(57)【要約】  アルツハイマー病におけるタウ病理の診断用イメージング剤として有用な放射性標識化合物が記載されている。組成物及びかかる化合物の製造方法も記載されている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（Ｉ）の放射性標識化合物。
【化１】
2013542993.tif 000036
（式中、
Ｒ1は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｐは各々独立に１〜４の整数であり、
Ｘは各々独立にＮ、Ｏ又はＳであり、
Ｒ２はＨ又はアルキルであり、
Ｒ３は各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
ｎは１〜５の整数であり、
Ｙは対アニオンであり、
Ｒ1、Ｒ２及びＲ３の１以上は放射性核種を含んでいる。）
【請求項２】
次の式（Ｉａ）の放射性標識化合物。
【化２】
2013542993.tif 000037
（式中、
Ｒ1は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｐは各々独立に１〜４の整数であり、
Ｘは各々独立にＮ、Ｏ又はＳであり、
Ｒ２はＨ又はアルキルであり、
Ｒ３は各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
ｎは１〜５の整数であり、
Ｙは対アニオンであり、
Ｒ1、Ｒ２及びＲ３の１以上は放射性核種を含んでいる。）
【請求項３】
次の式（ＩＩ）の放射性標識化合物。
【化３】
2013542993.tif 000038
（式中、
Ｒは各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｎは１〜６の整数であり、
Ｒ*は放射性核種であり、
Ｙ-は対アニオンである。）
【請求項４】
次の式（ＩＩａ）の放射性標識化合物。
【化４】
2013542993.tif 000039
（式中、Ｒ'、ｎ、Ｒ*及びＹ-の各々は請求項３の式（ＩＩ）の化合物に関して定義した通りである。）
【請求項５】
次の式（ＩＩＩ）の放射性標識化合物。
【化５】
2013542993.tif 000040
（式中、
ＲはＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
Ｒ"はＨ又はアルキルであり、
Ｒ*は放射性核種であり、
ｎは１〜１０の整数であり、
Ｙ-は対アニオンである。）
【請求項６】
次の式（ＩＶ）の放射性標識化合物。
【化６】
2013542993.tif 000041
（式中、
Ｒは各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'はＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
Ｒ"はＨ又はアルキルであり、
Ｒ*は放射性核種であり、
ｎは１〜１０の整数であり、
Ｙ-は対アニオンである。）
【請求項７】
次の式（ＩＶａ）の放射性標識化合物。
【化７】
2013542993.tif 000042
（式中、Ｒ'、Ｒ"、Ｒ*、ｎ及びＹ-の各々は請求項６の式（ＩＶ）の化合物に関して定義した通りである。）
【請求項８】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項９】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬組成物を用いるイメージング方法。
【請求項１１】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬組成物を用いて、タウ凝集物をインビトロ及び／又はインビボで検出する方法。
【請求項１２】
次の式を有する化合物。
【化８】
2013542993.tif 000043
【化９】
2013542993.tif 000044
【化１０】
2013542993.tif 000045
【請求項１３】
請求項１２記載の化合物及び薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１２記載の化合物又はその医薬組成物を用いるイメージング方法。
【請求項１５】
請求項１２記載の化合物又はその医薬組成物を用いて、タウ凝集物をインビトロ及び／又はインビボで検出する方法。
【請求項１６】
次の式を有する化合物。
【化１１】
2013542993.tif 000046
【化１２】
2013542993.tif 000047
【化１３】
2013542993.tif 000048
【請求項１７】
請求項１６記載の化合物及び薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性標識化合物、その組成物、かかる化合物の製造方法、及び特にアルツハイマー病に関連したタウ病理のイメージングプローブとしてのその使用に関する。本発明の化合物は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）又は単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）イメージングのために使用できる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、高齢者における認知症の最も普通の原因である。それは、死後の神経病理学に基づいて最終的に診断されかつステージ化される。ＡＤの病理学的特徴は、アミロイド斑及び神経細線維もつれ（ＮＦＴ）の沈着を伴う実質的なニューロン喪失である。
【０００３】
ＮＦＴは、微小管結合タンパク質タウから構成されたフィラメント状凝集物からなっている。多くの文献は、タウ凝集物（ＮＦＴ）又はＮＦＴ形成がアミロイド斑よりも緊密にＡＤの進行と相関することを示唆している（Ｂｒａａｋ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｈａｎｇｅｓ．Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ，８２，２３９−２５９，１９９１）。報告によれば、タウ凝集物又は神経細線維病変は、新皮質のアミロイド沈着及び認知症の徴候が検出可能になるより数十年前に一定領域（深部側頭葉）に出現する。タウ病変は臨床症状又は認知症徴候の表出前に起こり、認知症の重篤度と相関している。これらの属性により、タウ凝集物はＡＤの早期診断のための優れたアプローチとなる可能性がある。したがって、これらの病変又はＮＦＴのインビボ検出は、ＡＤの診断及び疾患進行の追跡のために有用であることがわかろう。
【０００４】
チアカルボシアニンはタウアンタゴニスト活性を有している。次式のＮ７４４のような対称チアカルボシアニンは、強力なタウ凝集阻害剤である（Ｅ  Ｃｈａｎｇ，Ｅ  Ｅ  Ｃｏｎｇｄｏｎ，Ｎ  Ｓ  Ｈｏｎｓｏｎ，Ｋ  Ｅ  Ｄｕｆｆ，ａｎｄ  Ｊ  Ｋｕｒｅｔ，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００９，５２，３５３９）。
【０００５】
【化１】
2013542993.tif 000002
次式のシアニン色素（特にベンゾチアゾリルトリメチンシアニン）は、低い濃度（＜３００ｎＭ）で不溶性タウ凝集物の形成を阻害することが報告されている（Ｅ  Ｃｈａｎｇ，Ｅ  Ｅ  Ｃｏｎｇｄｏｎ，Ｎ  Ｓ  Ｈｏｎｓｏｎ，Ｋ  Ｅ  Ｄｕｆｆ，ａｎｄ  Ｊ  Ｋｕｒｅｔ，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００９，５２，３５３９）。
【０００６】
【化２】
2013542993.tif 000003
しかし当技術分野には、ＮＦＴ用のイメージング剤として使用できる放射性標識化合物の製造方法に対するニーズが今なお存在している。以下に記載される本発明は、かかるニーズに応えるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
米国特許出願公開第２０１０／０２３９４９６号明細書
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、次の式（Ｉ）の放射性標識化合物を提供する。
【０００９】
【化３】
2013542993.tif 000004
式中、
Ｒ1は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｐは各々独立に１〜４の整数であり、
Ｘは各々独立にＮ、Ｏ又はＳ、好ましくはＳであり、
Ｒ２はＨ又はアルキルであり、
Ｒ３は各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
ｎは１〜５、好ましくは１〜４、さらに好ましくは１〜３の整数であり、
Ｙ-は当技術分野で知られる任意の対アニオン、好ましくはＩ-、Ｂｒ-、Ｃｌ-、トリフレート、トリフルオロアセテート、トシレート又はメシレート、さらに好ましくはＩ-であり、
Ｒ1、Ｒ２及びＲ３の１以上は放射性核種を含んでいる。
【００１０】
本発明は、次の式（Ｉａ）の放射性標識化合物を提供する。
【００１１】
【化４】
2013542993.tif 000005
式中、
Ｒ1は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｐは各々独立に１〜４の整数であり、
Ｘは各々独立にＮ、Ｏ又はＳ、好ましくはＳであり、
Ｒ２はＨ又はアルキルであり、
Ｒ３は各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
ｎは１〜５、好ましくは１〜４、さらに好ましくは１〜３の整数であり、
Ｙ-は当技術分野で知られる任意の対アニオン、好ましくはＩ-、Ｂｒ-、Ｃｌ-、トリフレート、トリフルオロアセテート、トシレート又はメシレート、さらに好ましくはＩ-であり、
Ｒ1、Ｒ２及びＲ３の１以上は放射性核種を含んでいる。
【００１２】
本発明は、次の式（ＩＩ）の放射性標識化合物を提供する。
【００１３】
【化５】
2013542993.tif 000006
式中、
Ｒは各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
ｎは１〜６の整数であり、
Ｒ*は放射性核種、好ましくは18Ｆであり、
Ｙ-は当技術分野で知られる任意の対アニオン、好ましくはＩ-、Ｂｒ-、Ｃｌ-、トリフレート、トリフルオロアセテート、トシレート又はメシレート、さらに好ましくはＩ-である。
【００１４】
本発明は、次の式（ＩＩａ）の放射性標識化合物を提供する。
【００１５】
【化６】
2013542993.tif 000007
式中、Ｒ'、ｎ、Ｒ*及びＹ-の各々は式（ＩＩ）の化合物に関して定義した通りである。
【００１６】
本発明は、次の式（ＩＩＩ）の放射性標識化合物を提供する。
【００１７】
【化７】
2013542993.tif 000008
式中、
ＲはＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'は各々独立にＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
Ｒ"はＨ又はアルキルであり、
Ｒ*は放射性核種、好ましくは18Ｆであり、
ｎは１〜１０、好ましくは１〜７、さらに好ましくは１〜５の整数であり、
Ｙ-は当技術分野で知られる任意の対アニオン、好ましくはＩ-、Ｂｒ-、Ｃｌ-、トリフレート、トリフルオロアセテート、トシレート又はメシレート、さらに好ましくはＩ-である。
【００１８】
本発明は、次の式（ＩＶ）の放射性標識化合物を提供する。
【００１９】
【化８】
2013542993.tif 000009
式中、
Ｒは各々独立にＨ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）であり、
Ｒ'はＨ、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルキルオキシ又はヒドロキシポリ（オキソエチレン）オキシであり、
Ｒ"はＨ又はアルキルであり、
Ｒ*は放射性核種、好ましくは18Ｆであり、
ｎは１〜１０、好ましくは１〜７、さらに好ましくは１〜５の整数であり、
Ｙ-は当技術分野で知られる任意の対アニオン、好ましくはＩ-、Ｂｒ-、Ｃｌ-、トリフレート、トリフルオロアセテート、トシレート又はメシレート、さらに好ましくはＩ-である。
【００２０】
本発明は、次の式（ＩＶａ）の放射性標識化合物を提供する。
【００２１】
【化９】
2013542993.tif 000010
式中、Ｒ'、Ｒ"、Ｒ*、ｎ及びＹ-の各々は式（ＩＶ）の化合物に関して定義した通りである。
【００２２】
本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び／又は（ＩＶａ）の放射性標識化合物の製造方法を提供する。
【００２３】
本発明はさらに、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（ＩＶａ）の化合物及び薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００２４】
本発明は、本明細書中にそれぞれ記載されているような本発明の放射性標識化合物又はその医薬組成物を投与することにより、タウ凝集物又はＮＦＴをインビトロ又はインビボで検出する方法を提供する。
【００２５】
本発明は、本明細書中にそれぞれ記載されているような本発明の放射性標識化合物又はその医薬組成物を投与する段階を含んでなるイメージング方法を提供する。
【００２６】
本発明は、アルツハイマー病及び他のタウオパシー（ｔａｕｏｐａｔｈｉｅｓ）の発症前検出のための診断用イメージング剤として使用するための放射性標識化合物を提供する。本発明の化合物は、インビトロ及びインビボイメージング目的のために使用し得るように放射性標識することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、［18Ｆ］９（８．０分）を含む反応混合物のＨＰＬＣ分析結果（上段：放射能チャネル、下段：２５４ｎｍのＵＶチャネル）を示している。
【図２】図２は、19Ｆ−２０参照化合物（７．８分）を添加した［18Ｆ］９（７．８分）を含む反応混合物のＨＰＬＣ分析結果（上段：放射能チャネル、下段：２５４ｎｍのＵＶチャネル）を示している。
【図３】図３は、［18Ｆ］９（７．９分）を含む反応混合物のＨＰＬＣ分析結果（上段：放射能チャネル、下段：２５４ｎｍのＵＶチャネル）を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の化合物の例には下記のものがある。
【００２９】
【化１０】
2013542993.tif 000011
【００３０】
【化１１】
2013542993.tif 000012
【００３１】
【化１２】
2013542993.tif 000013
本発明に従えば、本明細書中に記載した本発明の化合物に関しては、放射性核種は当技術分野で知られる任意の放射性同位体を意味するものとする（以後は「放射性標識化合物」という）。好ましくは、放射性核種はイメージング（例えば、ＰＥＴやＳＰＥＣＴ）に適した放射性同位体である。一実施形態では、放射性核種はＰＥＴイメージングに適した放射性同位体である。さらに好ましくは、放射性核種は11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、68Ｇａ、62Ｃｕ、18Ｆ、76Ｂｒ、124Ｉ又は125Ｉであり、さらに一段と好ましくは、放射性核種は18Ｆである。
【００３２】
一実施形態では、放射性核種はＳＰＥＣＴイメージングに適した放射性同位体である。さらに好ましくは、放射性核種は99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、201Ｔｌ、123Ｉ又は133Ｘｅであり、さらに一段と好ましくは、放射性核種は99mＴｃ又は123Ｉである。
【００３３】
本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び／又は（ＩＶａ）の化合物において、放射性核種が非放射性同位体等価物で置き換えられたもの（例えば、18Ｆが19Ｆ又はＦで置き換えられたもの）（「非放射性標識化合物」）を提供する。
【００３４】
本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び／又は（ＩＶａ）の非放射性標識化合物の製造方法を提供する。
【００３５】
本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び／又は（ＩＶａ）の非放射性標識化合物及び薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００３６】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び／又は（ＩＶａ）の非放射性標識化合物の例には下記のものがある。
【００３７】
【化１３】
2013542993.tif 000014
【００３８】
【化１４】
2013542993.tif 000015
【００３９】
【化１５】
2013542993.tif 000016
医薬組成物又は放射性医薬組成物
本発明は、本明細書中に記載したような本発明の化合物を薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物又は放射性医薬組成物を提供する。本発明に従えば、本発明の化合物が放射性核種で放射性標識されている場合、医薬組成物は放射性医薬組成物である。
【００４０】
本発明はさらに、本明細書中に記載したような本発明の化合物を、哺乳動物への投与に適した薬学的に許容されるキャリヤー、賦形剤又は生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物又は放射性医薬組成物を提供する。
【００４１】
当業者には理解される通り、薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤は、当技術分野で知られる任意の薬学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤であり得る。
【００４２】
「生体適合性キャリヤー」は、医薬組成物が生理学的に認容され得るようにして（例えば、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）本発明の化合物を懸濁又は溶解し得る任意の流体（特に液体）であり得る。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤーはまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性キャリヤーのｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００４３】
医薬組成物又は放射性医薬組成物は非経口的に（即ち、注射によって）投与でき、最も好ましくは水溶液である。かかる組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えば、シクロデキストリン或いはＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎ又はリン脂質のような界面活性剤）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ゲンチシン酸又はｐ−アミノ安息香酸）のような追加成分を任意に含み得る。本発明の化合物が放射性医薬組成物として提供される場合、前記化合物の製造方法はさらに、放射性医薬組成物を得るために必要な段階（例えば、有機溶媒の除去、生体適合性緩衝剤及び任意の追加成分の添加）を含むことができる。非経口投与のためには、放射性医薬組成物が無菌性かつ非発熱原性であることを保証するための段階を採用することも必要である。かかる段階は当業者には公知である。
【００４４】
本発明の化合物の製造
本発明の化合物は、当技術分野で知られる任意の手段（特に限定されないが、求核芳香族置換、求核脂肪族置換及びクリック化学を含む）によって製造できる。
【００４５】
本発明の化合物の製造例は、２つのＮ−アルキル化２−メチル複素環（例えば、２３ａ及び２３ｂ）をアミジン（２４）（スキームＡ）又はオルトエステル（２５）（スキームＢ）と反応させることである。
【００４６】
【化１６】
2013542993.tif 000017
【００４７】
【化１７】
2013542993.tif 000018
スキームＡ及びスキームＢ中、Ｒ及びＲ"の各々は本明細書中で定義した通りである。
【００４８】
本発明の一実施形態では、本発明の化合物は、所望のハロゲン又は放射性核種を用いて適当な脱離基を求核芳香族置換又は求核脂肪族置換することにより、放射性核種で放射性標識することができる。求核芳香族置換に適した脱離基の例には、特に限定されないが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＯ2及び+Ｎ(Ｒ)4がある。求核脂肪族置換に適した脱離基の例には、特に限定されないが、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭｓ（メシレート）及びＯＴｓ（トシレート）がある。
【００４９】
本発明の一実施形態では、放射性核種は一段階の放射合成で導入される。
【００５０】
例えば、式（ＩＩ）の化合物は、下記のスキームＣ（式中、Ｒは本明細書中に記載した通りである。）に従って18Ｆで放射性標識できる。
【００５１】
【化１８】
2013542993.tif 000019
式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物もまた、２３ａ及び２３ｂが対称的でない点を除き、スキームＣに従って製造できる。
【００５２】
スキームＤ、Ｅ、Ｆ及びＧ（式中、Ｒは本明細書中に記載した通りである。）は、本発明の化合物の芳香環を放射性標識するための様々な経路を示している。
【００５３】
スキームＤ：求核フッ素化のためのピリジン環の使用は、当技術分野で知られる手段によって行うことができる。ピリジル部分の窒素は、環の電子吸引性を高め、したがってフッ素化を促進する。脱離基（ＬＧ）は、ピリジル部分の窒素に対してオルト位又はパラ位にある。
【００５４】
【化１９】
2013542993.tif 000020
スキームＥ：Ｔｏｂｉａｓ  Ｒｉｔｔｅｒ（Ｔａｋｅｒｕ  Ｆｕｒｕｙａ，Ｈａｎｎｓ  Ｍａｒｔｉｎ  Ｋａｉｓｅｒ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００８，４７，５９９３−５９９６）。
【００５５】
【化２０】
2013542993.tif 000021
スキームＦ：Ｂｕｃｈｗａｌｄ法（Ｄｏｎａｌｄ  Ａ．Ｗａｔｓｏｎ，Ｍｉｎｇｊｕａｎ  Ｓｕ，Ｇｅｏｒｇｉｙ  Ｔｅｖｅｒｏｖｓｋｙ，Ｙｏｎｇ  Ｚｈａｎｇ，Ｊｏｒｇｅ  Ｇａｒｃｉａ−Ｆｏｎｔａｎｅｔ，Ｔｏｍ  Ｋｉｎｚｅｌ，Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｌ．Ｂｕｃｈｗａｌｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖ３２５，２００９，１６６１）。
【００５６】
【化２１】
2013542993.tif 000022
スキームＧ：脱離基としてのヨージウム塩の使用（国際公開第２００５／０９７７１３号、同第２００５／０６１４１５号）。
【００５７】
【化２２】
2013542993.tif 000023
例えば、放射性同位体［18Ｆ］−フッ化物イオン（18Ｆ-）は、通常は核反応18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆから水溶液として得られ、カチオン性対イオンの添加及びそれに続く水の除去によって反応性にされる。好適なカチオン性対イオンは、無水反応溶媒中において、18Ｆ-の溶解性を維持するのに十分な溶解度を有するべきである。したがって、使用されてきた対イオンには、ルビジウム又はセシウムのような大きいが軟らかい金属イオン、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウム、及びテトラアルキルアンモニウム塩がある。好ましい対イオンは、無水溶媒中での溶解性が良く、18Ｆ-の反応性を高めることから、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）のようなクリプタンドと錯体化したカリウムである。18Ｆはまた、ハロゲン又はトシレート基のような適当な脱離基の求核置換によっても導入できる。公知の18Ｆ標識技法についての一層詳細な議論は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”（２００３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ：Ｍ．Ｊ．  Ｗｅｌｃｈ  ａｎｄ  Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ，Ｅｄｓ．）の第６章に見出すことができる。同様な方法は、本明細書中に記載されるＰＥＴ及びＳＰＥＣＴ放射性同位体を含む他の放射性同位体で本発明の化合物を放射性標識するためにも使用できる。
【００５８】
自動化合成
一実施形態では、本明細書中にそれぞれ記載されているような本発明の放射性標識化合物の製造方法は自動化される。例えば、本発明の［18Ｆ］標識化合物は、自動化放射合成装置の使用により、自動化方式で簡便に製造できる。かかるプラットホーム装置には、ＴＲＡＣＥＲｌａｂ（商標）（例えば、ＴＲＡＣＥＲｌａｂ（商標）ＭＸ）及びＦＡＳＴｌａｂ（商標）（共にＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ製）を始めとするいくつかの市販例が存在している。かかる装置は通常、放射化学を実施するための（しばしば使い捨ての）「カセット」を含んでいて、これは放射合成を実施するため装置に取り付けられる。カセットは、普通、流体通路、反応器、及び試薬バイアルを受け入れるためのポート並びに放射合成後の清掃段階で使用される任意の固相抽出カートリッジを含んでいる。任意には、本発明のさらに別の実施形態では、自動化放射合成装置を高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）に連結することができる。したがって、本発明は本発明の化合物の自動化合成のためのカセットを提供する。
【００５９】
イメージング方法
本明細書中に記載したような本発明の放射性標識化合物は、ＮＦＴ又はタウ凝集物に結合し、ＡＤのステージと相関し得るＮＦＴ／タウ凝集物の存在量の確認を助けることができる（例えば、Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔａｕ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｌｉｇａｎｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００９，６，４０９−４１４，Ｅｄｗａｒｄ  Ｃｈａｎｇ，Ｎｉｃｏｌｅｔｔｅ  Ｓ．Ｈｏｎｓｏｎ，Ｋｒｉｓｔｅｎ  Ｅ．Ｆｕｎｋ，Ｊｏｒｄａｎ  Ｒ．ｊｅｎｓｅｎ，Ｂｈａｓｗａｔｉ  Ｂａｎｄｙｏｐａｄｈｙａｙ，Ｓｏｈｅｅ  Ｋｉｍ，Ｓｗａｔｉ  Ｎａｐｈａｄｅ  ａｎｄ  Ｊｅｆｆ  Ｋｕｒｅｔを参照されたい）。
【００６０】
本発明はさらに、本明細書中に記載したような本発明の放射性標識化合物を被験体に投与する段階、及び前記被験体において本発明の前記放射性標識化合物を検出する段階を含んでなるイメージング方法を提供する。本発明はさらに、本明細書中に記載したような本発明の放射性標識化合物を用いて、タウ凝集物をインビトロ又はインビボで検出する方法を提供する。本発明の放射性標識化合物は、好ましくは本明細書中に記載したような本発明の放射性医薬組成物として投与される。したがって本発明は、アルツハイマー病の早期検出及び診断のための一層良好なツールを提供する。
【００６１】
当業者には理解される通り、イメージングのタイプ（例えば、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ）は放射性同位体の性質によって決定される。例えば、本発明の放射性標識化合物が18Ｆを含むならば、それはＰＥＴイメージングに適している。
【００６２】
かくして本発明は、タウ凝集物をインビトロ又はインビボで検出する方法であって、
ｉ）本明細書中に記載したような本発明の放射性標識化合物を被験体に投与する段階、
ｉｉ）本発明の前記放射性標識化合物を前記被験体内のＮＦＴに結合させる段階、
ｉｉｉ）本発明の前記結合放射性標識化合物中の前記放射性同位体から放出される信号を検出する段階、
ｉｖ）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階、並びに
ｖ）前記被験体における前記タウ凝集物の分布及び程度を決定する段階
を含んでなる方法を提供する。
【００６３】
本発明の放射性標識化合物を「投与する」段階は、好ましくは非経口的に実施され、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、化合物を被験体の身体全域に送達するための最も効率的な方法である。静脈内投与は、被験体に対して実質的な物理的介入も実質的な健康リスクももたらさない。投与段階は、本発明のイメージング方法の完全な定義のためには必要でない。したがって本発明のイメージング方法は、本発明の放射性標識化合物を予め投与した被験体に関して実施される、上述の段階（ｉｉ）〜（ｖ）を含むものとして理解することもできる。
【００６４】
投与段階後かつ検出段階前に、本発明の放射性標識化合物をタウ凝集物に結合させる。例えば、被験体がインタクトな哺乳動物である場合、本発明の放射性標識化合物は哺乳動物の身体を通って動的に移動し、体内の様々な組織に接触する。ひとたび本発明の放射性標識化合物がタウ凝集物に接触すれば、それはタウ凝集物に結合する。
【００６５】
本発明の方法の「検出」段階は、本発明の放射性標識化合物に含まれる放射性同位体から放出される信号を、前記信号に対して感受性を有する検出器（例えば、ＰＥＴカメラ）の使用によって検出することを含んでいる。この検出段階はまた、信号データの取得として理解することもできる。
【００６６】
本発明の方法の「生成」段階は、取得された信号データに再構築アルゴリズムを適用してデータセットを得るコンピューターによって実施される。次いで、このデータセットを操作することで、放射性同位体から放出される信号の位置及び／又は量を示す画像が生成される。放出される信号は酵素又は新生物組織の量と直接に相関する結果、生成された画像を評価することで「決定」段階を行うことができる。
【００６７】
本発明の「被験体」は、任意のヒト又は動物被験体であり得る。好ましくは、本発明の被験体は哺乳動物である。最も好ましくは、前記被験体はインタクトな哺乳動物生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被験体はヒトである。
【００６８】
「タウ凝集物に関連する病的状態」は、ＭＣＩ（軽度認知障害）、認知症又はアルツハイマー病であり得る。
【実施例】
【００６９】
特記しない限り、すべての反応剤及び機器は商業的に入手可能である。
【００７０】
【化２３】
2013542993.tif 000024
【実施例１】
【００７１】
実施例１．Ｎ−ヒドロキシエチル−５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウムブロミドの製造
【００７２】
【化２４】
2013542993.tif 000025
５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール（５ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）及び２−ブロモエタノール（５．２２ｇ、４１．９ｍｍｏｌ、２．９６ｍＬ）の混合物を１２０℃で１２時間加熱した。得られた混合物をＣＨＣｌ3で洗浄して過剰のブロモエタノールを除去し、濾過することで純生成物（７ｇ）（８３％）をオフホワイトの固体として得た。
【００７３】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ11Ｈ14Ｂｒ-Ｎ+Ｏ2Ｓに関するｍ／ｚ計算値３０４．２、実測値２２３．８。
【００７４】
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ３．２０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3Ｃ），３．９０（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），３．９６（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．８６（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ａｒ−４−ＣＨ，Ｊ＝５，１０Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ａｒ−６−ＣＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），８．３２（１Ｈ，ｄ，Ａｒ−７−ＣＨ，Ｊ＝１０Ｈｚ）。
【実施例２】
【００７５】
実施例２．３−（２−ヒドロキシエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウムブロミドの製造
【００７６】
【化２５】
2013542993.tif 000026
ピリジン（６５ｍＬ）中のＮ−ヒドロキシエチル−５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウムブロミド（実施例１参照、６．５ｇ、２１．３６ｍｍｏｌ）及びトリエチルオルトアセテート（１．７３ｇ、１０．６８ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１２時間加熱した。反応の完了をＬＣＭＳでチェックした。追加のトリエチルオルトアセテート（１．７３ｇ、１０．６８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をさらに１２時間加熱した。反応塊をジエチルエーテル（３０ｍＬ）の添加によって脱活した。上澄み溶液を分離し、生成した固体をメタノール及びアセトンから再結晶して３．６ｇ（３２％）の濃いピンク色の固体を得た。
【００７７】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ24Ｈ27Ｂｒ-Ｎ+2Ｏ４Ｓ2に関するｍ／ｚ計算値５５１．５２、実測値４７０．４。
【００７８】
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ２．５７（３Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），３．９０（８Ｈ，ｓ，２−ＯＣＨ3，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），４．５５（４Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．１３（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2０Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），６．６０（２Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），７．０７（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−４−ＣＨ），７．３７（２Ｈ，ｓ，２−Ａｒ−６−ＣＨ），７．９３（２Ｈ，ｄ，２−Ａｒ−７−ＣＨ，Ｊ＝１０Ｈｚ）。
【実施例３】
【００７９】
実施例３．メトキシ−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（５−メトキシ−３−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−３−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（「ジメシル化化合物」）
【００８０】
【化２６】
2013542993.tif 000027
及び２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシ−３−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（「モノメシル化化合物」）の製造
【００８１】
【化２７】
2013542993.tif 000028
出発原料である３−（２−ヒドロキシエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウムブロミド（実施例２参照、０．２ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのピリジンに溶解した。メタンスルホニルクロリド（０．２１ｇ、１．８ｍｍｏｌ、０．１４ｍＬ）を０℃で添加した。次いで、反応塊を室温でさらに１．５時間撹拌した。反応の完了をＬＣＭＳで確認した。モノメシル化及びジメシル化化合物の生成を確認した。次いで、反応開をジエチルエーテル（１５ｍＬ）で脱活した。上澄み溶液を除去し、固体を再びメタノールに溶解し、エーテルで再結晶した。次いで、得られた物質を半分取ＨＰＬＣシステムによって精製することで、５０ｍｇのジメシル化化合物及び６０ｍｇのモノメシル化化合物を得た。
【００８２】
ジメシル化化合物：ＬＣ−ＭＳ：Ｃ26Ｈ31Ｂｒ-Ｎ+2Ｏ8Ｓ4に関するｍ／ｚ計算値７０６．０１、実測値６２７。
【００８３】
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：２．６０（３Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），３．１６（６Ｈ，ｓ，２−ＣＨ3ＳＯ2ＯＣＨ2），３．９１（６Ｈ，ｓ，２−ＯＣＨ3），４．６９（４Ｈ，ｓ，２−ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），４．９０（４Ｈ，ｓ，２−ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），６．５８（２Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），７．１０（２Ｈ，ｄ，２−Ａｒ−４−ＣＨ，Ｊ＝１０Ｈｚ），７．４２（２Ｈｓ，２−Ａｒ−６−ＣＨ），７．９２（２Ｈ，ｄ，２−Ａｒ−７−ＣＨ，Ｊ＝１０Ｈｚ）。
【００８４】
モノメシル化化合物：ＬＣ−ＭＳ：Ｃ25Ｈ29ＢｒＮ2Ｏ6Ｓ3に関するｍ／ｚ計算値６２８．０４、実測値５４９．１２。
【００８５】
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）：２．５９（３Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），３．１６（６Ｈ，ｓ，２−ＣＨ3ＳＯ2ＯＣＨ2），３．９０（６Ｈ，ｓ，２−ＯＣＨ3），４．６０（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），４．６７（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），４．８５（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），５．１６（２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ），６．５３（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），６．６５（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），７．０２−７．１４（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−４−ＣＨ），７．４０（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−６−ＣＨ），７．９３（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−７−ＣＨ）。
【００８６】
【化２８】
2013542993.tif 000029
【実施例４】
【００８７】
実施例４．Ｎ−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウムトシレートの製造
【００８８】
【化２９】
2013542993.tif 000030
５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール（０．８５ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）及び２−フルオロエチル−４−メチルベンゼンスルホネート（３．２４ｇ、１４．８４ｍｍｏｌ）の混合物を１４０℃で４時間マイクロ波照射した。得られた生成物をエタノール（１０ｍＬ）及びジエチルエーテル（１００ｍＬ）から結晶化することで、１．０７ｇ（９５％）を褐色の固体として得た。
【００８９】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ11Ｈ13ＦＮＯＳ+に関するｍ／ｚ計算値２２６．２９、実測値２２６．４。
【実施例５】
【００９０】
実施例５．３−（２−フルオロエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（２０）の製造
【００９１】
【化３０】
2013542993.tif 000031
ピリジン（３５ｍＬ）中のＮ−ヒドロキシエチル−５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウムブロミド（実施例１参照、０．４ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、Ｎ−（２−フルオロエチル）−５−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾリウムトシレート（実施例４参照、０．４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）及びトリエチルオルトアセテート（３．０ｍＬ）の混合物を１００℃で１６時間加熱した。得られた混合物を真空下で濃縮乾固した。生成物を半分取ＨＰＬＣで精製し、純画分を集めて凍結乾燥することで、０．０７２ｇの所望化合物を紫色の固体として得た。
【００９２】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ24Ｈ26ＦＮ2Ｏ3Ｓ2+に関するｍ／ｚ計算値４７３．６０及び実測値４７３．７０。
【００９３】
1Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ3ＣＮ）：２．５８（３Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），，３．９２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．０５（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），４．５３（２Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），４．６５（１Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，Ｊ＝５Ｈｚ），４．７０（１Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，Ｊ＝５Ｈｚ）４．９０（１Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，Ｊ＝５Ｈｚ）４．９９（１Ｈ，ｔ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ，Ｊ＝５Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），６．６１（１Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），６．９９−７．０５（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−４−ＣＨ），７．０８（１Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−６−ＣＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−６−ＣＨ，Ｊ＝５Ｈｚ），７．７４（２Ｈ，ｍ，２−Ａｒ−７−ＣＨ，Ｊ＝５Ｈｚ）。
【実施例６】
【００９４】
実施例６．３−（２−フルオロエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−フルオロエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（１８）の製造
【００９５】
【化３１】
2013542993.tif 000032
表題化合物（３５ｍｇ）を実施例５に示したものと同じ反応物から単離した。
【００９６】
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ24Ｈ26ＦＮ2Ｏ3Ｓ2+に関するｍ／ｚ計算値４７５．５９及び実測値４７５．６（Ｍ＋）。
【００９７】
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯｄ６）：２．５８（３Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），３．９１（６Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），４．８５（４Ｈ，Ｂｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ）４．９３（２Ｈ，Ｂｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ）５．００（２Ｈ，Ｂｓ，ＮＣＨ2ＣＨ2Ｆ），６．５８（２Ｈ，ｓ，ＣＨＣ（ＣＨ3）ＣＨ），７．０９（２Ｈ，ｄｄ，２−Ａｒ−６−ＣＨ，Ｊ＝３，９Ｈｚ），７．４（２Ｈ，Ｂｓ，２−Ａｒ−６−ＣＨ，），７．９５（２Ｈ，ｄ，２−Ａｒ−７−ＣＨ，Ｊ＝９Ｈｚ）。
【実施例７】
【００９８】
タウ及びＡβの凝集
タウタンパク質（２つのヌクレオチド結合モチーフ及び４つの反復結合領域を有するタウ−４１２、４２．９ｋＤａ、１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｔｒａｔｅｃｈ社）を、絶えず振盪しながらヘパリン（０．１ｍｇ／ｍｌ）の存在下において３７℃で７２時間インキュベートしてタウ凝集物を生成させた。Ａβ1-40タンパク質（４．３ｋＤａ、１ｍｇ／ｍｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を、絶えず振盪しながら室温（ＲＴ）で７２時間インキュベートしてＡβ1-40凝集物を生成させた。
【００９９】
インビトロ結合アッセイ
２種の試験化合物１８（実施例６参照）及び２０（実施例５参照）をＤＭＳＯに溶解しかつ段階希釈した。凝集したタウ及びＡβ1-40（１０μｇ／試料）を含む試料を、９６ウェルプレート中において各試験化合物の段階希釈液（濃度範囲１ｎＭ〜１００μＭ）と共にＲＴで１時間インキュベートした。インキュベーション後、試料をスピンカラムプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社）に移し、次いで１５００×ｇで２分間遠心することで、試料から遊離化合物を除去した。最後に、試料を黒色９６ウェルプレートに移し、Ｔｅｃａｎプレートリーダーを用いて蛍光強度を４８５〜６１２ｎＭで測定した。すべての実験は三重反復で実施した。各化合物に関するＫｄ値は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ社）を用いてデータを非線形結合曲線に当てはめることで算出した。
【０１００】
組織結合アッセイ
アルツハイマー病患者及び健常被験体からの嗅内皮質（ｅｎｔｏｒｈｉｎａｌ  ｃｏｒｔｅｘ）の凍結組織チャックをＴｉｓｓｕｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ社（クリデバンク、英国）から入手した。組織を凍結切片化し、中性緩衝ホルマリンで後固定し、リン酸緩衝食塩水中０．２５％ＫＭｎＯ4中で組織をインキュベートすることで組織の自己蛍光を消光させた。隣接する組織切片を各化合物で標識し（１００μＭ、ＲＴで３０分のインキュベーション）、続いて神経細線維もつれ（マウス抗タウ、クローンＡＴ８、１：２０希釈度、Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ社）又はＡβ斑（マウス抗Ａβ、クローン４Ｇ８、１：５０希釈度、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）に対する一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。最後に、組織切片を蛍光二次抗体（ＡＬＥＸＡ４８８又はＡＬＥＸＡ５６４ヤギ抗マウス、希釈度１：１０００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）と共にＲＴで１時間インキュベートし、次いでＤａｐｉでＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティング媒体中にマウントして核を対比染色した。Ｌｅｉｃａ顕微鏡に連結されたＮｉｋｏｎ  ＤｉＲＳカメラを用いて画像を捕獲した。
【０１０１】
結果
結果は、試験化合物が低いナノモル濃度内のＫｄをもってタウ凝集物に結合する一方、Ａβ1-40凝集物に対するＫｄは顕著に高いことを実証している。このように、１８及び２０はいずれもＡβ1-40凝集物に比べて凝集タウに対して高度に選択的である。
【０１０２】
【表１】
2013542993.tif 000033
【実施例８】
【０１０３】
実施例８．［18Ｆ］３−（２−フルオロエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（［18Ｆ］９）の製造
【０１０４】
【化３２】
2013542993.tif 000034
18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ反応を用いて濃縮［18Ｏ］Ｈ2Ｏを照射することで、サイクロトロンからフッ素−１８を得た。［18Ｆ］フッ化物イオンの水溶液（０．２ｍＬ、１０８ＭＢｑ）を、炭酸カリウム（１ｍｇ、７．２μｍｏｌ）、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）（５ｍｇ、１３．２μｍｏｌ）及びアセトニトリル（１ｍＬ）を含むホイートンバイアル（３ｍＬ）に添加した。バイアルを１００℃に加熱し、窒素流を用いて溶媒を除去した。無水アセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加し、蒸発を繰り返した。この共沸乾燥段階を２回繰り返した。室温に冷却した後、無水ジメチルスルホキシド（０．２ｍＬ）中の２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシ−３−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エチル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（実施例３参照、２ｍｇ、３．２μｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を８０℃で１５分間加熱し、分析ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｃ１８（２），５０×４．６ｍｍ，３μｍ、溶媒Ａ：酢酸アンモニウム緩衝液，２０ｍＭ，ｐＨ４．３、溶媒Ｂ：アセトニトリル、勾配：１５分で２０〜８０％Ｂ、流量：１ｍｌ／分、ＵＶ波長：２５４ｎｍ）によって分析した。ＨＰＬＣ分析結果は、［18Ｆ］９の生成のために１６％の標識効率を示し（図１）、また安定な19Ｆ−９参照物質との共溶出を示した（図２）。
【実施例９】
【０１０５】
実施例９．［18Ｆ］３−（２−フルオロエチル）−２−（（１Ｅ，３Ｚ）−３−（３−（２−ヒドロキシエチル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２（３Ｈ）−イリデン）−２−メチルプロプ−１−エン−１−イル）−５−メトキシベンゾ［ｄ］チアゾール−３−イウム（［18Ｆ］９）の製造
【０１０６】
【化３３】
2013542993.tif 000035
炭酸カリウムの代わりに重炭酸カリウム（１ｍｇ、１０μｍｏｌ）を使用した点を除き、実施例８に示した手順に従って化合物［18Ｆ］９を製造した。放射性ＨＰＬＣによる反応混合物の分析結果は、１４％の標識効率を示した（図３）。
【０１０７】
上記に論議及び／又は引用されたすべての特許、雑誌論文、刊行物及び他の文書の内容は、援用によって本明細書中に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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