(57)【要約】  長時間作用型インスリン化合物、速効型インスリン化合物、ニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含むインスリン製剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
・  アシル化インスリンまたはそのアナログ、
・  ヒトインスリンまたはそのアナログ、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
【請求項２】
アシル化インスリンまたはそのアナログが、親インスリン分子のB鎖中の位置のLys残基のε-アミノ基がアシル化されたインスリンである、請求項1に記載のインスリン製剤。
【請求項３】
親インスリンが、ヒトインスリン;desB1ヒトインスリン;desB30ヒトインスリン;GlyA21ヒトインスリン;GlyA21 desB30ヒトインスリン;AspB28ヒトインスリン;ブタインスリン;LysB28 ProB29ヒトインスリン;LysB3 GluB29ヒトインスリンおよびAspB28 desB30ヒトインスリンからなる群から選択される、請求項2に記載のインスリン製剤。
【請求項４】
アシル化インスリンが、NεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリンである、請求項1から3のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項５】
アシル化インスリンが、NεB29-ミリストイル(desB30)ヒトインスリンである、請求項1から4のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項６】
インスリンアナログが、B28Aspヒトインスリンである、請求項1から5のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【請求項７】
インスリンアナログが、B28LysB29ProヒトインスリンおよびB3LysB29Gluヒトインスリンからなる群から選択される、請求項1から6のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項８】
ヒトインスリンまたはそのアナログおよびアシル化インスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約10.0mMまでの量で存在する、請求項1から7のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項９】
アシル化インスリンまたはそのアナログが、約70%で存在し、ヒトインスリンまたはインスリンアナログが、約30%で存在する、請求項1から8のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項１０】
ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその組合せからなる群から選択される、請求項1から9のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項１１】
ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドである、請求項1から10のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項１２】
約1mMから約120mMまでのアルギニンを含む、請求項1から11のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項１３】
緩衝剤および/または金属イオンおよび/または安定化剤および/または保存剤および/または等張化剤をさらに含む、請求項1から12のいずれかに記載のインスリン製剤。
【請求項１４】
治療を必要とする患者に、請求項1から13のいずれかに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減する方法。
【請求項１５】
請求項1から13のいずれか一項に記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
【請求項１６】
ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防、ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、請求項1から13のいずれか一項に記載のインスリン製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、長時間作用型インスリン化合物、速効型(fast-acting)インスリン化合物、ニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含むインスリン製剤に関する。本発明はまた、持続性作用プロファイルおよび即効性作用プロファイルの両方を有するインスリン製剤を製造するための方法ならびに糖尿病の治療のための医薬組成物を製造するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
真性糖尿病は、グルコースを利用する能力が部分的にまたは完全に失われている代謝障害である。全人口の約5%が糖尿病に罹患しており、その障害は流行病と言えるほどまでになっている。
【０００３】
1920年代におけるインスリンの導入以来、糖尿病の治療において継続的な進歩がなされてきた。高血糖レベルを避ける一助とするために、多くの場合、糖尿病患者は頻回注射療法を実施し、それによって、インスリンを食事のたびに投与する。糖尿病患者は、数十年の間インスリンを用いて治療されるため、安全で、生活の質を向上させるインスリン製剤を主に必要としている。市販のインスリン製剤の中で、即効型(rapid-acting)、中間作用型および持続性作用型の製剤が挙げられる。
【０００４】
現在、1型糖尿病および2型糖尿病の両方の糖尿病の治療は、以前にも増して、いわゆる強化インスリン治療に頼っている。このレジメンによると、患者は、基礎インスリン必要量を補うための長時間作用型インスリンの1日1回または2回注射を含み、食事に関連するインスリン必要量を補うための即効型インスリンのボーラス注射で補充される、頻回インスリン注射を用いて治療される。
【０００５】
真性糖尿病の治療において、レギュラーインスリン(Actrapid(登録商標)など)、イソフェンインスリン(NPHと称される)、インスリン亜鉛懸濁液(Semilente(登録商標)、Lente(登録商標)およびUltralente(登録商標)など)ならびに二相性イソフェンインスリン(NovoMix(登録商標)など)などの、インスリンの多くの種類の医薬製剤が提案され、使用されている。作用の特定のプロファイル、すなわち速効型または持続性作用型に設計された、ヒトインスリンアナログおよび誘導体も開発されている。長時間作用型インスリンアナログであるデグルデクは、現在、フェーズ3a臨床試験中(in fase 3a clinic)であり(Begin(商標))、デグルデクおよび速効型インスリンアスパルトの二相性製剤であるDegludecPlusは、フェーズ3臨床試験に入っている(BOOST(商標))。即効型インスリンアナログを含む市販のインスリン製剤の中には、NovoRapid(登録商標)(B28Aspヒトインスリンの製剤)、Humalog(登録商標)(B28LysB29Proヒトインスリンの製剤)およびApidra(登録商標)(B3LysB29Gluヒトインスリンの製剤)が含まれる。長時間作用型インスリンアナログを含む市販のインスリン製剤の中には、Lantus(登録商標)(インスリングラルギンの製剤)およびLevemir(登録商標)(インスリンデテミルの製剤)が含まれる。
【０００６】
国際出願WO 91/09617および同WO/9610417(Novo Nordisk A/S)は、ニコチンアミドまたはニコチン酸もしくはその塩を含有するインスリン製剤を開示している。
【０００７】
ほとんどの場合、インスリンの医薬製剤は、皮下注射によって投与される。患者にとって重要なのは、インスリンの作用プロファイルであり、これは、注射からの時間の関数としての、インスリンがグルコース代謝に及ぼす作用を意味する。このプロファイルでは、とりわけ、作用の開始時間、作用の極大値および作用の全持続時間が重要である。ボーラスインスリンの場合には、異なる作用プロファイルを有する種々のインスリン製剤が望ましく、患者によって要望される。患者は誰でも、非常に異なる作用プロファイルを有するインスリン製剤を、同日に使用し得る。望ましい作用プロファイルは、例えば、その日の時刻ならびに患者によって摂取される食事の量および組成によって決まる。
【０００８】
インスリンの際立った性質は、会合してヘキサマーとなるその能力であり、ヘキサマーの状態で、生合成中および保存中の化学的および物理的な分解から保護されるホルモンを形成する。インスリンを対象としたX線結晶学的研究は、ヘキサマーが、3回対称軸によって関連している3つのダイマーからなることを示している。これらのダイマーは、3回対称軸に位置するその中心における2つの亜鉛イオンの相互作用を通じて、密接に関連している。ヒトインスリンが高濃度の医薬製剤の形で皮下組織中に注入されると、それは自己会合し、ここでは、モノマーへの解離が比較的遅い。インスリンのヘキサマーおよびダイマーは、モノマーに比べて、毛細血管壁に浸透するのが遅い。
【０００９】
WO 2003/094956およびWO 2003/094951は、速効作用および長時間作用の両方を有する安定なインスリン(アシル化インスリン、インスリンデテミル)を開示している。WO 2007/074133は、長時間作用型アシル化インスリン(デグルデク)および即効型インスリン(インスリンアスパルト)を含む組成物を開示している。
【００１０】
患者にとって同じように重要なのは、インスリン製剤の化学的安定性であり、これは例えば、Penfill(登録商標)カートリッジが入るデバイスなどのペン型注射デバイスを何度も使用するからであり、インスリン製剤はこのデバイスの中でカートリッジ全体が空になるまで保存され、それは1.5〜3.0mlカートリッジを含有するデバイスについて、少なくとも1〜2週であり得る。保存中、インスリン構造に共有結合性の化学的変化が起こる。このことは、脱アミド生成物およびより高分子量のトランスフォーメーション生成物(ダイマー、ポリマー)などの、より活性が低くおよび/または潜在的に免疫原性を有し得る分子の形成につながる可能性がある。さらに、同様に重要なのは、インスリン製剤の物理的安定性である。何故ならば、長期保存は、結局のところ、生物学的に不活性で潜在的に免疫原性である不溶性繊維の形成につながる可能性があるからである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際出願WO 91/09617
【特許文献２】国際出願WO/9610417
【特許文献３】WO 2003/094956
【特許文献４】WO 2003/094951
【特許文献５】WO 2007/074133
【特許文献６】欧州特許第214826号
【特許文献７】WO 2005/012347
【特許文献８】WO2008034881
【特許文献９】米国特許第5,962,267号
【特許文献１０】WO 95/16708
【特許文献１１】欧州特許第0055945号
【特許文献１２】欧州特許第0163529号
【特許文献１３】欧州特許第0347845号
【特許文献１４】欧州特許第0741188号
【特許文献１５】米国特許第6500645号
【特許文献１６】米国特許第5,395,922号
【特許文献１７】欧州特許第765,395号
【特許文献１８】WO 08037735
【特許文献１９】PCT WO 2007/074133
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995
【非特許文献２】Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992
【非特許文献３】Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999
【非特許文献４】Frank他(1981) in Peptides: Proceedings of the 7th American Peptide Chemistry Symposium (Rich & Gross編), Pierce Chemical Co., Rockford, III. 729〜739頁
【非特許文献５】Chan他(1981) PNAS 78:5401〜5404頁
【非特許文献６】Thim他(1986) PNAS 83:6766〜6770頁
【非特許文献７】Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177, 244〜249頁
【非特許文献８】LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274〜284頁
【非特許文献９】Nielsen他(2001) Biochemistry 40, 6036〜6046頁
【非特許文献１０】Pharmaceutical Research, 21(2004)1498〜1504頁
【非特許文献１１】Pharmaceutical Research, 23(2006)49〜55頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、長時間作用型インスリン化合物、速効型インスリン化合物、ニコチン酸系化合物および/またはその塩ならびにアミノ酸を含むインスリン製剤に関する。
【００１４】
本発明は、速効型インスリン化合物の改良された吸収速度を有すると同時に、長時間作用型インスリン化合物の持続性作用プロファイルを維持するインスリン製剤に関する。本発明はさらに、好ましい化学的および物理的な安定性を有する製剤に関する。
【００１５】
一実施形態では、本発明は、
・  アシル化インスリンまたはアシル化インスリンアナログである、長時間作用型インスリン化合物
・  インスリンアナログまたはヒトインスリンである、速効型インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤に関する。
【００１６】
別の実施形態では、本発明はまた、対象または哺乳動物に、本発明によるインスリン製剤を投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法または対象の血中グルコースレベルを低減するための方法を企図する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】BOOST(商標)配合物(灰色線)におけるインスリンアスパルトの吸収速度が、製剤(実施例3)中に80mM(点線)、120mM(実線)および230mM(破線)のニコチンアミドを含むことによって増加することを示す図である。
【図２】BOOST(商標)配合物(灰色線)におけるインスリンデグルデクの動態プロファイルが、230mM(破線)のニコチンアミドを含むことによって変化するのに対して、80mM(点線)または120mM(実線)のニコチンアミドを含む配合物は、参照物質に類似していることを示す図である(実施例3)。
【図３】緩衝生理食塩水中、Superose 6PCカラム上でのサイズ排除クロマトグラフィーを使用したインビトロモデルによると、表1によるインスリンアスパルトと組み合わせた製剤中のインスリンデグルデクのマルチヘキサマー形成は、230mM(破線)または120mM(実線)のニコチンアミドを含むことによって減少するのに対して、80mM(点線)または40mM(破点線)のニコチンアミドを含む製剤のマルチヘキサマー複合体のピーク高さは、ニコチンアミド無しの参照製剤(灰色実線)とほぼ同一であったことを示す図である(実施例5)。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、長時間作用型インスリン化合物、速効型インスリン化合物、ニコチン酸系化合物および/またはその塩ならびにアミノ酸を含むインスリン製剤に関する。
【００１９】
本発明のインスリン製剤中の速効型インスリン化合物の皮下注射後の吸収は、驚いたことに、参照のインスリン製剤のものに比べて速いことが見出された。この性質は、特に、インスリンが毎食前に与えられる頻回注射レジメンに関連して、即効型インスリンには有用である。作用の開始がより速いため、本インスリンは、従来の即効型インスリン液剤のものに比べて、食事により近い時間に都合良く摂取することができる。さらに、インスリンのより速い消失は、恐らく食事後の低血糖のリスクを減らす。同時に、本発明のインスリン製剤中の長時間作用型インスリン化合物のマルチヘキサマーの形成は、長時間作用型インスリン化合物には依然として好ましい。
【００２０】
本発明のインスリン製剤は、インスリンデグルデクなどの長時間作用型インスリン化合物、インスリンアスパルトなどの即効型インスリン化合物、ニコチンアミドなどのニコチン酸系化合物およびアミノ酸であるアルギニンを含む混合製剤である。一実施形態では、本発明のインスリン製剤は、他のアミノ酸を含み得る。これらのインスリン製剤は、既存療法に比べて、正常な生理機能をより精密に模倣する、急速な吸収および超長時間のプロファイルの組合せを有する。さらに、本発明のインスリン製剤は、市販の医薬製剤に適した化学的および物理的な安定性を有する。
【００２１】
本発明のインスリン製剤は、既存のインスリン療法と比較して、速効型インスリン化合物の作用がさらにより速く開始され、長時間作用型インスリン化合物の超長時間作用プロファイルは変更されない。本製剤中の超速効型インスリン化合物は、第1フェーズであるインスリン放出の回復、注射の利便性および肝臓によるグルコース産生の停止という利点を有する。本発明のインスリン製剤は、皮下組織から血漿中への好ましい吸収速度を有し、ブタにおける数種のPK/PD実験によって示唆されているように、BOOST(商標)などの従来の製剤と比較した場合、初期の吸収速度の増加は、1.5から3倍までの範囲である。このより速い吸収速度は、血糖コントロールおよび利便性を改善し得、食前から食後の投与への切り替えが可能となり得る。本発明はある部分、ニコチンアミドの追加によって、即効型インスリンアナログの吸収速度の増加が可能になるが、それはまた、HMWP量を著しく増加させることによって、化学的安定性に負の影響をもたらすという驚くべき発見に基づいている。本発明のインスリン製剤は、アルギニンの追加によって改良された化学的安定性を有し、このことは、例えば、保存後のダイマーインスリンおよびポリマーインスリンならびに脱アミドインスリンの形成を減少させることに反映されている。
【００２２】
高濃度のニコチンアミドの追加は、ブタモデルにおいて、デグルデクの長時間作用プロファイルを変えるのに対し、より低濃度のニコチンアミドは、デグルデクのプロファイルに全く影響を及ぼさない上に、インスリンアスパルトの吸収速度をなお増加させることが示された。同様に、より高濃度のニコチンアミドでは、組成物中のデグルデクのマルチヘキサマー形成が減少し、組成物中のより低濃度のニコチンアミドでは、マルチヘキサマー形成に及ぼす影響は少なかった。
【００２３】
本発明の一実施形態では、ニコチン酸系化合物は、組成物中に、260mM未満または230mM未満の濃度で存在する。
【００２４】
一実施形態では、インスリン製剤は、長時間作用型インスリン化合物、速効型インスリン化合物またはその組合せ、ニコチン酸系化合物および/またはその塩ならびにアルギニンおよび/またはその塩を含む。
【００２５】
本発明は、約0.1mMから約10.0mMまでの濃度で存在する本発明による速効型インスリン化合物および長時間作用型インスリン化合物を含み、3から8.5までのpHを有するインスリン製剤を提供する。製剤は、ニコチン酸系化合物およびアルギニンも含む。製剤は、金属イオン、緩衝系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤および/または界面活性剤をさらに含む。
【００２６】
一実施形態では、長時間作用型インスリンは、アシル化インスリンアナログである。
【００２７】
別の実施形態では、アシル化インスリンアナログは、NεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリン(NεB29-hexadecandiyol-γ-Glu-(desB30) human insulin)である。
【００２８】
一実施形態では、本発明によるインスリン製剤は、NεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリン、B28Aspヒトインスリン、ニコチンアミドおよびアルギニンの水性溶液を含む。本発明の製剤中のNεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリンの含量は、15〜500国際単位(IU)/mlの範囲内であり得、例えば、注射用製剤中に30〜333IU/mlの範囲内であり得る。本発明の液剤中のB28Aspヒトインスリンの含量は、15〜500国際単位(IU)/mlの範囲内であり得、例えば、注射用製剤中に30〜333IU/mlの範囲内であり得る。しかし、非経口投与の他の目的に関して、インスリン化合物の含量はより高い可能性がある。
【００２９】
本状況において、単位「IU」は、6nmolに相当する。
【００３０】
「インスリンデグルデク」または「デグルデク」という用語は、アシル化ヒトインスリンアナログNεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリンを指す。
【００３１】
「インスリンアスパルト」または「アスパルト」という用語は、ヒトインスリンアナログB28Aspヒトインスリンを指す。
【００３２】
「開始」という用語は、注射からPK曲線が増加に移るまでの時間を指す。
【００３３】
「吸収速度」という用語は、PK曲線の傾きを指す。
【００３４】
本発明による「インスリン化合物」は、本明細書において、ヒトインスリン、インスリンアナログおよび/またはその組合せであると理解されるべきである。
【００３５】
本明細書において使用される「ヒトインスリン」という用語は、構造および性質がよく知られているヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基、すなわちA鎖とB鎖との間のジスルフィド架橋によって結合されている2つのポリペプチド鎖を有する。A鎖は、アミノ酸21個のペプチドであり、B鎖は、アミノ酸30個のペプチドであり、2つの鎖は3つのジスルフィド架橋によって結合されている:1つ目は、A鎖の6位のシステインと11位のシステインとの間、2つ目は、A鎖の7位のシステインとB鎖の7位のシステインとの間、3つ目は、A鎖の20位のシステインとB鎖の19位のシステインとの間にある。
【００３６】
ホルモンは、アミノ酸24個のプレペプチドからなる単鎖前駆体プロインスリン(プレプロインスリン)として合成され、その後、以下の配置:プレペプチド-B-Arg Arg-C-Lys Arg-A[式中、Cは31個のアミノ酸が結合したペプチドである]において86個のアミノ酸を含有するプロインスリンになる。Arg-ArgおよびLys-Argは、結合ペプチドをAおよびB鎖から開裂するための開裂部位である。
【００３７】
本明細書において使用される「基礎インスリン」という用語は、糖尿病の標準的なモデルにおいて15時間を超える時間-作用を有し、夜間および食間のインスリン要求を補うのに適したインスリンペプチドの製剤を意味する。好ましくは、基礎インスリンは、少なくとも20時間の時間-作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、少なくとも10時間の時間-作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、15から48時間までの範囲の時間-作用を有する。好ましくは、基礎インスリンは、NPHインスリンもしくはNεB29-テトラデカノイルdesB30ヒトインスリンの市販の医薬組成物について観察されるのと類似のまたはそれよりも長い時間-作用を有する。
【００３８】
本明細書において使用される「ボーラスインスリン」、「食事関連インスリン」または「即効型インスリン」という用語は、即効性であり、食中および食後のインスリン要求を補うのに適したインスリンペプチドを意味する。
【００３９】
本明細書において使用される「二相性インスリン」という用語は、「ボーラスインスリン」および「基礎インスリン」の混合物を含む医薬組成物を意味する。
【００４０】
本明細書において使用される「非鈍化(no blunting)」という用語は、即効型インスリンおよびアシル化インスリンの両方が、1つの製剤中に配合される場合に、即効型インスリンおよびアシル化インスリンを別個の製剤で投与する場合と同一または実質的に同一の作用プロファイルを有していることを意味する。
【００４１】
本明細書において使用される「OAD」または「OAD(s)」という用語は、1種または複数種の経口抗糖尿病薬を意味する。OADの非限定的なリストは、スルホニルウレア(SU)、ビグアナイド系、例えばメトホルミン(Melformin)またはチアゾリジンジオン系(TZD)であり得る。
【００４２】
「コード可能なアミノ酸」または「コード可能なアミノ酸残基」という表現は、ヌクレオチドのトリプレット(「コドン」)によってコードされ得るアミノ酸またはアミノ酸残基を示すために用いられる。
【００４３】
hGluはホモグルタミン酸である。
【００４４】
α-Aspは、-HNCH(CO-)CH2COOHのL-体である。
【００４５】
β-Aspは、-HNCH(COOH)CH2CO-のL-体である。
【００４６】
α-Gluは、-HNCH(CO-)CH2CH2COOHのL-体である。
【００４７】
γ-Gluは、-HNCH(COOH)CH2CH2CO-のL-体である。
【００４８】
α-hGluは、-HNCH(CO-)CH2CH2CH2COOHのL-体である。
【００４９】
δ-hGluは、-HNCH(COOH)CH2CH2CH2CO-のL-体である。
【００５０】
β-Alaは、-NH-CH2-CH2-COOHである。
【００５１】
Sarは、サルコシン(N-メチルグリシン)である。
【００５２】
「側鎖にカルボン酸基を有するアミノ酸残基」という表現は、Asp、GluおよびhGluのようなアミノ酸残基を表す。アミノ酸は、L-またはD-配置であり得る。何も特定されない場合には、アミノ酸残基はL配置であると理解される。
【００５３】
「中性の側鎖を有するアミノ酸残基」という表現は、Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Pro、Ser、Thr、Cys、Met、Tyr、AsnおよびGlnのようなアミノ酸残基を表す。
【００５４】
本発明によるインスリン誘導体が、「生理学的pH値で可溶性」であると述べられている場合、それは、インスリン誘導体が、生理学的pH値で完全に溶解する注射可能なインスリン組成物を調製するために使用され得ることを意味する。そのような好ましい溶解度は、インスリン誘導体単独の固有の性質のためまたはインスリン誘導体と媒体中に含有される1種もしくは複数種の成分との間の好ましい相互作用の結果のためであり得る。
【００５５】
「高分子量(high molar weight)インスリン」または「hmw」という表現は、ヒトインスリンの複合体、インスリンアナログの複合体またはインスリン誘導体の複合体の分子量が、ヒト血清アルブミンを超える、インスリンアナログもしくはインスリン誘導体のドデカマー複合体を超えるまたは約70kダルトンを超えることを意味する。
【００５６】
「中分子量インスリン」または「mmw」という表現は、ヒトインスリンの複合体、インスリンアナログの複合体またはインスリン誘導体の複合体の分子量が、大体インスリンヘキサマーから大体インスリンドデカマーまでであり、24から80kダルトンの間であることを意味する。
【００５７】
「低分子量インスリン」または「lmw」という表現は、ヒトインスリン、インスリンアナログまたはインスリン誘導体の分子量が、24kダルトン未満であることを意味する。「実効電荷」という表現は、分子の全体的な電荷を意味する。pH7.4で、ヒトインスリンは約-3の負の実効電荷を有し、またはヘキサマーを形成する場合には、インスリンモノマー当たり約-2.5の負の実効電荷を有する。
【００５８】
以下の略語が、明細書および実施例において使用されている:
hGlu    ホモグルタミン酸
Sar:      サルコシン(N-メチル-グリシン)
S.c.      皮下
Acyl ins  アシル化インスリン
Ins      インスリン
【００５９】
本発明による「インスリン」は、本明細書において、ヒトインスリン、インスリンアナログおよび/またはその組合せであると理解されるべきである。
【００６０】
本明細書において使用される「ヒトインスリン」という用語は、構造および性質がよく知られているヒトホルモンを意味する。ヒトインスリンは、システイン残基、すなわちA鎖とB鎖との間のジスルフィド架橋によって結合されている2つのポリペプチド鎖を有する。A鎖は、アミノ21個の酸ペプチドであり、B鎖は、アミノ酸30個のペプチドであり、2つの鎖は3つのジスルフィド架橋によって結合されている:1つ目は、A鎖の6位のシステインと11位のシステインとの間、2つ目は、A鎖の7位のシステインとB鎖の7位のシステインとの間、3つ目は、A鎖の20位のシステインとB鎖の19位のシステインとの間にある。
【００６１】
ホルモンは、アミノ酸24個のプレペプチドからなる単鎖前駆体プロインスリン(プレプロインスリン)として合成され、その後、以下の配置:プレペプチド-B-Arg Arg-C-Lys Arg-A[式中、Cは31個のアミノ酸が結合したペプチドである]において86個のアミノ酸を含有するプロインスリンになる。Arg-ArgおよびLys-Argは、結合ペプチドをAおよびB鎖から開裂するための開裂部位である。本明細書において使用される「インスリンアナログ」とは、天然に存在するインスリンの一次構造、例えばヒトインスリンの一次構造から、変異によって誘導されるポリペプチドを意味する。1種または複数種の変異体は、天然に存在するインスリン中に存在する少なくとも1つのアミノ酸残基を欠失および/または置換することによっておよび/または少なくとも1つのアミノ酸残基を付加することによって作製される。付加および/または置換されたアミノ酸残基は、コード可能なアミノ酸残基または他の天然に存在するアミノ酸残基であり得る。
【００６２】
一実施形態では、インスリンアナログは、親インスリンと比較して8つ未満の改変(置換、欠失、付加およびその組合せ)を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して7つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して6つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して5つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して4つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して3つ未満の改変を含み、あるいは、アナログは、親インスリンと比較して2つ未満の改変を含む。
【００６３】
インスリン分子における変異は、天然のアミノ酸を置換するアミノ酸について、鎖(AまたはB)、位置および3文字コードを記述して表示される。「desB30」または「B(1〜29)」とは、B30アミノ酸残基を欠く天然のインスリンB鎖またはそのアナログを意味し、B28Aspヒトインスリンとは、B鎖の28位のアミノ酸残基が、Aspで置換されているヒトインスリンを意味する。
【００６４】
デグルデク説明4頁:本発明のアシル化インスリン化合物は、互いに会合して、亜鉛を含む複合体を形成する。これらのインスリン-亜鉛複合体は、医薬製剤中に、ヘキサマー、ドデカマーまたはドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在し得る。すべての種類のインスリン、例えば、ヒトインスリン、アシル化インスリン(インスリン誘導体)およびインスリンアナログは、亜鉛と複合体を形成する。
【００６５】
本発明の一実施形態では、アシル化インスリンのうちの少なくとも85%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する。
【００６６】
本発明の一実施形態では、アシル化インスリンのうちの少なくとも90、92、95、96、97、98、99または99.5%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する。
【００６７】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、医薬組成物の重量に基づいて、0.0005〜0.01%の量で存在し得る。一実施形態では、界面活性剤は、組成物の重量に基づいて、0.0005〜0.007%の量で存在し得る。界面活性剤の例は、ポリソルベート20を挙げることができ、これは、組成物の重量に基づいて、0.001〜0.003%の量で組成物中に存在し得る。別の例は、ポロキサマー188であり、これは、組成物の重量に基づいて、0.002〜0.006%の量で存在し得る。
【００６８】
本発明の長時間作用型インスリンは、インスリン分子中の種々の位置でアシル化され得る。一実施形態では、長時間作用型インスリンは、親インスリン分子のB鎖中の位置のLys残基のε-アミノ基、例えば、ヒトインスリン分子中のB29リジン基のε-アミノ基がアシル化される。しかし、本発明の他の態様によると、アシル化は、長時間作用型インスリン分子中の別の位置で行われることがあり、例えば、もしB29がリジンから別のアミノ酸残基に変化するならば、B1位のα-アミノ基または長時間作用型インスリン分子中の天然アミノ酸残基がリジン残基で置換されている位置で行われ得る。
【００６９】
一実施形態では、長時間作用型インスリンは、B1位のα-アミノ基またはインスリン分子のA-またはB鎖中のリジン残基の遊離ε-アミノ基がアシル化される。
【００７０】
一実施形態では、長時間作用型インスリンは、インスリン分子のB29位のリジン残基の遊離ε-アミノ基がアシル化される。
【００７１】
アシル基は、親油性基(liphophilic group)であり、典型的には、少なくとも1つの遊離カルボン酸基または中性pHで負に荷電している基を含み、約6個から約32個までの炭素原子を有する脂肪酸部分である。より典型的には、脂肪酸部分は、6個から24個まで、8個から20個まで、12個から20個まで、12個〜16個まで、10個〜16個まで、10個〜20個まで、14個〜18個までまたは14個〜16個までの炭素原子を有する。
【００７２】
一実施形態では、医薬組成物は、少なくとも1つの遊離カルボン酸または中性pHで負に荷電している基を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、4個から32個までの炭素原子を有するジカルボン酸脂肪酸から誘導されるアシル基を含む。
【００７３】
別の実施形態では、脂肪酸部分は、約6個から約32個まで、6個から24個まで、8個から20個まで、12個から20個まで、12個〜16個まで、10個〜16個まで、10個〜20個まで、14個〜18個までまたは14個〜16個までの炭素原子を有するジカルボン酸脂肪酸から誘導される。
【００７４】
一実施形態では、医薬組成物は、アミド結合を介したリンカー基によって、インスリンに結合しているアシル基を含む。
【００７５】
アシル基は、問題となっている遊離アミノ基に直接結合していてよい。しかし、アシル基は、インスリン分子中の遊離アミノ基と、問題となっているアシル基とを一緒に連結するリンカーによって、アミド結合を介して結合していてもよい。
【００７６】
長時間作用型アシル化インスリンは、典型的には、ヒトインスリンと比較して、少なくとも1つのまたは2つの追加の負の実効電荷を有し、より典型的には、それは、2つの追加の負の電荷を有する。追加の負の電荷は、脂肪酸中の遊離カルボン酸基によってまたは少なくとも1つが遊離カルボン酸もしくは中性pHで負に荷電している基を含有する1つまたは複数のアミノ酸残基を含み得るリンカー基によってもたらされ得る。さらなる態様では、アシル基は、ジカルボン酸脂肪酸から誘導される。
【００７７】
一実施形態では、医薬組成物は、インスリンが、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基または親インスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基にアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも1つの遊離カルボン酸基または中性pHで負に荷電している基と、炭素鎖中に約4個から約32個の炭素原子を有する脂肪酸部分と;場合によって、側鎖中の個々の成分をアミド結合を介して一緒に連結する、1つまたは複数のリンカーとを含む側鎖を有する、長時間作用型インスリンを含む。
【００７８】
一実施形態では、長時間作用型インスリン分子は、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基に結合している側鎖を有し、その側鎖は、一般式:
-W-X-Y-Z2
[式中、Wは:
・  側鎖中にカルボン酸基を有するα-アミノ酸残基であって、そのカルボン酸基のうちの1つとともに、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基と一緒になってアミド基を形成するα-アミノ酸残基;
・  アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている2つ、3つもしくは4つのα-アミノ酸残基からなる鎖であって、アミド結合を介した鎖は、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基に連結しており、Wのアミノ酸残基は、Wが側鎖中にカルボン酸基を有する少なくとも1つのアミノ酸残基を有するように、中性の側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖;または
・  Xから親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基までの共有結合
であり;
Xは、
・  -CO-;
・  -CH(COOH)CO-;
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CO-;
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CON(CH2COOH)CH2CO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CH2CO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CH2CON(CH2CH2COOH)CH2CH2CO-;
・  -CO-NHCH(COOH)(CH2)4NHCO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CO-;または
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CH2CO-
であって、
a)Wがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖である場合、下線の炭素からの結合を介して、W中のアミノ基とアミド結合を形成するか、または、
b)Wが共有結合である場合、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基とアミド結合を形成し;
Yは、
・  -(CH2)m-であり、mは、6から32の範囲の整数であり;
・  1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に10個から32個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖
であり;
Z2は、
・  -COOH;
・  -CO-Asp;
・  -CO-Glu;
・  -CO-Gly;
・  -CO-Sar;
・  -CH(COOH)2;
・  -N(CH2COOH)2;
・  -SO3H;もしくは
・  -PO3H
ただし、Wが共有結合であり、Xが-CO-である場合には、Zは-COOHとは異なる]
からなるものならびにその任意のZn2+複合体である。
【００７９】
本発明の一実施形態では、B30アミノ酸残基は欠失されており、アシル化インスリンはdesB30インスリンである。
【００８０】
本発明の一実施形態では、Wは4個から10個までの炭素原子を有するα-アミノ酸残基であり、さらなる態様では、Wは、α-Asp、β-Asp、α-Glu、γ-Glu、α-hGluおよびδ-hGluからなる群から選択される。
【００８１】
本発明の一実施形態では、Xは、-CO-である。
【００８２】
本発明の一実施形態では、Z2は、-COOHである。
【００８３】
側鎖-W-X-Y-Z2の下部構造Yは、式-(CH2)m-の基であり得、mは、6から32まで、8から20まで、12から20までまたは12〜16までの範囲の整数である。
【００８４】
本発明の一実施形態では、Yは、1個、2個または3個の-CH=CH-基および鎖中に6個から32個まで、10個から32個まで、12個から20個までまたは12個〜16個までの範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖である。
【００８５】
本発明の一実施形態では、Yは、式-(CH2)vC6H4(CH2)W-[式中、vおよびwの合計が、6から30まで、10から20までまたは12〜16までの範囲になるように、vおよびwは整数またはそれらのうちの1つは0である]の二価の炭化水素鎖である。
【００８６】
さらなる態様では、Wは、α-Asp、β-Asp、α-Gluおよびγ-Gluからなる群から選択され;Xは、-CO-または-CH(COOH)COであり;Yは、-(CH2)m-であり、mは、12〜18の範囲の整数であり、Z2は、-COOHまたは-CH(COOH)2である。
【００８７】
アシル化インスリン化合物の非限定的な例は、NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)15CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)17CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)18CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu-N-(γ-Glu)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-α-Glu-N-(β-Asp)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Gly-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Sar-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; (NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-β-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-α-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-D-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)16CO-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)14CO-IDA) desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)16CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; およびNεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシメチル)-β-Ala] desB30 ヒトインスリンである。
【００８８】
本発明の一実施形態では、側鎖は、少なくとも1つの芳香族基または少なくとも1つの二官能性(disfunctionel)PEG基を含み得る。下文では、略語「PEG」を、ポリエチレングリコールに対して使用する。
【００８９】
本発明の一実施形態では、医薬組成物中に使用されるアシル化インスリンは、式
【００９０】
【化１】
2013545782.tif 000002
【００９１】
[式中、Insは、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基またはインスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のCO-基に結合されている親インスリン部分であり;
X4は、
・  -(CH2)nであり、nは、1、2、3、4、5もしくは6であり;
・  NRであり、Rは、水素もしくは-(CH2)p-COOH;-(CH2)p-SO3H;-(CH2)p-PO3H2;-(CH2)p-O-SO3H2;-(CH2)p-O-PO3H2;1個もしくは2個の-(CH2)p-O-COOH基で置換されているアリーレン;-(CH2)p-テトラゾリルであり、pは1から6の範囲の整数であり;
・  -(CR1R2)q-NR-CO-であり、R1およびR2は、互いに独立におよびそれぞれのqの値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、qは1〜6であり、Rは上記のように定義され;
・  -((CR3R4)q1-NR-CO)2-4-であり、R3およびR4は、互いに独立におよびそれぞれのq1の値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、q1は1〜6であり、Rは上記のように定義され;または、
・  結合
であり;
W1は、-COOH、-SO3Hおよび-PO3H2ならびにテトラゾリルからなる群から選択される1つまたは2つの基で置換されていてもよいアリーレンまたはヘテロアリーレンであるかあるいはW1は結合であり;
mは、0、1、2、3、4、5または6であり;
X5は、
【００９２】
【化２】
2013545782.tif 000003
【００９３】
であり、Rは上記のように定義され;または
・  結合
であり;
Y1は、
・  -(CR1R2)q-NR-CO-であり、R1およびR2は、互いに独立におよびそれぞれのqの値についても独立に、H、-COOH、結合もしくはOHであってよく、qは1〜6であり、Rは上記のように定義され;
・  NRであり、Rは上記のように定義され;
・  -((CR3R4)q1-NR-CO)2-4-であり、R3およびR4は、互いに独立におよびそれぞれのq1の値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、q1は1〜6であり、Rは上記のように定義され;または、
・  結合
であり;
Q7は、
・  -(CH2)r-であり、rは、4から22までの整数であり;
・  1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に4個から22個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖
であり;または
・  式
-(CH2)s-Q8-(C6H4)v1-Q9-(CH2)W-Q10-(C6H4)v2-Q11-(CH2)t-Q12-(C6H4)v3-Q13-(CH2)z-
の二価の炭化水素鎖であり、
[式中、Q8〜Q13は、互いに独立に、O;Sもしくは結合であってよく;s、w、tおよびzは、互いに独立に、s、w、tおよびzの合計が4から22の範囲になるように、0もしくは1から10までの整数であり、v1、v2およびv3は、互いに独立に、0もしくは1であり得、ただし、W1が結合である場合には、Q7は、式-(CH2)v4C6H4(CH2)W1-[式中、v4およびw1の合計が6から22の範囲になるように、v4およびw1は整数であるかまたはそれらのうちの1つは0である]の二価の炭化水素鎖ではない]
であり;
Z1は、
-COOH;
-CO-Asp;
-CO-Glu;
-CO-Gly;
-CO-Sar;
-CH(COOH)2;
-N(CH2COOH)2;
-SO3H
-PO3H2;
-O-SO3H;
-O-PO3H2;
-テトラゾリルまたは
-O-W2
であり、W2は、-COOH、-SO3Hおよび-PO3H2ならびにテトラゾリルから選択される1つまたは2つの基で置換されているアリーレンまたはヘテロアリーレンであり;
ただし、W1が結合であり、v1、v2およびv3がすべて0であり、Q1-6がすべて結合である場合には、Z1はO-W2である]
を有しているものならびにその任意のZn2+複合体である。
【００９４】
本発明の一実施形態では、W1はフェニレンである。本発明の別の実施形態では、W1は、窒素、酸素または硫黄を含む5〜7員の複素環系である。本発明の別の実施形態では、W1は、少なくとも1つの酸素を含む5員の複素環系である。
【００９５】
本発明の一実施形態では、Q7は、-(CH2)r-であり、rは、4から22まで、8から20まで、12から20までまたは14〜18までの範囲の整数である。本発明の一実施形態では、Q8、Q9、Q12およびQ13は、すべて結合であり、v2は1であり、v1およびv3は、0である。本発明の一実施形態では、Q10およびQ11は、酸素である。
【００９６】
本発明の一実施形態では、
X4およびY1は、結合であり、X5は、
【００９７】
【化３】
2013545782.tif 000004
【００９８】
[式中、Rは、-(CH2)p-COOHであり、pは、1〜4である]
である。
【００９９】
本発明の一実施形態では、Z1は-COOHである。
【０１００】
本発明の一実施形態では、医薬組成物のアシル化インスリンは、0100-0000-0496 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0515 NεB29-[N-(HOOC(CH2)13CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0522 NεB29-[N-(HOOC(CH2)15CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0488 NεB29-[N-(HOOC(CH2)16CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0544 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシメチル)-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン、および0100-0000-029 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-(フラニレン)CO] desB30 ヒトインスリン、0100-0000-0552 NεB29 -{4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシ-フェノキシ)-デカノイルアミノ]-ブチリル}desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される。
【０１０１】
本発明の一実施形態では、医薬組成物中に存在するアシル化インスリンは、式
【０１０２】
【化４】
2013545782.tif 000005
【０１０３】
[式中、Insは、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基またはインスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のCO-基に結合されている親インスリン部分であり;
それぞれのnは、独立に、0、1、2、3、4、5または6であり;
Q1、Q2、Q3、およびQ4は、互いに独立に、
・  (CH2CH2O)s-;(CH2CH2CH2O)s-;(CH2CH2CH2CH2O)s-;
(CH2CH2OCH2CH2CH2CH2O)s-または(CH2CH2CH2OCH2CH2CH2CH2O)s-であり、sは、1〜20であり;
・  -(CH2)r-であり、rは、4から22の整数であり;または、1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に4個から22個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖であり;
・  -(CH2)t-もしくは-(CH2OCH2)t-であり、tは、1から6までの整数であり;
・  -(CR1R2)q-であり、R1およびR2は、互いに独立に、H、-COOH、(CH2)1-6COOHであってよく、R1およびR2は、それぞれの炭素において異なっていてよく、qが1〜6であり;
・  -((CR3R4)q1)1-(NHCO-(CR3R4)q1-NHCO)1-2-((CR3R4)q1)1もしくは-((CR3R4)q1)1-(CONH-(CR3R4)q1-CONH)1-2-((CR3R4)q1-)-、-((CR3R4)q1)1-(NHCO-(CR3R4)q1-CONH)1-2-((CR3R4)q1)1もしくは-((CR3R4)q1)1-(CONH-(CR3R4)q1-NHCO)1-2-((CR3R4)q1)1であり、R3およびR4は、互いに独立に、H、-COOHであってよく、R3およびR4は、それぞれの炭素において異なっていてよく、q1は、1〜6であり;あるいは
・  結合
であってよく、
ただし、Q1〜Q4は異なっており;
X1、X2およびX3は、独立に、
・  O;
・  結合;または
【０１０４】
【化５】
2013545782.tif 000006
【０１０５】
[式中、Rは、水素または-(CH2)p-COOH、-(CH2)p-SO3H、-(CH2)p-PO3H2、-(CH2)p-O-SO3H;-(CH2)p-O-PO3H2;または-(CH2)p-テトラゾール-5-イルであり、それぞれのpは、他のp'とは独立に、1から6の範囲の整数である]
であり;
Zは、
-COOH;
-CO-Asp;
-CO-Glu;
-CO-Gly;
-CO-Sar;
-CH(COOH)2;
-N(CH2COOH)2;
-SO3H
-OSO3H
-OPO3H2
-PO3H2または
-テトラゾール-5-イル
である]
を有しているものならびにその任意のZn2+複合体である。
【０１０６】
本発明の一実施形態では、sは、2〜12、2〜4または2〜3の範囲である。本発明の一実施形態では、sは、好ましくは1である。
【０１０７】
本発明の一実施形態では、Zは-COOHである。
【０１０８】
本発明の一実施形態では、医薬組成物のアシル化インスリンは、NεB29-(3-[2-{2-(2-[ω-カルボキシ-ペンタデカノイル-γ-グルタミル-(2-アミノ-エトキシ)]-エトキシ)-エトキシ}-エトキシ]-プロピノイル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-{2-(2-[ω-カルボキシ-ヘプタデカノイル-γ-グルタミル-(2-アミノ-エトキシ)]-エトキシ)-エトキシ}-エトキシ]-プロピノイル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル desB30 ヒトインスリン、NεB29-(ω-[2-(2-{2-[2-(2-カルボキシ-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-ヘプタデカノイル-α-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(ω-[2-(2-{2-[2-(2-カルボキシ-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-ヘプタデカノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[7-カルボキシヘプタノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]-エトキシ}プロピルカルバモイル)プロピオニル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシ}プロピルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[9-カルボキシノナノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]エトキシ}-プロピルカルバモイル)プロピオニル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(9-カルボキシノナノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(9-カルボキシノナノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシ}-プロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(2-[3-(2-(2-{2-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)エトキシ}エトキシ)-エチルカルバモイル]プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシペンタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニル)) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[ω-カルボキシペンタデカノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]-エトキシ}プロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシプロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(ω-カルボ���シトリデカノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシプロピル-カルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシトリデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシペンタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニル-γ-γ-D-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(9-カルボキシノナノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニイル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシトリデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される。
【０１０９】
本発明のアシル化インスリンは、WO 2007/074133に記載されているように製造され得る。
【０１１０】
親インスリン分子は、ヒトインスリンまたはそのアナログである。ヒトインスリン非限定的なアナログは、desB30アナログ;B30位のアミノ酸残基がLysであり、B29位のアミノ酸残基が、Cys、Met、ArgおよびLysを除く任意のコード可能なアミノ酸であるインスリンアナログ;A21位のアミノ酸残基がAsnであるインスリンアナログおよびB3位のアミノ酸残基がLysであり、B29位のアミノ酸残基がGluであるインスリンアナログである。
【０１１１】
親インスリンアナログの別の群では、B28位のアミノ酸残基はAspである。親インスリンアナログのこの群からの具体例は、欧州特許第214826号に開示されているAspB28ヒトインスリンである。
【０１１２】
親インスリンアナログの別の群では、B28位のアミノ酸残基はLysであり、B29位のアミノ酸残基はProである。親インスリンアナログのこの群からの具体例は、LysB28ProB29ヒトインスリンである。
【０１１３】
親インスリンアナログの別の群では、B30位のアミノ酸残基はLysであり、B29位のアミノ酸残基は、Cys、Met、ArgおよびLysを除く任意のコード可能なアミノ酸である。例として、B29位のアミノ酸残基がThrであり、B30位のアミノ酸残基がLysであるインスリンアナログが挙げられる。親インスリンアナログのこの群からの具体例は、ThrB29LysB30ヒトインスリンである。
【０１１４】
親インスリンアナログの別の群では、B3位のアミノ酸残基はLysであり、B29位のアミノ酸残基はGluである。親インスリンアナログのこの群からの具体例は、LysB3GluB29ヒトインスリンである。インスリンアナログの例は、B鎖の28位のProが、Asp、Lys、Leu、ValまたはAlaで変異しているおよび/またはB29位のLysが、Pro、GluまたはAspで変異しているような例である。さらに、B3位のAsnは、Thr、Lys、Gln、GluまたはAspで変異し得る。A21位のアミノ酸残基は、Glyで変異し得る。B1位のアミノ酸は、Gluで変異し得る。B16位のアミノ酸は、GluまたはHisで変異し得る。インスリンアナログのさらなる例は、例えば、ヒトインスリン中のB30アミノ酸が欠失されているアナログ(des(B30)ヒトインスリン)、ヒトインスリン中のB1アミノ酸が欠失されているインスリンアナログ(des(B1)ヒトインスリン)、des(B28〜B30)ヒトインスリンおよびdes(B27)ヒトインスリンなどの欠失アナログである。A鎖および/またはB鎖が、N-末端伸長部分を有するインスリンアナログならびにA鎖および/またはB鎖が、B鎖のC-末端に付加された2つのアルギニン残基を有するようなC-末端伸長部分を有するインスリンアナログも、インスリンアナログの例である。さらなる例は、言及されている変異の組合せを含むインスリンアナログである。A14位のアミノ酸が、Asn、Gln、Glu、Arg、Asp、GlyまたはHisであり、B25位のアミノ酸がHisであり、場合によって、1つまたは複数の追加の変異をさらに含むものが、インスリンアナログのさらなる例である。A21位のアミノ酸残基がGlyであり、インスリンアナログが、2つのアルギニン残基を有するC-末端においてさらに伸長されるものも、インスリンアナログの例である。
【０１１５】
インスリンアナログのさらなる例には、DesB30 ヒトインスリン; AspB28 ヒトインスリン; AspB28、desB30 ヒトインスリン; LysB3、GluB29 ヒトインスリン; LysB28、ProB29 ヒトインスリン; GluA14、HisB25 ヒトインスリン; HisA14、HisB25 ヒトインスリン; GluA14、HisB25、desB30 ヒトインスリン; HisA14、HisB25、desB30 ヒトインスリン; GluA14、HisB25、desB27、desB28、desB29、desB30 ヒトインスリン; GluA14、HisB25、GluB27、desB30 ヒトインスリン; GluA14、HisB16、HisB25、desB30 ヒトインスリン; HisA14、HisB16、HisB25、desB30 ヒトインスリン; HisA8、GluA14、HisB25、GluB27、desB30 ヒトインスリン; HisA8、GluA14、GluB1、GluB16、HisB25、GluB27、desB30 ヒトインスリン; およびHisA8、GluA14、GluB16、HisB25、desB30 ヒトインスリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１６】
本発明による医薬組成物は、治療を必要とする患者における、1型糖尿病、2型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のための治療有効量のアシル化インスリンを、薬学的に許容される担体と一緒に含む。
【０１１７】
本発明のさらなる態様では、治療を必要とする患者における、1型糖尿病、2型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための医薬組成物であって、上記に定義されている治療有効量のアシル化インスリン誘導体を、インスリンまたは作用が急速に開始するインスリンアナログと混合して、薬学的に許容される担体および添加物(additive)と一緒に含む医薬組成物が提供される。
【０１１８】
したがって、医薬組成物は、2種のインスリン成分:遅延性のインスリン作用を有するもの、基礎インスリンおよび作用が急速に開始する別のもの、ボーラスインスリンの混合物を含み得る。そのような混合物の例は、WO 2005/012347に開示されている、LysB29Nε-ヘキサデカンジオイル-γ-Glu desB30ヒトインスリンに相当するNεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-γ-Glu)desB30ヒトインスリンと混合した、インスリンアスパルト、AspB28ヒトインスリンである。そのような混合物の別の例は、LysB29Nε-ヘキサデカンジオイル-γ-Glu desB30ヒトインスリンと混合した、Lispro、LysB28ProB29ヒトインスリンである。そのような混合物の第3の例は、LysB29Nε-ヘキサデカンジオイル-γ-Glu desB30ヒトインスリンと混合した、グルリジン、LysB3GluB29-ヒトインスリンである。
【０１１９】
本発明の一実施形態では、即効型インスリンのうちの少なくとも85%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも小さな分子量を有する複合体として存在する。
【０１２０】
本発明の一実施形態では、即効型インスリンのうちの少なくとも90、92、95、96、97、98、99、99.5%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも小さな分子量を有する複合体として存在する。
【０１２１】
アシル化インスリン誘導体および即効型インスリンアナログは、約90%/10%;約75%/25%、約70%/30%、約50%/50%、約25%/75%、約30%/70%または約10%/90%のモル比で混合することができる。
【０１２２】
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、約6.5から約8.5の間のpHを有する。別の態様では、pHは、約7.0から約8.2までであり、pHは、約7.2から8.0までまたは約7.4から約8.0までであり、またはpHは、約7.4から約7.8までである。
【０１２３】
本発明はさらに、6分子のアシル化インスリン当たり約4個を超える亜鉛原子を組成物に加える、アシル化インスリンを含む医薬組成物を製造するための方法を含む。
【０１２４】
本発明のさらなる態様では、6分子のアシル化インスリン当たり約4.3個を超える亜鉛原子を組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり約4.5個を超える亜鉛原子を組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり約5個を超える亜鉛原子を組成物に加える。さらなる態様では、6分子のアシル化インスリン当たり約5.5個を超える亜鉛原子、または約6.5個を超える亜鉛原子、または約7.0個を超える亜鉛原子、または約7.5個を超える亜鉛原子を組成物に加える。
【０１２５】
本発明の一実施形態では、本方法は、6分子のアシル化インスリン当たり、最大約12個までの亜鉛原子を組成物に加えることを含む。
【０１２６】
本発明の一実施形態では、本方法は、6分子のアシル化インスリン当たり、約4.3個から約12個の間の亜鉛原子を組成物に加えることを含む。
【０１２７】
本発明のさらなる態様では、6分子のアシル化インスリン当たり約4.5個から約12個の間の亜鉛原子を組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり、約5個から約11.4個の間の亜鉛原子を組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり約5.5個から約10個の間の亜鉛原子を組成物に加える。本発明の一実施形態では、アシル化インスリンは、NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)15CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)17CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)18CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu-N-(γ-Glu)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-α-Glu-N-(β-Asp)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Gly-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Sar-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; (NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-β-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-α-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-D-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)16CO-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)14CO-IDA) desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)16CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; およびNεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシメチル)-β-Ala] desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される。
【０１２８】
「ニコチン酸系化合物」という用語は、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せを含む。
【０１２９】
本発明によると、ニコチン酸系化合物および/またはその塩の濃度は、約1mMから約300mMまでまたは約5mMから約200mMまでの範囲である。
【０１３０】
「アルギニン」または「Arg」という用語は、アミノ酸であるアルギニンおよび/またはその塩を含む。
【０１３１】
一実施形態では、インスリン製剤は、1から100mMのアルギニンを含む。
【０１３２】
一実施形態では、インスリン製剤は、1から20mMのアルギニンを含む。
【０１３３】
一実施形態では、インスリン製剤は、20から90mMのアルギニンを含む。
【０１３４】
一実施形態では、インスリン製剤は、30から85mMのアルギニンを含む。
【０１３５】
本明細書において使用される「医薬製剤」または「インスリン製剤」という用語は、速効型インスリン化合物、長時間作用型インスリン化合物、ニコチン酸系化合物およびアミノ酸を含み、場合によって、保存剤、キレート剤、張性調節剤、充填剤、安定化剤、酸化防止剤、ポリマーおよび界面活性剤、金属イオン、油脂性媒体ならびにタンパク質(例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質)などの他の添加剤(excipient)と一緒に含む製品を意味し、前記インスリン製剤は、前記インスリン製剤の人への投与によって、疾患または障害を治療、予防またはその重症度を軽減するのに有用である。したがって、インスリン製剤は、医薬製剤、医薬組成物または組成物として、当技術分野においても知られている。
【０１３６】
緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸またはその混合物からなる群から選択され得るが、これらに限定されない。これらの具体的な緩衝剤のそれぞれは、本発明の代替の実施形態を構成する。
【０１３７】
本発明のインスリン製剤は、インスリン製剤に共通の他の成分、例えば、クエン酸塩などの亜鉛錯化剤およびリン酸緩衝液をさらに含み得る。
【０１３８】
グリセロールおよび/またはマンニトールおよび/または塩化ナトリウムは、0から250mM、0から200mMまたは0から100mMの濃度に相当する量で存在し得る。
【０１３９】
安定化剤、界面活性剤および保存剤も、本発明のインスリン製剤中に存在し得る。
【０１４０】
本発明のインスリン製剤は、薬学的に許容される保存剤をさらに含み得る。保存剤は、保存効果を得るのに十分な量で存在し得る。インスリン製剤中の保存剤の量は、例えば、当技術分野の文献および/または例えば市販の製品中の保存剤について知られている量から決定され得る。これらの具体的な保存剤のそれぞれは、本発明の代替の実施形態を構成する。医薬製剤における保存剤の使用は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995に記載されている。
【０１４１】
本発明のインスリン製剤中に存在する保存剤は、これまでの従来のインスリン製剤におけるように、例えば、フェノール、m-クレゾールおよびメチルパラベンであってよい。
【０１４２】
本発明のインスリン製剤は、キレート剤をさらに含み得る。医薬製剤におけるキレート剤の使用は、当業者にはよく知られている。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【０１４３】
本発明のインスリン製剤は、安定化剤をさらに含み得る。本明細書において使用される「安定化剤」という用語は、ペプチドを安定化させるために、すなわち、そのような製剤の保存寿命および/または使用時間を延ばすために、医薬製剤を含有するポリペプチドに加えられる化学物質を指す。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【０１４４】
本発明のインスリン製剤は、界面活性剤をさらに含み得る。本明細書において使用される「界面活性剤」という用語は、水溶性(親水性)部分、頭部および脂溶性(親油性)セグメントを含む任意の分子またはイオンを指す。界面活性剤は、好ましくは、界面に集積し、親水性部分が水の方向へ向けられ(親水相)、親油性部分が油の方向または疎水相(すなわち、ガラス、空気、油など)へ向けられる。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は、臨界ミセル濃度またはCMCとして知られている。さらに、界面活性剤は、液体の表面張力を下げる。界面活性剤は、両親媒性化合物としても知られている。「洗剤」という用語は、一般に、界面活性剤について使用される同義語である。医薬製剤における界面活性剤の使用は、当業者にはよく知られている。便宜上、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995を参照のこと。
【０１４５】
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のインスリン化合物の水性溶液および緩衝剤を含むインスリン製剤であって、前記インスリン化合物が、0.1mMからまたはそれを超える濃度で存在し、前記製剤が、室温(約25℃)で約3.0から約8.5までのpHを有するインスリン製剤に関する。
【０１４６】
本発明はまた、本発明のインスリン製剤を製造するための方法に関する。
【０１４７】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、
a)  インスリン化合物を別々に溶解させることによって、インスリン化合物の水中または緩衝剤中溶液または混合物を調製すること;
b)  二価の金属イオンを水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
c)  1種、2種以上の保存剤を水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって;または保存剤を別々に水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること
d)  等張化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
e)  緩衝剤を水中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
f)  界面活性剤および/または安定化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
g)  ニコチンアミドを水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
h)  溶液a)と、溶液b)、c)、d)、e)、f)およびg)のうちの1種または複数種とを混合すること;
最後に、h)における混合物のpHを所望のpHに調整した後、滅菌ろ過を行うこと
を含む。
【０１４８】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、
a)  インスリン化合物を別々に溶解させることによって、インスリン化合物の水中または緩衝剤中溶液または混合物を調製すること;
b)  二価の金属イオンを水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
c)  1種、2種以上の保存剤を水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって;または保存剤を別々に水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること
d)  等張化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
e)  緩衝剤を水中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
f)  界面活性剤および/または安定化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
g)  吸収速度増強剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製すること;
h)  溶液a)と、溶液b)、c)、d)、e)、f)およびg))のうちの1種または複数種とを混合すること;
最後に、h)における混合物のpHを所望のpHに調整した後、滅菌ろ過を行うこと
を含む。
【０１４９】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、以下の連続したステップ:
a)  長時間作用型インスリン化合物を含む溶液を調製するステップ、
b)  亜鉛を加える前に、a)に、1種、2種以上のフェノール系保存剤および最終的に等張化剤、緩衝剤、安定化剤およびニコチンアミドを加えるステップ、
c)  約pH7.4以上で、亜鉛を加えるステップ、
d)  亜鉛をpH7.4以下で加えた場合には、1時間から一晩待機し、亜鉛を加えたpHが約7.8であった場合には、数分待機するステップ
e)  即効型インスリン化合物を加えるステップならびに
f)  ニコチンアミドを加えるステップ
を含む。
【０１５０】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、以下の連続したステップ:
a)  インスリンデグルデクを含む溶液を調製するステップ
b)  亜鉛を加える前に、a)に、フェノールおよびm-クレゾールを加えるステップ、
c)  pH7.4以上で、亜鉛を加えるステップ、
d)  すべてのデグルデクが、ジ-ヘキサマー形であることを検証するステップ
d)  亜鉛をpH7.4以下で加えた場合には、1時間から一晩待機し、pH約7.8の場合には、数分待機するステップ、
e)  インスリンアスパルトを加えるステップならびに
f)  ニコチンアミドを加えるステップ
を含む。
【０１５１】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤を作製するための方法は、以下の連続したステップ:
a)  インスリンデテミルを含む溶液を調製するステップ
b)  酢酸亜鉛または塩化亜鉛を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製するステップ;
c)  保存剤を水中もしくは緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製するステップ;
d)  等張化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製するステップ;
e)  界面活性剤および/または安定化剤を水中または緩衝剤中に溶解させることによって、溶液を調製するステップ;
f)  溶液a)と、溶液b)、c)、d)およびe)のうちの1種または複数種とを混合するステップ;
g)  インスリンアスパルトの溶液を調製するステップ;
h)  g)とb)とを約3Zn/6insに合わせて混合し、保存剤溶液を加え、pHを7.4に調整するステップ;
h)  亜鉛および保存剤を含むデテミル溶液を、亜鉛および保存剤を含むアスパルト溶液と混合するステップ;
i)  ニコチンアミドを加えるステップ
最後に、i)における混合物のpHを所望のpHに調整した後、滅菌ろ過を行うこと
を含む。
【０１５２】
本明細書において使用される「吸収速度増強剤」という用語は、皮下貯蔵から血中への吸収速度を増加させる物質を意味する。吸収速度増強剤の例は、ニコチンアミド、ヒアルロニダーゼ、EDTA(エデト酸塩)およびクエン酸塩である。
【０１５３】
本発明のインスリン製剤は、非経口投与による糖尿病の治療において使用することができる。本発明のインスリン製剤の、患者に投与されるべき投与量は、主治医によって選択されることが推奨される。
【０１５４】
非経口投与は、シリンジを用い、場合によってペン様のシリンジを用いた皮下、筋肉内、腹腔内または静脈内注射によって行われ得る。あるいは、非経口投与は、注入ポンプを用いて行うことができる。さらなる選択肢として、本発明のインスリン化合物を含有するインスリン製剤は、例えば、無針注射によるもしくは貼付剤からの、場合によってイオン導入パッチからの経皮投与またはバッカル剤などの経粘膜投与に適合し得る。
【０１５５】
本発明によるインスリン製剤は、そのような治療を必要とする患者に、いくつかの部位に、例えば、局所部位、例えば、皮膚および粘膜部位に、バイパス吸収を行う部位、例えば、動脈中、静脈中、心臓内への投与を行う部位にならびに吸収を伴う部位、例えば、皮内、皮下、筋肉内または腹腔内への投与を行う部位に投与され得る。
【０１５６】
本発明のインスリン製剤は、OADまたはGLP-1とともに、同時にまたは連続して投与され得る。要素は、単回剤形が両方の化合物を含有する単回剤形で供給され得るかまたはアシル化インスリンを含む医薬組成物および第2の単位剤形としてOADを含有する医薬組成物を含む医薬組成物の製剤を含むキット-オブ-パーツの形で供給され得る。第1の、第2のまたは第3等の単位剤形が、本明細書を通じて言及されるときはいつでも、投与の好ましい順序を示しているのではなく、単に便宜上の目的で示しているに過ぎない。
【０１５７】
アシル化インスリンを含む医薬組成物の製剤およびOADまたはGLP-1の製剤の「同時」投与とは、単回剤形での化合物の投与、または第1の薬剤の投与に続く、15分、10、5または2分以下の時間間隔での第2の薬剤の投与を意味する。いずれか一方の要素が、最初に投与され得る。
【０１５８】
「連続した」投与とは、第1の薬剤の投与に続く、15分を超える時間間隔での第2の薬剤の投与を意味する。2つの単位剤形のうちのいずれかが、最初に投与され得る。好ましくは、両方の製品が、同一の静脈内通路に注射される。
【０１５９】
本発明の一実施形態では、インスリン製剤は、OADまたはGLP-1とともに、1日1回、同時にまたは連続して投与される。本発明の別の実施形態では、インスリン製剤は、1日最大5回まで与えることができる。
【０１６０】
本発明の一実施形態では、インスリン製剤は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。そのような製剤は、典型的には、溶液または懸濁液である。本発明のさらなる実施形態では、インスリン製剤は、水性溶液である。
【０１６１】
「水性製剤」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む製剤と定義される。同様に、「水性溶液」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む溶液と定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも50%w/wの水を含む懸濁液と定義される。
【０１６２】
水性懸濁液は、活性化合物を、水性懸濁液の製造に適した添加剤と混合して含有し得る。
【０１６３】
一実施形態では、本発明のインスリン製剤は、注射によるインスリン療法に使用されるペン様デバイスにおける適用に十分適している。
【０１６４】
本明細書において使用されるインスリン製剤の「物理的安定性」という用語は、タンパク質を熱-機械的応力に曝した結果としておよび/または疎水性表面および界面などの不安定な界面および表面との相互作用の結果として、生物学的に不活性なおよび/または不溶性のタンパク質の凝集体を形成する、タンパク質の傾向を指す。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、適した容器(例えば、カートリッジまたはバイアル)に満たされた製剤を、異なる温度で、種々の期間、機械的/物理的応力(例えば、撹拌)に曝した後に、目視検査および/または濁度測定を用いて評価される。製剤の目視検査は、暗い背景で、集束させた鋭い光の中で行われる。製剤の濁度は、例として、0から3までの尺度で、濁度の程度をランク付けする視覚的尺度によって特性決定される(濁度を示さない製剤は、視覚的尺度0に相当し、日光の下で視覚的濁度を示す製剤は、視覚的尺度3に相当する)。製剤は、日光の下で視覚的濁度を示す場合、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。あるいは、製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定によって評価することができる。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、分光学的薬剤またはタンパク質の配座状態のプローブを使用することによって評価することもできる。プローブは、好ましくは、タンパク質の非天然配座異性体に選択的に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子分光学的プローブの一例は、チオフラビンTである。チオフラビンTは、アミロイド繊維の検出のために広く使用されている蛍光色素である。繊維の存在下で、恐らく他のタンパク質の配置も同様に、チオフラビンTは、繊維タンパク質形態に結合すると、約450nmで最大となる新たな励起および約482nmの増強された発光を生じる。未結合チオフラビンTは、それらの波長で本質的に非蛍光性である。
【０１６５】
本明細書において使用されるタンパク質製剤の「化学的安定性」という用語は、天然のタンパク質構造と比較して、より低い生物学的効力を潜在的に有するおよび/またはより増大した免疫原性を潜在的に有する化学的分解生成物の形成をもたらす、タンパク質の共有結合構造の変化を指す。種々の化学的分解生成物は、天然のタンパク質のタイプおよび性質ならびにタンパク質が曝される環境に応じて形成され得る。化学的分解生成物の量の増加は、タンパク質製剤の保存中および使用中に見られることが多い。ほとんどのタンパク質は、脱アミド化する傾向があり、その過程で、グルタミニルまたはアスパラギニル残基中の側鎖アミド基が加水分解されて遊離カルボン酸を形成しまたはアスパラギニル残基はIsoAsp誘導体を形成する。他の分解経路は、高分子量生成物の形成に関与し、ここでは2つ以上のタンパク質分子が、アミド基転移および/またはジスルフィド相互作用を通じて互いに共有結合し、共有結合したダイマー、オリゴマーおよびポリマー分解生成物の形成をもたらす(Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992)。酸化(例として、メチオニン残基の)は、化学的分解の別の変種として言及することができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なる環境条件(分解生成物の形成は、例として、温度上昇によってしばしば加速され得る)に曝された後に、種々の時点で化学的分解生成物の量を測定することによって評価することができる。個々の分解生成物のそれぞれの量は、多くの場合、種々のクロマトグラフィー技術(例えば、SEC-HPLCおよび/またはRP-HPLC)を使用して、分子サイズおよび/または電荷に応じて分解生成物を分離することによって測定される。HMWP生成物は、潜在的に免疫原性であり、生物学的に活性ではないため、低レベルのHMWPが有利である。
【０１６６】
「安定化された製剤」という用語は、増加した物理的安定性、増加した化学的安定性または増加した物理的および化学的な安定性を有する製剤を指す。一般に、製剤は、使用期限に達するまでは、(推奨される使用条件および貯蔵条件に従って)使用中および保存中に安定でなければならない。
【０１６７】
「糖尿病」または「真性糖尿病」という用語は、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病(妊娠中の)および高血糖を引き起こす他の状態を含む。この用語は、膵臓が不十分な量のインスリンを産生するまたは体細胞がインスリンに対して適切に応答できず、細胞がグルコースを吸収できない代謝障害に使用される。結果として、グルコースは、血中に蓄積する。
【０１６８】
1型糖尿病は、インスリン依存性真性糖尿病(IDDM)および若年型糖尿病とも呼ばれており、B-細胞の破壊によって引き起こされ、通常は絶対的なインスリン欠乏に至る。
【０１６９】
2型糖尿病は、非インスリン依存性真性糖尿病(NIDDM)および成人型糖尿病としても知られており、主にインスリン抵抗性であり、ひいては相対的なインスリン不足を伴うおよび/またはインスリン抵抗性を有し、主にインスリンの分泌低下を伴う。
【０１７０】
本明細書において使用される「薬学的に許容される」という用語は、標準的な薬学的適用に適している、すなわち、患者においていかなる重篤な有害事象も生じさせないことを意味する。
【０１７１】
本明細書において使用される「疾患の治療」という用語は、疾患、状態または障害を発症している患者の管理およびケアを意味し、疾患の治療、予防または緩和を含む。治療の目的は、疾患、状態または障害と闘うことである。治療は、疾患、状態または障害を取り除くまたは抑制するためのおよび疾患、状態または障害に関連する症状または合併症を緩和するための活性化合物の投与ならびに疾患、状態または障害の予防を含む。
【０１７２】
その最も広い意味では、「重症患者(critically ill patient)」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者、手術を受けている途中で、合併症が併発する場合の患者ならびに7日間以内に生命の維持に必要不可欠な臓器において手術を受けているまたは7日間以内に大手術を受けている患者を指す。より制限された意味では、「重症患者」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者あるいは手術を受けている途中で、合併症が併発する場合の患者を指す。さらに制限された意味では、「重症患者」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患または負傷によって、命を脅かすような単臓器もしくは多臓器系不全を起こしているまたはそれを急性的に起こす危険性がある患者を指す。同様に、これらの定義は、「重症患者(critical illness in a patient)」および「重症患者(patient is critically ill)」などの類似の表現に適用する。重症患者の例は、心臓手術、脳手術、胸部手術、腹部手術、血管手術もしくは移植手術を必要とする患者あるいは神経系疾患、脳外傷、呼吸不全、腹膜炎、多発外傷もしくは重症の火傷または重症の多発性神経障害に罹患している患者である。
【０１７３】
本明細書において使用される「同化」という用語は、より小さい単位から分子を構成する一連の代謝経路を意味する。これらの反応は、エネルギーを必要とする。代謝過程を分類する1つのやり方は、細胞、器官または有機体のレベルで、「同化」として分類するかまたは正反対の「異化」として分類するかである。同化は、巨大分子をより小さい部分に分解して呼吸に使い尽くす異化によって、エネルギーが供給される。多くの同化過程は、アデノシン三リン酸(ATP)によってエネルギーが供給される。同化過程は、器官および組織を「築き上げる」方向に働く。これらの過程によって、細胞が成長および分化し、体のサイズが大きくなり、ある過程は、複雑な分子の合成に関与している。同化過程の例には、骨の成長および石化ならびに筋肉量の増加が含まれる。内分泌学者は伝統的に、ホルモンが代謝のどの部分を刺激するかによって、ホルモンを同化または異化として分類してきた。同化と異化との間のバランスはまた、概日リズムによって調節され、グルコース代謝などの過程は、終日にわたって、動物の標準的な活動期間に合うように変動する。これらのホルモンの「同化作用」のいくつかの例は、アミノ酸からタンパク質の合成の増加、食欲増加、骨リモデリングおよび成長の増加ならびに赤血球の産生を増加させる骨髄の刺激である。多くの機構を通じて、同化ホルモンは、筋肉細胞の形成を刺激し、よって骨格筋のサイズの増加をもたらし、その結果、強さが増すことになる。
【０１７４】
別の実施形態では、本発明によるインスリンアナログは、2型糖尿病における疾患の悪化を遅延または予防するための医薬品として使用される。
【０１７５】
本発明の一実施形態では、ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防のための医薬品として使用するための、本発明によるインスリン製剤が提供される。
【０１７６】
本発明のさらなる実施形態では、ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患、脳卒中の治療または予防のための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、そのような治療のための有効量の本発明によるインスリン製剤を投与することを含む方法が提供される。
【０１７７】
本発明によるインスリン製剤での治療はまた、第2のまたはそれ以上の薬理学的に活性な物質、例えば、抗糖尿病剤、抗肥満剤、食欲調節剤、抗高血圧剤、糖尿病に起因するまたは関連する合併症の治療および/または予防のための薬剤ならびに肥満に起因するまたは関連する合併症および障害の治療および/または予防のための薬剤から選択される物質と組み合わされ得る。
【０１７８】
本発明によるインスリン製剤での治療はまた、胃バンディング術または胃バイパス術などの、グルコースレベルおよび/または脂質恒常性に影響を及ぼす手術である肥満手術と組み合わされ得る。
【０１７９】
ポリペプチド、例えば、インスリンの製造は、当技術分野においてよく知られている。本発明によるインスリン化合物は、例として、古典的なペプチド合成、例えば、t-BocもしくはFmocの化学または他のよく確立された技術を使用する固相ペプチド合成によって製造され得、例えば、Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999を参照のこと。インスリン化合物は、アナログをコードするDNA配列を含有し、適した栄養培地中で、インスリン化合物の発現が許容される条件下で、インスリン化合物を発現することが可能な宿主細胞を培養することを含む方法によっても製造され得る。非天然のアミノ酸残基を含むインスリン化合物については、例として、tRNA変異体の使用によって、非天然のアミノ酸が化合物に組み込まれるように、組換え細胞を改変するべきである。よって、手短に言えば、本発明によるインスリン化合物は、知られているインスリン化合物の調製と同じように調製される。
【０１８０】
インスリン化合物の製造には、いくつかの方法が使用され得る。例えば、微生物中でのインスリンの製造に使用される3つの主な方法が、WO2008034881に開示されている。これらのうちの2つは、大腸菌(Escherichia coli)が関与しており、細胞質中での巨大融合タンパク質の発現(Frank他(1981) in Peptides: Proceedings of the 7th American Peptide Chemistry Symposium (Rich & Gross編)、Pierce Chemical Co.、Rockford、III. 729〜739頁)またはペリプラズム空間の中への分泌を可能にするためのシグナルペプチドの使用(Chan他(1981) PNAS 78:5401〜5404頁)である。3つ目の方法は、培地中にインスリン前駆体を分泌させるために、サッカロミセスセレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)を利用している(Thim他(1986) PNAS 83:6766〜6770頁)。先行技術は、大腸菌またはサッカロミセスセレビシエにおいて発現される多くのインスリン前駆体を開示している。米国特許第5,962,267号、WO 95/16708、欧州特許第0055945号、欧州特許第0163529号、欧州特許第0347845号および欧州特許第0741188号を参照のこと。
【０１８１】
インスリン化合物は、例えば米国特許第6500645号に開示されているようなよく知られている技術によって、問題となっているインスリン化合物をコードするDNA配列を、適した宿主細胞中で発現することによって製造される。インスリン化合物は、直接発現されるかまたはB鎖上にN-末端伸長部分もしくはB鎖上にC-末端伸長部分を有する前駆体分子として発現される。N-末端伸長部分は、直接発現される生成物の収率を高める機能を有し、15個までのアミノ酸残基の長さであり得る。N-末端伸長部分は、培養ブロスから単離した後、インビトロで開裂されることになり、それ故に、B1に隣接して開裂部位を有する。本発明において、適したタイプのN-末端伸長部分は、米国特許第5,395,922号および欧州特許第765,395号に開示されている。C-末端伸長部分は、宿主細胞のエキソプロテアーゼによる、細胞内のタンパク質分解プロセシングに対して、成熟インスリンまたはインスリンアナログ分子を保護する機能を有し得る。C-末端伸長部分は、培養ブロス中で、分泌された活性なカルボキシペプチダーゼによって、細胞外に開裂されるかまたは培養ブロスから単離した後、インビトロで開裂されることになる。B鎖上にカルボキシペプチダーゼ(carboxypetidase)によって除去されるC-末端伸長部分を有する、成熟インスリンおよびインスリン化合物を製造する方法は、WO 08037735に開示されている。このプロセスの標的インスリン生成物は、B鎖の短いC-末端伸長部分を有していても有していなくてもよい、2本鎖ヒトインスリンまたは2本鎖ヒトインスリンアナログであり得る。標的インスリン生成物が、B鎖のC-末端伸長部分を有していない場合には、前記C-末端伸長部分は、その後、さらなる精製ステップ前に、B鎖から開裂されることが可能であるべきである。
【０１８２】
本発明はまた、本明細書における他の箇所でさらに記載されている、以下の実施形態の非限定的なリストを企図する。
1. ・  アシル化インスリンまたはそのアナログ、
・  ヒトインスリンまたはインスリンアナログ、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
2. アシル化インスリンまたはそのアナログが、親インスリン分子のB鎖中の位置のLys残基のε-アミノ基がアシル化されたインスリンである、実施形態1に記載のインスリン製剤。
3. アシル化インスリンまたはそのアナログのアシル基が、少なくとも1つの遊離カルボン酸または中性pHで負に荷電している基を含む、実施形態1または2に記載のインスリン製剤。
4. アシル化インスリンまたはそのアナログのアシル基が、4個から32個までの炭素原子を有するジカルボン酸脂肪酸から誘導される、実施形態1から3のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
5. アシル化インスリンまたはそのアナログのアシル基が、アミド結合を介したリンカー基によって、インスリン分子に結合している、実施形態1または5に記載のインスリン製剤。
6. リンカー基が、少なくとも1つの遊離カルボキシル基または中性pHで負に荷電している基を含む、実施形態1または6に記載のインスリン製剤。
7. インスリン分子が、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基または親インスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基にアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも1つの遊離カルボン酸基または中性pHで負に荷電している基と、炭素鎖中に約4個から約32個の炭素原子を有する脂肪酸部分と;側鎖中の個々の成分をアミド結合を介して一緒に連結する、可能な1つまたは複数のリンカーとを含む側鎖を有する、実施形態1から6のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
8. 側鎖が、少なくとも1つの芳香族基を含む、実施形態1から7のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
9. 側鎖が、少なくとも1つの二官能性PEG基を含む、実施形態1から7のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
10. インスリン分子が、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基に結合している側鎖を有し、その側鎖は、一般式:
-W-X-Y-Z2
[式中、Wは:
・  側鎖中にカルボン酸基を有するα-アミノ酸残基であって、そのカルボン酸基のうちの1つとともに、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基と一緒になってアミド基を形成するα-アミノ酸残基;
・  アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている2つ、3つもしくは4つのα-アミノ酸残基からなる鎖であって、アミド結合を介した鎖は、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基に連結しており、
Wのアミノ酸残基は、Wが側鎖中にカルボン酸基を有する少なくとも1つのアミノ酸残基を有するように、中性の側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖;または
・  Xから親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基までの共有結合
であり;
Xは、
・  -CO-;
・  -CH(COOH)CO-;
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CO-;
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CON(CH2COOH)CH2CO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CH2CO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CH2CON(CH2CH2COOH)CH2CH2CO-;
・  -CO-NHCH(COOH)(CH2)4NHCO-;
・  -CO-N(CH2CH2COOH)CH2CO-;または
・  -CO-N(CH2COOH)CH2CH2CO-
であって、
a)Wがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖である場合、下線の炭素からの結合を介して、W中のアミノ基とアミド結合を形成するかまたは、
b)Wが共有結合である場合、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基とアミド結合を形成し;
Yは、
・  -(CH2)m-であり、mは、6から32の範囲の整数であり;
・  1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に10個から32個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖
であり;
Z2は、
・  -COOH;
・  -CO-Asp;
・  -CO-Glu;
・  -CO-Gly;
・  -CO-Sar;
・  -CH(COOH)2;
・  -N(CH2COOH)2;
・  -SO3H;もしくは
・  -PO3H
ただし、Wが共有結合であり、Xが-CO-である場合には、Zは-COOHとは異なる]
からなるものならびにその任意のZn2+複合体である、実施形態1から7のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
11. Z2が-COOHである、実施形態1から7および10のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
12. アシル化インスリンが、NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)15CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)17CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)18CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-Glu-N-(γ-Glu)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Glu-OC(CH2)14CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Asp-OC(CH2)16CO-) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-α-Glu-N-(β-Asp)) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Gly-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(Sar-OC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-γ-Glu) desB30 ヒトインスリン; (NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-β-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)13CO)-α-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)16CO)-γ-D-Glu) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン NεB29-(Nα-(HOOC(CH2)14CO)-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)16CO-β-D-Asp) desB30 ヒトインスリン; NεB29-(N-HOOC(CH2)14CO-IDA) desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)16CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-Gly] desB30 ヒトインスリン; およびNεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシメチル)-β-Ala] desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態1から7および10から11のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
13. アシル化インスリンが、式
【０１８３】
【化６】
2013545782.tif 000007
【０１８４】
[式中、Insは、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基またはインスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のCO-基に結合されている親インスリン部分であり;
X4は、
・  -(CH2)nであり、nは、1、2、3、4、5もしくは6であり;
・  NRであり、Rは、水素もしくは-(CH2)p-COOH;-(CH2)p-SO3H;-(CH2)p-PO3H2;-(CH2)p-O-SO3H2;-(CH2)p-O-PO3H2;1個もしくは2個の-(CH2)p-O-COOH基で置換されているアリーレン;-(CH2)p-テトラゾリルであり、pは1から6の範囲の整数であり;
・  -(CR1R2)q-NR-CO-であり、R1およびR2は、互いに独立におよびそれぞれのqの値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、qは1〜6であり、Rは上記のように定義され;
・  -((CR3R4)q1-NR-CO)2-4-であり、R3およびR4は、互いに独立におよびそれぞれのq1の値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、q1は1〜6であり、Rは上記のように定義され;または、
・  結合
であり;
W1は、-COOH、-SO3Hおよび-PO3H2ならびにテトラゾリルからなる群から選択される1つまたは2つの基で置換されていてもよいアリーレンまたはヘテロアリーレンであるかあるいはW1は結合であり;
mは、0、1、2、3、4、5または6であり;
X5は、
【０１８５】
【化７】
2013545782.tif 000008
【０１８６】
であり、Rは上記のように定義され;または
・  結合
であり;
Y1は、
・  -(CR1R2)q-NR-CO-であり、R1およびR2は、互いに独立におよびそれぞれのqの値についても独立に、H、-COOH、結合もしくはOHであってよく、qは1〜6であり、Rは上記のように定義され;
・  NRであり、Rは上記のように定義され;
・  -((CR3R4)q1-NR-CO)2-4-であり、R3およびR4は、互いに独立におよびそれぞれのq1の値についても独立に、H、-COOHもしくはOHであってよく、q1は1〜6であり、Rは上記のように定義され;または、
・  結合
であり;
Q7は、
・  -(CH2)r-であり、rは、4から22までの整数であり;
・  1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に4個から22個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖
であり;または
・  式
-(CH2)s-Q8-(C6H4)v1-Q9-(CH2)W-Q10-(C6H4)v2-Q11-(CH2)t-Q12-(C6H4)v3-Q13-(CH2)z-
の二価の炭化水素鎖であり、
[式中、Q8〜Q13は、互いに独立に、O;Sもしくは結合であってよく;s、w、tおよびzは、互いに独立に、s、w、tおよびzの合計が4から22の範囲になるように、0もしくは1から10までの整数であり、v1、v2およびv3は、互いに独立に、0もしくは1であり得、ただし、W1が結合である場合には、Q7は、式-(CH2)v4C6H4(CH2)W1-[式中、v4およびw1の合計が6から22の範囲になるように、v4およびw1は整数であるかまたはそれらのうちの1つは0である]の二価の炭化水素鎖ではない]
であり;
Z1は、
-COOH;
-CO-Asp;
-CO-Glu;
-CO-Gly;
-CO-Sar;
-CH(COOH)2;
-N(CH2COOH)2;
-SO3H
-PO3H2;
-O-SO3H;
-O-PO3H2;
-テトラゾリルまたは
-O-W2
であり、W2は、-COOH、-SO3Hおよび-PO3H2ならびにテトラゾリルから選択される1つまたは2つの基で置換されているアリーレンまたはヘテロアリーレンであり;
ただし、W1が結合であり、v1、v2およびv3がすべて0であり、Q8-13がすべて結合である場合には、Z1はO-W2である]
を有しているものならびにその任意のZn2+複合体である、実施形態1から8のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
14. W1がフェニレンである、実施形態1または13に記載のインスリン製剤。
15. W1が、窒素、酸素または硫黄を含む5〜7員の複素環系である、実施形態1または13に記載のインスリン製剤。
16. W1が、少なくとも1つの酸素を含む5員の複素環系である、実施形態1、13および15のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
17. Q7が、-(CH2)r-であり、rが、4から22まで、8から20まで、12から20までまたは14〜18までの範囲の整数である、実施形態13から16のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
18. Q8、Q9、Q12およびQ13が、すべて結合であり、v2は1であり、v1およびv3は、0である、先の実施形態13から16のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
19. Q10およびQ11が、酸素である、実施形態18のいずれかに記載のインスリン製剤。
20. X4およびY1が、結合であり、X5が、
【０１８７】
【化８】
2013545782.tif 000009
【０１８８】
[式中、Rは、-(CH2)p-COOHであり、pは、1〜4である]
である、実施形態13から19のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
21. Z1が-COOHである、実施形態13から20のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
22. アシル化インスリンまたはそのアナログが、式
【０１８９】
【化９】
2013545782.tif 000010
【０１９０】
[式中、Insは、B鎖のN-末端アミノ酸残基のα-アミノ基またはインスリン部分のB鎖中に存在するLys残基のε-アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のCO-基に結合されている親インスリン部分であり;
それぞれのnは、独立に、0、1、2、3、4、5または6であり;
Q1、Q2、Q3、およびQ4は、互いに独立に、
・  (CH2CH2O)s-;(CH2CH2CH2O)s-;(CH2CH2CH2CH2O)s-;
(CH2CH2OCH2CH2CH2CH2O)s-または(CH2CH2CH2OCH2CH2CH2CH2O)s-であり、sは、1〜20であり;
・  -(CH2)r-であり、rは、4から22の整数であり;または、1個、2個もしくは3個の-CH=CH-基および鎖中に4個から22個の範囲の総数の炭素原子を与えるのに十分な数の-CH2-基を含む二価の炭化水素鎖であり;
・  -(CH2)t-もしくは-(CH2OCH2)t-であり、tは、1から6までの整数であり;
・  -(CR1R2)q-であり、R1およびR2は、互いに独立に、H、-COOH、(CH2)1-6COOHであってよく、R1およびR2は、それぞれの炭素において異なっていてよく、qが1〜6であり;
・  -((CR3R4)q1)1-(NHCO-(CR3R4)q1-NHCO)1-2-((CR3R4)q1)1もしくは-((CR3R4)q1)1-(CONH-(CR3R4)q1-CONH)1-2-((CR3R4)q1-)-、-((CR3R4)q1)1-(NHCO-(CR3R4)q1-CONH)1-2-((CR3R4)q1)1もしくは-((CR3R4)q1)1-(CONH-(CR3R4)q1-NHCO)1-2-((CR3R4)q1)1であり、R3およびR4は、互いに独立に、H、-COOHであってよく、R3およびR4は、それぞれの炭素において異なっていてよく、q1は、1〜6であり;あるいは
・  結合
であってよく、
ただし、Q1〜Q4は異なっており;
X1、X2およびX3は、独立に、
・  O;
・  結合;または
【０１９１】
【化１０】
2013545782.tif 000011
【０１９２】
[式中、Rは、水素または-(CH2)p-COOH、-(CH2)p-SO3H、-(CH2)p-PO3H2、-(CH2)p-O-SO3H;-(CH2)p-O-PO3H2;または-(CH2)p-テトラゾール-5-イルであり、それぞれのpは、他のpとは独立に、1から6の範囲の整数である]
であり;
Zは、
-COOH;
-CO-Asp;
-CO-Glu;
-CO-Gly;
-CO-Sar;
-CH(COOH)2;
-N(CH2COOH)2;
-SO3H
-OSO3H
-OPO3H2
-PO3H2または
-テトラゾール-5-イル
である]
を有しているものならびにその任意のZn2+複合体である、実施形態1から7および9のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
23. sが、2〜12、2〜4または2〜3の範囲である、実施形態1または22に記載のインスリン製剤。
24. sが、好ましくは1である、実施形態1または22に記載のインスリン製剤。
25. Zが-COOHである、実施形態22から24のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
26. 親インスリンが、desB30ヒトインスリンアナログである、実施形態のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
27. 親インスリンが、ヒトインスリン;desB1ヒトインスリン;desB30ヒトインスリン;GlyA21ヒトインスリン;GlyA21 desB30ヒトインスリン;AspB28ヒトインスリン;ブタインスリン;LysB28 ProB29ヒトインスリン;およびLysB3 GluB29ヒトインスリンまたはAspB28 desB30ヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態1から26のいずれかに記載のインスリン製剤。
28. アシル化インスリンまたはそのアナログが、0100-0000-0496 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0515 NεB29-[N-(HOOC(CH2)13CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0522 NεB29-[N-(HOOC(CH2)15CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0488 NεB29-[N-(HOOC(CH2)16CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン; 0100-0000-0544 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシメチル)-C6H4CO] desB30 ヒトインスリン、および0100-0000-029 NεB29-[N-(HOOC(CH2)14CO)-N-(カルボキシエチル)-CH2-(フラニレン)CO] desB30 ヒトインスリン、0100-0000-0552 NεB29 -{4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシ-フェノキシ)-デカノイルアミノ]-ブチリル}desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態1から8、13から21および26から27のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
29. アシル化インスリンまたはそのアナログが、NεB29-(3-[2-{2-(2-[ω-カルボキシ-ペンタデカノイル-γ-グルタミル-(2-アミノ-エトキシ)]-エトキシ)-エトキシ}-エトキシ]-プロピノイル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-{2-(2-[ω-カルボキシ-ヘプタデカノイル-γ-グルタミル-(2-アミノ-エトキシ)]-エトキシ)-エトキシ}-エトキシ]-プロピノイル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル desB30 ヒトインスリン、NεB29-(ω-[2-(2-{2-[2-(2-カルボキシ-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-ヘプタデカノイル-α-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(ω-[2-(2-{2-[2-(2-カルボキシ-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-ヘプタデカノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[7-カルボキシヘプタノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]-エトキシ}プロピルカルバモイル)プロピオニル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシ}プロピルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[9-カルボキシノナノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]エトキシ}-プロピルカルバモイル)プロピオニル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(9-カルボキシノナノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(9-カルボキシノナノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシ}-プロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(2-[3-(2-(2-{2-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)エトキシ}エトキシ)-エチルカルバモイル]プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシペンタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}-エトキシ)エトキシ]プロピオニル)) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-トリデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ)-エトキシ]-エトキシ}-プロピオノイル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{2-[2-(3-[ω-カルボキシペンタデカノイルアミノ]プロポキシ)エトキシ]-エトキシ}プロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)プロポキシ]ブトキシプロピルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(3-{4-[3-(ω-カルボキシトリデカノ��ルアミノ)プロポキシ]ブトキシプロピル-カルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバモイル)-プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-(3-(2-{2-[2-(ω-カルボキシトリデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}-エチルカルバモイル)プロピオニル-γ-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニル-γ-γ-D-グルタミル) desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(7-カルボキシヘプタノイルアミノ)エトキシ]-エトキシ}エトキシ)エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(9-カルボキシノナノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニイル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシウンデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)-エトキシ]-プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリン、NεB29-{3-[2-(2-{2-[2-(ω-カルボキシトリデカノイルアミノ)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エトキシ]プロピオニル-γ-グルタミル} desB30 ヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態1から28のいずれかに記載のインスリン製剤。
30. アシル化インスリンまたはそのアナログが、NεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリンである、実施形態1から29のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
31. アシル化インスリンまたはそのアナログが、インスリンデテミル(NεB29-ミリストイル)desB30ヒトインスリン)である、実施形態1から30のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
32. アシル化インスリンまたはそのアナログのうちの少なくとも85%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から31のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
33. アシル化インスリンまたはそのアナログのうちの少なくとも92%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から32のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
34. アシル化インスリンまたはそのアナログのうちの少なくとも95%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から33のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
35. アシル化インスリンまたはそのアナログのうちの少なくとも97%が、アシル化インスリンドデカマーである複合体またはアシル化インスリンドデカマーよりも高分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から34のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
36. インスリンがヒトインスリンまたはインスリンアナログである、実施形態1から35のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
37. インスリンアナログが、B28Aspヒトインスリンである、実施形態1から36のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
38. インスリンアナログが、B28LysB29Proヒトインスリンである、実施形態1から37のいずれかに記載のインスリン製剤。
39. インスリンアナログが、B3LysB29Gluヒトインスリンである、実施形態1から38のいずれかに記載のインスリン製剤。
40. ヒトインスリンまたはインスリンアナログのうちの少なくとも85%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも少分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から39のいずれかに記載のインスリン製剤。
41. ヒトインスリンまたはインスリンアナログのうちの少なくとも92%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも少分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から40のいずれかに記載のインスリン製剤。
42. ヒトインスリンまたはインスリンアナログのうちの少なくとも95%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも少分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から41のいずれかに記載のインスリン製剤。
43. ヒトインスリンまたはインスリンアナログのうちの少なくとも97%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも少分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から42のいずれかに記載のインスリン製剤。
44. ヒトインスリンまたはインスリンアナログのうちの少なくとも99%が、即効型インスリンヘキサマーまたは即効型インスリンヘキサマーよりも少分子量を有する複合体として存在する、実施形態1から43のいずれかに記載のインスリン製剤。
45. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、以下の:0.1〜10.0mM;0.1〜3.0mM;0.1〜2.5mM;0.1〜2.0mM;0.1〜1.5mM;0.2〜2.5mM;0.2〜2.0mM;0.2〜1.5mM;0.3〜3.0mM;0.3〜2.5mM;0.3〜2.0mM;0.3〜1.5mM;0.5〜1.3mMおよび0.6〜1.2mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から44のいずれかに記載のインスリン製剤。
46. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約10.0mMまでの量で存在する、実施形態1から45のいずれかに記載のインスリン製剤。
47. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約3.0mMまでの量で存在する、実施形態1から46のいずれかに記載のインスリン製剤。
48. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から47のいずれかに記載のインスリン製剤。
49. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から48のいずれかに記載のインスリン製剤。
50. 長時間作用型および速効型インスリン化合物が、約0.1mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から49のいずれかに記載のインスリン製剤。
51. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.2mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から50のいずれかに記載のインスリン製剤。
52. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.2mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から51のいずれかに記載のインスリン製剤。
53. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.2mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から52のいずれかに記載のインスリン製剤。
54. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.3mMから約3.0mMまでの量で存在する、実施形態1から53のいずれかに記載のインスリン製剤。
55. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.3mMから約2.5mMまでの量で存在する、実施形態1から54のいずれかに記載のインスリン製剤。
56. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約2.0mMまでの量で存在する、実施形態1から55のいずれかに記載のインスリン製剤。
57. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.1mMから約1.5mMまでの量で存在する、実施形態1から56のいずれかに記載のインスリン製剤。
58. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.15mMから約1.3mMまでの量で存在する、実施形態1から57のいずれかに記載のインスリン製剤。
59. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.15mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態1から58のいずれかに記載のインスリン製剤。
60. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.15mMから約1.2mMまでの量で存在する、実施形態1から59のいずれかに記載のインスリン製剤。
61. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.15mMから約0.5mMまでの量で存在する、実施形態1から60のいずれかに記載のインスリン製剤。
62. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.3mMの量で存在する、実施形態1から61のいずれかに記載のインスリン製剤。
63. アシル化インスリン、そのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.6Mの量で存在する、実施形態1から62のいずれかに記載のインスリン製剤。
64. アシル化インスリンまたはそのアナログが、約0.42mMの量で存在し、速効型インスリン化合物が、約0.18mMの量で存在する、実施形態1から63のいずれかに記載のインスリン製剤。
65. アシル化インスリンまたはそのアナログが、約0.18mMの量で存在し、ヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.42mMの量で存在する、実施形態1から64のいずれかに記載のインスリン製剤。
66. アシル化インスリンまたはそのアナログが、約0.84mMの量で存在し、ヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.36mMの量で存在する、実施形態1から65のいずれかに記載のインスリン製剤。
67. アシル化インスリンまたはそのアナログが、約0.36mMの量で存在し、ヒトインスリンまたはそのアナログが、約0.84mMの量で存在する、実施形態1から66のいずれかに記載のインスリン製剤。
68. アシル化インスリンまたはそのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログの合計が、約0.6mMの量で存在する、実施形態1から67のいずれかに記載のインスリン製剤。
69. アシル化インスリンまたはそのアナログおよびヒトインスリンまたはそのアナログの合計が、約1.2mMの量で存在する、実施形態1から68のいずれかに記載のインスリン製剤。
70. アシル化インスリンまたはそのアナログが、70%で存在し、ヒトインスリンまたはそのアナログが、約30%で存在する、実施形態1から69のいずれかに記載のインスリン製剤。
71. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せからなる群から選択される、実施形態1から70のいずれかに記載のインスリン製剤。
72. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドおよびニコチン酸および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せから選択される、実施形態1から71のいずれかに記載のインスリン製剤。
73. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミドおよび/またはその塩である、実施形態1から72のいずれかに記載のインスリン製剤。
74. ニコチン酸系化合物が、以下の:1〜300mM;5〜200mM;10〜150mM,20〜140mMまたは20〜100mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から73のいずれかに記載のインスリン製剤。
75. 約1mMから約300mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から74のいずれかに記載のインスリン製剤。
76. 約8mMから約260mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から75のいずれかに記載のインスリン製剤。
77. 約10mMから約200mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から76のいずれかに記載のインスリン製剤。
78. 約10mMから約150mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から77のいずれかに記載のインスリン製剤。
79. 約5mMから約20mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から78のいずれかに記載のインスリン製剤。
80. 約20mMから約120mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から79のいずれかに記載のインスリン製剤。
81. 約40mMから約120mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から80のいずれかに記載のインスリン製剤。
82. 約20mMから約40mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から81のいずれかに記載のインスリン製剤。
83. 約40mMから約80mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から82のいずれかに記載のインスリン製剤。
84. 約20mMから約100mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から83のいずれかに記載のインスリン製剤。
85. 約30mMから約130mMまでのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から84のいずれかに記載のインスリン製剤。
86. 約8mM、20mM、40mM、100mMまたは120mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から85のいずれかに記載のインスリン製剤。
87. 約8mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から86のいずれかに記載のインスリン製剤。
88. 約30mM、70mM、100mMまたは130mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から87のいずれかに記載のインスリン製剤。
89. 約40mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から88のいずれかに記載のインスリン製剤。
90. 約80mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から89のいずれかに記載のインスリン製剤。
91. 約120mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から90のいずれかに記載のインスリン製剤。
92. 約150mMのニコチン酸系化合物を含む、実施形態1から91のいずれかに記載のインスリン製剤。
93. 以下の範囲:1〜100mM、5〜120mM、8〜50mM、5〜50mM、5〜30mM、8〜30mM、10〜30mM、30〜60mMまたは10〜40mMのアルギニン化合物を含む、実施形態1から92のいずれかに記載のインスリン製剤。
94. 以下の範囲:1〜120mM、8〜85mMまたは1〜40mMのアルギニン化合物を含む、実施形態1から93のいずれかに記載のインスリン製剤。
95. 約1mMから約120mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から94のいずれかに記載のインスリン製剤。
96. 約1mMから約100mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から95のいずれかに記載のインスリン製剤。
97. 約5mMから約80mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から96のいずれかに記載のインスリン製剤。
98. 約20mMから約80mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から97のいずれかに記載のインスリン製剤。
99. 約5mMから約25mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から98のいずれかに記載のインスリン製剤。
100. 約8mMから約85mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から99のいずれかに記載のインスリン製剤。
101. 約10mMから約60mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から100のいずれかに記載のインスリン製剤。
102. 約10mMから約40mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から101のいずれかに記載のインスリン製剤。
103. 約1mMから約40mMまでのアルギニンを含む、実施形態1から102のいずれかに記載のインスリン製剤。
104. アルギニンが、以下の:1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、12mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mMまたは40mM、45mM、50mM、55mMまたは60mMから選択される範囲で存在する、実施形態1から103のいずれかに記載のインスリン製剤。
105. 約1mMのアルギニンを含む、実施形態1から104のいずれかに記載のインスリン製剤。
106. 約2mMのアルギニンを含む、実施形態1から105のいずれかに記載のインスリン製剤。
107. 約3mMのアルギニンを含む、実施形態1から106のいずれかに記載のインスリン製剤。
108. 約4mMのアルギニンを含む、実施形態1から107のいずれかに記載のインスリン製剤。
109. 約5mMのアルギニンを含む、実施形態1から108のいずれかに記載のインスリン製剤。
110. 約6mMのアルギニンを含む、実施形態1から109のいずれかに記載のインスリン製剤。
111. 約7mMのアルギニンを含む、実施形態1から110のいずれかに記載のインスリン製剤。
112. 約8mMのアルギニンを含む、実施形態1から111のいずれかに記載のインスリン製剤。
113. 約10mMのアルギニンを含む、実施形態1から112のいずれかに記載のインスリン製剤。
114. 約15mMのアルギニンを含む、実施形態1から113のいずれかに記載のインスリン製剤。
115. 約20mMのアルギニンを含む、実施形態1から114のいずれかに記載のインスリン製剤。
116. 約25mMのアルギニンを含む、実施形態1から115のいずれかに記載のインスリン製剤。
117. 約30mMのアルギニンを含む、実施形態1から116のいずれかに記載のインスリン製剤。
118. 約35mMのアルギニンを含む、実施形態1から117のいずれかに記載のインスリン製剤。
119. 約40mMのアルギニンを含む、実施形態1から118のいずれかに記載のインスリン製剤。
120. 約45mMのアルギニンを含む、実施形態1から119のいずれかに記載のインスリン製剤。
121. 約50mMのアルギニンを含む、実施形態1から120のいずれかに記載のインスリン製剤。
122. 約55mMのアルギニンを含む、実施形態1から121のいずれかに記載のインスリン製剤。
123. 約60mMのアルギニンを含む、実施形態1から122のいずれかに記載のインスリン製剤。
124. 緩衝剤をさらに含む、実施形態1から123のいずれかに記載のインスリン製剤。
125. 前記緩衝剤がトリスである、実施形態124に記載のインスリン製剤。
126. 約2mMから約50mMまでのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
127. 約3mMから約40mMまでのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
128. 約20mMから約30mMまでのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
129. 約7mM、10mM、20mM、30mMまたは40mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
130. 約7mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
131. 約10mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
132. 約20mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
133. 約30mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
134. 約40mMのトリスを含む、実施形態125に記載のインスリン製剤。
135. 金属イオンをさらに含む、実施形態1から134のいずれかに記載のインスリン製剤。
136. 金属イオンが亜鉛である、実施形態135に記載のインスリン製剤。
137. 6個のインスリン化合物当たり約6個未満の亜鉛イオンが存在する、実施形態136に記載のインスリン製剤。
138. 6個のインスリン化合物当たり約5個未満の亜鉛イオンが存在する、実施形態136に記載のインスリン製剤。
139. 6個のインスリン化合物当たり約4.5個未満の亜鉛イオンが存在する、実施形態136に記載のインスリン製剤。
140. 6個のインスリン化合物当たり約4.2個の亜鉛イオンが存在し、長時間作用型インスリン化合物の百分率が70%であり、速効型インスリン化合物の百分率が30%である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
141. 6個の長時間作用型インスリン化合物当たり約4.7個の亜鉛イオンが、6個の速効型インスリン化合物当たり約3個の亜鉛イオンと組み合わされる、実施形態136に記載のインスリン製剤。
142. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2:6から約6:6までである、実施形態136に記載のインスリン製剤。
143. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3:6から約5:6までである、実施形態136に記載のインスリン製剤。
144. 組合せ前の、長時間作用型インスリン化合物についての亜鉛:インスリンのモル比が、約4:6から約6:6までであり、短時間作用型インスリン化合物については4:6未満である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
145. 亜鉛:インスリンのモル比が、約2.5:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
146. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
147. 亜鉛:インスリンのモル比が、約3.5:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
148. 亜鉛:インスリンのモル比が、約4:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
149. 亜鉛:インスリンのモル比が、約4.5:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
150. 亜鉛:インスリンのモル比が、約5:6である、実施形態136に記載のインスリン製剤。
151. 安定化剤をさらに含む、実施形態1から150のいずれかに記載のインスリン製剤。
152. 安定化剤が非イオン性洗剤である、実施形態151に記載のインスリン製剤。
153. 洗剤が、ポリソルベート20(Tween20)またはポリソルベート80(Tween80)である、実施形態152に記載のインスリン製剤。
154. 洗剤が、ポリソルベート20(Tween20)である、実施形態152に記載のインスリン製剤。
155. 洗剤が、ポリソルベート80(Tween80)である、実施形態152に記載のインスリン製剤。
156. 約5から100ppmまで、約10から約50ppmまでまたは約10から約20ppmまでのポリソルベートを含む、実施形態153から155のいずれかに記載のインスリン製剤。
157. 1種または複数種の保存剤をさらに含む、実施形態1から156のいずれかに記載のインスリン製剤。
158. 前記保存剤がフェノール化合物である、実施形態157に記載のインスリン製剤。
159. 前記フェノール化合物が、約0から約6mg/mlまでまたは約0から約4mg/mlまでの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
160. 前記フェノール化合物が、約5から約70mMまでの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
161. 前記フェノール化合物が、約5から約50mMまでの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
162. 前記フェノール化合物が、約5から約30mMまでの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
163. 前記フェノール化合物が、約16mMの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
164. 前記フェノール化合物が、約19mMの量で存在する、実施形態158に記載のインスリン製剤。
165. 前記保存剤がm-クレゾールである、実施形態157に記載のインスリン製剤。
166. m-クレゾールが、約0.5から約4.0mg/mlまでの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
167. m-クレゾールが、約5から約70mMまでの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
168. m-クレゾールが、約5から約50mMまでの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
169. m-クレゾールが、約5から約30mMまでの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
170. m-クレゾールが、約16mMの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
171. m-クレゾールが、約19mMの量で存在する、実施形態165に記載のインスリン製剤。
172. グリセロールを、約0.5から約2.5%までの量でさらに含む、実施形態1から171のいずれかに記載のインスリン製剤。
173. グリセロールを、約0.7から約2.0%までの量でさらに含む、実施形態1から172のいずれかに記載のインスリン製剤。
174. グリセロールを、約0.8から約1.6%までの量でさらに含む、実施形態1から173のいずれかに記載のインスリン製剤。
175. グリセロールを、約1.1%の量でさらに含む、実施形態1から174のいずれかに記載のインスリン製剤。
176. pHが、中性から弱塩基性である、実施形態1から175のいずれかに記載のインスリン製剤。
177. pHが、約7.0から約8.0までである、実施形態1から176のいずれかに記載のインスリン製剤。
178. pHが、約7.0である、実施形態1から177のいずれかに記載のインスリン製剤。
179. pHが、約7.1である、実施形態1から178のいずれかに記載のインスリン製剤。
180. pHが、約7.2である、実施形態1から179のいずれかに記載のインスリン製剤。
181. pHが、約7.3である、実施形態1から180のいずれかに記載のインスリン製剤。
182. pHが、約7.4である、実施形態1から181のいずれかに記載のインスリン製剤。
183. pHが、約7.5である、実施形態1から182のいずれかに記載のインスリン製剤。
184. pHが、約7.6である、実施形態1から183のいずれかに記載のインスリン製剤。
185. pHが、約7.7である、実施形態1から184のいずれかに記載のインスリン製剤。
186. pHが、約7.8である、実施形態1から185のいずれかに記載のインスリン製剤。
187. pHが、約7.9である、実施形態1から186のいずれかに記載のインスリン製剤。
188. pHが、約8.0である、実施形態1から187のいずれかに記載のインスリン製剤。
189. 6分子のそれぞれの化合物当たり、約4個を超える亜鉛原子を組成物に加える、アシル化インスリンおよび速効型インスリンを含む医薬組成物を製造するための方法。
190. 6分子のそれぞれのインスリン化合物当たり、最大約12個までの亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189に記載の方法。
191. 6分子のそれぞれのインスリン化合物当たり、約4.3個から約12個の間の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189または190に記載の方法。
192. 保存剤を加える前に、亜鉛を組成物に加える、実施形態189から191のいずれかに記載の方法。
193. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリン当たり、1個を超える亜鉛原子である、実施形態189から192のいずれかに記載の方法。
194. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリン当たり、2個を超える亜鉛原子である、実施形態189から193のいずれかに記載の方法。
195. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリン当たり、3個を超える亜鉛原子である、実施形態189から194のいずれかに記載の方法。
196. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリン当たり、4個を超える亜鉛原子である、実施形態189から195のいずれかに記載の方法。
197. 保存剤を加えた後に、亜鉛を組成物に加える、実施形態189から196のいずれかに記載の方法。
198. 保存剤を加えた後に、6分子のアシル化インスリン当たり、少なくとも0.5個の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189から197のいずれかに記載の方法。
199. 保存剤を加えた後に、6分子のアシル化インスリン当たり、少なくとも1個の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189から198のいずれかに記載の方法。
200. 保存剤を加える前に、亜鉛の一部を加え、保存剤を加えた後に、亜鉛の一部を加える、実施形態189から199のいずれかに記載の方法。
201. 保存剤が、フェノールおよび/またはm-クレゾールである、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
202. 6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、最大約14個までの亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
203. 6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、約4.3個から約14個の間の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
204. 保存剤を加える前に、亜鉛を組成物に加える、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
205. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、1個を超える亜鉛原子である、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
206. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、2個を超える亜鉛原子である、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
207. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、4個を超える亜鉛原子である、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
208. 保存剤を加える前に加える亜鉛原子の数は、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、5個を超える亜鉛原子である、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
209. 保存剤を加えた後に、亜鉛を組成物に加える、実施形態189から200のいずれかに記載の方法。
210. 保存剤を加えた後に、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、少なくとも0.2個の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態209に記載の方法。
211. 保存剤を加えた後に、6分子のアシル化インスリンまたはそのアナログ当たり、少なくとも1個の亜鉛原子を組成物に加える、実施形態209に記載の方法。
【０１９３】
本発明のさらなる態様では、6分子のアシル化インスリン当たり約2個を超える亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり約3個を超える亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加えるか、または6分子のアシル化インスリン当たり約4個を超える亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加える。
【０１９４】
本発明のさらなる態様では、6分子のアシル化インスリン当たり約4.5個から約12個の間の亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加えるか、またはより好ましくは、6分子のアシル化インスリン当たり約5個から約11.4個の間の亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加えるか、またはさらに好ましくは6分子のアシル化インスリン当たり約5.5個から約10個の間の亜鉛原子を保存剤を加えた後に組成物に加える。
【０１９５】
212. 保存剤を加える前に亜鉛の一部を加え、保存剤を加えた後に亜鉛の一部を加える、実施形態1から211のいずれかに記載の方法。
【０１９６】
一実施形態では、本方法は、保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2〜3個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり最大約11個までの亜鉛原子を加えることを含む。
【０１９７】
一実施形態では、本方法は、保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2〜3個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり最大約10個までの亜鉛原子を加えることを含む。
【０１９８】
一実施形態では、本方法は、保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも3個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも1個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも3個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも2〜3個の亜鉛原子を加えること、または保存剤を加える前に6分子のアシル化インスリン当たり少なくとも3個の亜鉛原子を加えること、および保存剤を加えた後に6分子のアシル化インスリン当たり最大約9個までの亜鉛原子を加えることを含む。
【０１９９】
213. 保存剤が、フェノールおよび/またはm-クレゾールである、実施形態212に記載の方法。
214. 治療を必要とする患者に、実施形態1から213のいずれかに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減する方法。
215. 実施形態1から214のいずれかに記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
216. 非経口投与のための、実施形態1から215のいずれかに記載の方法。
217. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、実施形態1から188のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
218. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および他の疾患、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防に使用するための、実施形態1から188のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
【０２００】
本発明のさらなる実施形態は、以下に関する。
219. ・  長時間作用型インスリン化合物、
・  速効型インスリン化合物、
・  ニコチン酸系化合物および
・  アルギニン
を含むインスリン製剤。
220. 長時間作用型インスリンが、アシル化インスリンである、実施形態219に記載のインスリン製剤。
221. アシル化インスリンが、親インスリン分子のB鎖中の位置のLys残基のε-アミノ基がアシル化されたインスリンである、実施形態219または220に記載のインスリン製剤。
222. 親インスリンが、ヒトインスリン;desB1ヒトインスリン;desB30ヒトインスリン;GlyA21ヒトインスリン;GlyA21 desB30ヒトインスリン;AspB28ヒトインスリン;ブタインスリン;LysB28 ProB29ヒトインスリン;GlyA21 ArgB31 ArgB32ヒトインスリンおよびLysB3 GluB29ヒトインスリンまたはAspB28 desB30ヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態221に記載のインスリン製剤。
223. アシル化インスリンが、NεB29-ヘキサデカンジオール-γ-Glu-(desB30)ヒトインスリンである、実施形態222に記載のインスリン製剤。
224. 長時間作用型インスリンが、NεB29-ミリストイル(desB30)ヒトインスリンおよびA21GlyB31ArgB32Argヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態222に記載のインスリン製剤。
225. 速効型インスリンが、ヒトインスリンまたはインスリンアナログである、実施形態219から224のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
226. 速効型インスリンが、B28Aspヒトインスリンである、実施形態219から225のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
227. 速効型インスリン化合物が、B28LysB29ProヒトインスリンおよびB3LysB29Gluヒトインスリンからなる群から選択される、実施形態219から226のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
228. 長時間作用型および速効型インスリン化合物が、約0.1mMから約10.0mMまでの量で存在する、実施形態219から227のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
229. 長時間作用型インスリン化合物が、約70%で存在し、速効型インスリン化合物が、約30%で存在する、実施形態219から228のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
230. ニコチン酸系化合物が、ニコチンアミド、ニコチン酸、ナイアシン、ナイアシンアミドおよびビタミンB3および/もしくはその塩ならびに/またはその任意の組合せからなる群から選択される、実施形態219から229のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
231. 約1mMから約120mMまでのアルギニンを含む、実施形態219から230のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
232. 緩衝剤および/または金属イオンおよび/または安定化剤および/または保存剤および/または等張化剤をさらに含む、実施形態219から231のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
233. 治療を必要とする患者に、実施形態219から230のいずれか1つに記載の治療活性用量のインスリン製剤を投与することによる、哺乳動物における血中グルコースレベルを低減するための方法。
234. 実施形態219から231のいずれか1つに記載のインスリン製剤を対象に投与することを含む、対象の真性糖尿病の治療方法。
235. ストレス誘発性高血糖、2型糖尿病、耐糖能の低下、1型糖尿病を含む高血糖、ならびに火傷、手術による傷および同化作用が治療に必要とされる他の疾患または負傷、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈性心疾患および他の心血管疾患の治療または予防ならびに重症の糖尿病患者および非糖尿病患者の治療に使用するための、実施形態219から232のいずれか1つに記載のインスリン製剤。
【０２０１】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、この実施例は、限定するものとして解釈されるべきではない。
【０２０２】
本明細書に引用されている、出版物、特許出願および特許を含むすべての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれていることを個々におよび具体的に指示された場合と同程度に、ならびに本明細書において完全に説明された場合と同程度に(法律で認められている最大限の程度に)、それらの内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２０３】
すべての見出しおよび小見出しは、本明細書において便宜上使用されているに過ぎず、決して本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０２０４】
本明細書において提供されている、任意のおよびすべての実施例または例示的な言葉(例えば、「などの」)の使用は、本発明をより良く明らかにすることを意図するものに過ぎず、他に特に請求しない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる言葉も、請求されていない任意の要素を、本発明の実施に必要不可欠なものとして示すものと解釈されるべきではない
【０２０５】
本明細書における特許文書の引用および組み込みは、便宜上なされているものに過ぎず、そのような特許文書の妥当性、特許性および/または権利行使可能性についてのいずれの見解も反映するものではない。
【０２０６】
本発明は、準拠法で許されているように、本明細書に添付されている特許請求の範囲に記載された主題のすべての改変物および均等物を含む。
【０２０７】
(実施例)
(実施例1)
医薬製剤の調製
本発明の医薬製剤は、長時間作用型インスリン化合物の中間調製品に、フェノールおよびまたはフェノール系保存剤を加えた後、酢酸亜鉛または塩化亜鉛を加え、速効型インスリン化合物の中間調製品と組み合わせたものとして調製され得る。組み合わせた製剤は、ニコチンアミドおよびアルギニンを含まなければならず、それらを、一方または両方の中間調製品に、または別々に加え得る。組み合わせた製剤は、緩衝剤、例えばトリスヒドロキシメチルアミノメタン(トリス)をさらに含み得、例えばグリセロールで等張化する。
【０２０８】
製剤A〜Hの製造
インスリンデグルデクのストック溶液の作製は、2566mgのインスリン化合物(152nmol/mg)を、注射(水)用に120mLの水に懸濁し、0.2N水酸化ナトリウムを加えてpH7.4にした後、注射用に水を加え、3000μMに相当する130.5gにすることによって行った。溶液を0.22μmの滅菌フィルターを通してろ過した。
【０２０９】
添加剤のストック溶液の調製は、pHを約7.4に調整することを含み、グリセロールについては2100mmol/kgに、フェノールについては320mmol/kgに、m-クレゾールについては160mmol/kgに、アルギニン塩酸塩については500mmol/kgに、塩化ナトリウムについては500mmol/kgにおよびニコチンアミドについては2400mmol/kgに調製した。最後に、10mM酢酸亜鉛の溶液を作製した。
【０２１０】
ニコチンアミドおよび酢酸亜鉛を除く添加剤のストック溶液は、例えば、製剤Dについては:3.91gのグリセロール溶液、2.16gのフェノール溶液(製造中の保存上の損失を補正するために、1.03のファクターを用いた)、4.32gのm-クレゾール溶液、1.2gのアルギニン塩酸塩溶液および10gの水を組み合わせた後、8.4gのデグルデク3000μMを加えた。酢酸亜鉛溶液を、2分毎に1Zn/6insの分量で、4.7Zn/6デグルデクに加え、0.2N水酸化ナトリウムによってpHを7.4に調整し、水を加えて40.2gにした。溶液を一晩保存した後、保存剤および亜鉛を含む18.1gの600μMインスリンアスパルト配合物と組み合わせ、最後に、2.0gの2400mmol/kgニコチンアミドストック溶液と組み合わせた。最後に、組み合わせた配合物を滅菌フィルターを通してろ過し、注射システム用のカープル(carpoule)に移した。
【０２１１】
インスリンアスパルト中間調製品の作製は、1192mgのアスパルト(151nmol/mg)を60gの水に懸濁し、5.4当量の塩酸、0.5当量の酢酸亜鉛および水を加えて150gにした後、30.9gのm-クレゾールストック溶液および15.45gのフェノールストック溶液を加え、0.2N水酸化ナトリウムによってpHを7.4に調整し、水を加えて300.9gにすることによって行った。
【０２１２】
【表１】
2013545782.tif 000012
【０２１３】
製剤I〜Jの製造
製剤I
インスリンデテミルストック溶液の作製は、2114mgのインスリン化合物(141.9nmolデテミル/mg、2.3Zn/6ins、1フェノール/ins)を、55gの水に溶解させ、pH7.4に調整し、水を加え、4000μMに相当する75gにすることによって行う。溶液を0.22μmの滅菌フィルターを通してろ過する。
【０２１４】
添加剤のストック溶液の調製は、pHを約7.4に調整することを含み、グリセロールについては2100mmol/kgに、フェノールについては320mmol/kgに、m-クレゾールについては160mmol/kgに、アルギニン塩酸塩については500mmol/kgに、トリスについては500mmol/kgにおよびニコチンアミドについては2400mmol/kgに調製する。最後に、10mM酢酸亜鉛の溶液を作製する。
【０２１５】
デテミル中間調製品の作製は、ニコチンアミドおよび酢酸亜鉛を除く添加剤のストック溶液を、インスリンデテミルを加える前に:3.53のグリセロール溶液、2.25gのフェノール溶液、5.14gのm-クレゾール溶液、1.2gのアルギニン塩酸塩溶液、0.84gのトリス溶液および25.2gのデテミルストック溶液(4000μM)を組み合わせることによって行う。359μLの酢酸亜鉛溶液(9.37μM)を、2.5Zn/6デテミルに加え、0.2N水酸化ナトリウムによってpHを7.4に調整し、水を加えて42.2gにした。
【０２１６】
インスリンアスパルト中間調製品の作製は、1192mgのアスパルト(151nmol/mg)を60gの水に懸濁し、5.4当量の塩酸、0.5当量の酢酸亜鉛および水を加えて150gにした後、30.9gのm-クレゾールストック溶液および15.45gのフェノールストック溶液を加え、0.2N水酸化ナトリウムによってpHを7.4に調整し、水を加えて300.9gにすることによって行う。
【０２１７】
デテミル中間調製品を一晩保存した後、保存剤および亜鉛を含む18.1gの600μM中間アスパルト製剤と組み合わせる。最後に、組み合わせた配合物を滅菌フィルターを通してろ過し、注射システム用のカープルに移す。
【０２１８】
製剤J
製剤Jは、製剤Iと同様に製造されるが、ただし、水による調整によって総重量を2.0g減らしてデテミル中間調製品にし、2.0gの2400mmol/kgニコチンアミドストック溶液を、組み合わせたデテミルおよびアスパルト製剤に加える。
【０２１９】
【表２】
2013545782.tif 000013
【０２２０】
製剤1〜7の製造
インスリンデグルデク中間調製品(すべての濃度に7/6を掛ける)の作製は、834mgのインスリン化合物(151nmol/mg)を100mLの水に懸濁し、0.2N水酸化ナトリウムを加えてpH7.8にした後、21.6gのフェノール溶液(320mmol/kg)、10.53gの酢酸亜鉛溶液(9.37mM)、21.0gのニコチンアミド溶液(2600mmol/kg)を加え、pHを7.4に調整した後、水を加えて180.5gにすることによって行った。溶液を0.22μmの滅菌フィルターを通してろ過した。
【０２２１】
インスリンアスパルト中間調製品の作製は、397mgのアスパルト(151nmol/mg)を20gの水に懸濁し、1Nの塩酸324μL、3.20gの酢酸亜鉛溶液(9.37mM)および水を加えて50gにした後、10.3gのフェノールストック溶液(320mmol/kg)を加え、0.2N水酸化ナトリウムによってpHを7.4に調整し、10.0gのニコチンアミド溶液(2600mmol/kg)を加え、水を加えて100.3gにすることによって行った。溶液を0.22μmの滅菌フィルターを通してろ過した。
【０２２２】
アルギニン塩酸塩、グルタミン酸およびグリシンのpH7.4のストック溶液は、pH調整のために、水酸化ナトリウム/塩酸を使用して、500mmol/kgに作製し、ヒスチジンは、300mmol/kgに作製した。ストック溶液を0.22μmの滅菌フィルターを通してろ過した。
【０２２３】
Table 3(表3)に示す最終製剤の作製は、18.0gのインスリンデグルデク中間調製品に、アミノ酸ストック溶液を加え、最終的に水を加えて3.0gにし、最後に、9.0gのアスパルト中間調製品と組み合わせることによって行った。物理的および化学的安定性を決定するために、製剤を注射システム用のカープルに移し、2週間37℃または5℃で保存した。
【０２２４】
【表３】
2013545782.tif 000014
【０２２５】
(実施例2)
インスリンの化学的安定性の分析
サイズ排除クロマトグラフィー
高分子量タンパク質(HMWP)およびモノマーインスリンアスパルトの定量は、ウォーターズInsulin(300×7.8mm、部品番号wat201549)上で、2.5M酢酸、4mMのL-アルギニンおよび20%(V/V)のアセトニトリルを含有する溶離液を用い、流速1ml/分で周囲温度にて行った。検出は、波長可変吸光度検出器(Waters486)を用い、276nmで行った。注入量は40μlであり、600μMのヒトインスリン標準であった。HMWPおよび製剤の濃度は、それぞれのサンプリング点で測定した。
【０２２６】
逆相クロマトグラフィー
インスリンアスパルトに関連した不純物の決定は、RP C18、4.6×150mmカラム、粒子径3.5μm、Waters Sunfireを使用し、流速1ml/分、43℃にて、214nmでの検出を使用するHPLCシステム上で行った。溶出は以下からなる移動相を用いて行った:
A. 7.7%(w/w)アセトニトリル、2.8%(w/w)硫酸ナトリウム、0.27%(w/w)o-リン酸、pH3.6。
B. 42.8%(w/w)アセトニトリル。勾配:0〜20分は、A/Bが58%/42%の定組成(アスパルトの主なピークは、約16分に調整)、20〜32分は、A/Bが10%/90%への線形変化、32〜33分は、初期状態への線形変化および移動時間40分。
【０２２７】
B28イソ-アスパラギン酸、脱アミド体および他の関連した不純物の量は、総吸光度面積に対する百分率で測定される吸光度面積として決定し、総吸光度面積は、28分まで続く保存剤の溶出後に決定した。インスリンデグルデクは、約30分に溶出した。
【０２２８】
インスリンデグルデクに関連した不純物の決定は、RP C8、4.6×150mmカラム、粒子径3.5μm、Waters Symmetry Shieldを使用し、流速1ml/分、40℃にて、214nmでの検出を使用するHPLCシステム上で行った。溶出は以下からなる移動相を用いて行った:
A. 7.7%(w/w)アセトニトリル、1.42%(w/w)硫酸ナトリウム、1.38%(w/w)リン酸二水素ナトリウム一水和物、水酸化ナトリウムによってpH5.9に調整。
B. 42.8%(w/w)アセトニトリル。勾配:0〜45分は、A/Bが50%/50%の定組成(デグルデクの主なピークは、約20分に調整)、45〜50分は、A/Bが20%/80%への線形変化、51分に初期状態への急変化および移動時間60分。
【０２２９】
インスリンデグルデクの親水性不純物の量は、主なピークまで約10分のm-クレゾールの溶出後、総吸光度面積に対する百分率での吸光度面積として決定し、疎水性不純物1は、主なピークから勾配の開始まで、疎水性不純物2は、勾配によって溶出されるピークの面積として決定した。
【０２３０】
Table 3(表3)に示す製剤を、インスリンアスパルトおよびインスリンデグルデクの化学的不純物について分析し、カープル中、2週間37℃または5℃で保存した製剤間の差異として決定した。結果をTable 4(表4)に示す。
【０２３１】
【表４】
2013545782.tif 000015
【０２３２】
アルギニンを追加すると、形成される分解生成物、特にHMWPおよび脱アミド体の量が減少する。アルギニンの濃度を10から50mMの範囲で増加させると、さらに分解が減少することになる。
【０２３３】
ThTアッセイにおけるラグタイムとして測定される物理的安定性は、30mMおよび50mMのアルギニンを加えると減少し、10mMアルギニンでは変化しない。
【０２３４】
Table 3(表3)に示すように、分解生成物の形成の減少に関して、50mMアルギニンの全体的な能力は、50mMグリシンまたは50mMグルタミン酸よりも優れており、30mMアルギニンは、30mMヒスチジンよりも優れている。
【０２３５】
(実施例3)
LYDブタモデルを対象とした薬物動態学的(PK)/薬力学(PD)研究および血漿分析アッセイ
LYDブタを対象としたPK/PD研究
PK/PD研究は、体重55から110kgの間のLYD交雑種である国産雌ブタについて、行った。このブタを、研究開始の少なくとも2日前に、耳静脈を経て頸静脈内にカテーテルを挿入した。研究開始前の最後の食餌は、試験製剤の注射の約18時間前に動物に与え、動物は、絶食期間および試験期間中のすべての時間に、水を自由に摂取した。
【０２３６】
0時間に、試験製剤を首の側面に皮下投与した。投与前に血液試料を採取し、投与後に一定の時間間隔で、カテーテルから試料を採取し、ヘパリンでプレコーティングされた1.5mlガラス管に入れた。血液試料は、遠心によって血漿を分離するまで、氷水中に入れておいた。遠心は、最初の30分以内に、4℃で10分間、3000rpmで行った。血漿試料は、4℃で短時間(2〜3時間)保存または-18℃で長期保存し、グルコースについてはYSIまたはKonelab 30iでおよびインスリンアスパルト濃度についてはLOCIによって分析した。
【０２３７】
インスリンアスパルトおよびインスリンデグルデクの定量化のためのLuminescent Oxygen Channeling Immunoassay(LOCI)法
インスリンアスパルトおよびインスリンデグルデクLOCIは、モノクロナール抗体に基づいたサンドイッチイムノアッセイであり、ユーロピウムでコーティングされたアクセプタービーズとストレプトアビジンでコーティングされたドナービーズである2つのビーズの近接を応用している。アクセプタービーズはヒトインスリンに対する特異的抗体でコーティングされており、血漿試料中のインスリンアスパルトを認識する。第2のビチオン化抗体はインスリンアスパルトに特異的に結合し、それらはストレプトアビジンでコーティングされたビーズと一緒にサンドイッチを作り上げる。ビーズ-会合体-免疫複合体のイルミネーションは、アクセプタービーズにチャネルするドナービーズから一重項酸素を放出し、化学発光を引き起こす。化学発光が測定され、発生した光の量がインスリンアスパルトの濃度に比例する。同様に、インスリンデグルデクに対しても、特異的なLOCIアッセイを使用した。
【０２３８】
フェーズ3段階の製品であるBOOST(商標)(製剤A、ニコチンアミド無し)と比較して、本発明に含まれる230mM、120mMまたは80mMのニコチンアミドを含む製剤(製剤B、CおよびD)のインスリンアスパルトの初期吸収速度は速い(図1)。
【０２３９】
同一のブタの実験において、インスリンデグルデクの吸収プロファイルを測定する。230mMという高ニコチンアミド濃度で、デグルデクの動態プロファイルは中程度に高い血漿濃度に変化したのに対して、デグルデクのプロファイルは、120mMおよび80mMのニコチンアミドでは影響を受けなかった(図2)。
【０２４０】
(実施例4)
タンパク質配合物の物理的安定性の評価のためのThT繊維化アッセイの一般的概論
ペプチドの低い物理的安定性は、アミロイド繊維形成を引き起こし得、それは、試料中に秩序立った糸状高分子構造として観察され、最終的にゲルの形成をもたらす。このことは、伝統的に、試料の目視検査によって測定されている。しかし、そのような測定は、非常に主観的であり、観察者に依存している。それ故に、小分子指標プローブの適用が、はるかに有利である。チオフラビンT(ThT)はそのようなプローブであり、繊維に結合すると、はっきりと識別できる蛍光サインを示す[Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177, 244〜249頁; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274〜284頁]。繊維形成の経時変化は、以下の式を有するS字曲線によって記載することができる[Nielsen他(2001) Biochemistry 40, 6036〜6046頁]。
【０２４１】
【数１】
2013545782.tif 000016
【０２４２】
ここで、Fは、時刻tにおけるThT蛍光である。定数t0は、最大蛍光の50%に達するために必要な時間である。繊維形成を説明する2つの重要なパラメーターは、t0-2τによって計算されるラグタイムおよび見かけの速度定数κapp=1/τである。
【０２４３】
繊維形成の経時変化:
【０２４４】
【化１１】
2013545782.tif 000017
【０２４５】
部分的に折りたたまれたペプチドの中間体の形成は、繊維化の一般的な開始機構として提案されている。それらの中間体が核となって鋳型を形成し、その上にさらなる中間体が集まり得、繊維化が進行することはほとんどない。ラグタイムは、臨界量の核が蓄積される間隔に相当し、見かけの速度定数は繊維それ自体が形成される速度である。
【０２４６】
試料調製
試料は、それぞれのアッセイ前に新しく調製した。それぞれの試料の組成は、それぞれの実施例中に記載されている。試料のpHは、濃縮されたNaOHおよびHClO4またはHClの適量を使用して、所望の値に調整した。チオフラビンTを、H2O中のストック溶液から試料に加えて最終濃度を1μMとした。
【０２４７】
200μlの試料アリコートを、96ウェルマイクロタイタープレート(Packard OptiPlate(商標)-96、白色ポリスチレン)に置いた。通常、それぞれの試料について4つまたは8つの複製(1回の試験条件に対応する)が、ウェルの一列に置かれた。プレートは、Scotch Pad(Qiagen)で密封した。
【０２４８】
インキュベーションおよび蛍光測定
所定の温度でのインキュベーション、振盪およびThT蛍光発光の測定は、Fluoroskan Ascent FL蛍光プレートリーダーまたはVarioskanプレートリーダー(Thermo Labsystems)において行った。温度は37℃に調整した。軌道振盪は、すべての提示データにおいて、1mmの振幅で960rpmに合わせた。蛍光測定は444nmフィルターを通した励起および485nmフィルターを通した発光測定を使用して行った。
【０２４９】
それぞれの実行は、プレートをアッセイ温度で10分間インキュベートすることによって開始した。プレートを20分毎に所望の期間測定した。それぞれの測定の間、記載されている通りにプレートを振盪し加熱した。
【０２５０】
データの取り扱い
測定点を、さらなる処理のために、マイクロソフトエクセル形式に保存し、GraphPad Prismを使用して曲線描画およびフィッティングを行った。繊維の非存在下でのThT由来のバックグラウンド発光は無視できるものであった。データ点は、典型的には、4つまたは8つの試料の平均であり、標準偏差のエラーバーとともに示される。同一実験で得られたデータのみ(すなわち同一プレート上の試料)が、同一グラフに提示され、実験の間における繊維化の相対的な測定を保証している。
【０２５１】
データセットは方程式(1)に適合させ得る。しかし、完全なS字曲線が、常に測定時間中に得られるとは限らず、本明細書では、ThT蛍光がバックグラウンドレベルとは異なる時点として、ラグタイムをThT蛍光曲線から目視で決定した。
【０２５２】
初期濃度および最終濃度の測定
試験された製剤のそれぞれにおけるペプチド濃度は、ThT繊維化アッセイへの適用前(「初期」)およびThT繊維化完了後(「ThTアッセイ後」)の両方で測定した。濃度は、プラムリンチド標準を参照として使用し、逆HPLC法によって決定した。完了後の測定前に、複製のそれぞれから150μlを採取し、エッペンドルフ型チューブへ移した。これらを30000Gで40分間遠心した。上清を0.22μmフィルターを通してろ過した後、HPLCシステムに適用した。
【０２５３】
(実施例5)
インビトロモデル
サイズ排除クロマトグラフィーは、インスリンデテミルが皮下貯蔵から血液コンパートメント中へ消失することについてのインビトロモデルとして[Pharmaceutical Research, 21(2004)1498〜1504頁を参照のこと]ならびに保存剤であるフェノールおよびm-クレゾールを医薬製剤から除去した後、インスリン化合物が自己会合して高分子量複合体になることについてのインビトロモデルとして[Pharmaceutical Research, 23(2006)49〜55頁]使用されている。長時間作用型および速効型インスリン化合物の混合物または組合せのサイズ排除クロマトグラフィーによる評価は、PCT WO 2007/074133に記載されており、本発明によるインスリンデグルデクおよびインスリンアスパルトの参照製剤については、インスリンデグルデクは、5メガダルトンのタンパク質を超えるくらいのサイズの高分子量複合体をsuperpose 6カラムの排除限界に溶出する。フェノールの除去後に形成されるこの高分子量複合体は、マルチヘキサマーを形成するインスリン化合物の遅延における主な要素であると予想されている。速効型インスリン化合物は、クロマトグラムの終了時に、インスリンモノマー領域に溶出する。
【０２５４】
インビトロモデルのSECは、table 1(表1)に含まれる製剤に対して用いられており、実施例を図3に示す。table 1(表1)に従って、インスリンアスパルトと組み合わせた製剤中のインスリンデグルデクのマルチヘキサマー形成は、230mM(破線)または120mM(実線)のニコチンアミドを含むことによって減少するのに対して、80mM(点線)または40mM(破点線)のニコチンアミドを含む製剤のマルチヘキサマー複合体のピーク高さは、ニコチンアミド無しの参照製剤(灰色実線)とほぼ同一であった。
【０２５５】
方法:カラム:Superose 6PC(0.32×30cm)。溶離液:10mMトリスを用いておよび37℃で緩衝剤処理した生理食塩水。流速:80μL/分。注入量:20μLおよび276nmにてUV検出。
【０２５６】
(実施例6)
医薬製剤中のジヘキサマーインスリン含量の決定方法
サイズ排除クロマトグラフィーを、Waters BEH200 SECカラム上で、140mM塩化ナトリウム、2mMフェノールおよび10mMトリスpH7.3を使用し、300μL/分の流速で、周囲温度にて行った。20μLの試料を注入し、276nmでUV検出を行った。参照物質は、モノマーインスリン(AspB9、GluB27、ヒトインスリン;RT=5.9分)、Co(III)インスリン-ヘキサマー(ヘキサマーRT=4.9分;ジヘキサマーRT=4.4分)およびヒトアルブミン(アルブミンRT=4.2分;アルブミンダイマーRT=3.7分)であった。この領域は、テトラ-ヘキサマーおよびインスリンの高分子量会合体、ジヘキサマーインスリン、ヘキサマーインスリンならびにモノマーおよびダイマーインスリンを指すピークに分けられた。
【図１】
2013545782.tif 000018
【図２】
2013545782.tif 000019
【図３】
2013545782.tif 000020
【国際調査報告】
2013545782.tif 000021
2013545782.tif 000022
2013545782.tif 000023