(57)【要約】ＩＬ−１５Ｒａ又はその機能性断片をコードする単離された核酸分子とともに免疫原をコードする単離された１又は２以上の核酸分子を含む、組成物、組換え体ワクチン、弱毒化生病原体が開示される。そのような組成物を用いて、個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法も開示される。例えば、免疫原をコードする、単離された核酸分子と、ＩＬ−１５Ｒα又はその機能性断片をコードする、単離された核酸分子とを含む組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫原をコードする、単離された核酸分子と、
ＩＬ−１５Ｒα又はその機能性断片をコードする、単離された核酸分子とを含む組成物。
【請求項２】
前記免疫原が、病原体抗原、癌関連抗原、又は自己免疫疾患に関与する細胞に関連する抗原のいずれかである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記免疫原が、慢性感染症を引き起こす病原体に由来する病原体抗原である請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＩＬ−１５Ｒαをコードする前記単離された核酸分子は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載の配列を有するＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列を含む請求項１乃至３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
ＩＬ−１５又はその機能性断片をコードする核酸配列をさらに含む請求項１乃至４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記核酸分子がプラスミドである請求項１乃至５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載の組成物を含む、注入可能な医薬組成物。
【請求項８】
個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法であって、
請求項１乃至７のいずれかに記載の組成物を個体に対して投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
調節エレメントに機能可能に結合された免疫原をコードするヌクレオチド配列と、
ＩＬ−１５Ｒα又はその機能性断片をコードするヌクレオチド配列とを含む、組換え体ワクチン。
【請求項１０】
前記免疫原が、病原体抗原、癌関連抗原、又は自己免疫疾患に関与する細胞に関連する抗原のいずれかである請求項９に記載の組換え体ワクチン。
【請求項１１】
前記免疫原が、慢性感染症を引き起こす病原体に由来する病原体抗原である請求項１０に記載の組換え体ワクチン。
【請求項１２】
ＩＬ−１５Ｒαをコードする前記単離された核酸分子は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載の配列を有するＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列を含む請求項９乃至１１のいずれかに記載に組換え体ワクチン。
【請求項１３】
ＩＬ−１５又はその機能性断片をコードする核酸配列をさらに含む請求項９乃至１２のいずれかに記載の組換え体ワクチン。
【請求項１４】
個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法であって、
請求項９乃至１３のいずれかに記載の組換え体ワクチンを個体に対して投与する工程を含む、方法。
【請求項１５】
ＩＬ−１５Ｒα又はその機能性断片をコードするヌクレオチド配列を含む、弱毒化生病原体。
【請求項１６】
前記病原体が、慢性感染症を引き起こす病原体の弱毒株である請求項１５に記載の弱毒化生病原体。
【請求項１７】
ＩＬ−１５Ｒαをコードする核酸コード配列がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列である請求項１５又は１６に記載の弱毒化生病原体。
【請求項１８】
ＩＬ−１５又はその機能性断片をコードする核酸配列をさらに含む請求項１５乃至１７のいずれかに記載の弱毒化生病原体。
【請求項１９】
個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法であって、
請求項１５乃至１８のいずれかに記載の弱毒化生病原体を個体に対して投与する工程を含む、方法。
【請求項２０】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列、又はＩＬ−１５Ｒα免疫調節機能、ＩＬ−１５結合機能、ＩＬ−１５受容体複合体の他のサブユニットへの結合機能、もしくはそれらの組合せの機能を有するその断片を含む、核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００９年９月１４日出願の米国仮出願第６１／２４２，２１０号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願の全内容は引用により本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明は、免疫原に対して個体を予防的および／または治療的に免疫化するための改善されたワクチン、改善された方法、ならびに改善された免疫治療薬組成物および改善された免疫治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
免疫治療とは、望ましい治療効果をあげるために個体の免疫応答を調節することをいう。免疫治療薬とは、個体に投与されたとき、望ましくない免疫応答に関連する症状を最終的に軽減する、または望ましい免疫応答を高めることによって症状を最終的に緩和するのに十分な程度に個体の免疫系を調節する組成物をいう。いくつかの事例においては、免疫治療は、個体にワクチンを投与して、免疫応答を生じる免疫原にその個体をさらすワクチン接種プロトコールの一部である。そのような場合、免疫治療によって、特定の状態、感染症、または疾病を治療または予防するために望ましい免疫応答が増加され、および／またはそのような免疫応答の一部（例えば、細胞性免疫または体液性免疫）が選択的に増強される。
【０００４】
ワクチンプロトコールは、改善された免疫応答を誘発するように個体の免疫応答を調節する薬剤を与えることにより改善され得る。個体にワクチンを投与して、個体の免疫応答の対象となる免疫原にその個体をさらすワクチン接種プロトコールのなかには、特定の状態、感染症、または疾病を治療または予防するために望ましい免疫応答を増加させ、および／またはそのような免疫応答の一部（例えば、細胞性免疫または体液性免疫）を選択的に増強させる薬剤を用いるものがある。
【０００５】
ワクチンは、アレルゲン、病原体抗原、またはヒトの疾病に関与する細胞に関連する抗原などの標的の抗原に対して個体を免疫化するのに有用である。ヒトの疾病に関与する細胞に関連する抗原には、癌関連腫瘍抗原や自己免疫疾患に関与する細胞に関連する抗原等がある。
【０００６】
そのようなワクチンの設計において、ワクチン接種された個体の細胞で標的の抗原を作り出すワクチンが、免疫系の細胞性免疫を誘発するのに効果的であることが認識されてきた。具体的には、弱毒化生ワクチン、非病原性ベクターを用いた組換え体ワクチン、ＤＮＡワクチンのそれぞれは、ワクチン接種された個体の細胞での抗原の産生をもたらし、これにより免疫系の細胞性免疫が誘発される。一方、死菌即ち不活化ワクチン、タンパク質のみを含むサブユニットワクチンは、効果的な体液性応答を誘導するが、良好な細胞性の免疫応答は誘発しない。
【０００７】
細胞性免疫応答は、病原体感染に対する防御を与えるため、そして病原体感染、癌、または自己免疫疾患の治療のための効果的な免疫介在性療法に必要となることが多い。従って、弱毒化生ワクチン、非病原性ベクターを用いた組換え体ワクチン、ＤＮＡワクチンのような、ワクチン接種された個体の細胞で標的の抗原を作り出すワクチンが、多くの場合好ましい。
【０００８】
ＤＮＡワクチン技術による強力なＣＤ８＋Ｔ細胞の応答の発生は、ＤＮＡワクチンの開発者が求めてきた目標である。ＨＩＶモデル並びに他のウイルス感染において，ヒトモデル（Ｋｏｕｐら，１９９４（非特許文献１）；Ｃａｏら，１９９５（非特許文献２）；、Ｍｕｓｅｙら，１９９７（非特許文献３）；Ｏｇｇら，１９９８（非特許文献４）；Ｂｅｔｔｓら，１９９９（非特許文献５））、および非ヒト霊長類モデル（Ｊｉｎら，１９９９（非特許文献６）；Ｓｃｈｍｉｔｚら，１９９９（非特許文献７）；Ｂａｒｏｕｃｈら，２０００（非特許文献８）；Ａｍａｒａら，２００１（非特許文献９）；Ｓｈｉｖｅｒら，２００２（非特許文献１０））の両方において、ＣＤ８＋Ｔ細胞がウイルス複製コントロールに関係しているとの報告が行われている。
【０００９】
ＤＮＡワクチン技術とともに、送達技術の改善、構造設計の強化、異種プライムブースト法、分子アジュバントの使用を含む多くの異なる戦略が用いられてきた。ケモカインやサイトカイン等の分子アジュバントをワクチン戦略に組み入れて、免疫応答を細胞性または体液性免疫に向けて傾斜させることができる。ＩＬ−１２およびＩＬ−１５などのサイトカインは、マウスモデルや非ヒト霊長類モデルの両方で免疫応答を強化するのに効果的であった（ＭｏｒｒｏｗおよびＷｅｉｎｅｒ，２００８（非特許文献１１））。
【００１０】
インターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、ＩＬ−２にも利用されている共通のβ、γ鎖を通してシグナル伝達することからＣＤ８＋Ｔ細胞の生成と維持に一定の役割を果たすことがわかった。またＩＬ−１５は、ナチュラルキラー細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミングの間にＩＬ−１５Ｒαを介して抗原提示細胞の表面上でトランス提示されることがわかった（Ｄｕｂｏｉｓら，２００２（非特許文献１２）；Ｋｏｋａら，２００４（非特許文献１３）；Ｌｕｃａｓら，２００７（非特許文献１４）；Ｓａｔｏら，２００７（非特許文献１５））。最近、ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５分泌の調節においてある役割を果たしていることが分かった（Ｄｕｉｔｍａｎら，２００８（非特許文献１６））。この細胞表面複合体は、ＩＬ−１５がメモリＣＤ８＋Ｔ細胞上のβγ受容体を通してシグナル伝達できるようにし、これらの細胞の細胞分裂や生存を促進していると考えられる（Ｌｏｄｏｌｃｅら，１９９８（非特許文献１７）；Ｋｅｎｎｅｄｙら，２０００（非特許文献１８）；Ｌｏｄｏｌｃｅら，２００１（非特許文献１９）；Ｂｕｒｋｅｔｔら，２００３（非特許文献２０）；Ｂｕｒｋｅｔｔら，２００４（非特許文献２１）；Ｓａｎｄａｕら，２００４（非特許文献２２）；Ｓｃｈｌｕｎｓら，２００４ａ（非特許文献２３）；Ｓｃｈｌｕｎｓら，２００４ｂ（非特許文献２４））。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαは合わせて１つの複合体として、それぞれの分子単体と比べて高い安定度と分泌を示す（Ｂｅｒｇａｍａｓｃｈｉら，２００８（非特許文献２５））。
【００１１】
ワクチン接種モデルにおけるその利用については、プラスミドにコードされたＩＬ−１５をＨＩＶ−１ワクチンアジュバントとして用いることによって、マウスにおける細胞障害性メモリＣＤ８＋Ｔ細胞の応答を増強することが以前に報告されている（Ｏｈら，２００３（非特許文献２６）；Ｋｕｔｚｌｅｒら，２００５（非特許文献２７）；Ｚｈａｎｇら，２００６（非特許文献２８）；Ｃａｌａｒｏｔａら，２００８（非特許文献２９）；Ｌｉら，２００８（非特許文献３０））。アカゲザルでの研究により、ＩＬ−１５は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のエフェクタ機能を高め（Ｐｉｃｋｅｒら，２００６（非特許文献３１））、エフェクタＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方で二重ＩＦＮ−γ／ＴＮＦ応答をレスキューする能力（Ｈａｌｗａｎｉら，２００８（非特許文献３２））も有することが分かった。重要な点として、アカゲザルにＳＩＶ／ＨＩＶ抗原とともにｐＩＬ−１５を加えると、ＳＨＩＶ８９．６ｐの投与の後の防御が増強された（Ｂｏｙｅｒら，２００７（非特許文献３３））ことが挙げられる。
【００１２】
そのようなワクチンは、多くの場合、病原体感染やヒトの疾病に対して予防的または治療的に個体を免疫化するために効果的であるが、より改善されたワクチンの必要性が存在する。また、より強化された免疫応答を発生させる組成物や方法の必要性も存在する。さらに、ＤＮＡワクチンに対する免疫応答を増強する新規なアジュバントなど、効果的なＤＮＡワクチンを可能にするべく戦略を改善する必要性も依然として存在する。
【００１３】
同様に、いくつかの免疫治療薬は患者の免疫応答を調節するのに有用であるが、より改善された免疫治療薬組成物や免疫治療方法の必要性も依然として存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】ＫＯＵＰ，Ｒ．Ａ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．Ｔ．，ＣＡＯ，Ｙ．，ＡＮＤＲＥＷＳ，Ｃ．Ａ．，ＭＣＬＥＯＤ，Ｇ．，ＢＯＲＫＯＷＳＫＹ，Ｗ．，ＦＡＲＴＨＩＮＧ，Ｃ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９４）．Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６８，  ４６５０−４６５５．
【非特許文献２】ＣＡＯ，Ｙ．，ＱＩＮ，Ｌ．，ＺＨＡＮＧ，Ｌ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９５）．Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３２，  ２０１−２０８．
【非特許文献３】ＭＵＳＥＹ，Ｌ．，ＨＵＧＨＥＳ，Ｊ．，ＳＣＨＡＣＫＥＲ，Ｔ．，ＳＨＥＡ，Ｔ．，ＣＯＲＥＹ，Ｌ．，およびＭＣＥＬＲＡＴＨ，Ｍ．Ｊ．（１９９７）．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，  ｖｉｒａｌ  ｌｏａｄ，  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３７，  １２６７−１２７４．
【非特許文献４】ＯＧＧ，Ｇ．Ｓ．，ＪＩＮ，Ｘ．，ＢＯＮＨＯＥＦＦＥＲ，Ｓ．，ＤＵＮＢＡＲ，Ｐ．Ｒ．，ＮＯＷＡＫ，Ｍ．Ａ．，ＭＯＮＡＲＤ，Ｓ．，ＳＥＧＡＬ，Ｊ．Ｐ．，ＣＡＯ，Ｙ．，ＲＯＷＬＡＮＤ−ＪＯＮＥＳ，Ｓ．Ｌ．，ＣＥＲＵＮＤＯＬＯ，Ｖ．，ＨＵＲＬＥＹ，Ａ．，ＭＡＲＫＯＷＩＴＺ，Ｍ．，ＨＯ，Ｄ．Ｄ．，ＮＩＸＯＮ，Ｄ．Ｆ．，およびＭＣＭＩＣＨＡＥＬ，Ａ．Ｊ．（１９９８）．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ−１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｌｏａｄ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ＲＮＡ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２７９，  ２１０３−２１０６．
【非特許文献５】ＢＥＴＴＳ，Ｍ．Ｒ．，ＫＲＯＷＫＡ，Ｊ．Ｆ．，ＫＥＰＬＥＲ，Ｔ．Ｂ．，ＤＡＶＩＤＩＡＮ，Ｍ．，ＣＨＲＩＳＴＯＰＨＥＲＳＯＮ，Ｃ．，ＫＷＯＫ，Ｓ．，ＬＯＵＩＥ，Ｌ．，ＥＲＯＮ，Ｊ．，ＳＨＥＰＰＡＲＤ，Ｈ．，およびＦＲＥＬＩＮＧＥＲ，Ｊ．Ａ．（１９９９）．Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｓ  ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ  ｔｙｐｅ  １  ｖｉｒａｌ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ＨＩＶ  ｔｙｐｅ  １−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ．  ＡＩＤＳ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  １５，  １２１９−１２２８．
【非特許文献６】ＪＩＮ，Ｘ．，ＢＡＵＥＲ，Ｄ．Ｅ．，ＴＵＴＴＬＥＴＯＮ，Ｓ．Ｅ．，ＬＥＷＩＮ，Ｓ．，ＧＥＴＴＩＥ，Ａ．，ＢＬＡＮＣＨＡＲＤ，Ｊ．，ＩＲＷＩＮ，Ｃ．Ｅ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．Ｔ．，ＭＩＴＴＬＥＲ，Ｊ．，ＷＥＩＮＢＥＲＧＥＲ，Ｌ．，ＫＯＳＴＲＩＫＩＳ，Ｌ．Ｇ．，ＺＨＡＮＧ，Ｌ．，ＰＥＲＥＬＳＯＮ，Ａ．Ｓ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９９）．Ｄｒａｍａｔｉｃ  ｒｉｓｅ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｖｉｒｅｍｉａ  ａｆｔｅｒ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍａｃａｑｕｅｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８９，  ９９１−９９８．
【非特許文献７】ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＳＡＮＴＲＡ，Ｓ．，ＳＡＳＳＥＶＩＬＬＥ，Ｖ．Ｇ．，ＳＩＭＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＲＡＣＺ，Ｐ．，ＴＥＮＮＥＲ−ＲＡＣＺ，Ｋ．，ＤＡＬＥＳＡＮＤＲＯ，Ｍ．，ＳＣＡＬＬＯＮ，Ｂ．Ｊ．，ＧＨＲＡＹＥＢ，Ｊ．，ＦＯＲＭＡＮ，Ｍ．Ａ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＲＩＥＢＥＲ，Ｅ．Ｐ．，ＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．，およびＲＥＩＭＡＮＮ，Ｋ．Ａ．（１９９９）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ｉｎ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤ８＋  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２８３，  ８５７−８６０．
【非特許文献８】ＢＡＲＯＵＣＨ，Ｄ．Ｈ．，ＳＡＮＴＲＡ，Ｓ．，ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＦＵ，Ｔ．Ｍ．，ＷＡＧＮＥＲ，Ｗ．，ＢＩＬＳＫＡ，Ｍ．，ＣＲＡＩＵ，Ａ．，ＺＨＥＮＧ，Ｘ．Ｘ．，ＫＲＩＶＵＬＫＡ，Ｇ．Ｒ．，ＢＥＡＵＤＲＹ，Ｋ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＮＩＣＫＥＲＳＯＮ，Ｃ．Ｅ．，ＴＲＩＧＯＮＡ，Ｗ．Ｌ．，ＰＵＮＴ，Ｋ．，ＦＲＥＥＤ，Ｄ．Ｃ．，ＧＵＡＮ，Ｌ．，ＤＵＢＥＹ，Ｓ．，ＣＡＳＩＭＩＲＯ，Ｄ．，ＳＩＭＯＮ，Ａ．，ＤＡＶＩＥＳ，Ｍ．Ｅ．，ＣＨＡＳＴＡＩＮ，Ｍ．，ＳＴＲＯＭ，Ｔ．Ｂ．，ＧＥＬＭＡＮ，Ｒ．Ｓ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＥＭＩＮＩ，Ｅ．Ａ．，ＳＨＩＶＥＲ，Ｊ．Ｗ．，およびＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．（２０００）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＡＩＤＳ  ｉｎ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｂｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２９０，  ４８６−４９２．
【非特許文献９】ＡＭＡＲＡ，Ｒ．Ｒ．，ＶＩＬＬＩＮＧＥＲ，Ｆ．，ＡＬＴＭＡＮ，Ｊ．Ｄ．，ＬＹＤＹ，Ｓ．Ｌ．，Ｏ’ＮＥＩＬ，Ｓ．Ｐ．，ＳＴＡＰＲＡＮＳ，Ｓ．Ｉ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＸＵ，Ｙ．，ＨＥＲＮＤＯＮ，Ｊ．Ｇ．，ＷＹＡＴＴ，Ｌ．Ｓ．，ＣＡＮＤＩＤＯ，Ｍ．Ａ．，ＫＯＺＹＲ，Ｎ．Ｌ．，ＥＡＲＬ，Ｐ．Ｌ．，ＳＭＩＴＨ，Ｊ．Ｍ．，ＭＡ，Ｈ．Ｌ．，ＧＲＩＭＭ，Ｂ．Ｄ．，ＨＵＬＳＥＹ，Ｍ．Ｌ．，ＭＩＬＬＥＲ，Ｊ．，ＭＣＣＬＵＲＥ，Ｈ．Ｍ．，ＭＣＮＩＣＨＯＬＬ，Ｊ．Ｍ．，ＭＯＳＳ，Ｂ．，およびＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｈ．Ｌ．（２００１）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ａ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＩＤＳ  ｂｙ  ａ  ｍｕｌｔｉｐｒｏｔｅｉｎ  ＤＮＡ／ＭＶＡ  ｖａｃｃｉｎｅ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ  ２９２，６９−７４．
【非特許文献１０】ＳＨＩＶＥＲ，Ｊ．Ｗ．，ＦＵ，Ｔ．Ｍ．，ＣＨＥＮ，Ｌ．，ＣＡＳＩＭＩＲＯ，Ｄ．Ｒ．，ＤＡＶＩＥＳ，Ｍ．Ｅ．，ＥＶＡＮＳ，Ｒ．Ｋ．，ＺＨＡＮＧ，Ｚ．Ｑ．，ＳＩＭＯＮ，Ａ．Ｊ．，ＴＲＩＧＯＮＡ，Ｗ．Ｌ．，ＤＵＢＥＹ，Ｓ．Ａ．，ＨＵＡＮＧ，Ｌ．，ＨＡＲＲＩＳ，Ｖ．Ａ．，ＬＯＮＧ，Ｒ．Ｓ．，ＬＩＡＮＧ，Ｘ．，ＨＡＮＤＴ，Ｌ．，ＳＣＨＬＥＩＦ，Ｗ．Ａ．，ＺＨＵ，Ｌ．，ＦＲＥＥＤ，Ｄ．Ｃ．，ＰＥＲＳＡＵＤ，Ｎ．Ｖ．，ＧＵＡＮ，Ｌ．，ＰＵＮＴ，Ｋ．Ｓ．，ＴＡＮＧ，Ａ．，ＣＨＥＮ，Ｍ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｋ．Ａ．，ＣＯＬＬＩＮＳ，Ｋ．Ｂ．，ＨＥＩＤＥＣＫＥＲ，Ｇ．Ｊ．，ＦＥＲＮＡＮＤＥＺ，Ｖ．Ｒ．，ＰＥＲＲＹ，Ｈ．Ｃ．，ＪＯＹＣＥ，Ｊ．Ｇ．，ＧＲＩＭＭ，Ｋ．Ｍ．，ＣＯＯＫ，Ｊ．Ｃ．，ＫＥＬＬＥＲ，Ｐ．Ｍ．，ＫＲＥＳＯＣＫ，Ｄ．Ｓ．，ＭＡＣＨ，Ｈ．，ＴＲＯＵＴＭＡＮ，Ｒ．Ｄ．，ＩＳＯＰＩ，Ｌ．Ａ．，ＷＩＬＬＩＡＭＳ，Ｄ．Ｍ．，ＸＵ，Ｚ．，ＢＯＨＡＮＮＯＮ，Ｋ．Ｅ．，ＶＯＬＫＩＮ，Ｄ．Ｂ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＭＩＵＲＡ，Ａ．，ＫＲＩＶＵＬＫＡ，Ｇ．Ｒ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．，ＣＡＵＬＦＩＥＬＤ，Ｍ．Ｊ．，ＢＥＴＴ，Ａ．Ｊ．，ＹＯＵＩＬ，Ｒ．，ＫＡＳＬＯＷ，Ｄ．Ｃ．，およびＥＭＩＮＩ，Ｅ．Ａ．（２００２）．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｉｎｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉ−ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ−ｖｉｒｕｓ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４１５，  ３３１−３３５．
【非特許文献１１】ＭＯＲＲＯＷ，Ｍ．Ｐ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００８）．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  ＡＩＤＳ  （Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｅｎｇｌａｎｄ）  ２２，  ３３３−３３８．
【非特許文献１２】ＤＵＢＯＩＳ，Ｓ．，ＭＡＲＩＮＥＲ，Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．（２００２）．ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ  ｒｅｃｙｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｅｎｔｓ  ＩＬ−１５  Ｉｎ  ｔｒａｎｓ  ｔｏ  ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １７，  ５３７−５４７．
【非特許文献１３】ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，およびＭＡ，Ａ．（２００４）．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｑｕｉｒｅ  ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｔｏ  ｐｒｉｍｅ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７３，  ３５９４−３５９８．
【非特許文献１４】ＬＵＣＡＳ，Ｍ．，ＳＣＨＡＣＨＴＥＲＬＥ，Ｗ．，ＯＢＥＲＬＥ，Ｋ．，ＡＩＣＨＥＬＥ，Ｐ．，およびＤＩＥＦＥＮＢＡＣＨ，Ａ．（２００７）．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｉｍｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔｒａｎｓ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２６，  ５０３−５１７．
【非特許文献１５】ＳＡＴＯ，Ｎ．，ＰＡＴＥＬ，Ｈ．Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．（２００７）．Ｔｈｅ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ  ｏｎ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  ｅｎａｂｌｅｓ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ＩＬ−１５  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｌｏｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ＣＤ８  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０４，  ５８８−５９３．
【非特許文献１６】ＤＵＩＴＭＡＮ，Ｅ．Ｈ．，ＯＲＩＮＳＫＡ，Ｚ．，ＢＵＬＡＮＯＶＡ，Ｅ．，ＰＡＵＳ，Ｒ．，およびＢＵＬＦＯＮＥ−ＰＡＵＳ，Ｓ．（２００８）．Ｈｏｗ  ａ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｓ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｏｗｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：  ｌｅｓｓｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ｛ａｌｐｈａ｝．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ．
【非特許文献１７】ＬＯＤＯＬＣＥ，Ｊ．Ｐ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＳＷＡＩＮ，Ｒ．Ｅ．，ＤＡＳＳＯＰＯＵＬＯＳ，Ｔ．，ＴＲＥＴＴＩＮ，Ｓ．，およびＭＡ，Ａ．（１９９８）．ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｈｏｍｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９，  ６６９−６７６．
【非特許文献１８】ＫＥＮＮＥＤＹ，Ｍ．Ｋ．，ＧＬＡＣＣＵＭ，Ｍ．，ＢＲＯＷＮ，Ｓ．Ｎ．，ＢＵＴＺ，Ｅ．Ａ．，ＶＩＮＥＹ，Ｊ．Ｌ．，ＥＭＢＥＲＳ，Ｍ．，ＭＡＴＳＵＫＩ，Ｎ．，ＣＨＡＲＲＩＥＲ，Ｋ．，ＳＥＤＧＥＲ，Ｌ．，ＷＩＬＬＩＳ，Ｃ．Ｒ．，ＢＲＡＳＥＬ，Ｋ．，ＭＯＲＲＩＳＳＥＹ，Ｐ．Ｊ．，ＳＴＯＣＫＩＮＧ，Ｋ．，ＳＣＨＵＨ，Ｊ．Ｃ．，ＪＯＹＣＥ，Ｓ．，およびＰＥＳＣＨＯＮ，Ｊ．Ｊ．（２０００）．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅａｇｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９１，  ７７１−７８０．
【非特許文献１９】ＬＯＤＯＬＣＥ，Ｊ．Ｐ．，ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，およびＭＡ，Ａ．（２００１）．Ｔ  ｃｅｌｌ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５Ｒａｌｐｈａ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９４，  １１８７−１１９４．
【非特許文献２０】ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＣＨＡＮ，Ｆ．，ＭＡ，Ａ．，およびＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．（２００３）．ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １００，  ４７２４−４７２９．
【非特許文献２１】ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，およびＭＡ，Ａ．（２００４）．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  （ＩＬ）−１５Ｒａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００，  ８２５−８３４．
【非特許文献２２】ＳＡＮＤＡＵ，Ｍ．Ｍ．，ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．，およびＪＡＭＥＳＯＮ，Ｓ．Ｃ．（２００４）．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｔｒａｎｓｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｂｙ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｎｅｃｅｓｓｉｔａｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ａｎｄ  ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７３，  ６５３７−６５４１．
【非特許文献２３】ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＫＬＯＮＯＷＳＫＩ，Ｋ．Ｄ．，およびＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．（２００４ａ）．Ｔｒａｎｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ＋  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １０３，  ９８８−９９４．
【非特許文献２４】ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＮＯＷＡＫ，Ｅ．Ｃ．，ＣＡＢＲＥＲＡ−ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ，Ａ．，ＰＵＤＤＩＮＧＴＯＮ，Ｌ．，ＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．，およびＡＧＵＩＬＡ，Ｈ．Ｌ．（２００４ｂ）．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｓｕｂｓｅｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｂｙ  ｍｅａｎｓ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０１，  ５６１６−５６２１．
【非特許文献２５】ＢＥＲＧＡＭＡＳＣＨＩ，Ｃ．，ＲＯＳＡＴＩ，Ｍ．，ＪＡＬＡＨ，Ｒ．，ＶＡＬＥＮＴＩＮ，Ａ．，ＫＵＬＫＡＲＮＩ，Ｖ．，ＡＬＩＣＥＡ，Ｃ．，ＺＨＡＮＧ，Ｇ．Ｍ．，ＰＡＴＥＬ，Ｖ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，およびＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．（２００８）．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｍｕｔｕａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８３，  ４１８９−４１９９．
【非特許文献２６】ＯＨ，Ｓ．，ＢＥＲＺＯＦＳＫＹ，Ｊ．Ａ．，ＢＵＲＫＥ，Ｄ．Ｓ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＰＥＲＥＲＡ，Ｌ．Ｐ．（２００３）．Ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＩＬ−１５  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＩＬ−２  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １００，  ３３９２−３３９７．
【非特許文献２７】ＫＵＴＺＬＥＲ，Ｍ．Ａ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＣＨＡＴＴＥＲＧＯＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＣＨＯＯ，Ｄ．Ｋ．，ＣＨＯＯ，Ａ．Ｙ．，ＣＨＯＥ，Ｐ．Ｙ．，ＲＡＭＡＮＡＴＨＡＮ，Ｍ．Ｐ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＫＵＤＣＨＯＤＫＡＲ，Ｓ．，ＴＡＭＵＲＡ，Ｙ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．，ＲＯＯＰＣＨＡＮＤ，Ｖ．，ＫＩＭ，Ｊ．Ｊ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００５）．Ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｅｌｐ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７５，  １１２−１２３．
【非特許文献２８】ＺＨＡＮＧ，Ｗ．，ＤＯＮＧ，Ｓ．Ｆ．，ＳＵＮ，Ｓ．Ｈ．，ＷＡＮＧ，Ｙ．，ＬＩ，Ｇ．Ｄ．，およびＱＵ，Ｄ．（２００６）．Ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ＤＮＡ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｃｏｒｅ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １２，  ４７２７−４７３５．
【非特許文献２９】ＣＡＬＡＲＯＴＡ，Ｓ．Ａ．，ＤＡＩ，Ａ．，ＴＲＯＣＩＯ，Ｊ．Ｎ．，ＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．，ＬＯＲＩ，Ｆ．，およびＬＩＳＺＩＥＷＩＣＺ，Ｊ．（２００８）．ＩＬ−１５  ａｓ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ＨＩＶ−１  ＤｅｒｍａＶｉｒ  ｖａｃｃｉｎｅ．  Ｖａｃｃｉｎｅ．
【非特許文献３０】ＬＩ，Ｗ．，ＬＩ，Ｓ．，ＨＵ，Ｙ．，ＴＡＮＧ，Ｂ．，ＣＵＩ，Ｌ．，およびＨＥ，Ｗ．（２００８）．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ＨＩＶ−１  ｇａｇ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｂｏｏｓｔｉｎｇ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２６，  ３２８２−３２９０．
【非特許文献３１】ＰＩＣＫＥＲ，Ｌ．Ｊ．，ＲＥＥＤ−ＩＮＤＥＲＢＩＴＺＩＮ，Ｅ．Ｆ．，ＨＡＧＥＮ，Ｓ．Ｉ．，ＥＤＧＡＲ，Ｊ．Ｂ．，ＨＡＮＳＥＮ，Ｓ．Ｇ．，ＬＥＧＡＳＳＥ，Ａ．，ＰＬＡＮＥＲ，Ｓ．，ＰＩＡＴＡＫ，Ｍ．，ＪＲ．，ＬＩＦＳＯＮ，Ｊ．Ｄ．，ＭＡＩＮＯ，Ｖ．Ｃ．，ＡＸＴＨＥＬＭ，Ｍ．Ｋ．，およびＶＩＬＬＩＮＧＥＲ，Ｆ．（２００６）．ＩＬ−１５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ＣＤ４  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｅｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１６，  １５１４−１５２４．
【非特許文献３２】ＨＡＬＷＡＮＩ，Ｒ．，ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，ＹＡＳＳＩＮＥ−ＤＩＡＢ，Ｂ．，ＨＡＤＤＡＤ，Ｅ．Ｋ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＫＵＭＡＲ，Ｓ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＷＵ，Ｌ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．Ｋ．，ＰＨＩＬＬＩＰＳＯＮ−ＷＥＩＮＥＲ，Ｒ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＳＨＥＮ，Ａ．，ＳＩＬＩＣＩＡＮＯ，Ｒ．Ｆ．，ＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．，およびＳＥＫＡＬＹ，Ｒ．Ｐ．（２００８）．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  （ＳＩＶ）−ＤＮＡ＋ＩＬ−１２  ｏｒ  ＩＬ−１５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＣＤ８  ｍｅｍｏｒｙ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ＳＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍａｃａｑｕｅｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０，  ７９６９−７９７９．
【非特許文献３３】ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＫＵＴＺＬＥＲ，Ｍ．Ａ．，ＶＡＮＳＡＮＴ，Ｇ．，ＨＯＫＥＹ，Ｄ．Ａ．，ＫＵＭＡＲ，Ｓ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＷＵ，Ｌ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．Ｋ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＢＲＯＷＮ，Ｃ．，ＳＩＬＶＥＲＡ，Ｐ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＭＯＮＦＯＲＴＥ，Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，ＥＬＤＲＩＤＧＥ，Ｊ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００７）．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｓｉｍｉａｎ／ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  （ＳＨＩＶ）  ８９．６Ｐ  ｉｎ  ｍａｃａｑｕｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＳＨＩＶ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０４，  １８６４８−１８６５３．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、ＩＬ−１５Ｒａの免疫調節機能および／またはＩＬ−１５の結合機能および/またはＩＬ−１５受容体複合体の他のサブユニットへの結合機能を有するタンパク質をコードするＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはその断片を含む核酸分子に関する。
【００１６】
本発明は、免疫原をコードする単離された核酸分子を、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片をコードする単離された核酸分子とともに含む組成物に関する。
【００１７】
本発明はさらに、免疫原およびＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片の両方をコードする単離された核酸分子を含む組成物に関する。
【００１８】
本発明は、免疫原をコードする単離された核酸分子を、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片をコードする単離された核酸分子とともに含む注入可能な医薬組成物に関する。
【００１９】
本発明はさらに、免疫原およびＩＬ−Ｒａまたはその機能性断片の両方をコードする単離された核酸分子を含む注入可能な医薬組成物に関する。
【００２０】
本発明のいくつかの側面では、前記免疫原は病原体抗原、癌関連抗原、または自己免疫疾患に関連する細胞からの抗原である。いくつかの側面では、前記病原体は、慢性感染症を引き起こす病原体である。
【００２１】
本発明はさらに、免疫原をコードする単離された核酸分子を、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片をコードする単離された核酸分子とともに含む組成物を個体に対して投与する工程を含む、個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法に関する。
【００２２】
本発明はさらに、免疫原とＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片とをコードする核酸分子を個体に対して投与する工程を含む、個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法に関する。
【００２３】
本発明はさらに、調節エレメントに機能可能に結合された免疫原をコードするヌクレオチド配列、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片をコードするヌクレオチド配列を含む組換え体ワクチン、およびそのような組換え体ワクチンを個体に対して投与する工程を含む、個体において免疫原に対する免疫応答を誘発する方法に関する。
【００２４】
本発明はさらに、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片をコードするヌクレオチド配列を含む弱毒化生ワクチン、およびその弱毒化生ワクチンを個体に対して投与する工程を含む、個体において病原体に対する免疫応答を誘発する方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＩＬ−１５Ｒαモノクローナル抗体の産生に関連する結果と情報を示す図である。図１Ａは、１２．０乃至０．１６μｇタンパク質からの２倍希釈溶液における組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のクマシー染色を示す。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体で、直接法のＥＬＩＳＡで組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を検出できることを示す。図１Ｃは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗ヒトＩＬ−１５Ｒαモノクロナール抗体の産生のための免疫化スケジュールを示す。図１Ｄは、ＥＬＩＳＡにより、クローンＫＫ１．２３からのハイブリドーマ上清が、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質に対する高力価抗体を有することを示す。図１Ｅは、精製されたモノクローナル抗体ＫＫ１．２３がＥＬＩＳＡにて組換え体ＩＬ−１５Ｒαに結合することを示し、ウエスタンブロット法により結合が特異的であることを示す。
【図１Ｂ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＩＬ−１５Ｒαモノクローナル抗体の産生に関連する結果と情報を示す図である。図１Ａは、１２．０乃至０．１６μｇタンパク質からの２倍希釈溶液における組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のクマシー染色を示す。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体で、直接法のＥＬＩＳＡで組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を検出できることを示す。図１Ｃは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗ヒトＩＬ−１５Ｒαモノクロナール抗体の産生のための免疫化スケジュールを示す。図１Ｄは、ＥＬＩＳＡにより、クローンＫＫ１．２３からのハイブリドーマ上清が、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質に対する高力価抗体を有することを示す。図１Ｅは、精製されたモノクローナル抗体ＫＫ１．２３がＥＬＩＳＡにて組換え体ＩＬ−１５Ｒαに結合することを示し、ウエスタンブロット法により結合が特異的であることを示す。
【図１Ｃ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＩＬ−１５Ｒαモノクローナル抗体の産生に関連する結果と情報を示す図である。図１Ａは、１２．０乃至０．１６μｇタンパク質からの２倍希釈溶液における組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のクマシー染色を示す。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体で、直接法のＥＬＩＳＡで組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を検出できることを示す。図１Ｃは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗ヒトＩＬ−１５Ｒαモノクロナール抗体の産生のための免疫化スケジュールを示す。図１Ｄは、ＥＬＩＳＡにより、クローンＫＫ１．２３からのハイブリドーマ上清が、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質に対する高力価抗体を有することを示す。図１Ｅは、精製されたモノクローナル抗体ＫＫ１．２３がＥＬＩＳＡにて組換え体ＩＬ−１５Ｒαに結合することを示し、ウエスタンブロット法により結合が特異的であることを示す。
【図１Ｄ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＩＬ−１５Ｒαモノクローナル抗体の産生に関連する結果と情報を示す図である。図１Ａは、１２．０乃至０．１６μｇタンパク質からの２倍希釈溶液における組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のクマシー染色を示す。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体で、直接法のＥＬＩＳＡで組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を検出できることを示す。図１Ｃは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗ヒトＩＬ−１５Ｒαモノクロナール抗体の産生のための免疫化スケジュールを示す。図１Ｄは、ＥＬＩＳＡにより、クローンＫＫ１．２３からのハイブリドーマ上清が、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質に対する高力価抗体を有することを示す。図１Ｅは、精製されたモノクローナル抗体ＫＫ１．２３がＥＬＩＳＡにて組換え体ＩＬ−１５Ｒαに結合することを示し、ウエスタンブロット法により結合が特異的であることを示す。
【図１Ｅ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＩＬ−１５Ｒαモノクローナル抗体の産生に関連する結果と情報を示す図である。図１Ａは、１２．０乃至０．１６μｇタンパク質からの２倍希釈溶液における組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のクマシー染色を示す。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体で、直接法のＥＬＩＳＡで組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を検出できることを示す。図１Ｃは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗ヒトＩＬ−１５Ｒαモノクロナール抗体の産生のための免疫化スケジュールを示す。図１Ｄは、ＥＬＩＳＡにより、クローンＫＫ１．２３からのハイブリドーマ上清が、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質に対する高力価抗体を有することを示す。図１Ｅは、精製されたモノクローナル抗体ＫＫ１．２３がＥＬＩＳＡにて組換え体ＩＬ−１５Ｒαに結合することを示し、ウエスタンブロット法により結合が特異的であることを示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｃ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｄ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｅ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｆ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図２Ｇ】図２Ａ〜図２Ｇは、ＩＬ−１５ＲαのＤＮＡのプラスミドの構築と発現に関連する図である。図２Ａは、ヒトＩＬ−１５ＲαのｃＤＮＡが、いかにしてｐＶＡＸ１発現ベクターに挿入されたかを示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、Ｒ＆Ｄ社のモノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体およびＫＫ１．２３モノクローナル抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体を用いた放射性元素を利用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により検出されたように、プラスミドのＩＬ−１５Ｒαが適切なサイズのタンパク質（〜３０ｋＤａ）を発現していることを示す。図２Ｄは、モノクローナルＫＫ１．２３抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）が、トランスフェクトされていないＨｅＬａ細胞には結合しないことを示す（２０×）。図２Ｅは、マウスのＩｇＧ１アイソタイプの対照で（緑に）染色した、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＩＬ−１５Ｒαトランスフェクト細胞を示す（２０×）。図２Ｆおよび図２Ｇは、ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（赤）が、ｐＩＬ−１５Ｒα−ｐＴＲＡＣＥＲトランスフェクト細胞に結合することを２０×および６０×でそれぞれ示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、それぞれのプラスミド単体が与えられた場合と比較して免疫応答を一層増強することを示す図である。図３Ａは、ベクター、抗原性プラスミド（ＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ）、ｐＩＬ−１５、および／またはｐＩＬ−１５Ｒαの組合せを含むＤＮＡ調合物を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスのグループに対する免疫化スケジュールを示す。ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せは、マウスの同じ脚に与えられるか、または２つの異なる脚にそれぞれ分けて（一方にｐＩＬ−１５、他方にｐＩＬ−１５Ｒα）与えられた。筋肉内接種を、電気穿孔処理とともに３回行い、マウスは最終追加接種の１週間後に犠牲処置した。図３Ｂおよび図３Ｃは、細胞性の応答を示す。免疫化マウス由来の脾細胞を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイで用いた。脾細胞を、培地とともに（陰性対照）、コンカナバリンＡとともに（陽性対照）、または抗原性ペプチド（ＨＩＶ−１  ｇａｇおよびｐｏｌプール）とともに一晩刺激し、ＩＦＮ−γスポット形成ユニット数をカウントした。
【図３Ｂ】図３Ａ〜図３Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、それぞれのプラスミド単体が与えられた場合と比較して免疫応答を一層増強することを示す図である。図３Ａは、ベクター、抗原性プラスミド（ＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ）、ｐＩＬ−１５、および／またはｐＩＬ−１５Ｒαの組合せを含むＤＮＡ調合物を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスのグループに対する免疫化スケジュールを示す。ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せは、マウスの同じ脚に与えられるか、または２つの異なる脚にそれぞれ分けて（一方にｐＩＬ−１５、他方にｐＩＬ−１５Ｒα）与えられた。筋肉内接種を、電気穿孔処理とともに３回行い、マウスは最終追加接種の１週間後に犠牲処置した。図３Ｂおよび図３Ｃは、細胞性の応答を示す。免疫化マウス由来の脾細胞を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイで用いた。脾細胞を、培地とともに（陰性対照）、コンカナバリンＡとともに（陽性対照）、または抗原性ペプチド（ＨＩＶ−１  ｇａｇおよびｐｏｌプール）とともに一晩刺激し、ＩＦＮ−γスポット形成ユニット数をカウントした。
【図３Ｃ】図３Ａ〜図３Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、それぞれのプラスミド単体が与えられた場合と比較して免疫応答を一層増強することを示す図である。図３Ａは、ベクター、抗原性プラスミド（ＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ）、ｐＩＬ−１５、および／またはｐＩＬ−１５Ｒαの組合せを含むＤＮＡ調合物を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスのグループに対する免疫化スケジュールを示す。ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せは、マウスの同じ脚に与えられるか、または２つの異なる脚にそれぞれ分けて（一方にｐＩＬ−１５、他方にｐＩＬ−１５Ｒα）与えられた。筋肉内接種を、電気穿孔処理とともに３回行い、マウスは最終追加接種の１週間後に犠牲処置した。図３Ｂおよび図３Ｃは、細胞性の応答を示す。免疫化マウス由来の脾細胞を、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイで用いた。脾細胞を、培地とともに（陰性対照）、コンカナバリンＡとともに（陽性対照）、または抗原性ペプチド（ＨＩＶ−１  ｇａｇおよびｐｏｌプール）とともに一晩刺激し、ＩＦＮ−γスポット形成ユニット数をカウントした。
【図４Ａ】図４Ａおよび図４Ｂは、ＩＬ−１５ＲαＤＮＡプラスミドが、ｐＩＬ−１５の不存在下で用量に依存する免疫原性であることを示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、ベクター、５μｇの抗原性プラスミド（ＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ）、および用量を漸次増加させたＩＬ−１５Ｒα（７．５、１０、または１５μｇ）の組合せを含むＤＮＡ調合物で図３Ａに示すように免疫化した。Ｒ１０で（陰性対照）、コンカナバリンＡで（陽性対照）、およびＨＩＶ−１ｇａｇペプチドのプールまたはＨＩＶ−１ｐｏｌペプチドのプールで刺激した脾細胞に対してＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔを実施した。ＨＩＶ−１ｇａｇペプチドのプールを用いた実験のデータを図４Ａに示す。ＨＩＶ−１ｐｏｌペプチドのプールを用いた実験のデータを図４Ｂに示す。
【図４Ｂ】図４Ａおよび図４Ｂは、ＩＬ−１５ＲαＤＮＡプラスミドが、ｐＩＬ−１５の不存在下で用量に依存する免疫原性であることを示す図である。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、ベクター、５μｇの抗原性プラスミド（ＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ）、および用量を漸次増加させたＩＬ−１５Ｒα（７．５、１０、または１５μｇ）の組合せを含むＤＮＡ調合物で図３Ａに示すように免疫化した。Ｒ１０で（陰性対照）、コンカナバリンＡで（陽性対照）、およびＨＩＶ−１ｇａｇペプチドのプールまたはＨＩＶ−１ｐｏｌペプチドのプールで刺激した脾細胞に対してＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔを実施した。ＨＩＶ−１ｇａｇペプチドのプールを用いた実験のデータを図４Ａに示す。ＨＩＶ−１ｐｏｌペプチドのプールを用いた実験のデータを図４Ｂに示す。
【図５Ａ】図５Ａおよび図５Ｂは、ｐＩＬ−１５Ｒαが、主にＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増加させることを示す図である。ＣＤ８＋Ｔ細胞による分泌がＩＦＮ−γの分泌中のどの程度を占めるかを、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社のビーズを用いて、免疫化されたマウスの脾細胞からのＣＤ８＋Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ除去処理によって測定した。図５Ａは、全脾細胞に対するもの（黒色）と、ＣＤ８が欠乏した脾細胞（灰色）とに対する全抗原反応であって、ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔによって測定されたものを示す。図５Ｂでは、ＨＩＶ−１ｇａｇ  ｐ２４抗原性タンパク質に対する抗体の力価を、［材料および方法］の項で説明する同一の構築物とスケジュールで免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスの血清サンプルから決定した。犠牲時に採取されたサンプルの希釈液列を、ｐ２４でコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で走らせて、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体で検出し、抗原特異的なＩｇＧのレベルを測定した。希釈液ウェルのみにおけるバックグラウンドの反応は、グラフに描く前にサンプルのＯＤ値から差し引いた。
【図５Ｂ】図５Ａおよび図５Ｂは、ｐＩＬ−１５Ｒαが、主にＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増加させることを示す図である。ＣＤ８＋Ｔ細胞による分泌がＩＦＮ−γの分泌中のどの程度を占めるかを、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社のビーズを用いて、免疫化されたマウスの脾細胞からのＣＤ８＋Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ除去処理によって測定した。図５Ａは、全脾細胞に対するもの（黒色）と、ＣＤ８が欠乏した脾細胞（灰色）とに対する全抗原反応であって、ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔによって測定されたものを示す。図５Ｂでは、ＨＩＶ−１ｇａｇ  ｐ２４抗原性タンパク質に対する抗体の力価を、［材料および方法］の項で説明する同一の構築物とスケジュールで免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスの血清サンプルから決定した。犠牲時に採取されたサンプルの希釈液列を、ｐ２４でコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上で走らせて、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体で検出し、抗原特異的なＩｇＧのレベルを測定した。希釈液ウェルのみにおけるバックグラウンドの反応は、グラフに描く前にサンプルのＯＤ値から差し引いた。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、メモリ応答を増強させないことを示す図である。マウスは３回免疫化し、犠牲前に３０週間おいた。図６Ａは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔにより、免疫化されたマウスの脾細胞からＩＦＮ−γ分泌を測定したことを示す。図６Ｂは、免疫化されたマウスからのメモリ応答を決定するために用いた細胞内サイトカイン染色を示す。免疫化されたマウスの脾細胞を、培地において、ＰＭＡ／イオノマイシンで、またはブレフェルジンＡの存在下でドミナントな、およびサブドミナントなＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ抗原ペプチドのそれぞれで５時間刺激した。図６Ｃでは、免疫化されたマウスから血清を採取し、ＨＩＶ−１ｇａｇ  ｐ２４ＥＬＩＳＡで走らせた。血清の希釈液列において抗原特異的ＩｇＧの有無を解析した。希釈液ウェルのみにおけるバックグラウンドの反応は、グラフに描く前にサンプルのＯＤ値から差し引いた。
【図６Ｂ】図６Ａ〜図６Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、メモリ応答を増強させないことを示す図である。マウスは３回免疫化し、犠牲前に３０週間おいた。図６Ａは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔにより、免疫化されたマウスの脾細胞からＩＦＮ−γ分泌を測定したことを示す。図６Ｂは、免疫化されたマウスからのメモリ応答を決定するために用いた細胞内サイトカイン染色を示す。免疫化されたマウスの脾細胞を、培地において、ＰＭＡ／イオノマイシンで、またはブレフェルジンＡの存在下でドミナントな、およびサブドミナントなＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ抗原ペプチドのそれぞれで５時間刺激した。図６Ｃでは、免疫化されたマウスから血清を採取し、ＨＩＶ−１ｇａｇ  ｐ２４ＥＬＩＳＡで走らせた。血清の希釈液列において抗原特異的ＩｇＧの有無を解析した。希釈液ウェルのみにおけるバックグラウンドの反応は、グラフに描く前にサンプルのＯＤ値から差し引いた。
【図６Ｃ】図６Ａ〜図６Ｃは、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが、メモリ応答を増強させないことを示す図である。マウスは３回免疫化し、犠牲前に３０週間おいた。図６Ａは、ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔにより、免疫化されたマウスの脾細胞からＩＦＮ−γ分泌を測定したことを示す。図６Ｂは、免疫化されたマウスからのメモリ応答を決定するために用いた細胞内サイトカイン染色を示す。免疫化されたマウスの脾細胞を、培地において、ＰＭＡ／イオノマイシンで、またはブレフェルジンＡの存在下でドミナントな、およびサブドミナントなＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌ抗原ペプチドのそれぞれで５時間刺激した。図６Ｃでは、免疫化されたマウスから血清を採取し、ＨＩＶ−１ｇａｇ  ｐ２４ＥＬＩＳＡで走らせた。血清の希釈液列において抗原特異的ＩｇＧの有無を解析した。希釈液ウェルのみにおけるバックグラウンドの反応は、グラフに描く前にサンプルのＯＤ値から差し引いた。
【図７Ａ】図７Ａ〜図７Ｃは、ｐＩＬ−１５Ｒαが、内生ＩＬ−１５の不存在下でアジュバントとなり得ることを示す図である。ＩＬ−１５Ｒαがアジュバントとして機能する機序を探るために、本発明者はヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合する能力を調べた。図７Ａは、放射性標識したヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合し、抗マウスＩＬ−１５抗体と免疫共沈降したことを示す。図７Ｂに示すように対照のＣ５７ＢＬ／６においても、また図７Ｃに示すようにＩＬ−１５ノックアウトマウスにおいても、図３Ａのスケジュールに従って免疫化を反復し、脾細胞に対してはＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔを実施した。
【図７Ｂ】図７Ａ〜図７Ｃは、ｐＩＬ−１５Ｒαが、内生ＩＬ−１５の不存在下でアジュバントとなり得ることを示す図である。ＩＬ−１５Ｒαがアジュバントとして機能する機序を探るために、本発明者はヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合する能力を調べた。図７Ａは、放射性標識したヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合し、抗マウスＩＬ−１５抗体と免疫共沈降したことを示す。図７Ｂに示すように対照のＣ５７ＢＬ／６においても、また図７Ｃに示すようにＩＬ−１５ノックアウトマウスにおいても、図３Ａのスケジュールに従って免疫化を反復し、脾細胞に対してはＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔを実施した。
【図７Ｃ】図７Ａ〜図７Ｃは、ｐＩＬ−１５Ｒαが、内生ＩＬ−１５の不存在下でアジュバントとなり得ることを示す図である。ＩＬ−１５Ｒαがアジュバントとして機能する機序を探るために、本発明者はヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合する能力を調べた。図７Ａは、放射性標識したヒトＩＬ−１５ＲαがマウスのＩＬ−１５に結合し、抗マウスＩＬ−１５抗体と免疫共沈降したことを示す。図７Ｂに示すように対照のＣ５７ＢＬ／６においても、また図７Ｃに示すようにＩＬ−１５ノックアウトマウスにおいても、図３Ａのスケジュールに従って免疫化を反復し、脾細胞に対してはＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔを実施した。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本明細書で使用される「ＩＬ−１５Ｒａ」という用語は、インターロイキン１５受容体αタンパク質をさす。
【００２７】
本明細書で使用される「機能性断片」とは、ＩＬ−１５Ｒａの断片であって、免疫原とともに与えられたときに誘発される免疫応答が、その断片なしに免疫原が与えられたときに誘発される免疫応答と比較して高い免疫応答となるものを意味する。断片は通常１０個以上のアミノ酸からなる長さを有する。
【００２８】
本明細書で使用される「標的タンパク質」という用語は、免疫応答の標的タンパク質として作用する、本発明の遺伝子構築物によってコードされるペプチドおよびタンパク質を意味する。「標的タンパク質」という用語と「免疫原」という用語は、互換的に用いられ、免疫応答が誘発される対象となるタンパク質をさす。標的タンパク質は免疫原性タンパク質であって、病原体または、免疫応答の対象となることが望ましい癌細胞または自己免疫疾患に関与する細胞などの望ましくない細胞型に由来するタンパク質と少なくとも１つのエピトープを共有する。標的タンパク質に対する免疫応答は、当該標的タンパク質が関連する特定の感染症や疾病に対して個体を防御および／または治療するものとなる。
【００２９】
本明細書で使用される「遺伝子構築物」とは、標的タンパク質または免疫調節タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子をさす。コード配列は、当該核酸分子が投与される個体の細胞での発現を誘導できるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに機能可能に結合された開始シグナルおよび終止シグナルを含む。
【００３０】
本明細書で使用される「発現可能な形態」という用語は、標的タンパク質または免疫調節タンパク質をコードするコード配列に機能可能に結合された、必要な調節エレメントを含み、個体の細胞に存在するとき、そのコード配列が発現されるように構成された遺伝子構築物をさす。
【００３１】
本明細書で使用される「エピトープの共有」という用語は、他のタンパク質のエピトープと同一または実質的に類似なエピトープを少なくとも１つ含むタンパク質をさす。
【００３２】
本明細書で使用される「実質的に類似なエピトープ」という用語は、別のあるタンパク質のエピトープと構造は同一ではないが、そのタンパク質と交差反応する細胞性免疫応答または体液性免疫応答を引き起こすエピトープを意味する。
【００３３】
本明細書で使用される「細胞内病原体」という用語は、その生殖周期または生活周期の少なくとも一時期にホストの細胞内部に存在し、そこで病原体タンパク質を産生する、またはその産生を引き起こすウイルスまたは病原体を意味する。
【００３４】
本明細書で使用される「過剰増殖性疾患」という用語は、細胞の過剰増殖によって特性化される疾病および障害を意味する。
【００３５】
本明細書で使用される「過剰増殖関連タンパク質」という用語は、過剰増殖性疾患に関連するタンパク質を意味する。
【００３６】
本発明は、ＩＬ−１５Ｒａとその機能性断片、およびそれらの組合せをコードする核酸分子が、ワクチンの成分として与えられたとき、免疫応答を調節するという発見から生まれたものである。従って、ＩＬ−１５Ｒａとその機能性断片、およびそれらの組合せをコードする核酸分子は、免疫治療薬としてワクチンと組合せて、またはワクチンの成分として投与され得る。
【００３７】
さらに、本発明は、ＩＬ−１５Ｒａまたはその機能性断片、およびそれらの組合せをコードする核酸分子が、ＩＬ−１５またはその機能性断片と組合せてワクチンの成分として与えられたとき免疫応答を調節するという発見から生まれたものである。従って、ＩＬ−１５Ｒａとその機能性断片、およびそれらの組合せをコードする核酸分子を、ＩＬ−１５またはその機能性断片と組合せたものは、免疫治療薬としてワクチンと組合せて、またはワクチンの成分として投与され得る。
【００３８】
本発明のいくつかの側面は、特にＣＤ８＋メモリＴ細胞応答が望ましくない場合における、治療用ワクチンでのＩＬ−１５Ｒａの核酸コード配列の使用を提供する。そのような治療用ワクチンには、抗原標的が、疾病関連細胞のみならず正常な細胞でも発現される抗原であることにより、抗原を有する細胞が短時間で除去されると、抗原を発現する正常細胞を対象とする長期免疫応答を生じさせることなく治療効果をあげられるものが含まれる。従って、本発明のこの側面は、正常な細胞にも存在する癌細胞上の抗原を対象とする治療用ワクチン、正常な細胞にも存在する自己免疫疾患関連の細胞によって発現される抗原を対象とする治療用ワクチン、および継続的な免疫応答が生ずるのは望ましくない慢性感染症に関与する病原体抗原を対象とする治療用ワクチンにおいて特に有用である。慢性感染症とは、病原体が除去されない病原体感染症をさす。その例として、ポリオ、天然痘、流行性耳下腺炎等の急性感染症とは異なる、ＨＣＶ、ＨＳＶ、ＣＭＶ、水疱瘡、ＨＩＶ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
本発明のいくつかの側面は、特に増強された急速な免疫応答が望ましい場合における、治療用ワクチンでのＩＬ−１５をコードする核酸コード配列と組合せたＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列の使用を提供する。ＩＬ−１５Ｒａタンパク質の核酸コード配列と、ＩＬ−１５をコードする核酸コード配列とを組合せると、免疫応答の初期の誘発時に付加的なアジュバント効果が得られる。付加的な免疫応答を達成するためには、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列とＩＬ−１５をコードする核酸コード配列とを同じ部位に投与しても、或いはＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列と後者の核酸コード配列とを、それぞれ別の場所に与えてもよい。
【００４０】
前記ヒトＩＬ−１５Ｒａのヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ１７２２００およびＮＭ００２１８９として開示されており、それぞれ引用により本明細書の一部とする。ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ１３２６１、ＮＰ００２１８０およびＮＰ７５１９５０として開示されおり、それぞれ引用により本明細書の一部とする。本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列は、発現レベルが高くなるように最適化される。本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列のように最適化される。本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の配列のように最適化される。
【００４１】
ヒトＩＬ−１５のヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ１７２１７４およびＮＭ０００５８５として開示されており、それぞれ引用により本明細書の一部とする。ヒトＩＬ−１５のタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＡＡ８６１００、ＣＡＡ６２６１６、ＡＡＩ００９６４、ＣＡＡ７２０４４、ＡＡＨ１８１４９およびＡＡＵ２１２４１として開示されており、それぞれ引用により本明細書の一部とする。本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列が、高い発現レベルとなるように最適化される。いくつかの実施形態では、改良型ＩＬ−１５として、米国特許出願第１０／５６０，６５０号明細書（米国特許出願公開第２００７−００４１９４１号）に記載されているようなものが構築される。この出願の内容は引用により本明細書の一部とする。いくつかの実施形態では、改良型ＩＬ−１５として、米国特許出願第１２／１６０，７６６号明細書に記載されているようなものが構築される。この出願の内容は引用により本明細書の一部とする。本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３である。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列および標的抗原をコードする核酸コード配列が、それぞれ同一のプラスミド上に組み入れられる。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態では、２種のプラスミドを含む組成物が提供され、第１のプラスミドはＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列を含み、第２のプラスミドは標的抗原をコードする核酸コード配列を含む（それぞれ同一のプラスミド上に）。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態では、２種類の組成物が提供される。第１の組成物は、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含み、第２の組成物は、標的抗原をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む（それぞれ同一のプラスミド上に）。前記２種類の組成物を別々の容器に入れ、キットとしてパッケージ化してもよい。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列、ＩＬ−１５をコードする核酸コード配列、および標的抗原をコードする核酸コード配列が、それぞれ同一のプラスミド上に存在する。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明は２種類のプラスミドを含む組成物を提供する。ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列およびＩＬ−１５をコードする核酸コード配列が一方のプラスミド上に存在し、標的抗原をコードする核酸コード配列が第２のプラスミド上に存在する。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明は３種のプラスミドを含む組成物を提供する。ＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列は第１のプラスミド上に、ＩＬ−１５をコードする核酸コード配列は第２のプラスミド上に、標的抗原をコードする核酸コード配列は第３のプラスミド上にある。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明が、１種類のプラスミドを含む第１の組成物と、１種類のプラスミドを含む第２の組成物からなる２種類の組成物を提供する。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列と標的抗原をコードする核酸コード配列とを含むプラスミドを含む。そして第２の組成物はＩＬ−１５をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列と、標的抗原をコードする核酸コード配列とを含むプラスミドを含む。そして第２の組成物はＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列と、ＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列とを含むプラスミドを含む。そして第２の組成物は、標的抗原をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。これら複数種の組成物を別々の容器で提供し、それらがキットを構成するようにパッケージ化してもよい。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明は、２種類の組成物、即ち２種のプラスミドを含む第１の組成物と１種のプラスミドを含む第２の組成物とを提供する。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列を含む第１のプラスミドと、標的抗原をコードする核酸コード配列を含む第２のプラスミドとを含む。そして第２の組成物は、ＩＬ−１５をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列を含む第１のプラスミドと、標的抗原をコードする核酸コード配列を含む第２のプラスミドとを含む。そして第２の組成物は、ＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸コード配列を含む第１のプラスミドと、ＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸コード配列を含む第２のプラスミドとを含む。そして第２の組成物は、標的抗原をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。これら複数種の組成物を別々の容器で提供し、それらがキットを構成するようにパッケージ化してもよい。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態では、本発明は、１種類のプラスミドを含む第１の組成物と、１種類のプラスミドを含む第２の組成物と、１種類のプラスミドを含む第３の組成物とからなる３種類の組成物を提供する。そのような実施形態のいくつかでは、第１の組成物がＩＬ−１５Ｒａタンパク質をコードする核酸コード配列と標的抗原をコードする核酸コード配列とを含むプラスミドを含む。そして第２の組成物は標的抗原をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。さらに第３の組成物はＩＬ−１５をコードする核酸コード配列を含むプラスミドを含む。これら複数種の組成物を別々の容器で提供し、それらがキットを構成するようにパッケージ化してもよい。
【００５１】
免疫調節タンパク質をコードする単離されたｃＤＮＡは、その免疫調節タンパク質を産生し得る構築物の作製の開始材料として有用である。標準的な技術と入手容易な材料を用いて、免疫調節タンパク質をコードする核酸分子を作製し得る。
【００５２】
その核酸分子は、ＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種ともいう）や、組換え体ベクター（組換え体アデノウイルス、組換え体アデノウイルス関連ウイルス、および組換え体ワクシニアウイルスなど）を含むいくつかの周知技術のいずれかを用いて供給できる。
【００５３】
ＤＮＡワクチンについては、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，７３９，１１８号、同第５，８１７，６３７号、同第５，８３０，８７６号、同第５，９６２，４２８号、同第５，９８１，５０５号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５５号、同第５，６７６，５９４号、ならびにこれらで引用される優先権基礎出願の各明細書中に記載され、それぞれ引用により本明細書の一部とする。上記の特許出願明細書中に記載された送達プロトコールに加えて、ＤＮＡを供給する別の方法が、米国特許第４，９４５，０５０号および同第５，０３６，００６号の各明細書中に記載されており、ともに引用により本明細書の一部とする。
【００５４】
投与経路としては、筋肉内投与、鼻腔内投与、腹腔内投与、皮内投与、皮下投与、静脈内投与、動脈内投与、眼内投与、および経口投与とともに、吸入又は座薬による、または洗浄などによる粘膜組織（膣、直腸、尿道、頬および舌下組織など）への経皮投与、局所投与が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい投与経路としては、粘膜組織への投与や、筋肉内、腹腔内、皮内、および皮下への注射等が挙げられる。遺伝子構築物は、従来型の注射器、無針注射器、または「微小遺伝子銃」などによって投与してもよいが、これらの手段に限定されない。
【００５５】
別の投与経路として、遺伝子構築物を送達するために電気穿孔法を利用する手法が、米国特許第５，２７３，５２５号、同第５，４３９，４４０号、同第５，７０２，３５９号、同第５，８１０，７６２号、同第５，９９３，４３４号、同第６，０１４，５８４号、同第６，０５５，４５３号、同第６，０６８，６５０号、同第６，１１０，１６１号、同第６，１２０，４９３号、同第６，１３５，９９０号、同第６，１８１，９６４号、同第６，２１６，０３４号、同第６，２３３，４８２号、同第６，２４１，７０１号、同第６，３４７，２４７号、同第６，４１８，３４１号、同第６，４５１，００２号、同第６，５１６，２２３号、同第６，５６７，６９４号、同第６，５６９，１４９号、同第６，６１０，０４４号、同第６，６５４，６３６号、同第６，６７８，５５６号、同第６，６９７，６６９号、同第６，７６３，２６４号、同第６，７７８，８５３号、同第６，８６５，４１６号、同第６，９３９，８６２号、および第６，９５８，０６０号の各明細書中に記載され、これらは引用により本明細書の一部とする。
【００５６】
細胞に取り込まれたとき、遺伝子構築物は、機能する染色体外分子として細胞内に存在し続けることができる。ＤＮＡは細胞に導入され、そこに１つのプラスミドまたは複数のプラスミドの形で一時的に存在することもできる。あるいは、ＲＮＡを細胞に投与してもよい。セントロメア、テロメア、複製起点を含む直鎖状のミニ染色体として遺伝子構築物を提供することも意図されている。遺伝子構築物は、被験者に投与される弱毒化生微生物や組換え体微生物のベクターにおいて遺伝子材料の一部を構成し得る。遺伝子構築物は、遺伝子材料が染色体外に存在する組換え体ウイルスワクチンのゲノムの一部であり得る。遺伝子構築物は、核酸分子の遺伝子発現に必要な調節エレメントを含む。そのエレメントには、プロモーター、開始コドン、停止コドン、およびポリアデニル化シグナルが含まれる。加えて、標的タンパク質または免疫調節タンパク質をコードする配列の遺伝子発現にはエンハンサーが必要となることが多い。これらのエレメントは、必要なタンパク質をコードする配列に機能可能に結合されていること、調節エレメントが、投与対象の個体において機能できるものである必要がある。
【００５７】
開始コドンおよび停止コドンは、必要なタンパク質をコードするヌクレオチド配列の一部であると一般的には考えられる。しかし、これらのエレメントは、遺伝子構築物が投与される個体において機能的である必要がある。開始コドンと終止コドンは、コード配列のフレーム内に入っていなければならない。
【００５８】
使用されるプロモーターとポリアデニル化シグナルは、前記個体の細胞内で機能的でなければならない。
【００５９】
本発明の実施、特にヒトの遺伝子ワクチンの製造において有用なプロモーターの例としては、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ＢＩＶ末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターのようなヒト免疫不全ウイルス（ＭＶ）由来のプロモーター、モロニーウイルス由来のプロモーター、ＡＬＶ由来プロモーター、ＣＭＶ前初期プロモーターのようなサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロモーター、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）由来のプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）由来のプロモーター、ならびにヒト遺伝子（ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒトの筋肉のクレアチン、およびヒトメタロチオネインなど）由来のプロモーターなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本発明の実施、特にヒトの遺伝子ワクチンの製造において有用なポリアデニル化シグナルの例としては、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ｂｇｈ−ＰｏｌｙＡ）シグナル、およびＬＴＲポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。特に、ｐＣＥＰ４プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）（ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルともよばれる）に含まれているＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが用いられる。
【００６１】
ＤＮＡの発現に必要な調節エレメントに加えて、他のエレメントもＤＮＡ分子に含められ得る。そのような付加的エレメントにはエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンのエンハンサーや、ＣＭＶ、ＲＳＶ、およびＥＢＶ由来のエンハンサーなどのウイルス由来エンハンサーからなる群から選択されたものであり得るが、これらに限定されない。
【００６２】
遺伝子構築物は、当該構築物を染色体外に維持し、細胞内でその構築物の複数のコピーを作り出すために、哺乳類の複製起点を備える形で提供され得る。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から市販されているプラスミドｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４、およびｐＲＥＰ４は、エプスタイン−バーウイルスの複製起点、および融合なしで高コピーのエピソームの複製を作り出す核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域を含む。
【００６３】
免疫化の用途に関連する好ましい実施形態のいくつかでは、標的タンパク質、免疫調節タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、および、それに加えてそのような標的タンパク質に対する免疫応答をさらに増強するタンパク質の遺伝子が与えられる。そのような遺伝子の例として、例えばインターフェロンα、インターフェロンγ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−１５（シグナル配列が除去され、選択に応じてＩｇＥ由来のシグナルペプチドを含むＩＬ−１５など）のような他のサイトカインやリンホカインをコードする遺伝子が挙げられる。
【００６４】
前記方法で用いられる組成物はさらに、引用により本明細書の一部とする米国特許出願第１０／１３９，４２３号明細書（米国特許出願公開第２００３−０１７６３７８号に対応）に記載のような、以下に挙げるタンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。即ち、主要組織適合性複合体抗原（主要組織適合複合体クラスＩ抗原、または主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ抗原を含む）；デスドメイン受容体（以下に限定されないが、ＡＰｏ−１、Ｆａｓ、ＴＮＦＲ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、およびＤＲ６の各受容体を含む）；デスシグナル即ちデスドメイン受容体と相互作用するタンパク質（以下に限定されないが、ＦＡＤＤ、ＦＡＰ−１、ＴＲＡＤＤ、ＲＩＰ、ＦＬＩＣＥ、およびＲＡＩＤＤを含む）；またはデスドメイン受容体と結合し、アポトーシスを開始させるリガンドを含むデスシグナル（以下に限定されないが、ＦＡＳ−ＬおよびＴＮＦを含む）；およびデスドメイン受容体と相互作用するメディエーター（以下に限定されないが、ＦＡＤＤ、ＭＯＲＴ１、およびＭｙＤ８８を含む）；細胞を殺すタンパク質を含む毒素（以下に限定されないが、昆虫やヘビの毒、緑膿菌の内毒素など細菌の内毒素、一本鎖毒素を含むリシンなどの二重鎖リボソーム不活性化タンパク質、およびゲロニンを含む）、および／またはそれらをコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。
【００６５】
前記方法で用いられる組成物はさらに、引用により本明細書の一部とする米国特許出願第１０／５６０，６５０号明細書（米国特許出願公開第２００７／００４１９４１号明細書に対応）に記載のような、以下に挙げるタンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。即ち、ＩＬ−１５タンパク質配列に結合した非ＩＬ−１５シグナルペプチドを含む融合タンパク質（ＩＬ１５−タンパク質配列、ＣＤ４０Ｌ、ＴＲＡＩＬに結合したＩｇＥシグナルペプチドを含む融合タンパク質など）；ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、Ｆ４６１８１１またはＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＣＤ３０、ＣＤ１５３（ＣＤ３０Ｌ）、ＦＯＳ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ１、ＪＮＫ２、ＪＮＫ１Ｂ２、ＪＮＫ１Ｂ１、ＪＮＫ２Ｂ２、ＪＮＫ２Ｂ１、ＪＮＫ１Ａ２、ＪＮＫ２Ａ１、ＪＮＫ３Ａ１、ＪＮＫ３Ａ２、ＮＦ−κ−Ｂ２、ｐ４９スプライスフォーム、ＮＦ−κ−Ｂ２、ｐ１００スプライスアイソフォーム、ＮＦ−κ−Ｂ２、ｐ１０５スプライスフォーム、ＮＦ−κ−Ｂ５０Ｋ単鎖前駆体、ＮＦｋＢのｐ５０、ヒトＩＬ−１α、ヒトＩＬ−２、ヒトＩＬ−４、マウスＩＬ−４、ヒトＩＬ−５、ヒトＩＬ−１０、ヒトＩＬ−１５、ヒトＩＬ−１８、ヒトＴＮＦ−α、ヒトＴＮＦ−β、ヒトＩＬ−１２、ＭＡｄＣＡＭ−１、ＮＧＦ  ＩＬ−７、ＶＥＧＦ、ＴＮＦ−Ｒ、Ｆａｓ、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−４、ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−３、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−１、ＰＥＣＡＭ、Ｐ１５０．９５、Ｍａｃ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ３４、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、Ｅ−セレクチン、ＣＤ２、ＭＣＰ−１、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、ＦＬＴ、Ａｐｏ−１、Ｆａｓ、ＴＮＦＲ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ）、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、ＩＣＥ、ＶＬＡ−１、およびＣＤ８６（Ｂ７．２）、および／またはそれらをコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。
【００６６】
前記方法で用いられる組成物はさらに、引用により本明細書の一部とする米国特許出願第１０／５６０，６５３号明細書（米国特許出願公開第２００７／０１０４６８６号明細書に対応）に記載のような、以下に挙げるタンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。即ち、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性なＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０リガンド、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、およびＴＡＰ２、および／またはそれらをコードする核酸分子の１種または２種以上を含み得る。
【００６７】
遺伝子構築物を受けた細胞を、なんらかの理由で除去することが望ましい場合には、細胞破壊のための標的として役立つ付加的なエレメントを加えてもよい。発現可能な形態でのヘルペスチミジンキナーゼ（ｔｋ）遺伝子を、遺伝子構築物に含めることができる。薬物のガングシクロビルが、個体に投与され得、そしてその薬が、ｔｋを産生するあらゆる細胞を選択的に殺し、従って、その遺伝子構築物を持つ細胞の選択的な破壊の手段を提供する。
【００６８】
タンパク質産生を最大にするために、その構築物が投与される細胞における遺伝子発現によく適合した調節配列が選択され得る。さらに、その細胞中で最も効果的に転写されるコドンが選択され得る。当業者は、その細胞中で機能するＤＮＡ構築物を作製できる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、遺伝子構築物が、ＩｇＥシグナルペプチドに結合された本明細書に記載の免疫調節タンパク質のコード配列を作りだすために提供され得る。
【００７０】
本発明の方法の１つは、核酸分子を、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、皮下、皮内に、または局所的にもしくは洗浄により、吸入、膣、直腸、尿道、頬および舌下からなる群から選択された粘膜組織へ投与する工程を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、その核酸分子は、ポリヌクレオチド機能エンハンサーまたは遺伝子ワクチン促進物質の投与と組合せて、細胞に送達される。ポリヌクレオチド機能エンハンサーは、米国特許第５，５９３，９７２号および同第５，９６２，４２８号の各明細書に記載されており、それぞれ引用により本明細書の一部とする。遺伝子ワクチン促進物質は、米国特許第５，７３９，１１８号明細書に記載されており、その内容は引用により本明細書の一部とする。核酸分子とともに投与される助剤は、その核酸分子との混合物として投与され得るか、または別々に、核酸分子の投与と同時、投与前もしくは投与後に、投与され得る。加えて、トランスフェクト剤、および／または複製剤、および／または炎症性物質として機能し得、かつポリヌクレオチド機能エンハンサーと同時投与され得る他の物質として、成長因子、サイトカインやリンホカイン（インターフェロンα、インターフェロンγ、ＧＭ−ＣＳＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＬ−１５ならびに線維芽細胞増殖因子など）、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）などの界面活性剤、モノホスホリルリピドＡ（ＷＬ）を含むＬＰＳアナログ、ムラミルペプチド、キノンアナログならびにスクアレンやスクワレンなどの小胞、およびヒアルロン酸が挙げられ、これらはまた遺伝子構築物とともに用いられ投与され得る。いくつかの実施形態では、免疫調節タンパク質も、ポリヌクレオチド機能エンハンサーとして使用することができる。いくつかの実施形態において、核酸分子は、送達／取り込みを増強するためにポリ（ラクチド-ｃｏ-グリコリド）（ＰＬＧ）と結合した形で提供される。
【００７２】
本発明による医薬組成物は、約１ｎｇ〜約２０００μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、本発明による医薬組成物は、約５ｎｇ〜約１０００μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、その医薬組成物は、約１０ｎｇ〜約８００μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、その医薬組成物は、約０．１μｇ〜約５００μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、その医薬組成物は、約１μｇ〜約３５０μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、その医薬組成物は、約２５μｇ〜約２５０μｇのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、その医薬組成物は、約１００μｇ〜約２００μｇのＤＮＡを含む。
【００７３】
本発明による医薬組成物は、用いられる投与の方式に応じて調合される。医薬組成物が、注入可能なものである場合、その医薬組成物は滅菌され、発熱物質を含まず、そして微粒子を含まない。等浸透圧性の調合物を用いるのが好ましい。一般的に、等浸透圧のための添加剤としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、および乳糖を挙げることができる。場合によっては、リン酸緩衝食塩水のような等浸透圧性の溶液が好ましい。安定剤としては、ゼラチンおよびアルブミンが挙げられる。いくつかの実施形態では、血管収縮剤がその調合物に加えられる。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、免疫原に対する免疫応答を誘導する方法が、免疫原およびＩＬ−１５Ｒαまたはその機能性断片を個体に与えることによって提供される。ワクチンは、弱毒化生ワクチン、組換え体ワクチンまたは核酸ワクチンもしくはＤＮＡワクチンであり得る。
【００７５】
本発明は、標的たんぱく質、即ち病原体、アレルゲンまたは個体自身の「異常な」細胞に特異的に関連するタンパク質に対する増強された免疫応答を誘導するのに役立つ。本発明は、病原体タンパク質に対する免疫応答が病原体に対する防御免疫をもたらすように、病原性の物質や生物に対して個体を免疫化する上で有用である。本発明は、過剰増殖性細胞に特異的に関連する標的タンパク質に対する免疫応答を引き出すことによって癌などの過剰増殖性疾患や障害を治療するのに役立つ。本発明は、自己免疫状態に関与する細胞に特異的に関連する標的タンパク質に対する免疫応答を引き出すことによって自己免疫疾患や障害を治療するのに役立つ。
【００７６】
本発明のいくつかの側面によれば、標的タンパク質および免疫調節タンパク質をコードするＤＮＡまたはＲＮＡが、発現される個体の組織の細胞に導入され、従って、そのコードされたタンパク質が産生される。標的タンパク質および免疫調節タンパク質をコードするＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列が、個体の細胞中での発現に必要な調節エレメントに結合される。ＤＮＡ発現のための調節エレメントには、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルが含まれる。加えて、コザック領域のような他のエレメントも、その遺伝子構築物中に含めることができる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質をコードする配列の発現可能な形態、および両方の免疫調節タンパク質をコードする配列の発現可能な形態が、個体に与えられる同じ核酸分子上に存在する。
【００７８】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質をコードする配列の発現可能な形態は、免疫調節性のタンパク質をコードする配列の発現可能な形態を含むものとは別の核酸分子上に存在する。いくつかの実施形態では、標的タンパク質をコードする配列の発現可能な形態と、１種または２種以上の免疫調節性のタンパク質群をコードする配列の発現可能な形態とが、免疫調節タンパク質をコードする配列の発現可能な形態を含む核酸分子とは別の１つの核酸分子上に存在する。本発明によれば、複数の異なる核酸分子を作り出し、与えることができる。
【００７９】
核酸分子は、組換え体ベクターの核酸分子であるプラスミドＤＮＡとして、または弱毒化ワクチンで提供される遺伝子物質の一部として提供され得る。あるいは、いくつかの実施形態では、標的タンパク質および免疫調節タンパク質が、それらをコードする核酸分子に加えて、またはそれらをコードする核酸分子のかわりに、タンパク質として与えられ得る。
【００８０】
遺伝子構築物は、標的タンパク質、または遺伝子発現に必要な調節エレメントに機能可能に結合された免疫調節タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み得る。本発明によれば、標的タンパク質をコードするヌクレオチド配列の発現可能な形態を含む構築物、および免疫調節タンパク質をコードするヌクレオチド配列の発現可能な形態を含む構築物を含む遺伝子構築物の組合せが提供される。遺伝子構築物の組合せを含む、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を生細胞に導入することにより、そのＤＮＡまたはＲＮＡが発現し、標的タンパク質と１種または２種以上の免疫調節タンパク質が産生される。標的タンパク質に対する増強された免疫応答を結果として生じる。
【００８１】
本発明は、ウイルス、原核生物と真核生物の病原性生物（例えば、単細胞病原生物や多細胞の寄生虫など）のような病原体に対して個体を免疫化するために用いられ得る。本発明は、特に、細胞に感染し、かつ被包性でない病原体（例えば、ウイルス）、および原核生物（淋菌、リステリア菌、および赤痢菌など）に対して個体を免疫化するために特に有用である。加えて、本発明は、原生動物病原体（それらが細胞内病原体である、生活周期上のステージを含む）に対して、個体を免疫化するためにも有用である。表１は、本発明によってワクチンが作られ得るウイルスの科および属のいくつかのリストを提供する。表に記載される抗原のような病原体抗原上に提示されるエピトープに同一または実質的に類似である少なくとも１つのエピトープを含むペプチドをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ構築物は、ワクチンにおいて有用である。さらに、本発明は、表２に記載されたような、原核生物および真核生物である原生動物病原体、ならびに多細胞寄生生物を含む他の病原体に対して、個体を免疫化するためにも役立つ。当業者は、慢性感染症を生じさせる病原体を容易に特定し、感染後除去されるもの（即ち急性感染症）から区別できる。
【００８２】
[表]
表１−ウイルス
ピコナウイルス科
属：
ライノウイルス：（医学上）通常の感冒の５０％の症例の原因となる。
エンテロウイルス：（医学上）ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、およびＡ型肝炎ウイルスなどのヒトエンテロウイルス
アフトウイルス：（獣医学上）これらは口蹄疫ウイルスである。
標的抗原：  ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰＧ
カリシウイルス科
属：
ノーフォークウイルス群：（医学上）これらのウイルスは流行性胃腸炎の重要な原因病原体である。
トガウイルス科
属：
アルファウイルス：（医学上および獣医学上）例としてシンドビスウイルス、ロスリバーウイルスならびに東部ウマ脳炎ウイルスおよび西部ウマ脳炎ウイルスが挙げられる。
レオウイルス：（医学上）風疹ウイルス
フラビウイルス科
例：
（医学上）デング熱、黄熱病、日本脳炎、セントルイス脳炎、およびダニ媒介脳炎ウイルス。
西ナイルウイルス（Ｇｅｎｂａｎｋ  ＮＣ００１５６３、ＡＦ５３３５４０、ＡＦ４０４７５７、ＡＦ４０４７５６、ＡＦ４０４７５５、ＡＦ４０４７５４、ＡＦ４０４７５３、ＡＦ４８１８６４、Ｍ１２２９４、ＡＦ３１７２０３、ＡＦ１９６８３５、ＡＦ２６０９６９、ＡＦ２６０９６８、ＡＦ２６０９６７、ＡＦ２０６５１８およびＡＦ２０２５４１）
代表的な標的抗原：
Ｅ
ＮＳ５
Ｃ
Ｃ型肝炎ウイルス：
（医学上）これらのウイルスは未だ科に位置づけられていないが、トガウイルスまたはフラビウイルスのいずれかであると考えられる。最も類似性が高いのはトガウイルス科である。
コロナウイルス科：（医学上および獣医学上）
伝染性気管支炎ウイルス（家禽）
ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ブタ）
ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス（ブタ）
ネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ネコ）
ネコ腸コロナウイルス（ネコ）
イヌコロナウイルス（犬）
ＳＡＲＳ関連コロナウイルス
ヒト呼吸器コロナウイルスは一般的な感冒の症例の約４０％の原因となる。
ＥＸ．  ２２４Ｅ、ＯＣ４３
注−コロナウイルスは、非Ａ型、非Ｂ型または非Ｃ型の肝炎を起こし得る。
標的抗原：
Ｅ１−Ｍまたはマトリックスタンパク質とも呼ばれる。
Ｅ２−Ｓまたはスパイクタンパク質とも呼ばれる。
Ｅ３−ＢＥまたはヘマグルチンエルテロースとも呼ばれる。
糖タンパク質（すべてのコロナウイルスに存在するわけではない）
Ｎ−ヌクレオカプシド
ラブドウイルス科
属：
ベシクロウイルス
リッサウイルス（医学上および獣医学上）
狂犬病
標的抗原：
Ｇタンパク質
Ｎタンパク質
フィロウイルス科：（医学上）
マールブルグウイルスまたはエボラウイルスなどの出血熱ウイルス
パラミクソウイルス科：
属：
パラミクソウイルス：（医学上および獣医学上）流行性耳下腺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ニワトリに重要な病原体）
麻疹ウイルス：（医学上および獣医学上）麻疹、イヌジステンパー
肺炎ウイルス：（医学上および獣医学上）呼吸器合胞体ウイルス
オルトミクソウイルス科：（医学上）インフルエンザウイルス
ブンヤウイルス科
属：
ブンヤウイルス：（医学上）カリフォルニア脳炎、ラクロスウイルス
フレボウイルス：（医学上）リフトバレー熱
ハンタウイルス：プレマーラ（ｐｕｒｅｍａｌａ）はヘマハギン（ｈｅｍａｈａｇｉｎ）熱ウイルスである。
ナイロウイルス：（獣医学上）ナイロビヒツジ病
さらに多くの未分類のブンヤウイルスが存在する。
アレナウイルス科（医学上）ＬＣＭ、ラッサ熱ウイルス
レオウイルス科
属：
レオウイルス：ヒト病原体の可能性がある
ロタウイルス：小児の急性胃腸炎
オルビウイルス：（医学上および獣医学上）コロラドダニ熱、レボンボ（Ｌｅｂｏｍｂｏ）（ヒト）ウマ脳症、ブルータング
レトロウイルス科
亜科：
オンコウイルス亜科：（獣医学上）（医学上）ネコ白血病ウイルス、ＨＴＬＶＩおよびＨＴＬＶＩＩ
レンチウイルス亜科：（医学上および獣医学上）ＨＩＶ、ネコ免疫不全ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス
スプマウイルス亜科
パポーバウイルス科
亜科：
ポリオーマウイルス：（医学上）ＢＫＵ及びＪＣＵウイルス
亜科：
パピローマウイルス：（医学上）癌や乳頭腫の悪性進行に関連する多種のウイルス
アデノウイルス（医学上）
ＥＸ  ＡＤ７、ＡＲＤ、Ｏ．Ｂ．
−呼吸器疾患を引き起こす。
−２７５などいくつかのアデノウイルスは腸炎の原因となる。
パルボウイルス科（獣医学上）
ネコパルボウイルス：ネコ腸炎を引き起こす。
ネコパンロイコペニアウイルス
イヌパルボウイルス
ブタパルボウイルス
ヘルペスウイルス科
亜科：
アルファヘルペスウイルス亜科
属：
単純ヘルペスウイルス（医学上）
ＨＳＶＩ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ｘ１４１１２、ＮＣ００１８０６）、ＨＳＶＩＩ（ＮＣ００１７９８）
水痘帯状疱疹ウイルス（医学上および獣医学上）：仮性狂犬病、水痘帯状疱疹
亜科：
ベータヘルペスウイルス亜科
属：
サイトメガロウイルス（医学上）
ＨＣＭＶ
ムロメガロウイルス
亜科：
ガンマヘルペスウイルス亜科
属：
リンフォクリプトウイルス（医学上）
ＥＢＶ−（バーキットリンパ腫）
ポックスウイルス科
亜科：
コードポックスウイルス亜科（医学上および獣医学上）
属：
痘瘡（天然痘）
ワクシニア（牛痘）
パラポックスウイルス−獣医学上
アビポックスウイルス−獣医学上
カプリポックスウイルス
レポリポックスウイルス
スイポックスウイルス
亜科：
エントモポックスウイルス亜科
ヘパドナウイルス科
Ｂ型肝炎ウイルス
未分類
Ｄ型肝炎ウイルス
【００８３】
表２
細菌性病原体
肺炎球菌、ブドウ球菌、および連鎖球菌を含む病原性グラム陽性球菌
髄膜炎菌および淋菌を含む病原性グラム陰性菌
病原性腸内グラム陰性桿菌には次のものが含まれる。
腸内細菌科；シュードモナス、アシネトバクタおよびエイケネラ、類鼻疽菌；サルモネラ属；赤痢菌；ヘモフィルス属；軟性下疳菌；ブルセラ症菌；野兎病菌；エルシニア属（パスツレラ属）；ストレプトバシラスモニリフォルミスおよびスピリルム属；リステリア菌：豚丹毒菌；ジフテリア菌、コレラ菌、炭疽菌；ドノバノーシス（鼠径部肉芽腫）菌；およびバルトネラ症菌。
病原性嫌気性細菌には次のものが含まれる。
破傷風菌、ボツリヌス菌；他のクロストリジウム属；結核菌；らい菌；および他のマイコバクテリア。
病原性のスピロヘータ疾患には次のものが含まれる。
梅毒；−トレポネーマ症：フランベジア、ピンタと風土病性梅毒；およびレプトスピラ症の細菌。
高病原性細菌および病原性真菌による他の感染症には次のものが含まれる。
放線菌症；ノカルジア症；クリプトコッカス症、ブラストミセス症、ヒストプラスマ症、およびコクシジオイデス症；カンジダ症、アスペルギルス症、およびムコール症；スポロトリクム症；パラコクシジオイドミコーシス、ペトリエリジオーシス（ｐｅｔｒｉｅｌｌｉｄｉｏｓｉｓ）、トルロプシス症、菌腫、およびクロモミコーシス；ならびに皮膚糸状菌症。
リケッチア感染は、リケッチア感染症およびリケッチア症を含む。
マイコプラズマおよびクラミジア感染症の例としては、マイコプラズマ肺炎；鼠径部リンパ肉芽腫；オウム病；および周産期のクラミジア感染症が挙げられる。
病原性真核生物
病原性原生動物および蠕虫による感染症には次のものが含まれる。
アメーバ症；マラリア；リーシュマニア症；トリパノソーマ症；トキソプラズマ症；ニューモシスティスカリニ；バベシア症；ジアルジア症；旋毛虫症；フィラリア症；住血吸虫症；線虫感染症；吸虫類感染症；および条虫（サナダムシ）感染症。
【００８４】
病原体感染を防ぐ遺伝子ワクチンを作るため、防御免疫反応の対象となり得る免疫原タンパク質をコードする遺伝子物質が、標的のためのコード配列として、遺伝子構築物中に含められなければならない。ＤＮＡおよびＲＮＡはともに比較的小さく、そして比較的容易に作製できるため、本発明は、多数の病原体抗原でワクチン接種することを可能にする付加的な利点を提供する。遺伝子ワクチンにおいて用いられる遺伝子構築物は、多くの病原体抗原をコードする遺伝子物質を含み得る。例えば、いくつかのウイルス遺伝子が、１つの構築物中に含まれ得、それにより複数の標的を提供する。
【００８５】
表１および表２は、いくつかの病原体および病原性生物のリストを含み、それらによる感染から個体を防御するために遺伝子ワクチンを調製できる。いくつかの好ましい実施形態では、病原体に対して個体を免疫する方法が、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ））、またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）を対象とする。
【００８６】
本発明の別の側面が、過剰増殖性の疾患に特徴的な過剰増殖細胞に対する防御免疫応答を付与する方法、および過剰増殖性疾患に罹患している個体を処置する方法を提供する。過剰増殖性疾患の例としては、全ての形態の癌および乾癬が挙げられる。
【００８７】
免疫原である「過剰増殖細胞」関連タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物の、個体の細胞内への導入が、個体のワクチン接種された細胞でのこれらのタンパク質の産生をもたらすことが発見された。過剰増殖性疾患に対して免疫化するため、過剰増殖性疾患に関連するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が、個体に投与される。
【００８８】
過剰増殖関連タンパク質が有効な免疫原性標的であるためには、正常細胞と比較した場合、それが、過剰増殖細胞中で排他的に、または高レベルで産生されるタンパク質でなければならない。標的抗原はそのようなタンパク質、その断片およびペプチドを含み、それらは、そのようなタンパク質上に見出される少なくとも１つのエピトープを含む。場合によっては、過剰増殖関連タンパク質は、タンパク質をコードする遺伝子の変異の産物である。その変異した遺伝子は、正常なタンパク質では見られない異なるエピトープを生じる、わずかに異なるアミノ酸配列を持つこと以外は、正常なタンパク質とほぼ相同なタンパク質をコードする。そのような標的タンパク質としては、癌遺伝子（例えば、ｍｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎ、および転座遺伝子でもあるｂｃｒ／ａｂｌ、ｒａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋ、ならびにＥＧＲＦなど）によりコードされるタンパク質が挙げられる。標的抗原としての癌遺伝子産物に加えて、抗癌処置および保護的レジメンのための標的タンパク質としては、Ｂ細胞リンパ腫により作られる抗体の可変領域およびＴ細胞リンパ腫のＴ細胞受容体の可変領域が挙げられ、それらはいくつかの実施形態では、自己免疫疾患のための標的抗原としても用いられる。他の腫瘍関連タンパク質がまた、標的タンパク質として用いられ得るが、それらは腫瘍細胞において高レベルで存在するタンパク質であり、モノクローナル抗体１７−ＩＡにより認識されるタンパク質および葉酸塩結合タンパク質またはＰＳＡを含む。
【００８９】
本発明は、１つまたはそれ以上の数のいくつかの形態の癌に対して、個体を免疫化するために用いられ得るが、本発明は特に、特定の癌を発症しやすいか、または過去に癌にかかり、従って再発しやすい個体を予防的に免疫化するために有用である。疫学とともに遺伝学および技術における発展によって、個体における癌の発症の見込みの決定およびリスクアセスメントが可能となる。遺伝子スクリーニングおよび／または家族の健康暦を用いて、特定の個体が、いくつかの型の癌のいずれかを発症する見込みを予測することができる。
【００９０】
同様に、既に癌を発症した個体、および癌を除去する処置を受けたか、またはさもなければ寛解期の個体は、ぶり返しおよび再発を特に受けやすい。処置レジメンの一部として、そのような個体を、再発と戦うために、その個体が有したと診断された癌に対して免疫化し得る。従って、個体が、ある型の癌を有し再発のリスクがあると一度分かったならば、その個体を、あらゆる将来の癌の出現とも戦う免疫系を準備するべく免疫化し得る。
【００９１】
本発明は、過剰増殖性疾患に罹患した個体を処置する方法を提供する。そのような方法において、遺伝子構築物の導入は、標的タンパク質を産生する過剰増殖細胞と戦うべく個体の免疫系を誘導し促進する免疫療法として役立つ。
【００９２】
本発明は、自己免疫に関連する標的（細胞受容体、および「自己」に対する抗体を産生する細胞を含む）に対する広範囲にわたる防御免疫応答を与えることにより、自己免疫疾患および自己免疫障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。
【００９３】
Ｔ細胞媒介自己免疫疾患としては、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾癬、脈管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、クローン病、および潰瘍性大腸炎が挙げられる。これらの疾患のそれぞれは、内生抗原に結合し、そして自己免疫疾患に関連する炎症カスケードを開始するＴ細胞受容体によって特性化される。Ｔ細胞の多様な領域に対するワクチンの接種は、それらのＴ細胞を除去するＣＴＬを含む免疫応答を誘発する。
【００９４】
ＲＡでは、その疾患に関与するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のいくつかの特異的な可変領域が特性化されている。これらのＴＣＲとしては、Ｖβ−３、Ｖβ−１４、２０  Ｖβ−１７、およびＶａ−１７が挙げられる。従って、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物を用いたワクチン接種が、ＲＡに関連するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発することになる。参照：Ｈｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．，ら，１９９１  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０９２１−１０９２５；Ｐｉｌｉａｒｄ，Ｘ．，ら，１９９１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：３２５−３２９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．，ら，１９９２  Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：３２６−３３３；それぞれ引用により本明細書の一部とする。ＭＳでは、その疾患に関与するＴＣＲのいくつかの特異的な可変領域が特性化されている。これらのＴＣＲには、ＶｆＰおよびＶａ−１０が含まれる。従って、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物を用いるワクチン接種は、ＭＳに関連するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発することになる。参照：Ｗｕｃｈｅｒｐｆｅｎｎｉｇ，Ｋ．Ｗ．，ら，１９９０  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８：１０１６−１０１９；Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．，ら，１９９０  Ｎａｔｕｒｅ  ３４５：３４４−３４６；それぞれ引用により本明細書の一部とする。
【００９５】
強皮症では、その疾患に関与するＴＣＲのいくつかの特異的な可変領域が特性化されている。これらのＴＣＲには、Ｖβ−６、Ｖβ−８、Ｖβ−１４およびＶａ−１６、Ｖａ−３Ｃ、Ｖａ−７、Ｖａ−１４、Ｖａ−１５、Ｖａ−１６、Ｖａ−２８およびＶａ−１２が含まれる。従って、これらのタンパク質の少なくとも１つをコードするＤＮＡ構築物を用いるワクチン接種は、強皮症に関連するＴ細胞を標的とする免疫応答を誘発することになる。
【００９６】
特にＴＣＲの可変領域がまだ特性化されていないＴ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を処置するため、滑膜の生検を行い得る。存在するＴ細胞のサンプルを採取し、そしてそれらのＴＣＲの可変領域を、標準的な技術を用いて特定し得る。遺伝子ワクチンは、この情報を用いて調製することができる。
【００９７】
Ｂ細胞媒介自己免疫疾患としては、狼瘡（ＳＬＥ）、グレーブズ病、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、ぜん息、クリオグロブリン血症、原発性胆汁性硬化症、および悪性貧血が挙げられる。これらの疾患のそれぞれは、内生抗原に結合し、そして自己免疫疾患に関連する炎症カスケードを開始する抗体によって特性化される。抗体の可変領域に対するワクチン接種は、その抗体を産生するＢ細胞を除去するＣＴＬを含む免疫応答を誘発する。
【００９８】
Ｂ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を処置するため、自己免疫活性に関与する抗体の可変領域が同定されなければならない。生検を実行し得、そして、炎症部位に存在する抗体のサンプルを採取し得る。それらの抗体の可変領域を、標準的な技術を用いて同定し得る。遺伝子ワクチンは、この情報を用いて調製することができる。
【００９９】
ＳＬＥの場合、１つの抗原はＤＮＡであると考えられている。従って、ＳＬＥに対して免疫化される患者においては、患者の血清を抗ＤＮＡ抗体についてスクリーニングし得、そして、その血清中にみとめられるそのような抗ＤＮＡ抗体の可変領域をコードするＤＮＡ構築物を含むワクチンを調製し得る。
【０１００】
ＴＣＲおよび抗体の両方の可変領域の中の、共通の構造的な特徴は周知である。特定のＴＣＲまたは抗体をコードするＤＮＡ配列は、周知の方法（例えば、引用により本明細書の一部とするＫａｂａｔ，ら１９８７  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤに記載された方法）に従って通常見出すことができる。加えて、抗体から機能性の可変領域をクローニングする一般的な方法は、引用により本明細書の一部とするＣｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．，ら，１９９０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１０６６に見出すことができる。
【０１０１】
遺伝子ワクチンを改善するために免疫調節タンパク質コード配列の発現可能な形態を用いることに加えて、本発明は、改善された弱毒化生ワクチン、および抗原をコードする外来遺伝子を送達する組換えベクターを用いる改善されたワクチンに関する。弱毒化生ワクチンおよび外来抗原を送達する組換えベクターを用いるワクチンの例は、米国特許第４，７２２，８４８号；同第５，０１７，４８７号；同第５，０７７，０４４号；同第５，１１０，５８７号；同第５，１１２，７４９号；同第５，１７４，９９３号；同第５，２２３，４２４号；同第５，２２５，３３６号；同第５，２４０，７０３号；同第５，２４２，８２９号；同第５，２９４，４４１号；同第５，２９４，５４８号；同第５，３１０，６６８号；同第５，３８７，７４４号；同第５，３８９，３６８号；同第５，４２４，０６５号；同第５，４５１，４９９号；同第５，４５３，３６４号；同第５，４６２，７３４号；同第５，４７０，７３４号；および同第５，４８２，７１３号の各明細書に記載され、それぞれ引用により本明細書の一部とする。ＩＬ−Ｒ１５αまたはその機能性断片をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供され、そのヌクレオチド配列は、ワクチンにおいて、発現をもたらすように機能し得る調節配列に機能可能に連結される。本発明による改善されたワクチンを製造するために、遺伝子構築物は、弱毒化生ワクチンおよび組換え体ワクチン中に組み込まれる。
【０１０２】
本発明は、個体を免疫化する改善された方法であって、ＤＮＡワクチン、弱毒化生ワクチン、および組換え体ワクチンを含むワクチン組成物の部分として個体の細胞に遺伝子構築物を送達する工程を含む方法を提供する。その遺伝子構築物は、ＩＬ−１５受容体αまたはその機能性断片をコードし、ワクチンにおいて、発現をもたらすように機能し得る調節配列に機能可能に連結されるヌクレオチド配列を含む。改善されたワクチンは、細胞性免疫応答を増強させる。
【実施例】
【０１０３】
マウスをｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαで共免疫して、ＨＩＶ−１  ＤＮＡワクチン抗原を用いて誘発された、増強された免疫応答を判定した。データによれば、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαの組合せは細胞全体の免疫応答を実際に増強したが、驚くべきことに、ＩＬ−１５ＲαのプラスミドはＩＬ−１５とは無関係に免疫応答を増大させた。重要な点として、誘発されたメモリ応答は、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαとで共免疫されたマウスでのみ維持され、ＩＬ−１５Ｒα単体では維持されなかった。初めて行われたこれらの試験から立証されるのは、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質が単独で、限定された免疫増殖の表現型でアジュバントとして機能し得るということである。
【０１０４】
［材料および方法］
（ウエスタンブロット法による解析）
標準的なプロトコールに従ってウエスタンブロット解析を行った。ウェル１つ当たり３μｇの組換え体ＩＬ−１５αまたはＶＰＲタンパク質（Ａｂｇｅｎｔ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭＥ）上で走らせ、ニトロセルロースメンブランにブロットし、Ｒ＆Ｄ製またはＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体のいずれかでプローブした。抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｚｙｍｅｄ）を用いてシグナルを増幅し、ＥＣＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈａｌｆｏｎｔ  Ｓｔ．Ｇｉｌｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）で検出した。
【０１０５】
（ＤＮＡプラスミド）
ＨＩＶ−１ｇａｇおよびＨＩＶ−１ｐｏｌを発現するＤＮＡワクチン構築物（Ｋｉｍら、１９９８）とヒトＩＬ−１５（Ｋｕｔｚｌｅｒら，２００５）を、前述したように準備した。ヒトＩＬ−１５Ｒαのオープンリーディングフレームを、ｐＶＡＸ１およびｐＴＲＡＣＥＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に移した。ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩまたはＮｈｅＩ／ＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を利用した制限酵素による消化をそれぞれ用いた。陽性のクローンをシーケンス解析により検証した。
【０１０６】
（Ｉｎ−ｖｉｔｒｏ翻訳アッセイ）
ＴＮＴ−Ｔ７  Ｑｕｉｃｋ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＷＩ）と［３５Ｓ］メチオニンを用いて、標識されたＩＬ−１５Ｒαタンパク質産物を作り出した。ｐＶＡＸベクター単体（陰性対照）またはＩＬ−１５Ｒαおよび［３５Ｓ］メチオニンを含むｐＶＡＸベクターを、製造元の指示に従って反応混合物に添加した。反応は３０℃で１時間かけて行った。標識されたタンパク質を、５μｇの精製モノクローナル抗ＩＬ−１５Ｒα抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはクローンＫＫ１．２３を用いて、ＲＩＰＡバッファ中で４℃で一晩、回転撹拌させて免疫沈降した。約５ｍｇのプロテインＧセファロースビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）（１００ｍｇ／ｍＬストックの５０μＬ）を各免疫沈降反応物に添加し、そのサンプルを４℃で２時間、回転撹拌しながらインキュベートした。高濃度の塩とウシ血清アルブミンを含む結合バッファで３回洗浄し、最終的に２×のサンプルバッファに懸濁した。免疫沈降したタンパク質複合体を、５分間ボイルしてセファロースビーズから溶出させ、１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ｃａｍｂｒｅｘ）上を走らせた。ゲルを固定し、増幅溶液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で処理して、ゲル乾燥機（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）で２時間乾燥した。乾燥したゲルを−８０度でＸ線フィルムに露出し、Ｋｏｄａｋ自動現像機（Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を用いて現像した。
【０１０７】
（間接免疫蛍光アッセイ）
ｐＩＬ−１５Ｒαプラスミドの発現を確認するための間接免疫蛍光アッセイを、以前に説明された（Ｒａｍａｎａｔｈａｎら，２００２）、以下のプロトコールに従って行った。スライドチャンバ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）において、完全ＤＭＥＭ培地プラス１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）と抗生物質／抗真菌薬（ＧＩＢＣＯ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で１チャンバ当たり１００，０００セルの密度で成長したＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、接着できるように一晩おいた。ＦｕＧＥＮＥ  ６  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を製造元のプロトコールに従って用いて、細胞にｐＩＬ−１５Ｒα、ｐＴＲＡＣＥＲ、またはｐＶＡＸ−１（１μｇ／ウェル）をトランスフェクトした。トランスフェクトの２４時間後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、室温で１時間かけて２％ＰＦＡ／ＰＢＳを用いてスライド上に固定した。スライドを、発明者の研究室で作製した５μｇのクローンＫＫ１．２３マウス抗ヒトＩＬ−１５Ｒα、またはＩｇＧ１アイソタイプの対照（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とともに３７度で９０分間インキュベートした。二次抗体にコンジュゲートした抗マウスＩｇＧ−ローダミン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）を１：２００で添加し、そのスライドを室温で４５分間インキュベートした。室温で１０分間ＤＡＰＩ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）染色した後、スライドをＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ培地（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡ）に設置し、蛍光顕微鏡検査のためのＰｈａｓｅ３  Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏｇｒａｍ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）を用いて解析した。
【０１０８】
（プラスミド免疫化とマウス）
６乃至８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ）またはＩＬ−１５ノックアウト（Ｔａｃｏｎｉｃ）（Ｋｅｎｎｅｄｙら、２０００）マウスの前脛骨筋に、２週間の間隔をおいて３回注射し、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）適応的定電流装置（ＶＧＸ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｔｈｅ  Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ，ＴＸ）を用いて、以前に説明された（Ｋｈａｎら，２００３；Ｌａｄｄｙら，２００８）電気穿孔処理を行った。全てのマウス実験のために、その動物を、３５μｇのｐＶＡＸ１、５μｇのＨＩＶ−１抗原プラスミド（ｇａｇ、ｐｏｌ）、１０μｇのｐＩＬ−１５、および／または７．５μｇの、１０μｇの、または１５μｇのｐＩＬ−１５Ｒα（各グループあたりｎ＝３−７）で免疫化した。さまざまな遺伝子プラスミドの同時投与では、指定したＤＮＡプラスミドの混合の後、等張クエン酸塩バッファ（Ｋｉｍら，１９９８；Ｋｕｔｚｌｅｒら，２００５）にいれた０．２５％塩酸ブピバカイン（Ｓｉｇｍａ）に注入し，最終容量を４０μlとした。全ての動物は、ペンシルベニア大学の温度制御、光サイクル機能付き施設に収容され、その世話は米国国立衛生研究所とペンシルベニア大学のガイドラインに従って行われた。
【０１０９】
（マウス犠牲処置、サンプル収集、および組織回収の方法）
免疫化スケジュールの指定された複数の時点で、動物を鎮痛剤を用いて沈静化し、血液を採取した後に、当該動物を頚部脱臼により犠牲処置した。各マウスの脾臓を採取して、Ｒ１０培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ウシ胎仔血清、抗生物質／抗真菌薬およびＢ−メルカプトエタノール）を含む１５ｍｌの三角管に（実験グループごとに）プールした。滅菌組織培養フードでは、各実験グループからプールされた脾臓／培地混合物を、ストマッカー装置（Ｓｅｗａｒｄ８０、Ｍｅｔｒｏｈｍ，Ｒｉｖｅｒｖｉｅｗ，ＦＬ）を用いて破砕し、単一細胞の懸濁液とした。細胞／組織間質は、４０ミクロンのセルストレーナーに通し、Ｒ１０で洗浄してペレット化して、ＡＣＫ溶解バッファ（Ｌｏｎｚａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中で５分間室温でインキュベートして、赤血球を溶解させた。その後脾細胞をカウントし、後述するように免疫アッセイにて利用した。
【０１１０】
（ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ）
ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを、前述したように（Ｋｕｔｚｌｅｒら，２００５）行って、免疫化されたマウスからの抗原特異的なサイトカインの分泌を判定した。簡潔に説明すると、ＥＬＩＳｐｏｔ９６穴プレートを抗マウスＩＦＮ−γ捕捉抗体でコーティングし、４℃で２４時間インキュベートする（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）。免疫化したマウスからの２×１０５の脾細胞をＥＬＩＳｐｏｔプレートの各ウェルに加え、５％のＣＯ２、３７℃で一晩刺激した。この処置は、Ｒ１０（陰性対照）、コンカナバリンＡ（陽性対照）、または特定のペプチド（ＨＩＶ−１ｇａｇまたはｐｏｌ）抗原（１０μｇ／ｍｌ）の存在下で行った。１１個のアミノ酸で重複し、それぞれのタンパク質の全体にまたがるＨＩＶ−１コンセンサスクレードＢのサブタイプＨＩＶ−１ｇａｇおよびｐｏｌの１５量体ペプチドを、ＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ａｎｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）から入手した。ＣＤ８欠失実験のために、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ８ａ（ＬＹ−２）抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を製造元のプロトコールに従って用いて、ポジティブ磁気選択により全脾細胞から除去した。２４時間の刺激の後、プレートを洗浄し、４℃で一晩ビオチン化抗マウスＩＦＮ−γ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともにインキュベートした。次いでプレートを洗浄し、室温で２時間、ストレプトアビジンアルカリホスファターゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともにインキュベートした。さらにプレートを洗浄し、５−ブロモ−４−クロロ−３’−インドリルホスフェートｐ−トルイジン塩（ＢＣＩＰ）とニトロブルー塩化テトラゾリウム（ＮＢＴ）（クロモゲン着色試薬、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加えた。プレートを蒸留水でリンスし、室温で乾燥させた。そして、自動化されたＥＬＩＳｐｏｔリーダー（ＣＴＬ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｉｎｃ．  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）によってスポットをカウントした。生の値を決定しそれを５倍して、データが１００万個の脾細胞あたりのセル形成スポットとして表現されるようにした。グラフに描く前に、グラフ各グループのＲ１０ウェルでのバックグラウンド値をペプチド刺激されたウェルの値から差し引いた。
【０１１１】
細胞内サイトカイン染色ＨＩＶ−１特異的Ｔ細胞応答も、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキットと標準プロトコール（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いた細胞内サイトカイン染色により決定した。免疫化マウスからの脾細胞を、Ｒ１０およびＤＭＳＯ（陰性対照）、１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび２５０ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン（陽性対照）、またはＨＩＶ−１コンセンサスクレードＢｇａｇまたはｐｏｌの１５量体のペプチドとともに、１ｕｌ／ｍｌのＧｏｌｇｉＰｌｕｇ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で５時間刺激した。表面染色の前に、細胞を３７℃で１０分間  ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  ｆｉｘａｂｌｅ  ｖｉｏｌｅｔキット（分子プローブ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色し、Ｆｃブロック（ＢＤ）を加えて４度で１５分間おきＦｃ受容体をブロックした。全抗体はＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、試験１回あたり１μｌを使用した。透過／固定化処理の前に細胞を、４０℃で３０分間、ＣＤ４−Ａｌｅｘａ７００およびＣＤ８−ＰｅｒＣＰで染色した。４度で４５分間の細胞内染色では、ＣＤ３−ＰＥＣｙ５およびＩＦＮ−γＰＥ−Ｃｙ７を含めた。５００００の生きたＣＤ３＋リンパ球作動性イベントからのデータを、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．，Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して解析した。グラフに描く前に、陰性対照ウェルからの応答を抗原刺激のものから差し引いた。
【０１１２】
（ＨＩＶ−１Ｇａｇ結合抗体の解析）
以前に説明されたように（Ｏｇａｗａら，１９８９；Ｍｅｓｔｅｃｋｙら，２００４）、ＥＬＩＳＡを用いて、マウス血清中のＨＩＶ−１Ｇａｇ特異的抗体ＩｇＧの有無を判定した。ＥＩＡ／ＲＩＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、ウェル当たり１００μｌの最終容量にＰＢＳ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）で希釈した１μｇ／ｍｌの組換え体ＨＩＶ−１ＩＩＩＢｇａｇ  ｐ２４遺伝子（Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）でコーティングした後、４℃で一晩インキュベートした。プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄し、２００μｌのブロッキングバッファ／希釈液（ＰＢＳ中３％ＢＳＡ）を用いて室温で２時間かけて非特異的結合に対してブロックした。プレートを洗浄し、免疫化マウス由来のプールした血清の希釈液を、１／１０から１／１６００までの希釈度で３部づつ（ウェルあたり１００μｌ）加え、室温で２時間インキュベートした。結合した抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｚｙｍｅｄ）で検出し、基質ＴＭＢ  Ｈ２Ｏ２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で現像検出した。呈色反応を２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で停止し、４５０ｎｍでの吸光度をＥＬ３１２  Ｂｉｏ−Ｋｉｎｅｔｉｃｓマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）で読み取った。
【０１１３】
［結果］
（抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体の生成）
市販の抗体は細胞上のＩＬ−１５Ｒαプラスミド（ｐＩＬ−１５Ｒα）の発現を検出する能力が不十分なので、ヒトＩＬ−１５Ｒαに対してモノクローナル抗体を生成した。組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαは、以下のように作製した。
【０１１４】
組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、Ａｂｇｅｎｔ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に作製させた。ヒトＩＬ−１５Ｒαのオープンリーディングフレーム（Ｔｈｏｍａｓ  Ｗａｌｄｍａｎｎ（ＮＣＩ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）からの贈与）を、高発現細菌ベクターｐＥＴ２１ａ（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）にクローン化した。コンピテント細胞を、大腸菌内に形質転換して増幅し、組換え体タンパク質をＮｉ−ＮＴＡカラムを用いて精製した。精製タンパク質の精製度は、抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた直接ＥＬＩＳＡにより確認した。
【０１１５】
新しく生成されたＩＬ−１５Ｒαタンパク質の大きさを確認するために、精製タンパク質の濃度を順次減らした希釈液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上を走らせて、クマシーブルー色素で染色した（図１Ａ）。図１Ａに示すように、生成されたタンパク質は、予想されたサイズである約３０ｋＤａに動いた。このタンパク質について、その適正な完全さの指標として、市販の抗体に結合する能力の有無を検査した。図１Ｂは、組換え体ＩＬ−１５Ｒα、または陰性対照であるＶＰＲタンパク質を結合したプレートのＥＬＩＳＡアッセイを示す。ＶＰＲはＩＬ−１５Ｒαタンパク質と同様の方法によって製造されるので、これを用いた。図１Ｂは、市販の抗ヒトＩＬ−１５Ｒα抗体が、生成された組換えタンパク質を検出できることを示す。
【０１１６】
ＩＬ−１５Ｒαに対する抗体を生成するため、組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質を、以下に説明するように図１Ｃに示すＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。
【０１１７】
モノクローナル抗体を生成するため、組換え体ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質をＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝４）に注射した。各注射のたびに、完全フロイントアジュバント（初回の接種のみ）や不完全フロイントアジュバント（その後の接種）に乳化した５μｇの全タンパク質を与えた（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。５０μｌをそれぞれの脇腹に皮下注射し、１００μｌを腹腔に注射した。細胞融合処理の３日前に、マウスに対して、滅菌したＰＢＳ中の３５μｇのタンパク質の静脈内への最終追加接種を行った。次に血清中の抗体標識を、組換え体ＩＬ−１５Ｒαタンパク質と抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｚｙｍｅｄ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用いて直接ＥＬＩＳＡにより測定した。ＩＬ−１５Ｒαに対する抗体の力価が１：８，０００のマウス１匹を、そこから切除された脾臓と骨髄腫細胞株との細胞融合を行うために犠牲処置した。１５００のハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによってスクリーニングし、８個の陽性クローンを増殖し、そのうちの１つを硫酸アンモニウムのカラムと抗体ＫＫ１．２３により精製した。モノクローナル抗体の作製と精製を、Ｗｉｓｔａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ＦａｃｉｌｉｔｙのＪｕｌｉａ  Ｃｏｎｉｃｅｌｌｏ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）に依頼した。
【０１１８】
図１Ｄに示すように、ＥＬＩＳＡ法により約１５００のハイブリドーマの培養上清をスクリーニングした後、１つのハイブリドーマＫＫ１．２３が抗体の力価（＞１〜１２，８００）を示した。その後このハイブリドーマを、クローン化し増殖させて、精製した。精製した抗体ＫＫ１．２３は、図１Ｅのウエスタンブロット解析によって示すように、ヒトＩＬ−１５Ｒαに特異的である。さらに、ＫＫ１．２３は、市販の抗体（図１Ｅ）よりも高い親和性をもってヒトＩＬ−１５Ｒαに結合するとみられる。
【０１１９】
（ｐＩＬ−１５Ｒαによる生物活性タンパク質の発現）
ワクチン接種の試験に適するＩＬ−１５Ｒα発現ベクターを作製した。ＣＭＶプロモーターの制御の下、図２Ａに示すようにヒトＩＬ−１５ＲαＯＲＦをｐＶＡＸ１発現ベクターにクローン化した。ＩＬ−１５Ｒαプラスミドが適切に発現していることを評価するため、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳アッセイを行った。予想通り、対照プラスミドのｐＶＡＸは一切の検出可能なタンパク質産物を作り出さなかったのに対し、Ｓ３５放射性標識したタンパク質が概ね３０．０ｋＤに移行したことが図２Ｂ及び図２Ｃに示されている。ヒトＩＬ−１５Ｒαに対する市販のＲ＆Ｄの抗体（図２Ｂ）またはＫＫ１．２３抗体（図２Ｃ）抗体を利用して、放射性標識タンパク質を免疫沈降した。
【０１２０】
プラスミドＩＬ−１５Ｒαの発現を確認するために、上述の実施例１のＫＫ１．２３抗体を用いて免疫蛍光アッセイを行った。ヒトＩＬ−１５ＲαのＯＲＦを、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レポーターもコードしているｐＴＲＡＣＥＲ発現ベクターにクローン化した。従って、緑色に蛍光発色する細胞（図２Ｅ−図２Ｇ）も、ｐＩＬ−１５Ｒαを発現している。ＫＫ１．２３抗ヒトＩＬ−１５Ｒαは、抗マウスＩｇＧ−ＰＥを用いて検出される（赤）。トランスフェクトされていない対照は図２Ｄに、アイソタイプ対照は図２Ｅに示されている。前記データは、ｐＩＬ−１５Ｒαプラスミドの発現能力、ならびに抗ヒトＰＩＬ−１５Ｒα抗体の翻訳されたタンパク質産物を検出する能力を示している。ｐＩＬ−１５Ｒαプラスミドは、立体構造的に正確かつ表面局在したタンパク質をコードする。
【０１２１】
（ｐＩＬ−１５とアジュバントとしてのｐＩＬ−１５Ｒαの結合）
ｐＩＬ−１５と比較したｐＩＬ−１５Ｒαの免疫応答を増強する能力を調べるために、ＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、図３Ａに示すスケジュールに従い、ｉｎ  ｖｉｖｏでの電気穿孔処理を伴う前脛骨筋への筋肉内免疫化処理を行った。マウスを、ｐＶＡＸ対照ベクター、または５μｇの抗原性構築物（ＨＩＶ−１ｇａｇ、ＨＩＶ−１ｐｏｌ）のいずれかとともに、１０μｇのｐＩＬ−１５、１５μｇのｐＩＬ−１５Ｒα、またはｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの両方の最終容量４０μｌのいずれかで免疫化した。これらの用量は、予備試験（データは示さず）において、最適な応答を与えるために予め決定された。図３Ｂに示すように、抗原性構築物の単体で免疫化すると、ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔにより測定したとき、１０６の脾細胞あたり２３００のスポット形成細胞（ＳＦＣ）が生じた。ｐＩＬ−１５の添加により３８００ＳＦＣまで応答が増強したが、ｐＩＬ−１５ＲαとｐＩＬ−１５とで共免疫すると抗原群単独に対して最も劇的な増加を示し、５９００ＳＦＣとなった。これらの結果は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα免疫複合体の形成が、ＩＬ−１５単独よりも強力なアジュバントとして機能し得るという説を裏づけている。
【０１２２】
この免疫複合体が実際にｉｎ  ｖｉｖｏで形成されたか否かを判定するため、ｐＩＬ−１５およびＰｐＬ−１５Ｒαが（抗原とともに）それぞれ別々の脚に注射された、もう１つの免疫化グループを追加した。この分割供給方式では、プラスミドで供給されたＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαは、免疫複合体を形成できなくなる。別々の脚へのＰＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの共免疫化は、同じ組合せを同じ脚に供給したときに観察されたものと類似レベルのＩＦＮ−γ（それぞれ４５６２ＳＦＣ、４０７２ＳＦＣ）を誘発することが判明した。
【０１２３】
抗原性構築物とｐＩＬ−１５Ｒαでの免疫化グループはまた、約３５００ＳＦＣに抗原特異的ＩＦＮ−γ分泌も増強する（図３Ｂ）ことに留意されたい。これらの結果を確認するため、本発明者は、ｐＩＬ−１５Ｒαが用量依存的に応答を誘発するか否かを確認するべく、抗原性構築物とともに漸次増加させた用量のｐＩＬ−１５Ｒαプラスミドでマウスの新しい組を免疫化した。図４に示すように、ｐＩＬ−１５Ｒαを含めても、ｐＧａｇに対する応答（パネルＡ）またはｐＰｏｌに対する応答（パネルＢ）をそれぞれ測定した結果、誘導されるＩＦＮ−γ分泌は用量依存的に増加しなかった。ＨＩＶ−１抗原性構築物の使用の有無にかかわらず、最高用量で使用したｐＩＬ−１５Ｒαとの共免疫化によって細胞の免疫応答は１．５倍から２倍に増大した。注目すべき点として、ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５の不存在下であっても抗原特異的免疫応答を増強するとみられる。
【０１２４】
さらにｐＩＬ−１５Ｒαのアジュバント特性を確認するため、ワクチン接種の後のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクタ機能を調べた。ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔアッセイを実施する前に、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、前述のように各ワクチンの組合せで免疫化したマウスの脾細胞から除去した。図５Ａに示すように、ｐＩＬ−１５、ｐＩＬ−１５Ｒα、または両方の組合せで免疫化されたマウスの脾細胞からのＣＤ８＋Ｔ細胞の除去処理により、検出されたＩＦＮ−γ分泌の量は有意に減少した。いずれの免疫化グループにおいても、全脾細胞において観察された全免疫応答（黒色）と比較したＣＤ４＋Ｔ細胞の占める程度（灰色）の間に差はみられなかった。以上を総合すると、ワクチン接種戦略におけるｐＩＬ−１５ＲαとｐＩＬ−１５の組合せは、それぞれ単独の構築物を用いた場合より大幅に免疫応答を増強する。この相加効果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団が除去された場合には当該効果は失われたことから、主としてＣＤ８＋Ｔ細胞に作用する。
【０１２５】
ｐＩＬ−１５Ｒαが体液性免疫応答にも影響を与えるか否かを判定する判断するため、各ワクチン接種戦略において誘発される免疫応答もＥＬＩＳＡによって測定した。免疫化したマウスからの血清をアッセイして、ＨＩＶ−１Ｇａｇ（ｐ２４）タンパク質に対するＩｇＧ抗体のレベルを測定した（図５Ｂ）。細胞性免疫の誘発にはｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せが最もよい結果が得られたが、ｐＩＬ−１５、ｐＩＬ−１５Ｒαのいずれか単体で免疫化したマウスでのＨＩＶ−１特異的抗体の力価（１：１６００）は、ｐＶＡＸで免疫化したマウスの場合（検出されず）、ｐＧａｇ単独でまたはｐＶＡＸとｐＧａｇの組合せで免疫化したマウスの場合（１：８００）と比較して最も高くなった。
【０１２６】
（ＣＤ８＋Ｔ細胞メモリを増強しないとみられるｐＩＬ−１５Ｒａアジュバント）
マウスは、本明明細書中で前述したように３回免疫したが、３回目の免疫の一週間後にこれらのマウスを犠牲処置する代わりに約３０週間の無処置期間をおくと、観察される応答が主としてメモリ細胞の集団によるものであることが確実となる。図６Ａに示すように、有意な無処置期間の後の応答は依然として非常に堅調であった。単独の抗原性構築物で免疫化したマウスは、概ね１７００ＳＦＣの応答を有していた。最大の応答は、ｐＩＬ−１５との共免疫のグループであることは明らかであり、ｐＩＬ−１５と、ｐＩＬ−１５／ｐＩＬ−１５Ｒａの組合せの両方で〜２８００ＳＦＣであった。ｐＩＬ−１５の不存在下でのｐＩＬ−１５Ｒαとの共免疫では、アジュバントの効果はもはや観察されなかった（〜１７００ＳＦＣ）。同じ傾向はまた、細胞内サイトカイン染色とフローサイトメトリー（図６Ｂ）によっても観察され、ここではＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ産生のレベルは、ｐＩＬ−１５との共免疫化マウスにおいて最も顕著であった。ｐＩＬ−１５が大きな影響を与えることが観察されたのに対し、ワクチン接種戦略においてｐＩＬ−１５Ｒαを追加しても、メモリ細胞の応答にはほとんど影響がないことが観察された。従って、ｐＩＬ−１５Ｒαはワクチン接種の直後には強力なアジュバントであったが、時間の経過とともに、ＩＬ−１５がメモリＣＤ８＋Ｔ細胞の優れた誘発物質となるという理論が裏付けられる。
【０１２７】
メモリ細胞の抗体応答は、エフェクタ期で観察されたものと同様であった。図６Ｃに示すように、ｐＩＬ−１５で免疫したマウスでは、希釈列から検出可能なＨＩＶ−１Ｇａｇ（Ｐ２４）に対する抗体が１：１６００まであったが、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せを含む他の全てのグループでは、希釈したものから検出された抗体が１：４００であった。ｐＩＬ−１５は、細胞性のメモリ応答のみならず体液性の応答の発生においても効果的なアジュバントであることを示しているが、一方ｐＩＬ−１５Ｒαは、抗原に対する急性の免疫応答の促進に一定の役割を果たしているとみられる。
【０１２８】
（ＩＬ−１５のないｐＩＬ−１５Ｒαアジュバント）
ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、内生のマウスＩＬ−１５と複合体を形成することにより、ワクチン接種したマウスの免疫応答を増強し得るか否かを調べるため、またはＩＬ−１５とは無関係に、ＩＬ−１５ノックアウトマウスでワクチン接種を試験した。最初に、対照として、翻訳されたヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質のマウスＩＬ−１５への結合の有無について試験した。図７Ａに示すように、マウスＩＬ−１５とともにインキュベートした、Ｓ３５放射標識されたヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、抗マウスＩＬ−１５抗体とともに免疫沈降させることができ、このことは、マウスＩＬ−１５のヒトＩＬ−１５Ｒαに結合する能力を示唆している。
【０１２９】
マウスＩＬ−１５の不存在下でｐＩＬ−１５Ｒαのアジュバントとなる能力を調べた。従って、ＩＬ−１５ノックアウトマウスでの同様のワクチン接種の試験、即ち内生ＩＬ−１５を欠いており、結果としてＮＫ細胞およびメモリＣＤ８＋Ｔ細胞の欠失した条件でのワクチン接種の試験を行った（Ｋｅｎｎｅｄｙら，２０００）。図７Ｃは、ノックアウトマウスでの内生マウスＩＬ−１５の不存在下でｐＩＬ−１５Ｒαは免疫応答を増強することが、ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔにより判明したことを示す。また、ｐＩＬ−１５とｐＩＬ−１５Ｒαの組合せは、最初にＢＡＬＢ／ｃマウスで観察されたようにいずれかのアジュバントを単独で投与された場合より免疫応答を増強することはない。ＩＬ−１５−／−マウスは、ＴａｃｏｎｉｃのＣ５７／ＢＬ６バックグラウンド上で作製した。従って、適切なバックグラウンド対照マウスで、ＢＡＬＢ／ｃで観察されたのと同様の免疫応答が得られるか否かを確認するため、同じ実験を反復した。図７Ｂは、同一のスケジュールで免疫化した対照マウスからの結果を示しており、ＢＡＬＢ／ｃ免疫化マウスと同様の傾向を示している。
【０１３０】
［結論］
ヒトＩＬ−１５およびＨＩＶ−１抗原性ＤＮＡ構築物とＩＬ−１５Ｒα構築物との共免疫化は、抗原性構築物単体で免疫化した場合より、２．５倍のＩＦＮ−γ分泌レベルの増強をもたらした（図３Ｂ）。ＥＬＩＳｐｏｔ上に置く前のＣＤ８＋Ｔ細胞の除去処理がＩＦＮ−γの分泌を１０分の１に減らしたことから、ＩＦＮ−γ分泌はＣＤ８＋Ｔ細胞によるものであった。ｐＩＬ−１５およびｐＩＬ−１５Ｒａを別々の脚に（抗原とともに）注射しても、同じ脚に供給した場合と類似の免疫応答が誘発されることから、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの組合せを与えた場合に観察された効力の増加は、トランスフェクトされた細胞での安定な複合体の形成によるものではないとみられる。従って、ｐＩＬ−１５／ｐＩＬ−１５Ｒαの同時供給で観察された応答の増強は、２つの独立したアジュバントの相加効果である可能性が高い。これら２つのアジュバントを同時供給しても、血清中のＩｇＧ抗体によって測定される体液性免疫応答の増強もみられなかった。
【０１３１】
ｐＩＬ−１５／ｐＩＬ−１５Ｒαの組合せの免疫応答に対する長期的な影響も調べた。メモリの応答を観察するため、免疫の解析を実施する前に３回目の免疫化から３０週間無処置においた。その結果から、これら２つのアジュバントの組合せは、免疫応答の初期段階で強力なＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発するが、メモリＴ細胞への影響は主としてｐＩＬ−１５と共に免疫化したマウスのみでしか観察されないことが分かった。抗原単独の場合よりメモリ応答を増強するためには、ｐＩＬ−１５を含めることが必要であった。同様に、ＩＬ−１５Ｒαは、最初にＩＬ−１５と等しいかそれより大きいの免疫応答を誘発するが、それはメモリ応答を維持する助けにはならなかった。従って、ＩＬ−１５Ｒαがバーストサイズまで増大しても、メモリに対するＩＬ−１５シグナルの不存在下でのバーストサイズは、長期的な応答を維持するために不十分であった。
【０１３２】
驚くべき所見としては、ｐＩＬ−１５Ｒαを含む抗原性プラスミドの供給によっても細胞性免疫応答は増強され、ｐＩＬ−１５によって誘発されたものに等しくなった。確認のため、複数の免疫化処理をｐＩＬ−１５Ｒαの量を増加させながら行い、用量依存的な応答を観察した。これは、マウスＩＬ−１５はヒトＩＬ−１５と〜７３％相同であるため（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，１９９５ａ）、ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質は内生マウスＩＬ−１５に結合し、それを同様に転移させられるということであるとみられる。この仮説を調べるため、内生ＩＬ−１５を欠くＩＬ−１５ノックアウトマウスを免疫化した。ｐＩＬ−１５Ｒαで免疫化されたＩＬ−１５ノックアウトマウスにおいて、抗原単独の場合のおよそ２倍の増加が観察された。６−８週齢ＩＬ−１５−／−のメスのマウスを大量に得ることが困難であるため、これらの実験からｐＩＬ−１５のグループは除外した。しかし、ｐＩＬ−１５／ｐＩＬ−１５Ｒαの組合せの増強効果はもはや観察されなかった。対照のＣ５７／ＢＬ６マウスは、ＢＡＬＢ／ｃマウスで見られたのと同じ傾向を示す（総スポット数は小さく、ｐＶＡＸグループでのバックグラウンドは高いが）こと、およびＩＬ−１５ノックアウトマウスはＣ５７／ＢＬ６マウスに比較した場合でも全体的に低い応答を示したことに留意すべきである。これらのマウスは、ワクシニアチャレンジ感染に対する防御ができないなど、多少欠陥のあるホストの防御応答を有することが以前に報告されている（Ｋｅｎｎｅｄｙら，２０００）。全体的な免疫応答が低いにもかかわらず、ｐＩＬ−１５Ｒαのアジュバント効果は、あらゆる内生ＩＬ−１５の不存在下でも依然として観察された。この理論によって拘束されることを意図するものではないが、十分に結果を考慮すると、ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５から独立して応答を誘発することができる新規なアジュバントとして機能し得ると考えられる。この免疫応答の増幅は、ホストＴ細胞応答のメモリ期より急性期での免疫の増大に特に集中しているとみられる。
【０１３３】
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ＢＡＲＯＵＣＨ，Ｄ．Ｈ．，ＳＡＮＴＲＡ，Ｓ．，ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＦＵ，Ｔ．Ｍ．，ＷＡＧＮＥＲ，Ｗ．，ＢＩＬＳＫＡ，Ｍ．，ＣＲＡＩＵ，Ａ．，ＺＨＥＮＧ，Ｘ．Ｘ．，ＫＲＩＶＵＬＫＡ，Ｇ．Ｒ．，ＢＥＡＵＤＲＹ，Ｋ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＮＩＣＫＥＲＳＯＮ，Ｃ．Ｅ．，ＴＲＩＧＯＮＡ，Ｗ．Ｌ．，ＰＵＮＴ，Ｋ．，ＦＲＥＥＤ，Ｄ．Ｃ．，ＧＵＡＮ，Ｌ．，ＤＵＢＥＹ，Ｓ．，ＣＡＳＩＭＩＲＯ，Ｄ．，ＳＩＭＯＮ，Ａ．，ＤＡＶＩＥＳ，Ｍ．Ｅ．，ＣＨＡＳＴＡＩＮ，Ｍ．，ＳＴＲＯＭ，Ｔ．Ｂ．，ＧＥＬＭＡＮ，Ｒ．Ｓ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＥＭＩＮＩ，Ｅ．Ａ．，ＳＨＩＶＥＲ，Ｊ．Ｗ．，およびＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．（２０００）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＡＩＤＳ  ｉｎ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｂｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２９０，  ４８６−４９２．
ＢＥＣＫＥＲ，Ｔ．Ｃ．，ＷＨＥＲＲＹ，Ｅ．Ｊ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．，ＭＵＲＡＬＩ−ＫＲＩＳＨＮＡ，Ｋ．，ＡＮＴＩＡ，Ｒ．，ＭＡ，Ａ．，ａｎｄＡＨＭＥＤ，Ｒ．（２００２）．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｎｅｗａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９５，  １５４１−１５４８．
ＢＥＲＧＡＭＡＳＣＨＩ，Ｃ．，ＲＯＳＡＴＩ，Ｍ．，ＪＡＬＡＨ，Ｒ．，ＶＡＬＥＮＴＩＮ，Ａ．，ＫＵＬＫＡＲＮＩ，Ｖ．，ＡＬＩＣＥＡ，Ｃ．，ＺＨＡＮＧ，Ｇ．Ｍ．，ＰＡＴＥＬ，Ｖ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，およびＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．（２００８）．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｍｕｔｕａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８３，  ４１８９−４１９９．
ＢＥＴＴＳ，Ｍ．Ｒ．，ＫＲＯＷＫＡ，Ｊ．Ｆ．，ＫＥＰＬＥＲ，Ｔ．Ｂ．，ＤＡＶＩＤＩＡＮ，Ｍ．，ＣＨＲＩＳＴＯＰＨＥＲＳＯＮ，Ｃ．，ＫＷＯＫ，Ｓ．，ＬＯＵＩＥ，Ｌ．，ＥＲＯＮ，Ｊ．，ＳＨＥＰＰＡＲＤ，Ｈ．，およびＦＲＥＬＩＮＧＥＲ，Ｊ．Ａ．（１９９９）．Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｓ  ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ  ｔｙｐｅ  １  ｖｉｒａｌ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ＨＩＶ  ｔｙｐｅ  １−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ．  ＡＩＤＳ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  １５，  １２１９−１２２８．
ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＫＵＴＺＬＥＲ，Ｍ．Ａ．，ＶＡＮＳＡＮＴ，Ｇ．，ＨＯＫＥＹ，Ｄ．Ａ．，ＫＵＭＡＲ，Ｓ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＷＵ，Ｌ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．Ｋ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＢＲＯＷＮ，Ｃ．，ＳＩＬＶＥＲＡ，Ｐ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＭＯＮＦＯＲＴＥ，Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，ＥＬＤＲＩＤＧＥ，Ｊ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００７）．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｓｉｍｉａｎ／ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  （ＳＨＩＶ）  ８９．６Ｐ  ｉｎ  ｍａｃａｑｕｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＳＨＩＶ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０４，  １８６４８−１８６５３．
ＢＵＬＡＮＯＶＡ，Ｅ．，ＢＵＤＡＧＩＡＮ，Ｖ．，ＰＯＨＬ，Ｔ．，ＫＲＡＵＳＥ，Ｈ．，ＤＵＲＫＯＰ，Ｈ．，ＰＡＵＳ，Ｒ．，およびＢＵＬＦＯＮＥ−ＰＡＵＳ，Ｓ．（２００１）．Ｔｈｅ  ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｓｉｇｎａｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｓｙｋ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７，  ６２９２−６３０２．
ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，およびＭＡ，Ａ．（２００４）．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  （ＩＬ）−１５Ｒａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００，  ８２５−８３４．
ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＣＨＡＮ，Ｆ．，ＭＡ，Ａ．，およびＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．（２００３）．ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ  ｆｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｏｒｙ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １００，  ４７２４−４７２９．
ＣＡＬＡＲＯＴＡ，Ｓ．Ａ．，ＤＡＩ，Ａ．，ＴＲＯＣＩＯ，Ｊ．Ｎ．，ＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．，ＬＯＲＩ，Ｆ．，およびＬＩＳＺＩＥＷＩＣＺ，Ｊ．（２００８）．ＩＬ−１５  ａｓ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ＨＩＶ−１  ＤｅｒｍａＶｉｒ  ｖａｃｃｉｎｅ．  Ｖａｃｃｉｎｅ．
ＣＡＯ，Ｙ．，ＱＩＮ，Ｌ．，ＺＨＡＮＧ，Ｌ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９５）．Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３２，  ２０１−２０８．
ＤＵＢＯＩＳ，Ｓ．，ＭＡＲＩＮＥＲ，Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．（２００２）．ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ  ｒｅｃｙｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｅｎｔｓ  ＩＬ−１５  Ｉｎ  ｔｒａｎｓ  ｔｏ  ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １７，  ５３７−５４７．
ＤＵＩＴＭＡＮ，Ｅ．Ｈ．，ＯＲＩＮＳＫＡ，Ｚ．，ＢＵＬＡＮＯＶＡ，Ｅ．，ＰＡＵＳ，Ｒ．，およびＢＵＬＦＯＮＥ−ＰＡＵＳ，Ｓ．（２００８）．Ｈｏｗ  ａ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｓ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｉｔｓ  ｏｗｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：  ｌｅｓｓｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ｛ａｌｐｈａ｝．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ．
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ＨＡＬＷＡＮＩ，Ｒ．，ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，ＹＡＳＳＩＮＥ−ＤＩＡＢ，Ｂ．，ＨＡＤＤＡＤ，Ｅ．Ｋ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＫＵＭＡＲ，Ｓ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＷＵ，Ｌ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．Ｋ．，ＰＨＩＬＬＩＰＳＯＮ−ＷＥＩＮＥＲ，Ｒ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＬＥＷＩＳ，Ｍ．Ｇ．，ＳＨＥＮ，Ａ．，ＳＩＬＩＣＩＡＮＯ，Ｒ．Ｆ．，ＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．，およびＳＥＫＡＬＹ，Ｒ．Ｐ．（２００８）．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  （ＳＩＶ）−ＤＮＡ＋ＩＬ−１２  ｏｒ  ＩＬ−１５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＣＤ８  ｍｅｍｏｒｙ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ＳＩＶ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍａｃａｑｕｅｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０，  ７９６９−７９７９．
ＨＯＫＥＹ，Ｄ．Ａ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００６）．ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ＨＩＶ：  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２８，  ２６７−２７９．
ＪＩＮ，Ｘ．，ＢＡＵＥＲ，Ｄ．Ｅ．，ＴＵＴＴＬＥＴＯＮ，Ｓ．Ｅ．，ＬＥＷＩＮ，Ｓ．，ＧＥＴＴＩＥ，Ａ．，ＢＬＡＮＣＨＡＲＤ，Ｊ．，ＩＲＷＩＮ，Ｃ．Ｅ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．Ｔ．，ＭＩＴＴＬＥＲ，Ｊ．，ＷＥＩＮＢＥＲＧＥＲ，Ｌ．，ＫＯＳＴＲＩＫＩＳ，Ｌ．Ｇ．，ＺＨＡＮＧ，Ｌ．，ＰＥＲＥＬＳＯＮ，Ａ．Ｓ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９９）．Ｄｒａｍａｔｉｃ  ｒｉｓｅ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｖｉｒｅｍｉａ  ａｆｔｅｒ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｍａｃａｑｕｅｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８９，  ９９１−９９８．
ＫＥＮＮＥＤＹ，Ｍ．Ｋ．，ＧＬＡＣＣＵＭ，Ｍ．，ＢＲＯＷＮ，Ｓ．Ｎ．，ＢＵＴＺ，Ｅ．Ａ．，ＶＩＮＥＹ，Ｊ．Ｌ．，ＥＭＢＥＲＳ，Ｍ．，ＭＡＴＳＵＫＩ，Ｎ．，ＣＨＡＲＲＩＥＲ，Ｋ．，ＳＥＤＧＥＲ，Ｌ．，ＷＩＬＬＩＳ，Ｃ．Ｒ．，ＢＲＡＳＥＬ，Ｋ．，ＭＯＲＲＩＳＳＥＹ，Ｐ．Ｊ．，ＳＴＯＣＫＩＮＧ，Ｋ．，ＳＣＨＵＨ，Ｊ．Ｃ．，ＪＯＹＣＥ，Ｓ．，およびＰＥＳＣＨＯＮ，Ｊ．Ｊ．（２０００）．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅａｇｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９１，  ７７１−７８０．
ＫＨＡＮ，Ａ．Ｓ．，ＳＭＩＴＨ，Ｌ．Ｃ．，ＡＢＲＵＺＺＥＳＥ，Ｒ．Ｖ．，ＣＵＭＭＩＮＧＳ，Ｋ．Ｋ．，ＰＯＰＥ，Ｍ．Ａ．，ＢＲＯＷＮ，Ｐ．Ａ．，およびＤＲＡＧＨＩＡ−ＡＫＬＩ，Ｒ．（２００３）．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｌａｓｍｉｄｓ  ｉｎ  ｐｉｇｓ．  ＤＮＡ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ２２，  ８０７−８１４．
ＫＩＭ，Ｊ．Ｊ．，ＮＯＴＴＩＮＧＨＡＭ，Ｌ．Ｋ．，ＳＩＮ，Ｊ．Ｉ．，ＴＳＡＩ，Ａ．，ＭＯＲＲＩＳＯＮ，Ｌ．，ＯＨ，Ｊ．，ＤＡＮＧ，Ｋ．，ＨＵ，Ｙ．，ＫＡＺＡＨＡＹＡ，Ｋ．，ＢＥＮＮＥＴＴ，Ｍ．，ＤＥＮＴＣＨＥＶ，Ｔ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｄ．Ｍ．，ＣＨＡＬＩＡＮ，Ａ．Ａ．，ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，ＡＧＡＤＪＡＮＹＡＮ，Ｍ．Ｇ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（１９９８）．ＣＤ８  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １０２，  １１１２−１１２４．
ＫＯＫＡ，Ｒ．，ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，およびＭＡ，Ａ．（２００４）．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｑｕｉｒｅ  ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｔｏ  ｐｒｉｍｅ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７３，  ３５９４−３５９８．
ＫＯＵＰ，Ｒ．Ａ．，ＳＡＦＲＩＴ，Ｊ．Ｔ．，ＣＡＯ，Ｙ．，ＡＮＤＲＥＷＳ，Ｃ．Ａ．，ＭＣＬＥＯＤ，Ｇ．，ＢＯＲＫＯＷＳＫＹ，Ｗ．，ＦＡＲＴＨＩＮＧ，Ｃ．，およびＨＯ，Ｄ．Ｄ．（１９９４）．Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６８，  ４６５０−４６５５．
ＫＵ，Ｃ．Ｃ．，ＭＵＲＡＫＡＭＩ，Ｍ．，ＳＡＫＡＭＯＴＯ，Ａ．，ＫＡＰＰＬＥＲ，Ｊ．，およびＭＡＲＲＡＣＫ，Ｐ．（２０００）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤ８＋  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｏｐｐｏｓｉｎｇ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２８８，  ６７５−６７８．
ＫＵＴＺＬＥＲ，Ｍ．Ａ．，ＲＯＢＩＮＳＯＮ，Ｔ．Ｍ．，ＣＨＡＴＴＥＲＧＯＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＣＨＯＯ，Ｄ．Ｋ．，ＣＨＯＯ，Ａ．Ｙ．，ＣＨＯＥ，Ｐ．Ｙ．，ＲＡＭＡＮＡＴＨＡＮ，Ｍ．Ｐ．，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮ，Ｒ．，ＫＵＤＣＨＯＤＫＡＲ，Ｓ．，ＴＡＭＵＲＡ，Ｙ．，ＳＩＤＨＵ，Ｍ．，ＲＯＯＰＣＨＡＮＤ，Ｖ．，ＫＩＭ，Ｊ．Ｊ．，ＰＡＶＬＡＫＩＳ，Ｇ．Ｎ．，ＦＥＬＢＥＲ，Ｂ．Ｋ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，ＢＯＹＥＲ，Ｊ．Ｄ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００５）．Ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｐａｒｔｉａｌｌｙ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｅｌｐ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７５，  １１２−１２３．
ＬＡＤＤＹ，Ｄ．Ｊ．，ＹＡＮ，Ｊ．，ＫＵＴＺＬＥＲ，Ｍ．，ＫＯＢＡＳＡ，Ｄ．，ＫＯＢＩＮＧＥＲ，Ｇ．Ｐ．，ＫＨＡＮ，Ａ．Ｓ．，ＧＲＥＥＮＨＯＵＳＥ，Ｊ．，ＳＡＲＤＥＳＡＩ，Ｎ．Ｙ．，ＤＲＡＧＨＩＡ−ＡＫＬＩ，Ｒ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００８）．Ｈｅｔｅｒｏｓｕｂｔｙｐｉｃ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ａｖｉａｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｖｉａ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ＤＮＡ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ３，  ｅ２５１７．
ＬＥＩＦＥＲＴ，Ｊ．Ａ．，ＲＯＤＲＩＧＵＥＺ−ＣＡＲＲＥＮＯ，Ｍ．Ｐ．，ＲＯＤＲＩＧＵＥＺ，Ｆ．，およびＷＨＩＴＴＯＮ，Ｊ．Ｌ．（２００４）．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍｉｄ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  １９９，  ４０−５３．
ＬＩ，Ｗ．，ＬＩ，Ｓ．，ＨＵ，Ｙ．，ＴＡＮＧ，Ｂ．，ＣＵＩ，Ｌ．，およびＨＥ，Ｗ．（２００８）．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ＨＩＶ−１  ｇａｇ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｂｏｏｓｔｉｎｇ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２６，  ３２８２−３２９０．
ＬＯＤＯＬＣＥ，Ｊ．Ｐ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，ＣＨＡＩ，Ｓ．，ＳＷＡＩＮ，Ｒ．Ｅ．，ＤＡＳＳＯＰＯＵＬＯＳ，Ｔ．，ＴＲＥＴＴＩＮ，Ｓ．，およびＭＡ，Ａ．（１９９８）．ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｈｏｍｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９，  ６６９−６７６．
ＬＯＤＯＬＣＥ，Ｊ．Ｐ．，ＢＵＲＫＥＴＴ，Ｐ．Ｒ．，ＢＯＯＮＥ，Ｄ．Ｌ．，ＣＨＩＥＮ，Ｍ．，およびＭＡ，Ａ．（２００１）．Ｔ  ｃｅｌｌ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５Ｒａｌｐｈａ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９４，  １１８７−１１９４．
ＬＵＣＡＳ，Ｍ．，ＳＣＨＡＣＨＴＥＲＬＥ，Ｗ．，ＯＢＥＲＬＥ，Ｋ．，ＡＩＣＨＥＬＥ，Ｐ．，およびＤＩＥＦＥＮＢＡＣＨ，Ａ．（２００７）．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｉｍｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔｒａｎｓ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２６，  ５０３−５１７．
ＭＥＳＴＥＣＫＹ，Ｊ．，ＪＡＣＫＳＯＮ，Ｓ．，ＭＯＬＤＯＶＥＡＮＵ，Ｚ．，ＮＥＳＢＩＴ，Ｌ．Ｒ．，ＫＵＬＨＡＶＹ，Ｒ．，ＰＲＩＮＣＥ，Ｓ．Ｊ．，ＳＡＢＢＡＪ，Ｓ．，ＭＵＬＬＩＧＡＮ，Ｍ．Ｊ．，およびＧＯＥＰＦＥＲＴ，Ｐ．Ａ．（２００４）．Ｐａｕｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＡ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｓｅｒａ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＨＩＶ−ｔｙｐｅ  １−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．  ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ２０，  ９７２−９８８．
ＭＯＯＲＥ，Ａ．Ｃ．，ＫＯＮＧ，Ｗ．Ｐ．，ＣＨＡＫＲＡＢＡＲＴＩ，Ｂ．Ｋ．，およびＮＡＢＥＬ，Ｇ．Ｊ．（２００２）．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｏｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７６，  ２４３−２５０．
ＭＯＲＲＯＷ，Ｍ．Ｐ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００８）．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  ＡＩＤＳ  （Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｅｎｇｌａｎｄ）  ２２，  ３３３−３３８．
ＭＵＳＥＹ，Ｌ．，ＨＵＧＨＥＳ，Ｊ．，ＳＣＨＡＣＫＥＲ，Ｔ．，ＳＨＥＡ，Ｔ．，ＣＯＲＥＹ，Ｌ．，およびＭＣＥＬＲＡＴＨ，Ｍ．Ｊ．（１９９７）．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ−Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，  ｖｉｒａｌ  ｌｏａｄ，  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３７，  １２６７−１２７４．
ＯＧＡＷＡ，Ｔ．，ＴＡＲＫＯＷＳＫＩ，Ａ．，ＭＣＧＨＥＥ，Ｍ．Ｌ．，ＭＯＬＤＯＶＥＡＮＵ，Ｚ．，ＭＥＳＴＥＣＫＹ，Ｊ．，ＨＩＲＳＣＨ，Ｈ．Ｚ．，ＫＯＯＰＭＡＮ，Ｗ．Ｊ．，ＨＡＭＡＤＡ，Ｓ．，ＭＣＧＨＥＥ，Ｊ．Ｒ．，およびＫＩＹＯＮＯ，Ｈ．（１９８９）．Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ａｎｄ  ＩｇＡ  ｓｕｂｃｌａｓｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｔｉｓｓｕｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４２，  １１５０−１１５８．
ＯＧＧ，Ｇ．Ｓ．，ＪＩＮ，Ｘ．，ＢＯＮＨＯＥＦＦＥＲ，Ｓ．，ＤＵＮＢＡＲ，Ｐ．Ｒ．，ＮＯＷＡＫ，Ｍ．Ａ．，ＭＯＮＡＲＤ，Ｓ．，ＳＥＧＡＬ，Ｊ．Ｐ．，ＣＡＯ，Ｙ．，ＲＯＷＬＡＮＤ−ＪＯＮＥＳ，Ｓ．Ｌ．，ＣＥＲＵＮＤＯＬＯ，Ｖ．，ＨＵＲＬＥＹ，Ａ．，ＭＡＲＫＯＷＩＴＺ，Ｍ．，ＨＯ，Ｄ．Ｄ．，ＮＩＸＯＮ，Ｄ．Ｆ．，およびＭＣＭＩＣＨＡＥＬ，Ａ．Ｊ．（１９９８）．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ−１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｌｏａｄ  ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ＲＮＡ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２７９，  ２１０３−２１０６．
ＯＨ，Ｓ．，ＢＥＲＺＯＦＳＫＹ，Ｊ．Ａ．，ＢＵＲＫＥ，Ｄ．Ｓ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＰＥＲＥＲＡ，Ｌ．Ｐ．（２００３）．Ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＩＶ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＩＬ−１５  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＩＬ−２  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １００，  ３３９２−３３９７．
ＯＨ，Ｓ．，ＰＥＲＥＲＡ，Ｌ．Ｐ．，ＢＵＲＫＥ，Ｄ．Ｓ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＢＥＲＺＯＦＳＫＹ，Ｊ．Ａ．（２００４）．ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｖｉｄｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０１，  １５１５４−１５１５９．
ＯＨ，Ｓ．，ＰＥＲＥＲＡ，Ｌ．Ｐ．，ＴＥＲＡＢＥ，Ｍ．，ＮＩ，Ｌ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＢＥＲＺＯＦＳＫＹ，Ｊ．Ａ．（２００８）．ＩＬ−１５  ａｓ  ａ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ＣＤ４＋  ｈｅｌｐ  ｆｏｒ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｖｏｉｄａｎｃｅ  ｏｆ  ＴＲＡＩＬ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０５，  ５２０１−５２０６．
ＯＮＵ，Ａ．，ＰＯＨＬ，Ｔ．，ＫＲＡＵＳＥ，Ｈ．，およびＢＵＬＦＯＮＥ−ＰＡＵＳ，Ｓ．（１９９７）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｌｅａｄｅｒ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｆ  ｔｗｏ  ＩＬ−１５  ｉｓｏｆｏｒｍｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８，  ２５５−２６２．
ＰＩＣＫＥＲ，Ｌ．Ｊ．，ＲＥＥＤ−ＩＮＤＥＲＢＩＴＺＩＮ，Ｅ．Ｆ．，ＨＡＧＥＮ，Ｓ．Ｉ．，ＥＤＧＡＲ，Ｊ．Ｂ．，ＨＡＮＳＥＮ，Ｓ．Ｇ．，ＬＥＧＡＳＳＥ，Ａ．，ＰＬＡＮＥＲ，Ｓ．，ＰＩＡＴＡＫ，Ｍ．，ＪＲ．，ＬＩＦＳＯＮ，Ｊ．Ｄ．，ＭＡＩＮＯ，Ｖ．Ｃ．，ＡＸＴＨＥＬＭ，Ｍ．Ｋ．，およびＶＩＬＬＩＮＧＥＲ，Ｆ．（２００６）．ＩＬ−１５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ＣＤ４  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｅｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１６，  １５１４−１５２４．
ＲＡＭＡＮＡＴＨＡＮ，Ｍ．Ｐ．，ＣＵＲＬＥＹ，Ｅ．，３ＲＤ，ＳＵ，Ｍ．，ＣＨＡＭＢＥＲＳ，Ｊ．Ａ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００２）．Ｃａｒｂｏｘｙｌ  ｔｅｒｍｉｎｕｓ  ｏｆ  ｈＶＩＰ／ｍｏｖ３４  ｉｓ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  ＨＩＶ−１−Ｖｐｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７７，  ４７８５４−４７８６０．
ＳＡＮＤＡＵ，Ｍ．Ｍ．，ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．，およびＪＡＭＥＳＯＮ，Ｓ．Ｃ．（２００４）．Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｔｒａｎｓｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｂｙ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｎｅｃｅｓｓｉｔａｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ａｎｄ  ＩＬ−１５Ｒ  ａｌｐｈａ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７３，  ６５３７−６５４１．
ＳＡＴＯ，Ｎ．，ＰＡＴＥＬ，Ｈ．Ｊ．，ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．（２００７）．Ｔｈｅ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ  ｏｎ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅｓ  ｅｎａｂｌｅｓ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ＩＬ−１５  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｌｏｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ＣＤ８  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０４，  ５８８−５９３．
ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＫＬＯＮＯＷＳＫＩ，Ｋ．Ｄ．，およびＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．（２００４ａ）．Ｔｒａｎｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ＋  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ．  Ｂｌｏｏｄ  １０３，  ９８８−９９４．
ＳＣＨＬＵＮＳ，Ｋ．Ｓ．，ＮＯＷＡＫ，Ｅ．Ｃ．，ＣＡＢＲＥＲＡ−ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ，Ａ．，ＰＵＤＤＩＮＧＴＯＮ，Ｌ．，ＬＥＦＲＡＮＣＯＩＳ，Ｌ．，およびＡＧＵＩＬＡ，Ｈ．Ｌ．（２００４ｂ）．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｓｕｂｓｅｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｂｙ  ｍｅａｎｓ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０１，  ５６１６−５６２１．
ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＳＡＮＴＲＡ，Ｓ．，ＳＡＳＳＥＶＩＬＬＥ，Ｖ．Ｇ．，ＳＩＭＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＲＡＣＺ，Ｐ．，ＴＥＮＮＥＲ−ＲＡＣＺ，Ｋ．，ＤＡＬＥＳＡＮＤＲＯ，Ｍ．，ＳＣＡＬＬＯＮ，Ｂ．Ｊ．，ＧＨＲＡＹＥＢ，Ｊ．，ＦＯＲＭＡＮ，Ｍ．Ａ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＲＩＥＢＥＲ，Ｅ．Ｐ．，ＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．，およびＲＥＩＭＡＮＮ，Ｋ．Ａ．（１９９９）．Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｖｉｒｅｍｉａ  ｉｎ  ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤ８＋  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ  ２８３，  ８５７−８６０．
ＳＣＨＯＥＮＬＹ，Ｋ．Ａ．，およびＷＥＩＮＥＲ，Ｄ．Ｂ．（２００８）．Ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｖａｃｃｉｎｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  “ｓｐｏｔｔｙ  ｂｕｓｉｎｅｓｓ”．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ８２，  ３１６６−３１８０．
ＳＨＩＶＥＲ，Ｊ．Ｗ．，ＦＵ，Ｔ．Ｍ．，ＣＨＥＮ，Ｌ．，ＣＡＳＩＭＩＲＯ，Ｄ．Ｒ．，ＤＡＶＩＥＳ，Ｍ．Ｅ．，ＥＶＡＮＳ，Ｒ．Ｋ．，ＺＨＡＮＧ，Ｚ．Ｑ．，ＳＩＭＯＮ，Ａ．Ｊ．，ＴＲＩＧＯＮＡ，Ｗ．Ｌ．，ＤＵＢＥＹ，Ｓ．Ａ．，ＨＵＡＮＧ，Ｌ．，ＨＡＲＲＩＳ，Ｖ．Ａ．，ＬＯＮＧ，Ｒ．Ｓ．，ＬＩＡＮＧ，Ｘ．，ＨＡＮＤＴ，Ｌ．，ＳＣＨＬＥＩＦ，Ｗ．Ａ．，ＺＨＵ，Ｌ．，ＦＲＥＥＤ，Ｄ．Ｃ．，ＰＥＲＳＡＵＤ，Ｎ．Ｖ．，ＧＵＡＮ，Ｌ．，ＰＵＮＴ，Ｋ．Ｓ．，ＴＡＮＧ，Ａ．，ＣＨＥＮ，Ｍ．，ＷＩＬＳＯＮ，Ｋ．Ａ．，ＣＯＬＬＩＮＳ，Ｋ．Ｂ．，ＨＥＩＤＥＣＫＥＲ，Ｇ．Ｊ．，ＦＥＲＮＡＮＤＥＺ，Ｖ．Ｒ．，ＰＥＲＲＹ，Ｈ．Ｃ．，ＪＯＹＣＥ，Ｊ．Ｇ．，ＧＲＩＭＭ，Ｋ．Ｍ．，ＣＯＯＫ，Ｊ．Ｃ．，ＫＥＬＬＥＲ，Ｐ．Ｍ．，ＫＲＥＳＯＣＫ，Ｄ．Ｓ．，ＭＡＣＨ，Ｈ．，ＴＲＯＵＴＭＡＮ，Ｒ．Ｄ．，ＩＳＯＰＩ，Ｌ．Ａ．，ＷＩＬＬＩＡＭＳ，Ｄ．Ｍ．，ＸＵ，Ｚ．，ＢＯＨＡＮＮＯＮ，Ｋ．Ｅ．，ＶＯＬＫＩＮ，Ｄ．Ｂ．，ＭＯＮＴＥＦＩＯＲＩ，Ｄ．Ｃ．，ＭＩＵＲＡ，Ａ．，ＫＲＩＶＵＬＫＡ，Ｇ．Ｒ．，ＬＩＦＴＯＮ，Ｍ．Ａ．，ＫＵＲＯＤＡ，Ｍ．Ｊ．，ＳＣＨＭＩＴＺ，Ｊ．Ｅ．，ＬＥＴＶＩＮ，Ｎ．Ｌ．，ＣＡＵＬＦＩＥＬＤ，Ｍ．Ｊ．，ＢＥＴＴ，Ａ．Ｊ．，ＹＯＵＩＬ，Ｒ．，ＫＡＳＬＯＷ，Ｄ．Ｃ．，およびＥＭＩＮＩ，Ｅ．Ａ．（２００２）．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｉｎｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｖｅｃｔｏｒ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉ−ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ−ｖｉｒｕｓ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４１５，  ３３１−３３５．
ＳＰＲＥＮＴ，Ｊ．（２００３）．Ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ／  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ５，  ２２７−２３１．
ＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．，ＢＡＭＦＯＲＤ，Ｒ．Ｎ．，ＤＥＦＩＬＩＰＰＩＳ，Ａ．Ｐ．，およびＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．（１９９６）．ＩＬ−１５：  ａ  ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｗｈｏｓｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ａｔ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｌｅｖｅｌｓ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４，  ３２９−３３６．
ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．（２００２）．Ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＩＬ−２  ａｎｄ  ＩＬ−１５  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｆｅ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４  Ｓｕｐｐｌ  ３，  Ｓ１６１−１６７．
ＷＡＬＤＭＡＮＮ，Ｔ．Ａ．，およびＴＡＧＡＹＡ，Ｙ．（１９９９）．Ｔｈｅ  ｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｉｓ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．  Ａｎｎｕａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７，  １９−４９．
ＹＡＪＩＭＡ，Ｔ．，ＮＩＳＨＩＭＵＲＡ，Ｈ．，ＩＳＨＩＭＩＴＳＵ，Ｒ．，ＷＡＴＡＳＥ，Ｔ．，ＢＵＳＣＨ，Ｄ．Ｈ．，ＰＡＭＥＲ，Ｅ．Ｇ．，ＫＵＷＡＮＯ，Ｈ．，およびＹＯＳＨＩＫＡＩ，Ｙ．（２００２）．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｄｒｉｖｅｎ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａ  ｍｉｃｒｏｂｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６８，  １１９８−１２０３．
ＺＨＡＮＧ，Ｗ．，ＤＯＮＧ，Ｓ．Ｆ．，ＳＵＮ，Ｓ．Ｈ．，ＷＡＮＧ，Ｙ．，ＬＩ，Ｇ．Ｄ．，およびＱＵ，Ｄ．（２００６）．Ｃｏｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＩＬ−１５  ｐｌａｓｍｉｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ｏｆ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ＤＮＡ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  ｖｉｒｕｓ  ｃｏｒｅ  ａｎｔｉｇｅｎ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １２，  ４７２７−４７３５．
ＺＨＡＮＧ，Ｘ．，ＳＵＮ，Ｓ．，ＨＷＡＮＧ，Ｉ．，ＴＯＵＧＨ，Ｄ．Ｆ．，およびＳＰＲＥＮＴ，Ｊ．（１９９８）．Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｍｏｒｙ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ＩＬ−１５．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８，  ５９１−５９９．
【０１３４】
【表３−１】
2013504600.tif 000002
【０１３５】
【表３−２】
2013504600.tif 000003
【図１Ｂ】
2013504600.tif 000004
【図１Ｃ】
2013504600.tif 000005
【図１Ｄ】
2013504600.tif 000006
【図１Ｅ】
2013504600.tif 000007
【図３Ａ】
2013504600.tif 000008
【図４Ｂ】
2013504600.tif 000009
【図５Ａ】
2013504600.tif 000010
【図５Ｂ】
2013504600.tif 000011
【図６Ａ】
2013504600.tif 000012
【図１Ａ】
2013504600.tif 000013
【図２Ａ】
2013504600.tif 000014
【図２Ｂ】
2013504600.tif 000015
【図２Ｃ】
2013504600.tif 000016
【図２Ｄ】
2013504600.tif 000017
【図２Ｅ】
2013504600.tif 000018
【図２Ｆ】
2013504600.tif 000019
【図２Ｇ】
2013504600.tif 000020
【図３Ｂ】
2013504600.tif 000021
【図３Ｃ】
2013504600.tif 000022
【図４Ａ】
2013504600.tif 000023
【図６Ｂ】
2013504600.tif 000024
【図６Ｃ】
2013504600.tif 000025
【図７Ａ】
2013504600.tif 000026
【図７Ｂ】
2013504600.tif 000027
【図７Ｃ】
2013504600.tif 000028
【配列表】
2013504600000001.xml
【国際調査報告】
2013504600.tif 000031
2013504600.tif 000032