(57)【要約】  タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物、並びにその調製方法及び使用が開示される。該タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の分子式は、Ｃ19Ｈ17ＮａＯ6・ｎＨ2Ｏ（式中、ｎは０．５〜４．０である）である。本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の貯蔵安定性は、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム無水物の貯蔵安定性よりも良好である。
2013510097.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子式がＣ19Ｈ17ＮａＯ6Ｓ・ｎＨ2Ｏ（式中、ｎは０．５〜４．０である）である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項２】
ｎが２．５である、請求項１に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項３】
ｎが１．５である、請求項１に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項４】
ｎが０．５である、請求項１に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折法を用いて回折角２θ（３°〜８０°）の範囲内で測定することにより、前記水和物が以下の２θ：約３．７、４．３、６．２、７．３、８．８、９．３、１１．５、１４．７、１５．４、１７、１７．７、２１．２、２５．９、２７．３、２７．６、２９．４で対応する特性値を有することを特徴とする、請求項２に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折法を用いて回折角２θ（３°〜８０°）の範囲内で測定することにより、前記水和物が以下の２θ：約３．７、６．２、７．３、８．８、９．２、１１．５、１４．７、１５．４、１７、１７．７、２０．６、２１．２、２５．９、２７．１、２７．６、２９．４で対応する特性値を有することを特徴とする、請求項３に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折法を用いて回折角２θ（３°〜８０°）の範囲内で測定することにより、前記水和物が以下の２θ：約３．７、７．６、９．０、９．６、１５．３、２２．０、２６．０、２７．６、２９．８で対応する特性値を有することを特徴とする、請求項４に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折法を用いて回折角２θ（３°〜８０°）の範囲内で測定することにより、前記水和物が図５に示されるような粉末Ｘ線回折特性を有することを特徴とする、請求項６に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折法を用いて回折角２θ（３°〜８０°）の範囲内で測定することにより、前記水和物が図４に示されるような粉末Ｘ線回折特性を有することを特徴とする、請求項７に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を調製する方法であって、
方法Ａ：タンシノンＩＩＡを反応容器に入れ、酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、無水プロピオン酸、及びハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素の１つ又は複数を添加し、撹拌し、硫酸若しくは発煙硫酸、若しくはクロロスルホン酸中の酢酸、無水酢酸、プロピオン酸及び無水プロピオン酸の溶液の１つ又は複数を添加し、滴加終了後、３０℃で０．１〜６時間撹拌し、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及び水酸化ナトリウムの溶液の１つ又は複数を添加し、十分に沈殿させ、濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液若しくは飽和硫酸ナトリウム溶液で１回若しくは数回洗浄し、次いで水若しくはＣ１〜Ｃ６低分子量アルコール若しくはそれらの組合せで１回若しくは数回洗浄し、濾過し、得られた固体を水、Ｃ１〜Ｃ６低分子量アルコール、Ｃ３〜Ｃ６低級ケトン、Ｃ２〜Ｃ８低級エステル、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素、Ｃ２〜Ｃ６低級エーテル及び芳香族炭化水素の１つ又は複数による結晶化に供し、冷却し、静置し、結晶析出後に濾過し、乾燥させてタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を得て、該生成物を精製すること、又は
方法Ｂ：タンシノンＩＩＡを反応容器に入れ、酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、無水プロピオン酸、及びハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素の１つ又は複数を添加し、撹拌し、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素の１つ又は複数中のクロロスルホン酸の溶液を添加し、滴加終了後、３０℃で０．１〜６時間撹拌し、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、有機層を分離し、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムの１つ又は複数の飽和溶液を得られた水溶液層に添加し、静置し、十分に沈殿させ、濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液若しくは飽和硫酸ナトリウム溶液で１回若しくは数回洗浄し、次いで水若しくはＣ１〜Ｃ６低分子量アルコール若しくはそれらの組合せの１つ又は複数で１回若しくは数回洗浄し、得られた固体を水、Ｃ１〜Ｃ６低分子量アルコール、Ｃ３〜Ｃ６低級ケトン、Ｃ２〜Ｃ８低級エステル、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素、Ｃ２〜Ｃ６低級エーテル及び芳香族炭化水素の１つ又は複数による結晶化に供し、静置し、冷却し、結晶析出後に濾過し、乾燥させてタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を得ること
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を調製する方法。
【請求項１１】
結晶化に使用される前記溶媒が水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ブタノン、ヘキソン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、エチルエーテル及びベンゼンから選択される１つ又は複数である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
注射用凍結乾燥粉末、注射用無菌充填粉末、輸液、少量注射液及び消化管投与用製剤を形成するように加工される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ヒト及び哺乳動物における冠動脈性心疾患、狭心症、心筋梗塞、不整脈、虚血性脳疾患、各種動脈閉塞症を含む末端循環障害、血管炎、糖尿病に起因する微小循環障害、高血圧又は脂質異常症の治療又は予防における薬剤の製造における請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は製薬技術分野に関する。具体的には、本発明は、心臓−脳血管障害の治療において有用なタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を提供する。本発明は、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を調製する方法、及び心臓−脳血管障害の治療又はその方法におけるタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の使用に更に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンシノンＩＩＡは、漢方薬である丹参（タンジン（salvia miltiorrhiza bunge））からの抽出によって得られる（非特許文献１）。タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは、タンシノンＩＩＡをスルホン化することによって得られ、この薬物は強い水溶性及びタンシノンＩＩＡよりも良好な治療効果を有する。タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは、高カリウムに起因するカルシウム流入の増大を顕著に阻害することができ、従来のカルシウム拮抗薬ベラパミルと同様の効果を有する。タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは、血管平滑筋の自発性電気活動を顕著に低減するとともに、カリウムチャネル（ＫＡＴＰ、ＫＣａ）の開口とカルシウムチャネルの遮断との相乗効果又は複合効果によって血管拡張を誘導することができ、そのため心臓−脳血管疾患の治療において重要な適用価値を有する。これまでのところ、国内及び国外の文献はタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム（タンシノンＩＩスルホン酸ナトリウム（Ｃ19Ｈ17ＮａＯ6Ｓ）、分子量：３９６．３９）について報告するものでしかなく、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶、並びにその調製方法及び使用について報告している文献はない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Acta Chimica Sinica, 1978, 3:199-206
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは驚くべきことに、研究において、結晶水含有タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム（すなわち、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物）が結晶水を含有しないタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムよりもはるかに低い吸湿性を有し、結晶水含有タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムが結晶水を含有しないタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムよりも安定であり、したがって貯蔵及び輸送が容易であり、室温でのその良好な水溶性のために水溶性製剤の形成が容易であることを見出した。加えて、無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムと比べると、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は良好な滑性、改善された製剤の操作性を有する。上記の発見に基づき、本発明者らは本発明を完成させた。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物のサーモグラムである。
【図２】タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物のサーモグラムである。
【図３】タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物のサーモグラムである。
【図４】タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物の粉末Ｘ線回折パターンである。
【図５】タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物の粉末Ｘ線回折パターンである。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
一態様では、本発明は、分子式がＣ19Ｈ17ＮａＯ6Ｓ・ｎＨ2Ｏ（式中、ｎは０．５〜４．０である）である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を提供する。
【０００７】
１つの実施の形態では、本発明は、分子式がＣ19Ｈ17ＮａＯ6Ｓ・ｎＨ2Ｏ（式中、ｎは０．５〜３．０であるか、又はｎは０．５〜２．５である）である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を提供する。
【０００８】
１つの実施の形態では、本発明は、ｎが２．５である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を提供する。
【０００９】
別の実施の形態では、本発明は、ｎが１．５である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を提供する。
【００１０】
別の実施の形態では、本発明は、ｎが０．５である、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を提供する。
【００１１】
本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は異なる結晶形を有し得る。例えば、メタノール−水、エタノール−水又はアセトン−水の結晶化系又は再結晶化系から調製されるようなタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５、１．５、２．５、３．５水和物の粉末Ｘ線回折パターンは異なり得る。
【００１２】
別の態様では、本発明は、粉末Ｘ線回折特性を有するタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物を提供する。
【００１３】
１つの実施の形態では、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物は、粉末Ｘ線回折法によって測定される回折角２θ（３°〜８０°）の測定範囲において、以下の２θ：約３．７、７．６、９．０、９．６、１５．３、２２．０、２６．０、２７．６、２９．８で対応する特性値を有する。
【００１４】
別の実施の形態では、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物は、粉末Ｘ線回折法によって測定される回折角２θ（３°〜８０°）の測定範囲において、以下の２θ：約３．７、６．２、７．３、８．８、９．２、１１．５、１４．７、１５．４、１７、１７．７、２０．６、２１．２、２５．９、２７．１、２７．６、２９．４で対応する特性値を有する。
【００１５】
別の実施の形態では、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物は、粉末Ｘ線回折法によって測定される回折角２θ（３°〜８０°）の測定範囲において、以下の２θ：約３．７、４．３、６．２、７．３、８．８、９．３、１１．５、１４．７、１５．４、１７、１７．７、２１．２、２５．９、２７．３、２７．６、２９．４で対応する特性値を有する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を調製する方法であって、
方法Ａ：タンシノンＩＩＡを反応容器に入れ、酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、無水プロピオン酸、及びハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素（ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、テトラクロロエタンの１つ又は複数を含む）を添加し、撹拌し、硫酸若しくは発煙硫酸、若しくはクロロスルホン酸中の酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、無水プロピオン酸の溶液の１つ又は複数を添加し、滴加終了後、３０℃以下で０．１〜６時間撹拌し、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムの溶液（好ましくは、その飽和溶液）の１つ又は複数を添加し、十分に沈殿させ、濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液若しくは飽和硫酸ナトリウム溶液で１回若しくは数回洗浄し、次いで水若しくはＣ１〜Ｃ６低分子量アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノールを含む）で１回若しくは数回洗浄し、濾過し、残留塩酸ナトリウムを無水エタノール還流で除去し、濃縮し、得られた固体を水、Ｃ１〜Ｃ６低分子量アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノール等を含む）、Ｃ３〜Ｃ６低級ケトン（アセトン、ブタノン、ヘキソン等を含む）、Ｃ２〜Ｃ８低級エステル（酢酸ブチル、酢酸エチル、ギ酸エチル等を含む）、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素（ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム等を含む）、Ｃ２〜Ｃ６低級エーテル（エチルエーテル、メチルエチルエーテル、イソプロピルエーテル等を含む）、Ｃ５〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐アルカン若しくはシクロアルカン（ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、シクロヘキサン等を含む）及び芳香族炭化水素（ベンゼン、トルエン等の１つ又は複数を含む）による結晶化に供し、静置し、冷却し、結晶析出後に濾過し、乾燥させてタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を得ること（純度の更に高い生成物を得るために、この結晶化手順を１回又は数回繰り返すことができる）、又は
方法Ｂ：タンシノンＩＩＡを反応容器に入れ、酢酸、無水酢酸、プロピオン酸、無水プロピオン酸、及びハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素（ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、テトラクロロエタンの１つ又は複数を含む）を添加し、撹拌し、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素（ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、テトラクロロエタンの１つ又は複数を含む）中のクロロスルホン酸の溶液を添加し、滴加終了後、３０℃以下で０．１〜６時間撹拌し、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、有機層を分離し、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムの飽和溶液の１つ又は複数を得られた水溶液層に添加し、静置し、十分に沈殿させ、濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液若しくは飽和硫酸ナトリウム溶液で１回若しくは数回洗浄し、次いで水又はＣ１〜Ｃ６低分子量アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノールを含む）の１つ又は複数で１回若しくは数回洗浄し、濾過し、得られた固体を水、Ｃ１〜Ｃ６低分子量アルコール（メタノール、エタノール、イソプロパノール等を含む）、Ｃ３〜Ｃ６低級ケトン（アセトン、ブタノン、ヘキソン等を含む）、Ｃ２〜Ｃ８低級エステル（酢酸ブチル、酢酸エチル、ギ酸エチル等を含む）、ハロゲンで置換されたＣ１〜Ｃ６低級炭化水素（ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム等を含む）、Ｃ２〜Ｃ６低級エーテル（エチルエーテル、メチルエチルエーテル、イソプロピルエーテル等を含む）、Ｃ５〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐アルカン若しくはシクロアルカン（ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、シクロヘキサン等を含む）及び芳香族炭化水素（ベンゼン、トルエン等の１つ又は複数を含む）による結晶化に供し、静置し、冷却し、結晶析出後に濾過し、乾燥させてタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を得ること（この結晶化手順を１回又は数回繰り返すことができる）
を含む、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶を調製する方法を提供する。
【００１７】
１つの実施の形態では、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶の結晶化又は再結晶化に使用される溶媒は、好ましくは水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ブタノン、ヘキソン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、石油エーテル及びベンゼンの１つ又は複数である。
【００１８】
本発明の生成物の乾燥は、種々の温度（例えば２０℃〜１００℃）、乾燥時間（１時間〜数日間）の条件下で、又は更なる乾燥剤（シリカゲル、五酸化リン、無水塩化カルシウム、無水硫酸ナトリウム等を含む）によって、又は最終生成物を乾燥させるために常圧若しくは減圧を用いて行うことができる。乾燥温度は好ましくは６０℃以下である。
【００１９】
別の態様では、本発明は、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
１つの実施の形態では、本発明の医薬組成物は、注射用凍結乾燥粉末、注射用無菌充填粉末、輸液、少量注射液及び消化管投与用製剤等を形成するように調製される。
【００２１】
経口製剤としては、デンプン、加工デンプン、ラクトース、微結晶性セルロース、シクロデキストリン、ソルビトール、マンニトール、リン酸カルシウム、アミノ酸等の薬学的に許容可能な充填剤、デンプン、加工デンプン、微結晶性セルロース、ナトリウムカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、界面活性剤等の薬学的に許容可能な崩壊剤、ゲル化デンプン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸及びその塩等の薬学的に許容可能な湿潤剤及び粘着剤、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール４０００〜８０００、タルク粉、微粉シリカ、ドデシル硫酸マグネシウム等の薬学的に許容可能な潤滑剤及び流動促進剤、アスパルテーム、シクラミン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、トリクロロスクロース、食用香料等の薬学的に許容可能な甘味料及び着香料を含み得る錠剤、カプセル、顆粒が挙げられる。
【００２２】
本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は、例えば以下の方法によって注射用凍結乾燥粉末を形成するように加工することができる：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を準備し、任意で薬学的に許容可能な補助溶媒、凍結乾燥用支持剤又は賦形剤、安定剤、注射用水を添加し、撹拌して溶解させ、必要に応じて薬学的に許容可能な酸／アルカリを添加してｐＨを３．５〜８．５に調整し、０．００５〜０．５％（Ｗ／Ｖ）の活性炭を添加し、１５分間〜４５分間撹拌し、濾過し、水を補充し、無菌濾過し、１ボトル当たり５ｍｇ〜８０ｍｇ（主要薬物単位で表される）で分注し、凍結乾燥し、圧填し、最終生成物を得る。
【００２３】
本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は、例えば以下の方法によって少量の注射液を形成するように更に加工することができる：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物に、注射用水及び薬学的に許容可能な添加剤（例えば、薬学的に許容可能なｐＨ調整剤、薬学的に許容可能な酸化防止剤、不活性ガス）を添加し、濾過し、滅菌して、ｐＨ値が３．５〜８．５の滅菌した少量の注射液を得る。
【００２４】
薬学的に許容可能な凍結乾燥支持剤又は賦形剤としては、ラクトース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストラン、アミノ酸又はその塩（グリシン、タウリン、アルギニン等を含む）、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム等の１つ又は複数を挙げることができる。
【００２５】
薬学的に許容可能なｐＨ調整剤は、薬学的に許容可能な無機酸又は有機酸、無機アルカリ又は有機アルカリであってもよく、より広義ではルイス酸又はルイスアルカリであってもよく、その１つ又は複数を含有してもよく、塩酸、リン酸、プロピオン酸、酢酸及び酢酸塩（酢酸ナトリウム等）、乳酸及び薬学的に許容可能な乳酸塩、薬学的に許容可能なクエン酸塩、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸塩、酒石酸及び薬学的に許容可能なその塩、ホウ砂、ホウ酸、コハク酸、ヘキサン酸、アジピン酸、フマル酸、マレイン酸、トリヒドロキシアミノメタン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、イソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−プロパン−１，３−ジオールアミン、ヘキサン−１，２−ジアミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ジイソプロピルアミン及びその塩、ポリヒドロキシカルボン酸及び薬学的に許容可能なその塩（グルクロン酸、グルコン酸、ラクトビオン酸、リンゴ酸、トレオン酸、グルコヘプトン酸等）、アミノ酸及びアミノ酸塩等の１つ又は複数であってもよい。
【００２６】
薬学的に許容可能な酸化防止剤及び安定剤は、亜硫酸、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、メタ重亜硫酸塩、亜ジチオン酸塩、チオ硫酸塩、有機硫黄化合物（チオ尿素、グルタチオン、ジメルカプトプロパノール、チオグリコール酸及びその塩、チオ乳酸及びその塩、チオジプロピオン酸及びその塩等）、フェノール化合物（没食子酸及びその塩、コーヒー酸、カフェイン酸塩、フェルラ酸、フェルラ酸塩、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐ−フェノール、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸塩、フェノール又は誘導体、サリチル酸及びその塩等）、アミノ酸及びその塩、アスコルビン酸及びアスコルビン酸塩、イソアスコルビン酸及びイソアスコルビン酸塩、ニコチンアミド、酒石酸、硝酸塩、リン酸塩、薬学的に許容可能な酢酸塩、クエン酸塩、ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ塩（ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡ四ナトリウム等）、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、グルコシル−シクロデキストリン（Ｇ1−ＣＹＤ）、マルトシル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（２−ＨＰ−β−ＣＹＤ）、３−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（３−ＨＰ−β−ＣＹＤ）、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）（ＳＢＥ7−β−ＣＤ、ＳＢＥ4−β−ＣＤ等）の１つ又は複数であり得る。
【００２７】
薬学的に許容可能な補助溶媒は、グルコース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ニコチンアミド、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−エチルグルコサミン、リン酸及び薬学的に許容可能なリン酸塩（リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸二水素カリウム等であり得る）、乳酸、乳酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ポリヒドロキシカルボン酸及び薬学的に許容可能なその塩（グルクロン酸、グルコン酸、ラクトビオン酸、リンゴ酸、トレオン酸、グルコヘプトン酸又は薬学的に許容可能なその塩等）、アミノ酸及びアミノ酸塩（塩酸アルギニン、塩酸リジン等であり得る）、塩酸、硫酸、酒石酸、Ｔｗｅｅｎ  ２０〜８０、ポロキサマー（ポロキサマー１２４、１８８、２３７、３３８、４０７等を含む）、ポリエチレングリコール２００〜２０００、エタノール、エチレングリコール、グリセロール、グルコシル−シクロデキストリン（Ｇ1−ＣＹＤ）、マルトシル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（２−ＨＰ−β−ＣＹＤ）、３−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（３−ＨＰ−β−ＣＹＤ）、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥ−β−ＣＤ）（ＳＢＥ7−β−ＣＤ、ＳＢＥ4−β−ＣＤ等）並びに水等の１つ又は複数であり得る。
【００２８】
薬学的に許容可能な等浸透圧調整剤は、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、転化糖、マルトース、デキストラン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸ナトリウム等の１つ又は複数であり得る。
【００２９】
本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は、ヒト及び哺乳動物における冠動脈性心疾患、狭心症、心筋梗塞、不整脈、虚血性脳疾患（脳血栓症、脳塞栓症を含む）、各種動脈閉塞症等の末端循環障害、血管炎、糖尿病に起因する微小循環障害、高血圧又は脂質異常症等の予防又は治療においてカルシウム拮抗薬として使用することができる。
【００３０】
別の態様では、本発明は、ヒト及び哺乳動物における冠動脈性心疾患、狭心症、心筋梗塞、不整脈、虚血性脳疾患、各種動脈閉塞症を含む末端循環障害、血管炎、糖尿病に起因する微小循環障害、脂質異常症の治療又は予防に有用な薬剤の製造における本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の使用を提供する。
【００３１】
代替的には、本発明は、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を用いることによって上記の疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とする被験体に、予防的又は治療的に有効な量の本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を投与することを含む、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を用いることによって上記の疾患を治療又は予防する方法を提供する。
【００３２】
投与量及び用法：一般に、成人については以下の通りである：筋肉注射：１回につき５ｍｇ〜８０ｍｇ、１日１回又は２回。静脈注射：１回につき５ｍｇ〜８０ｍｇ、２０ｍｌの２５％グルコース注射液で希釈。静脈点滴：５ｍｇ〜８０ｍｇ、２５０ｍｌ〜５００ｍｌの５％グルコース注射溶液又は０．９％塩化ナトリウム注射溶液で希釈、１日１回又は２回。小児については、上記の投与量の半分以下を使用する。消化管投与の投与量及び用法は以下の通りである：体重が１０ｋｇ〜７０ｋｇのヒト又は動物については、一般に１日当たり１０ｍｇ〜２００ｍｇ、１回〜３回のバッチで投与。小児については、上記の投与量の半分以下を使用する。
【００３３】
中華人民共和国薬局方（２００５年版）に従って行った吸湿性試験により、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の吸湿性が、無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムよりもはるかに低いことが確認された。
【００３４】
加えて、中華人民共和国薬局方（２００５年版）に従って行った加速安定性試験により、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶が、無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムよりも良好な貯蔵安定性を有しており、したがって、より長期間安定に貯蔵することができることが確認された。
【００３５】
本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物は、赤色又は赤れんが色又は茶褐色の結晶性粉末である。無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムの処理中には、潮解による付着を回避するために空気遮断（air isolation）が必要とされることに加えて、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶は良好な滑性を有し、それにより製剤の操作性を改善する。得られる固体製剤は良好な溶解性を有するため、容易に吸収されて血液循環に入り、バイオアベイラビリティを改善し、その作用の速やかな発現を促進することができる。
【実施例】
【００３６】
熱分析の方法
アッセイ条件：Ｓｅｔｓｙｓ  １６、ＮＥＴＺＳＣＨ  ＳＴＡ４４９Ｃ（Setaram Company製）、サンプル量：約５ｍｇ、温度勾配速度：１０Ｋ／分、Ｎ2流量：５０ｍｌ／分、温度：一般に室温〜約４００℃。
【００３７】
驚くべきことに、本発明の水和物は特徴的に、サーモグラム（ＴＧ−ＤＴＡ又はＴＧ−ＤＳＣ）における重量減少プラットフォームで対応する吸熱ピークを有し、サーモグラムはタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムの結晶性水和物（その０．５水和物、１．５水和物、２．５水和物等）を示す。
【００３８】
粉末Ｘ線回折法
武漢科技大学材料試験センター内のＤ／ＭＸ−ＩＩＩＡ  Ｘ線回折装置を使用して、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物のＸ線回折パターンを回折角２θ走査範囲３°〜８０°で測定した。
【００３９】
吸湿性試験
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物及び無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムのサンプル：各々約５ｇの無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム及び本発明の水和物を一定重量の乾燥時計皿に入れ、正確に秤量し、２５℃及び相対湿度（ＲＨ）７５％で試験に供し、試験の０時間及び４８時間の時点で別個にサンプリングし、吸湿性による重量増加率を算出した。結果は、無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムが、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物よりもはるかに高い吸湿性を有することを示す。
【００４０】
【表１】
2013510097.tif 000003
【００４１】
安定性試験
ＲＨ７５％、３０℃及び遮光の条件下で、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶及び無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムのサンプルを、加速安定性試験用のアンプル内に別個に密封し、クロマトグラフ条件：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ18カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）、移動相：メタノール−０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素カリウム溶液（リン酸でｐＨ４に調整）（６０：４０）、検出波長：２７１ｎｍ、流量：１ｍｌ／分で関連物質の増加分を測定した（表１及び表２の結果を参照されたい）。
【００４２】
【表２】
2013510097.tif 000004
【００４３】
表の結果から、本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物結晶が、無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムよりもはるかに安定であることが確認される。
【００４４】
実施例１：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物の調製
４ｇのタンシノンＩＩＡ（市販）、３０ｍｌの氷酢酸及び４５ｍｌの無水酢酸を、乾燥三つ口フラスコに入れ、撹拌して溶解させ、３６ｍｌの氷酢酸−濃硫酸の混合溶液（体積比１／１）を滴加し、２５℃以下で０．５時間〜３時間、撹拌下で反応させ、反応物をゆっくりと水に注ぎ込み、２０ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液を添加し、固体の沈殿が完了した後に濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、９５％冷エタノールで２回洗浄し、吸引濾過し、固体を５ｍｌのメタノール、１２ｍｌのエタノール、１０ｍｌのクロロホルム、２０ｍｌのエチルエーテル、２ｍｌの水の溶媒で再結晶化し、０℃に置き、結晶析出が完了した後に吸引濾過し、得られた固体を再度１０ｍｌのメタノール、１５ｍｌのクロロホルム、１５ｍｌのエチルエーテル、１ｍｌの水の溶媒で再結晶化させ、０℃に置き、結晶折出が完成した後に吸引濾過し、結晶を約５０℃で６時間乾燥させて、約０．６ｇの赤色の結晶を得た。融点：２０５℃〜２０７℃（ＥＬＥＣＴＲＯＴＨＥＲＭＡＬ  ＭＥＬＴＩＮＧ  ＰＯＩＮＴ  ＡＰＰＡＲＡＴＵＳ、未較正）；λH2Omax２００、２２８ｎｍ、２５６ｎｍ、２７１ｎｍ；1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．８６（１Ｈ）、δ７．５７（１Ｈ）、δ３．０８（２Ｈ）、δ２．３３（３Ｈ）、δ１．７３（２Ｈ）、δ１．６２（２Ｈ）、δ１．２９（６Ｈ）、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおけるδ３．４での水ピークは重水交換後に消失した；13Ｃ−ＮＭＲは総炭素数１９を示す、13Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１８２．９、δ１７５．９、δ１５８．７、δ１５４．６、δ１５０．１、δ１４３．５、δ１３４．１、δ１２７．６、δ１２７．１、δ１２０．６、δ１２０．３、δ１１７．５、δ３８．０、δ３５．０、δ３２．１（２Ｃ）、δ３０．２、δ１９．４、δ１０．０（ｐｐｍ）；ＤＥＰＴスペクトル：３個の第１級炭素原子：δ３２．１（２Ｃ）、δ１０．０；３個の第２級炭素原子：δ３８．０、δ３０．２、δ１９．４；２個の第３級炭素原子。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：３９６；ＥＩ：ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｎａ］３７３、［Ｍ＋Ｎａ］４１９；赤外スペクトル：νKBrmaxｃｍ-1３４６４（ワイド）、２９５８、２９２９、２８６７、１６７４、１６４４、１５７８、１４６３、１４２９、１３６４、１３３１、１２１７、１１４４、１１２０、１０７６、１０４０、９２３、８４１、７０９、６５４；カールフィッシャー法による水分含量は１０．４６％であった、熱分析：プラットフォーム重量減少は約１０．２６％であり、これは２．５結晶水を含有するサンプルの結果の誤差範囲内であった（理論値：１０．２１％）（図１を参照されたい）、元素分析、理論値：Ｃ  ５１．７０％、Ｈ  ５．０２％、Ｎａ  ５．２１％、Ｓ  ７．２６％；測定値：Ｃ  ５１．５４％、Ｈ  ５．１６％、Ｎａ  ５．０８％、Ｓ  ７．３９％。
【００４５】
実施例２：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム３水和物の調製
結晶化の溶媒を上記の実施例と同様の比率のエタノール、クロロホルム、エチルエーテル、水に変更した以外は上記の操作及び工程を採用し、結晶固体物質を約３０℃で４時間乾燥させて、０．５ｇの橙赤色の結晶を得た。融点：１８８℃〜１９３℃（未較正）；λH2Omax２００、２２８ｎｍ、２５６ｎｍ、２７１ｎｍ、ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：３９６；ＥＩ：ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｎａ］３７３、［Ｍ＋Ｎａ］４１９；カールフィッシャー法による水分含量は１４．０７％であった、熱分析：プラットフォーム重量減少は約１３．２２％（理論値：１３．２８％）であった。
【００４６】
実施例３：無水タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムの調製（比較例）
実施例２の物質を約８０℃、Ｐ2Ｏ5の存在下で２４時間〜４８時間以上真空乾燥させて、その無水物質を得た。カールフィッシャー法によるその水分含量は概して約１．３％未満であった。
【００４７】
実施例４：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物の調製
４ｇのタンシノンＩＩＡ（市販）、３０ｍｌのプロピオン酸及び４５ｍｌの無水プロピオン酸を乾燥三つ口フラスコに入れ、撹拌し、３６ｍｌの氷酢酸−濃硫酸の混合溶液（体積比１／１）を滴加し、撹拌下、２５℃以下で０．５時間〜３時間反応させ、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、７５ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液を添加し、固体の沈殿が完了した後に真空濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、７５％冷エタノールで洗浄し、吸引濾過し、得られた固体を無水エタノールで還流させ、吸引濾過し、液体を真空濃縮し、濃縮した残渣を１６ｍｌのメタノール、１０ｍｌのクロロホルム、２５ｍｌのエチルエーテル、１．５ｍｌの水、４ｍｌのアセトンで再結晶化させ、０℃に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体をもう一度同様の割合の溶媒で再結晶化させ、０℃に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体を約６０℃で約４時間乾燥させて、約０．５ｇの赤色結晶を得た。融点：２１４℃で分解（未較正）；紫外スペクトル：５μｌ／ｍｌのその水溶液を準備し、分光光度法に従って測定した。最大吸収は２００ｎｍ、２２８ｎｍ、２５６ｎｍ及び２７１ｎｍの波長で得られ、特性吸収は２８０ｎｍで見られた；赤外スペクトル：νKBrmaxｃｍ-1３４４６（ワイド）、２９５９、２９３２、２８６７、１６７４、１６４６、１５７８、１５３７、１４８０、１４６３、１４２９、１３６４、１３３１、１２１９、１１４４、１１２０、１０７７、１０４２、９２３、８４４、７０９、６５３；1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ７．８４（１Ｈ）、δ７．５４（１Ｈ）、δ３．０６（２Ｈ）、δ２．３４（３Ｈ）、δ１．７２（２Ｈ）、δ１．６２（２Ｈ）、δ１．２９（６Ｈ）、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおけるδ３．４での水ピークは重水交換後に消失した；13Ｃ−ＮＭＲは総炭素数１９を示した、13Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１８２．８、δ１７５．７、δ１５８．６、δ１５４．６、δ１５０．０、δ１４３．４、δ１３４．０、δ１２７．６、δ１２７．１、δ１２０．６、δ１２０．３、δ１１７．５、δ３８．０、δ３５．０、δ３２．１（２Ｃ）、δ３０．１、δ１９．３、δ１０．０（ｐｐｍ）；ＤＥＰＴスペクトル：３個の第１級炭素原子：δ３２．１（２Ｃ）、δ１０．０；３個の第２級炭素原子：δ３８．０、δ３０．１、δ１９．３；２個の第３級炭素原子。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：３９６；ＥＩ：ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｎａ］３７３、［Ｍ＋Ｎａ］４１９；カールフィッシャー法による水分含量は６．６２％であった、熱分析：プラットフォーム重量減少は約５．９１％であり、これは１．５結晶水を含有するサンプルの結果の誤差範囲内であった（理論値：６．３８％）（図２を参照されたい）、元素分析、理論値：Ｃ  ５３．９０％、Ｈ  ４．７６％、Ｎａ  ５．４３％、Ｓ  ７．５７％；測定値：Ｃ  ５３．７２％、Ｈ  ４．９１％、Ｎａ  ５．２７％、Ｓ  ７．４３％。粉末Ｘ線回折パターンは図５に示した。
【００４８】
実施例５：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物の調製
３．５ｇのタンシノンＩＩＡ（市販）、３０ｍｌのプロピオン酸及び４５ｍｌの無水プロピオン酸を乾燥三つ口フラスコに入れ、撹拌し、３６ｍｌのプロピオン酸−濃硫酸の混合溶液（体積比１／１）を滴加し、撹拌下、２５℃以下で０．５時間〜３時間反応させ、反応物を水にゆっくりと注ぎ込み、５ｍｌの飽和炭酸ナトリウムを撹拌下でゆっくりと滴加し、次いで６０ｍｌの飽和塩化ナトリウム溶液を添加し、固体の沈殿が完了した後に吸引濾過し、沈殿物を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、５０％冷エタノールで洗浄し、吸引濾過し、得られた結晶を無水エタノールで還流させ、濾過し、濃縮し、高度に濃縮された残渣を１５ｍｌのメタノール、２０ｍｌのクロロホルム、１０ｍｌのエチルエーテル、１ｍｌの水で結晶化し、０℃に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体をもう一度同様の割合の溶媒で再結晶化させ、０℃に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体をＰ2Ｏ5の存在下、約６０℃で約６時間乾燥させて、約０．４ｇの赤色の結晶を得た。融点：１９５℃〜１９８℃で分解（未較正）；紫外スペクトル：５μｇ／ｍｌのその水溶液を準備し、分光光度法に従って測定した。λH2Omax２００ｎｍ、２２８ｎｍ、２５６ｎｍ、２７１ｎｍ；1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ７．８５（１Ｈ）、δ７．５６（１Ｈ）、δ３．０７（２Ｈ）、δ２．３４（３Ｈ）、δ１．７２（２Ｈ）、δ１．６２（２Ｈ）、δ１．２９（６Ｈ）、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおけるδ３．４での水ピークは重水交換後に消失した；13Ｃ−ＮＭＲは総炭素数１９を示した。13Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１８２．９、δ１７５．９、δ１５８．７、δ１５４．６、δ１５０．１、δ１４３．５、δ１３４．１、δ１２７．６、δ１２７．１、δ１２０．６、δ１２０．３、δ１１７．５、δ３８．０、δ３５．０、δ３２．１（２Ｃ）、δ３０．２、δ１９．４、δ１０．O（ｐｐｍ）；ＤＥＰＴスペクトル：３個の第１級炭素原子：δ３２．１（２Ｃ）、δ１０．０；３個の第２級炭素原子：δ３８．０、δ３０．２、δ１９．４；２個の第３級炭素原子。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：３９６；ＥＩ：ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｎａ］３７３、［Ｍ＋Ｎａ］４１９；赤外スペクトル：νKBrmaxｃｍ-1３４８６（ワイド）、２９３３、１６７２、１６２０、１５７４、１５３６、１４６０、１３３０、１２１６、１０４０、９２２、８４２、６５６、カールフィッシャー法による水分含量は２．５７％であった。熱分析ＴＧ−ＤＳＣ：プラットフォーム重量減少は約２．１４％であり、これは０．５結晶水を含有するサンプルの結果の誤差範囲内であった（理論値：２．２２％）（図３を参照されたい）；元素分析、理論値：Ｃ  ５６．２９％、Ｈ  ４．４８％、Ｎａ  ５．６７％、Ｓ  ７．９１％；測定値：Ｃ  ５６．１５％、Ｈ  ４．６２％、Ｎａ  ５．４８％、Ｓ  ７．７６％。粉末Ｘ線回折特性は図４に示した。
【００４９】
実施例６：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物の調製
４ｇのタンシノンＩＩＡ（市販）、２５０ｍｌの乾燥ジクロロメタン及び５０ｍｌの乾燥テトラクロロエタンを三つ口フラスコに入れ、撹拌して溶解させ、６．５ｍｌのクロロスルホン酸（予め４０ｍｌの乾燥ジクロロメタンに溶解させる）を滴加し、ＴＬＣによってモニタリングされる反応物のスポットが消失するまで撹拌下、１０℃以下で反応させ、反応物を４０ｍｌの水にゆっくりと注ぎ込み、水溶液層を分離し、飽和炭酸ナトリウム溶液をｐＨが約５に達するまで撹拌下でゆっくりと滴加し、０℃以下に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体を約１６ｍｌのメタノール、約１０ｍｌのクロロホルム、約２５ｍｌのエチルエーテル、約１ｍｌの水、約２ｍｌのアセトンで結晶化し、０℃以下に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体をもう一度同様の割合の溶媒で再結晶化させ、０℃以下に置き、沈殿が完了した後に吸引濾過し、得られた固体を約６０℃で約４時間真空乾燥させて、約０．２ｇの赤色の結晶を得た。融点：２１２℃で分解（未較正）；紫外スペクトル：５μｇ／ｍｌのその水溶液を準備し、分光光度法に従って測定した：λH2Omax２００ｎｍ、２２８ｎｍ、２５６ｎｍ、２７１ｎｍ；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：３９６；ＥＩ：ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｎａ］３７３、［Ｍ＋Ｎａ］４１９；1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ７．８４（１Ｈ）、δ７．５４（１Ｈ）、δ３．０６（２Ｈ）、δ２．３４（３Ｈ）、δ１．７２（２Ｈ）、δ１．６２（２Ｈ）、δ１．２９（６Ｈ）、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおけるδ３．４の水ピークは重水交換後に消失した；13Ｃ−ＮＭＲは総炭素原子数１９を示した、13Ｃ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１８２．９、δ１７５．７、δ１５８．６、δ１５４．６、δ１５０．１、δ１４３．４、δ１３４．０、δ１２７．６、δ１２７．１、δ１２０．６、δ１２０．３、δ１１７．４、δ３８．０、δ３５．０、δ３２．１（２Ｃ）、δ３０．１、δ１９．３、δ１０．０（ｐｐｍ）；赤外スペクトル：νKBrmaxｃｍ-1３４４８（ワイド）、２９５９、２９３２、２８６７、１６７４、１６４６、１５７８、１５３７、１４８０、１４６３、１４２９、１３６４、１３３１、１２１８、１１４４、１１２０、１０７６、１０４２、９２３、８４４、７０９、６５４；カールフィッシャー法による水分含量は６．５７％であった。熱分析ＴＧ−ＤＳＣ：プラットフォーム重量減少は約６．１６％であり、これは理論値６．３８％に対する誤差範囲内であった。
【００５０】
実施例７：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の凍結乾燥製剤の製造
５ｇのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物に、１５ｇのマンニトール、４ｇのリン酸二水素ナトリウム、２ｇの酒石酸ナトリウム、１ｇのアスコルビン酸、０．０２ｇのＥＤＴＡ二ナトリウム、約８００ｍｌの注射用水を３０℃〜５０℃で添加し、撹拌して溶解させ、１Ｍ〜５Ｍのクエン酸の溶液及び水酸化ナトリウムの溶液を添加してｐＨを４．０〜７．０に調節し、１０００ｍｌになるまで注射用水を補充し、活性炭を０．０１％〜０．５％（Ｗ／Ｖ）の量で添加し、１５分間〜３０分間撹拌し、濾過し、０．２２μｍの微多孔膜で濾過するか、又は６０００〜２００００の分子カットオフ値を有する限外濾過膜で濾過し、準最終生成物の含量を測定し、５ｍｇ／ボトル、１０ｍｇ／ボトル又は２０ｍｇ／ボトル（無水主要薬物単位で表される）で分注し、真空凍結乾燥させて、圧填し、凍結乾燥生成物を得た。
【００５１】
実施例８：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の凍結乾燥製剤の製造
１０ｇのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物又は０．５水和物に、２０ｇのソルビトール、４ｇのリン酸二水素ナトリウム、２ｇのクエン酸ナトリウム、０．０２ｇのＥＤＴＡ二ナトリウム、約８００ｍｌの注射用水を３０℃〜５０℃で添加し、撹拌して溶解させ、１Ｍ〜５Ｍのクエン酸の溶液及び水酸化ナトリウムの溶液を添加してｐＨを５．０〜７．５に調節し、１０００ｍｌになるまで注射用水を補充し、活性炭を０．０１％〜０．５％（Ｗ／Ｖ）の量で添加し、１５分間〜３０分間撹拌し、濾過し、０．２２μｍの微多孔膜で濾過し、準最終生成物の含量を測定し、１０ｍｇ／ボトル又は２０ｍｇ／ボトル又は４０ｍｇ／ボトル（タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム単位で表される）で分注し、真空凍結乾燥させ、圧填し、凍結乾燥生成物を得た。
【００５２】
実施例９：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の製造
５ｇのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物又は１．５水和物又は０．５水和物（乾燥生成物単位で表される）に、４ｇのグルコン酸ナトリウム、２ｇのクエン酸ナトリウム、１ｇのアスコルビン酸、３ｍｌのプロピルグリコール、０．０６ｇのＥＤＴＡ二ナトリウムを添加し、強い光を避けて注射用水を添加し、窒素ガスを供給し、撹拌して溶解させ、１Ｍ〜５Ｍのクエン酸の溶液及びクエン酸ナトリウムの溶液を添加してｐＨを４．０〜７．０に調節し、活性炭を０．０１％（Ｗ／Ｖ）の量で添加し、１５分間〜４５分間撹拌し、濾過し、２０００ｍｌになるまで注射用水を補充し、０．２２μｍの微多孔膜又は６０００〜２００００の分子カットオフ値を有する限外濾過膜で濾過し、溶液に窒素ガスを供給して飽和させ、１０ｍｇ／ボトル、２０ｍｇ／ボトル又は４０ｍｇ／ボトルで分注し、滅菌して生成物を得た。
【００５３】
実施例１０：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の製造
３００ｇのグルコースを秤量し、注射用水に添加し、撹拌して完全に溶解させ、活性炭を調合された溶液の量に対して０．５％の量で添加し、１０分間〜３０分間加熱し、砂濾過棒で濾過して炭素を除去した。１０ｇのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物を上記の濾液と均一に混合し、１０ｇのリン酸二水素ナトリウム、２ｇの酒石酸ナトリウム、１ｇのスルホブチル−β−シクロデキストリン、０．１ｇのＥＤＴＡ二ナトリウムを添加し、撹拌して溶解させ、５０００ｍｌになるまで注射用水を補充し、１Ｍ〜３Ｍの塩酸又は乳酸又はクエン酸の溶液及びクエン酸ナトリウムの溶液を添加してｐＨを３．５〜６．０に調節し、活性炭を調合された溶液の量に対して０．０５％の量で添加し、１０分間〜３０分間加熱及び撹拌し、濾過して炭を除去し、次いで０．２２μｍの微多孔膜又は６０００〜２００００の分子カットオフ値を有する限外濾過膜で１回若しくは複数回濾過し、溶液に高純度窒素ガスを供給して飽和させ、準最終生成物を含量、ｐＨ値及び透明度についてアッセイし、適切な溶液を１０ｍｇ／ボトル、２０ｍｇ／ボトル、４０ｍｇ／ボトル又は８０ｍｇ／ボトルで分注し、滅菌して生成物を得た。
【００５４】
実施例１１：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の塩化ナトリウム輸液の製造
２０ｇのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物又は０．５水和物（無水生成物単位で表される）、４２５ｇの塩化ナトリウム、５ｇのクエン酸ナトリウム、５ｇの酒石酸、０．６ｇのＥＤＴＡ二ナトリウムを注射用水に添加し、溶液に高純度窒素ガスを供給して飽和させ、撹拌して完全に溶解させ、クエン酸溶液及びクエン酸ナトリウム溶液を添加してｐＨを３．５〜６．５に調節し、５００００ｍｌになるまで注射用水を添加し、活性炭を調合された溶液の量に対して０．０５％の量で添加し、１０分間〜３０分間加熱及び撹拌し、濾過して炭を除去し、０．２２μｍの膜又は６０００〜２００００の分子カットオフ値を有する限外濾過膜で濾過し、準最終生成物を含量、ｐＨ値及び透明度についてアッセイし、高純度窒素ガス雰囲気下で５０ｍｌ、１００ｍｌ又は２５０ｍｌ容のボトル又はプラスチック袋に分注し、滅菌して生成物を得た。
【００５５】
実施例１２：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の錠剤又はカプセル（１個の錠剤又はカプセル当たり２０ｍｇ）
配合：
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物  ２０ｇ
微結晶性セルロース  ６５ｇ
ラクトース  １０ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース  ５ｇ
β−シクロデキストリン  ５ｇ
５％ＰＶＰ−Ｋ３０（５０％エタノール水溶液）  適量
ステアリン酸マグネシウム  ２ｇ
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物、微結晶性セルロース、ラクトース、β−シクロデキストリン、１００メッシュの篩に通した低置換度ヒドロキシプロピルセルロースに、適当量の５％ＰＶＰ−Ｋ３０の５０％エタノール水溶液を粘着剤として添加して軟物質を形成し、１８メッシュ〜２４メッシュの篩に通し、乾燥させ、１４メッシュ〜２０メッシュの篩に通して整粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、カプセル充填又は打錠した。
【００５６】
実施例１３：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の錠剤又はカプセル（１個の錠剤又はカプセル当たり５０ｍｇ）
配合：
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物  ５０ｇ
ラクトース  １６５ｇ
カルボキシメチルナトリウムデンプン  ５ｇ
５％ＰＶＰ−Ｋ３０（５０％エタノール水溶液）  適量
ステアリン酸マグネシウム  ２ｇ
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物、ラクトース、１００メッシュの篩に通したカルボキシメチルナトリウムデンプンに、適当量の５％ＰＶＰ−Ｋ３０の５０％エタノール水溶液を粘着剤として添加して軟物質を形成し、１８メッシュ〜２４メッシュの篩に通し、乾燥させ、顆粒を形成し、１４メッシュ〜２０メッシュの篩に通して整粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、カプセル充填又は打錠した。
【００５７】
実施例１４：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の錠剤又はカプセル（１個の錠剤又はカプセル当たり１００ｍｇ）
配合：
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物  １００ｇ
ラクトース  １５５ｇ
デンプン  ４０ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース  ５ｇ
５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（５０％エタノール水溶液）  適量
ステアリン酸マグネシウム  ２ｇ
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物、微結晶性セルロース、ラクトース、１００メッシュの篩に通した低置換度ヒドロキシプロピルセルロースに、適当量の５％ヒドロキシプロピルメチルセルロースの５０％エタノール水溶液を粘着剤として添加して軟物質を形成し、１８メッシュ〜２４メッシュの篩に通し、顆粒を形成し、乾燥させ、１４メッシュ〜２０メッシュの篩に通して整粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、カプセル充填又は打錠した。
【００５８】
実施例１５：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の顆粒の製造
内容物：タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム４水和物又はタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム３水和物又はタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムの顆粒（１つのバッグ当たり５０ｍｇ）
配合：
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物  ５０ｇ（無水生成物単位で表される）
マンニトール  １５５ｇ
ラクトース  ２０ｇ
固形食用エッセンス  １ｇ
５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース  適量
タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物、マンニトール、ラクトース、食用エッセンスを１００メッシュの篩に通し、適当量の５％ヒドロキシプロピルメチルセルロースの５０％エタノール水溶液を粘着剤として添加して軟物質を形成し、１８メッシュ〜２４メッシュの篩に通して顆粒を形成し、６０℃以下で乾燥させ、１４メッシュ〜２０メッシュの篩に通して整粒し、分注した。
【００５９】
実施例１６：薬理試験
１．ラットにおける塩化カルシウムによって誘導される不整脈に対する効果
５０匹のＳＤラット（雄及び雌、体重２２６±３１ｇ）を準備し、無作為に５つの群に分け、６ｍｇ・ｋｇ-1の生理食塩水、キニジン、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物（生理食塩水に溶解させる）を静脈注射によって別個に投与した。ラットを４０ｍｇ・ｋｇ-1の３％ペントバルビタールナトリウムで麻酔し、手術台に仰臥位で固定し、６分間かけて舌静脈から注射し、１００ｍｇ・ｋｇ-1（０．４ｍ１／１００ｇ）の２．５％塩化カルシウムを迅速に静脈注射し（５秒で注射を完了）、心室細動を起こした動物の数及び死亡した動物の数を記録した。
【００６０】
結果は、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の群において、ラットにおける塩化カルシウムによって誘導される心室細動が有意に阻害され得ること（ｐ＜０．０５）、及びタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物の群において、ラットにおける塩化カルシウムによって誘導される不整脈死が有意に阻害され得ることを示す（表３）。
【００６１】
【表３】
2013510097.tif 000005
【００６２】
２．ラットの虚血再灌流に対する効果
３６匹の雄ウィスターラット（体重２５０ｇ〜３００ｇ）を、無作為に３つの群（偽手術群、虚血再灌流群及び本発明の薬物の群）に１群当たり１２匹のラットで分けた。本発明の薬物の群については、ラットに生理食塩水中のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物を、４０ｍｇ／ｋｇの用量（dose）で１日２回、連続７日間腹膜投与し、最後の投与の６０分後に脳虚血手術に供した。偽手術群及び虚血再灌流群のラットには、同容量の（same volume of isometric）生理食塩水をそれぞれ投与した。
【００６３】
ラットを１０％抱水クロラール（３．５ｍｌ／ｋｇ）で腹膜注射によって麻酔し、仰臥位で固定し、文献（Journal of Shanghai Jiaotong University (Medicine), 2007, 27(10):1218-1222）の改善されたZea Longaの糸閉塞法によってモデル化した。偽手術群においては、糸を単に１０ｍｍ挿入し、他の工程はモデル群と同様にして、手術側にホルネル症候群、反対側に運動障害を発現した動物を確立に成功したモデルとみなした。モデルの確立に成功した後、動物に上記と同じ用量を１日２回投与し、偽手術群及び虚血再灌流群にそれぞれ同容量の生理食塩水を投与した。モデルの確立の２時間後に抜糸し、再灌流の２４時間後にラットを屠殺し、その脳を迅速に取り出し、秤量した。生理食塩水を使用して１０％脳組織ホモジネート溶液を低温で調製し、低温、３０００ｒ／分で１０分間遠心分離し、沈殿物を捨て、上清を取り、対応する市販のＳＯＤ、ＭＤＡ、ＮＯ、ＮＯＳキットの仕様書に従って試験してＳＯＤ、ＭＤＡ、ＮＯ、ＮＯＳの含量又は活性を求めた。結果を表４に示す。
【００６４】
【表４】
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【００６５】
結果は、偽手術群と比較して、虚血再灌流群のラットの脳組織におけるＳＯＤ活性が有意に低下し、ＭＤＡ含量、ＮＯ含量及びＮＯＳ活性が有意に増大したこと（Ｐ＜０．０１）、虚血再灌流群と比較して、本発明の薬物の群がラットの脳組織におけるＳＯＤ活性の有意な増大、ＮＯＳ活性の低下、並びにＭＤＡ含量及びＮＯ含量の有意な低下を有していたこと（Ｐ＜０．０１）を示す。本発明のタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム０．５水和物及びタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム２．５水和物を別個に上記の虚血再灌流試験に供したところ、タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム１．５水和物と同様の結果が得られた。これらの結果から、本発明の薬物がＮＯＳ活性及びＮＯ含量を調節することによって脳虚血再灌流傷害に対する保護効果をもたらすことが確認される。
【００６６】
３．心筋カルシウムパラドックスに対する保護効果
文献（XU Shuyun, et al.編, Pharmacological Test Method, 3rd edition, p986-1000; Chinese Journal of Pathophysiology, 1987, 3:154-158）を参照して、モルモットにおいてｅｘ  ｖｉｖｏ心臓灌流を作り出すことによって心筋カルシウムパラドックスモデルを確立した。４８匹の健常モルモット（体重２８０ｇ〜３６０ｇ）を別個に正常対照群、カルシウムパラドックス群、イプロベラトリル陽性対照群、３つの薬物投与群を含む６つの群に１つの群当たり８匹のモルモットで分け、動物を試験前に一晩絶食させ、ヘパリンを０．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射し、２０分後に３０ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウムを腹腔内注射し、麻酔後に開胸し、心臓を迅速に取り出し、氷冷したクレブス−ヘンゼライト（Ｋ−Ｈ）灌流液に浸漬し、大動脈挿管後、心臓を恒温恒圧のｅｘ  ｖｉｖｏ心臓灌流装置に入れた。文献（Chinese Journal of Pathophysiology, 1987, 3:154-158）を参照して、心臓をランゲンドルフ法によって３７℃で灌流した。ここでは、３つの薬物投与群をカルシウムパラドックス＋３２ｍｇ／Ｌの本発明の化合物の投与に供し、正常対照群をカルシウム含有クレブス−ヘンゼライト液での連続灌流に３５分間供して、最後の２０分間の冠状動脈の流出液を回収し、他の５つの群をカルシウム含有Ｋ−Ｈ液での灌流に１０分間供して心臓の安定状態を達成し、無カルシウムＫ−Ｈ液で５分間、次いで再度カルシウム含有Ｋ−Ｈ液で２０分間の灌流に供した。このようにしてカルシウムパラドックスモデルをかかる灌流手順によって確立した。陽性対照群は全手順において２．１ｍｇ／Ｌのイプロベラトリルを含む灌流液での灌流に供し、薬物投与群は３２ｍｇ／ＬのタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウム水和物を別個に添加した灌流液での灌流に供した。カルシウム含有灌流液が回復した時点で２０分間の冠状動脈の流出液を回収し、回収した冠状動脈流出液におけるタンパク質放出量（ｍｇ／分／ｇ乾燥重量）及び心筋組織のカルシウム取り込み（μｍｏｌ／ｇ乾燥重量）を参考文献に従って測定した。カルシウムパラドックス群と比べた薬物投与群の結果の違いは有意であることが見出されている（Ｐ＜０．０１）。表５及び表６を参照されたい。
【００６７】
【表５】
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【００６８】
【表６】
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【００６９】
本発明の化合物が心筋カルシウムパラドックス傷害に対する有意な保護効果を有し、カルシウムイオン拮抗作用を有し、カルシウム流入を阻害することができ、カルシウムパラドックス手順中の心筋組織カルシウム沈着及び心筋損傷に起因するタンパク質放出を減少させることが分かる。
【００７０】
本発明の精神及び範囲を限定しない細部の多くの変更が可能であり、本発明が上記の実施例に限定されないことを当業者は理解することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2013510097.tif 000015
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