(57)【要約】ニッケイに由来する実質的にクマリンを含まない抽出物を含む医薬組成物。いくつかの工程：原材料をすり潰し、前の工程からの原材料を第１溶媒を用いて浸して柔らかくすることにより抽出してシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物を得て、前の工程からの原材料を第２溶媒を用いた液液抽出により分画して実質的にクマリンを含まない抽出物を得て、ここでその第２溶媒はその第１溶媒と混和せず、そして場合によりその実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させる；を含む、その製造方法。毎日消費されるのに、および長期の使用において安全である医薬組成物を製造するための、その実質的にクマリンを含まない抽出物を単一の構成要素として、または適切な医薬賦形剤（単数または複数）との組み合わせで含む医薬組成物。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程：
（ａ）シナモムム・ブルマンニーの原材料をすり潰し、
（ｂ）工程（ａ）からの原材料を第１溶媒を用いて浸して柔らかくすることにより抽出してシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物を得て、
（ｃ）工程（ｂ）からの抽出された原材料を第２溶媒を用いた液液抽出により分画して実質的にクマリンを含まない抽出物を得て、ここで該第２溶媒は該第１溶媒と混和せず、そして場合により
（ｄ）該実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させる；
を含む、シナモムム・ブルマンニーに由来する実質的にクマリンを含まない抽出物の調製のためのプロセス。
【請求項２】
工程（ｂ）において用いられる第１溶媒が水、アルコール類、アセトンまたはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
工程（ｂ）の粗抽出物および工程（ｃ）における第２溶媒の比率が約１：１〜１：２である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項４】
実質的にクマリンを含まない抽出物中のクマリンの含有量が０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物以下の値を有する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
以下の工程：
（ａ）シナモムム・ブルマンニー植物の原材料をすり潰し、
（ｂ）工程（ａ）からの原材料を第１溶媒を用いて浸して柔らかくすることにより抽出してシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物を得て、
（ｃ）工程（ｂ）からの抽出された原材料を第２溶媒を用いた液液抽出により分画して実質的にクマリンを含まない抽出物を得て、ここで該第２溶媒は該第１溶媒と混和せず、そして場合により
（ｄ）該実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させる；
を含むプロセスにより調製されるシナモムム・ブルマンニーに由来する実質的にクマリンを含まない抽出物であって、実質的にクマリンを含まない抽出物中のクマリンレベルが０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物以下の値を有する、前記シナモムム・ブルマンニーに由来する実質的にクマリンを含まない抽出物。
【請求項６】
固体、半固体、もしくは液体剤形、医薬または食品／飲料製品を製造するための、請求項５に記載のシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を単一の構成要素として、または適切な医薬賦形剤（単数または複数）との組み合わせで含む医薬組成物または食事栄養補助剤。
【請求項７】
ビタミンが含まれ、錠剤、カプセル、シロップ、発泡錠、ゲル、軟膏、クリーム、またはマウスウォッシュ（ｍｏｕｔｈｗａｓｈ）製剤が含まれる、医薬製品または食品栄養補助剤を製造するための、請求項５に記載のシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を含む医薬組成物または食事栄養補助剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シナモムム・ブルマンニー（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｂｕｒｍａｎｉｉ）の実質的にクマリンを含まない抽出物を製造するためのプロセスに関する。本発明は、シナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を含む医薬組成物および食事栄養補助剤（ｄｉｅｔａｒｙ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）にも関する。
【背景技術】
【０００２】
シナモムム・ブルマンニーはインドネシアの在来植物の１つであり、その薬物としての効力に関して経験的に知られてきた。シナモムム・ブルマンニーは一般にニッケイと呼ばれる。ニッケイに基づく製品はしばらく前から食品栄養補助剤（ｆｏｏｄ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）として市場に出されており、様々な疾患を処置することが示されてきた。しかし、その療法的作用にもかかわらず、ニッケイの植物から抽出されたニッケイ製品のほとんどは高レベルのクマリンを含有していることが最近分かってきた。
【０００３】
クマリンは、ニッケイ、トンカ豆、ヴァニリ（ｖａｎｉｌｉ）およびクスクタ・レフレクサ（Ｃｕｓｃｕｔａ  ｒｅｆｌｅｘａ）（薬草）が含まれるいくつかの植物中に存在する天然のベンゾピロン化合物である。それは１８８２年以来香料の製造における構成要素の１つとして広く知られ、用いられてきた。医薬的使用に関して、クマリンは抗凝固薬の製造における前駆体である。しかし、クマリンは特に長期の使用後に肝臓に対して毒性になり得る。
【０００４】
欧州安全機関（ＥＳＡ）は、クマリンの耐容１日摂取量（ＴＤＩ）を体重１キログラムあたりクマリン０．１ｍｇとして推奨しており、それは健康に危険を及ぼすことなく生涯にわたって毎日摂取することができる。
【０００５】
今日までに、現在市場で入手できる低レベルのクマリンを有するシナモムム・ブルマンニーの抽出物は存在しない。人々は通常シナモムム・ゼイラニクム（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ）を含むニッケイの代替源を使用し、これはそのクマリンのレベルが低く、安全であると考えられるためである。しかし、シナモムム・ゼイラニクムはより高価であり、従ってそれは大規模な産業的適用にとって経済的でない。従って、実質的にクマリンを含まないシナモムム・ブルマンニーの抽出物を開発する必要性が存在する。本発明は、実質的にクマリンを含まず、従ってそれを長期使用のために安全に消費することができるシナモムム・ブルマンニー抽出物の製造プロセスを教示する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明から教示される目的および／または解決法は、好ましい態様において述べられるであろう。説明される態様は、本発明の実施から学ぶことができる他の態様の可能性を限定することなく、本発明を理解する目的に役立つ。本発明において教示される目的および／または解決法は、本明細書における特許請求の範囲において詳細に述べられる要素および組み合わせから実現されるであろう。
【０００７】
本発明の解決法を達成するため、および本発明の目的に従って、その態様において説明されるように、およびこの出願において広く記述されるように、本発明の第１観点は、抽出プロセスに続いて２種類の異なる不混和性の液体中の相対的溶解度に基づく分画プロセスを行うことによる、シナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の調製のためのプロセスに向けられている。このプロセスは現在液液抽出として知られている。
【０００８】
本発明の第２観点は、単一の有効成分としての、または組み合わせでのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物に向けられており、ここで前記の抽出物中のクマリンレベルは０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物以下である。
【０００９】
本発明の第３観点は、単一の有効成分としての、または組み合わせでのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を含む医薬組成物または製剤に向けられており、ここで前記の抽出物中のクマリンレベルは０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物以下である。
【００１０】
本出願の明細書中に組み込まれ、その一部を構成する以下の図面は、本発明の１つまたはいくつかの態様を説明している。以下の図面は、本発明により教示される原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、クマリン標準の薄層クロマトグラムである。
【図２】図２は、水を用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物およびクロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、およびｎ−ヘキサンを用いて調製されたその実質的にクマリンを含まない抽出物の薄層クロマトグラムである。注釈：  １はクマリン標準であり、  ２および３は水を用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり、  ４および５はクロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ６および７はｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ８および９は酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；そして  １０および１１はｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であった。
【図３】図３は、メタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物およびクロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、およびｎ−ヘキサンを用いて調製されたその実質的にクマリンを含まない抽出物の薄層クロマトグラムである。注釈：  １はクマリン標準であり、  ２および３はメタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり、  ４および５はクロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ６および７はｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ８および９は酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；そして  １０および１１はｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であった。
【図４】図４は、エタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物およびクロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、およびｎ−ヘキサンを用いて調製されたその極性抽出物の薄層クロマトグラムである。注釈：  １はクマリン標準であり、  ２および３はエタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり、  ４および５はクロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ６および７はｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ８および９は酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；そして  １０および１１はｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であった。
【図５】図５は、アセトンを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物およびクロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、およびｎ−ヘキサンを用いて調製されたその実質的にクマリンを含まない抽出物の薄層クロマトグラムである。注釈：  １はクマリン標準であり、  ２および３はアセトンを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり、  ４および５はクロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ６および７はｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；  ８および９は酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であり；そして  １０および１１はｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物であった。
【図６】図６は、標準クマリン化合物の高速液体クロマトグラムである。
【図７】図７は、水を用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図８】図８は、メタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図９】図９は、エタノールを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１０】図１０は、アセトンを用いて抽出されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１１】図１１は、水を用いて抽出され、クロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１２】図１２は、メタノールを用いて抽出され、クロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１３】図１３は、エタノールを用いて抽出され、クロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１４】図１４は、アセトンを用いて抽出され、クロロホルムを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１５】図１５は、水を用いて抽出され、ｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１６】図１６は、メタノールを用いて抽出され、ｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１７】図１７は、エタノールを用いて抽出され、ｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１８】図１８は、アセトンを用いて抽出され、ｎ−ブタノールを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図１９】図１９は、水を用いて抽出され、酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２０】図２０は、メタノールを用いて抽出され、酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２１】図２１は、エタノールを用いて抽出され、酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２２】図２２は、アセトンを用いて抽出され、酢酸エチルを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２３】図２３は、水を用いて抽出され、ｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２４】図２４は、メタノールを用いて抽出され、ｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２５】図２５は、エタノールを用いて抽出され、ｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【図２６】図２６は、アセトンを用いて抽出され、ｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の高速液体クロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、本発明の範囲を記述された実施例に限定することなく実施例を与えることにより、詳細に論じられるであろう。
この発明は一般に、以下の工程が含まれる２つの主な工程に分けられる：第１工程、水および／または様々な有機溶媒（アルコール類、アセトンが含まれるがそれらに限定されない）が含まれるがそれらに限定されない第１溶媒を用いてシナモムム・ブルマンニーを抽出し、粗抽出物を生成する；第２工程、その粗抽出物を、クロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチルまたはｎ−ヘキサンが含まれるがそれらに限定されない、その第１溶媒（単数または複数）と混和しない他の有機溶媒（単数または複数）を用いて分画し、実質的にクマリンを含まない抽出物を得る。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた分析観察を実施した。
【００１３】
本発明の教示によれば、用語“実質的にクマリンを含まない”は、それによりクマリンのレベルが欧州安全機関（ＥＳＡ）により提案される耐容１日摂取量（ＴＤＩ）の限界より下である状態を意味する。原材料は、抽出プロセスを全く経ていない天然材料であり；粗抽出物は、分画プロセスを経ていない抽出物であり；そして実質的にクマリンを含まない抽出物は、抽出プロセス、続いて分画プロセスを経ており、それによりクマリンのレベルが欧州安全機関（ＥＳＡ）により提案される耐容１日摂取量（ＴＤＩ）の限界より下である抽出物である。
【００１４】
本発明の教示によれば、その抽出プロセスは、水、アルコール類、アセトン、またはそれらの組み合わせが含まれる様々な溶媒を用いて行うことができる。あらゆる溶媒を用いた抽出プロセスの結果もたらされるクマリン含有量は、原材料の質ならびに用いた溶媒中のクマリンの溶解度に依存して様々である。
【００１５】
その抽出プロセスに続いて実施される分画プロセスは、クマリン含有量が特定の目標に達するまで繰り返し行われる。
【実施例】
【００１６】
Ａ．水を用いた抽出プロセスおよびそれからのクマリンの除去
本発明の教示に従う実質的にクマリンを含まないシナモムム・ブルマンニー抽出物は、水に基づく抽出法を用いて調製される。クマリンは熱水中で高度に可溶性であり、従って一般的な水抽出はシナモムム・ブルマンニー抽出溶液中のクマリンの高い含有量をもたらす。
【００１７】
水を用いた抽出プロセスは、シナモムム・ブルマンニーのあらゆる部分、好ましくは樹皮部分をすり潰すことにより開始された。次いでその後に、すり潰されたシナモムム・ブルマンニーの樹皮の原材料の５〜１５倍の体積の、５０〜１００℃の範囲の温度を有する熱水中に１〜２時間浸して柔らかくした。濾過プロセスを実施して濾液を得て、次いでそれを、その濾液を４０〜１００ｃｐｓの範囲の粘度に達するまで蒸発させることにより濃縮した。その濃縮物の粘度を、スピンドル＃６１を有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄｓ  ＤＶ−Ｅ粘度計を用いて、２７℃、１００ｒｐｍにおいて２分間で測定した。従って、シナモムム・ブルマンニーの粗抽出物が得られる。
【００１８】
その粗抽出物中のクマリンの含有量を低減するため、次いでその濃縮物を、クロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチルおよび／またはｎ−ヘキサンが含まれるがそれらに限定されない有機溶媒（単数または複数）を用いた液液抽出（ＬＬＥ）により、相対的溶解度に基づいて分画した。分画溶媒と比較したその粗抽出物の比率は、おおよそ１：１〜１：２である。エマルジョンの形成を回避するため、その混合物を穏やかに振盪した。シナモムム・ブルマンニーの粗抽出物が実質的にクマリンを含まなくなるまで、そのＬＬＥを繰り返し実施した。クマリン含有量に関する分析を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）において実施した。ＴＬＣおよびＨＰＬＣ分析は下記でさらに詳細に説明されるであろう。最後に、そのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させた。
【００１９】
Ｂ．アルコール類を用いた抽出プロセスおよびそれからのクマリンの除去
あるいは、本発明の教示に従う実質的にクマリンを含まないシナモムム・ブルマンニー抽出物は、アルコール類を用いる抽出プロセスにより調製することもできる。クマリンはアルコール類中で容易に溶け、それはアルコール類に基づくシナモムム・ブルマンニー抽出物が高レベルのクマリンを含有する原因となる。
【００２０】
この発明の教示に従って用いられるアルコール類にはメタノール、エタノール、およびブタノールが含まれるが、それらに限定されない。エタノールおよびメタノールが好ましい。アルコール類を用いた抽出プロセスはシナモムム・ブルマンニーのあらゆる部分、好ましくは樹皮部分をすり潰すことにより開始され、続いてその原材料の５〜１５倍の体積のエタノールまたはメタノール中に１〜２時間浸して柔らかくした。この実施例において、水中のアルコール含有量は７０％より大きくなかった。濾過プロセスを実施して濾液を得て、次いでそれを、その濾液を４０〜１００ｃｐｓの範囲の粘度に達するまで蒸発させることにより濃縮した。その濃縮物の粘度を、スピンドル＃６１を有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄｓ  ＤＶ−Ｅ粘度計を用いて、２７℃、１００ｒｐｍにおいて２分間で測定した。従って、シナモムム・ブルマンニーの粗抽出物が得られる。
【００２１】
その粗抽出物中に存在するクマリンの含有量を除去するため、次いでその濃縮物を、クロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチルおよび／またはｎ−ヘキサンが含まれるがそれらに限定されない有機溶媒（単数または複数）を用いた液液抽出（ＬＬＥ）により分画した。分画溶媒と比較したその粗抽出物の比率は、おおよそ１：１〜１：２である。エマルジョンの形成を回避するため、その混合物を穏やかに振盪した。その粗抽出物が実質的にクマリンを含まなくなるまで、そのＬＬＥを繰り返し実施した。クマリン含有量に関する分析を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）において実施した。その後、そのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させた。
【００２２】
Ｃ．アセトンを用いた抽出プロセスおよびそれからのクマリンの除去
さらに代わりに、本発明の教示に従う実質的にクマリンを含まないシナモムム・ブルマンニー抽出物は、アセトンを用いる抽出プロセスにより調製することもできる。
【００２３】
この抽出プロセスはシナモムム・ブルマンニーのあらゆる部分、好ましくは樹皮部分をすり潰すことにより開始され、続いてその原材料の５〜１５倍の体積のアセトンを用いて１〜２時間浸して柔らかくした。この実施例において、水中のアセトン含有量は７０％より大きくなかった。濾過プロセスを実施して濾液を得て、次いでそれを、その濾液を４０〜１００ｃｐｓの範囲の粘度に達するまで蒸発させることにより濃縮した。その濃縮物の粘度を、スピンドル＃６１を有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄｓ  ＤＶ−Ｅ粘度計を用いて、２７℃、１００ｒｐｍにおいて２分間で測定した。従って、シナモムム・ブルマンニーの粗抽出物が得られる。
【００２４】
次いでその濃縮物を、クロロホルム、ｎ−ブタノール、酢酸エチルおよび／またはｎ−ヘキサンが含まれるがそれらに限定されない有機溶媒（単数または複数）を用いた液液抽出（ＬＬＥ）により分画した。分画溶媒と比較したその粗抽出物の比率は、おおよそ１：１〜１：２である。エマルジョンの形成を回避するため、その混合物を穏やかに振盪した。シナモムム・ブルマンニーの粗抽出物が実質的にクマリンを含まなくなるまで、ＬＬＥを繰り返し実施した。その分析は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）において行われた。次いで、水およびアルコール類を用いる抽出プロセスと同様に、そのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させた。
【００２５】
Ｄ．薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を用いたクマリン含有量の分析
この実験は、シナモムム・ブルマンニーの抽出物の内容物が実質的にクマリンを含まないことを確かめるために実施された。上記で論じたようないくつかの異なる抽出プロセスから得られたシナモムム・ブルマンニーの抽出物を、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレートにおいて分析した。４０００ｐｐｍの濃度のシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物および実質的にクマリンを含まない抽出物を調製し、同じ濃度のクマリン標準と比較した。トルエンおよび酢酸エチル（９３：７）を移動相として用いて溶離を行なった。次いでそのクロマトグラムを、２５４ｎｍおよび３６６ｎｍの紫外線の下で、ならびに可視光の下でも観察した。
【００２６】
標準クマリン化合物に関するスポットは、０．４２のＲｆにおいて示された。図４、５、および６のそれぞれの線２および３において、液液抽出による分画の前に調製された粗抽出物のみが標準クマリン化合物と同じＲｆを有することが示された。これは２５４ｎｍの紫外線の下で観察された溶離において明確に見ることができる。一方で、図４、５、および６のそれぞれの線４〜１１において示されているように、液液抽出を用いた分画プロセスの生成物であるシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物は、クマリン化合物のスポットを表わすＲｆ  ０．４２の辺りのスポットを全く示さなかった。これは、本発明の教示に従って調製されたシナモムム・ブルマンニーの抽出物が実質的にクマリンを含まないことを示していた。
【００２７】
Ｅ．高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いたクマリン含有量の分析
検出器フォトダイオードアレイＡｌｌｉａｎｃｅ  ２８８９を有する高速流体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５を用いた分析を実施して、シナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物中のクマリンの含有量を定量的に決定した。
【００２８】
そのシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を乾燥させ、次いでＨＰＬＣで分析した。この分析において、その粗抽出物およびシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物を４０００ｐｐｍの濃度で調製し、５０ｐｐｍの濃度のクマリン標準と比較した。分析プロセスは水：アセトニトリル（６０：４０）の移動相を用いて行われ、それは２７４ｎｍにおいて１２分の保持時間で観察されることになった。
【００２９】
その結果は、標準クマリン化合物のピークは５．０９９の保持時間において見ることができることを示した。水、アルコール類およびアセトンを用いた抽出プロセスから得られたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物は、クマリン化合物を表すピークを示した。具体的には、図７において示したように、水抽出から得られた粗抽出物は約５．０１２分においてピークを示した。アルコール抽出から得られた粗抽出物は、エタノールに関して約５．０１２分およびメタノールに関して約５．００７分においてピークを示した。アセトン抽出から得られた粗抽出物は、約５．０１１分においてピークを示した。
【００３０】
その所見とは逆に、そして本発明の教示に従って、有機溶媒（単数または複数）であるクロロホルムまたはｎ−ブタノールまたは酢酸エチルおよび／またはｎ−ヘキサンを用いて分画されたシナモムム・ブルマンニーの抽出物は、クマリンを表すピークを全く示さなかった。図１３〜２６参照。従って、本発明の教示に従って調製されたシナモムム・ブルマンニーの抽出物は実質的にクマリンを含まない。
【００３１】
既知の濃度（５０ｐｐｍ）のクマリン標準のピーク面積を、粗抽出物および実質的にクマリンを含まない抽出物のクマリン標準と同じ保持時間において示されたピーク面積と比較することにより、その粗抽出物および実質的にクマリンを含まない抽出物中のクマリンの濃度を計算することができる。
【００３２】
【表１】
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【００３３】
実施例：消費されるシナモムム・ブルマンニー抽出物の平均耐容量の計算
・クマリンの耐容１日摂取量＝０．１ｍｇ／ｋｇ体重
平均体重＝７０ｋｇ
１日に消費される耐容クマリンレベル＝７ｍｇクマリン
・３．０４〜２２．７３ｐｐｍまたは３．０４〜２２．７３ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物の範囲の、粗抽出物中のクマリンレベル。
【００３４】
（７ｍｇクマリン）／（３．０４ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物）＝２．３０２ｋｇ抽出物から（７ｍｇクマリン）／（２２．７３ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物）＝０．３１ｋｇ抽出物までの範囲の、１日に消費される抽出物の耐容量。
【００３５】
・実質的にクマリンを含まない抽出物中の最高クマリンレベル＝０．３９ｐｐｍ＝０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物。
１日に消費される抽出物の最低耐容量＝７ｍｇクマリン／０．３９ｍｇクマリン／ｋｇ抽出物＝１７．９４８ｋｇ抽出物。
【００３６】
表．１において示したデータは、水、アルコール類およびアセトン（水中７０％以下）を用いた抽出プロセスにより調製されたシナモムム・ブルマンニーの粗抽出物は高レベルのクマリンを含有していることを示唆している。しかし、その粗抽出物を本発明の教示に従う液液抽出により分画した後、そのクマリン含有量は非常に低くなり、検出下限未満にさえなる。さらに、その実施例において示されたデータは、その粗抽出物の消費可能な限界は非常に低いが、その実質的にクマリンを含まない抽出物は広い範囲の量で消費されることができ、体に全く害を及ぼさないことを示している。それはその実質的にクマリンを含まない抽出物の値は欧州安全機関（ＥＳＡ）により推奨される耐容１日摂取量（ＴＤＩ）よりもはるかに下であることを示している。従って、本発明の教示に従って調製されたシナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物は、毎日消費されるのに、および長期使用において安全である。
【００３７】
さらに、本発明は、シナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の単一の有効成分としての、またはその医薬組成物もしくは製剤としての組み合わせでの使用は、毎日および長期の消費に関して安全であることも予想する。
【００３８】
Ｆ．産業的適用
シナモムム・ブルマンニーの実質的にクマリンを含まない抽出物の、抽出物または医薬剤形は、抽出物、粉末抽出物、および／または主に経口剤形、例えば固体、半固体、もしくは液体のための医薬剤形、または食品および飲料の製造において、産業的規模で用いることができる。
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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