(57)【要約】  本発明は、インビボイメージング方法を用いてマイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）の存在を決定するために有用な新規インビボイメージング剤を提供する。また、本発明のインビボイメージング剤の合成において有用な前駆体化合物、及び前記前駆体化合物を用いて本発明のインビボイメージング剤を得るための方法も本発明によって提供される。本発明のインビボイメージング剤が使用できるインビボイメージング方法及び診断方法も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉのインビボイメージング剤。
【化１】
2013534239.tif 000019
（式中、
Ｘ1は直接結合又はリンカー−（Ｌ）n−（式中、各Ｌは独立に−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲ'2−、−ＣＲ'＝ＣＲ'−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ'2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ'2−、−ＮＲ'−、−ＮＲ'ＣＯ−、−ＣＯＮＲ'−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ'−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ'−、−ＳＯ2ＮＲ'−、−ＮＲ'ＳＯ2−、−ＣＲ'2ＯＣＲ'2−、−ＣＲ'2ＳＣＲ'2−又は−ＣＲ'2ＮＲ'ＣＲ'2−であり、各Ｒ'基はＨ又はＣ1-6アルキルである。）を表し、
Ｃｈ1−Ｍ1は金属イオン錯体（式中、Ｃｈ1はキレート剤であり、Ｍ1はインビボイメージングに適した金属イオンである。）である。）
【請求項２】
インビボイメージングに適した前記金属イオンが放射性金属イオン又は常磁性金属イオンである、請求項１記載のインビボイメージング剤。
【請求項３】
前記放射性金属イオンが、99mＴｃ、111Ｉｎ、113mＩｎ及び67Ｇａから選択されるγ線放出型放射性金属イオンである、請求項２記載のインビボイメージング剤。
【請求項４】
前記放射性金属イオンが99mＴｃである、請求項３記載のインビボイメージング剤。
【請求項５】
前記放射性金属イオンが、64Ｃｕ、48Ｖ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、94mＴｃ及び68Ｇａから選択される陽電子放出型放射性金属イオンである、請求項２記載のインビボイメージング剤。
【請求項６】
前記常磁性金属イオンが、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）及びＤｙ（ＩＩＩ）から選択される、請求項２記載のインビボイメージング剤。
【請求項７】
Ｃｈ1が以下のものから選択される、請求項１記載のインビボイメージング剤。
（ａ）ジアミンジオキシム、
（ｂ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ3Ｓリガンド、
（ｃ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ2Ｓ2リガンド、
（ｄ）テトラアミン、アミドトリアミン又はジアミドジアミンドナーセットを有する開鎖又は大環状リガンドであるＮ4リガンド、及び
（ｅ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ2Ｏ2リガンド。
【請求項８】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を薬学的に許容されるキャリヤーと共に含んでなる医薬組成物。
【請求項９】
次の式ＩＩの前駆体化合物。
【化２】
2013534239.tif 000020
（式中、Ｘ2は請求項１でＸ1に関して定義した通りであり、Ｃｈ2は請求項１又は請求項７でＣｈ1に関して定義した通りである。）
【請求項１０】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボイメージング剤の製造方法であって、
（ｉ）請求項９に記載した式ＩＩの前駆体化合物を用意する段階、及び
（ｉｉ）前記前駆体化合物を、請求項１乃至請求項６のいずれか１項に記載したインビボイメージングに適した金属イオンの供給源と反応させる段階
を含んでなる方法。
【請求項１１】
インビボイメージングに適した金属イオンの前記供給源が99mＴｃの供給源である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
99mＴｃの前記供給源が過テクネチウム酸イオンである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１０乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法を実施するためのキットであって、請求項９記載の前駆体化合物を含むバイアルを含んでなるキット。
【請求項１４】
被験体内に存在する結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴＢ））の位置及び／又は量を決定するための方法であって、
（ａ）請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を、インビボイメージングに適した量で前記被験体に投与する段階、
（ｂ）投与したインビボイメージング剤を前記被験体内に存在するＭＴＢに結合させる段階、
（ｃ）前記インビボイメージング剤中に含まれる、インビボイメージングに適した前記金属イオンから放出される信号を適当なインビボイメージング操作によって検出する段階、
（ｄ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｅ）前記信号の位置及び／又は量を前記被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量に帰因させる段階
を含んでなる方法。
【請求項１５】
前記投与段階が静脈内注射によって実施される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記インビボイメージング剤が請求項８記載の医薬組成物として投与される、請求項１４又は請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施される請求項１４乃至請求項１６のいずれか１項記載の方法であって、前記計画がＭＴＢによって引き起こされるＴＢと戦うための薬物の投与を含む方法。
【請求項１８】
被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量を決定するための、請求項１４乃至請求項１７のいずれか１項記載の方法で使用するための、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１４乃至請求項１７のいずれか１項記載の方法で使用するための、請求項８記載の医薬組成物の製造における、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載のインビボイメージング剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインビボイメージングに関し、さらに詳しくは、結核の存在を検出するためのインビボイメージングに関する。同様な既知のインビボイメージング剤に比べてそれを有利にする性質をもった新規インビボイメージング剤が本発明によって提供される。
【背景技術】
【０００２】
肺結核（ＴＢ）は結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴＢ））によって引き起こされる空気感染症であり、特に発展途上国において高い死亡率及び罹患率を引き起こしている（Ｄｙｅ  ｅｔ  ａｌ，ＪＡＭＡ  １９９９；２８２（７）：６７７−６８６）。世界保健機構が発表した最近のファクトシートは、ＴＢの新症例数が東南アジア、東地中海及びアフリカにおいて毎年増加し続けていることを報告した（）。ＭＴＢの薬剤耐性株の出現により、他の方法では治せない疾患を治療するための新しい薬剤を同定する努力が行われている。
【０００３】
感染を制御すると共に、感染した患者に対する適切な治療を保証するためには、正確で迅速な診断が重要である。現在、ＴＢの確実な診断には、患者から採取した試料からのＭＴＢの培養が必要である。喀痰塗沫陽性の結果から肺疾患の明確な徴候及び症状を示す患者では、診断するのにいかなる問題も生じない。しかし、ゆっくりと増殖するＭＴＢ生物を実験室で培養する際には困難が生じることがある。さらに、ＨＩＶの出現が喀痰塗沫陽性の可能性の低下及び非呼吸器系疾患の増加をもたらす結果、これらの症例では容易な診断が一層困難になっている（Ｊｅｏｎｇ  ＆  Ｌｅｅ，Ａｍ  Ｊ  Ｒｏｅｎｔ  ２００８；１９１：８３４−８４４；Ｄａｖｉｅｓ  ＆  Ｐａｉ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｔｕｂｅｒｃ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓ  ２００８；１２（１１）：１２２６−１２３４；及びＬａｎｇｅ  ＆  Ｍｏｒｉ，Ｒｅｓｐｉｒｏｌｏｇｙ  ２０１０；１５：２２０−２４０による総説を参照されたい）。
【０００４】
インビボイメージング剤はＴＢの診断において有用であり得る。胸部Ｘ線検査は、ＴＢが知られ又は疑われる患者においてスクリーニング、診断及び治療モニタリングに広く使用されているインビボイメージング方法である。胸部計算機断層撮影（ＣＴ）は通常のＸ線検査より感度が高く、早期実質病変又は縦隔リンパ節腫脹を同定するため、及び結核における疾患活性を決定するために適用できる（Ｌｅｅ  ＆  Ｉｍ，ＡＪＲ  １９９５；１６４（６）：１３６１−１３６７）。核イメージング方法はまた、ＴＢの診断及び治療モニタリング向けにも報告されている。陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）トレーサーである18Ｆ−フルオロデオキシグルコース（［18Ｆ］ＦＤＧ）は、ＴＢ患者における疾患活性の診断及び治療モニタリングに有用なものとして提唱されている（Ｄｅｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃ  Ｍｅｄ  Ｍｏｌ  Ｉｍａｇ  ２００９；３６：６３２−６３９）。
【０００５】
ピラジンアミド（ＰＺＡ）は、ＴＢの治療で使用される公知の重要なファーストライン薬剤である。ＰＺＡの作用機序はあまりよく理解されていないが、実験的証拠は、ＰＺＡがＭＴＢ中に拡散し、ピラジンアミダーゼによりピラジン酸に転化されて細菌中にｐＨ不均衡を引き起こし、続いて細菌細胞壁の破壊を引き起こすことを示唆している（Ｚｈａｎｇ  ＆  Ｍｉｔｃｈｉｓｏｎ  ２００３  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｔｕｂｅｒｃ  Ｌｕｎｇ  Ｄｉｓ；７（１）：６−２１）。ＰＺＡの標識バージョンに関しては、若干の公知教示が存在している。
【０００６】
米国特許出願公開第２００８／０１０７５９８号は、標的化リガンドが抗菌剤を含む多種多様の薬剤から選択できる金属キレート−標的化リガンドコンジュゲートを教示している。広範囲の選択された抗菌剤のうち、ＰＺＡが好適な標的化リガンドとして開示されている。しかし、米国特許出願公開第２００８／０１０７５９８号中には、特定の金属キレート化−ＰＺＡコンジュゲートを得るための方法についての具体的な教示は存在しない。
【０００７】
Ｃｈｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｍｅｔａｌ−ｂａｓｅｄ  Ｄｒｕｇｓ  １９９８；５（６）：３４７−３５４）は、コバルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）及び亜鉛（ＩＩ）から選択される金属と錯化されたＰＺＡ誘導体を教示している。かかるＰＺＡ誘導体は、以下の構造を有するものとして開示されている。
【０００８】
【化１】
2013534239.tif 000002
式中、ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり得る。かかる金属錯体は１種以上の細菌種に対して生物学的活性を有するものとして開示されており、金属錯体は非錯化リガンドより活性である。リガンドはＭＴＢに対して試験されておらず、Ｃｈｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌはＴＢの診断又はインビボイメージングに関する開示を含んでいない。
【０００９】
Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２０１０；５３：２８８２−２８９１）は、11Ｃ標識結核治療薬及び陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを用いてこれらの治療薬の体内分布を研究する際におけるそれの使用を開示している。11Ｃ標識ＰＺＡが開示されている（式中のアステリスクは11Ｃラベルの位置を表している）。
【００１０】
【化２】
2013534239.tif 000003
11Ｃの半減期は比較的短く（２０．４分）、その生成はサイクロトロンを必要とする窒素ターゲット上での核反応14Ｎ（ｐ，α）11Ｃに基づいている。したがって、11Ｃ標識ＰＥＴトレーサーの製造はサイクロトロン施設への近接を必要し、これらのトレーサーの地理的利用可能性は制限される。これが特に当てはまるのは、インド、中国及びアフリカ諸国のような、ＴＢ発生率の高い若干の国々であり、そこでは人口工の多くが遠隔地に住んでいる。いずれにせよ、サイクロトロン施設は建設するのに多大の費用がかかり、したがって広く利用できるわけではない。これらの理由から、11Ｃ−ＰＥＴトレーサーはＴＢの診断に関しては理想的でない。
【００１１】
韓国特許出願公開第２００７／００９２５３６号は結核イメージング用の放射性標識ＰＺＡを開示し、放射性ラベルが99mＴｃ、111Ｉｎ、131Ｉ及び123Ｉから選択できることを教示している。しかし、特定の構造は以下の放射性ヨウ素化ＰＺＡについてしか示されていない。
【００１２】
【化３】
2013534239.tif 000004
123Ｉは１３．２２時間という11Ｃより長い半減期を有するが、11Ｃと同じく、それの製造にはサイクロトロンを必要とし、したがってサイクロトロン施設から予定の使用現場まで輸送する必要がある。これは遠隔地の場合には物流的に困難となることがあり、このような理由から123ＩはインビボＴＢイメージング剤用の理想的なトレーサーでない。
【００１３】
米国特許第５９５５０５３号は、ＰＺＡ部分（例えば、Ｌ−ＣＥＰＺ）を含むキレーターを教示しており、これは以下の構造を有している。
【００１４】
【化４】
2013534239.tif 000005
インビボイメージングに適した金属イオン（例えば、99mＴｃ）が上記の構造によって配位された場合、米国特許第５９５５０５３号の請求項１に記載された一般式中に示される通り、ＰＺＡ部分の窒素の１つは配位に関与する。そのため、ＭＴＢに対するＰＺＡ部分の所望の生物学的活性はマイナスの影響を受ける可能性がある。確かに、米国特許第５９５５０５３号にはこれらの化合物がＴＢの診断での使用に役立つという記述は存在しない。
【００１５】
したがって、ＴＢの診断において有用な改良インビボイメージング剤に対する余地が存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許第５９５５０５３号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、インビボイメージング方法を用いてマイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）の存在を決定するために有用な新規インビボイメージング剤を提供する。本発明のインビボイメージング剤は、マイコバクテリア感染症に対する治療薬として良好な性質を有することが知られている非標識小分子の放射性標識誘導体である。本発明のインビボイメージング剤は、関連する非標識化合物と同様な又は改善された生物学的性質を有している。また、本発明のインビボイメージング剤の合成において有用な前駆体化合物、及び前記前駆体化合物を用いて本発明のインビボイメージング剤を得るための方法も本発明によって提供される。本発明のインビボイメージング剤が使用できるインビボイメージング方法及び診断方法も提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
インビボイメージング剤
一態様では、本発明は次の式Ｉのインビボイメージング剤を提供する。
【００１９】
【化５】
2013534239.tif 000006
式中、
Ｘ1は直接結合又はリンカー−（Ｌ）n−（式中、各Ｌは独立に−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲ'2−、−ＣＲ'＝ＣＲ'−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ'2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ'2−、−ＮＲ'−、−ＮＲ'Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ'−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ'−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ'−、−ＳＯ2ＮＲ'−、−ＮＲ'ＳＯ2−、−ＣＲ'2−Ｏ−ＣＲ'2−、−ＣＲ'2−Ｓ−ＣＲ'2−又は−ＣＲ'2−ＮＲ'−ＣＲ'2−であり、各Ｒ'基は独立にＨ又はＣ1-6アルキルである。）を表し、
Ｃｈ1−Ｍ1は金属イオン錯体（式中、Ｃｈ1はキレート剤であり、Ｍ1はインビボイメージングに適した金属イオンである。）である。
【００２０】
本発明の文脈中における「インビボイメージング剤」とは、インビボイメージング操作における画像の生成を容易にする標識化合物である。本明細書中で使用する「インビボイメージング」という用語は、被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。
【００２１】
本明細書中で使用する「リンカー」という用語は、１０〜１００の原子、好ましくは１０〜５０の原子を有する二価の鎖をいう。特に除外されるのは、２以上のカルボニル基が互いに結合したリンカー、又は２以上のヘテロ原子が互いに結合したリンカーである。当業者には理解される通り、これらは化学的に実現できないか、或いは過度の反応性又は不安定性を有するため本発明の分野で使用するのに適さない。式ＩのＸ１がリンカー−（Ｌ）n−を表す場合、好ましいＬ基は−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ2−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−及び−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−から選択される。特に好ましいリンカー基は式−（ＣＨ2）m−（式中、ｍは１〜６、好ましくは２〜４である。）を有するものである。
【００２２】
「金属錯体」という用語は、金属イオンが周囲の一連の分子又は陰イオン（本発明では、これらはキレート剤Ｃｈ1中に含まれる）と結合してなる配位錯体を意味すると考えられる。本発明の金属錯体は、「キレート交換に耐える」こと（即ち、金属配位座に関して他の潜在的に競合するリガンドとのリガンド交換を受けにくいこと）が極めて好ましい。潜在的に競合するリガンドには、インビボイメージング剤自体に加えて、インビトロでは製剤中の他の賦形剤（例えば、製剤中に使用される放射線防護剤又は抗菌防腐剤）があり、インビボでは内因性化合物（例えば、グルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）がある。
【００２３】
「キレート剤」とは、２以上のドナー原子を介して金属イオンとの配位結合を形成し得る有機化合物である。本発明に適する典型的なキレート剤では、２〜６（好ましくは２〜４）の金属ドナー原子が（金属ドナー原子を結合する炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位主鎖を有することで）五員又は六員のキレート環を生じるように配列されている。キレート剤の一部として金属イオンとよく結合するドナー原子種の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。例えば、インビボイメージングに適する金属が99mＴｃである場合には99mＴｃ（ＣＯ）3放射化学を用いるように、他の配列も想定される。
【００２４】
キレート交換に耐える金属錯体を形成するテクネチウム用の好適なキレート剤の例には、特に限定されないが、以下のものがある。
（ａ）ジアミンジオキシム、
（ｂ）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ3Ｓリガンド、
（ｃ）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ2Ｓ2リガンド、
（ｄ）テトラアミン、アミドトリアミン又はジアミドジアミンドナーセットを有する開鎖又は大環状リガンドであるＮ4リガンド、及び
（ｅ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ2Ｏ2リガンド。
【００２５】
上述したキレート剤は、インビボイメージングに適する金属イオンがテクネチウム（例えば、94mＴｃ又は99mＴｃ）である場合に特に好適であり、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９９；９９：２２０５−２２１８）によって一層詳しく記載されている。これらのキレート剤は、銅（64Ｃｕ又は67Ｃｕ）、バナジウム（例えば、48Ｖ）、鉄（例えば、52Ｆｅ）或いはコバルト（例えば、55Ｃｏ）のような他の金属に対しても有用である。他の好適なキレート剤はＳａｎｄｏｚの国際公開第９１／０１１４４号に記載されており、これらはインジウム、イットリウム及びガドリニウムに対して特に好適である。かかる好適なキレート剤の例には、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）及びジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）がある。ガドリニウムの非イオン性（即ち、中性）金属錯体が知られており、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。
【００２６】
さらに上記に特筆された通り、放射性金属イオンが99mＴｃである場合、放射性金属錯体は、“Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ−９９ｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００７  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；Ｚｏｌｌｅ，Ｅｄ．）の第２．２章にＳｃｈｉｂｌｉが一層詳しく記載しているような99mＴｃ（ＣＯ）3放射化学を用いて形成することもできる。この化学の利点は、それがピラジンアミド活性部分に対する99mＴｃの非特異的結合の可能性をさらに低下させ得ることである。したがって、この化学を用いた放射性金属錯体は、99mＴｃ（ＣＯ）3に結合した三座キレートの形態を有するであろう。
【００２７】
リンカー基の役割は、金属配位後に生じる比較的バルキーな金属錯体をピラジンアミドの活性部位から遠ざけることで、例えば基質の結合が損なわれないようにすることであると想定される。これは、バルキーな基が活性部位から離れて位置する自由を与えるような柔軟性（例えば、単純アルキル鎖）及び／又は金属錯体が活性部位から離れるように向きを定める剛性（例えば、シクロアルキル又はアリールスペーサー）の組合せによって達成できる。リンカー基の性質はまた、得られるコンジュゲートのテクネチウム錯体の体内分布を変化させるためにも使用できる。即ち、例えばリンカー中にエーテル基を導入することは、血漿タンパク質の結合を最小限に抑えるために役立つ。或いは、ポリアルキレングリコール、特にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のようなポリマーリンカー基の使用は、インビボで血液中のインビボイメージング剤の寿命を延ばすために役立ち得る。ピラジンアミドは、結合が血液中において容易に代謝を受けないようにしてキレーターに結合していることが極めて好ましい。それは、本発明のインビボイメージング剤が所望のインビボ標的部位に到達する前に、かかる代謝がイメージング金属錯体の切断をもたらすからである。
【００２８】
「インビボイメージングに適した金属イオン」とは、被験体に投与した後、インビボイメージング技法によって外部から検出できる金属イオンを意味する。好ましくは、式Ｉのインビボイメージングに適した前記金属イオンは、放射性金属イオン又は常磁性金属イオンである。金属イオンが放射性金属イオンである場合、それはγ線放出型放射性金属イオン又は陽電子放出型放射性金属イオンである。好ましいγ線放出型放射性金属イオンは99mＴｃ、111Ｉｎ、113mＩｎ及び67Ｇａから選択され、99mＴｃが最も好ましい。好ましい陽電子放出型放射性金属イオンは64Ｃｕ、48Ｖ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、94mＴｃ及び68Ｇａから選択される。金属イオンが常磁性金属イオンである場合、それは好ましくはＧｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）及びＤｙ（ＩＩＩ）から選択され、Ｇｄ（ＩＩＩ）が最も好ましい。本発明のインビボイメージングに適した最も好ましい金属イオンはγ線放出型放射性金属イオン、特に99mＴｃである。
【００２９】
本発明のイメージング剤のレニウム誘導体に関して予備的インビトロ評価を実施した（実施例５参照）。得られたデータは、レニウム錯体が少なくともＰＺＡと同等の活性を有し、恐らくはＰＺＡより好ましい活性を有することを示唆している。
【００３０】
医薬組成物
好ましくは、本発明のインビボイメージング剤は、薬学的に許容されるキャリヤーと共に医薬組成物として提供される。「薬学的に許容されるキャリヤー」とは、医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）インビボイメージング剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。薬学的な許容されるキャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。薬学的な許容されるキャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤー媒質はパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００３１】
本発明の医薬組成物は、好適には、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したシール（例えば、クリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れた状態で供給される。かかる容器は１回分又は複数回分の患者用量を含み得る。好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む（例えば、容積１０〜３０ｃｍ3の）単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードの注射器に抜き取ることができる。予備充填注射器は１回分のヒト用量又は「単位用量」を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。医薬組成物が放射性医薬組成物である場合（即ち、金属イオンがγ放射体又は陽電子放射体である場合）、予備充填注射器には、施術者を放射線量から防護するための注射器シールドを任意に設けることができる。好適なかかる放射性医薬品注射器シールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなっている。
【００３２】
本発明の医薬組成物は、本発明の追加の態様で以下に記載されるようにキットから製造できる。別法として、それを無菌製造条件下で製造することで所望の無菌生成物を得ることができる。医薬組成物を非無菌条件下で製造し、次いで例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いて終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、本発明の医薬組成物はキットから製造される。
【００３３】
前駆体化合物
別の態様では、本発明は次の式ＩＩの前駆体化合物を提供する。
【００３４】
【化６】
2013534239.tif 000007
式中、Ｘ2はＸ1に関して本明細書中に定義した通りであり、Ｃｈ2はＣｈ1に関して本明細書中に定義した通りである。
【００３５】
Ｘ1及びＣｈ1の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、Ｘ2及びＣｈ2に等しく適用できる。
【００３６】
「前駆体化合物」は、金属イオンがキレート剤によって錯化されていない式Ｉのインビボイメージング剤の誘導体からなる。かかる前駆体化合物は、通例、好都合な化学形態の金属イオンとの化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望のインビボイメージング剤が得られるように設計されている。部位特異的な反応を容易にするため、本発明の前駆体化合物は適当な保護基を任意に含むことができる。
【００３７】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させて所望の生成物を得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。保護基は当業者にとって公知であり、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００７）に記載されている。
【００３８】
本発明の前駆体化合物は、例えば以下のスキーム１に示されるように、商業的に入手可能なピラジン誘導体を所望キレートの適当な誘導体とカップリングすることで直截的に得ることができる。
【００３９】
【化７】
2013534239.tif 000008
式中、Ｘ3及びＣｈ3はそれぞれＸ1及びＣｈ1に関して本明細書中に好適なもの及び好ましいものとして定義した通りである。カップリング反応に適した反応条件は、有機化学分野の当業者にとって公知である（Ｍａｒｃｈ'ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６th  Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｉｌｅｙ：Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｅｄｓ．を参照されたい）。
【００４０】
本発明の前駆体化合物は、理想的には無菌で非発熱性の形態で提供される。したがって前駆体化合物は、本発明の上述した医薬組成物の製造に使用できると共に、以下に一層詳しく記載されるような、かかる医薬組成物を製造するためのキット中に一成分として含めるためにも使用できる。
【００４１】
製造方法
さらに別の態様では、本発明は、本明細書中に記載したインビボイメージング剤の製造方法であって、
（ｉ）本明細書中に記載したような式ＩＩの前駆体化合物を用意する段階、及び
（ｉｉ）前記前駆体化合物を、本明細書中に記載したような、インビボイメージングに適した金属イオンの供給源と反応させる段階
を含んでなる方法を提供する。
【００４２】
前駆体化合物をインビボイメージングに適した金属イオンの供給源と「反応させる」段階は、できるだけ高い放射化学収率（ＲＣＹ）で所望のインビボイメージング剤を生成するのに適した反応条件下で２種の反応体を合わせることを含んでいる。本発明の特定のインビボイメージング剤を得るための合成経路を以下の実験セクションに示す。
【００４３】
「金属イオンの供給源」という用語は、本発明の前駆体化合物と単一の段階で反応して式Ｉの金属キレート−ＣＨ1−Ｍ1をを生成する化学形態の金属イオンをいう。例えば、金属イオンがテクネチウムである場合、標識のための通常のテクネチウム供給源は、テクネチウムがＴｃ（ＶＩＩ）酸化状態にある過テクネチウム酸イオン（即ち、ＴｃＯ4-）である。過テクネチウム酸イオン自体は容易に錯体を形成せず、したがってテクネチウム錯体の製造には、第一スズイオンのような適当な還元剤を添加してテクネチウムの酸化状態を低い酸化状態（通常はＴｃ（Ｉ）乃至Ｔｃ（Ｖ））に還元することで錯化を容易にすることが通常必要である。溶媒は、有機溶媒又は水性溶媒或いはこれらの混合物であり得る。溶媒が有機溶媒を含む場合、有機溶媒は好ましくはエタノール又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のような生体適合性溶媒である。好ましくは、溶媒は水性溶媒であり、最も好ましくは等張食塩水である。Ｇｄ（ＩＩＩ）で標識することが所望される場合には、Ｇｄ2Ｏ3を本発明の前駆体化合物と反応させることができる。インビボイメージング剤に関する当業者は、本発明における用途に適した金属イオンの他の供給源に精通しているであろう。さらなる詳細については、読者は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”（２００３；Ｗｅｌｃｈ  ａｎｄ  Ｒｅｄｖａｎｌｙ，Ｅｄｓ）及び“Ｃｏｎｔｒａｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ：Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ”（２００２；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｋｒａｕｓｅ  Ｅｄ）を参照されたい。
【００４４】
本発明のこの態様に適用される、本発明のインビボイメージング剤及び本発明の前駆体化合物の好適な実施形態及び好ましい実施形態は、上記に記載した通りである。
【００４５】
キット
さらに別の態様では、本発明は、本発明のインビボイメージング剤を製造するため、好ましくは本発明の医薬組成物を製造するための上記方法を実施するためのキットであって、本明細書中に記載した本発明の前駆体化合物を含むバイアルを含んでなるキットを提供する。
【００４６】
本発明の前駆体化合物は、好ましくは無菌で非発熱性の形態で本発明のキット中に供給される。したがって、適当な金属イオンの無菌供給源と反応させることにより、最小数の操作で所望の医薬品が得られる。かかる考慮事項は、放射性医薬品（特に、放射性同位体が比較的短い半減期を有する放射性医薬品）の場合において、取扱いを容易にし、したがって放射性薬剤師に対する放射線量を低減させるために特に重要である。かくして、かかるキットの再構成用の反応媒質は好ましくは上記に定義したような「薬学的に許容されるキャリヤー」であり、最も好ましくは水性のものである。
【００４７】
好適なキット容器は、注射器による溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする密封容器を含んでいる。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工したセプタムシールバイアルである。かかる容器は、例えばヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【００４８】
キット中に使用する場合、本発明の前駆体化合物の好ましい態様は、本明細書中に記載した通りである。キット中に使用するための前駆体化合物を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。また、前駆体化合物を非無菌条件下で使用し、続いて例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体化合物は無菌で非発熱性の形態で使用される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体化合物は上述したような密封容器に入れて使用される。
【００４９】
99mＴｃに関しては、キットは好ましくは凍結乾燥され、99mＴｃ放射性同位体ジェネレーターからの無菌の99mＴｃ−過テクネチウム酸イオン（ＴｃＯ4-）を用いて再構成することで、それ以上の操作なしにヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。好適なキットは、未錯化キレート剤を、薬学的に許容される還元剤（例えば、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ））及び弱有機酸と薬学的に許容される陽イオンとからなる１種以上の塩と共に収容した容器（例えば、セプタムシールバイアル）を含んでいる。「薬学的に許容される陽イオン」という用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。好適な薬学的に許容される陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい薬学的に許容される陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００５０】
99mＴｃイメージング剤製造用のキットは、任意にはさらに、トランスキレーターとして機能する第２の弱有機酸又はそれと生体適合性陽イオンとの塩を含むことができる。トランスキレーターは、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、次いでキットのキレーターによって置換される化合物である。これは、テクネチウム錯化と競合する過テクネチウム酸イオンの迅速な還元によって還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が生成するリスクを最小限に抑える。好適なかかるトランスキレーターは上述した弱有機酸及びその塩であり、好ましくは酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩、好ましくはホスホン酸塩、最も好ましくはジホスホン酸塩である。好ましいかかるトランスキレーターは、ＭＤＰ（即ち、メチレンジホスホン酸）又はそれと生体適合性陽イオンとの塩である。
【００５１】
99mＴｃキットに関してはまた、キットはキレーターの非放射性金属錯体を任意に含むことができる。これは、テクネチウムを添加すると、金属交換反応（即ち、リガンド交換）を受けて所望の生成物を与える。好適なかかる金属交換反応用錯体は銅又は亜鉛錯体である。
【００５２】
99mＴｃイメージング剤キット中に使用される薬学的に許容される還元剤は、好ましくは塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩であり、無水状態又は水和状態のいずれであってもよい。第一スズ塩は、好ましくは塩化第一スズ又はフッ化第一スズである。
【００５３】
キットはさらに、放射線防護剤、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤又はフィラーのような追加成分を任意に含むことができる。
【００５４】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素遊離基のような高反応性遊離基を捕捉することで分解反応（例えば、レドックス過程）を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及びこれらと薬学的に許容される陽イオンとの塩から選択される。「薬学的に許容される陽イオン」及びその好ましい実施形態は、上述した通りである。
【００５５】
「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、用量に応じ、多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、再構成後の医薬品組成物中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、再構成前のキットの１種以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも任意に使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。
【００５６】
「ｐＨ調整剤」という用語は、再構成されたキットのｐＨがヒト又は哺乳動物への投与に許容し得る範囲（およそｐＨ４．０〜１０．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（即ち、トリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。前駆体化合物を酸性塩の形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。
【００５７】
「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。
【００５８】
臨床使用
本発明のインビボイメージング剤は、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴＢ））によって引き起こされる感染症の診断及びモニタリングにおいて使用できる。したがって本発明は、被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量を決定するための方法であって、
（ａ）本明細書中に記載したインビボイメージング剤を、インビボイメージングに適した量で前記被験体に投与する段階、
（ｂ）投与したインビボイメージング剤を前記被験体内に存在するＭＴＢに結合させる段階、
（ｃ）前記インビボイメージング剤中に含まれる、インビボイメージングに適した前記金属イオンから放出される信号を適当なインビボイメージング操作によって検出する段階、
（ｄ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
（ｅ）前記信号の位置及び／又は量を前記被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量に帰因させる段階
を含んでなる方法を提供する。
【００５９】
インビボイメージング剤を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、インビボイメージング剤を被験体の身体全域に送達するための最も効率的な方法であると共に、被験体の身体に対して実質的な物理的介入を及ぼさない。「実質的な」という用語は、実施するために職業的な医学専門技術を必要とするか、或いは所要の職業的医療及び専門技術をもって実施した場合でも実質的な健康リスクを伴う介入を意味する。本発明のインビボイメージング剤は、好ましくは本明細書中に記載される本発明の医薬組成物として投与される。本発明のインビボイメージング方法はまた、本発明のインビボイメージング剤を予め投与した被験体に関して実施される上述の段階（ｂ）〜（ｅ）を含むものとしても理解できる。
【００６０】
投与段階後かつ検出段階前に、インビボイメージング剤を前記被験体内に存在するＭＴＢに結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、インビボイメージング剤は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたびインビボイメージング剤がＭＴＢに接触すれば、２種の実体が結合する結果、ＭＴＢが存在する組織からのインビボイメージング剤のクリアランスは、ＭＴＢが存在しない組織又はＭＴＢが少ない組織よりも長い時間がかかる。一定の時点に達すれば、ＭＴＢをもった組織に結合したインビボイメージング剤とＭＴＢをもたない組織に結合したインビボイメージング剤との比の結果として、ＭＴＢに特異的に結合したインビボイメージング剤の検出が可能となる。これが検出段階を実施するための最適時点である。
【００６１】
本発明の方法の「検出」段階は、放射性同位体から放出される信号を、前記信号に対して感度を有する検出器によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。γ線放出型金属イオンに関しては単光子放出断層撮影（ＳＰＥＣＴ）が使用され、陽電子放出型金属イオンに関しては陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）が使用され、常磁性金属イオンに関しては磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）が使用される。
【００６２】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、インビボイメージング剤中に含まれる金属イオンから放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号はＭＴＢの存在と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【００６３】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。本インビボイメージング方法は、ＭＴＢによって引き起こされるＴＢを有することが知られ又は疑われる被験体において使用できる。本発明のインビボイメージング方法は、前記被験体に関する治療計画の進行中に繰り返して実施することができ、前記計画はＭＴＢによって引き起こされるＴＢと戦うための薬物の投与を含んでいる。
【００６４】
別の態様では、本発明は、被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量を決定するための、本明細書中に前述した方法で使用するための本発明の医薬組成物を提供する。
【００６５】
さらに本発明は、被験体内に存在するＭＴＢの位置及び／又は量を決定するための、本明細書中に前述した方法で使用するための本発明の医薬組成物の製造における、本発明のインビボイメージング剤の使用を提供する。
【実施例】
【００６６】
実施例の簡単な説明
実施例１は、本発明の前駆体を製造するための出発原料の合成を記載している。
【００６７】
実施例２は、本発明の特定の前駆体化合物を得るための方法を記載している。
【００６８】
実施例３は、実施例１からの前記化合物をレニウムで標識するための方法を記載している。
【００６９】
実施例４は、実施例１の前記化合物を99mＴｃで放射性標識して本発明のインビボイメージング剤を得るための方法を記載している。
【００７０】
実施例５は、本発明の化合物のレニウム誘導体のインビトロ評価を記載している。
【００７１】
実施例中で使用される略語のリスト
ＤＣＭ      ジクロロメタン
ＥＤＴＡ    エチレンジアミン四酢酸
ＨＰＬＣ    高速液体クロマトグラフィー
ＭｅＯＨ    メタノール
ｍｇ        ミリグラム
ｍＬ        ミリリットル
ｍｍｏｌ    ミリモル
ＭＳ        質量分析
ＭＳＡ      メタンスルホン酸
ＮＭＲ      核磁気共鳴
ＲＴ        室温
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
実施例１：Ｎ’−［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル］−Ｎ’−｛２−［４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミノ］−エチル｝−プロパン−１，３−ジアミン（１）
１（ａ）  ２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミンの合成
【００７２】
【化８】
2013534239.tif 000009
窒素ブランケット下でナトリウム（１．５０ｇ、６５．２ｍｍｏｌ）を少量（約１００ｍｇ）ずつ、激しく撹拌したメタノール（５０ｍｌ、ＨＰＬＣグレード）に添加した。発泡が止んだ時、２−アミノエタンチオール塩酸塩（３．６ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）を一度に添加したところ、溶液から塩化ナトリウムが沈殿した。ｐ−メトキシベンジルクロリド（５．０ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）を一度に添加し、混合物を７５〜８０℃で３０分間加熱還流した。冷却後、固体を濾過によって除去し、濾過ケークをメタノール（１５ｍｌ）で洗浄した。有機抽出液を合わせ、揮発分を減圧（１０ｍｍＨｇ、４０℃）下で除去することで、塩化ナトリウム結晶を含む無色の油状物を得た。この残留物をＤＣＭ（２５ｍｌ）に再溶解し、水（２５ｍｌ×３）で抽出し、（ＭｇＳＯ4で）乾燥し、濾過し、溶媒を除去して無色の油状物を得た。この物質はほとんど（９５％）が所望の化合物からなり、それ以上は精製しなかった。収量５．４ｇ（８７％）。
【００７３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ  １．２５（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ2），２．４２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2），２．７３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2Ｎ），２．７３（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2Ａｒ），３．７４（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），６．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨｘ２），７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨｘ２）。
【００７４】
１（ｂ）  Ｎ−｛（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル｝−２−クロロアセトアミドの合成
【００７５】
【化９】
2013534239.tif 000010
２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミン（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（６００ｍｇ、５．９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した氷浴冷却（０〜５℃）溶液に、乾燥ＤＣＭ（５ｍｌ）中のクロロアセチルクロリド（６３０ｍｇ、５．６ｍｍｏｌ）を撹拌しながら５分かけて滴下した。滴下後、冷却浴を取り除き、撹拌を３０分間続けた。溶液を水（５０ｍｌ×２）で抽出し、（ＭｇＳＯ4で）乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて淡黄褐色の固体を得た。収量１．３０ｇ（９５％）。この物質はそれ以上の精製を必要としなかった。
【００７６】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ  ２．５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2），３．３９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．６６（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2Ａｒ），３．９９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２），６．９０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．２１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２）。
【００７７】
１（ｃ）  メチル３−［（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミノ］プロパノエート
【００７８】
【化１０】
2013534239.tif 000011
２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミン（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した撹拌溶液に、メタノール（１ｍｌ）中のアクリル酸メチル（４４０ｍｇ、５．１ｍｍｏｌ）を一度に添加した。無色の溶液をＲＴで２時間撹拌した。揮発分を回転蒸発によって除去することで、生成物を約９５％の純度を有する無色の粘稠な油状物として得た。収量１．３５ｇ（９６％）。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９８：２）で溶出するシリカ上でのクロマトグラフィーによって分析試料を得た。生成物は無色の粘稠な油状物として単離された（ｒf＝０．２）。
【００７９】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ  １．６７（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2Ｃ＝Ｏ），２．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2），２．７２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），２．８１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．６４（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2−Ｃ−Ｎ），３．６６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3ｅｓｔｅｒ），３．７５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3メトキシ），６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２），７．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２）。
【００８０】
１（ｄ）  ３−［２−（４−メトキシベンジルスルファニル）−エチルアミノ］プロパンアミド
【００８１】
【化１１】
2013534239.tif 000012
メチル３−［（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミノ］プロパノエート（１．３５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）、メタノール（１５ｍｌ）及びアンモニア溶液（２５ｍｌ）をＲＴで１６時間撹拌した。揮発分を減圧（１０ｍｍＨｇ、５０℃）下で除去かることで、静置後に凝固する粘稠な油状物を得た。収量１．２８ｇ（９９％）。この物質は約９５％の純度を有し、次の段階で使用できる。ＤＣＭ／メタノール（８０：２０）で溶出するシリカ上でのクロマトグラフィーによる精製後に分析試料を得た。生成物はｒf＝０．１５を有し、白色の固体として単離それた。
【００８２】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ  ２．５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2Ｃ＝Ｏ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2−Ｃ−Ｎ），２．９１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．００（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．８４（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨＰｈ），３．９５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２），７．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２）。
【００８３】
１（ｅ）  ３−（［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル］−｛［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−アミノ）プロピオンアミド
【００８４】
【化１２】
2013534239.tif 000013
３−［２−（４−メトキシベンジルスルファニル）−エチルアミノ］プロパンアミド（６７０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−｛（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル｝−２−クロロアセトアミド（６８０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、トリメチルアミン（３００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（５ｍｌ）を７０℃で１６時間加熱還流した。溶媒を減圧下で除去して橙色／褐色の残留物を得、これをＤＣＭ（２５ｍｌ）に再溶解し、水（２５ｍｌ×２）で抽出し、（ＭｇＳＯ4で）乾燥し、濾過し、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させた。残留物をＤＣＭ／メタノール（９５：５）で溶出するシリカ上で精製することで（ｒf＝０．１５）、無色の粘稠な油状物を得た（収量４５０ｍｇ、３６％）。
【００８５】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ  ２．２７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＯ），２．５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2），２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＳＣＨ2），２．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），２．７６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．０４（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＯ），３．３９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ｈ2ＣＮＨ），３．６２（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2Ｐｈ），３．６５（（２Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2Ｐｈ），３．７６（６Ｈ，ｓ，ＯＭｅｘ２），５．５２（１Ｈｂｓ，ＮＨ），５．９７（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），６．８１（４Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ４），７．１８（２Ｈ．ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２），７．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨｘ２），７．７０（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＨＮＣＯ）。
【００８６】
１（f）  Ｎ’−［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル］−Ｎ’−｛２−［４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルアミノ］−エチル｝−プロパン−１，３−ジアミン（１）
【００８７】
【化１３】
2013534239.tif 000014
３−（［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチル］−｛［２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−エチルカルバモイル］−メチル｝−アミノ）プロピオンアミド（４５０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ中の１．０Ｍボラン（１２ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で注射器によって添加した。得られた無色の溶液を７０℃で加熱還流した。約４０分後に白色のガム状物が沈殿したが、加熱をさらに１６時間続けた。ＲＴに冷却した後、水（２ｍｌ）を滴下して激しい発泡を停止させた。溶媒を減圧下で除去してろう状の固体を得、これに希ＨＣｌ（２％、２０ｍｌ）を添加し、混合物を１００℃で３時間加熱還流した。冷却後、ｐＨ１０〜１１に達するまで水酸化ナトリウムを添加した。この混合物をＤＣＭ（２５ｍｌ×３）で抽出し、画分を合わせ、（ＭｇＳＯ4で）乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させてろう状の固体を得た。この物質を13Ｃ  ＮＭＲで分析したところ、一還元及び二官能性生成物の混合物であることが判明した。この物質を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨ（９０：１０：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーに付した。生成物はｒf＝０．３５で溶出し、無色の油状物として単離された。収量１８０ｍｇ（４２％）。
【００８８】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ  １．４８（２Ｈ，五重線，Ｊ＝７Ｈｚ，−ＣＨ2−），２．２９−２．５２（１５Ｈ，ＳＣＨ2ｘ２＋４ｘＣＨ2Ｎ＋ＮＨ2＋ＮＨ，ｍ），２．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），２．６７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＮＣＨ2），３．５９（４Ｈ，ｓ，ＳＣＨ2Ｐｈｘ２），３．７０（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3ｘ２），６．７６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨｘ４），７．１５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＣＨｘ４）。
【００８９】
実施例２：前駆体化合物１（４−（ヒドラジンカルボニル）−Ｎ−（３−（（２−（４−メトキシベンジルチオ）エチル）（２−（２−（４−メトキシベンジルチオ）エチルアミノ）エチル）アミノ）プロピル）ピコリンアミド）
【００９０】
【化１４】
2013534239.tif 000015
ジメチルホルムアミド中のピラジン酸（２，１５．４ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩（３０ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２１ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）の混合物に、１（５０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し、ＲＴで一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルに溶解し、水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、コンビフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。収量、２１ｍｇ（２９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ  ９．３７（ｓ，１Ｈ），８．７３−８．７７（ｄ，１Ｈ），８．５（ｓ，１Ｈ），７．１７−２．２７（ｄｄ，４Ｈ），６．７７−６．８７（ｄｄ，４Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），３．５２−３．６（ｍ，２Ｈ），２．４８−３．０２（ｍ，１４Ｈ）ａｎｄ１．７２−１．８２（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５８４．６（Ｍ＋Ｈ+）。
【００９１】
実施例３：前駆体化合物１のＲｅ標識
【００９２】
【化１５】
2013534239.tif 000016
Ｚｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９９；４２：２８０５−２８１５）によって記載された方法を、前駆体化合物１をレニウムで標識するために改変した。７０ｍｇ（０．１１７ｍｍｏｌ）の前駆体化合物１を１ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）に溶解し、１滴のアニソール及び０．２ｍＬのＭＳＡを添加した。反応混合物を窒素雰囲気下６０℃で９０分間撹拌した。その後、それを真空下で２時間濃縮してＴＦＡ／アニソール／ＭＳＡを除去した。得られた塊状物を１４ｍＬのＣＨ3ＯＨ：ＴＨＦ（７：１）中に取り、加熱還流した。塩化スズ（ＩＩ）（４９ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、３００μＬの０．１Ｍ  ＨＣｌ中）を添加し、続いて直ちに過レニウム酸ナトリウム（７０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、３００μＬの蒸留水中）の溶液を添加した。還流を１６時間続けた後、溶液を濾過して濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣによって９９％の純度に精製した。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５５８．３（Ｍ＋Ｈ+）。
【００９３】
実施例４：前駆体化合物１の99mＴｃ標識
【００９４】
【化１６】
2013534239.tif 000017
Ｍｅｅｇａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  １９９８；４１：４２８−４３６）によって記載された99mＴｃ標識条件を使用すれば、前駆体化合物１を99mＴｃで標識することができる。要約すれば、上記実施例３に示した手順に従い、前駆体化合物１（０．２〜０．４μｍｏｌ）をＴＦＡ／アニソール／ＭＳＡで処理する。揮発分の除去後、残留物を１００μＬのＥｔＯＨ及び１００μＬのＨＣｌ（１Ｎ）に溶解する。ＨＣｌ（５００μＬ、１Ｎ）、１ｍＬのＳｎ−グルコヘプトネート溶液（１３６μｇのＳｎＣｌ2及び２００μｇのグルコヘプトン酸Ｎａを含むもの、ｐＨ６．６７）及び５０μＬのＥＤＴＡ溶液（０．１Ｎ）を順次に添加する。次いで、食塩溶液中の［99mＴｃ］過テクネチウム酸イオン（１００〜２００μＬ、１〜２０ｍＣｉ）を添加する。反応混合物を１００℃で３０分間（又はオートクレーブ内において１２１℃で３０分間）加熱し、ＲＴに冷却し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で中和する。錯体を酢酸エチル（１×３ｍＬ、２×１．５ｍＬ）で水性反応媒質から中和し、小さいＮａ2ＳＯ4カラムを通した後、酢酸エチル抽出液をＮ2流下で濃縮する。残留物を２００μＬのＥｔＯＨに溶解し、ＨＰＬＣによって精製する。
【００９５】
実施例５：インビトロ評価
既知化合物の性質を本発明のインビボイメージング剤のレニウム誘導体と共に測定するため、一連のインビトロ試験を実施した。これらの試験は、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙ（ＭＡＢＡ）（Ｆｒａｎｚｂｌａｕ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １９９８，３６，３６２−３６６）、Ｌｏｗ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ａｓｓａｙ（ＬＯＲＡ）（Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ２００７，５１，１３８０−１３８５）、及びＩＣ５０を決定するためのＶＥＲＯ  ｃｅｌｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙ（Ｃｏｒｙ  ＡＨ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９１，３，２０７−１２）であった。
【００９６】
５（ａ）  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙ（ＭＡＢＡ）
最初のスクリーンは、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ  Ａｓｓａｙ（ＭＡＢＡ）を用いて、ＢＡＣＴＥＣ  １２Ｂ培地中のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７Ｒｖ（ＡＴＣＣ  ２７２９４）に対して行った。１０の２倍希釈液（通例１００μｇ／ｍＬ〜０．１９μｇ／ｍＬ、ｐＨ６．８）中で化合物を試験した。ＭＩＣ９０は、対照に比べて蛍光を９０％低減させる濃度として定義される。この値は、曲線当てはめプログラムを用いて用量−応答曲線から求めた。
【００９７】
５（ｂ）  Ｌｏｗ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ａｓｓａｙ（ＬＯＲＡ）
このアッセイは、単一濃度（通例≧１０μＭ又はμｇ／ｍｌ）で、ルシフェラーゼ遺伝子を有する低酸素順応Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７Ｒｖに対して行った。嫌気条件下で試験化合物に１０日間暴露し、発光の％阻止を読み取った。
【００９８】
５（ｃ）  ＩＣ５０を決定するための方法
ＶＥＲＯ  ｃｅｌｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙは、ＴＢ  Ｄｏｓｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｓｓａｙと並行して行った。７２時間の暴露後、存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養物中の生存可能な細胞の数を決定するための均質方法であるＰｒｏｍｅｇａ’ｓ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを用いて生存可能性を評価した。曲線当てはめプログラムを用いて、用量−応答曲線から細胞毒性をＩＣ５０として求めた。
【００９９】
以下の表１は、親ＰＺＡ化合物、上記実施例１（ｆ）の方法で得られたキレーター、実施例２の方法で得られた、前記キレートにコンジュゲートされたＰＺＡ、及び実施例３の方法で得られた、前記キレートにコンジュゲートされたＰＺＡのレニウム錯体に関して得られたデータを示している。
【０１００】
【表１】
2013534239.tif 000018
【国際調査報告】
2013534239.tif 000021
2013534239.tif 000022
2013534239.tif 000023