(57)【要約】  本発明は、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療におけるブロモドメイン阻害剤の使用、このような化合物を含有する医薬組成物、並びにこのような疾患又は病態の治療において用いるための化合物を同定する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量のブロモドメイン阻害剤を、それを必要としている被験体に投与することを含む、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療する方法。
【請求項２】
前記ブロモドメイン阻害剤が、アセチル化リシン残基に対するＢＥＴファミリーのブロモドメインの結合を阻害する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＢＥＴファミリーのブロモドメインが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３又はＢＲＤ４である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ブロモドメイン阻害剤が、
１−メチルエチル（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−２−メチル−６−｛４−［（メチルアミノ）メチル］フェニル｝−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル）カルバメート、
２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］−Ｎ−エチルアセトアミド、
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−８−（メトキシ）−１−［（１Ｒ）−１−（２−ピリジニル）エチル］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−８−（メトキシ）−１−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン、
４−｛（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル｝安息香酸、及び
Ｎ−｛１−メチル−７−［４−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−イル｝尿素
から選択される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態が、細菌、ウィルス、菌類、寄生虫、又はこれらの毒素の感染に対する炎症反応を伴う、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態が、敗血症、敗血症症候群、敗血症性ショック、エンドトキシン血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器機能不全症候群、毒素性ショック症候群、急性肺障害、ＡＲＤＳ（成人型呼吸窮迫症候群）、急性腎不全、劇症肝炎、熱傷、急性膵炎、術後症候群、サルコイドーシス、ヘルクスハイマー反応、脳炎、脊髄炎、脳膜炎、マラリア、並びにインフルエンザ、帯状疱疹、単純疱疹、コロナウイルス等のウィルス感染に関連するＳＩＲＳからなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するためのブロモドメイン阻害剤。
【請求項８】
自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療するための医薬の製造におけるブロモドメイン阻害剤の使用。
【請求項９】
ブロモドメイン阻害剤と、少なくとも１種の医薬担体とを含む医薬製剤であって、前記ブロモドメイン阻害剤が、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するのに有効な量で存在する医薬製剤。
【請求項１０】
自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を同定する方法であって、前記化合物が、ブロモドメインとその同種アセチル化タンパク質との結合を阻害するかどうかを判定する工程を含む、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法によって同定される自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療における化合物の使用、このような化合物を含有する医薬組成物、並びにこのような疾患又は病態の治療において用いるための化合物を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
真核生物のゲノムは、細胞の核内で高度に組織化されている。二本鎖ＤＮＡの長い鎖は、ヒストンタンパク質（大部分は、２コピーのヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、及びＨ４を含む）の八量体に巻き付いて、ヌクレオソームを形成する。次いで、この基本単位は、ヌクレオソームの凝集及び折り畳みによって更に圧縮されて、高度に凝縮したクロマチン構造を形成する。様々な異なる状態の凝縮が可能であり、この構造の堅固さは、細胞周期中に変化し、細胞分裂期の間が最もコンパクトである。クロマチン構造は、遺伝子転写の調節において重要な役割を果たしているが、これは、高度に凝縮したクロマチンからは効率的に生じることができない。クロマチン構造は、ヒストンタンパク質、特にヒストンＨ３及びＨ４、最も一般的にはコアヌクレオソーム構造を超えて伸びるヒストンテイル内に対する一連の翻訳後修飾によって制御される。これら修飾としては、アセチル化、メチル化、リン酸化、ユビキチニル化、ＳＵＭＯ化が挙げられる。これらエピジェネティックマークは、特定の酵素によって生じたり消えたりし、前記酵素は、ヒストンテイル内の特定の残基にタグを配置して、エピジェネティックコードを形成し、これは、次いで、細胞によって解釈されて、クロマチン構造を遺伝子特異的に調節して、転写させる。
【０００３】
ヒストンのアセチル化は、大部分は遺伝子転写の活性化に関連しているが、その理由は、修飾が、静電気を変化させることによりＤＮＡとヒストン八量体との相互作用を弱めるためである。この物理的変化に加えて、エピジェネティックコードを読み取るために、特定のタンパク質がヒストン内のアセチル化リシン残基に結合する。ブロモドメインは、ヒストンの状況において一般的ではあるが排他的ではなくアセチル化リシン残基に結合するタンパク質内の小さな（約１１０アミノ酸）特徴的ドメインである。ブロモドメインを含有することが知られている約５０のタンパク質のファミリーが存在し、それらは、細胞内で様々な機能を有している。
【０００４】
ブロモドメイン含有タンパク質のＢＥＴファミリーは、近接する２つのアセチル化リシン残基に結合することができるタンデムなブロモドメインを含有する４つのタンパク質（ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、及びＢＲＤ−ｔ）を含み、相互作用の特異性を上昇させる。ＢＲＤ２及びＢＲＤ３は、活発に転写されている遺伝子に沿ってヒストンと会合すると報告されており、転写伸長の促進に関与している可能性があるが（Ｌｅｒｏｙら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２００８年３０（１）：５１−６０）、一方、ＢＲＤ４は、誘導可能な遺伝子へのｐＴＥＦ−β複合体の動員に関与していると思われ、その結果、ＲＮＡポリメラーゼがリン酸化され、転写生産が増加する（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら，Ｃｅｌｌ，２００９年１３８（１）：１２９−１４５）。ＢＲＤ−ｔは、精巣及び卵巣でのみ発現する。全てのファミリーのメンバーは、細胞周期の制御又は実行の局面において何らかの機能を有していると報告されており、細胞分裂中、染色体との複合体を保持することが示されている。これは、エピジェネティックメモリーの維持における役割を示唆している。更に、一部のウィルスは、ウィルス複製の過程の一部として、これらタンパク質を利用して前記ウィルスのゲノムをホスト細胞のクロマチンに繋ぎ止める（Ｙｏｕら  Ｃｅｌｌ，２００４年１１７（３）：３４９−６０）。
【０００５】
特開２００８−１５６３１１号公報には、ＢＲＤ２ブロモドメイン結合剤であるといわれているベンズイミダゾール誘導体が開示されており、これはウィルス感染／増殖に関して有用性を有する。
【０００６】
国際公開第２００９／０８４６９３号パンフレットには、アセチル化ヒストンとブロモドメイン含有タンパク質との間の結合を阻害するといわれている一連のチエノトリアゾロジアゼピエン誘導体が開示されており、これは、抗癌剤として有用であるといわれている。
【０００７】
様々な自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において有用性を有する、ブロモドメインとその同種のアセチル化タンパク質との結合を阻害する化合物が現在見出されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００８−１５６３１１号公報
【特許文献２】国際公開第２００９／０８４６９３号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｌｅｒｏｙら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．２００８年３０（１）：５１−６０
【非特許文献２】Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら，Ｃｅｌｌ，２００９年１３８（１）：１２９−１４５
【非特許文献３】Ｙｏｕら  Ｃｅｌｌ，２００４年１１７（３）：３４９−６０
【発明の概要】
【００１０】
本発明の第１の態様では、治療上有効な量のブロモドメイン阻害剤をそれを必要としている被験体に投与することを含む、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療する方法を提供する。
【００１１】
本発明の第２の態様では、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するためのブロモドメイン阻害剤を提供する。
【００１２】
本発明の第３の態様では、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療するための医薬の製造におけるブロモドメイン阻害剤の使用を提供する。
【００１３】
第４の態様では、本発明は、ブロモドメイン阻害剤と、少なくとも１つの医薬担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬製剤であって、前記ブロモドメイン阻害剤が、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するのに有効な量で存在する医薬製剤を提供する。
【００１４】
第５の態様では、本発明は、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を同定する方法であって、前記化合物がブロモドメインとその同種のアセチル化タンパク質との結合を阻害するかどうかを判定する工程を含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、治療上有効な量のブロモドメイン阻害剤をそれを必要としている被験体に投与することを含む、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療する方法を提供する。
【００１６】
好適には、それを必要としている被験体は、哺乳類、特にヒトである。
【００１７】
本発明で使用する用語「有効な量」は、例えば、研究者又は臨床医によって求められている組織、系、動物、又はヒトの生物学的反応又は医学的反応を誘発する薬物又は医薬剤の量を意味する。更に、用語「治療上有効な量」は、このような量を投与されていない対応する被験体と比較したとき、疾患、障害又は副作用の治療、治癒、予防若しくは回復を改善させるか、又は疾患若しくは障害の進行速度を低下させる任意の量を意味する。また、この用語は、正常な生理機能を増強するのに有効な量をその範囲内に含む。
【００１８】
本発明で使用する用語「ブロモドメイン阻害剤」は、ブロモドメインとその同種のアセチル化タンパク質との結合を阻害する化合物を意味する。１つの実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、ブロモドメインのアセチル化リシン残基への結合を阻害する化合物である。更なる実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、ヒストン、特にヒストンＨ３及びＨ４における、ブロモドメインのアセチル化リシン残基への結合を阻害する化合物である。
【００１９】
特定の実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、アセチル化リシン残基へのＢＥＴファミリーのブロモドメインの結合を阻害する化合物である（以下、「ＢＥＴファミリーのブロモドメイン阻害剤」と称する場合もある）。１つの実施形態では、ＢＥＴファミリーのブロモドメインは、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、又はＢＲＤ４、特にＢＲＤ２又はＢＲＤ３である。ＢＥＴファミリーのブロモドメイン阻害剤は、本明細書に記載する結合アッセイのうちの少なくとも１つ以上においてｐＩＣ５０≧５．０である化合物である。
【００２０】
１つの実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、小分子、具体的には分子量７５０未満、より具体的には５００未満の化合物である。
【００２１】
１つの実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、表１に示す実施例１〜６からなる群より選択される化合物である。
【表１−１】
2013510121.tif 000002
【表１−２】
2013510121.tif 000003
【００２２】
実施例１〜６は、本明細書に記載する方法によって調製することができる。
【００２３】
更なる実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、国際公開第２００６／０３２４７０号パンフレット（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に一般的に又は具体的に開示されている化合物である。このような化合物は、本明細書に記載する方法によって調製することができる。
【００２４】
更なる実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、国際公開第２００９／０８４６９３号パンフレット（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｔａｎａｂｅ）に一般的に又は具体的に開示されている化合物である。このような化合物は、本明細書に記載する方法によって調製することができる。
【００２５】
更なる実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、特開２００８−１５６３１１号公報に記載されている１−［２−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イルチオ）エチル］−１，３−ジヒドロ−３−メチル−２Ｈ−ベンズイミダゾール−２−チオンである。
【００２６】
本発明において使用されるブロモドメイン阻害剤は、レシピエントに投与したとき本発明のブロモドメイン阻害剤を（直接又は間接的に）提供することができる薬学的に許容しうる塩、溶媒和物（例えば、水和物）、若しくはプロドラッグ、又はこのような化合物の他の誘導体、あるいはその活性代謝産物又は残基の形態であってもよいと認識される。好適な薬学的に許容し得る塩は、酸又は塩基付加塩を含んでもよい。好適な塩に関する概説については、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６：１−１９，（１９７７年）を参照されたい。典型的に、薬学的に許容し得る塩は、必要に応じて望ましい酸又は塩基を用いることによって容易に調製することができる。得られる塩は、溶液から沈殿させ、濾過によって収集してもよく、溶媒を蒸発させることによって回収してもよい。好適なプロドラッグは、過度の実験を行うことなく、当業者が認識可能である。しかし、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，第５版，Ｖｏｌ１：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅの教示を参照する。
【００２７】
本発明の第２の態様では、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するためのブロモドメイン阻害剤を提供する。
【００２８】
本発明の第３の態様では、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態を治療するための医薬の製造におけるブロモドメイン阻害剤の使用を提供する。
【００２９】
本発明で使用する用語「自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態」は、広範囲にわたる慢性の自己免疫性及び炎症性病態、例えば、関節リウマチ、変形性関節症、急性痛風、乾癬、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎）、喘息、慢性閉塞性気道疾患、肺炎、心筋炎、心膜炎、筋炎、湿疹、皮膚炎、脱毛、白斑、水疱性皮膚疾患、腎炎、脈管炎、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、うつ病、網膜炎、ブドウ膜炎、強膜炎、肝炎、膵臓炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、アジソン病、下垂体炎、甲状腺炎、１型糖尿病及び移植臓器の急性拒絶を意味することを意図する。
【００３０】
用語「自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態」は、急性炎症性病態、例えば、急性痛風、巨細胞性動脈炎、狼瘡腎炎を含む腎炎、糸球体腎炎等の臓器障害を伴う脈管炎、巨細胞性動脈炎を含む脈管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、結節性多発性動脈炎、ベーチェット病、川崎病、高安動脈炎、臓器障害を伴う脈管炎、及び移植臓器の急性拒絶を含むことも意図する。
【００３１】
用語「自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態」は、細菌、ウィルス、菌類、寄生虫、又はこれらの毒素の感染に対する炎症反応を伴う疾患又は病態、例えば、敗血症、敗血症症候群、敗血症性ショック、エンドトキシン血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器機能不全症候群、毒素性ショック症候群、急性肺障害、ＡＲＤＳ（成人型呼吸窮迫症候群）、急性腎不全、劇症肝炎、熱傷、急性膵炎、術後症候群、サルコイドーシス、ヘルクスハイマー反応、脳炎、脊髄炎、脳膜炎、マラリア、インフルエンザ、帯状疱疹、単純疱疹、コロナウイルス等のウィルス感染に関連するＳＩＲＳを含むことも意図する。
【００３２】
用語「自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態」は、上記疾患状態の各々又は全てを含むことを意図する。
【００３３】
１つの実施形態では、ブロモドメイン阻害剤が指示される疾患又は病態は、敗血症、熱傷、膵臓炎、大外傷、出血及び乏血等の全身性炎症反応症候群に関連する疾患から選択される。この実施形態では、ブロモドメイン阻害剤は、ＳＩＲＳ、ショックの発症、急性の肺障害、ＡＲＤＳ、急性の腎臓、肝臓、心臓、及び胃腸の傷害を含む多臓器機能不全症候群、並びに死亡の発生率を低下させるために診断時点で投与される。別の実施形態では、高リスクの敗血症、出血、広範囲にわたる組織損傷、ＳＩＲＳ又はＭＯＤＳ（多臓器機能障害症候群）に関連する手術又は他の手技の前にブロモドメイン阻害剤を投与する。特定の実施形態では、敗血症、敗血症症候群、敗血症性ショック又はエンドトキシン血症の治療のためにブロモドメイン阻害剤が指示される。別の実施形態では、急性又は慢性の膵炎を治療するためにブロモドメイン阻害剤が指示される。別の実施形態では、熱傷の治療のためにブロモドメインが指示される。
【００３４】
治療に用いるために、ブロモドメイン阻害剤を未加工の化学物質として投与することも可能であるが、活性成分を医薬組成物として提示することが一般的である。
【００３５】
第４の態様では、本発明は、ブロモドメイン阻害剤と、少なくとも１つの医薬担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬製剤であって、前記ブロモドメイン阻害剤が、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するのに有効な量で存在する医薬製剤を提供する。
【００３６】
担体、希釈剤、又は賦形剤は、組成物の他の成分と適合し、かつそのレシピエントにとって有害ではないという意味で許容可能でなければならない。
【００３７】
医薬組成物は、単位用量当たり所定の量の活性成分を含有する単位用量形態で提示してもよい。好ましい単位投薬組成物は、日用量若しくはサブ用量、又はその適切な割合の活性成分を含有しているものである。したがって、このような単位用量は、１日に２回以上投与してもよい。好ましい単位投薬組成物は、本明細書に上記した通り、（１日に２回以上投与するために）日用量若しくはサブ用量、又はその適切な割合の活性成分を含有するものである。
【００３８】
医薬組成物は、任意の適切な経路、例えば、経口（頬側又は舌下を含む）、直腸、吸入、鼻腔内、局所（頬側、舌下、又は経皮を含む）、膣、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内、又は皮内）経路による投与に適している場合がある。このような組成物は、薬学分野において公知である任意の方法によって、例えば、活性成分を担体又は賦形剤と会合させることによって調製することができる。
【００３９】
１つの実施形態では、医薬組成物は、非経口投与、特に静脈内投与に適している。
【００４０】
非経口投与に適している医薬組成物としては、酸化防止剤、バッファ、静菌剤及び組成物を対象レシピエントの血液と等張にする溶質を含有してもよい水性及び非水性の無菌注射液；並びに、懸濁化剤及び増粘剤を含んでもよい水性及び非水性の無菌懸濁剤が挙げられる。組成物は、単位用量又は複数用量用の容器、例えば、密閉されたアンプル及びバイアルで提示されてもよく、使用直前に無菌液体担体、例えば、注射用の水を添加することのみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。無菌の散剤、顆粒剤及び錠剤から即時注射液及び懸濁剤を調製してもよい。
【００４１】
経口投与に適している医薬組成物は、カプセル剤又は錠剤等の個々の単位；散剤又は果粒剤；水性又は非水性の液体における液剤又は懸濁剤；食用の発泡体又はホイップ；あるいは水中油型エマルション又は油中水型エマルションとして提示されてもよい。
【００４２】
例えば、錠剤又はカプセル剤の形態の経口投与については、活性薬物成分は、エタノール、グリセロール、水等の経口で無毒な薬学的に許容しうる不活性の担体と組み合わせてもよい。錠剤又はカプセル剤に配合するのに好適な粉末は、（例えば、微粉化により）化合物を好適な細かい大きさにし、同様に調製された薬学担体、例えば、例えばデンプン又はマンニトール等の食用炭水化物等と混合することによって調製することができる。また、着香剤、保存剤、分散剤及び着色剤が存在してもよい。
【００４３】
カプセル剤は、上記の通り、粉末混合物を調製し、成形されたゼラチンシースに充填することにより作製することができる。充填操作の前に、コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム又は固体ポリエチレングリコール等の流動促進剤及び滑沢剤を粉末混合物に添加してもよい。また、カプセル剤を服用するときの薬剤のアベイラビリティを改善するために、寒天、炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム等の崩壊剤又は可溶化剤を添加してもよい。
【００４４】
更に、望ましい場合又は必要な場合、好適な結合剤、流動促進剤、滑沢剤、甘味剤、着香剤、崩壊剤及び着色剤を混合物に配合してもよい。好適な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、グルコース又はベータラクトース等の天然糖、コーンシロップ、アラビアゴム、トラガカントゴム、又はアルギン酸ナトリウム等の天然及び合成ゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ろう等が挙げられる。これら剤形において使用される滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が挙げられる。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が挙げられるが、これらに限定されない。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化又はスラッギングし、滑沢剤及び崩壊剤を添加し、錠剤に圧縮することによって製剤化される。粉末混合物は、粉砕されていることが好ましい化合物と、上記のような希釈剤又は基剤、及び任意でカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン又はポリビニルピロリドン等の結合剤、パラフィン等の溶解遅延剤、四級塩等の吸収促進剤、及び／又はベントナイト、カオリン又はリン酸二カルシウム等の吸着剤とを混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アカディア粘液（ａｃａｄｉａ  ｍｕｃｉｌａｇｅ）、又はセルロース若しくは高分子物質の溶液等の結合剤で湿潤させ、篩に通すことによって顆粒化することができる。別の顆粒化法として、粉末混合物を打錠機に通してもよく、その結果、不完全に形成された小塊が顆粒になる。顆粒は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク又は鉱油を添加することにより、錠剤成形型にくっつくのを防ぐために潤滑してもよい。次いで、潤滑された混合物を錠剤に圧縮する。また、本発明の化合物は、自由流動不活性担体と合わせ、顆粒化工程又はスラッギング工程を経ることなく直接錠剤に圧縮してもよい。セラックのシーラー、糖又は高分子物質のコーティング、及びろうの光沢コーティングからなる透明又は不透明な保護コーティングを提供してもよい。異なる単位投薬量を識別するために、これらのコーティングに染料を添加してもよい。
【００４５】
液剤、シロップ剤及びエリキシル剤等の口腔液は、所与の量が所定の量の化合物を含有するように、単位剤形で調製してもよい。シロップ剤は、好適に着香された水溶液に化合物を溶解させることにより調製することができ、一方、エリキシル剤は、非毒性のアルコール性ビヒクルの使用を通して調製される。懸濁剤は、非毒性ビヒクルに化合物を分散させることにより製剤化することができる。エトキシ化イソステアリルアルコール及びポリオキシエチレンソルビトールエーテル等の可溶化剤及び乳化剤、保存剤、ハッカ油等の着香用添加物、あるいは天然甘味料、又はサッカリン、又は他の人工甘味料等を添加してもよい。
【００４６】
適切な場合、経口投与用投薬量単位組成物をマイクロカプセル化してもよい。また、製剤は、例えば、ポリマー、ろう等の微粒子物質でコーティングするか又は埋め込むことにより、長時間又は持続して放出するように調製することもできる。
【００４７】
また、ブロモドメイン阻害剤は、小さな単層小胞、大きな単層小胞及び多重層小胞等のリポソーム送達系の形で投与してもよい。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリン等の様々なリン脂質から形成することができる。
【００４８】
局所投与に適している医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、液剤、パスタ剤、ゲル、スプレー、エアゾール剤又は油剤として製剤化してもよい。
【００４９】
眼又は他の外部組織、例えば、口及び皮膚の治療の場合、組成物は、局所用の軟膏剤又はクリーム剤として塗布されることが好ましい。軟膏剤に製剤化されるとき、活性成分は、パラフィン又は水のいずれかに混和性である軟膏基剤を使用してもよい。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤を含むクリーム剤に製剤化してもよい。
【００５０】
目への局所投与に適している医薬組成物としては、好適な担体、特に水性溶媒に活性成分を溶解又は懸濁させた点眼薬が挙げられる。
【００５１】
鼻又は吸入投与のための剤形は、エアゾール剤、液剤、懸濁剤、ゲル剤又は乾燥散剤として便利に製剤化することができる。
【００５２】
吸入投与に好適な及び／又は適している組成物については、本発明の化合物が、例えば、微粉化により得られる粒径減少形態であることが好ましい。径減少（例えば、微粉化）化合物又は塩の好ましい粒径は、（例えばレーザー回折を使用して測定したとき）約０．５〜約１０ミクロンのＤ５０値によって定義される。
【００５３】
例えば、吸入投与するためのエアゾール製剤は、薬学的に許容し得る水性又は非水性溶媒における活性物質の溶液又は微細懸濁液を含んでもよい。エアゾール製剤は、霧吹き装置又は吸入器と共に用いるためのカートリッジ又はリフィルの形態をとってもよい密閉容器内に入れられた無菌形態の単回又は複数回用量で提示されてもよい。あるいは、密閉容器は、容器の内容物が一度排出されたら廃棄することを意図する絞り弁（定量吸入器）を備える単回用量鼻吸入器又はエアゾールディスペンサ等の単一式分配装置であってもよい。
【００５４】
剤形がエアゾールディスペンサを含む場合、圧縮空気、二酸化炭素、ヒドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）等の有機噴射剤等の好適な加圧噴射剤を収容することが好ましい。好適なＨＦＣ噴射剤としては１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン及び１，１，１，２−テトラフルオロエタンが挙げられる。エアゾール剤形は、ポンプ式霧吹き器の形態をとってもよい。加圧エアゾールは、活性化合物の溶液又は懸濁液を含有してもよい。これは、懸濁製剤の分散特性及び均質性を改善するために、更なる賦形剤、例えば、共溶媒及び／又は界面活性剤を配合することを必要とする場合がある。溶液製剤は、エタノール等の共溶媒の添加を必要とする場合もある。
【００５５】
吸入投与に好適な及び／又は適している医薬組成物では、前記医薬組成物は、乾燥粉末の吸入可能な組成物であってもよい。このような組成物は、ラクトース、グルコース、トレハロース、マンニトール又はデンプン等の粉末基剤、式（Ｉ）の化合物又はその塩（好ましくは、粒径減少形態、例えば、微粉化形態）、及び任意でＬ−ロイシン若しくは別のアミノ酸等の性能変更剤、及び／又はステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウム等のステアリン酸の金属塩を含んでもよい。好ましくは、乾燥粉末の吸入可能な組成物は、ラクトース、例えば、ラクトース一水和物と式（Ｉ）の化合物又はその塩との乾燥粉末ブレンドを含む。このような組成物は、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから販売されており、例えば、英国特許出願公開第２２４２１３４  Ａ号明細書に記載されているＤＩＳＫＵＳ（登録商標）装置等の好適な装置を用いて患者に投与することができる。
【００５６】
ブロモドメイン阻害剤は、流体ディスペンサ、例えば、流体ディスペンサのポンプ機構にユーザが印加した力が印加されたときに、それを通して定量の流体製剤が分配される分配ノズル又は分配オリフィスを有する流体ディスペンサから送達するための流体製剤として製剤化してもよい。このような流体ディスペンサは、一般的に、複数の一定用量の流体製剤用の容器を備え、前記用量は、順次ポンプを作動させたときに分配可能である。分配ノズル又はオリフィスは、流体製剤を鼻腔に噴霧分配するためにユーザの鼻孔に挿入する構成であってもよい。前述の種類の流体ディスペンサは、国際公開第２００５／０４４３５４号パンフレットに記載及び図示されている。
【００５７】
ブロモドメイン阻害剤の化合物の治療上有効な量は、例えば、動物の年齢及び体重、治療を必要とする正確な症状及びその重篤度、製剤の性質、並びに投与経路を含む多数の要因に依存し、最終的には主治医又は獣医の裁量である。医薬組成物において、経口又は非経口投与用の各投薬量単位は、遊離塩基として計算される本発明の化合物を０．０１〜３０００ｍｇ、より好ましくは０．５〜１０００ｍｇ含有することが好ましい。鼻又は吸入投与用の各投薬量単位は、遊離塩基として計算される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を０．００１〜５０ｍｇ、より好ましくは０．０１〜５ｍｇ含有することが好ましい。
【００５８】
本発明で使用するための化合物は、遊離塩基として計算される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩が、例えば、１日当たり０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇ又は１日当たり０．５〜１０００ｍｇの経口又は非経口用量、あるいは１日当たり０．００１〜５０ｍｇ又は１日当たり０．０１〜５ｍｇの鼻又は吸入用量の日用量（成人患者の場合）で投与することができる。この量は、合計日用量が同じになるように、１日当たり単回用量、又はより一般的には１日当たり多数（例えば２、３、４、５、又は６）のサブ用量で投与することができる。その塩の有効な量は、式（Ｉ）の化合物自体の有効な量の比率として決定することができる。
【００５９】
本発明で使用するための化合物は、単独で又は他の治療剤と共に使用することができる。したがって、本発明に係る併用療法は、ブロモドメイン阻害剤の投与、及び少なくとも１つの他の薬学的活性剤の使用を含む。好ましくは、本発明に係る併用療法は、少なくとも１つのブロモドメイン阻害剤、及び少なくとも１つの他の治療活性剤の投与を含む。ブロモドメイン阻害剤及び他の薬学的活性剤は、単一の医薬組成物で共に投与されてもよく、又は別々に投与されてもよく、別々に投与されるとき、同時に投与してもよく、任意の順序で順次投与してもよい。ブロモドメイン阻害剤及び他の薬学的活性剤の量、並びに投与の相対的タイミングは、望ましい組合せ治療効果を得るために選択される。したがって、更なる態様では、ブロモドメイン阻害剤及び少なくとも１つの他の薬学的活性剤を含む組合せを提供する。
【００６０】
したがって、１つの態様では、本発明に係る医薬組成物は、例えば、抗生物質、抗ウィルス剤、グルココルチコステロイド、ムスカリン性アンタゴニスト、ベータ−２アゴニスト、ＮＳＡＩＤ及び抗ＴＮＦα剤から選択される１以上の他の治療剤と併用してもよく、又はこれらを含んでもよい。
【００６１】
ブロモドメイン阻害剤が、吸入、静脈内、経口、又は鼻内経路によって通常投与される他の治療剤と組合せて投与される場合、得られる医薬組成物も同じ経路で投与できると認識される。あるいは、組成物の個々の成分を異なる経路で投与してもよい。
【００６２】
本発明の１つの実施形態は、１つ又は２つの治療剤を含む組合せを包含する。
【００６３】
適切な場合、他の治療成分は、治療成分の活性及び／又は安定性及び／又は可溶性等の物理的特性を最適化するために、例えば、アルカリ金属若しくはアミン塩、又は酸付加塩等の塩の形態で、あるいはプロドラッグとして、あるいは例えば低級アルキルエステル等のエステルとして、あるいは例えば水和物等の溶媒和物として用いてもよいことが当業者には明らかである。また、適切な場合、治療成分は、光学的に純粋な形態で用いてもよいことも明らかである。
【００６４】
上記組合せは、医薬組成物の形態で用いるために便利に提示されてもよく、したがって、薬学的に許容し得る希釈剤又は担体と共に上に定義される組合せを含む医薬組成物は、本発明の更なる態様を表す。
【００６５】
新規ブロモドメイン阻害剤の同定は、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療により有効な薬物をもたらすことができる。したがって、更なる態様では、本発明は、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を同定する方法であって、前記化合物がブロモドメインとその同種のアセチル化タンパク質との結合を阻害するかどうかを判定する工程を含む方法を提供する。１つの実施形態では、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を同定する方法であって、前記化合物がＢＥＴファミリーのブロモドメイン阻害剤であるかどうかを判定する工程を含む方法を提供する。
【００６６】
好適なスクリーニング方法は、当業者によく知られており、蛍光（例えば、ＦＲＥＴ）及び放射性リガンド結合技術を含む。
【００６７】
更に、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を同定する方法であって、前記化合物がブロモドメインとその同種のアセチル化タンパク質、及びブロモドメイン阻害剤の蛍光又は放射性リガンド誘導体との結合を阻害するかどうかを判定するための化合物間の競合結合アッセイを含む方法を提供する。１つの実施形態では、ブロモドメイン阻害剤の蛍光又は放射性リガンド誘導体は、実施例１〜６等の本明細書に記載するブロモドメイン阻害剤の蛍光誘導体である。更なる実施形態では、ブロモドメイン阻害剤の蛍光誘導体は、レファレンス化合物Ｃである。レファレンス化合物Ｃは、新規であると考えられる。
【００６８】
また、本発明は、上記方法によって同定される、自己免疫性及び炎症性の疾患又は病態の治療において使用するための化合物を提供する。
【００６９】
本発明で使用するための特定の化合物は、下記方法又は類似の方法によって調製することができる。
【実施例】
【００７０】
一般的な実験の詳細
言及される全ての温度は摂氏である。
【００７１】
略記
ＡｃＣｌは、塩化アセチルを指す。
【００７２】
ＡｃＯＨは、酢酸を指す。
【００７３】
ＢＩＮＡＰは、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチルを指す。
【００７４】
ＣＶは、カラム体積を指す。
【００７５】
ＤＣＭは。ジクロロメタンを指す。
【００７６】
１，２−ＤＣＥは、１，２−ジクロロエタンを指す。
【００７７】
ＤＭＥは、ジメトキシエタンを指す。
【００７８】
ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指す。
【００７９】
ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシドを指す。
【００８０】
エーテルは、ジエチルエーテルを指す。
【００８１】
Ｅｔ２Ｏは、ジエチルエーテルを指す。
【００８２】
Ｅｔ３Ｎは、トリエチルアミンを指す。
【００８３】
ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルを指す。
【００８４】
ＦＭＯＣは、９−フルオレニルメトキシカルボニルを指す。
【００８５】
ＨＰＬＣは、高速液体クロマトグラフィーを指す。
【００８６】
ＨＲＭＳは、高解像度質量分光法を指す。
【００８７】
ｉ−Ｐｒ２Ｏは、ジイソプロピルエーテルを指す。
【００８８】
ＭＤＡＰ又は質量自動分取は、分取質量ＨＰＬＣを指す。
【００８９】
ＭｅＣＮは、アセトニトリルを指す。
【００９０】
ＭｅＯＨは、メタノールを指す。
【００９１】
Ｍｐは、融点を指す。
【００９２】
Ｒｆは、保持因子を指す。
【００９３】
ｒ．ｔ．は、室温を指す。
【００９４】
Ｒｔは、保持時間を指す。
【００９５】
Ｎａ２ＳＯ４は、硫酸ナトリウムを指す。
【００９６】
ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸を指す。
【００９７】
ＴＨＦは、テトラヒドロフランを指す。
【００９８】
ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーを指す。
【００９９】
本明細書に言及されるＬＣ−ＭＳ方法Ａ〜Ｆの実験の詳細は、以下の通りである：
ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）は、４０℃でＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ｉ．ｄ．  １．７μｍパッキング直径）にて実施し、１ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、アンモニア溶液（溶媒Ａ）及びアセトニトリル（溶媒Ｂ）でｐＨ１０に調整された水中１０ｍＭの重炭酸アンモニウムで溶出した：０〜１．５分  １〜９７％のＢ、１．５〜１．９分  ９７％のＢ、１．９〜２．０分、１００％のＢ。ＵＶ検出は、２１０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長からの信号を合計した。質量スペクトルは、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ−ｓｃａｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙを用いてＷａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分析計にて記録した。イオン化データは、最も近い整数に四捨五入した。
【０１００】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）は、４０℃でＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ｉ．ｄ．  １．７μｍパッキング直径）にて実施し、１ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、ギ酸の０．１％ｖ／ｖ水溶液（溶媒Ａ）及びギ酸の０．１％ｖ／ｖアセトニトリル溶液（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜１．５分  ３〜１００％のＢ、１．５〜１．９分  １００％のＢ、１．９〜２．０分、３％のＢ。ＵＶ検出は、２１０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長からの信号を合計した。質量スペクトルは、Ａｌｔｅｒｎａｔｅ−ｓｃａｎ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙを用いてＷａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分析計にて記録した。イオン化データは、最も近い整数に四捨五入した。
【０１０１】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｃ）は、４０℃でＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ｉ．ｄ．  １．７μｍパッキング直径）にて実施し、１ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、トリフルオロ酢酸の０．１％ｖ／ｖ水溶液（溶媒Ａ）及びトリフルオロ酢酸の０．１％ｖ／ｖアセトニトリル溶液（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜１．５分  ３〜１００％のＢ、１．５〜１．９分  １００％のＢ、１．９〜２．０分、３％のＢ。ＵＶ検出は、２１０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長からの信号を合計した。質量スペクトルは、Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙを用いてＷａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分析計にて記録した。イオン化データは、最も近い整数に四捨五入した。
【０１０２】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）は、Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＬＣＡＢＺ＋ＰＬＵＳカラム（３μｍ、３．３ｃｍ×４．６ｍｍ  ＩＤ）にて実施し、３ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、水中０．０％のＨＣＯ２Ｈ及び０．０１Ｍの酢酸アンモニウム（溶媒Ａ）と、水中９５％のアセトニトリル及び０．０５％のＨＣＯ２Ｈ（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜０．７分  ０％のＢ、０．７〜４．２分  ０−１００％のＢ、４．２〜５．３分  １００％のＢ、５．３〜５．５分  １００−０％のＢ。質量スペクトル（ＭＳ）は、エレクトロスプレー陽イオン化［［Ｍ＋Ｈ］＋及び［Ｍ＋ＮＨ４］＋分子イオンを得るための（ＥＳ＋ｖｅ］又はエレクトロスプレー陰イオン化［Ｍ−Ｈ］−分子イオンを得るための（ＥＳ−ｖｅ］モードを用いてＦｉｓｏｎｓ  ＶＧ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ質量分析計にて記録した。この装置の分析データは、以下の形式：［Ｍ＋Ｈ］＋又は［Ｍ−Ｈ］−で得られる。
【０１０３】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｅ）は、Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ  １８カラム（１００×４．６ｍｍ  ｉｄ）にて実施し、５ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、水中０．０１Ｍの酢酸アンモニウム（溶媒Ａ）及び１００％のアセトニトリル（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜４分  ０−１００％のＢ、４〜５分  １００％のＢ。質量スペクトル（ＭＳ）は、大気圧化学陽イオン化［ＭＨ＋分子イオンを得るためのＡＰ＋ｖｅ］又は大気圧化学陰イオン化［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを得るためのＡｐ−ｖｅ］を用いてｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ−ＬＣ質量分析計にて記録した。この装置の分析データは、以下の形式：［Ｍ＋Ｈ］＋又は［Ｍ−Ｈ］−で得られる。
【０１０４】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｆ）は、３０℃でＳｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８カラム（３０ｍｍ×４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．３．５μｍパッキング直径）にて実施し、３ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、トリフルオロ酢酸の０．１％ｖ／ｖ水溶液（溶媒Ａ）及びトリフルオロ酢酸の０．１％ｖ／ｖアセトニトリル溶液（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜０．１分  ３％のＢ、０．１〜４．２分  ３−１００％のＢ、４．２〜４．８分、１００％のＢ、４．８〜４．９分  １００−３％のＢ、４．９〜５．０分  ３％のＢ。ＵＶ検出は、２１０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長からの信号を平均し、陽性のエレクトロスプレーイオン化を使用して質量分析計に質量スペクトルを記録した。イオン化データは、最も近い整数に四捨五入した。
【０１０５】
ＬＣ／ＨＲＭＳ：分析ＨＰＬＣは、Ｕｐｔｉｓｐｈｅｒｅ−ｈｓｃカラム（３μｍ  ３３×３ｍｍ  ｉｄ）にて実施し、１．３ｍＬ／分の流速で、以下の溶出勾配を用いて、水中０．０１Ｍの酢酸アンモニウム（溶媒Ａ）及び１００％のアセトニトリル（溶媒Ｂ）で溶出した：０〜０．５分  ５％のＢ、０．５〜３．７５分  ５→１００％のＢ、３．７５〜４．５  １００％のＢ、４．５〜５  １００％→５％のＢ、５〜５．５  ５％のＢ。質量スペクトル（ＭＳ）は、エレクトロスプレー陽イオン化［ＭＨ＋分子イオンを得るためのＥＳ＋ｖｅ］又はエレクトロスプレー陰イオン化［（Ｍ−Ｈ）−分子イオンを得るためのＥＳ−ｖｅ］を用いてｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣＴ質量分析計にて記録した。
【０１０６】
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）とは、シリカゲル６０  Ｆ２５４でコーティングされたＭｅｒｃｋによって販売されているＴＬＣプレートの使用を指す。
【０１０７】
「質量自動分取」／「分取質量ＨＰＬＣ」は、以下のような系で実施した；Ｗａｔｅｒｓ  ６００勾配ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ  ２７６７インジェクト／コレクター、Ｗａｔｅｒｓ  Ｒｅａｇｅｎｔマネージャー、Ｇｉｌｓｏｎ  Ａｓｐｅｃ−廃棄物収集器、Ｇｉｌｓｏｎ  １１５分画後ＵＶ検出器、及びコンピュータシステムを含むＷａｔｅｒｓ  ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステム。用いられるカラムは、典型的に、寸法が内径２０ｍｍ及び長さ１００ｍｍであるＳｕｐｅｌｃｏ  ＬＣＡＢＺ＋＋カラムである。固定相の粒径は、５μｍである。用いた流速は、適切な溶出勾配を用いて、ギ酸又はトリフルオロ酢酸の０．１％水溶液（溶媒Ａ）及びギ酸又はトリフルオロ酢酸の０．１％アセトニトリル溶液（溶液Ｂ）で２０ｍＬ／分であった。質量スペクトルは、エレクトロスプレーポジティブ及びネガティブモード、交互スキャンを用いてＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ質量分析計に記録した。用いたソフトウェアは、ＭａｓｓＬｙｎｘ  ４．０であったか、又は等価な別のシステムを用いる。
【０１０８】
シリカクロマトグラフィー技術は、自動（Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ又はＢｉｏｔａｇｅ  ＳＰ４）技術、又はプレパックドカートリッジ（ＳＰＥ）若しくは手動でパックされるフラッシュカラムにおける手動クロマトグラフィーのいずれかを含む。
【０１０９】
マイクロ波化学作用は、典型的に、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ（商標）マイクロ波合成器等の好適なマイクロ波反応器システムを用いて照射する密閉容器内で実施される。
【０１１０】
商業的供給元の名称が化合物又は試薬の名称の後に記載される場合、例えば、「化合物Ｘ（Ａｌｄｒｉｃｈ）」又は「化合物Ｘ／Ａｌｄｒｉｃｈ」は、化合物Ｘが、名称が記載されている商業的供給元等の商業的供給元から入手可能であることを意味する。
【０１１１】
同様に、文献又は特許の参照文献が化合物の名称の後に記載される場合、例えば、化合物Ｙ（欧州特許第０  １２３  ４５６号明細書）は、名称が記載されている参照文献に化合物の調製について記載されていることを意味する。
【０１１２】
上述の実施例の名称は、化合物命名プログラム「ＡＣＤ  Ｎａｍｅ  Ｐｒｏ  ６．０２」を用いて得たものである。
【０１１３】
中間体１
［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］酢酸
【化１】
2013510121.tif 000004
【０１１４】
室温における中間体２（７．４ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１３０ｍＬ）溶液に、１ＮのＮａＯＨ（３６．２ｍＬ、３６．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をこの温度で５時間攪拌した後、１ＮのＨＣｌ（３６．２ｍＬ）でクエンチし、真空内で濃縮した。次いで、水を添加し、水層をＤＣＭ（×３）で抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、淡黄色の固体として標題化合物（７ｇ、収率９８％）を得た。
【０１１５】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ３９７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１６】
中間体２
メチル［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセテート
【化２】
2013510121.tif 000005
【０１１７】
粗中間体３（推定９．７ｇ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に懸濁させ、室温でＡｃＯＨ（６０ｍＬ）を添加した。反応混合物をこの温度で２日間攪拌した後、減圧下で濃縮した。粗固体をｉ−Ｐｒ２Ｏ中で粉砕し、濾過して、オフホワイトの固体として標題化合物（８．７ｇ、３段階で９１％）を得た。
【０１１８】
Ｃ２１Ｈ２０ＣｌＮ４Ｏ３について計算されたＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  ４１１．１２２９；実測値４１１．１２４５。
【０１１９】
中間体３
メチル［（３Ｓ）−２−［（１Ｚ）−２−アセチルヒドラジノ］−５−（４−クロロフェニル）−７−（メチルオキシ）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセテート
【化３】
2013510121.tif 000006
【０１２０】
０℃における中間体４（９．０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）懸濁液に、ヒドラジン一水和物（３．４ｍＬ、６９．６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を５℃と１５℃との間で５時間攪拌した後、０℃で冷却した。次いで、Ｅｔ３Ｎ（９．７ｍＬ、６９．６ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、ＡｃＣｌ（７．９５ｍＬ、６９．６ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、混合物を１６時間かけて室温に加温した後、減圧下で濃縮した。粗生成物をＤＣＭに溶解させ、水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空内で濃縮して、粗標題化合物（９．７ｇ、収率９８％）を得、これを更に精製することなく用いた。
【０１２１】
Ｒｆ＝０．４９（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９０／１０）。
【０１２２】
中間体４
メチル［（３Ｓ）−５−（４−クロロフェニル）−７−（メチルオキシ）−２−チオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセテート
【化４】
2013510121.tif 000007
【０１２３】
室温におけるＰ４Ｓ１０（３６．１ｇ、８１．１ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（８．６ｇ、８１．１ｍｍｏｌ）の１，２−ＤＣＥ（７００ｍＬ）懸濁液を２時間攪拌した後、中間体５（１６．８ｇ、４５．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で２時間攪拌した後、冷却し、濾過した。固体をＤＣＭで２回洗浄し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９９／１）、黄色がかった固体として標題化合物（１７．２ｇ、収率９８％）を得た。
【０１２４】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ３８９［Ｍ（３５Ｃｌ）＋Ｈ］＋、Ｒｔ  ２．６４分。
【０１２５】
Ｃ１９Ｈ１８３５ＣｌＮ２Ｏ３Ｓについて計算されたＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  ３８９．０７２７；実測値３８９．０７１４。
【０１２６】
中間体５
メチル［（３Ｓ）−５−（４−クロロフェニル）−７−（メチルオキシ）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］アセテート
【化５】
2013510121.tif 000008
【０１２７】
粗中間体Ｃ１２（推定０．２ｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍＬ）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（５００ｍＬ、３．６５ｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を２４時間還流させた後、濃縮した。得られた粗アミンを１，２−ＤＣＥ（１．５Ｌ）に溶解させ、ＡｃＯＨ（１０４ｍＬ、１．８ｍｏｌ）を慎重に添加した。次いで、反応混合物を６０℃で２時間攪拌した後、真空内で濃縮し、ＤＣＭに溶解させた。有機層を１ＮのＨＣｌで洗浄し、水層をＤＣＭ（×３）で抽出した。合わせた有機層を水で２回及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗固体をＭｅＣＮ中で再結晶化させ、淡黄色の固体として標題化合物（５１ｇ）を得た。
【０１２８】
Ｒｆ＝０．３４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９５／５）。Ｃ１９Ｈ１８３５ＣｌＮ２Ｏ４について計算されたＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  ３７３．０９５５；実測値３７３．０９５７。
【０１２９】
中間体６
メチルＮ１−［２−［（４−クロロフェニル）カルボニル］−４−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル）オキシ］カルボニル｝−Ｌ−α−アスパラギネート
【化６】
2013510121.tif 000009
【０１３０】
メチルＮ−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル）オキシ］カルボニル｝−Ｌ−α−アスパルチル塩化物（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．１９９２年，４０，１３−１８）（９３ｇ、０．２４ｍｏｌ）をＣＨＣｌ３（２７０ｍＬ）に溶解させ、中間体７（５３ｇ、０．２ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１時間攪拌した後、冷却し、体積で６０％に濃縮した。エーテルを０℃で添加し、得られた沈殿物を濾過し、廃棄した。濾液を減圧下で濃縮し、更に精製することなく用いた。
【０１３１】
中間体７
［２−アミノ−５−（メチルオキシ）フェニル］（４−クロロフェニル）メタノン
【化７】
2013510121.tif 000010
【０１３２】
０℃における中間体８（４０．０ｇ、０．２１ｍｏｌ）のトルエン／エーテル（２／１）混合物（７６０ｍＬ）溶液に、４−クロロフェニルマグネシウム臭化物（１７０ｍＬ、Ｅｔ２Ｏ中１Ｍ、０．１７ｍｏｌ）の溶液を滴下した。反応混合物を室温に加温し、１時間攪拌した後、１ＮのＨＣｌ（２００ｍＬ）でクエンチした。水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。次いで、粗化合物をＥｔＯＨ（４００ｍＬ）に溶解させ、６ＮのＨＣｌ（１６０ｍＬ）を添加した。反応混合物を２時間還流させた後、体積で３分の１に濃縮した。得られた固体を濾過し、エーテルで２回洗浄した後、ＥｔＯＡｃに懸濁させ、１ＮのＮａＯＨで中和した。水層をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。黄色の固体（３９ｇ、収率８８％）として標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ２６２［Ｍ＋Ｈ］＋、Ｒｔ  ２．５７分。
【０１３３】
中間体８
２−メチル−６−（メチルオキシ）−４Ｈ−３，１−ベンゾキサジン−４−オン
【化８】
2013510121.tif 000011
【０１３４】
５−メトキシアントラニル酸（Ｌａｎｃａｓｔｅｒ）（４１．８ｇ、０．２５ｍｏｌ）の溶液を無水酢酸（２３０ｍＬ）中で３．５時間還流させた後、減圧下で濃縮した。次いで、粗化合物をトルエンの存在下で２回濃縮した後、濾過し、エーテルで２回洗浄して、茶色の固体として標題化合物（３３．７ｇ、収率７１％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  １９２［Ｍ＋Ｈ］＋、Ｒｔ  １．６９分
【０１３５】
中間体９
４−クロロ−７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−３−キノリンカルボキサミド
【化９】
2013510121.tif 000012
【０１３６】
ＰＯＣｌ３（２５０ｍＬ）中の中間体１０（２７．７ｇ、０．０７９ｍｏｌ）と無水ＤＭＦ１０滴との混合物を５時間還流させた。次いで、混合物を濃縮して、真空乾固させた。残渣を１００ｍＬのトルエンで２回処理し、蒸発乾固させて、最後の微量ＰＯＣｌ３を除去した。得られた乾燥発泡体を、氷浴で０／５℃に冷却されたアンモニア水溶液（２５％、３００ｍＬ）に少しずつ添加する。添加の最後に、この温度で１時間激しい攪拌を維持した。次いで、茶色の固体物質を濾取し、それぞれ水（３×２００ｍＬ）、ジイソプロピルエーテル（２×２００ｍＬ）、及びペンタン（１００ｍＬ）で洗浄して、乾燥させた後、粗生成物を得た。この物質をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して（溶離剤＝ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、９５／５）、標題化合物（１６．８ｇ、６４．７％）を得た。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）δ：８．９６（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ）．
【０１３８】
中間体１０
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−４−ヒドロキシ−６−（メチルオキシ）−３−キノリンカルボン酸
【化１０】
2013510121.tif 000013
【０１３９】
中間体１１（５．６ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）、エタノール（４０ｍＬ）、及び水酸化ナトリウム（１Ｍ溶液、１６．４ｍＬ）の混合物を丸底フラスコ内で合わせ、１６時間かけて１００℃に加熱した。更なる水酸化ナトリウム（１０ｍＬの濃縮ＮａＯＨ溶液）及び１０ｍＬの水を添加し、反応混合物を１００℃で還流し続けた。反応混合物を蒸発乾固させ、水に溶解させた。沈殿物が形成されるまで１ＭのＨＣｌを滴下した。これを濾過し、真空デシケータ内で乾燥させて、ベージュ色の固体として標題化合物（４．６ｇ、８０％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｅ）：ｍ／ｚ  ３１５  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４０】
中間体１１
エチル７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−４−ヒドロキシ−６−（メチルオキシ）−３−キノリンカルボキシレート
【化１１】
2013510121.tif 000014
【０１４１】
１Ｌの３つ口丸底フラスコにジフェニルエーテル（３５０ｍＬ）を添加し、２６０℃に加熱した。中間体１２を一度に添加し（４０ｇ）、反応物を３０分間窒素下でディーンスターク装置を用いて加熱した。反応混合物を１７０℃に冷却し、ポンプを用いて溶媒を蒸留した。次いで、反応混合物を８０℃に冷却し、１：１のジイソプロピルエーテル／シクロヘキサン（５００ｍＬ）の溶液に注いだ。固体を濾過し、ジイソプロピルエーテル及びペンタンで洗浄し、５０℃で乾燥させて、茶色の固体として標題化合物（２８ｇ、７９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｅ）：ｍ／ｚ  ３４３．１１  ［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４２】
中間体１２
ジエチル（｛［３−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−４−（メチルオキシ）フェニル］アミノ｝メチリデン）プロパンジオアート
【化１２】
2013510121.tif 000015
【０１４３】
中間体１３（１０７．８ｇ、０．５０ｍＬ）、ジエチルエトキシメチレンマロン酸塩（１０５ｍＬ、０．５１８ｍｏｌ）の混合物を、ディーンスターク装置を用いて１３０℃で加熱した。４５分間後、エタノール（１５ｍＬ）を除去した。温度を７５℃に調整し、ジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）に注いだ。反応混合物を攪拌し、固体の沈殿物を濾過し、ジイソプロピルエーテルで洗浄して、茶色の固体として標題化合物（１６９．５ｇ、８８％）を得た。
【０１４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ−ｄ，ｐｐｍ）δ：１１．０（１Ｈ，ｓ），８．４（１Ｈ，ｄ），７．２（１Ｈ，ｄｄ），７．０（１Ｈ，ｄ），６．９（１Ｈ，ｄ），４．３（２Ｈ，ｑ），４．２５（２Ｈ，ｑ），３．８（３Ｈ，ｓ），２．３（３Ｈ，ｓ），２．２（３Ｈ，ｓ），１．４（３Ｈ，ｔ），１．３５（３Ｈ，ｔ）
【０１４５】
中間体１３
３−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−４−（メトキシ）アニリン
【化１３】
2013510121.tif 000016
【０１４６】
中間体１４（１．７ｇ、６．８５ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＨ（１７０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％炭素上、８５ｍｇ）を添加し、反応物を４時間窒素下で攪拌した。ＡｃＯＨ（１．７ｍＬ）を添加し、反応物を２０時間水素化した。濾過後、溶媒を真空内で蒸発させた。粗化合物をＤＣＭに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。赤色の油状物として標題化合物（１．３８ｇ、８８％）を得た。ＧＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ：２１８。
【０１４７】
中間体１４
３，５−ジメチル−４−［２−（メトキシ）−５−ニトロフェニル］イソオキサゾール
【化１４】
2013510121.tif 000017
【０１４８】
２−ヨード−１−（メトキシ）−４−ニトロベンゼン（２ｇ、７．１７ｍｍｏｌ、１当量）及び（３，５−ジメチルイソキサゾール）ボロン酸（３．０３ｇ、２１．５ｍｍｏｌ、３当量）のＤＭＥ（４４ｍＬ）及び水（７ｍＬ）溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．４１５ｇ、０．０５当量）及びＢａ（ＯＨ）２・８Ｈ２Ｏ（４．５２ｇ、１４．３３ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。混合物を１６時間８０℃で加熱した。反応を完了させるために、（３，５−ジメチルイソキサゾール）ボロン酸（１当量）を添加し、混合物を４時間加熱した。冷却した混合物を濾過し、ＤＣＭで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。真空内で溶媒を蒸発させて、粗油を得、これをｉ−Ｐｒ２Ｏを用いて沈殿させて、赤褐色の固体として標題化合物（１．７３５ｇ、９７％）を得た。ＧＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ：２４８
【０１４９】
中間体１５
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−Ｎ４−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−３，４−キノリンジアミン
【化１５】
2013510121.tif 000018
【０１５０】
ＣＨ３ＣＮ（３０ｍＬ）中の中間体１６（２．５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）―（＋）−α−メチルベンジルアミン（２当量、１．８２ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の混合物を２時間６０℃で加熱した。混合物をＤＣＭで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をジエチルエーテルに溶解させた。沈殿物を濾取し、真空内で乾燥させて、７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−３−ニトロ−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−４−キノリンアミン（２．５ｇ）を得、これを次の工程で精製することなく用いた。
【０１５１】
このニトロ中間体（２．５ｇ、２４．８２ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）及びＨＣｌ（３．８ｍＬ）の混合物溶液に、ＳｎＣｌ２、２Ｈ２Ｏ（５．６ｇ、２４．８２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を１時間かけて４０℃に加熱し、次いで、ＮａＯＨ  Ｎで加水分解し、ＤＣＭで抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、茶色の粉末として標題化合物（０．５ｇ、１７％）を得た。
【０１５２】
ＬＣＭ（方法Ｅ）：ｍ／ｚ：３８９（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ＝２．９５分。
【０１５３】
中間体１６
４−クロロ−７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−３−ニトロキノリン
【化１６】
2013510121.tif 000019
【０１５４】
中間体１７（５ｇ、１６ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（２０ｍＬ）懸濁液を一晩還流させた。冷却後、混合物を蒸発乾固させた。得られた残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させて、薄茶色の粉末として標題化合物（５ｇ、９４％）を得た。
【０１５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：９．２７（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），４．０５（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）．
【０１５６】
中間体１７
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−３−ニトロ−４−キノリノール
【化１７】
2013510121.tif 000020
【０１５７】
室温における中間体１８（２８ｇ、１０４ｍｍｏｌ）のプロパン酸（４５０ｍｍＬ）溶液に硝酸（１０ｍＬ）をゆっくり添加し、次いで、反応混合物を１時間かけて１００℃に加熱した。氷浴で冷却した後、沈殿物を濾取し、ペンタンで洗浄して、黄色の粉末として標題化合物（２７ｇ、８２％）を得た。
【０１５８】
ＬＣＭ（方法Ｅ）：ｍ／ｚ：３１４（ＭＨ−）、Ｒｔ＝２．１２分間。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１３．０６（ｓ，１Ｈ），９．２６（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ）．
【０１５９】
中間体１８
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−４−キノリノール
【化１８】
2013510121.tif 000021
【０１６０】
３，５−ジメチルイソキサゾール−４−ボロン酸（４９．２ｇ、０．３４９ｍｏｌ）及びＢａ（ＯＨ）２・８Ｈ２Ｏ（９１．８ｇ、０．２９１ｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）を、中間体１９（３５ｇ、０．１１６ｍｏｌ）の水（１８０ｍＬ）及び１，２−ジメトキシエタン（６００ｍＬ）混合物溶液に添加した。反応物を１５分間窒素下に置き、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を添加した（４．１ｇ、３．５５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）。反応混合物を１０５℃で一晩撹拌した。室温で冷却した後、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。水層を濃ＨＣｌでｐＨ７に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。水層をＮａＯＨ  ５ＮでｐＨ１０に塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥させた。次いで、茶色の粗油をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）で溶出して、茶色の油状物として標題化合物（３１．４ｇ、４３．９％）を得た。
【０１６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１１．７２（ｂｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），６．０３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，１Ｈ），２．１１（ｓ，１Ｈ）．
【０１６２】
中間体１９
６−ヨード−７−（メトキシ）−１−キノリノール
【化１９】
2013510121.tif 000022
【０１６３】
中間体２０（２００ｇ、０．４９６ｍｏｌ）を２６０℃のジフェニルエーテル（２Ｌ）に添加した。反応混合物を１０分間２６０℃で撹拌した。次いで、黒色の溶液を１００℃で冷却し、既に０℃に冷却されているジイソプロピルエーテル（８Ｌ）に注いだ。沈殿物を濾取し、シクロヘキサン（１Ｌ）に注ぎ、次いで、１時間加熱還流させた。固体を濾取し、メタノール（２５０ｍＬ）に注ぎ、４５℃で１５分間加熱した。次いで、固体を濾取し、ペレットをポンプで乾燥させて、標題化合物（１０５ｇ、７０％）を得た。
【０１６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ  ６−ＤＭＳＯ，ｐｐｍ）δ：８．０７（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），６．０６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）．
【０１６５】
中間体２０
５−（｛［３−ヨード−４−（メトキシ）フェニル］アミノ｝メチリデン）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン
【化２０】
2013510121.tif 000023
【０１６６】
２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（２０３ｇ、１．４ｍｏｌ）及びトリメトキシメタン（１．５Ｌ）の混合物を１時間加熱還流させ、次いで、３−ヨード−４−メトキシ−アニリン（３４９．２ｇ、１．４０２ｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応混合物を還流させながら１時間攪拌し、次いで室温に冷却した。得られた沈殿物を濾取し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、乾燥させて、ベージュ色の粉末として標題化合物（４８５ｇ、８５．９％）を得た。
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１１．２（ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５０−８．３９（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｓ，６Ｈ）．
【０１６８】
中間体２１
メチル４−｛（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル｝ベンゾエート
【化２１】
2013510121.tif 000024
【０１６９】
トルエン（２０ｍＬ）中の中間体２２（８００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を充填したフラスコに、４−クロロブロモベンゼン（５０１ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、ＮａＯｔＢｕ（３１９ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）及び２’−（ジシクロヘキシルホスファニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ビフェニルアミン（７４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間８０℃に加熱し、還流させながら更に３時間加熱した。混合物を水に注ぎ、１ＮのＨＣｌを添加して酸性にした。ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出し、有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、Ｃ６Ｈ１２／ＥｔＯＡｃ：８０／２０で溶出して、白色の固体（３５０ｍｇ）として標題化合物（３５０ｍｇ）を得た。
【０１７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２（ｄ，３Ｈ）１．３５（ｍ，１Ｈ）２．２５（ｓ，３Ｈ）２．７（ｍ，１Ｈ）３．９５（ｓ，３Ｈ），４．２５（ｍ，１Ｈ）４．９５（ｍ，１Ｈ）６．６（ｄ，２Ｈ）７．１５（ｄ，２Ｈ）７．２５（ｓ，１Ｈ）７．５５（ｍ，４  Ｈ），８．１（ｄ，２Ｈ）
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ４４９［Ｍ＋Ｈ］＋及び４４７［Ｍ−Ｈ］−  Ｒｔ＝３．６７分。［α］Ｄ＝＋３２６（ｃ＝０．９８ｇ／ｃｌ、ＥｔＯＨ）
標題化合物は、移動相としてヘキサン／エタノール  ９０／１０を用いるＣＨＩＲＡＣＥＬ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ  １０μｍ）カラムを用いて、第２のピークとしてＨＰＬＣによって２２．５８分で溶出された。１ｍＬ／分の流速を適用し、１ｍＬの溶離剤で１ｍｇの標題化合物を希釈することにより調製されたサンプル１０μＬを注入した。化合物の検出は、２１０及び２５４ｎＭのＵＶ波長で実施した。他のエナンチオマーは、１５．４６分に得られた。
【０１７１】
中間体２２
メチル４−［（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−４−アミノ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル］ベンゾエート
【化２２】
2013510121.tif 000025
【０１７２】
Ｎａ２ＣＯ３の水溶液を添加して、ＤＣＭ（３Ｌ）中の中間体２３（１２１ｇ）の混合物を塩基性化した。得られた遊離アミンをＤＣＭ（２Ｌ）で抽出し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて、オフホワイトの固体として標題化合物（７９ｇ）を得た。
【０１７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．１５（ｍ，４Ｈ）１．７（ｍ，２Ｈ）２．１５（ｓ，３Ｈ）２．６（ｍ，１Ｈ）３．８（ｄｄ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ）４．８５（ｍ，１Ｈ）７．２（ｄ，１Ｈ）７．５５（ｄ，１Ｈ）７．７（ｄ，２  Ｈ），７．８（ｓ，１Ｈ）８．１（ｄ，２Ｈ）
［α］Ｄ＝＋３３３．８（ｃ＝０．９８５ｇ／ｃｌ，ＥｔＯＨ）．
標題化合物は、移動相としてヘキサン／エタノール８０／２０を用いるＣＨＩＲＡＣＥＬ  ＯＤ（２５０×４．６ｍｍ  １０μｍ）カラムを用いて、第２のピークとしてＨＰＬＣによって１８．５７分で溶出された。１ｍＬ／分の流速を適用し、１ｍＬの溶離剤で１ｍｇの標題化合物を希釈することにより調製されたサンプル１０μＬを注入した。化合物の検出は、２１０及び２５４ｎＭのＵＶ波長で実施した。他のエナンチオマーは、１２．８分に得られた。
【０１７４】
中間体２３
（２Ｓ，３Ｓ）−２，３−ビス［（フェニルカルボニル）オキシ］ブタン二酸−メチル４−（１−アセチル−４−アミノ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル）ベンゾエート（１：２）
【化２３】
2013510121.tif 000026
【０１７５】
ＥｔＯＨ（６００ｍＬ）及びＬ−（＋）−乳酸（水中２０％、４５０ｍＬ）中のラセミ混合物であるアミン中間体２４（１８５ｇ）を３０分間加熱還流させた。減圧下で濃縮した後、ヘキサン（３００ｍＬ）を残渣に添加し、得られた混合物を１０分間加熱還流させた。混合物を定着させ、ヘキサン相を廃棄した。残りのペーストをＥｔ２Ｏ（３００ｍＬ）に溶解させ、１０分間加熱還流させ、定着させた。Ｅｔ２Ｏ相を廃棄し、得られたペーストを再度ヘキサン（２００ｍＬ）で処理し、加熱還流させ、定着させた。ヘキサン相を廃棄し、残りのペーストにＥｔＯＡｃ（２．３Ｌ）を添加した。混合物を加熱還流させ、室温で１６時間静置させた。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ２ＣＯ３を添加して濾液を塩基性化し、得られた遊離アミノをＥｔＯＡｃ（３×１０００ｍＬ）で抽出し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。ＴＨＦ（９５０ｍＬ）溶液中の得られた遊離アミノ（９５ｇ）をＬ（−）−ジベンゾイル酒石酸（５０．３ｇ、０．１４ｍｏｌ）で処理し、３０分間加熱還流させた。得られた沈殿物を１６時間室温で静置させ、次いで、濾過し、ＴＨＦ（２００ｍＬ）で洗浄した。中和したアリコートをＨＰＬＣでモニタリングしたところ、９５．６％ｅｅの予測アミンエナンチオマーを示した。ＥｔＯＨ（１Ｌ）中で酒石酸塩を再結晶化させることにより、単一のジアステレオマー塩として標題化合物（９５ｇ）を得た。
【０１７６】
ｍｐ：１９６℃。
【０１７７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９５（ｄ，３Ｈ）１．１５（ｍ，１Ｈ）２．０５（ｓ，３Ｈ）２．５５（ｍ，１Ｈ）３．８５（ｓ，３Ｈ）４．０（ｍ，１Ｈ）４．５５（ｍ，１Ｈ）５．７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ  ｔａｒｔａｒｉｃ）７．４（ｍ，３Ｈ）７．６（ｍ，２Ｈ）７．８５（ｍ，３Ｈ），７．９５（ｍ，４Ｈ）．
【０１７８】
中間体２４
メチル４−（１−アセチル−４−アミノ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル）ベンゾエート
【化２４】
2013510121.tif 000027
【０１７９】
中間体２５（２０．０ｇ）のメタノール（４００ｍＬ）懸濁液を再還流させ、次いでＨＣｌ  ６Ｎ（１８ｍＬ）で処理した。得られた混合物を２時間還流させた。懸濁液をワットマン紙で濾取し、乾固するまで濾液を濃縮させた。アセトン（７０ｍＬ）を残渣に添加し、固体を濾取し、乾燥させた。酢酸エチル（３００ｍＬ）中の得られた塩をＮａＯＨ  １Ｎ（１００ｍＬ）で処理した。水層と有機層とを分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９：１（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、乾固するまで濃縮して、白色の固体として標題化合物（１３．８３ｇ）を得た。ＬＣＭ（方法Ｅ）Ｒｔ  ２．５１  ＭＨ＋３３９
【０１８０】
中間体２５
メチル４−［１−アセチル−４−（ホルミルアミノ）−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル］ベンゾエート
【化２５】
2013510121.tif 000028
【０１８１】
中間体２６（１−アセチル−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル）ホルムアミド（６２．２４ｇ）のＤＭＥ（６００ｍＬ）懸濁液に、室温でパラジウムテトラキス（１１．５６ｇ）を添加した。１０分間撹拌した後、｛４−［（メチルオキシ）カルボニル］フェニル｝ボロン酸（５４ｇ）と、Ｎａ２ＣＯ３（３００ｍＬ）の２Ｎ溶液とを添加し、混合物を攪拌し、１６時間加熱還流させた。混合物を減圧下で濃縮した。２００ｍＬのＤＣＭを残渣に添加した後、生成物が沈殿したら、それを濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。残りの水を除去するために、固体をイソプロピルエーテル（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、固体を温イソプロピルエーテル２２０ｍＬに添加し、得られた混合物をソニケータ内に放置した。固体を濾取し、乾燥させて、ベージュ色の固体として標題化合物（６４．７ｇ）を得た。
【０１８２】
ＬＣＭ（方法Ｅ）Ｒｔ  ２．５８  ＭＨ＋３６７
【０１８３】
中間体２６
［１−アセチル−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］ホルムアミドＮ−｛１−メチル−７−［４−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−イル｝尿素
【化２６】
2013510121.tif 000029
【０１８４】
中間体２７（７１ｇ、０．２６ｍｏｌ）のＤＣＭ（１Ｌ）とピリジン（３５０ｍＬ）との混合物溶液に、０℃の塩化アセチル（２１ｍＬ、０．２９ｍｏｌ）を滴下した。０℃で２時間攪拌した後、混合物を、砕氷（２ｋｇ）と濃ＨＣｌ（４５０ｍＬ）との混合物に注いだ。生成物をＤＣＭ（１Ｌ）で抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下で濃縮させて、オフホワイトの固体として予測生成物（８２ｇ、１００％）を得た。
【０１８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９８（ｄ，３Ｈ）１．１５（ｍ，１Ｈ）１．９５（ｓ，３Ｈ）２．４（ｍ，１Ｈ）４．７（ｍ，１Ｈ）４．８５（ｍ，１Ｈ）５．８（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）６．８５（ｄ，１Ｈ）７．１５（ｓ，１Ｈ）７．２５（ｄ，１Ｈ）８．２（ｓ，１Ｈ）
【０１８６】
中間体２７
（６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル）ホルムアミド
【化２７】
2013510121.tif 000030
【０１８７】
３Ｌの４つ口フラスコに、窒素雰囲下で、Ｎ−ビニルホルムアミド（６６．２ｇ、０．９４６ｍｏｌ）及び無水ＴＨＦ（４００ｍＬ）を充填した。ＢＦ３Ｅｔ２Ｏ（２３９ｍＬ、１．９ｍｏｌ）を乳状混合物に−５℃で滴下した。１５分間後、ＴＨＦ（１Ｌ）溶液中の中間体２８（１５０ｇ、０．４７３ｍｏｌ）を−５℃で添加した。２時間後、混合物をゆっくり且つ慎重にＮａＨＣＯ３溶液（５Ｌ）に注いだ。酢酸エチル（２Ｌ）を添加し、混合物を別の漏斗に移した。有機層を分離し、１×２００ｍＬのＨ２Ｏ、１×２００ｍＬのブラインで洗浄し、（Ｎａ２ＳＯ４）上で乾燥させた。混合物を濾過し、固体を１×５０ｍＬの酢酸エチルで洗浄した。沈殿物が生じるまで濾液を徐々に濃縮し、混合物を２時間氷浴中で冷却した。ブーフナー漏斗を通して沈殿物を濾過し、２×１００ｍＬのｉ−Ｐｒ２Ｏで洗浄して、固体として標題化合物（７１ｇ、５６％）を得た。
【０１８８】
ＬＣ／ＭＳ：（方法Ｅ）、ｍ／ｚ  ２６９及び２７１［Ｍ＋Ｈ］＋、Ｒｔ＝２．２９分；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ０．９８（ｄ，３Ｈ）１．２４（ｑ，１Ｈ）２．０４（ｄｄｄ，１Ｈ）３．３３（ｍ，１Ｈ）５．１７（ｍ，１Ｈ）５．４５（ｍ，１Ｈ）６．１５（ｄ，１Ｈ）６．８８（ｄｄ，１Ｈ）７．００（ｄ，１Ｈ）８．１１（ｓ，１Ｈ）
【０１８９】
中間体２８
［１−（１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イル）エチル］（４−ブロモフェニル）アミン
【化２８】
2013510121.tif 000031
【０１９０】
３Ｌの４つ口フラスコ内のベンゾトリアゾール（１３９ｇ、１．１６ｍｏｌ）のトルエン（２Ｌ）懸濁液に、窒素雰囲下で、４−ブロモアニリン（２００ｇ、１．１６ｍｏｌ）のトルエン（３００ｍＬ）溶液を室温で添加した。次いで、滴下漏斗を介して、トルエン（２００ｍＬ）溶液中のアセトアルデヒド（６４．７ｍＬ、１．１７ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物は徐々に均質になり、次いで、沈殿物が生じる。得られた混合物を窒素雰囲下で１２時間攪拌し、次いで濾過する。沈殿物をトルエン中で再結晶化させて、白色の固体として標題化合物（３０４ｇ、８２％）を得る。
【０１９１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  ２．１（ｍ，３Ｈ）４．９（ｍ，０．６６Ｈ）５．１５（ｍ，０．３３Ｈ）６．５−６．９（ｍ，３Ｈ）７．２−８．２（ｍ，７Ｈ）
【０１９２】
中間体２９
フェニル｛１−メチル−７−［４−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−イル｝カルバメート
【化２９】
2013510121.tif 000032
【０１９３】
中間体３０（３．５ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（７０ｍＬ）懸濁液に、ピリジン（１．１５ｍＬ）を添加し、次いで、クロロギ酸フェニル（１．５４ｍＬ、１２．２６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．５ｍＬ）溶液を滴下し、混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物に炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）の飽和溶液を添加し、有機相を抽出した。水層をＤＣＭで洗浄した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾固するまで濃縮した。残渣を７０ｇのシリカカートリッジを備えるフラッシュマスターによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ：９５／５で溶出して、黄色の固体として標題化合物（１．４９ｇ、３２％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ４９２（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ２．８８分。
【０１９４】
中間体３０
１−メチル−７−［４−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−アミン
【化３０】
2013510121.tif 000033
【０１９５】
中間体の３１（１．１ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）のトルエン／エタノール（５ｍＬ／５ｍＬ）混合物溶液に、３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾニトリル（１．１８ｇ、５．１６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２３０ｍｇ）及び２ＮのＮａ２ＣＯ３（５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）溶液を添加した。混合物をマイクロ波加熱下で攪拌し、次いで、蒸発乾固させ、ジクロロメタンで希釈した。次いで、有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ：９５／５で溶出して、白色の固体として標題化合物（９３０ｍｇ、７９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ３００（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ２．３７分。
【０１９６】
中間体３１
７−ブロモ−１−メチル［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−アミン
【化３１】
2013510121.tif 000034
【０１９７】
鉄（１６．２ｇ、２９４ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）及び酢酸（１ｍＬ）溶液を、室温で１５分間攪拌した。次いで、酢酸エチル（１５０ｍＬ）及び酢酸（１５０ｍＬ）を添加し、次いで、中間体３２（２２．３ｇ、７２．６ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。添加の最後に、混合物を２４時間室温で撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ（１／１）の混合物に溶解させ、次いで濾過した。濾液を減圧下で蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ：８５／１５で溶出して、クリーム色の固体として標題化合物（１８．７８ｇ、９３％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ２７９（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ２．３９分。
【０１９８】
中間体３２
７−ブロモ−１−メチル−４−ニトロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン
【化３２】
2013510121.tif 000035
【０１９９】
中間体３３（１１１．３ｇ、３９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１．１Ｌ）懸濁液に、オルソ酢酸メチルエステル（１００ｍＬ、１．１８ｍｏｌ）を添加し、１滴のＨ２ＳＯ４及び混合物を４時間室温で撹拌した。次いで、固体を濾過し、メタノール、ジイソプロピルエーテル（２×３００ｍＬ）、及びペンタン（２×３００ｍＬ）で洗浄した。固体を乾燥させて、茶色−黄色の固体として標題化合物（１１７．３ｇ、９７％）を得た。
【０２００】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ３０８（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ２．３２分。
【０２０１】
中間体３３
（２Ｚ）−６−ブロモ−３−ニトロ−２（１Ｈ）−キノリノンヒドラゾン
【化３３】
2013510121.tif 000036
【０２０２】
中間体３４（１２２．２７ｇ、４２６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．２Ｌ）懸濁液に、ヒドラジン水和物（１６５ｍＬ、３．４ｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で２４時間攪拌した。反応が完了しなかったので、ヒドラジン水和物（２０．６３ｍＬ、４２６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２時間室温で攪拌した。次いで、固体を濾過し、ＥｔＯＨ、ジイソプロピルエーテル（２×３００ｍＬ）及びペンタン（２×３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、若干ヒドラジンが残っている茶色−黄色の固体を得た。固体を水（６００ｍＬ）中で１５分間攪拌し、濾過した。固体を水（２×３００ｍＬ）、ジイソプロピルエーテル（２×３００ｍＬ）及びペンタン（２×３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、オレンジ色の固体として表題化合物（１１１．８ｇ、９３％）を得た。
【０２０３】
ｍｐ：１８７．４℃。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ２８３（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ２．７６分。
【０２０４】
中間体３４
６−ブロモ−２−クロロ−３−ニトロキノリン
【化３４】
2013510121.tif 000037
【０２０５】
中間体３５（１３０ｇ、４８３ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（６７５ｍＬ、７．２５ｍｏｌ）懸濁液を還流下で３時間攪拌した。次いで、溶液を８０℃に冷却し、トルエン（５００ｍＬ）をゆっくり添加し、混合物を２４時間室温で攪拌した。固体をトルエン（５００ｍＬ）及びペンタン（５００ｍＬ）で洗浄し、黄色の結晶として標題化合物（８０．５ｇ、５８％）を得た。
【０２０６】
ｍｐ：２０２．８℃。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ２８７（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ  ３．３６分。
【０２０７】
中間体３５
６−ブロモ−３−ニトロ−２（１Ｈ）−キノリノン
【化３５】
2013510121.tif 000038
【０２０８】
２−アミノ−５−ブロモベンズアルデヒド（１４０．５ｇ、７０２．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．４Ｌ）溶液に、ニトロ酢酸エチル（１５６ｍＬ、１．４ｍｏｌ）及びピペリジン（３５ｍＬ、３５１．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１８時間還流下で撹拌した。室温で冷却した後、固体を濾過し、ジイソプロピルエーテル（２×３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、黄色の固体として標題化合物（１３０．５ｇ、７０％）を得た。
【０２０９】
ｍｐ：２７６．５℃。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｍ／ｚ  ２６９（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ２．４２分。
【０２１０】
中間体３６
（３Ｓ）−３−（フェニルアミノ）ブタンニトリル
【化３６】
2013510121.tif 000039
【０２１１】
（３Ｓ）−３−アミノブタンニトリル（８．６ｇ、１０２ｍｍｏｌ、国際公開第２００５１００３２１号パンフレットに記載されている通り調製することができる）、ブロモベンゼン（１６．１６ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（５０．０ｇ、１５３ｍｍｏｌ）をトルエン（１００ｍＬ）中で合わせ、４５分間窒素下で攪拌した。フェニルボロン酸（０．１８７ｇ、１．５３４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、パラジウム（ＩＩ）アセテート（０．１８８ｇ、０．８３７ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）及び２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（０．４４３ｇ、１．１２５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）を窒素下でテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（６．６７ｍＬ）中で合わせ、４５分間攪拌した。ＴＨＦ溶液をトルエン溶液に添加し、反応物を一晩かけて８０℃に加熱した。反応混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）とに分液した。水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で再抽出した。合わせた有機層を水及びブライン（各５００ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、オレンジ色の油状物を得た。粗生成物を最小限のＤＣＭに溶解させ、２００ｇのＣｏｍｐａｎｉｏｎ  ＸＬカラムに適用し、１ＣＶのシクロヘキサン中５％の酢酸エチル、次いで、１２ＣＶ超の５〜３０％の酢酸エチルで溶出し、３ＣＶは３０％で保持した。ＵＶ収集；４５０ｍＬの画分。生成物をオフホワイトの固体（１１．３５ｇ）として単離した。
【０２１２】
ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝０．８７、ＭＨ＋＝１６１
【０２１３】
中間体３７
（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタンニトリル
【化３７】
2013510121.tif 000040
【０２１４】
（３Ｓ）−３−（フェニルアミノ）ブタンニトリル（調製については、中間体３６を参照されたい）（１１．３５２６ｇ、７０．９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２００ｍＬ）に窒素下で溶解させ、氷浴で冷却した。ＮＢＳ（１２．６１ｇ、７０．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を攪拌した。２０分後、反応物をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）とに分液した。有機層を２ＭのＮａＯＨ×２、水、及びブライン（各５００ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、クリーム色の固体として生成物（１７．３ｇ）を得た。ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝１．０５、ＭＨ＋＝２３９
【０２１５】
中間体３８
（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタンアミド
【化３８】
2013510121.tif 000041
【０２１６】
（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタンニトリル（調製については中間体３７を参照されたい）（１７．３ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）をトルエン（５００ｍＬ）に溶解させ、Ｈ２ＳＯ４（１９．２８ｍＬ、３６２ｍｍｏｌ）を添加した。二相混合物を６０℃で攪拌した。２時間後、ＬＣＭＳによってほんの少量のＳＭが残ったので、反応物を水（５００ｍＬ）で希釈し、相を分離した。水相を１０ＮのＮａＯＨで塩基性化し、ＥｔＯＡｃ（２×７５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、クリーム色の固体として生成物（１７．５ｇ）を得た。
【０２１７】
ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝０．７７、ＭＨ＋＝２５７
【０２１８】
中間体３９
１−メチルエチル｛（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタノイル｝カルバメート
【化３９】
2013510121.tif 000042
【０２１９】
（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタンアミド（調製については中間体３８を参照されたい、２４．９ｇ、９７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（８５０ｍＬ）に溶解させ、＜−９℃（内部）に冷却した。イソプロピルクロロギ酸塩（１１６ｍＬ、１１６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、次いで、温度を０℃未満に保ちながら、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２３２ｍＬ）中のリチウムｔｅｒｔブトキシド（１８．６１ｇ、２３２ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応物を３０分間攪拌し、次いで、ＬＣＭＳによって確認したところ、完全に反応していることを示した。混合物をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）と２ＮのＨＣｌ（２０００ｍＬ）とに分液した。有機層をブライン（２０００ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、茶色の油状物として生成物（１７．９ｇ）を得た。
【０２２０】
ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝１．０９、ＭＨ＋＝３４３
代替方法
１−メチルエチル（２Ｅ）−２−ブテノイルカルバメート（中間体４２、９．３８ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）を窒素下でトルエン（２８１ｍＬ）中にて攪拌し、（Ｒ−ＢＩＮＡＰ）ジトリフラートビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）（中間体４４、３．３５ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を添加した。触媒はゴム状の球を形成し、溶液は不透明な黄色の混合物になり、２０分間攪拌した。４−ブロモアニリン（１４．１４ｇ、８２ｍｍｏｌ）を添加したところ、溶液は透明な薄茶色になり、ゴム状の触媒は更に溶解した。混合物を一晩撹拌した。
【０２２１】
同様に、１−メチルエチル（２Ｅ）−２−ブテノイルカルバメート（中間体４２、８．５１ｇ、４９．７ｍｍｏｌ）の第２のバッチを窒素下でトルエン（２５５ｍＬ）中にて攪拌し、（Ｒ−ＢＩＮＡＰ）ジトリフラートビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）（中間体４４、３．０４ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）を添加した。触媒はゴム状の球を形成し、溶液は不透明な黄色の混合物になり、２０分間攪拌した。４−ブロモアニリン（１２．８３ｇ、７４．６ｍｍｏｌ）を添加したところ、溶液は透明な薄茶色になり、ゴム状の触媒は更に溶解した。混合物を一晩撹拌した。
【０２２２】
２つの反応混合物を合わせ、１．５ｋｇのＩｓｃｏシリカＲｅｄｉｓｅｐカラムにロードした。カラムをＤＣＭ：ＭｅＯＨ（０％→０．５％、１９ＣＶ）で溶出した。生成物を含有する透明な画分を蒸発させて、薄茶色の油状物を得た。混合物を４０℃で一晩真空オーブン内にて乾燥させて、白色の固体（２４．２ｇ、全体として６７％）を得た。
【０２２３】
ＬＣＭ（方法Ｃ）：Ｒｔ＝０．９１、ＭＨ＋＝３４３．ｅｅ＝９２％。
【０２２４】
中間体４０
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート
【化４０】
2013510121.tif 000043
【０２２５】
１−メチルエチル｛（３Ｓ）−３−［（４−ブロモフェニル）アミノ］ブタノイル｝カルバメート（調製については中間体３９を参照されたい）（１７．９ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５０ｍＬ）に溶解させ、ＣＯ２／アセトン浴中にて−１０℃（内部）未満に冷却した。温度を−５℃未満に保ちながら、ＮａＢＨ４（１．３８１ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、水（２５ｍＬ）中の塩化マグネシウム六水和物（１１．３５ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を＜０℃で１時間攪拌し、次いで、室温に加温し、１時間攪拌した。得られた濃い懸濁液を、クエン酸（２５．０５ｇ、１３０ｍｍｏｌ）、ＨＣｌ（２０５ｍＬ、２０５ｍｍｏｌ）、及びジクロロメタン（ＤＣＭ）（２０５ｍＬ）の混合物に注いだ。二相混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳはＳＭの残りを示さなかったので、有機層を抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、薄茶色の固体として生成物（１４．１ｇ）を得た。
【０２２６】
ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝１．１３、ＭＨ＋＝３２７
【０２２７】
中間体４１
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−６−（４−ホルミルフェニル）−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート
【化４１】
2013510121.tif 000044
【０２２８】
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート（調製については中間体４３を参照されたい）（１ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）、（４−ホルミルフェニル）ボロン酸（０．４８７ｇ、３．２５ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（０．１５６ｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）、及び炭酸カリウム（０．４８７ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）を無水エタノール（７ｍＬ）及び無水トルエン（７．００ｍＬ）中で合わせ、反応混合物を１０分間脱気した。反応混合物を８５℃で一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。粗反応混合物を水（１５ｍＬ）と酢酸エチル（５ｍＬ）とに分液し、室温で３０分間攪拌した。薄い灰色の固体が沈殿したので、それを濾取し、水（５ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン内で乾燥させて、８５４ｍｇの灰色の固体を得た。ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝１．００、ＭＨ＋＝３９５
【０２２９】
中間体４２
１−メチルエチル（２Ｅ）−２−ブテノイルカルバメート
【化４２】
2013510121.tif 000045
【０２３０】
カルバミン酸イソプロピル（３０ｇ、２９１ｍｍｏｌ、ＴＣＩから入手可能）を３ＬのＬａｒａ容器に充填し、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１５０ｍＬ）を添加した。（２Ｅ）−２−ブテノイル塩化物（３１．２ｍＬ、３２６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）を窒素下で添加し、ジャケットを−３０℃に冷却した。溶液温度が−１７℃に達したら、反応温度を−１０℃〜−１８℃に保ちながら、１Ｍのリチウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６５５ｍＬ、６５５ｍｍｏｌ）を２時間かけて蠕動ポンプによって添加した。添加が完了したら、混合物を３０分間攪拌し、０℃にした。ジエチルエーテル（４５０ｍＬ）及び１ＭのＨＣｌ（３７５ｍＬ）を添加し、激しく攪拌して混合物を２０℃にした。攪拌を停止し、層を分離させ、水層を廃棄した。ブライン（３７５ｍＬ）を添加し、混合物を激しく攪拌した。攪拌を停止し、層を分離させ、水層を廃棄した。有機層を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過し、蒸発させて、茶色の油状物（６０ｇ）を得た。混合物を４０＋Ｍ  Ｂｉｏｔａｇｅシリカカラムにロードし、ＤＣＭ：酢酸エチル（１：１〜０：１、１０ＣＶ）で溶出した。生成物を含有する画分を蒸発乾固させ、１５００ｇのＲｅｄｉｓｅｐ  Ｉｓｃｏシリカカラムにロードし、シクロヘキサン中０〜４０％酢酸エチルの勾配で溶出した。生成物を含有する透明な画分を蒸発させて、オフホワイトの固体（１５．４１ｇ）を得た。ＬＣＭ（方法Ｃ）：Ｒｔ＝０．６８、ＭＨ＋＝１７２
【０２３１】
中間体４３
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート
【化４３】
2013510121.tif 000046
【０２３２】
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−６−ブロモ−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート（調製については中間体４０を参照されたい）（１４．１ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）を室温で窒素下にてジクロロメタン（ＤＣＭ）（４００ｍＬ）に溶解させた。ピリジン（１０．４６ｍＬ、１２９ｍｍｏｌ）、次いで塩化アセチル（４．６０ｍＬ、６４．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を一晩撹拌した。ＬＣＭＳは完全に反応していることを示したので、それをＥｔＯＡｃ（２０００ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（８００ｍＬ）とに分液した。有機層を抽出し、水及びブライン（各１５００ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、紫色の固体を得た。粗生成物を最小限のＤＣＭに溶解させ、３３０ｇのＣｏｍｐａｎｉｏｎ  ＸＬカラムに適用し、シクロヘキサン中１２〜６３％の酢酸エチル勾配で溶出した。生成物を含有する画分を、オフホワイトの固体（１２．３７ｇ）として収集した。
【０２３３】
ＬＣＭ（方法Ｂ）：Ｒｔ＝１．０３、ＭＨ＋＝３６９
［α］Ｄ＝＋２８１．１０２５°（Ｔ＝２０．７℃、１０ｍｍのセル、ｃ＝０．５０８ｇ／１００ｍＬ、エタノール）
【０２３４】
中間体４４
（Ｒ−ＢＩＮＡＰ）ジトリフラートビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）
【化４４】
2013510121.tif 000047
【０２３５】
Ｒ−（＋）−ＢＩＮＡＰ（６．０８ｇ、９．７６ｍｍｏｌ、Ａｖｏｃａｄｏから入手可能）をジクロロメタン（ＤＣＭ）（６２６ｍＬ）中で攪拌し、ジクロロビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）（２．５ｇ、９．６４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）を添加した。混合物を窒素下で３０分間攪拌したが、懸濁液は溶液にならなかったので、更にＤＣＭ（１００ｍＬ）を添加した。混合物を更に３０分間攪拌し、アセトニトリル（２５０ｍＬ）に溶解しているトリフラート銀（５．００ｇ、１９．４７ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）を添加した。混合物は、オレンジ色の曇った懸濁液から黄色の懸濁液に変化した。混合物を１時間攪拌し、ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、蒸発させて、オレンジ色の固体を得た。残渣を真空下（約１４ｍｂａｒ）で室温にて週末の間乾燥させて、望ましい生成物（１０．６９ｇ）を得た。
【０２３６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＣＮ−ｄ３）δ  ｐｐｍ  ２．０（ｓ，６  Ｈ），６．７（ｄ，２Ｈ），６．９（ｂｒｍ，４Ｈ），７．１（ｂｒ  ｔ，２Ｈ），７．２（ｔ，２Ｈ），７．５  ？  ７．９（ｍ，２２Ｈ）
【０２３７】
実施例１
１−メチルエチル（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−２−メチル−６−｛４−［（メチルアミノ）メチル］フェニル｝−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル）カルバメート
【化４５】
2013510121.tif 000048
【０２３８】
１−メチルエチル［（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−６−（４−ホルミルフェニル）−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−４−キノリニル］カルバメート（調製については中間体４１を参照されたい）（１００ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍＬ）に溶解させ、ＴＨＦ（０．２５４ｍＬ、０．５０７ｍｍｏｌ）中２Ｍのメチルアミンを添加した。黄色の溶液を１３５分間室温で窒素下にて攪拌し、その時点で水素化ホウ素ナトリウム（１５．３５ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間攪拌し、次いで、一晩静置した。反応物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）を添加した。白色の固体を濾取し（ｂｏｎｄ  ｅｌｕｔ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）、望ましい生成物であることを見出した（３４ｍｇ）。濾液を分液し、有機層を乾燥させた。有機層を濃縮させて６７ｍｇの無色の残渣を得、これをシリカ１２＋Ｓ  Ｂｉｏｔａｇｅカラムに適用し、精製し、ＤＣＭ中１〜５％のメタノール性アンモニアの勾配で溶出した。生成物を含有する画分を濃縮して、望ましい生成物（５２ｍｇ）の別のバッチを得た。
【０２３９】
ＬＣＭ（方法Ｃ）：Ｒｔ＝０．７１、ＭＨ＋＝４１０
【０２４０】
実施例２
２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］−Ｎ−エチルアセトアミド
【化４６】
2013510121.tif 000049
【０２４１】
室温における中間体１（４．５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、ＤＩＥＡ（４ｍＬ、２２．７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、ＨＢＴＵ（８．６ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をこの温度で３時間攪拌し、エチルアミン（１１．３ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、２２．７ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を一晩攪拌した後、減圧下で濃縮した。粗物質をＤＣＭに溶解させ、水、１ＮのＮａＯＨ、及び１ＮのＨＣｌで順次洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空内で濃縮した。粗固体をＭｅＣＮ中で再結晶化させて、白色の固体として標題化合物（４．１ｇ、収率８５％）を得た。
【０２４２】
Ｒｆ＝０．４８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９０／１０）．
Ｍｐ  １４０〜１４５℃（ゴム状になる）。
【０２４３】
Ｃ２２Ｈ２３ＣｌＮ５Ｏ２について計算されたＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  ４２４．１５４０；実測値４２４．１５２５。キラルＨＰＬＣ：カラム：ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ  ２５０×４．６  ｍｍ  １０μｍ；移動相：６０／４０、ＥｔＯＨ／ヘキサン；流速：１．０ｍＬ／分；ＵＶ波長：２１０及び２５４ｎｍ。表題化合物は５．７６分間で溶出された。［α］Ｄ＝＋８８．１（ｃ  １．００１５／ＭｅＯＨ）。
【０２４４】
実施例３
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−８−（メトキシ）−１−［（１Ｒ）−１−（２−ピリジニル）エチル］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン
【化４７】
2013510121.tif 000050
【０２４５】
中間体９（６ｇ、１８ｍｍｏｌ）の混合物をＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）中の（１Ｒ）−１−（２−ピリジニル）エタンアミン（２当量、４．４３ｇ、３６ｍｍｏｌ）と反応させ、１１０℃で４時間攪拌した。反応混合物を真空内で濃縮した。残渣を水とＤＣＭとの間で分液した。Ｎａ２ＳＯ４上で有機層を乾燥させ、濃縮乾固させて、７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−６−（メトキシ）−４−｛［（１Ｒ）−１−（２−ピリジニル）エチル］−アミノ｝−３−キノリンカルボキサミドを得、精製することなく次の工程で用いた。
【０２４６】
カルボキサミド中間体（６ｇ）を過剰のＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）中ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード］ベンゼン（１９．３５ｇ、４５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を真空内で濃縮し、得られた残渣をＤＣＭに溶解させ、水で洗浄した。シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５）によって粗生成物を精製し、得られた化合物をＤＣＭに溶解させ、ジエチルエーテルから沈殿させて、オフホワイトの粉末として標題化合物（２．５ｇ、３３％）を得た。
【０２４７】
Ｃ２３Ｈ２１Ｎ５Ｏ３について計算されたＬＣ−ＨＲＭＳ  ＥＳ＋の正確な質量：４１６．１７２２（ＭＨ＋）。実測値  ４１６．１７３６、Ｒｔ＝２．２２分間。
【０２４８】
ＬＣＭＳ（方法Ｅ）ｍ／ｚ  ４１５．９７（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ＝２．５分。
【０２４９】
実施例４
７−（３，５−ジメチル−４−イソオキサゾリル）−８−（メトキシ）−１−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン
【化４８】
2013510121.tif 000051
【０２５０】
０℃における中間体１５（０．５ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍＬ）溶液に、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル塩化物（１．０５当量、１．４ｍｍｏｌ、０．１５ｇ、Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加し、次いで、混合物を０℃で１５分間攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で加水分解し、ＤＣＭで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得、精製することなく次の工程で用いた。ＡｃＯＨを粗生成物に添加し、混合物を１００℃で一晩攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＮａＯＨ  １Ｎで加水分解し、ＤＣＭで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５）上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、白色の粉末（０．１６ｇ、２６％）として表題化合物を得た。
【０２５１】
ＬＣＭＳ（方法Ｅ）ｍ／ｚ  ４８３（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｒｔ＝２．９３分、［α］Ｄ２０＝−３８．７°（ｃ＝０．８００５ｇ／１００ｍＬ、ＣＨＣｌ３）。
【０２５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：９．１３（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．５１−７．２１（ｍ，５Ｈ），６．７３（ｂｓ，１Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），４．０９−３．８５（ｍ，２Ｈ），３．６９−３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．０７（ｄ，Ｊ＝  ７Ｈｚ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０４−１．９２（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．８０（ｍ，２Ｈ）．
【０２５３】
実施例５
４−｛（２Ｓ，４Ｒ）−１−アセチル−４−［（４−クロロフェニル）アミノ］−２−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−キノリニル｝安息香酸
【化４９】
2013510121.tif 000052
【０２５４】
中間体２１（３２０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）及び１ＮのＮａＯＨ（１．５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）溶液を加熱還流させた。１時間後、ｔｌｃモニタリングによって反応が完了したことが示された。粗生成物を蒸発乾固させ、残渣を水（１０ｍＬ）に溶解させた。１ＮのＨＣｌ溶液を添加することによって混合物をｐＨ＝３に酸性化した。有機物質をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空内で濃縮した後、残渣をＤＣＭ／ヘキサン混合物に溶解させて、濾過後に赤色の固体を得た。化合物をＥｔＯＡｃ中で再結晶化させ、濾過し、ｉ−Ｐｒ２Ｏで洗浄した。得られた白色の粉末をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏに可溶化させ、濃縮乾固し、Ｈ２Ｏに溶解させた。最後に、沈殿物を濾過して、白色の粉末として標題化合物（１４７ｍｇ）を得た、ｍｐ：２７５℃。
【０２５５】
Ｃ２５Ｈ２３Ｎ２Ｏ３Ｃｌ（Ｍ−Ｈ）−について計算されたＨＲＭＳ  ４３３．１３１９：４３３．１２９９。Ｒｔ：２．２１分。
【０２５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）δ  ｐｐｍ  １．２（ｄ，３Ｈ）１．３５（ｍ，１Ｈ）２．３（ｓ，３Ｈ）２．７（ｍ，１Ｈ）４．２５（ｄｄ，１Ｈ）４．９５（ｍ，１Ｈ）６．６５（ｄ，２Ｈ）７．１５（ｄ，２Ｈ）７．２５（ｓ，１Ｈ）７．５５（ｍ，４Ｈ），８．１５（ｄ，２Ｈ）
ＥｔＯＡｃ再結晶化段階で測定された［α］Ｄ＝＋３９５（ｃ＝０．９６ｇ／ｃｌ、ＥｔＯＨ）。
【０２５７】
標題化合物は、移動相としてｔｅｒｔ−ブチルメチルオキシド（ＭＴＢＥ）＋０．１％  ＴＦＡ／エタノール：９０／１０と共にＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ（２５０×４．６ｍｍ  ５μｍ）を用いて第１のピークとしてＨＰＬＣによって４．５１分で溶出された。１ｍＬ／分の流速を適用し、１ｍＬの溶離剤で１ｍｇの標題化合物を希釈することにより調製されたサンプル１０μＬを注入した。化合物の検出は、２１０及び２５４ｎＭのＵＶ波長で実施した。他のエナンチオマーは、５．９２分に得られた。
【０２５８】
実施例６
Ｎ−｛１−メチル−７−［４−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］キノリン−４−イル｝尿素
【化５０】
2013510121.tif 000053
【０２５９】
中間体２９（０．１５ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）懸濁液に、ＭｅＯＨ中７Ｍのアンモニア溶液（２２０μＬ、１．５５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４８時間室温で攪拌した。得られた沈殿物を濾過し、０．５ＮのＮａＯＨ溶液と共に粉砕し、ジイソプロピルエーテルで洗浄して、白色の固体として標題化合物（５２ｍｇ、４１％）を得た。
【０２６０】
ｍｐ：＞２６０℃。Ｃ２４Ｈ２８Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋について計算されたＨＲＭＳ  ４１５．２２４６：４１５．２２０８、Ｒｔ：２．０４分。
【０２６１】
レファレンス化合物Ａ：１，１−ジメチルエチル［５−（｛［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセチル｝アミノ）ペンチル］カルバメート
【化５１】
2013510121.tif 000054
【０２６２】
［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］酢酸（調製については、中間体１を参照されたい）（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．９ｇ、５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．８８ｍＬ、５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で８０分間撹拌し、これに、１，１−ジメチルエチル（４−アミノブチル）カルバメート（１．０５ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した後、濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解させ、１ＮのＨＣｌで洗浄した。水層をジクロロメタンで２回抽出した。有機層を１Ｎの水酸化ナトリウムで洗浄し、次いで、塩化ナトリウムの飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。ジクロロメタン／メタノール９５／５を用いてシリカ上でフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して、黄色の固体として標題化合物（１．２ｇ）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ＲＴ＝３．０４分
【０２６３】
レファレンス化合物Ｂ：Ｎ−（５−アミノペンチル）−２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセトアミドトリフルオロ酢酸
【化５２】
2013510121.tif 000055
【０２６４】
１，１−ジメチルエチル［５−（｛［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセチル｝アミノ）ペンチル］カルバメート（調製については、レファレンス化合物Ａを参照されたい）（０．２ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（０．０５３ｍＬ、０．６８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を０℃から室温に３時間攪拌した。反応混合物を濃縮乾固させて、吸湿性の黄色の固体として標題化合物（２００ｍｇ）を得た。
【０２６５】
ＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：ｒｔ＝２．３３分間。
【０２６６】
Ｃ２５Ｈ２９ＣｌＮ６Ｏ２について計算されたＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  ４８１．２１１９；実測値４８１．２１６２。
【０２６７】
レファレンス化合物Ｃ：Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８−Ｎ−（５−アミノペンチル）−２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセトアミドの５−及び６−異性体の混合物
【化５３】
2013510121.tif 000056
【０２６８】
Ｎ−（５−アミノペンチル）−２−［（４Ｓ）−６−（４−クロロフェニル）−１−メチル−８−（メチルオキシ）−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−４−イル］アセトアミドトリフルオロアセテート（調製についてはレファレンス化合物Ｂを参照されたい）（７．６５ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３００μＬ）に溶解させ、エッペンドルフ遠心管内のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８のカルボン酸スクシンイミジルエステル（５ｍｇ、７．７７μｍｏｌ、５及び６異性体の混合物、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能、製品番号Ａ−２０１００）に添加した。ヒューニッヒの塩基（７．０μＬ、０．０４０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を一晩ボルテックスで混合した。１８時間後、反応混合物を蒸発乾固させ、残渣をＤＭＳＯ／水（５０％、合計＜１ｍＬ）に再溶解させ、分取Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８カラムに適用し、１５０分間かけて１０ｍＬ／分の流速で９５％  Ａ：５％  Ｂ〜１００％  Ｂ（Ａ＝水中０．１％のトリフルオロ酢酸、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／９０％アセトニトリル／１０％水）の勾配で溶出した。不純画分を合わせ、同システムを用いて再精製した。画分を合わせ、蒸発させて、示される２つの位置異性体の混合物として標題生成物（２．８ｍｇ）を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｆ）、ＭＨ＋＝９９９、ｒｔ＝１．８８分。
【０２６９】
生物学的試験方法
蛍光異方性結合アッセイ
本発明において使用するための化合物のブロモドメイン阻害剤ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、及びＢＲＤ４に対する結合を、蛍光異方性結合アッセイを用いて評価した。
【０２７０】
ブロモドメインタンパク質、蛍光リガンド（レファレンス化合物Ｃ、上記を参照されたい）、及び様々な濃度の試験化合物を共にインキュベートして、試験化合物の非存在下で蛍光リガンドが著しく（＞５０％）結合し、十分な濃度の強力な阻害剤の存在下で非結合蛍光リガンドの異方性が測定可能な程度に結合値と異なるような条件下で熱力学的平衡に達した。
【０２７１】
全てのデータを、各プレートにおける１６の高対照及び１６の低対照ウェルの平均に対して正規化した。次いで、以下の式の４つのパラメータ曲線適合を適用した：
ｙ＝ａ＋（（ｂ−ａ）／（１＋（１０＾×／１０＾ｃ）＾ｄ）
式中、「ａ」は最小値であり、「ｂ」はヒル勾配であり、「ｃ」はｐＩＣ５０であり、「ｄ」は最大値である。
【０２７２】
Ｎ末端に６−Ｈｉｓタグを備える組換えヒトブロモドメイン（ＢＲＤ２（１〜４７３）、ＢＲＤ３（１〜４３５）、及びＢＲＤ４（１〜４７７））を、大腸菌細胞（ｐＥＴ１５ｂベクター中）で発現させた。Ｈｉｓタグ付ブロモドメインを、０．１ｍｇ／ｍＬのリゾチーム及び超音波処理を用いて大腸菌細胞から抽出した。次いで、ＨｉｓＴＲＡＰ  ＨＰカラムにおいて親和性クロマトグラフィーによってブロモドメインを精製し、２０Ｃｖにわたって線形１０〜５００ｍＭイミダゾール勾配で溶出した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ｐｒｅｐ  ｇｒａｄｅのサイズ排除カラムによる更なる精製を完了した。精製したタンパク質を２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）及び１００ｍＭのＮａＣｌ中で−８０℃にて保存した。
【０２７３】
ブロモドメインＢＲＤ２についてのプロトコール：全ての成分を、最終濃度がＢＲＤ２  ７５ｎＭ、蛍光リガンド  ５ｎＭになるように、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍｍのＮａＣｌ、及び０．５ｍＭのＣＨＡＰＳのバッファ組成物に溶解させた。ｍｉｃｒｏ  ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用いて、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル黒色低体積マイクロタイタープレート中に１００ｎＬの様々な濃度の試験化合物又はＤＭＳＯビヒクル（最終１％）を収容しており、室温で暗条件６０分間にて平衡化されたウェルにこの反応混合物１０μＬを添加した。蛍光異方性をＥｎｖｉｓｉｏｎ（λｅｘ＝４８５ｎｍ、λＥＭ＝５３０ｎｍ；二色性−５０５ｎＭ）で読み取った。
【０２７４】
ブロモドメインＢＲＤ３についてのプロトコール：全ての成分を、最終濃度がＢＲＤ３  ７５ｎＭ、蛍光リガンド  ５ｎＭになるように、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍｍのＮａＣｌ、及び０．５ｍＭのＣＨＡＰＳの組成のバッファに溶解させた。ｍｉｃｒｏ  ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用いて、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル黒色低体積マイクロタイタープレート中に１００ｎＬの様々な濃度の試験化合物又はＤＭＳＯビヒクル（最終１％）を収容しており、室温で暗条件６０分間にて平衡化されたウェルにこの反応混合物１０μＬを添加した。蛍光異方性をＥｎｖｉｓｉｏｎ（λｅｘ＝４８５ｎｍ、λＥＭ＝５３０ｎｍ；二色性−５０５ｎＭ）で読み取った。
【０２７５】
ブロモドメインＢＲＤ４についてのプロトコール：全ての成分を、最終濃度がＢＲＤ４  ７５ｎＭ、蛍光リガンド  ５ｎＭになるように、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍｍのＮａＣｌ、及び０．５ｍＭのＣＨＡＰＳの組成のバッファに溶解させた。ｍｉｃｒｏ  ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用いて、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル黒色低体積マイクロタイタープレート中に１００ｎＬの様々な濃度の試験化合物又はＤＭＳＯビヒクル（最終１％）を収容しており、室温で暗条件６０分間にて平衡化されたウェルにこの反応混合物１０μＬを添加した。蛍光異方性をＥｎｖｉｓｉｏｎ（λｅｘ＝４８５ｎｍ、λＥＭ＝５３０ｎｍ；二色性−５０５ｎＭ）で読み取った。
【０２７６】
実施例１〜６を上記アッセイで試験したところ、上記ＢＲＤ２、ＢＲＤ２、及びＢＲＤ３アッセイのうちの１以上において、ｐＩＣ５０≧６．０を有することが見出された。
【０２７７】
リポ多糖類（ＬＰＳ）刺激性全血計量ＴＮＦαレベルアッセイ
細菌性脂質多糖体（ＬＰＳ）等のトール様受容体のアゴニストによる単球細胞の活性化は、ＴＮＦαを含む重要な炎症伝達物質を産生させる。このような経路は、様々な自己免疫性及び炎症性疾患の病態生理学の中心となると広く考えられている。
【０２７８】
試験される化合物を様々な適切な濃度に希釈し、希釈原液１μＬを９６プレートのウェルに添加した。全血（１３０μＬ）を添加した後、プレートを３７℃（５％  ＣＯ２）で３０分間インキュベートし、その後、２．８μｇ／ｍＬのリポ多糖類（ＬＰＳ）１０μＬを添加し、完全ＲＰＭＩ１６４０（最終濃度＝２００ｎｇ／ｍＬ）で希釈して、１ウェル当たりの合計体積を１４０μＬにした。３７℃で２４時間更にインキュベートした後、１４０μＬのＰＢＳを各ウェルに添加した。プレートを密閉し、１０分間振盪し、次いで、遠心分離した（２５００ｒｐｍ×１０分間）。１００μＬの上清を除去し、直後又は−２０℃で保存した後にイムノアッセイ（典型的に、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによる）によってＴＮＦαのレベルをアッセイした。各化合物の用量応答曲線をデータから作成し、ＩＣ５０値を計算した。
【０２７９】
上記アッセイで試験した実施例１〜６は、ｐＩＣ５０≧６．０を有することが見出された。
【０２８０】
これらのデータは、上記アッセイで試験したブロモドメイン阻害剤が、重要な炎症伝達物質であるＴＮＦαの産生を阻害したことを示す。
【０２８１】
インビボにおけるマウスの内毒血症モデル
高用量の内毒素（細菌のリポ多糖類）を動物に投与すると、強い炎症反応、心臓血管機能の調節異常、臓器の機能不全及び最終的には死を含む深刻なショック症候群が生じる。この応答パターンは、重篤な細菌感染に対する体の応答が同様に生命を脅かす場合があるヒトの敗血症及び敗血症性ショックと非常に類似している。
【０２８２】
本発明で用いられる化合物を試験するために、８群のＢａｌｂ／ｃオスマウスに致死用量である１５ｍｇ／ｋｇのＬＰＳを腹腔内注入により投与した。９０分後、動物にビヒクル（非発熱性水中２０％シクロデキストリン、１％エタノール）又は化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した。４日目に動物の生存率をモニタした。
【０２８３】
４日目に生存している動物数（複数の反復実験の合計）
ビヒクル  ４／６６（６％）
実施例３の化合物  ５５／６６（８３％）
実施例５の化合物  １４／２４（５８％）
実施例２の化合物  ２４／５６（５２％）
実施例４の化合物  ９／２４（３８％）
これらのデータは、上記モデルで試験したブロモドメイン阻害剤が、静脈内投与後に有意な動物の生存効果を生じさせたことを示す。
【０２８４】
本明細書に引用される特許及び特許出願を含むがこれらに限定されない全ての刊行物は、個々の刊行物が具体的且つ個々に、全文を通して参照することによって組み込まれることを示すかのように、参照することによって本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
2013510121.tif 000057
2013510121.tif 000058
2013510121.tif 000059