(57)【要約】  本発明は、特に皮下投与に有用であり、ヒト免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０  ｇ／ｌであることを特徴とする、ヒト免疫グロブリンＧ組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む液体医薬組成物の製造方法であって、以下の：
ａ)  ＩｇＧ製剤を提供し；
ｂ)  少なくとも１種の界面活性剤および／または少なくとも１種のアミノ酸を製剤に添加し；
ｃ)  限外濾過によりＩｇＧを濃縮し；
ｄ)  そして、工程ｂ)の界面活性剤と同一でも異なってもよい界面活性剤を添加する
工程を含む、方法。
【請求項２】
親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸である少なくとも１種のアミノ酸を工程ｂ)で添加することを特徴とする、請求項１に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項３】
アミノ酸が、好ましくは、２００〜３００mMの濃度グリシンであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
糖、糖誘導体および塩類から選択される１種以上の化合物も工程ｂ)において添加されることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項５】
無機塩および有機塩から選択されるアルカリまたはアルカリ土類金属の塩または遷移金属の塩も工程ｂ)に添加されることを特徴とする、請求項４に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項６】
０〜１００mMの酢酸ナトリウムが添加されることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
スクロース、二糖類および三糖類および多糖類から選択される糖も工程ｂ)に添加されることを特徴とする、請求項４ないし６のいずれかに記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項８】
工程ｄ)において添加される界面活性剤が好ましくは非イオン性界面活性剤であることを特徴とする、請求項１ないし７のいずれかに記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項９】
界面活性剤がポリソルベートおよびポロキサマーから選択されることを特徴とする、請求項１ないし８のいずれかに記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項１０】
界面活性剤がポリソルベート、好ましくはポリソルベート２０またはポリソルベート８０であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
界面活性剤が工程ｂ)および／またはｄ)において総濃度５０〜３００ppmで添加されることを特徴とする、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
界面活性剤が７５ppmよりも少なく、好ましくは５０ppmよりも少なく、好ましくは４０ppmよりも少ない濃度で工程ｂ)において添加されることを特徴とする、請求項１ないし１１のいずれかに記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
工程ｃ)の限外濾過が３０℃より低い、好ましくは２５℃より低い温度で行われることを特徴とする、請求項１ないし１２のいずれか１項に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項１４】
工程ｃ)の限外濾過が１５℃〜２５℃、好ましくは約２０℃の温度で行われることを特徴とする、請求項１３に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項１５】
ＩｇＧ濃度が組成物中少なくとも２３０ｇ／ｌ、好ましくは２３０ｇ／ｌ〜３５０ｇ／ｌであることを特徴とする、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の液体医薬組成物の製造方法。
【請求項１６】
得られる医薬組成物がｐＨ４.２〜５.５である、請求項１ないし１５のいずれか１項に記載の方法により得られる液体医薬組成物。
【請求項１７】
得られる医薬組成物がｐＨ６.８〜７.８である、請求項１ないし１５のいずれか１項に記載の方法に得られる液体医薬組成物。
【請求項１８】
ＩｇＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌ、好ましくは２３０〜３５０ｇ／ｌであることを特徴とする、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む液体医薬組成物。
【請求項１９】
−  ２３０〜３５０ｇ／ｌ、好ましくは約２５０ｇ／ｌである濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  グリシン；
−  場合により酢酸ナトリウム緩衝液；
−  ポリソルベート、好ましくはポリソルベート８０またはポロキサマー
を含む、請求項１８に記載の液体医薬組成物。
【請求項２０】
−  ２３０〜３５０ｇ／ｌ、好ましくは約２５０ｇ／ｌである濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２００〜３００mMのグリシン；
−  ０〜１００mMの酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および５０〜３００ppmのポリソルベート
を含む、請求項１９に記載の液体医薬組成物。
【請求項２１】
−  約２５０ｇ／ｌである濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２００mMのグリシン；
−  ５０mMの酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および２００ppmのポリソルベート
を含む、請求項２０に記載の液体医薬組成物。
【請求項２２】
−  約２５０ｇ／ｌである濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２５０mMのグリシン；
−  および２００ppmポリソルベート
を含む、請求項２０に記載の液体医薬組成物。
【請求項２３】
−  約２５０ｇ／ｌであるＩｇＧ；
−  約１５０mMのグリシン；
−  約５０mMの酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および約２００ppmのポリソルベート８０
を含み、組成物のｐＨが４.２〜５.５である、請求項２０に記載の液体医薬組成物。
【請求項２４】
ＩｇＧ濃度が２３０〜３５０ｇ／ｌであり、好ましくは少なくとも２３０ｇ／ｌであり、ｐＨが６.８〜７.８であることを特徴とする、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む液体医薬組成物。
【請求項２５】
ＩｇＧ濃度が２３０〜３５０ｇ／ｌであり、好ましくは少なくとも２３０ｇ／ｌであり、ｐＨが７.３であることを特徴とする、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む液体医薬組成物。
【請求項２６】
皮下または筋肉内投与、好ましくは皮下投与に適した形態である、請求項８ないし２５のいずれか１項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２７】
抗体産生不全を伴う原発性免疫不全、川崎病、小児および成人免疫性血小板減少性紫斑病、抗体産生不全を伴う二次性免疫不全、特に再発性感染に関連する慢性リンパ系白血病または骨髄腫、細菌感染と関連する小児のＨＩＶ感染、多巣性運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、慢性または重症急性パルボウイルスＢ１９感染、後天性または体質性免疫不全、コルチコ抵抗性皮膚筋炎、急性筋無力症、慢性特発性多発性神経根炎、例えば、ＨＩＶ感染に関連する免疫性血小板減少性紫斑病、全身硬直症候群、自己免疫性好中球減少症、耐性自己免疫性赤芽球減少症、自己抗体誘発性後天性抗凝血症候群、リウマチ性関節炎、ブドウ膜炎を処置するための医薬として用いられる、請求項８ないし２６のいずれか１項に記載のヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む液体医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療に有用なヒト免疫グロブリンＧの製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、多くの病態が、免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)組成物により処置されている。例えば、抗体産生不全を伴う原発性免疫不全、川崎病、小児および成人免疫性血小板減少性紫斑病、抗体産生不全を伴う二次性免疫不全、特に再発性感染に関連する慢性リンパ系白血病または骨髄腫、細菌感染と関連する小児のＨＩＶ感染、多巣性運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、慢性または重症急性パルボウイルスＢ１９感染、後天性または体質性免疫不全、コルチコ抵抗性皮膚筋炎、急性筋無力症、慢性特発性多発性神経根炎、例えば、ＨＩＶ感染に関連する免疫性血小板減少性紫斑病、全身硬直症候群、自己免疫性好中球減少症、耐性自己免疫性赤芽球減少症、自己抗体誘発性後天性抗凝血症候群、リウマチ性関節炎、ブドウ膜炎などを挙げ得る。
【０００３】
免疫グロブリンで処置される病態は、１月あたり、患者の体重あたり約０.４〜２グラムの用量である極めて高い薬量学が関与する。この状況で、現在市販されている免疫グロブリンＧの大部分は、静脈内投与を意図し、これは、３週間または４週間に１回の割合で、数百ミリリットルの製剤中、数十グラムのＩｇＧの静脈注射を可能とする。静脈内投与は、医療従事者の同席を必要とする；通常病院において行われる。小児および高齢者においては、静脈へのアプローチが困難であるために静脈内投与が難しいことがあり、これはある場合には処置を利用する機会を妨げ得る。
【０００４】
皮下投与(ＳＣＩｇ)を意図したＩｇＧが存在する。この投与経路は、患者に大きな柔軟性および大きな独立性を与え、患者のクオリティ・オブ・ライフを改善する。さらに、皮下投与による免疫グロブリン(ＳＣＩｇ)の使用は、静脈内点滴に伴う副作用、特に全身反応のリスクも減少させる。静脈内経路に見られる循環力価の大きな変動が皮下経路により回避され、点滴間の生理学的範囲における血清力価のよりよい制御を可能とする。
【０００５】
ＳＣＩｇの使用の主要な制限の一つは、投与すべき用量である：２週間または毎週またはさらには週に数回、ＩＶＩｇよりも短い頻度で、一カ所以上に大容積の注射を必要とする。市販のＳＣＩｇの大容積の注入は、局所の不耐反応、例えば浮腫または紅斑を生じる(M. Delire et al., “Experience clinique de l'administration d'immunoglobulines par voie sous-cutanee dans le traitement des immunodeficiences primaires”[“Clinical experience of the subcutaneous administration of immunoglobulins in the treatment of primary immunodeficiencies”], Rev Med Liege 2010;65:2;103-108)。ＳＣＩｇ濃度は、注入容積および注入部位数を条件付ける決定特性である。注入用量および部位ごとの最大注入容積を考慮して、ＳＣＩｇ濃度が注入部位数および結果的に投与頻度を決定する。
【０００６】
皮下投与できる、Hizentraの濃縮ＩｇＧ溶液２００ｇ／ｌまたは２０％：ＩｇＰｒｏ２０(登録商標)が知られている。
さらに、皮下投与できる、他の濃縮ＩｇＧ溶液１６０ｇ／ｌまたは１６％も存在し、例えば特に、BaxterのVivaglobulin(登録商標)またはOctapharmaのGammanorm(登録商標)がある。
【０００７】
皮下投与に安定で耐容性が良好な高濃縮ＩｇＧ組成物を得るには、相当な技術的制約を考慮する必要がある。
事実、ＩｇＧ組成物の免疫グロブリンの濃度を上げると、該組成物中にオリゴマーおよびポリマーが形成され得ることが特に知られている。オリゴマーおよびポリマーは、アナフィラキシー反応のリスクに関連する補体系を活性化し得る。またこれらのオリゴマーおよびポリマーは、処置された患者において低血圧現象を誘導し得る。これは、望ましくなく、制御の観点から厳密に管理される。
【０００８】
加えて、タンパク質の高濃縮溶液は、凝集により引き起こされる不安定性の問題を生ずることも知られている。一般に濃度と無関係な化学反応とは逆に、生物分子衝突が関連する凝集は、濃度に直接依存する。熱的、機械的または化学的ストレスへの何らかの暴露が、凝集を誘導し得る。例えば、水−空気界面の相互作用、限外濾過工程(ミクロキャビテーション)の機械的ストレスおよびまたイオン強度の変化が、タンパク質凝集を誘導することが知られている。
【０００９】
他の相当な技術的制限が、ＩｇＧの製造方法に通常用いられる接線限外濾過工程に関連する：高ＩｇＧ濃度においては、膜でのＩｇＧの局所的過剰濃度が、分極層を破壊し得、それゆえ、接線限外濾過を非効率にするかまたは完全に膜を塞ぎ、接線限外濾過を阻止し得る。
【００１０】
ＩｇＧ濃度に関連する粘度の増加も、主要な技術的制約である。濃縮ＩｇＧの流れを減少することにより、製剤工程および無菌製剤分配工程の観点からおよび最終適用に関するＩｇＧ組成物の注射針通過性の観点からの両者において、実際に問題を生じ得る。
【００１１】
この状況において、患者の快適性を改善し、副作用を低減することを可能とする、皮下投与として容易に投与でき、かつ耐容性が良好である、注入容積を減少させるために高度に上昇させた濃度でＩｇＧ組成物を、例えば、ヒト血漿から製造する必要性が増加している。
【発明の概要】
【００１２】
高度に濃縮されたＩｇＧを得ることにより生じる問題を克服するため、出願人は、皮下投与が容易である、少なくとも２３０ｇ／ｌであり、より一般的には２３０〜３５０ｇ／ｌである、高度に濃縮されたＩｇＧ組成物を得るための新しい方法を開発した。好ましくは、新方法は、少なくとも２５０ｇ／ｌであり、好ましくは約２５０ｇ／ｌ〜約３００ｇ／ｌで濃縮ＩｇＧ組成物を得ることを可能とする。
【００１３】
より具体的には、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む医薬組成物の製造方法は、以下の：
ａ)  ＩｇＧ製剤を提供し；
ｂ)  少なくとも１種の界面活性剤および／または少なくとも１種のアミノ酸を製剤に添加し；
ｃ)  限外濾過によりＩｇＧを濃縮し；
ｄ)  そして、工程ｂ)の界面活性剤と同一でも異なってもよい界面活性剤を添加する
工程を含む。
糖、糖誘導体および塩類から選択される１種以上の化合物も工程ｂ)で添加できる。
【００１４】
好ましくは、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む医薬組成物の新規な製造方法は、以下の：
ａ)  ヒト血液の血漿分画から精製したＩｇＧ製剤を提供し；
ｂ)  少なくとも１種の界面活性剤および／または少なくとも１種のアミノ酸および場合により糖、糖誘導体および塩類から選択される１種以上の化合物を製剤に添加し(該界面活性剤は、好ましくは該界面活性剤の臨界ミセル濃度より低い濃度で添加される)；
ｃ)  限外濾過によりＩｇＧを濃縮し；
ｄ)  そして、所望の液体医薬組成物を得るために、工程ｂ)で添加される界面活性剤と同一でも異なってもよい界面活性剤を添加する
工程を含む。
【００１５】
本発明の方法の工程ｂ)の添加物(アミノ酸類、糖、糖誘導体、塩類および／または該界面活性剤の臨界ミセル濃度よりも低い濃度の界面活性剤)は、限外濾過による濃縮の工程の前に添加される。
【００１６】
親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸であってもよい少なくとも１種のアミノ酸を、液体医薬組成物の製造方法の工程ｂ)において添加することが有利である。
【００１７】
特に、親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸である少なくとも１種のアミノ酸を、少なくとも１種の疎水性アミノ酸と組み合わせて、液体医薬組成物の製造方法の工程ｂ)において添加することが有利である。
【００１８】
スクロース、二糖および三糖、多糖、例えば、デキストロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、シクロデキストリン、マルトデキストリンおよびデキストラン、還元糖またはポリオールから選択される少なくとも１種の糖または１種の糖誘導体を、液体医薬組成物の製造方法の工程ｂ)において添加することが有利である。
【００１９】
無機塩および有機塩から選択される塩を工程ｂ)において添加することが有利である。
工程ｂ)および／またはｄ)において添加される界面活性剤は、好ましくは、非イオン性界面活性剤である。
【００２０】
本発明の他の対象は、ＩｇＧ濃度が少なくとも組成物１ｌあたり２３０ｇであることを特徴とする、この方法の手段により得られた、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む医薬組成物に関する。好ましくは、ＩｇＧ濃度は、少なくとも組成物１ｌあたり２５０ｇである。
本発明の組成物は、有利には液体形態である。
【００２１】
１つの態様において、本発明の組成物は、アミノ酸および界面活性剤を含む。
他の態様において、本発明の組成物は、アミノ酸、塩および界面活性剤を含む。
他の態様において、本発明の組成物は、糖または糖誘導体および界面活性剤を含む。
【００２２】
他の態様において、本発明の組成物は、アミノ酸、糖または糖誘導体および界面活性剤を含む。
他の態様において、本発明の組成物は、アミノ酸、糖または糖誘導体、塩および界面活性剤を含む。
【００２３】
ここに記載した方法により得られたまたは得ることのできる組成物もまた、本発明の一部である。
【００２４】
これらの組成物は、有利には皮下または筋肉内投与、好ましくは皮下投与に適する形態である。
【００２５】
発明の詳細な説明：
定義
本発明の文脈において、用語「ヒト免疫グロブリンＧ」または「ヒトＩｇＧ」は、本質的にＩｇＧであり、場合によりＩｇＭを含んでよい多価免疫グロブリンを意味することを意図する。それらは、全免疫グロブリンまたは断片、例えばＦ(ａｂ’)２またはＦ(ａｂ)および多価免疫グロブリンの製造工程において得られるあらゆる中間断片であり得る。
【００２６】
用語「安定性」は、ＩｇＧの物理的および／または化学的安定性に対応する。用語「物理的安定性」は、Ｉｇのダイマー、オリゴマーまたはポリマー形態の不溶性または可溶性凝集体の形成の減少または不存在およびあらゆる分子の構造的変性の減少または不存在を言う。
【００２７】
用語「化学安定性」は、加速条件下、固体状態または溶解形態での、保存中のＩｇＧの化学修飾のあらゆる減少または不存在を言う。例えば、加水分解、脱アミノ化および／または酸化現象が阻止または遅延される。硫黄含有アミノ酸の酸化が制限される。
【００２８】
製造方法：
より具体的には、以下の：
ａ)  ＩｇＧ製剤を提供し；
ｂ)  アミノ酸、糖、糖誘導体、塩類および界面活性剤から選択される１種以上の化合物を製剤に添加し(該界面活性剤は、該界面活性剤の臨界ミセル濃度より低い濃度で添加される)；
ｃ)  限外濾過によりＩｇＧを濃縮し；
ｄ)  そして、工程ｂ)で添加される界面活性剤と同一でも異なってもよい界面活性剤を添加する
工程を含むヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む医薬組成物の製造方法をここに記載する。
【００２９】
より具体的には、本発明者らは、限外濾過の前に界面活性剤を加え、好ましくは工程ｂ)と工程ｄ)で本界面活性剤を分割して使用することが、免疫グロブリンの分解を避けることを可能とすることを発見した。
【００３０】
本発明の状況において、液体ＩｇＧ組成物は、ヒト血漿分画により直接得られたＩｇＧ組成物の水性溶液を示す。水性媒体は、ＩｇＧと適合性のある薬学的に許容される添加物を含有してよい注射用水(ＷＦＩ)からなる。ＩｇＧ組成物は、あらかじめ、例えば、界面活性溶媒処置、低温殺菌および／またはナノ濾過のような特定のウイルス不活性化／除去工程に付してよい。本発明の組成物は、ポリクローナルでもモノクローナルでもよいＩｇＧを含む。ＩｇＧは、ヒトまたは動物の血液から単離できまたは、他の方法で、例えば、当業者によく知られた細胞系において、例えば、分子生物学的技術により製造してもよい。本発明の組成物は、特に高度に精製したＩｇＧに適している。本発明のＩｇＧは、ヒト血漿の分画により得られたものが有利である。ヒト血漿の分画の好ましい方法は、Cohnら(J. Am. Chem. Soc., 68, 459, 1946)、Kistlerら(Vox Sang., 7, 1962, 414-424), Steinbuchら(Rev. Franc. Et. Clin. et Biol., XIV, 1054, 1969)によりおよび特許出願国際公開第９４／９３３４号公報に記載されており、これらの文献は参照として全体が組み込まれる。免疫グロブリンＧ組成物の製造方法は、参照として全体が組み込まれる特許出願国際公開第０２／０９２６３２号公報にも記載されている。
【００３１】
ＩｇＧ濃縮物は、一般的に、接線限外濾過による濃縮と、続く滅菌濾過の一連の工程に付され、そしてボトルに包装することができ、好ましくは約４℃の温度で保存される。異なる態様においては、本発明のＩｇＧは、特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報に示すように抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を枯渇させ得る。
【００３２】
本発明の接線限外濾過による濃縮工程は、膜を塞ぐことなく、免疫グロブリンの完全性を保ち、同時に、流動応力または剪断応力下の界面での凝集および変性を避けて、少なくとも２３０ｇ／ｌ、好ましくは少なくとも２５０ｇ／ｌの免疫グロブリン濃度を達成することが可能である。
【００３３】
添加物の選択は、安定化能力および接線限外濾過工程中のＩｇＧ濃縮を可能とする能力に基づいて行われる。
【００３４】
添加物は、以下の方法で添加される：
少なくとも１種のアミノ酸および／または少なくとも１種の界面活性剤である添加物が、ヒト血液の血漿分画から精製したヒト免疫グロブリンＧ製剤に添加される。好ましくは、界面活性剤は、該界面活性剤の臨界ミセル濃度よりも低い濃度で添加される；
限外濾過後、所望の医薬組成物を得るために、工程ｂ)で添加した界面活性剤と同一でも異なってもよい界面活性剤を添加する。
【００３５】
この工程は、免疫グロブリンＧ濃度を最適化することを可能とする。
好ましくは、限外濾過工程は、例えば、１５０ｋＤよりも小さいカットオフ閾値を有する膜において行われる、接線限外濾過工程である。
【００３６】
限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される添加物は、１種以上のアミノ酸類および／または１種以上の界面活性剤および場合により１種以上の塩類を含むか、これらから成ることが有利である。
【００３７】
１つの態様としては、限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される添加物は、１種以上のアミノ酸類および界面活性剤を含むか、これらから成る。
【００３８】
異なる態様としては、１種以上の糖または糖誘導体を含むかまたはこれらから成る添加物も限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される。
【００３９】
限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される添加物は、１種以上のアミノ酸類および１種以上の糖または糖誘導体および界面活性剤を含むか、これらから成ることが有利である。
【００４０】
異なる有利な態様において、限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される添加物は、１種以上のアミノ酸類および１種以上の糖または糖誘導体および１種以上の塩類を含むか、これらから成る。
【００４１】
異なる有利な態様において、限外濾過の前にＩｇＧ製剤に添加される添加物は、１種以上のアミノ酸類および１種以上の糖または糖誘導体、１種以上の塩類および界面活性剤を含むか、これらから成る。
【００４２】
出願人は、驚くべきことに、第一に必要なＩｇＧ製剤の直接製剤、第二に、医薬組成物の安定性、適合性および良好な耐容性、加えて限外濾過膜における閉塞現象の回避を確実にするために、アミノ酸および／または典型的には該界面活性剤の臨界ミセル濃度より低い濃度で、界面活性剤を添加することにより、限外濾過によりＩｇＧ濃縮工程の前に製剤化することにより高度に濃縮されたＩｇＧが得られることを示した。
【００４３】
本発明の方法の工程ｂ)において添加できるアミノ酸は、次の群から選択される：親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸および場合により少なくとも１種の疎水性アミノ酸。親水性(または極性)アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンを含む。
親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸の中では、グリシンまたはヒスチジンの使用が好ましい。
【００４４】
親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸、例えばアルギニンおよび適切な場合には、疎水性アミノ酸またはさらにはアルカリまたはアルカリ土類金属または遷移金属の塩の添加が、ヒトＩｇＧの安定性を促進する。
【００４５】
(非極性側鎖を有する)疎水性アミノ酸は、特に次のアミノ酸を含む：アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリンなど。
【００４６】
１つの好ましい態様において、工程ｂ)のアミノ酸は、好ましくは２００〜３００mMの濃度のグリシンである。
【００４７】
本発明の方法の工程ｂ)において添加できる糖または糖誘導体は、次のものからなる群から選択される：スクロース、二糖および三糖および多糖、例えばデキストロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、シクロデキストリン、マルトデキストリンおよびデキストラン、還元糖またはポリオール。還元糖としては、特にグルコースまたはフルクトースを挙げ得る。ポリオールとしては、特にマンニトール、ソルビトールおよびキシリトールを挙げ得る。
【００４８】
用語「塩」は、アルカリまたはアルカリ土類金属または遷移金属の塩を意味することを意図する。本発明の工程ｂ)の方法において添加される塩類は、以下からなる群から選択される：無機塩類、有機塩類または複数の塩類の混合物。無機塩類としては、特に、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を挙げ得る。
【００４９】
有機塩としては、特に、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたはチオシアン酸ナトリウムを挙げ得る。
【００５０】
好ましくは、用いられる塩は有機塩であり、好ましくは酢酸ナトリウムである。
工程ｂ)で酢酸ナトリウム０〜１００mMを添加することが有利である。
【００５１】
本発明の方法の工程ｂ)は、１種以上の界面活性剤、例えば非イオン性界面活性剤を添加することを含み、該界面活性剤は、この工程中、臨界ミセル濃度より低い濃度で添加される。本発明の組成物において用いられる適切な界面活性剤は、ポリソルベート８０(またはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであるツイーン(登録商標)８０)、ポリソルベート２０(またはポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートであるツイーン(登録商標)２０)、トリトン(登録商標)Ｘ１００(オクトキシノール１０)、ポロキサマー、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、エチレン／ポリプロピレンのブロックコポリマーおよびプルロニック(登録商標)Ｆ６８(ポリエチレンポリプロピレングリコール)から選択されるものが有利である。好ましくは、ツイーン(登録商標)８０、ツイーン(登録商標)２０およびポロキサマー１８８を用いる。非イオン性界面活性剤をまた互いに組み合わせることができる。
【００５２】
医薬組成物のｐＨは本発明の方法の工程ｂ)の間中、調節される。好ましくは、ｐＨは、４.０〜８.０で調節され、４.２〜５.５または６.８〜７.８であることが有利である。特に、液体医薬組成物のｐＨは６.９〜７.６、好ましくは７.０〜７.６、好ましくは７.１〜７.５、好ましくは７.２〜７.４および好ましくは７.３である。
【００５３】
本発明の方法の工程ｄ)は、１種以上の界面活性剤、例えば非イオン性界面活性剤を含み得る。本発明の組成物において用いられる適切な界面活性剤は、ポリソルベート８０(またはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであるツイーン(登録商標)８０)、ポリソルベート２０(またはポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートであるツイーン(登録商標)２０)、トリトン(登録商標)Ｘ１００(オクトキシノール１０)、ポロキサマー、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、エチレン／ポリプロピレンのブロックコポリマーおよびプルロニック(登録商標)Ｆ６８(ポリエチレンポリプロピレングリコール)から選択されるものが有利である。好ましくは、ツイーン(登録商標)８０、ツイーン(登録商標)２０およびポロキサマー１８８を使用する。非イオン性界面活性剤をまた互いに組み合わせることができる。本発明の組成物を安定化させるのに十分な非イオン性界面活性剤の濃度は、好ましくは０〜１０００ppm、好ましくは０〜３００ppm、好ましくは０〜５０ppmである。工程ｄ)において界面活性剤を添加することで、組成物の凝集の現象を避けることが可能となる。
【００５４】
１つの好ましい態様としては、界面活性剤はポリソルベートであり、好ましくはポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。
【００５５】
好ましくは、界面活性剤は、工程ｂ)および／またはｄ)において、総濃度５０〜３００ppmで添加される。
【００５６】
界面活性剤は、工程ｂ)は７５ppmより低い、好ましくは５０ppmより低い、好ましくは４０ppmより低い濃度であることが有利である。
【００５７】
驚くべきことに、本発明者らは、対蹠的に高い温度は必要でないことも証明した。３０℃より低い温度で良好な結果が得られている。
【００５８】
それゆえ、工程ｃ)の限外濾過は、３０℃より低い温度、好ましくは２５℃より低い温度で行うことができる。好ましくは、工程ｃ)の限外濾過は、１５℃〜２５℃の温度、好ましくは約２０℃で行われる。
【００５９】
本発明の方法は、組成物においてＩｇＧ濃度が組成物中少なくとも２３０ｇ／ｌ、好ましくは少なくとも２５０ｇ／ｌ、典型的には該組成物中２３０ｇ／ｌ〜３５０ｇ／ｌであることを特徴とする液体医薬組成物を得ることを可能とする。
【００６０】
製剤：
本発明の液体医薬組成物は、少なくとも免疫グロブリンＧを２３０ｇ／ｌ、好ましくは免疫グロブリンＧを２５０ｇ／ｌを含む。
【００６１】
有利には、該液体医薬組成物はまたアミノ酸および界面活性剤も含み得る。特に、該液体医薬組成物は、１種以上の親水性アミノ酸または正電荷側鎖を有するアミノ酸および場合により少なくとも１種の疎水性アミノ酸および界面活性剤も含み得る。
【００６２】
有利には、該液体医薬組成物は、アミノ酸、塩および界面活性剤も含み得る。
有利には、該液体医薬組成物は、糖または糖誘導体および界面活性剤も含み得る。
【００６３】
有利には、該液体医薬組成物は、アミノ酸、糖または糖誘導体および界面活性剤も含み得る。
有利には、該液体医薬組成物は、アミノ酸、糖または糖誘導体、塩および界面活性剤も含み得る。
【００６４】
１つの特定の態様としては、本発明は、少なくとも１種のアミノ酸、少なくとも１種の界面活性剤および場合により少なくとも１種の塩を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物を提供する。好ましくは、該組成物はアミノ酸、塩および界面活性剤を含む。
【００６５】
１つの例示的な態様において、該組成物は：
−  ＩｇＧ２３０ｇ／ｌ；
−  グリシン；
−  酢酸ナトリウム緩衝液；
−  およびポリソルベート、例えばポリソルベート８０もしくは２０またはポロキサマーを含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００６６】
１つの特定の態様としては、本発明は少なくとも１種のアミノ酸、少なくとも１種の塩および少なくとも１種の界面活性剤を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物を提供する。好ましくは、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも約２５０ｇ／ｌであり、本組成物はアミノ酸、塩および界面活性剤を含む。
【００６７】
１つの例示的な態様としては、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  グリシン；
−  場合により酢酸ナトリウム緩衝液；
−  およびポリソルベート、好ましくはポリソルベート８０もしくは２０またはポロキサマーを含み、組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００６８】
より具体的には、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約５０〜３００mMのグリシン；
−  約２５〜１５０mMの酢酸緩衝液；
−  および約１００〜３００ppmのポリソルベート８０またはポロキサマーを含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００６９】
１つの特定の例としては、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約２００mMのグリシン；
−  約５０mM(すなわち酢酸ナトリウム２５mM＋酢酸２５mM)の酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および約２００ppmのポリソルベート８０を含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７０】
１つの好ましい例において、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約２００mMまたは１５０mMのグリシン；
−  約５０mM(すなわち酢酸ナトリウム２５mM＋酢酸２５mM)の酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および約２００ppmのポリソルベート８０を含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７１】
他の特定の例としては、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約２００mMのグリシン；
−  約５０mM(すなわち酢酸ナトリウム２５mM＋酢酸２５mM)の酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および約２００ppmのポロキサマー１８８を含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７２】
１つの特定の態様としては、少なくとも１種のアミノ酸および少なくとも１種の界面活性剤を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物を提供する。好ましくは、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも約２５０ｇ／ｌであり、本組成物はアミノ酸および界面活性剤を含む。
【００７３】
本発明の好ましい液体医薬組成物は：
−  ２３０〜３５０ｇ／ｌ、好ましくは約２５０ｇ／ｌの濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  グリシン；
−  場合により酢酸ナトリウム緩衝液；
−  ポリソルベート、好ましくはポリソルベート８０またはポロキサマーを含み、
本組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７４】
より具体的には、好ましい組成物は：
−  ２３０〜３５０ｇ／ｌ、好ましくは約２５０ｇ／ｌの濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２００〜３００mMのグリシン；
−  ０〜１００mMの酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および５０〜３００ppmのポリソルベートを含み、
本組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７５】
特に、好ましい組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌの濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２００mMのグリシン；
−  ５０mMの酢酸ナトリウム緩衝液；
−  および２００ppmのポリソルベート、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７６】
他の好ましい組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌの濃縮ヒト免疫グロブリンＧ；
−  ２５０mMのグリシン；
−  および２００ppmのポリソルベートを含み、
組成物のｐＨは、好ましくは４.２〜５.５である。
【００７７】
他の特定の例において、該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約２００〜２５０mMのヒスチジン；
−  および、適切な場合には、１００〜３００ppmのポリソルベート８０またはポロキサマーを含み、
本溶液のｐＨは、６.８〜７.８である。
【００７８】
他の特定の例において、組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約２００〜２５０mMのアルギニン；
−  および、適切な場合には、約１００〜３００ppmのポリソルベート８０またはポロキサマーを含み、
本溶液のｐＨは、６.８〜７.８である。
【００７９】
他の特定の態様としては、本発明は、少なくとも１種のアミノ酸、少なくとも１種の糖または１種の糖誘導体および少なくとも１種の界面活性剤を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物を提供する。好ましくは、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも約２５０ｇ／ｌであり、本組成物はアミノ酸、糖および界面活性剤を含み、溶液のｐＨが４.２〜５.５である。
【００８０】
またここに記載するのは、少なくとも１種の糖または１種の糖誘導体および少なくとも１種の界面活性剤を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物である。好ましくは、免疫グロブリンＧ濃度は少なくとも２５０ｇ／ｌであり、本組成物は糖および界面活性剤を含む。
【００８１】
１つの特定の例としては、ここに記載する該組成物は：
−  約２５０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  約４０−５０ｇ／ｌのマンニトール；
−  および、適切な場合には、約１００〜３００ppmのポリソルベート８０またはポロキサマーを含み、
溶液のｐＨは、４.２〜５.５である。
【００８２】
１つの特定の態様としては、本発明は、少なくとも１種のアミノ酸、少なくとも１種の塩および少なくとも１種の界面活性剤を含み、免疫グロブリンＧ濃度が少なくとも２３０ｇ／ｌであることを特徴とする免疫グロブリンＧ組成物を提供する。好ましくは、免疫グロブリンＧ濃度は２７０ｇ／ｌであり、本組成物はアミノ酸、塩および界面活性剤を含む。
【００８３】
１つの例示的な態様としては、該組成物は：
−  約２７０ｇ／ｌのＩｇＧ；
−  グリシン；
−  酢酸緩衝液(酢酸ナトリウム／酢酸)；
−  および、適切な場合には、ポリソルベート８０またはポロキサマーを含む。
【００８４】
好ましくは、本発明のＩｇＧ組成物の唯一の添加物は、該アミノ酸、塩および界面活性剤(好ましくは非イオン性界面活性剤)である。これらの添加物(ＩｇＧに加え)から排他的に成るこのようなＩｇＧ組成物は、ＩｇＧ組成物の良好な安定性、良好な適合性および良好な局所耐容性を提供し、また、最少有効数の添加物および最少有効量の添加物の存在のため、産業規模調製時間および費用を減少させる利点を有する。
【００８５】
投与経路：
本発明のＩｇＧ組成物は、治療に有用であり、特に、静脈内だけでなく、有利には皮下または筋肉内に注射可能な形態である。
【００８６】
慢性自己免疫性疾患の処置のための皮下経路は、例えば、患者の快適性の改善および副作用の低減のようないくつかの利点がある。
【００８７】
皮下投与は、静脈アクセスを必要としないため、特に小児において、静脈アプローチの非存在が利用可能な処置を妨げるときに、ある場合には、それにより決定的な利点となる。
【００８８】
皮下経路を介した免疫グロブリンの使用は、静脈内注入に関連する特定の副作用、特に全身作用のリスクも軽減する。静脈内経路により観測される循環力価の大きな変動が回避され、注入間の生理学的範囲における血清力価のよりよい制御を可能とする。皮下経路を介したバイオアベイラビリティは本質的に低いにもかかわらず、皮下投与された免疫グロブリン(ＳＣＩｇ)は、静脈内投与された免疫グロブリン(ＩＶＩｇ)と少なくとも等価な効果を有する。
【００８９】
最後に、家での処置のためのＳＣＩｇの利用可能性は、特定の処置に決定的ではないにしても、重要な利点となる。患者により大きな柔軟性および独立性を提供し、患者のクオリティ・オブ・ライフを改善する。
【００９０】
濃度の増加は、注射頻度を減少することにより患者の心地よさに貢献する。ＳＣＩｇ濃度は、注射容量および注射部位数および結果として投与頻度を条件付ける決定的な特性である。
【００９１】
液体形態で、２５℃で６ヶ月保存後の本発明のＩｇＧ組成物では、ポリマーのレベルが欧州薬局方により設定された標準(３％)よりはるかに下であり、有利には約１％未満である。
【００９２】
本発明の組成物は、医薬組成物、すなわち治療的使用に適した組成物である。
【００９３】
それゆえ、本発明の医薬組成物は、特に抗体産生不全を伴う原発性免疫不全、川崎病、小児および成人免疫性血小板減少性紫斑病、抗体産生不全を伴う二次性免疫不全、特に再発性感染に関連する慢性リンパ系白血病または骨髄腫、細菌感染と関連する小児のＨＩＶ感染、多巣性運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、慢性または重症急性パルボウイルスＢ１９感染、後天性または体質性免疫不全、コルチコ抵抗性皮膚筋炎、急性筋無力症、慢性特発性多発性神経根炎、例えば、ＨＩＶ感染に関連する免疫性血小板減少性紫斑病、全身硬直症候群、自己免疫性好中球減少症、耐性自己免疫性赤芽球減少症、自己抗体誘発性後天性抗凝血症候群、リウマチ性関節炎、ブドウ膜炎を処置するための医薬として有用である。
【００９４】
以下の実施例は、その範囲を限定することなく本発明を説明する。
【実施例】
【００９５】
実施例１：２５％  ＩｇＧ組成物の製造
１.１.  組成物Ｆ１の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン１５０mMおよびＮａＣｌ５０mMを得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ溶液をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。このようにして、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【００９６】
１.２.  組成物Ｆ２の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
プロリン２００mMを得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ溶液をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。このようにして、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【００９７】
１.３.  組成物Ｆ３の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
プロリン２００mMを得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて２００ppmのツイーン８０を加え、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【００９８】
１.４.  組成物Ｆ４の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン１５０mMおよび酢酸緩衝液５０mM(酢酸ナトリウム２５mMおよび酢酸２５mM)を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて２００ppmのツイーン８０を加え、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【００９９】
１.５.  組成物Ｆ５の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン１５０mMおよび酢酸緩衝液５０mM(酢酸ナトリウム２５mMおよび酢酸２５mM)を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて２００ppmのポロキサマーを加え、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１００】
１.６.  組成物Ｆ６の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン１５０mMおよび酢酸緩衝液５０mM(酢酸ナトリウム２５mMおよび酢酸２５mM)を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０１】
１.７.  組成物Ｆ７の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
プロリン１５０mMおよび酢酸緩衝液５０mM(酢酸ナトリウム２５mMおよび酢酸２５mM)を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて２００ppmのツイーン８０を加え、このようにして、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０２】
１.８.  組成物Ｆ８の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
プロリン２５０mMおよび５ppmのツイーン８０を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.６〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて、１９５ppmのツイーン８０を加え、このようにして、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０３】
１.９.  組成物Ｆ９の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
ヒスチジン２５０mMおよび５ppmのツイーン８０を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ６.８〜７.８のカセットで接線限外濾過する。続いて、１９５ppmのツイーン８０を加え、このようにして製剤され、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０４】
１.１０.  組成物Ｆ１０の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
アルギニン２５０mMおよび５ppmのツイーン８０を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ６.８〜７.８のカセットで接線限外濾過する。続いて、１９５ppmのツイーン８０を加え、このようにして製剤され、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０５】
１.１１.  組成物Ｆ１１の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン２００mMおよび酢酸緩衝液５０mM(酢酸ナトリウム２５mMおよび酢酸２５mM)を得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.５〜５のカセットで接線限外濾過する。続いて、２００ppmのツイーン８０を加え、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０６】
１.１２.  組成物Ｆ１２の製造
ＩｇＧ組成物は、国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報において本出願人により開発された方法に従い得た。
グリシン２５０mMを得られたＩｇＧ組成物に加え、製剤前のＩｇＧ組成物をｐＨ４.５〜５.５のカセットで接線限外濾過する。２００ppmのツイーン８０を加え、２５０ｇ／ｌの製剤され、濃縮されたＩｇＧ組成物を得る。
【０１０７】
結果を以下の表１に示す。
【表１】
2013534540.tif 000002
【０１０８】
以下の表２に詳述する組成物である、１０％ＩｇＧ溶液(国際特許出願国際公開第２００７／０７７３６５号公報または国際公開第０２／０９２６３２号公報において本出願人により開発された方法により得た)をコントロールとして用いる。
【０１０９】
【表２】
2013534540.tif 000003
【０１１０】
実施例２：組成物安定性試験
材料および方法：
２.１. 凝集測定
２.１.１. 可視粒子
直径が約５０μmより大きいタンパク質凝集体または外因性粒子は、肉眼で見える。暗室において、３人の操作者により白色光の光線にボトルを曝され、彼らが可視粒子の存在または不存在を記録する。
【０１１１】
２.１.２. 非可視粒子
１０μmおよび２５μmより大きい直径を有する粒子を、欧州薬局方６版、§２.９.１９、方法１Ｂ出典の光遮蔽法(Light Obscuration;Particle Measuring Systems Inc.の装置Model LS-200)により定量する。サンプルを、生成物の粘度を低下させるため、分析の直前に、０.２２μmで濾過した注射用水で２倍希釈する。希釈生成物５mlを濯ぎに用い、５mlを測定に用いる。
【０１１２】
２.１.３. 動的光散乱(以後ＤＬＳと呼ぶ)測定
ＤＬＳは、溶液中に存在するタンパク質および凝集体の水力学的直径の測定を可能とする。この測定は、ナノメートルからミクロンの範囲で利用できるため、形成の初期段階で凝集現象の追跡を可能とする。この試験について、測定は９０°の角度のＡＬＶの散乱ベンチ(ALV/CGS-3 Compact Goniometer System)を用いて行った。さらに、十分なイオン強度を維持し、密着サイズ測定を可能とするため、０.０４ＭのＮａＣｌをすべての溶液に加えた。
【０１１３】
２.１.４. ＨＰ−ＳＥＣ(高速サイズ排除クロマトグラフィー)によるポリマーの定量
これは、タンパク質をそれらの分子サイズにより分離する液相クロマトグラフィー法であり、モノマー、ダイマーおよびポリマーのパーセンテージを決定することを可能とする。この試験は、GE HealthcareのTricorn Superdex 200 10/300 GLカラムを用いて行う。
【０１１４】
２.２. 断片測定
免疫グロブリン断片化をHP-SECにより定量する。
【０１１５】
結果：
すべての製剤は、２５℃において良好な安定性を示す。
これらの結果は、界面活性剤の存在が製剤の安定性の観点から、微小粒子(可視粒子および非可視粒子)の形態への凝集に関して非常に重要であることを示す。事実、組成物Ｆ１、Ｆ２およびＦ６において検出された可視および非可視粒子のレベルは、界面活性剤を含有する組成物(Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５およびＦ７)で測定されたものよりはるかに高く、界面活性剤の存在の重要性を明らかに示す。２５℃での１６ヵ月の安定性試験の後、界面活性剤を含有する組成物(Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５およびＦ７)は、可視粒子がなく、組成物Ｆ１、Ｆ２およびＦ６よりも非可視粒子が少ない状態を維持した。
さらに、２５℃での１６ヵ月までの安定性試験において、検出されたポリマーレベルは、すべての組成物について、薬局方で課された標準(＜３％)を下回った。
２５℃での１６ヵ月までの安定性試験において、断片化のレベルは、ＩｇＧ参照生成物の１０％に相当する。
【０１１６】
実施例３：限外濾過による温度の濃度への影響
接線限外濾過によるＩｇＧの温度の濃度への影響についての試験を、Milliporeの２種の再生セルロース膜、Ultracel V(登録商標)およびUltracel C(登録商標)で、カットオフ閾値３０kDで、Ultracel V(登録商標)膜については１５℃および２０℃でおよびUltracel C(登録商標)膜については１５℃および３０℃で行った。
【０１１７】
結果
結果を以下の表３に示す。
【表３】
2013534540.tif 000004
３０℃よりも低い温度で、２５０ｇ／ｌまでの濃度が実行可能であることが証明される。
【０１１８】
実施例４：ミニブタにおける局所耐容性の試験
局所耐容性の試験を、組成物Ｆ４、１０％ＩｇＮＧ、Subcuvia(登録商標)(１６０ｇ／ｌまたは１６％ＩｇＧ、Baxter)およびグリシン−酢酸塩−ツイーン８０製剤緩衝液について流速１０ml／時間で同時皮下投与により処置した３匹の動物で行った。注入容積は１０mlに固定した。２７Ｇ針を用いた。注入部位に関連する偏りを避けるため、注入部位は各動物において無作為とした。
【０１１９】
結果：
全身毒性を示す臨床的な兆候は観察されなかった。注入部位で、血腫または硬化は、処置の前、最中または後において報告されなかった。局所反応は、注入部位の紅斑および浮腫に限られた。
剖検(死後巨視的試験)で、関連する異常は観察されなかった。
結論として、試験条件下、組成物Ｆ４の局所耐容性は十分であると考えられる。
【国際調査報告】
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2013534540.tif 000006
2013534540.tif 000007
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