(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物または前記化合物の薬学的に許容できる塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、本明細書に記載されている通りである）、その医薬組成物、および動物においてアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によりモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のその使用を提供する。【化１】2013510191.tif 000038
2013510191.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2013510191.tif 000037
の化合物、または薬学的に許容できるその塩
（式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、フルオロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立して選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、またはシアノであり、
Ｒ３は、各々独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ４は、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、前記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立して選択される１〜３個の置換基で各々置換されていてもよい）。
【請求項２】
Ｒ１が、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、またはテトラヒドロフラニルであり、Ｒ２が、水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ１が、エチル、イソプロピルまたはｔ−ブチルであり、各Ｒ３が、水素であり、Ｒ４が、フェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、インドリル、ベンゾピラジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾロニル、ピロロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリジニル、ピラゾロピリミジニル、インダゾリル、インドリノニル、ナフチリジニル、キノリニル、キノリノニル、ジヒドロキノリノニル、オキソ−ジヒドロキノリノニル、イソキノリニル、イソキノリノニル、ジヒドロイソキノニルまたはオキソ−ジヒドロイソキノニルであり、各々が、フルオロ、クロロ、メチル、メトキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、アミド、シアノ、フェニル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピリジニルまたはモルホリニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい、請求項２に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ１が、イソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ２が、水素である、請求項３に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
Ｒ４が、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリニル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニル、２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、１Ｈ−ピラゾリルフェニル、１Ｈ−ピラゾリルピリジニル、または１Ｈ−イミダゾリルフェニルであり、各々が、１〜２個のメチル、クロロまたはフルオロで置換されていてもよい、請求項４に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（４−クロロ−３−メチル−フェニルカルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６，６−ジメチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；
（Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；および
（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン
からなる群から選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項７】
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；
（Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン；および
（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン
から選択される請求項６に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項８】
治療有効量の請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む医薬組成物。
【請求項９】
少なくとも１つの追加の抗糖尿病薬をさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイヤビニーズ、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシン−Ｑ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンジン−３、エキセンジン−４、トロデュスケミン、レセルバトロール、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
動物において２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法。
【請求項１２】
動物において非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝インスリン抵抗性を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法。
【請求項１３】
動物において２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、請求項８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１４】
動物において非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝インスリン抵抗性を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、請求項８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
動物においてアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によりモジュレートされる疾患、状態または障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、
（ｉ）治療量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む第一の組成物、ならびに
（ｉｉ）抗肥満症薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１つの追加の医薬剤、および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む第二の組成物
を含む２つの別々の医薬組成物を投与するステップを含み、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によりモジュレートされる前記疾患、状態または障害が、肥満症、肥満症関連障害、２型糖尿病、糖尿病関連障害、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝インスリン抵抗性からなる群から選択される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害薬として作用する置換ピラゾロスピロケトン化合物およびアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素の阻害によりモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、ほとんどの種において見出される酵素のファミリーであり、アセチル−ＣｏＡからのマロニル−ＣｏＡの産生を触媒することによって脂肪酸の合成および代謝に関係している。哺乳動物では、ＡＣＣ酵素の２つのアイソフォームが同定されている。ＡＣＣ１は、脂肪および肝臓などの脂質合成組織において高レベルで発現され、長鎖脂肪酸の生合成の最初の関与ステップを制御する。アセチル−ＣｏＡが、マロニル−ＣｏＡを形成するためにカルボキシル化されない場合、アセチル−ＣｏＡは、クレブス回路によって代謝される。ＡＣＣ２は、肝臓ＡＣＣの微量構成要素であるが、心臓および骨格筋における主要なアイソフォームであり、ミトコンドリアのサイトゾル表面においてマロニル−ＣｏＡの産生を触媒し、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼを阻害することにより脂肪酸がβ−酸化において利用される程度を調節する。したがって、脂肪酸利用を増加させること、およびデノボ脂肪酸合成の増加を妨げることにより、ＡＣＣ阻害薬（ＡＣＣ−Ｉ）の慢性投与はまた、高脂肪食または低脂肪食を摂取している肥満対象における肝臓および脂肪組織のトリグリセリド（ＴＧ）貯蔵を激減させ、体脂肪の選択的な減少につながる可能性もある。
【０００３】
Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａらにより行われた研究は、ＡＣＣ２が、脂肪酸酸化を制御する際に不可欠な役割を果たすことを示唆しており、したがって、ＡＣＣ２は、肥満症および２型糖尿病などの肥満症関連疾患に対する療法における標的を提供するであろう。Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａ，Ｌ．ら、「Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｍｕｔａｎｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ／ｈｉｇｈ−ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｄｉｅｔｓ」ＰＮＡＳ、１００（１８）１０２０７〜１０２１２（２００３）を参照されたい。Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｆａｔ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｔａｌ  ｅｎｅｒｇｙ  ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ，ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆａｔ  ｍａｓｓ，ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」ＰＮＡＳ、１０４（４２）１６４８０〜１６４８５（２００７）も参照されたい。
【０００４】
肝臓の脂質蓄積は、肝インスリン抵抗性を引き起こし、２型糖尿病の病因に寄与することがますます明らかになりつつある。Ｓａｌｖａｇｅらは、ＡＣＣ１とＡＣＣ２が共に、肝細胞における脂肪酸化の調節に関与しているが、ラット肝臓における主要なアイソフォームであるＡＣＣ１が、脂肪酸合成の唯一の調節因子であることを証明した。さらに、著者らのモデルにおいて、両アイソフォームの合わせた減少が、肝臓のマロニル−ＣｏＡレベルを有意に下げ、摂食状態における脂肪酸化を増加させ、脂質蓄積を低減し、インビボにおけるインスリン作用を改善するのに必要とされる。したがって、肝臓のＡＣＣ１阻害薬およびＡＣＣ２阻害薬が、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝インスリン抵抗性の治療に有用であることを示している。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２７３００を参照されたい。Ｏｈ，Ｗ．ら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｗｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９（２００５）も参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、脂肪酸合成を阻害することおよび脂肪酸酸化を増加させることにより肥満症および肥満症関連疾患（ＮＡＦＬＤおよび２型糖尿病など）を治療するためのＡＣＣ１阻害薬および／またはＡＣＣ２阻害薬を含有する医薬品が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）
【０００７】
【化１】
2013510191.tif 000003
の構造を有する化合物、または薬学的に許容できるそれらの塩に関し、
式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立して選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、シアノまたは−Ｃ（＝ＮＨ）（ＯＣＨ３）であり、
Ｒ３は、各々独立して、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ４は、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールであり、前記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５〜１２員ヘテロアリールまたは８〜１２員縮合複素環式アリールは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立して選択される１〜３個の置換基で各々置換されていてもよい。本発明の好ましい実施形態は、Ｒ４が、フェニルまたはナフチルから選択される（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール；ピリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、トリアゾリル、インドリジニル、インダゾリル、ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニル、ピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジニル、ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジニル、ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−オニル、１，６−ナフチリジニル、キノキサリニル、キノリン−４−オニルまたはイソキノリン−１−オニルから選択される５〜１２員ヘテロアリール；または３，４−ジヒドロキノリン−２−オニルまたはインドリン−２−オニルから選択される８〜１２員縮合複素環式アリールであり、各Ｒ４基が、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミド、フェニル、５〜６員ヘテロアリールまたは５〜６員ヘテロシクリルから独立して選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるそれらの塩である。
【０００８】
本発明の別の好ましい実施形態は、Ｒ１が、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、またはテトラヒドロフラニルであり、Ｒ２が、水素またはメチルである式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明のさらに別の好ましい実施形態は、Ｒ１が、エチル、イソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ４が、フェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、インドリル、ベンゾピラジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾロニル、ピロロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリジニル、ピラゾロピリミジニル、インダゾリル、インドリノニル、ナフチリジニル、キノリニル、キノリノニル、ジヒドロキノリノニル、オキソ−ジヒドロキノリノニル、イソキノリニル、イソキノリノニル、ジヒドロイソキノニル（ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｎｙｌ）またはオキソ−ジヒドロイソキノニル（ｏｘｏ−ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｎｙｌ）であり、各々が、フルオロ、クロロ、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、アミド、シアノ、フェニル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピリジニルまたはモルホリニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明のさらなる好ましい実施形態は、Ｒ１が、イソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ２が、水素であり、各Ｒ３が、水素である式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明のさらに別の好ましい実施形態は、Ｒ４が、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリニル、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニル、２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾリル、１Ｈ−ピラゾリルフェニル、１Ｈ−ピラゾリルピリジニル、または１Ｈ−イミダゾリルフェニルであり、各々が、１〜２個のメチル、クロロまたはフルオロで置換されていてもよい式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【０００９】
本発明の別の好ましい実施形態は、２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン、２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（４−クロロ−３−メチル−フェニルカルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン、２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６，６−ジメチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン、２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン、（Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン、および（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１０】
本発明の別の態様は、ある量の実施形態のうちのいずれかに記載されている式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む医薬組成物である。本組成物は、治療有効量の本発明の化合物を含むことが好ましい。本組成物は、少なくとも１つの追加の医薬剤も含有することができる。好ましい薬剤は、抗糖尿病薬および／または抗肥満症薬を包含する。
【００１１】
本発明のさらに別の態様は、哺乳動物においてアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害により仲介される疾患、状態または障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている哺乳動物、好ましくは、ヒトに、治療有効量の本発明の化合物、もしくは薬学的に許容できるその塩またはその医薬組成物を投与するステップを包含する方法である。
【００１２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害薬により仲介される疾患、障害または状態は、ＩＩ型糖尿病ならびに非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝インスリン抵抗性、高血糖症、代謝症候群、グルコース耐性障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、肥満症、脂質異常症、高血圧症、高インスリン血症、およびインスリン抵抗性症候群などの糖尿病関連疾患を包含する。好ましい疾患、障害、または状態は、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝インスリン抵抗性、高血糖症、グルコース耐性障害、肥満症、およびインスリン抵抗性症候群を包含する。ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝インスリン抵抗性、高血糖症および肥満症がより好ましい。ＩＩ型糖尿病が最も好ましい。
【００１３】
好ましい実施形態は、動物において２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する（例えば、それらの進行または発症を遅延させる）ための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１４】
別の好ましい実施形態は、動物において肥満症および肥満症関連障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１５】
さらに別の好ましい実施形態は、動物において非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝インスリン抵抗性を治療するための方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１６】
本発明の化合物は、他の医薬剤（特に、本明細書において下で記載されている抗肥満症薬および抗糖尿病薬）と組み合わせて投与することができる。組合せ療法は、（ａ）本発明の化合物、本明細書に記載されている少なくとも１つの追加の医薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、もしくは担体を含む単一の医薬組成物として、または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、もしくは担体を含む第一の組成物、および（ｉｉ）本明細書に記載されている少なくとも１つの追加の医薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、もしくは担体を含む第二の組成物を含む２つの別々の医薬組成物として投与することができる。医薬組成物は、同時にまたは逐次的に、任意の順序で投与することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義
「治療有効量」という語句は、（ｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害の１つまたは複数の症状を減弱、軽減、もしくは除去する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載されている特定の疾患、状態、もしくは障害の１つまたは複数の症状の発症を予防もしくは遅延させる本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩の量を意味する。
【００１８】
「動物」という用語は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）、食料源動物、動物園動物、海生動物、鳥および他の類縁動物種を指す。「食用動物」とは、ウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽などの食料源動物を指す。
【００１９】
「薬学的に許容できる」という語句は、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分、および／またはそれらで治療されている哺乳動物と化学的にかつ／または毒性学的に適合していなければならないことを示す。
【００２０】
「治療すること」、「治療する」、または「治療」という用語は、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）、すなわち、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）治療と姑息的治療の両方を包含する。
【００２１】
本明細書で使用されている「モジュレートされる」または「モジュレートすること」、または「モジュレートする」という用語は、他に指示がない限り、本発明の化合物によるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）の阻害を指す。
【００２２】
本明細書で使用されている「仲介される」または「仲介すること」または「仲介する」という用語は、他に指示がない限り、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）を阻害することによる、（ｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害の治療もしくは予防、（ｉｉ）特定の疾患、状態、もしくは障害の１つまたは複数の症状の減弱、軽減、もしくは除去、または（ｉｉｉ）本明細書に記載されている特定の疾患、状態、もしくは障害の１つまたは複数の症状の発症の予防もしくは遅延を指す。
【００２３】
「本発明の化合物」という用語は（他に具体的な指示がない限り）、式（Ｉ）の化合物および化合物の任意の薬学的に許容できる塩、ならびに、すべての立体異性体（ジアステレオ異性体およびエナンチオマーを包含する）、互変異性体、配座異性体、および同位体標識化合物を指す。化合物が、それぞれ水または溶媒と結び付いている本発明の化合物の水和物および溶媒和物は、本発明の組成物と見なされる。
【００２４】
「（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル」および「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」という用語は、それぞれ１〜６個または１〜３個の炭素の指定された数の炭素のアルキル基であり、直鎖または分岐であってよい。例えば、「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」という用語は、１〜３個の炭素を有し、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルからなる。
【００２５】
「（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル」という用語は、３〜７個の炭素原子を持つシクロアルキル基を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルからなる。「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。「（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール」という用語は、フェニルまたはナフチルなどの６〜１０個の炭素原子からなる芳香族基を意味する。
【００２６】
「５〜１２員ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有する５〜１２員芳香族基を意味する。本明細書で使用されているように、「５〜１２員ヘテロアリール」基の接続点は、その基の炭素原子上にある。「５〜１２員ヘテロアリール」基は、単環式または二環式であってよい。単環式ヘテロアリールの好ましい実施形態は、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニル、およびピリミジニルを包含するが、それらに限定されるものではない。二環式ヘテロアリールの好ましい実施形態は、下記の環系の基を包含するが、それらに限定されるものではない：
【００２７】
【化２】
2013510191.tif 000004
【００２８】
「８〜１２員縮合複素環式アリール」という用語は、非芳香族複素環が、アリール基と縮合している８〜１２員環系を意味する。本明細書で使用されている場合、「８〜１２員縮合複素環式アリール」基の接続点は、その基の炭素原子上にある。好ましい実施形態は、
【００２９】
【化３】
2013510191.tif 000005
などの環系の基を包含する。
【００３０】
本発明の化合物は、特に、本明細書に含まれる説明を踏まえて、化学技術分野においてよく知られているものに類似したプロセスを包含する合成経路により合成することができる。出発材料は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）などの商業ソースから一般的に入手可能であるか、当業者によく知られている方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７〜１９９９編）、または補遺（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても入手可能）を包含するＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎに一般的に記載されている方法により調製される）。
【００３１】
例示を目的として、下に示されている反応スキームは、本発明の化合物ならびに重要中間体を合成するための可能な経路を提供している。個別の反応ステップについてのより詳細な説明については、下の実施例の項を参照されたい。当業者は、他の合成経路を使用して本発明の化合物を合成することができることを理解しているはずである。具体的な出発材料および試薬が下でスキーム中に示され論じられているが、他の出発材料および試薬を容易に代用し、様々な誘導体および／または反応条件を提供することができる。さらに、下に記載されている方法により調製される化合物の多くは、当業者によく知られている従来の化学反応を使用する本開示を踏まえてさらに修飾することができる。
【００３２】
本発明の化合物の調製において、中間体の遠く離れた官能基（例えば、一級または二級アミン）の保護が必要なことがある。そのような保護の必要性は、遠く離れた官能基の性質および調製方法の条件によって異なるはずである。適当なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を包含する。同様に、「ヒドロキシ保護基」とは、ヒドロキシ官能基を遮断または保護するヒドロキシ基の置換基を指す。適当なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）は、例えば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジル、トリチルなどを包含する。そのような保護の必要性は、当業者により容易に決定される。保護基およびそれらの使用の一般的説明については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。
【００３３】
下記の反応スキーム、反応スキームＩ〜反応スキームＩＩは、式（Ｉ）の化合物を調製するために使用される代表的な手順を提供している。これらの反応スキームは、非限定的に解釈されるべきであること、および示されている方法の妥当な変形形態を使用し、式（Ｉ）の化合物を調製することができることが理解されるべきである。
【００３４】
反応スキームＩは、Ｒ２および各Ｒ３が、各々水素である式（Ｉ）の化合物である式（Ｉａ）を有する本発明の化合物を提供するために一般的に使用することができる一般手順の概略を示している。保護されたスピロピペリジン誘導体（ＶＩＩＩａ）は、適切に保護されたピペリジンアルデヒド（Ｘａ）をメチルビニルケトン（ＩＸａ）で処理することにより形成させることができる。基Ｐｇは、適切なアミン保護基を表し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）、好ましくは、Ｃｂｚであることが好ましい。この反応は、Ｒｏｙ，Ｓ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００６、１２、３７７７〜３７８８の３７８６により記載されているものに類似した手順に従ってエタノール性水酸化カリウムの存在下に行うことができる。代替方法として、反応を、還流ベンゼン中でパラ−トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ）の存在下に行い、望ましい生成物（ＶＩＩＩａ）を提供することができる。
【００３５】
【化４】
2013510191.tif 000006
【００３６】
次いで、スピロピペリジン誘導体（ＶＩＩＩａ）を、好ましくは、６０℃〜還流などの高温にて、エタノールなどの適切な溶媒中、適切なヒドラジン誘導体、Ｒ１ＮＨＮＨ２と反応させ、官能基化されたスピロピペリジン誘導体（ＶＩＩａ）を提供することができる。
【００３７】
次いで、化合物（ＶＩＩａ）を、好ましくは、８０℃などの高温にて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびオキシ塩化リンから生成されるフィルスマイヤー試薬と反応させ、式（ＶＩａ）の望ましい環化化合物を提供する。次いで、式（ＶＩａ）の化合物を、ＴＨＦ中メタノールの存在下にＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）で処理し、式（Ｖａ）の対応するブロモメトキシ誘導体を提供することができる。次いで、ブロモメトキシ誘導体（Ｖａ）を、ＴＨＦ中でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの強塩基を使用する脱離条件にかけ、化合物（ＩＶａ）を提供し、次いで、２Ｎ  ＨＣｌなどの強酸と反応させ、式（ＩＩＩａ）の化合物を提供する。
【００３８】
次いで、式（ＩＩＩａ）の化合物を、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用して脱保護し、式（ＩＩａ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、Ｐｇが、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）を表す場合、ジオキサン中の４Ｎ塩酸またはジクロロメタンなどの適切な溶媒中のトリフルオロ酢酸などの標準的な強酸脱保護条件を使用し、ＢＯＣ基を除去することができる。Ｐｇが、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）を表す場合、エタノール中でのパラジウム炭素上での水素化またはエタノールもしくは酢酸エチル中でのパラジウム炭素の存在下におけるギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエンなどの水素源による処理を用い、脱保護を行うことができる。
【００３９】
次いで、式（ＩＩａ）のスピロピペリジン誘導体を、標準的方法を用いることによりアシル化し、式（Ｉａ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉａ）を、望ましいカルボン酸（Ｒ４ＣＯ２Ｈ）との標準的ペプチドカップリング反応を使用して形成させることができる。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩａ）およびカルボン酸（Ｒ４ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ４ＣＯ２Ｈ）を、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）またはジクロロメタンなどの適当な溶媒中、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）などの活性化剤の存在または非存在下およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）などの適当な塩基の存在下、ヘキサフルオロリン酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）などのペプチドカップリング試薬と接触させることなどにより活性化されたカルボン酸エステルを形成させ、次いで、活性化されたカルボン酸エステルを、スピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と接触させることによりカップリングさせ、式（Ｉａ）の化合物を形成させることができる。
【００４０】
代替方法として、式（Ｉａ）の化合物は、塩化チオニルと反応させることなどにより、カルボン酸（Ｒ４ＣＯ２Ｈ）を酸塩化物（Ｒ４ＣＯＣｌ）に先ず変換し、次いで、酸塩化物を、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中でトリエチルアミンなどの適切な塩基の存在下にスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と反応させることにより形成させ、式（Ｉａ）の化合物を形成させることができる。さらに別の代替方法は、カルボン酸（Ｒ４ＣＯ２Ｈ）を、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦなどの適当な溶媒中でＮ−メチルモルホリンなどの適当な塩基の存在下に２−クロロ−４，６−ジメトキシトリアジンで処理することを必要とする。活性化されたエステルに、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦなどの適当な溶媒中、スピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）およびＮ−メチルモルホリンなどの塩基の溶液を加え、次いで、式（Ｉａ）の化合物を提供する。
【００４１】
反応スキームＩＩは、式（ＩＩＩｂ）の中間体から出発する式（Ｉｂ）の化合物の合成を提供する。反応スキームＩＶにおける変換は、化合物（ＩＩＩｂ）のＲ３位における適切な基の導入を示している。化合物（ＩＩＩｂ）を、好ましくは、低温にて、適切な溶媒中で適切な無水条件下にリチウムヘキサメチルジシラジド（ＬＨＭＤＳ）などの強塩基で脱プロトン化する。次いで、そのようにして形成されるエノレートを、Ｌｇが、適切な脱離基を表す適切な求核試薬Ｒ３Ｌｇ（Ｒ３Ｌｇが、ヨウ化メチルなどのハロゲン化アルキルである場合にはハロゲン化物など）と反応させ、Ｒ３が、アルキル基などの適切な基である（ＩＩＩｃ）を提供する。次いで、（ＩＩＩｃ）の脱プロトン化および別のＲ３Ｌｇとの反応は、望ましい場合に再度行うことができる。次いで、式（ＩＩＩｃ）の化合物を、反応スキームＩで前に記載されているように脱保護およびアシル化し、式（Ｉｂ）の化合物を提供することができる。
【００４２】
【化５】
2013510191.tif 000007
【００４３】
本発明の化合物は、それ自体で、またはそれらの薬学的に許容できる塩の形態で単離および使用することができる。本発明によれば、複数の塩基性窒素原子を持つ化合物は、様々な当量（「ｅｑ」）数の酸と塩を形成することができる。すべてのそのような塩が、本発明の範囲内にあることは当業者により理解されるはずである。
【００４４】
薬学的に許容できる塩は、本発明の化合物に関連して本明細書で使用されているように、化合物の薬学的に許容できる無機塩および有機塩を包含する。これらの塩は、化合物の最終単離および精製の間にインサイチュで、またはその化合物を、適当な有機もしくは無機の酸と別個に反応させ、そのようにして形成される塩を単離することにより調製することができる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート（ｎａｐｈｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩などを包含するが、それらに限定されるものではない。これらは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリおよびアルカリ土類金属などに基づく陽イオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウムなどを包含するがそれらに限定されない無毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、およびアミン陽イオンを包含することもある。追加の例については、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９（１９７７）を参照されたい。
【００４５】
本発明の化合物は、２種以上の結晶形態で存在することがある。式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩（溶媒和物および水和物を包含する）の多形体は、本発明の一部を形成し、異なる条件下での、例えば、再結晶のための異なる溶媒または異なる溶媒混合物；異なる温度における結晶化；結晶化の間の極めて速い冷却から極めて遅い冷却に及ぶ様々な冷却様式を使用する本発明の化合物の結晶化により調製することができる。多形体は、本発明の化合物を加熱または融解し、続いて、徐々にまたは急速に冷却することにより得ることもできる。多形体の存在は、固体プローブ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、赤外（ＩＲ）分光法、示差走査熱量測定法、粉末Ｘ線回折またはそのような他の技法により決定することができる。
【００４６】
本発明は、１つまたは複数の原子が、天然において通常見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられているという事実を除いて、式（１）により記載されているものと同一である同位体標識化合物も包含する。本発明の化合物に組み入れることができる同位体の例は、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、および１８Ｆなどの水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体を包含する。本発明のある種の同位体標識化合物、例えば、３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体が組み入れられているものは、薬物および／または基質の組織分布アッセイに有用である。トリチウム化（すなわち、３Ｈ）および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易さおよび検出能のため特に好ましい。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）などのより重い同位体による置換は、より大きい代謝安定性、例えば、インビボ半減期の増加または用量要件の軽減よりもたらされるある種の治療上の利点を提供することができ、それ故に、一部の環境において好ましいことがある。本発明の同位体標識化合物は、一般的に、非同位体標識試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識試薬を用いることにより、スキームおよび／または下の実施例に開示されている手順を行うことにより調製することができる。
【００４７】
本発明の化合物は、立体中心を含有することがある。これらの化合物は、エナンチオマーの混合物としてまたは純粋なエナンチオマーとして存在することがある。ある化合物が、立体中心を包含する場合、その化合物は、当業者に知られている方法により、例えば、例えば結晶化により分離することができるジアステレオ異性の塩の形成；例えば、結晶化、ガス−液体もしくは液体クロマトグラフィーにより分離することができるジアステレオ異性の誘導体もしくはコンプレックスの形成；１つのエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応、例えば、酵素的エステル化；または、例えば、結合しているキラルなリガンドを持つシリカなどのキラルな支持体上のもしくはキラルな溶媒の存在下におけるキラルな環境におけるガス−液体もしくは液体クロマトグラフィーにより、純粋なエナンチオマーに分割することができる。望ましい立体異性体が、上に記載されている分離手順のうちの１つにより別の化学物質に変換される場合に、望ましいエナンチオマーの形態を遊離させるにはさらなるステップが必要とされることが理解されるはずである。代替方法として、具体的な立体異性体は、光学活性な出発材料を使用することにより、光学活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成により、または不斉変換により１つの立体異性体を他の立体異性体に変換することにより合成することができる。
【００４８】
本発明の化合物は、分離可能な場合がある異なる安定な立体配座形態で存在することがある。不斉単結合の周りの束縛回転に起因するねじれ不斉は、例えば、立体障害または環ひずみのために、異なるコンフォーマーの分離を可能にすることがある。本発明の化合物は、式（１）の化合物の各立体配座異性体およびそれらの混合物をさらに包含する。
【００４９】
本発明の化合物は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）（特に、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２）の阻害によりモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療するのに有用である。本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む医薬組成物である。本発明の化合物（そこで使用される組成物およびプロセスを包含する）は、本明細書に記載されている治療上の応用のために医薬品の製造においても使用することができる。
【００５０】
典型的な製剤は、本発明の化合物と担体、希釈剤または賦形剤を混ぜることにより調製される。適当な担体、希釈剤および賦形剤は、当業者によく知られており、炭水化物、ワックス、水溶性かつ／または膨潤性のポリマー、親水性または疎水性の材料、ゼラチン、油、溶媒、水などを包含する。使用される特定の担体、希釈剤または賦形剤は、本発明の化合物が適用されている手段および目的によって決まるはずである。溶媒は、一般的に、哺乳動物へ投与することが安全である（ＧＲＡＳ）と当業者に認められている溶媒を基準として選択される。一般に、安全な溶媒は、水などの無毒性の水性溶媒および水に可溶か混和可能である他の無毒性溶媒である。適当な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、ならびにそれらの混合物を包含する。製剤は、１つまたは複数の緩衝液、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤（ｏｐａｑｕｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味料、芳香剤、矯味剤および洗練された体裁の薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）を提供するためまたは医薬製品の製造を助けるための（すなわち、医薬品を調製する際に使用するための）他の知られている添加物を包含することもできる。
【００５１】
製剤は、従来の溶解および混合手順を使用して調製することができる。例えば、バルク薬物物質（すなわち、本発明の化合物または化合物の安定化された形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の知られているコンプレックス形成剤とのコンプレックス））を、上に記載されている賦形剤の１つまたは複数の存在下に適当な溶媒に溶かす。難水溶性化合物の溶解速度は、参照により本明細書に組み込まれている「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｐｏｏｒｌｙ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｄｒｕｇ（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）ｂｙ  ａ  ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３９、７６９〜７７３（１９８７）中のＴａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら；およびＥＰ０９０１７８６  Ｂ１（ＵＳ２００２／００９４９４）により記載されているものなどの噴霧乾燥された分散液の使用により高めることができる。本発明の化合物は、典型的には、容易に制御可能な用量の薬物を提供し、洗練されかつ容易に取り扱える製品を患者に与えるための医薬剤形に製剤化される。
【００５２】
医薬組成物は、本発明の化合物の溶媒和物および水和物も包含する。「溶媒和物」という用語は、式（Ｉ）により表される化合物（薬学的に許容できるその塩を包含する）の１つまたは複数の溶媒分子との分子コンプレックスを指す。そのような溶媒分子は、レシピエントに対して無害であることが知られている医薬技術分野において一般に使用されるもの、例えば、水、エタノール、エチレングリコールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水であるコンプレックスを指す。溶媒和物および／または水和物は、結晶性形態で存在することが好ましい。メタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｓ）−プロピレングリコール、（Ｒ）−プロピレングリコール、１，４−ブチン−ジオールなどの他の溶媒を、より望ましい溶媒和物の調製における中間溶媒和物として使用することができる。
【００５３】
適用のための医薬組成物（または、製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて様々なやり方で包装することができる。一般的に、流通のための物品は、適切な形態で医薬製剤をその中に収納した容器を包含する。適当な容器は、当業者によく知られており、瓶（プラスチックおよびガラス）、サシェ、アンプル、プラスチック袋、金属円筒などの材料を包含する。容器は、包装の内容物への不注意な接触を防ぐための不正開封防止アセンブリッジを包含することもできる。さらに、容器は、容器の内容物について記載しているラベルをその上に配置している。ラベルは、適切な警告を包含することもできる。
【００５４】
本発明は、動物においてアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によりモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療する方法であって、そのような治療を必要としている動物に、治療有効量の本発明の化合物または有効量の本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、または担体を含む医薬組成物を投与することを包含する方法をさらに提供する。方法は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害が有益である疾患、状態および／または障害を治療するために特に有用である。
【００５５】
本発明の一態様は、肥満症、および肥満症関連障害（例えば、過体重、体重増加、または体重維持）の治療である。
【００５６】
肥満症および過体重は、一般的に、総体脂肪と相関性があって疾患の相対リスクを予測するボディマス指数（ＢＭＩ）により定義される。ＢＭＩは、二乗した身長（メートル）で除された体重（キログラム）（ｋｇ／ｍ２）により算出される。過体重は、典型的には、２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義され、肥満症は、典型的には、３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義される。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ、Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９８〜４０８３（１９９８）を参照されたい。
【００５７】
本発明の別の態様は、１型糖尿病（「ＩＤＤＭ」とも呼ばれるインスリン依存性糖尿病）および２型糖尿病（「ＮＩＤＤＭ」とも呼ばれるインスリン非依存性糖尿病）、グルコース耐性障害、インスリン抵抗性、高血糖症、ならびに糖尿病性合併症（アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心疾患、脳卒中、末梢血管疾患、腎症、高血圧症、神経障害、および網膜症）を包含する糖尿病または糖尿病関連障害の治療の（例えば、進行または発症を遅延させる）ためである。
【００５８】
本発明のさらに別の態様は、代謝症候群などの肥満症併存疾患の治療である。代謝症候群は、脂質異常症、高血圧症、インスリン抵抗性、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、冠状動脈疾患および心不全などの疾患、状態または障害を包含する。代謝症候群に関するより詳細な情報については、例えば、Ｚｉｍｍｅｔ，Ｐ．Ｚ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ；Ｐｅｒｈａｐｓ  ａｎ  Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ  Ｍｙｓｔｅｒｙ  ｂｕｔ  Ｆａｒ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｙｔｈ−Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏｅｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｎｄ？」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ＆  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、７（２）、（２００５）；およびＡｌｂｅｒｔｉ，Ｋ．Ｇ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ−Ａ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ」、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１０５９〜６２（２００５）を参照されたい。本発明の化合物の投与は、薬物を含有しないビヒクル対照と比較して、血漿レプチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および／またはコレステロールの低下などの少なくとも１つの心臓血管疾患危険因子の統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を提供することが好ましい。本発明の化合物の投与は、グルコース血清レベルの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を提供することもできる。
【００５９】
本発明のさらに別の態様は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝インスリン抵抗性の治療である。
【００６０】
約１００ｋｇの体重を有する正常な成人ヒトについて、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇから約１０ｍｇまでの範囲の用量が典型的には十分であり、好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５．０ｍｇ／ｋｇまで、より好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇまでである。しかしながら、一般的用量範囲における何らかの変動が、治療されている対象の年齢および体重、意図された投与経路、投与されている特定の化合物などに応じて必要とされることがある。特定の患者についての用量範囲および最適な用量の決定は、本開示の利益を有する当業者の能力の十分範囲内にある。本発明の化合物は、それらの形態もまた当業者によく知られている持続放出製剤、制御放出製剤、および遅延放出製剤で使用することができることも留意されたい。
【００６１】
本発明の化合物は、本明細書に記載されている疾患、状態および／または障害を治療するための他の医薬剤（複数可）と併せて使用することもできる。したがって、他の医薬剤と組み合わせて本発明の化合物を投与することを包含する治療の方法も提供される。本発明の化合物と組み合わせて使用することができる適当な医薬剤は、抗肥満症薬（食欲抑制薬を包含する）、抗糖尿病薬、抗高血糖症薬、脂質低下薬、および抗高血圧症薬を包含する。
【００６２】
適当な抗肥満症薬は、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害薬、ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ−１）阻害薬、ＭＣＲ−４作動薬、コレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）作動薬、モノアミン再取込み阻害薬（シブトラミンなど）、交感神経興奮作用薬、β３アドレナリン作動薬、ドーパミン作動薬（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃ作動薬、メラニン凝集ホルモン拮抗薬、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチン作動薬、ガラニン拮抗薬、リパーゼ阻害薬（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制薬（ボンベシン作動薬など）、ニューロペプチド−Ｙ拮抗薬（例えば、ＮＰＹ  Ｙ５拮抗薬）、ＰＹＹ３−３６（その類似体を包含する）、甲状腺ホルモン様薬、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、グルココルチコイドの作動薬または拮抗薬、オレキシン拮抗薬、グルカゴン様ペプチド−１作動薬、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹおよびＰｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク（ＡＧＲＰ）阻害薬、グレリン拮抗薬、ヒスタミン３の拮抗薬または逆作動薬、ニューロメディンＵ作動薬、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害薬（例えば、ジルロタピドなどの腸選択的ＭＴＰ阻害薬）、オピオイド拮抗薬、オレキシン拮抗薬などを包含する。
【００６３】
本発明の組合せ態様において使用するための好ましい抗肥満症薬は、腸選択的ＭＴＰ阻害薬（例えば、ジルロタピド、ミトラタピドおよびインプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ  Ｎｏ．４０３９８７）およびＣＡＳ  Ｎｏ．９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａ作動薬（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００  Ａ１号に記載されているＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃ作動薬（例えば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４作動薬（例えば、ＵＳ６，８１８，６５８に記載されている化合物）、リパーゼ阻害薬（例えば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書で使用されているように「ＰＹＹ３−３６」は、ペグ化されたＰＹＹ３−３６などの類似体、例えば、米国公開第２００６／０１７８５０１号に記載されているものを包含する）、オピオイド拮抗薬（例えば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ  Ｎｏ．１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ  Ｎｏ．２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンを包含する。本発明の化合物および組合せ療法は、運動および理にかなった食事と併せて投与されることが好ましい。
【００６４】
適当な抗糖尿病薬は、ナトリウム−グルコース共輸送体（ＳＧＬＴ）阻害薬、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）−１０阻害薬、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）１または２の阻害薬、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイヤビニーズ（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、およびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害薬（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害薬（例えば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害薬（例えば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシン−Ｑ、およびサルボスタチン）、ＰＰＡＲγ作動薬（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γ作動薬（例えば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（例えば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標）、エキセンジン−３およびエキセンジン−４）、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害薬（例えば、トロデュスケミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、ヒルチオサール抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）により開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害薬（例えば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害薬（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進薬、脂肪酸酸化阻害薬、Ａ２拮抗薬、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害薬、インスリン、インスリン模倣薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬、ＶＰＡＣ２受容体作動薬およびグルコキナーゼ活性化薬を包含する。好ましい抗糖尿病薬は、メトホルミン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標））およびＤＰＰ−ＩＶ阻害薬（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）である。
【００６５】
引用されている米国特許および出版物（実施例において参照されているすべての技術公報を包含する）のすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００６６】
下で本明細書に記載される実施例は、例示のみを目的とする。本明細書において反映される組成物、方法、および様々なパラメーターは、本発明の様々な態様および実施形態を例示することのみが意図されており、決して特許請求の範囲に記載されている本発明の範囲を制限することは意図されていない。
【実施例】
【００６７】
下に記載されている化合物および中間体は、概して、有機化学の命名法に関するＩＵＰＡＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）勧告およびＣＡＳ索引ルールに従って名前を付けることができる。特に断りのない限り、すべての反応剤は、商業的に入手した。
【００６８】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、４３、２９２３により記載されている方法に従って行った。
【００６９】
本明細書で論じられているすべてのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）精製は、ＫＰ−ＳＩＬシリカ（４０〜６３μＭ、６０オングストローム）（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＡＢ；Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を含有する４０Ｍまたは４０ＳのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）カラムを使用して行った。
【００７０】
本明細書で論じられているすべてのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）精製は、パック済みＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）シリカカラムを利用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎシステム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ；Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）を使用して行った。
【００７１】
質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．；Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。特別の定めがない限り、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。
【００７２】
プロトンＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場に百万分率で与えられ、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  ４００または５００ＭＨｚ（メガヘルツ）分光計（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．；Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）で記録した。ＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシラン（プロトンについて）またはフルオロトリクロロメタン（フッ素について）から低磁場に百万分率で示す。
【００７３】
下に記載されている調製を、下記の実施例に例示されている化合物の合成において使用した。
【００７４】
出発材料および中間体の調製
カルボン酸出発材料
下記の市販カルボン酸を使用して本発明の例示化合物を調製した：４−クロロ−３−メチル安息香酸（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（Ｓｐｈｉｎｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１−メチル−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ  Ｒ  ＆  Ｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（Ａｆｆｉｎｉｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）、１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ）、４−アミノ−２−メチルピリミジン−５−カルボン酸（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ）、２−（メチルアミノ）イソニコチン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、７Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２−オキソインドリン−５−カルボン酸（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、２−アミノ−１，６−ナフチリジン−３−カルボン酸（ＡＣＥＳ  Ｐｈａｒｍａ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、３−アミノキノキサリン−２−カルボン酸（ＡｓｉｓＣｈｅｍ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、７−アミノピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−６−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）安息香酸（Ｓｐｈｉｎｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）安息香酸（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、５−アミノ−２−フェニル−２Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、８−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、２−カルバモイルニコチン酸（Ｊ  ＆  Ｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、８−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、３−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）安息香酸（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ．Ｃｏｒｎｗａｌｌ、ＵＫ）、３−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）安息香酸（ＡＫｏｓ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）、６−モルホリン−４−イルニコチン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、７−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、５−ピリジン−３−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、６−メチル−２−（メチルアミノ）ニコチン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジン−７−カルボン酸（Ｂｅｐｈａｒｍ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｓｐｈｉｎｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、７−ヒドロキシピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−６−カルボン酸（Ｂｕｔｔ  Ｐａｒｋ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、インドリジン−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、２−ピリジン−２−イル−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸（Ａｍｂｉｎｔｅｒ  Ｓｔｏｃｋ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）安息香酸（Ｇｒｅｅｎｃｈｅｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、ピロロ［１，２−ｃ］ピリミジン−３−カルボン酸（Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ  Ｐｈａｒｍ  Ｔｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｚａｓｙｎｔｈ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−７−カルボン酸（Ｂｅｐｈａｒｍ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）安息香酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、６−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）ニコチン酸（Ｂｕｔｔ  Ｐａｒｋ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、１，６−ナフチリジン−２−カルボン酸（Ｂｅｐｈａｒｍ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（Ｓｐｈｉｎｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１−メチル−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジ��−６−カルボン酸（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸（Ｐａｒｋｗａｙ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）キノキサリン−２−カルボン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）、３−アセトアミド安息香酸（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、４−クロロ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（Ｓｉｎｏｖａ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）、２−モルホリノピリミジン−５−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、１Ｈ−イミダゾ［１，２−ｂ］ピラゾール−６−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ）、３−ヒドロキシキノリン−４−カルボン酸（ＡＫｏｓ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、８−ヒドロキシキノリン−７−カルボン酸（ＴＣＩ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）および３−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）安息香酸（ＡＫｏｓ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）。
【００７５】
下記のカルボン酸（下の実施例に記載されている化合物を調製するために使用した）は、以前に公表されている手段により調製した：３−ヒドロキシ−６−メチルピコリン酸（Ｐ．Ｋｏｒｏｖｃｈｅｎｋｏら、Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｄａｙ  ２００７、１２１、１３〜２１）；４−ヒドロキシ−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸（Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．１９７１、１９、１５９１）；３−アミノ−２，６−ジメチルイソニコチン酸（Ｇｕｌｌａｎｄ，Ｊ．Ｍ．、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｒ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｔｒａｎｓ．１９２５、１２７、１４９３〜５０３）；５−ヒドロキシキノリン−６−カルボン酸（Ｂｏｇｅｒｔ，Ｍ．Ｔ．；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｈａｒｒｙ  Ｌ．Ｏｒｉｇ．Ｃｏｍ．８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎ．Ｃａｎｇｒ．Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．１９１２、６、３７〜４４；５−ヒドロキシイソキノリン−６−カルボン酸（対応するメチルエステルの加水分解により調製することができる：Ｄｙｋｅ，Ｓ．Ｆ．；Ｗｈｉｔｅ，Ａ．Ｗ．Ｃ．；Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｄ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９７３、２９、８５７〜６２）；３−メチル−１−（ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸（Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．１９９９、３６、２１７に類似した化学反応により調製することができる）。
【００７６】
下記のカルボン酸出発材料（下の実施例に記載されている化合物を調製するために使用した）を、下に記載されているように調製した。
【００７７】
酸調製１：４−クロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−カルボン酸
【００７８】
【化６】
2013510191.tif 000008
酢酸（１００ｍＬ）中の４−アミノ−３−ニトロ安息香酸（１０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃にて、塩化スルフリル（８．９８ｇ、６６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、周囲温度まで温め、終夜撹拌した。混合物を、氷水中に注ぎ、濾過し、風乾すると、黄色の固体として４−アミノ−５−クロロ−３−ニトロ安息香酸（７．３５ｇ、６２％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.24 (s, 2 H) 8.19 (s, 1 H) 7.86 (s, 1 H)
【００７９】
メタノール（１５０ｍＬ）中の４−アミノ−５−クロロ−３−ニトロ安息香酸（７．３５ｇ、３４ｍｍｏｌ）の懸濁液を、濃硫酸（４０ｍＬ）で処理した。懸濁液を、終夜還流状態まで加熱した。反応溶液を、真空中で濃縮すると、黄色の固体が得られ、酢酸エチル（２００ｍＬ）および水（３０ｍＬ）に取った。溶液を、０℃まで冷却し、水（３０ｍＬ）中の炭酸カリウム（１２．４ｇ）を加えた。層を分離し、水層を、酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮すると、黄色の固体として４−アミノ−５−クロロ−３−ニトロ安息香酸メチル（７．２５ｇ、９３％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.50 (d, J=2.15 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 7.84 (br. s.,
2 H) 3.80 (s, 3 H).
【００８０】
エタノール（１１５ｍＬ）、水（２５０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中の４−アミノ−５−クロロ−３−ニトロ安息香酸メチル（４．２９ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロ亜硫酸ナトリウム（８０ｇ、３９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、２時間にわたって周囲温度にて撹拌した。反応物に、水（５５ｍＬ）を加えた。さらに１時間にわたって撹拌した後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１４０ｍＬ）を反応物に加えた。反応混合物を濾過し、濾液を、酢酸エチルで２回抽出した（各２００ｍＬ）。有機抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）と、続いて、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、１００ｍＬの最終体積まで真空中で濃縮し、次いで、終夜周囲温度に置くと、沈殿物が得られた。混合物を濾過し、窒素流下で乾燥すると、３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸メチル（９７３ｍｇ、２６％）が得られた。濾液を、真空中で濃縮すると、３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸メチル（２．４５ｇ、６６％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.11 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 7.08 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 5.44 (s, 2 H)
5.08 (s, 2 H) 3.70 (s, 3 H).
【００８１】
３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸エステル（１．２ｇ、６ｍｍｏｌ）を、水（１０ｍＬ）およびギ酸（８２６ｍｇ、１８ｍｍｏｌ）に加え、４時間にわたって還流状態にて加熱した。反応物を、周囲温度まで冷却し、水酸化カリウム水溶液を加えた（２１ｍＬ、１Ｍ）。反応溶液を、酢酸エチル（２×各２５ｍＬ）で洗浄した。水層を、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ＝５まで酸性化すると、沈殿物が得られ、濾過し、水で洗浄し、窒素流下で乾燥すると、表題化合物（４３９ｍｇ、３７％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.45 (s, 1 H) 8.10 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 7.77 (d, J=1.37 Hz, 1
H).
【００８２】
酸調製２：７−クロロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
【００８３】
【化７】
2013510191.tif 000009
３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸エステル（酸調製１から、１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール（８９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中で混ぜ合わせ、１６時間にわたって撹拌した。反応溶液を、３時間にわたって６０℃まで加熱した。反応物に、カルボニルジイミダゾール（８１ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、反応を、２時間にわたって６０℃にて続けた。反応物を、室温まで冷却し、１６時間にわたって撹拌した。沈殿物が形成した。混合物を濾過した。濾液を、真空中で濃縮し、残渣を、酢酸エチル中でスラリー化した。スラリーを、始めの濾過と同じフィルター上で濾過した。集められた固体を、少量の酢酸エチルで洗浄し、次いで、窒素流下で乾燥すると、白色の固体として７−クロロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（９３ｍｇ、８２％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.60 (br. s., 1 H) 11.16 (s, 1 H) 7.55 (d, J=1.37 Hz, 1 H)
7.38 (d, J=1.56 Hz, 1 H) 3.80 (s, 3 H).
【００８４】
７−クロロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（３５１ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、１Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．７７４ｍＬ、１．５５ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（５ｍＬ）を混ぜ合わせ、２時間にわたって５０℃まで加熱した。反応物に、１Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．７７４ｍＬ、１．５５ｍｍｏｌ）およびメタノール（１０ｍＬ）を加え、反応物を、６時間にわたって還流状態まで加熱し、次いで、終夜周囲温度まで冷却した。反応溶液を、真空中で濃縮し、テトラヒドロフランおよびメタノールを除去した。残留水層を、酢酸エチル（２ｍＬ）で抽出した。水層に、水（２ｍＬ）酢酸エチル（２ｍＬ）および３Ｍ塩酸水溶液を加えた。沈殿物が形成した。混合物を濾過し、固体を、水および酢酸エチルで洗浄した。固体を、窒素流下で乾燥すると、表題化合物（２９６ｍｇ、９０％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.54 (s, 1 H) 11.12 (s, 1 H) 7.54 (d, J=1.37 Hz, 1 H) 7.38 (d,
J=1.37 Hz, 1 H).
【００８５】
酸調製３：４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボン酸
【００８６】
【化８】
2013510191.tif 000010
２．５〜５ｍＬのマイクロ波管に、脱気した１，４ジオキサン（１．５ｍＬ）に懸濁した６−ブロモ−４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（１６０ｍｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）を加えた。これに、脱気した水（２ｍＬ）に溶かした炭酸ナトリウム（２３７ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）と一緒に、トランス−ジ（ｕ−アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジ−パラジウム（ＩＩ）（２６ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）およびモリブデンヘキサカルボニル（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、２０秒にわたって撹拌し、次いで、１０分にわたってマイクロ波中で１５５℃にて加熱し、１６バール未満に圧力を保った。容器を、取り扱う前にベントし、室温にて終夜放置した。水（２ｍＬ）および酢酸エチル（３ｍＬ）を、反応物に加え、次いで、混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した。濾液を、酢酸エチルで分配し、分離した。水性画分を、もう一度酢酸エチルで洗浄し、合わせた有機層を取っておいた。別の部分の水（５ｍＬ）を、水層に加え、ｐＨ３まで０．５Ｍ  ＨＣｌで酸性化し、褐色の沈殿物を形成させた。混合物を、１時間にわたって４℃にて冷蔵庫中に放置した。混合物を濾過し、水で洗浄すると、灰色の固体として４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボン酸が得られた、（６３％収率）。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.99 (br. s., 1 H) 8.47 (s, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 7.52 (d,
J=11.71 Hz, 1 H).
【００８７】
酸調製４：１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸
【００８８】
【化９】
2013510191.tif 000011
トルエン（１０００ｍＬ）中の（Ｅ）−３−（３−ブロモフェニル）アクリル酸（１００ｇ、０．４４ｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．４８ｍｏｌ）の混合物に、０〜１０℃にてアジ化ジフェニルホスホリル（１２７．４ｇ、０．４５ｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を、終夜室温にて撹拌した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝８：１）は、反応の終了を示した。得られた混合物を、１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（２０００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を濃縮すると、粗製の（Ｅ）−１−アジド−３−（３−ブロモフェニル）プロパ−２−エン−１−オンが得られ、次のステップで直接使用した。
【００８９】
粗製の（Ｅ）−１−アジド−３−（３−ブロモフェニル）プロパ−２−エン−１−オン（粗製約１２０ｇ）とトルエン（２００ｍＬ）の混合物を、２時間にわたって還流した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝８：１）は、出発材料の大部分が消費されたことを示した。混合物を濃縮すると、粗製の（Ｅ）−１−ブロモ−３−（２−イソシアナトビニル）ベンゼン（１００ｇ、９４％）が得られ、次のステップで直接使用した。
【００９０】
トルエン（２００ｍＬ）中の（Ｅ）−１−ブロモ−３−（２−イソシアナトビニル）ベンゼン（１００ｇ、０．４４ｍｏｌ）の溶液に、１９０℃にてトリブチルアミン（１００ｍＬ）とオキシジベンゼン（５００ｍＬ）の混合物を滴下添加した。添加後、混合物を、さらに２時間にわたって２１０℃にて加熱した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）は、反応が終了したことを示した。混合物を、室温まで冷却し、濾過し、固体を、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で洗浄した。固体を、真空下で乾燥すると、薄黄色の固体として粗製の６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（３０ｇ、３０％）が得られ、次のステップで直接使用した。
【００９１】
メタン（３００ｍＬ）中の６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（３０ｇ、１３４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１７．６ｇ、１７４ｍｍｏｌ）、塩化パラジウム（ＩＩ）（０．２４ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−（−）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０．８４ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の混合物を、２ＭＰａの一酸化炭素下で１００℃にて加熱し、１２時間にわたって撹拌した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）は、反応が終了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣を、水で洗浄し、固体を濾過し、真空中で乾燥すると、黄色の固体として粗製の１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸メチル（２３．８ｇ、９５％）が得られ、次のステップで直接使用した。
【００９２】
１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸メチル（２５ｇ、０．１３３ｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）の混合物に、室温にて水酸化リチウム（１６．８ｇ、０．４０ｍｏｌ）を加え、混合物を、４時間にわたって撹拌した。薄層クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）は、反応が終了したことを示した。反応混合物を、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、不純物を除去した。水層を、ｐＨ５まで４ＮＨＣｌ水溶液で酸性化し、濾過した。固体を、真空中で乾燥すると、薄黄色の固体として１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸（１１．３ｇ、４８％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.48 (s, 1H), 8.24 (d, 2H), 7.93 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 6.68
(d, 1H).
【００９３】
酸調製５：１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボン酸
【００９４】
【化１０】
2013510191.tif 000012
１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボン酸は、１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸、（酸調製４）と類似した方法で調製した。
【００９５】
酸調製６：５−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ピコリン酸
【００９６】
【化１１】
2013510191.tif 000013
５−ブロモピコリノニトリル（２．０ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）、イミダゾール（８１８ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）炭酸カリウム（１．６６ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）を混ぜ合わせ、２０時間にわたって１３０℃まで加熱した。反応溶液を蒸発させ、残渣を、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）の間で分配した。相を分離し、有機相を、水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、蒸発させると、残渣が得られ、ジクロロメタン中２〜３％メタノールグラジエントで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、５−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ピコリノニトリル（１．２３ｇ、６６％）が得られた。
【００９７】
５−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ピコリノニトリル（１３６ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を、２時間にわたって６Ｎ塩酸水溶液（１０ｍＬ）中で還流状態まで加熱した。反応混合物を蒸発させ、残渣を、３部分のトルエンと共沸させると、残渣が得られ、水中０〜１０％ピリジングラジエントで溶離するイオン交換カラム（ＡＧ−５０  Ｂｉｏｒａｄ）上で精製すると、白色の固体として表題化合物（１２８ｍｇ、８４％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.10 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.26-8.33 (m, 1H), 8.13-8.20 (m,
1H), 7.96 (s, 1H), 7.16 (s, 1H).
【００９８】
酸調製７：７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【００９９】
【化１２】
2013510191.tif 000014
クロロホルム（５０ｍＬ）中の４−アミノ−３−クロロ−５−メチル−ベンゾニトリル（３．０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）の混合物に、無水酢酸（３．９２ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、５時間にわたって還流状態にて加熱し、次いで、室温まで冷却した。混合物に、酢酸カリウム（５３０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）および亜硝酸イソアミル（５．２８ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、１６時間にわたって還流状態にて加熱した。反応混合物を、室温まで冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、有機物を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮すると、褐色の油が得られた。油を、メタノール（２５ｍＬ）に溶かし、濃塩酸（２５ｍＬ）を加えた。反応物を、２２時間にわたって室温にて撹拌し、メタノールを、真空中で濃縮した。残った水層を、７のｐＨに調整し、得られた沈殿物を濾過すると、褐色の固体が得られ、溶離液としてヘプタン中５０％ジクロロメタンを使用するフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、固体として７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル（５８５ｍｇ、１８％）が得られた：-ESI MS (M-1) 176.0; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.29 (br. s., 2 H), 8.08 (s, 1 H), 7.61 (s, 1 H).
【０１００】
エタノール（５２．５ｍＬ）中の７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル（１．３６ｇ、７．６６ｍｍｏｌ）の混合物に、水（１７．５ｍＬ）および水酸化カリウム（６．４４ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、１６時間にわたって還流状態にて加熱した。反応混合物を、室温まで冷却し、エチルエーテルで２回抽出し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性化し、得られた沈殿物を濾過すると、褐色の固体として７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（９００ｍｇ、６０％）が得られた：-ESI MS (M-H) 195.2.
【０１０１】
酸調製８：５−モルホリノピコリン酸
【０１０２】
【化１３】
2013510191.tif 000015
マロン酸ジエチル（１５１ｇ、０．９４４ｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（１Ｌ）中の鉱油中６０％水素化ナトリウム（３７．８ｇ、０．９４４ｍｏｌ）に撹拌下で滴下添加した。水素発生が止まった後、２−クロロ−５−ニトロピリジン（１２５ｇ、０．７８７ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、２時間にわたって還流し、次いで、テトラヒドロフランを、真空中で蒸発させると、粗製の（５−ニトロピリジン−２−イル）マロン酸ジエチルが得られ、精製することなく次の段階で使用した。
【０１０３】
粗製の（５−ニトロピリジン−２−イル）マロン酸ジエチルを、撹拌下で沸騰している６５％硝酸（１．５Ｌ）に加えた。反応混合物を、１５時間にわたって撹拌下で還流した。反応混合物を、真空中で濃縮し、得られた固体を、クロロホルムで洗浄すると、５−ニトロピリジン−２−カルボン酸（収率６５％、８５．９ｇ）が得られた。
【０１０４】
５−ニトロピリジン−２−カルボン酸（１００ｇ、０．６０ｍｏｌ）を、５時間にわたってメタノール（１Ｌ）および硫酸（５７ｍＬ）中で還流状態にて加熱した。反応混合物を冷却し、真空中で半分の体積まで減らし、残渣を、炭酸ナトリウムの溶液で中和した。得られた沈殿物を濾過すると、５−ニトロピリジン−２−カルボン酸メチル（収率８９％、９８ｇ）が得られた。
【０１０５】
５−ニトロピリジン−２−カルボン酸メチル（１８２ｇ、１ｍｏｌ）を、１時間にわたってピペリジン（２５０ｍＬ）中で還流した。反応混合物を、真空中で濃縮すると、粗製の５−ニトロ−２−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジンが得られ、さらに精製することなく次の段階のために使用した。
【０１０６】
粗製の５−ニトロ−２−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジンを、酢酸（５００ｍＬ）中で炭素上１０％パラジウム（４ｇ）の存在下に大気圧下で水素により還元した。触媒を、濾過により分離し、溶媒を、真空中で蒸発させると、粗製の６−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン−３−アミンが得られ、さらに精製することなく次の段階のために使用した。
【０１０７】
濃塩酸（１．５Ｌ）中の亜硝酸ナトリウム（６９ｇ）の溶液を、０℃にて粗製の６−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン−３−アミンに加え、混合物を、１０分にわたって撹拌した。尿素（２０ｇ）を加え、混合物を、１５分にわたって撹拌した。ヨウ化ナトリウム（１５０ｇ）を加え、生成物を、濾過により分離し、エタノールから再結晶すると、５−ヨード−２−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン（５−ニトロピリジン−２−カルボン酸メチルについて計算して収率２３％、７１ｇ）が得られた。
【０１０８】
トルエン（４００ｍＬ）中の５−ヨード−２−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン（７１ｇ、０．２３ｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．０３ｇ、４６ｍｍｏｌ）、２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）ビフェニル（２．７６ｇ、９２ｍｍｏｌ）、モルホリン（２３．７ｇ、０．２８ｍｏｌ）、およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２７．８ｇ、０．２８ｍｏｌ）を、２時間にわたって９５℃にてアルゴン下で撹拌した。生成物を、クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル）により単離し、エタノールから再結晶すると、４−［６−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン−３−イル］モルホリン（収率３７％、２２ｇ）が得られた。
【０１０９】
２５％  ＫＯＨ（１００ｍＬ）を、４−［６−（ピペリジン−１−イルカルボニル）ピリジン−３−イル］モルホリン（１８．３ｇ）に加え、混合物を還流し、次いで、ＨＣｌで中和した。溶液を、真空中で蒸発させ、生成物を、温イソプロパノールで抽出すると、表題化合物（収率７１％、１１．５ｇ）が得られた。+ESI MS (M+H) 209.7; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ ppm 8.34 (br. s., 1 H), 8.03 (d, 1 H), 7.65 (dd, 1
H), 3.75 (br. s., 4 H), 3.40 (br. s., 4 H).
【０１１０】
酸調製９：７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
【０１１１】
【化１４】
2013510191.tif 000016
２Ｎ塩酸（８ｍＬ）を、エタノール（２０ｍＬ）中の３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸メチル（酸調製１から、４３５ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を、還流状態まで加熱し、次いで、アセチルアセトン（４３７ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ）を、黄色の溶液に加える。黄色の溶液は、添加により紫色に変わった。１時間にわたって還流状態にて撹拌すると、溶液は、黄色に戻った。さらに１時間にわたって還流状態にて撹拌する。溶媒を濃縮し、無色の残渣とする。水（２０ｍＬ）を加える。懸濁液を、酢酸（２０ｍＬ）で抽出する。水層を、ｐＨ約１０まで２Ｎ水酸化ナトリウム（約８ｍＬ）で塩基性化する。酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出する。塩基性抽出の合わせた有機物を、塩水（５ｍＬ）で洗浄する。硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥すると、無色の固体として７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（２９０ｍｇ、５９％）が得られる。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.68 (s, 3 H), 3.93 (s, 3 H), 7.25 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H).
【０１１２】
２Ｎ水酸化ナトリウム（５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を、メタノール（７．５ｍＬ）中の７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（２８０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に加える。１６時間にわたって６５℃にて撹拌する。メタノールを、真空中で濃縮し、残った水層を、酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。水層を、１Ｎ塩酸（約５ｍＬ）でｐＨ約４まで酸性化する。無色の沈殿物を濾過し、高真空下で乾燥すると、表題化合物（１８９ｍｇ、７２％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2.61 (s, 3 H), 7.86 (d, J=1.37 Hz, 1 H), 8.08 (d, J=1.17 Hz, 1
H).
【０１１３】
酸調製１０：７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
【０１１４】
【化１５】
2013510191.tif 000017
丸底フラスコに、５−ブロモ−３−フルオロベンゼン−１，２−ジアミン（４００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびエタノール３０ｍＬを充填した。次いで、５Ｎ塩酸（８ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、還流状態まで加熱し、２，４−ペンタンジオンを加えた。反応混合物は、深い紫色に変わり、次いで、黄褐色にゆっくりと戻った。反応を、３時間にわたって進行させ、次いで、冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和した。次いで、反応混合物を、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機層を、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。粗製の混合物を、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、次いで、濾過すると、黄褐色の固体として６−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（３７５ｍｇ、８２％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.44 (br. s., 1 H), 7.10 (d, J=11.22 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H).
【０１１５】
５ｍＬのマイクロ波バイアルに、脱気したジオキサン（２ｍＬ）に懸濁した６−ブロモ−４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（１８７ｍｇ、０．８１５ｍｍｏｌ）、トランス−ジ−μ−アセタトビス［２−（ジ−Ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム（ＩＩ）（２８ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）およびモリブデンヘキサカルボニル（１１０ｍｇ、０．４１７ミリモル）を充填した。次いで、脱気した１０％炭酸ナトリウム水溶液（２．４５ｍＬ、２．４５ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応物を、２０秒にわたって撹拌した後、１０分にわたって極めて高い吸収で１５５℃にてマイクロ波中で反応させた。次いで、容器をベントし、室温にて終夜放置した。次いで、水（２ｍＬ）および酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した。層を分離し、水層を、酢酸エチル（２×）で洗浄した。合わせた酢酸エチル層を取っておいた。水（５ｍＬ）を、水層に加え、次いで、３のｐＨまで０．５Ｍ塩酸で酸性化し、次いで、４℃まで冷却した。固体が形成し、濾過し、水で洗浄すると、黄色の固体として表題化合物（６１ｍｇ、３７％）が得られた。第二クロップが形成し、次いで、濾過すると、表題化合物（１００ｍｇ、６３％）が得られた。1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8.22 (d, J=0.98 Hz, 1 H), 7.91 (d, J=10.49 Hz, 1 H), 2.95 (s, 3
H).
【０１１６】
酸調製１１：１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸
【０１１７】
【化１６】
2013510191.tif 000018
ジメチルホルムアミド（７５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（５．０８ｇ、１２７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃にてマロン酸ジエチル（１９．２６ｍＬ、１２７ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、溶液を、３０分にわたって周囲温度にて撹拌し、ジメチルホルムアミド（７５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−クロロ−３−ニトロピリジン（３０ｇ、１２７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。次いで、暗褐色の混合物を、２時間にわたって１００℃にて撹拌した後、周囲温度まで冷却し、０℃にて塩化アンモニウムの飽和溶液（５００ｍＬ）でクエンチした。混合物を、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を、硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を、真空中で除去すると、暗褐色の油が得られ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製すると、褐色の固体として２−（５−ブロモ−３−ニトロピリジン−２−イル）マロン酸ジエチル（３１．８ｇ、８８ｍｍｏｌ、６９％）が得られた。1HNMR ( 400 MHz, CDCl3):δ ppm 8.86 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 5.44 (1H, s), 4.29 (q, 4H), 1.27
(t, 6H).
【０１１８】
塩酸水溶液（６Ｍ、１．４Ｌ）中の２−（５−ブロモ−３−ニトロピリジン−２−イル）マロン酸ジエチル（３１．８ｇ、８８ｍｍｏｌ）の混合物を、１８時間にわたって還流状態にて撹拌した。反応混合物を、周囲温度まで冷却し、０℃にて重炭酸ナトリウム水溶液の飽和水溶液（４Ｌ）に極めてゆっくりと加えた。次いで、混合物を、ジクロロメタン（７Ｌ）で抽出し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を、真空中で除去すると、オレンジ色の油として５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロピリジン（１３．８ｇ、６３．９ｍｍｏｌ、７２％）が得られ、放置すると固化した。1HNMR (300 MHz, CDCl3) :δ ppm 8.78 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 2.79 (s, 3H).
【０１１９】
工業用メタノール変性アルコール（３３０ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロピリジン（１３．８ｇ、６３．９ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（２０ｇ）（クランピングを避けるために少量ずつ）と、続いて、濃塩酸水溶液（５ｍＬ）を加えた。暗褐色の混合物を、２時間にわたって還流状態にて激しく撹拌し、次いで、冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した（工業用メタノール変性アルコール１Ｌで洗浄した）。次いで、溶媒を、真空中で除去し、残渣を、酢酸エチル（２００ｍＬ）に取り、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を、真空中で除去すると、オレンジ色の固体として５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−アミン（１０．７ｇ、５７．５ｍｍｏｌ、８９．９％）が得られた。1HNMR (400 MHz, CDCl3):δ ppm 7.91 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 3.75 (br.s, 2H), 2.25 (s, 3H).
【０１２０】
ジクロロメタン（５７５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−アミン（１０．７ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にて無水酢酸（１２ｍＬ、１２６．５ｍｍｏｌ）と、続いて、トリエチルアミン（２２ｍＬ、１５８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、周囲温度まで温め、１８時間にわたって撹拌し、その時点でさらなる当量の無水酢酸（６ｍＬ、６３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、さらに７２時間にわたって周囲温度にて撹拌した。反応混合物を、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（５００ｍＬ）でクエンチし、有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で濃縮すると、褐色の固体が得られた。この固体を、ヘキサン中３０％酢酸エチルと共にトリチュレートすると、灰色がかった白色固体としてＮ−（５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−イル）アセトアミド（８．２８ｇ、３６ｍｍｏｌ、６３％）が得られた。1HNMR (400 MHz, CD3OD):δ ppm 8.31 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.18 (s, 3H).
【０１２１】
クロロホルム（５５０ｍＬ）中のＮ−（５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−イル）アセトアミド（８．２８ｇ、３６ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度にて、酢酸カリウム（４．３２ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）、酢酸（２．５ｍＬ、４３．６ｍｍｏｌ）と、続いて、無水酢酸（６．８６ｍＬ、７２．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、１５分にわたって周囲温度にて撹拌した後、４０℃まで加熱した。次いで、亜硝酸イソアミルを滴下添加した。次いで、反応物を、４８時間にわたって６０℃にて撹拌した。反応混合物を、０℃にて重炭酸ナトリウムの飽和溶液（５００ｍＬ）中にゆっくりと注いだ。有機相を残しておき、水相を、ジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出した。次いで、合わせた有機物を濃縮し、褐色の油とし、メタノール（５００ｍＬ）に溶かした。水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、５００ｍＬ）を、０℃にて加え、混合物を、１時間にわたって周囲温度にて撹拌した後、メタノールを、真空中で除去した。次いで、水性混合物を、酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を、真空中で除去すると、淡褐色の固体として６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（５．５ｇ、２７．９ｍｍｏｌ、７７％）が得られた。1HNMR (400, CD3OD):δ ppm 8.55 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.21 (s, 1H).
【０１２２】
メタノール（１２５ｍＬ）およびアセトニトリル（７５ｍＬ）中の６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（５．５ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２２ｍＬ、１５６ｍｍｏｌ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（１．９８ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、二塩化パラジウム（１．２３ｇ、６．９８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、２０バールの一酸化炭素下に置き、１００℃まで加熱し、１８時間にわたって激しく撹拌した。反応混合物を、周囲温度まで冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した後、溶媒を、真空中で除去すると、褐色の油が得られた。次いで、この粗製の油を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１：１、酢酸エチル：ヘキサン）により精製すると、黄白色の固体として１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸メチル（４．５２ｇ、９２％収率）が得られた。1HNMR (400, CDCl3) δ ppm 10.56 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 4.01
(s, 3H).
【０１２３】
メタノール（２５０ｍＬ）および水（１９０ｍＬ）中の１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸メチル（３．５２ｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にて、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、６４ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。次いで、懸濁液を、周囲温度まで温め、１８時間にわたって撹拌した。次いで、メタノールを、真空中で除去し、水性混合物を、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した後、塩酸水溶液（２Ｍ、７０ｍＬ）で酸性化（ｐＨ５〜６まで）した。次いで、沈殿したクリーム色の固体を濾別し、デシケーター中で乾燥すると、表題化合物（０．６７５ｇ、４．１６ｍｍｏｌ、２１％収率）が得られた。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6):δ ppm 8.97 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.39 (s, 1H).
【０１２４】
酸調製１２：３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１２５】
【化１７】
2013510191.tif 000019
酢酸（４５０ｍＬ）中の（２−ニトロフェニル）−アセトニトリル（３０ｇ、１８５ｍｍｏｌ）および炭素上１０％パラジウム（２ｇ）の懸濁液を、２時間にわたって周囲温度にて３０ｐｓｉ圧力下にＰａｒｒ装置中で水素化した。混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドに通して濾過し、濾液を、真空中で濃縮した。得られた残渣を、酢酸エチル（２５０ｍＬ）に溶かした。得られた溶液を、水（２×１００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮すると、生成物が得られた。粗製の材料を、溶離液として石油エーテル中８％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により精製すると、固体として（２−アミノフェニル）アセトニトリル（１３．５ｇ、５５％）が得られた。1HNMR (CDCl3) δ ppm 7.3-7.1 (m, 2H), 6.9-6.7 (m, 2H), 3.7 (br, 2H), 3.5 (s, 2H).
【０１２６】
ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）中の（２−アミノフェニル）アセトニトリル（１３ｇ、９８ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、０℃にて、３０分にわたってＮ−ブロモスクシンイミド（１９．３ｇ、１０８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、１時間にわたって０℃に維持した。混合物を、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、水（３×１００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗製の生成物を、溶離液として石油エーテル中１０％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により精製すると、固体として（２−アミノ−５−ブロモフェニル）アセトニトリル（１１ｇ、５３％）が得られた。1HNMR (CDCl3) δ 7.35 (s, 1H),  7.25(d, 1H), 6.65(d, 1H), 3.7 (br,  2H),
3.52(s, 2H).
【０１２７】
濃塩酸（１１０ｍＬ）中の（２−アミノ−５−ブロモフェニル）アセトニトリル（１１ｇ、５２ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、−５０℃にて、水（２０ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（３．９ｇ、５７ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加えた。添加後、混合物を、２時間にわたって−５０℃にて撹拌した。混合物を、０℃にて３３％水酸化アンモニウムで中和し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、飽和塩化ナトリウム（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。得られた粗製の生成物を、溶離液として石油エーテル中１０％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により精製すると、固体として５−ブロモ−３−シアノインダゾール（７ｇ、６０％）が得られた。1HNMR (CDCl3) δ ppm 10.7 (br, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.5 (d, 1H).
【０１２８】
メタノール（１００ｍＬ）中の５−ブロモ−３−シアノインダゾール（３ｇ、１３．５１ｍｍｏｌ）、二塩化パラジウム１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１．７６ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（３．３２ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）の懸濁液を脱気し、１６時間にわたってオートクレーブ中で８０℃にて一酸化炭素（８０ｐｓｉ）下に保った。混合物を、水（５０ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）ベッドに通して濾過し、濾液を濃縮した。得られた残渣を、１０％クエン酸溶液で酸性化し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮した。得られた粗製の生成物を、溶離液としてクロロホルム中１０％酢酸エチルを使用するカラムクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により精製すると、固体として３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸メチル（１．８ｇ、６８％）が得られた。1HNMR (CDCl3) δ ppm 10.8 (s, 1H), 8.7 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 4.0 (s,
3H).
【０１２９】
エタノール（４０ｍＬ）中の３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸メチル（２．５ｇ、１２ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１５ｍＬ）中の水酸化リチウム（１．０４ｇ、２４．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、１６時間にわたって周囲温度にて撹拌した。混合物を濃縮し、得られた残渣を、水（２５ｍＬ）に溶かし、酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄した。水層を、１０％クエン酸溶液で酸性化し、得られた沈殿物を濾過し、石油エーテル中５０％酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥すると、褐色の固体として表題化合物（１．９ｇ、８２％）が得られた。1HNMR (DMSO-d6) δ ppm 13.8-12.4 (br, 2H), 8.44 (s, 1H), 8.1 (d, 1H), 7.82 (d, 1H).
【０１３０】
酸調製１３：２−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）イソニコチン酸
【０１３１】
【化１８】
2013510191.tif 000020
濃硫酸１５０ｍＬ中の２−ブロモ−４−メチルピリジン２９．０ｇ（６９ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、重クロム酸カリウム６７．９ｇ（２３１ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を、温度が２０〜５０℃に留まるように氷浴で冷却した。添加が終了した後、撹拌を、さらに２時間にわたって室温にて続けた。次いで、反応混合物を、氷水２Ｌ上にゆっくりと注ぎ、混合物を、室温にて１時間にわたって撹拌した。得られた結晶を、濾過により集め、洗浄液が無色になるまで水で洗浄し、真空中で乾燥すると、２−ブロモイソニコチン酸３０．０ｇ（８８％）が得られた。
【０１３２】
ジクロロメタン（５００ｍＬ）およびメタノール（３５ｇ、１．０８ｍｏｌ）中の２−ブロモイソニコチン酸（７３ｇ、０．３６１ｍｏｌ）の氷冷した溶液に、少量ずつ１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド塩酸塩（６７ｇ、０．４３４ｍｏｌ）を加えた。混合物を、終夜周囲温度にて撹拌した。次いで、シリカゲル１２０ｇを加え、溶媒を蒸発させた。残渣を、石油エーテル中５％酢酸エチルで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、白色の固体として２−ブロモイソニコチン酸メチル５８ｇ（７５％）が得られた。
【０１３３】
２−ブロモイソニコチン酸メチル（２１６ｇ、１ｍｏｌ）、乾燥アセトニトリル（１．７Ｌ）、エチニル（トリメチル）シラン（１１７ｇ、１．２ｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン（１２２ｇ、１．２ｍｏｌ）、およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３６ｇ、０．０５ｍｏｌ）を、窒素流で２回パージした十分に乾燥した三つ口フラスコに入れた。反応混合物を、０．５時間にわたって撹拌し、１０℃まで冷却し、ヨウ化銅（１９ｇ、０．１ｍｏｌ）を、窒素流下で加えた。２０℃にて、反応混合物は、濃厚かつ黒くなり、発熱が観察され、続いて、沈殿物が形成した。ヨウ化銅の添加後、反応混合物を、周囲温度にてさらに２時間にわたって撹拌した。沈殿した残渣を、濾過により分離し、ジエチルエーテル（８００ｍＬ）で２回洗浄した。濾液を、飽和塩化アンモニウム（２×３００ｍＬ）および塩水（２×３００ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を蒸発させた。残渣を、ヘキサンと、続いて、石油エーテル中５％酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムを使用して精製すると、２−（（トリメチルシリル）エチニル）イソニコチン酸メチル１９１ｇ（８２％）が得られた。
【０１３４】
濃硫酸（６０ｍＬ、１．１ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（６００ｍＬ）中の２−（（トリメチルシリル）エチニル）イソニコチン酸メチル（１２７ｇ、０．５４ｍｏｌ）および酢酸水銀（５１．５ｇ、０．１６ｍｏｌ）の懸濁液に加えた。懸濁液を、５０℃にて３時間にわたって撹拌し、終夜保った。反応混合物を、ジエチルエーテル（１．５Ｌ）で希釈し、硫酸を、飽和重炭酸ナトリウム（１５０ｇ、１．７ｍｏｌ）で中和した。水銀塩の残渣を、濾過により分離した。エーテル溶液を、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を除去すると、油として２−アセチルイソニコチン酸メチルが得られ、次のステップで直接使用した。
【０１３５】
２Ｌの三つ口フラスコに、２−アセチルイソニコチン酸メチル（１６０ｇ、０．８９４ｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド−ジメチルアセトアミド（３５０ｍＬ）およびトルエン（３５０ｍＬ）を加えた。混合物を、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップで約５時間にわたって還流し、生成されるメタノールを除去した。追加のジメチルホルムアミド−ジメチルアセトアミドおよびトルエンを加え、約８００〜９００ｍＬの反応体積を保った。液体クロマトグラフィー−質量分析法が、反応が終了したことを示したら、溶媒を除去すると、黒い固体として粗製の（Ｚ）−２−（３−（ジメチルアミノ）アクリロイル）イソニコチン酸メチルが得られた。粗製の固体は、次のステップで直接使用した。
【０１３６】
２Ｌの三つ口フラスコに、（Ｚ）−２−（３−（ジメチルアミノ）アクリロイル）イソニコチン酸メチル（０．８９４ｍｏｌ）、ヒドラジン水和物（４８．８ｇ）、無水エタノール（１Ｌ）を加えた。懸濁液を、終夜２０℃にて撹拌した。溶媒を、真空中で除去した。残渣を、濃塩酸（６００ｍＬ）に取り、２時間にわたって還流状態まで加熱した。混合物を、周囲温度まで冷却した。得られた沈殿物を濾過し、水、エタノールおよびアセトンで洗浄し、乾燥すると、褐色の固体として表題化合物７８．６ｇが得られた。1HNMR (DMSO-d6/D2O)
δ ppm 8.80 (d, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.87
(dd, 1H), 7.15 (d, 1H).
【０１３７】
酸調製１４：３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
【０１３８】
【化１９】
2013510191.tif 000021
ヒドロ亜硫酸ナトリウムの水溶液（水８０ｍＬ中１７．４ｇ、１００ｍｍｏｌ）を、０℃にて、テトラヒドロフラン（７０ｍＬ）およびエタノール（３０ｍＬ）中の３−（メチルアミノ）−４−ニトロベンゼンカルボン酸メチル（８５５ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ）に加える。オレンジ色の溶液は、添加でオレンジ色の懸濁液に変わった。混合物を、２時間にわたって室温にて撹拌する。オレンジ色の懸濁液は、この時間にかけて黄色の懸濁液に変わった。飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）を加えると、黄色の懸濁液は、無色に変わった。混合物を、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を、塩水（３０ｍＬ）で洗浄する。硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥すると、黄色の油として４−アミノ−３−（メチルアミノ）安息香酸メチル（５８６ｍｇ、６８％）が得られる。得られた油は、１０分後に、放置すると結晶化し始めた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.89 (s, 3 H), 3.37 - 3.81 (m, 2 H), 3.85 (s, 3 H), 6.67 (d,
J=8.01 Hz, 1 H), 7.33 (d, J=1.37 Hz, 1 H), 7.44 (dd, J=8.11, 1.66 Hz, 1 H).
【０１３９】
カルボニルジイミダゾール（５６７ｍｇ、３．５０ｍｍｏｌ）を、室温にて、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の４−アミノ−３−（メチルアミノ）安息香酸メチル（５８６ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）の溶液に加える。黄色の溶液を、１６時間にわたって室温にて撹拌する。カルボニルジイミダゾール（５００ｍｇ、０．９６）を加える。４時間にわたって室温にて撹拌する。酢酸エチル（７５ｍＬ）を加える。１０％クエン酸（５ｍＬ）、１Ｎ水酸化ナトリウム（５ｍＬ）、および塩水（５ｍＬ）で洗浄する。有機物を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥すると、粗製の黄色の固体（６９０ｍｇ、１００％）が得られる。この粗製の固体を、酢酸エチル（１０ｍＬ）と共にトリチュレートする。沈殿物を濾過し、高真空下で乾燥すると、３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（４２２ｍｇ、６４％）が得られる。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.46 (s, 3 H), 3.92 (s, 3 H), 7.12 (d, J=8.21 Hz, 1 H), 7.68
(s, 1 H), 7.84 (dd, J=8.31, 1.47 Hz, 1 H), 9.87 - 10.03 (m, 1 H).
【０１４０】
１Ｎ水酸化ナトリウム（６．１ｍＬ、６．１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｍＬ）中の３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（４２０ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。懸濁液は、１Ｎ水酸化ナトリウムの添加で溶液に変わった。１６時間にわたって６５℃にて撹拌する。室温まで冷却し、次いで、濃縮し、メタノールを除去する。水層を、酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出する。水層を、ｐＨ約２まで２Ｎ塩化水素（３ｍＬ）で酸性化する。水層を濃縮し、固体とする。固体を、水（３ｍＬ）と共にトリチュレートする。沈殿物を濾過し、高真空下で乾燥すると、淡褐色の固体として表題化合物（２３４ｍｇ、５９％）が得られる。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.28 (s, 3 H), 7.01 (d, J=8.21 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.63
(dd, J=8.11, 1.27 Hz, 1 H), 11.19 (s, 1 H), 12.60 (s, 1 H).
【０１４１】
酸調製１５：７−ブロモ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
【０１４２】
【化２０】
2013510191.tif 000022
メタノール（１００ｍＬ）中の４−アミノ−３−ブロモ−５−ニトロ安息香酸メチル（１０ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）および塩化スズ（ＩＩ）（３３ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、６０℃まで加熱し、４時間にわたって維持した。反応塊を、周囲温度まで冷却し、濃縮すると、残渣が得られ；残渣を、ｐＨが１１になるまで飽和重炭酸ナトリウム水溶液を使用して塩基性化し、水層を、ジクロロメタン（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮すると、灰色がかった白色の固体として３，４−ジアミノ−５−ブロモ安息香酸メチル（５ｇ、５８％）が得られた。1HNMR (CDCl3): δ ppm 7.74 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.18 (広幅なs,
2H), 3.85 (s, 3H)および3.38-3.56 (広幅なs, 2H).
【０１４３】
ジクロロメタン（６ｍＬ）中の３，４−ジアミノ−５−ブロモ安息香酸メチル（１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃まで冷却した。ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のトリホスゲン（１．２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）の溶液を、この溶液に加えた。反応混合物を、周囲温度まで温め、１８時間にわたって維持した。反応塊を、水（３ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮すると、灰色がかった白色の固体として７−ブロモ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（５００ｍｇ、４５％）が得られた。1HNMR (CDCl3 + DMSO-d6):
δ 11.35 (s, 1H), 11.05 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.52 (s,
1H)および3.85 (s, 3H).
【０１４４】
７−ブロモ−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸メチル（２３８ｍｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）および２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１．５０ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を、メタノール（５ｍＬ）中で混ぜ合わせ、９０分にわたって５０℃まで加熱した。反応溶液を濃縮し、メタノールを除去した。反応残渣に、酢酸エチル（５ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、１Ｎ塩酸水溶液（１．５ｍＬ）で酸性化し、４の最終ｐＨを得た。沈殿物が形成し、濾過し、真空下で乾燥すると、固体として表題化合物（２２６ｍｇ、１００％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.89 (d, J=1.37 Hz, 1 H) 7.65 (d, J=1.37 Hz, 1 H).
【０１４５】
酸調製１６：２−（３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）イソニコチン酸
【０１４６】
【化２１】
2013510191.tif 000023
アセトニトリル（２ｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２ｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（２ｍｏｌ）の混合物を、３日にわたって室温にて撹拌し、次いで、濾過し、濾液を、２０℃未満で濃縮すると、白色の固体として（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシアセトイミドアミド（１５０ｇ）が得られ、次のステップで直接使用した。
【０１４７】
メタノール（８００ｍＬ）、水酸化カリウム（４４ｇ、０．９５ｍｏｌ）およびピリジン−２，４−ジカルボン酸ジメチル（ＣｈｅｍＰａｃｉｆｉｃ）（１５６ｇ、０．７９ｍｏｌ）の混合物を、０．５時間にわたって還流し、次いで、真空中で蒸発させると、黄色の固体として４−（メトキシカルボニル）ピコリン酸（１４４ｇ）が得られた。
【０１４８】
ジクロロメタン（５００ｍＬ）中の４−（メトキシカルボニル）ピコリン酸（１５０ｇ、１．６２ｍｏｌ）に、塩化オキサリル（４００ｍＬ）を加え、３日にわたって２５〜３０℃に温度を保った。反応物を、真空中で蒸発させると、黄色の油として２−（クロロカルボニル）イソニコチン酸メチルが得られた。
【０１４９】
ジクロロメタン（５００ｍＬ）中の２−（クロロカルボニル）イソニコチン酸メチルの溶液に、（Ｚ）−Ｎ’−ヒドロキシアセトイミドアミドおよびトリエチルアミンを加え、１日にわたって２５〜３０℃に温度を保った。反応物を、真空中で濃縮すると、黄色の固体として（Ｚ）−２−（（１−アミノエチリデンアミノオキシ）カルボニル）イソニコチン酸メチルが得られた。
【０１５０】
トルエン（１Ｌ）中の（Ｚ）−２−（（１−アミノエチリデンアミノオキシ）カルボニル）イソニコチン酸メチルの溶液を、終夜還流状態にて加熱した。得られた混合物を蒸発させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すると、白色の固体として２−（３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）イソニコチン酸メチルが得られた。
【０１５１】
水酸化リチウム（１５ｇ、０．３５ｍｏｌ）、エタノール（５００ｍＬ）および２−（３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）イソニコチン酸メチル（５２ｇ、０．２３ｍｏｌ）の混合物を、５時間にわたって室温にて撹拌し、次いで、混合物を、真空中で濃縮した。水を加え、次いで、酢酸エチルで抽出した。水層を、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ１．５として、酢酸エチルで抽出した。有機層を、真空中で濃縮すると、白色の固体として表題化合物（４２ｇ）が得られた。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 14.08 (br s, 1H) 9.00-8.98 (m, 1 H) 8.50 (s, 1H) 8.09-8.07 (m,
1H), 2.46 (s, 3H).
【０１５２】
調製Ｉ−１Ａ−０：９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５３】
【化２２】
2013510191.tif 000024
メチルビニルケトン（１４６ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（１８Ｌ）中の４−ホルミルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３７５ｇ）の溶液に加えた。反応混合物を、−５℃まで冷却し、エタノール中の水酸化カリウムの溶液（３Ｎ、０．２４３Ｌ）を、１０分かけて滴下添加した。反応混合物を、室温まで温め、１６時間にわたって撹拌した。シクロヘキサン（１０Ｌ）を加え、溶液を、飽和塩化ナトリウム（３×１０Ｌ）で洗浄した。有機層を濃縮し、油とした。この油を、８０：２０シクロヘキサン／酢酸エチル２Ｌに溶かし、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過し、不溶の材料を除去した。濾液を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（７０：３０ヘキサン／酢酸エチル）を介して精製すると、油として生成物が得られた。油を、ヘキサン中でトリチュレートすると、白色の固体として望ましい生成物（１３１ｇ、２８％）が得られた。
【０１５４】
調製Ｉ−１Ａ−１：９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジル
【０１５５】
【化２３】
2013510191.tif 000025
Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを取り付けた２Ｌの三つ口フラスコ中で撹拌する４−ホルミルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（９０．０ｇ、３６３．９ｍｍｏｌ）のベンゼン（７００ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（６．９２ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、７０℃まで加熱し、３−ブテン−２−オン（６１．８ｍＬ、７５３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、２４時間にわたって還流状態にて加熱し、トラップに放出された水を集めた。反応物を、室温まで冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液５００ｍＬで洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた暗褐色の油を、ジクロロメタン２００ｍＬに取り、シリカパッド（６００ｍＬのシリカ）に通して濾過し、ヘプタン２Ｌと、続いて、５０％酢酸エチル／ヘプタン３Ｌ、次いで、酢酸エチル３Ｌで溶離し、１Ｌずつ画分を集めた。きれいな生成物を含有する画分を合わせ、濃縮すると、濃厚な褐色の油として表題化合物６８．１ｇが得られた。不純な生成物を含有する画分を合わせ、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン、３４０ｇのシリカゲル）により精製すると、濃厚な褐色の油として表題化合物がさらに２３．６ｇ得られた。９１．７ｇ（９４．１％）の合わせた収量が実現した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.27 - 7.43 (m, 5 H), 6.79 (d, J=10.3 Hz, 1 H), 5.95 (d, J=10.3
Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.56 - 3.71 (m, 2 H), 3.39 - 3.55 (m, 2 H), 2.38 -
2.50 (m, 2 H), 1.96 (t, J=6.7 Hz, 2 H), 1.70-1.52 (m, 4 H).
【０１５６】
調製Ｉ−１Ａ−１ａ：（Ｅ）−９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジル塩酸塩
【０１５７】
【化２４】
2013510191.tif 000026
９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジル、調製Ｉ−１Ａ−１（４．８９ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を、エタノール６０ｍＬに溶かし、ｔｅｒｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩（２．４４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、４時間にわたって還流状態にて加熱し、次いで、４８時間にわたって６０℃にて撹拌した。反応物を、室温まで冷却し、減圧下で濃縮すると、黄褐色の油が得られ、放置すると固化し、黄褐色の固体として表題化合物６．６０ｇ（９９％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.26 - 7.42 (m, 5 H), 6.46 (d, J=10.0 Hz, 1 H), 6.26 (br. s., 1
H), 5.08 - 5.16 (m, 2 H), 3.43 - 3.58 (m, 4 H), 3.19 (s, 2 H), 1.78 (s, 2 H),
1.44 - 1.63 (m, 4 H), 1.17 - 1.30 (m, 9 H); +ESI MS (M+H) = 370.3.
【０１５８】
調製Ｉ−１Ａ−１ｂ：２−ｔｅｒｔ−ブチル−２，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボン酸ベンジル
【０１５９】
【化２５】
2013510191.tif 000027
調製Ｉ−１Ａ−１ａ（８．００ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１００ｍＬに溶かし、重炭酸ナトリウム（１．７ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）で処理した。３０分にわたって撹拌し、形成された塩化ナトリウムを濾別し、減圧下で濃縮すると、（Ｅ）−９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジルが得られた。２５０ｍＬの丸底フラスコに、ジメチルホルムアミド８０ｍＬを充填し、０℃まで冷却した。オキシ塩化リン（５．５１ｍＬ、５９．１ｍｍｏｌ）を、２分かけて滴下添加し、０℃にて３０分撹拌した。この溶液に、ＤＭＦ１５ｍＬ中の（Ｅ）−９−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジルを加え、反応物を、１８時間にわたって８０℃にて加熱した。反応物を、室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。得られた油を、酢酸エチル５００ｍＬに溶かし、塩水２×１５０ｍＬで洗浄した。水層を、追加の酢酸エチル１００ｍＬで抽出した。合わせた有機層を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた油を、フラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタングラジエント、１００ｇのシリカ）により精製すると、黄白色の油として表題化合物４．８９ｇ（６５％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.25 - 7.36 (m, 5 H), 7.18 (s, 1 H), 6.57 (d, J=10.0 Hz, 1 H),
5.86 (d, J=10.0 Hz, 1 H), 5.12 (s, 2 H), 3.51 - 3.69 (m, 2 H), 3.36 - 3.53 (m,
2 H), 2.58 (s, 2 H), 1.59 - 1.74 (m, 2 H), 1.52 - 1.58 (m, 9 H), 1.41 - 1.53
(m, 2 H); +ESI MS (M+H) = 380.0.
【０１６０】
調製Ｉ−１Ａ−１ｃ：６−ブロモ−２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−メトキシ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボン酸ベンジル
【０１６１】
【化２６】
2013510191.tif 000028
調製Ｉ−１Ａ−１ｂ（５６０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を、２０％メタノール／テトラヒドロフラン混合物２５ｍＬに溶かした。Ｎ−ブロモスクシンイミド（３１５ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、３０分にわたって撹拌した。混合物を、減圧下で濃縮した。得られた油を、酢酸エチル５０ｍＬと水５０ｍＬの間で分配した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた油を、フラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタングラジエント、２５ｇのシリカ）により精製すると、無色の油として表題化合物５３８ｍｇ（７３％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.27 - 7.43 (m, 6 H), 5.12 (s, 2 H), 4.74 (d, J=2.7 Hz, 1 H),
4.41 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 3.60 - 3.84 (m, 2 H), 3.54 - 3.61 (m, 3 H), 3.14 -
3.39 (m, 2 H), 2.59 (s, 2 H), 1.86 (br. s., 1 H), 1.69 (br. s., 3 H), 1.51 - 1.60
(m, 9 H).
【０１６２】
調製Ｉ−１Ａ−１ｄ：２−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボン酸ベンジル
【０１６３】
【化２７】
2013510191.tif 000029
調製Ｉ−１Ａ−１ｃ（１５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン５ｍＬに溶かし、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６１ｍＬ、０．６１ｍｍｏｌ、１Ｍテトラヒドロフラン）で処理し、３０分撹拌した。２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を、室温にて１５分撹拌した。水５０ｍＬで希釈し、酢酸エチル５０ｍＬで抽出した。有機層を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（１０ｇのシリカ、１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタングラジエント）により精製すると、透明な油として表題化合物８６ｍｇ（７１％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.38 (s, 1 H), 7.27 - 7.35 (m, 5 H), 5.11 (s, 2 H), 3.48 (t,
J=5.8 Hz, 4 H), 2.71 (s, 2 H), 2.57 (s, 2 H), 1.57 - 1.66 (m, 9 H), 1.47 - 1.59
(m, 4 H); +ESI MS (M+H) = 396.5
【０１６４】
調製Ｉ−１Ａ−１ｅ：２−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩
【０１６５】
【化２８】
2013510191.tif 000030
調製Ｉ−１Ａ−１ｄ（４４１ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、メタノール１５ｍＬに溶かし、ギ酸アンモニウム（１２７ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（５０ｍｇ、１０％Ｐｄ、５０％  Ｈ２Ｏ）で処理した。反応物を、室温にて２時間にわたって撹拌し、次いで、触媒を、濾過により除去した。濾液を、減圧下で濃縮した。得られた無色の固体を、酢酸エチル２０ｍＬに取り、ジエチルエーテル中０．５Ｍ  ＨＣｌ  １ｍＬで処理した。混合物を、３０分にわたって撹拌し、減圧下で濃縮した。得られた無色の固体を、ヘプタン２０ｍＬと共にトリチュレートすると、無色の固体として表題化合物２６５ｍｇ（８０％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.74 (s, 1 H) 3.20 (t, J=6.1 Hz, 4 H) 2.88 (s, 2 H) 2.64 (s, 2
H) 1.67 - 1.91 (m, 4 H) 1.55 - 1.63 (m, 9 H). +ESI MS
(M+H) = 262.1.
【０１６６】
２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボン酸ベンジル（Ｉ−１Ａ−３ａ）および２−ｔｅｒｔ−ブチル−６，６−ジメチル−７−オキソ−２，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボン酸ベンジル（Ｉ−１Ａ−４ａ）の調製
【０１６７】
【化２９】
2013510191.tif 000031
調製Ｉ−１Ａ−１ｄ（２６１ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン５ｍＬに溶かし、−７８℃まで冷却した。リチウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液（２．６４ｍＬ、２．６４ｍｍｏｌ、１Ｍ  ＴＨＦ）を加え、−７８℃にて３０分、次いで、０℃にて１０分撹拌した。混合物を、−７８℃まで冷却し、ヨウ化メチル（０．１２ｍＬ、１．９８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を、室温まで温めながら１時間撹拌した。反応物を、飽和塩化アンモニウム水溶液５ｍＬでクエンチした。混合物を、水５０ｍＬで希釈し、酢酸エチル１００ｍＬで抽出した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた油を、フラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％グラジエント酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカ）により精製すると、無色の油としてラセミのＩ−１Ａ−３ａ  １１０ｍｇ（４１％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.26 - 7.41 (m, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 3.60 - 3.76 (m, 2 H), 3.18
- 3.41 (m, 2 H), 2.62 - 2.78 (m, 2 H), 2.51 (q, J=7.2 Hz, 1 H), 1.59 - 1.65 (m,
9 H), 1.47 - 1.59 (m, 4 H), 1.15 (d, J=7.2 Hz, 3 H). +ESI
MS (M+H) = 410.2.
【０１６８】
調製Ｉ−１Ａ−１ｄと調製Ｉ−１Ａ−４ａの１：１混合物からなる追加の材料（６０ｍｇ）も単離された。この混合物を、上の反応条件に再びかけると、透明な油として調製Ｉ−１Ａ−４ａ  ４０ｍｇ（１４％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.26 - 7.42 (m, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 3.99 (br. s., 2 H), 2.93
(br. s., 3 H), 1.36 - 1.77 (m, 13 H), 1.20 - 1.32 (m, 2 H), 1.15 (s, 6 H). +ESI MS (M+H) = 424.4.
【０１６９】
調製Ｉ−１Ａ−３ｂ：２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩
【０１７０】
【化３０】
2013510191.tif 000032
調製Ｉ−１Ａ−３ｂは、調製Ｉ−１Ａ−１ｄの合成と同様に調製した。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.73
(s, 1 H), 3.14 - 3.27 (m, 4 H), 2.89 (s, 2 H), 2.51 (q, J=7.2 Hz, 1 H), 1.67 -
1.89 (m, 4 H), 1.55 - 1.62 (m, 9 H), 1.17 (d, J=7.4 Hz, 3 H); +ESI MS (M+H) =
276.5.
【０１７１】
調製Ｉ−１Ａ−４ｂ：２−ｔｅｒｔ−ブチル−６，６−ジメチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン塩酸塩
【０１７２】
【化３１】
2013510191.tif 000033
調製Ｉ−１Ａ−４ｂは、調製Ｉ−１Ａ−１ｄの合成と同様に調製した。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.71
(s, 1 H) 3.08 - 3.26 (m, 4 H) 1.81 - 2.04 (m, 4 H) 1.59 (s, 9 H) 1.21 - 1.33
(m, 2 H) 1.10 - 1.22 (m, 6 H).
【０１７３】
（実施例１）
２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン（１Ａ−１）の調製：
【０１７４】
【化３２】
2013510191.tif 000034
調製Ｉ−１Ａ−１ｅ（２６５ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）および塩化１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル塩酸塩（２１２ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１０ｍＬに懸濁し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６２ｍＬ、３．５６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を、１８時間にわたって周囲温度にて撹拌した。混合物を、ジクロロメタン１５０ｍＬで希釈し、塩水で洗浄した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた油を、メタノール２５ｍＬに取り、炭酸カリウム３００ｍｇで処理した。混合物を、室温にて３０分撹拌した。メタノールを、減圧下で除去し、得られた油を、酢酸エチル１００ｍＬと水の間で分配した。有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮し、次いで、酢酸エチルで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、無色の粉末として表題化合物１２６ｍｇ（３５％）が得られた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.12 (s, 1 H), 7.88 (s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 7.59 (d, J=8.8 Hz,
1 H), 7.43 (dd, J=8.6, 1.6 Hz, 1 H), 3.44 - 3.92 (m, 4 H), 2.87 (s, 2 H), 2.64
(s, 2 H), 1.47 - 1.78 (m, 13 H). +ESI MS (M+H) = 406.3.
【０１７５】
下の表１に列挙されている化合物は、商業的に入手可能である、当業者によく知られている調製物を使用して調製される、または他の中間体について上に記載されている経路に類似した方法で調製される適切な出発材料を使用して、化合物１Ａ−１の合成について上に記載されているものに類似した手順を使用して調製した。下に列挙されている化合物は、当初は遊離塩基として単離され、試験するためにそれらの対応する塩酸塩に変換されることがある。
【０１７６】
【表１】
2013510191.tif 000035
【０１７７】
（実施例２）
（ｅｎｔ１）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン  オン（２Ａ−１）および（ｅｎｔ２）−２−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（２Ｈ）−オン（２Ａ−２）の調製：
【０１７８】
【化３３】
2013510191.tif 000036
ラセミの実施例１Ａ−３を、キラルＨＰＬＣ：［Ｃｈｉｒａｌｐａｋｌ  ＯＪ−Ｈ（１０×２５０）；移動相：８５：１５（ＣＯ２／メタノール）；流速＝１０ｍＬ／分］を使用して分離し、対応する２つのエナンチオマーを得た。Ｅｎｔ１：保持時間＝４．２９分；Ｅｎｔ２：保持時間＝５．８８分。
【０１７９】
薬理学的データ
生物学的プロトコル
動物、特に、哺乳動物（例えば、ヒト）における疾患（本明細書に詳述されているものなど）の治療における本発明の化合物の有用性は、下に記載されているインビトロアッセイおよびインビボアッセイを包含する当業者に知られている従来のアッセイにおけるその活性により証明することができる。そのようなアッセイは、本発明の化合物の活性を、他の知られている化合物の活性と比較することができる手段も提供する。
【０１８０】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性を、標準的手順に基づく方法により証明した。例えば、式（Ｉ）の化合物についてのＡＣＣ活性の直接阻害は、組換えヒトＡＣＣ１（ｒｈＡＣＣ１）および組換えヒトＡＣＣ２（ｒｈＡＣＣ２）の調製物を使用して決定した。アッセイにおいて使用することができる組換えヒトＡＣＣ１およびＡＣＣ２の代表的な配列は、それぞれ図１（配列番号１）および図２（配列番号２）に提供される。
【０１８１】
［１］ｒｈＡＣＣ１の調製。完全長ヒトＡＣＣ１  ｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスに感染したＳＦ９細胞２リットルを、氷冷溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１０％グリセロール；５ｍＭイミダゾール（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ）；２ｍＭ  ＴＣＥＰ（ＢｉｏＶｅｃｔｒａ；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ、Ｃａｎａｄａ）；Ｂｅｎｚｏｎａｓｅヌクレアーゼ（１００００Ｕ／１００ｇ細胞ペースト；Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）；ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害薬カクテル（１錠／５０ｍＬ；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に懸濁した。細胞を、３サイクルの凍結融解により溶解し、４０分にわたって４０，０００×ｇにて遠心分離した（４℃）。上清を、ＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦクルードカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）上に直接ロードし、２０カラム体積（ＣＶ）にわたって最高で０．５Ｍまでのイミダゾールグラジエントで溶離した。ＡＣＣ１含有画分をプールし、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロールで１：５に希釈し、ＣａｐｔｏＱ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム上に直接ロードし、２０ＣＶにわたって最高で１ＭまでのＮａＣｌグラジエントで溶離した。リン酸基を、４℃にて１４時間にわたるラムダホスファターゼ（１００Ｕ／１０μＭ標的タンパク質；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）とのインキュベーションにより精製ＡＣＣ１から除去し；オカダ酸を添加し（１μＭ最終濃度；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ホスファターゼを阻害した。精製ＡＣＣ１を、４℃における６時間の透析により２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロール、０．５Ｍ  ＮａＣｌに交換した。アリコートを調製し、−８０℃にて凍結させた。
【０１８２】
［２］ｒｈＡＣＣ１阻害の測定。ｈＡＣＣ１を、５０μＭ  ＡＴＰ反応についての製造者の推奨条件を使用してＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用してＣｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中でアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰ、および１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３とした。典型的には、１０μｌ反応を、２５℃にて１２０分にわたって実行し、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒの停止および検出緩衝液１０μｌを添加し、組合せを、さらに１時間にわたって室温にてインキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用するＥｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）で取得した。
【０１８３】
［３］ｒｈＡＣＣ２の調製。ヒトＡＣＣ２阻害を、精製した組換えヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を使用して測定した。簡潔に述べると、ＡＣＣ２の完全長Ｃｙｔｏｍａｘクローンを、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中にサブクローニングした。ＡＣＣ２を、テトラサイクリン誘導によりＣＨＯ細胞において発現させ、１μｇ／ｍＬテトラサイクリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）と共にグルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２  ５リットルに収集した。次いで、ＡＣＣ２を含有する馴化培地を、Ｓｏｆｔｌｉｎｋ  Ｓｏｆｔ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ａｖｉｄｉｎカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に適用し、５ｍＭビオチンで溶離した。ＡＣＣ２  ４ｍｇが、０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度（Ａ２８０により決定した）にて９５％の推定純度（Ａ２８０により決定した）で溶離された。精製したＡＣＣ２を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、および５％グリセロール中で透析した。プールタンパク質を、融解時の活性の損失なしに−８０℃にて凍結させ、保存した。ＡＣＣ２活性の測定およびＡＣＣ２阻害の評価については、試験化合物をＤＭＳＯに溶かし、最終ＤＭＳＯ濃度が１％の５×ストックとしてｒｈＡＣＣ２酵素に添加した。
【０１８４】
［４］ヒトＡＣＣ２阻害の測定。ｈＡＣＣ２を、５０ｕＭ  ＡＴＰ反応についての製造者の推奨条件を使用するＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用してＣｏｓｔａｒ  ＃３６７６（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中でアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰ、および８ｍＭ  ＫＨＣＯ３とした。典型的には、１０μｌ反応を、２５℃にて５０分にわたって実行し、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒの停止および検出緩衝液１０μｌを添加し、組合せを、さらに１時間にわたって室温にてインキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用するＥｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）で取得した。
【０１８５】
上に記載されている組換えｈＡＣＣ１および組換えｈＡＣＣ２  Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒアッセイを使用した結果を、上の実施例に例示されている式（Ｉ）の化合物について下の表に要約している。
【０１８６】
実験動物におけるＡＣＣ阻害の急性インビボ評価
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、処置動物の肝臓および筋肉組織においてマロニル−ＣｏＡレベルを低減するそれらの能力の評価によりインビボで確認することができる。
【０１８７】
実験動物におけるマロニル−ＣｏＡ産生阻害の測定。この方法において、自由摂取の標準固形飼料および水で飼養されている雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２２５〜２７５ｇ）を、研究の前に無作為化した。動物に、摂食させるかまたは実験開始の前の１８時間にわたって絶食させた。明期に入って２時間で、動物に、５ｍＬ／ｋｇの体積（０．５％メチルセルロース；ビヒクル）または適切な化合物（ビヒクル中で調製した）を経口投与した。摂食ビヒクル対照は、ベースラインの組織マロニル−ＣｏＡレベルを決定するために包含し、一方、絶食動物は、マロニル−ＣｏＡレベルに対する絶食の影響を決定するために包含した。化合物投与の１時間後、動物を、ＣＯ２で窒息させ、組織を摘出した。具体的には、血液を、心臓穿刺により集め、ＥＤＴＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ）を含有するＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ管に入れ、混合し、氷上に置いた。血漿を使用し、薬物曝露を決定した。肝臓および大腿四頭筋を摘出し、直ちに凍結クランプし、ホイルに包み、液体窒素中で保存した。
【０１８８】
組織を、液体Ｎ２下で粉砕し、サンプリングにおける均一性を確保した。マロニル−ＣｏＡを、ＦａｓｔＰｒｅｐ  ＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、速度＝５．５；４５秒にわたって）中でＬｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ａ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＰＮ６９１０）中の５体積の１０％トリカルボン酸で組織（１５０〜２００ｍｇ）から抽出した。マロニル−ＣｏＡを含有する上清を、３０分にわたる１５０００×ｇにおける遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４０２）後に細胞残屑から取り出した。試料を、分析が終了するまで−８０℃にて安定に凍結させた。
【０１８９】
肝臓および筋肉組織中のマロニルＣｏＡレベルの分析は、下記の方法論を使用して評価することができる。
【０１９０】
方法は、下記の材料を利用する：Ｉｓｏｔｅｃ（Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ、ＯＨ、ＵＳＡ）から購入したマロニル−ＣｏＡ四リチウム塩およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ三リチウム塩、過塩素酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号４１０２４１）、トリクロロ酢酸（ＡＣＲＯＳ、カタログ番号４２１４５）、リン酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号０２６０−０１）、ギ酸アンモニウム（Ｆｌｕｋａ、カタログ番号１７８４３）、メタノール（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号９０９３−３３）、および水（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、４２１８−０３）を使用し、必要な移動相を作成した。Ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラム、２５μｍ、２０ｍｍ×２．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ（カタログ番号００Ｍ−Ｓ０３３−Ｂ０−ＣＢ）は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）から入手した。ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラム、３．５μｍ、１００ｍｍ×３．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．（カタログ番号１８６００２５４３）は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０１９１】
この方法は、下記の機器を利用して行うことができる。Ａｇｉｌｅｎｔ１１００バイナリーポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００クォータナリーポンプおよび２つのＶａｌｃｏ  Ｃｈｅｍｉｎｅｒｔ  ６ポート２位置弁を使用する二次元クロマトグラフィー。試料を、１０℃に維持されたＰｅｌｔｉｅｒ冷却スタックおよび２０μＬサンプリングループ付きのＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーを介して導入した。オートサンプラー用のニードル洗浄液は、Ｗａｓｈ１については水中１０％トリクロロ酢酸（ｗ／ｖ）であり、Ｗａｓｈ２については９０：１０メタノール：水である。分析用カラム（Ｓｕｎｆｉｒｅ）は、ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｉｃｒｏ−ＬＣ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｏｖｅｎを使用して３５℃に維持した。溶離液を、Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎ  Ｓｐｒａｙ付きのＡＢＩ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計で分析した。
【０１９２】
二次元クロマトグラフィーは、オンライン固相抽出および逆相クロマトグラフィーのための異なるグラジエント溶離条件を使用して並行して行った。方法の一般的な設計は、一次元を、試料クリーンアップおよび対象とする分析物の捕捉と、続く、一次元から二次元上への溶離のために両次元の短いカップリングのために利用するようになっていた。続いて、次元をアンカップリングし、定量化のための二次元からの分析物のグラジエント溶離を可能にし、同時に、配列の次の試料のために一次元を調製した。両次元が、一緒に短くカップリングされた場合、一次元中の移動相の流れは、二次元上への分析物溶離のために逆転され、最適なピーク幅、ピーク形状、および溶離時間を可能にした。
【０１９３】
ＨＰＬＣ系の一次元は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラムならびに溶媒Ａについては１００ｍＭ過塩素酸ナトリウム／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸および溶媒Ｂについてはメタノールからなる移動相を利用した。
【０１９４】
ＨＰＬＣ系の二次元は、Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラムならびに溶媒Ａについては１００ｍＭギ酸アンモニウムおよび溶媒Ｂについてはメタノールからなる移動相を利用した。グラジエントの初期条件を、２分にわたって維持し、この間に、分析物を、分析用カラムに移した。初期条件は、分析用で保持している間にオンラインＳＰＥカラムから分析物を溶離するのに十分な強度であることが重要であった。その後、グラジエントは、洗浄および再平衡ステップの前に４．５分で７４．５％Ａまで直線的に上がった。
【０１９５】
質量分析は、ＨＰＬＣとカップリングされた場合、複雑なマトリックス中の分析物を定量的に測定するための高度に選択的かつ高感度な方法であり得るが、依然として妨害および抑制を受ける。二次元ＨＰＬＣを質量分析計とカップリングすることにより、これらの妨害は、有意に低減された。さらに、三連四重極質量分析計の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特徴を利用することにより、信号対雑音比は、顕著に改善された。
【０１９６】
このアッセイについては、質量分析計を、ＴｕｒｂｏＩｏｎＳｐｒａｙ電圧が２２５０Ｖの陽イオンモードで操作した。噴霧ガスは、４５０℃まで加熱した。デクラスタリング電位（ＤＰ）、集束電位（ＦＰ）、および衝突エネルギー（ＣＥ）は、それぞれ６０、３４０、および４２Ｖに設定した。四重極１（Ｑ１）分解能は、ユニット分解能に設定し、四重極３（Ｑ３）は、低に設定した。ＣＡＤガスは、８に設定した。モニターされたＭＲＭ遷移は、２００ｍｓの滞留時間を持つマロニルＣｏＡについて：８５４．１→３４７．０ｍ／ｚ（Ｌ．Ｇａｏら（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８５３、３０３〜３１３）、およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡについて：８５７．１→３５０．０ｍ／ｚであった。溶離液を、分析物についての予想溶離時間の近くで質量分析計に方向を変えさせ、そうでなければ、供給源の保持および器具の頑健性の改善に役立てるために廃棄物に方向を変えさせた。得られたクロマトグラムを、Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して取り込んだ。マロニルＣｏＡの組織濃度を、水中トリクロロ酢酸の１０％溶液中で調製した標準曲線から計算した。
【０１９７】
組織抽出物中のマロニル−ＣｏＡを定量化するための標準曲線を含む試料は、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）中で調製し、０．０１〜１ｐｍｏｌ／μＬの範囲とした。マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬの最終濃度）を、各標準曲線成分および試料に内部標準として添加した。
【０１９８】
６個のアッセイ内品質対照を調製した；絶食動物から調製されたプール抽出物から３個および摂食動物から作製されたプールから３個。これらを、０、０．１または０．３ｐｍｏｌ／μＬの１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡならびにマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）をスパイクした独立した試料として実行した。各アッセイ内品質対照は、内部標準（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）および１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡが寄与する残りの部分と共に水性組織抽出物の８５％を含有した。大腿四頭筋の１つの絶食および１つの摂食プール試料ならびに／または肝臓の１つの絶食および１つの摂食プール試料からなるアッセイ間対照を、各実行において包含させた。すべてのそのような対照に、マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）をスパイクする。
【配列表】
2013510191000001.app
【国際調査報告】
2013510191.tif 000039
2013510191.tif 000040