(57)【要約】  患者の組織の抗菌処置で使用するためのキトサン、および患者の組織の抗菌処置で使用するためのキトサンを含む医薬組成物。微生物感染を治療する方法であって、該方法は患者に有効量のキトサンおよびキトサンを含む水溶液を投与する工程を含む。患者の組織の上皮細胞増殖促進処置で使用するためのキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物。上皮細胞の増殖を促進する方法であって、該方法は患者または上皮細胞含有細胞培養に有効量のキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物を投与する工程を含む。キトサンまたはキトサンを含む組成物からなることを特徴とする組織ドレッシング材料。
2013503818.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物感染の危険を防止すること、既存の微生物感染の微生物負荷を減少させること、微生物感染の拡大を防止するかまたは低下させること、のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せのための、患者の組織の抗菌処置で使用するための天然キトサンであって、該感染が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、ペニシリン耐性肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）感染、多剤耐性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せである、キトサン。
【請求項２】
該処置が、局所に限定されることを特徴とする、請求項１に記載のキトサン。
【請求項３】
該キトサンのアセチル化度が、４０％以下であることを特徴とする、請求項１または請求項２に記載のキトサン。
【請求項４】
該キトサンが脱アセチル化されていることを特徴とする、請求項３に記載のキトサン。
【請求項５】
該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化工程を伴う方法により調製可能であることを特徴とする、請求項３または請求項４に記載のキトサン。
【請求項６】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、６．５以上のｐＨで不溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項７】
該キトサンの１％よりも大きい画分が、６．５のｐＨで可溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項１または請求項６に記載のキトサン。
【請求項８】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、１０ｋＤ以上の分子量を有することを特徴とする、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項９】
該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項１０】
微生物感染の危険を防止すること、既存の微生物感染の微生物負荷を減少させること、微生物感染の拡大を防止するかまたは低下させること、のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せのための、患者の組織の抗菌処置で使用するための天然キトサンを含む医薬組成物であって、該感染が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル感染、ペニシリン耐性肺炎球菌感染、多剤耐性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）緑膿菌感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ感染のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せである、医薬組成物。
【請求項１１】
該医薬組成物が、アルコールを含まないことを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
該医薬組成物が液体であることを特徴とする、請求項１０または請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該医薬組成物がキトサンの水溶液であることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該医薬組成物が固体またはゲル様であることを特徴とする、請求項１０〜請求項１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
該処置が、局所に限定されることを特徴とする、請求項１０〜請求項１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル感染、ペニシリン耐性肺炎球菌感染、多剤耐性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）緑膿菌感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ感染による、微生物感染を治療する、微生物感染の該危険を防止する、あるいは微生物感染の該拡大を防止するかまたは低下させる方法であって、該方法が、患者に有効量の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
患者の組織の上皮細胞増殖促進処置で使用するための、天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物。
【請求項１８】
該上皮細胞がケラチノサイトであることを特徴とする、請求項１７に記載の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物。
【請求項１９】
上皮細胞の該増殖を促進する方法であって、該方法が、患者にまたは上皮細胞含有細胞培養に、有効量の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
該上皮細胞がケラチノサイトであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２１】
患者の組織の抗菌処置または上皮細胞増殖促進処置で使用するためのキトサンを調製する方法であって、該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化（ｄｅａｃｙｔｅｌａｔｉｏｎ）工程で脱アセチル化されることを特徴とする、方法。
【請求項２２】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンからなる組織ドレッシング材料。
【請求項２３】
該キトサンが天然キトサンであることを特徴とする、請求項２２に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２４】
該キトサンが脱アセチル化されていることを特徴とする、請求項２３に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２５】
該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化工程を伴う方法により調製可能であることを特徴とする、請求項２２〜請求項２４のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２６】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、６．５以上のｐＨで不溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項２２〜請求項２５のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２７】
該キトサンの１％よりも大きい画分が、６．５のｐＨで可溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項２２〜請求項２６のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２８】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンを含む組成物である組織ドレッシング材料。
【請求項２９】
該キトサン含有組成物が、アルコールを含まないか、または任意のその他の有機可溶化剤もしくは安定剤であることを特徴とする、請求項２８に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３０】
該キトサン含有組成物が液体であることを特徴とする、請求項２８または請求項２９に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３１】
該キトサン含有組成物がキトサンの水溶液であることを特徴とする、請求項３０に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３２】
該キトサン含有組成物が固体またはゲル様であることを特徴とする、請求項２８または請求項２９に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３３】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンを含む水溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キトサンの医学的用途およびキトサンを含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、微生物感染を治療する方法、およびキトサンを含む水溶液に関する。本発明はさらに、患者の組織の上皮細胞増殖促進処置のためのキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物、ならびに上皮細胞の増殖を促進する方法に関する。本発明はまた、組織ドレッシング（ｄｒｅｓｓｉｎｇ；被覆）材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
多糖キトサンは、キチンの少なくとも部分的なＮ−脱アセチル化誘導体である。キチンは、節足動物の外骨格、ゲル、甲殻類および昆虫の角皮において広く見出すことができる。キチンは通常そのような天然源に由来する。キトサンは、一般に、キチンの加水分解により合成的に調製されるが、その中で発生する所定の真菌から自然に直接的に引き出すこともできる。一般に、希酸中のキチンとキトサンの溶解性の違いは、これら２つの多糖を区別するため使用される。キトサンの可溶型は、０％〜約６０％の間のアセチル化度（ＤＡ）を有することができ、その上限は加工条件、分子量、および溶媒特性などのパラメータによって決まる。キトサンは酸性の水性媒体に可溶性であるものの、６．３よりも高いｐＨで沈殿する。
【０００３】
キチンおよびキトサンのどちらも、その生体適合性、生分解性およびグリコサミノグリカンとの構造的類似性のために、生物医学的応用に有望なポリマーである。キチンおよびキトサンの潜在的応用に関する包括的概説には、例えば、Ｓｈｉｇｅｍａｓａ  ａｎｄ  Ｍｉｎａｍｉ，「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｈｉｔｉｎ  ａｎｄ  ｃｈｉｔｏｓａｎ  ｆｏｒ  ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ」，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｇｅｎｅｔｉｃ．Ｅｎｇ．Ｒｅｖ．１９９６，１３，３８３；Ｋｕｍａｒ，「Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｈｉｔｉｎ  ａｎｄ  ｃｈｉｔｏｓａｎ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，Ｒｅａｃｔ．Ｆｕｎｃｔ．Ｐｏｌｙｍ．２０００，４６（１），１；および  Ｓｉｎｇｈ  ａｎｄ  Ｒａｙ，「Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｈｉｔｉｎ，ｃｈｉｔｏｓａｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０００，Ｃ４０（１），６９を参照されたい。
【０００４】
Ａｒａｎａｚ  ｅｔ  ａｌ．は、「Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｉｔｉｎ  ａｎｄ  ｃｈｉｔｏｓａｎ」，Ｃｕｒｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２００９，３，２０３において、細菌、酵母、および真菌に対する活性を含む、キトサンの抗菌活性を考察している。考察される第一の機構は、グラム陰性菌の細胞表面との相互作用を伴い、その相互作用は必要な溶質の輸送を妨げると考えられる。もう一つの機構は、細胞核におけるＲＮＡおよびタンパク質合成の抑制を伴う。この理論は、比較的低い分子量および比較的低いアセチル化度がキトサンの活性を増加させると予測していると思われる。しかし、一部の著者らがキトサンのアセチル化度と抗菌活性との間の明白な関係を見出していないことも指摘している。例えば、Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による研究において、２５％アセチル化キトサンは、１０％および５０％アセチル化キトサンのそれと比較してより効果的な抗菌活性を示した。その他の提案される機構は、キレート化剤としてのキトサンの活性、凝集タンパク質と相互作用するキトサンの活性、および真菌における膜機能の直接的妨害を伴う。
【０００５】
特許出願ＷＯ２０１０／０２１９３０Ａ１号は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌を含む細菌に対するいくつかのキトサン誘導体の活性を開示している。
【０００６】
特許出願ＵＳ２００９／０１１７２１３Ａ１号は、抗ウイルス作用、抗細菌作用および止血作用を有するキトサン／アルコール溶液を開示している。特に、１５０〜３００ｋＤ（キロダルトン）の間の分子量および５％のアセチル化度をもつキトサン１．５％を含む溶液（この溶液は２５％  ｖ／ｖエチルアルコールをさらに含む）は、インビトロでいくつかの細菌株に対して、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に対する中程度の活性を含む抗生物質活性を示した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、キトサンの新しい医学的使用を提供することである。本発明はさらに、医学的使用のためのキトサンを含む改良された医薬組成物を提供することを目的とする。さらに、本発明は、微生物感染を治療する新しい方法、およびキトサンの改良された製薬形態を提供しようとするものである。本発明のさらなる目的は、上皮細胞の増殖を促進する新しい方法を提供することである。本発明のもう一つの目的は、改良された組織ドレッシング材料、および改良された組織ドレッシング材料を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によれば、この問題は患者の組織の抗菌処置で使用するためのキトサンを提供することによって解決される。また、この問題は、患者の組織の抗菌処置で使用するためのキトサンを含む医薬組成物を提供することによっても解決される。
【０００９】
この問題はさらに、微生物感染を治療する方法を提供することによって解決され、該方法は、患者に有効量のキトサンを投与する工程を含む。この問題は、キトサンを含む水溶液を提供することによってさらに解決される。
【００１０】
従って、キトサンの抗菌特性が利用される。
【００１１】
本発明によれば、この問題は、患者の組織の上皮細胞増殖促進処置で使用するためのキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物を提供することによってさらに解決される。この問題は、上皮細胞の増殖を促進する方法を提供することによってさらに解決され、該方法は、患者に有効量のキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物を投与する工程を含む。従って、キトサンの上皮細胞増殖促進特性が利用される。上皮細胞は好ましくは、ヒト上皮細胞である。上皮細胞は好ましくは、ケラチノサイトである。
【００１２】
有利には、本発明によるキトサンおよび医薬組成物は、抗菌処置および上皮細胞増殖促進処置を同時に提供することができる。これは様々な種類の創傷の治療において特に有利である。一部の適した種類の創傷は、以下の本発明の好ましい実施形態の考察にさらに列挙されている。
【００１３】
この問題はまた、キトサンからなる組織ドレッシング材料を提供することによって、かつ、キトサンを含む組成物である組織ドレッシング材料を提供することによって解決される。本発明による組織ドレッシング材料の一つの達成可能な利点は、キトサンの抗菌特性のおかげで、さらなる抗菌剤または抗生物質を組織ドレッシング材料に添加せずに、それが多様な微生物を本質的に含まない状態を保つことができる点である。特に、本発明による組織ドレッシング材料は、さらなる抗菌剤または抗生物質を組織ドレッシング材料に添加せずに、適切な衛生要件に従って滅菌状態を保つことができる。
【００１４】
組織ドレッシング材料は、好ましくは創傷を手当てするために使用される。有利には、組織ドレッシング材料は、本発明による抗菌剤および／または上皮細胞促進処置に使用することができる。
【００１５】
本発明の状況において、患者はヒトまたは動物であり得る。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態
単独でまたは組み合わせて適用することのできる本発明の好ましい特徴は、従属請求項および以下の説明において考察される。
【００１７】
本発明の一部の実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、患者にインビボで適用することができる。あるいは、それはエクスビボで上皮細胞含有細胞培養に適用することができる。
【００１８】
好ましい処置は、次のうちの少なくとも１つまたはその組合せのための処置である。その処置とは、微生物感染の危険を防止すること、既存の微生物感染の微生物負荷を減少させること、微生物感染の拡大を防止または低下させること、である。本発明によるキトサンまたは医薬組成物は、処置される組織の内部および外部から微生物感染を保護する障壁として働くことができる。
【００１９】
抗菌処置は、好ましくは抗細菌処置であり、キトサンの抗生物質特性を利用する。好ましい適用には、院内感染が含まれる。好ましい適用には、多剤耐性細菌株での感染が含まれる。感染は、好ましくは、次のうちの少なくとも１つまたはその組合せである。その感染とは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、ペニシリン耐性肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）感染、多剤耐性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染、バンコマイシン耐性（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）感染、である。適した細菌としては、グラム陽性菌、グラム陰性菌および芽胞形成菌が挙げられる。適した細菌としては、例えば、黄色ブドウ球菌、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（Ａ群）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｅｌｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｏｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、バルトネラ・ヘンセラ菌（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、塹壕熱菌（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｑｕｉｎｔａｎａ）、コリネバクテリウム・ミヌティシマム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｃｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、緑膿菌が挙げられる。しかし、抗菌処置は、抗真菌処置（例えば皮膚糸状菌などの足白癬病に関与する真菌に対する）、またはそれに対する処置でもあり得る。適した真菌および酵母としては、例えば、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ケカビ属（Ｍｕｃｏｒ）（ムコール・プシルス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ）、ムコール・プランベウス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｌｕｍｂｅｕｓ）、ムコール・ラセモサス（Ｍｕｃｏｒ  ｒａｃｅｍｏｓｕｓ）、ムコール・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ））、スポロトリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）、ヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）、白癬菌属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）、ミクロスポルム属（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ）、エピデルモフィトン属（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）、ケラトミセス（Ｋｅｒａｔｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコッカス、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌ���ｉｃａｎｓ）、カンジダ・デュブリエンシス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｄｕｂｌｉｅｎｓｉｓ）、マラセジア・フルフル（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）が挙げられる。同様に、有利には、本発明による組織ドレッシング材料は、キトサンの存在によって、その他の抗菌剤または抗生物質を組織ドレッシング材料に添加せずに上記の微生物を本質的に含まない状態を保つことができる。
【００２０】
処置は、好ましくは局所に限定される（ｌｏｃａｌｌｙ  ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ）処置である。本発明の状況において「局所に限定される」とは、キトサンまたはキトサン含有組成物の活性が、それが適用されるこの組織およびそれが適用される組織に隣接する組織に本質的に制限されることを意味する。好ましくは、キトサンまたはキトサン含有組成物が同様に活性な、隣接する組織は、キトサンまたはキトサン含有組成物が適用される組織から１０ｍｍ（ミリメートル）よりも小さく、より好ましくは５ｍｍよりも小さく広がる。隣接する組織におけるこのような活性は、例えば、適用後の、適用部位から隣接組織へのキトサンまたはキトサン含有組成物の有効成分の輸送（例えば、拡散、毛管力、浸透輸送、キャビテーションによる）の結果であり得る。局所に限定される処置により、本質的に局所の活性のみを実現するために、キトサンまたはキトサン含有組成物が適用され従って活性が生じる部位を十分に制御することができることを利用することができる。有利には、全身作用、すなわちこのような活性が必要とされない、かつ／または望ましくない、患者の身体領域における医学的作用を回避することができる。従って、本発明は副作用を低減することができ、患者の迅速な回復に寄与することができる。
【００２１】
好ましい局所に限定される処置は、キトサンまたはキトサン含有組成物の外用である。しかし、内部処置も可能である。キトサンまたはキトサン含有組成物は、例えば患者の身体の明確に定義された部位に注入されるか、吸入されるかまたは嚥下されることができる。好ましくは、キトサンまたはキトサン含有組成物は、処置する組織に接触して、または処置する組織の周囲組織に接触して適用される。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態では、処置は、局所に限定される（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ）処置である。本発明の状況において「局所に限定される」とは、適用が、患者の組織の表面、例えば患者の皮膚の一部分で行われる「局所に限定される」処置をさす。本発明のこの実施形態により、キトサンまたはキトサン含有組成物の活性を、このような表面（例えば皮膚）および表面の直下の部位、好ましくは表面の１０ｍｍ未満、より好ましくは５ｍｍ未満下に制限することができることを有利に達成することができる。好ましい表面としては、健康な生体表面、感染表面、および創傷が挙げられる。これらの表面は、例えば直接適用により、例えば液滴、水洗、噴霧またはエアゾール吸入などにより局所に到達可能であり得る。表面には、動脈内（ｉ．ａ．）外部表面、外科的に生成された表面、および鼻腔表面、喉頭腔および肺胞を含む肺腔が含まれ得る。
【００２３】
本発明による処置は、持続的予防および／または急性期治療のためのものであり得る。
【００２４】
好ましくは、キトサンまたはキトサン含有組成物のキトサン成分は、キトサンまたはキトサン成分の濃度が、作用部位、例えば処置する組織において体積あたり１重量％よりも高い、より好ましくは０．１重量％よりも高い、より好ましくは０．０１重量％よりも高い場合、処置する微生物感染に特異的な薬剤活性を示す。他方では、キトサンまたはキトサン含有組成物のキトサン成分は、キトサンまたはキトサン成分の濃度が体積あたり０．００１重量％未満、より好ましくは０．０１重量％未満、より好ましくは０．１重量％未満である場合、好ましくは処置する微生物感染に対して特異的薬剤活性を示さない。従って、十分に高濃度のキトサンまたはキトサン成分が維持される、処置する組織などの作用部位に薬剤活性が局所に限定されることを実現することができる。
【００２５】
好ましくは、キトサンまたはキトサン含有医薬組成物のキトサン成分は、作用部位、例えば処置する組織におけるキトサンまたはキトサン成分の濃度が１００μＭ／Ｌよりも高い（マイクロモル／リットル）、より好ましくは１０μＭ／Ｌよりも高い、より好ましくは１μＭ／Ｌよりも高い場合に、処置する微生物感染に特異的な薬剤活性を示す。他方では、キトサンまたはキトサン含有医薬組成物のキトサン成分は、キトサンまたはキトサン成分の濃度が０．１μＭ／Ｌ未満、より好ましくは１μＭ／Ｌ未満、より好ましくは１０μＭ／Ｌ未満である場合に、好ましくは、処置する微生物感染に特異的な薬剤活性を示さない。
【００２６】
本発明によるキトサンまたはキトサン含有組成物は、好ましくは処置する組織の表面に適用される。処置する組織は、好ましくは一次元で（一般に奥行次元）１０ｍｍ未満、より好ましくは５ｍｍ未満の厚さである。この実施形態では、本発明によるキトサンまたはキトサン含有組成物を、このような組織の表面に適用することができ、好ましくは拡散により、組織において十分な濃度のキトサンまたはキトサン成分を実現して活性を示すことができることが利用される。
【００２７】
好ましく処置される組織としては、慢性創傷、手術後創傷、傷口、擦過創、火傷、剃刀負け、褥瘡、潰瘍組織、潰瘍性となりやすいウイルスに起因する創傷、皮膚病に罹患した組織、例えば足白癬病、糖尿病性足病変および乾癬、虫刺され、挫瘡、特に尋常性挫瘡に罹患した組織、紅斑性狼瘡、特に頬部発疹に罹患した組織、粘膜組織、腫瘍組織、扁桃腺、生殖器部の組織および体腔もしくは身体開口部の組織が挙げられる。本発明はまた、外科手術が患者に行われる場合に役立ち得る。創傷組織を処置する場合、キトサンまたはキトサン含有組成物は、創傷の中または創傷の上に適用され得る。
【００２８】
好ましいキトサンは、天然キトサンである。本発明の状況において、用語「天然キトサン」とは、ポリ（Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン−コ−Ｄ−グルコサミン）共重合体またはポリ（Ｄ−グルコサミン）ホモポリマーである、定義済みの化学物質であるキトサンをさす。あらゆる架橋されたかまたは別の方法で化学修飾されたキトサンが、天然キトサンとは異なる特性を有するキトサン誘導体とみなされる。本発明の状況において、用語「天然キトサン」には、キトサン塩基と、溶解されたかまたは溶解されていないキトサン塩の形態のキトサンの両方が含まれる。本発明の状況において、「キトサン」と呼ばれる場合、一般に、これは天然キトサンのあらゆる形態、塩または塩基であるか、あるいは架橋された、かつ／または別の方法で修飾されたポリ（Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン−コ−Ｄ−グルコサミン）共重合体またはポリ（Ｄ−グルコサミン）ホモポリマーのあらゆる誘導体であり得る。
【００２９】
好ましくは、キトサンのアセチル化度（ＤＡ）は、４０％以下、好ましくは２０％以下、好ましくは１０％以下である。好ましくは、キトサンは脱アセチル化されている。本発明の状況において、用語「脱アセチル化キトサン」とは、キトサンのＤＡが２．５％未満であることを意味する。そのように低いＤＡは、キトサンの抗菌活性に寄与し得る。本発明による好ましいキトサンまたはキトサン含有組成物において、脱アセチル化キトサンの、または脱アセチル化天然キトサンのＤＡは、２％以下、好ましくは１．５％以下、より好ましくは１％以下、より好ましくは０．５％以下である。有利には、そのような極めて低いアセチル化度は、本発明の抗菌特性をさらに改良することができる。また、キトサンのリゾチームによる（ｌｙｓｏｚｙｍａｌ）生分解またはその溶解は、制限されるかまたは妨げられ得る。
【００３０】
ＤＡは、例えば、Ｌａｖｅｒｔｕ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａ  ｖａｌｉｄａｔｅｄ  １Ｈ  ＮＭＲ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｇｒｅｅ  ｏｆ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｉｔｏｓａｎ」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．２００３，３２，１１４９に開示される１Ｈ  ＮＭＲ分光法を用いて得ることができる。本発明の状況において「脱アセチル化天然キトサン」とは、天然であり、上記定義に従って脱アセチル化されてもいるキトサンをさす。
【００３１】
好ましいキトサンは、少なくとも２つの脱アセチル化工程を伴う方法により調製することができる。２つの脱アセチル化工程は、少なくとも脱アセチル化の副生成物、例えば酢酸塩などが少なくとも部分的に除去される洗浄工程で区切られる（従って単一の脱アセチル化工程と区別される）。好ましくは、少なくとも１つの、より好ましくは全ての脱アセチル化工程が、加水分解工程である。加水分解工程は、キトサンと水酸化ナトリウムなどの水酸化物の溶液との混合を伴い得る。好ましくは、加水分解工程の間、キトサンは室温よりも高い温度、例えば１００℃に曝露される。好ましくは、各々の脱アセチル化工程の終わりに、キトサンを、例えば水で洗浄する。さらに、最後の脱アセチル化工程の少なくとも終わりに、好ましくは各々の脱アセチル化工程の終わりに、キトサンを乾燥させる。
【００３２】
本発明のある種の実施形態では、２つの脱アセチル化工程の間にアセチル化工程を実施する。好ましいアセチル化工程は、キトサンまたは酸性キトサン溶液を有機溶媒と混合し、それに続いて室温にてカルボン酸無水物で処置することを伴い得る。好ましくは、アセチル化工程の終わりに、アセチル化キトサンを洗浄および乾燥させる。
【００３３】
好ましくは、キトサンは、特定のｐＨで一方のキトサン画分が不溶性であるがもう一方が可溶性であるという意味で、特定のｐＨでの溶解度に関して２つの画分で存在する。従って、このｐＨで不溶性画分は、固体またはゲル様の形態、好ましくはヒドロゲルの形態をとることができ、従って可溶性画分を保持するリザーバまたはマトリックスとして働くことができ、その可溶性画分はリザーバまたはマトリックスから目的の組織または患者の血液の中に拡散することができることを有利に実現することができる。
【００３４】
好ましくは、キトサンの１０％よりも大きい画分は、少なくとも６．５のｐＨで、より好ましくは少なくとも６．５〜８．５の間のどのｐＨでも不溶性の形態で存在する。より好ましくは、該画分は、キトサンの２０％よりも大きく、より好ましくは５０％よりも大きく含む。より好ましくは、該画分はまた、６．３のｐＨで、より好ましくは少なくとも６．３〜８．５の間のどのｐＨでも不溶性である。本発明のこの実施形態において、有利には、キトサンまたはキトサン含有組成物は、固体またはゲル、好ましくはヒドロゲルの形態をとることができる。
【００３５】
好ましくは、キトサンの０．１％よりも大きい画分は、６．５のｐＨで可溶性の形態で存在する。より好ましくは、該画分は、キトサンの１％よりも大きく、より好ましくは５％よりも大きく、より好ましくは１０％よりも大きく含む。より好ましくは、該画分はまた、７．０のｐＨで、より好ましくは７．５のｐＨでも同様に可溶性である。本発明のこの実施形態で、キトサンの前記部分が処置する組織に容易に拡散することができることは、有利に達成可能である。
【００３６】
用語「可溶性」および「溶解する」は、キトサンを含む文脈で、水性環境での溶解度に起因して分子量が減少することのない（すなわちポリマー鎖長が減少することのない）キトサンの質量減少のプロセスをさすことを意味する。これは、キトサンの重合に起因する分子量減少のプロセスである「分解」と区別されるものである。
【００３７】
一般に、特定のキトサンが可溶性であるｐＨは、その鎖長、および従ってその分子量によって決まる。さらに、一般に、本発明による組成物のキトサンまたはキトサン成分は、分子量の分布を含有する。好ましくは、キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量は、１０ｋＤ（キロダルトン）以上である。より好ましくは、該画分は、キトサンの２０％よりも大きく、より好ましくは５０％よりも大きく含む。
【００３８】
好ましくは、キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量は、１０ｋＤ未満である。より好ましくは、該画分は、キトサンの１％よりも大きく、より好ましくは５％よりも大きく、より好ましくは１０％よりも大きく含む。より好ましくは、この画分の平均分子量は、１ｋＤよりも大きい。
【００３９】
好ましくは、キトサンは、キトサンに加えてその他の成分を含む組成物の部分である。しかし、キトサンは、好ましくは組成物の主成分である。本発明の状況において、キトサンまたはキトサンの種類（例えば一般的なキトサン、脱アセチル化キトサン、天然キトサンまたは脱アセチル化天然キトサン）に関して「主成分」という表現は、それぞれの種類のキトサンが、組成物の少なくとも５０重量％を構成することを意味する。従って、例えばキトサンまたはキトサン含有組成物材料が組織に適用される固体またはゲル様のフィルムとして提供される場合、このフィルムは、少なくとも５０重量％のそれぞれの種類のキトサンで構成されていることが必要とされる。液体のキトサン含有組成物の場合、水性混合物中の水以外の構成成分に関して「主成分」という表現は、水以外の全ての構成成分の組合せの少なくとも５０重量％がそれぞれの種類のキトサンでなければならないことを意味する。
【００４０】
好ましい組成物は、アルコールを含まない。このことは、組成物がそれを適用する組織に対して低刺激性であるという有利な点を有する。より好ましくは、組成物は、アルコールまたは任意のその他の有機可溶化剤もしくは安定剤を含まない。より好ましくは、キトサン含有組成物は、一般に、アルコールに加えて、エステル、アルカン、ハロゲン化溶媒、アミンおよびアミドを含む有機溶媒を含まない。しかし、それはしばしば有機酸を含有し得る。有機酸は本発明の状況において有機溶媒とみなされない。好ましくは、組成物材料は、さらなる防腐剤を含まない。それは無菌の薬剤、抗酸化剤および界面活性剤を含まないことが好ましく、それによって毒性反応またはアレルギー反応の危険を低下させる。
【００４１】
一部の実施形態では、キトサン含有組成物は、少なくとも１つのキトサン以外の薬学活性成分および／または生物活性成分を含む。適した生物活性成分は、例えば、タンパク質、ペプチドまたはその誘導体、核酸またはその誘導体、薬物、例えば抗生物質または抗炎症剤などとして活性のある低分子量化合物、または自然免疫系のアゴニストもしくはアンタゴニスト、または細胞の少なくとも１つのサブタイプの増殖を刺激または分化させるための刺激もしくは分化増殖因子、または創面から抽出される特定の成分に対する親和性をもつ樹脂、あるいは、溶解もしくは分散した、光吸収性、蛍光性またはリン光もしくは光反射性粒子などの装飾的機能をもつ化合物もしくはポリマーであり得る。あるいは、またはそれに加えて、キトサン含有組成物は、生体細胞を含むことができる。
【００４２】
本発明の１つの好ましい実施形態では、キトサン含有組成物は、適用部位でのｐＨを視覚的に示すためのｐＨ感受性色素を含む。ｐＨは、適用部位の組織の状態を示すための代用物として使用することができる。本発明の好ましい実施形態では、組成物は、特にそれが固体、ゲル様または以下でより詳細に説明される固化形態の場合に、透明である。有利には、組成物の外用において、このことは、処置する組織を、特にそれが創傷組織である場合に医師が検査することをより簡単にすることができる。一部の実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、透明な固体フィルムである。他では、組成物は組織に適用すると、透明なフィルムを生じる分散液、懸濁液または溶液などの混合物である。また、組成物がｐＨ感受性色素を含む場合、色素の色は、キトサン含有組成物の透明度によって判断することができる。
【００４３】
好ましい組成物は、液体である。一般に、適用後、少なくとも一画分の液体組成物は固化する、すなわち、組成物は固体またはゲル、例えばヒドロゲルに変わる。本発明の一部の実施形態では、適用時に液体組成物中に存在した溶媒の除去、好ましくは蒸発が、固化を引き起こすか、または少なくともその一因となる。その上にまたはあるいは、固化は、組成物のポリマー成分の化学的または物理的な架橋などのその他の要因により引き起こされるか、またはそれが一因となる。
【００４４】
本発明の達成可能な利点は、組成物の適用後にキトサンの濃度がその他の成分の、特に溶媒の除去によって、好ましくは蒸発により、増加し得ることである。そのような除去は、好ましくは自発的に、つまりさらなる化学物質または熱を加えるなどの濃縮プロセスを開始させるために任意のさらなる方策を必要とせずに起こる。言い換えれば、この材料は自己濃縮性である。好ましくは、自己濃縮プロセスを促進するために、キトサン材料またはキトサン含有組成物は、適用時に非吸湿性であるという点で選択される。
【００４５】
好ましくは、キトサン含有組成物は、水性混合物、例えば分散液または懸濁液、より好ましくは溶液である、すなわち、それはそれぞれ混合媒体または溶媒として水を含む。さらに、本発明の一部の実施形態では、それは共溶媒、例えばイソプロパノールなどのアルコールを含むことができる。このことは、組成物の（画分）の急速な固化が必要とされる場合に、溶媒の蒸発がより速いという点で有利であり得る。前に考察されるその他の実施形態は、一般に組織への刺激を回避するためにアルコールを含まない、好ましくは有機溶媒を含まない。
【００４６】
溶質またはより一般には混合物媒体に一旦とどまる組成物の構成成分は、組成物の固化により除去され、好ましくは天然キトサンの塩またはキトサン誘導体の塩などのキトサン塩を含み、より好ましくはそれからなる。好ましい塩は、塩酸などの無機酸、または２個〜１２個の炭素原子および１〜５の間の第一ｐＫａ値を有する一塩基または多塩基有機酸、例えば酢酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、マンデル酸、シュウ酸、酒石酸、アスコルビン酸などの群から選択される有機酸中の天然キトサンなどのキトサンの溶解から誘導されるものである。
【００４７】
好ましくは、キトサン、より好ましくは天然キトサンは、液体組成物の水以外の主成分である。好ましくは、水以外の混合物の構成成分の少なくとも７０重量％が、キトサン、好ましくは天然キトサンである。特に好ましい混合物は、本質的にキトサン、好ましくは天然キトサン、および水のみからなる。好ましい混合物は酸性である。
【００４８】
液体組成物中のキトサンの濃度は、好ましくは１５重量％未満、より好ましくは１０重量％未満、より好ましくは７．５重量％未満、より好ましくは５重量％未満、より好ましくは２．５重量％未満、より好ましくは１重量％未満である。液体組成物中のキトサンの濃度は、好ましくは、０．１重量％よりも大きい、より好ましくは０．２５重量％よりも大きい、より好ましくは０．５重量％よりも大きい、より好ましくは１重量％よりも大きい。
【００４９】
適用には、液体のキトサン含有組成物を、好ましくは組織の上に噴霧し、混合媒体または溶媒をその後に蒸発させて固体またはゲル様のフィルムを形成させる。一般に、フィルムは０．１μｍ〜５０μｍの厚さ、好ましくは１μｍ〜２５μｍの間である。それは、創傷などの処置する組織、および、好ましくは、周囲組織の一部も同様に被覆するのに十分な表面積を有する。従って、キトサン含有組成物は、好ましくは、キトサン含有組成物を患者の組織に噴霧するための噴霧装置中に、または噴霧装置と組み合わせて提供される。好ましい噴霧装置は、キトサン含有組成物を貯蔵するための容器を含む。それはまた、キトサン含有組成物を排出するための加圧ガスを含むこともできる。組成物は、キトサン含有組成物の組織への適用の直前または適用中に混合される、２以上の液体成分で提供することができる。この場合、噴霧装置は数個の容器からなり得、かつ／または数個の噴霧装置が提供され得、その各々が液体成分の１つを含有する。あるいは、液体のキトサン含有組成物は、組織の上にブラシで塗るか、またはスポンジ、スパチュラ、ピペット、またはガーゼを用いて適用することができる。従って、組成物は、好ましくは、キトサン含有組成物またはキトサン含有組成物の少なくとも１つの構成成分を組織に適用するためのスポンジ、ブラシ、スパチュラ、ピペットまたはガーゼと組み合わせて提供される。
【００５０】
あるいは、本発明によるキトサンまたは組成物は、固体またはゲル様の形態で、例えばヒドロゲルとして提供される。好ましくは、キトサンまたは組成物は、フィルムの形態を有する。フィルムは、広範な面積の組織、例えば皮膚の処置に特に有利である。好ましくは、フィルムは、処置する組織、例えば創傷などと、好ましくは一部の周囲組織も同様に被覆するために十分な表面積を有する。好ましいフィルムは、滑らかな表面を有し、好ましくは平均粗さＲａは１μｍ（マイクロメートル）以下、より好ましくは０．３μｍ以下、より好ましくは０．１μｍ以下である。有利には、滑らかな表面は、それが適用される組織への機械的定着（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ａｎｃｈｏｒｉｎｇ）の形成を減らすことができ、それにより、使用後のキトサンまたは組成物の除去を促進する。好ましいフィルムは、厚さが１０ｍｍ未満、より好ましくは１ｍｍ未満である。一般に、フィルムの乾燥時の厚さは、０．５μｍ〜５００μｍの間、好ましくは５μｍ〜１００μｍの間、より好ましくは１０μｍ〜５０μｍの間、より好ましくは２０μｍ〜３０μｍの間である。あるいは、固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物は、繊維または管の形状を有し得る。典型的な繊維または管は、厚さが１０μｍ〜１０ｍｍ（ミリメートル）の間、長さが１ｍｍ〜１００ｃｍ（センチメートル）の間である。
【００５１】
好ましくは、固体もしくはゲル様の組成物の少なくとも７０重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、より好ましくは少なくとも９５重量％が、キトサン、好ましくは天然キトサンである。
【００５２】
好ましい固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサンを含む組成物は、少なくとも一部分は水溶性である。言い換えれば、患者の（ｐａｔｅｎｔ’ｓ）組織に適用されるために提供される時に、それは中性のｐＨの水に少なくとも一部分溶解し得る。キトサンは、例えばキトサン塩、例えば天然キトサンまたはキトサン誘導体の塩であり得る。本発明のこの実施形態の達成可能な利点は、キトサンまたはキトサン含有組成物が組織にうまく付着することである。従って、キトサンまたはキトサン含有組成物が尚早に組織から剥離することを避けることができる。本発明のこの実施形態は、有利には、キトサン塩が中性のｐＨの水性溶媒に可溶性であるという事実を利用する。従って、湿ったまたは事前に湿らせた組織は、キトサンまたはキトサン含有組成物の表面を液化することができ、組織との耐久性のある接触をもたらす。好ましい塩は、塩酸などの無機酸、または２個〜１２個の炭素原子および１〜５の間の第一ｐＫａ値を有する一塩基または多塩基有機酸、例えば酢酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、マンデル酸、シュウ酸、酒石酸、アスコルビン酸などの群から選択される有機酸中の天然キトサンなどのキトサンの溶解から生じるものである。本発明の代替実施形態では、キトサンは、キトサン塩基の形態で存在する。
【００５３】
好ましくは、キトサン塩、より好ましくは天然キトサンの塩は、固体もしくはゲル様のキトサン含有組成物の主成分を構成する。より好ましくは、固体もしくはゲル様のキトサン含有組成物の少なくとも７０重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、より好ましくは少なくとも９５重量％は、キトサン塩、好ましくは天然キトサンの塩である。
【００５４】
液体キトサン含有キトサン含有組成物または固体もしくはゲル様の水溶性キトサンまたはキトサン含有組成物を適用した後、かつ液体組成物の場合には固化の間または後に、それを好ましくは水不溶型、例えばキトサン塩基に変換させる。この変換は、例えば、空気と接触した際のキトサン含有組成物の構成成分の蒸発に起因して起こり得る。また、それはキトサンと体液および／または組織自体の相互作用の結果でもあり得る。例えば比較的高いｐＨの血液および／または血液中に存在するタンパク質とキトサンの接着が、変換を誘導し得る。あるいはまたはそれに加えて、変換は、変換媒体、例えばアルカリ水溶液を、キトサンまたはキトサン含有組成物に適用することにより実現することができる。有利には、変換後、キトサンまたはキトサン含有組成物は依然として有効であり、従って通常条件下で、例えば、組織を水道水（中性のｐＨ）で洗浄するかまたは石鹸（アルカリ性）を適用する場合に、薬学的に活性であることを実現することができる。キトサンまたはキトサンを含む組成物は、キットとして、変換媒体と組み合わせて提供することができる。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、８．５よりも低い、好ましくは８よりも低い、特に好ましくは７〜７．５前後のｐＨを有する。好ましいｐＨは、６．３よりも高い、より好ましくは６．５よりも高い。本発明のこの実施形態の達成可能な利点は、キトサンの一方の画分は可溶性であって、他方は不溶性であり、可溶性画分のリザーバまたはマトリックスとしての機能を果たすことができることである。また、有利には、このｐＨは健康な組織のものに近く、その結果キトサン含有組成物を適用する組織の刺激または損傷が回避される。
【００５６】
本発明のもう一つの好ましい実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、６．３よりも低い、好ましくは６よりも低い、特に好ましくは５〜５．５前後のｐＨを有する。好ましいｐＨは３．０よりも高い、より好ましくは４．０よりも高い、より好ましくは４．５よりも高い。６．３のｐＨでキトサンは一般に水性媒体に可溶性であるので、この実施形態は、液体キトサン組成物に特に有利である。本発明のこの実施形態は、さらに、好ましくはキトサンまたはキトサン含有組成物の外用にあてはまる。本発明のこの実施形態の達成可能な利点は、ｐＨが健康な皮膚の表面のものに近く、その結果キトサンまたはキトサン組成物が付着している組織の刺激または損傷が回避されることである。さらに、その後の変換によって、ｐＨは６．３よりも高い、より好ましくは６．５よりも高く上昇し得るので、キトサンの一方の画分は可溶性のままであり得るが、一方は不溶性となり、可溶性画分のリザーバまたはマトリックスとしての機能を果たすことができる。
【００５７】
本発明者らは、グリセロールが固体キトサンまたはキトサン含有組成物に存在することが、水溶性の状態から、製品が酸性液体溶媒にのみ可溶性である状態への変換を加速し得ることを見出した。例えば、キトサン塩としての天然キトサン塩の場合、変換は、約１ヶ月からほんの１週間に加速され得る。本発明を特定の理論に制限するものではないが、本発明者らは、この加速は、キトサン塩の結晶構造を破壊するグリセロールの作用に起因し得ると考える。有利には、より速い変換により、変換の有益な効果がより早期に始まることが可能となる。グリセロール含有量は、好ましくは、重量で固体組成物のキトサン塩含有量の少なくとも１０重量％、より好ましくは少なくとも１５重量％、より好ましくは少なくとも２０重量％を構成する。グリセロールは、好ましくは１０重量％よりも大きい、より好ましくは１５重量％よりも大きい、より好ましくは２０重量％よりも大きい濃度で存在する。グリセロールは、好ましくは６０重量％未満、より好ましくは４５重量％未満、より好ましくは３０重量％未満の濃度で存在する。
【００５８】
本発明によるキトサンまたはキトサンを含む組成物は、好ましくは、使用後に、例えば交換するために、または治療の終わりに、患者の組織から水不溶性の固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物の分離を促進するための分離溶媒と組み合わせたキットとして提供される。本発明の状況において、「分離溶媒」は、キトサンまたはキトサン含有組成物が固体もしくはゲル様の状態である場合に適用することのできる、好ましくは少なくとも一部分それを溶解および／または膨潤させることにより組織から製品の分離を促進することのできる液体である。好ましい分離溶媒は、製品の患者の組織への付着性を低下させることができる。従って、分離溶媒によって、キトサンまたはキトサン含有組成物の除去の間に組織が損傷することを回避することができ、特に、キトサンまたはキトサン含有組成物を除去する場合、キトサンまたは医薬組成物に付着しているその下の組織の一部が引き裂かれることを回避することができる。いくつかある事例の中でも、創傷組織は、機械的ストレスに対して非常に感受性が高い可能性があるので、キトサンまたはキトサン含有組成物が創傷ドレッシング材または創傷ドレッシング材の一部として創傷に適用される場合が大いに有利であり得る。従って、本発明で、再生組織の刺激または損傷を回避することができる。キトサンまたはキトサン含有組成物を分離溶媒とともにキットで提供することにより、患者は、分離溶媒を事前に適用せずにキトサンまたはキトサン含有組成物を組織から分離しようとする可能性が低いという意味で、コンプライアンスを大幅に改善することができる。本発明によるキットは、使用者が別の不適当なまたはおそらくは有害でさえある溶媒を適用することを防ぐこともできる。
【００５９】
好ましくは、分離溶媒は、水性溶媒、例えば蒸留水、塩化ナトリウム水溶液などのイオン化合物の水溶液、酢酸／酢酸塩緩衝溶液などの緩衝溶液、またはグルコース水溶液などの非イオン化合物の水溶液である。有利には、水は溶媒として、多くの有機溶媒よりも皮膚に対して刺激が少ない。原則として本発明による水性分離溶媒は、水に加えて水以外の１以上の共溶媒、例えばイソプロパノールまたは別のアルコールなどの有機共溶媒を含み得るが、好ましい分離溶媒は、アルコール、エステル、アルカン、ハロゲン化溶媒、アミンおよびアミドを含む有機溶媒を含まない。しかし、それはしばしば有機酸を含有する。有機酸は、本発明の状況において有機溶媒とみなされない。
【００６０】
分離溶媒は、好ましくは酸性である。本発明のこの実施形態は、キトサンの溶解度がｐＨ依存性であり得るという事実を活用する。従って、有利には、分離溶媒のｐＨは、全てのキトサン画分が溶解する範囲から選択することができる。分離溶媒の好ましいｐＨは、６．５よりも低い、より好ましくは６．３よりも低い。より好ましくは、分離溶媒のｐＨは、６よりも低い、より好ましくは５．５よりも低い、より好ましくは５よりも低い。分離溶媒のｐＨは、好ましくは３．５よりも高い。従って、有利には高酸度の分離溶媒に起因する組織の刺激が回避され得る。より好ましくは、分離溶媒のｐＨは、４よりも高い、より好ましくは４．５よりも高い。好ましい分離溶媒は、界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎなどのポリソルベートを含む。あるいは、またはそれに加えて、それはポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールエステルなどの置換もしくは非置換のポリアルキレン酸化物を含むことができる。このような添加剤の存在により、固体の、ゲル様のまたは固化した液体キトサンまたはキトサン含有組成物の分離を大幅に促進することができることが見出された。
【００６１】
キット中に提供される分離溶媒の量は、キット中に提供されるキトサンの量の１重量あたり少なくとも５倍、より好ましくは１重量あたり少なくとも５０倍である。十分な量の分離溶媒を提供することにより、キトサンまたはキトサン含有組成物のｐＨが特定の閾値に入ることを回避することができる。適用には、分離溶媒を噴霧するか、ブラシでこするか、あるいはスポンジ、スパチュラ、ピペットまたはガーゼを用いて塗布することができる。従って、好ましいキットは、分離溶媒を適用するためのスポンジ、ブラシ、スパチュラ、ピペットまたはガーゼを含有する。分離溶媒は、例えば密封瓶または使い捨てのピペット中に、あるいは分離溶媒を浸したガーゼ、スポンジまたはゲルを用いて提供することができる。また、それは噴霧装置中に提供され得る。好ましい噴霧装置は、分離溶媒を貯蔵するための容器を含む。また、それは分離溶媒を排出するための加圧ガスを含むことができる。
【００６２】
本発明による好ましいキットは、固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサンを含む組成物と、キトサンを含む液体組成物の両方を含む。本発明による好ましい方法では、キトサン含有組成物の、最初に液体を、そしてその後に固体もしくはゲル様のキトサンを適用する。好ましくはこの方法では、固体またはゲル様の製品は、製品が固化する前に適用される。本発明者らは、液体製品が、固体またはゲル様の製品の目的組織への付着を促進することができることを見出した。これは、水溶性の固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサンを含む組成物について、そして水溶性の固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物を付着前に水で湿らせた代替法と比較すると、特にあてはまる。これは、後者の方法が、しばしば固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物の望ましくない変形を引き起こし、その変形は、固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物の付着のために、液体のキトサン含有組成物を適用することにより回避され得ることが見出されたためである。好ましくは、キット中の液体組成物は、本明細書に記載される好ましい液体のキトサン含有組成物の１つである。同様に、固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサンを含む組成物は、本明細書に記載される好ましい固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物の１つである。好ましくは、液体組成物および／または固体もしくはゲル様のキトサンまたはキトサン含有組成物と分離溶媒は、別々の容器中に提供される。
【００６３】
本発明によるキトサンまたはキトサンを含む医薬組成物は、組織ドレッシング材、好ましくは創傷ドレッシング材として適用することができる、あるいは、それは組織ドレッシング材または創傷ドレッシング材の一部を形成することができる。同様に、本発明による組織ドレッシング材料は、好ましくはその他の成分を含む組織ドレッシング材の一部である。本発明の好ましい実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、キトサンまたは組成物で形成される第一の層、および少なくとも別の材料から形成されるもう一方の層を含む組織ドレッシング材の一部であり、このもう一方の層は支持体の働きをする。特に、支持体は、有利には組織ドレッシング材の組織からの尚早の分離を防ぐのに役立ち得る。支持体は、好ましくは組織と接触している面と反対の、組織ドレッシング材の面に位置する。好ましくは、支持体はキトサンまたはキトサン含有組成物に隣接している。キトサン塩基は一般にキトサン塩を含有する組織ドレッシング材料ほど十分に組織に付着しないので、本発明による支持体は、それぞれの種類のキトサン、好ましくは脱アセチル化天然キトサンが、組織ドレッシング材料にキトサン塩基の形態で提供される場合に特に有利である。支持体は、例えば織物、発泡体または有孔フィルムであり得る。支持体は、例えば綿などの天然材料または天然もしくは合成ポリマーであり得る。適したポリマーとしては、生分解性ポリマー、例えばポリエステル、ポリオルソエステル、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリリン酸エステル、多糖、ポリペプチド、ならびにこれらのポリマーに基づく誘導体、共重合体、およびブレンドが挙げられる。また、適したポリマーとしては、生体溶解性（ｂｉｏｄｉｓｓｏｌｖａｂｌｅ）ポリマー、例えばポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、多糖、ポリペプチド、ならびにこれらのポリマーに基づく誘導体、共重合体、およびブレンドが挙げられる。さらに、支持体は、非生分解性／非生体溶解性ポリマー、例えばシリコーン、ポリウレタン、ポリエチレンテレフタラート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリエーテルエーテルケトン、ポリカーボネート、ポリメタクリレート、多糖、ポリペプチド、ならびにこれらのポリマーに基づく誘導体、共重合体、およびブレンドからなり得る。
【００６４】
本発明による好ましい組織ドレッシング材は、キトサンまたはキトサン含有組成物で形成される第一の層、および別の材料から形成されるもう一方の層を含み、このもう一方の層は少なくとも部分的な防湿層の働きをする。言い換えればもう一方の層は、本発明による組織ドレッシング材で組織を処置している間の水の蒸発を防ぐかまたは少なくとも遅延させることができる。これは、組織ドレッシング材が乾燥した創傷に適用される場合に特別な利点であり得る。もう一方の層は、好ましくは組織と接触している面と反対の組織ドレッシング材の層の面に位置する。好ましくは、もう一方の層は、キトサンまたはキトサン含有組成物に隣接している。本発明はまた、支持体層と、少なくとも部分的な防湿層の働きをする別の層の両方を有する組織ドレッシング材も包含する。当然、両方の機能、つまり支持体の機能と少なくとも部分的な防湿層の機能は、単一のその他の層で実現することもできる。もう一方の層は、例えばシリコーンまたは上に記載されるポリマーの群からの別のポリマーまたはポリマー組成物ででき得る。一般にもう一方の層は、１０〜１０００μｍの間、好ましくは５０〜５００μｍの間の厚さである。本発明の一部の実施形態では、もう一方の層は孔が開いている。穿孔の穴は、一般に直径が１０〜１５００μｍの間、好ましくは５０〜１０００μｍの間である。本発明の代替実施形態では、防湿層の代わりに、体液、例えば創傷滲出液を吸収することのできる層が提供される。適した材料は、例えば多糖系ヒドロゲルまたはセルロース誘導体を含む親水コロイド、またはポリウレタンフォームであり得る。これは、組織ドレッシング材が湿った創傷に適用される場合に特に有利であり得る。
【００６５】
本発明の好ましい実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物、好ましくは組織ドレッシング材は、それが容器の中に入っていて有効期間が過ぎていない限り、キトサンまたはキトサン含有組成物の、その液体もしくは水溶性の状態からその水不溶性の状態への変換を防ぐことのできる容器中で提供される。好ましくは、容器は防湿性であり、より好ましくはそれは本質的に気密性である。さらに、本発明の一部の実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物は、患者の組織に接触して適用されることが意図されるその面で、剥離可能なカバーシートで覆われる。カバーシートは、防湿性、より好ましくは空気不透過性である。これは、キトサンまたはキトサン含有組成物のその水溶性の状態の液体から、患者の組織に適用される前のその水不溶性の状態への尚早の変換の防止に寄与し得る。
【００６６】
好ましいキトサンまたはキトサン含有組成物は、１５００重量％未満、より好ましくは１００重量％未満、より好ましくは８０重量％未満の水分取込み能を有する。その結果、有利には、創傷治癒に好ましい湿度を、創傷部位に適用される組織ドレッシング材の下で維持することができることが達成可能である。好ましくは、固体もしくはゲル様の形態のキトサンまたはキトサン含有組成物の水分取込み能は、２５％よりも大きい、より好ましくは５０％よりも大きい。有利には本発明のこの実施形態は、滲出液および毒素を吸収するのに適している。本発明の特に好ましい実施形態では、キトサンまたはキトサン含有組成物の水分取込み能は、６５％〜７５％の間である。
【００６７】
本発明を、次の図面を用いてより詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】購入したままの天然キトサンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】さらなる加水分解工程の後に本質的に脱アセチル化した天然キトサンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】本発明によるキトサン溶液の、１２時間のインキュベーションの後に寒天プレートで培養した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）への効果を説明する図である。
【図４】本発明によるキトサン溶液の、１２時間のインキュベーションの後に寒天プレートで培養したスタフィロコッカス・カルノーサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｒｎｏｓｕｓ）への効果を説明する図である。
【図５】本発明によるキトサン調製物を含有する（Ａ）およびキトサンを含まない（Ｂ）Ｔｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ培地のサンプルを含む遠心管を示す図である。
【図６】大腸菌接種後の１６時間のインキュベーションの後の図３のサンプルを示す図である。
【図７】本発明によるキトサン繊維の、一晩インキュベーションした後に寒天プレートで培養したスタフィロコッカス・カルノーサスへの効果を説明する図である。
【図８】酢酸緩衝液で浸漬したガーゼを適用することによる、本発明によるキトサンの制御された溶解を説明する図である。
【図９】分離溶媒の適用の前（９ａ）、間（９ｂ）、および後（９ｃ）の、本発明によるキトサンを含む組織ドレッシング材を示す図である。
【図１０】本発明による液体のキトサン含有組成物を適用した創傷を概略的に説明する図である。
【図１１】本発明による固体のキトサン材料を適用した創傷を概略的に説明する図である。
【図１２】本発明による無孔創傷ドレッシング材を適用した創傷を概略的に説明する図である。
【図１３】本発明による有孔創傷ドレッシング材を適用した創傷を概略的に説明する図である。
【図１４】組織培養ポリスチレン対照（ＰＳ＝１００％）と比較した、様々なアセチル化度のキトサン材料でのケラチノサイトの細胞生存度を説明する図である。
【図１５】様々なアセチル化度のキトサン材料で増殖したヒトケラチノサイトの顕微鏡画像を示す図である（Ａ：１．５％；Ｂ：１４．５％）。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
＜１．１Ｈ  ＮＭＲ分光法＞
以下の実施例で用いるキトサンは、Ｃｏｇｎｉｓ（ドイツ国）より細かいフレークの形態で入手した。アセチル化度（ＤＡ）は、１Ｈ  ＮＭＲ分光法により決定した。図１は、この市販のキトサンから得た１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。図２は、以下にさらに説明されるように市販の製品に適用したさらなる加水分解工程の後に脱アセチル化したキトサンから得た対応する１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。いずれの場合も、キトサンは、約０．５％（ｗ／ｖ）のキトサン濃度のＤ２Ｏ中０．２５％ＤＣｌの混合物中で分析した。Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ２００スペクトロメーターを用いてスペクトルを記録した。ＮＭＲ化学シフト（δ、単位はｐｐｍ）は、ＨＤＯのシグナル（δ＝４．８ｐｐｍ）を基準とした。Ｄ−グルコサミンサブユニットのＨ２−Ｈ６に関連するピーク下の積分面積と、メチル基のそれとを比較することにより計算されるＤＡは、購入したままの天然キトサンについて１４．５％、および脱アセチル化天然キトサンについて１．５％と決定した。
【００７０】
＜２．低ＤＡキトサンの合成＞
さらなる加水分解のために、供給業者であるＣｏｇｎｉｓから入手した５０ｇ（グラム）のキトサンフレークをガラス容器に入れ、５００ｇの４５％水酸化ナトリウム水溶液を添加した。ガラス容器をよく振盪して成分を混合し、１００℃のオーブンの中に２時間入れた。次に、それをオーブンから取り出し、５００ｍＬ（ミリリットル）の蒸留水を添加した。混合物をガラスフリットで濾過した。次に、キトサンを蒸留水で濾液のｐＨが６．５に達するまで洗浄し、１００℃で４ｈ（時間）乾燥させた。次に、この加水分解処理を反復し、１Ｈ  ＮＭＲ分光法で測定して１．５％のアセチル化度を有する、４２ｇの脱アセチル化天然キトサンを得た。
【００７１】
＜３．キトサン溶液の調製（溶液Ａ１、Ａ２およびＡ３）＞
１５ｇの、このようにして得た１．５％のＤＡを有する天然キトサンを、５００ｍＬの２％酢酸水溶液に２４時間穏やかに振盪することにより溶解した。以下、この材料をキトサン溶液Ａ１と呼ぶ。
【００７２】
キトサン濃度が１．５％の第２のキトサン溶液を、５００ｍｌの蒸留水を５００ｍｌの溶液Ａ１に添加することによって得た。以下、この材料をキトサン溶液Ａ２と呼ぶ。
【００７３】
キトサン濃度が０．７５％の第３のキトサン溶液を、１５００ｍｌの蒸留水を５００ｍｌの溶液Ａ１に添加することによって得た。以下、この材料をキトサン溶液Ａ３と呼ぶ。
【００７４】
＜４．固体フィルム型キトサンの第１の実施例（キトサンＢ）の調製＞
２部の各々１４４ｍＬの溶液Ａ２を、２４×２４ｃｍ２（平方センチメートル）のサイズの２つの正方形の型に注入し、室温で乾燥させるために無塵環境に置いたままにした。得られるフィルムを最初の型から取り出し、１０ｋＧｙ（キログレイ）の電子線を用いて滅菌した。完全に脱アセチル化天然キトサン酢酸塩から本質的になる約８０μｍ厚さの透明フィルムを得た。以下、この材料をキトサンＢと呼ぶ。
【００７５】
＜５．固体フィルム型キトサンの第２の実施例（キトサンＣ）の調製＞
第２の型から乾燥したフィルムを、メタノール／水９０／１０（ｖ／ｖ）中１．５％アンモニアの溶液を含有する浴中に２時間入れた。次に、フィルムを浴から取り出し、室温貯蔵により乾燥させた。フィルムを１０ｋＧｙの電子線を用いて滅菌した。完全に脱アセチル化天然キトサン塩基から本質的になる厚さ約８０μｍの透明なフィルムを得た。以下、この材料をキトサンＣと呼ぶ。
【００７６】
＜６．固体フィルム型キトサンの第３の実施例（キトサンＤ１）の調製＞
１４４ｍＬの溶液Ａ２を、最初にガラス繊維フィルター（細孔径約１μｍ）で、次に滅菌用の０．２２μｍフィルターで濾過し、２４×２４ｃｍ２のサイズの正方形の型に注入し、室温で乾燥させるために無塵環境に置いた。３日貯蔵した後、得られるフィルムを型から取り出し、プラスチックバッグに移し、次いでそれを堅く密封し、２５ｋＧｙ（キログレイ）の電子線を用いて滅菌した。完全に脱アセチル化キトサン酢酸塩から本質的になる厚さ約８０μｍの透明なフィルムを得た。以下、この材料をキトサンＤ１と呼ぶ。
【００７７】
＜７．固体フィルム型キトサンの第４の実施例（キトサンＤ２）の調製＞
わずかに修正した手順で、４％（ｗ／ｗ）グリセロールを前の実施例の濾過溶液に添加した後、それを正方形の型に注入した。キトサンＤ１のための上記のその後の処理により、完全に脱アセチル化キトサン酢酸塩およびグリセロールの混合物から本質的になる透明なフィルムを得た。以下、この材料をキトサンＤ２と呼ぶ。
【００７８】
＜８．固体フィルム型キトサンの第５の実施例（キトサンＤ３）の調製＞
さらなる修正手順で、脱アセチル化キトサンのグリセロール含有溶液を、正方形の型に注入し、それをポリウレタン／ポリエチレンからなる２層フィルム（Ｐｌａｔｉｌｏｎ  Ｕ０７３  ＰＥ、Ｅｐｕｒｅｘ、ボムリッツ／ドイツ国）で、ポリウレタンの面を上に、ポリエチレンの面を型の底に固定して覆った。キトサンＤ１のための上記のその後の処理により、ポリウレタン／ポリエチレン支持体フィルムに付着した、完全に脱アセチル化キトサン酢酸塩およびグリセロールの混合物から本質的になる透明なフィルムを得た。以下、この材料をキトサンＤ３と呼ぶ。使用時に、ポリエチレン層を除去する。残りのポリウレタン層はガス透過性である。
【００７９】
＜９．固体フィルム型キトサンの第６の実施例（キトサンＤ４）の調製＞
キトサンフィルムＤ２の調製へわずかに修正した手順で、１％（ｗ／ｗ）グリセロールを濾過溶液に添加した後、それを正方形の型に注入した。キトサンＤ１のための上記のその後の処理により、完全に脱アセチル化キトサン酢酸塩およびグリセロールの混合物から本質的になる透明なフィルムを得た。以下、この材料をキトサンＤ４と呼ぶ。
【００８０】
＜１０．より高いＤＡのキトサンの２つの実施例（キトサンＥ１およびＦ１）の調製＞
キトサンの２つのさらなる実施例を、一方の例では加水分解工程を短縮し、４％のＤＡ（キトサンＥ１）をもたらし、もう一方の例では加水分解工程を完全に省いて、１６％のＤＡ（キトサンＦ１）をもたらす、わずかに変更したキトサンＤ１をもたらす手順により作成した。
【００８１】
＜１１．寒天での大腸菌の増殖の抑制＞
寒天プレートを２００μＬのグラム陽性菌大腸菌の懸濁液（約１０８細胞／ｍｌ）でコーティングした。円形の空洞がプレートにでき、１００μＬの溶液Ａ１をピペットでその空洞の中に移した。次に、プレートを３７℃で１２時間インキュベートした。実験の結果を図３に示す。キトサン溶液を含有する穴の周囲に明瞭な円形の抑制域を見出すことができ、キトサン溶液の大腸菌に対する抗生物質活性が示される。
【００８２】
＜１２．寒天でのスタフィロコッカス・カルノーサスの増殖の抑制＞
上記の実験をグラム陰性菌スタフィロコッカス・カルノーサスで反復した。寒天プレートを２００μＬの細菌の懸濁液（約１０８細胞／ｍｌ）でコーティングし、溶液Ａをピペットでプレートの空洞の中に移した。次に、プレートを３７℃で１２時間インキュベートした。実験の結果を図４に示す。キトサン溶液を含有する穴の周囲に明瞭な円形の抑制域を見出すことができ、キトサン溶液のスタフィロコッカス・カルノーサスに対する抗生物質活性が示される。
【００８３】
＜１３．液体培地での大腸菌の増殖の抑制＞
本発明によるキトサン調製物の抗生物質活性を試験するため、５ｍＬの溶液Ａ１に、１００μＬの、Ｔｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ液体培地中室温で一晩活性化させた大腸菌（光学細胞密度ＯＤ５００＝５）を播種した。サンプルを遠心管に充填し、図５の左側に示す（サンプルＡ）。比較のために、５ｍＬの、キトサンを含まないＴＳＢ培地に、１００μＬの一晩活性化させた大腸菌（光学細胞密度ＯＤ５００＝５）を播種した。キトサンを含まないサンプルを満たした遠心管を、図５の右側に示す（サンプルＢ）。播種の後に、振盪下室温にて１６時間のインキュベーションが続いた。
【００８４】
実験の結果を図６に示す。キトサンを含まない培地（サンプルＢ）では、溶液の濁度のかなりの増加が観察され、細菌の増殖が示された。対照的に、キトサン含有溶液（サンプルＡ）は、認められる濁度の増加を示さない。従って、この実験はＴｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ液体培地中での大腸菌に対するキトサン溶液の抗生物質活性を示す。
【００８５】
＜１４．液体培地での大腸菌の増殖の抑制＞
本発明によるキトサン調製物の抗生物質活性を試験する別の実験では、溶液Ａ１に、振盪下３７℃で１５時間ＬＢ培地（ｌｙｓｏｇｅｎｅ  ｂｒｏｔｈ  ｍｅｄｉｕｍ）中の大腸菌Ｋ１２（ＯＤ０．２）を播種した。溶液Ａ１を、異なる容積で添加して、表１に指定される最終キトサン濃度をもたらした。
【００８６】
この実験の結果を表１に要約する。
【００８７】
【表１】
2013503818.tif 000003
【００８８】
０．１％キトサンの、３７℃で１５時間０．２のＯＤで開始し、（大腸菌の最適増殖培地中での）振盪する対数増殖期の大腸菌への添加は、溶液の清澄化（ｃｌｅａｒｉｎｇ）をもたらし、溶液は５日のさらなる観察期間（振盪せず、室温）の間無菌のままであった。
【００８９】
＜１５．抗菌性保存有効性＞
抗菌性保存有効性を、Ｐｈ．Ｅｕｒ．７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５．１．３に記載される基準に従って溶液Ａ３で試験した。２つの容器を、各々２０ｍＬの溶液Ａ３で充填し、緑膿菌ＡＴＣＣ９０２７または黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ６５３８のいずれかの懸濁液を播種して１０５〜１０６微生物／ｍＬの接種菌液を得た。懸濁液を完全に混合して均質な分布を確保した。播種した生成物を光保護下２０℃〜２５℃で維持した。１ｍＬのサンプルを各々の容器からゼロ時および表２に指定される間隔で取り出し、生存微生物の数をプレートカウントにより決定した。
【００９０】
【表２】
2013503818.tif 000004
【００９１】
＜１６．キトサン繊維の抗菌活性＞
キトサン繊維の抗生物質活性を実証するため、キトサン繊維を、等量のＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）と混合した２％酢酸中４％キトサン溶液５０ｍＬを、長さ５０ｍｍ、内径１．０ｍｍの針を通じて押出することにより作製した。この針を、２Ｌ（リットル）のＮＭＰおよび３ｍＬの２５％アンモニア水溶液の混合物を含有する凝固浴に浸漬した。押出の完了後、繊維を一晩凝固浴に置いた。次に、それを０．１重量％の２５％アンモニア水溶液を含有する蒸留水中で２時間２回洗浄した後、室温にて乾燥させた。
【００９２】
スタフィロコッカス・カルノーサスを、Ｔｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ増殖培地中で室温にて一晩培養した。その後、５００μＬの、このようにして得た細菌懸濁液を用いてｐＨ５．５のミューラー・ヒントン寒天プレートを被覆した。長さ４センチメートル、直径０．２ミリメートルのキトサン繊維片をプレートに置き、３７℃で一晩インキュベートした。
【００９３】
実験の結果を図７に示す。明瞭な抑制域がキトサン繊維の周囲に観察され、スタフィロコッカス・カルノーサスに対する繊維の抗生物質活性が示された。
【００９４】
＜１７．ＭＲＳＡ感染の処置＞
顔面の創傷からの再発性の重度の出血に関連する脳−眼窩−顔面（ｃｅｒｅｂｒｏ−ｏｒｂｉｔｏ−ｆａｃｉａｌ）の動静脈奇形を患う３９歳の男性患者が、ＭＲＳＡ創傷感染と診断された。男性を、キトサン溶液Ａ３を毎日３週間、顔面の創傷に噴霧することにより処置した。処置後、ＭＲＳＡ生存微生物は、もはや検出することができず、キトサン処置の部位にその他の微生物感染を見出すこともできなかった。
【００９５】
＜１８．キトサンＣの水分取込み＞
上記実施例に記載される通り作製されたキトサンＣを秤量し、次に蒸留水の中に１５分間入れた。湿ったフィルムの重量を乾燥したフィルムの重量と比較し、水分取込みを７２重量％と決定した。
【００９６】
＜１９．キトサンＤ４の水分取込み＞
上記実施例に記載される通り作製されたキトサンＤ４を秤量し、次に蒸留水の中に６０分間入れた。湿ったフィルムの重量を乾燥したフィルムの重量と比較し、水分取込みをフィルム作製の７日後に１２１７重量％、フィルム作製の１４日後に４７５重量％と決定した。
【００９７】
＜２０．キトサンの溶解＞
キトサンＢおよびＣの制御溶解を、蒸留水、０．９％塩化ナトリウム水溶液、および０．５％酢酸／酢酸塩緩衝溶液をそれぞれ用いる溶解実験で試験した。適切な量の１Ｎ塩酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて、溶液のｐＨを表２に示される値に調節した。キトサンＢおよびＣを、各々５〜１０ｍｇの間の乾燥重量を有する長方形のサンプルに切断した。フィルムの乾燥重量に対して、容積当たり１００倍過剰（１００−ｆｏｌｄ  ｐｅｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ｅｘｃｅｓｓ）のそれぞれの溶液に浸したガーゼを各々のサンプルフィルムに適用し、完全なフィルムの溶解のための時間を記録した。
【００９８】
【表３】
2013503818.tif 000005
【００９９】
キトサン材料Ｃおよび０．５％酢酸／酢酸ナトリウム（表３の右列）の混合物での制御溶解実験を、図８に説明する。材料は、より良い視覚化のために０．０１％インジゴカルミン水溶液中で１時間貯蔵することにより染色した。完全な溶解は、ｐＨ４．０および４．５で３０分後に、ｐＨ５．０で２時間後に、ｐＨ５．５で４時間後にそれぞれ観察された。
【０１００】
＜２１．水溶性キトサンの水不溶性キトサンへの原位置での変換＞
溶液Ａ２およびキトサンＤ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４のサンプルを、室温および湿度２０〜４０％で密封せずに空気中に放置した。これらの条件下、数時間以内に溶液Ａ２を乾燥させて固体フィルムとした。蒸留水への完全な溶解を、３日、７日、および１４日に分析した。結果を表４に要約する。
【０１０１】
【表４】
2013503818.tif 000006
【０１０２】
同様に、乾燥した溶液Ａ２およびキトサンＤ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４の水溶性から水不溶性形態への変換を、創傷ドレッシング材をヒト皮膚に適用した後に観察した。Ｄ３の場合、キトサンを、そのキトサンの面で皮膚に適用した。乾燥した溶液Ａ２およびキトサンＤ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４の水溶性から水不溶性形態への変換は、アルカリ処理またはアルカリ雰囲気中での貯蔵の後にも観察された。
【０１０３】
＜２２．分離溶媒でのキトサンの溶解＞
キトサンＤ１、Ｅ１およびＦ１を、２％酢酸／酢酸塩緩衝溶液中に貯蔵することにより溶解した。貯蔵溶液のｐＨを、適切な量の１０％水酸化ナトリウム溶液を用いて表５に示される値に調節した。様々なアセチル化度（ＤＡ）のキトサンから作成したフィルムＤ１、Ｅ１およびＦ１を、水不溶性形態への変換のために１４日間空気中に放置し、１×１ｃｍ２サイズの長方形のサンプルに切断し、約１０ｍＬのそれぞれの溶液中で貯蔵し、完全なフィルム溶解にかかる時間を記録した。
【０１０４】
【表５】
2013503818.tif 000007
【０１０５】
もう一つの溶解実験では、フィルムＣ（３×１ｃｍ２）を市販の有孔バンドエイド（５×２ｃｍ）の内側に固定し、次にそれをペトリ皿に固定した。酢酸／酢酸塩緩衝溶液（ｐＨ５．５）をバンドエイドの孔を通じて滴下し、創傷ドレッシング材料フィルムを溶解させた。フィルムを含む組織ドレッシング材の面を、溶液の適用前の図９ａおよび適用後の図９ｃに示す。創傷ドレッシング材のバンドエイドの面への溶液の適用を、図９ｂに示す。
【０１０６】
＜２３．低ＤＡキトサンの不溶性および可溶性画分の分析＞
実施例２に記載されるように調製される、ＤＡが１．５％のキトサンの０．１ｇサンプルを、各々１０ｍｌのリン酸塩緩衝溶液の中に入れ、ｐＨ７．４で穏やかに振盪しながら室温で保持した。表Ｘに示される時点で、混合物を濾過し、フィルターに残っている不溶性のキトサンを完全に洗浄し、最後に乾燥させた。不溶性キトサンの量を実験室規模で重量測定法によって決定した。結果を表６に要約する。
【０１０７】
【表６】
2013503818.tif 000008
【０１０８】
＜２４．低ＤＡキトサンでの細胞生存力＞
それぞれ１．５％、４．０％、および１４．５％のＤＡを有するキトサンフィルムを、２４ウェル細胞培養プレートに入れ、ヒトＨａＣａＴケラチノサイトを５×１０４細胞／ｃｍ２の密度で播種し、２日間培養した。ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞生存力を決定した。細胞でのＭＴＳインキュベーションの４時間後、４９０ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーにより測定し、対照（細胞を含まない）のそれから減算して補正した吸光度を得た。各々のＤＡの５つのサンプルを試験した。図１４は、３つのサンプルおよびポリスチレン（ＰＳ）を用いる対照についての４９０ｎｍでの相対吸光度α（ＰＳ＝１００％）を示す。
【０１０９】
＜２５．異なるＤＡのキトサンでの細胞増殖＞
ヒトケラチノサイト（５×１０４細胞／ウェル）を、２４ウェルプレートに置いて、それぞれ１．５％および１４．５％のＤＡを有するキトサンフィルム上で３７℃にて２日間増殖させた。試験のために細胞をヒト皮膚から単離し、サブコンフルエントに達するまで増殖させた。２４時間後、非付着細胞を除去するために培地（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍｉｘを含むケラチノサイト培地、Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）を交換した。図１５は、インキュベーションの１日後にキトサンフィルムで増殖した細胞の代表例を示す。
【０１１０】
図１０では、創傷２を含む組織１が概略的に示される。より分かりやすく説明するために、図５〜図８は縮尺どおりに描かれていない。本発明による液体のキトサン含有組成物を、組織２に適用し、構成成分の水を蒸発させ、創傷３を含む組織２を手当てするフィルム３を後に残した。一般に、フィルム３は約１０μｍ〜２０μｍの厚さである。有利には、フィルム３は、創傷表面５を含む組織表面４にぴったりと寄り添う。
【０１１１】
図１１は、創傷２を含む組織１に適用される固体フィルム６の形態のキトサンを概略的に示す。固体フィルムは、約８０μｍの厚さである。組織１とキトサン６との間の空洞７、８は、水または滲出液で満たされ得る。
【０１１２】
図１２では、第１の層として図１１のキトサンフィルム６および第２の層としてシリコンフィルム１０を含む組織ドレッシング材９を、創傷２を含む組織１に適用する。シリコンフィルム１０は、約５０μｍの厚さ（ｔｉｃｋ）である。この場合もやはり、組織１と組織ドレッシング材料６との間の空洞７、８は、水または滲出液で満たされ得る。最後に、図１３は、創傷２を含む組織１に適用された組織ドレッシング材１１を示し、組織ドレッシング材１１は、シリコンフィルム１０に穿孔があり、創傷ドレッシング材料６を通して（ｔｈｏｕｇｈ）組織１と周囲との間の空気の交換を可能にするという点で図１２の組織ドレッシング材９とは異なっている。穿孔は、５０μｍ〜１００μｍの間の直径を有する。
【０１１３】
上記の説明、特許請求の範囲および図に記載される特徴は、どんな組合せでも、本発明に関連し得る。特許請求の範囲の参照番号は、単に特許請求の範囲の解釈を促進するために導入されたものであり、決して制限されることを意味するものではない。
【図１】
2013503818.tif 000009
【図２】
2013503818.tif 000010
【図３】
2013503818.tif 000011
【図４】
2013503818.tif 000012
【図５】
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【図６】
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【図７】
2013503818.tif 000015
【図８】
2013503818.tif 000016
【図９ａ】
2013503818.tif 000017
【図９ｂ】
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【図９ｃ】
2013503818.tif 000019
【図１０】
2013503818.tif 000020
【図１１】
2013503818.tif 000021
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年11月5日(2012.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物感染の危険を防止すること、既存の微生物感染の微生物負荷を減少させること、微生物感染の拡大を防止するかまたは低下させること、のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せのための、患者の組織の抗菌処置で使用するための天然キトサンであって、該感染が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、ペニシリン耐性肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）感染、多剤耐性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）感染のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せである、キトサン。
【請求項２】
該処置が、局所に限定されることを特徴とする、請求項１に記載のキトサン。
【請求項３】
該キトサンのアセチル化度が、４０％以下であることを特徴とする、請求項１または請求項２に記載のキトサン。
【請求項４】
該キトサンが脱アセチル化されていることを特徴とする、請求項３に記載のキトサン。
【請求項５】
該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化工程を伴う方法により調製可能であることを特徴とする、請求項３または請求項４に記載のキトサン。
【請求項６】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、６．５以上のｐＨで不溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項７】
該キトサンの１％よりも大きい画分が、６．５のｐＨで可溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項１または請求項６に記載のキトサン。
【請求項８】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、１０ｋＤ以上の分子量を有することを特徴とする、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項９】
該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載のキトサン。
【請求項１０】
微生物感染の危険を防止すること、既存の微生物感染の微生物負荷を減少させること、微生物感染の拡大を防止するかまたは低下させること、のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せのための、患者の組織の抗菌処置で使用するための天然キトサンを含む医薬組成物であって、該感染が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル感染、ペニシリン耐性肺炎球菌感染、多剤耐性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）緑膿菌感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ感染のうちの少なくとも１つまたはそれらの組合せである、医薬組成物。
【請求項１１】
該医薬組成物が、アルコールを含まないことを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
該医薬組成物が液体であることを特徴とする、請求項１０または請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該医薬組成物がキトサンの水溶液であることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該医薬組成物が固体またはゲル様であることを特徴とする、請求項１０〜請求項１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
該処置が、局所に限定されることを特徴とする、請求項１０〜請求項１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）感染、多剤耐性クロストリジウム・ディフィシル感染、ペニシリン耐性肺炎球菌感染、多剤耐性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）緑膿菌感染、多剤耐性アシネトバクター・バウマンニ感染による、微生物感染を治療する、微生物感染の該危険を防止する、あるいは微生物感染の該拡大を防止するかまたは低下させる方法であって、該方法が、患者（ヒトを除く）に有効量の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
患者の組織の上皮細胞増殖促進処置で使用するための、天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物。
【請求項１８】
該上皮細胞がケラチノサイトであることを特徴とする、請求項１７に記載の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物。
【請求項１９】
上皮細胞の該増殖を促進する方法であって、該方法が、患者（ヒトを除く）にまたは上皮細胞含有細胞培養に、有効量の天然キトサンまたは天然キトサンを含む医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
該上皮細胞がケラチノサイトであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２１】
患者（ヒトを除く）の組織の抗菌処置または上皮細胞増殖促進処置で使用するためのキトサンを調製する方法であって、該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化（ｄｅａｃｙｔｅｌａｔｉｏｎ）工程で脱アセチル化されることを特徴とする、方法。
【請求項２２】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンからなる組織ドレッシング材料。
【請求項２３】
該キトサンが天然キトサンであることを特徴とする、請求項２２に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２４】
該キトサンが脱アセチル化されていることを特徴とする、請求項２３に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２５】
該キトサンが、少なくとも２つの脱アセチル化工程を伴う方法により調製可能であることを特徴とする、請求項２２〜請求項２４のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２６】
該キトサンの１０％よりも大きい画分が、６．５以上のｐＨで不溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項２２〜請求項２５のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２７】
該キトサンの１％よりも大きい画分が、６．５のｐＨで可溶性の形態で存在することを特徴とする、請求項２２〜請求項２６のいずれか一項に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項２８】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンを含む組成物である組織ドレッシング材料。
【請求項２９】
該キトサン含有組成物が、アルコールを含まないか、または任意のその他の有機可溶化剤もしくは安定剤であることを特徴とする、請求項２８に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３０】
該キトサン含有組成物が液体であることを特徴とする、請求項２８または請求項２９に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３１】
該キトサン含有組成物がキトサンの水溶液であることを特徴とする、請求項３０に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３２】
該キトサン含有組成物が固体またはゲル様であることを特徴とする、請求項２８または請求項２９に記載の組織ドレッシング材料。
【請求項３３】
キトサンの１０％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ以上であり、該キトサンの０．１％よりも大きい画分の分子量が１０ｋＤ未満であることを特徴とする、アセチル化度が２０％以下の該キトサンを含む水溶液。
【国際調査報告】
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2013503818.tif 000028
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