(57)【要約】  本発明は抗ＮＧＦ抗体及びその抗原結合断片の安定な組成物と、ＮＧＦ活性が有害となる各種疾患及び障害（例えば疼痛障害）の予防及び／又は治療におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０
を含有する医薬組成物であって；
組成物のｐＨが約５．０〜約６．０である前記組成物。
【請求項２】
前記組成物が約１０〜約３０ｍＭのヒスチジンを含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ｐＨが約５．５である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
組成物が約０．０１％〜約０．０２％のポリソルベート８０を含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
組成物が更に約１〜約１００ｍｇ／ｍＬのポリオールを含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ポリオールがソルビトール及びマンニトールから構成される群から選択される請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ポリオールがマンニトールである請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
組成物が約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有する請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
組成物が更に約１０〜約１００ｍｇ／ｍＬの糖類を含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
糖類がスクロースである請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
組成物が約１０〜約７０ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物がポリオール又は糖類を含有しない請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物がメチオニンを含有しない請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
抗体又はその抗原結合部分の濃度が約１〜約２４０ｍｇ／ｍＬである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
抗体又はその抗原結合部分の濃度が約２０〜約１２０ｍｇ／ｍＬである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
（ａ）抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）ポリオール、糖類又はその組合せのモル比が１：１４００を上回る請求項１から１１及び１３から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、
（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合部分と；
（ｂ）約１５ｍＭのヒスチジンと；
（ｃ）約０．０１％のポリソルベート８０
を含有しており；
製剤のｐＨが約５．５である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、
（ａ）約６０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合部分と；
（ｂ）約３０ｍＭのヒスチジンと；
（ｃ）約０．０２％のポリソルベート８０
を含有しており；
製剤のｐＨが約５．５である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
凍結乾燥に適している請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
（ａ）約１〜約１２０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと；
（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０
を含有する凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２１】
組成物が、
（ａ）約６０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約４．７ｍｇのヒスチジンと；
（ｃ）約０．２ｍｇのポリソルベート８０
を含有する請求項２０に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２２】
組成物が、
（ａ）約２０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約２．３ｍｇのヒスチジンと；
（ｃ）約０．１ｍｇのポリソルベート８０
を含有する請求項２０に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２３】
更に約１〜約１００ｍｇのポリオールを含有する請求項２０から２２のいずれか一項に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２４】
ポリオールが約１０〜約５０ｍｇのマンニトールである請求項２３に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２５】
更に約１〜約１００ｍｇの糖類を含有する請求項２０から２４のいずれか一項に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２６】
糖類が約１〜１００ｍｇのスクロースである請求項２５に記載の凍結乾燥医薬組成物。
【請求項２７】
抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分がヒトＮＧＦと結合する請求項１から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分がヒトＩｇＧ４定常領域を含む請求項１から２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分がヒンジ部突然変異を含む請求項１から２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
ヒンジ部突然変異が配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンの突然変異を含む請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンをプロリンに突然変異させた請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
ヒトＩｇＧ４定常領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含む請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
抗体又はその抗原結合部分が以下の機能的性質：
ａ）ヒトＮＧＦと結合するが、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒトニューロトロフィン３（ＮＴ−３）又はヒトニューロトロフィン４（ＮＴ−４）とは結合しない；
ｂ）１００ｐＭ以下のＫＤでヒト又はラットＮＧＦと結合する；
ｃ）ＮＧＦとＴｒｋＡ又はｐ７５ＮＴＲの結合を阻害する；
ｄ）ＴＦ−１細胞のＮＧＦ依存性増殖を阻害する；
ｅ）ＮＧＦ依存性ニワトリ胚後根神経節生存を阻害する；及び
ｆ）ＮＧＦ依存性ＰＣ１２細胞神経突起伸長を阻害する
の１種以上をもつ請求項１から３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
対象に投与したときに抗体又はその抗原結合部分がリバウンド作用を示さない請求項１から３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
抗体又はその抗原結合部分が夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域を含む請求項１から３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
抗体又はその抗原結合部分が夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む請求項１から３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
抗体又はその抗原結合部分が配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む請求項１から３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
抗体又はその抗原結合部分が配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
抗体又はその抗原結合部分がＮＧＦとの結合に関して配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する請求項１から３８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
抗体又はその抗原結合部分が配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む請求項１から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
抗体又はその抗原結合部分が配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む請求項１から２６及び４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
（ａ）（ｉ）夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列をもつヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１０〜約５０ｍｇ／ｍＬである前記抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭのヒスチジン濃度のヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％〜０．０２％の濃度のポリソルベート８０
を含有する医薬組成物であって；
組成物のｐＨが約５．０〜約６．０である前記医薬組成物。
【請求項４３】
（ａ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列をもつ重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列をもつ軽鎖可変領域と、（ｉｉｉ）配列番号９の１０８位にヒンジ部突然変異を含むヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体であって、抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１０〜約５０ｍｇ／ｍＬである前記抗体と；
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭのヒスチジン濃度のヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％〜０．０２％の濃度のポリソルベート８０
を含有する医薬組成物であって；
組成物のｐＨが約５．０〜約６．０である前記医薬組成物。
【請求項４４】
（ａ）ヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体であって、前記抗体が配列番号１３のアミノ酸配列をもつ重鎖と配列番号１６のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含み、前記抗体又はその抗原結合断片の濃度が約１０〜約５０ｍｇ／ｍＬである前記抗体と；
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭのヒスチジン濃度のヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％〜０．０２％の濃度のポリソルベート８０
を含有する医薬組成物であって；
組成物のｐＨが約５．０〜約６．０である前記医薬組成物。
【請求項４５】
更に約１０〜約５０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有する請求項４２から４４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
更に約５〜約７０ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する請求項４２から４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
（ａ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％のポリソルベート８０
から本質的に構成され；
組成物のｐＨが約５．５である請求項４２から４４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
（ａ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％のポリソルベート８０と；
（ｄ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬのマンニトール
から本質的に構成され；
組成物のｐＨが約５．５である請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
（ａ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％のポリソルベート８０と；
（ｄ）約４０〜７０ｍｇ／ｍＬのスクロース；
から本質的に構成され；
組成物のｐＨが約５．５である請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
（ａ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬの抗体又はその抗原結合断片と；
（ｂ）約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液と；
（ｃ）約０．０１％のポリソルベート８０と；
（ｄ）約１０〜３０ｍｇ／ｍＬのマンニトールと；
（ｅ）約５〜１０ｍｇ／ｍＬのスクロース
から本質的に構成され；
組成物のｐＨが約５．５である請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
抗体又はその抗原結合断片とポリオール又は糖類の比が１：１４００を上回る請求項４２から５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
医薬組成物が凍結乾燥形態である請求項４２から５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
抗体又はその抗原結合部分がモノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、複特異性抗体及び二重特異性抗体から構成される群から選択される請求項１から５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
抗体又はその抗原結合部分がＰＧ１１０抗体である請求項１から５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
製剤が液体形態で少なくとも約３カ月間安定である請求項１から５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
製剤が液体形態で少なくとも約１２カ月間安定である請求項１から５５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
製剤が凍結又は凍結乾燥形態で少なくとも３カ月間安定である請求項１から５６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
製剤が凍結又は凍結乾燥形態で少なくとも６カ月間安定である請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
製剤が凍結又は凍結乾燥形態で少なくとも１２カ月間安定である請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
製剤が２〜８℃で保存される請求項５５又は５６に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
製剤が−８０℃で凍結保存される請求項５７又は５８に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
製剤が凍結乾燥形態で２〜８℃にて保存される請求項５７又は５８に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
製剤が凍結乾燥形態で室温にて保存される請求項５７又は５８に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
抗体の凝集が約１０％未満である請求項５５から６３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
抗体の凝集が約３％未満である請求項５５から６３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
製剤が静脈内、皮下及び／又は筋肉内投与に適している請求項１から６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
請求項１から６５のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む装置。
【請求項６７】
装置がシリンジ、ペン、インプラント、無針注射装置、吸入装置及びパッチから構成される群から選択される請求項６６に記載の装置。
【請求項６８】
請求項１から６７のいずれか一項に記載の医薬組成物又は装置を含む製品。
【請求項６９】
ＮＧＦ介在性疾患又は病態を治療するための請求項１から６５のいずれか一項に記載の医薬組成物又は請求項６６から６７のいずれか一項に記載の装置の使用。
【請求項７０】
ＮＧＦ介在性疾患又は病態が疼痛である請求項６９に記載の使用。
【請求項７１】
疼痛が変形性関節症性疼痛、慢性腰痛、糖尿病性神経障害性疼痛、癌性疼痛、骨転移による疼痛、間質性膀胱炎、有痛性膀胱症候群、慢性無菌性前立腺炎に伴う疼痛、子宮内膜症に伴う疼痛、子宮筋腫に伴う疼痛及び術後疼痛から構成される群から選択される請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
医薬組成物が０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０／ｍｇ／ｋｇの範囲の用量の抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片の投与に適している請求項６９から７１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７３】
医薬組成物が静脈内、皮下又は関節内投与に適している請求項６９から７２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７４】
医薬組成物が第２の薬剤との併用投与に適している請求項６９から７４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７５】
第２の薬剤がＮＳＡＩＤ、オピオイド鎮痛薬と非定型鎮痛薬を含む鎮痛薬、局所麻酔薬、神経ブロック、フェノールブロック、治療用抗体、ステロイド、抗痙攣薬、抗鬱薬、局所カプサイシン、抗ウイルス薬、ＴｒｋＡ阻害剤及びＰＫＣ阻害剤から構成される群から選択される請求項７４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
神経成長因子（ＮＧＦ）は感覚神経細胞及び交感神経細胞の生存と分化を促進する分子として５０年以上前に発見された分泌型蛋白質である。ＮＧＦのβ鎖はＮＧＦの神経成長刺激活性のみに関与する。β鎖はホモ二量体化し、更に大きな蛋白質複合体に組込まれる。ＮＧＦはニューロトロフィンと呼ばれる神経栄養因子ファミリーのメンバーである。ＮＧＦはＴｒｋＡと呼ばれるトロポミオシン受容体キナーゼと高親和性で結合する。ＮＧＦは他のニューロトロフィンとも相互作用する腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであるｐ７５ＮＴＲと呼ばれる受容体と結合することもできる。ＮＧＦの構造と機能は例えばＳｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４：１２１７−１２８１；Ｗｅｉｓｍａｎｎ，Ｃ．ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｏｓ，Ａ．Ｍ．（２００１）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５８：７４８−７５９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ．（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：１−２６に記載されている。
【０００２】
ＮＧＦは当初はニューロンの生存と分化を促進できるものとして同定されたが、これらの発生上の作用がＮＧＦの生物学の一側面に過ぎないことは益々立証されつつある。特に、ＮＧＦは持続性ないし慢性疼痛の伝達と維持に関係があるとされている。例えば、ＮＧＦの局所及び全身投与はいずれも痛覚過敏とアロディニアを誘発することが示されている（Ｌｅｗｉｎ，Ｇ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．６：１９０３−１９１２）。ＮＧＦをヒトに静脈内輸液すると全身筋肉痛を生じ、局所投与すると、全身作用に加えて注入部位に痛覚過敏とアロディニアを誘発する（Ａｐｆｅｌ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：６９５−７０２）。更に、所定の形態の癌において、過剰のＮＧＦは癌性疼痛の誘導と共に神経繊維の成長と浸潤を助長する（Ｚｈｕ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２４１−２２８）。
【０００３】
ＮＧＦは慢性疼痛に関与するため、ＮＧＦの作用の阻害に基づく治療アプローチに多大な関心が寄せられるようになった（例えばＳａｒａｇｏｖｉ，Ｈ．Ｕ．ａｎｄ  Ｇｅｈｒｉｎｇ，Ｋ．（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２１：９３−９８参照）。例えば、ＮＧＦの活性を遮断するために可溶型ＴｒｋＡ受容体が使用され、病変部のニューロンの細胞体を損傷せずに神経障害性疼痛の原因となる神経腫の形成を有意に軽減することが示されている（Ｋｒｙｇｅｒ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｈａｎｄ  Ｓｕｒｇ．（Ａｍ．）２６：６３５−６４４）。
【０００４】
ＮＧＦ活性を中和する別のアプローチは抗ＮＧＦ抗体の使用であり、このような抗体の例が記載されている（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／７８６９８号、ＷＯ２００１／６４２４７号、ＷＯ２００２／０９６４５８号、ＷＯ２００４／０３２８７０号、ＷＯ２００５／０６１５４０号、ＷＯ２００６／１３１９５１号、ＷＯ２００６／１１０８８３号、米国特許第７，４４９，６１６号；米国特許公開第ＵＳ２００５００７４８２１号、ＵＳ２００８００３３１５７号、ＵＳ２００８０１８２９７８号及びＵＳ２００９００４１７１７号参照）。神経障害性疼痛の動物モデル（例えば神経幹又は脊髄神経結紮）でＮＧＦに対する中和抗体を全身注射すると、アロディニアと痛覚過敏のどちらも予防できる（Ｒａｍｅｒ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｂｉｓｂｙ，Ｍ．Ａ．（１９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１：８３７−８４６；Ｒｏ，Ｌ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐａｉｎ  ７９：２６５−２７４）。更に、中和性抗ＮＧＦ抗体を投与すると、マウス癌性疼痛モデルで有意な疼痛軽減が得られる（Ｓｅｖｃｉｋ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｐａｉｎ  １１５：１２８−１４１）。
【０００５】
抗ＮＧＦ抗体を含有する初期の製剤（例えばＰＧ１１０）は多量の可視粒子形成及び沈殿現象により反映されるように、製剤中の抗体の物理的不安定の問題があった。従って、抗ＮＧＦ抗体を含有する製剤として、物理的安定性を維持すると共に粒子の形成し易さを抑制した製剤が当分野で必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００１／７８６９８号
【特許文献２】国際公開第２００１／６４２４７号
【特許文献３】国際公開第２００２／０９６４５８号
【特許文献４】国際公開第２００４／０３２８７０号
【特許文献５】国際公開第２００５／０６１５４０号
【特許文献６】国際公開第２００６／１３１９５１号
【特許文献７】国際公開第２００６／１１０８８３号
【特許文献８】米国特許第７，４４９，６１６号明細書
【特許文献９】米国特許出願公開第２００５／００７４８２１号明細書
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００８／００３３１５７号明細書
【特許文献１１】米国特許出願公開第２００８／０１８２９７８号明細書
【特許文献１２】米国特許出願公開第２００９／００４１７１７号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４：１２１７−１２８１
【非特許文献２】Ｗｅｉｓｍａｎｎ，Ｃ．ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｏｓ，Ａ．Ｍ．（２００１）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５８：７４８−７５９
【非特許文献３】Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ．（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：１−２６
【非特許文献４】Ｌｅｗｉｎ，Ｇ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．６：１９０３−１９１２
【非特許文献５】Ａｐｆｅｌ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：６９５−７０２
【非特許文献６】Ｚｈｕ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２４１−２２８
【非特許文献７】Ｓａｒａｇｏｖｉ，Ｈ．Ｕ．ａｎｄ  Ｇｅｈｒｉｎｇ，Ｋ．（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２１：９３−９８
【非特許文献８】Ｋｒｙｇｅｒ，Ｇ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｈａｎｄ  Ｓｕｒｇ．（Ａｍ．）２６：６３５−６４４
【非特許文献９】Ｒａｍｅｒ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｂｉｓｂｙ，Ｍ．Ａ．（１９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１：８３７−８４６
【非特許文献１０】Ｒｏ，Ｌ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐａｉｎ  ７９：２６５−２７４
【非特許文献１１】Ｓｅｖｃｉｋ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｐａｉｎ  １１５：１２８−１４１
【発明の概要】
【０００８】
（発明の概要）
本発明は抗ＮＧＦ抗体（例えばヒト化ＰＧ１１０抗体）を含有する新規製剤として、物理的に安定しており、粒子形成し易さの問題のない製剤の発見を少なくとも一因とする。
【０００９】
従って、本発明は（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０を含有する医薬組成物を提供し、前記組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。所定態様において、組成物は更に本願に記載するもの等の糖類及び／又はポリオールを含有する。他の態様において、組成物はポリオール又は糖類を含有しない。更に他の態様において、組成物はメチオニンを含有しない。
【００１０】
所定態様において、本発明は（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供し、前記組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。
【００１１】
所定態様において、本発明は（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０と、（ｄ）ポリオール及び／又は糖類から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供し、前記組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。
【００１２】
所定態様において、本発明は（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０と、（ｄ）ポリオールから構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供し、前記組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。
【００１３】
所定態様において、本発明は（ａ）抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約５〜約６０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液と、（ｃ）約０．０１％〜約０．１％の濃度のポリソルベート８０と、（ｄ）糖類から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供し、前記組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。
【００１４】
所定態様において、本発明の医薬組成物は液体医薬組成物である。他の態様において、医薬組成物は凍結乾燥に適している。従って、本発明は更に（ａ）約１〜約２４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと、（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０を含有する凍結乾燥医薬組成物を提供する。所定態様において、凍結乾燥組成物は更に糖類及び／又はポリオールを含有する。他の態様において、凍結乾燥組成物はポリオール又は糖類を含有しない。
【００１５】
所定態様において、本発明は（ａ）約１〜約２４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと、（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供する。
【００１６】
他の態様において、本発明は（ａ）約１〜約２４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと、（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０と、（ｄ）約１〜約１００ｍｇのポリオール及び／又は約１〜約１００ｍｇの糖類から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供する。
【００１７】
他の態様において、本発明は（ａ）約１〜約２４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと、（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０と、（ｄ）約１〜約１００ｍｇのポリオールから構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供する。
【００１８】
更に他の態様において、本発明は（ａ）約１〜約２４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、（ｂ）約１〜約１０ｍｇのヒスチジンと、（ｃ）約０．１〜約０．４ｍｇのポリソルベート８０と、（ｄ）約１〜約１００ｍｇの糖類から構成されるか又は本質的に構成される医薬組成物を提供する。所定態様において、抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分はヒトＮＧＦと結合する。他の態様において、抗体又はその抗原結合部分はヒトＩｇＧ４定常領域を含み、前記ヒトＩｇＧ４定常領域はヒンジ部突然変異を含む。好ましくは、ＩｇＧ４定常領域におけるヒンジ部突然変異は（ヒトＩｇＧ４定常領域の野生型アミノ酸配列を示す）配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンの突然変異を含む。より好ましくは、配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンをプロリンに突然変異させる。好ましい１態様において、抗ＮＧＦ抗体のヒトＩｇＧ４定常領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【００１９】
本発明の組成物に含まれる好ましい抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０抗体であり、その重鎖アミノ酸配列を配列番号１３に示し、その軽鎖アミノ酸配列を配列番号１６に示す。別の態様において、本発明は配列番号１１のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖と配列番号１４のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む抗ＮＧＦ抗体を含有する組成物を提供する。別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は（ＰＧ１１０の重鎖可変領域を示す）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は（ＰＧ１１０の軽鎖可変領域を示す）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。更に別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。更に別の態様において、抗ＮＧＦ抗体はＮＧＦとの競合に関して、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【００２０】
別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域を含む（なお、配列番号３、４及び５は夫々ＰＧ１１０の重鎖可変領域ＣＤＲ１、２及び３を示す）。別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む（なお、配列番号６、７及び８は夫々ＰＧ１１０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、２及び３を示す）。更に別の態様において、抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域と、夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２１】
更に他の態様において、抗体又はその抗原結合部分は以下の機能的性質の１以上をもつ：ａ）ヒトＮＧＦと結合するが、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒトニューロトロフィン３（ＮＴ−３）又はヒトニューロトロフィン４（ＮＴ−４）とは結合しない；ｂ）１００ｐＭ以下のＫＤでヒト又はラットＮＧＦと結合する；ｃ）ＮＧＦとＴｒｋＡ又はｐ７５ＮＴＲの結合を阻害する；ｄ）ＴＦ−１細胞のＮＧＦ依存性増殖を阻害する；ｅ）ＮＧＦ依存性ニワトリ胚後根神経節生存を阻害する；ｆ）ＮＧＦ依存性ＰＣ１２細胞神経突起伸長を阻害する。
【００２２】
更に他の態様において、抗体又はその抗原結合部分はモノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、複特異性抗体、二重特異性抗体、又は潜在性Ｔ細胞エピトープを消失させた抗体から構成される群から選択される。別の態様において、抗体又はその抗原結合部分はヒト化型である。
【００２３】
特に好ましい態様において、本発明は終末相消失半減期の延長と疼痛緩和期間の延長という有利な特徴を兼備する抗ＮＧＦ抗体を含有する組成物を提供する。従って、本発明は更にヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗ＮＧＦ抗体を提供し、前記ヒトＩｇＧ４定常領域は突然変異（好ましくはヒンジ部突然変異）を含み、前記抗体はカニクイザルにおいて終末相消失半減期が少なくとも１５日間、より好ましくは少なくとも２１日間であり、前記抗体は対象に抗体の単回投与後に少なくとも約１週間〜約１２週間疼痛を緩和する。
【００２４】
本発明は更に本発明の医薬組成物をヒト対象に投与することにより、ＮＧＦ関連疾患又は病態に罹患したヒト対象におけるＮＧＦ活性を阻害する方法に関する。他の態様では、本願に記載するような第２の薬剤を対象に投与する。所定態様において、ＮＧＦ関連疾患又は病態は疼痛である。ＮＧＦ関連疾患及び病態の非限定的な例としては、炎症性疼痛、術後疼痛、神経障害性疼痛、骨折痛、通風性関節痛、ヘルペス後神経痛、癌性疼痛、変形性関節症性もしくは関節リウマチ性疼痛、坐骨神経痛、鎌状赤血球クリーゼに伴う疼痛、頭痛、月経困難症、子宮内膜症、筋骨格系疼痛、慢性腰痛、線維筋痛症、捻挫、内臓痛、卵巣嚢胞、前立腺炎、膀胱炎、間質性膀胱炎、切開による疼痛、偏頭痛、三叉神経痛、熱傷及び／もしくは創傷による疼痛、外傷に伴う疼痛、筋骨格系疾患に伴う疼痛、強直性脊椎炎、関節周囲病変、骨転移による疼痛、ＨＩＶによる疼痛、肢端紅痛症又は膵炎もしくは腎臓結石に起因する疼痛が挙げられる。ＮＧＦ関連疾患及び病態の他の例としては、悪性メラノーマ、シェーグレン症候群及び喘息（例えば重度気道過敏症に伴うコントロール不良な喘息）、及び難治性嗽咳が挙げられる。本発明の方法により治療するのに特に好ましい疾患及び病態としては、炎症性疼痛（特に変形性関節症性又は関節リウマチ性疼痛）、筋骨格系疼痛（特に慢性腰痛）、神経障害性疼痛（特に糖尿病性神経障害）、癌性疼痛及び骨転移による疼痛、間質性膀胱炎／有痛性膀胱症候群、慢性無菌性前立腺炎に伴う疼痛、子宮内膜症及び／又は子宮筋腫に伴う疼痛並びに術後疼痛が挙げられる。好ましくは、疼痛は変形性関節症性疼痛、慢性腰痛、糖尿病性神経障害性疼痛、癌性疼痛、骨転移による疼痛、間質性膀胱炎、有痛性膀胱症候群、慢性無菌性前立腺炎に伴う疼痛、子宮内膜症に伴う疼痛、子宮筋腫に伴う疼痛及び術後疼痛から構成される群から選択される。
【００２５】
本発明の医薬組成物は例えば静脈内、（例えばペン型注入器又は皮下インプラントにより）皮下、筋肉内又は関節内に投与することができるが、他の適切な投与経路についても本願に記載する。
【００２６】
本願では本発明の医薬組成物を含むキット又は製品も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】製剤１及び製剤２の経時的安定性をグラフにより比較する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は安定性を改善した抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分の改良型組成物（例えば医薬組成物）に関する。本発明の組成物は一般に抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、適切な緩衝液（例えばヒスチジン緩衝液）と、適切な添加剤（例えばポリソルベート８０）を含有しており、ｐＨが約５．０〜約６．０である。本発明の組成物は凍結乾燥に適した液体、及び／又は凍結乾燥形態とすることができる。
【００２９】
本発明を理解し易くするために、先ず所定の用語を定義する。その他の定義については詳細な説明の随所に記載する。
【００３０】
Ｉ．定義
不定冠詞は本願ではこの不定冠詞の文法上の対象の１以上（即ち少なくとも１）の意味で使用する。例えば、「要素」とは１個の要素又は２個以上の要素を意味する。
【００３１】
「医薬製剤」なる用語は活性成分の生物学的活性を明白に有効にできるような形態であり、製剤を投与する対象に有意に毒性となる付加成分を含有しない調製物を意味する。
【００３２】
「医薬的に許容可能な担体」なる用語は当分野で周知の通り、哺乳動物（例えばヒト）に投与するのに適した医薬的に許容可能な材料、組成物又は賦形剤を包含する。このような担体としては、目的の物質を生体のある臓器又はその部分から生体の別の臓器又はその部分に移送ないし輸送するのに関与する液体又は固体増量剤、希釈剤、添加剤、溶媒又はカプセル化材料が挙げられる。各担体は組成物の他の成分と適合可能であり、ヒト対象に無害であり、又はその安全性に影響を与えないという意味で「許容可能」でなければならない。
【００３３】
「緩衝液」とはその酸−塩基共役成分の作用によりｐＨ変化を阻止する緩衝溶液を意味する。本発明の緩衝液は約４〜約８の範囲のｐＨをもつ。ｐＨをこの範囲に制御する緩衝液の例としては、リン酸、酢酸（例えば酢酸ナトリウム）、コハク酸（例えばコハク酸ナトリウム）、グルコン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、クエン酸及び他の有機酸緩衝液が挙げられる。
【００３４】
「添加剤」なる用語は例えばバルク特性を変えることにより所望のコンシステンシーを提供するため、安定性を改善するため、及び／又は浸透圧を調整するために添加することができる物質を意味する。通常使用される添加剤の例としては、限定されないが、糖類、ポリオール、アミノ酸、界面活性剤及びポリマーが挙げられる。「医薬的に許容可能な添加剤」（例えば賦形剤、混和剤）は利用する活性成分の有効用量を提供するために哺乳動物対象（例えばヒト）に妥当に投与することができるものである。
【００３５】
本願で使用する「ポリオール」とは、複数の水酸基をもつ物質であり、糖アルコールと糖酸を包含する。特定のポリオールは分子量約６００Ｄ未満（例えば約１２０〜約４００Ｄ）である。ポリオールの非限定的な例としては、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、ソルボース、メレジトース、ラフィノース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、トレイトール、ソルビトール、グリセロール、Ｌ−グルコン酸及びその金属塩が挙げられる。
【００３６】
「糖類」は特徴的な甘味をもつ糖質である。糖類は単糖類、二糖類及び多糖類に分類することができる。「単糖類」は単純糖（例えばフルクトース、レブロース、グルコース及びデキストロースないしブドウ糖）である。「二糖類」としては、ラクトースないし乳糖、マルトースないし麦芽糖、結晶性二糖、スクロース及びトレハロース（別称ミコース又はトレマロース）が挙げられる。加水分解すると、二糖分子は２個の単糖分子となる。「多糖類」としては、セルロース、デキストリン、グリコーゲン及び澱粉等の物質が挙げられる。多糖類は単純等から構成されるポリマー化合物であり、加水分解すると、単純糖となる。二糖類は場合により低分子多糖類（通常では３〜４単純糖単位から構成されるもの）と結合し、「オリゴ糖」と呼ばれる分類の糖質を形成する場合がある。
【００３７】
「糖類」は「還元糖」又は「非還元糖」に分類することもできる。還元糖はその遊離性又は潜在的に遊離性のアルデヒド基又はケトン基により、多くの金属塩（例えば銅、銀、ビスマス、水銀及び鉄の塩）のアルカリ溶液を容易に還元する性質をもつことを特徴とする。還元糖としては、例えばマルトース、ラクトース、セロビオース、ゲンチオビオース、メリビオース及びツラノースが挙げられる。非還元糖の非限定的な例としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、メレジトース、スタキオース及びベルバスコースが挙げられる。
【００３８】
「界面活性剤」なる用語は一般に空気／溶液界面に誘導されるストレス及び溶液／表面に誘導されるストレスから組成物中の蛋白質を保護する物質を包含する。例えば、界面活性剤は蛋白質を凝集から防ぐことができる。適切な界面活性剤としては、例えばポリソルベート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばＢｒｉｊ  ３５（登録商標））、又はポロキサマー（例えばＴｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０又はポロキサマー１８８）が挙げられる。好ましい界面活性剤はポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばＢｒｉｊ  ３５（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  Ａ２５、Ｓｙｍｐａｔｅｎｓ  ＡＬＭ／２３０）、ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎ類（例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０、Ｍｉｒｊ）及びポロキサマー（例えばポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７及びＴｗｅｅｎ類（例えばＴｗｅｅｎ  ２０及びＴｗｅｅｎ  ８０））である。
【００３９】
「安定な」組成物とは、組成物中の活性成分（例えば抗体）が製造工程中及び／又は保存後にその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を本質的に維持する組成物である。蛋白質安定性を測定するための各種分析技術が当分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０に記載されている。
【００４０】
抗体は色及び／もしくは透明度の目視試験、又は紫外線散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによる測定時に例えば凝集、沈殿及び／又は変性の徴候を実質的に全く示さない場合に医薬組成物中で「その物理的安定性を維持する」。凝集は個々の蛋白質分子又は複合体が共有的又は非共有的に会合して凝集物を形成するプロセスである。凝集は可視沈殿が形成される程度まで進行し得る。抗ＮＧＦ抗体を含有する医薬組成物の物理的安定性は例えば溶液中の単量体蛋白質の百分率により判定することができ、分解（例えば断片化）及び／又は凝集蛋白質の百分率が低い（例えば３％未満）ならば、組成物は安定であると判断される。
【００４１】
所与時点における化学的安定性を検討した場合に抗体が下記に定義するようにその生物学的活性を依然として維持しているとみなされる程度であるならば、抗体は本発明の医薬組成物中で「その化学的安定性を維持する」。化学的安定性は例えば抗体の化学的改変形態を検出及び定量することにより評価することができる。化学的改変としてはサイズ改変（例えばクリッピング）が挙げられ、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び／又はマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を使用して評価することができる。他の型の化学的改変としては、（例えば脱アミド化又は酸化の結果として生じる）電荷改変が挙げられ、例えばイオン交換クロマトグラフィーにより評価することができる。
【００４２】
医薬組成物中の抗体がその所期目的のために生物学的に活性である場合に、抗体は本発明の医薬組成物中で「その生物学的活性を維持する」。例えば、医薬組成物中の抗体の生物学的活性が（例えば抗原結合アッセイで測定した場合に）医薬組成物の製造時に示される生物学的活性の（アッセイの誤差内で）約３０％、約２０％又は約１０％以内であるならば、生物学的活性は維持される。本発明の製剤内に含まれる抗ＮＧＦ抗体の生物学的活性としては、限定されないが、ヒトＮＧＦとの結合、ＮＧＦとＴｒｋＡ又はｐ７５ＮＴＲの結合の阻害、ＴＦ−１細胞のＮＧＦ依存性増殖の阻害、ニューロンのＮＧＦ依存性生存及び分化の阻害、並びにＮＧＦ依存性疼痛伝達の阻害が挙げられる。「活性」なる用語は更に抗原に対する抗体（例えばＮＧＦ抗原と結合する抗ＮＧＦ抗体）の結合特異性／親和性等の活性も包含する。
【００４３】
本願で使用する「阻害」なる用語は生物学的活性の任意の統計的に有意な低下を意味し、活性の完全な遮断も含む。例えば、「阻害」とは生物学的活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の低下を意味することができる。
【００４４】
「神経成長因子」ないし「ＮＧＦ」なる用語は本願では同義に使用し、変異体、アイソフォーム、ホモログ、オーソログ及びパラログを包含する。例えば、ヒトＮＧＦに特異的な抗体は場合により、ヒト以外の種に由来するＮＧＦと交差反応する場合がある。他の態様において、ヒトＮＧＦに特異的な抗体はヒトＮＧＦに完全に特異的であり、交差反応性の種又は他の型を示さなくてもよい。「ヒトＮＧＦ」なる用語はヒト配列ＮＧＦを意味し、例えばその前駆体形態がＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００２５０６のヌクレオチド配列によりコードされるＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２４９７をもつヒトＮＧＦ−β鎖のアミノ酸配列を含む。ヒトＮＧＦ−βがＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２４９７のヒトＮＧＦ−βと実質的に同一の生物学的機能をもつ限り、ヒトＮＧＦ−β鎖配列は例えば保存置換又は非保存領域の置換を含むことにより、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２４９７のヒトＮＧＦ−βと相違していてもよい。「ラットＮＧＦ」なる用語はラット配列ＮＧＦを意味し、例えばその前駆体形態がＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿２２７５２５のヌクレオチド配列によりコードされるＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＸＰ＿２２７５２５をもつラットＮＧＦ−β鎖のアミノ酸配列を含む。「マウスＮＧＦ」なる用語はラット配列ＮＧＦを意味し、例えばその前駆体形態がＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１３６０９のヌクレオチド配列によりコードされるＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０３８６３７をもつマウスＮＧＦ−βのアミノ酸配列を含む。
【００４５】
本願で使用する「ＴｒｋＡ受容体」なる用語は当分野でトロポミオシンキナーゼ受容体Ａ及び神経栄養チロシンキナーゼ受容体タイプ１（ＮＴＲＫ１）とも呼ばれるＮＧＦ受容体を意味する。ヒトＴｒｋＡ受容体の配列の非限定的な例としては、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１０１２３３１（アイソフォーム１）、ＮＰ＿００２５２０（アイソフォーム２）及びＮＰ＿００１００７７９３（アイソフォーム３）のアミノ酸配列が挙げられる。
【００４６】
本願で使用する「ｐ７５ＮＴＲ受容体」なる用語はＮＧＦ及び他のニューロトロフィンと結合する分子量約７５ｋＤａのニューロトロフィン受容体を意味し、このような受容体は例えばＢｏｔｈｗｅｌｌ，Ｍ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：５０６−５０７に記載されている。ヒトｐ７５ＮＴＲ受容体の配列の非限定的な１例はＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００２５０７のヌクレオチド配列によりコードされるＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２４９８のアミノ酸配列である。
【００４７】
抗ＮＧＦ抗体に関して本願で使用する「終末相消失半減期」なる用語は抗体を投与した対象の血清中で測定した場合に抗体の吸収及び再分配の完了後に抗体の濃度を半減させるために必要な時間を意味する。対象群を使用する場合には、対象における終末相消失半減期の幾何平均を抗体の終末相消失半減期の数値として使用することができる。
【００４８】
抗ＮＧＦ抗体に関して本願で使用する「薬理学的半減期」なる用語は薬効をインビボで維持するための平均時間（薬効のＭＲＴ）を意味する。これは下式：
【００４９】
【数１】
2013522313.tif 000002
を使用して経時的累積基線補正薬効（効果−時間曲線下面積，ＡＵＥＣ）に対する初期基線補正効果−時間曲線下面積（ＡＵＭＥＣ）の比として計算することができる。対象群を使用する場合には、対象における薬理学的半減期の幾何平均を抗体の薬理学的半減期の数値として使用することができる。
【００５０】
本願で使用する「阻害」なる用語は生物学的活性の任意の統計的に有意な低下を意味し、活性の完全な遮断も含む。例えば、「阻害」は生物学的活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の低下を意味することができる。
【００５１】
「抗体」ないし「免疫グロブリン」なる用語は本願では同義に使用し、全長抗体及び抗原（例えばＮＧＦ）と特異的に結合する能力を維持する任意抗原結合断片（即ち「抗原結合部分」）又はその１本鎖を包含する。全長抗体において、各重鎖は重鎖可変領域（本願ではＨＣＶＲないしＶＨと略称する）と重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３領域から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本願ではＬＣＶＲないしＶＬと略称する）と軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１個の領域ＣＬから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は更に相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域とその間に配置されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存度の高い領域に区分される。各ＶＨ及びＶＬはアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の順に配置された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は免疫系の各種細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織又は因子と免疫グロブリンの結合に介在することができる。免疫グロブリン分子は任意型（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスとすることができる。
【００５２】
抗体の「抗原結合部分」ないし「抗原結合断片」（又は単に「結合部分」）なる用語は抗原（例えばＮＧＦ）と特異的に結合する能力を維持する抗体の１以上の断片を意味する。このような抗体態様は２種以上の異なる抗原と特異的に結合する二重特異性、複特異性又は多重特異性フォーマットでもよい。抗体の「抗原結合部分」なる用語に含まれる結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１領域から構成される１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ部でジスルフィド架橋により結合した２個のＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ領域とＣＨ１領域から構成されるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の１本のアームのＶＬ領域とＶＨ領域から構成されるＦｖ断片；（ｖ）一方の可変領域のみを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４  Ａ１）；並びに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖ断片のＶＬ及びＶＨの２領域は別々の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して合成リンカーにより結合させ、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して１価分子を形成する１本の蛋白質鎖を形成させることもできる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる；例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３参照）。他の形態の一本鎖抗体（例えばダイアボディ）も含まれる。ダイアボディは２価の二重特異性抗体であり、ＶＨ領域とＶＬ領域が１本のポリペプチド鎖上に発現されるが、使用するリンカーが短いため、同一鎖上の２領域を対合させることができず、これらの領域は別の鎖の相補的領域と対合し、２個の抗原結合部位を形成する（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。このような一本鎖抗体も当分野で周知の通り、抗体の「抗原結合部分」なる用語に含むものとする（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，７９０（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。
【００５３】
本願で使用する「ヒンジ部突然変異」なる用語は免疫グロブリン定常領域のヒンジ部における突然変異（例えば点突然変異、置換、付加又は欠失）を意味する。
【００５４】
本願で使用する「モノクローナル抗体」なる用語は実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を意味し、即ち集団を構成する個々の抗体は場合により存在する少量の天然突然変異を除いて一致する。モノクローナル抗体は単一抗原部位に対して高度に特異的である。更に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むのが通例であるが、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に特異的である。モノクローナル抗体は当分野で周知の任意技術を使用して作製することができ、例えばＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載されているようなハイブリドーマ法、例えば文献に記載されているようなトランスジェニック動物（例えばＬｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９参照）、組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号参照）、又は例えばＣｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を使用するファージ抗体ライブラリーの使用が挙げられる。モノクローナル抗体としては、キメラ抗体、ヒト抗体及びヒト化抗体が挙げられ、天然に存在するものでもよいし、組換え生産したものでもよい。
【００５５】
「組換え抗体」なる用語は組換え手段により作製、発現、創製又は単離された抗体を意味し、例えば（ａ）免疫グロブリン遺伝子（例えばヒト免疫グロブリン遺伝子）に対してトランスジェニックもしくはトランスクロモソミックな動物（例えばマウス）又はこのような動物から作製したハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞（例えばトランスフェクトーマ）から単離された抗体、（ｃ）ファージディスプレイ法を使用して（例えばヒト抗体配列を含む）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体、及び（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列（例えばヒト免疫グロブリン遺伝子）を他のＤＮＡ配列にスプライシングする他の任意手段により作製、発現、創製又は単離された抗体が挙げられる。このような組換え抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域をもつことができる。他方、所定態様では、このような組換えヒト抗体をインビトロ突然変異誘発させることができ、従って、組換え抗体のＶＨ領域とＶＬ領域のアミノ酸配列はヒト生殖細胞系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、近縁であるが、天然ではヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内にインビボで存在しない場合もある配列である。
【００５６】
「キメラ免疫グロブリン」ないし抗体なる用語はその可変領域が第１の種に由来し、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンないし抗体を意味する。キメラ免疫グロブリンないし抗体は異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから例えば遺伝子工学により構築することができる。
【００５７】
「ヒト化抗体」ないし「ヒト化免疫グロブリン」なる用語は少なくとも１本のヒト化抗体ないし免疫グロブリン鎖（即ち少なくとも１本のヒト化軽鎖又は重鎖）を含む抗体ないし免疫グロブリンを意味する。「ヒト化免疫グロブリン鎖」ないし「ヒト化抗体鎖」（即ち「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」又は「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）なる用語はヒト免疫グロブリンないし抗体に実質的に由来する可変領域フレームワーク領域と非ヒト免疫グロブリンないし抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば少なくとも１個のＣＤＲ、好ましくは２個のＣＤＲ、より好ましくは３個のＣＤＲ）を含み、更に定常領域（例えば軽鎖の場合には少なくとも１個の定常領域又はその部分であり、重鎖の場合には好ましくは３個の定常領域）を含む可変領域をもつ免疫グロブリンないし抗体鎖（即ち夫々軽鎖又は重鎖）を意味する。「ヒト化可変領域」（例えば「ヒト化軽鎖可変領域」又は「ヒト化重鎖可変領域」）なる用語はヒト免疫グロブリンないし抗体に実質的に由来する可変領域フレームワーク領域と非ヒト免疫グロブリンないし抗体に実質的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を意味する。
【００５８】
１態様において、「ヒト化抗体」なる用語は、該当抗原と免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列をもつフレームワーク（ＦＲ）領域と実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列をもつ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又はその変異体、誘導体、類縁体もしくは断片を意味する。ＣＤＲに関して本願で使用する「実質的に」なる用語は非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％一致するアミノ酸配列をもつＣＤＲを意味する。ヒト化抗体は少なくとも１個、典型的には２個の可変領域（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含み、ＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部が非ヒト抗体免疫グロブリン（即ちドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。１態様において、ヒト化抗体は更に免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。所定態様において、ヒト化抗体は軽鎖と、重鎖の少なくとも可変領域の両方を含む。抗体は更に重鎖のＣＨ１、ヒンジ部、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含んでいてもよい。１態様において、ヒト化抗体はヒト化軽鎖のみを含む。別の態様において、ヒト化抗体はヒト化重鎖のみを含む。特定態様において、ヒト化抗体は軽鎖のヒト化可変領域及び／又はヒト化重鎖のみを含む。ヒト化抗体はＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意クラスの免疫グロブリンと、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意アイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は２種以上のクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことができ、当分野で周知の技術を使用して所望のエフェクター機能を最適化するように特定の定常領域を選択することができる。
【００５９】
「エピトープ」なる用語は免疫グロブリンと特異的に結合することが可能な任意のｘ決定基（例えばポリペプチド）を包含する。所定態様において、エピトープ決定基はアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、スルホニル等の化学的に活性な表面分子群を含み、所定態様では、三次元構造特徴及び／又は特定の電荷特徴をもつ場合がある。エピトープは抗体が結合する抗原の領域である。所定態様では、蛋白質及び／又は巨大分子の複雑な混合物中でその標的抗原を優先的に認識する場合に抗体は抗原と特異的に結合すると言う。
【００６０】
本願で使用する「ヒト抗体」なる用語は例えばＫａｂａｔらにより記載されているようにフレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域をもつ抗体を包含するものとする（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）。更に、抗体が定常領域を含む場合には、定常領域もヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えばランダムもしくは部位特異的当然変異誘発によりインビトロ又は体細胞突然変異によりインビボで導入される突然変異）を含んでいてもよい。他方、本願で使用する「ヒト抗体」なる用語はマウス等の別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を包含するものではない。
【００６１】
本願で使用する「単離抗体」とは、異なる抗原特異性をもつ他の抗体を実質的に含まない抗体を意味するものである（例えばＮＧＦと特異的に結合する単離抗体はＮＧＦ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。更に、単離抗体は通常では他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない。
【００６２】
本願で使用する「特異的結合」、「特異的に結合する」、「選択的結合」及び「選択的に結合する」なる用語は抗体又はその抗原結合部分が特定の抗原又はエピトープに対して相当程度の親和性を示し、一般に他の抗原及びエピトープに対して有意な交差反応性を示さないことを意味する。「相当程度の」ないし好ましい結合は少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９Ｍ−１、又は１０１０Ｍ−１の親和性で結合することを包含する。１０７Ｍ−１を上回る親和性、好ましくは１０８Ｍ−１を上回る親和性がより好ましい。上記数値の中間の数値も本発明の範囲内に含むものとし、好ましい結合親和性は例えば１０６〜１０１０Ｍ−１、好ましくは１０７〜１０１０Ｍ−１、より好ましくは１０８〜１０１０Ｍ−１の範囲の親和性として示すことができる。「有意な交差反応性を示さない」抗体とは、望ましくない物質（例えば望ましくない蛋白性物質）と相当程度まで結合しない抗体である。特異的ないし選択的結合はこのような結合の測定手段として当分野で周知の任意手段により測定することができ、例えば、スキャッチャード解析及び／又は競合結合アッセイが挙げられる。
【００６３】
本願で使用する「ＫＤ」なる用語は例えば平衡状態における滴定測定又は解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を会合速度定数（Ｋｏｎ）で割ることにより得られる特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数ないし抗原に対する抗体の親和性を意味するとする。会合速度定数（Ｋｏｎ）、解離速度定数（Ｋｏｆｆ）及び平衡解離定数（Ｋ）は抗原に対する抗体の結合親和性を表すために使用される。会合速度定数と解離速度定数の測定方法は当分野で周知である。蛍光技術を使用すると、高感度が得られ、平衡状態の生理的緩衝液中のサンプルを試験することができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイ等の他の実験アプローチ及び機器（例えばＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの子会社であるＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデンから市販されている機器）も使用できる。更に、Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ）から市販されているＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（動的排除アッセイ）アッセイも使用することができる。
【００６４】
１態様において、本発明の抗体は表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイを使用して測定した場合に約１００ｐＭ以下（即ちこれと同等以上に良好）（例えば約９０ｐＭ又は約８０ｐＭ又は約７０ｐＭ又は約６０ｐＭ又は約５０ｐＭ又は約４０ｐＭ又は約３０ｐＭ）の親和性（ＫＤ）で抗原（例えばＮＧＦ）と結合する。好ましい１態様において、抗体は約２５〜３５ｐＭの親和性（ＫＤ）でＮＧＦと結合する。
【００６５】
本願で使用する「Ｋａｓｓ」、「Ｋａ」及び「Ｋｏｎ」なる用語は抗体が会合して抗体／抗原複合体となる会合速度定数を意味するものとする。この数値は下式：
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ−Ａｇ
により示されるように、抗体とその標的抗原の結合速度ないし抗体と抗原の間の複合体形成速度を表す。
【００６６】
本願で使用する「Ｋｄｉｓｓ」、「Ｋｄ」及び「Ｋｏｆｆ」なる用語は抗体が抗体／抗原複合体から解離する解離速度定数を意味するものとする。この数値は下式：
Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ−Ａｇ
により示されるように、抗体がその標的抗原から解離する速度ないしＡｂ−Ａｇ複合体が経時的に遊離抗体及び抗原に分離する速度を表す。
【００６７】
本願で使用する「ＩＣ５０」なる用語はインビトロ又はインビボアッセイにおける応答を最大阻害応答の５０％、即ち最大阻害応答と未処理応答の中間のレベルまで阻害する抗体の濃度を意味する。
【００６８】
本願で使用する「治療する」、「治療用」及び「治療」なる用語は本願に記載する治療又は予防手段を意味する。「治療」方法は疾患又は病態の１種以上の症状を予防、治癒、遅延、重篤度低減又は改善するために、対象（例えばＮＧＦ関連疾患又は病態をもつ対象）への本発明の抗体の投与を利用する。
【００６９】
本願で使用する「ＮＧＦ関連疾患又は病態」なる用語はＮＧＦ活性が疾患又は病態の１種以上の症状に関与、又は関連、又は介在、又はこれらの症状を促進する疾患及び病態を意味する。
【００７０】
本願で使用する「対象」なる用語は任意ヒト又は非ヒト動物を包含する。特定態様において、対象はヒトである。「非ヒト動物」なる用語は全脊椎動物、例えば哺乳動物及び非哺乳動物（例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等）を包含する。
【００７１】
本願で使用する「リバウンド作用」なる用語は単回又は反復投与後の初期有効期間後に対象に生じるＮＧＦ阻害剤（例えば抗ＮＧＦ抗体）の効力低下を意味する。例えば、抗ＮＧＦ抗体を投与すると、例えば炎症又は神経損傷又は他の病因による疼痛を当初は緩和することができるが、その後の鎮痛効力低下期間に疼痛は最終的に投与前とほぼ同等又はそれ以上の強さになる。別の例において、抗ＮＧＦ抗体は（単回又は反復投与後の所定期間（例えば投与後１週間（例えば投与後１〜７日））対象に初期効力を示すことができるが、その後、効力低下期間（例えば投与後１〜２週間（例えば投与後７〜１４日））を伴う。この「リバウンド」期間後に抗ＮＧＦ抗体の効力回復期間を迎えることができる。例えば、抗ＮＧＦ抗体の単回又は反復投与後に２相鎮痛プロファイルが得られ、中間期間として効力低下期間又は疼痛感覚増大期間を伴う。このリバウンド作用は例えば臨床疼痛試験、疼痛の実験モデル及び／又は抗ＮＧＦ効力の他のモデルで評価することができる。このリバウンド作用は例えばリバウンド期間中の対象における疼痛増加及び／又は有害イベント増加（例えばアロディニアから異常感覚、錯感覚及び知覚過敏又は知覚鈍磨に至る知覚異常）に結び付けることができる。機序に限定する意図はないが、リバウンド作用はＮＧＦ発現変化、ＴｒｋＡもしくはｐ７５受容体発現もしくはシグナル伝達変化又は初期有効期間後の抗ＮＧＦの単回もしくは反復投与後後の過渡的効力低下をもたらす他の何らかの機序に起因すると考えられる。
【００７２】
以下のサブセクションでは本発明の各種側面を更に詳細に説明する。
【００７３】
ＩＩ．本発明の医薬組成物
本発明は抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片を含有する液体及び凍結乾燥医薬組成物として、当分野で周知の組成物に比較して特性を改善した組成物を提供する。本発明の組成物は例えば製造、保存、及び／もしくは反復凍結／解凍処理工程又は拡大した空気−液体界面への長期暴露中に抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片の溶解性と安定性を維持することができる（例えば有意な乳白、凝集又は沈殿を示さない）。例えば、本発明の組成物は多量（例えば約１０〜約２４０ｍｇ／ｍＬ）の抗体又はその抗原結合断片を含有するにも拘わらず、低レベルの蛋白質凝集（即ち３％未満）を維持する。本発明の組成物は更に多量（例えば約１０〜約２４０ｍｇ／ｍＬ）の抗体を含有するにも拘わらず、皮下注射に適した範囲内の低粘度を維持する。更に、本発明の組成物は溶解性を維持し、皮下又は静脈内注射に適した低粘度を維持し、例えば約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０のｐＨ範囲で安定性を維持する。従って、本発明の抗体組成物は安定性、粘度、濁度及び物理的分解の問題を含めて抗体組成物の多数の公知問題を解決する。
【００７４】
従って、１側面において、医薬組成物は抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と、液体及び／又は凍結乾燥形態の抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片の安定性を維持するために十分な緩衝液及び添加剤を含有する。
【００７５】
本発明の組成物で使用することができる抗ＮＧＦ抗体及びその抗原結合断片と、このような抗体及びその抗原結合断片の製造方法については本願に詳細に記載する。組成物中に存在する抗体の量は例えば、所望の用量、体積及び投与方法を考慮することにより決定される。本発明の所定態様において、本発明の組成物（例えば液体及び／又は凍結乾燥組成物）は（再構成時に）は約１０〜約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約１２０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約２４０ｍｇ／ｍＬ、約５０〜１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５〜約７５ｍｇ／ｍｌ、又は約１０〜約２０ｍｇ／ｍｌの蛋白質濃度の抗ヒトＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片を含有する。本発明の好ましい態様は蛋白質濃度の高い組成物であるが、本発明の組成物は約１ｍｇ／ｍＬ〜約２４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの抗体濃度でもよいと考えられる。本発明の１態様において、抗体の濃度は約１００ｍｇ／ｍＬである。本発明の１態様において、抗体の濃度は約６０ｍｇ／ｍＬである。本発明の１態様において、抗体の濃度は約３０ｍｇ／ｍＬである。別の態様において、抗体の濃度は約２０ｍｇ／ｍＬである。別の態様において、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍＬである。本発明の別の態様において、組成物は約５５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を含有する。
【００７６】
例えば上記範囲の中間の範囲（例えば７５〜９０ｍｇ／ｍｌ）も本発明に含むものとする。例えば、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲も含むものとする。更に、上記量及び濃度の中間の抗ＮＧＦ抗体の濃度（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９又は約２４０ｍｇ／ｍＬ）も本発明に含むものとする。
【００７７】
本発明の所定態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１〜１００ｍｇ、１〜７５ｍｇ、１〜５５ｍｇ、１〜３０ｍｇ、１〜２０ｍｇ、１〜１０ｍｇ、１０〜２０ｍｇ、１５〜７５ｍｇ、１００〜１５０ｍｇ、１１０〜１５０ｍｇ、１００〜１４０ｍｇ、１１０〜１４０ｍｇ、１２０〜１４０ｍｇ、１３０〜１４０ｍｇの抗ＮＧＦ抗体を含有する。他の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約４０〜２４０、４０〜２００、４０〜１８０、４０〜１６０、４０〜１４０、４０〜１２０ｍｇ、４５〜１００ｍｇ、５０〜８０ｍｇ、又は５５〜７０ｍｇの抗体を含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１０ｍｇの抗体を含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約２０ｍｇの抗体を含有する。
【００７８】
上記範囲の中間の範囲（例えば１３２〜１３８、又は５５〜６５）も本発明に含むものとする。例えば、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲も含むものとする。更に、上記量及び濃度の中間の抗ＮＧＦ抗体の量及び濃度（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３４．１、１３４．２、１３４．３、１３４．４、１３４．５、１３４．６、１３４．７、１３４．８、１３４．９、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は約１５０ｍｇの抗体）も本発明に含むものとする。
【００７９】
本発明の医薬組成物で使用される緩衝液は組成物のｐＨを約４．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．０〜約６．５、約５．５〜約７．０の範囲に維持するのに適したものである。好ましくは、緩衝液は本発明の医薬組成物のｐＨを約５．０〜約６．０、約６．０〜約７．０、約５．５〜約６．０、約６．０〜約６．５、約５．７５〜約６．２５及び約５．２５〜約５．７５に維持する。１態様において、本発明の組成物のｐＨは約６．０である。１態様において、本発明の組成物のｐＨは約５．５である。１態様において、本発明の組成物のｐＨは約５．０である。上記ｐＨの中間の範囲及び数値（例えば５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３又は６．４のｐＨ）も本発明に含むものとする。上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲も含むものとする。
【００８０】
ｐＨを約５．５〜約７．０の範囲内に制御する緩衝液の例としては、リン酸、酢酸（例えば酢酸ナトリウム）、コハク酸（例えばコハク酸ナトリウム）、アルギニン、グルコン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、クエン酸及び他の有機酸緩衝液が挙げられる。
【００８１】
１態様において、緩衝液はヒスチジンである。本発明の所定態様において、組成物中のヒスチジンの濃度は１〜１００ｍＭ、約１〜３０ｍＭ、約５〜３０ｍＭ、約１０〜３０ｍＭ、約３０〜６０ｍＭ、約３０〜４０ｍＭ、約１０〜５０ｍＭ、約１５〜６０ｍＭ、約１５〜４５ｍＭ、約１５〜３０ｍＭ、約１５〜２５又は約１５〜２０ｍＭである。１態様において、組成物中のヒスチジンの濃度は約２０ｍＭである。別の態様において、組成物中のヒスチジンの濃度は約１５ｍＭである。別の態様において、組成物中のヒスチジンの濃度は約３０ｍＭである。上記濃度の中間のヒスチジンの濃度及び範囲（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００又は約１００ｍＭのヒスチジン）も本発明に含むものとする。上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する濃度範囲も含むものとする。
【００８２】
本発明の他の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１〜１０ｍｇのヒスチジン又は約２〜５ｍｇのヒスチジンを含有する。１態様において、組成物は約６ｍｇ、例えば約５．７ｍｇのヒスチジンを含有する。１態様において、組成物は約５ｍｇ、例えば約４．７ｍｇのヒスチジンを含有する。１態様において、組成物は約２〜３ｍｇのヒスチジンを含有する。上記量の中間のヒスチジンの量及び範囲（例えば約１、１．５、２、２．２、２．３、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５又は約１０ｍｇのヒスチジン）も本発明に含むものとする。上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する範囲の量も含むものとする。
【００８３】
本発明の抗体組成物にはデタージェントないし界面活性剤も添加剤として添加することができる。典型的なデタージェントとしては非イオン性デタージェント（例えばポリソルベート（例えばポリソルベート２０、８０等）又はポロキサマー（例えばポロキサマー１８８））が挙げられる。デタージェントの添加量は製剤化抗体の凝集を減らし、及び／又は組成物中の粒状物の形成を最小限にし、及び／又は吸着を減らすように選択される。適切な界面活性剤としては、例えばポリソルベート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばＢｒｉｊ  ３５（登録商標））、又はポロキサマー（例えばＴｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０又はポロキサマー１８８）が挙げられる。好ましいデタージェントはポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばＢｒｉｊ  ３５（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  Ａ２５、Ｓｙｍｐａｔｅｎｓ  ＡＬＭ／２３０）、ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎ類（例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０、Ｍｉｒｊ）及びポロキサマー（例えばポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７及びＴｗｅｅｎｓ類（例えばＴｗｅｅｎ  ２０及びＴｗｅｅｎ  ８０））である。
【００８４】
本発明の好ましい１態様において、組成物はポリソルベートである界面活性剤を含有する。本発明の別の好ましい態様において、組成物はデタージェントとしてポリソルベート８０を含有する。１態様において、組成物は約０．０１〜約２．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０１〜約１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５〜約２．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５〜約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０５〜約０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含有する。１態様において、組成物は約１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含有する。別の態様において、組成物は約０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含有する。更に別の態様において、組成物は約０．０５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を含有する。１態様において、組成物は約０．００１％〜約０．１％、約０．００５％〜約０．０８％、約０．００７％〜約０．０６％、約０．０１％〜約０．０４％、約０．０１％〜約０．０３％、又は約０．０１％〜０．０２％のポリソルベート８０を含有する。１態様において、組成物は約０．０１％のポリソルベート８０を含有する。１態様において、組成物は約０．０２％のポリソルベート８０を含有する。他方、本発明の他の態様において、組成物は界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ又はポリソルベート）を本質的に含有しないか又は全く含有しない。
【００８５】
本発明の所定態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約０．０１〜０．５ｍｇ、例えば約０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５又は約０．５ｍｇの界面活性剤を含有することができる。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約０．２０ｍｇの界面活性剤（例えばポリソルベート８０）を含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約０．１０ｍｇの界面活性剤（例えばポリソルベート８０）を含有する。界面活性剤の上記濃度及び量の中間の範囲及び量（例えば０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９及び２．０ｍｇ／ｍＬの界面活性剤）も本発明に含むものとする。更に、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲（例えば０．０４〜１．８ｍｇ／ｍＬの界面活性剤）も含むものとする。
【００８６】
本発明の組成物は更にポリオールを含有することができる。本発明の組成物で有用なポリオールとしては、限定されないが、トレハロース、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、ソルボース、メレジトース、ラフィノース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、トレイトール、ソルビトール、グリセロール、Ｌ−グルコン酸及びその金属塩の１種以上が挙げられる。
【００８７】
１態様において、ポリオールはソルビトール、グリセロール、トレハロース及びマンニトール又はその組合せから構成される群から選択される。１態様において、ポリオールはマンニトール以外のものである。所定態様において、本発明の組成物中のポリオールの濃度は約１〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０〜約９０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜約７０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、又は約５０〜約６０ｍｇ／ｍＬである。他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１０〜１００ｍｇ、約１０〜約９０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜約７０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、又は約５０〜約６０ｍｇ／ｍＬの濃度のポリオールを含有する。他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬ又は約２０〜２５ｍｇ／ｍＬのポリオールを含有する。
【００８８】
更に他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１０〜１２０、約２０〜１２０、約３０〜１２０、約４０〜１２０、約５０〜１２０、約６０〜１２０、約１０〜１１０、約１０〜１００、約１０〜９０、約１０〜８０、約１０〜７０ｍｇのポリオール又はその組合せを含有する。上記濃度の中間のポリオールの濃度及び範囲（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００又は約１００ｍｇ／ｍＬのポリオール）も本発明に含むものとする。上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用するポリオールの濃度範囲（例えば３５〜７０ｍｇ／ｍｌのポリオール）も含むものとする。
【００８９】
１態様において、本発明の組成物で使用するのに適したポリオールは糖アルコール（例えばソルビトール）である。本発明の組成物は約２０〜６０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜６０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜５０ｍｇ／ｍＬ、又は約３５〜４５ｍｇ／ｍＬのソルビトールを含有することができる。１態様において、組成物は約４０ｍｇ／ｍＬのソルビトールを含有する。
【００９０】
別の態様において、本発明の組成物で使用するのに適したポリオールはマンニトールである。本発明の組成物は約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜４０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜３０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜２５ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有することができる。１態様において、組成物は約２０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有する。１態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜３０ｍｇ／ｍＬ又は約２０〜２５ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有し、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含有する。更に他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約４０〜６０ｍｇ、約４５〜５５ｍｇ、又は約４８〜５２ｍｇのマンニトールを含有する。１態様において、組成物は約５０ｍｇ、例えば約４９．５ｍｇのマンニトールを含有する。
【００９１】
別の態様において、本発明の組成物で使用するのに適したポリオールはグリセロールである。本発明の組成物は約１〜５０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜４０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜３０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜２５ｍｇ／ｍＬ、又は約２０ｍｇ／ｍＬのグリセロールを含有することができる。
【００９２】
１種以上の糖類を本発明の組成物に添加してもよい。本発明の組成物で有用な糖類の非限定的な例としては、マルトース、ラクトース、セロビオース、ゲンチオビオース、メリビオース及びツラノース、フルクトース、レブロース、グルコース、及びデキストロース、ラクトース、スクロース及びトレハロース（別称ミコース又はトレマロース）、ラフィノース、メレジトース、スタキオース及びベルバスコースが挙げられる。所定態様において、糖類の濃度は約１〜約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０〜約９０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜約７０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、又は約５０〜約６０ｍｇ／ｍＬである。他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１０〜１２０、約２０〜１２０、約３０〜１２０、約４０〜１２０、約５０〜１２０、約６０〜１２０、約１０〜１１０、約１０〜１００、約１０〜９０、約１０〜８０、約１０〜７０ｍｇの糖類を含有する。
【００９３】
所定態様において、糖類はスクロースであり、約１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、約１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜８０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜７０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜７０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、又は約２５〜６５ｍｇ／ｍＬのスクロースが本発明の組成物中に存在する。１態様において、組成物は約７０ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約５ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約４５ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約４６ｍｇ／ｍＬのスクロースを含有する。
【００９４】
更に他の態様において、本発明の組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１〜１００、約１〜７０、約１〜５０、約１０〜１２０ｍｇ、約１０〜１００ｍｇ、約１０〜５０ｍｇ、約１０〜２０ｍｇ、又は約１２ｍｇ、例えば約１２．２５ｍｇのスクロースを含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約５０〜１２０ｍｇ、約７５〜１２０ｍｇ、又は約１００〜１２０ｍｇのスクロース、例えば約１１０、１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９又は１２０ｍｇのスクロースを含有する。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１１３ｍｇのスクロースを含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約７０ｍｇのスクロースを含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約２０ｍｇのスクロースを含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１０ｍｇのスクロースを含有する。別の態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約５ｍｇのスクロースを含有する。
【００９５】
別の態様において、糖類はトレハロースである。約１０〜１００ｍｇ／ｍＬ、約１０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜８０ｍｇ／ｍＬ、約１０〜７０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜９０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜８０ｍｇ／ｍＬ、約２０〜７０ｍｇ／ｍＬ、約３０〜７０ｍｇ／ｍＬ、約２５〜６５ｍｇ／ｍＬ、又は約３５〜５５ｍｇ／ｍｌのトレハロースが組成物中に存在することができる。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）は約４０〜５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約４５ｍｇ／ｍＬのトレハロースを含有する。
【００９６】
上記濃度の中間の糖類の濃度及び範囲（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９又は約１２０ｍｇ／ｍＬの糖類）も本発明に含むものとする。上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する糖類の濃度範囲（例えば３５〜７０ｍｇ／ｍｌの糖類）も含むものとする。
【００９７】
他の態様において、上記糖類の１種以上と上記ポリオールの１種以上の任意組合せを本発明の組成物に配合することができる。例えば、本発明の組成物（例えば凍結乾燥に適した組成物）はポリオール（例えばマンニトール）と糖類（例えばスクロース）を含有することができる。所定態様において、ポリオール（例えばマンニトール）、糖類（例えばスクロース）又はその組合せ（例えばマンニトールとスクロース）に対する抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片のモル比は約１：１２００を上回り、好ましくは約１：１４００を上回り、より好ましくは約１：１４００〜１：１５００、又は約１：１５００を上回る。
【００９８】
本発明の所定態様において、組成物は更にアミノ酸（例えばメチオニン）を含有する。１態様において、組成物は約１〜１０ｍＭ、約２〜１０ｍＭ、約２〜９ｍＭ、約２〜８ｍＭ、約２〜７ｍＭ、約２〜６ｍＭ、約２〜５ｍＭ、約３〜８ｍＭ、約３〜７ｍＭ、約３〜６ｍＭ、又は約３〜５ｍＭのメチオニンを含有する。１態様において、組成物は約４ｍＭのメチオニンを含有する。別の態様において、組成物は約５ｍＭのメチオニンを含有する。１態様において、メチオニンを含有する組成物は更にポリオール（例えばマンニトール）及び／又は糖類（例えばスクロース）を含有する。１態様において、組成物はメチオニンと、マンニトールと、スクロースを含有する。１態様において、組成物はアミノ酸（例えばメチオニン）を含有しない。
【００９９】
本発明の所定態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約０．１〜１０ｍｇ、０．５〜９ｍｇ、１．０〜８ｍｇ、１〜６ｍｇ、１〜５ｍｇ、１〜４ｍｇ、１〜３ｍｇ又は１〜２ｍｇ、例えば約１．５、１．６、１．７、１．７５、１．８、１．８１、１．８２、１．８３、１．８４、１．８５、１．９又は２．０ｍｇのメチオニンを含有することができる。１態様において、組成物（例えば凍結乾燥組成物）は約１．８ｍｇ、例えば１．８３ｍｇのメチオニンを含有する。メチオニンの上記濃度及び量の中間の範囲及び量（例えば１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５及び１０ｍＭ）も本発明に含むものとする。更に、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲（例えば３．５〜９ｍＭ）も含むものとする。
【０１００】
１態様において、組成物はベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、クロロブタノール及びベンゼトニウムＣｌ等の防腐剤を本質的に含まない。別の態様では、防腐剤を組成物に加えてもよい。組成物の所望の特徴に有意に悪影響を与えない限り、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されているもの等の１種以上の他の医薬的に許容可能な担体、添加剤又は安定剤も組成物に加えてもよい。許容可能な担体、添加剤又は安定剤は採用する用量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、他の緩衝剤、補助溶媒、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸及びメチオニン）、キレート剤（例えばＥＤＴＡ）、金属錯体（例えばＺｎ−蛋白質錯体）、生分解性ポリマー（例えばポリエステル）、及び／又は塩を形成する対イオン（例えばナトリウム）が挙げられる。
【０１０１】
特定態様において、本発明の医薬組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約５〜５０、５〜３０、５〜２０又は１０〜２０ｍＭのヒスチジンと；（ｃ）約０．０１〜０．０２％のポリソルベート８０を含有する液体、又はこれらの成分から本質的に構成される液体、又はこれらの成分から構成される液体として製剤化され、組成物のｐＨは約５．０〜６．０又は約５．５である。所定の好ましい態様において、抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１００又はＰＧ１１０の抗原結合断片である。所定の好ましい態様において、ヒスチジンの濃度は約１０又は１５ｍＭである。
【０１０２】
特定態様において、本発明の医薬組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約５〜５０、５〜３０、５〜２０又は１０〜２０ｍＭのヒスチジンと；（ｃ）約０．０１〜０．２％のポリソルベート８０と；（ｄ）約２０〜８０、３０〜８０又は４０〜８０ｍｇのポリオールを含有する液体、又はこれらの成分から本質的に構成される液体、又はこれらの成分から構成される液体として製剤化され、組成物のｐＨは約５．０〜６．０又は約５．５である。所定の好ましい態様において、抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０又はＰＧ１１０の抗原結合断片である。所定の好ましい態様において、ヒスチジンの濃度は約１０又は１５ｍＭである。所定の好ましい態様において、ポリオールはマンニトール又はソルビトールである。他の好ましい態様において、ポリオールの濃度は２０、３０又は４０ｍｇ／ｍＬである。他の好ましい態様において、組成物は更に約１０〜２０、２０〜５０又は３０〜８０ｍｇ／ｍＬの濃度の糖類、好ましくはスクロース又はトレハロースを含有する。
【０１０３】
特定態様において、本発明の医薬組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約５〜５０、５〜３０、５〜２０又は１０〜２０ｍＭヒスチジンと；（ｃ）約０．０１〜０．２％のポリソルベート８０と；（ｄ）約２０〜８０、３０〜８０又は４０〜８０ｍｇ／ｍＬの糖類を含有する液体、又はこれらの成分から本質的に構成される液体、又はこれらの成分から構成される液体として製剤化され、組成物のｐＨは約５．０〜６．０又は約５．５である。所定の好ましい態様において、抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０又はＰＧ１１０の抗原結合断片である。所定の好ましい態様において、ヒスチジンの濃度は約１０又は１５ｍＭである。所定の好ましい態様において、糖類はスクロース又はトレハロースである。他の好ましい態様において、糖類の濃度は７０又は８０ｍｇ／ｍＬである。特定態様において、本発明の医薬組成物は液体形態に再構成するのに適した凍結乾燥形態で提供される。再構成後の液体１ｍＬ当たり、凍結乾燥組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約１〜２０、１〜１０、１〜５又は２〜４ｍｇのヒスチジンと；（ｃ）約０．１〜０．２ｍｇのポリソルベート８０を含有するか、又はこれらの成分から本質的に構成されるか、又はこれらの成分から構成される。所定の好ましい態様において、組成物は約１０、２０又は５０ｍｇのＰＧ１１０又はＰＧ１１０の抗原結合断片を含有する。所定の好ましい態様において、組成物は約２〜３ｍｇのヒスチジンを含有する。所定の好ましい態様において、組成物は０．１ｍｇのポリソルベート８０を含有する。
【０１０４】
特定態様において、本発明の医薬組成物は液体形態に再構成するのに適した凍結乾燥形態で提供される。再構成後の液体１ｍＬ当たり、凍結乾燥組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約１〜２０、１〜１０、１〜５又は２〜４ｍｇのヒスチジンと；（ｃ）約０．１〜０．２ｍｇのポリソルベート８０と；（ｄ）約２０〜８０、３０〜８０又は４０〜８０ｍｇのポリオールを含有するか、又はこれらの成分から本質的に構成されるか、又はこれらの成分から構成される。所定の好ましい態様において、組成物は約１０、２０又は５０ｍｇのＰＧ１００又はＰＧ１１０の抗原結合断片を含有する。所定の好ましい態様において、組成物は約２〜３ｍｇのヒスチジンを含有する。所定の好ましい態様において、組成物は０．１ｍｇのポリソルベート８０を含有する。所定の好ましい態様において、組成物は１０、２０、３０又は４０ｍｇのマンニトール又はソルビトールを含有する。所定の好ましい態様において、組成物は更に約１０〜４０ｍｇの糖類、好ましくはスクロース又はトレハロースを含有する。
【０１０５】
特定態様において、本発明の医薬組成物は液体形態に再構成するのに適した凍結乾燥形態で提供される。再構成後の液体１ｍＬ当たり、凍結乾燥組成物は（ａ）約１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１０〜３０、２０〜５０又は２０〜７５ｍｇの抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片と；（ｂ）約１〜２０、１〜１０、１〜５又は２〜４ｍｇのヒスチジンと；（ｃ）約０．１〜０．２ｍｇのポリソルベート８０と；（ｄ）２０〜８０、３０〜８０又は４０〜８０ｍｇ／ｍＬの糖類を含有するか、又はこれらの成分から本質的に構成されるか、又はこれらの成分から構成される。所定の好ましい態様において、組成物は約１０、２０又は５０ｍｇのＰＧ１００又はＰＧ１１０の抗原結合断片を含有する。所定の好ましい態様において、組成物は約２〜３ｍｇのヒスチジンを含有する。所定の好ましい態様において、組成物は０．１ｍｇのポリソルベート８０を含有する。所定の好ましい態様において、組成物は約２０、４０、７０又は８０ｍｇの糖類、好ましくはスクロース又はトレハロースを含有する。
【０１０６】
本発明の組成物は治療する特定適応症の必要に応じて１種以上の他の治療剤、好ましくは組成物の抗体に悪影響を与えない相補的活性をもつ治療剤と併用してもよい。このような治療剤は所期目的に有効な量で共存することが適切である。
【０１０７】
インビボ投与に使用する組成物は無菌でなければならない。これは組成物の製造前又は製造後に滅菌濾過膜で濾過することにより容易に実施される。
【０１０８】
上記のように、本発明の組成物（例えば凍結乾燥に適した液体及び凍結乾燥組成物）は有利な安定性と保存特性をもつ。液体組成物の安定性は保存形態に依存せず、限定されないが、凍結、凍結乾燥、噴霧乾燥した組成物、又は活性成分を懸濁した組成物が挙げられる。安定性は選択された温度で選択された期間にわたって測定することができる。本発明の１側面において、液体組成物中の蛋白質は液体形態で少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１８カ月又はそれ以上にわたって安定である。上記期間の中間の範囲（例えば約９カ月等）も本発明に含むものとする。更に、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲も含むものとする。
【０１０９】
好ましくは、組成物は室温、もしくは約３０℃、もしくは４０℃で少なくとも約１カ月間安定であり、及び／又は約２〜８℃で少なくとも約１年間安定であり、又はより好ましくは約２〜８℃で少なくとも約２年間安定である。更に、組成物は好ましくは組成物の（例えば−８０℃までの）凍結及び解凍（以下、「凍結／解凍サイクル」と言う）後に安定である。１態様において、組成物は１、２、３又は４サイクル以上の凍結−解凍サイクル後に安定である。
【０１１０】
液体組成物中の蛋白質の安定性は例えば紫外線散乱又はサイズ排除クロマトグラフィーにより測定した組成物中の蛋白質の単量体、凝集物もしくは断片又はその組合せの百分率として表すこともできる。本発明の１側面において、安定な液体組成物は組成物中に凝集物として存在する蛋白質が約１０％未満、好ましくは約５％未満、より好ましくは約２％未満である組成物である。
【０１１１】
１態様において、液体組成物の物理的安定性は撹拌ストレスアッセイ（例えば２４時間又は４８時間撹拌ストレスアッセイ）後に組成物の濁度を測定することにより測定される。例えば、マグネチックスターラー（例えばマルチポイントＨＰ，５５０ｒｐｍ）を取り付けたビーカーに適切な体積の液体組成物を加え、任意の適切な時点（例えばＴ０〜Ｔ４８（時間））でアリコートを分取し、アリコートに所望に応じて適切なアッセイを実施することにより撹拌ストレスアッセイを実施することができる。同一条件下で非撹拌下の組成物のサンプルを対照とする。濁度測定はＨａｃｈ（ドイツ）製実験室濁度測定システムを使用して実施することができ、比濁計濁度単位（ＮＴＵ）として報告する。
【０１１２】
本発明の組成物は更に有利な忍容性をもつ。忍容性は疼痛ビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を使用して対象に感知される注射部位疼痛の評価に基づいて評価される。（ＶＡＳ）は連続値（例えばゼロから過剰量までの疼痛）の間で疼痛を測定する測定手段である。機能的には、ＶＡＳは長さ約１００ｍｍの横線の両端に数値的及び／又は言語的記述語（例えば０もしくは１０、又は「無痛」もしくは「激痛」）を割当て、場合により更に両端間に言語的又は数値的記述語（例えば軽度、中度及び重度；又は１〜９）を割当てたものである（例えばＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ａｃａｄ．Ｅｍｅｒｇ．Ｍｅｄ．７：５５０参照）。
【０１１３】
測定することができる忍容性の他の指標としては、例えばドレイズスケール（出血、溢血、紅斑、浮腫、痒み及び紫斑）が挙げられる。
【０１１４】
ＩＩＩ．抗ＮＧＦ抗体
本発明の医薬組成物で使用することができる抗ＮＧＦ抗体は例えばＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１０／１２８３９８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／７８６９８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／６４２４７号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００２／０９６４５８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０３２８７０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０５８１８４号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／０６１５４０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／０１９２６６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０７７４４１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／１３１９５１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／１１０８８３号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０２３５４０号、米国特許第７，４４９，６１６、米国公開第ＵＳ２００５００７４８２１号、米国公開第ＵＳ２００８００３３１５７号、米国公開第ＵＳ２００８０１８２９７８号又は米国公開第ＵＳ２００９００４１７１７号に記載されており、各々その開示内容全体、特に抗ＮＧＦ抗体に関する内容を本願に援用する。
【０１１５】
１態様において、医薬組成物で使用する抗ＮＧＦ抗体はインビボで認められる長い終末相消失半減期により立証されるように、インビボ安定性の向上を特徴とする。機序により限定する意図はないが、抗体の終末相消失半減期の延長は抗体の分布容積の増加よりも抗体のクリアランス速度の低下に起因すると考えられる。好ましくは、本発明の医薬組成物で使用する抗体は突然変異を含むヒトＩｇＧ４定常領域を含む。好ましい突然変異はヒンジ部突然変異である。好ましくは、ヒンジ部突然変異は配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンの突然変異を含む（配列番号９は野生型ヒトＩｇＧ４定常領域のアミノ酸配列を示す）。より好ましくは、ヒンジ部突然変異は配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリン→プロリンの突然変異を含む。好ましい１態様において、ヒトＩｇＧ４定常領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
１態様において、本発明の医薬組成物で使用する抗ＮＧＦ抗体は予想外に長い終末相消失半減期を示し、例えばカニクイザルにおいて少なくとも１５日間、典型的には約１５〜約２２日間（又は１５〜２２日間）、又は約１５日間〜約２８日間（又は１５〜２８日間）又は約２１日間〜約２８日間（又は２１〜２８日間）の終末相消失半減期を示す。この安定化抗ＮＧＦ抗体は更にラットにおいて少なくとも８日間、典型的には約８〜約９日間（又は８〜９日間）の終末相消失半減期を示す。
【０１１７】
１態様において、本発明の医薬組成物で使用するのに好ましい抗ＮＧＦ抗体であるＰＧ１１０はカニクイザルにおいて少なくとも１５日間、典型的にはそれ以上の平均終末相消失半減期を示す。例えば、あるカニクイザル試験では、約１５〜約２２日間の平均終末相消失半減期が認められた。別のカニクイザル試験では、約２１〜約２８日間の平均終末相消失半減期が認められた。更に、ＰＧ１１０はラットにおいて約８〜約９日間の平均終末相消失半減期を示す。更に、ヒトにおけるＩｇＧの終末相消失半減期はサルの約２倍であることが当分野で知られているので、本発明の抗ＮＧＦ抗体（例えばＰＧ１１０）はヒトにおいて少なくとも１０〜３０日間、又は少なくとも１０日間、又は少なくとも１５日間、又は少なくとも２０日間、又は少なくとも２５日間、又はより好ましくは少なくとも３０日間又は少なくとも４０日間、あるいは約１０日間〜約４０日間（又は１０〜４０日間）又は約１５〜約３０日間（又は１５〜３０日間）の終末相消失半減期をもつと予想される。上記に加え、又は上記の代わりに、抗体はヒトにおいて少なくとも３０日間、又は少なくとも３５日間、又は少なくとも４０日間、あるいは少なくとも４〜６週間（又は４〜６週間）、又は少なくとも４〜７週間（又は４〜７週間）又は少なくとも４〜８週間（又は４〜８週間）の平均薬理学的半減期を示すことができる。実施例８に更に記載するように、本発明の抗ＮＧＦ抗体はヒトにおいて上記範囲の平均薬理学的半減期をもつことが判明した。
【０１１８】
カニクイザルにおけるＰＧ１１０の終末相消失半減期はカニクイザルで他のＩｇＧ４抗体について報告されている半減期よりも著しく長い。例えば、ＩｇＧ４抗ＴＮＦ抗体であるＣＤＰ５７１では、カニクイザルで約４０〜９０時間（約１．６〜３．８日間）の半減期が報告されている（Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．８５：６６８−６７４参照）。同様に、ＩｇＧ４抗インテグリン抗体であるナタリズマブでは、カニクイザルで約３日間の半減期が報告されている（Ｒｅｆｕｓａｌ  ＣＨＭＰ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｆｏｒ  Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ，Ｌｏｎｄｏｎ，１５  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００７，Ｄｏｃ．Ｒｅｆ．ＥＭＥＡ／ＣＨＭＰ／８２０３／２００８参照）。
【０１１９】
１態様において、本発明の医薬組成物は好ましいヒンジ部突然変異が配列番号９の１０８位におけるセリン→プロリン突然変異である抗ＮＧＦ抗体を含有する。この突然変異は当分野で従来記載されており（Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−１０８参照）、ＩｇＧ４分子の不均一性、特に１本の重鎖と１本の軽鎖を含む半分子抗体の形成を阻止すると報告されている。従って、ＩｇＧ４分子の不均一性（例えば半分子抗体の形成）の解消においてＳｅｒ→Ｐｒｏ突然変異と同一の効果が達成される限り、配列番号９の１０８位のプロリン以外のアミノ酸の置換も本発明に含まれる。１０８位の突然変異がＩｇＧ４分子の不均一性を解消できるかどうかかはＡｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３），前出に記載されているように評価することができる。
【０１２０】
配列番号９の１０８位の変異に加え、又はその代わりに、ＦｃＲｎ−ＩｇＧ相互作用の親和性を改善し、その結果、変異後のＩｇＧの半減期を延長する他のＩｇＧヒンジ部突然変異も記載されている。このような付加的又は代替的変異の例としては、（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４；Ｐｅｔｋｏｖａ，ＳＢ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１７５９−１７６９；Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３−６２１６；Ｋａｍｅｉ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９２：７４８−７６０；Ｖａｃｃａｒｏ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１２８３−１２８８；Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３４６−３５６に詳細に記載されているような）Ｔｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３０８、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３及び／又はＡｓｎ４３４に対応する１カ所以上のＩｇＧ定常領域残基の突然変異が挙げられる。
【０１２１】
更に、ヒンジ部突然変異の代わりに、ＩｇＧ４定常領域の他の安定化変異も記載されている。例えば、他の態様において、ヒトＩｇＧ４定常領域の突然変異は米国特許公開第２００８００６３６３５号に詳細に記載されているように、ＩｇＧ４  ＣＨ３領域→ＩｇＧ１  ＣＨ３領域の置換、ＩｇＧ４  ＣＨ２及びＣＨ３領域→ＩｇＧ１  ＣＨ２及びＣＨ３領域の置換又はＩｇＧ４定常領域の４０９位（Ｋａｂａｔナンバリングによる）のアルギニン→リジンの置換を含む。更に他の態様において、ヒトＩｇＧ４定常領域の突然変異はＡｒｇ４０９、Ｐｈｅ４０５又はＬｙｓ３７０（Ｋａｂａｔナンバリングによる）の置換（例えばＰＣＴ公開ＷＯ２００８／１４５１４２に記載されているように、Ａｒｇ４０９→Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、ＭｅｔもしくはＬｅｕの置換、又はＰｈｅ４０５→Ａｌａ、Ｖａｌ、ＧｌｙもしくはＬｅｕの置換）を含む。
【０１２２】
標準組換えＤＮＡ技術（例えばヒトＩｇＧ４定常領域をコードする核酸の部位特異的突然変異誘発又はＰＣＲによる突然変異誘発）を使用して所望の突然変異をヒトＩｇＧ４定常領域に導入することができる。更に、可変領域と定常領域が機能的に連結され、定常領域が突然変異ヒトＩｇＧ４定常領域である全長免疫グロブリン重鎖をコードするベクターを作製するように、突然変異ヒトＩｇＧ４定常領域をコードする発現ベクターに抗体重鎖可変領域をコードするＤＮＡを導入することができる。その後、標準組換え蛋白質発現法を使用して全長免疫グロブリン重鎖を発現させるために発現ベクターを使用することができる。例えば、実施例１に更に詳細に記載するように本発明の抗ＮＧＦ抗体を構築することができる。
【０１２３】
抗体の終末相消失半減期は当分野で公知の標準方法を使用して測定することができる。例えば、抗体を対象（例えばカニクイザル、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット）に投与後に、投与後の各種時点で血液サンプルを採取し、当分野で公知の抗体濃度測定技術（例えばＥＬＩＳＡアッセイ）を使用して血液サンプルからの血清中の抗体濃度を測定することができる。抗体の終末相半減期の計算は公知薬物動態法を使用して実施することができ、例えば薬物動態パラメーターを計算するように設計されたコンピューターシステム及びソフトウェアを使用することができる（その非限定的な１例はＳＮＢＬ  ＵＳＡ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｗｉｔｈ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアである）。
【０１２４】
１態様において、本発明の医薬組成物はＰＧ１１０抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分を含有する。ＰＧ１１０の重鎖可変領域を配列番号１に示し、ＰＧ１１０の軽鎖可変領域を配列番号２に示す。従って、１態様において、本発明の抗ＮＧＦ抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の態様において、本発明の抗ＮＧＦ抗体は配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。更に別の態様において、本発明の抗ＮＧＦ抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１２５】
ＰＧ１１０重鎖（可変領域及び定常領域）の全長アミノ酸配列を配列番号１３に示す。この重鎖はリーダー又はシグナル配列を含む前駆体重鎖（例えば配列番号１２に示すアミノ酸配列）から作製することができる。配列番号１２の前駆体重鎖は配列番号１１に示すヌクレオチド配列によりコードされる。
【０１２６】
ＰＧ１１０軽鎖（可変領域及び定常領域）の全長アミノ酸配列を配列番号１６に示す。この軽鎖はリーダー又はシグナル配列を含む前駆体軽鎖（例えば配列番号１５に示すアミノ酸配列）から作製することができる。配列番号１５の前駆体軽鎖は配列番号１４に示すヌクレオチド配列によりコードされる。
【０１２７】
従って、別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記抗体はカニクイザルにおいて少なくとも１５日間の血清半減期をもつ。別の態様において、カニクイザルにおける血清半減期は約１５日間〜約２２日間（又は１５〜２２日間）とすることができる。他の態様において、ラットにおける血清半減期は少なくとも８日間又は約８日間〜約９日間（又は８〜９日間）とすることができる。更に他の態様において、ヒトにおける血清半減期は少なくとも１０〜３０日間、又は少なくとも１０日間、又は少なくとも１５日間、又は少なくとも２０日間、又は少なくとも２５日間、又は少なくとも３０日間、又は少なくとも４０日間、あるいは約１０日間〜約４０日間（又は１０〜４０日間）又は約１５〜約３０日間（又は１５〜３０日間）とすることができる。上記に加え、又は上記の代わりに、抗体はヒトにおいて少なくとも３０日間、又は少なくとも３５日間、又は少なくとも４０日間、あるいは少なくとも４〜６週間（又は４〜６週間）、又は少なくとも４〜７週間（又は４〜７週間）、又は少なくとも４〜８週間（又は４〜８週間）の平均薬理学的半減期を示すことができる。好ましくは、重鎖は配列番号１１のヌクレオチド配列によりコードされる。好ましくは、抗体の軽鎖は配列番号１６のアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖は配列番号１４のヌクレオチド配列によりコードされる。
【０１２８】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１２９】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１１のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖と、配列番号１４のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む。
【０１３０】
ＰＧ１１０の結合特異性は可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）により得られるので、別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０の重鎖、ＰＧ１１０軽鎖又は両方のＣＤＲを含む。ＰＧ１１０の重鎖ＣＤＲ１、２及び３を夫々配列番号３、４及び５に示す。ＰＧ１１０の軽鎖ＣＤＲ１、２及び３を夫々配列番号６、７及び８に示す。従って、１態様において、本発明の抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域を含む。別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む。更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域と、夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１３１】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０の重鎖及び／又は軽鎖可変領域に相同のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含むことができ、前記抗体はＰＧ１１０により示される高いインビボ安定性を維持する。例えば、抗ＮＧＦ抗体の重鎖可変領域は配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％相同、より好ましくは少なくとも９５％相同、より好ましくは少なくとも９７％相同、更により好ましくは少なくとも９９％相同のアミノ酸配列を含むことができる。抗ＮＧＦ抗体の軽鎖可変領域は配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％相同、より好ましくは少なくとも９５％相同、より好ましくは少なくとも９７％相同、更により好ましくは少なくとも９９％相同のアミノ酸配列を含むことができる。
【０１３２】
本願で使用する２つのアミノ酸配列間の相同度百分率は２つの配列間の一致度百分率と等価である。２つの配列間の一致度百分率は２つの配列を最適に整列させるために導入する必要があるギャップ数と各ギャップの長さを考慮し、配列間で一致する共通の位置数の関数である（即ち、相同度％＝一致する位置数／合計位置数×１００）。２つの配列間の配列の比較と一致度百分率の決定は数学的アルゴリズムを使用して実施することができる。例えば、２つのアミノ酸配列間の一致度百分率はＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用してＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。更に、２つのアミノ酸配列間の一致度百分率はＢｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスと、ギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６又は４と、長さ重み１、２、３、４、５又は６を使用してＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【０１３３】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０の重鎖及び／又は軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含むことができ、配列には１以上の保存置換が導入されているが、抗体はＰＧ１１０により示される高いインビボ安定性を維持する。例えば、抗ＮＧＦ抗体の重鎖可変領域は配列番号１に比較して１、２、３、４又は５カ所の保存アミノ酸置換以外は配列番号１のアミノ酸配列に一致するアミノ酸配列を含むことができる。抗ＮＧＦ抗体の軽鎖可変領域は配列番号２に比較して１、２、３、４又は５カ所の保存アミノ酸置換以外は配列番号２のアミノ酸配列に一致するアミノ酸配列を含むことができる。
【０１３４】
本願で使用する「保存アミノ酸置換」なる用語はアミノ酸配列を含む抗体の結合又は安定性特徴に有意に影響又は変化を与えないアミノ酸変異を意味するものとする。このような保存変異としては、アミノ酸置換、付加及び欠失が挙げられる。当分野で公知の標準技術（例えば部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲによる突然変異誘発）により本発明の抗体に変異を導入することができる。保存アミノ酸置換は同類の側鎖をもつアミノ酸残基でアミノ酸残基を置換するものである。同類の側鎖をもつアミノ酸残基のファミリーが当分野で明示されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖をもつアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖をもつアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖をもつアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖をもつアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖をもつアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖をもつアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。従って、ＰＧ１１０の可変領域内の１以上のアミノ酸残基を同一側鎖ファミリーに由来する他のアミノ酸側鎖で置換することができ、本願に記載する機能アッセイを使用して改変抗体の機能維持を試験することができる。
【０１３５】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０抗体と同一のＮＧＦ上のエピトープと結合するか又はＮＧＦとの結合に関してＰＧ１１０と交差競合する抗原結合領域（即ち可変領域）を含む。従って、１態様において、本発明の抗ＮＧＦ抗体はＮＧＦとの結合に関して配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【０１３６】
このような交差競合抗体は標準ＮＧＦ結合アッセイでＰＧ１１０と交差競合するその能力に基づいて同定することができる。例えば、標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用することができ、組換えＮＧＦ蛋白質（例えばヒトＮＧＦ−β）をプレートに固定化し、抗体の一方を蛍光標識し、非標識抗体が標識抗体の結合を競合により排除する能力を評価する。上記に加え、又は上記の代わりに、ＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用し、抗体の交差競合能を評価することができる。抗体がＮＧＦとの結合に関して配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する能力を試験するために使用することができる適切な結合アッセイは従来記載されている（例えばＷＯ／２０１０／１２８３９８）。
【０１３７】
更に他の態様において、本発明の組成物で有用な抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０抗体の１種以上の機能的性質を示す。例えば、本発明の抗ＮＧＦ抗体は以下の機能的性質の１種以上を示すことができる：
・ヒトＮＧＦと結合するが、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒトニューロトロフィン３（ＮＴ−３）又はヒトニューロトロフィン４（ＮＴ−４）とは結合しない；
・１００ｐＭ以下のＫＤでヒト又はラットＮＧＦと結合する；
・ＮＧＦとＴｒｋＡ又はｐ７５ＮＴＲの結合を阻害する；
・ＴＦ−１細胞のＮＧＦ依存性増殖を阻害する；
・ＮＧＦ依存性ニワトリ胚後根神経節生存を阻害する；
・ＮＧＦ依存性ＰＣ１２細胞神経突起伸長を阻害する。これらの機能的性質は例えばＷＯ／２０１０／１２８３９８に記載されている当分野で周知のインビトロアッセイを使用して評価することができる。ヒトＮＧＦと抗体の特異的結合に関して本願で使用する「脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒトニューロトロフィン３（ＮＴ−３）又はヒトニューロトロフィン４（ＮＴ−４）とは結合しない」なる用語は標準結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ又は実施例に記載するような他の適切なインビトロアッセイ）で観測されるＢＤＮＦ、ＮＴ−３又はＮＴ−４と抗体の結合量が（例えば対照抗体の）バックグラウンド結合レベルと同等（例えばバックグラウンドレベルの２倍以下）であるか、又はＢＤＮＦ、ＮＴ−３又はＮＴ−４との結合が（ヒトＮＧＦとの結合レベルを１００％結合とした場合に）ヒトＮＧＦとの結合に比較して５％未満であることを意味するものとする。
【０１３８】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体はヒトＩｇＧ４定常領域を含み、ヒトＩｇＧ４定常領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含み（又はヒトＩｇＧ４定常領域は配列番号９のアミノ酸位置１０８位のセリンの突然変異、好ましくは１０８位のセリン→プロリン突然変異を含み）、抗体は１００ｐＭ以下のＫＤ（あるいは、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１５０ｐＭ以下、７５ｐＭ以下又は５０ｐＭ以下のＫＤ）でヒト又はラットＮＧＦと結合し、２５０ｐＭ以下のＩＣ５０（あるいは、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下又は２００ｐＭ以下のＩＣ５０）でＮＧＦとＴｒｋＡ又はｐ７５ＮＴＲの結合を阻害し、５０ｎｇ／ｍｌ以下のＩＣ５０（あるいは、１５０ｎｇ／ｍｌ以下、１００ｎｇ／ｍｌ以下、７５ｎｇ／ｍｌ以下又は４０ｎｇ／ｍｌ以下のＩＣ５０）でＴＦ−１細胞のＮＧＦ依存性増殖を阻害する。好ましくは、抗体はヒトにおける平均終末相消失半減期が少なくとも１０〜３０日間、又は少なくとも１０日間、又は少なくとも１５日間、又は少なくとも２０日間、又は少なくとも２５日間、又は少なくとも３０日間、あるいは約１０日間〜約４０日間（又は１０〜４０日間）又は約１５日間〜約３０日間（又は１５〜３０日間）である。上記に加え、又は上記の代わりに、抗体はヒトにおいて少なくとも３０日間、又は少なくとも３５日間、又は少なくとも４０日間、あるいは少なくとも４〜６週間（又は４〜６週間）、又は少なくとも４〜７週間（又は４〜７週間）又は少なくとも４〜８週間（又は４〜８週間）の平均薬理学的半減期を示すことができる。上記に加え、又は上記の代わりに、抗体はカニクイザルにおいて少なくとも１５日間、典型的には約１５〜約２２日間（又は１５〜２２日間）、又は約１５日間〜約２８日間（又は１５〜２８日間）又は約２１日間〜約２８日間（又は２１〜２８日間）の平均終末相消失半減期を示すことができる。上記に加え、又は上記の代わりに、抗体はラットにおいて少なくとも８日間、典型的には約８〜約９日間（又は８〜９日間）の終末相消失半減期を示すことができる。抗体は更に１種以上の他の機能的性質を示すことができる（例えばヒトＮＧＦと結合するが、ヒト脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ヒトニューロトロフィン３（ＮＴ−３）又はヒトニューロトロフィン４（ＮＴ−４）とは結合しない；ＮＧＦ依存性ニワトリ胚後根神経節生存を阻害する；及び／又はＮＧＦ依存性ＰＣ１２細胞神経突起伸長を阻害する）。好ましくは、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後少なくとも約１週間〜約１２週間疼痛を緩和する。好ましくは、抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域を含み、又は抗体は夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含み、又は抗体は夫々配列番号３、４及び５のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む重鎖可変領域と、夫々配列番号６、７及び８のアミノ酸配列をもつＣＤＲ１、２及び３を含む軽鎖可変領域を含む。好ましくは、抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、又は抗体は配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、又は抗体は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、又は抗体はＮＧＦとの結合に関して配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【０１３９】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は対象に投与（例えば対象にリバウンド作用が生じないような用量と頻度で抗体を投与）した場合にリバウンド作用を示さない。抗ＮＧＦ抗体が単回又は反復投与後の初期有効期間後に対象において効力低下を示す現象であるリバウンド作用は他の抗ＮＧＦ抗体の動物モデル及び臨床試験の両者で報告されている。例えば、「リバウンド現象」と呼ばれるこのような作用は抗ラットＮＧＦ抗体ではラットの慢性絞扼性神経損傷（ＣＣＩ）モデルで報告されている（Ｒｏ，Ｌ−Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐａｉｎ  ７９：２６５−２７４）。更に、抗ＮＧＦ抗体タネズマブ（ＲＮ６２４，Ｅ３，ＣＡＳ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  Ｎｏ．８８０２６６−５７−９）による臨床疼痛試験が報告されており、初期鎮痛期間後に有害イベント（例えば触覚過敏及び「ピン・針」感覚）増加期間が認められた（Ｈｅｆｔｉ，Ｆｒａｎｚ  Ｆ．，Ｒｉｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＳＵＨＳＣ，Ｓｈｒｅｖｅｐｏｒｔ，Ｌｏｕｉｓｉａｎａ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２６，２００６による発表参照）。機序により限定する意図はないが。本願に記載する抗ＮＧＦ抗体は終末相消失半減期が長いため、リバウンド作用を示さないようにすることができると考えられる。従って、本発明の組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体の他の利点としては、他の従来技術の抗ＮＧＦ抗体と比較して安定した超期間のインビボ活性が挙げられる。このような抗ＮＧＦ抗体は終末相消失半減期が長くなるため、（他の抗ＮＧＦ抗体に比較して）用量を減らすことができ、抗体を含有する組成物を必要に応じてより高頻度で使用することができ、対象にリバウンド作用が生じないように用量及びタイミング治療レジメンを選択することができる。
【０１４０】
更に別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は対象において疼痛を長期間緩和することが可能であり、例えば抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１週間〜約１２週間（又は１週間〜１２週間）疼痛を緩和することが可能である。１態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１週間（又は少なくとも１週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約２週間（又は少なくとも２週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約４週間（又は少なくとも４週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約８週間（又は少なくとも８週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１２週間（又は少なくとも１２週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約４週間〜約１２週間（又は４週間〜１２週間）疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約８週間〜約１２週間（又は８週間〜１２週間）疼痛を緩和する。
【０１４１】
抗体が対象において疼痛を緩和する能力は当分野で周知のアッセイを使用して評価することができる。抗ＮＧＦ抗体による疼痛緩和期間を評価するのに適した動物モデルが例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／１３１９５１号及び米国特許公開第２００８０１８２９７８号に記載されている。このような動物モデルの非限定的な例としては、坐骨神経の慢性絞扼により誘発した神経障害性疼痛モデル、後足の切開を行う外科処置後疼痛モデル、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）により関節炎を誘発させた関節リウマチ性疼痛モデル、並びにＨａｌｖｏｒｓｏｎ，Ｋ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：９４２６−９４３５及びＳｅｖｃｉｋ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｐａｉｎ  １１５：１２８−１４１に記載されているような癌性疼痛モデルが挙げられる。更に、ヒトで臨床的に疼痛緩和を評価することができ、抗ＮＧＦ抗体を投与したヒト対象により報告された疼痛レベルに基づいて疼痛緩和期間を判定することができる。
【０１４２】
更に他の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はモノクローナル抗体を産生させる方法として当分野で公知の標準方法（例えば非ヒトモノクローナル抗体（これらの抗体をその後、ヒト化することができる）を作製するためにＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載されている標準体細胞ハイブリダイゼーション技術や、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニック動物を使用するファージディスプレイライブラリー技術ないし方法）により作製された抗ＮＧＦ抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含むことができる。抗体を選択するためのファージディスプレイライブラリー技術は例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）及びＨｏｅｔ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３，３４４−３４８；米国特許第５，２２３，４０９号、５，４０３，４８４号及び５，５７１，６９８号（Ｌａｄｎｅｒら）；米国特許第５，４２７，９０８号及び５，５８０，７１７号（Ｄｏｗｅｒら）；米国特許第５，９６９，１０８号及び６，１７２，１９７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら）；並びに米国特許第５，８８５，７９３号、６，５２１，４０４号、６，５４４，７３１号、６，５５５，３１３号、６，５８２，９１５号及び６，５９３，０８１号（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら）に記載されている。抗体を産生させるためにヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニック動物を使用する方法は例えばＬｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３；Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６；米国特許第５，５４５，８０６号、５，５６９，８２５号、５，６２５，１２６号、５，６３３，４２５号、５，７８９，６５０号、５，８７７，３９７号、５，６６１，０１６号、５，８１４，３１８号、５，８７４，２９９号；及び５，７７０，４２９号（いずれもＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙ）；米国特許第５，５４５，８０７号（Ｓｕｒａｎｉら）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０３９１８号、ＷＯ９３／１２２２７号、ＷＯ９４／２５５８５号、ＷＯ９７／１３８５２号、ＷＯ９８／２４８８４号及びＷＯ９９／４５９６２号（いずれもＬｏｎｂｅｒｇとＫａｙ）；ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３４７８号（Ｉｓｈｉｄａら）；米国特許第５，９３９，５９８号、６，０７５，１８１号、６，１１４，５９８号、６，１５０，５８４号及び６，１６２，９６３号（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら）に記載されている。
【０１４３】
各種態様において、本発明の組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体とすることができる。更に、抗体は潜在性Ｔ細胞エピトープを消失させた抗体でもよい。Ｔ細胞エピトープを消失させて抗体の潜在的免疫原性を低下させる方法は従来技術に記載されている（例えばＣａｒｒらの米国特許公開第２００３０１５３０４３号参照）。
【０１４４】
本発明の抗体又は抗体部分は誘導体化又は別の機能的分子（例えば別のペプチド又は蛋白質）と連結することができる。従って、本発明の医薬組成物で使用される抗体及び抗体部分は本願に記載するＰＧ１１０抗体の誘導体化及び他の修飾形態を包含するものとする。例えば、本発明の抗体又は抗体部分は１以上の他の分子状物質（例えば別の抗体（例えば二重特異性抗体又はダイアボディ）、検出可能な物質、細胞傷害性物質、薬剤、及び／又は抗体もしくは抗体部分と別の分子（例えばストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグ）の結合に介在することが可能な蛋白質もしくはペプチドと（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有的結合又は他の方法により）機能的に連結することができる。
【０１４５】
ある種の誘導体化抗体は（例えば二重特異性抗体を作製するために同一型又は異なる型の）２以上の抗体を架橋させることにより作製される。適切な架橋剤としては、適切なスペーサーにより分離された２個の非常に反応性の基をもつヘテロ二官能性架橋剤（例えばｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）又はホモ二官能性架橋剤（例えばスベリン酸ジスクシンイミジル）が挙げられる。このようなリンカーはＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬから市販されている。
【０１４６】
本発明の抗体又は抗体部分を誘導体化することができる有用な検出可能な物質としては、蛍光化合物が挙げられる。典型的な蛍光性の検出可能な物質としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリスリン等が挙げられる。検出可能な酵素（例えばアルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等）で抗体を誘導体化してもよい。検出可能な酵素で抗体を誘導体化する場合には、検出可能な反応生成物を生成するために酵素により使用される他の試薬を添加することにより検出される。例えば、検出可能な物質として西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素とジアミノベンジジンを添加すると、検出可能な着色反応生成物が生じる。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジン結合の間接的測定により検出してもよい。
【０１４７】
ＩＶ．抗体作製
本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は抗ＮＧＦ抗体をコードする核酸分子を使用して作製することができる。核酸分子は無傷細胞中、細胞溶解液中、又は部分精製形態もしくは実質的に純粋な形態で存在することができる。核酸はアルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動及び当分野で周知の他の方法等の標準技術により他の細胞成分又は他の汚染物質（例えば他の細胞内核酸又は蛋白質）から精製される場合に「単離される」ないし「実質的に純粋にされる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照。本発明の核酸は例えばＤＮＡ又はＲＮＡとすることができ、イントロン配列を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。好ましい１態様において、核酸はｃＤＮＡ分子である。本発明の核酸は標準分子生物学技術を使用して取得することができる。
【０１４８】
１態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１１のヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされる。別の態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１４のヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされる。
【０１４９】
ＶＨセグメントとＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られたら、これらのＤＮＡ断片を標準組換えＤＮＡ技術により更に操作し、例えば可変領域が定常領域と機能的に連結されるように可変領域遺伝子から全長抗体鎖遺伝子を作製する（例えば実施例１参照）。この文脈で使用する「機能的に連結」なる用語は２つのＤＮＡ断片によりコードされるアミノ酸配列がインフレームに維持されるように２つのＤＮＡ断片を連結することを意味するものとする。
【０１５０】
本発明の医薬組成物で使用される抗体は当分野で公知の方法を使用して宿主細胞中で産生させることができる（例えばＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）。例えば、抗体を発現させるためには、遺伝子が転写及び翻訳制御配列と機能的に連結されるように重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入することができる。この文脈で「機能的に連結」なる用語は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写と翻訳を調節するというその所期機能を発揮するように抗体遺伝子をベクターにライゲーションすることを意味するものとする。発現ベクターと発現制御配列は使用する発現宿主細胞と適合可能になるように選択される。抗体軽鎖遺伝子と抗体重鎖遺伝子を別々のベクターに挿入することもできるが、より典型的には両方の遺伝子を同一の発現ベクターに挿入する。抗体遺伝子は標準方法（例えば抗体遺伝子断片とベクター上の相補的制限部位のライゲーション、又は制限部位が存在しない場合には平滑末端ライゲーション）により発現ベクターに挿入される。更に、組換え発現ベクターは宿主細胞から抗体鎖を分泌し易くするシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端とインフレームに連結されるように抗体鎖遺伝子をベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（即ち非免疫グロブリン蛋白質に由来するシグナルペプチド）とすることができる。
【０１５１】
抗体鎖遺伝子に加え、組換え発現ベクターは典型的には宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列をもつ。「調節配列」なる用語はプロモーター、エンハンサー及び抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を制御する他の発現制御エレメント（例えばポリアデニル化シグナル）を包含するものとする。このような調節配列は例えばＧｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０））に記載されている。当業者に自明の通り、調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は形質転換させようとする宿主細胞の選択、所望の蛋白質発現レベル等の因子に依存し得る。哺乳動物宿主細胞発現に好ましい調節配列としては、哺乳動物細胞で高レベルの蛋白質発現を誘導するウイルスエレメント（例えばサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサー）が挙げられる。あるいは、非ウイルス調節配列（例えばユビキチンプロモーター又はβ−グロビンプロモーター）を使用してもよい。更に、異なる起源に由来する配列から構成される調節エレメントも挙げられる（例えばＳＶ４０初期プロモーターとヒトＴ細胞白血病ウイルスタイプ１のＬＴＲ配列に由来する配列を含むＳＲαプロモーターシステム（Ｔａｋｅｂｅ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６−４７２））。
【０１５２】
抗体鎖遺伝子と調節配列に加え、組換え発現ベクターは他の配列（例えば宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば複製起点）及び選択マーカー遺伝子）を含むことができる。選択マーカー遺伝子はベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えばいずれもＡｘｅｌらの米国特許第４，３９９，２１６号、４，６３４，６６５号及び５，１７９，０１７号参照）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子はベクターが導入された宿主細胞に薬剤（例えばＧ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキサート）に対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ−宿主細胞でメトトレキサート選択／増幅に使用）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択に使用）が挙げられる。
【０１５３】
軽鎖と重鎖を発現させるためには、重鎖と軽鎖をコードする発現ベクターを標準技術により宿主細胞にトランスフェクトする。各種語形の「トランスフェクション」なる用語は外来ＤＮＡを原核又は真核宿主細胞に導入するために広く使用されている多様な技術を包含するものとし、例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション等が挙げられる。理論的には原核宿主細胞でも真核宿主細胞でも抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞、特に哺乳動物細胞は原核細胞よりも正しく折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組立てて分泌する可能性が高いため、真核細胞、最も好ましくは哺乳動物宿主細胞で抗体を発現させることが最も好ましい。抗体遺伝子の原核細胞発現は活性な抗体の高収率産生には無効であると報告されている（Ｂｏｓｓ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，Ｃ．Ｒ．（１９８５）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ６：１２−１３）。
【０１５４】
本発明の組換え抗体を発現させるために好ましい哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載されており、例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているようにＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯミエローマ細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が挙げられる。別の好ましい発現システムはＷＯ８７／０４４６２（Ｗｉｌｓｏｎ）、ＷＯ８９／０１０３６（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ）及びＥＰ  ３３８，８４１（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ）に開示されているＧＳ遺伝子発現システムである。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合には、宿主細胞で抗体を発現させるため、又はより好ましくは宿主細胞を増殖させる培地に抗体を分泌させるために十分な時間にわたって宿主細胞を培養することにより抗体を産生させる。標準蛋白質精製法を使用して抗体を培地から回収することができる。
【０１５５】
１態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は発現ベクターを使用して作製され、ベクターは抗体重鎖をコードする配列番号１１のヌクレオチド配列と、抗体軽鎖をコードする配列番号１４のヌクレオチド配列を含む。好ましい発現ベクターはＧＳ（グルタミンシンテターゼ）遺伝子を含む。別の好ましい態様において、本発明の好ましい宿主細胞はＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞である。
【０１５６】
更に別の好ましい態様において、本発明の医薬組成物で使用される抗ＮＧＦ抗体は配列番号１１によりコードされる重鎖と配列番号１４によりコードされる軽鎖を含む抗ＮＧＦ抗体が発現されるように、（抗体重鎖をコードする）配列番号１１のヌクレオチド配列と（抗体軽鎖をコードする）配列番号１４のヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養することにより産生される。
【０１５７】
Ｖ．投与方法
本発明の医薬組成物は当分野で公知の各種方法により投与することができる。当業者に自明の通り、投与経路及び／又は方法は所望結果により異なる。一般に、本発明の医薬組成物は静脈内、関節内、皮下、筋肉内、非経口、腫瘍内、鼻腔内、膀胱内、滑膜内、経口、粘膜、舌下、脊髄もしくは表皮投与又は体腔（例えば腹腔、胸腔、副鼻腔）への点滴による投与に適している。所定の好ましい態様において、本発明の医薬組成物は静脈内、（例えばペン型注入器による）皮下又は関節内投与に適している。
【０１５８】
本発明の医薬組成物は単独で投与してもよいし、併用療法で投与してもよく、即ち他の薬剤と併用してもよい。例えば、併用療法は本発明の組成物と、少なくとも１種以上の他の薬剤を含むことができる。例えば、少なくとも１種以上の他の薬剤を別に投与してもよいし、組成物に配合してもよい。好ましい１態様では、抗ＮＧＦ抗体又はその抗原結合断片を含有する本発明の医薬組成物を第２の薬剤と併用投与し、第２の薬剤はＮＳＡＩＤ、鎮痛薬（オピオイド鎮痛薬及び非定型鎮痛薬を含む）、局所麻酔薬、神経ブロック、フェノールブロック、治療用抗体、ステロイド、抗痙攣薬、抗鬱薬、局所カプサイシン及び抗ウイルス薬から構成される群から選択される。疼痛緩和に使用するのに特に好ましい類の第２の薬剤はオピオイド鎮痛薬である。上記に加え、又は上記の代わりに、例えば疼痛緩和において第２の治療レジメンを本発明の抗体と併用することができる。このような第２の治療レジメンの例としては、放射線療法（例えば癌性疼痛）、外科処置（例えば三叉神経痛のガッセル神経節及びガッセル神経節後根侵襲（穿刺）処置）、催眠法及び鍼治療が挙げられる。
【０１５９】
ＮＳＡＩＤの例としては、アセチル化サリチル酸系（例えばアスピリン）；非アセチル化サリチル酸系（例えばサルサレート、ジフルニサル）；酢酸系（例えばエトドラク、ジクロフェナク、インドメタシン、ケトロラック、ナブメトン）；プロピオン酸系（例えばフェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン）；フェナム酸系（例えばメクロフェナム酸、メフェナム酸）；フェニルブタゾン、ピロキシカム；ＣＯＸ−２阻害剤（例えばセレコキシブ、エトリコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブ、ルミラコキシブ）が挙げられる。鎮痛薬の例としては、パラセタモール（アセトアミノフェン）、トラマドール、タペンタドール、カプサイシン（局所）、オピオイド鎮痛薬及び非定型鎮痛薬が挙げられる。オピオイド鎮痛薬の例としては、モルヒネ、コデイン、テバイン、ヒドロモルホン、ヒドロコドン、オキシコドン、オキシモルホン、デソモルヒネ、ジアセチルモルヒネ、ニコモルヒネ、ジプロパノイルモルヒネ、ベンジルモルヒネ、エチルモルヒネ、フェンタニル、ペチジン、メタドン、トラマドール及びプロポキシフェンが挙げられる。非定型鎮痛薬の例としては、三環系抗鬱薬、カルバゼピン、ガバペンチン、プレガバリン、デュロキセチン及びカフェインが挙げられる。ステロイドの例としては、関節内コルチコステロイド（ＩＡＣ）及びプレドニゾンが挙げられる。治療用抗体の例としては、抗ＴＮＦ抗体（例えばＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）及びＨｕｍｉｒａ（登録商標））と、抗ＣＤ２０抗体（例えばＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）及びＡｒｚｅｒｒａ（登録商標））が挙げられる。抗ウイルス薬の例としてはアシクロビル及びリン酸オセルタミビル（Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標））が挙げられる。
【０１６０】
好ましい１態様において、併用療法は本発明の抗ＮＧＦ抗体医薬組成物と少なくとも１種以上のＴｒｋＡ阻害剤（例えばＴｒｋＡ活性を阻害する化合物）を含むことができる。ＴｒｋＡ阻害剤は例えばＴｒｋＡ受容体と細胞外相互作用することにより、又はＴｒｋＡシグナル伝達機構と細胞内相互作用すること（例えばＴｒｋＡキナーゼ活性の阻害）により機能することができる。細胞外ＴｒｋＡ阻害剤の非限定的な例としては、抗ＴｒｋＡ抗体（例えば米国特許公開第２００９０２０８４９０号及び米国特許公開第２００９０３００７８０号に記載されているヒト化抗ＴｒｋＡ抗体）や、（Ｄｅｂｅｉｒ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：４０６７−４０７２に記載されているような）ＴｒｋＡを阻害するＮＧＦペプチドミメティクスが挙げられる。細胞内ＴｒｋＡ阻害剤の非限定的な例としては、（例えばＨｉｒｏｓｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１０６：１０７−１１３；Ｕｅｄａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，Ｍａｒｃｈ  ３０，２０１０発行に記載されているような）ＴｒｋＡ機能を阻害する細胞透過性ペプチドや、（例えばＷｏｏｄ，Ｅ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４：９５３−９５７；Ｔｒｉｐａｔｈｙ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１８：３５５１−３５５５に記載されているような）ＴｒｋＡキナーゼ阻害剤等の低分子阻害剤が挙げられる。ＴｒｋＡ阻害剤の他の非限定的な例としては、ＡＲＲＹ−４７０及びＡＲＲＹ−８７２（Ａｒｒａｙ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）が挙げられる。
【０１６１】
別の好ましい態様において、併用療法は本発明の抗ＮＧＦ抗体組成物と少なくとも１種以上のプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤（例えばＰＫＣ活性を阻害する化合物）を含むことができる。
【０１６２】
本発明の医薬組成物の滅菌注射用製剤は活性化合物に必要に応じて上記成分（例えば緩衝液、添加剤等）の１種又は組合せと配合した後、滅菌微量濾過することにより製造することができる。一般に、塩基性分散媒と上記に挙げた成分のうちで必要な他の成分を含有する滅菌担体に活性化合物を配合することにより分散液を製造する。滅菌注射溶液の調製用滅菌粉末の場合には、好ましい製造方法は予め滅菌濾過したその溶液から活性成分と他の全所望成分の粉末を得る真空乾燥法とフリーズドライ法（凍結乾燥）である。
【０１６３】
製剤は用量単位形態にすると好都合であり、製薬分野で公知の任意方法により製造することができる。本願で使用する用量単位形態とは、治療する対象に単位用量として適切な物理的に分離した単位を意味し、各単位は所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
【０１６４】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは患者に有害にならずに特定の患者、組成物及び投与方法に所望の治療応答を達成するために有効な活性成分の量が得られるように変動させることができる。選択される用量レベルは利用される本発明の特定組成物又はそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、利用される特定化合物の排泄速度、治療期間、利用される特定組成物と併用される他の薬剤、化合物及び／又は材料、治療する患者の年齢、性別、体重、体調、全身健康状態及び病歴、並びに医療分野で周知の他の因子を含む各種薬物動態因子により異なる。通常の知識をもつ医師又は獣医であれば、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医は所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低レベルから医薬組成物中で利用される本発明の化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで用量を漸増することができる。一般に、本発明の組成物の適切な１日用量は治療効果を生じるために有効な最低用量に相当する化合物の量となろう。このような有効用量は一般に上記因子に依存するであろう。
【０１６５】
１態様において、本発明の組成物の有効量はＮＧＦ活性が有害となる障害に罹患した対象におけるＮＧＦ活性を阻害する量である。１態様において、組成物は１回の注射当たり抗体１００ｍｇの有効用量を提供する。別の態様において、組成物は抗体約０．１〜約１００ｍｇの範囲の有効用量を提供する。所望により、医薬組成物の１日有効用量を２回、３回、４回、５回、６回又は７回以上に分け、１日の間に適切な間隔で場合により単位用量形態で投与してもよい。
【０１６６】
本発明の１態様において、組成物中の抗体の用量は約５〜約１５０ｍｇである。別の態様において、組成物中の抗体の用量は約２５〜約１００ｍｇである。別の態様において、組成物中の抗体の用量は約４０〜約８０ｍｇである。別の態様において、組成物中の抗体の用量は約５０〜約１００ｍｇである。別の態様において、組成物中の抗体の用量は約０．１〜約１００ｍｇ、約０．５〜７５ｍｇ、約１．０〜６０ｍｇ、約５〜４０ｍｇ、約１０〜３０ｍｇ、又は約１０〜２０ｍｇである。組成物は１０ｍｇを上回る高い抗体用量に特に適している。本発明の特定態様において、組成物は約１０ｍｇ又は約２０ｍｇの用量の抗体を提供する。別の態様において、組成物は約８０ｍｇ又は約１００ｍｇの用量の抗体を提供する。
【０１６７】
本発明の１態様において、組成物中の抗体の用量は約０．１〜約１５０ｍｇ、１〜約１５０ｍｇ、約５〜約１４５ｍｇ、約１０〜約１４０ｍｇ、約１５  １３５ｍｇ、約２０〜約１３０ｍｇ、約２５〜約１２５ｍｇ、約３０〜約１２０ｍｇ、約３５〜約１１５ｍｇ、約４０〜約１１０ｍｇ、約４５〜約１０５ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約５５〜約９５ｍｇ、約６０〜約９０ｍｇ、約６５〜約８５ｍｇ、約７０〜約８０ｍｇ、又は約７５ｍｇである。１態様において、抗体の用量は１０ｍｇである。１態様において、抗体の用量は２０ｍｇである。上記用量の中間の範囲（例えば約２〜約１４９ｍｇ）も本発明に含むものとする。例えば、上記数値のいずれかの組合せを上限及び／又は下限として使用する数値範囲も含むものとする。
【０１６８】
特定の投与経路では、用途に合わせて適切な送達装置を選択することができる。例えば、皮下又は筋肉内投与には、ペン型注入器（例えば自己注射できるもの）を使用することができる。このようなペン型注入器（別称注射器）は当分野で公知であり、１回分の液体抗体を収容するもの（例えばＰＣＴ公開ＷＯ２００８／００５３１５に記載されているもの）が挙げられる。また、皮下投与には、皮下インプラントを使用することができる。更に、局所経皮（皮膚）パッチ（例えば接着パッチ）の使用により経皮送達を行うことができる。ドライパウダーの注射により経皮投与を行うこともできる（例えばＧｌｉｄｅ  Ｐｈａｒｍａから市販されている注射器）。更に、（例えば喘息又は難治性嗽咳の治療における）肺送達には、例えばインヘラー又はネブライザーと、噴射剤を含有する組成物の使用により、肺投与を利用することができる。例えば米国特許第６，０１９，９６８号、５，９８５，３２０号、５，９８５，３０９号、５，９３４，２７２号、５，８７４，０６４号、５，８５５，９１３号、５，２９０，５４０号及び４，８８０，０７８号、並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、ＷＯ９７／３２５７２号、ＷＯ９７／４４０１３号、ＷＯ９８／３１３４６号及びＷＯ９９／６６９０３号参照。
【０１６９】
好ましい１態様において、本発明の治療用組成物は米国特許第５，３９９，１６３号、５，３８３，８５１号、５，３１２，３３５号、５，０６４，４１３号、４，９４１，８８０号、４，７９０，８２４号又は４，５９６，５５６号に開示されている装置等の無針皮下注射装置を使用して投与することができる。本発明で有用な周知インプラント及びモジュールの例としては、制御された速度で医薬を分配するための埋込型微量輸液ポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して医薬を投与するための治療装置を開示している米国特許第４，４８６，１９４号；正確な輸液速度で医薬を送達するための投薬輸液ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号；連続薬剤送達用可変流量埋込型輸液装置を開示している米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬剤送達システムを開示している米国特許第４，４３９，１９６号；及び浸透圧薬剤送達システムを開示している米国特許第４，４７５，１９６号が挙げられる。多くの他のこのようなインプラント、送達システム及びモジュールも当業者に公知である。
【０１７０】
所定態様において、本発明の医薬組成物は更に適正なインビボ分配を確保するように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は多くの親水性の高い化合物を排除する。本発明の治療用化合物が（所望により）ＢＢＢを通過できるようにするためには、例えばリポソームとして製剤化することができる。リポソームの製造方法については、例えば米国特許第４，５２２，８１１号、５，３７４，５４８号及び５，３９９，３３１号参照。リポソームは特定細胞又は臓器に選択的に輸送される１以上の部分を収容することができ、従って、標的薬剤送達を強化することができる（例えばＶ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５参照）。典型的な標的送達部分としては、葉酸又はビオチン（例えばＬｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；異なる種に本発明の製剤及び本発明の分子の成分を含むことができるサーファクタント蛋白質Ａ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられる。更に、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照。
【０１７１】
最適な所望の応答（例えば治療応答）を提供するように投与レジメンを調整する。例えば、単回ボーラスを投与してもよいし、時間をかけて数回に分けて投与してもよいし、治療状況の要件に応じて用量を比例的に増減してもよい。（以下に詳述する投与スケジュールで投与することができる）典型的な１回当たりの用量は本願に記載する因子に応じて約０．１μｇ／ｋｇから１μｇ／ｋｇまで、３μｇ／ｋｇまで、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３０００μｇ／ｋｇ（３ｍｇ／ｋｇ）まで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、又はそれ以上までのいずれかの範囲とすることができる。例えば、約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ又は約３ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体を投与することができる。好ましい１態様では、抗ＮＧＦ抗体を約３μｇ／ｋｇ〜約３０００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。別の好ましい態様では、抗ＮＧＦ抗体を１００μｇ／ｋｇの用量で投与する。別の好ましい態様では、抗ＮＧＦ抗体を２００μｇ／ｋｇの用量で投与する。別の好ましい態様では、抗ＮＧＦ抗体を３００μｇ／ｋｇの用量で投与する。別の好ましい態様では、抗ＮＧＦ抗体を４００μｇ／ｋｇの用量で投与する。
【０１７２】
体調に応じて数日間、数週間又は数カ月間以上の反復投与には、症状の所望の抑制が生じるまで又は（例えば疼痛を軽減するために）十分な治療レベルを達成するまで治療を持続する。典型的な投与レジメンは約３μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇの範囲の用量の抗ＮＧＦ抗体を初期投与後、約３μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇを毎月持続投与する。別の態様では、約２００μｇ／ｋｇの用量を１カ月に１回投与する。更に別の態様では、約４００μｇ／ｋｇの用量を２カ月に１回投与する。他方、医師が達成したいと望む薬物動態パターンに応じて他の投与レジメンが有用な場合もある。例えば、所定態様では、１週間に１回〜４回の投与が考えられる。しかし、抗ＮＧＦ抗体は疼痛緩和期間が長いため、投与頻度を減らすことができる。所定態様では、抗ＮＧＦ抗体を１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１５週間に１回、２０週間に１回、２５週間に１回、２６週間に１回又はそれ以上の間隔で投与する。所定態様では、抗ＮＧＦ抗体を１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回、６カ月に１回又はそれ以上の間隔で投与する。
【０１７３】
好ましい１態様において、抗ＮＧＦ抗体はＰＧ１１０抗体又はその抗原結合断片であり、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは０．１５ｍｇ／ｋｇの用量で１２週間に１回（例えばヒトに）静脈内投与する。別の好ましい態様では、抗ＮＧＦ抗体を０．２ｍｇ／ｋｇ〜０．４ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは０．３ｍｇ／ｋｇの用量で１２週間に１回（例えばヒトに）皮下投与する。更に他の態様では、ＰＧ１１０又はその断片を０．１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。
【０１７４】
投与し易さと投与量を均一にするために非経口組成物を用量単位形態に製剤化すると特に有利である。本願で使用する用量単位形態とは、治療する対象に単位用量として適切な物理的に分離した単位を意味し、各単位は所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を必要な医薬担体と共に含有する。本発明の用量単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴と達成しようとする特定の治療効果、及び（ｂ）個体における過敏の治療用にこのような活性化合物を調合する分野で固有の問題により決定され、これらに直接依存する。例えば、用量単位形態の非限定的な例としては、０．２ｍｇ（約７０ｋｇのヒトでは３μｇ／ｋｇの用量に対応）、２ｍｇ（約７０ｋｇのヒトでは３０μｇ／ｋｇの用量に対応）及び７ｍｇ（約７０ｋｇのヒトでは１００μｇ／ｋｇの用量に対応）が挙げられる。
【０１７５】
Ｖ．使用方法
本発明は保存寿命が長く、１態様ではＮＧＦ活性が有害となる障害に罹患した対象におけるＮＧＦ活性を阻害するために使用される安定な高濃度組成物を提供する。方法は一般に対象におけるＮＧＦ活性を低下又は抑制させるように本発明の組成物を対象に投与する段階を含む。好ましくは、ＮＧＦはヒトＮＧＦであり、対象はヒト対象である。あるいは、対象は本発明の抗体が交差反応するＮＧＦを発現する哺乳動物とすることができる。更に、対象は（例えばｈＮＧＦの投与又はｈＮＧＦトランスジーンの発現により）ｈＮＧＦが導入された哺乳動物とすることができる。更に、獣医学的目的又はヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＮＧＦを発現する非ヒト哺乳動物（例えば霊長類、ブタ又はマウス）に本発明の組成物を投与することもできる。後者に関して、このような動物モデルは本発明の抗体の治療効力を評価するため（例えば用量及び投与期間の試験）に有用であると思われる。
【０１７６】
本発明の組成物は治療又は予防目的でヒト対象に投与することができる。従って、別の側面において、本発明は対象におけるＮＧＦ関連疾患又は病態の治療（例えば緩和又は抑制）方法を提供し、前記方法は本発明の医薬組成物を対象に投与する段階を含む。好ましくは、抗ＮＧＦ抗体は疼痛（例えば疼痛の発生又は持続が少なくとも部分的にＮＧＦに介在される疾患又は病態に伴う疼痛）を軽減又は緩和するために使用される。ＮＧＦ関連疾患又は病態の非限定的な例としては、炎症性疼痛、外科処置後疼痛、術後疼痛（歯痛を含む）、神経障害性疼痛、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、骨折痛、通風性関節痛、ヘルペス後神経痛、癌性疼痛、変形性関節症性又は関節リウマチ性疼痛、坐骨神経痛、鎌状赤血球クリーゼに伴う疼痛、頭痛（例えば偏頭痛、緊張型頭痛、群発頭痛）、月経困難症、子宮内膜症、子宮筋腫、筋骨格系疼痛、慢性腰痛、線維筋痛症、捻挫、内臓痛、卵巣嚢胞、前立腺炎、慢性骨盤痛症候群、膀胱炎、間質性膀胱炎、有痛性膀胱症候群及び／又は膀胱痛症候群、慢性無菌性前立腺炎に伴う疼痛、切開による疼痛、偏頭痛、三叉神経痛、熱傷及び／又は創傷による疼痛、外傷に伴う疼痛、筋骨格系疾患に伴う疼痛、強直性脊椎炎、関節周囲病変、骨転移による疼痛、ＨＩＶによる疼痛、肢端紅痛症又は膵炎もしくは腎臓結石に起因する疼痛、悪性メラノーマ、シェーグレン症候群、喘息（例えば重度気道過敏症を伴うコントロール不良な喘息）、難治性咳嗽、脱髄疾患、慢性アルコール依存症、脳卒中、視床痛症候群、毒素による疼痛、化学療法による疼痛、線維筋痛症、炎症性腸障害、過敏性腸症候群、炎症性眼障害、炎症性又は不安定性膀胱障害、乾癬、炎症性要素を伴う皮膚疾患、日光皮膚炎、心炎、皮膚炎、筋炎、神経炎、膠原病、慢性炎症性疾患、炎症性疼痛とそれに伴う痛覚過敏及びアロディニア、神経障害性疼痛とそれに伴う痛覚過敏又はアロディニア、糖尿病性神経障害性疼痛、カウザルギー、交感神経性持続疼痛、求心路遮断性疼痛症候群、上皮組織損傷又は機能障害、呼吸器、泌尿生殖器、胃腸又は血管領域における内臓運動障害、アレルギー性皮膚反応、痒み、白斑、一般胃腸障害、大腸炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、血管運動性又はアレルギー性鼻炎、気管支障害、消化不良、胃食道逆流症、膵炎、並びに内臓痛が挙げられる。
【０１７７】
更に、ＮＧＦは前立腺癌、甲状腺癌、肺癌、プロラクチノーマ及びメラノーマ等の癌の増殖にも関係があるとされている。従って、別の態様において、本発明の医薬組成物を使用して治療することができるＮＧＦ関連疾患又は病態は癌、好ましくは前立腺癌、甲状腺癌、肺癌、プロラクチノーマ又はメラノーマである。従って、別の態様において、本発明は対象における癌、好ましくは前立腺癌、甲状腺癌、肺癌、プロラクチノーマ又はメラノーマの治療方法として、本発明の医薬組成物を対象に投与する段階を含む方法も提供する。
【０１７８】
更に別の態様において、ＮＧＦ関連疾患又は病態はＨＩＶ／ＡＩＤＳとすることができる。本発明の抗ＮＧＦ抗体を使用してＮＧＦを遮断すると、ＨＩＶに感染したマクロファージを遮断し、従って、ＨＩＶ／ＡＩＤＳを治療することができる。従って、別の態様において、本発明は対象におけるＨＩＶ／ＡＩＤＳの治療方法として、本発明の医薬組成物を対象に投与する段階を含む方法も提供する。
【０１７９】
本発明の方法により治療するのに特に好ましい疾患及び病態としては、炎症性疼痛（特に変形性関節症性又は関節リウマチ性疼痛）、筋骨格系疼痛（特に慢性腰痛）、癌性疼痛、神経障害性疼痛（特に糖尿病性神経障害性疼痛）、骨転移による疼痛、間質性膀胱炎／有痛性膀胱症候群、慢性無菌性前立腺炎に伴う疼痛、子宮内膜症及び／又は子宮筋腫による疼痛、並びに術後疼痛が挙げられる。
【０１８０】
子宮内膜症及び／又は子宮筋腫に伴う疼痛及び／又は他の症状としては、月経困難症；慢性非月経骨盤痛；性交疼痛症；排便困難症；月経過多症；下腹部痛又は腰痛；不妊症及び妊娠率低下；排尿困難；下腹部膨満感及び排尿痛；悪心、嘔吐及び／又は下痢が挙げられる。症状としては、子宮内膜病変又は腹腔外に位置する線維腫に関連する症状も挙げられ、例えば喀血、気胸又は血胸として発現する子宮内膜症胸部症候群や、呼吸困難及び肺腫瘤として発現する肺平滑筋腫が挙げられる。
【０１８１】
特に好ましい態様において、本発明の医薬組成物は疼痛を治療するために使用される。好ましくは、治療される疼痛の種類は変形性関節症性疼痛、慢性腰痛、糖尿病性神経障害性疼痛、癌性疼痛並びに子宮内膜症性及び／又は子宮筋腫性疼痛から構成される群から選択される。従って、好ましい１態様において、本発明は対象における疼痛の治療方法として、対象における疼痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。好ましくは、疼痛は変形性関節症性疼痛、慢性腰痛、糖尿病性神経障害性疼痛、癌性疼痛並びに子宮内膜症性及び／又は子宮筋腫性疼痛から構成される群から選択される。従って、１態様において、本発明は対象における変形性関節症性疼痛の治療方法として、対象における変形性関節症性疼痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。別の態様において、本発明は対象における慢性腰痛の治療方法として、対象における慢性腰痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。更に別の態様において、本発明は対象における糖尿病性神経障害性疼痛の治療方法として、対象における糖尿病性神経障害性疼痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。更に別の態様において、本発明は対象における癌性疼痛の治療方法として、対象における癌性疼痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。更に別の態様において、本発明は対象における子宮内膜症性及び／又は子宮筋腫性疼痛の治療方法として、対象における子宮内膜症性及び／又は子宮筋腫性疼痛を治療するように本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法を提供する。
【０１８２】
好ましい１態様において、本発明の医薬組成物は配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗ＮＧＦ抗体を含有しており、抗体を長期間投与する対象において疼痛を緩和する。例えば、１態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１週間〜約１２週間（又は少なくとも１週間〜１２週間）にわたって疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１週間（又は少なくとも１週間）にわたって疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約２週間（又は少なくとも２週間）にわたって疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約４週間（又は少なくとも４週間）にわたって疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約８週間（又は少なくとも８週間）にわたって疼痛を緩和する。別の態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約１２週間（又は少なくとも１２週間）にわたって疼痛を緩和する。１態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約４週間〜約１２週間（又は４週間〜１２週間）にわたって疼痛を緩和する。１態様において、抗体は対象に抗ＮＧＦ抗体の単回投与後に少なくとも約８週間〜約１２週間（又は８週間〜１２週間）にわたって疼痛を緩和する。
【０１８３】
別の態様において、本発明の医薬組成物は第２の薬剤又は第２の治療レジメンと共に投与される。抗体と第２の薬剤又は抗体と第２の治療レジメンは同時に投与又は実施してもよいし、あるいは、先ず抗体を投与した後に第２の薬剤又は第２のレジメンを投与又は実施してもよいし、先ず第２の薬剤又はレジメンを投与又は実施した後に抗体を投与してもよい。適切な第２の薬剤と第２の治療レジメンの非限定的な例は医薬組成物に関する上記セクションに記載した通りである。本発明の抗体と併用するのに特に好ましい第２の薬剤はオピオイド鎮痛薬である。本発明の抗体と併用するのに好ましい他の第２の薬剤はＴｒｋＡ阻害剤（例えば医薬組成物に関するセクションに詳述したような細胞外ＴｒｋＡ阻害剤又は細胞内ＴｒｋＡ阻害剤）とプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤である。
【０１８４】
更に別の側面において、本発明は対象におけるリバウンド作用を避けるように対象における神経成長因子（ＮＧＦ）関連疾患又は病態を緩和又は抑制する方法を提供し、前記方法はヒトＩｇＧ４定常領域を含む抗ＮＧＦ抗体を含有する本発明の医薬組成物を対象に投与する段階を含み、ヒトＩｇＧ４定常領域は突然変異（好ましくはヒンジ部突然変異）を含み、抗体はカニクイザルにおける終末相消失半減期が少なくとも１５日間である。別の態様において、抗体はカニクイザルにおける終末相消失半減期が約１５日間〜約２２日間（又は１５〜２２日間）、又は約１５日間〜約２８日間（又は１５〜２８日間）、又は約２１日間〜約２８日間（又は２１〜２８日間）である。別の態様において、抗体はラットにおける終末相消失半減期が少なくとも８日間である。更に別の態様において、抗体はヒトにおける平均終末相消失半減期が少なくとも１０〜３０日間（又は少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも４０日間、あるいは約１０日間〜約４０日間、もしくは１０〜４０日間、又は約１５〜約３０日間、もしくは１５〜３０日間）である。好ましい突然変異としては、上記に詳述したものが挙げられる。好ましい抗体としては上記に詳述した配列及び／又は機能的性質をもつ抗ＮＧＦ抗体が挙げられる。
【０１８５】
ＶＩ．製品
本発明の液体医薬組成物を収容するペン型自己注射器、プレフィルドシリンジ又は無針投与装置も本発明の範囲に含まれる。１態様において、本発明は１００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＮＧＦ抗体又はその抗原結合部分を含有する組成物の１回量を収容する送達装置に関し、例えばペン型自己注射器又はプレフィルドシリンジは約１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、５０ｍｇ、５１ｍｇ、５２ｍｇ、５３ｍｇ、５４ｍｇ、５５ｍｇ、５６ｍｇ、５７ｍｇ、５８ｍｇ、５９ｍｇ、６０ｍｇ、６１ｍｇ、６２ｍｇ、６３ｍｇ、６４ｍｇ、６５ｍｇ、６６ｍｇ、６７ｍｇ、６８ｍｇ、６９ｍｇ、７０ｍｇ、７１ｍｇ、７２ｍｇ、７３ｍｇ、７４ｍｇ、７５ｍｇ、７６ｍｇ、７７ｍｇ、７８ｍｇ、７９ｍｇ、８０ｍｇ、８１ｍｇ、８２ｍｇ、８３ｍｇ、８４ｍｇ、８５ｍｇ、８６ｍｇ、８７ｍｇ、８８ｍｇ、８９ｍｇ、９０ｍｇ、９１ｍｇ、９２ｍｇ、９３ｍｇ、９４ｍｇ、９５ｍｇ、９６ｍｇ、９７ｍｇ、９８ｍｇ、９９ｍｇ、１００ｍｇ、１０１ｍｇ、１０２ｍｇ、１０３ｍｇ、１０４ｍｇ又は１０５ｍｇの組成物の１回量を収容する。
【０１８６】
液体又は凍結乾燥形態の本発明の医薬組成物を含み、場合によりＮＧＦ関連疾患又は病態の治療における使用説明書を含むキットも本発明の範囲に含まれる。キットはキットの内容物の所期用途を指示するラベルを含むことができる。ラベルなる用語はキットに添付もしくは同梱、又は他の方法でキットに付属される任意文書、販売資料又は記録資料を包含する。
【０１８７】
例えば、本発明はキット又は製品の内側に包装された本発明の包装医薬組成物も提供する。本発明のキット又は製品は対象におけるＮＧＦ関連疾患又は病態の治療（予防、治療及び／又は診断を含む）に有用な資料を含む。好ましい態様において、ＮＧＦ関連疾患又は病態は炎症性疼痛（特に変形性関節症性又は関節リウマチ性疼痛）、筋骨格系疼痛（特に慢性腰痛）、神経障害性疼痛（特に糖尿病性神経障害性疼痛）、癌性疼痛（特に骨転移による疼痛）、子宮内膜症及び／又は子宮筋腫に伴う疼痛、並びに術後疼痛である。キット又は製品は容器を含み、本願に記載するＮＧＦ関連疾患又は病態の治療における抗ＮＧＦ抗体（例えばＰＧ１１０）の使用に関する情報を提供するラベル又は添付文書又は印刷物を容器に添付又は付属させたものである。
【０１８８】
キット又は製品とは、ＮＧＦ関連疾患又は病態の治療のために本発明の医薬組成物と併用投与するコンポーネントを含む包装製品を意味する。キットは好ましくはキットのコンポーネントを保持するボックス又は容器を含み、更に医薬組成物の投与プロトコル及び／又は「添付文書」を含むことができる。ボックス又は容器は好ましくはプラスチック、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン又はプロピレン容器の内側に収容された本発明のコンポーネントを保持する。例えば、本発明の医薬組成物に適した容器としては、例えばボトル、バイアル、シリンジ、ペン等が挙げられる。
【０１８９】
「添付文書」なる用語は治療用製品の市販パッケージに慣例的に含まれる説明書であり、このような治療用製品の使用に関して適応症、用途、使用量、投与、禁忌及び／又は注意事項に関する情報を記載したものを意味するために使用される。１態様において、本発明の添付文書は治療用に本発明の医薬組成物を投与しようとする対象（例えば購入者）を含む読者に、本発明の医薬組成物が本願に記載するＮＧＦ関連疾患又は病態の治療に指定されていることを知らせる。１態様において、添付文書は疼痛緩和を含む本発明の医薬組成物の所定の治療効果について記載する。別の態様において、添付文書は本発明の医薬組成物中の抗ＮＧＦの使用量に関する記載を含むことができる。別の態様において、添付文書は本発明の医薬組成物の投与経路及び頻度に関する記載を含むことができる。別の態様において、本発明の添付文書は本発明の医薬組成物を摂取する対象に安全性と効力の両方の目的での併用に関する情報を提供することもできる。例えば、所定態様において、キットは更に別の治療剤を含有する第２の医薬組成物を含み、ＮＧＦ関連疾患又は病態の治療用としての両方の治療剤の投与説明書を同梱又は並行宣伝する。本発明のキットを使用して治療するのに特に好ましい疾患及び病態としては、炎症性疼痛（特に変形性関節症性又は関節リウマチ性疼痛）、筋骨格系疼痛（特に慢性腰痛）、神経障害性疼痛（特に糖尿病性神経障害）、癌性疼痛及び骨転移による疼痛、子宮内膜症及び／又は子宮筋腫に伴う疼痛、並びに術後疼痛が挙げられる。
【０１９０】
本発明の他の態様を以下の実施例に記載するが、これらの実施例は限定的であると解釈すべきでない。本願の随所に引用する配列表、図面並びに全参考文献、特許及び公開特許出願の内容は特に本願に援用する。
【０１９１】
以下の実施例はＰＧ１１０の適切な製剤を開発するために溶液ｐＨ、凍結−解凍、ＰＧ１１０蛋白質濃度、並びに各種緩衝液及び添加剤がＰＧ１１０の物理的及び化学的安定性に及ぼす影響を試験するために実施した実験について詳細に記載する。
【０１９２】
溶液中のＰＧ１１０の安定性を評価及びモニターするために実施した実験では以下の分析方法を使用した。
【０１９３】
一般方法
一般品質パラメーター（例えばｐＨ）、物理的安定性のパラメーター（例えば透明度、色、粒子汚染及び純度）、並びに化学的安定性のパラメーターとして脱アミド化、酸化、一般化学的安定性及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）についてＰＧ１１０製剤を試験した。典型的な試験としては、可視粒状物汚染試験、肉眼で見えない粒子の光遮断粒子計数試験、及び純度試験（例えばサイズ排除ＨＰＬＣ及びイメージングキャピラリー等電点電気泳動法）を実施した。
【０１９４】
目視検査により粒状物汚染（例えば可視粒子）を判定した。米国薬局方（ＵＳＰ）による光遮断法により肉眼で見えない粒子をモニターした。更に、断片と凝集物の検出を可能にするＳＥＣにより製剤の物理化学的安定性を評価した。
【０１９５】
化学的安定性をモニターするために、サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）（製剤試料中の断片及び加水分解の検出用）とｉｃＩＥＦ（イメージングキャピラリー等電点電気泳動法）を実施した。
【０１９６】
ｉｃＩＥＦ法
ＰｒｉｎＣＥオートサンプラーを接続したｉＣＥ２８０イメージングｃＩＥＦシステム（Ｃｏｖｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してｉｃＩＥＦ分析を実施した。下表１はｉｃＩＥＦ分析に使用した試薬と材料の一覧である。
【０１９７】
【表１】
2013522313.tif 000003
【０１９８】
製造業者の指示に従ってｉＣＥ２８０装置を操作した。夫々のバイアルに新鮮な陽極液と陰極液を充填し、廃液バイアルにＭｉｌｌｉＱ  ＨＰＬＣ水を充填し、ＵＶランプを点灯した。
【０１９９】
ｐＩ５．１２及びｐＩ９．２２の両者のマーカーをＭｉｌｌｉＱ  ＨＰＬＣ水で１０倍に希釈し、十分に混合することによりｐＩマーカーを調製した。
【０２００】
ＰＧ１１０試験サンプルをＭｉｌｌｉＱ  ＨＰＬＣ水で１ｍｇ／ｍＬまで希釈し、希釈した抗体溶液に下表の成分を加え、短時間ボルテックスすることにより分析用ＰＧ１１０サンプルを調製した。次にオートサンプラーチューブに挿入したガラスインサートにサンプルを移し、５分間脱気後、ＰｒｉｎＣＥオートサンプラーに導入した。
【０２０１】
【表２】
2013522313.tif 000004
【０２０２】
サイズ排除ＨＰＬＣ法
ＰＧ１１０溶液の純度を測定するためにサイズ排除ＨＰＬＣを使用した。以下に概説するようにアッセイを実施した。
【０２０３】
ＴＳＫゲルガード（カタログ番号０８５４３，６．０ｍｍ×４．０ｃｍ，７μｍ）をＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷ（カタログ番号０８５４１，７．８ｍｍ×３０ｃｍ，５μｍ）に接続し、カラム圧力上限を７０ｂａｒとして泳動させた。移動相は１００ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４／２００ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４，ｐＨ７．０から構成した。この緩衝液は無水リン酸水素２ナトリウム４９．６８ｇと無水硫酸ナトリウム９９．４４ｇをＭｉｌｌｉ−Ｑ水約３３００ｍＬに溶解し、１Ｍリン酸を使用してｐＨを７．０に調整し、緩衝液体積をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で３５００ｍＬまで増量し、溶液をメンブレンフィルターで濾過することにより調製した。
【０２０４】
実験パラメーターは以下の通りとした：
・流速０．３ｍｌ／ｍｉｎ
・注入量２０μＬ（２０μｇサンプルに等価）
・カラム室温
・オートサンプラー温度２〜８℃
・泳動時間５０分
・アイソクラチックグラジエント。
【０２０５】
２１４ｎｍ波長（＞０．１分ピーク幅及び８ｎｍバンド幅）及び３６０ｎｍリファレンス波長（１００ｎｍバンド幅）を使用してダイオードアレイ検出器を使用して検出を行った。
【０２０６】
試験サンプルを２本ずつ注入した。緩衝液関連ピークを除くサンプル中の全２１４ｎｍ吸収性成分の総面積とＰＧ１１０抗体ピークの面積を比較することにより純度を測定した。この方法を使用して高分子量凝集物及び抗体断片を無傷のＰＧ１１０から分離した。
【０２０７】
光遮断
抗体溶液の不溶性粒状物含有量を測定するために光遮断アッセイを実施した。測定中の外来粒子汚染を最小限にするために光遮断測定装置（粒子カウンター，モデルシリンジ，Ｋｌｏｔｚ（Ｂａｄ  Ｌｉｅｂｅｎｚｅｌｌ，ドイツ，シリーズＳ２００３７））に層流フード（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．，Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ，ＮＣ，モデル番号ＵＬＴ２５８６−９−Ａ４０）を取付けた。以下のように光遮断分析を実施した。層流条件下で３．５ｍＬサンプルを５ｍＬ丸底試験管に加えた。初期０．８ｍＬリンス後に、製造業者の指示に従ってｎ＝３モード（１回測定当たり０．８ｍＬ）で測定を実施した。
【０２０８】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣ分析の前に、Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒカセットを使用して適切な緩衝液系で蛋白質を透析する。この緩衝液系（１０ｍＭリン酸，１０ｍＭクエン酸）をＤＳＣ測定用リファレンス／ブランクとしても使用する。１〜２ｍｇ／ｍＬの抗体を分析する。Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｃｅｌｌ（Ｍｉｃｒｏｃａｌ）ＤＳＣ装置を接続した自動ＶＰ−ＤＳＣを使用する。２５℃〜９５℃の温度範囲で走査速度１℃／分を適用して分子のアンフォールディングを試験する。他の測定パラメーターは、フィッティング時間１６秒、走査前待ち時間１０分、フィードバックモードなしとする。
【０２０９】
目視検査
サンプル容器内の蛋白質溶液を肉眼で注意深く検査することにより蛋白質サンプルの目視検査を行った。一般には、可視粒状物、濁り、乳白、又は蛋白質沈殿並びに可視粒子及び凝集物を識別し易くするために白色及び暗色／黒色背景に対してサンプルを検査する。目視検査に利用可能なサンプル容器は種々のものを利用でき、半透明及び透明ファルコンチューブ、ガラスバイアル、小容積バイアル／チューブ、及びｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒカセット等の容器が挙げられる。
【実施例】
【０２１０】
［実施例１］
反復凍結／解凍試験（−８０℃／３０℃）中のＰＧ１１０製剤の安定性に及ぼす溶液ｐＨの影響
蛋白質溶液を凍結状態とｐＨ４、ｐＨ５、ｐＨ６、ｐＨ７及びｐＨ８の液体状態の間で４回まで交互に遷移させることにより１０ｍＭクエン酸／１０ｍＭリン酸緩衝液中１ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の凍結解凍挙動を評価した。−８０℃に温度制御した冷凍庫により凍結を行い、３０℃に温度制御した水浴により解凍を行った。各凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）サイクル後にサンプルを抽出し、ＳＥＣにより分析した。この実験のために各ＰＧ１１０溶液約２０ｍＬを３０ｍＬ  ＰＥＴＧ容器に加えた。表３はＳＥＣの試験間隔と実施した凍結／解凍サイクル数に関する概要を示す。表４は残留しているＰＧ１１０の単量体の量とこれらのｐＨレベルで製剤化したサンプル中で形成された断片及び凝集物の量に及ぼす凍結／解凍処理の影響を示す。
【０２１１】
【表３】
2013522313.tif 000005
【０２１２】
【表４】
2013522313.tif 000006
以上の結果から明かなように、ＰＧ１１０単量体の量は反復凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）処理中に僅かに減少したが、その程度は小さく、９５％を上回る無傷の単量体が溶液中で安定に維持された。
【０２１３】
各凍結／解凍工程中に形成された肉眼で見えない粒子数を測定するために光遮断実験を実施した。表５は光遮断の試験間隔と実施した凍結／解凍サイクル数に関する概要を示す。表６及び７は夫々１ｍＬ当たりの１μｍ以上と１０μｍ以上の粒子数に及ぼす凍結／解凍処理の影響を示す。
【０２１４】
【表５】
2013522313.tif 000007
【０２１５】
【表６】
2013522313.tif 000008
【０２１６】
【表７】
2013522313.tif 000009
【０２１７】
［実施例２］
加速保存中のＰＧ１１０製剤の物理化学的安定性に及ぼす溶液ｐＨの影響
蛋白質液体及び凍結乾燥製剤の加速／長期保存中の蛋白質安定性に影響を与える重要な因子は製剤のｐＨと保存温度である。これらの因子の影響を評価するために、予備製剤化及び製剤化計画段階中に蛋白質を高温短期保存に供し、より低温（例えば２〜８℃）での長期保存のための製剤化実現可能性について手早く洞察した。
【０２１８】
溶液（２ｍｇ／ｍＬ，１０ｍＭクエン酸／１０ｍＭリン酸緩衝液）中のＰＧ１１０抗体の保存安定性を制御温度条件下で長期間各種温度にて評価した。指定保存期間後、サンプルを抽出し、ＰＧ１１０安定性に及ぼす保存時間と保存温度の影響を評価した。
【０２１９】
このｐＨスクリーニング試験では、ｐＨ３、ｐＨ４、ｐＨ５、ｐＨ６、ｐＨ７及びｐＨ８で１０ｍＭリン酸，１０ｍＭクエン酸中２ｍｇ／ｍＬとなるようにＰＧ１１０を製剤化した。
【０２２０】
サンプルを滅菌バイアル（各約５００μＬ）に充填し、制御条件下で（温度制御室内で無光下に）４０℃及び５０℃にて保存した。指定時点で表８に示すサンプル抽出スキームに従って調製溶液のサンプルを分析用に抽出した。数値は保存／抽出したバイアル数を示す。得られたデータを表９及び表１０に示す。
【０２２１】
【表８】
2013522313.tif 000010
【０２２２】
【表９】
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【０２２３】
【表１０】
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加速安定性の上記サンプルのイメージングキャピラリー等電点電気泳動のデータも評価した。ｉｃＩＥＦは分子の化学的安定性に関する情報を提供する。表１１及び１２は夫々サンプル抽出スキームとデータを示す。
【０２２４】
【表１１】
2013522313.tif 000013
【０２２５】
【表１２】
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2013522313.tif 000015
これらのデータから明らかなように、約ｐＨ５〜７の溶液ｐＨ範囲は高温でＰＧ１１０安定性を最良に維持する。４０℃及び５０℃で１週間保存後では、ｐＨ６で製剤化したサンプルの単量体濃度が最高であった。
【０２２６】
ｐＨ５〜７範囲外の２ｍｇ／ｍＬのＰＧ１１０は凝集物及び断片濃度の増加により反映されるように、明白に安定性低下を誘導した。断片濃度はｐＨ約６で製剤化したサンプルで分解が最小限であることが判明した。ｉｃＩＥＦデータでもＰＧ１１０の安定性を維持するためには約６のｐＨが最良であった。これらのデータから、約５．５〜６．５のｐＨはこの実験で適用した特定のストレス条件下でＰＧ１１０蛋白質安定性を最良に維持すると考えられる。
【０２２７】
［実施例３］
３０ｍｇ／ｍＬ条件下で反復凍結／解凍試験（−８０℃／３０℃）中のＰＧ１１０製剤の安定性に及ぼす製剤の影響
製剤原料を凍結状態とｐＨ５．５の液体状態の間で３回まで交互に遷移させることにより各種製剤中３０ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）挙動を評価した。評価した製剤は、
（１）１０ｍＭ酢酸＋１２５ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．５）
（２）１５ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．５）
（３）１５ｍＭヒスチジン＋０．０１％  Ｔｗｅｅｎ  ８０（ｐＨ５．５）
である。
【０２２８】
−８０℃に温度制御した冷凍庫により凍結を行い、３０℃に温度制御した水浴により解凍を行った。各凍結／解凍サイクル後にサンプルを抽出し、ＳＥＣと目視検査により分析した。この実験のためにＰＧ１１０溶液約１ｍＬを容器に加えた。表１３はＳＥＣの試験間隔と実施した凍結／解凍サイクル数に関する概要を示す。表１４は残留しているＰＧ１１０の単量体の量とこれらのｐＨレベルで製剤化したサンプル中で形成された断片及び凝集物の量に及ぼす凍結／解凍処理の影響を示す。
【０２２９】
【表１３】
2013522313.tif 000016
【０２３０】
【表１４】
2013522313.tif 000017
【０２３１】
各種製剤の目視検査の結果、ヒスチジンとｔｗｅｅｎ  ８０（ポリソルベート８０）を含有する製剤は３Ｆ／Ｔサイクル後でも粒子形成が最小限であり、ヒスチジンとＴｗｅｅｎ  ８０はどちらもＰＧ１１０安定性を維持するために非常に適切な添加剤であることが判明した。他の２種類の製剤は可視粒子数が著しく多かった（容器当たり可視粒子２０〜３０個）。
【０２３２】
［実施例４］
１ｍｇ／ｍＬ条件下で微量熱量測定中のＰＧ１１０製剤の安定性（固有安定性）に及ぼす製剤パラメーターの影響
微量熱量測定を使用することにより各種製剤中１ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の熱力学的安定性（固有安定性）を評価した。１℃／分の走査速度で加熱を実施した。結果を表１５にまとめる。
【０２３３】
【表１５】
2013522313.tif 000018
これらのデータから明らかなように、ＰＧ１１０の固有安定性は製剤パラメーター（例えば製剤ｐＨ及び添加剤）の影響を受ける。
【０２３４】
［実施例５］
１００ｍｇ／ｍＬ条件下で反復凍結／解凍試験（−８０℃／３０℃）中のＰＧ１１０製剤の安定性に及ぼす濃度の影響
蛋白質溶液を凍結状態とｐＨ６の液体状態の間で４回まで交互に遷移させることにより１００ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）挙動を評価した。先のデータによると、ヒスチジンはＰＧ１１０の安定化に適した緩衝液／添加剤であるため、ＰＧ１１０蛋白質安定性に及ぼすヒスチジンの安定化の影響を蛋白質濃度１００ｍｇ／ｍＬで試験した。
【０２３５】
−８０℃に温度制御した冷凍庫により凍結を行い、３０℃に温度制御した水浴により解凍を行った。各凍結解凍サイクル後にサンプルを抽出し、ＳＥＣと目視検査により分析した。表１６はＳＥＣの試験間隔と実施した凍結／解凍サイクル数に関する概要を示す。表１７は残留しているＰＧ１１０の単量体の量とこれらのｐＨレベルで製剤化したサンプル中で形成された断片及び凝集物の量に及ぼす凍結／解凍処理の影響を示す。
【０２３６】
【表１６】
2013522313.tif 000019
【０２３７】
【表１７】
2013522313.tif 000020
【０２３８】
データから明らかなように、１００ｍｇ／ｍＬでは、ｆ／ｔ実験を通して単量体、凝集物及び断片濃度は実質的に変化しなかったので、ＰＧ１１０製剤は反復ｆ／ｔ処理中に物理的に不安定にならず、ヒスチジンはｆ／ｔ処理中にＰＧ１１０安定性を維持するために非常に適切な添加剤であることが判明した。
【０２３９】
［実施例６］
目視検査により判定した透析後のＰＧ１１０製剤内の粒子の濁度と形態に及ぼす緩衝液と添加剤の影響
ＰＧ１１０による先の実験によると、１０ｍＭ酢酸，１２５ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ５．５の溶液中で保存した場合に深刻な可視粒子形成及び沈殿現象が生じたことから明かなように、蛋白質は物理的に不安定になり易い。本実験は可視粒子形成が蛋白質自体に固有であるか否か、又は物理的安定性を維持し、粒子を形成しにくい製剤を同定できるか否かを確認しようとした。
【０２４０】
上記粒子は肉眼で観測できるので、各種添加剤を加えて製剤化したＰＧ１１０溶液の入念な目視検査はどのような製剤条件が粒子形成を加速又は防止できるかを判定する非常に有用な方法である。
【０２４１】
これを実施するために、表１８に示す添加剤を添加した濃度１ｍｇ／ｍｌのＰＧ１１０の溶液を透析により調製した。
【０２４２】
【表１８】
2013522313.tif 000021
【０２４３】
１ｍｇ／ｍｌを上回るＰＧ１１０溶液を１０，０００ＭＷＣＯのｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒカセットに挿入し、目的緩衝液／添加剤媒体１Ｌで１時間透析した。その後、透析媒体を新鮮な媒体に交換し、透析を一晩続けた。透析後、溶液の濃度をＵＶ２８０により測定した。濃度が高過ぎる場合には、対応する緩衝液で溶液を目標濃度まで希釈した。濃度が低過ぎる場合には、溶液をＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心管で目標濃度まで濃縮した。次に、溶液のｐＨをチェックした。ｐＨが６±０．１以内でない場合には、ｐＨを０．１Ｍ  ＮａＯＨ又は０．１Ｍ  ＨＣｌで目標値に調整した。ｐＨ６の条件を選択したのは、この値が化学的及び物理的安定性に最適なｐＨに近いことが先の実験で判明したためである。その後、溶液を０．２０μｍフィルターに通して透明ＰＥＴＧ容器に捕集した。蒸留水も同一フィルターに通してＰＥＴＧ容器に捕集し、対照とした。
【０２４４】
この操作後、ＰＥＴＧバイアル中のＰＧ１１０溶液の粒子を目視検査した。ボトルを弱い蛍光と黒色背景に対して保持した。更にボトルを穏和に振盪し、粒子を流動させ、目視検査し易くした。次にボトルを４℃で一晩保存した。翌日、ボトルを  保管所から取出し、上記のように検査した。
【０２４５】
濾過直後の検査では、全サンプル中に可視粒子は認められなかった。しかし、４℃で一晩保存後、目視検査によると、緩衝液／添加剤の多くで粒子形成が判明した。結果を表１９にまとめる。
【０２４６】
【表１９】
2013522313.tif 000022
【０２４７】
データによると、Ｔｗｅｅｎ−８０は可視粒子の形成を妨げるため、その使用が適切であると認められる。ｐＨ６緩衝能をもつ上記添加剤（クエン酸、リン酸、コハク酸、ヒスチジン）のうち、データによると、ヒスチジンは可視粒子形成の防止に最良である。
【０２４８】
［実施例７］
反復凍結／解凍サイクル（−８０℃／３０℃）中のＰＧ１１０製剤の安定性に及ぼす緩衝液及び製剤添加剤の影響
本実施例は反復透析（−８０℃に温度制御した冷凍庫）及び解凍（３０℃に温度制御した循環水浴）処理後の２ｍｇ／ｍＬ及びｐＨ６のＰＧ１１０溶液製剤中の各種緩衝液及び添加剤の安定化能を評価するために実施した実験のデータについて記載する。（ｐＨ６の条件を選択したのは、この値が化学的及び物理的安定性に最適なｐＨに近いことが先の実験で判明したためである）。試験した緩衝液及び添加剤を表２０にまとめる。
【０２４９】
【表２０】
2013522313.tif 000023
【０２５０】
Ｔ０、Ｔ１（１凍結／解凍工程後）、Ｔ２及びＴ３でサンプルを抽出した。１凍結−解凍処理工程はサンプルを−８０℃で少なくとも４時間保存後にサンプルを３０℃循環水浴中で解凍するものとした。凍結−解凍サンプルを分析するために、（０．２μｍフィルターで濾過したＷＦＩでリンスした５ｍＬピペットチップを使用して）抗体製剤３．５ｍＬを５ｍＬ丸底試験管に充填し、光遮断測定した。更に、各サンプル０．１ｍＬをＳＥＣ分析用に抽出し、サンプル０．２ｍＬを抽出し、−８０℃で保存した（非必須付加的分析特性決定用にサンプル保存）。
【０２５１】
【表２１】
2013522313.tif 000024
【０２５２】
ＰＧ１１０の凍結解凍処理中の粒度≧１μｍ及び≧１０μｍの肉眼で見えない粒子の形成に及ぼす緩衝液及び添加剤の影響を夫々表２２及び２３に示す。ＳＥＣデータを表２４、２５及び２６に示す。
【０２５３】
所定製剤（例えばリン酸、クエン酸、ソルビトール、マンニトール及びスクロースを添加したもの）では、１ｍＬ当たりの≧１μｍ粒子数は最初の凍結−解凍サイクル後のみに増加し、第２サイクル後は減少した。他の製剤（例えばヒスチジン、アルギニン又は水のみを添加したもの）では、１ｍＬ当たりの≧１μｍ粒子数は凍結−解凍サイクル後毎に増加した。リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、アルギニン及び水のみを添加した製剤では、１ｍＬ当たりの≧１０μｍ粒子は凍結−解凍サイクル後毎に増加した。ソルビトール、マンニトール又はスクロースを添加した製剤では、１ｍＬ当たりの≧１０μｍ粒子は最初の凍結−解凍サイクル後に増加したが、第２サイクル以降では減少した。１凍結−解凍サイクル後に、ソルビトール又はマンニトールを添加した製剤は１ｍＬ当たりの≧１μｍ粒子数も（少なくとも＞〜２００，０００）、１ｍＬ当たりの≧１０μｍ粒子数（平均〜２５０００）も最大であった。しかし、第３凍結−解凍サイクル後に、全製剤は１ｍＬ当たりの≧１μｍ粒子が１００，０００未満になることが判明した。
【０２５４】
ポリソルベート８０はＰＧ１１０の凍結解凍処理中に肉眼で見えない粒子の形成を防止したので、ＰＧ１１０安定性の維持に関してプラスの効果があることが判明した。これはポリソルベート８０類が氷−水界面における抗体の変性を防止できるためであると考えられる。マンニトール、ソルビトール及びスクロースを含む糖類／糖アルコールは初期凍結−解凍サイクル後に肉眼で見えない粒子の形成を誘導することが判明した。これらの結果はＳＥＣデータにより裏付けられ、マンニトールとソルビトールを添加した製剤では単量体％の顕著な低下とこれに相応して凝集物％の増加を示す。（他の全添加剤では、ＳＥＣデータは安定性の点で差がない。）
【０２５５】
【表２２】
2013522313.tif 000025
【０２５６】
【表２３】
2013522313.tif 000026
【０２５７】
【表２４】
2013522313.tif 000027
【０２５８】
【表２５】
2013522313.tif 000028
【０２５９】
【表２６】
2013522313.tif 000029
【０２６０】
［実施例８］
加速安定性試験中のＰＧ１１０製剤の物理化学的安定性に及ぼす緩衝液及び添加剤の影響
先の実施例ではｐＨ及び保存温度を含めて、長期保存中のＧ１１０製剤の安定性に影響を与える因子について検討した。これらの外因に加え、製剤成分自体も保存中の蛋白質製剤原料安定性に及ぼすその影響について評価する必要がある。これを実施するためには、予備製剤化及び製剤化計画段階中に蛋白質製剤原料を高温短期保存に供し、より低温（大半の場合には２〜８℃）での長期保存のための製剤化実現可能性について手早く洞察する。
【０２６１】
溶液中のＰＧ１１０抗体の保存安定性を各種緩衝液及び添加剤中でｐＨ６にて制御温度条件下で長期間各種温度にて評価した。ｐＨ６の条件を選択したのは、この値が化学的及び物理的安定性に最適なｐＨに近いことが先の実験で判明したためである。指定保存時間後、サンプルを抽出し、ＰＧ１１０安定性に及ぼす保存時間と保存温度の影響をＳＥＣとｉＣＩＥＦにより評価した。
【０２６２】
本試験では、表２７に列挙する各種緩衝液及び添加剤中２ｍｇ／ｍｌでＰＧ１１０を製剤化した。
【０２６３】
【表２７】
2013522313.tif 000030
【０２６４】
次にサンプルを制御条件下で（温度制御室内で無光下に）各種温度で保存した。予め指定した時点で夫々ＳＥＣ及びｉＣＩＥＦについて表２８及び２９に示すサンプル抽出スキームに従って調製溶液のサンプルを分析用に抽出した。数値は各緩衝液又は添加剤条件について保存／抽出したバイアル数を示す。データを表３０、３１及び３２に示す。
【０２６５】
【表２８】
2013522313.tif 000031
【０２６６】
【表２９】
2013522313.tif 000032
【０２６７】
【表３０】
2013522313.tif 000033
【０２６８】
【表３１】
2013522313.tif 000034
【０２６９】
【表３２】
2013522313.tif 000035
【０２７０】
【表３３】
2013522313.tif 000036
2013522313.tif 000037
【０２７１】
ＰＧ１１０安定性は全蛋白質に予想される挙動通り、保存温度の上昇と共に低下した。他方、これまでに収集されたデータによると、リン酸、アルギニン又はグリセロールを使用してＰＧ１１０を製剤化すると、潜在的変性を生じる可能性がある。グリセロールの存在下で５０℃にて７日間保存後、ＳＥＣにより蛋白質は検出されず、全ＰＧ１１０は物理的に不安定になり、不溶性凝集物を形成するため、ＳＥＣ／ＵＶ検出できなくなることが判明した。
【０２７２】
［実施例９］
−８０℃で保存時のＰＧ１１０製剤の安定性に及ぼす緩衝液及び製剤添加剤の影響
先の実施例の結果から、１５ｍＭヒスチジンと０．０１％  ｔｗｅｅｎ  ８０の製剤が製剤原料の液体製剤における可視粒子形成の防止に最適であると判断された（実施例６）。Ｔｗｅｅｎ  ８０も実施例７に詳述したように凍結−解凍ストレスにより誘導される肉眼で見えない粒子の形成を防止した。加速安定性試験（実施例８）からもこれら２種類の添加剤は許容不能なレベルの凝集又は断片化を生じないと判断された。
【０２７３】
これを踏まえると、次の問題は添加剤が−８０℃で保存時に製剤原料の不安定化を生じるか否かである。これを試験するために、原製剤（１０ｍＭ酢酸、１２５ｍＭ  ＮａＣｌ）、１５ｍＭヒスチジン（ｐＨ６）及び１５ｍＭヒスチジン（ｐＨ６）＋０．０１％  Ｔｗｅｅｎ  ８０に１ｍｇ／ｍｌ及び１０ｍｇ／ｍｌのＰＧ１１０を溶解した溶液１５０μＬを調製し、クライオバイアルで−８０℃にて保存した。５日目に、各サンプルのバイアルを保管所から取出し、物理化学的分解をＳＥＣにより定量した。１０日目に、各サンプルの残りのバイアルを取出し、同様に分析した。表３４、３５及び３６はこれらの実験の結果を示す。
【０２７４】
データから明らかなように、ヒスチジン又はヒスチジン＋ｔｗｅｅｎ  ８０を添加した製剤では単量体％が０から５日まで増加し、少なくとも１０日までこのレベルのままである。これに対して、１０ｍＭ酢酸と１２５ｍＭ  ＮａＣｌ中に１０ｍｇ／ｍｌのＰＧ１１０を溶解した場合には０から５日、更に１０日まで凝集物％の増加に対応する単量体％の安定した減少を示す。総合すると、ヒスチジン＋ｔｗｅｅｎ  ８０製剤は−８０℃で保存時に製剤原料を不安定化させないことがデータから明らかである。
【０２７５】
【表３４】
2013522313.tif 000038
【０２７６】
【表３５】
2013522313.tif 000039
【０２７７】
【表３６】
2013522313.tif 000040
【０２７８】
目視検査データからもヒスチジン含有製剤は１００ｍｇ／ｍＬでも４Ｆ／Ｔサイクル後でも可視粒子を含まないことが判明し、ヒスチジンはＰＧ１１０安定性を維持するために非常に適切な添加剤であることが更に示された。
【０２７９】
［実施例１０］
各種濃度の各種製剤中のＰＧ１１０の安定性に及ぼす凍結−解凍、撹拌及び加速安定性試験の影響
各種ストレス実験でＰＧ１１０安定性に及ぼす添加剤の影響を評価した。
１）反復凍結−解凍処理（−８０℃／３０℃水浴）；
２）有効に撹拌ストレスを生じ、空気−液体界面を拡大させ、物理的不安定性とＰＧ１１０分解を誘導するための撹拌（６Ｒガラスバイアル、周囲温度、約９ｍｍテフロン（登録商標）コート撹拌棒，５５０ｒｐｍ，４８時間まで撹拌）；
３）加速安定性試験：各種サンプルを２〜５Ｃ，２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／６０％ＲＨでリアルタイム及び加速安定性に供し、天然ＰＧ１１０単量体の含有量に及ぼす蛋白質濃度と安定化添加剤の影響をＳＥＣ／ＵＶによりモニターした。
【０２８０】
以下のＰＧ１１０製剤及び製剤組成を試験した。
製剤１：５２ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
５．０ｍｇ／ｍＬ  スクロース；
２０．０ｍｇ／ｍＬ  マンニトール；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
製剤２：５２ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
４６ｍｇ／ｍＬ  スクロース；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
製剤３：５２ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
４６ｍｇ／ｍＬ  トレハロース；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
製剤４：２０ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
５．０ｍｇ／ｍＬ  スクロース；
２０．０ｍｇ／ｍＬ  マンニトール；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
製剤５：２０ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
４６ｍｇ／ｍＬ  スクロース；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
製剤６：２０ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ６．０；
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン；
４６ｍｇ／ｍＬ  トレハロース；及び
０．１０ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
【０２８１】
５２ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の凍結解凍安定性は夫々２ｆ／ｔサイクル後と４ｆ／ｔサイクル後に以下の通りであった。
【０２８２】
【表３７】
2013522313.tif 000041
上記データから明らかなように、スクロース、トレハロース及びマンニトールは反復ｆ／ｔストレス中にＰＧ１１０の物理的安定性を維持するために好適である。ストレス実験を通して天然ＰＧ１１０単量体含有量に関して分解はほぼ全く検出されなかった。
【０２８３】
５２ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の撹拌ストレス安定性は夫々２４時間及び４８時間撹拌後に以下の通りであった。
【０２８４】
【表３８】
2013522313.tif 000042
上記データから明らかなように、スクロース、トレハロース及びマンニトールは長期撹拌ストレス中にＰＧ１１０の物理的安定性を維持するために好適である。ストレス実験を通して天然ＰＧ１１０単量体含有量に関して分解はほぼ全く検出されなかった。
【０２８５】
５２ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの蛋白質濃度のＡＢＴ１１０抗体の加速分解反応結果は５℃で１４日後と５０℃で１４日後に以下の通りであった。
【０２８６】
【表３９】
2013522313.tif 000043
上記データから明らかなように、スクロース、トレハロース及びマンニトールは長期撹拌ストレス中にＰＧ１１０の物理的安定性を維持するために好適である。５０℃に１４日間暴露した場合でも、試験した全サンプルに天然単量体の＞８０％が存在していた。
【０２８７】
［実施例１１］
各種条件下で保存した場合のＰＧ１１０凍結乾燥粉末の長期安定性
ＰＧ１１０の凍結乾燥及び保存中の安定剤としてのスクロースとマンニトールの適性を更に試験した。注射溶液用のＰＧ１１０凍結乾燥粉末の２種類の製剤を長期保存条件（２〜８℃）、２５℃／６０％ＲＨの加速保存条件、及び４０℃／７５％ＲＨと５０℃のストレス条件下においた。これらの実験室規模の薬剤製品バッチは例えば表４０に示すような標準方法に従って製造した１３０Ｌ規模の製剤原料から製造及び凍結乾燥した。
【０２８８】
【表４０】
2013522313.tif 000044
【０２８９】
試験のために、製剤のサンプルを室温で滅菌蒸留水に再懸濁した。
製剤１：
２０ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ５．５
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン
７０ｍｇ／ｍＬ  スクロース
０．１ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０
製剤２：
２０ｍｇ／ｍＬ  ＰＧ１１０，ｐＨ５．５
２．３３ｍｇ／ｍＬ  ヒスチジン
１０ｍｇ／ｍＬ  スクロース  
３０ｍｇ／ｍＬ  マンニトール
０．１ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０。
【０２９０】
製剤原料の品質、生物学的活性及び純度に関連する試験方法を種々の時点で実施し、各バッチにおけるＰＧ１１０の安定性プロファイルを評価した。使用した分析方法を以下に挙げる：
・外観（目視）
・粒子（目視）
・肉眼で見えない粒子（光遮断法）
・ｐＨ
・イメージングキャピラリー等電点電気泳動法（ｉｃＩＥＦ）
・ＳＤＳ  ＰＡＧＥ（還元及び非還元）
・サイズ排除ＨＰＬＣ
・製品特異的抗原結合アッセイ
・製品特異的機能バイオアッセイ。
【０２９１】
薬剤製品バイアルをメチレンブルー溶液中で真空に暴露した後、青着色を目視検査する色素浸透法を使用して容器密封完全性試験を実施した。標準方法に従い、ＵＳＰにより含水率を測定した。バッチ１及びバッチ２からのサンプルで得られた安定性データを表４１〜４８に示す。
【０２９２】
【表４１】
2013522313.tif 000045
【０２９３】
【表４２】
2013522313.tif 000046
【０２９４】
【表４３】
2013522313.tif 000047
【０２９５】
【表４４】
2013522313.tif 000048
【０２９６】
【表４５】
2013522313.tif 000049
【０２９７】
【表４６】
2013522313.tif 000050
【０２９８】
【表４７】
2013522313.tif 000051
【０２９９】
【表４８】
2013522313.tif 000052
【０３００】
２〜８℃の目標保存条件下で保存した製剤１及び２からのサンプルと、２５℃及び４０℃で６カ月間保存したサンプルに関する全データは合格基準を満たし、これらの温度で安定性パラメーター試験のいずれでも有意変化は全く認められなかった。より苛酷なストレス条件（５０℃）で１カ月間保存すると、純度が低下し、これはｉｃＩＥＦのみで明白であった。
【０３０１】
製剤１及び２を４０℃で６カ月間比較した結果、スクロースのみを添加して製剤化したＰＧ１１０抗体はスクロースとマンニトールの組合せを添加して製剤化した抗体よりも安定性レベルが高いことが判明した（図１）。更に、糖類及び／又はポリオール：蛋白質のモル比が１４００を上回るこれらの製剤（例えば製剤１−蛋白質：糖類＝１：１５１５；製剤２−蛋白質：糖類＋ポリオール比＝１４３６）では、肉眼で見えない粒子及び可視粒子の形成は４０℃での加速安定性試験でも経時的に変化しないことが意外にも認められた。
【０３０２】
（文献援用）
本発明は蛋白質製剤分野で周知の技術全体を援用する。これらの技術としては、限定されないが、以下の刊行物に記載されているものが挙げられる：Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９９）；Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１）；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｄｓ．，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，Ｍａｓｓ．２９８  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８���２９９−２１−Ｘ），Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．＆  Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  Ｅｄ．１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．Ｖｏｌｓ．１−３（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）；Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８；Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．（ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ）．６３４  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）。
【０３０３】
（等価物）
本発明はその趣旨ないし本質的特徴を逸脱せずに他の特定形態で実施することもできる。従って、上記態様は本願に記載する発明を限定するものではなく、あらゆる点において例証とみなすべきである。従って、本発明の範囲は上記記載ではなく、特許請求の範囲に記載する通りであり、あらゆる変更を包含する。
【０３０４】
（配列表の概要）
【０３０５】
配列番号１（ＰＧ１１０ＶＨ）
【０３０６】
【化１】
2013522313.tif 000053
【０３０７】
配列番号２（ＰＧ１１０ＶＬ）
【０３０８】
【化２】
2013522313.tif 000054
【０３０９】
配列番号３（ＰＧ１１０ＶＨ  ＣＤＲ１）
【０３１０】
【化３】
2013522313.tif 000055
【０３１１】
配列番号４（ＰＧ１１０ＶＨ  ＣＤＲ２）
【０３１２】
【化４】
2013522313.tif 000056
【０３１３】
配列番号５（ＰＧ１１０ＶＨ  ＣＤＲ３）
【０３１４】
【化５】
2013522313.tif 000057
【０３１５】
配列番号６（ＰＧ１１０ＶＬ  ＣＤＲ１）
【０３１６】
【化６】
2013522313.tif 000058
【０３１７】
配列番号７（ＰＧ１１０ＶＬ  ＣＤＲ２）
【０３１８】
【化７】
2013522313.tif 000059
【０３１９】
配列番号８（ＰＧ１１０ＶＬ  ＣＤＲ３）
【０３２０】
【化８】
2013522313.tif 000060
【０３２１】
配列番号９（野生型ヒトＩｇＧ４定常領域）
【０３２２】
【化９】
2013522313.tif 000061
【０３２３】
配列番号１０（セリン→プロリン突然変異ヒトＩｇＧ４定常領域）
【０３２４】
【化１０】
2013522313.tif 000062
【０３２５】
配列番号１１（シグナル配列を含むＰＧ１１０全長重鎖ヌクレオチド配列）
【０３２６】
【化１１】
2013522313.tif 000063
【０３２７】
配列番号１２（シグナル配列を含むＰＧ１１０全長重鎖アミノ酸配列）
【０３２８】
【化１２】
2013522313.tif 000064
【０３２９】
配列番号１３（シグナル配列を除くＰＧ１１０成熟重鎖アミノ酸配列）
【０３３０】
【化１３】
2013522313.tif 000065
【０３３１】
配列番号１４（シグナル配列を含むＰＧ１１０全長軽鎖ヌクレオチド配列）
【０３３２】
【化１４】
2013522313.tif 000066
2013522313.tif 000067
【０３３３】
配列番号１５（シグナル配列を含むＰＧ１１０全長軽鎖アミノ酸配列）
【０３３４】
【化１５】
2013522313.tif 000068
【０３３５】
配列番号１６（シグナル配列を除くＰＧ１１０成熟軽鎖アミノ酸配列）
【０３３６】
【化１６】
2013522313.tif 000069
【図１】
2013522313.tif 000070
【配列表】
2013522313000001.app
【国際調査報告】
2013522313.tif 000071
2013522313.tif 000072
2013522313.tif 000073