(57)【要約】  本発明は癌の治療のための抗ＶＥＧＦ抗体とのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の併用療法、特にアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体を用いたＣＤ２０発現癌の併用療法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＶＥＧＦ抗体と併用される癌治療医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用。
【請求項２】
上記癌がＣＤ２０発現癌であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
上記ＣＤ２０発現癌が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
上記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であることを特徴とする請求項１から３の何れか一項に記載の使用。
【請求項５】
上記抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であることを特徴とする請求項１から４の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
上記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１であり、上記抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブ又はＢ２０シリーズ抗体であることを特徴とする請求項１から３の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
一又は複数の更なる他の細胞傷害、化学療法又は抗癌剤、又は該薬剤の効果を亢進する化合物又は電離放射線が投与されることを特徴とする請求項１から６の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、及びベバシズマブ又はＢ２０シリーズ抗体を含有する癌治療のための組成物。
【請求項９】
抗ＶＥＧＦ抗体と併用して、フコース量がＡｓｎ２９７におけるオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を、かかる治療を必要とする患者に投与することによる、癌に罹患している患者を治療する方法。
【請求項１０】
上記癌がＣＤ２０発現癌であることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
上記ＣＤ２０発現癌が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
上記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であることを特徴とする請求項９から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
上記抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であることを特徴とする請求項９から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
上記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１であり、上記抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブ又はＢ２０シリーズ抗体であることを特徴とする請求項９から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
一又は複数の更なる他の細胞傷害、化学療法又は抗癌剤、又は該薬剤の効果を亢進する化合物又は電離放射線が投与されることを特徴とする請求項９から１４の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌治療のための抗ＶＥＧＦ抗体とのアフコシル化ＣＤ２０抗体の併用療法に関する。
【発明の背景】
【０００２】
アフコシル化抗体
モノクローナル抗体の細胞媒介性エフェクター機能は、Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、そのオリゴ糖成分を操作することによって亢進せしめることができる。癌免疫療法において最もよく使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、保存されたＮ結合型グリコシル化部位を各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合型二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋もれて、ポリペプチド主鎖との広範囲の接触面を形成し、その存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のようなエフェクター機能を媒介するために必須である（Lifely, M.R.等, Glycobiology 5 (1995) 813-822；Jefferis, R.等, Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76；Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号は、２つに分岐したオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ(１,４)-Ｎ-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、抗体のインビトロでのＡＤＣＣ活性を有意に増大せしめることを示した。Ｎ２９７炭水化物の組成の改変又はその除去もまたＦｃγＲ及びＣ１ｑへの結合、Ｆｃへの結合に影響を及ぼす（Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；Davies, J.等, Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294；Mimura, Y.等, J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547；Radaev, S.等, J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483；Shields, R.L.等, J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604；Shields, R.L.等, J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740；Simmons, L.C.等, J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147）。
【０００３】
抗ＣＤ２０抗体を含むアフコシル化及びフコシル化抗体の活性を検討する研究が報告されている（例えば、Iida, S.等, Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887；Natsume, A.等, J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103；Satoh, M.等, Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173；Kanda, Y.等, Biotechnol. Bioeng. 94 (2004) 680-688；Davies, J.等, Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294。
【０００４】
ＣＤ２０及び抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも称される）は、広く開示されているプレＢ細胞及び成熟Ｂリンパ球上に位置する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A.等, J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287；及びEinfeld, D.A.等, EMBO J. 7 (1988) 711-717；Tedder, T.F.等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212；Stamenkovic, I.等, J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980；Tedder, T.F.等, J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。ＣＤ２０は、９０％を越えるＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）で発現している（Anderson, K.C.等, Blood 63 (1984) 1424-1433）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常形質細胞、又は他の正常組織には見いだせない（Tedder, T.F.等, J, Immunol. 135(1985) 973- 979）。
【０００５】
そのＣＤ２０結合態様及び生物学的活性が顕著に異なる２つの異なったタイプの抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S.等, Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S.等, Blood 101 (2003) 1045-105）。例えばリツキシマブ等のＩ型抗体（８５％以上のフコース量を有する非アフコシル化抗体）は補体誘導性細胞傷害が強力である。
【０００６】
例えばトシツモマブ（Ｂ１）、１１Ｂ８、ＡＴ８０又はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体等のＩＩ型抗体は、同時のホスファチジルセリン曝露でカスパーゼ非依存性アポトーシスを介して標的細胞死を効率的に開始せしめる。
【０００７】
Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が共有する共通の特徴を表１にまとめる。
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【０００８】
ＶＥＧＦ及び抗ＶＥＧＦ抗体
ヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ−Ａ）は、例えばLeung, D.W.等, Science 246 (1989) 1306-1309; Keck, P.J.等, Science 246 (1989) 1309-1312及びConnolly, D.T.等, J. Biol. Chem. 264 (1989) 20017-20024に記載されている。ＶＥＧＦは、正常及び異常な血管新生、及び腫瘍や眼病に関連する新血管新生の調節に関与している（Ferrara, N., 及び Davis-Smyth, T., Endocr. Rev. 18 (1997) 4-25；Berkman, R.A.等, J. Clin. Invest. 91 (1993) 153-159；Brown, L.F.等, Human Pathol. 26 (1995) 86-91；Brown, L.F.等, Cancer Res. 53 (1993) 4727-4735；Mattern, J.等, Brit. J. Cancer. 73 (1996) 931-934；及びDvorak, H.等, Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039）。ＶＥＧＦは数種の供給源から単離されているホモ二量体糖タンパク質である。ＶＥＧＦは内皮細胞に対して高度に特異的な分裂促進活性を示す。ＶＥＧＦは胎児脈管形成期における新規の血管形成と成人期の血管形成において、重要な調節機能を有する（Carmeliet, P.等, Nature, 380 (1996) 435-439；Ferrara, N.等, Nature, 380 (1996) 439-442；Ferrara, N.及びDavis-Smyth, T., Endocrine Rev., 18 (1997) 4-25）。ＶＥＧＦが担っている役割の重要性は、単一のＶＥＧＦ対立遺伝子の不活性化が脈管構造の発達の失敗による胚性致死に至ることを示した研究で証明されている（Carmeliet, P.等, Nature 380 (1996) 435-439；Ferrara, N.等, Nature 380 (1996) 439-442）。さらに、ＶＥＧＦは単球への強力な走化性因子活性を有し、内皮細胞においてプラスミノーゲンアクチベーター及びプラスミノーゲンアクチベーターインヒビターを誘導可能であり、さらに毛細血管透過性も誘導可能である。後者の活性により、しばしば血管透過性因子（ＶＰＦ）とも称される。ＶＥＧＦの単離及び特性は概説されている；Ferrara, N.等, J. Cellular Biochem. 47 (1991) 211-218及びConnolly, J. Cellular Biochem. 47 (1991) 219-223を参照のこと。単一の ＶＥＧＦ遺伝子の選択的ｍＲＮＡスプライシングにより、ＶＥＧＦの５つのアイソフォームが生じる。
【０００９】
抗ＶＥＧＦ中和抗体は、マウスにおける多様なヒト腫瘍細胞株の増殖を抑制する（Kim, K.J.等, Nature 362 (1993) 841-844；Warren, R.S.等, J. Clin. Invest. 95 (1995) 1789-1797；Borgstrom, P.等, Cancer Res. 56 (1996) 4032-4039；及びMelnyk, O.等, Cancer Res. 56 (1996) 921-924）。
【００１０】
一実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体には、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ１０７０９により生産されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；Presta等 Cancer Res. 57 (1997)4593-4599に従い産生された組換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が含まれ、限定されるものではないが、「ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ」又は「アバスチン」としても知られている「ベバシズマブ（ＢＶ）」として知られる抗体も含まれる。ベバシズマブは、そのレセプターへのヒトＶＥＧＦの結合をブロックするマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１からの抗原結合相補性決定領域及び変異したヒトＩｇＧ１フレームワーク領域を含む。ほとんどのフレームワーク領域を含む、ベバシズマブのアミノ酸配列の約９３％がヒトＩｇＧ１から誘導され、配列の約７％がマウス抗体Ａ４．６．１から誘導されている。ベバシズマブは、約１４９０００ダルトンの分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、２００５年２月２６日に発行された米国特許第６８８４８７９号にさらに記載されている。付加的な好ましい抗体には、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１３５９に記載されているような、Ｇ６又はＢ２０シリーズ抗体（例えば、Ｇ６−２３、Ｇ６−３１、Ｂ２０−４．１）が含まれる。さらなる好ましい抗体については、米国特許第７０６０２６９号、米国特許第６５８２９５９号、米国特許第６７０３０２０号；米国特許第６０５４２９７号；国際公開第９８／４５３３２号；国際公開第９６／３００４６号；国際公開第９４／１１０２０２号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許出願公開第２００６００９３６０号、米国特許出願公開第２００５０１８６２０８号、米国特許出願公開第２００３０２０６８９９号、米国特許出願公開第２００３０１９０３１７号、米国特許出願公開第２００３０２０３４０９号、及び米国特許出願公開第２００５０１１２１２６号；及びPopkov等, Journal of Immunological Methods 288(2004）149-164 を参照。それらはヒト及びマウスＶＥＧＦへの結合によって特徴付けられ；これは、マウスモデルにおけるマウスｍｕＶＥＧＦ刺激性血管新生に対するその効果を研究するための必須条件である。この発明の「Ｇ６シリーズ抗体」は、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１２３５９の図７、２４−２６、及び３４−３５のいずれか一つのＧ６抗体又はＧ６−誘導抗体の配列から誘導される抗ＶＥＧＦ抗体である。この発明の「Ｂ２０シリーズ抗体」は、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１２３５９の図２７−２９のいずれか一つのＢ２０抗体又はＢ２０-誘導抗体の配列から誘導される抗ＶＥＧＦ抗体である。
【００１１】
国際公開第９４／１０２０２号、国際公開第９８／４５３３２号、国際公開第２００５／００９００号及び国際公開第００／３５９５６号は、ＶＥＧＦに対する抗体に言及している。ヒト化モノクローナル抗体であるベバシズマブ（商品名アバスチン(登録商標)として販売）は、腫瘍治療に使用される抗ＶＥＧＦ抗体である（国際公開第９８／４５３３１号）。
【００１２】
ラニビズマブ（商品名ルセンティス（登録商標））は、ベバシズマブ（アバスチン）と同じ親マウス抗体から誘導されたモノクローナル抗体断片である。それは親分分子よりかなり小さく、ＶＥＧＦ−Ａに対して強力な結合をもたらすように親和性成熟されている（国際公開第９８／４５３３１号）。「滲出」型の加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）、つまり加齢性視力喪失の一般的形態の治療に承認されている抗血管形成剤である。
【００１３】
他の抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば国際公開第２００５／０１２３５９Ａ３号、米国特許出願公開第２００７／０１４１０６５号に記載されているＢ２０−４．１である。
【００１４】
他の抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば国際公開第２００５／０１２３５９Ａ３号に記載されているＨｕＭａｂ Ｇ６−３１である。
【００１５】
ベバシズマブをリツキシマブ及び他の薬剤と組合せて使用する前臨床及び／又は臨床研究が報告されている（例えば、Ganjoo, K.N.等, Leuk Lymphoma. 47 (2006) 998-1005；Ruan, J.等, Annals of Oncology  20 (2009) 413-424）。
【発明の概要】
【００１６】
我々は、抗ＶＥＧＦ抗体とのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の併用が、相乗的な抗増殖効果を示すことを今見出した。
【００１７】
本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体と併用される癌治療医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
【００１８】
本発明の一態様は、癌に罹患している患者を治療する方法であって、かかる治療を必要とする患者に、抗ＶＥＧＦ抗体と組み合わせて、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を投与することにより治療する方法である。
【００１９】
本発明の他の態様は、抗ＶＥＧＦ抗体と併用される癌治療のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体である。
【００２０】
一実施態様では、フコース量は、Ａｓｎ２９７におけるオリゴ糖（糖）全量の４０％から６０％である。
【００２１】
他の実施態様では、フコース量は、Ａｓｎ２９７におけるオリゴ糖全量の０％である。
【００２２】
一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１抗体である。
【００２３】
他の実施態様では、上記癌はＣＤ２０発現癌、好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、一実施態様では、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００２４】
一実施態様では、上記抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であり、一実施態様ではＢ２０シリーズ抗体であり、一実施態様ではベバシズマブである。
【００２５】
一実施態様では、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、上記抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であり、上記癌はＣＤ２０発現癌、一実施態様ではＢ細胞非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)である。
【００２６】
一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、１０−８Ｍ〜１０−１３ＭのＫＤでＣＤ２０に結合する。
【００２７】
本発明の一実施態様は、癌の治療のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化抗とＣＤ２０抗体（一実施態様では、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）と、抗ＶＥＧＦ抗体（一実施態様ではベバシズマブ又はＢ２シリーズ抗体）を含有する組成物である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】（ＳＵ−ＤＨＬ−４ヒトリンパ腫細胞を用いた）マウス異種移植のインビボ腫瘍増殖阻害；抗ＣＤ２０抗体（糖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ＝ＧＡ１０１）））と、抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０−４．１の、単独及び併用での比較。併用は腫瘍増殖阻害に対して相乗効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、抗ＶＥＧＦ抗体と併用される癌治療医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
【００３０】
一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖）全量の４０％から６０％の間である。
【００３１】
「抗体」なる用語は、限定しないが全抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及び遺伝子操作抗体、例えばモノクローナル抗体、キメラ抗体又は組換え抗体並びに本発明に係る特徴的な性質が保持される限り、かかる抗体の断片を含む様々な形態の抗体を包含する。ここで使用される「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」なる用語は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を意味する。従って、「ヒトモノクローナル抗体」なる用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有し、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。一実施態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００３２】
「キメラ抗体」なる用語は、一つの供給源又は種に由来する可変領域、すなわち結合領域と、別の供給源又は種に由来する定常領域の少なくとも一部分を含む、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製されるモノクローナル抗体を称する。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。このようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントとヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子を発現させた産物である。本発明によって包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラス又はサブクラスが元の抗体のものから改変又は変化せしめられたものである。このような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を作製するための方法は、従来からの組換えＤＮＡ及び当該技術分野で今はよく知られている遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L.等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；米国特許第５２０２２３８号及び米国特許第５２０４２４４号を参照のこと。
【００３３】
「ヒト化抗体」なる用語は、フレームワーク領域又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比べて異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を意味する。好ましい実施態様では、ヒト抗体のフレームワーク領域中にマウスＣＤＲをグラフトさせて「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Riechmann, L.等, Nature 332 (1988) 323-327；及びNeuberger, M.S.等, Nature 314 (1985) 268-270を参照のこと。特に好ましいＣＤＲは、キメラ及び二官能性抗体に対して上述した抗原を認識する配列を表すものに対応する。
【００３４】
ここで使用される「ヒト抗体」なる用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は従来からよく知られている（van Dijk, M.A.及びvan de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374）。かかる技術に基づいて、非常に様々な標的に対するヒト抗体を製造できる。ヒト抗体の例は例えばKellermann, S.A.等, Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。
【００３５】
ここで使用される「組換えヒト抗体」なる用語は、組換え手段によって調製され、発現され、創製され又は単離された全てのヒト抗体、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えばマウス）に由来するか又はＮＳ０細胞又はＣＨＯ細胞のような宿主細胞から単離された抗体又は宿主細胞に形質移入された組換え発現ベクターを使用して発現される抗体を含むことが意図される。このような組換えヒト抗体は、再編成された形態のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する。本発明に係る組換えヒト抗体は、インビボ体細胞高頻度突然変異に供されている。よって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、これらに関するものであるが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない場合がある配列である。
【００３６】
ここで使用される場合、「結合する」又は「特異的に結合する」なる用語は、腫瘍抗原のエピトープへのインビトロアッセイ、好ましくはプラズモン共鳴アッセイ（BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden）で精製された野生型抗原への結合を意味する。結合親和性はｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の結合の速度定数）、ｋＤ（解離定数）、及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）なる用語によって定義される。結合する又は特異的に結合するは、１０−８Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍから１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）を意味する。よって、本発明に係るアフコシル化抗体は、１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは１０−８Ｍから１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）で腫瘍抗原に特異的に結合する。
【００３７】
ここで使用される「核酸分子」なる用語は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は一本鎖又は二本鎖でありうるが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００３８】
「定常ドメイン」は抗原に対する抗体の結合には直接的には関与しないがエフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合、及びＣＤＣ）に関与している。
【００３９】
ここで使用される「可変領域」（軽鎖（ＶＬ）の可変領域、重鎖（ＶＨ）の可変領域）は、抗原への抗体の結合に直接関与する軽鎖及び重鎖の各対を示す。ヒト軽鎖及び重鎖の可変ドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインが、その配列が広く保存され３つの「高頻度可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はｂシート高次構造を採用し、ＣＤＲはｂシート構造を連結するループを形成しうる。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によってその三次元構造に維持され、他の鎖のＣＤＲと一緒になって抗原結合部位を形成する。
【００４０】
「高頻度可変領域」又は「抗体の抗原結合部分」なる用語は、ここで使用される場合、抗原結合を担っている抗体のアミノ酸残基を称する。高頻度可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、ここで定義される高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。よって、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)の標準的な定義に従って決定され、及び／又は「高頻度可変ループ」からの残基である。
【００４１】
「アフコシル化抗体」なる用語は、減少したレベルのフコース残基を有するＡｓｎ２９７におけるＦｃ領域中の改変されたグリコシル化パターンを有するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）の抗体を意味する。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、コアフコシル化二分岐複合型オリゴ糖グリコシル化としてＡｓｎ２９７で生じ、２個までのＧａｌ残基で終結する。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（α１，６もしくはα１，３）、又はＧ２グリカン残基と命名されている（Raju, T.S., BioProcess Int. 1 (2003) 44-53）。抗体Ｆｃ部分のＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Routier, F. H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207に記載されている。非糖修飾ＣＨＯ宿主細胞中で組換え的に発現される抗体は、通常、少なくとも８５％の量がＡｓｎ２９７においてフコシル化されている。ここで使用されるアフコシル化抗体なる用語は、そのグリコシル化パターン中にフコースを有していない抗体を含むと理解されるべきである。抗体中の典型的なグリコシル化残基位置はＥＵ番号付けシステムによる２９７位のアスパラギン（「Ａｓｎ２９７」）であることが一般に知られている。
【００４２】
「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基を指す場合に一般に使用される（例えば出典明示により明示的にここに援用される、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)に報告されたＥＵインデックス）。
【００４３】
よって、本発明に係るアフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下である（これはＡｓｎ２９７におけるＦｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％以上がアフコシル化されていることを意味する）ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）の抗体を意味する。一実施態様では、フコース量は、Ａｓｎ２９７におけるＦｃ領域のオリゴ糖の４０％から６０％の間である。他の実施態様では、フコース量は５０％以下であり、更に他の実施態様では、フコース量はＡｓｎ２９７におけるＦｃ領域のオリゴ糖の３０％未満である。本発明によれば、「フコースの量」は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定され、平均値として算出される、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖（糖）（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造物）の合計に対するＡｓｎ２９７におけるオリゴ糖（糖）鎖内の上記オリゴ糖（フコース）の量を意味する（フコースの量を定量する詳細な手順は例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されている）。更に、一実施態様では、Ｆｃ領域のオリゴ糖は二分されている。本発明に係るアフコシル化抗体は、Ｆｃ領域におけるオリゴ糖を部分的にフコシル化するのに十分な量でＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドをコードする少なくとも一の核酸を発現するように操作された糖修飾宿主細胞において発現させることができる。一実施態様において、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは、融合ポリペプチドである。別法では、米国特許第６９４６２９２号に従って宿主細胞のα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を低下させるか又は消失させて、糖修飾した宿主細胞を産生させることもできる。抗体フコシル化の量は、例えば発酵条件（例えば発酵時間）によって、又は異なったフコシル化量の少なくとも２種の抗体を組合わせることによって、予め決定することができる。このようなアフコシル化抗体及び各糖鎖工学法は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180、国際公開第９９／１５４３４２号、国際公開第２００５／０１８５７２号、国際公開第２００６／１１６２６０号、国際公開第２００６／１１４７００号、国際公開第２００５／０１１７３５号、国際公開第２００５／０２７９６６号、国際公開第９７／０２８２６７号、米国特許第２００６／０１３４７０９号、米国特許第２００５／００５４０４８号、米国特許第２００５／０１５２８９４号、国際公開第２００３／０３５８３５号、国際公開第２０００／０６１７３９号に記載されている。これらの糖操作抗体は増加したＡＤＤＣを有している。本発明に係るアフコシル化抗体を生じせしめる他の糖鎖工学法は、例えばNiwa, R.等, J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160；Shinkawa, T.等, J Biol Chem, 278 (2003) 3466-3473；国際公開第０３／０５５９９３号又は米国特許第２００５／０２４９７２２号に記載されている。
【００４４】
よって、本発明の一態様は、抗ＶＥＧＦ抗体と併用される癌治療医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下である、ＣＤ２０に特異的に結合するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプ）のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。好ましくは、フコース量は、Ａｓｎ２９７におけるオリゴ糖（糖）の全量の４０％から６０％の間である。
【００４５】
ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても知られており；配列はＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６によって特徴付けられる）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置する分子量がおよそ３５ｋＤの疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A.等, J. Biol. Chem. 264(19) (1989) 11282-11287；Tedder, T.F.等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212；Stamenkovic, I.等, J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-80；Einfeld, D.A.等, EMBO J. 7 (1988) 711-7；Tedder, T.F.等, J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としてもまた知られている膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンスプライス境界によって特徴付けられ、造血細胞及び非リンパ系組織間で独特の発現パターンを示す。この遺伝子はＢ細胞の発生及び形質細胞への分化において所定の役割を担っているＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーはファミリーメンバーのクラスター間の１１ｑ１２に局在化している。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異体を生じる。
【００４６】
「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」という用語はここでは互換的に使用され、細胞により天然に発現される、又はＣＤ２０遺伝子を形質移入した細胞で発現されるヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォーム及び種ホモログを含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０の不活性化によるＣＤ２０発現細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０発現細胞の死滅は、次の機構の一又は複数によって生じうる：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ。
【００４７】
当該技術分野で認識されているように、ＣＤ２０の同意語には、Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂ−リンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５が含まれる。
【００４８】
本発明に係る「抗ＣＤ２０抗体」なる用語は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗体のＣＤ２０抗原への結合特性及び生物活性に依存して、Cragg, M.S.等, Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S.等, Blood 101 (2003) 1045-1051に従い、２つのタイプの抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）に区別できる。表２を参照のこと。
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【００４９】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えばヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示される）、及びＡＴ８０ ＩｇＧ１を含む。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプならば）を有している。
【００５０】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えばリツキシマブ、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ，ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）及び２Ｈ７ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示）を含む。
【００５１】
本発明に係るアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、一実施態様ではＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、他の実施態様では、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００５２】
本発明に係るアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、フコースが減少していない抗ＣＤ２０抗体と異なり増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有している。
【００５３】
「増加した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体」は、該用語がここで定義されるように、当業者に知られる任意の適切な方法により決定されて増加したＡＤＣＣを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を意味する。一つの許容されるインビトロＡＤＣＣアッセイは、次の通りである：
１）該アッセイは、抗体の抗原結合領域により認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）該アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選択された健常なドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）該アッセイは、次のプロトコルに従って実施される：
ｉ）標準的な密度遠心分離手順を使用してＰＢＭＣを単離し、５×１０６細胞／ｍｌの濃度でＲＰＭＩ細胞培養培地に懸濁させる；
ｉｉ）標準的な組織培養法により標的細胞を増殖させ、生存率が９０％以上の対数増殖期に回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、細胞培養培地で２回洗浄し、１０５細胞／ｍｌの密度で細胞培養培地に再懸濁させる；
ｉｉｉ）上記１００マイクロリットルの最終的な標的細胞懸濁物を９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を細胞培養培地で４０００ｎｇ／ｍから０．０４ｎｇ／ｍｌに連続希釈し、５０マイクロリットルの得られた抗体溶液を９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加し、上記の全濃度範囲をカバーする様々な抗体濃度で３回試験する；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールに対して、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）に代えて、５０マイクロリットルの非イオン性洗浄剤（Nonidet, Sigma, St. Louis）の２％（ＶＮ）水溶液を添加する；
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）コントロールに対して、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）に代えて、５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培養培地を添加する；
ｖｉｉ）ついで、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離し、１時間４℃でインキュベートする；
ｖｉｉｉ）エフェクター：標的細胞の比率が２５：１となるように各ウェルに５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上記のｉ項）を添加して、該プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター中に４時間配する；
ｉｘ）各ウェルから無細胞の上清を回収し、ガンマカウンターを使用して、実験的に放出された放射能（ＥＲ）を定量する；
ｘ）特定の細胞溶解の割合を、各抗体濃度について、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００に従って計算する。ここで、ＥＲは、各抗体濃度で定量（上記のｉｘ項）された平均放射能であり、ＭＲは、ＭＲコントロール（上記のｖ項）において定量（上記のｉｘ項）された平均放射能であり、ＳＲは、ＳＲコントロール（上記のｖｉ項）において定量（上記のｉｘ項）された平均放射能である；
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特定の細胞溶解の最大割合の増加、及び／又は上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特定の細胞溶解の最大割合の半分を達成するのに必要な抗体濃度の減少の何れかとして定義される。ＡＤＣＣの増加は、上記アッセイで測定され、当業者に知られている同じ標準的な生産、精製、製剤化及び保存法を使用して同じ種類の宿主細胞により産生された同じ抗体により媒介されるものであるが、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作された宿主細胞により産生されたものではないＡＤＣＣと比較したものである。
【００５４】
前記「増加したＡＤＣＣ」は、前記抗体の糖操作により得ることができ、これは、Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されたそのオリゴ糖類成分の操作によるモノクローナル抗体の前記天然の細胞媒介性エフェクター機能の亢進を意味する。
【００５５】
「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」なる用語は、補体存在下での本発明に係る抗体によるヒト標的腫瘍細胞の溶解を称する。ＣＤＣは、好ましくは、補体の存在下で本発明に係る抗ＣＤ２０抗体を用いたＣＤ２０発現細胞の調製物の処理により測定される。ＣＤＣは、抗体が、１００ｎＭの濃度で４時間後に腫瘍細胞を２０％以上溶解（細胞死）させるかどうかにより見出される。該アッセイは、好ましくは、５１Ｃｒ又はＥｕ標識腫瘍細胞で、放出された５１Ｃｒ又はＥｕを測定することにより実施される。コントロールは、抗体を含まないで補体と腫瘍標的細胞をインキュベーションすることを含む。
【００５６】
「リツキシマブ」抗体（参照抗体；Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作キメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含み、１９９８年４月１７日に発行され、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに付与された米国特許第５７３６１３７号（Andersen等）の「Ｃ２Ｂ８」という名称で特定されている。リツキシマブは、再発性又は難治性の低悪性度又は濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療に対して承認されている。インビトロ作用機序研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を示すことを示している（Reff, M.E.等, Blood 83(2) (1994) 435-445）。加えて、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて有意な活性を示す。リツキシマブはアフコシル化されていない。
【００５７】
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【００５８】
「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」なる用語は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を称し、これらは、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体のＢ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２（Poppema, S.及びVisser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照のこと）を、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインを用いてキメラ化され、ついでヒト化することにより取得された（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照のこと）。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。
【００５９】
一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３から配列番号２０の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する（国際公開第２００５／０４４８５９及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８からＢ−ＨＬ１７）。特定の一実施態様において、このような可変ドメインは、配列番号３、４、７、９、１１、１３及び１５である（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）からなる群から選択される。特定の一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号２０の軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶｌ）。特定の一実施態様では、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号７の重鎖の可変領域（ＶＨ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ６）と配列番号２０の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）を有している。更に、一実施態様では、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はＩｇＧ１抗体である。本発明によれば、かかるアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号に記載された手順に従ってＦｃ領域において糖操作（ＧＥ）される。一実施態様では、アフコシル化糖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１はＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１である。そのような糖操作されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域において改変されたグリコシル化パターンを有しており、好ましくは、フコース残基のレベルが低下している。一実施態様では、フコース量がＡｓｎ２９７においてオリゴ糖の全量の６０％以下である（一実施態様では、フコース量が４０％と６０％の間であり、他の実施態様では、フコース量が５０％以下であり、更に他の実施態様では、フコース量が３０％以下である）。他の実施態様では、Ｆｃ領域のオリゴ糖は好ましくは２分されている。これらの糖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は増加したＡＤＣＣを有している。
【００６０】
ここで使用される「ＶＥＧＦ」なる用語は、例えばLeung, D.W.等, Science 246 (1989) 1306-1309; Keck, P.J.等, Science 246 (1989) 1309-1312及びConnolly, D.T.等, J. Biol. Chem. 264 (1989) 20017-20024に記載されている血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ−Ａ）を意味する。ＶＥＧＦは、正常及び異常な血管新生、及び腫瘍や眼病に関連する新血管新生の調節に関与している（Ferrara, N., 及び Davis-Smyth, T., Endocr. Rev. 18 (1997) 4-25；Berkman, R.A.等, J. Clin. Invest. 91 (1993) 153-159；Brown, L.F.等, Human Pathol. 26 (1995) 86-91；Brown, L.F.等, Cancer Res. 53 (1993) 4727-4735；Mattern, J.等, Brit. J. Cancer. 73 (1996) 931-934；及びDvorak, H.等, Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039）。ＶＥＧＦは、数種の供給源から単離されたホモ二量体糖タンパク質である。ＶＥＧＦは内皮細胞に対して、高度に特異的な分裂促進活性を示す。ＶＥＧＦは胎児脈管形成期における新規の血管形成、及び成人期の血管形成において、重要な調節機能を有する（Carmeliet, P.等, Nature, 380 (1996) 435-439；Ferrara, N.等, Nature, 380 (1996) 439-442；Ferrara, N.及びDavis-Smyth, T., Endocrine Rev., 18 (1997) 4-25を参照）。ＶＥＧＦが担っている役割の重要性は、単一のＶＥＧＦ対立遺伝子の不活性化が脈管構造の発達の失敗による胚性致死に至ることを示した研究で証明されている（Carmeliet, P.等, Nature 380 (1996) 435-439；Ferrara, N.等, Nature 380 (1996) 439-442）。さらに、ＶＥＧＦは単球への強力な走化性因子活性を有し、内皮細胞においてプラスミノーゲンアクチベーター及びプラスミノーゲンアクチベーターインヒビターを誘導可能であり、さらに毛細血管透過性も誘発可能である。後者の活性により、しばしば血管透過性因子(ＶＰＦ)とも称される。ＶＥＧＦの単離及び特性は概説されている；Ferrara, N.等, J. Cellular Biochem. 47 (1991) 211-218及びConnolly, J. Cellular Biochem. 47 (1991) 219-223を参照のこと。単一の ＶＥＧＦ遺伝子の選択的ｍＲＮＡスプライシングにより、ＶＥＧＦの５つのアイソフォームが生じる。
【００６１】
本発明にかかる「抗ＶＥＧＦ抗体」なる用語は、ＶＥＧＦ抗原に特異的に結合する抗体である。一実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体には、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９により生産されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体 Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；Presta等 Cancer Res. 57 (1997)4593-4599に従い産生された組換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が含まれ、限定されるものではないが、「ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ」又は「アバスチン」としても知られている「ベバシズマブ(ＢＶ)」として知られる抗体も含まれる。ベバシズマブは、そのレセプターへのヒトＶＥＧＦの結合をブロックするマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１からの抗原結合相補性決定領域及び変異したヒトＩｇＧ１フレームワーク領域を含む。ほとんどのフレームワーク領域を含む、ベバシズマブのアミノ酸配列の約９３％がヒトＩｇＧ１から誘導され、配列の約７％がマウス抗体Ａ４．６．１から誘導されている。ベバシズマブは、約１４９０００ダルトンの分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、２００５年２月２６日に発行された米国特許第６８８４８７９号にさらに記載されている。付加的な好ましい抗体には、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１３５９に記載されているような、Ｇ６又はＢ２０シリーズ抗体（例えば、Ｇ６−２３、Ｇ６−３１、Ｂ２０−４．１）が含まれる。さらなる好ましい抗体については、米国特許第７０６０２６９号、米国特許第６５８２９５９号、米国特許第６７０３０２０号；米国特許第６０５４２９７号；国際公開第９８／４５３３２号；国際公開第９６／３００４６号；国際公開第９４／１１０２０２号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許出願第２００６００９３６０号、米国特許第２００５０１８６２０８号、米国特許第２００３０２０６８９９号、米国特許第２００３０１９０３１７号、米国特許第２００３０２０３４０９号、及び米国特許第２００５０１１２１２６号；及びPopkov等, Journal of Immunological Methods 288:(2004）149-164を参照。それらはヒト及びマウスＶＥＧＦへの結合によって特徴付けられ；これは、マウスモデルにおけるマウスｍｕＶＥＧＦ刺激性血管新生に対するその効果を研究するための必須条件である。この発明の「Ｇ６シリーズ抗体」は、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１２３５９の、図７、２４−２６、及び３４−３５の任意の一つのＧ６抗体又はＧ６-誘導抗体の配列から誘導された抗ＶＥＧＦ抗体である。この発明の「Ｂ２０シリーズ抗体」は、ＰＣＴ出願公開第２００５／１０１２３５９の、図２７−２９の任意の一つのＢ２０抗体又はＢ２０-誘導抗体の配列から誘導された抗ＶＥＧＦ抗体である。
【００６２】
オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態、及び特定の生物活性を含む、治療用糖タンパク質の効能に関連した特性に有意に影響し得る。そのような性質は、オリゴ糖の有無だけでなく、その特定の構造にも依存しうる。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間の一般化を図ることができる。例えば、所定のオリゴ糖構造は、特定の糖結合タンパク質との相互作用を通じての血流からの糖タンパク質の迅速な排除を媒介する一方、他のものは抗体に結合し、望まれない免疫反応を惹起させる（Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００６３】
哺乳動物細胞は、ヒトへの応用に最も適合性のある形態にタンパク質をグリコシル化するその能力のために治療用糖タンパク質生産のための優れた宿主である（Cumming, D.A.等, Glycobiology 1 (1991) 115-30；Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。細菌はタンパク質を非常に希にしかグリコシル化せず、酵母、糸状真菌、昆虫及び植物細胞等の他のタイプの一般的な宿主と同様に、血流からの迅速な排除、望ましくない免疫相互作用、及びある特定の場合では、生物活性の低下に関与するグリコシル化パターンを生じる。哺乳動物細胞の中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、最近２０年間に最も一般的に使用されている。適切なグリコシル化パターンを与えるのに加えて、これらの細胞は、遺伝的に安定で、高度に生産性のクローン細胞系の一貫した産生を可能とする。これらは、簡単なバイオリアクター中で、無血清培地を使用して高密度で培養することが可能で、安全かつ再現可能なバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に使用される動物細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０−マウスミエローマ細胞を含む。より最近では、トランスジェニック動物由来の生産物もまた試験されている（Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【００６４】
全ての抗体は、重鎖定常領域の保存位置に炭水化物構造を含み、各アイソタイプは、Ｎ結合型等構造の別個のアレイを有し、これらはタンパク質アセンブリ、分泌又は機能的活性に様々に影響する（Wright, A.及びMonison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。結合したＮ結合炭水化物の構造は、プロセシングの度合いに応じてかなり変化し、高マンノースの多重に分岐した、並びに二分岐複合体オリゴ糖を含みうる（Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。 典型的には、特定のグリコシル化部位で結合したコアオリゴ糖構造の不均一なプロセシングが存在し、モノクローナル抗体であっても複数の糖形態として存在する。同様に、細胞株の間で抗体のグリコシル化において大きな差異が生じることが示されており、異なる培養条件下で増殖した与えられた細胞株に対して更に僅かな差異が見られる（Lifely, M.R.等, Glycobiology 5(1995) 813-822）。
【００６５】
単純な生産プロセスを維持し、有意な望ましくない副作用を潜在的に回避しながら、効力を大きく増加させる一つの方法は、Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されるように、そのオリゴ糖成分を操作することにより、モノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を亢進させることである。癌免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合した２分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋まり、ポリペプチド主鎖との広範な接触を形成し、その存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）等のエフェクター機能を媒介するのに必須である（Lifely, M.R.等, Glycobiology 5 (1995) 813-822；Jefferis, R.等, Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76；Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。
【００６６】
２分岐オリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（ｌ，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ１１（「ＧｎＴＩＩ１７ｙ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞により生産される抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に増加させることが既に示されている（その全内容が出典明示によりここに援用されるUmana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及び国際公開第９９／１５４３４２号を参照）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な工業用細胞株において生産された場合、殆ど効力を有さず臨床的に有用ではない非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。その研究は、２分岐非フコシル化オリゴ多糖を含む、定常領域（Ｆｃ）に結合した２分岐のオリゴ糖の割合の増加をまた引き起こす、ＧｎＴＩＩＩを発現するように、抗体産生細胞を操作することにより、天然に生じる抗体に見出されるレベルを超えて、ＡＤＣＣ活性の大幅な増加が達成されうることを最初に示したものである。
【００６７】
ここで使用される「癌」なる用語は、リンパ腫、リンパ性白血病、肺癌、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）癌、細気管支肺胞性細胞肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚又は眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部位の癌、胃癌（stomach cancer）、胃癌（gastric cancer）、結腸癌、乳癌、子宮癌、輪卵管の癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓又は尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、多形性神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、髄膜腫、扁平上皮細胞癌、下垂体腺腫、上記癌の任意の抵抗性のもの、又は上記癌の一又は複数の組合せを含む。一実施態様では、癌なる用語はＣＤ２０発現癌を意味する。
【００６８】
「ＣＤ２０抗原の発現」なる用語は、腫瘍又は癌のそれぞれに由来し、好ましくは非固形腫瘍に由来する細胞、好ましくはＴ細胞又はＢ細胞、より好ましくはＢ細胞の細胞表面上にＣＤ２０抗原の有意なレベルの発現を示すことを意図する。「ＣＤ２０発現癌」の患者は、当該技術分野で知られている標準的なアッセイにより判定されうる。例えば、ＣＤ２０抗原の発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳ又は対応するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出を使用して測定され得る。
【００６９】
ここで使用される「ＣＤ２０発現癌」なる用語は、癌細胞がＣＤ２０抗原の発現を示す全ての癌を称する。好ましくは、ここで使用されるＣＤ２０発現癌は、リンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を称する。かかるリンパ腫及びリンパ性白血病には、例えばａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小非切断細胞リンパ腫／バーキットリンパ腫（風土性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、及び脾臓性辺縁帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリーセル白血病、ｇ）リンパ性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ｉ）形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病を含む。
【００７０】
一実施態様では、ＣＤ２０発現癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。他の実施態様では、ＣＤ２０発現癌は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリーセル白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。
【００７１】
例えば癌に適用される場合、「治療する方法」なる用語又はその等価な用語は、患者の癌細胞の数を減少させ又は消滅させるように、又は癌の症状を緩和するように設計された作用手順又は過程を称する。癌又は他の増殖性疾患を「治療する方法」は、癌細胞又は他の疾患が実際に消滅し、細胞又は疾患の数が実際に減少し、又は癌又は他の疾患の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味しない。しばしば、癌を治療する方法は、成功率が低くとも実施されるが、そうした方法は、患者の病歴及び推定余命を与えられると、それでもかかわらず、全体的な有益な作用過程をもたらすものとみなされる。
【００７２】
「同時投与」又は「同時投与する」なる用語は、上記アフコシル化抗ＣＤ２０及び抗ＶＥＧＦ抗体を単一の製剤として又は２つの別個の製剤として投与することを称する。同時投与は、同時又は何れかの順で逐次的であり得、好ましくは、両方の（又は全ての）活性成分がそれらの生物学的活性を同時に奏する期間が存在する。上記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体は、同時に又は逐次的に（持続的な注入を通じて静脈内（ｉ．ｖ．）経由で同時投与される（一つは抗ＣＤ２０抗体であり、最終的にもう一つは抗ＶＥＧＦ抗体）。両方の治療剤を逐次的に同時投与する場合、投薬は、同じ日に２回の別個の投与で投与されるか、薬剤の一つを１日目に投与し、第２のものが２日から７日目に、好ましくは２日から４日目に同時投与される。よって、「逐次的に」なる用語は、第１の成分（抗ＣＤ２０抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体）の投薬後７日以内、好ましくは第１の成分の投薬後４日以内を意味し；「同時に」なる用語は同時を意味する。上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体の維持用量に関して「同時投与」なる用語は、治療サイクルが双方の薬物に適している場合、例えば毎週、該維持用量が同時に同時投与されうることを意味する。あるいは、例えば抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば１日から３日毎に投与され、上記アフコシル化抗体は毎週投与される。あるいは、維持用量が、１日以内か数日以内に、逐次的に同時投与される。
【００７３】
抗体が、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床家により求められる、組織、系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発する各化合物又は組合せの量である「治療的に有効な量」（又は単に「有効量」））で患者に投与されることは自明である。
【００７４】
上記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体の同時投与の量及び同時投与のタイミングは、治療される患者のタイプ（種、性別、年齢、体重など）及び症状及び治療される疾患又は症状の重篤度に依存する。上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体は、適切には、１回で又は一連の治療で、例えば同日又は翌日に患者に同時投与される。
【００７５】
投与が静脈内である場合、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体に対する初期注入時間は、続く注入時間より長くてもよく、例えば初期注入が約９０分で、以後の注入が約３０分でもよい（初期注入が十分に許容される場合）。
【００７６】
疾患のタイプと重篤度に応じて、約１μｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び約１μｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の抗ＶＥＧＦ抗体が、患者への同時投与の初期候補投薬量である。一実施態様では、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の好ましい投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組合せ）の一又は複数の用量が患者に同時投与されうる。一実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体（好ましくはベバシズマブ）の投薬量は約０．５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。よって、０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの一又は複数の投薬量（又はその任意の組合せ）が、患者に同時投与されうる。
【００７７】
患者のタイプ（種、性別、年齢、体重など）と症状、及びアフコシル化抗ＣＤ２０抗体のタイプに応じて、上記アフコシル化抗体の投薬量及び投与スケジュールは、抗ＶＥＧＦ抗体とは異なる可能性がある。例えば上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、例えば一週間毎から３週間毎に投与され得、抗ＶＥＧＦ抗体は毎日又は２から１０日毎に投与されうる。初期の高用量後に一又は複数の低用量をまた投与してもよい。
【００７８】
一実施態様では、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の好ましい投薬量は、３から６週投薬サイクルの１、８、１５日目に８００から１２００ｍｇ、ついで８回までの３から４週投薬サイクルの１日目に８００から１２００ｍｇの投薬量で投与される。一実施態様では、ベバシズマブの好ましい投薬量は、ｉｖ注入として１４日毎に１回、５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇである。乳癌、脳の癌（神経膠芽腫）又は腎臓（腎細胞）癌の治療におけるベバシズマブの推奨投薬量は、ｉｖ注入で４日毎に、１０ｍｇ／ｋｇである。推奨投薬量は、同時投与される化学療法剤があるかどうかや化学療法剤のタイプに基づき、変わるであろう（５又は１０ｍｇ／ｋｇ）（例えば、週毎に５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを、Ｒ−ＣＨＯＰと共に、又はサイクル１の１日目に１５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブ、続いて２日目にＲ−ＣＨＯＰ；及び可能な投与パターンとして、サイクル２−８では１日目にＲ−ＣＨＯＰ）。
【００７９】
また、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の好ましい投薬量は、８回までの３週投薬サイクルの１日目に例えば８０から１２００ｍｇ（好ましくは１０００ｍｇ）とすることができる。ベバシズマブについての好ましい投薬量は、ｉｖ注入として１４日毎に１回、５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇである。
【００８０】
一実施態様では、医薬は、癌、好ましくはＣＤ２０発現癌に罹患している患者において転移又は更なる播種性転移を予防又は低減させるのに有用である。該医薬は、かかる患者の生存期間を増加させ、かかる患者の無増悪生存期間を増加させ、応答期間を増加させ、生存期間、無増悪生存期間、奏効率又は応答期間により測定される治療される患者の統計的に有意で臨床的に意味のある改善を生じせしめるのに有用である。好ましい実施態様では、医薬は患者群の奏効率を増加させるのに有用である。
【００８１】
本発明の文脈において、更なる他の細胞傷害剤、化学療法剤又は抗癌剤、又はかかる薬剤の作用を亢進させる化合物（例えばサイトカイン）が、癌のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体の併用治療において使用されうる。かかる分子は、適切には、意図される目的に対して効果的な量で組み合わされて存在する。一実施態様では、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体併用治療は、かかる更なる細胞傷害剤、化学療法剤又は抗癌剤、又はかかる薬剤の効果を亢進する化合物なしで使用される。
【００８２】
このような薬剤は、例えば、アルキル化剤又はアルキル化作用を有する薬剤、例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばシトキサン（登録商標））、クロランブシル（ＣＨＬ；例えばリューケラン（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えばプラチノール(platinol)（登録商標））、ブスルファン（例えばミレラン（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣ等；代謝拮抗物質、例えばメソトレキセート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばベプシド（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えばゼローダ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）等；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えばアドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン等；アルカロイド、例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチン等；及び他の抗腫瘍剤、例えばパクリタキセル（例えばタキソール（登録商標）））、及びパクリタキセル誘導体、細胞分裂阻害剤、グルココルチコイド、例えばデキサメタゾン（ＤＥＸ；例えばデカドロン（登録商標））及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾン、ヌクレオシド酵素インヒビター、例えばヒドロキシ尿素、アミノ酸枯渇化酵素、例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体、及び類似の多様な抗腫瘍剤を含む。次の薬剤もまた更なる薬剤として使用することができる：アルニホスチン（例えばエチヨル（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えばドキシル（登録商標））、ゲムシタビン（例えばジェムザール（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えばダウノキソーム（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばタキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロランブシル。好ましくは、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体併用治療は、かかる更なる薬剤なしで、使用される。
【００８３】
上述の細胞傷害及び抗癌剤並びに抗増殖性標的特異的抗癌薬、例えば化学療法レジメンにおけるプロテインキナーゼインヒビターの使用は、一般に癌治療の技術分野で充分に特徴付けられており、ここでのその使用は、幾らかの調整を施して、耐性と効能をモニターし、また投与経路と投薬量を管理するための同じ考慮事項に属する。例えば細胞傷害剤の実際の投薬量は、組織培養法を使用して決定される患者の培養細胞応答に依存して変動しうる。一般に、投薬量は、更なる他の薬剤の非存在下で使用される量と比較して減少される。
【００８４】
効果的な細胞傷害剤の典型的な投薬量は、製造者によって推奨される範囲であり得、インビトロ応答又は動物モデルにおける応答により示される場合、約１オーダー分までの濃度又は量を減少させることができる。よって、実際の投薬量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性腫瘍細胞又は組織培養組織試料のインビトロ応答性、又は適切な動物モデルで観察される応答に基づく治療方法の効能に依存する。
【００８５】
本発明の文脈では、ＣＤ２０発現癌のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体併用治療に加えて、有効量の電離放射が照射され、及び／又は放射性医薬品が使用されうる。放射線源は、治療される患者に対して体外でも体内でもよい。放射線源が患者に対して体外である場合、治療は外部ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者に対して体内である場合、治療は密封小線源治療法（ＢＴ）と呼ばれる。本発明の文脈で使用される放射性原子は、限定されないが、ラジウム、セシウム−１３７、インジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨード−１２３、ヨード−１３１、及びインジウム−１１１を含む群から選択されうる。また、かかる放射性同位体で抗体を標識することもできる。一実施態様において、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体併用治療は、かかる電離放射線なしで使用される。
【００８６】
放射線療法は、切除不能な又は手術不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移をコントロールするための標準的な治療法である。改善された結果は、放射線療法を化学療法と組合せると得られる。放射線療法は、標的領域に送達される高線量の放射線が、腫瘍組織と正常組織の両方の生殖細胞死を生じるという原理に基づく。放射線量レジメンは、一般に放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間及び分割で定義され、腫瘍学者により注意深く定められなければならない。患者が受ける放射線被爆量は様々な考慮事項に依存するが、２つの最も重要なことは、体の他の重要な構造もしくは臓器に対する腫瘍の位置と、腫瘍が広がっている度合いである。放射線療法を受けている患者の典型的な治療過程は、１〜６週間で、患者に投与される総線量が１０〜８０Ｇｙで、１日の割合が約１．８〜２．０Ｇｙで、週に５日間という治療スケジュールである。この発明の好適な実施態様では、ヒト患者の腫瘍が本発明の併用治療と放射線で治療される場合に相乗作用がある。換言すれば、本発明の組合せを含む薬剤による腫瘍増殖の阻害は、放射線と組合せ、場合によっては更なる化学療法又は抗癌剤を組合せられると、亢進される。アジュバント放射線療法のパラメータは、例えば国際公開第９９／６００２３号に含まれている。
【００８７】
アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、既知の方法に従って、例えばボーラスとして静脈内投与により、又は一定時間かけての連続的注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液内、又はくも膜下経路で、患者に投与されうる。一実施態様では、そのような抗体は静脈内又は皮下投与に投与される。
【００８８】
抗ＶＥＧＦ抗体は、既知の方法に従って、例えばボーラスとして静脈内投与により、又は一定時間かけての連続的注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液内、又はくも膜下経路で、患者に投与されうる。一実施態様では、そのような抗体は静脈内又は腹腔内投与によって投与される。
【００８９】
ここで使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は、溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤、及び薬剤投与に適合する他の材料や化合物を含む医薬の投与に適合性のある任意かつ全ての物質を含むことが意図される。任意の媒体又は薬剤が活性化合物と非適合性である場合以外は、本発明の組成物におけるその使用が考えられる。補充の活性化合物もまた組成物中に導入することができる。
【００９０】
薬学的組成物
薬学的組成物は、この発明に係る抗ＣＤ２０抗体及び／又は抗ＶＥＧＦ抗体を、薬学的に許容可能な無機又は有機担体とプロセシングすることによって得ることができる。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等を、例えば錠剤、被覆錠剤、糖衣錠及び硬質ゼラチンカプセルのかかる担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセルのための適切な担体は、例えば植物油、ロウ、脂肪、半固形及び液体ポリオール等である。しかしながら、活性物質の性質に応じて、軟質ゼラチンカプセルの場合、通常は担体は必要とされない。溶液及びシロップの製造のための適切な担体は例えば水、ポリオール、グリセロール、植物油等である。坐薬に対して適切な担体は例えば天然又は硬化油、ロウ、脂肪、半液体又は液体ポリオール等である。
【００９１】
薬学的組成物は更に保存料、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味料、浸透圧を変化させる塩、バッファー、マスキング剤又は抗酸化剤を含みうる。それらはまた更に他の治療的に価値のある物質を含みうる。
【００９２】
本発明の一実施態様では、組成物は、癌、特にＣＤ２０発現癌（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））の治療における使用のために、フコースの量が６０％以下である上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、上記アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）と抗ＶＥＧＦ抗体を含有する。
【００９３】
上記薬学的組成物は一又は複数の薬学的に許容可能な担体を更に含有しうる。
【００９４】
本発明は、（ｉ）フコースの量が６０％以下である第一有効量のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）と、（ｉｉ）第二有効量の抗ＶＥＧＦ抗体を含有する、特に癌の治療に使用するための、薬学的組成物を更に提供する。かかる組成物は場合によっては薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を含有する。
【００９５】
本発明に従って使用されるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体単独の薬学的組成物は、貯蔵のために、所望の純度を有する抗体を任意成分の薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と混合することにより（Remington's Pharmaceutical Sciences 16版, Osol, A.(編) (1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、貯蔵のために調製される。許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントにとって非毒性であり、ホスフェート、シトレート、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【００９６】
抗ＶＥＧＦ抗体の薬学的組成物はアフコシル化抗ＣＤ２０抗体に対して上述したものと同様でありうる。
【００９７】
本発明の更なる一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び抗ＶＥＧＦ抗体が二つの別個の薬学用組成物に処方される。
【００９８】
活性成分はまた例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル、及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルを、コロイド薬剤送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンで、例えばコアセルベーション法又は界面重合により調製されるマイクロカプセルに捕捉することができる。かかる技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16版, Osol, A.編(1980)に開示されている。
【００９９】
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の適切な例は、抗体を含む固形親水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、該マトリックスは、成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメート共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体と酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフィア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
【０１００】
インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜による濾過によって直ぐに達成される。
【０１０１】
一実施態様は、癌の治療のための、Ａｓｎ２９７においてフコース量がオリゴ糖（糖）全量の６０％以下であるアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体とベバシズマブ又はＢ２０シリーズ抗体を含有する組成物である。
【０１０２】
本発明は、（ｉ）フコースの量が６０％以下である第一有効量のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、アフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）と、（ｉｉ）第二有効量の抗ＶＥＧＦ抗体を、かかる治療を必要とする患者に投与することを含む、癌の治療方法を更に提供する。
【０１０３】
一実施態様では、フコース量は４０％と６０％の間である。
【０１０４】
好ましくは、上記癌はＣＤ２０発現癌である。
【０１０５】
好ましくは、上記ＣＤ２０発現癌はＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１０６】
好ましくは、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。
【０１０７】
好ましくは、上記抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１０８】
好ましくは、上記抗ＶＥＧＦ抗体は、ベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体、より好ましくはＢ２０シリーズ抗体、さらに好ましくはベバシズマブである。
【０１０９】
好ましくは、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１であり、上記抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であり、上記癌はＣＤ２０発現癌、好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１１０】
ここで使用される場合、「患者」なる用語は、好ましくは、何らかの目的でアフコシル化抗ＣＤ２０抗体による治療を必要とするヒト（例えばＣＤ２０発現癌に罹患している患者）、より好ましくは、癌、又は前癌症状又は病態の処置を要するヒトを称する。しかしながら、「患者」という用語は、また非ヒト動物、好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ及び非ヒト霊長類等の哺乳動物を指す場合もある。
【０１１１】
本発明は抗ＶＥＧＦ抗体との併用での癌の治療のための、フコース量が６０％以下のアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を更に含む。
【０１１２】
本発明は、癌の治療に使用するためにフコース量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と抗ＶＥＧＦ抗体を更に含む。
【０１１３】
好ましくは、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１１４】
好ましくは、上記抗ＶＥＧＦ抗体は、ベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体、より好ましくはＢ２０シリーズ抗体、更に好ましくはベバシズマブである。
【０１１５】
好ましくは、上記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１であり、上記抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブ、Ｂ２０シリーズ抗体又はＧ６シリーズ抗体であり、上記癌はＣＤ２０発現癌、好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１１６】
次の実施例と図は本発明の理解を助けるために提供されるもので、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載される。本発明の精神から逸脱することなく、記載された手順に変更をなすことができることが理解される。
【０１１７】
配列リスト
配列番号１：マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２：マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖の可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。
配列番号３−１９：ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９、Ｂ−ＨＬ８、及びＢ−ＨＬ１０からＢ−ＨＬ１７）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２０：ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体Ｂ−ＫＶ１の軽鎖の可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。
【実施例】
【０１１８】
実験手順
マウス異種移植における抗ＶＥＧＦ抗体とのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の併用治療の抗腫瘍活性
試験剤
アフコシル化抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、糖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、＝ＧＡ１０１；国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照）及びＢ２０−４．１は、GlycArt, Schlieren, Switzerlandから提供された。抗体バッファーは、ヒスチジン、トレハロース及びポリソルベート２０を含んでいた。抗体溶液は先の注入のために原液からＰＢＳで適宜希釈した。
【０１１９】
ベバシズマブはマウス交差反応性でないので（Fuh, G.等, J. Biol. Chem. 281 (2006) 6625-631）、抗ＶＥＧＦ抗体として（ベバシズマブの確立されている代替抗体として）Ｂ２０−４．１抗体を代わりに使用し、抗ＶＥＧＦ抗体とのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（６０％以下のフコース量を有する）Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、糖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、＝ＧＡ１０１）の腫瘍増殖阻害に対する相乗効果を示した。
【０１２０】
細胞株と培養条件
ＳＵ−ＤＨＬ−４ヒトリンパ腫細胞株及び培養培地を、Oncodesignから購入し、提供された。
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【０１２１】
腫瘍細胞を、加湿環境（５％のＣＯ２、９５％の空気）中で３７℃の懸濁液として増殖させた。培養培地は、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ref BE12-702F, Batch N° 8MB0056, Lonza, Verviers, Belgium）を含み、１０％のウシ胎仔血清（Ref 3302, Batch N° P282005, Lonza）が補填されたＲＰＭＩ１６４０であった。細胞を血球計測器で計測し、その生存率を、０．２５％のトリパンブルー排除により評価した。
【０１２２】
動物
５−６週齢の１６−２０ｇ体重の雌のＣＢ１７ ＳＣＩＤべージュマウスを、Charles River（L'Arbresle, France）から得た。処置前に我々の特定病原体除去（ＳＰＦ）動物ケアにおいて７日間観察した。
【０１２３】
動物のケアユニットは、French ministries of Agriculture and Research (agreement No A21231011)により認可されている。動物実験は、動物実験の倫理的ガイドライン（１）、及び実験用腫瘍における動物福祉の英国ガイドライン（２）に従って実施した。
【０１２４】
ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＳＣ ＳＵ−ＤＨＬ−４腫瘍の誘発
マトリゲル（５０：５０、BD Biosciences, France）を含む１００μｌのＰＢＳに１千万（１０７）のＳＵ−ＤＨＬ−４腫瘍細胞が入ったものを、５２匹のメスのＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下（ＳＣ）注射した。
【０１２５】
モニタリング
動物の体重測定、腫瘍体積、臨床的及び死亡率の記録、及び薬剤処置管理を含む、全ての研究データを、Vivo Manager(登録商標)ソフトウェア(Biosystemes, Dijon, France)を使用して管理した。
【０１２６】
イソフルラン・フォレン(Minerve, Bondoufle, France)を使用し、腫瘍細胞のＳＣ播種の前に動物に麻酔をかけ、化合物のＩＶ注射で屠殺した。死亡率、臨床的兆候及び行動を毎日記録した。動物の体重と腫瘍体積をモニターし、週に２回記録した。
【０１２７】
動物の処置
腫瘍が１７２±９５ｍｍ３の平均体積に達した時に、５２の腫瘍担持ヌードマウスのうちの４０匹を、１０匹のマウスの４グループに分配した。処置スケジュールを以下のように選択した：
グループ１のマウスは、４連続週、ビヒクルのＩＶボーラス注射を、週に１回受容した（Ｑ７Ｄ×４）。
グループ２のマウスは、４連続週、３ｍｇ／ｋｇ／注射で、抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥのＩＶボーラス注射を、週に１回受容した（Ｑ７Ｄ×４）。
グループ３のマウスは、４連続週、１０ｍｇ／ｋｇ／注射で、Ｂ２０−４．１のＩＶボーラス注射を、週に１回受容した（Ｑ７Ｄ×４）。
グループ４のマウスは、３ｍｇ／ｋｇ／注射で、抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥのＩＶボーラス注射を週に１回（Ｑ７Ｄ×４）、１０ｍｇ／ｋｇ／注射で、Ｂ２０−４．１のＩＶボーラス注射を週に１回（Ｑ７Ｄ×４）、併用して受容した。
【０１２８】
インビボでの腫瘍増殖阻害研究
抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、糖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、＝ＧＡ１０１）単独と、Ｂ２０−４．１との併用による抗腫瘍効果を調査した。単一薬剤として注射されたＢ２０−４．１を、参照化合物として使用した。単一薬剤として、準最適量３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ、又は１０ｍｇ／ｋｇのＢ２０−４．１では、中程度の腫瘍増殖阻害となった。抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥとＢ２０−４．１の併用処置で、いずれかの薬剤単独と比較して、インビボでの抗腫瘍活性が改善した。３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥと１０ｍｇ／ｋｇのＢ２０−４．１で治療されたグループの９人の被験者には、腫瘍がなかった。単一薬剤グループよりも、併用治療グループの方が、腫瘍増殖が一貫してゆっくりであった。併用治療グループにおける著しい抗腫瘍活性のために、腫瘍増殖遅延及び腫瘍倍化時間の算出はできなかった。腫瘍細胞注入の４６日後、ビヒクルグループと比較した治療グループのＴ／Ｃ（％）値は、抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ、Ｂ２０−４．１それぞれ、及び双方の併用で、５１、３３及び４であった。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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