(57)【要約】  本発明は、バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防すること、またはそれに対処することを目的とした活性剤のスクリーニング方法であって、培養ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２の発現を刺激する活性剤を選択することを含む、スクリーニング方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防すること、またはそれに対処することが可能な活性剤のスクリーニング方法であって、
ａ）ヒトドナー由来の培養ケラチノサイトの試料を、植物抽出物などの活性剤を用いて処理する工程、
ｂ）前記処理試料におけるＡＲＮＴ２の発現を、同じ細胞の非処理試料と比較して、定量する工程、
ｃ）非処理試料と比較してＡＲＮＴ２の発現を増加させる活性剤を選択する工程
を含む、スクリーニング方法。
【請求項２】
ＡＲＮＴ２の発現の定量を、ＲＴ−ＰＣＲによって行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程ｃ）が、ＡＲＮＴ２の遺伝子発現レベルを、発現を１とする非処理試料と比較して、少なくとも１．７倍増加させる活性剤を選択することを含むことを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＡＲＮＴ２の発現の定量を、免疫細胞化学染色によって行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程ｃ）が、免疫細胞化学染色によって得られ、幾つものランダムな画像上で視覚的に評価される染色の平均強度を、非処理試料を用いて得られる染色について評価した平均強度の少なくとも１．４倍にする活性剤を選択することを含むことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ヒトの皮膚に局所的に適用したときに、バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防すること、またはそれに対処することが可能な活性剤を選択するための、請求項１から５のいずれかに記載の方法の使用。
【請求項７】
ヒトの皮膚に局所的に適用したときに、乾燥の徴候から皮膚を保護すること、外部環境、特に紫外線の傷害作用から皮膚を保護すること、または毒素、薬物、および化学物質の侵入から皮膚を保護すること、ならびに皮膚の酸化負荷を軽減することが可能な活性剤を選択するための、請求項１から５のいずれかに記載の方法の使用。
【請求項８】
前記徴候が、皮膚の粗さ、肌の輝きの喪失、および／または皮膚の柔軟性の喪失から選ばれることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
ヒトの皮膚に局所的に適用したときに、皮膚の光老化を予防することが可能な活性剤を選択するための、請求項１から５のいずれかに記載の方法の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防すること、またはそれに対処することを目的とした活性剤のスクリーニング方法であって、培養ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２の発現を刺激する活性剤を選択することを含む、スクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、主に３つの層、すなわち、最上層から順に、表皮、真皮、および皮下組織から構成される。
【０００３】
表皮は、特に、ケラチノサイト（大部分）、メラノサイト（皮膚の着色に関わる）、およびランゲルハンス細胞からなる。その機能は、外部環境から身体を保護すること、その完全性を確保すること、特に、微生物または化学物質の侵入を止めること、皮膚に含有される水分の蒸発を防ぐこと、および外部攻撃、特に紫外線（ＵＶ）に対してバリアを構成することである。
【０００４】
これを行うために、ケラチノサイトは、増殖と、その後の継続的な一定方向の成熟の過程を受け、この間に、表皮の基底層に位置するケラチノサイトはその分化の最終段階で、角質細胞を形成するが、この角質細胞は、タンパク質とセラミドなどの脂質とからなる角質鞘の形態の、完全に角質化した死細胞である。この分化過程の間、角質細胞間表皮脂質も形成され、次いで角質層における二重層（ラメラ）の形態で組織化され、この脂質は、上記の角質鞘と共に、表皮のバリア機能に関与する。
【０００５】
しかし、表皮のバリア機能は、特定の気候条件下（例えば、寒さおよび／または風の影響下）またはストレスもしくは疲労の影響下において、乱れるので、特に、アレルゲン、刺激物または微生物の侵入が促進されることがある。これらの外的要因は、皮膚の乾燥を生じさせ（皮膚がその透過性を喪失し、水分を失い、皮膚の経皮的水分喪失が増加する）、また肌の輝きおよび皮膚の柔軟性を損なわせる。皮膚のバリアの損傷は、微小荒れ（microchapping）または微小ひび割れ（microcracks）の出現も促進し得る。
【０００６】
さらに、増殖および分化過程の損傷に起因して粗悪に形成されたバリアは、もはや紫外線またはいかなる他種の外部攻撃に対しても皮膚を保護しない。皮膚を透過する紫外線は、次いで、フリーラジカルを生じ得るが、このフリーラジカルは、種々の標的に有害な作用を及ぼす恐れがある。例えば、それぞれコラーゲンおよびエラスチンを分解し、したがって皮膚の弾性および張りを低下させ、皺を形成する原因となる、コラゲナーゼおよびエラスターゼを活性化させる恐れがある。
【０００７】
皮膚のバリア機能の変化を予防または修正するために、公知の慣例では、皮膚中に存在する水分を取り込むことにより、水分の蒸発を阻止することを目的とした吸湿剤、例えば糖または多価アルコールを含有する化粧用組成物を、皮膚に適用する。また、水分の蒸発の阻止に貢献する密封フィルムを皮膚上に形成することができる脂肪物質も、従来より利用されている。さらに、これらの組成物は、皮膚の代謝回転過程、特に、ケラチノサイトの分化、表皮の脂質合成および角質細胞の粘着、または天然保湿因子（ＮＭＦ）皮膚成分の内因性合成、特に、プロテオグリカンの合成のいずれかに関わる、様々な生物学的標的の１つまたは複数に作用する活性剤を頻繁に取り入れている。
【０００８】
しかし、皮膚のバリア機能を強化して、皮膚の不快感、ヒリヒリ感、つっぱり、かゆみ、熱感、または発赤、および／または微小荒れもしくは微小ひび割れの出現、および／または肌の輝きの喪失もしくはくすんだ肌を予防および／または低減するため、ならびに／あるいはＵＶに対する表皮の保護を改善するための、新規な化粧用の活性剤を提案することが常に必要とされている。
【０００９】
さらに、合成成分をできるだけ含有しない天然物に対する消費者による探究の高まり、および化学産業由来の化合物に対する規制上の制約の負担増加を考えると、これらの化粧用活性剤は、植物起源であることが望ましいと思われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願人は、名誉なことに、新規な生物学的標的、すなわち、アリール炭化水素受容体核輸送体アイソフォーム２（ＡＲＮＴ２）に作用して、バリア機能の損傷に対処することが可能であることを、予想外にも今や明らかにした。
【００１１】
ＡＲＮＴ２は、塩基性−ヘリックス−ループ−ヘリックス−Ｐｅｒ−Ａｒｎｔ−Ｓｉｍ（ｂＨＬＨ−ＰＡＳ）ファミリーの一員の転写因子であり、これは環境ストレスへの適合、すなわち、酸化ストレス、低酸素、環境毒素および薬物への応答に関わっている。
【００１２】
ＡＲＮＴ２タンパク質は、同じＡＲＮＴグループの構成員にとって二量体形成のパートナーである、またはアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）グループに属するタンパク質である。センサータンパク質との得られたヘテロ二量体は、次いで、環境刺激に応答する遺伝子の制御ＤＮＡ配列に結合する。ＡＲＮＴ２は、恒常性またはストレス応答の全経路における遺伝子発現ネットワークの活性制御に肝要である（E.J. DOUGHERTY et al., Toxicological Sciences, Vol. 103, No. 1, pp. 191-206, 2008 ； H. SEKINE et al., Journal of Biological Chemistry, Vol. 281, No. 49, pp. 37507-37516, 2006 ; 0. HANKINSON, Toxicological Sciences, Vol. 103, No. 1, pp. 1-3, 2008）。
【００１３】
低酸素条件下で、Ａｒｎｔ２は、核内の低酸素誘導因子１α（ＨＩＦα）と複合体を形成し、この複合体は、酸素応答遺伝子のエンハンサーおよびプロモーターにおける低酸素応答配列に結合する。酸素応答遺伝子の発現増加により、Ｇｌｕｔ１（グルコース輸送−栄養素および酸素の増加）；ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ−β（血管新生）；ＴＧＦ−α（成長刺激）が刺激されることになった。
【００１４】
ＡＲＮＴ２は、神経系、腎臓、および網膜において、高度に発現される。本出願人の知るところでは、皮膚、ましてやヒトの皮膚におけるＡＲＮＴ２発現に関する利用可能な公開データはない。
【００１５】
S. TAKAGI et al., The Journal of Clinical Investigation, Vol. 112, No. 9 （2003）によって、ＡＲＮＴが、セラミドの生合成を調節し、表皮バリア機能の維持に不可欠であるセラミド組成の皮膚における維持に関わっていることが示されている。また、ヒトおよびマウスの皮膚におけるＡＲＮＴの発現の証拠も、表皮バリア機能における役割と共に、S. GENG et al, Journal of Cell Science, Vol. 119, No. 23, pp. 4901-4912 （2006）によって示されている。
【００１６】
しかし、数名の著者が強調していることだが、ＡＲＮＴとＡＲＮＴ２とは同じ転写因子ファミリーに属し、かつ非常に近似した構造を有していながら、同じ細胞においては発現しておらず、その生物学的作用が著しく異なっている（例えば、K. HIROSE et al., Molecular and Cellular Biology, Vol. 16, No. 4, pp. 1706-1713, 1996を参照のこと）。
【００１７】
このように、これまで、ＡＲＮＴ２がヒトの皮膚細胞において発現し得るかどうか、またあるとすれば、そこでどの役割を果たし得るかを予測することはできなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本出願人は、予想外にも、ＡＲＮＴ２がヒトケラチノサイトにおいて発現しており、しかもＡＲＮＴ２がケラチノサイトのアポトーシスを予防すると共に、皮膚のＵＶＢに対する応答に関与していることを明らかにした。また、本出願人は、名誉なことに、この標的に作用する活性剤、したがって、皮膚のバリア機能の改善のためにヒトの皮膚に局所的に適用し得る活性剤、例えば、植物抽出物を選択するためのスクリーニング試験を開発した。
【００１９】
さらに、本出願人は、ＡＲＮＴ２が線維芽細胞において発現していたことも明らかにした。したがって、ＡＲＮＴ２の発現を刺激する化合物は、線維芽細胞の酸化ストレスに対する生理的応答も増加させ、したがって、生涯を通じて細胞に対して引き起こされ、老化した皮膚の構造、外観および機能の損傷の原因となる酸化的傷害を減少させることができよう。
【００２０】
したがって、本発明の１つの主題は、バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防すること、またはそれに対処することができる活性剤のスクリーニング方法であって、
ａ）ヒトドナー由来の培養ケラチノサイトの試料を、植物抽出物などの活性剤を用いて処理する工程、
ｂ）前記処理試料におけるＡＲＮＴ２の発現を、同じ細胞の非処理試料と比較して、定量する工程、
ｃ）非処理試料と比較して、ＡＲＮＴ２の発現を増加させる活性剤を選択する工程
を含む、スクリーニング方法である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
この方法において、ＡＲＮＴ２の発現の定量は、培養ケラチノサイトに対してリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって行ってもよい。この場合、工程ｃ）は、ＡＲＮＴ２の遺伝子発現レベルを、発現を１とする非処理試料と比較して、少なくとも１．７倍増加させる活性剤を選択することを含むことが好ましい。
【００２２】
あるいは、ＡＲＮＴ２の発現の定量は、培養ケラチノサイトに対して免疫細胞化学染色によって行ってもよい。この場合、工程ｃ）は、免疫細胞化学染色によって得られ、幾つかのランダムな画像上で視覚的に評価される染色の平均強度を、非処理試料を用いて得られる染色について評価した平均強度の少なくとも１．４倍にする活性剤を選択することを含むことが有利である。
【００２３】
しかし、ＡＲＮＴ２の発現を定量する任意の他の手段、例えば、ＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡまたはＡＲＮＴ２タンパク質のいずれかの産生の定量による任意の他の手段を、本発明を逸脱することなく、使用することができる。
【００２４】
本発明に従って選択し得る活性剤は、有利には植物抽出物であり、すなわち、任意の種類の溶媒を使用して、例えば、樹皮、木部、根、根茎、茎、葉、果実、または花などの植物の任意の部分を抽出することによって得られる活性剤である。
【００２５】
一般的に、抽出は、植物の新鮮な部分または乾燥した部分に対して、場合によっては切り刻み、または粉砕して、通常どおりに行うことができる。一般的には、抽出は、１種もしくは複数の極性もしくは無極性の溶媒またはそれらの混合物中で、例えば、室温〜１００℃、有利には３０〜７０℃の範囲の温度で、約３０分〜１２時間、好ましくは１〜８時間の期間、浸漬または穏やかに振盪することによって行う。得られた溶液は、次いで、植物の不溶性の物質を除去するために濾過することが好ましい。溶媒もまた、好適な場合には、それが揮発性溶媒、例えば、エタノール、メタノール、またはイソプロパノールであれば、除去する。
【００２６】
あるいは、植物抽出物は、二酸化炭素などの超臨界流体を使用する抽出によって調製してもよい。
【００２７】
さらに別の実施形態によれば、植物抽出物は、水蒸気蒸留によって、すなわち、精油を取り除いた後に、極性指数が３．５より大きい極性有機溶媒を使用して、場合により極性指数が１未満である非極性有機溶媒と混合して、水蒸気蒸留残渣を抽出する工程を含む方法に従って得てもよい。
【００２８】
これらの抽出方法は、植物抽出物の分野では一般的であり、当業者であれば、その一般的知識に基づいて、その反応パラメータを調節することができる。
【００２９】
この抽出工程の後、植物抽出物が得られ、この植物抽出物は、次いで、特に活性炭を溶媒の存在下で使用して、脱色工程に付してもよい。活性炭の重量は、好ましくは、抽出物の重量の０．５％〜５０％の間である。特に、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、例えば、メタノール、エタノール、もしくはイソプロパノールなど、極性有機溶媒、例えば、プロピレングリコールもしくはジプロピレングリコールなど、または当該分野で一般的な任意の他の溶媒から選ばれる１種または複数の溶媒が使用され得る。揮発性溶媒は、次いで減圧下で除去してもよい。
【００３０】
当業者であれば、種々の植物抽出物を、例えば、使用する植物および溶媒を変化させて、調製することができよう。あるいは、植物抽出物は、商業的に入手してもよい。これら活性剤は、次いで、上記および以下の実施例に記載されるように、このような植物抽出物のいずれかがＡＲＮＴ２の遺伝子発現レベルを増大させて本発明に従って選択され得るかどうかを決定するためにスクリーニング試験に付すことができる。
【００３１】
上記スクリーニング試験に合格すると、本発明に従って選択された活性剤は、化粧用途に使用して、ヒトの皮膚に局所的に適用したときに、バリア機能の非病的損傷に起因する皮膚の徴候を予防し、またはそれに対処し得る。
【００３２】
したがって、上記スクリーニング方法を使用して、ヒトの皮膚に局所的に適用したときに、乾燥の徴候からの皮膚を保護すること、外部環境、特に紫外線の傷害作用から皮膚を保護すること、または毒素、薬物、および化学物質の侵入から皮膚を保護すること、ならびに皮膚の酸化負荷を軽減することが可能な活性剤を選択することができる。
【００３３】
バリアの完全性は、特に、コルネオメトリー（corneometry）によって、当業者によく知られた通常の技術に従って測定し得る。
【００３４】
変形として、本発明のスクリーニング方法を使用して、ヒトの皮膚に局所的に適用したときに皮膚の光老化を予防することが可能な活性剤を選択することができる。
【００３５】
本発明に従って選択される活性剤または当該活性剤を含有する組成物は、非病的乾燥皮膚および／または老化した皮膚に適用されることが好ましい。これらは、顔、首、およびおそらくは襟ぐり、または変形として身体のあらゆる部分の皮膚に、有利に適用され得る。
【００３６】
これに関し、活性剤は、組成物の総重量に対して、例えば、０．００００１重量％〜１０重量％の比率、好ましくは、０．０００１重量％〜５重量％の比率、より好ましくは０．００１重量％〜１重量％の比率で化粧用組成物中に含まれる。
【００３７】
この活性剤を含有する組成物は、朝におよび／または夕に、顔全体、首、および場合によっては襟ぐり、またさらには身体に適用することができる。
【００３８】
本組成物には、一般的に、先に記載した活性剤に加えて、生理学的に許容でき、かつ好ましくは化粧上許容できる媒体、すなわちヒトの皮膚と接触する使用に好適であり、毒性、不適合性、不安定性、またはアレルギー応答の危険性が全くなく、特に、使用者に受容できない不快感（発赤、つっぱり、ヒリヒリ感など）を全く引き起こさない媒体を含む。
【００３９】
この媒体は、一般に水、および、場合によってエタノールなどの他の溶媒を含有する。
【００４０】
本発明に従って選択される活性剤を含有する組成物は、皮膚への局所的適用に適する任意の形態、特に、場合によりマイクロエマルジョンもしくはナノエマルジョンでもよい水中油型、油中水型、もしくは多層エマルジョン（Ｗ／Ｏ／ＷもしくはＯ／Ｗ／Ｏ）の形態、または水性分散液、溶液、水性ゲル、もしくは無水組成物の形態とすることができる。この組成物は、水中油型エマルジョンの形態であることが好ましい。
【００４１】
この組成物は、好ましくは、顔および／または身体の皮膚に対するケア製品および／またはクレンジング製品として使用され、特に、例えば、ポンプ−ディスペンサーボトル、エアロゾルもしくはチューブ内に調整された流体、ゲルもしくはムースの形態、または例えば、広口ビン内に調整されたクリームの形態であってよい。変形として、本組成物は、メーキャップ製品の形態、特に、ファンデーションまたはルースパウダーもしくはコンパクトパウダーの形態であってもよい。
【００４２】
この組成物は、様々な補助剤、例えば、以下から選ばれる少なくとも１つの化合物を含有することができる。
−油、特に、直鎖状または環状の、揮発性または不揮発性のシリコーン油、例えば、ポリジメチルシロキサン（ジメチコーン）、ポリアルキルシクロシロキサン（シクロメチコーン）、およびポリアルキルフェニルシロキサン（フェニルジメチコーン）；合成油、例えば、フッ素油など、安息香酸アルキルおよび分枝鎖炭化水素、例えば、ポリイソブチレン；植物油、特にダイズ油、またはホホバ油；ならびに鉱物油、例えば、液状石油ゼリー（liquid petroleum jelly）から選べる油；
−ロウ、例えば、オゾケライト、ポリエチレンロウ、蜜ロウ、またはカルナウバロウ；
−特に、触媒の存在下で、少なくとも１つの反応基（特に、水素またはビニル）を含有し、末端および／または側鎖の位置に少なくとも１つのアルキル基（特に、メチル）またはフェニルを保有するポリシロキサンと、有機シリコーン、例えば、オルガノヒドロゲノポリシロキサンとを反応させることによって得られるシリコーンエラストマー；
−界面活性剤、好ましくは、非イオン性、陰イオン性、陽イオン性、または両性にかかわらず乳化性界面活性剤、特に多価アルコールの脂肪酸エステル、例えば、グリセロールの脂肪酸エステル、ソルビタンの脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールの脂肪酸エステル、およびショ糖の脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールの脂肪アルキルエーテル；アルキルポリグルコシド；ポリシロキサン変性ポリエーテル；ベタインおよびその誘導体；ポリクオタニウム；エトキシ化脂肪アルキル硫酸塩；スルホサクシネート；サルコシネート；リン酸アルキルおよびジアルキルならびにこれらの塩；ならびに脂肪酸石鹸；
−補助界面活性剤、例えば、直鎖脂肪アルコール、特にセチルアルコールおよびステアリルアルコール；
−増粘剤および／またはゲル化剤、ならびに、特にアクリロイルメチルプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳ）の、および／またはアクリルアミドの、および／またはアクリル酸の、および／またはアクリル酸の塩もしくはエステルの、架橋または非架橋の、親水性または両親媒性のホモポリマーおよびコポリマー；キサンタンゴムまたはグアーゴム；セルロース誘導体；ならびにシリコーンゴム（ジメチコノール）；
−有機スクリーニング剤、例えば、ジベンゾイルメタン誘導体（ブチルメトキシジベンゾイルメタンを含む）、ケイ皮酸誘導体（メトキシケイ皮酸エチルヘキシルを含む）、サリチル酸塩、パラアミノ安息香酸、β，β’−ジフェニルアクリレート、ベンゾフェノン、ベンジリデンカンファー誘導体、フェニルベンズイミダゾール、トリアジン、フェニルベンゾトリアゾール、およびアントラニル誘導体；
−被覆もしくは非被覆の顔料またはナノ顔料の形態の鉱物酸化物をベースとした、特に二酸化チタンもしくは酸化亜鉛をベースとした、無機スクリーニング剤；
−染料；
−保存剤；
−特にポリアミド、シリカ、タルク、雲母、および繊維（特にポリアミド繊維もしくはセルロース繊維）から選べる充填剤、特にソフトフォーカス効果のある粉末；
−捕捉剤、例えば、ＥＤＴＡ塩；
−香料；
−およびそれらの混合物、但し、このリストに限定されない。
【００４３】
これらの補助剤の例は、特に、ＣＴＦＡ辞典（International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association出版, 11th edition, 2006）において言及されており、この辞典には、限定するものではないが、スキンケア業界において通常使用されている化粧用成分および薬剤成分が、広範囲に記載されており、それらは本発明による組成物における付加的な成分として使用するのに適している。
【００４４】
本発明に従って選択される活性剤を含有する組成物は、さらなる利益（鎮静もしくは抗炎症活性、漂白もしくは脱色素活性、および／または清浄活性を含む）も提供し得る。
【００４５】
この組成物は、ＡＲＮＴ２の発現を刺激する活性剤以外の活性剤を含むことができ、特に、角質溶解薬、特にα−ヒドロキシ酸、例えば、グリコール酸、乳酸、およびクエン酸など、ならびにこれらのエステルまたは塩；β−ヒドロキシ酸、例えば、サリチル酸およびその誘導体；ケラチノサイトの分化および／または角質化を、直接的に、または、例えば、β−エンドルフィンの生成を刺激することによって間接的に、増大させる作用剤、例えば、高度好熱菌（Thermus thermophilus）抽出物、またはカカオ（Theobroma cacao）の豆殻抽出物、トウモロコシの水溶性抽出物、バンバラマメ（Voandzeia substerranea）のペプチド抽出物、およびナイアシンアミド；表皮脂質、および表皮脂質の合成を、直接的に、またはグルコシルセラミドなどの脂質前駆物質の、セラミドへの脱グリコシル化を調節するある種のβ−グルコシダーゼを刺激することによって、増大させる作用剤、例えば、リン脂質、セラミド、ルピナスタンパク質加水分解物、およびジヒドロジャスモン酸誘導体；湿潤剤、例えば、多価アルコール、特に、グリセロール、ヒアルロン酸などのグルコサミノグリカン、それらの糖およびアルキルエステル、アミノ酸、例えば、グリシン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、スレオニン、リシン、グルタミン酸、タウリン、プロリン、セリンなど、およびこれらの誘導体、ピロリドンカルボキシル酸（ＰＣＡ）およびその塩、尿素およびその誘導体、エクトイン、グルコサミン、クレアチン、コリン、ベタイン、無機塩、例えば、塩素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、マンガン、またはリン酸塩など、ならびに湿潤剤合成ポリマー、例えば、メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンホモポリマーおよびコポリマー、ならびにグリセリル（メタ）アクリレートホモポリマーおよびコポリマー；抗酸化剤、および／またはフリーラジカルスカベンジャー、ならびに／または汚染防止剤、例えば、トコフェロールおよびそのエステル、アスコルビン酸、およびそのアルキルおよびホスホリルエステル、ならびに植物または藻類のある種の抽出物、特に、高度好熱菌（Thermus thermophilus）の抽出物；ならびにこれらの混合物から選ばれる少なくとも１つの活性剤を含むことができるが、このリストに限定されない。
【００４６】
ＡＲＮＴ２の発現を刺激する活性剤を、上記の作用剤の１種または複数と組み合わせることにより、同じ処方において、これら２種類の活性剤の効果を有利に組み合わせることが可能になり、これにより、皮膚の最大かつ持続的な保護を得ることができる。
【００４７】
本発明をここで、以下の非限定的な実施例によって、例証する。
【実施例１】
【００４８】
正常ヒト線維芽細胞およびケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現レベル試験
プロトコル：
ＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現レベルを、培養した正常ヒト線維芽細胞と正常ヒトケラチノサイトとに対して評価した。
【００４９】
新生児の包皮に由来する線維芽細胞（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を、６ウェルプレートに配置し、ウシ胎仔血清（ＧＩＢＣＯ）およびペニシリン−ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ）を補充したＤＭＥＭ増殖培養培地（ＧＩＢＣＯ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養する。インキュベーター中で２４時間、３７℃で培養した後、ほぼコンフルエントな細胞を、ＨＢＳＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で洗浄し、ｍＲＮＡ抽出に使用した。
【００５０】
新生児の包皮に由来するケラチノサイト（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を、６ウェルプレートに配置し、補助剤を含むケラチノサイト増殖培養培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養する。インキュベーター中で２４時間、３７℃で培養した後、７０％コンフルエントな細胞を、ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で洗浄し、ｍＲＮＡ抽出に使用した。
【００５１】
線維芽細胞およびケラチノサイトを、２４時間培養した。ｍＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙキットを使用して単離し、ＱｕａｎｔＩｔキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）を使用して定量した。
【００５２】
細胞試料におけるＡＲＮＴ２のｍＲＮＡの発現レベルを定量するために、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を使用した。これらの試料のハウスキーピング遺伝子の発現と比較して、結果を正規化した。結果は、２つの細胞型における標的遺伝子ＡＲＮＴ２の発現レベルの変化の倍数として表した。
【００５３】
ＡＲＮＴ２  ＰＣＲプライマーは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）から入手した。
【００５４】
ハウスキーピング遺伝子は、ＧＡＰＤＨであった。ＧＡＰＤＨ  ＰＣＲプライマーは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）から入手した。
【００５５】
逆転写は、ｇｅｎｅ  Ａｍｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者の推奨に従って行った。
【００５６】
リアルタイムＰＣＲ測定は、ｉＣＹＣＬＥＲ  ＩＱ機器（Ｂｉｏ−ｒａｄ、ＣＡ）を、Ｔａｑｍａｎプローブと共に使用して行った。
【００５７】
全ての試験において、ｃＤＮＡは、標準化されたプログラムを使用して増幅した。各試料に、Ｔａｑｍａｎマスターミックス、Ｔａｑｍａｎプライマー、プローブおよび水を入れた。反応あたりのｃＤＮＡの最終量は、逆転写に使用した５０ｎｇの総ＲＮＡに対応していた。
【００５８】
標的遺伝子の発現の相対的定量を、Ｐｆａｆｆｌ数理モデルを使用して行った（Pfaffl, MW, Nucleic Acids Res. 29（9）, p.E45, 2001）。
【００５９】
結果：
ＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡは、正常ヒト線維芽細胞と正常ヒトケラチノサイトの両方において発現している。正常線維芽細胞におけるＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡの発現は、正常ヒトケラチノサイトにおける発現よりも有意に高い。線維芽細胞とケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡの発現を評価したところ、それぞれ、５３．４（±３．６５）と１（±０．２）であった。
【実施例２】
【００６０】
ＵＶＢ照射による、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現刺激試験
プロトコル：
ＵＶＢ照射が、ＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）発現に与える効果を、培養ケラチノサイトに対して評価した。
【００６１】
新生児の包皮に由来するケラチノサイト（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を、６ウェルプレートに配置し、補助剤を含むケラチノサイト増殖培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。インキュベーター中で２４時間、３７℃で培養した後、７０％コンフルエントな細胞を、ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で洗浄し、次いで、ＢｉｏＳｕｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｖｉｌｂｅｒ  Ｌｏｕｒｍａｔ、Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、様々な線量のＵＶＢで、ＵＶＢ照射を行い、最後にケラチノサイト基礎培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で２４時間インキュベートした。陽性の結果は、２人の異なるドナー由来の細胞を使用して確認した。抽出物の細胞毒性は、活性を試験する前に、ヒト培養ケラチノサイトにおいて評価した。
【００６２】
実施例１の試験と同様の試験を行った。
【００６３】
結果：
１０ｍＪ／ｃｍ２、２０ｍＪ／ｃｍ２、および３０ｍＪ／ｃｍ２の線量のＵＶＢを照射した、１人のドナー由来のケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡの発現を評価したところ、それぞれ、１．５（±０．１９）、３．６（±１．２５）、および１０．９（±２．３７）であった。無処理対照ケラチノサイトでは、発現レベルは、１．０（±０．２５）であった。データは、２人のドナーのケラチノサイトにおいて確認した。
【００６４】
このように、ケラチノサイトによるＡＲＮＴ２の合成の増加は、皮膚がＵＶ照射に対して自己を保護するために確立する第１の防御手段に関与している。したがって、ケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２の発現を刺激する化合物も、酸化ストレスに対して皮膚を保護するはずである。
【実施例３】
【００６５】
ＡＲＮＴ２サイレンシングが、細胞培養物におけるケラチノサイトの生存性に与える効果
１人のドナーの新生児の包皮に由来するケラチノサイト（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、インキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２で、ケラチノサイトの増殖に適した増殖培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、培養した。次いで、これらのケラチノサイトに、ＡＲＮＴ２に特異的なサイレンサーＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ、ＴＸ）を、形質移入剤ＮｅｏＦＸ（Ａｍｂｉｏｎ、ＴＸ）を使用して、供給業者により記載された形質移入プロトコルに従って形質移入した。ＡＲＮＴ２遺伝子の発現を抑制する３つの異なるｓｉＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ、ＴＸ）を試験した。ＡＲＮＴ２発現を最も抑制する１つのｓｉＲＮＡを、さらなる実験のために選択した。ＡＲＮＴ２に対するｓｉＲＮＡを形質移入した細胞と、スクランブルｓｉＲＮＡを形質移入した細胞（陰性対照  ＃１）（Ａｍｂｉｏｎ、ＴＸ）と、形質移入しなかった細胞（陰性対照  ＃２）とを、０〜５日間培養した。次いで、試料を、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより、ノックダウンを確認するために実施例１に記載したものと同じ方法を使用して分析し、またアポトーシスを評価するためにＦＡＣＳ分析を使用して分析した。
【００６６】
ＡＲＮＴ２サイレンシングがアポトーシスに与える効果を、ケラチノサイト細胞培養物において、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ染色（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｉｅｓ）およびＦＡＣＳ分析を使用して評価した。陰性対照ｓｉＲＮＡで処理した細胞およびＡＲＮＴ２に対するｓｉＲＮＡで処理した細胞を、氷冷ＰＢＳで洗浄し、製造業者が提案する手法に従ってアネキシンＶ−ＦＩＴＣを用いて３連で染色を行った。染色後、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーターおよびＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｉｅｓ）ならびにＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、フローサイトメトリーにより、細胞を分析した。
【００６７】
結果：
得られた結果から、個々のサイレンサーＲＮＡを通じてＡＲＮＴ２の発現を不活性化することによって、培養ケラチノサイトの生存性の著しい低下が誘導されることが、実証できた。ＡＲＮＴ２に対するｓｉＲＮＡによるサイレンシング後のケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡの発現を評価したところ、ＡＲＮＴ２発現が６０％減少したことが示された。
【００６８】
１人のドナー由来のこれらのケラチノサイトにおいてアポトーシスを評価したところ、アポトーシス率が２７．３４％（±７．２６）増加したことが示された。無処理のまたはスクランブルｓｉＲＮＡで処理した対照ケラチノサイトにおけるアポトーシス率は、それぞれ１３．３８（±２．１９）および１２．８６％（±０．１５）であった。データは、２人のドナーのケラチノサイトにおいて確認した。
【００６９】
この試験から、ケラチノサイトによるＡＲＮＴ２の発現が、ケラチノサイトの生存性に必須であることが分かる。
【実施例４】
【００７０】
合成活性剤による、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現刺激試験
プロトコル：
ＷＯ２００６／１３４２８２の実施例１に記載のレスベラトロール３，５−ジアセテート−４’−リポ酸塩が、ＡＲＮＴ２のｍＲＮＡの発現に与える効果を、ケラチノサイトにおいて評価した。
【００７１】
新生児の包皮に由来するケラチノサイト（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）を、６ウェルプレートにおいて、補助剤を伴うケラチノサイト培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。２４時間、３７℃で培養した後、７０％コンフルエントな細胞を、ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で洗浄し、試験対象の活性剤を含有する基本ケラチノサイト培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、２４時間、濃度を増加させながらインキュベートした。活性剤の細胞毒性は、活性を試験する前に、ヒト培養ケラチノサイトにおいて評価した。
【００７２】
ケラチノサイトを、様々な濃度の活性剤を用いて、３連で、２４時間処理した。ｍＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＣＡ）を使用して単離し、ＱｕａｎｔＩｔキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）を使用して定量した。
【００７３】
ＰＣＲプライマーは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）から得た。使用したハウスキーピング遺伝子は、ＲＰＬＰＯであった。
【００７４】
非処理試料と比較して処理試料におけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡの発現を定量するために、リアルタイムポリメラーゼ連鎖増幅（ＲＴ−ＰＣＲ）を行った。これらの試料のハウスキーピング遺伝子の発現と比較して、結果を正規化した。結果は、非処理対照に対する処理試料における標的遺伝子ＡＲＮＴ２の発現の増加倍数および減少倍数として表した。
【００７５】
逆転写は、ｇｅｎｅ  Ａｍｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者の推奨に従って行った。
【００７６】
リアルタイムＰＣＲ測定は、ｉＣＹＣＬＥＲ  ＩＱ機器（ＢｉｏＲａｄ、ＣＡ）を使用して、Ｔａｑｍａｎプライマーと共に行った。
【００７７】
全ての試験において、ｃＤＮＡは、標準化されたプログラムを使用して増幅した。各試料を、Ｔａｑｍａｎマスターミックス、Ｔａｑｍａｎプライマーおよび水と共にインキュベートした。反応あたりのｃＤＮＡの最終量は、逆転写に使用された７５ｎｇの総ＲＮＡに対応していた。
【００７８】
標的遺伝子の発現の相対的定量を、Ｐｆａｆｆｌ数理モデルを使用して行った（Pfaffl, MW, Nucleic Acids Res. 29（9）, p.E45, 2001）。
【００７９】
陽性の結果は、２人の異なるドナー由来の細胞を使用して確認した。単一のドナーからの代表的なデータを結果に示す。
【００８０】
結果：
結果を以下の表１に示す。
【表１】
2013512937.tif 000002
【００８１】
この試験から、試験した活性剤が、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のｍＲＮＡの発現を有意に刺激することができ、したがって皮膚のバリア機能を維持するために使用し得ることが、明らかになる。
【実施例５】
【００８２】
植物抽出物による、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の発現刺激試験
プロトコル：
バニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）抽出物は、ＷＯ２００７／０３４０４２の実施例１に記載のように調製した。
【００８３】
植物抽出物が、ＡＲＮＴ２  ｍＲＮＡの発現に与える効果を、培養ケラチノサイトに対して評価した。実施例４の試験と同様の試験を行った。
【００８４】
ケラチノサイトは、様々な濃度のバニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）抽出物を用いて、３連で、２４時間処理した。ｍＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＣＡ）を使用して単離し、ＱｕａｎｔＩｔキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）を使用して定量した。ＰＣＲプライマーは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＣＡ）から得た。使用したハウスキーピング遺伝子は、ＧＡＰＤＨであった。
【００８５】
非処理試料と比較して処理試料におけるＡＲＮＴ２のメッセンジャーＲＮＡの発現を定量するために、リアルタイムポリメラーゼ連鎖増幅（ＲＴ−ＰＣＲ）を行った。これらの試料のハウスキーピング遺伝子の発現と比較して、結果を正規化した。結果は、非処理対照に対する処理試料における標的遺伝子ＡＲＮＴ２の発現の増加倍数または減少倍数として表した。
【００８６】
逆転写は、ｇｅｎｅ  Ａｍｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者の推奨に従って行った。
【００８７】
リアルタイムＰＣＲ測定は、ｉＣＹＣＬＥＲ  ＩＱ機器（ＢｉｏＲａｄ、ＣＡ）を使用して、Ｔａｑｍａｎプライマーと共に行った。
【００８８】
全ての試験において、ｃＤＮＡは、標準化されたプログラムを使用して増幅した。各試料を、Ｔａｑｍａｎマスターミックス、Ｔａｑｍａｎプライマーおよび水と共にインキュベートした。反応あたりのｃＤＮＡの最終量は、逆転写に使用された５０ｎｇの総ＲＮＡに対応していた。
【００８９】
標的遺伝子の発現の相対的定量を、Ｐｆａｆｆｌ数理モデルを使用して行った（Pfaffl, MW, Nucleic Acids Res. 29（9）, p.E45, 2001）。
【００９０】
陽性の結果は、２人の異なるドナー由来の細胞を使用して確認した。１人のドナーから得られた代表的なデータを結果に示す。
【００９１】
結果：
結果を以下の表２に示す。
【表２】
2013512937.tif 000003
【００９２】
この試験から、バニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）抽出物が、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２のｍＲＮＡの発現を有意に刺激することができ、したがって皮膚のバリア機能を改善および保護するために使用し得ることが、明らかになる。
【実施例６】
【００９３】
植物抽出物による、正常ヒトケラチノサイトにおける発現ＡＲＮＴ２タンパク質の刺激試験
プロトコル：
実施例５で使用した植物抽出物が、ＡＲＮＴ２タンパク質の発現に与える効果を、培養ケラチノサイトに対して評価した。
【００９４】
新生児の包皮に由来するケラチノサイト（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）を、ポリ−Ｌ−オルニチン（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ）で被覆したカバーグラスを含有する６ウェルプレートにおいて、補助剤を含むケラチノサイト培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。２４時間、３７℃で培養した後、７０％コンフルエントな細胞を、ＰＢＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）で洗浄し、試験対象の抽出物を含有する基本ケラチノサイト培養培地（ＥｐｉＬｉｆｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に、２４時間インキュベートした。抽出物の細胞毒性を、活性を試験する前に、ヒト培養ケラチノサイトにおいて評価した。
【００９５】
非処理試料と比較して処理試料におけるＡＲＮＴ２タンパク質の発現を定量するために、２人のドナー由来の培養ケラチノサイトを有するカバーグラスの免疫細胞化学染色（ＩＣ）を使用した。各ドナーに対し、１次ウサギ抗ヒトＡＲＮＴ２抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）および２次ヤギ抗ウサギ抗体（Ｌａｂ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＣＡ）を用いて、３連で、染色を行った。染色は、ＡＥＣシステム（Ｌａｂ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＣＡ）で視覚化した。染色の程度は、各実験条件に対して３０個のランダムな画像上で評価し、１を最小強度、５を最大強度とする１〜５のスケールを使用して、染色の視覚評価を行った。平均値間の有意差を、独立ｔ検定を使用して評価した。
【００９６】
結果：
ケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２染色を評価したところ、０．０５％のバニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）で処理したケラチノサイトでは、４．５２（±０．５１）であり、０．０２５％のバニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）で処理したケラチノサイトでは、３．９３（±０．８３）であり、無処理対照ケラチノサイトでは、１．５２（±０．７０）であった。非処理ケラチノサイトと処理ケラチノサイトとにおけるＡＲＮＴ２染色の差異は有意であった（ｐ＜０．０００２）。これにより、０．０５％および０．０２５％のバニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）による処理で、ＡＲＮＴ２タンパク質の量が増加することが、実証される。
【００９７】
結果を以下の表３に示す。
【表３】
2013512937.tif 000004
【００９８】
この試験から、バニラ・プラニフォリア（Vanilla Planifolia）抽出物が、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２タンパク質の発現を刺激することができ、したがって皮膚のバリア機能を保護および改善するために使用し得ることが、明らかになる。
【実施例７】
【００９９】
合成活性剤による、正常ヒトケラチノサイトにおける発現ＡＲＮＴ２タンパク質の刺激試験
プロトコル：
実施例４で使用した活性剤が、ＡＲＮＴ２タンパク質の発現に与える効果を、ケラチノサイトにおいて評価した。実施例６の試験と同様の試験を行った。
【０１００】
陽性の結果は、２人の異なるドナー由来の細胞を使用して確認した。１人のドナーからの代表的なデータを結果に示す。
【０１０１】
結果：
ＡＲＮＴ２染色を評価したところ、処理ケラチノサイトでは、２．２２（±０．６４）であり、無処理対照ケラチノサイトでは、１．５２（±０．７０）であった。非処理ケラチノサイトと処理ケラチノサイトとにおけるＡＲＮＴ２染色の差異は、有意であった（ｐ＝０．０００２）。
【０１０２】
結果を以下の表４に示す。
【表４】
2013512937.tif 000005
【０１０３】
この試験から、試験された活性剤が、正常ヒトケラチノサイトにおけるＡＲＮＴ２の発現を有意に刺激し、したがって皮膚のバリア機能を維持するために、および、ＵＶ照射の傷害作用に対して皮膚を保護するために使用し得ることが、明らかになる。
【実施例８】
【０１０４】
化粧用組成物
以下の組成物は、当業者にとって従来通りに調製し得る。下記に示す量は、重量パーセンテージで表している。大文字の成分は、ＩＮＣＩ名称に従って特定している。
ＥＤＴＡ四ナトリウム                                ０．０５％
ポリグリセリルメタクリレート  ＆  
プロピレングリコール（１）                            ５．００％
グリセロール                                        ６．００％
水相ゲル化剤                                        ５．５０％
非イオン性乳化剤                                    ４．００％
セテアリルアルコール                                ２．００％
皮膚軟化剤                                        １７．００％
酢酸トコフェロール                                  ０．５０％
保存剤                                              ２．２０％
植物抽出物（２）                                      ０．０５％
ヒアルロン酸ナトリウム                              ５．００％
香料                                                    十分量
染料                                                    十分量
水                                    １００．００％まで十分量
（１）Ｇｕａｒｄｉａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製のＬＵＢＲＡＪＥＬ  ＭＳ（登録商標）
（２）実施例４または５に開示される試験に基づいて種々の植物抽出物をスクリーニングすることによって得られたもの
【０１０５】
この組成物は、水中油型エマルジョンの形態であり、毎日、朝および／または夕に、顔の皮膚に対して、その保湿のために、および柔軟で、なめらかな輝きのある皮膚にするために、適用し得る。
【国際調査報告】
2013512937.tif 000006
2013512937.tif 000007
2013512937.tif 000008