(57)【要約】    本発明は、脂質（即ちモノ、ジ及びトリグリセリド）及びリン脂質をふくむ脂肪酸から、膜コンタクターで脂肪酸アルキルエステルを得るための新たなプロセスに関する。
2013524779.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質から脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＡＥ）を巻くコンタクターで分画するプロセスであり、前記プロセスは：
（ａ）  順次ＦＡＡＥ放出を達成するために前記脂質を酵素的アルコール分解するステップ；
（ｂ）  前記ステップ（ａ）の粗生成物混合物を前記膜コンタクターの供給区画Ａへ供給するステップ；及び
（ｃ）  ＦＡＡＥを、放出されるに従って、有機溶媒又は溶媒混合物を含む前記膜コンタクターの生成物区画Ｂを横切って分離するステップ、を含むプロセス。
【請求項２】
請求項１に記載のプロセスであり、
（ａ）  前記酵素反応が、脂質、アルコール、酵素及び必要な場合には他の溶媒を含む酵素反応装置で起こり、
（ｂ）  放出されたＦＡＡＥを含む前記反応混合物が、前記膜コンタクターの供給区画Ａへ供給され、かつ前記反応装置Ｒへ戻され、
（ｃ）  有機溶媒又は溶媒混合物が、生成物回収タンクＴから、前記膜コンタクターの生成物区画Ｂのへ循環され、さらに前記生成物回収タンクＴに戻され、及び
（ｄ）  前記ＦＡＡＥが、区画Ａから生成物区画Ｂへ拡散により膜Ｍ又はを横切り、ＦＡＡＥを蓄積する、プロセス。
【請求項３】
請求項１に記載のプロセスであり、前記設定が図１に示される、プロセス。
【請求項４】
請求項１に記載のプロセスであり、前記酵素が、容易に除去される支持体上に固定化されている、プロセス。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載のプロセスであり、ＦＡＡＥが順次放出され、前記飽和及びモノ不飽和の中鎖から長鎖脂肪酸が第１の段階で実質的に放出され、かつ多価不飽和脂肪酸が最後の段階で実質的に放出される、プロセス。
【請求項６】
請求項５に記載のプロセスであり、前記飽和及びモノ不飽和脂肪酸のアルキルエステルが、前記第１の段階で分離された生成物中の全ＦＡＡＥの重量で、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、最も好ましくは少なくとも９０％である、プロセス。
【請求項７】
請求項５に記載のプロセスであり、前記長鎖多価不飽和脂肪酸のアルキルエステルが、前記最後の段階で生成物相内の全ＦＡＡＥの重量で、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、最も好ましくは少なくとも８０％である、プロセス。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれかに記載のプロセスであり、前記脂質が任意の由来の、モノ、ジ及びトリグリセリド及びリン脂質からなる群から選択される、プロセス。
【請求項９】
請求項１に記載のプロセスであり、前記アルコールが好ましくは、低級アルキルアルコール（Ｃ１−Ｃ６）の群から選択される、プロセス。
【請求項１０】
請求項１に記載のプロセスであり、前記溶媒又は溶媒混合物が、低級アルキルアルコールの群及び／又は非極性溶媒の群、好ましくはヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、ペンタン、ブタン、トルエン、ジクロロエタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトン及びこれらの混合物からなる群から選択される、プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質、即ちモノ、ジ及びトリグリセリド及びリン脂質を含む脂肪酸から、膜コンタクターで脂肪酸アルキルエスを得るための新たなプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
長鎖オメガ３多価不飽和酸は、人にとって必須脂肪酸であり、食物により供給される必要がある。これらのうち、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸、Ｃ２２：６Δ４、７、１０、１３、１６、１９）及びＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸、Ｃ２２：６Δ４、７、１０、１３、１６、１９）は特に偏光に有益であり、食品サプリメントとしてだけでなく、また冠状動脈性心臓病の処置のための薬物化合物として使用され得る（Ｎａｒａｙａｎ等、２００６、Ｆｏｏｄ  Ｒｅｖ  Ｉｎｔｅｒｎａｔ  ２２：２９１−３０７）。機能性食品中、動物飼料及び医薬品応用に使用されるべき油の富化のために、脂肪酸又はそれらのアルキルエステル誘導体の濃縮が必要となる。
【０００３】
脂肪酸アルキルエステルは、植物油又は海産物油から触媒の存在下でアルコールとの反応で製造される。海産物油の化学的エステル交換反応は、望ましい生成物により、例えばナトリウムメトキシド又はナトリウムエトキシドなどの塩基性触媒で実行される。又は、リパーゼを用いる酵素的エステル化又はアルコール分解である。脂肪酸の化学的構造及びそのグリセロール分子の位置は、前記酵素反応に影響を与える。従って、最も容易に酵素反応が可能な脂肪酸が最初に放出されることとなる。酵素的アルコール分解は、グリセリド分画にＬＣ−ＰＵＦＡ（ＥＰＡ及びＤＨＡなどの）を富化するために適用されてきた。これは、Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎ等のＪＡＯＣＳ、７４：１４１９−１４２４（１９９７）及びＬｙｂｅｒｇとＡｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚのＥｕｒ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１１０：３１７−３２４（２００８）、さらには米国特許出願公開第２００６／０１４８０４７Ａ１に開示されている。
【０００４】
国際公開第２０１０／１４３９７４Ａ１号には、脂肪酸を膜コンタクターモジュールで水性バイオマスから抽出するための新しいプロセスが記載されている。我々は、類似の膜コンタクターはまた、脂質から脂肪酸アルキルエステルを分画するために使用できることを見出した。
【０００５】
膜コンタクターは、化学的アルコール分解により精製される脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）を単離するために使用されてきた（国際公開第２００６／０８９４２９Ａ１号、カナダ特許出願公開第２７０９５７５Ａ１号及び国際公開第２００９／０７７１６１Ａ２号）。これらのプロセスは、過剰のメタノール及び圧力を反応の駆動力として適用する。我々の新たなプロセスでは、膜コンタクターを適用し、駆動力としては、異なる相での脂肪酸アルキルエステルの溶解性（分配係数）により作られる濃度勾配である。異なるアルキルエステルを次々に放出するリパーゼを用いる酵素的アルコール分解と前記膜分離を組み合わせることで、ＬＣ−ＰＵＦＡアルキルエステルの富化が達成され得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００６／０１４８０４７Ａ１号
【特許文献２】国際公開第２０１０／１４３９７４  Ａ１号
【特許文献３】国際公開第２００６／０８９４２９Ａ１号
【特許文献４】カナダ特許出願公開第２７０９５７５Ａ１号
【特許文献５】国際公開第２００９／０７７１６１Ａ２号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｎａｒａｙａｎ等、Ｆｏｏｄ  Ｒｅｖ  Ｉｎｔｅｒｎａｔ  ２２：２９１−３０７（２００６）
【非特許文献２】Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎ等、ＪＡＯＣＳ、７４：１４１９−１４２４（１９９７）
【非特許文献３】ＬｙｂｅｒｇとＡｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１１０：３１７−３２４（２００８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで本発明の課題は、脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＡＥ）を得るための新たなプロセスを提供することである。
【０００９】
本発明の他の課題は、長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）のアルキルエステルを得るための新たなプロセスを提供することである。
【００１０】
さらに本発明の他の課題は、前記オメガ３及び／又はオメガ６脂肪酸のアルキルエステルを得るための新たなプロセスを提供することである。
【００１１】
さらに本発明の他の課題は、ＤＨＡ及びＥＰＡ及びのオメガ３脂肪酸のアルキルエステルを得るための新たなプロセスを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
これらの課題は本発明により達成される。
【００１３】
本発明は、膜コンタクターでの脂質から脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＡＥ）を分画するためのプロセスに関し、前記プロセスは：（ａ）ＦＡＡＥの順次放出を達成するために前記脂質の酵素的アルコール分解ステップ、（ｂ）前記ステップ（ａ）の粗生成物混合物を、前記膜コンタクターの前記供給区画Ａへ供給するステップ、及び（ｃ）前記ＦＡＡＥが放出されるに従い、前記ＦＡＡＥを前記膜を横切って前記膜コンタクターの、有機溶媒又は溶媒混合物を含む生成物区画Ｂへ分離するステップとを含む。
【００１４】
本明細書において、用語脂質は、モノ、ジ及びトリグリセリド及びリン脂質を含む。
【００１５】
前記膜コンタクターの模式的構成が図１に示される。
【００１６】
前期酵素反応は、脂質、アルコール、酵素及び必要な場合にはその他の溶媒を含む酵素反応装置Ｒで実施される。前記酵素は、容易に除去可能な支持体上に固定化されている。反応混合物は、放出されたＦＡＡＥを含み、前記膜コンタクターの前記供給区画Ａに供給され、前記反応装置Ｒへ戻される。有機溶媒又は溶媒混合物は、生成物回収タンクＴから前記膜コンタクターの生成物区画Ｂへ循環されて生成物回収タンクＴへ戻る。その際、前記ＦＡＡＥは、区画Ａから区画Ｂへ拡散により前記膜を横切って移動され、そこでＦＡＡＥは蓄積される。図１では、前記膜での矢印は移動の方向を示す。
【００１７】
この新たな本発明のプロセスは、脂肪酸アルキルエステルの順次放出を達成するための酵素的アルコール分解を、前記ＦＡＡＥを分画して分離するための膜濾過と組合せて利用するものである。第１の段階では、構造的及び／又は位置特異性による飽和及びモノ不飽和脂肪酸を選択的に攻撃する最初のリパーゼにより、飽和及びモノ不飽和、特にＣ１６及びＣ１８の中鎖から長鎖の脂肪酸のＦＡＡＥが形成される。最後の段階では、前記最初のリパーゼを残して長時間作用させることで、又は異なるリパーゼを追加することで、中鎖から長鎖の多価不飽和脂肪酸アルキルエステル、特にＤＨＡとＥＰＡが得られる。前記第１の段階と前記最後の段階の間では、対象となる脂肪酸アルキルエステルに依存してさらなる段階が生じ得る。前記第１の段階で形成されるＦＡＡＥのほとんどは、次の段階が開始される前に前記膜を横切って分離される。
【００１８】
親水性及び疎水性膜が使用され得るが、非極性溶媒を適用する場合には、疎水性膜の使用が最もあり得る。
【００１９】
疎水性膜は、ポリイミドなどの任意のポリマー材料から作られ得る。異なるポリマーが使用され、好ましくはＬｅｎｚｉｎｇＰ８４及びＭａｔｒｉｍｉｄ５２１８であるが、これらに限定されない。膜は、不織ポリエステル裏打ち材料などから作られる多孔性支持層により強化されていてよい。
【００２０】
本発明で適用される膜は多孔性でも、また非多孔性であってもよい。相反転により製造される一体化形成ポリイミド非対称膜が適用可能である（国際公開第２０１０／１４２９７９Ａ１）。前記２相間でそれぞれの化合物の分配係数が異なる前記膜は、未反応のグリセリドからＦＡＡＥを分離することを可能にするバリアを形成する。
【００２１】
膜コンタクターモジュール構造は、選択された膜設計に従い適合される。当業者に知られる任意の設計、例えばチューブ状、中空ファイバ状又は平坦シート状膜などが本発明で使用可能である。前記膜は、知られる任意の設計に従い構成され得る。例えば、プレート及びフレーム状、螺旋巻、シェルとチューブ状、及びそれらの誘導形状である。
【００２２】
脂質アルコール分解は、モノ、ジ及びトリグリセリド及びリン脂質をアルコールと反応させ、ＦＡＡＥを放出させる。前記反応は、１又はそれ以上の酵素により触媒される。前記脂質は任意の由来であってよく、例えば動物、植物又は微生物などが挙げられるが、特に興味のあるものは、海産物及び微生物由来の油であり、これらにはＥＰＡ及び／又はＤＨＡなどのＬＣ−ＰＵＦＡが含まれる。前記海産物油は、海藻、動物プランクトン、魚及び哺乳類などの任意の海産バイオマス又は動物からである。
【００２３】
本発明により分離されるＦＡＡＥは興味の対象となる任意のＦＡＡＥである。それらは、中鎖から長鎖脂肪酸で、１４から１６炭素数を含み、飽和又は不飽和の脂肪酸のアルキルエステルであり得る。例えば、飽和脂肪酸であるミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）及びアラキジン酸（Ｃ２０：０）及びモノ不飽和のオレイン酸（Ｃ１８：１）及びガドレイン酸（Ｃ２０：１）が挙げられる。しかし、本発明により分離されるべき好ましいＦＡＡＥは、長鎖の多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）であって炭素数が１８より多く、少なくとも３つの二重結合を持つ、特にＥＰＡ及び及びＤＨＡのアルキルエステルである。
【００２４】
適用される酵素はリパーゼであり、例えば、カンジダルゴサ、カンジダシリンドラセア、カンジダアンタークチカ、シュードモナスｓｐ、ムコールジャバニカス、ムコールミヘイ、サーモマイセスラニギノサス（Ｌｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＬ  １００Ｌ）及びこれらの混合物からの１、３位置特異的及び非特異的リパーゼなどの微生物由来のリパーゼが挙げられるが、これらに限定されない。脂肪酸に関する選択性と個々の脂肪酸アルキルエステルの放出速度は、前記最適な酵素を選択する上で最も重要である。
【００２５】
本発明により使用されるリパーゼは、容易に除去可能な支持体に固定化され得る。セライト粒子（Ｃ．Ｔｏｒｒｅｓ等Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｊｏｕｒｎａｌ、４２：１０５−１１０、２００８）、ポリプロピレン粒子（Ａ．Ｍ．Ｌｙｂｅｒｇ等  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１１０：３１７−３２４、２００８）に吸着又は前記膜内に閉じ込めて（Ｌ．Ｇｉｏｒｎｏ等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７６：５９−６７、２００６）酵素を固定化することは通常に行われる方法であるより最近、ナノファイバや磁気ナノ粒子などの支持体が導入されてきている（Ｒ．Ｓ．Ｐｒａｋａｓｈａｍ等、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｃ、１  １１：３８４２−３８４７、２００７；Ｚ．Ｇ．Ｗａｎｇ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃａｔａｌ．Ｂ．、５６：１８９−１９５、２００９）。
【００２６】
アルコール分解反応に適用するアルコールは、前記応用及び／又はさらなる精製の要求に基づき好ましくは低級アルキルアルコール（Ｃ１−Ｃ６）である。反応及び未反応グリセリドとの間の区別を改善するため及び／又は相再循環を改善するために必要な場合には、前記供給相でのアルコールの追加が検討され得る。
【００２７】
前記生成物回収タンクから前記膜コンタクターの生成物区画Ｂへ循環し前記生成物回収タンクＴへ戻される前記生成物相は、最初は適切な溶媒又は溶媒混合物で満たされる。好ましくは、前記溶媒又は溶媒混合物は、これまで特定されたアルコール及び／又は非極性溶媒であって限定されるものではないが好ましくはヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、ペンタン、トルエン、ジクロロエタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトン又はこれらの任意の混合物が挙げられる。
【００２８】
１つの実施態様では、化学量論又は少過剰のアルコール及び固定化酵素が、前記供給相の脂質へ添加される。前記酵素反応装置（Ｒ）で反応は、飽和及びモノ不飽和アルキルエステルが放出されるまで実行され、その後前記膜コンタクターの前記供給区画Ａへ供給される。前記供給相はＦＡＡＥ、未反応グリセリド及びグリセロール及び最後にはアルコールの残渣量を含むものとなる。形成された放出ＦＡＡＥのみが、区画Ｂの生成物相へ前記膜を通過する。前記Ｂには、受け取るための溶媒又は溶媒混合物が循環している。
【００２９】
前記望ましい分離が達成されると、残留するモノ及びジグリセリドと反応させるために必要な量のアルコールが酵素反応装置Ｒが添加される。前記第１の酵素は、他の酵素に交換され得る。アルコール分解が完了すると、供給相は再び前記膜コンタクターの区画Ａのへ供給され、形成されたＦＡＡＥが区画Ｂの生成物相へ前記膜Ｍを通過する。前記Ｂにはすでに新しい溶媒又は溶媒混合物が使用のために交換されている。
【００３０】
前記最初の段階と最後の段階の間では、興味の対象である脂肪酸アルキルエステルに依存してさらなる段階が生じ得る。
【００３１】
前記操作条件は、前記膜、原材料、酵素、溶媒又は溶媒混合物及び分画される脂肪酸アルキルエステルにより変化し得る。操作条件の最適化は、本技術分野の当業者に、一般知識内であり実施可能である。
【００３２】
本発明によるプロセスは、バッチプロセス又はより好ましくは半連続又は連続プロセスとして操作され得る。半連続又は連続プロセスが好ましい場合には、前記反応混合物中のエタノールの濃度は、ゆっくりとした供給により制御され、放出されたＦＡＡＥは前記膜を通じて移動することで同時に除去される。
【００３３】
１つの好ましい実施態様では、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）及びオレイン酸（Ｃ１８：１）アルキルエステル、及び他の容易に攻撃される酸のアルキルエステルが前記段階的酵素的アルコール分解に第１段階で除去される。飽和及びモノ不飽和脂肪酸のアルキルエステルは、前記酵素的アルコール分解の第１の段階で相分離された生成物での全ＦＡＡＥ重量で、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、最も好ましくは少なくとも９０％である。この段階で相分離されたＤＨＡ及びＥＰＡアルキルエステルは、１０％以下、より好ましくは５％以下である。
【００３４】
ＬＣ−ＰＵＦＡの主分画は、前記段階的アルコール分解の最後の段階で放出され、前記第１の酵素の連続した作用によるか、又は後に添加された酵素の作用のいずれかによる。本発明の１つの好ましい１つの実施態様では、長鎖多価不飽和脂肪酸のアルキルエステルは、前記酵素的アルコール分解の最後の段階で相分離生成物において全脂肪酸アルキルエステルの重量の少なくとも５０％、好ましくは６０％、最も好ましくは８０％である。適切な酵素の選択により、ＥＰＡアルキルエステルは中間段階でＤＨＡから分離され得る（Ｂｒｅｉｖｉｋ等、ＪＡＯＣＳ、７４（１１）：１４２５−１４２９、１９９７）。
【００３５】
本発明によるプロセスを停止の後、溶媒又は溶媒混合物は回収され得る。溶媒回収は好ましくは、前記提案されるシステムでは蒸留よりも有機溶媒ナノ濾過（ＯＳＮ）により達成される。しかしながら、溶媒混合物の回収のためには任意のプロセスが使用され得る。有機溶媒がナノ濾過で回収される間に、生成物回収タンクＴでのＦＡＡＥは濃縮される。
【００３６】
生成物回収タンクＴで得られる濃縮ＦＡＡＥは当業者に知られる方法、例えば分子蒸留やクロマトグラフなど、特に高性能向流クロマトグラフ（ＨＰＣＣＣ）によりさらに精製され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、本発明によるプロセスを模式的に示す。前記脂肪酸アルキルエステルが富化された相（供給相）は、酵素反応装置Ｒから前記膜コンタクターの区画Ａのへ循環して酵素反応装置Ｒへ戻される。有機溶媒又は溶媒混合物は、生成物回収タンクＴから前記膜コンタクターの区画Ｂのへ循環されて生成物回収タンクＴへ戻される。脂肪酸アルキルエステルは、区画Ａの前記供給相から区画Ｂの生成物相へ拡散により前記膜Ｍを横切って移動し、区画Ｂで興味の対象である生成物は蓄積される。
【図２】図２は実施例１で説明される実験の際の、供給相の成分及び生成物相での脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）の蓄積を示す。グラフ中で、ＦＡＥＥの濃度は、ＧＣクロマトグラフの面積により表され、これはＦＡＥＥの質量に比例する。前記ＦＡＥＥは、肝油をエタノールで化学的にエステル交換することで製造された。全ての供給相に存在した全てのＦＡＥＥは、前記膜を横切る類似の質量移動速度を持っていた。
【図３】図３は、前記実験を通じて水相及び有機相での、ＤＨＡ及びパルミチン酸の濃度を示す。プロットは２つの区分に分けられている。第１の段階は、前記第１のリパーゼが使用されている場合に達成された分離に対応する。予想されるように、有機相のＣ１６：０濃度はこの段階の最終ではＤＨＡの濃度よりも大きい。第２の段階は、第２にリパーゼが残りのグリセリドの加水分解のために添加された時に開始され、従ってより多くのＤＨＡが放出され、有機相内のＤＨＡの濃度は直線的に増加していった。  以下の実施例により本発明を説明する。
【００３８】
実施例１：  化学的エタノール分解及びそれに続く膜分離
脂肪酸アルキルエステルが疎水性膜を通過して移動され得ることを示すために、以下の実験を行った。
【００３９】
脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）を富化させた溶液を肝油をエタノールで化学的エステル交換反応により調製した。１．５％水酸化カリウムを含むエタノール（９９．９％）の５０ｍｌを、エルレンマイヤーフラスコ内の肝油１８４ｇ（Ｍｏｌｌｅｒ’ｓ  ｔｒａｎ、  Ａｘｅｌｌｕｓ  ＡＳ、Ｎｏｒｗａｙ）に添加した。窒素でフラッシュし適切にシールした後、前記フラスコを５５℃でウォーターバスに入れ、混合物を１０００ｒｐｍで３０分間撹拌した。化学的エタノール分解が終了した後、撹拌を止め、混合物を３０分間静置した。その後、重相（グリセロール）と軽相（エチルエステル）が完全に形成され区別された。前記脂肪酸エチルエステルを含む前記軽相の５０ｍｌを、新しいエルレンマイヤーフラスコへ移し、２００ｍｌのエタノール（９９．９％）を添加して５倍に希釈した。この溶液をさらに、前記膜分離試験の供給相として使用した。
【００４０】
前記膜コンタクターでは非対称性ポリイミド膜が使用された。Ｍａｔｒｉｍｉｄ５２１８が選択された。というのはこのポリイミドの疎水性がよく知られているからである。前記平坦シート膜は相逆転により調製された。即ちドープ溶液は、必要とされる量のポリマーをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して調製された。膜は分子量カットオフ約３５ｋＤａを持ち、膜コンタクターの濾過表面積は４１ｃｍ２であった。
【００４１】
前記疎水性膜で分離された、エタノール（供給相）及び有機溶媒（生成物相、この場合は又エタノール）中のＦＡＥＥはそれぞれの膜の側で連続的に循環された。前記流速は両方の側で同じであった。これは両方の溶媒が同じであるので相破壊を避けるために必要である。
【００４２】
供給相及び生成物相の開始容量はそれぞれ２５０及び２００ｍｌであった。実験は、室温及び大気圧下で８時間行われた。サンプル（１ｍｌ）を両方の相から、１、２、５及び８時間で取り出した。窒素下でエタノールを蒸発させた後、ＦＡＥＥを０．０２％ヘンエイコサン酸メチルエステル（＞９９％純度、内部標準）及び０．５％ＢＨＴを含むヘキサン中に溶解した。サンプルはさらに、ＦＡＥＥの定量のためにＧＣで分析した。
【００４３】
実験を通じて、前記供給相の成分（主にＦＡＥＥ）及び生成物相での対応するＦＡＥＥの蓄積が、図２に示される。最初の供給相での全ＦＡＥＥの１４％が８時間後には生成物相へ移動した。前記供給相に存在する全てのＦＡＥＥは前記膜を横切る類似の質量移動速度を持っていた。
【００４４】
この実験は、脂肪酸アルキルエステルは、脂肪酸アルキルエステルが富化された相から疎水性膜を通って膜コンタクターシステムでの生成物相へ移動することができる、ことを示すものである。
【００４５】
実施例２：  順次酵素加水分解による脂肪酸の分画と膜コンタクターでの同時分画
この実験は、飽和及び多価不飽和脂肪酸の分画の原理を示すものであり、酵素脂質加水分解により飽和及び／又はモノ不飽和脂肪酸及びＰＵＦＡを順次放出させ、放出された脂肪酸を膜コンタクターシステムの膜を通じて同時に抽出する、というものである。
【００４６】
表１に与えられる脂肪酸成分を持つ２重量％脂質を含む海藻バイオマスから放出されたトリグリセリドの０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）中の懸濁液を原料／供給溶液として使用した。１００ｍｌのエタノールを前記トリグリセリド懸濁液に添加し、フラスコを３７℃のウォーターバス中でインキュベートし、前記最初のリパーゼを添加した。前記トリグリセリド懸濁液の膜コンタクターの水性区画への再循環を前記トリグリセリド加水分解の開始後２時間で開始した。飽和脂肪酸が十分除去され、前記有機相の溶媒を新たな溶媒に置き換えて、前記第２のリパーゼを前記バイオマス懸濁液に添加した。
【００４７】
【表１】
2013524779.tif 000003
使用した疎水性膜及び実験貢献は実施例１と同じであった。前記疎水性膜で分離された前記２つの流体循環、即ち前記脂肪酸が富化された相（トリグリセリド懸濁液）及び有機相は、膜のそれぞれの側で連続的に循環された（ギアポンプ）。前記脂肪酸が富化された相の循環の流速（９０Ｌ／時間）は、有機相の循環の流速（２０Ｌ／時間）よりも高く、これは水の侵入を避けるためと前記膜を前記溶媒で容易に濡れるようにするためである。脂肪酸の多い相及び有機相の最初の容量は、それぞれ２５０ｍｌ及び２００ｍｌであった。実験は大気圧下で行われた。サンプルは定期的に集められ、直ぐにメチル化されさらにＧＣにより分析された。
【００４８】
図３に示されるように、これらの実験は、多価不飽和脂肪酸が残余の側に残る一方で、飽和脂肪酸（即ちＣ１６：０）は好ましく第１の段階で抽出されること、を証明した。前記第２のリパーゼを添加することで、残るグリセリドが加水分解された。従って前記実験の第２の段階で、多価不飽和脂肪酸（即ちＤＨＡ）の質量移動速度の強化が観測された。Ｃ１６：０は安定していた一方で、ＤＨＡの移動はこの実験の最後までなお直線的に増加しつづけた。
【図１】
2013524779.tif 000004
【図２】
2013524779.tif 000005
【図３】
2013524779.tif 000006
【国際調査報告】
2013524779.tif 000007
2013524779.tif 000008
2013524779.tif 000009
2013524779.tif 000010