(57)【要約】  調節が所望される皮膚の区域に、第１のパーソナルケア組成物を適用する工程によって、哺乳類の皮膚の状態を調節するための方法。この第１のパーソナルケア組成物は、ゲル組成物を含む。別の工程では、真皮にエネルギーを供給して、真皮内のコラーゲンを加熱することにより、その真皮内の加熱されたコラーゲンが、表皮及び角質層を、角質層が約３７℃〜約４８℃の外面温度に到達するまで加熱する。次いで、真皮へのエネルギー供給を制御して、角質層の温度を、約３７℃〜約４８℃の範囲に維持する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の皮膚の状態を調節するための方法であって、前記皮膚が、角質層の外面層、表皮、及び真皮の、少なくとも３つの層を有し、
（ａ）調節が所望される皮膚の区域に、第１のパーソナルケア組成物を適用する工程であって、前記第１のパーソナルケア組成物が、ゲル組成物を含む工程と、
（ｂ）前記真皮にエネルギーを供給して、前記真皮内のコラーゲンを加熱することにより、前記真皮内の前記加熱されたコラーゲンが、前記表皮及び角質層を、前記角質層が約３７℃〜約４８℃の外面温度に到達するまで加熱する工程であって、次いで、前記真皮への前記エネルギー供給を制御して、前記角質層の前記温度を約３７℃〜約４８℃の範囲に維持する工程と、を含む、方法。
【請求項２】
前記エネルギーが、ＲＦエネルギーデバイスによって供給され、前記ＲＦエネルギーが、前記ゲル組成物を介して前記角質層に接触する２つ以上の電極を介して供給される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＲＦエネルギーデバイスのスイッチを入れると、前記ＲＦエネルギーデバイスが、約２０〜約５０秒にわたって、全出力の３５％〜約６５％の範囲で前記ＲＦエネルギーを供給し、次いで、約２０〜約５０秒にわたって、前記出力が約６５％〜約１００％まで増大し、次いで、前記エネルギー供給を制御することにより、前記角質層の前記温度が、前記約３７℃〜約４８℃の範囲に維持される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記エネルギー供給デバイスが、手持ち式であり、消費者の眼の下に適用されて、前記眼の下から、前記目尻のしわ区域の真上に移動され、次いで、方向が逆転されて、前記エネルギー供給デバイスが、約３〜約６分間、この経路全体にわたって前後移動される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記エネルギー供給デバイスが、手持ち式であり、消費者の眼の上に適用されて、前記眼の上から、前記目尻のしわ区域の真下に移動され、次いで、方向が逆転されて、前記エネルギー供給デバイスが、約３〜約６分間、この経路全体にわたって前後移動される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が、前記消費者の他方の眼の下で繰り返される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記方法が、前記消費者の他方の眼の上で繰り返される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ゲル組成物が、約１，０００〜約２，０００μＳ／ｃｍの導電率を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記デバイスが、手持ち式であり、前記エネルギー供給デバイスを、消費者の一方の眼の下に適用して、約３〜約６分間、持続的な前後運動で、前記目尻のしわ区域の真上に移動させる工程と、次いで、前記エネルギー供給デバイスを、前記消費者の眼の上に適用して、約３〜約６分間、持続的な前後運動で、前記目尻のしわ区域の真下に移動させる工程と、これらの２つの工程を、前記消費者の他方の眼に対して繰り返すことにより、前記消費者の両眼に隣接する前記目尻のしわ区域が、それぞれ約６〜約１２分間、処置される工程と、を含む、多重工程レジメンで使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記多重工程レジメンが、約３週間〜約６週間にわたる、週に３〜５日のレジメン期間で、少なくとも１日につき１回、完了される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記消費者が、約２〜約８ヶ月間待機して、次いで、前記レジメン期間にわたって、前記多重工程レジメンを繰り返す、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記消費者の前記眼の周りの、微細な小じわ及びしわが、各レジメン期間の後、可視的に低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＲＦエネルギー供給デバイスが光を放出せず、電磁エネルギーを発生しない、請求項２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚の状態を調節するための、哺乳類の皮膚へのエネルギー及び局所適用組成物の適用の併用に関する。エネルギー供給デバイスの最も有効な使用に関するレジメン、並びにエネルギー供給デバイス、組成物、及びレジメンの有効性を判定するための方法もまた、開示される。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の内因性経時的老化及び外因性環境的老化の影響を、回避又は低減するための皮膚処置は、数十億ドルの商用産業であり、この産業は、新たな技術の開発及び検証への更に多額な投資によって支えられている。電磁（ＥＭ）エネルギーの、皮膚の表面への適用を介した、皮膚への投与は、数十年間にわたって既知であり、広範囲の形態で、かつ様々な供給デバイスを通じて、実装されている。一般的には、ＥＭベースの皮膚処置方法は、切除手技と非切除手技とに分類することができるが、双方とも、ＥＭエネルギーの適用の熱融解効果を利用する。
【０００３】
皮膚の状態を改善し、典型的な老化の兆候を遅延及び／又は防止するための様々な製品が、消費者には入手可能である。そのような兆候としては、例えば、微細な小じわ、しわ、色素沈着過剰、血色の悪さ、弛み、目の下のくま、腫れぼったい目、不均一な皮膚の色合い、拡大した毛穴、表皮細胞代謝回転の速度の低下、及び異常な剥離若しくは落屑が挙げられる。しかしながら、一部の消費者に関しては、多種多様な入手可能な製品、及びスキンケア技術の進歩は、依然として所望の結果を生み出すことができず、より侵襲的な医療手技に転向する必要性を感じる消費者もいる。
【０００４】
切除レーザーなどの切除手技は、瘢痕及び刺青の除去手技の際などの、皮膚の、肉眼的な形態上の表面入れ替え若しくは除去に関する、有効な方法であることが判明しており、また老化及び光損傷した皮膚の外観を処置して改善するために有効であることも、判明している。切除手技は、顔面皮膚の、美容上脆弱な口周囲区域及び眼窩周囲区域内の、微細な小じわ並びにしわの外観を改善するために有効であるが、大きな不利益としては、不必要に長い期間にわたって、著しく損なわれた美容上の外観を消費者に強要する、長期の治癒及び回復が挙げられる。更には、結果的に生じる恐れがある、感染、瘢痕化、及び色素沈着の不規則性の、潜在的な副作用は、特に顔面皮膚に関与する場合に、消費者には、美容上許容不可能であると見なされる場合が多い。
【０００５】
近年の研究開発努力は、それゆえ、より安価で、より簡便、かつより安全な、非切除の、皮膚の抗老化及び若返りの処置を、消費者に提供することに焦点を当てている。皮膚の外観の改善を促進することを目的とする、熱エネルギーの皮膚への投与を伴う美容レジメンは、当該技術分野において周知である。消費者の家庭使用を対象とする、手持ち式デバイスの形態の、電磁エネルギー供給技術が、ほぼ１０年間にわたって市販されている。この技術の改善及び進歩は、より深い標的皮膚組織に対して熱的に誘導される利益を最大化する一方で、標的組織、並びに周辺及び表面組織の双方に対する望ましくない損傷を最小限に抑えることを中心とする。選択的な熱処置は、新たなコラーゲン形成を誘導し、選択的な熱損傷は、とりわけ真皮マトリックスの再構築を誘導すると考えられる。しかしながら、現在利用可能な技術は、過熱、焼損、紅斑、及び色素の不規則性を含めた、問題のある損傷の、望ましくない持続的な負の副作用を結果的にもたらすことが知られている。
【０００６】
過去には、これらのデバイス及び組成物の有効性は、外面的な方法のみによって判定された。すなわち、皮膚の外面層に、可視的な改善が存在した場合には、そのエネルギー供給デバイスは、機能しているはずである。しかし、これらのエネルギー供給デバイスに関する、最適な時間、温度、及び組成物を判定するための方法は、殆ど存在しない。更には、皮膚の表面上に発生する可視的な変化の多くは、皮膚の真皮層及び表皮層内の、表面の下方で発生する変化の結果であることが、一般的に認められている。デバイスが皮膚の下位層にどのような影響を及ぼすかを知ることなく、デバイスの性能を制御及び最大化する方法を正確に知ることは、困難である。
【０００７】
皮膚組織の選択的光熱融解は、具体的には、単色レーザーエネルギー、及び広域スペクトルのインテンスパルスライト（ＩＰＬ）エネルギーの投与を含む処置で、広く実践されている美容処置形態である。これらの技術では、光エネルギーが、皮膚の表面に直接適用され、浸透は、表皮を通過する透過、及び真皮内での吸収に依存する。浅黒い皮膚、及び表皮上の色素沈着過剰しみは、エネルギーを吸収することによって、透過を妨害し、処置の有効性を阻害する恐れがあり、また、水疱形成、焼損、及び他の美容上望ましくない効果をもたらす、色素沈着区域の過熱を結果的にもたらす恐れもある。
【０００８】
ＥＭベースの熱融解の代替案として、電気的に伝導される高周波（ＲＦ）電流もまた、美容皮膚処置のモダリティとして、検討されている。医薬技術でのＲＦ電流及びパルス状高周波（ｐＲＦ）の使用は既知であるが、消費者による自己供給のための、非切除の皮膚若返り技術としてのＲＦ電流の使用は、比較的、依然として革新的である。ＲＦ電流の皮膚への適用では、双極性ＲＦ電流の伝達が、皮膚に直接適用される２つの電極を通じて発生する。この電流は、それゆえ、真皮層を直接通過して流れ、電極から電極へ伝導されるため、表皮を通過して集束され、波長浸透深さに影響を及ぼす因子によって制限される、ＥＭエネルギーの適用とは区別される。
【０００９】
ＲＦ電流の投与は、理論的には、ＥＭエネルギーの適用に勝る、顕著な皮膚処置の有利点を提供するように思われる。電磁エネルギーとは異なり、例えば、電気的に伝導されるＲＦエネルギーは、発色団非依存性であり、このことにより、色素沈着した皮膚と色素沈着していない皮膚との間の吸収差の存在に関連する、煩雑性及び有効性の問題と、その結果もたらされる、より多くのエネルギー吸収メラミンを有する、より浅黒い皮膚、及び光波長を反射し得る、より明色の皮膚を処置する際の問題とが回避される。双方の場合とも、結果の一貫性は損なわれ、発色団を含む皮膚内での熱制御には、依然として問題が残される。
【００１０】
しかしながら、熱処置有効性を提供し得るエネルギーレベルでの、ＲＦ電流の皮膚への投与は、治験責任医師が、望ましくない皮膚損傷の非存在下で、所望の利益を達成するようにパラメータを最適化することができないという問題を抱えている。ＲＦ電流は、皮膚表面の下方の真皮組織を通過して供給されるが、温度センサー又は水分センサーによる効果監視は、アクセス可能な皮膚の表面に限定される。ＲＦ電流インピーダンスは、組織組成と、コラーゲンの密度及び一体性、水和レベルなどを含めた、皮膚組織の属性との関数である。電極間の距離、並びにパルス長及び周波数などのパラメータの制御は、効果を最適化して、安全性への懸念を回避するように、理論的に調整することができるが、そのような調整は、組織状態の変化を監視するための装置又は他の手段の恩恵がなければ、ほぼ不可能である。ＥＭエネルギーベースの供給の場合には、表面の皮膚が、典型的には、最高処置温度に到達するため、その表面での温度監視により、表皮下組織への望ましくない損傷を防止することができる。しかしながら、ＲＦ電流の場合には、表皮下組織が、実際には、表面の皮膚よりも高い処置温度に到達するため、損傷は、表面で測定可能に顕在化することなく、より深い組織に生じる恐れがある。高度に訓練された医療関係者の監督下での、高機能の計器装備を使用する臨床設定以外では、ＲＦ電流の単独の供給に基づく、消費者による個人使用を対象とするデバイス及びレジメンは、それゆえ、適切な表皮下監視機構の非存在下では、有効処置レベルでの、安全性への配慮が継続して存在するため、一般的に回避されている。ＲＦ電流を単一の処置モダリティとして提供し、かつ家庭の消費者使用を対象とする、手持ち式エネルギー供給デバイスは、事実上知られていない。そのようなものと称される１つのデバイス（ＳＴＯＰ（商標）、Ｕｌｔｒａｇｅｎ  Ｌｔｄ）が、欧州では、個人使用向けに消費者に対して市販されているが、そのデバイスの処置忍容性は、望ましくない損傷を回避するために、極めて低く設定されることにより、制御された条件下での臨床的有効性の客観的証拠は、入手不可能である。
【００１１】
それゆえ、皮膚処置でのＲＦの役割は、他の熱融解手順と組み合わされる、補助的機能又は予備的機能に、実質的に限定される。例えば、２００２年には、Ｂｉｔｔｅｒ及びＭｕｌｈｏｌｌａｎｄ（「Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｓｋｉｎ  ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｄｕａｌ  ｍｏｄｅ  ｐｕｌｓｅｄ  ｌｉｇｈｔ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｅｎｅｒｇｙ  ｓｏｕｒｃｅｓ：ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｓ」、Ｊ．Ｃｏｓｍｅｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００２；１：１４２〜１４５）が、ＲＦ電流とＩＰＬとの組み合わせに基づく処置プロトコルを提唱し、１００の被験者の顔面処置に基づく結果を報告したが、執筆者は、具体的な処置設計パラメータを開示することができなかった。その研究では、ＲＦは、ＩＰＬ処置の効果を補強することが報告された。副作用には、美容上望ましくない色素沈着作用の報告が含まれており、消費者の疼痛の知覚は、表面的冷却によって制御された。
【００１２】
ＲＦはまた、標的光エネルギーの適用と併せた、美容皮膚処置に関しても有用であるとして、示唆及び検討されている。全般的には、この処置プロトコル設計により、ＲＦは、光エネルギーに対して補助的に使用され、光エネルギーの一部のパラメータに従って適用される。例えば、Ｈａｍｍｅｓら（「Ｅｌｅｃｔｒｏ−ｏｐｔｉｃａｌ  ｓｙｎｅｒｇｙ（ＥＬＯＳ（商標））ｆｏｒ  ｎｏｎａｂｌａｔｉｖｅ  ｓｋｉｎ  ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ：ａ  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．ａｎｄ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ  ２００６，２０，１０７０〜１０７５）では、執筆者は、ＲＦ電流と光エネルギーとの間の調整パルス周波数に焦点を当て、これらのエネルギー形態の間に、より低い、侵襲性の少ないレベルの光エネルギーの使用を許容し得る、相乗作用が存在することを示唆し、更に、単独のＲＦ適用に付随する副作用が、この複合プロトコルによって低減又は回避されることを示唆する。更には、これらのデバイスを採用するレジメンは、過熱に応答して、又は過熱を防止するために、皮膚を機械的に冷却する手段を含む。
【００１３】
別の例では、米国特許出願公開第２００８／００３３５１６（Ａ１）号（Ａｌｔｓｈｕｌｅｒ）は、標的深さまでの皮膚の加熱と、電磁放射線を使用する標的区域の照射との組み合わせを伴う、皮膚組織の「温度制御された光生体刺激」を開示している。Ａｌｔｓｈｕｌｅｒは、ＡＴＰの産生、細胞増殖、及びタンパク質の産生を増大させ、並びに低悪性度の炎症反応の誘導によって生育反応を引き起こすと一般に考えられている、低レベル光、低レベルレーザー、単色及び準単色光刺激ベースの皮膚処置方法の、既存の技術に言及しているが、一貫性のない結果の報告、及び臨床的な有効性の確認の欠如に言及している。Ａｌｔｓｈｕｌｅｒは、熱エネルギー適用が、光刺激反応を増進し得ると仮定している。Ａｌｔｓｈｕｌｅｒは、一定の容積の皮膚の温熱療法が、その容積の温度を、好ましくは３７°〜４５℃まで上昇させることが可能な、任意の既知の供給源によって達成することができることを教示し、高温空気、ＡＣ若しくはＤＣ電流、伝導熱源の使用、超音波若しくはマイクロ波放射線、又は３８０〜２７００ｎｍの範囲の任意の好適な波長のＥＭ放射線による加熱を、具体的に例示している。しかしながら、全てのＡｌｔｓｈｕｌｅｒの実施形態では、所望の処置効果を達成するために、ＥＭエネルギーに依存している。Ａｌｔｓｈｕｌｅｒは、熱が、光刺激の所望の効果の相乗的増進を提供することを教示しているが、ＥＭの非存在下での熱は、放射線誘導ＤＮＡ損傷の修復の遅延、後続の熱適用に対する耐性を構築する熱ショックタンパク質の産生、並びに皮膚組織の再生及び修復に伴うものを含めた酵素プロセスの改変などの、望ましくない生体刺激を結果的にもたらす恐れがあることも示唆し、皮膚処置のモダリティとしての、光の非存在下での熱からは離れて、全般的に教示している。Ａｌｔｓｈｕｌｅｒは、表皮下の皮膚の状態を評価又は監視することができない点に関連する欠陥を克服する方法は、示唆していない。
【００１４】
更には、消費者の順守性は、常に、現在入手可能なデバイスに関する問題である。消費者には、自らの美容レジメンのための、日々の時間の量が限られている。デバイスの製造元は、消費者が最大の利益を得ることを保証するために、その製造元のデバイスを消費者が長期間にわたって使用することを推奨したいと望むが、消費者が順守する可能性は低い。それゆえ、デバイスの長期間の使用を推奨することと、デバイスを使用するための日々の自由時間の量が、消費者には限られていることを理解することとの間に、トレードオフが存在する。
【００１５】
消費者経験もまた、デバイス、組成物、及びレジメンを設計する際、重要である。例えば、音波検査は、一般に実行される手技であり、多大な医療上の利益を提供する。しかし、音波検査の手技で使用されるゲルは、濃厚で、除去することが困難であり、消費者に不快感を引き起こす。更には、多くのエネルギー供給デバイスは、過度に素早く、又は過度に熱く、外面皮膚を加熱して、不快な消費者経験を引き起こす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００８／００３３５１６（Ａ１）号
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｂｉｔｔｅｒ及びＭｕｌｈｏｌｌａｎｄ（「Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｓｋｉｎ  ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｄｕａｌ  ｍｏｄｅ  ｐｕｌｓｅｄ  ｌｉｇｈｔ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｅｎｅｒｇｙ  ｓｏｕｒｃｅｓ：ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｓ」、Ｊ．Ｃｏｓｍｅｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２００２；１：１４２〜１４５）
【非特許文献２】Ｈａｍｍｅｓら（「Ｅｌｅｃｔｒｏ−ｏｐｔｉｃａｌ  ｓｙｎｅｒｇｙ（ＥＬＯＳ（商標））ｆｏｒ  ｎｏｎａｂｌａｔｉｖｅ  ｓｋｉｎ  ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ：ａ  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．ａｎｄ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ  ２００６，２０，１０７０〜１０７５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
それゆえ、より侵襲的な手技の必要性、及びそれらの手技に付随するリスクを回避するように、皮膚の状態を十分に改善する方法が、引き続き必要とされている。また、エネルギー供給デバイスの有効性を判定する、より良好な方法に対する必要性が存在し、その方法を使用して、より消費者に許容可能な経験を展開する一方で、皮膚の外観の改善の、所望の結果を達成することができる。
【００１９】
当該技術分野には、消費者による個人使用に好適な、安全かつ有効な非切除の皮膚処置及び若返りのデバイス、療法、並びにレジメンに対する必要性が残されている。具体的には、処置される標的組織又は周囲の組織に、望ましくない損傷を引き起こすことなく、コラーゲン合成及び真皮の再構築を増進することによって、表皮下の皮膚組織を処置する手段に対する必要性が残されている。当該技術分野には、所望の利益の提供に関してＲＦ電流の投与を最適化するために、ＲＦ電流ベースの消費者遂行処置の効果を評価及び監視する方法に対する、具体的な必要性が存在し、また、ＥＭベースの療法に付随する問題を回避し、処置に伴う機械的冷却に依存しない、最適化されたＲＦ電流ベースの療法に対する必要性が残されている。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、哺乳類の皮膚の状態を調節するための方法に関する。皮膚は、角質層の外面層、表皮、及び真皮の、少なくとも３つの層を有する。また、この方法は、調節が所望される皮膚の区域に、第１のパーソナルケア組成物を適用する工程を含み、この第１のパーソナルケア組成物は、ゲル組成物を含む。別の工程は、真皮にエネルギーを供給して、真皮内のコラーゲンを加熱することにより、その真皮内の加熱されたコラーゲンが、表皮及び角質層を、角質層が約３７℃〜約４８℃の外面温度に到達するまで加熱することを含む。次いで、真皮へのエネルギー供給を制御して、角質層の温度を、約３７℃〜約４８℃の範囲に維持する。供給されるエネルギーは、ＲＦエネルギーデバイスからのものとすることができ、ＲＦエネルギーは、ゲル組成物を介して角質層に接触する、２つ以上の電極を介して供給される。エネルギー供給デバイスが光を放出せず、電磁エネルギーを発生しないことが好ましい場合がある。また、一実施形態では、ゲル組成物は、約１，０００〜約２，０００μＳ／ｃｍの導電率を有する。
【００２１】
本発明の別の実施形態では、ＲＦエネルギーデバイスのスイッチを入れると、ＲＦエネルギーデバイスは、約２０〜約５０秒にわたって、全出力の３５％〜約６５％の範囲でＲＦエネルギーを供給し、次いで、約２０〜約５０秒にわたって、出力が約６５％〜約１００％まで増大し、次いで、エネルギー供給を制御することにより、角質層の温度が、約３７℃〜約４８℃の範囲に維持される。
【００２２】
本発明の更に別の実施形態では、エネルギー供給デバイスは、手持ち式であり、消費者の眼の下に適用されて、眼の下から、目尻のしわ区域の真上に移動され、次いで、方向が逆転されて、そのエネルギー供給デバイスは、約３〜約６分間、この経路全体にわたって前後移動される。この方法を、消費者の他方の眼の下で、繰り返すことができる。更には、エネルギー供給デバイスは、消費者の眼の上に適用して、眼の上から、目尻のしわ区域の真下に移動させることができ、次いで、方向が逆転されて、そのエネルギー供給デバイスは、約３〜約６分間、この経路全体にわたって前後移動される。この方法を、消費者の他方の眼の上で、繰り返すことができる。
【００２３】
エネルギー供給デバイスを、消費者の一方の眼の下に適用して、約３〜約６分間、持続的な前後運動で、目尻のしわ区域の真上に移動させる工程と、次いで、エネルギー供給デバイスを、消費者の眼の上に適用して、約３〜約６分間、持続的な前後運動で、目尻のしわ区域の真下に移動させる工程と、これらの２つの工程を、消費者の他方の眼に対して繰り返すことにより、消費者の両眼に隣接する目尻のしわ区域が、それぞれ約６〜約１２分間、処置される工程とを含む、多重工程レジメンが開示される。この多重工程レジメンは、約３週間〜約６週間にわたる、週に３〜５日のレジメン期間で、少なくとも１日につき１回、完了することができる。次いで、消費者は、約２〜約８ヶ月間待機して、次いで、このレジメン期間にわたって、多重工程レジメンを繰り返すことができる。好ましくは、消費者の眼の周りの、微細な小じわ及びしわは、各レジメン期間の後、可視的に低減される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
本明細書は、本発明を具体的に指摘し、明確に請求する特許請求の範囲をもって結論とするが、本発明は、添付図面と併せてなされる以下の説明から、より良好に理解されることが考えられる。
【図１】ヒト皮膚内の自然発生的な損傷及び修復のサイクルの概略図。
【図２Ａ】ヒトコラーゲンの特性。
【図２Ｂ】ヒトコラーゲンの特性。
【図３】ＲＦ電流投与の有効性の生物学的モデルの概略図。
【図４Ａ】編成遺伝子に関する２４時間平均の倍率変化。
【図４Ｂ】編成遺伝子に関する２４時間平均の倍率変化。
【図５Ａ】例示的遺伝子に関する２４時間平均の倍率変化。
【図５Ｂ】例示的遺伝子に関する２４時間平均の倍率変化。
【図６Ａ】編成遺伝子に関する１ヶ月平均の倍率変化。
【図６Ｂ】編成遺伝子に関する１ヶ月平均の倍率変化。
【図７Ａ】例示的遺伝子に関する１ヶ月平均の倍率変化。
【図７Ｂ】例示的遺伝子に関する１ヶ月平均の倍率変化。
【図８Ａ】ＲＦ単純熱伝達の２つのグラフ。
【図８Ｂ】ＲＦ単純熱伝達の２つのグラフ。
【図９】ＲＦ単純熱伝達の概略図。
【図１０】消費者の眼の周囲の目尻のしわ区域の概略図。
【図１１】消費者の皮膚の領域Ａ。
【図１２】消費者の皮膚の領域Ｂ。
【図１３】消費者の皮膚の領域Ｃ。
【図１４】消費者の皮膚の領域Ｄ。
【図１５】消費者の皮膚の領域Ｅ。
【図１６】消費者の皮膚の領域Ｆ。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明の全ての実施形態では、特に記述のない限り、全ての百分率は、全組成物の重量％である。全ての比率は、特に記述のない限り、重量比である。全ての範囲は、包含的であり、かつ組み合わせ可能である。有効桁数は、指示される量に対しても、測定値の精度に対しても、限定を伝えるものではない。全ての数値的な量は、特に指示のない限り、用語「約」によって修飾されることが理解されよう。全ての測定は、２５℃及び周囲条件で実施され、「周囲条件」とは、１気圧の下、かつ５０％の相対湿度での条件を意味することが理解されよう。
【００２６】
本明細書に添付の、いずれの方法の特許請求の範囲に記載される工程も、特に指定のない限り、任意の順序で実行し得ることを理解されたい。例えば、工程（ａ）、工程（ｂ）、及び工程（ｃ）を記載する方法の特許請求の範囲では、工程（ｃ）を、工程（ａ）及び工程（ｂ）の前に、若しくはそれらの工程の間に実行することが可能である。更には、個々の工程は、別個の工程として記載されているが、一部又は完全に重なり合う期間中に実行することができる。
【００２７】
本明細書では、「皮膚の状態を調節すること」とは、皮膚の状態を改善すること、及び／又は皮膚の状態を予防的に調節することを意味し、例えば、紫外線から組織を保護すること、及び皮膚の老化の兆候を調節することを含む。本明細書では、「哺乳類の皮膚の状態を改善すること」とは、視覚的及び／又は触覚的に知覚可能な、組織の外観並びに感触の好ましい変化をもたらすことを意味する。調節及び／又は改善することができる状態としては、以下のうちの１つ以上が挙げられるが、それらに限定されない：しわ及び粗く深い小じわ、微細な小じわ、裂け目、突出、並びに大きい毛穴の外観を低減すること；皮膚を厚くすること（例えば、皮膚の表皮及び／又は真皮及び／又は真皮下層を構築することであり、皮膚、毛髪、又は爪の萎縮を低減するために、爪及び毛幹の角質層に適用可能）；真皮−表皮の境界のよれ（乳頭間隆起としても知られる）を増大させること；皮膚又は毛髪の弾性の損失を防止すること、例えば、機能性皮膚エラスチンの損失、損傷、及び／又は不活性化によるものであり、弾力線維症、弛み、皮膚又は毛髪の変形からの反跳の損失などの状態を結果的にもたらす；セルライトの低減；皮膚、毛髪、又は爪への呈色の変化、例えば、目の下のくま、しみだらけの状態（例えば、不均一な赤色の呈色、例えば、酒さによる）、血色の悪さ、毛細血管拡張症若しくはクモ状血管腫によって引き起こされる変色、乾燥、脆性、及び白髪。
【００２８】
本明細書で使用するとき、「皮膚の老化の兆候」としては、皮膚の老化による、外面上の視覚的及び触覚的に知覚可能な顕在化、並びにいずれの巨視的又は微視的な影響も挙げられるが、これらに限定されない。これらの兆候は、以下に挙げるプロセスから生じ得るが、それらのプロセスに限定されない：しわ及び粗く深いしわ、微細な小じわ、皮膚の小じわ、裂け目、突出、大きい毛穴、不均一性、又は粗さなどの、組織構造上の不連続性の発達；剥落；乾燥；皮膚の弾性の損失；変色（目の下のくまを含む）；しみだらけの状態；血色の悪さ；加齢しみ及びソバカスなどの、色素沈着過剰な皮膚領域；角化症；異常分化；超角質化；弾力線維症；コラーゲン分解、並びに角質層、真皮、表皮、脈管系内でのその他の組織構造の変化（例えば、毛細血管拡張症又はクモ状血管腫）、及び下層組織（例えば、脂質及び／又は筋肉）、特に皮膚に近接する下層組織内でのその他の組織構造の変化。
【００２９】
「色素沈着過剰」は、本明細書で使用するとき、色素沈着が、隣接する皮膚の区域の色素沈着よりも大きい、皮膚の区域を指す（例えば、色素しみ、加齢しみなど）。
【００３０】
本明細書では、「パーソナルケア組成物」とは、哺乳類の皮膚上の局所適用に関して好適な組成物を意味する。本明細書で説明されるパーソナルケア組成物は、１種以上のスキンケア活性物質を含有し得る。「スキンケア活性物質」又は「活性物質」とは、本明細書で使用するとき、皮膚の状態、及び他の哺乳類の皮膚の状態を調節する際に、例えば、その皮膚への利益又は改善を提供することによって援助する、化合物を意味する。
【００３１】
「エネルギー供給デバイス」とは、本明細書で使用するとき、哺乳類の皮膚及び／又は毛髪にエネルギーを供給するために使用される、任意のデバイスを意味する。本明細書では、「エネルギーの供給」とは、皮膚の表面及び／又は層が、エネルギー供給デバイスから発出するエネルギーに晒され、そのエネルギーが、毛幹及び／又は毛嚢を含めた、所望の皮膚の層に浸透し得ることを意味する。
【００３２】
「持続的レベル」とは、本明細書で使用するとき、デバイスによって供給されるエネルギー、すなわちエネルギー出力が、デバイスの起動時とデバイスの非作動時との間で、本質的に一定のレベルに維持されることを意味する。
【００３３】
「パルス状」とは、本明細書で使用するとき、デバイスの起動時とデバイスの非作動時との間で、エネルギー出力が、予測可能な方式で変動することを意味し、より高い出力の期間（パルス）とより低い出力の期間とが、交互に現れることによって特徴付けられる。パルスの開始は、急激な場合があり、又は緩やかな場合もある。「予測可能」とは、パルスピーク強度、パルス形状、パルス持続時間、及びパルス間の時間的間隔が、実質的に同一であることを意味する。パルスの持続時間、及びパルス間の時間は、変動する場合がある。
【００３４】
「手持ち式」とは、本明細書で使用するとき、デバイスが、平均的な成人が無理なく保持するために好適な重量及び寸法のものであることを意味する。
【００３５】
ヒトの皮膚は、表皮と、表皮下又は下層の真皮との、２つの主要な構造層に分類することができる。角質層を有する表皮は、環境に対する生物学的障壁としての役割を果たす。表皮の基底層内には、皮膚の色の主要な決定因子である、メラニン細胞と呼ばれる色素形成細胞が存在する。
【００３６】
下層の真皮は、皮膚の主要な構造的支持を提供する。この下層の真皮は、コラーゲンと呼ばれる細胞外タンパク質から主に構成される。コラーゲンは、線維芽細胞によって産生され、熱不安定性化学結合及び熱安定性化学結合で接続される３つのポリペプチド鎖を有する、３重螺旋として合成される。コラーゲン含有組織が加熱されると、このタンパク質マトリックスの物理的特性の改変が、特性温度で発生する。コラーゲンマトリックスのコラーゲン収縮及び再構築の、構造転移が熱で発生する。
【００３７】
皮膚の内部では、若干量の修復活性が発生して、継続的なコラーゲン産生を促進する。老化の間は、損傷が発生する割合は、修復活性よりも速く増大する場合があり、又は損傷は、実質的に一定の割合で発生し続ける場合もあるが、修復活性が遅滞する。いずれの場合にも、その結果は、コラーゲンの低減、並びに微細な小じわ、しわ、及び色素沈着過剰しみなどの、表面欠陥の外観を含めた、老化の兆候としての損なわれた外観の顕在化である。通常の修復活性サイクル、及び結果として生じる、外観に対する経時的な影響を、図１及び図３に示す。
【００３８】
図１では、ボックスは、コラーゲン産生の通常の起因を表す。多くの理由により、皮膚内のコラーゲンの増加、及びコラーゲンが修復されて入れ替わる速度は、より完全で、より健康的な、より魅力的外見の皮膚に寄与する。継続的な増殖及び真皮の再構築は、自然的に発生するが、残念ながら、これらのプロセスは、老化するにつれて遅くなる。コラーゲンはまた、皮膚が損傷した場合、例えば太陽からの放射線による、例えば炎症又は傷害の後にも、産生される。図１の円は、コラーゲンが形成される機序の一部、及びコラーゲン形成を追跡することができる方法を表す。ＭＭＰ及びサイトカイン活性のみが、コラーゲンの修復及び補充のサイクルを追跡するために役立つ、２つの測定可能な量である。
【００３９】
図３は、ｅｌｕｒｅの有効性に関する２重作用の生物学的モデル２０の概略図である。皮膚２１は、角質層３０、表皮３２、及び真皮３４の、３つの層に分類される。コラーゲン再構築、及び新たなコラーゲンの産生は、真皮層内で発生する。皮膚２１への通常の傷害２２は、定常的に発生し、通常の老化、ＵＶ傷害、ｐＨの変化、化学的傷害などが含まれる。通常の傷害２２は、コラーゲン２４の損傷を結果的にもたらす。同様に、通常の低レベルの炎症２６が発生して、サイトカイン、ＨＳＰ、及びＨＳＦの活性を結果的にもたらす。最終的には、反復される低レベル熱エネルギーは、ＭＭＰ活性３６の増大を生み出し、コラーゲン断片の産生を結果的にもたらす。熱の増大は、コラーゲンの形成及び修復を引き起こす、細胞活性の上方調節３８を引き起こす。機序３６及び機序３８の双方が、健常なコラーゲン２８の形成及び再構築を結果的にもたらす。
【００４０】
コラーゲンは、最大５０℃の融解温度を有するように測定されるが、修復サイクルは、より低いレベルでの熱の追加によって、変更及び増進することができる。分子内水素結合架橋の熱切断は、切断イベントと弛緩イベント（水素結合の再形成）との平衡によって作り出される。このプロセスを発生させるためには、外力を必要としない。結果として、分子間の応力が、分子内水素結合の熱切断によって作り出される。架橋分子の三次構造の収縮が、最初の分子間の収縮ベクトルを作り出す。ＲＦモデル加熱曲線を、図８Ａ、図８Ｂ、及び図９に示す。
【００４１】
真皮構造は、主としてコラーゲン１（図２Ａ及び図２Ｂの、５０）から構成される。コラーゲンは、線維芽細胞によって、一本鎖タンパク質の、プロコラーゲン５２として発現される。プロコラーゲン５２は、発現後、コラーゲン１（５０）へと切り取られ、「トロポコラーゲン」５４と呼ばれる３重螺旋配座へと折り畳まれる。このプロセスを、図２Ａ及び図２Ｂに示す。
【００４２】
コラーゲン架橋は、分子内（共有結合又は水素結合）の場合があり、又は分子間（共有結合又はイオン結合）の場合もある。老化の関数としてのコラーゲン変性の起因としては、熱エネルギー傷害、機械的傷害、コラゲナーゼ及びＭＭＰの速度に対するｐＨの影響、水分補給状態、及びコラーゲン細線維を「ジップ」するか、若しくは「アンジップ」してＭＭＰに消化されやすくすることができる、コラーゲン細線維の自然平衡の全般的な崩壊が挙げられる。これらは多数の傷害タイプを代表するが、全て、温度によって速度制御される。更には、通常のコラーゲン代謝回転サイクルは、＜３７℃〜４３℃の温度範囲内で調節することができる。
【００４３】
コラーゲン結合の切断はまた、より低速ではあるが、より低温でも発生する。低レベルの熱切断は、分子長の正味の変化を伴わずに結合が再形成される、弛緩現象に関連する頻度が高い。
【００４４】
真皮の再構築は、細胞レベル及び分子レベルで発生する、生物物理学的な現象である。コラーゲンの分子収縮又は部分的変性は、３重螺旋の熱不安定性結合を切断することによって、分子の長手方向軸を不安定化する、エネルギー源の適用を伴う。結果として、応力が生み出され、マトリックスの分子間結合を破断する。このことは、本質的には細胞外プロセスであるが、細胞収縮には、損傷区域内への、線維芽細胞の遊走及び増殖に関する、遅滞期が必要とされる。治癒反応は、一般的には、初期の炎症プロセスを伴い、このプロセスは、細胞残屑を処分する白血球による湿潤からなる。このプロセスの後に、傷害部位での線維芽細胞の増殖、及び／又は、沈着に利用可能なコラーゲンの最終的な増加を伴う代謝回転の増大が続く。線維芽細胞は、細胞の軟組織の収縮の発生源である、収縮性の筋線維芽細胞へと分化する。細胞収縮に続いて、コラーゲンが、緊縮した軟組織構造内の、静的な支持マトリックスとして配置される。この新生瘢痕マトリックスの、沈着及び後続の再構築が、審美的な目的に関して、軟組織の稠度及び幾何学形状を変更するための手段を提供する。
【００４５】
皮膚の表面外観の改善を最終的に達成するために、損傷を惹起して、カスケードを修復する、熱エネルギーの適用は、当該技術分野において既知であるが、現在利用可能な技術には、既知の欠陥が付随する。例えば、レーザー供給デバイスは、皮膚を貫通して、特定の発色団に結合し、選択的光熱融解と呼ばれるプロセスを通じて、様々な色及び色素を皮膚から除去する、特定の波長の光を使用する。レーザーは、大型かつ高価な資本設備であり、皮膚内の特定の問題点又は色のみを攻撃し、レーザー熱傷、瘢痕が生じやすく、色素沈着過剰及び／又は色素沈着減少を引き起こす可能性があり、使用者及び患者の眼外傷を結果的にもたらす恐れがある。強烈な広帯域光のシステムは、複数波長の光を放出し、選択的光熱融解を通じて、同様に皮膚の変色を改善し、皮膚の加熱を通じて、非特異的に皮膚のきめを改善する。このシステムもまた、大型かつ高価で、皮膚のきめ及びしわの改善は、最低限のものであり、皮膚の熱傷、色素沈着減少若しくは色素沈着過剰、及び瘢痕のリスクもまた存在する。一般的には、電磁エネルギーの適用は、表面の色素沈着因子及び真皮層の組成によって制限される浸透で、表皮を通過して達成される。
【００４６】
高周波技術もまた、皮膚処置の技術分野において既知である。ＲＦ技術は、電流を使用して真皮を加熱し、皮膚を堅固にして緊縮させるコラーゲン線維及びエラスチン線維の産生を刺激する。しかしながら、処置パラメータを最適化することができないために、この技術の現況においては、実質的な欠点が存在する。ＲＦ電流の適用は、他の熱エネルギー供給技術とは逆の温度勾配を、皮膚内に作り出す。ＲＦ電流の投与は、皮膚上の、ある程度の距離で離間して配置される電極間で伝導される。電流は、真皮を通って電極間で伝導されることにより、真皮の温度が、皮膚表面での温度よりも急速に上昇する。殆どの皮膚パラメータ測定デバイスは、皮膚表面の測定に関して設計されるため、真皮の過度の加熱が、認識される前に実施される恐れがある。
【００４７】
それゆえ、熱消光、機械的冷却、又は内部加熱を制御するように設計された他の技術の非存在下での、ＲＦ電流による処置は、当該技術分野において回避されている。
【００４８】
しかしながら、ゲノミクス及びプロテオノミクスの、バイオテクノロジーの近年の進歩を利用して、本発明者らは、ＲＦ電流の真皮投与の効果を評価するための方法を開発した。具体的には、本発明者らは、真皮のコラーゲンマトリックス、真皮の炎症及び再構築、並びに表皮分化に関与するとして同定される、潜在的な遺伝子のグループを選別した。結果として得られる遺伝子発現プロファイルに基づく、遺伝子シグネチャー及び遺伝子チップの構成要素を、特定のＲＦ電流処置のパラメータ、条件、及びレジメンに従う場合の、潜在的な遺伝子の示差的調節の、分析並びに精査によって判定した。
【００４９】
皮膚の層に対して、及び／又は皮膚の層内へと供給されるエネルギーは、例えば、高周波及びマイクロ波を含む、ＲＦエネルギーの形態とすることができる。例示的なＲＦエネルギーデバイスが、米国特許第６，８８９，０９０号、同第６，７０２，８０８号、同第６，６６２，０５４号、同第５，５６９，２４２号、同第５，７５５，７５３号、同第６，２４１，７５３号、同第６，４３０，４４６号、同第６，３５０，２７６号、同第５，９１９，２１９号、同第５，６６０，８３６号、同第６，４１３，２５５号、同第６，２２８，０７８号、同第５，３６６，４４３号、及び同第６，７６６，２０２号に開示されている。
【００５０】
本発明の方法は、第１のパーソナルケア組成物、及び所望により第２のパーソナルケア組成物を、哺乳類の皮膚の区域に適用する工程を含む。第１及び第２のパーソナルケア組成物は、様々な形態とすることができ、それらの形態としては、ローション、クリーム、セラム、フォーム、ゲル、スプレー、軟膏、マスク、スティック、保湿剤、パッチ、粉末、及び／又は拭き取り用品が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、第１のパーソナルケア組成物は、エネルギーの供給の前、及び／又は供給の間に適用される。代替的実施形態では、第２のパーソナルケア組成物は、第１の組成物の適用、及びエネルギーの供給の後に、適用される。所望により、本発明の方法は、第３のパーソナルケア組成物を皮膚に適用する工程を含み、この第３の組成物は、コンディショニング剤を含む。一実施形態では、第３のパーソナルケア組成物は、第１のパーソナルケア組成物の適用の前に適用される。好ましくは、第３のパーソナルケア組成物は、エネルギーの供給の少なくとも２４時間前に適用される。代替的実施形態では、第１のパーソナルケア組成物は、１日２回適用され、エネルギーは、１日１回、あるいは週１回、またあるいは月１回供給される。一実施形態では、第１のパーソナルケア組成物は、１日２回皮膚に適用され、エネルギーは、週１回皮膚に供給される。
【００５１】
第１、第２、及び第３のパーソナルケア組成物は、様々な成分を含み得、その成分の非限定的な例は、Ｔｈｅ  ＣＴＦＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｔｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００４）に見出すことができる。
【００５２】
本発明の組成物は、５０％〜９９．９％の、皮膚科学的に許容可能な担体を含み得る。本発明の担体は、エマルションの形態である。本明細書では、「エマルション」は、全般的に、水相及び油相を含む。油は、動物、植物、又は石油に由来するものとすることができ、天然又は合成のものとすることができ、シリコーンオイルを挙げることができる。エマルション担体としては、水中油型、油中水型、水中油中水型、及びシリコーン中水中油型のエマルションが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、皮膚科学的に許容可能な担体は、水中油型エマルション、及び代替的には、水中シリコーン型エマルションを含む。エマルションは、保湿剤、例えば、グリセリン、並びに非イオン性、カチオン性、及び／又はアニオン性の乳化剤を、更に含み得る。好適な乳化剤は、例えば、米国特許第３，７５５，５６０号（Ｄｉｃｋｅｒｔら）、同第４，４２１，７６９号（Ｄｉｘｏｎら）、及びＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ，Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，３１７〜３２４ページ（１９８６）に開示されている。
【００５３】
広範囲の量の本発明の組成物を採用して、皮膚の状態を改善することができる。皮膚に適用されるパーソナルケア組成物の量は、身体上の場所、及び所望の利益に応じて、変化し得る。例示的な量としては、０．１ｍｇ／ｃｍ2〜４０ｍｇ／ｃｍ2が挙げられる。１つの有用な適用の量は、０．５ｍｇ／ｃｍ2〜１０ｍｇ／ｃｍ2である。
【００５４】
温度変化が、皮膚内で、あるいは皮膚の表面に適用された組成物内で、同時に誘発され得る。この温度変化は、供給されたエネルギー自体によって誘発される、いずれの温度変化とも別のものである。例えば、皮膚を、エネルギーの供給の前に加熱することができ、あるいは、皮膚を、エネルギーの供給の前に、供給中に、及び／又は供給の後に、冷却することができる。
【００５５】
処置後の遺伝子パネル及び遺伝子シグネチャー、並びに広範囲の消費者調査を使用して、処置区域のサイズを最適化するレジメン領域を開発し、最適処置時間を開発した。当該技術分野における教示に反して、広域にわたるデバイスの使用は、最良の処置方法ではないことが見出された。過度に広い区域が処置される場合、最初の部分は、その部分の上を消費者が再び掃引する前に、冷えて元に戻る恐れがある。過度に小さい区域が処置される場合には、消費者は、過剰処置及び不必要な損傷の危険を冒す。更には、処置自体が、消費者にとって集中を要する作業であり、処置を控えめな量に分割することにより、消費者にとって、レジメンを完全に順守することが容易になる。同様に、デバイスと共に使用されるパーソナルケア組成物は、消費者が、そのパーソナルケア組成物を小さい区域に適用して、その区域を処置し、次いでいずれの残存するパーソナルケア組成物も除去することができる場合には、消費者にとって遙かに魅力的である。パーソナルケア組成物を、顔面全体上に、又は更に顔面の半分上に置くことは、処置経験を不快なものにする恐れがある。このことは同様に、消費者の順守性に悪影響を及ぼす。
【００５６】
ここで図１０を参照すると、消費者６２の目尻のしわ区域６０が、破線の円で特定されており、眼６４の上下で、各眼の外側の曲がり角に隣接して発生する。目尻のしわ区域６０が、ヒトの老化と共に、しわ及び微細な小じわの形成を生じやすく、環境的傷害を被ることは周知である。図１１は、領域Ａ（７０）を示し、領域Ａ内部の矢印は、デバイス（図示せず）に関する例示的な処置経路を明示するように示される。処置の回数は、上述されている。図１０は、消費者６２の同じ眼の上にあり、目尻のしわ区域６０に重なり合う、領域Ｂ（７２）を示す。例示的な矢印は、可能な処置の経路を説明するように示される。この方式で領域Ａ（７０）及び領域Ｂ（７３）を画定することによって、目尻のしわ区域６０は、領域Ａ及び領域Ｂの目尻のしわではない部分の、２倍の長さで処置される。このことは、処置を必要とする、消費者の顔面上の微細な小じわ及びしわの殆どが、目尻のしわ区域内にあるため、重要な発見である。
【００５７】
図１３及び図１４は、消費者６２の他方の眼６４上の、領域Ｃ（７４）及び領域Ｄ（７６）を示す。予想されるように、これらの処置区域は、領域Ａ及び領域Ｂと、実質的に同様であり、同じ方式で処置される。
【００５８】
代替的な処置プロトコルを、図１５及び図１６に示し、領域Ｅ（８０）及び領域Ｆ（８２）が、消費者６２上に示される。これらの「Ｃ」字形状の処置区域は、図１０の目尻のしわ区域６０を、各通過について１回のみ処置するが、このより長い「Ｃ」字形状の処置区域は、デバイスがもう１回通過するために戻る前に、処置される皮膚の各区域が、僅かに冷却されることを可能にする。それゆえ、消費者の快適性は向上するが、図１０の目尻のしわ区域６０は、１つの処置サイクルの間にのみ処置される。
【００５９】
第２のパーソナルケア組成物を、所望により、上述の方法と併せて使用することができる。第２のパーソナルケア組成物は、第１のパーソナルケア組成物及び熱的加熱デバイスを採用する、連続的な処置期間の合間に使用することができる。第２のパーソナルケア組成物は、好ましくは、第１のパーソナルケア組成物中に存在しない、少なくとも１種のスキンケア活性物質を含む。
【００６０】
真皮を通過するＲＦ電流の投与を含む、ＲＦの適用及び処置レジメンを、ＲＦ処置の所望の効果を最適化するために、初めて設計することができる。遺伝子発現データの分析及び精査によって、驚くべきことに、潜在的な遺伝子のデータセットは、真皮コラーゲンの増大、及び所望のホルミシス的ストレス誘導真皮再構築を、より問題となる炎症性サイトカイン損傷反応の非存在下で提供するように、処置レジメンを最適化する際に、特定の有用性を有する、３つのサブセットにまとめることが可能であることを見出した。本発明者らが知る限りでは、このことは、ＲＦ電流技術を採用する美容処置に、初めてゲノミクスが適用されていることを表す。発現プロファイルは、制御され最適化された投与が、所望の真皮再構築を開始させて持続させながらも、望ましくない生物学的影響に関連する従来の損傷を回避する、好ましいホルミシス的ストレスの提供を結果的にもたらすことを明らかにする。本発明は、これらの発見に基づく、新規な遺伝子チップ、遺伝子シグネチャー、選別の方法、及び最適化可能なレジメンを提供する。
【００６１】
潜在的な遺伝子として検討される遺伝子としては、真皮マトリックスの一体性に関連する遺伝子（ＦＢＮ１、ＦＢＬＮ１、ＴＮＸＢ、ＦＮ１、ＬＯＸＬ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＥＬＮ、及びＬＯＸＬ１）、真皮炎症開始再構築に関連する遺伝子（ＴＩＭＰ２、ＩＬ１Ａ、ＴＩＭＰ１、ＴＮＦ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ９、ＭＭＰ３、ＳＯＤ２、及びＩＬ１Ｂ）、及び表皮の障壁機能に関連する遺伝子（ＫＲＴ２、ＫＲＴ６Ａ、ＣＬＤＮ１、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＩＶＬ、ＤＲＴ１０、ＡＱＰ３、及びＫＲＴ１４）が挙げられる。これらの遺伝子に関する発現データの分析から導かれるサブセットを、表１（真皮マーカー）、表２（マトリックス再構築マーカー、すなわち、好ましいホルミシス的ストレスのイニシエータ）、及び表３（炎症性サイトカイン反応、すなわち、修復反応外の損傷のマーカー）に記載する。
【００６２】
遺伝子発現プロファイルは、１組の条件に対する細胞応答についての情報を提供する。遺伝子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を作製するための指令を含む。しかしながら、任意の所定の時点で、各細胞は、各細胞が保有する遺伝子のうちの一部のみから、ｍＲＮＡを作製する。遺伝子は、ｍＲＮＡを産生するために使用されている場合には、「オン」になっていると称され、そうでない場合には、「オフ」になっていると称される。用語「調節」とは、遺伝子の制御状態とは異なる転写状態を引き起こすことを指す。例えば、「上方調節」は、単にオンにすることを含む場合があり、又は転写速度を、コントロール若しくは参照条件から導かれる基準速度を超えて増大させることを指す場合もある。
【００６３】
発現プロファイルでは、２つ以上の実験条件で発現するｍＲＮＡの相対量を測定する。ｍＲＮＡのレベルの変化は、そのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の必要性の変更を示唆する。例えば、酵素触媒又は酵素補助因子の転写の増大は、細胞環境内の、その酵素の基質の濃度の上昇に応答して観察される。
【００６４】
全般的には、遺伝子発現プロファイルは、実験条件の変化の下で、顕著な差異を明示する遺伝子を含む。これは、典型的には、ゲノム全体を含み得る何らかのデータセットのサブセットである。１つのタイプの細胞に関しては、その発現パターンの組み合わせが、所定の条件に対して独自に特性的である遺伝子のグループが、その条件の遺伝子シグネチャーを構成する。遺伝子シグネチャーは、例えば、特定の処置から利益を得ることができる患者を選択するために、又は所望のシグネチャーを最大化する処置プロトコルを設計するために、使用することができる。
【００６５】
潜在的な遺伝子のデータセットに関する、遺伝子発現プロファイルは、マイクロアレイを使用して判定することができる。例示的なｃＤＮＡマイクロアレイが市販されており、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，Ｃａｌｉｆ．）、Ｎａｎｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、及びＰｒｏｔｏｇｅｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）などの企業から購入することができる。本主題の方法で採用される発現プロファイルを生成するために同様に実践することができる、具体的なハイブリダイゼーション技術としては、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，１４３，８５４号、同第５，２８８，６４４号、同第５，３２４，６３３号、同第５，４３２，０４９号、同第５，４７０，７１０号、同第５，４９２，８０６号、同第５，５０３，９８０号、同第５，５１０，２７０号、同第５，５２５，４６４号、同第５，５４７，８３９号、同第５，５８０，７３２号、同第５，６６１，０２８号、同第５，８００，９９２号、並びに国際公開第９５／２１２６５号、同第９６／３１６２２号、同第９７／１０３６５号、同第９７／２７３１７号、欧州特許第３７３２０３号、及び同第７８５２８０号で説明される技術が挙げられる。これらの技術では、全般的には、その発現が分析評価されている表現型決定遺伝子のそれぞれに関するプローブを含む、「プローブ」核酸のアレイを、上述のような標的核酸と接触させる。接触は、ハイブリダイゼーション条件、例えば、厳密なハイブリダイゼーション条件の下で実施し、次いで、非結合の核酸を除去する。結果として生じる、ハイブリダイズされた核酸のパターンは、探索された遺伝子のそれぞれに関しての、発現に関連する情報を提供し、その発現情報は、遺伝子が、典型的には、どのレベルで発現するか否かに関するものであり、この発現データ、すなわち発現プロファイルは、定性的及び定量的の双方とすることができる。あるいは、発現プロファイルは、定量的ＰＣＲによって、又はｍＲＮＡを測定するための他の定量方法によって、判定される。
【００６６】
本発明の一実施形態は、哺乳類の皮膚の組織容積内での、その組織容積を処置温度まで加熱するために十分な高周波電流の発生に応答して、哺乳類の皮膚内で調節される遺伝子を含む、遺伝子パネルを提供する。少なくとも１つの遺伝子は、表１又は表２から選択され、少なくとも１つの遺伝子は、表３から選択される。具体的な実施形態では、少なくとも１つの遺伝子は、３つの表のそれぞれから選択される。本発明による全ての遺伝子パネルは、少なくとも１つの遺伝子を表３から含むように想到されるが、これは、それらの遺伝子の発現の変化の欠如により、「悪性の」損傷応答の欠如が指示されるためである。プローブは、所望の効果に関して処置レジメンを設計、選別、適合、若しくは監視する際の有用性を有する、極めて特異的なマイクロアレイを構築するために、又は処置される被験者における処置レジメンの検証のために、本発明の遺伝子チップを構成する各遺伝子を標的とするように設計することができる。本発明による遺伝子パネルを構成する遺伝子を、ハイブリダイズして検出することが可能な、１組の固定化核酸プローブを含む、マイクロアレイが想到される。
【００６７】
本明細書で使用するとき、「プローブ」とは、そのプローブに相補的な配列を有する核酸と、特異的にハイブリダイズすることが可能な、天然に存在するか、若しくは合成的に産生されるかのいずれかである、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又はＤＮＡ分子を指す。本発明のプローブは、具体的には、ＤＮＡマイクロアレイ基材内の固体支持体に取り付けられる、オリゴヌクレオチドを指す。プローブは、一本鎖又は二本鎖のいずれかとすることができる。このプローブは、典型的には、１５〜２５の、又はそれよりも多くのヌクレオチドを含むが、より少ないヌクレオチドを含む場合もある。本明細書でのプローブは、特定の標的核酸配列の種々の鎖と相補的であるように選択され、それゆえ、１組の既定条件の下で、対応する標的鎖と特異的にハイブリダイズすることが可能であるように、十分に相補的でなければならない。それゆえ、プローブ配列は、標的の正確な相補的配列を反映する必要はない。例えば、非相補的ヌクレオチド断片を、プローブの５'末端又は３'末端に取り付け、プローブ配列の残部を、標的鎖に相補的にすることができる。あるいは、プローブ配列が、標的核酸の配列との十分な相補性を有して、その標的核酸の配列と特異的にアニールするのであれば、非相補的塩基又はより長い配列を、そのプローブ内に散在させることができる。
【００６８】
本発明の別の実施形態は、哺乳類の皮膚に利益を提供するための方法を含む。この利益は、皮膚に損傷を与える炎症性サイトカイン反応の非存在下で、哺乳類の皮膚の真皮層内に、コラーゲン形成及び／又は真皮の再構築を誘導することを含み、この方法は、哺乳類の皮膚の組織容積内で、その組織容積を処置温度まで加熱するために十分な処置サイクルにわたって、高周波電流を発生させる一方で、表３に記載される遺伝子の発現の上方調節を回避することを含む。ＲＦ電流は、１つの処置サイクル内で複数回数発生させることができる。
【００６９】
本明細書で使用するとき、「処置する」及び「処置」などの用語は、全般的には、標的の生物学的反応によって支えられる、所望の美容効果又は審美的効果を獲得することを指す。「処置」は、本明細書で使用するとき、哺乳類、具体的にはヒトにおける処置を包含し、（ａ）美容上望ましくない皮膚の状態、例えば、微細な小じわ、しわ、色素沈着過剰しみ、並びに経時的若しくは環境的老化、又は皮膚に対する衝撃から結果的に生じる他の皮膚の不規則性の発達を、防止あるいは回避すること、（ｂ）美容上望ましくない皮膚の状態の出現を、阻止、寛解、又は遅延すること、（ｃ）美容上望ましくない皮膚の状態を、逆行又は退行させることを含む。
【００７０】
本発明による１つ以上の処置サイクルを、処置期間の全体にわたって遂行することができる。処置サイクルは、所望の反応を生じさせるために必要な限り、持続時間を短くすることができる。具体的な実施形態では、処置サイクルは、約１分間以下であるが、他の具体的な実施形態では、処置サイクルは、約１分間よりも長い。他の具体的な実施形態では、処置サイクルは、約１〜約６分間持続し、他の実施形態では、約２〜約６分間持続する。本発明による処置期間は、１つ以上の処置サイクルを含み、具体的な実施形態では、少なくとも１週間であり、少なくとも１つの処置サイクルを含む。他の具体的な実施形態では、処置期間は、１週間〜１２週間である。より具体的な実施形態では、処置期間は、３週間〜８週間である。特定の実施形態では、処置期間の各週は、１〜６つの処置サイクルを含むが、このことは、処置されている個体の独自の特徴と共に変化し得ることが、当該技術分野において理解されよう。
【００７１】
一般的には、ＲＦ電流の投与は、皮膚表面よりも真皮内で、より高い温度を生じさせるが、皮膚の温度は、その表面で、最も簡便かつ非侵襲的に測定される。それゆえ、特定の実施形態では、ＲＦ電流が通過して伝導される組織容積の温度として本明細書で定義される、処置温度は、約４５℃未満の、組織容積の上の皮膚表面の温度を生じさせる。より具体的な実施形態では、処置温度は、約３７℃〜約４３℃の、組織容積の上の皮膚表面の温度を生じさせる。
【００７２】
本発明による所望の利益は、ＲＦ電流が通過して伝導される組織容積から採取されたサンプルから、ｍＲＮＡを抽出し、表１及び／又は表２から選択される少なくとも１つの遺伝子、並びに表３から選択される少なくとも１つの遺伝子からなる遺伝子パネルの、発現プロファイルを判定することによって、評価することができる。利益が指示されるのは、表３から選択される遺伝子の発現が実質的に変化しないことと組み合わされた、表１及び／又は表２から選択される遺伝子の上方調節を、発現プロファイルが反映して、利益が提供されていることを指示する場合である。
【００７３】
全般的には、本発明による遺伝子の調節は、発現倍率変化データに反映される。条件間で示差的に発現する遺伝子を同定する、マイクロアレイベースの実験の分析のための、多くの方法が存在し、その方法の選択が、同定される遺伝子のセットに影響を及ぼし得ることは、当該技術分野において既知である。倍率変化は、最も再現可能な結果を提供すると考えられる。倍率変化は、平均対照観測結果と平均処置観測結果との比率として（又は、平均ログ対照データと平均ログ処置データとの差異）として定義することができる。１の倍率変化は、それゆえ、対照観測結果を超える変化がないことを表す。正の倍率変化は、本明細書では上方調節と称される、一定の期間にわたる発現の増大を指示し、負の倍率変化は、本明細書では下方調節と称される、一定の期間にわたる発現の減少を指示する。倍率変化の有意性は、通常の統計的方法によって判定することができる。
【００７４】
本発明の特定の態様によれば、利益は、発現プロファイルに応答して、処置温度及び／又は他の処置パラメータを調整することによって、最適化することができ、表１及び／又は表２から選択される遺伝子の上方調節が最大化される一方で、表３から選択される遺伝子の発現は、実質的に変化しないように維持される。本発明の処置レジメンは、維持処置を含み得、利益は、１つ以上の維持処置によって、処置期間を超えても維持され、各維持処置は、少なくとも１つの維持サイクルを含む。
【００７５】
本発明の皮膚処置レジメンは、手持ち式ＲＦ電流供給デバイスを介した、電気的に伝導されるＲＦ電流による、熱エネルギーの適用を想到する。本発明による好ましいＲＦ供給デバイスは、皮膚上の、互いにある程度距離を置いて配置される２つの電極間で、電気的に伝導される電流として、ＲＦを供給する。本発明の利益を生じさせる供給デバイスは、電磁スペクトルの可視光線又は赤外線周波数での電磁放射線の非存在下、及び組織容積に向けて方向付けられる、補足的な単色光源若しくは多色光源の非存在下、並びに機械的冷却の非存在下で、高周波電流を、組織容積を通過して伝導させる。
【００７６】
本発明の特定の実施形態は、本発明による利益を提供する際の、任意のエネルギー供給デバイス又はエネルギー供給技術の組み合わせの有効性を評価するための、能力を提供する。それゆえ、皮膚を加熱することによって、皮膚に利益を提供するように設計された、エネルギー供給デバイスの、処置有効性を評価するための具体的な方法は、エネルギー供給デバイスの適用によって皮膚を処置することと、処置された皮膚のサンプルからｍＲＮＡを抽出することと、本発明による遺伝子パネルに関する発現プロファイルを作成することと、を含む。以下の実施例３で説明されるように、ＲＦ電流供給デバイスは、本発明による発現プロファイルを生み出すようにダイヤルを合わせることが可能な、パラメータ仕様許容範囲を含んで存在する。好適なデバイスは、Ｓｙｎｅｒｏｎによって製造されている。本発明のゲノム反応目標を達成するように設計されていないデバイスの一例は、ＳＴＯＰ（商標）の商標名で欧州で流通される、Ｕｌｔｒａｇｅｎ  Ｌｔｄによる製造の、手持ち式個人使用ＲＦ供給デバイスである。このデバイスもまた、比較を目的として実施例３で説明されるが、表１及び表２内の遺伝子の上方調節を引き起こすことはできない。このデバイスの仕様は、より大きい皮膚区域にわたって適用される、実質的により小さい熱エネルギーの提供に基づくレジメンに対応するように、設計されており、本発明によるデバイス及びレジメンによって達成される、好ましい相同異質形成効果を達成するために必要とされるレベルには到達し得ない。
【００７７】
本発明の別の実施形態によれば、顔面皮膚処置レジメンを選別する方法が提供される。この方法は、皮膚に損傷を与える炎症性サイトカイン反応を刺激することなく、哺乳類の皮膚にコラーゲン及び／又は真皮の再構築の利益を提供する際の、有効性に関して選別される。この方法は、全般的には、処置レジメンに従って顔面皮膚を処置することと、処置された顔面皮膚のサンプルからｍＲＮＡを抽出することと、本発明による遺伝子パネルに関する遺伝子発現プロファイルを作成することと、その遺伝子発現プロファイルを参照プロファイルと比較することと、その発現プロファイルが、表１及び／又は表２から選択される遺伝子の上方調節、並びに表３から選択される遺伝子の調節の実質的な欠如を反映する場合に、その顔面処置レジメンが有効であることを判定することと、を含む。具体的な実施形態では、顔面皮膚処置レジメンは、高周波電流発生デバイスを使用して、顔面皮膚の第１組織容積を通過するパルス状高周波電流を、処置サイクルにわたって発生させることを含む。この処置レジメンは、高周波電流発生デバイスを移動させて、顔面皮膚の第２組織容積を通過するパルス状高周波電流を、処置サイクルの間に発生させることを含み得る。
【００７８】
選別方法では、皮膚の区域は、標的処置区域の特性、具体的には、顔面の特性との一致に関して選択される。美容上脆弱な顔面皮膚の区域としては、眼窩周囲区域及び口周囲区域が挙げられる。それゆえ、耳周囲皮膚として知られる、耳の周りの顔面皮膚は、標的処置区域に構造が類似するが、簡単な生検手技から結果的にもたらされ得る瑕瑾の場合には、容易に視認されない。それゆえ、生検が必要とされる本発明の態様では、必要なサンプルは、処置された耳周囲皮膚の生検によって採取され、参照は、処置前又は非処置の耳周囲皮膚の生検によって採取される。全般的には、処置前又は非処置の耳周囲参照皮膚は、処置された耳周囲皮膚に実質的に隣接する皮膚を含む。極めて具体的な実施形態では、表１及び／又は表２から選択される遺伝子の発現プロファイルは、統計的に１よりも大きい、参照を超える倍率変化を明らかにする。
【００７９】
明らかに、本発明は、顔面皮膚以外の皮膚に利益を提供することができるが、しかしながら、顔面皮膚は、経時的並びに環境的な老化及び損傷の双方の影響を最も容易に顕在化し、身体の他の区域よりも、初期には、より薄く、より脆弱であるという点で、最大の美容処置の課題を提起することから、例示的な実施例で強調される。更には、顔面皮膚は、美容処置技術の消費者にとっては、極めて審美的に重要な区域である。
【００８０】
特定の実施形態では、ＲＦ電流の適用によって提供される利益は、パルス状高周波電流の発生と併せた、顔面皮膚に対する美容活性物質又は組成物の適用によって、補強又は増進させることができる。この活性物質又は組成物は、本発明による遺伝子発現プロファイルに対する、増強効果又は相乗効果を有し得る。好適な美容活性物質の非限定的な例としては、レチノールプロピオナート及びその誘導体、カフェイン、ヒアルロン酸、並びに一般的には植物抽出物が挙げられる。
【００８１】
本発明による選別方法は、処置サイクル、処置期間、処置温度、及び供給デバイスに関して、本発明による処置方法と実質的に同じパラメータを含み、それらのパラメータは、所望の選別許容範囲に調整される。
【００８２】
本発明の更なる実施形態によれば、美容上の皮膚の利益を同定するために好適な、示差的に発現する遺伝子の、遺伝子シグネチャーが提供される。この利益は、皮膚に損傷を与える炎症性サイトカイン反応の非存在下で、哺乳類の皮膚の真皮層内に、コラーゲン形成及び／又は真皮の再構築を誘導することを含み、遺伝子シグネチャーは、表１、表２、及び表３のそれぞれから選択される少なくとも１つの遺伝子を含む。一般的には、遺伝子シグネチャーは、特定の特性、形質、又は生物学的機能に関連する、遺伝子のデータセットから得られる、遺伝子のサブセットである。遺伝子シグネチャーは、遺伝子データセットの全て、又は一部から得ることができ、本発明によるシグネチャーは、少なくとも約２つの遺伝子からの、又は最大でデータセット全体を構成する数までの任意数の遺伝子からの情報を、含み得る。データセットのサブセットを使用する場合、そのサブセットは、上方調節される遺伝子、下方調節される遺伝子、実質的に調節されない遺伝子、又はそれらの組み合わせを含み得る。
【００８３】
以下の実施例は、本発明の様々な実施形態の特定の特徴及び有利点を説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８４】
実施例１：処置プロトコル
この実施例は、ゲノム的評価及び組織学的評価を遂行することを目的とする、顔面皮膚の耳周囲区域の処置を説明する。それゆえ、全ての処置は、制御目的のために、臨床設定内で、専門技術者によって投与される。処置は、処置区域の範囲内の４つの領域に対して、各領域当り４分間の合計１６分間で、６週間にわたり週３回で投与される。このプロトコルは、一方の側の耳周囲領域にのみ、この処置が適用され、対応する他方の側の耳周囲領域には、ゲル及び電力未使用デバイスからなる偽処置が適用される、被験者内制御設計における、分割顔面／頚部研究によるものである。処置は、各４分間の処置の間、４０〜４３℃の標的皮膚表面温度が、最初の１分以内に到達されて、超過せずに維持されることを確実にするように、熱画像カメラで監視される。
【００８５】
処置部位は、耳の真下に、中心を合わせて配置される。この部位は、幅が約３．８１ｃｍ（１．５インチ）、及び長さが約１０．２ｃｍ（４インチ）である。処置される皮膚の区域が、過度に乾燥しているか、又は過度に熱くなる場合には、別途にゲルを適用することができる。被験者の顔面及び頚部は、清潔であり、ローション、香料などを含まない。毛髪は、処置区域から、後方にクリップ留めされる。
【００８６】
デバイス処置：
１．１回のポンプ（約１．４ｇのゲル）を処置部位に適用して、拭うことなく均等に塗り広げる。被験者によって、皮膚が過度に熱くなると表現される場合には皮膚を冷却するために、処置の間に、処置区域の上方の頬に対する追加のゲルのポンプを、必要に応じて適用することができる。
２．デバイスのスイッチを入れ、４分間のタイマーを設定する。
３．デバイスのアプリケータヘッド部を皮膚に適用し、前後運動及び軽い接触を使用して、処置部位に沿って移動させる。処置区域全体にわたってデバイスのヘッド部を操作する間、接続性を維持する。皮膚との適切な接触は、接触を指示する赤色を点滅し続けるはずの、アプリケータ上のレンズによって指示される。
４．処置の間、熱カメラ画像を監視する。３０〜６０秒以内に、処置区域内の皮膚は、４０〜４３℃の最適温度に到達する。熱画像上の色彩パターンが、温度を指示する。全般的には、デバイスが温まるにつれて、皮膚全体にわたってアプリケータを迅速に移動させ、昇温による不快感を回避する。処置が継続するにつれて、移動を減速させて、理想的な温度を維持する。被験者は、デバイスを温かく感じるが、被験者を焼損することがないように、警告される。
５．熱画像が、赤一色の区域を示す場合には、温度は４３℃を超過している。温度は、前後運動の処置速度を増大させることによって、処置区域のサイズを若干増大させることによって、前後運動と８の字パターンとを交互に行なうことによって、又はこの偶発事象に備えて頬上に付着させた別途のゲルに、アプリケータヘッド部を接触させることにより、より多くのゲルを追加することによって、制御される。
６．処置区域が、最適温度に到達することができない場合には、又は処置区域が冷める場合には、処置区域の大半が標的温度となるまで、前後運動を減速させるべきである。
【００８７】
実施例２：生検プロトコル
この実施例は、本明細書に開示される発明及び支援データの特定の態様による、評価目的及び監視目的に関するサンプルを収集するために使用される、比較的寛容な生検プロトコルを説明する。
【００８８】
臨床生検研究を、３０人の成人女性被験者に、ＲＦ電流供給デバイスを使用して遂行した。処置は、顔面皮膚の耳周囲（耳の周り）領域内に提供した。耳周囲皮膚は、好適な眼窩周囲の代用物として、美容技術分野において既知である。処置は、Ｓｙｎｅｒｏｎ  Ｖ８デバイス（実施例３を参照）、及び標的プロファイルとしての４分間の加熱プロファイルを使用して、臨床的に投与した。被験者は、合計６週間にわたり、週３回で処置を受けた。生検を遂行して、処置の関数としての皮膚組織構造を精査し、ゲノミクスプロファイルを作成した。
【００８９】
生検手技：
１つの４ｍｍ生検を、頚部の右側及び左側の双方からの耳周囲区域（この区域は、耳の真下に位置する）から採取した。３０ゲージ滅菌針を使用して、エピネフリンを有する、麻酔剤含有２％キシロカインを、生検される皮膚の直下に注入する。その区域が無感覚であることを、被験者が指示した後、適切なサイズのパンチ生検を、標準的な防菌技術を使用して収集し、続いて縫合閉塞する。塩化アルミニウムの２０％水溶液を、生体恒常性の点から、必要に応じて使用する。生検に続いて、パンチ部位を、通常の治癒に関して監視し、７日後に縫合糸を除去する。
【００９０】
生検後サンプルの取り扱い：
生検組織を、一方が遺伝子発現試験に関し、他方が組織学的評価に関する、２つの別個のサンプルに分割する。サンプルは、角質層から真皮に引いた線と平行な線で、均等に半分に分割される。サンプルの取り扱いは、業界標準に従う。
【００９１】
実施例３：ｍＲＮＡの抽出及び分析
この実施例は、遺伝子チップ、遺伝子シグネチャー、及びＲＦ供給レジメン設計を導く生物学的モデルの発見を含めた、本発明の特定の実施形態を支える、ＲＮＡバイオマーカーの同定及び分析を説明する。
【００９２】
実施例２による４ｍｍ生検を、上記のように耳の真下の顔面／頚部の両側から、１回は最終処置後２４時間、１回は処置後４週間で、２回採取した。
【００９３】
生検サンプルを、１．５ｍＬの組織貯蔵試薬（ＲＮＡｌａｔｅｒ（登録商標）溶液、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を収容する、２ｍＬ遠心管に移した。管を、２〜８℃で一晩冷蔵した。貯蔵試薬を除去して、サンプルを、処理するまで、−８０℃で冷凍庫内に置いた。処理の直前に、サンプルを冷凍庫から取り出し、フェノール及びグアニジンイソチオシアネートの単相溶液１．５ｍＬ（ＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））、並びに１つの３ｍＭタングステン炭化物ビード（３ｍＭタングステン炭化物ビード、Ｑｉａｇｅｎ、カタログ＃６９９９７）を、各管に添加した。サンプルを、ミキサーミル（Ｑｕｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．）内で、４回の、３０／秒での３分間の振盪で、各回の後でアダプタを反転させて、均質化した。サンプルを、１２，０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離させ、壊死組織片を除去した。次いで、上澄みを、予めスピンさせた位相固定ゲル重管（Ｐｈａｓｅ  Ｌｏｃｋ  ｇｅｌ  ｈｅａｖｙ  ｔｕｂｅｓ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、カタログ＃００３２−００５−１５２）に移し、３００μＬのクロロホルム（Ｓｉｇｍａ）を添加して、過剰にボルテックスさせずに、管を強く振盪した。サンプルを、１２，０００ｒｐｍで１０分間、遠心分離させ、その後に、上澄みを、新たな２ｍＬ遠心管内に移した。
【００９４】
７０％エタノール８００μＬを添加することによって、結合状態を調整し、管をボルテックスして混合し、次いで短時間スピンした。８３０ｍＬのサンプルを、真空マニホールド内のＲＮｅａｓｙミニスピンカラムに移して、真空を適用した。残余のサンプル（約２１．１ｍｍ（８３０ミル）を、同じＲＮｅａｓｙカラム上に移して、真空を適用した。７００μＬ及び５００μＬの緩衝剤ＲＷ１を、ＲＮｅａｓｙカラム上に連続的にピペット操作し、各すすぎの後に真空を適用することによって、汚染物質を除去した。
【００９５】
ＲＮｅａｓｙスピンカラムを、新たな０．０５ｍｍ（２ミル）収集管に移し、この管を１４，０００ｒｐｍで２分間、遠心分離させ、カラムを新たに１．５ｍＬ収集管内に移した。残留エタノールを、各カラムの内側隆起部から吸引した。３０μＬの予熱されたＲｎａｓｅフリー水を、ＲＮｅａｓｙ膜上に直接ピペット操作し、この膜を５分間インキュベートして、次いで１４，０００ｒｐｍで２分間、遠心分離させた。次いで溶離液を収集して、直ちに使用可能な水中ＲＮＡを提供した。
【００９６】
分離の後、ＲＮＡの収量を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ．）より入手可能な、ＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏ  ＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）キット＃５０６５−４４７６を使用して判定した。ＲＮＡを、１工程ＲＴ−ＰＣＲ法によって評価した。ＲＴ−ＰＣＲバイオマーカー分析に関しては、ＲＮＡを、５ｎｇ／ｗｅｌｌの最終濃度に希釈した。
【００９７】
精製ＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲキット（ＱＳｃｒｉｐｔ（商標）Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  Ｆａｓｔ  ＭＧＢ  ｑＲＴ−ＰＣＲキット、Ｑｕａｎｔａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）より入手可能）を使用して、ｃＤＮＡに変換した。５００ナノグラムのＲＮＡを、次いで、ＱＳｃｒｉｐｔ酵素／緩衝剤混合物と混合し、キットの使用説明書に従って、サーマルサイクラーにかけた。得られたｃＤＮＡの１μＬを、次いで、Ｑｕａｎｔａ  Ｐｅｒｆｅｃｔａ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘと混合し、以下の遺伝子に関する、予め検証されたプライマーを含む、カスタムアレイプレート（Ｃｕｓｔｏｍ  ＲＴ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（商標）ＰＣＲアレイ、ＳＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｒｐ．（Ｆｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）より入手可能）の全体にわたって分取した：ＫＲＴ２、ＫＲＴ６Ａ、ＣＬＤＮ１、ＬＯＲ、ＦＬＧ、ＩＶＬ、ＫＲＴ１０、ＡＱＰ３、ＫＲＴ１４、ＦＢＮ１、ＦＢＮＬ１、ＴＮＸＢ、ＦＮ１、ＬＯＸＬ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＥＬＮ、ＬＯＸＬ１、ＴＩＭＰ２、ＩＬ１Ａ、ＴＩＭＰ１、ＴＮＦ、ＭＭＰ１、ＭＭＰ９、ＭＭＰ３、ＳＯＤ２、及びＩＬ１Ｂ。次いで、このアレイプレートを封止して、サーマルサイクラー（ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｕｐｇｒａｄｅ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）製）にかけた。
【００９８】
データ分析を、ＳＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ．）によって提供される、データ分析ソフトウェアを使用して実行した。
【００９９】
上記の２７の編成遺伝子に関する、２４時間及び４週間の標的時間での、発現倍率変化データを、それぞれ、上記の図４Ａ、４Ｂ、及び図６Ａ、６Ｂに記載する。真皮マトリックスに関連する遺伝子を、９０及び９１としてグループ化し、真皮炎症再構築に関連する遺伝子を、９２及び９３としてグループ化し、表皮分化に関連する遺伝子を、９４及び９５として共にグループ化する。例示的な遺伝子に関する倍率変化データは、図５Ａにコラーゲン１Ａ１を、図５Ｂにエラスチンを、また図７Ａにコラーゲン１Ａ１を、図７Ｂにエラスチンを記載する。多くのコラーゲン１Ａ１遺伝子とエラスチン遺伝子との間の、共調節に留意されたい。
【０１００】
倍率変化データを、精査及び分析して、グルーピングを施すと、驚くべきことに、処置に応答する調節を殆ど明示しなかった遺伝子を分離した場合（ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、及びＴＮＦ）、それらの遺伝子は、炎症性サイトカイン反応遺伝子を含んでおり、その一方で、コラーゲンの合成及び代謝回転、並びに真皮再構築に関連する遺伝子は、処置条件下で上方調節されることが見出された。倍率変化データに基づいて選択される遺伝子を、したがって、以下の表１、表２、及び表３に作表する。
【０１０１】
更には、驚くべきことに、２４ヶ月で存在した、遺伝子発現に対する処置レジメンの好ましい影響は、標的外の１ヶ月で、殆ど衰えずに維持されることが見出された。これよりも長い期間にわたって、ゲノム効果を維持するためには、維持処置が望ましい場合がある。
【０１０２】
遺伝子発現プロファイルは、翻訳産物での下流の上方調節を反映すると想到される。観察される倍率変化は、比較的低い場合があるが、長期間にわたる、特定のタンパク質及び酵素の合成での持続的な上方調節は、皮膚に対して、実質的に長続きする美容上の利益をもたらすと考察される。
【０１０３】
実施例４パーソナルケア組成物
以下は、本発明のデバイスと共に使用するための、例示的なパーソナルケア組成物である。
【０１０４】
【表１】
2013524946.tif 000002
【０１０５】
本明細書に開示される寸法及び値は、記述された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解するべきではない。むしろ、特に指定のない限り、そのような各寸法は、記述された値、及びその値の周辺の機能的に同等の範囲の双方を意味するものとする。例えば、「４０ｍｍ」として開示される寸法は、「約４０ｍｍ」を意味するものとする。
【０１０６】
本発明の「発明を実施するための形態」に引用される全ての文書は、関連部分で、参照により本明細書に組み込まれ、いずれの文書の引用も、本発明に対する先行技術であることを容認するものとして解釈されるべきではない。本文書中の用語の、いずれかの意味又は定義が、参照により組み込まれる文書中の用語の、いずれかの意味又は定義と矛盾する範囲では、本文書中でその用語に割り当てられる意味又は定義に準拠するものとする。
【０１０７】
本発明の具体的な実施形態が例示され説明されているが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、他の様々な変更及び修正を実施できることが、当業者には自明であろう。それゆえ、本発明の範囲内にあるそのような全ての変更及び修正を、添付の「特許請求の範囲」で扱うものとする。
【０１０８】
【表２】
2013524946.tif 000003
【０１０９】
【表３】
2013524946.tif 000004
【０１１０】
【表４】
2013524946.tif 000005
【図１】
2013524946.tif 000006
【図２Ａ】
2013524946.tif 000007
【図２Ｂ】
2013524946.tif 000008
【図３】
2013524946.tif 000009
【図４Ａ】
2013524946.tif 000010
【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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