(57)【要約】  本発明は、ＢＥＴタンパク質（例えば、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、Ｂｒｄ４）を阻害する作用物質の有効量を含んでなる組成物と、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療または予防するためのこのような組成物の使用方法とを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪細胞または前脂肪細胞をブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量に接触させるステップを含んでなる、脂肪生成を阻害する方法。
【請求項２】
脂肪細胞の分化、増殖、または肥大を抑制する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脂肪細胞をブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量に接触させるステップを含んでなる、脂肪細胞の生物学的機能を阻害する方法。
【請求項４】
脂肪酸合成、脂質生成、脂肪滴蓄積を低下させる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象において代謝症候群を治療または予防するステップを含んでなる、対象において代謝症候群を治療または予防する方法。
【請求項６】
腹部肥満、アテローム発生性異脂肪血症、血圧上昇、インシュリン抵抗性、またはＩＩ型糖尿病を低下させる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象において肥満または体重増加を治療または予防するステップを含んでなる、対象において肥満または体重増加を治療または予防する方法。
【請求項８】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象において肝臓脂肪症を抑制するステップを含んでなる、対象において肝臓脂肪症を抑制する方法。
【請求項９】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象において皮下脂肪または内臓脂肪を低下させるステップを含んでなる、対象において皮下脂肪または内臓脂肪を低下させる方法。
【請求項１０】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象において食物摂取量を抑制しまたは代謝を増大させるステップを含んでなる、対象において食物摂取量を抑制しまたは代謝を増大させる方法。
【請求項１１】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量を対象に投与するステップと、それによって前記対象においてインシュリン抵抗性から保護するステップを含んでなる、対象においてインシュリン抵抗性から保護する方法。
【請求項１２】
前記作用物質が、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、または本明細書で開示される任意の化合物、またはその誘導体である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物がＪＱ１である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記作用物質が阻害核酸分子である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記阻害核酸分子が、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、またはＢｒｄ４の発現を低下させる、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはアンチセンス核酸分子である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質が、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、またはＢｒｄ４である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
Ｃ／ＥＢＰαおよび／またはＰＰＡＲγポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルを低下させる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ステロール調節結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体２（ＰＰＡＲｇ２）、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼβ、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（ＳＣＤ１）、およびジアシグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ）のレベルを低下させる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記作用物質が局所的にまたは全身的に投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質阻害剤の有効量と、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法におけるキットの使用法を含んでなる、体重障害を治療するためのキット。
【請求項２１】
前記ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質阻害剤がＪＱ１である、請求項２０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書、２０１０年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書、２０１０年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／３７５，８６３号明細書、２０１１年３月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４６７，３７６号明細書、および２０１１年３月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４６７，３２１号明細書の優先権を主張する。これらの各特許出願の内容は、参照によってその内容全体を本明細書に組み込む。
【０００２】
連邦により支援された研究開発の下でなされた発明の権利への宣言
この研究は、国立衛生研究所からの補助金番号Ｋ０８ＣＡ１２８９７２（Ｂｒａｄｎｅｒ）；Ｋ０８ＨＬ１０５６７８−０１（Ｂｒｏｗｎ）によって支援された。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
代謝症候群および肥満症は、全ての先進工業国における主要な健康問題に相当する。代謝症候群は、同時に発生して、心疾患、脳卒中、および糖尿病を含む重篤な疾患に対する患者のリスクを増大させる、心疾患および糖尿病危険因子の一団である。代謝症候群の潜在的危険因子としては、インシュリン抵抗性および腹部肥満が挙げられる。肥満症は西欧諸国における最も顕著な栄養障害であり、その有病率の推定値は３０％〜５０％の範囲にわたる。肥満症は、冠動脈疾患、脳卒中、およびＩＩ型糖尿病の発生率増大と相関する。肥満症は、そもそも単なる行動障害ではない。むしろ肥満対象と正常対象の間で観察される示差的体組成は、代謝および神経学／代謝的相互作用の双方の差異に起因する。これらの差異は、ある程度、遺伝子発現、および／または遺伝子産物または活性のレベルにおける差異に起因するようである。体組成を制御する遺伝学的要因の性質については、未知である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
代謝症候群および肥満症の重篤性と蔓延を考えると、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および代謝の望ましくない変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療し予防する、組成物および方法に対する大きな必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
下述するように、本発明は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療および／または予防する組成物および方法を特徴とする。
【０００６】
一態様では、本発明は、脂肪細胞または前脂肪細胞をブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量に接触させるステップを伴う、脂肪生成を阻害する方法を提供する。
【０００７】
別の態様では、本発明は、脂肪細胞をブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量に接触させるステップを伴う、脂肪細胞の生物学的機能を阻害する方法を提供する。
【０００８】
さらに別の態様では、本発明は、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量をヒトに投与するステップと、それによってヒトにおいて代謝症候群を治療または予防するステップを伴う、ヒトにおいて代謝症候群を治療または予防する方法を提供する。
【０００９】
さらなる態様では、本発明は、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量をヒトに投与するステップと、それによってヒトにおいて肥満または体重増加を治療または予防するステップを伴う、ヒトにおいて肥満または体重増加を治療または予防する方法を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量をヒトに投与するステップと、それによって肝臓脂肪症を抑制するステップを伴う、ヒトにおいて肝臓脂肪症を抑制する方法を提供する。
【００１１】
さらなる態様では、本発明は、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量をヒトに投与するステップと、それによってヒトにおいて皮下脂肪または内臓脂肪を低下させるステップを含んでなる、ヒトにおいて皮下脂肪または内臓脂肪を低下させる方法を提供する。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明はブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質を阻害する作用物質の有効量をヒトに投与するステップと、それによってヒトにおいて食物摂取量を抑制しまたは代謝を増大させるステップを含んでなる、ヒトにおいて食物摂取量を抑制しまたは代謝を増大させる方法を提供する。
【００１３】
追加的な態様では、本発明は、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質阻害剤の有効量と、本明細書で開示される方法のいずれかを実施するためのキットの使用法とを含んでなる、体重障害を治療するためのキットを提供する。
【００１４】
本発明の上の態様または本明細書に記述される任意のその他の態様の様々な実施形態では、方法は、脂肪細胞の分化、増殖、または肥大を抑制する。別の実施形態では、方法は、脂肪酸合成、脂質生成、脂肪滴蓄積を低下させる。さらなる実施形態では、方法は、腹部肥満、アテローム発生性異脂肪血症、血圧上昇、インシュリン抵抗性、またはＩＩ型糖尿病を低下させる。別の実施形態では、作用物質は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、または本明細書の任意のその他の化合物、またはその誘導体である。さらに別の実施形態では、化合物はＪＱ１である。追加的な実施形態では、作用物質は阻害核酸分子である。さらに別の実施形態では、阻害核酸分子は、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、またはＢｒｄ４の発現を低下させる、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはアンチセンス核酸分子である。別の実施形態では、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質は、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、またはＢｒｄ４である。さらなる実施形態では、方法は、Ｃ／ＥＢＰαおよび／またはＰＰＡＲγポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルを低下させる。さらなる実施形態では、方法は、ステロール調節結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体２（ＰＰＡＲｇ２）、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼβ、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（ＳＣＤ１）、およびジアシグリセロール（ｄｉａｃｙｇｌｙｃｅｒｏｌ）アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ）のレベルを低下させる。なおも追加的な実施形態では、作用物質は、局所的にまたは全身的に投与される。別の実施形態では、ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質阻害剤はＪＱ１である。
【００１５】
本発明は、ＢＥＴファミリー阻害剤の有効量を含んでなる組成物と、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療または予防するためのこのような組成物の使用方法とを提供する。本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明から、および特許請求の範囲から明白になるであろう。
【００１６】
定義
「脂肪生成」は、脂肪細胞数の増大を意味する。脂肪生成は、典型的に脂肪細胞の過形成（数の増大）を伴う。脂肪細胞の肥大は、過剰なトリグリセリド蓄積の結果としての既存の脂肪細胞のサイズ増大である。肥大は、エネルギー摂取量がエネルギー消費量を上回る場合に起きる。過形成は、脂肪組織内における、前駆細胞からの新たな脂肪細胞の形成に起因する。典型的に、過形成は前脂肪細胞の増殖と、それらの脂肪細胞への分化を伴う。
【００１７】
「体重障害」は、異常な体重をもたらす任意の障害または疾患を意味する。
【００１８】
「ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）タンパク質阻害剤」は、ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの活性を阻害し、または低下させる、任意の作用物質を意味する。
【００１９】
「ＪＱ１」は、本明細書に記載される（＋）−ＪＱ１（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセテート）を意味する。
【００２０】
「代謝症候群」は、冠動脈心疾患、脳卒中、末梢血管の疾患および／またはＩＩ型糖尿病を発症する対象の性向を増大させる、１つまたは複数の危険因子を意味する。代謝症候群と関連付けられている危険因子としては、腹部肥満（すなわち、腹部および周囲の過剰脂肪組織、高トリグリセリドや低ＨＤＬコレステロールと高ＬＤＬコレステロールを含むがこれに限定されるものではないアテローム発生性異脂肪血症、血圧上昇、インシュリン抵抗性またはグルコース不耐性血栓易形成状態（例えば血中の高フィブリノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１）炎症促進状態（例えば血中のＣ反応性タンパク質の上昇）が挙げられる。本発明の作用物質は、１つまたは複数の前述の危険因子を有する対象において、代謝症候群を治療または防止するのに有用である。
【００２１】
「肥満症」は、除脂肪体重と比較した体脂肪の過剰を意味する。対象は、３０以上の体型指数（ＢＭＩ）を有する場合に肥満と見なされる。
【００２２】
「体型指数（ＢＭＩ）」は、メートル単位の対象の身長の二乗で除した、キログラム単位の対象の体重である。
【００２３】
「体重増加」は、以前の時点における個人の体重と比較した、または基準体重と比較した、体重増加を意味する。一実施形態では、基準体重は約２５のＢＭＩに相当する。
【００２４】
「ブロモドメイン」は、アセチル化リジン残基を認識するポリペプチド部分を意味する。一実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドのブロモドメインはおよそ１１０個のアミノ酸を含んでなり、クロマチンと相互作用する多様なループ領域によって結合する、４本のαらせんの左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。
【００２５】
「ＢＥＴファミリーポリペプチド」は、２つのブロモドメインと、転写調節因子活性またはアセチル化リジン結合活性を有する末端外（ｅｘｔｒａｔｅｒｍｉｎａｌ）（ＥＴ）ドメインまたはその断片を含んでなるポリペプチドを意味する。例示的なＢＥＴファミリーメンバーとしては、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴが挙げられる。
【００２６】
「ＢＲＤ２ポリペプチド」は、ＮＰ＿００５０９５と少なくとも８５％の同一性を有し、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【００２７】
例示的なＢＲＤ２ポリペプチドの配列を下に示す。
ＭＬＱＮＶＴＰＨＮＫＬＰＧＥＧＮＡＧＬＬＧＬＧＰＥＡＡＡＰＧＫＲＩＲＫＰＳＬＬＹＥＧＦＥＳＰＴＭＡＳＶＰＡＬＱＬＴＰＡＮＰＰＰＰＥＶＳＮＰＫ
ＫＰＧＲＶＴＮＱＬＱＹＬＨＫＶＶＭＫＡＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＲＱＰＶＤＡＶＫＬＧＬＰＤＹＨＫＩＩＫＱＰＭＤＭＧＴＩＫＲＲＬＥＮＮＹＹＷＡＡＳＥ
ＣＭＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＴＤＤＩＶＬＭＡＱＴＬＥＫＩＦＬＱＫＶＡＳＭＰＱＥＥＱＥＬＶＶＴＩＰＫＮＳＨＫＫＧＡＫＬＡＡＬＱＧＳＶＴ
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ＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＤＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＦＲＹＡＫＭＰＤＥＰＬＥＰＧＰＬＰＶＳＴＡＭＰＰＧＬＡＫＳＳＳＥＳＳＳＥＥＳＳＳＥＳＳ
ＳＥＥＥＥＥＥＤＥＥＤＥＥＥＥＥＳＥＳＳＤＳＥＥＥＲＡＨＲＬＡＥＬＱＥＱＬＲＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＧＰＩＳＫＰＫＲＫＲＥＫＫＥＫＫＫＫＲＫＡ
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ＶＳＲＬＳＡＳＳＳＳＳＤＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＤＴＳＤＳＤＳＧ
【００２８】
「ＢＲＤ２核酸分子」は、ＢＲＤ２ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００２９】
「ＢＲＤ３ポリペプチド」は、クロマチン結合または転写調節ができるＮＰ＿０３１３９７．１と少なくとも８５％の同一性を有する、タンパク質またはその断片を意味する。
【００３０】
例示的なＢＲＤ３ポリペプチドの配列を下に示す。
１  ｍｓｔａｔｔｖａｐａ  ｇｉｐａｔｐｇｐｖｎ  ｐｐｐｐｅｖｓｎｐｓ  ｋｐｇｒｋｔｎｑｌｑ  ｙｍｑｎｖｖｖｋｔｌ  ｗｋｈｑｆａｗｐｆｙ
６１  ｑｐｖｄａｉｋｌｎｌ  ｐｄｙｈｋｉｉｋｎｐ  ｍｄｍｇｔｉｋｋｒｌ  ｅｎｎｙｙｗｓａｓｅ  ｃｍｑｄｆｎｔｍｆｔ  ｎｃｙｉｙｎｋｐｔｄ
１２１  ｄｉｖｌｍａｑａｌｅ  ｋｉｆｌｑｋｖａｑｍ  ｐｑｅｅｖｅｌｌｐｐ  ａｐｋｇｋｇｒｋｐａ  ａｇａｑｓａｇｔｑｑ  ｖａａｖｓｓｖｓｐａ
１８１  ｔｐｆｑｓｖｐｐｔｖ  ｓｑｔｐｖｉａａｔｐ  ｖｐｔｉｔａｎｖｔｓ  ｖｐｖｐｐａａａｐｐ  ｐｐａｔｐｉｖｐｖｖ  ｐｐｔｐｐｖｖｋｋｋ
２４１  ｇｖｋｒｋａｄｔｔｔ  ｐｔｔｓａｉｔａｓｒ  ｓｅｓｐｐｐｌｓｄｐ  ｋｑａｋｖｖａｒｒｅ  ｓｇｇｒｐｉｋｐｐｋ  ｋｄｌｅｄｇｅｖｐｑ
３０１  ｈａｇｋｋｇｋｌｓｅ  ｈｌｒｙｃｄｓｉｌｒ  ｅｍｌｓｋｋｈａａｙ  ａｗｐｆｙｋｐｖｄａ  ｅａｌｅｌｈｄｙｈｄ  ｉｉｋｈｐｍｄｌｓｔ
３６１  ｖｋｒｋｍｄｇｒｅｙ  ｐｄａｑｇｆａａｄｖ  ｒｌｍｆｓｎｃｙｋｙ  ｎｐｐｄｈｅｖｖａｍ  ａｒｋｌｑｄｖｆｅｍ  ｒｆａｋｍｐｄｅｐｖ
４２１  ｅａｐａｌｐａｐａａ  ｐｍｖｓｋｇａｅｓｓ  ｒｓｓｅｅｓｓｓｄｓ  ｇｓｓｄｓｅｅｅｒａ  ｔｒｌａｅｌｑｅｑｌ  ｋａｖｈｅｑｌａａｌ
４８１  ｓｑａｐｖｎｋｐｋｋ  ｋｋｅｋｋｅｋｅｋｋ  ｋｋｄｋｅｋｅｋｅｋ  ｈｋｖｋａｅｅｅｋｋ  ａｋｖａｐｐａｋｑａ  ｑｑｋｋａｐａｋｋａ
５４１  ｎｓｔｔｔａｇｒｑｌ  ｋｋｇｇｋｑａｓａｓ  ｙｄｓｅｅｅｅｅｇｌ  ｐｍｓｙｄｅｋｒｑｌ  ｓｌｄｉｎｒｌｐｇｅ  ｋｌｇｒｖｖｈｉｉｑ
６０１  ｓｒｅｐｓｌｒｄｓｎ  ｐｄｅｉｅｉｄｆｅｔ  ｌｋｐｔｔｌｒｅｌｅ  ｒｙｖｋｓｃｌｑｋｋ  ｑｒｋｐｆｓａｓｇｋ  ｋｑａａｋｓｋｅｅｌ
６６１  ａｑｅｋｋｋｅｌｅｋ  ｒｌｑｄｖｓｇｑｌｓ  ｓｓｋｋｐａｒｋｅｋ  ｐｇｓａｐｓｇｇｐｓ  ｒｌｓｓｓｓｓｓｅｓ  ｇｓｓｓｓｓｇｓｓｓ
７２１  ｄｓｓｄｓｅ
【００３１】
「Ｂｒｄ３核酸分子」は、ＢＲＤ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３２】
「ＢＲＤ４ポリペプチド」は、ＮＰ＿０５５１１４と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
１  ｍｓａｅｓｇｐｇｔｒ  ｌｒｎｌｐｖｍｇｄｇ  ｌｅｔｓｑｍｓｔｔｑ  ａｑａｑｐｑｐａｎａ  ａｓｔｎｐｐｐｐｅｔ  ｓｎｐｎｋｐｋｒｑｔ
６１  ｎｑｌｑｙｌｌｒｖｖ  ｌｋｔｌｗｋｈｑｆａ  ｗｐｆｑｑｐｖｄａｖ  ｋｌｎｌｐｄｙｙｋｉ  ｉｋｔｐｍｄｍｇｔｉ  ｋｋｒｌｅｎｎｙｙｗ
１２１  ｎａｑｅｃｉｑｄｆｎ  ｔｍｆｔｎｃｙｉｙｎ  ｋｐｇｄｄｉｖｌｍａ  ｅａｌｅｋｌｆｌｑｋ  ｉｎｅｌｐｔｅｅｔｅ  ｉｍｉｖｑａｋｇｒｇ
１８１  ｒｇｒｋｅｔｇｔａｋ  ｐｇｖｓｔｖｐｎｔｔ  ｑａｓｔｐｐｑｔｑｔ  ｐｑｐｎｐｐｐｖｑａ  ｔｐｈｐｆｐａｖｔｐ  ｄｌｉｖｑｔｐｖｍｔ
２４１  ｖｖｐｐｑｐｌｑｔｐ  ｐｐｖｐｐｑｐｑｐｐ  ｐａｐａｐｑｐｖｑｓ  ｈｐｐｉｉａａｔｐｑ  ｐｖｋｔｋｋｇｖｋｒ  ｋａｄｔｔｔｐｔｔｉ
３０１  ｄｐｉｈｅｐｐｓｌｐ  ｐｅｐｋｔｔｋｌｇｑ  ｒｒｅｓｓｒｐｖｋｐ  ｐｋｋｄｖｐｄｓｑｑ  ｈｐａｐｅｋｓｓｋｖ  ｓｅｑｌｋｃｃｓｇｉ
３６１  ｌｋｅｍｆａｋｋｈａ  ａｙａｗｐｆｙｋｐｖ  ｄｖｅａｌｇｌｈｄｙ  ｃｄｉｉｋｈｐｍｄｍ  ｓｔｉｋｓｋｌｅａｒ  ｅｙｒｄａｑｅｆｇａ
４２１  ｄｖｒｌｍｆｓｎｃｙ  ｋｙｎｐｐｄｈｅｖｖ  ａｍａｒｋｌｑｄｖｆ  ｅｍｒｆａｋｍｐｄｅ  ｐｅｅｐｖｖａｖｓｓ  ｐａｖｐｐｐｔｋｖｖ
４８１  ａｐｐｓｓｓｄｓｓｓ  ｄｓｓｓｄｓｄｓｓｔ  ｄｄｓｅｅｅｒａｑｒ  ｌａｅｌｑｅｑｌｋａ  ｖｈｅｑｌａａｌｓｑ  ｐｑｑｎｋｐｋｋｋｅ
５４１  ｋｄｋｋｅｋｋｋｅｋ  ｈｋｒｋｅｅｖｅｅｎ  ｋｋｓｋａｋｅｐｐｐ  ｋｋｔｋｋｎｎｓｓｎ  ｓｎｖｓｋｋｅｐａｐ  ｍｋｓｋｐｐｐｔｙｅ
６０１  ｓｅｅｅｄｋｃｋｐｍ  ｓｙｅｅｋｒｑｌｓｌ  ｄｉｎｋｌｐｇｅｋｌ  ｇｒｖｖｈｉｉｑｓｒ  ｅｐｓｌｋｎｓｎｐｄ  ｅｉｅｉｄｆｅｔｌｋ
６６１  ｐｓｔｌｒｅｌｅｒｙ  ｖｔｓｃｌｒｋｋｒｋ  ｐｑａｅｋｖｄｖｉａ  ｇｓｓｋｍｋｇｆｓｓ  ｓｅｓｅｓｓｓｅｓｓ  ｓｓｄｓｅｄｓｅｔｇ
７２１  ｐａ
【００３３】
「Ｂｒｄ４核酸分子」は、ＢＲＤ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３４】
「ＢＲＤＴポリペプチド」は、ＮＰ＿００１７１７と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
１  ｍｓｌｐｓｒｑｔａｉ  ｉｖｎｐｐｐｐｅｙｉ  ｎｔｋｋｎｇｒｌｔｎ  ｑｌｑｙｌｑｋｖｖｌ  ｋｄｌｗｋｈｓｆｓｗ  ｐｆｑｒｐｖｄａｖｋ
６１  ｌｑｌｐｄｙｙｔｉｉ  ｋｎｐｍｄｌｎｔｉｋ  ｋｒｌｅｎｋｙｙａｋ  ａｓｅｃｉｅｄｆｎｔ  ｍｆｓｎｃｙｌｙｎｋ  ｐｇｄｄｉｖｌｍａｑ
１２１  ａｌｅｋｌｆｍｑｋｌ  ｓｑｍｐｑｅｅｑｖｖ  ｇｖｋｅｒｉｋｋｇｔ  ｑｑｎｉａｖｓｓａｋ  ｅｋｓｓｐｓａｔｅｋ  ｖｆｋｑｑｅｉｐｓｖ
１８１  ｆｐｋｔｓｉｓｐｌｎ  ｖｖｑｇａｓｖｎｓｓ  ｓｑｔａａｑｖｔｋｇ  ｖｋｒｋａｄｔｔｔｐ  ａｔｓａｖｋａｓｓｅ  ｆｓｐｔｆｔｅｋｓｖ
２４１  ａｌｐｐｉｋｅｎｍｐ  ｋｎｖｌｐｄｓｑｑｑ  ｙｎｖｖｋｔｖｋｖｔ  ｅｑｌｒｈｃｓｅｉｌ  ｋｅｍｌａｋｋｈｆｓ  ｙａｗｐｆｙｎｐｖｄ
３０１  ｖｎａｌｇｌｈｎｙｙ  ｄｖｖｋｎｐｍｄｌｇ  ｔｉｋｅｋｍｄｎｑｅ  ｙｋｄａｙｋｆａａｄ  ｖｒｌｍｆｍｎｃｙｋ  ｙｎｐｐｄｈｅｖｖｔ
３６１  ｍａｒｍｌｑｄｖｆｅ  ｔｈｆｓｋｉｐｉｅｐ  ｖｅｓｍｐｌｃｙｉｋ  ｔｄｉｔｅｔｔｇｒｅ  ｎｔｎｅａｓｓｅｇｎ  ｓｓｄｄｓｅｄｅｒｖ
４２１  ｋｒｌａｋｌｑｅｑｌ  ｋａｖｈｑｑｌｑｖｌ  ｓｑｖｐｆｒｋｌｎｋ  ｋｋｅｋｓｋｋｅｋｋ  ｋｅｋｖｎｎｓｎｅｎ  ｐｒｋｍｃｅｑｍｒｌ
４８１  ｋｅｋｓｋｒｎｑｐｋ  ｋｒｋｑｑｆｉｇｌｋ  ｓｅｄｅｄｎａｋｐｍ  ｎｙｄｅｋｒｑｌｓｌ  ｎｉｎｋｌｐｇｄｋｌ  ｇｒｖｖｈｉｉｑｓｒ
５４１  ｅｐｓｌｓｎｓｎｐｄ  ｅｉｅｉｄｆｅｔｌｋ  ａｓｔｌｒｅｌｅｋｙ  ｖｓａｃｌｒｋｒｐｌ  ｋｐｐａｋｋｉｍｍｓ  ｋｅｅｌｈｓｑｋｋｑ
６０１  ｅｌｅｋｒｌｌｄｖｎ  ｎｑｌｎｓｒｋｒｑｔ  ｋｓｄｋｔｑｐｓｋａ  ｖｅｎｖｓｒｌｓｅｓ  ｓｓｓｓｓｓｓｓｅｓ  ｅｓｓｓｓｄｌｓｓｓ
６６１  ｄｓｓｄｓｅｓｅｍｆ  ｐｋｆｔｅｖｋｐｎｄ  ｓｐｓｋｅｎｖｋｋｍ  ｋｎｅｃｉｌｐｅｇｒ  ｔｇｖｔｑｉｇｙｃｖ  ｑｄｔｔｓａｎｔｔｌ
７２１  ｖｈｑｔｔｐｓｈｖｍ  ｐｐｎｈｈｑｌａｆｎ  ｙｑｅｌｅｈｌｑｔｖ  ｋｎｉｓｐｌｑｉｌｐ  ｐｓｇｄｓｅｑｌｓｎ  ｇｉｔｖｍｈｐｓｇｄ
７８１  ｓｄｔｔｍｌｅｓｅｃ  ｑａｐｖｑｋｄｉｋｉ  ｋｎａｄｓｗｋｓｌｇ  ｋｐｖｋｐｓｇｖｍｋ  ｓｓｄｅｌｆｎｑｆｒ  ｋａａｉｅｋｅｖｋａ
８４１  ｒｔｑｅｌｉｒｋｈｌ  ｅｑｎｔｋｅｌｋａｓ  ｑｅｎｑｒｄｌｇｎｇ  ｌｔｖｅｓｆｓｎｋｉ  ｑｎｋｃｓｇｅｅｑｋ  ｅｈｑｑｓｓｅａｑｄ
９０１  ｋｓｋｌｗｌｌｋｄｒ  ｄｌａｒｑｋｅｑｅｒ  ｒｒｒｅａｍｖｇｔｉ  ｄｍｔｌｑｓｄｉｍｔ  ｍｆｅｎｎｆｄ
【００３５】
「ＢＲＤＴ核酸分子」は、ＢＲＤＴポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３６】
「化合物」は、任意の小分子化合物、抗体、核酸分子、またはポリペプチド、またはその断片を意味する。
【００３７】
「ジアステレオマー」という用語は、２つ以上の不斉中心があり、その分子が互いに鏡像でない立体異性体を指す。
【００３８】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【００３９】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【００４０】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、本明細書で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【００４１】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【００４２】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【００４３】
本明細書の用法では、「アルキル」という用語は、典型的に１〜１０個の炭素原子を有する、飽和直鎖または分枝非環式炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルとしてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルが挙げられ；一方、飽和分枝アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、２−メチル−４−エチルペンチル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２−メチル−４−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、３，３−ジエチルヘキシルなどが挙げられる。本発明の化合物に含まれるアルキル基は、非置換であってもよく、またはアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルコキシ、アルキルチオ、オキソ、ハロ、アシル、ニトロ、ヒドロキシル、シアノ、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、カルボシクリル、カルボシクリルオキシ、カルボシクリルチオ、カルボシクリルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ヘテロシクリルチオなどの１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。本発明の化合物では、低級アルキルが典型的に好まれる。
【００４４】
本明細書の用法では、「芳香族環」または「アリール」という用語は、炭素および水素原子を含んでなる単環または多環式芳香族環または環遊離基を意味する。適切なアリール基の例としては、フェニル、トリル、アンタセニル（ａｎｔｈａｃｅｎｙｌ）、フルオレニル、インデニル、アズレニル、およびナフチル、ならびに５，６，７，８−テトラヒドロナフチルなどのベンゾ融合炭素環式部分が挙げられるが、これに限定されるものではない。アリール基は非置換であり得て、または例えば本明細書でアルキル基について記載される置換基（制限なしにアルキル（好ましくは低級アルキルまたは１つまたは複数のハロ置換アルキル）、ヒドロキシ、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ）、アルキルチオ、シアノ、ハロ、アミノ、ボロン酸（−Ｂ（ＯＨ）２、およびニトロを含む）などの１つまたは複数の置換基で、任意選択的に置換され得る。特定の実施形態では、アリール基は単環であり、環は６個の炭素原子を含んでなる。
【００４５】
「ヘテロアリール」という用語は、単環系の場合は１〜４環ヘテロ原子、二環系の場合は１〜６個のヘテロ原子、三環系の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員環単環系、８〜１２員環二環系、または１１〜１４員環三環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリール基は、例えば本明細書に記載のように、アリール基などの１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、ベンゾジオキソリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、およびインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００４６】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族または特定の実施形態では非芳香族のどちらかであり得る。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００４７】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【００４８】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【００４９】
「コンピュータによるモデル化」は、以下の１つまたは複数を求めるための計算プログラムの応用を意味する：結合部分に対するリガンドの位置および結合近接性、結合リガンドの占有空間、結合部分とリガンド間の相補的接触面積、結合部分への所与のリガンドの結合の変形エネルギー、および水素結合強度のある程度の推定、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、および／またはリガンドと結合部分間の静電相互作用エネルギー。コンピュータモデル化はまた、モデル系と候補化合物の特徴間の比較を提供し得る。例えばコンピュータによるモデル化実験は、本発明のファーマコフォアモデルを候補化合物と比較して、候補化合物とモデルの適合を評価し得る。
【００５０】
「コンピューターシステム」は、原子の座標データ分析のために使用される、ハードウェア手段、ソフトウェア手段、およびデータ記憶手段を意味する。本発明のコンピュータベースのシステムの最小ハードウェア手段は、中央演算処理装置（ＣＰＵ）、入力手段、出力手段、およびデータ記憶手段を含んでなる。望ましくは、構造データを視覚化するモニターが提供される。データ記憶手段は、ＲＡＭ、または本発明のコンピュータ可読媒体にアクセスする手段であってもよい。このようなシステムの例は、Ｕｎｉｘベース、Ｗｉｎｄｏｗｓ  ＮＴまたはＩＢＭ  ＯＳ／２オペレーティングシステムが作動する、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄおよびＳｕｎ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓから入手できる、マイクロコンピュータワークステーションである。
【００５１】
「コンピュータ可読媒体」は、例えば上述のコンピューターシステムで使用するのに媒体が適するように、コンピュータによって直接読み取られアクセスされ得る任意の媒体を意味する。媒体としては、フロッピーディスク、ハードディスク記憶媒体、および磁気テープなどの磁気記憶媒体；光ディスクまたはＣＤ−ＲＯＭなどの光学式記憶媒体；ＲＡＭおよびＲＯＭなどの電気記憶媒体；および磁気／光学式記憶媒体などのこれらのカテゴリーのハイブリッドが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００５２】
「検出可能な標識」は、対象分子に結合した際に、対象分子を分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的手段を介して検出可能にする、組成物を意味する。例えば有用な標識としては、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡで通常使用されるものなど）、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテンが挙げられる。
【００５３】
「疾患」は、細胞、組織、または臓器の正常機能を損ないまたは妨げる、任意の病状または障害を意味する。本明細書に記述される化合物による治療に感受性である疾病の例としては、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害が挙げられる。
【００５４】
「有効量」は、未治療患者と比較して、疾患症状を改善するのに必要な作用物質の量を意味する。疾患治療のために本発明を実施するのに使用される活性化合物の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重、および総体的な健康に応じて変動する。究極的に、主治医または獣医が、適切な量および投薬計画を決定する。このような量は、「有効」量と称される。
【００５５】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【００５６】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【００５７】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、上で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【００５８】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【００５９】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【００６０】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族または非芳香族のどちらかであり得る。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００６１】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【００６２】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【００６３】
本発明は、本明細書で記述される方法によって特性解析される障害を治療するための高度に特異的な薬剤開発に有用な、いくつかの標的を提供する。これに加えて、本発明の方法は、対象にとって安全な治療法を同定する容易な手段を提供する。これに加えて、本発明の方法は、ハイスループット、高感度、および低複雑度で、本明細書に記載される疾患に対する影響について、実質的にいくつもの化合物を分析する手段を提供する。
【００６４】
「適合」は、自動または半自動手段によって、作用物質分子の１つまたは複数の原子と、ＢＥＴファミリーメンバーの１つまたは複数の原子または結合部位（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴのブロモドメイン）の間の相互作用を測定し、このような相互作用が安定である度合いを判定することを意味する。適合のための様々なコンピュータベースの方法については、本明細書でさらに記載される。
【００６５】
本明細書の用法では、「光学異性体」という用語は、キラル分子としてもまた知られている分子を含み、これらは互いに重ね合わせることができない正確な鏡像である。
【００６６】
「単離ポリヌクレオチド」は、本発明の核酸分子が由来する生物の天然ゲノム中で遺伝子側面に位置する遺伝子が、含まれない核酸（例えばＤＮＡ）を意味する。したがって本用語は、例えば、ベクター中に、自己複製プラスミドまたはウイルス中に、または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれた組換えＤＮＡ；またはその他の配列から独立して別個の分子（例えばｃＤＮＡまたはＰＣＲまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって生成されるゲノムまたはｃＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡを含む。これに加えて、本用語は、ＤＮＡ分子から転写されるＲＮＡ分子を含み、ならびに追加的ポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡを含む。
【００６７】
「単離ポリペプチド」は、天然でそれに付随する構成要素から分離された、本発明のポリペプチドを意味する。典型的に、ポリペプチドは、それが少なくとも６０％重量であり、それが天然に結合するタンパク質または天然有機分子が不在であれば、単離されている。好ましくは、調製品は、少なくとも７５重量％、より好適には少なくとも９０重量％、最も好適には少なくとも９９重量％が、本発明のポリペプチドである。本発明の単離ポリペプチドは、例えば天然原料からの抽出によって；このようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；またはタンパク質の化学的合成によって、得られてもよい。純度は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析などの任意の適切な方法によって測定し得る。
【００６８】
「マーカー」は、疾患または障害と関連付けられている発現レベルまたは活性に変更を有する、任意のタンパク質またはポリヌクレオチドを意味する。
【００６９】
本明細書の用法では、「作用物質を得る」に見られるような「得る」は、作用物質を合成し、購入し、または別の方法で入手することを含む。
【００７０】
「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、本明細書の用法では、制限なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および輸液を含む、通常は注射による、経腸投与および局所投与以外の投与様式を意味する。
【００７１】
「ポリシクリル」または「多環式基」という用語は、二環式以上の遊離基（例えばシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリル）を指し、その中では２つ以上の炭素が２つの隣接する環で共有され、例えば環は「融合環」である。非隣接原子を通じて結合する環は、「架橋」環と称される。多環式環のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、およびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル、およびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシラート、スルフェート、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキル、アルキルアリール、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含む。
【００７２】
「多形体」という用語は、本明細書の用法では、本発明の化合物の固体結晶形態またはその複合体を指す。同じ化合物の異なる多形体は、異なる物理的、化学的および／または分光学的特性を呈示し得る。異なる物理的特性としては、安定性（例えば熱または光に対する）、圧縮率および密度（製剤および製品製造で重要）、および溶出速度（生物学的利用能に影響し得る）が挙げられるが、これに限定されるものではない。安定性の差異は、化学反応性変化（例えば剤形が１つの多形体からなる場合、別の多形体からなる場合よりも迅速に変色するような差異的酸化）または機械的特性変化（例えば動力学的に好まれる多形体が熱力学的により安定した多形体に転換するにつれて、錠剤が貯蔵中に崩壊する）または双方（例えば高湿では、１つの多形体の錠剤は破壊をより被りやすい）から帰結し得る。多形体の異なる物理的特性は、それらの加工に影響を及ぼし得る。
【００７３】
「プロドラッグ」という用語は、生体内で代謝され得る部分がある化合物を含む。一般に、プロドラッグは生体内でエステラーゼによって、またはその他の機構によって活性薬剤に代謝される。プロドラッグの例およびそれらの使用は、当該技術分野で周知である（例えばＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。プロドラッグは、化合物の最終的な単離および精製中に原位置で調製し得て、または精製化合物の遊離酸形態またはヒドロキシルを個別に適切なエステル化剤と反応させることにより調製し得る。ヒドロキシル基は、カルボン酸による処理を介してエステルに転換し得る。プロドラッグ部分の例としては、置換および非置換の、分枝または非分枝の低級アルキルエステル部分（例えばプロピオン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級アルキルエステル（例えばジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステルが挙げられる（例えばアセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えばピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール低級アルキルエステル（例えばベンジルエステル）、置換（例えばメチル基、ハロ、またはメトキシ置換基による）アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミド、およびヒドロキシアミドが挙げられる。好ましいプロドラッグ部分は、プロピオン酸エステルおよびアシルエステルである。生体内でその他の機構を通じて活性形態に転換されたプロドラッグもまた、含まれる。
【００７４】
さらに炭素−炭素二重結合全体の立体化学の指標もまた、一般化学分野と対立し、その中で「Ｚ」は「ｃｉｓ」（同側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す一方、「Ｅ」は「ｔｒａｎｓ」（反対側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す。ｃｉｓ／ｔｒａｎｓおよび／またはＺ／Ｅのどちらの立体配置も、本発明の化合物に包含される。
【００７５】
キラル中心の命名法に関して、「ｄ」および「ｌ」立体配置という用語は、ＩＵＰＡＣ勧告によって定義される通りである。ジアステレオマー、ラセミ体、エピマー、および鏡像異性体という用語の使用については、これらは調製品の立体化学について記述するそれらの通常の文脈で使用される。
【００７６】
「低下させる」とは、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の負の変化を意味する。
【００７７】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【００７８】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列の断片、または完全ｃＤＮＡまたは遺伝子配列など、指定された配列のサブセットまたは全体であってもよい。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約２０個のアミノ酸、より好適には少なくとも約２５個のアミノ酸、そしてなおもより好ましくは約３５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸である。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好適には少なくとも約７５ヌクレオチド、そしてなおもより好ましくは約１００ヌクレオチドまたは約３００ヌクレオチドであり、またはそれらの前後またはそれらの間の任意の整数である。
【００７９】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【００８０】
本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。「ハイブリダイズ」は、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば本明細書に記載される遺伝子）またはその部分間で二本鎖分子を形成する対合、を意味する。（例えばＷａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい）。
【００８１】
例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常、約７５０ｍＭのＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、好ましくは約５００ｍＭのＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、より好適には約２５０ｍＭのＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションが、例えばホルムアミドなどの有機溶剤不在下で得られるのに対し、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、より好適には少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られる。ストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約３０℃、より好適には少なくとも約３７℃、最も好適には少なくとも約４２℃の温度が挙げられる。ハイブリダイゼーション時間、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの洗剤の濃縮、およびキャリアＤＮＡの包含または排除などの追加的なパラメータを変化させることは、当業者に周知である。必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることで、様々なストリンジェンシーレベルが達成される。好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３０℃で、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３７℃で、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中で起きる。最も好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、４２℃で、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中で起きる。これらの条件の有用な変動は、当業者には容易に分かる。
【００８２】
ほとんどの用途では、ハイブリダイゼーションに続く洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーが変動する。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度と温度によって規定され得る。上と同様、塩濃度の低下または温度の上昇によって、洗浄ストリンジェンシーを増大させ得る。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは約３０ｍＭのＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、最も好適には約１５ｍＭのＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約２５℃、より好適には少なくとも約４２℃、なおもより好ましくは少なくとも約６８℃の温度が挙げられる。好ましい実施形態では、洗浄ステップは、２５℃で、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、４２℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、６８℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。これらの条件の追加的な変動は、当業者には容易に分かる。ハイブリダイゼーション技術は当業者に周知であり、例えばＢｅｎｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載される。
【００８３】
「実質的に同一」とは、参照アミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれ１つ）、または核酸配列（例えば本明細書に記載される核酸配列のいずれか１つ）と、少なくとも８５％の同一性を呈示するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。好ましくは、このような配列は、比較のために使用される配列に対して、アミノ酸または核酸レベルで、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一である。
【００８４】
配列同一性は、典型的に、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。このようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／またはその他の修飾に相同性の程度を割り当てることで、同一または類似配列をマッチさせる。保存的置換としては、典型的に、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン群中の置換が挙げられる。同一性の程度を判定する例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用してもよく、ｅ．ｓｕｐ．−３とｅ．ｓｕｐ．−１００の間の確率スコアは、近縁関係にある配列を示唆する。
【００８５】
「増大させる」は、参照と比較して、少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％のプラスの変化を意味する。
【００８６】
「平均二乗偏差」は、平均からの偏差の平方の算術平均の平方根を意味する。
【００８７】
「対象」は、ヒト、またはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコなどの非ヒト哺乳類を含むが、これに限定されるものではない、哺乳類を意味する。
【００８８】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【００８９】
「スルフヒドリル」または「チオール」という用語は、−ＳＨを意味する。
【００９０】
本明細書の用法では、「互変異性体」という用語は、互変異性化によって容易に相互転換する有機分子の異性体を指し、その中では、水素原子またはプロトンが反応中に移動して、場合によっては、単結合と隣接する二重結合との交替が伴う。
【００９１】
本明細書の用法では「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を低下させまたは改善することを指す。「改善する」は、疾患の発症または進行を低下させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化することを意味する。排除はされないものの、障害または病状を治療することは、障害とそれに伴う症状または病状を完全に排除することを要さないことが理解されるであろう。
【００９２】
本明細書の用法では、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害または病状を有さないが、リスクがあるまたは発症しやすい対象中で、障害または病状が発症する確率を低下させることを指す。
【００９３】
「有効量」は、治療対象に治療効果もたらす化合物の量を指す。治療効果は、客観的（すなわちある種の試験またはマーカーで測定可能）または主観的（すなわち対象に効果の徴候があり、または対照が効果を感じる）であってもよい。本明細書に記載される化合物の有効量は、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約５０００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲であってもよい。有効量はまた、投与経路、ならびにその他の作用物質の同時使用可能性に応じて変動する。
【００９４】
本明細書で提供される範囲は、範囲内の全ての値で省略表現であることが理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分的範囲を含むものと理解される。
【００９５】
本明細書の用法では「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を低下させまたは改善することを指す。排除はされないものの、障害または病状を治療することは、障害とそれに伴う症状または病状を完全に排除することを要さないことが理解されるであろう。
【００９６】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「または」という用語は包括的であると理解される。特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という用語は、単数または複数であると理解される。
【００９７】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「約」という用語は、例えば平均の２標準偏差以内など、当該技術分野の通常の許容差の範囲内と理解される。約は、記載値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内と理解され得る。文脈から明らかである場合を除き、本明細書で提供される全ての数値は、約という用語によって修飾される。
【００９８】
本明細書の任意の変数の定義における化学基一覧の列挙は、任意の単一群または列挙された群の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書の変数または態様に関する実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としてのその実施形態、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさったその実施形態を含む。
【００９９】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供されるその他の組成物および方法のいずれかの１つまたは複数と組み合わせ得る。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】脂肪生成モデルとして広く使用されている細胞系である３Ｔ３Ｌ１細胞中において、ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害が、用量依存様式で脂肪生成をブロックすることを示す８枚の顕微鏡写真を含む。細胞は、様々な用量の活性ＪＱ１（Ｓ）鏡像異性体または不活性対照ＪＱ１（Ｒ）鏡像異性体で処理した。薬物処理に続いて、脂肪細胞分化の程度を示す、脂質蓄積の尺度としてのオイルレッドＯで細胞を染色した。示されるように、ＪＱ１（Ｓ）鏡像異性体は、脂質蓄積を阻害した。
【図２】３Ｔ３Ｌ１細胞中において、脂肪細胞分化中に、ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害が、Ｃ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγの発現をブロックすることを示すグラフである。Ｃ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγは、脂肪生成に必須の正の調節因子である。図２Ａは、対照およびＪＱ１処理３Ｔ３Ｌ１細胞中のＣ／ＥＢＰαの経時的発現レベルのグラフである。図２Ｂは、対照およびＪＱ１処理３Ｔ３Ｌ１細胞中のＰＰＡＲγの経時的発現レベルのグラフである。結果は、ＲＴ−ＰＣＲを使用して得られた。
【図３】レプチン欠損マウス肥満症モデルであるｏｂ／ｏｂマウスにおいて、ＢＥＴファミリーメンバーの阻害が体重増加をブロックすることを示すグラフである。図３Ａは、ＪＱ１による１４日間の処理の前後のｏｂ／ｏｂマウスの体重のグラフである。図３Ｂは、対照およびＪＱ１処理ｏｂ／ｏｂマウスの経時的体重のグラフである。図３Ｃは、対照処理およびＪＱ１処理ｏｂ／ｏｂマウスの１４日間の処理中の総体重増加を示すグラフである。図３Ｄは、対照処理およびＪＱ１処理ｏｂ／ｏｂマウスの１４日間の処理中の総食物摂取量のプロットである。図３Ｅは、対照処理およびＪＱ１処理ｏｂ／ｏｂマウスの１４日間の処理中の飼料効率のプロットである。重要なことには、ＪＱ１は、対照マウスと比較して、ｏｂ／ｏｂマウスの体重増加をブロックした。
【図４】ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害が、ｏｂ／ｏｂマウスの肝重量および脂肪組織重量を低下させることを示すグラフである。図４Ａは、ビヒクルまたはＪＱ１で処理したｏｂ／ｏｂマウスの肝重量を定量化する。図４Ｂは、ビヒクルまたはＪＱ１で処理したｏｂ／ｏｂマウスの皮下脂肪重量を定量化する。
【図５】ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害が、マウス肥満症モデルにおける脂肪肝形成を完全にブロックすることを示す、２枚の顕微鏡写真を含む。切片は、ヘマトキシリンおよびエオジンで染色された。大型の脂肪滴が、ビヒクルのみを与えたｏｂ／ｏｂマウスから得られた切片のいたる所にある。顕著に、ＪＱ１処理されたマウスでは、肝臓の形態は正常である。
【図６】ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害が、肝臓内の脂肪蓄積を制御する遺伝子の発現を低下させることを示す。図６Ａ〜６Ｆは、ビヒクル処理およびＪＱ１処理ｏｂ／ｏｂマウスの遺伝子発現を示すをグラフのパネルである。興味深いことに、ＪＱ１１は、ＳＲＥＢＰ（図６Ａ）、ＰＰＡＲγ２（図６Ｂ）、ＦＡＳ（これは統計的に有意でなかった）（図６Ｃ）、ＡＣＣβ（図６Ｄ）、ＳＣＤ１（図６Ｅ）、およびＤＧＡＴ（図６Ｆ）の発現を低下させた。
【図７】ブロモドメインの阻害が、通常固形飼料を与えたマウスにおいて、内臓脂肪量を低下させたことを示す。図７Ａは、ビヒクル処理およびＪＱ１処理マウス（毎日５０ｍｇ／ｋｇの投与）における、正常固形飼料を与えたマウスの体重の経時的グラフである。図７Ｂは、８週間のビヒクル対照またはＪＱ１処理のどちらかの後に、マウスの内臓脂肪を比較するグラフである。図７Ｃは、８週間のビヒクル対照またはＪＱ１処理のどちらかの後に、皮下脂肪を比較するグラフである。
【図８】ブロモドメイン阻害が、高脂肪食に応えた体重増加をブロックしたことを示す。図８は、ビヒクル処理およびＪＱ１処理マウス（毎日５０ｍｇ／ｋｇの投与）における、高脂肪食を与えたマウスの体重の経時的グラフである。
【図９】ブロモドメイン阻害が、８週間の高脂肪食への曝露後に、インシュリン抵抗性を予防することを示す。図９Ａは、高脂肪食を７週間にわたって与え、毎日ビヒクル対照またはＪＱ１で処理したマウスへのインシュリン注射に続く血糖のグラフである。図９Ｂは、図９Ａのデータの曲線下面積（ＡＵＣ）のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０１０１】
本発明は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、肝臓脂肪症、および代謝の望ましくない変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療または予防するのに有用な、組成物および方法を特徴とする。
【０１０２】
本発明は、ＢＥＴタンパク質ファミリーの１つまたは複数のメンバーを阻害する作用物質が、体重増加をブロックし、多数の転写因子を負に調節するする、という発見に少なくとも部分的に基づき、これらの転写因子は、脂肪生成において機能し、また脂質分配および肝臓や筋肉などのその他の組織中の脂肪の異所性蓄積も調節する。ＢＲＤ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴを含むＢＥＴファミリーのタンパク質は、クロマチン再構成の重要な調節因子であり、おそらくは、ＳＲＥＢＰおよびＰＰＡＲγ２を含む転写因子の発現を低下させ、ならびに脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、ＡＣＣβ、ＳＣＤ１、およびＤＧＡＴを含む、これらの転写因子によって調節される標的遺伝子の発現を低下させることで、脂肪細胞分化を制御する。（注記：厳密にいえば、ＦＡＳデータは統計的有意性を満たさなかった）。本明細書で報告される結果は、ＢＥＴファミリーのブロモドメインに対する生化学的選択性がある、細胞透過性の強力な小分子阻害剤（ＪＱ１）を使用して得られた。本発明は、核クロマチン上のアセチルリジン残基を認識するブロモドメインを含有するポリペプチドファミリーである、ブロモドメインファミリーを調節できる関連化合物の使用をさらに提供する。リジンアセチル化は、細胞および疾患生物学に広く関係する、シグナル伝達修飾であることが分かってきた。側鎖のアセチル化を可逆的に媒介する酵素を標的指向化することは、長年にわたって創薬研究の活発な領域である。今まで、成功裏の努力は、核クロマチンの文脈で現れた、共有結合修飾の「ライター」（アセチルトランスフェラーゼ）および「イレーサー」（ヒストンデアセチラーゼ）に限定されてきた。
【０１０３】
最近のＢＲＤ４の高解像度共結晶構造の特性解析は、アセチルリジン結合窩との優れた形状相補性を明らかにした。ＪＱ１とＢＲＤ４のタンデムブロモドメインとの結合は、アセチルリジン競合的であり、ヒト細胞中のクロマチンからＢＲＤ４を置き換える。これらのデータは、エピジェネティックな「リーダー」のタンパク質−タンパク質相互作用を標的指向化して、脂肪細胞分化をブロックすることの実現可能性を確立する。さらに、このような化合物の生体内における長期の使用は、マウス肥満症モデルであるｏｂ／ｏｂマウスで確立され、ＢＥＴタンパク質の阻害が体重増加をブロックし、脂肪組織重量を低下させて、肝臓の脂肪蓄積を阻害することを示した。肝臓内では、脂肪蓄積の低下は、脂肪合成を制御する遺伝子の発現の顕著な低下に付随して起こる。本明細書で報告されるデータは、ＢＥＴタンパク質を阻害する作用物質が、肥満症および脂肪肝を含む関連代謝障害の強力な阻害剤であることを確立する。肥満症および脂肪肝の治療は、代謝症候群、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害、およびそれらの症状にとって有益である。
【０１０４】
代謝症候群
代謝症候群は、同時に発生して、心疾患、脳卒中、および糖尿病を含む重篤な疾患に対する患者のリスクを増大させる、心疾患および糖尿病危険因子の一団である。一実施形態では、代謝症候群の基準としては、ウエスト回りの増大（腹部肥満）、トリグリセリド上昇、高密度リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）低下、血圧上昇、および／または空腹時グルコース上昇が挙げられる。特に、１５０ｍｇ／ｄＬ以上のトリグリセリドレベル；男性では４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性では５０ｍｇ／ｄＬ未満の高密度リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール；１３０／８５ｍｍＨｇ以上の血圧レベル；または１００ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時グルコース。大多数のアメリカ人では、女性では３５インチ以上、男性では４０インチ以上のウエスト回りは、異常な増大と見なされる。列挙された基準の少なくとも３つに異常なレベルを有する個人は、代謝症候群を有すると見なされる。多くの医師は、代謝症候群が、おそらくはインシュリン抵抗性に付随すると考えている。代謝症候群は、アテローム硬化性心血管疾患のリスクを１．５〜３倍に増大させ、ＩＩ型糖尿病のリスクを３〜５倍に上昇させる。これは２６パーセントを超える成人に、または５千万人を超えるアメリカ人に影響を及ぼす。
【０１０５】
代謝症候群の臨床管理は、アテローム硬化性心血管疾患に対するリスクを低下させ、臨床糖尿病を未だ発症していない患者におけるＩＩ型糖尿病のリスク低下に焦点を合わせる。最近発表された結果は、米国では成人の５人に１人が代謝症候群を有することを示唆する。代謝症候群を治療する現在の方法は、不十分である。１つまたは複数のＢＥＴタンパク質（例えば、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、Ｂｒｄ４）の生物学的活性を阻害する作用物質を含んでなる本発明の組成物は、代謝症候群の予防または治療に有用であり、または代謝症候群と関連付けられている危険因子の１つまたは複数の予防または治療に有用である。
【０１０６】
ブロモドメイン含有タンパク質
遺伝子制御は、基本的に、可逆的な高分子の非共有結合アセンブリーによって支配される。ＲＮＡポリメラーゼへの情報伝達は、クロマチンの翻訳後修飾状態を解釈できるアセンブリー要素によって空間的に制御される、より高次のタンパク質複合体を必要とする。エピジェネティックなリーダーは、ヒストンタンパク質またはＤＮＡの共有結合修飾を認識する、１つまたは複数の進化的に保存されたエフェクターモジュールをそれぞれが保有する、構造的に多様なタンパク質である。ヒストン尾部上のリジン残基（Ｋａｃ）のε−Ｎ−アセチル化は、オープンクロマチン構造および転写活性化と関連付けられている３。アセチルリジンのコンテクスト特異的分子認識は、主にブロモドメインによって媒介される。
【０１０７】
ブロモドメイン含有タンパク質には、転写因子複合体（ＴＡＦ１、ＰＣＡＦ、Ｇｃｎ５、およびＣＢＰ）、およびエピジェネティックメモリー決定因子の構成要素として、非常に高い生物学的関心が持たれている４。合計で５７の多様なブロモドメインを含有する、４１個のヒトタンパク質がある。大きな配列多様性にも関わらず、全てのブロモドメインは、基質特異性を決定する多様なループ領域（ＺＡおよびＢＣループ）によって結合する、４本のαらせん（αＺ、αＡ、αＢ、αＣ）の左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。ペプチド性基質との共結晶構造は、アセチルリジンが、中心疎水性窩によって認識され、ほとんどのブロモドメイン中に存在するアスパラギン残基との水素結合によってアンカーされることを示した５。ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）ファミリー（ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）は、高レベルの配列保存を呈示する２つのＮ末端ブロモドメインを含んでなる一般的ドメイン構造と、より多岐にわたるＣ−末端動員ドメインとを共有する６。
【０１０８】
本発明は、ヒトブロモドメインタンパク質を阻害するのに有用な組成物および方法を特徴とする。
【０１０９】
発明の化合物
本発明は、ＢＥＴファミリーメンバーの第１のブロモドメイン（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４）のａｐｏ結晶構造の結合ポケット中に結合する化合物（例えばＪＱ１および本明細書で記述される式の化合物）を提供する。本発明は、このような化合物、ならびに本明細書に記載される方法の技術分野で公知のその他のＢＲＤ２、ＢＲＤ３、およびＢＲＤ４阻害剤の使用を提供する。このような化合物は、例えば参照によって本明細書に援用する、国際公開第２００９０８４６９３号パンフレットおよび対応する米国特許第２０１０２８６１２７号明細書に記載される。理論による拘束は望まないが、これらの化合物は、特に脂肪生成、脂肪細胞分化、および脂肪細胞の生物学的活性の有害な側面（例えば、過剰な脂肪合成、過剰な脂肪蓄積／脂肪細胞肥大、脂肪細胞炎症、臓器線維症を抑制するのに効果的であってもよい。１つのアプローチでは、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療するために有用な化合物は、ブロモドメイン構造結合ポケットに結合することが予測される化合物を同定する、分子ドッキングプログラムを使用して選択される。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の生物学的活性を少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％妨げ、阻害し、または妨害し、または低下させて、および／または例えばブロモドメインａｐｏ結合ポケット中の結合部位に結合することにより、このようなタンパク質の細胞内局在化を妨害し得る。
【０１１０】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、約１０００ダルトン未満、８００未満、６００未満、５００未満、４００未満、約３００ダルトン未満の分子量を有する小分子である。本発明の化合物の例としては、ＢＥＴファミリーメンバーの第１のブロモドメイン（例えばＢＲＤ４（以下、ＢＲＤ４（１）と称される；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＯＳＳ）のａｐｏ結晶構造の結合ポケットに結合する、ＪＱ１およびその他の化合物が挙げられる。ＪＱ１は、新規チエノ−トリアゾロ−１，４−ジアゼピンである。本発明は、このような化合物の薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【０１１１】
一態様では、化合物は、式Ｉ、
【化１】
2013527177.tif 000002
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ（重水素）、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３でＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１１２】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。
【０１１３】
特定の実施形態では、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３または任意選択的に置換されるアリールである。特定の実施形態では、各Ｒ３は独立して、Ｈ；Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有する−Ｃ１〜Ｃ８アルキル；またはＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６からなる群から選択される。
【０１１４】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲンまたはメチルである。
【０１１５】
特定の実施形態では、ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアルコキシである。
【０１１６】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１１７】
特定の実施形態では、環Ａは５または６員環アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、環Ａはチオフラニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０１１８】
特定の実施形態では、環Ａはフェニルまたはチエニルである。
【０１１９】
特定の実施形態では、ｍは１または２であり、ＲＡの少なくとも１つの存在はメチルである。
【０１２０】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、Ｈ、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０１２１】
別の態様では、化合物は、式ＩＩ、
【化２】
2013527177.tif 000003
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ’１はＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルからなる群から選択され；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただしＲ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１２２】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。
【０１２３】
特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはＲ’１はＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０１２４】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１２５】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１２６】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールを形成し得る。
【０１２７】
特定の実施形態では、各ＲＡはメチルである。
【０１２８】
別の態様では、化合物は、式ＩＩＩ、
【化３】
2013527177.tif 000004
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでない、および
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１２９】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。
【０１３０】
特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である。
【０１３１】
特定の実施形態では、各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールである。
【０１３２】
特定の実施形態では、Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【０１３３】
別の態様では、化合物は、式ＩＶ、
【化４】
2013527177.tif 000005
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１３４】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、ｎは１または２であり、Ｌはアルキルまたは−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはｎは１または２であり、ＬはＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０１３５】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨまたはメチルである。
【０１３６】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３７】
特定の実施形態では、環Ａはフェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０１３８】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０１３９】
本発明の方法はまた、式Ｖ〜ＸＸＩＩの化合物、および本明細書に記載される任意の化合物に関する。
【０１４０】
別の態様では、化合物は、式、
【化５】
2013527177.tif 000006
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１４１】
特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１：
【化６】
2013527177.tif 000007
またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１４２】
別の態様では、化合物は、式、
【化７】
2013527177.tif 000008
または
【化８】
2013527177.tif 000009
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１４３】
別の態様では、化合物は、式、
【化９】
2013527177.tif 000010
または
【化１０】
2013527177.tif 000011
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１４４】
別の態様では、本発明は、式、
【化１１】
2013527177.tif 000012
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１４５】
別の態様では、本発明は、式、
【化１２】
2013527177.tif 000013
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１４６】
別の態様では、本発明は、式、
【化１３】
2013527177.tif 000014
【化１４】
2013527177.tif 000015
【化１５】
2013527177.tif 000016
【化１６】
2013527177.tif 000017
【化１７】
2013527177.tif 000018
【化１８】
2013527177.tif 000019
【化１９】
2013527177.tif 000020
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１４７】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、
【化２０】
2013527177.tif 000021
【化２１】
2013527177.tif 000022
【化２２】
2013527177.tif 000023
【化２３】
2013527177.tif 000024
【化２４】
2013527177.tif 000025
【化２５】
2013527177.tif 000026
の構造の１つによって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物であり得る。
【０１４８】
一実施形態では、化合物は、構造
【化２６】
2013527177.tif 000027
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１４９】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化２７】
2013527177.tif 000028
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５０】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化２８】
2013527177.tif 000029
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５１】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、本明細書に示される任意の化合物の逆のキラリティーを有し得る。
【０１５２】
特定の実施形態では、化合物は、式（Ｖ）、（ＶＩ）、または（ＶＩＩ）によって表される化合物、
【化２９】
2013527177.tif 000030
（式中、Ｒ、Ｒ１、およびＲ２およびＲＢは式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ＹはＯ、Ｎ、Ｓ、またはＣＲ５であり、Ｒ５は式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ｎは０または１であり；式（ＶＩＩ）中の破線の円は芳香族または非芳香族環を示す）、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１５３】
式Ｉ〜ＩＶおよびＶＩ（または本明細書の任意の式）のいずれかの特定の実施形態では、Ｒ６は、下の表Ａで示されるアルデヒドの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６ＣＨＯのアルデヒドでは、Ｒ６はアルデヒドの非カルボニル部分である）。特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ６は、組み合わさって、表Ａで示されるケトンの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ４のケトンでは、Ｒ４およびＲ６はケトンの非カルボニル部分である）。
【０１５４】
【表１】
2013527177.tif 000031
【０１５５】
【表２】
2013527177.tif 000032
【０１５６】
【表３】
2013527177.tif 000033
【０１５７】
【表４】
2013527177.tif 000034
【０１５８】
一実施形態では、化合物は、式、
【化３０】
2013527177.tif 000035
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物、または水和物である。
【０１５９】
特定の実施形態では、化合物は（ラセミ）ＪＱ１であり；特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１である。特定の実施形態では、化合物は、
【化３１】
2013527177.tif 000036
および
【化３２】
2013527177.tif 000037
からなる群から選択される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１６０】
追加的な化合物の例としては、式、
【化３３】
2013527177.tif 000038
【化３４】
2013527177.tif 000039
に記載の化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物が挙げられる。
【０１６１】
式ＩＸ〜ＸＸＩＩ中では、ＲおよびＲ’は、例えば、それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルであり得る。式ＸＩＶ中では、Ｘは、本明細書に記載されるようなアリール基のための任意の置換基であり得る。
【０１６２】
本発明の化合物は、そのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製し得る。例えば、下で提供される化学物質の例は、化合物ＪＱ１（ラセミ体として）および鏡像異性体（＋）−ＪＱ１および（−）−ＪＱ１（スキームＳ１およびＳ２を参照されたい）を調製するための合成スキームを提供する。式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の多様な化合物は、適切な出発原料の置換により、類似法によって調製し得る。
【０１６３】
例えば、ＪＱ１から出発して、下のスキーム１に示されるようにして、類似アミンを調製し得る。
【化３５】
2013527177.tif 000040
スキーム１
【０１６４】
スキーム１に示されるように、ＪＱ１のｔ−ブチルエステルの加水分解は、カルボン酸を与え、それはジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）で処理されて、クルチウス転位条件にさらされてＣｂｚ保護アミンを提供し、次にそれは脱保護されてアミンをもたらす。例えば還元的アミノ化による引き続くアミン基の合成は第二級アミンをもたらし、それをらにアルキル化して三級アミンを提供し得る。
【化３６】
2013527177.tif 000041
スキーム２
【０１６５】
スキーム２は、例えば、（例えば式Ｉの環Ａを異なる芳香族環で置換することで）その中で融合環コアが修飾される、式Ｉの本発明の化合物のさらなる実施例の合成を示す。（例えば後述のスキームＳ１中のアミノジアリールケトンＳ２に代えて）適切な官能性を有するアミノジアリールケトンを使用することで、多様な融合環コアおよび／または付属アリール基（式Ｉの基Ｒに対応する）を有する新しい化合物を提供する。このようなアミノジアリールケトンは市販され、またはそのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製され得る。
【０１６６】
スキーム３は、さらなる本発明の化合物を調製するための追加的な例示的合成スキームを提供する。
【化３７】
2013527177.tif 000042
スキーム３
【０１６７】
スキーム３で示されるように、融合二環式前駆体（この化合物の合成については後述のスキームＳ１を参照されたい）を部分Ｒ（ＤＡＭ＝ジメチルアミノメチレン保護基）で官能化し、次にヒドラジドとの反応によって合成して、三環式融合コアを形成する。置換基Ｒｘは、適切なヒドラジドの選択によって変化させ得る。
【０１６８】
（本明細書に記載される方法によって調製し得る）本発明の化合物の追加的な実施例としては、以下が挙げられる。
【０１６９】
アミド
アミドは、例えば対応するカルボン酸またはエステルの調製と、それに続く標準条件を使用した適切なアミンでのアミド化によって、調製し得る。特定の実施形態では、アミドは、末端末端窒素含有環（例えばピリジル、ピペリジル、ピペラジニル、イミダゾリル（Ｎ−メチル−イミダゾリルを含む）、モルホリニルなどとの二炭素「リンカー」を提供する。例示的なアミド構造としては、
【化３８】
2013527177.tif 000043
が挙げられる。
【０１７０】
アミド部分と末端窒素含有環の間の二炭素リンカーの使用が好ましい。
【０１７１】
「逆方向アミド」
【化３９】
2013527177.tif 000044
【０１７２】
第二級アミン
【化４０】
2013527177.tif 000045
【０１７３】
ボロン酸
【化４１】
2013527177.tif 000046
【０１７４】
特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、ラセミ形態で存在する。特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、鏡像異性的に濃縮され、すなわち少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、９９％または１００％の鏡像体過剰率（ｅ．ｅ．）を有する。特定の実施形態では、化合物は、本明細書に記載される化合物（＋）−ＪＱ１（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート）と同一の絶対配置を有する。
【０１７５】
本明細書で開示される式のいずれかの特定の実施形態では、化合物は以下の構造によって表されない。
【化４２】
2013527177.tif 000047
式中、
Ｒ’１はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’２は水素、ハロゲン、またはハロゲン原子またはヒドロキシル基で任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’３はハロゲン原子、任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、またはシアノ；−ＮＲ５−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６（式中、Ｒ５は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｍは０〜４の整数であり、Ｒ６は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）；または−ＮＲ７−ＣＯ−−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ８（式中、Ｒ７は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｎは０〜２の整数であり、Ｒ８は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）であり；
Ｒ’４は−（ＣＨ２）ａ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ９（式中、ａは１〜４の整数であり、Ｒ９は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである）；Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ；または任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノまたはヒドロキシル基または−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯＯＲ１０（式中、ｂは１〜４の整数であり、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ４アルキルである）によって置換されるフェニルまたはピリジルである。
【０１７６】
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、本明細書で開示される化合物（例えばＪＱ１、式Ｉ〜ＸＸＩＩの化合物）または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機塩基を有する塩を指す。適切な塩基としては、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換モノ−、ジ−、またはトリアルキルアミンなどの有機アミン；ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル，Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）−アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−アミンなどのＮ、Ｎ，−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン）；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書で開示される化合物または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、アミノ官能基などの塩基性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機酸を有する塩も指す。適切な酸としては、硫酸水素、クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、リン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルカロン酸、糖酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１７７】
阻害核酸
本発明の阻害核酸分子は、ＢＥＴタンパク質または核酸分子（例えば、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、Ｂｒｄ４）の発現を阻害するオリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌクレオチドとしては、ＢＥＴポリペプチド（例えば、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ）をコードする核酸分子に結合する、一本鎖および二本鎖核酸分子（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびそのアナログ）、ならびにＢＥＴポリペプチド（例えば、Ｂｒｄ２、Ｂｒｄ３、Ｂｒｄ４）に直接結合して、その生物学的活性を調節する核酸分子（例えばアプタマー）が挙げられる。
【０１７８】
リボザイム
本発明のアンチセンスＢＥＴ配列を含む、触媒ＲＮＡ分子またはリボザイムを使用して、生体内でＢＥＴ核酸分子の発現を阻害し得る。リボザイム配列のアンチセンスＲＮＡ内への包含は、それらにＲＮＡ切断活性をもたらし、それによってコンストラクトの活性を増大させる。標的ＲＮＡ特異的リボザイムのデザインおよび使用は、そのそれぞれを参照によって援用する、Ｈａｓｅｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５８５−５９１．１９８８、および米国特許出願公開第２００３／０００３４６９Ａ１号明細書に記載される。
【０１７９】
したがって、本発明は、結合アーム中に８〜１９個の連続核酸塩基を有するアンチセンスＲＮＡを含む、触媒ＲＮＡ分子もまた特徴とする。本発明の好ましい実施形態では、ハンマーヘッドまたはヘアピンモチーフで、触媒核酸分子が形成される。このようなハンマーヘッドモチーフの例は、Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，８：１８３，１９９２に記載される。ヘアピンモチーフ例は、１９８８年９月２０日に出願された米国特許出願第０７／２４７，１００号明細書の継続出願である、１９８９年９月２０日に出願されたＨａｍｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，”ＲＮＡ  Ｃａｔａｌｙｓｔ  ｆｏｒ  Ｃｌｅａｖｉｎｇ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＲＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”、Ｈａｍｐｅｌ  ａｎｄ  Ｔｒｉｔｚ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８：４９２９，１９８９、およびＨａｍｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１８：２９９，１９９０に記載される。これらの特異的モチーフは、本発明を制限するものではなく、当業者は、本発明の酵素核酸分子中で重要なのは、それが標的遺伝子ＲＮＡ領域の１つまたは複数に相補的な特異的基質結合部位を有すること、そしてそれが分子にＲＮＡ切断活性を与えるヌクレオチド配列をその基質結合部位または周囲に有することであると認識する。
【０１８０】
小型ヘアピンＲＮＡは、任意の３’ＵＵ−オーバーハングがあるステムループ構造からなる。変動してもよいが、ステムは２１〜３１ｂｐ（望ましくは２５〜２９ｂｐ）の範囲に及び、ループは４〜３０ｂｐ（望ましくは４〜２３ｂｐ）の範囲に及び得る。細胞内におけるｓｈＲＮＡの発現では、ポリメラーゼＩＩＩ  Ｈ１−ＲＮＡまたはＵ６プロモーターのどちらかを含有するプラスミドベクター、ステムループＲＮＡインサートのためのクローニング部位、および４−５−チミジン転写終結シグナルを用い得る。ポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、一般に、明確に定義された開始および停止部位を有し、それらの転写物にはポリ（Ａ）尾部が欠損している。これらのプロモーターの終結シグナルはポリチミジンｔｒａｃｔによって規定され、転写物は典型的に第２のウリジンの後で切断される。この位置における切断は、発現されたｓｈＲＮＡに３’ＵＵオーバーハングを生成し、それは合成ｓｉＲＮＡ３’のオーバーハングに類似している。哺乳類細胞中でｓｈＲＮＡを発現する追加的な方法は、上で引用した参考文献に記載される。
【０１８１】
ｓｉＲＮＡ
短い２１〜２５本のヌクレオチド二本鎖ＲＮＡが、遺伝子発現を下方制御するのに効果的である（参照によって本明細書に援用する、Ｚａｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １０１：２５−３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−４９８，２００１）。ＭｃＣａｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：３８−３９．２００２）によって、生体内で、哺乳類におけるｓｉｒＮＡアプローチの治療有効性が実証された。
【０１８２】
標的遺伝子の配列を考えると、ｓｉＲＮＡは、その遺伝子を不活性化するようにデザインされてもよい。このようなｓｉＲＮＡは、例えば罹患組織に直接投与され、または全身投与され得る。ＢＥＴ遺伝子の核酸配列を使用して、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をデザインし得る。２１〜２５個のヌクレオチドｓｉＲＮＡは、例えば、血管疾患または障害を治療するための治療薬として使用してもよい。
【０１８３】
本発明の阻害性核酸分子は、ＢＥＴ発現のＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）媒介ノックダウンのための二本鎖ＲＮＡとして用いてもよい。一実施形態では、脂肪細胞または前脂肪細胞中でＢＥＴ発現が低下する。ＲＮＡｉは、対象の特定タンパク質の細胞発現を低下させる方法である（Ｔｕｓｃｈｌ，Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ２：２３９−２４５，２００１；Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌ．１５：４８５−４９０，２０００；Ｈｕｔｖａｇｎｅｒ  ａｎｄ  Ｚａｍｏｒｅ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌ．１２：２２５−２３２，２００２；ａｎｄ  Ｈａｎｎｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：２４４−２５１，２００２でレビューされる）。ｄｓＲＮＡの形質移入による、またはプラスミドベースの発現系を使用したｓｉＲＮＡ発現を通じた、細胞へのｓｉＲＮＡ導入は、哺乳類細胞中で機能喪失表現型を作り出すために、ますます盛んに用いられている。
【０１８４】
本発明の一実施形態では、本発明の核酸塩基オリゴマーの８〜１９個の連続核酸塩基を含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子が作られる。ｄｓＲＮＡは、二重鎖化した２本の個別のＲＮＡ鎖であり得て、または自己二重鎖化した単一ＲＮＡ鎖であり得る（小型ヘアピン（ｓｈ）ＲＮＡ）。典型的に、ｄｓＲＮＡは、約２１または２２個の塩基対であるが、所望ならば、より短くても、またはより長くてもよい（約２９個の核酸塩基まで）。ｄｓＲＮＡは、標準的な技術（例えば化学合成または生体外転写）を使用して作成し得る。例えば、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘ．）およびＥｐｉｃｅｎｔｒｅ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）からキットが入手できる。哺乳類細胞中でｄｓＲＮＡを発現させる方法は、そのそれぞれを参照によって本明細書に援用する、Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３，２００２；Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌ．１６：９４８−９５８，２００２．Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５−５０８，２００２；Ｓｕｉｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９：５５１５−５５２０，２００２；Ｙｕｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９：６０４７−６０５２，２００２；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７−５００，２００２；およびＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００−５０５  ２００２に記載される。
【０１８５】
小型ヘアピンＲＮＡは、任意の３’ＵＵ−オーバーハングがあるステムループ構造からなる。変動してもよいが、ステムは２１〜３１ｂｐ（望ましくは２５〜２９ｂｐ）の範囲に及び、ループは４〜３０ｂｐ（望ましくは４〜２３ｂｐ）の範囲に及び得る。細胞内におけるｓｈＲＮＡの発現では、ポリメラーゼＩＩＩ  Ｈ１−ＲＮＡまたはＵ６プロモーターのどちらかを含有するプラスミドベクター、ステムループＲＮＡインサートのためのクローニング部位、および４−５−チミジン転写終結シグナルを用い得る。ポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、一般に、明確に定義された開始および停止部位を有し、それらの転写物にはポリ（Ａ）尾部が欠損している。これらのプロモーターの終結シグナルはポリチミジンｔｒａｃｔによって規定され、転写物は典型的に第２のウリジンの後で切断される。この位置における切断は、発現されたｓｈＲＮＡに３’ＵＵオーバーハングを生成し、それは合成ｓｉＲＮＡ３’のオーバーハングに類似している。哺乳類細胞中でｓｈＲＮＡを発現する追加的な方法は、上で引用した参考文献に記載される。
【０１８６】
核酸塩基オリゴマーの送達
裸の阻害核酸分子またはそのアナログは、哺乳類細胞内に入って対象の遺伝子発現を阻害できる。それでもなお、オリゴヌクレオチドまたはその他の核酸塩基オリゴマーの細胞への送達を助ける製剤を利用することが、望ましいことがある。（例えば、そのそれぞれを参照によって本明細書に援用する米国特許第５，６５６，６１１号明細書、米国特許第５，７５３，６１３号明細書、米国特許第５，７８５，９９２号明細書、米国特許第６，１２０，７９８号明細書、米国特許第６，２２１，９５９号明細書、米国特許第６，３４６，６１３号明細書、および米国特許第６，３５３，０５５号明細書を参照されたい）。
【０１８７】
スクリーニング方法
上述したように、本発明は、ブロモドメイン結合ポケットに結合して、脂肪生成、脂肪細胞分化、および脂肪細胞の生物学的活性（例えば、脂肪合成、脂肪蓄積を阻害する、ＪＱ１を含む化合物、ならびにその他の置換化合物の特定例を提供する。しかし本発明は、それに限定されない。本発明は、脂肪生成、脂肪細胞分化、および脂肪細胞の生物学的活性（例えば、脂肪合成、脂肪蓄積を抑制できる作用物質（核酸、ペプチド、小分子阻害剤、および模倣剤を含む）を同定する単純な手段をさらに提供する。このような化合物はまた、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療または予防するのに有用であることが予測される。
【０１８８】
特に、本発明の特定の態様は、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドの生物学的活性を低下させる作用物質が、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害の治療または予防のための治療薬としておそらく有用であるという発見に、少なくとも部分的に基づく。特定の実施形態では、脂肪生成、脂肪細胞分化、脂肪細胞の生物学的活性（例えば、脂肪合成、脂肪蓄積）、脂肪生成で機能する転写因子およびその他のタンパク質の発現、体重増加、および脂肪蓄積（例えば、内臓脂肪、皮下脂肪、脂肪肝）をアッセイすることにより、本発明の化合物またはその他の作用物質の効果が分析される。脂肪生成、脂肪細胞分化、脂肪細胞の生物学的活性（例えば、脂肪合成、脂肪蓄積）、脂肪生成で機能する転写因子およびその他のタンパク質の発現、体重増加、および脂肪蓄積（例えば、内臓脂肪、皮下脂肪、脂肪肝）を低下させる発明の作用物質および化合物は、代謝症候群、肥満症、および代謝の望ましくない変更によって特徴付けられる関連障害の治療または予防に有用であると同定される。
【０１８９】
ＢＥＴファミリーメンバーと特異的に結合する、またはＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させる、実質的にいかなる作用物質も本発明の方法で用いてよい。本発明の方法は、代謝症候群、肥満症、および代謝の望ましくない変更によって特徴付けられる関連障害の治療または予防のために、脂肪生成、脂肪細胞分化、脂肪細胞の生物学的活性（例えば、脂肪合成、脂肪蓄積）、脂肪生成で機能する転写因子およびその他のタンパク質の発現、体重増加、および脂肪蓄積（例えば、内臓脂肪、皮下脂肪、脂肪肝）を低下させ、遅延させ、または別の方法で阻害する、候補作用物質のハイスループット低コストのスクリーニングのために有用である。次にＢＥＴファミリーメンバーのブロモドメインと特異的に結合する候補作用物質を単離して、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療するその能力について、生体外アッセイまたは生体内アッセイで活性を試験する。当業者は、細胞に対する候補作用物質の効果が、候補作用物質に接触させなかった対応する対照細胞と、典型的に比較されることを理解する。したがって、スクリーニング方法は、候補作用物質に接触させた脂肪細胞の生物学的活性と、未処理対照脂肪細胞の生物学的活性とを比較するステップを含む。別の実施形態では、ｏｂ／ｏｂマウス、ｄｂ／ｄｂマウスを使用して、または高脂肪食の給餌などの別の肥満症動物モデル内で、候補作用物質の生物学的活性を評価する。
【０１９０】
別の実施形態では、候補作用物質で処理された細胞中のＢＥＴファミリーメンバーの発現または活性と、未処理対照サンプルとを比較して、接触させた細胞中のＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させる候補化合物を同定する。ポリペプチドの発現または活性は、ウエスタンブロット法、フローサイトメトリー、免疫細胞化学、磁性および／またはブロモドメイン特異的抗体被覆ビーズへの結合、原位置ハイブリダイゼーション、蛍光原位置ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ＥＬＩＳＡ、マイクロアレイ分析、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット法、またはＢｒａｄｆｏｒｄアッセイやＬｏｗｒｙアッセイのような比色分析アッセイなどの当該技術分野で周知の手順によって比較し得る。
【０１９１】
一実施例では、脂肪細胞または前脂肪細胞を含有する培養液に、１つまたは複数の候補作用物質を様々な濃度で添加する。細胞中で発現される脂質生成転写因子またはその他の脂質生成タンパク質（例えば、Ｃ／ＥＢＰ−α、ＰＰＡＲγ、ＳＲＥＢＰ、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、ＡＣＣβ、ＳＣＤ１、ＤＧＡＴ）の発現を低下させる作用物質は、本発明で有用と見なされ；このような作用物質は、例えば、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を予防し、遅延させ、改善し、安定化し、または治療する、治療薬として使用してもよい。ひとたび同定されると、本発明の作用物質（例えば、ブロモドメインと特異的に結合するおよび／または拮抗する作用物質）を使用して、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療してもよい。本発明の方法に従って同定された作用物質は、局所的にまたは全身的に送達されて、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害原位置を治療する。
【０１９２】
潜在的ブロモドメイン拮抗薬としては、有機分子、ペプチド、ペプチド模倣剤、ポリペプチド、核酸リガンド、アプタマー、およびＢＥＴファミリーメンバーブロモドメインに結合してその活性を低下させる抗体が挙げられる。候補作用物質は、脂肪細胞の分化または生物学的活性を低下させるそれらの能力について試験してもよい。
【０１９３】
試験化合物および抽出物
特定の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバー拮抗薬（例えばブロモドメインと特異的に結合して活性を低下させる作用物質）は、天然物または合成（または半合成）抽出物の大きなライブラリーから、または化学物質ライブラリーまたはポリペプチドまたは核酸ライブラリーから、当該技術分野で公知の方法に従って同定される。創薬研究開発分野の当業者は、試験抽出物または化合物の正確な起源が、本発明のスクリーニング手順に重要でないことを理解する。スクリーニングで使用される作用物質としては、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、または望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられるその他の障害を治療する治療薬として知られるものが挙げられる。代案としては、本明細書に記載される方法を使用して、実質的にいくつもの未知の化学物質の抽出物または化合物をスクリーニングし得る。このような抽出物または化合物例としては、植物ベース、真菌ベース、原核生物ベースまたは動物ベースの抽出物、発酵ブロス、および合成化合物、ならびに既存ポリペプチドの修飾が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９４】
細菌、真菌、植物、および動物抽出物の形態の天然ポリペプチドのライブラリーは、Ｂｉｏｔｉｃｓ（Ｓｕｓｓｅｘ，ＵＫ）、Ｘｅｎｏｖａ（Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｒａｎｃｈ  Ｏｃｅａｎｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｔ．Ｐｉｅｒｃｅ，Ｆｌａ．）、およびＰｈａｒｍａＭａｒ，Ｕ．Ｓ．Ａ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を含む、いくつかの供給元から商業的に入手できる。このようなポリペプチドを当該技術分野で公知の本明細書に記載される方法を使用して修飾し、タンパク質形質導入ドメインを包含させ得る。これに加えて、所望ならば、当該技術分野で公知の方法に従って、例えば標準抽出法および分画法によって、天然のおよび合成的に生成したライブラリーを生成する。分子ライブラリー合成法の例は、例えば、ＤｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９，１９９３；Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：１１４２２，１９９４；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８，１９９４；Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３，１９９３；Ｃａｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９，１９９４；Ｃａｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１，１９９４；およびＧａｌｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３，１９９４などのように、当該技術分野に見られる。さらに、所望ならば、任意のライブラリーまたは化合物は、標準化学的、物理的、または生化学的方法を使用して、容易に修飾される。
【０１９５】
糖類ベース、脂質ベース、ペプチドベース、および核酸ベースの化合物を含むが、これに限定されるものではない、いくつものポリペプチド、化合物のランダムまたは指向性合成（例えば半合成または全合成）を生じさせる多数の方法が利用できる。合成化合物ライブラリーは、Ｂｒａｎｄｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ，Ｎ．Ｈ．）およびＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）から商業的に入手できる。代案としては、候補化合物として使用される化合物は、当業者に知られている標準合成技術および技法を使用して、容易に入手できる出発原料から合成し得る。本明細書に記載される方法で同定される化合物を合成するのに有用な合成化学転換および保護基手法（保護および脱保護）は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓＲｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）、およびそれに続く版などで記載されるものが挙げられる。
【０１９６】
化合物ライブラリーは、溶液中（例えばＨｏｕｇｈｔｅｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：４１２−４２１，１９９２）、またはビーズ上（Ｌａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４，１９９１）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６，１９９３）、細菌上（Ｌａｄｎｅｒ，米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、胞子上（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、プラスミド上（Ｃｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９，１９９２）またはファージ上（Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０，１９９０；Ｄｅｖｌｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：４０４−４０６，１９９０；Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３７８−６３８２，１９９０；Ｆｅｌｉｃｉ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０，１９９１；Ｌａｄｎｅｒ、前出）で提示されてもよい。
【０１９７】
これに加えて、創薬研究開発当業者は、活性が既知である材料の複製または反復の脱複製（例えば分類学的脱複製、生物学的脱複製、および化学的脱複製、または任意のその組み合わせ）または排除を可能ならいつでも用いるべきであることを容易に理解する。
【０１９８】
粗抽出物が、ＢＥＴファミリーメンバーブロモドメイン結合活性を有することが分かった場合、観察された効果の原因である分子成分を単離するために、陽性のリード抽出物のさらなる分画が必要である。したがって、抽出、分画、および精製工程の目標は、粗抽出物中にある、新生物細胞の脂肪生成、脂肪細胞分化、または脂肪細胞の生物学的活性を低下させる、化学実体の注意深い特性解析と同定である。このような不均一抽出物を分画および精製する方法は、当該技術分野で公知である。所望ならば、治療薬として有用なことが示される化合物は、当該技術分野で公知の方法に従って化学的に修飾される。
【０１９９】
本発明は、本明細書の式の化合物を含んでなる医薬組成物の治療的有効量を対象（例えばヒトなどの哺乳類）に投与するステップを含んでなる、代謝症候群、肥満、インスリン抵抗性、および関連疾患および／または疾病またはその症状を治療する方法を提供する。したがって、方法の一実施形態は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を患っているまたはそれに罹りやすい対象、またはその症状の治療である。方法は、疾患または障害が治療されるような条件下において、疾患または障害またはその症状を治療するのに十分な量の本明細書の化合物の治療量を哺乳類に投与するステップを含む。
【０２００】
本明細書の方法は、このような効果を生じると本明細書に記載される、本明細書に記載される化合物または組成物の有効量を（このような治療を必要とすると同定された対象を含む）対象に投与するステップを含む。このような治療を必要とする対象の同定は、対象または医療従事者が判断し得て、主観的（例えば意見）または客観的であり得る（例えば試験または診断法により測定可能である）。
【０２０１】
（予防的治療を含む）本発明の治療法は、一般に、本明細書の式の化合物などの本明細書の化合物の治療的有効量を哺乳類を含む、特にヒトである、それを必要とする対象（例えば動物、ヒト）に投与するステップを含んでなる。このような治療は、適切には、疾患、障害、またはその症状を患っている、有する、それに罹りやすい、またはそのリスクがある対象、特にヒトに適切に実施される。「リスクがある」対象の判定は、診断試験による、または対象またはヘルスケア提供者の意見（例えば遺伝子試験、酵素またはタンパク質マーカー、Ｍａｒｋｅｒ（本明細書で定義される）、家族歴など）による、任意の客観的または主観的判定によって下し得る。本明細書の化合物はまた、その中で望ましくない代謝の変更、脂肪蓄積、脂肪生成、脂肪細胞分化、または脂肪細胞の生物学的活性が関係しているとされる、任意のその他の障害の治療で使用してもよい。
【０２０２】
一実施形態では、本発明は、治療経過をモニターする方法を提供する。本方法は、診断マーカー（Ｍａｒｋｅｒ）（例えば、体重増加、脂肪酸合成、トリグリセリド輸送、インシュリン抵抗性、または本明細書の化合物によって調節される本明細書で記述される任意の標的、タンパク質またはその指示薬など）、または脂肪生成、脂肪細胞分化、または脂肪細胞の生物学的活性の望ましくない変化と関連付けられている、障害またはその症状を患っている、またはそれに罹りやすい対象中における診断測定（例えばスクリーニング、アッセイ）のレベルを測定するステップを含み、疾患またはその症状を治療するのに十分な治療量の本明細書の化合物が、対象に投与される。本方法で測定されるＭａｒｋｅｒのレベルを健態対照者またはその他の患者のどちらかの既知のＭａｒｋｅｒレベルと比較して、対象の疾患状態を確立し得る。好ましい実施形態では、第１のレベル測定よりも後の時点で、対象中のＭａｒｋｅｒの第２のレベルを測定し、２つのレベルを比較して、疾患の経過または治療法の有効性をモニターする。特定の好ましい実施形態では、本発明に従った治療開始に先だって、対象中のＭａｒｋｅｒの治療前レベルを測定し；次にこのＭａｒｋｅｒの治療前レベルを治療開始後の対象中のＭａｒｋｅｒレベルと比較して、治療の有効性を判定し得る。
【０２０３】
治療薬
別の実施形態では、本明細書に記載される方法を使用して、薬理効果を有することが発見された作用物質（例えばＪＱ１または本明細書に記述される式の化合物）は、薬剤として、または例えば合理的薬物設計による既存化合物の構造的修飾の情報として有用である。このような方法は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害に対して効果がある作用物質をスクリーニングするのに有用である。
【０２０４】
治療用途では、本明細書で開示される方法を使用して同定された組成物または作用物質は、例えば生理的食塩水などの薬学的に許容可能な緩衝液中に配合して、全身投与してもよい。好ましい投与経路としては、例えば、患者において連続的な持続性薬剤レベルを提供する、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または皮内注射が挙げられる。ヒト患者またはその他の動物の治療は、生理学的に許容可能なキャリア中の本明細書で同定された治療薬の治療的有効量を使用して実施される。適切なキャリアおよびそれらの処方については、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載される。投与される治療薬の量は、投与様式、患者の年齢と体重、および代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害の臨床症状次第で変動する。概して、量は、代謝症候群と関連付けられているその他の疾病、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害の治療で使用される、その他の作用物質で使用される量の範囲内であるが、場合によっては化合物の特異性増大のために、より少ない量が必要とされる。化合物は、当業者に知られている方法による測定で、または体重増加または脂肪蓄積を測定する任意のアッセイを使用した測定で、脂肪生成、脂肪細胞分化、脂肪細胞の生物学的活性を低下させる投与量で投与される。
【０２０５】
医薬組成物の処方
代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療するための化合物の投与は、その他の構成要素との組み合わせで、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を改善し、低下させ、または安定化するのに効果的な治療薬濃度をもたらす、任意の適切な手段によってもよい。化合物は、任意の適切なキャリア物質中に任意の適切な量で含有されてもよく、通常、組成物総重量の１〜９５重量％の量で存在する。組成物は、非経口（例えば皮下、静脈内、筋肉内、または腹腔内）投与経路に適した剤形で提供されてもよい。医薬組成物は、従来の製薬慣行に従って調合してもよい（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  ｅｄ．），ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。特定の一実施形態では、本発明の作用物質は、脂肪細胞または肝臓に直接投与される。本発明の化合物を肝臓に投与する一手段は、門脈または肝動脈を介する。本発明の化合物を対象組織に投与する別の手段は、デバイスまたは固体担体（ステントまたはグラフトなど）への付着による。
【０２０６】
ヒト投与量は、最初に、マウスで使用される化合物量の外挿によって決定し得て、当業者は認識するように、これは動物モデルと比較してヒトのための投与量を変更する技術分野におけるルーチンである。一実施形態では、本発明の作用物質は、５０ｍｇ／ｋｇで経口的にまたは全身的に投与される。特定のその他の実施形態では、投与量は、約１μｇ化合物／Ｋｇ体重〜約５０００ｍｇ化合物／Ｋｇ体重；または約５ｍｇ／Ｋｇ体重〜約４０００ｍｇ／Ｋｇ体重または約１０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約３０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約５０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約２０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約１００ｍｇ／Ｋｇ体重〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約１５０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／Ｋｇ体重で変動してもよいことが想定される。別の実施形態では、この用量は、約１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、または５０００ｍｇ／Ｋｇ体重であってもよい。別の実施形態では、用量は、約５ｍｇ化合物／Ｋｇ体重〜約１００ｍｇ化合物／Ｋｇ体重の範囲内であってもよいことが想定される。別の実施形態では用量は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００ｍｇ／Ｋｇ体重であってもよい。もちろん、この投与量は、このような治療プロトコルで慣例的に行われるように、初期臨床試験の結果と特定患者のニーズに応じて、上向きまたは下向きに調節してもよい。
【０２０７】
本発明に従った医薬組成物は、投与時に実質的に即座に、または投与後の任意の所定時間または期間に、活性化合物を放出するように調合してもよい。後者の種類の組成物は、一般に放出制御製剤として知られ、（ｉ）体内で長期にわたり実質的に定濃度の薬剤をもたらす製剤；（ｉｉ）所定の遅延時間後に、体内で長期にわたり実質的に定濃度の薬剤をもたらす製剤；（ｉｉｉ）活性物質の血漿レベルのゆらぎ（鋸歯状動態パターン）と関連付けられている望ましくない副作用を同時に最小化しながら、体内で比較的一定した効果的レベルを保つことで、所定期間中に作用を維持する製剤；（ｉｖ）例えば、胸線に隣接または接触する、放出制御組成物の空間配置によって、作用を局在化させる製剤；（ｖ）用量が例えば１週間または２週間毎に投与されるような、便利な投与ができるようにする製剤；（ｖｉ）治療薬を特定の細胞型（例えば脂肪細胞）または組織（内臓脂肪、異所性脂肪、脂肪肝）に送達するキャリアまたは化学誘導体の使用によって、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を標的とする製剤が挙げられる。いくつの用途では、放出制御製剤は、日中に血漿レベルを治療レベルに保つための頻繁な投与に対する必要性をなくす。
【０２０８】
放出速度が、問題になっている化合物の代謝率を補って余りある、放出制御を得るために、いくつかのストラテジーを追究し得る。一例では、放出制御は、例えば、様々な種類の放出制御組成物およびコーティングを含む、様々な処方パラメータおよび成分の適切な選択によって得られる。したがって、治療薬は、適切な賦形剤と共に医薬組成物に調合され、それは投与時に、治療薬を制御された様式で放出する。実施例としては、一単位または複数単位の錠剤またはカプセル組成物、油剤、懸濁液、エマルション、マイクロカプセル、微小球、分子複合体、ナノ粒子、パッチ、およびリポソームが挙げられる。
【０２０９】
非経口組成物
医薬組成物は、投薬形態または製剤での注射、輸液または移植（皮下、静脈内に、筋肉内、腹腔内、など）によって、または従来の無毒の薬学的に許容可能なキャリアおよびアジュバントを含有する適切な送達デバイスまたはインプラントを介して、非経口的に投与してもよい。このような組成物の処方および調製は、製剤処方当業者に周知である。処方は、前出のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙにある。
【０２１０】
非経口用の組成物は、単位用量形態（例えば単回投与アンプル）で、またはその中に適切な保存料が添加されてもよい数回の用量を含有するバイアルで提供されてもよい（下記参照）。組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、輸液用器具、または埋め込み用送達デバイスの形態であってもよく、またはそれは、使用前に水または別の適切なビヒクルで戻される乾燥粉末として提示されてもよい。代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を低下させまたは改善する活性薬剤の他に、組成物は、適切な非経口的に許容可能なキャリアおよび／または賦形剤を含んでもよい。活性治療薬は、放出制御のために、微小球、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込まれてもよい。さらに、組成物は、懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調節剤、浸透圧調節剤、および／または分散剤を含んでもよい。
【０２１１】
上述の通り、本発明に従った医薬組成物は、無菌注射に適した形態であってもよい。このような組成物を調製するために、適切な抗代謝症候群治療薬を非経口的に許容可能な液体ビヒクルに溶解または懸濁する。用いてもよい許容可能ビヒクルおよび溶剤は、水、適量の塩酸または水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝液の添加によって適切なｐＨに調節された水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張の塩化ナトリウム溶液とデキストロース溶液である。水性製剤は、１つまたは複数の保存料（例えばメチル、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート）もまた含有してもよい。場合によっては、化合物の１つが難溶性またはわずかに水溶性であれば、溶解促進剤または可溶化剤を添加し得て、または溶媒に１０〜６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールなどを含めることもできる。
【０２１２】
放出制御非経口組成物
放出制御非経口組成物は、水性懸濁液、微小球、マイクロカプセル、磁性微小球、油剤、油懸濁液、またはエマルションの形態であってもよい。代案としては、活性薬剤は、生体適合性キャリア、リポソーム、ナノ粒子、インプラント、または輸液用器具に組み込まれてもよい。
【０２１３】
微小球および／またはマイクロカプセル調製品で使用するための材料は、例えばポリガラクチン、ポリ−（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン）、およびポリ（乳酸）などの生分解性／生体内分解性のポリマーである。放出制御非経口製剤を処方する際に使用してもよい生体適合性キャリアは、炭水化物（例えばデキストラン）、タンパク質（例えばアルブミン）、リポタンパク、または抗体である。インプラントで使用するための材料は、非生分解性（例えばポリジメチルシロキサン）、または生分解性（例えばポリ（カプロラクタム）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）またはポリ（オルトエステル）またはその組み合わせ）であり得る。
【０２１４】
経口使用のための固体剤形
経口使用のための製剤としては、無毒の薬学的に許容可能な賦形剤との混合物中の活性成分を含有する錠剤が挙げられる。このような製剤は、当業者に知られている。賦形剤は例えば、不活性希釈剤または増量剤（例えばスクロース、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン類、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）；顆粒化剤および崩壊剤（例えば、微結晶セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）；結合剤（例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、α化デンプン、微結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）；および平滑剤、流動促進剤、および粘着防止剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油、または滑石）であってもよい。その他の薬学的に許容可能な賦形剤は、着色剤、着香剤、可塑剤、湿潤剤、緩衝剤などであり得る。
【０２１５】
錠剤は、未被覆であってもよく、またはそれらは公知の技術によって被覆されて、任意選択的に、胃腸管内における崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたり持続性作用を提供する。コーティングは、（例えば放出制御製剤を達成するために）所定のパターンで活性薬剤を放出するように適合されてもよく、またはそれは胃通過後まで、活性薬剤を放出しないように適合されてもよい（腸溶コーティング）。コーティングは、糖コーティング、フィルムコーティング（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリレート共重合体、ポリエチレングリコールおよび／またはポリビニルピロリドンベース）、または腸溶コーティング（例えばメタクリル酸共重合体、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸コハク酸メチルセルロースヒドロキシプロピル、ポリビニルアセテートフタレート、シェラック、および／またはエチルセルロースベース）であってもよい。さらに、例えばモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料もまた用いてもよい。
【０２１６】
固体錠剤組成物は、望まれない化学変化（例えば活性治療剤の放出前の化学分解）から組成物を保護するように適合されたコーティングを含んでもよい。コーティングは、前出のＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに記載されている様式と同じようにして、固体剤形上に塗布してもよい。
【０２１７】
少なくとも２つの治療薬を錠剤中で一緒に混合してもよく、または分割してもよい。一例では、第２の治療薬のかなりの部分が第１の治療薬の放出前に放出されるように、第１の治療薬が錠剤内部に、第２の活性治療薬が外側に含有される。
【０２１８】
経口使用のための製剤は、チュアブル錠として、または活性成分が不活性固体希釈剤（例えばジャガイモデンプン、乳糖、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が、例えば、落花生油、流動パラフィン、またはオリーブ油などの水または油媒質と混合される、軟質ゼラチンカプセルとして提示されてもよい。粉末および顆粒は、錠剤およびカプセルについて上述された成分を使用して、例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥装置を使用して、従来の様式で調製してもよい。
【０２１９】
放出制御経口投薬形態
経口使用のための放出制御組成物は、例えば、活性物質の溶出および／または拡散を制御することで、活性治療薬を放出するように構築されてもよい。溶出または拡散放出制御は、錠剤、カプセル、ペレットの適切なコーティングによって、または化合物の顆粒製剤によって、または化合物を適切なマトリックスに組み込むことによって達成し得る。放出制御コーティングとしては、上述の１つまたは複数のコーティング物質および／または、例えば、シェラック、蜜蝋、グリコワックス、水素化ヒマシ油、カルナウバ蝋、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリン、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ−ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メタクリル酸メチル、２-ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、１，３ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、および／またはポリエチレングリコールが挙げられる。放出制御マトリックス製剤中では、マトリックス材は、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバ蝋およびステアリルアルコール、カルボポル９３４、シリコーン、トリステアリン酸グリセリル、アクリル酸メチル−メタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、および／またはハロゲン化フルオロカーボンもまた含んでもよい。
【０２２０】
１つまたは複数の治療用化合物を含有する放出制御組成物はまた、浮揚性錠剤またはカプセル（すなわち、経口投与時に、一定時間胃内容物上部に浮遊する錠剤またはカプセル）の形態であってもよい。化合物の浮揚性錠剤処方は、化合物と賦形剤の混合物をヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの２０〜７５％ｗ／ｗの親水コロイドと共に顆粒化することで調製し得る。次に得られた顆粒を錠剤に圧縮し得る。胃液との接触時に、錠剤はその表面周辺に、実質的に不透水性のゲルバリアを形成する。このゲルバリアは、１未満の密度の維持に荷担し、それによって錠剤が胃液中で浮揚性のままであるようにする。
【０２２１】
併用療法
任意選択的に、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を治療するための治療薬は、代謝症候群、インシュリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病または肥満症を治療するための任意のその他の標準治療法と組み合わせて投与され；このような方法は当業者に知られており、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載される。所望ならば、本発明の作用物質（例えば、ＪＱ１、本明細書に記述される式の化合物、およびその誘導体）は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害の治療に有用な任意の従来の治療薬と組み合わせて投与される。これらの作用物質は、抗糖尿病薬（スルホニルウレア、経口血糖降下薬、ＰＰＡＲ作動薬または拮抗薬など）、心臓脈管薬（降圧剤、抗狭心症薬など）、および抗炎症性薬剤（コルチコステロイド、ＨＤＡＣ阻害剤、ＴＮＦ−α調節因子など）を含み得る。
【０２２２】
キットまたは医薬品システム
本組成物は、代謝症候群、肥満症、ＩＩ型糖尿病、インシュリン抵抗性、および望ましくない代謝の変更または脂肪蓄積によって特徴付けられる関連障害を改善するために使用される、キットまたは医薬品システムに組み立ててもよい。本発明のこの態様に従ったキットまたは医薬品システムは、その中に、バイアル、チューブ、アンプル、ボトルなどの１つまたは複数の収容手段を厳重に密封して有する、箱、カートン、筒などの運搬手段を含んでなる。本発明のキットまたは医薬品システムは、本発明の作用物質を使用するための付属使用説明もまた含んでなってもよい。
【０２２３】
本発明の実施は、特に断りのない限り、十分に当業者の技量の範囲内である、従来の（組換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学技術を用いる。このような技術については、文献“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）において詳細に記載される。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用でき、したがって本発明の作成および実施で検討し得る。以下の節で、特定の実施形態のために特に有用な技術を考察する。
【０２２４】
以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療法を作成して使用する方法の完全な開示と説明を提供するために提示され、発明者らが彼らの発明と見なす範囲を制限することは意図されない。
【実施例】
【０２２５】
Ｉ．化学物質実施例−合成および調製法
本発明の化合物は、本明細書の説明を考慮して、本明細書に記載される方法によって、および／または当業者に知られている方法に従って、合成し得る。
【０２２６】
スキームＳ１．ラセミブロモドメイン阻害剤（±）−ＪＱ１の合成
【化４３】
2013527177.tif 000048
【０２２７】
（２−アミノ−４，５−ジメチルチオフェン−３−イル）（４−クロロフェニル）メタノン（Ｓ２）
上に示すスキームに従って、化合物ＪＱ１を調製した。
【０２２８】
２３℃のエタノール（２０ｍｌ、０．３５Ｍ）中の４−クロロベンゾイルアセトニトリルＳ１（１．２４ｇ、６．９ｍｍｏｌ、１等量）、２−ブタノン（０．６２ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）、およびモルホリン（０．６０ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、イオウ（２２０ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）を固体として添加した２１。次に混合物を７０℃に加熱した。１２時間後、反応混合物を２３℃に冷却し、鹹水（１００ｍｌ）中に注いだ。水層を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ２（１．２８ｇ、７０％）を黄色固体として得た。
【０２２９】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（８６４ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１０等量）の溶液に、（２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）（８２７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７２ｍｌ、４．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１６時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（６２５ｍｇ、９０％）を褐色油として得た。
【０２３０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（４．０ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（５６０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（３７０ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は７５％に下がった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２３１】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（２８０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を１０％酢酸エタノール溶液（２１ｍｌ、０．０３Ｍ）に溶解した。反応混合物を８５℃に加熱した。３０分後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（２４１ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。Ｓ５のエナンチオマ純度は６７％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２３２】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−チオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ６）
ジグリム（１．２５ｍｌ、０．４Ｍ）中のＳ５（２１０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、五硫化リン（２２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、炭酸水素ナトリウム（１６８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。反応混合物を９０℃に加熱した。１６時間後、鹹水（２０ｍｌ）および酢酸エチル（３５ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（３×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（２ｘ１５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、回収されたＳ５（７３ｍｇ、３４％）と共に、Ｓ６（１４１ｍｇ、６５％）を褐色固体として得た。
【０２３３】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（±）ＪＱ１］
０℃のＴＨＦ（２．６ｍｌ、０．１４Ｍ）中のＳ６（１５８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、ヒドラジン（０．０１５ｍｌ、０．４５ｍｍｏｌ、１．２５等量）を添加した。反応混合物を２３℃に加温して、２３℃で１時間撹拌した。全ての溶剤を減圧下で除去した。得られたヒドラジンを精製なしで直接使用した。次にヒドラジンをオルト酢酸トリメチルとトルエンの２：３混合物（６ｍｌ、０．０６Ｍ）に溶解した。反応混合物を１２０℃に加熱した。２時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、ＪＱ１（１４０ｍｇ、２段階で８５％）を白色固体として得た。反応条件は、不斉中心をさらにエピマー化して、ラセミ体ＪＱ１がもたらされた。（ＡＳ−Ｈカラムを用いて、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２３４】
スキームＳ２．鏡像異性的に濃縮された（＋）−ＪＱ１の合成
【化４４】
2013527177.tif 000049
【０２３５】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（４１１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．０等量）溶液に、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシル）トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ）（４９４ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、０．９５等量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５０ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ、２．７５等量）を逐次した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。４時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（４５２ｍｇ，７２％）を褐色油として得た。
【０２３６】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（２．２ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（３１０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（１８４ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は、９１％であった。（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によりチェックした）。
【０２３７】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（１８４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍｌ、０．０４Ｍ）に溶解した。シリカゲル（３００ｍｇ）を添加して、反応混合物を９０℃に加熱した。３時間後、反応混合物を２３℃に冷却した。シリカゲルを濾過して、酢酸エチルで洗浄した。合わせた濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（１６８ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。エナンチオマ純度は９０％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２３８】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（＋）ＪＱ１］
−７８℃のＴＨＦ（１．８ｍｌ、０．１５Ｍ）中のＳ５（１１４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、０．３ｍｌ、０．３０ｍｍｏｌ、１．１０等量）を添加した。反応混合物を−１０℃に加温して、２３℃で３０分間撹拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した。クロロリン酸ジエチル（０．０４７ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ、１．２０等量）を反応混合物に添加した２２。得られた混合物を−１０℃で４５分間加温した。酢酸ヒドラジド（３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．５０等量）を反応混合物に添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１時間後、９０℃に加熱された反応混合物に、１−ブタノール（２．２５ｍｌ）を添加した。１時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（＋）−ＪＱ１（１１４ｍｇ、９２％）を白色固体として９０％のエナンチオマ純度で得た（ＡＳ−Ｈカラム、８５％ヘキサン−メタノール、２１０ｎｍ、ｔＲ（Ｒ−鏡像異性体）＝１．５９分、ｔＲ（Ｓ−鏡像異性体）＝３．６７分を使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によって測定した）。キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によって生成物をさらに精製し、９９％ｅｅ以上でＳ鏡像異性体を得た。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６ＭＨｚ，１Ｈ），３．５４−３．５２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）．
１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ１７１．０，１６３．８，１５５．７，１５０．０，１３６．９，１３１．１，１３０．９，１３０．６，１３０．３，１２８．９，８１．２，５４．１，３８．１，２８．４，１４．６，１３．５，１２．１．
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値Ｃ２１Ｈ２４ＣｌＮ２Ｏ３Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋：４５７．１４６０，実測値４５７．１４５１ｍ／ｚ．
ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）、Ｒｆ：０．３２（ＵＶ）
［α］２２Ｄ＝＋７５（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０２３９】
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨを出発原料として用いて、同様にして（−）−ＪＱ１を合成し、キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によってさらに精製して、９９％ｅｅを超えるＲ鏡像異性体を得た。［α］２２Ｄ＝−７２（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０２４０】
追加的な化合物の合成
スキームＳ３で図示されるようにして、追加的な本発明の化合物を調製した。
【０２４１】
スキームＳ３．ヒドラジン誘導体の合成
【化４５】
2013527177.tif 000050
【０２４２】
スキームＳ３で示されるようにして、（＋）−ＪＱ１のｔ−ブチルエステル（１）を切断して遊離酸（２）をもたらし、それをヒドラジンと結合してヒドラジド（３）をもたらした。４−ヒドロキシベンズアルデヒドとの反応は、ヒドラゾン（４）を生じた。
【０２４３】
ヒドラジド（３）およびヒドラゾン（４）のどちらも、少なくとも１つの生物学的アッセイで活性を示した。
【０２４４】
ヒドラジド（３）と多様なカルボニル含有化合物との反応によって、化合物のライブラリーを調製した（上の表Ａ参照）。
【０２４５】
例えばアッセイ開発のためのプローブとして使用するために、追加的な化合物を調製した。例示的な合成を下のスキームＳ４に示す。
【０２４６】
スキームＳ４．プローブとして有用な誘導体の合成
【化４６】
2013527177.tif 000051
【０２４７】
追加的な化合物を下の表で示すようにして調製した。
【０２４８】
【表５】
2013527177.tif 000052
【０２４９】
【表６】
2013527177.tif 000053
【０２５０】
【表７】
2013527177.tif 000054
【０２５１】
【表８】
2013527177.tif 000055
【０２５２】
【表９】
2013527177.tif 000056
【０２５３】
【表１０】
2013527177.tif 000057
【０２５４】
【表１１】
2013527177.tif 000058
【０２５５】
【表１２】
2013527177.tif 000059
【０２５６】
各化合物のスペクトルデータは、割り当てられた構造に一致した。
【０２５７】
ＩＩ．生物学的活性および処理法
実施例１：ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害は、脂肪生成をブロックする
３Ｔ３Ｌ１細胞は、大型脂肪滴を含有する脂肪細胞に分化し得る、特徴のはっきりした細胞型である。この実験では、ＢＥＴファミリータンパク質の化学阻害剤ＪＱ（図１、上部パネル）または阻害剤の不活性バージョン（図１、下部パネル）の増大する濃度の存在下で、３Ｔ３Ｌ１細胞を分化させた。細胞を８日間にわたり分化させた。最終日に、細胞中の脂質蓄積を染色するオイルレッドＯで、細胞を染色した。図１に示されるように、ＪＱ（Ｓ）鏡像異性体での処理が用量依存様式で脂肪生成を阻害したのに対し、不活性ＪＱ（Ｒ）鏡像異性体は脂質生成に影響を及ぼさなかった。ＢＥＴタンパク質の阻害は、細胞中の赤色染色の損失による測定で、脂質蓄積を顕著に低下させ、この影響は投与依存性であった。
【０２５８】
実施例２：３Ｔ３Ｌ１細胞においてＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害は、脂肪細胞分化中にＣ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγの発現をブロックする
ＢＥＴタンパク質ファミリーの化学阻害剤（５００ｎＭのＪＱ）の存在下または不在下で、３Ｔ３Ｌ１細胞を分化させた。分化の最初の４日間に、脂肪細胞分化中で機能する２つの重要なタンパク質、Ｃ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγの遺伝子発現レベルを測定した。図２Ａおよび２Ｂに示されるように、ＢＥＴタンパク質の阻害は、Ｃ／ＥＢＰαおよびＰＰＡＲγ発現の誘導を顕著にブロックした。
【０２５９】
実施例３：ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害は、肥満症のマウスモデルにおける体重増加をブロックする
Ｏｂ／ｏｂマウスは、通常マウス固形飼料で体重が迅速に増加する、十分に確立されたマウス肥満症モデルである。５週齢のＯｂ／ｏｂマウスをビヒクル（対照）またはＢＥＴタンパク質ファミリー阻害剤（ＪＱ）で、１４日間にわたって処理した。図３Ａ〜３Ｃに示されるように、５０ｍｇ／ｋｇＪＱでの処理は、ｏｂ／ｏｂマウスにおける体重増加をブロックした。ＪＱ処理はまた、図３Ｄおよび３Ｅにそれぞれ示されるように、食物摂取量と飼料効率を穏やかに阻害した。ＢＥＴタンパク質ファミリー阻害剤による飼料効率の低下は、食物摂取量が体重の差異を説明できないことを示す。理論による拘束は望まないが、おそらく不一致は、ＪＱで処理されたｏｂ／ｏｂマウスが、未処理ｏｂ／ｏｂマウスと比較して飼料を代謝する様式の差異に起因する。
【０２６０】
実施例４：ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害は、ｏｂ／ｏｂマウスの肝臓および脂肪組織の重量を低下させる
５週齢のＯｂ／ｏｂマウスをビヒクル（対照）、またはＢＥＴタンパク質ファミリーの化学阻害剤（ＪＱ）のどちらかで、およそ２週間処理した。処置に続いてマウスを安楽死させ、臓器を採取して秤量した。肝臓および皮下脂肪重量を測定した。図４Ａおよび４Ｂに示されるように、ＢＥＴタンパク質ファミリー阻害剤で処理されたマウス群は、肝臓（図４Ａ）および皮下脂肪体重（図４Ｂ）の統計的に有意な低下を実証した。これに加えて、臓器採取に続いて、肝臓を薄片してＨ＆Ｅで染色した。ビヒクル処理マウスでは、細胞中の豊富な大型白色滴液によって実証されるように、肝臓内に著しい脂肪滴が存在した（図５）。この所見は、肝臓脂肪症または脂肪肝に一致する。対照的に、ＢＥＴタンパク質阻害剤で処理したマウスは、２週間の処理に続いて肝臓脂肪症の完全なブロックを明らかにした。ＪＱ処理マウスの肝臓の組織学は、形態学的に正常であり、肝臓内の脂質蓄積の完全な不在を明らかにした。これは、ＪＱでの処理が、肝臓脂肪症を逆転できたことを示す。
【０２６１】
実施例５：ＢＥＴタンパク質ファミリーメンバーの阻害は、肝臓内の脂肪蓄積を制御する遺伝子の発現を低下させた
５週齢Ｏｂ／ｏｂマウスを２週間にわたりＢＥＴタンパク質ファミリー阻害剤で処理した。処理に続いて臓器を採取し、肝臓ＲＮＡを単離して遺伝子発現プロフィールを測定した。肝臓内の脂肪蓄積の制御において機能する、遺伝子パネルの発現レベルを測定した。肝臓内の脂肪蓄積低下を実証する組織学と一致して、ＢＥＴタンパク質ファミリーの阻害は、ステロール調節結合タンパク質（「ＳＲＥＢＰ」）（図６Ａ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体２（「ＰＰＡＲｇ２」）（図６Ｂ）、脂肪酸シンターゼ（「ＦＡＳ」）（図６Ｃ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼβ（「ＡＣＣβ」）（図６Ｄ）、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（「ＳＣＤ１」）（図６Ｅ）、およびジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（「ＤＧＡＴ」）（図６Ｆ）の発現を顕著に低下させた。
【０２６２】
実施例６：ブロモドメインの阻害は、通常固形飼料を与えたマウスの内臓脂肪量を低下させた
８週齢のＣ５７Ｂｌ／６オスマウスに、標準固形飼料を８週間与えた。これらのマウスにはまた、毎日１回腹腔内注射投与される５０ｍｇ／ｋｇのブロモドメイン阻害剤ＪＱ１、またはビヒクル対照による処理も開始した。図７Ａ〜７Ｃに示されるように、８週間の処理後、ＪＱ１処理マウスは精巣上体脂肪組織重量（図７Ｂ）の顕著な低下を実証した一方で、全体的体重（図７Ａ）および皮下脂肪組織（図７Ｃ）は、ビヒクル処理動物と同様であった。
【０２６３】
実施例７：ブロモドメイン阻害は、高脂肪食に応えた体重増加をブロックした
８週齢のＣ５７Ｂｌ／６オスマウスに、６０％ｋｃａｌの脂肪を含有する高脂肪食を開始した。これらのマウスにはまた、毎日１回腹腔内注射投与される５０ｍｇ／ｋｇのブロモドメイン阻害剤ＪＱ１、またはビヒクル対照による処理も開始した。体重を毎週測定した。図８に示されるように、ビヒクル処理マウスは、この８週間の食餌チャレンジ（ｄｉｅｔａｒｙ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）間に、１０グラム近く体重が増加した；しかし、ＪＱ１での処理はこの体重増加をブロックし、ＪＱ１処理マウスは太らなかった。体重曲線は、処理の３週間後に統計的に有意に分かれた（＊ｐ＜．０５）。
【０２６４】
実施例８：ブロモドメイン阻害は、高脂肪食への曝露後にインシュリン抵抗性から保護した
８週齢のＣ５７Ｂｌ／６オスマウスに、６０％ｋｃａｌの脂肪を含有する高脂肪食を開始した。これらのマウスにはまた、毎日１回腹腔内注射投与される５０ｍｇ／ｋｇのブロモドメイン阻害剤ＪＱ１、またはビヒクル対照による処理も開始した。体重を毎週測定した。次にインシュリン耐性試験によって、マウスをインシュリン抵抗性の程度について調べた。７週間の高脂肪食と、同時のＪＱ１またはビヒクル処理後、マウスを４時間絶食させて、次に腹腔内注射によってインシュリン（０．５Ｕ／ｋｇ）を単回ボーラス投与した。インシュリン注射に続いて、示される時点で血糖を測定した。図９Ａに示されるように、ビヒクル処理マウスは、出発レベルへの血糖の迅速な復帰によって示されるように、インシュリン抵抗性を実証した。対照的に、ＪＱ処理マウスは、インシュリン注射の２時間後まで、血糖の持続性の低下を示し、インシュリンへの応答亢進と、血糖クリアランスを実証した（図９Ａ）。図９Ｂに示されるように、血糖変化の曲線下面積は、この２時間経過中のグルコースの統計的に有意な低下を明らかにした（ｐ＜．０５）。
【０２６５】
その他の実施形態
前述の説明から、本明細書に記載される発明に変更および修正を加えて、様々な用途と条件に適合させてもよいことは明らかである。このような実施形態もまた、以下の請求項の範囲内である。
【０２６６】
本明細書の任意の変数の定義における要素一覧の列挙は、任意の単一要素または列挙された要素の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としての、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさった、その実施形態を含む。
【０２６７】
本明細書で言及される全ての特許および刊行物は、具体的に任意の目的のために特許および刊行物がそれぞれが独立して個々に援用されたかのように、参照によって本明細書に援用する。本明細書に記載される主題は、そのそれぞれをこの参照によって本明細書に組み込んだ、米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書、米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書、および米国仮特許出願第６１／３７５，６６３号明細書の主題に関連することもある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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