(57)【要約】  本発明は、単離された抗ランゲリンワクチン、単離された抗ランゲリン抗体又はその結合断片を作製及び使用するための方法、並びに単離された抗ランゲリン抗体のカルボキシ末端にある１又は２以上の抗原性ペプチドを包含し、前記ペプチドは、２以上の抗原性ペプチドが存在する場合、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のリンカーペプチドによって分離されている。本発明はまた、抗ランゲリン抗原送達ベクターの発現のための単離されたベクター、並びにその製造及び使用を含む。
2013504599.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、前記抗ランゲリン抗体のカルボキシ末端にある１又は２以上の抗原性ペプチドとを含むワクチンであって、２以上の抗原が存在する場合、前記抗原が、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のリンカーペプチドによって分離されているワクチン。
【請求項２】
抗体結合断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、又はＳｃＦｖ断片から選択される、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
抗体が、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はその直接的な同等物から選択される１又は２以上の相補性決定領域を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項４】
抗原性ペプチドが、
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV（配列番号９）;
LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD（配列番号１０）;
LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS（配列番号１１）;
NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP（配列番号１２）;
SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１３）;
IMDQVPFSV（配列番号１４）;
ITDQVPFSV（配列番号１５）;
YLEPGPVTV（配列番号１６）;
YLEPGPVTA（配列番号１７）;
KTWGQYWQV（配列番号１８）;
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１９）;
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ（配列番号２０）;
PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS（配列番号２１）;
GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA（配列番号２２）;
QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ（配列番号２３）;
GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ （配列番号２４）;
MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY（配列番号２５）;
DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK（配列番号２６）;
MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV（配列番号２７）;
QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL（配列番号２８）;
LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV（配列番号２９）;又は
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI（配列番号３０）から選択される癌抗原、又はそれら結合断片である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項５】
抗原性ペプチドが、
VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL（配列番号３１）;
HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL（配列番号３２）;
EKIRLRPGGKKKYKLKHIV（配列番号３３）;
NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD（配列番号３４）;
AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY（配列番号３５）;
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGKCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMV（配列番号３６）;
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLA（配列番号３７）;又は
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL（配列番号３８）
から選択されるウイルス抗原である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項６】
１又は２以上のペプチドリンカーが、
SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP（配列番号３９）;
PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG（配列番号４０）;
TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP（配列番号４１）;又は
TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA（配列番号４２）
から選択される、請求項１に記載のワクチン。
【請求項７】
抗ランゲリン抗体が、配列番号２と４とのアミノ酸配列対、配列番号６と７とのアミノ酸配列対、配列番号５２と５４とのアミノ酸配列対、配列番号５６と５８とのアミノ酸配列対、配列番号７８と配列番号８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される、請求項１に記載のワクチン。
【請求項８】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸配列対、配列番号５と６との核酸配列対、配列番号５１と５３との核酸配列対、配列番号５５と５７との核酸配列対、又は配列番号７７と７９との核酸配列対の発現産物である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項９】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそのヒト化された誘導体の少なくとも１つである、請求項１に記載のワクチン。
【請求項１０】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片及び抗原性ペプチドが融合タンパク質である、請求項１に記載のワクチン。
【請求項１１】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、前記抗ランゲリン抗体の軽鎖、重鎖、若しくは前記軽鎖及び前記重鎖の両方のカルボキシ末端にある２以上の抗原性ペプチドとを発現する、単離された核酸ベクターであって、２以上の抗原性ペプチドが存在する場合、前記抗原性ペプチドが、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のペプチドリンカーによって分離されている、単離された核酸ベクター。
【請求項１２】
抗原性ペプチドが、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）（例えば、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
抗原性ペプチドが、白血病及びリンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１４】
抗原性ペプチドが、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｌｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１５】
抗ランゲリン抗体が、配列番号２と４とのアミノ酸配列対、配列番号６と７とのアミノ酸配列対、配列番号５２と５４とのアミノ酸配列対、配列番号５６と５８とのアミノ酸配列対、配列番号７８と８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１６】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸酸配列対、配列番号５と６との核酸配列対、配列番号５１と５３との核酸配列対、配列番号５５と５７との核酸配列対、配列番号７７と７９との核酸配列対の発現産物である、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１７】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体の少なくとも１つである、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１８】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片及び抗原性ペプチドが融合タンパク質である、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１９】
Ｔ細胞及びＢ細胞の応答を増強させる方法であって、
抗ランゲリン抗体又はその結合部分と前記抗ランゲリン抗体のカルボキシ末端に連結した１又は２以上の抗原性ペプチドとを含む単離された融合タンパク質を含む有効量のワクチンで、ワクチン接種を必要とする対象を免疫化すること
を含む方法。
【請求項２０】
抗原性ペプチドが、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）（例えば、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
抗原性ペプチドが、白血病、リンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
抗原性ペプチドが、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１（ＨＡ１−１）、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｈｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
抗ランゲリン抗原融合タンパク質を作製する方法であって、
抗ランゲリン抗体又はその結合断片を含む単離された融合タンパク質を宿主細胞において発現させること、
及び融合タンパク質を単離すること
を含み、前記融合タンパク質が、前記抗ランゲリン抗体又はその結合断片のカルボキシ末端において１又は２以上の抗原性ペプチドを含み、２以上の癌ペプチドが存在する場合、前記癌ペプチドが、１又は２以上のリンカーによって分離されており、少なくとも１つのリンカーがグリコシル化部位を含む方法。
【請求項２４】
宿主において発現した融合タンパク質がさらに精製される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
宿主が真核細胞である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
抗原性ペプチドが、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ関連タンパク質（ムチン）（ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
抗原性ペプチドが、白血病及びリンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
癌ペプチドが、
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV（配列番号９）;
LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD（配列番号１０）;
LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS（配列番号１１）;
NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP（配列番号１２）;
SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１３）;
IMDQVPFSV（配列番号１４）;
ITDQVPFSV（配列番号１５）;
YLEPGPVTV（配列番号１６）;
YLEPGPVTA（配列番号１７）;
KTWGQYWQV（配列番号１８）;
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１９）;
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ（配列番号２０）;
PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS（配列番号２１）;
GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA（配列番号２２）;
QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ（配列番号２３）;
GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ （配列番号２４）;
MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY（配列番号２５）;
DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK（配列番号２６）;
MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV（配列番号２７）;
QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL（配列番号２８）;
LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV（配列番号２９）;又は
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI（配列番号３０）の少なくとも１つ、又はそれら免疫原性断片から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞をインビトロで増殖する方法であって、
癌患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、
前記単離されたＰＢＭＣを、免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは腫瘍関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、
有効量のＩＬ−２の存在下で前記ＰＢＭＣを増殖すること、
細胞を採取すること、及び
前記細胞によるサイトカイン生産を評価して抗癌特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定すること
を含む方法。
【請求項３０】
癌患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、
前記単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは腫瘍関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、
有効量のＩＬ−２の存在下で前記ＰＢＭＣを増殖すること、
細胞を採取すること、及び
前記細胞によるサイトカイン生産を評価して腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定すること
を含む方法によって作製された、腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞。
【請求項３１】
式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ−ＰＬ、又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ−Ａｇ（式中、Ａｂが抗ランゲリンモノクローナル抗体又はその結合断片であり、ＰＬが少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、Ａｇが少なくとも１つの感染性疾患抗原であり、ｘが１〜２０の整数である）を含む単離された融合タンパク質を含む治療用ワクチン。
【請求項３２】
抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞をインビトロで増殖する方法であって、
感染を有する疑いのある患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、
前記単離されたＰＢＭＣを、免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又はαランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは感染性作用物質の抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、
有効量の１又は２以上のサイトカインの存在下で前記ＰＢＭＣを増殖すること、
細胞を採取すること、及び
前記細胞によるサイトカイン生産を評価して抗感染性作用物質特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定すること
を含む方法。
【請求項３３】
ウイルス感染を有する疑いのある患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、
前記単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇはウイルス関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、
有効量の１又は２以上のサイトカインの存在下で前記ＰＢＭＣを増殖すること、
細胞を採取すること、及び
前記細胞によるサイトカイン生産を評価してウイルス関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定すること
を含む方法によって作製された、ウイルス関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞。
【請求項３４】
式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ−ＰＬ、又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ−Ａｇ（式中、Ａｂが抗ランゲリンモノクローナル抗体又はその結合断片であり、ＰＬが少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、Ａｇが少なくとも１つのウイルス抗原であり、ｘが１〜２０の整数である）を含む単離された融合タンパク質を含む治療用ワクチン。
【請求項３５】
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はその直接的な同等物から選択される相補性決定領域の１又は２以上を含む、単離された抗体。
【請求項３６】
ヒト化されている、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３７】
ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体である、請求項２７に記載の抗体。
【請求項３８】
１５Ｂ１０抗体、２Ｇ３抗体、９１Ｅ７抗体、３７Ｃ１抗体、又は４Ｃ７抗体、その抗体結合断片、又はそのヒト化された誘導体をコードする単離された核酸。
【請求項３９】
抗ランゲリン抗体が、配列番号２と４とのアミノ酸配列対、配列番号６と７とのアミノ酸配列対、配列番号５２と５４とのアミノ酸配列対、配列番号５６と５８とのアミノ酸配列対、配列番号７８と８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される、請求項３８に記載の核酸。
【請求項４０】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸酸配列対、配列番号５と６との核酸酸配列対、配列番号５１と５３との核酸酸配列対、配列番号５５と５７との核酸酸配列対、配列番号７７と７９との核酸酸配列対の発現産物、又はそれら結合断片の核酸酸配列対である、請求項３８に記載の核酸。
【請求項４１】
単離された抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、前記抗ランゲリン抗体に付着した１又は２以上の抗原性ペプチドとを含み、２以上の抗原が存在する場合、前記抗原が、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のリンカーペプチドによって分離されている、医薬組成物。
【請求項４２】
抗体結合断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、又はＳｃＦｖ断片から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
抗ランゲリン抗体が、配列番号２と４とのアミノ酸配列対、配列番号６と７とのアミノ酸配列対、配列番号５２と５４とのアミノ酸配列対、配列番号５６と５８とのアミノ酸配列対、配列番号７８と８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸酸配列対、配列番号５と６との核酸酸配列対、配列番号５１と５３との核酸酸配列対、配列番号５５と５７との核酸酸配列対、配列番号７７と７９との核酸酸配列対の発現産物である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそのヒト化された誘導体の少なくとも１つである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４６】
抗ランゲリン抗体又はその結合断片及び抗原性ペプチドが融合タンパク質である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４７】
さらにアジュバントを含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４８】
さらに１又は２以上の薬学的賦形剤を含む、請求項４１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全体としてワクチンの分野に関するものであり、さらに特に、高親和性の抗ランゲリンモノクローナル抗体及びそれとの融合タンパク質を用いて、抗原提示のために、ランゲルハンス細胞へ抗原を標的化及び送達するための組成物及び方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明の範囲を限定することなく、本発明の背景は、抗原提示との関連において記載される。
【０００３】
樹状細胞（ＤＣ、Dendritic Cell）は、免疫応答を誘発及び維持する専門の抗原提示細胞（ＡＰＣ、antigen-presenting cell）であり、寛容性及び免疫性の両方の確立において必須である。ＤＣは抗原を捕捉し、それをＣＤ４＋Ｔ細胞に提示し、次に前記Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の量及び質を決定する。ＤＣのサブセットが存在し（Banchereau J, Steinman RM. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 1998;392:245-252、Pascual V, Banchereau J, Palucka A. The Central Role of Dendritic Cells and Interferon-alpha in SLE. Curr Opin Rheumatol. 2003;in press）、これは、骨髄樹状細胞及び形質細胞様樹状細胞（それぞれｍＤＣ（myeloid DC）及びｐＤＣ（plasmacytoid DC））の両方を包含する。
【０００４】
従来のランゲリン関連作用物質には、Duvert-Frances, et al.に付与された米国特許第６，８７８，５２８号明細書において教示されているものが含まれ、これには、哺乳動物のランゲルハンス細胞抗原をコードするポリヌクレオチドが含まれ、前記抗原には、精製された哺乳動物ＤＣ細胞表面タンパク質、指定されたランゲリン、ランゲリンをコードする核酸、及びランゲリンを特異的に結合する抗体が含まれる。
【０００５】
他の抗ＤＣ関連作用物質は、例えば、Bowdish, et al.によって出願された米国特許出願公開第２００６０２５７４１２号公報において教示されており、これには、寛容性を誘発する抗原提示細胞による抗原提示を誘導することによって自己免疫疾患を治療する方法が含まれる。簡潔に述べると、この出願は、抗原提示細胞に対する抗体が、抗原提示細胞とＴ細胞を包含する免疫細胞との相互作用に干渉するために利用され得ることを教示している。ペプチドは抗体に連結し得、それによって、このようなペプチド、例えば、自己免疫に関連するペプチドに対する免疫応答を生じさせる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６，８７８，５２８号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００６０２５７４１２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Banchereau J, Steinman RM. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 1998;392:245-252
【非特許文献２】Pascual V, Banchereau J, Palucka A. The Central Role of Dendritic Cells and Interferon-alpha in SLE. Curr Opin Rheumatol. 2003;in press
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
１つの実施形態において、本発明は、Ｔ細胞及びＢ細胞の応答を活性化するためのＡＰＣの適正な活性化と共に、抗原を抗原提示細胞に標的化することによって、Ｔ細胞及びＢ細胞の応答を活性化させるための組成物及び方法を包含する。１つの実施形態は、単離された抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、抗ランゲリン抗体のカルボキシ末端にある１又は２以上の抗原性ペプチドとを含むワクチンであり、２以上の抗原が存在する場合、抗原は、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のリンカーペプチドによって分離されている。１つの態様において、抗体の結合断片は、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、又はＳｃＦｖ断片から選択される。別の態様において、抗体は、ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はその直接的な同等物から選択される、１又は２以上の相補性決定領域を含む。別の態様において、抗原性ペプチドは、MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV（配列番号９）;LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD（配列番号１０）;LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS（配列番号１１）;NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP（配列番号１２）;SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１３）;IMDQVPFSV（配列番号１４）;ITDQVPFSV（配列番号１５）;YLEPGPVTV（配列番号１６）;YLEPGPVTA（配列番号１７）;KTWGQYWQV（配列番号１８）;APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１９）;DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ（配列番号２０）;PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS（配列番号２１）;GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA（配列番号２２）;QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ（配列番号２３）;GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ（配列番号２４）;MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY（配列番号２５）;DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK（配列番号２６）;MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV（配列番号２７）;QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL（配列番号２８）;LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV（配列番号２９）;又はAAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI（配列番号３０）から選択される癌抗原、又はそれら結合断片である。別の態様において、抗原性ペプチドは、VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL（配列番号３１）;HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL（配列番号３２）;EKIRLRPGGKKKYKLKHIV（配列番号３３）;NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD（配列番号３４）;AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY（配列番号３５）;DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGKCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMV（配列番号３６）;DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLA（配列番号３７）;又はPIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL（配列番号３８）から選択されるウイルス抗原である。別の態様において、２以上の抗原が存在する場合、抗原は、SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP（配列番号３９）、PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG（配列番号４０）、TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP（配列番号４１）、又はTNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA（配列番号４２）から選択される１又は２以上のペプチドリンカーによって分離されている。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号２及び４とのアミノ酸配列対、６及び７とのアミノ酸配列対、５２及び５４とのアミノ酸配列対、５６及び５８とのアミノ酸配列対、並びに７８及び８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号１及び３との核酸配列対、５及び６との核酸配列対、５１及び５３との核酸配列対、５５及び５７との核酸配列対、並びに７７及び７９との核酸配列対の発現産物である。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体の少なくとも１つである。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片及び抗原性ペプチドは、融合タンパク質である。
【０００９】
本発明の別の実施形態は、抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、抗ランゲリン抗体の軽鎖、重鎖、若しくは軽鎖及び重鎖の両方のカルボキシ末端にある２以上の抗原性ペプチドとを発現する、単離された核酸ベクターを包含し、２以上の抗原性ペプチドが存在する場合、抗原性ペプチドは、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のペプチドリンカーによって分離されている。１つの態様において、抗原性ペプチドは、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ、prostate specific antigen）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ムチン（ＭＵＣ、Mucin）（例えば、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ、（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ、prostate serum antigen）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、エプスタインバーウイルス核抗原（ＥＢＮＡ、Epstein-Barr Virus nuclear antigen）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ、human papilloma virus）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ、lung resistance protein）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、抗原性ペプチドは、白血病及びリンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、抗原性ペプチドは、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、クロストリジウム・サーモセラム（C. thermocellum）から得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｌｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号２及び４とのアミノ酸配列対、６及び７とのアミノ酸配列対、５２及び５４とのアミノ酸配列対、５６及び５８とのアミノ酸配列対、並びに７８及び８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号１及び３との核酸配列対、５及び６との核酸配列対、５１及び５３との核酸配列対、５５及び５７との核酸配列対、並びに７７及び７９との核酸配列対の発現産物である。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体の少なくとも１つである。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片及び抗原性ペプチドは、融合タンパク質である。
【００１０】
本発明のさらに別の実施形態は、抗ランゲリン抗体又はその結合部分と抗ランゲリン抗体のカルボキシ末端に連結した１又は２以上の抗原性ペプチドとを含む単離された融合タンパク質を含む有効量のワクチンで、ワクチン接種を必要とする対象を免疫化することを含む、Ｔ細胞及びＢ細胞の応答を増強させる方法を包含する。１つの態様において、抗原性ペプチドは、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）（例えば、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、抗原性ペプチドは、白血病及びリンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、抗原性ペプチドは、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１（ＨＡ１−１）、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｈｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される。
【００１１】
さらに別の実施形態は、抗ランゲリン抗体又はその結合断片を含む単離された融合タンパク質を宿主細胞において発現させること、及び融合タンパク質を単離することを含む、抗ランゲリン抗原融合タンパク質を作製する方法であり、前記融合タンパク質は、抗ランゲリン抗体又はその結合断片のカルボキシ末端において１又は２以上の抗原性ペプチドを含み、２以上の癌ペプチドが存在する場合、癌ペプチドは、１又は２以上のリンカーによって分離されており、少なくとも１つのリンカーはグリコシル化部位を含む。１つの態様において、宿主において発現した融合タンパク質はさらに単離及び精製される。別の態様において、宿主は真核細胞である。別の態様において、抗原性ペプチドは、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ関連タンパク質（ムチン）（ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、抗原性ペプチドは、白血病、リンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである。別の態様において、癌ペプチドは、MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV（配列番号９）;LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD（配列番号１０）;LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS（配列番号１１）;NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP（配列番号１２）;SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１３）;IMDQVPFSV（配列番号１４）;ITDQVPFSV（配列番号１５）;YLEPGPVTV（配列番号１６）;YLEPGPVTA（配列番号１７）;KTWGQYWQV（配列番号１８）;APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１９）;DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ（配列番号２０）;PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS（配列番号２１）;GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA（配列番号２２）;QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ（配列番号２３）;GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ（配列番号２４）;MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY（配列番号２５）;DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK（配列番号２６）;MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV（配列番号２７）;QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL（配列番号２８）;LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV（配列番号２９）;又はAAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI（配列番号３０）の少なくとも１つ、又はそれら免疫原性断片から選択される。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、癌患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ、peripheral blood mononuclear cell）を単離すること、単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは腫瘍関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、有効量のＩＬ−２の存在下でＰＢＭＣを増殖すること（expanding）、細胞を採取すること、及び細胞によるサイトカイン生産を評価して抗癌特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定することを含む、抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞をインビトロで増殖する方法を包含する。
【００１３】
さらに別の実施形態において、本発明は、癌患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは腫瘍関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、有効量のＩＬ−２の存在下でＰＢＭＣを拡張すること、細胞を採取すること、及び細胞によるサイトカイン生産を評価して腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定することを含む方法によって作製された、腫瘍関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞を包含する。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ−ＰＬ、又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ−Ａｇを含む単離された融合タンパク質を含む治療用ワクチンを包含し、式中、Ａｂは抗ランゲリンモノクローナル抗体又はその結合断片であり、ＰＬは少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、Ａｇは少なくとも１つの感染性疾患抗原であり、ｘは１〜２０の整数である。
【００１５】
さらに別の実施形態は、感染を有する疑いのある患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又はαランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは感染性作用物質の抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、有効量の１又は２以上のサイトカインの存在下でＰＢＭＣを拡張すること、細胞を採取すること、及び細胞によるサイトカイン生産を評価して抗感染性作用物質特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定することを含む、抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞をインビトロで増殖する方法を包含する。別の実施形態は、ウイルス感染を有する疑いのある患者から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離すること、単離されたＰＢＭＣを免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇはウイルス関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートすること、有効量の１又は２以上のサイトカインの存在下でＰＢＭＣを拡張すること、細胞を採取すること、及び細胞によるサイトカイン生産を評価してウイルス関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定することを含む方法によって作製された、ウイルス関連抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞である。
【００１６】
別の実施形態は、式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ−ＰＬ、又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ−Ａｇ（式中、Ａｂは抗ランゲリンモノクローナル抗体又はその結合断片であり、ＰＬは少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、Ａｇは少なくとも１つのウイルス抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）を含む単離された融合タンパク質を含む治療用ワクチンである。１つの実施例において、単離された抗体は、ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はその直接的な同等物から選択される相補性決定領域の１又は２以上を含む。１つの態様において、抗体はヒト化されている。別の態様において、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、及びそれらヒト化された誘導体である。別の態様において、抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体である。
【００１７】
さらに別の実施形態は、１５Ｂ１０抗体、２Ｇ３抗体、９１Ｅ７抗体、３７Ｃ１抗体、又は４Ｃ７抗体、その抗体結合断片、又はそれらヒト化された誘導体をコードする単離された核酸である。１つの態様において、抗ランゲリン抗体は、それぞれ、配列番号２及び４とのアミノ酸配列対、６及び７とのアミノ酸配列対、５２及び５４とのアミノ酸配列対、５６及び５８とのアミノ酸配列対、並びに７８及び８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号１及び３との核酸配列対、５及び６との核酸配列対、５１及び５３との核酸配列対、５５及び５７との核酸配列対、並びに７７及び７９との核酸配列対の発現産物、又はそれら結合断片の核酸配列対であり、前記結合断片は、それぞれ、１５Ｂ１０抗体、２Ｇ３抗体、９１Ｅ７抗体、３７Ｃ１抗体、又は４Ｃ７抗体である。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態は、単離された抗ランゲリン抗体又はその結合断片と、抗ランゲリン抗体に付着した１又は２以上の抗原性ペプチドとを含む、医薬組成物であり、２以上の抗原が存在する場合、抗原は、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のリンカーペプチドによって分離されている。１つの態様において、抗体結合断片は、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、又はＳｃＦｖ断片から選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号２及び４とのアミノ酸配列対、６及び７とのアミノ酸配列対、５２及び５４とのアミノ酸配列対、５６及び５８とのアミノ酸配列対、並びに７８及び８０とのアミノ酸配列対、又はそれら結合断片のアミノ酸配列対から選択される。別の態様において、抗ランゲリン抗体は、配列番号１及び３との核酸配列対、５及び６との核酸配列対、５１及び５３との核酸配列対、５５及び５７との核酸配列対、並びに７７及び７９との核酸配列対の発現産物である。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体の少なくとも１つである。別の態様において、抗ランゲリン抗体又はその結合断片、及び抗原性ペプチドは、融合タンパク質である。別の態様において、組成物はさらにアジュバントを含む。別の態様において、組成物はさらに１又は２以上の薬学的賦形剤を含む。
【００１９】
本発明のさらに別の実施形態は、式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ−ＰＬ）ｘ、Ａｂ−（Ａｇ−ＰＬ−Ａｇ）ｘ、Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ−ＰＬ、又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ−Ａｇ（式中、Ａｂは抗ランゲリンモノクローナル抗体又はその結合断片であり、ＰＬは少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、Ａｇは少なくとも１つのウイルス抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）を含む融合タンパク質を含む治療用ワクチンである。
【００２０】
本発明は、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）又は及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むランゲリン結合抗体（１５Ｂ１０）を提供する。
【００２１】
したがって、本発明は、
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体（１５Ｂ１０）を提供する。
【００２２】
本発明は、
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）又は及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むランゲリン結合抗体（２Ｇ３）を提供する。
【００２３】
したがって、本発明は、
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体（２Ｇ３）を提供する。
【００２４】
１つの態様において、本発明は、上記に定義された重鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む単離された免疫グロブリン軽鎖を含む単一ドメインランゲリン抗体を提供する。別の態様において、本発明は、上記に定義された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む単離された免疫グロブリン重鎖を含む単一ドメインランゲリン結合分子を提供する。
【００２５】
別の態様において、本発明はまた、軽鎖（ＶＬ）可変ドメインを含むランゲリン結合抗体であって、ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;又はVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;及びその直接的な同等物をコードするアミノ酸配列及び核酸配列から得られる超可変領域を配列に含む抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体を提供する。
【００２６】
別の態様において、本発明はまた、SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;又はSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;及びその直接的な同等物から得られる超可変領域を配列に含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列及び核酸配列を含むランゲリン結合抗体を提供する。
【００２７】
ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｋ−それぞれ、マウス抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体のｃＤＮＡの軽鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCCGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAAATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGACTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAACAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG（配列番号４９）
DVVMTQTPLSLPVRLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMNSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
（配列番号５０）
【００２８】
ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ  −  それぞれ、ヒトＩｇＧ４に融合したマウス抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGGAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号５１）
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKAS（配列番号５２）
【００２９】
ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｌ−それぞれ、マウス抗ランゲリン２Ｇ３抗体のｃＤＮＡの軽鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGGCCTGGATTTCACTTATACTCTCTCTCCTGGCTCTCAGCTCAGGGGCCATTTCCCAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGTTTCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGCCAGCCCAAGTCTTCGCCATCAGTCACCCTGTTTCCACCTTCCTCTGAAGAGCTCGAGACTAACAAGGCCACACTGGTGTGTACGATCACTGATTTCTACCCAGGTGTGGTGACAGTGGACTGGAAGGTAGATGGTACCCCTGTCACTCAGGGTATGGAGACAACCCAGCCTTCCAAACAGAGCAACAACAAGTACATGGCTAGCAGCTACCTGACCCTGACAGCAAGAGCATGGGAAAGGCATAGCAGTTACAGCTGCCAGGTCACTCATGAAGGTCACACTGTGGAGAAGAGTTTGTCCCGTGCTGACTGTTCCTAG（配列番号５３）
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGT PVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS（配列番号５４）
【００３０】
ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−それぞれ、マウス抗ランゲリン２Ｇ３抗体のｃＤＮＡの重鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAAGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号５５）
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKAS（配列番号５６）
【００３１】
別の実施形態において、本発明は、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はその直接的な同等物から選択される相補性決定領域の１又は２以上を含む抗体を包含する。１つの態様において、抗体はヒト化されている。別の態様において、抗体は１５Ｂ１０、２Ｇ３、又はそれらヒト化された誘導体である。別の態様において、本発明は、１５Ｂ１０抗体、２Ｇ３抗体、又はそれらヒト化された誘導体をコードする核酸を包含する。
【００３２】
本発明の特性及び利点をさらに完全に理解するために、以下に、添付の図面に従って、本発明の詳細な説明について言及する。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】２つの主要なＤＣ分化経路が存在することを示す図である。黒色腫経路は、皮膚などの重層上皮において見られるランゲルハンス細胞（ＬＣ、langerhans cell）、及び全ての他の組織において見られる間質性ＤＣ（ｉｎｔＤＣ、interstitial DC）という２つのサブセットを生じさせる。
【図２】抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体が、細胞表面ランゲリンに結合するそれらの能力を保持していることを示す図である。
【図３】ヒト前立腺特異的癌抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体の、健康なドナーの抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡張を引き起こす能力を実証する図である。
【図４】ヒト前立腺特異的癌抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体の、前立腺癌患者の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を引き起こす能力を実証する図である。
【図５】抗ランゲリンが表皮ＬＣを優先的に標的化することを示す図である。
【図６】ヒトの皮膚ＤＣによるランゲリンの差次的な発現を示す図である。
【図７】抗ランゲリン抗体（１５Ｂ１０）がヒトランゲルハンス細胞を特異的に染色することを示す図である。
【図８】ヒトではない霊長類標的に対する抗ランゲリン抗体の結合の結果を示す図である。
【図９】Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１に融合した組換え抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体の、ＮＨＰにおける強力な抗原特異的抗体の生産を引き起こす能力を示す図である。
【図１０】抗ヒトＤＣ受容体と抗原との組換え融合タンパク質がＮＨＰにおいて抗原特異的免疫応答を誘発することを示す図である。
【図１１】抗ランゲリンＧ３抗体がＮＨＰランゲルハンス細胞を特異的に染色することを示す図である。
【図１２】全てポリＩ：Ｃをアジュバントとして有するか又は有さない、ｇａｇマイクロ粒子、抗ｈＩＧＧ４−ｇａｇ抗体、抗ＤＣＩＲ−ｇａｇワクチン、及び抗ランゲリン−ｇａｇ−ｐ２４ワクチンでのＮＨＰのワクチン接種における、抗ＨＩＶ−ｇａｇ抗体についての抗体力価を示す図である。
【図１３】ランゲリンクローンでのＦＡＣＳ分析を示す図である。２９３Ｆ細胞に、ヒト、アカゲザル、及びマウスの、完全長（細胞表面）ランゲリンの発現を指示するベクターを一時的に形質転換した。
【図１４】直接的（プレートに直接的に結合した抗原、及び抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰコンジュゲートで検出される結合型抗体）及び捕捉（プレートに結合した抗体という２つのフォーマットでのＥＬＩＳＡ結合分析の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明の様々な実施形態の作製及び使用が以下に詳細に論じられるが、当然のことながら、本発明は、広範な具体的背景において具現化され得る多くの適用可能な発明概念を提供する。本明細書において論じられる具体的な実施形態は、本発明を作製及び使用するための具体的な方策を例示するにすぎず、本発明の範囲を定めるものではない。
【００３５】
本発明の理解を容易にするために、多くの用語が以下に定義される。本明細書において定義される用語は、本発明に関連する分野の当業者によって一般に理解されている意味を有する。「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」などの用語は、単一形のもののみをいうことを意図したものではなく、その具体的な例が例示のために用いられ得る全般的なクラスも包含する。本明細書における専門用語は、本発明の具体的な実施形態を記載するために用いられるが、それらの利用は、特許請求の範囲において概説されるものを除き、本発明を定めるものではない。
【００３６】
樹状細胞（ＤＣ）のサブセット。本発明者らは、２つの主要なＤＣ分化経路が存在することを発見した。黒色腫経路は、皮膚などの重層上皮において見られるランゲルハンス細胞（ＬＣ）、及び全ての他の組織において見られる間質性ＤＣ（ｉｎｔＤＣ）という２つのサブセットを生じさせる。形質細胞様経路は形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ、plasmacytoid DC）を生じさせ、これは、ウイルス感染の後に大量のＩＦＮαβを分泌し（Palucka K, Banchereau J. Dendritic cells: a link between innate and adaptive immunity. J Clin Immunol. 1999;19:12-25）、ウイルス抗原を新規なメカニズムで効率的に提示する（Di Pucchio T, Chatterjee B, Smed-Sorensen A, et al. Direct proteasome-independent cross-presentation of viral antigen by plasmacytoid dendritic cells on major histocompatibility complex class I. Nat Immunol. 2008;9:551-557）（図１）。ＤＣ及びその前駆体は、顕著な機能的可塑性を示す。例えば、ｐＤＣは、侵入してくるウイルスの拡張に対する第１のバリアを形成し、それによって、自然免疫応答の一環としてのインターフェロンの放出を介して作用する（Kadowaki N, Antonenko S, Lau JY, Liu YJ. Natural interferon alpha/beta-producing cells link innate and adaptive immunity. J Exp Med. 2000;192:219-226、Fonteneau JF, Gilliet M, Larsson M, et al. Activation of influenza virus-specific CD4+ and CD8+ T cells: a new role for plasmacytoid dendritic cells in adaptive immunity. Blood. 2003;101:3520-3526）。単球は、スカベンジャーとして作用するマクロファージ又は特異的免疫応答を誘発するＤＣのいずれかに分化し得る（Randolph GJ, Beaulieu S, Lebecque S, Steinman RM, Muller WA. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendothelial trafficking. Science. 1998;282:480-483、Chomarat P, Dantin C, Bennett L, Banchereau J, Palucka AK. TNF skews monocyte differentiation from macrophages to dendritic cells. J Immunol. 2003;171:2262-2269）。異なるサイトカインは、単球のインビトロでの分化を歪めて、異なる表現型及び機能を有するＤＣをもたらす。したがって、（例えば、ＧＭ−ＣＳＦによって）活性化された単球がＩＬ−４と出会うと、単球は、ＩＬ−４ＤＣをもたらす（Romani N, Gruner S, Brang D, et al. Proliferating dendritic cell progenitors in human blood. J Exp Med. 1994;180:83-93、Sallusto F, Lanzavecchia A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor a. JExpMed. 1994;179:1109-1118、Peters JH, Xu H, Ruppert J, Ostermeier D, Friedrichs D, Gieseler RK. Signals required for differentiating dendritic cells from human monocytes in vitro. Adv Exp Med Biol. 1993;329:275-280）。逆に、ＩＦＮα、ＴＮＦα、又はＩＬ−１５と出会った後は、活性化された単球は、ＩＦＮＤＣ（Paquette RL, Hsu NC, Kiertscher SM, et al. Interferon-alpha and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor differentiate peripheral blood monocytes into potent antigen-presenting cells. J Leukoc Biol. 1998;64:358-367、Luft T, Jefford M, Luetjens P, et al. Functionally distinct dendritic cell (DC) populations induced by physiologic stimuli: prostaglandin E(2) regulates the migratory capacity of specific DC subsets. Blood. 2002;100:1362-1372、He B, Xu W, Santini PA, et al. Intestinal bacteria trigger T cell-independent immunoglobulin A(2) class switching by inducing epithelial-cell secretion of the cytokine APRIL. Immunity. 2007;26:812-826、Blanco P, Palucka AK, Gill M, Pascual V, Banchereau J. Induction of dendritic cell differentiation by IFN-alpha in systemic lupus erythematosus. Science. 2001;294:1540-1543）、ＴＮＦＤＣ（Chomarat P, Dantin C, Bennett L, Banchereau J, Palucka AK. TNF skews monocyte differentiation from macrophages to dendritic cells. J Immunol. 2003;171:2262-2269）、又はＩＬ−１５ＤＣ（Mohamadzadeh M, Berard F, Essert G, et al. Interleukin 15 skews monocyte differentiation into dendritic cells with features of Langerhans cells. J Exp Med. 2001;194:1013-1020）に分化する。これらのＤＣサブセットのそれぞれは、細胞表面分子とサイトカインとの固有の組合せによって決定される、共通する、且つ固有の生物学的機能を有する。例えば、ＩＬ−４ＤＣは、ＬＣを欠く未成熟細胞の同種集団であるが、ＩＦＮＤＣの大部分はＣＤ１ａ及びランゲリンを発現する（Chomarat P, Dantin C, Bennett L, Banchereau J, Palucka AK. TNF skews monocyte differentiation from macrophages to dendritic cells. J Immunol. 2003;171:2262-2269）。
【００３７】
本発明はまた、抗体（又は「Ａｂ」）又はその断片のバリアント及び他の修飾、例えば、抗ランゲリン融合タンパク質（抗体は、「免疫グロブリン」という用語と交換可能に用いられる）を包含する。本明細書において用いられる場合、「抗体又はその結合断片」という用語は、抗体全体又は抗体の結合断片、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’ 断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃ断片、及び一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ、single chain Fv）断片、若しくは、例えばランゲリンに特異的に結合する免疫グロブリンのあらゆる生物学的に効果的な断片を包含する。ヒト由来の抗体又はヒト化抗体は、ヒトにおける免疫原性が低くされているか又はヒトにおける免疫原性を有しておらず、非ヒト抗体と比較して免疫原性エピトープの数が少ないか又は免疫原性エピトープを有していない。抗体及びその断片は、通常、ヒトにおける抗原性のレベルが低減しているように、又はヒトにおける抗原性を有さないように選択される。
【００３８】
本明細書において用いられる場合、「Ａｇ」又は「抗原」という用語は、免疫グロブリン分子の抗原結合領域に結合し得るか、又は免疫応答、例えば、主要組織適合性抗原（ＭＨＣ、Major Histocompatibility Antigen）細胞タンパク質上の抗原の提示によるＴ細胞介在性の免疫応答を引き起こし得る物質をいう。本明細書において用いられる場合、「抗原」には、限定はしないが、抗原決定基、ハプテン、及び免疫原が含まれ、免疫原は、ペプチド、低分子、炭水化物、脂質、核酸、又はそれらの組合せであり得る。熟練した免疫学者には、Ｔ細胞への提示のためにプロセシングされる抗原について論じる場合、「抗原」という用語が、ＭＨＣによってＴ細胞受容体に提示されるＴ細胞エピトープである、抗原の一部分（例えば、ペプチド断片）をいうことが認識されよう。「抗原」に特異的な、すなわち抗体（軽鎖及び重鎖）の可変ドメインの相補性決定領域に結合する抗原の一部分に特異的な抗体の形態で、Ｂ細胞介在性の免疫応答の背景において用いられる場合、結合した部分は線状エピトープ又は三次元エピトープであり得る。本発明の背景において、抗原という用語は、両方の背景で用いられ、すなわち、抗体はタンパク質抗原（ランゲリン）に特異的であるが、ＭＨＣによるＴ細胞への提示のための１又は２以上のペプチドエピトープも坦持している。特定のケースにおいて、本発明のワクチン又は融合タンパク質によって送達される抗原は、抗原提示細胞によって内在化され、そして、提示の前に、例えば抗体又は融合タンパク質の１又は２以上の部分の切断によってプロセシングされる。
【００３９】
本明細書において用いられる場合、「抗原性ペプチド」という用語は、Ｂ細胞又はＴ細胞のいずれかによって特異的に認識されるポリペプチド抗原の一部分をいう。Ｂ細胞は、抗体の生産を介して外来の抗原決定基に対して応答し、一方、Ｔリンパ球は、介在性の細胞性免疫である。したがって、抗原性ペプチドは、抗体によって認識される抗原の一部分であるか、又は、ＭＨＣの背景においては、Ｔ細胞受容体によって認識される抗原の一部分である。
【００４０】
本明細書において用いられる場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンに特異的に結合し得るか、又は主要組織適合複合体（ＭＨＣ、Major Histocompatibility Complex）タンパク質（例えば、クラスＩ又はクラスII）によってＴ細胞受容体に提示され得る、あらゆるタンパク質決定基をいう。エピトープ決定基は、通常、ＭＨＣ分子の溝の中にフィットする５〜３０アミノ酸長の短いペプチドであり、前記ＭＨＣ分子は、例えば、溝、ペプチド側基、及びＴ細胞受容体の特異的な荷電特徴に起因して、Ｔ細胞受容体に向かって特定のアミノ酸側基を提示し、且つ溝の中に特定の他の残基を有する。通常、解離定数が１ｍＭ、１００ｎＭ、又はさらに１０ｎＭである場合、抗体は抗原に特異的に結合する。
【００４１】
本明細書において用いられる場合、「ベクター」という用語は、２つの異なる背景において用いられる。ワクチンを参照して「ベクター」という用語を用いる場合、ベクターは、ワクチンの抗原性部分を向かわせるか又は送達するために用いられる非抗原性部分を記載するために用いられる。例えば、抗体又はその結合断片は、免疫応答を引き起こす抗原に結合し得るか、又は前記抗原と融合タンパク質を形成し得る。細胞ワクチンでは、抗原を送達及び／又は提示するためのベクターは、抗原を負荷された細胞によって送達される抗原提示細胞である。特定のケースにおいて、細胞ベクター自体はまた、抗原（単数又は複数）をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示し、抗原特異的免疫応答を活性化し得る。核酸の背景において用いられる場合、「ベクター」は、宿主細胞において所望の１又は２以上の遺伝子又はポリヌクレオチド配列を送達し得る、好ましくは発現し得る構築物をいう。ベクターの例には、限定はしないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡ発現ベクター又はＲＮＡ発現ベクター、陽イオン性凝縮剤を伴うＤＮＡ発現ベクター又はＲＮＡ発現ベクター、リポソーム内にカプセル化されたＤＮＡ発現ベクター又はＲＮＡ発現ベクター、及び特定の真核細胞、例えば産生細胞が含まれる。
【００４２】
本発明の組成物及び方法は、抗体又はその結合断片とペプチドリンカー又は「ＰＬ」とが安定な及び／又は可溶性のタンパク質を生成する、広範なペプチド及び／又はタンパク質と共に用いることができる。
【００４３】
本明細書において用いられる場合、組成物及び方法は、式
Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘ
を含む抗ランゲリン抗原送達ベクターを用い、
式中、Ａｂは、抗ランゲリン抗体又はその結合断片であり、
ＰＬは、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む少なくとも１つのペプチドリンカーであり、
Ａｇは、少なくとも１つの抗原であり、且つ
ｘは、１〜２０の整数である。
【００４４】
本明細書において用いられる場合、タンパク質を参照する場合の「安定な」及び「不安定な」という用語は、その三次元構造及び／若しくは活性を維持する（安定な）、又は即時に若しくは経時的にその三次元構造及び／若しくは活性を喪失する（不安定な）ペプチド又はタンパク質を記載するために用いられる。本明細書において用いられる場合、「不溶性」という用語は、細胞において生産される場合に（例えば、真核細胞又は原核細胞又はインビトロで発現する組換えタンパク質）、変性条件又は変性剤（例えば、それぞれ熱又は化学的変性剤）を用いない溶液において可溶性ではないタンパク質をいう。本明細書において教示される抗体又はその結合断片及びリンカーは、ペプチドとの抗体融合タンパク質を、不溶性の及び／又は不安定なタンパク質から、安定な及び／可溶性のタンパク質に変換することが明らかにされている。安定性と不安定性との別の例は、同一の溶液において測定した場合に、安定な立体構造を有するタンパク質のドメインが、タンパク質の不安定なドメインよりも高い融解温度（Ｔｍ）を有する場合である。ドメインは、同一の溶液において測定した場合に、Ｔｍの差が少なくとも約２℃、より好ましくは約４℃、さらに好ましくは約７℃、さらに好ましくは約１０℃、さらに好ましくは約１５℃、さらに好ましくは約２０℃、さらに好ましくは約２５℃、そして最も好ましくは約３０℃である場合に、別のドメインと比較して安定である。
【００４５】
本明細書において用いられる場合、「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、一本鎖形態又は二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチド鎖又はリボヌクレオチド鎖をいう（天然ヌクレオチドの既知のアナログを包含する）。二本鎖の核酸配列は、相補配列を包含する。ポリヌクレオチド配列は、１又は２以上のリンカーとの融合タンパク質内に形成される免疫グロブリンの可変領域ドメイン及び／又は定常領域ドメインをコードし得る。本発明との使用では、マルチクローニング部位（ＭＣＳ、multiple cloning site）を、リンカー間での発現のためにペプチドをインフレームで挿入することを可能にするように、抗体の重鎖及び／又は軽鎖のカルボキシ末端の位置内に操作することができる。本明細書において用いられる場合、「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム由来、ｃＤＮＡ由来、若しくは合成由来のポリヌクレオチド、又はそれらのいくつかの組合せをいう。その由来源に基づいて、「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然で見られるポリヌクレオチドの、全て若しくは一部に伴っていないか、（２）「単離されたポリヌクレオチド」が天然で連結していないポリヌクレオチドに、機能可能に連結しているか、又は（３）天然では、より大きな配列の一部としては生じない。当業者には、式Ａｂ−（ＰＬ−Ａｇ）ｘ又はＡｂ−（Ａｇ−ＰＬ）ｘを有するベクターの設計及び実行が、当技術分野において知られている技術を用いることによって核酸レベルで操作され得ることが認識され、前記技術は、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる、John Wiley and SonsによるCurrent Protocols in Molecular Biology, 2007において教示されているものなどである。簡潔に述べると、Ａｂ、Ａｇ、及びＰＬをコードする核酸配列を、ポリメラーゼ連鎖反応、発現ベクターであり得るベクターへのオリゴヌクレオチド又はポリメラーゼ連鎖反応断片の酵素的挿入を用いて、挿入することができる。抗体の軽鎖、重鎖、又はその両方のカルボキシ末端での（ＰＬ−Ａｇ）ｘ又は（Ａｇ−ＰＬ）ｘの挿入を容易にするために、マルチクローニング部位（ＭＣＳ）を、抗体配列を有する配列内に操作することができる。
【００４６】
本明細書において用いられる場合、「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーをいい、具体的な長さの生成物をいうものではなく、したがって、ペプチド、オリゴペプチド、及びタンパク質がポリペプチドの定義に含まれる。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などをいうものでも排除するものでもない。定義には、例えば、アミノ酸の１又は２以上のアナログを含有するポリペプチド（例えば、非天然アミノ酸などを包含する）、置換された連結を有するポリペプチド、並びに、天然由来及び非天然由来の両方の、当技術分野において知られている他の修飾が含まれる。「ドメイン」又は「ポリペプチドドメイン」という用語は、その非変性立体構造の単一の球状領域に折り畳み、個別の結合特性又は機能的特性を示し得る、ポリペプチドの配列をいう。本明細書において用いられる場合、「融合タンパク質」という用語は、１つのタンパク質への少なくとも２つの遺伝子のヌクレオチド配列を含む核酸分子によって発現される、ハイブリッドタンパク質をいう。例えば、融合タンパク質は、２以上の抗原が抗体又はその断片と融合している場合、１若しくは２以上の抗原及び／又は１若しくは２以上のリンカーと融合した抗ランゲリン抗体又はその結合断片の少なくとも一部分を含み得る。
【００４７】
指定された核酸配列「に由来する」ポリペプチド配列又はアミノ酸配列は、配列においてコードされているポリペプチドのアミノ酸配列に同一なアミノ酸配列を有するポリペプチド又はその一部分をいい、この一部分は、少なくとも３〜５個のアミノ酸、好ましくは少なくとも４〜７個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも８〜１０個のアミノ酸、さらに好ましくは少なくとも１１〜１５個のアミノ酸からなるか、又は配列においてコードされるポリペプチドと免疫学的に同一であると見なすことが可能である。この専門用語はまた、指定された核酸配列から発現されるポリペプチドも包含する。
【００４８】
本明細書において用いられる場合、「薬学的に許容される担体」は、本発明の免疫グロブリン（Ｉｇ、immunoglobulin）融合タンパク質と組み合わされた場合に、Ｉｇが生物学的活性を保持することを可能にするあらゆる材料をいい、通常は対象の免疫系と非反応性である。例には、限定はしないが、標準的な薬学的担体、例えばリン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、及び様々なタイプの湿潤剤が含まれる。例えばエアロゾル又は非経口投与のために、特定の希釈剤を本発明と共に用いることができ、これは、リン酸緩衝生理食塩水又は通常の（０．８５％）生理食塩水であり得る。
【００４９】
本発明は、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）又は及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むランゲリン結合抗体（１５Ｂ１０）を提供する。
【００５０】
したがって、本発明は、
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体（１５Ｂ１０）を提供する。
【００５１】
本発明は、
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）又は及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含むランゲリン結合抗体（２Ｇ３）を提供する。
【００５２】
したがって、本発明は、
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）及びその直接的な同等物
をコードするアミノ酸配列及び核酸配列を含む少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体（２Ｇ３）を提供する。
【００５３】
１つの態様において、本発明は、上記に定義された重鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む単離された免疫グロブリン軽鎖を含む単一ドメインランゲリン抗体を提供する。別の態様において、本発明は、上記に定義された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む単離された免疫グロブリン重鎖を含む単一ドメインランゲリン結合分子を提供する。
【００５４】
別の態様において、本発明はまた、軽鎖（ＶＬ）可変ドメインを含むランゲリン結合抗体であって、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;又はVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;及びその直接的な同等物をコードするアミノ酸配列及び核酸配列から得られる超可変領域を配列に含む抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗原結合部位を含むランゲリン結合抗体を提供する。
【００５５】
別の態様において、本発明はまた、SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;又はSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;及びその直接的な同等物から得られる超可変領域を配列に含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列及び核酸配列を含むランゲリン結合抗体を提供する。
【００５６】
別段の指示がない限り、いかなるポリペプチド鎖も、本明細書において、Ｎ末端で開始しＣ末端で終わるアミノ酸配列を有するものとして記載される。抗原結合部位がＶＨドメインとＶＬドメインとの両方を含む場合、これらは同一のポリペプチド分子上に位置し得るか、又は好ましくは、各ドメインは異なる鎖上に位置し得、ＶＨドメインは免疫グロブリン重鎖又はその結合断片の一部分であり、ＶＬは免疫グロブリン軽鎖又はその結合断片の一部分である。
【００５７】
本明細書において用いられる場合、「ランゲリン結合分子」又は「ランゲリン結合抗体」という用語は、単独で、又は本明細書において教示される１若しくは２以上のＶＬ  ＣＤＲ及びＶＨ  ＣＤＲ、いくつかのケースでは２個、３個、４個、５個、若しくは６個全てのＣＤＲを有する他の分子を伴ってランゲリン抗原に結合し得るあらゆる分子をいう。結合反応は、標準的な方法（定性アッセイ）によって示され得、この方法には、例えば、関連しない特異性を有するが同一のアイソタイプである抗体、例えば抗ＣＤ２５抗体又は抗ＣＤ８０抗体が用いられる陰性対照試験を参照する、ランゲリンへの他の分子の結合をブロックすることによって決定するためのバイオアッセイ、又はあらゆる種類の結合アッセイ若しくは活性アッセイ（例えば、活性化、免疫応答の低減又は調節）が含まれる。
【００５８】
本発明はまた、１０〜３０アミノ酸、好ましくは１５〜２５アミノ酸を通常含むペプチドリンカーが共有結合している抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインを有する単一鎖抗体内に作製され得る。したがって、このような構造は、重鎖及び軽鎖の定常部分を含まず、小さいペプチドスペーサーは定常部分全体ほどには抗原性でないと考えられる。
【００５９】
本明細書において用いられる場合、「キメラ抗体」という用語は、重鎖又は軽鎖又はその両方の定常領域がヒト由来であるが、重鎖と軽鎖との両方の可変ドメインがヒト由来ではない（例えば、マウス、ハムスター、又はラット由来である）、又はヒト由来であるが異なるヒト抗体に由来する抗体をいう。
【００６０】
本明細書において用いられる場合、「ＣＤＲグラフト型抗体」という用語は、超可変相補性決定領域（ＣＤＲ、complementarity determining region）がドナー抗体、例えば非ヒト（例えばマウス）抗体、又は異なるヒト抗体に由来するが、免疫グロブリンの全ての又は実質的に全ての他の部分（例えば、可変ドメインの保存された領域、すなわちフレームワーク領域）がアクセプター抗体（ヒト化抗体のケースでは、ヒト由来の抗体）に由来する抗体をいう。ＣＤＲグラフト型抗体は、わずかなアミノ酸からなるドナー配列を、フレームワーク領域内、例えば超可変領域に隣接するフレームワーク領域の一部分内に包含し得る。
【００６１】
本明細書において用いられる場合、「ヒト抗体」という用語は、必ずしも同一の抗体から得られるわけではないが、重鎖と軽鎖との両方の定常領域及び可変領域が全てヒト由来であるか、又はヒト由来の配列に実質的に同一である抗体をいい、マウス、ハムスター、又はラット免疫グロブリンの可変部分及び定常部分の遺伝子がそのヒト対応物によって置き換えられている、マウスによって生産される抗体を包含し、例えば、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる欧州特許第０５４６０７３号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、欧州特許第０４３８４７４号明細書、及び欧州特許第０４６３１５１号明細書において一般用語で記載されている。
【００６２】
本発明のランゲリン結合抗体は、抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体から得られるＣＤＲを含むヒト化抗体を包含する。キメラ抗体の１つの例は、重鎖と軽鎖との両方がヒト由来である可変ドメイン、例えば、抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体の可変ドメインを包含する。定常領域ドメインは、好ましくはまた、例えば"Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat E. A. et al, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Healthにおいて記載されている、適切なヒト定常領域ドメインを含む。
【００６３】
超可変領域は、いかなる種類のフレームワーク領域、例えばヒト由来のフレームワーク領域も伴い得る。適切なフレームワーク領域は、Kabat E. A.において記載された。１つの重鎖フレームワークは、ＦＲ１Ｌ領域、ＦＲ２Ｌ領域、ＦＲ３Ｌ領域、及びＦＲ４Ｌ領域という軽鎖フレームワーク領域の配列を包含する重鎖フレームワーク、例えば、抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体のそのような重鎖フレームワークである。同様に、抗ランゲリン１５Ｂ１０又は２Ｇ３の重鎖フレームワークは、ＦＲ１Ｈ領域、ＦＲ２Ｈ領域、ＦＲ３Ｈ領域、及びＦＲ４Ｈ領域の配列を包含する。ＣＤＲは、Rybak, et al.に付与された7,456,260において記載されているものなどのヒト抗体フレームワークに付加することができ、前記文献は、新たなヒト可変鎖フレームワーク領域、及びこのフレームワーク領域を含むヒト化抗体を教示しており、関連する部分及びフレームワーク配列は、参照することによって本明細書に組み込まれる。遺伝子レベルでのグラフト化を達成するために、本発明はまた、ＶＬ領域及びＶＨ領域並びに完全な抗体及びそれらヒト化された型の、根底にある核酸配列を包含する。本発明の核酸配列は、それぞれ抗ランゲリン抗体の軽鎖及び重鎖と、同一のアミノ酸配列及び核酸レベル又はアミノ酸レベルで８５、９０、９５、又は１００％の配列同一性を有するその保存的変異についての可変のコドン使用頻度を包含する核酸配列とを包含する。同様に、ＣＤＲは、個別に、群で、又は２個、３個、４個、若しくは５個か、又は一斉に、核酸レベル又はアミノ酸レベルで、８５、９０、９５、又は１００％の配列同一性を有し得る。
【００６４】
全てのヒトにおいて天然で見られるタンパク質に対するモノクローナル抗体は、典型的には、非ヒト系において、例えばマウスにおいて開発され、そのため、典型的には非ヒトタンパク質である。この直接的な結果として、異種抗体は、ハイブリドーマによって生産されるため、ヒトに投与されると、異種免疫グロブリンの定常部分が主に介在する望ましくない免疫応答を引き起こす。異種抗体は、宿主免疫応答を引き起こす傾向があり、そのため、長時間にわたって投与することができないため、このような抗体の使用が限定される。したがって、ヒトに投与された場合に実質的な同種応答を引き起こさないと考えられる、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト型抗体、又は特にヒト抗体を用いることが特に有用である。本発明は、実質的に同一な特性を有する元のタンパク質の対立遺伝子形態にすぎない、１つの、わずかな、又はさらにはいくつかのアミノ酸の欠失、付加、又は置換などのわずかな変化をアミノ酸配列に有する抗体を包含する。
【００６５】
ランゲリンのその受容体への結合の阻害は、様々なアッセイにおいて都合良く試験することができ、このようなアッセイに含まれるものは、以下、文章内に記載される。「同程度に」という用語は、参照分子又は同等分子が、上記で述べたアッセイの１つにおいて、統計に基づいて本質的に同一のランゲリン結合阻害曲線を示すことを意味する。例えば、用いられるアッセイは、本発明の結合分子によるランゲリンの結合の競合的阻害のアッセイであり得る。
【００６６】
全体として、ヒト抗ランゲリン抗体は、少なくとも（ａ）１位アミノ酸で開始し１０７位アミノ酸で終わる１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体に実質的に同一なアミノ酸配列を有する可変ドメインとヒト軽鎖の定常部分とを含む１つの軽鎖、及び（ｂ）１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体に実質的に同一なアミノ酸配列を有する可変ドメインとヒト重鎖の定常部分とを含む１つの重鎖を含む。ヒト重鎖の定常部分は、γ１タイプ、γ２タイプ、γ３タイプ、γ４タイプ、μタイプ、β２タイプ、又はδタイプ、又はεタイプのもの、好ましくはγタイプのものであり得、一方、ヒト軽鎖の定常部分は、κタイプ又はλタイプ（λ１サブタイプ、λ２サブタイプ、及びλ３サブタイプを包含する）のものであり得るが、好ましくはκタイプのものである。可変ドメイン及び定常ドメインの概略的な位置のアミノ酸配列は、当技術分野において周知であり、Ｋａｂａｔの命名に通常従う。
【００６７】
本発明のランゲリン結合分子は、組換えＤＮＡ技術によって生産され得る。この点から、結合分子をコードする１又は２以上のＤＮＡ分子は、構築され、適切な制御配列下に置かれ、発現のために適切な宿主生物内に移されるべきである。
【００６８】
非常に全体的な様式において、したがって、（ｉ）本発明の単一ドメインランゲリン結合分子を、本発明の一本鎖ランゲリン結合分子を、本発明のランゲリン結合分子の重鎖若しくは軽鎖又はその結合断片をコードするＤＮＡ分子、及び（ii）組換え方法によって本発明のランゲリン結合分子を生産するための、本発明のＤＮＡ分子の使用が提供される。
【００６９】
当技術分野の現状は、当業者が、本明細書において提供される情報、すなわち超可変領域のアミノ酸配列及びそれをコードするＤＮＡ配列を考慮して、本発明のＤＮＡ分子を合成し得るようなものである。可変ドメインの遺伝子を構築するための方法は、例えば、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる欧州特許出願公開第２３９４００号公報において記載されている。簡潔に述べると、ＭＡｂの可変ドメインをコードする遺伝子がクローニングされる。フレームワーク領域及び超可変領域をコードするＤＮＡセグメントが決定され、超可変領域をコードするＤＮＡセグメントが除去され、その結果、フレームワーク領域をコードするＤＮＡセグメントが、接合部で、適切な制限部位と共に融合する。制限部位は、標準的な手順によるＤＮＡ分子の突然変異生成によって、適切な位置で生成され得る。二本鎖の合成ＣＤＲカセットは、１５Ｂ１０又は２Ｇ３に与えられる配列に従ってＤＮＡ合成によって調製される（それぞれアミノ酸配列及び核酸配列）。これらのカセットには、多くの場合、それがフレームワークの接合部でライゲーションされ得るように、粘着性の末端が提供される。
【００７０】
本発明のランゲリン結合分子をコードするＤＮＡ構築物を得るために、生産ハイブリドーマ細胞系から得られるｍＲＮＡを利用する必要はない。例えば、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願の国際公開第９０／０７８６１号パンフレットは、遺伝子のヌクレオチド配列に関する記載された情報のみを考慮して、組換えＤＮＡ技術によって抗体を生産するための、完全な指示を記載している。簡潔に述べると、本方法は、多くのオリゴヌクレオチドの合成、ＰＣＲ法によるその増幅、及び所望のＤＮＡ配列を得るためのそのスプライシングを含む。
【００７１】
適切なプロモーター又は重鎖及び軽鎖の定常部分をコードする遺伝子を含む発現ベクターが公に利用可能である。したがって、本発明のＤＮＡ分子が調製されると、このＤＮＡ分子は適切な発現ベクター内に都合良く移され得る。一本鎖抗体をコードするＤＮＡ分子はまた、例えば国際公開第８８／１６４９号パンフレットにおいて記載されているように、標準的な方法によって調製され得る。前述の点から、記載の十分性の基準を満たすために、ハイブリドーマ又は細胞系の寄託は必要ではない。
【００７２】
例えば、ランゲリンに特異的に結合する第１及び第２のＤＮＡ構築物が作製される。簡潔に述べると、第１のＤＮＡ構築物は、抗体の軽鎖、ＣＤＲ、又はその結合断片をコードし、且つ、ａ）フレームワーク領域及び超可変領域を代替的に含む可変ドメインをコードする第１の部分であって（超可変領域は、配列ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、及びＣＤＲ３Ｌ内にあり、そのアミノ酸配列は配列番号４５〜４８で見られる）、可変ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンで開始し、可変ドメインの最後のアミノ酸をコードするコドンで終わる、第１の部分と、ｂ）重鎖の定常部分の第１のアミノ酸をコードするコドンで開始し、定常部分又はその結合断片の最後のアミノ酸をコードするコドンで終わり、その後に停止コドンがある、軽鎖の定常部分又はその結合断片をコードする第２の部分とを含む。
【００７３】
第１の部分は、１５Ｂ１０又は２Ｇ３のアミノ酸配列に実質的に同一なアミノ酸配列を有する可変ドメインをコードする。第２の部分は、ヒト重鎖の定常部分、より好ましくはヒトγ１鎖の定常部分をコードする。この第２の部分は、ゲノム由来のＤＮＡ断片（イントロンを含む）又はｃＤＮＡ断片（イントロンを有さない）であり得る。
【００７４】
第２のＤＮＡ構築物は、重鎖又はその結合断片をコードし、且つ、ａ）フレームワーク領域及び超可変領域を代替的に含む可変ドメインをコードする第１の部分であって（超可変領域はＣＤＲ１Ｈであり、１５Ｂ１０又は２Ｇ３のアミノ酸配列であるＣＤＲ２Ｈ及びＣＤＲ３Ｈであってもよい）、可変ドメインの第１のアミノ酸をコードするコドンで開始し、可変ドメインの最後のアミノ酸をコードするコドンで終わる、第１の部分と、ｂ）軽鎖の定常部分の第１のアミノ酸をコードするコドンで開始し、定常部分又はその結合断片の最後のアミノ酸をコードするコドンで終わり、その後に停止コドンがある、重鎖の定常部分又はその結合断片をコードする第２の部分とを含む。
【００７５】
第１の部分は、１５Ｂ１０又は２Ｇ３のアミノ酸配列に実質的に同一のアミノ酸配列を有する可変ドメインをコードする。第１の部分は、１位のヌクレオチドで開始し３２１位のヌクレオチドで終わる、１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体のヌクレオチド配列を有する。同様に好ましくは、第２の部分は、ヒト軽鎖の定常部分、より好ましくはヒトκ鎖の定常部分をコードする。
【００７６】
本発明はまた、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ、ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、若しくはＣＤＲ３Ｈ、又はフレームワークの残基の１又は２以上、典型的にはわずかのみ（例えば、ＦＲ１〜４Ｌ又はＨ）が、例えば、対応するＤＮＡ配列の部位特異的突然変異生成によって、１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体の残基から変化している、ランゲリン結合分子を包含する。本発明は、このような変化したランゲリン結合分子をコードするＤＮＡ配列を包含する。特に、本発明は、ＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、及び／又はＣＤＲ３Ｌの１又は２以上の残基が１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体の残基から変化しており、ＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、及び／又はＣＤＲ３Ｈの１又は２以上の残基が１５Ｂ１０抗体又は２Ｇ３抗体の残基から変化している、ランゲリン結合分子を包含する。
【００７７】
ＤＮＡ構築物のそれぞれは、適切な制御配列の制御下、特に適切なプロモーターの制御下に置かれる。発現のためにＤＮＡ構築物が移される先である宿主生物に適合しているならば、いかなる種類のプロモーターも用いることができる。しかし、発現を哺乳動物細胞において起こす場合、免疫グロブリン遺伝子のプロモーターをＢ細胞において用いることができる。第１の部分及び第２の部分はイントロンによって分離することができ、エンハンサーは、第１の部分と第２の部分との間のイントロン内に都合良く位置させることができる。転写はされるが翻訳はされないこのようなエンハンサーの存在は、効果的な転写の助けとなり得る。特定の実施形態において、第１及び第２のＤＮＡ構築物は、例えば重鎖ヒト遺伝子の、エンハンサーを含む。
【００７８】
抗体又はその結合断片は、当技術分野において知られているあらゆる方法を用いて、単離、精製、及び保存することができる。結合断片は、無傷抗体の特異的結合活性を保持し、無傷抗体を採用するいかなる適用にも用いることができる（例えば、治療学、診断的アッセイ、競合結合アッセイなど）。
【００７９】
別の態様において、本発明は、上記の方法によって生じる抗体又は結合断片を提供し、半減期を伸ばす媒体、例えば当業者に知られているものをさらに包含し得る。このような媒体には、限定はしないが、線状ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、polyethylene glycol）、ポリリジン、デキストランなど）、分枝鎖ポリマー（例えば、米国特許第４，２８９，８７２号明細書、米国特許第５，２２９，４９０号明細書、国際公開第９３／２１２５９号パンフレットを参照されたい）、脂質、コレステロール基（例えば、ステロイド）、炭水化物若しくは多糖、又はあらゆる天然若しくは合成のタンパク質、ポリペプチド、若しくはペプチドが含まれる。さらに、当然のことながら、１又は２以上のＦｃ領域もまた、半減期を増大させるために本発明と共に採用され得る。当然のことながら、媒体は、例えば共有結合による連結を包含する、当技術分野において知られている様々な技術によって、抗体又は結合断片に連結し得る。
【００８０】
所望の抗体は、動物において腹水として、細胞培養物において、又はトランスジェニック動物において、生産され得る。適切なトランスジェニック動物は、標準的な方法に従って得ることができ、この方法には、適切な制御配列下に置かれた第１及び第２のＤＮＡ構築物を卵内にマイクロ注入すること、そのように調製された卵を適切な偽妊娠メス内に移すこと、並びに所望の抗体を発現する子孫を選択することが含まれる。
【００８１】
本発明はまた、上記のＤＮＡ構築物の少なくとも１つを含む、原核細胞系又は真核細胞系において複製し得る発現ベクターを提供する。ＤＮＡ構築物を含有する各発現ベクターは、次に、適切な宿主生物内に移される。ＤＮＡ構築物が２つの発現ベクターに個別に挿入される場合、それらのベクターは個別に移され得、すなわち細胞当たり１つのタイプのベクターが移され得るか、又は共に移され得、この後者の可能性が好ましい。適切な宿主生物は、細菌細胞系、酵母細胞系、又は哺乳動物細胞系であり得、この後者が好ましい。より好ましくは、哺乳動物細胞系は、リンパ球由来のもの、例えば骨髄腫の、ハイブリドーマの、又は正常な不死化Ｂ細胞であり、これは、都合の良いことに、いかなる内因性抗体の重鎖も軽鎖も発現しない。
【００８２】
抗体の鎖が細胞培養において生産される場合、ＤＮＡ構築物はまず、単一の発現ベクター内に、又は２つの個別のしかし適合する発現ベクター内に挿入されなくてはならず、後者の可能性が好ましい。哺乳動物細胞における発現では、ランゲリン結合分子のコード配列が、宿主細胞ＤＮＡ内の、ランゲリン結合分子の高レベルの発現を可能にするか又は前記発現に有利な遺伝子座内に組み込まれることが好ましい。
【００８３】
本発明のさらなる態様において、（ｉ）上記に定義された発現ベクターで形質転換されている生物を培養すること、及び（ii）培養物からランゲリン結合分子を回収することを含む、ランゲリン結合分子を生産するためのプロセスが提供される。
【００８４】
本発明に従って、抗ランゲリン抗体１５Ｂ１０、２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体が、ヒトランゲリンの抗原性エピトープに対する結合特異性を有すると思われることが明らかにされた。したがって、このエピトープに対する抗体、例えば、抗ランゲリン１５Ｂ１０、２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそれらヒト化された誘導体が、抗原を樹状細胞（ＤＣ）内に効率的に送達し得ることは、最も驚くべきことである。成熟ヒトランゲリンの抗原性エピトープに対する結合特異性を有する抗体、特にキメラ抗体及びＣＤＲグラフト型抗体、特にヒト抗体と、ＤＣ抗原負荷に対するこのような抗体の使用とは新規であり、本発明の範囲内に含まれる。
【００８５】
治療適応に本発明の抗ランゲリン抗体を用いるために、当然のことながら、適切な投薬量は、例えば、採用される本明細書において開示される抗体、宿主、投与態様、並びに治療する症状の性質及び重症度に応じて変化する。しかし、予防的使用では、体重１キログラム当たり約０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇ、より一般的には体重１キログラム当たり約０．１ｍｇ〜約５ｍｇの投薬量で、十分な結果が通常見られる。予防的使用での投薬の頻度は、一般的には、１週間当たり約１回から、最大で３カ月ごとに約１回の範囲であり、より一般的には、２週間ごとに約１回から、最大で１０週間ごとに約１回の範囲であり、例えば、４〜８週間ごとに１回である。本発明の抗ランゲリン抗体は、非経口で、静脈内に、例えば肘正中静脈若しくは他の末梢血管内に、筋肉内に、又は皮下に投与することができる。
【００８６】
本発明の医薬組成物は、従来の様式で、例えば、凍結乾燥形態で製造することができる。即時投与では、これは適切な水性担体、例えば注入用滅菌水又は無菌緩衝生理食塩水内に溶解される。どちらかというとボーラス注入としての、点滴による投与のために、より大きな容量の溶液を作製することが望ましいと考えられ得る場合、ヒト血清アルブミン又は患者自身のヘパリン化血液を製剤時に生理食塩水内に組み込むことが有利である。過剰なこのような生理学的に不活性のタンパク質の存在によって、点滴溶液と共に用いられる容器及び試験管の壁への吸着による抗体の損失が防がれる。アルブミンを用いる場合、適切な濃度は、生理食塩水の０．５〜４．５重量％である。
【００８７】
本発明の１つの実施形態は、１又は２以上のエフェクター分子、抗原（単数又は複数）、及び／又は検出可能な標識（単数又は複数）に連結した本発明のヒト化抗体、例えばヒト化された抗ランゲリン抗体を含む、免疫コンジュゲートを提供する。好ましくは、エフェクター分子は、治療用分子、例えば、１又は２以上のＴ細胞エピトープ、毒素、低分子、サイトカイン若しくはケモカイン、酵素、又は放射性標識を含む１又は２以上のペプチドである。
【００８８】
例示的な毒素には、限定はしないが、シュードモナス外毒素又はジフテリア毒素が含まれる。低分子の例には、限定はしないが、化学療法用化合物、例えばタキソール、ドキソルビシン、エトポシド、及びブレイオマイシンが含まれる。例示的なサイトカインには、限定はしないが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１２、ＩＬ−１７、及びＩＬ−２５が含まれる。例示的な酵素には、限定はしないが、ＲＮＡｓｅ、ＤＮＡｓｅ、プロテアーゼ、キナーゼ、及びカスパーゼが含まれる。例示的な放射性同位体には、限定はしないが、３２Ｐ及び１２５Ｉが含まれる。
【００８９】
本明細書において用いられる場合、「エピトープ」という用語は、免疫応答を刺激し得る分子又は物質をいう。１つの実施例において、エピトープには、限定はしないが、ポリペプチド、及びポリペプチドをコードする核酸が含まれ、ポリペプチドへの核酸の発現は、ポリペプチドがプロセシングされており主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子上に提示されている場合、免疫応答を刺激し得る。通常、エピトープには、クラスＩ又はクラスIIのＭＨＣの結合溝に非共有結合している細胞の表面上に提示されているペプチドであって、それによってＴ細胞受容体及びそれぞれのＴ細胞アクセサリー分子と相互作用し得るペプチドが含まれる。
【００９０】
抗原のタンパク質分解性プロセシング。抗原提示細胞上のＭＨＣによって提示されるエピトープは、切断ペプチドであるか、又は、より大きなペプチド若しくはタンパク質の抗原前駆体の生成物である。ＭＨＣ  Ｉエピトープでは、タンパク質抗原は、多くの場合、細胞に内在するプロテアソームによって消化される。細胞内プロテアソーム消化は、約３〜２３アミノ酸長のペプチド断片を生産し、これは次にＭＨＣタンパク質上に負荷される。細胞内の、又は細胞外媒環境における、さらなるタンパク質分解活性は、これらの断片をさらに切り取り、プロセシングし得る。ＭＨＣクラスIIエピトープのプロセシングは、通常、リソソーム／エンドソーム区画からの細胞内プロテアーゼを介して生じる。本発明は、１つの実施形態において、増強した免疫応答が探求される対象であるペプチドを抗原提示細胞に直接向かわせる抗ランゲリン抗体（又はその結合断片）に付着している、プロセシング前のペプチドを包含する。
【００９１】
免疫原化合物として潜在的に効果的なエピトープを同定するために、ＭＨＣ結合のみの予測が有用であるが、多くの場合不十分である。本発明は、抗原提示細胞及び応答Ｔ細胞の特異的由来源に対して探求される免疫応答をもたらす可能性が最も高い、抗原内のエピトープを特異的に同定するための方法を包含する。
【００９２】
本発明は、患者自身の抗原提示細胞及びＴ細胞レパートリーを用いて所望の免疫応答を生じさせる可能性が最も高いエピトープを同定するための、迅速で容易なアッセイを可能にする。本発明の組成物及び方法は、いかなるタンパク質配列にも適用可能であり、利用者による、ＭＨＣに結合し得、且つ抗原に応答するＴ細胞に対して適性に提示されるエピトープの同定を可能にする。したがって、本発明は、いかなる特定の標的又は医学的症状にも限定されるわけではないが、その代わりに、いかなる有用な由来源からのＭＨＣエピトープ（単数又は複数）も包含する。
【００９３】
本明細書において用いられる場合、「ベニア化」という用語は、非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、又はハムスター）から得られる抗原結合部位又はＣＤＲが、ヒト重鎖及び軽鎖が保存されている構造的フレームワーク領域（ＦＲ、framework region）内にある、ヒト化抗体フレームワークをいい、前記構造的フレームワーク領域は、例えば、当業者には容易に明らかとなろうが、非ヒト抗体の特異性を、例えば配列番号４５〜４８又はこれらの配列をコードする核酸から得られるヒトフレームワーク内に「グラフト」するための、軽鎖ポリヌクレオチド又は重鎖ポリヌクレオチド内にある。ベニア化された抗体を発現する１又は２以上のポリヌクレオチド発現ベクターは、非ヒト抗体の抗原特異性を示す組換えヒト抗体であって、その発現、安定性、可溶性、又はそれらの組合せを増強させる翻訳後修飾を受ける組換えヒト抗体の発現のための、形質転換哺乳動物細胞であり得る。
【００９４】
抗原。
本発明と共に用いるためのウイルス抗原の例には、限定はしないが、例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、ピコルナウイルスなどが含まれる。レトロウイルス抗原の非限定的な例は、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ、human immunodeficiency virus）抗原から得られるレトロウイルス抗原、例えば、ｇａｇ遺伝子、ｐｏｌ遺伝子、及びｅｎｖ遺伝子の遺伝子産物、Ｎｅｆタンパク質、逆転写酵素、並びに他のＨＩＶ成分；肝炎ウイルス抗原、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスのＳタンパク質、Ｍタンパク質、及びＬタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのプレＳ抗原、並びに他の肝炎ウイルス成分、例えば、Ａ型肝炎ウイルス成分、Ｂ型肝炎ウイルス成分、及びＣ型肝炎ウイルス成分、例えばＣ型肝炎ウイルスＲＮＡ；インフルエンザウイルス抗原、例えば、血球凝集素及びノイラミニダーゼ及び他のインフルエンザウイルス成分；麻疹ウイルス抗原、例えば、麻疹ウイルス融合タンパク質及び他の麻疹ウイルス成分；風疹ウイルス抗原、例えば、タンパク質Ｅ１及びＥ２並びに他の風疹ウイルス成分；ロタウイルス抗原、例えば、ＶＰ７ｓｃ及び他のロタウイルス成分；サイトメガロウイルス抗原、例えば、エンベロープ糖タンパク質Ｂ及び他のサイトメガロウイルス抗原成分；呼吸器合胞体ウイルス抗原、例えば、ＲＳＶ融合タンパク質、Ｍ２タンパク質、及び他の呼吸器合胞体ウイルス抗原成分；単純ヘルペスウイルス抗原、例えば、前初期タンパク質、糖タンパク質Ｄ、及び他の単純ヘルペスウイルス抗原成分；水痘帯状疱疹ウイルス抗原、例えば、ｇｐＩ、ｇｐII、及び他の水痘帯状疱疹ウイルス抗原成分；日本脳炎ウイルス抗原、例えば、タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１−ＮＳ２Ａ、８０％Ｅ、及び他の日本脳炎ウイルス抗原成分；狂犬病ウイルス抗原、例えば、狂犬病糖タンパク質、狂犬病核タンパク質、及び他の狂犬病ウイルス抗原成分である。ウイルス抗原のさらなる例については、Fundamental Virology, Second Edition, eds. Fields, B. N. and Knipe, D. M. (Raven Press, New York, 1991)を参照されたい。少なくとも１つのウイルス抗原は、アデノウイルス、レトロウイルス、ピコルナウイルス、ヘルペスウイルス、ロタウイルス、ハンタウイルス、コロナウイルス、トガウイルス、フラビルウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、オルトミクソウイルス、ブニヤウイルス、アレナウイルス、レオウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、又は海綿状ウイルスのペプチドであり得る。特定の具体的な非限定的な例において、少なくとも１つのウイルス抗原は、ＨＩＶウイルス、ＣＭＶウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びＣ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、天然痘ウイルス、風疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタインバーウイルス、日本脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、流感ウイルス、並びに／又は風邪ウイルスの少なくとも１つから得られるペプチドである。
【００９５】
１つの態様において、抗原性ペプチドの１又は２以上は、Nef（66-97）:VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL（配列番号３１）;Nef（116-145）:HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL（配列番号３２）;Gag p17（17-35）:EKIRLRPGGKKKYKLKHIV（配列番号３３）;Gag p17-p24（253-284）:NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD（配列番号３４）;又はPol 325-355（RT 158-188）:AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY（配列番号３５）の少なくとも１つから選択される。１つの態様において、融合タンパク質ペプチドは、SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP（配列番号３９）;PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG（配列番号４０）;TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP（配列番号４１）;又はTNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA（配列番号４２）から選択される１又は２以上のリンカーによって分離されている。
【００９６】
本発明の抗ランゲリン抗原ワクチンを用いて送達され得る抗原標的には、抗原をコードする遺伝子、例えばウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、又は寄生動物抗原をコードする遺伝子が含まれる。病原体には、トリパノソーマ、条虫、回虫、蠕虫、マラリアが含まれる。腫瘍マーカー、例えば胎児抗原又は前立腺特異的抗原は、この様式で標的化され得る。他の例には、ＨＩＶｅｎｖタンパク質及びＢ型肝炎表面抗原が含まれる。ワクチン接種を目的とした、本発明に従ったベクターの投与は、強力な免疫応答が望まれる対象である導入遺伝子の長期にわたる発現を可能にするためにベクター関連抗原が十分に非免疫原性であることを必要とする。いくつかのケースにおいて、個体のワクチン接種は、まれに、例えば１年に１回又は２年に１回必要とされるのみであり得、感染性作用物質に対する長期にわたる免疫学的防御をもたらし得る。ベクターにおいて用いるための、そして最終的には本発明との抗原として用いるための生物、アレルゲン、並びに核酸配列及びアミノ酸配列の具体的な例は、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる米国特許第６，５４１，０１１号明細書、特に、本発明と共に用いられ得る生物及び具体的な配列を適合させる表において見ることができる。
【００９７】
本明細書において開示される抗ランゲリン抗原ワクチンと共に用いるための細菌抗原には、限定はしないが、例えば細菌抗原、例えば、百日咳毒素、線維状血球凝集素、パータクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３、アデニル酸シクラーゼ、及び他の百日咳細菌抗原成分；ジフテリア細菌抗原、例えば、ジフテリア毒素又はジフテリアトキソイド、及び他のジフテリア細菌抗原成分；破傷風細菌抗原、例えば、破傷風毒素又は破傷風トキソイド、及び他の破傷風細菌抗原成分；連鎖球菌細菌抗原、例えば、Ｍタンパク質及び他の連鎖球菌細菌抗原成分；グラム陰性桿菌細菌抗原、例えば、リポ多糖及び他のグラム陰性細菌抗原成分；結核菌（Mycobacterium tuberculosis）細菌抗原、例えば、ミコール酸、熱ショックタンパク質６５（ＨＳＰ６５、heat shock protein 65）、３０ｋＤａの主要分泌型タンパク質、抗原８５Ａ、及び他のマイコバクテリア抗原成分；ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）細菌抗原成分；肺炎球菌細菌抗原、例えば、ニューモリシン、肺炎球菌莢膜多糖、及び他の肺炎球菌細菌抗原成分；インフルエンザ菌（haemophilus influenza）細菌抗原、例えば、莢膜多糖及び他のインフルエンザ菌細菌抗原成分；炭疽菌細菌抗原、例えば、炭疽菌防御抗原及び他の炭疽菌細菌抗原成分；リケッチア細菌抗原、例えば、ｒｏｍｐＡ及び他のリケッチア細菌抗原成分が含まれる。また、本明細書において記載される細菌抗原と共に、いかなる他の細菌抗原、マイコバクテリア抗原、マイコプラズマ抗原、リケッチア抗原、又はクラミジア抗原も含まれる。部分的な病原体又は病原体全体はまた、インフルエンザ菌、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、髄膜炎菌（neisseria meningitidis）、肺炎連鎖球菌（streptococcus pneumoniae）、淋菌（neisseria gonorrhoeae）、腸チフス菌（salmonella serotype typhi）、赤痢菌（shigella）、コレラ菌（vibrio cholerae）、デング熱、脳炎、日本脳炎、ライム病、ペスト菌（Yersinia pestis）、西ナイルウイルス、黄熱、野兎病、肝炎（ウイルス性、細菌性）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ、respiratory syncytial virus）、ＨＰＩＶ１及びＨＰＩＶ３、アデノウイルス、天然痘、アレルギー、及び癌であり得る。
【００９８】
本発明の組成物及び方法と共に用いるための真菌抗原には、限定はしないが、例えば、カンジダ真菌抗原成分；ヒストプラスマ真菌抗原、例えば、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０、heat shock protein 60）及び他のヒストプラスマ真菌抗原成分；クリプトコッカス真菌抗原、例えば、莢膜多糖及び他のクリプトコッカス真菌抗原成分；コクシジオイデス真菌抗原、例えば、球状体抗原及び他のコクシジオイデス真菌抗原成分；並びに白癬真菌抗原、例えば、トリコフィチン及び他のコクシジオイデス真菌抗原成分が含まれる。
【００９９】
原生動物抗原及び他の寄生動物抗原の例には、限定はしないが、例えば、マラリア原虫（plasmodium falciparum）抗原、例えば、メロゾイト表面抗原、スポロゾイト表面抗原、スポロゾイト周囲抗原、生殖母細胞／配偶子表面抗原、血液期抗原ｐｆ１５５／ＲＥＳＡ、及び他のプラスモジウム抗原成分；トキソプラズマ抗原、例えば、ＳＡＧ−１、ｐ３０、及び他のトキソプラズマ抗原成分；住血吸虫抗原、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、パラミオシン、及び他の住血吸虫抗原成分；リーシュマニア主要抗原及び他のリーシュマニア抗原、例えば、ｇｐ６３、リポホスホグリカンとその関連タンパク質、及び他のリーシュマニア抗原成分；並びにクルーズトリパノソーマ（trypanosoma cruzi）抗原、例えば、７５〜７７ｋＤａの抗原、５６ｋＤａの抗原、及び他のトリパノソーマ抗原成分が含まれる。
【０１００】
本発明の抗ランゲリン抗原ワクチンを用いて標的化され得る抗原は、通常、内在化の可能性、免疫細胞の特異性のレベル、標的化される免疫細胞のタイプ、免疫細胞の成熟度及び／又は活性化のレベルなどを包含する、多くの因子に基づいて選択される。この実施形態において、抗体は、単一特異的抗体、又は１つの抗ランゲリン結合ドメインと第２の抗原に対する１つの結合ドメインとを包含する二重特異的抗体であり得、前記第２の抗原は、例えば、樹状細胞の細胞表面マーカー、例えば、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、Ｂ７−２、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ３１、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＭＲＦ−４４、ＣＭＲＦ−５６、ＤＣＩＲ、及び／又はＤｅｃｔｉｎ−１などであり、一方、いくつかのケースにおいてはまた、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、及び／又はＣＤ５７が非存在である。抗原提示細胞の細胞表面マーカーの例には、限定はしないが、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＣＤ４５、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＦＮ−γ受容体及びＩＬ−２受容体、ＩＣＡＭ−１、並びに／又はＦｃγ受容体が含まれる。Ｔ細胞の細胞表面マーカーの例には、限定はしないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＣＤ４５、及びＨＬＡ−ＤＲが含まれる。
【０１０１】
送達のための細胞表面上の標的抗原は、腫瘍組織の細胞の細胞表面、細胞質、核、オルガネラなどに典型的に由来する腫瘍抗原の特徴を包含する。本発明の抗体部分のための腫瘍標的の例には、限定はしないが、血液癌、例えば、白血病及びリンパ腫、星状細胞腫及び膠芽腫等の神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、前立腺癌及び陰茎癌等の泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病が含まれる。
【０１０２】
本発明を用いて単独で又は組み合わせて抗原提示のために免疫細胞に送達され得る抗原の例には、腫瘍タンパク質、例えば、突然変異型癌遺伝子、腫瘍と関連するウイルスタンパク質、並びに腫瘍ムチン及び腫瘍糖脂質が含まれる。抗原は、上記のウイルスのクラスから得られるウイルスタンパク質である、腫瘍と関連するウイルスタンパク質であり得る。特定の抗原は、腫瘍に特徴的であり得る（１つのサブセットは、腫瘍前駆細胞によって通常は発現されないタンパク質である）か、又は、腫瘍前駆細胞において通常発現するが、腫瘍に特徴的な突然変異を有するタンパク質であり得る。他の抗原には、活性又は細胞内分布が改変されている、正常なタンパク質の突然変異バリアント（単数又は複数）、例えば、腫瘍抗原を生じさせる遺伝子の突然変異が含まれる。
【０１０３】
抗ランゲリン融合タンパク質ワクチンにおいて用いるための腫瘍抗原の具体的な非限定的な例には、例えば、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）（例えば、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２など）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＤＡＧＥ、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、Ｋｉ−６７、サイクリンＢ１、ｇｐ１００、スルビビン、並びにＮＹＥＳＯ−１が含まれる。
【０１０４】
さらに、免疫原性分子は、病理が、関連する標的生物、標的組織、又は標的細胞によって発現される分子に特異的な抗体の活性に大きく起因する、自己免疫疾患、例えばＳＬＥ又はＭＧの、開始及び／又は伝播に関与する自己抗原であり得る。このような疾患において、関連する自己抗原に対する進行中の抗体介在性（すなわち、Ｔｈ２型）免疫応答を、細胞性（すなわち、Ｔｈ１型）免疫応答に向かわせることが望ましい場合がある。或いは、適切な自己抗原に対するＴｈ１応答を予防的に誘発することによって、関連する自己免疫疾患を有さないが前記疾患に感染しやすいことが疑われる対象おいて、自己抗原に対するＴｈ２応答の開始を予防するか、又は前記応答のレベルを減少させることが望ましい場合がある。所望の自己抗原には、限定はしないが、（ａ）ＳＬＥに関して、スミスタンパク質、ＲＮＰリボ核タンパク質、並びにＳＳ−Ａタンパク質及びＳＳ−Ｂタンパク質と、（ｂ）ＭＧに関して、アセチルコリン受容体とが含まれる。１又は２以上のタイプの自己免疫応答に関与する他の混合型抗原の例には、例えば、内因性ホルモン、例えば黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、テストステロン、成長ホルモン、プロラクチン、及び他のホルモンが含まれる。
【０１０５】
自己免疫疾患、アレルギー、及びグラフト拒絶に関与する抗原を、本発明の組成物及び方法において用いることができる。例えば、糖尿病、真性糖尿病、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変型性関節炎、乾癬性関節炎を包含する）、多発性硬化症、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎及び湿疹様皮膚炎を包含する）、乾癬、シェーグレン症候群に続発する乾性角結膜炎を包含する、シェーグレン症候群、円形脱毛症、節足動物刺咬反応に起因するアレルギー応答、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、薬疹、らい境界反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、クローン病、グレーブス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ブドウ膜炎、及び間質性肺線維症という自己免疫疾患又は自己免疫障害のいずれか１又は２以上に関与する抗原を、本発明において用いることができる。自己免疫疾患に関与する抗原の例には、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５（ＧＡＤ６５、glutamic acid decarboxylase 65）、非変性ＤＮＡ、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンプロテオリピドタンパク質、アセチルコリン受容体成分、サイログロブリン、及び甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ、thyroid stimulating hormone）受容体が含まれる。
【０１０６】
アレルギーに関与する抗原の例には、花粉抗原、例えば、スギ花粉抗原、ブタクサ花粉抗原、ライグラス花粉抗原、動物由来の抗原、例えばイエダニ抗原及び猫抗原、組織適合性抗原、並びにペニシリン及び他の治療用薬剤が含まれる。グラフト拒絶に関与する抗原の例には、グラフトレシピエント内に移植されるグラフトの抗原成分、例えば、心臓グラフト成分、肺グラフト成分、肝臓グラフト成分、膵臓グラフト成分、腎臓グラフト成分、及び神経グラフト成分が含まれる。抗原は、自己免疫疾患の治療において有用な、改変されたペプチドリガンドであり得る。
【０１０７】
当業者には当然のことながら、いかなるタンパク質エフェクター分子の配列も、エフェクタータンパク質の機能的利点に実質的に影響しない様式で改変され得る。例えば、グリシン及びアラニンは、典型的には、アスパラギン酸及びグルタミン酸とアスパラギン及びグルタミンとがそうであるように、交換可能であると考えられる。当業者には、エフェクター配列の多くの異なる変異が、天然エフェクターとほとんど同一の活性を有するエフェクターをコードすることが認識されよう。エフェクター分子及び抗体は、上記の化学的手段又は組換え手段によってコンジュゲートされ得る。化学的修飾には、例えば、タンパク質化学の技術分野において周知の方法によって、直接的に又は連結化合物を介して、エフェクター分子と抗体とを互いに連結することを目的とした、誘導体化が含まれる。共有結合による付着方法と非共有結合による付着方法との両方を、本発明のヒト化抗体内で用いることができる。
【０１０８】
エフェクター分子を抗体に付着させるための手順は、抗体に付着させる部分の化学的構造に従って変化する。ポリペプチドは、典型的には、様々な官能基、例えば、カルボン酸基（ＣＯＯＨ）、遊離アミン基（−ＮＨ２）、又はスルフヒドリル基（−ＳＨ）を含有し、これらは、エフェクター分子の結合をもたらすための、抗体上の適切な官能基との反応に利用可能である。或いは、抗体は、例えば、Pierce Chemical Company社、Rockford Illから入手可能なものなどの多くのリンカー分子のいずれかの付着によって、さらなる反応性官能基を曝露するか又は付着させるように誘導体化することができる。
【０１０９】
リンカーは、抗体とエフェクター分子との両方への共有結合を形成し得る。適切なリンカーは、当業者に周知であり、限定はしないが、直鎖状又は分岐状の炭素リンカー、複素環炭素リンカー、又はペプチドリンカーが含まれる。抗体及びエフェクター分子がポリペプチドである場合、リンカーは、それらの側基を介して（例えば、システインへのジスルフィド連結を介して）、構成成分であるアミノ酸に接合し得る。しかし、好ましい実施形態において、リンカーは、末端アミノ酸のα炭素のアミノ基及びカルボキシル基に接合する。
【０１１０】
いくつかの状況において、免疫コンジュゲートがその標的部位に達したときには、エフェクター分子を抗体から遊離させることが望ましい。したがって、これらの状況において、免疫コンジュゲートは、標的部位の付近で切断可能である連結を含む。抗体からエフェクター分子を放出するためのリンカーの切断は、免疫コンジュゲートが標的細胞内若しくは標的部位の付近のいずれかで受ける酵素活性又は条件によって促進され得る。標的部位が腫瘍である場合、腫瘍部位で存在する条件下（例えば、腫瘍関連酵素又は酸性ｐＨに曝露される場合）で切断可能なリンカーを用いることができる。
【０１１１】
本発明のエフェクター分子及び抗体の例示的な化学的修飾にはまた、周知の方法に従った、循環系における滞留時間を伸ばすため及び免疫原性を低減させるための、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、polyethylene glycol）での誘導体化が含まれる（例えば、Lisi, et al., Applied Biochem. 4:19 (1982)、Beauchamp, et al., Anal Biochem. 131:25 (1982)、及びGoodson, et al., Bio/Technology 8:343 (1990)を参照されたい）。
【０１１２】
本発明は、能動免疫化の実施形態と受動免疫化の実施形態との両方において用いるためのワクチンを考慮する。ワクチンとしての使用に適していることが提案される免疫原性組成物は、本明細書において開示される様式で調製される免疫原性Ｔ細胞刺激ペプチドから、最も容易に直接的に調製することができる。最終的なワクチン接種材料は、望ましくない低分子量の分子を除去するために広く透析され、且つ／又は所望の媒体内にさらに即座に製剤するために凍結乾燥される。本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物及び方法は、細胞ワクチンを製造するために用いられ、例えば、抗体の抗原送達抗ランゲリン結合部分が、抗原（単数又は複数）を抗原提示細胞に向かわせるために用いられ、前記細胞は次に、提示のために、抗原をＭＨＣタンパク質上に「負荷」する。細胞ワクチンは、したがって、抗原を負荷された抗原提示細胞を生成するために本発明の組成物を用いて負荷されている抗原提示細胞である。
【０１１３】
ワクチンが抗ランゲリン結合タンパク質自体である場合、例えば、完全抗体又はその結合断片である場合、これらの「活性原料」は、当技術分野、例えば、関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる米国特許第４，６０８，２５１号明細書、米国特許第４，６０１，９０３号明細書、米国特許第４，５９９，２３１号明細書、米国特許第４，５９９，２３０号明細書、及び米国特許第４．５７８，７７０号明細書において理解されている方法を用いてワクチン内に作製され得る。典型的には、このようなワクチンは、注入物質として、例えば、液体溶液若しくは液体懸濁液、又は注入の前に液体に再懸濁するのに適した固体形態として調製される。調製物はまた、乳化され得る。活性免疫原性原料は、多くの場合、薬学的に許容され活性原料と適合可能である賦形剤と混合される。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組合せである。さらに、必要に応じて、ワクチンは、少量の補助物質、例えば、湿潤剤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、又はワクチンの有効性を増強させるアジュバントを含有し得る。
【０１１４】
ワクチンは、投薬製剤に適合する様式で、及び治療上効果的であり免疫原性である量で投与される。投与される量は、治療する対象に依存し、これは例えば、個体の免疫系の、免疫応答を生じさせる能力を包含する。投与する必要がある細胞又は活性原料の正確な量は、施術者の判断に依存する。しかし、適切な投薬範囲は、細胞ワクチンでは、およそ数千個の細胞（から数百万個の細胞）である。したがって、標準的なエピトープ又はエピトープ送達ワクチンでは、ワクチンは、ワクチン接種当たり数百マイクログラムの活性原料であり得る。初回投与及び追加注射のための適切なレジメンもまた可変であるが、初回投与の後に次の接種又は他の投与を行うことが代表的である。
【０１１５】
適用の様式は広く変化し得るが、しかし、本明細書における特定の実施形態は、静脈内に、又は腫瘍若しくは感染の部位に直接的に送達される可能性が最も高い。それでも、ワクチンを投与するための従来のいかなる方法も適用可能である。ワクチンの投薬量は、投与経路に依存し、宿主のサイズに従って変化する。
【０１１６】
多くの場合において、複数回のワクチン投与、例えば、１週間に１回又は２週間に１回提供される４〜６回のワクチン接種が望ましい。通常のワクチン接種レジメンは、多くの場合、２〜１２週間の間隔で、又は３〜６週間の間隔で行われる。１〜５年間、通常は３年間の間隔での周期的な追加投与が、免疫応答の防御レベルを維持するため、又は寛解若しくは再感染の可能性がある際に、望ましい場合がある。免疫化の過程は、最も一般的にはインビトロで行われる、アッセイ、例えばＴ細胞の活性化、サイトカインの分泌、又はさらに抗体の生産についてのアッセイによって追跡され得る。これらの免疫応答アッセイは周知であり、広範な特許において見ることができ、また本明細書において教示されている。
【０１１７】
本発明のワクチンは、核酸ベクターが用いられるか、最終精製タンパク質が用いられるか、又は最終ワクチン形態が用いられるかに応じて、１又は２以上の「単位用量」で提供され得る。単位用量は、その投与に関連して、すなわち適切な経路及び治療レジメンに関連して、所望の応答をもたらすように計算された、所定量の治療用組成物を含有すると定義される。投与される量並びに特定の経路及び製剤は、臨床分野の当業者の技術の範囲内である。治療される対象はまた、特に対象の免疫系の状態及び所望の防御が評価され得る。単位用量は、単回注入として投与される必要はないが、一定期間にわたる連続的な点滴を包含し得る。本発明の単位用量は、都合良くは、体重１ｋｇ当たりのＤＮＡ（又は体重１Ｋｇ当たりのタンパク質）に関して記載され得、体重１ｋｇ当たりのＤＮＡ又はタンパク質当たり、約０．０５、０．１０、０．１５、０．２０、０．２５、０．５、１、１０、５０、１００、１０００、又は１０００超のｍｇ範囲が投与される。
【０１１８】
同様に、送達される抗ランゲリン抗原ワクチンの量は、体重１ｋｇ当たり約０．２〜約８．０ｍｇで変化し得る。したがって、特定の実施形態において、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．８ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、４．０ｍｇ、５．０ｍｇ、５．５ｍｇ、６．０ｍｇ、６．５ｍｇ、７．０ｍｇ、及び７．５ｍｇのワクチンが、インビボで個体に送達され得る。投与されるワクチンの投薬量は、治療される対象の体重及び身体状態、並びに投与経路及び治療の頻度に大きく依存する。リポソーム送達ベクター又はウイルス送達ベクターに事前に結合した裸のポリヌクレオチドを含む医薬組成物は、１μｇ〜１ｍｇのポリヌクレオチドから１μｇ〜１００ｍｇのタンパク質にわたる量で投与され得る。したがって、特定の組成物は、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３．０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、又は１００ｍｇのベクターに独立して結合した、約１μｇ、５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、又は１０００μｇの間のポリヌクレオチド又はタンパク質を含み得る。
【０１１９】
本発明の抗体は、検出可能な標識に共有結合又は非共有結合によって連結していてもよい。このような使用に適した検出可能な標識には、分光的方法、光化学的方法、生化学的方法、免疫化学的方法、電気的方法、光学的方法、又は化学的方法によって検出可能ないかなる組成物も含まれる。本発明における有用な標識には、磁気ビーズ（例えば、DYNABEADS（商標））、蛍光染料（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質など）、放射性標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、又は３２Ｐ）、酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びＥＬＩＳＡにおいて一般に用いられる他の酵素）、及び比色分析標識、例えばコロイド金又は着色ガラスビーズ若しくは着色プラスチックビーズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）が含まれる。
【０１２０】
このような標識を検出する方法は、当業者に周知である。したがって、例えば、放射性標識は、写真用フィルム又はシンチレーションカウンターを用いて検出することができ、蛍光マーカーは、発光を検出するための光検出器を用いて検出することができる。酵素標識は、典型的には、酵素に基質を提供すること、及び基質に対する酵素の作用によって生産される反応生成物を検出することによって検出され、比色分析標識は、着色した標識を単純に視覚化することによって検出される。
【０１２１】
本発明の抗体及び／又は免疫コンジュゲート組成物は、非経口投与、例えば静脈内投与又は体腔内への投与に特に有用である。投与のための組成物は、一般的には、薬学的に許容される担体内、好ましくは水性担体内に溶解された抗体及び／又は免疫コンジュゲートの溶液を含む。様々な水性担体、例えば緩衝生理食塩水などを用いることができる。これらの溶液は無菌であり、通常、望ましくない物質を有さない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。組成物は、近似した生理学的条件のための要求に応じて、薬学的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有し得る。これらの製剤における融合タンパク質の濃度は、広く変化し得、選択される特定の投与態様及び患者の要求に従って、流体の容量、粘度、体重などに主に基づいて選択される。
【０１２２】
したがって、静脈内投与のための本発明の典型的な薬学的免疫コンジュゲート組成物は、１日当たり１患者当たり約０．１〜１０ｍｇである。１日当たり１患者当たり０．１から最大約１００ｍｇの投薬量が用いられ得る。投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に知られているか又は自明であり、REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE, 19TH ED., Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1995)などの刊行物においてさらに詳細に記載されている。
【０１２３】
本発明の組成物は、治療的治療のために投与することができる。治療的適用では、組成物は、疾患及びその合併症を治癒するか又は少なくとも部分的に止めるために十分な量で、疾患に罹患している患者に投与される。これを達成するために適した量は、「治療上効果的な用量」と定義される。この使用に有効量は、疾患の重症度及び患者の健康の全身状態に依存する。有効量の化合物は、症候（単数又は複数）の自覚的な軽減、又は臨床医若しくは他の適格な観察者によって認められる客観的に同定可能な改善をもたらすものである。
【０１２４】
組成物の単回投与又は複数回投与は、患者によって必要とされ寛容される投薬量及び頻度に応じて投与される。いかなる事象においても、組成物は、患者を効果的に治療するために十分な量の本発明のタンパク質を提供するべきである。好ましくは、投薬量は、１回投与されるが、治療的結果が達成されるまで、又は副作用によって治療の中断を余儀なくされるまで、定期的に適用され得る。通常、用量は、患者に対する許容不可能な毒性をもたらすことなく、疾患の症候又は兆候を治療又は改善するために十分なものである。
【０１２５】
本発明の免疫コンジュゲート組成物の制御放出非経口製剤は、インプラント、油性注入、又は粒子系として作製することができる。タンパク質送達系の概要については、参照することによって本明細書に組み込まれるBanga, A. J., THERAPEUTIC PEPTIDES AND PROTEINS: FORMULATION, PROCESSING, AND DELIVERY SYSTEMS, Technomic Publishing Company, Inc., Lancaster, Pa., (1995)を参照されたい。粒子系には、ミクロスフェア、マイクロ粒子、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノスフェア、及びナノ粒子が含まれる。マイクロカプセルは、治療用タンパク質を中心核として含有する。ミクロスフェアにおいて、治療物質は、粒子の全体にわたって分散している。約１μｍよりも小さい粒子、ミクロスフェア、及びマイクロカプセルは通常、それぞれナノ粒子、ナノスフェア、及びナノカプセルと呼ばれる。毛細管はおよそ５μｍの直径を有し、そのため、ナノ粒子のみが静脈内投与される。マイクロ粒子は、典型的には、約１００μｍの直径であり、皮下又は筋肉内に投与される。
【０１２６】
ポリマーは、本発明の免疫コンジュゲート組成物のイオン制御された放出のために用いることができる。制御された薬剤送達において用いるための様々な分解可能及び分解不可能なポリマーマトリクスは、当技術分野において知られている（Langer, R., Accounts Chem. Res. 26:537-542 (1993)）。例えば、ブロックコポリマーであるpoloxamer４０７（登録商標）は、粘性はあるが可動性の、低温の液体として存在するが、体温で半固体ゲルを形成し、ヒドロキシアパタイトは、タンパク質の制御放出のためのマイクロ担体として用いられており、且つ／又は、リポソームは、液体カプセル化薬剤の制御放出及び薬剤標的化のために用いられ得る。治療用タンパク質を制御送達するための多くのさらなる系が知られている。例えば、それぞれの関連する部分が参照することによって本明細書に組み込まれる米国特許第５，０５５，３０３号明細書、米国特許第５，１８８，８３７号明細書、米国特許第４，２３５，８７１号明細書、米国特許第４，５０１，７２８号明細書、米国特許第４，８３７，０２８号明細書、米国特許第４，９５７，７３５号明細書及び米国特許第５，０１９，３６９号明細書、米国特許第５，０５５，３０３号明細書、米国特許第５，５１４，６７０号明細書、米国特許第５，４１３，７９７号明細書、米国特許第５，２６８，１６４号明細書、米国特許第５，００４，６９７号明細書、米国特許第４，９０２，５０５号明細書、米国特許第５，５０６，２０６号明細書、米国特許第５，２７１，９６１号明細書、米国特許第５，２５４，３４２号明細書、並びに米国特許第５，５３４，４９６号明細書を参照されたい。
【０１２７】
本発明の免疫コンジュゲートの様々な使用の中には、融合タンパク質の毒性作用によって消失し得る、特異的ヒト細胞により生じる様々な病状が含まれる。例えば、ヒト化された抗ランゲリン抗体では、例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びその結合断片が、本明細書において開示される。例えば、免疫コンジュゲートの１つの適用は、ランゲリンを発現する悪性細胞の治療である。例示的な悪性細胞には、慢性リンパ急性白血病及び有毛細胞白血病のものが含まれる。
【０１２８】
別の実施形態において、本発明は、１又は２以上のＴ細胞エピトープ又はＢ細胞エピトープにコンジュゲートしているか又は前記細胞との融合タンパク質の形態である抗原、例えばランゲリン、又はその免疫反応性断片を送達するためのキットを提供する。本明細書において用いられる「生物学的試料」は、抗原を含有する生物学的組織又は生体液の試料である。このような試料には、限定はしないが、生検から得られる組織、血液、及び血球（例えば、白血球）が含まれる。好ましくは、細胞はリンパ球であり、例えば樹状細胞である。生物学的試料にはまた、組織切片、例えば、組織学的目的で採取された凍結切片が含まれる。生物学的試料は、典型的には、多細胞性真核生物、好ましくは、ラット、マウス、ウシ、イヌ、モルモット、又はウサギなどの哺乳動物から、より好ましくは霊長類、例えばマカク、チンパンジー、又はヒトから得られるものである。最も好ましくは、試料はヒトから得られるものである。本発明の抗体はまた、インビボで、例えばインビボイメージングのための診断ツールとして用いることができる。
【０１２９】
キットは、典型的には、本発明の抗体（又はその結合断片）をコードする核酸配列と、１又は２以上のフレームワーク部分又はカルボキシ末端にあるマルチクローニング部位とを含み、前記フレームワーク部分又はマルチクローニング部位に、１又は２以上の抗原についてのコード配列を挿入することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化された抗ランゲリンＦｖ断片、例えばｓｃＦｖ断片又はｄｓＦｖ断片である。さらに、キットは、典型的には、（例えば、自己樹状細胞であり得る樹状細胞での免疫化の前に樹状細胞内へ負荷するために）本発明の抗体を用いる方法を開示する教材を包含する。キットはまた、キットが設計された目的である特定の適用を容易にするためのさらなる成分を包含し得る。したがって、例えば、キットは、標識を検出する方法（例えば、酵素標識のための酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、ヒツジ抗マウスＨＲＰなどの適切な二次標識など）をさらに含有し得る。キットは、特定の方法を実施するために通常用いられる緩衝液及び他の試薬をさらに包含し得る。このようなキット及び適切な内容物は、当業者に周知である。
【０１３０】
本発明のための、使用の別の組において、本発明の抗体によって標的化される免疫コンジュゲートを、標的化された細胞を培養物中の細胞集団から除去するために用いることができる。例えば、Ｔ細胞の特異的な集団が好ましい場合、本発明の免疫コンジュゲートを、進行している免疫応答の逆の影響を有するＴ細胞集団を強化するために用いることができる。したがって、例えば、癌を有する患者から培養された細胞は、癌、ウイルス、又は他の病原体に対する免疫応答を引き起こす抗原に対する標的化部分として本発明の抗体を用いて抗原負荷された樹状細胞を患者に提供することによって、癌細胞が除去されている可能性がある。同様に、免疫コンジュゲートは、調節性Ｔ細胞の集団を増大させるため、又は細胞傷害性Ｔ細胞応答に向かう若しくは当該応答から離れる免疫応答を駆動するため、或いはさらにＢ細胞応答を駆動するために用いることができる。
【０１３１】
ＤＣサブセットの差次的な機能：本発明者らは、ＣＤ３４＋造血前駆細胞に由来するＬＣ及びｉｎｔＤＣが、リンパ球を活性化させる能力において異なることを実証した（図１）。ｉｎｔＤＣは、免疫グロブリン分泌血漿細胞への非変性Ｂ細胞の分化、及び濾胞性ヘルパーＴ細胞（ＴＦＨ、follicular helper T cell）へのＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を誘発し（Caux C, Massacrier C, Vanbervliet B, et al. CD34+ hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus tumor necrosis factor alpha: II. Functional analysis. Blood. 1997;90:1458-1470、Caux C, Vanbervliet B, Massacrier C, et al. CD34+ hematopoietic progenitors from human cord blood differentiate along two independent dendritic cell pathways in response to GM-CSF+TNF alpha. J Exp Med. 1996;184:695-706）、一方、ＬＣは、細胞傷害性ＣＤ８＋リンパ球（ＣＴＬ、cytotoxic lymphocyte）の特に効率的な活性化因子である。さらに、間質性ＤＣのみがＩＬ−１０を生産し、その酵素活性は、Ｔ細胞に提示されるペプチドの選択の基礎であり得るが、同一ではない。実際、異なる酵素は、ＨＩＶ  ｎｅｆタンパク質で示されるように、抗原を異なるペプチドレパートリーに分解する可能性が高い（Seifert U, Maranon C, Shmueli A, et al. An essential role for tripeptidyl peptidase in the generation of an MHC class I epitope. Nat Immunol. 2003;4:375-379）。これによって、ＭＨＣ／ペプチド複合体の異なる組が提示され、且つ区別可能な抗原特異的Ｔ細胞レパートリーがもたらされる。Dudziak D, et al.（Dudziak D, Kamphorst AO, Heidkamp GF, et al. Differential antigen processing by dendritic cell subsets in vivo. Science. 2007;315:107-111）は、サブセット特異的レクチンであるデクチン１を介してＤＣに送達された抗原はＭＨＣクラスII上で差次的に提示されたが、ＤＥＣ−２０５を介して提示されたものは主にＭＨＣクラスＩ上にあり、この差はＤＣサブセットに内在的なものであったことを示している。
【０１３２】
ＤＣサブセットは、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答の決定において重要な役割を有する。極性ＤＣ又は区別可能なＤＣサブセットのいずれかは、免疫応答のタイプ（タイプ１とタイプ２）を決定する異なるシグナルをＴ細胞に提供する（Shortman K, Liu YJ. Mouse and human dendritic cell subtypes. Nature Rev Immunol. 2002;2:151-161）。したがって、マウスにおいて、脾臓ＣＤ８＋ＤＣは、ＩＬ−１２を伴うプロセスでＴｈ１サイトカインを形成するために、非変性ＣＤ４＋Ｔ細胞をプライミングするが、脾臓ＣＤ８＋ＤＣは、Ｔｈ２サイトカインを形成するために非変性ＣＤ４＋Ｔ細胞をプライミングする（Maldonado-Lopez R, De Smedt T, Michel P, et al. CD8alpha+ and CD8alpha- subclasses of dendritic cells direct the development of distinct T helper cells in vivo. J Exp Med. 1999;189:587-592、Pulendran B, Smith JL, Caspary G, et al. Distinct dendritic cell subsets differentially regulate the class of immune response in vivo. ProcNatlAcadSci. 1999;96:1036-1041）。さらに、ＤＣが大腸菌（Escherichia coli）リポ多糖（ＬＰＳ、lipopolysaccharide）で活性化される場合にはＩＬ−１２の生産及びＴｈ１細胞の分極が誘発されるが、ＤＣがポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）のＬＰＳに曝露される場合にはＩＬ−１２の生産及びＴｈ２細胞の分極が誘発されないことによって示されるように、同一のＤＣから得られる異なるシグナルは、異なるＴ細胞分極を誘発し得る（Pulendran B, Kumar P, Cutler CW, Mohamadzadeh M, Van Dyke T, Banchereau J. Lipopolysaccharides from distinct pathogens induce different classes of immune responses in vivo. J Immunol. 2001;167:5067-5076）。ＣＤ４０−リガンド（ＣＤ４０Ｌ、CD40-ligand）で活性化されたＤＣは、ＩＬ−１２依存性のメカニズムを介してＴｈ１応答をプライミングし、一方、ＩＬ−３及びＣＤ４０Ｌで活性化されたｐＤＣは、ごく少量のＩＬ−１２を分泌し、Ｔｈ２応答をプライミングすることが示されている（Rissoan MC, Soumelis V, Kadowaki N, et al. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation. Science. 1999;283:1183-1186）。Soares, et al.はまた、異なるレクチンを発現する２つのＤＣサブセットが、区別可能なメカニズムによってインビボでＴｈ１／Ｔｈ２バランスに差次的に影響する、本来の傾向を有することを報告した。さらに興味深いことには、本発明者らは、同一の抗原を同一のタイプのＤＣに、しかし異なるＤＣ受容体を介して送達することが、異なる質のＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することを見出した（予備データを参照されたい）。したがって、ＤＣサブセットとＤＣが曝露される活性化シグナルとの両方は、免疫の結果の性質を決定する重要な因子である。
【０１３３】
図２  −  抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体は、細胞表面ランゲリンに結合するそれらの能力を保持している。ＣＨＯ−Ｓ細胞に、完全長ヒトランゲリンの発現を指示するプラスミドを安定的に形質転換した。純粋な組換え抗ランゲリン２Ｇ３又は１５Ｂ１０マウスＶ領域−ヒトＩｇＧ４キメラ抗体、又は鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１ドメイン、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株（ＨＡ１−１）から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｈｉｐｏ５）へのＣ末端融合を有する同一の抗体を、ランゲリン−ＣＨＯ細胞に対して適定した。氷上でインキュベートした後、細胞を洗浄し、抗ヒトＦｃ−ＰＥ試薬で処理した。氷上でさらにインキュベートした後、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳアレイ機器上で分析して、細胞結合型の蛍光の量を決定した（形質転換されていないＣＨＯ−Ｓ細胞と比較したＭＦＩ％として表す）。
【０１３４】
このデータは、Ｈ鎖のＣ末端への抗原の付加が、細胞表面ランゲリンへの抗体の結合に影響しないことを示し、また、これらの抗ランゲリン抗体が、ヒトランゲリンを有する細胞の表面に抗原をもたらすための効果的な媒体として役立つことを実証する。
【０１３５】
図３  −  ヒト前立腺特異的癌抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体の、健康なドナーの抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡張を引き起こす能力の実証。図３ａは、ＣＤ４０を介するＤＣへのＰＳＡの送達を比較し、ランゲリンは、ＩＦＮγを生産するＰＳＡ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘発する。健康なドナーのＣＤ４＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ４０−ＰＳＡ又は抗ランゲリン−ＰＳＡで標的化したＩＦＮＤＣと８日間にわたって共培養した。細胞をＰＳＡの個別のペプチド（１５ｍｅｒの５９ペプチド）（５μＭ）で刺激した。２日後、ＩＦＮγを測定するために培養上清を分析した。点線は、ペプチドなしでの平均±ＳＤの上限を表し、このラインを超える応答は有意であると考えられる。図３ｂは、ペプチド特異的細胞内ＩＦＮγ＋細胞の頻度を測定するためにＣＤ４＋Ｔ細胞を染色したことを示す。
【０１３６】
これらのデータは、癌抗原を有する抗ランゲリンワクチンが、正常な個体の免疫細胞を用いて、強力な抗原特異的抗ＣＤ４＋Ｔ細胞応答をインビトロでプライミングし得ることを示す。このインビトロでの培養系において、この作用物質は、抗ＣＤ４０に基づいたワクチンと同程度に強力であり、これらのＤＣは両方の受容体を発現する。インビボでは、抗ランゲリンに基づいたワクチンは、ランゲルハンス細胞（ＬＣ、Langerhans cell）に対してのみ抗原を標的化し、最近の研究に基づくと［Immunity, Volume 29, Issue 3, 497-510, 19 September 2008］、ＬＣは、ヘルパーＴ２（Ｔｈ２、T helper 2）細胞のサイトカインを分泌するＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を優先的に誘発し、且つ非変性ＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミング及びクロスプライミングで特に効率的であり、後者の特徴が、抗癌ＣＴＬ応答を引き起こすために特に望ましい。逆に、抗ＣＤ４０標的化作用物質は、インビボで、非常に広範囲のＡＰＣに抗原を送達する。
【０１３７】
図４  −  ヒト前立腺特異的癌抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体の、前立腺癌患者の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を引き起こす能力の実証。抗ＣＤ４０−ＰＳＡで標的化されたＤＣ及びＤＣに標的化された抗ランゲリン−ＰＳＡは、ＰＳＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発する。（ａ）ＩＦＮＤＣを、１ｍｇの、ＰＳＡとのｍＡｂ融合タンパク質で標的化した。精製された自己ＣＤ８＋Ｔ細胞を、１０日間にわたって共培養した。細胞を抗ＣＤ８及びＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマーで染色した。細胞は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性の前立腺癌患者から得る。ＰＳＡテトラマー試薬は、ＰＳＡのKLQCVDLHVペプチドを有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体と特異的に反応する、Ｔ細胞を有するＴ細胞受容体を同定した。
【０１３８】
これらのデータは、癌抗原を有する抗ランゲリンワクチンが、前立腺癌の免疫細胞を用いて、強力な抗原特異的抗ＣＤ８＋Ｔ細胞応答をインビトロでプライミングし得ることを示す。このインビトロの培養系において、この作用物質は、抗ＣＤ４０に基づいたワクチンと同程度に強力であり、これらのＤＣは両方の受容体を発現する。インビボでは、抗ランゲリンに基づいたワクチンは、ランゲルハンス細胞（ＬＣ）に対してのみ抗原を標的化し、最近の研究に基づくと［Immunity, Volume 29, Issue 3, 497-510, 19 September 2008］、ＬＣは、ヘルパーＴ２（Ｔｈ２）細胞のサイトカインを分泌するＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を優先的に誘発し、且つ非変性ＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミング及びクロスプライミングで特に効率的であり、後者の特徴が、抗癌ＣＴＬ応答を引き起こすために特に望ましい。逆に、抗ＣＤ４０標的化作用物質は、インビボで、非常に広範囲のＡＰＣに抗原を送達する。
【０１３９】
図５  −  抗ランゲリンは、表皮ＬＣを優先的に標的化する。ＨＬＡ−Ａ２０１ドナーの精製された皮膚ＤＣサブセット（表皮ＬＣ、真皮ＣＤ１ａ＋ＤＣ、及び真皮ＣＤ１４＋ＤＣ）を、８ｎＭの抗ランゲリン、ＩｇＧ４コンジュゲートｍＡｂ、遊離ＦｌｕＭＰと共に、又は抗原を伴わずに、３時間にわたって培養した。同系の精製されたＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗原でパルスされたＤＣと共に、１：２０のＤＣ／Ｔ比率で培養した。２４時間後に、ＣＤ４０Ｌ（１００ｎｇ／ｍｌ、R&D）を培養物に添加した。ＣＤ４０のライゲーションは、ＤＣによる交差提示を増強する。共培養物を３７℃で８〜１０日間にわたってインキュベートした。ＩＬ−２（１０Ｕ／ｍｌ）を３日目に添加した。ＦｌｕＭＰ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の応答を、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマーを用いて評価した。
【０１４０】
パネル図５Ａにおけるデータ：２Ｄ  ＦＡＣのプロットは、特異的ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）テトラマーの染色によって評価される、ＦｌｕＭＰ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を示し、これは、抗ランゲリンを介する抗原の標的化が、ＬＣを介してのみ抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を引き起こすことを実証し、これは、遊離ＦｌｕＭＰなどの他の抗原送達方法よりも堅固である。ある程度の応答は、真皮ＣＤ１ａ＋ＤＣによって、この細胞の、培養物においてランゲリンを上方調節する能力に従って、誘発される。図５Ｂは、平均±ｓｄ、Ｎ＝３を示すグラフのデータをまとめたものである。図５Ｃ。ランゲリン−ＦｌｕＭＰ、対照ＩｇＧ４−ＦｌｕＭＰ、遊離ＦｌｕＭＰと共に、又は抗原を伴わずに、８日間にわたって培養されたヒトＬＣの培養上清におけるＩＦＮ−γレベル。
【０１４１】
図６は、ヒト皮膚ＤＣによるランゲリンの差次的な発現を示す。図６Ａは、単離されたヒト皮膚ＤＣサブセットでのランゲリンの発現を示す。データは、ヒトＬＣではランゲリンの発現が制限されているが、真皮ＣＤ１ａ＋ＤＣ又は真皮ＣＤ１４＋ＤＣでは制限されていないことを示す。図６Ｂは、３つの異なる標本から単離された皮膚ＤＣによるランゲリンの遺伝子発現分析を示す。ＲＮＡを、分類された移動型の皮膚ｍＤＣサブセットである表皮ＬＣ、真皮ＣＤ１ａ＋ＤＣ、及び真皮ＣＤ１４＋ＤＣから調製した。図６Ｃは、ランゲリン及びＨＬＡ−ＤＲｍＡｂを用いる正常なヒト皮膚の免疫蛍光染色を示す。
【０１４２】
図７  −  抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体（ハイブリドーマＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２により生産された）は、ヒトランゲルハンス細胞を特異的に染色する。ヒト上皮層を調製し、Alexa568［赤］で標識された抗ランゲリン１５Ｂ１０及び緑に標識されている市販されている抗ＨＬＡ抗体で染色した。一番上の画像は、これらの２つのマーカーの共局在化を強調している、重ね合わされた赤及び緑の画像を示す。
【０１４３】
構築物。
ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｋ  −  それぞれ、マウス抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体のｃＤＮＡの軽鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCCGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAAATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGACTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAACAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG（配列番号１）
DVVMTQTPLSLPVRLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMNSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号２）
【０１４４】
ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ  −  それぞれ、ヒトＩｇＧ４に融合したマウス抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体の重鎖可変領域のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGGAATGGAGGATCTTTCTCTTCATCCTGTCAGGAACTGCAGGTGTCCACTCCCAGGTTCAGCTGCGGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTTACTGACTATGTTATAAGTTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGAAGTGGTTATTCTTTCTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAACCTACTATAACTACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCTGAGTTCGAAGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号３）
QVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCATYYNYPFAYWGQGTLVTVSAAKTTGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKAS（配列番号４）
【０１４５】
ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｌ（ハイブリドーマＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３によって生産される）−それぞれ、マウス抗ランゲリン２Ｇ３抗体のｃＤＮＡの軽鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGGCCTGGATTTCACTTATACTCTCTCTCCTGGCTCTCAGCTCAGGGGCCATTTCCCAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTACCAACAACCGAGTTTCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGCCAGCCCAAGTCTTCGCCATCAGTCACCCTGTTTCCACCTTCCTCTGAAGAGCTCGAGACTAACAAGGCCACACTGGTGTGTACGATCACTGATTTCTACCCAGGTGTGGTGACAGTGGACTGGAAGGTAGATGGTACCCCTGTCACTCAGGGTATGGAGACAACCCAGCCTTCCAAACAGAGCAACAACAAGTACATGGCTAGCAGCTACCTGACCCTGACAGCAAGAGCATGGGAAAGGCATAGCAGTTACAGCTGCCAGGTCACTCATGAAGGTCACACTGTGGAGAAGAGTTTGTCCCGTGCTGACTGTTCCTAG（配列番号５）
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS（配列番号６）
【０１４６】
ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−それぞれ、マウス抗ランゲリン２Ｇ３抗体のｃＤＮＡの重鎖のヌクレオチド配列及び成熟タンパク質アミノ酸配列。可変領域の残基には下線が引かれている。
ATGACATTGAACATGCTGTTGGGGCTGAAGTGGGTTTTCTTTGTTGTTTTTTATCAAGGTGTGCATTGTGAGGTGCAGCTTGTTGAGTCTGGTGGAGGATTGGTGCAGCCTAAAGGGTCATTGAAACTCTCATGTGCAGCCTCTGGATTAACCTTCAATATCTACGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTGGAATGGGTTGCTCGCATAAGAAATAAAAGTAATAATTATGCAACATATTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTCACCATCTCCAGAGATGATTCACAAAGCTTGCTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGGACGGGACTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号７）
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYCVGRDWFDYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGKAS（配列番号８）
【０１４７】
Ｃ８４  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−ドッケリン］  このＨ鎖ドッケリン融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000003
【０１４８】
Ｃ８４重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、ドッケリンには下線が引かれている。
2013504599.tif 000004
【０１４９】
Ｃ８５  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−Ｆｌｅｘ−ＦｌｕＨＡ１−１−６ｘＨｉｓ］このＨ鎖−Ｆｌｕ  ＨＡ１−１融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000005
【０１５０】
Ｃ８５重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、Ｆｌｕ  ＨＡ１−１には下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000006
【０１５１】
Ｃ８６  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−Ｆｌｅｘ−ＦｌｕＨＡ５−１−６ｘＨｉｓ］このＨ鎖−Ｆｌｕ  ＨＡ５−１融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000007
【０１５２】
Ｃ８６重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、Ｆｌｕ  ＨＡ５−１には下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000008
【０１５３】
Ｃ８０４  ｒＡＢ−ｃｅｔＨＳ−ｐｕｒｏ［ｍ抗ランゲリン２Ｇ３Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧＫ−Ｃ−Ｆｌｅｘ−ｈＰＳＡ］このＨ鎖−ＰＳＡ融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000009
【０１５４】
Ｃ８０４重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、ＰＳＡには下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000010
【０１５５】
Ｃ８７  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＳＬＡＭＬ−Ｖ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｆｌｅｘ−ＦｌｕＨＡ５−１−６ｘＨｉｓ］このＨ鎖−Ｆｌｕ  ＨＡ５−１融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000011
【０１５６】
Ｃ８７重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、Ｆｌｕ  ＨＡ５−１には下線が引かれている。
2013504599.tif 000012
【０１５７】
Ｃ８８  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＳＬＡＭＬ−Ｖ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−ドッケリン］このＨ鎖−ドッケリン融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000013
【０１５８】
Ｃ８８重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、ドッケリンには灰色の影が付いている。柔軟なリンカーの接合配列には下線が引かれている。
2013504599.tif 000014
【０１５９】
Ｃ８９  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＳＬＡＭＬ−Ｖ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｆｌｅｘ−ＦｌｕＨＡ１−１−６ｘＨｉｓ］このＨ鎖−Ｆｌｕ  ＨＡ１−１融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000015
【０１６０】
Ｃ８９重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、Ｆｌｕ  ＨＡ１−１には下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000016
【０１６１】
Ｃ２４６  ｒＡＢ−ｐＩＲＥＳ２［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＳＬＡＭＬ−Ｖ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｖｉｒａｌｇａｇ］このＨ鎖−ｇａｇ融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000017
【０１６２】
Ｃ８９重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、Ｇａｇ  ｐ２４には下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000018
【０１６３】
Ｃ７４２  ｒＡＢ−ｃｅｔＨＳ−ｐｕｒｏ［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−Ｆｌｅｘ−ｈＰＳＡ］このＨ鎖−ＰＳＡ融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGC制限部位も同様である。
2013504599.tif 000019
【０１６４】
Ｃ７４２重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、ＰＳＡには下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000020
【０１６５】
Ｃ１０１１  ｒＡＢ−ｃｅｔＨＳ−ｐｕｒｏ［ｍ抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＬＶ−ｈＩｇＧ４Ｈ−Ｃ−Ｆｌｅｘ−ｖ１−Ｐｅｐ−ｇａｇ１７−ｆ１−ｇａｇ２５３−ｆ２−ｎｅｆ１１６−ｆ３−ｎｅｆ６６−ｆ４−ｐｏｌ１５８］、別名抗ランゲリン１５Ｂ１０Ｈ−ＨＩＰＯ５。このＨ鎖−ＨＩＶペプチド融合タンパク質のコード領域を以下に示す。開始コドン及び停止コドンは太字であり、接合性のGCTAGT制限部位も同様である。
2013504599.tif 000021
【０１６６】
Ｃ１０１１重鎖の成熟Ｈ鎖配列を以下に示す。接合配列ＡＳは太字であり、ＨＩＶペプチドには下線が引かれている。柔軟なリンカーの接合配列はイタリック体である。
2013504599.tif 000022
【０１６７】
図８は、抗原に融合した組換え抗ランゲリン抗体の結合が、ヒト及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ、non-human primate）のランゲリン細胞外ドメインタンパク質で装飾されたビーズに結合するそれらの能力を保持していることを示す。異なる色のルミネックスビーズを、ドッケリンに融合したセルロース結合タンパク質に、共有結合によって連結させた。次に、ビーズを、コヒーシンに融合したヒトランゲリン細胞外ドメイン又はコヘーシンに融合したＮＨＰ（アカゲザル）ランゲリン細胞外ドメインと混合した。ビーズを洗浄及び混合し、次に、様々な純粋な組換え抗ランゲリン２Ｇ３若しくは１５Ｂ１０マウスＶ領域−ヒトＩｇＧ４キメラ抗体、又はヒト前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）へのＣ末端融合体を有する同一の抗体、又は対照の純粋な組換え抗ＣＤ４０  １２Ｅ１２マウスＶ領域−ヒトＩｇＧ４キメラ抗体の連続希釈物と共にインキュベートした。洗浄した後、ビーズを、抗ヒトＦｃ−ＰＥ試薬と共にインキュベートし、再び洗浄し、次に、BioPlex機器で読み取って、異なる色のビーズに結合した蛍光を検出した（各ビーズタイプで見られる最大シグナルに対するＭＦＩ％として表す。
【０１６８】
図９は、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１に融合した組換え抗ランゲリン１５Ｂ１０抗体の、ＮＨＰにおいて強力な抗原特異的抗体の生産を引き起こす能力を示す。ＮＨＰに、１０Ｅ６  ｐｒ８  Ｆｌｕウイルスを筋肉内（ｉｍ、intramuscularly）に、及びＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４タンパク質を皮下（ｓｃ、subcutaneously）に注入し（第１の追加免疫）、約２カ月後に、ＮＨＰに、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４タンパク質を再び注入し（第２の追加免疫）、約６週間及び４カ月後に、ＮＨＰに、１００μｇの抗ランゲリン１５Ｂ１０  ＨＡ１−１融合タンパク質及びアジュバントとしてのポリＩＣを、又は抗ＤＣＩＲ  ＨＡ１−１融合タンパク質及びポリＩＣを、又は標準的な用量の市販されているVaccigrip  Ｆｌｕワクチン及び１０Ｅ６  ｐｒ８  Ｆｌｕウイルスを、皮内（ｉｄ、intradermal）に注入した。示された日に、血清試料を採取及びプールし（１群当たり４頭のＮＨＰ）、連続希釈物を、ビーズに基づいたアッセイによって、ＨＡ１−１特異的ＩｇＧ抗体について試験した。データは、抗ランゲリンＨＡ１−１ワクチンが、ＮＨＰにおいて強力な高力価の抗ＨＡ１−１抗体応答をもたらすことを示し、観察された力価は、Vaccigrip対照群で観察されたものよりも１〜２ｌｏｇ高かった。
【０１６９】
これらのデータは、抗ランゲリン１５Ｂ１０組換え抗体と抗ランゲリン２Ｇ３組換え抗体との両方、又は癌抗原に連結したこのような抗体が、抗原標的化ワクチンとしてのこれらの抗体の商業的開発のための非常に望ましい特性である、ＮＨＰランゲリンに対する有意な結合を保持していることを示す［これにより、ＮＨＰモデルにおける安全性及び有効性の、メカニズムに基づいた臨床前試験が可能になる］。
【０１７０】
図１０は、抗ヒトＤＣ受容体と抗原との組換え融合タンパク質が、ＮＨＰ、すなわち生インフルエンザウイルス（Ａ／ＰＲ８、Ｈ１Ｎ１）及びＨＩＶｇａｇ由来のｐ２４−ＰＬＡで０日目にｉ．ｍ．で免疫化されたアカゲザル（各群当たり４頭の動物）において抗原特異的免疫応答を誘発することを示す。２８日目に、動物を、ｐ２４−ＰＬＡ単独で追加免疫した。７７日目及び１１９日目に、各動物群を、図１８において記載されているようにして免疫化した（以下）。アカゲザルにおける抗ランゲリンＨＡ１応答  −  ＨＡペプチドでエクスビボで刺激した後にELISPOTによって測定されたＩＦＮ−γ応答。赤い矢印は、生インフルエンザウイルス（Ａ／ＰＲ８、Ｈ１Ｎ１）でのプライミング注入を示す。青の矢印は、追加免疫注入を示す。対照群（４頭の動物）は、動物ごとに、生インフルエンザウイルス及び市販のｆｌｕワクチンであるVACCIGRIPと、１００ｕｇのポリＩ：Ｃとで、ｉ．ｍ．で免疫化した。実験群（４頭の動物）は、動物ごとに、抗ＤＣＩＲ−ＨＡ１（１００μｇ／動物）と１００μｇのポリＩ：Ｃとで、ｉ．ｄ．で追加免疫した。上記のデータは、抗ランゲリンＨＡ１が、ＩＦＮγ  ELISPOTによって測定されるように、強力なＨＡ１特異的Ｔ細胞応答を引き起こしたことを示す。
【０１７１】
図１１は、抗ランゲリンＧ３抗体が、ＮＨＰランゲルハンス細胞を特異的に染色することを示す。アカゲザルの皮膚切片を調製し、抗ランゲリン２Ｇ３で染色し、次に、テキサスレッドで標識されたヤギ抗マウス試薬で染色した。細胞核をＤＡＰＩ［青］で染色した。これは、ＮＨＰのＬＣの特異的な染色を示し、このことは、この抗ヒトランゲリン抗体とＮＨＰランゲリンとの特異的な交差反応性を実証する。
【０１７２】
１５Ｂ１０．３ハイブリドーマは、ブダペスト条約のもとで、U.S. American Type Culture Collectionに寄託されており、ＰＴＡ−９８５２という寄託番号を受けており、２Ｇ３．６ハイブリドーマは、ＰＴＡ−９８５３という寄託番号を受けている。
【０１７３】
図１２は、全てポリＩ：Ｃをアジュバントとして有するか又は有さない、ｇａｇマイクロ粒子、抗ｈＩＧＧ４−ｇａｇ抗体、抗ＤＣＩＲ−ｇａｇワクチン、及び抗ランゲリン−ｇａｇ−ｐ２４ワクチンでのＮＨＰのワクチン接種における抗ＨＩＶ−ｇａｇ抗体についての抗体力価を示す。簡潔に述べると、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を免疫化し、抗ランゲリン−ｇａｇ２４抗体応答を決定した。マイクロ担体上のｇａｇ  ｐ２４又は対照抗体ｐ２４よりも、抗ランゲリン−ｇａｇｐ２４構築物で、より強力な応答が可能であることが見出された。抗ＤＣＩＲ標的化とは異なり、抗ランゲリン−Ａｇワクチン接種は、ポリＩ：Ｃアジュバントと比較的無関係であることが見出された。各曲線は個別のサルであり、アッセイは、ｐ２４に対する抗体について試験された血清希釈である。カニクイザルは、２５０ｕｇの、各抗体−ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４ワクチン又はマイクロ担体に付着したｇａｇ  ｐ２４を、ｉ．ｄ．に注入した（ｐ２４の量は、注射されたｐ２４塊の実際の量に対応するように正規化された）。次に、動物に、６週間の間隔で、さらに２回注入した。図１２のグラフは、３回目の注入の２週間後に採取された血清試料の抗原特異的な抗ｇａｇ  ｐ２４の力価についてのＥＬＩＳＡアッセイを表す。図１２は、各個別のサルについてグラフに記載された血清の連続希釈を示す［グラフの線は青で示されている］。並行サル群に、ｐ２４タンパク質とポリＩ：Ｃアジュバントとを共注入した［グラフの線は赤で示されている］。
【０１７４】
図１３  −  ランゲリンクローンに対するＦＡＣＳ分析：２９３Ｆ細胞に、ヒト、アカゲザル、及びマウスの完全長（細胞表面）ランゲリンの発現を指示するベクターを一時的に形質転換した。細胞を、純粋なモノクローナル抗体の連続希釈物で染色し、洗浄し、次に、抗マウスＩｇＧ−ＰＥコンジュゲートで対比染色し、次に再び洗浄した。細胞を、フローサイトメトリーによって分析した。データは、対照の形質転換されていない細胞と比較して、陽性の細胞表面染色シグナルをもたらす細胞％として表す。
【０１７５】
図１４  −  ２つのフォーマットでのＥＬＩＳＡ分析  −  直接的（プレートに直接的に結合した抗原、及び抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰコンジュゲートで検出される結合型抗体）及び捕捉（ニュートラアビジン−ＨＲＰ試薬で検出される、固定された濃度のビオチン化されたランゲリン細胞外ドメインタンパク質を捕捉する、プレートに結合した抗体）。ヒト、アカゲザル、及びマウスのランゲリン細胞外ドメインタンパク質についてのＥＬＩＳＡデータを示す。
【０１７６】
【表１】
2013504599.tif 000023
【０１７７】
ｍ抗ランゲリン９１Ｅ７Ｋ軽鎖配列
ATGGATTTTCAGATGCAGATTATCAGCTTGCTGCTAATCAGTGTCACAGTCATAGTGTCTAATGGAGAAATTGTGCTCACCCAGTCTCCAACCACCATGGCTGCATCTCCCGGGGAGAAGATCACTATCACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAGTTCCCATTACTTACATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGATTCTCCCCTAAACTCTTGATTTATAGGACATCCAATCTGGCTTCTGGAGTCCCAGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATTGACACCATGGAGGCTGAAGATGTTGCCACTTACTACTGCCAGCAGGGTAGTAGTATACCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG（配列番号５１）
【０１７８】
ｍ抗ランゲリン９１Ｅ７Ｋ軽鎖配列
EIVLTQSPTTMAASPGEKITITCSASSSISSHYLHWYQQKPGFSPKLLIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTIDTMEAEDVATYYCQQGSSIPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号５２）
【０１７９】
ｍ抗ランゲリン９１Ｅ７Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］重鎖
ATGAGATCACTGTTCTCTTTACAGTTACTGAGCACACAGGACCTCGCCATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCTCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGTTACTGGATGCAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGCTATACTAACTACAATCAAAGGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTGGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATACAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACTCTGCGGTCTGTTTCTGTGCAAGACGCTACTATGGTAACTACGATGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGCTCCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCCGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAAGCTAGCTGA
［太字のGCTAGCは、Ｈ鎖のＣ末端にある、抗原のインフレームの融合体である］（配列番号５３）
【０１８０】
ｍ抗ランゲリン９１Ｅ７Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］成熟Ｈ重鎖配列
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQRFKGKATLTVDTSSSTAYIQLSSLTSEDSAVCFCARRYYGNYDGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISPSPMVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS（配列番号５４）
【０１８１】
ｍ抗ランゲリン３７Ｃ１Ｋ軽鎖
ATGAGGGCCCCTGCTCAGTTTTTTGGGATCTTGTTGCTCTGGTTTCCAGGTATCAGATGTGACATCAAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCATGTATGCATCGCTGGGAGAGAGAGTCACTATTACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTAAAAGCTATTTAACTTGGTACCAGCAGAAACCATGGAAATCTCCTAAGACCCTGATCAATTATGCAACAAGCTTGGCAGATGGGGTCCCATCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGACAAGATTATTCTCTAACCATCAGCAGCCTGGAGTCTGACGATACAGCAACTTATTACTGTCTACAGCATGGTCAGAGTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAGGCTGGAGATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCGGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG（配列番号５５）
【０１８２】
ｍ抗ランゲリン３７Ｃ１Ｋ軽鎖
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIKSYLTWYQQKPWKSPKTLINYATSLADGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLESDDTATYYCLQHGQSPFTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号５６）
【０１８３】
ｍ抗ランゲリン３７Ｃ１Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］重鎖
ATGAGATCACTGTTCTCTTTACAGTTACTGAGCACACAGGACCTCGCCATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCTCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGTTACTGGATGCAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACAGGGCCTTGAGTGGACCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGCTATACTAACTACAATCAAAGGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTGGACACATCCTCCAGCACAGCCTACACACAGCTCAGCAGCCTGACGTCTGAGGACTCTGCGGTCCATTTCTGTGCAAGACGCTACTATGGTAACTACGATGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGCTCCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGGTCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号５７）
【０１８４】
ｍ抗ランゲリン３７Ｃ１Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］重鎖
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWTGEIDPSDSYTNYNQRFKGKATLTVDTSSSTAYTQLSSLTSEDSAVHFCARRYYGNYDGFAYWGQGTLVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCAAPDLLGGPSVFIFPPKVKDVLMISLSPMVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS（配列番号５８）
【０１８５】
ｍ抗ランゲリン４Ｃ７Ｋ（軽鎖）
ATGGATTTTCAAGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATCAGTGCTTCAGTCATAATGTCCAGAGGACAAATTGTTCTCTCCCAGTCTCCAGCAATCCTGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACAATGACTTGCAGGGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGCACTGGTACCAGCGGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATGCCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATCGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG（配列番号７７）
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQRKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC（配列番号７８）
【０１８６】
ｍ抗ランゲリン４Ｃ７Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］重鎖
ATGGAATGGAGCTGGGTCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAATTGCAGGTGTCCAATCCCAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTATTGACCATGATATGCACTGGGTGCAGCAGACACCTGTGTATGGCCTGGAATGGATCGGAGCTATTGATCCTGAAACTGGTGATACTGGCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCATACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGGACAGCCTACATGGAACTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAATCCCCTTCTACTATAGTAACTACAGCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGGCTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCGGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGGTACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTCTCCTGCAGTCTGGCCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAACACCTGGCCCAGCCAGACCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAAGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGTGCCCATAACACAGAACCCCTGTCCTCCACTCAAAGAGTGTCCCCCATGCGCAGACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATGGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGACGCCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAGAGCCCTCCCATCCCCCATCGAGAAAACCATCTCAAAACCCAGAGGGCCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGCAGAAGAGATGACTAAGAAAGAGTTCAGTCTGACCTGCATGATCACAGGCTTCTTACCTGCCGAAATTGCTGTGGACTGGACCAGCAATGGGCGTACAGAGCAAAACTACAAGAACACCGCAACAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTCAGAGTACAAAAGAGCACTTGGGAAAGAGGAAGTCTTTTCGCCTGCTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCTTACGACTAAGACCATCTCCCGGTCTCTGGGTAAAGCTAGCTGA（配列番号７９）
【０１８７】
ｍ抗ランゲリン４Ｃ７Ｈ［マウスＩｇＧ２ａ］重鎖
QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFIDHDMHWVQQTPVYGLEWIGAIDPETGDTGYNQKFKGKAILTADKSSRTAYMELRSLTSEDSAVYYCTIPFYYSNYSPFAYWGQGALVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCADLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCVVVDVSEDDPDAQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS（配列番号８０）
【０１８８】
この明細書において論じられるあらゆる実施形態が、本発明のあらゆる方法、キット、試薬、又は組成物に関して実施され得ることが考慮され、その逆もまた同様である。さらに、本発明の組成物は、本発明の方法を達成するために用いることができる。
【０１８９】
本明細書において記載される特定の実施形態は、例示を目的として示されており、本発明の限定として示されているわけではないことが理解されよう。本発明の主な特性は、本発明の範囲から逸脱することなく、様々な実施形態において採用され得る。当業者であれば、ただの通常の実験、すなわち本明細書において記載される具体的な手順の多くの同等物の使用を認識するか、又は確認し得よう。このような同等物は、本発明の範囲内であると考えられ、特許請求の範囲によって網羅される。
【０１９０】
本明細書において述べられる全ての刊行物及び特許出願は、本発明が関連する技術分野における当業者のレベルの指標である。全ての刊行物及び特許出願は、各個別の刊行物又は特許出願が参照することによって組み込まれることが具体的に且つ個別に示されるかのように、同程度に、参照することによって本明細書に組み込まれる。
【０１９１】
「１つの（a）」又は「１つの（an）」という単語の使用は、特許請求の範囲及び／又は明細書において「含む（comprising）」という用語と組み合わせて用いられる場合、「１つの（one）」を意味し得るが、「１又は２以上の（one or more）」、「少なくとも１つの（at least one）」、及び「１又は２以上の（one or more than one）」の意味とも一致する。特許請求の範囲における「又は（or）」という用語の使用は、開示が代替物及び「及び／又は（and/or）」のみをいうという定義をサポートしていても、代替物のみをいうことが明確に示されない限り、又は代替物が互いに矛盾しない限り、「及び／又は（and/or）」を意味するために用いられる。この出願を通して、「約（about）」という用語は、値が、デバイスの誤差、値を決定するために採用される方法、又は研究対象間に存在するばらつきの、固有のばらつきを包含することを示すために用いられる。
【０１９２】
本明細書及び請求項（単数又は複数）において用いられる場合、「含む（comprising）」（並びに含む（comprising）のあらゆる形態、例えば「含む（comprise）」及び「含む（comprises）」）、「有する（having）」（並びに有する（having）のあらゆる形態、例えば「有する（have）」及び「有する（has）」）、「包含する（including）」（並びに含む（including）のあらゆる形態、例えば「含む（includes）」及び「含む（include）」）、又は「含有する（containing）」（並びに含有する（containing）のあらゆる形態、例えば「含有する（contains）」及び「含有する（contain）」）という単語は、包括的又は無制約なものであり、さらなる列挙されていない要素又は方法ステップを排除するものではない。本明細書において用いられる場合、「から基本的になる（consisting essentially of）」という表現は、請求項の範囲を、具体的な材料又はステップ、及び特許請求の範囲に記載された発明の基本的な及び新規な特徴（単数又は複数）に実質的に影響しない材料又は方法に限定する。本明細書において用いられる場合、「からなる（consisting of）」という表現は、例えばその要素又は限定に通常伴う不純物を除いて、請求項において特定されていない、いかなる要素、ステップ、又は原料も排除する。
【０１９３】
本明細書において用いられる「又はその組合せ（or combinations thereof）」という用語は、その用語の前にある列挙された事項の全ての順列及び組合せをいう。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、又はその組合せ（A, B, C, or combinations thereof）」は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、又はＡＢＣの少なくとも１つを含むことを意図し、特定の背景において順序が重要であれば、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、又はＣＡＢも含まれる。この例に続いて、１又は２以上の事項又は用語の繰返しを含有する組合せ、例えば、ＢＢ、ＡＡＡ、ＭＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢなどが明確に含まれる。当業者であれば、背景からそうでないことが明らかでない限り、典型的に、いかなる組合せにおいても事項又は用語の数は限定されないことが理解されよう。
【０１９４】
本明細書において用いられる場合、限定はしないが、「約（about）」、「実質的な（substantial）」、又は「実質的に（substantially）」などの近似的な単語は、そのように修飾されたものが絶対的又は完全である必要はないと理解される場合に、それでも、表されている条件を示すことが当業者によって認められるほどに十分に近いと考えられる条件をいう。記載が変化し得る程度は、起こり得る変化の大きさに依存し、当業者が依然として、修飾された特性を、修飾されていない特性の所要の特徴及び可能性を依然として有すると認識するようなものである。通常、しかし前記の議論に従うが、近似的な単語、例えば「約（about）」によって修飾されている、本明細書における数値は、述べられた値から少なくとも±１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、又は１５％変化し得る。
【０１９５】
本明細書において、開示される、及び特許請求の範囲に記載される組成物及び／又は方法の全ては、本開示に照らして不必要な実験を行うことなく作製及び実行することができる。本発明の組成物及び方法は、好ましい実施形態に関して記載されているが、当業者には当然のことながら、本発明の概念、趣旨、及び範囲から逸脱することなく、本明細書において記載される組成物及び／又は方法に、並びに方法の複数のステップにおいて、又は一連のステップにおいて、変型が適用され得る。当業者に自明の全てのこのような類似の置換及び修飾は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨、範囲、及び概念の範囲内であると見なされる。
【受託番号】
【０１９６】
ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９８５２
ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−９８５３
【０１９７】
（参考文献）
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【図１】
2013504599.tif 000024
【図２】
2013504599.tif 000025
【図３】
2013504599.tif 000026
【図４】
2013504599.tif 000027
【図５】
2013504599.tif 000028
【図６】
2013504599.tif 000029
【図７】
2013504599.tif 000030
【図８】
2013504599.tif 000031
【図９】
2013504599.tif 000032
【図１０】
2013504599.tif 000033
【図１１】
2013504599.tif 000034
【図１２】
2013504599.tif 000035
【図１３】
2013504599.tif 000036
【図１４】
2013504599.tif 000037
【配列表】
2013504599000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年6月8日(2012.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗ランゲリン抗体又はその断片のカルボキシ末端に、１又は２以上の抗原性ペプチドが連結した抗原性ペプチド連結抗ランゲリン抗体を含む組成物であって、２以上の抗原が存在する場合、前記抗原が、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のペプチドリンカーによって分離されている、前記組成物。
【請求項２】
（ａ）抗ランゲリン抗体が、
ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS（配列番号４５）;
SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA（配列番号４６）;
VTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCA（配列番号４７）;
SLKLSCAASGLTFNIYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRNKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSLLYLQMNNLKTEDTAMYYC（配列番号４８）;又はそれら直接的な同等物から選択される１又は２以上の相補性決定領域を含み、且つ
（ｂ）抗原性ペプチドが、
MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWV（配列番号９）;
LTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHD（配列番号１０）;
LMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVIS（配列番号１１）;
NDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERP（配列番号１２）;
SLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１３）;
IMDQVPFSV（配列番号１４）;
ITDQVPFSV（配列番号１５）;
YLEPGPVTV（配列番号１６）;
YLEPGPVTA（配列番号１７）;
KTWGQYWQV（配列番号１８）;
APLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP（配列番号１９）;
DTTEPATPTTPVTTPTTTKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSQSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQ（配列番号２０）;
PLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAXVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPAS（配列番号２１）;
GTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAA（配列番号２２）;
QVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQ（配列番号２３）;
GIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIVPGILLTGQEAGLGQ （配列番号２４）;
MEMKILRALNFGLGRPLPLHFLRRASKIGEVDVEQHTLAKYLMELTMLDY（配列番号２５）;
DWLVQVQMKFRLLQETMYMTVSIIDRFMQNNCVPKK（配列番号２６）;
MEHQLLCCEVETIRRAYPDANLLNDRVLRAMLKAEETCAPSVSYFKCV（配列番号２７）;
QKEVLPSMRKIVATWMLEVCEEQKCEEEVFPLAMNYLDRFLSLEPVKKSRLQLLGATCMFVASKMKETIPLTAEKLCIYTDNSIRPEELLQMELL（配列番号２８）;
LVNKLKWNLAAMTPHDFIEHFLSKMPEAEENKQIIRKHAQTFVALCATDVKFISNPPSMV（配列番号２９）;又は
AAGSVVAAVQGLNLRSPNNFLSYYRLTRFLSRVIKCDPDCLRACQEQIEALLESSLRQAQQNMDPKAAEEEEEEEEEVDLACTPTDVRDVDI（配列番号３０）から選択される癌抗原である、又は
（ｃ）抗原性ペプチドが、
VGFPVTPQVPLRPMTYKAAVDLSHFLKEKGGL（配列番号３１）;
HTQGYFPDWQNYTPGPGVRYPLTFGWLYKL（配列番号３２）;
EKIRLRPGGKKKYKLKHIV（配列番号３３）;
NPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILD（配列番号３４）;
AIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMDDLY（配列番号３５）;
DTICIGYHANNSTDTVDTVLEKNVTVTHSVNLLEDSHNGKLCRLKGIAPLQLGKCNIAGWLLGNPECDPLLPVRSWSYIVETPNSENGICYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFPKESSWPNHNTNGVTAACSHEGKSSFYRNLLWLTEKEGSYPKLKNSYVNKKGKEVLVLWGIHHPPNSKEQQNLYQNENAYVSVVTSNYNRRFTPEIAERPKVRDQAGRMNYYWTLLKPGDTIIFEANGNLIAPMYAFALSRGFGSGIITSNASMHECNTKCQTPLGAINSSLPYQNIHPVTIGECPKYVRSAKLRMV（配列番号３６）;
DQICIGYHANNSTEQVDTIMEKNVTVTHAQDILEKKHNGKLCDLDGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFINVPEWSYIVEKANPVNDLCYPGDFNDYEELKHLLSRINHFEKIQIIPKSSWSSHEASLGVSSACPYQGKSSFFRNVVWLIKKNSTYPTIKRSYNNTNQEDLLVLWGIHHPNDAAEQTKLYQNPTTYISVGTSTLNQRLVPRIATRSKVNGQSGRMEFFWTILKPNDAINFESNGNFIAPEYAYKIVKKGDSTIMKSELEYGNCNTKCQTPMGAINSSMPFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLA（配列番号３７）;又は
PIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVL（配列番号３８）
から選択されるウイルス抗原である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
１又は２以上のペプチドリンカーが、
SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP（配列番号３９）;
PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG（配列番号４０）;
TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP（配列番号４１）;又は
TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA（配列番号４２）
から選択される、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
抗ランゲリン抗体が、配列番号２と４とのアミノ酸配列対、配列番号６と８とのアミノ酸配列対、配列番号５２と５４とのアミノ酸配列対、配列番号５６と５８とのアミノ酸配列対、配列番号７８と配列番号８０とのアミノ酸配列対、又はそれら断片のアミノ酸配列対から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸配列対、配列番号５と７との核酸配列対、配列番号５１と５３との核酸配列対、配列番号５５と５７との核酸配列対、又は配列番号７７と７９との核酸配列対の発現産物である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
抗ランゲリン抗体又はその断片が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５２を有する１５Ｂ１０、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−９８５３を有する２Ｇ３、９１Ｅ７、３７Ｃ１、又は４Ｃ７、及びそのヒト化された誘導体の少なくとも１つである、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
連結が融合である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
抗ランゲリン抗体又はその断片の軽鎖、及び／又は重鎖のカルボキシ末端に、２以上の抗原性ペプチドが連結した抗原性ペプチド連結抗ランゲリン抗体を発現する、単離された核酸ベクターであって、２以上の抗原性ペプチドが存在する場合、前記抗原性ペプチドが、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む１又は２以上のペプチドリンカーによって分離されている、前記単離された核酸ベクター。
【請求項９】
抗原性ペプチドが、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、又は
抗原性ペプチドが、リンパ腫、神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、又は
抗原性ペプチドが、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｌｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される、請求項８に記載の核酸ベクター。
【請求項１０】
抗ランゲリン抗体が、配列番号１と３との核酸酸配列対、配列番号５と７との核酸配列対、配列番号５１と５３との核酸配列対、配列番号５５と５７との核酸配列対、配列番号７７と７９との核酸配列対の発現産物である、請求項８又は９に記載の核酸ベクター。
【請求項１１】
連結が融合である、請求項８〜１０のいずれかに記載の核酸ベクター。
【請求項１２】
Ｔ細胞及びＢ細胞の応答を増強させるために用いるための、有効量のワクチンであって、
抗ランゲリン抗体又はその断片のカルボキシ末端に、１又は２以上の抗原性ペプチドが連結した抗原性ペプチド連結抗ランゲリン抗体を含む単離された融合タンパク質を含むことを特徴とする、前記ワクチン。
【請求項１３】
抗原性ペプチドが、ＣＥＡ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ１〜４、６及び１２、ＭＵＣ（ムチン）、ＧＭ２ガングリオシド及びＧＤ２ガングリオシド、ｒａｓ、ｍｙｃ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ（黒色腫抗原）、ＭＡＲＣＯ−ＭＡＲＴ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ、Ｐｍｅｌ１７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ−ＶイントロンＶ配列（Ｎ−アセチルグルコアミニルトランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺Ｃａ  ｐｓｍ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫抗原）、β−カテニン、ＭＵＭ−１−Ｂ（黒色腫の遍在性の突然変異型遺伝子産物）、ＧＡＧＥ（黒色腫抗原）１、ＢＡＧＥ（黒色腫抗原）２〜１０、ｃ−ＥＲＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核抗原）１〜６、ｇｐ７５、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６及びＥ７、ｐ５３、肺耐性タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ−２、並びにＫｉ−６７から選択される腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、又は
抗原性ペプチドが、リンパ腫、神経腫瘍、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、胃腸腫瘍、胃癌、結腸癌、肝臓癌、膵臓癌、頸癌、子宮癌、卵巣癌、膣癌、精巣癌、泌尿生殖器腫瘍、骨腫瘍、血管腫瘍、又は唇、鼻咽頭、咽頭及び口腔の癌、食道、直腸、胆嚢、胆道、喉頭、肺及び気管支の癌、膀胱、腎臓、脳及び神経系の他の部分の癌、甲状腺の癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、並びに白血病の抗原を含む腫瘍関連抗原から選択される癌ペプチドである、又は
抗原性ペプチドが、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２０１−ＦｌｕＭＰ（５８−６６）ペプチド（GILGFVFTL）テトラマー、鳥インフルエンザ（ＨＡ５−１）、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株から得られるインフルエンザＡ血球凝集素ＨＡ−１（ＨＡ１−１）、クロストリジウム・サーモセラムから得られるドッケリンドメイン（ｄｏｃ）、ＨＩＶ  ｇａｇ  ｐ２４（ｇａｇ）、又は一連のＨＩＶペプチド（Ｈｉｐｏ５）、ＰＳＡ（KLQCVDLHV）テトラマー、又はＨＩＶｇａｇに由来するｐ２４−ＰＬＡから選択される、請求項１２に記載のワクチン。
【請求項１４】
抗原性ペプチド融合抗ランゲリン抗体を作製する方法であって、
抗ランゲリン抗体又はその断片のカルボキシ末端に、１又は２以上の抗原性ペプチドが融合した抗原性ペプチド融合抗ランゲリン抗体を単離された宿主細胞において発現させるステップと、
発現させた抗原性ペプチド融合抗ランゲリン抗体を単離するステップを含み、
抗原性ペプチドの中に２以上の癌ペプチドが存在する場合、前記癌ペプチドが、１又は２以上のリンカーによって分離されており、少なくとも１つのリンカーがグリコシル化部位を含む、前記方法。
【請求項１５】
抗原特異的Ｔ細胞又はＢ細胞をインビトロで増殖する方法であって、
癌患者から以前に単離された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を得るステップと、
前記単離されたＰＢＭＣを、免疫原性量の単離された抗ランゲリン（ＰＬ−Ａｇ）ｘワクチン又は抗ランゲリン（Ａｇ−ＰＬ）ｘワクチン（式中、Ａｇは腫瘍関連抗原であり、ｘは１〜２０の整数である）と共にインキュベートするステップと、
有効量のＩＬ−２の存在下で前記ＰＢＭＣを増殖するステップと、
増殖したＰＢＭＣ細胞を採取するステップと、
前記増殖したＰＢＭＣ細胞によるサイトカイン生産を評価して抗癌特異的Ｔ細胞又はＢ細胞の存在を決定するステップと
を含む方法。
【国際調査報告】
2013504599.tif 000038
2013504599.tif 000039
2013504599.tif 000040
2013504599.tif 000041