(57)【要約】  細胞におけるｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３の量とは独立し、細胞におけるｈＣＥ−１の量に比例して細胞内イメージングシグナルを作り出す、細胞のための造影剤であって、上記造影剤は、（ａ）造影剤及び（ｂ）アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルの共有結合性の複合体であり、ここで、（ａ）は（ｂ）に直接的に結合しているか、或いは（ａ）は（ｂ）にリンカーラジカルにより間接的に結合し、上記の直接的な結合又は間接的な結合は（ｂ）のアミノ基を介し、当該アミノ基は、カルボニル基に直接結合せず、且つ上記アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステル部分は、細胞内酵素ｈＣＥ−２又はｈＣＥ−３に比べて、細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素ｈＣＥ−１により、対応するカルボン酸部分に選択的に加水分解可能である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞におけるｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３の量とは無関係に独立し、細胞におけるｈＣＥ−１の量に比例して細胞内イメージングシグナルを作り出す、細胞のための造影剤であって、
上記造影剤は、（ａ）造影剤及び（ｂ）アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルの共有結合性の複合体であり、
（ａ）は（ｂ）に直接的に結合しているか、或いは（ａ）は（ｂ）にリンカーラジカルにより間接的に結合し、上記の直接的な結合又は間接的な結合は（ｂ）のアミノ基を介し、
当該アミノ基は、カルボニル基に直接結合せず、且つ
上記アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステル部分は、細胞内酵素ｈＣＥ−２又はｈＣＥ−３に比べて、細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素ｈＣＥ−１により対応するカルボン酸部分に選択的に加水分解可能である、造影剤。
【請求項２】
アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルが、式（ＩＡ）又は式（ＩＢ）：
【化１】
2013545795.tif 000039
［式中、
Ｒ１は、１以上の細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解可能なエステル基であり；
Ｒ２は、天然又は非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ２であり；
Ｙは、結合、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ４−、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ４−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−又は−ＮＲ４−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ４は、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
Ｌは、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して、０又は１であり、
Ｑは、（ｉ）置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカル、又は（ｉｉ）ｍ及びｐが同時に０の場合、式−Ｘ２−Ｑ１−又は式−Ｑ１−Ｘ２−の二価のラジカル（式中、Ｘ２は、−Ｏ−、−Ｓ−又はＮＲＡ−（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）であり、且つＱ１は、置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカルである。）であり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、置換されていてもよい二価のＣ３−Ｃ７シクロアルキルラジカル、又は置換されていてもよい直鎖又は分枝鎖の、Ｃ１−Ｃ６アルキレンラジカル、Ｃ２−Ｃ６アルケニレンラジカル又はＣ２−Ｃ６アルキニレンラジカル（それらは、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）又はアミノ（−ＮＲＡ−）（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）のリンクを含んでいてもよく、或いは末端に有していてもよい。）である。）であり；
Ｘは、結合、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５−、−ＮＲ４Ｓ（＝Ｏ）２−又は−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−（式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
ｚは、０又は１であり；且つ
環Ｄは、置換されていてもよい３ないし７員のヘテロシクリル基であり、ここで、Ｒ１は、示された環窒素に隣接している環炭素に結合しており；且つ環Ｄは、フェニル基、５ないし６員のヘテロアリール基、Ｃ３−７カルボシクリル基又は５ないし６員のヘテロシクリル基を含む第二の環と縮合していてもよく、環Ｄが、フェニル基、５ないし６員のヘテロアリール基、Ｃ３−７カルボシクリル基又は５ないし６員のヘテロシクリル基を含む第二の環と縮合している場合、リンカー基−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚが、環Ｄ又は当該第二の環の環原子の基である。］
のラジカルによって造影剤に間接的に結合している、請求項１に記載の造影剤。
【請求項３】
Ｒ３がＨである、請求項２に記載の造影剤。
【請求項４】
アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルが、式（ＩＡ）のラジカルによって造影剤に間接的に結合しており、ここで、
Ｒ１が、式−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１４のエステル基（式中、Ｒ１４は、
Ｒ８Ｒ９Ｒ１０Ｃ−（式中、
（ｉ）  Ｒ８が、水素、置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−又は置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ３）アルケニル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−（式中、ａ及びｂは、独立して、０又は１であり、且つＺ１は、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＲ１１−（式中、Ｒ１１は、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。）である。）であり；且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；
（ｉｉ）  Ｒ８が、水素又は置換されていてもよいＲ１２Ｒ１３Ｎ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（式中、Ｒ１２は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、且つＲ１３は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであるか；或いはＲ１２及びＲ１３は、それらが結合する窒素とともに、置換されていてもよい、単環式の５又は６個の環原子のヘテロ環又は二環式の８ないし１０個の環原子のヘテロ環系を形成している。）であり、且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；或いは
（ｉｉｉ）  Ｒ８及びＲ９が、それらが結合する炭素とともに、置換されていてもよい、単環式若しくは架橋単環式の３ないし７個の環原子の炭素環又は二環式若しくは架橋単環式の８ないし１０個の環原子の炭素環系を形成し、且つＲ１０が水素であり、
ただし、上記の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の場合の「アルキル」はフルオロアルキルを含む。）である。）であり；
Ｒ２が、
Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、２−、３−又は４−ヒドロキシフェニル基、２−、３−又は４−メトキシフェニル基、２−、３−又は４−ピリジルメチル基、ベンジル基、フェニルエチル基、２−、３−又は４−ヒドロキシベンジル基、２−、３−又は４−ベンジルオキシベンジル基、２−、３−又は４−Ｃ１−Ｃ６アルコキシベンジル基及びベンジルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−基；
任意の官能基が保護されていてもよい天然のαアミノ酸の特徴的な基；
基−［Ａｌｋ］ｎＲ６（式中、Ａｌｋは、１以上の−Ｏ−原子、−Ｓ−原子又は−Ｎ（Ｒ７）−基［式中、Ｒ７は、水素原子又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。］が割り込んでいてもよい、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基であり、ｎは０又は１であり、且つＲ６は、置換されていてもよいシクロアルキル基又は置換されていてもよいシクロアルケニル基である。）；
式−ＯＣＨ２ＣＯＲ８の基でフェニル環が置換されたベンジル基（式中、Ｒ８は、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）アミノ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ酸の残基、又はその酸ハロゲン化物、そのエステル若しくはそのアミド誘導体の残基であり、当該残基は、アミド結合を介して結合し、当該アミノ酸は、グリシン、α又はβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる。）；
ヘテロ環（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（ここで、ヘテロ環が、置換されていないか、或いはハロ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、トリフルオロメチル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、メルカプト、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルフェニルメチルでモノ−又はジ−置換されている。）；及び
基−ＣＲａＲｂＲｃ（式中：
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それぞれ独立して水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであるか；或いは
Ｒｃが、水素であり、且つＲａ及びＲｂが、独立して、フェニル又はヘテロアリール（例、ピリジル）であるか；或いは
Ｒｃが、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり、且つＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、３ないし８員のシクロアルキル環又は５ないし６員のヘテロ環を形成するか；或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それらが結合する炭素原子とともに、三環式の環（例えばアダマンチル）を形成するか；或いは
Ｒａ及びＲｂが、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又は以下でＲｃとして定義された水素以外の基であるか、或いはＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、シクロアルキル環又はヘテロ環を形成し、且つＲｃが、水素、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ２（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル又は基−Ｑ−Ｗ（式中、Ｑは、結合又は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−又は−ＳＯ２−であり、且つＷは、フェニル基、フェニルアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニルアルキル基、ヘテロアリール基又はヘテロアリールアルキル基であり、ここで、基Ｗは、ヒドロキシル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。）である。）から選ばれ；
Ｒ３が、Ｈ又はＲ２であり；
Ｙが、結合であり；
Ｌが、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐが、独立して０又は１であり、
Ｑが、１，４−フェニレンであり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２が、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２−、ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２、−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＷＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−又は−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）であるか、或いはＡｌｋ１及びＡｌｋ２が、独立して、シクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル又はシクロヘキシルラジカルであってもよい。）であり；
Ｘが、結合、−Ｏ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；且つ
ｚが、０又は１である、請求項２又は３に記載の造影剤。
【請求項５】
アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルが、式（ＩＡ）のラジカルによって造影剤に間接的に結合しており、ここで、
Ｒ１が、エステル基ＣＯＯＲ１４（式中、Ｒ１４が、メチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチルから選ばれる。）であり；
Ｒ２が、ベンジル、フェニル、シクロヘキシルメチル、ピリジン−３−イルメチル、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ベンジルチオ−１−メチルエチル、１−メチルチオ−１−メチルエチル、１−メルカプト−１−メチルエチル、フェニルエチルから選ばれ；
Ｒ３が、Ｈ又はＲ２であり；
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚが、−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｖＯ−、（ＣＨ２）ｗＯ−、
【化２】
2013545795.tif 000040
（式中、ｖは、１、２、３又は４であり、且つｗは、１、２又は３である。）、並びに−（ＣＨ２）ｘ−Ｈｅｔ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（Ｈｅｔ１）ｙｙ−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ２）ｚ−及び−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｐｈは、１，４−フェニレン基であり、Ｈｅｔ１は、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｈｅｔ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり、ｘは、０、１又は２であり、ｙは、０又は１であり、且つｙｙは、０又は１である。）から選ばれる、
請求項２ないし４の何れか１項に記載の造影剤。
【請求項６】
アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルが、式（ＩＢ）のラジカルによって造影剤に間接的に結合しており、ここで、
環Ｄが、環Ｄに示される窒素原子に加えて、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる０、１又は２個のヘテロ原子を含む飽和した非縮合の５ないし６員のヘテロシクリル基であり、当該環は、基Ｒ１で置換され、且つ基Ｒ２で置換されていてもよく、ここでＲ１は、示された環窒素原子に隣接した環炭素原子に結合し、且つＲ２は、基Ｒ１を有する同一の炭素原子上にあり、且つ環Ｄは、さらに置換されていないか、或いはハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基及びヒドロキシル基から選ばれる１又は２個の基でさらに置換されており；
Ｒ１が、式−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１４のエステル基（式中、Ｒ１４は、
Ｒ８Ｒ９Ｒ１０Ｃ−（式中、
（ｉ）  Ｒ８が、水素、置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−又は置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ３）アルケニル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−（式中、ａ及びｂは、独立して、０又は１であり、且つＺ１は、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＲ１１−（式中、Ｒ１１は、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。）である。）であり；且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；
（ｉｉ）  Ｒ８が、水素又は置換されていてもよいＲ１２Ｒ１３Ｎ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（式中、Ｒ１２は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、且つＲ１３は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであるか；或いはＲ１２及びＲ１３は、それらが結合する窒素とともに、置換されていてもよい、単環式の５又は６個の環原子のヘテロ環又は二環式の８ないし１０個の環原子のヘテロ環系を形成している。）であり、且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；或いは
（ｉｉｉ）  Ｒ８及びＲ９が、それらが結合する炭素とともに、置換されていてもよい、単環式若しくは架橋単環式の３ないし７個の環原子の炭素環又は二環式若しくは架橋単環式の８ないし１０個の環原子の炭素環系を形成し、且つＲ１０が水素であり、
ただし、上記の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の場合の「アルキル」はフルオロアルキルを含む。）である。）であり；
Ｒ２が、存在する場合、
Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、２−、３−又は４−ヒドロキシフェニル基、２−、３−又は４−メトキシフェニル基、２−、３−又は４−ピリジルメチル基、ベンジル基、フェニルエチル基、２−、３−又は４−ヒドロキシベンジル基、２−、３−又は４−ベンジルオキシベンジル基、２−、３−又は４−Ｃ１−Ｃ６アルコキシベンジル基及びベンジルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−基；
任意の官能基が保護されていてもよい天然のαアミノ酸の特徴的な基；
基−［Ａｌｋ］ｎＲ６（式中、Ａｌｋは、１以上の−Ｏ−原子、−Ｓ−原子又は−Ｎ（Ｒ７）−基［式中、Ｒ７は、水素原子又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。］が割り込んでいてもよい、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基であり、ｎは０又は１であり、且つＲ６は、置換されていてもよいシクロアルキル基又は置換されていてもよいシクロアルケニル基である。）；
式−ＯＣＨ２ＣＯＲ８の基でフェニル環が置換されたベンジル基（式中、Ｒ８は、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）アミノ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ酸の残基、又はその酸ハロゲン化物、そのエステル若しくはそのアミド誘導体の残基であり、当該残基は、アミド結合を介して結合し、当該アミノ酸は、グリシン、α又はβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる。）；
ヘテロ環（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（ここで、ヘテロ環が、置換されていないか、或いはハロ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、トリフルオロメチル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、メルカプト、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルフェニルメチルでモノ−又はジ−置換されている。）；及び
基−ＣＲａＲｂＲｃ（式中：
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであるか；或いは
Ｒｃが、水素であり、且つＲａ及びＲｂが、独立して、フェニル又はヘテロアリール（例、ピリジル）であるか；或いは
Ｒｃが、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり、且つＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、３ないし８員のシクロアルキル環又は５ないし６員のヘテロ環を形成するか；或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それらが結合する炭素原子とともに、三環式の環（例えばアダマンチル）を形成するか；或いは
Ｒａ及びＲｂが、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又は以下でＲｃとして定義された水素以外の基であるか、或いはＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、シクロアルキル環又はヘテロ環を形成し、且つＲｃが、水素、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ２（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル又は基−Ｑ−Ｗ（式中、Ｑは、結合又は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−又は−ＳＯ２−であり、且つＷは、フェニル基、フェニルアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニルアルキル基、ヘテロアリール基又はヘテロアリールアルキル基であり、ここで、基Ｗは、ヒドロキシル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。）である。）から選ばれ、
Ｙが、結合であり；
Ｌが、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐが、独立して０又は１であり、
Ｑが、１，４−フェニレンであり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２が、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２−、ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２、−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＷＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−又は−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）であるか、或いはＡｌｋ１及びＡｌｋ２が、独立して、シクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル又はシクロヘキシルラジカルであってもよい。）であり；
Ｘが、結合、−Ｏ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；且つ
ｚが、０又は１である、
請求項２に記載の造影剤。
【請求項７】
アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルが、式（ＩＢ）のラジカルによって造影剤に間接的に結合しており、ここで、
環Ｄが、
【化３】
2013545795.tif 000041
から選ばれる基であり、
Ｒ１が、エステル基ＣＯＯＲ１４（式中、Ｒ１４が、メチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチルから選ばれる。）であり；
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚが、−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｖＯ−、（ＣＨ２）ｗＯ−、
【化４】
2013545795.tif 000042
（式中、ｖは、１、２、３又は４であり、且つｗは、１、２又は３である。）、並びに
−（ＣＨ２）ｘ−Ｈｅｔ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（Ｈｅｔ１）ｙｙ−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ２）ｙ−及び−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｐｈは１，４−フェニレン基であり、Ｈｅｔ１は−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｈｅｔ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり、ｘは、０、１又は２であり、ｙは、０又は１であり、且つｙｙは、０又は１である。）から選ばれる、
請求項２又は６に記載の造影剤。
【請求項８】
式：
【化５】
2013545795.tif 000043
を有する化合物並びにそれらの塩から選ばれる、請求項１に記載の造影剤。
【請求項９】
マクロファージ細胞のための造影剤として使用するための、上記請求項の何れかに記載の造影剤。
【請求項１０】
請求項１ないし８の何れか１項に記載の造影剤を用いて、対象に対するイメージング研究を実施することを含む、マクロファージ細胞をイメージングするためのイメージング方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、細胞における細胞内カルボキシエステラーゼｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３の量とは無関係に独立し、細胞における細胞内カルボキシエステラーゼｈＣＥ−１の量に比例して細胞内イメージングシグナルを作り出す造影剤に関する。該造影剤は、薬剤の残りの部分に直接的に又はリンカーラジカルによって間接的に結合したアルファアミノ酸エステルモチーフを含み、そのエステルモチーフは、ｈＣＥ−２及びｈＣＥ−３に比べてｈＣＥ１により、より急速に且つ完全に、対応する酸に加水分解される。アミノ酸エステルモチーフを有する造影剤は、容易に細胞内に入るものの、加水分解生成物（即ち、酸）は、細胞外に容易に排出されない。従って、酸加水分解生成物が蓄積した細胞では、イメージングシグナルがより強くなる。単球細胞（例、マクロファージ）にはｈＣＥ−１が含まれるが、他の細胞型には、一般的に含まれないか、或いは僅かな量しかｈＣＥ−１が含まれないので、このような細胞における本発明の造影剤からのシグナルは、他の細胞型におけるシグナルよりもより強くなる。従って、本発明の造影剤は、単球の選択的な造影剤として有用である。
【０００２】
（発明の背景）
特定の医療用診断法は、外科的技術又は他の侵襲的技術に頼ることのない、ヒト又は動物の体における対象となる組織や細胞の研究や可視化に有用である。このような医療用診断の分野は、造影剤、体へのその投与、並びに得られたイメージングデータの収集及び分析に関する。
【０００３】
造影剤は、体外手段により検出される、シグナルを発する検出可能な基を有する化学物質である。イメージングシグナルは、造影剤自体からの検出可能な放出により能動的に生じるもの、又は外部手段による造影剤の刺激の結果として受動的に生じるものである。造影剤をいったん体に投与すると、体の組織、細胞及び内部空洞への分布が、検出器によりモニタリングできる。検出器は画像を作るのに有用な情報を収集し、その結果、体の内部環境についての有用な情報を提供する。造影剤及び外部検出手段を含む非常に多くのイメージング技術が当業者に知られている。
【０００４】
あるよく知られているイメージング技術の分野は、１以上の特定の放射性同位元素で標識された造影剤に依存している。単一光子放射断層撮影（以下、ＳＰＥＣＴと称する）として知られているイメージング技術は、特定の崩壊する放射性同位元素（例、９９Ｔｃ、１２３Ｉ及び２０１Ｔｌ）から放出される放射線を検出するために有用である。ポジトロン断層法（以下、ＰＥＴと称する）として知られる別の方法の技術は、特定の崩壊する放射性同位元素（例、１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ及び６４Ｃｕ）から放出される放射線を検出するために有用である。
【０００５】
また、蛍光性の検出可能な基を有する蛍光性造影剤もよく知られている。蛍光基から放出される放射線は、造影剤の分布を示す画像を作り出すために検出され、用いられる。
【０００６】
Ｘ線造影剤（造影剤（contrast agent）としても知られている）は、Ｘ線ビームを減衰する検出可能な基を有する。造影剤を投与し、標的領域のＸ線イメージングを行うことにより、その領域における造影剤の濃度を示す画像を得ることができる。元素の原子一つ当たりの電子の数が大きい（高い原子量に対応する）元素は、特にＸ線を減衰させるのに効果的であるとういうことは当技術分野で周知である。ヨウ素は、強力なＸ線アッテネータとしてよく知られており、従ってＸ線造影剤（X-ray contrast agent）において検出可能な基として一般的に用いられている。
【０００７】
造影剤は磁気共鳴映像法（以下、ＭＲＩと称する）として知られる技術で用いることができる。ＭＲＩ造影剤（造影剤（constrast agents）としても知られている）は、造影剤に近接した分子の特定の性質を変化させるので、検出器で造影剤が蓄積した領域を識別できる。検出器から集められた情報により、体内構造の可視性が向上した画像を作り出すことができる。ＭＲＩ造影剤は、薬剤の直ぐ傍の組織及び体腔におけるプロトン緩和時間を変化させるので検出可能である。ＭＲＩコントラスト増強法のために最も一般的に使われる造影剤は、ガドリニウム系のもの（特にガドリニウム含有大員環）である。
【０００８】
ヒト又は動物の体の細胞及び組織をより詳細に可視化できる改良された造影剤には絶えず需要がある。特に、特定の組織及び又は細胞を標的にできる造影剤には需要がある。細胞標的へのさまざまなアプローチが知られており、ｐＨ駆動ナノ分子（Org. Lett. 2006, 8, 3363）、ナノ粒子増強イメージング（Cancer Biomarkers 2009, 5, 59）、抗体誘導型プロドラッグ酵素療法ＡＤＥＰＴ（Clin Cancer Res. 2000  6, 765-72）、抗体医薬複合体（Curr Opin Chem Biol. 2010 ,14, 529-37）が挙げられる。
【０００９】
特に、単球細胞（特に、マクロファージ）の選択的なイメージングを可能にする造影剤には需要がある。このような細胞の非侵襲的なイメージングは、疾患（例、アテローム性動脈硬化症、ＣＯＰＤ及び関節リウマチ）が進行した炎症性細胞病巣の位置をｉｎ  ｖｉｖｏで同定するために絶対不可欠である。
【００１０】
（発明の簡単な説明）
本発明は、細胞における細胞内カルボキシエステラーゼｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３の量とは独立し、細胞における細胞内カルボキシエステラーゼｈＣＥ１の量に比例して細胞内イメージングシグナルを作り出す利用可能な造影剤を提供する。
【００１１】
脂溶性（低極性の又は電荷的中性）分子が、比較的容易に細胞膜を通過し細胞に入るのに対して、親水性（高極性、電荷した）分子は、比較的容易には細胞膜を通過せず細胞に入らないという事実を利用する。従って、脂溶性モチーフが所定の造影剤に結合している場合、薬剤が細胞に入ることができ、モチーフが細胞内でより高極性のモチーフに転換した場合、より高極性の結合したモチーフを伴う薬剤が、細胞に蓄積するということが期待できる。従って、結合したより高極性のモチーフを伴う造影剤の蓄積は、細胞内での濃度の増加及び長期滞留をもたらすことを期待できる。
【００１２】
本発明は、所定の造影剤に結合したアルファアミノ酸エステルモチーフの親酸への加水分解に活用可能なカルボキシルエステラーゼ酵素が細胞内に存在するという事実を利用する。従って、造影剤は、アルファアミノ酸エステルに共有結合していてもよく、投与すると直ぐに細胞に入り、１以上の細胞内カルボキシルエステラーゼによって効率的に加水分解され、結果として生じたアルファアミノ酸造影剤複合体が細胞内に蓄積し、それにより、細胞型の選択的な検出及びイメージングを可能にする。アルファアミノ酸モチーフの修飾又は共有結合により、造影剤が単球及びマクロファージを標的にすることができるということもわかる。本明細書では「単球（単数）」又は「単球（複数）」が示されていない限り、用語マクロファージ（単数）又はマクロファージ（複数）は、マクロファージ（複数）（腫瘍関連マクロファージ（複数）を含む）及び／又は単球（複数）を示すために用いられ得る。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、細胞におけるｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３の量とは独立し、細胞内のｈＣＥ−１の量に比例して細胞内イメージングシグナルを作り出す、細胞のための造影剤を提供する。
ここで、上記造影剤は、
（ａ）造影剤及び（ｂ）アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルの共有結合性の複合体であり、
（ａ）は（ｂ）に直接的に結合しているか、或いは（ａ）は（ｂ）にリンカーラジカルにより間接的に結合し、上記の直接的な結合又は間接的な結合は（ｂ）のアミノ基を介し、
当該アミノ基は、カルボニル基に直接結合せず、且つ
上記アルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステル部分は、細胞内酵素ｈＣＥ−２又はｈＣＥ−３に比べて、細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素ｈＣＥ−１により、対応するカルボン酸部分に選択的に加水分解可能である。
【００１４】
上記のように、本発明は造影剤の修飾に関する。本発明は、一般的な適用であり、造影剤の化学的同一性により制限されない。
【００１５】
アルファアミノ酸エステルモチーフが、細胞内でカルボキシルエステラーゼにより加水分解される場合、アルファアミノ酸エステルモチーフは、明白に、カルボキシルエステラーゼのための基質であるに違いない。細胞内カルボキシルエステラーゼは、加水分解するそれらの能力がアミノ酸エステル基質の非常に厳密な構造要件に依存しないという点で一般的にやや乱雑である。従って、アルファアミノ酸エステルモチーフを造影剤に共有結合する大部分の方法は、加水分解を可能にする。
【００１６】
接続したアルファアミノ酸エステルのエステル基を対応する酸に加水分解できる細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素としては、三つの既知のヒトカルボキシルエステラーゼ（「ｈＣＥ」）酵素のアイソタイプであるｈＣＥ−１（ＣＥＳ−１としても知られている）、ｈＣＥ−２（ＣＥＳ−２としても知られている）及びｈＣＥ−３（Drug Disc. Today 2005, 10, 313-325）が挙げられる。これらが主な酵素であると考えらるが、他のカルボキシルエステラーゼ酵素（例、ビフェニルヒドロラーゼ（ＢＰＨ））が、複合体を加水分解する役割を有しているかもしれない。
【００１７】
以下に記載された破壊細胞アッセイは、造影剤及びアルファアミノ酸エステルの所定の複合体、又は可能なカルボキシルエステラーゼエステルモチーフとして評価される所定のアルファアミノ酸エステルが、必要に応じて加水分解されていていることを確認する単純な方法である。また、これらの酵素は組み換え技術を用いて容易に発現させることができ、組み換えの酵素が加水分解の発生を決定又は確認するために用いられてもよい。
【００１８】
本発明の特徴としては、目的の複合体が、細胞内でカルボキシルエステラーゼにより加水分解される場合、細胞からの加水分解された複合体の除去が妨害又は抑制され、その結果、細胞内の蓄積の一因となるモチーフの極性カルボキシル基である、共有結合したアルファアミノ酸モチーフを保持する点である。細胞には、一般的に、数種のペプチダーゼ酵素が含まれるため、複合体が、或いはとりわけ加水分解された複合体（対応する酸）が、上記のペプチダーゼの基質でないことが好ましい。特に、アルファアミノ酸エステル基が、複合体におけるジペプチドモチーフのＣ末端の要素でないことが強く好ましい。さらに、以下で説明するように、マクロファージ選択性を達成するために、アルファアミノ酸エステルモチーフのアミノ基が、カルボニル基に直接結合していないということが不可欠である。しかしながら、共有結合の様態に対する上記の制限を除いて、アルファアミノ酸エステル基が造影剤にそのアミノ基を介して共有結合してもよい。ある場合では、造影剤は、アルファアミノ酸エステルモチーフの格好の結合点を有し、他の場合では、合成戦略は、その結合のために考え出されなければならないであろう。
【００１９】
ｈＣＥ−１又は組み換えのｈＣＥ−１を含む細胞が、窒素上の広範囲の基を伴うアミノ酸複合体を加水分解する一方で、アルファアミノ酸基の窒素が、置換されていないか、或いはカルボニル基に直接結合されている場合のみ、カルボキシルエステラーゼｈＣＥ−２及び／又はｈＣＥ−３並びにこれらの酵素の組み換え型を発現する細胞が、アミノ酸エステル複合体を、それらの結果として生じる酸に加水分解し得るということがわかる。ｈＣＥ−２及びｈＣＥ−３のこの選択的要件は、モジュレータがある細胞型のみで酵素又はレセプターを標的にする必要があるという点で有利になり得る。これらの三つのカルボキシルエステラーゼ酵素の相対的な量は、細胞型（図１及びhttp://symatlas.gnf.org/SymAtlasのデータベース（ここで留意すべきはこのデータベースにおいて、ｈＣＥ３／ＣＥＳ３は、記号ＦＬＪ２１７３６として言及されている））の間で変わることがわかる。モジュレータが、ｈＣＥ−１が見られる細胞型のみで活性を示すものである場合、アミノ基がカルボニル以外の基に直接結合したアルファアミノ酸エステルモチーフの結合は、有効濃度のｈＣＥ−１を伴う細胞で選択的に蓄積する加水分解されたモジュレータ複合体をもたらす。別の様態として示した、ｈＣＥ−１発現細胞における造影剤複合体由来の酸の特異的な蓄積は、アルファアミノ酸エステルモチーフをアミノ酸エステル部分のアミノ基を介して造影剤に結合させることよって達成できる（ただし、アミノ基の窒素はカルボニル基に直接結合される（例えば、アミド結合−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−を介した結合は許容されない。）。）。
【００２０】
マクロファージは、サイトカイン（特にＴＮＦα及びＩＬ−１）を放出することにより炎症性障害で重要な役割を果たしていることが知られている（van Roon et al Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229-1238）。関節リウマチでは、それらは関節炎症及び関節破壊の主要原因である（Conell in N.Eng J. Med. 2004, 350, 2591-2602）。また、マクロファージは、腫瘍の成長及び進行にも関係している（Naldini and  Carraro in Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005, 3-8）。従って、マクロファージ細胞を選択的にイメージングする薬剤は、癌、炎症及び自己免疫疾患（例えば関節炎）の診断に有用であり得る。特定の細胞型をターゲットとすることが、イメージング結果（例えば関節炎）において大きなコントラストを導くことが期待されるであろう。本発明は、結果として生じる酸が異なる細胞型に蓄積しようとしまいと、アルファアミノ酸エステルモチーフを造影剤に結合させることにより、特定のカルボキシルエステラーゼにより加水分解されるかどうかを決定するという上記観察に基づき、造影剤をマクロファージへのターゲットとする方法を可能にする。特に、ｈＣＥ−１酵素は主として単球細胞（例、マクロファージ）で発現するということがわかっている。本発明の複合体では、アルファアミノ酸エステルモチーフの窒素が、置換されている（ただし、カルボニル基部分に直接結合していない）場合、エステルはｈＣＥ−１によってのみ加水分解られ得る。従って、エステラーゼ加水分解された造影剤複合体は、単球細胞（例えばマクロファージ）のようなｈＣＥ−１を含む細胞にのみ蓄積し得る。
【００２１】
従って、本発明は、本発明の造影剤を用いて、対象に対するイメージング研究を実施することを含む、マクロファージ細胞をイメージングするイメージング方法も提供する。当該方法は、対象に造影剤を与える工程を含んでいてもよく、また造影剤が、プレデリバリーされていてもよい。
【００２２】
また、本発明は、マクロファージ細胞のための造影剤として用いるための本発明の造影剤も提供する。造影剤は、上記の薬剤を対象にデリバリーし、上記対象のマクロファージ細胞をイメージングすることを含む方法で用いられるためものであってもよい。さらに、上記薬剤を対象にデリバリーし、上記対象のマクロファージ細胞をイメージングすることを含む方法で用いられる薬剤の製造における本発明の造影剤の使用を提供する。
【００２３】
本発明は、例えば、動脈硬化性プラーク又は関節炎患者の関節をイメージングすることを含むさまざまなイメージング研究で用いられてもよい。
【００２４】
もちろん、原理上、造影剤に結合させるためのカルボキシルエステラーゼエステルモチーフに存在し得る、多くの可能なエステル基が存在する。同様に、アルファ炭素上の側鎖が異なる、多くの天然及び非天然両方のアルファアミノ酸が存在し、カルボキシルエステラーゼエステルモチーフにおけるエステルとして用いられてもよい。一部のアルファアミノ酸エステルは、１以上のｈＣＥ−１、−２及び−３アイソタイプ又はこれらの酵素を含む細胞によって急速に加水分解される。その一方で、それ以外ではよりゆっくり加水分解されるか、或いは非常にわずかしか加水分解されない。一般的に、カルボキシルエステラーゼが、遊離アミノ酸エステルを親酸に加水分解する場合、上述のｈＣＥ−２及びｈＣＥ−３のＮ−カルボニルの結合基によらず、造影剤に共有結合した場合のアミノ酸エステルモチーフを加水分解する。従って、本明細書に記載された破壊細胞アッセイ及び／又は分離したカルボキシルエステラーゼのアッセイは、必須の加水分解分析結果を示すエステルに関する、直接的、迅速且つ単純な第一スクリーンを提供する。次いで、そのようにして選ばれた、選択された結合化学により造影剤に結合する場合に、アミノ酸エステルモチーフを、同様のカルボキシルエステラーゼアッセイで再アッセイし、それに基づき、さらにカルボキシルエステラーゼ基質であることを確認する。アミノ酸エステルの望ましいタイプについて以下に記載する。しかしこの点で、アルファアミノ酸のシクロペンチルエステルが効率的に加水分解されるのに対して、アルファアミノ酸のｔ−ブチルエステルが、ｈＣＥ−１、−２及び−３に対して比較的弱い基質であるということがわかるということを言及できる。また、望ましいアルファアミノ酸については、以下により詳細に記載する。しかし、この点で、フェニルアラニン、ホモフェニルアラニン、フェニルグリシン及びロイシンが一般的に望ましく、第二級アルコールのエステルが好ましいということを言及することができる。
【００２５】
以上のように、アルファアミノ酸エステルは、アミノ酸エステルのアミノ基を介して造影剤と接続していてもよい。リンカーラジカルが、アミノ酸エステルモチーフと造影剤との間に存在していてもよい。例えば、アルファアミノ酸エステルは、式（ＩＡ）又は式（ＩＢ）のラジカルとして造影剤に接続していてもよい：
【００２６】
【化１】
2013545795.tif 000002
【００２７】
［式中、
Ｒ１は、１以上の細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解可能なエステル基であり；
Ｒ２は、天然又は非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ２であり；
Ｙは、結合、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ４−、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ４−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−又は−ＮＲ４−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ４は、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
Ｌは、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して、０又は１であり、
Ｑは、（ｉ）置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカル、又は（ｉｉ）ｍ及びｐが同時に０の場合、式−Ｘ２−Ｑ１−又は式−Ｑ１−Ｘ２−の二価のラジカル（式中、Ｘ２は、−Ｏ−、−Ｓ−又はＮＲＡ−（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）であり、且つＱ１は、置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカルである。）であり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、置換されていてもよい二価のＣ３−Ｃ７シクロアルキルラジカル、又は置換されていてもよい直鎖又は分枝鎖の、Ｃ１−Ｃ６アルキレンラジカル、Ｃ２−Ｃ６アルケニレンラジカル又はＣ２−Ｃ６アルキニレンラジカル（それらは、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）又はアミノ（−ＮＲＡ−）（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）のリンクを含んでいてもよく、或いは末端に有していてもよい。）である。）であり；
Ｘは、結合、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５−、−ＮＲ４Ｓ（＝Ｏ）２−又は−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−（式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
ｚは、０又は１であり；且つ
環Ｄは、置換されていてもよい３ないし７員のヘテロシクリル基であり、ここで、Ｒ１は、示された環窒素に隣接している環炭素に結合しており；且つ環Ｄは、フェニル基、５ないし６員のヘテロアリール基、Ｃ３−７カルボシクリル基又は５ないし６員のヘテロシクリル基を含む第二の環と縮合していてもよく、環Ｄが、フェニル基、５ないし６員のヘテロアリール基、Ｃ３−７カルボシクリル基又は５ないし６員のヘテロシクリル基を含む第二の環と縮合している場合、リンカー基−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚが、環Ｄ又は当該第二の環の環原子の基である。］。
【００２８】
本発明の一形態では、Ｘは、結合−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５−、−ＮＲ４Ｓ（＝Ｏ）２−又は−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−（式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）である。
【００２９】
これらのラジカルにおいて、Ｒ１は、１以上の細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解可能であり、基Ｒ１−Ｃ−ＮＨ−がアルファアミノ酸基を形成するカルボキシルエステル基である。式（ＩＡ）において、アルファアミノ酸は、鎖状であり、アミノ基を介してリンカー−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚ−に結合し、そして造影剤に結合する。式（ＩＢ）において、アルファアミノ酸基は、アミノ基とアルファ炭素原子とが環を形成し、環状であり、環は、さらにリンカーラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚ−を介して造影剤に結合している。
【００３０】
用語「エステル」又は「エステル化されたカルボキシル基」は、Ｒ９が理論上アルコールＲ９ＯＨに由来するエステルとして特徴づけられる基である基Ｒ９Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−を意味する。
【００３１】
本明細書で用いられる用語「（Ｃａ−Ｃｂ）アルキル」（ａ及びｂは整数）とは、ａ個からｂ個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキルラジカルを言う。したがって、例えば、ａが１、ｂが６の場合、当該用語としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル及びｎ−ヘキシルが挙げられる。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「二価の（Ｃａ−Ｃｂ）アルキレンラジカル」（ａ及びｂは整数）とは、ａ個からｂ個の炭素原子を有し、２の不飽和原子価を有する飽和した炭化水素鎖を言う。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「（Ｃａ−Ｃｂ）アルケニル」（ａ及びｂは整数）とは、ａ個からｂ個の炭素原子を有し、Ｅ又はＺの適切な立体化学どちらかの、少なくとも一つの二重結合を有する直鎖又は分枝鎖アルケニル部分を言う。当該用語としては、例えば、ビニル、アリル、１−及び２−ブテニル及び２−メチル−２−プロぺニルが挙げられる。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「二価の（Ｃａ−Ｃｂ）アルケニレンラジカル」とは、ａ個からｂ個の炭素原子を有し、少なくとも一つの二重結合を有し、且つ２の不飽和原子価を有する炭化水素鎖を意味する。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「Ｃａ−Ｃｂアルキニル」（ａ及びｂは整数）とは、２個から６個の炭素原子を有し、さらに一つの三重結合を有する、直鎖又は分枝鎖の炭化水素基を言う。当該用語としては、例えば、エチニル、１−プロピニル、１−及び２−ブチニル、２−メチル−２−プロピニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル及び５−ヘキシニルが挙げられる。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「二価の（Ｃａ−Ｃｂ）アルキニレンラジカル」（ａ及びｂは整数）とは、２個から６個の炭素原子を有し、少なくとも一つ三重結合を有する二価の炭化水素鎖を言う。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「炭素環」とは、１６個以下の環原子を有し、その全てが炭素である単環式、二環式又は三環式のラジカルを言い、アリール及びシクロアルキルが挙げられる。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子を有する単環式の飽和の炭素環ラジカルを言い、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。
【００３９】
本明細書で用いられる限定されない用語「アリール」とは、単環式、二環式又は三環式の炭素環芳香族ラジカルを言い、共有結合により直接結合された二つの単環式の炭素環芳香族環を有するラジカルが含まれる。上記ラジカルの実例としては、フェニル、ビフェニル及びナフチルが挙げられる。
【００４０】
本明細書で用いられる限定されない用語「ヘテロアリール」とは、Ｓ、Ｎ及びＯから選ばれる１以上のヘテロ原子を含む単環式、二環式又は三環式の芳香族ラジカルを言い、共有結合により直接結合された、二つの上記単環式の環を有するラジカル、或いは一つの上記単環式の環及び一つの単環式のアリール環を有するラジカルを含む。上記ラジカルの実例としては、チエニル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダゾニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリル及びインダゾリルが挙げられる。
【００４１】
本明細書で用いられる限定されない用語「ヘテロシクリル」又は「ヘテロ環」としては、上記で定義された「ヘテロアリール」が挙げられ、非芳香族を意味する場合、Ｓ、Ｎ及びＯから選ばれる１以上のヘテロ原子を含む単環式、二環式又は三環式の非芳香族ラジカル（例、飽和したもの）、及び他のこのようなラジカル又は単環式の炭素環ラジカルと共有結合した１以上の上記ヘテロ原子を含む単環式の非芳香族ラジカルからなる基に関する。上記ラジカルの実例としては、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、アゼピニル、モルホリニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミド及びスクシンイミド基が挙げられる。
【００４２】
対象の文章中に特に定めのない限り、用語「置換された」（明細書中任意の部分に適用される）とは、４つ以下の組み合わせ可能な置換基で置換されていることを意味し、そのそれぞれが独立していてもよく、例えば、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、フェニル、ハロ（フルオロ、ブロモ及びクロロを含む）、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル（−ＣＮ）、オキソ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲＡ、−ＣＯＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＣＯＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＮＨＲＡ、−ＳＯ２ＮＨＲＡ、−ＣＯＮＲＡＲＢ、−ＳＯ２ＮＲＡＲＢ、−ＮＨ２、−ＮＨＲＡ、−ＮＲＡＲＢ、−ＯＣＯＮＨ２、−ＯＣＯＮＨＲＡ、−ＯＣＯＮＲＡＲＢ、−ＮＨＣＯＲＡ、−ＮＨＣＯＯＲＡ、−ＮＲＢＣＯＯＲＡ、−ＮＨＳＯ２ＯＲＡ、−ＮＲＢＳＯ２ＯＨ、−ＮＲＢＳＯ２ＯＲＡ、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＮＲＡＣＯＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨＲＢ、−ＮＲＡＣＯＮＨＲＢ、−ＮＨＣＯＮＲＡＲＢ又は−ＮＲＡＣＯＮＲＡＲＢ（ＲＡ及びＲＢは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、フェニル、又は５又は６個の環原子を有する単環式ヘテロアリールである。）が挙げられる。「任意の置換基」は、上述の置換基の一つである。
【００４３】
用語「天然又は非天然のアルファアミノ酸の側鎖」とは、天然又は非天然のアミノ酸の式ＮＨ２−ＣＨ（Ｒ１）−ＣＯＯＨにおける基Ｒ１を言う。
【００４４】
天然又は非天然のアルファアミノ酸の側鎖の例としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、ヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、α−アミノアジピン酸、α−アミノ−ｎ−酪酸、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモセリン、α−メチルセリン、オルニチン、ピペコリン酸及びチロキシンの側鎖が挙げられ、好ましい側鎖としては、Ｌ−ロイシン、Ｌ−フェニルグリシン、Ｌ−シクロヘキシルグリシン、Ｌ−ｔブチルセリン、ジメチルグリシン及びアラニンの側鎖が挙げられる。
【００４５】
特徴的な側鎖に官能性置換基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、メルカプト基、グアニジル基、イミダゾリル基又はインドリル基）を含む天然のアルファ−アミノ酸としては、アルギニン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、チロシン及びシステインが挙げられる。本発明の化合物のＲ２が、側鎖の一つである場合、官能性置換基は保護されていてもよい。
【００４６】
用語「保護された」とは、天然のアルファ−アミノ酸の側鎖の官能性置換基に関して用いられている場合、実質的に非官能性の上記の置換基の誘導体を意味する。例えば、カルボキシル基は、エステル（例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキルエステル）化されていてもよく、アミノ基は、アミド（例えば、ＮＨＣＯＣ１−Ｃ６アルキルアミド）又はカルバメート（例えば、ＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＣ１−Ｃ６アルキル又はＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈカルバメート）に転換されていてもよく、ヒドロキシル基は、エーテル（例えば、ＯＣ１−Ｃ６アルキル又はＯ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）フェニルエーテル）又はエステル（例えば、ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキルエステル）に転換されていてもよく、チオール基は、チオエーテル（例えば、ｔｅｒｔ−ブチル又はベンジルチオエーテル）又はチオエステル（例えば、ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキルチオエステル）に転換されていてもよい。
【００４７】
非天然のアルファアミノ酸の側鎖の例としては、本発明の化合物に用いられている望ましいＲ２の群の事例として以下に示されるものが挙げられる。
【００４８】
本明細書で用いられる用語「塩」としては、塩基付加塩、酸付加塩及び第四級塩が挙げられる。酸性の本発明の化合物が形成することができる塩としては、アルカリ金属水酸化物（例、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム）；アルカリ土類金属水酸化物（例、水酸化カルシウム、水酸化バリウム及び水酸化マグネシウム）のような塩基；有機塩基（例、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、コリントリス（ヒドロキシメチル）アミノ−メタン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミン等）との薬学上許容される塩が挙げられる。塩基性の本発明の化合物が形成することができる塩としては、無機酸（例、塩酸又は臭化水素酸のようなハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸又はリン酸等）及び有機酸（例、酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、グルタミン酸、乳酸及びマンデル酸等）との薬学上許容される塩が挙げられる。
【００４９】
（エステル基Ｒ１）
エステル基が１以上の細胞内酵素により加水分解可能でなければならないという必要性に加えて、一部の適用（例えば、複合体の全身投与）に関して、血漿におけるカルボキシルエステル加水分解酵素による加水分解に耐性があることが好ましく、これにより、全身投与後、接続したモジュレータがエステルとして細胞に浸透するために十分長く存在し続けることを確保する。エステルの血漿半減期を測定するために、血漿中のインキュベートによって任意の得られた複合体を試験することは容易である。しかしながら、理論上第二級アルコール由来のエステルは、第一級アルコール由来のものよりも、血漿カルボキシルエステル加水分解酵素に対してより安定であるということが見出されている。さらに、理論上第三級アルコール由来のエステルは、血漿カルボキシルエステル加水分解酵素に対して一般的に安定しているが、多くの場合、細胞内カルボキシルエステラーゼに対しても比較的安定しているということも見出されている。これらのことを踏まえると、上記の式（ＩＡ）及び式（ＩＢ）におけるＲ１は、現在、式−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１４のエステル基（式中、Ｒ１４は、
Ｒ８Ｒ９Ｒ１０Ｃ−（式中、
（ｉ）  Ｒ８が、水素、置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−又は置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ３）アルケニル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−（式中、ａ及びｂは、独立して、０又は１であり、且つＺ１は、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＲ１１−（式中、Ｒ１１は、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。）である。）であり；且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；
（ｉｉ）  Ｒ８が、水素又は置換されていてもよいＲ１２Ｒ１３Ｎ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（式中、Ｒ１２は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、且つＲ１３は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであるか；或いはＲ１２及びＲ１３は、それらが結合する窒素とともに、置換されていてもよい、単環式の５又は６個の環原子のヘテロ環又は二環式の８ないし１０個の環原子のヘテロ環系を形成している。）であり、且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；或いは
（ｉｉｉ）  Ｒ８及びＲ９が、それらが結合する炭素とともに、置換されていてもよい、単環式若しくは架橋単環式の３ないし７個の環原子の炭素環又は二環式若しくは架橋単環式の８ないし１０個の環原子の炭素環系を形成し、且つＲ１０が水素である。）である。）であることが好ましい。
【００５０】
上記の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の場合、「アルキル」はフルオロアルキルを含む。
【００５１】
これらのクラス（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）において、Ｒ１０は、多くの場合水素である。Ｒ１４の具体的な例としては、メチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチル、例えばメチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチルが挙げられる。Ｒ１４は、一般に、ネオペンチル又はシクロペンチルの場合が好ましく、特に、シクロペンチルの場合が好ましい。
【００５２】
（アミノ酸側鎖Ｒ２）
細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によって加水分解可能であることを必要条件として、側鎖の基のＲ２の選択を、加水分解速度によって決定することができる。例えば、アルファアミノ酸の炭素に隣接したＲ２における炭素が、分枝を含まない場合（例えばＲ２がエチル、イソ−ブチル又はベンジルの場合）エステルは、Ｒ２が分枝している場合（例えば、Ｒ２がイソ−プロピル又はｔ−ブチルの場合）に比べてより早く加水分解される。
【００５３】
アミノ酸側鎖の例としては、
Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、２−、３−又は４−ヒドロキシフェニル基、２−、３−又は４−メトキシフェニル基、２−、３−又は４−ピリジルメチル基、ベンジル基、フェニルエチル基、２−、３−又は４−ヒドロキシベンジル基、２−、３−又は４−ベンジルオキシベンジル基、２−、３−又は４−Ｃ１−Ｃ６アルコキシベンジル基及びベンジルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−基；
任意の官能基が保護されていてもよい天然のαアミノ酸の特徴的な基；
基−［Ａｌｋ］ｎＲ６（式中、Ａｌｋは、１以上の−Ｏ−原子、−Ｓ−原子又は−Ｎ（Ｒ７）−基［式中、Ｒ７は、水素原子又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。］が割り込んでいてもよい、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基であり、ｎは０又は１であり、且つＲ６は、置換されていてもよいシクロアルキル基又は置換されていてもよいシクロアルケニル基である。）；
式−ＯＣＨ２ＣＯＲ８の基でフェニル環が置換されたベンジル基（式中、Ｒ８は、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）アミノ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ酸の残基、又はその酸ハロゲン化物、そのエステル若しくはそのアミド誘導体の残基であり、当該残基は、アミド結合を介して結合し、当該アミノ酸は、グリシン、α又はβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる。）；
ヘテロ環（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（ここで、ヘテロ環が、置換されていないか、或いはハロ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、トリフルオロメチル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、メルカプト、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルフェニルメチルでモノ又はジ置換されている。）；及び
基−ＣＲａＲｂＲｃ（式中、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであるか；或いは
Ｒｃが、水素であり、且つＲａ及びＲｂが、独立して、フェニル又はヘテロアリール（例、ピリジル）であるか；或いは
Ｒｃが、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり、且つＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、３ないし８員のシクロアルキル環又は５ないし６員のヘテロ環を形成するか；或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それらが結合する炭素原子とともに、三環式の環（例えばアダマンチル）を形成するか；或いは
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又は以下でＲｃとして定義された水素以外の基であるか、或いはＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、シクロアルキル環又はヘテロ環を形成し、且つＲｃが、水素、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ２（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル又は基−Ｑ−Ｗ（Ｑは、結合又は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−若しくは−ＳＯ２−であり、且つＷは、フェニル基、フェニルアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニルアルキル基、ヘテロアリール基又はヘテロアリールアルキル基であり、ここで、基Ｗは、ヒドロキシル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。）である。）が挙げられる。
特定のＲ２の基の例としては、ベンジル、フェニル、シクロヘキシルメチル、ピリジン−３−イルメチル、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ベンジルチオ−１−メチルエチル、１−メチルチオ−１−メチルエチル、１−メルカプト−１−メチルエチル、フェニルエチルが挙げられる。好ましいＲ２の基としては、存在する場合、フェニル、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、フェニルエチル及びイソ−ブチルが挙げられる。
【００５４】
（ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−［ＣＨ２］ｚ−）
アルファアミノ酸エステルが式（ＩＡ）又は式（ＩＢ）のラジカルにより造影剤に接続する場合、当該ラジカル（又は結合）は、アミノ酸エステルモチーフＲ１Ｃ（Ｒ３）（Ｒ２）ＮＨ−、又は式（ＩＢ）について、環状アミノ酸基を造影剤に結合するために選ばれる特定の化学戦略に基づく。明確に、その結合のための化学戦略は大きく変化してもよく、したがって、変化するＹ、Ｌ、Ｘ及びｚの多くの組み合わせが可能である。
【００５５】
分子からのアミノ酸の開裂をもたらし得る、アミノ酸エステルモチーフと造影剤との間の結合が細胞内におけるペプチダーゼ活性の基質ではない場合、上述したアルファアミノ酸エステルモチーフの利益（細胞内への容易な侵入、細胞内におけるカルボキシルエステラーゼ加水分解、およびカルボン酸加水分解生成物の細胞内における蓄積）が最も良好に達成されるということにも留意しなければらない。もちろん、細胞内ペプチダーゼへの安定性は、破壊細胞内容物で化合物をインキュベートし、及び任意の上記開裂の分析することで容易に試験される。
【００５６】
上述の一般的な所見を考慮して、順にラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−［ＣＨ２］ｚ−を構成する記号について説明する：
モジュレータに結合するメチレンラジカルは任意であるため、ｚは０又は１であってもよい。
アルファアミノ酸エステルが、式（ＩＡ）又は式（ＩＢ）のラジカルのように阻害剤に接続している場合、例えば、Ｙは、結合、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ４−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＲ４−及び−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４（式中、Ｒ４は、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）から選ばれ；Ｙは、結合であることが好ましい。
ラジカルＬにおいて、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２ラジカルの例としては、存在する場合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２−、ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−及びＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２が挙げられ、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２の追加の例としては、−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＷＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−及び−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）が挙げられ；例えば−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−及び−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）が挙げらる。Ａｌｋ１及びＡｌｋ２のさらなる例としては、二価のシクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル及びシクロヘキシルラジカルが挙げられる。
Ｌにおいて、ｎが０の場合、ラジカルは炭化水素鎖（置換されていてもよく、場合によってエーテル、チオエーテル又はアミノ結合を有していてもよい）である。現在、Ｌにおいて任意の置換基が存在しないことが好ましい。ｍ及びｐが共に０の場合、Ｌは、５〜１３個の環原子を伴う二価の単環式又は二環式の炭素環ラジカル（置換されていてもよい）又はヘテロ環ラジカル（置換されていてもよい）である。ｎが１であり且つｍ及びｐの少なくとも一つが１の場合、Ｌは、二価のラジカル（炭化水素鎖（単数または複数）、及び５〜１３個の環原子を伴う単環式又は二環式の炭素環ラジカル（置換されていてもよい）又はヘテロ環ラジカル（置換されていてもよい）が挙げられる）である。Ｑは、存在する場合、例えば、二価のフェニルラジカル、ナフチルラジカル、シクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル又はシクロヘキシルラジカル又は５ないし１３員環の単環式又は二環式のヘテロ環ラジカル（例、ピペリジニル、ピペラジニル、インドリル、ピリジル、チエニル又はピロリルラジカル）であってもよいが、現在、１，４−フェニレンが好ましい。
具体的に、本発明のいくつかの実施形態では、ｎが１であると共にｍ及びｐは０であってもよい。他の実施態様では、ｍが１であると共にｎ及びｐが０であってもよい。さらなる実施態様では、ｍ、ｎ及びｐは全て０であってもよい。なおさらなる実施態様では、ｍは０であってもよく、Ｑは単環式のヘテロ環ラジカルであると共にｎは１であってもよく、且つｐは０又は１であってもよい。なおさらなる実施態様では、Ｑは単環式のヘテロ環ラジカルであり且つｐが０又は１であると共に、ｍ及びｎは共に等しく１であってもよい。Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、存在する場合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−から選ばれてもよく、且つＱは１，４−フェニレンであってもよい。別の形態では、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、存在する場合、−（ＣＨ２）ｘ−、−Ｈｅｔ１−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ１）ｙ−及び−ＣＨ＝ＣＨ−（ｘは、０、１、２又は３であり、ｙは、０又は１であり、且つＨｅｔ１は、−Ｏ−又は−ＮＨ−である）から（特に、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ（ＣＨ２）２−、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ２）２ＮＨ−及び−ＣＨ＝ＣＨ−から）選ばれてもよく、且つＱは１，４−フェニレンであってもよい。特に、Ａｌｋ１はメチレンであってもよい。
【００５７】
Ｘは、結合、−Ｏ−又は−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）−（式中、Ｎは、基Ｙに結合しており、且つＲ４は水素又はメチル（好ましくは水素）である。）であってもよい。
【００５８】
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−［ＣＨ２］ｚ−の具体的な例としては、−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｖＯ−、（ＣＨ２）ｗＯ−、
【００５９】
【化２】
2013545795.tif 000003
【００６０】
（式中、ｖは、１、２、３又は４であり、且つｗは、１、２又は３である。）（例、−ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−）が挙げられる。
【００６１】
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−［ＣＨ２］ｚ−のさらなる例としては、−（ＣＨ２）ｘ−Ｈｅｔ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（Ｈｅｔ１）ｙｙ−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ２）ｙ−及び−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｐｈは、１，４−フェニレン基であり、Ｈｅｔ１は−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｈｅｔ２は−Ｏ−、−ＮＨ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり、ｘは、０、１又は２であり、ｙは、０又は１であり、且つｙｙは、０又は１である。）が挙げられる。一実施態様では、、ｘ、ｙ及びｙｙは、全て０である。別の態様では、ｙｙが、０又は１の場合、ｙは、１であってもよく且つｘは、０、１又は２であってもよい。さらなる実施態様では、ｙは、０であり、ｘは、１又は２であり且つｙｙは、１である。ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−［ＣＨ２］ｚ−の具体的な例としては、−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｏ−（ＣＨ）２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｏ−（ＣＨ）２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｏ−（ＣＨ）２−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−、−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（ＣＨ）２−Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−及び−（ＣＨ）２−Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−が挙げられる。
【００６２】
前述のとおり、本発明のアルファアミノ酸エステル複合体のエステル部分は、細胞内カルボキシルエステラーゼｈＣＥ−２及びｈＣＥ−３に比べて、細胞内カルボキシルエステラーゼｈＣＥ−１により、対応するカルボン酸部分に選択的に加水分解される。例えば、エステル部分は、非単球細胞を用いた同じアッセイに比べ、単球細胞の破壊細胞アッセイ（後述する）において少なくとも２倍の速さで加水分解され得る。造影剤複合体が非単球細胞に比べ単球細胞にて少なくとも３倍の速さで加水分解されることが好ましく；少なくとも５倍の速さで加水分解されることがより好ましく；少なくとも１０倍の速さで加水分解されることが更に一層好ましく；少なくとも２０倍の速さで加水分解されることがなお好ましい。
【００６３】
全身投与されるための本発明の化合物については、全身循環前代謝（pre-systemic metabolism）の影響をあまり受けないので、低速でカルボキシルエステラーゼの開裂するエステルが好ましい。従って、標的組織に完全なまま到達する能力が増加し、エステルを標的組織の細胞内で酸生成物に転換することができる。しかしながら、局所投与については、エステルを標的組織に塗布するか、或いは例えば吸入により標的組織に移動させる場合、全身暴露や結果として起こる望ましくない副作用を最小限に抑えるために、多くの場合エステルの急速なエステラーゼ開裂が望まれる。上記の式（ＩＡ）又は式（ＩＢ）に関し、エステラーゼモチーフがアミノ基を介して造影剤と結合する場合、アルファアミノ酸エステルのアルファ炭素に隣接した炭素がモノ置換されている場合（即ちＲ２がＣＨ２Ｒｚ（Ｒｚがモノ置換基））は、炭素がジ置換又はトリ置換されている場合（例えばＲ２がフェニル又はシクロヘキシルの場合）に比べ、エステルがより急速に開裂する傾向がある。
【００６４】
（環Ｄ）
式（ＩＢ）について、環Ｄは、通常、Ｒ１が環Ｄに示される窒素原子に隣接する炭素原子に結合する、非縮合の３ないし７員のヘテロアリール又はヘテロシクリル基である。通常、環Ｄは非縮合の５ないし７員のヘテロアリール又はヘテロシクリル基であり、好ましくは、非縮合の５又は６員のヘテロアリール又はヘテロシクリル基である。より好ましくは、環Ｄは、非縮合の５ないし６員のヘテロシクリル基（例えば、環Ｄに示される窒素原子に加えて、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる０、１又は２個のヘテロ原子を含む飽和した非縮合の５ないし６員のヘテロシクリル基）である。環Ｄの望ましい基の例としては、ピロリジニル基、オキサゾリジニル基、イソオキサゾリジニル基、イミダゾリジニル基、ピラゾリジニル基、チアゾリジニル基、イソチアゾリジニル基、ピペリジニル基、ヘキサヒドロピリミジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基及びチオモルホリニル基が挙げられる。環Ｄは、より好ましくは、ピロリジニル基、ピペラジニル基又はピペリジニル基であり、より好ましくは、ピペリジル基又はピペラジニル基であり、特にピペラジニル基である。
【００６５】
環Ｄは、環Ｄの炭素原子を介して、環Ｄに縮合した環を介して、或いはさらなる窒素原子が存在する場合にそのさらなる窒素原子を介して、基Ｙに接続していてもよい。好ましくは、環Ｄは、環Ｄの炭素原子を介して或いはさらなる窒素原子を介して基Ｙに接続する。一実施態様では、環Ｄは一方の窒素原子がアミノ酸基の一部を形成し、他方の窒素原子が基Ｙに接続しているピペラジニル環である。
【００６６】
環Ｄは、基Ｒ１を有していることに加え、基Ｒ１を有する同一の炭素原子に基Ｒ２が存在していてもよい。望ましい基Ｒ２は、上述のものである。一実施態様では、Ｒ２が存在せず且つＲ１を有する環炭素原子がさらに置換されていない。Ｒ１及びＲ２基に加えて、環Ｄは、好ましくは、置換されていないか、或いはハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基及びヒドロキシル基から選ばれる１又は２個の基で置換されている。より好ましくは、環Ｄは、基Ｒ１を有することを除いて、Ｒ２は置換されていなくてもよい。
【００６７】
好ましい環Ｄの基は、ラジカル（ａ）、ラジカル（ｂ）及びラジカル（ｃ）であり、最も好ましくはラジカル（ｃ）である：
【００６８】
【化３】
2013545795.tif 000004
【００６９】
本発明の一実施態様では、造影剤が、式（ＩＡ）で示されるラジカルと接続することによってアルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルに接続している。
【００７０】
【化４】
2013545795.tif 000005
【００７１】
［式中、
Ｒ１は、１以上の細胞内カルボキシルエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解可能なエステル基であり；
Ｒ２は、天然又は非天然のアルファアミノ酸の側鎖であり；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ２であり；
Ｙは、結合、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ４−、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ４−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−又は−ＮＲ４−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ４は、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
Ｌは、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して、０又は１であり、
Ｑは、（ｉ）置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカル、又は（ｉｉ）ｍ及びｐが同時に０の場合、式−Ｘ２−Ｑ１−又は式−Ｑ１−Ｘ２−の二価のラジカル（式中、Ｘ２は、−Ｏ−、−Ｓ−又はＮＲＡ−（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）であり、且つＱ１は、置換されていてもよい二価の単環式又は二環式の５〜１３員環の炭素環又はヘテロ環のラジカルである。）であり、
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、置換されていてもよい二価のＣ３−Ｃ７シクロアルキルラジカル、又は置換されていてもよい直鎖又は分枝鎖の、Ｃ１−Ｃ６アルキレンラジカル、Ｃ２−Ｃ６アルケニレンラジカル又はＣ２−Ｃ６アルキニレンラジカル（それらは、エーテル（−Ｏ−）、チオエーテル（−Ｓ−）又はアミノ（−ＮＲＡ−）（式中、ＲＡは、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。）のリンクを含んでいてもよく、或いは末端に有していてもよい。）である。）であり；
Ｘは、結合、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−ＮＲ４Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５−、−ＮＲ４Ｓ（＝Ｏ）２−又は−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ４−（式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素又は置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルである。）であり；
ｚは、０又は１である。
【００７２】
上述の実施態様では、Ｒ３は、多くの場合Ｈである。
【００７３】
他の実施態様では、Ｒ１は、式−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１４のエステル基（式中、Ｒ１４は、
Ｒ８Ｒ９Ｒ１０Ｃ−（式中、
（ｉ）  Ｒ８が、水素、置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−又は置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ３）アルケニル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−（式中、ａ及びｂは、独立して、０又は１であり、且つＺ１は、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＲ１１−（式中、Ｒ１１は、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。）である。）であり；且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；
（ｉｉ）  Ｒ８が、水素又は置換されていてもよいＲ１２Ｒ１３Ｎ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（式中、Ｒ１２は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、且つＲ１３は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであるか；或いはＲ１２及びＲ１３は、それらが結合する窒素とともに、置換されていてもよい、単環式の５又は６個の環原子のヘテロ環又は二環式の８ないし１０個の環原子のヘテロ環系を形成している。）であり、且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；或いは
（ｉｉｉ）  Ｒ８及びＲ９が、それらが結合する炭素とともに、置換されていてもよい、単環式若しくは架橋単環式の３ないし７個の環原子の炭素環又は二環式若しくは架橋単環式の８ないし１０個の環原子の炭素環系を形成し、且つＲ１０が水素であり、
ただし、上記の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の場合の「アルキル」はフルオロアルキルを含む。）である。）であり；
Ｒ２は：
Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、２−、３−又は４−ヒドロキシフェニル基、２−、３−又は４−メトキシフェニル基、２−、３−又は４−ピリジルメチル基、ベンジル基、フェニルエチル基、２−、３−又は４−ヒドロキシベンジル基、２−、３−又は４−ベンジルオキシベンジル基、２−、３−又は４−Ｃ１−Ｃ６アルコキシベンジル基及びベンジルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−基；
任意の官能基が保護されていてもよい天然のαアミノ酸の特徴的な基；
基−［Ａｌｋ］ｎＲ６（式中、Ａｌｋは、１以上の−Ｏ−原子、−Ｓ−原子又は−Ｎ（Ｒ７）−基［式中、Ｒ７は、水素原子又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。］が割り込んでいてもよい、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基であり、ｎは０又は１であり、且つＲ６は、置換されていてもよいシクロアルキル基又は置換されていてもよいシクロアルケニル基である。）；
式−ＯＣＨ２ＣＯＲ８の基でフェニル環が置換されたベンジル基（式中、Ｒ８は、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）アミノ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ酸の残基、又はその酸ハロゲン化物、そのエステル若しくはそのアミド誘導体の残基であり、当該残基は、アミド結合を介して結合し、当該アミノ酸は、グリシン、α又はβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる。）；
ヘテロ環（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（ここで、ヘテロ環が、置換されていないか、或いはハロ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、トリフルオロメチル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、メルカプト、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルフェニルメチルでモノ又はジ置換されている。）；及び
基−ＣＲａＲｂＲｃ（式中：
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであるか；或いは
Ｒｃが、水素であり、且つＲａ及びＲｂが、独立して、フェニル又はヘテロアリール（例、ピリジル）であるか；或いは
Ｒｃが、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり、且つＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、３ないし８員のシクロアルキル環又は５ないし６員のヘテロ環を形成するか；或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それらが結合する炭素原子とともに、三環式の環（例えばアダマンチル）を形成するか；或いは
Ｒａ及びＲｂが、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又は以下でＲｃとして定義された水素以外の基であるか、或いはＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、シクロアルキル環又はヘテロ環を形成し、且つＲｃが、水素、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ２（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル又は基−Ｑ−Ｗ（Ｑは、結合又は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−若しくは−ＳＯ２−であり、且つＷはフェニル基、フェニルアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニルアルキル基、ヘテロアリール基又はヘテロアリールアルキル基であり、ここで、基Ｗは、ヒドロキシル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。）である。）が挙げられ；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ２であり；
Ｙは、結合であり；
Ｌは、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して、０又は１であり、
Ｑは、１，４−フェニレンであり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２−、ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２、−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＷＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−又は−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）であるか、或いはＡｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、シクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル又はシクロヘキシルラジカルであってもよい。）であり；
Ｘは、結合、−Ｏ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；且つ
ｚは、０又は１である。
【００７４】
他の実施態様では、Ｒ１は、エステル基ＣＯＯＲ１４（式中、Ｒ１４は、メチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチルから選ばれる。）であり；
Ｒ２は、ベンジル、フェニル、シクロヘキシルメチル、ピリジン−３−イルメチル、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、１−ベンジルチオ−１−メチルエチル、１−メチルチオ−１−メチルエチル、１−メルカプト−１−メチルエチル、フェニルエチルから選ばれ；
Ｒ３は、Ｈ又はＲ２であり；
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚは、−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｖＯ−、（ＣＨ２）ｗＯ−、
【００７５】
【化５】
2013545795.tif 000006
【００７６】
（式中、ｖは、１、２、３又は４であり、且つｗは、１、２又は３である。）、並びに−（ＣＨ２）ｘ−Ｈｅｔ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（Ｈｅｔ１）ｙｙ−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ２）ｙ−及び−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｐｈは、１，４−フェニレン基であり、Ｈｅｔ１は、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｈｅｔ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり、ｘは、０、１又は２であり、ｙは、０又は１であり、且つｙｙは、０又は１である。）から選ばれる。
【００７７】
従って、上記の実施態様では、本発明の造影剤は、式（ＩＡ’）のものである：
【００７８】
【化６】
2013545795.tif 000007
【００７９】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｙ、Ｌ、Ｘ及びｚは、上記定義の通りであり、且つＩｍは造影剤である。）。
【００８０】
他の実施態様では、造影剤は、式（ＩＢ）で示されるラジカルに接続することにより、アルファモノ又はジ置換されたアミノ酸エステルに接続している：
【００８１】
【化７】
2013545795.tif 000008
【００８２】
［式中：
環Ｄは、環Ｄに示された窒素原子に加えて、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれる０、１又は２個のヘテロ原子を含む飽和した非縮合の５ないし６員のヘテロシクリル基であり、当該環は、基Ｒ１で置換され、且つ基Ｒ２で置換されていてもよく、ここでＲ１は、示された環窒素原子に隣接した環炭素原子に結合し、且つＲ２は、基Ｒ１を有する同一の炭素原子上にあり、且つ環Ｄは、さらに置換されていないか、或いはハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−４アルコキシ基及びヒドロキシル基から選ばれる１又は２個の基でさらに置換されており；
Ｒ１は、式−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１４のエステル基（式中、Ｒ１４は、
Ｒ８Ｒ９Ｒ１０Ｃ−（式中、
（ｉ）  Ｒ８が、水素、置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−又は置換されていてもよい（Ｃ２−Ｃ３）アルケニル−（Ｚ１）ａ−［（Ｃ１−Ｃ３）アルキル］ｂ−（式中、ａ及びｂは、独立して、０又は１であり、且つＺ１は、−Ｏ−、−Ｓ−又は−ＮＲ１１−（式中、Ｒ１１は、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである。）である。）であり；且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；
（ｉｉ）  Ｒ８が、水素又は置換されていてもよいＲ１２Ｒ１３Ｎ−（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−（式中、Ｒ１２は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、且つＲ１３は水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであるか；或いはＲ１２及びＲ１３は、それらが結合する窒素とともに、置換されていてもよい、単環式の５又は６個の環原子のヘテロ環又は二環式の８ないし１０個の環原子のヘテロ環系を形成している。）であり、且つＲ９及びＲ１０が、独立して、水素又は（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−であるか；或いは
（ｉｉｉ）  Ｒ８及びＲ９が、それらが結合する炭素とともに、置換されていてもよい、単環式若しくは架橋単環式の３ないし７個の環原子の炭素環又は二環式若しくは架橋単環式の８ないし１０個の環原子の炭素環系を形成し、且つＲ１０が水素であり、
ただし、上記の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の場合の「アルキル」はフルオロアルキルを含む。）である。）であり；
Ｒ２は、存在する場合：
Ｃ１−Ｃ６アルキル基、フェニル基、２−、３−又は４−ヒドロキシフェニル基、２−、３−又は４−メトキシフェニル基、２−、３−又は４−ピリジルメチル基、ベンジル基、フェニルエチル基、２−、３−又は４−ヒドロキシベンジル基、２−、３−又は４−ベンジルオキシベンジル基、２−、３−又は４−Ｃ１−Ｃ６アルコキシベンジル基及びベンジルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−基；
任意の官能基が保護されていてもよい天然のαアミノ酸の特徴的な基；
基−［Ａｌｋ］ｎＲ６（式中、Ａｌｋは、１以上の−Ｏ−原子、−Ｓ−原子又は−Ｎ（Ｒ７）−基［式中、Ｒ７は、水素原子又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。］が割り込んでいてもよい、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル基であり、ｎは０又は１であり、且つＲ６は、置換されていてもよいシクロアルキル基又は置換されていてもよいシクロアルケニル基である。）；
式−ＯＣＨ２ＣＯＲ８の基でフェニル環が置換されたベンジル基（式中、Ｒ８は、ヒドロキシル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）アミノ、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ酸の残基、又はその酸ハロゲン化物、そのエステル若しくはそのアミド誘導体の残基であり、当該残基は、アミド結合を介して結合し、当該アミノ酸は、グリシン、α又はβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる。）；
ヘテロ環（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（ここで、ヘテロ環が、置換されていないか、或いはハロ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、シアノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、トリフルオロメチル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、ジ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、メルカプト、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、メルカプト（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキルフェニルメチルでモノ又はジ置換されている。）；及び
基−ＣＲａＲｂＲｃ（式中：
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであるか；或いは
Ｒｃが、水素であり、且つＲａ及びＲｂが、独立して、フェニル又はヘテロアリール（例、ピリジル）であるか；或いは
Ｒｃが、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり、且つＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、３ないし８員のシクロアルキル環又は５ないし６員のヘテロ環を形成するか；或いは
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃが、それらが結合する炭素原子とともに、三環式の環（例えばアダマンチル）を形成するか；或いは
Ｒａ及びＲｂが、それぞれ独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、フェニル（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、又は以下でＲｃとして定義された水素以外の基であるか、或いはＲａ及びＲｂが、それらが結合する炭素原子とともに、シクロアルキル環又はヘテロ環を形成し、且つＲｃが、水素、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、−ＳＯ２（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル又は基−Ｑ−Ｗ（式中、Ｑは、結合又は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−又は−ＳＯ２−であり、且つＷは、フェニル基、フェニルアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル基、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニルアルキル基、ヘテロアリール基又はヘテロアリールアルキル基であり、ここで、基Ｗは、ヒドロキシル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ４）ペルフルオロアルキル、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２、−ＮＨＣＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ４−Ｃ８）シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。）である。）が挙げられ；
Ｙは、結合であり；
Ｌは、式−（Ａｌｋ１）ｍ（Ｑ）ｎ（Ａｌｋ２）ｐ−の二価のラジカル（式中、
ｍ、ｎ及びｐは、独立して、０又は１であり、
Ｑは、１，４−フェニレンであり；
Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２−、ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ２、−ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＷＣＨ２ＣＨ２Ｗ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＷＣＨ２ＣＨ２ＷＣＨ２−又は−ＷＣＨ２ＣＨ２−（式中、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）−又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２−である。）であるか、或いはＡｌｋ１及びＡｌｋ２は、独立して、シクロプロピルラジカル、シクロペンチルラジカル又はシクロヘキシルラジカルであってもよい。）であり；
Ｘは、結合、−Ｏ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり；且つ
ｚは、０又は１である。］。
【００８３】
通常、上記の実施態様では、Ｒ２は存在しない。
【００８４】
他の実施態様では、
環Ｄは、
【００８５】
【化８】
2013545795.tif 000009
【００８６】
から選ばれる基であり、
Ｒ１は、エステル基ＣＯＯＲ１４（式中、Ｒ１４は、メチル、トリフルオロメチル、エチル、ｎ−若しくはイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−若しくはｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、ノルボルニル、アリル、フェニル、ベンジル、２−、３−若しくは４−ピリジルメチル、Ｎ−メチルピペリジン−４−イル、テトラヒドロフラン−３−イル又はメトキシエチルから選ばれる。）であり；
ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚは、−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｖＯ−、（ＣＨ２）ｗＯ−、
【００８７】
【化９】
2013545795.tif 000010
【００８８】
（式中、ｖは、１、２、３又は４であり、且つｗは、１、２又は３である。）、並びに−（ＣＨ２）ｘ−Ｈｅｔ２−、−ＣＨ２−Ｐｈ−（Ｈｅｔ１）ｙｙ−（ＣＨ２）ｘ−（Ｈｅｔ２）ｙ−及び−ＣＨ２−Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−（式中、Ｐｈは、１，４−フェニレン基であり、Ｈｅｔ１は、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｈｅｔ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−であり、ｘは、０、１又は２であり、ｙは、０又は１であり、且つｙｙは、０又は１である。）から選ばれる。
【００８９】
式（ＩＢ）のラジカルでは、ラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚは、最も好ましくは、アルキレン基−（ＣＨ２）ｖ−（式中、ｖは０、１、２、３又は４である。）又は基−（ＣＨ２）−Ｐｈ−（式中、Ｐｈは１，４−フェニレン基である。）であり、より好ましくは、アルキレン基−（ＣＨ２）ｖ−である。
【００９０】
アミノ酸ラジカルが、式（ＩＢ）のラジカルとして接続している上記の実施態様で、本発明の造影剤は、式（ＩＢ’）のものである：
【００９１】
【化１０】
2013545795.tif 000011
【００９２】
（式中、Ｒ１、Ｄ、Ｙ、Ｌ、Ｘ及びｚは、上記定義の通りであり、且つＩｍは造影剤である。）。
【００９３】
本発明の造影剤の具体的な例は、式：
【００９４】
【化１１】
2013545795.tif 000012
【００９５】
の化合物及びその塩である。
【００９６】
本明細書中記載された造影剤は、マクロファージ細胞の造影剤として使用されるものが好ましい。
【００９７】
（造影剤）
本発明の原理は、広範囲の造影剤に適用することができる。適切なアルファアミノ酸エステルモチーフは、広範囲の造影剤の何れか一つに直接的又は間接的に結合していてもよい。例えば、表１にいくつかの望ましい造影剤をリストアップした。
表１
【００９８】
【表１−１】
2013545795.tif 000013
【００９９】
【表１−２】
2013545795.tif 000014
【０１００】
【表１−３】
2013545795.tif 000015
【０１０１】
【表１−４】
2013545795.tif 000016
【０１０２】
表１にリストアップされた造影剤は、本発明で用いるために利用可能な造影剤の単なる例示である。上記の造影剤又は代わりの造影剤のバリエーションも想定される。特に、いくつかの商業的に利用可能な造影剤は、追加の官能基を含んでいてもよい。このような官能基は、本発明の造影剤において存在しないくてもよい。
【０１０３】
ここで、実証することを目的として、アルファアミノ酸エステルがどのように、既知の造影剤に直接的又は間接的に結合し得るのかを示す例をリストアップした表２を引用する。
表２
【０１０４】
【表２−１】
2013545795.tif 000017
【０１０５】
【表２−２】
2013545795.tif 000018
【０１０６】
＊Ｃｕ−６４は、イメージングに有用な優れた崩壊特性を備える銅の放射性核種である。Ｃｕ−６４錯体は、既知の銅キレート剤に基づく（Solvent Extraction. Classical and Novel Approaches, Vladimir S. Kislik. Also, J. Inorg. Nucl. Chem, Vol 42, pp 431-439）。
【０１０７】
また同様のアプローチが、表１で示された他の造影剤にも使用することができる。
【０１０８】
このように、造影剤をアルファモノ−又はジ−置換されたアミノ酸エステルに結合させる位置は広く変化させることができ、且つ一般的に、望ましい結合点は、当業者により選択され得ることがわかる。アミノ酸エステル部分の結合点は、造影剤の機能及びアルファアミノ酸エステル基の加水分解能力を保つように選択されるべきである。本発明の造影剤は、アミノ酸部分の分離した生成物及び造影剤により、例えば標準的な付加反応化学を用いて、２つの部分を結合することにより合成することができる。別の方法として、本発明の造影剤を代わりの出発原料から合成してもよい。典型的な合成法は、以下の実施例の節で示される。
【０１０９】
さらに、上記の式（ＩＡ’）及び式（ＩＢ’）において、造影剤ラジカルＩｍが：
ＰＥＴで用いられる造影剤（例えば１８Ｆ、１１Ｃ、１３Ｎ及び６４Ｃｕ）（６４Ｃｕ錯体を含む（例えば、
【０１１０】
【化１２】
2013545795.tif 000019
【０１１１】
［式中、Ｒは、Ｈ又は置換基（例、Ｃ１−Ｃ６アルキル基）である。］）。）；
ＳＰＥＣＴで用いられる造影剤（例、９９Ｔｃ、１２３Ｉ及び２０１Ｔｌ）及び９９Ｔｃ、１２３Ｉ又は２０１Ｔｌを含むラジカル（例、
【０１１２】
【化１３】
2013545795.tif 000020
【０１１３】
）；
蛍光色素分子（例、
【０１１４】
【化１４】
2013545795.tif 000021
【０１１５】
）及びその誘導体（その置換されたラジカルを含む）；
Ｇｄ３＋錯体を含むＭＲＩ造影剤（MRI contrast agent）（例、
【０１１６】
【化１５】
2013545795.tif 000022
【０１１７】
）；及び
ヨウ素含有ラジカルのようなＸ線造影剤（例えば、２，４，６−ヨードフェニル化合物；（例、
【０１１８】
【化１６】
2013545795.tif 000023
【０１１９】
）
から選ばれるものであってもよいということが上記の表１及び表２から明確である。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
次に、本発明は、図を参照しながら実施例としてのみ記載する：
【図１】図１は、単球細胞株及び非単球細胞株でのｈＣＥ−１、ｈＣＥ−２及びｈＣＥ−３の絶対発現を示す；
【図２】図２は、ＴＨＰ−１細胞株、ＨＬ−６０細胞株及びＫＧ−１細胞株でのｈＣＥ−１の相対発現を示す；
【図３】図３は、染色３０分後の本発明の造影剤（実施例１）で染色したＨＬ６０細胞（ほとんどｈＣＥ−１を含有せず）を示す；
【図４】図４は、染色３０分後の本発明の造影剤（実施例１）で染色したＴＨＰ１細胞（有意な量のｈＣＥ−１を含有）を示す；
【図５】図５は、本発明の造影剤（実施例１）でＫＧ−１細胞（ほとんどｈＣＥ−１を含有せず）を処理した後の蛍光の僅かな増加を図示する；
【図６】図６は、本発明の造影剤（実施例１）でＴＨＰ−１細胞（有意な量のｈＣＥ−１を含有）を処理した後の蛍光の大きな増加を図示する；
【図７】図７は、本発明の造影剤のｈＣＥ−１への結合を概略的に示す；
【図８】図８は、実施例３の化合物及びそのｈＣＥ１結晶構造１ＸＭ１への予測される結合を示す。
【０１２１】
本発明の造影剤を用いた処理では、有意な量のｈＣＥ−１を発現した細胞（図４）は、有意的にｈＣＥ−１を発現していない細胞（図３）に比べて、より簡単に背景と区別することができることがわかる。
【０１２２】
このように、造影剤複合体は、単球細胞（例、マクロファージ）を含む有意な量のｈＣＥ−１を発現した細胞の選択的なイメージングを可能にする。言い換えれば、請求項に係る造影剤複合体は、非単球細胞に比べ単球細胞を選択的に照らし出す。本発明の造影剤での処理後、有意な量のｈＣＥ−１を発現したＴＨＰ−１単球細胞（図６）は、ｈＣＥ−１を有意に発現していないＫＧ−１非−単球細胞（図５）に比べて、非常に高い度合いの蛍光を示すということが図５及び６に示された画像からわかる。以上の通り、単球細胞で観察されるより強い蛍光は、ｈＣＥ−１による複合体のアミノ酸エステルの選択的な加水分解に起因している。
【０１２３】
アミノ酸エステルラジカルの造影剤への好ましい結合点は、ｈＣＥ−１のＸ線結晶構造にて提案される造影剤／アミノ酸エステル複合体のドッキングスタディを用いることで、図７で描かれているように、酵素の活性部位へのエステルの良好な調和を確認することができる。リンカーの結合部位は、主なイメージングコア構造を妨げるべきではない。
【０１２４】
ここで、本発明を、本発明の具体的な実施態様である実施例１から３を引用して詳細に説明する。
【０１２５】
実施例 1. シクロペンチル(2S)-[(4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}ベンジル)アミノ](フェニル)エタノアート
【０１２６】
【化１７】
2013545795.tif 000024
【０１２７】
造影剤実施例１は、蛍光性造影剤及びアルファ置換されたアミノ酸エステルの共有結合性複合体である。細胞に侵入することで、アミノ酸エステルモチーフは、ｈＣＥ−１により、低い細胞透過性の対応する酸に選択的に加水分解され、これにより、加水分解された複合体は、ｈＣＥ−１が有意に発現した細胞（例、単球細胞（例、マクロファージ））において選択的に蓄積する原因となる。
【０１２８】
実施例１の調製
本発明の造影剤（特に実施例１）を、以下に記載された方法により調製してもよい。
【０１２９】
（合成）
本発明に関する造影剤の合成のための多様な合成戦略が存在するが、すべては有機合成化学者に知られた周知の化学に基づく。したがって、造影剤は、標準的な文献に記載された手順及び当業者に良く知られた手順に従って合成することができる。代表的な文献源は、「Advanced organic chemistry」, 4th Edition (Wiley), J March; 「Comprehensive Organic Transformation」, 2nd Edition (Wiley), R.C. Larock; 「Handbook of Heterocyclic Chemistry」, 2nd Edition (Pergamon), A.R. Katritzky; 「Synthesis」、「Acc. Chem. Res.」、「Chem. Rev」で見られるようなレビュー論文、又は標準的な文献検索オンラインによって特定される主な文献源、又は「Chemical Abstracts」又は「Beilstein」のような二次情報源からものである。実施例１及びその中間体の調製で用いられる合成経路は、類似の化合物の調製のためのものが適用されてもよい。
【０１３０】
（略記）
ＭｅＯＨ  ＝  メタノール
ＥｔＯＨ  ＝  エタノール
ＥｔＯＡｃ  ＝  酢酸エチル
Ｂｏｃ  ＝  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＦ３．ＯＥｔ２  ＝  ボロントリフルオリドジエチルエーテラート
ＤＣＭ  ＝  ジクロロメタン
ＤＣＥ  ＝  １，２−ジクロロエタン
ＤＭＡＰ  ＝  ジメチルアミノピリジン
ＴＦＡ  ＝  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  ＝  テトラヒドロフラン
ＮａＨＣＯ３  ＝  炭酸水素ナトリウム
ＨＣｌ  ＝  塩酸
ａｑ  ＝  水溶液
ｓａｔ  ＝  飽和した
ＳＴＡＢ  ＝  ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド
Ｎ２  ＝  窒素
Ｎａ２ＳＯ４  ＝  硫酸ナトリウム
Ｅｔ３Ｎ  ＝  トリエチルアミン
ＭｇＳＯ４  ＝  硫酸マグネシウム
ＥＤＣ  ＝  Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＴＬＣ  ＝  薄層クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ  ＝  液体クロマトグラフィー／質量分析
ｍＬ  ＝  ミリリットル
ｇ  ＝  グラム
ｍｇ  ＝  ミリグラム
ｍｏｌ  ＝  モル
ｍｍｏｌ  ＝  ミリモル
ＨＰＬＣ  ＝  高速液体クロマトグラフィー
ＮＭＲ  ＝  核磁気共鳴
ｒ．ｔ  ＝  室温
ｈｒ（ｓ）  ＝  時間
【０１３１】
市販の試薬及び溶媒（ＨＰＬＣグレード）をさらに精製することなく用いた。溶媒はＢｕｃｈｉロータリーエバポレーターを用いて除去した。マイクロウェーブ照射はＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ（登録商標）Ｅｉｇｈｔマイクロウェーブ合成装置を用いて行った。フラッシュクロマトグラフィーカラムによる化合物の精製は、Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍから入手した、粒径４０−６３μμｍ（２３０−４００メッシュ）のシリカゲルを用いて実行した。逆相カラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ  ｌｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−１８  （４０−６０μｍ）のプレカラムを用いた後、ＲｅｄｉＳｅｐ  Ｒｆ  Ｃ１８カラム（Ｐｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）を用いたＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ、Ｎｅｂｒａｓｋａ、ＵＳＡ）で精製して実行した。分取ＨＰＬＣによる化合物の精製は、ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｈａｓｅ  Ａｘｉａ（登録商標）ｐｒｅｐ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム（１０μｍｕ、１００ｘ２１．２ｍｍ）（グラジエント０−１００％Ｂ（Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、Ｂ＝アセトニトリル／０．０５％ＴＦＡ）（１０分に渡る）、流速＝２５ｍｌ／分、２５４ｎｍでのＵＶ検出）を使用したＧｉｌｓｏｎ  ｓｙｓｔｅｍｓで行った。
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、重水素化溶媒中にてＢｒｕｋｅｒ  ３００  ＭＨｚ  ＡＶ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで記録した。化学シフト（δ）は、百万分率とした。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析は、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４  （Ｍｅｒｃｋ）プレートを用いて実行し及びＵＶ光を用いて可視化した。分析ＨＰＬＣ／ＭＳを、逆相ＬｕｎａＣ１８カラム（３μμｍ、５０ｘ４．６ｍｍ）（グラジエント５−９５％Ｂ（Ａ＝水／０．１％ギ酸、Ｂ＝アセトニトリル／０．１％ギ酸）（２．２５分に渡る）、流速＝２．２５ｍｌ／分）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００  ＬＣ  ｓｙｓｔｅｍで実行した。ＵＶスペクトルは、Ｇ１３１５Ｂ  ＤＡＤ  検出器を用いて２２０及び２５４ｎｍにて記録した。質量スペクトルは、ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬ  Ｇ１９５６Ｂ検出器で範囲ｍ／ｚ１５０〜８００にて得た。データは、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ及びＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ  Ｄａｔｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて集積し報告した。
【０１３２】
スキーム  １  −  実施例  １の調製手順
【０１３３】
【化１８】
2013545795.tif 000025
【０１３４】
工程1. tert-ブチル {3-[4-(ヒドロキシメチル)フェノキシ]プロピル}カルバメート
【０１３５】
【化１９】
2013545795.tif 000026
【０１３６】
4-ヒドロキシベンジルブロミド(0.1 g, 0.8 mmol)及びtert-ブチル(3-ブロモプロピル)カルバメート(0.29 g, 1.2 mmol)のDMF(5 mL)溶液に、炭酸カリウム(0.44 g, 3.2 mmol)を加えた。反応を70℃で終夜加熱した。TLCでは30%終結したことのみを示したため、反応を終夜再び加熱した。反応を酢酸エチル(10 mL)で希釈し、水(10 mL)で洗浄した。水層を酢酸エチル(1 x 5 mL)で洗浄し、合わせた有機層を乾燥(Na2SO4)した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を分取TLC(シリカゲル, 50% 酢酸エチル／ヘプタン)で精製し、粘性油状物として生成物(120 mg)を得た。
LCMS: m/z 282 [M+H]+.
【０１３７】
工程 2. [4-(3-アミノプロポキシ)フェニル]メタノール トリフルオロアセテート
【０１３８】
【化２０】
2013545795.tif 000027
【０１３９】
tert-ブチル{3-[4-(ヒドロキシメチル)フェノキシ]プロピル}カルバメート(120 mg)を2% TFA／DCMに溶解し、室温で20分間静置した。溶媒を減圧下で除去し、[4-(3-アミノプロポキシ)フェニル]メタノール トリフルオロアセテート(135 mg)を得た。LCMS: m/z 182 [M+H]+.
【０１４０】
工程 3. (4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}フェニル)メタノール
【０１４１】
【化２１】
2013545795.tif 000028
【０１４２】
[4-(3-アミノプロポキシ)フェニル]メタノール トリフルオロアセテート(135 mg, 0.47 mmol)のEtOH(2 mL)撹拌溶液に、炭酸カリウム(126 mg, 0.91 mmol)を加えた。この溶液に、4-クロロ-7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサダイゾール(91 mg, 0.47 mmol)のEtOH(3 mL)溶液を室温で2時間滴下した。溶媒を留去し、残渣を分取TLC(シリカゲル, 50% 酢酸エチル／ヘプタン)で精製し、鮮黄色固体として(4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}フェニル)メタノール(20 mg)を得た。LCMS: m/z 345 [M+H]+.
【０１４３】
工程 4. 4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}ベンズアルデヒド
【０１４４】
【化２２】
2013545795.tif 000029
【０１４５】
4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}フェニル)メタノール(20 mg, 5.8 mmol)のCH2Cl2(0.5 mL)溶液に、二酸化マンガン(25 mg, 0.29 mmol)を加え、反応を室温で終夜撹拌した。追加の二酸化マンガン(12 mg)を加え、5日間続けて撹拌した。反応をセライトパッドでろ過し、DCMで十分に洗浄した。合わせたろ液を留去し、残渣を次の工程で精製することなく用いた。
【０１４６】
工程 5. シクロペンチル (2S)-[(4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}ベンジル)アミノ](フェニル)エタノアート
【０１４７】
【化２３】
2013545795.tif 000030
【０１４８】
4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}ベンズアルデヒド(20 mg,0.01 mmol)及びシクロペンチル L-フェニルグリシナート トシル酸塩*(33 mg, 0.01 mmol)の溶液に、炭酸カリウム(11mg, 0.01 mmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(7 mg, 0.011 mmol)及び酢酸(1 滴)を加え、反応を室温で12 時間撹拌した。反応を留去し、乾燥し、残渣をEtOAc(10 mL)と水(3 mL)で分配し、有機層を(2 x 3 mL)で洗浄した。有機層を乾燥(Na2SO4)し、留去した。残渣を、分取TLC(60% EtOAc／ヘプタン)で精製し、シクロペンチル (2S)-[(4-{3-[(7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール-4-イル)アミノ]プロポキシ}ベンジル)アミノ](フェニル)エタノアート(8 mg)を得た。
LCMS: m/z 546 [M+H]. 1H NMR (CD3OD) δppm: 8.39 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.31-7.16 (5H, m), 7.08 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.82 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.31 (1H, d, J = 7.0 Hz), 5.48 (1H, s), 5.02 (1H, m), 4.17 (2H, s), 4.03 (2H, m), 3.51 (2H, m), 2.47 (2H, m), 2.14 (2H, m), 1.78-1.26 (10H, m).
【０１４９】
*シクロペンチルL-フェニルグリシナート トシル酸塩の合成は、以下に記載した通り。
【０１５０】
【化２４】
2013545795.tif 000031
【０１５１】
(S)-フェニルグリシン(5 g, 33.1 mmol)のシクロヘキサン(150 mL)のスラリーに、シクロペンタノール(29.84 ml, 331 mmol)及びp-トルエンスルホン酸(6.92 g, 36.4 mmol)を加えた。反応に、ディーン・スターク・レシーバーを装着し、135℃に昇温し、完全に溶解させた。12時間後、反応を室温に放冷し、白色固体の沈殿物を導いた。固体をろ過し、EtOAcで洗浄し、その後、減圧下で乾燥し、所望の生成物を白色粉末(11.01 g, 85%)として得た。1H NMR (300MHz, d6-DMSO) δppm; 8.82 (2H, br s), 8.73 (1H, br s), 7.47 (7H, m), 7.11 (2H, d), 5.25 (1H, br s), 5.18 (1H, m), 2.29 (3H, s), 1.87-1.36 (8H, m).
【０１５２】
以下の構成単位を、本明細書に記載された実施例2及び3の合成で用いた：
【０１５３】
【化２５】
2013545795.tif 000032
【０１５４】
構成単位Ａ − シクロペンチル L-ロイシナートを以下に記載された手順を用いて調製した：
L-ロイシン(5 g, 30.5 mmol)のシクロヘキサン(150 mL)のスラリーに、シクロペンタノール(27.5 mL, 305 mmol)及びp-トルエンスルホン酸(6.33 g, 33.3 mmol)を加えた。反応にディーン・スターク・レシーバーを装着し、135℃に加熱し、完全に溶解させた。当該温度を、12時間（反応が完結する時間後）にわたって維持した。反応を室温に放冷し、白色固体を沈殿させた。固体をろ過し、EtOAcで洗浄し、減圧下で乾燥した。トシル酸塩として所望の生成物(10.88 g, 85 %)を分離した。
LCMS: m/z = 200 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) d: 1.01 (6H, t, J=5.8 Hz), 1.54-2.03 (11H, m), 2.39 (3H, s), 3.96 (1H, t, J=6.5 Hz), 5.26-5.36 (1H, m), 7.25 (2H, d, J=7.9 Hz), 7.72 (2H, d, J=8.3 Hz).
【０１５５】
構成単位Ｂ − 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル ピペラジン-1,2-ジカルボキシラート
【０１５６】
【化２６】
2013545795.tif 000033
【０１５７】
1-tert-ブチル 2-シクロペンチル ピペラジン-1,2-ジカルボキシラートを、スキーム２に示された経路を用いて合成した。
【０１５８】
【化２７】
2013545795.tif 000034
【０１５９】
ステージ1. 4-ベンジル 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル ピペラジン-1,2,4-トリカルボキシラート
【０１６０】
4-[(ベンジルオキシ)カルボニル]-1-(tert-ブトキシカルボニル)ピペラジン-2-カルボン酸(9.96 g, 27 mmol)を、DCM(50 mL)に溶解し、0℃に冷却した。次いで、シクロペンタノール(7.4 mL, 82 mmol)、EDC(7.86 g, 41 mmol)及びDMAP(0.33 g, 2.7 mmol)を加え、反応を室温に昇温し、24時間撹拌した。次いで、水(100 mL)及びDCM(50 mL)を加え、層を分離した。水層をDCM(2 x 50 mL)で再抽出し、次いで、合わせた有機層をMgSO4で乾燥し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー(40% EtOAc/ヘプタン)で精製し、無色油状物として標題化合物(10.4 g, 88%)を得た。
LC/MS: m/z 455 [M+Na]+.  
【０１６１】
ステージ2. 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル ピペラジン-1,2-ジカルボキシラート
【０１６２】
4-ベンジル 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル ピペラジン-1,2,4-トリカルボキシラート(10.4 g)を酢酸エチル(100 mL)に溶解し、10% パラジウム炭素(2 g, 20% w/w)とともに水素下大気圧で18時間撹拌した。次いで、反応混合物をセライト（登録商標）でろ過し、溶媒を真空下除去し、白色固体として標題化合物(6.62 g, 92%)を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 5.27 (1H, m), 4.50 (1H, m), 3.81 (1H, m), 3.50 (1H, m), 2.82-3.2 (3H, m), 2.72 (1H, m), 1.55-1.95 (8H, br m), 1.45 (9H, s).
【０１６３】
実施例 2 − 1,3,5,7-テトラメチル-8-(4-シクロペンチル N-ベンジル-L-ロイシナート)-4,4’-ジフルオロボロジアザインダセン
【０１６４】
【化２８】
2013545795.tif 000035
【０１６５】
スキーム 3 − 構成単位Ａからの実施例2の調製手順
【０１６６】
【化２９】
2013545795.tif 000036
【０１６７】
ステージ1 − シクロペンチル N-[4-(ジエトキシメチル)ベンジル]-L-ロイシナート 
【０１６８】
DCE(20 mL)中の構成単位Ａ(5.35 g, 14.4 mmol)に、テレフタルデヒド モノ-ジエチル アセタール(2 g, 9.6 mmol)を加えた。反応混合物を室温で1時間撹拌し、次いで、STAB(4.07 g, 19.2 mmol)を少しずつ加え、室温で18時間撹拌した。DCM(100 mL)を加え、反応混合物をsat. NaHCO3(2 x 100 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(10%-25% EtOAc/ヘプタン)で精製し、無色油状物として目的の生成物(1.85 g, 収率49%)を得た。
LC/MS: m/z 392 [M+H]+. 
【０１６９】
ステージ2 − シクロペンチル N-(4-ホルミルベンジル)-L-ロイシナート 
【０１７０】
THF(10 mL)中のシクロペンチル N-[4-(ジエトキシメチル)ベンジル]-L-ロイシナート(1.85 g)に1M HCl(10 mL)を加えた。反応混合物を室温で18時間撹拌し、反応を完結させた。THFを減圧下で除去し、EtOAc(50 mL)を加え、sat. NaHCO3 (100 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、減圧下で濃縮し、無色油状物として目的の生成物(1.18 g, 収率79%)を得、さらに精製することなく進めた。
LC/MS: m/z 318 [M+H]+.  
1H NMR (300 MHz, CDCl3) d: 10.0 (1H, s), 7.84 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.51 (2H, d, J=8.1 Hz), 5.25 (1H, m), 3.91 (1H, d J=13.8 Hz), 3.68 (1H, d, J=13.8 Hz), 3.2 (1H, t, J=7.2 Hz), 1.95-1.55 (9H, bm), 1.45 (2H, t, J=7.5 Hz), 0.93 (3H, d J=6.9 Hz), 0.88 (3H, d, J=6.9 Hz).
【０１７１】
ステージ3 − 1,3,5,7-テトラメチル-8-(4-シクロペンチル N-ベンジル-L-ロイシナート)-4,4’-ジフルオロボロジアザインダセン
【０１７２】
シクロペンチル N-(4-ホルミルベンジル)-L-ロイシナート(1.18 g, 3.72 mmol)をDCM(250 mL)に溶解し、2,4-ジメチルピロール(707 mg, 7.44 mmol)を加えた。3滴のTFAを加え、室温で15時間撹拌した。追加の2滴のTFAを加え、2時間撹拌し、反応を完結させた。次いでDCM(150 mL)中のテトラクロロベンゾキノン(915 mg, 3.72 mmol)を加え、30分間撹拌し、Et3N(12 mL)及びBF3.OEt2(12 mL)を加えた。さらに18時間撹拌し、粗反応混合物を水(2 x 100 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー(0%-5% MeOH/DCM)で精製し、目的の生成物を得、ヘプタン(150 mL)に懸濁した。ヘプタン層を回収し、減圧下留去し、暗赤色ゴム状物として実施例2(184 mg, 9%)を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δppm: 7.4 (2H, d, J=8.4Hz), 7.15 (2H, d, J=8.4Hz), 5.9 (2H, s), 5.2 (1H, m), 3.85 (1H, d,  J=13.2Hz), 3.6 (1H, d, J=13.2Hz), 3.15 (1H, t, J=7.2Hz), 2.48 (6H, s), 1.75-1.9 (3H, m), 1.51-1.74 (8H, m), 1.4 (1H, t, J=7.0Hz), 1.31 (6H, s), 0.85 (3H, d, J=6.5Hz), 0.79 (3H, d, J=6.4Hz).
LCMS: m/z 537 [M+H]+
【０１７３】
実施例 3 −1,3,5,7-テトラメチル-8-(4-シクロペンチル 4-ベンジルピペラジン-2-カルボキシラート)-4,4’-ジフルオロボロジアザインダセン
【０１７４】
【化３０】
2013545795.tif 000037
【０１７５】
スキーム 4 −構成単位Ｂからの実施例３の調製手順
【０１７６】
【化３１】
2013545795.tif 000038
【０１７７】
ステージ1 − 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル 4-[4-(ジエトキシメチル)ベンジル]ピペラジン-1,2-ジカルボキシラートを構成単位Ｂから以下のように調製した：
【０１７８】
DCM(5 mL)中の構成単位Ｂ(479 mg, 1.6 mmol)に、テレフタルデヒド モノ-ジエチル アセタール(222 mg, 1.07 mmol)を加えた。反応混合物を室温で1時間撹拌し、次いで、STAB(453 mg, 2.14 mmol)を少しずつ加え、18時間室温で撹拌した。DCM(100 mL)を加え、反応混合物をsat. NaHCO3(2 x 50 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、減圧下で濃縮し、透明油状物として所望の生成物(606 mg, 収率>100%)を得、さらに精製することなく進めた。
LC/MS: m/z 491 [M+H]+.  
【０１７９】
ステージ2 − 1-tert-ブチル 2-シクロペンチル 4-(4-ホルミルベンジル)ピペラジン-1,2-ジカルボキシラート
【０１８０】
1-tert-ブチル 2-シクロペンチル 4-[4-(ジエトキシメチル)ベンジル]ピペラジン-1,2-ジカルボキシラート(606 mg)/THF(6 mL)に1M HCl(6 mL)を加えた。反応混合物を室温で18時間撹拌し、反応を完結させた。反応混合物をEtOAc(50 mL)で希釈し、sat. NaHCO3(2 x 50 mL)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)及び減圧下で濃縮し、無色油状物として目的の生成物(440 mg, 収率99%)を得、さらに精製することなく進めた。
LC/MS: m/z 417 [M+H]+.  
【０１８１】
ステージ3 − 1,3,5,7-テトラメチル-8-(4- シクロペンチル 4-ベンジルピペラジン-2-カルボキシラート)-4,4’-ジフルオロボロジアザインダセン
【０１８２】
1-tert-ブチル 2-シクロペンチル 4-(4-ホルミルベンジル)ピペラジン-1,2-ジカルボキシラート(440 mg, 1.06 mmol)を、DCM(90 mL)に溶解し、2,4-ジメチルピロール(200 mg, 2.12 mmol)を加えた。3滴のTFAを加え、室温で15時間撹拌し、反応を完結させた。次いで、DCM(60 mL)中のテトラクロロベンゾキノン(260 mg, 1.06 mmol)を加え、15分間撹拌し、Et3N(5 mL)及びBF3.OEt2(5 mL)を加えた。さらに18時間撹拌し、粗反応混合物を水(2 x 100 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー(0%-5% MeOH/DCM)で精製し、得られた物質をさらにヘプタン(100 mL)に懸濁させた。ヘプタン層を回収し、減圧下留去した。LCMSデータからBoc保護生成物と保護されてない生成物の混合物が確認された。
【０１８３】
112mgの粗物質を2M HCl/ジエチルエーテル(50 mL)に溶解し、室温で18時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー(0%-5% MeOH/DCM)で精製し、橙色油状物として目的の生成物(5.6 mg, 3%)を得た。
LC/MS: m/z 535 [M+H]+.  
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.37 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.15 (2H, d, J=8.1 Hz), 5.91 (2H, s), 5.14 (1H, m), 3.55 (2H, s), 3.49 (1H, m), 3.05 (1H, m), 2.80 (2H, m), 2.48 (6H, s), 2.35 (1H, m), 2.27-2.00 (3H, bm), 1.80 (2H, m), 1.69-1.45 (6H, bm), 1.30 (6H, s).
【０１８４】
図８は、蛋白質構造データバンクから予測したhCE1結晶構造1MX1への実施例3の結合を示している。エステルは、セリン221に近接しており、エステル加水分解を可能にする。また、イメージングコアの溶媒暴露の性質は、アミノ酸エステルのエステラーゼへの結合を伴うコアが、ほとんど影響しないことを意味している。
【０１８５】
（生物学アッセイ）
（破壊細胞カルボキシルエステラーゼアッセイ）
化合物は、破壊細胞加水分解アッセイ(以下記載)における単球細胞（例、マクロファージ）での選択的な加水分解を評価することができる。当該アッセイを単球細胞(例、U937細胞)で実行する場合、加水分解速度は、通常、数千pg/ml/分を超える。しかしながら、この同じ実験を非単球細胞(例、HCT116細胞及びHuT78細胞)で実行すると、加水分解速度は100 pg/ml/分未満となる。
【０１８６】
（細胞抽出物の調製）
U937(単球)又はHCT116(非単球)の腫瘍細胞(〜109)を、4体積のDulbeccos PBS(〜1リットル)で洗浄し、10分間、4℃、525gでペレット状にした。これを二度繰り返し、最終の細胞ペレットを35 mlの低温の均質化バッファー(Trizma 10 mM, NaCl 130 mM, CaCl2 0.5 mM pH 7.0 25oC)に再懸濁した。ホモジネートを窒素キャビテーション(700 psi 4oCで50分間)により調製した。ホモジネートを氷上に保ち、以下の最終濃度で阻害剤のカクテルを補った。
ロイペプチン 1 μM
アプロチニン  0.1 μM
E64 8 μM
ペプスタチン1.5 μM
ベスタチン   162 μM
キモスタチン33 μM
【０１８７】
525gの10分間の遠心分離による細胞ホモジネートの清澄化後、得られた上澄みをエステラーゼ活性源として使用し、必要となるまで-80oCで保存した。
【０１８８】
（エステル開裂の測定）
エステルの対応するカルボン酸への加水分解は、上述のようにして得られる細胞抽出物を用いて測定することができる。それを趣旨として、細胞抽出物(〜30 μg / 合計アッセイ体積0.5 ml)を37℃でトリス-HCl 25 mM、125 mM NaClバッファー、pH7.5 25℃にて、インキュベートした。次いで、ゼロ時間で、エステル(基質)を最終濃度2.5 μMにて加え、サンプルを37℃で適切な時間(通常0又は80分)インキュベートした。反応を3体積のアセトニトリルを加えて停止した。ゼロ時間サンプルに、エステル化合物に先立ってアセトニトリルを加えた。12000g 5分間の遠心分離の後、サンプルを、エステル及びその対応するカルボン酸について室温でLCMS(Sciex API 3000, HP1100バイナリポンプ, CTC PAL)により分析した。クロマトグラフィーは、AcCN(75*2.1mm)カラム及び移動相5-95 % アセトニトリル/水（0.1 % ギ酸）に基づいた。
【０１８９】
ここで記載されたように、通常、カルボキシエステラーゼが、遊離アミノ酸エステル(例、遊離環状アミノ酸エステル)を親酸に加水分解する場合、リンカーラジカル−Ｙ−Ｌ−Ｘ−（ＣＨ２）ｚを介して造影剤に結合した場合に、同じエステルモチーフも加水分解する。従って、ここで記載された破壊細胞アッセイは、アミノ酸エステルが細胞内カルボキシエステラーゼ酵素により加水分解可能であるかどうかを決定するための遊離アミノ酸エステルの試験のために用いることができ、この試験の結果は、接続した分子の性質に関する良好な指標を与える。次いで、そのようにして選ばれたエステルモチーフは、それぞれのリンカーラジカルリンカーラジカルを介して阻害剤に接続している場合に、同じカルボキシエステラーゼアッセイで再アッセイし、それに基づき、さらにカルボキシエステラーゼ基質であることを確認する。
【０１９０】
（単球及び非単球細胞株におけるhCE-1、hCE-2及びhCE-3発現の定量化）
遺伝子特異的プライマーを、hCE-1、-2及び-3をヒトcDNAからPCR増幅するために用いた。PCR生成物をプラスミドベクターにクローニングし、シークエンス検証した。次いで、リアルタイムPCR反応における標準的なカーブとして使用するためにそれらを段階希釈した。全RNAを様々なヒト細胞株から抽出し、cDNAを調製した。細胞株におけるhCEの絶対水準を計るために、遺伝子発現レベルをリアルタイムSYBR Green PCRアッセイにおいて、クローニングしたPCR生成物の基準と比較した。図１からhCE-1のみが単球細胞株において有意な量で発現していることがわかる。
【０１９１】
同じ方法を図２で示されるように相対的な発現レベルを見るために用いた。ここでは、レベルをGAPDH発現に対して評価した。
【０１９２】
（染色実験（図３及び４に示す））
THP1又はHL60細胞を前日に播種し、総体積50mlの完全培地(full media)中で1x104/mlで染色した。HL60については、RMPI1640+10%牛胎児血清、1%グルタミン及び1% ペニシリン/ストレプトマイシンが用いられた。THP1については、RMPI1640 +10%牛胎児血清、1% グルタミン及び1% ペニシリン/ストレプトマイシン、0.05mM メルカプトエタノールを用いた。細胞を、5%CO2の加湿型インキュベーターにて終夜37℃でインキュベートした。次いで、細胞を遠心分離にかけ、50ml PBSを用いて37℃で一度洗浄し、2ml無血清培地中に再懸濁した。
【０１９３】
無血清培地中50 μMの造影剤実施例1を準備し、2mlを細胞懸濁液(総体積4 ml  最終濃度25 μM)に加え、得られた混合物を6ウェルのプレートに導入し、37oCで45 分間インキュベートした。洗浄工程を繰り返し、細胞ペレットを4mlの完全培地(full media)に再懸濁し、さらに30分間37℃でインキュベートした。0.5 mlの細胞懸濁液を4mlで希釈し、各希釈サンプル100μlを96ウェルのプレートに移し、蛍光顕微鏡を用いて試験した。二つの細胞株の画像を、細胞密度を観察するために、ともに白色光照明を用い、造影剤実施例1又は実施例1の加水分解生成物を励起させるために、460-490nmフィルターを使用して、同じ倍率で取得した。
【０１９４】
（単球の及び非単球細胞株の時間に対する蛍光測定（図５及び６に示す））
実施例1で処理後の単球の及び非単球細胞株の蛍光の程度を、フローサイトメトリーを用いて評価した。当該評価をBD Biosciences BD FACSCanto（登録商標）フローサイトメトリーシステムを用いて実行した。
【０１９５】
細胞株を実施例1の3000nM溶液で処理する。結果として得られた混合物を0時間、1時間、2時間、4時間及び6時間でサンプリングする。それぞれの時間ポイントで、細胞のサンプルを遠心分離で採取し、洗浄し、30分間静置し、次いで再び洗浄し、少量に再懸濁し、フローサイトメトリー(FACSCanto（登録商標） A BD Biosciences)（502nmロングパスダイクロイックフィルタ及び530±15バンドパスフィルタを用いたFITC検出器で488nM青色レーザー線放射の励起）で分析する。データをFITCチャンネルにおける細胞群に対する平均蛍光強度(MFI)として表し、線グラフで時間に対してプロットする。無染色細胞でMFIを100とする。
【０１９６】
図５及び６から、本発明の造影剤で処理して2時間後、有意な量のhCE-1を発現した細胞の蛍光強度は、有意な量のhCE-1を発現していない細胞の蛍光強度に比べて少なくとも三倍大きいことがわかる。
【図１】
2013545795.tif 000044
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2013545795.tif 000049
【図７】
2013545795.tif 000050
【図８】
2013545795.tif 000051
【国際調査報告】
2013545795.tif 000052
2013545795.tif 000053
2013545795.tif 000054
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