(57)【要約】  Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する式（Ｉ）の化合物、および動物における、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の調節と関連付けられる疾患の治療のためのその使用が本明細書に記載される。【図１】2013505290.tif 000041
2013505290.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉを有する化合物
【化１】
2013505290.tif 000038
［式中、
Ｘは、ＡまたはＢ
【化２】
2013505290.tif 000039
であり、
Ｙは、Ｏまたは結合であり、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ３または
【化３】
2013505290.tif 000040
であり、
Ｒ２は、水素、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、ハロ、もしくはヒドロキシで置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、但し、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、またはヒドロキシ基は、Ｒ１中のＯに連結している炭素原子では結合しておらず、
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ、シアノ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルコキシ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはヒドロキシルで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、但し、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基またはヒドロキシル基は、ピラゾール窒素に連結している炭素には結合しておらず、
Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、それぞれ独立に、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃおよびＲ８ｄは、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはヒドロキシもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
またはＲ８ａおよびＲ８ｂは、これらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを形成していてもよく、
またはＲ８ｃおよびＲ８ｄは、これらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを形成していてもよく、
またはＲ８ａとＲ８ｃは一緒になって、完全飽和二炭素橋を形成していてもよく、但し、Ｒ８ａおよびＲ８ｃは、これらが結合している環系の同じ平面上にある］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
ＸがＡであり、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃおよびＲ８ｄが、それぞれ水素であり、Ｒ３が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルで置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ７ａおよびＲ７ｂが、それぞれ独立に、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１、２または３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が水素であり、Ｒ５がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
以下の化合物、すなわち、
４−｛［６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル；
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル；
４−｛［５−シアノ−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル；
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの鏡像異性体１；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの鏡像異性体２；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−イソプロピル；
または薬学的に許容できるこれらの塩。
【請求項７】
以下の化合物、すなわち、
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの鏡像異性体１；
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの鏡像異性体２；
または薬学的に許容できるこれらの塩。
【請求項８】
少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された、治療有効量で存在する請求項１から７のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項９】
抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤をさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記抗肥満薬が、ジルロタピド、ミトラタピド、イミプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、ＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６、ロルカセリン、セチリスタット、ＰＹＹ３−３６、ナルトレキソン、オレオイル−エストロン、オビネピチド、プラムリンチド、テソフェンシン、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン３、エキセンディン４、トロダスケミン、レセルバトロール、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
治療有効量の請求項１から７のいずれかに記載の化合物の、その必要がある患者への投与を含む、糖尿病の治療方法。
【請求項１３】
治療有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与するステップを含む、代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法。
【請求項１４】
高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコース異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害および血管伸展性の障害、高アポＢリポタンパク質血症、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、ならびに過敏性腸症候群からなる群から選択される疾患、状態または障害の治療方法であって、治療有効量の請求項１から７のいずれかに記載の化合物の投与を含む方法。
【請求項１５】
代謝性または代謝関連の疾患、状態、または障害の治療方法であって、そのような治療の必要がある患者に、
（ｉ）請求項８に記載の第一の組成物、および
（ｉｉ）抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の追加の薬剤と少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤とを含む第二の組成物
を含む２種の別個の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１６】
前記第一の組成物と前記第二の組成物が同時に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第一の組成物と前記第二の組成物が逐次的に、任意の順序で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する疾患、状態、または障害を治療するための医薬の製造における、請求項１から７に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
糖尿病または前記糖尿病に付随する病的状態を治療するための医薬の調製における、請求項１から７のいずれかに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な部類の環縮合ピロリジン、それらの化合物を含有する医薬組成物、およびＧタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、異常なグルコース恒常性の結果として高濃度の血中グルコースが存在する障害である。最も一般的な形態の糖尿病は、Ｉ型糖尿病（インスリン依存型糖尿病とも呼ばれる）およびＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病とも呼ばれる）である。すべての糖尿病症例のおよそ９０％を占めるＩＩ型糖尿病は、微小血管合併症（たとえば、網膜症、神経障害、および腎障害を含める）、ならびに大血管合併症（たとえば、加速性のアテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、および卒中を含める）をもたらす深刻な進行性疾患である。
【０００３】
現在、糖尿病の治療法は存在しない。この疾患の標準的な治療は限られており、血中グルコース濃度をコントロールして、合併症を最小限に抑える、または遅らせることに集中している。現行の治療は、インスリン抵抗性（メトホルミンもしくはチアゾリジンジオン）、またはβ細胞からのインスリン放出（スルホニル尿素、エキサナチド（ｅｘａｎａｔｉｄｅ））のどちらかをターゲットとしている。β細胞の脱分極を介して働くスルホニル尿素および他の化合物は、循環グルコース濃度とは無関係にインスリン分泌を刺激するので、低血糖を促進する。認可されている薬物の１つであるエキサナチドは、高グルコースの存在下でインスリン分泌を刺激するが、経口による生物学的利用能を欠くので、注射しなければならない。ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤であるシタグリプチンは、インクレチンホルモンの血中濃度を上昇させる薬物であり、そのインクレチンホルモンは、インスリン分泌を増加させ、グルカゴン分泌を減少させることができ、あまり特徴付けられていない他の効果ももち得る。しかし、シタグリプチンおよび他のジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤は、他のホルモンおよびペプチドの組織濃度にも影響を及ぼすことがあり、このより広範な影響による長期的な結果については、十分な調査がなされていない。
【０００４】
ＩＩ型糖尿病では、筋細胞、脂肪細胞、および肝細胞がインスリンに正常に反応しない。この状態（インスリン抵抗性）は、細胞のインスリン受容体の数の減少、細胞のシグナル伝達経路の破綻、またはこの両方に起因する可能性がある。最初のうち、β細胞は、インスリン産生量を増加させてインスリン抵抗性の埋合せをする。しかし結局、β細胞は、正常なグルコース濃度（正常血糖）を維持するのに十分なインスリンを産生できなくなり、ＩＩ型糖尿病への進行を示す。
【０００５】
ＩＩ型糖尿病では、β細胞の機能不全と相まったインスリン抵抗性により空腹時高血糖が生じる。β細胞異常機能不全には２つの態様がある。すなわち、１）（非刺激性の低グルコース濃度で起こる）基礎インスリン放出の増加（これは、ＩＩ型糖尿病だけでなく、肥満のインスリン抵抗性前糖尿病段階でも認められる）、および２）高血糖負荷に反応して、インスリン放出が、すでに上昇している基礎レベルを上回って増加しないこと（この現象は、前糖尿病段階では起こらず、正常血糖のインスリン抵抗性段階からＩＩ型糖尿病へと移行する前兆となる場合もある）。後者の態様を治療する現行の療法としては、内在性の貯蔵インスリンの放出を誘発するためのＡＴＰ感受性β細胞カリウムチャネルの阻害剤、および外因性インスリンの投与が挙げられる。どちらも血中グルコース濃度の的確な正常化を実現するものでなく、また低血糖を惹起するリスクを伴う。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、グルコース依存的に機能する薬剤の発見に大きな関心が寄せられている。このように機能する生理学的なシグナル伝達経路は、腸管ペプチドのＧＬＰ−１およびＧＩＰを含めて、よく知られている。これらのホルモンは、同種のＧタンパク質共役受容体を介して信号を送って、膵臓β細胞におけるｃＡＭＰの産生を刺激する。ｃＡＭＰが増加しても、空腹時または食事前の状態の間はインスリン放出が刺激されないようである。しかし、ＡＴＰ感受性カリウムチャネル、電位感受性カリウムチャネル、および開口分泌機構を含めた、ｃＡＭＰのいくつかの生化学的ターゲットは、食後のグルコース刺激によるインスリン分泌が顕著に強化されるように調節される。したがって、同様に機能する、ＧＰＲ１１９を含めた新規なβ細胞ＧＰＣＲのアゴニスト調節因子も、ＩＩ型糖尿病患者において、内在性インスリンの放出を刺激し、グルコース濃度の正常化を促進するということになる。たとえばＧＬＰ−１が刺激された結果としてｃＡＭＰが増加すると、β細胞増殖が促進され、β細胞死が抑制され、したがって膵島質量が向上することもわかっている。β細胞質量に対するこのプラスの効果は、インスリンが十分に産生されないＩＩ型糖尿病において有益となるはずである。
【０００７】
代謝性疾患が他の生理系に悪影響を及ぼすことはよく知られており、複合的な疾患状態（たとえば、「シンドロームＸ」におけるＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、異脂肪症、肥満、または心血管疾患）、または腎疾患や末梢神経障害などの、糖尿病に引き続いて生じる続発性疾患がしばしば併発される。したがって、糖尿病状態の新しい治療に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によれば、新規な部類のＧＰＲ１１９調節因子が発見された。これらの化合物は、以下に示す式Ｉ
【０００９】
【化１】
2013505290.tif 000003
［式中、
Ｘは、ＡまたはＢ
【００１０】
【化２】
2013505290.tif 000004
であり、
Ｙは、Ｏまたは結合であり、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ３または
【００１１】
【化３】
2013505290.tif 000005
であり、
Ｒ２は、水素、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、ハロ、もしくはヒドロキシで置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、但し、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、またはヒドロキシ基は、Ｒ１中のＯに連結している炭素原子では結合しておらず、
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロ、シアノ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ５は、水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルコキシ、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはヒドロキシルで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、但し、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基またはヒドロキシル基は、ピラゾール窒素に連結している炭素には結合しておらず、
Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、それぞれ独立に、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃおよびＲ８ｄは、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、またはヒドロキシもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
またはＲ８ａおよびＲ８ｂは、これらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを形成していてもよく、
またはＲ８ｃおよびＲ８ｄは、これらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを形成していてもよく、
またはＲ８ａとＲ８ｃは一緒になって、完全飽和二炭素橋を形成していてもよく、但し、Ｒ８ａおよびＲ８ｃは、これらが結合している環系の同じ平面上にある］
または薬学的に許容できるその塩によって表すことができる。
【００１２】
式Ｉの化合物は、Ｇタンパク質共役受容体の活性を調節する。より詳細には、式Ｉの化合物は、ＧＰＲ１１９を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の治療に有用である。そのような状態の例として、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコース異常（ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｆａｓｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｇｌｕｃｏｓｅ）状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化および潰瘍性大腸炎、内皮障害、ならびに血管伸展性の障害が挙げられる。式Ｉの化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。式Ｉの化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、式Ｉの化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物を含有する医薬組成物を対象とする。そのような製剤は通常、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された式Ｉの化合物を含有する。そうした製剤はまた、少なくとも１種の追加の（本明細書に記載の）薬剤を含有してもよい。そのような薬剤の例として、（後述する）抗肥満薬および／または抗糖尿病薬が挙げられる。本発明の追加の態様は、糖尿病および本明細書に記載の関連状態を治療する医薬の調製における式Ｉの化合物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、本発明の例示的な実施形態についての以下の詳細な記述およびその中に含まれる実施例を参照することにより、より一層容易に理解することができる。
【００１６】
本発明は、当然様々に異なり得る、特定の合成的製造方法に限定されないことを理解されたい。本明細書で使用する専門用語は、特定の実施形態について述べるためのものにすぎず、限定するものではないことも理解されたい。複数形および単数形は、数を示す以外では、交換可能であるとして扱うべきである。
【００１７】
本文書内の見出しは、読者が文書に手早く目を通せるようにするために利用されるにすぎない。それらの見出しは、本発明または特許請求の範囲をいかなる形でも限定しないものと解釈すべきである。
ａ．「ハロ」または「ハロゲン」とは、塩素、フッ素、ヨウ素、または臭素原子を指す。
ｂ．「アルキル」とは、分枝状または直鎖状アルキル基、たとえば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチルなどを指す。
ｃ．「アルコキシ」とは、直鎖または分枝鎖アルコキシ基、たとえば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ペントキシなどを指す。
ｄ．「シクロアルキル」とは、完全に水素化され、単環として存在する、非芳香族の環を指す。そのような炭素環の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
ｅ．「ハロアルキル」とは、１個または複数のハロ基で置換されている直鎖または分枝鎖アルキル基、たとえば、クロロメタン、フルオロメタン、ジクロロメタン、ジフルオロメタン、ジブロモメタン、トリクロロメタン、トリフルオロメタン、クロロフルオロメタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンなどを指す。
ｆ．「フルオロアルキル」とは、１個または複数のフルオロ基で置換されている直鎖または分枝鎖アルキル基、たとえば、フルオロメタン、ジフルオロメタン、トリフルオロメタンなどを指す。
ｇ．「ハロアルコキシ」とは、１個または複数のハロ基で置換されている直鎖または分枝鎖アルコキシ基、たとえば、クロロメトキシ、フルオロメトキシ、ジクロロメトキシ、ジフルオロメトキシ、ジブロモメトキシ、トリクロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロフルオロメトキシ、１，１，１，２−テトラフルオロエトキシなどを指す。
ｈ．「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、状態、または障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状を緩和し、寛解させ、もしくは除去する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態、または障害の１つまたは複数の症状の発症を予防し、もしくは遅らせる、本発明の化合物の量を意味する。
ｉ．「患者」とは、温血動物、たとえば、モルモット、マウス、ラット、アレチネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、サル、チンパンジー、およびヒトを指す。
ｊ．「治療する」とは、化合物が、患者の疾患（もしくは状態）または疾患に関連する任意の組織損傷を軽減し、解消し、またはその進行を緩慢にし得ることを指す。
ｈ．用語「調節された」、「調節すること」、または「調節する」とは、本明細書では、別段指摘しない限り、本発明の化合物を用いた、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を指す。
ｉ．「薬学的に許容できる」とは、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分および／またはそれによる治療を受ける哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
ｊ．「塩」とは、薬学的に許容できる塩、および化合物の調製などの工業的プロセスでの使用に適する塩を指すものとする。
ｋ．「薬学的に許容できる塩」とは、化合物の実際の構造に応じて、薬学的に許容できる酸付加塩」または「薬学的に許容できる塩基付加塩」のどちらかを指すものとする。
ｌ．「薬学的に許容できる酸付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される化合物の非毒性のいかなる有機酸または無機酸付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する無機酸の実例として、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）や硫酸水素カリウムなどの酸金属塩が挙げられる。適切な塩を形成する有機酸の実例として、モノ、ジ、およびトリカルボン酸が挙げられる。そのような酸の実例は、たとえば、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ−安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ならびにメタンスルホン酸や２−ヒドロキシエタンスルホン酸などのスルホン酸である。このような塩は、水和した形態または実質的に無水の形態のどちらで存在してもよい。一般に、こうした化合物の酸付加塩は、水および種々の親水性有機溶媒に可溶性である。
ｍ．「薬学的に許容できる塩基付加塩」とは、式Ｉまたはその中間体のいずれかによって表される化合物の非毒性のいかなる有機または無機塩基付加塩にも該当するものとする。適切な塩を形成する塩基の実例として、水酸化ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、バリウムなどの、アルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物；アンモニア；ならびにメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピコリンなどの、脂肪族、脂環式、または芳香族有機アミンが挙げられる。
ｎ．「式Ｉの化合物」、「本発明の化合物」、および「化合物」は、本出願全体にわたり区別なく使用しており、同義語として扱うべきである。
「異性体」とは、以下で定義するような「立体異性体」および「幾何異性体」を意味する。
ｏ．「立体異性体」とは、１つまたは複数のキラル中心を有する化合物を意味し、各中心は、ＲまたはＳ立体配置で存在し得る。立体異性体として、すべてのジアステレオ異性体、鏡像異性体、およびエピマーの形態、ならびにそのラセミ体および混合物が挙げられる。
ｐ．「幾何異性体」とは、シス、トランス、アンチ、シン、エントゲーゲン（Ｅ）、およびツザンメン（Ｚ）の形態、ならびにその混合物として存在し得る化合物を意味する。
【００１８】
本発明の化合物は、不斉中心またはキラル中心を含んでおり、したがって、異なる立体異性体形態で存在する。別段指定しない限り、本発明の化合物のすべての立体異性体形態、ならびにラセミ混合物を含めたその混合物は、本発明の一部をなすものとする。加えて、本発明は、すべての幾何異性体および位置異性体も包含する。たとえば、本発明の化合物に二重結合または縮合環が組み込まれている場合、シスおよびトランス両方の形態ならびに混合物が本発明の範囲内に包含される。
【００１９】
ジアステレオ異性体混合物は、その物理化学的差異に基づき、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶、蒸留、昇華などの当技術分野でよく知られている方法によって、その個々のジアステレオ異性体に分離することができる。鏡像異性体は、鏡像異性体混合物を、光学活性のある適切な化合物（たとえば、キラルアルコールやＭｏｓｈｅｒの酸塩化物などのキラル助剤）との反応によってジアステレオ異性体混合物に変換し、ジアステレオ異性体を分離し、個々のジアステレオ異性体を対応する純粋な鏡像異性体に変換（たとえば、加水分解）することにより分離できる。また、本発明の化合物の一部は、アトロプ異性体（たとえば、置換ビアリール）である場合もあり、本発明の一部とみなされる。鏡像異性体は、キラルＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）カラムを使用して分離することもできる。
【００２０】
本発明の中間体および化合物は、異なる互変異性体形態で存在し得ることも考えられ、そうしたすべての形態が本発明の範囲内に包含される。用語「互変異性体」または「互変異性体形態」とは、低いエネルギー障壁で相互変換可能な、異なるエネルギーの構造異性体を指す。たとえば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られる）は、ケト−エノール異性体およびイミン−エナミン異性体などの、プロトンの移動による相互変換を伴う。プロトン互変異性体の具体的な例は、プロトンが２つの環窒素間を移動し得るイミダゾール部分である。原子価互変異性体は、結合電子の一部が再編成されることによる相互変換を伴う。一部の中間体（および／または中間体の混合物）の閉じた形態と開いた形態の平衡は、当業者に知られている、アルドースが関与する変旋光の過程を連想させる。
【００２１】
加えて、本発明の化合物は、溶媒和していない形で存在しても、水、エタノールなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和した形で存在してもよい。一般に、本発明の目的では、溶媒和した形態は、溶媒和していない形態と同等であるとみなす。化合物は、１種または複数の結晶状態、すなわち多形体で存在する場合もあり、または非晶質固体として存在する場合もある。そのようなすべての形態が特許請求の範囲に包含される。
【００２２】
本発明は、１個または複数の原子が、原子質量または質量数が自然界で通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子で置き換えられていること以外は、本明細書で列挙するものと同一である、同位体標識された本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例として、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、３６Ｃｌなどの、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体が挙げられる。
【００２３】
本発明の特定の同位体標識された化合物（たとえば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化同位体（すなわち３Ｈ）および炭素１４同位体（すなわち１４Ｃ）は、調製しやすく検出可能であるので特に好ましい。さらに、ジュウテリウム（すなわち２Ｈ）などのより重い同位体で置換すると、代謝安定性がより高いために得られる特定の治療上の利点（たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少）がもたらされる場合もあり、したがってある状況においては好ましいこともある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、１８Ｆなどの陽電子放射同位体は、基質占有率を調べる陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。同位体標識された本発明の化合物は、一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに同位体標識された試薬を用いることにより、本明細書において以下でスキームおよび／または実施例の中で開示する手順と同様の手順に従って調製することができる。
【００２４】
式Ｉの化合物のいくつかは、以下で図示するように、エーテル結合を介してピリミジン環に結合した３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン環を含んでいる。このアザビシクロ−ノナンは、幾何異性体として存在し、以下で図示するシンまたはアンチ異性体のいずれかとして存在し得る。
【００２５】
【化４】
2013505290.tif 000006
【００２６】
式Ｉを有する化合物の一実施形態では、ＸはＡであり、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ３である。
【００２７】
式Ｉを有する化合物の別の実施形態では、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃおよびＲ８ｄは、それぞれ水素であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルで置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。
【００２８】
式Ｉを有する化合物の別の実施形態では、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、それぞれ独立に、水素、フルオロ、またはＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【００２９】
式Ｉを有する化合物の別の実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ５はＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【００３０】
合成
本発明の化合物は、化学分野でよく知られている方法と類似した方法を包含する合成経路によって、特に本明細書に収められている記述に照らして、合成することができる。出発材料は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）などの市販品供給元から一般に入手可能であり、または当業者に知られている方法を使用して容易に調製される（たとえば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク（１９６７〜１９９９年版）、またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版、ベルリン、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編（増刊を含める）（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースからも入手可能）に一般に記載されている方法によって調製される）。
【００３１】
例示する目的で、以下で図示する反応スキームにより、本発明の化合物ならびに重要中間体を合成する潜在的経路を示す。個々の反応ステップのより詳細な説明については、以下の実施例の部を参照されたい。当業者なら、本発明の化合物の合成に他の合成経路を使用してもよいことがわかるであろう。詳細な出発材料および試薬をスキームの中で示し、以下で論じるが、他の出発材料および試薬で容易に置き換えて、様々な誘導体および／または反応条件を準備することができる。加えて、以下で述べる方法によって調製される化合物の多くは、当業者によく知られている従来の化学を使用し、この開示に照らしてさらに改変することができる。
【００３２】
式Ｉの化合物は、当技術分野で同様に知られているエーテル生成の方法を使用して調製することができる。１）Ｈｕｇｈｅｓ，Ｄ．Ｌ．、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  １９９２、４２  ３３５−６５６、米国ニュージャージー州ホーボーケン、２）Ｔｉｋａｄ，Ａ．、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｓ．、Ａｋｓｓｉｒａ，Ｍ．、Ｌｅｇｅｒ，Ｊ．−Ｍ．ｌ、Ｊａｒｒｙ，Ｃ．、Ｇｕｉｌｌａｕｍｅｔ，Ｇ．、Ｓｙｎｌｅｔｔ  ２００６、１２、１９３８〜４２、および３）Ｌｏｋｓｈａ，Ｙ．Ｍ．、Ｇｌｏｂｉｓｃｈ，Ｄ．、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，Ｅ．Ｂ．、Ｌａ  Ｃｏｌｌａ，Ｐ．、Ｃｏｌｌｕ，Ｇ．、Ｌｏｄｄｏ，Ｒ．、Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．２００８、４５、１１６１〜６などの、そうした反応についてより詳細に記載している教本に目を向けられたい。
【００３３】
すぐ下のスキームＩは、式Ｉの化合物を組み立てるための代替方法を例示するものである。分子の中心部分は、置換されていてもよいピリミジン環である。式Ｉの化合物は、以下に示すように、ピリミジンとエーテル結合およびアミノ結合の両方を形成することにより生成される。この反応シーケンスをどの順序で実施するかは重要でないが、但し、Ｒ５がシアノまたはニトロである場合は例外である。そうした場合では、ステップＩ−ＢおよびＩ−Ｃを使用して式Ｉの化合物を組み立てる。
【００３４】
【化５】
2013505290.tif 000007
【００３５】
反応スキームＩの出発材料は、Ｒ２およびＲ５が通常、本明細書に記載する通り、最終生成物において所望されるものと同じ置換基によって表される、構造化合物Ｉ−１のジヒドキシ−ピリミジンである。このようなピリミジンの生成方法は、当技術分野で知られている。
【００３６】
ステップＩ−Ａの塩素化反応は、当技術分野で知られているとおりに実施する。構造Ｉ−１の化合物を、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの添加剤を加えまたは加えずに、過剰に使用されるか、またはトルエン、ベンゼン、キシレンなどの溶媒中で使用される、ＰＯＣｌ３（オキシ塩化リン）などの塩素化試薬と反応させる（Ｍａｔｕｌｅｎｋｏ，Ｍ．Ａ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７、１５、１５８６〜１６０５）。この反応は、条件の選択に応じて、室温（約２３℃）〜約１４０℃の範囲の温度で実施することができる。代替塩素化試薬は、ＰＣｌ３（三塩化リン）、ＰＯＣｌ３／ＰＣｌ５（五塩化リン）、塩化チオニル、塩化オキサリル、またはホスゲンからなり、構造Ｉ−２のジクロロピリミジンを与えることができる。場合によっては、構造Ｉ−２のジクロロピリミジンは、市販品供給元から入手することもできる。任意選択により、構造Ｉ−２のジクロロピリミジンを反応液から単離および回収し、さらに当技術分野で知られているとおりに精製してもよい。別法として、以下で記載するステップＩ−Ｂにおいて未精製材料を使用してもよい。
【００３７】
スキームＩのステップＩ−Ｂでは、構造Ｉ−３のテトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールと構造Ｉ−２のジクロロピリミジン間にアミノ結合を形成する。構造Ｉ−３の縮合ピロリジンにおいて、Ｒ６、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃおよびＲ８ｄは通常、本明細書に記載するとおり、最終生成物において所望されるものと同じ置換基によって表される。このようなテトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体は、文献で知られており、または当業者によく知られている様々な方法によって好都合に調製することができる（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ、２００２、５６、２５７〜２６４）。アミノ結合は、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの極性プロトン性溶媒中にて、当量の構造Ｉ−２とＩ−３の化合物を、どの溶媒を使用するかに応じて約０〜１２０℃の範囲の温度で０．５〜２４時間反応させることにより形成する。この反応に利用する典型的な条件は、１０８℃で１時間加熱を行う溶媒としてのイソプロパノールの使用である。別法として、トリエチルアミンやジエチルイソプロピルアミンなどのアミン塩基、または炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムなどの無機塩基をこの反応に加えてもよい。上記アミンまたは無機塩基の１種を使用する場合では、溶媒をアセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、１，４−ジオキサンなどの極性非プロトン性溶媒（約０〜１００℃で０．５〜２４時間）に変更することができる。この反応に利用する典型的な条件として、アセトニトリル中にて室温で３時間のジエチルイソプロピルアミンの使用が挙げられる。また、水、メタノール、エタノール、プロパノールなどの単独または組合せの極性プロトン性溶媒中での塩酸の使用も、約０〜１１０℃の温度でのこの変換に使用することができる。典型的な条件は、エタノール中にて７８℃で水を使用するものである。構造Ｉ−５の中間体は、反応液から単離および回収し、当技術分野で知られているとおりにさらに精製することができる。別法として、以下で記載するステップＩ−Ｃにおいて未精製材料を使用してもよい。
【００３８】
スキームＩのステップＩ−Ｃでは、構造Ｉ−５の中間体と構造Ｉ−４のアルコール間にエーテル結合を形成して、式Ｉの化合物を生成する。構造Ｉ−４のアルコールにおいて、Ｘは、Ａ、ＢまたはＣであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、所望の最終生成物に見られるものと同じ置換基によって表される。Ｒ１によって表される置換基は、式Ｉの核を生成した後に操作することができる。そのような変形形態は、当業者によく知られており、本発明の一部とみなすべきである。ステップＩ−Ｃでは、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド（「ＤＭＳＯ」）などの溶媒中にて、水素化ナトリウム；ナトリウムおよびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドなどの塩基の存在下、当量の反応物を反応させる。この変換の典型的な条件として、１，４−ジオキサン中にて約１０５℃で１時間のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドの使用が挙げられる。
【００３９】
反応が完了した後、所望の式Ｉの化合物は、当技術分野で知られているとおりに回収し、単離することができる。化合物は、当技術分野で知られているように、蒸発、抽出などによって回収することができる。化合物は、場合により、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、または当技術分野で知られている他の技術によって精製してもよい。
【００４０】
上で反応スキームＩに示した代替合成では、構造Ｉ−２のジクロロ−ピリミジンを構造Ｉ−４のアルコールと最初に反応させて、構造Ｉ−６によって示される中間体を生成する。ステップＩ−Ｃでのように、構造Ｉ−４は、所望の最終生成物に応じて、ＸがＡ、ＢまたはＣであるアルコールとなる。これらのヘテロ環において、Ｒ１およびＲ４は通常、最終生成物において所望されるものと同じ置換基で表されることとなり、またはＲ１は、式Ｉの核を生成した後に操作することができる。
【００４１】
当量の構造Ｉ−２と構造Ｉ−４の化合物を極性非プロトン性溶媒および塩基の存在下で反応させて、ステップＩ−Ｄに示す構造Ｉ−６の中間体を生成する。適切な系として、０〜１４０℃の温度で、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ＤＭＳＯなどの溶媒中の、水素化ナトリウム、ナトリウムおよびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウム、カリウム、およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；ナトリウム、カリウム、およびリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドなどの塩基が挙げられる。この変換の典型的な条件として、ＴＨＦ中にて約０℃〜室温で１４時間のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの使用が挙げられる。構造Ｉ−６の中間体は、反応液から単離および回収し、当技術分野で知られているとおりにさらに精製することができる。別法として、以下で記載するステップＩ−Ｅにおいて未精製材料を使用してもよい。
【００４２】
次いで、構造Ｉ−６の中間体を、上で予め記載した縮合テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体Ｉ−３と反応させることにより、式Ｉの化合物を生成することができる。通常、塩基の存在下で、当量の構造Ｉ−３の縮合ピロリジンを式Ｉ−６のクロロ中間体と反応させる。適切な塩基は、ＤＭＦ、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、もしくはＤＭＳＯ、またはこれらの混合物などの溶媒中の、水素化ナトリウム、ナトリウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ナトリウム、カリウム、またはリチウムビス（トリメチルシリル）アミド；およびナトリウム、カリウム、またはリチウムｔｅｒｔ−アミルオキシドとすることができる。これらの反応は、使用する溶媒に応じて、約−１０〜１５０℃の範囲の温度で実施することができる。通常、反応は、不活性雰囲気中にて約１５分〜２４時間の範囲の時間をかけて進行させる。適切な条件として、１０５℃で１時間、１，４−ジオキサン中の、ナトリウムビス（ジメチルシリル）アミドが挙げられる。
【００４３】
別法として、この反応は、構造Ｉ−６の中間体と構造Ｉ−３のテトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール誘導体を、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの極性プロトン性溶媒中で０．５〜２４時間加熱することにより実施してもよい。この変換の典型的な条件は、イソプロパノール中にて１０８℃で２時間加熱するものである。
【００４４】
この反応は、式Ｉの化合物中に見られる重要な置換アミン結合の形成に遷移金属触媒を使用して実施することもできる。遷移金属触媒は、限定はしないが、トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）、塩化パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＣｌ２）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、（トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ヨウ化銅（Ｉ）（ＣｕＩ）、酢酸銅（ＩＩ）（Ｃｕ（ＯＡｃ）２）、および銅（ＩＩ）トリフルオロメタン（Ｃｕ（ＯＴｆ）２）からなるものとすることができる。通常、これらの反応では塩基を利用する。パラジウム触媒と共に使用するのに適する塩基は、１，４−ジオキサン、ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、トルエンなどの適切な溶媒中のナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−アミルオキシド、またはＫ３ＰＯ４とすることができる。銅触媒の使用について、適切な塩基は、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ジメチルアセトアミドなどの適切な溶媒中の炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウムなどのアルカリ塩基からなるものとすることができる。
【００４５】
通常、配位子を加えると、アミン生成反応を促進することができる。パラジウムを触媒とする反応のための配位子として、限定はしないが、９，９−ジメチル−４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）キサンテン（キサントホス）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ＤＰＰＦ）、２，８，９−トリイソブチル−２，５，８，９−テトラアザ−１−ホスファビシクロ［３．３．３］ウンデカン（Ｐ［Ｎ（ｉ−Ｂｕ）ＣＨ２ＣＨ３］３Ｎ）、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（ｔｅｒｔ−Ｂｕ３Ｐ）、（ビフェニル−２−イル）ビス（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフィン（ＪｏｈｎＰｈｏｓ）、Ｐｄ−ＰＥＰＰＳＩ（商標）−ＳＩＰｒ：（１，３−ビス（２，６−ジイソプロピルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン）（３−クロロピリジル）パラジウム（ＩＩ）ジクロリドを挙げることができる。銅を触媒とする反応に適する配位子として、限定はしないが、Ｌ−プロリン、Ｎ−メチルグリシン、ジエチルサリチルアミドを挙げることができる。式Ｉの化合物の生成に適する条件は、トルエン中にてＰｄ２（ｄｂａ）３をナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドと共に１２０℃で１２時間使用するものである。
【００４６】
反応を完了した後、所望の式Ｉの化合物は、当技術分野で知られているとおりに回収および単離することができる。化合物は、当技術分野で知られているような蒸発、抽出などによって回収することができる。化合物は、クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、または先行技術で知られている他の技術によって、場合により精製してもよい。
【００４７】
また、当業者には容易に理解されるように、Ｒ１によって表される置換基の多くは、式Ｉの核を生成した後に操作することができる。そのような変形形態は、当業者によく知られており、本発明の一部とみなすべきである。
【００４８】
【化６】
2013505290.tif 000008
【００４９】
スキームＩＩは、本発明の式ＩにおいてＸ＝Ｂに対応する構造ＩＩ−１４およびＩＩ−１５のアルコールの生成方法について記載したものである。Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは通常、本明細書に記載するとおり、最終生成物で所望されるものと同じ置換基によって表される。構造ＩＩ−７の化合物からの構造ＩＩ−８の化合物の合成は、当技術分野で知られている。それらの変換（ステップＩＩ−Ａ）は、文献で教示されており、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８１、４６、３１９６〜３２０４、ＪＰ２００９０９６７４４、ＷＣ０３５３０３、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００８、１３０、５６５４〜５６５５、およびＯｒｇ．Ｌｅｔｔ．、２００６、３、４３０〜４３６において例示されている。スキームＩＩのステップＩＩ−Ｂでは、メタノールのようなアルコール系溶媒中にて約０℃〜室温の範囲の温度で水素化ホウ素ナトリウムを使用するなどの、当技術分野で知られている標準のプロトコールを使用して、ケトンのカルボニル基を還元する。ステップＩＩ−Ｄ、すなわち、構造ＩＩ−１０からのベンジル保護基を除去してＩＩ−１１を得るステップは、水素化分解によって実現することができる。この反応の典型的な条件として、水素、および５〜２０％パラジウム担持炭素や１０〜２０％水酸化パラジウムなどのパラジウム触媒の利用が挙げられる。この反応の典型的な溶媒は、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、または酢酸エチルである。
【００５０】
最終生成物中にピリミジン置換基が所望される場合、エタノールやメタノールなどのプロトン性溶媒中、または１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはジメチルスルホキシドなどの極性非プロトン性溶媒中にて、炭酸セシウムやＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下、化合物ＩＩ−１１を、構造ＩＩ−１２として示す適切に置換された２−クロロピリミジンに付加して、構造ＩＩ−１４を生成することができる。こうした反応は、およそ室温〜約１１０℃の範囲の温度で実施することができる。別法として、溶媒を使用せずＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在下、または化合物ＩＩ−１１を過剰に使用する場合では塩基または溶媒を使用せずに、構造ＩＩ−１１と構造ＩＩ−１２の化合物を一緒に加熱することもできる。
【００５１】
最終生成物中にカルバメート置換基が所望される場合、ジクロロメタンまたはクロロホルム中にて、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピリジンなどの塩基の存在下、等価な量の構造ＩＩ−１３のアルキルハロホルメートを、構造ＩＩ−１１の化合物と反応させる。別法として、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフランなどの溶媒中にて、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、トリエチルアミンなどのアミン塩基の存在下、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＯＣ無水物）や二炭酸ジイソプロピルなどの二炭酸ジアルキルを使用して、構造ＩＩ−１１の化合物から構造ＩＩ−１５の化合物を生成することもできる。加えて、Ｒ３＝１−メチル−シクロプロピルまたは１−ジフルオロメチル−シクロプロピルであるとき、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジメトキシエタン、テトラヒドロフランのような溶媒中にて、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどのような塩基の存在下、約０℃〜周囲温度程度の範囲の温度でカーボネートＩＩ−１３’（ＷＯ０９１０５７１７およびＷＯ０９００５６７７を参照されたい）を使用して、カルバメート官能基を導入することができる。
【００５２】
最終の構造ＩＩ−１４またはＩＩ−１５は、当技術分野で知られているとおりに単離し、精製することができる。所望なら、この最終構造を分離ステップにかけて所望のシンまたはアンチ異性体を得ることもできる。
【００５３】
別法として、ビス−アミノールエーテル誘導体ＩＩ−９とケトンＩＩ−７間の二重マンニッヒ反応を介して、その後、ケトンカルボニルを還元し、官能基を操作してＩＩ−１０型の構造を得ることにより、Ｒ７ａおよびＲ７ｂの少なくとも一方が水素である式ＩＩ−１０の非対称構造に到達することができる。特定の例では、Ｒ９ａは、構造ＩＩ−１０において示すベンジル基よりもα−メチル−ベンジル基とすることが好ましいことが認識される。適切なＲ９ｂ基としては、メチルまたはエチルが挙げられる。式ＩＩ−８の構造を得るための二重マンニッヒ反応の使用は、化学文献に発表されており（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００５  ６１、５８７６〜５８８８；Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００６  ８、３３９９〜３４０１）、当業者によって実現することができる。同様に、容易に入手できる出発材料から出発し、シス−またはトランス−ジフルオロ−２，６シクロヘキサノンの生成に関する化学文献で知られているプロトコール（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９７０  ２６、２４４７）を使用して、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが両方ともフルオロである式ＩＩ−１０の構造に到達することもできる。
【００５４】
スキームＩＩＩでは、式ＩにおいてＸ＝Ａに対応する式ＩＩＩ−１９の化合物の調製について記載する。
【００５５】
【化７】
2013505290.tif 000009
【００５６】
スキームＩＩＩに示すように、Ｒ３が本明細書に記載のとおりであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂの少なくとも一方が水素である式ＩＩＩ−１９の化合物は、市販されているＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリドン（Ａｌｄｒｉｃｈ）から出発して、または４−ピペリドンから、その後にカルバメート生成して調製することができる。式ＩＩＩ−１９の化合物は、ステップＩＩＩ−Ａによって示すように、式ＩＩＩ−１６またはＩＩＩ−１８の化合物のケトンカルボニルの還元による還元によって調製する。このための適切な条件として、エタノールなどのアルコール系溶媒とＴＨＦの混合物中での水素化ホウ素ナトリウムの使用が挙げられる。Ｒ７ａおよびＲ７ｂの少なくとも一方がフルオロである式ＩＩＩ−１９の化合物は、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００３  ６８、３２３２およびＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２  ６７、８６１０に記載されているように、ケトンをエノール化してシリルエノールエーテルとしてトラップし、適切な求電子性フルオロ供給源と反応させることにより調製することができる。Ｒ７ａおよびＲ７ｂの少なくとも一方がアルキル基である式ＩＩＩ−１８の化合物は、ハロゲン化アルキルやアルキルスルホネートなどの適切な求電子性アルキル基を使用して同様に調製することができる。加えて、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが両方ともフルオロなどのハロである式ＩＩＩ−１９の構造には、容易に入手できるＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリドンから、化学文献で知られている同様のプロトコール（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９７０、２６、２４４７）を使用して到達することができる。本発明の式ＩにおいてＸがＡであるとき、そのようなピペリジン化合物は、市販されているか、文献で知られているか、または市販（Ａｌｄｒｉｃｈ）のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリドンもしくは適切にＮ保護された他のピペリドンから調製できることもまた認識される。
【００５７】
ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである）は、合成の多くの段階で、塩酸やトリフルオロ酢酸などの酸を使用して除去することができ、その結果生じる遊離アミンは、スキームＩＩのステップＩＩ−Ｅ’およびＩＩ−Ｅでそれぞれ記載した一般的な条件を使用して、別のカルバメートまたはピリミジンに変換できることが認識される。式ＩＩＩ−１９の化合物の調製は、ＷＯ２００９０１４９１０にも記載されている。
【００５８】
スキームＩＶでは、式ＩＶ−２３の化合物の合成について記載する。
【００５９】
【化８】
2013505290.tif 000010
【００６０】
スキームＩＶの式ＩＶ−２３のテトラヒドロピロロ−ピラゾールは、式ＩＶ−２１の化合物から、適切な式ＩＶ−２２のヒドラジンとの付加／脱水環化（ステップＩＶ−Ｂ）に続いて、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基を脱保護する（ステップＩＶ−Ｃ）ことにより調製することができる。式ＩＶ−２１の化合物は、スキームＩＶの式ＩＶ−２０の化合物から、ホルミル化反応（ステップＩＶ−Ａ）によって調製することができる。スキームＩＶのステップＩＶ−Ａの適切な条件として、化合物ＩＶ−２０をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（ＤＭＦＤＭＡ）の存在下で加熱することが挙げられる。スキームＩＶの式ＩＶ−２０の化合物は、市販されており（Ａｌｄｒｉｃｈ）、文献で知られており、または当業者により容易に調製することができる。
【００６１】
Ｒ８ａおよびＲ８ｂまたはＲ８ｃおよびＲ８ｄが、これらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを形成している例は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００４  ６９、２７５５〜２７５９およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９６２  ２７、２９０１〜５において見られる。Ｒ８ａとＲ８ｃは一緒になって、完全飽和二炭素橋を形成していてもよく、Ｒ８ａおよびＲ８ｃが、これらが結合している環系の同じ平面上にある例としては、（１Ｒ，４Ｓ）−２−オキソ−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｂｒｏｔｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｃｏ．から市販されている、ＣＡＳ番号１６５１３−９８−２）が挙げられる。この化合物のラセミ体も、文献で知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００３  ４６、９２１〜９２４；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９４  ５９、１７７１〜８、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００８  １８、４６５１〜４６５４）。
【００６２】
当業者には容易にわかるように、中間体の遠位官能基（たとえば、第一級または第二級アミン）を保護する必要がある場合もある。そのような保護の必要性は、その遠位官能基の性質および調製方法の条件に応じて異なってくる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）として、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。同様に、「ヒドロキシ保護基」とは、ヒドロキシ官能基を封鎖または保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）として、たとえば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、ｐａｒａ−メトキシベンジル、トリチルなどが挙げられる。このような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基およびその使用に関する総説については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９９１を参照されたい。
【００６３】
上述のとおり、本発明の化合物の一部は、薬学的に許容できるカチオンと塩を形成することができる。本発明の化合物の一部は、薬学的に許容できるアニオンと塩を形成することができる。そのような塩はすべて、本発明の範囲内にあり、従来の方法によって、たとえば、適宜、水性、非水性、または部分的に水性の媒質中にて、酸性実体と塩基性実体とを、通常は化学量論比で合わせるなどして調製することができる。塩は、適宜、濾過、非溶媒で沈殿させてからの濾過、溶媒の蒸発、または水溶液の場合では凍結乾燥によって回収する。化合物は、エタノール、ヘキサン、水／エタノール混合物などの適切な（１種または複数の）溶媒に溶解させるなどの、当技術分野で知られている手順に従って、結晶の形で得る。
【００６４】
本発明は、原子質量または質量数が自然界で通常見られる原子質量または質量数と異なっている原子で１個または複数の原子が置き換えられていること以外は本明細書で列挙したものと同一である、同位体標識された本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例として、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、３６Ｃｌなどの、それぞれ、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、および塩素の同位体が挙げられる。
【００６５】
特定の同位体標識された本発明の化合物（たとえば、３Ｈおよび１４Ｃで標識された化合物）は、化合物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム、１４Ｃ、３５Ｓ、および１２５Ｉが組み込まれている特定の同位体標識されたリガンドは、放射リガンド結合アッセイにおいて有用となり得るはずである。トリチウム化（すなわち３Ｈ）およびカーボン１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、調製しやすく、検出性がよいので、特に好ましい。さらに、ジュウテリウム（すなわち２Ｈ）などのより重い同位体での置換は、代謝安定性がより高いために生じる特定の治療上の優位性（たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少）をもたらす場合もあり、したがって、状況によっては好ましいこともある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、１８Ｆなどの陽電子放射同位体は、受容体占有率を調べるための陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識された化合物は、一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに同位体標識された試薬を用いて、スキームおよび／または後述の実施例で開示する手順と類似した手順に従って調製することができる。
【００６６】
特定の本発明の化合物は、２種以上の結晶形で存在する場合もある（一般に「多形体」と呼ばれる）。多形体は、種々の条件下での結晶化によって、たとえば、結晶化の際に、異なる再結晶用溶媒もしくは溶媒混合物、異なる温度での結晶化、および／または超急速冷却から超緩速冷却の範囲の種々の冷却モードを使用して、調製することができる。多形体は、本発明の化合物を加熱または溶融した後、徐々にまたは急速に冷却して得ることもできる。多形体の存在は、固体プローブＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折、または他のそのような技術によって判定することができる。
【００６７】
医学的使用
本発明の化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性を調節する。そのため、前記化合物は、糖尿病などの、ＧＰＲ１１９の活性が疾患の病理または症状の一因となる疾患の予防および治療に有用である。したがって、本発明の別の態様は、個体において代謝性疾患および／または代謝関連障害を治療する方法であって、そのような治療が必要である個体に、治療有効量の本発明の化合物、前記化合物の塩、またはそのような化合物を含有する医薬組成物を投与することを含む方法を包含する。代謝性疾患および代謝関連障害は、限定はしないが、高脂血症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、特発性Ｉ型糖尿病（Ｉｂ型）、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、早発性２型糖尿病（ＥＯＤ）、若年性非定型糖尿病（ＹＯＡＤ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、栄養不良関連糖尿病、妊娠糖尿病、冠動脈心疾患、虚血発作、血管形成術後の再狭窄、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋梗塞（たとえば、壊死およびアポトーシス）、異脂肪症、食後脂肪血症、耐糖能障害（ＩＧＴ）状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、代謝性アシドーシス、ケトーシス、関節炎、肥満、骨粗鬆症、高血圧、うっ血性心不全、左室肥大、末梢動脈疾患、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、慢性腎不全、糖尿病性ニューロパシー、メタボリック症候群、シンドロームＸ、月経前症候群、冠動脈心疾患、狭心症、血栓症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、卒中、血管再狭窄、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝障害、耐糖能障害状態、空腹時血漿グルコースの異常状態、肥満、勃起機能不全、皮膚および結合組織の障害、足の潰瘍化、内皮障害、高アポＢリポタンパク質血症（ｈｙｐｅｒ  ａｐｏ  Ｂ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）、ならびに血管伸展性の障害から選択される。さらに、本発明の化合物は、アルツハイマー病、統合失調症、認知障害などの神経障害の治療に使用することもできる。本発明の化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群などの胃腸疾患においても有益となる。上述のように、本発明の化合物は、肥満患者、特に糖尿病に罹患している肥満患者において体重減少を刺激するのにも使用することができる。
【００６８】
前述の内容によれば、本発明はさらに、その必要がある対象において、上述の疾患または障害のいずれかの症状を予防し、または寛解させる方法であって、治療有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明の別の態様は、糖尿病およびその関連合併症を治療する医薬の調製を包含する。
【００６９】
上述の治療特性を示すためには、化合物は、Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の活性化を調節するのに十分な量で投与する必要がある。この量は、治療する特定の疾患／状態、患者の疾患／状態の重症度、患者、投与する特定の化合物、投与経路、および患者内の他の基礎病態の存在などに応じて様々となり得る。全身に投与するとき、化合物は通常、上で挙げた疾患または状態のいずれに対しても、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲でその効果を示す。毎日の連続投与が望ましい場合もあり、上で概略を述べた状態に応じて異なってくる。
【００７０】
本発明の化合物は、様々な経路によって投与することができる。本発明の化合物は、経口投与することができる。本発明の化合物は、非経口（すなわち、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、またはくも膜下腔内）、直腸、または局所投与することもできる。
【００７１】
共投与
本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患、状態、および／または障害を治療するための他の薬剤と共に使用することもできる。したがって、本発明の化合物を他の薬剤と組み合わせて投与することを含む治療方法も提供する。本発明の化合物と組み合わせて使用することのできる適切な薬剤として、抗肥満薬（食欲抑制薬を含める）、抗糖尿病薬、抗高血糖薬（ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔ）、高脂血症治療薬、および降圧薬が挙げられる。
【００７２】
適切な抗糖尿病薬として、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ２（ＡＣＣ−２）阻害剤、ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ−１）阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）１０阻害剤、スルホニル尿素（たとえば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース（ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド（ｇｌｉｐｅｎｔｉｄｅ）、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、およびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（たとえば、テンダミスタット（ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔ）、トレスタチン、およびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（たとえば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（たとえば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシンＱ、およびサルボスタチン（ｓａｌｂｏｓｔａｔｉｎ））、ＰＰＡＲγ作動薬（たとえば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン（ｉｓａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、およびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γ作動薬（たとえば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７、およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（たとえば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬（たとえば、エキセンディン３およびエキセンディン４）、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（たとえば、トロダスケミン（ｔｒｏｄｕｓｑｕｅｍｉｎｅ）、ヒルチオサール抽出物（ｈｙｒｔｉｏｓａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ）、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）で開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（たとえば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）、インスリン分泌刺激物質、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２拮抗薬、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、インスリン、インスリン模倣物、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ＶＰＡＣ２受容体作動薬、およびＳＧＬＴ２阻害剤（ナトリウム依存性グルコース輸送体阻害剤、たとえば、ダパグリフロジンなど）が挙げられる。好ましい抗糖尿病薬は、メトホルミンおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（たとえば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、およびサクサグリプチン）である。
【００７３】
適切な抗肥満薬として、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４作動薬、コレシストキニンＡ（ＣＣＫ−Ａ）作動薬、モノアミン再取込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経様作動薬、β３アドレナリン作動薬、ドーパミン作動薬（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃ作動薬、メラニン濃縮ホルモン拮抗薬、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチン作動薬、ガラニン拮抗薬、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制薬（ボンベシン作動薬など）、ニューロペプチドＹ拮抗薬（たとえば、ＮＰＹ  Ｙ５拮抗薬、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含める）、甲状腺模倣薬（ｔｈｙｒｏｍｉｍｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、糖質コルチコイド作動薬または拮抗薬、オレキシン拮抗薬、グルカゴン様ペプチド１作動薬、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク州タリータウン、およびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、オハイオ州シンシナティーから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリン拮抗薬、ヒスタミン３拮抗薬または逆作動薬、ニューロメジンＵ作動薬、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）などの消化管選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイド拮抗薬、オレキシン拮抗薬などが挙げられる。
【００７４】
本発明の組合せ態様で使用するのに好ましい抗肥満薬として、消化管選択的ＭＴＰ阻害剤（たとえば、ジルロタピド（ｄｉｒｌｏｔａｐｉｄｅ）、ミトラタピド（ｍｉｔｒａｔａｐｉｄｅ）およびイミプリタピド（ｉｍｐｌｉｔａｐｉｄｅ）、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａ作動薬（たとえば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００Ａ１号に記載のＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃ作動薬（たとえば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４作動薬（たとえば、ＵＳ６，８１８，６５８に記載の化合物）、リパーゼ阻害剤（たとえば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書では、「ＰＹＹ３−３６」は、ベグ化ＰＹＹ３−３６（たとえば、米国公開２００６／０１７８５０１に記載のもの）などの類似体を包含する）、オピオイド拮抗薬（たとえば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）、およびシブトラミンが挙げられる。本発明の化合物および併用療法は、運動および賢明な食生活と合わせて投与することが好ましい。
【００７５】
上で引用した米国特許および公開はすべて、参照により本明細書に援用する。
【００７６】
医薬製剤
本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容できる賦形剤と混和された治療有効量の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、経口、局所、または非経口の使用に適合させた形態の組成物を包含し、上述のような糖尿病および関連状態の治療に使用することができる。
【００７７】
医薬組成物は、皮下、吸入、経口、局所、非経口などの、当技術分野で知られている任意の経路による投与用に製剤することができる。医薬組成物は、限定はしないが、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、ロゼンジ、または経口もしくは滅菌非経口溶液もしくは懸濁液などの液体製剤を含めて、当技術分野で知られているどんな形態でもよい。
【００７８】
経口投与用の錠剤およびカプセル剤は、単位用量体裁にすることができ、従来の賦形剤、たとえば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシンなどの充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカなどの打錠滑沢剤；バレイショデンプンなどの崩壊剤；またはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿潤剤を含有してよい。錠剤は、標準の薬務でよく知られている方法に従ってコーティングしてもよい。
【００７９】
経口液体製剤は、たとえば、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、もしくはエリキシルの形にすることもでき、または使用前に水もしくは適切な他のビヒクルで再形成する乾燥製品としての体裁にすることもできる。このような液体製剤は、従来の添加剤、たとえば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加食用脂などの懸濁化剤；レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、アカシアなどの乳化剤；扁桃油、グリセリンのような油性エステル、プロピレングリコール、エチルアルコールなどの非水性ビヒクル（食用油を含めてもよい）；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、ソルビン酸などの保存剤、および所望なら、従来の着香剤または着色剤を含有してよい。
【００８０】
非経口投与では、化合物および無菌ビヒクル（水が好ましい）を利用して、流動性の単位剤形を調製する。化合物は、使用するビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクルまたは適切な他の溶媒に懸濁または溶解させることができる。溶液の調製では、化合物を、注射用の水に溶解させ、濾過滅菌した後、適切なバイアルまたはアンプルに充填し、密封することができる。有利にするため、局所麻酔剤、保存剤、緩衝剤などの薬品をビヒクルに溶解させることができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後凍結させ、真空中で水を除去することができる。次いで、凍結乾燥した乾燥粉末をバイアルに密閉し、使用前に液体を再形成するための付属のバイアルの注射用水を支給することができる。非経口懸濁液は、化合物をビヒクルに溶解させる代わりに懸濁させること、および滅菌が濾過によって実現できないことを除き、実質上同じようにして調製する。無菌ビヒクルに懸濁させる前にエチレンオキシドにさらすことにより、化合物を滅菌することができる。組成物に界面活性剤または湿潤剤を組み込んで、化合物の均一な分布を促進すると有利である。
【００８１】
組成物は、投与方法に応じて、たとえば約０．１重量％〜約９９重量％の活性材料を含有してよい。組成物が投与量単位を構成する場合、各単位は、たとえば、約０．１〜９００ｍｇ、より典型的な場合では１ｍｇ〜２５０ｍｇの活性成分を含有することになる。
【００８２】
本発明の化合物は、他の抗糖尿病薬による類推によって、ヒト医学または獣医学で使用するための好都合な任意の方法における投与用に製剤することができる。そのような方法は、当技術分野で知られており、上で概略を述べている。そうした製剤の調製に関するより詳細な論述については、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版に目を向けられたい。
【００８３】
以下の実施例によって、本発明の実施形態を例示する。しかし、本発明の実施形態は、実施例の詳細な項目を限定せず、このためそれらの他の変形形態が、当業者には知るところとなり、またはこの開示に照らして明白となることを理解されたい。
【００８４】
（実施例）
別段指定しない限り、出発材料は一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．（ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（ニューハンプシャー州Ｗｉｎｄｈａｍ）、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（ニュージャージー州フェアローン）、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｔｄ．（英国コーンウォール）、Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（ニュージャージー州プリンストン）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（英国ロンドン）、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｂａｋｅｒ（ニュージャージー州フィリップスバーグ）、ＥＭＤ（ニュージャージー州Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ）などの市販品供給元から入手可能である。
【００８５】
一般実験手順
プロトン分析について、ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ（商標）４００（ＤＧ４００−５プローブ）または５００（ＤＧ５００−５プローブ）（共にＶａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルトから入手可能）を用い、室温にてそれぞれ４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで記録した。化学シフトは、内部標準としての残存溶媒を基準とした百万分率（δ）で表示する。ピーク形状は、次のとおりに表記する。すなわち、ｓ：一重線、ｄ：二重線、ｄｄ：二重二重線、ｔ：三重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線、ｂｓ：ブロード一重線、２ｓ：２本の一重線。
【００８６】
大気圧化学イオン化質量スペクトル（ＡＰＣＩ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）分光計（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ、キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォードから入手可能）を用い、０．３ｍＬ／分の流量で、５０：５０の水／アセトニトリル溶離液系を利用して取得した。エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル（ＥＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ（商標）（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱまたはＺＭＤ機器（キャリヤーガス：窒素）（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州ミルフォード）の液体クロマトグラフィー質量分析計を用い、各溶媒に０．０１％のギ酸を加えた９５：５〜０：１００の勾配の水アセトニトリル溶液を利用して取得した。これらの機器には、３．７５分間１ｍＬ／分または１．９５分間２ｍＬ／分の流量で、Ｖａｒｉａｎ  Ｐｏｌａｒｉｓ  ５  Ｃ１８−Ａ２０×２．０ｍｍカラム（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州パロアルト）を用いた。
【００８７】
カラムクロマトグラフィーは、Ｆｌａｓｈ  ４０  Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）カラム（ＩＳＣ，Ｉｎｃ．、コネティカット州シェルトン）またはＢｉｏｔａｇｅ（商標）ＳＮＡＰカートリッジＫＰｓｉｌまたはＲｅｄｉｓｅｐ  Ｒｆシリカ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  Ｉｎｃより）のいずれかを用い、シリカゲルを使用して窒素圧下で実施した。分取ＨＰＬＣは、フォトダイオードアレイ（Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６）および質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ）検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ  ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステムを使用して実施した。分析ＨＰＬＣ作業は、フォトダイオードアレイ、単収束四極子質量検出および蒸発光散乱検出スキームを備えたＷａｔｅｒｓ  ２７９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣまたはＷａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣを用いて行った。
【００８８】
真空中での濃縮とは、ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させることを指す。
【００８９】
別段言及しない限り、化学反応は室温（摂氏約２３度）で実施した。また、別段言及しない限り、化学反応は窒素雰囲気中で進めた。
【００９０】
薬理学的データ
Ｇタンパク質共役受容体ＧＰＲ１１９の本発明の化合物によるアゴニスト活性化によって調節される疾患を治療する本発明の実施は、後述する機能アッセイの１つまたは複数における活性によって証明することができる。供給元は括弧内に示す。
【００９１】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ機能アッセイ
β−ラクタマーゼ：
ＧＰＲ１１９アゴニストについてのアッセイでは、ヒトＧＰＲ１１９のアゴニスト活性化を、環状ＡＭＰ反応要素（ＣＲＥ）によってβ−ラクタマーゼ産生と合体させた、細胞を主体とした（ｈＧＰＲ１１９  ＨＥＫ２９３−ＣＲＥ  β−ラクタマーゼ）レポーター構築物を利用する。そしてＧＰＲ１１９活性は、ＦＲＥＴを可能にするβ−ラクタマーゼ基質であるＣＣＦ４−ＡＭ（Ｌｉｖｅ  Ｂｌａｚｅｒ  ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ  Ｌｏａｄｉｎｇキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）を利用して測定する。詳細には、ｈＧＰＲ１１９−ＨＥＫ−ＣＲＥ−β−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２．５×１０７／ｍＬ）を液体窒素貯蔵庫から取り出し、プレーティング培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、２００ｎＭのクラブラン酸カリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ３４９４）に希釈した。細胞プレーティング培地を使用して細胞濃度を調節し、この細胞懸濁液（１２．５×１０４生細胞）５０μＬを、ポリ−ｄ−リシンでコートされた黒色透明底３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅカタログ番号７８１９４６）の各ウェルに加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において３７℃でインキュベートした。４時間後、プレーティング培地を除去し、４０μＬのアッセイ培地（アッセイ培地は、クラブラン酸カリウムおよびＨＩＦＢＳを含有しないプレーティング培地である）と入れ替えた。次いで、試験対象の様々な濃度の各化合物を１０ｕＬの体積（最終ＤＭＳＯ≦０．５％）で加え、５％の二酸化炭素を含有する加湿した環境において細胞を３７℃で１６時間インキュベートした。プレートをインキュベーターから取り出し、約１５分間かけて室温に平衡化させた。１０ｕＬの６×ＣＣＦ４／ＡＭ作用色素溶液（Ｌｉｖｅ  Ｂｌａｚｅｒ  ＦＲＥＴ−Ｂ／Ｇ  Ｌｏａｄｉｎｇキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｋ１０２７）に入っている説明書に従って調製）をウェル毎に加え、暗所にて室温で２時間インキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ蛍光定量プレートリーダー（励起４０５ｎｍ、発光４６０ｎｍ／５３５ｎｍ）で蛍光を測定した。４パラメータロジスティック用量反応方程式を使用した曲線適合プログラムで分析を行ったアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【００９２】
ｃＡＭＰ：
細胞中のｃＡＭＰレベルを測定するＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）ｃＡＭＰ検出キット（ｃＡＭＰ  ｄｙｎａｍｉｃ  ２アッセイキット  Ｃｉｓ  Ｂｉｏカタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。この方法は、細胞によって産生される自然なｃＡＭＰと、色素ｄ２で標識したｃＡＭＰの競合イムノアッセイである。トレーサー結合を、クリプテートで標識したＭａｂ抗ｃＡＭＰによって可視化する。特異的シグナル（すなわち、エネルギー移動）は、標準またはサンプル中のｃＡＭＰの濃度に反比例する。
【００９３】
詳細には、ｈＧＰＲ１１９  ＨＥＫ−ＣＲＥβ−ラクタマーゼ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２．５×１０７／ｍＬ、上述のβ−ラクタマーゼアッセイで使用した同じ細胞系）を凍結保存から取り出し、増殖培地（ダルベッコ変法イーグル培地高グルコース（ＤＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１９９５−０６５）、１％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））中に希釈する。細胞濃度を１．５×１０５細胞／ｍｌに調整し、この懸濁液３０ｍｌをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。１６時間（一晩経過）後、細胞をＴ−１７５フラスコから（フラスコの側面を叩いて）取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでアッセイ培地（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）および２５ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０））に再懸濁した。アッセイ培地を用いて細胞濃度を６．２５×１０５細胞／ｍｌに調整し、この細胞懸濁液８μｌ（５０００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加えた。
【００９４】
試験対象の様々な濃度の各化合物を３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｉ５８７９）を含有するアッセイ緩衝液に希釈し、２μＬの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＩＢＭＸ濃度は４００μＭとし、最終ＤＭＳＯ濃度は０．５８％とした）。室温で３０分間のインキュベートに続いて、５μＬの標識したｄ２ｃＡＭＰおよび５μＬの抗ｃＡＭＰ抗体（両方とも細胞溶解緩衝液に１：２０希釈したもの、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。次いでプレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４マルチラベルプレートリーダーで、励起波長３３０ｎｍ、発光波長６１５ｎｍおよび６６５ｎｍを使用し、ＨＴＲＦシグナルの変化を読み取った。生データを、ｃＡＭＰ検量線からの内挿によってｎＭ  ｃＡＭＰに変換し（製造者のアッセイプロトコールに記載のとおり）、４パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【００９５】
ＧＰＲ１１９の活性化によるｃＡＭＰ反応は、ここで使用した特定の細胞系以外の細胞でも発生し得ることが認められている。
【００９６】
β−アレスチン：
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒβ−アレスチン細胞アッセイ技術およびそのＵ２ＯＳ  ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞系（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸカタログ番号９３−０３５６Ｃ３）を利用する細胞アッセイでも、ＧＰＲ１１９アゴニスト活性を求めた。このアッセイでは、アゴニストによって誘発される、β−アレスチンと活性化型ＧＰＲ１１９の相互作用を測定することにより、アゴニスト活性化を判定する。ＰｒｏＬｉｎｋと呼ばれる、小さい４２アミノ酸の酵素断片を、ＧＰＲ１１９のＣ末端に付加した。アレスチンを、ＥＡ（酵素アクセプター）と呼ばれるより大きい酵素断片に融合した。ＧＰＲ１１９が活性化すると、アレスチンの結合が刺激され、２つの酵素断片の相補性が引き出される結果、基質を加水分解し、化学発光シグナルを発生させることのできる機能性β−ガラクトシダーゼ酵素が生成する。
【００９７】
詳細には、Ｕ２ＯＳ  ｈＧＰＲ１１９β−アレスチン細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ  １×１０７／ｍｌ）を凍結保存から取り出し、増殖培地（最小必須培地（ＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏカタログ番号１１０９５−０８０）、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｆ４１３５−１００）、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｓ８６３６）、５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｇ８１６８）、および２５０μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１０６８７−０１０）中に希釈する。細胞濃度を１．６６×１０５細胞／ｍｌに調整し、この懸濁液３０ｍｌをＴ−１７５フラスコに加え、５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。２４時間後、酵素不使用の細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１３１５１−０１４）を用いて細胞をＴ−１７５フラスコから取り出し、８００×ｇで遠心分離し、次いでプレーティング培地（Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＢＲＬカタログ番号３１９８５−０７０）および２％チャコールデキストラン処理ウシ胎児血清（ＣＤ血清、ＨｙＣｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００６８．０３））に再懸濁した。プレーティング培地を用いて細胞濃度を２．５×１０５細胞／ｍｌに調整し、この細胞懸濁液１０μＬ（２５００細胞）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル白色小体積アッセイプレート（ＶＷＲカタログ番号８２０５１−４５８）の各ウェルに加え、プレートを５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃でインキュベートした。
【００９８】
１６時間（一晩経過）後、インキュベーターからアッセイプレートを取り出し、試験対象の様々な濃度の各化合物（アッセイ緩衝液（１×ＨＢＳＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１４０２５−０９２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．０（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０−０８０）、および０．１％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ａ９５７６）中に希釈したもの）を２．５μＬの体積でアッセイプレートウェルに加えた（最終ＤＭＳＯ濃度を０．５％とした）。５％二酸化炭素の加湿環境において３７℃で９０分インキュベートした後、７．５μＬのＧａｌａｃｔｏｎ  Ｓｔａｒβ−ガラクトシダーゼ基質（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘカタログ番号９３−０００１）、製造者のアッセイプロトコールに記載のとおりに調製）をアッセイプレートの各ウェルに加えた。プレートを室温でインキュベートし、６０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４マルチラベルプレートリーダーを用い、ウェルあたり０．１秒で発光の変化を読み取った。４−パラメータロジスティック用量反応式を使用して曲線適合プログラムで分析したアゴニスト反応曲線から、ＥＣ５０を決定した。
【００９９】
ＢａｃＭａｍを使用したＧＰＲ１１９の発現およびＧＰＲ１１９結合アッセイ
鋳型としてのｐＩＲＥＳ−ｐｕｒｏ−ｈＧＰＲ１１９および以下のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（Ｐｆｕ  Ｔｕｒｂｏ  Ｍａｔｅｒ  Ｍｉｘ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州ラホーヤ）によって、野生型ヒトＧＰＲ１１９（図１）を増幅した。
ｈＧＰＲ１１９  ＢａｍＨ１、上流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＧＡＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＣＡＴＣＴＴＴＣＴＣＡＴＴＴＧＧＡＧ−３’
（５’末端にＢａｍＨＩ部位を挿入する）
ｈＧＰＲ１１９  ＥｃｏＲＩ、下流
５’−ＴＡＡＡＴＴＧＡＡＴＴＣＴＴＡＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＡＡＣＴＣＴＧＡＧＣ−３’
（３’末端にＥｃｏＲＩ部位を挿入する）
【０１００】
製造者のプロトコールに従い、増幅産物を精製し（Ｑｉａｑｕｉｃｋ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）、ＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。ベクターｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリ（図２）をＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、マサチューセッツ州イプスウィッチ）で消化した。消化したＤＮＡを１％アガロースゲルでの電気泳動によって分離し、断片をゲルから切り出し、精製した（Ｑｉａｑｕｉｃｋ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）。ベクターと遺伝子断片を連結し（Ｒａｐｉｄ  Ｌｉｇａｓｅ  Ｋｉｔ、Ｒｏｃｈｅ、カリフォルニア州プレザントン）、ＯｎｅＳｈｏｔ  ＤＨ５αＴ１Ｒ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つのアンピシリン耐性コロニー（「クローン１〜８」）をミニプレップ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）用に成長させ、配列決定して、同一性および正しい挿入の方向を確認した。
【０１０１】
製造者のプロトコールに従い、ｐＦＢ−ＶＳＶＧ−ＣＭＶ−ポリ−ｈＧＰＲ１１９構築物（クローン＃１）をＯｎｅＳｈｏｔ  ＤＨ１０Ｂａｃ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に形質転換した。８つの陽性（すなわち白色）のコロニーを画線し直して、「陽性」であると確認し、引き続いてバクミド単離に向けて成長させた。組換え型ｈＧＰＲ１１９バクミドは、Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カリフォルニア州バレンシア）の緩衝液を使用する変法アルカリ溶解手順によって単離した。簡潔に述べると、ペレット化した細胞を緩衝液Ｐ１に溶解させ、緩衝液Ｐ２中で中和し、緩衝液Ｎ３で沈殿させた。沈殿を遠心分離（１７，９００×ｇで１０分間）によってペレット化し、上清をイソプロパノールと合わせてＤＮＡを沈殿させた。ＤＮＡを遠心分離（１７，９００×ｇで３０分間）によってペレット化し、７０％エタノールで１回洗浄し、５０μＬの緩衝液ＥＢ（Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。市販のプライマー（Ｍ１３Ｆ、Ｍ１３Ｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、バクミド中にｈＧＰＲ１１９挿入断片が存在することを確認した。
【０１０２】
ｈＧＰＲ１１９組換え型バキュロウイルスの生成
Ｐ０ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞に、製造者のプロトコール（Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）に従って１０μＬのｈＧＰＲ１１９バクミドＤＮＡをトランスフェクトした。５日間インキュベートした後、条件培地（すなわち「Ｐ０」ウイルスストック）を遠心分離し、０．２２μｍフィルター（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、マサチューセッツ州ビルリカ）で濾過した。
【０１０３】
凍結ウイルス（ＢＩＩＣ）ストックの作製
長期間のウイルス貯蔵および作業（すなわち「Ｐ１」）ウイルスストック生成に備えて、凍結ＢＩＩＣ（バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞）ストックを以下のとおりに作製した。懸濁液に適合させたＳｆ９細胞をＳｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させ、ｈＧＰＲ１１９  Ｐ０ウイルスストックで感染させた。２４時間増殖させた後、感染した細胞を穏やかに遠心分離し（約１００×ｇ）、凍結用培地（１０％のＤＭＳＯ、１％のアルブミンを含有するＳｆ９００ＩＩ培地）に再懸濁して、最終密度を１×１０７細胞／ｍＬとし、標準の凍結用プロトコールに従って、１ｍＬずつの一定分量にして凍結させた。
【０１０４】
作業（「Ｐ１」）ウイルスストックの作製
Ｓｆ９００ＩＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）で増殖させた、懸濁液に適合させたＳｆ９細胞を、解凍したｈＧＰＲ１１９  ＢＩＩＣストックの１：１００希釈物で感染させ、数日間インキュベートした（振盪しながら２７℃）。細胞の生存度が７０％に到達したとき、条件培地を遠心分離によって回収し、ＥＬＩＳＡ（ＢａｃｕｌｏＥｌｉｓａ  Ｋｉｔ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンヴュー）によってウイルス力価を決定した。
【０１０５】
懸濁液に適合させたＨＥＫ  ２９３ＦＴ細胞におけるｈＧＰＲ１１９の過剰発現
振盪フラスコにおいて、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）を、５０μｇ／ｍＬのネオマイシンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充した２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた（３７Ｃ、８％二酸化炭素、振盪）。細胞を穏やかに遠心分離し（約５００×ｇ、１０分）、ペレットを、１８％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したダルベッコＰＢＳ（Ｍｇ＋＋／−Ｃａ＋＋なし）とＰ１ウイルスの混合物に再懸濁して、感染多重度（ＭＯＩ）が１０になり、最終細胞密度が１．３×１０６／ｍＬ（合計体積２．５リットル）になるようにした。細胞を５リットルのＷａｖｅ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ  Ｗａｖｅｂａｇ（Ｗａｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、マサチューセッツ州）に移し、２７℃で４時間インキュベートし（１７振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）、インキュベート期間の終わりに、３０ｍＭの酪酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充した等体積（２．５リットル）の２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ培地を加え（最終濃度＝１５ｍＭ）、細胞を２０時間増殖させた（３７℃、８％ＣＯ２［０．２リットル／分｝、２５振動（ｒｏｃｋ）／分、乗せ台角度７°）。細胞を遠心分離（３，０００×ｇ、１０分）によって収集し、ＤＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で１回洗浄し、０．２５Ｍのスクロース、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。
【０１０６】
放射リガンド結合アッセイに向けた膜調製
凍結した細胞を氷上で解凍し、４℃で１０分間７００×ｇ（１４００ｒｐｍ）で遠心分離した。細胞ペレットを２０ｍＬのリン酸緩衝溶液に再懸濁し、１４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次いで細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１５６３０）、ｐＨ７．５、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ、＃ＢＩＯ２６０−１５）、１ｍＭのＥＧＴＡ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ−４３７８）、０．０１ｍｇ／ｍｌのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍｌのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍｌのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍｌのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ１１５３））に再懸濁し、氷上で１０分間インキュベートした。次いで細胞を、タイトフィット型ガラス製Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーで１５回の穏やかなストロークで溶解させた。ホモジネートを４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で遠心分離した。上清を氷上の新たな遠心管に移した。細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、４℃で１０分間１０００×ｇ（２２００ｒｐｍ）で再び遠心分離し、その後上清を取り出し、ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁した。この過程を３回目も繰り返し、その後上清を合わせ、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ  ＃７１２０６）およびＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ  ＃６３０２０）を加えて最終濃度をそれぞれ１Ｕ／ｍｌおよび６ｍＭとし、氷上で１時間インキュベートした。次いで溶液を４℃で２０分間２５，０００×ｇ（１５０００ｒｐｍ）で遠心分離し、上清を廃棄し、ペレットを新鮮なホモジナイズ緩衝液（ＢｅｎｚｏｎａｓｅおよびＭｇＣｌ２なし）に再懸濁した。２５，０００×ｇでの遠心分離ステップを繰り返した後、最終膜ペレットをホモジナイズ緩衝液に再懸濁し、−８０℃で凍結させた。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ試薬Ａ  ＃２３２２３およびＢ  ＃２３２２４）を使用して、タンパク質濃度を決定した。
【０１０７】
［３Ｈ］Ｃｍｐｄ  Ａの合成および精製
【０１０８】
【化９】
2013505290.tif 000011
化合物Ａ（「Ｃｍｐｄ  Ａ」、４−（１−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３ａ，７ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル、上で示したとおり）（４ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、得られる溶液を（１，５−シクロオクタジエン）（ピリジン）（トリシクロヘキシルホスフィン）−イリジウム（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．１９７９、１６８、１８３）（５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）で処理した。反応容器を密封し、溶液をトリチウムガス雰囲気中で１７時間撹拌した。減圧下で反応溶媒を除去し、得られる残渣をエタノールに溶解させた。未精製の［３Ｈ］Ｃｍｐｄ  Ａの精製を、以下の条件を使用する分取ＨＰＬＣによって実施した。
カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ、４．６×１５０ｍｍ、５μｍ
移動相Ａ：水／アセトニトリル／ギ酸（９８／２／０．１）
移動相Ｂ：アセトニトリル
勾配：  時間            ％Ｂ
０．００        ３０．０
１．００        ３０．０
１３．００      ８０．０
分析時間：１６分
ポストタイム：５分
流量：１．５ｍＬ／分
注入体積：２０〜５０μＬ
注入溶媒：ＤＭＳＯ
検出：２１０ｎｍおよび２４５ｎｍでのＵＶ
【０１０９】
精製した［３Ｈ］Ｃｍｐｄ  Ａの比活性は、質量分析によって、７０Ｃｉ／ｍｍｏｌと決定した。
【０１１０】
ＧＰＲ１１９放射リガンド結合アッセイ
試験化合物を１００％ＤＭＳＯ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  ＃９２２４０１）に段階希釈した。各希釈液２μＬを９６ウェルプレートの適切なウェルに加えた（各濃度３通りにして）。未標識Ｃｍｐｄ  Ａを最終濃度１０μＭで使用して、非特異的結合を測定した。
【０１１１】
３Ｈ−Ｃｍｐｄ  Ａを結合緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ７４４３）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２（Ｆｌｕｋａ  ６３０２０）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ  ＃ＢＩＯ２６０−１５）、０．１５％のウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ７５１１）、０．０１ｍｇ／ｍＬのベンズアミジン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ６５０６）、０．０１ｍｇ／ｍＬのバシトラシン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｂ０１２５）、０．００５ｍｇ／ｍＬのロイペプチン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ８５１１）、０．００５ｍｇ／ｍＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ１１５３））中に希釈して濃度を６０ｎＭとし、９６ウェルプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  ＃２６７２４５）のすべてのウェルに１００μＬを加えた。
【０１１２】
ＧＰＲ１１９を発現する膜を解凍し、結合緩衝液に希釈して最終濃度を２０μｇ／各ウェル１００μＬとし、希釈した膜１００μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。
【０１１３】
プレートを振盪しながら室温（約２５℃）で６０分間インキュベートした。Ｐａｃｋａｒｄハーベスターを使用した、０．３％ポリエチレンアミンに予浸したＧＦ／Ｃフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ  ＃６００５１７４）での真空濾過によって、アッセイを終結させた。次いで、洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、４℃に保ったもの）を使用してフィルターを６回洗浄した。次いでフィルタープレートを室温で終夜風乾した。３０μｌのシンチレーション液（Ｒｅａｄｙ  Ｓａｆｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＃１４１３４９）を各ウェルに加え、プレートを密封し、Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉｌｕｘ  ＭｉｃｒｏＢｅｔａプレートベースのシンチレーションカウンターを使用して、各フィルターに付随する放射能を測定した。
【０１１４】
３Ｈ−Ｃｍｐｄ  ＡのＫｄは、一部位双曲線（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ）に適合させる非線形回帰によるデータ解析を用いた飽和結合実験を実施して求めた。ＩＣ５０は、専有の曲線適合プログラム（ＳＩＧＨＴＳ）および４パラメータロジスティック用量反応式を用いて分析した競合曲線から求めた。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を使用してＩＣ５０値から算出した。
【０１１５】
β−ラクタマーゼおよびβ−アレスチン機能アッセイについて、以下の結果が得られた。
【０１１６】
【表１】
2013505290.tif 000012
【０１１７】
ｃＡＭＰアッセイおよび結合アッセイについて、以下の結果が得られた。
【０１１８】
【表２】
2013505290.tif 000013
【０１１９】
出発材料の調製
調製例１：３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの異性体（４および５）。実験の細目は以下のスキームＡで詳述する。
【０１２０】
【化１０】
2013505290.tif 000014
【０１２１】
ステップＡ．４−［（トリメチルシリル）オキシ］−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２）
【０１２２】
【化１１】
2013505290.tif 000015
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ピペリドン（３０．０ｇ、０．１５ｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）に溶かした室温の溶液に、塩化トリメチルシリル（２２．９ｍＬ、０．１８ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５０．４ｍＬ、０．３６ｍｏｌ）を添加漏斗で連続的に加えた。得られる溶液を８０℃で終夜加熱し、次いで室温に冷却した。反応混合物を水およびヘプタンで希釈した。層を分離し、水層をヘプタンで抽出した。ヘプタン層を合わせて水およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、粗生成物を黄色の油状物として得た。油状物を９０：１０のヘプタン／酢酸エチル中でシリカゲル充填物に通すことにより精製して、表題化合物を無色の油状物（３３．６ｇ、８２％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.78 (br s, 1H), 3.86 (br s, 2H), 3.51
(t, 2H), 2.09 (br s, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.18 (s, 9H).
【０１２３】
ステップＢ．３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３）
【０１２４】
【化１２】
2013505290.tif 000016
４−［（トリメチルシリル）オキシ］−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２８．８ｇ、０．１１ｍｏｌ）をアセトニトリル（３００ｍＬ）に溶かした室温の撹拌した溶液に、Ｓｅｌｅｃｔｆｌｕｏｒ（商標）（４１．４ｇ、０．１２ｍｏｌ）を加えた。得られる淡黄色の懸濁液を室温で１．５時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）および酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、層を分離した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、すべての有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで順次洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、粗生成物を淡黄色の油状物として得た。この材料を、ヘプタン／酢酸エチル勾配（２：１〜１：１）を用いたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーを繰り返すことにより精製すると、表題化合物が白色の固体（１５．５ｇ、６７％）として得られた。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 4.88 (dd, 0.5 H), 4.77 (dd, 0.5H), 4.47
(br s, 1H), 4.17 (ddd, 1H), 3.25 (br s, 1H), 3.23 (ddd, 1H), 2.58 (m, 1H), 2.51
(m, 1H), 1.49 (s, 9H).
【０１２５】
ステップＣ．（Ｒ＊）−３−（Ｓ）−フルオロ−４−（Ｒ）−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの異性体（４および５）（ラセミ）
【０１２６】
【化１３】
2013505290.tif 000017
３−フルオロ−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５．５ｇ、７１．３ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（３．５１ｇ、９３．７ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで室温に温めた。飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、粗生成物混合物を得、これを、ヘプタン−酢酸エチル（３：２〜１：１）を溶離液とするシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、第１の溶離生成物である（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．８１ｇ、２４％）を淡黄色の油状物として得たが、油状物は静置すると凝固して白色の固体になった。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.35 (ddd,
0.5 H), 4.18 (ddd, 0.5 H), 4.15 (br s, 1H), 3.89-3.74 (m, 2H), 2.97 (br s, 1H),
2.93 (ddd, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.05-1.92 (m, 1H), 1.58-1.46 (m, 1H), 1.44 (s,
9H).
【０１２７】
次いで、第２の溶離化合物である（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０．５７ｇ、６８％）を白色の固体として単離した。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 4.69 - 4.65
(m, 0.5H), 4.53-4.49 (m, 0.5H), 3.92 - 3.86 (m, 2H), 3.69 (br s, 1H), 3.39 (br
s, 1H), 3.16 (br s, 1H), 2.13 (s, 1H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
【０１２８】
ステップＤ．（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの鏡像異性体
ラセミ体の（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのサンプル１ｇを、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（１０×２５０ｍｍ）を利用し、それぞれ９０：１０の二酸化炭素とエタノールからなる移動相を１０ｍＬ／分の流量で用いた分取高圧液体クロマトグラフィーによって、その鏡像異性体に精製した。分離をモニターする波長は、２１０ｎMとした。Ｃｈｒｉａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを使用し、それぞれ９０：１０の二酸化炭素とエタノールからなる定組成移動相を２．５ｍＬ／分の流量で用いた分析高圧クロマトグラフィーの使用によって、各鏡像異性体の純度分析値を決定した。ピークをモニターする波長は、２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、鏡像異性体１（３６３ｍｇ）：Ｒｔ＝２．６７分（１００％ｅｅ）および（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル、鏡像異性体２（４０３ｍｇ）：Ｒｔ＝２．９９分（８８％ｅｅ）。
【０１２９】
調製例２：−９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（シンおよびアンチ異性体の混合物）
【０１３０】
【化１４】
2013505290.tif 000018
【０１３１】
スキームＢのステップＡ．  ７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オン−塩酸塩（２）の合成：
テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン１（６０．０ｇ、０．６０ｍｏｌ）、ベンジルアミン（６３．４ｇ、０．６０ｍｏｌ）、および氷酢酸（３５．９ｇ、０．６０ｍｏｌ）を無水メタノール（１．２Ｌ）に溶かした溶液を、パラホルムアルデヒド（３９．６ｇ、１．３ｍｏｌ）を無水メタノール（１．２Ｌ）に懸濁させた撹拌した懸濁液に、６５℃で７５分間かけて加えた。２回目の分のパラホルムアルデヒド（３９．６ｇ、１．３ｍｏｌ）を加え、混合物を６５℃で１時間撹拌した。反応を水（１．２Ｌ）および１Ｍ水酸化カリウム水溶液（６００ｍＬ）で失活させた。混合物を酢酸エチル（３Ｌ×３）で抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮乾燥した。残渣をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２０：１〜２：１）によって精製して、褐色の油状物を得た。残渣を６Ｍ無水塩酸１，４ジオキサン溶液（５００ｍＬ）で希釈し、混合物を３０分間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、アセトン（５００ｍＬ）を加えた。得られる混合物を３０分間音波処理して白色の沈殿物を生成させた。混合物を濾過し、固体をアセトンで洗浄し、次いで真空中で乾燥させて、所望の生成物を白色の固体（２１ｇ、１３％）として得た。1H NMR (400 MHz, 酸化重水素) δ 7.43 - 7.42 (m, 5H), 4.66 (s, 2H), 3.95
- 3.90 (m, 4H), 3.54 - 3.47 (m, 4H); 1.96 (bs, 2H); LCMS (ES+): 232.0 (M + 1).
【０１３２】
スキームＢのステップＢ．  ７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）（３）の合成：
７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オン塩酸塩（４．４０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）をエタノール（４０ｍＬ）および無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に懸濁させた。混合物を氷浴で冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．５ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）を１回で加えた。混合物を４時間かけてゆっくりと室温に温めた。次いで反応液を真空中で濃縮して、エタノールおよびテトラヒドロフランの大部分を除去した。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルと１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液とに分配した。溶液を３０分間撹拌した後、２つの層を分離した。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、真空中で濾液を濃縮して透明な油状物を得、これを静置すると部分的に凝固して油性の白色固体（３．７１ｇ、９４％）になった。このシンおよびアンチの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の混合物を、それ以上精製せずに次のステップで使用した。LCMS (ES+): 234.1 (M+1).
【０１３３】
スキームＢのステップＣ．  ３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）（４）の合成：
シンおよびアンチの７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の出発混合物（３．７１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）をエタノール（１２０ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ（ＯＨ）２（４５０ｍｇ）を加えた。Ｐａｒｒシェーカーにおいて混合物を５０ｐｓｉの水素中で２．５時間振盪した。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、収集した固体をメタノールで３回洗浄した。真空中で濾液を濃縮して油性の固体を得た。この油性の固体を酢酸エチルに溶解させ、ヘプタンを加えた。真空中で溶液を濃縮して、３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オールのシンおよびアンチ異性体混合物を白色の固体（２．０８ｇ、９１％）として得た。この材料をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。LCMS (ES+): 144.1 (M+1).
【０１３４】
スキームＢのステップＤ．９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（シンおよびアンチ異性体の混合物）（５）の合成：
３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オールのシンおよびアンチ異性体混合物（２．０８ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（２．８０ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）の０℃のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、クロロギ酸イソプロピル（１４．２ｍＬ、１４．２ｍｍｏｌ、１．０Ｍトルエン溶液）を滴下した。反応混合物を１４時間かけて室温に温めた。次いで反応液を１Ｍ塩酸水溶液（５０ｍＬ）で希釈し、水層を分離した。有機層を水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して無色の油状物を得た。この油状物を酢酸エチルに溶解させ、ヘプタンを加え、混合物を濃縮した。得られる油状物を真空中で乾燥させて、９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体混合物を透明な油状物（２．７４ｇ、８２％）として得た。LCMS (ES+): 230.1 (M+1).
【０１３５】
ステップＥ．９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボキン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体の分離：
それぞれ６５ｍＬ／分の流量の８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とした、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用する分取高圧液体クロマトグラフィーによって、９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルのシンおよびアンチ異性体混合物（５．０４ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）を分離した。分離をモニターする波長は２１０ｎｍとした。それぞれ２．５ｍＬ／分の流量の８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とした、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを用いた分析用高圧クロマトグラフィーを使用して、分析による各異性体の純度を決定した。ピークをモニターする波長は２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（６）（１．３４ｇ）：透明な油状物であったが、静置すると凝固した。保持時間（Ｒｔ）＝２．３分、1H NMR (400 MHz, 重水素化-DMSO): δ 5.12 (d, 1H, J=2.8Hz), 4.76 - 4.71
(m, 1H), 4.20 (d, 1H, J=13Hz), 4.16 (d, 1H, J=13Hz), 3.96 - 3.92 (m, 2H), 3.79
(d, 1H, J=3Hz), 3.55 (s, 1H), 3.52 (S, 1H), 3.08 (d, 1H, J=13Hz), 2.98 (d, 1H,
J=13Hz), 1.47 (m, 2H) 1.16 (d, 3H, J=3Hz), 1.15 (d, 3H, J=3Hz); LCMS (ES+):
230.2 (M+1).
９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピル（７）（１．７０ｇ）：琥珀色の油状物、Ｒｔ＝３．０８分、1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 5.11 (d, 1H, J=2.8Hz), 4.74 - 4.67 (m, 1H), 3.89 (d, 1H, J=13Hz),
3.84 - 3.78 (m, 2H, J=11Hz), 3.80 (d, 1H, J=6Hz), 3.78 (d, 1H, J=3Hz), 3.52 -
3.47 (m, 2H), 3.35 - 3.30 (m, 1H), 3.24 - 3.20 (m, 1H), 1.53 (s, 1H), 1.51 (s,
1H), 1.13 (d, 3H, J=1Hz), 1.16 (d, 3H, J=1Hz); LCMS (ES+): 230.2 (M+1)
【０１３６】
別法として、上記反応スキームＡのステップＡとＢを以下で述べるように組み合わせて、７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物）を合成することもできる。
ベンジルアミン（２１．３５ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）、テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）（１９．９５ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）、および酢酸（１１．９７ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）をメタノール（４００ｍＬ）に溶解させた。混合物を還流加熱した。反応混合物に、ホルムアルデヒド水溶液（３７％、３２．３４ｇ、３９８．５３ｍｍｏｌ）およびメタノール（１００ｍＬ）を、反応液を還流させたまま６０分かけて加えた。反応液を室温に冷却した。次いで炭酸水素ナトリウム（１６．７４ｇ、１９９．２７ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。引き続いて、反応温度を２５℃以下に保ちながら、水素化ホウ素ナトリウム（７．９２ｇ  ２０９．２３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）（２０ｇ）を加えた後、水（１００ｍＬ）および１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加えた。これを１時間撹拌した後、混合物を濾過し、フィルターケーキをメタノールおよび水（各２０ｍＬ）で順次すすいだ。濾液を真空中で濃縮して、メタノールの大部分を除去した。得られる水性混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して、シンおよびアンチ−７−ベンジル−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール異性体の混合物を油状物として得たが、油状物は室温で静置すると凝固した（２２．０ｇ、４７．３％）。
【０１３７】
調製例３：９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（シンおよびアンチ異性体の混合物）
【０１３８】
【化１５】
2013505290.tif 000019
３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−９−オール（シンおよびアンチ異性体の混合物、調製例２ステップＣの生成物）（３．７８ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）を水（３０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５．７６ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液を滴下した。溶液を徐々に室温に温めながら約１５時間撹拌した。反応液をジクロロメタンおよび水で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、表題化合物が透明な油状物（６．５５ｇ）として現れ、これをそれ以上精製せずに使用した。
【０１３９】
調製例４：９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのシンおよびアンチ異性体の分離
【０１４０】
【化１６】
2013505290.tif 000020
調製例３の９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０４ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）のシンおよびアンチ異性体の混合物を、それぞれ８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とし、流量を６５ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用する分取高圧液体クロマトグラフィーによって分離した。分離をモニターする波長は２１０ｎｍとした。各異性体の純度分析値は、それぞれ８５：１５の二酸化炭素およびメタノールを移動相とし、流量を２．５ｍＬ／分としたＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを使用する分析高速クロマトグラフィーを使用して求めた。ピークをモニターする波長は２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
９−アンチ−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（１．３０ｇ、１００％ｄｅ）、静置すると白色の固体に凝固した透明な油状物、保持時間（Ｒｔ）＝３．１５分。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.44 (s, 9 H), 1.66 (d, J=16.79 Hz, 2 H), 1.84 (d, J=2.93 Hz, 1 H),
3.30 - 3.52 (m, 2 H), 3.64 (t, J=11.03 Hz, 2 H), 3.93 - 4.21 (m, 5 H).
９−シン−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（１．６４ｇ、８９％ｄｅ）、静置すると白色の固体に凝固した透明な油状物、Ｒｔ＝３．５５分。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.47 (s, 9 H), 1.64 (d, J=13.47 Hz, 2 H), 2.12 (d, J=3.32 Hz, 1 H),
2.92 - 3.22 (m, 2 H), 3.71 - 3.83 (m, 2 H), 3.99 (d, J=3.32 Hz, 1 H), 4.09 -
4.19 (m, 2 H), 4.32 (d, J=13.66 Hz, 1 H), 4.48 (d, J=13.66 Hz, 1 H).
【０１４１】
調製例５：４−［（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１４２】
【化１７】
2013505290.tif 000021
４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（５５３ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶かした溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．４５０ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を６５℃で１０分間撹拌した。上記混合物に４，６−ジクロロピリミジン（０．４００ｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られる溶液を６５℃で１時間撹拌した。混合物を周囲温度に冷却し、水（１００ｍＬ）で失活させ、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）によって精製して、生成物を白色の固体（３５０ｍｇ、４４％）として得た。
【０１４３】
調製例６：４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１４４】
【化１８】
2013505290.tif 000022
４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（４８２ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液に、０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．４１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６５℃で１０分間撹拌した。上記混合物に４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（０．４０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、得られる溶液を６５℃で１時間撹拌した。混合物を周囲温度に冷却し、水（１００ｍＬ）で失活させ、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）によって精製して、生成物を白色の固体（６８０ｍｇ、８０％）として得た。
【０１４５】
調製例７：４−クロロ−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−５−カルボニトリル
【０１４６】
【化１９】
2013505290.tif 000023
４，６−ジクロロピリミジン−５−カルボニトリル（１７４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）および１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ２００２  ５６  ２５７〜２６４およびＵＳ２００７２３２６７６）（１２３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かした溶液に、室温でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５０ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。水（５０ｍＬ）を加え、得られる混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を合わせてブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮した。残渣を分取薄層クロマトグラフィーによって精製して、生成物を白色の固体（１５０ｍｇ、５８％）として得た。
【０１４７】
調製例８：４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１４８】
【化２０】
2013505290.tif 000024
２０ｍＬのＢｉｏｔａｇｅ（商標）マイクロ波対応管を窒素パージし、４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（０．６００ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）および４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５３４ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を投入した。１，４−ジオキサン（１４．９ｍＬ）を加え、混合物を１００℃に加熱した。混合物にナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（３．５８ｍＬ、３．５８ｍｍｏｌ、１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液）を１０分かけて滴下した。混合物を６０分間撹拌し、次いで室温で１２時間撹拌した。水で反応を失活させ、水層を酢酸エチルで抽出した（３回）。有機抽出物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製材料をシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇのＳｉＯ２カラム、０〜５０％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配）によって精製して、表題化合物（８４２ｍｇ、８６％）を得た。
【０１４９】
調製例９：５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール
【０１５０】
【化２１】
2013505290.tif 000025
１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール二塩酸塩（２．００ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロ−５−メチルピリミジン（１．６６ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を室温でテトラヒドロフラン（５１ｍＬ）に懸濁させた。これにトリエチルアミン（４．４１ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）を加えると、混合物が濁り、フラスコの壁面に褐色の固体が固着した。この混合物を室温で４時間撹拌し、次いでさらに１９時間５０℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈した。この混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。真空中で濾液を乾燥状態まで減少させて、表題化合物を淡褐色の固体（１．９５ｇ、７８％）として得、これをそれ以上精製せずに次のステップで使用した。
1H NMR
(500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 2.54
(s, 3 H) 3.88 (s, 3 H) 4.90 (見かけd, J=3.66 Hz, 4 H) 7.28
(s, 1 H) 8.29 (s, 1 H).
【実施例】
【０１５１】
（実施例１）
４−｛［６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１５２】
【化２２】
2013505290.tif 000026
調製例５の４−［（６−クロロピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（０．２００ｇ、０．６６７ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリジノン（５ｍＬ）溶液に、周囲温度で、１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（８２ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、次いで炭酸セシウム（１．０８ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を３時間１５０℃に加熱した。反応混合物を周囲温度に冷却した。水（５０ｍＬ）を加え、次いで、得られる混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ、３回）で抽出した。有機層を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次いで濃縮して残渣を得、これを、６３％のアセトニトリル（改質剤として０．０５％の水酸化アンモニウム）水（改質剤として０．０５％の水酸化アンモニウム）溶液からなる移動相を溶離液とするＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム１５０×３０ｍｍでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、生成物を白色の固体（３５ｍｇ、１４％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.16 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.51 (s,
1H), 5.09-5.13 (m, 1H), 4.74-4.80 (m, 1H), 4.48-4.60 (s, 2H), 4.19-4.48 (s,
2H), 3.70 (s, 3H), 3.63-3.66 (m, 2H), 3.13-3.19 (m, 2H), 1.80-1.83 (m, 2H),
1.55-1.57 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.4 Hz, 6H); LCMS (ES+): 387.3 (M+H).
【０１５３】
（実施例２）
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１５４】
【化２３】
2013505290.tif 000027
調製例６の４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（０．０２０ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリジノン（０．５６ｍＬ）溶液に、１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（０．０１０ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）に続いて炭酸セシウム（９１ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３時間１５０℃に加熱した。反応液を水で希釈し、水層をジクロロメタンで３回抽出した。有機抽出物を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を真空中で濃縮した。未精製材料を、水アセトニトリル溶液（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）の勾配で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取ＨＰＬＣによって精製して、生成物（８．３ｍｇ、１３％）を得た。分析ＬＣＭＳ：保持時間０．９７分（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍカラム、１．８分かけて９５％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、５％の水／アセトニトリルで２．０分まで保持、０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤、流量１．３ｍＬ／分）、LCMS (ES+): 401.5 (M+H).
【０１５５】
（実施例３）
４−｛［５−シアノ−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル
【０１５６】
【化２４】
2013505290.tif 000028
４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（７７ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液に、周囲温度でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０Ｍ無水テトラヒドロフラン溶液、０．６３ｍＬ、０．６３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。上記混合物に、室温で、調製例７の４−クロロ−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−５−カルボニトリル（６５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液を加えた。得られる混合物を７０℃で１時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）で失活させ、酢酸エチル（１００ｍＬ、３回）で抽出した。有機抽出物を合わせてブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、６６％のアセトニトリル（改質剤としての０．０５％の水酸化アンモニウム）水（改質剤としての０．０５％の水酸化アンモニウム）溶液からなる移動相で溶離するＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム１５０×３０ｍｍでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、生成物を白色の固体（２５ｍｇ、２４％）として得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.23 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.33-5.36
(m, 1H), 4.83-4.89 (m, 5H), 3.80 (s, 3H), 3.64-3.70 (m, 2H), 3.38-3.41 (m, 2H),
1.80-1.91 (m, 2H), 1.75-1.79 (m, 2H), 1.19-1.23 (d, J=6.4 Hz, 6H): LCMS (ES+):
434.4 (M+Na).
【０１５７】
（実施例４）
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１５８】
【化２５】
2013505290.tif 000029
調製例８の４−［（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．４００ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を含有するＮ−メチルピロリジノン（４．０７ｍＬ）に、１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（２８７ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）に続いて炭酸セシウム（１．９９ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間１５０℃に加熱した。反応を水で失活させ、水層を酢酸エチルで３回抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。未精製材料をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配）によって精製して、所望の生成物（７７ｍｇ、１５％）を得た。
【０１５９】
（実施例５）
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０１６０】
【化２６】
2013505290.tif 000030
４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（実施例４）（７７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）に、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に続いてトリフルオロ酢酸（１．５０ｍＬ）を加えた。混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残りのトリフルオロ酢酸を減圧下でトルエン共沸混合物によって除去した。
【０１６１】
未精製の１−メチル−５−［５−メチル−６−（ピペリジン−４−イルオキシ）ピリミジン−４−イル］−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールを含有するジクロロメタン（１．８ｍＬ）に、炭酸１−メチルシクロプロピル４−ニトロフェニル（ＷＯ０９１０５７１７）（８７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、約１０％の炭酸１−イソプロピル４−ニトロフェニルが混入したもの）に続いてトリエチルアミン（０．２５６ｍＬ、１．８４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物が濃い黄色になった。反応液を室温で１２時間撹拌した。未精製材料をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液の勾配）によって精製して、約１０％の４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルが混入している所望の生成物（７６ｍｇ、３３％）を得た。1H NMR (400 MHz, 重水素化クロロホルム): δ 8.17 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 5.30-5.22
(m, 1H), 4.86-4.83 (m, 2H), 4.82-4.79 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.77-3.55 (m, 2H),
3.45-3.28 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.00-1.85 (m, 2H), 1.79-1.65 (m, 2H), 1.54 (s,
3H), 0.88-0.82 (m, 2H), 0.63-0.58 (m, 2H); LCMS (ES+): 413.5 (M+H).
【０１６２】
（実施例６）
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）
【０１６３】
【化２７】
2013505290.tif 000031
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．６７ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）と調製例９の５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（９００ｍｇ、３．６０ｍｍｏｌ）の混合物を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）に溶解させ、１０５℃に加熱した。１０分間加熱した後、すべての材料が溶液になっており、混合物にナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（４．３ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ、１Ｍトルエン溶液）を速やかに加えると、濁った黄色の混合物となり、次いでこれを１０５℃で２時間撹拌した。次いで反応液を室温に冷却し、水と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の等体積混合物を加えて失活させた。混合物を酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮して黄色の残渣を得、これを、６０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液とするシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製した。表題化合物と出発５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾールの混合物を白色の固体（１．２０ｇ）として単離し、それ以上精製せずに後続の反応で使用した。
【０１６４】
同じ条件下で進めた別個の反応の１回分の未精製（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルをＨＰＬＣによって精製した。未精製サンプル（９．５ｍｇ）をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、８０％の水／アセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）から８．５分で０％の水／アセトニトリルへの線形勾配、続いて０％の水／アセトニトリルで１．５分間、流量：２５ｍＬ／分で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。そうして表題化合物（５ｍｇ）が得られた。分析ＬＣＭＳ：保持時間２．８１分（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム、４．０分かけて９０％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、続いて５％の水／アセトニトリルで１分間、０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤、流量：２．０ｍＬ／分）、LCMS (ES+) 433.2 (M+1).
【０１６５】
（実施例７）
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（ラセミ体）
【０１６６】
【化２８】
2013505290.tif 000032
実施例６の未精製（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２０ｇ）をジクロロメタン（１２ｍＬ）に溶解させ、この溶液にトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、残渣を水（５０ｍＬ）および１Ｎ塩酸水溶液（１０ｍＬ）に溶解させた。混合物をジクロロメタン（１０×３０ｍＬ）で抽出した。次いで、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加えて水層をｐＨ１２とし、ジクロロメタン（４０ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物を合わせてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、５−（６−｛［（３，４−シス）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（０．７２ｇ、２ステップで６０％）を白色の固体として得、これをそれ以上精製せずに使用した。
1H NMR
(500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.84 -
2.08 (m, 2 H) 2.33 (s, 3 H) 2.69 - 2.84 (m, 1 H) 2.83 - 3.01 (m, 1 H) 3.16 (d,
J=13.66 Hz, 1 H) 3.27 - 3.44 (m, 1 H) 3.86 (s, 3 H) 4.78-4.91 (m, 1 H) 4.86 (d,
J=1.95 Hz, 2 H) 4.88 (d, J=1.95 Hz, 2 H) 5.21 - 5.32 (m, 1 H) 7.26 (s, 1 H)
8.18 (s, 1 H); LCMS (ES+) 333.4 (M+1).
【０１６７】
５−（６−｛［（３，４−シス）−３−フルオロピペリジン−４−イル］オキシ｝−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（７１７ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）および炭酸１−メチルシクロプロピル４−ニトロフェニル（ＮＭＲ積分によると約１０％の炭酸イソプロピル４−ニトロフェニルが混入したもの）（６２０ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１１ｍＬ）に溶かした溶液に、トリエチルアミン（０．６０ｍＬ、４．３１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１５時間撹拌した。次いで反応混合物をさらに４時間還流加熱し、室温に冷却し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物を合わせて、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液／ブライン溶液（１０ｍＬ）の２：１混合物で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。真空中で濾液を減圧乾固させ、黄色の泡沫を得た。７０〜１００％の酢酸エチルヘプタン溶液を溶離液としながらシリカゲルで精製すると、表題化合物が白色の固体（０．８４ｇ、９０％、純度９１％）として得られた。サンプルは、０．９１ｐｐｍでのシクロプロピルメチレンおよび１．２８ｐｐｍでのイソプロピルメチルシグナルのＮＭＲ積分によって求めたところ、それぞれ１０：１の比で、（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルが混入していた。
1H NMR
(500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 0.62 -
0.67 (m, 2 H) 0.87 - 0.94 (m, 2 H) 1.57 (s, 3 H) 1.88 (br. s., 1 H) 2.10 (br.
s., 1 H) 2.32 (s, 3 H) 3.04 - 3.23 (m, 1 H) 3.23 - 3.49 (m, 1 H) 3.86 (s, 3 H)
3.99 - 4.34 (m, 2 H) 4.66 - 5.04 (m, 5 H) 5.32 (m, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 8.17 (s,
1H); LCMS (ES+) 431.4 (M+1).
【０１６８】
また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの生物学的な特徴付けのために、同じ条件下で進めた別個の反応の１回分の未精製（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルをＨＰＬＣによって精製した。未精製材料（５２ｍｇ）をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、８０％の水／アセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）から８．５分で０％の水／アセトニトリルへの線形勾配、流量：２５ｍＬ／分で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。分析ＬＣＭＳ：保持時間２．５９分（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム、４．０分かけて９０％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤、流量：２．０ｍＬ／分）、LCMS (ES+) 431.2 (M+1)。そうして表題化合物が得られた（２２ｍｇ、５５％）。このサンプルの純度は、使用した炭酸シクロプロピルメチルが不純であったために、９０％であると推定された。
【０１６９】
（実施例８）
（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ラセミ体）
【０１７０】
【化２９】
2013505290.tif 000033
セプタムでふたをしたバイアルにおいて、調製例１の（３，４−トランス）−３−フルオロ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）と調製例９の５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物を１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）に溶解させ、１０５℃に加熱した。５分後、溶液に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．３２ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ、１Ｍトルエン溶液）を速やかに加え、琥珀色から濃緑色へと色を変化させた。１０５℃で１０分間加熱した後、反応混合物が濁った褐色の混合物になり、加熱をさらに２時間続けた。反応混合物を室温に冷却し、水と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の等体積混合物で失活させ、混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮して残渣を得、これをジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、８０％の水／アセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）から８．５分で０％の水／アセトニトリルへの線形勾配、流量：２５ｍＬ／分で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（９．２ｍｇ、１１％）を得た。分析ＬＣＭＳ：保持時間３．２１分（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム、４．０分かけて９０％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、０．０５％のトリフルオロ酢酸改質剤、流量：２．０ｍＬ／分）、LCMS (ES+) 433.2 (M+1).
【０１７１】
（実施例９）
（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０１７２】
【化３０】
2013505290.tif 000034
セプタムでふたをしたバイアルにおいて、（９−アンチ）−９−ヒドロキシ−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）と調製例９の５−（６−クロロ−５−メチルピリミジン−４−イル）−１−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物を１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）に溶解させ、１０５℃で５分間加熱した。混合物に、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．３２ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ、１Ｍトルエン溶液）を速やかに加え、琥珀色の溶液を濃緑色に変色させた。１０５℃で１０分間加熱した後、反応混合物が濁った褐色の混合物になり、加熱をさらに２時間続けた。反応液を室温に冷却し、水と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の等体積混合物を加えて失活させ、酢酸エチル（１５ｍＬ）で３回抽出した。有機抽出物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮乾燥して、橙褐色の泡沫を得た。この材料のサンプルをジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解させ、８０％の水／アセトニトリル（０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤）から８．５分で０％の水／アセトニトリルへの線形勾配、流量：２５ｍＬ／分で溶離するＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  １９×１００ｍｍ、０．００５ｍｍカラムでの分取逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（１０．２ｍｇ、１１％）を得た。分析ＬＣＭＳ：保持時間２．５３分（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、０．００５ｍｍカラム、４．０かけて９０％の水／アセトニトリルから５％の水／アセトニトリルへの線形勾配、０．０３％の水酸化アンモニウム改質剤、流量：２．０ｍＬ／分）、LCMS (ES+) 457.2 (M+1)。材料の残りを、５０〜１００％の酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を淡黄色の固体（３３ｍｇ、３６％）として得た。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.49 (s, 9 H) 1.92 - 2.12 (m, 2 H) 2.35
(s, 3 H) 3.37 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 3.47 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 3.74 - 3.96 (m, 5
H) 4.07 - 4.23 (m, 3 H) 4.29 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 4.70 - 5.02 (m, 4 H) 5.37 (t,
J=3.42 Hz, 1 H) 7.27 (s, 1 H) 8.19 (s, 1 H); LCMS (ES+) 457.5 (M+1).
【０１７３】
（実施例１０）
（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸１−メチルシクロプロピル
【０１７４】
【化３１】
2013505290.tif 000035
（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（実施例９）（３２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）で処理し、室温で２時間撹拌した。得られる反応混合物を真空中で濃縮すると、黄色の残渣が残った。残渣をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（０．１ｍＬ）で処理した後、１Ｈ  ＮＭＲ積分によって求めたところ約１０％の炭酸イソプロピル４−ニトロフェニルが混入している炭酸１−メチルシクロプロピル４−ニトロフェニル（２０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（５ｍＬ）で希釈し、溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。ジクロロメタン層を除去し、水層をジクロロメタン（１０ｍＬ）で２回抽出した。有機抽出物をプールし、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液と飽和ブライン（２０ｍＬ）の１：１溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮乾燥して淡黄色の泡沫を得、これを、酢酸エチルを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。そうして、表題化合物と（９−アンチ）−９−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝−３−オキサ−７−アザビシクロ［３．３．１］ノナン−７−カルボン酸イソプロピルのそれぞれ１３：１の比（０．７９ｐｐｍでのシクロプロピルメチレンおよび１．１８ｐｐｍでのイソプロピルメチルシグナルの１Ｈ  ＮＭＲ積分によって求めたもの）の混合物が、白色の固体（２７．４ｍｇ、８６％、純度９３％）として得られた。1H NMR (500 MHz, 重水素化ジメチルスルホキシド) δ 0.53 - 0.63 (m, 2 H) 0.75 - 0.83 (m, 2
H) 1.46 (s, 3 H) 1.93 (d, 2 H) 2.32 (s, 3 H) 3.23 (d, J=13.17 Hz, 1 H) 3.33 (m,
1 H) 3.64 - 3.75 (m, 2 H) 3.79 (s, 3 H) 3.87 - 4.02 (m, 3 H) 4.12 (d, J=13.17
Hz, 1 H) 4.79 (s, 2 H) 4.90 (s, 2 H) 5.29 (t, J=3.29 Hz, 1 H) 7.24 (s, 1 H)
8.15 (s, 1 H); LCMS (ES+) 455.4 (M+1).
【０１７５】
（実施例１１および１２）
キラルな（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの鏡像異性体（個々の鏡像異性体の絶対立体化学は不明）
【０１７６】
【化３２】
2013505290.tif 000036
実施例７にあるように調製したラセミ体の（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピルの約７００ｍｇのサンプルを、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用し、それぞれ７０：３０の二酸化炭素とメタノールからなる移動相を６５ｍＬ／分の流量で用いたキラル分取高圧液体クロマトグラフィーによって、その鏡像異性体に精製した。分離をモニターする波長は、２１０ｎｍとした。Ｃｈｒｉａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ）カラムを使用し、それぞれ７０：３０の二酸化炭素とメタノールからなる移動相を２．５ｍＬ／分の流量で用いた分析高圧クロマトグラフィーの使用によって、各鏡像異性体の純度分析値を決定した。ピークをモニターする波長は、２１０ｎｍとした。以下の２種の異性体が得られた。
【０１７７】
（実施例１１）
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（鏡像異性体２、絶対立体化学不明）（２６６ｍｇ）：Ｒｔ＝６．５４分（１００％）は、丸底フラスコにおいて６０％の酢酸エチル／ヘプタン混合物（１０ｍＬ）中に入れ、室温で２０時間スラリー化した。混合物を濾過し、固体を６０％の酢酸エチル／ヘプタン混合物（３ｍＬ）で２回すすぎ、窒素流中で乾燥させた。固体を真空中でさらに乾燥させると、完全に結晶質の白色の固体（１９９ｍｇ）が得られた。LCMS (ES+) 431.3 (M+1)
【０１７８】
（実施例１２）
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−メチルシクロプロピル（鏡像異性体１、絶対立体化学不明）（３０５ｍｇ）：Ｒｔ＝５．６３分（１００％ｅｅ、対応するカルバミン酸イソプロピルを約８％含有する）。この材料を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈカラム（２１×２５０ｍｍ）を利用し、それぞれ７５：２５の二酸化炭素とメタノールからなる移動相を６５ｍＬ／分の流量で用いたキラル分取高圧液体クロマトグラフィーで精製し直して、対応するカルバミン酸イソプロピル不純物を除去した。分離をモニターする波長は、２１０ｎｍとした。Ｒｔ＝６．２分（１００％ｅｅ）。
【０１７９】
（実施例１３）
（３，４−シス）−３−フルオロ−４−｛［５−メチル−６−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５（１Ｈ）−イル）ピリミジン−４−イル］オキシ｝ピペリジン−１−カルボン酸１−イソプロピル（ラセミ体）
【０１８０】
【化３３】
2013505290.tif 000037
表題化合物は、クロロギ酸イソプロピルを使用したことを除き、実施例７に記載のとおりに調製した。1H NMR (500 MHz, 重水素化クロロホルム) δ 1.27 (d, J=6.34 Hz, 6 H) 1.83 - 1.95 (m,
1 H) 2.07 - 2.18 (m, 1 H) 2.32 (s, 3 H) 3.20 (br. s., 1 H) 3.29 - 3.50 (m, 1 H)
3.86 (s, 3 H) 3.90 - 4.11 (m, 1 H) 4.24 (br. s., 1 H) 4.79 - 4.93 (m, 1 H)4.84
- 4.90 (ほぼd, 4 H) 4.93 - 5.01 (m, 1 H) 5.28 - 5.43 (m,
1 H) 7.27 (s, 1 H) 8.18 (s, 1 H); LCMS (ES+) 419.4 (M+1).
【０１８１】
本出願では終始、様々な刊行物を参照文献として引用している。それらの刊行物の開示は、その全体が、あらゆる目的で参照により本出願に援用される。
【０１８２】
本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本発明に様々な変更および変化を添えてよいことは、当業者に明白となろう。本発明の他の実施形態は、本明細書を検討し、本明細書で開示する本発明を実践する中で、当業者に明らかとなろう。本明細書および実施例は、例示的なものにすぎないとみなし、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示すものとする。
【図１】
2013505290.tif 000042
【図２】
2013505290.tif 000043
【国際調査報告】
2013505290.tif 000044
2013505290.tif 000045