(57)【要約】  個人におけるアテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を治療及び／又は予防するための、免疫賦活性Ｔ細胞、組成物、方法及びシステムである。【選択図】図５
2013510586.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡｐｏＢ１００の１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分によって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞であって、活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞が該１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項２】
前記１種以上の免疫原性断片の各々が、配列番号１〜配列番号３０２の内の１つを有するペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項３】
前記１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分が、アテローム性動脈硬化の縮小に関係がある、請求項１又は２に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項４】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号１、配列番号２、配列番号１０、配列番号１１、配列番号２５、配列番号３０〜３４、配列番号４０、配列番号４５、配列番号６８、配列番号７４、配列番号９４、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１２９、配列番号１４３、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５４、配列番号１６２、配列番号１６９、配列番号１７７、配列番号１９９、配列番号２１０、配列番号２２２、配列番号２３６、配列番号２５２、及び配列番号３０１の内の１つを含むペプチドを１種以上含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項５】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号２、配列番号１１、配列番号３２、配列番号４５、配列番号７４、配列番号１０２、配列番号１４８、配列番号１６２、及び配列番号２１０の内の１つを含むペプチドを１種以上含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項６】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号１４３を有するペプチド及び配列番号２１０を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項７】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号１１を有するペプチド、配列番号２５を有するペプチド及び配列番号７４を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項８】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号９９を有するペプチド、配列番号１００を有するペプチド、配列番号１０２を有するペプチド、配列番号１０３を有するペプチド、及び配列番号１０５を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項９】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号２を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１０】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号４５を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１１】
前記１種以上の免疫原性断片が、配列番号２１０を有するペプチドを含む、請求項３に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１２】
薬剤として用いるための、請求項３〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１３】
個体におけるアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防に用いるための、請求項３〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１４】
前記治療が、個体に有効量のＣＤ８（＋）Ｔ細胞を投与することを含む、請求項１３に記載のＣＤ８(＋）Ｔ細胞。
【請求項１５】
前記有効量が、約５００，０００〜約２，０００，０００の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の間に含まれる、請求項１４に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１６】
前記有効量が、約１，５００，０００の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞である、請求項１４に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１７】
前記投与が、非経口的に行われる、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞。
【請求項１８】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞を適切な媒体と共に含む組成物。
【請求項１９】
請求項３〜１１のいずれか１項に記載の活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞を薬学的に許容できる媒体と共に含む医薬品組成物。
【請求項２０】
アテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を治療及び／又は予防するのに適した活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供する方法であって、当該方法は、
ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的なＣＤ８（＋）Ｔ細胞を得るための条件下で接触させる工程であって、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分がアテローム性動脈硬化の縮小と関係があるところの工程を含む方法。
【請求項２１】
前記接触が、インビトロで、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を免疫原性断片約１００μｇで脈動させることによって行われる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記接触が、非ヒト動物においてインビボで行われ、該接触は、非ヒト動物に有効量の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分を投与することによって行われる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記接触が、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞エンハンサーと組み合わせて行われる、請求項２０〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
個体におけるアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用の治療薬を確認する方法であって、当該方法は、
ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供するための条件下で接触させる工程であって、該活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞が該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的であるところの工程と、
前記活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を動物モデルに投与し、該動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化の縮小を検出する工程と
を含む方法。
【請求項２５】
個体におけるアテローム性動脈硬化を治療及び／又は予防するシステムであって、当該システムは、個体におけるアテローム性動脈硬化を治療又は予防するための方法において、同時に組み合わせて又は連続的に使用するための、
１種以上の請求項３〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞の２種以上と、
１種以上のアジュバントと、を含んでなり、当該方法が、
請求項３〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ８（＋）Ｔ細胞１種以上を適切なアジュバント１種以上と組み合わせて投与する工程を含む、システム。
【請求項２６】
活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供するシステムであって、当該システムは、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の方法において、同時に組み合わせて又は連続的に使用するための、
１種以上のＣＤ８（＋）Ｔ細胞の少なくとも２種と、
１種以上のＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、
１種以上のＴ細胞エンハンサーと、
を含むシステム。
【請求項２７】
前記１種以上のＡｐｏＢ１００の免疫原性断片が、配列番号１〜配列番号３０２から選択される配列を有するペプチドを含む、請求項２６に記載のシステム。
【請求項２８】
前記１種以上のＴ細胞エンハンサーが、ＩＬ２、ＩＬ１５及びＩＬ２−抗ＩＬ２−抗体複合物の内の１種以上を含む、請求項２６又は２７に記載のシステム。
【請求項２９】
個体におけるアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用の治療薬を確認するシステムであって、当該システムが、請求項２４に記載の方法において、同時に組み合わせて又は連続的に使用するための、
ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の少なくとも２種と、Ｔ細胞エンハンサーと、動物モデルと、Ｔ細胞の活性化を検出する試薬と、アテローム性動脈硬化の縮小を検出する試薬とを含む、
システム。
【請求項３０】
前記動物モデルがマウスである、請求項２９に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願についての相互参照）
本開示は、２００９年１１月１４日に提出された、発明の名称が「アテローム性動脈硬化を治療及び／又は予防するための免疫調節方法及びシステム」という米国仮出願Ｓ／Ｎ６１／２６１，３３１に対する優先権を主張するものであり、その全体が参照することによりここに組み込まれる。
【０００２】
本開示は、アテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を治療又は予防するのに適した免疫調節方法及びシステムに関するものである。
【背景技術】
【０００３】
現在、アテローム性動脈硬化は、動脈壁の脂質に関係のある免疫介在性の慢性炎症性疾患と見なされている。多くの免疫成分は、アテローム発生に関与することが確認されている。臨床前研究では、それら成分を標的にする免疫調節治療がアテローム性動脈硬化を縮小できることを示唆するという期待できる結果が得られている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
ここに提供されるのは、個体における免疫調節応答を誘発するための方法及びシステムである。幾つかの実施態様においては、本開示の方法及びシステムによって誘発される免疫調節応答が、個体におけるアテローム性動脈硬化又はそれに関係した状態に関連している治療効果及び／又は予防効果と関係がある。
【０００５】
第１の態様によれば、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分によって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞が、関連した方法及びシステムと共に記載される。その活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、上記免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。
【０００６】
第２の態様によれば、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分によって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞が、薬剤用として、特には個体におけるアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用として記載される。その活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、上記免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。上記免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分は、個体におけるアテローム性動脈硬化の縮小に関係している。
【０００７】
第３の態様によれば、個体におけるアテローム性動脈硬化を治療及び／又は予防するための方法及びシステムが記載される。上記方法は、個体に、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分によって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞を有効量投与することを含んでおり、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分は、アテローム性動脈硬化の縮小に関係しており、該活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。上記システムは、少なくとも２種の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞、１種以上の適したアジュバントを含む。
【０００８】
第４の態様によれば、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供するための方法及びシステムが記載される。上記方法は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的なＣＤ８（＋）Ｔ細胞を得るための条件下で接触させることを含む。一部の実施態様においては、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞が、アテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を治療及び／又は予防するのに適している。上記免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分は、アテローム性動脈硬化の縮小に関係している。上記システムは、少なくとも２種のＣＤ８（＋）Ｔ細胞、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片、前述の免疫原性断片の免疫原性的に活性がある部分、及びＴ細胞エンハンサーを含む。
【０００９】
第５の態様によれば、ここに記載される少なくとも１種の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を適切な媒体と共に含む組成物が記載される。
【００１０】
第６の態様によれば、個体におけるアテローム性動脈硬化の治療及び／又は予防用の治療薬を確認するための方法及びシステムが記載される。上記方法は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供するための条件下で接触させることを含み、該活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。上記方法は、更に、上記活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を動物モデルに投与することと、該動物モデルにおいてアテローム性動脈硬化の縮小を検出することとを含む。上記システムは、少なくとも２種のＣＤ８（＋）Ｔ細胞、Ｔ細胞エンハンサー、動物モデル、Ｔ細胞の活性化を検出するための試薬、及びアテローム性動脈硬化の縮小を検出するための試薬を含む。
【００１１】
ここに記載されたＴ細胞、組成物、方法及びシステムは、プラークの減少、プラーク成長の減弱及び／又は個体におけるアテローム性動脈硬化に対する治療的若しくは予防的効果が望まれる応用に関連して使用できる。
【００１２】
以下、付随の図面及び説明において、上記開示の一以上の実施態様の詳細を説明する。他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかになる。
【００１３】
付随の図面は、この明細書に組み込まれ、明細書の一部を構成するものであり、本開示の一以上の実施態様を詳細な説明及び実施例のセクションと共に説明し、本開示の本質及び実施を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ｐ２１０免疫化が粥状保護効果を与えることを示す。（Ａ）天然ｐ２１０を用いた免疫化は、ＰＢＳ及びｃＢＳＡ／ミョウバングループと比較した場合、アテローム性大動脈硬化の有意な縮小をもたらした（各グループｎ＝９〜１０、各グループからの典型となる写真を示す）。（Ｂ）ｐ２１０免疫化は、大動脈洞プラークにおけるマクロファージ浸潤及びＤＣの存在を有意に低減した。それぞれは、ＭＯＭＡ−２（各グループｎ＝９〜１０）及びＣＤ１１ｃ（各グループｎ＝７〜１２）によって評価された。
【図２】ＤＣｓに対するｐ２１０免疫化の効果を示す。一次免疫の一週間後、（Ａ）ＣＤ１１ｃ（＋）又は（Ｂ）ＣＤｃ（＋）ＣＤ８６（＋）細胞は、免疫化部位にて、ｃＢＳＡ／ミョウバングループと比べてｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループの場合に有意に減少した。各グループｎ＝１０。（Ｃ）三次免疫の一週間後、ｐ２１０免疫化マウスは、ｃＢＳＡ／ミョウバングループと比べて、リンパ節中のＣＤ１１ｃ（＋）ＣＤ８６（＋）細胞を低減させた（各グループｎ＝５；ＡＮＯＶＡと、その後の多群比較）。
【図３】ｐ２１０免疫化の前後でのｐ２１０に対するＩｇＭ又はＩｇＧ力価を示す。（Ａ）ｐ２１０ＩｇＧ力価は、免疫化の前が低く、安楽死時点では、ＰＢＳグループは低いままであったが、ｃＢＳＡ／ミョウバン及びｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループにおいては有意に増加し、ｃＢＳＡ／ミョウバングループが最も高い力価であった。（Ｂ）ｐ２１０ＩｇＭ力価は、免疫化の前が低く、安楽死時点で有意に増加し、マウスの３グループで差異はなかった。６〜７週間の時点でｎ＝５、２５週間の時点でｎ＝９である。
【図４】インビボでの免疫化後の活性化したリンパ球集団を示す。（Ａ）リンパ節におけるＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞集団は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループと比較して、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループが有意に高かった；（Ｂ）リンパ節におけるＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞は、３つのグループの間で差異がなかった。３つのグループの中では、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループが、脾臓ＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ−１０（＋）Ｔ−細胞の集団が有意に大きかったものの（Ｃ）、脾臓ＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ１２（＋）Ｔ−細胞は、３つのグループの中で差異がなかった（Ｄ）。脾臓ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ−１０（＋）Ｔ−細胞集団は、ｃＢＳＡ／ミョウバングループにおいて有意に増加したが、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバン免疫化によって有意に減弱され（Ｅ）、そして、（Ｆ）脾臓ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ１２（＋）Ｔ−細胞は、３つのグループにおいて差異がなかった。（Ａ）及び（Ｂ）については、各グループｎ＝９〜１０で、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）については、各グループｎ＝５である。
【図５】ｐ２１０免疫化ドナーからＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の養子移植は、ｐ２１０免疫化の粥状保護効果を再現したが、Ｂ−細胞又はＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞の移植によってはなかったことを示す。（Ａ）ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバン免疫化ドナーからＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の受容マウスは、他の２つのグループからＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の受容マウスと比べて有意に小さいアテローム性動脈硬化症を発現した（各グループｎ＝９〜１０）。（Ｂ）ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバンドナーからＢ−細胞の養子移植は、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループからＢ−細胞の受容マウスと比較して、アテローム性動脈硬化を縮小しなかった（各グループｎ＝９）。異なる２つの用量（Ｃ．１×１０５細胞／マウス又はＤ．３×１０５細胞／マウス）によるＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞の受容マウス（各グループｎ＝９〜１３）は、ｐ２１０免疫化の粥状縮小効果を再現できなかった。
【図６】インビトロでの樹枝状細胞に対するｐ２１０活性化マウスからのＣＤ８（＋）Ｔ細胞の細胞溶解活性の増加を示す。ｐ２１０免疫化マウスからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞は、ＰＢＳ又はＢＳＡ／ミョウバングループからのものと比較して細胞溶解活性が有意に高かった。各グループにおいて５匹のマウスから毎回プールされたＣＤ８（＋）Ｔ−細胞を用いて、実験を４回繰り返し行った。各グループ全体で合計１１個のデータ点を用い、二重反復試験及び三重反復試験を毎回行った。
【図７】ｐ２１０免疫化マウスからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞がＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループからのものと比べて高いレベルのグランザイムＢを含有する一方で、パーフォリンレベルに違いがないことを示す。
【図８】ｐ２１０免疫化後のＫＬＨ又はＴＮＰに対するＩｇＧ力価を示す。（Ａ）ｐ２１０による事前の免疫化は、ＩｇＧ抗体力価によって評価されるように、マウスがＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバンを受け取った場合と比較して、その後のＴ−細胞依存性（ＫＬＨ、各グループｎ＝３〜６）又は（Ｂ）Ｔ−細胞非依存性（ＴＮＰ、各グループｎ＝４〜５）免疫化の有効性に影響しなかった。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
個体におけるアテローム性動脈硬化又はそれに関係した状態の治療及び／又は予防に適しているＴ細胞並びに関連した方法及びシステムをここに説明する。
【００１６】
ここに使用される「Ｔ細胞」の語は、リンパ球として知られる白血球細胞のグループに属するＴリンパ球を示し、体液性又は細胞媒介性の免疫に関与する。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）等、その細胞表面上の特異的マーカーの存在によって、Ｂ細胞及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）等の他のリンパ球の種類と区別できる。Ｔ細胞を確認する追加のマーカーには、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８の他、場合により当業者が理解し得るＴ細胞の状態及び／又は機能性と関係した追加のマーカーが含まれる。
【００１７】
ここに使用される「治療する」又は「治療」の語は、ある状態への医療的ケアの一部であるか又はある状態を医学的に若しくは外科的に扱うあらゆる活動を示す。ここに使用される「予防する」又は「予防」の語は、個体におけるある状態からの死亡率又は罹患率の重荷を減少させるあらゆる活動を示す。これは、一次、二次及び三次の予防レベルで起こり、ここでは、ａ）一次予防が、疾患の発生を回避し；ｂ）二次予防活動が、早期の疾患治療を目的としており、それにより、疾患の進行及び症状の発生を防ぐための介入の機会を増加させ；ｃ）三次予防が、既に確立している疾患の負の影響を機能の回復及び疾患に関連した合併症の減少によって低下させる。
【００１８】
ここに使用される「アテローム性動脈硬化」の語は、コレステロール等の脂肪質の蓄積の結果として動脈壁が厚くなる状態を示す。それは、大部分が酸化脂質、マクロファージ、活性化リンパ球の蓄積によるか又は低密度リポタンパク質（コレステロール及びトリグリセリドを運ぶ血漿タンパク質）によって促進された、動脈血管に典型的に影響する症候群である。それは、一般に、動脈の硬化と称される。アテローム性動脈硬化は、現在、動脈壁の脂質に関連した免疫介在性の慢性炎症性疾患と見なされている。多くの免疫成分は、アテローム発生に関与することが確認されており、臨床前研究では、それら成分を標的にする免疫調節治療がアテローム性動脈硬化を縮小できることを示唆するという期待できる結果が得られている。その戦略の１つに、ａｐｏＢ−１００に関連したペプチドを免疫原として使用するものがあり、幾つかの候補ペプチドには、かかる用途が確認されている（非特許文献１及び２参照）。
【００１９】
ここに使用される「状態」の語は、通常、身体的、精神的、場合により社会的に完全な健康状態と関係している個体の身体状況（全体又はその器官の１つ若しくは複数）に従わない個体の体の身体状況（全体又はその器官の１つ若しくは複数）を示す。ここに記載される状態には、限定されるものではないが、障害及び疾患が挙げられ、ここで、「障害」の語は、体又はその器官のいずれかの機能的異常に関係している生存個体の状態を示し、「疾患」の語は、体又はその器官のいずれかの正常な機能を害する生存個体の状態を示し、典型的には兆候及び症状を見分けることにより明らかになる。状態の例としては、限定されるものではないが、傷害、身体障害、障害（精神的な及び身体的な障害を含む）、症候群、感染、個体の逸脱行動、並びに個体の体又はその器官の構造及び機能の異型変化が挙げられる。
【００２０】
２つの事項に関してここに使用される「に関係した」との表現は、第一の事項の出現が第二の事項の出現を伴うような２つの事項間の関係を示し、限定されるものではないが、因果関係及び兆候／症状−疾患関係が含まれる。
【００２１】
ここに使用される「個体」の語は、高等動物等の単一生物有機体、特には哺乳動物等の脊椎動物、特には人間を示す。
【００２２】
一実施態様においては、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片によって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞が記載され、該活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、該免疫原性断片に対して特異的である。
【００２３】
「ＣＤ８（＋）Ｔ細胞」の語は、その表面でＣＤ８糖タンパク質を発現するＴ細胞を示し、ここで、ＣＤ８（表面抗原分類８）糖タンパク質は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体として機能する膜貫通糖タンパク質である。ＴＣＲと同様に、ＣＤ８は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合するが、分類ＩのＭＨＣタンパク質に対して特異的である。ＣＤ８Ｔ細胞の例としては、細胞傷害性記憶ＣＤ８Ｔ細胞、制御性ＣＤ８Ｔ細胞、細胞傷害性エフェクターＣＤ８Ｔ−細胞、及び当業者によって識別可能な追加の細胞が含まれる。ＣＤ８タンパク質の２つのイソ型、アルファ及びベータが確認されており、それぞれは、異なる遺伝子によってコードされている。ヒトにおいて、両遺伝子は、位置２ｐ１２における染色体２に位置する。
【００２４】
特に、ここに記載されるＴ細胞、組成物、方法及びシステムの一部の実施態様において、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、ＡｐｏＢ１００の１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分を用いて活性化できる。
【００２５】
ここに使用される「活性化された」及び「活性化」の語は、Ｔ細胞が、特異抗原を提示する抗原提示細胞と、ある時間の間、免疫系内で予め定められた免疫学的役割（例えば細胞傷害性）を有するＴ細胞をもたらす条件下で相互作用する課程を示す。「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）の語は、その表面上に主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）との抗原複合体を表示する細胞を示す。Ｔ−細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこの複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、先天及び後天免疫を結び付ける際に重要な役割を果たすことが知られている樹枝状細胞（ＤＣ）（非特許文献３及び４参照）が挙げられ、両方の免疫応答は、アテローム発生に関与する（非特許文献５及び６参照）。
【００２６】
Ｔ細胞、特にはＣＤ８（＋）Ｔ細胞の検出は、ＣＤ８等のマーカー単独での又はＴＣＲ及び当業者によって特定可能な追加のマーカーと組み合わせた検出によって実行できる。活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の検出は、表面マーカーの検出に適した方法及び技術を用いたＴ細胞マーカー並びにＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６２及び当業者によって特定可能な追加のマーカー等の他のマーカーの検出によって実行できる。
【００２７】
ここに使用される「検出する」又は「検出」の語は、限定されるものではないが、サンプル、反応混合物、分子複合体及び基質を含む限られた空間部分における分子又は細胞の生存、存在又は実態の決定を示す。ここに使用される「検出する」又は「検出」は、限定されるものではないが、他の化合物と相互作用、特には結合する能力、他の化合物を活性化する能力、及び本開示を読んだ際に当業者によって特定可能な追加の特性を含む標的の化学的及び／又は生物学的特性の決定を含むことができる。上記検出は、定量的でも定性的でもよい。検出が、標的又は信号の量の測定について言及し、関係し又は含む場合、それは「定量的」であり（定量化ともいう）、限定されるものではないが、標的又は信号の量又は割合を決定するように設計されたあらゆる分析が含まれる。検出が、標的又は信号の質又は種類を他の標的又は信号に対する相対存在量の観点から同定することについて言及し、関係し又は含む場合、それは「定性的」であり、数量化されない。
【００２８】
Ｔ細胞マーカーを検出するのに適した技術の例としては、適切なモノクローナル若しくはポリクローナル抗体又は検出を可能にする適当な分子で標識された抗原特異的ＨＬＡ若しくはＭＨＣ五量体若しくは六量体の使用、並びに当業者によって特定可能な追加の方法及び技術が含まれる。アプローチの例では、Ｔ細胞マーカーが、実施例セクションに記載されるように、フローサイトメトリー分析によって確認される。
【００２９】
本開示に従う活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、ＡｐｏＢ１００の１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分によって活性化され、典型的には、その活性化に使用された免疫原性断片又は免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。
【００３０】
免疫応答に関してここに使用される「特異的な」、「特異的に」又は「特異性」との表現は、免疫学的活性をある抗原に向ける免疫学的薬剤の能力であって、一緒に存在し得る他の抗原に対しては免疫学的活性が実質的に低いか又は無いものを指す。結果として、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、この点で、それらを活性化するために使用された免疫原性断片又は活性部分に対して特異的に活性化され、他の抗原については活性化されない。
【００３１】
上記免疫原性断片に対して特異的なＣＤ８Ｔ細胞を確認するのに使用できる抗原特性の例には、実施例セクションにおいて例示されたような方法及び技術を用いて検出可能な体液性及び／又は細胞応答、並びに当業者によって特定可能な他の方法及び技術が含まれる。抗原特性を検出するための方法及びシステムの例には、本開示の意味において、ＥＬＩＳＡ、特には血清ＥＬＩＳＡ、及び実施例セクションにおいて例示された追加の方法が含まれる。Ｔ細胞マーカーを検出するのに適した技術の例には、適切なモノクローナル若しくはポリクローナル抗体又は検出を可能にする適当な分子で標識された抗原特異的ＨＬＡ若しくはＭＨＣ五量体若しくは六量体の使用、並びに当業者によって特定可能な追加の方法及び技術が含まれる。アプローチの例では、Ｔ細胞マーカーが、実施例セクションに記載されるように、フローサイトメトリー分析によって確認される。
【００３２】
ここに使用される「免疫原性断片」又は「抗原断片」の語は、抗原等の、免疫応答を発生することが可能な任意の長さのポリペプチドの一部を示す。抗原は、免疫系によって認識される分子である。従って、ＡｐｏＢ１００の抗原断片は、抗原特性を提示するａｐｏＢ−１００の一部である。
【００３３】
本開示の意味における「ＡｐｏＢ１００の断片」の語は、ＡｐｏＢ１００からの任意の長さの断片だけでなく、遺伝子組み換えによって生成された又は化学的に合成されたペプチドでもあって、ＡｐｏＢ１００からの配列を含むものも含む。本開示の意味で「免疫原性断片」の語は、更に、変異断片（残基が置換、追加又は除去された断片を含む）、酸化誘導体、及び／又はＭＤＡ若しくは銅で処置したペプチド等のあらゆる断片の誘導体をも含み、それらは、元の断片の検出可能な抗原特性（例えば、特異的体液性及び／又は細胞応答）を維持する。
【００３４】
第一ペプチド（例えば免疫原性断片）に関してここに使用される「誘導体」の語は、第一ペプチドと構造的に関連しており、第一ペプチドの機能的特性を維持しつつ第一ペプチドに存在しない特徴を導入する修飾によって第一ペプチドから誘導できる第二ペプチドを示す。従って、免疫原性断片又はその任意部分（例えばそのエピトープ）の誘導ペプチドは、通常、アミノ酸配列の修飾によって元の免疫原性断片又はその部分と異なるが、該アミノ酸配列は、元のペプチド又はその部分に存在しない追加の機能と関係していてもよいし、関係していなくてもよい。しかしながら、免疫原性断片又はその任意部分の誘導ペプチドは、免疫原性断片又はその部分に関連してここに記載される１種以上の免疫原性の活性を保有する。抗原特性は、免疫原性断片のために既に記載されているような方法及びシステム、並びに当業者によって特定可能な追加の方法及びシステムを用いて検証できる。典型的には、免疫原性断片の誘導体は、該免疫原性断片のエピトープを少なくとも１種含む。
【００３５】
本開示の意味における「免疫原性の活性がある部分」の語は、特異的な免疫応答を誘発できる基準抗原のあらゆる部分を示す。免疫原性の活性がある部分の例は、免疫原性断片内の５個以上の残基によって典型的に形成されるエピトープである。一部の実施態様において、１種以上の断片内のエピトープは、重複することができる。
【００３６】
免疫原性断片は、親和性又はエピトープタグとの融合、遊離の又は担体タンパク質に結合したオリゴペプチドの化学合成、或いはＡｐｏＢ−１００ペプチドを発現するための当該技術分野において知られているあらゆる他の方法等の、組み換え技術によって発現できる。
【００３７】
ＡｐｏＢ１００の断片の例は、実施例セクションにおいて更に詳細に説明される配列番号１〜配列番号３０２のような配列表に記載された配列の一つを含むペプチドである。本開示の意味における免疫原性断片を確認するのに適した方法及びシステムは、ＷＯ０２／０８０９５４に記載されており、参照することによってここに組み込まれる。追加の方法は、実施例セクションにおいて例示される（例えば、例１参照）。
【００３８】
ここに使用される「タンパク質」又は「ポリペプチド」又は「ペプチド」の語は、２つ以上のアミノ酸モノマー及び／又はその類似体からなる有機ポリマーを示す。「ポリペプチド」の語には、全長タンパク質又はペプチド並びにその類似体及び断片を含むあらゆる長さのアミノ酸ポリマーが含まれる。３つ以上のアミノ酸のペプチドは、オリゴペプチドとも称される。ここに使用されるように、「アミノ酸」、「アミノ酸モノマー」又は「アミノ酸残基」の語は、非天然の側鎖を持つ合成アミノ酸を含み、そして、Ｄ及びＬ光学異性体の両方を含む２０種のアミノ酸のいずれかを指す。「アミノ酸類似体」の語は、１つ以上の個別の原子が異なる原子、同位体と置換されたり又は異なる官能基と置換されたりするアミノ酸を指すが、別の面では、その天然アミノ酸類似体と同一である。
【００３９】
一実施態様において、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片は、アテローム性動脈硬化の縮小に関係している。特に、一部の実施態様において、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片は、個体又は動物モデルにおけるアテローム性動脈硬化の縮小に関係した免疫応答を生じる免疫原性断片である。これら実施態様の一部においては、アテローム性動脈硬化の縮小割合が、少なくとも２０％、又は少なくとも３０％〜５０％又は４０％〜８０％である。実施例セクションについて言及すると、ここでは、本開示の実施態様が、約５７．６％のアテローム性動脈硬化の縮小と関係した免疫原性断片ｐ２１０に関して例示されている（例２参照）。
【００４０】
一部の実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した免疫原性断片は、少なくとも１種のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ１（配列番号１）、ｐ２（配列番号２）、ｐ１０（配列番号１０）、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ２５（配列番号２５）、ｐ３０〜ｐ３４（配列番号３０〜３４）、ｐ４０（配列番号４０）、ｐ４０（配列番号４０）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ６８（配列番号６８）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ９４（配列番号９４）、ｐ９９（配列番号９９）、ｐ１００（配列番号１００）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１０３（配列番号１０３）、ｐ１０５（配列番号１０５）、ｐ１０７（配列番号１０７）、ｐ１１１（配列番号１１１）、ｐ１２９（配列番号１２９）、ｐ１４３（配列番号１４３）、ｐ１４８（配列番号１４８）、ｐ１４９（配列番号１４９）、ｐ１５４（配列番号１５４）、ｐ１６２（配列番号１６２）、ｐ１６９（配列番号１６９）、ｐ１７７（配列番号１７７）、ｐ１９９（配列番号１９９）、ｐ２１０（配列番号２１０）、ｐ２２２（配列番号２２２）、ｐ２３６（配列番号２３６）、ｐ２５２（配列番号２５２）又はｐ３０１（配列番号３０１）を含む。
【００４１】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、１種以上のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ２（配列番号２）、ｐ１１（配列番号１１）、ｐ３２（配列番号３２）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１４８（配列番号１４８）、ｐ１６２（配列番号１６２）又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。
【００４２】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、２種のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ１４３（配列番号１４３）又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、３種のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ１１（配列番号１１）、ｐ２５（配列番号２５）又はｐ７４（配列番号７４）の内の１種を含む。一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、５種のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ９９（配列番号９９）、ｐ１００（配列番号１００）、ｐ１０２（配列番号１０２）、ｐ１０３（配列番号１０３）及びｐ１０５（配列番号１０５）の内の１種を含む。
【００４３】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、１種以上のペプチドを含み、該ペプチドはそれぞれｐ２（配列番号２）、ｐ４５（配列番号４５）、ｐ７４（配列番号７４）、ｐ１０２（配列番号１０２）又はｐ２１０（配列番号２１０）を含む。
【００４４】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００のアミノ酸１６〜３５（ｐ２；配列番号２）を含むペプチドを含む。
【００４５】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００のアミノ酸６６１〜６８０（ｐ４５；配列番号４５）を含むペプチドを含む。
【００４６】
一実施態様において、アテローム性動脈硬化の縮小に関係した１種以上の免疫原性断片は、ヒトａｐｏＢ−１００のアミノ酸３１３６〜３１５５（ｐ２１０；配列番号２１０）を含むペプチドを含む。
【００４７】
上記ペプチドのアテローム性動脈硬化の縮小に対する関係を示す典型的なデータは、国際出願ＷＯ０２／０８０９５４に示されており、全体が参照することによりここに組み込まれる（特に表１、表２、表Ａ及び表Ｂ参照）。特に、それらペプチド又はそれらの組み合わせの一部について、６４．６％（ｐ１４３及びｐ２１０）、５９．６％（ｐ１１、ｐ２５及びｐ７４）、５６．８％（ｐ１２９、ｐ１４８及びｐ１６７）、ｐ６７．７（ｐ２）、５７．９％（ｐ２１０）、５５．２％（ｐ３０１）、４７．４％（ｐ４５）、３１％（ｐ１）の縮小百分率が検出された（全体が参照することによりここに組み込まれるＷＯ／０２０８０９５４、特には表Ｂ参照）。
【００４８】
一部の実施態様において、ここに記載される適切な活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、該免疫原性断片に対して特異的なＣＤ８（＋）Ｔ細胞を得るための条件下で、接触させることにより活性化できる。
【００４９】
一実施態様において、上記接触は、インビボで、個体に有効量の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分を投与することによって実行できる。一部の実施態様において、上記有効量は、動物モデルにおいて決定できる。一部の実施態様においては、上記投与の後に、当業者によって特定可能な方法に従って、活性化Ｔ細胞を個体（例えば血液又は他の液体サンプル）から単離する。
【００５０】
インビボでＴ細胞を活性化させるのに有効な免疫原性断片の量は、活性化が行われる個体によって決まることになり、当業者によって特定可能である。例えば、一実施態様において、Ｔ細胞活性化は、約１〜約１００μｇの免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分の有効量で実行できる。一実施態様において、Ｔ細胞活性化は、約１〜約１００ｍｇの免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分の有効量で実行できる。追加の有効量は、活性化が行われる個体及び望まれる活性化を考慮して、当業者によって特定可能である。
【００５１】
一実施態様において、上記接触は、インビトロで、Ｔ細胞を適当量の免疫原性断片又はその活性がある部分によって脈動させる等の適切な技術を用いて実行できる（例えば、全体が参照することによりここに組み込まれる（４１）及び（４２）参照）。
【００５２】
インビトロでＴ細胞を活性化させるのに有効な免疫原性断片の量は、当業者によって特定可能である。例えば、一実施態様において、Ｔ細胞活性化は、約１〜約１００μｇの免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分の有効量で実行できる。
【００５３】
一実施態様において、上記接触は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞をＣＤ８（＋）Ｔ細胞活性化のエンハンサーと共に接触させることによって実行できる。
【００５４】
「エンハンサー」及び「増強する」の語は、それがＣＤ８Ｔ細胞に関係した分子に関連するため、免疫系の細胞の活性化を促進することによって免疫応答を変更する分子の能力を指す。適当なエンハンサーの選択は、免疫応答の活性化の制御を可能にすることができる。エンハンサーの例には、ＩＬ−２等のサイトカインが含まれる。ここに使用される「サイトカイン」の語は、免疫調節剤として作用し、当業者が特定可能であるようなインターロイキン及びインターフェロン等のタンパク質を含む細胞シグナル伝達分子を指す。適切なサイトカインの選択は、適当な条件下で、体液性又は細胞免疫応答の選択的誘導をもたらすことができる。
【００５５】
一実施態様において、エンハンサーは、インターロイキン２（ＩＬ２）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、ＴＧＦ−ベータ（ＴＧＦ−β）、ＩＬ２−抗ＩＬ−２抗体複合体及び／又は本開示を読んだ際に当業者によって特定可能な追加のエンハンサーとすることができる。非特許文献３８、非特許文献３９及び非特許文献４０について言及すると、それぞれはその全体が参照することによりここに組み込まれており、Ｔ細胞活性化に関係したエンハンサーの使用の例を記載している。
【００５６】
特に、一部の実施態様において、上記増強は、個体における樹枝状細胞によってＣＤ８６の発現及び／又はＩＬ１２の分泌を低下させることにより行われる。
【００５７】
幾つかの実施態様において、個体におけるアテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態の治療又は予防は、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的な活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を個体中に増加させることによって実行できる。
【００５８】
特に、幾つかの実施態様において、ｐ２１０特異的ＣＤ８（＋）又はここに記載される他の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の増加は、アテローム性動脈硬化巣における樹枝状細胞の減少と関連する。より具体的には、この特異的ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の増加が、配列ＫＴＴＫＱ  ＳＦＤＬＳ  ＶＫＡＱＹ  ＫＫＮＫＨ（配列番号２１０）を含むペプチドｐ２１０又はここに記載された個体におけるアテローム性動脈硬化の縮小に関係した他の免疫原性断片の有効量を個体に投与することによって実行できる。
【００５９】
一実施態様において、上記増加は、有効量の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を個体に投与することによって実行できる。
【００６０】
一実施態様において、上記有効量は、約５００，０００〜２，０００，０００細胞の間に含まれることが期待される。一実施態様において、上記有効量は、約７５０，０００〜約１，５００，０００細胞の間に含まれることが期待される。一実施態様において、上記有効量は、約１，０００，０００細胞であることが期待される。
【００６１】
特に、一実施態様において、約１，０００，０００細胞の投与は、アテローム性動脈硬化の治療及び予防の両方をもたらすことが期待される。投与は、処置されるべき個体の状態及び望ましい効果に基づき特定される用量及び予定に従って行われることが期待される。例えば、予防を対象とする投与では、有効量の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の投与が、個体の状態に基づいた所望の免疫化を得るため、ここに記載される活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の単回投与又は複数回投与（例えば３回以上の投与、特には６回以下の投与）を間隔をおいて行うことによって実行できる。特に、複数回投与は、持続効果が望まれる場合にいつでも実行できる。
【００６２】
ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞の投与は、当業者によって特定可能な個体を免疫化するための方法に従って実行できる。一実施態様において、上記投与は、非経口投与によって実行できる。非経口投与は、消化管以外の経路によって物質が与えられる全身投与経路であり、限定されるものではないが、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、腹腔内投与、及び膀胱内注入が含まれる。特に、一実施態様において、上記投与は、静脈内投与によって実行できる。
【００６３】
一実施態様において、投与は、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、１回で、典型的には静脈内経路を通して、免疫効果の所望の持続時間に応じて１回又は複数回で、投与することによって実行できる。
【００６４】
一実施態様において、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の投与は、ＡｐｏＢ１００の１種以上の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分を単独で組み合わせて又はこれらのいずれかをＩＬ２等のＣＤ８（＋）Ｔ細胞エンハンサーと共に組み合わせて行われる場合、特に有効であることが期待される。特に、一部の実施態様において、上記投与はまた、ここに記載される活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞と、ここに記載されるＡｐｏＢ１００の免疫原性断片のいずれかとの任意の組み合わせを、場合によりここに記載されるエンハンサーと組み合わせて投与することによっても実行できる。
【００６５】
一実施態様において、個体中の活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を増加させると、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的な活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、プラーク、樹枝状細胞含量及び／又はマクロファージ含量の減少をもたらすことが期待される。指導目的のためにだけ提供され、限定されることを目的としない考えられる機構によれば、動脈壁中での危険信号（酸化ＬＤＬ、熱ショックタンパク質等）は、ＤＣ又は他のＡＰＣを活性化することができ、それらは、アテローム性動脈硬化巣の成長又は不安定化に導く免疫介在性の炎症カスケード及びメディエーターのその後の活性化によってエフェクターＴ−細胞を誘発する（非特許文献７及び８参照）。動脈壁中へのかかるＤＣ補充の減少は、アテローム性動脈硬化の減少と関係付けることができる。
【００６６】
また、一部の実施態様において、上記増強は、寛容原性樹枝状細胞を発生させるように個体における樹枝状細胞の表現型を調節することによって行われる。加えて、幾つかの実施態様において、アテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を提示する個体は、個体におけるＴ制御性細胞集団を増強させることによって治療できる。
【００６７】
一実施態様において、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、アテローム性動脈硬化又はそれに関係した状態の治療及び／又は予防のための治療薬を確認する方法において使用できる。上記方法は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分と、ある時間の間、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を提供するための条件下で、接触させることを含み、該活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、該免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的である。上記方法は、更に、活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を動物モデルに投与することと、該動物モデル中でのアテローム性動脈硬化の縮小を検出することとを含む。
【００６８】
ここに使用される「動物モデル」の語は、ヒトの疾患の調査及び研究期間中に、その過程中にあるヒトが実際に害を受けるという副次的なリスクもなく、ヒトの疾患を更に理解する目的で使用される非ヒトの生存動物を示す。選択される動物は、通常、必要に応じて人間生理学と似た方法で疾患又はその治療と反応させるために、ヒトに対する決定された分類学的同等性を満たすことになる。ヒトの疾患についての多くの薬剤、治療及び治癒は、動物モデルの使用によって開発されてきた。また、開発過程の調査及び研究において特異的な分類群を表す動物モデルは、モデル生物と称される。
【００６９】
一実施態様において、動物モデル中でのアテローム性動脈硬化の縮小の検出は、実施例セクションで説明されるような免疫組織化学技術及び組織形態計測技術によって実行できる。ヒト中でのアテローム性動脈硬化の縮小の検出は、頸動脈内膜厚さの超音波測定、頸動脈アテローム性動脈硬化のＭＲＩスキャン、冠状動脈又は末梢動脈循環のＣＴ血管造影等の画像技術によって実行できる。
【００７０】
免疫原性断片及び／又はその免疫原性の活性がある部分並びにそれによって活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、動物モデル中での投与を受けてアテローム性動脈硬化の縮小に関係したものであり、アテローム性動脈硬化の治療又は予防用の治療薬として選択できる。特に、一部の実施態様においては、免疫原性断片若しくはその免疫原性部分又はそれにより活性化されたＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、少なくとも２０％のアテローム性動脈硬化の縮小に関係があり、治療薬として選択できる。一実施態様において、縮小割合は、約３０％〜５０％又は約４０％〜８０％になることがある。
【００７１】
ここに開示されるように、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞、免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分、及びエンハンサーは、アテローム性動脈硬化又はそれに関係した状態を治療及び／又は予防するためのシステムの一部として、或いは、アテローム性動脈硬化又はそれに関係した状態の治療及び／又は予防における治療薬を確認するためのシステムの一部として提供できる。
【００７２】
一部の実施態様において、上記システムは、個体中で活性化したＣＤ８（＋）Ｔ細胞を増加させるのに適した１種以上の薬剤の内の２種以上及び／又は増加したＣＤ８（＋）Ｔ細胞を個体において検出するのに適した１種以上の薬剤を含む。
【００７３】
一部の実施態様において、上記システムは、ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片に対して特異的な活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を個体において増加させるのに適した１種以上の薬剤の内の２種以上と、減少したプラーク、樹枝状細胞含量及び／又はマクロファージ含量を個体において検出するのに適した１種以上の薬剤を含む。
【００７４】
上記システムは、複数の部品からなるキットの形態において提供できる。複数の部品からなるキットにおいて、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞、及びここに記載される方法を行うための他の試薬は、独立して、キット中に含まれることができる。ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、１種以上の組成物中に含まれてもよく、ここに記載される各ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、適切な媒体と一緒に組成物中にあってもよい。
【００７５】
追加の成分としては、単独又は組み合わせでのここに記載される免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分、エンハンサー（例えば、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ２−抗ＩＬ２抗体複合物）、アジュバント（例えば、アルミニウム塩、一般にはアルミニウムアジュバント）、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞を検出することのできる試薬、標識分子、特には標識抗体、標識、微小流体チップ、参照基準等のプラークの減少を検出することのできる試薬、及び本開示を読んだ際に当業者によって特定可能な追加の成分の内のいずれかを含むことができる。
【００７６】
複合体又は分子の成分としてここに使用される「標識」及び「標識分子」の語は、検出可能な分子を指し、限定されるものではないが、放射性同位体、フルオロフォア、化学発光色素、発色団、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素阻害剤、色素、金属イオン、ナノ粒子、金属ゾル、リガンド（ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又はハプテン等）等が挙げられる。「フルオロフォア」の語は、検出可能な画像において蛍光を示すことが可能な物質又はその一部を指す。結果として、ここに使用される「標識信号」との表現は、標識の検出を可能にする標識から放出される信号を示し、限定されるものではないが、放射線、蛍光、化学発光、酵素反応の結果の化合物の生成等が挙げられる。
【００７７】
一実施態様において、上記システムは、（例えば、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を生成するために）個体においてＣＤ８（＋）Ｔ細胞を増加させることに向けられており、そして、上記システムは、個体において活性化したＣＤ８（＋）Ｔ細胞を増加させるのに適した１種以上の薬剤の内の２種以上及び／又は個体において増加したＣＤ８（＋）Ｔ細胞を検出するのに適した１種以上の薬剤を含む。
【００７８】
一実施態様において、上記システムは、プラーク、樹枝状細胞含量及び／又はマクロファージ含量を（例えば治療のための個体中で又は生物学的調査のための動物モデル中で）減少させることに向けられており、そして、上記システムは、個体においてＡｐｏＢ１００の免疫原性断片又はその免疫原性の活性がある部分に対して特異的な活性化ＣＤ８（＋）Ｔ細胞を増加させるのに適した１種以上の薬剤の内の２種以上並びに個体においてプラーク、樹枝状細胞含量及び／又はマクロファージ含量の減少を検出するのに適した１種以上の薬剤を含む。
【００７９】
一部の実施態様において、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞の検出は、蛍光に基づく読み出しを経由して行うことができ、ここで、その標識抗体は、フルオロフォアで標識されており、それは、包括的ではないものの、小分子色素、タンパク質発色団、量子ドット、及び金ナノ粒子を含む。追加の技術は、本開示を読んだ際に当業者によって特定可能であり、更に詳細には論じない。
【００８０】
特に、上記キットの要素は、ここに記載される方法を行うため、適当な指示及び他の必要な試薬を備えることができる。上記キットは、通常、別個の容器に組成物を含有することになる。指示、例えば書面又は音声による指示は、分析を行うため、テープ又はＣＤ−ＲＯＭ等の紙又は電子支持体上にあり、通常、キット中に含まれることになる。また、上記キットは、使用される特定の方法に応じて、他の包装試薬及び材料（例えば、洗浄緩衝剤等）を含有することができる。
【００８１】
一部の実施態様において、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、適切な媒体と共に組成物中に含まれることができる。
【００８２】
ここに使用される「媒体」の語は、活性成分として組成物中に含まれるＴ細胞用の溶媒、キャリヤー、結合剤又は希釈剤として通常作用する各種媒体のいずれかを示す。
【００８３】
上記組成物が個体に投与される一部の実施態様において、該組成物は、抗炎症性医薬組成物になることができ、Ｔ細胞及び薬学的に許容できる媒体を含む。
【００８４】
特に、一部の実施態様においては、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞の少なくとも１種を、適合性のある薬学的に許容できる媒体の１種以上と組み合わせて、特には薬学的に許容できる希釈剤又は賦形剤と組み合わせて含有する医薬組成物が開示される。これら医薬組成物において、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、個体のある状態の治療又は予防用の活性成分として投与できる。
【００８５】
ここに使用される「賦形剤」の語は、薬剤の活性成分用のキャリヤーとして使用される不活性物質を示す。ここに開示される医薬組成物に適した賦形剤には、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞を吸収する個体の体の能力を増強するあらゆる物質が含まれる。また、適切な賦形剤には、簡便で正確な用量を可能にするためにここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞を含む製剤を大きくするのに使用できるあらゆる物質も含まれる。その単一用量での使用に加えて、賦形剤は、製造過程においても使用でき、ここに記載されるＣＤ８（＋）Ｔ細胞の取り扱いの助けとなる。投与経路及び薬剤の形態に応じて、異なる賦形剤を使用することができる。賦形剤の例としては、限定されるものではないが、付着防止剤、結合剤、被覆剤、崩壊剤、充填剤、香味料（甘味料等）及び着色剤、流動促進剤、潤滑剤、防腐剤、吸着剤が挙げられる。
【００８６】
ここに使用される「希釈剤」の語は、組成物の活性成分を希釈するか又は運ぶために供される希釈剤を示す。適切な希釈剤には、医薬製剤の粘度を低減できるあらゆる物質が含まれる。
【００８７】
一実施態様において、ここに記載される組成物は、更に、アジュバントを含むことができる。ここに記載される「アジュバント」の語は、免疫系を刺激でき、ワクチンに対する応答を増大でき、それ自体には特異的な抗原効果がない薬剤を示す。「アジュバント」の単語は、ラテン語のａｄｊｕｖａｒｅに由来し、役立つこと又は助けることを意味する。典型的に、免疫学的アジュバントは、特異的なワクチン抗原と組み合わせて使用する場合に抗原特異的免疫応答を加速、延長又は増強させるように作用するあらゆる物質と定義される。
【００８８】
本開示の更なる利点及び特徴は、説明の目的のみのために実験セクションを参照し、以下に示す詳細な開示からより明らかになる。
【実施例】
【００８９】
ここに記載される方法及びシステムを以下に示す例において更に説明する。該例は、説明のために提供され、限定することを目的としていない。
【００９０】
具体的に、以下に示す例は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の例と、関連した活性化の方法及びアテローム性動脈硬化を治療又は予防するための使用を説明する。より詳細には、免疫原性断片ｐ２１０を用いて行われたＣＤ８（＋）Ｔ細胞の活性化、並びにそのようにして得られたＣＤ８（＋）Ｔ細胞のマウスモデルにおけるアテローム性動脈硬化を治療及び予防するための使用を示す。
【００９１】
当業者は、本開示の実施態様に従いインビボ又はインビトロで皮下に投与された又は他の投与経路を用いた、追加の免疫原性断片に、本セクションにおいて詳細に説明される特徴を適合させるため、適用性及び必要な変更を正しく理解するであろう。
【００９２】
他に示されていない限り、以下に示す材料及び方法は、以下に報告される例に従ったものである。
【００９３】
免疫化のためのペプチドの選択及びその調製
ヒトａｐｏＢ−１００の確立及び選別は報告されている（８）。出願人のパイロット実験及び事前報告（非特許文献９及び１０参照）に基づき、出願人は、候補免疫原としてペプチド２１０（ｐ２１０、ＫＴＴＫＱ  ＳＦＤＬＳ  ＶＫＡＱＹ  ＫＫＮＫＨ−配列番号２１０）を選択した。天然ｐ２１０ペプチド（Ｅｕｒｏ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ  ＡＢ，スウェーデン）は、先に報告された方法を用い、キャリヤーとしての陽イオン性ウシ血清アルブミン（ｃＢＳＡ）に結合させた（非特許文献３及び４参照）。アジュバントとしてミョウバンを用い、体積比１：１のペプチド／ｃＢＳＡ接合体と混合した。ペプチドの結合及びミョウバンとの混合は、それぞれの免疫化前に新しく準備された。
【００９４】
免疫化プロトコル
雄ａｐｏＥ（−／−）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、米国実験動物管理公認協会によって認定されている動物施設に収容し、水及び食物の利用が無制限の１２時間昼／夜サイクルを続けた。Ｃｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ医療センターの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）は、その実験プロトコルを承認した。パイロット実験では、用量１００μｇを用いたｐ２１０の免疫化が、用量２５又は５０μｇと比べて、最適な粥状低下を与えた。それ故、その後の全実験に１００μｇの用量を用いた。マウスは、通常の食事で維持され、年齢６〜７週で肩甲骨間の背部領域に皮下の一次免疫を受け、次に、年齢９週及び１２週で追加免疫が行われた。最後の追加免疫から１週間後、食事を高コレステロール食事に切り替え（ＴＤ８８１３７、Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ）、年齢２５週での安楽死まで続けた。同一の免疫化時点でＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバンを受けたマウスの個々のグループは、コントロールとした。ｐ２１０に対する免疫応答を評価するため、一部のマウスを年齢８又は１３週で犠牲にした。
【００９５】
組織の収集及び準備
安楽死時点でその心臓を収集し、クリオ・セクションのため、ＯＣＴコンパウンド（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ）に埋め込んだ。大動脈全体を清潔にし、加工し、オイル・レッド・Ｏによって染色し、コンピューターを使った組織形態計測により、正面からのアテローム性動脈硬化の範囲を評価した（非特許文献３及び４参照）。
【００９６】
免疫組織化学及び組織形態計測
大動脈洞からの部分をＭＯＭＡ−２（Ｓｅｒｏｔｅｃ）又はＣＤ１１ｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）抗体で染色し、標準的なプロトコルを用いてマクロファージ又は樹枝状細胞を免疫組織化学的に確認した。プラークサイズのためのオイル・レッド・Ｏ染色は、標準的なプロトコルを用いて行われた。コンピューターを使ったマクロファージ分析を行い、先に記載されるように組織形態計測を評価した（非特許文献３及び４参照）。
【００９７】
血清ＥＬＩＳＡ
平底９６ウェルポリスチレンプレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ、ドイツ）は、それぞれ１００μｌ（２０μｇ／ｍｌ）のｐ２１０、ＫＬＨ、ＴＮＰ−ＫＬＨ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｔ−５０６０）又はＢＳＡ（ＩｇＧに対して２μｇ／ｍｌ、ＩｇＭに対して１０μｇ／ｍｌ）を用いて、４℃で一晩のインキュベーションによってプレコートされ、標準的なプロトコルを用いて抗体レベルを評価した。被覆濃度は、パイロット実験において最適化された。ヤギ抗マウスＨＲＰ−ＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ３１４３７）又はＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を検出抗体として用い、その結合した抗体を基質としてのＡＢＴＳ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）中での発現によって検出し、光学密度値を４０５ｎｍにて記録した。
【００９８】
フローサイトメトリー分析
フローサイトメトリー分析は、標準的なプロトコルによって、以下の表１に記載の抗体及びＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）又はＣｙＡｎ  ＡＤＰ分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて行われた。細胞内サイトカイン染色については、細胞が染色手順を受ける前に、２時間培養した細胞にブレフェルジンＡ（３μｇ／ｍｌ）を加えた。細胞内分子の染色のため、細胞膜を透過処理した。
【００９９】
【表１−１】
2013510586.tif 000003
【０１００】
【表１−２】
2013510586.tif 000004
【０１０１】
養子移植実験
規則正しい食事の雄ａｐｏＥ（−／−）マウスは、先の段落に記載されるように、皮下免疫化を受け、ドナーとして年齢１３週時に犠牲にされた。同一処理グループの脾細胞を細胞の単離前に貯めておいた。ドナーＣＤ８（＋）Ｔ−細胞、ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞又はＢ−細胞を、製造業者のプロトコルに従い、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  ＦｌｏｗＣｏｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、単離した。ＣＤ４（＋）Ｔ−細胞は、脾細胞から負の選択がなされ、次に、ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）細胞の正の選択が行われた。Ｂ細胞は、負の単離がなされ、ＣＤ８（＋）Ｔ−細胞は、最初に正の単離がなされ、ビーズから放出された。貯蔵されたＣＤ８（＋）Ｔ−細胞、ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞及びＢ−細胞の純度は、それぞれ９０％、８０％及び７０％であった。次いで、単離したＣＤ８（＋）Ｔ−細胞（１×１０６細胞／マウス）、ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞（１×１０５又は３×１０５細胞／マウス）、又はＢ−細胞（２×１０７細胞／マウス）を、尾静脈注射によって、年齢６〜７週の未処置雄ａｐｏＥ（−／−）受容マウスに養子移植した。血管細胞学の既刊文献では、養子移植したリンパ球の数が、大幅に変化した。Ｂ−細胞移植では、２つの事前報告に基づき、２×１０７細胞／マウスの数を選択した（非特許文献１１及び１２参照）。ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞移植では、移植細胞数は、既刊文献において、５×１０４細胞／マウス〜１×１０６細胞／マウスの範囲に及んだ（１３、１４及び１５参照）。それ故、出願人は、我々の実験のため、２つの中間の用量を選ぶ。ＣＤ８（＋）Ｔ−細胞に関しては、自己免疫疾患の分野からの報告に基づき、１×１０６細胞を選んだ（非特許文献１６参照）。出願人は、未処理の又は抗原刺激したＣＤ４（＋）Ｔ−細胞がアテローム生成に促進的であることが知られているため、ＣＤ４（＋）Ｔ−細胞を養子移植しなかった（非特許文献１７及び１８参照）。受容マウスに、年齢１３週まで、通常の食事を与え、年齢２５週での安楽死まで、食事を高コレステロールの食事に切り替えた。大動脈を収集し、アテローム性動脈硬化の範囲を評価した。
【０１０２】
ＫＬＨ又はトリニトロフェニル−リポ多糖（ＴＮＰ−ＬＰＳ）免疫化
また、出願人は、ｐ２１０免疫化がその後の他の抗原との免疫化の有効性に影響するかどうかを試験した。ＫＬＨを原型のＴ−細胞依存性抗原として、ＴＮＰをＴ−細胞非依存性抗原として選んだ。規則正しい食事の雄Ｃ５７／ＢＬ６マウスは、ａｐｏＥ（−／−）マウスについて先の段落に記載されるように、ｐ２１０接合体又はアジュバントコントロールを用いた皮下免疫化を受けた。年齢１３及び１５週にて、マウスを、ｐ２１０部位から離れた注入部位で（アジュバントとしてのミョウバンと共に）１００μｇＫＬＨにより皮下免疫化するか、又は１００μｇＴＮＰ−ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）を腹腔内に注射した。マウスの個々のグループにおいて、ＫＬＨ又はＴＮＰ免疫化を行った。安楽死時点で、後眼窩穿刺によって血液を集めた（年齢１６週）。
【０１０３】
ＢＭ由来樹枝状細胞（ＢＭＤＣ）のインビトロ発生
ＢＭＤＣをＧＭ−ＣＳＦにより発生させるための方法を、修飾を用いた先の刊行物から採用した（非特許文献１９参照）。簡潔に、雄ａｐｏＥ−／−マウスの大腿骨及び脛骨からの骨髄細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する２０ｍｌの完全ＲＰＭＩ−１６４０を備えた１０ｃｍ培養皿（Ｆａｌｃｏｎ）中に蒔いた。細胞を洗浄し、３日目及び５日目に、その古い培地を除去し、次いで、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を備えた新鮮な培地で補充することにより摂食させた。８日目に、未成熟ＤＣは、顕微鏡下で非接着性細胞として現れ、活発なピペット操作によって収集し、１．５ｍｌの培地中に２×１０５ＤＣを備えた新しい培養皿中に継代培養した。
【０１０４】
インビトロでのＣＤ８＋Ｔ−細胞の単離及び樹枝状細胞との共培養
ＣＤ８（＋）Ｔ−細胞用のドナーマウス［雄ａｐｏＥ（−／−）マウス］を、先の段落中に記載された予定に従って、ＰＢＳ、ｃＢＳＡ／ミョウバン、又はｃＢＳＡ／ミョウバン／Ｐ２１０により免疫化し、年齢１３歳にて脾細胞を収集した。ＣＤ８（＋）Ｔ−細胞は、製造業者のプロトコルによって、ＣＤ８選択Ｄｙｎａｂｅａｄｓキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて負の単離がなされた。次いで、選択されたＣＤ８（＋）Ｔ−細胞を、ＤＣと共に、ＣＤ８：ＤＣ比３：１で、共培養させた。一連のパイロット研究は、この分析に最適なＣＤ８：ＤＣ比を決定するために行われた。４時間の共培養後、細胞を集め、ＬＳＲ  ＩＩフロー血球計算器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によるＣＤ１１ｃ及び７−ＡＡＤのフローサイトメトリー決定のために加工し、Ｓｕｍｍｉｔ  Ｖ４．３ソフトウェアを用いてデータを分析した。共培養中におけるＣＤ８（＋）Ｔ−細胞なしでの樹枝状細胞死をベースラインとして用い、細胞の特異的な溶解の割合を、先に記載された方法を用いて、求めた（非特許文献２０参照）。
【０１０５】
統計
データを平均値±標準偏差で示す。各グループ中での動物の数を文章又は図面の記載において記載する。データをＡＮＯＶＡにより分析し、次いで、ニューマン−クルーズグループ比較、又は適切な場合にはｔ−検定を行った。Ｐ＜０．０５は、統計的に有意であると見なされ、各図中の水平バーは、グループ間の統計的に有意な差を示した。
【０１０６】
（実施例１）
ＡｐｏＢ１００の免疫原性断片
ＬＤＬに見られる単一タンパク質に焦点を合わせることによって、特異的な免疫原性エピトープ、アポリポタンパク質Ｂ−１００（ａｐｏＢ）を特徴付けた。３０２のペプチドからなり、長さが２０アミノ酸残基で、ヒトａｐｏＢの完全な４５６３のアミノ酸配列を網羅するペプチドライブラリーを作った。ペプチドは、全ての配列をカバーするために切断点にて５個のアミノ酸を重複させることによって作られた。ペプチドは、以下の表２に示されるように、ａｐｏＢのＮ末端から始めて１〜３０２の番号が付けられた。
【０１０７】
【表２−１】
2013510586.tif 000005
【０１０８】
【表２−２】
2013510586.tif 000006
【０１０９】
【表２−３】
2013510586.tif 000007
【０１１０】
【表２−４】
2013510586.tif 000008
【０１１１】
【表２−５】
2013510586.tif 000009
【０１１２】
【表２−６】
2013510586.tif 000010
【０１１３】
【表２−７】
2013510586.tif 000011
【０１１４】
【表２−８】
2013510586.tif 000012
【０１１５】
【表２−９】
2013510586.tif 000013
【０１１６】
【表２−１０】
2013510586.tif 000014
【０１１７】
【表２−１１】
2013510586.tif 000015
【０１１８】
【表２−１２】
2013510586.tif 000016
【０１１９】
【表２−１３】
2013510586.tif 000017
【０１２０】
ＡｐｏＢ１００の完全長配列は、その全体が参照することによってここに組み込まれる非特許文献４３等の各種出版物において見出すことができる（特には図１参照）。
【０１２１】
（実施例２）
ｐ２１０免疫化の粥状保護効果
ｐ２１０による免疫化は、ＰＢＳ及びｃＢＳＡ／ミョウバングループと比べて、アテローム性大動脈硬化をそれぞれ５７％及び５０％縮小し（図１Ａ）、循環コレステロールレベル又は体重には影響がなかった（表３）。
【０１２２】
【表３】
2013510586.tif 000018
【０１２３】
ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループからの大動脈洞プラークは、有意に減少したマクロファージ及びＤＣ免疫反応性を含有した。それぞれは、ＭＯＭＡ−２及びＣＤ１１ｃ免疫染色によって評価された（図１Ｂ）。
【０１２４】
（実施例３）
ｐ２１０免疫化で誘発された免疫応答の特徴付け
ＤＣは、細胞性及び体液性免疫応答の両方に対して上流の主要な細胞型であるため、出願人は、それら細胞が免疫化戦略の影響を受けるかどうかを決定した。皮下免疫化部位からの細胞を、一次免疫化の１週間後に、フローサイトメトリー分析のため、単離した。ＰＢＳグループは、ＰＢＳ注入を受けるマウスがその注入部位での膨張又は細胞蓄積を発現しなかったため、この分析に含めなくてもよかった。
【０１２５】
ｃＢＳＡ／ミョウバングループに比べて、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループは、免疫化部位にて、ＣＤ１１ｃ（＋）及びＣＤ１１ｃ（＋）ＣＤ８６（＋）細胞が有意に少なかった（図２Ａ及び２Ｂ）。３回目の免疫化の１週間後にフローサイトメトリーをＬＮ細胞に関して行った場合、ＣＤ１１ｃ（＋）ＣＤ８６（＋）細胞もまた、ｃＢＳＡ／ミョウバングループと比較して有意に減少した（図２Ｃ）。
【０１２６】
次に、出願人は、抗体応答を評価し、ｐ２１０に対する体液性免疫応答を明確にした。免疫化前に、３グループのマウスはすべてｐ２１０に対するＩｇＧ力価が低いレベルであった。安楽死時点では、ＰＢＳグループの場合、ｐ２１０に対するＩｇＧ力価が低いままであったが、ｃＢＳＡ／ミョウバングループでは有意に増加した。ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバンによる免疫化は、ＰＢＳグループと比べて、ｐ２１０ＩｇＧ力価の増加をもたらしたが、ｃＢＳＡ／ミョウバングループと比べて有意に低減した（図３Ａ）。ｐ２１０ＩｇＧ応答と対照的に、全てのグループでｐ２１０ＩｇＭ力価が有意に増加し（図３Ｂ）、ｐ２１０に対する内因性免疫応答を示唆した。
【０１２７】
ＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）は、明確なリンパ球活性化マーカーである。そこで、出願人は、一次免疫化の１週間後に、マウスの浅頸及び腋窩リンパ節（ＬＮ）からのＣＤ４（＋）又はＣＤ８（＋）Ｔ−細胞上でのＣＤ２５の発現を分析し、Ｔ−細胞免疫応答を評価した。リンパ節中のＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞集団は、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループにおける場合、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループと比較して、有意に高かったが（図４Ａ）、一方、リンパ節中のＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞は、３つのグループの中で差異がなかった（図４Ｂ）。
【０１２８】
ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループは、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループと比較して、脾臓ＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ−１０（＋）Ｔ−細胞の集団が有意に大きかったが（図４Ｃ）、一方、３つのグループの中では、脾臓ＣＤ８（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ１２（＋）Ｔ−細胞に差異がなかった（図４Ｄ）。脾臓ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ−１０（＋）Ｔ−細胞集団は、ｃＢＳＡ／ミョウバングループで有意に増大した。しかしながら、この増大した応答は、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバン免疫化によって有意に減弱され（図４Ｅ）；一方、脾臓ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ＩＬ１２（＋）Ｔ−細胞は、３つのグループで差異がなかった（図４Ｆ）。
【０１２９】
（実施例４）
ｐ２１０免疫化マウスから未処理受容体へのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の養子移植は、ｐ２１０免疫化の粥状保護効果を再現する
ＰＢＳ、ｃＢＳＡ／ミョウバン又はｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループからのドナーＣＤ８（＋）Ｔ−細胞は、年齢６〜７週で未免疫の受容ａｐｏＥ（−／−）マウスに養子移植された。安楽死時点では、ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞が注入された受容マウスが、ＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞が注入された受容マウスと比較して、有意に小さいアテローム性動脈硬化症を発現した（図５Ａ）。
【０１３０】
この大動脈病変の縮小は、脾臓ＣＤ１１ｃ（＋）ＤＣの減少と関連しており（ＰＢＳグループ：４．３±１．７％；ｃＢＳＡ／ミョウバングループ：３．４±０．３％；ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループ：１．５±０．３％；各グループｎ＝５、ｐ＜０．０５  ＡＮＯＶＡによるＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループに対するｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループ）、３つのグループの中で、全コレステロールの循環レベルに差異はなかった（ＰＢＳグループ：１０８３±２９６ｍｇ／ｄｌ；ｃＢＳＡ／ミョウバングループ：９７５±４０１ｍｇ／ｄｌ；ｐ２１０／ｃＢＳＡ／ミョウバングループ：１０９８±３７９ｍｇ／ｄｌ）。
【０１３１】
ｐ２１０免疫化ドナーマウスの脾臓から単離したＢ細胞の養子移植は、他のドナーからＢ細胞を受けたマウスと比較して、受容マウスのアテローム性動脈硬化に影響を与えなかった（図５Ｂ）。
【０１３２】
皮下のｐ２１０免疫化によって誘発される可能性がある粥状保護メディエーターとしてＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞を除外するため、出願人は、未処理受容ａｐｏＥ−／−マウス中にＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞を１×１０５細胞／マウスの用量で養子移植した。３つのグループのＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞受容体の中で病変の大きさに差異はなかった（図５Ｃ）。３×１０５細胞／マウスのより高い数のＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ−細胞の移植は、３つの受容体グループで病変の大きさを減少しなかった（図５Ｄ）。
【０１３３】
（実施例５）
インビトロでの樹枝状細胞に対するｐ２１０免疫化マウスからのＣＤ８（＋）Ｔ細胞の細胞溶解活性の増大
ｐ２１０免疫化が免疫化部位及びアテローム性動脈硬化巣中におけるＤＣを低減し、ｐ２１０免疫化ドナーからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の養子移植が受容体中の脾臓ＤＣを減少させたという観察を鑑みて、出願人は、ＤＣがＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の標的の可能性があると仮定した。
【０１３４】
これをテストするため、出願人は、各種免疫化グループからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞と共に、骨髄由来ＤＣを共培養した。ｐ２１０免疫化マウスからのＣＤ８（＋）Ｔ−細胞は、ＰＢＳ又はＢＳＡ／ミョウバングループからのものと比較して、ＤＣ死の割合が有意に増加した（図６）。このＣＤ８（＋）Ｔ−細胞の増大した細胞溶解性機能は、グランザイムＢの発現の増加と関係があるが、パーフォリンとは関係がなかった（図７）。
【０１３５】
（実施例６）
ｐ２１０による免疫化は、他のＴ−細胞依存性又は非依存性抗原に対する適応性免疫応答に影響を与えない
ｐ２１０免疫化がＣＤ１１ｃ（＋）ＤＣを低減し、ｐ２１０に対する適応性ＩｇＧ応答を低減したという観察を鑑みて、出願人は、次に、このようなｐ２１０免疫化によるＤＣの修飾が他の抗原に対して宿主免疫応答を変えるかどうかをテストした。
【０１３６】
出願人は、まず、先のセクションに記載されるように、ｐ２１０を用いてマウスを免疫化し、次いで、２つの別個の皮下ＫＬＨ免疫化又はＴＮＰ−ＬＰＳの腹腔内注射を行った。個々の免疫化の有効性のためにサロゲートとしてＫＬＨ−又はＴＮＰ−ＩｇＧ力価を用い、出願人は、ｐ２１０免疫化マウスとＰＢＳ又はｃＢＳＡ／ミョウバングループのマウスからの力価の間で、ＫＬＨ−又はＴＮＰ−ＩｇＧ力価の差異がないことが分かった（図８）。
【０１３７】
追加の例は、ＵＳ仮Ｓ／Ｎ６１／２６１，３３１、特に前述の仮の付属書類Ａに記載されており、その全体がここに組み込まれる。要約すれば、幾つかの実施態様において、免疫賦活性Ｔ細胞、組成物、方法及びシステムが、アテローム性動脈硬化及び／又はそれに関係した状態を個体において治療及び／又は予防するために記載されている。
【０１３８】
先に説明した例は、本開示のＴ細胞、組成物、システム及び方法の実施態様をどのように作り、どのように使用するかの完全な開示及び説明を当業者に与えるために提供されており、発明者がそれら開示と見なすものの範囲を限定することを目的としていない。当業者に明らかな開示を実施するために上述した形態の変更は、特許請求の範囲内にあることを意図する。本明細書で述べた全ての特許、特許出願及び出版物は、本開示が関連する当業者のレベルを示す。この開示に引用された全ての参考文献は、各参考文献全体が個々に参照されることにより組み込まれた場合と同一の範囲にまで、参照することにより組み込まれる。
【０１３９】
背景、概要、詳細な説明及び実施例において引用された各文献（特許、特許出願、学術論文、要約書、実験マニュアル、本又は他の開示を含む）の全開示が、参照することにより、ここに組み込まれる。
【０１４０】
更に、コンピューター可読の形態でここに提出された配列表のコピーは、本記載の一部を形成し、その全体が参照することによりここに組み込まれる。
【０１４１】
本開示は、特定の組成物又は生体系に限定されず、当然に変わり得ることが理解される。また、ここに使用された専門用語は、特定の実施態様のみを説明するためのものであり、限定することを目的としていないことが理解される。この明細書及び特許請求の範囲に使用されるように、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」の単数形は、その内容が別に明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。「複数（ｐｌｕｒａｌｉｔｙ）」の語は、その内容が別に明確に指示しない限り、２つ以上の指示対象を含む。別段の定義がない限り、ここに使用される全ての技術的及び科学的用語は、本開示が関連する当業者によって通常理解されるものと同一の意味を有する。
【０１４２】
ここに記載されるものと類似の又は同等な方法及び材料は、実施に際して、本開示の物、方法及びシステムのテストのために使用できるが、適当な例示材料及び方法が例としてここに記載されている。
【０１４３】
本開示の多くの実施態様を説明した。それにもかかわらず、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な変更がなされ得ることを理解する。従って、他の実施態様は、特許請求の範囲の範囲内にある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１４４】
【非特許文献１】Shah, P. K., K. Y. Chyu, G. N. Fredrikson, and J. Nilsson. 2005. Immunomodulation of atherosclerosis with a vaccine. Nat. Clin. Pract. Cardiovasc. Med. 2:639-646
【非特許文献２】Hansson, G. K., P. Libby, U. Schonbeck, and Z. Q. Yan. 2002. Innate and adaptive immunity in the pathogenesis of atherosclerosis. Circ. Res. 91:281-291
【非特許文献３】Chyu, K. Y., X. Zhao, O. S. Reyes, S. M. Babbidge, P. C. Dimayuga, J. Yano, B. Cercek, G. N. Fredrikson, J. Nilsson, and P. K. Shah. 2005. Immunization using an Apo B-100 related epitope reduces atherosclerosis and plaque inflammation in hypercholesterolemic apo E (-/-) mice. Biochem. Biophys. Res. Commun. 338: 1982-1989
【非特許文献４】Fredrikson, G. N., I. Soderberg, M. Lindholm, P. Dimayuga, K. Y. Chyu, P. K. Shah, and J. Nilsson. 2003. Inhibition of Atherosclerosis in ApoE-Null Mice by Immunization with ApoB-100 Peptide Sequences. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 23:879-884
【非特許文献５】Fredrikson, G. N., L. Andersson, I. Soderberg, P. Dimayuga, K. Y. Chyu, P. K. Shah, and J. Nilsson. 2005. Atheroprotective immunization with MDA-modified apo B-100 peptide sequences is associated with activation of Th2 specific antibody expression. Autoimmunity 38: 171-179
【非特許文献６】Fredrikson, G. N., H. Bjorkbacka, I. Soderberg, I. Ljungcrantz, and J. Nilsson. 2008. Treatment with apo B peptide vaccines inhibits atherosclerosis in human apo B-100 transgenic mice without inducing an increase in peptide- specific antibodies. J. Intern. Med. l-8
【非特許文献７】Klingenberg, R., M. Lebens, A. Hermansson, G. N. Fredrikson, D. Strodthoff, M. Rudling, D. F. Ketelhuth, N. Gerdes, J. Holmgren, J. Nilsson, and G. K. Hansson. 2010. Intranasal Immunization With an Apolipoprotein B-100 Fusion Protein Induces Antigen-Specific Regulatory T Cells and Reduces Atherosclerosis. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 30:946-952
【非特許文献８】Fredrikson, G. N., B. Hedblad, G. Berglund, R. Aim, M. Ares, B. Cercek, K. Y. Chyu, P. K. Shah, and J. Nilsson. 2003. Identification of Immune Responses Against Aldehyde-Modified Peptide Sequences in ApoB Associated With Cardiovascular Disease. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 23:872-878
【非特許文献９】Schiopu, A., J. Bengtsson, I. Soderberg, S. Janciauskiene, S. Lindgren, M. P. Ares, P. K. Shah, R. Carlsson, J. Nilsson, and G. N. Fredrikson. 2004. Recombinant Human Antibodies Against Aldehyde-Modified Apolipoprotein B-100 Peptide Sequences Inhibit Atherosclerosis. Circulation 2004. 110:2047-2052
【非特許文献１０】Sjogren, P., G. N. Fredrikson, A. Samnegard, C. G. Ericsson, J. Ohrvik, R. M. Fisher, J. Nilsson, and A. Hamsten. 2008. High plasma concentrations of autoantibodies against native peptide 210 of apoB-100 are related to less coronary atherosclerosis and lower risk of myocardial infarction. Eur. Heart J. 29:2218-2226
【非特許文献１１】Dimayuga, P., B. Cercek, S. Oguchi, G. N. Fredrikson, J. Yano, P. K. Shah, S. Jovinge, and J. Nilsson. 2002. Inhibitory effect on arterial injury-induced neointimal formation by adoptive B-cell transfer in Rag-1 knockout mice. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 22:644-649
【非特許文献１２】Caligiuri, G., A. Nicoletti, B. Poirier, and G. K. Hansson. 2002. Protective immunity against atherosclerosis carried by B cells of hypercholesterolemic mice. J. Clin. Invest. 109:745-753
【非特許文献１３】Yang, K., D. Li, M. Luo, and Y. Hu. 2006. Generation of HSP60-specific regulatory T cell and effect on atherosclerosis. Cell Immunol. 243:90-95
【非特許文献１４】Mor, A., D. Planer, G. Luboshits, A. Afek, S. Metzger, T. Chajek-Shaul, G. Keren, and J. George. 2007. Role of naturally occurring CD4+ CD25+ regulatory T cells in experimental atherosclerosis. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 27:893-900
【非特許文献１５】Ait-Oufella, H., B. L. Salomon, S. Potteaux, A. K. Robertson, P. Gourdy, J. Zoll, R. Merval, B. Esposito, J. L. Cohen, S. Fisson, R. A. Flavell, G. K. Hansson, D. Klatzmann, A. Tedgui, and Z. Mallat. 2006. Natural regulatory T cells control the development of atherosclerosis in mice. Nat. Med. 12: 178-180
【非特許文献１６】Yang, G. X., Z. X. Lian, Y. H. Chuang, Y. Moritoki, R. Y. Lan, K. Wakabayashi, A. A. Ansari, R. A. Flavell, W. M. Ridgway, R. L. Coppel, K. Tsuneyama, I. R. Mackay, and M. E. Gershwin. 2008. Adoptive transfer of CD8(+) T cells from transforming growth factor beta receptor type II (dominant negative form) induces autoimmune cholangitis in mice. Hepatology. 47: 1974-1982
【非特許文献１７】Zhou, X., A. Nicoletti, R. Elhage, and G. K. Hansson. 2000. Transfer of CD4(+) T cells aggravates atherosclerosis in immunodeficient apolipoprotein E knockout mice. Circulation 102:2919-2922
【非特許文献１８】Zhou, X., A. K. Robertson, C. Hjerpe, and G. K. Hansson. 2006. Adoptive transfer of CD4+ T cells reactive to modified low-density lipoprotein aggravates atherosclerosis. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 26:864-870
【非特許文献１９】Inaba, K., M. Inaba, N. Romani, H. Aya, M. Deguchi, S. Ikehara, S. Muramatsu, and R. M. Steinman. 1992. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J. Exp. Med. 176: 1693-1702
【非特許文献２０】Lecoeur, H., M. Fevrier, S. Garcia, Y. Riviere, and M. L. Gougeon. 2001. A novel flow cytometric assay for quantitation and multiparametric characterization of cell-mediated cytotoxicity. J. Immunol. Methods 253: 177-187
【非特許文献２１】Palinski, W., E. Miller, and J. L. Witztum. 1995. Immunization of low density lipoprotein (LDL) receptor-deficient rabbits with homologous malondialdehyde-modified LDL reduces athero genesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 92:821-825
【非特許文献２２】Ameli, S., A. Hultgardh-Nilsson, J. Regnstrom, F. Calara, J. Yano, B. Cercek, P. K. Shah, and J. Nilsson. 1996. Effect of immunization with homologous LDL and oxidized LDL on early atherosclerosis in hypercholesterolemic rabbits. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 16: 1074-1079
【非特許文献２３】Freigang, S., S. Horkko, E. Miller, J. L. Witztum, and W. Palinski. 1998. Immunization of LDL receptor-deficient mice with homologous malondialdehyde-modified and native LDL reduces progression of atherosclerosis by mechanisms other than induction of high titers of antibodies to oxidative neoepitopes. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 18: 1972-1982
【非特許文献２４】George, J., A. Afek, B. Gilburd, H. Levkovitz, A. Shaish, I. Goldberg, Y. Kopolovic, G. Wick, Y. Shoenfeld, and D. Harats. 1998. Hyperimmunization of apo-E-deficient mice with homologous malondialdehyde low-density lipoprotein suppresses early athero genesis. Atherosclerosis 138: 147-152
【非特許文献２５】Zhou, X., G. Caligiuri, A. Hamsten, A. K. Lefvert, and G. K. Hansson. 2001. LDL immunization induces T-cell-dependent antibody formation and protection against atherosclerosis. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 21: 108-114
【非特許文献２６】Chyu, K. Y., O. S. Reyes, X. Zhao, J. Yano, P. Dimayuga, J. Nilsson, B. Cercek, and P. K. Shah. 2004. Timing affects the efficacy of LDL immunization on atherosclerotic lesions in apo E (-/-) mice. Atherosclerosis 176:27-35
【非特許文献２７】Zhou, X., A. K. Robertson, M. Rudling, P. Parini, and G. K. Hansson. 2005. Lesion development and response to immunization reveal a complex role for CD4 in atherosclerosis. Circ. Res. 96:427-434
【非特許文献２８】Roselaar, S. E., P. X. Kakkanathu, and A. Daugherty. 1996. Lymphocyte populations in atherosclerotic lesions of apoE -/- and LDL receptor -/- mice. Decreasing density with disease progression. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 16: 1013-1018
【非特許文献２９】Zhou, X., S. Stemme, and G. K. Hansson. 1996. Evidence for a local immune response in atherosclerosis. CD4+ T cells infiltrate lesions of apolipoprotein-E-deficient mice. Am. J. Pathol. 149:359-366
【非特許文献３０】Fyfe, A. I., J. H. Qiao, and A. J. Lusis. 1994. Immune-deficient mice develop typical atherosclerotic fatty streaks when fed an atherogenic diet. J. Clin. Invest. 94:2516-2520
【非特許文献３１】Bobryshev, Y. V., T. Taksir, R. S. Lord, and M. W. Freeman. 2001. Evidence that dendritic cells infiltrate atherosclerotic lesions in apolipoprotein E-deficient mice. Histol. Histopathol. 16:801-808
【非特許文献３２】Niessner, A., and C. M. Weyand. 2009. Dendritic cells in atherosclerotic disease. Clin. Immunol. 134:25-32
【非特許文献３３】Paulson, K. E., S. N. Zhu, M. Chen, S. Nurmohamed, J. Jongstra-Bilen, and M. I. Cybulsky. 2010. Resident intimal dendritic cells accumulate lipid and contribute to the initiation of atherosclerosis. Circ. Res. 106:383-390
【非特許文献３４】Liu, P., Y. R. Yu, J. A. Spencer, A. E. Johnson, C. T. Vallanat, A. M. Fong, C. Patterson, and D. D. Patel. 2008. CX3CR1 deficiency impairs dendritic cell accumulation in arterial intima and reduces atherosclerotic burden. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 28:243-250
【非特許文献３５】Wu, H., R. M. Gower, H. Wang, X. Y. Perrard, R. Ma, D. C. Bullard, A. R. Burns, A. Paul, C. W. Smith, S. I. Simon, and C. M. Ballantyne. 2009. Functional role of CDl lc+ monocytes in atherogenesis associated with hypercholesterolemia. Circulation. 119:2708-2717
【非特許文献３６】Sakamoto, N., K. Tsuji, L. M. Muul, A. M. Lawler, E. F. Petricoin, F. Candotti, J. A. Metcalf, J. A. Tavel, H. C. Lane, W. J. Urba, B. A. Fox, A. Varki, J. K. Lunney, and A. S. Rosenberg. 2007. Bovine apolipoprotein B-100 is a dominant immunogen in therapeutic cell populations cultured in fetal calf serum in mice and humans. Blood 110:501-508
【非特許文献３７】van den Elzen, p., S. Garg, L. Leon, M. Brigl, E. A. Leadbetter, J. E. Gumperz, C. C. Dascher, T. Y. Cheng, F. M. Sacks, P. A. Illarionov, G. S. Besra, S. C. Kent, D. B. Moody, and M. B. Brenner. 2005. Apolipoprotein-mediated pathways of lipid antigen presentation. Nature 437:906-910
【非特許文献３８】Mitchell DM, Ravkov EV, Williams MA Distinct roles for IL-2 and IL-15 in the differentiation and survival of CD8+ effector and memory T cells. J Immunol. 2010 Jun 15;184(12):6719-30. Epub 2010 May 14
【非特許文献３９】Perret R, Ronchese F. Effector CD8+ T cells activated in vitro confer immediate and long-term tumor protection in vivo. Eur J Immunol. 2008 Oct;38(10):2886-95.
【非特許文献４０】Kamimura D, Bevan MJ. Naive CD8+ T cells differentiate into protective memorylike cells after IL-2 anti IL-2 complex treatment in vivo. J Exp Med. 2007 Aug 6;204(8): 1803-12. Epub 2007 Jul 30.
【非特許文献４１】J. Immunol. 2006;177:5868-5877
【非特許文献４２】J. Immunol. 2004;172: 1991-1995
【非特許文献４３】San-Hwan Chen et al The compltecDNA and aminoacid sequence of Human Apolipoprotein B100 Journal of Biological Chemistry 1986 Vol. 261No 28, Issue of October 5, 12918-12921
【図１】
2013510586.tif 000019
【図２】
2013510586.tif 000020
【図３】
2013510586.tif 000021
【図４】
2013510586.tif 000022
【図５】
2013510586.tif 000023
【図６】
2013510586.tif 000024
【図７】
2013510586.tif 000025
【図８】
2013510586.tif 000026
【配列表】
2013510586000001.app
【国際調査報告】
2013510586.tif 000027
2013510586.tif 000028