(57)【要約】【課題】低コストで、また臨床投与の安全性、有効性と品質管理性を向上させ、リポソーム材料の使用量が少ないタクソール/ステロイド化合物を提供する、【解決手段】タクソール/ステロイド化合物は、タクソール/ステロイドを含有する。タクソールとステロイドのモル比が1:0.2-4で、1:0.25-2を優先選択する。本発明もタクソール/ステロイド化合物の作製方法や作製されたサブマイクロエマルション、乳剤、セルフマイクロエマルションの応用を公表した。【選択図】図１
2013509360.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タクソール／ステロイドによって化合してこれになり、タクソールとステロイドのモル比は、１：０．２〜４であることを特徴とする一種のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項２】
タクソールとステロイドのモル比が１：０．２５〜２であることを特徴とする請求項１に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項３】
タクソールとステロイドのモル比が１：０．３３〜１であることを特徴とする請求項２に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項４】
前述のステロイドが天然のステロイドあるいはその派生物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項５】
前述の天然ステロイドとして、コレステロール、７−デヒドロコレステロール、ラノステロール、シトステロール、ブラシカステロール、真菌ステロイド、イタボガキ属ステロール、スチグマステロール、マイケルステロールとエルゴステロールの中から少なくとも一種を選択し、
前述のステロイド派生物として、コール酸、デオキシコール酸、チエノーデオキシコール酸の中から少なくとも一種を選択することを特徴とする請求項４に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項６】
さらに、抗酸化安定剤が含まれていることを特徴とする請求項１〜５に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項７】
前述の抗酸化安定剤として、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ビタミンＣ、ＥＤＴＡとその塩、ビタミンＥとその派生物の中から少なくとも一種を選択することを特徴とする請求項６に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【請求項８】
次の工程を含むことを特徴とする請求項１〜７に記載のタクソール／ステロイド化合物の作製方法。
工程ａ．タクソール／ステロイドリポソ−ム材料を比例によって混合し、適量の有機溶剤を加入して溶解する。
工程ｂ．適当の温度の条件の下で攪はんして、有機溶剤を取り除いて、真空乾燥してそれを得る。
【請求項９】
前記工程ａ．の中で、それぞれタクソール／ステロイドを取り、別の有機溶剤溶解を採取した後、それを混合させることを特徴とする請求項８に記載のタクソール／ステロイド化合物の作製方法。
【請求項１０】
前述の有機溶剤は、ジクロロメタン、エタノール、メタノール、ベンジルアルコール、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、三級ブタノールの中の一種や多様なものから選択できることを特徴とする請求項８または９に記載のタクソール／ステロイド化合物の作製方法。
【請求項１１】
前述の有機溶剤は、エタノール、アセトン、酢酸エチルとテトラヒドロフランの中の一種や多様なものから選択できることを特徴とする請求項８または９に記載のタクソール／ステロイド化合物の作製方法。
【請求項１２】
水中油型サブマイクロエマルション剤、干乳剤、セルフマイクロエマルションシステムや経口製剤として作成されて提供されることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載のタクソール／ステロイド化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一つタクソール/ステロイド化合物及びその作製やり方にかかわり、本発明も同タクソール/ステロイド化合物の用途にかかわり、医薬製剤の技術分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
タクソール(paditaxel，Taxol)は、重要な抗腫瘍活性をもつ、臨床では卵巣癌や乳癌・非小細胞肺がんや頭頸部がんなどの治療に広く使われている。そのはほぼ水(0.006μg/ml)に溶解しないので、現在、臨床に用したのタクソールの一般注射剤Taxol（登録商標）がCremopher
EL(クレモフォールEL)/エタノール(50:50、v/v)の混合溶液5mlを采用して30mgのタクソールを溶解することで作られている。処方の中で大量のCremopher ELに含まれているために、体内のヒスタミンが釈放しやすく、大変なアレルギー反応となった。このため、臨床使用時には.次のように脱感処理しなければならない：治療の前12時間には10mg経口デキサメタゾン、治療前の6時間にはもう一度経口デキサメタゾン10mg、治療前の30 ~ 60分には筋肉注射がベネドリル20mg、静脈注射がシメチジン300mgまたはラニチジン50mgである。このようにもかかわらず、5~30%臨床の患者たちが依然として異常にのアレルギー反応を見せた。また、Cremopher
EL /アルコール可溶化タクソール濃溶液を薄めて、物理的安定性の問題を存在する、たとえば環境温度が低いや滴注長時間、発散薬物ができることがあり、隠れた危険がある。 
【０００３】
タクソール注射剤の問題点については、タクソールが市場に出回る後の二十数年で、国内外の薬剤学従事者は幅広く新型の釈薬システムの研究を繰り広げた、技術プログラムに関係しているものはシクロデキストリン包接化合物、リポソーム、高分子ミセル、ナノ粒などが含まれている。
【０００４】
シクロデキストリン包接化合物はタクソール溶解度を増加することができるが、シクロデキストリン用量が大きすぎての厳しい腎臓毒性を誘発しやすい、そして水を薄めて発散薬物がやすいため、現在でも臨床に入ることができない。
【０００５】
リポソームは封入率が低いため、長期貯蔵が漏洩しやすい、そして水を薄めて発散薬物がやすいの上で欠陥があり、産業化の発展が困難で、海外には20年間の研究を経験したが、結局は製品発売されていることを見えない。国内では早期(2004年)の承認されたタクソールリポソーム（Liposome) 凍結乾燥粉末の注射薬は1本あたり30mg薬物を含有し、規格や臨床使用剤量が市販の一般注射液と一致して、効果が特に違いがあるものがない、しかし中間調合の部分を増加した、しかも同様に脱感前処理を采用しなければならず、技術の優位性は明らかではない。
【０００６】
タクソール高分子ミセルについては、国内外の研究が非常に活発になったが、
装薬量も低く、放置した後の品質が不安定であるため、保存の場合では凍結乾燥しなければならない、産業化の発展を制限している。近年では、新しいタイプの高分子材料の大量に出現することにつれて、高分子ミセルの研究技術が急速な発展を実現させるが、大量の新しい構造のポリマー材料を生体内に導入したのは、その臨床用薬の安全性はつぶさに観察することに待たなければならない。
【０００７】
2005年、米国のバイオサイエンス公司がFDAによって市場に出回る許可を獲得したの注射用アルブミン接合型タクソールナノ粒(符丁ABI-007)は、これまで国際で最も影響力のある国際特許の保護タクソール新製剤である。その技術提案は、ヒトのアルブミン血で薬物担体として、タクソールをアルブミン接合型ナノ粒に作られている、無菌濾過と冷凍乾燥した後、1本当たりタクソール100mgとアルブミン900mgの凍結乾燥粉末の注射薬を含有しているものがついていた。一般の注射液に比べ、注射用アルブミン接合型タクソールナノ粒の優位が2つ側を体現している、1) 処方の中でCremopher ELが含まれない、過敏反応を完全に取り除いた、国際で唯一脱感処理の必要ではないとして直接使用されているタクソール新製剤になる。2) 毒性の削減、耐受性を高めるのために、臨床の患者が使用されている剤量には一般注射液の135~175mg/m2 から260mg/m2までが高めた、臨床治療効果がタクソール一般注射液よりもはるかに優れている。しかし担体材料アルブミンの用量が大きいため、値段が高すぎる(1本が6200人民元)、また中間の調合操作が非常に複雑で、要求が厳しいので、アルブミン接合型タクソールナノ粒の臨床応用を制限した。
【０００８】
水中で油サブマイクロエマルションは薬物の親脂肪性によって、薬物を油相に溶解する、天然のリン脂質を乳化剤として、高圧均質の乳化作製を経過して、平均粒径600nm以下の乳液を得る。薬物は内油相に存在することにより、水と空気の接触を免れ、難溶性薬物の溶解度が低いと安定性不良で液体製剤の作ることに不利な欠陥を克服できる。リポソーム技術に比べて、サブマイクロエマルションがさらに産業化の発展優位を持っています。アルブミン接合型ナノ粒に比べ、サブマイクロエマルションの製造コストも低い、端末で滅菌を采用することができ、臨床では直接的な点滴注入することができ、薬物を析出しにくいため、使用の場合では便利安全便利である。それで、サブマイクロエマルションを担体としてタクソール新製剤を発展することは良好な将来性がある。国内外の学者はタクソールサブマイクロエマルションに対して大量の試してみるにもかかわらず、タクソール水溶性が悪いだけでなく、同時に油の中で溶解度も小さい(約0.25mg/ml)、直接的な作製のサブマイクロエマルションの載量が0.02mg/mlより低い、また殺菌や貯蔵過程で薬物は油相からが水相まで転移しやすい、乳剤の破損、層間剥離や凝集を引き起こす。油の中でタクソールの溶解度が低いの制限され、これまで国際には薬の載量が高い、耐熱圧滅菌および長期貯蔵を経て品質安定のタクソールサブマイクロエマルション製剤を開発できない。 
【０００９】
油相の中で薬物の溶解度を高めるため、物理化学的性質についてタクソールサブマイクロエマルション剤の研究に対しての制限を突破するため、前期では「タクソールリポソーム化合物」や「リポソーム化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤」に対して研究してきており、また二つの発明特許を申請した:申請番号は200810168213.Xの「タクソールリポソーム化合物」と申請番号は200810168212.5の「リポソーム化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤」である。
【００１０】
200810168213.Xに公開されたタクソールリポソーム化合物は、天然卵黄レシチン、大豆リン脂質とコレステロールのリポソーム材料を優先選択する、タクソールとリポソーム材料の重さの割合は1:1~19、すなわちリポソーム材料の用量がタクソールの1~19倍に達する(その中ではリン脂質をリポソーム材料として場合、タクソールとリポソーム材料のモル比は約1:1~20で、コレステロールをリポソーム材料として場合、タクソールとリポソーム材料のモル比は約1:2.2~42で、コール酸をリポソーム材料として場合、タクソールとリポソーム材料のモル比は約1:2.1~40である)。200810168212.5に公開されたサブマイクロエマルション剤は、200810168213.Xに公開されたタクソールリポソーム化合物を中間担体とする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】中国特許第200810168213.X号明細書
【特許文献２】中国特許第200810168212.5号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
タクソールリポソーム化合物の作製目的は、油の中でタクソール溶解度を向上させるために、サブマイクロエマルションの作製に良い中間担体を提供する。しかしさらにの研究結果によると、200810168213.Xと200810168212.5特許の中で技術案は次の欠陥を存在するものである: 
【００１３】
1、リン脂質をリポソーム材料として化合物を作製するの際、薬物の油溶性に改善効果があるが、ただ最大の2mg/mlに達することができるだけ、さらにリン脂質の使用量を向上させることが油の中で溶解度を引き続き高めるわけではない。油の中で溶解度が低いの制限することによる、リン脂質化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション剤を作製するの際、最大の薬物負荷は0.5mg/ml程度に放置して達するだけであり、また6ヵ月放置後、品質が不安定であり、臨床の需要を満たすことができない。
【００１４】
2、コレステロールをリポソーム材料として化合物を作製するの際、薬物の油溶性について改善効果が明らかにリン脂質より優れているが、コレステロールがステロイド類リポソーム材料で、その用量がタクソール重量の1~19倍に達し、多くの弊害を存在する、（1）摂取量があまり大きい：健康の大人がコレステロールの摂取量は、おおかた300mg~500mg(1~2個の卵黄のコレステロール量に相当する)で、タクソール臨床の投薬量が約300mgで、 200810168213.X特許ではコレステロール化合物とその製剤にかかわるものによって、コレステロール300mg~5700mgに相当するものを摂取し、最高では19個の卵黄に相当し、明らかに高い、隠れた危険がある。 （2）作製のサブマイクロエマルションを長期貯蔵は不安定である:コレステロール化合物を中間担体としてサブマイクロエマルションを作製の場合、治療剤の用量や特定のタクソール濃度によって、化合物の中のリポソーム材料の用量が高ければ高いほど、サブマイクロエマルションの内油相の中で包まれた化合物量が多くなる。内油相の中の油滴体積や油水インタフェースの制限によって、包まれた化合物総量は油相と油水インタフェースの内容物を超える場合、一部の薬が外水相へ遊離することになり、そのため封入率が下げ、また作製のサブマイクロエマルション剤が不安定である。200810168212.5特許の説明によってサブマイクロエマルションを視察することを経て、封入率は85%で、4℃で貯蔵6ヵ月の質は比較的安定しているが、貯蔵12ヵ月の時まで、明らかに層間剥離現象を出現し、マークアップ含有量が低下し、タクソール不純物が明らかに上昇する。（3）作製コストが高い：リポソーム材料の使用量が大きく、作製過程で溶剤用量は大きく、溶剤を振り回して乾燥することに必要な時間が長く、したがって製造コストが高いことになり、薬物経済学の原則に合わない。
【００１５】
このためには、これら2つの特許申請の基礎の上で、リポソーム材料の使用量が少ない化合物を提供するために、コストを下げ、また臨床投与の安全性、有効性と品質管理性を向上させるため、本を申請が大量の実験と検討を経て、リポソーム材料及び使用量に対していっそう選別と最適化を行った。発明者が発見して、数多くのリポソーム材料の中で、ステロイド(別名ステロール類)は最適のリポソーム材料である。具体的にはステロイドリポソーム材料がタクソールに対して化合能力が）強く、少ない使用量のステロイドは薬物が油の中で溶解度を最大化の向上させる。本発明特許が前述のステロイド化合物を中間担体として作製した水中で油サブマイクロエマルション剤について、包んで化合物総量が減少するので、作製したのサブマイクロエマルション剤の封入率がとても高いだけでなく、長期的な貯蔵では乳剤を破壊しにくい、物理学化学的安定性が200810168212.5特許に紹介したサブマイクロエマルション剤より良い。
【００１６】
本発明が提供したタクソール/ステロイド化合物は、後続のサブマイクロエマルション剤の品質の可制御性と臨床用薬の有効性と安全性のために強固な基盤を築いた。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
発明内容
本発明の一つ目的は、一種タクソール/ステロイド化合物を提供することであり、それがタクソール/ステロイドによって構成される。タクソール/ステロイドのモル比は1：0.2~4で、1:0.25~2を優先選択し、さらに1:0.33~1を優先選択する。
【００１８】
本発明では前述のタクソール/ステロイド化合物は、そのステロイドリポソーム材料が天然ステロイド物質や派生物の中で少なくとも1種である。
前述の天然ステロイドは、コレステロール、7-水素化コレステロール(別名7-脱水素コレステロール)、ラノステロール、シトステロール、スチグマステロール、マイケルステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、真菌ステロイド、イタボガキ属ステロールの中から選択する。前述のステロイド派生物がコ-ル酸、デオキシコ-ル酸とチエノ-オキシコ-ル酸から選択する。優先選択したステロイド材料がステロイド、7-水素化コレステロールとエルゴステロールで、さらにステロールとエルゴステロールを優先選択する。
【００１９】
本発明のタクソール/ステロイド化合物は、抗酸化安定剤を含有することもできる。優先選択した抗酸化安定剤が亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ビタミンC、EDTAや塩、ビタミンEやその派生物の中で少なくとも1種もある。
本発明の別の一つ目的は、本発明のタクソール/ステロイド化合物の作製やり方を提供し、前述のタクソール/ステロイド化合物には次のようなやり方1または2によって作製できる、
【００２０】
やり方1の次第:
a .タクソールをステロイドと比例によって混ぜて、適当量の有機溶剤を加入して溶解し、任意選択で抗酸化安定剤を加入する。
b.適当の温度の条件の下で攪はんして、有機溶剤を取り除いて、真空乾燥してそれを得る。
【００２１】
やり方2の次第:
a .タクソールとステロイドをそれぞれ適当量の多様な有機溶剤を加入して溶解させ、それを混ぜて、任意選択で抗酸化安定剤を加入する。
【００２２】
b.適当の温度の条件の下で攪はんして、回転蒸発あるいはスプレー乾燥を通じて、有機溶剤を取り除いて、真空乾燥してそれを得る。
本発明の作製やり方の中で、前述の有機溶剤はジクロロメタン、エタノール、メタノール、ベンジルアルコール、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、三級ブタノールの一種や多様なものから選択できる。エタノール、アセトン、酢酸エチルとテトラヒドロフランの一種や多様を優先選択できる。様々な有機溶剤を選択使用した時、それは選択された有機溶剤の混合物をさす。
【００２３】
本発明の作製やり方の中で、有機溶剤を取り除くことは回転蒸発あるいはスプレー乾燥を通じて実現することである。
本発明の作製やり方の中で、「比例によって混合する」とは、本申請された前述のタクソールとステロイドの比例混合で、すなわちタクソールとステロイドのモル比が1:0.2~4で、1:0.25~2を優先選択し、さらに1:0.33~1を優先選択する。
「適量の有機溶剤」の中の「適量」と言うのは、本分野の技術者が慣例技術に従って、タクソールとステロイドの混合物を溶解することを確認できるの量は、たとえば、タクソールとステロイド化合物を溶液の中で濃度がタクソールで計算し、0.5~16mg/mlことができ、1.0~8.0mg/mlを優先選択する。「適当の温度の条件」は、25℃-70℃で、35-55℃を優先選択し、たとえば25℃、35℃、45℃、55℃あるいは70℃である。攪拌の反応時間と真空乾燥の時間も本分野の技術者で通常技術どおり確定することができる、例えば撹拌反応の時間が0.5~3.0時間ができ、例えば0.5時間、1.0時間、1.5時間や2.0時間で、真空乾燥の時間は8時間-48時間ができ、例えば8時間、12時間、16時間や24時間である。
本発明の作製やり方の中で、適量の抗酸化安定剤を加入することを考慮でき、抗酸化安定剤の使用量は本分野がリポソーム材料化合物を作製する中で通常の使用量を採用し、一般的にタクソールとコレステロール両者の重量の和の1 %(重量) を超えない。
【００２４】
本発明もタクソールとステロイド化合物の作製された水中油型サブマイクロエマルション剤、干乳剤、セルフマイクロエマルションシステムや経口製剤の中の応用を提供した。そのうち水中油型サブマイクロエマルション剤や干乳剤は本発明に紹介したタクソールとステロイド化合物を通じて、油相に溶解された作製することである。注射投与することによって腫瘍の臨床治療に使われる。この製剤の装薬量が高い、安定性が良い、また処方ではCremopher ELを含有しない、安全性が市販の注射剤より優れている。セルフマイクロエマルションシステムは本発明に紹介したタクソールとステロイド化合物を油相に溶解し、適量の界面活性剤(乳化剤)、共界面活性剤 (補助乳化剤) を加入することによって作製されることになる。それは注射、粘膜や経口を通じて腫瘍の臨床治療に用いることができる。経口製剤、特に固体製剤は、たとえばカプセルや錠剤など、本発明に紹介したタクソールとステロイド化合物によって薬剤学に許可された医薬用賦形剤を加入して作製されることになる。それは経口を通じて腫瘍の臨床治療に用いることができ、より高い生物学的利用率を持つ。
【００２５】
本発明も作製した抗がん薬物の中で応用されたタクソールサとステロイドを提供して,前述の癌は卵巣癌、乳癌、非小細胞肺癌、頭癌や頚癌から選択する。また胃癌や膵臓癌である。
【００２６】
本発明では特別な指摘がなかったとしたら、本文に科学と技術の用語や名称を用いたことは、いずれも本発明の分野に所属している一般技術者の通常の理解と似たような意味を持つ。そして特別な指摘がなかったとしたら、このうち、物質とその含有量や比例、装置や機器、作製条件など採用したことは、すべて本分野の技術者がよく知っているあるいはその本発明の説明を根拠して知ることができる。
【発明の効果】
【００２７】
本発明が提供したタクソール/ステロイド化合物は、特別に以下のような利点を持つ: 
【００２８】
1）リポソ-ム材料の使用量が少なく、作製コストも低い:薬物とリポソ-ム材料の化合は、完全には薬物が油の中で溶解度によって最大の改善と向上させることを得たの前提である。本分野では知られたタクソール化合物、特許200810168213.xによって作製されたタクソール化合物に比べて、本発明の薬物がリポソ-ム材料ステロイドとのモル比が1:0.2~4で、1:0.25~2を優先選択し、さらに1:0.33~1を優先選択する。
本発明で選択したステロイドリポソ-ム材料の分子量は384.6~414.7で、これによって計算して、薬物がステロイドとのモル比が1:0.2の時、対応の重量の比が1:0.09~1:0.097である。モル比が1:4時、対応の重量の比が15 1:1.80~1.94である。すなわち薬物がステロイドとのモル比が1:0.2~4を優先選択された範囲内で、対応の重量の比が1:0.09~1.94である。それに応じて、薬物がステロイドとのモル比が1:0.25~2を優先選択された時、重さの比は1-0 . 11 ~ 0 . 97;薬がステロイドの・ムーアがより優先に向って. 33 ~ 1時、対応の重量の比が1:0.15~0.49である。
200810168213.xが公開した内容に比べて、本発明はステロイドを採用しているリポソ-ム材料として、薬物とリポソ-ム材料の重量比例の範囲は、1:1~19から1:0.09~1.94まで減縮した（1:0.11~0.97を優先選択する)。リポソ-ム材料の使用量が下げり、使用量の範囲が小さくなり、化合物の中でタクソールの装薬量(5%~50%から35%~91.7%まで) を高め、またタクソールの完全に化合を確保でき、油の中で溶解度を最大限に高め、後続サブマイクロエマルション剤の作製を満足させる。リポソ-ム材料の使用量を増やして薬物を油の中で溶解度に引き続き高められない。
【００２９】
2）リポソ-ムの摂取量が少ない: 毎回タクソールの投与300mgたびによって計算し、毎回摂取したステロイドの量は27mg~580mgで、33mg~290mgを優先選択し、200810168213.X特許技術の300mg~5700mgに比べ、ステロイド物質の摂取量が大幅に減り、ステロイドの大量に摂取することによって安全性の隠れた危険の可能性が減少した。
【００３０】
3）サブマイクロエマルションの封入率と安全性の向上に有利だ：本発明で提供した化合物の中でステロイドの最大の使用量はわずかタクソールの重量の1.94倍で、0.97倍を優先選択し、それを植物油に溶解して水中で油サブマイクロエマルション剤を作製する時、内油相の中で包んで化合物の総量が小さく、封入率と長期貯蔵の物理の安定性や化学の安定性の向上に有利である。比較研究によると、本発明の化合物を中間担体として作製したサブマイクロエマルション剤は、封入率がいずれも90%以上、4℃で貯蔵12ヵ月が品質の安定で、しかし200810168212.5特許に紹介したサブマイクロエマルション剤の封入率は65~85%、4℃で貯蔵12ヵ月間が明らかに層間剥離現象を出現し、不純物が目立って上昇している。
4）安全性を高める：市販されている一般の注射液に比べ、本発明のタクソール/ステロイド化合物を中間担体として作製したサブマイクロエマルション剤は、処方にCremopher ELを含有しない、Cremopher ELによる厳しいアレルギー反応を免れた、動物毒性を下げる、許容量を向上させる。
【００３１】
次に付図説明と実施例を参照して本発明をさらに詳しく説明しているが、本分野の技術者たちは理解しなければならない、本発明がこれらの実施例と使用の作製やり方に限らず。また本分野の技術者が本発明の説明に基づいて本発明に対して同等の代替、組み合わせ、改良や修飾を行うことができるが、これらは本発明の範囲内が含まれる。 
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】実験例3の中では異なるモル比の化合物と物理的混合物のDSC曲線図
【図２】実験例6のX線回折図
【図３】実験例7の赤外線スペクトログラム
【図４−１】実験例8の紫外線スペクトログラム
【図４−２】実験例8のHPLCクロマチックグラフのピーク比較(ピーク1がタクソールである）
【発明を実施するための形態】
【００３３】
具体的な実施方式
【実施例】
【００３４】
実施例1 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール9.0gとコレステロ-ル0.81gを取り、回転蒸発器の中に置いて、アセトン3000mlをその中に入れて溶解し、40℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、40℃減圧と真空乾燥12時間によって得ることができる。
【００３５】
実施例2 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール9.0gとコレステロ-ル0.99gを取り、回転蒸発器の中に置いて、テトラヒドロフラン3000mlをその中に入れて溶解し、25℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、25℃減圧と真空乾燥12時間によって得ることができる。
【００３６】
実施例3 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール8.5gとコレステロ-ルを三角フラスコの中に置いて、テトラヒドロフラン3000mlをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1.5時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、45℃減圧と真空乾燥16時間によって得ることができる。
【００３７】
実施例4 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール8.0gとコレステロ-ル1.84gを三角フラスコの中に置いて、アセトン1000mlをその中に入れて溶解し、35℃温度の条件の下で1時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、35℃減圧と真空乾燥10時間によって得ることができる。
【００３８】
実施例5 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール7.0gとコレステロ-ル3.15gを三角フラスコの中に置いて、アセトン32500mlをその中に入れて溶解し、50℃温度の条件の下で2時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、50℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００３９】
実施例6 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール7.0gとコレステロ-ル4.2gを三角フラスコの中に置いて、酢酸エチル5000mlをその中に入れて溶解し、55℃温度の条件の下で1時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、40℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４０】
実施例7 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール5.2gとコレステロ-ル4.73gを取り、回転蒸発器の中に置いて、ジクロロメタン3000mlをその中に入れて溶解し、60℃温度の条件の下で2.5時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、55℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４１】
実施例8 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール5.2g、コレステロ-ル4.85g、ビタミンE 0.05gを取り、回転蒸発器の中に置いて、アセトン4000mlをその中に入れて溶解し、40℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、噴霧乾燥15時間によって溶剤を取り除く、55℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４２】
実施例9 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール5.1g、コレステロ-ル4.95gを取り、回転蒸発器の中に置いて、5200mlのエタノ-ルと三級ブタノールの混合物をその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４３】
実施例10 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール5.0g、コレステロ-ル7.51gを取り、回転蒸発器の中に置いて、5200mlのエタノ-ルと三級ブタノールの混合物をその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４４】
実施例11 タクソールコレステロ-ル化合物
タクソール5.0g、コレステロ-ル9.10gを取り、回転蒸発器の中に置いて、5200mlのエタノ-ルと三級ブタノールの混合物をその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４５】
実施例12  タクソール/7脱コレステロール化合物
タクソール5gを取り、0.55gの7脱コレステロールをその中に入れ、回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４６】
実施例13  タクソール/7脱コレステロール化合物
タクソール5gを取り、4.85gの7脱コレステロールをその中に入れ、回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４７】
実施例14  タクソール/7脱コレステロール化合物
タクソール5gを取り、9.70gの7脱コレステロールをその中に入れ、回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４８】
実施例15  タクソール/エルゴステロール化合物
タクソール5g、エルゴステロール0.54gを取り、いっしょに回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００４９】
実施例16  タクソール/エルゴステリン化合物
タクソール5g、エルゴステロール4.83gを取り、回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００５０】
実施例17  タクソール/エルゴステロール化合物
タクソール5gを取り、回転蒸発器の中に置いて、500mlのアセトンをその中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００５１】
実施例18  タクソールコール酸化合物
それぞれタクソール4gの合計5組を取り、それぞれ0.5g、2.0g、3.0g、4.6gと7.70gのコール酸をそれらの中に入れて、回転蒸発器の中に置いて、それぞれ1000mlのアセトンをそれらの中に入れて溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する、回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって得ることができる。
【００５２】
実施例19  タクソール/ステロイド化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション  
グリセロ-ル25gを取り、約720ml注射用水の中に溶かして、40-60℃まで加熱してから、精製大豆レシチン15gとポロキサマ-(188)30
gを加入して、ワーリングブレンダーに置いて処理し、均一の水相が作られ、この温度の下を持つ。別にそれぞれ実施例1〜実施例18の中で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール500mgと等しい)を取り、200ml大豆油の中に加入し、40-60℃まで予熱して油相が作られる。攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、攪拌して均一の初乳が形成されている。初乳を高圧均質機の中へ迅速に移転し、数回の均質化して、0.1mol/L塩酸でpHを4.0-6.0まで調節し、また1000ml水まで加え、全部乳液を収集してから、115℃30分で滅菌し、0.5mg/ml装薬量のサブマイクロエマルション剤を得る。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、平均粒径は125 nm~150nmである。
【００５３】
実施例20 タクソール/ステロイド化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション
グリセロ-ル12.5gを取り、約300ml注射用水の中に溶かして、約50℃まで加熱してから、卵黄レシチン7.5gとポロキサマ-(188)15
gを加入して、ワーリングブレンダーの中に置いて処理し、均一の水相が作られ、この温度の下を持つ。別にそれぞれ実施例5、13、16の中で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール500mgと等しい)を取り、125ml大豆油と中鎖の油によって構成した等容性混合油の中に加入し、.約50℃まで加熱して油相が作られる。攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、高速攪拌して均一の初乳が形成されている。初乳を高圧均質機の中へ迅速に移転し、数回の均質化して、0.1mol/L塩酸でpHを4.0-6.0まで調節し、また500ml水まで加え、全部乳液を収集してから、115℃30分で滅菌し、1.0mg/ml装薬量のサブマイクロエマルション剤を得る。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、平均粒径は230 nm~250nmである。
【００５４】
実施例21 タクソールステロイド化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション
グリセロ-ル12.5gを取り、約300ml注射用水の中に溶かして、55℃まで加熱してから、精製大豆レシチン7.5gとポロキサマ-(188)15gを加入して、ワーリングブレンダーの中に置いて処理し、均一の水相が作られ、この温度の下を持つ。別にそれぞれ実施例1〜実施例18の中で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール600mgと等しい)を取り、125ml大豆油の中に加入し、約55℃まで加熱して油相が作られる。攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、高速攪拌して均一の初乳が形成されている。初乳を高圧均質機の中へ迅速に移転し、数回の均質化して、0.1mol/L塩酸でpHを4.0-6.0まで調節し、また500ml水まで加え、全部乳液を収集してから、115℃30分で滅菌し、1.2mg/ml装薬量のサブマイクロエマルション剤を得る。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、平均粒径は125 nm ~133nmである。
【００５５】
実施例22 タクソールステロイド化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション
グリセロ-ル12.5gを取り、約300ml注射用水の中に溶かして、60℃まで加熱してから、精製大豆レシチン7.5gとポロキサマ-(188)15gを加入して、ワーリングブレンダーの中に置いて処理し、高速攪拌して均一の水相が作られ、この温度の下を持つ。別にそれぞれ実施例1〜実施例18の中で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール1000mgと等しい)を取り、150ml大豆油の中に加入し、約60℃まで加熱して油相が作られる。攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、高速攪拌して均一の初乳が形成されている。初乳を高圧均質機の中へ迅速に移転し、数回の均質化して、0.1mol/L塩酸でpHを4.0-6.0まで調節し、また500ml水まで加え、全部乳液を収集してから、115℃30分で滅菌し、2.0mg/ml装薬量のサブマイクロエマルション剤を得る。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、平均粒径は128nm ~141nmである。
【００５６】
実施例23 タクソールステロイド化合物を中間担体として干乳剤
実施例20〜実施例22で作製した滅菌処理をしないままの適量のサブマイクロエマルションを取り、3％（W/V）マンニトールを加入して溶解し、0.22μm膜で無菌濾過して、冷凍乾燥によって得る。
【００５７】
実施例24 タクソールステロイド化合物を中間担体としてセルフマイクロエマルション
それぞれ実施例1-実施例18で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール100mgと等しい)を取り、中鎖の油5mlを加入し、攪拌して溶解させ、1.6mlPEG400、0.5mlトゥイーン-80を加入し、均一に攪拌して、均一透明なセルフマイクロエマルションを得る。上述のセルフマイクロエマルションシステム10mlを取り、5%ブドウ糖注射液を加入して10mlまで、マイクロエマルションは形成され、粒径が100nmより小さい。
【００５８】
実施例25  タクソールステロイド化合物を中間担体としてカプセル剤
それぞれ実施例1-18で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール250mgと等しい)を取り、2 号硬カプセルのなかに入れることを得る。
【００５９】
実施例26  タクソールステロイド化合物を中間担体として錠剤
それぞれ実施例1-実施例18で適量のタクソール/ステロイド化合物(タクソール500mgと等しい)を取り、微晶質セルロース500 mg、乳糖500 mg、適量のステアリン酸マグネシウムを加入し、均一に混合したりパンチャーピンを調整して、押された規格は100-250mgの錠剤である。
【００６０】
テスト例
テスト例1：中国の特許申請200810168213.X特許公開の技術案検証
中国の特許申請200810168213.X特許によって優先選択したリポソ-ム材料及びその使用量は、それぞれ大豆レシチンとコレステロールをリポソ-ム材料とする、薬物とリポソ-ム材料の重量比が1:1.85~18.5を制御して、参照比較化合物を作製し、大豆油の溶解度(タクソールとして計)を考察し、また化合しなかった遊離しているタクソールと比較している。
【００６１】
【表１】
2013509360.tif 000003
【００６２】
結果によると、リン脂質の使用量はタクソール重量の5.55倍を超える時、溶解度が平穏に向かい、約2.12~2.32mg/mlである。コレステロールの使用量がタクソール重量の1.82~18.12倍の範囲内で、溶解度が8.75~9.15
mg/mlに定している。ヒントを与えることはコレステロールをリポソ-ム材料として薬物油の中で溶解度の改善効果がリン脂質より明らかに優れているうえ、コレステロールの使用量がさらに下げたと優れた空間を持っている。
【００６３】
テスト例2
本発明のタクソール/ステロイド化合物は油の中で溶解度の影響要因分析
タクソール/ステロイド投料割合
タクソール4gを量っ取り、表2の投料割合によってそれぞれコレステロール、7-脱コレステロールとエルゴステロ-ルを一緒に回転蒸発器の中に置いて、それぞれ500mlのアセトンを加入して溶解し、45℃温度の条件の下で1時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、65℃減圧と真空乾燥15時間によって化合物を得ることができる。適量の化合物を取り、それぞれ注射用大豆油20gを加入して、60℃水浴加熱1hまた外揺れ、過飽和溶液を得り、サンプリング濾過を行って、適量の後続の濾液を量っ取り、絶対的なエチルアルコールによって定容積の後、20μlを取って液体クロマトグラフに注入して、Kromasil-C18(250mm×4.6mm，5μm)をクロマトグラフィーカラムとして、アセトニトリル-水(54:46)を移動相とする、流速が1.0mL/min、検出波長が230nm、法則に従って測定し、植物油の中のタクソール溶解度を計算する。結果が下表のとおり。
【００６４】
【表２】
2013509360.tif 000004
【００６５】
結果によると、タクソールとステロイドのモル比は1:0.2~4で、すなわちステロイドの最大使用量を制御したタクソールモル比数の4倍以下で、薬物は油の中で溶解度が最大限向上させた。
【００６６】
タクソールの濃度
アセトンをは反応溶剤として、タクソールとコレステロールの投料モル比が1：1で、反応気温が35℃で、反応時間が0.5hである。タクソール濃度16.0、8.0、4.0、2.0、1.0と0.5mg/mLを化合物の作製結果に対する影響を考察している。結果によると、タクソールの濃度は化合物に油で溶解度の影響が明らかであはない、下表のとおりである。
【００６７】
【表３】
2013509360.tif 000005
【００６８】
テスト例3  タクソールコレステロール化合物のDSC曲線特徴
テストサンプル：
●タクソール；
●コレステロール；
●タクソール/コレステロール化合物（テスト例2項の下表2の中に作製した化合物のモル比は4:1，3:1，2:1，1:1，1:2，1:4である）；
●タクソール/コレステロール物理的混合物（化合物と同じモル比によって投料する、両者を直接混合することを得り、対照研究に用いる）；
テストやり方：示差走査熱量測定（DSC）を採用してDSC曲線特徴を考察して、温度が25〜300℃、昇温スピードが10℃/min、窒素ガス流速が60ml/min、DSC曲線が付図1を見よ。
【００６９】
テスト結果：タクソールの吸熱溶融ピークは225.7℃で、コレステロールの吸熱ピークは150.9℃である。異なる比例によって作製した物理的混合物の中で、コレステロールの吸熱特徴が変わっていない、溶融温度も149-150℃で、タクソールの吸熱ピークは少量ズレが発生したが、溶融ピ特徽が依然として存在し、ヒントを与えた両者が簡単な物理的混合物である。物理的混合物でタクソールの溶融ピークが発生したズレの原因を分析することは、次のように：コレステロールの溶融点がタクソールの溶融点より低い、コレステロールが溶融した後、薬物の分散状態へ一定の影響を発生し、タクソールの溶融特徴を変えさせる。
【００７０】
異なる比例によって作製した化合物の中で、コレステロールの吸熱特徴が著しくズレを発生し、タクソールの吸熱ピークが完全に消えた、ヒントを与えた両者が完全に化合した。
【００７１】
テスト例4  タクソールコレステロール化合物は異なる油相の中で溶解度の考察
テスト例2項の下表2中の適量のタクソール/コレステロール化合物を取り、それぞれ注射用大豆油、中鎖の油(MCT)と大豆油/ MCT(1：1)の混合油を加入し、60℃まで加熱し、攪拌して十分な混合溶解させ、60℃水浴で1h加熱させて、この過程の中で絶えず外揺れ、過飽和溶液を作った、サンプリングで濾過を行って、適量の後続の濾液を量っ取り、絶対的なエチルアルコールによって希釈した後、HPLC法によって測定し、油の中で化合物の溶解度を計算する。もう適量のタクソールを取り、同じ法によって溶解度を測定した。化合物と原薬の溶解度を比較した、結果によると、本発明が作製した異なる比例のコレステロール化合物はいずれも油の中で薬物の溶解度を高めることができる。下表のとおり。
【００７２】
【表４】
2013509360.tif 000006
【００７３】
テスト例5  タクソールコレステロール化合物はn-オクチルアルコールの中で溶解度の考察
表2中の適量のタクソール/コレステロール化合物を取り、50mlの三角フラスコに入れ、n-オクチルアルコール10 10gを加入し、25℃恒温発振器の中に置い、24h振動して、過飽和溶液を得る。サンプリング5ml用として、0.45μmフィルタ膜で濾過し、適量の後続の濾液を取り、絶対的なエチルアルコールによって希釈して、紫外分光光度法で法によって測定し、n-オクチルアルコールの中の物理の混合物とコレステロール化合物の見かけの溶解度を計算し、また比較して、結果によると、異なる比例コレステロール化合物はいずれもn-オクチルアルコールの中で薬物の溶解度を高めることができる、下表のとおり。
【００７４】
【表５】
2013509360.tif 000007
【００７５】
テスト例6  タクソールコレステロール化合物X線回折分析（XRD）
測定サンプル：タクソール、コレステロール、タクソールコレステロール化合物（実施例5のサンプル）、タクソールコレステロール物理的混合物（モル比1：1）。
検出条件：Cu-K  ターゲット、測定した管圧力40kV、管流200MA、
回折範囲は3°<2θ<60°である。
測定結果：X線回折測定結果が付図2を見よ。
結果によると、タクソールの特徴回折ピークは2、4、7号で、回折角(2θ)は5.480、8.840、12.180で、ピーク強度は23567、11319、13277である。 コレステロールの最強回折ピークが1号で、回折角が5.160で、ピーク強度が35506である。 混合物図鑑の中で両者の特徴回折ピークもはっきり見えた、タクソールとコレステロール図鑑の簡単な重畳である。化合物回折図鑑は変わりましたが、タクソールとコレステロールそれぞれの特徴回折ピーク強度が大きく弱化あるいはピークが消えてなくなるが、回折角は15.240、16.759、17.160と17.960のところでは、新たな特徴回折ピークを現れた、回折ピーク強度は4492、3588、2604や3186で、タクソールとコレステロールのそれぞれの特徴回折ピーク強度より低い。はっきりと表して、タクソールが化合物の中で微細結晶状態や非晶質状態で分散された。
【００７６】
テスト例7  タクソールコレステロール化合物赤外線スペクトルの特性(IR)の分析
それぞれタクソール、コレステロール、タクソールコレステロール化合物(実施例5の中でモル比は1：1のサンプル)、タクソールとコレステロールの物理的混合物(モル比1：1) を取り、臭化カリウムペレットを採用し、400~4000cm-1範囲内で赤外線スペクトルを走査して、結果が付図3を見よ。
赤外線図鑑によると、タクソール主な特徴吸収ピークは、ケトンカルボニルC=0の1733.8cm-1と1714.4cm-1波数のところの二つクラックポイントピークで、アミドが1646.4cm - 1波数のところの二つのカルボニルピーク及び3300~3500cm-1波数のところのヒドロキシ0-H の収縮弛緩振動吸収ピークである。コレステロール赤外線スペクトル主な特徴吸収ピークは、2933.1cm-1、2901.0cm-1と2866.4cm -1波数のところの飽和C−Hキーの収縮振動や、3402.3cm-1波数のところのヒドロキシ伸振動吸収ピークである。物理的混合物の赤外線スペクトルは基本的にはコレステロールとタクソール各吸収ピークの重畳である。化合物の特徴吸収ピークは変わりました、タクソールケトンカルボニルとアミドの特徴ピークの
スパイクが変化した、ケトンカルボニルは二つクラックポイントピークによって1724.7 cm -1ところ一つ吸収強度の大きな鈍いピーク、
アミドのカルボニルピークは1646.4cm-1波数のところのスパイクが鈍いになり、コレステロールのヒドロキシは3432.9cm-1波数のところで、吸収ピークのスパイクが広く、吸収の強度が増加している。これによると、タクソールのケトンカルボニル遺伝子とコレステロールのヒドロキシの間で分子の間の相互作用を発生した、一つ化合物となっている。
【００７７】
テスト例8  コレステロール化合物の紫外吸収分光（UV）及びHPLCクロマトグラムピークの考察
タクソールおよびタクソールコレステロール化合物(実施例5の中でモル比は1：1のサンプル)を取り、それぞれ絶対的なエチルアルコールの中に溶かして、絶対的なエチルアルコールを空白として、200~400nm範囲内で紫外線走査して、結果が付図4-1を見よ。
【００７８】
結果によると、タクソールとタクソールコレステロール化合物両者の紫外特徴と一致している、はっきりと表して、化合物の中でタクソールの発色基団が変わっていない、すなわち両者が分子の間の作用力を通じて化合物を形成した後、新しい化学結合をなされない。
【００７９】
上述のタクソールおよびびタクソールコレステロール化合物のエタノール溶液20μlを別に取って液体クロマトグラフに注入して、Kromasil-C18(250mm×4.6mm，5μm)をクロマトグラフィーカラムとして、アセトニトリル-水(54:46)を移動相とする、流速が1.0mL/min、検出波長が230nm、法則に従って測定し、クロマトグラムのピークの保持時間を記録し、結果が付図4-2を見よ。
【００８０】
結果によると、タクソールとタクソールコレステロール化合物の主ピーク保持時間が完全に一致している、はっきりと表して、陽子化のエタノール溶液の中で、化合物から遊離のタクソールを解離した。
【００８１】
テスト例9：タクソール/コレステロール化合物の安定性考察
実施例1-18作製の薬物/ステロイド化合物固体粉末を取り、25℃条件の下に貯蔵し、定期的にサンプリングし、外観の変化を考察します。絶対的なエチルアルコールを加え、適合濃度の溶液が作られ、20μlを量っ取り、HPLC計に注入し、15 Kromasil-C18(250mm×4.6mm，5μm)をクロマトグラフィーカラムとして、アセトニトリル-水(54:46)を移動相とする、流速が1.0mL/min、検出波長が230nm、含有量と不純物を測定する。結果によると、初期に比べ、外観、含有量および不純物ともの変化がない、品質が安定である。
【００８２】
【表６】
2013509360.tif 000008
【００８３】
テスト例10
テスト作製例10-1 タクソールステロイド化合物
実験化合物1~実験化合物6：本発明特許の技術要求によってコレステロール、7-脱コレステロールとエルゴステロ-ルを選択して使用する、作製したタクソール/ステロイドのモル比は1:1~1:4の化合物で、具体的な作製方法はタクソールとコレステロ-ルをいっしょに三角フラスコの中に置いて、アセトン2000mlをその中に入れて溶解し、40℃温度の条件の下で1時間で攪拌する回転蒸発器の中に移す、回転蒸発法によって溶剤を取り除く、40℃減圧と真空乾燥24時間によって得ることができる。
参照比較化合物1~参照比較化合物4： 200810168212.5特許の中の化合物の技術を要求によって、大豆リン脂質とコレステロールを選択して使用してリポソ-ム材料として、上述の同じ方法で4組参照比較化合物を作製して対比研究に用いている、そのうちだった中タクソール/リン脂質化合物のモル比は1:6と1:10で、タクソール/コレステロール化合物のモル比は1:10、20である。詳細が下表のとおり。
【００８４】
【表７】
2013509360.tif 000009
【００８５】
テスト作製例10-2：タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤
【００８６】
2013509360.tif 000010
【００８７】
[作製やり方]
▲約130
~ 140ml注射用水を取り、処方量によって卵黄レシチン、ポロキサマー(188)とグリセロールを加入して、ワーリングブレンダーの中に入れて分散し、均一の水相を作られ、40℃まで加熱し、.温度を保つ。
▲処方量によって大豆油を取り、40℃まで予熱し、実施例1の作製したタクソールコレステロール化合物1を量って取り、予熱の大豆油の中に溶かして、ワーリングブレンダーの中に入れて均一の油相を分散で作られる。 
▲攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、10000回転/ min切り取り5minによって、均一の初乳になり、高圧均質機の中へ迅速に移転して、6回均質を行って、全部乳液を収集し、0.1mol/L塩酸でpHを4.0±0.5まで調節し、また水を200mlまで添加し、均等に振り、分けて入れ、115℃/ 30分で滅菌し、それを得ることになる。
【００８８】
サブマイクロエマルション1-サブマイクロエマルション4、乳化剤(卵黄レシチン)の用量は、それぞれサブマイクロエマルション剤の総量の1.0%(g/ml)と1.2%(g /ml)と1.5%(g/ml)と1.5%(g/ml)である。補助乳化剤ポロキサマー(188)の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の0.5%(g/ml)と1.0%(g/ml)、2.0(g/ml)と3.0%(g/ ml)である。タクソールの装薬量は、それぞれ0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ225nm、233nm、245nm、230nmである。
【００８９】
テスト作製例10-3：タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤
【００９０】
2013509360.tif 000011
【００９１】
[作製やり方] 
▲約130
~ 140ml注射用水を取り、処方量によってポロキサマー(188)とグリセロールを加入して、ワーリングブレンダーの中に入れて分散し、均一の水相を作られ、80℃まで加熱し、.温度を保つ。 
▲処方量によって大豆油を量っ取り、80℃まで予熱し、処方量によって化合物2、卵黄レシチンやビタミンEを量って取り、予熱の大豆油の中に入れ、ワーリングブレンダーの中に入れて均一透明の油相を分散溶解で作られる。 
▲攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、20000回転/ min切り取り10minによって、均一の初乳になり、高圧均質機の中へ迅速に移転して、6回均質を行って、全部乳液を収集し、0.1mol/L塩酸でpH 5.5±0.5まで調節し、また水を200mlまで添加し、均等に振り、分けて入れ、115℃/ 30分で滅菌し、それを得ることになる。
【００９２】
サブマイクロエマルション5-サブマイクロエマルション8、乳化剤(卵黄レシチン)の用量は、それぞれサブマイクロエマルション剤の総量の1.0%(g/ml)と1.2%(g /ml)と1.5%(g/ml)と1.5%(g/ml)である。補助乳化剤ポロキサマー(188)の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の1.2%(g/ml)と2.0%(g/ml)、2.0(g/ml)と3.0%(g/ ml)である。タクソールの装薬量は、それぞれ0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ246nm、262nm、231nm、242nmである。
【００９３】
テスト作製例10-4：タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤
【００９４】
2013509360.tif 000012
【００９５】
[作製やり方] 
テスト作製例10-3と同じである。そのうちpH値を5.0±0.5に調節する。
サブマイクロエマルション9-サブマイクロエマルション12、乳化剤(大豆リン脂質)の用量は、それぞれサブマイクロエマルション剤の総量の1.2%(g/ml)と1.2%(g /ml)と1.2%(g/ml)と1.5%(g/ml)である。補助乳化剤ポロキサマー(188)の用量は、みなサブマイクロエマルション剤の総量の2.0(g/ml)である。タクソールの装薬量は、それぞれ0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/mlと5.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ165nm、153nm、127nm、138nmである。
【００９６】
テスト作製例10-5：タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤 
【００９７】
2013509360.tif 000013
【００９８】
[作製やり方] 
実施例3と同じである。そのうちpH値を4.5±0.5に調節する。
サブマイクロエマルション13-サブマイクロエマルション16、乳化剤(大豆リン脂質)の含有量は、それぞれサブマイクロエマルション剤の総量の1.2%(g/ml)と1.2%(g /ml)と1.2%(g/ml)と2.0%(g/ml)である。補助乳化剤ポロキサマー(188)の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の1.5%(g/ml)、1.5%(g/ml)、2.0%(g/ml) と2.0%(g/ml))である。タクソールの装薬量は、それぞれ1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/mlと5.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ145nm、138nm、133nm、146nmである。
【００９９】
テスト作製例10-6：  タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤 
【０１００】
2013509360.tif 000014
【０１０１】
[作製やり方]  
実施例2と同じである。そのうちpH値を5.5±0.5に調節する。
サブマイクロエマルション17-サブマイクロエマルション20、乳化剤(卵黄レシチン)の含有量は、それぞれサブマイクロエマルション剤の総量の1.5%(g/ml)、1.5%(g/ml)、2.0%(g/ml) と3.0%(g/ml)である。補助乳化剤ポロキサマー(188)の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の2.0%(g/ml)、2.0%(g/ml)、3.0%(g/ml) と3.0%(g/ml)である。タクソールの装薬量は、それぞれ0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/mlと5.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ255nm、263nm、285nm、232nmである。
【０１０２】
テスト作製例10-7：  タクソールコレステロール化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤 
【０１０３】
2013509360.tif 000015
【０１０４】
[作製やり方] 
実施例3と同じである。 
サブマイクロエマルション21とサブマイクロエマルション22の中で、脂肪酸グリセリド乳化剤の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の1.5%(g/ml)と2.0%(g/ml)である。サブマイクロエマルション23と24は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルを使用して乳化剤とする、その用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の2.0%(g/ml)と3.0%(g/ml)である。サブマイクロエマルション21-サブマイクロエマルション24の中で、補助乳化剤ポロキサマー(188) の用量は、サブマイクロエマルション剤の総量の1.5%(g/ml)、2.0%(g/ml)、2.0%(g/ml) と3.0%(g/ml)である。タクソールの装薬量は、それぞれ0.5mg/ml、1.0mg/ml，2.0mg/mlと4.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ145nm、133nm、126nm、158nmである。
【０１０５】
テスト作製例10-8： 7水素化コレステロールあるいはエルゴステロール化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション
【０１０６】
2013509360.tif 000016
【０１０７】
[作製やり方] 
実施例5と同じである。
サブマイクロエマルション25-サブマイクロエマルション28の中で、タクソールの装薬量はみな1.0mg/mlである。レーザー粒度寸法測定器によって測定し、4組の乳剤の平均粒径はそれぞれ143nm、138nm、141nm、132nmである。
【０１０８】
テスト作製例10-9：参照比較化合物を中間担体としてタクソールサブマイクロエマルション剤
テスト作製例1項の下で作製した参照比較化合物1-参照比較化合物4を取り、上述の実施例のサブマイクロエマルション剤の作製方法を参照して、サブマイクロエマルション剤29 ~サブマイクロエマルション剤32を作製し、装薬量はそれぞれ0.5、1.0、1.0と2.0mg/mlで、対比研究に用いる。
具体的な処方、作製やり方や測定の封入率の結果は以下のとおり。 
【０１０９】
2013509360.tif 000017
【０１１０】
[作製やり方] 
約130~140ml注射用水を取り、処方量によって卵黄レシチン、ポロキサマー(188)とグリセロールを加入して、ワーリングブレンダーの中に入れて分散し、均一の水相を作られ、40-80℃まで加熱し、.温度を保つ。
処方量によって大豆油を取り、40-80℃まで予熱し、実施例1の作製したタクソールコレステロール化合物1を量って取り、予熱の大豆油の中に溶かして、ワーリングブレンダーの中に入れて均一の油相を分散で作られる。
攪拌する条件の下で、水相を油相の中にゆっくりと加入し、10000-20000回転/ min切り取り5~10minによって、均一の初乳になり、高圧均質機の中へ迅速に移転して、6回均質を行って、全部乳液を収集し、0.1mol/L塩酸でpHを 4.0±0.5まで調節し、また水を200mlまで添加し、均等に振り、分けて入れ、115℃ 25で30分で滅菌し、それを得ることになる。 
【０１１１】
上述のテスト作製例で作製したサブマイクロエマルション剤の安定性調査と比較
テスト作製例10-2 ~テスト作製例10-8で作製したの28組サブマイクロエマルション剤とテスト作製例10-9で作製した4組サブマイクロエマルション剤を取り、それぞれ4℃条件の下に貯蔵12ヵ月間、0、6、12ヵ月でサンプリング調査し、以下のやり方によって外観、粒径、含有量および不純物の変化を考察します。 
性質と状態：視覚法は、実物の記述のサブマイクロエマルション剤の色によって表面で油滴や層間剥離現象を持つかどうかことを記録する。 
粒径：サブマイクロエマルション剤を取り， MASTER SIZER 2000レーザー粒度寸法測定器（MALVERN）を採用して粒径を測定する。 
含有量および関連物質：適量のタクソールサブマイクロエマルション剤を精密的に量っ取り、無水エタノールを入れて乳剤を破壊し、適当濃度の試験製剤を作製する。精密的に量っ取って各20μLの試験製剤をクロマトグラフに注入し、HPLC 法によってKromasil-C18(300mm×4.6mm，5μm)をクロマトグラフィーカラムとして、アセトニトリル-水(54:46)を移動相とする、流速が1.0mL/min、検出波長が230nm、カラム温度は部屋の温度で、法則に従って測定し、クロマトグラム図を記録し、ピーク面積で外部標準法によって乳剤の中で薬物の含有量を計算し、帰一法によって不純物の含有量を計算する。
測定結果：細かいことは下表のとおり。
【０１１２】
【表８】
2013509360.tif 000018
【０１１３】
本発明のステロイド化合物を中間担体として作製したサブマイクロエマルション1~サブマイクロエマルション28は、冷蔵庫(4℃)で貯蔵12ヵ月後、初期に比べて、1) 装薬量5.0mg/mlの乳剤の均一粒径は増加傾向を持っているが、層間剥離を見ない、外観や含有量ともみな著しく変化しない、不純物が増えることはあっても、2.0%を超えない;2) 装薬量4.0mg/ml乳剤は層間剥離を見ない、粒径、外観や含有量ともみな著しく変化しない、不純物が増えることはあっても、1.3%を超えない;3) 装薬量3mg/ml乳剤は層間剥離を見ない、粒径、外観や含有量ともみな著しく変化しない、不純物が1.0%を超えない;4) 装薬量は2mg / mlあるいは以下の場合、外観の性質と状態、粒径と含有量ともみな著しく変化しない、不純物が0.7%より低いレベルになることがある。
【０１１４】
参照比較のタクソール/リン脂質化合物を中間担体としてサブマイクロエマルション剤を作製する。1) 装薬量は0.5mg/mlの時で均一乳剤 (サブマイクロエマルション剤29) を形成でき、放置した6ヵ月後に外観や粒径ともみな著しく変化しない、不純物が3.0%まで増加したが、放置してから12ヵ月後の粒径が著しく増大し、不純物レベルが7%以上に達した、含有量は著しく低下し、また層間剥離と浮遊する油現象を出現する;2) 装薬量は1.0mg/mlまで増加したの時、均一乳剤(サブマイクロエマルション剤30)を形成できない、初期のときに薬物結晶と油滴が存在していることを観察できる。
【０１１５】
参照比較のタクソール/コレステロール化合物を中間担体として、装薬量が1.0mg/mlと2.0mg/mlの時で、みな均一乳剤 (サブマイクロエマルション剤31~32) を形成できる。1）放置した6ヵ月に外観や粒径と含有量ともみな著しく変化しない、不純物が高くなるが、1.5%に過ぎなかった。2) 貯蔵した12ヵ月後には、2つ装薬量の乳剤径粒が大きくなり、含有量が減少する傾向を有し、不純物がそれぞれま3.58%と4.64％まで上昇することになり、このうち装薬量2.0mg/mlの乳剤は軽度の層間剥離現象を出現する。
【図１】
2013509360.tif 000019
2013509360.tif 000020
【図２】
2013509360.tif 000021
【図３】
2013509360.tif 000022
【図４−１】
2013509360.tif 000023
【図４−２】
2013509360.tif 000024
【国際調査報告】
2013509360.tif 000025
2013509360.tif 000026
2013509360.tif 000027
2013509360.tif 000028
2013509360.tif 000029
2013509360.tif 000030