(57)【要約】  カテプシンＳの不適正な発現又は活性化を特徴とする障害の予防又は治療における使用のための、式（Ｉ）［式中、Ｒ２ａとＲ２ｂは、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、又はＣ１−Ｃ４アルコキシであるか又は、Ｒ２ａとＲ２ｂは、それらが付く炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよい、Ｃ５−Ｃ１０アルキルである；又はＲ３は、少なくとも２個のクロロ又は３個のフルオロ置換基があるＣ２−Ｃ４アルキル鎖である；又はＲ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよい、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルメチルであり；Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノである；又はＲ４は、Ｈｅｔ又はカルボシクリルであり、そのいずれも、１〜３の置換基で置換されていてもよく；ｎは、１、２又は３である］の化合物。
2013534917.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2013534917.tif 000064
［式中：
Ｒ２ａとＲ２ｂは、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシより独立して選択されるか又は、Ｒ２ａとＲ２ｂは、それらが付く炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；
Ｒ３はＣ５−Ｃ１０アルキルであり、該基は、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく；又は
Ｒ３は、少なくとも２個のクロロ又は３個のフルオロ置換基があるＣ２−Ｃ４アルキル鎖である；又は
Ｒ３はＣ３−Ｃ７シクロアルキルメチルであり、該基はＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノである；又は
Ｒ４は、Ｈｅｔ又はカルボシクリルであり、そのいずれも：
ハロ、アジド、シアノ、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノスルホニル、ＮＲａＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、ＮＲａ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲａＲｂより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく（ここで置換基としてのオキソは、原子価が許容される場合にのみ存在し得る）；
及び／又は、ここでＨｅｔ又はカルボシクリル基は、式：−Ｘ−Ｒ５の基で置換されていてもよく；ここで
Ｘは、Ｃ１−Ｃ４アルキレンであるか又は、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、ＣＦ２−、−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＮＲａ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａ−、エステル、尿素、又はカルバメート官能基の隣に、又はその両側に配置された０〜３のメチレン基を含んでなる１〜４員の連結基（linkage）であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルケニル、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、インドリニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオピラニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、テトラゾリル、ピラゾリル、インドリルより選択される単環式の環であり、該Ｃ１−Ｃ４アルキル又は単環式の環は：
ハロ、アジド、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニルより選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく；
ｎは、１、２又は３であり；
ＲａとＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｈｅｔは、Ｏ、Ｓ、及びＮより独立して選択される１〜４個のへテロ原子を含有する、安定した単環式又は二環式の飽和、一部飽和、又は芳香族の環系であり、各環は、５若しくは６個の環原子を有し；
カルボシクリルは、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルケニル、又はフェニルである］の化合物、又はその医薬的に許容される塩、水和物、又はＮ−オキシド。
【請求項２】
Ｒ２ａとＲ２ｂがともにＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎが２であり、かつＲ２ａとＲ２ｂがともにＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが２であり、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方がＣｌ、Ｆ、Ｆ３Ｃ、又はＭｅＯである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、ｔ−ブチルメチル、シクロブチルメチル、１−メチルシクロブチルメチル、又は１−メチルシクロペンチルメチルであり、このいずれも１又は２のＦ又はＣＨ３Ｏで置換されていてもよい、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が１−メチルシクロペンチルメチル又は１−フルオロシクロペンチルメチルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４が、１、２、又は３のフルオロで置換されていてもよいフェニルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４がＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、該基はＣＨ３又はＣＦ３で置換されていてもよい、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４が、ＣＦ３で置換されていてもよいシクロプロピル若しくはシクロブチルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４が、Ｃ１−Ｃ６アルキルであるか又はモノ、ジ又はトリフルオロＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
式ＩＩ：
【化２】
2013534917.tif 000065
［式中、Ｒ４’は、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６ハロアルキルである］を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４’が、メチル、エチル、又はｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ｎが１又は２である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
式ＩＩＩ：
【化３】
2013534917.tif 000066
［式中、Ｒ３’は、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ２ａとＲ２ｂは、独立して、Ｈ又はＦであり、並びにＲ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、ここでＣ３−Ｃ６シクロアルキルは、メチル、ＣＦ３、又は１若しくは２のフルオロで置換されていてもよい］を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２ａとＲ２ｂが、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシより独立して選択される、請求項１又は５〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物とその医薬的に許容される賦形剤（vehicle）を含んでなる医薬組成物。
【請求項１７】
カテプシンＳの不適正な発現又は活性化を特徴とする障害の治療のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１８】
障害が：
ａ）乾癬；
ｂ）掻痒症；
ｃ）特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレイブス病、及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）が含まれる自己免疫適応症；又は
ｄ）アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び慢性疼痛が含まれる非自己免疫適応症より選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
カテプシンＳの不適正な発現又は活性化を特徴とする障害の治療のための方法であって、その障害に罹患しているか又はそのリスクがあるヒト又は動物への請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の有効量の投与を含んでなる、前記方法。
【請求項２０】
障害が：
ａ）乾癬；
ｂ）掻痒症；
ｃ）特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレイブス病、及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）からなる群より選択される自己免疫適応症；又は
ｄ）アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び慢性疼痛からなる群より選択される非自己免疫適応症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
医薬品としての使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
ａ）乾癬；
ｂ）掻痒症；
ｃ）特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレイブス病、及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）が含まれる自己免疫適応症；又は
ｄ）アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び慢性疼痛が含まれる非自己免疫適応症の治療又は予防における使用のための、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
カテプシンＳの不適正な発現又は活性化を特徴とする障害の治療又は予防のための医薬品の製造における、請求項１〜１５のいずれにも記載の化合物の使用。
【請求項２４】
ａ）乾癬；
ｂ）掻痒症；
ｃ）特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレイブス病、及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）が含まれる自己免疫適応症；又は
ｄ）アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び慢性疼痛が含まれる非自己免疫適応症の治療又は予防のための医薬品の製造における、請求項２３に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カテプシンＳの阻害剤と、自己免疫障害、アレルギー、及び慢性疼痛状態のような、カテプシンＳが関与する障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
システインプロテアーゼのパパインスーパーファミリーは、哺乳動物、無脊椎動物、原生動物、植物、及び細菌が含まれる多様な種に広く分布している。カテプシンＢ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｏ、Ｓ、及びＷが含まれる、いくつかの哺乳動物カテプシン酵素は、このスーパーファミリーに帰属されて、関節炎、筋ジストロフィー、炎症、糸球体腎炎、及び腫瘍浸潤が含まれるいくつかの代謝障害では、その活性の不適正な調節との関連が示唆されてきた。病原性のカテプシン様酵素には、細菌のギンギパイン、マラリア原虫のファルシパインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ（以下続く）、及びカリニ肺炎菌（Pneumocystis carinii）、トリパノソーマ・クルゼイ及びブルセイ（Trypanosomacruzei and brucei）、クリチジア・フシクラータ（Crithidia fusiculata）、住血吸虫種（Schistosoma spp．）由来のシステインプロテアーゼが含まれる。
【０００３】
ＷＯ９７／４００６６には、カテプシンＳに対する阻害剤の使用が記載されている。この酵素の阻害は、プロテアーゼ活性によって引き起こされる疾患を予防するか又は治療すると示唆されている。カテプシンＳは、パパインスーパーファミリーに属する、高活性のシステインプロテアーゼである。その一次構造は、ヒトのカテプシンＬ及びＨと植物のシステインプロテアーゼパパインとそれぞれ５７％、４１％、及び４５％相同であるが、カテプシンＢとは３１％しか相同でない。このことは、Ｂ細胞、樹状細胞、及びマクロファージに主に見出されて、この限られた出現は、変性疾患の病理発生におけるこの酵素の潜在的な関与を示唆する。さらに、ＭＨＣクラスＩＩ分子が抗原性ペプチドへ結合して、生じる複合体が細胞表面へ輸送されるには、タンパク分解によるＩｉの破壊が必要であることが見出された。さらにまた、Ｂ細胞では、クラスＩＩ分子がペプチドへ結合することを可能にするのに有効なＩｉタンパク分解にカテプシンＳが必須であることが見出された。故に、この酵素の阻害は、クラスＩＩ拘束性の免疫応答を調節するのに有用であり得る（ＷＯ９７／４００６６）。カテプシンＳの関与が示唆される他の障害は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、子宮内膜症、及び慢性疼痛である。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第一の側面により、式Ｉ：
【０００５】
【化１】
2013534917.tif 000003
【０００６】
［式中：
Ｒ２ａとＲ２ｂは、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシより独立して選択されるか又は、Ｒ２ａとＲ２ｂは、それらが付く炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；
Ｒ３はＣ５−Ｃ１０アルキルであり、該基はハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく；又は
Ｒ３は、少なくとも２個のクロロ又は３個のフルオロ置換基があるＣ２−Ｃ４アルキル鎖であり；又は
Ｒ３はＣ３−Ｃ７シクロアルキルメチルであり、該基はＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく、；
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノである；又は
Ｒ４は、Ｈｅｔ又はカルボシクリルであり、そのいずれも：
ハロ、アジド、シアノ、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノスルホニル、ＮＲａＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、ＮＲａ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲａＲｂより独立して選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく（ここで置換基としてのオキソは、原子価が許容される場合にのみ存在し得る）；
及び／又は、ここでＨｅｔ又はカルボシクリル基は、式：−Ｘ−Ｒ５の基で置換されていてもよく；ここで
Ｘは、Ｃ１−Ｃ４アルキレンであるか又は、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、ＣＦ２−、−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＮＲａ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲａ−、エステル、尿素、又はカルバメート官能基の隣に、又はその両側に配置された０〜３のメチレン基を含んでなる１〜４員の連結基（linkage）であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルケニル、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、インドリニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオピラニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、テトラゾリル、ピラゾリル、インドリルより選択される単環式の環であり、該Ｃ１−Ｃ４アルキル又は単環式の環は：
ハロ、アジド、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニルより選択される１〜３の置換基で置換されていてもよく；
ｎは、１、２又は３であり；
ＲａとＲｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｈｅｔは、Ｏ、Ｓ、及びＮより独立して選択される１〜４個のへテロ原子を含有する、安定した単環式又は二環式の飽和、一部飽和、又は芳香族の環系であり、各環は、５若しくは６個の環原子を有し；
カルボシクリルは、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルケニル、又はフェニルである］の化合物、又はその医薬的に許容される塩、水和物、又はＮ−オキシドを提供する。
【０００７】
本発明の典型的な態様には、ｎが１又は２である化合物、即ち、１，１−シクロプロピレニル又は１，１−シクロブチレニル環を有して、それにより式Ｉａ又はＩｂ：
【０００８】
【化２】
2013534917.tif 000004
【０００９】
による化合物をそれぞれ提供する化合物が含まれる。
置換基のＲ２ａ及びＲ２ｂは、１，１−シクロアルキレニル基の原子のいずれへも付いてよい。
【００１０】
本発明の好ましい態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂが、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、及びＣ１−Ｃ４アルコキシより独立して選択される。Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＣ１−Ｃ４アルコキシである態様では、他方の１つが、好ましくはＨである。
【００１１】
本発明のいくつかの態様では、１，１−シクロアルキレニル環が未置換である、即ち、Ｒ２ａとＲ２ｂがともにＨである。
ｎが２である、本発明のいくつかの態様では、１，１−シクロブチレニル環が１又は２の置換基で置換されている、即ち、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方又は両方はＨではない。典型的には、これらの態様によれば、置換基（複数）は、シクロブチレニル環の２位に位置していて、それにより式Ｉｃ：
【００１２】
【化３】
2013534917.tif 000005
【００１３】
による化合物を提供する。
ｎが２であるいくつかの態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂがともに水素である。ｎが２である代わりの態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方が、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、又はＣ１−Ｃ４アルコキシである。ｎが２であるさらに代わりの態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂがともにハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４ハロアルキルである。
【００１４】
ｎが２である典型的な態様には、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方がＣｌ、Ｆ、ＣＦ３、又はＭｅＯである化合物が含まれる。
ｎが２である好ましい態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方がＦである。この態様に従って特に好ましいのは、式Ｉｄ：
【００１５】
【化４】
2013534917.tif 000006
【００１６】
に示す立体化学を有する化合物である。
ｎが２であるいくつかの態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂがともにＦである。この側面の化合物は、式Ｉｅ：
【００１７】
【化５】
2013534917.tif 000007
【００１８】
を有する。
ｎが２である他の態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方がＣｌ、Ｆ、ＣＦ３、又はＭｅＯである。
【００１９】
いくつかの態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂが、それらが付く炭素原子（複数）と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；典型的には、この態様によると、Ｒ２ａとＲ２ｂは同じ炭素原子へ付いて、それによりスピロ環式の環系を形成する。
【００２０】
いくつかの態様では、Ｒ３が、例えば、ハロ（Ｆのような）又はアルコキシ（ＭｅＯのような）で置換されていてもよいシクロアルキルアルキルである。例示の種には、１−メチルシクロペンチルメチル、１−メチルシクロヘキシルメチル、１−メチルシクロブチルメチル、１−メチル−３，３−ジフルオロシクロブチルメチル、１−メチル−４，４−ジフルオロシクロヘキシルメチル、シクロプロピルメチル、又は１−メチル−３，３−ジフルオロシクロペンチルメチルが含まれる。
【００２１】
代表的なＲ３の種には、ｔ−ブチルメチル、シクロブチルメチル、１−メチルシクロブチルメチル、及び１−メチルシクロペンチルメチルが含まれ、このいずれも、１又は２のＦ又はＭｅＯで置換されていてもよい。代表的な種は、１−フルオロシクロブチルメチル及び１−フルオロシクロペンチルメチルである。
【００２２】
さらに代表的なＲ３の種には、１−メチルシクロペンチルメチル及び１−フルオロシクロペンチルメチルが含まれる。
他の態様では、Ｒ３が、１〜３個のハロ（例、Ｃ又はＦ）又はＣ１−Ｃ４アルコキシ（例、ＭｅＯ）で置換されていてもよい、５〜１０個のＣ原子の直鎖若しくは分岐鎖アルキルである。例示の種には、２，２−ジメチルプロピル、３，３−ジメチルペンチル、２，２，３，３−テトラメチルブチルが含まれる。ハロゲン化アルキルの例示の種には、２，２−ジクロロエチル、３，３，３−トリフルオロプロピル、２，２−トリフルオロメチルエチル、又は２，２，２−トリフルオロエチルが含まれる。
【００２３】
本発明の他の態様には、Ｒ４が、エチル、イソプロピル、又はｔｅｒｔ−ブチルのようなＣ１−Ｃ６アルキルである化合物が含まれる。
別の態様には、Ｒ４がクロロアルキル又はフルオロアルキルのようなＣ１−Ｃ６ハロアルキルである化合物が含まれる。典型的には、この態様によると、Ｒ４は、モノフルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、又はトリフルオロブチルのような、モノ、ジ又はトリトリフルオロＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００２４】
本発明の別の態様には、Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルコキシ又はＣ１−Ｃ６ハロアルコキシである化合物が含まれ、それにより式ＩＩ：
【００２５】
【化６】
2013534917.tif 000008
【００２６】
［式中、Ｒ４’は、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６ハロアルキルである］に示すカルバメート官能基を有する化合物を提供する。典型的には、この態様によると、Ｒ４’は、メチル又はエチルである。
【００２７】
本発明の１つの態様には、ｎが２であり、かつＲ２ａとＲ２ｂの少なくとも１つがハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、又はＣ１−Ｃ４アルコキシである、式ＩＩの化合物が含まれる。典型的には、この態様によると、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方が、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチル、又はメトキシ；特に、フルオロ又はメトキシである。好ましくは、この態様によると、Ｒ２ａとＲ２ｂは、シクロブチレニル基の２位に位置している。
【００２８】
本発明の好ましい態様には、ｎが２であり、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方がＨであって、他方がＦである、式ＩＩの化合物が含まれる。この態様に従って特に好ましいのは、シクロブチレニル基の２位にＦ原子が位置していて、式ＩＩａ：
【００２９】
【化７】
2013534917.tif 000009
【００３０】
に示す立体化学を有する化合物である。
本発明の他の態様には、ｎが２であり、Ｒ２ａとＲ２ｂがともにＦである、式ＩＩの化合物が含まれ、それにより式ＩＩｂ：
【００３１】
【化８】
2013534917.tif 000010
【００３２】
の化合物を提供する。
式ＩＩの化合物のさらなる態様では、Ｒ２ａとＲ２ｂがともにＨであり、それにより式ＩＩｃ：
【００３３】
【化９】
2013534917.tif 000011
【００３４】
の化合物を提供する。
この態様に従う好ましい化合物は、ｎが２である、即ち、シクロブチレニル基が形成されるものであり、それにより式ＩＩｄ：
【００３５】
【化１０】
2013534917.tif 000012
【００３６】
の化合物を提供する。
いくつかの態様では、Ｒ４が、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、シクロペンチル、シクロヘキシル、又はピリジニルであり、そのいずれも、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）アミノ、又はＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｑで置換されていてもよく；
ここでＲａは、Ｈ又はＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒｑは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｈｅｔ、又はカルボシクリルであり、このいずれも、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシで置換されていてもよく；並びに
ｍは、０、１又は２である。
【００３７】
他の態様において、Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）、ハロ（例、Ｆ）、又はＣ１−Ｃ４アルコキシ（例、ＭｅＯ）で置換されていてもよい、チアゾール−５−イルのような、置換されていてもよいチアゾリルである。
【００３８】
他の態様において、Ｒ４は、モルホリン−４−イルである。
いくつかの態様では、Ｒ４が環窒素を介して隣接の骨格アミドへ連結して、それによって尿素官能基を規定する。代表的な種は、モルホリン−４−イルである。さらに代表的な種は、部分構造：
【００３９】
【化１１】
2013534917.tif 000013
【００４０】
［式中、ＸはＣであって、Ｒｔは、ヒドロキシ、フルオロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル（例、ｇｅｍ−メチル）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（例、ＭｅＯ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（例、ＣＦ３）、又はＮＲｋ−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｓ官能基であり、ここでＲｓは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｈｅｔ、又はカルボシクリルであって、このいずれも、１〜３のＣ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）、ハロ（例、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（例、ＣＦ３）、又はＣ１−Ｃ４アルコキシ（例、ＭｅＯ）で置換されていてもよい。あるいは、ＸはＮであって、Ｒｔは、Ｃ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）又は−ＮＲｋ−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｓ官能基であり、ここでＲｓは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｈｅｔ、又はカルボシクリルであって、このいずれも、１〜３のＣ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）、ハロ（例、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（例、ＣＦ３）、又はＣ１−Ｃ４アルコキシ（例、ＭｅＯ）で置換されていてもよい］を有する。
【００４１】
いくつかの態様では、Ｒ４が、ピペラジン−１−イル若しくはピペリジン−１−イル（このいずれも、４位で置換される）又はピペリジン−４−イル（１位で置換される）であり；それぞれの場合において、置換基は、ＮＨＳ（＝Ｏ）２カルボシクリル又はＮＨＳ（＝Ｏ）２Ｈｅｔより選択され、ここで該カルボシクリル又はＨｅｔは、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、又はＣ１−Ｃ４アルコキシで置換されていてもよい。
【００４２】
他の態様において、Ｒ４は、４位で、ハロ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）アミノ、又はヒドロキシで置換された、シクロヘキシル又はピペラジン−１−イルである。
【００４３】
いくつかの態様では、Ｒ４が置換（された）フェニルである。
いくつかの態様では、Ｒ４が、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、及びＣ１−Ｃ４アルコキシより独立して選択される１、２、又は３の置換基で置換されたフェニルである。
【００４４】
代表的な種には、ｍ−フルオロ、ｐ−フルオロ、ｐ−ヒドロキシ、ｐ−ヒドロキシ−ｍ−クロロ、ｐ−ヒドロキシ−ｍ−フルオロ、ｐ−ヒドロキシ−ｍ−メトキシ、ｐ−ヒドロキシ−ｍ−メチル、ビス−ｐ−クロロ−ｐ−ヒドロキシ、ｍ−シアノ、ｐ−アセトアミド、又はｏ−フルオロ−ｐ−ヒドロキシで置換されたフェニルが含まれる。
【００４５】
上記に規定されるように、Ｒ４は、式：Ｘ−Ｒ５の基で置換されてよく、ここでＲ５は、Ｈ、置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル、又はＲ４環より二価Ｘリンカーによって隔てられている、置換されていてもよい単環式の環である。
【００４６】
リンカーＸは、エチレン又はメチレンのような、直鎖のＣ１−Ｃ４アルキレンを含んでよい。あるいは、該リンカーは、ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（ＣＨ３）２、ＣＦ２、エテン、エチン、Ｃ０−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ０−Ｃ４アルキルアミド、スルホンアミド、エステル、エーテル、尿素、又はカルバメートより選択される二価官能基を含んでよく、これらは、Ｒ４及び／又はＲ５へ直接結合しても、その官能基とＲ４の間に、及び／又はその官能基とＲ５の間に１以上のメチレン基を有してもよい。リンカーの全長は、その官能基とＲ４及び／又はＲ５の間のあらゆるメチレン基を含めて、１〜４個、好ましくは１〜３個の鎖原子である。
【００４７】
アミド、スルホンアミド、エステル、又はカルバメートのような、多数のヘテロ原子を含有する、Ｘ−リンカー中の二価官能基は、いずれの配向でも配置されてよく、例えば、カルバメートの場合は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−又は−ＮＨ（＝Ｏ）Ｏ−である。Ｘ−リンカーの文脈中でのＣ０−Ｃ４アルキルアミン及びＣ０−Ｃ４アルキルアミドという表現は、アルキル基（又は、Ｃ０の場合はＨ）が窒素原子より分岐する（例えば、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（＝Ｏ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）−等）ことを意味する。
【００４８】
なおさらなるＲ４基には、その内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０６６４２０６に記載されるものが含まれる。この参考文献からの注目すべきＲ４基には、以下の部分構造：
【００４９】
【化１２】
2013534917.tif 000014
【００５０】
［式中、
Ｒ４’’は、Ｈ、ハロ、ＯＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｋＲｌ、ＮＲｋＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル、ＮＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＲｋＲｌ、又は−ＮＲｋＣ（＝Ｏ）ＯＣ１−Ｃ４アルキル、又はＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＭｅであり、ＲｋとＲｌは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキルであるか又は、Ｒｋ、Ｒｌ、及びそれらがともに付く隣接Ｎ原子は、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、又はＮ−メチルピペラジニルより選択される環式アミンを規定する］のあるものが含まれる。
【００５１】
好まれる亜集合には、Ｒ４’’が、フルオロ、メトキシ、ジメチルカルバモイル、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ３、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＭｅ、又は環式アミンであるものが含まれる。
【００５２】
ＷＯ０６６４２０６内の他のＲ４の態様は、部分構造：
【００５３】
【化１３】
2013534917.tif 000015
【００５４】
［式中、Ｒｍは、−ＮＲａＳＯｍＲ５又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＲｋＲｌであり；
Ｒｋ、Ｒｌとそれらがともに付くＮ原子は、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、又はＮ−メチルピペラジニルより選択される環式アミンを規定し；
そしてＲ４’’’は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、又はＣ１−Ｃ４アルコキシである］を有する。
【００５５】
好まれる亜集合には、Ｒ５が、メチル、エチル、又はｉ−プロピル、又はｔ−ブチルのようなＣ１−Ｃ４アルキル；トリフルオロメチルのようなハロゲン化Ｃ１−Ｃ４アルキル；シクロプロピル又はシクロヘキシルのようなＣ３−Ｃ６シクロアルキル；又はフェニル若しくはベンジル（このいずれも、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、ハロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシで置換されていてもよい）であるものが含まれる。
【００５６】
ＷＯ０６６４２０６内の他のＲ４の態様は、部分構造：
【００５７】
【化１４】
2013534917.tif 000016
【００５８】
［式中、Ｒｘは、Ｍｅ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、及びＯＭｅより独立して選択されて、ｎは、独立して、０、１又は２である］を有する。
好まれる亜集合は、部分構造：
【００５９】
【化１５】
2013534917.tif 000017
【００６０】
［Ｒａは、Ｈ又はメチルであり、
Ｒｐは、Ｈ、Ｍｅ、Ｆであり、
Ｒｘは、Ｍｅ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、及びＯＭｅより独立して選択されて、ｎは、０、１又は２である］；
特に、部分構造：
【００６１】
【化１６】
2013534917.tif 000018
【００６２】
［式中、Ｒｘは、Ｈ、Ｆ、Ｍｅである］を有する。
ＷＯ０６／６４２０６に記載される、なおさらなるＲ４基には：
【００６３】
【化１７】
2013534917.tif 000019
【００６４】
［式中、Ｒｘは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、Ｍｅ、ＯＭｅであり、Ｒｚは、ＣＨ、ＮＨ、ＮＭｅ、又はＯであって、Ｓ原子は、
【００６５】
【化１８】
2013534917.tif 000020
【００６６】
又は好ましくは
【００６７】
【化１９】
2013534917.tif 000021
【００６８】
へ酸化されていてもよい］が含まれる。
ＷＯ０６／６４２０６に記載される、なおさらなるＲ４基には：
【００６９】
【化２０】
2013534917.tif 000022
【００７０】
［式中、Ｒｙは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アミノ、ＮＨＣ１−Ｃ４アルキル（メチルアミノのような）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２（ジメチルアミノのような）、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル（アセトアミドのような）であり；
環窒素は、Ｃ１−Ｃ４アルキル（メチル、エチル、又はｔ−ブチルのような）、又はＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル（アセチルのような）で置換されていてもよく；そして
Ｒｘは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３、Ｍｅ、ＯＭｅである］が含まれる。
【００７１】
ＷＯ０６／６４２０６に記載される、なおさらなるＲ４基には：
【００７２】
【化２１】
2013534917.tif 000023
【００７３】
［式中、Ｒｘは、独立して、Ｈ、Ｆ、ＣｌＣＦ３、又はＯＭｅであり；
一方又は両方の環窒素原子は、Ｃ１−Ｃ４アルキル（メチル、エチル、又はｔ−ブチルのような）、又はＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ４アルキル（アセチルのような）で置換されていてもよく；
Ｏ’は、非存在（即ち、２個の水素原子）であるか又はＯである］が含まれる。
【００７４】
さらに典型的なＲ４基には：
【００７５】
【化２２】
2013534917.tif 000024
【００７６】
［式中、Ｈｅｔ＊は、Ｓ、Ｏ及びＮより独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する、５若しくは６員で、飽和、一部不飽和、又は芳香族の複素環である］が含まれる。
本発明の好ましい化合物は、式Ｉｆ：
【００７７】
【化２３】
2013534917.tif 000025
【００７８】
［式中、Ｒ３’は、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ２ａとＲ２ｂは、独立して、Ｈ又はＦであり、そしてＲ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、ここで該Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルは、メチル又はＣＦ３で置換されていてもよい］を有するものである。
【００７９】
本発明のさらに好ましい化合物は、式ＩＩｅ：
【００８０】
【化２４】
2013534917.tif 000026
【００８１】
［式中、Ｒ３’は、ＣＨ３又はＦであり、Ｒ２ａとＲ２ｂは、独立して、Ｈ又はＦであり、そしてＲ４’は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキルである］を有するものである。
【００８２】
式Ｉの化合物は、様々な有利な医薬特性を特徴として、先行技術の化合物に照らして、少なくとも１つの改善された特性を明示する。特に、本発明の阻害剤は、以下の薬理学に関連した特性、即ち、効力、細胞傷害性の減少、薬物動態の改善、許容される投与量、及び服薬負担（pill burden）の１以上において優れている。
【００８３】
理論にも、あるいは特定の変数についての暫定的な結合形式の帰属にも縛られることを決して欲することなく言えば、本明細書で使用するＰ１、Ｐ２、及びＰ３は、便宜のためにのみ提供するのであって、その慣用的な意味を有して、その酵素のＳ１、Ｓ２、及びＳ３サブサイトをそれぞれ占めると考えられている阻害剤のその部分を示し、ここでＳ１は、切断部位に隣接して、Ｓ３は、切断部位より離れている。
【００８４】
本発明のさらなる側面は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の予防又は治療に式Ｉの化合物を利用する方法を含む。
【００８５】
好ましい側面において、本発明は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の治療に、本明細書に特定されるような式Ｉの化合物又はそのあらゆる亜群を利用する方法に関する。
【００８６】
本発明のさらなる側面は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の予防又は治療への式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００８７】
好ましい側面において、本発明は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の治療への、本明細書に特定されるような式Ｉの化合物又はそのあらゆる亜群の使用に関する。
【００８８】
本発明のさらなる側面は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の予防又は治療用医薬品の製造への式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００８９】
好ましい側面において、本発明は、カテプシンの異常な発現又は活性化によって引き起こされる疾患（即ち、カテプシンＳの阻害によって、好ましくはパパインスーパーファミリーの他のメンバーの実質的な同時阻害を伴わずに、軽減又は緩和される疾患又は状態）の治療用医薬品の製造への、本明細書に特定されるような式Ｉの化合物又はそのあらゆる亜群の使用に関する。
【００９０】
直前の３つのパラグラフにおいて規定した、そのような疾患又は状態の例には、自己免疫疾患、喘息及び枯草熱のようなアレルギー、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、等のように、ＷＯ９７／４００６６に収載されたものが含まれる。さらなる例は、ＷＯ０３／２０２８７に開示されるような、子宮内膜症、そして特に、慢性疼痛の治療である。さらに本発明は、カテプシンＳの阻害によって軽減又は緩和される疾患又は状態の療法における、そしてその治療用医薬品の製造における、式Ｉの化合物又は式Ｉのあらゆる亜群の使用を提供する。
【００９１】
一連の態様において、本方法は、自己免疫疾患のリスク状態にあるか又はそれに罹患した哺乳動物、特にヒトを治療するために利用される。自己免疫とは、宿主の免疫応答がそれ自身の構成部分に敵対して、病態をもたらす現象を意味する。多くのヒト自己免疫疾患は、一定のクラスＩＩ  ＭＨＣ複合体と関連している。この関連が生じるのは、Ｔ細胞（自己免疫を引き起こす細胞）によって認識される構造がクラスＩＩ  ＭＨＣ分子と抗原性ペプチドからなる複合体であるからである。自己免疫疾患が生じ得るのは、宿主自身の遺伝子産物より派生したペプチドと複合したときの宿主のクラスＩＩ  ＭＨＣ分子とＴ細胞が反応するときである。これらのクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が形成されるのが阻害されるならば、自己免疫応答は、抑制又は抑止される。クラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性複合体が役割を果たすどの自己免疫疾患も、本発明の方法に従って治療され得る。
【００９２】
このような自己免疫疾患には、例えば、若年発症糖尿病（インスリン依存型）、多発性硬化症、尋常性天疱瘡、グレイブス病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、及び橋本甲状腺炎が含まれる。
【００９３】
別系列の態様において、本方法は、アレルギー応答のリスク状態にあるか又はそれに罹患した哺乳動物、特にヒトを治療するために利用される。「アレルギー応答」とは、特別な抗原に対する宿主の免疫応答が不必要であるか又は不均衡であり、病態をもたらす現象を意味する。当該技術分野ではアレルギーがよく知られていて、「アレルギー応答」という用語は、本明細書において、医療分野での標準的な使用法に従って使用される。
【００９４】
アレルギーの例には、限定されないが、花粉、「ブタクサ」、甲殻類、飼育動物（例、ネコとイヌ）、ハチ毒、ハウスダスト、ダニアレルゲン、等に対するアレルギーが含まれる。別の特に考慮されるアレルギー応答は、喘息を引き起こすものである。アレルギー応答がヒトで起こり得るのは、Ｔ細胞が特別なクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体を認識するからである。これらのクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が形成されるのが阻害されるならば、アレルギー応答は、抑制又は抑止される。クラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が役割を果たすどのアレルギー応答も、本発明の方法に従って治療され得る。本発明の方法による免疫抑制は、典型的には、喘息性発作又はアナフィラキシーショックの間に生じ得るような、重症又は致死性のアレルギー応答への予防的又は療法的治療となろう。好ましくは、治療は、療法的治療である。
【００９５】
別系列の態様において、本方法は、臓器移植又は組織移植片を受けたか又は受ける予定である哺乳動物、特にヒトを治療するために利用される。組織移植（例、腎臓、肺臓、肝臓、心臓）又は皮膚移植では、ドナー及びレシピエントのクラスＩＩ  ＭＨＣ遺伝子型（ＨＬＡタイプ）の間にミスマッチがあるとき、抗原性ペプチドを提示する非自己又は同種異系のクラスＩＩ  ＭＨＣ分子がドナー細胞の表面に存在することより生じる、ドナー組織に対する重篤な「同種異系の」免疫応答があり得る。この応答がクラスＩＩＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体の形成に依存する限りは、カテプシンＳの阻害がこの応答を抑止して、組織拒絶を緩和させる場合がある。カテプシンＳの阻害剤は、免疫抑制を達成して移植片の存続を促進するために、単独で使用しても、他の治療薬剤とともに（例えば、シクロスポリンＡ及び／又は抗リンパ球γ−グロブリンへの補助剤として）使用してもよい。好ましくは、外科手術の前及び／又は後での宿主への全身適用によって投与を達成する。代替的に、又は追加的に、臓器移植又は移植術（grafting）に先立つか又はそれに続くドナーの臓器又は組織の灌流が有効であり得る。
【００９６】
上記の態様については、ＭＨＣクラスＩＩの機序で例解したが、本発明は、この作用機序に限定されない。例えば、ＣＯＰＤ又は慢性疼痛の治療法としてのカテプシンＳの抑止には、ＭＨＣクラスＩＩが全く関与しない場合がある。
【００９７】
本発明の関連した側面は、ある療法を受けている患者を治療する方法へ向けられて、ここで該療法は、免疫応答、好ましくは有害な免疫応答をその患者において引き起こし、該方法は、式Ｉの化合物、又はその医薬的に許容される塩、Ｎ−オキシド又は水和物を該患者へ投与することを含んでなる。典型的には、免疫応答は、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって媒介される。本発明の化合物は、その療法に先立って、それと同時に、又はその後で投与することができる。典型的には、この療法は、タンパク質、好ましくは抗体、より好ましくはモノクローナル抗体のような生物製剤での治療を伴う。より好ましくは、生物製剤は、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｒｅｆａｃｔｏ（登録商標）、Ｒｅｆｅｒｏｎ  Ａ（登録商標）、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）、インターフェロンβ、Ｂｏｔｏｘ（登録商標）、Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（登録商標）、Ｍｙｏｂｌｏｃ（登録商標）、Ａｌｄｕｒａｚｙｒｎｅ（登録商標）、Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標）、インターフェロンα、Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、又はＯＫＴ３である。あるいは、この治療は、ヘパリン、低分子量ヘパリン、プロカインアミド、又はヒドララジンの使用を伴う。
【００９８】
ニューロパシー疼痛又は炎症性疼痛が含まれる慢性疼痛の治療におけるカテプシンＳ阻害剤の評価のアッセイについては、ＷＯ０３／２０２８７に記載される通りである。
本発明に従って治療可能な現行で好ましい適応症には：
乾癬；
掻痒症；
特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレイブス病、及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）が含まれる自己免疫適応症；
アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び慢性疼痛が含まれる非自己免疫適応症が含まれる。
【００９９】
本発明の化合物は、本発明の追加の側面を形成する塩を生成することができる。本発明の化合物の適正な医薬的に許容される塩には、有機酸の塩、具体的には、カルボン酸塩（限定されないが、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、パントテン酸塩、イセチオン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、シュウ酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、ニコチン酸塩、パルモエート（palmoate）、ペクチン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、ラクトビオン酸塩、ピボル酸塩（pivolate）、ショウノウ酸塩、ウンデカン酸塩、及びコハク酸塩が含まれる）、有機スルホン酸の塩（メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩のような）；及び、無機酸の塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ヘミ硫酸塩、チオシアン酸塩、過硫酸塩、リン酸及びスルホン酸のような）が含まれる。
【０１００】
本発明の化合物は、いくつかの場合において、水和物として単離されてよい。水和物は、典型的には、ジオキシン、テトラヒドロフラン、又はメタノールのような有機溶媒を使用する、水性／有機溶媒混合物からの再結晶によって製造する。水和物は、対応するケトンの患者への投与によってその場で（in situ）生成することもできる。
【０１０１】
本発明の化合物のＮ−オキシドは、当業者に知られた方法によって製造することができる。例えば、Ｎ−オキシドは、本発明の化合物の非酸化型を、好適な不活性有機溶媒（例、ジクロロメタンのようなハロゲン化炭化水素）においてほぼ０℃で、酸化剤（例、トリフルオロ過酢酸、過マレイン酸、過安息香酸、過酢酸、メタ−クロロペルオキシ安息香酸、等）で処理することによって製造することができる。あるいは、本発明の化合物のＮ−オキシドは、適正な出発材料のＮ−オキシドより製造することができる。
【０１０２】
本発明の非酸化型の化合物は、本発明の対応する化合物のＮ−オキシドより、好適な不活性有機溶媒（例、アセトニトリル、エタノール、水性ジオキサン、等）において０〜８０℃で、還元剤（例、イオウ、二酸化イオウ、トリフェニルホスフィン、ホウ水素化リチウム、ホウ水素化ナトリウム、二塩化リン、三臭化物、等）で処理することによって製造することができる。
【０１０３】
本発明には、式Ｉ又は式Ｉのあらゆる亜群の同位体標識化合物も含まれ、ここでは、その原子の１以上がその原子の同位体（即ち、天然で通常見出される原子（複数）と同じ原子番号を有するが、それとは異なる原子量を有する原子）に置き換わっている。式Ｉ又は式Ｉのあらゆる亜群の化合物へ取り込まれ得る同位体の例には、限定されないが、２Ｈ及び３Ｈ（それぞれ、重水素ではＤ、トリチウムではＴとも表記される）のような水素の同位体、１１Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃのような炭素の同位体、１３Ｎ及び１５Ｎのような窒素の同位体、１５Ｏ、１７Ｏ、及び１８Ｏのような酸素の同位体、３１Ｐ及び３２Ｐのようなリンの同位体、３５Ｓのようなイオウの同位体、１８Ｆのようなフッ素の同位体、３６Ｃｌのような塩素の同位体、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、及び８２Ｂｒのような臭素の同位体、並びに、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、及び１３１Ｉのようなヨウ素の同位体が含まれる。
【０１０４】
同位体標識化合物に含まれる同位体の選択は、その化合物の具体的な応用に依存する。例えば、薬物又は基質の組織分布アッセイでは、一般的には、３Ｈ又は１４Ｃのような放射活性同位体が取り込まれた化合物が最も有用であろう。放射造影の応用、例えば、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）では、１１Ｃ、１８Ｆ、１３Ｎ、又は１５Ｏのような陽電子射出同位体が有用であろう。重水素（即ち、２Ｈ）のようなより重い同位体の取込みは、式Ｉ又は式Ｉのあらゆる亜群の化合物へより大きな代謝安定性をもたらして、それにより、例えば、該化合物の in vivo 半減期の増加、又は投与必要性の抑制を生じる可能性がある。例えば、２Ｈ−同位体（複数）は、典型的には、代謝を受けやすいように配置される位置（複数）で取り込まれる。本発明の化合物では、２Ｈ−同位体の取り込みに適した位置は、例えば、１，１−シクロアルキレン基への置換基にあり、即ち、Ｒ２ａとＲ２ｂの一方又は両方が２Ｈである。
【０１０５】
式Ｉ又は式Ｉのあらゆる亜群の同位体標識化合物は、対応する非同位体標識試薬又は出発材料の代わりに、適正な同位体標識試薬又は出発材料を使用することによる、本明細書の下記の「スキーム」及び／又は「実施例」に記載されるものに類似した方法によって、又は当業者に知られた慣用の技術によって製造することができる。
【０１０６】
諸定義において使用されるどの分子部分上の残基の位置は、それが化学的に安定である限りは、そのような部分上のどこにあってもよいことに注目されたい。
本明細書に使用するように、以下の用語は、下記に定義されるような意味を有する：
それ自身で、又はＣｍ−Ｃｎハロアルキル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルカルボニル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルアミン、Ｃｍ−Ｃｎアルキルスルホニル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルスルホニルアミノ、等のような複合表現において使用されるＣｍ−Ｃｎアルキルは、指定の炭素原子数を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル残基を表し、例えば、Ｃ１−Ｃ４アルキルは、１〜４個の炭素原子を有するアルキル残基を意味する。本発明における使用に好ましいアルキル残基はＣ１−Ｃ４アルキルであって、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−ブチル、及びイソブチルが含まれる。典型的には、メチルとｔ−ブチルが好ましい。Ｃ１−Ｃ６アルキルは、対応する意味を有して、ペンチル及びヘキシルのすべての直鎖及び分岐鎖異性体も含まれる。Ｃ５−Ｃ１０アルキルのようなＣｍ−Ｃｎアルキルの他の記述（recitals）も、対応する意味を有する。
【０１０７】
Ｍｅという用語はメチルを意味し、ＭｅＯはメトキシを意味し、Ｅｔはエチルを意味して、Ａｃはアセチルを意味する。
Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレンのような複合表現において使用されるＣ０−Ｃ２アルキレンは、メチル又はエチル基より派生する二価の残基を意味するか、又はＣ０の場合、Ｃ０−Ｃ２アルキレンいう用語は、結合を意味する。
【０１０８】
Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルは、少なくとも１個のＣ原子がハロゲン、好ましくはクロロ又はフルオロで置換されているＣ１−Ｃ４アルキルを意味する。典型的には、トリフルオロメチルが好ましい。
【０１０９】
Ｃ１−Ｃ４アルコキシは、残基：Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｏを表して、ここでＣ１−Ｃ４アルキルは、上記に定義される通りであって、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ブトキシ、及びイソブトキシが含まれる。典型的には、メトキシとイソプロポキシが好ましい。Ｃ１−Ｃ６アルコキシは、対応する意味を有して、ペントキシ及びヘキソキシのすべての直鎖及び分岐鎖異性体が含まれるように拡張される。Ｃ５−Ｃ１０アルコキシのようなＣｍ−Ｃｎアルコキシの他の記述も、対応する意味を有する。
【０１１０】
本明細書に使用されるＣ１−Ｃ４ハロアルコキシには、少なくとも１個のＣ原子が１個以上のハロゲン原子（複数）、典型的には、クロロ又はフルオロで置換されているＣ１−Ｃ４アルコキシが含まれることを意味する。多くの場合、トリフルオロメチルが好ましい。
【０１１１】
Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニルは、残基：Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）を意味する。
カルボシクリルには、シクロペンチル、シクロヘキシル、そして特に、シクロプロピル及びシクロブチルが含まれる。さらにカルボシクリルには、シクロペンテニルとシクロヘキセニルが含まれ、いずれの場合にも単一の二重結合がある。カルボシクリルでしばしば好ましい意義は、フェニルである。
【０１１２】
環式アミンには、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、及びモルホリニルが含まれる。
Ｈｅｔは、Ｏ、Ｓ、及びＮより独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を含有して、各環が５若しくは６個の環原子を有する、安定した、単環式又は二環式、飽和、部分飽和、又は芳香族の環系であり；例示の芳香族Ｈｅｔには、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、インダゾール、等が含まれる。例示の不飽和Ｈｅｔには、テトラヒドロフラン、ピラン、ジヒドロピラン、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキサン、ピペリジン、ピロリジン、モルホリン、テトラヒドロチオピラン、テトラヒドロチオフェン、２Ｈ−ピロール、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリン、チアゾリジン、イソオキサゾリジン、等が含まれる。
【０１１３】
本発明の化合物には、慣用のプロドラッグ部分を適用し得る、ＯＨ、ＮＨ、又はＣＯＯＨ基のようないくつかのハンドル基（handles）が含まれる。プロドラッグは、典型的には、in vivo で加水分解されて、親化合物を血漿、肝臓、又は腸壁に放出する。好まれるプロドラッグは、Ｒ４でのフェノール性ヒドロキシル基のような、ヒドロキシル基のエステル、又はスルホンアミドアミン官能基のようなアミン官能基である。好ましい医薬的に許容されるエステルには、アセチル又はピバロイルのようなＣ１−Ｃ６カルボン酸より誘導されるもの、又は、好ましくは未置換であるか又は、Ｒ１ａについておおまかに記載されるような置換基、典型的には、１〜３個のハロ（例、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（例、ＣＦ３）、又はＣ１−Ｃ４アルキルオキシ（例、ＭｅＯ）基で置換された、置換されていてもよい安息香酸エステルが含まれる。好まれるスルホンアミドプロドラッグには、アセチル又はピバロイルのようなＣ１−Ｃ６カルボン酸より誘導されるアミノアシル、又は好ましくは未置換であるか又は、可変のＲ１ａについて一般に記載されるような置換基、典型的には、１〜３個のハロ（例、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４アルキル（例、Ｍｅ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（例、ＣＦ３）、又はＣ１−Ｃ４アルキルオキシ（例、ＭｅＯ）基で置換された、置換されていてもよい安息香酸エステルが含まれる。
【０１１４】
他に言及しなければ、又は示されなければ、化合物の化学表記には、前記化合物が保有し得る、すべての可能な立体化学上の異性型の混合物が含まれる。前記混合物は、前記化合物の基本的な分子構造のすべてのジアステレオマー及び／又はエナンチオマーを含有し得る。本発明の化合物のすべての立体化学上の異性型は、純粋な形態でも、互いとの混合型でも、本発明の範囲内に含まれると企図される。
【０１１５】
本明細書に言及されるような化合物及び中間体の純粋な立体異性型は、前記化合物又は中間体の同じ基本分子構造の他のエナンチオマー型もジアステレオマー型も実質的に含まない異性体として定義される。特に、「立体異性体的に純粋な」という用語は、少なくとも８０％（即ち、最小でも９０％の１つの異性体と最大でも１０％の他の可能な異性体）の立体異性体過剰率から１００％（即ち、１００％の１つの異性体と０％の他の異性体）の立体異性体過剰率までを有する化合物又は中間体、より特別には、９０％から１００％までの立体異性体過剰率を有する化合物又は中間体、なおより特別には、９４％から１００％までの立体異性体過剰率を有する、そして最も特別には、９７％から１００％までの立体異性体過剰率を有する化合物又は中間体に関する。「エナンチオマー的に純粋な」及び「ジアステレオマー的に純粋な」という用語も同様のやり方で理解されるべきであるが、この場合は、当該混合物のエナンチオマー過剰率とジアステレオマー過剰率についてそれぞれ考慮される。
【０１１６】
本発明の化合物は、その化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させて一対のジアステレオ異性体の化合物を生成すること、このジアステレオマーを分離させること、及び光学的に純粋なエナンチオマーを回収することによって、その個々の立体異性体として製造することができる。エナンチオマーの分割は、式Ｉの化合物の共有結合性のジアステレオマー誘導体を使用して行うことができるが、解離可能な複合体（例えば、結晶性；ジアステレオ異性体の塩）が好ましい。ジアステレオマーは、別々の物理特性（例、融点、沸点、溶解度、反応性、等）を有して、これらの相違点を利用することによって容易に分離させることができる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィー、例えば、ＨＰＬＣによって、好ましくは、溶解度の差に基づいた分離／分割技術によって分離させることができる。次いで、ラセミ化を決して生じない実践的な手段によって、光学的に純粋なエナンチオマーを分割剤と一緒に回収する。化合物のラセミ混合物からのその立体異性体の分割に適用可能な技術のより詳しい記載については、Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen,「Enantiomers, Racemates and Resolutions（エナンチオマー、ラセミ体、及び分割）」ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社（1981）に見出すことができる。
【０１１７】
活性薬剤を単独で投与することは可能であるが、それを医薬製剤の一部として提示することが好ましい。そのような製剤は、上記に規定される活性薬剤を１以上の許容される担体（carriers）／賦形剤（excipients）と一緒に含み、そして他の治療成分を含んでもよい。担体（複数）は、製剤の他の成分と適合可能であって、レシピエントに対して有害でないという意味において許容されなければならない。
【０１１８】
製剤には、直腸、経鼻、局所（頬内及び舌下が含まれる）、膣内、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内、及び皮内が含まれる）投与に適したものが含まれるが、好ましくは、製剤は、経口投与製剤である。製剤は、簡便には、単位剤形（例、錠剤及び持続放出カプセル剤）において提示されてよく、調剤学の技術分野でよく知られたどの方法によっても製造してよい。そのような方法には、上記に規定した活性薬剤を担体と一体化させる工程が含まれる。一般に、製剤は、活性薬剤を液体担体又は微細な固体担体、又はその両方と均一かつ緊密に一体化させること、そしてその後必要ならば、その産物を成形することによって製造する。本発明は、式Ｉの化合物又はその医薬的に許容される塩を医薬的に許容される担体又は媒体（vehicle）と一緒にするか又は一体化させることを含んでなる、医薬組成物を製造するための方法へ拡張される。医薬製剤の製造が、医薬賦形剤と塩型の有効成分との緊密な混合を伴うのであれば、性質が非塩基性（即ち、酸性又は中性のいずれか）である賦形剤を使用することがしばしば好ましい。
【０１１９】
本発明における経口投与用の製剤は、所定量の活性薬剤をそれぞれ含有するカプセル剤、カシェ剤、又は錠剤のような離散単位として；散剤又は顆粒剤として；水性液体又は非水性液体中の活性薬剤の溶液剤又は懸濁液剤として；又は水中油型の液体乳剤又は油中水型の液体乳剤として、及びボーラス剤、等として提示してよい。
【０１２０】
経口投与用の組成物（例、錠剤及びカプセル剤）に関して言えば、好適な担体という用語には、一般的な賦形剤のような媒体が含まれる；例、結合剤、例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ショ糖、及びデンプン；充填剤及び担体、例えば、コーンスターチ、ゼラチン、乳糖、ショ糖、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウム、及びアルギン酸；並びに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムと他のステアリン酸金属塩、ステアリン酸グリセロール、ステアリン酸、シリコーン液、タルク、ワックス、オイル、及びコロイド状シリカのような滑沢剤。ペパーミント、ウィンターグリーンオイル、チェリーフレーバー、等のような香味剤も使用することができる。着色剤を加えて、剤形を容易に識別可能にすることが望ましい場合もある。錠剤はまた、当該技術分野でよく知られた方法によって被覆してよい。
【０１２１】
錠剤は、１以上の副成分を伴ってもよい、圧縮又は成形によって作製することができる。圧縮錠剤は、好適な機械において、粉末又は顆粒のような自由流動性の形態中の活性薬剤を、結合剤、滑沢剤、不活性希釈相、保存剤、界面活性剤、又は分散剤と任意選択的に混合して圧縮することによって製造することができる。成形錠剤は、好適な機械において、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を成形することによって作製することができる。錠剤は、被覆しても割線を入れてもよく、活性薬剤の遅延又は制御放出をもたらすように製剤化してよい。
【０１２２】
経口投与に適した他の製剤には、活性薬剤を香味基剤、通常はショ糖及びアカシア又はトラガカントに含んでなる口内錠；活性薬剤をゼラチン及びグリセリン、又はショ糖及びアカシアのような不活性基剤に含んでなるトローチ剤（pastilles）；及び、活性薬剤を好適な液体担体に含んでなる洗口剤が含まれる。
【０１２３】
すべての医薬品で同様に、本発明の化合物又は製剤に適正な投与量は、適応症、疾患の重症度、患者のサイズ及び代謝活力、投与形式に依存して、慣用の動物試験によって容易に決定される。典型的には、０．１〜５μＭのような、０．０１〜１００μＭ、より好ましくは０．０１〜１０μＭの桁数の（パパインスーパーファミリーの生理学的プロテアーゼを阻害するための）細胞内濃度を提供する投与量が望ましくて、達成可能である。
【０１２４】
本発明の化合物は、多様な液相及び固相の化学によって製造される。
典型的な第一工程は、式ＩＩＩ：
【０１２５】
【化２５】
2013534917.tif 000027
【０１２６】
［式中、Ｒ２ａとＲ２ｂは、上記に定義される通りであって、ＰＧは、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はＦｍｏｃのような慣用のＮ保護基である］のＰ１合成断片（building block）の製造である。これらの合成断片は新規であって、本発明のさらなる側面を構成する。引き続き、このＰ１合成断片（ＩＩＩ）を式（ＩＶ）：
【０１２７】
【化２６】
2013534917.tif 000028
【０１２８】
［式中、Ｒ２ａとＲ２ｂは、上記に定義される通りであって、ＰＧは、Ｂｏｃ、ＣＢｚ、又はＦｍｏｃのような慣用のＮ保護基である］のＰ１プライム側鎖（prime side）単位へ変換する。これらの合成断片は新規であって、本発明のさらなる側面を構成する。
【０１２９】
式ＩＩＩ及びＩＶの合成断片は、典型的には、以下のスキーム１に記載のように製造する：
【０１３０】
【化２７】
2013534917.tif 000029
【０１３１】
好適な出発材料は、Ｎ−保護化シクロアルキルアミノ酸であり、そのいくつかは、市販されているか又は以下の「実施例」に示すように、又は J. Med. Chem., 1990 33(10) 2905-2915 において Allan et al. によって記載されるように製造することができる。
【０１３２】
カルボン酸（１ａ）を、ワインレブ（Weinreb）合成を介してＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキサム酸（１ｂ）へ変換して、これより対応のアルデヒド（１ｃ）がもたらされる。このアルデヒドは、シクロアルキルアミノ酸のカルボン酸官能基の還元とそれに続くデス・マーチン（Dess Martin）条件下での酸化によっても入手し得る。引き続き、このアルデヒド（１ｃ）をパッセリーニ（Passerini）反応においてｔ−ブチルイソシアニド又は同等物と反応させて、α−ヒドロキシアミド（１ｄ）を得ることができる。次いで、このアミドの後続の加水分解によって、必要とされるα−ヒドロキシカルボン酸のＰ１合成断片（ＩＩＩ）が得られる。一般に、このアミドを加水分解するのに必要とされる強酸性条件はまた、使用されるならば、ＮＢｏｃ保護の消失をもたらす。次いで、このアミンは、Ｐ２合成断片へ直接的にカップリングするために使用しても、あるいは保存する必要があるならば、そのアミンは再保護化することができる。次いで、このＰ１合成断片（ＩＩＩ）をＣ末端で修飾して、一級アミドＰ１プライム側鎖単位（ＩＶ）を得る。典型的には、Ｐ１合成断片（ＩＩＩ）は、炭酸カリウム等のような好適な塩基の存在下でのヨウ化メチルとの反応によりメチルエステルを経て、続いて、例えば、アンモニアのメタノール飽和溶液での処理によって実効される、この中間体メチルエステルの一級アミドへの加水分解によって、一級アミドへ変換される。
【０１３３】
次いで、このようにして得られたＰ１プライム側鎖単位（ＩＶ）をＮ末端で伸長させて、式Ｉの化合物を得る。以下のスキーム２は、Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｈｅｔ、又はカルボシクリルである式Ｉの化合物への経路を例解する。
【０１３４】
【化２８】
2013534917.tif 000030
【０１３５】
Ｐ１プライム側鎖単位（ＩＶ）をＮ末端で脱保護化して、慣用のペプチド化学を使用して、Ｐ２で、そして引き続きＰ３合成断片で伸長させる。例えば、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡのような標準カップリング条件を使用して、ＢｏｃＰ２−ＯＨを介してＰ２残基を導入することができる。メタノール中の塩化アセチル又は同等物で、末端のＢｏｃ保護基を再び外して、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡのような標準カップリング条件を使用して、Ｐ３−ＯＨを介してＰ３残基を導入する。あるいは、Ｐ３−Ｐ２合成断片を別々に製造して、Ｐ１プライム側鎖−合成断片（ＩＶ）へ１工程で直接的に付加して、それによりジペプチド誘導体（２ｂ）を得てもよい。次いで、デス・マーチン酸化又はモファット（Moffat）酸化、等のような、当該技術分野で知られた慣用の酸化法を使用して、α−ヒドロキシアミドの対応するα−ケトアミド（２ｃ）への酸化を実効する。
【０１３６】
式ＩＩの化合物、即ち、Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキルである化合物は、一般的にはスキーム３で例解されるように、Ｎ−保護化アミン（２ａ）より製造することができる。
【０１３７】
【化２９】
2013534917.tif 000031
【０１３８】
ペプチド合成の技術分野でよく知られた標準技術［ｂｏｃ−保護基の場合は、酸での処理に続く、ジイソプロピルエチルアミド、等のような塩基の存在下であってもよい、クロロギ酸アルキル又は二炭酸ジアルキルのような好適なアルコキシカルボニル化剤との反応のような］を使用する、Ｎ−保護化アミン（２ａ）からのＮ−保護基の除去により、カルバメート（３ａ）を得る。次いで、デス・マーチン酸化又はモファット酸化、等のような、当該技術分野で知られた慣用の酸化法を使用して、α−ヒドロキシアミドの対応するα−ケトアミド（３ｂ）への酸化を実効する。
【０１３９】
Ｐ２合成断片に適した広範囲の適正保護化Ｌ−アミノ酸と、Ｐ３合成断片に適したカルボン酸、カルボン酸ハロゲン化物、及びハロゲン化カルバモイルは、市販されているか、又は単純な化学によって、又はＷＯ０６／０６４２８６に示されるように入手される。あるいは、Ｐ３及びＰ２合成断片は、初めにカップリングさせてから、Ｐ１プライム側鎖単位と反応させてもよい。
【０１４０】
伸長は、典型的には、好適なカップリング剤、例えば、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジノホスホニウム・ヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、又は１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下に、任意選択的には、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、等のような塩基の存在下に行う。この反応は、典型的には、２０〜３０℃で、好ましくは約２５℃で行って、完了するのに２〜２４時間を要する。好適な反応溶媒は、ハロゲン化有機溶媒（例、塩化メチレン、クロロホルム、等）、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサンのようなエーテル性溶媒、等といった不活性有機溶媒である。
【０１４１】
あるいは、上記の伸長カップリング工程は、初めにＰ３／Ｐ２合成断片をスクシンイミドエステルのような活性酸誘導体へ変換してからそれをＰ１アミンと反応させることによって行うことができる。この反応は、典型的には、完了するのに２〜３時間を要する。この反応に利用する条件は、活性酸誘導体の性質に依存する。例えば、それが酸クロリド誘導体であれば、この反応は、好適な塩基（例、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、等）の存在下に行う。好適な反応溶媒は、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンのような極性有機溶媒、又はこれらのあらゆる好適な混合物である。
【０１４２】
本明細書に使用する「Ｎ−保護基」又は「Ｎ−保護化」という用語は、アミノ酸又はペプチドのＮ末端を保護するか又は合成手順の間の望まれない反応に対してアミノ基を保護するように企図された基に言及する。通常使用されるＮ−保護基については、参照により本明細書に組み込まれる、Greene，「Protective Groups in Organic Synthesis（有機合成の保護基）」（ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨーク、1981）に開示されている。Ｎ−保護基には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、等のようなアシル基；ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、等のようなスルホニル基；ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル、等のようなカルバメート形成基；ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、等のようなアルキル基；及び、トリメチルシリルのようなシリル基、等が含まれる。好まれるＮ−保護基には、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル（ｂｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、及びベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）が含まれる。
【０１４３】
ヒドロキシ及び／又はカルボキシ保護基についても、Greene, 同上において広汎に概説されていて、メチルのようなエーテル、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、等のような置換メチルエーテル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリベンジルシリル、トリフェニルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリルトリイソプロピルシリル、等のようなシリルエーテル、１−エトキシメチル、１−メチル−１−メトキシエチル、ｔ−ブチル、アリル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、等のような置換エチルエーテル、トリチル及びピキシル（９−ヒドロキシ−９−フェニルキサンテン誘導体、具体的には、塩化物）のようなアラルキル基が含まれる。エステルヒドロキシ保護基には、ホルメート、ベンジルホルメート、クロロアセテート、メトキシアセテート、フェノキシアセテート、ピバロエート、アダマントエート、メシトエート、ベンゾエート、等のようなエステルが含まれる。炭酸ヒドロキシ保護基には、メチルビニル、アリル、シンナミル、ベンジル、等が含まれる。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
これから、本発明の様々な態様について、以下の「実施例」を参照にして、例示のためにのみ記載する。
以下の実施例では、典型的には、以下のシステムを利用する：
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、示す溶媒において、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ７  Ｔｅｓｌａ  ３００ＭＨｚ機器、又はＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚ機器で記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）からの下方及び上方磁場のｐｐｍで示す。共鳴多重性について、ｓ、ｄ、ｔ、ｍ、ｂｒ、及びａｐｐは、それぞれ一重項、二重項、三重項、多重項、ブロード、及びアパレントをそれぞれ示す。質量分析（ＭＳ）スペクトルは、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７０００  ＴＳＰ又はＦｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７１０  ＤＩ／ＥＩ機器で報告した。ＬＣ−ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ  ＸｔｅｒｒａＴＭ  ＭＳ  Ｃ８（２．５μｍ  ２．１ｘ３０ｍｍ）カラム、Ｗａｔｅｒｓ  ９９６  フォトダイオードアレイ検出器、及びＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤを取り付けたＷａｔｅｒｓ  ２７９０ＬＣシステムで得た。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイは、Ｚｏｒｂａｘ  カラムＳＢ−Ｃ８（４．６ｍｍｘ１５ｃｍ）を取り付けたヒューレット・パッカード  １１００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して実施した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ、ＡＳＴＭ，メルク）を使用して実施して、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ＴＬＣプレコートプレート、シリカゲル６０  Ｆ２５４（メルク）で実施した。
【０１４５】
合成断片１（ＢＢ１）、Ｐ１合成断片の製造
【０１４６】
【化３０】
2013534917.tif 000032
【０１４７】
工程ａ）２−（１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロブチル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ１−ａ）
１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブタンカルボン酸（３ｇ，１３．９４ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液へＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンｘＨＣｌ（１．３６ｇ，１３．９４ミリモル）とＤＩＥＡ（９．２１ｍＬ，５５．７５ミリモル）を加えた。この反応フラスコを０℃へ冷やして、１０分後、この溶液へＨＡＴＵ（５．３０ｇ，１３．９４ミリモル）を加えた（添加時に黄色くなった）。２時間後、減圧でのロータリーエバポレーションによってＤＭＦを除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶かして１０％クエン酸（水溶液）と飽和ＮａＨＣＯ３（水性）溶液で２回洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、シリカ上で蒸発させた。この生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル（１：１））によって精製して、ゆっくり結晶化する無色のオイルとして生成物（３．１３ｇ）を収率８７％で得た。
【０１４８】
工程ｂ）（１−ホルミル−シクロブチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ１−ｂ）
乾燥ジエチルエーテル（３５ｍＬ）に溶かしたワインレブアミドＢＢ１−ａ（１．１０ｇ，４．２７ミリモル）の溶液へＬｉＡｌＨ４（２０２ｍｇ，５．３３ミリモル）を０℃で加えた。この溶液を１５分間撹拌した後で、この反応物を酒石酸水素カリウム（飽和水溶液）のゆっくりとした添加で冷まして、１０分間撹拌した。この溶液を分離漏斗へ注いで、水相を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を０．５Ｍ  ＨＣｌ（３回）、ＮａＨＣＯ３（水溶液）（２回）、及び塩水（１回）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、シリカ上で蒸発させた。この生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル（４：１→３：１））によって精製して、生成物（０．６４７ｇ）を白色の結晶として収率７６％で得た。
【０１４９】
工程ｃ）［１−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−ヒドロキシ−メチル）−シクロブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ１−ｃ）
ＢＢ１−ｂ（１．７５ｇ，８．７８ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１８ｍＬ）に溶かして、不活性気体下に氷浴で冷やした。ピリジン（２．８５ｍＬ）に続いてｔ−ブチルイソシアニド（１．５０ｍＬ，１３．３ミリモル）を加えた。次いで、トリフルオロ酢酸（１．３５ｍＬ，１７．５ミリモル）を３０分にわたり滴下した。この黄色の溶液を室温で一晩撹拌した。この混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈して、１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、及び飽和ＮａＣｌ（２ｘ５０ｍＬ）で連続的に洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）と、真空下での濃縮。得られた粗生成物をＴＨＦ（２．５ｍＬ）とＭｅＯＨ−水中１Ｍ  ＬｉＯＨ（３／１，２．５ｍＬ）で、室温で処理した。１５分後、ＴＬＣ（石油エーテル−ＥｔＯＡｃ（３／１））は、完全なエステル加水分解を示した。４５分の反応時間の後で、１Ｎ  ＨＣｌ（２．５ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、及びＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を加えて、層を分離させた。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）と、次いで飽和ＮａＣｌ（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（７５ｇシリカ、５／１〜１／１  石油エーテル：ＥｔＯＡｃ）によって、白色の固形物（２．３６ｇ，８９％）を得た。
【０１５０】
工程ｄ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブチル）−ヒドロキシ−酢酸（ＢＢ１）
ＢＢ１−ｃ（１．３０ｇ，４．３３ミリモル）を、アミド加水分解がＬＣＭＳによりモニタリングされるように完了するまで、６Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）とともに還流させた。この混合物を蒸発させて、水と数回同時蒸発させた。残渣へ１Ｍ  ＮａＯＨ（１５ｍＬ）を加えて、この塩基性溶液を真空下に１５分間撹拌した。ｐＨを１０〜１１に保ちながら、ジオキサン（１０ｍＬ）中のＢｏｃ２Ｏ（１．９２ｇ，８．８０ミリモル）を加えて、この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、氷浴において１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３へ酸性化してから、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ，次いで３０ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、蒸発させて、粗製のＰ１合成断片ＢＢ１（０．６４９ｇ）を得た。
【０１５１】
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 6.88 (br s, 1H), 4.15 (s, 1H), 2.40 (br m, 2H), 1.98 (br m, 2H), 1.80 (br m, 2H), 1.35 (s, 9H); ms ES+m/z 146 (100 %), 190 (50 %)。
【０１５２】
合成断片２（ＢＢ２）、Ｐ１合成断片の製造
【０１５３】
【化３１】
2013534917.tif 000033
【０１５４】
工程ａ）（（１−ブロモ−３−クロロプロパン−２−イルオキシ）メチル）ベンゼン（ＢＢ２−ａ）
臭化ベンジル（１８５ｇ，１．０８モル）と（１．５ｇ）の塩化水銀の撹拌混合物へエピクロロヒドリン（１００ｇ，１．０８モル）を加えた。この反応混合物を１００℃で１２時間加熱した。ＴＬＣ分析により、生成物の生成を確認した。この生成物を、石油エーテルを溶出液として使用するカラムクロマトグラフィーによって、濃褐色の反応混合物より分離させた。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．７。収量；１４８ｇ，５１％。
【０１５５】
工程ｂ）３−ベンジルオキシ−シクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチルエステル（ＢＢ２−ｂ）
水素化ナトリウム（２２．５ｇ，０．５６２モル）の８００ｍＬの乾燥ジオキサン中の撹拌懸濁液へマロン酸ジエチル（９０ｇ０．５６２モル）を２０分にわたり滴下した。この添加が完了した後で、ＢＢ２−ａ（１４８ｇ，０．５６モル）を２０分にわたり滴下した。次いで、この混合物を還流で２４時間加熱した。室温へ冷却後、この混合物へ少量のジオキサン（約２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２２．５ｇ，０．５６２モル）を加えて、還流での加熱をさらに４８時間続けた。溶媒を減圧下に一部除去して、この混合物を８００ｍＬの水で処理した。次いで、この混合物を酢酸エチル（５００ｍＬｘ３）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて真空で濃縮して、残渣を、石油エーテル：酢酸エチル（１０％）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量：１００ｇ，５８％。
【０１５６】
工程ｃ）３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｃ）
化合物ＢＢ２−ｂ（４０ｇ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）溶液へ１０％パラジウム担持チャコール（４ｇ）を加えて、この混合物を５０ｐｓｉにて室温で３．５時間水素化した。触媒を濾過によって除去し、酢酸エチル、ＥｔＯＨで洗浄してから、溶媒を減圧下に除去した。ヘキサン／酢酸エチルを溶出液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製して、表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量：１８ｇ，６４％。
【０１５７】
工程ｄ）３−オキソシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｄ）
化合物ＢＢ２−ｃ（１８ｇ，０．０８３３モル）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液へＰＣＣ（３７ｇ，０．１７６モル）を加えて、この混合物を室温で４時間撹拌した。この溶液をシリカゲルカラムに通して濾過し、残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９８／２）で洗浄してから、同様のカラムに通して濾過した。合わせた画分を減圧下に蒸発させて、所望の化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量：１１ｇ，６２％。
【０１５８】
工程ｅ）３，３−ジフルオロシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｅ）
化合物ＢＢ２−ｄ（１１ｇ，０．０５１３モル）の乾燥ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の冷却溶液へＤＡＳＴ（１８．７２ｇ，０．１１６モル）の溶液を滴下して、この混合物を室温で一晩撹拌した。この混合物を氷水へ加えて、ＤＣＭで３回抽出した。この溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させて、減圧下に蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチルを溶出液として利用するシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製して、表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（７：３），ＲＦ＝０．５。収量：７．７ｇ，６４％。
【０１５９】
工程ｆ）１−（エトキシカルボニル）−３，３−ジフルオロシクロブタンカルボン酸（ＢＢ２−ｆ）
化合物ＢＢ２−ｅ（７．７ｇ，０．０３２５モル）を氷冷０．５Ｍエタノール性水酸化カリウム溶液（３０ｍＬ）と水（６ｍＬ）に溶かした。この混合物を室温で一晩撹拌した。水を加えて、ほとんどのエタノールを減圧下に除去した。この混合物を２Ｍ  ＨＣｌで酸性化して、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下に蒸発させて、所望の化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．３。収量：５．８ｇ，８６％。
【０１６０】
工程ｇ）１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３，３−ジフルオロシクロブタンカルボン酸エチル（ＢＢ２−ｇ）
化合物ＢＢ２−ｆ（５．８ｇ，０．０２７３モル）の乾燥ジオキサン（１００ｍＬ）溶液へｔｅｒｔ−ブタノール（２４．４ｍＬ）、ＤＰＰＡ（７．８７ｇ，０．０２７モル）、及びＴＥＡ（２．８７ｇ，０．０２８４モル）を加えて、この混合物を５時間還流させた。酢酸エチル（約２００ｍＬ）を加えて、有機相を５％クエン酸と飽和炭酸水素ナトリウムで２回洗浄した。この溶液を乾燥させて、減圧下に蒸発させた。所望の生成物をヘキサン／酢酸エチルでのシリカゲルクロマトグラフィーによって単離した。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．５。収量：４ｇ，５１．４％。
【０１６１】
工程ｈ）３，３−ジフルオロ−１−（ヒドロキシメチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｈ）
化合物ＢＢ２−ｇ（４ｇ，０．０１４３モル）の乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の氷冷溶液へ２Ｍホウ水素化リチウムの溶液（３０ｍＬ）をゆっくり加えて、この混合物をそのまま室温まで温めた。この混合物を室温で３時間撹拌した。氷水と５％クエン酸を加えて、この混合物をＤＣＭで３回抽出した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過し、減圧下に蒸発させて、表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．３。収量：３．１ｇ，９１％。
【０１６２】
工程ｉ）３，３−ジフルオロ−１−ホルミルシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｉ）
化合物ＢＢ２−ｈ（３．１ｇ，０．０１３０モル）の乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液へデス・マーチン（Dess Martin）ペルヨージナン（１９．９ｇ，０．０４７０モル）を加えて、この混合物を室温で３時間撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えて、有機相を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液で２回、０．５Ｍ  ＮａＯＨで２回、そして塩水で洗浄した。有機相を乾燥させて、減圧下に蒸発させた。ヘキサン／酢酸エチルを溶出液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残渣を精製して、これより表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．４。収量：２．７ｇ，８７％。
【０１６３】
工程ｊ）１−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３，３−ジフルオロシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｊ）
化合物ＢＢ２−ｉ（１．５ｇ，０．００６４モル）の乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の氷冷溶液へｔｅｒｔ−ブチルイソシアネート（０．８１ｇ，０．００９モル）とピリジン（２．０４ｇ，０．０２７モル）を加えた。トリフルオロ酢酸（１．５８ｇ，０．０１５モル）を１０分の時間にわたり加えた。この混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチルを加えて、有機相を５％クエン酸と塩水で２回洗浄した。有機相を蒸発させて、ジオキサン（５０ｍＬ）に溶かした。１Ｍ  ＬｉＯＨ溶液（１００ｍＬ）を加えて、この混合物を室温で一晩撹拌した。５％クエン酸を加えて、この混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機相を塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過して、減圧下に蒸発させた。この生成物を、ヘキサン／酢酸エチルを溶出液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。ＴＬＣシステム；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．４。収量：１．０ｇ，４６％。
【０１６４】
工程ｋ）２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３，３−ジフルオロシクロブチル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ２）
化合物ＢＢ２−ｊ（１ｇ）を６Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）に溶かして、加熱して２４時間還流させた後で、ＴＬＣは、この反応がすでに完了に達したことを示した。この反応混合物を真空で濃縮して、残渣をＴＨＦ；Ｈ２Ｏ（７；３，５０ｍＬ）に溶かして、ＴＥＡ（１．８ｍＬ，０．０１２モル）とＢｏｃ無水物（２．６ｇ，０．０１２モル）をともに加えた。この混合物を室温で８時間撹拌したときに、ＴＬＣによりこの反応がすでに完了に達したことを確認した。この反応混合物を真空で濃縮して、クロロホルム中５％メタノールを使用するカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、これより表題化合物を得た。ＴＬＣシステム；ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３（１：９），ＲＦ＝０．４。収量：０．６ｇ，７２％。
【０１６５】
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.30 (br s, 1H), 4.11 (s, 1H), 2.90 (br m, 2H), 2.61 (br m, 2H), 1.35 (s, 9H); ms ES+ m/z 281 (100 %)。
合成断片３（ＢＢ３）、Ｐ１合成断片の製造
【０１６６】
【化３２】
2013534917.tif 000034
【０１６７】
工程ａ）（(１−ブロモ−３−クロロプロパン−２−イルオキシ）メチル）ベンゼン（ＢＢ３−ａ）
臭化ベンジル（４６．０ｇ，０．２６９モル）及びエピクロロヒドリン（２４．９ｇ，０．２６９モル）及び塩化水銀（０．０４ｇ，０．０８５ミリモル）の混合物を１５０℃で１２時間加熱した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中１％  ＥｔＯＡｃ）によって精製して、これより表題化合物（５０ｇ，収率７０％）を粘稠な液体として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中１０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．６。
【０１６８】
工程ｂ）３−（ベンジルオキシ）シクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｂ）
撹拌子、滴下漏斗、及び還流冷却器を取り付けた３つ首フラスコに乾燥ジオキサン（１５０ｍＬ）中のＮａＨ（４．６ｇ，０．１９２モル）を入れた。この撹拌した反応混合物へマロン酸ジエチル（３０．７５ｇ，０．１９２モル）を３０分にわたり滴下した。この添加が完了した後で、化合物ＢＢ３−ａ（５０ｇ，０．１９モル）を３０分の時間にわたり滴下した。この反応混合物を２４時間還流させた。室温へ冷却後、この反応混合物へＮａＨ（４．６ｇ，０．１９２モル）と乾燥ジオキサン（４０ｍＬ）を加えて、さらに加熱してさらに４８時間還流させた。溶媒を減圧下に一部除去して、この混合物を水（１５０ｍＬ）で処理した。生成物をジエチルエーテル（３ｘ１００ｍＬ）で抽出し、有機層を塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中２％  ＥｔＯＡｃ）によって精製し、これより表題化合物（３３ｇ，収率５７％）を粘稠な液体として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中１５％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．５。
【０１６９】
工程ｃ）３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｃ）
化合物ＢＢ３−ｂ（３３ｇ，０．１０８モル）のＥｔＯＨ（３００ｍＬ）溶液へ１０％パラジウム担持チャコール（１０ｇ）を加えて、この混合物を５０ｐｓｉ気圧にて室温で４８時間水素化した。触媒をセライトベッドに通す濾過によって除去して、ＥｔＯＡｃで徹底的に洗浄した。溶媒を減圧下に除去した。この生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ）によって精製して、これより表題化合物（３）（１２ｇ，収率５１％）を粘稠な液体として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中３０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１７０】
工程ｄ）３−フルオロシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｄ）
化合物ＢＢ３−ｃ（０．８ｇ，０．００３７モル）を乾燥ＤＣＭ（１６ｍＬ）に溶かして、０℃へ冷やした。この冷たい溶液へＤＡＳＴ（１．８ｇ，０．０１１モル）を滴下した。この反応混合物を室温へ温めて、１２時間撹拌した。この反応混合物を冷たい飽和ＮａＨＣＯ３溶液で冷ました。粗生成物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を１０％  ＮａＨＣＯ３溶液、水に続いて塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中１〜２％  ＥｔＯＡｃ）によって精製して、これより表題化合物（４６０ｍｇ，収率５７％）を薄黄色の液体として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中１０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１７１】
工程ｅ）１−（エトキシカルボニル）−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ＢＢ３−ｅ）
化合物ＢＢ３−ｄ（０．４６ｇ，０．００２１モル）をＥｔＯＨ中の氷冷０．５Ｍ水酸化カリウム溶液（４．２ｍＬ）と水（１．４ｍＬ）に溶かした。この混合物を室温で一晩撹拌した。水を加えて、ほとんどのエタノールを減圧下に除去した。この混合物を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化して、ＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗製の表題化合物（０．３５ｇ，粗製）を得て、これをそのまま次の工程に使用した。ＴＬＣシステム：石油エーテル中５０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１７２】
工程ｆ）１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−フルオロシクロブタンカルボン酸エチル（ＢＢ３−ｆ）
化合物ＢＢ３−ｅ（０．３５ｇ，０．００１８モル）の乾燥ジオキサン（６ｍＬ）溶液へｔｅｒｔ−ブタノール（１．８ｍＬ）、ジフェニルホスホリルアジド（０．５６ｇ，０．００２モル）、及びトリエチルアミン（０．２ｇ，０．００２モル）を加えて、この混合物を５時間還流させた。この反応の完了後、この反応混合物へＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）を加えて、有機層を５％クエン酸（２ｘ２０ｍＬ）に続いて飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄した。有機溶媒を減圧下に蒸発させた。残渣へＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を加えて、有機層を塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中５〜１０％  ＥｔＯＡｃ）によって精製し、これより表題化合物（０．２７ｇ，収率５６％）を白色の結晶として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１７３】
工程ｇ）３−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｇ）
化合物ＢＢ３−ｆ（０．２７ｇ，０．００１モル）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の氷冷溶液へ２Ｍホウ水素化リチウム溶液（２ｍＬ，０．００４モル）をゆっくり加えて、この混合物をそのまま室温まで温めた。この混合物を室温で３時間撹拌した。この反応混合物を氷水（２ｍＬ）と５％クエン酸（５ｍＬ）で冷まして、粗生成物をＤＣＭ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中１５〜１８％  ＥｔＯＡｃ）によって精製し、これより表題化合物（９０ｍｇ，収率３９％）を白色の固形物として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中５０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．５。
【０１７４】
工程ｈ）３−フルオロ−１−ホルミルシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｈ）
乾燥ＤＣＭ（４．５ｍＬ）中の化合物ＢＢ３−ｇ（９０ｍｇ，０．０００４モル）の脱気溶液へデス・マーチンペルヨージナン（０．２１ｇ，０．０００５モル）を加えて、この混合物を室温で３時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）を加えて、有機層を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（２ｘ１０ｍＬ）、０．５Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｍＬ）、及び塩水で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で濃縮して、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：石油エーテル中１０〜１５％  ＥｔＯＡｃ）によって精製し、これより表題化合物（７５ｍｇ，収率８７％）を白色の結晶性固形物として得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１７５】
工程ｉ）１−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−フルオロシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｉ）
化合物ＢＢ３−ｈ（１．３ｇ，０．００５９モル）の乾燥ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の氷冷溶液へｔｅｒｔ−ブチルイソシアニド（０．７５ｇ，０．００８９モル）と乾燥ピリジン（２．６ｍＬ）を加えた。温度を０℃に維持しながら、トリフルオロ酢酸（０．９ｍＬ，０．０１１８モル）を１０分の時間にわたり加えた。この反応混合物を室温へゆっくり温めて、１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加えて、有機相を５％クエン酸と塩水で２回洗浄した。有機相を蒸発させて、粗生成物をＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶かした。ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（３：２  ｖ／ｖ）中の１Ｍ  ＬｉＯＨ溶液（２．６ｍＬ）を加えて、この混合物を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を５％クエン酸で冷まして、この混合物を酢酸エチル（２ｘ２５ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空で蒸発させて、次の工程で使用するのに十分純粋である表題化合物（１．６ｇ，収率８４％）を得た。ＴＬＣシステム：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１７６】
工程ｊ）２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−フルオロシクロブチル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ３）
化合物ＢＢ３−ｉ（１．６ｇ，０．００５モル）を、アミド加水分解が完了するまで、６Ｎ  ＨＣｌ（６０ｍＬ）とともに１６時間還流させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、水と数回同時蒸発させた。生成物をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（７：３  ｖ／ｖ，５０ｍＬ）に溶かし、０℃へ冷やして、Ｅｔ３Ｎ（２．１ｍＬ，０．０１５モル）に続いて二炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（２．１８ｇ，０．０１モル）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した（この反応を通して、ｐＨを一定間隔でモニタリングして、約１１に保った）。この反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌで中和して、生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄して無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、カラムクロマトグラフィーによる精製（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、溶出液：ＣＨＣｌ３中５％  ＭｅＯＨ）を続けて、これより表題のＰ１合成断片（０．６５ｇ，収率５０％）を固形物として得た。ＴＬＣシステム：ＣＨＣｌ３中３０％  ＭｅＯＨ，Ｒｆ＝０．３。
【０１７７】
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.01 (br s, 1H), 5.16 (br m, 1H), 4.97 (br m, 1H), 2.49 (br m, 5H), 1.36 (s, 9H); ms ES+ m/z 262 (100 %)。
合成断片４、Ｐ１合成断片（ＢＢ４）
【０１７８】
【化３３】
2013534917.tif 000035
【０１７９】
工程ａ）１−（ヒドロキシメチル）−３−メトキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ４−ａ）
５００ｍｇ（１．５１ミリモル）の１−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−３−ヒドロキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（J. Med. Chem., 199033 (10) 2905-2915 に記載のように、１−［［（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル］アミノ］−３−ヒドロキシシクロブタン−１−カルボン酸エチルの還元によって製造する）とプロトンスポンジ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルナフタレン−１，８−ジアミン）（１．６３ｇ，６．０４ミリモル）をＤＣＭ（１８ｍｌ）に溶かし、０℃へ冷やして、（４４７ｍｇ，３．０２ミリモル）の四フッ化ホウ素トリメチルオキソニウムを激しい撹拌下に固形物として一分量で加えた。この反応混合物を３時間撹拌し、ＤＣＭ（５０ｍｌ）で希釈して、塩水（２０ｍｌ）を激しい撹拌下に加えた。有機相を重炭酸ナトリウム、塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、短いシリカカラム（ＤＣＭを溶出液とする）で精製した。生じる生成物をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶かして、フッ化テトラブチルアンモニウムのＴＨＦ溶液（１Ｍ，４．５ｍｌ）を加えて、この反応物を室温で４．５時間撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングして、完了に達したとみなされたらすぐにシリカ上へ吸着させて、シリカ（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：１〜純正ＥｔＯＡｃ）で精製して、表題化合物（２５１ｍｇ，７２％）を得た。LC/MS 232 (M+1)。
【０１８０】
工程ｂ）１−ホルミル−３−メトキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ４−ｂ）
アルコールＢＢ４−ａをＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶かして、デス・マーチン試薬を一分量で加えた。反応物を２．５時間撹拌した。反応が完了に達したとみなされたらすぐにこれを５０ｍｌのＤＣＭで希釈して、２０ｍｌの１０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を加えた。この混合物を撹拌し、重炭酸ナトリウム、塩水で洗浄して、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させた。シリカ（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：１〜純正ＥｔＯＡｃ）での精製によって表題化合物（５００ｍｇ，５９％）を得た。
【０１８１】
工程ｃ）［１−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−メトキシシクロブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ４−ｃ）
アルデヒドＢＢ４−ｂ（４．４５ミリモル）を乾燥ＤＣＭ（１１ｍＬ）に溶かした。ピリジン（２ｍＬ）を撹拌条件下に加えて、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアニド（６．６８ミリモル）の添加を続けた。この反応物を氷浴に入れて、ＴＦＡ（０．６８ｍＬ）を２０分間滴下した。この反応混合物を一晩撹拌した。次いで、この反応が完了に達したとみなして、溶媒を減圧下に除去した。残渣をＥｔＯＡｃに再び溶かして、１Ｍ  ＨＣｌ（２ｘ）、重炭酸ナトリウム、塩水で洗浄して、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させて蒸発させた。残る残渣をジオキサンに溶かして水酸化リチウム溶液とともに一晩撹拌して、クエン酸で中和した。生じる溶液より生成物をＥｔＯＡｃで抽出してシリカ（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：３〜１：１）で精製し、それにより８５０ｍｇの表題化合物（５８％）を得た。ＴＬＣ：ｒｆ＝０．６１（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン  １：１）。
【０１８２】
工程ｄ）（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−メトキシ−シクロブチル）−ヒドロキシ−酢酸（ＢＢ４）
アミドＢＢ４−ｃ（８５０ｍｇ，２．５７ミリモル）を６Ｎ  ＨＣｌ（６０ｍＬ）とともにアミド加水分解が完了するま１６時間還流させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、水と同時蒸発させた。生成物をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（７：３  ｖ／ｖ，５０ｍＬ）に溶かし、０℃へ冷やして、Ｅｔ３Ｎ（１．４ｍＬ，１０．２ミリモル）に続いて二炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル（２．２５ｇ，１０．２モル）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃで洗浄して、続いて１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３へ酸性化して、ＥｔＯＡｃ（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄して無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、これより表題化合物（３６０ｍｇ，収率５１％）を固形物として得た。
【０１８３】
合成断片５（ＢＢ５）、Ｐ２合成断片
【０１８４】
【化３４】
2013534917.tif 000036
【０１８５】
工程ａ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−クロロ−プロピオン酸メチルエステル（ＢＢ５−ａ）
Ｎ−Ｂｏｃ−セリンメチルエステル（５０ｇ，０．２２８モル）のジクロロメタン（１７０ｍＬ）溶液へトリフェニルホスフィン（６５．８ｇ，０．２５１モル）及びヘキサクロロエタン（５９．４ｇ，０．２５１モル）のジクロロメタン（８５０ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下に１分量で加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌してから、この反応をＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１５０ｍＬ）で止めた。この有機生成物をジクロロメタン（２ｘ３００ｍＬ）で抽出して、合わせた有機層を塩水（３００ｍＬ）で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。この溶液を減圧下に濃縮してから、Ｅｔ２Ｏ（５００ｍＬ）で摩砕した。濾過と溶媒の蒸発の後で、この粗生成物を、石油エーテル中６〜８％  ＥｔＯＡｃで溶出させるシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（４２ｇ，７８％）を得た。
【０１８６】
工程ｂ）（２−クロロ−１−ヒドロキシメチル−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｂ）
ＢＢ５−ａ（４２ｇ，０．１７７モル）のＥｔＯＨ−ＴＨＦ（９：１）中の撹拌溶液へホウ水素化リチウム（４．３ｇ，０．１９５モル）をアルゴン雰囲気下に０℃で少量ずつ加えた。この反応物を室温で８時間撹拌してから、塩化アンモニウムの飽和溶液（２０ｍＬ）で反応停止させた。生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩水（３００ｍＬ）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、得られた粗生成物を、石油エーテル中１５％  ＥｔＯＡｃで溶出させるシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（２７．５ｇ，７４％）を得た。
【０１８７】
工程ｃ）［２−クロロ−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｃ）
化合物ＢＢ５−ｂ（２７．５ｇ，０．１３１モル）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２７．４ｍＬ，０．１５７モル）のジクロロメタン（３５０ｍＬ）中の撹拌溶液へ（２−クロロメトキシ−エチル）−トリメチル−シラン（２６．１８ｇ，０．１５７モル）をアルゴン雰囲気下に０℃で滴下した。この反応物をそのまま室温へ達せしめて、１８時間撹拌した。この反応混合物を真空下に濃縮してから、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ２００ｍＬ）で抽出して、有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下に蒸発させて、得られた粗生成物を、石油エーテル中５％  ＥｔＯＡｃで溶出させるシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（２５．５ｇ，５７％）を得た。
【０１８８】
工程ｄ）［２−（１−ヒドロキシ−シクロブチル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｄ）
化合物ＢＢ５−ｃ（２ｇ，５．８８ミリモル）のＴＨＦ（１７０ｍＬ）中の撹拌溶液へｎ−ＢｕＬｉ（１０ｍＬ，０．０１６モル、ヘキサン中１．６Ｍ溶液）をアルゴン雰囲気下に−７８℃で滴下した。この撹拌を１５分間続けて、ＬｉＮｐ（１０４ｍＬ，ＴＨＦ中０．４２Ｍ溶液、０．０４４モル）の５分にわたる滴下を続けた。この黒ずんだ溶液を−７８℃で１時間撹拌してから、シクロブタノン（０．８８ｍＬ，１１．７７ミリモル）を滴下した。この反応混合物を−７８℃で１６時間撹拌してから、ＮＨ４Ｃｌの飽和溶液（５０ｍＬ）で反応停止させて、そのまま室温へ温めた。この反応物をエーテル（１００ｍＬ）とＮＨ４Ｃｌの飽和溶液（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離させて、水層をエーテル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて、溶媒を減圧下に蒸発させた。この粗生成物を、ヘプタン：エーテル（３：２）で溶出させるシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（１．５４ｇ，７０％）を得た。
【０１８９】
工程ｅ）［２−（１−フルオロ−シクロブチル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｅ）
ＢＢ５−ｄ（０．５ｇ，１．３３ミリモル）、ＴＨＦ中５０％デオキソフルオール（過剰）、及びピリジン（過剰）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中で混合した。生じる混合物を室温で一晩撹拌した。この反応混合物を１０％クエン酸（水溶液）と飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて、蒸発させた。得られた粗生成物を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（７：１〜２：１）を溶出液として使用するシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（１９２ｍｇ，３８％）を得た。
【０１９０】
工程ｆ）［２−（１−フルオロ−シクロブチル）−１−ヒドロキシメチル−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｆ）
ＢＢ５−ｅ（１９２ｍｇ，０．５１ミリモル）のＭｅＯＨ中０．１Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）溶液を３時間撹拌してから、トリエチルアミン（１ｍＬ）を加えて、この溶液を濃縮した。得られた粗生成物を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）を溶出液として使用するシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、これより表題化合物（６９．３ｍｇ，５５％）を白色の固形物として得た。
【０１９１】
工程ｇ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（１−フルオロ−シクロブチル）−プロピオン酸（ＢＢ５）
ＢＢ５−ｆ（６９ｍｇ，０．２７９ミリモル）とジクロム酸ピリジン（１．１５ｇ，３．０５ミリモル）を乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶かした。５時間後、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）を加えて、生成物をＤＣＭ（３ｘ２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて蒸発させた。この粗製物を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：１）に続いてＥｔＯＨ（１００％）を溶出液として使用するシリカカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。これより表題化合物（２２．３ｍｇ，３１％）を白色の固形物として得た。262.4 [M+H]+。
【０１９２】
合成断片６（ＢＢ６）、Ｐ１α−ヒドロキシアミド
【０１９３】
【化３５】
2013534917.tif 000037
【０１９４】
工程ａ）（１−（２−（（２，４−ジメトキシベンジル）アミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３，３−ジフルオロシクロブチル）カルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ６−ａ）
α−ヒドロキシ酸ＢＢ２（１．５ｇ，５．３ミリモル）と２，４−ジメトキシベンジルアミン（８０９ｍｇ，５．３５ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）及びＤＭＦ（３ｍｌ）に溶かした。ＨＡＴＵ（２．０６６ｇ，５．４３ミリモル）に続いてジイソプロピルエチルアミン（９４８μｌ，５．４ミリモル）を加えて、この混合物を２２℃で一晩撹拌した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈して、０．１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）ｘ２で洗浄してから乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過して濃縮した。ｐ−エーテル／ＥｔＯＡｃ（８：２→６：４）を使用するシリカによって残渣を精製して、これより表題化合物（２．２５ｇ，５．２２ミリモル、収率９８％）を澄明なオイルとして得た。
【０１９５】
工程ｂ）（Ｓ）−２−（１−アミノ−３，３−ジフルオロシクロブチル）−２−ヒドロキシアセトアミド塩酸塩（ＢＢ６）
化合物ＢＢ６−ａ（３４２ｍｇ，０．７９ミリモル）をＴＦＡ：ＣＨ２Ｃｌ２（７５：２５）（３ｍＬ）及び５％トリエチルシラン（１５０μＬ）の溶液に溶かした。この混合物をマイクロ波反応器において１１０℃まで２０分間加熱した。次いで、この混合物を氷／１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）の混合物へ注いで、ＣＨ２Ｃｌ２ｘ３で洗浄し、その後で酸性の水相をロータリーエバポレータで、３５℃で濃縮して、これより表題化合物を塩酸塩として得た。[M+1]+ = 180.8。
【０１９６】
合成断片７（ＢＢ７）、Ｐ１α−ヒドロキシアミド
【０１９７】
【化３６】
2013534917.tif 000038
【０１９８】
（Ｓ）−２−（１−アミノシクロブチル）−２−ヒドロキシアセトアミド（ＢＢ７）
α−ヒドロキシ酸ＢＢ１より、ＢＢ６の工程ａ及びｂに記載の手順に従って、表題化合物を製造した。
【０１９９】
合成断片８、Ｐ１α−ヒドロキシアミド
【０２００】
【化３７】
2013534917.tif 000039
【０２０１】
工程ａ）（１−（シアノ（（トリメチルシリル）オキシ）メチル）シクロペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ８−ａ）
Ｎ−Ｂｏｃ−シクロロイシナール（１．０３５ｇ，４．８５ミリモル）の乾燥ＤＣＭ（２０ＭＬ）溶液へＴＭＳ−ＣＮ（６４５μＬ，４．８５ミリモル）を加えて、この溶液を７２時間撹拌してから、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で反応停止させて、ＤＣＭで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（０〜５０％）でのフラッシュシリカカラムを使用して残渣を精製して、表題化合物（１．３６ｇ）を無色のオイルとして得た。[M+1]+ = 312.8。
【０２０２】
工程ｂ）２−（１−アミノシクロペンチル）−２−ヒドロキシアセトアミド（ＢＢ８）
シアノ化合物ＢＢ８−ａ（４２０．７ｍｇ，１．３４８ミリモル）をギ酸：ＨＣｌ（１：１）（６ｍＬ）の溶液に溶かして、生じる溶液を１６時間撹拌した。アセトニトリルを加えて、この溶液を濃縮して、トルエンと同時蒸発させて、表題のアミンを塩酸塩として得た。[M+1]+ = 158.9。
【０２０３】
合成断片９、Ｐ１α−ヒドロキシアミド
【０２０４】
【化３８】
2013534917.tif 000040
【０２０５】
２−（１−（（Ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロピル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ９）
Ｎ−Ｂｏｃ−１−アミノシクロプロパンカルボン酸（５．０３ｇ，２５．０ミリモル）より、ＢＢ１の製造について記載の手順に従って、表題化合物を２９％の全体収率で製造した。
【実施例】
【０２０６】
実施例Ｃ１
【０２０７】
【化３９】
2013534917.tif 000041
【０２０８】
工程ａ）（１ｒ，３ｒ）−１−（２−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−フルオロシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ１−ａ）
ＢＢ３（２５４ｍｇ，０．９６ミリモル）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液へ炭酸カリウム（１４７．５ｍｇ，１．０６ミリモル）を加えて、ヨウ化メチル（７２μＬ，１．１５ミリモル）の添加を続けた。この反応混合物を室温で２．５時間撹拌してから、ＤＣＭとＮａＨＣＯ３（飽和）水溶液の間で分配した。相を分離させて有機層を水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて濃縮した。MS m/z 277.9 (M+H)+。生成したメチルエステルの粗製残渣をＮＨ３のメタノール中の飽和溶液（１０ｍＬ）に溶かしてから、６０℃で５日間加熱して濃縮して、これより、さらなる精製なしで次の工程に使用し得るほど純粋な表題化合物を得た。MS m/z 262.9 (M+H)+。
【０２０９】
工程ｂ）（Ｓ）−１−（（１ｒ，３Ｓ）−１−（２−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−フルオロシクロブチルアミノ）−４，４−ジメチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ１−ｂ）
Ｂｏｃ−保護化アミンＣ１−ａ（０．４８ミリモル）をＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ，５ｍＬ）で３時間処理し、その後でこの反応混合物を濃縮した。生じるアミン塩酸塩をＢｏｃ−β−ｔＢｕ−Ａｌａ−ＯＨ（１２９．５ｍｇ，０．５３ミリモル）及びＨＡＴＵ（２００ｍｇ，０．５３ミリモル）の無水ＤＭＦ（４ｍＬ）中の冷たい溶液へ０℃で加えて、ＤＩＥＡ（３３５μＬ，１．９２ミリモル）の添加を続けた。この反応混合物を室温で一晩撹拌してから、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／イソヘキサン、０：１〜７：３）による精製によって、表題化合物（０．１３０ｇ，７０％）を得た。MS m/z 390.0 (M+H)+。
【０２１０】
工程ｃ）（Ｓ）−１−（（１ｒ，３Ｓ）−１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）−３−フルオロシクロブチルアミノ）−４，４−ジメチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ１）
α−ヒドロキシアミドＣ１ｂ（０．１８４ｇ，０．４７ミリモル）のＤＣＭ（５ｍｌ）溶液へデス・マーチンペルヨージナン（０．３０１ｇ，０．７１ミリモル）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌して、１０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液とＮａＨＣＯ３（飽和）水溶液で反応停止させた。相を分離させて、有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／イソヘキサン、０：１〜１：０）による精製によって、表題化合物（０．１３０ｇ，６７％）を得た。少量をＲＰ−ＬＣ−ＭＳ（アセトニトリル中０．１％  ＮＨ４ＯＨ−０．１％  ＮＨ４ＯＨ水溶液、９分にわたり４０〜６５％）によってさらに精製した。MS m/z 386.5 (M-H)-。
【０２１１】
実施例Ｃ２〜Ｃ４
下記の表に例示した化合物は、適正なＰ１及びＰ２合成断片を使用して、最終生成物のα−ケトアミドへの酸化を続ける、実施例Ｃ１に記載の手順に類似して製造した。
【０２１２】
【表１】
2013534917.tif 000042
【０２１３】
実施例Ｃ５
【０２１４】
【化４０】
2013534917.tif 000043
【０２１５】
［１−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−フルオロ−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−フルオロ−シクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸エチルエステル（Ｃ５−ａ）
アミンＡ１−ｂ、２−アミノ−Ｎ−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−フルオロ−シクロブチル］−３−（１−フルオロシクロペンチル）−プロピオンアミド（０．２３ミリモル）のＤＭＦ中の撹拌溶液へジイソプロピルエチルアミン（０．０８７ｍＬ，０．５ミリモル）とクロロギ酸エチル（０．０２４ｍＬ，０．２５ミリモル）を加えた。１５分後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とＤＣＭを加えて、有機層を採取して濃縮し、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜１０％）を使用するフラッシュシリカゲルカラムで精製して、これより表題化合物（６２ｍｇ）を得た。[M+1]+ 391.9。
【０２１６】
［１−（１−アミノオキサリル−３−フルオロ−シクロブチルカルバモイル）−２−（１−フルオロ−シクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸エチルエステル（Ｃ５）
固体の［１−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−フルオロ−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−フルオロ−シクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸エチルエステル（６２ｍｇ）へデス・マーチンペルヨージナン（７５ｍｇ，０．１７７ミリモル）のジクロロエタン（５ｍＬ）溶液を加えた。２時間撹拌後、ＮａＨＣＯ３（水溶液）を加えて、層を分離させて有機層を濃縮した。得られた粗生成物を分取用ＲＰ  ＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳで精製して、これより表題化合物（１４ｍｇ）を得た。[M+1] + 389.9。
【０２１７】
実施例Ｃ６
【０２１８】
【化４１】
2013534917.tif 000044
【０２１９】
工程ａ）２−エトキシカルボニルアミノ−３−（１−フルオロシクロペンチル）−プロピオン酸（Ｃ６−ａ）
２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（１−フルオロシクロペンチル）−プロピオン酸（２００ｍｇ，０．７３ミリモル）をジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（３ｍＬ）に２０分間保った。次いで、この混合物を凍結乾燥させて、真空下に２時間放置した。固形の残渣をジオキサン−Ｈ２Ｏ（１：１）（１２ｍＬ）に溶かした。ＮａＨＣＯ３（２．１８ミリモル、３当量）と、次いでジオキサン（１ｍＬ）に溶かしたクロロギ酸エチル（０．８７ミリモル、１．２当量）を加えた。この反応混合物を２０分間撹拌すると、ＬＣ−ＭＳによって完了とみなされた。この混合物をクエン酸（１０％水溶液）によってｐＨ５へ酸性化した。生成物をＤＣＭ（２０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥（ＭｇＳＯ４）させて濃縮した。得られた粗製物をさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０２２０】
工程ｂ）［１−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−フルオロシクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸エチルエステル（Ｃ６−ｂ）
２−エトキシカルボニルアミノ−３−（１−フルオロ−シクロペンチル）−プロピオン酸（５０ｍｇ，０．２ミリモル）のＤＭＦ中の撹拌及び冷却（０℃）溶液へＨＡＴＵ（８４ｍｇ，０．２２ミリモル）とジイソプロピルエチルアミン（０．１４ｍＬ，０．８ミリモル）を加えた。５分後、２−（１−アミノ−シクロブチル）−２−ヒドロキシアセトアミド（２９０ｍｇ，ＢＢ１よりＢｏｃ基の除去によって達成）の粗製ＨＣｌ塩を加えて、温度を周囲温度へ高めた。１時間後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とＤＣＭを加えて、有機層を採取し、濃縮して、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜１０％）を使用するフラッシュシリカカラムで精製して、これより表題化合物（３７ｍｇ）を得た。[M+1]+ 373.8。
【０２２１】
工程ｃ）［１−（１−アミノオキサリル−シクロブチルカルバモイル）−２−（１−フルオロシクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸エチルエステル（Ｃ６）
実施例Ｃ５に記載のように、デス・マーチンペルヨージナンを使用して、α−ヒドロキシアミドＣ６−ｂ（４２ｍｇ）を酸化して、これより表題化合物（１．７ｍｇ）を得た。[M+1]+= 371.9。
【０２２２】
実施例Ｃ７
【０２２３】
【化４２】
2013534917.tif 000045
【０２２４】
（１−（（１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）シクロペンチル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバミン酸（Ｓ）−エチル（Ｃ７）
実施例Ｃ１、工程ｂに記載のように、ＢＢ８をＰ２−合成断片（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）プロパン酸へカップリングさせて、その後で実施例Ｃ５に記載のように、クロロギ酸エチルとの反応によってＰ３部分を付加して、これより表題化合物を得た。[M+1]+= 386.8。
【０２２５】
実施例Ｃ８
【０２２６】
【化４３】
2013534917.tif 000046
【０２２７】
工程ａ）（１−（（１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）−３，３−ジフルオロシクロブチル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバミン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ８）
実施例Ｃ１、工程ｂに記載の方法に従って、アミンＢＢ６をＰ２−合成断片（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）プロパン酸へカップリングさせた。得られたα−ヒドロキシアミド（９２ｍｇ，０．２１ミリモル）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶かして、ＤＭＳＯ（１５０μＬ，２．１ミリモル）に続いてＥＤＣ塩酸塩（２０１ｍｇ，１ミリモル）を加えた。この溶液を１５分間撹拌して、その後でジクロロ酢酸（２０μＬ，０．１５ミリモル）を加えた。この溶液を１６時間撹拌してからＤＣＭで希釈して、ＮａＨＣＯ３水溶液に続いてクエン酸（２％水溶液）で洗浄した。有機層を分離させて濃縮乾固させて、残渣を、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜３％）でのフラッシュシリカカラムを使用して精製して、分取用ＬＣ−ＭＳによってさらに精製して、これより表題化合物（３ｍｇ）を得た。[M+1]+ = 436.18。
【０２２８】
表Ｃ２中の化合物は、適正な合成断片を使用して、実施例Ｃ１に記載の手順に従って製造した。
【０２２９】
【表２】
2013534917.tif 000047
【０２３０】
化合物Ｃ１４は、適正な合成断片を使用して、実施例Ｃ５に記載の手順に従って製造した。
【０２３１】
【表３】
2013534917.tif 000048
【０２３２】
実施例Ａ１
【０２３３】
【化４４】
2013534917.tif 000049
【０２３４】
工程ａ）（（Ｓ）−１−（（（１ｒ，３Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−フルオロシクロブチル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ａ１−ａ）
実施例Ｃ１、工程ｂに記載の方法に従って、Ｂｏｃ−保護化ヒドロキシアミンＣ１−ａより、「Ｐ２−合成断片」（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１−フルオロシクロペンチル）プロパン酸との反応によって、表題化合物を製造した。
【０２３５】
工程ｂ）２−アミノ−Ｎ−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−フルオロ−シクロブチル］−３−（１−フルオロ−シクロペンチル）−プロピオンアミド（Ａ１−ｂ）
２０％  ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９．５：０．２５：０．２５，４ｍＬ）を含有するジクロロメタンの溶液にＢｏｃ−保護化アミンＡ１−ａ（０．２２３ミリモル、９３ｍｇ）を３０分間保ってから、この溶液を濃縮乾固させた。ＤＣＥとジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（１ｍＬ）を加えて、濃縮乾固を続けて、これより表題化合物を塩酸塩として得た。[M+1]+ = 320.1。
【０２３６】
工程ｃ）Ｎ−［１−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−３−フルオロ−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−フルオロ−シクロペンチル）−エチル］−３−イミダゾール−１−イル−ベンズアミド（Ａ１−ｃ）
「Ｐ３−酸」３−イミダゾール−１−イル−安息香酸（４７ｍｇ，０．２５ミリモル）のＤＭＦ（４ｍＬ）中の撹拌溶液へＨＡＴＵ（９５ｍｇ，０．２５ミリモル）とジイソプロピルアミン（０．１４７ｍＬ，１ミリモル）を加えた。２分後、アミンＡ１−ｂ（０．２２ミリモル）を加えた。２時間後、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（３ｍＬ）を加えて、この混合物をＤＣＭ（５ｍＬ）で抽出した。有機相を濃縮し、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜１０％）でのフラッシュシリカカラムを使用して残渣を精製して、これより表題化合物（１０ｍｇ）を得た。[M+1]+ = 489.9。
【０２３７】
工程ｄ）Ｎ−［１−（１−アミノオキサリル−３−フルオロ−シクロブチルカルバモイル）−２−（１−フルオロ−シクロペンチル）−エチル］−３−イミダゾール−１−イル−ベンズアミド（Ａ１）
α−ヒドロキシアミドＡ１−ｃ（１０ｍｇ）へデス・マーチンペルヨージナンのジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を加えた。２時間撹拌後、ＮａＨＣＯ３（水溶液）を加え、層を分離させて、有機層を濃縮した。得られた粗生成物を分取用ＲＰ  ＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳで精製して、これより表題化合物（１．５ｍｇ）を得た。[M+1] + 487.8。
【０２３８】
実施例Ａ２
【０２３９】
【化４５】
2013534917.tif 000050
【０２４０】
工程ａ）シクロプロパンカルボン酸［１−［１−（カルバモイル−ヒドロキシメチル）−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−メチル−シクロペンチル）−エチル］−アミド（Ａ２−ａ）
２０％  ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９．５：０．２５：０．２５）（４ｍＬ）を含有するジクロロメタンにＢｏｃ−保護化アミンＣ４−ｂ（４０ｍｇ，０．１ミリモル）を２時間保って、その後でこの溶液を蒸発させて、残渣を真空下に２時間置いた。得られた遊離アミンをＤＭＦ（４ｍＬ）に溶かして、ジイソプロピルエチルアミン（０．０５２ｍＬ，０．３ミリモル）を撹拌しながら加えて、塩化シクロプロパンカルボニル（０．０１２ｍＬ，０．１２ミリモル）の添加を続けた。ＮａＨＣＯ３水溶液を加えて、生成物をジクロロメタンで抽出した。ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜１０％）でのフラッシュシリカカラムによって表題化合物（３０ｍｇ）を得た。[M+1]+ = 365.9。
【０２４１】
工程ｂ）シクロプロパンカルボン酸［１−（１−アミノオキサリル−シクロブチルカルバモイル）−２−（１−メチル−シクロペンチル）−エチル］−アミド（Ａ２）
上記の実施例Ｃ５に記載のように、デス・マーチンペルヨージナンを使用して、α−ヒドロキシアミドＡ２−ａ（３０ｍｇ，０．０８ミリモル）を酸化した。得られた粗生成物を分取用ＲＰ  ＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳで精製して、これより表題化合物（５．７ｍｇ）を得た。[M+1]+ = 363.9。
【０２４２】
実施例Ａ３〜Ａ４
下記の表中の化合物Ａ３及びＡ４は、適正な酸クロリドを使用して、実施例Ａ２に概説した手順に従って製造した。
【０２４３】
【表４】
2013534917.tif 000051
【０２４４】
下記の表中の化合物は、適正な「Ｐ３−酸」Ｒ４Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、「Ｐ１及びＰ２−合成断片」を使用して、実施例Ａ１に概説した手順に従って製造した。
【０２４５】
【表５−１】
2013534917.tif 000052
【０２４６】
【表５−２】
2013534917.tif 000053
【０２４７】
下記の表Ａ３中の化合物は、適正な「Ｐ３−酸」Ｒ４Ｃ（＝Ｏ）ＯＨと「Ｐ１及びＰ２−合成」断片を使用して、最後にデス・マーチンペルヨージナンを使用して酸化し、実施例Ａ１に記載の手順に従って製造した。
【０２４８】
【表６】
2013534917.tif 000054
【０２４９】
実施例Ａ４２
【０２５０】
【化４６】
2013534917.tif 000055
【０２５１】
工程ａ）２−（１−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）プロパンアミド）シクロプロピル）−２−ヒドロキシ酢酸メチル（Ａ４２−ａ）
ヒドロキシル酸ＢＢ８（１００ｍｇ，０．４３ミリモル、１当量）をメタノール（１０ｍＬ）に溶かして、黄色の色が残るまでＴＳＭ−ＣＨ２Ｎ２（ヘキサン中２Ｍ）を加えると、ＴＬＣは、出発材料が残っていないことを示した。溶媒を真空下に除去した。残る固形物をメタノール：塩化酢酸（９：１）に溶かして、生じる混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下に除去した。残渣をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶かして、２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸（１当量）とジイソプロピルエチルアミン（４当量）を加えた。その後、ＨＡＴＵ（１当量）を加えて、生じる反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下に除去して、粗生成物を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（３：３〜１：１）を溶出液として使用するシリカカラムで精製して、これより表題化合物（３８％）を得た。
【０２５２】
工程ｂ）Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（１−（２−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）シクロブチル）アミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）−２，２−ジフルオロシクロプロパンカルボキサミド（Ａ４２−ｂ）
２−（１−（（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１メチルシクロペンチル）−プロパンアミド）シクロプロピル）−２−ヒドロキシ酢酸メチルをメタノール：塩化酢酸（９：１）に溶かして、生じる混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空下に除去した。残渣をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶かして、２，２−ジフルオロシクロプロパン−カルボン酸（１当量）とジイソプロピルエチルアミン（４当量）を加えた。その後ＨＡＴＵ（１当量）を加えて、生じる反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下に除去して、粗生成物をＥｔＯＡｃに溶かして、ＮａＨＣＯ３（水溶液）、ＨＣｌ（１．２Ｍ）、及びＨ２Ｏで洗浄した。有機相を真空下に濃縮して、残渣をメタノールに溶かした。この混合物を０℃へ冷やして、この反応混合物にＮＨ３を泡立てて入れた。溶媒を蒸発させて、この粗生成物を次の工程に使用した。
【０２５３】
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）シクロプロピル）アミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）−２，２−ジフルオロシクロプロパンカルボキサミド
工程ｃ）（Ｓ）−Ｎ−（１−（（１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）シクロブチル）アミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）−１−オキソプロパン−２−イル）シクロプロパンカルボキサミド（Ａ４２−１及びＡ４２−２）
固体のα−ヒドロキシアミド（Ａ４２−ｂ）へデス・マーチンペルヨージナン（１．５当量）のジクロロエタン（４ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を１時間撹拌してからＮａＨＣＯ３（水溶液）を加えた。有機層を分離させて濃縮した。分取用ＲＰ  ＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳでの精製によって、表題化合物を２種の分離したジアステレオマーとして得た。[M+1]+ 386.3 及び [M+1]+386.3。
【０２５４】
以下の化合物は、適正な合成断片を使用して、実施例Ａ４２に記載の方法に従って製造した。
【０２５５】
【表７】
2013534917.tif 000056
【０２５６】
下記の表中の化合物は、適正な「Ｐ３−酸」Ｒ４Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、「Ｐ１及びＰ２−合成断片」を使用して、実施例Ａ１で概説した手順に従って製造した。
【０２５７】
【表８】
2013534917.tif 000057
【０２５８】
実施例Ｕ１
【０２５９】
【化４７】
2013534917.tif 000058
【０２６０】
（Ｓ）−Ｎ−（１−（２−アミノ−２−オキソアセチル）シクロブチル）−２−（３−エチルウレイド）−３−（１−メチルシクロペンチル）−プロパンアミド（Ｕ１）
実施例Ｃ１、工程ｂに記載の方法に従って、アミンＢＢ７を「Ｐ２−合成断片」（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）プロパン酸へカップリングさせた。得られたアミン（１６０ｍｇ，０．４ミリモル）を、２０％  ＴＦＡ／水／トリイソプロピルシラン（９．５：０．２５：０．２５）（８ｍＬ）を含有するジクロロメタン中に２時間保ち、その後でこの溶液を蒸発させて、残渣を真空下に２時間置いた。得られた遊離アミンをＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶かして、ジイソプロピルエチルアミン（０．２１ｍＬ，１．２ミリモル）を撹拌しながら加えて、エチルイソシアネート（０．４ミリモル、０．０３２ｍＬ）の添加を続けた。ＮａＨＣＯ３水溶液を加えて、生成物をジクロロメタンで抽出した。ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（０〜１０％）でのフラッシュシリカカラムによって残渣を得て、これをデス・マーチンペルヨージナン（２００ｍｇ，０．４７ミリモル）のジクロロエタン溶液へ加えた。２時間撹拌後、この溶液をＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、濃縮乾固させて分取用ＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳで精製して、これより２４ｍｇの表題化合物を得た。[M+1]+ = 367.1。
【０２６１】
生物学的実施例
カテプシンＫタンパク分解触媒活性の定量
ＰＤＢに記載されるように、ヒトの組換え酵素を使用して、カテプシンＫについての簡便なアッセイを行う。
【０２６２】
ＩＤ  ＢＣ０１６０５８標準品；ｍＲＮＡ；ＨＵＭ；１６９９ＢＰ。
ＤＥ  ヒトカテプシンＫ（濃化異骨症）、ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡクローンＭＧＣ：２３１０７）。
【０２６３】
ＲＸ  ＭＥＤＬＩＮＥ；ＲＸ  ＰＵＢＭＥＤ；１２４７７９３２。
ＤＲ  ＲＺＰＤ；ＩＲＡＬｐ９６２Ｇ１２３４。
ＤＲ  ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ；Ｐ４３２３５；
組換えカテプシンＫは、大腸菌、ピキア、及びバキュロウイルスの系が含まれる、様々な市販の発現系において発現させることができる。この精製された酵素は、慣用法によるプロ配列の除去によって活性化される。
【０２６４】
反応速度定数の定量のための標準アッセイ条件では、発蛍光ペプチド基質、典型的には、Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを使用して、１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び１０ｍＭ  ２−メルカプトエタノールを含有する１００ｍＭ  Ｍｅｓ／トリス（ｐＨ７．０）、又は１００ｍＭ  リン酸Ｎａ塩、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  ＰＥＧ４０００（ｐＨ６．５）、又は５ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２０ｍＭシステインを含有する１００ｍＭ  酢酸Ｎａ塩（ｐＨ５．５）のいずれかで定量して、いずれの場合も１Ｍ  ＤＴＴを安定化剤として含んでもよい。使用した酵素濃度は、５ｎＭであった。ストック基質溶液は、ＤＭＳＯ中１０ｍＭで調製した。スクリーニングを６０μＭの一定基質濃度で行って、綿密な反応速度試験は、２５０μＭからの基質の倍々希釈で行った。アッセイ中の全ＤＭＳＯ濃度は、３％未満に保った。すべてのアッセイを周囲温度で実施した。生成物の蛍光（３９０ｎｍで励起、４６０ｎｍで放射）を Labsystems Fluoroskan Ascent 蛍光プレートリーダーでモニタリングした。ＡＭＣ産物の産生から１５分にわたり、産物の進行曲線を作成した。
【０２６５】
カテプシンＳ  Ｋｉ定量
本アッセイでは、バキュロウイルス発現性のヒトカテプシンＳと Bachem より入手可能なｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ蛍光基質を３８４ウェルフォーマットにおいて使用して、ここでは７種の試験化合物を、既知のカテプシンＳ阻害剤比較薬を含んでなる陽性対照と並行して試験することができる。
【０２６６】
基質の希釈
２８０μｌ／ウェルの１２．５％  ＤＭＳＯを９６ディープウェル・ポリプロピレンプレートの２列のＢ〜Ｈ行へ加える。７０μｌ／ウェルの基質をＡ行へ加える。２ｘ２５０μｌ／ウェルのアッセイ緩衝液（１００ｍＭ  リン酸Ｎａ塩、１００ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ６．５）をＡ行へ加え、混合し、プレートの下方へＨ行まで倍々希釈する。
【０２６７】
阻害剤の希釈
９６ウェルのＶ字底ポリプロピレンプレートの４行の２〜５及び７〜１２列へ１００μｌ／ウェルのアッセイ緩衝液を加える。１及び６列へ２００μｌ／ウェルのアッセイ緩衝液を加える。
【０２６８】
最上行の第１列へＤＭＳＯで調製した第一の試験化合物を、典型的には最初に定量するＫｉ概数の１０〜３０倍を提供する容量で加える。このＫｉ概数は、９６ウェルＭｉｃｒｏｆｌｕｏｒＴＭプレートのＢ〜Ｈ行へ１ｍＭ  ｂｏｃ−ＶＬＫ−ＡＭＣ（アッセイ緩衝液へ希釈した、ＤＭＳＯ中１０ｍＭストックの１／１０希釈液）の１０μｌ／ウェルを分配して、Ａ行へ２０μｌ／ウェルを分配する、予備試行より計算する。Ａ行、１〜１０列の別々のウェルへ各１０ｍＭ試験化合物の２μｌを加える。１ｍＭ  ＤＴＴ及び２ｎＭカテプシンＳを含有するアッセイ緩衝液の９０μｌをＢ〜Ｈ行の各ウェルへ加え、その１８０μｌをＡ行へ加える。マルチチャネルピペットを使用してＡ行を混合して、Ｇ行まで倍々希釈する。Ｈ行を混合して、蛍光分光光度計で読み取る。この読取り値は、Ｓ＝１００μＭ、及びＫＭ＝１００μＭと設定した競合阻害式へ適合したＰｒｉｓｍデータであり、１００μＭの最大値までのＫｉの推定値が得られる。
【０２６９】
第二の試験化合物を最上行の第６列へ加え、第三の試験化合物を第２行の第１列へ加える、等。１μｌの比較薬を最下行の第６列へ加える。第１列を混合して、第５列まで倍々希釈する。第６列を混合して、第１０列まで倍々希釈する。
【０２７０】
５ｘ１０μｌへ設定した８チャンネルのマルチステッピング（multistepping）ピペットを使用して、１０μｌ／ウェルの基質を３８４ウェルアッセイプレートへ分配する。基質希釈プレートの第１列を、Ａ行より始まるアッセイプレートのすべての列へ分配する。マルチチャネルピペットの先端間隔により、交互の行が正確に省略される。第２列を、Ｂ行より始まるすべての列へ分配する。
【０２７１】
４ｘ１０μｌへ設定した１２チャンネルのマルチステッピングピペットを使用して、１０μｌ／ウェルの阻害剤を３８４ウェルアッセイプレートへ分配する。阻害剤希釈プレートの第１行を、Ａ１より始まるアッセイプレートの交互の行へ分配する。マルチチャネルピペットの先端間隔により、交互の列が正確に省略される。同様に、第２、第３、及び第４行をそれぞれＡ２、Ｂ１、及びＢ２より始まる交互の行及び列へ分配する。
【０２７２】
２０μＬのアッセイ緩衝液と２０μｌの１Ｍ  ＤＴＴを混合する。２ｎＭの最終濃度を得るのに十分なカテプシンＳを加える。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ３８４のような分配器を使用して、アッセイプレートの全ウェルへ３０μｌ／ウェルを加えて、Ａｓｃｅｎｔのような蛍光分光光度計で読み取る。
【０２７３】
蛍光読取り値（それぞれ３９０ｎｍ及び４６０ｎｍの波長で励起及び放射、バンド・パスフィルターを使用して設定）は、蛍光基質の酵素切断の程度を反映して、阻害剤があるにもかかわらず、各ウェルに適合した線形速度である。
【０２７４】
各阻害剤についてすべてのウェルでの適合比率を、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ  ２０００を使用して競合阻害式へ適合させて、Ｖ、Ｋｍ、及びＫｉの値を定量する。
カテプシンＬ  Ｋｉ
カテプシンＬのＫｉの定量には、上記の手順を以下の修正とともに使用する。
【０２７５】
この酵素は、市販（例えば、Calbiochem）のヒトカテプシンＬである。基質は、Bachem より入手可能なＨ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣである。アッセイ緩衝液は、１００ｍＭ酢酸ナトリウム、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ５．５）である。ＤＭＳＯストック（１００％  ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）をアッセイ緩衝液で１０％へ希釈する。酵素は、アッセイ緩衝液＋１ｍＭジチオスレイトール中５ｎＭ濃度で使用直前に調製する。１００％  ＤＭＳＯにおいて作製した１０ｍＭ阻害剤の２μｌをＡ行へ分配する。５０μＭの基質（＝アッセイ緩衝液で希釈した、ＤＭＳＯ中１０ｍＭストックの１／２００希釈液）の１０μｌを調製する。
【０２７６】
阻害試験
上記のアッセイを可変濃度の試験化合物とともに使用して、潜在的な阻害剤をスクリーニングする。基質及び阻害剤の緩衝化溶液への酵素の添加によって反応を開始した。式１：
【０２７７】
【化４８】
2013534917.tif 000059
【０２７８】
［式中、ｖ０は反応速度であり、Ｖは最大速度であり、Ｓは、ミカエリス定数ＫＭでの基質濃度であり、Ｉは阻害剤の濃度である］に従って、Ｋｉ値を計算した。
本発明の化合物の選択物によって明示されるカテプシンＳ、カテプシンＫ、及びカテプシンＬの阻害をＫｉ値として表して、表１に提示する。
【０２７９】
【表９】
2013534917.tif 000060
【０２８０】
このように、式Ｉの化合物は、カテプシンＳの強力な阻害剤であるが、密接に関連したカテプシンＫ及びＬに優って選択的である。
透過性
本実験は、ヒト胃腸管の細胞を通した阻害剤の輸送を測定する。本アッセイは、継代数が４０と６０の間にあるよく知られたＣａｃｏ−２細胞を使用する。
【０２８１】
頂端側（apical）から側底側（basolateral）への輸送
一般に、各化合物を２〜４のウェルで試験する。側底側ウェルと頂端側ウェルは、それぞれ１．５ｍＬと０．４ｍＬの輸送緩衝液（ＴＢ）を含有して、被験物質の標準濃度は、１０μＭである。さらに、すべての試験溶液及び緩衝液は、１％  ＤＭＳＯを含有する。実験に先立って、輸送プレートを、１０％の血清を含有する培養基で３０分間プレコートして、プラスチック材料への非特異的な結合を回避する。フィルター支持体上で２１〜２８日の培養後、その細胞は、透過性実験への準備ができている。
【０２８２】
輸送プレート番号１は、それぞれ４ウェルの３行を含む。行１を「洗浄」、行２を「３０分」、そして行３を「６０分」と表示する。輸送プレート番号２は、４ウェルの３行を含み、行４を「９０分」、行５を「１２０分」と表示して、残る行は、割り当てない。
【０２８３】
頂端側ウェルからの培養基を除去して、行１〜行５において１．５ｍＬの輸送緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４）ですでに調製した、インサートのない２つのプレートのうち輸送プレート（プレート番号１）中の「洗浄」行（行１）へインサートを移す。Ａ→Ｂのスクリーニングでは、側底側ウェル中のＴＢは、１％ウシ血清アルブミンも含有する。
【０２８４】
このインサートへ０．５ｍＬの輸送緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭＭＥＳ，ｐＨ６．５）を加えて、ポリミクスシェーカー中に３７℃で３０分間、細胞単層を輸送緩衝液系に平衡化させる。この緩衝液系へ平衡化させた後で、各ウェルにおいて、ＥＶＯＭチョップスティック装置によって経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）値を測定する。ＴＥＥＲ値は、各ウェルで通常４００〜１０００Ωである（使用する継代数に依存する）。
【０２８５】
頂端側から輸送緩衝液（ＴＢ，ｐＨ６．５）を除去し、インサートを「３０分」行（行２）へ移して、試験物質が含まれる新鮮な４２５μＬ  ＴＢ（ｐＨ６．５）を頂端側（ドナー）ウェルへ加える。ポリマーシェーカーにおいて、３７℃で、ほぼ１５０〜３００ｒｐｍの低い振とう速度でプレートをインキュベートする。
【０２８６】
行２での３０分のインキュベーションの後で、新たに予熱した側底側（レシーバー）ウェルへインサートを３０分ごとに移動させる；行３（６０分）、行４（９０分）、及び行５（１２０分）。
【０２８７】
約２分後と実験の終了時に、頂端側溶液より２５μＬの試料を取り出す。これらの試料は、実験の開始から終了までのドナー試料を表す。
それぞれの予定された時点で側底側（レシーバー）ウェルより３００μＬを取り出して、実験の終了時にＴＥＥＲのポスト値を測定する。すべての採取試料へアセトニトリルを加えて、試料中５０％の最終濃度とする。採取試料は、ＨＰＬＣ又はＬＣ−ＭＳによる分析まで、−２０℃で保管する。
【０２８８】
側底側から頂端側への輸送
一般に、各化合物を２〜４のウェルで試験する。側底側ウェルと頂端側ウェルは、それぞれ１．５５ｍＬと０．４ｍＬのＴＢを含有して、被験物質の標準濃度は、１０μＭである。さらに、すべての試験溶液及び緩衝液は、１％  ＤＭＳＯを含有する。実験に先立って、輸送プレートを、１０％の血清を含有する培養基で３０分間プレコートして、プラスチック材料への非特異的な結合を回避する。
【０２８９】
フィルター支持体上で２１〜２８日の培養後、その細胞は、透過性実験への準備ができている。頂端側ウェルより培養基を除去して、インサートのない新しいプレート（輸送プレート）中の「洗浄」行（行１）へインサートを移す。
【０２９０】
この輸送プレートは、４ウェルの３行を含む。行１を「洗浄」と表示して、行３を「実験行」と表示する。輸送プレートは、「洗浄」行１において１．５ｍＬのＴＢ（ｐＨ７．４）で、そして「実験行」３（ドナー側）において、試験化合物が含まれる、１．５５ｍＬのＴＢ（ｐＨ７．４）ですでに調製した。
【０２９１】
行１中のインサートへ０．５ｍＬの輸送緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭ  ＭＥＳ，ｐＨ６．５）を加えて、ポリミクスシェーカー中に３７℃で３０分間、細胞単層を輸送緩衝液系に平衡化させる。この緩衝液系へ平衡化させた後で、各ウェルにおいて、ＥＶＯＭチョップスティック装置によってＴＥＥＲ値を測定する。
【０２９２】
頂端側から輸送緩衝液（ＴＢ，ｐＨ６．５）を除去し、インサートを行３へ移して、このインサートへ４００μＬの新鮮なＴＢ（ｐＨ６．５）を加える。３０分後、頂端側（レシーバー）ウェルより２５０μＬを回収して、新鮮な輸送緩衝液に置き換える。その後、１２０分での実験の終了時まで、３０分ごとに２５０μＬの試料を回収して、新鮮な輸送緩衝液に置き換えて、最後に、ＴＥＥＲのポスト値を測定する。約２分後と実験の終了時に、側底側（ドナー）コンパートメントより２５μＬの試料を取り出す。これらの試料は、実験の開始から終了までのドナー試料を表す。
【０２９３】
すべての採取試料へアセトニトリルを加えて、試料中５０％の最終濃度とする。採取試料は、ＨＰＬＣ又はＬＣ−ＭＳによる分析まで、−２０℃で保管する。
計算
時間に対する累積吸収率ＦＡｃｕｍの決定。ＦＡｃｕｍは：
【０２９４】
【化４９】
2013534917.tif 000061
【０２９５】
［式中、ＣＲｉは、間隔ｉの終了時でのレシーバー濃度であって、ＣＤｉは、間隔ｉの開始時でのドナー濃度である］より計算される。直線関係が得られるはずである。
透過係数（Ｐａｐｐ，ｃｍ／ｓ）の決定は：
【０２９６】
【化５０】
2013534917.tif 000062
【０２９７】
［式中、ｋは、時間（分）の関数としての累積吸収率（ＦＡｃｕｍ）の線形回帰によって得られる傾きとして定義される輸送速度（分−１）であり、ＶＲは、レシーバーチャンバ中の容積（ｍＬ）であって、Ａは、フィルターの面積（ｃｍ２）である］より計算される。
【０２９８】
参照化合物
【０２９９】
【表１０】
2013534917.tif 000063
【０３００】
胃腸組織を介したより高い透過性は、より高い用量で投与される、より透過性が低い化合物に対して、より少ない用量の使用で同様の曝露レベルを達成することが可能になる点で有利である。低用量は、長引いた時間帯で服用される薬物においてきわめて重要なパラメータである、１日用量の商品原価を最小化する点で有利である。
【０３０１】
特許及び特許出願が含まれる、本出願において参照したすべての参考文献は、可能な限り完全な程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書と以下に続く特許請求項を通して、その内容が他のことを求めなければ、「含む（comprise）」という単語と「含む（comprises）」及び「含んでなる（comprising）」というような変化形には、述べられる整数、ステップ、整数の群、又はステップの群の包含を含意するが、必ずしも他のあらゆる整数、ステップ、整数の群、又はステップの群の排除を含意しないと理解されたい。
【０３０２】
本記載と特許請求項が一部を形成する本出願は、あらゆる後続の出願に関する優先性の基礎として使用され得る。このような後続出願の特許請求項は、本明細書に記載のあらゆる特徴又は特徴の組合せへ指向される可能性がある。それらは、生成物、組成物、方法、又は使用の特許請求項の形態をとる可能性があり、例として、そして無制限に、以下の特許請求項が含まれる可能性がある。
【国際調査報告】
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2013534917.tif 000068
2013534917.tif 000069
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