(57)【要約】  コンパニオンアニマルの免疫力を高める方法である。本方法は、コンパニオンアニマルに、グルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含みうる。グルコース代謝拮抗物質は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせでありうる。コンパニオンアニマルは、イヌ又はネコでありうる。免疫力を高めることは、例えば、Ｔ細胞及びＢ細胞の増殖能を改変すること、及び、免疫細胞の表現型の相対的分布を改変することを含みうる。
2013542227.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法であって、前記コンパニオンアニマルに、前記コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記グルコース代謝拮抗物質が、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されるグルコース代謝拮抗成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記コンパニオンアニマルが、イヌ科動物及びネコ科動物からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記グルコース代謝拮抗物質が、マンノヘプツロースを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、キブル、好ましくは栄養的にバランスのとれたキブルを含む、前記１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記キブルが、約５％未満のマンノヘプツロースを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記投与する工程が、前記コンパニオンアニマルに１日当たり体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約５０ｍｇのマンノヘプツロースを与えること、好ましくは、前記コンパニオンアニマルに１日当たり体重１ｋｇ当たり約２ｍｇのマンノヘプツロースを与えることを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記投与する工程が、１日当たり約１ｍｇ〜約１０００ｍｇのマンノヘプツロースを与えること、好ましくは１日当たり約５ｍｇ〜約１００ｍｇのマンノヘプツロースを与えることを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が補助食品である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与する工程が、前記コンパニオンアニマルにマンノヘプツロースの供給源を与えることを含み、前記マンノヘプツロースの供給源が、アボカド、アボカド抽出物、アボカド粉末、アボカド濃縮物、並びにこれらの組み合わせ及び混合物からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与する工程が、ＤＮＡの損傷が低減されるような低濃度の血清８−ＯＨｄＧによって免疫力の向上につながる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法であって、前記コンパニオンアニマルに、前記コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含み、前記免疫力を高めることが、刺激チャレンジに反応するＴ及びＢ免疫細胞の増殖能が、前記グルコース代謝拮抗物質の投与後に変化するように、前記コンパニオンアニマルの免疫系の反応する能力を高めることを含む、方法。
【請求項１３】
前記投与する工程が、前記コンパニオンアニマルにマンノヘプツロースを含む組成物を与えることを含み、
前記組成物が、栄養的にバランスのとれたキブルを含み、
前記与えることが、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのマンノヘプツロースの日用量を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法であって、前記コンパニオンアニマルに、前記コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含み、前記免疫力を高めることが、加齢にともなうＣＤ１８＋細胞の増加を減速させることによって免疫系の機能低下を減速させることを含む、方法。
【請求項１５】
前記投与する工程が、前記コンパニオンアニマルにマンノヘプツロースを含む組成物を与えることを含み、
前記組成物が、栄養的にバランスのとれたキブルを含み、
前記与えることが、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのマンノヘプツロースの日用量を含む、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の実施形態は、コンパニオンアニマルの免疫力を高める方法に関する。より詳細には、本発明の実施形態は、限定的ではないが、コンパニオンアニマルにグルコース代謝拮抗物質を投与することによって、コンパニオンアニマルの免疫力を高める方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
絶食によるカロリー摂取の制限が、多くが加齢及び加齢関連疾患に関連するある種の望ましくない細胞プロセスを実験動物において遅らせるという知見が、生物学的理論によって正確に予見されている。
【０００３】
詳細には、カロリー制限は、寿命を確実に延ばし、腫瘍の発生及び進行を遅らせ、多くのシステムにおいて生理学的加齢を遅らせることが示されている。実際、７０年以上にわたる研究により、カロリー制限は動物の寿命を確実に延ばす栄養学的介入であることが示されている。これについては以下を参照されたい。Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ  ａｎｄ  Ｗａｌｆｏｒｄ、「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；及びＦｉｓｈｂｅｉｎ、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）。寿命及び腫瘍発生に対するカロリー制限のこのような効果については、ＭｃＫａｙによる初期の研究以来、多くの報告がある。これについては以下を参照されたい。ＭｃＫａｙら、「Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｒｅｔａｒｄｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  Ｌｅｎｇｔｈ  ｏｆ  Ｌｉｆｅｓｐａｎ  ａｎｄ  Ｕｐｏｎ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  Ｂｏｄｙ  Ｓｉｚｅ」、Ｊ．Ｎｕｔｒ．，Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．６３〜７９（１９３５）。実際、過去２０年間にわたり、老年学においてカロリー制限に対する関心が再び高まったことにより、このような食事療法が多くのシステムで生理学的な加齢を遅らせるということが広く受け容れられるようになった。これについては以下を参照されたい。Ｗｅｉｎｄｒｕｃｈ  ａｎｄ  Ｗａｌｆｏｒｄ、「Ｔｈｅ  Ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＩＬ：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｃ．Ｔｈｏｍａｓ（１９８８）；Ｙｕ、「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）；並びにＦｉｓｈｂｅｉｎ、「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）及びＭａｓｏｒｏ，Ｅ．Ｊ．「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｃａｌｏｒｉｃ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｇｅｉｎｇ」、Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．１２６，ｐｐ  ９１３〜９２２（２００５）。
【０００４】
空腹時の血糖値及びインスリン濃度の低下、並びにインスリン感受性の改善が、カロリー制限のバイオマーカーとして速やかに測定される。カロリー制限を行ったげっ歯類では、空腹時の血糖値及びインスリン濃度はより低く、グルコースチャレンジにおけるピーク血糖値及びインスリン濃度は、カロリー制限を行ったものでは低下している。これについては以下を参照されたい。Ｋａｌａｎｔら、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｄｉｅｔ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ  Ｒａｔｓ」、Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．，Ｖｏｌ．４６，ｐｐ．８９〜１０４（１９８８）。高インスリン血症は、心臓疾患及び糖尿病を含む幾つかのこうした疾患プロセスにともなう危険因子である（Ｂａｌｋａｕ  ａｎｄ  Ｅｓｃｈｗｅｇｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ．Ｍｅｔａｂ．１（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ２３−１，１９９９）。インスリン濃度及び体温の低下は、こうした代謝プロファイルの変化の最も信頼性の高い２つの指標である（Ｍａｓｏｒｏら、Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４７：Ｂ２０２〜Ｂ２０８，１９９２）；Ｋｏｉｚｕｍｉら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１１７：３６１〜３６７，１９８７；Ｌａｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：４１５４〜４１６４，１９９６）。
【０００５】
２−デオキシ−Ｄ−グルコースなどのグルコース代謝拮抗物質は、グルコースに関連した化合物である。しかしながら、グルコースとの構造の違いのため、こうした化合物は炭水化物の代謝の特定の側面を阻止又は阻害し、したがってカロリー制限の効果と同様の効果をもたらしうる（Ｒｅｚｅｋら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１０６：１４３〜１５７，１９７２）。これらの代謝拮抗物質は、体重の低下、血漿インスリン濃度の低下、体温の低下、腫瘍の発生及び増殖の阻害、並びに血液循環中の糖質コルチコイドホルモン濃度の上昇などの多くの生理学的作用を示す。（概説は以下を参照。Ｒｏｔｈら、Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２８：３０５〜３１５，２００１）。これらの生理学的作用は、炭水化物代謝の阻害によるものである。
【０００６】
このため、哺乳動物において免疫力を高める成分としてのグルコース代謝拮抗物質の使用は、有効であると考えられる。栄養と免疫反応との相互作用は、過去５０年間にわたって重点的に研究がなされてきた領域である。１９５０年代にＳｃｒｉｍｓｈａｗにより、栄養、免疫反応、及び感染症間の双方向の相互作用が示唆された（Ｓｃｈｒｉｍｓｈａｗ  ＮＳ，Ｔａｙｌｏｒ  ＣＥ，Ｇｏｒｄｏｎ  ＪＥ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  １９５９；２３７：３６７〜４０３）。その後、栄養失調の患者は感染症のリスクが高いことが認識された。追跡調査により、多くの微量栄養素の欠乏がホストの防御機構の機能不全に結びつくことが実証されている。その一方で、許容される必要量を上回る量の特定の栄養素を補給することによって、特定の免疫反応の指標が改善されうることも示されている。これらを合わせて考えると、栄養摂取は免疫力に影響を与えることが可能であることは明白である。免疫機能の調節異常が加齢の結果であることは裏付けがなされている。このような調節異常は、疾病率（病気）及び死亡率（死亡）の増加につながりうる。細胞性免疫、主としてＴ細胞は、加齢による悪影響が最も大きい免疫系の要素であることは明らかである。概説は以下を参照されたい。Ｐａｗｅｌｅｃ（Ｐａｗｅｌｅｃ  Ｇ，Ｗａｇｎｅｒ  Ｗ，Ａｄｉｂｚａｄｅｈ  Ｍ，Ｅｎｇｅｌ  Ａ．Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  １９９９；３４：４１９〜２９）。加齢にともなうＴ細胞免疫機能不全は、関節炎、癌、自己免疫疾患、及び感染症に対する感受性の増大を含む、高齢者における多くの慢性変性疾患の原因であることが示唆されている。こうした機能低下の原因となっている機構を説明することを試みた多くの理論が存在するが、観察されるすべての変化を完全に説明することができる理論は存在していない。高齢のイヌは、若齢のイヌと比較して免疫反応の低下を示すことが報告されている。高齢のイヌは、若齢のイヌと比較して免疫の構成も異なっている。これらの観察に基づけば、加齢のプロセスは、イヌにおいても他の種と同様、免疫反応の調節異常を引き起こし、この種又は関連する種類における栄養調節の機会を更に与えるものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、例えばＴ及びＢ免疫細胞の増殖能を改変し、免疫細胞の表現型の相対的分布を改変することなどによって、免疫力に対する生理学的作用を有するグルコース代謝拮抗物質などの栄養素を与えることが有効であると考えられる。また、こうしたグルコース代謝拮抗成分を含む組成物を提供することが有効であると考えられる。したがって、本発明の実施形態はこのような効果に関するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書における各実施形態は、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法に関する。本方法は、一実施形態において、コンパニオンアニマルに、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含みうる。グルコース代謝拮抗物質は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択することができる。コンパニオンアニマルは、イヌ科動物及びネコ科動物でありうる。特定の実施形態では、グルコース代謝拮抗物質はマンノヘプツロースであってよい。特定の実施形態では、組成物はキブルであってよく、そのキブルは栄養的にバランスのとれたものであってよく、約５％未満のマンノヘプツロースを含みうる。
【０００９】
本方法は、コンパニオンアニマルに１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇのマンノヘプツロースを与えることを含みうる。本方法は更に、１日当たり約１ｍｇ〜約１０００ｍｇのマンノヘプツロースを与えることを含みうる。
【００１０】
特定の実施形態では、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法は、コンパニオンアニマルに、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含み、免疫力を高めることが、刺激チャレンジに反応するＴ及びＢ免疫細胞の増殖能が、グルコース代謝拮抗物質の投与後に変化するように、コンパニオンアニマルの免疫系の反応する能力を高めることを含む。
【００１１】
特定の実施形態では、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるための方法は、コンパニオンアニマルに、コンパニオンアニマルの免疫力を高めるうえで有効な量のグルコース代謝拮抗物質を投与する工程を含み、免疫力を高めることが、加齢にともなうＣＤ１８＋細胞の増加を減速させることによって免疫系の機能低下を減速させることを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】イヌ群１のＣＤ１８＋免疫細胞のグラフ。
【図２】イヌ群２のＣＤ１８＋免疫細胞のグラフ。
【図３】イヌ群１のＣｏｎＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図４】イヌ群２のＣｏｎＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図５】イヌ群１のＰＨＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図６】イヌ群２のＰＨＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図７】イヌ群１のＰＷＭに対するＢ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図８】イヌ群２のＰＷＭに対するＢ細胞の分裂促進刺激のグラフ。
【図９】イヌ群１の平均の血清８−ＯＨｄＧ濃度のグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
本明細書において使用するところの「ｔｈｅ」、「ａ」及び「ａｎ」を含む冠詞は、特許請求の範囲又は明細書において使用される場合、特許請求されるか又は記載されるものの１以上を意味するものとして理解される。
【００１４】
本明細書において使用するところの「含む（include）」、「含む（includes）」、及び「含んでいる（including）」は、非限定的であることを意味する。
【００１５】
本明細書において使用するところの「複数」なる用語は、１よりも多いことを意味する。
【００１６】
本明細書において使用するところの「動物」又は「ペット」なる用語は、これらに限定されるものではないが、飼いイヌ（イヌ科動物）、ネコ（ネコ科動物）、ウマ、ウシ、フェレット、ウサギ、ブタ、ラット、マウス、ジャービル、ハムスター、ウマなどを含む家畜を意味する。飼いイヌ及び飼いネコはペットの具体的な例であり、本明細書において「コンパニオンアニマル」と呼ぶ。本開示の全体を通じて、動物、ペット、又はコンパニオンアニマルなる用語を使用する場合、動物、ペット、又はコンパニオンアニマルは特に断らないかぎりは非疾患状態であるものとして理解されるべきである。
【００１７】
本明細書で使用するところの「動物飼料」、「動物飼料組成物」、「動物飼料キブル」、「ペットフード」又は「ペットフード組成物」なる用語はいずれも、ペットによって摂取されることを目的とした組成物を意味する。ペットフードとしては、これらに限定されるものではないが、毎日の食餌に適した栄養的にバランスのとれた組成物、並びに栄養的にバランスがとれていてもいなくともよい栄養補助食品及び／又はペットスナックを挙げることができる。
【００１８】
本明細書において使用するところの「栄養的にバランスのとれた」なる用語は、ペットフードなどの組成物が、更に加える必要のある水を除き、生命を維持するうえで必要とされる既知の栄養素を、ペット栄養分野における、米国食品医薬品局動物薬センター、米国飼料検査官協会などの（ただしこれらに限定されない）行政機関を含む広く認識された当局の推奨に基づく適切な量及び割合で有することを意味する。
【００１９】
本発明のすべての経口用量は、特に示されないかぎりは、哺乳動物の体重１ｋｇ当たりで計算される。
【００２０】
本明細書の全体を通じて与えられるすべての最大数値限定は、それよりも小さいすべての数値限定を、あたかもそれらの小さい数値限定が本明細書に明確に記載されているものと同様にして含むものとして理解されるべきである。本明細書の全体を通じて与えられるすべての最小数値限定は、それよりも大きいすべての数値限定を、あたかもそれらの大きい数値限定が本明細書に明確に記載されているものと同様にして含むものである。本明細書の全体を通じて与えられるすべての数値範囲は、そのようなより広い数値範囲内に含まれるそれよりも狭いすべての数値範囲を、あたかもそれらのより狭い数値範囲がすべて本明細書に明確に記載されているものと同様にして含むものである。
【００２１】
品目の全リスト、例えば、成分のリストは、マーカッシュ群として解釈されることを意図しており、またそのように解釈されるべきである。したがって、すべてのリストは、．．．リストの品目．．．「からなる群から選択される」品目「並びにこれらの組み合わせ及び混合物」として読んで解釈することができる。
【００２２】
本明細書では、本発明の実施形態において使用される異なる成分を含む各成分についてはその商品名で参照している。本明細書において特定の商品名の材料により限定されることは、本発明者らの意図するところではない。本明細書の説明文中において、商品名によって参照される材料と同等の材料（例えば、異なる名称又は参照符合で異なる供給源から得られるもの）に置き換えて使用することもできる。
【００２３】
本明細書におけるプロセス、方法、組成物、及び装置は、本明細書に述べられる特徴又は実施形態の任意のものを含むか、これらから基本的になるか、又はこれらからなりうる。
【００２４】
本開示の異なる実施形態の説明において、異なる実施形態又は個々の特徴について開示する。当業者には明らかなように、このような実施形態及び特徴のすべての組み合わせが可能であり、本開示の好ましい実施となりうるものである。本発明の様々な実施形態及び個々の特徴について例示及び説明したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、他の様々な変更及び改変を行うことが可能である。やはり明らかなことであるが、上記の開示において教示された実施形態及び特徴のすべての組み合わせが可能であり、本発明の好ましい実施となりうるものである。
【００２５】
本発明の実施形態
本発明の各実施形態は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択されるグルコース代謝拮抗成分を含む組成物に関するものである。理論によって限定されることは意図するところではないが、これらの成分は、グルコース代謝拮抗物質として受け入れられているものである。別の実施形態では、各成分は、アボカドなどの植物体、又はアルファルファ、イチジク、サクラソウなどのマンノヘプツロースの他の豊富な供給源の一成分として、記載される組成物中に存在しうる。
【００２６】
本発明の各実施形態は、哺乳動物の免疫力を高める方法にも関する。こうした方法は、本明細書に開示される組成物を哺乳動物に投与することに関し、その組成物は哺乳動物の年齢に関わらず、哺乳動物の免疫力を高めるうえで有効である。特定の一実施形態では、本方法は、グルコース代謝拮抗物質を含む組成物の投与によって、コンパニオンアニマルなどの哺乳動物の免疫系の反応する能力を高める（免疫反応を高めるとも言う）ことに関する。他の特定の一実施形態では、本方法は、グルコース代謝拮抗物質を含む組成物の投与によって、コンパニオンアニマルなどの哺乳動物の加齢にともなう免疫系の機能低下を維持及び／又は減速させることに関する。
【００２７】
免疫は、自然免疫と獲得免疫とに分けることができる。免疫系の獲得免疫の経路は、細胞性免疫と体液性免疫によって代表され、トリチウム化チミジンリンパ球増殖反応（tritiated thymidine lymphoproliferative response）などの（ただしこれに限定されない）アッセイによって測定することが可能なＴ細胞及びＢ細胞の高い反応性によって定義することができる。免疫系の自然免疫の経路は、ＣＤ１８＋免疫細胞によって代表され、これは、免疫蛍光法によって測定される白血球集団の相対的及び絶対的比率の変化などの（ただしこれに限定されない）アッセイによって測定することが可能である。
【００２８】
更に、免疫力を高めることには、例えば、Ｔ細胞及びＢ細胞の増殖能を改変すること、及び、免疫細胞の表現型の相対的分布を改変することが含まれうる。
【００２９】
本明細書に開示される哺乳動物には、脊椎動物、及び昆虫（例えばショウジョウバエ）及び／又は線虫（例えば、カエノラブディティス・エレガンス（Caenorbabditis elegans））などの無脊椎動物が含まれうる。本明細書ではヒト及びコンパニオンアニマルについて開示する。
【００３０】
本明細書において開示されるグルコース代謝拮抗成分としては、２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、及び２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトールなどのアンヒドロ糖類、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせが含まれる。マンノヘプツロースは、具体的なグルコース代謝拮抗物質の１つである。一実施形態では、マンノヘプツロースは、アボカド、アボカド抽出物、アボカド粉末、アボカド濃縮物、又は他のマンノヘプツロースの豊富な供給源などの植物体の１成分として、記載される組成物中に存在しうる。マンノヘプツロースの豊富な供給源の非限定的な例としては、アルファルファ、イチジク、及びサクラソウが挙げられる。植物体には、果実、種子（若しくは核）、枝、葉、若しくは関連する植物の他の任意の部分、又はそれらの組み合わせが含まれうる。
【００３１】
アボカド（一般的にワニナシ、アグアカテ、又はパルタとも呼ばれる）は、関連する糖類及び他の炭水化物と同様、マンノヘプツロースの極めて豊富な供給源を含む。アボカドは、亜熱帯性常緑樹の果実であり、カリフォルニア州、フロリダ州、ハワイ州、グアテマラ共和国、メキシコ、西インド諸島、南アフリカ共和国、及びアジアの各地域で最もよく生育する。
【００３２】
アボカドの種としては、例えばパーシー・アメリカーナ（Persea Americana）及びパーシー・ヌビゲナ（Persea nubigena）が挙げられ、これらの例示的な種に含まれるすべての栽培品種が含まれる。栽培品種としては、「アナハイム（Anaheim）」、「ベーコン（Bacon）」、「クリームハート（Creamhart）」、「デューク（Duke）」、「フエルテ（Fuerte）」、「ガンター（Ganter）」、「グウェン（Gwen）」、「ハス（Hass）」、「ジム（Jim）」、「ルラ（Lula）」、「リヨン（Lyon）」、「メヒコーラ・グランデ（Mexicola Grande）」、「マリエッタ・グリーン（Murrieta Green）」、「ネイバル（Nabal）」、「ピンカートン（Pinkerton）」、「クィーン（Queen）」、「プエブラ（Puebla）」、「リード（Reed）」、「リンコン（Rincon）」、「ライアン（Ryan）」、「スピンクス（Spinks）」、「トパ・トパ（Topa Topa）」、「ウィトセル（Whitsell）」、「ビュルツ（Wurtz）」及び「ズッターノ（Zutano）」を挙げることができる。本明細書での使用にはアボカドの果実が特に好ましく、果実は核を含んでいてもよく、あるいは核を取り除くか又は少なくとも部分的に取り除くかしてもよい。パーシー・アメリカーナ（Persea Americana）からの果実以外に、アナハイム（Anaheim）、クリームハート（Creamhart）、フエルテ（Fuerte）、ハス（Hass）、ルラ（Lula）、リヨン（Lyon）、マリエッタ・グリーン（Murrieta Green）、ネイバル（Nabal）、クィーン（Queen）、プエブラ（Puebla）、リード（Reed）、ライアン（Ryan）及びスピンクス（Spinks）などのより大きな果実（例えば、果実が熟したときに約３４０グラム（約１２オンス）以上）を実らせる栽培品種から得られる果実が本明細書での使用には特に好ましい。
【００３３】
アルファルファ、イチジク又はサクラソウからの植物体も、比較的高濃度のマンノヘプツロースを与えることが報告されている。アルファルファはまた、メディカゴ・サティバ（Medicago sativa）とも呼ばれる。イチジクすなわちフィカス・カリカ（Ficus carica）（例えば、フサナリイチジク（Cluster fig）又はエジプトイチジク（Sycamore fig）が挙げられる）以外に、サクラソウすなわちプリムラ・オフィシナリスを使用することもできる。
【００３４】
２−デオキシ−Ｄ−グルコース、５−チオ−Ｄ−グルコース、３−Ｏ−メチルグルコース、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール、２，５−アンヒドロ−Ｄ−マンニトール、マンノヘプツロース、並びにこれらの混合物及び組み合わせからなる群から選択される成分の特定の濃度が、本明細書での使用には有用でありうることが見出されている。詳細には、比較的低濃度、及び比較的高用量のこうした成分は有用ではあるものの、所望の目的には不充分な効果しか得られない可能性がある。用量は使用されるグルコース代謝拮抗成分によって決まり、グルコース代謝拮抗物質が投与される哺乳動物の大きさ及び状態に応じて異なる。幾つかの実施形態では、約０．０００１又は約０．００１ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの範囲の用量が有効でありうる。本明細書において用量がｍｇ／ｋｇで使用される場合、「ｍｇ」は、マンノヘプツロースなどの成分の濃度を示し、「ｋｇ」はイヌ又はネコなどの哺乳動物の体重のキログラムを示す。２−デオキシ−Ｄ−グルコースが大型の動物で使用される場合には、より低い範囲の用量が適当である場合もある。特に５−チオ−Ｄ−グルコース又はマンニトールのような化合物のより高い用量も容易に許容される。一実施形態では、哺乳動物に毎日投与される成分の用量は、「ｍｇ」が成分の濃度を示し、「ｋｇ」が哺乳動物の体重のキログラムを示すものとして、約０．１、０．５、１、２、又は５ｍｇ／ｋｇ〜約１５、２０、５０、１００、１５０、又は２００ｍｇ／ｋｇ、及びこれらの範囲のすべての組み合わせであってよい。一実施形態では、哺乳動物に毎日投与される用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇであってよい。一実施形態では、哺乳動物に毎日投与される用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇであってよい。特定の実施形態では、これらの量は、いずれも組成物の重量にして、約５％未満、又は約２％未満、又は約０．０００１％〜約０．５％、又は約０．１％〜約１０％、又は約０．１％〜約５％の成分を含む組成物に相当しうる。これらの間のすべての範囲も考えられる。成分の濃度は、例えば組成物の形態（例えば、乾燥性組成物、半湿潤組成物、湿潤組成物、若しくは補助食品、又はこれらの他の任意の形態若しくは混合物のいずれであるか）などの異なる因子に基づいて、当業者が決定することができる。当業者であれば、好ましい用量を使用し、特定の組成物中の成分の最適濃度を決定することが可能である。
【００３５】
同様に、哺乳動物に毎日投与される成分の全体用量も与えることができる。こうした日用量は、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日であってよい。こうした日用量は、組成物を摂取する哺乳動物の大きさにも依存しうる。例えば一実施形態では、より大きな哺乳動物はより小さな哺乳動物よりも多くを摂取しうる。このことは、哺乳動物の単位質量当たりの用量に関して本明細書に開示される用量と一致していることは言うまでもない。したがって、一実施形態では、哺乳動物が大きくなるほど、大量の組成物を投与することができる。
【００３６】
したがって、一実施形態では、こうした日用量は、本明細書に開示される哺乳動物の単位質量当たりの毎日の用量に相当しうる。具体的には、日用量は、実施形態によっては、哺乳動物の大きさ及び上記に述べた日用量に応じて、約０．１ｍｇ／日〜約１０００ｍｇ／日の範囲、又は更にはそれ以上でありうる。他の実施形態では、日用量は、約１ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日、又は約１ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日、又は約５ｍｇ／日〜約８０ｍｇ／日、又は約１０ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約４０ｍｇ／日であってよい。これらの間のすべての範囲も考えられる。
【００３７】
同様に、本明細書の組成物において植物体の抽出物又は粉末が用いられる場合には、抽出物又は粉末の濃度は、こうした抽出物又は粉末中の有効成分の濃度によって決まりうる。本明細書では、いずれも抽出物又は粉末の重量にして約０．５％〜約９９％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５％〜約７５％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５％〜約５０％のグルコース代謝拮抗成分、又は約０．５％〜約２５％のグルコース代謝拮抗成分を含む抽出物及び／又は粉末が見出されている。グルコース代謝拮抗成分が、抽出物及び／又は粉末の重量の約０．５、１、２、５、又は１０％〜約１５、２５、５０又は７５％でありうる抽出物及び／又は粉末が見出されている。
【００３８】
したがって、本発明の実施形態は、哺乳動物により摂取されることを目的とした組成物に関する。組成物は、必要な食餌要求成分を供給することを目的とした食品ばかりでなく、ペットスナック（例えばビスケット）又は他の補助食品も含む。必要に応じて、本明細書の組成物は、乾燥組成物（例えばキブル）、半湿潤組成物、湿潤組成物、又はこれらの任意の混合物であってよい。これに代えるか又はこれに加えて、組成物は、グレービー、飲み水、ヨーグルト、粉末、懸濁液、チュー、ペットスナック（例えばビスケット）又は他の任意の投与形態などの補助食品である。
【００３９】
更に、一実施形態では、組成物は、ペットフードキブルのように栄養的にバランスのとれたものであってよい。別の実施形態では、組成物は、補助食品、ペットスナック、又はペット用の他の投与形態などの栄養的にバランスのとれていないものである。
【００４０】
本明細書で使用される組成物は、必要に応じて１以上の更なる成分を含みうる。他の成分は本明細書で使用される組成物に含めるうえで効果的ではあるが、本発明の目的では任意である。一実施形態では、組成物は、乾燥物基準で、組成物の重量の約１０％〜約９０％の粗タンパク質、又は約２０％〜約５０％の粗タンパク質、又は約２０％〜約４０％の粗タンパク質、又は組成物の重量の約２０％〜約３５％の粗タンパク質を含みうる。粗タンパク質材料には、大豆、穀物（トウモロコシ、小麦など）、綿の実、及びピーナツなどの植物性タンパク質、又はカゼイン、アルブミン、及び肉タンパク質などの動物性タンパク質が含まれうる。本明細書で有用な肉タンパク質の非限定的な例としては、牛肉、豚肉、羊肉、鶏肉、魚、及びこれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質源が挙げられる。
【００４１】
更に、組成物は、乾燥物基準で、組成物の重量の約５％〜約４０％の脂肪、又は約１０％〜約３５％の脂肪を含みうる。
【００４２】
本発明の組成物に関する各実施形態は、炭水化物源を更に含みうる。一実施形態では、組成物は、組成物の重量の約３５％〜組成物の重量の約５０％までの炭水化物源を含みうる。他の実施形態では、組成物は、組成物の重量の約３５％〜約４５％、又は組成物の重量の約４０％〜５０％の炭水化物源を含みうる。例示的な炭水化物源としては、米、トウモロコシ、ミロ、ソルガム、大麦、小麦などのグレイン又は穀物がある。
【００４３】
組成物は、これらに限定されるものではないが、乾燥ホエイ及び他の乳製品副産物、ビートパルプ、セルロース、繊維、魚油、亜麻、ビタミン類、ミネラル類、香味料、酸化防止剤、並びにタウリンなどの他の材料も含みうる。
【００４４】
組成物は、他の任意成分を更に含んでもよい。任意成分としては、プロバイオティック成分（ビフィズス菌及び／又は乳酸菌）及びプレバイオティック（フラクトオリゴ糖類）成分が挙げられる。含まれうるプロバイオティック成分及びプレバイオティック成分の例並びに量については、例えば米国特許出願公開第２００５／０１５８２９４号に開示されている。含まれうる他の任意成分としては、オメガ６及びオメガ３脂肪酸、カルニチン、ヘキサメタリン酸塩、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、βカロチン、ビタミンＥ、及びルテインを含むカロチノイド、並びに下記表１に示されるような成分がある。
【００４５】
免疫
本明細書に開示するように、本組成物は、哺乳動物、特にコンパニオンアニマルの免疫力を高めるのに有用でありうる。免疫に関して、ＣＤ１８は、加齢にともなって、また炎症時に増加することが示されているＰａｎ白血球細胞表面マーカーである（Ｖａｌｅｎｔｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｌｄｅｒｌｙ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ−−ｔｈｅ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ａｎｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ；Ｊ  Ｔｒａｕｍａ．２００９；６７（５）：９６８〜７４）。白血球は、炎症による組織傷害の発生において重量な役割を担っている。白血球−内皮細胞の相互作用が増大している部位では、微小循環中の白血球が内皮細胞上の接着分子と相互作用し、ローリング、接着、及び遊走を生じる。この後、白血球はサイトカインを放出し、プロテアーゼ及びスーパーオキシドラジカル種を生成するが、これらも炎症カスケードに加わる。組織の炎症及び内皮細胞の傷害を引き起こすのは、こうした白血球の反応である。上記に述べたように、活性酸素中間体（ＲＯＩ）の食作用による生成に関連したＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（ＣＲ３）の発現は、高齢の患者からの単球では若齢の患者と比較して上昇している。同様に、自己免疫反応は、ヘテロ２量体であるβインテグリンリンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８の過剰発現に一部よるものである。そのため、リンパ球上でのＣＤ１１ａ／ＣＤ１８抗原の密度の増大は、インビトロでのリンパ球増殖反応の低下及び高齢患者において報告されている他の免疫学的機能不全につながる機構における１つの事象として検討されている（Ｃｈｉｒｉｃｏｌｏ  Ｍ，Ｍｏｒｉｎｉ  ＭＣ，Ｍａｎｃｉｎｉ  Ｒ，Ｂｅｌｔｒａｎｄｉ  Ｅ，Ｂｅｌｌｅｔｔｉ  Ｄ，Ｃｏｎｔｅ  Ｒ．Ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ＣＤ１１ａ  ａｎｄ  ＣＤ１８  ｉｎ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｏｌｄ  ａｇｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ．１９９５；４１（４）：２２７〜３４）。加齢にともなって見られるＣＤ１８の過剰発現の、以前に報告されているこのようなすべての弊害のため、ＣＤ１８の加齢にともなう増加を低減／減速させることが望ましいと考えられるが、本明細書に示されるように、グルコース代謝拮抗物質、特にマンノヘプツロースは、イヌなどのコンパニオンアニマルにおいてこれを行うことが示されている。
【００４６】
図１に示されるように、年齢別に分析を行った場合、動物の体重１ｋｇ当たり２ｍｇのマンノヘプツロースが投与されるように配合された試験食餌を与えたイヌでは、同じ食餌を与えたコントロールと比較して、ＣＤ１８＋免疫細胞の増加が大幅に減速することが示された。ＣＤ１８＋免疫細胞の増加は、インビトロでのリンパ球増殖反応の低下及び高齢患者において報告されている他の免疫学的機能不全につながる機構における１つの事象と考えられており、したがって、この増加を減速させることは、哺乳動物にとって免疫学的に有益であると考えられる。
【００４７】
図２に示されるように、年齢別に分析を行った場合、マンノヘプツロースを含む試験食餌を与えたイヌでは、同じ食餌を与えたコントロールと比較して、ＣＤ１８＋免疫細胞の増加が減速する傾向が示された。ＣＤ１８＋免疫細胞の増加は、インビトロでのリンパ球増殖反応の低下及び高齢患者において報告されている他の免疫学的機能不全につながる機構における１つの事象と考えられており、したがって、この増加を減速させることは、哺乳動物にとって免疫学的に有益であると考えられる。
【００４８】
イヌ群１とした図１のイヌは、イヌ群２とした図２のイヌよりも約２歳だけ高齢のイヌ群を表す。
【００４９】
コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）は、特にＴリンパ球に対して分裂促進活性を示す（Ｒｕｓｃｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｖｅｎｉｃｋ  １９７５；Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙ  ａｎｄ  Ｋａｔｃｈａｌｓｋｉ  １９７１；Ｐｅｒｌｍａｎｎら、１９７０）。フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）は、インゲンマメ（ファセオルス・ブルガリス（Phaseolus vulgaris））からのレクチン抽出物であり、強力なＴ細胞分裂促進活性を有している（Ｈａｍｍｅｒｓｔｒｏｍ，Ｓ．ら、（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９，１６１１〜１６１５）。アメリカヤマゴボウ（Phytolacca Americana）に由来するヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）は、Ｂ細胞分裂促進因子である（Ｓｃｈｒｅｃｋら、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ  １２，Ｉｓｓｕｅ  ６，４５５〜４６２）。広く受け入れられている、インビボ免疫反応の指標であるリンパ球幼若化アッセイにおいて、これら３つのマイトジェンを用いて免疫細胞をインビトロで刺激した。多くの研究により、このアッセイは、加齢にともなう免疫系の反応の低下を検出することが示されている（Ｇｏｌｄｒｏｓｅｎら、１９７７−Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ９：２２９〜２３４）。低い増殖能力は、免疫細胞が活性化されず、効果的に分裂できないことを示す（効果的な免疫反応を開始するうえで重要なステップ）。このような増殖能力の低下は、加齢にともなって見られる疾病率及び死亡率の増大と関連付けられていることから、免疫能の重要な指標である。
【００５０】
上記の２群のイヌについて、図３〜８にＣｏｎＡ、ＰＨＡ、及びＰＷＭのデータを示す。
【００５１】
ＣｏｎＡについては、図３及び４に、Ｔ細胞の増殖能力に対するマンノヘプツロースの有効性が示されている。ベースラインの値はいずれも同様であり（ｐ＞０．０５）、コントロールの食餌群に対してマンノヘプツロースを含む食餌を与えたイヌでは、数値的に、統計的傾向において、又は統計的により高かった。以上を合わせると、これらの観察結果は、マンノヘプツロースがこの免疫細胞集団のコンパートメントに対して有益であるという結論を支持するものである。Ｔ細胞の反応性は加齢にともなって低下し、加齢にともなって見られる疾病率及び死亡率の増大の主な要因である。したがって、この作用を逆転又は低減させることにより、イヌの健康及び免疫反応によい影響が及ぼされる。すなわち、図３及び４には、マンノヘプツロースを含む試験食餌を与えたイヌでは、ＣｏｎＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激において一定の統計的傾向又は統計的改善が認められることが示されている。この増大は、マンノヘプツロースを含む食餌を与えたイヌのＴ細胞は、コントロールの食餌を与えたイヌからのＴ細胞と比較して、チャレンジに対する反応性が良好であることを示している。
【００５２】
ＣｏｎＡと同様、図５及び６に示されるＰＨＡに対する反応は、分裂促進刺激に対するＴ細胞コンパートメントの反応性に対するマンノヘプツロースの有効性を示している。ベースラインの値はいずれも同様であり（ｐ＞０．０５）、処置期間の間、ＰＨＡ刺激したＴ細胞のすべてのデータは、コントロールに対してマンノヘプツロースを与えたイヌにおいて、数値的に、統計学的傾向において、又は統計的により高かった。以上をＣｏｎＡで見られた結果と合わせると、これらの観察結果は、マンノヘプツロースが免疫細胞集団のＴ細胞コンパートメントに有益であるという結果を支持するものである。Ｔ細胞の反応性は加齢にともなって低下し、加齢にともなって見られる疾病率及び死亡率の増大の主な要因となっていることはよく知られている。したがって、この作用を逆転又は低減させることにより、イヌの免疫反応、健康及び健康状態によい影響が及ぼされる。上記の図５及び６には、マンノヘプツロースを含む試験食餌を与えたイヌでは、ＰＨＡに対するＴ細胞の分裂促進刺激において一定の統計的傾向又は統計的改善が認められることが同様に示されている。この増大は、マンノヘプツロースを含む食餌を与えたイヌのＴ細胞は、コントロールの食餌を与えたイヌからのＴ細胞と比較して、チャレンジに対する反応性が良好であることを示している。
【００５３】
図７及び８に示される結果は、図中、ＰＭＷとして示されるように、イヌにおけるＢ細胞の増殖能力に対するマンノヘプツロースを与えることの有効性を示している。ベースラインのデータはいずれも統計的に同様であり、顕著な有効性が認められる場合、それはマンノヘプツロースを与えたことによるものである。Ｂ細胞の応答性も加齢にともなって低下することが知られており、加齢にともなって見られる疾病率及び死亡率に対する別の要因となっている。したがって、この作用を逆転又は低減させることにより、イヌの免疫反応、健康及び健康状態によい影響が及ぼされる。上記の図７及び８には、マンノヘプツロースを含む試験食餌を与えたイヌでは、ＰＷＭに対するＢ細胞の分裂促進刺激において一定の統計的傾向又は統計的改善が認められることが同様に示されている。この増大は、マンノヘプツロースを含む食餌を与えたイヌのＢ細胞は、コントロールの食餌を与えたイヌからのＢ細胞と比較して、チャレンジに対する反応性が良好であることを示している。
【００５４】
８−オキソ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）は、デオキシグアノシンの酸化誘導体である。８−ＯＨｄＧは、ＤＮＡの酸化の主な生成物の１つである。免疫反応の一環として、Ｔ及びＢ細胞は増殖しなければならない（活性化して分裂する）。安定した増殖の重要なステップの１つは、ＤＮＡの複製である。細胞のＤＮＡが損傷したり、ＤＮＡを修復したりしなければならない場合に、この重要なステップを阻害することができる。図９に示されるように、マンノヘプツロースを含む試験食餌を与えたイヌでは、コントロールの食餌を与えたイヌと比較して、血清中の８−ＯＨｄＧは大幅に低かった。マンノヘプツロースを与えたイヌにおけるＤＮＡの損傷を低下させることにより、免疫細胞の複製が促進され、免疫系の活性化カスケードにおける重要なステップが起こる助けとなる。
【００５５】
まとめとして、下記に表１を示す。表１の１列目は、特定の反応を示す。２列目は、「一般的加齢」と題して、多くの種で加齢が生じるに従ってマーカーに何が起きるかを示している。３列目はイヌに関したもので、２列目の多くの種の一般的加齢と一致しており、したがって、マンノヘプツロースが与えられない場合には、イヌにおいて一般的加齢の兆候が継続して見られることを示している。これに対して、４列目には、マンノヘプツロースを含む食餌をイヌが摂取した場合の加齢のマーカーが示されている。表から分かるように、マンノヘプツロースを含む食餌をイヌが摂取した場合には、Ｔ細胞の増殖及びＢ細胞の増殖反応が増大するのに対して、Ｔ細胞の増殖及びＢ細胞の増殖反応は、通常は、加齢にともなって低下する。同様なことがＣＤ１８＋細胞及びＤＮＡの損傷についても当てはまり、マンノヘプツロースを含む食餌の摂取により、これらのマーカーは、一般的には加齢にともなって増大するのと対照的に低下している。したがって、マンノヘプツロースを含む食餌は、特にイヌが加齢する際の免疫反応の低下を減速し、免疫系がチャレンジされた場合に反応する能力を高めることによって、免疫反応によい影響を与えることができる。
【表１】
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【００５６】
別の実施形態では、商品が与えられる。商品はパッケージを含みうる。本明細書で開示する組成物の配送及び販売に用いられる任意の標準的なパッケージングを使用することができる。パッケージには、マンノヘプツロース又は他の任意のグルコース代謝拮抗物質を含む本明細書に開示される組成物が収容される。組成物は、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物であってよい。パッケージには、特定の効果の説明が書かれていてもよい。特定の効果の説明は、組成物の消費者に対して与えられる効果に関するものであってよい。特定の効果の説明は、組成物が摂取されると免疫力が高められることに関するものであってもよい。例えば特定の効果の説明は、組成物がコンパニオンアニマルに投与される場合に、コンパニオンアニマルの免疫系が応答する能力を高めることに関するものであってよい。別の例では、組成物が加齢するコンパニオンアニマルに投与される場合に、加齢するコンパニオンアニマルの免疫系の機能低下を維持及び／又は減速することに関するものであってよい特定の効果の説明が含まれる。したがって、コンパニオンアニマル組成物が収容されたパッケージを有する商品であって、そのパッケージ内に収容されたコンパニオンアニマル組成物をコンパニオンアニマルが摂取した場合に、コンパニオンアニマルの免疫力が高められることに関する効果の説明をパッケージが有する商品が提供される。
【実施例】
【００５７】
以下の実施例は、本発明の実施形態を例示するために与えられるものであって、本発明の範囲をいかなる意味においても限定することを目的とするものではない。
【００５８】
マンノヘプツロースを含むアボカド粉末の調製：
新鮮なアボカド（ルラ（Lula）種）をフレッシュキング社（Fresh King Incorporated）（フロリダ州、ホームステッド）より入手した。アボカドを手で割って、種を取り出して捨てた。残った皮及び果肉を、Ｈｏｂａｒｔ業務用食品加工装置（製品番号１１−１０４１０２３５）で１２と１／４のシーブを使用してすりつぶした。次いで、すりつぶしたアボカドをＥｄｗａｒｄｓ凍結乾燥機（Ｓｕｐｅｒ  Ｍｏｄｕｌｙｏモデル、英国、サセックス州、クローリー）に移した。凍結乾燥機は最初の２４時間は−２０℃に、次の２４時間は−５℃に、最後の７２時間は５℃に設定した。この粉末を凍結乾燥機から取り出し、Ｓｔｒａｕｂグラインディングミル（モデル４Ｅ、ペンシルベニア州、フィラデルフィア）を使用して粉末にすりつぶした。このアボカド粉末を分析したところ、粉末の重量にして約１０．３５％のマンノヘプツロースを含有していた。アボカド中のマンノヘプツロースの量は、特定の品種及び熟度の状態によって異なる点は注意を要する。
【００５９】
アボカド抽出物の調製
高濃度のマンノヘプツロースを含むアボカド抽出物を、必要に応じて行われる以下のプロセスに従って調製し、本発明の各実施形態の組成物中に使用する。
【００６０】
アボカド果実の全体（約９００ｋｇ）を得る。果実を割って種の一部又は全部を取り出し、約２２５ｋｇの種を除いた半分のアボカドを得る。この生のアボカドを粉砕機に入れ、少し攪拌してから水（約３０００ｋｇ）及びＣＥＬＬＵＢＲＩＸ（ノボザイムズ社（Novozymes A/S）より市販されるもの）（約１Ｌ）を更に加える。この混合物を更に攪拌しながら約６６℃に加熱する。全部を加え終わった時点で、ＣＥＬＬＵＢＲＩＸ（約１Ｌ）を更に加え、混合物全体をｐＨを約５．５に調整して攪拌下に約１２時間おく。温度を更に約８０℃に上昇させて、少なくとも約２時間維持する。次いで、得られた消化された植物混合物を８０℃で濾過して、炭水化物抽出物を濾液として得る。次いで、この炭水化物抽出物を簡単な再循環システム中で８０℃で真空下に蒸発させて、約１０％〜約２０％の固形分及び約５．５のｐＨを有する炭水化物抽出物を得る。次いで、抽出物をリフラクタンスウインドードライヤー（refractance window dryer）を使用して更に濃縮して、約１００ｋｇの抽出物を結晶又は粉末として得る（アボカドの全果実の開始質量に対して約１１％の炭水化物抽出物の収率。これを分析すると、アボカドの全果実の開始質量に対して約０．２５％〜約４．５％のマンノヘプツロースの収率を得る）。アボカド中のマンノヘプツロースの量は、果実の特定の品種及び熟度の状態によって異なる点は注意を要する。この抽出物を、本発明の各実施形態の組成物中に使用することができる。
【００６１】
キブル組成物
表１は、下記の成分を概ね示される量で含み、押出しを含む当該技術分野では標準的な方法によって調製した、イヌ及び／又はネコに毎日の餌として与えられる２種類のキブル組成物を示す。
【表２】
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＊アボカドを、マンノヘプツロースの含量が高い他の植物体に置き換えることができる。同様にマンノヘプツロース源を加えることによって、組成物中の同様の量のグレイン源が置き換えられる。
＊＊ビタミン類及びミネラル類としては以下が含まれうる。すなわち、ビタミンＥ、β−カロチン、ビタミンＡ、アスコルビン酸、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１、ナイアシン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、葉酸、塩化コリン、イノシトール、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、酸化亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、酸化マンガン、硫酸第一鉄、ヨウ化カリウム、炭酸コバルト。
＊＊＊微量成分としては以下が含まれうる。すなわち、魚油、亜麻仁、亜麻粉、セルロース、香味料、酸化防止剤、タウリン、酵母、カルニチン、コンドロイチン硫酸、グルコサミン、ルテイン、ローズマリーエキス。
【００６２】
投与
８０頭（ｎ＝８０）のラブラドルレトリーバーを年齢、性別、及び同腹子についてランダム化し、下記に述べるように、Ｅｕｋａｎｕｂａ  Ｓｅｎｉｏｒ  Ｌａｒｇｅ  Ｂｒｅｅｄに似た完全かつ栄養的にバランスのとれたコントロール食餌、又はマンノヘプツロースを含む以外はコントロール食餌と同じである実験食餌を与えた。イヌは２つの実験群に分けた。
【００６３】
実験１：全体で３９頭の高齢のラブラドルレトリーバーに、０又は約２ｍｇ／ｋｇ（イヌの体重）の濃度のマンノヘプツロースを与える栄養的にバランスのとれた組成物を与える。４年間の実験の開始時のイヌ（１２頭の去勢した雄、２７頭の避妊した雌）の平均の年齢は、６．７歳であり、コホート中の最も若いイヌと最も高齢のイヌの年齢はそれぞれ５．１〜８．２歳の範囲である。コントロール組成物は栄養的にバランスの取れた組成物として与え、マンノヘプツロース（０ｍｇ／ｋｇ）、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を含まない。試験組成物は、栄養的にバランスのとれたコントロール組成物に、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を配合して、マンノヘプツロースを約２ｍｇ／ｋｇ（イヌの体重）の用量で与えるものである。高齢のイヌに、毎日７時３０分と１４時３０分に毎日の割り当ての１／２を与える。イヌは、体重及び体組成スコア（ＢＣＳ）が２〜４のスコア範囲内に維持されるように給餌した。餌の調整を行う場合には、１／４ずつ行った。すべてのイヌを一晩絶食させ、すべての免疫測定用に血液採取を行うことができるようになるまで朝食を与えなかった。水は制限なく与えた。
【００６４】
実験２：全体で４１頭の若齢のラブラドルレトリーバーに、０又は約２ｍｇ／ｋｇ（イヌの体重）の濃度のマンノヘプツロースを与える栄養的にバランスのとれた組成物を与える。３６ヶ月の給餌実験の開始時のイヌ（１２頭の去勢した雄、２９頭の避妊した雌）の平均の年齢は、４．０歳であり、コホート中の最も若いイヌと最も高齢のイヌの年齢はそれぞれ２．０〜６．１歳の範囲である。コントロール組成物は栄養的にバランスの取れた組成物（Ｅｕｋａｎｕｂａ  Ｓｅｎｉｏｒ  Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  Ｆｏｒｍｕｌａ）として与え、マンノヘプツロース（０ｍｇ／ｋｇ）、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を含まない。試験組成物は、栄養的にバランスのとれたコントロール組成物に、アボカド抽出物、アボカド粉末、又はアボカド濃縮物を配合して、マンノヘプツロースを約２ｍｇ／ｋｇ（イヌの体重）の用量で与えるものである。若齢のイヌに、毎日７時３０分と１４時３０分に毎日の割り当ての１／２を与える。イヌは、体重及び体組成スコア（ＢＣＳ）が２〜４のスコア範囲内に維持されるように給餌した。餌の調整を行う場合には、１／４ずつ行った。しかしながら、すべてのイヌを一晩絶食させ、すべての免疫測定用に血液採取を行うことができるようになるまで朝食を与えなかった。水は制限なく与えた。
【００６５】
方法
幼若化アッセイの材料及び方法：
イヌの全血をヘパリンチューブに採取し、６００ｇで１０分間遠心した。バフィーコートを新しい滅菌ポリプロピレンチューブに移し、ＰＢＳで１３ｍＬに希釈した。次いで、この血液混合物を９ｍＬの室温のＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ  １．０７７上に層を形成するように載せ、５００ｇで３０分間遠心した。ＰＢＭＣ層を勾配から取り出して、ＰＢＳで洗った。残留赤血球をＡＣＫ溶解バッファー（ＮＨ４ＣＬ  １５５ｍＭ、ＥＤＴＡ  ０．１ｍＭ、ＫＨＣＯ３−１０ｍＭ、ｐＨ７．４）で除去し、ＰＢＭＣを再びＰＢＳで洗った。細胞数を、Ｚ２  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（ベックマン・コールター社（Beckman Coulter））上で測定した。
【００６６】
各マイトジェンは、シグマ社（Sigma）より購入し、完全培地（１０％ＦＢＳ及び１％  ＰｅｎＳｔｒｅｐを加えたＲＰＭＩ）中に希釈した。希釈した各マイトジェンを、９６穴組織培養プレートのウェルに以下の濃度で加えた。すなわち、コンカバリンＡ：２．５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬ、ＰＨＡ：２．５μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び２０μｇ／ｍＬ、ヤマゴボウマイトジェン：０．２５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬ。更に完全培地中のＰＢＭＣを各ウェルに、２×１０＾５細胞／ウェルとなるように加えた。各ウェルの全体の体積は２００μＬであった。次いで各プレートを５％  ＣＯ２中、３７℃で全体で７２時間、インキュベートした。５２時間後（±２時間）に、細胞を１μＣｉ／ウェルの３Ｈ−チミジンによりパルス標識した。細胞を収穫し、液体シンチレーションにより放射能をカウントした。
【００６７】
８−ＯＨＤＧアッセイ：
全血から分離したイヌ血清試料を用いて、アッセイを行った。８−ＯＨＤＧの量を、オクシスヘルスプロダクツ社（Oxis Health Products）より販売される市販のＥＬＩＳＡキット（カタログ番号２１０２６）によって定量した。
【００６８】
試薬及び試料は、使用に先立ってすべて室温に戻す。
【００６９】
１．一次抗体を一次抗体希釈バッファーで戻す。
２．各ウェル当たり５０ｍＬの試料又はスタンダードを加える。エッジ効果を防止するため、最も外側の列（列Ａ及びＨ）は使用しない。
３．５０ｍＬの戻した一次抗体を、ブランクを除くすべてのウェルに加える。プレートシールによりプレートを緊密にシールする。プレートを左右に振って完全に混合する。３７℃で１時間インキュベートする。
４．プレートの中身を捨てる。２５０ｍＬの希釈した洗浄バッファーを各ウェルにピペットで加える。攪拌によってよく洗い、洗浄バッファーを捨てる。プレートを裏返して、きれいなペーパータオルに押し当てて残りの洗浄バッファーをすべて取り去る。洗浄を２回繰り返す。
５．二次抗体を二次抗体希釈バッファーで戻す。
６．各ウェル当たり１００ｍＬの戻した二次抗体を加える。プレートシールによりプレートを緊密にシールする。プレートを左右に振って完全に混合する。３７℃で１時間インキュベートする。
７．クロモゲンを１００倍量のクロモゲン希釈バッファーで希釈する。
８．工程４を繰り返す。
９．各ウェル当たり１００ｍＬの希釈したクロモゲンを加える。プレートを左右に振って完全に混合する。暗所において室温で１５分間インキュベートする。
１０．１００ｍＬの反応停止溶液を加えて混合し、３分間待ってから４５０ｎｍの吸光度を読み取る。
【００７０】
フローサイトメトリー−ＣＤ１８法：
イヌの全血をＥＤＴＡチューブに採取し、４００Ｇで３０分間遠心した。バフィーコートを新しい滅菌ポリプロピレンチューブに移し、２ｍＬのＰＢＳで希釈した。５ｍＬのＨ２Ｏを１分間加え、５ｍＬの２Ｘ氷冷ＰＢＳにより停止することにより、赤血球を溶解した。細胞を３００ｇで１０分間遠心してペレットとした。白血球のペレットが得られるまで溶解工程を繰り返した。次いで、細胞を０．８ｍＬのＦＡＣＳ洗浄バッファー（１％  ＦＢＳ及び０．０２％ＮａＮ３を加えたＰＢＳ）中に再懸濁した。１００μＬの細胞懸濁液の一定分量を染色用に各ＦＡＣＳチューブに入れた。
【００７１】
染色用抗体はセロテック社（Serotec）より購入した。一次抗体：マウス抗イヌＣＤ１８（ＭＣＡ１７８０）を１：１０の希釈率で使用。二次抗体：ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）ＦＩＴＣ（ＳＴＡＲ１１７Ｆ）を１：５０の希釈率で使用。ネガティブコントロール抗体：マウスＩｇＧ１  ＦＩＴＣ／Ｒａｔ  ＩｇＧ２ａ  ＲＰＥ（ＤＣ０５０）を１：１０の希釈率で使用。細胞を氷上で各抗体と３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ洗浄バッファーで洗い、４％ホルマリンで固定してから分析を行った。細胞集団を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏソフトウェアを使用してＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（ベクトン・ディキンソン社（Becton Dickinson））で分析した。
【００７２】
本明細書に開示した寸法及び値は、記載された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきでない。むしろ、特に断らないかぎり、そのような寸法はそれぞれ、記載された値及びその値周辺の機能的に同等の範囲の両方を意味するものとする。例えば、「４０ｍｍ」として開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味するものとする。
【００７３】
相互参照されるか又は関連するすべての特許又は特許出願を含む、本願に引用されるすべての文書を、特に除外又は限定することを明言しないかぎりにおいて、その全容にわたって本願に援用するものである。いずれの文献の引用も、こうした文献が本願で開示又は特許請求されるすべての発明に対する先行技術であることを容認するものではなく、あるいは、こうした文献が、単独で、又は他のすべての参照文献とのあらゆる組み合わせにおいて、こうした発明のいずれかを参照、教示、示唆又は開示していることを容認するものでもない。更に、本文書において、ある用語の任意の意味又は定義の範囲が、援用文献中の同じ用語の任意の意味又は定義と矛盾する場合には、本文書中でその用語に与えられる意味又は定義が優先するものとする。
【００７４】
本発明の特定の実施形態を説明及び記述してきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を行えることが当業者には明白であろう。したがって、本発明の範囲に含まれるそのようなすべての変更及び改変を添付の特許請求の範囲において網羅するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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