(57)【要約】【課題】チロシンキナーゼモジュレーターである新規化合物を提供する。【解決手段】本発明は、式（Ｉ）の新規化合物を対象とする。本発明の化合物は、強力なチロシンキナーゼモジュレーターであり、チロシンキナーゼ受容体の異常な活性に関連する疾患および状態を治療および予防するのに適している。【選択図】なし【化１】2013503903.tif 000038
2013503903.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
任意の薬学的に許容される塩またはプロドラッグを包含する式Ｉによって表される化合物：
【化１】
2013503903.tif 000031
式Ｉ
［式中、
Ｘは、ＮＲ1、Ｏ、Ｓ（Ｏ）nからなる群から選択され；
ｎは、０であるか、または１から２の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環を形成していてよく；
ＲIは、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｓ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＳ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＳＯ2Ｒ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＯＳＯ2Ｒ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、ＯＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）Ｎ＝Ｓ（Ｏ）Ｒ5Ｒ6、ＮＲ2Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、ＨＮＣ（Ｏ）Ｒ4、ＨＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4および（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2からなる群から選択され、ここで、Ｒ4はそれぞれ、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、アリール、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、（ＣＲ5Ｒ6）dおよびＮ（Ｒ4）2は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、５−フルオロピロリジン、ピペリジン、６−フルオロピペリジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、２，６−ジメチルモルホリン、チオモルホリンを含む３〜７員の複素環式環を形成していてよく、かつ前記複素環式環は、３個までのＲ5で置換されていてもよく；Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキル、スルホネートからなる群から独立に選択され、かつＣＲ5Ｒ6は、５から６個の炭素を含む炭素環式または複素環式環を表していてよいか、または代わりに、（ＣＲ5Ｒ6）dおよび（ＣＲ5Ｒ6）eは、３〜７員の炭素環式または複素環式環を形成していてよく、その環は、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキルおよびスルホネートのうちの３個までで置換されていてもよく；
ａは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｄは、０であるか、または１から５の整数であり；
ｅは、１から４の整数であり；
ｆは、０であるか、または１から２の整数であり；
ＲIIは、水素、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲ2Ｒ3）アルコキシ、（ＮＲ2Ｒ3）アルケニル、（ＮＲ2Ｒ3）アルキル、（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルケニルおよび（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルキルからなる群から選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
ｂは、０または１から２の整数であり；
Ｙは、
（ａ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｏ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｂ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ1−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｃ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＯ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｄ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｅ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ2Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｆ）  −（ＣＨ2）ｇ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｇ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｈ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ2）ｈ−；および
（ｉ）  単結合
からなる群から選択され；
ここで、
ｇは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｈは、０であるか、または１から３の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいはＲ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
Ｒ2は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から選択され；
環Ａは、
【化２】
2013503903.tif 000032
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）ナフチル；
（ｉｉｉ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜５個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基および
（ｉｖ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜６個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIIIは、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐アルキル、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ5アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロからなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；
Ｚは、
（１’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（２’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（３’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）；
（４’）  Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（５’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｓ（Ｏ）2；および
（６’）  Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
からなる群から選択され；
ここで、
ｉは、０または１であり；
ｊは、０または１であり；
Ｒ7およびＲ8は、水素およびアルキルからなる群から独立に選択され；
環Ｂは：
【化３】
2013503903.tif 000033
（ｉ’）フェニル；
（ｉｉ’）ナフチル；
（ｉｉｉ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基；および
（ｉｖ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIVは、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アリールオキシ、アリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロおよび−ＮＲ9Ｒ10からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；ここで、Ｒ9およびＲ10は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルからなる群から独立に選択される］。
【請求項２】
Ｚが、（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j、（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）jおよび（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）jからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
環Ａおよび環Ｂが、
【化４】
2013503903.tif 000034
からなる群から独立に選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＳである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＲIが水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、ＯＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）Ｎ＝Ｓ（Ｏ）Ｒ5Ｒ6、ＮＲ2Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、ＨＮＣ（Ｏ）Ｒ4、ＨＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4および（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2からなる群から選択され、ここで、Ｒ4はそれぞれ、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、アリール、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、（ＣＲ5Ｒ6）dおよびＮ（Ｒ4）2は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、５−フルオロピロリジン、ピペリジン、６−フルオロピペリジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、２，６−ジメチルモルホリン、チオモルホリンを含む３〜７員の複素環式環を形成していてよく、ここで、前記複素環式環は、３個までのＲ5で置換されていてもよく；Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキル、スルホネートからなる群から独立に選択され、ＣＲ5Ｒ6は、５〜６個の炭素を含む炭素環式または複素環式環を表していてよいか、または代わりに、（ＣＲ5Ｒ6）dおよび（ＣＲ5Ｒ6）eは、３〜７員の炭素環式または複素環式環を形成していてよく、ここで、環は、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキルおよびスルホネートのうちの３個までで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
【化５】
2013503903.tif 000035
2013503903.tif 000036
2013503903.tif 000037
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
チロシンキナーゼ阻害薬として使用するための請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ヒトにおける結腸直腸癌、肺癌、血液癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、糖尿病性網膜症、黄斑変性、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症、眼血管形成、網膜浮腫、網膜虚血、糖尿病性黄斑浮腫、嚢胞様黄斑浮腫、網膜静脈閉塞、分枝静脈閉塞、網膜前血管新生、レーザー誘発脈絡膜血管新生、角膜移植に随伴する血管新生、緑内障および眼腫瘍、関節炎、再狭窄、肝硬変、アテローム硬化症、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症、神経変性疾患および免疫障害からなる群から選択される疾患または状態のいずれかを治療するために使用される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
治療有効量の請求項１に記載の化合物を、そのための薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１０】
錠剤、カプセル剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、局部注射剤、局所クリーム剤、ゲル剤および軟膏剤、点眼剤、眼用軟膏剤、眼用噴霧剤、眼科用懸濁液剤、眼用乳剤、硝子体中注射剤、テノン嚢下注射剤、眼用生浸食性インプラント剤および非生浸食性眼用インサート剤またはデポー剤を含む、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チロシンキナーゼシグナル伝達を調節、制御および／または阻害することができる複数の芳香族成分を有する新規な化合物を対象とする。本発明はまた、これらに限られないが、細胞増殖障害、代謝障害、血管増殖性障害、炎症性障害、神経変性疾患および免疫障害を包含する、制御から逸脱したチロシンキナーゼシグナル伝達に関連する障害を予防および／または治療する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質チロシンキナーゼ（「ＰＴＫ」）は、細胞増殖および分化の制御において重要な役割を果たしている。ＰＴＫは、酵素活性を有するタンパク質からなる大きく多様な群を含む。ＰＴＫは、受容体型（細胞外、膜貫通および細胞内ドメインを有する）または非受容体型（全て細胞内にある）に属し得る。例えば、受容体チロシンキナーゼ（「ＲＴＫ」）によって媒介されるシグナル伝達は、特異的増殖因子（即ち、リガンド）との細胞外相互作用によって開始され、次いで、受容体二量体化、内因性タンパク質チロシンキナーゼ活性の一過性刺激およびリン酸化が続く。それによって、細胞内シグナル伝達分子のための結合部位が作られ、適切な細胞応答（例えば、細胞分裂、代謝ホメオスターシスおよび細胞外微細環境に対する応答）を促進する一連の細胞質シグナル伝達分子との複合体の形成をもたらす。
【０００３】
ＲＴＫに関して、チロシンリン酸化部位が、シグナル伝達分子のＳＨ２（ｓｒｃ相同性）ドメインへの高親和性結合部位として機能することも示されている。ＲＴＫと結合する複数の細胞内基質タンパク質が同定されており、２つの主要な群、即ち、（１）触媒ドメインを有する基質；および（２）触媒ドメインは欠いているが、アダプターとして役立ち、触媒活性分子に結合する基質に分類されている。受容体またはタンパク質とその基質のＳＨ２ドメインとの相互作用の特異性は、リン酸化チロシン残基のすぐ周囲にあるアミノ酸残基によって決定される。ＳＨ２ドメインと、特定の受容体の上にあるホスホチロシン残基の周囲のアミノ酸配列との結合親和性における相違は、その基質リン酸化プロファイルにおいて見られる相違と一致する。これらの知見は、各ＲＴＫの機能は、その発現パターンおよびリガンドアベイラビリティーによってだけではなく、特定の受容体によって活性化される一連の下流シグナル伝達経路によっても決定されることを示唆している。したがって、リン酸化は、特異的な増殖因子受容体、さらに分化因子受容体によって動員されるシグナル伝達経路の選択性を決定する重要な調節ステップを提供する。
【０００４】
ＲＴＫは、多様な生物学的活性を有する膜貫通受容体からなる大きなファミリーを含む。ＲＴKの固有の機能は、リガンドが結合すると活性化されて、受容体および複数の細胞基質のリン酸化、続いて、様々な細胞応答をもたらす。現在、少なくとも１９種の別個のＲＴＫサブファミリーが同定されている。ＨＥＲサブファミリーと称されるＲＴＫサブファミリーの１つは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４からなると考えられている。ＨＥＲサブファミリーの受容体に対するリガンドには、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、ＴＧＦ−α、アンフィレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ベータセルリンおよびヘレグリンが包含される。インスリンサブファミリーと称されるＲＴＫの第２のサブファミリーは、ＩＮＳ−Ｒ、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲ−Ｒからなる。第３のＲＴＫサブファミリー、即ち「ＰＤＧＦ」ファミリーには、ＰＤＧＦαおよびβ受容体、ＣＳＦＩＲ、ｃ−ｋｉｔおよびＦＬＫ−ＩＩが包含される。ＦＬＫファミリーとして同定されているＲＴＫの他のサブファミリーは、キナーゼ挿入ドメイン受容体胎児肝臓キナーゼ−１（ＫＤＲ／ＦＬＫ−１）、胎児肝臓キナーゼ４（ＦＬＫ−４）およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｆｉｔ−１）からなると考えられている。これらの受容体はそれぞれ、造血成長因子のための受容体であると当初は考えられていた。ＲＴＫの他の２つのサブファミリーは、ＦＧＦ受容体ファミリー（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３およびＦＧＦＲ４）およびＭｅｔサブファミリー（ｃ−ｍｅｔおよびＲｏｎ）と称されている。ＰＤＧＦおよびＦＬＫサブファミリーは似ているので、これら２つのサブファミリーは多くの場合に、一緒に検討される。公知のＲＴＫサブファミリーは、参照によって本明細書に組み込まれるＰｌｏｗｍａｎら、１９９４、ＤＮ＆Ｐ  ７（６）：３３４〜３３９において同定されている。
【０００５】
非受容体型チロシンキナーゼは、細胞外および膜貫通配列が欠如している細胞酵素群を表している。現在、１１種のサブファミリー（Ｓｒｃ、Ｆｒｋ、Ｂｔｋ、Ｃｓｋ、Ａｂｌ、Ｚａｐ７０、Ｆｅｓ／Ｆｐｓ、Ｆａｋ、Ｊａｋ、ＡｃｋおよびＬＩＭＫ）を成す２４種を超える個々の非受容体型チロシンキナーゼが同定されている。現在、非受容体型チロシンキナーゼのＳｒｃサブファミリーは、最大数のＰＴＫから成り、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＹｒｋを包含する。Ｓｒｃサブファミリーの酵素は、発癌に関連づけられている。非受容体型チロシンキナーゼについてのより詳細な検討は、参照によって本明細書に組み込まれるＢｏｌｅｎ、１９９３、Ｏｎｃｏｇｅｎ  ８：２０２５〜２０３１に示されている。
【０００６】
ＲＴＫであるか、または非受容体型チロシンキナーゼであるかに関わらず、多くのタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）が、細胞シグナルカスケードならびに癌、乾癬および高度免疫応答などの病原性状態をもたらす細胞シグナル伝達経路に関与していることが判明している。細胞増殖ならびに異常な細胞増殖と関連している疾患および障害を制御、調節およびモジュレーションする際のＰＴＫの重要性に鑑み、突然変異リガンド（米国特許第４，９６６，８４９号）、可溶性受容体および抗体（Ｋｅｎｄａｌｌ  ＆  Ｔｈｏｍａｓ、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ９０：１０７０５〜０９；Ｋｉｍら、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：８４１〜８４４）、ＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｌｉｎｅｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：１０４５０〜５６）；Ｔａｋａｎｏら、１９９３、Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌｌ  ４：３５８Ａ；Ｋｉｎｓｅｌｌａら、１９９２、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．１９９：５６〜６２；Ｗｒｉｇｈｔら、１９９２、Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓ．１５２：４４８〜５７）およびチロシンキナーゼ阻害薬（米国特許第５，３３０，９９２号；Ｍａｒｉａｎｉら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３５：２２６８）の使用を包含する様々なアプローチを使用して、受容体および非受容体型チロシンキナーゼ「阻害薬」を同定する多くの試みがなされている。
【０００７】
さらに最近では、チロシンキナーゼ阻害薬として作用する小分子を同定する試みがなされている。例えば、ビス単環式、二環式または複素環式アリール化合物（ＰＣＴ出願ＷＯ９２／２０６４２号）、ビニレン−アザインドール誘導体（ＰＣＴ出願ＷＯ９４／１４８０８号）および１−シクロプロピル−４−ピリジル−キノロン（米国特許第５，３３０，９９２号）は、チロシンキナーゼ阻害薬として概して記載されている。スチリル化合物（米国特許第５，２１７，９９９号）、スチリル置換ピリジル化合物（米国特許第５，３０２，６０６号）、ある種のキナゾリン誘導体（欧州特許出願第０５６６２６６Ａ１号）、セレオインドールおよびセレニド（ＰＣＴ出願ＷＯ９４／０３４２７号）、三環式ポリヒドロキシ化合物（ＰＣＴ出願ＷＯ９２／２１６６０号）およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ出願ＷＯ９１／１５４９５号）は、癌を治療する際に使用するためのチロシンキナーゼ阻害薬として使用される化合物として記載されている。
【０００８】
加えて、全てその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，７６５，０１２号；同第６，５４１，５０４号；同第６，７４７，０２５号；同第５，７９２，７８３号；同第５，８３４，５０４号；同第５，８８３，１１３号；同第５，８８３，１１６号および同第５，８８６，０２０号に開示されている化合物などの他の小分子が、チロシンキナーゼ阻害薬として研究された。
【０００９】
受容体および非受容体チロシンの活性をモジュレートすることによって、シグナル伝達を特異的に阻害する化合物を同定および使用することが、本発明の一態様である。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、チロシンキナーゼシグナル伝達をモジュレート、調節および／または阻害することができる式Ｉによって表される化合物ならびに疾患を治療および予防するための該化合物および該化合物が組み込まれた組成物の使用を対象とする。
【００１１】
本発明の化合物は、一般式Ｉにおいて示すことができる：
【化１】
2013503903.tif 000003
式Ｉ
［式中、
Ｘは、ＮＲ1、Ｏ、Ｓ（Ｏ）nからなる群から選択され；
ｎは、０であるか、または１から２の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
ＲIは、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｓ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＳ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＳＯ2Ｒ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＯＳＯ2Ｒ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、ＯＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）Ｎ＝Ｓ（Ｏ）Ｒ5Ｒ6、ＮＲ2Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、ＨＮＣ（Ｏ）Ｒ4、ＨＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4および（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2からなる群から選択され、ここで、Ｒ4はそれぞれ、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、アリール、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、（ＣＲ5Ｒ6）dおよびＮ（Ｒ4）2は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、５−フルオロピロリジン、ピペリジン、６−フルオロピペリジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、２，６−ジメチルモルホリン、チオモルホリンを含む３〜７員の複素環式環を形成していてよく、かつ前記複素環式環は、３個までのＲ5で置換されていてもよく；Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキル、スルホネートからなる群から独立に選択され、かつＣＲ5Ｒ6は、５から６個の炭素を含む炭素環式または複素環式環を表していてよいか、または代わりに、（ＣＲ5Ｒ6）dおよび（ＣＲ5Ｒ6）eは、３〜７員の炭素環式または複素環式環を形成していてよく、その環は、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキルおよびスルホネートのうちの３個までで置換されていてもよく；
ａは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｄは、０であるか、または１から５の整数であり；
ｅは、１から４の整数であり；
ｆは、０であるか、または１から２の整数であり；
ＲIIは、水素、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲ2Ｒ3）アルコキシ、（ＮＲ2Ｒ3）アルケニル、（ＮＲ2Ｒ3）アルキル、（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルケニルおよび（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルキルからなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
ｂは、０または１から２の整数であり；
Ｙは、
（１）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｏ−（ＣＨ2）ｈ−；
（２）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ1−（ＣＨ2）ｈ−；
（３）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＯ−（ＣＨ2）ｈ−；
（４）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ＣＨ2）ｈ−；
（５）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ2Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（６）  −（ＣＨ2）ｇ−（ＣＨ2）ｈ−；
（７）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（８）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ2）ｈ−；および
（９）  単結合
からなる群から選択され；
ここで、
ｇは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｈは、０であるか、または１から３の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
Ｒ2は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から選択され；
環Ａは、
【化２】
2013503903.tif 000004
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）ナフチル；
（ｉｉｉ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜５個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基および
（ｉｖ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜６個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIIIは、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐アルキル、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ5アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロからなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；
Ｚは、
（１’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（２’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（３’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）；
（４’）  Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（５’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｓ（Ｏ）2；および
（６’）  Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
からなる群から選択され；
ここで、
ｉは、０または１であり；
ｊは、０または１であり；
Ｒ7およびＲ8は、水素およびアルキルからなる群から独立に選択され；
環Ｂは：
【化３】
2013503903.tif 000005
（ｉ’）フェニル；
（ｉｉ’）ナフチル；
（ｉｉｉ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基；および
（ｉｖ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIVは、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アリールオキシ、アリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロおよび−ＮＲ9Ｒ10からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；ここで、Ｒ9およびＲ10は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルからなる群から独立に選択される］。
【００１２】
一部の本発明の実施形態は、次のパラグラフに包含される：
１）任意の互変異性体、立体異性体、ジアステレオ異性体形態、多形形態、結晶形、溶媒和物、水和物、代謝産物、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ、種々の立体異性体の混合物、種々の結晶形の混合物を包含する式Ｉによる化合物； 
２）プロドラッグの形態の式Ｉの化合物；
３）Ｙが、
（ａ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｂ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ1−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｃ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＯ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｄ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｅ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ2Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｆ）  −（ＣＨ2）ｇ−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｇ）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（ｈ）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｏ−（ＣＨ2）ｈ−；および
（ｉ）単結合
からなる群から選択されるパラグラフ１による化合物；
４）Ｚが、（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j、（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j、（ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）およびＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）jからなる群から選択されるパラグラフ１〜３による化合物；
５）ＸがＮＨであるパラグラフ１〜４による化合物；
６）環Ａおよび環Ｂが、
【化４】
2013503903.tif 000006
からなる群から独立に選択されるパラグラフ１〜５による化合物；
７）ＸがＳであるパラグラフ６による化合物；
８）任意の互変異性体、立体異性体、ジアステレオ異性体形態、結晶形、多形形態、立体異性体の混合物、多形形態の混合物、結晶形の混合物、溶媒和物、水和物、代謝産物、薬学的に許容される塩またはプロドラッグを包含する、式ＩＩ：
【化５】
2013503903.tif 000007
式ＩＩ
によってさらに表すことができるパラグラフ１による化合物；
９）ＲIが水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、ＯＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＮＲ2Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、ＨＮＣ（Ｏ）Ｒ4、ＨＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4および（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2からなる群から選択され、ここで、Ｒ4はそれぞれ、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、アリール、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、（ＣＲ5Ｒ6）dおよびＮ（Ｒ4）2は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、５−フルオロピロリジン、ピペリジン、６−フルオロピペリジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、２，６−ジメチルモルホリン、チオモルホリンを含む３〜７員の複素環式環を形成していてよく、ここで、前記複素環式環は、３個までのＲ5で置換されていてもよく；Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキル、スルホネートからなる群から独立に選択され、ＣＲ5Ｒ6は、５〜６個の炭素を含む炭素環式または複素環式環を表していてよいか、または代わりに、（ＣＲ5Ｒ6）dおよび（ＣＲ5Ｒ6）eは、３〜７員の炭素環式または複素環式環を形成していてよく、ここで、環は、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキルおよびスルホネートのうちの３個までで置換されていてもよいパラグラフ１〜８による化合物；
１０）下式：
【化６】
2013503903.tif 000008
2013503903.tif 000009
からなる群から選択される化合物：
１１）チロシンキナーゼモジュレーターとして使用する、パラグラフ１〜１０の化合物を使用する方法；
１２）治療有効量のパラグラフ１〜１０の化合物を薬学的に許容される担体と一緒に投与することを含む、制御から逸脱したチロシンキナーゼ活性に関係する疾患または状態を治療または予防するための医薬品を調製する際のパラグラフ１〜１０の化合物の使用；
１３）疾患または状態が、細胞増殖および代謝障害、血管増殖性障害、炎症性障害、神経変性疾患および免疫障害からなる群から選択されるパラグラフ１２の使用；
１４）疾患または状態が、結腸直腸癌、肺癌、血液癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、糖尿病性網膜症、黄斑変性、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症、眼血管形成、網膜浮腫、網膜虚血、糖尿病性黄斑浮腫、嚢胞様黄斑浮腫、網膜静脈閉塞、分枝静脈閉塞、網膜前血管新生、レーザー誘発脈絡膜血管新生、角膜移植に随伴する血管新生、緑内障および眼腫瘍、関節炎、再狭窄、肝硬変、アテローム硬化症、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症、神経変性疾患および免疫障害からなる群から選択されるパラグラフ１２〜１３の使用；
１５）全身、非経口、局部または局所送達に適している、治療有効量のパラグラフ１〜１０による化合物を薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物；
１６）錠剤、カプセル剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、局部注射剤、局所クリーム剤、ゲル剤および軟膏剤、点眼剤、眼用液剤、眼科用懸濁液剤、眼用乳剤、硝子体中注射剤、テノン嚢下注射剤、眼用生浸食性インプラント剤および非生浸食性眼用インサート剤またはデポー剤からなる群から選択される形態のパラグラフ１５の医薬組成物；
１７）疾患および状態を治療するための医薬品を製造する際のパラグラフ１０の化合物の使用であって、該医薬品が、パラグラフ１５および１６による薬学的に許容される組成物を含有する使用。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害薬として有用な複数の芳香族成分を有する一連の化合物を対象とする。本発明の化合物は、制御から逸脱したチロシンキナーゼシグナル伝達に関係する疾患、例えば、癌、血管増殖性障害、線維性障害および神経変性疾患を治療するために有用である。詳細には、本発明の化合物は、結腸直腸癌、肺癌、血液癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、糖尿病性網膜症、黄斑変性、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症、眼血管形成、網膜浮腫、網膜虚血、糖尿病性黄斑浮腫、嚢胞様黄斑浮腫、網膜静脈閉塞、分枝静脈閉塞、網膜前血管新生、レーザー誘発脈絡膜血管新生、角膜移植に随伴する血管新生、緑内障および眼腫瘍、関節炎、再狭窄、肝硬変、アテローム硬化症、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症、神経変性疾患および免疫障害を治療するために有用である。
【００１４】
１．本発明の化合物
本発明は、式Ｉの化合物を対象とする：
【化７】
2013503903.tif 000010
式Ｉ
［式中、
Ｘは、ＮＲ1、Ｏ、Ｓ（Ｏ）nからなる群から選択され；
ｎは、０であるか、または１から２の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
ＲIは、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｓ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＡｒ、（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＳ（Ｏ）fＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＳ（Ｏ）fＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、ＮＲ4（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｏ（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＯＳＯ2Ｒ4、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＯＳＯ2Ｒ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）eＰ（Ｏ）（ＯＲ4）2、ＯＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｃ（Ｏ）Ｎ＝Ｓ（Ｏ）Ｒ5Ｒ6、ＮＲ2Ｃ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＲ5、ＨＮＣ（Ｏ）Ｒ4、ＨＮ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、Ｓ（Ｏ）f（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＲ4、（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＯＲ4および（ＣＲ5Ｒ6）dＣ（Ｏ）（ＣＲ5Ｒ6）dＮ（Ｒ4）2からなる群から選択され、ここで、Ｒ4はそれぞれ、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、アリール、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、（ＣＲ5Ｒ6）dおよびＮ（Ｒ4）2は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、５−フルオロピロリジン、ピペリジン、６−フルオロピペリジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリン、２，６−ジメチルモルホリン、チオモルホリンを含む３〜７員の複素環式環を形成していてよく、かつ前記複素環式環は、３個までのＲ5で置換されていてもよく；Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキル、スルホネートからなる群から独立に選択され、かつＣＲ5Ｒ6は、５から６個の炭素を含む炭素環式または複素環式環を表していてよいか、または代わりに、（ＣＲ5Ｒ6）dおよび（ＣＲ5Ｒ6）eは、３〜７員の炭素環式または複素環式環を形成していてよく、その環は、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ1〜Ｃ8アルキル、Ｃ1〜Ｃ8ヒドロキシアルキル、Ｃ1〜Ｃ8アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルアルキル、アミド、アルキルアミド、アミドアルキルおよびスルホネートのうちの３個までで置換されていてもよく；
ａは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｄは、０であるか、または１から５の整数であり；
ｅは、１から４の整数であり；
ｆは、０であるか、または１から２の整数であり；
ＲIIは、水素、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルキル、（ＮＲ2Ｒ3）アルコキシ、（ＮＲ2Ｒ3）アルケニル、（ＮＲ2Ｒ3）アルキル、（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルケニルおよび（ＮＲ2Ｒ3）カルボニルアルキルからなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；別法ではＲ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
ｂは、０または１から２の整数であり；
Ｙは、
（１）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｏ−（ＣＨ2）ｈ−；
（２）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ1−（ＣＨ2）ｈ−；
（３）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＯ−（ＣＨ2）ｈ−；
（４）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ2−（ＣＨ2）ｈ−；
（５）  −（ＣＨ2）ｇ−ＮＲ2Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（６）  −（ＣＨ2）ｇ−（ＣＨ2）ｈ−；
（７）  −（ＣＨ2）ｇ−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ2）ｈ−；
（８）  −（ＣＨ2）ｇ−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ2）ｈ−；および
（９）  単結合
からなる群から選択され；
ここで、
ｇは、０であるか、または１から３の整数であり；
ｈは、０であるか、または１から３の整数であり；
Ｒ1は、水素、アルケニル、アルコキシアルキル、ＣＦ3、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシアルキルおよびアルキル（ＮＲ2Ｒ3）からなる群から独立に選択され、ここで、Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から独立に選択されるか；あるいは、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、Ｎを含む５〜７員の複素環式環を形成していてよく；
Ｒ2は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ハロアルキルスルホニルおよびヘテロシクリルスルホニルからなる群から選択され；
環Ａは、
【化８】
2013503903.tif 000011
（ｉ）フェニル；
（ｉｉ）ナフチル；
（ｉｉｉ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜５個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基および
（ｉｖ）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜６個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIIIは、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐アルキル、Ｃ1〜Ｃ5直鎖または分岐ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ5アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ5アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6ジアルキルアミノ、ハロゲン、シアノおよびニトロからなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；
Ｚは、
（１’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（２’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（３’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｃ（Ｏ）；
（４’）  Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
（５’）  （ＣＨ2）iＮ（Ｒ7）Ｓ（Ｏ）2；および
（６’）  Ｓ（Ｏ）2Ｎ（Ｒ8）（ＣＨ2）j；
からなる群から選択され；
ここで、
ｉは、０または１であり；
ｊは、０または１であり；
Ｒ7およびＲ8は、水素およびアルキルからなる群から独立に選択され；
環Ｂは：
【化９】
2013503903.tif 000012
（ｉ’）フェニル；
（ｉｉ’）ナフチル；
（ｉｉｉ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５または６員の単環式ヘテロアリール基；および
（ｉｖ’）Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を有する８から１０員の二環式ヘテロアリール基
からなる群から選択され；
ＲIVは、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アリールオキシ、アリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロおよび−ＮＲ9Ｒ10からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基を表してもよく；ここで、Ｒ9およびＲ10は、水素、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルからなる群から独立に選択される］。
【００１５】
別段に示されていない限り、化合物に関する言及は、図示されている構造の化学成分または化学名の化合物、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、互変異性体、立体異性体、ジアステレオ異性体、代替固体形態、結晶形、多形形態、水和物、溶媒和物、代謝産物、立体異性体の混合物、結晶形の混合物、非共有結合複合体およびこれらの組み合わせを幅広く包含すると解釈されるべきである。
【００１６】
薬学的に許容される塩は、動物またはヒトに投与するのに適した親化合物の任意の塩である。薬学的に許容される塩はまた、酸を投与した結果としてｉｎ  ｖｉｖｏで生じ得る任意の塩、他の塩または酸もしくは塩に変換されるプロドラッグを指す。塩は、共役酸または塩基などの１種または複数のイオンの形態の化合物を、１種または複数の対応する対イオンを随伴して含む。塩は、１種または複数の脱プロトン化酸性基（例えばカルボン酸）、１種または複数のプロトン化塩基性基（例えばアミン）またはその両方（例えば双性イオン）から形成することができるか、または含んでいてよい。
【００１７】
「プロドラッグ」は、対象（哺乳動物など）の体に投与されると、対象の代謝経路で分解されて、活性な式Ｉの化合物をもたらす化合物である。より具体的には、プロドラッグは、対象または患者にプロドラッグが投与された後、加水分解、代謝などのｉｎ  ｖｉｖｏでの生理学的作用を介して化学的に変性されて本発明の化合物になる、活性または不活性「マスキング」された化合物である。プロドラッグの一般的な形態の１つは、マスキングされたカルボン酸基である。マスキングされたカルボン酸塩陰イオンの例には、アルキル（例えば、メチル、エチル）、シクロアルキル（例えば、シクロヘキシル）、アラルキル（例えば、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル）およびアルキルカルボニルオキシアルキル（例えば、ピバロイルオキシメチル）などの様々なエステルが包含される。アミンは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてエステラーゼによって切断されて、遊離薬物およびホルムアルデヒドを放出するアリールカルボニルオキシメチル置換誘導体としてマスキングされている（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２５０３（１９８９））。また、イミダゾール、イミド、インドールなどの酸性ＮＨ基を含有する薬物は、Ｎ−アシルオキシメチル基でマスキングされている（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５））。ヒドロキシ基は、エステルおよびエーテルとしてマスキングされている。ＥＰ第０３９，０５１号（ＳｌｏａｎおよびＬｉｔｔｌｅ、１９８１年４月１１日）は、マンニッヒ塩基ヒドロキサム酸プロドラッグ、その調製および使用を開示している。例えば、変換を、エステル基または一部の他の生物学的に不安定な基を加水分解することによって行うことができる。プロドラッグ調製は、当分野では周知である。例えばＲｉｃｈａｒｄ  Ｂ．  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ、第２版、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、２００４、ｐｐ．４９６〜５５７の１つの章である「Ｐｒｏｄｒｕｇ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」は、このテーマに関するさらなる詳細を提供している。
【００１８】
互変異性体は、相互に迅速に平衡する異性体である。例えば、互変異性体は、プロトン、水素原子またはヒドリドイオンの移動に関係づけられ得る。立体化学が明確かつ明白に示されていない限り、構造は、純粋な形であっても、任意の可能な混合物の形であっても、起こり得る立体異性体の全てを包含することを意図している。
【００１９】
代替固体形態は、本明細書に記載の手順を実施することで生じさせることができるものとは別の固体形態である。例えば、代替固体形態は、非晶形、結晶形、多形およびそれらの混合物であってよい。
【００２０】
非共有結合複合体は、化合物と追加の化学種との共有結合相互作用を必要としない、化合物と１種または複数の追加的な化学種とから生じさせることができる複合体である。これらは、化合物と追加の化学種との特異的な比を有してもよいし、または有さなくてもよい。実施例には、溶媒和物、水和物、電荷移動錯体などが包含されるであろう。
【００２１】
２．使用、製剤および投与
本発明はまた、タンパク質チロシンキナーゼモジュレーターおよび阻害薬としての化合物の使用を対象とする。これらの化合物は、調節から逸脱したチロシンキナーゼシグナル伝達に関連した疾患、例えば、様々な癌、血管増殖性障害、線維性障害および神経変性疾患を治療するために使用することができる。詳細には、本発明の化合物は、ヒトにおける結腸直腸癌、肺癌、血液癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、糖尿病性網膜症、黄斑変性、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症、眼血管形成、網膜浮腫、網膜虚血、糖尿病性黄斑浮腫、嚢胞様黄斑浮腫、網膜静脈閉塞、分枝静脈閉塞、網膜前血管新生、レーザー誘発脈絡膜血管新生、角膜移植に随伴する血管新生、緑内障および眼腫瘍、関節炎、再狭窄、肝硬変、アテローム硬化症、乾癬、糖尿病、創傷治癒、炎症、神経変性疾患および免疫障害を治療および／または予防するために有用である。
【００２２】
本発明はまた、チロシンキナーゼ受容体の異常な活性に関連する疾患および状態を治療および予防するための医薬品を調製することを対象としている。該医薬品は、治療有効量の本発明の化合物を薬学的に許容される担体と共に含む薬学的に許容される組成物を含有する。
【００２３】
本開示の目的に関して、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、疾患または他の望ましくない状態を診断、治癒、緩和、治療または予防することを指す。
【００２４】
薬学的に許容される組成物は、治療有効量の本発明の化合物を含有する。これらの組成物は、医薬品として使用し、それを必要とするヒトなどの哺乳動物に投与することができる。種々の種類の適切な剤形および医薬品が当分野では周知であり、これらに限られないが、全身、非経口、局部および局所送達など、本発明の化合物を送達するために容易に適合させることができる。剤形は、錠剤、カプセル剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、局部注射剤、局所クリーム剤、ゲル剤および軟膏剤、点眼剤、眼用液剤、眼科用懸濁液剤、眼用乳剤、硝子体中注射剤、テノン嚢下注射剤、眼用生浸食性インプラント剤および非生浸食性眼用インサート剤またはデポー剤、経鼻噴霧剤および軟膏剤、様々な直腸または膣用製剤であってよい。
【００２５】
３．実施例
表１：本発明の化合物の例示
【表１】
2013503903.tif 000013
2013503903.tif 000014
【００２６】
３．１  化合物合成および特性決定
【００２７】
化合物Ｆ１
メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート
【化１０】
2013503903.tif 000015
メチル７−ブロモチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（２００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ８ｍｌ中の撹拌溶液に、ＣｕＢｒ（１０ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）、エチル２−シクロヘキサノンカルボキシレート（２６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５００ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）および４−アミノフェノール（９６ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を窒素で１０分間パージし、次いで、７０℃、Ｎ2下で３時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水１００ｍｌに注いだ。沈澱物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗製のアニリン中間体を淡緑色の固体（〜１４０ｍｇ）として得た。この粗製の物質をＴＨＦ１０ｍｌに溶かし、２−フルオロ−５−メチルフェニルイソシアネート（７０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌し、水１００ｍｌに注いだ。茶色の沈澱物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗製の生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって、２〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で溶離して精製して、メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートを薄茶色の固体として得た。収率：９０ｍｇ、２７％。
1ＨＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ）ｄ：９．２５（ｓ、１Ｈ）、８．６１（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．５０（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．９６（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝１１．４、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．７１−６．８５（ｍ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ＋）：４５２（ＭＨ）、４７４（Ｍ＋Ｎａ+）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：４５０（Ｍ−Ｈ）
【００２８】
化合物Ｆ２
７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸
【化１１】
2013503903.tif 000016
メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）−フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．１ｌｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍｌ）中の撹拌懸濁液に、０．４ＭのＬｉＯＨ／ＭｅＯＨ溶液（１０ｍｌ、４．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で７時間加熱し、水１００ｍｌに注いだ。ｐＨ＝４まで、１ＭのＨＣ１を加えた。生じた沈澱物を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥させて、７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸を薄灰色の固体として得た。収量：４０ｍｇ、８３％。
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１３．８８（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、９．１９（ｓ、１Ｈ）、８．５８（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．４７（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｓ、１Ｈ）、７．９６（ｄｄ、Ｊ＝７．９、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３−７．５９（ｍ、２Ｈ）、７．２２−７．２７（ｍ、２Ｈ）、７．０８（ｄｄ、１Ｈ）、６．７７−６．８０（ｍ、１Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：４３６（Ｍ−Ｈ）
【００２９】
化合物Ｆ３
メチル７−［３−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート
【化１２】
2013503903.tif 000017
化合物Ｆ１と同様の手順を使用して調製した。
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：９．５１（ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．６０（ｓ、１Ｈ）、８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．８７（ｄｄ、Ｊ＝７．８、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｔ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｔ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｄｄ、Ｊ＝８．２、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｄｄ、Ｊ＝１１．３、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．９１（ｄｄ、Ｊ＝７．９、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．７７（ｔｄ、Ｊ＝５．２、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、２．２１（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ＋）：４５２（ＭＨ）、４７４（Ｍ＋Ｎａ+）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：４５０（Ｍ−Ｈ）
【００３０】
化合物Ｆ４
メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート
【化１３】
2013503903.tif 000018
メチル７−ブロモチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（６８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）および１−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）−３−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］尿素（１０２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン８ｍｌ中の混合物に、ＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2（１０ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）および１ＭのＮａ2ＣＯ3水溶液（０．２５ｍｌ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃、Ｎ2下で１時間加熱し、室温に冷却し、水１００ｍｌを注いだ。茶色の沈澱物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗製の生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって、２〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で溶離して精製して、メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートを薄黄色の固体として得た。収量：３０ｍｇ、２８％。
1ＨＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ）ｄ：９．３８（ｓ、１Ｈ）、８．８４（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．５８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、７．６０−８．０６（ｍ、６Ｈ）、７．０６−７．１９（ｍ、１Ｈ）、６．８２（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：４３４（Ｍ−Ｈ）
【００３１】
化合物Ｆ５
７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸
【化１４】
2013503903.tif 000019
メチル７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（２０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ（５ｍｌ／５ｍｌ）中の撹拌溶液に、１ＭのＮａＯＨ（２．０ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を７０℃で３０分間加熱し、室温に冷却し、水５０ｍｌに注いだ。ｐＨ＝４まで、１ＭのＨＣｌを加え、生じた沈澱物を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥させて、７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸を得た。
収量：２０ｍｇ、１００％。
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：４２０（Ｍ−Ｈ）
【００３２】
７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジンの調製
【化１５】
2013503903.tif 000020
チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オール（２０ｇ、０．１３２ｍｏｌ）をオキシ塩化リン（８０．９ｇ、０．５２８ｍｏｌ）中に懸濁させ、１００℃で２時間撹拌した。溶液を室温に冷却し、氷の上に注いだ。水溶液を水酸化ナトリウムで中和し、生じた沈澱物を濾過によって集め、水で洗浄した。濾滓をジクロロメタンに入れ、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶液を濾過し、濾液を乾燥するまで濃縮して、７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジンを茶色の液体として得たが、これは高真空下で、ベージュ色の固体に固化した。収量：２０．４ｇ（９１％）；
【００３３】
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+１６９．９；1ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１3）δ：８．７（ｄ、１Ｈ）、７．８（ｄ、１Ｈ）、７．６（ｄ、１Ｈ）、７．３（ｄ，１Ｈ）ｐｐｍ。
【００３４】
メチル７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートの調製
【化１６】
2013503903.tif 000021
７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン（１９．７ｇ、０．１１６ｍｏｌ）をＴＨＦ（４００ｍＬ）に入れ、約−７０℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ、８０ｍＬ、０．１２８ｍｏｌ）を撹拌しながら、窒素雰囲気下で滴加した。溶液を−７０℃で１時間撹拌したが、この時点で、そのままのクロロギ酸メチルを滴加した。反応混合物を徐々に室温に加温し、週末のあいだ撹拌した。反応混合物をメタノール２５ｍＬで処置し、次いで、乾燥するまで濃縮して、栗色の残渣を残した。粗製の固体をジクロロメタンに入れ、１：１のヘキサン／酢酸エチルで溶離してシリカゲルカラムに通した。生成物を含有するフラクションを合わせ、濃縮して、赤色の固体を得た。９：１のヘキサン／ジエチルエーテルと共に摩砕して、濾過の後に、メチル７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートをピンク色の固体として得た。収量：１４．５ｇ（５５％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+  ２２７．９；1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：８．７（ｄ、１Ｈ）、８．３（ｓ、１Ｈ）、７．４（ｄ、１Ｈ）ｐｐｍ。
【００３５】
メチル７−（４−アミノ−３−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートの調製
【化１７】
2013503903.tif 000022
メチル７−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（５ｇ、０．０２２ｍｏｌ）および４−アミノ−３−フルオロフェノール（３．３ｇ、０．０２６ｍｏｌ）を炭酸セシウム（１４．８ｇ、０．０４５ｍｏｌ）、エチル−２−シクロヘキサノンカルボキシレート（０．７３ｇ、０．００４ｍｏｌ）および塩化銅（Ｉ）（０．２２ｇ、０．００２ｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに加えた。混合物をＤＭＳＯ（２５０ｍＬ）で希釈し、７０℃、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。暗色の反応混合物を室温に冷却し、激しく撹拌しながら、酢酸エチル（５００ｍＬ）／水（１Ｌ）に注いだ。混合物をセライトで濾過し、濾液の有機層部分を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶液を濾過し、濾液を濃縮して、紫色の粘稠性の液体を得た。粗製の生成物をジクロロメタンに入れ、１：１のヘキサン／酢酸エチルで溶離してシリカゲルカラムに通した。生成物を含有するフラクションを合わせ、濃縮して、メチル７−（４−アミノ−３−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートを赤色の固体として得た。収量：１．６２ｇ（２３％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+３１９．１。
【００３６】
化合物Ｆ９
メチル７−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレイド）フェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート
【化１８】
2013503903.tif 000023
メチル７−（４−アミノ−３−フルオロフェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（１．６２ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル５５ｍＬに入れ、続いて、酢酸エチル５ｍｌ中の２−フルオロ−５−メチルフェニルイソシアネート（０．８５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）を滴加した。室温で一晩撹拌した後、溶液は、ラベンダー色の固体を生じた。濾過によって固体を集め、ジエチルエーテルで洗浄して、メチル７−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレイド）フェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートをオフホワイト色の固体として得た。収量：１．７５ｇ（７３％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+  ４７０．１；1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：９．２（ｓ、１Ｈ）、９．０（ｓ、１Ｈ）、８．６（ｄ、１Ｈ）、８．３（ｔ、１Ｈ、８．１（ｓ、１Ｈ）、８．０（ｄ、１Ｈ）、７．５（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｍ、２Ｈ）、６．８（ｍ、２Ｈ）、３．９（ｓ、３Ｈ）、２．１（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００３７】
化合物Ｆ１０
メチル３−［（｛７−［３−フルオロ−４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパノエート
【化１９】
2013503903.tif 000024
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：９．１０（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、９．０３（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．９６（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．５６（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．２６（ｔ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄｄ、Ｊ＝１１．６、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６−７．１６（ｍ、２Ｈ）、６．７４−６．８４（ｍ、２Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．４８−３．５５（ｍ、２Ｈ）、２．６２（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ＋）：５６３（Ｍ＋Ｎａ+）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：５３９（Ｍ−Ｈ）
【００３８】
化合物Ｆ１１
メチル３−［（｛７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパノエート
【化２０】
2013503903.tif 000025
７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸（１２０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１２２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の混合物を室温で１０分間撹拌し、続いて、（Ｒ）−３−ピロリジノール（５６ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱し、６０℃で３０分間撹拌し、水１００ｍｌに注いだ。ｐＨ＝４まで、２ＭのＨＣｌを滴加した。沈澱物を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥させて、メチル３−［（｛７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパノエートを白色の固体として得た。収量：１２８ｍｇ、９０％。
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：９．１８（ｓ、１Ｈ）、９．０１（ｔ、１Ｈ）、８．５４（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．４７（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．２０（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．０８（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、６．６９（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．４６−３．５５（ｍ、２Ｈ）、２．６２（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ＋）：５４５（Ｍ＋Ｎａ+）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：５２１（Ｍ−Ｈ）
【００３９】
化合物Ｆ６
３−［（｛７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパン酸
【化２１】
2013503903.tif 000026
メチル３−［（｛７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパノエート（９８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶媒ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１０ｍｌ／１０ｍｌ）混合物中の撹拌溶液に、１ＭのＮａＯＨ溶液２ｍｌ（２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、水１００ｍｌに注いだ。ｐＨ＝４まで、２ＭのＨＣｌを加えた。生じた沈澱物を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥させて、３−［（｛７−［４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパン酸をオフホワイト色の固体として得た。収量：９０ｍｇ、９５％。
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１２．２５（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、９．１８（ｓ、１Ｈ）、８．９９（ｔ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．５４（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．４７（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．９５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．２２（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．０８（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、６．６８（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．４２−３．５３（ｍ、２Ｈ）、２．５３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：５０７（Ｍ−Ｈ）
【００４０】
化合物Ｆ７
３−［（｛７−［３−フルオロ−４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル｝カルボニル）アミノ］プロパン酸
【化２２】
2013503903.tif 000027
1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：１２．２６（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、９．０９（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、９．００（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．９６（ｂｒ．ｓ．、１Ｈ）、８．５６（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．２５（ｔ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５−７．４４（ｍ、１Ｈ）、７．０５−７．１６（ｍ、２Ｈ）、６．７１−６．８５（ｍ、２Ｈ）、３．４２−３．５４（ｍ、２Ｈ）、２．５３（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）
ＬＲ  ＭＳ（ＥＳ−）：５２５（Ｍ−Ｈ）
【００４１】
化合物Ｆ８
７−［３−フルオロ−４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸
【化２３】
2013503903.tif 000028
メチル７−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレイド）フェノキシ）チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（１．８４ｇ、３．９２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ１００ｍＬに入れ、続いて、１Ｎの水酸化ナトリウム（４．８ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）を滴加した。溶液を室温で３時間撹拌し、この時点で、追加の１Ｎの水酸化ナトリウム２．４ｍＬを加えた。溶液を室温で一晩撹拌し、生じた混合物を水７５ｍＬで希釈し、１ＮのＨＣｌを使用して酸性化した。濾過によって、不溶性の物質を分離し、濾滓を酢酸エチルに懸濁させ、濾過の前に、数分撹拌した。濾滓を酢酸エチルで数回洗浄し、高真空下で乾燥させて、７−［３−フルオロ−４−（｛［（２−フルオロ−５−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェノキシ］チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸をオフホワイト色の固体として得た。収量：１．６ｇ（９０％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］+４５６．１；1ＨＮＭＲ（DＭＳＯ−ｄ6）δ：１３．９（ｂｓ、１Ｈ）、９．２（ｓ、１Ｈ）、９．０（ｓ、１Ｈ）、８．６（ｄ、１Ｈ）、８．３（ｔ、１Ｈ）、８．１（ｓ、１Ｈ）、８．０（ｄ、１Ｈ）、７．５（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｍ、２Ｈ）、６．８（ｍ、２Ｈ）、２．１（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００４２】
本出願の教示に従って製造することができる他の化合物には、下記の化合物が包含される：
【化２４】
2013503903.tif 000029
【００４３】
４．生物学的試験
本発明の化合物の生物学的データを、次のアッセイのいずれか１つまたは複数を使用することによって得た。
【００４４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＶＥＧＦ刺激Ｃａ++シグナル
蛍光色素を取り込ませた内皮細胞において、ＶＥＧＦにより誘発される細胞内カルシウム濃度の上昇に対する阻害薬をスクリーニングするために、自動ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー）法を使用した。ＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯静脈内皮細胞）（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）を、フィブロネクチンでコーティングされた黒色壁９６ウェルプレートに、３７℃／５％ＣＯ2で一晩播種した。細胞に、カルシウム指示薬であるＦｌｕｏ−４を、３７℃で４５分間にわたって取り込ませた。細胞を４回洗浄し（Ｏｒｉｇｉｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｗａｓｈ、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）、細胞外の色素を除去した。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中で再構成し、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるように細胞に加えた。スクリーニングのために、細胞を、単一濃度（１０μＭ）または０．０１〜１０．０μＭの範囲の濃度の試験剤と共に３０分間予めインキュベーションし、次いでＶＥＧＦ刺激した（５ｎｇ／ｍＬ）。５１６ｎｍにおける蛍光の変化を、９６ウェル全部で同時に、冷却ＣＣＤカメラを用いて測定した。未刺激サンプル、刺激サンプルおよび薬物処置サンプルでの最高−最低蛍光レベルを決定することによってデータを得た。試験化合物のＩＣ50値を、阻害薬が存在しない場合のＶＥＧＦ刺激応答に対する抑制％から計算した。
【００４５】
ＶＥＧＦＲ２キナーゼアッセイ
Ｈｉｓ改変バキュロウイルスを用いて昆虫細胞を感染させることによって、ヒスチジン標識融合タンパク質として、ヒトＶＥＧＥ受容体（ＶＥＧＦＲ−２）の細胞質ドメインを発現させた。ニッケル樹脂クロマトグラフィーを使用してＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定して同一となるまで、Ｈｉｓ−ＶＥＧＦＲ−２を精製した。１０ｍＭのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．２〜７．４）中の３０μｇのポリ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（４：１）で一晩コーティングした９６ウェルマイクロタイタープレート中で、キナーゼアッセイを行った。プレートを１％ＢＳＡと共にインキュベートし、次いでＰＢＳで４回洗い、その後、反応を開始した。キナーゼ緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）、２０ｍＭのＭｇＣｌ2、０．１ｍＭのＭｎＣｌ2および０．２ｍＭのＮａ3ＶＯ4）中３．６μＭのＡＴＰを含有する１２０μＬの反応体積で、反応を実施した。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中で再構成し、最終ＤＭＳＯ濃度が５％になるように反応に加えた。精製タンパク質０．５ｎｇを加えることによって、反応を開始した。２５℃で１０分間インキュベーションした後に、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳで反応を４回洗浄した。モノクローナル抗ホスホチロシン抗体−ペルオキシダーゼ複合体１００μＬをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で１：１００００希釈し、ウェルに３０分間加えた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で４回洗った後、過酸化尿素を含有するリン酸−クエン酸緩衝液中のＯ−フェニレンジアミンジヒドロクロリド１００μＬを、ペルオキシダーゼの発色基質として、ウェルに７分間加えた。各ウェルに２．５ＮのＨ2ＳＯ4１００μＬを加えることによって反応を停止し、４９２ｎｍに設定したマイクロプレートＥＬＩＳＡリーダーを使用して読み取った。光学密度（任意単位）に対する化合物濃度のグラフから、ブランク値を差し引くことによって、化合物の阻害のＩＣ50値を直接計算した。
【００４６】
モルモットにおけるＶＥＧＦ誘発皮膚管外遊出（マイルズアッセイ）
雄のＨａｒｔｌｅｙモルモット（３００〜６００ｇ）にイソフルオランで麻酔をかけ、剃毛し、薬物またはそれぞれのビヒクルを一回投与した。表３で別段に示されていない限り、モルモットには経口で投与した。薬物処置が終了する１０分前に、モルモットにイソフルオランで麻酔をかけ、ＰＢＳ中０．５％のエバンスブルー色素（ＥＢＤ）（ＥＢＤ用量１３〜１５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内注射した。５分後に、ＰＢＳ１００μｌ中のｒｈＶＥＧＦ165１００ｎｇおよびＰＢＳ１００μｌのみの三重皮内注射を側腹部に投与した。２０分後に、各動物をＰｅｎｔｏｓｏｌで安楽死させ、画像分析のために、皮内注射部位を含む皮膚を切除した。ＰＣに接続したアナログビデオカメラを使用して、透過した各皮膚試料の画像を写し、各注射部位の積算光学密度をＩｍａｇｅＰｒｏ４を使用して測定した。各皮膚試料について、ＶＥＧＦ部位の平均光学密度とＰＢＳ部位の平均光学密度との差違が、その動物におけるＶＥＧＦ誘発ＥＢＤ管外遊出の大きさである。これらの測定値を研究群ごとに平均して、各実験条件での平均ＶＥＧＦ誘発ＥＢＤ管外遊出を決定し、次いで、群平均を比較して、薬物処置群におけるＶＥＧＦ誘発ＥＢＤ管外遊出の阻害をビヒクル処置対照と比べて評価した。５０％阻害（ＩＤ50）に必要な用量を決定するために、ＭｉｃｒｏＳｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌソフトウェアの「ベストフィット」分析を使用して、阻害パーセントデータを経口用量の関数として、プロットした。プロットデータを使用することによって、ＩＤ50値を視覚的に実証した（５０％ｙ値からの水平線とベストフィットラインとの交差点において、垂直線をｘ軸（用量）へ下ろす）。
【００４７】
ラットにおけるレーザー誘発性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）（ＣＮＶアッセイ）
このモデルでは、既に記載されているとおりに（ＥｄｅｌｍａｎおよびＣａｓｔｒｏ．Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．２０００；７１：５２３〜５３３）、ＣＮＶを誘発し、定量化した。０日目に雄のＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラット（２００〜３００ｇ）にケタミン１００ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン１０ｍｇ／ｋｇで麻酔をかけ、１％トロピカミドで瞳孔を拡張させた。干渉性Ｎｏｖｕｓアルゴンレーザーの青−緑セットを使用して、３レーザー熱傷（９０ｍＷで０．１秒；直径１００μｍ）を視神経乳頭のまわりの網膜血管の間の各眼球に当てた。指示されたビヒクル中の試験化合物をラットに一日一回経口投与した。
【００４８】
１０日目に、１００％ＣＯ2でラットを屠殺し、ＦＩＴＣ−デキストラン（ＭＷ２×１０6）１０ｍｇ／ｍｌを用いる血管灌流によって、血管を標識した。スポットデジタルカメラおよびＰＣに接続した落射蛍光顕微鏡（２０×）を使用して、各眼球からのRPE−脈絡膜−強膜の平坦な丘から画像を得て、ＩｍａｇｅＰｒｏ４ソフトウェアを使用して、各レーザー損傷部位内において過蛍光新生血管によって占められている面積を測定した。
【００４９】
５０％阻害（ＩＤ50）に必要な用量を決定するために、ＭｉｃｒｏＳｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌソフトウェアの「ベストフィット」分析を使用して、阻害パーセントデータを経口用量の関数として、プロットした。プロットデータを使用することによって、ＩＤ50値を視覚的に実証した（５０％ｙ値からの水平線とベストフィットラインとの交差点において、垂直線をｘ軸（用量）へ下ろす）。
【００５０】
ウサギ眼球ＶＥＧＦ透過性モデル
使用されたアッセイは、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ＥｄｅｌｍａｎなどによってＥｘｐ．Ｅｙｅ．Ｒｅｓ．８０（２００５）、２４９〜２５８頁に詳述されている。
【００５１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＰＤＧＦ刺激Ｃａ2+シグナル
蛍光色素を取り込ませた内皮細胞において、ＰＤＧＦにより誘発される細胞内カルシウム濃度の上昇に対する阻害薬をスクリーニングするために、自動ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー）法を使用した。ＮＨＤＦ−Ａｄ（正常ヒト皮膚線維芽細胞）（Ｌｏｎｚａ）を、フィブロネクチンコーティングされた黒色壁３８４ウェルのプレートに３７℃／５％ＣＯ2で一晩播種した。細胞に、カルシウム指示薬であるＦｌｕｏ−４を３７℃で４５分間にわたって取り込ませた。細胞を４回洗浄し（ＥＬｘ４０５−ＣＷ、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）、細胞外の色素を除去した。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中で再構成し、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるように細胞に加えた。スクリーニングのために、細胞を、単一濃度（１０μＭ）または０．００１〜１０．０μＭの範囲の濃度の試験剤と共に３０分間予めインキュベーションし、次いでＰＤＧＦ刺激した（１０ｎｇ／ｍＬ）。５１５ｎｍにおける蛍光の変化を、３８４ウェル全部で同時に、冷却ＣＣＤカメラを用いて測定した。未刺激サンプル、刺激サンプルおよび薬物処置サンプルでの最高−最低蛍光レベルを決定することによってデータを得た。試験化合物のＩＣ50値を、阻害薬が存在しない場合のＰＤＧＦ刺激応答に対する抑制％から計算した。
【００５２】
表ＩＩ：本発明の化合物の生物学的活性
【表２】
2013503903.tif 000030
【国際調査報告】
2013503903.tif 000039
2013503903.tif 000040
2013503903.tif 000041