(57)【要約】  本発明は、関心のある生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）を放射性ヨウ素で標識する新規方法を提供する。また、本方法を用いて調製した新規放射性ヨウ素化ＢＴＭ並びにかかる放射性ヨウ素化ＢＴＭを含む放射性医薬組成物も提供する。本発明はまた、本方法に有用な、放射性ヨウ素化中間体並びに放射性ヨウ素化ＢＴＭを用いるインビボイメージング法も提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体ターゲティング部分の放射性ヨウ素化の方法であって、
（ｉ）次の式（Ｉ）の化合物を準備する工程と、
【化１】
2013513578.tif 000031
（ｉｉ）クリック環化付加触媒の存在下で、式（Ｉ）の化合物を以下の式（ＩＩａ）又は式（ＩＩｂ）の化合物と反応させて、それぞれ以下の式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）のコンジュゲートを得る工程と
【化２】
2013513578.tif 000032
【化３】
2013513578.tif 000033
を含む方法。
式中、
Ｉ*は、123Ｉ、124Ｉ又は131Ｉから選択されるインビボイメージングに適したヨウ素の放射性同位体であり、
Ｌ1、Ｌ2及びＬ3は各々独立にリンカー基であって、存在していても、存在していなくてもよく、
Ｙ1は−Ａｒ1−又はＸ1−であって、−Ａｒ1−はＣ3-10アリーレンであり、−Ｘ1−は−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）n−（Ａｒ1）j−又はＣＨ＝ＣＨ−（Ａｒ1）j−（ＣＨ2）n−であり、ｊは０又は１であり、ｎは値０〜４の整数であるが、Ｙ1が−Ｘ1−のときは、Ｉ*はＸ1の−ＣＨ＝ＣＨ末端に結合しており、
ＢＴＭは生体ターゲティング部分である。
【請求項２】
Ｉ*が123Ｉである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＢＴＭが、１個のアミノ酸、３〜８０量体ペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物である、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
ＢＴＭがＲＧＤペプチドである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ＢＴＭが、次式のフラグメントを含むペプチドである、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【化４】
2013513578.tif 000034
【請求項６】
ＢＴＭが、次の式（Ａ）のペプチドである、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【化５】
2013513578.tif 000035
【請求項７】
クリック環化付加触媒が、元素態銅を含むＣｕ（Ｉ）触媒である、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
元素態銅が、
（ｉ）０．００１〜１ｍｍの範囲内の粒径を有する銅粉体、
（ｉｉ）０．０１〜１．０ｍｍの範囲内の直径を有する銅線
を含む、請求項７記載の方法。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物が、次の式（Ｉａ）の化合物の脱保護によって生成する、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【化６】
2013513578.tif 000036
式中、Ｍ1はアルキン保護基である。
【請求項１０】
式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物が、以下の式（ＩＶａ）又は式（ＩＶｂ）の前駆体を放射性ヨウ素イオン原料と酸化剤の存在下で反応させて、それぞれ式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物を得ることによって、生成する、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【化７】
2013513578.tif 000037
式中、Ｙ1、Ｌ2及びＬ3は、請求項１で定義した通りであり、各Ｒaは独立にＣ1-4アルキルである。
【請求項１１】
式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の生成物が放射性医薬組成物として得られるように、当該方法が無菌的に実施される、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
自動合成装置を用いて実施される、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
次の式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物。
【化８】
2013513578.tif 000038
式中、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3及びＹ1は、請求項１で定義した通りであり、Ｉ*は請求項１又は請求項２で定義した通りであり、ＢＴＭは請求項１又は請求項３乃至請求項６のいずれか１項で定義した通りである。
【請求項１４】
請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法に有用な、次の式（ＩＩａａ）又は（ＩＩｂｂ）の化合物。
【化９】
2013513578.tif 000039
式中、Ｉ*、Ｙ1、Ｌ2及びＬ3は請求項１又は請求項２で定義した通りである。
【請求項１５】
有効量の請求項１３記載の化合物を生体適合性担体と共に含む放射性医薬組成物。
【請求項１６】
インビボイメージング又はインビボ放射線療法の方法に使用するための放射性医薬品の製造のための請求項１３又は請求項１４記載の化合物の使用。
【請求項１７】
請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法を実施するための自動合成装置の使用。
【請求項１８】
請求項１７記載の自動合成装置法における使用に適した、単回使用の無菌カセットであって、無菌非発熱性形態の、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法を実施するのに必要な非放射性試薬を含むカセット。
【請求項１９】
ヒト又は動物の身体の画像を形成する方法であって、請求項１３記載の化合物又は請求項１５記載の組成物を投与して、化合物又は組成物が分布した身体の少なくとも一部分の画像をＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて生成させることを含む方法。
【請求項２０】
薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、請求項１３記載の化合物又は請求項１５記載の組成物を身体に投与し、化合物又は組成物が分布した身体の少なくとも一部の化合物又は組成物の取込みをＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて検出し、投与と検出を任意ではあるが好ましくは薬剤による治療の前後又は途中に実施することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関心のある生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）を放射性ヨウ素で標識する新規方法を提供する。また、本方法を用いて調製した新規放射性ヨウ素化ＢＴＭ並びにかかる放射性ヨウ素化ＢＴＭを含む放射性医薬組成物も提供される。本発明は、本方法に有用な放射性ヨウ素化中間体並びに放射性ヨウ素化ＢＴＭを用いるインビボイメージング法も提供する。
【背景技術】
【０００２】
有機分子に放射性ハロゲンを導入する方法は公知である［Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］。123Ｉ標識放射性医薬品のＥｅｒｓｅｌｓ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４８，２４１−２５７（２００５）］によって以下の以下の４つの主要な合成経路が比較されている。
（Ｉ）酸化的放射性ヨウ素化
（ｉｉ）求核性同位体交換
（ｉｉｉ）求核性非同位体交換
（ｉｖ）求電子性標識。
【０００３】
経路（ｉｖ）は、通例、トリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機水銀又は有機タリウム誘導体のような有機金属前駆体の使用を伴う。これらのうち、室温での位置特異的放射性ヨウ素化が可能である点で、放射性ヨードデスタニレーション（radioiododestannylation）経路が好ましい求電子性標識法として認識されている。ただし、Ｅｅｒｓｅｌｓ他は、選択は放射性ヨウ素化すべき化合物の性状に依存するので、全般に好ましい放射性ヨウ素化法はないと結論づけている。
【０００４】
放射性医薬品合成における有機スズ中間体の使用は、Ａｌｉ他［Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４２３−４４５（１９９６）］の総説に記載されている。Ｋａｂａｌｋａ他は、放射性同位体及び放射性ハロゲン標識が可能となる有機ボラン前駆体の使用に関して広範な報文を発表している［例えば、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５０，４４６−４４７及び８８８−８９４（２００７）参照］。
【０００５】
クリックケミストリーはバイオテクノロジー研究の成長分野である［”Ｃｌｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ”，Ｊ．Ｌａｈａｎｎ（Ｅｄ），Ｗｉｌｙ，（２００９）］。Ｈｅｉｎ他は、１−ヨードアルキンがアジドと以下のクリック環化反応を起こすと報告している［Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，４８，８０１８−８０２１（２００９）］。
【０００６】
【化１】
2013513578.tif 000002
Ｈｅｉｎの報告は内部アルキン（ＲがＨでないもの）に関するものであり、放射化学に関しては何ら記載されていない。
【０００７】
放射化学を始めとする生物医学研究に「クリックケミストリー」を応用することは、Ｎｗｅ他［Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］の総説に記載されている。この総説に記載されている通り、主たる関心はＰＥＴ放射性同位体18Ｆ（及び程度は少ないが11Ｃ）と、ＳＰＥＣＴイメージングに適した99mＴｃ又は111Ｉｎのような放射性金属に対する「キレート用クリック（click to chelate）」アプローチであった。Ｇｌａｓｅｒ及びＲｏｂｉｎｓは、ＰＥＴ放射化学標識反応におけるクリックケミストリーの使用について、放射性同位体18Ｆ及び11Ｃに焦点を当てて概説している［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，４０７−４１４（２００９）］。
【０００８】
ターゲティングペプチドを18Ｆクリック標識して、18Ｆ−フルオロアルキル置換トリアゾールが導入された生成物を得ることは、Ｌｉ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（６），１９８７−１９９４（２００７）］及びＨａｕｓｎｅｒ他［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（１９），５９０１−５９０４（２００８）］に記載されている。
【０００９】
国際公開第２００６／０６７３７６号には、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下での、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応によって、それぞれ式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含むベクターの標識法が開示されている。
【００１０】
【化２】
2013513578.tif 000003
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々リンカー基であり、Ｒ*は放射性核種を含むレポーター部分である。
【００１１】
国際公開第２００６／０６７３７６号のＲ*は、放射性核種（例えば、陽電子放出性放射性核種）を含むレポーター部分である。その目的に適した陽電子放出性放射性核種としては、11Ｃ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、124Ｉ、82Ｒｂ、68Ｇａ、64Ｃｕ及び62Ｃｕがあり、11Ｃ及び18Ｆが好ましいと記載されている。その他の有用な放射性核種としては、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、211Ａｔ、99mＴｃ及び111Ｉｎが挙げられると記載されている。
【００１２】
国際公開第２００７／１４８０８９号には、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下での、式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応を含むベクターの放射性標識法が開示されている。
【００１３】
【化３】
2013513578.tif 000004
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々リンカー基であり、Ｒ*は放射性核種を含むレポーター部分である。
【００１４】
国際公開第２００６／０６７３７６号及び同２００７／１４８０８９号のいずれにも、例えば、当業者に公知の方法による直接導入によって、金属放射性核種がキレート剤に適切に導入されると記載されている。国際公開第２００６／０６７３７６号又は同２００７／１４８０８９号のいずれにも、クリック放射性ヨウ素化に特有の方法論は開示されておらず、特に、どのような組合せの式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物や、どのような組合せのリンカー基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びどのような種類のＲ*基が適しているかについては何ら開示されていない。
【００１５】
国際公開第２００６／１１６６２９号（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．）には、標的生体高分子に対して親和性を有する放射性標識リガンド又は基質を調製する方法が開示されており、この方法は、
（ａ）（ｉ）第１の分子構造と、
（ｉｉ）脱離基と、
（ｉｉｉ）クリックケミストリー反応に参加できる第１の官能基と、適宜、
（ｉｖ）第１の官能基と分子構造の間のリンカーと
を含む第１の化合物を、脱離基を放射性試薬の放射性成分で置換するのに十分な条件下で、放射性試薬と反応させて、第１の放射性化合物を形成する工程と、
（ｂ）（ｉ）第２の分子構造と、
（ｉｉ）第１の官能基とのクリックケミストリー反応に参加できる第２の相補的官能基と
を含む第２の化合物であって、第２の化合物と第２の官能基の間にリンカーを適宜含んでいてもよい第２の化合物を用意する工程と、
（ｃ）クリックケミストリー反応によって、第１の放射性化合物の第１の官能基を、第２の化合物の相補的官能基と反応させて、放射性リガンド又は基質を生成させる工程と、
（ｄ）放射性リガンド又は基質を単離する工程と
を含んでいる。
【００１６】
国際公開第２００６／１１６６２９号には、上記方法は放射性同位体124Ｉ、18Ｆ、11Ｃ、13Ｎ及び15Ｏとの使用に適しており、好ましい放射性同位体は18Ｆ、11Ｃ、123Ｉ、124Ｉ、127Ｉ、131Ｉ、76Ｂｒ、64Ｃｕ、99mＴｃ、90Ｙ、67Ｇａ、51Ｃｒ、192Ｉｒ、99Ｍｏ、153Ｓｍ及び201Ｔｌであると教示されている。国際公開第２００６／１１６６２９号には、使用し得る他のの放射性同位体として、72Ａｓ、74Ａｓ、75Ｂｒ、55Ｃｏ、61Ｃｕ、67Ｃｕ、68Ｇａ、68Ｇｅ、125Ｉ、132Ｉ、111Ｉｎ、52Ｍｎ、203Ｐｂ及び97Ｒｕが挙げられると教示されている。しかし、国際公開第２００６／１１６６２９号は、この方法を生体分子の放射性ヨウ素化にどのように応用するかについて、具体的な教示は何ら記載されていない。
【００１７】
Ｑｕ他［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５０（１４），３３８０−３３８７（２００７）］には、125Ｉ標識アミンの調製が開示されている。
【００１８】
【化４】
2013513578.tif 000005
非放射性ヨードフェニル−トリアゾール前駆体は、Ｒ−≡−Ｈ及びＩ−Ｃ6Ｈ4−Ｎ3のクリック環化によって調製される。国際公開第２００８／１３１１４８号は、同様の化学について開示したＱｕ他の対応特許出願である。
【００１９】
Ｄｏｎｇ他［ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，１０，１１４９−１１５１（２００９）］には、クリックケミストリーを用いたタンパク質のヨウ素化法が開示されている。
【００２０】
【化５】
2013513578.tif 000006
Ｄｏｎｇ他は、Ｎ末端Ｍｅｔ残基の代わりに、合成アミノ酸ホモプロパルギルグリシンを用いてタンパク質にアルキン基を導入している。検討されたタンパク質は、システインを含まないよう操作され、９０残基のアミノ酸からなる。Ｄｏｎｇ他は、この方法は、放射性同位体125Ｉを用いたラジオイムノアッセイに役立てることができると示唆しているが、放射性化学については何ら記載されていない。
【００２１】
国際公開第２０１０／１３１７４５号には、以下の式の18Ｆ標識フェニルアジド、並びにそれをクリック環化付加によるアルキン官能化オリゴヌクレオチドの放射性標識に使用してトリアゾール環を形成することが開示されている。
【００２２】
【化６】
2013513578.tif 000007
そこで、インビボ代謝による脱ヨウ素化に耐性をもつ化学的形態のヨウ素標識で、インビボイメージングに適した放射性ヨウ素化生体ターゲティング分子を得ることのできる代替放射性ヨウ素化法に対するニーズが依然として存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】国際公開第２００７／１４８０８９号
【発明の概要】
【００２４】
本発明は、クリック放射性ヨウ素化反応を用いた生体ターゲティング分子（ＢＴＭ）の放射性ヨウ素化の方法を提供する。本方法は、穏和な条件下で実施でき、そのため、放射性ヨウ素化反応条件下でのＢＴＭの不安定性のため従来の直接ヨウ素化法を実施できないおそれのあった分子を始めとして、広範な生体分子に適合しているという利点がある。かかる感受性の例として、従来の放射性ヨウ素化に必要とされる酸化性条件との不適合性又は不安定性が挙げられる。本方法は、非酸化性条件下で実施でき、したがって、酸化に鋭敏なＢＴＭの標識に特に有利な放射性ヨウ素化法を提供する。
【００２５】
本方法で使用されるクリック環化は選択性が高く、放射性ヨウ素化は、式Ｉの官能化ＢＴＭのアルキン基で位置選択的に起こる。本方法は、炭素−ヨウ素結合のインビボ代謝に耐性であるように選択される基（Ｙ1）に放射性ヨウ素が直接結合した生成物を与える。放射性ヨウ素化生成物は、インビボでの代謝による脱ヨウ素化に対して良好な安定性を呈し、放射性ヨウ素の不要な胃及び／又は甲状腺取込みに対しても良好な安定性を示すと予想される。したがって、生成物は、インビボイメージング用の放射性医薬品としての使用に適しており、これは重要な利点である。
【００２６】
クリック放射性ヨウ素化法は、自動合成装置での使用に容易に適合化させることができる。その選択性のために、保護基の使用を必要とせずにＢＴＭ標識を行うことができる。さらに、さらに、本標識法は、例えば、活性エステルカップリングを用いた従来の結合反応よりも高い放射性標識収率を達成できる可能性がある。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
第１の態様では、本発明は、生体ターゲティング部分の放射性ヨウ素化する方法であって、
（ｉ）次の式（Ｉ）の化合物を準備する工程と、
【００２８】
【化７】
2013513578.tif 000008
（ｉｉ）クリック環化付加触媒の存在下で、式（Ｉ）の化合物を以下の式（ＩＩａ）又は式（ＩＩｂ）の化合物と反応させて、それぞれ以下の式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）のコンジュゲートを得る工程と
【００２９】
【化８】
2013513578.tif 000009
【００３０】
【化９】
2013513578.tif 000010
を含む方法を提供する。
式中、
Ｉ*は、123Ｉ、124Ｉ又は131Ｉから選択されるインビボイメージングに適したヨウ素の放射性同位体であり、
Ｌ1、Ｌ2及びＬ3は各々独立にリンカー基であって、存在していても、存在していなくてもよく、
Ｙ1は−Ａｒ1−又はＸ1−であって、−Ａｒ1−はＣ3-10アリーレンであり、−Ｘ1−は−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）n−（Ａｒ1）j−又はＣＨ＝ＣＨ−（Ａｒ1）j−（ＣＨ2）n−であり、ｊは０又は１であり、ｎは値０〜４の整数であるが、Ｙ1が−Ｘ1−のときは、Ｉ*はＸ1の−ＣＨ＝ＣＨ末端に結合しており、
ＢＴＭは生体ターゲティング部分である。
【００３１】
「放射性ヨウ素化」という用語は、その通常の意味を有しており、放射性標識に用いられる放射性同位体がヨウ素の放射性同位体である放射性標識法を意味する。
【００３２】
リンカー基（Ｌ1）が存在しないときは、式（Ｉ）のアルキン基がＢＴＭに直接結合していることを意味する。例えば、アルキンが、ＢＴＭペプチド若しくはタンパク質のアミノ酸の側鎖に結合していることを意味することもあるし、ＢＴＭペプチドのＮ末端又はＣ末端に直接結合していることを意味することもある。リンカー基（Ｌ1）が存在する場合、各リンカー基は好ましくは合成品であり、独立に式−（Ａ）m−の基を含んでいるが、各Ａは独立に−ＣＲ2−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ2−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ2ＮＲ−、−ＮＲＳＯ2−、−ＣＲ2ＯＣＲ2−、−ＣＲ2ＳＣＲ2−、−ＣＲ2ＮＲＣＲ2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基又はＣ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックであり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ1-4アルコキシアルキル又はＣ1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の整数である。
【００３３】
「生体ターゲティング部分」（ＢＴＭ）という用語は、投与後に、インビボで哺乳類の身体の特定の部位に選択的に取り込まれるか又は局在化する化合物を意味する。かかる部位は、例えば、特定の病態に関係していることもあるし、臓器又は代謝過程がいかに機能しているかの指標となることもある。
【００３４】
ヨウ素の放射性同位体という用語は、その通常の意味を有しており、放射性であるヨウ素元素の同位体を意味する。かかる放射性同位体でインビボイメージングに適しているのは123Ｉ、124Ｉ及び131Ｉである。125Ｉはインビボイメージングには適しておらず、特許請求の範囲に記載されたものには該当しない。放射性ヨウ素化生成物は、画像診断又はインビボ治療用の放射性医薬品として有用である。かかる治療用途として、ＢＴＭが抗体又は抗体フラグメントである場合の放射免疫治療が挙げられる。131Ｉがインビボ治療用の好ましい放射性同位体である。
【００３５】
「クリック環化付加触媒」という用語は、第１の態様のクリック（アルキン＋アジド）又はクリック（アルキン＋イソニトリルオキシド）環化付加反応を触媒することが知られている触媒を意味する。クリック環化付加反応での使用に適した触媒は、当技術分野で公知である。好ましい触媒として、Ｃｕ（Ｉ）があり、これについては以下で説明する。好適な触媒についての詳細は、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｆｏｋｉｎ［Ａｌｄｒｉｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，４０（１），７−１７（２００７）］及びＭｅｌｄａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｒｎｏｅ  ［Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．，１０８，２９５２−３０１５（２００８）］に記載されている。
【００３６】
「Ｃ3-10アリーレン」という用語は、炭素原子数３〜１０の二価アリール基を意味する。この用語には、含炭素ヘテロアリール基が包含される。好適なヘテロアリール基として、ピリジン環、インドール環又はイミダゾール環が挙げられる。式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）において、放射性ヨウ素同位体（Ｉ*）はＹ1のアリール環又はビニル基に直接結合している。
【００３７】
Ｙ1がＸ1である場合、「Ｉ*はＸ1の−ＣＨ＝ＣＨ末端に結合」しているという表現は、式（ＩＩａ）の化合物がＩ*−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）n−（Ａｒ1）m−Ｎ3又はＩ*−ＣＨ＝ＣＨ−（Ａｒ1）m−（ＣＨ2）n−Ｎ3であることを意味する（式中、ｍは０又は１であり、ｎは０〜４の整数である）。化合物（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）についても同様である。
【００３８】
好ましい態様
第１の態様の方法での使用に好ましい前駆体は、式（ＩＩａ）のアジドであり、好ましい生成物は式（ＩＩＩａ）のトリアゾールである。
【００３９】
本発明での使用に好ましいヨウ素の放射性同位体は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いたインビボ医用イメージングに適したものである。したがって、Ｉ*は好ましくは123Ｉ又は124Ｉであり、123ＩはＳＰＥＣＴイメージングに適しており、124ＩはＰＥＴイメージングに適している。Ｉ*は、最も好ましくは123Ｉである。
【００４０】
Ｙ1基はＩ*と直接結合し、Ｙ1−Ｉ*結合は式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の生成物の一部をなす。したがって、本発明のＹ1基は、放射性ヨウ素標識（Ｉ*）がインビボ脱ヨウ素化を起こしにくい生成物が得られるように設計される。Ｙ1がＡｒ1である場合、好ましいＡｒ1基はＣ4-6アリーレンであり、さらに好ましくは置換又は非置換フェニル又はピリジン環、最も好ましくはフェニレン環を含む。Ｙ1がＸ1である場合、ビニル基は、Ｅ又はＺ配置のいずれでもよく、いずれのジアステレオマーも本発明の技術的範囲に属する。Ｘ1は、好ましくはｎが１〜４であるように、さらに好ましくはｎが１〜４であってｊが０であるように選択される。Ｙ1は、好ましくは、上述の好ましいＡｒ1基を含むＡｒ1である。
【００４１】
ＢＴＭは、合成したものでも、天然のものでもよいが、好ましくは合成品である。「合成品」という用語とは、その通常の意味を有しており、天然の起源（例えば哺乳類の身体）から単離したものとは対照的に、人工のものを意味する。かかる化合物は、その製造及び不純物プロファイルを十分に制御できるという利点を有する。したがって、天然起源のモノクローナル抗体及びそのフラグメントは、本明細書で用いる「合成品」には属さない。ＢＴＭは、好ましくは非タンパク質性もの、つまりタンパク質を含まないものである。
【００４２】
ＢＴＭの分子量は、好ましくは１００００ダルトン以下である。さらに好ましくは、分子量は２００〜９０００ダルトン、最も好ましくは３００〜８０００ダルトンであり、４００〜６０００ダルトンが特に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下であり、さらに好ましくは２００〜２５００ダルトン、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが特に好ましい。
【００４３】
生体ターゲティング部分には、好ましくは、線状又は環状ペプチド又はその組合せのいずれでもよい３〜８０量体ペプチド、ペプチド類似体、ペプトイド又はペプチド模倣体（）、１個のアミノ酸、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト（部分アゴニストを含む）又は酵素阻害剤、受容体結合化合物（受容体基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は基質を含む）、オリゴヌクレオチド又はオリゴＤＮＡ若しくはオリゴＲＮＡフラグメントがある。
【００４４】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（つまり、あるアミノ酸のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）で連結した２以上のアミノ酸（以下で定義）を含む化合物を意味する。「ペプチド模倣体」又は「模倣体」という用語は、ペプチド又はタンパク質の生物活性を模倣するが、化学的性状がペプチドでない（つまり、ペプチド結合（アミノ酸間のアミド結合）を含まない）生物活性化合物をいう。ここでは、ペプチド模倣体という用語は広義に用いられ、性状が完全にはペプチドでない分子（例えば、プソイドペプチド、セミペプチド及びペプトイド）を包含する。「ペプチド類似体」という用語は、以下に記載する１種以上のアミノ酸類似体を含むペプチドをいう。”Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｉｅｍｅ（２００４）のＳｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ，Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ他，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ  Ｖｏｌ  Ｅ２２ｃ参照。
【００４５】
「アミノ酸」という用語は、Ｌアミノ酸又はＤアミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）又はアミノ酸模倣体を意味し、天然のものでも純粋な合成品であってもよく、光学的に純粋つまり単一の鏡像異性体（従ってキラルなもの）であってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸の慣用三文字略語又は一文字略語を用いる。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、アイソスター（つまり、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたもの）である天然アミノ酸の合成類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者に周知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールが挙げられる［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７，（１９８５）参照］。チロシン、ヒスチジン、メチオニン又はプロリンのような放射性標識アミノ酸は、有用なインビボ造影剤として知られている。
【００４６】
ＢＴＭが、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物である場合、ＢＴＭは好ましくは非ペプチド、さらに好ましくは合成品である。「非ペプチド」という用語は、ペプチド結合（２つのアミノ酸残基間のアミド結合）を全く含まない化合物を意味する。好適な酵素基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤には、グルコース及びグルコース類似体（例えばフルオロデオキシグルコースなど）、脂肪酸、又はエラスターゼ、アンジオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤がある。好ましい非ペプチド系アンジオテンシンＩＩアンタゴニストはロサルタンである。好適な合成受容体結合化合物には、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２受容体リガンド、及びトロパンのようなドーパミン輸送体用リガンド、並びにセロトニン受容体用リガンドがある。
【００４７】
ＢＴＭは、最も好ましくは３〜１００量体ペプチド又はペプチド類似体である。ＢＴＭがペプチドである場合、好ましくは４〜３０量体ペプチド、最も好ましくは５〜２８量体ペプチドである。
【００４８】
ＢＴＭが、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト又は酵素阻害剤である場合、本発明の好ましい生体ターゲティング分子は、合成薬物様低分子、すなわち、医薬分子である。好ましいドーパミン輸送体リガンドはトロパン、脂肪酸、ドーパミンＤ−２受容体リガンド、ベンズアミド、アンフェタミン、ベンジルグアニジン、イオマゼニル、ベンゾフラン（ＩＢＦ）又は馬尿酸などである。好ましいトロパン誘導体は、123Ｉ−ＣＩＴ（Ｄｏｐａｓｃａｎ（商標））、123Ｉ−ＣＩＴ−ＦＰ（ＤａＴＳＣＡＮ（商標））及び123Ｉ−２β−カルボメトキシ−３β−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−（１−ヨードプロパ−１−エン−３−イル）ノルトロパンのＥ異性体（Ａｌｔｒｏｐａｎｅ（商標））である。Ｄｏｐａｓｃａｎ（商標）及びＤａＴＳＣＡＮ（商標）が特に好ましい。上記その他のトロパン剤は、Ｍｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ｎｏｗｏｔｎｉｋ  ［Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．，１２（３），１３７−１４５（１９９９）に記載されている。好ましい脂肪酸は123Ｉ−ＢＭＩＰＰ及び123Ｉ−ＩＰＰＡである。好ましいアンフェタミン誘導体は123Ｉ−ＩＭＰである。好ましいベンジルグアニジンはメタ−ヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、すなわち123Ｉ−ＭＩＢＧである。
【００４９】
ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいペプチドには以下のものがある。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
・ＳＴ受容体に結合するペプチド（ここで、ＳＴとは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）その他の微生物によって産生される耐熱性毒素をいう。）。
・ボンベシン。
・血管作用性小腸ペプチド。
・ニューロテンシン。
・ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
・白血球集積部位をターゲティングするためのＮ−ホルミル走化性ペプチド。
・血小板第４因子（ＰＦ４）及びそのフラグメント。
・例えば、血管形成をターゲティングし得るＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド［Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ他，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７  Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６］、［Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．１９９７  Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７］。
・α2−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチドフラグメント。α2−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参考文献に見出すことができる。α2−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅ他，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、β−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ他，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎ他，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４）。
・アンジオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ  ２２，９，１０３８−１０４４）及び［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ他，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。
【００５０】
好ましいＢＴＭペプチドは、ＲＧＤペプチドである。さらに好ましいＲＧＤペプチドは、以下のフラグメントを含む。
【００５１】
【化１０】
2013513578.tif 000011
かかるＲＧＤペプチドとして最も好ましいのは、ＢＴＭが式（Ａ）のペプチドであるものである。
【００５２】
【化１１】
2013513578.tif 000012
式Ａにおいて、ａは好ましくは１である。
【００５３】
ＢＴＭがペプチドである場合、ペプチドの一端又は両端（好ましくは両端）に代謝阻害基（ＭIG）が結合している。このように両方のペプチド末端を保護することは、インビボイメージング用途で重要である。さもないと、急速な代謝が起こって、ＢＴＭペプチドに対する選択的結合親和性が失われてしまうと予想されるからである。「代謝阻害基（ＭIG）」という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端でのＢＴＭペプチドの酵素（特にペプチダーゼ）代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基はインビボ適用に特に重要であり、当業者に周知であり、好適には、ペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＲG（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）ＲGはＣ1-6アルキル、Ｃ3-10アリール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックから選択されるＲGを有する。）から選択される。好適なＰＥＧ基については、リンカー基（Ｌ）に関して後述する。好ましいＰＥＧ基は、式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２（後記）のバイオモディファイアーである。好ましいアミノ末端ＭIG基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。
【００５４】
ペプチドカルボキシル末端に適した代謝阻害基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックがある。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭIG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。好ましいＭIG基はカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましい基はカルボキサミドである。
【００５５】
第１の態様の方法では、リンカー基Ｌ1が好ましくは存在する。リンカー基Ｌ2及びＬ3は、任意ではあるが、存在しないのが好ましい。リンカー基がＣ3-12ヘテロアリーレン基を含む場合、ヘテロ原子は好適にはＮ、Ｏ及びＳから選択され、好ましくはＮ及びＯである。
【００５６】
Ｌ1が１〜１０アミノ酸残基のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸又はセリンから選択される。Ｌ1がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２の単分散ＰＥＧ様構造のオリゴマー化で得られる単位を含む。
【００５７】
【化１２】
2013513578.tif 000013
かかるＰＥＧ様構造は、式Ｂｉｏ１（式中、ｐは１〜１０の整数である。）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸でよい。或いは、式Ｂｉｏ２のプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造も使用できる。
【００５８】
【化１３】
2013513578.tif 000014
式中、ｐは式Ｂｉｏ１について定義した通りであり、ｑは３〜１５の整数である。
【００５９】
式Ｂｉｏ２において、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。
【００６０】
リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖を含まない場合、好ましいＬ1基は、２〜１０の原子、最も好ましくは２〜５の原子、特に好ましくは２又は３の原子を含む−（Ａ）m−部分を構成する結合原子の主鎖を有している。
【００６１】
市販されていないＢＴＭペプチドは、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ  ａｎｄ  Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されているような固相ペプチド合成法によって合成できる。
【００６２】
第１の態様の方法では、式（Ｉ）の化合物は、適宜、式（Ｉａ）の化合物の脱保護によって生成させることができる。
【００６３】
【化１４】
2013513578.tif 000015
式中、Ｍ1はアルキン保護基である。
【００６４】
式（Ｉａ）におけるＬ1の好ましい態様は、式（Ｉ）について記載した通りである。
【００６５】
本発明の方法は、ＢＴＭで広範な官能基を許容する。ただし、ＢＴＭが遊離チオール基（例えば、還元型システイン含有ペプチド）を含む場合、かかるチオール基は、第１の態様の反応を実施する前に保護しておくのが好ましい。同様に、キレート官能基又は銅（Ｉ）に良好に配位する基も保護が必要とされることがある。
【００６６】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻害又は抑制するが、分子の残部を改質しない十分に穏和な条件下で問題の官能基から脱離させることのできる十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。好適な保護基は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，４th  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，２００７）に記載されている。アルキン保護基は、その第８章９２７〜９３３頁に記載されており、その例ごして、トリアルキルシリル基（各アルキル基が独立にＣ1-4アルキルであるもの）、アリールジアルキルシリル基（アリール基が好ましくはベンジル又はビフェニルであり、アルキル基が各々独立にＣ1-4アルキルであるもの）、ヒドロキシメチル又は２−（２−ヒドロキシプロピル）が挙げられている。好ましいアルキン保護基はトリメチルシリルである。式（Ｉａ）の保護アルキンは、式（Ｉ）の所望のアルキンを制御下に生成させることができ、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物でのクリック環化付加反応の効率を最大限にすることができるという利点を有する。
【００６７】
第１の態様のクリック放射性ヨウ素化法は、適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、Ｃ1-4アルキルアルコール、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はジメチルスルホキシド、或いはそれらの水性混合物）中又は水中で実施できる。ｐＨ域４〜８、さらに好ましくは５〜７の水性緩衝液を使用してもよい。反応温度は好ましくは５〜１００℃、さらに好ましくは７５〜８５℃、最も好ましくは室温（通例１５〜３７℃）である。クリック環化付加は、Ｍｅｌｄａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｒｎｏｅ  ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．  １０８，２９５２，Ｔａｂｌｅ  １（２００８）］に記載の通り、適宜、有機塩基の存在下で実施してもよい。
【００６８】
好ましいクリック環化付加触媒はＣｕ（Ｉ）を含む。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、反応を進行させるのに十分な量、通例、触媒量又は過剰量（例えば、式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物に対して０．０２〜１．５モル当量）で存在する。好適なＣｕ（Ｉ）触媒として、ＣｕＩ又は［Ｃｕ（ＮＣＣＨ3）4］［ＰＦ6］のようなＣｕ（Ｉ）塩が挙げられるが、好適には、硫酸銅（ＩＩ）のようなＣｕ（ＩＩ）塩を還元剤存在下で使用してＣｕ（Ｉ）をインサイチュで生成させてもよい。好適な還元剤には、アスコルビン酸又はその塩（例えば、アスコルビン酸ナトリウム）、ヒドロキノン、金属銅、グルタチオン、システイン、Ｆｅ2+又はＣｏ2+が挙げられる。Ｃｕ（Ｉ）は元素態銅粒子の表面にも内因的に存在し、したがって、例えば粉体又は顆粒の形態の元素態銅も触媒として使用し得る。粒径の制御された元素態銅が好ましいＣｕ（Ｉ）触媒源である。さらに好ましい触媒は、０．００１〜１ｍｍ、好ましくは０．１ｍｍ〜０．７ｍｍ、さらに好ましくは約０．４ｍｍの粒径を有する銅粉体としての元素態銅である。或いは、０．０１〜１．０ｍｍ、好ましくは０．０５〜０．５ｍｍの直径、さらに好ましくは０．１ｍｍの直径を有する巻き銅線を使用してもよい。Ｃｕ（Ｉ）触媒は、適宜、クリックケミストリーでＣｕ（Ｉ）の安定化に使用されるバソフェナントロリンの存在下で使用してもよい。
【００６９】
ＢＴＭがペプチド又はタンパク質である式（Ｉ）の非放射性前駆体化合物は、標準的なペプチド合成法、例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ａｎｄ  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；“Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９に記載されているような固相ペプチド合成法によって調製できる。式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）の化合物へのアルキン基の導入は、ペプチドのＮ又はＣ末端の反応、或いはペプチド配列に含まれる他の官能基であって、その修飾がベクターの結合特性に影響を及ぼさない官能基との反応によって達成できる。アルキン基は、好ましくは、例えばペプチドのアミン官能基と活性化酸との反応或いはペプチドの酸官能基とアミン官能基との反応による安定なアミド結合の形成によって導入され、ペプチドの合成中又は合成後に導入される。細胞、ウイルス、細菌のようなベクターにアルキン基を導入する方法は、Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂ  ａｎｄ  Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ  ８（２４），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００３及びその引用文献に見出すことができる。式（Ｉ）の化合物へのアルキン基の導入に有用である好適な二官能性中間体には以下のものがある。
【００７０】
【化１５】
2013513578.tif 000016
式中、Ｌ1及びその好ましい実施形態は上記で定義した通りである。
【００７１】
上記式中、Ｌ1は好適には存在している。しかし、アジド官能化アミノ酸では、アジド官能基は任意にはいかなるリンカー基も介さずにアミノ酸の側鎖に直接結合していてもよい。この種のアルキン前駆体は、Ｇｌａｓｅｒ  ａｎｄ  Ａｒｓｔａｄ  ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，９８９−９９３（２００７）］に記載されている。同報文には、アルキン基をペプチドに導入する方法についても記載されている。
【００７２】
ＢＴＭをアルキン基で官能化するためのその他のアプローチは、Ｎｗｅ他［Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２４（３），２８９−３０２（２００９）］に記載されている。Ｓｍｉｔｈ他は、アルキン官能化イサチン前駆体の合成法について報告しており、イサチン化合物は、カスパーゼ−３又はカスパーゼ−７に特異的である［Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（２４），８０５７−８０６７（２００８）］。Ｄｅ  Ｇｒａａｆ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，２０（７），１２８１−１２９５（２００９）］には、アルキン側鎖を有する非天然アミノ酸と、後段でのクリックコンジュゲーションのためのペプチド又はタンパク質への部位特異的導入法が記載されている。実施例７（後記）では、二官能性アルキン−マレイミドについて報告するが、これは、後段でのクリック環化付加に適したアルキン基を導入するためのチオール含有ＢＴＭのチオール基との結合に用いることができる。
【００７３】
式（ＩＩａ）の放射性ヨウ素化アジドは、Ｂｅｒｃｏｖｉｃｉ他［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７（８），１４８４−１４８９（１９７８）］の方法で合成することができる。１−アジド−４−［125Ｉ］ヨードベンゼン（つまり、Ｙ1が１，４−フェニレン基であるもの）は、Ｂｏｏｔｈ他の方法［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７９，３９７−４０５（１９７９）］で以下の通り（Ｉ*＝125Ｉ）得ることができる。
【００７４】
【化１６】
2013513578.tif 000017
追加の選択肢は、アニリンを出発原料として、求電子置換及び適当な酸化剤を用いて、それを直接放射性ヨウ素化すること（パラ位が最も活性が高いので）である。このようにアニリンをヨウ素化し、次いでジアゾ化して上述のジアゾニウム中間体を得ることができる。或いは、位置特異性を担保すべくトリアルキルスズ前駆体を使用してもよい。
【００７５】
式（ＩＩｂ）のニトリルオキシドは、Ｋｕ他［Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，３（２６），４１８５−４１８７（２００１）］及びその引用文献に記載された方法によって得ることができる。例えば、これらは、通例、α−ハロアルドキシムをトリエチルアミンのような有機塩基で処理することによってインサイチュで生成される。好ましい合成方法並びにその後で所望のイソキサゾールを得るためのクリック環化の条件は、Ｈａｎｓｅｎ他［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，７０（１９），７７６１−７７６４（２００５）］に記載されている。Ｈａｎｓｅｎ他は、対応アルデヒドをクロラミン−Ｔ三水和物と反応させ、次いで水酸化ナトリウムで脱塩素化することによって、所望のα−ハロアルドキシムをインサイチュで生成させている。対応アルドキシムは、対応アルデヒドをヒドロキシルアミン塩酸塩とｐＨ９〜１０で反応させることによって調製される。Ｋ．Ｂ．Ｇ．Ｔｏｒｓｅｌｌ  ”Ｎｉｔｒｉｌｅ  Ｏｘｉｄｅｓ，Ｎｉｔｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｎｉｔｒｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”  ［ＶＣＨ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）］も参照されたい。
【００７６】
ニトリルオキシド基の不安定性のため、これらは、最も好適には、例えば対応アルデヒド又はマスクされたニトリルオキシド（例えば環状亜硫酸エステル）から式（ＩＩａ）の化合物にインサイチュで導入される。
【００７７】
【化１７】
2013513578.tif 000018
一実施形態では、Ｙ1が１，４−フェニレンである式（ＩＩａ）の化合物を提供するが、かかる化合物は、実施例１（後記）に従って容易に調製される。
【００７８】
式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物は、好ましくは、以下の式（ＩＶａ）又は式（ＩＶｂ）の前駆体を酸化剤の存在下で放射性ヨウ素イオン原料とで反応させて、それぞれ式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物を得ることによって、生成させる。
【００７９】
【化１８】
2013513578.tif 000019
式中、Ｙ1、Ｌ2及びＬ3並びにその好ましい実施形態は、上記で定義した通りであり、各Ｒaは独立にＣ1-4アルキルである。
【００８０】
式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）の前駆体は非放射性である。有機スズ中間体は、Ａｌｉ他［Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４２３−４４５（１９９６）］に記載されている。好適な酸化剤は、Ｂｏｌｔｏｎ  ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。好ましい酸化剤は、ｐＨ約４の過酢酸及びｐＨ約１の過酸化水素／ＨＣｌ水溶液である。カリウムアルキニルトリフルオロボレート前駆体の合成は、Ｋａｂａｌｋａ他［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４８，３５９−３６２（２００５）及びＪ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４９，１１−１５（２００６）］に記載されている。カリウムアルキニルトリフルオロボレート前駆体は、空気及び水の両方に安定な結晶性固体であると記載されている。
【００８１】
本発明は、化学選択性の高い放射性ヨウ素化法を提供する。連結反応は、ＢＴＭの所定部位で起こり、１種類の生成物しか与えない。したがって、この方法は化学選択的である。さらに、アルキン及びアジド官能基はいずれもほとんどの反応条件下で安定であり、大半の一般的ペプチド官能基とは非反応性であり、放射性標識合成の際に必要とされる保護及び脱保護段階が最小限となる。さらに、標識反応の際に形成されるトリアゾール及びイソキサゾール環は加水分解せず、酸化及び還元に対して極めて安定であるが、これは標識ＢＴＭが高いインビボ安定性を有することを意味する。トリアゾール環は、大きさ及び極性の点でアミドと同程度であり、その結果、標識ペプチド又はタンパク質は、その天然の対応物の優れた摸倣となる。特に、トリアゾール環は公知のアミド模倣基又はバイオアイソスターである。
【００８２】
第１の態様の方法は、好ましくは、式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の生成物が放射性医薬組成物として得られるように、無菌的に実施される。放射性医薬組成物についての詳細は、第４の態様（後記）で説明する。このように、本方法は無菌製造条件下で実施され、所望の無菌で非発熱性の放射性医薬品生成物が得られる。したがって、重要な部品、特に式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の生成物と接触する装置の部材（例えば、バイアル及び輸送管）は無菌であるのが好ましい。部品及び試薬は、無菌濾過或いは（例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる）最終滅菌を始めとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。非放射性成分を予め滅菌しておけば、放射性ヨウ素化された放射性医薬品生成物に関して最小限の数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、少なくとも最終無菌濾過段階を含めておくのが好ましい。
【００８３】
式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）及び式（ＩＩ）の化合物、Ｃｕ（Ｉ）触媒、その他の試薬及び溶媒は、各々、無菌健全性及び／又は放射能安全性、さらに適宜ヘッドスペースの不活性ガス（例えば、窒素又はアルゴン）を維持できるとともに、注射器又はカニューレでの溶液の添加及び吸引も行うことのできる密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。かかる容器として好ましいのは、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）と共にクリンプオンしたセプタムシールバイアルである。蓋は、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で１回又は複数回穿刺するのに適したもの（例えば、クリンプオン式セプタムシール蓋）である。かかる容器は、所望に応じて（例えばヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気のため）真空に蓋が耐えるとともに、酸素や水蒸気のような外部雰囲気ガスを侵入させずに減圧のような圧力変化に耐えるという追加の利点がある。反応容器は好適にはこのような容器及びその好ましい実施形態から選択される。反応容器は、好ましくは生体適合性プラスチック（例えば、ＰＥＥＫ）から製造される。
【００８４】
第１の態様の方法は、好ましくは自動合成装置を用いて実施される。「自動合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］に記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に集約されることを意味し、広範な材料に適用できる。かかる自動合成装置は、本発明の方法、特に放射性医薬品生成物が所望される場合の本発明の方法に好ましい。これらは、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ社．、Ｉｏｎ  Ｂｅａｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社（ベルギー国、Ｂ−１３４８ルヴァン・ラ・ヌーブ、シュマン・デュ・シクロトロン３）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を始めとする様々な供給業者から市販されている［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ他、上掲］。
【００８５】
市販の自動合成装置は、放射性医薬品の製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器も提供する。自動合成装置は、適切に設計された放射能作業セル内で使用するように設計されているので、通例、放射線遮蔽が設けられていない。放射能作業セルは、潜在的な放射線量からオペレーターを保護するのに適した放射線遮蔽をもたらすとともに、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気装置を与える。自動合成装置は、好ましくは、第７の態様（後記）に記載する「カセット」を備える。
【００８６】
第２の態様では、本発明は、式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物を提供する。
【００８７】
【化１９】
2013513578.tif 000020
式中、Ｌ1、Ｌ2、Ｌ3、Ｙ1、ＢＴＭ及びＩ*は、その好ましい態様を含めて、第１の態様（上述）で定義した通りである。
【００８８】
好ましくは、第２の態様の化合物は式（ＩＩＩａ）のものである。式（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）の化合物において、リンカー基（それぞれＬ2及びＬ3）は好ましくは存在しない。本発明は、医学用途のための第２の態様で定義される式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物、好ましくは式（ＩＩＩａ）の化合物を提供する。
【００８９】
第３の態様では、本発明は、第１の態様の方法に有用な式（ＩＩａａ）又は（ＩＩｂｂ）の化合物を提供する。
【００９０】
【化２０】
2013513578.tif 000021
式中、Ｉ*及びＹ1は、その好ましい態様を含めて、上記で定義した通りである。
【００９１】
式（ＩＩａａ）又は（ＩＩｂｂ）の化合物は、好ましくは、生体適合性担体と共に医薬組成物として供給することができる。かかる組成物については、その好ましい態様を含めて、第４の態様（後記）で定義する。
【００９２】
第４の態様では、本発明は、第２の態様の式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物の有効量を、生体適合性担体と共に含む放射性医薬組成物を提供する。Ｉ*、Ｌ1及びＢＴＭの好ましい実施形態は、第１の態様（上述）で定義した通りである。第３の態様の化合物は、好ましくは式（ＩＩＩａ）のトリアゾールである。
【００９３】
「生体適合性担体」は、１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤を含む。これは、好ましくは、式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体は、エタノールのような生体適合性有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性化合物又は製剤を可溶化するのに有用である。好ましくは、生体適合性担体は発熱物質を含まない（パイロジェンフリーの）注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静注用の生体適合性担体のｐＨは、好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【００９４】
第５の態様では、本発明は、インビボイメージング又はインビボ放射線療法に使用するための放射性医薬品の製造のための、第２又は第４の態様の化合物の使用を提供する。好ましくは、使用はインビボイメージング法におけるものであり、さらに好ましくは哺乳類（特にヒト）のインタクトな身体のインビボイメージング、最も好ましくはＰＥＴ又はＳＰＥＣＴによるイメージングにおけるものである。好ましくは、第５の態様の使用は式（ＩＩＩａ）又は式（ＩＩＩｂ）の化合物、さらに好ましくは式（ＩＩＩａ）の化合物を含む。
【００９５】
第６の態様では、本発明は、第１の態様の方法を実施するための自動合成装置の使用を提供する。
【００９６】
自動合成装置及びその好ましい実施形態は、第１の態様（上述）で記載した通りである。
【００９７】
第７の態様では、本発明は、第１の態様の好ましい実施形態の自動合成装置での使用に適した使い捨て無菌カセットであって、第１の態様の方法を実施するのに必要な非放射性試薬を無菌の非発熱原性形態で含むカセットを提供する。
【００９８】
第７の態様では使用するための上記方法の好ましい実施形態は、第１の態様で記載した通りである。
【００９９】
「カセット」という用語は、合成装置の可動部材の機械的運動がカセットの外側から（即ち、外部から）カセットの動作を制御するように、自動合成装置（以下に定義する）に着脱自在かつ交換可能に装着できるように設計された装置を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立セプタムシールバイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。カセットを自動合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動合成装置の追加の可動部材は、注射器のプランジャー先端をつかみ、注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。
【０１００】
カセットは融通性の高いものであって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィー用カートリッジ（例えば、ＳＰＥ）を装着するために適した複数のポートを有している。カセットは常に反応容器を含んでいる。かかる反応容器は好ましくは１〜１０ｃｍ3、最も好ましくは２〜５ｃｍ3の容積を有しており、カセットの様々なポートから試薬又は溶媒を移送できるように、カセットの３以上のポートが反応容器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０個の弁、最も好ましくは２０〜３０個の弁を有しており、２５個の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくは各々同一であり、最も好ましくは三方弁である。本発明のカセットは放射性医薬品製造に適するように設計され、医薬グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造される。
【０１０１】
本発明の好ましい自動合成装置は、放射性ヨウ素化された放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するのに必要なすべての試薬、反応容器及び機器を含むディスポーザブルつまり使い捨てカセットを備えているものである。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性ヨウ素標識放射性医薬品を製造できる融通性を有することを意味する。カセットアプローチには、装置構成の単純化とそれに伴うオペレーターエラーのリスクの低減、ＧＭＰ（Good Manufacturing Practice）コンプライアンスの向上、マルチトレーサー能力、生産作業間の迅速な変更、カセット及び試薬の作業前自動診断検査、実施すべき合成と化学試薬との自動バーコードクロスチェック、試薬のトレーサビリティ、使い捨てであり、そのため相互汚染のリスクがなく、改竄及び誤用を防ぐことができるという利点がある。
【０１０２】
第８の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の画像を形成する方法であって、第２の態様の化合物又は第３の態様の放射性医薬組成物を投与して、該化合物又は組成物が分布した身体の少なくとも一部分の画像をＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて生成させることを含む方法を提供する。
【０１０３】
追加の態様では、本発明は、薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングする方法であって、第２の態様の化合物又は第３の態様の組成物を身体に投与し、化合物又は組成物が分布した身体の少なくとも一部の化合物又は組成物の取込みをＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて検出することを含む方法を提供する。
【０１０４】
この最後の態様における投与と検出は、ヒト又は動物における薬剤治療の効果を求めることができるように、好ましくは薬剤による治療の前後に実施される。薬剤治療が、治療の過程を含む場合、イメージングは治療の途中に実施することもできる。
【実施例】
【０１０５】
本発明を以下の実施例によって例示する。実施例１は、非放射性（ヨウ素同位体127Ｉ）ヨウ素化トリアゾール類似体化合物１及び化合物２の標準試料の合成を例示する。実施例２は、123Ｉ−４−ヨードフェニルアジド、本発明のクリック放射性標識化学の重要な前駆体の合成を例示する。実施例３は、２種類の代替クリック環化付加触媒を用いて、本発明のクリック環化付加法を用いた放射性ヨウ素化トリアゾール環（化合物１Ａ）の合成を例示する。合成は室温で実施することができ、穏和な条件下でのＢＴＭの標識に適していることを実証している。実施例４は、放射性ヨウ素化トリアゾール環（化合物２Ａ）の追加の合成法を例示する。実施例５は、非放射性（ヨウ素同位体127Ｉ）ヨウ素化イソキサゾール類似体化合物３の標準試料を例示する。実施例６は、本発明のクリック環化付加法を用いた放射性ヨウ素化イソキサゾール環（化合物３Ａ）の合成を例示する。実施例７は、アルキン基の導入のための、ＢＴＭのチオール基との共有結合に適した二官能性アルキン−マレイミドの合成を例示する。
【０１０６】
略語
ＤＣＭ：          ジクロロメタン
ＤＭＦ：          ジメチルホルムアミド
ＨＰＬＣ：        高速液体クロマトグラフィー
ＭｅＣＮ：        アセトニトリル
ＰＡＡ：          過酢酸
ＲＣＰ：          放射化学純度
ＲＴ：            室温
ｔR：             保持時間。
本発明の化合物
【０１０７】
【化２１】
2013513578.tif 000022
実施例１：Ｎ−ベンジル１−（４−ヨードフェニル）−１，２，３−トリアゾリル−４−カルボキサミド（化合物１）及び１−（４−ヨードフェニル）−４−フェニル−１，２，３−トリアゾール（化合物２）の調製
段階（ａ）：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルプロピオレートの調製
１，２−ジメトキシエタン（４０ｍＬ）中のプロピオル酸（２．１ｇ、３０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（３．４５ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を、１，２−ジメトキシエタン（３５ｍＬ）中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（６．１９ｇ、３０ｍｍｏｌ）を室温で滴下することによって処理した。添加の途中に混合物が濁った。混合物を一晩撹拌し、固体を濾別し、濾液を蒸発させて５．１ｇの淡褐色固体を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δH２．８３（４Ｈ，ｓ，２×ＣＨ2）及び３．３８（１Ｈ，ｓ，ＣＨ）。
【０１０８】
段階（ｂ）：Ｎ−ベンジルプロピンアミドの調製
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルプロピオレート（５．１ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を、氷浴で３０分間冷却した。ベンジルアミン（２．８９ｇ、２７ｍｍｏｌ、２．９５ｍＬ）を２〜３分間滴下した。混合物を、氷浴を溶かすことによって室温まで加温させた。この間に、反応に沈殿が生じた。次いで、混合物を一晩撹拌した。固体を濾別し、濾液を蒸発させて５．４ｇの暗黄色の油を得た。約２．２ｇの物質をシリカゲルの層に通して濾過し、ジクロロメタンで溶出した。こうして１．３ｇ（２７％）の淡黄色固体を得た。1Ｈ  ＮＭＲによって、この物質が所望の物質と一致することが判明した。純度８０〜９０％。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ）δH  ２．８０（１Ｈ，ｓ，ＣＣＨ）、４．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，ＣＨ2）、６．１９（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，ＮＨ）、及び７．３３（５Ｈ，ｍ，５×ＡｒＨ。
【０１０９】
段階（ｃ）：１−（４−ヨードフェニル）−４−フェニル−１，２，３−トリアゾール（化合物２）及びＮ−ベンジル１−（４−ヨードフェニル）−１，２，３−トリアゾリル−４−カルボキサミド（化合物１）の調製
メタノール（６ｍＬ）中の硫酸銅（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（１．５６ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）の暗黄色の撹拌溶液に、４−ヨードフェニルボロン酸（４９６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２４時間激しく撹拌した。反応の経過に伴って、暗黄色の溶液が、黄色を帯びた緑色の微細懸濁液になった。水（７ｍＬ）を加えて、混合物を緑色の乳状懸濁液にした。これを２部に分けた。各懸濁液をアスコルビン酸ナトリウム（９９ｍｇ）で処理し、一方は（Ａ）Ｎ−ベンジルプロピンアミド（１５９ｍｇ）で処理し、他方（Ｂ）はフェニルアセチレン（１０２ｍｇ、１１０μＬ）で処理した。２種類の混合物を、室温で６時間激しく撹拌した。数分で混合物は緑色の乳状懸濁液から黄色の乳状懸濁液へと変化し、次いで分離して水／メタノール混液中に懸濁した粉末状固体が得られた。固体を濾別し、水で洗浄し、一晩真空乾燥させて２種類の所望の物質を得た。
Ａ）化合物１（１４０ｍｇ、３５％）、灰白色粉末。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ6−ＤＭＳＯ）４．４９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＣＨ2）、７．２０〜７．３５（５Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｃ6Ｈ5）、７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１−（２，６−ＡｒＨ））、７．９８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１−（３，５−ＡｒＨ））、９．２６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＮＨ）、及び９．３２（１Ｈ，ｓ，５−ＡｒＨ）。
Ｃ16Ｈ13ＩＮ4Ｏのｍ／ｚ計算値４０４．０；実測値４０４．５。
Ｂ）化合物２（１９０ｍｇ、５５％）、淡黄色粉末。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ6−ＤＭＳＯ）７．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４−（４−ＡｒＨ））、７．５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４−（３，５−ＡｒＨ））、７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１−（２，６−ＡｒＨ））、７．９４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４−（２，６−ＡｒＨ））、８．０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１−（３，５−ＡｒＨ））、及び９．３５（１Ｈ，ｓ，５−ＡｒＨ）。
Ｃ14Ｈ10ＩＮ3のｍ／ｚ計算値３４７．０；実測値３４７．６。
【０１１０】
実施例２：［123Ｉ］−４−ヨードフェニルアジドの調製
【０１１１】
【化２２】
2013513578.tif 000023
これは、Ｂｏｏｔｈ他［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７９，３９７−４０５（１９７９）］の方法に基づく。
【０１１２】
一塩化ヨウ素（ＩＣｌ）試薬を、以下の通りに調製した。１０ｍＬの１Ｍ塩酸に、塩化ナトリウム（１．１６８ｇ）、ヨウ化カリウム（２０．８ｍｇ）及びヨウ素酸カリウム（１３．４ｍｇ）を溶解した。次いで、この橙色の溶液１．０ｍＬを、３．３ｍＭヨウ素酸カリウム溶液（水１０ｍＬ中７．０６ｍｇ）１．２ｍＬ、３７％塩酸０．９ｍＬ及び２Ｍ塩化ナトリウム３．７ｍＬを含有するシンチレーションバイアルに移した。淡黄色／橙色の溶液を−４℃で保存した。
【０１１３】
約５μＬのヨウ化ナトリウム［123Ｉ］（１３７ＭＢｑ）に、水酸化ナトリウム水溶液（２０μＬ  ０．０１Ｍ）、０．５Ｍ塩酸（０．１ｍＬ）に溶解した４−ヨードアニリン（１００μｇ、４．６×１０-7モル）及び一塩化ヨウ素試薬（２０μＬ）を加えた。反応混合物を室温で２０分間インキュベートした。ＨＰＬＣ分析で、４−［123Ｉ］ヨードアニリン（ｔR５分、系Ａ）が＞９０％のＲＣＰで確認された。
【０１１４】
氷浴中で冷却した粗［123Ｉ］−４−ヨードアニリンに、亜硝酸ナトリウム（水０．５ｍＬ中１．６ｍｇ、９．４×１０-7モル、２０μＬ）を加えた。２０分後、尿素（水０．５ｍＬ中２．５ｍｇ、１．６７×１０-6モル、２０μＬ）及びアジ化ナトリウム（１５μＬ、１．４２×１０-6モル、水０．５ｍＬ中３．１２ｍｇ）を加えた。１０分後、氷を除去し、濁った溶液をシンチレーションバイアルに移した。反応バイアルを２×０．５ｍＬアセトニトリルで濯ぎ、同じシンチレーションバイアルに移した。得られた透明な溶液を、１０ｍＬの水で希釈し、ｔＣ１８−ライト（２．５ｍＬのＭｅＣＮ及び５ｍＬの水で前処理）にロードし、０．６ｍＬのアセトニトリルで溶出すると、精製標品４−［123Ｉ］ヨードフェニルアジドが５５％の収率（崩壊補正せず）、＞９０％のＲＣＰ（ＨＰＬＣ  ｔR１３分、系Ａ）で得られた。
【０１１５】
【表１】
2013513578.tif 000024
実施例３：［123Ｉ］−Ｎ−ベンジル１−（４−ヨードフェニル）−１，２，３−トリアゾリル−４−カルボキサミド（化合物１Ａ）の調製
選択肢１：銅粉体を使用
【０１１６】
【化２３】
2013513578.tif 000025
この方法は、Ｇｌａｓｅｒ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（３），９８９−９９３（２００７）］に基づく。
【０１１７】
Ｗｈｅａｔｏｎバイアル中の銅粉体（−４０メッシュ、２００ｍｇ）に、リン酸ナトリウム緩衝液（２００μＬ、ｐＨ６、５０ｍＭ）、Ｎ−ベンジルプロピンアミド（ＤＭＦ０．１ｍＬ中１．０ｍｇ、６．３×１０-6モル）及び０．２ｍＬ  ＭｅＣＮ中の４−［123Ｉ］ヨードフェニルアジド（２２ＭＢｑ）を加えた。反応混合物を８４℃で２０分間加熱した。冷却した後、１０μＬの試料をＨＰＬＣで分析したところ、８４％のＲＣＰで目的生成物が確認された（ＨＰＬＣ  ｔR約９分、系Ａ、実施例２）。粗標品を、アセトニトリル中の０．１％  ＴＦＡ０．５ｍＬ及び水中の０．１％  ＴＦＡ０．６ｍＬで希釈し、目的生成物を、１００％のＲＣＰで、ＨＰＬＣ（系Ａ、実施例２）によって５８％の収率（崩壊補正せず）で単離した。精製標品と基準化合物１（実施例１）との共溶出が観察された。
【０１１８】
この反応は室温でも実施でき、収率は１７％でＲＣＰは１００％であった。
【０１１９】
選択肢２：硫酸銅（ＩＩ）及びアスコルビン酸ナトリウムを使用
Ｗｈｅａｔｏｎバイアル中の硫酸銅（ＩＩ）溶液（５０μＬ、０．０４５Ｍ溶液）に、アスコルビン酸ナトリウム溶液（５０μＬ、０．１５Ｍ溶液）、リン酸ナトリウム緩衝液（１００μＬ、ｐＨ６、５０ｍＭ）、Ｎ−ベンジルプロピンアミド（ＤＭＦ０．１ｍＬ中１．０ｍｇ、６．３×１０-6モル）及びＭｅＣＮ中の４−［123Ｉ］ヨードフェニルアジド０．２ｍＬ（２２ＭＢｑ）を加えた。反応混合物を８４℃で２０分間加熱した。冷却した後、粗標品をアセトニトリル中の０．１％  ＴＦＡ  ０．５ｍＬ及び水中の０．１％ＴＦＡ０．６ｍＬで希釈し、ＨＰＬＣ（系Ａ、実施例２）によって目的生成物を５６％の収率（崩壊補正せず）、１００％ののＲＣＰで単離した。精製標品と基準化合物１（実施例１）との共溶出が観察された。
【０１２０】
実施例４：［123Ｉ］−１−（４−ヨードフェニル）−４−フェニル−１，２，３−トリアゾール（化合物２Ａ）の調製
【０１２１】
【化２４】
2013513578.tif 000026
この方法は、Ｇｌａｓｅｒ他［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８（３），９８９−９９３（２００７）］に基づく。
【０１２２】
Ｗｈｅａｔｏｎバイアル中の銅粉体（−４０メッシュ、２００ｍｇ）に、リン酸ナトリウム緩衝液（２００μＬ、ｐＨ６、５０ｍＭ）、フェニルアセチレン（ＤＭＦ０．１ｍＬ中０．６４ｍｇ、６．３×１０-6モル）及び最後に、ＭｅＣＮ中の４−［123Ｉ］ヨードフェニルアジド０．２ｍＬ（２８ＭＢｑ）を加えた。反応混合物を８４℃で２０分間加熱した。冷却した後、１０μＬの試料をＨＰＬＣで分析したところ、８５％のＲＣＰで目的生成物が確認された（ＨＰＬＣ  ｔR２２．５分、系Ｂ）。粗標品を、アセトニトリル中の０．１％  ＴＦＡ０．４ｍＬ及び水中の０．１％  ＴＦＡ０．７ｍＬで希釈し、ＨＰＬＣ（系Ｂ）によって目的生成物を４８％の収率（崩壊補正せず）、１００％のＲＣＰで単離した。精製標品と基準化合物２（実施例１）との共溶出が観察された。
【０１２３】
【表２】
2013513578.tif 000027
実施例５：３−（４−ヨードフェニル）−５−フェニルオキサゾール（ｐｈｅｎｙｌｉｏｘａｚｏｌｅ）（化合物３）の合成
【０１２４】
【化２５】
2013513578.tif 000028
Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．  ７０，７７６１−７７６４（２００５）参照。
【０１２５】
ｔ−ブタノール（８ｍＬ）及び水（８ｍＬ）中のヒドロキシルアミン塩酸塩（７９ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、４−ヨードベンズアルデヒド（２５０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、次いで水酸化ナトリウム（４５ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、クロラミン−Ｔ三水和物（３１８ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を一度に加え、続いて、硫酸銅（７．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び銅削り屑（約２０ｍｇ）、エチニルベンゼン（１１５ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１２０μＬ）を加えた。２Ｎ  ＨＣｌを数滴添加してｐＨを約６に調整し、室温で１８時間撹拌した。反応混合物を氷／水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、希水酸化アンモニウム溶液（１０ｍＬ）を加え、生成物を濾過によって回収した。生成物をＤＣＭに再溶解し、シリカゲルの層に通し、２０％酢酸エチル：石油エーテル（７５ｍＬ）で溶出すると、不純物を含む灰白色固体が得られた。この物質を、さらに、シリカゲルクロマトグラフィーで、石油中の５〜１０％ＥｔＯＡｃで溶出して精製した。こうして白色固体（１０ｍｇ、３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δＨ  ６．８０（１Ｈ，ｓ）、７．４７（３Ｈ，ｍ）、７．６０（２Ｈ，ｍ）、及び７．８２（４Ｈ，ｍ）；13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δＨ  ９６．４、９７．２、１２５．９、１２７．３、１２８．４、１２８．６、１２９．０、１３０．４、１６２．２、及び１７０．７。
【０１２６】
実施例６：［123Ｉ］−３−（４−ヨードフェニル）−５−フェニルイソキサゾール（化合物３Ａ）の調製
段階（ａ）：［123Ｉ］４−ヨードベンズアルデヒドの調製
５．２μＬのヨウ化ナトリウム［123Ｉ］（１３８．１ＭＢｑ）に、酢酸アンモニウム緩衝液（１００μＬ、ｐＨ４、０．２Ｍ）、ヨウ化ナトリウム［127Ｉ］（５１μＬ、０．０１Ｍ水酸化ナトリウム中の１０ｍＭ溶液、５．１×１０-7モル）、過酢酸（１１μＬ、５０ｍＭ溶液、５．５×１０-7モル）及び４−トリブチルスタンニルベンズアルデヒド（１００μＬ、２００μｇ、アセトニトリル中の２ｍｇ／ｍＬ溶液、５．０６×１０-7モル）を加えた。追加の５０μＬのアセトニトリルを加えて、４−トリブチルスタンニルベンズアルデヒドの溶解性を促進し、反応混合物を室温で約２０分間インキュベートしてから、ＨＰＬＣ分析を行ったところ、［123Ｉ］−４−ヨードベンズアルデヒド（ｔR約８分、系Ａ、実施例２）が＞９０％のＲＣＰで確認された。反応混合物に、１ｍＬのアセトニトリル及び１０ｍＬの水を加え、得られた溶液をｔＣ−１８ライトカートリッジ（２．５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの水で前処理）にロードした。１：１  ｔ−ブタノール：水０．５ｍＬで、［123Ｉ］４−ヨードベンズアルデヒドが溶出し、収率は４８％（崩壊補正せず）であった。
【０１２７】
段階（ｂ）：化合物３Ａの調製
【０１２８】
【化２６】
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Ｗｈｅａｔｏｎバイアル中の精製［123Ｉ］−４−ヨードベンズアルデヒド（０．５ｍＬ）に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（７４μｇ、水中の４ｍｇ／ｍＬ溶液１８．５μＬ、１．０６×１０-6モル）及び水酸化ナトリウム（１０６．５μｇ、水中の１０ｍｇ／ｍＬ溶液１０．６μＬ、２．６５×１０-6モル）を加えた。ｐＨを約１０と測定し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。ＨＰＬＣ分析によって、オキシムと考えられる親水性種への８１％の転化が確認された（ｔR７．０分、系Ａ、実施例２）。粗オキシムに、以下の順序、クロラミン−Ｔ三水和物（７５０μｇ、水中の１００ｍｇ／ｍＬ溶液７．５μＬ、２．６６×１０-6モル）、硫酸銅（ＩＩ）（３．８μｇ、水中の０．５ｍｇ／ｍＬ溶液７．６μＬ、１．５３×１０−8モル）、−４０メッシュ銅粉体（５０ｍｇ）、リン酸ナトリウム緩衝液（１００μＬ、ｐＨ６、５０ｍＭ）及びフェニルアセチレン（ＤＭＦ０．１ｍＬ中の０．６４ｍｇ、６．３×１０-6モル）を添加した。反応混合物のｐＨ測定値は６であり、反応混合物を８０℃で２０分間加熱した。冷却後、１０μＬの試料をＨＰＬＣで分析したところ、目的生成物の生成が１１．６％のＲＣＰで確認された（ＨＰＬＣ  ｔR１９．５分、系Ａ、実施例２）。粗標品を、アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ０．４ｍＬ及び水中の０．１％ＴＦＡ０．４ｍＬで希釈し、ＨＰＬＣ（系Ａ、実施例２）によって目的生成物を３％の収率（崩壊補正せず）、１００％のＲＣＰで単離した。精製標品と基準化合物３（実施例５）との共溶出が観察された。
【０１２９】
実施例７：マレイミド−アルキン二官能性リンカー（１）の合成
【０１３０】
【化２７】
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無水ＤＭＦ１．０ｍＬに、Ｎ−［β−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル（５０ｍｇ、１．２５当量）を溶解した。無水ＤＭＦ０．５ｍＬ及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）２６μＬに、３−ブチン−１−アミンヒドロクロリド（１６ｍｇ、１．０当量）を溶解した。このアミン溶液を、スクシンイミドエステルに滴下し、その間エステル溶液は氷浴に保持した。混合物を０℃で１０分間撹拌した。溶液を室温まで加温し、１８時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を５ｍＬ  ＣＨ2Ｃｌ2に溶解した。有機溶液を、ブライン（３×５ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で精製した。生成物（１）を、試料を最小限の量のＣＨ2Ｃｌ2（約２ｍＬ）に溶解した後、ヘキサンで３回洗浄することによってグリースから精製した。生成物（１）は、綿毛状の白色固体として沈殿した。生成物の特性決定は、1Ｈ−ＮＭＲを用いて行った。1Ｈ−ＮＭＲ。収率：８．２ｍｇ（２５％）。1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ２．０２（ｓ，１）、２．４１（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，２）、２．５７（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，２）、３．４２（ｔｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，２）、３．８８（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ）、５．９０（ｂｓ，１）、６．７３（ｓ，２）。
【国際調査報告】
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