(57)【要約】血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療するための医薬の製造におけるアルクチゲニンの用途、及びアルクチゲニンを含む製剤、特に、アルクチゲニンを含むマイクロエマルション製剤が提供される。アルクチゲニンが化学療法の後に白血球数（特に、好中球性顆粒球の数）を顕著に増加させ得ることが実験から示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する医薬の製造におけるアルクチゲニンの使用。
【請求項２】
前記医薬は、血小板減少症、骨髄抑制、又は貧血の治療に用いられることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記骨髄抑制は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制であることを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記化学品は、癌治療用の化学療法薬物であることを特徴とする請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記癌治療用の化学療法薬物は、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩であることを特徴とする請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記骨髄抑制は、末梢血白血球の数の低下又は血小板減少症、骨髄形成異常又は再生不良性貧血であることを特徴とする請求項２〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記骨髄抑制は、末梢血の好中球細胞の低下であることを特徴とする請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記血小板減少症は、放射線療法又は化学療法により誘発された血小板減少症又は先天性血小板減少症であることを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項９】
前記先天性血小板減少症は、特発性血小板減少性紫斑病であることを特徴とする請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
アルクチゲニンを唯一の活性成分として使用することを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する方法であって、該治療又は予防を必要とする被験体に有効量のアルクチゲニンを投与する工程を含む、方法。
【請求項１２】
前記方法は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を治療又は予防するために使用されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
アルクチゲニンと、医薬的に許容される賦形剤とを含む、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する製剤。
【請求項１４】
前記製剤は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を治療又は予防するために使用されることを特徴とする請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤は、平均粒径が１５−８０ｎｍのマイクロエマルション製剤であることを特徴とする請求項１３又は１４に記載の製剤。
【請求項１６】
被験体において血細胞の産生を刺激する方法であって、有効量のアルクチゲニンを被験体に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルクチゲニンの医薬用途に関し、特に、血細胞の減少に関連する疾病の予防又は治療用医薬の製造におけるアルクチゲニンの使用に関し、化合物の治療活性分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
正常な血液には大量の細胞が含まれており、酸素を運搬する赤血球及び感染に対抗する白血球（ルーコサイト（白血球）ともいう）が含まれている。白血球には、好中球細胞、好酸球細胞、及び好塩基球細胞が含まれている。白血球は骨髄造血により産生される。正常な血液には、更に血小板が含まれている。血小板は血液凝固を起こす微細な細胞フラグメントである。ヒトの体内の血細胞は、造血システムより作られる。ヒトの造血システムは、少量の骨髄造血幹細胞及び異なる発育段階において異なるシリーズの造血細胞からなり、様々な物理化学因子及び体内代謝により産生された有害因子、例えば身体疲労、放射又はある化学療法薬物に暴露されること等に対して非常に敏感であるので、血細胞の減少による貧血、骨髄抑制（ミエロサプレッション（骨髄抑制）ともいう）等の疾病を招来してしまう。さらに、先天的血細胞減少も存在し、例えば特発性の血小板減少性紫斑病等がある。
【０００３】
癌患者は、相当長い間、放射線療法及び化学療法を主とする治療を受けなければならない。放射線療法及び化学療法は、放射又は細胞毒性薬を使用して癌を治療する療法である。しかしながら、放射線療法及び大多数の化学療法の治療は非特異的であり、これらは正常な急速に分裂する細胞に対して有毒である。大用量の放射も正常な急速に分裂する細胞に対して有毒である。このことが、多くの場合、化学療法及び放射線療法を受けている患者に様々な副作用を起こしてしまう。他の正常な組織も不利な影響を受け得るが、骨髄は、化学療法又は放射線療法のような増殖性特異的治療に対して特に敏感である。骨髄抑制、即ち骨髄において血細胞の産出が減少することがその副作用の一つであり、その表現は、骨髄の増殖の低下、血細胞数値の低下、末梢血白血球の低下、好中球細胞の減少及び／又は血小板減少、あるいは再生不良性貧血として特徴付けられ、患者の生活の質（クオリティーオブライフ）に酷い悪影響を与え、その生命を危うくすることさえある。
【０００４】
臨床において、放射線療法、化学療法を受ける患者は、異なる程度の骨髄抑制によって損傷を受け易く、末梢血白血球の低下、好中球細胞の低下、及び／又は血小板減少として表現される。人体の末梢血の好中球細胞は、白血球全体数の約５０−７０％を占め、その数値の増加及び減少は、白血球の総数の変化に対して直接的に影響する、即ち、好中球細胞の数が増加すると、白血球の数も増加し、好中球細胞の数が低下すると、白血球の総数も低下する。両者の数的関連性は、その意義的の一致性として表現され、即ち、好中球細胞の増減の意義は、白血球総数の増減の意義と基本的に一致する。骨髄抑制状態にある患者は感染に対して弱い。好中球白血球及び血小板の欠乏は、癌治療後の罹患率及び死亡率の主な原因であり、且つ癌治療の高コストにもつながる。
【０００５】
しかしながら、現在、放射線療法及び化学療法は依然として腫瘍治療における最も常用な手段である。放射線療法及び化学療法により誘発した骨髄造血抑制等の合併症は、患者の生活の質に影響する主な原因となっている。明確な効能のある腫瘍の補助的治療ための化学薬物は、その自身が使用された後に、比較的多い不良反応を生じさせ、患者の苦痛を増加する。医療従業者は、放射線療法及び化学療法による損害に対抗できる有効で且つ副反応の少ない薬物を探し求めてきた。
【０００６】
骨髄抑制に対して現在採用される臨床手段は、多くの場合、様々な成長因子を与えて、造血細胞の増殖を増加させることである。近年、市販し始めたばかりの組換えの造血成長因子、例えばモルグラモスチム（Ｌｅｖｃｏｍａｘ、ｒｈＧＭ−ＧＳＦ）、フィルグラスチム（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ、ｒｈＧ−ＣＳＦ）等は、白血球の数を向上させる効果が著しいものの、その値段が高いので、数多い患者に受け入れられることができない。さらに、ｒｈＧＭ−ＧＳＦ、ｒｈＧ−ＣＳＦは、化学療法と同時に使用されることができず、予防を目的として使用されることもできず、白血球減少症が現れた場合のみに使用でき、そうではないと毒副作用が生じてしまう。
【０００７】
さらに、遺伝子治療法における造血成長因子の利用、例えばＩＬ−６、ＩＬ−３等の遺伝子治療法は、現在動物試験段階に留まっている。また、自己由来の骨髄移植は、多くの場合、高用量の化学療法に合わせて使用されるが、繰り返して応用することは困難である。
【０００８】
従って、血細胞の減少、特に、化学療法及び放射線療法の副作用による血細胞の減少を予防及び治療するため、並びに、化学療法及び放射線療法後の白血球数量を刺激するための安全、有効、かつ安価な方法を開発することは、腫瘍に対する化学療法及び放射線療法の効果を向上し、癌患者の生存期間を延長し、生活の質を改善するために重要な意義がある。
【０００９】
ゴボウ（牛蒡）（Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａ；  ラテン名Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａｌ）は、キク科ゴボウ属の植物である。アルクチイン（ａｒｃｔｉｉｎ）とアルクチゲニン（ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ）は、ゴボウ（牛蒡）の乾燥した成熟果実由来である（すなわち、Arctium lappa Linne）。アルクチインの活性は非常に小さく、必ず代謝を経てアルクチゲニンに転化してから人体に吸収され得る。アルクチゲニンは人体によって直接吸収され得る有効成分であり、その構造は以下の通りである。
【化１】
2013542205.tif 000002
【００１０】
現在、既に文献によりアルクチゲニンが以下の薬理活性を持っていることが報告された。
１）抗炎症及び免疫調節作用、
２）ＨＩＶ−１及びインフルエンザウイルスを含む抗ウイルス活性、
３）腫瘍細胞のアポトーシス誘導、
４）腎症及び糖尿病、糖尿病合併症の治療作用、
５）熱ショック反応の抑制、
６）神経保護作用、
７）血管の拡張、
８）血小板活性因子の拮抗作用、
９）抗アルツハイマー、
１０）Ｋ＋拘縮の阻害等。
【００１１】
例えば、Ｃｈｏ  ＪＹ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ，ａ  ｌｉｇｎａｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α  ａｎｄ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍｃｏｌ．１９９９；５１（１１）：１２６７−１２７３．は、アルクチゲニンに抗炎症作用、及び免疫調節作用があることを報告した。高陽（Ｇａｏ Ｙ）ら（高陽ら、アルクチゲニンの体外での抗インフルエンザウイルス活性、漢方薬、２００２、（８）：７２４−７２６）は、アルクチゲニンに抗ウイルス活性があることを開示した。Ｋｉｍ  Ｓ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｄｉｂｅｎｚｙｌｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ  ｌｉｇｎａｎｓ  ｏｆ  Ｔｏｒｒｅｙａ  ｎｕｃｉｆｅｒａ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＣｌ４−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｒａｔ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．２００３；２６（８）：１２０２−１２０５．は、アルクチゲニンが腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する作用があることを公開した。以上の文献は、いずれも引用をもってその開示全体をここに援用することとする。
【００１２】
さらに、アルクチゲニンを分離するための抽出プロセスを報告した文献もあり、例えばＺｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．Ｌａｃｋ  ｏｆ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｒｃｔｉｉｎ  ｏｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｐｒｏｂａｓｉｎ／ＳＶ４０  Ｔ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．２００５；２２２（２）の第１４５−１５１頁には、カタツムリ酵素を用いてアルクチインを加水分解してアルクチゲニンを製造する方法が開示された。なお、『中薬化学成分分離抽出ハンドブック』（第７７頁、陽雲らが編集、中国中医薬出版社）には、アルクチゲニンの製造方法が報告され、ＨＰＬＣ測定による純度が９０％以上であった。中国発明特許出願ＣＮ１０１１３４０３１Ａには、２種のアルクチゲニンの製造方法及びその錠剤、ソフトカプセル、丸薬及び注射液の製造方法が開示されている。以上の文献は、いずれも引用をもってその開示全体をここに援用することとする。
【００１３】
現在、アルクチゲニンの血細胞の減少を予防又は治療する活性、特に、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療における活性を報告した文献はない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
発明の開示
本発明は、既存の血細胞減少の関連疾病を予防又は治療する薬物、特に骨髄抑制を予防及び治療する薬物に存在する欠点に鑑みてなされ、血細胞の減少を予防及び／又は治療し、特に放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を予防及び／又は治療する薬物を提供することを目的とする。
【００１５】
本発明者は、アルクチゲニンの抗癌活性を長期に研究して、多数の研究成果を取得した。最近、本発明者は、驚くべきことに、更なる研究過程において、アルクチゲニンが免疫の増強及び造血機能の促進の面で予期せぬ活性があることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記の知見に基づき、本発明の目的を実現される。より具体的には、本発明には以下の技術方案が含まれている：
本発明の一態様において、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する医薬の製造におけるアルクチゲニンの使用が提供される。
【００１７】
前記「アルクチゲニン」とは、前記構造を有する化合物を指し、抽出、生物合成、又は化学合成から得ることができ、アルクチゲニン、その医薬的に許容される塩又は可能な水和物が含まれる。本発明に係るアルクチゲニンは、アルクチゲニンの純度（ＨＰＬＣで測定した純度）が９０％以上、９５％以上、又は９８％以上の生物又は化学製品である。
【００１８】
本出願の出願日前に開示されたアルクチゲニンの製造方法は、何れも本発明に係るアルクチゲニンの製造方法として使用することができる。例えば、Ｚｅｎｇ  Ｙら（前文を参照）が開示した方法、又は中国特許出願第ＣＮ１０１１３４０３１Ａに開示された方法に従って調製を達成することができる。例えば、アルクチゲニンの抽出は、以下の工程を含むことができる：
（１）ゴボウの粗粉末を取り、適量の酸を添加してｐＨを酸性に調整して加水分解を行う。
（２）加水分解液を廃棄し、水でゴボウ水溶液をｐＨが中性になるまで洗浄し、乾燥して産物Ａを得る。
（３）前記（２）で得られた産物Ａを溶解する。
（４）前記（３）で得られた溶解液を冷却沈殿させ、沈殿物を除去する（例えば遠心分離機を用いる）。
（５）前記（４）の上清から産物Ｂを得る。
（６）産物Ｂを抽出して、アルクチゲニンの粗抽出物が得られ、ここで、アルクチゲニン含有量は６０％〜７０％である。
（７）アルクチゲニンの粗抽出物を精製（例えば、分取高速液体クロマトグラフィーによる精製）することにより、高純度のアルクチゲニンが得られ、その純度は９９．３％以上である。
【００１９】
前記の血細胞減少は、様々な原因により誘発され、例えば、特発性である場合もあるし、先天性である場合もあるし、或いは放射又は化学品により誘発された血細胞の減少である場合もあり、これらには、例えば、赤血球減少、血小板減少、又は各種白血球の減少などの種々の血細胞の減少が含まれる。前記の血細胞の減少に関連する疾病とは、血細胞の減少により誘発、媒介、又は引き起こされる疾病を指し、これらには、例えば血小板減少症、骨髄抑制、貧血、及び血細胞減少に関連するその他の特発性又は続発性の血液疾患が含まれるものの、これらに限定されるものではない。
【００２０】
本発明に係る「血小板減少症」とは、血小板の欠損を特徴とする病症であり、放射線療法又は化学療法、例えば抗癌剤により誘発した血小板減少症、及び特発性の血小板減少症、例えば原発性の血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ，ＩＴＰ）などが含まれる。現在、抗癌剤により誘発した血小板の喪失は、化学療法におけるスピード制限となっている。重篤な血小板減少症患者に対して、血小板レベルが閾値より高くなるまで、その治療を減らすか又は一時停止しなければならない。ＩＴＰ患者においてみられる臨床症状は、化学療法により誘発した血小板減少症患者と同じ臨床症状であり、出血のリスクの増加、及び命を脅かすような大出血さえ含まれる。
【００２１】
本発明に係る「骨髄抑制」または「ミエロサプレッション」とは、白血球、赤血球、好中球細胞を含む血細胞又は血小板の単独減少又は同時減少を指し、血細胞又は血小板の産出が減少されることにより特徴付けられる。健康な骨髄は、毎日大量の赤血球、白血球及び血小板を生成する。骨髄抑制の場合、骨髄から生成されるこれらの細胞が減少する。骨髄抑制の特徴の一つは、白血球の産出が減少することである。これら白血球の産出の減少は、ある治療より誘発される場合があり、特に癌治療、例えば化学療法及び放射線療法により誘発され得る。本発明に係る骨髄抑制の表現は、末梢血の白血球数の低下又は血小板減少、骨髄形成異常又は再生不良性貧血によって特徴付けられることが好ましい。一つの実施形態において、前記末梢血の白血球減少は、末梢血の好中球細胞の減少を示す。
【００２２】
本発明に係る「貧血」とは、ヘマトクリット測定による特徴に従って、血液中の赤血球及びヘモグロビンの数量、又は充填赤血球量が正常値より低く減少している状態を指す。病因に基づき貧血を分類することができ、例えば、再生不良性貧血、溶血性貧血、鉄欠乏性貧血及び鎌状赤血球貧血などが含まれるものの、これらに限定されない。これらの中でも、再生不良性貧血の特徴は、赤血球の再生欠乏及び治療に対する抵抗である。これらの患者において、骨髄性細胞、赤血球系及び血小板生成幹細胞群が明らかに低下し、汎血球減少症に至らしめる。
【００２３】
以上の疾病の基礎的病理学及び臨床症状は血細胞の減少として現れ、上記疾患のなかで一致していることが理解できる。したがって、本発明のアルクチゲニンの、免疫力増加、及び造血機能の促進における活性に基づき、本発明は、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する医薬の製造におけるアルクチゲニンの使用を提供する。
【００２４】
前記血細胞の減少は、血小板減少及び白血球減少であることが好ましく、好中球細胞の減少であることが特に好ましい。上記の疾病において、好ましくは、アルクチゲニンを骨髄抑制の予防又は治療のために用い、より好ましくは、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療のために用いる。
【００２５】
したがって、一つの具体的な実施形態において、本発明は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を予防又は治療するための医薬におけるアルクチゲニンの使用を提供する。
【００２６】
前記「放射」は、放射線療法の過程で受けた放射であってもよく、仕事、環境などの他の原因によって受けた放射であってもよい。好ましくは、本発明の使用における前記放射は、放射線療法の過程で受けた放射であり、例えば、癌治療のために放射線療法プロセスの間に受ける放射である。
【００２７】
前記「化学品」とは、血細胞の減少を引き起こし得るいずれの薬物又は化学薬剤であってもよい。一つの実施形態において、本発明の使用における上記化学品には、癌を治療するための化学療法薬物である。前記化学療法薬物は、アルキル化剤系薬物、代謝抵抗剤系薬物、抗生剤系薬物、植物系薬物、及びホルモン系薬物などが含まれるものの、これに限定されるものではない。アルキル化剤系薬物は、メクロレタミン、シクロホスファミド、チオテパ、シクロヘキシルニトロソ尿素、マイレラン(Ｍｙｌｅｒａｎ)、ダカルバジン、メチルベンジルヒドロジンなどを含むものの、これらに限定されるものでもない。前記代謝抵抗剤薬物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フトラフール（ＦＴ−２０７）、テガジフール（Ｔｅｇａｄｉｆｕｒ）（ＦＤ−１）、ウラシル−テガフール（ＵＦＴ）、フルツロン（５−ＤＦＵＲ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、アミノプテリン（白血寧）、アラビノシチジン（Ａｒａ−ｃ）、シクロシチジン、シクロシチジン塩酸塩、ヒドロキシウレア（ＨＵ）、イノシンジアルデヒド（ｉｎｏｓｉｎｅ  ｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ）、アデノシンジアルデヒド（アデノシンジアルデヒド−ｈｇｄｅ）、グアナゾール（ｇｕａｎａｚｏｌｅ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）を含むものの、これらに限定されるものではない。前記抗生剤系薬物は、ペニシリン系抗生剤、セファロスポリン系抗生剤、アミノグリコシド系抗生剤、マクロライド系抗生剤、スルホンアミド系抗生剤、キノロン系抗生剤、フラン系抗生剤を含むものの、これらに限定されるものではない。前記植物系薬物は、植物由来の薬物であり、伝統的な漢方薬配合類の薬物、現代の抽出分離手段により植物の有効な部位から獲得したもの、又は漢方単体を含む。前記ホルモン系薬物は、グルココルチコイド、副腎皮質ホルモン、ノルエピネフリンホルモン、プロゲステロン、エストロゲン、アンドロゲンなどを含むものの、これらに限定されるものでもない。
【００２８】
前記癌を治療するための化学療法薬物は、好ましくは、ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、イマチニブメシル酸塩（ｉｍａｔｉｎｉｂ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）又はその組み合わせであるが、これらに限定されるものではない。
【００２９】
本発明の第２の態様は、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する方法に関し、前記方法は、アルクチゲニンの有効量を、前記治療又は予防を必要とする被験体に投与する工程を含む。
【００３０】
前記「被験体」とは、哺乳動物であっても良く、例えばヒトであってもよい。
前記「有効量」には、治療有効量及び予防有効量が含まれる。「治療有効量」とは、投与される場合に必要時間内に希望する治療結果を達することができる量を指し、例えば、希望する骨髄抑制治療結果を得ることができる量である。ここで、前記アルクチゲニンの治療有効量は、投与経路、治療の異なる性質、患者の年齢、性別、体重、及び健康状況、及び放射線療法又は化学療法の種類並びに治療に関わる医師によって最終的に決定される他の因子に従って変更すると理解することができる。投与レジメンを調整することで、最良の治療効果を提供することができる。治療有効量は、有益な治療作用が毒性又は有害作用の何れを超える量であることもできる。「予防有効量」とは、投与される場合に必要時間内に希望する予防効果を達することができる量を指し、例えば、骨髄機能を予防若しく保護し、又は造血細胞を維持することができる量である。予防的投与は、通常、疾病が発する前に、又は疾病の比較的に早期段階で行われるため、予防有効量は治療有効量より低くても良い。
【００３１】
血細胞減少の予防又は治療に用い、好ましくは骨髄抑制の予防又は治療に用い、特に好ましくは、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療に用いるアルクチゲニンの有効量の範囲は、０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄであり、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇ／ｄであり、より好ましくは５〜５０ｍｇ／ｋｇ／ｄであり、例えば、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄである。
【００３２】
さらに、本発明によれば、アルクチゲニンは唯一の活性成分として血細胞減少に関連する疾病の予防及び／又は治療に用いられることができ、好ましくは、骨髄抑制の予防又は治療に用いられ、特に好ましくは、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療に用いられ、前記予防及び／又は治療を行うために他の薬物と組み合わせて使用することもできる。
【００３３】
血細胞減少を予防又は治療するため、特に、骨髄抑制を予防又は治療するためにアルクチゲニンと組み合わせて使用できる他の薬物は、白血球減少の治療において使用する他の薬物のうちの一種または複数（例えばビタミンＢ４、リュコゼン（Ｌｅｕｃｏｇｅｎ）、バチロール（Ｂａｔｉｌｏｌ）、補酵素Ａ）であることができ、又は血小板の数を増加させ得る薬物のうちの一種または複数（例えばインターロイキン−II、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）等の低用量糖質コルチコイド）であることができる。
【００３４】
一つの実施形態によれば、本発明の医薬用途において、他の薬物と組み合わせて使用する場合、二種の薬物の重量比は、患者の病状及び症状に合わせて適当に調整することができ、他の薬物とアルクチゲニンの重量比の好ましい範囲は、（０．００５−１００）：１であり、より好ましくは（０．００５−５０）：１であり、さらに好ましくは（０．０１−１００）：１であり、例えば（０．０５−２５）：１である。
【００３５】
アルクチゲニンは他の薬物と組み合わせて使用できるものの、好ましくは、アルクチゲニンを唯一の活性成分として放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を予防及び／又は治療するために使用する。
【００３６】
アルクチゲニンと、任意に選択した他の薬物の投与経路は、胃腸経路及び非経口経路を含み、非経口経路には、皮下、皮内、動脈、静脈、筋肉、関節、髄腔内、頭蓋内、胸膜内、腹腔内注射又は点滴注射があり、また、鼻、頬、舌下、気管、尿道、直腸、局所への投与が含まれるものの、これらに限定されることでもない。
【００３７】
放射又は化学品より誘発した骨髄抑制の予防及び／又は治療におけるアルクチゲニンの使用において、アルクチゲニンを、放射線療法又は化学療法を施す前に、途中に、又は施した後に使用することができる。アルクチゲニンを他の薬物と組み合わせて使用する場合、アルクチゲニンを他の薬物と同時に投与してもよいし、順次に投与してもよい。
【００３８】
本発明の第３の態様は、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する製剤に関し、この製剤は、アルクチゲニン及び医薬的に許容される医薬賦形剤を含む。前記製剤は、好ましくは骨髄抑制の予防又は治療に用いられ、特に好ましくは、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療に用いられる。
【００３９】
本発明で使用する「医薬的に許容される医薬賦形剤（薬用補助材）」とは、アルクチゲニンの生理的な役割に干渉せず、且つ人間を含む被験体に対して毒性のない全ての物質を指す。
【００４０】
本発明の製剤に用いられる医薬賦形剤は、当該分野で周知の従来の賦形剤である。適合な医薬賦形剤は、『薬用補助材大全』（第１２３頁、四川科学技術出版社、１９９３年出版、羅明生及び高天恵編集）に既に詳しく記載されている。例えば、マイクロエマルション製剤の製造によく用いられる医薬賦形剤は、大豆油、ポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル、１，２−プロパンジオール、水素化ココナッツ油グリセリド、ラウロイルポリエチレングリコール−３２−グリセリド、ポリエチレングリコール３３５０、紅花油、綿実油、モノステアリン酸デカグリセリルを含むものの、これらに限定されるものではない。丸薬製剤の製造によく用いられる医薬賦形剤には、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレングリコール１０００が含まれるものの、これらに限定されるものではない。カプセル製剤の製造によく用いられる医薬賦形剤は、乳糖とコーンスターチが含まれるものの、これらに限定されない。ソフトカプセル製剤の製造によく用いられる医薬的に許容されるキャリアには、中鎖脂肪酸グリセリド、ポリオキシエチレンヒマシ油、１，２−プロパンジオールが含まれるものの、これらに限定されない。
【００４１】
当業者は、実際の必要に応じて適当な医薬賦形剤を選択することができ、当該技術分野において一般的に利用される方法によって（例えば、中国特許出願ＣＮ１０１１３４０３１Ａを参照）、本発明の製剤を製造することができる。前記製剤には、固体、液体、油、乳剤、ゲル、エアロゾル、吸入剤、スプレイ剤、カプセル、丸剤、パッチ、及び坐剤が含まれるものの、これらに限定されない。
【００４２】
一つの好ましい実施形態によれば、本発明の製剤の剤型は、胃腸又は非経口投与に適する剤型であり、好ましくは、錠剤、乳剤、マイクロエマルション製剤、カプセル剤、丸薬又はソフトカプセルであり、より好ましくは、エマルション製剤である。前記エマルション製剤の平均粒径は１５−８０ｎｍであることが好ましい。
【００４３】
本発明のアルクチゲニンは、血細胞減少に関連する疾病の予防又は治療、特に放射又は化学品により誘発された骨髄抑制の予防又は治療において、以下に記載の有益な効果を有するものの、これに限定されない：
（１）癌治療において白血球の低下を防止し、ひいては好中球細胞の数量の低下を防止して、それによって、抗腫瘍化学療法の効果を向上させ、癌患者の生存期間を延長し、生活の質を改善する。腫瘍マウスの化学療法より誘発した骨髄抑制に対するアルクチゲニンの影響試験から分かるように、アルクチゲニンは、予期できない骨髄抑制を緩和する効果を有している。より具体的には、モデル組と比べて、アルクチゲニン組の白血球総数及び好中球細胞数は何れも増加され、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）又は有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。同時に、アルクチゲニン組は、ドセタキセル組とイマチニブメシル酸塩組に比べて、白血球総数及び好中球細胞数は何れも大幅に増加され、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）を示した。
（２）アルクチゲニンは、化学療法剤と同時に使用することができる。アルクチゲニンは、白血球減少症が現れた後にのみ投与するよりむしろ、副反応をある程度減少するために予防の目的で使用することも可能である。さらには、試験結果から分かるように、アルクチゲニンが、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩と組み合わせて抗癌剤として使用される場合、アルクチゲニンは、腫瘍の生長を阻害する作用を発揮するだけでなく、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩によって引き起こされる骨髄抑制を緩和させることができる。従って、アルクチゲニンは、化学療法剤と同時に使用できる。アルクチゲニンは、白血球減少症が現れた後にのみ投与するよりむしろ予防の目的で使用することが可能であり、それによって、腫瘍抑制率を確保すると共に、骨髄造血を促進し、白血球の数量及び好中球細胞数を増加させ、且つある程度の副反応を減少することができる。骨髄抑制を軽減するアルクチゲニンの効果は、骨髄中の造血幹細胞の増殖及び再生を促進するアルクチゲニンの能力と関係する可能性がある。表１の試験結果から分かるように、アルクチゲニン組のマウスの体重は（単独で投与される場合も他の薬剤と組み合わせて投与される場合も）、投与期間中、モデル組のマウスと有意差はない。動物の飲食量と生活状態にも明らかな差は観察されなかった。この結果は、アルクチゲニンが腫瘍抵抗剤及び骨髄抑制緩和剤として、顕著な毒性又は副作用がないことを意味する。
（３）放射線療法プロセスの間に生じた骨髄抑制の予防又は治療に対しても、アルクチゲニンは顕著な効果を有する。４Ｇｙ照射量で６０Ｃｏ照射したマウスの白血球及び血小板に対するアルクチゲニンの効果の実験結果から分かるように（表３）、アルクチゲニンは、放射線療法により生じた骨髄抑制に対し予期せぬ緩和効果を示した。具体的には、モデル組に比べて、アルクチゲニン組の白血球総数及び血小板総数は何れも増加され、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）又は有意差（Ｐ＜０．０５）を示し、ゴボウ抽出物組と比べて有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。
【実施例】
【００４４】
本発明の好ましい実施形態
本発明を、以下の実施形態を参照することによりさらに説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されない。
【００４５】
実施例１  アルクチゲニンの製造
（１）ゴボウ１ｋｇを取り、適量の塩酸又は硫酸を添加して溶液のｐＨを１．５程度に制御し、６５℃の温度で６時間加水分解した。
（２）酸性加水分解液を除去し、水でゴボウ抽出物の水溶液をｐＨが中性になるまで洗浄し、８０℃で乾燥して産物Ａを得た。
（３）適量のエタノールを用いて産物Ａを溶解させ、加熱還流してエタノール抽出液を得た。
（４）得られたエタノール抽出液を４℃で冷却沈殿させ、チューブ式遠心分離機を用いて２０００ｒ／ｍｉｎの回転速度で沈殿物を除去し、遠心分離した後の上清を収集した。
（５）得られた上清を乾燥して産物Ｂを得た。
（６）産物Ｂを粉状に研磨し、ジクロロメタンを添加して２．５時間抽出し、ジクロロメタン抽出液を減圧で蒸留して、アルクチゲニンの純度が６５％である粗製アルクチゲニンを得た。
（７）分取高速液体クロマトグラフィーにより、アルクチゲニン粗抽出物を精製して粗製アルクチゲニンを得た。
得られたアルクチゲニン粗抽出物を、アセトニトリル−水溶媒（アセトニトリル：水＝２：３、ｖ／ｖ）で溶解し、濾過して、分取高速液体クロマトグラフィーで精製した。充填材は粒径１０ｕｍであるオクタデシルシラン結合シリカ微粒子（ＳＥＰＡＸ、寧波海曙恒隆実験器材有限公司から購入）であり、移動相はアセトニトリル−水（アセトニトリル：水＝２：３、ｖ／ｖ）からなり、流速は２６０ｍｌ／ｍｉｎ−３３０ｍｌ／ｍｉｎであり、試料注入量は５０−１００ｍｌであり、定組成溶離を行った。紫外線検出器を採用し、測定波長２８０ｎｍでオンライン測定を行い、アルクチゲニンの製造成分を集中的に収集して、アルクチゲニン溶液を得た。アルクチゲニン溶液を減圧蒸留して、その中のアセトニトリルと水を除去して、高純度のアルクチゲニンが得られ、ＨＰＬＣ測定したアルクチゲニンの純度は９９．５％であった。
【００４６】
実施例２：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表１】
2013542205.tif 000003
製造工程：処方量の大豆油、ポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル、及び１，２−プロパンジオールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、ここで、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンマイクロエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径は１５ｎｍであった。
【００４７】
実施例３：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表２】
2013542205.tif 000004
製造工程：処方量の水素化ココナッツ油グリセリド、ラウロイルポリエチレングリコール−３２−グリセリド、１，２−プロパンジオール、及びポリエチレングリコール３３５０を量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンマイクロエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径が４０ｎｍであった。
【００４８】
実施例４：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表３】
2013542205.tif 000005
製造工程：処方量の紅花油、ポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル、及び１，２−プロパンジオールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンマイクロエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径が３６ｎｍであった。
【００４９】
実施例５：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表４】
2013542205.tif 000006
製造工程：処方量の綿実油、モノステアリン酸デカグリセリル、及び１，２−プロパンジオールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径が８０ｎｍであった。
【００５０】
実施例６：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表５】
2013542205.tif 000007
製造工程：処方量の大豆油、モノステアリン酸デカグリセリル、及び１，２−プロパンジオールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンマイクロエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径は４７ｎｍであった。
【００５１】
実施例７：アルクチゲニンマイクロエマルション製剤
【表６】
2013542205.tif 000008
製造工程：処方量の大豆油、モノステアリン酸デカグリセリル、及び１，２−プロパンジオールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清澄液のアルクチゲニンマイクロエマルション製剤を得た。レーザー粒度測定装置で測定した平均粒径が５８ｎｍであった。
【００５２】
実施例８：アルクチゲニン丸薬製剤
【表７】
2013542205.tif 000009
製造工程：処方量のアルクチゲニン（１００メッシュによってふるいにかけたもの）を量り取って、既に水浴で加熱溶融した処方量のポリエチレングリコール６０００、及びポリエチレングリコール１０００を含む混合液の中に添加し、十分に混合し、滴瓶中に装入し、９５±２℃の条件下で滴下プロセスを行った。４−６ｍＬのメチルシリコーン油が収容されているガラス凝縮カラムに滴下し、成形してから取り出し、吸水ペッパで粘着されたメチルシリコーン油を除去した。
【００５３】
実施例９：アルクチゲニン腸溶ソフトカプセル製剤
内容物処方：
【表８】
2013542205.tif 000010
カプセルシェル処方：
【表９】
2013542205.tif 000011
腸溶コーティング液の処方：
【表１０】
2013542205.tif 000012
製造工程：処方量の中鎖脂肪酸グリセリド、ポリオキシエチレンヒマシ油、１，２−プロパンジオール、無水エタノールを量り取り、混合してから十分に攪拌し、その後アルクチゲニンを添加して溶解し、ここで、超音波処理を必要に応じて行って溶解を促進し、清浄な濃縮液のアルクチゲニンマイクロエマルション濃縮物を得た。上記得られたマイクロエマルション濃縮物に、１：１０−２０の重量比で水を添加して希釈し、清浄液のソフトカプセルマイクロエマルション内容物を得た。処方量のゼラチン、グリセリン、精製水を量り取り、十分に混合して、カプセルシェルにプレスした。さらに処方量のＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ−５５、クエン酸トリエチル、タルク粉、精製水を量り取り、十分に混合して、腸溶コーティング液を得た。アルクチゲニンを含有するソフトカプセルマイクロエマルション内容物をカプセルシェルに入れてソフトカプセルを製造し、該ソフトカプセルに腸溶コーティング液を塗布して腸溶ソフトカプセルを得た。
【００５４】
実施例１０：アルクチゲニンカプセル製剤
【表１１】
2013542205.tif 000013
製造工程：アルクチゲニン１００ｇ、乳糖１２０ｇ及びコーンスターチ１３０ｇを混合装置の中で１０−１５分間混合し、ステアリン酸マグネシウム５ｇを添加してからさらに１−３分間混合し、これを１０００粒のカプセルシェルに殻に装入した。
【００５５】
実施例１１  腫瘍マウスにおいて化学療法によって引き起こされた骨髄抑制に対するアルクチゲニンの効果
１．材料
１．１  動物：昆明マウス（中国薬品生物製品検定所から購入、試験動物許可証番号：ＳＣＸＫII−００−００１０、雌雄半々、７週齢、マウス体重１８〜２２ｇ）を、２０±１℃、湿度４０％〜７０％で飼育し、自由に通常の餌料と水を与えた。
【００５６】
１．２  薬剤：
【表１２】
2013542205.tif 000014
【００５７】
２．方法：
３７℃，５％ＣＯ２条件の下で、マウスの癌細胞株ｓ１８０細胞を１６４０培養液の中で培養を行い、対数増殖期まで平均で二日毎に継代培養を行い、生理食塩水で密度が３．０×１０７個／ｍｌである単細胞懸濁液を調製した。無菌条件の下で、細胞懸濁液をマウスの腹腔に注射した。接種して七日後に、マウスの腹腔が明らかに腫れ、マウスを頸椎脱臼により殺傷し、７５％エタノールが装入されているビーカーの中で２〜３分間浸漬した。消毒した後のマウスを無菌実験台に置いて、腹部を曝し、無菌注射器で腹水を抽出し、さらなる使用のために無菌試薬瓶に保存した。上記の腹水をトリパンブルー（Ｔｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ）染色で計数し、生理食塩水で希釈して、細胞数が２．０×１０７個／ｍｌになるようにした。動物一匹あたり０．２ｍｌの量で、マウスの右腋の下に希釈液を接種した。
接種した後のマウスを、一組１０匹、かつ雌雄半々で、ランダムに以下の６組に分けた。
第１組はモデル組（グループＭ）：０．９％生理食塩水を腹腔に注射、
第２組はドセタキセル組（グループＤ）：７５ｍｇ／ｍ２／ｄドセタキセルを接種、
第３組はイマチニブメシル酸塩組（グループＩＭ）：２２２．２ｍｇ／ｍ２／ｄイマチニブメシル酸塩を接種、
第４組はアルクチゲニン組（グループＡ）：１０ｍｇ／ｍ２／ｄアルクチゲニンを接種、
第５組はドセタキセル＋アルクチゲニン組（グループＤ＋Ａ）：７５ｍｇ／ｍ２／ｄドセタキセル＋１０ｍｇ／ｍ２／ｄアルクチゲニンを接種、
第６組はイマチニブメシル酸塩＋アルクチゲニン組（グループＩＭ＋Ａ）：２２２．２ｍｇ／ｍ２／ｄイマチニブメシル酸塩＋１０ｍｇ／ｍ２／ｄアルクチゲニンを接種。
ドセタキセルとイマチニブメシル酸塩は、尾静脈注射により投与し、投与体積はそれぞれ２０ｍｌ／ｋｇである。アルクチゲニンは腹腔注射により投与し、投与体積は１０ｍｌ／ｋｇである。各組は、毎日一回で、合計十日投与を行った。実験プロセスにおいて、毎日動物の飲食、生存活動及び行為活動を観察し、毎日体重を測定した。実験の終了時に、動物を麻酔して解剖し、腹部の主静脈から採血して、ルーチンな血液検査を行い、白血球の総数、血小板の総数及び好中球細胞の総数を調査した。
【００５８】
３．  結果：
【表１３】
2013542205.tif 000015
【００５９】
表１の実験結果から分かるように、アルクチゲニン組（アルクチゲニンが単独で投与される場合も他の薬剤と組み合わせて投与される場合も）とモデル組のマウスとの間で、投与期間において、体重の顕著な差はない。動物の飲食量及び生活状態にも明らかな差別がなかった。この結果は、アルクチゲニンが抗腫瘍剤及び骨髄抑制緩和薬として、明らかな毒性又は副作用がないことを説明する。
【表１４】
2013542205.tif 000016
【００６０】
腫瘍マウスにおいて化学療法により誘発した骨髄抑制に対するアルクチゲニンの実験効果から分かるように（表２）、ドセタキセル組又はイマチニブメシル酸塩組（グループＤ又はＩＭ）のマウスは、その好中球細胞の数量がモデル組（グループＭ）に比べて明らかに減少した。対照的に、アルクチゲニンは骨髄抑制を緩和する予期せぬ効果を示した。具体的には、モデル組と比べて、アルクチゲニン組の白血球総数及び好中球細胞数はいずれも増加しており、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）又は有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。それと同時に、ドセタキセル組とイマチニブメシル酸塩組と比べて、アルクチゲニン組では、白血球総数及び好中球細胞数はいずれも大幅に増加しており、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）を示した。
【００６１】
さらには、実験結果から分かるように、アルクチゲニンは、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩と組み合わせて抗癌剤として使用する場合、腫瘍の成長を抑制する作用を発揮するだけでなく、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩によって引き起こされる骨髄抑制を緩和する。従って、アルクチゲニンは、他の化学療法剤と同時に使用することができる。アルクチゲニンは、白血球減少症が現れた後にのみ投与するよりむしろ予防の目的で使用することが可能であり、それによって、腫瘍抑制率を確保すると共に、骨髄造血を促進し、白血球の数量及び好中球細胞数を増加させ、且つある程度の副反応を減少することができる。骨髄抑制を軽減するアルクチゲニンの効果は、骨髄中の造血幹細胞の増殖及び再生を促進するアルクチゲニンの能力と関係する可能性がある。
【００６２】
実施例１２：６０Ｃｏ放射マウスの赤血球数に対するアルクチゲニンの効果
１．材料
１．１  動物：昆明マウス（中国薬品生物製品検定所から購入、実験動物許可番号：ＳＣＸＫ  II−００−００１０、雌雄半々、７週齢、体重１８〜２２ｇ）を、２０±１℃、湿度４０％〜７０％で飼育し、自由に通常の餌料と水を与えた。
【００６３】
１．２  薬剤：
【表１５】
2013542205.tif 000017
【００６４】
２．方法
正常組（１０匹）を除いて、他の各組のマウスに対して４Ｇｙ照射量で一度６０Ｃｏ放射を行った（全身照射を採用し、吸収線量は４Ｇｙで、吸収線量率は０．８８Ｇｙ／ｍｉｎである）。放射後の３日目、７日目、１０日目に、それぞれ眼窩静脈から採血して全血細胞数を検出した。連続で２回の全血細胞数の測定において、白血球の数が３．０×１０９／Ｌより低い又は血小板数が５００×１０９／Ｌより低いマウスを取り除き、残りのマウスを試験用のマウスとした。
【００６５】
照射後の実験要求を満たすマウスを、一組１０匹、雌雄半々で、ランダムに以下のモデル組、ゴボウ抽出物組とアルクチゲニン組に分けた。各組に対し、それぞれ以下のような方式で処理又は投与した。
第１組は正常組（グループＮ）：０．９％生理食塩水を腹腔注射、投与体積１０ｍｌ／ｋｇ
第２組はモデル組（グループＭ）：０．９％生理食塩水を腹腔注射、投与体積１０ｍｌ／ｋｇ
第３組はゴボウ抽出物組（グループＥ）：３．５ｍｌ／ｋｇ／ｄの用量でＡｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａの水抽出液を腹腔注射
第４組はアルクチゲニン組（グループＡ）：１０ｍｇ／ｋｇ／ｄアルクチゲニンを腹腔注射、投与体積１０ｍｌ／ｋｇ。
上記のゴボウ抽出物の製造方法は、以下のとおりである：（１）ゴボウをポットに入れ、その植物が完全に漬けられるまで、水を添加した。（２）有効成分の抽出を促進するためゴボウを３０ｍｉｎ漬けた。（３）沸騰するまで急速に加熱し、１−３ｍｉｎ完全に沸騰させ、引き続き２０−３０ｍｉｎ加熱して濃縮させ、滅菌ガーゼを通してビーカーに濾過した。（４）効果のバランスをとるため、最初の抽出の後に、最初の用量と再抽出された薬剤を一様に混合した。１ｋｇのゴボウから２００ｍＬの水抽出液に製造した。
【００６６】
各組に対し、毎日一回で、合計十日投与を行った。実験プロセスの間において、毎日動物の飲食、生存活動及び行為活動を観察し、毎日体重を測定した。試験の終了時に、動物を麻酔して解剖し、腹部の主静脈から血液を採取し、ルーチンの血液検査を行って、白血球総数及び血小板総数を調査した。
【００６７】
３．試験結果
【表１６】
2013542205.tif 000018
【００６８】
４Ｇｙで６０Ｃｏ放射を行ったマウスの白血球及び血小板に対するアルクチゲニンの効果の実験結果（表３）からわかるように、アルクチゲニンは、放射線療法により生じた骨髄抑制を緩和する予期せぬ効果があった。具体的には、モデル組に比べて、アルクチゲニン組の白血球総数及び血小板総数はいずれも増加し、極めて高い有意差（Ｐ＜０．０１）又は有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。また、ゴボウ抽出物組と比べても有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。
【００６９】
実施例１３：ＮＯＤマウスの白血球及び血小板に対するアルクチゲニンの効果
非肥満型の糖尿病（ＮＯＤ）マウスは、大きいマウス系統であり、ＮＯＤ／Ｓｃｉｄ、ＮＯＤ／Ｌｔｊマウスなどを含む。馮義ら（馮義、肖志堅、徐世才など、臍帯血巨核球細胞の体外拡増［Ｊ］．中国医学院科学院学報、Ｖｏｌ．２７、Ｎｏ．２：１９９−２０４）は、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）及びヘパリンを組み合わせて使用することによって、臍帯血ＣＤ３４＋細胞により巨核球前駆細胞を直接的に増殖させた。増幅して七日目に、増幅した巨核球細胞（濃度は５×１０６）を放射線の前処理を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに静脈注射すると、その血小板及び白血球のアカウントの回復を明らかに加速させ、マウスの生存を向上させることができた。本実験で使用したＮＯＤ／Ｌｔｊマウスは、免疫欠損マウスであり、その血小板及び白血球は通常のマウスに比べて明からに低下している。
【００７０】
１．材料
１．１  動物：ＮＯＤ／Ｌｔｊマウス（北京維通利華実験動物技術有限公司から購入、実験動物許可証番号はＳＣＸＫ（京）２００６−０００９）、雌性、５週齢、体重１６−２０ｇ、５２匹。
１．２  薬剤：
インターロイキン、Sino Biological Inc.から購入
ペントバルビタールナトリウム、上海科豊化学試剤有限公司から購入
アルクチゲニン、実施例１により製造、純度は９９．３％。
【００７１】
２．組分け及び投与：
１週間の適応性飼育をした後、５週齢の健康なＮＯＤマウスを取って、ランダムに４組に分けた。
Ｉ組はモデル対照組であり、合計１３匹である。
ＩＩ組は陽性対照組であり、合計１３匹で、毎日インターロイキン１０．０ｍｇ／ｋｇを胃内投与する。
ＩＩＩ組は低用量のアルクチゲニン組であり、合計１３匹で、毎日アルクチゲニン３０ｍｇ／ｋｇを胃内投与する。
ＩＶ組は高用量のアルクチゲニン組であり、合計１３匹で、毎日アルクチゲニン６０ｍｇ／ｋｇを胃内投与する。
各組に対し、毎日一回で、１５日連続して投与した後停止した。動物を麻酔して（３％ペントバルビタールナトリウム、腹腔注射、０．１〜０．１５ｍｌ／動物）、腹部の主静脈から１ｍｌを採血して抗凝固管に移し、ルーチンの血液検査を行った。
【００７２】
【表１７】
2013542205.tif 000019
【００７３】
表４から分かるように、低用量と高用量のアルクチゲニン組の白血球数量及び血小板数量は、何れもモデル組より明らかに高く、顕著な治療作用を体現した。陽性対照組（血小板の減少を防止するためのインターロイキン）に比べて、アルクチゲニン組は、白血球数量を増加させる面で顕著にメリット（ｐ＜０．０５）を示し、血小板の数量も顕著に増加し、免疫も向上した。特に、高用量のアルクチゲニン組は、他の組に比べて、白血球数及び血小板数を増加させる能力において、顕著なメリットを示した。
【００７４】
本発明は、アルクチゲニンを開発するための新しいルートを提供し、放射線療法又は化学療法の毒性及び副作用を低減させるために、理想的な天然薬物を提供し、従って、好ましい経済利益及び社会利益を生じることができる。
【００７５】
以上、本明細書で言及される全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、具体的な好ましい実施形態を参照して記載されているが、特許請求された本発明がそのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきでないことは理解されるべきである。実際に、生物化学及びバイオテクノロジー又は関連分野の当業者にとって明らかな、本発明を実施するための記載された方法の種々の修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【手続補正書】
【提出日】平成25年6月7日(2013.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
【表１７】
2013542205.tif 000020
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
以上、本明細書で言及される全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、具体的な好ましい実施形態を参照して記載されているが、特許請求された本発明がそのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきでないことは理解されるべきである。実際に、生物化学及びバイオテクノロジー又は関連分野の当業者にとって明らかな、本発明を実施するための記載された方法の種々の修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。

本発明は、以下の態様を包含する。
［１］
血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する医薬の製造におけるアルクチゲニンの使用。
［２］
前記医薬は、血小板減少症、骨髄抑制、又は貧血の治療に用いられることを特徴とする上記［１］に記載の使用。
［３］
前記骨髄抑制は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制であることを特徴とする上記［２］に記載の使用。
［４］
前記化学品は、癌治療用の化学療法薬物であることを特徴とする上記［３］に記載の使用。
［５］
前記癌治療用の化学療法薬物は、ドセタキセル又はイマチニブメシル酸塩であることを特徴とする上記［４］に記載の使用。
［６］
前記骨髄抑制は、末梢血白血球の数の低下又は血小板減少症、骨髄形成異常又は再生不良性貧血であることを特徴とする上記［２］〜［５］のいずれか一項に記載の使用。
［７］
前記骨髄抑制は、末梢血の好中球細胞の低下であることを特徴とする上記［６］に記載の使用。
［８］
前記血小板減少症は、放射線療法又は化学療法により誘発された血小板減少症又は先天性血小板減少症であることを特徴とする上記［２］に記載の使用。
［９］
前記先天性血小板減少症は、特発性血小板減少性紫斑病であることを特徴とする上記［８］に記載の使用。
［１０］
アルクチゲニンを唯一の活性成分として使用することを特徴とする上記［１］〜［９］のいずれか一項に記載の使用。
［１１］
血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する方法であって、該治療又は予防を必要とする被験体に有効量のアルクチゲニンを投与する工程を含む、方法。
［１２］
前記方法は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を治療又は予防するために使用されることを特徴とする上記［１１］に記載の方法。
［１３］
アルクチゲニンと、医薬的に許容される賦形剤とを含む、血細胞減少に関連する疾病を予防又は治療する製剤。
［１４］
前記製剤は、放射又は化学品により誘発された骨髄抑制を治療又は予防するために使用されることを特徴とする上記［１３］に記載の製剤。
［１５］
前記製剤は、平均粒径が１５−８０ｎｍのマイクロエマルション製剤であることを特徴とする上記［１３］又は［１４］に記載の製剤。
［１６］
被験体において血細胞の産生を刺激する方法であって、有効量のアルクチゲニンを被験体に投与することを含む、方法。
【国際調査報告】
2013542205.tif 000021
2013542205.tif 000022
2013542205.tif 000023
2013542205.tif 000024
2013542205.tif 000025
2013542205.tif 000026
2013542205.tif 000027
2013542205.tif 000028