(57)【要約】  本発明は、１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む、節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための組成物及びそれらの方法に関する。本発明は、レストラン、ビジネスホテル、モーテル、及び住宅群において、害虫及び害虫に関係する疾患を制御するためにトラップ及び化学農薬が頻繁に使用される場合、害虫制御方法から生じる悪臭を除去するための新規方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む、節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための組成物。
【請求項２】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物がさらに化学農薬を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記化学農薬が、餌製剤（ｂａｉｔ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、噴霧製剤、及び散粉用製剤（ｄｕｓｔａｂｌｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記化学農薬が、活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記節足動物がゴキブリである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ゴキブリが、チャバネゴキブリ ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、チャオビゴキブリ スペラ ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ ｌｏｎｇｉｐａｌｏａ）、トウヨウゴキブリ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、クロゴキブリ ペリプラネタ フリギノサ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ｆｕｌｉｇｉｎｏｓａ）、ワモンゴキブリ ペリプラネタ アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ Ａｍｅｒｉｃａｎａ）、トルキスタンゴキブリ ブラッタ ラテラリス（Ｂｌａｔｔａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ）、及びフィールドゴキブリ（ｆｉｅｌｄ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ バガ（Ｂｌａｔｔａ ｖａｇａ）である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための方法であって、以下のステップ：
（ａ）１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を有する組成物を調製し、及び
（ｂ）標的節足動物害虫に前記組成物を供すること
を含む、方法。
【請求項１１】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的節足動物害虫が、トラップ中に前記組成物を設置することにより前記組成物に供される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記標的節足動物害虫が、前記組成物と食料源とを組み合わせることにより、前記組成物に供される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記標的節足動物害虫が、前記組成物と化学農薬とを組み合わせることにより、前記組成物に供される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記化学農薬が、餌製剤、噴霧製剤、及び散粉用製剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記化学農薬が活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記標的節足動物害虫が１以上のゴキブリである、請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記ゴキブリが、チャバネゴキブリ ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、チャオビゴキブリ スペラ ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ ｌｏｎｇｉｐａｌｏａ）、トウヨウゴキブリ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、クロゴキブリ ペリプラネタ フリギノサ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ｆｕｌｉｇｉｎｏｓａ）、ワモンゴキブリ ペリプラネタ アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ Ａｍｅｒｉｃａｎａ）、トルキスタンゴキブリ ブラッタ ラテラリス（Ｂｌａｔｔａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ）、及びフィールドゴキブリ（ｆｉｅｌｄ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ バガ（Ｂｌａｔｔａ ｖａｇａ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
昆虫を誘引することができるチャンバー、及び１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む、節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための１以上の組成物を含む昆虫トラップ。
【請求項２２】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、請求項２１に記載の昆虫トラップ。
【請求項２３】
前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物がさらに化学農薬を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
前記化学農薬が、餌製剤、噴霧製剤、及び散粉用製剤である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記化学農薬が活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条の下、２０１０年１０月２９日に出願された米国仮特許出願第６１／４０８，１１５号に基づく優先権を主張し、その全内容は参考として本明細書に組み込まれている。
【０００２】
生物材料の寄託の参照
本出願は、生物材料の寄託の参照を含み、そして寄託は、参照として本明細書に組み込まれる。完全な情報については、発明の詳細な説明を参照のこと。
【０００３】
本発明は、死んだ昆虫によって放出される臭気を低減し又は除去するための昆虫病原糸状菌（ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ）を含む殺昆虫組成物、及びそのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
害虫の侵入は、家庭及び工業環境において頻繁に遭遇する問題である。多くの製品が、昆虫などの節足動物害虫を制御するために、及び新たな侵入を防ぐために利用可能である。しかしながら、害虫制御に関係する１つの頻繁に遭遇する問題は、死後及びさらに害虫体の腐敗後に維持する不快な臭気である。これらの不快な臭気は、ゴキブリ及び毛虫を含む多くの害虫の死の際に放出される「ネクロモン（ｎｅｃｒｏｍｏｎｅ）」と呼ばれる物質又は脂肪酸物質の最初の放出によって引き起こされる可能性がある。他の臭気は、自己分解及び腐敗を介した死んだ昆虫の自然腐敗由来のガスの放出によって引き起こされる可能性がある。
【０００５】
害虫個体群を制御するための解決法は、周知である。一般的な方法は、化学又は天然殺虫剤を、単独又はお互いに組み合わせて使用して害虫を標的にする。例えば、米国特許第５，８８８，９８９号では、害虫、特に農業病害虫からの防御のためにシラフルオフェンの殺虫及び殺ダニ組成物、並びに少なくとも１つの昆虫病原糸状菌を開示している。
【０００６】
米国特許第５，０５７，３１５号では、ゴキブリ個体群を制御するための非毒性の代替として昆虫病原糸状菌の使用を開示している。
【０００７】
米国特許第５，６７９，３６２号では、昆虫を引き付け、そしてそれらを生存能力のある病原性のメタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ）胞子で感染することができる昆虫感染チャンバーを対象にしている。
【０００８】
トラップや化学農薬などの解決法が、レストラン、ビジネスホテル、モーテル、及び住宅群で、害虫及び害虫に関連する疾患を制御するために頻繁に使用されているが、同様に害虫制御により生じる臭気を除去することが望ましい。要するに、昆虫の死骸の腐敗に関係する悪臭の除去における必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、死んだ害虫から生じる悪臭を低減し又は除去することができる１以上の昆虫病原糸状菌を、単独で又は市販の化学農薬と組み合わせて含む組成物を提供する。
【００１０】
本発明のさらに他の目的は、化学農薬が、素早い殺虫を提供するが、節足動物の生存している個体群を感染するために死骸から胞子を生じることを可能にするように、化学農薬と昆虫病原糸状菌とを結合することによって、半社会的行動を示すことが知られている節足動物の個体群にわたって１以上の昆虫病原糸状菌を水平伝播するための方法を提供する。
【００１１】
１つの実施態様において、本発明の目的は、節足動物の死骸が腐敗することにより生じた悪臭を低減し又は除去するための、１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む組成物を提供することである。組成物は、１以上の昆虫病原糸状菌を、単独で又は他の菌類と組み合わせて含んでもよい。昆虫病原糸状菌の属は、これらに限定されないが、メタリジウム属菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア属菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス属菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム属菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、又はヒルステラ属菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）由来の菌類が含まれてもよい。特に、組成物の昆虫病原糸状菌は、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である。より特に、昆虫病原糸状菌はＤＳＭ ３８８４、ＤＳＭ ３８８５、又はそれらの混合物である。
【００１２】
死んだ節足動物により生じる悪臭を低減し又は除去するための組成物は、化学農薬の有効量をさらに含んでもよい。化学農薬は、これらに限定されないが、餌製剤（ｂａｉｔ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、噴霧製剤、又は散粉用製剤（ｄｕｓｔａｂｌｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）でもよい。さらに、化学農薬のための活性成分は、これらに限定されないが、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドでもよい。
【００１３】
他の実施態様において、本発明の目的は、１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を有する組成物を調製し、及びその組成物を標的害虫に暴露することを含む、節足動物の死骸が腐敗することにより生じる悪臭を低減し又は除去するための方法を提供する。組成物は、１以上の昆虫病原糸状菌を単独で又は他の菌類と組み合わせて含んでもよい。昆虫病原糸状菌の属は、これらに限定されないが、メタリジウム属菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア属菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス属菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム属菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、又はヒルステラ属菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）由来の菌類が含まれてもよい。特に、組成物の昆虫病原糸状菌は、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である。より特に、昆虫病原糸状菌はＤＳＭ ３８８４、ＤＳＭ ３８８５、又はそれらの混合物である。
【００１４】
節足動物害虫は、これらに限定されないが、トラップ中に組成物を設置すること、組成物を食物源と組み合わせること、組成物を化学農薬と組み合わせること、又はそれらの任意の実行可能な組み合わせを含む方法を介して、昆虫病原糸状菌組成物に暴露されることが想定される。化学農薬は、これらに限定されないが、餌製剤、噴霧製剤、又は散粉用製剤でもよいことがさらに想定される。化学農薬のための活性成分は、これらに限定されないが、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドでもよいことがさらに想定される。
【００１５】
本明細書で記載される組成物及び方法は、すべての節足動物害虫を対象にすることを意図することが想定される一方で、本発明は特に、ゴキブリの死骸の腐敗に関係する悪臭に対抗するために有効であることがまた想定される。より特に、本明細書に記載される組成物及び方法は、チャバネゴキブリ ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、チャオビゴキブリ スペラ ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ ｌｏｎｇｉｐａｌｏａ）、トウヨウゴキブリ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、クロゴキブリ ペリプラネタ フリギノサ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ｆｕｌｉｇｉｎｏｓａ）、ワモンゴキブリ ペリプラネタ アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ Ａｍｅｒｉｃａｎａ）、トルキスタンゴキブリ ブラッタ ラテラリス（Ｂｌａｔｔａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ）、及びフィールドゴキブリ（ｆｉｅｌｄ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ バガ（Ｂｌａｔｔａ ｖａｇａ）の死骸の腐敗に関係する悪臭に対抗するために有効であることが想定される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、経時的に様々な処理に供されたゴキブリの死亡率（％）を示すグラフ表示である。
【図２】図２は、ゴキブリの死骸を有しない空試料のガスクロマトグラフ質量分析計（ＧＣ‐ＭＳ）測定値である。
【図３】図３は、市販の化学物質ゴキブリ餌により殺したゴキブリの死骸から生じる揮発性物質のＧＣ‐ＭＳ測定値である。
【図４】図４は、市販の化学物質ゴキブリ餌及びＭｅｔ５２で胞子形成することにより殺したゴキブリの死骸から生じる揮発性物質のＧＣ‐ＭＳ測定値である。
【図５Ａ】図５Ａは、経時的に様々な処理に供されたゴキブリ種の胞子形成（％）及び死亡率（％）を示したグラフ表示である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、経時的に様々な処理に供されたゴキブリ種の胞子形成（％）及び死亡率（％）を示したグラフ表示である。
【図６Ａ】図６Ａは、経時的に食料の存在下におけるブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリに関する胞子形成（％）及び死亡率（％）の間の相関を示した棒グラフ表示である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、経時的に食料の不在下におけるブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリに関する胞子形成（％）及び死亡率（％）の間の相関を示した棒グラフ表示である。
【図７Ａ】図７Ａは、経時的に食料の存在下におけるブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリに関する胞子形成（％）及び死亡率（％）の間の相関を示した棒グラフ表示である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、経時的に食料の不在下におけるブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリに関する胞子形成（％）及び死亡率（％）の間の相関を示した棒グラフ表示である。
【図８】図８は、水平伝播アッセイに供されたブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリに関する胞子形成（％）及び死亡率（％）の間の相関を示した棒グラフ表示である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、昆虫及び節足動物害虫の化学的及び自然死に関係する臭気を低減し及び除去するためのそれらの組成物及び方法に関する。
【００１８】
生物材料の寄託
以下の生物材料は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項に基づき、ＤＳＭ（（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ））Ｇｒｉｓｅｂａｃｈｓｔｒａｂｅ，Ｄ‐３４００ Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｂｕｎｄｅｒｓｒｅｐｕｂｌｉｋ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ）で寄託され、そして以下のアクセッション番号を与えられた。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
菌株は、それに権利を与えるための外国の特許法により決定されるものに、本出願の係属中に、入手可能である培養物を利用できる機会を保証する条件下で寄託されている。寄託は、寄託された菌株の実質的に純粋な培養物を表している。寄託は、本出願に対応する出願又はその子孫が出願された国におけるその国の特許法の定めるところにより利用可能である。しかしながら、寄託の可用性が、行政措置によって与えられる特許権の逸脱において、本発明を実施するためのライセンスを構成しないことを理解すべきである。
【００２１】
定義：
一般的に、本明細書で使用される用語及び熟語は、それらの技術分野で広く認められている意味を有し、そしてそれらは、当業者に公知の標準テキスト、ジャーナル参照文献、文脈を参照することにより見つけることができる。以下の定義は、開示の文脈におけるそれらの特定の使用を明確にするために提供される。
【００２２】
本発明の方法に従って使用される真菌株は、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）ＤＳＭ ３８８４、又はメタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）ＤＳＭ ３８８５でもよいが、しかしながら、真菌株が、上記単離されそして寄託された菌株と実質的に類似している特性を有する菌株の培養物でもよいことを理解すべきでる。好ましい特性は、節足動物病原体として節足動物の死骸に感染しそして消費することかできる昆虫病原糸状菌のそれらの特性を含む。
【００２３】
本明細書で使用されるように、「害虫（ｐｅｓｔ）」は、その存在を制御することが好ましい可能性がある任意の節足動物を意味することができる。
【００２４】
簡単にするために、用語「昆虫（ｉｎｓｅｃｔ）」は、本出願において使用されるものであるが、しかしながら、用語「昆虫」は、ゴキブリ及びアリなどの科学的な分類（綱）の昆虫綱の昆虫のみでなく、ダニ、クモ、及び他のクモ形類動物、並びに無脊椎動物なども意味することを理解すべきである。
【００２５】
本明細書で使用されるように、用語「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」、「有効濃度（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）」、又は「有効投与量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓａｇｅ）」は、死んだ昆虫又は昆虫個体群中に水平伝播により、放出される臭気の低減又は除去にその後つながる、昆虫における感染を引き起こすのに十分な昆虫病原糸状菌の量、濃度、投与量として定義される。絶対値での実際の有効投与量は、これらに限定されないが、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）が、他の微生物を排除しながら、昆虫に感染し、そして死骸内で増殖することができる速度と相対的な標的昆虫の死亡率、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）の活性を増加し又は低下するかもしれない他の活性又は不活性成分の間の相乗的又は拮抗的相互作用、昆虫のライフステージ及び種の特有の感受性、並びに製剤中のメタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）の安定性を含む要因に依拠する。
【００２６】
本発明の組成物は、昆虫を殺すことができる１以上の薬剤をさらに含んでもよい。そのような薬剤は、これらに限定されないが、活性成分：ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドを含む餌、噴霧、及び散粉用製剤を含む。
【００２７】
組成物は、原料として使用されてもよいが、１つの実施態様において、組成物は、家庭及び／又は工業使用に適切な容器、又はトラップ中に設置される。そのような容器は、これらに限定されないが、金属及びプラスチック缶、箱、トラップ、プラスチック容器、バット、並びに害虫の侵入及び実行可能な退去のための１以上の開口部を有するが、そうでなければ一般的にヒト又は他の動物への暴露から保護するための組成物を含む他の封入された容器を含む。
【００２８】
他の実施態様において、組成物は、害虫誘引薬をさらに含む。そのような誘引薬は、これらに限定されないが、食料、食料アロマ、フェロモンなどを含んでもよい。
【００２９】
他の実施態様において、組成物は、害虫を殺すことができる１以上の商品に添加してもよい。そのような商品の例は、これらに限定されないが、Ｒｏａｃｈ Ｐｒｕｆｅ（登録商標）、Ｈｏｔ Ｓｈｏｔ Ｍａｘ Ａｔｔｒａｘ（登録商標）、Ｒｏａｃｈ Ｐｏｗｄｅｒ Ａｖｅｒｔ（登録商標）、Ｎｉｂａｎ（登録商標）、Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ’ｓ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｏａｃｈ Ｆｏｏｄ（登録商標）、Ｍａｘｆｏｒｃｅ（登録商標）、Ｃｏｍｂａｔ（登録商標）、Ｍａｘｆｏｒｃｅ Ｓｉｅｇｅ（登録商標）、Ｈｏｔ Ｓｈｏｔ Ｍａｘａｔｔｒａｘ（登録商標）、Ｕｌｔｒａ Ｂｒａｎｄ Ｎｅｓｔ Ｄｅｓｔｒｏｙｅｒ Ｒｏａｃｈ Ｂａｉｔ（登録商標）、及びＰｒｅ‐Ｅｍｐｔ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ Ｃｏｃｋｒｏａｃｈ Ｇｅｌ Ｂａｉｔ（登録商標）を含んでもよい。
【実施例】
【００３０】
以下の実施例は、例示の目的のために提供され、そして本明細書で請求されるような本発明の範囲を限定するものではない。当業者が考え得る例示された実施例における任意の変更は、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００３１】
実施例１
実験材料及び方法
チャバネゴキブリ（ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ））の若虫を、Ｂｅｎｚｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈから取得し、そして実験場への送達時まで、冷たい部屋で飼育した。送達の際、ゴキブリの若虫を、バイオアッセイが実施されるまで、冷たい部屋で飼育した。バイオアッセイを開始した時点で、単独のチャバネゴキブリの若虫を所定のダイエットカップに加え、すべてのゴキブリに水分及び食料源として粉砕したドッグフードを与えた。ダイエットカップの底に円形の生け花用フォームを配置し、そしてそれを脱イオン水（ｄｉＨ2Ｏ）で飽和することにより、ゴキブリを水分に暴露した。円形の生け花用フォーム中のｄｉＨ2Ｏによって飽和することから食料を防ぐために、食料源を２．０ｍＬの微量遠心キャップ中に設置した。
【００３２】
手順
具体的には、バイオアッセイは、ゴキブリの若虫を処理アレイに供することを含む。処理は、対照、１×１０5分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２での処理、１×１０6分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２での処理、１×１０7分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２での処理、１×１０8分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２での処理、ゴキブリ餌のみでの処理、ゴキブリ餌と１×１０7分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２との組み合わせでの処理、ゴキブリ餌と１０％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末（ＵＳＥＰＡ登録番号：７０１２７‐７）との組み合わせでの処理、ゴキブリ餌と１％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末との組み合わせでの処理、１％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末で処理したドッグフードでの処理、３％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末で処理したドッグフードでの処理、及び１０％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末で処理したドッグフードでの処理を含む。それぞれの処理のために使用した１０匹の個別にケージに入れられたゴキブリの若虫の３つの反復がある。
【００３３】
真菌胞子を単独で使用した処理において、飽和に達するまで、分生子溶液を円形のフォームに直接添加した。本手順を、ゴキブリ餌を１×１０7分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２と組み合わせて使用する場合にも使用した。残りの処理のために、生け花用の湿潤フォームディスクをｄｉＨ2Ｏで飽和した。
【００３４】
Ｍｅｔ５２胞子粉末を市販の餌の場所（ｂａｉｔ ｓｔａｔｉｏｎ）と組み合わせて使用した処理のために、餌の場所を切り開き、そして餌を除去し、粉砕し、そして２．０ｍＬの微量遠心キャップ中に設置した。胞子粉末をその後粉砕した餌と組み合わせた。具体的には、０．６ｇの胞子粉末を６．１７ｇの粉砕した餌中に添加して、１０％胞子粉末餌を作製した。１％胞子粉末を作製するために、０．４８ｇの１０％胞子粉末餌を４．８６ｇの餌に添加した。
【００３５】
ドッグフードを胞子粉末と組み合わせる処理のために、食料源を胞子粉末と直接処理した。３つの処理を調製した。具体的には、約０．１ｇの胞子粉末を約９．９ｇの粉砕したドッグフードと組み合わせ、約０．３ｇの胞子粉末を約９．７ｇの粉砕したドッグフードと組み合わせ、及び約１．０ｇの胞子粉末を約９．０ｇの粉砕したドッグフードと組み合わせ、全重量に対してそれぞれ約１％、３％、及び１０％の胞子粉末を有するドッグフードを作製した。
【００３６】
それぞれのダイエットカップを、過度な水分の減少を防ぎながら、十分な換気を可能にする板紙の蓋で覆った。ゴキブリの若虫を１４日間にわたって室温で、ダイエットカップ中でインキュベートし、そして毎日死亡率を評価した。すべての若虫にバイオアッセイを通じて十分な水分及びドッグフードの食事を与えた。１４日のバイオアッセイの間に死んだ昆虫を表面殺菌し、そして１．５％の素寒天を含む９６ウェルプレートに移した。ウェルプレートをパラフィルムで覆って高湿度を維持し、真菌株の胞子形成について監視した。
【００３７】
結果
図１に示すように、１４日後、対照として指定した若虫の約２０％のみが死んだ。その一方、約３日後、餌のみ、１０％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末と組み合わせた餌、１％（ｗ／ｗ）Ｍｅｔ５２胞子粉末と組み合わせた餌、及び１×１０7分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２と組み合わせた餌の処理に供した１００％の若虫が死んだ。
【００３８】
１０％胞子粉末で処理したドッグフードに供した若虫は、約１２日後、０％〜１００％の範囲の死亡率（％）を示した。３％胞子粉末で処理したドッグフードに供した若虫は、約１４日後、０％〜約８２％の範囲の死亡率（％）を示した。１×１０7分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２の処理に供した若虫は、約１４日後、０％〜約７０％の範囲の死亡率（％）を示した。１×１０6分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２の処理に供した若虫は、約１４日後、０％〜約５６％の範囲の死亡率（％）を示した。１×１０8分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２の処理に供した若虫は、約１４日後、０％〜約７０％の範囲の死亡率（％）を示した。１％胞子粉末で処理したドッグフードに供した若虫は、約１４日後、０％〜約５０％の範囲の死亡率（％）を示した。最後に、１×１０5分生子／ｍＬ Ｍｅｔ５２の処理に供した若虫は、約１４日後、０％〜約３３％の範囲の死亡率（％）を示した。
【００３９】
２つの選択肢のブラインド嗅覚テストを、メタリジウム アニソプリエ（Ｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）処理由来の明らかな真菌症を示す胞子形成若虫死骸及びゴキブリ餌のみを使用して処理した死骸との間で実施した。上記の死骸群上のヘッドスペースをサンプリングし、そしてガスクロマトグラフ質量分析計（ＧＣ‐ＭＳ）を使用して評価した。具体的には、５０／３０μｍ ジビニルベンゼン／カルボキセン（Ｃａｒｂｏｘｅｎ）／ポリジメチルシロキサン（ＤＶＢ／ＣＡＲ／ＰＤＭＳ）固相マイクロ抽出（ＳＰＭＥ）ファイバー（Ｓｕｐｅｌｃｏ）を、Ｃｏｍｂｉ Ｐａｌ ＡＯＣ ５０００オートサンプラー（ＣＴＣ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）を使用して、バイアルのヘッドスペースに導入した（５０℃で５分間予備平衡）。抽出を５０℃で３０分間実施した。抽出の後に、ファイバーを、電子衝突四重極質量分析計（ＭＳ）システムに接続した、Ｓｉｌｔｅｋ ｓｐｌｉｔ／ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ ｉｎｌｅｔ ｌｉｎｅｒ（Ｒｅｓｔｅｋ）及びＥｑｕｉｔｙ‐５溶融シリカカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ膜厚；Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ）を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ ２０１０‐Ｓ ガスクロマトグラフ（ＧＣ）にすぐに導入した。注入口温度を２５０℃に設定した。カラムを５０℃で１分間運転し、そしてその後、１０℃／分で２７０℃まで、合計２３分間運転した。２つの空脱着を最初の試料の前に実施して検体のファイバーを取り除いた。ＧＣを５ｍＬ／分のスプリット及び０．５ｍＬ／分のパージで運転した。グレード５のヘリウムをキャリアガスとして使用して（１ｍＬ／分 カラム流量）、そしてＭＳイオン源温度を１８０℃に設定した。インターフェースを２００℃に設定し、そしてスキャンモードを使用した（ｍ／ｚ４０‐４００）。ピーク面積をＧＣ‐ＭＳソリューションソフトウェア（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）で計算し、そして化合物を、得られたスペクトルとスタンダードライブラリー（ＮＩＳＴ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒａｍ）とを比較することにより同定した。
【００４０】
図２〜４に示すように、ＧＣ‐ＭＳの結果は、ゴキブリの死骸が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔ５２）と組み合わせて設置した餌、又はメタリジウム アニソプリエ（Ｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔ５２）で処理して設置した餌から生じた真菌症を示す場合、ゴキブリの死骸の腐敗に関係する臭気が定量的に低減されることを示す。具体的には、図２は、空試料から生じた揮発性物質を示すＧＣ‐ＭＳ試験である。予想されたように、目的のピークは存在しない。図３は、ゴキブリの死骸を含む試料から生じた揮発性物質を示すＧＣ‐ＭＳである。図３は、最も強いピークであるピーク７及び１５を有する２９の全ピークを含む。ピーク７及び１５を、それぞれジメチルスルフィド及びフェノール化合物として同定する。ピーク７及び１５に関係する化合物は、一般に、好ましくない及び不快な臭いと見なされる臭気を有する。図４は、Ｍｅｔ５２で胞子形成しているゴキブリの死骸を含む試料から生じた揮発性物質を示すＧＣ‐ＭＳである。図３に示された結果と全く対照的に、図４に示された結果は、Ｍｅｔ５２での処理が、ゴキブリの死骸から放出された揮発性物質の総数だけでなく同様に揮発性物質の全体的な強度も大幅に低減したことを示す。具体的には、Ｍｅｔ５２をゴキブリ餌と組み合わせて設置した場合、それぞれ最も強いピークであるピーク４及び８を有する全１５ピークのみを観察した。要するに、Ｍｅｔ５２で胞子形成する昆虫を有するこれらの処理の明らかな区別があり、ゴキブリ餌を単独で使用した場合よりも、有意に少ない臭気、揮発性化合物の非常に異なるスペクトル、及び１０倍低い全ピーク面積を生じた。非胞子形成死骸の揮発性物質から同定された２９のピークの９のみが、胞子形成死骸由来の揮発物質と共通した。
【００４１】
図２〜４中のＧＣ‐ＭＳによって得られた結果に加えて、さらなる試験を実施し、ここで１３人の参加者に、餌のみで処理したゴキブリの死骸よりもＭｅｔ５２で処理したゴキブリの死骸の方がより少ない臭気を放出するかどうかを決定するために質問した。１３人中１２人が、非胞子形成死骸よりも胞子形成死骸の方がより少ない臭気を有することを識別し、ＧＣ‐ＭＳ実験において得た結果を確認した。
【００４２】
実施例２
実験材料及び方法
２種のゴキブリ、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、及びブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）を使用して、水平伝播アッセイを実施した。上記それぞれの種由来の胞子形成したゴキブリの死骸を７つの異なる処理で処理して、Ｃｏｍｂａｔ Ｒｏａｃｈ Ｔｒａｐｓ（登録商標）（０．０３％フィプロニル）中での活性成分を有する乳剤製剤（ＥＣ）（ＵＳＥＰＡ登録番号：７０１２７‐１０）及び工業グレード粉末（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｇｒａｄｅ ｐｏｗｄｅｒ）（ＴＧＰ）（ＵＳＥＰＡ登録番号：７０１２７‐７）の適合性を調査した。ＥＣは、ＥＣが水に分散することができるように、乳化剤を含む油中に懸濁したメタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）の組み合わせである。ＴＧＰは、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）胞子単独である。
【００４３】
Ｃｏｍｂａｔ Ｆａｓｔ Ａｃｔｉｎｇ Ｒｏａｃｈ Ｆｏｒｍｕｌａ（登録商標）（０．０３％フィプロニル）由来の大小のゴキブリトラップを、ＥＣ（約４×１０7の生存能力のある分生子／ｍＬの懸濁液）及びＴＧＰと組み合わせそして試験するために取得した。ＥＣを、約１：１００希釈のために、１９８ｍＬの滅菌ｄｄＨ2０中に２ｍＬの４×１０9の生存能力のある分生子／ｍＬの懸濁液を添加することにより、約４×１０9の生存能力のある分生子／ｍＬの懸濁液から、約４×１０7の生存能力のある分生子／ｍＬの懸濁液に希釈した。追加の材料は、Ｃｒｉｓｃｏ（登録商標）、Ｖａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）、脱イオン水（ｄｉＨ2Ｏ）、ペトリ皿、及び生け花用湿潤フォームを含む。ゴキブリの試験した種を、Ｂｅｎｚｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈから受け取った。
【００４４】
手順
それぞれの上記ゴキブリ種を、７つの考え得る処理の１つに暴露した。具体的には、処理は、対照（ｄｉＨ2Ｏ）、２ｍＬ／Ｌ（約１０7の分生子／ｍＬ）の飽和湿潤フォーム（Ｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｗｅｔ Ｆｏａｍ）（ＳＷＦ）、餌トラップ単独、餌とＳＷＦ（２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ））との組み合わせ、餌トラップの入口内に直接設置したＥＣスワブ（２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ））、１１重量％の胞子粉末とＣｒｉｓｃｏ（登録商標）との組み合わせ（約２２．４ｇのＣｒｉｓｃｏ（登録商標）中に約２．７５ｇの胞子粉末）、及び１１重量％の胞子粉末とＶａｅｌｉｎｅ（登録商標）の組み合わせ（約２２．２４ｇのＶａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）中に約２．７５ｇの胞子粉末）に、ゴキブリ種を暴露することを含む。
【００４５】
ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）のために、ペトリ皿に生け花用湿潤フォームを敷き詰めた。生け花用湿潤フォームを、上記実験材料及び方法に従って処理した。具体的には、それぞれのペトリ皿中の生け花用湿潤フォームを、対照に関して約８．５ｍＬ〜９．０ｍＬのｄｉＨ2Ｏ、及び処理された皿に関して約８．５ｍＬ〜９．０ｍＬの４×１０7分生子／ｍＬで飽和した。処理後、皿中に貯留水及び溶液はなかった。小さなゴキブリトラップを、トラップを必要とするペトリ皿処理に添加した。３つの小さな穴をペトリ皿の蓋に開けて、昆虫のために十分な換気及びガス交換を与えた。食料源を、いずれのペトリ皿にも添加しなかった。ペトリ皿の適切な調製の次に、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリを、ＣＯ2で窒息させ、そしてその後、約１０匹の成虫及び若虫ゴキブリの混合を、３連で、それぞれのペトリ皿に加えた。ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの死亡率及び胞子形成を、１６日間にわたって監視した。
【００４６】
ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）のために、滅菌プラスチックＴｕｐｐｅｒｗａｒｅ（登録商標）容器に生け花用湿潤フォームを敷き詰めた。生け花用湿潤フォームを上記実験材料及び方法に従って処理した。具体的には、生け花用湿潤フォームを、ｄｉＨ2Ｏ又は４×１０7分生子／ｍＬ（２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ））のいずれかで飽和した。トラップを有する容器に関して、トラップが容器の床の一部を覆うので、湿潤フォームを飽和するために約２０ｍＬのみを必要としたのに対して、ゴキブリトラップを有しない処理に関して、湿潤フォームを飽和するために５０〜５２ｍＬを必要とした。処理後、皿中に貯留水及び溶液はなかった。穴をそれぞれの蓋に開けず、そして食料源をいずれの容器にも加えなかった。容器の適切な調製の次に、ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリを、ＣＯ2で窒息させ、そして約７匹の成虫及び若虫ゴキブリの混合を、それぞれの容器に加えた。試験は、１連で実施した。ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの死亡率及び胞子形成を、１６日間にわたって監視した。
【００４７】
結果
図５Ａ〜５Ｂに示すように、ゴキブリトラップと組み合わせて設置した場合のＭｅｔ５２の有効性は、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、及びブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）それぞれを経時的に死亡率（％）の関数として観察した。図５Ａ〜５Ｂはまた、胞子形成（％）も示す。
【００４８】
図５Ａは、対照として指定したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリが、約１６日後に０％の死亡率から約６２％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示したことを表す。対照的に、餌トラップ単独に供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、約１．５日後に約８０％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。餌とＳＷＦとの組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、約６日後に３８％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。餌トラップの入口内に直接設置したＥＣスワブに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、約６日後に０％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。胞子粉末とＶａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）との組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、約６日後に８％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。胞子粉末とＣｒｉｓｃｏ（登録商標）との組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、約１２日後に２１％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。最後に、２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ））を有するＳＷＦに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリは、１６日後に０％の死亡率から８８％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。
【００４９】
ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリについて、対照と餌単独の暴露のどちらも胞子形成を引き起こさなかった。対照的に、餌とＳＷＦとの組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの約７３％が胞子形成し、胞子粉末とＣｒｉｓｃｏ（登録商標）との組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの約６３％が胞子形成し、胞子粉末とＶａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）との組み合わせに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの約５０％が胞子形成し、餌トラップの入口内に直接設置したＥＣスワブに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの約１７％が胞子形成し、及び２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ）を有するＳＷＦに供したブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの約１０％が胞子形成した。
【００５０】
図５Ｂは、対照として指定したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリが、約１６日後に０％の死亡率を示したことを表す。対照的に、餌トラップ単独に供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約１．５日後に約８５％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。餌と２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ）を有するＳＷＦとの組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約１．５日後に約７１％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。餌トラップの入口内に直接設置したＥＣスワブに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約１．５日後に約４２％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。胞子粉末とＣｒｉｓｃｏ（登録商標）との組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約６．５日後に約４２％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。胞子粉末とＶａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）との組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約６．５日後に約２８％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。最後に、２ｍＬのＥＣ／Ｌ（ｄｉＨ2Ｏ）を有するＳＷＦに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリは、約１１．５日後に約０％の死亡率から１００％の死亡率の範囲の死亡率（％）を示した。
【００５１】
ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリについて、対照と餌単独の暴露のどちらも胞子形成を引き起こさなかった。対照的に、餌とＳＷＦとの組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの約８６％が胞子形成し、胞子粉末とＣｒｉｓｃｏ（登録商標）との組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの約５７％が胞子形成し、胞子粉末とＶａｓｅｌｉｎｅ（登録商標）との組み合わせに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの約５７％が胞子形成し、餌トラップの入口内に直接設置したＥＣスワブに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの約２６％が胞子形成し、及びＳＷＦに供したブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの約１４％が胞子形成した。
【００５２】
実施例３
実験材料及び方法
水平伝播アッセイを実施して、胞子形成した死骸が、ゴキブリの典型的な個体群にＭｅｔ５２真菌胞子を効果的に伝播できるように、ゴキブリの半社会的行動を有効に使うことができることを確認した。アッセイにおいて、約１０匹のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリ及び約１０匹のブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリをお互いに共生させて、小規模コロニーをモデル化した。
【００５３】
手順
ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリのために、ペトリ皿の底に生け花用湿潤フォームを敷き詰め、そして脱イオン水（ｄｉＨ2Ｏ）で飽和した。１０〜１２匹のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリを、ＣＯ2を介して窒息させ、そして実施例１の臭気制御アッセイ／ＧＣ‐ＭＳから残しておいた単独のゴキブリの死骸を有するペトリ皿に置いた。この手順は、６回繰り返した。使用した死骸はいずれも、ＧＣ‐ＭＳ実験で使用していない。それぞれのペトリ皿をパラフィルムし、そしてアッセイを粉砕したドッグフードありで３回と粉砕したドッグフードなしで３回実施した。対照は、このアッセイのために使用しなかった。
【００５４】
ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリのために、滅菌Ｔｕｐｐｅｒｗａｒｅ（登録商標）容器に生け花用の湿潤フォームを敷き詰め、そしてｄｉＨ2Ｏで飽和した。１０匹のブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリを、ＣＯ2を介して窒息させ、そして胞子形成したゴキブリの死骸を有する容器中に置いた。それぞれの容器を蓋で閉じ、そしてアッセイを粉砕したドッグフードありで３回と粉砕したドッグフードなしで３回実施した。対照は、このアッセイのために使用しなかった。
【００５５】
結果
図６Ａ〜６Ｂは、食料源としてドッグフードの存在下又は非存在下の場合のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性の棒グラフ表示である。より具体的には、図６Ａ〜６Ｂは、経時的な死亡率（％）の関数としてブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群の間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性を示す。
【００５６】
図６Ａ〜６Ｂに示したように、死亡率（％）及び胞子形成（％）の間に正の相関が存在する。特に、Ｍｅｔ５２の胞子形成死骸のパーセンテージが、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群において増加した場合、同様に全体の死亡率（％）が、ゴキブリのその個体群の間で増加する。具体的には、図６Ａに示したように、ドッグフードが存在する場合、死亡率（％）は、約５日後に約７０％であり、そして１７日又は約１７日で１００％の死亡率に達した。図６Ｂに示したように、ドッグフードが存在しない場合、死亡率（％）は、約５日後に約４０％であり、そして１７日又は約１７日で１００％の死亡率に達した。
【００５７】
図６Ａの結果と図６Ｂの結果を比較すると、ゴキブリをＭｅｔ５２胞子形成死骸に加えてドッグフードに供した場合、この統計に基づく相関関係がより強いことが明らかになる。相関関係の強さにもかかわらず、図６Ａ〜６Ｂは、Ｍｅｔ５２で胞子形成している死骸のパーセンテージが、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群において増加した場合、同様に死亡率（％）がゴキブリのその個体群の間で増加することを明確に示している。図６Ａ〜６Ｂはさらに、ゴキブリの半社会的行動を、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群の間でＭｅｔ５２胞子を水平伝播するために有効に使えることを示している。図６Ａ〜６Ｂ中に示したデータは、ゴキブリの死骸の腐敗に関係する臭気を低減するためのゴキブリトラップ適用におけるＭｅｔ５２の使用を支持する。胞子形成死骸に対するゴキブリによる明らかな回避行動はなく、そして生きているゴキブリが、胞子形成死骸と密接に関係するのがしばしば見られた。注目されるのは、これらの死骸由来の分生子の病原性が、分生子源が胞子粉末又はＥＣのいずれかである前の実施例と比較して、ゴキブリの速い死亡率及び高い胞子形成率を明らかに高く与えることである。インビボで作られた分生子が、インビトロで作られたものよりも、しばしばより病原性となり、そしてそれは、一旦ゴキブリが化学農薬によって最初に殺された個体群における水平伝播を好む傾向にあることが文献で十分に報告されている。
【００５８】
図７Ａ〜７Ｂは、食料源としてドッグフードの存在下又は非存在下の場合のブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性の棒グラフ表示である。より具体的には、図７Ａ〜７Ｂは、経時的な死亡率（％）の関数としてブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの個体群の間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性を示す。
【００５９】
図７Ａ〜７Ｂに示したように、死亡率（％）及び胞子形成（％）の間に正の相関が存在する。特に、Ｍｅｔ５２の胞子形成死骸のパーセンテージが、ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの個体群において増加した場合、同様に全体の死亡率（％）が、ゴキブリのその個体群の間で増加する。具体的には、図７Ａに示したように、ドッグフードが存在する場合、死亡率（％）は、約５日後に約２１％であり、そして１７日又は約１７日で１００％の死亡率に達した。図７Ｂに示したように、ドッグフードが存在しない場合、死亡率（％）は、約５日後に約４０％であり、そして１７日又は約１７日で１００％の死亡率に達した。
【００６０】
図７Ａの結果と図７Ｂの結果を比較すると、ゴキブリをＭｅｔ５２胞子形成死骸に加えてドッグフードに供した場合、相関関係がより強い。相関関係の強さにもかかわらず、図７Ａ〜６Ｂはまた、Ｍｅｔ５２で胞子形成している死骸のパーセンテージが、ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの個体群において増加した場合、同様に死亡率（％）がゴキブリのその個体群の間で増加することを示している。図７Ａ〜７Ｂはさらに、ゴキブリの半社会的行動を、ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）ゴキブリの個体群の間でＭｅｔ５２胞子を水平伝播するために有効に使えることを示している。図７Ａ〜７Ｂ中に示したデータは、ゴキブリの死骸の腐敗に関係する臭気を低減するためのゴキブリトラップ適用におけるＭｅｔ５２の使用を支持する。
【００６１】
実施例４
実験材料及び方法
第二水平伝播アッセイを実施して、胞子形成死骸がＭｅｔ５２胞子のための最適な生育条件下；すなわち、高湿度の条件下で、ゴキブリの典型的な個体群に対してＭｅｔ５２真菌胞子を有効に伝播できるように、ゴキブリの半社会的行動を有効に使えることを確認した。アッセイにおいて、約１０〜１５匹のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの若虫を、お互いに共生させて、小規模コロニーをモデル化した。
【００６２】
手順
２５０匹のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの若虫をＢｅｎｚｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈから入手した。ペトリ皿の底に生け花用湿潤フォームを敷き詰め、そして脱イオン水（ｄｉＨ2Ｏ）で飽和した。１０〜１５匹のブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの若虫を、ＣＯ2を介して窒息させ、そして実施例３で開示しそして記載した水平伝播試験由来の単独の胞子形成ゴキブリ死骸を有するペトリ皿中に置いた。１つのペトリ皿について、４０匹のゴキブリを単独の胞子形成ゴキブリ死骸と一緒に置いた。それぞれのペトリ皿にパラフィルムをし、そしてアッセイを、食料源として小さなバイアル蓋に設置した粉砕ドッグフードありで、２０回実施した。
【００６３】
図８は、最適な生育条件下、食料源としてドッグフードの存在下でブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性の棒グラフ表示である。より具体的には、図８は、経時的な死亡率（％）の関数としてブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群の間で水平伝播したＭｅｔ５２の有効性を示す。
【００６４】
図８に示したように、死亡率（％）及び胞子形成（％）の間に正の相関が存在する。特に、Ｍｅｔ５２の胞子形成死骸のパーセンテージが、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリの個体群において増加した場合、同様に全体の死亡率（％）が、ゴキブリのその個体群の間で増加する。具体的には、図８に示したように、死亡率（％）は、約５日後に約２０％であり、そして１４日又は約１４日で９５％の死亡率であった。
【００６５】
最適な条件下、ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）ゴキブリ及び個体群の他のメンバーに胞子形成している死骸由来のＭｅｔ５２胞子を伝播するそれらの能力の大規模試験は、有効性をもたらした。このアッセイについて実施した繰り返しの回数が多いほど、胞子形成した個体群（％）に関して、より高い標準偏差を生じた。データを、平均して、単独の胞子形成死骸を取り込んだゴキブリの４０％を感染させ、Ｍｅｔ５２の菌糸成長によって消費し、そしてその後Ｍｅｔ５２によって胞子形成していると明白に識別することを示すために２週間にわたって外挿することができる。
【００６６】
本発明は、以下の番号が付けられた項により記載される。
１．１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む、節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための組成物。
２．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、第１項に記載の組成物。
３．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、第１項に記載の組成物。
４．前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、第３項に記載の組成物。
５．前記組成物がさらに化学農薬を含む、第１項に記載の組成物。
６．前記化学農薬が、餌製剤、噴霧製剤、及び散粉用製剤である、第５項に記載の組成物。
７．前記化学農薬が、活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、第６項に記載の組成物。
８．前記節足動物がゴキブリである、第１項に記載の組成物。
９．前記ゴキブリが、チャバネゴキブリ ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、チャオビゴキブリ スペラ ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ ｌｏｎｇｉｐａｌｏａ）、トウヨウゴキブリ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、クロゴキブリ ペリプラネタ フリギノサ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ｆｕｌｉｇｉｎｏｓａ）、ワモンゴキブリ ペリプラネタ アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ Ａｍｅｒｉｃａｎａ）、トルキスタンゴキブリ ブラッタ ラテラリス（Ｂｌａｔｔａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ）、及びフィールドゴキブリ（ｆｉｅｌｄ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ バガ（Ｂｌａｔｔａ ｖａｇａ）である、第８項に記載の組成物。
１０．節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための方法であって、以下のステップ：
（ａ）１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を有する組成物を調製し、及び
（ｂ）標的節足動物害虫に前記組成物を供すること
を含む、方法。
１１．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、第１０項に記載の方法。
１２．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、第１１項に記載の方法。
１３．前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、第１２項に記載の方法。
１４．前記標的節足動物害虫が、トラップ中に前記組成物を設置することにより前記組成物に供される、第１０項に記載の方法。
１５．前記標的節足動物害虫が、前記組成物と食料源とを組み合わせることにより、前記組成物に供される、第１０項に記載の方法。
１６．前記標的節足動物害虫が、前記組成物と化学農薬とを組み合わせることにより、前記組成物に供される、第１０項に記載の方法。
１７．前記化学農薬が、餌製剤、噴霧製剤、及び散粉用製剤である、第１６項に記載の方法。
１８．前記化学農薬が活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、第１７項に記載の方法。
１９．前記標的節足動物害虫が、１以上のゴキブリである、第１０項に記載の方法。
２０．前記ゴキブリが、チャバネゴキブリ ブラテッラ ジャーマニカ（Ｂｌａｔｅｌｌａ ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、チャオビゴキブリ スペラ ロンギパルパ（Ｓｕｐｅｌｌａ ｌｏｎｇｉｐａｌｏａ）、トウヨウゴキブリ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ オリエンタリス（Ｂｌａｔｔａ Ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、クロゴキブリ ペリプラネタ フリギノサ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ ｆｕｌｉｇｉｎｏｓａ）、ワモンゴキブリ ペリプラネタ アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ Ａｍｅｒｉｃａｎａ）、トルキスタンゴキブリ ブラッタ ラテラリス（Ｂｌａｔｔａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ）、及びフィールドゴキブリ（ｆｉｅｌｄ ｃｏｃｋｒｏａｃｈ）ブラッタ バガ（Ｂｌａｔｔａ ｖａｇａ）である、第１９項に記載の方法。
２１．昆虫を誘引することができるチャンバー、及び１以上の昆虫病原糸状菌の有効量を含む、節足動物の死骸の腐敗により生じる悪臭を低減し又は除去するための１以上の組成物を含む昆虫トラップ。
２２．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム菌（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビューベリア菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ペシロマイセス菌（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、レカニシリウム菌（Ｌｅｃａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、及びヒルステラ菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される、第２１項に記載の昆虫トラップ。
２３．前記昆虫病原糸状菌が、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）である、第２１項に記載の組成物。
２４．前記昆虫病原糸状菌が、ＤＳＭ３８８４、ＤＳＭ３８８５、又はそれらの混合物である、第２３項に記載の組成物。
２５．前記組成物がさらに化学農薬を含む、第２１項に記載の組成物。
２６．前記化学農薬が、餌製剤、噴霧製剤、及び散粉用製剤である、第２５項に記載の組成物。
２７．前記化学農薬が活性成分を含み、前記活性成分が、ホウ酸、アバメクチン、フィプロニル、ヒドラメチルノン、インドキサカルブ、及びイミダクロプリドからなる群から選択される、第２６項に記載の組成物。
【００６７】
明細書及び実施例が本発明の例示であり、そして本発明の要旨及び範囲内で、他の実施態様が当業者にそれら自身を示唆するであろうことが理解される。本発明は、特定の形態及びそれらの実施態様に関連して記載してきたが、上述したもの以外にも様々な変更が、添付の特許請求の範囲において規定するような本発明の要旨及び範囲を逸脱することなしに頼ってもよいことが理解される。例えば、均等物が、具体的に記載されたものと置換されてもよく、そして特定の場合において、ステップの特定の適用が、添付の特許請求の範囲において記載されたような発明の要旨又は範囲を逸脱することなしに、すべて逆にされても又は割り込まれてもよい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【国際調査報告】
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