(57)【要約】【解決手段】本発明は次に示す式を有するカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）である。2013544876.tif 000056  式中、Ｄは、独立して、−ＣＨ２−基、酸素原子、硫黄原子、スルフィニル基、もしくはスルホニル基を含む基から選択され、Ｅは、独立して、水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル、６〜２０個の炭素原子を有するアリール、二酸化窒素基、アジド基、アミノ基、グアニジニウム基、ハロゲン原子、−ＣＨ２Ｒ基（式中、Ｒはヒドロキシルである）、ハロゲン、アミノ基、Ｎ（アルキル）２基、ＮＨ（アルキル）基を含む基から選択されるか、又は、Ｅは、−ＣＯ−Ｒ’（式中、Ｒ’は水素原子である）、ヒドロキシル基、もしくはアミノを表し、Ｂは、Ａ−Ｃ基｛式中、Ａは、独立して、酸素原子、硫黄原子、ＮＨ基、もしくは（ＣＨ２）ｉ基（式中、ｉは１から１０の整数である）を含む基から選択され、Ｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニルを含む基から選択されるか、又は、  Ｃは、式（ＩＩ）の基である。2013544876.tif 000057本発明はカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の使用又は感染の第１段階でレクチンを使用する病原体の細菌感染を防止又は治療するための医薬組成物である。【選択図】なし
2013544876.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次に示す式を有するカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、
【化１】
2013544876.tif 000038
式中、
Ｄは、独立して、−ＣＨ２−基、酸素原子、硫黄原子、スルフィニル基、もしくはスルホニル基を含む基から選択され、
Ｅは、独立して、水素、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル、６〜２０個の炭素原子を有するアリール、二酸化窒素基、アジド基、アミノ基、グアニジニウム基、ハロゲン原子、−ＣＨ２Ｒ基（式中、Ｒはヒドロキシルである）、ハロゲン、アミノ基、Ｎ（アルキル）２基、ＮＨ（アルキル）基を含む基から選択されるか、又は、Ｅは、−ＣＯ−Ｒ’（式中、Ｒ’は水素原子である）、ヒドロキシル基、もしくはアミノを表し、
Ｂは、Ａ−Ｃ基
｛式中、
Ａは、独立して、酸素原子、硫黄原子、ＮＨ基、もしくは（ＣＨ２）ｉ基（式中、ｉは１から１０の整数である）を含む基から選択され、
Ｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニルを含む基から選択されるか、又は、
Ｃは、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000039
2013544876.tif 000040
（ＣＯ−ＮＨ）ｎ−（Ｖ）ｍ−Ｕ
（式中、
ｎは１〜３の整数であり、
Ｖは、ＣＨ２、Ｃ６Ｈ４（フェニル“Ｐｈ”）、ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２であり、
ｍは１〜１５の整数であり、
Ｕは、存在しないか、もしくはＣＨ２である）であり、
2013544876.tif 000041
【化３】
2013544876.tif 000042
もしくはこれらの誘導体である］であり、
かつ、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基のうちの少なくとも１つは、次に示す前記式の基
【化２】
2013544876.tif 000043
を表す｝、
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項２】
請求項１に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、前記Ｃ基の糖誘導体が、次に示す
【化４】
2013544876.tif 000044
を含む基から選択される、
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項３】
請求項１に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、前記Ｃ基の糖誘導体が、次に示す
【化５】
2013544876.tif 000045
を含む基から選択される、
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項４】
前記Ｃ基で定義される
2013544876.tif 000046
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、前記Ｃ基で定義される
2013544876.tif 000047
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２、Ｕ＝ＣＨ２、
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=Ｃ６Ｈ４（“Ｐｈ”）、Ｕは存在しない、
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２、Ｕ＝ＣＨ２、
を含む基から選択される、
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項６】
前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基のうちの２つが、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000048
を表す、請求項１〜５のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項７】
前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基のうちの３つが、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000049
を表す、請求項１〜５のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項８】
前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基が、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000050
を表す、請求項１〜５のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、Ｄが−ＣＨ２−基を表し、Ｅが、ｔｅｒｔ−ブチル基であるアルキル基を表し、かつ、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）のＢ基で定義されるＡが、酸素原子を表す、
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の製造方法であって、該方法は、
（ａ）次に示す式（ＩＶ）
【化６】
2013544876.tif 000051
（式中、Ｄ及びＥは、請求項１に定義するとおりである）のプロパルギル化カリックス［４］アレーンを製造する段階であって、塩基の存在下で、次に示す式（Ｖ）
【化７】
2013544876.tif 000052
のカリックス［４］アレーンと、次に示す式（ＶＩ）
【化８】
2013544876.tif 000053
のプロパルギル化化合物との位置選択的多重プロパルギル化によって、該プロパルギル化カリックス［４］アレーン（ＩＶ）を得る、前記段階と、
（ｂ）次に示す式（ＩＩ）
【化９】
2013544876.tif 000054
（式中、リンカー及び糖は、請求項１〜５のいずれか１項に定義するとおりであり、
Ｘは、アセタート（ＣＨ３ＣＯ）、ベンゾアート（Ｃ６Ｈ５ＣＯ）、もしくはベンジル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２）を含む基から選択される保護基を表し、この保護基が、糖ヒドロキシル基の酸素原子に結合している）の保護カリキサレン系グリコシル化化合物を製造する段階であって、リンカーの端部に隣接したアジド官能基を有する次の式（ＩＩＩ）
【化１０】
2013544876.tif 000055
の炭水化物誘導体と、前の段階で得られたプロパルギル化カリックス［４］アレーン（ＩＶ）との結合によって、該保護カリキサレン系グリコシル化化合物を製造し、
該炭水化物が、一方の端部でアルコール官能基を、他方の端部でアジド基を有したリンカーによるグリコシル化によって製造される、前記段階と、
（ｃ）式（ＩＩ）の該保護カリキサレン系グリコシル化化合物の保護基の脱保護によって、請求項１〜１０のいずれか１項に定義されるカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を得る段階と、
を含むことを特徴とする、
方法。
【請求項１１】
医薬的に許容し得る担体又は希釈剤と組み合わせて、請求項１〜９のいずれか１項に記載のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１２】
感染の第１段階においてレクチンを利用する病原体に対する抗感染性として有用な治療剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染の第１段階において、レクチンを利用する病原体に対する抗感染性としてのグリコミメティック化合物に関する。  
【背景技術】
【０００２】
緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）は、ピオシアニックバチラス（pyocyanic bacillus）とも呼ばれるグラム陰性菌であり、多湿な環境及び土壌中に生息している。緑膿菌はヒトの活動と関連しており、台所、浴室、病院等に存在している。この日和見細菌は、免疫低下患者の重度の院内感染の原因となり、その数は移植の増大に伴って増加している。フランスでは、緑膿菌は２００１年８月から２００６年６月の間に院内感染の８％を引き起こしている（Institut de veille sanitaire、BHE 30-31、2008）。緑膿菌はやけど、目と耳の感染の一般的な原因であり、また、カテーテルのような医療機器へのコロニー形成の大部分を引き起こしている。
【０００３】
また、緑膿菌は嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の肺感染における主要な病原体である。大部分のケースでは、ＣＦ患者はティーンエイジャーの段階に達すると慢性肺感染にかかる。この感染は病的状態及び死亡の主要な原因である。いったん慢性感染にかかると、抗生物質に多耐性を示す多数の菌株が発生するため、それを根絶することは非常に難しいか不可能である。緑膿菌のバイオフィルムの形成は宿主の免疫と抗生物質に対して耐性を増大させる結果となり、治療のアプローチを複雑にする。抗ウイルス薬や抗生物質のような薬物に対して耐性を示す多くの病原微生物の急速な発現は、公衆の健康にとって主要な関心事である。代わりとなる治療戦略が現在喫緊に必要とされている。
【０００４】
緑膿菌は、炭水化物を特異的に認識することができる多数のタンパク質受容体を産生する。レクチンと呼ばれるそれらの受容体は宿主組織への付着とバイオフィルムの形成において役割を果たす。レクチンは細菌内で可溶性の形で産生されるか、付着性オルガネラの頂端に存在する。ＬｅｃＡ（ＰＡ―ＩＬ）及びＬｅｃＢ（ＰＡ―ＩＩＬ）は緑膿菌の細胞質で産生される可溶性のレクチンであり、細菌細胞の外膜に多くの量が検出されている。ＬｅｃＡ及びＬｅｃＢは共に四量体のタンパク質であり、カルシウムの存在下でガラクト―スとフコースをそれぞれ認識する（Gilboa-Garber,Methods Enzymol. 1982, 83, 378-385）。それらは細菌に対する病原性因子として考えられており、感染の際に酵素及び他のタンパク質と同時発現する。ＬｅｃＡは気道細胞に対して毒性があることが立証されており（Bajolet-Laudinat et al. Infect.Immun. 1994, 62, 4481-4487）、細菌バイオフィルムの形成及び安定化の役割も果たしている。ＬｅｃＢもバイオフィルムの形成に関与しており（Tielker et al., Microbiology 2005, 151, 1313-1323）、培養した肺細胞の繊毛運動を阻害する（Adam et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997, 155, 2102-2104）。
【０００５】
多くの場合、感染プロセスは、レクチンと称する細菌受容体によって宿主上皮の糖複合体を特異的に認識することによって開始する。このレクチンの炭水化物に対する特異性が宿主と組織の標的を決定する。認識段階の後は付着が続き、このプロセスは細菌と宿主の両方の多くの細胞経路を起動させ、したがって、次の段階である侵襲とコロニー形成に影響を与える。それゆえ、糖複合体の可溶性類似化合物として作用する糖化合物（天然の糖又は糖複合体とは反対に“グリコミメティック（glycomimetic）”と称される。）によって付着をブロックすることは、感染に対する１つの可能な戦略である。このグリコミメティックはヒト組織に存在する天然の糖複合体と競合するため、細菌の付着とコロニーの形成をブロックする。細菌のレクチンと宿主の糖複合体の相互作用を特徴づけることは、前記プロセスに干渉することができ、それゆえ、細菌の付着及び／又はバイオフィルムの形成を制限することができるグリコミメティックの設計に必要な段階である。
【０００６】
宿主細胞の表面に微生物が付着することによって多くの感染が起こることから、炭水化物と誘導体は抗感染化合物の有望な供給源である。耐性菌株の発現を誘発するプロセスである、抗生物質で殺菌することよりもむしろ、提案する代替手段は付着プロセスを干渉することである。細菌付着に関与する天然オリゴ糖の特徴づけは、細胞表面の糖複合体と競合することができる可溶性類似化合物（すなわちグリコミメティック）の設計に役立つ。抗菌性のグリコミメティックの利点は、その局在的な利用と毒性の不存在である。さらには、細菌の代謝に直接影響しないため、耐性が起こるリスクは低い。最後に、このような化合物は他の処置、例えば、抗生物質と併せて利用することができる。
【０００７】
グリコミメティック化合物は寄生虫がヒト組織に付着するのを阻害することに対する関心のルートであり、それらのうちのいくつかは、すでに胃腸路、泌尿路又は耳に影響を与える細菌感染に対して開発されている。最近、ＦｉｍＨ、尿路病原性大腸菌の線毛に存在するレクチンに対して設計されたグリコミメティックが、膀胱上皮細胞への細菌の付着をブロックするだけでなく、バイオフィルムの形成を阻害することが立証された（Wellens et al., PLoS One.2008, 3, 2040）。
【０００８】
特許文献１、特許文献２及び特許文献３の文献は、いくつかの細菌感染を標的とするオリゴ糖について開示している。
【０００９】
しかしながら、グリコミメティックを開発する場合、細胞表面の糖複合体との有効な競合を得るためには強力な親和性が必要であり、そのようなグリコミメティックを開発することは常に容易とはいえないことを思い出す必要がある。レクチンと炭水化物の相互作用は、低い親和性（ミリモルの範囲）であり、このことは、生物学的に活性なグリコミメティック化合物の開発に対して主たる障害である点がしばしば特徴づけられる。多価であること（multivalency）は、該化合物と標的の間の相互作用を顕著に増大させるための有効な戦略であることが立証されている。低価の糖質クラスターから高価の糖質デンドリマー又は糖質高分子まで、いくつかのアプローチが利用されている。ＦｉｍＨを標的とする糖質デンドリマーは、尿路病原性大腸菌に対して抗付着性化合物として有効であることが立証されている（Touaibia et al., ChemMedChem. 2007, 2, 1190-1201）。近年、フコース提示糖質デンドリマーが、緑膿菌のいくつかの菌株のバイオフィルムを消散させるのに利用された（Johansson eta al., Chem Biol 2008, 15, 1249-1257）。この結果は、グリコミメティックが細菌感染と闘う可能性を有していることを確認し、抗付着戦略に利用されうることを立証している。
【００１０】
近年、本発明者は、グリコミメティック化合物について発表した。該化合物は、カリキサレン糖複合体であり、日和見細菌である緑膿菌のガラクトース結合レクチンＰＡ―ＩＬに対するリガンドとして評価された。この結果は、４つの糖を保持するカリキサレン糖複合体が、抗付着剤としての潜在用途に対して、ガラクトシル化表面へのＰＡ―ＩＬの結合の最も強力な阻害剤であることを示している。
【００１１】
この研究で得られた興味深い結果は、抗付着性を呈し、かつ、細菌レクチンに高い親和性を有する新規化合物を発見するための、本研究者の研究を進めることに刺激を与えた。
【００１２】
しかしながら、そのような化合物を発見することは容易ではない。レクチンに対するグリコミメティックの親和性、すなわち、その効率は、カリキサレン糖複合体によって示される糖の数、すなわち、価数だけに依存するのではなく、カリキサレン糖複合体のリンカーの長さと柔軟性にも依存している。該リンカーは糖部分をカリキサレン部分に結合している。１から４の価数をもつカリキサレン部分に基づいて、最終のグリコミメティック化合物に異なる特性をもたらす新たなリンカーに基づいて新たなクラスの分子を開発する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第２００５／０８９７３３号
【特許文献２】国際公開第２００７／０２１７２１号
【特許文献３】国際公開第２００７／１４３０５２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
それゆえ、病原体のレクチンに対する高い親和性及び抗感染活性をもつ新規な  グリコミメティック化合物を得るための新たな開発に対する必要性が未だ存在している。
【００１５】
本発明の目的の１つは、緑膿菌のレクチンＡ及び／又はレクチンＢを選択的にブロックすることができる新規なグリコミメティック化合物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、病原体の付着を限定することができ、したがって強力な抗菌性をもった新規なグリコミメティック化合物を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、バイオフィルムの形成を阻害することができ、したがってムコイド型細菌に対する抗感染化合物として興味深い新規なグリコミメティック化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の１つの態様においては、本発明は以下の式で表されるカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を提供する。
【化１】
2013544876.tif 000003
式中、
2013544876.tif 000004
（式中、Ｒ’は水素原子である）、ヒドロキシル基、もしくはアミノを表し、
Ｂは、Ａ−Ｃ基
｛式中、
Ａは、独立して、酸素原子、硫黄原子、ＮＨ基、もしくは（ＣＨ２）ｉ基（式中、ｉは１から１０の整数である）を含む基から選択され、
Ｃは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニルを含む基から選択されるか、又は、
Ｃは、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000005
2013544876.tif 000006
（ＣＯ−ＮＨ）ｎ−（Ｖ）ｍ−Ｕ
（式中、
ｎは１〜３の整数であり、
Ｖは、ＣＨ２、Ｃ６Ｈ４（フェニル“Ｐｈ”）、ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２であり、
ｍは１〜１５の整数であり、
Ｕは、存在しないか、もしくはＣＨ２である）であり、
2013544876.tif 000007
【化３】
2013544876.tif 000008
もしくはこれらの誘導体である］であり、
かつ、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基のうちの少なくとも１つは、次に示す前記式の基
【化２】
2013544876.tif 000009
を表す｝。
【００１９】
本発明で定義されるカリキサレン系グリコシル化化合物は、少なくとも１つのアーム（arm）をもち、最大で４つのアームをもつコアを含むグリコミメティック化合物としても定義されうる。該アームは以下のＣ基
【化２】
2013544876.tif 000010
によって表される。また、該コアは式（Ｉ）の残部として定義される。
【００２０】
本願で用いられる用語“グリコミメティック化合物”は、より詳しくは緑膿菌のＬｅｃＡ、ＬｅｃＢ又は両方のレクチンに対して高い親和性をもつ化合物（生理学的に許容される塩を含む。）を指す。
【００２１】
本発明の独創性は、特に２つの部分からなるリンカーの構造にある。
【００２２】
2013544876.tif 000011
【００２３】
該リンカーの第２の部分（炭水化物部分の隣に位置する。）は変動可能であり、上記したように構造（Ｖ）ｍ−Ｕで表される。この該リンカーの第２の変動可能部分はアミド結合、エチレングリコール部分又は芳香環部分を含む基で表すこともできる。この第２の変動可能部分は異なる柔軟性を有し、それゆえレクチンに対して異なる親和性を示すことができる。  
【００２４】
新たに設計されたグリコミメティックとＬｅｃＡの相互作用は、以前に報告された非アミド官能化化合物（Cecioni et al., 2009）と比較して高い親和性を呈することが示された。この新たに設計されたグリコミメティックに対し、測定された親和性は向上したため、実際に該分子の抗付着特性を予測することができる。
【００２５】
ここで用いる用語“アルキル”は、１から１０個の炭素原子を有するモノラジカル（monoradical）の分岐又は非分岐飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ―ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−オクチル、ｔｅｒｔ−オクチル、ｎ−デシルなどの基によって例示される。
【００２６】
ここで用いる用語“アリール”は、単一の環又は複数の縮合（融合）環を有する炭素原子６から２０個の不飽和芳香族炭素環式基を指す。この用語にはフェニル、ナフチルなどの基が例示される。
【００２７】
ハロゲン原子は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨウ素（Ｉ）を指す。
【００２８】
ここで用いる用語“アルケニル”は、分岐又は非分岐の不飽和炭化水素基のモノラジカルを指し、好ましくは２から１０個の炭素原子を有し、１〜６つのビニル不飽和部位を有する。この用語にはエテニル（−ＣＨ２＝ＣＨ２）、ｎ―プロペニル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）などの基が例示される。
【００２９】
用語“アルキニル”は、不飽和部位を有する不飽和炭化水素のモノラジカルを指し、好ましくは２から１０個の炭素原子を有し、少なくとも１又は２つのアセチレン（三重結合）を有する。この用語にはエチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）などの基が例示される。  
【００３０】
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基の１つが上記の以下の基：
【化２】
2013544876.tif 000012
であるときは、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は“一価の（monovalent）”カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）とも命名されうる。
【００３１】
４つのＣ基の２つが該基であるときは、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は“二価の（divalent）”と命名される。
【００３２】
４つのＣ基の３つが該基であるときは、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は“三価の（trivalent）”と命名される。
【００３３】
４つのＣ基が該基であるときは、該カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は“四価の（tetravalent）”と命名される。
【００３４】
Ｃ基の前記糖誘導体は以下の群から選択することが好ましい。
【化４】
2013544876.tif 000013
【００３５】
別の態様においては、Ｃ基の前記糖誘導体は以下の群から選択される。
【化５】
2013544876.tif 000014
【００３６】
2013544876.tif 000015
2013544876.tif 000016
【００３７】
2013544876.tif 000017
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２、Ｕ＝ＣＨ２、
これは以下のリンカー：ＣＯ―ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２に相当する。
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=Ｃ６Ｈ４（“Ｐｈ”）、Ｕは存在しない、
これは以下のリンカー：ＣＯ―ＮＨ−Ｃ６Ｈ４に相当する。
・ｎ＝１、ｍ＝１、Ｖ=ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２、Ｕ＝ＣＨ２、
これは以下のリンカー：ＣＯ―ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２に相当する。
【００３８】
好ましくは、本発明は、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の４つのＣ基のうちの２つが、次に示す式の基
【化２】
2013544876.tif 000018
を表すカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を提供する。
【００３９】
したがって、前記のように定義した二価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は、以下の置換パターンの１つによって表される。
１，２−二置換：
【化１１】
2013544876.tif 000019
１，３−二置換：
【化１２】
2013544876.tif 000020
【００４０】
別の態様においては、本発明は、４つのＣ基のうちの３つが、次に示す式の基を表す前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を提供する。
【化２】
2013544876.tif 000021
【００４１】
前記のように定義した三価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は、以下の三置換されたコンホメーションによって表すことができる。
【化１３】
2013544876.tif 000022
【００４２】
さらに別の態様においては、本発明は、４つのＣ基が、次に示す式の基を表す前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を提供する。
【化２】
2013544876.tif 000023
【００４３】
前記のように定義した四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は、以下の４つのコンホメーションの１つによって表すことができる。
コーンコンホメーション（cone conformation）：
【化１４】
2013544876.tif 000024
部分的コーンコンホメーション：
【化１５】
2013544876.tif 000025
１，３−交互コンホメーション：
【化１６】
2013544876.tif 000026
１，２−交互コンホメーション：
【化１７】
2013544876.tif 000027
【００４４】
好ましくは、本発明は、Ｄが−ＣＨ２−基を表し、Ｅが、ｔｅｒｔ−ブチル基であるアルキル基を表し、かつ、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）のＢ基で定義されるＡが酸素原子を表す、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を提供する。
【００４５】
本発明に係るカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の他の好ましい点は、調節・変更可能な合成方法によって該化合物を迅速に得ることができる点にある。
【００４６】
さらに別の態様においては、本発明は、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の製造方法であって、該方法は、
（ａ）次に示す式（ＩＶ）
【化６】
2013544876.tif 000028
（式中、Ｄ及びＥは、請求項１に定義するとおりである）のプロパルギル化カリックス［４］アレーンを製造する段階であって、塩基の存在下で、次に示す式（Ｖ）
【化７】
2013544876.tif 000029
のカリックス［４］アレーンと、次に示す式（ＶＩ）
【化８】
2013544876.tif 000030
のプロパルギル化化合物との位置選択的多重プロパルギル化によって、該プロパルギル化カリックス［４］アレーン（ＩＶ）を得る、前記段階と、
（ｂ）次に示す式（ＩＩ）
【化９】
2013544876.tif 000031
（式中、リンカー及び糖は、請求項１〜５のいずれか１項に定義するとおりであり、
Ｘは、アセタート（ＣＨ３ＣＯ）、ベンゾアート（Ｃ６Ｈ５ＣＯ）、もしくはベンジル（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２）を含む基から選択される保護基を表し、この保護基が、糖ヒドロキシル基（前述した該糖の式参照）の酸素原子に結合している）の保護カリキサレン系グリコシル化化合物を製造する段階であって、リンカーの端部に隣接したアジド官能基を有する次の式（ＩＩＩ）
【化１０】
2013544876.tif 000032
の炭水化物誘導体と、前の段階で得られたプロパルギル化カリックス［４］アレーン（ＩＶ）との結合によって、該保護カリキサレン系グリコシル化化合物を製造し、
該炭水化物が、一方の端部でアルコール官能基を、他方の端部でアジド基を有したリンカーによるグリコシル化によって製造される、前記段階と、
（ｃ）式（ＩＩ）の該保護カリキサレン系グリコシル化化合物の保護基の脱保護によって、請求項１〜１０のいずれか１項に定義されるカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を得る段階と、
を含むことを特徴とする、方法を提供するものである。
【００４７】
化合物（Ｖ）、（ＶＩ）と用いることができる塩基は、ＤＭＦ中においてＮａＨ（コーンコンホメーション）又はＫ２ＣＯ３、次いでＣｓ２ＣＯ３が挙げられる。そのとき、部分的コーンコンホメーションと１，３−交互コンホメーションの混合物が得られるが、これはシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離することができ、該プロパルギル化カリックス［４］アレーン（ＩＶ）が得られる。
【００４８】
また、本発明は、医薬的に許容し得る担体又は希釈剤と組み合わせて、前記カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）を含むことを特徴とする医薬組成物を提供するものである。
【００４９】
さらに本発明の別態様においては、感染の第１段階においてレクチンを利用する病原体に対する抗感染性として有用な治療剤をさらに含む前記医薬組成物である。
【００５０】
この治療剤は例えば嚢胞性線維症患者の肺感染、やけどにおける院内感染、及び老人の家における床ずれによる感染での緑膿菌感染に対する治療剤である。
【００５１】
また本発明は、インフルエンザウイルスのような宿主細胞への付着のためにレクチンを利用する病原体に対する抗感染性として使用するための前述したカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）又は医薬組成物を提供する。
【００５２】
さらに別の態様においては、本発明は、感染の第１段階においてレクチンを利用する病原体からの細菌感染を防止又は治療することを意図した医薬を製造するための前述したカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）又は医薬組成物に関する。
【００５３】
それらの医薬は、病原体が利用するレクチンに対する抗感染性として作用する。
【００５４】
本発明の別の態様においては、前述したカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）、医薬組成物又はこれらの化合物を含む医薬は、呼吸路又は肺路により用いられる。
【００５５】
これらの化合物、医薬又は組成物は、特にＣＦ患者又はしばしば院内感染の被害者である呼吸補助下にいる患者において、緑膿菌の感染を防止又は治療するため気道に吸入又は注入される。
【００５６】
本発明のさらなる態様においては、前述したカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）、医薬組成物又はこれらの化合物を含む医薬は、特にやけど又は肌傷に対して、緑膿菌の感染を防止又は治療するため局部的に又は包帯の上に用いられる。
【００５７】
本発明の新規な特徴は、本発明の以下の詳細な説明に述べた試験に基づいて当業者に明らかとなる。しかしながら、本発明の詳細な説明及び提示された固有の実施例は、本発明のある態様を示している一方、例示のためにのみ提供される。その理由は、本発明の趣旨及び範囲内における種々の変更及び改変は本発明の詳細な説明から当業者に明らかとなるからである。
【００５８】
添付図面１−７と共に、以下の例示が示される。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１ａ】四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の化学構造及び作製を示す概略的合成スキームを示す図であり、４つのＣは、式：
【化２】
2013544876.tif 000033
を表す。
【図１ｂ】図１ａの概略的合成スキームのうちの特定の合成スキームを示す図であり、四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）において、Ｄは、−ＣＨ２−基、Ｅはｔｅｒｔ−ブチル基（ｔ−Ｂｕ）であるアルキル基、Ｂ基において定義されるＡは酸素原子、リンカー、糖及びＸは前記のとおりである。図１ａ及び１ｂにおいて、得られたカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は四価である。しかしながら、一価、二価、又は三価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）は四価と同様にして得られる。フェノール基の選択的アルキル化は、ハロゲン化アルキルの存在下で塩基を用いて達成され、残りのフェノール基は（Ｖ）の（ＩＶ）への変換と同様の条件下でプロパルギル化される。
【図２ａ】それぞれ“３”（リンカー＝ＣＯ―ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）及び“８”（リンカー＝ＣＯ―ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ―ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２）と命名された炭水化物アジド誘導体（ＩＩＩ）の合成スキームを示す図である。各段階の試薬及び条件は以下に示す。段階ａ）：ＨＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、ＳｎＣｌ４、ＣＦ３ＣＯ２Ａｇ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２ｈ；段階ｂ）：ＮａＮ３、ｎＢｕ４ＮＩ、ＤＭＦ、８５℃、１６ｈ；段階ｃ）：Ｈ２、Ｐｄ−Ｃ  １０％、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１６ｈ；段階ｄ）：ＢｒＣＨ２ＣＯＢｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１２ｈ；段階ｅ）：ＮａＮ３、ｎＢｕ４ＮＩ、ＤＭＦ、８５℃、１６ｈ；段階ｆ）：酢酸プロパルギル、ＣｕＩ、ｉＰｒ２ＮＥｔ、ＤＭＦ、１１０℃、マイクロ波、１５分；段階ｇ）：ＭｅＯＨ、Ｈ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、室温、１６ｈ；段階ｈ）：ＨＯＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、ＳｎＣｌ４、ＣＦ３ＣＯ２Ａｇ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２ｈ； 段階ｉ）：Ｎ―クロロアセチルグリシン、ＥＤＣｌ、ＨＯＢｔ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ、室温、１６ｈ。
【図２ｂ】“１２”（リンカー＝ＣＯ―ＮＨ−Ｃ６Ｈ４）と命名された炭水化物アジド誘導体（ＩＩＩ）の合成スキームを示す図である。各段階の試薬及び条件は以下に示す。段階ａ）：Ａｃ２Ｏ、Ｃ５Ｈ５Ｎ、ＤＭＡＰ、室温、１６ｈ；段階ｂ）：Ｈ２、Ｐｄ―Ｃ  １０％、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、１６ｈ；段階ｃ）：ＢｒＣＨ２ＣＯＢｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温、２ｈ；段階ｄ）：ＮａＮ３、ｎＢｕ４ＮＩ、ＤＭＦ、５０℃、１６ｈ；段階ｅ）：酢酸プロパルギル、ＣｕＩ、ｉＰｒ２ＮＥｔ、ＤＭＦ、１１０℃、マイクロ波、１５分；段階ｆ）：ＭｅＯＨ、Ｈ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、室温、１６ｈ。
【図３ａ】図２に示された調製された“３”と命名された炭水化物アジド誘導体（ＩＩＩ）を使用することによる、“１９”と命名された四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の合成スキームを示す図である。
【図３ｂ】炭水化物アジド誘導体“８”を使用することにより、それぞれ“２１”（図３ｂ―１参照）、“２３”（図３ｂ―２参照）及び“２５”（図３ｂ―３参照）と命名されたグリコミメティック（Ｉ）の合成スキームを示す図である。
【図３ｃ】それぞれ“２７”（図３ｃ―１参照）、“２９”（図３ｃ―２参照）及び“３１”（図３ｃ―３参照）と命名されたグリコミメティック（Ｉ）の合成スキームを示す図である。
【図４】酵素結合レクチン測定法（ＥＬＬＡ）で得られた曲線を示す図である。詳しくは、この図は、３つの異なる一価のグリコシル化化合物（Ｉ）、すなわち、それぞれ５、１０及び１４の競合効果の比較を示している。記号■を有する曲線は、化合物５を表す。記号▲を有する曲線は、化合物１０を表す。記号●を有する曲線は、化合物１４を表す。
【図５ａ】ＳＰＲにおけるガラクトース被覆チップにＬｅｃＡの結合を阻害することに対し、１９と命名された四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）に関する図である。詳しくは、図５ａは化合物１９の濃度上昇に伴って得られたセンサーグラムを表す。
【図５ｂ】ＳＰＲにおけるガラクトース被覆チップにＬｅｃＡの結合を阻害することに対し、１９と命名された四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）に関する図である。異なるセンサーグラムに基づく阻害曲線を表し、ＩＣ５０値の計算に使用した。
【図６】ＬｅｃＡと糖質化合物の間の相互作用のＩＴＣサーモグラムを示す図である。上部は生のＩＴＣデータであり、下部は化合物１９のＬｅｃＡへの結合に対する結合等温線を示す図である。
【図７】緑膿菌に感染したマウスモデルにおいて、異なる単糖類（グルコース、ガラクトース）及び誘導体（化合物１４）の保護効果を示す図である。透過率は肺胞バリアの劣化、すなわち、細菌感染によって引き起こされた肺組織の障害を評価する。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
実施例Ｉ
カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の製造
一般式（Ｉ）で表されるカリキサレン系グリコシル化化合物を製造するために、この実施例で使用された概略的合成スキームを図１ａ及び１ｂに示している。そこでは、式（ＩＶ）のプロパルギル化カリックス［４］アレーンは、式（Ｖ）のカリックス［４］アレーンと、式（ＶＩ）のプロパルギル化化合物との位置選択的多重プロパルギル化によって得られる。次いで、式（ＩＶ）のプロパルギル化カリックス［４］アレーンは、式（ＩＩＩ）の炭水化物誘導体と結合して式（ＩＩ）のアセチル保護カリキサレン系グリコシル化化合物となり、これを加水分解により脱保護することによって、カリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）が得られる。
【００６１】
概略的合成スキームを示す特定の合成スキームを図２ａ、２ｂ及び図３ａ、３ｂ、３ｃに示す。
【００６２】
ここで製造された化合物について詳しく述べると、四価のカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）であって、
Ｄは、−ＣＨ２−基を表し、
Ｅは、ｔｅｒｔ―ブチル基であるアルキル基を表し、
Ｂ基で定義されたＡは、酸素原子を表し、
Ｃ基で定義された糖は、β−Ｄ―ガラクトシルであり、及び
Ｃ基で定義されたリンカーは、それぞれ
・ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２：（化合物“１９”参照）；
・ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２（化合物“２１”、“２３”、及び“２５”参照）；
・ＣＯ−ＮＨ−Ｃ６Ｈ４（化合物“２７”、“２９”、及び“３１”参照）。
【００６３】
四価のグリコミメティック化合物１９、２１、２３、２５、２７、２９は、以下のコンホメーションをとる。
グリコミメティック１９、２５、及び３１は、１，３−交互コンホメーション、
グリコミメティック２１及び２７は、コーンコンホメーション、
グリコミメティック２３及び２９は、部分的コーンコンホメーション。
【００６４】
これらのカリキサレン系グリコシル化化合物１９、２１、２３、２５、２７、２９、及び３１を製造するための概略的な実験方法について述べる。
【００６５】
合成のための全ての試薬は市販されたものであった（試薬グレードの化合物として入手可能な最も高純度のもの）。溶媒はＣａＨ２（ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｍｇ／Ｉ２（ＭｅＯＨ）、Ｎａ／ベンゾフェノン（ＴＨＦ）を加えて蒸留するか、ドライなものを購入した。全ての反応は、アルゴン雰囲気下で行った。マイクロ波による活性化した反応は、Biotage Initiator systemにより行った。ＮＭＲ溶媒はＥｕｒｉｓｏ―Ｔｏｐ（Saint Aubin, フランス）から購入した。
【００６６】
ＮＭＲスペクトルを２９３Ｋにて記録した。他に断りのない限り、３００ＭＨｚ又は４００ＭＨｚのスペクトロメータを使用した。シフトは重溶媒の残余ピークに対して参照される。
【００６７】
以下の略号は観察されたマルチプリシティを説明するために使用される。
S、シングレット；d、シングレット；t、トリプレット；q、カルテット；m、マルチプレット、及びbs、ブロードシングレット。
【００６８】
１Ｄ及び２Ｄ ＮＭＲからの完全なシグナル帰属はＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ及びＨＭＢＣ相関に基づいて行った。
赤外スペクトルはＡＴＲ装置を備えたＦＴ―ＩＲ spectrometerを用いて記録した。高解像度（ＬＳＩＭＳ）マススペクトルはThermo Finnigan Mat95XL spectrometerを用いてpositiveモードで記録した。
ＥＳＩマススペクトルはThermo Finnigan LCQ spectrometerを用いてpositiveモードで記録した。高解像度（ＨＲ―ＥＳＩ―ＱＴＯＦ）マススペクトルはBruker MicroOTOF-Q II XL spectrometerを用いてpositiveモードで記録した。
ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦマススペクトルについて、マトリックスとしてＣＨＣＡ（φ−シアノー４−ヒドロキシケイ皮酸、ＭｅＯＨ中１０ｇ・Ｌ−１）及びＮａＩ（アセトン中１０ｇ・Ｌ−１）を用いてVoyager DE-STR spectrometer（Applied Biosystem）を使用して、陽イオンリフレクトロンモードで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をシリカゲル６０ Ｆ254（Merck）で被覆したアルミニウムシート上で行った。ＴＬＣプレートはＵＶ光（λ＝２５４ｎｍ）により検出し、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（９５：５ｖ／ｖ）中に１０％Ｈ２ＳＯ４を含む混合物を用いた処理で展開し、次いで加熱した。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、シリカゲルＳｉ ６０（４０〜６３μｍ）を用いて行った。旋光性についてはPerkin Elmer polarimeterを用いて測定した。
【００６９】
１）１，３−双極子付加環化反応の一般的手順（方法Ａ）
他に断りがない限り、脱気したＤＭＦ中、アルキン官能化化合物、ヨウ化銅、ＤＩＰＥＡ及びアジド誘導体をBiotage Initiator２〜５ｍｌのバイアルに導入した。該バイアルをアルゴンでフラッシュし、その溶液に対し３０秒間超音波処理を行った。
該バイアルをセプタムキャップ（septum cap）で閉じ、１１０℃で１０分間、マイクロ波を照射して加熱した（溶媒吸収レベル：High）。該バイアルを開封した後、生成物が部分的に水に溶けるときは、該粗混合物を濃縮しフラッシュクロマトグラフィーの前にトルエンとの同時蒸発を３回行った。生成物が全然水に溶けないときは、該混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。その有機層を１５０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３、水及び塩水で連続して洗浄した。該有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過、蒸発させた。その粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、所望する環状付加化合物を得た。  
【００７０】
２）脱アセチル化の一般的手順（方法Ｂ）
他に断りがない限り、前記グリコシド又は糖質クラスター（１ｅｑ．）を蒸留ＭｅＯＨ、超純水及び超純トリエチルアミン（５：１：１：１、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）に懸濁した。該混合物を室温下で２〜４日間撹拌した。溶媒を蒸発させ、トルエンと３回同時蒸発させた。その結果生じた白色フォーム（white foam）を超純水（５ｍＬ）に溶解し、凍結乾燥させて、純正なグリコミメティックを得た。
【００７１】
ａ）１−アジドー３−オキサペンター５−イル ２，３，４，６−テトラーＯ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“２”）
新たに蒸留したジクロロメタン（６０ｍＬ）に１（２ｇ、５．１ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸銀（１．７ｇ、７．７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）及び２−（２−クロロエトキシ）エタノール（０．９５７ｇ、７．７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を溶解した撹拌溶液に、室温でＳｎＣｌ４（ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、１５．４ｍＬ、１５．４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を滴下した（６０分以内―シリンジポンプ）。該混合物は光から保護した。全てのＳｎＣｌ４を添加して１０分後に出発物質の消失が観察された（ＴＬＣモニタリング）。該混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に移し、ｐＨが８になるまでｐＨを確認した。該溶液を１５分激しく撹拌した。該二相溶液をＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。該有機層を混合して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１５０ｍＬ）、水（２×１５０ｍＬ）及び塩水（１５０ｍＬ）で連続して洗浄した。濃縮及び高真空でＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、粗生成物（淡黄色ガム質）を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（１．６６ｇ、２５．６ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）及びテトラーｎ―ブチルヨウ化アンモニウム（０．３７８ｇ、１．０ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ．）を加え、該混合物をアルゴン下、８０℃で１６時間撹拌した。該混合物をｒ．ｔ．に冷却、ろ過して、該固形物をＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ過物をＥｔＯＡｃで希釈して全量を４００ｍＬとした。該有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥した。濃縮後、該残留物（黄色〜橙色ガム質）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ、６：４）で精製して、対応するアジド官能化β―グリコシド２（無色のガム質）を得た（１．３４８ｇ、２段階以上５７％）。Ｒｆ＝０．３１（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、６：４）。[α]Ｄ＝−３．９°（ｃ＝１、ＣＨ２Ｃｌ２）。
【００７２】
ｂ）１−アジドアセトアミドー３−オキサペンター５−イル ２，３，４，６−テトラーＯ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“３”）
新たに蒸留したジクロロメタン４０ｍＬを、２（０．９５１ｇ、２．０６ｍｍｏｌ）を含む丸底フラスコにアルゴン下で添加した。該混合物を３サイクルの真空／アルゴンで脱気した。次いで、Ｐｄ／Ｃ（１０ｗｔ％）を０．２１９ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）添加し、該混合物を３サイクルの真空／アルゴンに供した。該溶液は、３サイクルの真空／水素により水素雰囲気に供し、ｒ．ｔ．で２０時間撹拌した。アジド部分の還元はＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）によってモニターすることができる。２０時間後に出発物質が存在しているときは、フラスコをアルゴンでフラッシュした後、Ｐｄ／Ｃを添加することができる。３サイクルの真空／アルゴンを行った後、該混合物はｒ．ｔ．でさらに数時間撹拌することができる。出発物質が完全になくなった後、該混合物をアルゴンでフラッシュし、Ｅｔ３Ｎ（５７５μＬ、４．１２ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を添加した。ブロモアセチルブロミド（２１４μＬ、２．４７ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を滴下し、１２時間撹拌した。Ｐｄ／Ｃを除去するため、該混合物をセライト（ＣＨ２Ｃｌ２）のプラグを通してろ過した。ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）中の粗生成物を１Ｎ ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮、高真空でＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、該粗生成物（淡橙色ガム質）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（０．６７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）及びテトラーｎ―ブチルヨウ化アンモニウム（０．１５２ｇ、０．４１ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ．）を添加し、該混合物をアルゴン下８０℃で１６時間撹拌した。該混合物をｒ．ｔ．に冷却し、ろ過して、該固形物をＥｔＯＡｃで洗浄した。該ろ過物をＥｔＯＡｃで希釈し、全体を３００ｍＬとした。該有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥した。濃縮後、該残留物（橙色ガム質）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）で精製して、アジド官能化β―グリコシド３（無色のガム質）を得た（５９０ｍｇ、３段階以上５７％）。Ｒｆ＝０．３７（ＥｔＯＡｃ）。[α]Ｄ＝−１３．３°（ｃ＝１、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２０Ｈ３０Ｎ４ＮａＯ１２［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値５４１．１７５２、実測値５４１．１７４４；Ｃ２０Ｈ３０Ｎ２ＮａＯ１２［Ｍ＋Ｎａ−Ｎ２］＋に対する計算値５１３．１６９１、実測値５１３．１６８８。
【００７３】
ｃ）１−［（１，２，３−トリアゾールー４−アセトキシメチルー１―イル）ーアセトアミド］―３−オキサペンター５−イル
２，３，４，６−テトラ―Ｏ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“４”）
方法Ａに従って白色フォーム（１３６ｍｇ、７２％）として得た：ＤＭＦ（３ｍＬ）中、３（１５８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、酢酸プロパルギル（４５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）、ヨウ化銅（５．８ｍｇ、０．１ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（１５９μＬ、３ｅｑ．）。該混合物をワークアップし、水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、該粗生成物をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物４を得た。Ｒｆ＝０．１６（ＥｔＯＡｃ）。[α]Ｄ＝−３０．８°（ｃ＝０．４、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２５Ｈ３６Ｎ４ＮａＯ１４［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値６３９．２１２０、実測値６３９．２０９６。
ｄ）１−［（１，２，３−トリアゾールー４−ヒドロキシメチルー１―イル）ーアセトアミド］―３−オキサペンター５−イル
β―Ｄ−ガラクトピラノシド（“５”）
方法Ｂに従って無色の油（７２ｍｇ、９４％）として得た：４（１１７ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．５ｍＬ）。 [α]Ｄ＝＋２．９°（ｃ＝０．４５、Ｈ２Ｏ）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１５Ｈ２６Ｎ４ＮａＯ９［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値４２９．１５８６、実測値４２９．１５９２。
【００７４】
ｅ）２−アジドエチル２，３，４，６−テトラーＯ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“６”）
新たに蒸留したジクロロメタン（１５０ｍＬ）に１（５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸銀（４．２ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）及び２−クロロエタノール（１．３ｍＬ、１９．２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を溶解した撹拌溶液に、ＳｎＣｌ４（ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、３８．４ｍＬ、３８．４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を室温で滴下した（１２０分以内―シリンジポンプ）。該混合物は光から保護した。出発物質と所望する化合物が同じＲｆであるため出発物質の消失は観察できなかった。３時間後（ＳｎＣｌ４添加終了後１時間）、該混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７５０ｍＬ）に移し、ｐＨが８になるまでｐＨを確認した。該溶液を２０分激しく撹拌した。該二相溶液をＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。該有機層を混合して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１５０ｍＬ）、水（２×１５０ｍＬ）及び塩水（１５０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。濃縮及び高真空でＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、粗生成物（淡黄色ガム質）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（４．３ｇ、６６．３ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）及びテトラーｎ―ブチルヨウ化アンモニウム（０．４９１ｇ、１．３ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）を加え、該混合物をアルゴン下、７０℃で１６時間撹拌した。該混合物をｒ．ｔ．に冷却、ろ過して、該固形物をＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ過物をＥｔＯＡｃで希釈して全量を４００ｍＬとした。該有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥した。濃縮後、該残留物（黄色油）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製して、対応するアジド官能化β―グリコシド６（無色のガム質）を得た（４．１８６ｇ、２段階以上７８％）。Ｒｆ＝０．４６（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、１：１）。
【００７５】
ｆ）２−［（Ｎ―クロロアセチル）グリシンアミド］―エチル ２，３，４，６−テトラ―Ｏ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“７”）
新たに蒸留したＣＨ２Ｃｌ２１５０ｍＬを、６（３．８７５ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）を含む丸底フラスコにアルゴン下で添加した。該混合物を３サイクルの真空／アルゴンで脱気した。次いで、Ｐｄ／Ｃ（１０ｗｔ％）を０．４９５ｇ添加し、該混合物を３サイクルの真空／アルゴンに供した。該溶液は、３サイクルの真空／水素により水素雰囲気に供し、ｒ．ｔ．で２０時間撹拌した。アジド部分の還元はＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターすることができる。
出発物質が完全になくなった後、該混合物をアルゴンでフラッシュし、Ｐｄ／Ｃを除去するため、該混合物をセライト（ＣＨ２Ｃｌ２）のプラグを通してろ過した。
該粗生成物を真空下で濃縮して灰色フォームを生成した。Ｎ―クロロアセチルグリシン（２．１１ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を含む第２の丸底フラスコ（２５０ｍＬ）に、無水ＤＭＦ（４５ｍＬ）及び蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）をアルゴン下で添加した。ＮａＣｌ／氷浴を用いて該混合物を−１０℃に冷却し、その後、ＨＯＢｔ（２．５１ｇ、１８．６ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）及びＥＤＣｌ（２．８１ｇ、１８．６ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を添加した。該混合物を４０分撹拌し、次いで該粗アミンのＣＨ２Ｃｌ２溶液５５ｍＬを滴下した（２時間以内）。該反応はｒ．ｔ．に上げることを許容し、ｒ．ｔ．で１６時間撹拌した。次いで該粗混合物は濃縮し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）に希釈して、ＨＣｌ １Ｎ（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮後、該残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）で精製して、クロロ官能化グリコシド７（白色フォーム）を得た（２．６１２ｇ、２段階以上５４％）。Ｒｆ＝０．３０（ＥｔＯＡｃ）。[α]Ｄ＝＋８．２°（ｃ＝１、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：５４７．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、１０７０．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋ＨＲ―ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２０Ｈ２９ＣｌＮ２ＮａＯ１２［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値５４７．１３０７、実測値５４７．１３０６。
【００７６】
ｇ）２−［（Ｎ―アジドアセトアミド）グリシンアミド］―エチル ２，３，４，６−テトラ―Ｏ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“８”）
無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）を、クロロ誘導体７（２．５３５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（１．５７ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）及びテトラーｎ―ブチルヨウ化アンモニウム（０．３５５ｇ、１．０ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）を含む１００ｍＬ丸底フラスコに添加した。該混合物をアルゴン下で１６時間撹拌した。出発物質と所望する化合物が同じＲｆであるため、ＴＬＣでは反応のモニタリングはできなかった。該混合物をｒ．ｔ．に冷却、ろ過し、該固形物をＥｔＯＡｃで洗浄した。該ろ過物はＥｔＯＡｃで希釈して、全量を４００ｍＬとした。該有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。濃縮後、該残留物（黄色油）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）で精製して、対応するアジド官能化グリコシド８（白色フォーム）を得た（２．００ｇ、７８％）。Ｒｆ＝０．３０（ＥｔＯＡｃ）。[α]Ｄ＝＋３．０°（ｃ＝１、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２０Ｈ２９Ｎ５ＮａＯ１２［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値５５４．１７０５、実測値５５４．１７１５。
【００７７】
ｈ）２−Ｎ―［（１，２，３―トリアゾールー４−アセトキシメチルー１−イル）―アセトアミド］グリシンアミド―エチル
２，３，４，６−テトラ―Ｏ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“９”）
方法Ａに従って白色フォーム（１７６ｍｇ、９９％）として得た：ＤＭＦ（３ｍＬ）中、８（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、酢酸プロパルギル（４１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）、ヨウ化銅（５．３ｍｇ、０．１ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（１４６μＬ、３ｅｑ．）。該粗混合物を蒸発させ、トルエンと３回同時蒸発させた。その結果得られた粗生成物を、２度の連続したフラッシュクロマトグラフィーによりシリカゲル（ＥｔＯＡｃ、次いでＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、純正な化合物を生成した。Ｒｆ＝０．５０（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ、９：１）。[α]Ｄ＝＋４．３°（ｃ＝１．１、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２５Ｈ３５Ｎ５ＮａＯ１４［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値６５２．２０７３、実測値６５２．２０７６。
【００７８】
ｉ）２−Ｎ―［（１，２，３―トリアゾールー４−ヒドロキシメチルー１−イル）―アセトアミド］グリシンアミド―エチル
β―Ｄ−ガラクトピラノシド（“１０”）
方法Ｂに従って白色のフリーズドライパウダ（８２ｍｇ、７８％）として得た：９（１６０ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）、水（１ｍＬ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ）。ｒ．ｔ．で２日間撹拌及び濃縮した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、その後、フリーズドライして、純正な脱アセチル化グリコシド１０を得た。[α]Ｄ＝＋４．２°（ｃ＝０．５５、Ｈ２Ｏ）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１５Ｈ２５Ｎ５ＮａＯ９［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値４４２．１５４０、実測値４４２．１５４４。
【００７９】
ｊ）４−（アジドアセトアミド）フェニル２，３，４，６―テトラーＯ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“１２”）
ピリジン（５０ｍＬ）を、１１（４．０７ｇ、１３．５１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２０ｍｇ）を含む２５０ｍＬ丸底フラスコにアルゴン下で添加した。次いで、３５ｍＬのＡｃ２Ｏを滴下した。該混合物をｒ．ｔ．で１６時間撹拌した。該粗混合物をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で希釈して、ＨＣｌ １Ｎ（２×３００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×３００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（３００ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）及び濃縮後、該残留物をＰＥから結晶化し、ろ過、乾燥して、純正なアセチル化中間体（５．７５ｇ）を得た（９１％）。次いで、アセチル化ｐ―ニトロフェニルーガラクトピラノシドを含む１Ｌ丸底フラスコにアルゴン雰囲気下で新たに蒸留したＣＨ２Ｃｌ２を添加した。該混合物を３サイクルの真空／アルゴンで脱気した。次いで、Ｐｄ／Ｃ（１０ｗｔ％）を０．６３４ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）添加し、該混合物を３サイクルの真空／アルゴンに供した。該溶液は、３サイクルの真空／水素により水素雰囲気に供し、ｒ．ｔ．で１６時間撹拌した。ニトロ基の還元はＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターすることができる。出発物質が完全になくなった後、該混合物をアルゴンでフラッシュし、０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（２．０ｍＬ、１４．３２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を添加した。ブロモアセチルブロミド（１．２４ｍＬ、１４．３２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）を滴下し、該混合物を０℃で１時間撹拌した。該混合物をｒ．ｔ．で１時間温め、Ｐｄ／Ｃを除去するため、該混合物をセライト（ＣＨ２Ｃｌ２）のプラグを通してろ過した。ＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）中の該粗混合物を、ＨＣｌ １Ｎ（２×２５０ｍＬ）、水（２×２５０ｍＬ）及び塩水（２５０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）後、濃縮及び高真空でＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、粗生成物（淡黄色固形物）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（４．１ｇ、６２．６ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）及びテトラーｎ―ブチルヨウ化アンモニウム（０．４６ｇ、１．２５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）を加え、該混合物をアルゴン下、５０℃で１６時間撹拌した。該混合物をｒ．ｔ．に冷却、ろ過して、該固形物をＥｔＯＡｃで洗浄した。ろ過物をＥｔＯＡｃで希釈して全量を６００ｍＬとした。該有機層を、ＮａＨＣＯ３水溶液（２×２００ｍＬ）、水（２×２００ｍＬ）、塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥した。濃縮後、該残留物（淡黄色固形物）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製した後、結晶化（ＣＨ２Ｃｌ２／ＰＥ）して、白色固形物であるアジド官能化グリコシド１２を得た（５．２２９ｇ、４段階以上７４％）。Ｒｆ＝０．２９（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、１：１）。[α]Ｄ＝＋６．６°（ｃ＝１．３、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：５４５．０［Ｍ＋Ｎａ］＋、１０６６．４［２Ｍ＋Ｎａ］＋ＨＲ―ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ２６Ｎ４ＮａＯ１１［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値５４５．１４９６、実測値５４５．１４９６。
【００８０】
ｋ）４−［（１，２，３―トリアゾールー４−アセトキシメチルー１−イル）―アセトアミド］フェニル２，３，４，６−テトラ―Ｏ―アセチルーβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“１３”）
方法Ａに従って白色フォーム（３５０ｍｇ、９８％）として得た：ＤＭＦ（４ｍＬ）中、１２（３００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、酢酸プロパルギル（８４ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）、ヨウ化銅（１０．９ｍｇ、０．１ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（３００μＬ、３ｅｑ．）。該粗混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に希釈し、該有機層をＨＣｌ １Ｎ（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）及び濃縮後、該残留物をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ）フラッシュクロマトグラフィーにより純正な化合物１３を生成した。[α]Ｄ＝＋８．２°（ｃ＝１、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：６２１．１［Ｍ＋Ｈ］+、６４３．０［Ｍ＋Ｎａ］＋、１２６２．３［２Ｍ＋Ｎａ］＋ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ２７Ｈ３２Ｎ４ＮａＯ１３［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値６４３．１８４１、実測値６４３．１８５８。
【００８１】
ｌ）４−［（１，２，３―トリアゾールー４−ヒドロキシメチルー１−イル）―アセトアミド］フェニルβ―Ｄ−ガラクトピラノシド（“１４”）
方法Ｂに従って白色のフリーズドライパウダ（２０６ｍｇ、９５％）として得た：１３（３３５ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）、水（２ｍＬ）及びトリエチルアミン（２ｍＬ）。ｒ．ｔ．で２日間撹拌及び濃縮した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、その後、フリーズドライして、純正な脱アセチル化グリコシド１４を得た。[α]Ｄ＝−１８．８°（ｃ＝０．４３、Ｈ２Ｏ）。ＥＳＩ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：４３３．１［Ｍ＋Ｎａ］＋。ＥＳＩ―ＭＳ（negativeモード）ｍ／ｚ：４０９．１［Ｍ−Ｈ］−、４３３．１［Ｍ＋Ｃｌ］−。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１７Ｈ２２Ｎ４ＮａＯ８［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値４３３．１３３０、実測値４３３．１３２４。
【００８２】
ｍ）グリコミメティック（“１８”）
方法Ａに従って白色フォーム（１５４ｍｇ、８９％）として得た：１７（４８ｍｇ、６０．１μｍｏｌ、１ｅｑ．）、３（１８７ｍｇ、３６１μｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（６ｍｇ、３０μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（５２μＬ、３００μｍｏｌ、５ｅｑ．）。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、１：０、次いで９５：５）により精製した。Ｒｆ＝０．４５（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９５：５）。[α]Ｄ＝−２．５（ｃ＝１．２６、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）：ｍ／ｚＣ１３６Ｈ１８５Ｎ１６Ｏ５２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２８７４．２３１８、実測値２８７４．２３０６、Ｃ１３６Ｈ１８６Ｎ１６Ｏ５２［Ｍ＋２Ｈ］＋＋に対する計算値１４３７．６１９６、実測値１４３７．６２６０。
【００８３】
ｎ）グリコミメティック（“１９”）
方法Ｂに従って白色フォーム（１０８ｍｇ、９９％）として得た：１８（１４２ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．５ｍＬ）。ｒ．ｔ．で２日間撹拌し、濃縮した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド１９を得た。[α]Ｄ＝−０．５（ｃ＝１．１／ＤＭＳＯ）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１０４Ｈ１５２Ｎ１６Ｎａ２Ｏ３６［Ｍ＋２Ｎａ］＋＋に対する計算値１１２３．５１７０、実測値１１２３．５２２６。
【００８４】
ｏ）グリコミメティック（“２０”）
方法Ａに従って白色フォーム（１０３ｍｇ、５６％）として得た：１５（５０ｍｇ、６３μｍｏｌ、１ｅｑ．）、８（２００ｍｇ、３８０μｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（６ｍｇ、３１μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（５４μＬ、３１０μｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：３５分、１１０℃。ワークアップなしで、粗混合物を濃縮し、トルエンと同時蒸発させ、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ、１：０、次いで９：１）により精製した。Ｒｆ＝０．０１（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９：１）。[α]Ｄ＝−１．２（ｃ＝１．０、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１３６Ｈ１８２Ｎ２０Ｏ５２［Ｍ＋２Ｈ］＋＋に対する計算値１４６３．６１００、実測値１４６３．６１５９、Ｃ１３６Ｈ１８１ＫＮ２０Ｏ５２［Ｍ＋Ｈ＋Ｋ］＋＋に対する計算値１４８２．５８８０、実測値１４８２．５８８５。
【００８５】
ｐ）グリコミメティック（“２１”）
方法Ｂに従って白色フォーム（７２ｍｇ、９２％）として得た：２０（１０２ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）、水（１ｍＬ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ）。ｒ．ｔ．で３日間撹拌し、濃縮した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド２１を得た。[α]Ｄ＝−０．４（ｃ＝０．６８／ＤＭＳＯ）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１０４Ｈ１４９Ｎ２０Ｏ３６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２２５４．０４３８、実測値２２５４．０４３０、Ｃ１０４Ｈ１４８Ｎ２０Ｎａ２Ｏ３６［Ｍ＋２Ｎａ］＋＋に対する計算値１１４９．５０７５、実測値１１４９．５１２６、  Ｃ１０４Ｈ１５０Ｎ２０Ｏ３６［Ｍ＋２Ｈ］＋＋に対する計算値１１２７．５２５５、実測値１１２７．５３０９。
【００８６】
ｑ）グリコミメティック（“２２”）
方法Ａに従って白色フォーム（１１１ｍｇ、８１％）として得た：ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中、１６（３７．７ｍｇ、４７μｍｏｌ、１ｅｑ．）、８（１４２ｍｇ、２８２μｍｏｌ、５．７ｅｑ．）、ヨウ化銅（２．５ｍｇ、２３μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（４１μＬ、２３５μｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：３０分、１１０℃。ワークアップなしで、粗混合物を濃縮し、トルエンと同時蒸発させ、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１：０、次いで８５：１５）により精製した。Ｒｆ＝０．４（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９０：１０）。[α]Ｄ＝−０．９（ｃ＝１．０、ＣＨ２Ｃｌ２）．ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１３６Ｈ１８０Ｎ２０Ｎａ２Ｏ５２［Ｍ＋２Ｎａ］＋＋に対する計算値１４８５．５９２０、実測値１４８５．５９３４。
【００８７】
ｒ）グリコミメティック（“２３”）
方法Ｂに従って白色フォーム（１０２ｍｇ、７９％）として得た：２２（１６６ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）、水（１ｍＬ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ）。ｒ．ｔ．で１日間撹拌し、濃縮した後、該混合物をトルエンと３回同時蒸発させ、Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ、アセトンから沈殿させた。ろ過した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド２３を得た。[α]Ｄ＝−１．５（ｃ＝１．１４、ＤＭＳＯ）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１０４Ｈ１４９ＫＮ２０Ｏ３６［Ｍ＋Ｈ＋Ｋ］＋＋に対する計算値１１４６．５０３５、実測値１１４６．５０２８。
【００８８】
ｓ）グリコミメティック（“２４”）
方法Ａに従って白色フォーム（１１０ｍｇ、５９％）として得た：１７（５０ｍｇ、６３μｍｏｌ、１ｅｑ．）、２（２００ｍｇ、３８０μｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（６ｍｇ、３１μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（５４μＬ、３１０μｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：１５分、１１０℃。ワークアップなしで、粗混合物を濃縮し、トルエンと同時蒸発させ、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、１：０、次いで９：１）により精製した。Ｒｆ＝０．５２（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９：１）。[α]Ｄ＝＋１．５（ｃ＝１．０、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１３６Ｈ１８０Ｎ２０ＮａＯ５２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２９４８．１９４８、実測値２４９８．１９５７、Ｃ１３６Ｈ１８０Ｎ２０Ｎａ２Ｏ５２［Ｍ＋２Ｎａ］＋に対する計算値１４８５．５９２０、実測値１４８５．５９５４。
【００８９】
ｔ）グリコミメティック（“２５”）
方法Ｂに従って白色フォーム（７６ｍｇ、９０％）として得た：２４（１１２ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．５ｍＬ）。ｒ．ｔ．で３日間撹拌し、濃縮した後、該混合物をトルエンと３回同時蒸発させ、ＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏ アセトンから沈殿させた。ろ過した後、該混合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド２５を得た。ＨＲ−ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１０４Ｈ１５０Ｎ２０Ｏ３６［Ｍ＋２Ｈ］＋＋に対する計算値１１２７．５２５５、実測値１１２７．５３２２、Ｃ１０４Ｈ１４８Ｎ２０Ｎａ２Ｏ３６［Ｍ＋２Ｎａ］＋＋に対する計算値１１４９．５０７５、実測値１１４９．５１３４、Ｃ１０４Ｈ１４９Ｎ２０Ｏ３６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２２５４．０４３８、実測値２２５４．０５１３。
【００９０】
ｕ）グリコミメティック（“２６”）
方法Ａに従って白色フォーム（２５３ｍｇ、７０％）として得た：１５（１００ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、１２（３９１ｍｇ、０．７４９ｍｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（１２ｍｇ、６２μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（１０９μＬ、０．６２４ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：４５分、１１０℃。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、４：６、次いでＥｔＯＡｃ、次いでＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９５：５）により精製した。[α]Ｄ＝＋１．５（ｃ＝０．６８、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（positiveイオンリフレクトロンモード）：Ｃ１４４Ｈ１６８Ｎ１６ＮａＯ４８［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値２９１２．１１、実測値２９１２．０３。
【００９１】
ｖ）グリコミメティック（“２７”）
方法Ｂに従って白色フォーム（１２９ｍｇ、８１％）として得た：２６（２０７ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）、水（２ｍＬ）及びトリエチルアミン（２ｍＬ）。ｒ．ｔ．で１日間撹拌し、濃縮した後、該混合物をトルエンと３回同時蒸発させた。該化合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド２７を得た。ＭＡＬＤＩ―ＴＯＦ ＭＳ（positiveイオンリフレクトロンモード）：Ｃ１１２Ｈ１３６Ｎ１６ＮａＯ３２［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値２２３９．９４、実測値２２３９．８４。
【００９２】
ｗ）グリコミメティック（“２８”）
方法Ａに従って白色フォーム（２７１ｍｇ、７５％）として得た：１６（１００ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、１２（３９１ｍｇ、０．７４９ｍｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（１２ｍｇ、６２μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（１０９μＬ、０．６２４μｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：１５分、１１０℃。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、４：６、次いでＥｔＯＡｃ、次いでＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９５：５）により精製した。[α]Ｄ＝＋３．２（ｃ＝１．４５、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（positiveイオンリフレクトロンモード）：Ｃ１４４Ｈ１６８Ｎ１６ＮａＯ４８［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値２９１２．１１、実測値２９１２．２０。
【００９３】
ｘ）グリコミメティック（“２９”）
方法Ｂに従って白色フォーム（１２４ｍｇ、７８％）として得た：２８（２０７ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）、水（１ｍＬ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ）。ｒ．ｔ．で３日間撹拌し、濃縮した後、該混合物をトルエンと３回同時蒸発させた。該化合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド２９を得た。[α]Ｄ＝＋７．１（ｃ＝１．１５、ＤＭＳＯ）。ＨＲ―ＥＳＩ―ＱＴＯＦ―ＭＳ（positiveモード）ｍ／ｚ：Ｃ１１２Ｈ１３７Ｎ１６ＮａＯ３２［Ｍ＋Ｈ＋Ｎａ］＋＋に対する計算値１１２０．４７３６、実測値１１２０．４７４４、Ｃ１１２Ｈ１３７ＫＮ１６Ｏ３２［Ｍ＋Ｈ＋Ｋ］＋＋に対する計算値１１２８．４６０５、実測値１１２８．４６０５、Ｃ１１２Ｈ１３６ＫＮ１６ＮａＯ３２［Ｍ＋Ｋ＋Ｎａ］＋＋に対する計算値１１３９．４５１５、実測値１１３９．４５２７。
【００９４】
ｙ）グリコミメティック（“３０”）
方法Ａに従って白色フォーム（３０７ｍｇ、８５％）として得た：１７（１００ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、１２（３９１ｍｇ、０．７４９ｍｍｏｌ、６ｅｑ．）、ヨウ化銅（１２ｍｇ、６２μｍｏｌ、０．５ｅｑ．）、及びＤＩＰＥＡ（１０９μＬ、０．６２４ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）。マイクロ波照射：１５分、１１０℃。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ、４：６、次いでＥｔＯＡｃ、次いでＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ、９５：５）により精製した。[α]Ｄ＝＋８．１（ｃ＝０．８０、ＣＨ２Ｃｌ２）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（positiveイオンリフレクトロンモード）：Ｃ１４４Ｈ１６８Ｎ１６ＮａＯ４８［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値２９１２．１１、実測値２９１２．１０。
【００９５】
ｚ）グリコミメティック（“３１”）
方法Ｂに従って白色フォーム（１５０ｍｇ、７３％）として得た：３０（２６８ｍｇ、１ｅｑ．）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）、水（２ｍＬ）及びトリエチルアミン（２ｍＬ）。ｒ．ｔ．で１日間撹拌し、濃縮した後、該混合物をトルエンと３回同時蒸発させた。該化合物を超純水（５ｍＬ）に溶解し、次いでフリーズドライして純正な脱アセチル化グリコシド３１を得た。[α]Ｄ＝−９．０（ｃ＝０．７７、ＤＭＳＯ）。
【００９６】
実施例ＩＩ
細胞上に存在する天然の糖複合体との結合を阻害するためのカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）の使用
１）実験条件
細胞上に存在する天然の糖複合体との結合に対するカリキサレン系グリコシル化化合物（Ｉ）によるin vitroにおける阻害性を評価するため、以下に示す４つの異なる方法を適用した。
方法（１）
赤血球凝集反応（ＩＨＡ）の阻害（赤血球凝集反応阻害測定（ＨＩＡ））
ＬｅｃＡレクチンは赤血球を凝集させる。赤血球は糖複合体で被覆されているからである。前記グリコミメティックはこの凝集を阻害する。
各化合物に対して、阻害することができる最小濃度を評価した。該方法はあまり定量的ではないが、自然のシステムを模倣している。
より詳しくは、赤血球凝集反応阻害測定をＵ形状の９６穴のマイクロタイタープレートを用いて行った。ウサギの赤血球をBiomerieuxから購入し、さらなる洗浄なしで使用した。該赤血球をＮａＣｌ（１５０ｍＭ）の４％溶液にまで希釈した。Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ
２０ｍＭ、ＮａＣｌ１００ｍＭ、及びＣａＣｌ２１００μＭの２ｍｇ／ｍＬのレクチン溶液を調製した。２５μＬの４％赤血球溶液を、段階希釈した（２倍）レクチンの２５μＬのアリコットに添加することによって、赤血球凝集反応活性（ＨＵ）を最初に得た。該混合物を２５℃で６０分インキュベートした。赤血球凝集反応を回避するのに必要な最小のレクチン濃度として、該活性を測定した。以下に述べるレクチン阻害測定においては、赤血球凝集反応活性の４倍のレクチン濃度、すなわち、ＬｅｃＡに対し６μｇ／ｍＬの濃度を使用した。次いで、糖質クラスター、モノマー分子及びコントロールの段階希釈物２５μＬに１２．５μＬレクチン溶液（必要とされる濃度）を添加して、その後の測定を行った。次いで、これらの溶液は２５℃で２時間インキュベートし、その後、１２．５μＬの４％赤血球溶液を添加し、さらに２５℃で３０分インキュベートした。各分子に対する最小阻害濃度は、簡単な目視検出により決定した。方法１によって、化合物５、１０、１４、１９、２１、２３、２５、２７、２９及び３１のＬｅｃＡに対する評価を行った。
【００９７】
方法（２）
酵素結合レクチン測定法（ＥＬＬＡ）による実験
ガラクトース（ＬｅｃＡにより結合される単糖）を提示するポリマーで９６穴のプレートを被覆した。競合するグリコミメティックの存在下、ビオチンでラベルしてレクチンを添加する。ＩＣ５０が測定できる。
より詳しくは、ＥＬＬＡによる実験は、炭酸系バッファーに希釈した重合体のβ―Ｄ―ガラクトース（５μｇ／ｍＬ：Lectinity Holding、Inc.、モスクワ））で被覆した９６穴のマイクロタイタープレート（Nunc Maxisorb）を用いて、ｐＨ９．６（１００μＬ）、３７℃で１時間行った。１穴当たり１００μＬの３％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ／ＰＢＳで３７℃、１時間ブロッキングした後、プレートを３７℃で１時間、１００μＬのビオチン化ＬｅｃＡ０．１μｇ／ｍＬと共に、段階希釈の阻害剤の存在下でインキュベートした。Ｔ―ＰＢＳ（０．０５％Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）で洗浄した後、１００μＬのストレプトアビジン／ペルオキシダーゼ複合体（希釈 １：１００００；Boehringer-Mannheim）を添加し、３７℃で１時間放置した。１穴当たり１００μＬの、Ｏ―フェニレンジアミンジヒドロクロライド（０．４ｍｇ／ｍＬ）及び過酸化尿素水素（０．４ｍｇ／ｍＬ）（Sigma-Aldrich）を含む０．０５Ｍリン酸／クエン酸バッファーを用いて発色させた。該反応は５０μＬの３０％Ｈ２ＳＯ４を添加して停止させた。マイクロタイタープレートリーダー（Bio-Rad; model 680）を用いて４９０ｎｍの吸収を測定した。
【００９８】
方法（３）
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
ＩＣ５０の正確な決定を可能にする精巧な装置（Biacore 3000）のガラクトース含有チップ上の小型化チャネルで実施される当量法である。
さらに詳しくは、ＳＰＲによる阻害実験をBiacore 3000装置を用いて２５℃で行った。測定は２つの固定された糖：α−Ｌ―フコース（チャネル１）、α―Ｄ―ガラクトース（チャネル２）を備えた２つのチャネルで行った。糖の固定は、ランニングバッファー（ＨＢＳ）５μＬ／分を用いて２５℃で行った。各チャネルへの固定（ＣＭ５チップ）は、以下のようにして独立して行った。最初に、ＥＤＣ／ＮＨＳ（３５μＬ、４２０ｓ）の新鮮な混合物を注入してチャネルを活性化した。次いで、ストレプトアビジンの溶液（ｐＨ５酢酸Ｎａバッファー中１００μｇ／ｍＬ）を注入した（５０μＬ、６００ｓ）。エタノールアミン（１Ｍ、３５μＬ、４２０ｓ）を注入して残りの反応性種をクエンチした。最後に、ストレプトアビジンービオチン相互作用を通じて、所望するビオチン化ポリアクリルアミド糖の溶液（Lectinity、２００μｇ／ｍＬ）を該表面に被覆した（５０μＬ、６００ｓ）。この作業により、それぞれチャネル１、チャネル２上に固定された糖の８０４ＲＵ（フコシド）と７９６ＲＵ（ガラクトシド）が得られる。阻害実験はガラクトシル化チャネル２を用いて行い、プロットは引算されたデータを表す（チャネル２−チャネル１）。
ＨＥＰＥＳ１０ｍＭ、ＮａＣｌ１５０ｍＭ、ＣａＣｌ２１０ｍＭ、Ｔｗｅｅｎ  Ｐ２０
０．００５％、ｐＨ７．４からなるランニングバッファーを用いてＬｅｃＡを注入した。阻害実験はＬｅｃＡ（５μＭ）及び各種濃度の阻害剤（２倍カスケード希釈）をインキュベート（＞１時間、ｒ．ｔ．）した混合物の注入（１５０μＬ、１０μＬ／分、解離：１２０秒）で構成される。各阻害測定において、阻害剤なしのＬｅｃＡ（５μＭ）を注入して、糖被覆表面（０％阻害）上へのレクチンの完全な付着を観察した。ＣＭ５チップはＤ―ガラクトースの連続注入により完全に再生された（２×３０μＬ、ランニングバッファー中、１００ｍＭ）。
結合については、ブランクのサブトラクション後の時間経過におけるＲＵとして測定し、データはBlAevaluation Software, version4.1を用いて評価した。ＩＣ５０の評価に対し、所定濃度の阻害剤の存在における平衡において、糖表面に結合したレクチンの量を応答（Req-fitted）とみなした。Origin 7.0 software（OriginLab Corp.）を用いて阻害剤濃度（対数スケール）に対する阻害剤のパーセントをプロットすることにより阻害曲線を得た。該阻害曲線のシグモイドフィットからＩＣ５０の値を抽出した。
【００９９】
方法（４）
等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）
本方法は、グリコミメティックとＬｅｃＡレクチンの間の親和性を直接測定することを可能にする。
より詳しくは、組み換え型の凍結乾燥したＬｅｃＡをバッファー（０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ―ＨＣｌ、６μＭＣａＣｌ２、ｐＨ７．５）に溶解し、脱気した（濃度の詳細はSupp.info.参照）。理論上のモル吸光係数２８０００を用いて光学密度の測定により、タンパク質濃度を確認した。炭水化物リガンドを直接に同じバッファーに溶解し、注入シリンジに充填した。ＩＴＣをMicroCal社のVP―ITC  MicroCalorimeterを用いて行った。ＰＡ―ＩＬを１．４４７８ｍＬのサンプルセルに２５℃で充填した。３００秒毎に炭水化物リガンドを１０μＬ注入し、滴下した。データは、標準的手順に従って、MicroCal Origin 7 softwareを用いてフィットした。フィットしたデータから、化学量論（ｎ）、結合定数（Ｋａ）及び結合エンタルピー（ΔＨ）が得られる。
他の熱力学的パラメータ（すなわち、自由エネルギーの変化、ΔＧ、及びエントロピー、ΔＳ）は等式：ΔＧ＝ΔＨ−ＴΔＳ＝−ＲＴｌｎＫａ（Ｔは絶対温度、Ｒ＝８．３１４Ｊ．ｍｏｌ−１．Ｋ−１）から計算した。試験した各リガンドに対して２又は３回の独立した滴定を行った。
【０１００】
２）生化学的結果
前述した４つの全ての方法に対して、数字が小さいほど、グリコミメティックの効率は良好である。
方法１
赤血球凝集反応阻害測定によって得られた結果を以下の表１に示す。
【０１０１】
【表１】
2013544876.tif 000034
【０１０２】
表１に示した値は、レクチン誘導赤血球細胞の凝集反応の阻害濃度である。一価の糖複合体化合物１４及び四価の糖複合体化合物２１及び２３は最も効率的である。赤血球細胞の溶血が四価の糖複合体化合物２７、２９及び３１に対して観察された。これは使用した濃度における起こりうる毒性を示している。
【０１０３】
方法２
酵素結合レクチン測定法によって得られた結果を以下の表２に示す。
【０１０４】
【表２】
2013544876.tif 000035
【０１０５】
表２に示された値は、マルチ穴プレート測定におけるガラクトシル化重合体へのラベル化ＬｅｃＡの結合の阻害に対するＩＣ５０の値を示す。
一価の糖複合体のうち、化合物１４が最も効率的な阻害剤である（図４に示す）。全ての四価の糖複合体は、低濃度でガラクトシル化表面へのＬｅｃＡの結合を阻害する。最も効率的な化合物はμＭ以下の範囲のＩＣ５０をもつ２７、２９である。
【０１０６】
方法３
表面プラズモン共鳴によって得られた結果を以下の表３に示す（ＩＣ５０値）。
【０１０７】
【表３】
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【０１０８】
表３に示した値は、表面プラズモン共鳴を使用して、ガラクトシル化チップ表面へのラベルフリーのＬｅｃＡの結合の阻害に対するＩＣ５０値である。化合物１９の各種濃度に対するセンサーグラムの実施例を、対応する阻害曲線と共に図５に示す。一価の糖複合体化合物のうち、１４だけが強い結合阻害を示している。四価の糖複合体化合物においては、１９、２３及び２５はμＭ範囲のＩＣ５０をもつ効率的な阻害剤である。他の四価の化合物は、この方法で試験をすることは困難であった。溶解度の制限の点から得ることが困難なリガンド濃縮溶液を必要とするためである。
【０１０９】
方法４
ＩＴＣによって得られた結果を以下の表４に示す。
【０１１０】
【表４】
2013544876.tif 000037
【０１１１】
表４に示された値は、ＬｅｃＡと糖複合化カリキサレンの溶液中の相互作用に対する解離定数である。化合物１９に対して得られた、測定された典型的サーモグラムを図６に示す。一価の糖複合体化合物のうち、１４だけが強い結合阻害を示している。四価の糖複合体化合物においては、１９は解離定数９４ｎＭをもつ優れた阻害剤である。いくつかの四価の化合物は、この方法で試験をすることは困難であった。溶解度の制限の点から得ることが困難なリガンド濃縮溶液を必要とするためである。
【０１１２】
実施例ＩＩＩ
Ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
１）実験条件
マウスにセボフルラン（sevoflurane）を吸入させて短時間で麻酔した。各マウスに対し、咽頭を介して気管内に挿入したゾンデを通じて肺内に５×１０８ＣＦＵ／ｍｌの接種細菌５０ｍｌを点滴した。肺内の肺胞タンパク質トレーサとして気管内に点滴された残存１２５Ｉ―アルブミン及び感染後６時間後の血漿中のその漏出と蓄積を測定することにより、肺胞毛細管バリア透過性を評価した。気管内点滴は、１μＣｉの１２５Ｉ―アルブミンと５％牛アルブミンに緑膿菌接種と各種単糖類又は糖質化合物を加えた混合物であった。該点滴の全放射活性を測定した。５０μｌの点滴を麻酔した各マウスの肺に接種した。該点滴の６時間後、ペントバルビタールをマウス腹腔内に投与して麻酔した。頸動脈穿刺により血液を採血し、胸骨切開を行って、肺、気管及び腹部の放射活性を回収、測定した。該血液循環内に漏出した１２５Ｉ―アルブミンの量は血液サンプル中の活性に血液容量を掛け合わせて算出した。
【０１１３】
２）生化学的結果
動物モデル測定において化合物１４と２つの単糖類：グルコースとガラクトースを比較した。化合物（グルコース、ガラクトース、化合物１４）を感染濃度の緑膿菌と一緒に同時に点滴した。これらの化合物が肺にもたらす保護を、肺胞バリアの完全性を測定することにより評価した。このために、ラベル化アルブミンを血液中に循環させ、肺胞バリアを通って肺に漏出した量を評価した。
図７は、緑膿菌が感染したマウスにおけるグルコース、ガラクトース、及び化合物１４の保護効果を示す。透過率は、肺胞バリアの劣化、すなわち、該細菌感染による肺組織の損傷を評価する。
一価の糖複合体化合物１４はガラクトースよりも効率的な阻害剤である。同時点滴すると、糖不在で細菌を点滴したコントロール実験と比べたとき、肺の損傷は約５０％減少する結果となる。この結果は化合物１４が緑膿菌による破壊とその結果生じる全身感染から肺組織を効率的に保護することを示している。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
2013544876.tif 000064
【図４】
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【図５ａ】
2013544876.tif 000066
【図５ｂ】
2013544876.tif 000067
【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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