(57)【要約】本発明は、一続きの外周溝（１１）から成る陥入部を有する、マイクロプレート（３）またはマイクロタイタープレートを目的としており、該一続きの外周溝（１１）によりたった一度の分配で「蒸発カーテン」の役割をする液体を陥入部に加えることができる。また、本発明は、そのようなマイクロプレートを含む装置、そのようなマイクロプレートの製造方法ならびに使用方法をも目的とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のウェルの一つのマトリクス（９）および蒸発犠牲の役割をする液体を収容するための陥入部（１１）とを有する基板（７）を含むマイクロプレート（３）であって、
前記マイクロプレート（３）は、前記陥入部（１１）が一つの一続きの外周溝から成り、かつ固有の隔壁を有することを特徴とする、マイクロプレート。
【請求項２】
前記陥入部（１１）が、基板（７）の外壁（１３）と複数のウェルのマトリクス（９）の外壁（１５）との間に位置付けられることを特徴とする、請求項１に記載のマイクロプレート。
【請求項３】
前記陥入部（１１）の深さＰが、マトリクスのウェル（９）の深さｐ以下であることを特徴とする、請求項１または２に記載のマイクロプレート。
【請求項４】
前記陥入部（１１）の深さＰが、マイクロプレート（３）の高さから基板の内壁の段差（１７）まであるマイクロプレート（３）の外壁部分（１３）の高さＨ以下であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一つに記載のマイクロプレート。
【請求項５】
前記陥入部（１１）の底部の厚みは、マトリクスのウェル（９）の底部の厚みと同じであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つに記載のマイクロプレート。
【請求項６】
前記陥入部（１１）が、マトリクス（９）の外周ウェルの列の円形突縁部にぴったり一致する形状の非直線隔壁（１４）を少なくとも一つ有することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一つに記載のマイクロプレート。
【請求項７】
前記一続きの外周溝（１１）が、二つの非直線隔壁（１２）および（１４）を有し、それらの形状がマトリクス（９）の外周ウェルの列の円形突縁部にぴったりと一致する形状であることを特徴とする、請求項６に記載のマイクロプレート。
【請求項８】
前記陥入部（１１）が、前記溝の充填ポイントの役割をする少なくとも一つの広がった口部（２２）を有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一つに記載のマイクロプレート。
【請求項９】
前記陥入部（１１）の幅が、ウェルの直径に沿っては２ミリメートルと２．５ミリメートルとの間で、二つのウェル間の接合部に沿っては５ミリメートルと６ミリメートルとの間であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一つに記載のマイクロプレート。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一つに記載のマイクロプレート（３）および、複数のウェルのマトリクス（９）ならびに前記マイクロプレート（３）の溝（１１）を完全に覆うように構想された蓋（５）を含む装置。
【請求項１１】
本発明によるマイクロプレート（３）を製造する第一の段階と、蓋（５）を製造する第二の段階を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の装置の製造方法。
【請求項１２】
真核細胞および／または原核細胞の培養および／または初代培養、組織培養および／またはプロト器官培養、ならびに、化学的、生化学的および／または生物学的試薬および物質の保管、反応および分析のための、請求項１〜９のいずれか一つに記載のマイクロプレートおよび／または請求項１０に記載の装置および／または請求項１１に記載の方法を実施することにより得られる装置の使用方法。
【請求項１３】
前記陥入部（１１）が、たった一度の分配により液体で充填されることを特徴とする、請求項１２に記載の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロタイター装置の分野に関するものである。
より詳細には、本発明は、「蒸発カーテン」の役割をする液体を、たった一度の分配のステップで加えることを可能にする、一続きの外周溝から成る陥入部を有する、マイクロプレートまたはマイクロタイタープレートを目的とする。
【背景技術】
【０００２】
マイクロプレートは、サンプル分析のレベルでエラーの原因になる可能性があるので、今日、多くのユーザは、実験室で用いられているマイクロプレートが充分満足できるものだとは認識していない。
そのようなエラーは、特にマイクロプレートの構成という観点からの問題に起因し得る。
主要な問題の一つは、蓋をしたマイクロプレートの中で、外周のウェルと中央のウェルとの間で蒸発勾配が起きることにある。
外部環境と、蓋をしたマイクロプレートの内部との間の熱勾配、および／または、水分勾配の影響によるマイクロプレートの複数のウェルにおいて観察される蒸発勾配は、マイクロプレートの長期インキュベーションの結果として起こり得るものであり、ひいては、実施される分析の結果を歪曲する可能性がある。
さらに、生物学的解析または生化学的解析を実施する温度が、サンプルのいくつかの構成要素の蒸発温度に近い可能性があるということに注意すべきである。
それは、したがって、蒸発、つまりサンプルを含むいくつかの溶媒、またはサンプル自体の液体状態から気体状態への変化を誘発する。
この蒸発勾配の犠牲になるウェルは、主に外周のウェルである。
それら外周ウェルは、実際、マイクロプレートの中央部分のウェルよりも高温および湿度変化にさらされ易い。
事実、それら外周ウェルの隔壁は、これらのマイクロプレート内に入れられたサンプルの保存培地の温度に急速に達し、またマイクロプレートの外縁部と蓋との間の通気ゾーンにより近く位置しているので、それにより、いくつかの構成要素の部分的および不均質な蒸発に至る。
「エッジ効果」または“ｅｄｇｅ  ｅｆｆｅｃｔ”という名で知られる、外周ウェルにみられるこの蒸発現象は、分析や結果の読取りを歪曲する可能性がある。
【０００３】
米国特許第５５８７３２１号明細書において、マイクロプレートの外部の状況を考えると、はじめに前記液体が蒸発の影響を受けることから、液体収容部の改良による、蒸発および凝結の問題の解決法が提案されている。
液体収容部は、複数のウェルのマトリクスを取り囲む複数の収容部からなり、ウェル間およびマトリクスの下に伸延している。
しかしながら、このモデルは、特にこの複数のウェルのマトリクスを取り囲む複数の収容部のせいで、あまりに複雑であり、前記収容部に入れられた液体の蒸発レベルを一定にすることができない。
さらに、ウェル間およびその下まである、複数のウェルのマトリクスを取り囲む収容部の形状の複雑さが、複数の部品の製造において製造コストを高くする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特に、マイクロプレートの複数のウェルのマトリクスの周囲に、追加のウェルを付加することによって、マイクロプレートを最適化しようとする他の試みがなされた。
しかしながら、このエッジ効果に対処する、単純かつ、とりわけ完全に効果的な実現可能な解決法は、先行技術では提案されていない。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、複数のウェルのマトリクスの周囲に陥入部を付加することにより、マイクロタイタープレートにおけるエッジ効果問題の解決法を提案する。
この陥入部は、「蒸発の犠牲」の役割をする液体を含む、一続きの外周溝の形状を呈しており、それにより、外部環境とマイクロプレートの内部との間の熱的変動および水分変動の影響下での、化学的、生化学的または生物学的な物質の反応性および均質な保存を可能にする。
【０００６】
したがって、本発明のマイクロプレートは、一続きの外周溝の液体が蒸発することでウェルの蒸発の代償が可能なおかげで、ウェルの内容物を変化させずに、熱的変動または湿度差を許容することができる。
マイクロプレートの外部と内部との気体交換もまた、マイクロプレート内の温度と湿度を保ちつつ維持される。
【０００７】
外周溝に入れられる液体は、したがって、はじめに熱的変動の影響を受けて蒸発することにより、外周ウェルを保護することを目的としている。
つまり、外周溝の液体の蒸発は、ウェルのサンプルの蒸発および損傷を強く制限するために蓋をされたマイクロプレートの、内部と外部との間の気体交換の熱的補償および保湿の緩衝ゾーンを構成する。
外部環境の温度は、はじめにマイクロプレートの外面にあてられる。
したがって、マイクロプレートが実験条件に適合されるとき、はじめに蒸発するのは外周溝の液体となる。
【０００８】
したがって、本発明は、複数のウェルの一つのマトリクスおよび蒸発犠牲の役割をする液体を収容するための陥入部とを有する基板を含むマイクロプレートを目的としており、前記マイクロプレートは、前記陥入部が、一つの一続きの外周溝から成ることを特徴とする。
【０００９】
本発明の利点は、上述のマイクロプレートが、ＳＢＳ（バイオ分子科学、英語名称では、“Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ”）およびＡＮＳＩ（米国規格協会、英語名称では、“Ａｍｅｒｉｃａ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ”）により定義されているマイクロプレートの寸法の技術仕様に対応していることにある。
【００１０】
本発明によるマイクロプレートは、特に、複数のウェルのマトリクスの周囲の基板を含む。
その基板は、マイクロプレートの支持の役割をする複数の隔壁から成る。
該基板は、「基板の内壁」、あるいは同様に「マイクロプレートの内壁」と呼ばれる一つの内壁、および「基板の外壁」または「マイクロプレートの外壁」と同じくいわれる一つの外壁を有しており、それはつまり、マイクロプレートの内壁および外壁が基板のそれに対応しているからである。
【００１１】
マイクロプレートは、また、マイクロプレートの隔壁の領域に段差を有する。
前記段差は、内側から外側へと指向する形状を呈し、そのようにしてマイクロプレートの外壁に突縁部を形成する。
マイクロプレート上に置かれる蓋は、したがって内側から外側へと指向する段差によって形成されたこの突縁部のおかげで保持される。
【００１２】
標準的には、マイクロプレートはさらに複数のウェルのマトリクスを有する。
このマトリクスは、分析対象のサンプル数を収容するために充分なだけ可変数のウェルから成ることができる。
ウェルの数は、したがって変化し得るが、それでもマイクロプレートは常に前記ウェルから成る同じ配列構成を呈する。
【００１３】
複数のウェルのマトリクスの外壁は、外周ウェルの列の外壁に対応しているものとする。
【００１４】
生物学的解析または生化学的解析を実施するために用いる標準規格のマイクロプレートの構成は、当業者に広く知られているので、ここでは詳述しないことにする。
【００１５】
「陥入部」という語は、「蒸発の犠牲」の役割をする液体を収容するための一続きの外周溝から成る、マイクロプレート内の凹形状の溝部を定義する。
【００１６】
「蒸発の犠牲の役割をする液体」とは、いくつかの制約を受ける、上述のようなマイクロプレートの外周ウェル内にあるサンプルの「代わりに」蒸発させることができる液体のことである。
【００１７】
「蒸発の犠牲の役割をする液体」の非制限的な例としては、水、または生理食塩水もしくは緩衝液、血清培地および培養培地、ならびに凍結受精卵の溶液を含むあらゆるタイプの水溶液が挙げられる。
同じように、またその延長として、蒸発の犠牲の役割をする液体としては、あらゆる溶液、すなわちウェル内に入れられるサンプルと同じタイプの蒸気を出す、分配後にゲル化させることのできる溶液を挙げることができる。
典型的な例としては、前記マイクロプレートのウェル内
に入れられるサンプルまたは試薬が、溶解された溶液に対応する溶液がある。
【００１８】
以下では、特に明確なことわりがない限り、「陥入部」または「一続きの外周溝」という表現は、区別なく用いることができる。
【００１９】
同様に、一続きの外周溝内に入れられる液体は、「蒸発の犠牲の役割をする液体」、「蒸発カーテンの役割をする液体」、「溝の液体」、「陥入部の液体」、「外周の液体」または「蒸発用液体」という同等の表現で呼ぶことができる。
【００２０】
溝の連続性は、本発明の主たる特徴の一つである。
その連続性により、液体がマイクロプレートの周囲の同一の溝内に行き渡っているので、溝の全地点における、液体の温度および蒸発の観点での完全な均質性を保証する。
したがって、前記溝の連続性は、液体の温度条件の均質化を可能にする。
こうして、溝の液体を蒸発させることで、マトリクスの外周ウェルを保護することができる。
【００２１】
本発明の第一の実施形態によると、一続きの外周溝は、その隔壁または縁部を複数のウェルのマトリクスならびに基板と共有することができる。
つまり、溝の内壁は、複数のウェルのマトリクスの外壁と対応し、溝の外壁は、基板の内壁と対応している。
【００２２】
本発明の別の実施態様によると、一続きの外周溝は、それぞれ固有の隔壁を有することができる。
溝の「固有の縁部」または「固有の隔壁」とは、前記溝が、本発明の装置を構成する他のいかなる要素とも隔壁を共有していないことを意味する。
【００２３】
他の言い方をすると、本発明は、複数のウェルのマトリクスと、蒸発の犠牲の役割をする液体を収容するための陥入部とを有する基板を含むマイクロプレートを目的としており、前記マイクロプレートは、前記陥入部が一つの一続きの外周溝から成り、かつ固有の隔壁を有することを特徴とする。
【００２４】
したがって、溝の外壁は、基板の外壁と並置され、溝の内壁は、複数のウェルのマトリクスの外壁と並置されている。
溝の固有の隔壁によって、前記溝が、直接かつ均質にマイクロプレートに与えられる温度条件を受けることが可能になる。
【００２５】
マイクロプレートが保持される、支持体と接触するマイクロプレートの下面は、必ずしも一様に平らというわけではない。
上述したように、基板は、マイクロプレートの外側へと指向する段差を含む隔壁から成る。
マイクロプレートのウェルは、前記段差には届かず、こうしてウェルの底部の下に空の空間が形成される。
この空間によって、マトリクスのウェルの下の環境での空気循環が可能になる。
ウェルおよび溝の下の空気循環によって、ウェル内に外周液体とサンプルを含む本発明の装置のもと、直接実験温度を適用することができる。
外周溝にとって固有の隔壁の存在により、前記溝の液体をより早く実験温度にさらし、したがって、より早く蒸発させることができる。
【００２６】
また、それぞれの隔壁は、マイクロプレートの製造の観点からも利点を呈する。
事実、および装置を製造する間に鋳型から取り外すとき、冷却するときの機械的応力を回避するために、溝は外周ウェルから離隔されていることが好ましい。
【００２７】
本発明の好ましい実施態様によると、マイクロプレートは、前記陥入部の深さＰが、マトリクスのウェルの深さｐ以下であることを特徴とする。
【００２８】
溝に入れられた液体が、マイクロプレートに与えられる温度の影響下で、はじめに蒸発するようにするために、溝の深さが、複数のウェルのマトリクスの深さを超えないようにする。
実際に、蒸発用液体の表面を、ウェル内のサンプルの表面の高さよりも高くする必要がある。
このようにして、蒸発用液体を、蓋の下を循環する空気の環境条件に接触させて、はじめに蒸発させることができる。
【００２９】
溝の液体は、マイクロプレートに与えられる温度の影響下で蒸発する。
マイクロプレートの蓋の下での蒸発によって、マトリクスのウェルの内容物を無傷のまま保持することが可能であることに加えて、蓋の下で、マトリクスのウェルの上部の温度条件を安定させることが可能である。
【００３０】
さらに別の実施態様によると、本発明によるマイクロプレートは、前記陥入部の深さＰが、マイクロプレートの高さから基板の内壁の段差まであるマイクロプレート外壁部分の高さＨ以下であることを特徴とする。
【００３１】
本発明のこの実施例は、空のマイクロプレートの保管の観点から利点を呈する。
実際、工業レベルでは、マイクロプレートは互いに重ねられた状態にある。
マトリクスのウェルの下の空の空間によって、最小限の保管スペースでマイクロプレートを積み重ねることが可能である。
縮小された保管占有空間におけるマイクロプレートの積み重ねが可能となるように、溝は、したがって、マイクロプレートの内縁部の段差を超えてはならない。
【００３２】
好ましい実施形態によると、本発明によるマイクロプレートは、前記陥入部の底部の厚みが、マトリクスのウェルの底部の厚みと同じであることを特徴とする。
【００３３】
溝とマトリクスのウェルに与えられる温度条件が同一になるようにするためには、前記溝の底部とウェルの底部が、厚みの観点で同様になるように構成する必要がある。
【００３４】
それは、プラスチックの節約および輸送ならびに梱包の重量の削減も可能にする。
【００３５】
一続きの外周溝の形状は、本発明の重要な特徴である。
実際、マイクロプレートに与えられる温度および水分の影響からマトリクスのウェル内部のサンプルを保護するために、外周溝の形状は、自らに入れられた液体の良好な蒸発の要となる。
【００３６】
本発明の好ましい実施形態によると、溝を形成する陥入部は、マトリクスの外周ウェルの列の円形突縁部にぴったり一致する形状の非直線隔壁を少なくとも一つ有する。
【００３７】
好ましくは、この溝の少なくとも一つの隔壁は非直線であり、かつ、外側の列のウェルの近接にある隔壁である内壁を構成する。
しかしながら、技術的問題から当然、マイクロプレートの外壁に近接する隔壁であるもう一方の隔壁をも構成することになる。
【００３８】
一続きの外周溝の少なくとも一つの隔壁の特徴的な形状は、結果として、前記溝の延長部になる。
したがって蒸発用液体は、複数のウェルのマトリクスの周囲のより大きな周囲区域に沿って広がる。
マトリクスのウェルの円形形状にぴったり一致することに加えて、溝の非直線隔壁は、前記ウェルから一定距離だけ離れて位置付けられている。
溝と外周ウェルとの間の近接は、外周ウェルのサンプルにではなく、溝の液体の蒸発だけに役立つのであり、こうして、前記溝により外周ウェルのサンプルが保護される。
マトリクスの外周ウェルの円形突縁部にぴったりと一致している溝の隔壁の非直線形状は、結果として、一続きの外周溝の長さを最大限に増加させ、したがって、つまり蒸発用液体の容量を増加させる。
【００３９】
また、溝の非直線隔壁の蛇行形状は、蒸発用液体の安定性においても役割を果たしている。
実際、マイクロプレートの移動により、特に一続きの溝において液体運動が起こる。
この運動は、外周の液体が、溝の長く継続される連続性により、マイクロプレートのウェル内のサンプルよりも流動性を有することに起因する。
溝の少なくとも一つの隔壁の非直線形状が、溝の液体内の衝撃波を妨げて、前記液体運動を制限することができる。
【００４０】
同様に好ましい別の実施形態によると、本発明によるマイクロプレートは、前記一続きの外周溝が二つの非直線隔壁を有し、それらの形状が、マトリクスの外周ウェルの列の円形突縁部にぴったりと一致する形状であることを特徴とする。
【００４１】
非直線な溝の片一方の隔壁の存在から観察されるのと同じ利点が、非直線な二つの隔壁の存在からでも同様に見いだされる。
溝の表面は、よりいっそう大きくなり、溝内の液体の流動性に起因する衝撃波は、この非直線な二つの隔壁の存在によって、よりいっそう制御され、制限される。
【００４２】
本発明の特定の実施態様によると、外周溝の内部に、垂直方向の軸に沿って、半円バッフルを形成する複数の隔壁を装備することができる。
このような隔壁は、外周溝をたった一度の工程で容易に充填することができるようにその連続形状を保たせるために、外周溝の端から端までを横断させてはならない。
このようなバッフルは、液体内の衝撃波を妨げて、液体の全体的な表面張力を増加させる効果を有するだろう。
半円バッフルを使用することによって、蛇行形状の溝から代えることも、またはその補助とすることもできるだろう。
【００４３】
本発明の別の利点は、外周溝の連続性に直接関連することであるが、溝を形成する陥入部が、前記溝の充填ポイントの役割をする少なくとも一つの広がった口部を有することにある。
【００４４】
ここで、「広がった口部」という表現は、本明細書において、特に「拡大部」という表現のようなあらゆる同義語に代えることができるということを言及しておく。
【００４５】
本発明の主たる特徴である溝の連続性は、「蒸発の犠牲」液体が、たった一度の分配で溝内に入れられるという利点を有する。
その溝の幅では、必ずしも容易な充填が可能ではないので、溝に比較的小さな広がった口部を付加して、溝の蒸発用液体での前記充填を可能にした。
【００４６】
優先的には、前記広がった口部は、マイクロプレートの角の領域に位置付けられる。
この位置によって、マイクロプレートの外周ウェルの周囲で溝の連続性を維持することが可能になる。
マイクロプレートの角の領域へ広がった口部を位置付けることによって、溝の領域のウェルの近接に広がった口部があるよりも、広がった口部の近接のウェルとの距離間隔を減らすことができる。
【００４７】
好ましい実施態様によると、一続きの外周溝の幅は、ウェルの直径の領域では２ミリメートルと２．５ミリメートルとの間で、ウェル間の接合部の領域では５ミリメートルと６ミリメートルの間である。
【００４８】
この幅は、マイクロプレート装置および既存のマシンに最良に適合するように計算されており、特に標準規格の蓋を使用することが可能になる。
しかしながら、もちろんこの幅は、様々な器機の開発に応じて当業者によって変更されることができる。
【００４９】
実際には、一続きの外周溝の断面は、例えば円錐、逆台形または長方形の形状のような、多様な形状を呈することができる。
一般的には、鋳型に対する充分な削り角を可能にするために、そして充填時に液体が、気泡に引っかかることなく、または液体がまだ溝中に充填されていないのに溢れてしまうことなく、溝の全周に行き渡るようにするためには、わずかに台形であることが好ましい。
その形状は、溝内の液体の幅が溝内の液体の高さの低下に伴って急速に減少しないように、あまりにも急な円錐状にしすぎてはならない。
保湿効果がもっとも必要なときには、保護効果が経時的に低下しすぎてしまっているかもしれない。
【００５０】
好ましくは、本発明によるマイクロプレートは、マイクロプレートの外側周囲の領域にスペースを含んでおり、前記スペースは、前記装置の英数字の印付けができるように充分な幅を有する。
【００５１】
いくつかのマイクロプレートのウェルの数を考慮すると、前記ウェルの英数字の印付けによって当業者はマイクロプレートを利用し易くなる。
印付けは、基板上のマイクロプレートの縁部に実施可能である。
印付けによって、水平方向または垂直方向での文字または数字による認識が可能になる。
したがって、本発明のマイクロプレートにおいて、ウェルの英数字の印付けを可能にするスペースを含めることは重要である。
【００５２】
標準的には、本発明によるマイクロプレートは、６、１２、２４、４８、９６、３８４または１５３６ウェルから成ることができる。
【００５３】
現在、合成、反応、保管または化学的解析、生物学的解析、または生化学的解析、さらにまたは細胞培養の実施のための極めて多様なマイクロプレートが存在する。
それ故に、本出願に記載の装置モデルは、分析的、化学的、生物学的または生化学的研究室で使用される、全てのタイプの、標準規格のマイクロプレートに適用可能である。
【００５４】
別の様相によると、本発明は上述のようなマイクロプレート、および、複数のウェルのマトリクスならびに前記マイクロプレートの蒸発溝を完全にだが密閉的ではなく覆うように構想された標準規格の蓋を含む装置に関するものである。
【００５５】
蓋は、特にマイクロプレートのウェル内に存在するサンプルを保護する目的で使用される。
前記蓋は、多くのモデルのマイクロプレートで使用される標準規格の蓋である。
それは、マイクロプレートの環境に伴った軽度な通気を可能にしながら、マトリクスのウェルおよび溝の上部でのマイクロプレート内の気体交換の均衡と維持を可能にする。
このような通気は、実際、ウェル内に入れられたいくつかの物質の生存性および／または機能性の保持に必要である。
このために、標準規格の蓋と共に使用される本発明によって、溝によってもたらされる効果の結果として、外周ウェルの内容物の蒸発に至ることなく、このような通気を可能にする。
【００５６】
蓋は、単純に、基板の内側の段差により形成される突縁部の領域でマイクロプレート上に設置される。
マイクロプレートの外側の基板の前記段差により、こうしてマイクロプレート上への蓋の取付けが可能となる。
【００５７】
別の様相によると、本発明は、上述のようなマイクロプレート、および、複数のウェルのマトリクスならびに前記マイクロプレートの蒸発溝を、完全にかつ密閉的に覆うように構想された特有の蓋を含む装置に関するものである。
この装置により、ウェル内に入れられたサンプルの長期保管を目的とした、マトリクスのウェルおよび溝の上部での気体交換の均衡が、決定的に可能になる。
【００５８】
さらに別の様相によると、本発明は、本発明によるマイクロプレートを製造する第一の段階と、蓋を製造する第二の段階を含むことを特徴とする、上述の装置の製造方法を目的とするものである。
【００５９】
たった二段階のみのマイクロプレートの製造は、本発明の装置の製造の簡易性にとって無視できない工業的利点を有する。
つまり、第一の段階は、基板、一続きの外周溝ならびに複数のウェルのマトリクスを構成する、マイクロプレート自体の製造から成る。
つまり、それはたった一つのパーツで実現され、その製造の簡易性を特徴付けている。
第二の製造段階は、マイクロプレートの蓋の製造に関するものだが、本発明のマイクロプレートに使用される蓋は、標準規格の蓋であることから、該段階はその製造にいかなる困難も有しない。
【００６０】
そして、最後の様相によると、本発明は、真核細胞および／または原核細胞の培養および／または初代培養、組織培養および／またはプロト器官培養、ならびに、化学的、生化学的および／または生物学的試薬および物質の保管、反応および分析のための、本発明による方法を実施することにより得られるマイクロプレートおよび／または装置の使用方法をも包含するものである。
【００６１】
より詳細にかつ有利には、前記陥入部が、溝を形成しておりたった一度の分配により液体で充填されることを特徴とする、上記のことを目指す使用方法を目的とする。
【００６２】
たった一度の分配の段階による一続きの外周溝の充填は、溝の連続性のおかげで可能である。
この使用方法は、複数のウェルのマトリクスの周囲に複数回の充填を実施する必要がないため、したがって、当業者にとって明確な実用性を有する。
【００６３】
本発明は、以下の図面を参照してなされる下記の実施例においてより詳細に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】本発明による９６ウェルのマイクロプレートの平面図である。
【図２】第一の実施態様の、ウェルの直径の領域（Ａ）とウェル間の接合部の領域（Ｂ）での切断面を示す図である。
【図３】第二の実施態様の、ウェルの直径の領域（Ａ）とウェル間の接合部の領域（Ｂ）での切断面を示す図である。
【図４】市販の９６ウェルのマイクロプレートと、本発明によるマイクロプレートとを対比させた、３、４日のインキュベーション後の、細胞生存率測定を示すダイアグラム（Ａ〜Ｆ）である。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
［実施例１］
まず図１〜３を参照するが、本装置は、マイクロプレート３および蓋５（図示せず）から成る。
マイクロプレート３は、複数のウェルのマトリクス９を取り囲む基板７を含む。
マイクロプレート３は、また「蒸発の犠牲」の役割をする液体を収容するための陥入部としての外周溝１１を含む。
図１で明確にわかるように、マイクロプレート３の前記陥入部は、一続きの外周溝１１から成る。
一続きの外周溝１１は、基板７の外壁１３と複数のウェルのマトリクス９の外壁１５との間に位置付けられる。
図２に示した本発明の好ましい実施態様によると、外周溝１１は、固有の隔壁、すなわち外壁１２と内壁１４とを有する。
一続きの外周溝１１の深さＰは、マトリクスのウェルの深さｐ以下である。
一続きの外周溝１１の深さＰは、基板７の外壁１３の段差１７の高さＨを超えない。
一続きの外周溝１１は、少なくとも一つの非直線隔壁１４を有し、該隔壁はマトリクス９の外周ウェルの列の各部分の円形突縁部にぴったりと一致する形状である。
一続きの外周溝１１は、また、二つの非直線隔壁としての外壁１２と内壁１４を有することもでき、該二つの隔壁は、マトリクス９の外周ウェルの列の各部分の円形突縁部にぴったりと一致する形状である（実施形状は図示せず）。
【００６６】
図３に示した、本発明の別の好ましい実施態様によると、複数のウェルのマトリクス９の外壁１５は、外周溝１１の内壁（図２では１４）を構成する。
【００６７】
外周溝１１は、その内部に半円バッフル２０を有し、該半円バッフルは、図１〜３の好ましい実施態様において二つのウェル間の接合部の領域にある、外周溝内に位置付けられる。
【００６８】
本発明に係る、記載されているマイクロプレートは、さらに、マイクロプレート３の外壁１３と複数のウェルのマトリクス９の外壁１５との間に強化バッフル２１を有することができる。
【００６９】
一続きの外周溝１１は、前記外周溝１１の充填ポイントの役割をする、少なくとも一つの拡大部すなわち広がった口部２２を有する。
広がった口部２２は、マイクロプレート３の角の領域に位置付けられる。
マイクロプレート３は、基板７の外側に、装置の英数字の印付けを可能にするスペース１９を含む。
【００７０】
［実施例２］
ここに記載される実施例は、ウェル毎に、一定数の細胞の細胞株を播種した、９６ウェルのマイクロプレートで実施された。
【００７１】
結果は、３、４日のインキュベーション後の細胞生存率測定に対応するもので、市販の９６ウェルのマイクロプレート内のインキュベーションと、生理食塩水で縁部を防御したマイクロプレート内の同一のインキュベーションとを対比させた。
【００７２】
実験１：インキュベータ１内での７２時間のインキュベーション後の、ＮＣＩ−４６０細胞系統の細胞生存率測定の結果を３Ｄヒストグラムの形で示す。
９６個の各棒は、９６ウェルのマイクロプレートの各ウェルに対応した細胞生存率に比例するそれぞれの信号値を示しており、ヒストグラムＡでは標準マイクロプレートについて、Ｂでは本発明によるマイクロプレートについて示している。
【００７３】
実験２：インキュベータ２内での７２時間のインキュベーション後の、ＷＭ２６６−４細胞系統の細胞生存率測定の結果を３Ｄヒストグラムの形で示す。
９６個の各棒は、９６ウェルのマイクロプレートの各ウェルに対応した細胞生存率に比例するそれぞれの信号値を示しており、ヒストグラムＣでは標準マイクロプレートについて、Ｄでは本発明によるマイクロプレートについて示している。
【００７４】
実験３：インキュベータ２内での９６時間のインキュベーション後の、ＷＭ２６６−４細胞系統の細胞生存率測定の結果を３Ｄヒストグラムの形で示す。
９６個の各棒は、９６ウェルのマイクロプレートの各ウェルに対応した細胞生存率に比例するそれぞれの信号値を示しており、ヒストグラムＥでは標準マイクロプレートについて、Ｆでは本発明によるマイクロプレートについて示している。
【符号の説明】
【００７５】
３  マイクロプレート
５  蓋
７  基板
９  マトリクス
１１  外周溝
１２  外壁
１３  外壁
１４  内壁
１５  外壁
１７  段差
１９  スペース
２０  半円バッフル
２１  強化バッフル
２２  口部
【先行技術文献】
【特許文献】
【００７６】
【特許文献１】米国特許第５５８７３２１号明細書
【図１】
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【図２Ａ】
2013504315.tif 000004
【図２Ｂ】
2013504315.tif 000005
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【国際調査報告】
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