(57)【要約】本発明は、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害の治療に有用な新規ｍＧｌｕ２アゴニストを提供する。該新規アゴニストは次式で示される。2013514974.tif 000029
2013514974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式の化合物
【化１】
2013514974.tif 000028
（式中、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノプロパノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は２−アミノアセチルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１はベンジルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３はベンジルであり、または
Ｒ１は（２−フルオロフェニル）メチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は（２−フルオロフェニル）メチルである）
またはその製薬的に許容し得る塩もしくは塩の溶媒和物。
【請求項２】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項５】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項７】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項９】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１１】
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１３】
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである請求項１に記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。
【請求項１５】
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
１８．６１および２１．０７に等しい２θ±０．２におけるピークを有するＸ線粉末回折パターンにより特徴付けられる結晶形態のビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または塩と、製薬的に許容し得る担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害からなる群より選択される精神疾患を治療する方法であって、有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記精神疾患が双極性障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記精神疾患が統合失調症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記精神疾患が鬱病である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記精神疾患が全般性不安障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
治療に使用するための請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項２５】
双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害からなる群より選択される精神疾患の治療に使用するための請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項２６】
前記精神疾患が双極性障害である、請求項２５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項２７】
前記精神疾患が統合失調症である、請求項２５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項２８】
前記精神疾患が鬱病である、請求項２５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項２９】
前記精神疾患が全般性不安障害である、請求項２５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項３０】
製薬的に許容し得る担体と、任意に他の治療成分と共に、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物または塩を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｍＧｌｕ２アゴニスト化合物、特にそのプロドラッグ、ならびにそれらの塩および溶媒和物、そしてより具体的には新規４−置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物、特にそのプロドラッグ、ならびにそれらの塩および溶媒和物、ならびに医薬組成物およびそのような化合物、特にプロドラッグ、ならびにそれらの塩および溶媒和物の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｌ−グルタミン酸塩は、中枢神経系における主要な興奮性神経伝達物質であり、興奮性アミノ酸と称されている。代謝型グルタミン酸（ｍＧｌｕ）受容体は、神経細胞の興奮性を調節するＧタンパク質共役受容体である。神経学的疾患または精神疾患の治療は、ｍＧｌｕ興奮性アミノ酸受容体の選択的活性化と関連している。種々の研究は、統合失調症の治療のためのグループＩＩｍＧｌｕ受容体（ｍＧｌｕ２および／またはｍＧｌｕ３を含む）活性化を支持している。特に、最近のデータは、ｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストが抗精神病特性を有し、統合失調症の治療のための新規の代替法を提供できることを実証している。研究は、ｍＧｌｕ２／３アゴニストの抗精神病活性がｍＧｌｕ２媒介性であることを実証している。また、ｍＧｌｕ２／３アゴニストが、精神安定、抗鬱および神経保護特性を有することを研究は実証している。従って、ｍＧｌｕ２アゴニストは、躁鬱病としても知られている、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害などの精神疾患の治療に有用であり得る。
【０００３】
特許文献１は、代謝型グルタミン酸受容体のアンタゴニストまたはアゴニストであるとして特定の４置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を開示している。特許文献２は、ｍＧｌｕＲ２受容体アゴニスト化合物のプロドラッグ形態であるとしてビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよびヘテロビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を開示している。
【０００４】
グルタミン酸作動性の過剰な傾向は中枢神経系の多くの疾患状態に関係があるが、そのような病態生理学的状態を正す効果的な薬剤は実際の医療現場には存在していない。特に、適切な薬物様特性を有するｍＧｌｕ２アゴニストがないために臨床的応用は実現されていない。従って、強力な効果のあるｍＧｌｕ２アゴニストが求められている。本発明は、強力かつ有効なｍＧｌｕ２アゴニストである、新規４−置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン（特に臨床開発に適した高いバイオアベイラビリティを提供するそのプロドラッグを含む）を提供する。このような本発明の新規化合物は、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害などの精神疾患の強力で有効な治療の必要性に対処する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９７１７９５２号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３１０４２１７号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、下記の式の化合物
【化１】
2013514974.tif 000003
（式中、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノプロパノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１は水素であり、Ｒ２は２−アミノアセチルであり、Ｒ３は水素であり、
Ｒ１はベンジルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３はベンジルであり、または
Ｒ１は（２−フルオロフェニル）メチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は（２−フルオロフェニル）メチルである）
またはその製薬的に許容し得る塩もしくは塩の溶媒和物を提供する。
【０００７】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【０００８】
具体的な実施形態として、本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸を提供する。
【０００９】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１０】
具体的な実施形態として、本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩を提供する。
【００１１】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１２】
具体的な実施形態として、本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩を提供する。
【００１３】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１４】
具体的な実施形態として、本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩を提供する。
【００１５】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１６】
具体的な実施形態として、本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩を提供する。
【００１７】
本発明は、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１８】
具体的な実施形態として、本発明は、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートを提供する。
【００１９】
本発明は、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。
【００２０】
具体的な実施形態として、本発明は、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩を提供する。
【００２１】
本発明は、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。
【００２２】
本発明は、結晶形態のビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。
【００２３】
本発明は、１８．６１および２１．０７に等しい２θ±０．２におけるピークを有するＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形態のビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。
【００２４】
本発明はまた、２１．０７、１５．３４、１４．７４、および１９．２０からなる群より選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わせて１８．６１において２θ±０．２におけるピークを有するＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形態のビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。
【００２５】
本発明の化合物は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート、および／またはビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート、あるいはそれらの製薬的に許容し得る塩である。
【００２６】
本発明は、製薬的に許容し得る担体と、任意に他の治療成分と共に、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を含む医薬組成物を提供する。
【００２７】
本発明は、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物と、製薬的に許容し得る担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００２８】
本発明は、精神疾患を治療する方法であって、有効量の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００２９】
本発明は、精神疾患を治療するための医薬の製造のための、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物の使用を提供する。
【００３０】
本発明は、治療に使用するための、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。本発明はまた、精神疾患の治療に使用するための、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその製薬的に許容し得る塩、ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその製薬的に許容し得る塩、あるいはビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物を提供する。
【００３１】
さらに、本発明は本明細書に記載される方法および使用の好ましい実施形態を提供し、精神疾患は、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害からなる群より選択される。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
上記、および本発明の記載全体にわたって使用される場合、以下の用語は、他に示されない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００３３】
「製薬的に許容し得る塩」は、本発明の化合物の比較的非毒性の無機塩および有機塩を指す。
【００３４】
「治療的に有効な量」または「有効量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床医が求める、組織、系、動物、哺乳動物またはヒトの生物学的もしくは医学的反応を引き起こすか、またはそれらに対して所望の治療効果を引き起こす、本発明の化合物またはその製薬的に許容し得る塩、その塩の溶媒和物、あるいは本発明の化合物またはその製薬的に許容し得る塩もしくはその塩の溶媒和物を含有する医薬組成物の量を意味する。
【００３５】
用語「治療」、「治療する」、「治療している」などは、障害の進行を遅延または反転させることを含むことを意味する。これらの用語はまた、障害または病態が実際に除去されなくとも、また、障害または病態の進行がそれ自体遅延または反転しなくとも、障害または病態の１つ以上の症状を緩和すること、寛解すること、減衰すること、除去すること、または低減することを含む。
【００３６】
本開示全体にわたって使用される標準的な専門語の下で、指定される側鎖の末端部が最初に記載され、続いて結合点の方向へ隣接する官能基が記載される。例えば、メチルスルホニル置換基はＣＨ３−ＳＯ２−と等価である。
【００３７】
本発明の化合物は、例えば、多くの無機酸および有機酸と反応して、製薬的に許容し得る酸付加塩または塩基付加塩を形成できる。そのような製薬的に許容し得る塩およびそれらを調製する一般的方法論は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。
【００３８】
本発明の化合物は好ましくは、１種以上の製薬的に許容し得る担体、希釈剤、または賦形剤を用いて医薬組成物として製剤化され、種々の経路により投与される。好ましくは、このような組成物は、経口または静脈内投与用である。このような医薬組成物およびそれらを調製するプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。
【００３９】
実際に投与される本発明の化合物（複数も含む）は、治療される病態、選択される投与経路、投与される本発明の実際の化合物（複数も含む）、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重症度を含む、関連状況の下で医師により決定されるだろう。通常、１日当たりの投薬量は約０．１〜約３００ｍｇの範囲内である。一部の場合において、上述の範囲の下限値以下の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合において、さらに多くの用量が使用されてもよい。
【００４０】
本発明の化合物は、当該技術分野において公知の種々の手順、ならびに以下の調製例および実施例に記載されている手順によって調製され得る。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、本発明の化合物を調製するために異なる方法で組み合わされてもよい。
【００４１】
他に示されない限り、置換基は上記の通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に入手可能である。他のものは、有機および複素環化学の標準的な技術、既知の構造的に同様の化合物の合成と同様の技術ならびにいずれかの新規手順を含む以下の調製例および実施例に記載される手順によって作製され得る。以下の調製例および実施例１〜７の命名はＳｙｍｙｘ  Ｄｒａｗ３．１を用いて行う。実施例８の命名はＡＣＤ  Ｌａｂｓから提供されるＣＡＳ命名を用いて行う。
【００４２】
本明細書で使用される場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＨＰＬＣ」は高圧液体クロマトグラフィーを指し、「ＬＣ」は液体クロマトグラフィーを指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し、「ＴＬＣ」は薄層クロマトグラフィーを指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＰＣＲ」はポリメラーゼ連鎖反応を指し、「ＳＣＸ」は強カチオン交換を指し；「ＨＬＢ」は親水性−親油性バランスを指す。
【実施例】
【００４３】
調製例１
Ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２】
2013514974.tif 000004
窒素雰囲気下で２口丸底フラスコに、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２０．７ｇ、０．５ｍｏｌ、合成の詳細については国際公開第０３／１０４２１７／Ａ２号パンフレットを参照のこと）、４−ジメチルアミノピリジン（１０．４ｇ、０．８５ｍｏｌ）、トリエチルアミン（６．９８ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルクロリド（１０．６ｇ、０．５５ｍｏｌ）を入れ、その混合物を室温にて一晩攪拌する。１Ｎの硫酸水素カリウム（２００ｍＬ）溶液、水（１００ｍＬ）を加え、有機層を抽出する。水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）、次いでヘプタン（９０ｍＬ）を加える。混合物を６０℃にて加熱し、さらなるヘプタン（２００ｍＬ）にゆっくりと加える。混合物を室温まで冷却する。固体を濾過し、真空中で乾燥させて、白色の固体として標題化合物（２４．６ｇ、８７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９０（Ｍ＋２３）。
【００４４】
調製例２
ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３】
2013514974.tif 000005
方法１：
窒素雰囲気下で丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．３Ｌ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４６２ｇ、８１３．８ｍｍｏｌ）、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（８８．２ｇ、８５４．５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１２３．７ｇ、８９５．２ｍｍｏｌ）を入れ、混合物を８０℃にて２時間攪拌する。反応混合物を室温まで冷却し、次いでメチル−ｔ−ブチルエーテル（２．３Ｌ）および水（４．６Ｌ）を加える。１Ｍの硫酸水素カリウム（１．８５Ｌ）をゆっくり添加した後、ガスの発生を観察する。混合物をメチル−ｔ−ブチルエーテル（２．３Ｌ）で抽出し、水相を捨てる。水（２．５Ｌ）、ブライン（２Ｌ）で連続して洗浄し、水相を捨てる。濃縮乾固して固体（４４０ｇ）を得る。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜７０：３０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固体として標題化合物を得る（３０５．６ｇ、７６％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９７（Ｍ＋１）。
【００４５】
方法２：
ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．３１ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（０．３１ｇ、３  ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７ｍＬ）に溶解し、次いで炭酸カリウム（６３９ｍｇ、４．６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を８０℃にて一晩攪拌する。濃縮乾固し、酢酸エチルに再溶解し、１０％クエン酸溶液および１０％ブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。酢酸エチル：ヘキサン（１０：９０〜８０：２０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（８３０ｍｇ、７２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９７（Ｍ＋１）。
【００４６】
調製例３
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化４】
2013514974.tif 000006
方法１：
丸底フラスコにｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３０５．６ｇ、０．６１ｍｏｌ）およびエタノール（１．５３Ｌ）を入れる。塩化チオニル（１７９．３ｍＬ、２．４６ｍｏｌ）（４５℃までの発熱反応）をゆっくり加え、混合物を８０℃にて一晩攪拌する。真空下で溶媒を除去して白色泡状物を得る。メチル−ｔ−ブチルエーテル（２．５Ｌ）を加え、真空下で溶媒を除去する。メチル−ｔ−ブチルエーテル（２．５Ｌ）を加え、一晩攪拌する。固体を濾過し、メチル−ｔ−ブチルエーテルで洗浄する。窒素ブランケット下で乾燥させて、白色の固体として標題化合物（２６４．６ｇ、０．７ｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４１（Ｍ＋１）。
【００４７】
方法２：
ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（８３０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）をエタノール（６．７ｍＬ）に溶解し、混合物を５℃まで冷却し、塩化チオニル（４８７μＬ、６．６９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃にて一晩加熱する。真空下で溶媒を除去して、白色の固体を得、次いでジエチルエーテルを加え、濃縮乾固する。その物質をさらに４８時間乾燥させて、標題化合物（７１４ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４１（Ｍ＋１）。
【００４８】
調製例４
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５】
2013514974.tif 000007
方法１：
窒素雰囲気下で５Ｌの反応器に、ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（２６４ｇ、０．７ｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（１．３２Ｌ）を加え、氷水浴で混合物を０〜５℃に冷却する。次いでクロロジメトキシトリアジン（１２５．５ｇ、０．７ｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（１４１．３ｇ、０．７３ｍｏｌ）を加える。Ｎ−メチルモルホリン（２３１．８ｍＬ、２．１ｍｏｌ）をゆっくり加え、３時間攪拌する。混合物を濾過し、白色の固体をテトラヒドロフランで洗浄する。固体を捨て、溶液を濃縮乾固する。酢酸エチル：ヘキサン（６０：４０〜１００：０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１９５ｇ、５４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１２（Ｍ＋１），５３４（Ｍ＋２３）。
【００４９】
方法２：
ジクロロメタン（９．４ｍＬ）中にジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（３５４ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（２７１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１１．５ｍｇ、９４μｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（２１９ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２７４ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を合わせ、次いでトリエチルアミン（３９３μＬ、２．８２ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下で混合物を室温にて一晩攪拌する。１０％クエン酸溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄する。水層を捨て、珪藻土カートリッジで有機層を濾過し、真空下で溶媒を除去する。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜１００：０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（３１９ｍｇ、６６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１２（Ｍ＋１），５３４（Ｍ＋２３）。
【００５０】
以下の化合物を調製例４の方法１に実質的に従って調製する。
【００５１】
【表１】
2013514974.tif 000008
【００５２】
調製例７
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化６】
2013514974.tif 000009
方法１：
２口丸底フラスコにジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１９５ｇ、０．３８ｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（１．１７Ｌ）を入れ、氷水浴を用いて混合物を４℃に冷却する。水（１．１７Ｌ）中の５０％水酸化ナトリウム水溶液（８１ｍＬ）の冷（４℃）溶液を３０分にわたってゆっくり加える（８℃まで低い発熱）。氷水浴を除去し、混合物を１５℃にて攪拌する。３時間後、２０℃以下に温度を維持しながら、濃塩酸および水（約１：３、５００ｍＬ）を用いて混合物をｐＨ＝３に酸性化する。濁った溶液を酢酸エチル（６００ｍＬ、次いで２×１００ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、水相を捨てる。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、白色の固体として標題化合物（１８７ｇ、０．４１ｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋１）。
【００５３】
方法２：
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３１９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４．２ｍＬ）に溶解し、次いで２Ｍの水酸化リチウム（２．５ｍＬ、５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温にて一晩攪拌する。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで洗浄する。有機層を捨てる。１Ｎの塩酸で水相をｐＨ＝２に調整し、酢酸エチルで抽出する。有機相を珪藻土カートリッジで乾燥させ、濃縮乾固して、標題化合物（２４４ｍｇ、８６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ＋１）。
【００５４】
以下の化合物を調製例７の方法２に実質的に従って調製する。
【００５５】
【表２】
2013514974.tif 000010
＊：使用した塩基は２．５Ｍ  ＬｉＯＨである。
【００５６】
調製例１０
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化７】
2013514974.tif 000011
塩化チオニル（２．５ｍＬ、３４．３２ｍｍｏｌ）を、５分にわたって０〜５℃にて、エタノール（４０ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．１ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に注意して滴下して加える（発熱反応）。冷却浴を除去し、還流温度にて１６時間反応混合物を加熱する。揮発性物質を蒸発させ、高真空下で７時間残渣を乾燥させて、ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩の無色泡状物を得る。次いで２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酢酸（０．８９ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）およびＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１．９３ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を、室温にて、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中のジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩の溶液に加え、次いでジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ、１１．４７ｍｍｏｌ）を加え、窒素下で１８時間、得られた黄色の溶液を攪拌する。溶媒を濃縮し、残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）との間に分配する。混合物を２０分間攪拌し、層を分離し、さらなる酢酸エチル（４０ｍＬ）で水層を抽出する。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾固する。残渣を、酢酸エチル：ｉｓｏ−ヘキサン（８０：２０〜１００：０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、無色固体として標題化合物（２．４２ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋１），５２０（Ｍ＋２３）。
【００５７】
調製例１１
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化８】
2013514974.tif 000012
２Ｍの水酸化ナトリウム（４．５ｍＬ、９ｍｍｏｌ）を、室温にて、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中のジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．４ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加える。二相混合物を２時間攪拌し、反応混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄する。水層を０〜５℃に冷却し、２Ｍの塩酸でｐＨ＝２に酸性化し、酢酸エチル（２×６０ｍＬ）で抽出する。有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾固して、白色の固体として標題化合物（０．７５ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）および残存の水層中に一部の標題化合物（約１．１２ｍｍｏｌ）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．１８−１．２７（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｓ，９Ｈ），１．４４−１．４９（ｍ，１Ｈ），２．０−２．６（ｍ，１Ｈ），２．１２−２．１９（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．７５（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．６８（ｍ，２Ｈ），４．１２−４．２１（ｍ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４２（Ｍ＋１），４６４（Ｍ＋２３）。
【００５８】
調製例１２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化９】
2013514974.tif 000013
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）中の４Ｍの塩化水素に、１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．９７ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）の溶液を加える。混合物を攪拌しながら一晩、５０℃で加熱する（加熱開始後すぐに白色の固体が溶液から沈殿し始める）。酢酸エチル（５０ｍＬ）を反応混合物（白色の濁った溶液）に加える。混合物を置いておき室温まで冷却し、次いで濾過により固体を回収し、乾燥させて白色の固体（１．９７ｇ）を得る。４０℃にて減圧下で週末にわたって固体を乾燥させて、一部の１，４−ジオキサンおよび少量のモノｔｅｒｔ−ブチルエステルが混合した白色の固体として標題化合物（１．９３６ｇ、６５％純粋ｗｔ／ｗｔ％、３．９５ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１）。
【００５９】
調製例１３
（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化１０】
2013514974.tif 000014
２．５Ｍの水酸化ナトリウム（１５．５５ｍＬ、３８．８８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２４．３  ｍＬ）およびエタノール（９．７２ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．０ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加える。反応混合物を６０℃に加熱し、一晩攪拌を維持する。次いで４時間加熱し続け、酢酸エチルで洗浄する。氷浴中に水相を冷却し、１Ｎの塩酸溶液でｐＨ＝２〜３に酸性化する。酢酸エチル（３回）で抽出し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、橙色固体として標題化合物（１．４ｇ、９６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２（Ｍ＋２３）。
【００６０】
調製例１４
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１１】
2013514974.tif 000015
２−フルオロベンジルブロミド（０．２１ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．４２ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（０．１７ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（０．３７ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に滴下して加える。得られた混合物を窒素下で室温にて一晩攪拌する。水でクエンチし、酢酸エチルで希釈する。水相を酢酸エチル（３回）で抽出し、有機層をブラインおよび水で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、薄茶色の油として粗製物を得る。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜３０：７０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油として標題化合物（２２９ｍｇ、７９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３８（Ｍ＋２３）。
【００６１】
調製例１５
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１２】
2013514974.tif 000016
ＴＨＦ中の１ＭのＬ−セレクトライド溶液（６．７８ｍＬ、６．７８ｍｍｏｌ）を、−７８℃にて、テトラヒドロフラン（２０．３ｍＬ）中のビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．３３ｇ、４．５２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に滴下して加える。得られた橙色の混合物を窒素下で１時間４５分攪拌する。−７８℃にて飽和炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチする。水および酢酸エチルで希釈する。層を分離し、ブラインおよび水で有機相を洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、ＭＳにより検出した場合、約６％の少量の異性体ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートが混合した淡黄色の油として粗製物を得る。その粗製物を、ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．２３ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）から同様に調製した第２のバッチと合わせる。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜５０：５０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより合わせた物質を精製して、単一の異性体として標題生成物（２．４９ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４０（Ｍ＋２３）。
【００６２】
調製例１６
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１３】
2013514974.tif 000017
ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０２ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）を、室温にて、ジクロロメタン（１９．３２ｍＬ）中のビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．５ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）の溶液に加える。氷水中で冷却し、次いでトリエチルアミン（０．７４ｍＬ、５．３１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチル４−アミノピリジン（１ｇ、８．２１ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。室温まで加温し、窒素下で一晩攪拌を維持する。水でクエンチし、層を分離する。有機層を１Ｍの硫酸水素カリウム溶液、ブラインおよび水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、真空下で乾燥させて、淡黄色の泡状物（２．７２ｇ）を得る。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜４０：６０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、無色の油として標題生成物（２．７ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７２（Ｍ＋１）。
【００６３】
調製例１７
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１４】
2013514974.tif 000018
４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（０．５９ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．８１ｇ、５．８７ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５．６６ｍＬ）中のビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．６３ｇ、３．９２ｍｍｏｌ）の溶液に加える。得られた混合物を、７０℃にて窒素下で、密閉管中で加熱し、攪拌を一晩維持する。水でクエンチし、酢酸エチルで希釈する。有機層をクエン酸溶液（水中に１０％）、ブラインで洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、淡茶色の油（２．３ｇ）として粗製物を得る。酢酸エチル：ヘキサン（３０：７０〜７０：３０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、無色の油として標題生成物（１．８４ｇ、３．０６ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０１（Ｍ＋１），６２３（Ｍ＋２３）。
【００６４】
実施例１
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化１５】
2013514974.tif 000019
方法１：
１，４−ジオキサン（１８．４２ｍＬ、７．３７ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩化水素を、１，４−ジオキサン（１７．６９ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３．６６ｇ、７．３７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を５０℃にて週末にわたって攪拌する。酢酸エチルを加え、氷浴中で混合物を冷却する。白色の固体をデカンテーションにより回収し、酢酸エチルで数回洗浄する。真空中で固体を乾燥させ、イオン交換クロマトグラフィーにより精製する。アセトニトリルでイオン交換カラム（ＳＣＸ−２カラム）を調整する。その物質を最小量の水に溶解し、カラム上に負荷する。アセトニトリル（２カラム容量）、メタノール中の２Ｎのアンモニア：アセトニトリル（１：１）（２カラム容量）、メタノール中のアンモニアおよびメタノール中の７Ｎのアンモニアで溶出する。乾燥するまでメタノール画分中の２Ｎのアンモニアを濃縮して、白色の固体として所望の物質（１．３９ｇ）を得る。４０℃にて４８時間、固体を乾燥させて、標題化合物（１．２４ｇ、６６％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．４１−１．５５（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｄｄ，Ｊ＝３．１ａｎｄ６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１５−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．１ａｎｄ１４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｓ，１Ｈ），４．２０−４．２８（ｍ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ）。
【００６５】
方法２：
ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４３３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（７ｍＬ）に溶解し、１，４−ジオキサン（７ｍＬ、２．８ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩化水素を加える。混合物をそのままにして５０℃にて一晩攪拌する。濃縮乾固する。陽イオン交換により精製する（Ｄｏｗｅｘ  Ｍａｒａｔｈｏｎ  Ｃ、Ｎａ＋強酸性を形成）。最小量の水に残渣を溶解して、物質を可溶化させ、樹脂上に負荷する。樹脂を２カラム容量の水、次いで２カラム容量の水：テトラヒドロフラン（１：１）および２カラム容量の水で連続して洗浄する。２カラム容量の水中の１０％ピリジンで所望の生成物を溶出する。濃縮乾固して、標題化合物（２０２ｍｇ、８２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１）。
【００６６】
実施例２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化１６】
2013514974.tif 000020
方法１：
機械的攪拌器を備えた５Ｌの３口丸底フラスコに、アセトン（１．１２Ｌ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（１８６ｇ、０．４１ｍｏｌ）を入れる。このスラリーに、水（１００ＭＬ）中の３７％塩酸を１５分にわたって滴下して加える。１時間、４０℃にて混合物を攪拌する。室温まで冷却し、アセトン（３．７２Ｌ）を加える。白色のガムが完全に形成するまで、混合物を２時間攪拌する。白色のガムが形成するまで、アセトン（３Ｌ）を繰り返し添加する。アセトンを除去し、トルエンを加え、濃縮して、油を得る。水（４００ｍＬ）に粗製物を再溶解し、その物質を凍結乾燥して、白色の固体として標題化合物（１４３ｇ、８９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５６（Ｍ＋１），３７８（Ｍ＋２３）．１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ１．３７−１．４３（ｍ，４Ｈ），１．６１（ｔ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３１−２．３４（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｄｄ，Ｊ＝２．９ａｎｄ６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．１ａｎｄ１４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｑ，Ｊ＝７，１Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．２５（ｍ，１Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ）。
【００６７】
方法２：
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（２４４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２４．５ｍＬ）に溶解し、０℃にて１〜２分間、塩化水素ガスを泡立てる。０℃にて５分後、室温にて９０分間、反応物を振盪する。真空下で溶媒を除去し、固体を水に再溶解する。溶液を凍結乾燥して、白色の固体として標題化合物（１８０ｍｇ、８６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５６（Ｍ＋１），３７８（Ｍ＋２３）。
【００６８】
実施例３
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化１７】
2013514974.tif 000021
１，４−ジオキサン（１９．３５ｍＬ、７７．３８ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩化水素を、水浴中で室温にて、１，４−ジオキサン（２６．６ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチルスルファニル−ブタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（２．６６ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加え、室温にて一晩攪拌を維持する。メチル−ｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）を加え、混合物を２時間攪拌する。固体を濾過し、真空中で一晩乾燥させる。その物質を水に再溶解し、一晩凍結乾燥する。還流にて固体をアセトン（１０容量）中で粉砕し、濾過し、窒素下で４８時間真空中で乾燥させて、白色の固体として標題化合物（２．３３ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１６（Ｍ＋１）。
【００６９】
実施例４
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化１８】
2013514974.tif 000022
１，４−ジオキサン（３．０１ｍＬ、１２．０６ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩化水素を、１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（０．４ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液に加える。一晩の添加後すぐに出現する白色の沈殿物を攪拌する。メチル−ｔ−ブチルエーテル（１６ｍＬ）を加え、デカンテーションにより白い固体を回収し、メチル−ｔ−ブチルエーテルで数回洗浄して、３３０ｍｇの所望の物質を得る。（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−４−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−ペンタノイル］アミノ］−２−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−４，６−ジカルボン酸（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）から同様に調製した物質の第２のロットと、１，４−ジオキサン（０．７５ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩化水素とを合わせて、３７４ｍｇの物質を得る。ＯＡＳＩＳ（登録商標）ＨＬＢ（１ｇ）カートリッジにより、その物質（１９０ｍｇ）の半分を精製する。所望の物質を含有する溶出液を１Ｎの塩酸でｐＨ＝２〜３に酸性化し、４５℃にて一晩真空下で乾燥させて、１７０ｍｇの白色の固体を得る。残存物質を同様に精製し、合わせて、標題化合物（２９０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９８（Ｍ＋１），７９５（２Ｍ＋１）。
【００７０】
実施例５
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化１９】
2013514974.tif 000023
５Ｍ塩酸（１０ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を、（（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［２−（ｔｅｒｔブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（約１．１２ｍｍｏｌ）の水溶液に加え、室温にて５時間攪拌する。濃縮乾固し、カチオン交換クロマトグラフィー（ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８−１００）により残渣を精製する。化合物を水に溶解し、ｐＨ＝２に調整する。１〜２秒ごとに約１滴の滴下速度で化合物をカラムに流す。初発容量を樹脂表面に滴下した後、水（５〜１０ｍＬ）でリンスし、３回繰り返す。流出物のｐＨをモニターし、適用が完了するまで、水でリンスを継続する（観察されるｐＨサイクル：カラムからの流出物は最初にｐＨ＝７で、次いでｐＨ＝１に低下し、ｐＨ＝７に戻る）。水、水：テトラヒドロフラン（１：１）、次いで水の各々の少なくとも１つのカラム容量でカラムを洗浄する。樹脂からの生成物を１０％ピリジン：水に移す。さらなる生成物がＴＬＣにより検出されなくなるまで、１０％ピリジン：水で溶出を継続する。生成物を含有する画分を濃縮して、無色の固体（１７３ｍｇ）を得る。固体を水（８ｍＬ）に溶解し、５Ｍ塩酸（０．１１ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を４８時間凍結乾燥して、白色の固体として標題化合物（１９５ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４２（Ｍ＋１）。
【００７１】
実施例６
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２０】
2013514974.tif 000024
塩化アセチル（２．５ｍＬ、３５．１４ｍｍｏｌ）を、室温にて、ベンジルアルコール（１８．１８ｍＬ、１７５．６８ｍｍｏｌ）および（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩（１．６１ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）の混合物に加える。濁った反応混合物を６０℃にて窒素下で加熱する。３日後、室温まで冷やし、アセトニトリル（１０ｍＬ）で反応混合物を注意深く希釈し、ＳＣＸ−２カラム（２０ｇ）により精製する。反応混合物を、アセトニトリルで調整したカラム上に負荷し、アセトニトリル（×２）で洗浄し、次いでメタノール中の２Ｎアンモニア：アセトニトリル（２カラム容量）で溶出し、次いで真空中で溶媒を蒸発させて、所望の粗生成物と一致する白色のガム（５７６ｍｇ）を得る。次いでメタノール中の７Ｎのアンモニア（１カラム容量）で溶出し、真空中で溶媒を除去して、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−６−ベンジルオキシカルボニル−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（７５０ｍｇ）と一致する白色の固体を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７２（Ｍ＋１）。粗生成物を、酢酸エチル：シクロヘキサン（６０：４０〜１００：０）で２回溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固体として標題化合物（４３０ｍｇ）を得る。ジクロロメタン：酢酸エチル：アセトニトリルの混合物に溶解し、濃縮乾固して、室温にて一晩、高真空下で乾燥させて、白色の固体として標題化合物（４０２ｍｇ、２５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６５（Ｍ＋１）。
【００７２】
塩化アセチル（９９８μＬ、１４．０２ｍｍｏｌ）を、室温にてベンジルアルコール（７．２６ｍＬ、７０．１１ｍｍｏｌ）および（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−６−ベンジルオキシカルボニル−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（０．７５ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）の混合物に加えることによって同様に標題化合物の第２のバッチを得る。窒素下で６０℃にて反応物を加熱する。３．５日後、塩化チオニル（２０４．３１μＬ、２．８ｍｍｏｌ）を反応混合物に注意して加え、２４時間、加熱を維持する。反応物を室温まで冷却し、アセトニトリル（１０ｍＬ）で希釈する。ＳＣＸ−２カラム（２０ｇ）により精製して、白色の固体（５６７ｍｇ）を得る。酢酸エチル：シクロヘキサン（６０：４０〜１００）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製する。酢酸エチル：シクロヘキサン（６０：４０〜８０：２０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、乾燥後、さらなるバッチの標題化合物（１４０ｍｇ、２１％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６５（Ｍ＋１）。
【００７３】
実施例７
ビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化２１】
2013514974.tif 000025
酢酸エチル（７．９１ｍＬ）中の濃塩化水素の溶液を、酢酸エチル（７．９１ｍＬ）中のビス［（２−フルオロフェニル）メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．４８ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に加える。室温にて一晩、得られた混合物を攪拌する。反応混合物に窒素をバブリングことによって塩化水素を除去する。濃縮し、得られた無色の油を真空オーブン中で４０℃にて一晩乾燥させる。その物質を水に再溶解し、４８時間、フリーザーに維持し、凍結乾燥して、標題化合物（３７９ｍｇ、８９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０１（Ｍ＋１），５２３（Ｍ＋２３）。
【００７４】
実施例８
ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物
【化２２】
2013514974.tif 000026
精製水（２８．０ｋｇ）に、攪拌しながら、（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノイル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（１１．０５ｋｇ）を加える。５０℃以下の温度で、塩酸（５Ｎ、８．５ｋｇ）を混合物に加える。５０℃〜５５℃にて１．５〜２．０時間、混合物を加熱する。混合物を１５℃〜２５℃に冷却する。水酸化アンモニウム（２５％、４．８ｋｇ）を滴下して加えることによってｐＨを９に調整し、４５℃〜５０℃に温度を維持する。次いでエタノール（３４ｋｇ）を加え、２０℃〜２５℃に冷却する。別の容器に、精製水（６．５ｋｇ）、（４５ｋｇの）ポリッシュ濾過した（ｐｏｌｉｓｈ  ｆｉｌｔｅｒｅｄ）無水エタノールおよび別々に調製したビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸、２−［［（２Ｓ）−２−アミノ−１−オキソプロピル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルチオ）−，モノアンモニウム塩，（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−，一水和物の種晶（０．１ｋｇ）を入れる。この混合物を４５℃〜５０℃に加熱し、次いで水酸化アンモニウム（ポリッシュ濾過した）反応溶液を滴下して加える。混合物を５０℃〜５５℃にて２〜３時間加熱し、無水エタノール（７２ｋｇ）を滴下して加え、５０℃〜５５℃に温度を維持する。窒素ブランケット下で１〜１．５時間、反応混合物の温度を４０℃〜４５℃にする。混合物を３０℃〜３５℃に冷却し、この温度で１〜１．５時間維持する。混合物を２０℃〜２５℃に冷却し、窒素ブランケット下でさらに３〜４時間、この温度で維持する。沈殿物を濾過し、精製水／エタノール（１：１０）でケーキをリンスする。５０℃〜５５℃にて真空下でケーキを乾燥させて、白色の固体として標題化合物（６．８２ｋｇ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９１（Ｍ＋１）。
【００７５】
結晶性固体のＸ線粉末回折（ＸＲＤ）パターンを、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４  Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｘ線粉末回折計で得る。サンプルを２θにおける０．００９°のステップサイズで、２θにおいて４°〜４０°の間で走査する。乾燥粉末を石英サンプルホルダに詰め、スライドガラスを用いて滑らかな面を得る。結晶性形態回折パターンを周囲温度および相対湿度にて収集する。この場合、２θにおける±０．２のピーク位置の変化は、示される結晶性形態の明確な識別を妨げずに潜在的変化を考慮に入れる。結晶性形態の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位）、典型的にはより突出したピークの任意の独自の組合せに基づいてなされ得る。周囲温度および相対湿度で収集した、結晶性形態の回折パターンは、８．８５および２６．７７°２θにてＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整する。
【００７６】
このように、化合物のサンプル結晶性形態は、以下のTable 1に記載する回折ピーク（２θ値）を有する、特に、０．２°の回折角についての許容で２１．０７、１５．３４、１４．７４、および１９．２０からなる群より選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１８．６１におけるピークを有すると、ＣｕＫα放射線を用いてＸＲＤパターンによって特徴付けられる。
【００７７】
Table 1：実施例８のＸ線粉末回折ピーク
【表３】
2013514974.tif 000027
【００７８】
ｍＧｌｕ受容体は神経細胞の興奮性を調節するＧタンパク質共役受容体である。より具体的には、変化したグルタミン酸神経伝達は統合失調症に関連しているが、全ての通常処方される抗精神病薬はドーパミン受容体に作用する。種々の研究は、統合失調症の治療のためのグループＩＩ  ｍＧｌｕ受容体（ｍＧｌｕ２および／またはｍＧｌｕ３を含む）活性化を支持している。特に、最近のデータは、抗精神病特性を有し、統合失調症の治療のための新規の代替法を提供できるｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストを示している（Ｐａｔｉｌら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００７）１３（３），１１０２−１１０７）。研究は、ｍＧｌｕ２／３アゴニストの抗精神病活性がｍＧｌｕ２媒介性であることを示している。研究はまた、ｍＧｌｕ２／３アゴニストが、精神安定剤、抗鬱剤および神経防護特性を有することを示している。従って、ｍＧｌｕ２アゴニストは、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害などの精神疾患の治療に有用であり得る。
【００７９】
本発明の化合物はｍＧｌｕ２アゴニストであるので、それらは上述の障害の治療に適切であり得る。
【００８０】
ヒトｍＧｌｕ２アゴニストＦＬＩＰＲアッセイ
シリアンハムスター線維芽細胞由来であり、ヒトｍＧｌｕ２受容体を安定に発現し、ラットグルタミン酸輸送体ＥＡＡＴ１（興奮性アミノ酸輸送体１）およびＧα１５サブユニットと同時トランスフェクトする、ＡＶ−１２細胞株をこれらの研究に使用する。Ｇα１５の発現は、Ｇｉ共役受容体がホスホリパーゼＣ経路を介してシグナル伝達することを可能にし、蛍光定量的カルシウム反応アッセイによって受容体活性化を測定する能力が得られる。５％透析ウシ胎仔血清、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、１ｍＭのＬ−グルタミン、および５μｇ／ｍＬのブラストサイジンを添加した高グルコースおよびピリドキシン塩酸塩を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養することによって細胞株を維持する（全ての培地はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した）。コンフルエントな培養物を、酵素を含まない解離溶液（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｓ−００４−Ｂ）を用いて隔週で継代する。細胞を、アッセイの２４時間前に収集し、８５，０００（ｍＧｌｕ２）または１１５，０００（ｍＧｌｕ３）細胞／ウェルにて、Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌ−Ｍａｔｅ細胞播種器を用い、２５０（ｍＧｌｕ２）または１２５（ｍＧｌｕ３）μＭのＬ−グルタミン（新たに加えた）のみを含有する培地入りの９６ウェルの黒壁のポリ−Ｄ−リシンコーティングプレート（ＢＤ  ＢｉｏＣｏａｔ＃３５４６４０）に分配する。
【００８１】
蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて化合物の添加前後に細胞内カルシウム濃度をモニターする。アッセイ緩衝液は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳを添加したハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ；Ｓｉｇｍａ）から構成される。培地を除去し、２５℃にて９０分間、アッセイ緩衝液中で８μＭのＦｌｕｏ−３ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｆ−１２４１；５０μＬ／ウェル）と共に細胞をインキュベートする。色素溶液を除去し、新鮮なアッセイ緩衝液（５０μＬ／ウェル）と置き換える。アゴニストグルタミン酸塩（Ｆｉｓｈｅｒ  Ａ１２５−１００）について１１点濃度反応曲線（１０μＭで開始する３倍希釈）を生成する単独添加ＦＬＩＰＲアッセイを、典型的なＥＣ５０反応を確認するために各実験の前に実施する。Ｐｒｉｓｍ  ｖ４．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて結果を解析する。２５μＭの最終濃度で開始する３倍希釈を用いる１０点濃度反応プロファイルを用いて、本発明の化合物を単独添加ＦＬＩＰＲアッセイにおいて試験する。本発明の化合物を、０．１Ｎ  ＮａＯＨ中の１０ｍＭストックとして可溶化させ、−２０℃にて保存する。それらをアッセイ緩衝液中で３倍希釈系列で希釈する。ＦＬＩＰＲ機器で初期の５秒蛍光を読み取った後、本発明の化合物を細胞プレート（５０μＬ／ウェル）に加える。アゴニスト活性を検出するために、データを、最初の３０秒間、毎秒収集し、次いで合計９０秒の間、３秒ごとに収集する。最大反応を、ＥＣｍａｘにより誘発されるもの（１００μＭグルタミン酸塩）と定義する。化合物の効果を、グルタミン酸塩の非存在下で測定した基礎蛍光を補正した相対蛍光単位（ＲＦＵ）において最大マイナス最小ピーク高さとして測定する。単一のプレートを用いて定量を実施する。アゴニスト効果を、最大グルタミン酸塩反応に対する化合物単独によって誘発される刺激の割合として定量化する。全てのデータを、４パラメーターロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて相対的ＥＣ５０値として算出する。
【００８２】
実施例１の化合物は、実質的に上記のように実施したｈｍＧｌｕ２  ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、２３．０ｎＭ±３．９のＥＣ５０（ｎ＝５、誤差はＳＥＭとして算出した）を有すると測定された。この結果は、実施例１、即ち実施例２〜８の活性な化合物、がｍＧｌｕ２アゴニストであることを示す。国際公開第９７１７９５２号パンフレットに記載されている、化合物１ＳＲ，２ＲＳ，４ＳＲ，５ＳＲ，６ＳＲ−２−アミノ−４−（フェニルチオ）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸は、実質的に上記のように実施したｈｍＧｌｕ２  ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、＞２５，０００ｎＭのＥＣ５０を有すると測定された。
【００８３】
ラットにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進（ｈｙｐｅｒｌｏｃｏｍｏｔｏｒ）活性の反転
ケタミンまたはフェンシクリジン（ＰＣＰ）などのＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの投与は、統合失調症を有する患者において観察されるそれらの病状と同様であるヒトにおける精神異常様作用を生じる。ＮＭＤＡアンタゴニストの運動刺激作用を反転させる薬剤の能力は、多くの場合、精神病の動物モデルとして使用され、統合失調症および双極性障害についての医薬の臨床効果を検出することに対する十分な予測妥当性を示している。
【００８４】
個々のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）ラットを、寝具類として１ｃｍ深さの木質チップ、およびケージの上部に金属グリルを有する、４５×２５×２０ｃｍ寸法の透明なプラスチックのシューボックス（ｓｈｏｅ−ｂｏｘ）ケージに入れることによって運動活性をモニターする。運動モニター（Ｋｉｎｄｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、１５ｃｍの高さで第２のラック（飼育行動を測定するため）を有し、５ｃｍの高さで８×４の構成、（または１５×７パターンにおける２２の高密度群）で配置される１２光束の矩形ラックから構成される。シューボックスケージは、隔離した部屋において３フィートの高さのテーブルトップ上にラックを有する、これらのラックの内側に配置される。本発明の化合物は、フェンシクリジン（ＰＣＰ）の５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の３０分前に、０．３〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で（腹腔内経路（ｉ．ｐ．）、非プロドラッグにより）投与される。本発明の化合物は、一晩絶食させたラットにおいて、ＰＣＰの５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の４時間前に、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内で投与（経口経路、プロドラッグ）される。試験日に、ラットを試験ケージに入れ、ＰＣＰチャレンジの前に３０分間順応させ、ＰＣＰ投与の後、さらに６０分間、ラットをモニターする。
【００８５】
データ解析およびＥＤ５０算出を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ．ＵＳＡ）を用いて実施する。検出力解析により、１群あたり８〜１０匹のラットは、治療差（検出力＝０．８）を検出するために適切な統計的検出力を有することが必要とされると決定される。事後ダネット多重比較検定（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｔｅｓｔ）を用いる一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、合計６０分の運動活性で実施する。ＥＤ５０算出を、各用量について反転した変換データのパーセントで非線形回帰曲線フィッティングを用いて実施する。
【００８６】
実施例１の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、１．２３ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）のＥＤ５０を有すると測定した。実施例２および３の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、それぞれ２．９４ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）および５．４６ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）のＥＤ５０を有すると測定した。これらの結果は、本発明の範囲内の化合物が、統合失調症および双極性障害についての有用な医薬であることを示す。
【００８７】
マウスにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進活性の反転
マウスにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進活性の反転についてのこのアッセイは、ラットの代わりにマウスを用いて、以下に示すように変更して、上記のラットにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進活性の反転のアッセイのように実質的に実施する。
【００８８】
個々のオスのＩＣＲ（ＣＤ−１）、（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）マウスを、寝具類として０．５ｃｍ深さの木質チップ、およびケージの上部にプラスチックの蓋を有する、４５×２５×２０ｃｍ寸法の透明なプラスチックのシューボックスケージに入れることによって運動活性をモニターする。運動モニター（Ｋｉｎｄｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、２．５ｃｍの高さで８×４の構成、（または１５×７パターンにおける２２の高密度群）で配置される１２光束の矩形ラックから構成される。シューボックスケージは、隔離した部屋において３フィートの高さのテーブルトップ上にラックを有する、これらのラックの内側に配置される。本発明の化合物は、フェンシクリジン（ＰＣＰ）の７．５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の３０分前に、より高い用量が使用され得るが、通常、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内で（腹腔内経路（ｉ．ｐ．）、非プロドラッグにより）投与される。試験日に、マウスを試験ケージに入れ、ＰＣＰチャレンジの前に４５分間順応させ、ＰＣＰ投与の後、さらに６０分間、マウスをモニターする。
【００８９】
検出力解析により、１群あたり７〜８匹のマウスは、治療差（検出力＝０．８）を検出するために適切な統計的検出力を有することが必要とされると決定される。
【００９０】
１０ｍｇ／ｋｇの単回用量の実験において、実施例１の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、ＰＣＰ誘発歩行（ｉ．ｐ．）の７８±９％の阻害を生じると測定された。複数回用量実験において、実施例１の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、１０ｍｇ／ｋｇ用量にてＰＣＰ誘発歩行（ｉ．ｐ．）の８１±５％の阻害を生じると測定された。これらの結果は、本発明の範囲内の化合物が、統合失調症および双極性障害についての有用な医薬であることを示す。化合物１ＳＲ，２ＲＳ，４ＳＲ，５ＳＲ，６ＳＲ−２−アミノ−４−（フェニルチオ）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸は、上記のように実質的に実施したアッセイにおいて、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量の実験においてＰＣＰ誘発歩行（ｉ．ｐ．）の１８±１１％の阻害、１０ｍｇ／ｋｇ用量についての複数回用量の実験においてＰＣＰ誘発歩行（ｉ．ｐ．）の５±１０％の阻害、および１００ｍｇ／ｋｇ用量についての複数回用量の実験においてＰＣＰ誘発歩行（ｉ．ｐ．）の１９±８％の阻害を生じると測定された。
【００９１】
ラットにおけるストレス誘発性異常高熱の減衰
異常高熱、中核体温の上昇は、ストレスに対する反応において、ヒトを含む、多くの哺乳動物において実証されている一般的現象である。多くの不安障害において、異常高熱は病状の一部として生じ、疾患の症状とみなされる。動物におけるストレス性異常高熱を減衰する化合物は、ヒトにおける不安障害を治療するのに有用であると考えられている。全般性不安障害は、このような化合物を用いて治療され得るこのような障害の一例である。ストレス性異常高熱を分析するための従来の低侵襲性方法は、直腸体温計による、体温、およびストレス性による体温の増加を測定することによる。２７５〜３５０ｇの体重のオスのＦｉｓｃｈｅｒ  Ｆ−３４４ラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を試験する。全ての動物は、食物および自動化された水を自由に入手可能であるように個々に収容し、１２時間の明／暗サイクル（０６：００に点灯）で維持する。明期の間に実施する、実験の前に動物を約１２〜１８時間絶食させる。実験の２時間前に、１ｍＬ／ｋｇの用量体積で腹腔内（ｉ．ｐ．、非プロドラッグ）または経口（ｐ．ｏ．、プロドラッグ）投与経路のいずれかでラットに投与する。本発明の化合物は、０．３、１、３、および１０、ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）ならびに４．１３、１３．７８、および４１．３５ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ）の用量であった。これらの経口用量は、それぞれ３、１０および３０ｍｇ／ｋｇの活性薬物物質の用量に対応する。これらの研究に使用されるビヒクルは、５〜７の間のｐＨを得るために添加される十分なＮａＯＨを含む生理食塩水である。前臨床モデルにおいて強力な精神安定剤様活性を示している、ｍＧｌｕＲ５アンタゴニストＭＴＥＰ（３−［（２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）エチニル］ピリジン）を、コンパレータ（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．経路、水に溶解した）として使用する。投与後すぐに、ラットをそれらのホームケージに戻し、実験者がライトを点け、部屋を出る。１時間の前処置時間の残りの間、投薬部屋は暗くする。
【００９２】
前処置時間の後、明るく照らされた隣の部屋にラットを個々に連れていき、ベースライン体温を、鉱油で潤滑させた直腸プローブの挿入により測定する。ＰＨＹＳＩＴＥＭＰ  ＲＥＴ−２（登録商標）ラット直腸プローブ（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）を有するＰＨＹＳＩＴＥＭＰ  ＢＡＴ−１２（登録商標）マイクロプローブ体温計を用いて体温を評価する。直腸内にプローブを約２ｃｍ挿入して、中核体温を測定する（これはベースライン体温、Ｔ１（℃）である）。１０分後、２回目の体温測定を記録する（Ｔ２）。体温の相違（Ｔ２−Ｔ１）をストレス性体温上昇反応と定義する。本発明の化合物が、ビヒクル反応と比べて、ストレス性上昇反応の３５％減少を生じる用量をＴ３５用量と定義する。
【００９３】
実施例１の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、１．２７ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）のＴ３５を有すると測定された。実施例２の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、１６．２ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．）のＴ３５を有することを測定された。これらの結果は、本発明の範囲内の化合物が不安障害に有用な医薬であることを示す。より具体的には、本発明の範囲内の化合物は、全般性不安障害に有用な医薬であり得る。
【００９４】
囓歯動物における強制水泳試験
囓歯動物の強制水泳試験アッセイは十分に特徴付けられており、大鬱病性障害についての現在の医薬の抗鬱剤様活性を検出するための十分な予測妥当性を示す。このアッセイにおいて、目的とする抗鬱剤様活性を有する機構は、短時間の回避できない強制水泳事象において不動性を減少させる。
【００９５】
強制水泳試験を、マウス（オスのＮＩＨ−Ｓｗｉｓｓマウス、２０〜２５ｇ、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）およびラット（オスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、２５０〜３５０ｇ、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）の両方で実施する。マウスを、６分間、２２〜２５℃の水を６ｃｍ満たした透明なプラスチックシリンダ（直径１０ｃｍ；高さ：２５ｃｍ）に入れる。６分の試験の最後の４分の間、不動時間を記録する。１５分間、１６ｃｍの深さまでの水（２２〜２５℃）で満たしたより大きな直径（直径：１８ｃｍ；高さ：４０ｃｍ）の透明なプラスチックシリンダでも、ラットを同様に試験する。加えて、マウスは１回の強制水泳曝露を受けさせ、ラットは、２４時間の間隔で５分のセッションを２回受けさせる（データは２日目のみに記録する）。実施例１の化合物を、試験の６０分前に、腹腔内用量（１、３、または１０ｍｇ／ｋｇ）を用いてマウスにおいて試験する。実施例２の化合物を、経口投与（１．４、４．１または１３．８ｍｇ／ｋｇ；１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの活性等価物に相当する）後にラットにおいて試験する。最初の強制水泳曝露の５分後、および２日目の試験セッションの１２０分前に実施例２を投与する。これらの研究についてのポジティブコントロールとしてイミプラミンを使用する。実施例１および実施例２の化合物に最小量のＮａＯＨ加えて、水ビヒクル中で化合物を製剤化する。化合物は透明な溶液である。不動に費やした時間（被験体の頭を水の上で維持するためだけの必要な動きと定義する）は依存する測定値であり、被験体の薬物治療に関して知らされていない観察者により記録される。データを、０．０５に設定したアルファレベルを用いて事後ダネット検定（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｔｅｓｔ）により解析する。強制水泳試験のマウスバージョンが最も一般に使用される。ＥＤ６０値（ビヒクルコントロールに対して６０％の不動時間）を算出して、試験化合物の有効性を推定する。これらの試験条件下で、ラットはマウスのようにしっかりと反応せず、陽性コントロールのイミプラミンに対する統計的有意性および最大効果を使用して、治療反応を評価する。
【００９６】
実施例１を上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて測定し、マウスにおいて優れた抗鬱剤様効果を生じた（Ｆ４，３９＝９．９、ｐ＜０．０００１）。ＥＤ６０は１０．５ｍｇ／ｋｇであり、最大効果は、ビヒクルコントロールレベルに対して１０ｍｇ／ｋｇ用量にて６１％のビヒクル不動性レベルである。この研究の４つの別の複製において、平均（±標準誤差）ＥＤ６０は６．１±２．５ｍｇ／ｋｇであり、最大効果は４９．５±１１．５％のビヒクル処置した不動性レベルである。比較すると、複数の研究にわたる抗鬱剤イミプラミンの効果は８．６±１．２ｍｇ／ｋｇ（ＥＤ６０）および３９±１．２％のビヒクル不動性レベルである。ラットにおいて、実施例２を上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて測定し、４．１および１３．８ｍｇ／ｋｇでの投与後、不動時間は顕著に減少した［Ｆ（４，２９）＝１４．７２、ｐ＜０．０００１］。実施例２の最大効果は、ビヒクルで処置したラットに対し６８％で、不動性を減少させる。比較すると、３０ｍｇ／ｋｇイミプラミンは、ビヒクルコントロールに対し７０％で、不動性を減少させる。これらの結果は、本発明の範囲内の化合物が鬱病のための有用な医薬であることを示す。
【００９７】
インビトロでのＰｅｐＴ１  ＧｌｙＳａｒ阻害スクリーニングおよびＩＣ５０測定
ＰｅｐＴ１アッセイを、腸管吸収輸送体ＰｅｐＴ１と相互作用するアミノ酸プロドラッグ化合物の能力を試験するために確立する。
【００９８】
ヒトの腸由来のＨｅＬａ細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション）を、５％ＣＯ２加湿雰囲気中で３７℃にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを有する１００ユニット／ｍＬペニシリンを含有するハイクローン培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＳＨ３０２４３）中で増殖させる。細胞株を４０継代まで使用し、次いで捨てる。１ｍｌバイアル中の凍結細胞を１〜２分間水浴中で解凍させ、３７℃にて５ｍＬの細胞培地に加える。Ｔフラスコの各々に、８．５ｍＬの新鮮な培地および１．５ｍＬの細胞ストックを与える。細胞を１週間の間に２回継代する。これは、１０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水−エチレンジアミン四酢酸（ＰＢＳ−ＥＤＴＡ）でフラスコをリンスし、細胞を分離するために、２〜５分間、２ｍＬのトリプシンを加え、トリプシンのさらなる活性を阻害するために８ｍＬの新鮮な培地を加えることによって達成される。１：６細胞希釈を得るために、各々の新しいフラスコに、８．５ｍＬの新鮮な培地と１．５ｍＬの細胞ストックとの混合物を入れる。取込実験の準備まで、細胞を３７℃にてインキュベートする。
【００９９】
Ｔフラスコ中の７０〜８０％コンフルエントな細胞をトランスフェクション処理の１日前に播種する。細胞ストックを有するフラスコをＰＢＳ−ＥＤＴＡおよびトリプシンで処理して、細胞を分離させ、この時点からトランスフェクション培地を使用する。トランスフェクション培地は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋ＮＥＡＡからなる。各ウェルに、０．５ｍＬの細胞混合物を加え（１．３×１０５が所望の細胞濃度である）、細胞を３７℃にて一晩インキュベートする。このアッセイの２４時間前に、細胞をＰＥＰＴ１でトランスフェクトする。トランスフェクション混合物を、６００μＬの無血清トランスフェクション培地、１８μＬのＦｕＧｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、および１１μｇのＰｅｐＴ１  ＤＮＡを混合することによって調製する。トランスフェクション試薬−ＤＮＡ複合体を２０分間インキュベートし、２４μＬの試薬−ＤＮＡ複合体を各ウェルに加える。
【０１００】
ＰＥＰＴ１媒介性［グリシル−１−２−１４Ｃ］グリシルサルコシン（ＧｌｙＳａｒ）取込活性の阻害を、既に公開されているように（Ｚｈａｎｇら，２００４．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｅｒ  Ｔｈｅｒ．３１０：４３７−４４５）、トランスフェクションの２４時間後、２４ウェルプレートで培養した細胞中で測定する。［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒの取込を阻害する本発明の化合物の能力を測定するために、プロドラッグ化合物を、５μＭの［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ（Ｍｏｒａｖｅｋ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）および２０μＭの冷Ｇｌｙ−Ｓａｒの存在下でｐＨ６．０の取込培地中で５ｍＭにてＨｅＬａ細胞を一過性にトランスフェクトした８０〜９０％のコンフルエントなＰｅｐＴ１とインキュベートする。取込培地は、１４０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ２、０．８ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、２５ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ＴＲＩＳ）からなる。次いで２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸を用いて溶液をｐＨ６．０にする。インキュベーション体積は５００μＬであり、室温にて３分間実施する。インキュベーション時間の終わりに取込を停止するために、取込培地を細胞単層から吸引し、５００μＬの氷冷ＰＢＳをウェルに加える。Ｃａ＋２およびＭｇ２＋を含まない５００μＬの室温ＰＢＳで細胞を３回洗浄する。次いで３００μＬの１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００Ｈ２Ｏ溶液で細胞を溶解させる。２００μＬのアリコートを除去し、液体シンチレーション計数により放射線を定量し、インキュベーションウェルの各々に存在する［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒを測定する。阻害剤なしのコントロールを確立し、各プロドラッグの阻害パーセントをこのコントロールに対して算出する。ネガティブコントロール（グリシン）および２つのポジティブコントロール（セファドロキシルおよびセファレキシン）を各実験で並行して実施して、アッセイ系の実行可能性を決定する。セファレキシンと等しいか、またはそれより良いＧｌｙＳａｒ取込阻害を有するプロドラッグ化合物は許容可能とみなす。平均値±標準偏差は、グリシンについて１０．１±９．５％（ｎ＝１９）、セファドロキシルについて５３．２±１３．２％（ｎ＝１９）、およびセファレキシンについて３７．５±１４．７％（ｎ＝１８）である。
【０１０１】
ＰｅｐＴ  ＩＣ５０アッセイに関して、プロドラッグ化合物を、５μＭ［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒおよび２０μＭ冷Ｇｌｙ−Ｓａｒの存在下で、種々の濃度（０．０６２５〜２５ｍＭ）でインキュベートする。インキュベーションおよびサンプリング処理は、上記のＰｅｐＴ１スクリーニングと全く同じである。［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ取込データをプロドラッグ化合物濃度の各々について評価し、ＩＣ５０値を算出する。
【０１０２】
実施例２、３、４、および５の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、それぞれ３８％（ｎ＝３、ＳＤ＝１８．４）、５１％（ｎ＝１）、３２％（ｎ＝１）、および４４％（ｎ＝１）の５ｍＭにおけるｈＰｅｐＴ１［３Ｈ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ取込阻害を有すると測定された。実施例２および３の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、それぞれ１．８４ｍＭ（ＳＥ＝０．４２）および５．３６ｍＭ（ＳＥ＝１．６９）のｈＰｅｐＴ１［３Ｈ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ取込阻害ＩＣ５０を有すると測定された。これらの結果は、本発明の範囲内のアミノ酸プロドラッグ化合物が、ＰｅｐＴ１輸送体を介して経口吸収されることを示す。
【０１０３】
インビトロでの腸プロドラッグ加水分解アッセイ
凍結したヒト十二指腸ホモジネート（１００ｍＭリン酸トリス緩衝液、ｐＨ７．４を用いる１：２の組織：緩衝液比）をＣｅｌｓｉｕｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から得、それはフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）およびＥＤＴＡの両方を含まなかった。
【０１０４】
ヒト十二指腸の各ロットを単一のドナーから得て、腸を小片にし、その部分を別個に凍結する。組織採集を全て４℃にて実施し、即座に−７０℃にて凍結する。ヒト腸ホモジネートを解凍し、インキュベーションの直前に、１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４中で０．５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度に希釈する。
【０１０５】
インキュベーションを９６ウェルプレート中で実施し、全てのプロドラッグ化合物を各日に２連で実施する。ストックプロドラッグ化合物溶液を１ｍＭの濃度にて水中で調製する。２００μＬアリコートの０．５ｍｇ／ｍＬ腸ホモジネートおよび１９６μＬの１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液を３７℃の水浴中の９６ウェルプレートに入れる。９６ウェルピペッターを用いて、４μＬの１ｍＭプロドラッグ化合物溶液をホモジネートに移す。プロドラッグ化合物の添加直後（０時）および１時間のインキュベーション後、インキュベーション混合物の５０μＬサンプルを、自動使い捨て同時９６ウェルピペッターを用いて除去し、１００ｎｇ／ｍＬの内部標準物を含む２００μＬのメタノールクエンチ溶液に直接加える。次いでサンプルを１０℃で５分間、３５００ｒｐｍにて遠心分離する。上清（２００μＬ）を最終９６ウェルＰＣＲプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分析のために密閉する。
【０１０６】
インキュベーション混合物中の本発明の加水分解化合物の濃度を、アナリストバージョン１．４．２、ターボイオンスプレー、陽イオン化、および選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を備えるＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００四重極質量分析計でＬＣ／ＭＳ／ＭＳ検出を用いて決定する。Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ（登録商標）Ｔ３（２０×２．１ｍｍ、５μＭ）ＨＰＬＣカラムを、１．０ｍＬ／分の流速および０．１％移動相Ａ〜９９％移動相Ａの移動相勾配を用いて周囲温度にて使用する。移動相Ａは１０００：５の水：ヘプタフルオロ酪酸であり、移動相Ｂは１：１のメタノール：氷酢酸である。
【０１０７】
腸インキュベーション混合物中の本発明の加水分解化合物の濃度を、１００ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４中で１０μＭにて開始する反復２倍希釈によって調製した標準曲線から決定し、その後、サンプルと同一のメタノール−内部標準溶液でクエンチする。平均および標準偏差を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｏｆｆｉｃｅ  Ｅｘｃｅｌ（登録商標）２００７を用いて算出する。加水分解の量を、加えたプロドラッグ化合物濃度に対して形成した化合物のモルパーセントとして決定する。ポジティブコントロール、内部プロドラッグ化合物Ａから内部化合物薬物Ａの加水分解は、各バッチにおいて実施すると、平均７５．３％になる（ｎ＝２０）。次いで最後の値を内部化合物薬物Ａの形成に対して正規化する。
【０１０８】
実施例２、３、４、５、および６の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、内部プロドラッグ化合物Ａに対するヒト腸加水分解が、それぞれ６１％（ｎ＝３、ＳＤ＝１１．１）、５３％（ｎ＝３、ＳＤ＝１１．９）、４５％（ｎ＝１）、３５％（ｎ＝２；３４．１、３５．２）、および２％（ｎ＝１）と測定された。これらの結果は、本発明の範囲内のプロドラッグ化合物がヒト腸において加水分解されることを示す。
【０１０９】
インビトロでのヒト肝臓Ｓ−９ホモジネート加水分解アッセイ
肝臓Ｓ９画分をＸｅｎｏｔｅｃｈ  ＬＬＣ（Ｌｅｎｅｘａ，ＭＯ）から得る。ロットは２人のドナー、１人は男性、１人は女性のプール由来のものである。肝臓Ｓ９画分を調製し、ＥＤＴＡを含まない４℃での５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、および１５０ｍＭ塩化カリウムからなる均一化緩衝液を用いて希釈する。プロドラッグ化合物を３７℃にて２時間、肝臓ホモジネート中でインキュベートし、その後、化合物の濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより決定する。クロピドグレルからクロピドグレルカルボン酸への加水分解をアッセイポジティブコントロールとして利用する。
【０１１０】
インキュベーションを９６ウェルフォーマット中で実施し、全てのプロドラッグ化合物を各日に２連で実施する。ストックプロドラッグ化合物溶液を１ｍＭの濃度で水中で調製する。ヒト肝臓Ｓ９画分を、１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４中で０．５ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度に希釈する。
【０１１１】
２００μＬアリコートの０．５ｍｇ／ｍｌヒト肝臓Ｓ−９ホモジネートおよび１９６μＬの１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液を、３７℃の水浴中で９６ウェルプレートに入れる。９６ウェルピペッターを用いて、４μＬの１ｍＭプロドラッグ溶液をホモジネートに移す。加水分解が化学的不安定性に起因しないことを確実にするために、プロドラッグ化合物も肝臓Ｓ−９を含まないＰＢＳ緩衝液のみとインキュベートする。プロドラッグ化合物の添加直後（０時）、および１時間のインキュベーション後、インキュベーション混合物の５０μＬのサンプルを、自動使い捨て同時９６ウェルピペッターを用いて除去し、１００ｎｇ／ｍｌの内部標準物を含む２００μＬのメタノールクエンチ溶液に直接加える。次いでサンプルを１０℃にて５分間、３５００ｒｐｍで遠心分離する。上清（２００μＬ）を最後の９６ウェルＰＣＲプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる解析のために密閉する。
【０１１２】
インキュベーションの間に形成した化合物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ定量化を、Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００、アナリストバージョン１．４．２、ターボイオンスプレー、陽イオン化、および選択反応モニタリング（ＳＲＭ）で実施する。使用したＨＰＬＣカラムは、１．０ｍＬ／分の移動相流速を用いて周囲温度でＷａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ（登録商標）Ｔ３（２０×２．１ｍｍ、５μＭ）である。移動相Ａは１０００：５の水：ヘプタフルオロ酪酸であり、移動相Ｂは１：１のメタノール：氷酢酸である。移動相勾配は、９９．９／０．１の開始移動相比Ａ／Ｂおよび１／９９の最終を利用する。
【０１１３】
インキュベーション混合物中の加水分解化合物の濃度を、１００ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４中の１０μＭで開始する反復２倍希釈により調製し、その後、サンプルと同一のメタノール−内部標準溶液でクエンチした標準曲線から決定する。平均および標準偏差を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｏｆｆｉｃｅ  Ｅｘｃｅｌ（登録商標）２００７を用いて算出する。最後の値を、加えたプロドラッグ化合物濃度に対して形成した化合物のモルパーセントとして示す。クロピドグレルからクロピドグレルカルボン酸への加水分解をポジティブコントロールとして使用し、平均すると７３．０％（ｎ＝２７）になる。
【０１１４】
実施例２、３、５、６、および７の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、それぞれ、１％（ｎ＝１）、８％（ｎ＝１）、０．４％（ｎ＝１）、９％（ｎ＝２；４．４、１３．６）、および２９％（ｎ＝１）のヒト肝臓Ｓ９加水分解を有すると測定する。これらの結果は、本発明の範囲内のプロドラッグ化合物がヒト肝臓において加水分解されることを示す。
【０１１５】
このデータは、本発明の範囲内のアミノ酸プロドラッグ化合物が、セファドロキシルおよびセファレキシン（Ｚｈａｎｇら，２００４．ＪＰＥＴ３１０：４３７−４４５）と同じ程、またはそれより良くＰｅｐＴ１基質ＧｌｙＳａｒの取込を阻害することを示し、このことから、ＰｅｐＴ１輸送体を介するヒト経口吸収が予測される。プロドラッグ化合物吸収に加えて、体内への侵入の際に、活性化合物を生じさせるために、プロドラッグ化合物加水分解は必須である。このインビトロでの加水分解研究は、本発明の範囲内のアミノ酸プロドラッグ化合物がヒト腸により加水分解され得ることを示す。ジエステルプロドラッグ化合物の加水分解はヒト肝臓ホモジネートで生じ、本発明の範囲内のジエステルプロドラッグ化合物が経口曝露後にヒトにおいて加水分解することを示す。同時にこれらのデータは、本発明の範囲内のアミノ酸プロドラッグ化合物およびジエステルプロドラッグ化合物がヒトにおいて加水分解されることが予測される。
【国際調査報告】
2013514974.tif 000030
2013514974.tif 000031