(57)【要約】本発明は，リポタイコ酸由来の糖脂質及びこれを含む薬学，食品，化粧品組成物及びワクチンアジュバントに関する。本発明によるリポタイコ酸由来の糖脂質は，炎症性サイトカインの生産を抑制することにより抗炎症効果を有するので，これを含む薬学，食品及び化粧品組成物を炎症性疾患の予防及び治療目的に使用することができ，これをワクチンアジュバントでも使用することができる。【選択図】  なし
2013502456.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α結合により結合された二重または三重ヘキソースのＣ１，Ｃ３，Ｃ４及びＣ６番の位置の中でいずれか１ヶ所以上にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和された２乃至６個のアシル鎖が結合されていることを特徴とする糖脂質。
【請求項２】
前記糖脂質は，下記の化学式(Ｉ)の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の糖脂質：
【化１６】
2013502456.tif 000021
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化１７】
2013502456.tif 000022
であり，
この時，Ｒ’は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃Ｃ３０のアルキルであり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【請求項３】
Ｒ１は，
【化１８】
2013502456.tif 000023
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項２に記載の糖脂質。
【請求項４】
Ｒ１は，
【化１９】
2013502456.tif 000024
であり，
Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいずれの一つは，
【化２０】
2013502456.tif 000025
であり，残りはヒドロキシであり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，１であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項２に記載の糖脂質。
【請求項５】
前記化学式(Ｉ)は，下記化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)であることを特 とする請求項２に記載の糖脂質：
【化２１】
2013502456.tif 000026
【化２２】
2013502456.tif 000027
【請求項６】
前記糖脂質は，乳酸菌由来であることを特徴とする請求項１に記載の糖脂質。
【請求項７】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス，ビフィドバクテリウム，ストレプトコッカスまたはラクトコッカス属であることを特徴とする請求項６に記載の糖脂質。
【請求項８】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)，ビフィドバクテリウム・ ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)，ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ) ，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)またはラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)であることを特徴とする請求項７に記載の糖脂質。
【請求項９】
アシル鎖が結合されなかったヘキソースのＣ６位置にポリグリセロールリン酸が追加で結合されたことを特徴とする請求項１に記載の糖脂質。
【請求項１０】
前記糖脂質は，下記の化学式(ＩＩ)の構造を有することを特徴とする請求項９に記載の糖脂質：
【化２３】
2013502456.tif 000028
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化２４】
2013502456.tif 000029
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン(Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ)，Ｄ−アラニン(Ｄ−ａｌａｎｉｎｅ)またはヒドロキシであり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃至Ｃ３０のアルキルであり，
ｌは，０乃至８０であり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【請求項１１】
Ｒ１は，
【化２５】
2013502456.tif 000030
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
ｌは，０乃至８０であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１２】
Ｒ１は，
【化２６】
2013502456.tif 000031
であり，
Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいすれか一つは，
【化２７】
2013502456.tif 000032
であり，残りはヒドロキシであり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
ｌは，０乃至８０であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１３】
前記化学式(ＩＩ)は，下記化学式(ＩＩ−１)または化学式(ＩＩ−２)であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質：
【化２８】
2013502456.tif 000033
【化２９】
2013502456.tif 000034
前記式において，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
ｌは，０乃至８０である。
【請求項１４】
前記糖脂質は，乳酸菌由来のリポタイコ酸であることを特徴とする請求項９に記載の糖脂質。
【請求項１５】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス，ビフィドバクテリウム，ストレプトコッカスまたはラクトコッカス属であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１６】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)，ビフィドバクテリウム・ ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)，ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)またはラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１７】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれの一項による糖脂質を含むことを特徴とする薬学組成物。
【請求項１８】
抗生剤，担体，賦形剤及び希釈剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項１９】
薬学組成物の剤形は，散剤，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，懸濁液，乳剤，シロップ，エアロゾルの経口製剤，外用剤，坐剤または滅菌注射液剤であることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項２０】
糖脂質は，薬学組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含まれることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質を含むことを特徴とする炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項２２】
炎症性疾患または免疫関連疾患は，敗血症，動脈硬化，菌血症，全身炎症反応症候群，多臓器機能不全，癌，骨粗鬆症，歯周炎，全身性｛ぜんしん せい｝エリテマトーデス，リュウマチ性関節炎，退行性関節炎，若年性慢性関節炎，脊椎関節症，全身性硬化症，特発性炎症性筋障害，シェーグレン症候群(Ｓｊｏｅｇｒｅｎ's ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，全身性脈管炎，サルコイドーシス(ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ)，自己免疫溶血性貧血，自己兔疫性血小板減少症，甲状腺炎，真性糖尿病，免疫介在性神経疾患，中枢神経系または末梢神経系の脱髄鞘疾患，特発性脱髄鞘多発性神経炎，ギラン・バレー症候群(Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，慢性炎症性脱髄鞘多発性神経炎，肝胆汁性疾患，感染性または自己兔疫性慢性活性肝炎，原発性胆汁性肝硬変，肉芽腫性肝炎，硬化性胆官炎，炎症性腸疾患(ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ)，潰瘍性大腸炎(Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ)，クローン病(Ｃｒｏｈｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，過敏性腸症候群(Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ Ｂｏｗｅｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，グルテン過敏性腸疾患，ウィップル病(Ｗｈｉｐｐｌｅ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，自己兔疫性または免疫介在性皮膚疾患，水疱性皮膚疾患多形性紅斑，接触性皮膚炎，乾癬，アレルギー性疾患，喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，飲食過敏症，蕁麻疹，肺の免疫疾患，
好酸球性肺炎，特発性肺纎維症，過敏性肺炎，移植関連疾患移植拒否または移植片対宿主疾患であることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項２３】
薬学組成物の投与形態は，経口，直腸または静脈，筋肉，皮下，子宮内硬膜または脳血管内注射であることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。 
【請求項２４】
糖脂質は，１日投与量が０.０１乃至１０,０００ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物 。
【請求項２５】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれの一項による糖脂質を含む ことを特徴とする食品組成物。
【請求項２６】
有機酸，リン酸塩，抗酸化剤，乳糖カゼイン，デキストリン，葡萄糖，砂糖及びソルビートルからなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２７】
糖脂質は，食品組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含まれることを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２８】
食品組成物の剤形は，固形，粉末，顆粒，錠剤，カプセルまたは液状形態であることを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２９】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質を含むことを特徴とする化粧品組成物。
【請求項３０】
ビタミン，アミノ酸，タンパク質，界面活性剤，乳化剤，香料，色素，安定製，防腐剤，抗酸化剤，紫外線遮断剤，ｐＨ調整剤及びキレート剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項２９に記載の化粧品組成物。
【請求項３１】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質からなるか，これを含むことを特徴とするアジュバント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，リポタイコ酸由来の糖脂質及びこれを含む薬学，食品，化粧品組成物及びワクチンアジュバントに関する。
【背景技術】
【０００２】
リポタイコ酸(ＬＴＡ：Ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ  ａｃｉｄ)はグラム陽性菌の細胞壁成分の中の一つである。一般的に，リポタイコ酸は，グルコースまたはＤ−アラニン置換剤を有するポリグリセロールリン酸(Ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ)及び糖単位と脂肪酸鎖を含む糖脂質の二つの構造体に区分され，この中でポリグリセロールリン酸のＤ−アラニン含量によってＴＮＦ−αのような炎症性サイトカインの発現が調節されると知られている(非特許文献１)。
【０００３】
特に，スタフィロコッカス・アウレウス (Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ)から分離したＬＴＡ(ａＬＴＡ)の場合，グラム陽性菌から敗血症を誘発する物質として知られているが，ａＬＴＡは大食細胞のような兔疫細胞のＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ２(ＴＬＲ２)と細胞膜連関性ＣＤ１４により認知されてＮＦ−κＢ及びＭＡＰキナーゼの活性を通じた炎症性サイトカインの発現増加を誘導する。
【０００４】
しかし，乳酸菌であるラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)から分離したＬＴＡの場合，ａＬＴＡとは異なる免疫活性を有している(非特許文献２)。すなわち，ａＬＴＡは兔疫細胞から過度な炎症反応を誘導するが，ラクトバチルスから分離したＬＴＡは兔疫細胞の炎症反応を抑制する作用をする。このようなＬＴＡの免疫活性の差は二つのＬＴＡの構造的な差に起因することが知られており，したがって，ＬＴＡの構造を分析することはＬＴＡの機能を究明して免疫活性を調節することにおいて非常に重要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍｏｒａｔｈ, Ｓ., Ａ. Ｇｅｙｅｒ, ｅｔａｌ. ２００１, Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ. Ｊ. Ｅｘｐ. Ｍｅｄ. １９３:３９３−３９７
【非特許文献２】ｄｅ Ｖｏｓ, Ｗ. Ｊ. ２００５. Ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ: Ｄ−ａｌａｎｉｎｅ ｍａｋｅｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ. Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ １０２ (３１):１０７６３−４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は，抗炎症効果を有する糖脂質及びこれを含む薬学，食品，化粧品組成物及びワクチンアジュバントを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成するため，本発明は，リポタイコ酸由来の糖脂質及びこれを含む薬学，食品，化粧品組成物及びワクチンアジュバントを提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によるリポタイコ酸由来の糖脂質は，炎症性サイトカインの生産を抑制することにより抗炎症効果を有するので，これを含む薬学，食品及び化粧品組成物を炎症性疾患の予防及び治療を目的として使用することができ，これをワクチンアジュバントとしても使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】Ｌ. ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＴＡの１Ｈ，１３Ｃ及び２Ｄ−ＮＭＲスペクトラムを示す。
【図２】Ｌ. ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＴＡのＣＯＳＹスペクトラムを示す。
【図３】Ｌ. ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＴＡのＨＭＱＣスペクトラムを示す(Ａ：オレフィン炭素に結合されたα-メチレンとメテレン，Ｂ：α−Ｄ−ガラクトースとα−Ｄ−グルコースのアノマー陽性子)。
【図４】ＬＴＡ加水分解物のＧＣ/ＭＳ分析結果を示す。
【図５】ＬＴＡ糖脂質のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳスペクトラムを示す(Ａ：Ｓ. ａｕｒｅｕｓ，Ｂ：Ｌ. ｐｌａｎｔａｒｕｍ)。
【図６】(Ａ)ａＬＴＡ及び(Ｂ)ｐＬＴＡのＩｎｔａｃｔ糖脂質及びＯ−アセチル化された糖脂質のＭＡＬＤＩ-ＴＯＦＭＳスペクトラムを示す。
【図７】ｐＬＴＡの糖脂質構造を示す。
【図８】ｐＬＴＡ糖脂質の質量を分析した表を示す。
【図９】(Ａ)ａＬＴＡ糖脂質及び(Ｂ)ｐＬＴＡ糖脂質のＬＴＱ-Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＦＴＭＳスペクトラムを示す。
【図１０】ＬＴＡ糖脂質の陰イオンＣＩＤスペクトラムを示す(Ａ：ジヘキソシル−ジアシル−グリセロール，Ｂ：トリヘキソシル−ジアシル−グリセロール)。
【図１１】ａＬＴＡ糖脂質の質量を分析した表 を示す。
【図１２】ａＬＴＡの脱アシル化された糖脂質のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳスペクトラムを示す(Ａ：Ｉｎｔａｃｔ糖脂質，Ｂ：ＮａＯＨ処理した糖脂質，Ｃ：Ｃａ(ＯＨ)２ 処理した糖脂質)。
【図１３】ｐＬＴＡ，ｄＬＴＡ，ｒＬＴＡ及びｓＬＴＡの糖脂質部位に対するＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析結果を示す。
【図１４】Ｉｎｔａｃｔ ａＬＴＡとｐＬＴＡ，これらから由来した糖脂質及びポリグリセロールリン酸のＴＮＦ−α発現誘導実験結果を示す。
【図１５】Ｉｎｔａｃｔ ａＬＴＡ，ｄｅ−ａｌａｎｉｎｅ ａＬＴＡ及びｄｅ−ａｃｙｌ ａＬＴＡの ＴＮＦ−α発現抑制実験結果を示す。
【図１６】Ｉｎｔａｃｔ ｐＬＴＡ，ｄｅ−ａｌａｎｉｎｅ ｐＬＴＡ及びｄｅ−ａｃｙｌ ｐＬＴＡのＴＮＦ−α発現抑制実験結果を示す。
【図１７】ｐＬＴＡ由来の糖脂質を前処理した細胞でＴＮＦ−αの発現が減少することを示す。
【図１８】相異なるＬＴＡから分離した糖脂質のＴＮＦ−αの発現抑制効果を示す。
【図１９】ｐＬＴＡ処理によるＳ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカン−誘導ＴＮＦ−α及びＩＬ−1βの発現抑制効果を示す(Ａ：ＴＮＦ−αの発現測定，Ｂ：ＩＬ−１βの発現測定，Ｃ：ポリミキシンＢ処理後のＴＮＦ−αの発現測定)。
【図２０】Ｓ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカン−誘導炎症反応において，ｐＬＴＡ処理による(Ａ)ＮＯＤ２ ｍＲＮＡの発現量の変化，(Ｂ)ＮＯＤ２タンパク質の発現量の変化，及び(Ｃ)ＮＦ−κＢの活性変化を示す。
【図２１】Ｓ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカン−誘導炎症反応において，ｐＬＴＡ処理によるＴＮＦ−αの発現変化を測定した結果を示す(Ａ：コントロールｓｉＲＮＡを形質転換させたＴＨＰ−１細胞，Ｂ：ＴＬＲ２ ｓｉＲＮＡを形質転換させたＴＨＰ−１細胞，Ｃ：正常マウスから分離したＢＭＭ，Ｄ：ＴＬＲ２ノックアウトマウスから分離したＢＭＭ)。
【図２２】ｐＬＴＡ処理によるＭＡＰキナーゼ及びＮＦ−κＢの活性の変化を示す(Ａ：ｐｈｏｓｐｈｏｒ−ＥＲＫ及びｐｈｏｓｐｈｏｒ−ＳＡＰＫ/ＪＮＫ活性，Ｂ：ＩκＢ−α分解活性，Ｃ：免疫蛍光染色法によるＮＦ−κＢ活性測定)。
【図２３】ＰＢＳまたはｐＬＴＡを腹腔注射した敗血症誘発マウスの(Ａ)生存率及び(Ｂ)血液内のＴＮＦ−αの含有量を示す。
【図２４】ｐＬＴＡの処理による(Ａ)ＤＮＣＢ−誘発アトピーマウスの皮膚病変及び(Ｂ)皮膚組織内のＩＬ−４分布を示す。
【図２５】ｒＬＴＡを前処理した細胞においてＴＮＦ−αの発現が減少することを示す。
【図２６】多様なＬＴＡのＴＮＦ−αの発現抑制効果 を示す。
【図２７】特定の信号抑制剤処理による多様なＬＴＡのＴＮＦ−αの発現抑制効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
乳酸菌由来のリポタイコ酸は炎症性サイトカインの発現を抑制する抗炎症活性を誘導する。本発明者らは，本発明を通じて乳酸菌であるラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)由来のリポタイコ酸(ｐＬＴＡ)が炎症反応を誘導するａＬＴＡとは異なる糖脂質構造を有することを知見した。特に，ｐＬＴＡ自体だけではなく，ｐＬＴＡのポリグリセロールリン酸部分を除去した糖脂質部分だけでも炎症性サイトカインの発現を抑制する抗炎症効果があることを証明することで本発明を完成した。すなわち，ｐＬＴＡの糖脂質構造を基礎としてこれと類似な多様な糖脂質変異体を製造することにより，抗炎症効果を有する多様な糖脂質変異体を効果的に活用することができる。
【００１１】
本発明は，α結合により結合された二重または三重ヘキソースのＣ１，Ｃ３，Ｃ４及びＣ６番位置の中でいずれか１ヶ所以上にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和された２乃至６個のアシル鎖が結合されている糖脂質を提供する。
【００１２】
この時，前記ヘキソースは，グルコース，ガラクトース，マンノースまたはフルクトースであり，好ましくは，グルコースまたはガラクトースである。
【００１３】
好ましくは，前記糖脂質は，一つ以上の不飽和されたアシル鎖を含む。
【００１４】
本発明の一つの具体的な例において，前記糖脂質は，下記化学式(Ｉ)の構造を有する糖脂質である。
【００１５】
【化１】
2013502456.tif 000003
【００１６】
前記式において，Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，または，下記の式である。
【００１７】
【化２】
2013502456.tif 000004
【００１８】
この時，Ｒ’は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。ｎは，０または１であり，Ｃｍは，Ｃ４乃至Ｃ３０のアルキル，具体的には，Ｃ６乃至Ｃ２６のアルキルまたはＣ１０乃至Ｃ２４のアルキルである。前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６，具体的には，２乃至４または２乃至３である。
【００１９】
より具体的に，前記化学式(Ｉ)において，Ｒ１は下記の式である。
【００２０】
【化３】
2013502456.tif 000005
【００２１】
この時，Ｒ'は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシであり，ｎは，１であり，１乃至１４個の二重結合，具体的には，１乃至１０個の二重結合，１乃至８個の二重結合，１乃至６個の二重結合，１乃至４個の二重結合，１乃至３個の二重結合または１乃至２個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含む。
【００２２】
また，具体的に，前記化学式(Ｉ)において，Ｒ１は，下記の式である。
【００２３】
【化４】
2013502456.tif 000006
【００２４】
この時，Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいずれか一つは，下記の式であり，残りはヒドロキシである。
【００２５】
【化５】
2013502456.tif 000007
【００２６】
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。ｎは，１であり，１乃至１４個の二重結合，具体的には，１乃至１０個の二重結合，１乃至８個の二重結合，１乃至６個の二重結合，１乃至４個の二重結合，１乃至３個の二重結合または１乃至２個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含む。
【００２７】
例えば，前記化学式(Ｉ)の糖脂質は，下記化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)の構造を有する糖脂質である。
【００２８】
【化６】
2013502456.tif 000008
【００２９】
【化７】
2013502456.tif 000009
【００３０】
この時，前記化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)に示した二重結合の位置は変わることができる。
【００３１】
本発明の他の具体的な例において，前記糖脂質は乳酸菌由来の糖脂質であり，前記乳酸菌は，これに制限されるのではないが，ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)，ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)，ストレプトコッカス(ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)またはラクトコッカス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ)属である。ラクトバチルスは，例えば，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)であり，ビフィドバクテリウムは，例えば，ビフィドバクテリウム・
ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)，ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)であり，ストレプトコッカスは，例えば，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)であり，ラクトコッカスは，例えば，ラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)である。
【００３２】
リポタイコ酸(ＬＴＡ)の中で構造が一番よく知られているはストレプトコッカス・アウレウス(Ｓ. ａｕｒｅｕｓ)のＬＴＡ(ａＬＴＡ)である。病原性微生物であるＳ.
ａｕｒｅｕｓ由来のａＬＴＡは，免疫増強活性を誘導して炎症性サイトカインの発現を増加させる。下記化学式(ＩＩＩ)に示したように，ａＬＴＡの主鎖(Ｂａｃｋｂｏｎｅ)は二つのグルコースがβ結合により結合されているゲンチオビオース(Ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ)[β１→６結合]として知られており，グルコースのＣ６と１,３−ホスホジエステル結合されたポリグリセロールリン酸鎖が結合されている。また，平均１５個の炭素を有する二つの飽和脂肪酸鎖(Ｃ１５：０)がエステル結合によりグルコースのＣ１に結合されている。
【００３３】
【化８】
2013502456.tif 000010
【００３４】
一方，乳酸菌であるｐＬＴＡ由来のリポタイコ酸は，炎症性サイトカインの発現を抑制する抗炎症活性を誘導する。本発明により明らかにしたｐＬＴＡ糖脂質の構造は，α結合により結合された三つのヘキソースを主鎖で有し，脂肪酸アシル鎖が結合されているヘキソースの反対側の末端ヘキソースのＣ６位置に，１,３−ホスホジエステル結合されたポリグリセロールリン酸鎖が結合されていることを特徴とする。また，ｐＬＴＡの糖脂質は，一番目のヘキソースのＣ１またはＣ６位置に二つまたは三つの脂肪酸アシル鎖がエステル結合により結合されていることを特徴とする。ｐＬＴＡ由来の糖脂質は，具体的には，化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)の構造を有することができ，前記化学式において，二重結合の位置は変更可能である。化学式(Ｉ−１)は，ヘキソースのＣ１位置に炭素数１８の飽和脂肪酸アシル鎖(Ｃ１８：０)と炭素数１８の不飽和脂肪酸アシル鎖(Ｃ１８：２)とが結合されているｐＬＴＡのグループＩ糖脂質を示す。化学式(Ｉ−２)は，前記化学式(Ｉ−１)の糖脂質のヘキソースのＣ６位置に炭素数１６の飽和脂肪酸鎖(Ｃ１６：０)を追加で含むことで，ｐＬＴＡのグループＩＩ糖脂質を示す。ヘキソースの結合，脂肪酸鎖の数，これらの結合位置，炭素数，及び不飽和脂肪酸の有無は，ＴＬＲ２がリポタイコ酸を認知するにあって重要な役割をする。したがって，このような構造的特性がＬＴＡの抗炎症活性を誘導する重要な要因になる。
【００３５】
従来，リポタイコ酸のポリグリセロールリン酸のＤ−アラニン含量によって，ＴＮＦ−αのような炎症性サイトカインの発現が調節されると知られているが，下記実施例によれば，ｐＬＴＡの場合，ポリグリセロールリン酸のＤ−アラニンより脂肪酸アシル鎖を含む糖脂質構造体のほうが，炎症性サイトカインの発現調節において一層重要な役割をすることが分かった。本発明者らは，ｐＬＴＡ由来の糖脂質がそれ自体で炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの発現を抑制することで抗炎症効果を有することを突き止めた。ｐＬＴＡ由来の糖脂質以外にもｐＬＴＡと類似した構造を有するラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌ. ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)由来のｒＬＴＡ及びラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌ. ｄｅｌｂｒｅｕｋｉｉ)由来のｄＬＴＡの場合も同様に糖脂質部分だけで炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの発現を抑制することで抗炎症効果を有することを確認した。
【００３６】
また，本発明は，アシル鎖が結合されているヘキソースの反対側末端ヘキソースのＣ６位置にポリグリセロールリン酸が追加で結合された糖脂質を提供する。
【００３７】
本発明の一つの具体的な例において，前記糖脂質は，下記化学式(ＩＩ)の構造を有する糖脂質である。
【００３８】
【化９】
2013502456.tif 000011
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，または，下記の式である。
【００３９】
【化１０】
2013502456.tif 000012
【００４０】
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン(Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ)，Ｄ−アラニン(Ｄ−ａｌａｎｉｎｅ)またはヒドロキシである。ｎは，０または１であり，Ｃｍは，Ｃ４乃至Ｃ３０のアルキル，具体的には，Ｃ６乃至Ｃ２６のアルキルまたはＣ１０乃至Ｃ２４のアルキルである。ｌは，０乃至８０，具体的には，０乃至６０，０乃至４０，または０乃至２０である。前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６，具体的には，２乃至４，または２乃至３である。
【００４１】
具体的に，前記化学式(ＩＩ)において，Ｒ１は，下記の式である。
【００４２】
【化１１】
2013502456.tif 000013
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシである。ｎは，１であり，ｌは，０乃至８０，具体的には，０乃至６０，０乃至４０，または０乃至２０であり，１乃至１４個の二重結合，具体的には，１乃至１０個の二重結合，１乃至８個の二重結合，１乃至６個の二重結合，１乃至４個の二重結合，１乃至３個の二重結合または１乃至２個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含む。
【００４３】
また，具体的に，前記化学式(ＩＩ)において，Ｒ１は，下記の式である。
【００４４】
【化１２】
2013502456.tif 000014
この時，Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいずれの一つは，下記の式であり，残りはヒドロキシである。
【００４５】
【化１３】
2013502456.tif 000015
【００４６】
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖，具体的には，Ｃ１４乃至Ｃ２６の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２４の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２２の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１４乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖，Ｃ１６乃至Ｃ２０の飽和または不飽和されたアシル鎖，またはＣ１６乃至Ｃ１８の飽和または不飽和されたアシル鎖である。Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシである。ｎは，１であり，ｌは，０乃至８０，具体的には，０乃至６０，０乃至４０，または０乃至２０であり，１乃至１４個の二重結合，具体的には，１乃至１０個の二重結合，１乃至８個の二重結合，１乃至６個の二重結合，１乃至４個の二重結合，１乃至３個の二重結合または１乃至２個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含む。
【００４７】
例えば，前記化学式(ＩＩ)は，下記化学式(ＩＩ−１)または化学式(ＩＩ−１)である。
【００４８】
【化１４】
2013502456.tif 000016
【００４９】
【化１５】
2013502456.tif 000017
【００５０】
前記式において，Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，ｌは，０乃至８０，具体的には，０乃至６０，０乃至４０または０乃至２０である。
【００５１】
また，前記化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)に示した二重結合の位置は変更可能である。
【００５２】
本発明の一つの具体的な例において，ポリグリセロールリン酸が追加で結合された糖脂質は，乳酸菌由来のリポタイコ酸であり，前記乳酸菌は，これに制限されるものではないが，ラクトバチルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)，ビフィドバクテリウム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)，ストレプトコッカス(ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ)またはラクトコッカス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ)の属である。ラクトバチルスは，例えば，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)であり，ビフィドバクテリウムは，例えば，ビフィドバクテリウム・
ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)， ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)であり，ストレプトコッカスは，例えば，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)であり，ラクトコッカスは，例えば，ラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)である。
【００５３】
また，本発明は，前記糖脂質を含む薬学組成物を提供する。
【００５４】
本発明による糖脂質は，下記実施例を通じて分かるように，耐性毒素ＬＰＳ刺激によるＮＦ−kＢの活性及びＩｋＢ−αの分解を抑制してＴＬＲ２の発現を抑制することで，炎症性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＬ−８の発現を抑制する抗炎症効果を有する。
【００５５】
本発明による糖脂質を含む薬学組成物は，通常的な方法によって，散剤，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，懸濁液，乳剤，シロップ，エアロゾルの経口製剤，外用剤，坐剤または滅菌注射液剤の形態で剤形化して使用することができ，薬学組成物の製造に通常的に使用する適切な抗生剤，担体，賦形剤及び希釈剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤をさらに含む。
【００５６】
具体的に，担体，賦形剤及び希釈剤では，ラクトース，デキストロース，スクロース，ソルビトール，マンニトール，キシリトール，エリスリトール，マルチトール，澱粉，アカシアゴム，アルギン酸，ゼラチン，リン酸カルシウム，ケイ酸カルシウム，セルロース，メチルセルロース，マイクロクリスタリンセルロース，ポリビニルピロリドン，水，メチルヒドロキシベンゾエート，プロピルヒドロキシベンゾエート，タルク，ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油を使用することができ，製剤化する場合には，一般的に使用する充填剤，増量剤，結合剤，湿潤剤，崩壊剤，界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤することができる。経口投与のための固形製剤には，錠剤，丸剤，散剤，顆粒剤，カプセル剤などが含まれ，このような固形製剤は，前記抽出物に少なくとも一つ以上の賦形剤，例えば，澱粉，炭酸カルシウム，スクロースまたはラクトース，ゼラチンなどを混ぜて調剤することができる。また，単純な賦形剤の以外に，ステアリン酸マグネシウム，タルクのような潤滑剤も使用できる。経口のための液状製剤では，懸濁液，内用液剤，乳剤，シロップ剤などがあり，よく使われる単純希釈剤である水，流動パラフィン以外にさまざまな賦形剤，例えば湿潤剤，甘味剤，芳香剤，保存剤などが含まれる。非経口投与のための製剤には，滅菌された水溶液，非水性溶剤，懸濁剤，乳剤，凍結乾燥製剤，坐剤などが含まれる。非水性溶剤，懸濁剤では，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール，オリーブオイルのような植物性油，オレイ酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤の基剤では，ウィテップゾール(ｗｉｔｅｐｓｏｌ)，マクロゴ−ル, ツイーン(ｔｗｅｅｎ)６１，カカオ脂，ラウリン脂，グリセロールゼラチンなどを使用することができる。
【００５７】
本発明による薬学組成物において糖脂質は，薬学組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部，０.１乃至９０重量部，１乃至８０重量部，または１０乃至８０重量部で含むことができるが，これに制限されるのではなく，患者の状態，疾患の種類及び進行程度によって変更することができる。
【００５８】
本発明による糖脂質は，抗炎症活性を有する炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療に使用することができる。したがって，本発明は前記糖脂質を含む炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物，炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用医薬の製造のための前記糖脂質の用途及び治療上有効量の糖脂質を対象体に投与する段階を含む炎症性疾患の予防及び治療方法を提供する。
【００５９】
具体的に，前記炎症性疾患または免疫関連疾患には，敗血症，動脈硬化，菌血症，全身炎症反応症候群，多臓器機能不全，癌，骨粗鬆症，歯周炎，全身性｛ぜんしん せい｝エリテマトーデス，リュウマチ性関節炎，退行性関節炎，若年性慢性関節炎，脊椎関節症，全身性硬化症，特発性炎症性筋障害，シェーグレン症候群(Ｓｊｏｅｇｒｅｎ's ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，全身性脈管炎，サルコイドーシス(ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ)，自己免疫溶血性貧血，自己兔疫性血小板減少症，甲状腺炎，真性糖尿病，免疫介在性神経疾患，中枢神経系または末梢神経系の脱髄鞘疾患，特発性脱髄鞘多発性神経炎，ギラン・バレー症候群(Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，慢性炎症性脱髄鞘多発性神経炎，肝胆汁性疾患，感染性または自己兔疫性慢性活性肝炎，原発性胆汁性肝硬変，肉芽腫性肝炎，硬化性胆官炎，炎症性腸疾患(ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ)，潰瘍性大腸炎(Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ)，クローン病(Ｃｒｏｈｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，過敏性腸症候群(Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ Ｂｏｗｅｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，グルテン過敏性腸疾患，ウィップル病(Ｗｈｉｐｐｌｅ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，自己兔疫性または免疫介在性皮膚疾患，水疱性皮膚疾患多形性紅斑，接触性皮膚炎，乾癬，アレルギー性疾患，喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，飲食過敏症，蕁麻疹，肺の免疫疾患，好酸球性肺炎，特発性肺纎維症，過敏性肺炎，移植関連疾患移植拒否または移植片対宿主疾患などがある。
【００６０】
本発明の一つの具体的な例において，前記糖脂質は，経口，直腸または静脈，筋肉，皮下，子宮内硬膜または脳室内(ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ)注射により対象体に投与することができる。
【００６１】
本発明による糖脂質の投与量は，患者の状態及び体重，疾患の種類及び程度，薬物形態，投与経路及び期間によって変更可能であり，当業者が適切に選択することができる。しかし，１日投与量は，０.０１乃至１０,０００ｍｇ/ｋｇ，具体的には，０.１乃至１０,０００ｍｇ/ｋｇ，より具体的には，０.１乃至１,０００ｍｇ/ｋｇであることが好ましい。投与は，一日一回投与するか数回に分けて投与することができ，これによって本発明の範囲が制限されるのではない。
【００６２】
本発明において，「対象体」とは，人間，オランウータン，チンパンジー，マウス，ラット，犬，牛，ニワトリ，豚，山羊，羊などを含むが，これらの例に限定されるのではない。
【００６３】
また，本発明は前記糖脂質を含む食品組成物を提供する。前記食品組成物は，敗血症，動脈硬化，菌血症，全身炎症反応症候群，多臓器機能不全，癌，骨粗鬆症，歯周炎，全身性｛ぜんしん せい｝エリテマトーデス，リュウマチ性関節炎，退行性関節炎，若年性慢性関節炎，脊椎関節症，全身性硬化症，特発性炎症性筋障害，シェーグレン症侯群(Ｓｊｏｅｇｒｅｎ's ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，全身性脈管炎，サルコイドーシス(ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ)，自己免疫溶血性貧血，自己兔疫性血小板減少症，甲状腺炎，真性糖尿病，免疫介在性神経疾患，中枢神経系または末梢神経系の脱髄鞘疾患，特発性脱髄鞘多発性神経炎，ギラン・バレー症候群(Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，慢性炎症性脱髄鞘多発性神経炎，肝胆汁性疾患，感染性または自己兔疫性慢性活性肝炎，原発性胆汁性肝硬変，肉芽腫性肝炎，硬化性胆官炎，炎症性腸疾患(ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ)，潰瘍性大腸炎(Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ)，クローン病(Ｃｒｏｈｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，過敏性腸症候群(Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ Ｂｏｗｅｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，グルテン過敏性腸疾患，ウィップル病(Ｗｈｉｐｐｌｅ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，自己兔疫性または免疫介在性皮膚疾患，水疱性皮膚疾患多形性紅斑，接触性皮膚炎，乾癬，アレルギー性疾患，喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，飲食過敏症，蕁麻疹，肺の免疫疾患，好酸球性肺炎，特発性肺纎維症，過敏性肺炎，移植関連疾患移植拒否または移植片対宿主疾患などの炎症性疾患，または免疫関連疾患の予防及び治療効果がある機能性食品及び一般食品の製造に使用することができる。
【００６４】
本発明の一つの具体的な例において，前記食品組成物は，これに制限されるものではないが，有機酸，リン酸ナトリウム，抗酸化剤，乳糖カゼイン，デキストリン，葡萄糖，砂糖及びソルビートルからなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことができる。有機酸は，これに制限されるのではないが，クエン酸，フマル酸，アジピン酸，乳酸またはりんご酸であり，リン酸塩は，これに制限されるものではないが，リン酸ナトリウム，リン酸カリウム，酸性｛さんせい｝ピロリン酸ナトリウムまたはポリリン酸ナトリウム(重合リン酸ナトリウム)であり，抗酸化剤は，これに制限されるものではないが，ポリフェノール，カテキン，α−トコフェロール，ローズマリー抽出物，甘草抽出物，キトサン，タンニン酸またはフィチン酸などの天然抗酸化剤である。
【００６５】
本発明において，糖脂質は，食品組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含むことができ，具体的には，１乃至９０重量部または３０乃至８０重量部で含まれる。
【００６６】
また，本発明の一つの具体的な例において，食品組成物の剤形は，これに制限されるものではないが，固形，粉末，課粒，錠剤，カプセルまたは液状形態である。
【００６７】
本発明による糖脂質を含む食品組成物は，これに制限されるものではないが，菓子類，糖類，アイスクリーム製品類，乳加工品，食肉製品，魚肉製品，豆腐類または寒天類，食用油脂類，麺類，茶類，飲料類，特殊栄養食品，健康補助食品，調味食品，氷，人参製品類，キムチづけ食品，干し肉類，果物，野菜，果物または野菜の乾燥製品，切断製品，果物ジュース，野菜ジュース，これらの混合ジュース，チップス類，麺類，畜産加工食品，水産加工食品，乳加工食品，発酵類食品，豆類食品，穀類食品，微生物発酵食品，製菓製パン，味付け類，肉加工類，酸性飲料水，甘草類，ハーブ類などの食品製造に使用することができる。前記食品の形態は，これに制限されるものではないが，固形，粉末，顆粒，錠剤，カプセル，液状または飲料形態を含む。
【００６８】
本発明の他の具体的な例において，前記糖脂質を含む組成物を健康機能食品の製造に使用する場合には，全体食品重量の０.０１乃至１５重量％で使用することができ，飲料の製造に使用する場合には，全体飲料重量の０.０２乃至１０重量％，または０.３乃至１ 重量％で使用することができる。
【００６９】
本発明による食品組成物には，前記糖脂質の以外にもさまざまな栄養剤，ビタミン，鉱物(電解質)，合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤，着色剤及び増進剤(チーズ，チョコレートなど)，ペクト酸及びその塩，アルギン酸及びその塩，有機酸，保護性コロイド増粘剤，ｐＨ調節剤，安定化剤，防腐剤，グリセリン，アルコール，炭酸飲料に使われる炭酸化剤などを添加することができる。また，本発明による食品組成物には，天然果物ジュース，果物ジュース飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を添加することができる。このような添加剤の割合は，これに制限されるものではないが，一般的に本発明の組成物１００重量部当たり０乃至約２０
重量部の範囲で選択する。
【００７０】
また，本発明は，前記糖脂質を含む化粧品組成物を提供する。
【００７１】
本発明において，糖脂質は，化粧品組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含むことができ，具体的には，１乃至９０重量部または３０乃至８０重量部で含むことができる。
【００７２】
本発明による化粧品組成物が使われる化粧品は，その剤形において，これに限定されるものではないが，例えば，柔軟化粧水，栄養化粧水，マッサージクリーム，栄養クリーム，パック，ジェル，エッセンス，リップスティック，メーキャップベース，ファウンデーション，ローション，軟膏，ゲル，クリーム，クレンジング，洗顔剤，せっけん，シャンプー，リンス，トリートメント及び美容液などを含む。このような化粧品は，水性ビタミン，油性ビタミン，高分子ペプチド，高分子多糖，スフィンゴ脂質などの通常の成分を含むことができ，これは当業者に広く知られた技術によって容易に製造できる。
【００７３】
また，前記成分とともに化粧品に通常使用される添加剤，例えば，ビタミン，アミノ酸，タンパク質，界面活性剤，乳化剤，香料，色素，安定剤，防腐剤，抗酸化剤，紫外線遮断剤，ｐＨ調整剤及びキレート剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことができる。
【００７４】
また，本発明は，前記糖脂質からなるか，それを含むワクチンアジュバントを提供する。
【００７５】
本発明による糖脂質は多様な目的で利用することができる。その一つの好ましい用途は，免疫原性ポリヌクレオチド(ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ)，ポリペプチド，抗体，Ｔ−細胞，または抗原−提供細胞(ＡＰＣ)を含む医薬組成物用の免疫刺激剤またはアジュバントとして使用されることである。
【００７６】
アジュバントワクチンは，より早い抗体形成を誘導することで抗原に対する免疫反応を強化させる気質を意味する。本発明による糖脂質は，炎症性サイトカインの発現に影響を与えるだけではなく，付着分子(ａｄｈｅｒｅｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌｅ)の発現など免疫作用にも影響を与えることで，抗原に対する免疫反応を増加させることができる。また，それ自体として免疫原性(ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ)がないためワクチンアジュバントで使用することができる。
【００７７】
本発明による糖脂質が刺激できる一つの免疫反応はＴｈ１またはＴｈ２類型であり，したがって，本発明によるアジュバントは，Ｔｈ１またはＴｈ２類型の免疫反応を優占的に誘導するようにデザインすることができる。高濃度のＴｈ１−類型サイトカイン(例えば，ＴＮＦ−α，ＩＦＮ−Ｎ−γ，ＩＬ−２及びＩＬ−１２)は，投与された抗原に対する細胞媒介された免疫反応の誘導を助力する傾向がある。対照的に，高濃度のＴｈ２−類型サイトカイン(例えば，ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−６，ＩＬ−１０及びＴＮＦ−β)は，体液性免疫反応の誘導を助力する傾向がある。本発明による糖脂質を含むワクチンを適用した患者は，Ｔｈ１−及びＴＨ２−類型の反応を含む免疫反応を維持することができる。反応が主にＴｈ１−類型である場合，Ｔｈ１−類型サイトカインの濃度はＴｈ２−類型サイトキンの濃度より大きく増加する。これらサイトカインの濃度は，標準分析法を利用して容易に評価できる。サイトカインファミリーの調査のために文献[Ｍｏｓｍａｎｎ ａｎｄ Ｃｏｆｆｍａｎ, Ａｎｎ. Ｒｅｖ. Ｉｍｍｕｎｏｌ. ７:１４５−１７３，１９８９]を参照することができる。また，(ＣｐＧディヌクレオチドが非メチル化された)ＣｐＧ−含有オリゴヌクレオチドが主にＴｈ１反応を誘導するが，このようなオリゴヌクレオチドはよく知られており，例えば，ＷＯ１９９６/０２５５５号公報に記述されている。
【００７８】
好ましくは，優勢なＴｈ１またはＴｈ２類型反応を誘導するために使用するアジュバントは，アルミン酸塩と一緒に前記糖脂質を含む。
【００７９】
以下，本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。下記実施例は，本発明の内容を例示するのみで，本発明の範囲が下記実施例に限定されるのではない。本発明の実施例は，当業界で平均的な知識を有した者に本発明をより詳細に説明するために提供されるものである。
【００８０】
<実験例>
下記実験例は，本発明による各々の実施例に共通的に適用される実験例を提供するものである。
【００８１】
ＬＴＡ及びＬＴＡ由来糖脂質とポリグリセロールリン酸の分離・精製
ＬＴＡの分離は，既存に報告された(Ｍｏｒａｔｈ, Ｓ., Ａ. Ｇｅｙｅｒ, ｅｔ ａｌ. ２００１. Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ
ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ. Ｊ. Ｅｘｐ. Ｍｅｄ. １９３(３):３９３−7.)方法を参考して実行した。１００ｇの細胞(ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ)を０.１Ｍクエン酸ナトリウムバッファー(ｐＨ４.７)４００ｍｌで懸濁させた後，超音波処理して細胞を破砕した。同量のｎ−ブタノールを添加して３０分間混ぜた後，遠心分離を通じてＬＴＡが含まれた収容層を分離した。１５％ｎ−プロパノールと０.１Ｍクエン酸ナトリウムバッファー(ｐＨ４.７)を添加してＬＴＡ切片を分離した後，半透過膜を利用して透析した。以後，オクチル−セファロースカラムＣＬ−４Ｂ(２.５ｃｍ x１０ｃｍ)を利用した疎水性相互作用クロマトグラフィーを実行した。１５％ｎ−プロパノールと０.１Ｍ酢酸ナトリウムバッファー(ｐＨ４.７)が含まれたバッファー２００ｍｌを利用してカラムを清浄した後，３００ｍｌの溶出バッファー(３５％ｎ−プロパノール，０.１Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ４.７)を利用してＬＴＡを採集した。ＬＴＡが含まれた切片は，さらにＤＥＡＥ−セファロースイオン交換クロマトグラフィー(１.５ｃｍｘ１０ｃｍ)のために平衡バッファー(３０％ｎ−プロパノール，０.１Ｍアセテートバッファー，ｐＨ４.７)を添加した後カラムに充填した。３００ｍｌの一連のＮａＣｌ(０〜１Ｍ)が含まれた平衡バッファーを利用してＬＴＡを採集した。
【００８２】
ＬＴＡ由来糖脂質の分離は，３０ｍｇのＩｎｔａｃｔ
ＬＴＡを５００ｍｌの９８％(ｖ/ｖ)酢酸水溶液に溶かした後，３０分間超音波処理して１００℃で３時間の間加熱して実行した。ｖａｃｕｕｍを利用して溶媒を除去した後，クルロロホルム/メタノール/水(１：１：０.９， ｖ/ｖ/ｖ)を利用して糖脂質を分離した。糖脂質は有機層から抽出し，ポリグリセロールリン酸は溶媒層から抽出した。
【００８３】
核磁気共鳴(ＮＭＲ)分光法
ＮＭＲ実験は，ｘ，ｙ，ｚ−ｓｈｉｅｌｄｅｄ ｇｒａｄｉｅｎｔ
ｔｒｉｐｌｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅプローブまたはｚ−ｓｈｉｅｌｄｅｄ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｔｒｉｐｌｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｃｒｙｏプローブを備えているＡｖａｎｃｅ−６００ＭＨｚとＡｖａｎｃｅ−８００ＭＨｚ高解像度ＮＭＲ分光器を使用した。１０ｍｇのＬＴＡを０.５ｍｌの２Ｈ２Ｏ溶液に溶かした。２Ｈ２Ｏは基準信号(４.７５ｐｐｍ，１Ｈ)で使用した。Ｈｏｍｏｎｕｃｌｅａｒ ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔは，ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ(ＣＯＳＹ)，ｄｏｕｂｌｅ−ｑｕａｎｔｕｍ ｆｉｌｔｅｒｅｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ(ＤＱＦ−ＣＯＳＹ)，ｔｏｔａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ(ＴＯＣＳＹ)，ｒｏｔａｔｉｎｇ ｆｒａｍｅ
Ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ(ＲＯＳＥＹ)スペクトラムから得た。１３Ｃａｓｓｉｇｎｍｅｎｔは，ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｑｕａｎｔｕｍ
ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ(ＨＭＱＣ)とｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｂｏｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ(ＨＭＢＣ)実験に基礎した。すべてのスペクトラムは３００Ｋで記録し，ＮＭＲデータはｐｒｏｇｒａｍｓ
ｎｍｒＰｉｐｅ２８を利用して処理しＳｐａｒｋｙを使用して視覚化した。
【００８４】
糖脂質のマイルドアルカリ加水分解(Ｍｉｌｄ ａｌｋａｌｉｎｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ)
糖脂質ｍｉｌｄ ａｌｋａｌｉ−ｌａｂｉｌｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔを結晶するために５０μgの試料を２００μlの０.５Ｍ
ＮａＯＨを利用して５６℃で６０分間溶解した。以後，３ Ｎ ＨＣｌを利用して酸性化させた後ヘクサン(ｈｅｘａｎｅ)と混ぜた。脂肪酸が含まれている上層液を除去した後，塩を除去するために下層液を乾燥させた。残基をクルロロホルム/メタノール/水(８：４：３，ｖ/ｖ) 溶液で区画させた後，遠心分離を通じて層を分離して上層液を除去した。また，塩を除去するために下層液を乾燥させた後，残基をクルロロホルム/メタノール(１：１：，ｖ/ｖ)溶液に溶かした後にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ分析に使用した。
【００８５】
エキソグリコシダーゼ(Ｅｘｏｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ) 処理
糖脂質を０.１％タウロデオキシコール酸ナトリウム(Ｓｏｄｉｕｍ Ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ)を含む５０μlの５０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３バッファーで懸濁した後，α−グルコシダーゼ(Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)，β−グルコシダーゼ(アーモンド)，α−ガラクトシダーゼ(コーヒー生豆)，またはβ−ガラクトシダーゼ(Ｅ. ｃｏｌｉ)を添加して３７℃で４８時間処理した。その後，クルロロホルム：メタノール(１：１，ｖ/ｖ)１.３５ｍｌと１００μｌのＤＷを添加して層を分離し，下層を乾燥させて連鎖分析(ｌｉｎｋａｇｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ)した。
【００８６】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ
０.５μｌの糖脂質溶液をマトリクス溶液(２,５−ジヒドロキシ安息香酸溶液，３０ｍｇ/ｍｌ ｉｎ ７０％アセトニトリル／３０％水[ｖ/ｖ]，０.５μｌ)に添加した後，ＭＡＬＤＩプローブに適用した。精製された糖脂質を直接またはＯ−アセチル化した後，ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳを通じて分析した。精製された糖脂質を８０℃で２時間の間ピリジン：無水酢酸(１：１，ｖ/ｖ)２００μｌでＯ−アセチル化させた。その後，溶媒を除去した後，ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
ＭＳで分析を行った。 
【００８７】
フッ化水素酸を利用したＬＴＡの部分的加水分解
ポリグリセロールリン酸主鎖の部分的または完璧な加水分解のために，１ｍｇのＬＴＡを１００μｌの４８％フッ化水素酸(ＨＦ)に添加した後，４℃で５〜４８時間処理した。その後，飽和された水酸化｛すいさんか｝リチウム(ＬｉＯＨ)で中和させた後，遠心分離(１２,０００ｘｇ，１０ｍｉｎ)を通じて沈殿物を除去した。上層液を収集してＴＬＣ及びＥＳＩ−ＬＩＴ
ＭＳ分析に使用した。
【００８８】
ガスクロマトグラフィー／質量分析法(ＧＣ/ＭＳ)
ＬＴＡ加水分解物から単糖類構成を分析するためにＧＣ/ＭＳ分析を行った。標準化合物(Ａｕｔｈｅｎｔｉｃ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ)(ガラクトース，グルコース，マンノース，Ｎ−アセチルグルコサミン)またはＬＴＡ加水分解物の試料をピリジンに溶かした後，常温で４８時間放置した。５０μｌのトリメチルシリルイミダゾールを添加した後，６７℃で３０分間加熱した。試料を２００μｌのクルロロホルムで溶かした後，Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ ｓｙｓｔｅｍ(ガスクロマトグラフィーモデルＧＣＱ，ＨＰ１９０９１Ｊ−４３３)に適用した。試料をｎｏｎｐｌａｒ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｏｌｕｍｎ(５％ｐｈｅｎｙｌ
ｍｅｔｈｙｌ ｓｉｌｏｘａｎｅ ｃａｐｉｌｌａｒｙ３０ｍｘ２５０μm ｉ.ｄ., ０.２５μm ｆｉｌｍ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ，ＨＰ−５)に適用した。カラムを１００℃で２分間置いた後，分当り４℃の速度で２２０℃まで増加させて５分間維持した。以後，分当り１５℃の速度で３００℃まで増加させて５分間維持した。質量分析計は，８５℃のイオン試料温度，６５ｅＶの電子エネルギー，３００ｍＡの放出電流(ｅｍｉｓｓｉｏｎ
ｃｕｒｒｅｎｔ)を有する陽イオン化学イオン化モード(ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｉｏｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍｏｄｅ)下で使用した。分析ガス(ａｎａｌｙｔｅ ｇａｓ)ではメタンを使用し，０.５ｔｏｒｒを維持した。
【００８９】
糖脂質の脂肪酸構成は，０.１μgのトリデカン酸を２００μgのＬＴＡ試料に添加した後，４ Ｎ ＫＯＨ(１００℃，４時間)で加水分解することで結晶した。加水分解物のｐＨを１に近くした後，自由脂肪酸をクルロロホルム(３ｔｉｍｅｓ，１ｍｌ)で抽出した後，Ｎ２ガスで乾燥させた。乾燥された脂肪酸をアセトニトリル(３０μｌ)で溶かした後，３５％臭化ペンタフルオロベンジル(アセトニトリル添加)１０μｌとジイソプロピルエチルアミン(１０μｌ)で処理した。溶液を４０℃で２０分間加熱した後，Ｎ２気体で乾燥させた。結果物であるペンタフルオロベンジルエステルをＮ,Ｏ−ビス(トリメチルシリル)-トリフルオロアセチルアミドでＯ/Ｎ処理した。カラムは，８５℃を維持し，１分当たり７℃の速度で２６５℃まで温度を上昇させた後１０分間維持した。ヒドロキシ脂肪酸の量はベースピークイオンの選択イオン検出方法を使用して結晶し，トリデカン酸の内部標準方法を使用して抽出物損失を補正した。
【００９０】
薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)
糖脂質分析のために，ｐｒｅ−ｃｏａｔｅｄ ｓｉｌｉｃａ
ｇｅｌ ＨＰＴＬＣプレート上でクルロロホルム−メタノール−酢酸−水(１００：２０：１２：５，ｖ/ｖ/ｖ/ｖ)を利用して実行した。ＴＬＣ上の糖脂質は，５％硫酸を処理した後，１２０℃で加熱して検出した。
【００９１】
グリセロールリン酸の分析のために，ｎ−ブタノール−ピリジン−水(１５：３０：２０，ｖ/ｖ/ｖ)を利用してＴＬＣを実行した。ＴＬＣ上でアラニンと糖置換体を検出するために，各々０.５％ニンヒドリン(ブタノール添加)と，５％硫酸(メタノール添加)を使用した。以後，グリセロールリン酸を１２０℃で加熱して可視化させた。ＴＬＣプレートから可視化されたスポット(ｓｐｏｔ)を集めた後，メタノールを使用してシリカゲルパウダーから試料を抽出してＭＳ分析に使用した。
【００９２】
ＥＳＩ−ＬＩＴ ＭＳ
Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００ ｎａｎｏ ＬＣ ｃｏｕｐｌｅｄ
ｔｏ ａ ＬＴＱ-Ｏｒｂｉｔｒａｐ ｈｙｂｒｉｄｅ ｌｉｎｅａｒ ｉｏｎ ｔｒａｐ質量分析計を利用して液体クロマトグラフィー−二重質量分析を実行した。５μｌの試料を注入した後，Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００ ｎａｎｏ ＬＣを利用してＺｏｒｂａｘ ３００ Ｅｘｔｅｎｄｅｄ−Ｃ１８カラム(３.５μm，０.３ｍｍ ｉ.ｄ ｘ １５０ｌｅｎｇｔｈ)に注入した。移動相Ａは，０.１％のギ酸(Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ)を含む１００％水であり，移動相Ｂは，０.１％ギ酸を含んでいる１００％アセトニトリルである。分離はＣ１８カラムを使用した。ＬＣシステムから分離された試料は，エレクトロスプレーイオン化法(ＥＳＩ)を使用して分析した。試料溶液は高圧(５ｋＶグリセロールリン酸及び４.５ｋＶ糖脂質)でメタルキャピラリー(ｍｅｔａｌ ｃａｐｉｌｌａｒｙ)を通じて分当り３μｌの速度でイオンソース(ｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ)中に注入した。キャピラリー温度は１８０℃を維持し，シースガス(ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ 8 ａｒｂｉｔｒａｒｙ)として窒素を使用した。分析器機は陰イオンモードで作動させた。イオンエントランスキャピラリー電圧(ｉｏｎ ｅｎｔｒａｎｃｅ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｖｏｌｔａｇｅ)とチューブレンズオフセット(ｔｕｂｅ ｌｅｎｓ ｏｆｆｓｅｔ)は−４５Ｖと−２６Ｖである。ＭＳｎ破砕(ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ)のために３５〜３７％の標準衝突エネルギー(ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ ｅｎｅｒｇｙ)と２.５〜３Ｄａの分離幅(ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｗｉｄｔｈ)を使用した。最大イオン収集 時間(ｍａｘｉｍｕｍ ｉｏｎ
ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ)は５０ｍｓに設定して，３個のマイクロスキャンを利用して平均値を求めた。
【００９３】
<実施例 １>
ＬＴＡ及びＬＴＡ糖脂質の構造分析
１Ｈ，１３Ｃ及び２Ｄ−ＮＭＲスペクトラムによるｐＬＴＡの全体的な構造究明
ａＬＴＡの１Ｈ−ＮＭＲスペクトラムにおいて，α−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ)のアセチル基の共鳴信号(ｒｅｓｏｎａｎｃｅ
ｓｉｇｎａｌ)が化学シフト(ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｈｉｆｔ)(δＨ)２.１であると報告された。しかし，ｐＬＴＡの１Ｈ−ＮＭＲスペクトラムにおいて，
化学シフト(δＨ)２.１でのピーク形状はａＬＴＡとは異なる様相を見せた。ｐＬＴＡの共振形状はａＬＴＡに比べて一層広く分布し，自由アセチル基(δＨ１.９)からの信号は見られなかった(図１)。ＣＯＳＹスペクトラムを利用して分析した結果，δＨ２.０１が(γ−ω)−メチレン−(−ＣＨ２-;δＨ１.２８)とオレフィン陽性子(−ＣＨ＝ＣＨ−; δＨ５.３８)と関連があることを確認した(図２)。また，ＨＭＱＣスペクトラムの分析結果，δＨ２.０１での陽性子がメチレン(ＣＨ２; δＣ２７)から割り当てられたことを確認した(図３Ａ)。ＣＯＳＹとＨＭＱＣスペクトラム分析に基礎する際，化学シフト(δＨ)２.０１は，脂肪酸にあるアルケニル炭素(−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−)に付いているメチレンの信号であることを確認した。結果的に，ｐＬＴＡはグリセロールリン酸主鎖にＧｌｃＮＡｃ置換剤を全く有していないことが分かった。
【００９４】
不飽和脂肪酸の存在もδＨ２.０１(ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ)とδＨ５.３８(ＣＨ＝ＣＨ)の信号の相互関係を通じて究明した(図２)。また，１Ｈ及び１３Ｃ
ＮＭＲスペクトラムの二つのアノマー陽性子信号[δＨ５.０８(ｄ，Ｊ＝Ｈｚ)及び５.１７(ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ)]と，二つのアノマー炭素信号[δｃ９６.５及び９７.７ｐｐｍ)とを通じて糖脂質に二つの糖単位が存在することを確認した。糖の測定は，ＬＴＡ加水分解物のＧＣ/ＭＳ分析を通じて実行し(図４)，ｐＬＴＡの糖脂質がグルコースとガラクトースのような糖に置換されたことを確認した。最後に，二つの糖単位のアノマーのＪ値(Ｊ ｖａｌｕｅ)は，Ｄ−ピラノースのアノマー中心がα方向であることを示し，δＨ５.０８と５.１７の信号は，各々δｃ９６.５と９７.７で共鳴するアノマー炭素に相応するα−Ｄ−グルコースとα−Ｄ−ガラクトースのアノマー陽性子であることを確認した(図３Ｂ)。これを通じてｐＬＴＡの糖脂質のヘキソースがα結合により結合されていることが分かった。
【００９５】
ｐＬＴＡの糖脂質構造分析
ＬＴＡの糖脂質試料をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ方法を通じて分析した。
ｐＬＴＡの糖脂質の質量スペクトラムは二つのグループに分けられる(図５Ｂ)。グループＩのイオン信号はｍ/ｚ１１０３からｍ/ｚ１２２７の範囲であり，グループＩＩではｍ/ｚ１３６８からｍ/ｚ１４６４の範囲であった。グループＩに属する糖脂質は，トリヘキソシル−ジアシル−グリセロール(Ｈｅｘ３−ＤＡＧ)で判明されたが，Ｃ１６からＣ２２のアシル鎖を有している。グループＩＩの糖脂質は，追加的なヘキソース残基またはアシル鎖を有していた。追加的なヘキソース残基は糖脂質のＯ−アセチル化を通じて確認した(図６Ａ)。
【００９６】
ヒドロキシル残基のアセチル化は４２質量単位の増加を誘発する。ｐＬＴＡのグループＩ糖脂質は，４２０質量単位(１０ヒドロキシル残基)の増加を見せ，トリヘキソースグループであると判明した(図６Ｂ)。また，グループＩＩにある大部分の糖脂質が３７８質量単位(９ヒドロキシル残基)ほど増加した。Ｏ−アセチル化分析によれば，グループＩＩの糖脂質はヘキソース残基に追加的なアシル鎖を有することが分かる(図７)。
【００９７】
追加的に，スペクトラムで１２質量単位の差を見せたが，これはアルケニル炭素の追加または減少を意味するもので，糖脂質が不飽和脂肪酸鎖を有していると判断できる。このような可能性はＣＯＳＹ
ＮＭＲを通じて確認した(図２)。ｐＬＴＡ糖脂質の分子構成に対する予測は，図８に示した。次に，二重ＭＳ分析のために，ＥＳＩ−ＦＴ
ＭＳ(陰イオンモード)を利用して糖脂質を分析し(図９)，そこから代表的なピークを選択・分析してアシル鎖の分布を決定した(図１０Ａ及び図１０Ｂ)。 
【００９８】
結果的に，ｐＬＴＡの糖脂質の構造は，図９に示したように，三つのヘキソース主鎖を有しており，不飽和脂肪酸を含むトリヘキソシル−ジアシルグリセロール(グループＩ)とトリヘキソシル−トリアシルグリセロール(グループＩＩ)となっており，アシル鎖は平均１８個の炭素数を有することが分かる。
【００９９】
ａＬＴＡの糖脂質構造分析
ａＬＴＡの場合，糖脂質の質量対電荷(ｍ/ｚ)の割合がＣ１５からＣ２１の鎖長さを有する脂肪酸であることを確認した(図５Ａ，図１１)。ａＬＴＡの糖脂質において大部分のｍ/ｚ信号は２９４質量単位が増加した。これは７個のヒドロキシルグループのアセチル化が発生したことを意味するもので，二つのヘキソースに該当する。結果的に，ａＬＴＡの糖脂質はジヘキソシルグループを有していることと判明した。また，糖脂質の脂肪酸アシル鎖の存在はマイルドアルカリ加水分解を通じて確認することができた(図１２)。
【０１００】
ｄＬＴＡ，ｒＬＴＡ及びｓＬＴＡの糖脂質構造分析
ｄＬＴＡ，ｒＬＴＡ及びｓＬＴＡの糖脂質部位の構造を分析するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を実行した。ｄＬＴＡはラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌ. ｄｅｌｂｒｅｕｋｉｉ)，ｒＬＴＡはラクトバチルス・ラムノ−サス(Ｌ. ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ｓＬＴＡはラクトバチルス・サケイ(Ｌ. ｓａｋｅｉ)由来のＬＴＡを各々示す。
【０１０１】
図１３に示したように，ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析結果，ｄＬＴＡ由来糖脂質は，ｐＬＴＡと同様にトリヘキソシル−ジアシルグリセロールとトリヘキソシル−トリアシルグリセロールを有する二つのグループに分けられ，それ以外にも四つのアシル鎖を有する三番目のグループが存在することが観察された。また，アシル鎖の平均炭素数は１８個であることが観察された。ｒＬＴＡ由来糖脂質は，ｐＬＴＡより全体的に分子量が少ない二つのグループに観察された。糖一つの分子量が１６０Ｄａなので三つのヘキソースではない二つのヘキソース主鎖からなるジヘキソシル−ジアシルグリセロールとジヘキソシル−トリアシルグリセロールを有することが観察された。アシル鎖の平均炭素数は１５個であった。ｓＬＴＡ由来糖脂質もジヘキソシル−ジアシルグリセロールとジヘキソシル−トリアシルグリセロールとして，平均炭素数が１８個でアシル鎖の長さがｒＬＴＡより長いことが観察された。
【０１０２】
<実施例２>
ＬＴＡ由来糖脂質の抗炎症効果
ＬＴＡ由来糖脂質のＴＮＦ−α発現抑制効果
Ｉｎｔａｃｔ ＬＴＡ，これから分離したＬＴＡ由来糖脂質及びＬＴＡ由来ポリグリセロ−ルリン酸を各々１００μg/ｍｌずつＴＨＰ−１細胞に４時間の間処理した後，培養液からＴＮＦ−αの発現量をＥＬＳＩＡ方法を通じて測定した。
【０１０３】
図１４に示したように，Ｉｎｔａｃｔ ａＬＴＡは，高いＴＮＦ−αの発現を誘導したが，Ｉｎｔａｃｔ ｐＬＴＡはＴＮＦ−αの発現を誘導しなかった。また，ａＬＴＡ由来の糖脂質及びポリグリセロールリン酸もＩｎｔａｃｔ
ａＬＴＡより発現量は少ないがＴＮＦ−αの発現をかなり誘導したが，ｐＬＴＡ由来の糖脂質及びポリグリセロールリン酸は，ＴＮＦ-αの発現をほとんど誘導しなかった。これを通じてＩｎｔａｃｔ ｐＬＴＡだけではなくｐＬＴＡ由来の糖脂質もａＬＴＡと異なりＴＮＦ-αの発現を誘導しないことが分かる。
【０１０４】
ＬＴＡ変形による抗炎症効果実験
ａＬＴＡ及びｐＬＴＡを変形(ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ)した後，活性を測定するための実験を実行した。まず，ポリグリセロールリン酸のＤ−アラニンを除去するためにＴｒｉｓ-ＨＣｌｐＨ８.５にＬＴＡをＯ/Ｎで培養した。また，糖脂質の脂肪酸アシル鎖を除去するために０.１Ｎ ＮａＯＨを使用してＬＴＡを処理した。以後，ｐＨを中和させた後，オクチルクロマトグラフィーを利用して変形されたＬＴＡを精製し，凍結乾燥した後に定量して実験に使用した。ＴＨＰ−１細胞に１００μｇ/ｍｌのＤ−アラニンを除去したＬＴＡ(ｄｅ−ａｌａｎｉｎｅ)と，脂肪酸アシル鎖を除去したＬＴＡ(ｄｅ−ａｃｙｌ)と，を１８時間前処理した後に，０.５μｇ/ｍｌのＬＰＳを４時間再処理した。以後，培養液からＴＮＦ-αの発現程度をＥＬＩＳＡ方法を通じて測定した。
【０１０５】
図１５は，ａＬＴＡを利用した実験結果を示す。ａＬＴＡの場合，Ｉｎｔａｃｔ
ａＬＴＡを前処理したＴＨＰ−１細胞でＬＰＳによるＴＮＦ−α発現を抑制する効果が多少あったが，Ｄ−アラニンと脂肪酸アシル鎖を除去したａＬＴＡ(ｄｅ−ａｌａｎｉｎｅ，ｄｅ−ａｃｙｌ)はほとんどこのような効果がなかった。
【０１０６】
図１６は，ｐＬＴＡを利用した同一な実験の実行結果を示す。ａＬＴＡと異なりＩｎｔａｃｔ
ｐＬＴＡはＬＰＳによるＴＮＦ-αの発現を大部分抑制し，ポリグリセロールリン酸アラニンを除去したｐＬＴＡ(ｄｅ−ａｌａｎｉｎｅ)の場合にも同一な効果を示した。しかし，糖脂質のアシル鎖を除去したｐＬＴＡ(ｄｅ−ａｃｙｌ)はＴＮＦ−αの発現抑制効果を見せなかった。
【０１０７】
このような結果は，ａＬＴＡとｐＬＴＡがお互いに異なる生物学的特性を有していることを示し，特に，ｐＬＴＡのＴＮＦ−α発現抑制効果において，ポリグリセロールリン酸内のＤ−アラニンよりは糖脂質のアシル鎖のほうが一層重要に作用していることを示す。
【０１０８】
ｐＬＴＡ由来糖脂質の抗炎症効果
ｐＬＴＡから分離した糖脂質の抗炎症効果を調べるために，ＴＨＰ−１細胞に多様な濃度の糖脂質を２０時間の間前処理した後，１０μｇ/ｍｌのｆｌｅｘＰＧＮを４時間の間再処理した。以後，培養液からＴＮＦ−αの発現程度をＥＬＩＳＡ方法を通じて測定した。
【０１０９】
図１７に示したように，１０μｇ/ｍｌのｆｌｅｘＰＧＮだけを処理した細胞の場合，高濃度のＴＮＦ-α発現を誘導した。しかし，糖脂質を前処理した細胞において前処理濃度によってＴＮＦ−αの発現が減少することを観察した。このような発現抑制効果は，同一な濃度のＩｎｔａｃｔ
ｐＬＴＡに比しては多少低いが，ｐＬＴＡの糖脂質部位だけでも十分なＴＮＦ-αの発現抑制効果を誘発することを示す。
【０１１０】
他のＬＴＡ由来糖脂質の抗炎症効果
ＴＨＰ−１細胞(５×１０５ｃｅｌｌｓ/ｍｌ)にＬＰＳ(ＬＰＳ ｆｒｏｍ
Ｅ. ｃｏｌｉ １１１：Ｂ４)と実験例に記載された方法により各々のＬＴＡ(ａＬＴＡ，ｒＬＴＡ，ｐＬＴＡ，ｄＬＴＡ，ｓＬＴＡ)から分離した糖脂質０.１μｇ/ｍｌを６時間処理した後，培養液からＴＮＦ-αの発現量をＥＬＳＩＡ方法を通じて測定した。
【０１１１】
図１８は，お互いに異なるＬＴＡから分離した糖脂質のＴＮＦ-αの発現抑制効果を示す。ａＬＴＡ及びｓＬＴＡ由来の糖脂質は，ＴＮＦ-αの発現抑制効果がほとんどないが，ｒＬＴＡ，ｐＬＴＡ及びｄＬＴＡ由来の糖脂質は，非常に効果的にＴＮＦ-αの発現を抑制することが分かる。
【０１１２】
<実施例３>
ｐＬＴＡの抗炎症効果に対するイン・ビトロ(ｉｎ ｖｉｔｒｏ)実験
ｐＬＴＡによるＳｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカン(ＰＧＮ)−誘導ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βの発現抑制効果実験
人間単核球細胞の一つであるＴＨＰ−１細胞を熱処理した１０％非活性ＦＢＳと１００Ｕ/ｍｌペニシリンと１００μｇ/ｍｌストレプトマイシンとが含まれたＲＰＭＩ１６４０培地を使用して，３７℃，５％ＣＯ２条件下で培養した。ＴＨＰ−１細胞を利用したサイトカイン誘導実験を実行するために，４x１０５個の細胞/ｗｅｌｌを９６−ｗｅｌｌプレートに移した後，３７℃，５％ＣＯ２条件下で２４時間培養して細胞を安定化させた。多様な濃度(０〜１００μｇ/ｍｌ)のｐＬＴＡを２４時間前処理した後，１０μｇ/ｍｌのペプチドグリカンを４時間の間再処理した。 
【０１１３】
ＴＮＦ-α及びＩＬ−１βの発現量測定は，細胞培養物から遠心分離を通じて細胞上澄液を回収した後，一般的なサンドイッチＥＬＩＳＡ方法を利用して実行した。ＥＬＩＳＡ実験は，各々Ｒ＆Ｄ
ｓｙｓｔｅｍｓから購入したａｎｔｉ−ＴＮＦ−α ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ１(ｃｌｏｎｅ ＃２８４１０)/ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ＴＮＦ−α ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｏａｔ ＩｇＧと，ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ
ＩＬ−１β ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ１(ｃｌｏｎｅ ２８０５)/ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ
ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ＩＬ−１β ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｏａｔ ＩｇＧを使用して行い，ストレプトアビジンＨＲＰを処理した後にサブストレートとしてＯ−フェニレンジアミンを使用して発光させた。ＥＬＩＳＡリーダーを使用してＯＤ
４５０ｎｍの測定値からＯＤ ５５０ｎｍの測定値を減算した値を有効値で使用した。 
【０１１４】
図１９に示したように，ＬＴＡを前処理する場合，ペブチドクリカンにより発現が増加するＴＮＦ−α(図１９Ａ)とＩＬ−１β(図９Ｂ)の発現が，ＬＴＡの濃度が増加することに従って減少した。このような炎症性サイトカインの発現抑制が内毒素によるものであるか否かを確認するためにポリミキシンＢを利用した実験を実行した。ポリミキシンＢはＬＰＳのｌｉｐｉｄ
Ａと結合してＬＰＳの活性を抑制する役割をする。したがって，前記の実験結果が内毒素によるものであれば，ポリミキシンＢを処理する場合，炎症性サイトカインの発現抑制現象が発生しないはずである。しかし，ｐＬＴＡによるＴＮＦ−αの発現抑制はポリミキシン(ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ)Ｂが含まれた培地下でも誘導された。このような結果は，ＬＴＡによる耐性誘導が内毒素(ＬＰＳ)により誘導されないことを意味する(図１９Ｃ)。 
【０１１５】
グラム陰性菌のペプチドグリカンは，兔疫細胞のＮＯＤ２を刺激することでこれら細胞から多量のプロ−炎症性サイトカインの発現を増加させる。しかし，ｐＬＴＡを兔疫細胞に前処理することによりグラム陰性菌のペプチドグリカンによるプロ−炎症性サイトカインの特異的な発現を抑制することができる。
【０１１６】
ｐＬＴＡによるペプチドグリカン−誘導ＮＯＤ２の発現抑制効果実験
ｐＬＴＡによる敗血症関連収容体ＮＯＤ２の発現変化測定を次のように実行した。８ｘ１０５個のＴＨＰ−１細胞/ｗｅｌｌを２４−ｗｅｌｌプレートに移した後，３７℃，５％ＣＯ２条件下で２４時間培養して細胞を安定化させた。１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡを２４時間の前処理した後，１０μｇ/ｍｌのＳ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカンを再処理して２時間間培養した。遠心分離を通じて各々の細胞を採取してから，全体ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した後，ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ
ＰＣＲを使用してＮＯＤ２の発現変化を測定した。ＮＯＤ２のタンパク質変化はウエスタンブロッティングを使用して測定した。上述した条件でｐＬＴＡを前処理したＴＨＰ−１細胞にペプチドグリカンを２時間処理した。細胞を破砕した後，ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディング染料を添加して５分間沸騰させ，１２％ＳＤＳ-ＰＡＧＥを通じてタンパク質を分離した。分離されたタンパク質をナイロンメンブレインに移した後，抗−ＴＬＲ２，−ＴＬＲ４，−ＮＯＤ２抗体を利用してウエスタンブロッティングを実行した。
【０１１７】
Ｓ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカンによる過度な炎症反応誘導において，ＮＯＤ２の役割を究明するために次のような実験を実行した。ＮＯＤ２発現ベクターとｐＮＦ−κＢ−Ｌｕｃ/ｐＲＬ−ＳＶ４０ベクターをＵ９３７細胞に形質転換させた。２４時間後に形質転換された各々の細胞に１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡで２４時間前処理して，１０μｇ/ｍｌのペプチドグリカンを１２時間の間再処理した。マイクロプレートリーダー機を利用して測定されたＮＦ−κＢの活性をＲｅｎｉｌｌａの活性値で分けてＮＯＤ２発現量によるＮＦ−κＢの活性変化を測定した。 
【０１１８】
図２０によれば，Ｓ. ｆｌｅｘｎｅｒｉペプチドグリカンは，ＴＨＰ−１細胞からＮＯＤ２の発現を顕著に増加させる。一方，ｐＬＴＡを前処理した細胞でのＮＯＤ２
ｍＲＮＡの発現は，ｐＬＴＡの前処理濃度が増加するにしたがって減少した(図２０Ａ)。また，ｐＬＴＡを前処理した細胞でのＮＯＤ２タンパク質発現量もｐＬＴＡを前処理しなかった細胞に比べて大きく減少した(図２０Ｂ)。このような結果は，ｐＬＴＡが敗血症関連収容体ＮＯＤ２の発現を抑制することよって，ＮＯＤ２とペプチドグリカンとの相互作用を通じた信号伝逹を抑制させることを意味する。
【０１１９】
また，ｐＬＴＡを前処理した細胞でのペプチドグリカン−誘導ＮＦ−κＢ活性がｐＬＴＡを前処理しなかった細胞に比べて大きく減少することが確認できる(図２０Ｃ)。しかし，ＮＯＤ２発現ベクターを形質転換させることによりこのようなＮＦ−κＢの活性抑制が消えた。このような結果は，ＮＯＤ２がペプチドグリカンの主な収容体として作用していることを意味し，また，ｐＬＴＡを前処理することによりＮＯＤ２の主な転写因子であるＮＦ−κＢの活性を抑制させて，結果的にＮＯＤ２のｍＲＮＡ発現を阻害させることを意味する。
【０１２０】
ｐＬＴＡとＴＬＲ２の関連性実験
ｐＬＴＡによるサイトカインの発現抑制作用において，ＴＬＲ２との関連性を試すためにＴＬＲ２
ｓｉＲＮＡ実験を実行した。ＴＬＲ２をターゲットにするｓｉＲＮＡ ｄｕｐｌｅｘは Ｓａｎｔａｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＳＡ)から購入した。ＴＬＲ２ ｓｉＲＮＡとコントロール
ｓｉＲＮＡをＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯ感染試薬(Ｍｉｒｕｓ，ＷＩ)を使用してＴＨＰ−１細胞に形質転換させた後，７２時間の間培養した。ＴＬＲ２
ｓｉＲＮＡとＣｏｎｔｒｏｌ ｓｉＲＮＡが形質転換された細胞に，１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡを２４時間の間前処理した後，１０μｇ/ｍｌのペプチドグリカンを４時間再処理して培養液からＴＮＦ-αの発現量をＥＬＩＳＡ方法を使用して測定した。
【０１２１】
また，他の実験として，ＴＬＲ２がノックアウトされたマウス(Ｃ５７ＢＬ/６)から骨髓油来の大食細胞(ＢＭＭ)を分離した後，９６ｗｅｌｌプレートに株分けして３７℃，５％ＣＯ２下で２４時間の間培養した。ＢＭＭに１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡを２４時間前処理した後，１０μｇ/ｍｌのペプチドグリカンを４時間の間再処理して培養液からＴＮＦ−αの発現量をＥＬＩＳＡ方法を通じて測定した。
【０１２２】
図２１に示したように，コントロールｓｉＲＮＡを形質転換させたＴＨＰ−１細胞では，ｐＬＴＡ
前処理による耐性誘導が発生することによりペプチドグリカン−誘導ＴＮＦ−αの発現が減少した(図２１Ａ)。一方，ＴＬＲ２
ｓｉＲＮＡを形質転換させたＴＨＰ−１細胞では，このような発現減少が発生しなかった(図２１Ｂ)。このような結果は，ＴＬＲ２がノックアウトされたＢＭＭでも見られるが，正常なマウスから分離したＢＭＭの場合，ペプチドグリカンの濃度によってＴＮＦ−αの発現が増加したが，このような発現増加はｐＬＴＡの前処理により減少した(図２１Ｃ)。一方，ＴＬＲ２−/−ＢＭＭの場合，ｐＬＴＡを前処理したか否かに関係なくペプチドグリカンの濃度にしたがってＴＮＦ-αの発現が増加した(図２１Ｄ)。このような結果は，ペプチドグリカン−誘導ＴＮＦ−αの過発現に対するｐＬＴＡの耐性誘導はＴＬＲ２が必須的な収容体として作用していることを意味する。
【０１２３】
ｐＬＴＡによるＮＦ−κＢの活性及びＴＮＦ−αの発現抑制
内毒素ＬＰＳの処理によるＴＮＦ−αの過発現は，ＭＡＰキナーゼのリン酸化とＮＦ−κＢの活性増加により発生する。ｐＬＴＡがこのようなＭＡＰキナーゼのリン酸化とＮＦ−κＢの活性にどのような影響を及ぶか調べるために，次のようにウエスタンブロッティング及び免疫蛍光染色実験を実行した。
【０１２４】
ウエスタンブロッティング：８ｘ１０５個のＴＨＰ−１細胞/ｗｅｌｌを２４−ｗｅｌｌプレートに移した後，３７℃，５％ＣＯ２条件下で，２４時間培養して細胞を安定化させた。１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡを２４時間前処理した後，０.１μｇ/ｍｌのＬＰＳを添加して１時間の間追加培養した。遠心分離を通じて細胞を採取した後，Ｌａｅｍｍｌｉバッファーで細胞を破砕した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥローディング染料を添加して５分間沸かした後，１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥを通じてタンパク質を分離した。分離されたタンパク質をナイロンメンブレインに移した後，抗リン酸化−ＭＡＰキナーゼ抗体(ａｎｔｉ-ｐｈｏｓｐｈｏ ＥＲＫ及びａｎｔｉ-ｐｈｏｓｐｈｏ ＪＮＫ)，抗ＮＦ−κＢ抗体，抗β−ａｃｔｉｎ抗体を利用してウエスタンブロッティングを実行した。
【０１２５】
免疫蛍光染色(ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ)：８ｘ１０５個のＴＨＰ−１細胞/ｗｅｌｌを２４−ｗｅｌｌプレートに移した後，３７℃，５％ＣＯ２条件下で２４時間培養して細胞を安定化させた。１００μｇ/ｍｌのｐＬＴＡまたは培地のみを２４時間前処理した後，０.５μｇ/ｍｌのＬＰＳを再処理して２時間の間培養した。培養した細胞を１５分間３,５００ｒｐｍで遠心分離してスライドグラス上に付着させた後，４％パラホルムアルデヒドで細胞を固定させた。以後，０.５％のトリトンＸ−１００(Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００)で細胞膜の透過性を増加させて，抗−ＮＦ−κＢ ｐ５０と抗−ＮＦ−κＢ ｐ６５抗体を２時間の間処理した。また，ｄｏｎｋｅｙ由来の抗−マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ抗体を９０分間処理した後，共焦点顕微鏡を使用して細胞内でのＮＦ−κＢ ｐ５０とＮＦ−κＢ ｐ６５のリン酸化程度を測定した。
【０１２６】
図２２に示したように，ｐＬＴＡ処理によりＭＡＰキナーゼの活性が減少することが確認された(図２２Ａ)。すなわち，ｐＬＴＡ耐性を与えない細胞の場合，ＬＰＳ処理後６０分たった時，ＥＲＫとＪＮＫの活性(リン酸化)が急激に増加した。一方，ｐＬＴＡ耐性を与えた細胞の場合，このような活性が耐性を与えない細胞に比べて低いことが確認された。
【０１２７】
ＬＰＳ−誘導ＮＦ−κＢ活性は，ＩＫＫキナーゼのリン酸化を必要とする。活性化されたＩＫＫは，Ｉ−κＢタンパク質群のリン酸化を誘発してＮＦ−κＢからＩ−κＢが分離される。ＮＦ−κＢは核内に移動して細胞付着，サイトカイン，サイトカイン収容体などに対する遺伝子の転写を増加させる。本実験結果，ｐＬＴＡ耐性を与えない細胞の場合，Ｉ−κＢαの分解がＬＰＳを処理した後にはやく行われた。しかし，ｐＬＴＡ耐性を与えた細胞の場合，このようなＩ−κＢα分解発生が少ないことを確認した(図２２Ｂ)。このような結果は，ＮＦ-κＢの活性が，ｐＬＴＡ耐性を与えた細胞で耐性を与えなかった細胞に比べて抑制されることを意味する。
【０１２８】
これを確認するために，抗ＮＦ−κＢ抗体を利用した免疫蛍光染色法を実行してｐＬＴＡ耐性によるＮＦ−κＢ活性の抑制を確認した(図２２Ｃ)。このような一連の信号伝逹関連要素の活性抑制は，ｐＬＴＡがＬＰＳにより誘導されたＴＮＦ-αの過発現を抑制する主要原因として作用することを意味する。
【０１２９】
<実施例４>
ｐＬＴＡの抗炎症効果に対するイン・ビボ(ｉｎ ｖｉｖｏ)実験
ｐＬＴＡの敗血症抑制効果
４週齢の雄マウス(ＢＡＬＢ/ｃ，１５匹)に３００ｍｇ/ｋｇのｐＬＴＡまたはＰＢＳを腹腔注射した後，２４時間後に２００μｌの敗血症誘発水溶液(２５０ｍｇ/ｋｇ ａＬＴＡ＋２５ｍｇ/ｋｇ
ＭＤＰ)を腹腔注射して内毒素性ショックを誘発した。マウスの生存率は敗血症誘発後に４日目まで観察した。 
【０１３０】
また，他の実験として，ｐＬＴＡを腹腔注射したマウスとＰＢＳを腹腔注射したマウス(各５匹)に敗血症誘発物質を注射した。１２時間後に心臓採血を通じてセラムを分離し，ＥＬＩＳＡ方法を通じて血液内ＴＮＦ−αの含有量を測定した。
【０１３１】
図２３に示したように，ＰＢＳを前処理したマウスの場合，敗血症誘発物質を腹腔注射した時，４８時間以内に皆敗死した。一方，ｐＬＴＡを前処理したマウスの場合，４日目まで約９０％の生存率を示した(図２３Ａ)。また，ｐＬＴＡを前処理したマウスの場合，血液内で発見されるＴＮＦ−αの量がＰＢＳを前処理したマウスの血液内のＴＮＦ−α量に比べて顕著に低く測定されることを確認した(図２３Ｂ)。
【０１３２】
このような結果は，ｐＬＴＡがａＬＴＡ＋ＭＤＰにより生体内で誘導される過度な炎症反応を抑制し，また，グラム陽性菌由来の敗血症を抑制するにおいて効果的であることを意味する。
【０１３３】
ｐＬＴＡ処理によるアトピー性皮膚疾患の緩和効果
アトピー性皮膚疾患は，バクテリアの感染，化学薬品に対する露出など多様な原因により発生する。４週齢のＳＰＦ(Ｓｐｅｃｉｆｉｒｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｒｅｅ)雄ＩＣＲマウス(中央実験動物)及び４週齢のＳＰＦ雄ＮＣ/Ｎｇａマウス(中央実験動物)を購入して７日間実験動物飼育室で適応させた後に実験に使用した。試験群当りＩＣＲマウス２０匹，ＮＣ/Ｎｇａマウス５匹ずつ二つの群に分けた。すべての試験群の場合，試験物質塗布前日に背部位を除毛し，アトピー性皮膚炎誘発は，以前研究を参考して１％ＤＮＣＢを４日間隔で２回塗布し，以後，３日間隔で４週間０.２％のＤＮＣＢ溶液を背に塗布した。アトピーの形成後，３５０μg/ｋｇのｐＬＴＡを腹腔注射してから皮膚病変を観察した。血液内のＴｈ２の偏向性と関連して皮膚炎掻痒付近の皮膚組職内に皮膚炎症及びアトピー関連サイトカイン(ＩＬ−４)の分布と水準を測定するためにＩＨＣ(Ｉｍｍｕｎｏ-ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ)法を使用した。
【０１３４】
図２４に示したように，ＤＮＣＢの塗布結果，ＩＣＲモデル及びＮＣ/Ｎｇａモデルの両方とも肉眼で全体背部位で紅斑，むくみだけではなく痂皮脱皮と膿瘍性丘疹及び，個体によってひどい場合出血所見まで見られ，人のアトピー皮膚炎の症状と非常に類似した皮膚病変を示した。また，皮膚炎程度においても他のモデルに比べて強く誘発された。しかし，このような現状は，ｐＬＴＡを注射することで緩和されることが観察された(図２４Ａ)。アトピー性皮膚炎の原因と言われるＴｈ２偏向現状を観察するために発病された皮膚組織内の関連ｃｙｔｏｋｉｎｅの水準を測定するためにＩＨＣを測定した。測定結果，ＩＣＲ及びＮＣの２個の全ての群で皮膚組職内のＩＬ−４が有意的に上昇して分布したが，ＩＦＮ−ｒの場合は別に別段差がなかった。一方，ｐＬＴＡを処理したマウスの場合，皮膚組職内のＩＬ−４の分布が減少することが確認された(図２４Ｂ)。このような結果は，ｐＬＴＡがＴｈ２反応を誘導するＩＬ−４の発現を抑制させることでアトピーの症状を減少させたことを意味する。
【０１３５】
<実施例５>
他のＬＴＡの抗炎症効果実験
ｒＬＴＡの抗炎症効果
他の種類の乳酸菌 Ｌ. ｒｈａｍｎｏｓｕｓ(ｒＬＴＡ)から分離したＬＴＡの抗炎症効果を調査するために，ＴＨＰ−１細胞に１００μｇ/ｍｌ濃度のｒＬＴＡを処理して４時間の間刺激した。以後，培養液からＴＮＦ−αの発現量をＥＬＩＳＡ方法を通じて測定した。 
【０１３６】
図２５に示したように，ｒＬＴＡの前処理濃度が増加するにしたがってＴＮＦ−αの発現量は減少した。 
【０１３７】
ａＬＴＡ，ｒＬＴＡ，ｐＬＴＡ，ｄＬＴＡ，ｓＬＴＡの抗炎症効果比較
ＴＨＰ−１ ｃｅｌｌにＬＰＳと各々のＬＴＡを処理してＴＮＦ-αの発現量を確認した。
図２６に示したように，１０μｇ/ｍｌ濃度で処理した時，ａＬＴＡ及びｓＬＴＡはＴＮＦ−αの発現を抑制できなかったが，残りのＬＴＡは効果的にＴＮＦ−αの発現を抑制することが分かる。
【０１３８】
また，ＬＴＡ別にＴＮＦ−αの発現様相が異なる理由は，各々のＬＴＡがその構造的な差により細胞信号経路(ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ)活性にお互いに異なる影響を及ぼしているはずであると仮定し，これを確認するために細胞信号経路に関連された信号抑制剤(ｓｉｇｎａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ)を処理した後にＬＴＡ別にＴＮＦ−αの生成を確認した。
【０１３９】
その結果，図２７及び各ＬＴＡのＴＮＦ−a発現抑制率を定量化して示した下記の表１のように，特定信号抑制剤を処理した時，ＴＮＦ−a発現が減少するか増加することを確認した。これを通じてＬＴＡの構造的な差が特定の細胞信号経路にお互いに異なる影響を与えることを確認した。
【０１４０】
【表１】
2013502456.tif 000018
【０１４１】
<実施例６>
ｐＬＴＡ由来糖脂質を利用した抗体反応の誘発
マウスをＢ型肝炎ウイルス表面抗原(“ＨＢｓＡｇ”)２.５μｇで０日目に１次免疫化させた。２１日目には前記マウスを２次免疫化させた(２００μｌ/注入)。前記１次免疫化した後の第２０日と２次免疫化後の第２７日にマウスから採血した。血清を収集して抗−ＨＢｓＡｇ抗体に対する標準ＥＬＩＳＡで検査した。下記表２は，本発明の糖脂質がＨＢｓＡｇと一緒に動物に投与された時，抗−ＨＢｓＡｇ抗体の生産を誘導することを示す。
【０１４２】
【表２】
2013502456.tif 000019
【０１４３】
<製造例１>
ｐＬＴＡを含む医薬
散剤の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)１０ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
タルク１０ｍｇ
前記成分を混合して気密布に充填して散剤を製造する。
錠剤の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体 (ａｎａｌｏｇｕｅｓ)５ｍｇ
トウモロコシ澱粉１００ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ
前記成分を混合した後に通常の錠剤製造方法によって打錠して錠剤を製造する。
カプセル剤の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)１０ｍｇ
結晶性セルロース３ｍｇ
ラクトース１４.８ｍｇ
マグネシウムステアレイト０.２ｍｇ
通常のカプセル剤製造方法によって前記成分を混合してゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
注射剤の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)５０ ｍｇ
マンニトール１８０ｍｇ
注射用滅菌蒸溜水２９７４ｍｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ２６ｍｇ
通常の注射剤製造方法によって１アンプル当り(２ｍｌ)前記成分含量で製造する。
液剤の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)１０ｍｇ
異性化糖１０ｇ
マンニトール５ｇ
精製水適量
通常の液剤製造方法によって精製水に各々の成分を加えて溶解させて，レモン香を適量加えた後に前記成分を混合して，精製水を加えて全体を精製水を加えて全体１００ｍｌで調節した後，茶色瓶に充填して滅菌し液剤を製造する。
【０１４４】
<製造例２>
ｐＬＴＡを含む健康食品
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)１００ｍｇ
ビタミン混合物適量
ビタミンＡアセテート７０μｇ
ビタミンＥ１.０ｍｇ
ビタミンＢ１０.１３ｍｇ
ビタミンＢ２０.１５ｍｇ
ビタミンＢ６０.５ｍｇ
ビタミンＢ１２０.２μｇ
ビタミンＣ１０ｍｇ
ビオチン１０μｇ
ニコチン酸アミド１.７ｍｇ
葉酸５０μｇ
パントテン酸カルシウム０.５ｍｇ
無機質混合物適量
硫酸第一鉄１.７５ｍｇ
酸化亜鉛０.８２ｍｇ
炭酸マグネシウム２５.３ｍｇ
リン酸二水素カリウム１５ｍｇ
リン酸カルシウム５５ｍｇ
クエン酸カリウム９０ｍｇ
炭酸カルシウム１００ｍｇ
塩化マグネシウム２４.８ｍｇ
前記ビタミン及びミネラル混合物の造成比は，比較的健康食品に適合な成分を好ましい実施例で混合して造成したが，その配合比を任意に変形実施しても構わず，通常の健康食品製造方法によって前記成分を混合した後，課粒を製造して，通常の方法によって健康食品組成物製造に使用することができる。
【０１４５】
<製造例３>
ｐＬＴＡを含む飲料
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)１００ｍｇ
ビタミンＣ１５ｇ
ビタミンＥ(粉末)１００ｇ
乳酸鉄１９.７５ｇ
酸化亜鉛３.５ｇ
ニコチン酸アミド３.５ｇ
ビタミンＡ０.２ｇ
ビタミンＢ１０.２５ｇ
ビタミンＢ２０.３ｇ
水定量
通常の健康飲料製造方法によって前記成分を混合して，約１時間の間８５℃で撹拌加熱した後，作られた溶液を濾過して滅菌された２ｌ容器に取得して密封滅菌して冷蔵保管した後，本発明の健康飲料組成物製造に使用する。
【０１４６】
前記造成比は，比較的嗜好飲料に適合な成分を好ましい実施例で混合造成したが，需要階層や，需要国家，使用用度など地域的，民族的嗜好度によってその配合比を任意に変形実施しても構わない。
【０１４７】
<製造例４>
ｐＬＴＡを含む飲料
柔軟化粧水(スキン)の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)０.１重量％
グリセリン３.０重量％
ブチレングリコール２.０重量％
プロピレングリコール２.０重量％
ポリオキシエチレン(６０)硬化ヒマシ油１.００重量％
エタノール１０.０重量％
トリエタノールアミン０.１重量％
防腐剤微量
色素微量
香料微量
精製水残量
栄養化粧水(ローション)の製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)０.１重量％
シトステロール１.７０重量％
オレイン酸ポリグリセリル−２  １.５０重量％
セテアレス−４  １.２重量
コレステロール１.５重量
ジセチルホスフェート０.４重量％
濃グリセリン５.０重量％
サンフラワーオイル１０.０重量％
カルボキシビニルポリマー ０.２重量％
キサンタンガム０.３重量％
防腐剤微量
香料微量
精製水残量
【０１４８】
<製造例５>
ｐＬＴＡを含むアジュバント
ｐＬＴＡを含むアジュバントの製造
ｐＬＴＡまたはｐＬＴＡ誘導体(ａｎａｌｏｇｕｅｓ)２５μｇ
ジオレオイルホスファチジルコリン(ＤＯＰＣ)５００μｇ
コレステロール１２５μｇ
ホスフェートＮａＣｌ緩衝溶液及び水残量
合計０.５ｍｌ
前記成分からなるアジュバントをＷＯ９６/３３７３９に記述されたように製造する。
【０１４９】
【表３】
2013502456.tif 000020
【図１】
2013502456.tif 000035
【図２】
2013502456.tif 000036
【図３】
2013502456.tif 000037
【図４】
2013502456.tif 000038
【図５】
2013502456.tif 000039
【図６】
2013502456.tif 000040
【図７】
2013502456.tif 000041
【図８】
2013502456.tif 000042
【図９】
2013502456.tif 000043
【図１０】
2013502456.tif 000044
【図１１】
2013502456.tif 000045
【図１２】
2013502456.tif 000046
【図１３】
2013502456.tif 000047
【図１４】
2013502456.tif 000048
【図１５】
2013502456.tif 000049
【図１６】
2013502456.tif 000050
【図１７】
2013502456.tif 000051
【図１８】
2013502456.tif 000052
【図１９】
2013502456.tif 000053
【図２０】
2013502456.tif 000054
【図２１】
2013502456.tif 000055
【図２２】
2013502456.tif 000056
【図２３】
2013502456.tif 000057
【図２４】
2013502456.tif 000058
【図２５】
2013502456.tif 000059
【図２６】
2013502456.tif 000060
【図２７】
2013502456.tif 000061
【手続補正書】
【提出日】平成24年2月28日(2012.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α結合により結合された二重または三重ヘキソースのＣ１，Ｃ３，Ｃ４及びＣ６番の位置の中でいずれか１ヶ所以上にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和された２乃至６個のアシル鎖が結合されていることを特徴とする糖脂質。
【請求項２】
前記糖脂質は，下記の化学式(Ｉ)の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の糖脂質：
【化１６】
2013502456.tif 000062
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化１７】
2013502456.tif 000063
であり，
この時，Ｒ’は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃Ｃ３０のアルキルであり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【請求項３】
Ｒ１は，
【化１８】
2013502456.tif 000064
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項２に記載の糖脂質。
【請求項４】
Ｒ１は，
【化１９】
2013502456.tif 000065
であり，
Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいずれの一つは，
【化２０】
2013502456.tif 000066
であり，残りはヒドロキシであり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，１であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項２に記載の糖脂質。
【請求項５】
前記化学式(Ｉ)は，下記化学式(Ｉ−１)または化学式(Ｉ−２)であることを特 とする請求項２に記載の糖脂質：
【化２１】
2013502456.tif 000067
【化２２】
2013502456.tif 000068
【請求項６】
前記糖脂質は，乳酸菌由来であることを特徴とする請求項１に記載の糖脂質。
【請求項７】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス，ビフィドバクテリウム，ストレプトコッカスまたはラクトコッカス属であることを特徴とする請求項６に記載の糖脂質。
【請求項８】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)，ビフィドバクテリウム・ ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)，ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ) ，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)またはラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)であることを特徴とする請求項７に記載の糖脂質。
【請求項９】
アシル鎖が結合されなかったヘキソースのＣ６位置にポリグリセロールリン酸が追加で結合されたことを特徴とする請求項１に記載の糖脂質。
【請求項１０】
前記糖脂質は，下記の化学式(ＩＩ)の構造を有することを特徴とする請求項９に記載の糖脂質：
【化２３】
2013502456.tif 000069
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化２４】
2013502456.tif 000070
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン(Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ)，Ｄ−アラニン(Ｄ−ａｌａｎｉｎｅ)またはヒドロキシであり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃至Ｃ３０のアルキルであり，
ｌは，０乃至８０であり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【請求項１１】
Ｒ１は，
【化２５】
2013502456.tif 000071
であり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
Ｒ２乃至Ｒ４は，ヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
ｌは，０乃至８０であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１２】
Ｒ１は，
【化２６】
2013502456.tif 000072
であり，
Ｒ２，Ｒ３またはＲ４の中でいすれか一つは，
【化２７】
2013502456.tif 000073
であり，残りはヒドロキシであり，
この時，Ｒ’は，各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
ｎは，１であり，
ｌは，０乃至８０であり，
１乃至１４個の二重結合を有するアシル鎖を一つ以上含むことを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１３】
前記化学式(ＩＩ)は，下記化学式(ＩＩ−１)または化学式(ＩＩ−２)であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質：
【化２８】
2013502456.tif 000074
【化２９】
2013502456.tif 000075
前記式において，
Ｒ’’は，各々独立的にＮ−アセチルグルコサミン，Ｄ−アラニンまたはヒドロキシであり，
ｌは，０乃至８０である。
【請求項１４】
前記糖脂質は，乳酸菌由来のリポタイコ酸であることを特徴とする請求項９に記載の糖脂質。
【請求項１５】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス，ビフィドバクテリウム，ストレプトコッカスまたはラクトコッカス属であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１６】
前記乳酸菌は，ラクトバチルス・プランタラム(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ)，ラクトバチルス・ラムノーサス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ)，ラクトバチルス・デルブルッキ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ)，ラクトバチルス・アシドフィルス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ)，ラクトバチルス・ガセリ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ)，ラクトバチルス・ジョンソニイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ)，ラクトバチルス・ヘルベティカス(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ)，ラクトバチルス・カゼイ(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ)，ビフィドバクテリウム・ ビフィド(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｏ)，ビフィドバクテリウム・ロンガム(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ)，ビフィドバクテリウム・インファンティス(Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ)，ビフィドバクテリウム・アニマリス(ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ)，ストレプトコッカス・サーモフィルス(Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ)またはラクトコッカス・ラクティス(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ)であることを特徴とする請求項１０に記載の糖脂質。
【請求項１７】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれの一項による糖脂質を含むことを特徴とする薬学組成物。
【請求項１８】
抗生剤，担体，賦形剤及び希釈剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項１９】
薬学組成物の剤形は，散剤，顆粒剤，錠剤，カプセル剤，懸濁液，乳剤，シロップ，エアロゾルの経口製剤，外用剤，坐剤または滅菌注射液剤であることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項２０】
糖脂質は，薬学組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含まれることを特徴とする請求項１７に記載の薬学組成物。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質を含むことを特徴とする炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項２２】
炎症性疾患または免疫関連疾患は，敗血症，動脈硬化，菌血症，全身炎症反応症候群，多臓器機能不全，癌，骨粗鬆症，歯周炎，全身性｛ぜんしん せい｝エリテマトーデス，リュウマチ性関節炎，退行性関節炎，若年性慢性関節炎，脊椎関節症，全身性硬化症，特発性炎症性筋障害，シェーグレン症候群(Ｓｊｏｅｇｒｅｎ's ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，全身性脈管炎，サルコイドーシス(ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ)，自己免疫溶血性貧血，自己兔疫性血小板減少症，甲状腺炎，真性糖尿病，免疫介在性神経疾患，中枢神経系または末梢神経系の脱髄鞘疾患，特発性脱髄鞘多発性神経炎，ギラン・バレー症候群(Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，慢性炎症性脱髄鞘多発性神経炎，肝胆汁性疾患，感染性または自己兔疫性慢性活性肝炎，原発性胆汁性肝硬変，肉芽腫性肝炎，硬化性胆官炎，炎症性腸疾患(ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ)，潰瘍性大腸炎(Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ)，クローン病(Ｃｒｏｈｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，過敏性腸症候群(Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ Ｂｏｗｅｌ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ)，グルテン過敏性腸疾患，ウィップル病(Ｗｈｉｐｐｌｅ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ)，自己兔疫性または免疫介在性皮膚疾患，水疱性皮膚疾患多形性紅斑，接触性皮膚炎，乾癬，アレルギー性疾患，喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎，飲食過敏症，蕁麻疹，肺の免疫疾患，
好酸球性肺炎，特発性肺纎維症，過敏性肺炎，移植関連疾患移植拒否または移植片対宿主疾患であることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項２３】
薬学組成物の投与形態は，経口，直腸または静脈，筋肉，皮下，子宮内硬膜または脳血管内注射であることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物。 
【請求項２４】
糖脂質は，１日投与量が０.０１乃至１０,０００ｍｇ/ｋｇであることを特徴とする請求項２１に記載の炎症性疾患または免疫関連疾患の予防及び治療用薬学組成物 。
【請求項２５】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれの一項による糖脂質を含む ことを特徴とする食品組成物。
【請求項２６】
有機酸，リン酸塩，抗酸化剤，乳糖カゼイン，デキストリン，葡萄糖，砂糖及びソルビートルからなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２７】
糖脂質は，食品組成物１００重量部に対して０.０１乃至９９.９重量部で含まれることを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２８】
食品組成物の剤形は，固形，粉末，顆粒，錠剤，カプセルまたは液状形態であることを特徴とする請求項２５に記載の食品組成物。
【請求項２９】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質を含むことを特徴とする化粧品組成物。
【請求項３０】
ビタミン，アミノ酸，タンパク質，界面活性剤，乳化剤，香料，色素，安定製，防腐剤，抗酸化剤，紫外線遮断剤，ｐＨ調整剤及びキレート剤からなる群より選択される一つ以上の添加剤を追加で含むことを特徴とする請求項２９に記載の化粧品組成物。
【請求項３１】
請求項１乃至請求項１６の中でいずれか一項による糖脂質からなるか，これを含むことを特徴とするアジュバント。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７】
2013502456.tif 000076
【手続補正書】
【提出日】平成24年8月9日(2012.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
【化１】
2013502456.tif 000077
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
前記糖脂質は，下記の化学式(Ｉ)の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の糖脂質：
【化１６】
2013502456.tif 000078
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化１７】
2013502456.tif 000079
であり，
この時，Ｒ’は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃Ｃ３０のアルキルであり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【手続補正書】
【提出日】平成24年9月26日(2012.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
【化１】
2013502456.tif 000080
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
前記糖脂質は，下記の化学式(Ｉ)の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の糖脂質：
【化１６】
2013502456.tif 000081
前記式において，
Ｒ１乃至Ｒ４は，各々独立的にヒドロキシ，
【化１７】
2013502456.tif 000082
であり，
この時，Ｒ’は各々独立的にＣ１０乃至Ｃ３０の飽和または不飽和されたアシル鎖であり，
ｎは，０または１であり，
Ｃｍは，Ｃ４乃Ｃ３０のアルキルであり，
前記糖脂質内のアシル鎖の総数は，２乃至６である。
【国際調査報告】
2013502456.tif 000083
2013502456.tif 000084
2013502456.tif 000085
2013502456.tif 000086