の関数として示される。図７は、Ｈ２９５Ｒ細胞を異種移植したマウスに関し、図８は、Ｒ７細胞を異種移植したマウスに関する（矢印は、マウスの処理の開始を示す）。
【０１０９】
実施例
本発明の化合物の化学合成
実施例１：７−モノ−置換プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン誘導体（３）の調製
化合物（３）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化３３】
2013514338.tif 000038
【０１１０】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−プレグナ−５−エン−７β−オール（１）
ＴＨＦ（２mL）及びメタノール（１mL）混合物に溶解させた、３，２０−ビス−エチレンジオキシ−プレグナ−５−エン−７−オン（Mappus E. & Cuilleron C.Y., J. Chem. Res. 1979 [S], 42-3; [M], 501-35を参照）（１００mg、０．２４０mmol、１．０当量）を、窒素下で、ＮａＢＨ４（１５mg、０．３４４mmol、１．４当量）の存在下、４℃で３０分間磁気撹拌した。反応物を４℃で冷却し、４℃で、アセトン（０．５mL）、酢酸（０．０３mL）及び水（０．５mL）混合物を添加して過剰のＮａＢＨ４を中和した。
【０１１１】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：２）で分析したところ、７α−及び７β−オール異性体に相当する２つの主要スポットが確認された。
【０１１２】
生成物を、同様の条件の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣで精製して、より保持の高い生成物として純粋な７β−オール異性体１（５５mg）と７α−オール異性体（１９mg）を得た。
【０１１３】
通常の抽出手順：反応混合物を、減圧下又は窒素気流下のいずれかで極少量に蒸発させ、水に溶かして、記載する有機溶媒で抽出した（×３／４回）。合わせた有機層を水で洗浄し（×３／４回）、相分離紙（Whatman）で濾過するか、又は固体硫酸ナトリウムを添加するかのいずれかにより乾燥させた。減圧下又は窒素気流下のいずれかで、溶媒を極少量に蒸発乾固させた。残留ピリジンが存在する場合、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により除去した。
【０１１４】
７β−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（２）
ビス−エチレンケタール誘導体１（５０mg、０．１１９mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２０mg）及び少量の水（０．６mL）を含有するアセトン（１２mL）溶液を、窒素下、室温で３日間磁気撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０１１５】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析した。
【０１１６】
生成物を同様の条件の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（展開×２）で精製して、ＵＶを吸収する微量の７β−ヒドロキシステロイド２（６mg）とはるかに高いＲｆ値を有する主要量の４，６−ジエン−３−オン（３２mg）を得た。
【０１１７】
７β−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（３）
７β−ヒドロキシ誘導体２（６mg、０．０１８mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（０．４２mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．０８mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（０．４mg）を含有する即時調製溶液中、室温で１時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。。
【０１１８】
通常の抽出（ジクロロメタン）の後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（クロロホルム／メタノール  １０：１；石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析したところ、出発物質のアルコール及び上記の４，６−ジエン−３−オンとは異なるＲｆ値の主要なＵＶ吸収スポットが確認された。
【０１１９】
生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で精製して、クロマトグラフ特性に基づいて７β−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルエーテル誘導体３と仮定される極少量の化合物を得た。
【０１２０】
実施例２：１１−モノ−置換（５β−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体（６）及び（７）の調製
化合物（６）及び（７）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化３４】
2013514338.tif 000039
【０１２１】
１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４）
０．８％ピリジン（８２mL）を含有するジオキサン−９５％エタノール１：１（v/v）混合物に溶解させた、１１α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（「１１α−ヒドロキシプロゲステロン」）（Sigma）（１．０ｇ、３．０３mmol、１．０当量）をガラス水素化装置に導入し、大気圧の水素下で、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（６８６mg）の存在下、３０℃で１７時間磁気撹拌した。
【０１２２】
反応混合物をCelite（商標）パッドで濾過し、減圧下で蒸発させた。ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。
【０１２３】
残渣を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：３）で分析したところ、主要な非ＵＶ吸収スポットが確認された。
【０１２４】
生成物を同様の条件の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣで精製して、純粋な４，５−二水素化ジオン４（７４９mg）を得た。
【０１２５】
１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（６）
１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（７）
１１α−ヒドロキシ誘導体４（１００mg、０．３０１mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（２．５０mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．５０mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（２．５mg）を含有する即時調製溶液中、室温で１時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３を添加して反応を停止した。
【０１２６】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０１２７】
石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を用いたＴＬＣから、報告されたテトラヒドロピラニルエーテル誘導体５[CAS 492453-68-6]に非分離Ｒ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。これらの２つの異性体を、同様の条件の分取ＴＬＣで分離して、より保持の低い異性体６（６４．４mg）とより保持の高い異性体７（５０．２mg）の純粋な試料を得た。
【０１２８】
より少なく保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体６
1H NMR (CDCl3) 0.652 (s, 18-CH3), 1.142 (s, 19-CH3), 2.153 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.12 (m, 11-H), 4.58 (m, 2'-H)
13C NMR (CDCl3) 39.22 (1), 38.45 (2), 214.62 (3), 42.77 (4), 46.22 (5), 25.86 (6), 26.71 (7), 34.47 (8), 45.10 (9), 36.00 (10), 70.45 (11), 43.68 (12), 43.75 (13), 55.58 (14), 24.47 (15), 23.21 (16), 63.33 (17), 14.41 (18), 22.75 (19), 209.32 (20), 31.58 (21), 96.38 (2'-OTHP), 31.89 (3'-OTHP), 21.71 (4'-OTHP), 25.33 (5'-OTHP), 65.45 (6'-OTHP)
【０１２９】
より保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体７
1H NMR (CDCl3) 0.613 (s, 18-CH3), 1.120 (s, 19-CH3), 2.135 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.80 (m, 11-H), 4.55 (m, 2'-H)
13C NMR (CDCl3) 39.65 (1), 38.34 (2), 213.76 (3), 42.66 (4), 45.91 (5), 26.03 (6), 26.74 (7), 34.81 (8), 45.24 (9), 36.00 (10), 78.48 (11), 47.87 (12), 43.95 (13), 55.19 (14), 24.52 (15), 22.74 (16), 63.51 (17), 14.32 (18), 23.48 (19), 209.09 (20), 31.61 (21), 101.37 (2'-OTHP), 31.30 (3'-OTHP), 20.04 (4'-OTHP), 25.32 (5'-OTHP), 62.99 (6'-OTHP)
【０１３０】
実施例３：１７−モノ−置換プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン誘導体（１０）及び（１１）の調製
この実施例は、下記式を有する１７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン１０及び１７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン１１の調製に関する：
【化３５】
2013514338.tif 000040
【０１３１】
１７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（１０）
１７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（１１）
１７α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（「１７α−ヒドロキシプロゲステロン」）（５０mg、０．１５１mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（１．２５mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．２５mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（１．２５mg）を含有する即時調製溶液中、室温で２日間撹拌した。次に、これらの試薬を同量さらに加え、出発物質のほとんどが変換されるまで撹拌を５日間維持した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０１３２】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。残留出発物質を、１回目の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で除去した。報告されたテトラヒドロピラニルエーテル誘導体９[CAS 29371-92-4]（４９．７mg）に存在する２つのＲ／Ｓ異性体の不純物を含有しない混合物を、分取ＴＬＣ（ジクロロメタン／酢酸エチル  ２０：１、展開×６）で分離して、より少なく保持された異性体１０（１３．５mg）とより保持の高い異性体１１（１２mg）の純粋な試料を得た。
【０１３３】
より少なく保持された１７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体１０（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.635 (s, 18-CH3), 1.182 (s, 19-CH3), 2.189 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.46 (m, 2'-H), 5.73 (s, 4-H)
13C NMR (CDCl3) 35.64 (1), 33.96 (2), 199.60 (3), 123.84 (4), 171.24 (5), 32.83 (6), 31.96 (7), 35.72 (8), 53.21 (9), 38.55 (10), 20.72 (11), 30.60 (12), 47.24 (13), 50.59 (14), 23.50 (15), 23.48 (16), 94.69 (17), 14.62 (18), 17.38 (19), 209.99 (20), 27.45 (21), 96.22 (2'-OTHP), 31.74 (3'-OTHP), 21.45 (4'-OTHP), 25.18 (5'-OTHP), 65.17 (6'-OTHP)
【０１３４】
より保持された１７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体１１（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.627 (s, 18-CH3), 1.186 (s, 19-CH3), 2.122 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.41 (m, 2'-H), 5.74 (s, 4-H)
13C NMR (CDCl3) 35.64 (1), 33.96 (2), 199.58 (3), 123.85 (4), 171.28 (5), 32.85 (6), 31.92 (7), 35.84 (8), 53.13 (9), 38.55 (10), 20.79 (11), 30.82 (12), 47.73 (13), 50.99 (14), 23.69 (15), 26.26 (16), 97.49 (17), 14.60 (18), 17.39 (19), 209.80 (20), 27.18 (21), 96.61 (2'-OTHP), 31.84 (3'-OTHP), 20.16 (4'-OTHP), 25.16 (5'-OTHP), 63.33 (6'-OTHP)
【０１３５】
実施例４：３，７−二置換（５α−Ｈ）プレグナン−２０−オン誘導体（１８）の調製
この実施例は、下記反応スキームに従う、３β，７α−ジベンゾイルオキシ（５α）−プレグナン−２０−オン（１８）の調製に関する：
【化３６】
2013514338.tif 000041
【０１３６】
３β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（１２）
３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン（「プレグネノロン」）（１０．０ｇ、３１．５９８mmol、１．０当量）（Sigma）を、ピリジン（２００mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（１０mL、８６．１４９mmol、２．７３当量）と室温で４時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル１５０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１５０mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１３７】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗ベンゾイル化生成物１２を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析し、これをさらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０１３８】
３β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−エチレンケタール（１３）
Dean-Stark水トラップを使用して、粗２０−ケトン１２（１３．４ｇ、３１．８６１mmol、１．０当量）のエチレングリコール（１５０mL）及び塩酸ピリジニウム（１．５ｇ）を含有するトルエン（１５００mL）溶液を還流下で２４時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、固体ＮａＨＣＯ３、次に、ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。
【０１３９】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗２０−ケタール１３を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析し、これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
【０１４０】
２０−エチレンジオキシ−３β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−７−オン１４
乾燥プレグナ−５−エン誘導体１３（５．０ｇ、１０．７６１mmol、１．０当量）を、無水ジクロロメタン７６０mLに無水ピリジン及び乾燥ＣｒＯ３を添加することにより４℃で即時調製した、無水ＣｒＯ３−（ピリジン）２錯体（６９．４ｇ、２６９．０２５mmol、２５当量）（Mappus E. & Cuilleron C.Y., J. Chem. Res. 1979 [S], 42-3; [M], 501-35）の激しく撹拌した溶液に加えた。４℃で１５分間、次に、室温で５時間撹拌を維持した。
【０１４１】
反応混合物をFlorisil（登録商標）カラムで濾過し、減圧下で蒸発させた。Ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。蒸発させて生成物が回収されなくなるまで、カラムをジクロロメタンで洗浄した。
【０１４２】
粗抽出物（４．５ｇ）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析した。
【０１４３】
生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ３：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、純粋な５−エン−７−オン１４（２．４７ｇ）を得た。
【０１４４】
２０−エチレンジオキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−７−オン（１５）
０．８％ピリジン（４２mL）含有するジオキサン−９５％エタノール１：１（ｖ／ｖ）混合物に溶解させた、５−エン−７−オン誘導体１４（５００mg、１．０４５mmol、１．０当量）をガラス水素化装置に導入し、大気圧の水素下で、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（３５０mg）の存在下、３０℃で２４時間磁気撹拌した。
【０１４５】
反応混合物をCelite（商標）パッドで濾過し、減圧下で蒸発させた。
【０１４６】
Ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析したところ、主要な非ＵＶ吸収スポットが確認された。この５，６−二水素化生成物１５を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０１４７】
２０−エチレンジオキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−７α−オール（１６）
（５α）プレグナン−７−オン誘導体１５（３９９mg、０．８３０mmol、１．０当量）の無水ＴＨＦ（１８mL）溶液に、−７８℃で、水素化トリ−sec−ブチルホウ素リチウム（L-Selectride, Aldrich）の１ＭＴＨＦ溶液３．０５mL（３．６７当量）を加えた（Amann A, Ourisson G, Luu B Synthesis 1987, 1002-4を参照）。溶液を窒素下、−７８℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を、７Ｎ  ＮａＯＨ水溶液３．０５mL及び３０％Ｈ２Ｏ２３．０５mLと３０分間撹拌し、減圧下で蒸発させた。
【０１４８】
通常の抽出（ＭＴＢＥ）の後、７α−オール異性体１６（３６５mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析した。
【０１４９】
７α−ヒドロキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（１７）
２０−エチレンジオキシ−７α−オール誘導体１６（３３０mg、０．６８４mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５５mg）及び少量の水（１．７mL）を含有するアセトン（３３．３mL）溶液を窒素下、室温で３時間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０１５０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗２０−オキソ−７α−オール誘導体１７を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析し、これをさらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０１５１】
３β，７α−ジベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（１８）
７α−ヒドロキシ誘導体１７（５０mg、０．１１４mmol、１．０当量）を、ピリジン（０．７２mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．０３７mL、２．８当量）と室温で４８時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル０．８mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液０．８mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１５２】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物（６０mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１）で分析した。
【０１５３】
生成物を、同様の条件の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣで精製して、純粋なジベンゾエート１８（４９mg）を得た。
【０１５４】
1H NMR (CDCl3) 0.681 (s, 18-CH3), 0.954 (s, 19-CH3), 2.108 (s, 21-CH3), 4.96 (m, 3-H), 5.21 (m, 11-H), 7.43 (m, m-Ar-H/3, 2H), 7.55 (m, m-Ar-H/7, 2H+ p-Ar-H/3, 1H), 7.61 (m, p-Ar-H/7, 1H), 8.01(o-Ar-H/7, 2H), 8.04 (o-Ar-H/3, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.60 (1), 27.45 (2), 73.77 (3), 33.41 (4), 47.43 (5), 33.32 (6), 71.48 (7), 38.28 (8), 38.65 (9), 35.64 (10), 21.11 (11), 38.47 (12), 44.22 (13), 50.92 (14), 23.86 (15), 22.80 (16), 63.48 (17), 11.40 (18), 13.16 (19), 208. 70 (20), 31.52 (21), 129.52 (o-Ar/3), 128.26 (m-Ar), 132.76 (p-Ar), 130.76 (置換-Ar), 166.06 (Ar-CO), 129.58 (o-Ar/7), 128.52 (m-Ar), 132.99 (p-Ar), 130.72 (置換-Ar), 165.69 (Ar-CO)
【０１５５】
実施例５：３，１１−二置換（５β−Ｈ）プレグナン−２０−オン誘導体（２０）の調製
この実施例は、３α／β，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−２０−オン（２０）の調製に関する：
【化３７】
2013514338.tif 000042
【０１５６】
３α／β，１１α−ジヒドロキシ（５β）プレグナン−２０−オン（１９）
１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン４（２００mg、０．６０２mmol、１．０当量）を、ピリジン（４mL）中、過剰のＮａＢＨ４（１４４mg、３．８０６mmol、６．３２当量、２等量に別けてｔ＝０と２４時間に加えた）と４℃で４８時間磁気撹拌した。反応物を４℃で冷却し、４℃で、アセトン（０．５mL）、酢酸（０．０３mL）及び水（０．５mL）混合物を添加して過剰のＮａＢＨ４を中和した。
【０１５７】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：３、１：５、及び酢酸エチル）で分析したところ、予想されるジオール混合物が混入したトリオール副生成物の存在が確認された。この粗ジヒドロキシ化合物１９を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０１５８】
３α／β，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−２０−オン（２０）
粗３α／β，１１α−ジヒドロキシ（５β）プレグナン−２０−オン１９（５０mg、０．１４９mmol、１．０当量）を、ピリジン（０．７mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．１mL、０．８６１mmol、５．７６当量）と室温で４５分間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル１mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１５９】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：２及び３：１）で分析した。
【０１６０】
生成物を蛍光シリカゲル分取ＴＬＣで精製した。混入しているトリベンゾエート副生成物は、１回目の蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１）で除去した。次に、分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１、展開×１、次に、石油エーテル／酢酸エチル  ３：１、展開×１）を行って、３−異性体の非分離混合物としてジベンゾエート２０（１７．６mg）の純粋な試料を得た。
【０１６１】
異性体３α（非分離混合物の試験的帰属）
1H NMR (CDCl3) 0.758 (s, 18-CH3), 1.097 (s, 19-CH3), 2.088 (s, 21-CH3), 5.00 (m, 3-H), 5.45 (m, 11-H), 7.38 (m, m-Ar-H, 4H), 7.61 (m, p-Ar-H, 2H), 7.97-8.11 (o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 37.62 (1), 27.57 (2), 74.82 (3), 32.83 (4), 44.13 (5), 27.12 (6), 26.10 (7), 34.90 (8), 43.41 (9), 35.75 (10), 72.21 (11), 45.73 (12), 44.05 (13), 55.74 (14), 24.34 (15), 22.84 (16), 63.36 (17), 14.29 (18), 23.62 (19), 208.67 (20), 31.48 (21), 129.50 (o-Ar/3α), 128.46 (m-Ar), 133.06 (p-Ar), 130.46 (置換-Ar), 166.12 (Ar-CO), 129.56 (o-Ar/11α), 128.32 (m-Ar), 132.81 (p-Ar), 130.87 (置換-Ar), 165.70 (Ar-CO)
異性体３β（非分離混合物の試験的帰属）
1H NMR (CDCl3) 0.739 (s, 18-CH3), 1.019 (s, 19-CH3), 2.088 (s, 21-CH3), 4.90 (m, 3-H), 5.45 (m, 11-H), 7.38 (m, m-Ar-H, 4H), 7.61 (m, p-Ar-H, 2H), 7.97-8.11 (o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 37.86 (1), 27.84 (2), 73.62 (3), 32.02 (4), 44.70 (5), 27.12 (6), 26.10 (7), 34.75 (8), 43.41 (9), 35.75 (10), 71.72 (11), 45.43 (12), 43.95 (13), 55.41 (14), 24.34 (15), 22.84 (16), 63.30 (17), 14.15 (18), 23.62 (19), 208.74 (20), 31.53 (21), 129.59 (o-Ar/３β), 128.24 (m-Ar), 132.73 (p-Ar), 130.59 (置換-Ar), 166.15 (Ar-CO), 129.56 (o-Ar/11α), 128.32 (m-Ar), 132.81 (p-Ar), 130.73 (置換-Ar), 165.70 (Ar-CO)
【０１６２】
実施例６：７，１１−二置換（５β−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体（３０）、（３２）、（３３）、（３９）、（４０）及び（４１）の調製
実施例６．１．７α，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３０）の調製
化合物（３０）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化３８】
2013514338.tif 000043
【０１６３】
３，２０−ビス−エチレンジオキシプレグナ−５−エン−１１α−オール（２１）
Dean-Stark水トラップを使用して、１１α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（「１１α−ヒドロキシプロゲステロン」）（Sigma）（１０ｇ、３０．２６１mmol、１．０当量）のエチレングリコール（１４０mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（０．６ｇ）を含有するトルエン（４５０mL）溶液を還流下で５時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、固体ＮａＨＣＯ３、次に、ＮａＨＣＯ３水溶液で中和した。
【０１６４】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、抽出物をシリカゲルＴＬＣ（クロロホルム／酢酸エチル  ３：１；クロロホルム／メタノール  １０：１）で分析した。
【０１６５】
１％ピリジンを含有するジクロロメタン−メタノール混合物で粗残渣を３回再結晶して、純粋なエチレンケタール誘導体を得た。母液を、溶離剤としてクロロホルム／酢酸エチル  １０：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製した。トルエンを添加し蒸発させて、精製ビス−エチレンケタール２１を乾燥させた。
【０１６６】
１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）プレグナ−５−エン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２２）
１１α−ヒドロキシ誘導体２１（６．０ｇ、１４．３３５mmol、１．０当量）の１Ｈ−イミダゾール（２．３７ｇ、３４．８１２mmol、２．４３当量）を含有する無水ＤＭＦ（２４０mL）溶液を、−１０℃（氷−アセトン浴）で冷却した。固体の塩化tert−ブチルジメチルシリル（５．２ｇ、３４．４９８mmol、２．４０当量）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応が完了するまで１１日間（ＴＬＣでモニタリング）反応物を室温で撹拌した。
【０１６７】
反応混合物を水８００mLに注いで抽出した。ステロイド誘導体の固体沈殿物を濾過して回収し、水で洗浄した。固体残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、相分離紙（Whatman）で濾過して、減圧下で蒸発乾固し、減圧下、トルエンとの共沸蒸留により乾燥させた。
【０１６８】
乾燥生成物（８．５５ｇ）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ５：１）で分析した。
【０１６９】
粗残渣を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ６：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、シリルエーテル２２（２．４ｇ）の純粋な試料を得たが、一方で純粋でない他のフラクションが回収された。
【０１７０】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−１１α−tert−ブチルジメチルシラニルオキシプレグナ−５−エン−７−オン（２３）
乾燥プレグナ−５−エン誘導体２２（３．５０ｇ、６．５６９mmol、１．０当量）を、無水ジクロロメタン４００mLに無水ピリジン及び乾燥ＣｒＯ３を添加することにより４℃で即時調製した、無水ＣｒＯ３−（ピリジン）２錯体（４２．３６８ｇ、１６４．２１７mmol、２５当量）溶液中、４℃で１５分間、次に、室温で５時間撹拌した。
【０１７１】
反応混合物をFlorisil（商標）カラムで濾過し、減圧下で蒸発させた。Ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。蒸発させて生成物が回収されなくなるまで、カラムをジクロロメタンで洗浄した。
【０１７２】
残渣を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０１７３】
粗生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ３：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、５−エン−７−オン２３（１．０２ｇ）を得た。
【０１７４】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−１１α−tert−ブチルジメチルシラニルオキシ（５β）プレグナン−７−オン（２４）
０．８％ピリジン（１２４mL）を含有するジオキサン−９５％エタノール１：１（v/v）混合物に溶解させた、プレグナ−５−エン−７−オン２３（１．５７６ｇ、２．８８２mmol、１．０当量）をガラス水素化装置に導入し、大気圧の水素下で、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（１．１１ｇ）の存在下、３０℃で２４時間磁気撹拌した。
【０１７５】
反応混合物をCelite（商標）パッドで濾過し、減圧下で蒸発させた。ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。
【０１７６】
乾燥５，６−二水素化生成物２４（１．５３３ｇ）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析したところ、主要な非ＵＶ吸収スポットが確認された。
【０１７７】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−１１α−tert−ブチルジメチルシラニルオキシ（５β）プレグナン−７α−オール（２５）
方法Ａ：
（５β）プレグナン−７−オン誘導体２４（９９０mg、１．８０４mmol、１．０当量）の無水ＴＨＦ（４０mL）溶液に、−７８℃で、水素化トリ−sec−ブチルホウ素リチウム（L-Selectride, Aldrich）の１ＭＴＨＦ溶液６．６７mL（３．７当量）を加えた（Amann A, Ourisson G, Luu B Synthesis 1987, 1002-4）。溶液を窒素下、−７８℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を、７Ｎ  ＮａＯＨ水溶液６．６７mL及び３０％Ｈ２Ｏ２６．６７mLと３０分間撹拌し、減圧下で蒸発させた。
【０１７８】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥生成物（９９９mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１、３：１、及び１：１）で分析したところ、７α−及び７β−ヒドロキシ異性体に相当する２つのスポットが確認された。
【０１７９】
粗残渣を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ３：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、より保持の低い異性体である７α−オール２５（４１９mg）の純粋な試料及び依然少量の７α−オールを含有する７β−オール副生成物３４の試料（下記参照）（４５２mg）を得た。
【０１８０】
方法Ｂ：
ＴＨＦ（１５mL）及びメタノール（７５mL）混合物に溶解させた、（５β）プレグナン−７−オン誘導体２４（３．６４ｇ、６．６３２mmol、１．０当量）を、窒素下で、ＮａＢＨ４（３００mg、７．９３mmol、１．２当量）の存在下、室温で４８時間磁気撹拌した。反応物を４℃で冷却し、４℃で、アセトン（１０mL）、酢酸（０．５mL）及び水（１０mL）混合物を添加して過剰のＮａＢＨ４を中和した。
【０１８１】
通常の抽出（ＭＴＢＥ）の後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析したところ、２つの主要スポットが確認された。
【０１８２】
粗生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ３：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、より保持の低い異性体である純粋な７α−オール異性体２５（１．０８７ｇ）、両方の異性体を含有する中間フラクション（１．８１８ｇ）、及び純粋な７β−オール異性体（０．８８６ｇ）を得た。
【０１８３】
７α−ベンゾイルオキシ−１１α−tert−ブチルジメチルシラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２６）
７α−ヒドロキシ誘導体２５（４００mg、０．７２６mmol、１．０当量）を、ピリジン（８mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．５mL、４．３０７mmol、５．９３当量）と室温で７２時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル１０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１０mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１８４】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、抽出物（４９１mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ５：１）で分析した。
【０１８５】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ５：１、展開×２）で精製して、７α−ベンゾエート２６を得た。
【０１８６】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−７α−ベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−１１α−オール（２７）
ＴＨＦ（１７mL）に溶解させた１１α−tert−ブチルジメチルシリル誘導体２６（Ｃ６５４．９５；１．５０ｇ、２．２９０mmol、１．０当量）に、市販のフッ化テトラ−ブチルアンモニウムの１ＭＴＨＦ溶液（１４mL、１４mmol、３．６０ｇ、６．０２当量）を添加した後、４℃で１２時間撹拌した。
【０１８７】
従来の抽出（酢酸エチル）の後、抽出物（１．３７ｇ）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析した。
【０１８８】
粗生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、１１α−オール２７（０．９３ｇ）の純粋な試料を得た。合わせた純粋ではないフラクションを、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で精製して、純粋な１１α−オールをさらに得た。
【０１８９】
７α−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２８）
ビス−エチレンジオキシ−１１α−オール誘導体２７（７０mg、０．１２９mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２１mg）及び少量の水（０．６mL）を含有するアセトン（１２mL）溶液を、室温で２日間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０１９０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥生成物（４４mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２）で分析した。
【０１９１】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２）で精製して、純粋な３，２０−ジオン２８（２９mg）を得た。
【０１９２】
７α，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２９）
ビス−エチレンジオキシ−７α−ベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−１１α−オール誘導体２７（６９mg、０．１２８mmol、１．０当量）を、ピリジン（１．４２mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．０８８mL、０．７５８mmol、５．９４当量）と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル５mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液５mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１９３】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥ビス−エチレンジオキシ−ジベンゾエート２９（８２mg回収）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１及び１：１）で分析した。
【０１９４】
７α，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３０）
方法Ａ：
ビス−エチレンジオキシ−ジベンゾエート２９（８０mg、０．１２４mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（６４mg）及び少量の水（１．９mL）を含有するアセトン（３８mL）溶液を、室温で１２時間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０１９５】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥生成物（６８mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析したところ、少量のより極性の高いモノ−ジオキソラン化副生成物の存在が確認された。
【０１９６】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で精製して、ジベンゾエート３０（５０mg）の純粋な試料を得た。
【０１９７】
方法Ｂ：
７α−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン２８（２４５mg、０．５４１mmol、１．０当量）を、ピリジン（６mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．３５mL、３．０１５mmol、５．５７当量）と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル２４mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液２４mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０１９８】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物（３１０mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０１９９】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１、展開×２）で精製して、ジベンゾエート３０（２３０mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.820 (s, 18-CH3), 1.235 (s, 19-CH3), 2.092 (s, 21-CH3), 5.30 (m, 7-H), 5.64 (m, 11-H), 7.45 (m, m-Ar-H, 4H), 7.58 (m, p-Ar-H, 2H), 8.02 (m, o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 38.80 (1), 37.94 (2), 211.78 (3), 45.03 (4), 43.46 (5), 31.04 (6), 71.68 (7), 37.59 (8), 39.46 (9), 36.13 (10), 71.25 (11), 45.19 (12), 43.78 (13), 50.53 (14), 23.68 (15), 22.90 (16), 62.88 (17), 14.03 (18), 22.55 (19), 208.22 (20), 31.47 (21), 129.44/54 (o-Ar/7+11), 128.59/77 (m-Ar/7+11), 133.39/42 (p-Ar/7+11), 130.02/06 (置換-Ar/7+11), 165.43/68 (Ar-CO/7+11)
【０２００】
実施例６．２．７α−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３２）及び７α−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３３）の調製
化合物（３２）及び（３３）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化３９】
2013514338.tif 000044
【０２０１】
７α−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン２８（８０７mg、１．７８３mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（２０mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（４mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（２０mg）を含有する即時調製溶液中、室温で３時間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０２０２】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物（９２３mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析したところ、テトラヒドロピラニルエーテル誘導体３１にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された（７α−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン）。
【０２０３】
２つのＲ／Ｓ異性体を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で分離した。それぞれ、純粋なより保持の低い異性体３２（４１６mg）、Ｒ／Ｓ異性体混合物（３４０mg）、及び純粋なより保持の高い異性体３３（１３６mg）に相当する３つのフラクションを得た。中間フラクションの２つのＲ／Ｓ異性体混合物（より保持の高い異性体が多い）を、分取ＴＬＣ（ジクロロメタン／酢酸エチル  ２：１、展開×２）でさらに分離して、より保持の低い異性体の純粋な試料をさらに得ることができた。
【０２０４】
より少なく保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体３２（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.702 (s, 18-CH3), 1.210 (s, 19-CH3), 2.141 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.28 (m, 11-H), 4.63 (m, 2'-H), 5.24 (m, 7-H), 7.47 (m, m-Ar-H), 7.59 (m, p-Ar-H), 7.98 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 38.84 (1), 38.35 (2), 213.56 (3), 45.29 (4), 44.50 (5), 31.21 (6), 71.71 (7), 37.47 (8), 39.95 (9), 36.25 (10), 70.11 (11), 43.17 (12), 43.48 (13), 50.31 (14), 23.79 (15), 23.28 (16), 62.96 (17), 14.08 (18), 22.37 (19), 209.09 (20), 31.50 (21), 129.44 (o-Ar), 128.68 (m-Ar), 133.21 (p-Ar), 130.16 (置換-Ar), 165.52 (Ar-CO), 96.56 (2'-OTHP), 31.96 (3'-OTHP), 21.88 (4'-OTHP), 25.33 (5'-OTHP), 65.76 (6'-OTHP)
【０２０５】
より保持された１７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体３３（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.645 (s, 18-CH3), 1.187 (s, 19-CH3), 2.130 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.01 (m, 11-H), 4.22 (m, 2'-H), 5.24 (m, 7-H), 7.48 (m, m-Ar-H), 7.61 (m, p-Ar-H), 7.99 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.43 (1), 38.33 (2), 212.60 (3), 45.15 (4), 44.27 (5), 31.25 (6), 71.65 (7), 37.86 (8), 39.83 (9), 36.34 (10), 77.22 (11), 47.46 (12), 43.70 (13), 49.93 (14), 23.87 (15), 22.80 (16), 63.16 (17), 13.97 (18), 23.01 (19), 208.77 (20), 31.57 (21), 129.46 (o-Ar), 128.72 (m-Ar), 133.26 (p-Ar), 130.10 (置換-Ar), 165.48 (Ar-CO), 101.79 (2'-OTHP), 31.38 (3'-OTHP), 20.45 (4'-OTHP), 25.26 (5'-OTHP), 63.60 (6'-OTHP)
【０２０６】
実施例６．３．７β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３９）及び７β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４０）の調製
化合物（３９）及び（４０）は下記のように調製される：
【化４０】
2013514338.tif 000045
【０２０７】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）（５β）プレグナン−７β−オール（３４）
この７β−オール化合物は、３，２０−ビス−エチレンジオキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）（５β）プレグナン−７α−オール異性体２５の調製において、副生成物として得られた（上記参照）。依然少量のα−異性体を含有するクロマトグラフフラクション（方法Ａ）を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２０８】
７β−ベンゾイルオキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）（５β）プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（３５）
７β−ヒドロキシ誘導体３４（４００mg、０．７２６mmol、１．０当量）を、ピリジン（８mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．５mL、４．３０７mmol、５．９３当量）と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル３０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液３０mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２０９】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物（４９１mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１、３：１、及び４：１）で分析した。
【０２１０】
生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ６：１、展開×２）で精製して、７β−ベンゾエート３５（２７８mg）及び７α−ベンゾエート副生成物（９４mg）の純粋な試料を得た。
【０２１１】
３，２０−ビス−エチレンジオキシ−７β−ベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−１１α−オール（３６）
ＴＨＦ（２．８mL）に溶解させた７β−ベンゾエート誘導体３５（２５０mg、０．３８２mmol、１．０当量）に、市販のフッ化テトラ−ブチルアンモニウムの１ＭＴＨＦ溶液（１．１４７mL、３．０１当量）を添加した後、４℃で７２時間撹拌した。同量の試薬をさらに加え、室温で２４時間撹拌を延長した。
【０２１２】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗１１α−オール３６（２３５mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析し、これをさらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２１３】
７β−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３７）
ビス−エチレンジオキシ−１１α−オール誘導体３６（２３５mg、０．４３５mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（６４mg）及び少量の水（１．９mL）を含有するアセトン（３８mL）溶液を、室温で２日間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０２１４】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物（１７８mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２、１：３、及び酢酸エチル）で分析した。
【０２１５】
生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２）で精製して、３，２０−ジオキソ−１１α−オール３７（４３mg）を得た。
【０２１６】
７β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３８）；７β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３９）及び７β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４０）
１１α−ヒドロキシ誘導体３７（９０mg、０．１９９mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（２．２５mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．４５mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（２．２５mg）を含有する即時調製溶液中、室温で１２時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０２１７】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析した。石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を用いたＴＬＣ（展開×２）から、テトラヒドロピラニルエーテル誘導体３８にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。
【０２１８】
これらの２つの異性体を、同様の条件の分取ＴＬＣで分離して、より保持の低い異性体３９（４３mg）及びより保持の高い異性体４０（３１mg）の純粋な試料を得た。
【０２１９】
より少なく保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体３９
1H NMR (CDCl3) 0.707 (s, 18-CH3), 1.209 (s, 19-CH3), 2.122 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.21 (m, 11-H), 4.56 (m, 2'-H), 5.19 (m, 7-H), 7.47 (m, m-Ar-H), 7.59 (m, p-Ar-H), 8.03 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 38.96 (1), 38.52 (2), 211.84 (3), 44.48 (4), 50.50 (5), 33.73 (6), 71.50 (7), 37.58 (8), 41.01 (9), 37.30 (10), 70.94 (11), 43.52 (12), 43.27 (13), 51.16 (14), 23.82 (15), 23.25(16), 62.92 (17), 14.16 (18), 10.21 (19), 209.06 (20), 31.40 (21), 129.63 (o-Ar), 128.53 (m-Ar), 133.16 (p-Ar), 130.33 (置換-Ar), 165.61 (Ar-CO), 97.44 (2'-OTHP), 32.15 (3'-OTHP), 22.06 (4'-OTHP), 25.31 (5'-OTHP), 65.90 (6'-OTHP)
【０２２０】
より保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体４０
1H NMR (CDCl3) 0.660 (s, 18-CH3), 1.172 (s, 19-CH3), 2.115 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.91 (m, 11-H), 4.63 (m, 2'-H), 5.19 (m, 7-H), 7.49 (m, m-Ar-H), 7.61 (m, p-Ar-H), 8.04 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.61 (1), 38.30 (2), 210.89 (3), 44.37 (4), 50.12 (5), 33.80 (6), 70.86 (7), 37.96 (8), 40.91 (9), 37.15 (10), 78.36 (11), 47.33 (12), 43.57 (13),  51.19 (14), 23.92 (15), 22.75 (16), 63.13 (17), 14.09 (18), 11.49 (19), 208.78 (20), 31.51 (21), 129.63 (o-Ar), 128.56 (m-Ar), 133.19 (p-Ar), 130.29 (置換-Ar), 165.60 (Ar-CO), 101.81 (2'-OTHP), 31.62 (3'-OTHP), 20.61 (4'-OTHP), 25.25 (5'-OTHP), 63.74 (6'-OTHP)
【０２２１】
実施例６．４．７β，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４１）の調製
化合物（４１）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４１】
2013514338.tif 000046
【０２２２】
７β，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４１）
１１α−ヒドロキシ誘導体３７（４５mg、０．０９９mmol、１．０当量）を、ピリジン（１．１mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．０６８mL、０．５８６mmol、５．８９当量）と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル４mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液４mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２２３】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物（６０mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０２２４】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で精製して、ジベンゾエート４１（２６mg）の純粋な試料を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.800 (s, 18-CH3), 1.226 (s, 19-CH3), 2.075 (s, 21-CH3), 5.28 (m, 7-H), 5.57 (m, 11-H), 7.51 (m, m-Ar-H, 4H), 7.61 (m, p-Ar-H, 2H), 8.07 (m, o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 39.46 (1), 38.22 (2), 210.46 (3), 44.94 (4), 50.00 (5), 33.82 (6), 70.55 (7), 37.90 (8), 40.82 (9), 37.21 (10), 71.54 (11), 44.21 (12), 43.62 (13), 50.25 (14), 23.83 (15), 22.86 (16), 62.88 (17), 13.94 (18), 11.12 (19), 208.27 (20), 31.46 (21), 129.60/65 (o-Ar/7+11), 128.60/63 (m-Ar/7+11), 133.32 (p-Ar/7+11), 130.26/28 (置換-Ar/7+11), 165.53 (Ar-CO/7+11)
【０２２５】
実施例７：１１，１７−二置換（５β−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体（５１）、（５２）、（５３）及び（５４）の調製
化合物（５１）、（５２）、（５３）及び（５４）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４２】
2013514338.tif 000047
【０２２６】
３−エチレンジオキシ−１１α−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン（４２）
３，２０−ビス−エチレンジオキシプレグナ−５−エン−１１α−オール２１（１０．０ｇ、２３．８９１mmol、１．０当量）の、アセトン（３０mL）に溶解させたｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３００mg）及び少量の水（３．７５mL）を含有するアセトン（１０００mL）溶液を、窒素下、室温で磁気撹拌した。定期的に反応をＴＬＣでモニタリングし、２０−ケタールの選択的加水分解が最適収量を示したときに停止した。反応混合物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０２２７】
通常の抽出（ジクロロメタン）の後、粗生成物を１％ピリジンを含有するジクロロメタン−メタノール混合物で再結晶して、純粋な２０−ケトンを得た。
【０２２８】
３−モノケタール４２（６．０ｇ）を含有する乾燥生成物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２）で分析した。
【０２２９】
３−エチレンジオキシ−１１α−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン（４３）
１１α−ヒドロキシ誘導体４２（１５ｇ、４０．０５２mmol、１．０当量）を、ピリジン（３００mL）に溶解させた過剰の無水酢酸（６０mL）と室温で１２時間撹拌した。
【０２３０】
反応混合物を減圧下で蒸発させた。微量の無水酢酸をエタノールを蒸発させて除去し、一方で、残留ピリジンを、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により除去した。
【０２３１】
乾燥生成物（１６．５ｇ）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１；ジクロロメタン／酢酸エチル  １：１）で分析した。
【０２３２】
粗生成物を、溶離剤としてジクロロメタン／酢酸エチル  １：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、純粋な１１−アセテート４３を得た。
【０２３３】
３−エチレンジオキシ−１１α−アセトキシ−１７α−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン（４４）
ＮａＨ（無水ｎ−ヘキサンの８０％市販品から鉱油を除去して得られた乾燥固体３．４ｇ）の新たに蒸留した無水ｔ−ブタノール（２６mL）及びＤＭＦ（３２mL）混合物の懸濁液を、窒素雰囲気下で４５分間超音波分解して、次に、−２５℃で冷却し（アセトン＋ドライアイス浴）、磁気撹拌した。この磁気撹拌した懸濁液に、亜リン酸トリエチル（２．９mL）、次に、新たに蒸留した無水ＴＨＦ（５４mL）及びＤＭＦ（１１mL）混合物に溶解させた３−エチレンジオキシ−１１α−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン誘導体４３（４．９ｇ、１１．７６３mmol、１．０当量）を加えた。反応混合物中に、酸素気流を−２５℃で２時間かなり強くバブリングした。酸素フローを止めた後、反応混合物を酢酸で中和し、ジクロロメタン（５００mL）及び水（３００mL）で希釈した。
【０２３４】
水層を分離し、ジクロロメタンで数回抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、相分離紙（Whatman）で濾過して、減圧下で蒸発乾固した。
【０２３５】
粗抽出物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：３、Ｒｆ０．３１）で分析した。
【０２３６】
生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  １：３を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、純粋な１７α−ヒドロキシ誘導体４４（２．０ｇ）を得た。
【０２３７】
１１α−アセトキシ−１７α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（４５）
３−エチレンジオキシ誘導体４４（４００mg、０．９２５mmol、１．０当量）のアセトン（４８mL）に溶解させたｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８０mg）及び少量の水（２．４mL）を含有するアセトン（４８mL）溶液を、窒素下、室温で２日間磁気撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチした。
【０２３８】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、３−オキソ生成物４５（３５７mg）を含有する残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１及び２：１）で分析し、これをさらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２３９】
１１α−アセトキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４６）
０．８％ピリジン（４２mL）を含有するジオキサン−９５％エタノール１：１（v/v）混合物に溶解させた、１１α−アセトキシ−１７α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン４５（３５６mg、０．９１６mmol、１．０当量）をガラス水素化装置に導入し、大気圧の水素下で、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（３５０mg）の存在下、３０℃で１２時間磁気撹拌した。
【０２４０】
反応混合物をCelite（商標）パッドで濾過し、減圧下で蒸発させた。ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。
【０２４１】
乾燥生成物（３５７mg）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析して、主要な非ＵＶ吸収スポットを得た。この４，５−二水素化生成物４６を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２４２】
１１α，１７α−ジヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４７）
１１α−アセトキシ誘導体４６（３５６mg、０．９１２mmol、１．０当量）を、窒素雰囲気下、メタノール（３５mL）及び水（５mL）混合物のＫ２ＣＯ３（４００mg）溶液中、５０℃で４８時間撹拌した。
【０２４３】
反応混合物を氷浴で冷却し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液で中和した。
【０２４４】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥１７−ヒドロキシ生成物４７（３０８mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１及び１：２）で分析し、これをさらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２４５】
１１α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４８）；１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（４９）及び１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５０）
１１α，１７α−ジオール４７（１００mg、０．２８７mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（０．８３３mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．１６６mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（１mg）を含有する即時調製溶液中、室温で４時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０２４６】
通常の抽出（ジクロロメタン）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析した。石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を使用したＴＬＣ（展開×３）から、テトラヒドロピラニルエーテル誘導体４８にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。これらの２つの異性体を、同様の条件の分取ＴＬＣで分離して、それぞれ、より保持の低い異性体４９（４７mg）とより保持の高い異性体５０（４９mg）を多く含む部分的に精製された試料を得た。
【０２４７】
１１α，１７β−ビス−Ｏ−［２’（Ｓ），２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５１）；１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｒ），２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５２）；１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｓ），２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５３）及び１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｒ），２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５４）
部分的に精製された１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］及び［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオンのＲ／Ｓ異性体４９及び５０（３６mg、０．０８３mmol、１．０当量）の試料を、無水ＴＨＦ（０．４１６mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．０８３mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（１mg）を含有する即時調製溶液中、室温で４時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０２４８】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１）で分析した。石油エーテル／酢酸エチル  ４：１を用いたＴＬＣから、１７α−Ｏ−テトラヒドロピラニルエーテルのＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２つの主要スポットが確認された。
【０２４９】
これらの２つの異性体を、同様の条件の分取ＴＬＣで分離した。
【０２５０】
より少なく保持された出発物質４９に相当する抽出物（３６mg）から、純粋な異性体５３を含有するより少なく保持されたスポット（８．８mg）と、少量の副生成物として他の異性体依然が混入した主要生成物の異性体５１を含有するより保持されたスポット（１３．２mg）に相当する２つのフラクションが得られた。
【０２５１】
より保持された出発物質５０に相当する抽出物（２８mg）から、主要化合物の上記異性体５１を含有するより少なく保持されたスポット（９．１mg）と、主要生成物として異性体５２を含有するより保持されたスポット（１５．８mg）に相当する２つのフラクションが得られた。これらの２つのフラクションは、依然として、少量の副生成物として他の異性体を含有していた（微量の異性体５４の存在は、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルでは明確に特徴付けることができなかった）。
【０２５２】
異性体１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｓ），２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ５１
1H NMR (CDCl3) 0.588 (s, 18-CH3), 1.137 (s, 19-CH3), 2.154 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 4H), 4.12 (m, 11-H), 4.37-4.65 (m, 2'-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 39.34 (1), 38.52 (2), 214.72 (3), 42.85 (4), 46.38 (5), 25.98 (6), 26.82 (7), 34.71 (8), 44.78 (9), 36.05 (10), 70.86 (11), 36.13 (12), 47.54 (13), 50.56 (14), 23.89 (15), 26.55 (16), 97.40 (17), 15.79 (18), 22.72 (19), 209.54 (20), 27.43 (21), 96.11 (2'-OTHP/11), 31.81 (3'-OTHP/11), 21.56 (4'-OTHP/11), 25.37 (5'-OTHP/11), 65.24 (6'-OTHP/11), 97.08 (2'-OTHP/17), 31.91 (3'-OTHP/17), 20.56 (4'- OTHP/17), 25.10 (5'-OTHP/17), 63.78 (6'-OTHP/17)
【０２５３】
異性体１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｒ），２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ５２
1H NMR (CDCl3) 0.577 (s, 18-CH3), 1.111 (s, 19-CH3), 2.124 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 4H), 3.82 (m, 11-H), 4.35-4.66 (m, 2'-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 39.58 (1), 38.35 (2), 213.90 (3), 42.74 (4), 46.10 (5), 26.10 (6), 26.83 (7), 35.00 (8), 45.05 (9), 36.02 (10), 79.22 (11), 40.14 (12), 47.59 (13), 50.05 (14), 23.89 (15), 26.34 (16), 96.27 (17), 15.63 (18), 23.46 (19), 209.93 (20), 27.08 (21), 101.28 (2'-OTHP/11), 31.26 (3'-OTHP/11), 19.82 (4'-OTHP/11), 25.40 (5'-OTHP/11), 62.61 (6'-OTHP/11), 97.13 (2'-OTHP/17), 31.94 (3'-OTHP/17), 20.58 (4'-OTHP/17), 25.11 (5'-OTHP/17), 63.84 (6'-OTHP/17)
【０２５４】
異性体１１α，１７α−ビス−Ｏ−［２’（Ｓ），２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ５３
1H NMR (CDCl3) 0.595 (s, 18-CH3), 1.135 (s, 19-CH3), 2.216 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 4H), 4.11 (m, 11-H), 4.46-4.57 (m, 2'-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 39.28 (1), 38.49 (2), 214.72 (3), 42.84 (4), 46.34 (5), 26.01 (6), 26.80 (7), 34.59 (8), 44.87 (9), 36.04 (10), 70.95 (11), 36.04 (12), 47.10 (13), 50.23 (14), 23.71 (15), 23.63 (16), 94.50 (17), 15.77 (18), 22.73 (19), 209.70 (20), 27.67 (21), 96.28 (2'-OTHP/11), 31.85 (3'-OTHP/11), 21.66 (4'-OTHP/11), 25.37 (5'-OTHP/11), 65.34 (6'-OTHP/11), 96.53 (2'-OTHP/17), 31.85 (3'-OTHP/17), 21.66 (4'-OTHP/17), 25.18 (5'-OTHP/17), 65.46 (6'-OTHP/17)
【０２５５】
実施例８：７，１２−二置換（５β−Ｈ）コラン誘導体（５７）、（５９）、（６０）、（６３）、（６４）、（７１）、（７３）及び（７４）の調製
実施例８．１．３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシコラン酸メチル（５７）の調製
化合物（５７）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４３】
2013514338.tif 000048
【０２５６】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシコラン酸メチル（「コール酸メチル」）（５５）
メタノール（２００mL）に溶解させた、３α，７α，１２α−トリヒドロキシ（５β−Ｈ）コラン−２４−酸（「コール酸」）（Aldrich社）（１０．０ｇ、２４．５mmol、１．０当量）を、濃ＨＣｌ２．５mLの存在下で３時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０２５７】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、白色の抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（クロロホルム／メタノール  １０：１）で分析したところ、メチルエステル５５に相当する出発物質よりはるかに高い位置の単一スポットが確認された。
【０２５８】
３−オキソ−７α，１２α−ジヒドロキシコラン酸メチル（５６）
トルエン（４０mL）に溶解させた、３α，７α，１２α−トリヒドロキシコラン酸メチル５５（２００mg、０．４７３mmol、１．０当量）を、Dean-Stark水トラップ中、Ag2CO3/Celite試薬２．０ｇの存在下で、還流下１２時間磁気撹拌した（Fieser L., Reagents for Organic Synthesis, Vol 2, p. 363; Fetizon M., Balogh V., Golfier M., J. Org. Chem. (1971), 36, 1339-41を参照）。
【０２５９】
反応混合物をCeliteカラムで濾過し、これを過剰のトルエンで洗浄した。合わせた濾液を減圧下で蒸発させた。
【０２６０】
白色の抽出物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（クロロホルム／酢酸エチル  １：３）で分析したところ、出発物質より高い位置に主要スポットが確認された。このモノ−３−オキソ生成物５６を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
【０２６１】
３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシコラン酸メチル（５７）
７α，１２α−ジオール５６（１００mg、０．２３８mmol、１．０当量）を、ピリジン（０．３mL）及びジクロロメタン（０．３mL）混合物に溶解させた過剰の塩化ベンゾイル（０．２０mL、１．７２１mmol、７．２当量）と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル３mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液３mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２６２】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析したところ、少量のモノベンゾイル化副生成物が確認された。
【０２６３】
粗生成物を、同様の条件の分取ＴＬＣで精製して、ジベンゾエート５７の純粋な試料を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.825 (d, 21-CH3), 0.876 (s, 18-CH3), 1.102 (s, 19-CH3), 3.579 (s, OCH3), 5.32 (m, 7-H), 5.44 (m, 12-H), 7.47 (m, m-Ar-H, 4H), 7.64 (m, p-Ar-H, 2H), 8.04 (o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 36.67 (1), 36.37 (2), 212.11 (3), 44.69 (4), 42.10 (5), 31.16 (6), 71.40 (7), 38.53 (8), 30.36 (9), 34.66 (10), 25.88 (11), 75.90 (12), 45.69 (13), 43.74 (14), 23.12 (15), 27.27 (16), 48.05 (17), 12.39 (18), 21.74 (19), 34.75 (20), 17.65 (21), 30.99 (22), 30.82 (23), 174.53 (24), 51.57 (OCH3), 129.48/51 (o-Ar/7+12), 128.89/92 (m-Ar/7+12), 133.33/41 (p-Ar/7+12), 130.52/58 (置換-Ar/7+12), 165.49/70 (Ar-CO/7+12)
【０２６４】
実施例８．２．３−オキソ−７α−ベンゾイルオキシ−１２α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（５９）及び３−オキソ−７α−ベンゾイルオキシ−１２α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６０）の調製
化合物（５９）及び（６０）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４４】
2013514338.tif 000049
【０２６５】
３−オキソ−７α−ヒドロキシ−１２α−テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（５８）
７α，１２α−ジオール５６（２５０mg、０．５９４mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（０．７２mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．０６mL、０．６５８mmol、１．１当量）及びｐ−トルエンスルホン酸（０．３mg）を含有する限定量の即時調製溶液と室温で１２時間撹拌した。未完了の反応を、過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して停止した。
【０２６６】
通常の抽出（ジクロロメタン）の後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１、石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１、クロロホルム／酢酸エチル  １：１）で分析した。
【０２６７】
１２−モノ−テトラヒドロピラニルエーテル５８を含有する生成物の混合物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１、展開×４）で精製して、同様の条件の分析ＴＬＣで照合された６つの異なるフラクションを得た：ｉ）おそらく、ビス−テトラヒドロピラニルエーテルに相当する、かなり高いＲｆのより保持の低いフラクション（４２mg）ｉｉ）Ｒｆ値が順に減少する、十分に分けられた４つの主要な中間フラクション（Ａ：５４mg、Ｂ：６５mg、Ｃ：２９mg及びＤ：３４mg）、及びｉｉｉ）未反応のジオール５６に相当するより保持されたフラクション（３６mg）。４つの中間フラクションを、さらに精製することなく次にベンゾイル化工程に用いた。
【０２６８】
３−オキソ−７α−ベンゾイルオキシ−１２α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（５９）及び３−オキソ−７α−ベンゾイルオキシ−１２α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６０）
異性体の７−テトラヒドロピラニルオキシ副生成物が混入した、モノ−１２α−テトラヒドロピラニルエーテル５８のＲ／Ｓ異性体混合物を含有する前述のモノヒドロキシル化クロマトグラフフラクションＡ、Ｂ、Ｃ及びＤ（それぞれ、５４mg、０．１０６mmol、６５mg、０．１２９mmol、２９mg、０．０５８mmol及び３４mg、０．０６８mmol）を、ピリジン（それぞれ、０．８０mL、０．７０mL、１．５０mL及び１．３０mL）に溶解させた過剰の塩化ベンゾイル（それぞれ、０．０５０mL、０．４３１mmol、０．０４５mL、０．３８８mmol、０．１００mL、０．８６１mmol及び０．０８０mL、０．６８９mmol）と室温で４８時間撹拌した。２つのフラクションＣ及びＤの場合、反応は４８時間後に完了したが、フラクションＡ及びＢの場合は反応が非常に遅く、室温で６日経過した後でも完全にベンゾイル化されなかった。この反応時間経過後、反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル１．５mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１．５mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２６９】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、ＵＶ吸収により容易に検出される粗ベンゾイル化生成物を、分取ＴＬＣ（石油エーテル／ＭＴＢＥ  ２：１、展開×２又は３）で精製した。
【０２７０】
ベンゾイル化フラクションＡのＴＬＣから、７α−モノベンゾエート−１２α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルエーテル５９の純粋な試料（２２mg）が得られ；ベンゾイル化フラクションＢのＴＬＣから、７α−モノベンゾエート−１２α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルエーテル−１２α−モノベンゾエート６０の純粋な試料（２１mg）が得られ；ベンゾイル化フラクションＣのＴＬＣから、７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルエーテル−１２α−モノベンゾエート６３の純粋な試料（２２mg）が得られ；そして、ベンゾイル化フラクションＤのＴＬＣから、７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルエーテル−１２α−モノベンゾエート６４の純粋な試料（２８mg）が得られた。
【０２７１】
精製した生成物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１；石油エーテル／ＭＴＢＥ  ２：１、展開×４）で分析した。ベンゾイル化誘導体のＲｆ値の順序（６０のＲｆ＝６４のＲｆ＞６３のＲｆ＞５９のＲｆ）は、前述のヒドロキシル化前駆体と異なることが明らかであり、２つの７−及び１２−ベンゾイル化ファミリーを効率的に分離することは困難であった。
【０２７２】
化合物６３及び６４の直接合成ならびにそのＮＭＲ特性を、本明細書下記で言及する。
【０２７３】
より保持された１２α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体５９（石油エーテル／酢酸エチルではより保持され、クロロホルム／酢酸エチルではより保持が低い）
1H NMR (CDCl3) 0.769 (s, 18-CH3), 1.004 (d, 21-CH3), 1.087 (s, 19-CH3), 3.63 (s, OCH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.05 (m, 12-H), 4.84 (m, 2'-H) 5.20 (m, 7-H), 7.42 (m, m-Ar-H, 2H), 7.56 (m, p-Ar-H, 1H), 7.97 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.97 (1), 36.69 (2), 212.45 (3), 44.86 (4), 42.10 (5), 31.30 (6), 71.76 (7), 38.79 (8), 29.24 (9), 34.85 (10), 23.96 (11), 77.07 (12), 46.58 (13), 42.42 (14), 23.58 (15), 28.05 (16), 45.98 (17), 12.68 (18), 21.85 (19), 36.15 (20), 17.25 (21), 31.22 (22), 31.22 (23), 174.85 (24), 51.59 (OCH3), 129.55 (o-Ar), 128.75 (m-Ar), 133.18 (p-Ar), 130.63 (置換-Ar), 165.59 (Ar-CO), 95.50 (2'-OTHP), 32.49 (3'-OTHP), 19.65 (4'-OTHP), 25.78 (5'-OTHP), 62.69 (6'-OTHP)
【０２７４】
より保持の低い１２α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体６０（石油エーテル／酢酸エチルではより保持が低いが、クロロホルム／酢酸エチルではより保持が高い）（７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体６３を含む非分離混合物の試験的帰属）
1H NMR (CDCl3) 0.725 (s, 18-CH3), 0.897 (d, 21-CH3), 1.068 (s, 19-CH3), 3.63 (s, OCH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.86 (m, 12-H), 4.70 (m, 2'-H) 5.22 (m, 7-H), 7.42 (m, m-Ar-H, 2H), 7.57 (m, p-Ar-H, 1H), 8.02 (m, o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.72 (1), 36.72 (2), 213.24 (3), 44.95 (4), 42.52 (5), 31.34 (6), 71.92 (7), 38.79 (8), 29.43 (9), 35.07 (10), 26.57 (11), 82.10 (12), 46.72 (13), 42.61 (14), 23.39 (15), 27.54 (16), 46.44 (17), 12.29 (18), 21.84 (19), 35.31 (20), 17.99 (21), 31.07 (22), 30.96 (23), 174.72 (24), 51.60 (OCH3), 129.61 (o-Ar), 128.66 (m-Ar), 133.14 (p-Ar), 130.74 (置換-Ar), 165.79 (Ar-CO), 100.33 (2'-OTHP), 31.72 (3'-OTHP), 19.84 (4'-OTHP), 25.95 (5'-OTHP), 62.89 (6'-OTHP)
【０２７５】
実施例８．３．３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６３）及び３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６４）の調製
化合物（６３）及び（６４）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４５】
2013514338.tif 000050
【０２７６】
３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−ヒドロキシコラン酸メチル（６１）及び３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシコラン酸メチル（５７）
７α，１２α−ジオール５６（３４３mg、０．８２mmol、１．０当量）を、ピリジン（１．３mL）及びジクロロメタン（１．３mL）混合物に溶解させた限定量の塩化ベンゾイル（０．１２１mL、１．０４mmol、１．２８当量）と室温で２４時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル１０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１０mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２７７】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（シクロヘキサン／酢酸エチル  ７：３）で分析したところ、少量のジベンゾイル化副生成物が確認された。
【０２７８】
粗生成物を、同様の条件のシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、より保持の低いフラクションから純粋なモノ−１２α−ベンゾエート６１（２２８mg）を、そして、より保持の高いフラクションから７α，１２α−ジベンゾエート副生成物５７（１７９mg）を得た。
【０２７９】
３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６２）；３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６３）及び３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（６４）
７α−ヒドロキシ誘導体６１（１００mg、０．１９mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（２mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．７７５mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（６mg）を含有する即時調製溶液中、室温で４日間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０２８０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１、シクロヘキサン／酢酸エチル  ９：１）で分析した。シクロヘキサン／酢酸エチル  ９：１を用いたＴＬＣから、粗テトラヒドロピラニルエーテル誘導体６２にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。次に、この生成物をカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  ７：３）で精製して、Ｒ／Ｓ異性体の混合物（１４１mg）を得た。この両異性体の混合物の一部（４０mg）を、分取ＴＬＣ（シクロヘキサン／酢酸エチル  ９：１、展開×２、次に、シクロヘキサン／酢酸エチル  ７：３、展開×３）で分離して、より保持された異性体６３（５mg）及びより少なく保持された異性体６４（８mg）の純粋な試料を得た。
【０２８１】
より保持された７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体６３
1H NMR (CDCl3) 0.837 (s, 18-CH3), 0.867 (d, 21-CH3), 1.034 (s, 19-CH3), 3.61 (s, OCH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.88 (m, 7-H), 4.71 (m, 2'-H) 5.43 (m, 12-H), 7.45 (m, m-Ar-H, 2H), 7.58 (m, p-Ar-H, 1H), 8.07 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.67 (1), 36.61 (2), 213.09 (3), 45.48 (4), 42.78 (5), 29.42 (6), 72.18 (7), 39.57 (8), 28.80 (9), 34.91 (10), 25.82 (11), 75.98 (12), 45.36 (13), 42.78 (14), 22.99 (15), 27.59 (16), 48.04 (17), 12.46 (18), 21.73 (19), 35.10 (20), 17.81 (21), 31.16 (22), 30.98 (23), 174.69 (24), 51.60 (OCH3), 129.55 (o-Ar), 128.67 (m-Ar), 133.24 (p-Ar), 130.80 (置換-Ar), 165.81 (Ar-CO), 95.66 (2'-OTHP), 31.22 (3'-OTHP), 19.73 (4'-OTHP), 25.82 (5'-OTHP), 62.86 (6'-OTHP)
【０２８２】
より少なく保持された７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体６４
1H NMR (CDCl3) 0.832 (s, 18-CH3), 0.864 (d, 21-CH3), 1.015 (s, 19-CH3), 3.612 (s, OCH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.77 (m, 7-H), 4.66 (m, 2'-H) 5.41 (m, 12-H), 7.43 (m, m-Ar-H, 2H), 7.58 (m, p-Ar-H, 1H), 8.03 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.73 (1), 36.73 (2), 213.59 (3), 45.50 (4), 43.15 (5), 32.98 (6), 77.16 (7), 39.91 (8), 28.64 (9), 34.85 (10), 25.77 (11), 75.87 (12), 45.53 (13), 43.26 (14), 24.15 (15), 27.50 (16), 47.87 (17), 12.47 (18), 21.74 (19), 34.90 (20), 17.77 (21), 31.10 (22), 30.92 (23), 174.68 (24), 51.61 (OCH3), 129.51 (o-Ar), 128.70 (m-Ar), 133.25 (p-Ar), 130.78 (置換-Ar), 165.68 (Ar-CO), 101.97 (2'-OTHP), 31.47 (3'-OTHP), 20.14 (4'-OTHP), 25.59 (5'-OTHP), 63.08 (6'-OTHP)
【０２８３】
実施例８．４．３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシ−２４−メトキシコラン（７１）の調製
化合物（７１）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４６】
2013514338.tif 000051
【０２８４】
３α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−７α，１２α−ジヒドロキシコラン酸メチル（６５）
ジメチルホルムアミド（４０mL）に溶解させた、３α，７α，１２α−トリヒドロキシコラン酸メチル５５（４．０ｇ、９．５mmol、１．０当量）を、１Ｈ−イミダゾール（１．３５ｇ、１９．８mmol、２．１当量）及び限定量の塩化tert−ブチル−ジメチルシリル（１．７１ｇ、１１．３mmol、１．２当量）の存在下、室温で２時間撹拌した。通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  １：１）で精製して、モノ−３−シリルエーテル６５を白色の固体として得た。
【０２８５】
３α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−７α，１２α−ジヒドロキシコラン−２４−オール（６６）
撹拌した、水素化アルミニウムリチウム（３５３mg、９．３１mmol、２．０当量）の新たに蒸留した脱水ジエチルエーテル懸濁液に、窒素雰囲気下、０℃で、７α，１２α−ジヒドロキシコラン酸メチル誘導体６５（２．５ｇ、４．６５mmol、１．０当量）の脱水ジエチルエーテル（８０mL）溶液をゆっくり加えた。室温で３時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテル（５０mL）で希釈し、４℃で冷却して、過剰の水素化アルミニウムリチウムが全て加水分解されるまで水で滴下処理した。
【０２８６】
通常の抽出（ジエチルエーテル）の後、粗抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  １：１）で精製して、２４−オール６６誘導体を白色の固体として得た。
【０２８７】
３α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−７α，１２α−ジヒドロキシ−２４−メトキシコラン（６７）
撹拌した、７α，１２α−ジヒドロキシコラン−２４−オール誘導体６６（１．５７ｇ、３．０８mmol、１．０当量）の新たに蒸留した脱水ＴＨＦ（２５mL）溶液に、窒素雰囲気下、市販の水素化ナトリウムの６０％鉱油懸濁液（２２２mg、５．５５mmol、オイルフリーの水素化物の１．８当量）を滴下した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、ヨウ化メチル（２１８μL、３．３９mmol、１．１当量）を加えた。反応混合物を、室温３時間、７０℃３時間で順次撹拌し、次に、室温で冷却した。
【０２８８】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  ６：４）で精製して、２４−メチルエーテル６７（１．３９ｇ）を淡黄色のペーストとして得た。
【０２８９】
３α，７α，１２α−トリヒドロキシ−２４−メトキシコラン（６８）
３α−tert−ブチル−ジメチル−シリルエーテル６７（１．６７ｇ、３．２mmol、１．０当量）の無水ＴＨＦ溶液に、０℃で、市販のフッ化テトラｎ−ブチルアンモニウム一水和物の１ＭＴＨＦ溶液（４．８０mL、４．８０mmol、１．５当量）を加えた。室温で５時間撹拌した後、追加のフッ化テトラｎ−ブチルアンモニウム溶液（１．６０mmol、０．５当量）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌し、次に、室温に冷却した。
【０２９０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、粗抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン１００％、次に、ジクロロメタン／メタノール  ９８：２）で精製して、トリオール６８（０．９２８ｇ）を黄色のペーストとして得た。
【０２９１】
３−オキソ−７α，１２α−ジヒドロキシ−２４−メトキシコラン（６９）
トルエン（３００mL）に溶解させた、３α，７α，１２α−トリオール６８（１．５ｇ、３．６７mmol、１．０当量）を、Dean-Stark水トラップ中、Ag2CO3/Celite試薬（上記参照）１５．２ｇの存在下で、還流下４時間磁気撹拌した。
【０２９２】
反応混合物をCeliteカラムで濾過し、これを過剰のトルエンで洗浄した。合わせた濾液を減圧下で蒸発させた。
【０２９３】
白色の抽出物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール  ９：１）で分析したところ、出発物質より高い位置に主要スポットが確認された。この生成物を同様の条件のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、純粋なモノ−３−ケトン６９（１．１５ｇ）を白色の固体として得た。
【０２９４】
３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−ヒドロキシ−２４−メトキシコラン（７０）
３−オキソ−７α，１２α−ジオール６９（４００mg、０．９８mmol、１．０当量）を、ピリジン（１．５mL）及びジクロロメタン（１．５mL）混合物に溶解させた限定量の塩化ベンゾイル（０．１４６mL、１．２５mmol、１．２８当量）と室温で２４時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル１２mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１２mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０２９５】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（シクロヘキサン／酢酸エチル  １：１）で分析したところ、少量のジベンゾイル化副生成物が確認された。
【０２９６】
粗生成物を、同様の条件のシリカゲルクロマトグラフィーで精製して、より溶出されたフラクションから純粋なモノ−１２α−ベンゾエート７０（２１８mg）を、そして、より溶出されにくいフラクションから７α，１２α−ジベンゾエート副生成物７１（１２６mg）を得た（下記参照）。
【０２９７】
３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシ−２４−メトキシコラン（７１）
このジベンゾエート７１は、３−オキソ−７α，１２α−ジヒドロキシ−２４−メトキシコランのモノ−ベンゾイル化の副生成物として得られた（上記の前工程を参照）。
1H NMR (CDCl3) 0.834 (d, 21-CH3), 0.875 (s, 18-CH3), 1.101 (s, 19-CH3), 3.24 (s, OCH3), 3.21-3.27 (m, 24-CH2O), 5.31 (m, 7-H), 5.44 (m, 12-H), 7.47 (m, m-Ar-H, 2H), 7.63 (m, p-Ar-H, 1H), 8.03 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.69 (1), 36.39 (2), 212.45 (3), 44.71 (4), 42.15 (5), 31.18 (6), 71.45 (7), 38.56 (8), 30.37 (9), 34.68 (10), 25.88 (11), 76.01 (12), 45.66 (13), 43.75 (14), 23.14 (15), 27.38 (16), 48.24 (17), 12.40 (18), 21.75 (19), 35.07 (20), 17.98 (21), 26.26 (22), 32.12 (23), 73.33 (24), 58.61 (OCH3), 129.01/50 (o-Ar/7+12), 128.87/92 (m-Ar/7+12), 133.31/34 (p-Ar/7+12), 130.55/67 (置換-Ar/7+12), 165.53/73 (Ar-CO/7+12)
【０２９８】
実施例８．５．３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−２４−メトキシコラン（７３）及び３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ−２４−メトキシコラン（７４）の調製
化合物（７３）及び（７４）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４７】
2013514338.tif 000052
【０２９９】
３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−２４−メトキシコラン（７２）；３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−２４−メトキシコラン（７３）及び３−オキソ−１２α−ベンゾイルオキシ−７αａ−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ−２４−メトキシコラン（７４）
７α−ヒドロキシ誘導体７０（１２０mg、０．２３mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（２．５mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（９５６μL）及びｐ−トルエンスルホン酸（８mg）を含有する即時調製溶液中、室温で４日間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０３００】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル、２：１）で分析した。シクロヘキサン／酢酸エチル  ９：１を用いたＴＬＣから、粗テトラヒドロピラニルエーテル誘導体７２にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。この生成物をカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  ９：１）で精製して、Ｒ／Ｓ異性体の混合物（１３６mg）を得た。この両異性体の混合物の一部（４０mg）を、分取ＴＬＣ（シクロヘキサン／酢酸エチル  ７：３、１cm長毎に展開×１７）で分離して、より保持の高い異性体７３（１０mg）及びより少なく保持された異性体７４（１０mg）の純粋な試料を得た。
【０３０１】
より保持された７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］ＴＨＰ異性体７３
1H NMR (CDCl3) 0.842 (s, 18-CH3), 0.882 (d, 21-CH3), 1.036 (s, 19-CH3), 3.270 (s, OCH3), 3.26-3.29 (m, 24-CH2O),  3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.88 (m, 7-H), 4.72 (m, 2'-H), 5.44 (m, 12-H), 7.44 (m, m-Ar-H, 2H), 7.58 (m, p-Ar-H, 1H), 8.08 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.68 (1), 36.64 (2), 213.11 (3), 45.51 (4), 42.78 (5), 29.46 (6), 72.23 (7), 39.61 (8), 28.82 (9), 34.93 (10), 25.86 (11), 76.08 (12), 45.33 (13), 42.82 (14), 23.04 (15), 27.68 (16), 48.24 (17), 12.47 (18), 21.74 (19), 35.41 (20), 18.16 (21), 26.47 (22), 32.29 (23), 73.49 (24), 58.64 (OCH3), 129.56 (o-Ar), 128.64 (m-Ar), 133.17 (p-Ar), 130.89 (置換-Ar), 165.82 (Ar-CO), 95.60 (2'-OTHP), 31.16 (3'-OTHP), 19.66 (4'-OTHP), 25.80 (5'-OTHP), 62.77 (6'-OTHP)
【０３０２】
より少なく保持された７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］ＴＨＰ異性体７４
1H NMR (CDCl3) 0.831 (s, 18-CH3), 0.872 (d, 21-CH3), 1.014 (s, 19-CH3), 3.286 (s, OCH3), 3.27-3.29 (m, 24-CH2O), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.76 (m, 7-H), 4.66 (m, 2'-H), 5.42 (m, 12-H), 7.42 (m, m-Ar-H, 2H), 7.57 (m, p-Ar-H, 1H), 8.02 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 36.71 (1), 36.71 (2), 213.59 (3), 45.49 (4), 43.11 (5), 32.99 (6), 77.20 (7), 39.90 (8), 28.61 (9), 34.84 (10), 25.74 (11), 75.94 (12), 45.46 (13), 43.26 (14), 24.15 (15), 27.55 (16), 48.00 (17), 12.45 (18), 21.72 (19), 35.14 (20), 18.09 (21), 26.28 (22), 32.19 (23), 73.42 (24), 58.64 (OCH3), 129.49 (o-Ar), 128.65 (m-Ar), 133.15 (p-Ar), 130.83 (置換-Ar), 165.80 (Ar-CO), 101.91 (2'-OTHP), 31.42 (3'-OTHP), 20.09 (4'-OTHP), 25.58 (5'-OTHP), 63.00 (6'-OTHP)
【０３０３】
実施例９：３，１７α−ジベンゾイルオキシプレグナ−３，５−ジエン−２０−オン（７５）の調製
ＢＲＣＰ阻害剤である化合物（７５）は、下記反応スキームに従って調製される：
【化４８】
2013514338.tif 000053
【０３０４】
３，１７α−ジベンゾイルオキシプレグナ−３，５−ジエン−２０−オン（７５）
１７α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（「１７α−ヒドロキシプロゲステロン」）（Sigma社）（３２０mg、０．９６８mmol、１．０当量）を、ジメチルアミノピリジン（１７７mg、１．５当量）を含有する、ピリジン（８mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．６４０mL、５．５１３mmol、５．７当量）と還流下で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル５mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液５mLを添加した後３０分間撹拌した。通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥生成物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０３０５】
粗生成物を、同様の条件の分取ＴＬＣで精製して、エノールベンゾエート誘導体７５（１８８mg）の純粋な試料を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.778 (s, 18-CH3), 1.080 (s, 19-CH3), 2.293 (s, 21-CH3), 5.462 (d, 6-H), 5.841 (d, 4-H), 7.44/50 (m, m-Ar-H, 4H), 7.57/71 (m, p-Ar-H, 2H), 8.10 (m, o-Ar-H, 4H)
13C NMR (CDCl3) 31.91 (1), 24.92 (2), 147.32 (3), 123.77 (4), 139.42 (5), 117.22 (6), 33.86 (7), 31.70 (8), 50.88 (9), 35.00 (10), 20.68 (11), 30.06 (12), 48.44 (13), 47.57 (14), 24.10 (15), 33.59 (16), 90.03 (17), 15.49 (18), 18.95 (19), 211.88 (20), 28.00 (21), 129.93/ 130.18 (o-Ar/3+17), 128.47/49 (m-Ar/3+17), 133.29/69 (p-Ar/3+17), 非検出 (130で重複) (置換-Ar/3+17), 165.15/170.90 (Ar-CO/3+17)
【０３０６】
実施例１０：３β−（２−ヒドロキシ−４−アジドベンゾイル）アミドプロピル−オキシプレグナ−５−エン−２０−オン（７７）及び３β−（２−ニトロ−５−アジドベンゾイル）アミドプロピルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（７８）の調製
これらの化合物は、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン（Sigma社）のジオキソラン化、その後の、３−ヒドロキシ基のシアノエチル化、ＬｉＡｌＨ４を用いたシアノエチル基のアミノプロピルアミンへの還元、保護ケタール基の加水分解、そして、事前に活性化されたカルボン酸基を有する、２つの対応する市販のアリールアジド誘導体（Pierce製）を用いたＮ−アシル化により調製される（Roy and Ray, Steroids 1995, 60, 530-533）。
【０３０７】
実施例１１：７−モノ−置換（５α−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体の調製
実施例１１．１．７α−（２−ヒドロキシ−４−アジドベンゾイル）アミドプロピルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（７９）及び７α−（２−ニトロ−５−アジドベンゾイル）アミドプロピルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（８０）の調製
【０３０８】
これらの化合物は、３，２０−ビス−エチレンジオキシ−プレグナ−５−エン−７−オン（上記実施例１、化合物１参照）から、接触水素化、その後の、水素化トリ−sec−ブチルホウ素リチウムを用いた７−ケトンの還元、そして、酸分解（上記実施例４、化合物１５〜１７参照）により、７α−ヒドロキシ−（５α）ジヒドロプロゲステロンを得て、これを、化合物（７７）及び（７８）で上述したように、アリールアジド誘導体（７９）及び（８０）に変換して調製した。
【０３０９】
実施例１１．２．７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｓ）（８１）、７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｒ）（８２）、７α−テトラヒドロピラニルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｓ）（８３）及び７α−テトラヒドロピラニルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｒ）（８４）の調製
【０３１０】
これらの化合物は、５−エン−３，２０−ビス−ジオキソランとして保護されたプロゲステロンから、ＣｒＯ３−（ピリジン）２錯体を用いたアリル酸化により５−エン−７−オンに変換し（Mappus E. & Cuilleron C.Y., J. Chem. Res. 1979 [S], 42-3; [M], 501-35）、次に、（５α）ジヒドロ−７−オンに接触水素化して（Mappus E. et Cuilleron C.Y. Steroids, 1979, 33, 693-718）、７α−又は７β−ヒドロキシ異性体に選択的還元した（Amann A, Ourisson G, Luu B Synthesis 1987, 1002-4）後、最後に、保護ケタール基を加水分解して、数工程で得られる７α−又は７β−ヒドロキシ−（５α）ジヒドロプロゲステロン中間体のテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３１１】
実施例１１．３．７α−（２’−ヒドロキシ）エチルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（８５）、７α−（２’−テトラヒドロピラニルオキシ）エチルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（８６）及び７β−（２’−テトラヒドロピラニルオキシ）エチルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（８７）の調製
【０３１２】
これらの化合物は、７α−又は７β−ヒドロキシ（５α）プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール前駆体から、ＮａＨの存在下、クロロ酢酸塩を用いたＯ−カルボキシメチル化、メチルエステルへのエステル化、ＬｉＡｌＨ４を用いたオキシエタノールへの還元、その後の、保護基の加水分解により数工程で得られる、７α−（２’−ヒドロキシ）エチルオキシ（５α）プレグナン−３，２０−ジオン（８５）のテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３１３】
実施例１１．４．７β−テトラヒドロピラニルオキシ−３−エチレンジオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（異性体Ｓ）（８８）及び７β−テトラヒドロピラニルオキシ−３−エチレンジオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（異性体Ｒ）（８９）の調製
【０３１４】
これらの化合物は、３，２０−ビスジオキソラン前駆体の部分加水分解から得られる、７β−ヒドロキシ−３−エチレンジオキシ（５α）プレグナン−２０−オン副生成物のテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３１５】
実施例１２：７α−ベンゾイル（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（９０）の調製
化合物（９０）は、２０−モノ−ジオキソラン化４，６−ジエン−３−オン前駆体からｍ−クロロ過安息香酸を用いた選択的６α，７α−エポキシ化、接触水素化及びケタール加水分解により数工程で得られる、７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオンのベンゾイル化により調製される（Lai et al., Steroids 1983, 42, 707-711）。
【０３１６】
実施例１３：７α−フェニルプロピルカルボキシアミド−３，２０−ビス−エチレンジオキシプレグナ−５−エン（９１）の調製
化合物（９１）は、５−エン−７−オン前駆体からオキシム誘導体の還元を介して得られる７α−アミノ−３，２０−ビス−エチレンジオキシプレグナ−５−エンのアシル化により調製される（Mappus et al., Steroids 1981, 38, 607-632）。
【０３１７】
実施例１４：７α−（２’−ヒドロキシ）エチルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（９２）及び７α−（２’−テトラヒドロピラニルオキシ）エチルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（９３）の調製
これらの化合物は、７−ブロモプレグナ−５−エン−３，２０−ビス−エチレンケタール前駆体のマロン酸アルキル化、その後の、脱カルボキシル化、エステル化及び３，２０−ビスジオキソラン保護基の加水分解を用いる報告された手順（Duval et al., J. Steroid Biochem. 1985, 22, 67-78）に従って、数工程で側鎖合成された７α−メチレンカルボン酸メチルエステルのＬｉＡｌＨ４還元により得られる７α−ヒドロキシエチル基のテトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３１８】
実施例１５：１１−モノ−置換プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン誘導体の調製
実施例１５．１．１１α−（２−ヒドロキシ−４−アジドベンゾイル）アミドプロピルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（９４）及び１１α−（２−ニトロ−５−アジドベンゾイル）アミドプロピルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（９５）の調製
これらの化合物は、１１α−ヒドロキシ−３，２０−ビス−エチレンジオキシプレグナ−５−エン−３，２０−ジオンから、化合物（７７）、（７８）、（７９）及び（８０）に記載するように調製される。
【０３１９】
実施例１５．２．１１α−（２’−テトラヒドロピラニルオキシ）エチルプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（９６）の調製
この化合物は、化合物８５で上述したように、１１α−ヒドロキシプレグナ−５−エン−３，２０−ビス−エチレンケタールから数工程で得られる１１α−（２’−ヒドロキシ）エチルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンのテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３２０】
実施例１５．３．１１α−テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（異性体Ｓ）（９７）及び１１α−テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（異性体Ｒ）（９８）の調製
これらの化合物は、１１α−ヒドロキシプロゲステロンのテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３２１】
実施例１６：１７α−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（より少なく保持された異性体）（１００）及び１７α−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（より保持の高い異性体）（１０１）の調製
これらの化合物は、１７α−ヒドロキシプロゲステロンの接触水素化により得られる１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオンのテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３２２】
実施例１７：２１−テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（Ｒ／Ｓ異性体（１０２）及び（１０３）の非分離混合物）の調製
この化合物は、２１−［ｐ−（Ｎ−α−（＋）メチルベンジルアミノアシルアミノ−フェニル）チオ］プレグナ−４−エン−３，２０−ジオンのテトラヒドロピラニル化により調製される（Leonessa et al., J. Med. Chem 2002, 45, 390-398）。
【０３２３】
実施例１８：３，７−二置換（５α−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体の調製
実施例１８．１．７α−テトラヒドロピラニルオキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（Ｒ／Ｓ異性体の非分離混合物）（１０４）、７α−テトラヒドロピラニルオキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（異性体Ｓ）（１０５）及び７α−テトラヒドロピラニルオキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オン（異性体Ｒ）（１０６）の調製
これらの化合物は、化合物（８１）、（８２）、（８３）、（８４）、（１０７）、（１０８）、（１０９）、（１１０）、（１１１）及び（１１２）で記載するように、３−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナ−５−エン−２０−オンから数工程で得られる７α−ヒドロキシ−３β−ベンゾイルオキシ（５α）プレグナン−２０−オンのテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３２４】
実施例１８．２．７β−テトラヒドロピラニルオキシ−３−β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（異性体Ｓ）（１０７）、７β−テトラヒドロピラニルオキシ−３−β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（異性体Ｒ）（１０８）、７α−テトラヒドロピラニルオキシ−３−β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（異性体Ｓ）（１０９）及び７α−テトラヒドロピラニルオキシ−３−β−ベンゾイルオキシプレグナ−５−エン−２０−オン（異性体Ｒ）（１１０）の調製
これらの化合物は、化合物（８１）、（８２）、（８３）及び（８４）で上述したように数工程で得られる、保護された３−ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル前駆体の加水分解から得られる３β−ヒドロキシ−７α−テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−５−エン−２０−オンのベンゾイル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３２５】
実施例１９：７，１１−二置換（５β−Ｈ）プレグナン−３，２０−ジオン誘導体の調製
実施例１９．１．１１α−ヒドロキシ−７β−ベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（３７）の調製
化合物（３７）は、活性化合物（３９）、（４０）及び（４１）の合成の前駆体として調製される（上記参照）。
【０３２６】
実施例１９．２．１１α，１７α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（５３）の調製
化合物（５３）は、活性化合物（５１）のより活性の低い１７−ＯＴＨＰ（Ｓ）異性体として得られる（上記参照）。
【０３２７】
実施例２０：１１α−テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｓ）（４９）及び１１α−テトラヒドロピラニルオキシ−１７α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（異性体Ｒ）（５０）の調製
これらの化合物は、活性化合物（５１）及び（５２）の合成における、モノ−１１α−テトラヒドロピラニルオキシ誘導体（４８）から分離されるＲ／Ｓ異性体前駆体として調製される（上記参照）。
【０３２８】
実施例２１：３，７，２０−三置換プレグナ−５−エン誘導体の調製
実施例２１．１．７α／β−ヒドロキシ−プレグナ−５−エン−３β，２０α／β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル（２つの分離異性体）（１１１）及び（１１２）ならびに７α／β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−３β，２０α／β−ジベンゾエート（異性体混合物）（１１３）の調製
これらの化合物は、化合物（８１）、（８２）、（８３）、（８４）、（１０７）、（１０８）、（１０９）、（１１０）、（１１１）及び（１１２）に記載するように、ＬｉＡｌＨ４を用いた３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オンの３，２０α／β−ジオールへの還元、３，２０−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル又は３，２０−ジベンゾエートへの変換、ＣｒＯ３−（ピリジン）２錯体を用いた５−エン−７−オンへのアリル酸化、及び７α／β−ヒドロキシ誘導体への還元により調製される。
【０３２９】
実施例２１．２．７α／β−テトラヒドロピラニルオキシプレグナ−５−エン−３β，２０α／β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル（３つの分離異性体）（１１４）、（１１５）及び（１１６）の調製
これらの化合物は、７α／β−ヒドロキシ前駆体のテトラヒドロピラニル化（及び異性体の部分的ＴＬＣ分離）により調製される。
【０３３０】
実施例２１．３．７α／β−テトラヒドロピラニルオキシ−３β，２０α／β−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナ−５−エン（１つの分離異性体）（１１７）の調製
この化合物は、７α／β−ヒドロキシ前駆体のテトラヒドロピラニル化（及び異性体の部分的ＴＬＣ分離）により調製される。
【０３３１】
実施例２２：３α／β−１１α−２０α／β−トリベンゾイルオキシ（５β）プレグナン（１１８）の調製
これらの化合物は、活性化合物３α／β−１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−２０−オン（２０）（上記参照）の合成で用いられる、１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ビスエチレンケタール前駆体の選択的３−ケタール加水分解において副生成物として得られる、完全に３，２０−保護された副生成物の両方の３−及び２０−ケト基の還元から得られる、異性体トリヒドロキシ誘導体混合物のベンゾイル化により調製される。
【０３３２】
実施例２３：３，７−二置換（５β−Ｈ）ケノデオキシコラン誘導体の調製
実施例２３．１．３α，７α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン酸メチル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）CAS[951694-76-1]（１１９）の調製
この化合物は、ケノデオキシコール酸（Aldrichから購入）のケノデオキシコラン酸メチルへのエステル化、その後の、ビス−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３３３】
実施例２３．２．３α−ベンゾイルオキシ−７α−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン酸メチル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２０）の調製
この化合物は、デオキシコラン酸メチルの３−モノ−ベンゾイル化（上記§２３．１参照）及び７−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３３４】
実施例２３．３．３−オキソ−７α−ベンゾイルオキシケノデオキシコラン酸メチル（１２１）の調製
この化合物は、炭酸銀試薬を用いた３−ケトンへのケノデオキシコラン酸メチル（上記§２３．１参照）の３α−ヒドロキシ基の選択的酸化（上記実施例８、化合物５６参照）及び７−ベンゾイル化により調製される。
【０３３５】
実施例２３．４．３α，７α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２２）の調製
この化合物は、ＬｉＡｌＨ４を用いた２４−コラノールへの３，７−ビス−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシデオキシコラン酸メチル（上記§２３．１参照）の還元、その後の、２４−ベンジルエーテルへの変換により調製される。
【０３３６】
実施例２３．５．３α−ベンゾイルオキシ−７α−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２３）の調製
この化合物は、３，７−ジオールへの３，７−ビス−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（１２９）の加水分解、その後の、選択的３−モノベンゾイル化により得られる３−モノベンゾエート−７−ヒドロキシ前駆体のテトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３３７】
実施例２３．６．３α，７α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン酸ベンジル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２４）の調製
この化合物は、塩化ベンジルを用いたケノデオキシコール酸（Aldrich社）のエステル化及びビス−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３３８】
実施例２３．７．３α−ベンゾイルオキシ−７α−テトラヒドロピラニルオキシケノデオキシコラン酸ベンジル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２５）の調製
この化合物は、ケノデオキシコラン酸ベンジル（上記§２３．６参照）の３−モノベンゾイル化、その後の、７−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３３９】
実施例２４：３，１２−二置換（５β−Ｈ）デオキシコラン誘導体の調製
実施例２４．１．３α，１２α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシデオキシコラン酸メチル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２６）の調製
化合物（１２６）は、デオキシコール酸（Aldrich社）のエステル化（ＭｅＯＨ／ＨＣｌ）により容易に得られるデオキシコラン酸メチルのビス−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３４０】
実施例２４．２．３α−ベンゾイルオキシ−１２α−テトラヒドロピラニルデオキシオキシコラン酸メチル（分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２７）の調製
この化合物は、デオキシコラン酸メチルの３−モノベンゾイル化及び１２−テトラヒドロピラニル化、その後の、Ｒ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離により調製される。
【０３４１】
実施例２４．３．３−オキソ−１２α−テトラヒドロピラニルオキシデオキシコラン酸メチル（非分離Ｒ／Ｓ異性体）（１２８）の調製
この化合物は、炭酸銀試薬（上記§２３．１参照）を用いた３−ケトンへのデオキシコラン酸メチルの３α−ヒドロキシ基の選択的酸化及び１２−テトラヒドロピラニル化により調製される。
【０３４２】
実施例２４．４．３α，１２α−ビス−テトラヒドロピラニルオキシデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（１２９）の調製
この化合物は、ＬｉＡｌＨ４を用いた２４−コラノールへの３，１２−ビス−テトラヒドロピラニルオキシ−デオキシコラン酸メチル（上記§２４．１参照）の還元、その後の、２４−ベンジルエーテルへの変換により調製される。
【０３４３】
実施例２４．５．３α−ベンゾイルオキシ−１２α−テトラヒドロピラニルオキシデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（分離Ｒ／Ｓ異性体）（１３０）の調製
この化合物は、３，１２−ジオールへの３，１２−ビス−テトラヒドロピラニルオキシデオキシコラン−２４−ベンジルエーテル（１２９）の加水分解及び選択的３−モノベンゾイル化により得られる、３−モノベンゾエート−１２−ヒドロキシ前駆体のテトラヒドロピラニル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３４４】
実施例２５：３，７，１２−三置換（５β−Ｈ）コラン誘導体の調製
実施例２５．１．３−α−ヒドロキシ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシコラン酸メチル（１３３）の調製
この化合物は、３−オキソ−７α，１２α−ジベンゾイルオキシコラン酸メチル（５７）の穏やかなＮａＢＨ４還元により調製される。
【０３４５】
実施例２５．２．種々の３−オキソ−７α，１２α−ジヒドロキシコラン酸メチル誘導体（１３４）、（１３５）、（１３６）及び（１３７）の調製
これらの化合物は、ｉ）ｐ−置換ベンゾエート基（即ち、ｐ−ニトロベンゾエート（１３４）又はｐ−ジメチルアミノベンゾエート（１３５））でのジアシル化により、ｉｉ）（１３６）などの誘導体を生成する、非置換又は置換ベンゾエートでのモノアシル化、その後の、メトキシメチル基（活性阻害にほとんど寄与しないテトラヒドロピラニルエーテル類似体）でのエーテル化により、そして、ｉｉｉ）ビス−テトラヒドロピラニル化（化合物[176256-19-2]（１３７）を生成）により調製される。
【０３４６】
実施例２６：３−又は７−モノ−置換（５α−Ｈ）アンドロスタン誘導体：３β−ベンゾイルアミド（５α）アンドロスタン[40212-36-0]（１３８）、３α−ベンゾイルアミド（５α）アンドロスタン[40212-36-0]（１３９）、３β−（Ｎ−メチル）−ベンゾイルアミド（５α）アンドロスタン（１４０）及び７β−ベンゾイルアミド（５α）アンドロスタン（１４２）の調製
これらの化合物は、３−又は７−オキソ（５α）アンドロスタン前駆体から、オキシム化、オキシムのアミンへの還元、ベンズアミドへのアシル化及びＮ−メチル化を介して調製される。
【０３４７】
実施例２７：７，１７−二置換（５β−Ｈ）アンドロスタン誘導体の調製
実施例２７．１．７α−ベンゾイルオキシ−１７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）アンドロスタン−３−オン（より少なく保持される異性体）（１４３）及び７α−ベンゾイルオキシ−１７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）アンドロスタン−３−オン（より保持される異性体）（１４４）の調製
これらの化合物は、１７β−ヒドロキシアンドロスタ−４，６−ジエン−３−オン前駆体から、化合物（９０）で上述したように、テトラヒドロピラニル化、ｍ−クロロ過安息香酸を用いた選択的６α，７α−エポキシ化及び接触水素化により数工程で得られる、７α−ヒドロキシ−１７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）アンドロスタン−３−オンのベンゾイル化（及びＲ／Ｓ異性体のＴＬＣ分離）により調製される。
【０３４８】
実施例２７．２．７α，１７β−ジベンゾイルオキシ（５β）アンドロスタン−３−オン（１４５）の調製
この化合物は、７α−ベンゾイルオキシ−１７β−テトラヒドロピラニルオキシ（５β）アンドロスタン−３−オン異性体（１４３）及び（１４４）で上述したように調製される（しかし、先のテトラヒドロピラニル化は行わない）。
【０３４９】
実施例２８：７，１１−二置換（５β）プレグナン誘導体（２０５）及び（２０６）の調製
これらの化合物は、６，７−エポキシプレグナ−４−エン−３−オン経路（Lai et al., Steroids, 1983, 42, 707-711）を介して調製され、下記式を有する：
【化４９】
2013514338.tif 000054
【０３５０】
１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（１９９）
１１α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（「１１α−ヒドロキシプロゲステロン」）（６．０ｇ、１４．３３５mmol、１．０当量）の１Ｈ−イミダゾール（２．３７ｇ、３４．８１２mmol、２．４３当量）を含有する無水ＤＭＦ（２４０mL）溶液を、−１０℃（氷−アセトン浴）で冷却した。固体塩化tert−ブチルジメチルシリル（５．２ｇ、３４．４９９mmol、２．４０当量）をアルゴン雰囲気下で加えた。反応が完了するまで１１日間（ＴＬＣでモニタリング）反応物を室温で撹拌した。
【０３５１】
反応混合物を水８００mLに注いで抽出した。ステロイド誘導体の固体沈殿物を濾過して回収し、水で洗浄した。固体残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、相分離紙（Whatman）で濾過して、減圧下で蒸発乾固し、減圧下、トルエンとの共沸蒸留により乾燥させた。
【０３５２】
乾燥生成物（８．５５ｇ）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ５：１）で分析した。
【０３５３】
粗残渣を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ６：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、純粋なシリルエーテル１９９の試料（２．４ｇ）を得たが、一方で、他の純粋でないフラクションが回収された。
【化５０】
2013514338.tif 000055
【０３５４】
１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）プレグナ−４，６−ジエン−３，２０−ジオン（２００）
エノン誘導体１９９（３．０ｇ、６．７４６mmol、１．０当量）を温ｔ−ブタール（１５０mL）に溶解させ、テトラクロロベンゾキノン（４．０ｇ、１６．２７mmol、２．４当量）の存在下、抽出アリコートのＵＶ最大吸収が２４０から２８５nmにシフトするまで還流下で３．５時間撹拌した。
【０３５５】
反応混合物をわずかに加熱した塩基性アルミナカラムで濾過し、蒸発させた。乾燥生成物（２．８ｇ）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析したところ、わずかに極性の高い少量の混入物の存在が確認された。
【０３５６】
着色した粗残渣を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ３：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、純粋なジエノン２００の試料（１．１６ｇ）を得て、一方で、他のフラクションを蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）でさらに精製して、ジエノンの追加試料（０．６８ｇ）を得た。
【化５１】
2013514338.tif 000056
【０３５７】
６α，７α−エポキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（２０１）
ジエノン誘導体２００（６８２mg、１．５４１mmol、１．０当量）をジクロロメタン（９０mL）に溶解させ、アルゴン雰囲気下、ｍ−クロロ過安息香酸（４３０mg、２．４９２mmol、１．６２当量）の存在下で、室温で３日間撹拌した。反応がまだ完了していなかったため、追加のｍ−クロロ過安息香酸（２１５mg、１．２４６mmol、０．８１当量）を加え、出発物質が完全に変換されるまで４日間撹拌を延長した。
【０３５８】
氷浴で冷却した反応混合物に、過剰の１０％亜硫酸ナトリウム水溶液（１００mL）を添加して不活性化した。ジクロロメタン有機層をデカントし、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、蒸発させた。
【０３５９】
さらに通常の抽出（酢酸エチル）を行った後、残渣（６３３mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析した。
【０３６０】
同様の条件の分取ＴＬＣから、モノエポキシド２０１の純粋な試料（４０５mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.075 & 0.091 (d, SiCH3), 0.688 (s, 18-CH3), 0.88 (s, SiC-CH3), 1.17 (s, 19-CH3), 2.122 (s, 21-CH3), 3.35 (d, J=3 Hz, 7-H), 3.46 (d, J=4 Hz, 6-H), 4.06-4.12 (m, 11-H), 6.07 (s, 4-H), 7.44 (m, m-Ar-H), 7.56 (m, p-Ar-H), 8.04 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 36.24 (1), 34.33 (2), 198.88 (3), 132.17 (4), 162.67 (5), 53.42 (6), 51.61 (7), 33.63 (8), 47.41 (9), 37.43 (10), 69.60 (11), 50.34 (12), 44.56 (13), 55.11 (14), 24.16 (15), 23.30 (16), 63.21 (17), 14.59 (18), 18.54 (19), 208.67 (20), 31.63 (21), -2.61 & -3.30 (SiCH3), 18.52 (SiC-CH3), 26.43 (SiC-CH3)
【化５２】
2013514338.tif 000057
【０３６１】
７α−ヒドロキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２０２）
０．８％ピリジン（４５mL）を含有するジオキサン−９５％エタノール１：１（v/v）混合物に溶解させたモノ−エポキシド２０１（４４７mg、０．９７４mmol、１．０当量）をガラス水素化装置に導入し、大気圧の水素下で、１０％Ｐｄ−Ｃ触媒（３９１mg）の存在下、３０℃で１２時間磁気撹拌した。抽出アリコートのＴＬＣで、反応の進行をモニタリングした（下記参照）。
【０３６２】
反応混合物をCelite（商標）パッドで濾過し、減圧下で蒸発させた。ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸留により残留ピリジンを除去した。
【０３６３】
残渣（４６０mg）を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析したところ、主要な非ＵＶ吸収スポットが確認された。
【０３６４】
粗生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ２：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、（５β−Ｈ）−７α−ヒドロキシ化合物２０２の純粋な試料（１２５mg）とわずかに不純なフラクション（２８７mg）を得て、これを再度精製した。
1H NMR (CDCl3) 0.084 & 0.092 (d, SiCH3), 0.622 (s, 18-CH3), 0.896 (s, SiC-CH3), 1.087 (s, 19-CH3), 2.128 (s, 21-CH3), 3.92 (m broad, 11-H), 4.12 (m, 7-H)
13C NMR (CDCl3) 39.71 (1), 38.88 (2), 214.19 (3), 34.64 (4), 45.31 (5), 46.42 (6), 68.76 (7), 38.80 (8), 40.90 (9), 36.61 (10), 70.72 (11), 50.23 (12), 44.18 (13), 50.48 (14), 24.21 (15), 23.08 (16), 63.65 (17), 14.45 (18), 22.90 (19), 209.03 (20), 31.71 (21), -2.50 & -3.15 (SiCH3), 18.77 (SiC-CH3), 26.67 (SiC-CH3)
【化５３】
2013514338.tif 000058
【０３６５】
７α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２０３）
７α−ヒドロキシ誘導体２０２（２１６mg、０．４６７mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（４．５mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．９mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（４．５mg）を含有する即時調製溶液中、室温で１時間、次に、４℃で１２時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応を停止した。
【０３６６】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣（２６０mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析した。
【０３６７】
粗生成物を、溶離剤として石油エーテル／酢酸エチル  ４：１を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、非分離テトラヒドロピラニルエーテルＲ／Ｓ混合物２０３の純粋な試料（２１９mg）を得た。
【化５４】
2013514338.tif 000059
【０３６８】
７α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２０４）
ＴＨＦ（２．４mL）に溶解させた、１１α−tert−ブチルジメチルシリル誘導体２０３（１７５mg、０．３２０mmol、１．０当量）に、市販のフッ化テトラ−ブチルアンモニウムの１ＭＴＨＦ溶液（１．１４７mL、１．１４７mmol、０．３００ｇ、３．５９当量）を添加した後、４℃で２時間、次に、室温で４８時間撹拌した。
【０３６９】
飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加した後、反応混合物を減圧下で蒸発乾固した。
【０３７０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、抽出物（１３５mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１及び２：１）で分析した。
【０３７１】
粗１１α−ヒドロキシ生成物２０４を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
【化５５】
2013514338.tif 000060
【０３７２】
７α−Ｏ−［２’（Ｒ及びＳ）］テトラヒドロピラニルオキシ−１１α−ベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２０５）及び（２０６）
１１α−ヒドロキシ誘導体２０４（１３５mg、０．３１２mmol、１．０当量）を、ピリジン（５．５mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．２０mL、１．７２３mmol、５．５２当量）と室温で１２時間撹拌した。
【０３７３】
反応混合物を４℃で冷却し、酢酸エチル２５mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液２５mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０３７４】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１；石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１）で分析した。
【０３７５】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１、展開×９）で精製して、極性の低いフラクション（４５mg）、極性の高いフラクション（１７mg）及びこれらの２つのフラクションの混合物を含有する中間フラクション（４９mg）を得て、この中間フラクションを、同様の分取ＴＬＣ（石油エーテル／エチルＭＴＢＥ  ２：１、展開×７）でさらに精製して、極性の低いものと極性の高いものが同様に多く含まれる２つのフラクション（１３mg及び２７mg）を得た。類似するフラクションの最後の分取ＴＬＣ（石油エーテル／エチルＭＴＢＥ  ２：１、展開×８）から、それぞれ、Ｒ及びＳ−テトラヒドロピラニルエーテル異性体２０５及び２０６に相当することが示された（ＲＸデータ）、極性の低い生成物（４７mg）及び極性の高い生成物（３０mg）の純粋な試料が得られた。
【０３７６】
（より保持の高い）７α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ異性体（２０６）（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.757 (s, 18-CH3), 1.166 (s, 19-CH3), 2.095 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.9 (m, 6'-H, 7-Hに重複), 4.58 (d, J=5.5 Hz, 2'-H), 5.56 (m, 11-H), 7.44 (m, m-Ar-H), 7.57 (m, p-Ar-H), 8.01 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.32 (1), 38.34 (2), 213.05 (3), 45.25 (4), 44.47 (5), 29.72 (6), 72.46* (7), 38.02 (8), 39.27 (9), 36.72 (10), 72.44* (11), 46.11 (12), 44.10 (13), 49.92 (14), 23.77 (15), 23.31 (16), 63.37 (17), 14.36 (18), 22.97 (19), 209.16 (20), 31.93 (21), 129.85 (o-Ar), 128.84 (m-Ar), 133.56 (p-Ar), 130.54 (置換-Ar), 166.14 (Ar-CO), 97.40 (2'-OTHP), 31.67 (3'-OTHP), 21.16 (4'-OTHP), 25.66 (5'-OTHP), 64.58 (6'-OTHP).
【０３７７】
（より少なく保持された）７α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ異性体（２０５）（構造は、Ｘ線結晶学的データにより確認した）
1H NMR (CDCl3) 0.754 (s, 18-CH3), 1.147 (s, 19-CH3), 2.097 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.74 (ブロードs, 7-H), 4.54 (d, J=5.0 Hz, 2'-H), 5.56 (m, 11-H), 7.42 (m, m-Ar-H), 7.56 (m, p-Ar-H), 8.00 (o-Ar-H).
13C NMR (CDCl3) 39.38 (1), 38.43 (2), 213.71 (3), 45.23 (4), 44.83 (5), 32.93 (6), 77.20 (7), 38.10 (8), 39.58 (9), 36.59 (10), 72.38 (11), 46.12 (12), 44.17 (13), 50.34 (14), 24.83 (15), 23.28 (16), 63.30 (17), 14.35 (18), 22.95 (19), 208.83 (20), 31.92 (21), 129.85 (o-Ar), 128.84 (m-Ar), 133.58 (p-Ar), 130.51 (置換-Ar), 166.14 (Ar-CO), 102.82 (2'-OTHP), 31.77 (3'-OTHP), 21.00 (4'-OTHP), 25.64 (5'-OTHP), 64.21 (6'-OTHP)
【０３７８】
実施例２９：３−オキソ−ヒドロデオキシコール酸メチルの６α−置換誘導体（２１０）及び（２１１）の調製
【化５６】
2013514338.tif 000061
３−オキソ−６α−ヒドロキシコラン酸メチル（２０７）
トルエン（４０mL）に溶解させた、３α，６α−ジヒドロキシコラン酸メチル（「ヒオデオキシコール酸メチル」）（２００mg、０．４９２mmol、１．０当量）を、Dean-Stark水トラップ中、Ag2CO3/Celite試薬４．０ｇの存在下、還流下で１２時間磁気撹拌した（Fieser L., Reagents for Organic Synthesis, Vol 2, p. 363; Fetizon M., Balogh V., Golfier M., J. Org. Chem. (1971), 36, 1339-41 and C.Y., Cuilleron, These de Doctorat d’Etat 1971, Orsay-Paris 11を参照）
【０３７９】
反応混合物をCeliteカラムで濾過し、これを過剰のトルエンで洗浄した。合わせた濾液を減圧下で蒸発させた。
【０３８０】
白色の抽出物を、蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析したところ、出発物質より高い位置に主要スポットが確認された。このモノ−３−オキソ生成物２０７を、さらに精製することなく後続の工程に用いた。
1H NMR (CDCl3) 0.673 (s, 18-CH3), 0.917 (d, 21-CH3, J=7 Hz), 1.000 (s, 19-CH3), 3.659 (s, OCH3), 4.10 (m, 6-H)
13C NMR (CDCl3) 37.41*(1), 37.41*(2), 213.00 (3), 36.37 (4), 50.50 (5), 68.03 (6), 34.71 (7), 34.88 (8), 40.57 (9), 36.56 (10), 21.42 (11), 40.15 (12), 43.18 (13), 56.44 (14), 24.48 (15), 28.41 (16), 56.25 (17), 12.38 (18), 23.19 (19), 35.65 (20), 18.60 (21), 31.37 (22), 31.26 (23), 175.05 (24), 51.86 (OCH3)
【化５７】
2013514338.tif 000062
【０３８１】
３−オキソ−６α−ベンゾイルオキシコラン酸メチル（２０８）
６α−ヒドロキシ誘導体２０７（８０mg、０．１９８mmol、１．０当量）を、ピリジン（２．２mL）に溶解させた過剰の塩化ベンゾイル（０．１４mL、１．２０６mmol、６．１当量）混合物と室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４℃の氷浴で冷却し、酢酸エチル９mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液９mLを添加した後３０分間撹拌した。
【０３８２】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、粗抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析したところ、少量のモノベンゾイル化副生成物が確認された。
【０３８３】
粗生成物を、同様の条件の分取ＴＬＣで精製して、ベンゾエート２０８の純粋な試料（６９mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.704 (s, 18-CH3), 0.929 (d, 21-CH3, J=7 Hz), 1.127 (s, 19-CH3), 3.660 (s, OCH3), 5.43 (m, 6-H), 7.42 (m, m-Ar-H, 2H), 7.54 (m, p-Ar-H, 1H), 7.98 (o-Ar-H, 2H)
13C NMR (CDCl3) 37.43 (1), 37.25* (2), 212.27 (3), 37.04* (4), 47.60 (5), 71.51 (6), 31.37 (7), 34.81 (8), 40.71 (9), 36.75 (10), 21.39 (11), 40.12 (12), 43.24 (13), 56.51 (14), 24.43 (15), 28.41 (16), 56.25 (17), 12.39 (18), 23.06 (19), 35.65 (20), 18.61 (21), 31.34 (22), 31.26 (23), 175.00 (24), 51.85 (OCH3), 129.88 (o-Ar), 128.71 (m-Ar), 133.36 (p-Ar), 130.62 (置換-Ar), 166.04 (Ar-CO)
【化５８】
2013514338.tif 000063
【０３８４】
３−オキソ−６α−Ｏ−［２’（Ｒ＋Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシコラン酸メチル（２０９）ならびにＲ／Ｓ異性体（２１０）及び（２１１）の分離
６α−ヒドロキシ誘導体２０７（１５０mg、０．３７１mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（４mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．８０mL、８．７６８mmol、２３．６当量）及びｐ−トルエンスルホン酸（０．４mg）を含有する限定量の即時調製溶液と室温で１２時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加して反応を停止した。
【０３８５】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で分析した。石油エーテル／酢酸エチル  ６：１（展開×６）又は石油エーテル／ＭＴＢＥ  ４：１（展開×６）を用いたＴＬＣから、テトラヒドロピラニルエーテル誘導体２０９にＲ／Ｓ異性体の存在に相当するＲｆ値が非常に近い２スポットが確認された。
【０３８６】
これらの２つの異性体を、同様の条件の２連続分取ＴＬＣで完全に分離して、それぞれ、Ｒ及びＳ−テトラヒドロピラニルエーテル異性体の１つに相当する極性の低い生成物２１０（２８mg）と極性の高い生成物２１１（５７mg）の純粋な試料を得た。現在の研究は、これらの異性体の絶対配置を確定することが目的である。
【０３８７】
（より小さい保持の）６α−Ｏ−［２’（Ｓ又はＲ）］ＴＨＰ異性体２１０
1H NMR (CDCl3) 0.662 (s, 18-CH3), 0.912 (d, 21-CH3, J=7 Hz), 1.007 (s, 19-CH3), 3.654 (s, OCH3), 3.5 & 3.8 (2m, 6'-H, 2H), 4.01 (m, 6-H), 4.69 (m, 2'-H)
13C NMR (CDCl3) 37.40 (1), 37.32* (2), 213.54 (3), 37.28* (4), 49.75 (5), 71.79 (6), 31.34* (7), 34.75 (8), 40.81 (9), 36.46 (10), 21.45 (11), 40.16 (12), 43.19 (13), 56.59 (14), 24.49 (15), 28.41 (16), 56.23 (17), 12.36 (18), 23.26 (19), 35.65 (20), 18.60 (21), 31.34** (22), 31.27** (23), 175.02 (24), 51.83 (OCH3), 96.69 (2'-OTHP), 31.27** (3'-OTHP), 19.65 (4'-OTHP), 25.84 (5'-OTHP), 62.52 (6'-OTHP)
【０３８８】
（より保持された）６α−Ｏ−［２’（Ｒ又はＳ）］ＴＨＰ異性体２１１
1H NMR (CDCl3) 0.664 (s, 18-CH3), 0.913 (d, 21-CH3, J=7 Hz), 0.996 (s, 19-CH3), 3.655 (s, OCH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.04 (m, 6-H), 4.59 (m, 2'-H)
13C NMR (CDCl3) 37.44* (1), 37.62* (2), 213.42 (3), 37.10* (4), 47.17 (5), 71.88 (6), 33.19* (7), 34.91 (8), 40.68 (9), 36.39 (10), 21.47 (11), 40.17 (12), 43.18 (13), 56.60 (14), 24.47 (15), 28.43 (16), 56.22 (17), 12.37 (18), 23.22 (19), 35.64 (20), 18.61 (21), 31.35** (22), 31.27** (23), 175.02 (24), 51.83 (OCH3), 96.65 (2'-OTHP), 31.44** (3'-OTHP), 20.20 (4'-OTHP), 25.77 (5'-OTHP), 63.28 (6'-OTHP)
【０３８９】
実施例３０：（５β）プレグナン（２１７）及び（２１８）の６β−置換誘導体の調製
これらの化合物は、プレグナ−５−エン前駆体のヒドロホウ素化を介して調製され、下記式を有する：
【化５９】
2013514338.tif 000064
【０３９０】
６β−ヒドロキシ−１１α−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ（５β）（プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２１２）
撹拌した、プレグナ−５−エン誘導体２２（２００mg、０．３７５mmol、１．０当量）の無水ＴＨＦ（８．０mL）溶液に、アルゴン雰囲気下、４℃で、市販のボラン−ＴＨＦ錯体の１ＭＴＨＦ溶液（０．６５mL、０．６５０mmol、１．６９当量）を滴下した。反応混合物を４℃で１時間、次に、室温で１時間撹拌した。
【０３９１】
４℃で、水（１．５mL）、次に、２Ｎ  ＮａＯＨ溶液（１．５mL）及び３０％Ｈ２Ｏ２（１．５mL）を滴下することにより過剰のボランを破壊した。反応混合物を５０℃で１時間加熱し、蒸発乾固した。
【０３９２】
通常の抽出（ＭＴＢＥ）の後、抽出物を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１；  石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：２）で分析した。
【０３９３】
残渣（１８５mg）を、溶離剤として石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：２を使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュ）で精製して、ほとんど純粋な主要生成物を含有する主要なフラクション（１３８mg）を得て、これを、溶離剤として石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１を使用した同様のクロマトグラフィーに付して、６−ヒドロキシ化合物２１２の純粋な試料（９５mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.048 & 0.059 (d, SiCH3), 0.767 (s, 18-CH3), 0.867 (s, SiC-CH3), 1.182 (s, 19-CH3), 1.287 (s, 21-CH3), 3.70 (ブロードs, 6-H), 3.927 (s, 3-OCH2), 3.84-3,99 (m, 20-OCH2), 4.00-4.06 (m, 11-H)
13C NMR (CDCl3) 36.35 (1), 31.15 (2), 110.01 (3), 37.26 (4), 49.75 (5), 72.69 (6), 34.57 (7), 29.37 (8), 47.43 (9), 35.84 (10), 70.56 (11), 51.26 (12), 42.69 (13), 55.84 (14), 24.14 (15), 23.20 (16), 58.40 (17), 14.43 (18), 24.84 (19), 111.99 (20), 24.64* (21), 64.53 (3-OCH2), 63.64 & 65.58 (20-OCH2), -2.78 & -3.07 (SiCH3), 18.69 (SiC-CH3), 26.64* (SiC-CH3)
【化６０】
2013514338.tif 000065
【０３９４】
６β−ベンゾイルオキシ−１１α−tert−ブチルジメチルシラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２１３）
６−ヒドロキシ誘導体２１２（３９７mg、０．７２１mmol、１．０当量）を、ピリジン（１５mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（１mL、１．７２３mmol、１１．９当量）と室温で１２時間撹拌した。
【０３９５】
４℃で冷却した反応混合物に、酢酸エチル６０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液６５mLを添加した後１時間撹拌した。
【０３９６】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥残渣を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１；石油エーテル／ＭＴＢＥ  １：１）で分析した。
【０３９７】
粗生成物（４６７mg）を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ４：１）で精製して、ベンゾエート誘導体２１３の純粋な試料（４５１mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.063 & 0.076 (d, SiCH3), 0.791 (s, 18-CH3), 0.882 (s, SiC-CH3), 1.187 (s, 19-CH3), 1.291 (d, J=2 Hz, 21-CH3), 3.94 (s, 3-OCH2), 3.84-3,99 (m, 20-OCH2), 4.04-4.09 (m, 11-H), 4.969 (ブロードs, 6-H), 7.44 (m, m-Ar-H), 7.56 (m, p-Ar-H), 8.04 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 36.09 (1), 31.43 (2), 109.76 (3), 37.10 (4), 46.85 (5), 75.48 (6), 31.79 (7), 30.21 (8), 46.66 (9), 35.78 (10), 70.52 (11), 51.30 (12), 42.69 (13), 55.73 (14), 24.13 (15), 23.19 (16), 58.36 (17), 14.52 (18), 24.85 (19), 111.94 (20), 25.88 (21), 64.59 & 64.63 (3-OCH2), 63.65 & 65.57 (20-OCH2), -2.73 & -3.09 (SiCH3), 18.71 (SiC-CH3), 26.65 (SiC-CH3), 129.91 (o-Ar), 128.71 (m-Ar), 133.09 (p-Ar), 131.23 (置換-Ar), 166.26 (Ar-CO)
【化６１】
2013514338.tif 000066
【０３９８】
６β−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ−（５β）（プレグナン−３，２０−ビス−エチレンケタール（２１４）
ＴＨＦ（４．８０mL）に溶解させた１１α−tert−ブチルジメチルシリル誘導体２１３（４２５mg、０．６４９mmol、１．０当量）に、市販のフッ化テトラ−ブチルアンモニウムの１ＭＴＨＦ溶液（２．１０３mL、２．１０３mmol、３．２４当量）を添加した後、４℃で２時間、次に、室温で５日間撹拌した。反応がまだ完了していなかったため、さらにフッ化テトラ−ブチルアンモニウム溶液（１．０５mL、１．０５mmol、１．６当量）を加え、加水分解が完了するまで、反応混合物を４℃で１時間、次に、室温で５日間再度撹拌した。
【０３９９】
飽和重炭酸ナトリウム水溶液の添加後、反応混合物を減圧下で蒸発乾固した。
【０４００】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥抽出物（３５１mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：３）で分析した。
【０４０１】
粗１１α−ヒドロキシ生成物２１４を精製することなく次の工程に用いた。
【化６２】
2013514338.tif 000067
【０４０２】
６β−ベンゾイルオキシ−１１α−ヒドロキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２１５）
ビス−エチレンジオキシ−１１α−オール誘導体２１４（３５１mg、０．６４９mmol、１．０当量）のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８０mg）及び少量の水（２．４mL）を含有するアセトン（４８mL）溶液を室温で２日間撹拌した。反応物を冷飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、溶媒を減圧下で蒸発させた。
【０４０３】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、乾燥生成物（３０１mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：２）で分析した。
【０４０４】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：３）で精製して、３，２０−ジオン２１５の純粋な試料（２２７mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.710 (s, 18-CH3), 1.183 (s, 19-CH3), 2.143 (s, 21-CH3), 4.09 (m, 11-H), 4.94 (d, J=2 Hz, 6-H), 7.46 (m, m-Ar-H), 7.58 (m, p-Ar-H), 8.01 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 40.03 (1), 38.02 (2), 211.74 (3), 41.99* (4), 48.71 (5), 74.14 (6), 31.36* (7), 30.56 (8), 47.76 (9), 36.01 (10), 68.68 (11), 50.64 (12), 44.56 (13), 55.60 (14), 24.67 (15), 23.38 (16), 63.46 (17), 14.85 (18), 25.24 (19), 209.12 (20), 31.72 (21), 129.88 (o-Ar), 128.84 (m-Ar), 133.42 (p-Ar), 130.69 (置換-Ar), 166.07 (Ar-CO)
【化６３】
2013514338.tif 000068
【０４０５】
６β，１１α−ジベンゾイルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２１６）
１１α−ヒドロキシ誘導体２１６（６０mg、０．１３３mmol、１．０当量）を、ピリジン（２．４mL）に溶解させた塩化ベンゾイル（０．１０mL、０．８６１mmol、６．５当量）と室温で１２時間撹拌した。
【０４０６】
４℃で冷却した反応混合物に、酢酸エチル１０mL及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１０mLを添加した後１時間撹拌した。
【０４０７】
通常の抽出（酢酸エチル）を行って、ｎ−ヘプタンの存在下、共沸蒸発により微量のピリジンを除去した後、乾燥残渣（０．０７８ｇ）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  １：１）で分析した。
【０４０８】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で精製して、ジベンゾエート誘導体２１６の純粋な試料（６０mg）を得た。
1H NMR (CDCl3) 0.837 (s, 18-CH3), 1.186 (s, 19-CH3), 2.103 (s, 21-CH3), 4.98 (d, J=2 Hz, 6-H), 5.59-5.65 (m, 11-H), 7.46 (m, m-Ar-H), 7.58 (m, p-Ar-H), 8.01 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.34 (1), 37.72 (2), 210.49 (3), 41.92* (4), 48.26 (5), 73.72 (6), 31.29* (7), 30.83 (8), 45.11 (9), 35.96 (10), 71.88 (11), 45.80 (12), 44.41 (13), 55.62 (14), 24.66 (15), 23.27 (16), 63.41 (17), 14.69 (18), 25.23 (19), 208.61 (20), 31.79 (21), 129.89 & 129.79 (o-Ar), 128.92 (m-Ar), 133.55 & 133.71 (p-Ar), 130.52 & 130.41 (置換-Ar), 166.05 & 165.89 (Ar-CO)
【化６４】
2013514338.tif 000069
【０４０９】
６β−ベンゾイルオキシ−１１α−Ｏ−［２’（Ｒ及びＳ）］テトラヒドロピラニルオキシ（５β）プレグナン−３，２０−ジオン（２１７）（Ｓ異性体）及び（２１８）（Ｒ異性体）
１１α−ヒドロキシ誘導体２１５（１４７mg、０．３２５mmol、１．０当量）を、無水ＴＨＦ（３mL）、新たに蒸留したジヒドロピラン（０．６mL）及びｐ−トルエンスルホン酸（３mg）を含有する即時調製溶液中、室温で１時間、次に、４℃で１２時間撹拌した。過剰の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を添加して反応を停止した。
【０４１０】
通常の抽出（酢酸エチル）の後、残渣（２３０mg）を蛍光シリカゲルＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で分析した。
【０４１１】
粗生成物を、蛍光シリカゲル分取ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル  ２：１）で精製して、それぞれ、Ｓ及びＲ−テトラヒドロピラニルエーテル異性体と帰属された（ＮＭＲデータ）、極性の低い生成物２１７（８９mg）と極性の高い生成物２１８（６５mg）の純粋な試料に相当する２つのフラクションを得た。
より少なく保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｓ）］テトラヒドロピラニルオキシ異性体２１７
1H NMR (CDCl3) 0.707 (s, 18-CH3), 1.181 (s, 19-CH3), 2.152 (s, 21-CH3), 3.4 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 4.20-4.24 (m, 11-H), 4.58 (m, 2'-H), 4.92 (d, J=2 Hz, 6-H), 7.45 (m, m-Ar-H), 7.56 (m, p-Ar-H), 8.01 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.20 (1), 38.04 (2), 212.20 (3), 42.10* (4), 49.15 (5), 74.22 (6), 31.58* (7), 30.70 (8), 45.77 (9), 36.08 (10), 70.56 (11), 43.89 (12), 44.11 (13), 55.60 (14), 24.78 (15), 23.63 (16), 63.48 (17), 14.78 (18), 24.96 (19), 209.41 (20), 31.83 (21), 129.90 (o-Ar), 128.80 (m-Ar), 133.34 (p-Ar), 130.78 (置換-Ar), 166.08 (Ar-CO), 96.89 (2'-OTHP), 32.26 (3'-OTHP), 22.13 (4'-OTHP), 25.65 (5'-OTHP), 65.93 (6'-OTHP)
【０４１２】
より保持された１１α−Ｏ−［２’（Ｒ）］テトラヒドロピラニルオキシ異性体２１８
1H NMR (CDCl3) 0.669 (s, 18-CH3), 1.182 (s, 19-CH3), 2.138 (s, 21-CH3), 3.5 & 3.9 (2m, 6'-H, 2H), 3.87-3.96 (m, 11-H), 4.68 (m, 2'-H), 4.92 (d, J=2 Hz, 6-H), 7.46 (m, m-Ar-H), 7.57 (m, p-Ar-H), 8.01 (o-Ar-H)
13C NMR (CDCl3) 39.77 (1), 37.95 (2), 211.32 (3), 41.97* (4), 48.89 (5), 74.08 (6), 31.67* (7), 31.03 (8), 45.91 (9), 36.11 (10), 78.45 (11), 48.03 (12), 44.32 (13), 55.25 (14), 24.85 (15), 23.14 (16), 63.69 (17), 14.71 (18), 25.64** (19), 209.11 (20), 31.88 (21), 129.88 (o-Ar), 128.84 (m-Ar), 133.42 (p-Ar), 130.70 (置換-Ar), 166.04 (Ar-CO), 101.68 (2'-OTHP), 31.77 (3'-OTHP), 20.34 (4'-OTHP), 25.64** (5'-OTHP), 63.35 (6'-OTHP)
【０４１３】
生物学的結果
プロトコール
１．細胞株及び培養条件
浸潤性の原発性副腎皮質癌から樹立されたヒトＡＣＣ細胞株のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒは、複数のステロイド産生経路を保持している（A.F. Gazdar et al., Cancer Research 50 (1990) 5488-5496）。これは、Dr. Martine Begeotの好意により提供された（INSERM U864, Lyon, France）。慢性骨髄性白血病の患者から樹立されたヒトＫ５６２細胞株（C.B. Lozzio and B.B. Lozzio, Blood 45 (1975) 331-334）及びＫ５６２細胞をドキソルビシンで処理して得られる耐性Ｒ７細胞株は、Pr. Charles Dumontetの好意により提供された（INSERM U590, Lyon, France）。
【０４１４】
ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞を、７５cm2培養フラスコ中、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で増殖させた。培養培地は、Ｌ−グルタミン（２mM）、抗生物質（５０μg/mLストレプトマイシン、50U/mLペニシリン）、２％Ultroser G、Ultroser SF（Biorad）及び市販のインスリン、トランスフェリン及び亜セレン酸ナトリウム混合物（ITS+1, Sigma）を添加した、ＤＭＥＭとHam’s F-12培地の１：１混合物から構成した。トリプシン（０．０５％）−ＥＤＴＡ（０．０２％）を用いて細胞を回収し、培養培地に再懸濁した。細胞生存率は常に９５％超であった。
【０４１５】
Ｋ５６２／Ｒ７細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、Ｌ−グルタミン（２mM）、グルコース（０．３％）、ピルビン酸ナトリウム（１mM）、ペニシリン（２００U/mL）及びストレプトマイシン（１００μg/mL）を添加したRPMI 1640中で培養した。５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で細胞を維持した。
【０４１６】
培地と添加剤は、Invitrogen-Gibco（Paisley, UK）から、培養フラスコは、BD-Falcon（Meylan, France）から入手した。
【０４１７】
２．ＲＮＡの単離及び定量ＲＴ−ＰＣＲ
市販のキット（RNeasy Mini kit; Qiagen SA, Courtaboeuf, France）を使用して、トータルＲＮＡを抽出した（Ｈ２９５Ｒ及びＫ５６２／Ｒ７細胞株から）。最初に、５０ユニットのSuperscript（商標）II逆転写酵素の存在下、ランダムヘキサマーとオリゴ（ｄＴ）プライマーの両方を使用して、トータルＲＮＡ５μgから一本鎖ｃＤＮＡを合成した（Invitrogen Kit, Life Technologies）。ＲＴ反応媒体の６０倍希釈液５μl、FastStart DNA Master Plus SYBER Green Kitの反応バッファー１５μl（Roche Diagnostics, Basel, Switzerland）ならびに特異的フォワードプライマー及びリバースプライマー１０pmol（Operon Biotechnologies, Cologne, Germany）を含有する、２０μlの最終容量で定量ＰＣＲを行った（表１）。
【０４１８】
それぞれのターゲット及び参照遺伝子について標準曲線を作製した。それぞれのアッセイを２連で行い、リアルタイムＰＣＲの実行の検証を、生成物の融解温度の評価ならびに標準曲線から得られた傾き及びエラーにより評価した。Light-Cycler software（Roche Diagnostics）を使用して解析を行った。結果をＧ３ＰＤＨのｍＲＮＡにより正規化して相対レベルで表す。
【０４１９】
【表１】
2013514338.tif 000070
【０４２０】
定量ＲＴ−ＰＣＲ実験から、天然の耐性Ｈ２９５Ｒ及びドキソルビシン耐性Ｒ７細胞の両方で、ＭＤＲ１のｍＲＮＡの存在が確認された。Ｒ７細胞では比較的多くの量が観察されたが、一方で、そのＫ５６２親細胞株ではわずかな量しか検出されなかった。
【０４２１】
また、ＭＤＲ表現型に寄与していることが知られている、ＭＲＰ１／ＡＢＣＣ１、ＭＲＰ２／ＡＢＣＣ２及びＢＣＲＰ／ＡＢＣＧ２の存在を調査した。少量のＭＲＰ１のｍＲＮＡがＲ７とＨ２９５Ｒ細胞の両方で確認され、一方で、Ｒ７細胞でのみ低レベルのＢＣＲＰが存在した。両方の細胞株でＭＲＰ２は全く検出できなかった。
【０４２２】
生存細胞における［３Ｈ］チミジン取り込みを用いた細胞毒性アッセイ
細胞（１５００００／ウェル）を２４ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃でインキュベートした。
【０４２３】
Ｈ２９５Ｒ細胞株の場合、細胞を２４ウェルプレートに播種し、細胞の接着（２４時間）の後、各ウェルの培養培地を、ＤＭＳＯの１０−２Ｍ初期溶液から調製した３種類の濃度（１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ）の本発明のステロイド誘導体、又はコントロールとして１０−２Ｍ初期水溶液から調製した同じ３種類の濃度のシクロスポリンＡを含有する培地に交換した。その直後に１０−６Ｍのドキソルビシン（ＤＯＸＯ）を各ウェルに加えた。２４時間インキュベーションした後、薬物含有培地を１μCi/mLの［メチル−３Ｈ］チミジン（GE Healthcare）を含有する新しい培地に交換した。３７℃でさらに２４時間インキュベートした後、［３Ｈ］チミジンを含有する培地を各ウェルから慎重に吸引し、１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）水溶液１mLで細胞を沈殿させた。４℃で１５分間インキュベートした後、培地を慎重に吸引して、沈殿物を５％ＴＣＡ５００μLで洗浄した。最後に、デオキシコール酸ナトリウム溶液（４％の０．５Ｍ  ＮａＯＨ溶液）（O. Joly-Pharaboz et al., J Steroid Biochemmol. Mol. Biol. 73 (2000) 237-249）３００μLを添加して沈殿物を可溶化した。液体シンチレーションカクテル（Perkin Elmer, Courtaboeuf, France）を添加した後、放射能を測定した（Tri-Carb 1900 CA, Packard）。
【０４２４】
Ｋ５６２／Ｒ７細胞株の場合では、細胞を２４ウェルプレートに分注し、Ｈ２９５Ｒ細胞の場合と同濃度の本発明の化合物又はシクロスポリンＡ及びドキソルビシンを含有する培地６００μLとインキュベートした。２４時間インキュベートした後、培養培地５００μlを除去し、１μCiの［３Ｈ］チミジンを含有する新しい培地５００μlに交換した。細胞をさらに２４時間インキュベートし、遠心（１０００rpm、５分間）してペレットにして、培地を吸引除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄して、上記のようにＴＣＡで沈殿させた後放射能を測定した。
【０４２５】
両方の細胞株で、各濃度のステロイド又はシクロスポリンＡを３連で試験し、補助培地のみを使用したコントロールを実施した。少なくとも３種の異なる実験を細胞型ごとに行った。
【０４２６】
結果を、未処理細胞に対する各ウェルの生存細胞における［３Ｈ］チミジン取り込み率として表した（表２）。
【０４２７】
【表２】
2013514338.tif 000071
【０４２８】
表２に列挙した結果から、本発明の試験化合物は、ドキソルビシンの細胞毒性を増加させるためプロゲステロンより活性であることが示される。さらに、いくつかの二置換誘導体、特に、シクロスポリンＡと同様の活性を示す化合物３３及び化合物５９＋６２混合物の両方でより効果が高いことが証明された。
【０４２９】
３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）試薬を用いた細胞毒性アッセイ
Ｋ５６２／Ｒ７細胞（１００００／ウェル）を９６ウェルプレートに播種し、本発明の化合物又はシクロスポリンＡを３種類の濃度（１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ）で含有する培地２００μLとインキュベートした。次に、各ウェルに１０−６Ｍのドキソルビシンを加えた。７２時間インキュベートした後、各ウェルにＭＴＴ試薬（５mg／mLのＰＢＳバッファー溶液）２０μLを加え、プレートを３７℃でさらに４時間インキュベートしたところ、生存細胞が黄色のＭＴＴを暗青のホルマザン結晶に変化させた。上清を慎重に廃棄し、１０％ＨＣＬ（１Ｍ）を含有するイソプロパノール１００μLを加えて、ホルマザン結晶を溶解させた。マイクロプレートリーダー（MultisKan EX, Thermo Electron）を用いて、５７０nmで各ウェルの吸光度を測定した。各濃度のステロイド又はシクロスポリンＡを３連で試験し、補助培地のみを使用したコントロールを実施した。少なくとも３種の異なる実験を行った。結果を、未処理細胞に対する各ウェルの生存細胞の百分率として表した。
【０４３０】
【表３】
2013514338.tif 000072
【０４３１】
表２ｂｉｓに列挙した結果から、化合物６３及び６４がより活性が高く、参照化合物のシクロスポリンＡよりも高い活性を有することが示される。
【０４３２】
細胞毒性物質のＩＣ５０の決定
細胞増殖を５０％阻害する細胞毒性薬の濃度として定義されるＩＣ５０値を、耐性Ｋ５６２／Ｒ７及びＨ２９５Ｒ細胞（１５００００細胞／ウェル）を増加濃度のいくつかの細胞毒性薬（１０−８〜１０−４Ｍ）で２４時間処理することにより決定した（図１及び２）。処理後、上述の［３Ｈ］チミジン取り込みにより生存細胞数を評価した。
【０４３３】
両方の細胞株は、ドキソルビシンにより高い耐性を示す（Ｈ２９５Ｒ細胞でＩＣ５０＝２０．６μM、Ｒ７細胞でＩＣ５０＝６３．５７μM）。２つの細胞株の違いは、別に試験された抗有糸分裂薬で明らかとなった。Ｒ７細胞は、コルヒチン、ミトキサントロン及びビンブラスチンに耐性であるが、一方で、Ｈ２９５Ｒ細胞は、ミトキサントロン及びビノレルビンに耐性である。
【０４３４】
ステロイドモジュレータによるドキソルビシンに対する化学療法剤耐性の復帰
ステロイドモジュレータによるドキソルビシン（ＤＯＸＯ）のＩＣ５０の調節を、適当な濃度のステロイド又はシクロスポリンＡの存在下又は非存在下、耐性Ｒ７及びＨ２９５Ｒ細胞（１５００００細胞／ウェル）を増加濃度のＤＯＸＯ（１０−８〜１０−４Ｍ）で２４時間処理することにより測定した（図３及び４）。また、コントロールとして、感受性親Ｋ５６２細胞を、ステロイドの非存在下、同じ増加濃度のＤＯＸＯ（１０−８〜１０−４Ｍ）で処理した。
【０４３５】
ドキソルビシンのＩＣ５０を低下させる最も効果的な誘導体は、それぞれ、０．４、０．５μMで用いた化合物３３及び５１であった（ＩＣ５０＝０．０１±０．００７及び０．０１±０．００８）。同条件のシクロスポリンＡで測定されたものより１０倍低いこれらの値は、in vitroにおいて、シクロスポリンＡに対し化合物３３及び５１が１０倍強力であることを示している。
【０４３６】
フローサイトメトリーで測定されたダウノルビシンの細胞内蓄積
本発明のステロイドモジュレータ、即ち、式（Ｉ）を有する化合物の存在下でのダウノルビシンの蓄積を、公開手順（G. Comte et al, J. Med. Chem., 44: 763-768, 2001）を用いて、フローサイトメトリーで測定した。Ｋ５６２又はＲ７細胞（１．１０−６細胞）を、本発明の化合物（１０μM）の存在下又は非存在下、１０μMのダウノルビシンを含有するRPMI 1640培地１mLと３７℃で１時間インキュベートした。次に、氷冷ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ−ＩＩ（Becton-Dickinson Corp., Mountain View, CA）のフローサイトメトリー解析まで氷上で維持した。少なくとも３つの異なる実験でアッセイを２連で行った。ポジティブコントロールとしてシクロスポリンＡを使用した（I. Raad et al., Bioorg. Med. Chem. 14 (2006) 6979-6987）。
【０４３７】
【表４】
2013514338.tif 000073
【０４３８】
本発明の試験化合物の全てが、プロゲステロンと比較しダウノルビシン蓄積の増加を誘導した。化合物３３の存在下の細胞によるダウノルビシン蓄積が、シクロスポリンＡを用いた場合よりも重要であった（１１９．２５±４．５３）が、一方で、化合物５２もしくは５３又は５９＋６２の混合物の存在下では、ダウノルビシン蓄積はシクロスポリンＡで観察されたものと同等であった。さらに、プレグネン／プレグナンならびにコランシリーズのいくつかの誘導体が、細胞内へのダウノルビシンの蓄積増加に関してシクロスポリンＡと同様に効果的であった。
【０４３９】
プロゲステロン受容体アッセイ
プロゲステロン受容体に対するステロイドモジュレータの相対的結合親和性を、以前に記載されたようにして、ＤＣＣ−競合結合アッセイにより測定した（F. Descotes et al., Breast Cancer Res. Treat., 49 (1998) 135-143）。簡単に述べると、細胞質ゾル（プロゲステロン受容体を高レベルで発現している乳癌プールから調製）のアリコート（８０μL）を、マイクロタイタープレート中、非標識競合剤（０．１４、０．７、１．４及び２．８×μM）の非存在下又は存在下で、プロゲステロン受容体の合成リガンドの［３Ｈ］ＯＲＧ２０５８（１００００cpm、１×１０−９Ｍ）２０μlと０℃で一晩インキュベートした。インキュベーション終了後、デキストラン被覆炭（ＤＣＣ）懸濁液（活性炭１．２５ｇ、デキストラン１２５mg及び１０mM  Tris-HCl、ｐＨ７．４）１００μLと４℃で１５分間インキュベーションすることにより遊離又は結合したステロイドを分離した。プレートを２２００rpmで１５分間遠心した。液体シンチレーションカクテル（Perkin Elmer, Courtaboeuf, France）２mLを添加した後、それぞれの上清のアリコート（１００μL）の放射能を測定した（Tri-Carb 1900 CA, Packard）。各濃度の競合剤について、結合した［３Ｈ］ＯＲＧ２０５４（Ｂ）の放射能は、競合剤（Ｂ）の非存在下で結合した放射能の百分率で表される（図５）。
【０４４０】
図５で示された曲線は、試験誘導体のいずれにおいても、プロゲステロン受容体に対して有意な結合親和性が見いだされなかったことを示している。
【０４４１】
ｈＰＸＲ受容体への結合
ステロイドモジュレータによるヒトプレグナンＸ受容体（ｈＰＸＲ）の活性化が、公開手順（G. Lemaire et al., Toxicol. Sci. 91 (2006) 501-509）を用いて、Dr P. Balaguer（INSERM U 896, Montpellier, France）により測定された。様々な試験誘導体によるｈＰＸＲの活性化が、全ての場合において、参照分子ＳＲ１２８１３（コレステロール降下薬）を用いた場合よりはるかに低いことが見出された（図６）。
【０４４２】
結論として、本発明の試験化合物では有意なホルモン受容体活性化が認められないことから、in vivoで用いられた場合、対応するホルモンの副作用が生じないことが支持される。
【０４４３】
in vivo実験
耐性Ｈ２９５Ｒ及びＲ７細胞を異種移植したＳＣＩＤ（重症複合免疫不全）マウスで、最も活性な（３３）誘導体のin vivo効果を評価した。それぞれの異種移植について、両方の脇腹に腫瘍を発症している５匹のマウスの４つの群を用いた。群１は溶剤のみを接種し、群２はＤＯＸＯ（１．５mg/kg/マウス＋溶剤）を接種し、群３は（３３）誘導体（溶剤で可溶化した１０mg/kg/マウス）を接種し、そして、群４はＤＯＸＯ＋誘導体を接種した。Ｈ２９５Ｒ及びＲ７異種移植の両方で、群４のマウスは、群１、２及び３と比較して腫瘍の発症が遅かった。さらに、群４のマウスでは、腫瘍体積は小さいままで処理の４０日後でも安定であり、これらのマウスの生存期間が延びた（図７及び８）。これらの結果から、化学療法治療に対して（３３）誘導体がアジュバンドと同様のin vivo効果であることが示された。
【図１】
2013514338.tif 000096
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2013514338.tif 000101
【図７】
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【図８】
2013514338.tif 000103
【配列表】
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【国際調査報告】
2013514338.tif 000104
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