(57)【要約】  以下の式を有する化合物：2013503170.tif 000026（式中、Ｒ１およびＲ２は本明細書に定義される通りである）、ならびにその作製および使用方法が開示される。
2013503170.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉによる化合物またはその塩：
【化１】
2013503170.tif 000025
［式中、
Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−ＯＲａであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−ＯＲａであり；および
Ｒａは、１〜３回ハロゲンにより置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルであり；
ただし、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１はメチルではない］。
【請求項２】
Ｒ１が、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、およびトリフルオロメトキシから選択され；
Ｒ２が、水素、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびメチルから選択される、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項３】
Ｒ２が、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびメチルから選択される、請求項１または２に記載の化合物または塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩と１種以上の医薬的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項５】
ＴＮＮＩ３Ｋと、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩とを接触させることを含んでなる、ＴＮＮＩ３Ｋを阻害する方法。
【請求項６】
鬱血性心不全を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩を投与することを含んでなる、方法。
【請求項７】
鬱血性心不全を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、請求項４に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項８】
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジブロモ−４−｛［６，−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−ブロモ−５−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジメチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［３−ブロモ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−ブロモ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−３−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−フルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−５−メチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−５−エチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、および
Ｎ−｛３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−［（トリフルオロメチル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
から選択される化合物およびその医薬的に許容可能な塩。
【請求項９】
請求項８に記載の化合物または塩と１種以上の医薬的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１０】
ＴＮＮＩ３Ｋと、請求項８に記載の化合物または塩とを接触させることを含んでなる、ＴＮＮＩ３Ｋを阻害する方法。
【請求項１１】
鬱血性心不全を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の請求項８に記載の化合物または塩を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１２】
鬱血性心不全を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、請求項９に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＮＮＩ３Ｋを阻害する化合物ならびにその作製および使用方法に関する。具体的には、本発明は、ＴＮＮＩ３Ｋ阻害剤としてのＮ−（４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＡＲＫ（心臓アンキリンリピートキナーゼ）としても知られている、心臓トロポニンＩ相互作用キナーゼ（ＴＮＮＩ３Ｋ）は、心臓組織に対して高い選択的発現を示すプロテインキナーゼであり、トロポニンＩを含むサルコメアの成分と相互作用することが示されている（Ｚｈａｏ，Ｙ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，２００３，８１，２９７−３０４；Ｆｅｎｇ，Ｙ．ら，Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２００７，２６，１０４−１０９；Ｗａｎｇ，Ｈ．ら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，２００８，１２，３０４−３１５）。ＴＮＮＩ３Ｋの基質は今まで同定されていなかったが、最近の報告により、このタンパク質は、圧力誘起による心筋細胞肥大および収縮不全の進行にある役割を果たし得ることが示唆されている（Ｗｈｅｅｌｅｒ，Ｆ．Ｃ．ら，Ｍａｍｍ．Ｇｅｎｏｍｅ，２００５，１６，４１４−４２３；Ｗａｎｇ，Ｘ．ら，「ＴＮＮＩ３Ｋ，ａ  ｃａｒｄｉａｃ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋｉｎａｓｅ，ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｃａｒｄｉａｃ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」，Ｐｏｓｔｅｒ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｔ  ｔｈｅ  ２００６  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｅｓｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）。ＴＮＮＩ３Ｋのキナーゼ活性の阻害はこれらのシグナル伝達経路を破壊でき、心不全が徐々に悪化している患者に見られる心臓肥大を軽減および／または反転できる。
【０００３】
心臓は、機械的、神経ホルモン的、および遺伝子的刺激に応答して、組織の酸素要求量を満たすのに十分な心拍出量を維持するために、肥大または筋成長し、かつ再造形される。これらの構造的変化は代償性として初期に見られるが、肥大シグナル伝達の持続した異常調節は、ポンプとして心臓がもはや適切に機能できなくなる病態生理学的状態である、心不全を導く場合がある（Ｍｕｄｄ，Ｊ．Ｏ．およびＫａｓｓ，Ｄ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００８，４５１，９１９−９２８）。病理学的心臓肥大の予防または反転は、鬱血性心不全の進行を遅延または予防する可能性を有する（ＭｃＫｉｎｓｅｙ，Ｔ．Ａ．およびＫａｓｓ，Ｄ．Ａ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，２００７，６，６１７−６３５；Ｋａｙｅ，Ｄ．Ｍ．およびＫｒｕｍ，Ｈ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，２００７，６，１２７−１３９）。
【０００４】
心不全は、かなりの割合の病人において生活の質の低下および早まった死の原因となり、低下したポンプ機能（収縮機能障害）または低下した充填（拡張機能障害）のいずれかに起因する心臓機能の障害により特徴付けられる。鬱血性心不全（ＣＨＦ）は、左心室機能の障害、増加した末梢血管抵抗および肺血管抵抗ならびに低下した運動耐容能および呼吸困難により特徴付けられる。心不全の有病率は高齢化と共に増加すると予測され、心不全を治療する新規かつ改良された方法の必要性が生じている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は新規のジアリール尿素に関する。具体的には、本発明は式Ｉによる化合物またはその塩：
【化１】
2013503170.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−ＯＲａであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、または−ＯＲａであり；および
Ｒａは、１〜３回ハロゲンにより置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルであり；
ただし、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１はメチルではない］
に関する。
【０００６】
本発明の化合物はＴＮＮＩ３Ｋの阻害剤であり、心臓病および心疾患、特に心不全の治療に有用であり得る。従って、本発明はさらに、本発明の化合物を含んでなる、医薬組成物に関する。本発明はなおさらに、ＴＮＮＩ３Ｋを阻害する方法および本発明の化合物または本発明の化合物を含んでなる、医薬組成物を用いてＴＮＮＩ３Ｋに関連する病態を治療する方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本明細書で用いる、用語「アルキル」は、直鎖または分枝鎖飽和炭化水素を示し、それは、非置換であってもよいし、または本明細書で定義される置換基の１つまたは複数により置換されていてもよい。例示的なアルキルとしては、限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、およびｔ−ブチルが挙げられる。用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を指す。
【０００８】
用語「ハロゲン」および「ハロ」は、クロロ、フルオロ、ブロモまたはヨード置換基を示す。
【０００９】
本発明の一実施形態は、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩（式中、Ｒ１は、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、およびトリフルオロメトキシから選択され；Ｒ２は、水素、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびメチルから選択される）である。本発明の別の実施形態において、Ｒ２は、クロロ、フルオロ、ブロモ、およびメチルから選択される。
【００１０】
本発明の特定の化合物は、
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジブロモ−４−｛［６，−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−ブロモ−５−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３，５−ジメチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［３−ブロモ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−ブロモ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−３−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−［３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−（メチルオキシ）フェニル］−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−フルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−５−メチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、
Ｎ−（３−クロロ−５−エチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素、および
Ｎ−｛３−クロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝−５−［（トリフルオロメチル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
およびこれらの塩、特に医薬的に許容可能な塩である。
【００１１】
本発明の代表的な化合物は実施例１〜１４の化合物を含む。
【００１２】
式Ｉによる化合物は１つ以上の不斉中心（キラル中心とも称される）を含んでもよく、従って、個々の鏡像異性体、ジアステレオマーもしくは他の立体異性体、またはそれらの混合物として存在してもよい。キラル炭素原子などのキラル中心はまた、アルキル基などの置換基に存在してもよい。式Ｉまたは本明細書に示した任意の化学構造に存在するキラル中心の立体化学が特定されない場合、その構造は全ての個々の立体異性体およびそれらの全ての混合物を包含することが意図されている。従って、１つ以上のキラル中心を含む式Ｉによる化合物は、ラセミ混合物、鏡像異性的に濃縮された混合物、または鏡像異性的に純粋な個々の立体異性体として使用されてもよい。
【００１３】
１つ以上の不斉中心を含む式Ｉによる化合物の個々の立体異性体は、当業者に公知の方法によって分割され得る。例えば、そのような分割は、（１）ジアステレオマー塩、複合体もしくは他の誘導体の形成によって；（２）立体異性体特異的試薬との選択的反応によって、例えば酵素的酸化もしくは還元によって；または（３）例えば、結合したキラルリガンドを有するシリカなどのキラル支持体上、もしくはキラル溶媒の存在下などのキラル環境におけるガス液体もしくは液体クロマトグラフィーによって実施されてもよい。当業者は、所望の立体異性体が、上記の分割処理のうちの１つによって別の化学物質に変換される場合、所望の形態を遊離するためにさらなる工程を必要とすることは理解するだろう。代替として、特定の立体異性体は、光学的に活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を用いる不斉合成によって、または不斉転換により１つの鏡像異性体をもう１つの鏡像異性体に変換することによって合成されてもよい。
【００１４】
開示される化合物またはその塩が、構造により命名されるか、または描かれる場合、その溶媒和物（特に水和物）を含む、化合物または塩は、結晶形態、非結晶形態またはそれらの混合物の形態で存在してもよいことは理解されるべきである。化合物またはその塩、もしくは溶媒和物（特に水和物）はまた、多形（すなわち、異なる結晶形態を生じる能力）を示してもよい。これらの異なる結晶形態は典型的に「多形」として知られている。構造によって命名されるか、または描かれる場合、開示される化合物、またはその溶媒和物（特に水和物）はまた、その全ての多形を含むことは理解されるべきである。多形は同じ化学組成を有するが、結晶固体状態の充填、幾何学的配置、および他の記述的特性が異なる。従って、多形は、形状、密度、硬度、変形能、安定性、および溶解特性などの異なる物理的特性を有してもよい。多形は典型的に、識別に使用され得る融点、ＩＲスペクトル、およびＸ線粉末回折パターンが異なっている。当業者は、異なる多形が、例えば、化合物を結晶化／再結晶化するのに使用される条件を変更または調節することによって生成され得ることは理解するだろう。
【００１５】
結晶形態である本発明の化合物、またはその塩の溶媒和物に関して、当業者は、医薬的に許容可能な溶媒和物が形成されることができ、溶媒分子が結晶化の間に結晶格子に組み込まれることを理解するだろう。溶媒和物は、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、および酢酸エチルなどの非水溶媒を含んでもよく、または、結晶格子に組み込まれる溶媒として水を含んでもよい。水が結晶格子に組み込まれる溶媒である溶媒和物は典型的に「水和物」と称される。水和物は、化学量論水和物および可変量の水を含む組成物を含む。本発明は全てのこのような溶媒物を含む。
【００１６】
医薬における潜在的使用のために、式Ｉの化合物の塩は好ましくは医薬的に許容可能である。本発明の化合物は塩基であり、所望の塩形態は、遊離塩基と、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、または酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（ｐｙｒａｎｏｓｉｄｙｌ  ａｃｉｄ）、例えばグルクロン酸またはガラクツロン酸、アルファ−ヒドロキシ酸、例えばクエン酸または酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸または桂皮酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などの有機酸との処理を含む、当該技術分野において公知の任意の適切な方法によって調製され得る。医薬的に許容可能な塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリル酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、安息香酸メチル、ジニトロベンゾエート、ヒドロキシベンゾエート、メトキシベンゾエート、フタル酸塩、酢酸フェニル、フェニルプロピオネート、フェニルブチレート、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシブチレート、グリコール酸塩、酒石酸塩、マンデル酸塩、およびスルホン酸塩、例えばキシレンスルホネート、メタンスルホネート、プロパンスルホネート、ナフタレン−１−スルホネートおよびナフタレン−２−スルホネートなどが挙げられる。
【００１７】
本発明の塩基性化合物が塩として単離される場合、その化合物の対応する遊離塩基形態は、無機または有機塩基、適切には化合物の遊離塩基形態より高いｐＫａを有する無機または有機塩基と塩との処理を含む、当該技術分野において公知の任意の適切な方法によって調製され得る。
【００１８】
一般的調製方法
式Ｉの化合物は、以下のスキームに例示する合成手順を使用することによって、または熟練した有機化学者の知識を利用することによって得ることができる。これらのスキームに提供される合成は、本明細書で概説した反応との適合性を達成するために必要に応じて適切に保護される適切な前駆体を利用して、種々の異なるＲ１およびＲ２基を有する本発明の化合物を生成するのに適用可能である。必要に応じて行われる後の脱保護により、一般に開示されている性質の化合物が得られる。式Ｉの化合物のみを用いてスキームを示すが、それらは、本発明の化合物を作製するのに使用され得るプロセスの例示にすぎない。
【００１９】
化合物名は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，１１０  Ｙｏｎｇｅ  Ｓｔｒｅｅｔ，１４ｔｈ  Ｆｌｏｏｒ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ，Ｍ５Ｃ  １Ｔ４（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｃｄｌａｂｓ．ｃｏｍ／）から入手可能なソフトウェア命名プログラムＡＣＤ／Ｎａｍｅ  Ｐｒｏ  Ｖ６．０２を用いて作成した。
【００２０】
スキーム１に示すように、式Ｉの化合物は、置換イソシアン酸フェニルと適切に置換されたヒドロキシアニリンとの反応による尿素部分の形成で開始される複数工程の手順で調製できる。式Ｉの化合物は、得られたフェノール−尿素と４，６−ジクロロピリミジンとを、塩基の存在下、適切な溶媒中で反応させ、その後メチルアミンで処理することによって調製できる。
【化２】
2013503170.tif 000004
ａ）ピリジン、ｒｔ、２ｄ；ｂ）４，６−ジクロロピリミジン、ＫＯｔ−Ｂｕ、Ｎａ２ＣＯ３、ＤＭＦ、ｒｔ、１８ｈ；ｃ）ＴＨＦ中のＣＨ３ＮＨ２、５０℃、２．５ｈまたはＴＨＦ中のＣＨ３ＮＨ２、イソプロパノール、μｗ  １２０℃、２０分。
【００２１】
代替として、式Ｉの化合物は、スキーム２に示す複数工程の手順により調製できる。このプロセスにおいて、ピリミジニル−フェニルエステルを、適切に置換されたニトロフェノールと４，６−ジクロロピリミジンとの反応により調製する。この反応は、以下（ａ、ｂ、ｃ、またはｄ）に示すような種々の条件下で実施できる。尿素の形成は、ピリミジニル−フェニルエーテルのニトロ部分を最初に還元して、対応するアニリンを形成し、続いて置換イソシアン酸フェニルとの反応によって達成される。続いてメチルアミンとの処理によって式Ｉの化合物を得る。
【化３】
2013503170.tif 000005
ａ）４，６−ジクロロピリミジン、ＮａＯＨ、イソプロパノール、Ｈ２Ｏ、μｗ、１２０℃、４０分；ｂ）４，６−ジクロロピリミジン、ＮａＯＨ、アセトン／Ｈ２Ｏ、４５℃、３６ｈ；ｃ）４，６−ジクロロピリミジン、Ｋ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、還流、４８ｈ；ｄ）４，６−ジクロロピリミジン、ＮａＯＨ、ＤＭＦ、μｗ、１４０−１６５℃、４０分；ｅ）Ｆｅ粉末、ＮＨ４Ｃｌ、ＥｔＯＨ、還流、１８−３６ｈ；ｆ）Ｆｅ粉末、ＡｃＯＨ、還流；ｇ）ＮａＢＨ４、ＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、ＭｅＯＨ、０℃、１０−２０分；ｈ）１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン、ＴＨＦ、ｒｔ、一晩；ｉ）１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン、ＣＨ２Ｃｌ２、ｒｔ、３ｄ；ｊ）１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン、ジオキサン、ｒｔ、４−１７ｈ；ｋ）１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン、ピリジン、ｒｔ、２ｈ；ｌ）ＴＨＦ中のＣＨ３ＮＨ２、イソプロパノール、μｗ、１００℃、２０分；ｍ）ＴＨＦ中のＣＨ３ＮＨ２、５０℃、２−３ｈ；ｎ）ＥｔＯＨ中のＣＨ３ＮＨ２、５０℃、２ｈ。
【００２２】
本発明はまた、式Ｉの化合物の種々の重水素化形態を含む。炭素原子に結合した各々の利用可能な水素原子は、独立して重水素原子と置換され得る。当業者は、式Ｉの化合物の重水素化形態を合成する方法を知っているだろう。例えば、重水素化アルキル基アミンは従来の技術によって調製できる（例えば：Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ，Ｃａｔ．Ｎｏ．４８９，６８９−２から入手可能なメチル−ｄ３−アミンを参照のこと）。スキーム１またはスキーム２によるこのような化合物を利用すれば、種々の水素原子が重水素原子で置換された式Ｉの化合物の調製が可能となる。
【００２３】
使用方法
本発明は、キナーゼと、式Ｉの化合物またはその塩、特にその医薬的に許容可能な塩とを接触させることを含んでなる、ＴＮＮＩ３Ｋを阻害する方法に関する。本発明はまた、ＴＮＮＩ３Ｋにより媒介される疾患または障害の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者、特にヒトに有効量の式Ｉの化合物またはその塩、特にその医薬的に許容可能な塩を投与することを含んでなる、方法に関する。本明細書で用いる、「患者」とは、ヒトまたは他の哺乳動物を指す。具体的には、本発明は、キナーゼと、有効量の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩とを接触させることを含んでなる、ＴＮＮＩ３Ｋ活性を阻害する方法に関する。例えば、ＴＮＮＩ３Ｋ活性は、有効量の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩を投与を必要とする患者に投与することによって、哺乳動物心臓組織において阻害され得る。
【００２４】
本発明の化合物は、特にＴＮＮＩ３Ｋ活性を阻害することによって、ＴＮＮＩ３Ｋにより媒介される疾患または障害の治療に特に有用であり得る。ここで、そのような疾患または障害は、心不全、特に鬱血性心不全；心臓肥大；および心臓肥大から生じる心不全または鬱血性心不全から選択される。本発明の化合物はまた、心筋虚血または心筋梗塞から生じる心不全または鬱血性心不全の治療に有用であり得る。
【００２５】
治療的「有効量」は、そのような治療を必要とする患者に投与された場合、本明細書に定義される治療を行うのに十分な化合物の量を意味することが意図されている。従って、例えば、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の治療的有効量は、それを必要とするヒトに投与された場合、ＴＮＮＩ３Ｋの活性を調節または阻害し、その結果、その活性によって媒介される病態が、低減され、軽減され、または予防されるのに十分な本発明の薬剤の量である。そのような量に相当する所定の化合物の量は、特定の化合物（例えば、特定の化合物の効力（ｐＸＣ５０）、効果（ＥＣ５０）、および生物学的半減期）、病態およびその重症度、治療の必要のある患者の特性（例えば、年齢、大きさおよび体重）などの要因に応じて変化するであろうが、それにも関わらず、当業者により慣用的に決定され得る。同様に、化合物の治療期間および投与時間（投与と投与の間の時間および投与のタイミング、例えば食前／食中／食後）は、治療を必要とする哺乳動物の特性（例えば体重）、特定の化合物およびその特性（例えば医薬的特徴）、疾患または病態およびその重症度ならびに使用される特定の組成物および方法に応じて変化するであろうが、それにも関わらず、当業者により慣用的に決定され得る。
【００２６】
「治療する」または「治療」は、ＴＮＮＩ３Ｋにより引き起こされるか、または媒介される患者における病態を少なくとも緩和することを意味することが意図されている。病態を緩和するための治療方法は、例えば、疾患の防止、遅延、予防、治療または治癒のために、任意の従来的に許容可能な方法による本発明の化合物の使用を含む。本発明の式Ｉの化合物は、心不全、特に鬱血性心不全の治療に有用であり得る。本発明の式Ｉの化合物は、心臓肥大、および心臓肥大、心筋虚血または心筋梗塞から生じる心不全または鬱血性心不全の治療に有用であり得る。
【００２７】
本発明の化合物は、全身投与および局所投与の両方を含む、任意の適切な投与経路によって投与されてもよい。全身投与には、経口投与、非経口投与、経皮投与、直腸投与、および吸入による投与が含まれる。非経口投与とは、腸、経皮、または吸入による投与以外の投与経路を指し、典型的には注射または注入による。非経口投与には、静脈内、筋肉内、および皮下注射または注入が含まれる。吸入とは、口を介してまたは鼻道を介して吸入されるか否かに関わらず、患者の肺への投与を指す。局所投与には皮膚による塗布が含まれる。
【００２８】
本発明の化合物は、１回投与されてもよいし、または投与計画に従って投与されてもよく、ここで、投与回数は、所定の期間、様々な時間間隔で投与される。例えば、１日に１回、２回、３回または４回、用量が投与されてもよい。所望の治療効果が達成されるまで、または所望の治療効果を維持するまで無制限に用量は投与されてもよい。本発明の化合物についての適切な投与計画は、吸収、分布、および半減期などのその化合物の薬物動態特性に依存し、当業者により決定され得る。加えて、本発明の化合物についての適切な投与計画（そのような計画が施される期間を含む）は、治療される病態、治療される病態の重症度、治療される患者の年齢および健康状態、治療される患者の病歴、併用療法の性質、所望の治療効果、および当業者の知識および見解の範囲内の同様の要因に依存する。適切な投与計画は、個々の患者が変更を必要とする場合、その投与計画または時間経過に対する個々の患者の反応を考慮して調節を要求し得ることが、そのような当業者にはさらに理解されるだろう。
【００２９】
ＴＮＮＩ３Ｋにより媒介される病態の治療は、本発明の化合物を用いて単独療法として達成できるし、または当該技術分野で知られている有効量を用いて投与される、他の心臓血管作用薬との併用、例えば以下の薬剤：ベータ遮断剤、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、カルシウムチャネル遮断剤、利尿薬、レニン阻害剤、中枢作動性降圧薬、二重ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤、アルドステロンシンターゼ阻害剤、およびアルドステロン受容体アンタゴニストのうちの１つ以上との併用などの二重もしくは多重併用療法によっても達成され得る。
【００３０】
適切なベータ遮断剤の例としては、チモロール（例えばＢＬＯＣＡＲＤＥＮ（商標））、カルテオロール（例えばＣＡＲＴＲＯＬ（商標））、カルベジロール（例えばＣＯＲＥＧ（商標））、ナドロール（例えばＣＯＲＧＡＲＤ（商標））、プロパノロール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）（例えばＩＮＮＯＰＲＡＮ  ＸＬ（商標））、ベタキソロール（例えばＫＥＲＬＯＮＥ（商標））、ペンブトロール（例えばＬＥＶＡＴＯＬ（商標））、メトプロロール（例えばＬＯＰＲＥＳＳＯＲ（商標）およびＴＯＰＲＯＬ−ＸＬ（商標））、アテノロール（例えばＴＥＮＯＲＭＩＮ（商標））、ピンドロール（例えばＶＩＳＫＥＮ（商標））、ビソプロロール、ブシンドロール、エスモロール、アセブトロール、ラベタロール、ネビボロール、セリプロロール、ソタロール、およびオクスプレノロールが挙げられる。適切なＡＣＥ阻害剤の例としては、アラセプリル、ベナゼプリル、ベナザプリラート（ｂｅｎａｚａｐｒｉｌａｔ）、カプトプリル、セロナプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシピリル（ｍｏｅｘｉｐｉｒｉｌ）、モベルトプリル（ｍｏｖｅｌｔｏｐｒｉｌ）、ペリンドプリル、キナプリル、キナプリラート、ラミプリル、ラミプリラート、スピラプリル、テモカプリル、トランドラプリル、およびゾフェノプリルが挙げられる。好適なＡＣＥ阻害剤は、ベナゼプリル、エナルプリル（ｅｎａｌｐｒｉｌ）、リシノプリル、およびラミプリルである。適切なアンジオテンシン受容体遮断剤の例としては、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、タソサルタン、テルミサルタン、およびバルサルタンが挙げられる。適切なカルシウムチャネル遮断剤の例としては、ジヒドロピリジン（ＤＨＰ）および非ＤＨＰが挙げられる。適切なＤＨＰとしては、アムロジピン、フェロジピン、リオシジン（ｒｙｏｓｉｄｉｎｅ）、イスラジピン、ラシジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニグルピジン（ｎｉｇｕｌｐｉｄｉｎｅ）、ニルジピン、ニモジフィン（ｎｉｍｏｄｉｐｈｉｎｅ）、ニソルジピン、ニトレンジピン、およびニバルジピンならびにそれらの医薬的に許容可能な塩が挙げられる。適切な非ＤＨＰは、フルナリジン、プレニラミン、ジルチアゼム、フェンジリン、ガロパミル、ミベフラジル、アニパミル、チアパミル、およびベランピミル（ｖｅｒａｍｐｉｍｉｌ）ならびにそれらの医薬的に許容可能な塩である。適切な利尿薬は、アミロライド、クロロサイアザイド、ヒドロクロロチアジド、メチルクロロジアジド、およびクロロタリドン（ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｉｄｏｎ）から選択されるチアジド誘導体である。適切なレニン阻害剤はアリスキレンである。適切な中枢作動性降圧薬の例としては、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシンおよびメチルドーパが挙げられる。適切な二重ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤の例としては、オマパトリラート、ファシドトリル、およびファシドトリラート（ｆａｓｉｄｏｔｒｉｌａｔ）が挙げられる。適切なアルドステロンシンターゼ阻害剤の例としては、アナストロゾール、ファドロゾール、およびエキセメスタンが挙げられる。適切なアルドステロン受容体ア���タゴニストの例としては、スピロノラクトンおよびエプレレノンが挙げられる。
【００３１】
本発明はさらに、特にＴＮＮＩ３Ｋによって媒介される疾患の治療における活性治療剤としての本発明の化合物の使用を含む。具体的には、本発明は、心不全、特に鬱血性心不全；心臓肥大；心臓肥大から生じる心不全または鬱血性心不全；および心筋虚血または心筋梗塞から生じる心不全または鬱血性心不全の治療における本発明の化合物の使用を含む。
【００３２】
別の態様において、本発明は上記障害の治療に使用するための薬剤の製造における本発明の化合物の使用を含む。
【００３３】
組成物
本発明の化合物は、必ずしも必要ではないが、通常、患者に投与する前に医薬組成物に製剤化される。従って、別の態様において、本発明は、本発明の化合物と、医薬的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医薬組成物に関する。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、有効量の本発明の化合物が抽出され、次いで粉末、シロップ、および注射用溶液などで患者に与えられ得るバルク形態で調製され、パッケージ化されてもよい。代替として、本発明の医薬組成物は、単位投薬形態で調製され、パッケージ化されてもよい。経口投与に関して、例えば、１つ以上の錠剤またはカプセル剤が投与されてもよい。医薬組成物の用量は、少なくとも治療的有効量の本発明の化合物（すなわち、式Ｉの化合物またはその塩、特にその医薬的に許容可能な塩）を含む。単位投薬形態で調製される場合、医薬組成物は１ｍｇ〜１０００ｍｇの本発明の化合物を含んでもよい。
【００３５】
本発明の医薬組成物は典型的に本発明の１つの化合物を含む。しかしながら、特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は１種より多い本発明の化合物を含む。加えて、本発明の医薬組成物は必要に応じて、１種以上のさらなる医薬的に活性な化合物を含んでもよい。
【００３６】
本明細書で用いる、「医薬的に許容可能な賦形剤」とは、組成物に形態または粘稠度を付与することに関与する物質、組成物またはビヒクルを意味する。各々の賦形剤は、患者に投与される場合の本発明の化合物の効果を実質的に減少させる相互作用および医薬的に許容可能でない医薬組成物を生じる相互作用が回避されるように、混合される場合、医薬組成物の他の成分と適合可能でなければならない。加えて、各々の賦形剤はもちろん、医薬的に許容可能であるように十分高い純度でなければならない。
【００３７】
本発明の化合物および医薬的に許容可能な賦形剤（複数も含む）は典型的に、所望の投与経路による患者への投与に適合した投薬形態に製剤化される。従来の投薬形態としては、（１）錠剤、カプセル剤、カプレット剤、丸薬、トローチ剤、散剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤、溶剤、乳剤、サシェ剤およびカシェ剤などの経口投与；（２）滅菌溶剤、懸濁剤、および復元用散剤などの非経口投与；（３）経皮パッチ剤などの経皮投与；（４）座剤などの直腸投与；（５）エアゾール剤および液剤などの吸入；ならびに（６）クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、溶剤、ペースト剤、スプレー剤、フォーム剤、およびゲル剤などの局所投与に適したものが挙げられる。
【００３８】
適切な医薬的に許容可能な賦形剤は、選択された特定の投与形態に依存して変わるであろう。加えて、適切な医薬的に許容可能な賦形剤は、それらが組成物の中で果たし得る特定の機能に基づいて選ぶことができる。例えば、ある医薬的に許容可能な賦形剤は、それらの均一な投与形態の製造を容易にする能力で選ぶことができる。ある医薬的に許容可能な賦形剤は、それらの安定な投与形態の製造を容易にする能力で選ぶことができる。ある医薬的に許容可能な賦形剤は、患者へ投与された本発明の化合物（複数も含む）が一つの臓器または身体の一部から別の臓器または身体の別の部分へ運搬または輸送されるのを容易にする能力で選ぶことができる。ある医薬的に許容可能な賦形剤は、患者の服薬遵守を高める能力で選ぶことができる。
【００３９】
適切な医薬的に許容可能な賦形剤としては、以下の種類の賦形剤が挙げられる：希釈剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動促進剤、造粒剤、コーティング剤、湿潤剤、溶媒、共溶媒、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、フレーバー剤、フレーバーマスキング剤、着色料、アンチケーキング剤、保湿剤、キレート化剤、可塑剤、増粘剤、抗酸化剤、保存剤、安定剤、界面活性剤、および緩衝剤。当業者にとって当然のことながら、ある医薬上許容される賦形剤は、２つ以上の機能を果たすことがあり、製剤中に存在する該賦形剤の量および製剤中に存在する他の成分に依存して別の機能を果たすことがある。
【００４０】
当業者は、本発明で使用される適切な量の医薬的に許容可能な適切な賦形剤を選択する当該技術分野の知識およびスキルを有している。加えて、医薬的に許容可能な賦形剤を記載している、当業者が利用可能であり、医薬的に許容可能な適切な賦形剤を選択するのに有用であり得る多くの資料がある。例として、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ（Ｇｏｗｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）、およびＴｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）が挙げられる。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の技術および方法を使用して調製される。当該技術分野で一般的に使用される方法のいくつかは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）に記載されている。
【００４２】
一態様において、本発明は、本発明の化合物の有効量および希釈剤または充填剤を含む錠剤またはカプセル剤のような固体経口投与形態を対象とする。適切な希釈剤および充填剤としては、ラクトース、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、デンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、およびアルファ澱粉）、セルロースおよびその誘導体（例えば、微結晶性セルロース）、硫酸カルシウムおよび第二リン酸カルシウムが挙げられる。固体経口投与形態は、さらに、結合剤を含むことができる。適切な結合剤としては、デンプン（例えば、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、およびアルファ澱粉）、ゼラチン、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、トラガカント、グアーガム、ポビドン、ならびにセルロースおよびそれらの誘導体（例えば、微結晶性セルロース）が挙げられる。固体経口投与形態は、さらに、崩壊剤を含むことができる。適切な崩壊剤としては、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロース、アルギン酸、およびカルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。固体経口投与形態は、さらに、滑沢剤を含むことができる。適切な滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルクが挙げられる。
【実施例】
【００４３】
以下の実施例は本発明を例示する。これらの実施例は本発明の範囲を限定することを意図せず、むしろ、本発明の化合物、組成物、および方法を調製および使用するために当業者に指針を与える。本発明の特定の実施形態を記載するが、当業者は種々の変更および改変が本発明の精神および範囲から逸脱せずになされてもよいことは理解するだろう。
【００４４】
以下の実験的記述において、以下の略語が使用され得る。
【００４５】
【表１−１】
2013503170.tif 000006
【表１−２】
2013503170.tif 000007
【００４６】
調製例１
２−ブロモ−６−（メチルオキシ）−４−ニトロフェノール
【化４】
2013503170.tif 000008
２−（メチルオキシ）−４−ニトロフェノール（１ｇ、５．９１ｍｍｏｌ）を超音波処理を用いて氷酢酸（１１．８２ｍＬ）に溶解した。臭素（０．３０５ｍｌ、５．９１ｍｍｏｌ）を、空気に対する隔壁およびニードル開口を用いて、室温で１０分にわたってシリンジによってそのまま（ｎｅａｔ）滴下した。得られた混合物を室温で一晩攪拌した。粗反応物を、よくかき混ぜた水（２００ｍＬ）に注意深くゆっくりとピペットで入れ、得られた混合物を１０分間攪拌した。得られた固体を濾過し、水（２×５０ｍＬ）で十分に洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、２−ブロモ−６−（メチルオキシ）−４−ニトロフェノール（１．１６ｇ、７５％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．０９（ｄ，Ｊ＝２．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝２．５１Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）２４８．７（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００４７】
以下のクロロ−ニトロ−フェノールを、出発物質として指定したニトロ−フェノールを用いて調製例１に記載したものと同様の手順を用いて調製し、純粋な（ｎｅａｔ）Ｂｒ２を加えるのではなく反応混合物にＣｌ２ガスを泡立てた。
【００４８】
【表２】
2013503170.tif 000009
【００４９】
調製例２
４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルアニリン
【化５】
2013503170.tif 000010
工程１．４−クロロ−６−［（２，６−ジメチル−４−ニトロフェニル）オキシ］ピリミジン
アセトン（２０ｍＬ）中の４，６−ジクロロピリミジン（３ｇ、２０．１４ｍｍｏｌ）および２，６−ジメチル−４−アミノフェノール（３．３７ｇ、２０．１４ｍｍｏｌ）に、ＮａＯＨ（０．８０５ｇ、２０．１４ｍｍｏｌ）および２０ｍＬの水を加えた。次いで得られた溶液を４５℃まで加熱した。４５℃にて１８時間後、出発物質は残っていた。次いで反応混合物を１８時間、６５℃まで加熱した。アセトンを真空中で除去し、残留物を水で希釈し、濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。次いで固体を１０％の炭酸ナトリウム（３回）、次いで水で洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、４−クロロ−６−［（２，６−ジメチル−４−ニトロフェニル）オキシ］ピリミジン（３．８１ｇ、６６％収率）を茶色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６３（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，２Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），２．１７（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）２７９．９（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００５０】
工程２．４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルアニリン
８０％エタノール（２６．８ｍＬ）中の４−クロロ−６−［（２，６−ジメチル−４−ニトロフェニル）オキシ］ピリミジン（１．５ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）に、鉄粉（１０ミクロン未満、１．４９８ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（１．５ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物をＮ２でフラッシュし、２１時間、加熱還流した。次いで反応混合物をＥｔＯＨで希釈し、セライト（登録商標）で濾過した。次いで大部分のＥｔＯＨを真空中で除去し、残留物を酢酸エチルおよび水で処理した。次いでＮａＨＣＯ３を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。次いで合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４０ｇシリカララム、０〜１００％の酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルアニリン（０．６３５ｇ、６１％収率）を黄褐色の固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）２４９．９（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００５１】
以下のアニリンを、工程１における出発物質として指定したフェノールおよび４，６−ジクロロピリミジン、ならびに工程１および２に関して記載した条件を用いて調製例２に記載したものと同様の手順を用いて調製した。
【００５２】
【表３】
2013503170.tif 000011
【００５３】
調製例３
３−クロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−５−（メチルオキシ）アニリン
【化６】
2013503170.tif 000012
工程１．４−アミノ−２−クロロ−６−（メチルオキシ）フェノール
エタノール（２００ｍＬ）中の２−クロロ−６−（メチルオキシ）−４−ニトロフェノール（８．０ｇ、３９．３ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（１１．０ｇ、１９６．５ｍｍｏｌ）、およびＣｕ（１．３ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）の混合物に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を３時間、加熱還流し、濾過した。濾液を酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、ブライン（２×５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、４−アミノ−２−クロロ−６−（メチルオキシ）フェノール（５．７ｇ、７１％収率）をオフホワイトの固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）１７４．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００５４】
工程２．３−クロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−５−（メチルオキシ）アニリン
ＤＭＦ中の４−アミノ−２−クロロ−６−（メチルオキシ）フェノール（４．７ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃にて、ＮａＨ（１．２８ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を加えた。次いで混合物を０℃にて３０分間攪拌し、その後、４，６−ジクロロピリミジン（４．０３ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を加えた。次いで得られた混合物を０℃にて３０分間攪拌し、その後、２０℃まで加温し、１７時間攪拌した。反応混合物を水でクエンチし、同一の条件下で行ったさらなる実験（５．７６ｍｍｏｌスケール）からの粗物質と合わせた。次いで合わせた反応混合物を酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、水（５００ｍＬ）、次いでブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、茶色の油を得た。粗物質をカラムクロマトグラフィーにより精製して、３−クロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−５−（メチルオキシ）アニリン（合計４．８９ｇ、５２％の合わせた収率）を茶色の固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）２８６．０（Ｍ＋Ｈ＋）。３−クロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−５−（メチルオキシ）アニリンを調製例３と同様の方法で調製した。ＭＳ（ｍ／ｚ）３４０．０（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００５５】
実施例１
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
【化７】
2013503170.tif 000013
工程１．Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
Ｎ２下で、無水ピリジン（５．６２ｍＬ）中の４−アミノ−２，６−ジクロロフェノール（１ｇ、５．６２ｍｍｏｌ）の溶液に、純粋な３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート（０．７４０ｍＬ、５．６２ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。２日後、反応混合物を１５０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌおよび５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に注いだ。次いで混合物を一晩静置すると、その間に生成物が完全に沈殿した。固体を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、乾燥させて、Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（２．１０ｇ、９４％収率）を紫色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．７６（ｓ，１Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ），８．８２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．６１（ｍ，１Ｈ），７．４６−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ，１Ｈ）。
【００５６】
工程２．Ｎ−｛３，５−ジクロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．５００ｇ、１．３６９ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロピリミジン（０．４０８ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（４．５７ｍＬ）の混合物に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．１５４ｇ、１．３６９ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（３２５メッシュ、０．１４５ｇ、１．３６９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで混合物を室温で１８時間攪拌した。
【００５７】
混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。次いで合わせた有機抽出物を水（２×５０ｍＬ）およびブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。次いで粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４０ｇシリカカラム、１５分にわたって０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、Ｎ−｛３，５−ジクロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．４４０ｇ、６６％収率）をオフホワイトのパリパリした（ｃｒｉｓｐｙ）泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３６（ｓ，１Ｈ），９．２５（ｓ，１Ｈ），８．７１（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．７２−７．７７（ｍ，３Ｈ），７．６０−７．６７（ｍ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．５３Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）３６６．８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００５８】
工程３．Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
Ｎ−｛３，５−ジクロロ−４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．１５０ｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ中の２Ｍメチルアミン（１．００ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）を加えた。次いで混合物を２．５時間、５０℃まで密閉チューブ中で加熱した。次いで揮発性物質を、キャップを外した状態で激しく攪拌することによって一晩かけて蒸発させた。残留物をＤＭＦおよびＭｅＯＨに溶解し、濾過し、次いで逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ、Ｓｕｎｆｉｒｅ、３０×１００ｍｍカラム、０．１％ＴＦＡを含む４４〜７８％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製して、Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート（０．０５１ｇ、２６％収率）を得た。
【００５９】
以下の化合物を、１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼンおよび工程１において出発物質として指定したアミンを用いて実施例１に記載したものと同様の手順を用いて調製した。
【００６０】
【表４】
2013503170.tif 000014
【００６１】
実施例４
Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
【化８】
2013503170.tif 000015
工程１．Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
無水ピリジン（８ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の４−アミノ−２，６−ジフルオロフェノール（１．６ｇ、１１．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート（１．２３６ｍＬ、８．８２ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。得られた溶液を室温で一晩攪拌した。
【００６２】
反応混合物を２００ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌ中にピペットで取り、１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、粗いフリットで濾過し、水で一度洗浄した。濾過物を１Ｎ  ＨＣｌおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。次いで粗物質を、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４０ｇのシリカカラム、０〜８５％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．４９８ｇ、１３％収率）を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝９．７１（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．８２（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．１１（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）３３２．９（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００６３】
工程２．Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジフルオロメチル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．９９６ｍＬ）中のＮ−（３，５−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．４９８ｇ、１．４９９ｍｍｏｌ）および４，６−ジクロロピリミジン（０．４４７ｇ、３．００ｍｍｏｌ）の溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．２１０ｇ、１．８７４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．２０７ｇ、１．４９９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間攪拌し、その後さらに１．２５当量のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．２１０ｇ、１．８７４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで反応混合物を一晩攪拌した。
【００６４】
混合物を酢酸エチル／エーテル（１：１、５０ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフロリジル上で吸収し、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇのシリカカラム、０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジフルオロフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．４０８ｇ、５８％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝９．３０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），８．７２（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）４４５．０（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００６５】
工程３．Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジフルオロフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（４０８ｍｇ、０．９１７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ中の２Ｍメチルアミン（２．２９３ｍＬ、４．５９ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（１ｍＬ）中で合わせ、１２０℃にて２０分間、マイクロ波反応器中で加熱した。次いで粗反応混合物をフロロジル（ｆｌｏｒｏｓｉｌ）上で吸収し、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇのシリカ、１０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、Ｎ−（３，５−ジフルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．１７７ｇ、４２％）を得た。
【００６６】
実施例５
Ｎ−（３，５−ジメチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
【化９】
2013503170.tif 000016
工程１．Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
室温にて、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（８ｍＬ）中の４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルアニリン（０．６３５ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）に、３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート（０．３７４ｍＬ、２．８０ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。得られた混合物を一晩攪拌した。翌朝、ＭｅＯＨを加えて、形成した固体を溶解し、すべての過剰なイソシアネートをクエンチした。溶媒を真空中で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４０ｇのシリカカラム、０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．９１４ｇ、７７％収率）を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０８（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．４８−７．６０（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），２．０２（ｓ，７Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）４３６．９（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００６７】
工程２．Ｎ−（３，５−ジメチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
ＴＨＦ中の２Ｍメチルアミン（２ｍＬ、４．００ｍｍｏｌ）中のＮ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３，５−ジメチルフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．２００ｇ、０．４５８ｍｍｏｌ）を５０℃で３時間、密閉チューブ中で加熱した。過剰なメチルアミンおよび溶媒を一晩かけて蒸発させた。次いで粗物質をＤＭＦおよびＭｅＯＨ（全量３ｍＬ）で処理し、濾過し、Ｗａｔｅｒｓ逆相ＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ−１８  １５０×３０ｍｍカラム、０．１％ＴＦＡを有する３０〜７０％アセトニトリル／水）により精製した。次いで適切な画分を濃縮して、Ｎ−（３，５−ジメチル−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート（０．１２０ｇ、４７％）を白色の固体／無色の薄膜として得た。
【００６８】
以下の化合物を、工程１における出発物質として１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼンおよび指定したアニリンを用いて実施例５に記載したものと同様の手順を用いて調製した。
【００６９】
【表５】
2013503170.tif 000017
【００７０】
実施例１１
Ｎ−（３−フルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
【化１０】
2013503170.tif 000018
工程１．Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３−フルオロフェニル｝―Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素
ジクロロメタン（４．１７ｍＬ）中の４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３−フルオロアニリン（０．１００ｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）の溶液に、３−トリフルオロメチルフェニルイソシアネート（０．１６０ｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を３日間攪拌した。溶媒を除去し、２ｍＬのエーテルに固体を懸濁し、濾過し、濾過ケーキをエーテル（３×０．５ｍＬ）で洗浄した。次いで得られた固体を減圧下で乾燥させて、Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３−フルオロフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．１７８ｇ、８５％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１７（ｓ，１Ｈ），９．１１（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝２．２７，１３．０９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．６４（ｍ，３Ｈ），７．３０−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．２７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）４２６．８（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００７１】
工程２．Ｎ−（３−フルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテート
Ｎ−｛４−［（６−クロロ−４−ピリミジニル）オキシ］−３−フルオロフェニル｝−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素（０．１４５ｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）と、ＴＨＦ中のＣＨ３ＮＨ２（１．６９９ｍＬ、３．４０ｍｍｏｌ）との混合物のイソプロパノール（０．６８０ｍＬ）溶液を、１００℃にて２０分間、マイクロ波反応器中で加熱した。次いで混合物を半分の体積まで濃縮してメチルアミンを除去し、濾過し、ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ、３０×１５０ｍｍ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８カラム、０．１％ＴＦＡを含む２５〜５５％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製して、Ｎ−（３−フルオロ−４−｛［６−（メチルアミノ）−４−ピリミジニル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］尿素トリフルオロアセテートを得た。
【００７２】
以下の化合物を、工程１における出発物質として１−イソシアネート−３−（トリフルオロメチル）ベンゼンおよび指定したアニリンを用いて実施例１１に記載したものと同様の手順を用いて調製した。実施例１４に関して、工程１はＣＨ２Ｃｌ２の代わりの溶媒としてピリジンを用いて調製した。実施例１３および１４の両方に関して、工程２は５０℃にて２時間、エタノール中のＣＨ３ＮＨ２を用いて実施した。
【００７３】
【表６】
2013503170.tif 000019
【００７４】
実施例１〜１４に関する分光分析データ
【００７５】
【表７−１】
2013503170.tif 000020
【表７−２】
2013503170.tif 000021
【表７−３】
2013503170.tif 000022
ａ  ＬＣＭＳ法：以下の溶離勾配：１．０ｍＬ／分の流速で２．５分にわたって１０％〜１００％（溶媒Ｂ）および１．７分間１００％に保持を用いて水中０．０５％ＴＦＡ（溶媒Ａ）およびアセトニトリル中０．０５％ＴＦＡ（溶媒Ｂ）で溶離するＳｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ５．０μｍカラム（３．０ｍｍ×５０ｍｍ内径）を備えたエレクトロスプレーポジティブ［Ｍ＋Ｈ＋を与えるためにＥＳ＋ｖｅ］を用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬまたはＶＬ。
ｂ  ＬＣＭＳ法：以下の溶離勾配：１．０ｍＬ／分の流速で１０．０分にわたって１０％〜１００％（溶媒Ｂ）および１．７分間１００％に保持を用いて水中０．０５％ＴＦＡ（溶媒Ａ）およびアセトニトリル中０．０５％ＴＦＡ（溶媒Ｂ）で溶離するＳｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ５．０μｍカラム（３．０ｍｍ×５０ｍｍ内径）を備えたエレクトロスプレーポジティブ［Ｍ＋Ｈ＋を与えるためにＥＳ＋ｖｅ］を用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬまたはＶＬ。
Ｃ  ＬＣＭＳ法：以下の溶離勾配：１．２ｍＬ／分の流速で０．９分にわたって１０％〜８０％（溶媒Ｂ）および０．６分間８０％に保持を用いて水中０．０３７５％ＴＦＡ（溶媒Ａ）およびアセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ（溶媒Ｂ）で溶離するｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＸＲ−ＯＤＳ  ２．２μｍカラム（３．０ｍｍ×３０ｍｍ、３．０ｍｍ内径）を備えたエレクトロスプレーポジティブ［Ｍ＋Ｈ＋を与えるためにＥＳ＋ｖｅ］を用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＶＬ上。
【００７６】
医薬組成物
実施例Ａ
錠剤は従来の方法を用いて調製し、以下のように製剤化する。
【００７７】
【表８】
2013503170.tif 000023
【００７８】
実施例Ｂ
カプセル剤は従来の方法を用いて調製し、以下のように製剤化する。
【００７９】
【表９】
2013503170.tif 000024
【００８０】
生物学的アッセイ
物質：Ｈｉｓ−ＭＢＰ−ＴＥＶ−完全長ヒトＴＮＮＩ３Ｋ（ｈＴＮＮＩ３Ｋ）をバキュロキナーゼ（Ｂａｃｕｌｏｋｉｎａｓｅ）系で発現させ、アミラーゼ親和性カラム、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００から精製した。蛍光リガンド５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸を用いた。ＭｇＣｌ２（カタログ番号Ｍ１０２８）、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（カタログ番号Ｂ７５３５）、ＤＴＴ（カタログ番号Ｄ９７７９）およびＣｈａｐｓ（カタログ番号Ｃ３０２３）を含む他の緩衝剤成分はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
【００８１】
５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸の調製
工程１．１−メチル−２−ニトロ−４−（２−プロペン−１−イルオキシ）ベンゼン
アセトン（２７８ｍＬ）中の４−メチル−３−ニトロフェノール（２０ｇ、１３１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２７．１ｇ、１９６ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（２１．５３ｇ、１４４ｍｍｏｌ）、および臭化アリル（１２．４３ｍＬ、１４４ｍｍｏｌ）の混合物を、３日間５５℃で加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物を２００ｍＬエーテルに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、１−メチル−２−ニトロ−４−（２−プロペン−１−イルオキシ）ベンゼン（２５．８ｇ、９７％収率）を橙色の油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５４（ｄ，Ｊ＝２．７７Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝２．７７，８．５６Ｈｚ，１Ｈ），６．００−６．１１（ｍ，Ｊ＝５．２６，５．２６，１０．４８，１７．２８Ｈｚ，１Ｈ），５．４２−５．４９（ｍ，１Ｈ），５．３１−５．３８（ｍ，１Ｈ），４．６０（ｄｔ，Ｊ＝１．５１，５．２９Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）１９４．２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８２】
工程２．２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）アニリン
エタノール（２８０ｍＬ）、水（２８ｍＬ）、および酢酸（５．６ｍＬ、９８ｍｍｏｌ）中の１−メチル−２−ニトロ−４−（２−プロペン−１−イルオキシ）ベンゼン（２５．２ｇ、１３０ｍｍｏｌ）の混合物に、鉄（２９．１ｇ、５２２ｍｍｏｌ）を６回に分けて加えた。得られた混合物を室温にて３日間攪拌した。次いでさらに酢酸（５．６ｍｌ、９８ｍｍｏｌ）および鉄（７．２８ｇ）を加えた。６時間後、さらに３当量の鉄（２１．８２ｇ）を加え、混合物を１７時間攪拌した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、エタノール、次いで水で洗浄し、真空中で濃縮して、エタノールを除去した。次いで得られた水性混合物をエーテル（３００ｍＬ）と２Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）との間に分配した。層を分離し、エーテル層を２Ｎ  ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）で抽出した。溶液がｐＨ９に到達するまで、合わせた水層をＮａＯＨで処理した。この混合物を塩化メチレン（３００ｍＬ）で希釈し、濾過した。次いで層を分離した。次いで水層を塩化メチレン（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２０ｇのシリカカラム、５〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）アニリン（１１．８ｇ、５０％収率）を暗赤色の油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２８（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄｄ，Ｊ＝２．５２，８．３１Ｈｚ，１Ｈ），５．９８−６．１３（ｍ，１Ｈ），５．４２（ｄｑ，Ｊ＝１．５３，１７．３１Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｄｑ，Ｊ＝１．３８，１０．４５Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄｔ，Ｊ＝１．５１，５．２９Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）１６４．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８３】
工程３．２−クロロ−Ｎ−［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］−４−ピリミジンアミン
ｔｅｒｔ−ブタノール（１０３ｍＬ）中の２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）アニリン（１１．８ｇ、７２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、２，４−ジクロロピリミジン（１０．７７ｇ、７２．３ｍｍｏｌ）、続いて炭酸水素ナトリウム（１８．２２ｇ、２１７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１７時間、８０℃で加熱した。次いでさらに２，４−ジクロロピリミジン（０．２５当量、２．６９ｇ）を加え、反応混合物を６時間攪拌した。さらに２，４−ジクロロピリミジン（０．２５当量、２．６９ｇ）を加え、混合物を６日間攪拌した。次いで２，４−ジクロロピリミジン（０．２５当量、２．６９ｇ）の第３部分を加え、混合物をさらに３日間攪拌した。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィ−（ＩＳＣＯ、３３０ｇのシリカカラム、１〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２−クロロ−Ｎ−［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］−４−ピリミジンアミン（１５．１ｇ、７２％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１０（ｄ，Ｊ＝５．７９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄｄ，Ｊ＝２．６４，８．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝５．７９Ｈｚ，１Ｈ），５．９９−６．１１（ｍ，１Ｈ），５．４２（ｄｄ，Ｊ＝１．５１，１７．３７Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｄｄ，Ｊ＝１．２６，１０．３２Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝５．２９Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）２７６．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８４】
工程４．３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］安息香酸
アセトン（５８．０ｍＬ）および水（５８．０ｍＬ）中の２−クロロ−Ｎ−［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］−４−ピリミジンアミン（８ｇ、２９．０ｍｍｏｌ）、３−アミノ安息香酸（３．９８ｇ、２９．０ｍｍｏｌ）、およびＨＣｌ（１４．５１ｍＬ、２９．０ｍｍｏｌ）の混合物を２日間、６０℃で加熱した。混合物を室温まで冷却した。空気のストリームを１分間溶液に通過させ、厚い固体を形成させた。混合物を水（１５０ｍＬ）で希釈し、濾過し、水（３×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］安息香酸（７．４ｇ、１０．９２ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．０２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．７９−７．８８（ｍ，２Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝７．４０Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝２．５１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄｄ，Ｊ＝２．５１，８．５３Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），５．９７−６．０９（ｍ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝１．６３，１７．１９Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．２５，１０．５４Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝５．２７Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）３７７．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８５】
工程５．１，１−ジメチルエチル｛２−［（｛３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］フェニル｝カルボニル）アミノ］エチル｝カルバメート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５１．８ｍＬ）中の３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］安息香酸（６．８３ｇ、１８．１５ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．５１ｍＬ、５４．４ｍｍｏｌ）、続いてＮ−（２−アミノエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．２０ｇ、１９．９６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（８．２８ｇ、２１．７７ｍｍｏｌ）を加えた。次いで得られた混合物を室温にて１８時間攪拌した。次いで混合物を酢酸エチル／エーテル（４００ｍＬ、１：１）で希釈し、水（３×３００ｍＬ）、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、１，１−ジメチルエチル｛２−［（｛３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］フェニル｝カルボニル）アミノ］エチル｝カルバメート（８．３ｇ、８４％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１７（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｔ，Ｊ＝５．４０Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−８．０４（ｍ，３Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝７．７８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝２．５１Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｔ，Ｊ＝５．６５Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝２．６４，８．４１Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ，１Ｈ），５．９４−６．０８（ｍ，１Ｈ），５．３７（ｄｄ，Ｊ＝１．７６，１７．３２Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．５１，１０．５４Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝５．２７Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｑ，Ｊ＝６．１９Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｑ，Ｊ＝６．１９Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）５１９．２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８６】
工程６．１，１−ジメチルエチル［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］カルバメート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４２．４ｍＬ）中の１，１−ジメチルエチル｛２−［（｛３−［（４−｛［２−メチル−５−（２−プロペン−１−イルオキシ）フェニル］アミノ｝−２−ピリミジニル）アミノ］フェニル｝カルボニル）アミノ］エチル｝カルバメート（５．５ｇ、１０．６１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（１．０１６ｍｌ、１１．６７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素で脱気した。次いでテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．２２６ｇ、１．０６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を８０℃で３時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、水（３×２００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、約５０ｍＬの酢酸エチルが残存するまで真空中で濃縮した。次いで混合物を一晩静置すると、その間に、生成物が沈殿した。混合物をエーテル（５０ｍＬ）で希釈し、濾過し、次いでエーテルで洗浄して、１，１−ジメチルエチル［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］カルバメート（４．７５ｇ、８４％収率）を橙色の粘性の固体として得た。さらに０．３５９ｇ（７％収率）を漏斗側から単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝６．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝７．３０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝７．８１Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．６４，８．１８Ｈｚ，１Ｈ），６．０５（ｄ，Ｊ＝６．０４Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．０４Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝６．１７Ｈｚ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）４７９．２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８７】
工程７．Ｎ−（２−アミノエチル）−３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）ベンズアミド
塩化メチレン（２８．６ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（７．１５ｍＬ）中の１，１−ジメチルエチル［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］カルバメート（４．７５ｇ、８．９３ｍｍｏｌ）の溶液を室温にて１８時間攪拌した。次いで溶媒を減圧下で除去して、Ｎ−（２−アミノエチル）−３−（｛４−［５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）ベンズアミド（６．５ｇ、９６％収率）を茶色の泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．２５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．６０（ｔ，Ｊ＝５．５４Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），７．７５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．５５Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝６．６７Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｄｄ，Ｊ＝２．３９，８．１８Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），３．５０（ｑ，Ｊ＝６．１３Ｈｚ，２Ｈ），２．９３−３．０４（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）３７９．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８８】
工程８．５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸
ＤＭＦ（１３．１９ｍＬ）中のＮ−（２−アミノエチル）−３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）ベンズアミド（１ｇ、１．３１９ｍｍｏｌ）、４−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）−１，３−ベンゼンジカルボン酸（０．３９７ｇ、１．０５５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．９１９ｍＬ、６．６０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．５０６ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢＴ（０．２０２ｇ、１．３１９ｍｍｏｌ）の混合物を室温にて一晩攪拌した。次いで反応混合物をｐＨ３まで２Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、水（１×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。次いでこの物質を同一の条件下で実施した別の実験（０．１３２ｍｍｏｌスケール）からのものと合わせ、逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ、３０×７５ｍｍ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８カラム、０．１％ＴＦＡを含む１０〜４０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製した。次いでこの物質を逆相ＨＰＬＣ（Ｒｅｓｔｅｋ  ３０×１００ｍｍ  ＰＦＰｐ（ペンタフルオロフェニルプロピル）カラム、１０〜９０％ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって２回目の精製を行い、５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸（０．０５５ｇ、５％収率）を明るい橙色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．４６（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．５１，８．０６Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝６．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．７１−７．７７（ｍ，１Ｈ），７．３８−７．４５（ｍ，１Ｈ），７．２６−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝２．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝２．２７Ｈｚ，２Ｈ），６．６２−６．６７（ｍ，３Ｈ），６．５５（ｄｄ，Ｊ＝２．２７，８．８１Ｈｚ，２Ｈ），６．０２（ｄ，Ｊ＝６．０４Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）７３７．２（Ｍ＋Ｈ＋）。
【００８９】
生物学的アッセイ方法Ｉ
蛍光偏向アッセイを使用して、ｈＴＮＮＩ３Ｋ  ＡＴＰ結合に対する化合物阻害の用量反応を測定した。ｈＴＮＮＩ３Ｋ  ＡＴＰ結合ポケットに対する５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸の結合により、蛍光偏向の増加が生じ、競合化合物による５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸の置換は、蛍光偏向の減少を導く。
【００９０】
溶液１：十（１０）ｍｌの５ｎＭ  ５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸溶液（溶液１）を、９９１０μＬの緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．５）中で５μＬの１Ｍ  ＤＴＴおよび８０μＬの１０％（ｗ／ｖ）Ｃｈａｐｓおよび５μＬの１０μＭ  ５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸ストック溶液を混合することによって調製した（ストック溶液：１００％ＤＭＳＯ中の５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸の１０μＭ溶液）。
【００９１】
溶液２：５３．８μＬの２．６μＭ  ｈＴＮＮＩ３Ｋと６９４６．２μＬアリコートの溶液１（上記の５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸溶液）とを混合することにより、ｈＴＮＮＩ３Ｋと５−（｛［２−（｛［３−（｛４−［（５−ヒドロキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）フェニル］カルボニル｝アミノ）エチル］アミノ｝カルボニル）−２−（６−ヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸との７ｍｌの混合物（溶液２）を作製した。
【００９２】
ＤＭＳＯ（またはＤＭＳＯコントロール）中の五十（５０）ｎＬの阻害剤を、３８４ウェルの低容量Ｇｒｅｉｎｅｒブラックプレート中にスタンプし、続いて、５μＬの溶液１をプレートのカラム１８に、そして５μＬの溶液２をプレートのカラム１〜１７および１９〜２４に加えた。次いでプレートを５００ｒｐｍにて３０秒間回転させ、室温にて６０分間インキュベートした。その後、蛍光偏向をＡｎａｌｙｓｔ（ｅｘ／ｅｍ：４８５／５３０ｎｍ、二色性：５０５）で測定した。用量反応実験に関して、正規化データをＡＢＡＳＥ／ＸＣ５０およびｐＸＣ５０＝（ｌｏｇ（（ｂ−ｙ）／（ｙ−ａ）））／ｄ−ｌｏｇ（ｘ）（式中、ｘは化合物濃度であり、ｙは指定した化合物濃度における活性％であり、ａは最小活性％であり、ｂは最大活性％であり、ｄはＨｉｌｌスロープである）にフィットさせた。
【００９３】
最低２回の実験に関して、ｐＸＣ５０を平均して平均値を測定した。上記の方法を用いて測定した場合、実施例１〜１４の化合物は６．０より大きいｐＸＣ５０を示した。例えば、実施例５および実施例１１の化合物の各々は、上記の方法において、７．６の平均ｐＸＣ５０によりｈＴＮＮＩ３Ｋを阻害した。
【国際調査報告】
2013503170.tif 000027
2013503170.tif 000028