(57)【要約】【課題】角膜混濁を治療するための組成物および方法を提供する。【解決手段】用いる組成物および方法はＥＰ２および／またはＥＰ４受容体を刺激する治療有効量の化合物を含む。開示の化合物を投与することにより、角膜混濁の発現を予防し、治療することができる。【選択図】なし
2013534251.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の角膜混濁を治療する方法であって、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニストおよびその組み合わせからなる群より選択される治療有効量の化合物を含む組成物を投与することにより、角膜混濁を治療する方法。
【請求項２】
角膜混濁は光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、レーシック（ＬＡＳＩＫ）、またはレーザー上皮細胞屈折矯正術（ＬＡＳＥＫ）により発生する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
化合物はＥＰ２アゴニストである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
化合物はＥＰ４アゴニストである請求項１に記載の方法。
【請求項５】
化合物は点眼薬、軟膏、クリームまたは眼内移植によって局所的に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
以下の構造の治療有効量の化合物を含む組成物を投与することにより眼の角膜混濁を治療する方法であって、
【化１】
2013534251.tif 000015
式中、破線はそれぞれ二重結合の存在または非存在を示し、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はそれぞれ独立してＨまたはＣ1−Ｃ6は直鎖アルキルから選択され、
Ｒ4はＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルケニル、その塩、またはそのアミンであり、
ＸおよびＹはそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ3から選択され、
Ｚ1およびＺ2はそれぞれ独立してＣＨまたはＮから選択され、
Ｗ1およびＷ2はそれぞれ独立してＣＨ、ＣＨ2、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールから選択され、
ｍは０〜４であり、
ｐは０または１であり、
ｏは０〜４であり、および
ＶはＣＨ3、アリール、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールであって、
投与により角膜混濁を治療する方法。
【請求項７】
Ｖは
【化２】
2013534251.tif 000016
であり、
式中、Ｒ5はハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルキル、またはＣ1−Ｃ6アルケニルであり、
ｎは０〜７であり、および
ＵはＳまたはＯである請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ｎは１、ＵはＳおよびＲ5はＣｌである請求項６に記載の方法。
【請求項９】
Ｗ2はチオフェンである請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
化合物は以下の構造である請求項６に記載の方法。
【化３】
2013534251.tif 000017
【請求項１１】
化合物は以下の構造である請求項６に記載の方法。
【化４】
2013534251.tif 000018
【請求項１２】
化合物は以下の構造である請求項６に記載の方法。
【化５】
2013534251.tif 000019
【請求項１３】
化合物は以下の構造である請求項６に記載の方法。
【化６】
2013534251.tif 000020
【請求項１４】
化合物は以下の構造である請求項６に記載の方法。
【化７】
2013534251.tif 000021
【請求項１５】
当該角膜に組成物を投与することにより角膜の透明性を維持する方法であって、当該組成物はＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、およびその組み合わせからなる群から選択される化合物を含む方法。
【請求項１６】
組成物をＰＲＫ、ＬＡＳＩＫ、またはＬＡＳＥＫから選択される施術の前、最中または後に投与する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
化合物は以下の構造である請求項１５に記載の方法。
【化８】
2013534251.tif 000022
【請求項１８】
化合物は以下の構造である請求項１５に記載の方法。
【化９】
2013534251.tif 000023
【請求項１９】
化合物は以下の構造である請求項１５に記載の方法。
【化１０】
2013534251.tif 000024
【請求項２０】
化合物は以下の構造である請求項１５に記載の方法。
【化１１】
2013534251.tif 000025
【請求項２１】
化合物は以下の構造である請求項１５に記載の方法。
【化１２】
2013534251.tif 000026
【請求項２２】
治療有効量のＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、またはその組み合わせを含む組成物を投与することにより眼内で線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害し、投与により線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法。
【請求項２３】
線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害することにより、角膜混濁を予防または減少させる請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害することにより、角膜の透明性を維持する請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
組成物を矯正方法の前、最中または後に投与する請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
矯正方法はＰＲＫ、ＬＡＳＩＫ、またはＬＡＳＥＫである請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１０年７月３０日に提出した米国仮出願第６１／３６９，２３２号および２０１０年１２月２日に提出した米国仮出願第６１／４１９，１１５号の利益を享受するものであり、その仮出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。
【背景技術】
【０００２】
角膜混濁は正常に鮮明な角膜の白色化を表す。この角膜の透明性の欠損により、ぼんやりとした視覚から失明まであらゆる症状を起こす可能性がある。角膜混濁は屈折異常を矯正するための光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、レーシック（ＬＡＳＩＫ）およびレーザー上皮細胞屈折矯正術（ＬＡＳＥＫ）の後に多く認められる。この矯正方法では、近視の治療の程度が高いほど、角膜混濁は重症になる。角膜混濁はまた角膜感染や外傷、水晶体や白内障の手術といったその他の眼科手術でも起こる。角膜混濁は視覚の転帰を低下し、得られた屈折の退行を進め、グレアやニューロン信号伝達の悪化を作り出し得るので、重大な問題である。
【０００３】
屈折矯正方法やその他の眼科手術の数が世界中で増加しているので、角膜混濁の予防が徐々に重要になっている。したがって角膜混濁を予防および／または治療することのできる組成物や方法が強く必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
角膜混濁／薄濁を治療および／または予防する方法および組成物を開示する。１つの実施形態では眼の角膜混濁の治療方法を提供する。当該方法はＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、およびその組み合わせからなる群より選択される治療有効量の化合物を含む組成物を投与することを含むことにより、角膜混濁を治療する。
【０００５】
もう１つ別の実施形態では、以下の構造の治療有効量の化合物を含む組成物を投与することにより、眼の角膜混濁を治療する方法を提供し、
【化１】
2013534251.tif 000003
式中、破線はそれぞれ二重結合の存在または非存在を示し、
Ｒ1、Ｒ2またはＲ3はそれぞれ独立してＨ、またはＣ1−Ｃ6直鎖アルキルから選択され、
Ｒ4はＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルケニル、その塩、またはそのアミンであり、
ＸおよびＹはそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、またはＣＦ3から選択され、
Ｚ1およびＺ2はそれぞれ独立してＣＨまたはＮから選択され、
Ｗ1およびＷ2はそれぞれ独立してＣＨ、ＣＨ2、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールから選択され、
ｍは０〜４であり、
ｐは０または１であり、
ｏは０〜４であり、および
ＶはＣＨ3、アリール、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールであり、
投与により角膜混濁を治療する。
【０００６】
もう１つ別の実施形態では、角膜に組成物を投与することにより角膜の透明性を維持する方法を開示し、当該組成物はＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、およびその組み合わせからなる群から選択される化合物を含む。
【０００７】
もう１つ別の実施形態では、治療有効量のＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニスト、またはその組み合わせを含む組成物を投与することにより、眼の線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法を開示する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１Ａ〜１Ｄはビヒクルで治療したヒト成人の皮膚線維芽細胞を免疫組織化学染色したもの（図１Ａ）、形質転換増殖因子β１（ＴＧＦ−β１、図１Ｂ）、ＴＧＦ−β１＋プロスタグランジン受容体サブタイプ４（ＥＰ４）アゴニスト（図１Ｃ）、ＴＧＦ−β１＋プロスタグランジン受容体サブタイプ２（ＥＰ２）アゴニスト（図１Ｄ）を示す。ＴＧＦ−β１は筋線維芽細胞の形質転換を誘導し、抗α平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）免疫細胞化学で緑色に染めた。
【図２】図２は培養した成人の皮膚線維芽細胞内の筋線維芽細胞の生体マーカー（α−ＳＭＡ）に対するＥＰ２およびＥＰ４アゴニストの影響をウエスタンブロット法で示したものである。平行してウエスタンブロット法を実施し、細胞可溶化物全体をゲル電気泳動で溶解した。総タンパク質負荷量を定量するために抗βアクチンを用いた。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
特定の用語については本明細書で使用するとき以下に記載する次の定義を参照することを意図する。用語の定義が使用されることの多い意味と異なる場合、特に明示しない限り、本出願では以下の定義を使用することを意図する。
【００１０】
「約」は限定する数、パラメータまたは指数のプラスまたはマイナス１０パーセントを意味する。
【００１１】
「アルキル」は、本明細書で使用するとき、１〜最大約１００個の炭素原子がある直鎖、分岐鎖、または環状ヒドロカルビル基を意味する。「１〜４」、または「Ｃ1−Ｃ4」のような数字の範囲は、本明細書ではいかなる場合も、所与の範囲の各整数を意味し、例えば「Ｃ1−Ｃ4アルキル」は、アルキル基が炭素原子１個だけ、炭素原子２個、炭素原子３個、または炭素原子４個を含み得る。しかし「アルキル」という用語はまた、炭素原子に数値範囲がない場合も含む。「置換アルキル」は水素、重水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、アミド、アジド、アシル（−Ｃ（Ｏ）Ｒ6）、アルコキシメチル、メルカプト（−Ｓ−Ｒ6）、スルホキシ（−Ｓ（Ｏ）−Ｒ6）、スルホニル（−Ｓ（Ｏ）2−Ｒ6）、スルホンアミド（−Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ6）2）、カルボナート（−ＯＣ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ6）、オキシアシル（−ＯＣ（Ｏ）−Ｒ6）、カルボキシル（−Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、エステル（−Ｃ（Ｏ）ＯＲ6）、カルバマート（−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ6）2）から一般的に選択される置換基を持つアルキル部分を意味し、Ｒ6はＨまたは低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、複素環等である。「低級アルキル」は、本明細書で使用するとき、１〜約４個、または１〜約６個の炭素原子があるアルキル部分を意味する。
【００１２】
「アルケニル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも１つの炭素炭素二重結合、および約２〜最大約１００個の炭素原子を持つ直鎖、分岐鎖または環式ヒドロカルビル基を意味する。「置換アルケニル」は、上述の１つ以上の置換基をさらに持つアルケニル基を意味する。「低級アルケニル」は、本明細書で使用するとき、１〜約６個の炭素原子を持つアルケニル部分を意味する。
【００１３】
「アルキニル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも１つの炭素炭素三重結合、および約２〜最大約１００個の炭素原子を持つ直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を意味する。「置換アルキニル」は、上述の１つ以上の置換基をさらに持つアルキニル基を意味する。「低級アルキニル」は、本明細書で使用するとき、２〜約４個または２〜約６個の炭素原子を持つアルキニル部分を意味する。
【００１４】
「シクロアルキル」は、本明細書で使用するとき、約３〜最大約８個の炭素原子を一般的に含む環式（すなわち環を含む）アルキル部分を意味する。「置換シクロアルキル」は、上述の１つ以上の置換基をさらに持つシクロアルキル基を意味する。
【００１５】
「アリール」は、本明細書で使用するとき、６〜最大１４個の炭素原子を持つ芳香族基を意味し、「置換アリール」は上述の１つ以上の置換基をさらに持つアリール基を意味する。
【００１６】
「ヘテロアリール」は、本明細書で使用するとき、環構造の部分として１つ以上のヘテロ原子（例えばＮ、Ｏ、Ｓ等）を含み、環構造に計５〜最大１４個の原子（すなわち炭素原子およびヘテロ原子）を持つ芳香族部分を意味する。「置換ヘテロアリール」は、上述の１つ以上の置換基をさらに持つヘテロアリール基を意味する。
【００１７】
「複素環式」または「複素環」は、本明細書で使用するとき、環構造の部分として１つ以上のヘテロ原子を含み（例えばＮ、Ｏ、Ｓ等）、３〜最大１４個の炭素原子を持つ非芳香族環式（すなわち環を含む）基を意味する。「置換複素環式」または「置換複素環」は上述の１つ以上の置換基をさらに持つ複素環式基または複素環を意味する。
【００１８】
「ハロゲン」または「ハロゲン化物」は、本明細書で使用するとき、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）を意味する。「フルオロ」、「クロロ」、「ブロモ」、および「ヨード」はまた、「トリフルオロメチル」といったハロゲン化された置換基を意味するとき、用いられ得る。
【００１９】
「ヒドロキシアルキル」は、本明細書で使用するとき、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル等のようなアルキル−ＯＨを意味する。
【００２０】
「アルキルアシル」は、本明細書で使用するとき、エタノン、プロパノン等のようなアルキルケトンを意味する。
【００２１】
「薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用するとき、親化合物の活性を保つ任意の塩を意味し、投与される対象に、および親化合物と比較して投与される文脈で、その他の有害かつ都合の悪い影響を与えない。薬学的に許容される塩はまた、酸、もう１つ別の塩、または酸または塩に変換するプロドラッグを投与した結果、ｉｎ  ｖｉｖｏで形成され得る任意の塩を意味する。さらに、薬学的に許容される塩は、生物学的な効果および遊離塩基の特性を保ち、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐトルエンスルホン酸、サリチル酸等のような無機酸と反応することにより得られる塩を意味する。
【００２２】
酸性の官能基の薬学的に許容される塩は有機塩基または無機塩基に由来する。塩は一価または多価イオンを含み得る。具体的には無機イオン、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムを対象とする。有機塩はアミン類、具体的にはモノ−、ジ−およびトリアルキルアミン類またはエタノールアミン類といったアンモニウム塩で作られ得る。塩はまたカフェイン、トロメタミンおよび類似の分子と形成され得る。塩酸またはいくつかの他の薬学的に許容される酸は、アミンまたはピリジン環のような塩基性基を含む化合物と塩を形成する。
【００２３】
用語「治療有効量」は、本明細書で使用するとき、研究者、獣医師、医師またはその他の臨床医が見つける医薬組成物を必要とする対象の生物学的または医薬的反応を引き出す医薬組成物の量を意味する。
【００２４】
本開示は角膜混濁を治療する（すなわち予防するまたは減少させる）ための組成物または方法を提供し、ＥＰ２アゴニスト、ＥＰ４アゴニストまたはその組み合わせを含む。また、角膜の透明性を維持し、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法も開示する。
【００２５】
角膜混濁はまた、角膜薄濁、角膜白濁、角膜の不透明性、および角膜上皮下の混濁を意味する。角膜混濁は、例えばエキシマレーザーフォトアブレーションの後に創傷が治癒する過程によって誘発される角膜実質の変化に起因する。角膜の筋線維芽細胞の産生は、角膜混濁を形成する役割を担う初期の生物学的イベントであることが最近明らかになっている。筋線維芽細胞は収縮性の高い細胞で、減少した透明度が細胞内のクリスタリン生成の低下に起因し得る。治癒過程で、ＴＧＦ−β１が静止状態の角膜実質細胞を角膜の線維芽細胞および筋線維芽細胞へと形質転換するトリガーをかけ、細胞外基質タンパク質類の新しい合成を刺激する。
【００２６】
ＥＰ２アゴニストおよびＥＰ４アゴニストがＴＧＦ−β１が誘導する線維芽細胞から筋線維芽細胞への形態学的な形質転換を防ぐことができることがわかっている。いかなる特定の理論に縛られることを望むものではないが、透明性を少なくする筋線維芽細胞の数の減少により、角膜の混濁の発現を減少すると考えられる。したがって、ＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニストの投与により、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を減少させることができ、角膜混濁の形成を予防または減少させることができる。
【００２７】
この点について、１つの実施形態では治療有効量のＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニストを投与することにより、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法を提供する。ＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニストは当該形質転換を阻害し、さらに角膜混濁の形成を治療する。
【００２８】
もう１つ別の実施形態では、治療有効量のＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニストを含む開示の組成物は角膜の透明性を維持するために眼に投与することができる。
【００２９】
いかなるＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニストも開示の方法に用いることができる。つまり、請求される方法では、ＥＰ２受容体に選択的な化合物（すなわち化合物Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ）およびＥＰ４受容体に選択的な化合物（すなわち化合物ＩＶおよびＶ）、およびＥＰ２受容体とＥＰ４受容体の双方を刺激する非選択的な化合物を使用できる。
【００３０】
特定の実施形態では、以下の構造式Ｉの治療有効量の化合物を含む組成物を投与することを含む方法を本明細書に開示し、
【化２】
2013534251.tif 000004
式中、破線はそれぞれ二重結合の存在または非存在を示し、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はそれぞれ独立してＨまたはＣ1−Ｃ6は直鎖アルキルから選択され、
Ｒ4はＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルケニル、その塩、またはそのアミンであり、
ＸおよびＹはそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ3から選択され、
Ｚ1およびＺ2はそれぞれ独立してＣＨまたはＮから選択され、
Ｗ1およびＷ2はそれぞれ独立してＣＨ、ＣＨ2、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールから選択され、
ｍは０〜４であり、
ｐは０または１であり、
ｏは０〜４であり、および
ＶはＣＨ3、アリール、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールである。
【００３１】
１つの実施形態では、Ｖは以下であり、
【化３】
2013534251.tif 000005
式中、Ｒ5はハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルキル、またはＣ1−Ｃ6アルケニルであり、
ｎは０〜７であり、および
ＵはＳまたはＯである。
【００３２】
もう１つ別の実施形態では、ｎは１であり、ＵはＳであり、Ｒ5はＣｌである。
【００３３】
１つの実施形態では、Ｗ2はチオフェンである。
【００３４】
もう１つ別の実施形態では、化合物は以下の構造である。
【化４】
2013534251.tif 000006
【００３５】
もう１つ別の実施形態では、化合物は以下の構造である。
【化５】
2013534251.tif 000007
【００３６】
実施形態ではさらに以下の構造の化合物を提供する。
【化６】
2013534251.tif 000008
【００３７】
特定の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物Ｉを含む。
【化７】
2013534251.tif 000009
【００３８】
もう１つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物ＩＩを含む。
【化８】
2013534251.tif 000010
【００３９】
もう１つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物ＩＩＩを含む。
【化９】
2013534251.tif 000011
【００４０】
もう１つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物ＩＶを含む。
【化１０】
2013534251.tif 000012
【００４１】
もう１つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物Ｖを含む。
【化１１】
2013534251.tif 000013
【００４２】
特定の実施形態では、化合物を組み合わせて用いることができる。例えば、１つの実施形態では、２つ以上のＥＰ２アゴニストを投与する。もう１つ別の実施形態では、２つ以上のＥＰ４アゴニストを投与する。もう１つ別の実施形態では、ＥＰ２アゴニストおよびＥＰ４アゴニストを投与する。いかなる化合物の数および組み合わせも、開示の方法にしたがって用いることができる。
【００４３】
本明細書に開示の方法で使用するのに適した開示の化合物およびその他の化合物を調製する方法は、例えば、Ｄｏｎｄｅら、１０，１０−Ｄｉａｌｋｙｌ  Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ、 米国特許第６，８７５，７８７号、Ｄｏｎｄｅら、１０，１０−Ｄｉａｌｋｙｌ  Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ、米国特許公開２００４／０２３５９５８、Ｄｏｎｄｅら、  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ、米国特許公開２００５／０１６４９９２に認めることができ、それぞれ参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。
【００４４】
開示の組成物は眼に局在的に、すなわち局所的または眼内に投与されることができる。局所的な処方として、軟膏、クリーム、ゲル、溶液、懸濁液等が挙げられる。例えば、治療を必要とする眼に開示の溶液を１回以上滴下投与することによって、溶液の局所的な投与ができる。眼内への投与は、眼の前部に生分解性の移植片を配置することによって可能である。
【００４５】
開示の化合物を含む医薬組成物の調製は、治療有効量の本開示に記載の少なくとも１つの化合物、または活性成分として薬学的に許容可能な塩を、通常の眼に許容可能な医薬賦形剤を混合することによって、および眼球への局所的な使用に適した単位剤形を調製することによって可能である。治療に効率的な量は、一般的には液体製剤中に約０．０００１〜約５％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．００１〜約１．０％（ｗ／ｖ）である。
【００４６】
特定の実施形態では、点眼液は主要なビヒクルとして生理食塩溶液を用いて調製できる。他の実施形態では、ビヒクルとして、限定されないが、ポリビニルアルコール、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポロキサマー類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよび精製水が挙げられる。
【００４７】
このような点眼液のｐＨは、好ましくは、適切な緩衝系で約４．５〜約８．０または約６．５〜７．２で維持されるものである。製剤はまた、通常の薬学的に許容可能な防腐剤、等張化剤および界面活性剤を含んでもよい。
【００４８】
点眼液に使用するのに適した防腐剤として、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀および硝酸フェニル水銀が挙げられる。界面活性剤の例としてＴｗｅｅｎ  ８０が挙げられる。
【００４９】
等張化剤は必要性または要求にしたがって添加してもよい。適した等張化剤として、限定されないが、塩類、特定の塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、グリセリンまたはその他の適した眼に許容可能な等張化剤が挙げられる。
【００５０】
結果として得られる製剤が眼に許容可能であれば、ｐＨを調節するための種々の緩衝液および方法を用いることができる。したがって、緩衝液として、酢酸塩緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸塩緩衝液およびホウ酸緩衝液が挙げられる。必要に応じて製剤のｐＨを調節するために酸または塩基を用いてもよい。
【００５１】
組成物はさらに１つ以上の眼に許容可能な抗酸化剤を含むことができる。適した抗酸化剤として、限定されないが、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソールおよびブチルヒドロキシトルエンが挙げられる。
【００５２】
眼の製剤中に含まれ得るその他の賦形剤にはキレート剤がある。許容可能なキレート剤の非限定的な例として、エデンテート二ナトリウムがあるが、その他のキレート剤を適切にまたは組み合わせて用いてもよい。
【００５３】
特定の実施形態では、表１に示す量で成分を用いることができる。
【表１】
2013534251.tif 000014
【００５４】
上述のように、局所投与に加えてまたはその代わりに、組成物は眼内への移植片を経由して投与することができる。移植片は角膜を治療するための任意の適切な眼部位、一般的には前部に配置することができる。こうした眼内への移植片の配置または挿入は当該技術分野に公知である。
【００５５】
移植片は好まれる薬剤の遊離プロファイル、使用される特定のＥＰ２および／またはＥＰ４アゴニスト、治療される眼の状態、および患者の病歴にしたがって変更することができる。移植片の大きさ（長さ、幅、奥行き）が過剰に組織を傷つけず、移植片を移植または挿入される患者の現状の視覚を不当に物理的に妨げることなく、挿入または移植できる程度であれば、当該移植片は前部の眼球領域または部位（すなわち角層化の挿入）に挿入（または移植）するのに適している。開示の移植片は生分解性のポリマーの中に分散される本明細書に開示の化合物を少なくとも１つ含む。このような移植片の産生は当該分野に良く知られており、眼内移植片を作る方法はいずれも本明細書に熟慮されるものである。
【００５６】
用いられる生分解性のポリマーマトリックスの選択は所望される遊離動態、患者の耐性等によって変更される。考えられるポリマーの特性として、限定されないが、移植部位での生体適合性および生分解性、対象の活性薬剤との適合性、および処理温度が挙げられる。生分解性のポリマーマトリックスは通常、移植片の少なくとも約１０、少なくとも約２０、少なくとも約３０、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、または少なくとも約９０重量パーセントを含む。１つの変動では、生分解性のポリマーマトリックスは移植片の約４０重量％を含む。
【００５７】
使用され得る生分解性のポリマーマトリックスは、限定されないが、有機エステル類またはエーテル類のようなモノマー類から作られるポリマー類であり、分解すると、生理学的に許容可能な分解生成物となる。無水物類、アミド類、オルソエステル類等が単体でもしくはその他のモノマーと結合して用いられることもある。ポリマー類は一般的に縮合ポリマーである。ポリマー類は架橋されてもよいし、架橋されていなくともよい。架橋されている場合、通常、せいぜいわずかに架橋されている程度で、架橋の割合は５％未満であり、通常１％未満である。
【００５８】
大部分で炭素と水素の他に、ポリマー類は酸素および窒素、具体的には酸素を含む。酸素はカルボン酸エステル等のように、オキシ、例えばヒドロキシ、またはエーテル、カルボニル、例えば、非オキソカルボニルとして示され得る。窒素はアミド、シアノ、およびアミノとして示され得る。
【００５９】
ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー類、ホモポリマー類またはコポリマー類のいずれか、および多糖類を用いることができる。ポリエステル類のうち、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、カプロラクトンおよびその組み合わせのホモポリマー類またはコポリマー類が挙げられる。グリコール酸および乳酸のコポリマー類が具体的な対象であり、生分解性の割合はグリコール酸と乳酸の比によって制御される。ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ）ａｃｉｄ（ＰＬＧＡ）中の各モノマーの割合は０〜１００％、約１５〜８５％、約２５〜７５％、または約３５〜６５％であり得る。好ましい変動では５０／５０ＰＬＧＡコポリマーを用いる。特定の実施形態では、５０／５０ＰＬＧＡのランダムコポリマーを用いる。
【００６０】
局所的または眼内投与のために、同じもしくは別々の組成物中に、その他の活性剤を本明細書に開示される化合物と共役して利用することができる。このようなその他の活性剤として、限定されないが、ＡＣＥ阻害薬、内因性サイトカイン、基底膜に影響を与える薬剤、内皮細胞の成長に影響を与える薬剤、アドレナリン作動性のアゴニストまたはブロッカー、コリン作動性のアゴニストまたはブロッカー、アルドース還元酵素阻害剤、鎮痛剤、麻酔薬、抗アレルギー薬、抗炎症薬、降圧薬、昇圧薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、抗感染症薬、抗腫瘍薬、代謝拮抗薬、抗血管新生薬、チロシンキナーゼ阻害薬、抗生物質、鎮痛剤、抗アレルギー薬、抗寄生虫薬、抗アメーバ剤、抗真菌薬、血管新生阻害化合物抗緑内障剤、抗腫瘍薬、代謝拮抗薬、免疫抑制剤、プロテアーゼ阻害薬、および種々の増殖因子が挙げられる。
【００６１】
開示の組成物はＰＲＫ、ＬＡＳＩＫ、またはＬＡＳＥＫのような矯正方法の施術前、最中、後に投与することができる。施術後の投与として矯正方法の完了時、および／または施術から数時間、数日、数週間、数ヶ月後に１回の用量が挙げられる。角膜混濁の発現を予防または低下させることのできる期間に、投与を継続することができる。さらに、必要に応じて組成物を片目または両目に投与することができる。
【００６２】
同じような状態に置かれた患者に一般的に発現する角膜混濁の量または重症度が全体的に減少しまたは予防されるとき、角膜混濁は「治療」されたことになる。例えば、矯正方法の後に一般的に発現する角膜混濁の程度は、治療している近視の状態の重症度に比例する。そのため、近視の状態が重症の患者では、角膜混濁の発現が同じような状態に置かれた患者に一般的に発現する量より少なければ（すなわち、約９０％、８０％、７０％、５０％、４０％、３０％、２０％、または１０％未満）、治療したと考えられる。したがって、治療には矯正方法の後に角膜混濁の発現を予防または減少させることを含む。
【００６３】
点眼製剤は、点眼器を装着した容器のように、眼に容易に適用するために計量の適用に適した剤形に梱包することができる。滴下に適した容器は通常、適した不活性、非毒性のプラスチック材料で作られ、一般的に約０．５〜約１５ｍｌの溶液を含有する。１つの梱包に１つ以上の単位用量を含有してもよい。
【００６４】
本明細書に用いられる患者は任意の哺乳動物であり得、一般的にはヒトである。ヒトの年齢、性別または民族は問わない。
【００６５】
実施例１
ＥＰ２およびＥＰ４アゴニストはＴＧＦ−β１が誘導する筋線維芽細胞の形質転換を阻害する。
【００６６】
方法。ヒト胎児皮膚線維芽細胞、ヒト成人皮膚線維芽細胞および成人のケラチノサイトをアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞を５％のＣＯ2存在下、３７℃で、１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリンおよびストレプトマイシンと共に、高グルコースダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）に培養した。ＥＰ２およびＥＰ４アゴニスト媒介シグナル伝達を試験するために、セルを１０ｃｍの培養皿に蒔いた。培養密度が９０％に達したとき、ＥＰ２アゴニスト（化合物ＩＩＩ）およびＥＰ４アゴニスト（化合物Ｉ）によってそれぞれ１００ｎＭと１０ｎＭで、または指示した時間ポイントでビヒクルによって細胞を処理した。細胞可溶化液をウエスタンブロット法解析に用いた。
【００６７】
事前に設置したカバーグラスを有する６ウェルのプレートに成人の皮膚ケラチノサイトを蒔いた。８０％の培養密度のケラチノサイトは、１００ｎＭのＥＰ２アゴニスト化合物ＩＩＩ、または１０ｎＭのＥＰ４アゴニスト化合物Ｉで、２．５時間にわたり、Ａｋｔ阻害剤のある場合とない場合とで処理した。ＢｒｄＵを培養の最後の３０分で添加した。その後、細胞は抗ＢｒｄＵ免疫細胞化学で染色し、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で共に染色した。ＢｒｄＵ陽性細胞は、２００倍の拡大率下で少なくとも５フィールド内にＤＡＰＩで染色した細胞で定量化した。
【００６８】
筋線維芽細胞の形質転換アッセイを実施するために、成人皮膚線維芽細胞を培養密度が７０％になるまで培養し、リン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）で洗浄し、血清のない培地で４８時間飢餓状態にした。飢餓状態の後、細胞は、新鮮な血清のない培地（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社、米国のＴＧＦ−β１）中、２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−β１単独、または１００ｎＭの化合物Ｖ、１０ｎＭの化合物ＩＩ、またはビヒクルと組み合わせて９６時間にわたり処置した。細胞可溶化液は試験の最後に回収し、ウエスタンブロット法を実施し、筋線維芽細胞のマーカーであるα平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）の発現をモニターした。
【００６９】
細胞は氷冷のＰＢＳで３回洗浄し、脱リン酸化酵素阻害薬およびプロテアーゼ阻害剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を含有する溶解緩衝液で溶解した。可溶化液中のタンパク質レベルを定量化した（ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット、ピアス社、米国）。ウエスタンブロット法について、等量のタンパク質を各レーンに適用し、電気泳動にかけた。電気泳動溶解の後のゲル結合タンパク質を硝酸セルロース膜上に移し、その後抗ｐＡＫＴ、抗ｐＥＲＫ１／２、およびＨＲＰ共役第二抗体でハイブリダイズした。標的タンパク質に関連する蛍光シグナルを蛍光感受性フィルム（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、 ビバリー、マサチューセッツ州）の曝露上に検知した。膜はベンダーが提供する緩衝液で取り除かれ、抗ＡＫＴ、抗ＥＲＫ１／２、およびＨＲＰ共役第二抗体と同じ手順にかけた。α−ＳＭＡの発現レベルを計測するために、マウスの抗α−ＳＭＡ抗体を１：１０００希釈で用いた（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社、米国）。ハウスキーピング遺伝子であるβアクチンもまた、負荷量の内部対照として同じ膜上に定量化した。
【００７０】
筋線維芽細胞の形質転換アッセイを実施するために、成人皮膚線維芽細胞を培養密度が７０％になるまで培養し、ＰＢＳで洗浄し、血清のない培地で４８時間飢餓状態にした。飢餓状態の後、細胞は、新鮮な血清のない培地（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社、米国のＴＧＦ−β１）中、２ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−β１単独、または１００ｎＭの化合物ＩＩＩ、１０ｎＭの化合物Ｉ、またはビヒクルと組み合わせて９６時間にわたり処置した。細胞可溶化液は試験の最後に回収し、ウエスタンブロット法を実施し、筋線維芽細胞のマーカーであるα平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）の発現をモニターした。
【００７１】
正常な筋線維芽細胞は、血清のない培地（図１〜２）に培養後６日経過しても、検知できるα−ＳＭＡ（筋線維芽細胞のマーカー）のない細い紡錘形であった。この期間、ＴＧＦ−β１による処置では細胞の大きさが数倍に増加し、筋線維芽細胞の典型的な生体マーカーである細胞質のα−ＳＭＡ陽性張力線維を誘導した。ＥＰ４またはＥＰ２アゴニストと共におこなったＴＧＦ−β１の処置では、α−ＳＭＡ陽性張力線維が有意に減少したが、細胞の大きさは有意に変化しなかった。ウエスタンブロット法の結果は、ＴＧＦ−β１がわずかに検知可能な基礎レベルからα−ＳＭＡの発現を顕著に増加させた形態学的な変化は一貫しており、ＥＰ２アゴニストによる処置ではα−ＳＭＡの発現が約５０％まで減少し、ＥＰ４アゴニストでは７５％近くまで減少した。
【００７２】
明示しない限り、成分の量を示す全数字、分子量、反応状態といった特性、本明細書および請求項に用いるもの等は、用語「約」によって全例に修正されることを理解されたい。したがって、反対のことを明示しない限り、本明細書および付随する請求項に記載の数字によるパラメータは、本発明によって得られようとする所望の特性によっては変更し得る近似値である。少なくとも、請求項の範囲に均等論を適用することを制限するものではなく、各数字によるパラメータは報告される有意な数字の数の観点から、および通常の丸め技法を適用することにより、少なくとも解釈されるものである。本発明の広義の範囲に記載されている数字の範囲およびパラメータは近似値であるとはいうものの、特定の実施例に記載の数値はできるだけ正確に報告する。しかしながら、いずれの数値も生来、個々の試験測定に認められる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含む。
【００７３】
本発明を記述する文脈（具体的には以下の請求項の文脈）に用いる用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および類似の指示対象は、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数と複数の両方を含むと理解されるものである。本明細書に値の範囲を詳述するのは、範囲内に収まる各値を個別に言及する簡略な方法としての役割を果たすことを意図するだけである。明示しない限り、個別の値は本明細書にあたかも個々に詳述されたかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法は残らず、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書中の任意および全実施例、または例示を示す言い回し（例えば「〜のような」）を用いることは、本発明をもっと明らかにすることを意図するだけであり、別に請求された本発明の範囲を制限しない。本明細書のいかなる言い回しも、本発明の実施に不可欠の請求されていない任意の要素を示していると解釈されるものではない。
【００７４】
本明細書に開示される発明の代替要素または実施形態の群は、制限であると解釈されるものではない。各群の要素は個別に、または群のその他の要素もしくは本明細書に認められるその他の要素と組み合わせて言及され、請求され得る。群の１つ以上の要素は、利便性および／または特許要件の理由から、群に含まれたり、群から削除されたりすることが予想される。このような包含または削除が生じるとき、本明細書は修正された群を含むとみなされ、添付の請求範囲に用いる全マーカッシュ群の記述を満たす。
【００７５】
本発明の特定の実施形態は、本発明を実施するために発明者に公知の最良の態様を含んで、本明細書に記載される。記述の実施形態の変形形態が以下に先の記述を読む当業者に明白になることは当然である。技術に長けた当業者がこのような変形形態を適切に用いることを期待し、本発明が本明細書に具体的に記述されたものとは別の方法で実施されることを意図する。したがって、本発明は、準拠法によって許可される本明細書に添付の請求項に詳述される主題の修正およびそれに相当するものをすべて含む。さらに、可能性のあるあらゆる変形形態の中の上述した要素の組み合わせはいずれも、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本発明に包含される。
【００７６】
本明細書に開示される特定の実施形態は、言い回し「〜からなる」または「本質的に〜からなる」を用いた請求項の中でさらに制限され得る。請求項に用いられるとき、出願時または補正ごとに加えられるかして、移行用語「〜からなる」は、請求項に明記されていない要素、ステップ、または成分はいずれも除外する。移行用語「本質的に〜からなる」は、明記された材料またはステップ、および基本的かつ新規の特徴（複数可）に実質的に影響を与えないものに請求の範囲を制限する。このように請求された本発明の実施形態は、固有にまたは特別に記述され、本明細書に有効である。
【００７７】
さらに、当該明細書にわたって特許および印刷された刊行物に対する参照はいずれも、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。
【００７８】
最後に、本明細書に開示される発明の実施形態は本発明の原理を説明することを理解されたい。使用され得るその他の修正は本発明の範囲内にある。本発明の代替構成が、実施例の方法により、限定されないが、本明細書の教示にしたがって利用され得る。したがって、本発明は正確に示され記述されるものに限定されない。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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