(57)【要約】治療を必要としている患者に、本明細書において開示される式（I）の化合物を投与する工程を含む、難治性癌を治療するための治療方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
5-FU、カンプトテシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、イコチニブ、テムシロリムス、およびテモゾロミドからなる群より選択される1種または複数種の薬物を含むレジメンを用いて以前に治療された癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000012
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項２】
オキサリプラチンおよび／または5-FUを含むレジメンを用いて以前に治療された結腸直腸癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000013
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項３】
シスプラチン、5-FU、イリノテカン、トポテカン、ミトキサントロン、メトトレキサート、カンプトテシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ドキソルビシン、エピルビシン、メトトレキサート、ゲフィチニブ、およびイマチニブより選択される1種または複数種の薬物を含むレジメンを用いて以前に治療された乳癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000014
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項４】
パクリタキセル、エルロチニブ、イコチニブ、およびゲフィチニブより選択される1種または複数種の薬物を含むレジメンを用いて以前に治療された肺癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000015
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項５】
ドセタキセル、パクリタキセル、およびビンブラスチンより選択される1種または複数種の薬物を含むレジメンを用いて以前に治療された前立腺癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000016
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項６】
テモゾロミドを含むレジメンを用いて以前に治療された黒色腫を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000017
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項７】
テムシロリムスを含むレジメンを用いて以前に治療された腎臓癌（例えば、腎細胞癌腫）を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000018
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項８】
KRAS遺伝子において活性化突然変異を有する非小細胞肺癌を治療するための医薬の製造のための、以下の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用：
2013544843.tif 000019
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。
【請求項９】
前記化合物がトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)である、請求項1〜8のいずれか一項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
米国関連出願の相互参照
本出願は、その内容が参照により本明細書に組み入れられる2010年12月1日に提出された米国仮出願第61/418,836号の恩典を主張するものである。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、癌を治療するための方法、とくに難治性癌を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、いくつかの種類の癌に有用であることが示唆されている有機ガリウム錯体である。例えば、米国特許第7,919,486号(特許文献1)は、黒色腫の治療のための、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)および関連化合物の使用を開示および主張している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第7,919,486号
【発明の概要】
【０００５】
現在、化合物トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、選択された難治性癌を治療するのにとりわけ有効であり得ることが見出されている。具体的には、化合物トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、選択された抗癌剤に抵抗性の試験されたいくつかの癌細胞株においてアポトーシスを誘導するのに有効であり、ゆえにそのような抗癌剤に抵抗性の癌またはそのような抗癌剤の前治療の後に再発している癌を治療するのに有用であり得ることが見出されている。
【０００６】
したがって、第一の局面において、本発明は、治療上有効量の下記の式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を用いて、以下に記載される選択された難治性癌を治療する方法を提供する。
【０００７】
第二の局面において、本発明は、1種または複数種の抗癌剤を用いて以前に治療された癌を有する患者に、予防上有効量の下記の式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を投与する工程を含む、選択された難治性癌を予防する、またはその発症を遅らせる方法を提供する。
【０００８】
本発明は、選択された難治性癌を治療する、予防する、またはその発症を遅らせるのに有用な医薬の製造のための、下記の式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）の使用をさらに提供する。
【０００９】
本発明の上記および他の利点および特徴、ならびにそれらを達成する様式は、好ましくかつ例示的な態様を例証している添付の実施例とともに、以下の本発明の詳細な説明を考慮すればより容易に明白になるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
発明の詳細な説明
本発明は、概して、いくつかの難治性癌を治療するための方法を提供する。本明細書において用いるとき、「（薬物）に対して難治性の」という用語は、特有の癌が、特定の抗新生物治療に好ましく反応していないこと、あるいは特定の抗新生物治療に好ましく反応した後に再発または再燃することを意味する。したがって、例えば、エルロチニブ「に対して難治性の」非小細胞肺癌とは、小細胞肺癌が、エルロチニブを含むが必ずしもこれに限定されない治療レジメンに好ましく反応していないまたは抵抗性を示していること、あるいは該治療レジメンに好ましく反応した後に再発または再燃していることを意味する。
【００１１】
難治性癌を同定するために、化学療法による治療を受けている患者を、抵抗性、非反応性、または再発性癌の兆候について慎重にモニターすることができる。これは、化学療法による治療に対する患者の癌の反応をモニターすることによっても達成され得る。治療に対する癌の反応、反応の欠如、または再燃は、当技術分野において実践される任意の適切な方法によって判定され得る。例えば、これは、腫瘍の大きさおよび数の査定によって達成され得る。腫瘍の大きさ、あるいは腫瘍の数の増大は、腫瘍が化学療法に反応していないこと、または再燃が生じていることを示す。判定は、Therasse et al., J. Natl. Cancer Inst., 92:205-216 (2000)において詳細に記載されている「RECIST」の基準に従って行われてよい。
【００１２】
本発明によれば、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩を用いて、選択された難治性癌を治療する、予防する、またはその発症を遅らせるための方法が提供される：
2013544843.tif 000002
式中、R1は水素、ハロゲン、もしくはスルホノ基SO3Mを表し、ここでMは金属イオンであり、かつR2は水素を表すか、またはR1はClであり、かつR2はIである。つまり、本発明は、式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩の使用に向けられている。薬学的に許容される塩の例には、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アンモニウム塩などが含まれる。好ましい態様では、該方法において化合物トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を用いる。トリス-(8-ヒドロキシキノリン)ガリウムとしても知られるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、Bernhard Keppler教授によって最初に作製されたガリウム錯体化合物であり、例えば米国特許第5,525,598号において開示されている。
【００１３】
本発明の一局面によれば、5-FUおよびそのプロドラッグ（例えば、カペシタビン、テガフール、およびS1）、カンプトテシン、ゲフィチニブ、エルロチニブ、テムシロリムス、ならびにテモゾロミドからなる群より選択される1種または複数種の薬物を含む治療レジメンを用いて以前に治療された癌を治療するための方法が提供される。該方法は、そのような以前に治療された癌を、治療上有効量の式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を用いて治療する工程を含む。いくつかの態様において、患者を、上に挙げられた抗癌剤のうちの1種または複数種を含む治療レジメンを用いて以前に治療された難治性癌を有すると同定する。患者は、そのような治療レジメンに反応していなくてもよく、または該治療レジメンに好ましく反応した後に再燃もしくは再発している癌を有してもよい。いくつかの特定の態様において、治療される難治性癌は、乳癌、結腸癌、肺癌（NSCLCまたはSCLC）、前立腺癌、腎臓癌（腎細胞癌腫）、または黒色腫である。
【００１４】
別の局面において、BCRPタンパク質を過剰発現している腫瘍組織または腫瘍細胞を有する癌を治療するための方法が提供される。いくつかの特定の態様において、治療される難治性癌は、乳癌、結腸癌、前立腺癌、黒色腫、または腎臓癌である。この目的のために、腫瘍細胞または腫瘍組織サンプルを、患者から入手することができ、かつ当技術分野において周知の技術に従ってBCRPの発現について解析することができる。BCRPを過剰発現している腫瘍を有すると同定された患者を、次いで治療上有効量の式（I）に従った化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を用いて治療する。
【００１５】
一態様において、オキサリプラチンおよび／または5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）を含む治療レジメンを用いて以前に治療された結腸直腸癌に対して患者を治療するために、本発明の方法を用いる。いくつかの特定の態様において、結腸直腸癌は、オキサリプラチンおよび／または5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）に対して難治性または抵抗性である。つまり、オキサリプラチンおよび／または5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）を含む治療レジメンを用いて以前に治療された結腸直腸癌（原発性または転移性）を有する患者を同定する。そのような患者は、そのような治療レジメンに反応していなくてもよく、またはそのような治療レジメンの後に再燃もしくは再発している結腸直腸癌を有してもよい。例証するために、オキサリプラチンおよび／または5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）を含む治療レジメンは、5-FU（またはカペシタビン）単独のレジメン、あるいはロイコボリンと組み合わせた、またはベバシズマブの有無にかかわらないFOLFOXもしくはFOLFIRIと組み合わせたレジメンであってよい。そのような患者が同定されたら、次いで該患者を治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を用いて治療してよい。難治性結腸直腸癌は、任意のステージにあってよく、局所性または転移性のいずれかであってよい。
【００１６】
さらに別の態様において、シスプラチン、5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ミトキサントロン、ドキソルビシン、エピルビシン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキサート、カンプトテシン、ゲフィチニブ、およびイマチニブの群より選択される1種または複数種の薬物を含む治療レジメンを用いて以前に治療された乳癌を治療するために、本発明の方法を用いる。いくつかの態様において、患者の乳癌は、上記で指名された抗癌剤のうちの1種または複数種に対して難治性または抵抗性であってよい。特定の態様において、該方法を用いて、5-FU（または、カペシタビン、テガフール、およびS1等のそのプロドラッグ）、パクリタキセル、ドキソルビシン、またはシスプラチンに対して難治性または抵抗性の乳癌を治療する。つまり、該方法は、そのような抗癌剤のうちの1種または複数種に対して難治性の乳癌を有すると同定された患者に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する工程を含む。
【００１７】
本発明の方法は、また、パクリタキセル、ならびにエルロチニブ、ゲフィチニブ、およびイコチニブ等のEGFR阻害剤の群より選択される1種または複数種の薬物を含む治療レジメンを用いて以前に治療された肺癌（例えば、非小細胞肺癌（NSCLC）または小細胞肺癌（SCLC））を治療するのにとくに有用である。いくつかの態様において、エルロチニブ、ゲフィチニブ、およびイコチニブの群より選択される1種または複数種の薬物に対して難治性または抵抗性のNSCLCまたはSCLCを治療するために、該方法を用いる。患者はそのような治療レジメンに反応しなかった、または癌が該治療レジメンの後に再燃もしくは再発した、のいずれかであった。ゆえに、該方法は、治療を必要としている同定された患者に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する工程を含む。
【００１８】
別の態様において、本発明は、KRAS遺伝子において活性化突然変異（例えば、KRAS遺伝子のコドン12、13、または61における突然変異）を有する癌（例えば、NSCLCまたは結腸直腸癌）を治療する方法を提供する。該方法は、腫瘍細胞のKRAS遺伝子において活性化突然変異（例えば、KRAS遺伝子のコドン12、13、または61における突然変異）を有すると同定された癌患者（例えば、NSCLCまたは結腸直腸癌）に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する工程を含む。任意で、該方法は、KRAS遺伝子において活性化突然変異を保持している腫瘍を有する患者（例えば、非小細胞肺癌または結腸直腸癌の患者）を同定する工程を含む。肺腺癌（例えば、NSCLC）および結腸直腸癌等の腫瘍のKRAS遺伝子における体細胞活性化突然変異（例えば、G12C、G12D、G12S、G12V、G13Cなど）は、当技術分野において周知である。KRAS遺伝子におけるエクソン2および3の活性化突然変異を検出する方法も、当技術分野において周知である。例えば、Pao et al., PLOS Med., 2(1):57-61 (2005)を参照されたい。
【００１９】
さらに別の態様において、前記方法を用いて、ドセタキセル、パクリタキセル、および／またはビンブラスチンを含む治療レジメンを用いて以前に治療された前立腺癌を治療する。いくつかの態様において、前立腺癌は、そのような治療レジメンに反応しなかった、または該治療レジメンの後に再燃もしくは再発した、のいずれかであった。ゆえに、本発明の方法に適した患者を同定し、かつ治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する。難治性前立腺癌を予防するまたはその発症を遅らせる目的で、ドセタキセル、パクリタキセル、およびビンブラスチンのうちの1種または複数種を含むレジメンを用いて以前に治療された患者を同定し、その後、該患者に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する。
【００２０】
加えて、本発明の方法は、また、テモゾロミドを含むレジメンを用いて以前に治療された黒色腫を治療するのにも有用である。いくつかの態様において、黒色腫は、テモゾロミドに対して難治性または抵抗性である。ゆえに、該方法は、テモゾロミドを含むレジメンを用いて以前に治療された黒色腫を有すると同定された患者に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する工程を含む。
【００２１】
本発明の方法は、また、テムシロリムスを含むレジメンを用いて以前に治療された腎臓癌、とくに腎細胞癌腫（RCC）を治療するのにも有用である。いくつかの態様において、腎臓癌は、テムシロリムスに対して難治性または抵抗性である。ゆえに、該方法は、テムシロリムスを含むレジメンを用いて以前に治療された腎臓癌、とくに腎細胞癌腫を有すると同定された患者に、治療上有効量の式（I）のガリウム錯体またはその薬学的に許容される塩、例えばトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を投与する工程を含む。
【００２２】
癌の再発を予防するかまたはその発症を遅らせる目的で、種々の態様における上記のような以前の治療レジメンを用いて治療を受けており、かつ寛解期にあるまたは安定したもしくは進行していない状態にある癌患者を、予防上有効量の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を用いて治療して、癌の再発または再燃を有効に予防し得るまたは遅らせ得る。
【００２３】
本明細書において用いるとき、「...を用いて...を治療する」という語句またはその言い換えは、患者に化合物を投与すること、または患者の体内で化合物の形成を引き起こすことを意味する。
【００２４】
トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)等の式（I）の薬学的化合物を、総体重に基づき患者の体重1kgあたり0.1mg〜1000mgの量で、静脈内注射または経口または他の任意の適切な手段によって投与することができる。活性成分は1回で投与されてよく、または所定の時間間隔で、例えば1日に1回もしくは2日おきに1回、いくつかのより少ない用量に分けて投与されてもよい。上記に示される投薬量の範囲は例示的なものにすぎず、本発明の範囲を限定することを意図するものではないと理解されるべきである。活性化合物の治療上有効量は、用いられる化合物の活性、患者の体内における活性化合物の安定性、軽減されるべき病状の重症度、治療される患者の総重量、投与の経路、身体による活性化合物の吸収、分布、および排出のされやすさ、治療されるべき患者の年齢および感受性などを含むが、これらに限定されない要素によって変わり得る。種々の要素が経時的に変化するとともに、投薬の量を調節することができる。
【００２５】
本発明によれば、上記の難治性癌を治療するのに有用な医薬の製造のための、式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を有する化合物の使用が提供される。該医薬は、例えば、経口形態であってよく、または例えば静脈内、皮内、もしくは筋肉内投与に適した注射可能な形態であってよい。注射可能な形態は、当技術分野において一般的に公知であり、例えば緩衝液または懸濁液の状態である。
【００２６】
本発明の別の局面によれば、容器内に単位投薬量形態の式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を含む、および本発明に従った方法において、例えば上記のような以前に治療された癌、とくに上記のような難治性もしくは抵抗性の癌を治療することにおいて、またはそのような難治性癌の再発を予防するもしくは遅らせることにおいてキットを使用するための使用説明書を任意で含む薬学的キットが提供される。当業者とって明白であるように、単位投薬量形態の治療用化合物の量は、本発明の方法における患者に対して用いられるべき投薬量によって決定される。キットにおいて、式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩（例えば、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)）を有する化合物は、例えば1mgの量の錠剤形態であってよい。
【実施例】
【００２７】
実施例1
オキサリプラチンまたは5-FUに抵抗性の結腸癌細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
結腸癌腫細胞株HCT116（HCT-116 p53（+/+））およびp53遺伝子を欠失している相当する亜細胞株（HCT-116 p53（-/-））を、10％FCSを有するMcCoy's培養培地中で成長させた。Bunz et al., TARGETED INACTIVATION OF P53 IN HUMAN CELLS DOES NOT RESULT IN ANEUPLOIDY, CANCER RES., 62:1129-1133 (2002)を参照されたい。細胞毒性アッセイのために、細胞を96ウェルプレートに播き（100μl/ウェル中に2×103個の細胞）、24時間回復させた。トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を別の100μl成長培地に添加し、細胞を該薬物に72時間曝露させた。生存細胞の割合を、メーカーの推奨に従ったMTTアッセイ（EZ4U、Biomedica, Vienna, Austria）によって判定した。2種の異なる細胞株に対するトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)（「試験薬物」）のIC50値を、表1に提示する。
【００２８】
【表１】
2013544843.tif 000003
【００２９】
結腸癌細胞株HCT-116 p53（+/+）は、オキサリプラチン処理に対して感受性を示すが、一方で、結腸癌細胞株HCT-116 p53（-/-）は、オキサリプラチンに抵抗性である。例えば、Hata et al., Mol. Cancer Ther., 4:1585 (2005)を参照されたい。したがって、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、オキサリプラチンに抵抗性の細胞において細胞死を誘導するのに有効である。
【００３０】
加えて、p53を欠いている結腸癌細胞株は、5-フルオロウラシル処理に抵抗性であることが示されている。例えば、Bunz et al., J. Clin. Invest., 104:263-269 (1999)；Bunz, et al., Science, 282:1497-1501 (1998)を参照されたい。つまり、結腸癌細胞株HCT-116 p53（-/-）は、5-FUに抵抗性である。ゆえに、上記の実験における結果は、また、ナトリウムトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)も、5-FUに抵抗性の細胞において細胞死を誘導するのに有効であることを示している。
【００３１】
実施例2
5-FUに抵抗性の乳癌細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)または5-フルオロウラシルの活性を試験するために、ヒト乳癌腫細胞株ZR-75-1を用いて、ATCCのMTT Cell Proliferation Assay（登録商標）を行った。本調査のために、保存培養物を70〜80％コンフルエントまで成長させた。示された細胞株に対するトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)または5-フルオロウラシルの抗増殖活性を、ATCCのMTT Cell Proliferation Assay（カタログNo.30-1010K）を用いてインビトロで評価した。ZR-75-1のプレートに3,000個/ウェルの細胞を播種し、1％（1M HEPES）、1％ピルビン酸ナトリウム、1％（45％グルコース）、10％FBS、および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（strep）/グルタミンを含有しているRPMI1640培地中で細胞を成長させた。培養物を37℃の加湿した5％ CO2/95％大気中で維持した。1,000μMまたはその4×希釈系列（250μM、62.5μMなど）のトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)または5-フルオロウラシルで細胞を処理した。処理の72時間後に各ウェルから100μlの培地を取り出し、各ウェルに10μlのMTT試薬を添加した。プレートを37℃で4時間インキュベーションし、次いで100μlの界面活性剤を添加した。プレートを室温で暗所にて一晩置き、SoftMax（登録商標）Pro（バージョン5.2、Molecular Devices）を用いてプレートリーダーで読み取った。
【００３２】
吸光度データを以下のように解析した：SoftMax（登録商標）Pro（バージョン5.2、Molecular Devices）を用いることによって、IC50算出のために、吸光度値を対照に対するパーセントに変換し、試験物質濃度に対してプロットした。対照に対するパーセントを算出する前に、すべてのウェルからプレートの空白シグナルの平均を引いた。各試験ウェルに対する吸光度値を、薬物なしの対照の平均（カラム11の値；細胞＋媒体の対照）で割りかつ100を掛けることによって、対照に対するパーセントを算出した。化合物濃度 対 対照に対するパーセントのプロットを4パラメーター方程式を用いて解析して、IC50値およびS字形用量反応曲線を描く他のパラメーターを得た。
【００３３】
以下の4パラメーターのロジスティック方程式を用いてデータを曲線適合させることによって、試験物質に対するIC50値を推定した：
2013544843.tif 000004
式中、「最高値」は対照吸光度の最大％（100％）であり、「最低値」は物質の最高濃度における対照吸光度の最小％（ゼロに至るまで）であり、Yは対照吸光度に対するパーセントであり、Xは試験物質の濃度であり、IC50は対照細胞と比較して細胞の成長を50％阻害する物質の濃度であり、nは曲線の傾きである。別のヒト乳癌細胞株MX-1も上記と同じ様式で試験し、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)（「試験薬物」）および5-FUのIC50値を得た。表2は結果をまとめたものである。
【００３４】
【表２】
2013544843.tif 000005
【００３５】
ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、5-FUに有意に抵抗性であるZR-75-1細胞において、さらにより活性である。
【００３６】
別個の実験において、乳癌細胞株MCF-7およびMDA-MB-231において、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)およびシスプラチンを上記と同じ様式で試験した。表3は、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)が、シスプラチンに対して感受性が低い細胞において、さらにより活性であることを示している。
【００３７】
【表３】
2013544843.tif 000006
【００３８】
実施例3
BCRPを過剰発現している乳癌細胞におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
乳癌細胞株MDA-MB-231およびその相当するbcrp過剰発現株MDA-MB-231/bcrpを、96ウェルプレートに播き（100μl/ウェル中に2×103個の細胞）、24時間回復させた。トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を別の100μl成長培地に添加し、該薬物に72時間曝露させた。生存細胞の割合を、メーカーの推奨に従ったMTTアッセイ（EZ4U、Biomedica, Vienna, Austria）によって判定し、かつIC50値を算出した。下記の表4に示されるように、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、BCRPを過剰発現している細胞において等しく有効である。BCRPの過剰発現は、イリノテカン、トポテカン、ミトキサントロン、メトトレキサート、カンプトテシン、ゲフィチニブ、およびイマチニブ等の薬物に対する抵抗性を与える。Fojo & Menefee, Ann. Oncol., 18 (補足5):v3-v8 (2007)を参照されたい。ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、そのような薬物に抵抗性の細胞において有効であるはずである。
【００３９】
【表４】
2013544843.tif 000007
【００４０】
実施例4
PGPを過剰発現しているヒト乳癌細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
肺胞上皮細胞癌腫細胞株SW-1573、ならびにMVPおよびMRP1を過剰発現しているその亜細胞株SW-1573/2R120を、10％ウシ胎仔血清を補充したDMEM培地中で成長させた。Elbling et al., Cytometry, 31:187-198 (1998)を参照されたい。細胞を96ウェルプレートに播き（100μl/ウェル中に2×103個の細胞）、24時間回復させた。トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を別の100μl成長培地に添加し、細胞を該薬物に72時間曝露させた。生存細胞の割合を、メーカーの推奨に従ったMTTアッセイ（EZ4U、Biomedica, Vienna, Austria）によって判定した。トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、SW1573細胞株およびその相当するPGP/MRP-1過剰発現細胞株において、実質的に同じIC50値を有した（それぞれ1.7μMおよび2.1μM）。PGP/MRP-1の過剰発現は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、タキソール、ドセタキセル、エトポシド、ミトキサントロン、ドキソルビシン、エピルビシン、トポテカン、イリノテカン、メトトレキサート、およびイマチニブ等の薬物に対する抵抗性を与える。Fojo & Menefee, Ann. Oncol., 18 (補足5):v3-v8 (2007)を参照されたい。ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、そのような薬物に抵抗性の乳癌細胞において有効であるはずである。
【００４１】
実施例5
シスプラチン、パクリタキセル、エルロチニブ、またはゲフィチニブに抵抗性のヒト肺癌細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
ヒト肺癌腫細胞株A549、NCI-H322M、およびH1975において、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)、シスプラチン、およびパクリタキセルを上記の実施例2において記載されるものと同じ様式で試験し、該細胞株におけるそれらのIC50値を得た。下記の表5および6は、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)が、シスプラチンまたはパクリタキセルに比較的抵抗性を呈する腫瘍細胞を殺傷するのにほぼ等しく有効であることを示している。
【００４２】
【表５】
2013544843.tif 000008
【００４３】
【表６】
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【００４４】
加えて、ヒト肺癌腫細胞株H1975は、細胞におけるEGFR遺伝子のT790M突然変異が理由で、エルロチニブおよびゲフィチニブに抵抗性であることが当技術分野において知られている。例えば、Bao et al., Mol. Cancer Ther., 8(12):3296-3306 (2009)を参照されたい。ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、エルロチニブおよびゲフィチニブ等のEGFR阻害剤に抵抗性の腫瘍細胞（例えば、NSCLC細胞）に対しても活性である。
【００４５】
さらに、下記の表7に示されるように、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、野生型KRASを有するものにおいてよりも、KRAS突然変異を有するNSCLC細胞においてより有効である。ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、例えばエルロチニブおよびゲフィチニブ等のEGFR阻害剤、ならびにEGFR抗体に典型的には抵抗性である、KRAS遺伝子において活性化突然変異を有する腫瘍細胞（例えば、NSCLC細胞）に対して活性であり得る。
【００４６】
【表７】
2013544843.tif 000010
【００４７】
実施例6
ヒト黒色腫細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
ヒト黒色腫細胞株A375において、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)およびテモゾロミドを上記の実施例2において記載されるものと同じ様式で試験し、該細胞株におけるそれらのIC50値を得た。A375細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)のIC50は1.95μMであり、一方で、テモゾロミドのIC50は369μMであった。
【００４８】
実施例7
ヒト前立腺癌細胞株におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
ヒト前立腺癌細胞株LNCaP（前立腺癌腫）およびPC-3（前立腺癌腫）において、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を上記の実施例2において記載されるものと同じ様式で試験し、該細胞株におけるそれらのIC50値を得た。加えて、LNCaPおよびPC-3細胞株におけるドセタキセルのIC50値を既刊文献から得た。他の薬物のうちの1種に対して感受性を示す細胞株および同じ薬物に対して感受性を示さない細胞株における、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)のIC50値の比を算出した。結果を下記の表8に示す（表中の「試験薬物」は、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を表す）。データは、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)が、実際には、ドセタキセルおよびビンブラスチンに対して比較的感受性を示すLNCaP細胞においてよりも、ドセタキセル、パクリタキセル、およびビンブラスチンに抵抗性であるPC-3細胞においてより有効であることを示している。Domingo-Domenech et al., Clin. Cancer Res., 12(18):5578-5586 (2006)；Blagosklonny et al., J. Urol., 163(3):1022-6 (2000)を参照されたい。したがって、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、そのような薬物に抵抗性の癌を治療するのに潜在的に有効である。
【００４９】
【表８】
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*Domingo-Domenech et al., Clin. Cancer Res., 12(18):5578-5586 (2006)
【００５０】
実施例8
テムシロリムスに抵抗性のヒト腎臓癌細胞におけるトリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)の活性
ヒト腎細胞株A498において、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)を上記の実施例2において記載されるものと同じ様式で試験し、該細胞株におけるそのIC50値を得た。トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、A498細胞においてアポトーシスを引き起こすことができた（IC50は32.9μMである）。A498細胞は、テムシロリムスに抵抗性を呈することが当技術分野において知られている。例えば、Mahalingam et al., Clin. Cancer Res., 16(1):141-153 (2010)を参照されたい。ゆえに、トリス(8-キノリノラト)ガリウム(III)は、テムシロリムスに抵抗性の腎臓癌を治療するのに有用であり得る。
【００５１】
本明細書において言及されるすべての刊行物および特許出願は、本発明が関連する技術分野における当業者のレベルの指標である。すべての刊行物および特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物または特許出願が参照により組み入れられることを具体的かつ個々に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。刊行物および特許出願についての単なる言及は、それらが本出願に対する先行技術であるという承認を必ずしもなすものではない。
【００５２】
上記の発明は、理解の明確性のために例証および実施例としていくらか詳細に記載されているが、ある程度の変更および修正が添付の特許請求の範囲の範囲内で実践され得ることは明白であろう。
【国際調査報告】
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