(57)【要約】式ＩＩＩの化合物が開示される。当該化合物の塩、当該化合物又は塩を含む医薬組成物、及び当該化合物又は塩を投与することによりＨＣＶ感染を治療するための方法も開示される。  【化１】2013503867.tif 000157【選択図】なし
2013503867.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式ＩＩＩ
【化１】
2013503867.tif 000152
（式中、各Ｒ１は独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立してＣ１−３アルキルであり；
Ｒ３基がある各炭素に関して、両Ｒ３はＨであるか、又はＲ３基はそれらが結合している炭素と一緒になって、４、５、又は６員飽和スピロ環を形成するかのいずれかであり（ただし、各飽和窒素含有環上に１個だけスピロ環が存在するものとする）；
Ｒ３基から形成される各飽和スピロは、独立してシクロアルキルであるか、或いは１個若しくは２個の酸素原子、又は１個若しくは２個の硫黄原子、又は１個のＳＯ２、又は１個のＮＲ４を含んでもよく；
各Ｒ４は独立してＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＣ１−４アルキル、ＳＯ２Ｃ１−４アルキルであり；そして
各スピロ環は、重水素、フッ素、又は１個若しくは２個のメチル基で置換されていてもよい）の化合物。
【請求項２】
Ｒ３基が、２個の図示された飽和窒素含有環のそれぞれの上にスピロ環を形成する、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記スピロ環が各飽和窒素含有環中の同じ関連する炭素原子と結合している、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３基が、２個の図示された飽和窒素含有環のうちの１個だけの上でスピロ環を形成する、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
下記式Ｉ
【化２】
2013503867.tif 000153
（式中、各Ｒ１が独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２が独立してＣ１−３アルキルであり；
各Ｘが独立してＣＲＲ、Ｏ又はＳであり；
ｎが２又は３であり；そして
各Ｒが独立してメチル、水素、又は重水素である）の化合物。
【請求項６】
下記式ＩＩ
【化３】
2013503867.tif 000154
（式中、各Ｒ１は独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立してＣ１−３アルキルであり；
各Ｘは独立してＣＲＲ、Ｏ、又はＳであり；
各ｎは独立して２又は３であり；そして
各Ｒは独立してメチル、水素、又は重水素である）の化合物。
【請求項７】
各Ｘが同一である、請求項５又は６記載の化合物。
【請求項８】
ＸがＳ又はＯである、請求項５〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
全てのＣＲＲがＣＨ２である、請求項５〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
各スピロ中の２個のＲだけがメチルである、請求項５〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
各Ｒ１がイソプロピルである、請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
各Ｒ２がメチルである、請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
化合物
【化４】
2013503867.tif 000155
【請求項１４】
以下のエナンチオマー
【化５】
2013503867.tif 000156
で鏡像異性的に富化されている、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項１６】
前記塩が二塩酸塩又は硫酸塩のいずれかである、請求項１５記載の塩。
【請求項１７】
前記塩が硫酸塩である、請求項１６記載の塩。
【請求項１８】
請求項１３又は１４記載の化合物の硫酸塩。
【請求項１９】
前記塩が結晶性である、請求項１６、１７、又は１８記載の塩。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかに記載の化合物又は塩を含む医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１３若しくは１４記載の化合物、又は請求項１８記載の塩を含む医薬組成物。
【請求項２２】
請求項２０又は２１記載の医薬組成物の投与を含む、ヒトにおけるウイルス感染の治療法。
【請求項２３】
前記ウイルス感染がＨＣＶ感染である、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
請求項１〜１９のいずれかに記載の化合物又は塩を含む、ヒトにおけるウイルス感染症の治療において使用される医薬組成物。
【請求項２５】
ヒトにおけるウイルス感染症の治療に用いられる請求項１〜１９のいずれかに記載の化合物又は塩。
【請求項２６】
ヒトにおけるウイルス感染症の治療で使用するための薬剤の製造における、請求項１〜１９のいずれかに記載の化合物又は塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、抗ウイルス化合物に関する。特に、本開示は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の治療に有用な化合物、当該化合物の結晶塩、当該化合物を含む医薬組成物、及びＨＣＶ感染症を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶでの慢性感染は、肝硬変、肝細胞癌及び肝不全に関連する大きな健康問題である。世界中で約１億７０００万人の慢性保菌者が肝疾患を発症する危険性がある。例えば、Ｓｚａｂｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐａｔｈｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．  ２００３，  ９：２１５−２２１、及びＨｏｏｆｎａｇｌｅ  ＪＨ，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９９７，  ２６：１５Ｓ−２０Ｓを参照。米国だけで２７０万人がＨＣＶに慢性的に感染し、２０００年のＨＣＶに関連する死亡者数は８，０００〜１０，０００人であり、この数値は今後数年にわたって著しく増大することが予想される。ＨＣＶによる感染は、何年も臨床症状を呈しない可能性がある慢性的に感染した（及び感染性の）保菌者が多く、潜行性である。肝硬変は最終的に肝不全に至る可能性がある。慢性的ＨＣＶ感染の結果起こる肝不全は、現在、肝移植の主因として認識されている。
【０００３】
ＨＣＶは動物及びヒトに影響を及ぼすＲＮＡウイルスのフラビウイルス科のメンバーである。ゲノムは、約９．６キロベースのＲＮＡの一本鎖であり、５’末端及び３’末端両方の未翻訳領域（５’−及び３’−ＵＴＲ）が隣接する約３０００アミノ酸のポリタンパク質をコード化する１つのオープンリーディングフレームから構成される。ポリタンパク質は、子孫ウイルス粒子の複製及び組立てに重要な少なくとも１０個の別個のウイルスタンパク質の前駆体としての働きをする。ＨＣＶポリタンパク質における構造及び非構造タンパク質の構成は以下のとおりである：Ｃ−Ｅ１−Ｅ２−ｐ７−ＮＳ２−ＮＳ３−ＮＳ４ａ−ＮＳ４ｂ−ＮＳ５ａ−ＮＳ５ｂ。ＨＣＶの複製サイクルはＤＮＡ中間体を含まず、ウイルスは宿主ゲノム中に組み込まれないので、ＨＣＶ感染を理論上は治癒させることができる。ＨＣＶ感染の病状は主に肝臓に影響を及ぼすが、ウイルスは末梢血リンパ球をはじめとする身体中の他の細胞型で見出される。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ  ＢＪ  ａｎｄ  Ｆｉｎｃｈ  ＲＧ、Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔ．  ２００５，  １１：８６−９４、及びＭｏｒｉｉｓｈｉ  Ｋ  ａｎｄ  Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｙ，  Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ２００３，  １４：２８５−２９７を参照。
【０００４】
現時点では、慢性的ＨＣＶの標準治療は、リバビリンと組み合わせたインターフェロンアルファ（ＩＦＮ−アルファ）であり、これは少なくとも６ヶ月に及ぶ治療を必要とする。ＩＦＮ−アルファは、いくつかの疾患、特にウイルス感染に反応してほとんどの動物有核細胞により産生され、分泌される抗ウイルス、免疫調節及び抗腫瘍活性などの特徴的な生物学的効果を有する天然に存在する小タンパク質のファミリーに属する。ＩＦＮ−アルファは、細胞間情報伝達及び免疫学的制御に影響を及ぼす増殖及び分化の重要な調節物質である。インターフェロンでのＨＣＶの治療は、しばしば、疲労、熱、悪寒、頭痛、筋肉痛、関節痛、軽度の脱毛症、精神医学的効果及び関連する障害、自己免疫現象及び関連する障害並びに甲状腺機能異常などの有害な副作用と関連する。イノシン５’一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害物質であるリバビリンは、ＨＣＶの治療においてＩＦＮ−アルファの有効性を増強する。リバビリンの導入にもかかわらず、５０％を越える患者ではインターフェロン−アルファ（ＩＦＮ）及びリバビリンの標準的治療でウイルスが除去されない。今まで、慢性Ｃ型肝炎の標準的治療は、ペグ化ＩＦＮ−アルファ＋リバビリンの組み合わせに変わってきている。しかし、多くの患者では、依然として主にリバビリンに関連する重大な副作用がある。リバビリンは、現在推奨される用量で患者の１０〜２０％において著しい溶血を引き起こし、この薬剤は、催奇性かつ胚毒性である。近年の改善をもってしても、かなりの割合の患者はウイルス負荷の持続的減少に反応せず、ＨＣＶ感染の更に有効な抗ウイルス療法に対する明確な必要性が存在する。例えば、Ｆｒｉｅｄ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００２，  ３４７：９７５−９８２を参照。
【０００５】
ウイルスと闘うために、多くの方法が実施されている。これらには、例えば、ＨＣＶ複製を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムの適用が含まれる。さらに、ＨＣＶタンパク質を直接阻害し、ウイルス複製を妨げる低分子量化合物は、ＨＣＶ感染を制御するための魅力的な方法と考えられる。ウイルス標的のうち、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ／ヘリカーゼ及びＮＳ５ｂ  ＲＮＡ−依存性ＲＮＡポリメラーゼは、新規薬剤の最も有望なウイルス標的と考えられる。例えば，  Ｎｉ，  Ｚ．  Ｊ．  ａｎｄ  Ｗａｇｍａｎ，  Ａ．  Ｓ．  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｄｅｖｅｌ．  ２００４，  ７，  ４４６−４５９，  Ｂｅａｕｌｉｅｕ，  Ｐ．  Ｌ．  ａｎｄ  Ｔｓａｎｔｒｉｚｏｓ，  Ｙ．  Ｓ．  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ  ２００４，  ５，  ８３８−８５０，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｐ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ  ３９，  ２２３−２３７，  ２００４を参照。
【０００６】
ウイルス遺伝子並びにそれらの転写及び翻訳産物を標的とすることの他に、抗ウイルス活性も、ウイルス複製に必要な宿主細胞タンパク質を標的とすることによって達成することができる。例えば、Ｗａｔａｓｈｉ，  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，  １９，  １１１−１２２，  ２００５は、宿主細胞サイクロフィリンを阻害することによって、どのようにして抗ウイルス活性を達成することができるかを示している。別法として、強力なＴＬＲ７アゴニストがヒトにおいてＨＣＶ血漿レベルを減少させることが示されている。Ｈｏｒｓｍａｎｓ，  ｅｔ  ａｌ，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ４２，  ７２４−７３１，  ２００５を参照。
【０００７】
ＨＣＶ感染の治療に有用であると言われる化合物が、例えば、ＷＯ２００８／０６４２１８（Ｌｅｉｖｅｒｓら）、ＷＯ２００８／２４４３８０（Ｂａｃｈａｎｄら）、及びＵＳ２００９／００６８１４０（Ｂａｃｈａｎｄら）で開示されている。これらの参考文献は、当該化合物を調製する方法、当該化合物を含む組成物、当該化合物及びさらなる化合物を含む医薬組成物、ＨＣＶを治療する方法、当該化合物の塩、投与経路、並びに当該化合物をどのようにして作製、処方、及び使用するかに関する他の情報も開示している。
【発明の概要】
【０００８】
手短に言うと、一態様において、本発明は下記式Ｉ
【化１】
2013503867.tif 000003
【０００９】
（式中、各Ｒ１は独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立してＣ１−３アルキルであり；
各Ｘは独立してＣＲＲ、Ｏ、又はＳであり；
ｎは２又は３であり；そして
各Ｒは独立してメチル、水素、又は重水素である）の化合物を開示する。
【００１０】
別の態様において、本発明は下記式ＩＩ
【化２】
2013503867.tif 000004
【００１１】
（式中、各Ｒ１は独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立してＣ１−３アルキルであり；
各Ｘは独立してＣＲＲ、Ｏ、又はＳであり；
各ｎは独立して２又は３であり；そして
各Ｒは独立してメチル、水素、又は重水素である）の化合物を開示する。
【００１２】
別の態様において、本発明は、下記式ＩＩＩ
【化３】
2013503867.tif 000005
【００１３】
（式中、各Ｒ１は独立してＨ又はＣ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立してＣ１−３アルキルであり；
Ｒ３基が存在する各炭素に関して、両Ｒ３はＨであるか、又はＲ３基は、それらが結合している炭素と一緒になって、４、５、又は６員飽和スピロ環を形成する（ただし、各飽和窒素含有環上にはスピロ環が１個だけ存在するものとする）かのいずれかであり；
Ｒ３基から形成される各飽和スピロは、独立してシクロアルキルであるか、或いは１個若しくは２個の酸素原子、又は１個若しくは２個の硫黄原子、又は１個のＳＯ２、又は１個のＮＲ４を含み得；
各Ｒ４は独立してＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＣ１−４アルキル、又はＳＯ２Ｃ１−４アルキルであり；
各スピロ環は、重水素、フッ素、又は１個若しくは２個のメチル基で置換されていてもよい）の化合物を開示する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、式Ｉ、ＩＩ、又はＩＩＩの化合物の医薬的に許容される塩を開示する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、式Ｉ、ＩＩ、若しくはＩＩＩの化合物、又はその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物を開示する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて、ウイルス感染、例えばＨＣＶでの感染を治療する方法であって、本発明の医薬組成物を投与することを含む方法を開示する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
前記式Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩにおいて、Ｒ１が水素である場合を除いて、Ｒ１が結合している炭素はキラルである。加えて、２個の図示された窒素含有５員飽和複素環のそれぞれにおける図示された第三炭素もキラルである。したがって、化合物は少なくとも２個のキラル炭素原子を含み、そして各Ｒ１がＣ１−３アルキルである場合、化合物は少なくとも４個のキラル炭素原子を含む。したがって、化合物は種々のエナンチオマー混合物で存在し得る。
【００１８】
本発明の一実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、若しくはＩＩＩの化合物、又はその医薬的に許容される塩は、前段落中で言及されるキラル炭素のすべてがＳ配置であるエナンチオマーを鏡像異性的に富化されている。一般的に、鏡像異性的に富化された化合物又は塩とは、特定のエナンチオマーが化合物又は塩の全エナンチオマーの合計重量の５０重量％超を構成することを意味する。Ｓ配置の４個のキラル炭素を有する化合物の一例を以下に示す。
【化４】
2013503867.tif 000006
【００１９】
本発明の一実施形態では、各Ｘは同一である。
【００２０】
本発明の一実施形態では、全てのＲがＨであるか、又は全てのＲが重水素（Ｄ）であるかのいずれかである。言い換えると、本発明の一実施形態では、スピロ中の全てのＣＲＲ基がＣＨ２であるか、又はスピロ中の全てのＣＲＲ基がＣＤ２であるかのいずれかである。重水素は、天然では、水素化合物中ごく少量で存在する。重水素又はＤとして置換基を表すことにより、本出願者らは、重水素の自然の同位体量が増大して、Ｈと比べて特定の置換基の半分以上がＤであることを意味する。
【００２１】
本発明の一実施形態では、２個以下のＲがメチルである。
【００２２】
本発明の一実施形態では、式ＩＩＩの化合物において、Ｒ３基が各飽和窒素含有環上でスピロ環を形成する場合、前記スピロ基のそれぞれは、各飽和窒素含有環中の同じ関連する炭素原子と結合している。
【００２３】
医薬的に許容される塩は、当該技術分野で周知の方法により調製することができる。好適な塩としては、例えば、Ｐ．  Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ，  Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．  Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），  ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ；２００２で記載されているものが挙げられる。ある抗ウイルス化合物の結晶塩の調製を記載するＷＯ２００９／０２０８２８（Ｋｉｍら）も参照。好ましい塩としては、ＨＣｌ塩、例えば二塩酸塩、及び硫酸塩が挙げられる。
【００２４】
本発明の化合物及び塩は、単独又は１以上の他の治療薬と組み合わせて用いることができる。一態様において、さらなる治療薬は、インターフェロン／リババリン、小分子ＨＣＶ複製阻害剤（より一般的には直接作用型抗ウイルス剤と呼ばれる）などの標準的治療薬から選択される。好適な併用療法は、例えばＷＯ２００８／０６４２１８（Ｌｅｉｖｅｒｓら）、ＷＯ２００８／２４４３８０（Ｂａｃｈａｎｄら）、及びＵＳ２００９／００６８１４０（Ｂａｃｈａｎｄら）に記載されている。これらの参考文献は、投与経路に関する重要な開示、並びに当該化合物をどのように調製、処方、及び使用するかに関する他の情報も含む。
【実施例】
【００２５】
この実験のセクションで用いられる略語の表を以下に記載する。
【表１】
2013503867.tif 000007
【００２６】
中間体１：｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル
【化５】
2013503867.tif 000008
【００２７】
中間体１は下記反応スキームにより示されるように調製することができる。
【化６】
2013503867.tif 000009
【００２８】
［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体１１）（３．８ｇ、６．３ミリモル）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中溶液をＨＣｌ（１０ｍＬ、ジオキサン中４Ｍ）で処理して、｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル（中間体１）を淡黄色固体（３．５ｇ、定量的）として得た。
【００２９】
中間体２：（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化７】
2013503867.tif 000010
【００３０】
中間体２を下記反応スキームで示されるようにして調製することができる。
【化８】
2013503867.tif 000011
【００３１】
（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸メチル（中間体１４）（３６０ｍｇ、０．９３２ミリモル）のＴＨＦ（４ｍＬ）、ｔ−ブタノール（１ｍＬ）及び水（１ｍＬ）の混合溶媒中撹拌溶液に、ＬｉＯＨ（４４ｍｇ、１．８６ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を２時間室温で撹拌した後、１ＮのＨＣｌでｐＨ約３に酸性化し、酢酸エチル（１００ｍＬ）でさらに希釈した。溶液を食塩水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（中間体２）（３１５ｍｇ、収率：９１％）を固体として得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３２】
中間体４：２−アミノ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン
【化９】
2013503867.tif 000012
【００３３】
２−ブロモ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン（１３０ｇ、０．４７８モル）のトルエン（２５００ｍＬ）中撹拌溶液に、ヘキサメチレンテトラミン（６５．６ｇ  ０．４７８モル）を添加した。混合物を４０℃で１６時間撹拌した。結果として得られた固体を濾過し、そしてトルエン及びエーテルで洗浄して、白色固体を得た。この白色固体のエタノール（８００ｍＬ）中撹拌懸濁液に、濃塩酸（３００ｍＬ）を添加した。混合物を周囲温度で２０時間撹拌した。固体を濾過により集め、エタノール及び水で洗浄し、そして真空乾燥して、２−アミノ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン（４）（９５ｇ、収率：９２％）を白色固体として得、これを次のステップのために精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．５８（ｓ，  ｂｒ，  ２Ｈ），  ７．９６（ｄ，  Ｊ＝８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．８１（ｄ，  Ｊ＝８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ４．４８−４．５２（ｍ，  ２Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２１４，  ２１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３４】
中間体５：［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０】
2013503867.tif 000013
【００３５】
２−アミノ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン塩酸塩（中間体４）（５０ｇ、０．２モル）、Ｂｏｃ２Ｏ（４８ｇ、０．２２モル）のＤＣＭ（１０００ｍＬ）中混合物に、ＴＥＡ（６８．８ｍＬ、０．５モル）を０℃で滴加した。添加後、結果として得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌し、濾過した。濾過を１ＮのＨＣｌ（３００ｍＬ×３）及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、灰白色固体を得、これを石油エーテルでさらに洗浄して、［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体５）（４０ｇ、収率：６４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ７．８３（ｄ，  Ｊ＝８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．６５（ｄ，  Ｊ＝８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ５．４８（ｓ，  ｂｒ，１Ｈ），  ４．６０−４．６２（ｍ，  ２Ｈ），  １．４９（ｓ，  ９Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３３６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【００３６】
中間体６：｛２−オキソ−２−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１１】
2013503867.tif 000014
【００３７】
中間体６は、下記反応スキームに示されるようにして調製することができる。
【化１２】
2013503867.tif 000015
【００３８】
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２．６ｇ、３．１８ミリモル）を、［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体５）（２０ｇ、６３．７ミリモル）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１９．４ｇ、７６．４ミリモル）及びＫＯＡｃ（２４．８ｇ、０．２５４モル）のジオキサン（３００ｍＬ）中混合物に添加し、フラスコを窒素でパージし（３×）、そして窒素雰囲気下で８０℃まで１６時間加熱した。反応混合物をヘキサン（３００ｍＬ）で希釈し、ろ過し、濃縮し、残留物をシリカゲル（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１）上クロマトグラフィーにより精製して、｛２−オキソ−２−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体６）（１３．３ｇ、収率：５８％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ７．９０−７．９３（ｍ，  ４Ｈ），  ５．５５（ｓ，  ｂｒ，１Ｈ），  ４．６８（ｓ，  ２Ｈ），  １．４８（ｓ，  ９Ｈ），  １．３５（ｓ，  １２Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３８４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【００３９】
中間体７：（２Ｓ）−２−（｛［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１３】
2013503867.tif 000016
【００４０】
１−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−Ｌ−プロリン（５０ｇ、０．２３３モル）、ＨＡＴＵ（１０６ｇ、０．２７９モル）及びＤＩＥＡ（１５０ｍＬ）のＤＭＦ（４００ｍＬ）中混合物を周囲温度で１０分間撹拌した。ＤＭＦ（５００ｍＬ）中２−アミノ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン塩酸塩（中間体４）（７０ｇ、０．２７９モル）を添加し、結果として得られた混合物を一晩撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で希釈した。溶液を１ＮのＨＣｌ（５００ｍＬ×４）及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を石油エーテル／酢酸エチル（２／１）の混合物から再結晶して、（２Ｓ）−２−（｛［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（中間体７）（５８．４ｇ、収率：６１％）を黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）δｐｐｍ  ８．２２（ｓ，  １Ｈ），  ７．９３（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．７７（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ４．４６−４．５１（ｍ，  ２Ｈ），  ４．１５−４．２１（ｍ，  １Ｈ），  ３．２８−３．４０（ｍ，  ２Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，  ４Ｈ），  １．２９−１．４１（ｍ，  ９Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝４１１．１，  ４１１３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４１】
中間体８：（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１４】
2013503867.tif 000017
【００４２】
（２Ｓ）−２−（｛［２−（４−ブロモフェニル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（７）（４０．０ｇ、９７．２ミリモル）及びＮＨ４ＯＡｃ（６０ｇ、０．７７８モル）のキシレン（４００ｍＬ）中混合物を密封リアクター中で１５０℃まで５時間加熱した。反応混合物を濃縮し、そして残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中に溶解させ、水性ＮａＨＣＯ３及び食塩水で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮乾固させた。粗生成物をシリカゲル上クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（中間体８）（３４ｇ、収率：８９％）を褐色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ７．５２（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４６（ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．２０（ｓ，  １Ｈ），  ５．５８−５．７１（ｍ，  １Ｈ），  ３．３８−３．４２（ｍ，  １Ｈ），  ２．８０−２．８７（ｍ，  ２Ｈ），  ２．０３−２．０６（ｍ，  ２Ｈ），  １．８８−２．００（ｍ，  ２Ｈ），  １．４９（ｓ，  ９Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３９２、３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４３】
中間体９：４−（４−ブロモフェニル）−２−［（２Ｓ）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール
【化１５】
2013503867.tif 000018
【００４４】
（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（中間体８）（７２．４ｇ、１８５ミリモル）をジオキサン中飽和ＨＣｌ（２００ｍＬ）で処理し、周囲温度で一晩撹拌した。結果として得られた固体を濾過し、そして石油エーテルで洗浄して、４−（４−ブロモフェニル）−２−［（２Ｓ）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール（中間体９）（６０ｇ、収率：９０％）を黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．１０（ｓ，  ２Ｈ），  ７．８８（ｄ，  Ｊ＝６．６  Ｈｚ，２Ｈ），  ７．７０（ｄ，  Ｊ＝６．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４９（ｓ，  １Ｈ），  ７．３２（ｓ，  １Ｈ），  ７．１６（ｓ，  １Ｈ），  ４．５０−４．５２（ｍ，  １Ｈ），  ３．１５−３．４０（ｍ，  ２Ｈ），１．８８−２．８８（ｍ，  ４Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２９１．１、２９３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
中間体１０：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化１６】
2013503867.tif 000019
【００４６】
ＤＣＭ（１０００ｍＬ）中Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（４３．１ｇ、０．２４６モル）及びＨＡＴＵ（９３．５ｇ、０．２４６モル）を１０分間撹拌した。４−（４−ブロモフェニル）−２−［（２Ｓ）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール（中間体９）（６０ｇ、０．２０５モル）を導入し、続いてＤＩＥＡ（８２．６ｍＬ、０．３０８モル）を滴加した。混合物を周囲温度で一晩撹拌した後、ＤＣＭ（１０００ｍＬ）で希釈し、そして水性ＮａＨＣＯ３及び食塩水で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮乾固させた。粗生成物をシリカゲル上クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／１）により精製して、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体１０）（６２ｇ、収率：６７％）を黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ：７．４３−７．５１（ｍ，  ４Ｈ），  ７．１７（ｓ，  １Ｈ），  ５．５３−５．５７（ｍ，  １Ｈ），  ５．２０−５．２２（ｍ，  １Ｈ），  ５．２９−５．３３（ｍ，  １Ｈ），  ３．６４−３．７１（ｍ，  ５Ｈ），  ２．９９−３．０３（ｍ，  １Ｈ），  １．８８−２．３１（ｍ，  ４Ｈ），  ０．８８−０．９２（ｍ，  ６Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝４４９、４５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４７】
中間体１１：［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
【化１７】
2013503867.tif 000020
【００４８】
［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体１０）（６２ｇ、０．１３８モル）、｛２−オキソ−２−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］エチル｝カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体６）（４７．７ｇ、０．１５２モル）及びＮａＨＣＯ３（３４．２ｇ、０．４１４モル）の混合ＤＭＥ（８００ｍＬ）及び水（２６０ｍＬ）中混合物に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５．６３ｇ、６．９ミリモル）を添加した。フラスコを窒素でパージ（３×）した後、８０℃まで１６時間加熱した。反応を室温まで冷却し、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）で希釈し、そして溶液を水性ＮａＨＣＯ３及び食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲル上クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／２）により精製して、［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］カルバミン酸１，１−ジメチルエチル（中間体１１）（４５ｇ、収率：５４％）を黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ８．０３（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．８８−７６０（ｍ，  ６Ｈ），  ５．５８（Ｓ，  ｂｒ，１Ｈ），  ５．４２（ｍ，  １Ｈ），  ５．２８−５．３０（ｍ，１Ｈ），  ４．７１（ｓ，  ２Ｈ），  ４．３２−４．３５（ｍ，  １Ｈ），  ３．７０−３．８４（ｍ，  ５Ｈ），  ２．９６（ｓ，  ｂｒ，１Ｈ），  １．９６−２．１１（ｍ，  ４Ｈ），  １．４９（ｓ，  ９Ｈ），  ０．８８−０．９２（ｍ，  ６Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝６０４，（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４９】
中間体１２：Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン酸メチル
【化１８】
2013503867.tif 000021
【００５０】
Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（２．８９ｇ、１６．５２ミリモル）のＤＣＭ中撹拌溶液に、ＴＥＡ（３．５１ｇ、３４．７ミリモル）及びＨＡＴＵ（３ｇ、１６．５２ミリモル）を添加した。約１０分間撹拌した後、（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン酸メチル塩酸塩（３ｇ、１６．５２ミリモル）を導入した。結果として得られた混合物を室温でさらに４時間撹拌した後、ＮａＨＣＯ３（ｓｓ）でクエンチした。層を分離し、そして水性層をＤＣＭで抽出した（２×）。合した有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ヘキサン中酢酸エチル）により精製して、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン酸メチル（中間体１２）（３．５ｇ、収率：７０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ５．３４−５．５４（ｍ，  １  Ｈ）  ４．６９（ｔ，  Ｊ＝８．４１  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．５５（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ４．２１（ｓ，  １  Ｈ）  ３．９２−４．０８（ｍ，  １  Ｈ）  ３．７４（ｓ，  ４  Ｈ）  ３．６６（ｓ，  ３  Ｈ）  ２．２９−２．５０（ｍ，  １  Ｈ）  １．９２−２．１９（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．８６−１．１３（ｍ，  ６  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３０３．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５１】
中間体１３：Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−４−オキソ−Ｌ−プロリン酸メチル
【化１９】
2013503867.tif 000022
【００５２】
Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリネート（中間体１２）（３．５ｇ、１１．９ミリモル）のＤＣＭ（８０ｍＬ）中撹拌溶液に、デス・マーチン（１０ｇ）を室温で添加した。結果として得られた混合物を室温でさらに４時間撹拌した後、５％の水性チオ硫酸ナトリウム（３５０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）でクエンチした。撹拌を１０分間続け、そして混合物をＤＣＭで抽出した（２×３００ｍＬ）。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ヘキサン中酢酸エチル）により精製して、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−４−オキソ−Ｌ−プロリン酸メチル（中間体１３）（７０１ｍｇ、収率：２０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    ５．２５（ｄ，  Ｊ＝９．１８  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ５．０７（ｄｄ，  Ｊ＝１０．７４，  ２．９３  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．３６（ｄ，  Ｊ＝１７．７７  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９７−４．２３（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．６９−３．７７（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．６３（ｓ，  ３  Ｈ）  ２．９２（ｄｄ，  Ｊ＝１８．９４，  １０．７４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．６２（ｄｄ，  Ｊ＝１８．９４，  ２．７３  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．０１（ｔ，  Ｊ＝３．３２  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ０．８６−１．１６（ｍ，  ６  Ｈ）。
【００５３】
中間体１４：（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸メチル
【化２０】
2013503867.tif 000023
【００５４】
Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−４−オキソ−Ｌ−プロリン酸メチル（中間体１３）（６５０ｍｇ、２．１６４ミリモル）、（２Ｓ，４Ｓ）−２，４−ペンタンジオール（９０２ｍｇ、８．６６ミリモル）及びＴｓＯＨ（８２ｍｇ、０．４３ミリモル）をディーン・スタークトラップでトルエン（４０ｍＬ）中、一晩還流加熱した。室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈した後、結果として得られた溶液をＮａＨＣＯ３（ｓｓ）及び食塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５０％のヘキサン中酢酸エチル）により精製して、（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸メチル（中間体１４）（３６６ｍｇ、収率：４４％）を油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ５．３８−５．５１（ｍ，  １  Ｈ）  ４．５４（ｔ，  Ｊ＝８．０３  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．２５−４．３６（ｍ，  １  Ｈ）  ３．９１−４．０５（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．８５（ｄ，  Ｊ＝１０．０４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．５４−３．７７（ｍ，  ６  Ｈ）  ２．４６−２．５３（ｍ，  １  Ｈ）  ２．１２（ｄｄ，  Ｊ＝１２．９２，  ７．６５  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．００−２．０６（ｍ，  １  Ｈ）  １．５４−１．７５（ｍ，  ３  Ｈ）  １．１０−１．２５（ｍ，  ６  Ｈ）  １．０３（ｄ，  Ｊ＝６．７８  Ｈｚ，  ３  Ｈ）  ０．８４−０．９６（ｍ，  ３  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝４０９．３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【００５５】
中間体２の調製において概要を述べた手順と類似した手順を用いて、中間体１５及び１７を調製した。
【００５６】
中間体１５：（３Ｓ，７Ｒ，９Ｒ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化２１】
2013503867.tif 000024
【００５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．５３（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ７．４９（ｄ，  １Ｈ），  ４．３４（ｄ，  １Ｈ），  ４．２４（ｔ，  １Ｈ），  ４．０６（ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ），    ３．９３（ｔ，  １Ｈ），  ３．３７（ｍ  ，  ４Ｈ），    ２．３５（ｍ，  １Ｈ），  ２．０９−１．８６（ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ），  １．５９（ｍ，  ２Ｈ），  １．１７（ｍ，  ６Ｈ），  ０．９１（ｍ，  ６Ｈ）。
【００５８】
中間体１６：（８Ｓ）−７−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸メチル
【化２２】
2013503867.tif 000025
【００５９】
ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３４５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
中間体１７：（８Ｓ）−７−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸
【化２３】
2013503867.tif 000026
【００６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．５６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．４０（ｄ，  Ｊ＝８．３９  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．３３（ｄｄ，  Ｊ＝８．７８，  ７．０２  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．８１−４．１０（ｍ，  ５  Ｈ）  ３．４１−３．６６（ｍ，  ５  Ｈ）  ２．２８−２．４３（ｍ，  １  Ｈ）  １．９４−２．１１（ｍ，  １  Ｈ）  １．７４−１．９４（ｍ，  １  Ｈ）  ０．６７−１．０５（ｍ，  ６  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３３１．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６２】
実施例１：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化２４】
2013503867.tif 000027
【００６３】
（（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（中間体２）（９６ｍｇ、０．２５８ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＥＡ（７８ｍｇ、０．７７３ミリモル）及びＨＡＴＵ（１０８ｍｇ、０．２８４ミリモル）を添加した。約３分間撹拌した後、｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（中間体１）（１４９ｍｇ、０．２５８ミリモル）を導入した。反応をさらに２時間室温で撹拌した後、混合物をＲＰ  ＨＰＬＣに直接かけ、５〜８０％のアセトニトリル／水（０．２％のＮＨ３Ｈ２Ｏ（濃））で溶出して、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３）を固体（１３５ｍｇ、収率：６１％）として得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．４０−１１．０１（ｍ，  １  Ｈ）  ７．３２−８．３０（ｍ，  １０  Ｈ）  ５．２８（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ４．５３−４．９６（ｍ，  ４  Ｈ）  ４．１７−４．５３（ｍ，  １  Ｈ）  ３．４０−４．１７（ｍ，  １１  Ｈ）  ２．８３−３．２２（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２６−２．７４（ｍ，  ３  Ｈ）  １．５４−２．２６（ｍ，  ８  Ｈ）  ０．４７−１．４３（ｍ，  １８  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝８５８．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６４】
［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３）（１３５ｍｇ、０．１５７ミリモル）のジオキサン（３ｍＬ）中撹拌溶液に、酢酸アンモニウム（１２１ｍｇ、１．５７ミリモル）を添加した。反応混合物を密封試験管中で一晩１１０℃まで加熱した。室温まで冷却し、過剰の酢酸アンモニウムを濾過した。濾液を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１５％の酢酸エチル中メタノール）により精製して、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（実施例１）を固体（８１ｍｇ、収率：５８％）として得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．２３−１１．０１（ｍ，  １  Ｈ）  ７．３１−８．０８（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．２３（ｄ，  Ｊ＝８．０３  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ５．１３−５．８９（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．３４−４．６９（ｍ，  １３  Ｈ）  ２．８４−３．３１（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．６３−２．８４（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２９−２．５３（ｍ，  １  Ｈ）  １．８５−２．２９（ｍ，  ４  Ｈ）  １．５６−１．８５（ｍ，  ４  Ｈ）  １．１６−１．４７（ｍ，  ６  Ｈ）  ０．６３−１．１６（ｍ，  １２  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８３５．４４５６；実測値：８３５．４４５８。
【００６５】
実施例２：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化２５】
2013503867.tif 000028
【００６６】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチルを、（８Ｓ）−７−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸（中間体１７）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（中間体１）から、実施例１で概要を記載した類似の２段階合成手順にしたがって得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．００−１１．３６（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．５６（ｂｒ．  ｓ．，  １０  Ｈ）  ７．０２−７．３４（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．０５−５．８９（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．７６−４．６５（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．５３−３．８３（ｍ，  ６  Ｈ）  ２．７７−３．５４（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．２６−２．７０（ｍ，  ２  Ｈ）  １．４５−２．２６（ｍ，  ６  Ｈ）  ０．６１−１．２５（ｍ，  １２  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：７９７．３９８６；実測値：７９７．３９８１。
【００６７】
実施例３：（４，４’−ビフェニルジイルビス｛１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３，２−ジイル］［（２Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１，２−ブタンジイル］｝）ビスカルバミン酸ジメチル
【化２６】
2013503867.tif 000029
【００６８】
Ｎ２雰囲気下で、１，１’−（４，４’−ビフェニルジイル）ビス（２−ブロモエタノン）（１１３ｍｇ、０．２８５ミリモル、ＷＯ２００９０２０８２５で提供される手順にしたがって調製）のアセトニトリル（５ｍＬ）中撹拌懸濁液に、（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（中間体２）（２１２ｍｇ、０．５７１ｍｇ）を添加し、続いてＴＥＡ（５７．５ｍｇ、０．５７１ミリモル）を添加した。懸濁液が透明になるまで、混合物を５０℃で撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、そして食塩水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ，３’Ｓ，７’Ｓ，９’Ｓ）ビス（７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸）４，４’−ビフェニルジイルビス−２−オキソ−２，１−エタンジイル（中間体１８）（２８０ｍｇ、定量的）を得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝９７９．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
密封試験管中で、（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ，３’Ｓ，７’Ｓ，９’Ｓ）ビス（７，９−ジメチル−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸）４，４’−ビフェニルジイルビス−２−オキソ−２，１−エタンジイル（中間体１８）（２８０ｍｇ、０．２８６ミリモル）のジオキサン（５ｍＬ）中撹拌溶液に、酢酸アンモニウム（４４１ｍｇ、５．７２ミリモル）を添加した。反応混合物を１１０℃まで一晩加熱した。室温まで冷却し、過剰の酢酸アンモニウムを濾過した。濾液を蒸発させ、そして残留物をカラム（シリカゲル、０〜１５％の酢酸エチル中メタノール）により精製して、（４，４’−ビフェニルジイルビス｛１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル［（３Ｓ，７Ｓ，９Ｓ）−７，９−ジメチル−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３，２−ジイル］［（２Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１，２−ブタンジイル］｝）ビスカルバミン酸ジメチル（実施例３）を固体（１１２ｍｇ、収率：４０％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．３０−１０．９９（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．６８−８．００（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．６１（ｄ，  Ｊ＝７．５３  Ｈｚ，  ６  Ｈ）  ７．２６−７．３５（ｍ，  ４  Ｈ）  ５．５９（ｄ，  Ｊ＝８．５３  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ５．２３−５．３９（ｍ，  １  Ｈ）  ４．４４（ｄｄ，  Ｊ＝８．４１，  ５．１４  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ４．０２−４．２３（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．９７（ｄ，  Ｊ＝１０．２９  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ３．７２（ｓ，  ６  Ｈ）  ３．６２（ｄ，  Ｊ＝１０．２９  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ３．０４−３．３２（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．７０（ｄ，  Ｊ＝１３．０５  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  １．９３（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．５６−１．８２（ｍ，  ４  Ｈ）  １．１３−１．４６（ｍ，  １２  Ｈ）  ０．６０−１．０２（ｍ，  １２  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：９３９．４９８０；実測値：９３９．４９８１。
【００７０】
実施例４：（４，４’−ビフェニルジイルビス｛１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル（８Ｓ）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８，７−ジイル［（２Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１，２−ブタンジイル］｝）ビスカルバミン酸ジメチル
【化２７】
2013503867.tif 000030
【００７１】
（４，４’−ビフェニルジイルビス｛１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル（８Ｓ）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８，７−ジイル［（２Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１，２−ブタンジイル］｝）ビスカルバミン酸ジメチルを１，１’−（４，４’−ビフェニルジイル）ビス（２−ブロモエタノン）及び（８Ｓ）−７−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸（中間体１７）から実施例３で概要を述べた二段階法と類似したプロセスを用いて得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    １１．１０−１１．２３（ｍ，  １  Ｈ）  １０．１０−１１．６３（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．４０−８．１５（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．２７−７．４０（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．２３−５．８８（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．３１（ｄｄ，  Ｊ＝８．６８，  ６．５４  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ３．８３−４．２１（ｍ，  １０  Ｈ）  ３．５７−３．８３（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．０５−３．４６（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．４７（ｄｄ，  Ｊ＝１３．４６，  ８．５９  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  １．５１−２．２０（ｍ，  ２  Ｈ）  １．０８（ｄ，  Ｊ＝６．８３  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ０．６０−０．９７（ｍ，  １２  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５５．４０４１；実測値：８５５．４０３９。
【００７２】
実施例５：（（１Ｓ）−１−メチル−２−｛（３Ｓ）−３−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−２−イル｝−２−オキソエチル）カルバミン酸メチル
【化２８】
2013503867.tif 000031
【００７３】
Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニン（２２．５ｍｇ、０．１５３ミリモル、ＷＯ２００３０５５４７４で記載されている手順にしたがって調製）のＤＭＦ（２ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＥＡ（１５．５ｍｇ、０．１５３ミリモル）及びＨＡＴＵ（５８．２ｍｇ、０．１５３ミリモル）を添加した。約３分撹拌した後、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（実施例１９）（１００ｍｇ、０．１５３ミリモル）を導入した。さらに２時間室温で攪拌した後、反応混合物を直接ＲＰ  ＨＰＬＣにかけ、５〜８０％のアセトニトリル／水（０．２％のＮＨ３Ｈ２Ｏ（濃））で溶出して、（（１Ｓ）−１−メチル−２−｛（３Ｓ）−３−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−２−イル｝−２−オキソエチル）カルバミン酸メチル（実施例５）を固体（３６ｍｇ、収率：２９％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．０４−１１．１１（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．３７−８．０２（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．１８−７．３６（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．６０（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．１７−５．４０（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．１７−４．７３（ｍ，  １４  Ｈ）  ２．７９−３．１９（ｍ，  １  Ｈ）  ２．４５−２．８１（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２９−２．４５（ｍ，  １  Ｈ）  １．４９−２．２９（ｍ，  ８  Ｈ）  １．２２−１．４７（ｍ，  ３  Ｈ）  ０．７３−１．１６（ｍ，  ６  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：７８３．３８３０；実測値：７８３．３８３２。
【００７４】
中間体１９：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチルの調製
中間体１９を下記反応スキームで示すようにして調製することができる。
【化２９】
2013503867.tif 000032
【００７５】
中間体２１：（３Ｓ）−３−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸フェニルメチル
【化３０】
2013503867.tif 000033
【００７６】
（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（中間体２０）（８７８ｍｇ、２．７３ミリモル）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中撹拌溶液に、ＴＥＡ（８２９ｍｇ、８．２０ミリモル）及びＨＡＴＵ（１０３９ｍｇ、２．７３ミリモル）を添加した。約３分間撹拌後、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体１）（１５７５ｍｇ、２．７３ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物をさらに２時間室温で撹拌した後、ＮａＨＣＯ３（ｓｓ）でクエンチし、そしてＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合した有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜６％のＤＣＭ中ＭｅＯＨ（２Ｍアンモニア））により精製して、（３Ｓ）−３−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸フェニルメチル（中間体２１）を固体（１．７６ｇ、収率：８０％）として得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝８０７．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７７】
中間体２２：（３Ｓ）−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸フェニルメチル
【化３１】
2013503867.tif 000034
【００７８】
密封試験管中で、（３Ｓ）−３−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボキシレート（中間体２１）（１．７６ｇ、２．１８ミリモル）のジオキサン（５ｍＬ）中撹拌溶液に、酢酸アンモニウム（１．６８ｄ、２１．８ミリモル）を添加した。反応混合物を１１０℃まで一晩加熱した。室温まで冷却し、過剰の酢酸アンモニウムを濾過した。濾液を蒸発させ、そして残留物をカラム（シリカゲル、０〜１５％酢酸エチル中メタノール）により精製して、（３Ｓ）−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸フェニルメチル（中間体２２）（１．４４ｇ、収率８４％）を泡状物として得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝７８８．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
中間体１９：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化３２】
2013503867.tif 000035
【００８０】
（３Ｓ）−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸フェニルメチル（中間体２２）（１．４４ｇ，１．８３ミリモル）をエタノール（１００ｍＬ）中、Ｐｄ／Ｃの触媒作用下で、バルーンを用いて２０時間水素化して［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体１９）を得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝６５４．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８１】
中間体２０：（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
中間体２０を下記反応スキームで示されるようにして調製することができる。
【化３３】
2013503867.tif 000036
【００８２】
中間体２３：（２Ｓ）−４−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）
【化３４】
2013503867.tif 000037
【００８３】
−７８℃で、塩化オキサリル（５．９７ｇ、４７ミリモル）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中撹拌溶液に、ＤＭＳＯ（４．８ｇ、６１．５ミリモル）をゆっくりと添加した。１０分間撹拌した後、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）（１０．１ｇ、３６．２ミリモル）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液を、反応フラスコ中に添加した。撹拌を６０分間続けた後、トリエチルアミン（１０．９８ｇ、１０８ミリモル）を添加した。冷却浴を次いで外し、反応混合物を０℃までゆっくりと温め、そして飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。層を分離し、そして水性層をＤＣＭ（２×）で抽出した。合した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、そして蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル  ０〜５０％のヘキサン中酢酸エチル）により精製して、（２Ｓ）−４−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）（中間体２３）（６．３ｇ、収率：６３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ７．２９−７．５６（ｍ，  ５  Ｈ）  ５．０８−５．３７（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．８０−５．０２（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８９−４．０８（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．５３−３．８８（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．９５（ｄｄ，  Ｊ＝１８．８２，  １０．７９  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．６３（ｄｄ，  １  Ｈ）。
【００８４】
中間体２４：（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−メチル２−（フェニルメチル）
【化３５】
2013503867.tif 000038
【００８５】
（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−メチル２−（フェニルメチル）（中間体２４）（１．０２ｇ、収率８４％）を（２Ｓ）−４−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）（１．０ｇ、３．６１ミリモル）及び１，３−プロパンジオール（０．５５ｇ、７．２１ミリモル）から、中間体１４の調製において概要を述べた類似の手順にしたがって調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ７．０５−７．６１（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．９１−５．２５（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．２９−４．６８（ｍ，  １  Ｈ）  ３．７５−４．０７（ｍ，  ５  Ｈ）  ３．３８−３．７５（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．２５−２．６７（ｍ，  ２  Ｈ）  １．５１−２．００（ｍ，  １Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３３６．６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８６】
中間体２０：（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化３６】
2013503867.tif 000039
【００８７】
（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（中間体２０）（８７８ｍｇ、収率：９０％）を（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−メチル２−（フェニルメチル）（中間体２４）（１．０２ｇ、３．０４ミリモル）及びＬｉＯＨ（８０ｍｇ、３．３５ミリモル）から、中間体２の調製で概要を記載した類似の手順にしたがって得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３２２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８８】
中間体２６、２７、２８、２９、３１、３３及び３４を、中間体２０の調製で記載したものと類似した手順を用いて調製した。
【化３７】
2013503867.tif 000040
【００８９】
中間体２５：（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−メチル２−（フェニルメチル）−ｄ２
【化３８】
2013503867.tif 000041
【００９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ７．２７−７．４６（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．９７−５．２７（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．２９−４．６４（ｍ，  １  Ｈ）  ３．７２−４．０２（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．４９−３．７２（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．１９−２．６７（ｍ，  ２  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３３８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９１】
中間体２６：（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸−ｄ２
【化３９】
2013503867.tif 000042
【００９２】
ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３２４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９３】
中間体２７：（３Ｓ）−８，８−ジメチル−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化４０】
2013503867.tif 000043
【００９４】
中間体２８：（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸−ｄ６
【化４１】
2013503867.tif 000044
【００９５】
中間体２９：（８Ｓ）−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸−ｄ４
【化４２】
2013503867.tif 000045
【００９６】
中間体３０：（２Ｒ，３Ｒ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７，８−ジカルボン酸８−メチル７−（フェニルメチル）
【化４３】
2013503867.tif 000046
【００９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １．１２−１．２４（ｍ，  ６  Ｈ），  ２．００−２．１８（ｍ，  １  Ｈ），  ２．３５−２．４６（ｍ，  １  Ｈ），  ３．３２（ｓ，  １  Ｈ），  ３．３５−３．４４（ｍ，  １  Ｈ），  ３．５６（ｓ，  ２  Ｈ），  ３．６４（ｓ，  ３  Ｈ），  ４．２８−４．３７（ｍ，  １  Ｈ），  ４．３８−４．４５（ｍ，  ０  Ｈ），  ５．０９（ｓ，  ２  Ｈ），  ７．２４−７．４１（ｍ，  ５  Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９８】
中間体３１：（２Ｒ，３Ｒ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸
【化４４】
2013503867.tif 000047
【００９９】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝  ３３６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１００】
中間体３２：（２Ｓ，３Ｓ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７，８−ジカルボン酸８−メチル７−（フェニルメチル）
【化４５】
2013503867.tif 000048
【０１０１】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １．１８−１．３１（ｍ，  ６  Ｈ），  ２．２３（ｄｄ，  Ｊ＝１３．１，  ５．９  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ２．３９（ｄｔ，    Ｊ＝１３．１，  ８．０  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ３．４９−３．６６（ｍ，  ６  Ｈ），  ３．７６（ｓ，  １  Ｈ），  ４．３９−４．５６（ｍ，  １  Ｈ），  ４．９８−５．２６（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．３６（ｓ，  ５Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０２】
中間体３３：（２Ｓ，３Ｓ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸
【化４６】
2013503867.tif 000049
【０１０３】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０４】
中間体３４：（５’Ｓ）−１’−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝テトラヒドロスピロ［フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−２，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸
【化４７】
2013503867.tif 000050
【０１０５】
ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３５０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０６】
実施例６：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化４８】
2013503867.tif 000051
【０１０７】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（４７ｍｇ、収率：５３％）を［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体１９）（６８ｍｇ、０．１０４ミリモル）、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（１８．２ｍｇ、０．１０４）及びＨＡＴＵ（４０ｍｇ、０．１０４ミリモル）から、実施例５で概要を記載した類似の手順にしたがって調製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．２０−１１．０６（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．３５−８．０２（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．２２（ｄ，  Ｊ＝７．７８  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ４．９７−５．８９（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．２２−４．５８（ｍ，  １５  Ｈ）  ２．８３−３．２０（ｍ，  １  Ｈ）  ２．５８−２．８３（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２９−２．５８（ｍ，  １  Ｈ）  １．５７−２．３１（ｍ，  ８  Ｈ）  ０．６４−１．２２（ｍ，  １２  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１１．４１４３；実測値：８１１．４１４２。
【０１０８】
実施例７〜１１は、実施例５の合成について記載した類似の合成シーケンスを用いて調製した。
【化４９】
2013503867.tif 000052
【０１０９】
実施例７：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−８，８−ジメチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化５０】
2013503867.tif 000053
【０１１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）  １１．８４（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  １１．８０（ｂｒ．  ｓ，  １Ｈ），  ７．９０−７．６０（ｂｒ．  ｍ，  ９Ｈ），  ７．５２（ｓ，  １Ｈ），  ７．３６−７．２５（ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ），  ５．０９（ｂｒ．  ｍ，  １Ｈ），    ４．９８（ｍ，  １Ｈ），  ４．４９（ｂｒ．  ｍ，  １Ｈ），    ４．１４−４．０２（ｂｒ．  ｍ，  ２Ｈ），  ３．８１（ｂｒ  ，  ２Ｈ），  ３．７３−３．４０（ｂｒ．  ｍ，  １１Ｈ），  ２．６５（ｍ，  １Ｈ），  ２．４３−２．０９（ｂｒ．  ｍ，  ３Ｈ），  ２．０７−１．８１（ｂｒ．  ｍ，  ４Ｈ），  １．０５−０．７５（ｂｒ．  ｍ，  １８Ｈ）
ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝８３９（Ｍ＋Ｈ）＋    純度（ＬＣ／ＭＳ）  ９６％。
【０１１１】
実施例８：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（３Ｓ）−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６，１０−ジオキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル−ｄ６
【化５１】
2013503867.tif 000054
【０１１２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）    δｐｐｍ  ７．６２（ｍ，  ８Ｈ），  ７．２９（ｍ，  ２Ｈ），  ５．１７（ｍ，  ２Ｈ），  ４．２０（ｍ，  ２Ｈ），  ４．００（ｍ，  ２Ｈ），  ３．８８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．６５（ｓ，  ６Ｈ），  ２．６５−２．０３（ｍ，  ８Ｈ），  ０．９０（ｍ，  １２Ｈ）。
【０１１３】
Ｃ４３Ｈ４８Ｎ８Ｏ８Ｄ６についてのＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１７、実測値：８１７。
【０１１４】
Ｃ４３Ｈ４８Ｎ８Ｏ８Ｄ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１７．４５１９、実測値：８１７．４５１７
純度（ＬＣ／ＭＳ）９５％。
【０１１５】
実施例９：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル−ｄ４
【化５２】
2013503867.tif 000055
【０１１６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）    δｐｐｍ  ７．６０（ｍ，  ８Ｈ），  ７．２８（ｍ，  ２Ｈ），  ５．１７（ｍ，  ２Ｈ），  ４．２３（ｍ，  １Ｈ），  ４．１５（ｍ，  １Ｈ），  ４．０６（ｍ，  １Ｈ），  ３．９７（ｍ，  １Ｈ），  ３．８８（ｍ，  ２Ｈ），  ３．６４（ｓ，  ６Ｈ），  ２．５０−２．００（ｍ，  ８Ｈ），  ０．９０（ｍ，  １２Ｈ）。Ｃ４２Ｈ４８Ｎ８Ｏ８Ｄ４についてのＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋    計算値：８０１、実測値：８０１。
【０１１７】
Ｃ４２Ｈ４８Ｎ８Ｏ８Ｄ４についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋    計算値：８０１．４２３７、実測値：８０１．４２３８
純度（ＬＣ／ＭＳ）９１％。
【０１１８】
実施例１０：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（２Ｒ，３Ｒ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化５３】
2013503867.tif 000056
【０１１９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ０．８５（ｄ，  Ｊ＝６．４  Ｈｚ，  １２  Ｈ），  １．２４（ｄｄ，  Ｊ＝１１．９，  ５．８  Ｈｚ，  ６  Ｈ），  １．８７−２．０６（ｍ，４  Ｈ），  ２．０８−２．２１（ｍ，  ２  Ｈ），  ２．３４−２．４３（ｍ，  １  Ｈ），  ３．５４（ｓ，  ６  Ｈ），  ３．５９−３．６８（ｍ，  ２  Ｈ），  ３．６９−３．７５（ｍ，  ２  Ｈ），  ３．８１（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ），  ３．９７−４．１４（ｍ，  ３  Ｈ），  ５．００−５．１７（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．２５−７．３３（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．４９−７．５４（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．６２−７．７１（ｍ，  ４  Ｈ），  ７．７８（ｄ，  Ｊ＝７．７  Ｈｚ，  ４  Ｈ），  １１．７９（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝８２５．５（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値８２５．４２９９；実測値８２５．４３０２。純度：９２％。
【０１２０】
実施例１１：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ，３Ｓ，８Ｓ）−２，３−ジメチル−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化５４】
2013503867.tif 000057
【０１２１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ０．７０−０．９６（ｍ，  ７  Ｈ），  １．１２−１．３５（ｍ，  ４  Ｈ），  １．８５−２．０４（ｍ，  ３  Ｈ），  ２．０４−２．２５（ｍ，  ２  Ｈ），  ２．３１−２．４７（ｍ，  １  Ｈ），  ３．３３（ｓ，  ７  Ｈ），  ３．４５−３．６１（ｍ，  ８  Ｈ），  ３．６３−３．８９（ｍ，  ７  Ｈ），  ３．９４−４．１５（ｍ，  ４Ｈ），  ４．９１−５．１７（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．２０−７．４０（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．４９−７．５９（ｍ，  １  Ｈ），  ７．６０−７．７０（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．７０−７．８１（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．８１−７．９３（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．９６−８．０８（ｍ，  ０  Ｈ），  １１．５９−１２．００（ｍ，  ２  Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ  ８２５．５（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８２５．４２９９；実測値：８２５．４３０２。
【０１２２】
中間体３６：（８Ｓ）−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸
【化５５】
2013503867.tif 000058
【０１２３】
中間体３５：（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７，８−ジカルボン酸８−メチル７−（フェニルメチル）
【化５６】
2013503867.tif 000059
【０１２４】
（２Ｓ）−４−オキソ−１，２−ピロリジンジカルボン酸２−メチル１−（フェニルメチル）（中間体２３）（６８０ｍｇ、２．４５２ミリモル）の無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）中撹拌溶液に、１，２−エタンチオジオール（４６２ｍｇ、４．９ミリモル）を添加し、続いてＢＦ３エーテラート（１３９ｍｇ、０．４ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を一晩室温で撹拌した後、ＮａＨＣＯ３（ｓｓ）でクエンチした。層を分離し、有機層を乾燥し、ろ過し、そして蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５０％ヘキサン中酢酸エチル）により精製して、（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７，８−ジカルボン酸８−メチル７−（フェニルメチル）（中間体３５）を油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    ７．２８−７．４８（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．９５−５．３５（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．３４−４．６３（ｍ，  １  Ｈ）  ３．９０−４．１１（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８２−３．９０（ｍ，  １  Ｈ）  ３．７８（ｓ，  ２  Ｈ）  ３．５０−３．６９（ｍ，  １  Ｈ）  ３．１５−３．４５（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．７４（ｄｄｄ，  Ｊ＝１３．３０，  ７．７８，  １．２５  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．４０−２．６４（ｍ，  １  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３５４．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２５】
中間体３６：（８Ｓ）−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸
【化５７】
2013503867.tif 000060
【０１２６】
（８Ｓ）−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸（中間体３６）（３６）（６４０ｍｇ、収率：８４％）を（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７，８−ジカルボン酸８−メチル７−（フェニルメチル）（７９８ｍｇ、２．２５ミリモル）及びＬｉＯＨ（６０ｍｇ、２．５ミリモル）から、中間体２の調製で概要を記載した手順に従って得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝３４０．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２７】
中間体３９：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチルの調製
【化５８】
2013503867.tif 000061
【０１２８】
中間体３７：（８Ｓ）−８−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル
【化５９】
2013503867.tif 000062
【０１２９】
（８Ｓ）−８−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル（中間体３７）（５８４ｍｇ、収率６８％）を｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（中間体１）（６０３ｍｇ、１．０４６ミリモル）、（８Ｓ）−７−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−８−カルボン酸（中間体３６）（３５５ｍｇ、１．０４６ミリモル）及びＨＡＴＵ（４９８ｍｇ、１．０４６ミリモル）から、中間体２１の調製で概要を記載した類似の手順に従って得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    ７．８８−８．０３（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．４５−７．８５（ｍ，  ６  Ｈ）  ７．０５−７．４５（ｍ，  ６  Ｈ）  ５．６１（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ４．９８−５．４１（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．４２−４．９２（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．３５（ｔ，  Ｊ＝７．７８  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９３−４．０６（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８６（ｄ，  Ｊ＝８．７８  Ｈｚ，  ３  Ｈ）  ３．６２−３．８０（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．３５（ｄ，  Ｊ＝５．０２  Ｈｚ，  ４  Ｈ）  ３．２１（ｄ，  Ｊ＝７．２８  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．６１−２．９６（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．２４（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．９３−２．１６（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．９８−１．１７（ｍ，  ３  Ｈ）  ０．９１（ｔ，  Ｊ＝７．１５  Ｈｚ，  ６  Ｈ）。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝８２５．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３０】
中間体３８：（８Ｓ）−８−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル
【化６０】
2013503867.tif 000063
【０１３１】
（８Ｓ）−８−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル（中間体３８）（４９７ｍｇ、８７％）を（８Ｓ）−８−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル（中間体３７）（５８４ｍｇ、０．７１ミリモル）及び酢酸アンモニウム（５４６ｍｇ、７．１ミリモル）から、中間体（２２）の調製で概要を記載した類似の手順に従って得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝８０６．４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３２】
中間体３９：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化６１】
2013503867.tif 000064
【０１３３】
室温で、（８Ｓ）−８−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノナン−７−カルボン酸フェニルメチル（中間体３８）（４９７ｍｇ、０．６１７ミリモル）のＴＦＡ（６ｍＬ）中撹拌溶液に、トリフリン酸（２７８ｍｇ、１．８５ミリモル）を添加した。結果として得られた混合物を室温で３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、ＮａＨＣＯ３（ＳＳ）で中和し、そして水性相をＤＣＭ（１５％ＩＰＡ）（３×）で抽出した。合した有機相を乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３９）（４００ｍｇ、収率：９７％）を得た。ＥＳ  ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝６７２．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３４】
実施例１２：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化６２】
2013503867.tif 000065
【０１３５】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（８８ｍｇ、収率：２７％）を［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３９）（２５０ｍｇ、０．３７２ミリモル）、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（６５ｍｇ、０．３７２ミリモル）及びＨＡＴＵ（１４１ｍｇ、０．３７２ミリモル）から、実施例５で概要を記載した類似の手順にしたがって得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  １０．０７−１１．０８（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．８２（ｂｒ．  ｓ．，  ３  Ｈ）  ７．５８（ｄ，  Ｊ＝６．０２  Ｈｚ，  ５  Ｈ）  ７．１０−７．３０（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．５４（ｄ，  Ｊ＝９．２９  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ５．１７−５．４２（ｍ，  ３  Ｈ）  ４．０１−４．４８（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．２３−４．０３（ｍ，  １０  Ｈ）  ２．７０−３．１９（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．３０−２．４９（ｍ，  １  Ｈ）  １．９１−２．２９（ｍ，  ４  Ｈ）  １．１９−１．５６（ｍ，  ４  Ｈ）  １．０７（ｄｄ，  Ｊ＝１０．５４，  ７．０３  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ０．５８−０．９７（ｍ，  １０  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８２９．３５３０；実測値：８２９．３５３４。
【０１３６】
実施例１３：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化６３】
2013503867.tif 000066
【０１３７】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（３５ｍｇ、収率：２７％）を［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３９）（１００ｍｇ、０．１４９ミリモル）、（２Ｓ）−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸（２４ｍｇ、０．１５ミリモル）及びＨＡＴＵ（５６．５ｍｇ、０．１４９ミリモル）から、実施例５で概要を記載した類似の手順にしたがって得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    ９．９９−１１．６４（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．５３（ｂｒ．  ｓ．，  ８  Ｈ）  ７．１２−７．３４（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．２６（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ３．１８−４．６４（ｍ，  １７  Ｈ）  ２．７９（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．４３−２．６２（ｍ，  ８  Ｈ）  ０．７０−１．１９（ｍ，  ９  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１５．３３７３；実測値：８１５．３３７３。
【０１３８】
実施例１４：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝アセチル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化６４】
2013503867.tif 000067
【０１３９】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝アセチル）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（１４ｍｇ、収率：２４％）を［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル（中間体３９）（５０ｍｇ、０．０７４ミリモル）、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］グリシン（１０ｍｇ、０．０７４ミリモル）及びＨＡＴＵ（２８．３ｍｇ、０．０７４ミリモル）から、実施例５で概要を記載した類似の手順にしたがって得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ    ９．８６−１１．３１（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．５０（ｂｒ．  ｓ．，  ８  Ｈ）  ６．９１−７．２７（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．４１−６．３１（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．２４（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ３．１２−４．４５（ｍ，  １８  Ｈ）  ２．７７（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．７７−２．５０（ｍ，  ４  Ｈ）  ０．５８−１．１５（ｍ，  ６  Ｈ）。ＨＲＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：７８７．３０５５；実測値：７８７．３０５６。
【０１４０】
実施例１５：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化６５】
2013503867.tif 000068
【０１４１】
（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル（中間体１０４）（１３１ｍｇ、０．１６ミリモル）及び酢酸アンモニウム（１２２ｍｇ、１．６ミリモル）のジオキサン（２ｍＬ）中溶液を脱気し、そして密封管中１８時間１１０℃まで加熱した。反応を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、濾過し、そして真空中で濃縮した。残留物をＣ１８ＲＰクロマトグラフィーにより精製し、１０〜９０％水／アセトニトリル／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、灰白色固体（４４ｍｇ、３４％収率）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５５−７．８７（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．３２（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ）  ５．０２−５．２３（ｍ，  ３  Ｈ）  ４．１３−４．３４（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．９３−４．０４（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８８（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ３．４９−３．８４（ｍ，  ８  Ｈ）  １．８６−２．５４（ｍ，  １０  Ｈ）  １．４５−１．８４（ｍ，  ４  Ｈ）  ０．６９−１．１２（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５７Ｎ８Ｏ７についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８０９．４３５０、実測値：８０９．４３４６。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９６％。
【０１４２】
中間体１０４の調製
【化６６】
2013503867.tif 000069
【０１４３】
中間体１０１：８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル
【化６７】
2013503867.tif 000070
【０１４４】
中間体１０１をテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルバルデヒド（１．０ｇ、８．８ミリモル）からＷＯ９８／０８８５０、５０ページで概要を記載した手順にしたがって、定量的収率で得た。
【０１４５】
中間体１０２：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル
【化６８】
2013503867.tif 000071
【０１４６】
８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル（１０１）（２００ｍｇ、０．９４ミリモル）、ＨＡＴＵ（３９２ｍｇ、１．０３ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（１８１ｍｇ、１．０３ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．３３ｍＬ、１．８８ミリモル）を添加し、溶液を室温、窒素下で撹拌した。２時間後、反応を真空中で濃縮し、Ｃ１８ＲＰクロマトグラフィーにより精製し、１０〜９０％ＡＣＮ／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、生成物を黄色油状物（３１３ｍｇ、９０％収率）として得た。
【０１４７】
中間体１０３：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化６９】
2013503867.tif 000072
【０１４８】
２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル（１０２）（３１０ｍｇ、０．８４ミリモル）のＴＨＦ／水／メタノール（６ｍＬ）の２：１：１混合物中溶液に、水酸化リチウム一水和物（７０ｍｇ、１．６７ミリモル）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。１ＮのＨＣｌ（１．６ｍＬ）で処理し、ＥｔＯＡｃ及び水（それぞれ３０ｍＬ）間で分配し、有機層をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、白色泡状物（２１１ｍｇ、７４％収率）を得た。この物質をさらに精製することなくその後のステップで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．４３（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．１９−７．４１（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０５−４．２８（ｍ，  １  Ｈ）  ３．９１−４．０５（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．４０−３．７１（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．２０−３．２８（ｍ，  １  Ｈ）  １．８１−１．９８（ｍ，  ２  Ｈ）  １．７０−１．８０（ｍ，  １  Ｈ）  １．４６−１．６９（ｍ，  ２  Ｈ）  １．３２−１．４６（ｍ，  １  Ｈ）  ０．６５−１．０３（ｍ，  １０  Ｈ）。
【０１４９】
中間体１０４：（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル
【化７０】
2013503867.tif 000073
【０１５０】
２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（１０３）（１００ｍｇ、０．２９ミリモル）、ＨＡＴＵ（１１１ｍｇ、０．２９ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（１６８ｍｇ、０．２９ミリモル）（実施例１に記載したようにして調製）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．２ｍＬ、１．１７ミリモル）を添加し、溶液を室温、窒素下で撹拌した。１時間後、反応を真空中で濃縮し、Ｃ１８ＲＰクロマトグラフィーにより精製し、１０〜９０％ＡＣＮ／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、生成物を黄色固体（１３３ｍｇ、５５％収率）として得た。
【０１５１】
実施例１６：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８，８−ジオキシド−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化７１】
2013503867.tif 000074
【０１５２】
（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８，８−ジオキシド−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル（１０８）（１０７ｍｇ、０．１２ミリモル）及び酢酸アンモニウム（９４ｍｇ、１．２ミリモル）のジオキサン（１．５ｍＬ）中溶液を窒素で脱気し、密封管中１８時間１１０℃まで加熱した。反応を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、濾過し、そして真空中で濃縮した。ＳＦＣにより精製して、生成物を黄褐色固体（３９ｍｇ、３７％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．６４（ｂｒ．  ｓ．，  １０  Ｈ）  ７．３２（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０５−５．２４（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０４−４．２９（ｍ，  １  Ｈ）  ３．９９（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．８１（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．５５−３．７３（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．０３−３．２５（ｍ，  ４  Ｈ）  １．８０−２．４７（ｍ，  １４  Ｈ）  ０．６８−１．０６（ｍ，  １６  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５７Ｎ８Ｏ８ＳについてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５７．４０２０、実測値：８５７．４０２０。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９７％。
【０１５３】
中間体１０８の調製
【化７２】
2013503867.tif 000075
【０１５４】
中間体１０５：８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル８，８−ジオキシド
【化７３】
2013503867.tif 000076
【０１５５】
この化合物をテトラヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４−カルバルデヒド１，１−ジオキシド（１．０５ｇ、６．４７ミリモル）から実施例１５と同様にして９０％の収率で得た。
【０１５６】
中間体１０６：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル８，８−ジオキシド
【化７４】
2013503867.tif 000077
【０１５７】
中間体１０６を８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル８，８−ジオキシド（１０５）（２００ｍｇ、０．７７ミリモル）から実施例１５と同様にして６０％の収率で調製した。
【０１５８】
中間体１０７：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸８，８−ジオキシド
【化７５】
2013503867.tif 000078
【０１５９】
中間体１０７を定量的収率で２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル８，８−ジオキシド（１０６）（１８７ｍｇ、０．４５ミリモル）から実施例１５と同様にして調製した。さらなる精製をすることなく次のステップで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．４８（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．１３−７．４４（ｍ，  １  Ｈ）  ４．１０−４．３１（ｍ，  １  Ｈ）  ３．４６−３．６１（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．９３−３．２４（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．３２（ｄｄ，  Ｊ＝３．７，  １．７６  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．９３−２．１３（ｍ，  ３  Ｈ）  １．７３−１．９４（ｍ，  ２  Ｈ）  １．５５−１．７１（ｍ，  １  Ｈ）  ０．６６−１．０４（ｍ，  １０  Ｈ）。
【０１６０】
中間体１０８：（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８，８−ジオキシド−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル
【化７６】
2013503867.tif 000079
【０１６１】
４９％の収率で２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−チア−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸  ８，８−ジオキシド（１０７）（１００ｍｇ、０．２６ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（１４８ｍｇ、０．２６ミリモル）から、実施例１５で記載したのと同様にして調製した。
【０１６２】
実施例１７：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［８，８−ジフルオロ−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−アザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化７７】
2013503867.tif 000080
【０１６３】
酢酸アンモニウム（５４０ｍｇ、６．９ミリモル）及び（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸２−｛４’−［（｛［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］カルボニル｝オキシ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−２−オキソエチル（中間体１１７）（３０７ｍｇ、０．３５ミリモル）の無水ジオキサン（３．５ｍＬ）中溶液を窒素で脱気し、密封管中３時間１１０℃まで加熱した。反応を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ及び飽和ＮａＨＣＯ３（それぞれ３５ｍＬ）間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製し、１０〜１００％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を黄色固体（２３５ｍｇ、８０％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）  ｐｐｍ  ７．６９−７．８２（ｍ，  ３  Ｈ）  ７．６３（ｂｒ．  ｓ．，  ５  Ｈ）  ７．１７−７．３７（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．０３−５．１９（ｍ，  １  Ｈ）  ４．２０（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ４．０６−４．１６（ｍ，  １  Ｈ）  ３．９６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．８５（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．６２（ｄ，  Ｊ＝３．１  Ｈｚ，  ６  Ｈ）  ２．２４−２．３８（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．１５（ｂｒ．  ｓ．，  ３  Ｈ）  １．８５−２．０９（ｍ，  ８  Ｈ）  １．７７−１．８５（ｍ，  ２  Ｈ）  １．５３−１．７６（ｍ，  ３  Ｈ）  ０．９６（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ）  ０．８７（ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ，  １２  Ｈ）。Ｃ４５Ｈ５７Ｎ８Ｏ６Ｆ２についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋      計算値：８４３．４３６９、実測値：８４３．４３７１。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９７％。
【０１６４】
中間体７０の調製
【化７８】
2013503867.tif 000081
【０１６５】
中間体６０：
（２Ｓ）−２−｛［（（２Ｓ）−２−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］アミノ｝−３−メチルブタン酸（２４．５７ｇ、１４３ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（２５．１ｇ、１４３ミリモル）をＤＣＭ（５０ｍＬ）中に溶解させた。ＤＩＰＥＡ（７５ｍＬ、４３０ミリモル）及びＨＯＢＴ（２１．９７ｇ、１４３ミリモル）を添加した。５分後、ＥＤＣ（２７．５ｇ、１４３ミリモル）を添加した。反応を室温で３時間攪拌した。水（５０ｍＬ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ（１ｍＬ）を添加した。沈殿をろ過し、疎水性フリットを通して有機／水性層をろ過し、濃縮乾固して、４２．９２ｇの無色油状物を得た。
【０１６６】
中間体６１：
Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン酸１，１−ジメチルエチル（６１ｇ、１８６ミリモル）をＨＣｌ（５０ｍＬ、１６４６ミリモル）（１５０  ｍＬ０  ｏｆ  ａ  ４Ｍ  ｓｏｌ）中に溶解させ、そして５時間攪拌した。濃縮乾固して、４７．９ｇの生成物を淡黄色粘着性泡状物として得た。
【０１６７】
中間体７０
１，１’−（４，４’−ビフェニルジイル）ビス（２−ブロモエタノン）（３７．８ｇ、９５ミリモル）をＤＭＦ（８００ｍＬ）中に溶解させ、１５分間脱気した（Ｎ２）。中間体６１（２１．９９ｇ、８１ミリモル）をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解させ、続いてＮａＨ（２．９４ｇ、７３．４ミリモル、油中６０％）を窒素下で１５分にわたって慎重に添加した。溶液をＮ２下で１５分間撹拌し、次いでゆっくりと１５分にわたって１，１’−（４，４’−ビフェニルジイル）ビス（２−ブロモエタノン）の溶液に滴加し、続いて１時間室温で撹拌した。溶媒体積を次いで真空中で約１００ｍＬまで減じ、２０℃まで冷却した。１００ｍＬの水をゆっくりと添加し、結果として得られた若干灰色がかった黄色固体をろ過し、そして水（２００ｍＬ）、ヘキサン（２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾燥した（１２ｈ）。粗化合物を５００ｇのシリカ上、ヘキサン／酢酸エチルで精製（勾配を５０％から１００％ＥＡまで増大させた）して、１４．５ｇ（３７．３％）の中間体７０を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．１１（ｄｄ，  Ｊ＝１２．０，  ８．５  Ｈｚ，  ４  Ｈ）  ７．９６（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  ４  Ｈ）  ７．４１（ｄ，  Ｊ＝８．４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ５．４３−５．７５（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．９９（ｓ，  ２  Ｈ）  ４．５３（ｄｄ，  Ｊ＝８．６，  ４．７  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．０３（ｔ，  Ｊ＝８．６  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．７６−３．９０（ｍ，  １  Ｈ）  ３．６０−３．７３（ｍ，  １  Ｈ）  ３．５３（ｓ，  ３  Ｈ）  ２．２２−２．３７（ｍ，  １  Ｈ）  ２．１２−２．２１（ｍ，  １  Ｈ）  １．８５−２．０６（ｍ，  ３  Ｈ）  ０．９０（ｄｄ，  Ｊ＝１０．７，  ６．６  Ｈｚ，  ６  Ｈ）。
【０１６８】
中間体１１７の調製
【化７９】
2013503867.tif 000082
【０１６９】
中間体１１０：８−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル
【化８０】
2013503867.tif 000083
【０１７０】
この化合物を、９８％収率で、ラセミ化合物として４−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝シクロヘキサンカルバルデヒド（シス／トランス異性体の混合物）（７．３５ｇ、３０．３ミリモル）から実施例１５と同様にして得た。
【０１７１】
中間体１１１：８−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）
【化８１】
2013503867.tif 000084
【０１７２】
乾燥ＤＣＭ中に溶解させた８−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル（１１０）（１０．６１ｇ、３１．３ミリモル）の溶液に、トリエチルアミンを添加し（１０．８ｍＬ、７８ミリモル）、０℃まで冷却し、続いてＣｂｚ−Ｃｌ（６．２ｍＬ、４３．５ミリモル）を添加し、そして反応を０℃で５分間、室温で１時間撹拌した。反応をＤＣＭ（７００ｍＬ）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（７００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１０〜６０％のヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を黄色油状物として得た（５．７３ｇ、３９％収率）。
【０１７３】
中間体１１２：８−ヒドロキシ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）
【化８２】
2013503867.tif 000085
【０１７４】
８−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）（１１１）（５．７３ｇ、１２．０５ミリモル）のＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、氷酢酸（１．３８ｍＬ、２４．０ミリモル）を添加し、続いてＴＢＡＦ（２４ｍＬ）をＴＨＦ中１Ｍ溶液として添加した。反応を室温で７２時間攪拌した。反応をＥｔＯＡｃ及び水（それぞれ２５０ｍＬ）間で分配し、有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。反応はＴＬＣにより完了していないことが判明した。残留物を乾燥ＴＨＦ（６０ｍＬ）中に溶解させ、０℃まで冷却し、そしてＨＦ−ピリジン（１．６ｍＬ、１８．０ミリモル）で処理し、室温まで温め、そして窒素下で２時間攪拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）中に注ぎ、そしてガス発生が止まるまで、固体炭酸カリウムを添加した。ＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、０．１ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を定量的収率で黄色油状物として得、これをさらに精製することなくその後の反応で使用した。
【０１７５】
中間体１１３：８−オキソ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）
【化８３】
2013503867.tif 000086
【０１７６】
８−ヒドロキシ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）（１１２）（４．３６ｇ、１２０．０５ミリモル）の乾燥ＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に、デス・マーチンペルヨージナン（１０．２２ｇ、２４．１ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で１８時間攪拌した。反応を１０％水性チオ硫酸ナトリウム（１５０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）中に注ぎ、そして１０分間撹拌した。ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２５〜８０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を淡黄色油状物（２．８９ｇ、６７％収率）として得た。
【０１７７】
中間体１１４：（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）
【化８４】
2013503867.tif 000087
【０１７８】
８−オキソ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）（１１３）（２．８９ｇ、７．１３ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に、Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ（２．２ｍＬ、１２．１ミリモル）を添加し、続いて触媒量のエタノールを添加し、そして反応を室温、窒素下で撹拌した。２．５時間後、反応を飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）中に注ぎ、１０分間撹拌した。ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、そして有機層を０．１ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、所望の化合物を黄色油状物（３．０１ｇ）として得、これは、（３Ｓ）−８−フルオロ−２−アザスピロ［４．５］デク−７−エン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）で１：１比で汚染されていることが判明した。残留物を乾燥ＤＣＭ（３５ｍＬ）中に溶解させ、ｍＣＰＢＡ（７７％、１．６６ｇ、７．４５ミリモル）で処理し、窒素下で１８時間攪拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）及び１０％の水性チオ硫酸ナトリウム（４０ｍＬ）中に注ぎ、１０分間撹拌した。ＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、５〜５０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出した。ラセミ化合物を次いで１０μｍＯＤカラム上キラルＨＰＬＣにより分離し、２５％ヘキサン中イソプロパノールで溶出して、標記化合物を透明油状物（６３２ｍｇ、２３％収率）として得た。絶対配置を振動円二色性（ＶＣＤ）により決定した。
【０１７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ７．２８−７．４１（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．９８−５．２３（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．３７（ｄｄｄ，  Ｊ＝１９．３，  ８．１，  ８．０  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．２２（ｑ，  Ｊ＝７．２  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９３−４．１２（ｍ，  １  Ｈ）  ３．４５−３．７０（ｍ，  １  Ｈ）  ３．３６（ｄｄ，  Ｊ＝１０．８，  ２．０  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．２２（ｄｄ，  Ｊ＝１２．８，  ８．５  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．７９−２．０３（ｍ，  ４  Ｈ）  １．５９−１．７８（ｍ，  ４  Ｈ）  １．５６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  １．２８（ｔ，  Ｊ＝７．１  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．２２（ｄ，  Ｊ＝６．１  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．１３（ｔ，  Ｊ＝７．１  Ｈｚ，  １  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８１．６８。
【０１８０】
中間体１１５：（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル
【化８５】
2013503867.tif 000088
【０１８１】
（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）（１１４）（６３０ｍｇ、１．６５ミリモル）の無水エタノール（１２ｍＬ）中溶液に、２０％の炭素上Ｐｄ（ＯＨ）２（６５ｍｇ）を添加し、フィッシャー・ポーター装置で反応を６０ｐｓｉにて１８時間水素化した。セライトを通して反応をろ過し、真空中で濃縮して、標記化合物を透明油状物（３８０ｍｇ、９３％収率）として得た。
【０１８２】
中間体１１６：（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化８６】
2013503867.tif 000089
【０１８３】
（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル（１１５）（３８０ｍｇ、１．５４ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（６１４ｍｇ、１．６ミリモル）、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（２８３ｍｇ、１．６ミリモル）、続いてトリエチルアミン（０．４３ｍＬ、３．１ミリモル）を添加し、反応を窒素下、室温で１時間攪拌した。反応を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１５〜８０％のヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出した。適切なフラクションを合し、そして真空中で濃縮した。残留物をＴＨＦ／水／メタノール（５ｍＬ／２．５ｍＬ／２．５ｍＬ）中に溶解させ、水酸化リチウム一水和物（１１９ｍｇ、２．８ミリモル）を添加し、溶液を室温で３０分間撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（３．５ｍＬ）で処理し、ＥｔＯＡｃ及び水（それぞれ５０ｍＬ）間で分配した。水性層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をジエチルエーテルで摩砕し、そして真空中で濃縮して、標記化合物を白色固体（５４２ｍｇ、９３％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．４７（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．４１（ｄ，  Ｊ＝８．０  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．２４（ｔ，  Ｊ＝８．６  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９５−４．１４（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．５２（ｓ，  ３  Ｈ）  ３．２５−３．３３（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２２（ｄｄ，  Ｊ＝１２．３，  ８．４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．７９−２．１１（ｍ，  ５  Ｈ）  １．５８−１．７７（ｍ，  ３  Ｈ）  １．４１−１．５９（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．９３（ｄｄ，  Ｊ＝１２．７，  ６．６  Ｈｚ，  ６  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７７．２３。
【０１８４】
中間体１１７：（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸２−｛４’−［（｛［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］カルボニル｝オキシ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−２−オキソエチル
【化８７】
2013503867.tif 000090
【０１８５】
（３Ｓ）−８，８−ジフルオロ−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（１１６）（１６８ｍｇ、０．４５ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン酸２−［４’−（ブロモアセチル）−４−ビフェニリル］−２−オキソエチル（７０）（２５０ｍｇ、０．４３ミリモル）の無水アセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６４ミリモル）を添加し、反応を窒素下、室温で１時間攪拌した。反応をＥｔＯＡｃ及び０．１ＮのＨＣｌ（それぞれ３０ｍＬ）間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６５〜１００％のヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を灰白色固体（３０９ｍｇ、８２％収率）として得た。
【０１８６】
実施例１８：（４，４’−ビフェニルジイルビス｛１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル（３Ｓ）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３，２−ジイル［（２Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１，２−ブタンジイル］｝）ビスカルバミン酸ジメチル
【化８８】
2013503867.tif 000091
【０１８７】
０℃まで冷却した、（３Ｓ，３’Ｓ）−３，３’−［４，４’−ビフェニルジイルビス（１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル）］ビス（８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸）ビス（フェニルメチル）（１１９）（２１０ｍｇ、０．２５ミリモル）のトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）中溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸（０．１３ｍＬ）を添加し、反応を室温まで温め、そして３０分間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、ロータリーエバポレーターで蒸発させた。残留物をロータリーエバポレーターでの蒸発によりトルエンから分離し、残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）中に懸濁させ、４Ｎのジオキサン中ＨＣｌ（０．６５ｍＬ）で処理した。反応を真空中で濃縮し、エーテル中で摩砕し、そしてろ過して、褐色固体を得た。
【０１８８】
この固体の無水ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（８８ｍｇ、０．５ミリモル）、ＨＡＴＵ（１８３ｍｇ、０．４８ミリモル）及びトリエチルアミン（０．４ｍＬ、２．８８ミリモル）を添加し、反応を室温で１時間攪拌した。粗反応混合物をＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を淡黄色固体（７９ｍｇ、３７％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．６０−７．７９（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３３（ｓ，  ２  Ｈ）  ５．１１（ｄｄ，  Ｊ＝９．９，  ７．９  Ｈｚ，  ２Ｈ）  ４．３０（ｄ，  Ｊ＝１０．２  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ４．１７（ｄ，  Ｊ＝８．２  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ３．７０−３．８７（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．５６−３．７１（ｍ，  １０  Ｈ）  ２．４０（ｄｄ，  Ｊ＝１２．９，  ７．８  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ２．１３（ｄｄ，  Ｊ＝１２．６，  １０．３  Ｈｚ，  ２Ｈ）  １．８８−２．００（ｍ，  ２Ｈ）  １．７０−１．８４（ｍ，  ４Ｈ）  １．４６−１．６９（ｍ，  ６  Ｈ）  ０．８３−０．９７（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４８Ｈ６３Ｎ８Ｏ８についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８７９．４７６９、実測値：８７９．４７６９。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９８％。
【０１８９】
中間体１１９の調製
【化８９】
2013503867.tif 000092
【０１９０】
中間体１１８：（３Ｓ，３’Ｓ）ビス（−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸）３，３’−［４，４’−ビフェニルジイルビス（２−オキソ−２，１−エタンジイル）］２，２’−ビス（フェニルメチル）
【化９０】
2013503867.tif 000093
【０１９１】
１，１’−（４，４’−ビフェニルジイル）ビス（２−ブロモエタノン）（１５５ｍｇ、０．３９ミリモル）及び（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（１２１）（２７５ｍｇ、０．８６ミリモル）の無水アセトニトリル（４ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．４ミリモル）を添加し、溶液を窒素下、室温で３．５時間撹拌した。反応をＥｔＯＡｃ及び０．１ＮのＨＣｌ（それぞれ４０ｍＬ）間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２０〜１００％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を白色固体（２２５ｍｇ、６６％収率）として得た。
【０１９２】
中間体１１９：（３Ｓ，３’Ｓ）−３，３’−［４，４’−ビフェニルジイルビス（１Ｈ−イミダゾール−４，２−ジイル）］ビス（８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸）ビス（フェニルメチル）
【化９１】
2013503867.tif 000094
【０１９３】
（３Ｓ，３’Ｓ）ビス（−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸）３，３’−［４，４’−ビフェニルジイルビス（２−オキソ−２，１−エタンジイル）］２，２’−ビス（フェニルメチル）（１１８）（２２５ｍｇ、０．２６ミリモル）のジオキサン（３．５ｍＬ）中溶液に、酢酸アンモニウム（３１８ｍｇ、４．１ミリモル）を添加した。反応を窒素で脱気し、密封管中１８時間１１０℃まで加熱した。反応をＥｔＯＡｃ及び飽和ＮａＨＣＯ３（それぞれ３５ｍＬ）間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を定量的収率で得た。
【０１９４】
中間体１２１の調製
【化９２】
2013503867.tif 000095
【０１９５】
中間体１２０：（３Ｓ）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）
【化９３】
2013503867.tif 000096
【０１９６】
８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸エチル（３．５４ｇ、１６．６ミリモル）を乾燥ジクロロメタン（８０ｍＬ）中に溶解させ、トリエチルアミン（５．８ｍＬ、４１．５ミリモル）を添加し、続いてクロロギ酸ベンジル（３．５ｍＬ、２４．９ミリモル）を添加し、反応を窒素下、室温で２時間撹拌した。反応をジクロロメタンで希釈し、０．２ＮのＨＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２０〜１００％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、黄色油状物を得た。ラセミ化合物を次いで１０μｍのＯＤカラム上キラルＨＰＬＣにより分離し、２５％ヘキサン中イソプロパノールで溶出して、標記化合物を透明油状物（１．６６ｇ、２９％収率）として得た。
【０１９７】
中間体１２１：（３Ｓ）−２−｛［（フェニルメチル）オキシ］カルボニル｝−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸 
【化９４】
2013503867.tif 000097
【０１９８】
（３Ｓ）−８−オキサ−２−アザスピロ［４．５］デカン−２，３−ジカルボン酸３−エチル２−（フェニルメチル）（１２０）（３００ｍｇ、０．８６ミリモル）のＴＨＦ／水／メタノール（３ｍＬ／１．５ｍＬ／１．５ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（７２ｍｇ、１．７ミリモル）を添加し、反応を室温で３０分間撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（２ｍＬ）で処理し、そしてＥｔＯＡｃ及び水間で分配した。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮して、標記化合物を定量的収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．５４−１２．９３（ｍ，  １  Ｈ）  ７．２１−７．４７（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．９０−５．２０（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．１１−４．４１（ｍ，  １  Ｈ）  ３．４４−３．７０（ｍ，  ５  Ｈ）  ３．２４（ｄｄ，  Ｊ＝１５．０，  １１．７  Ｈｚ，  １Ｈ）  ２．３２（ｔｄ，  Ｊ＝１３．６，  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ）  １．７３（ｄｄｄ，  Ｊ＝１６．８，  １２．９，  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ）  １．３８−１．６４（ｍ，  ４Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ  −  Ｈ）−＝３１８．１９。
【０１９９】
実施例１９：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化９５】
2013503867.tif 000098
【０２００】
２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−３−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（１３４）（１２６ｍｇ、０．１４ミリモル）及び酢酸アンモニウム（１０５ｍｇ、１．４ミリモル）の無水ジオキサン（１．５ｍＬ）中溶液を窒素で脱気し、密封管中で１１０℃まで１８時間加熱した。反応を真空中で濃縮し、ＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を黄褐色固体（８４ｍｇ、６８％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５６−７．８７（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３１（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０４−５．２３（ｍ，  １  Ｈ）  ４．１１−４．３２（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．９３−４．０４（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８０−３．９２（ｍ，  １  Ｈ）  ３．６３（ｓ，  ６  Ｈ）  ３．３３−３．６１（ｍ，  ６  Ｈ）  １．８６−２．４９（ｍ，  ９  Ｈ）  １．６８（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  １．５６（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．３７−１．４９（ｍ，  ９  Ｈ）  ０．８１−１．０８（ｍ，  １５  Ｈ）。Ｃ４９Ｈ６５Ｎ９Ｏ８についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：９０８．５０３４、実測値：９０８．５０３１。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９３％。
【０２０１】
中間体１３４の調製
【化９６】
2013503867.tif 000099
【０２０２】
中間体１３１：２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３，８−ジカルボン酸８−（１，１−ジメチルエチル）３−エチル
【化９７】
2013503867.tif 000100
【０２０３】
この化合物を、ラセミ化合物として４−ホルミル−１−ピペリジンカルボン酸１，１−ジメチルエチルから、ＷＯ９８／０８８５０の５０ページで概要を記載した手順にしたがって得た。
【０２０４】
中間体１３２：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３，８−ジカルボン酸８−（１，１−ジメチルエチル）３−エチル
【化９８】
2013503867.tif 000101
【０２０５】
２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３，８−ジカルボン酸８−（１，１−ジメチルエチル）３−エチル（１３１）（１５０ｍｇ、０．４８ミリモル）、ＨＡＴＵ（１８３ｍｇ、０．４８ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（９３ｍｇ、０．５３ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．１７ｍＬ、０．９６ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で２時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１５〜８０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を淡黄色油状物（１２５ｍｇ、５５％収率）として得た。
【０２０６】
中間体１３３：８−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸
【化９９】
2013503867.tif 000102
【０２０７】
２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３，８−ジカルボン酸８−（１，１−ジメチルエチル）３−エチル（１３２）（１２５ｍｇ、０．２７ミリモル）のＴＨＦ／水／ＭｅＯＨ（１．２ｍＬ／０．６ｍＬ／０．６ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（２２ｍｇ、０．５３ミリモル）を添加し、反応を室温で１．５時間撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（０．５ｍＬ）で処理し、そしてＥｔＯＡｃ及び０．１ＮのＨＣｌ（それぞれ１０ｍＬ）間で分配し、水性層をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を白色固体（１０７ｍｇ、９１％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．２９−１２．５４（ｍ，  １  Ｈ）  ７．０８−７．４４（ｍ，  １  Ｈ）  ４．４７（ｔ，  Ｊ＝５．４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．１３−４．３０（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８６−４．１３（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．４５−３．５８（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．１６−３．２７（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．６４（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ２．１５−２．３１（ｍ，  １  Ｈ）  １．８１−１．９５（ｍ，  １  Ｈ）  １．４３−１．６７（ｍ，  ３  Ｈ）  １．２９−１．４３（ｍ，  １１  Ｈ）  ０．６９−１．０３（ｍ，  ６  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ−Ｈ）−＝４４０．５９。
【０２０８】
中間体１３４：２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−３−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１００】
2013503867.tif 000103
【０２０９】
８−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−３−カルボン酸（１３３）（１０６ｍｇ、０．２４ミリモル）、ＨＡＴＵ（９１ｍｇ、０．２４ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（１３８ｍｇ、０．２４ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．１７ｍＬ、０．９６ミリモル）を添加し、反応を窒素下、室温で１時間攪拌した。反応を真空中で濃縮し、ＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を灰白色固体（１２９ｍｇ、５８％収率）として得た。
【０２１０】
実施例２０：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１０１】
2013503867.tif 000104
【０２１１】
２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（６８ｍｇ、０．０８ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．３ｍＬ）を添加し、そして反応を室温で２時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、ＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を黄褐色固体（４９ｍｇ、８１％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５６−７．８３（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３１（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．００−５．２２（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．１２−４．３０（ｍ，  ３  Ｈ）  ４．０１（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．８０−３．９１（ｍ，  １  Ｈ）  ３．５７−３．７０（ｍ，  ６  Ｈ）  ２．７６−３．０７（ｍ，  ４  Ｈ）  １．８９−２．４８（ｍ，  １０  Ｈ）  １．６９−１．８１（ｍ，  １  Ｈ）  １．６１（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ０．８２−１．０９（ｍ，  １５  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５８Ｎ９Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８０８．４５１０、実測値：８０８．４５０９。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９４％。
【０２１２】
実施例２１：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［８−アセチル−２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化１０２】
2013503867.tif 000105
【０２１３】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２０）（１９ｍｇ、０．０２ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．０１６ｍＬ、０．１２ミリモル）を添加し、続いて塩化アセチル（０．０１ｍＬ、０．１４ミリモル）を添加し、反応を室温で１時間攪拌した。反応を真空中で濃縮し、メタノール（０．７ｍＬ）中に溶解させ、これに炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ミリモル）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水（それぞれ３ｍＬ）間で分配し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を黄色固体（１８ｍｇ、９０％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５４−７．８８（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３２（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０５−５．２３（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．０３−４．３４（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．７１−４．０３（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．５６−３．７１（ｍ，  ８  Ｈ）  ３．３４−３．５６（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．１４−２．４６（ｍ，  ４  Ｈ）  １．８９−２．１４（ｍ，  ６  Ｈ）  １．４６−１．８３（ｍ，  ４  Ｈ）  １．１９−１．３２（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．７８−１．０７（ｍ，  １４  Ｈ）。Ｃ４６Ｈ６０Ｎ９Ｏ７についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５０．４６１６、実測値：８５０．４６１７。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９４％。
【０２１４】
実施例２２：２−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−３−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−カルボン酸メチル
【化１０３】
2013503867.tif 000106
【０２１５】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，８−ジアザスピロ［４．５］デク−３−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２０）（１９ｍｇ、０．０２ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．０１６ｍＬ、０．１２ミリモル）を添加し、続いて塩化アセチル（０．０１１ｍＬ、０．１４ミリモル）を添加し、反応を室温で１時間攪拌した。反応を真空中で濃縮し、メタノール（０．７ｍＬ）中に溶解させ、これに炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ミリモル）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水（それぞれ３ｍＬ）間で分配し、そして水性層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を黄色固体（１５ｍｇ、７４％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５１−７．９２（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３２（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０２−５．２５（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０３−４．３１（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．７５−４．０５（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．６１−３．７２（ｍ，  ７  Ｈ）  ３．３４−３．６０（ｍ，  ４  Ｈ）  １．８２−２．５０（ｍ，  ７  Ｈ）  １．７０（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．４４−１．６３（ｍ，  ４  Ｈ）  １．２７（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ）  ０．７７−１．１０（ｍ，  １４  Ｈ）。Ｃ４６Ｈ６０Ｎ９Ｏ８についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８６６．４５６５、実測値：８５０．４５６４。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９６％。
【０２１６】
実施例２３：６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−７−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０４】
2013503867.tif 000107
【０２１７】
６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−７−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（１４８）（４００ｍｇ、０．４５ミリモル）及び酢酸アンモニウム（３４３ｍｇ、４．５ミリモル）の無水ジオキサン（５ｍＬ）中溶液を窒素で脱気し、密封管中で１１０℃まで１８時間加熱した。反応をＥｔＯＡｃで希釈し、濾過し、そして真空中で濃縮した。残留物をＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製し、１０〜１００％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を淡黄色固体（３１５ｍｇ、８０％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １１．６３−１２．３５（ｍ，  １  Ｈ）  ７．４７−７．９２（ｍ，  ９  Ｈ）  ７．１９−７．４２（ｍ，  １  Ｈ）  ５．０８（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ３．９４−４．２３（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．６２−３．９３（ｍ，  ７  Ｈ）  ３．５６（ｓ，  ６  Ｈ）  ２．２４−２．４５（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．１４（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．７７−２．０７（ｍ，  ６  Ｈ）  １．３７（ｄ，  Ｊ＝５．５  Ｈｚ，  ９  Ｈ）  ０．７６−１．０２（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４７Ｈ６２Ｎ９Ｏ８についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８８０．４７２１、実測値：８８０．４７２５。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９５％。
【０２１８】
中間体１４８の調製
【化１０５】
2013503867.tif 000108
【０２１９】
中間体１４５：２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２，７−ジカルボン酸２−（１，１−ジメチルエチル）７−エチル
【化１０６】
2013503867.tif 000109
【０２２０】
この化合物を、３−ホルミル−１−アゼチジンカルボン酸１，１−ジメチルエチル（６５０ｍｇ、３．５ミリモル）から９３％の収率で、実施例１９における中間体１３１と同様にして調製した。
【０２２１】
中間体１４６：６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２，７−ジカルボン酸２−（１，１−ジメチルエチル）７−エチル
【化１０７】
2013503867.tif 000110
【０２２２】
２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２，７−ジカルボン酸２−（１，１−ジメチルエチル）７−エチル（１４５）（５００ｍｇ、１．７６ミリモル）、ＨＡＴＵ（７３５ｍｇ、１．９３ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリン（３３９ｍｇ、１．９３ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．６８ｍＬ、３．８７ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で２時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーにより精製し、１０〜９０％ＡＣＮ／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を灰白色固体（３９８ｍｇ、５１％収率）として得た。
【０２２３】
中間体１４７：２−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸
【化１０８】
2013503867.tif 000111
【０２２４】
６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２，７−ジカルボン酸２−（１，１−ジメチルエチル）７−エチル（１４６）（３４４ｍｇ、０．７８ミリモル）のＴＨＦ／水／メタノール（３ｍＬ／１．５ｍＬ／１．５ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（６５ｍｇ、１．５６ミリモル）を添加し、反応を室温で１．５時間撹拌するとすぐに、１ＮのＨＣｌ（１．５ｍＬ）で処理した。反応をＥｔＯＡｃ及び水（それぞれ３０ｍＬ）間で分配し、水性層をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を白色固体（２４５ｍｇ、７６％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．４６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．０６−７．６６（ｍ，  １  Ｈ）  ４．１３−４．３２（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８８−４．１２（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．５６−３．８９（ｍ，  ５  Ｈ）  ３．３９−３．５７（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．２４−２．４５（ｍ，  １  Ｈ）  １．９９−２．１９（ｍ，  １  Ｈ）  １．８０−１．９５（ｍ，  １  Ｈ）  １．２６−１．４４（ｍ，  ９  Ｈ）  ０．５６−１．００（ｍ，  ６  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ−Ｈ）−＝４１２．４１。
【０２２５】
中間体１４８：６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−７−（｛［２−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−２−オキソエチル］アミノ｝カルボニル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル
【化１０９】
2013503867.tif 000112
【０２２６】
２−｛［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル｝−６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸（１４７）（２４５ｍｇ、０．５９ミリモル）、ＨＡＴＵ（２２５ｍｇ、０．５９ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（３４２ｍｇ、０．５９ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．４１ｍＬ、２．３７ミリモル）を添加し、反応を窒素下、室温で１時間攪拌した。反応を真空中で濃縮し、Ｃ１８逆相クロマトグラフィーにより精製し、１０〜１００％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を灰白色固体（４００ｍｇ、７５％収率）として得た。
【０２２７】
実施例２４：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１１０】
2013503867.tif 000113
【０２２８】
この化合物を実施例２０と同様にして、６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−７−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸１，１−ジメチルエチル（２９８ｍｇ、０．３４ミリモル）から調製して、標記化合物を黄色固体（２０３ｍｇ、７７％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．４３−７．８６（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．０４−７．４２（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．２０−５．４１（ｍ，  １  Ｈ）  ５．０１−５．１９（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．３０−４．４３（ｍ，  １  Ｈ）  ４．１２−４．２７（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．７８−４．０３（ｍ，  ５  Ｈ）  ３．６５−３．７８（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．６１−３．６４（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．３９−３．５２（ｍ，  １  Ｈ）  ２．５４−２．７７（ｍ，  １  Ｈ）  ２．３８−２．５４（ｍ，  １  Ｈ）  ２．０９−２．３９（ｍ，  ２  Ｈ）  １．８９−２．１３（ｍ，  ４  Ｈ）  ０．８１−１．１３（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４２Ｈ５４Ｎ９Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：７８０．４１９７、実測値：７８０．４２００。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９６％。
【０２２９】
実施例２５：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−アセチル−６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化１１１】
2013503867.tif 000114
【０２３０】
この化合物を実施例２１と同様にして、［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２４）（４０ｍｇ、０．０５ミリモル）から調製して、標記化合物を黄色固体（３５ｍｇ、８３％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １１．６７−１２．３３（ｍ，  １  Ｈ）  ７．１９−７．９９（ｍ，  １２  Ｈ）  ５．０７（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ３．９２−４．２５（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．６７−３．９４（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．４５−３．６６（ｍ，  ８  Ｈ）  ２．２０−２．４６（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．１７（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．８０−２．０６（ｍ，  ５  Ｈ）  １．６０−１．８２（ｍ，  ３  Ｈ）  ０．７８−１．０２（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５６Ｎ９Ｏ７についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８２２．４３０３、実測値：８２２．４３００。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９１％。
【０２３１】
実施例２６：６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−７−（４−｛４’−［２−（（２Ｓ）−１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−２−ピロリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクタン−２−カルボン酸メチル
【化１１２】
2013503867.tif 000115
【０２３２】
この化合物を実施例２２と同様にして、［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２４）（４０ｍｇ、０．０５ミリモル）から調製して、標記化合物を黄色固体（３７ｍｇ、８７％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １１．３８−１２．３７（ｍ，  １  Ｈ）  ７．５８−７．９３（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．１９−７．５９（ｍ，  ３  Ｈ）  ４．９３−５．１７（ｍ，  １  Ｈ）  ３．６３−４．２２（ｍ，  ７  Ｈ）  ３．４５−３．６４（ｍ，  ６  Ｈ）  ２．２４−２．４８（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．０８（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ）  １．７９−２．０７（ｍ，  ６  Ｈ）  ０．９９−１．１８（ｍ，  １  Ｈ）  ０．７５−０．９７（ｍ，  １４  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５６Ｎ９Ｏ８についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８３８．４２５２、実測値：８３８．４２５２。純度（ＬＣ−ＭＳ）：８７％。
【０２３３】
実施例２７：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［２−［（メチルアミノ）カルボニル］−６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１１３】
2013503867.tif 000116
【０２３４】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２４）（４５ｍｇ、０．０６ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（０．６ｍＬ）中溶液に、イソシアン酸メチル（０．０１ｍＬ、０．１７ミリモル）を添加し、反応を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をメタノール（１ｍＬ）中に溶解させ、炭酸カリウム（４０ｍｇ、０．２９ミリモル）を添加し、反応を室温で１８時間撹拌した。反応をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）間で分配し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）で抽出し、有機層を合し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を黄色固体（３４ｍｇ、７０％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．６４（ｂｒ．  ｓ．，  １０  Ｈ）  ７．３３（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０６−５．２２（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０３−４．４６（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．７３−４．０４（ｍ，  ８  Ｈ）  ３．５４−３．７３（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．４６（ｑ，  Ｊ＝７．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ２．５２−２．７６（ｍ，  ５  Ｈ）  ２．１０−２．５３（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．０２（ｂｒ．  ｓ．，  ３  Ｈ）  ０．７０−１．０９（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５７Ｎ１０Ｏ７についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８３７．４４１２、実測値：８３８．４４１６。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９１％。
【０２３５】
実施例２８：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−（メチルスルホニル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１１４】
2013503867.tif 000117
【０２３６】
［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２，６−ジアザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル（実施例２４）（６０ｍｇ、０．０８ミリモル）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．０５４ｍＬ、０．３９ミリモル）を添加し、反応を０℃まで冷却した。メタンスルホニルクロリド（０．０１８ｍＬ、０．２３ミリモル）を添加し、反応を０℃で１５分間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物をメタノール（１ｍＬ）中に溶解させ、炭酸カリウム（８０ｍｇ、０．５８ミリモル）を添加し、反応を室温で１．５時間撹拌した。反応をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）間で分配し、有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして真空中で濃縮して、標記化合物を黄褐色固体（５７ｍｇ、８６％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５０−７．８６（ｍ，  １０  Ｈ）  ７．３３（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ５．０６−５．２１（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０４−４．２６（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．７５−４．０５（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．５６−３．７２（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．３８−３．５５（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．８４−３．０４（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．７０−２．８６（ｍ，  １  Ｈ）  ２．４０−２．６４（ｍ，  １  Ｈ）  ２．１０−２．４０（ｍ，  ３  Ｈ）  １．８３−２．０９（ｍ，  ２  Ｈ）  １．２０−１．３７（ｍ，  ２  Ｈ）  １．０７−１．２０（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．８１−１．０７（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４３Ｈ５６Ｎ９Ｏ８ＳについてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５８．３９７３、実測値：８５８．３９７５。純度（ＬＣ−ＭＳ）：８６％。
【０２３７】
実施例２９：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６−アザスピロ［３．４］オクト−７−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化１１５】
2013503867.tif 000118
【０２３８】
（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸２−｛４’−［（｛［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］カルボニル｝オキシ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−２−オキソエチル（１５７）（１０２ｍｇ、０．１２ミリモル）の無水ジオキサン（１．２ｍＬ）中溶液に、酢酸アンモニウム（１８４ｍｇ、２．４ミリモル）を添加し、反応を１１０℃まで４時間加熱した。反応をＥｔＯＡｃ及び飽和ＮａＨＣＯ３間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をＣ１８逆相クロマトグラフィーにより精製し、１０〜１００％アセトニトリル／水／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を黄色固体（６８ｍｇ、６９％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １１．４２−１２．３７（ｍ，  ２  Ｈ）  ７．５６−７．９０（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．５１（ｓ，  ２  Ｈ）  ７．１９−７．４６（ｍ，  ２  Ｈ）  ４．７３−５．３９（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．９１−４．２３（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．８２（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  ３．５４（ｓ，  ６  Ｈ）  ２．５５−２．８６（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．２０−２．４５（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．１４（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ）  １．７３−２．０９（ｍ，  ５  Ｈ）  ０．５７−０．９９（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４３Ｈ５３Ｎ８Ｏ６Ｆ２についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１５．４０５６、実測値：８１５．４０５９。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９７％。
【０２３９】
中間体１５７の調製
【化１１６】
2013503867.tif 000119
【０２４０】
中間体１５０：２−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸エチル
【化１１７】
2013503867.tif 000120
【０２４１】
この化合物を１１０（実施例１７）と同様にして、３−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝シクロブタンカルバルデヒド（２．２３ｇ、１０．４ミリモル）から調製して、標記化合物（２．９７ｇ、９２％収率）を黄色油状物として得た。
【０２４２】
中間体１５１：２−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）
【化１１８】
2013503867.tif 000121
【０２４３】
この化合物を１１１（実施例１７）と同様にして、２−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸エチル（１５０）（２．９７ｇ、９．５ミリモル）から調製して、標記化合物を黄色油状物（１．８７ｇ、４４％収率）として得た。
【０２４４】
中間体１５２：２−ヒドロキシ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）
【化１１９】
2013503867.tif 000122
【０２４５】
２−｛［（１，１−ジメチルエチル）（ジメチル）シリル］オキシ｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）（１５１）（１．８７ｇ、４．２ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、氷酢酸（０．４８ｍＬ）を添加し、続いてＴＢＡＦ（８．５ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ溶液）を添加し、反応を４５℃まで１８時間加熱した。反応を真空中で濃縮し、ＥｔＯＡｃ及び水間で分配した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３で、続いて食塩水で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、標記化合物を透明油状物として定量的収率で得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．１７−７．４８（ｍ，  ５  Ｈ）  ４．８３−５．１５（ｍ，  ３  Ｈ）  ３．８８−４．３４（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．３５−３．４７（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．０２−２．３９（ｍ，  ３  Ｈ）  １．６５−１．９６（ｍ，  ３  Ｈ）  １．００−１．２２（ｍ，  ３  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３４．１７。
【０２４６】
中間体１５３：２−オキソ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）
【化１２０】
2013503867.tif 000123
【０２４７】
この化合物を１１３（実施例１７）と同様にして、２−ヒドロキシ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）（１５２）（１．３９ｇ、４．２ミリモル）から調製して、標記化合物（１．２５ｇ、９０％収率）を透明油状物として得た。
【０２４８】
中間体１５４：（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）
【化１２１】
2013503867.tif 000124
【０２４９】
２−オキソ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）（１５３）（１．２５ｇ、３．８ミリモル）の無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、Ｄｅｏｘｏ−Ｆｌｕｏｒ（１．２ｍＬ、６．４ミリモル）を添加し、続いてエタノール（０．０４ｍＬ、０．７５ミリモル）を添加し、反応を室温で、窒素下、１８時間撹拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３中に注ぎ、１０分間撹拌した。混合物をジクロロメタン（２×）で抽出し、有機層を０．１ＮのＨＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、５〜５０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出した。ラセミ化合物を次いで１０μｍのＯＤカラム上キラルＨＰＬＣにより分離し、２５％ヘキサン中イソプロパノールで溶出して、標記化合物を透明油状物（３５６ｍｇ、３０％収率）として得た。
【０２５０】
中間体１５５：（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸エチル
【化１２２】
2013503867.tif 000125
【０２５１】
この化合物を１１５（実施例１７）と同様にして、（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−６，７−ジカルボン酸７−エチル６−（フェニルメチル）（１４）（３５６ｍｇ、１．０ミリモル）から調製して、標記化合物を透明油状物（２０９ｍｇ、９５％収率）として得た。
【０２５２】
中間体１５６：（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸
【化１２３】
2013503867.tif 000126
【０２５３】
この化合物を１１６（実施例１７）と同様にして、（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸エチル（１５５）（２０７ｍｇ、０．９４ミリモル）から調製して、標記化合物を白色固体（２６３ｍｇ、８１％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．５３（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．４６（ｄ，  Ｊ＝８．０  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．２４（ｔ，  Ｊ＝７．８  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ４．０２（ｄ，  Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９２（ｔ，  Ｊ＝８．５  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．６２（ｄ，  Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．５１（ｓ，  ３  Ｈ）  ２．５４−２．７８（ｍ，  ４  Ｈ）  ２．２８−２．４４（ｍ，  １  Ｈ）  １．８１−２．０５（ｍ，  ２  Ｈ）  ０．９１（ｄｄ，  Ｊ＝１１．２，  ６．７  Ｈｚ，  ６  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４９．１３。
【０２５４】
中間体１５７：（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸２−｛４’−［（｛［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］カルボニル｝オキシ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−２−オキソエチル
【化１２４】
2013503867.tif 000127
【０２５５】
この化合物を１１７（実施例１７）と同様にして、（７Ｓ）−２，２−ジフルオロ−６−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−６−アザスピロ［３．４］オクタン−７−カルボン酸（１５６）（５９ｍｇ、０．１７ミリモル）及びＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン酸２−［４’−（ブロモアセチル）−４−ビフェニリル］−２−オキソエチル（７０）（９５ｍｇ、０．１６ミリモル）から調製して、標記化合物を白色固体（１０４ｍｇ、７５％収率）として得た。
【０２５６】
実施例３０：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１２５】
2013503867.tif 000128
【０２５７】
（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル（１６９）（７１ｍｇ、０．０９ミリモル）の無水ジオキサン（１ｍＬ）中溶液に、酢酸アンモニウム（６６ｍｇ、０．８６ミリモル）を添加し、反応を窒素で脱気し、密封管中、１１０℃まで４８時間加熱した。反応をＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％水／アセトニトリル／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を灰白色固体（１０ｍｇ、１４％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５６−７．８６（ｍ，  ９  Ｈ）  ７．１６−７．４４（ｍ，  ２  Ｈ）  ６．８８−７．０９（ｍ，  １  Ｈ）  ５．７２（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ５．０９−５．２１（ｍ，  １  Ｈ）  ４．０３−４．２８（ｍ，  １  Ｈ）  ３．８０−４．０４（ｍ，  ６  Ｈ）  ３．４２−３．７１（ｍ，  ９  Ｈ）  ２．１１−２．５６（ｍ，  ８  Ｈ）  １．８８−２．１１（ｍ，  ６  Ｈ）  ０．８０−１．０６（ｍ，  １２  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５７Ｎ８Ｏ７についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８０９．４３５０、実測値：８０９．４３４７。純度（ＬＣ−ＭＳ）：９３％。
【０２５８】
中間体１６９の調製
【化１２６】
2013503867.tif 000129
【０２５９】
中間体１６２：２−［（ジフェニルメチリデン）アミノ］−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル
【化１２７】
2013503867.tif 000130
【０２６０】
Ｎ−（ジフェニルメチリデン）グリシン酸エチル（５．２９ｇ、１９．８ミリモル）、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（０．４１ｇ、１．８ミリモル）及び水酸化セシウム一水和物（４．５４ｇ、２７．０ミリモル）の無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液に、４−（２−ブロモエチリデン）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３．４４ｇ、１８．０ミリモル）を無水ジクロロメタン（４０ｍＬ）中溶液として添加し、反応を室温で７２時間、窒素下で撹拌した。反応をジクロロメタン及び水間で分配し、そして水性層をジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、５〜４０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を透明油状物として定量的収率で得た。
【０２６１】
中間体１６３：２−アミノ−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル
【化１２８】
2013503867.tif 000131
【０２６２】
２−［（ジフェニルメチリデン）アミノ］−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル（１６２）（６．８ｇ、１８．０ミリモル）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、水（３０ｍＬ）及び氷酢酸（２０ｍＬ）を添加し、反応を室温で２．５時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、残留物を０．１ＮのＨＣｌ中に溶解させた。これを酢酸エチルで２回抽出し、有機層を捨てた。溶液でｐＨ試験紙が青色になるまで、水性層に固体炭酸カリウムを添加した。水性層を１５％イソプロパノール／ジクロロメタン（３×）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして真空中で濃縮して、標記化合物を透明油状物（３．０５ｇ、７９％収率）として得た。
【０２６３】
中間体１６４：２−｛［（４−ニトロフェニル）スルホニル］アミノ｝−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル
【化１２９】
2013503867.tif 000132
【０２６４】
２−アミノ−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル（１６３）（１．０ｇ、４．７ミリモル）の無水ジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（１．６ｍＬ、９．４ミリモル）を添加し、続いて４−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（１．１４ｇ、５．２ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で２時間撹拌した。反応をジクロロメタンで希釈し、０．１ＮのＨＣｌで洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１０〜７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を灰白色固体として定量的収率で得た。
【０２６５】
中間体１６５：１−［（４−ニトロフェニル）スルホニル］−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル
【化１３０】
2013503867.tif 000133
【０２６６】
２−｛［（４−ニトロフェニル）スルホニル］アミノ｝−４−（テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−イリデン）ブタン酸エチル（１６４）（１．８７ｇ、４．７ミリモル）の無水クロロホルム（４７ｍＬ）中溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸（０．２ｍＬ、２．３ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で４時間撹拌した。反応をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、１０〜７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を白色固体（１．４７ｇ、７９％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ８．１９−８．３６（ｍ，  ２  Ｈ）  ８．０８（ｄ，  Ｊ＝８．８  Ｈｚ，  ２  Ｈ）  ４．５２（ｄｄ，  Ｊ＝８．５，  ２．１  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．９９−４．１４（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．８７−３．９９（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．２１−３．４９（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．５８−２．７８（ｍ，  ２  Ｈ）  ２．１０−２．３０（ｍ，  ２  Ｈ）  １．８９−２．０６（ｍ，  ２  Ｈ）  １．７７（ｄｄ，  Ｊ＝１３．０，  ２．１  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．３５（ｄｄ，  Ｊ＝１２．９，  １．６  Ｈｚ，  １  Ｈ）  １．２２（ｔ，  Ｊ＝７．１  Ｈｚ，  ３  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９９．４７。
【０２６７】
中間体１６６：８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル
【化１３１】
2013503867.tif 000134
【０２６８】
１−［（４−ニトロフェニル）スルホニル］−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル（１６５）（１．４７ｇ、３．７ミリモル）の無水アセトニトリル（２５ｍＬ）中溶液に、炭酸カリウム（０．７６ｇ、５．５ミリモル）、１８−クラウン−６（０．２ｇ、０．７ミリモル）及びチオフェノール（０．６ｍＬ、５．５ミリモル）を添加し、反応を室温で１８時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、残留物を０．１ＮのＨＣｌ中に溶解させた。水性層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、有機層を捨てた。溶液によりｐＨ試験紙が青くなるまで、水性層を固体炭酸カリウムで処理した。これを１５％イソプロパノール／ジクロロメタン（３×）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして真空中で濃縮して、標記化合物を透明油状物（０．７１ｇ、９０％収率）として得た。
【０２６９】
中間体１６７：１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル
【化１３２】
2013503867.tif 000135
【０２７０】
８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル（１６６）（１２５ｍｇ、０．５９ミリモル）の無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、シアン化銀（９８ｍｇ、０．７３ミリモル）を添加し、続いてＮ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリルクロリド（１４２ｍｇ、０．７３ミリモル）を無水ジクロロメタン（３．５ｍＬ）中溶液として添加し、溶液を室温で１８時間、窒素下で撹拌した。反応を濾過し、メタノールで処理し、そして５分間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、３０〜１００％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を白色固体（４３ｍｇ、２０％収率）として得た。
【０２７１】
中間体１６８：１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸
【化１３３】
2013503867.tif 000136
【０２７２】
１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル（１６７）（８０ｍｇ、０．２ミリモル）のＴＨＦ／水／メタノール（１．０ｍＬ／０．５ｍＬ／０．５ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（１３ｍｇ、０．３ミリモル）を添加し、反応を室温で７２時間撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（０．５ｍＬ）で処理し、反応をＥｔＯＡｃ及び０．１ＮのＨＣｌ間で分配した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、標記化合物を白色固体（５３ｍｇ、７２％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １２．８８（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ）  ７．４５−７．６１（ｍ，  １  Ｈ）  ４．８９−５．０３（ｍ，  １  Ｈ）  ３．７０−３．８７（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．６５（ｔ，  Ｊ＝９．２  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ３．５３（ｓ，  ３  Ｈ）  ３．０２（ｔｄ，  Ｊ＝１２．９，  ４．９  Ｈｚ，  １  Ｈ）  ２．７１−２．９０（ｍ，  １  Ｈ）  ２．２２−２．３８（ｍ，  １  Ｈ）  １．８７−２．１９（ｍ，  ３  Ｈ）  １．５３−１．７３（ｍ，  １  Ｈ）  １．３２−１．４２（ｍ，  １  Ｈ）  １．０６−１．１５（ｍ，  １  Ｈ）  ０．６１−０．９８（ｍ，  ８  Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４２．９５。
【０２７３】
中間体１６９：（（１Ｓ）−２−メチル−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［（｛［１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル］カルボニル｝アミノ）アセチル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝プロピル）カルバミン酸メチル
【化１３４】
2013503867.tif 000137
【０２７４】
１−｛Ｎ−［（メチルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル｝−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸（１６８）（５２ｍｇ、１．５ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（８８ｍｇ、０．１５ミリモル）及びＨＡＴＵ（５８ｍｇ、０．１５ミリモル）の無水ジクロロメタン（１．２ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．１２ｍＬ、０．６８ミリモル）を添加し、反応を室温で１時間撹拌した。反応を真空中で濃縮し、ＨＰＬＣにより精製し、１０〜９０％水／アセトニトリル／０．２％ＮＨ４ＯＨで溶出して、標記化合物を灰白色固体（７３ｍｇ、５８％収率）として得た。
【０２７５】
実施例３１：（（１Ｓ）−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［２−（１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝−２−メチルプロピル）カルバミン酸メチル
【化１３５】
2013503867.tif 000138
【０２７６】
この化合物を実施例３０と同様にして、｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（｛［（１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル）カルボニル］アミノ｝アセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル（１７２）（１１６ｍｇ、０．１６ミリモル）から調製して、標記化合物を黄褐色固体（１９ｍｇ、１７％収率）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．５１−７．９０（ｍ，  ８  Ｈ）  ７．１７−７．５２（ｍ，  ２  Ｈ）  ５．０８−５．２６（ｍ，  ２  Ｈ）  ３．８１−４．０３（ｍ，  ４  Ｈ）  ３．６４（ｓ，  ３  Ｈ）  ３．４１−３．６１（ｍ，  ３  Ｈ）  ２．２１−２．５１（ｍ，  ５  Ｈ）  ２．０１−２．２１（ｍ，  ４  Ｈ）  １．９７（ｄ，  Ｊ＝１９．９  Ｈｚ，  ５  Ｈ）  １．７７−１．９１（ｍ，  １  Ｈ）  １．６４−１．７５（ｍ，  １  Ｈ）  １．３１−１．４２（ｍ，  １  Ｈ）  ０．７９−１．０４（ｍ，  ８  Ｈ）。Ｃ３９Ｈ４８Ｎ７Ｏ５についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋      計算値：６９４．３７１７、実測値：６９４．３７１８。純度（ＬＣ−ＭＳ）：７９％。
【０２７７】
中間体１７２の調製
【化１３６】
2013503867.tif 000139
【０２７８】
中間体１７０：１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル
【化１３７】
2013503867.tif 000140
【０２７９】
８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル（１６６）（１３５ｍｇ、０．６３ミリモル）の無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（０．２２ｍＬ、１．３ミリモル）を添加し、続いて塩化アセチル（０．０５ｍＬ、０．７６ミリモル）を添加し、反応を室温、窒素下で１．５時間攪拌した。反応をジクロロメタンで希釈し、０．１ＮのＨＣｌで洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６０〜１００％ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶出して、標記化合物を黄色油状物（９４ｍｇ、５８％収率）として得た。
【０２８０】
中間体１７１：１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸
【化１３８】
2013503867.tif 000141
【０２８１】
１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸エチル（１７０）（９３ｍｇ、０．３４ミリモル）のＴＨＦ／水／メタノール（１．１ｍＬ／０．６ｍＬ／０．６ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（２９ｍｇ、０．６９ミリモル）を添加し、反応を室温で３時間撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（０．７ｍＬ）で処理し、ＥｔＯＡｃ及び０．１ＮのＨＣｌ間で分配し、水性層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合した有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して、標記化合物を白色固体（７９ｍｇ、９５％収率）として得た。
【０２８２】
中間体１７２：｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（｛［（１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル）カルボニル］アミノ｝アセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル
【化１３９】
2013503867.tif 000142
【０２８３】
この化合物を１６９と同様にして、１−アセチル−８−オキサ−１−アザスピロ［４．５］デカン−２−カルボン酸（１７１）（５６ｍｇ、０．２５ミリモル）及び｛（１Ｓ）−１−［（（２Ｓ）−２−｛４−［４’−（アミノアセチル）−４−ビフェニリル］−１Ｈ−イミダゾール−２−イル｝−１−ピロリジニル）カルボニル］−２−メチルプロピル｝カルバミン酸メチル二塩酸塩（１）（１４２ｍｇ、０．２５ミリモル）から調製して、標記化合物を灰白色固体（１１８ｍｇ、６７％収率）として得た。
【０２８４】
実施例３０及び３１と類似した合成シーケンスを用いて、実施例３２〜３７を調製した。
【０２８５】
実施例３２：［（１Ｓ）−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［８，８−ジフルオロ−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）−２−メチルプロピル］カルバミン酸メチル
【化１４０】
2013503867.tif 000143
【０２８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．９２−７．５１（ｍ，  ８  Ｈ），  ７．２９（ｂｒ．  ｓ．，  ２  Ｈ），  ５．７１（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ５．３２（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ４．２１（ｄ，  Ｊ＝７．４  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．１５−３．８０（ｍ，  ４  Ｈ），  ３．７７−３．４１（ｍ，  ８  Ｈ），  ３．１８（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ３．１２−２．８２（ｍ，  １  Ｈ），  ２．６３−１．４０（ｍ，  １６  Ｈ），  １．０５−０．８４（ｍ，  １０  Ｈ），  ０．７８−０．６４（ｍ，  １  Ｈ），  ０．４４−０．２８（ｍ，  １  Ｈ）。Ｃ４５Ｈ５７Ｆ２Ｎ８Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８４３．４３６９、実測値：８４３．４３６８。
【０２８７】
実施例３３：［（１Ｓ）−１−（｛８，８−ジフルオロ−２−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−アザスピロ［４．５］デク−１−イル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１４１】
2013503867.tif 000144
【０２８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．８４（ｄ，  Ｊ＝７．８  Ｈｚ，  ３  Ｈ），  ７．７２−７．４１（ｍ，  ６  Ｈ），  ７．３１−７．０９（ｍ，  ３  Ｈ），  ５．７３−５．１７（ｍ，  ４  Ｈ），  ５．１２（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ４．４１−４．０６（ｍ，  ３  Ｈ），  ３．９７−３．５６（ｍ，  １１  Ｈ），  ３．３７−２．７６（ｍ，  ４  Ｈ），  ２．６０−１．５５（ｍ，  ９  Ｈ），  １．４６−１．２０（ｍ，  ２  Ｈ），  １．０６（ｄ，  Ｊ＝６．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  １．００−０．７９（ｍ，  ５  Ｈ），  ０．５６（ｄ，  Ｊ＝７．３  Ｈｚ，  １  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５５Ｆ２Ｎ８Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８２９．４２１３、実測値：８２９．４２１１。
【０２８９】
実施例３４：（（１Ｓ）−２−｛８，８−ジフルオロ−２−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−アザスピロ［４．５］デク−１−イル｝−１−メチル−２−オキソエチル）カルバミン酸メチル
【化１４２】
2013503867.tif 000145
【０２９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ１０．９７−１０．１４（ｍ，  ２  Ｈ），  ７．９１−７．４０（ｍ，  ８  Ｈ），  ７．３４−７．１６（ｍ，  ２  Ｈ），  ５．６８−５．１５（ｍ，  ３  Ｈ），  ５．０８（ｄ，  Ｊ＝６．０  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ４．３４（ｄ，  Ｊ＝８．０  Ｈｚ，  ２  Ｈ），  ３．９５−３．５４（ｍ，  ８  Ｈ），  ３．３７−２．６９（ｍ，  ４  Ｈ），  ２．６０−１．５７（ｍ，  １３  Ｈ），  １．５６−１．１８（ｍ，  ３  Ｈ），  １．０６（ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ０．８９（ｄ，  Ｊ＝６．５  Ｈｚ，  ６  Ｈ）。Ｃ４３Ｈ５３Ｆ２Ｎ８Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８１５．４０５６、実測値：８１５．４０６１。
【０２９１】
実施例３５：［（１Ｓ）−１−（｛８，８−ジフルオロ−２−［４−（４’−｛２−［（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−２−ピロリジニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−アザスピロ［４．５］デク−１−イル｝カルボニル）−３−メチルブチル］カルバミン酸メチル
【化１４３】
2013503867.tif 000146
【０２９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ１１．０７−９．９４（ｍ，  ２  Ｈ），  ８．１７−７．４２（ｍ，  １０  Ｈ），  ７．３３−７．０８（ｍ，  ２  Ｈ），  ５．７２−５．１９（ｍ，  ３  Ｈ），  ５．１４−４．９９（ｍ，  １  Ｈ），  ４．８６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ４．５０−４．０９（ｍ，  ２  Ｈ），  ４．０２−３．５０（ｍ，  ８  Ｈ），  ３．４５（ｓ，  １  Ｈ），  ３．３３−２．７１（ｍ，  ４  Ｈ），  ２．５９−１．４７（ｍ，  １１  Ｈ），  １．４０（ｂｒ．  ｓ．，  ３  Ｈ），  １．１９−０．６７（ｍ，  １１  Ｈ），  ０．６３−０．４０（ｍ，  １  Ｈ）。Ｃ４６Ｈ５９Ｆ２Ｎ８Ｏ６についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５７．４５２６、実測値：８５７．４５３１。
【０２９３】
実施例３６：（（１Ｓ）−１−｛［（２Ｓ）−２−（４−｛４’−［２−（１−アセチル−８，８−ジフルオロ−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−４−ビフェニリル｝−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１−ピロリジニル］カルボニル｝−２−メチルプロピル）カルバミン酸メチル
【化１４４】
2013503867.tif 000147
【０２９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ１１．１７−１０．０７（ｍ，  ２  Ｈ），  ８．１６−７．４０（ｍ，  １０  Ｈ），  ７．３５−７．０３（ｍ，  ２  Ｈ），  ５．８５−４．９８（ｍ，  ２  Ｈ），  ４．５９−４．１２（ｍ，  １  Ｈ），  ３．７２（ｓ，  ５  Ｈ），  ３．４６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ３．３３−２．７２（ｍ，  ２  Ｈ），  ２．７６−１．３９（ｍ，  １７  Ｈ），  １．２７−０．７４（ｍ，  ５  Ｈ）。Ｃ４０Ｈ４８Ｆ２Ｎ７Ｏ４についてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：７２８．３７３６、実測値：７２８．３７３６。
【０２９５】
実施例３７：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［１−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−８，８−ジオキシド−８−チア−１−アザスピロ［４．５］デク−２−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチル
【化１４５】
2013503867.tif 000148
【０２９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．９２−７．５２（ｍ，  ９  Ｈ），  ５．３９（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ），  ４．３６（ｂｒ．  ｓ．，  １  Ｈ），  ３．９８−３．８２（ｍ，  １  Ｈ），  ３．８２−３．６０（ｍ，  １０  Ｈ），  ３．１９（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ），  ２．８８−２．７０（ｍ，  １  Ｈ），  ２．３３（ｂｒ．  ｓ．，  ４  Ｈ），  ２．０２（ｓ，  ４  Ｈ），  １．８１（ｂｒ．  ｓ．，  ５  Ｈ），  １．０６（ｓ，  １  Ｈ），  ０．８９（ｄ，  Ｊ＝７．０  Ｈｚ，  ６  Ｈ），  ０．７４（ｄ，  Ｊ＝６．５  Ｈｚ，  ３  Ｈ），  ０．４４−０．３４（ｍ，  ３  Ｈ）。Ｃ４４Ｈ５７Ｎ８Ｏ８ＳについてのＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  計算値：８５７．４０２０、実測値：８５７．４０１８。
【０２９７】
ＨＣＶレプリコンアッセイにおける化合物の試験及びデータ分析のプロトコル
化合物を、遺伝子型１ａ及び１ｂサブゲノムレプリコンモデルシステムを用いてＨＣＶに対する活性について分析した。遺伝子型１ａ及び１ｂレプリコンを有する安定な細胞系を、化合物をスクリーニングするために使用した。両レプリコンは双シストロン性であり、蛍ルシフェラーゼ遺伝子を含む。ＥＴ細胞系を、Ｉ３８９ｌｕｃ−ｕｂｉ−ｎｅｏ／ＮＳ３−３’／ＥＴレプリコンと蛍ルシフェラーゼ−ユビキチン−ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ融合タンパク質及び細胞培養適応的突然変異（Ｅ１２０２Ｇ；Ｔ１２８０Ｉ；Ｋ１８４６Ｔ）を含むＥＭＣＶ−ＩＲＥＳ誘導ＮＳ３−５Ｂポリタンパク質を有するＲＮＡ転写物で安定してトランスフェクトする（Ｋｒｉｅｇｅｒら、２００１及び未発表）。遺伝子型１ａレプリコンは、蛍ルシフェラーゼ遺伝子を含むように修飾された、Ａｐａｔｈ  ＬＬＣからライセンスを得た安定な細胞である。１０％のウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）／ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、１×非必須アミノ酸、及び２５０〜５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（「ジェネティシン」）を追加したＤＭＥＭ中で細胞を増殖させた。これらは全てＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．）から入手可能であった。細胞を５×１０３細胞／ウェルで、化合物を含む３８４ウェルプレート中に蒔いた。化合物の最終濃度は、０．０３ｐＭ〜５０μｍの範囲であり、０．５〜１％の最終ＤＭＳＯ濃度であった。
【０２９８】
Ｓｔｅａｄｙ  ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．）を添加することによりルシフェラーゼ活性を４８時間後に測定した。複製データの阻害率（％）を、化合物を含まない対照に対してプロットした。同じ条件下で、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ）を用いて化合物の細胞毒性を測定した。１０００倍超の濃度範囲に及ぶ各化合物について３〜４倍連続希釈を使用して、１１点用量反応曲線からＥＣ５０を決定した。各化合物についての阻害レベルを、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ又はＢｉｏＡｓｓａｙ＋Ｅｘｃｅｌ  ＸＣ５０モジュールで決定した。阻害率（％）は、次式を用いて決定した（式中、クロストーク補正値は、試験ウェルから得た値であり、化合物正の対照平均は、化合物が存在しないウェルの平均値であり、ＤＭＳＯ負の対照平均は、ＤＭＳＯを含むが、細胞が存在しないウェルの値の平均値である）。
【０２９９】
１００＊（１−（クロストーク補正値−化合物正の対照平均））
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
ＤＭＳＯ負の対照平均−化合物正の対照平均
これらの標準化された値をＥＣ５０へエクスポートし、標準的４パラメータロジスティック方程式を用いて、化合物モル濃度に対して値をプロットする：
【数１】
2013503867.tif 000149
【０３００】
（式中：
Ａ＝最小のｙ      Ｄ＝傾斜因子
Ｂ＝最大のｙ      ｘ＝ｌｏｇ１０化合物濃度［Ｍ］
Ｃ＝ｌｏｇ１０ＥＣ５０      ｐＥＣ５０＝−Ｃ）。
【０３０１】
以下に示すように、実施例２０を除く、試験した全ての化合物は、ｐＥＣ５０＞５でレプリコンの活性を阻害することが判明した。
【表２】
2013503867.tif 000150
【０３０２】
2013503867.tif 000151
【０３０３】
実施例２の化合物：［（１Ｓ）−２−メチル−１−（｛（２Ｓ）−２−［４−（４’−｛２−［（８Ｓ）−７−（（２Ｓ）−３−メチル−２−｛［（メチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタノイル）−１，４−ジオキサ−７−アザスピロ［４．４］ノン−８−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−４−ビフェニリル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１−ピロリジニル｝カルボニル）プロピル］カルバミン酸メチルの結晶塩の調製。
【０３０４】
実施例２の化合物の結晶性二塩酸塩：
ＷＯ２００９／０２０８２８は、ＨＣＶ感染を治療するために有用であると言われる化合物の結晶性二塩酸塩を開示している。ＷＯ２００９／０２０８２８の標題化合物をこの特許で記載されているようにして調製した。
【０３０５】
実施例２の化合物をアモルファス遊離塩基として単離し、精製した。このアモルファス遊離塩基をアセトン（３．６ｍＬ；３０体積）中に室温で撹拌しながら溶解させた。塩酸（ジオキサン中１．０Ｍを３１６ｕＬ；２．１当量）を添加し、結果としてアモルファス沈殿が生じた。固体がちょうど溶解するまで数回にわけてメタノール（４８０ｕＬ；４体積）を添加した。ＷＯ２００９／０２０８２８の二塩酸塩化合物の種結晶を添加し、混合物を週末にかけて撹拌した。生成物を濾過し（洗浄なし）、６２．６％（８４．０ｍｇ；０．０９４６ミリモル）の実施例２の化合物の結晶性二塩酸塩を得た。
【０３０６】
実施例２の化合物の結晶性二塩酸塩：
実施例２の化合物をアモルファス遊離塩基として単離し、精製した。このアモルファス遊離塩基（５５５ｍｇ；０．６９６ミリモル）をアセトン（８．３ｍＬ；１５体積）及びメタノール（２．２ｍＬ；４体積）中に５０℃で撹拌しながら溶解させた。塩酸（１．４６ｍＬのジオキサン中１．０Ｍ；２．１当量）をゆっくりと添加し、続いて実施例２の化合物の二塩酸塩の種結晶を添加した。スラリーを５０℃で１時間維持し、室温まで冷却し、そして週末にかけて撹拌した。生成物を素早く濾過し（洗浄なし）、そして５０℃、真空オーブン中、窒素ブリードで乾燥した。５４．０％（３２７ｍｇ；０．３７６ミリモル）の実施例２の化合物の結晶性二塩酸塩を得た。
【０３０７】
実施例２の化合物の結晶性硫酸塩：
１．０当量の硫酸を遊離塩基の溶液に添加し、そして濃縮乾固することによって、実施例２の化合物のアモルファス硫酸塩を調製した。アモルファス硫酸塩（約５０ｍｇ；０．０５６ミリモル）をアセトン（７５０ｕｌ；１５体積）中に溶かし、混合物を５０℃まで加熱した。固体がほとんど全て溶解するまで、メタノール（２１０ｕｌ；４．２体積）を１度に１０ｕＬずつ添加し、その結果、濁った溶液を得た。この濁った溶液を５０℃で１６時間混合し、次いで２３℃まで冷却した。生成物をろ過し、分析し、そして実施例２の化合物の結晶性硫酸塩と一致すると判定された。
【０３０８】
実施例２の化合物の結晶性硫酸塩：
実施例２の化合物のアモルファス遊離塩基（２５０ｍｇ；０．３１４ミリモル）をメタノール（１．２５ｍＬ；５体積）と混合し、そして撹拌しながら５０℃まで加熱して、溶解を促進した。硫酸（０．１０５ｍＬの水中３．０Ｍ；１．０当量）をゆっくりと添加し、続いて実施例２の化合物の硫酸塩の種結晶を添加した。スラリーを５０℃で３時間維持して、やや濃厚な黄色スラリーが形成した。温度を１５℃まで低下させて、収率を増大させた。生成物を濾過し（洗浄なし）、そして５０℃、真空オーブン中、窒素ブリードで乾燥した。７３．６％（２１１ｍｇ；０．２３１ミリモル）のＧＳＫ２３３６８０５の結晶性硫酸塩を得た。
【０３０９】
結晶塩の分析：
実施例２の化合物の結晶性二塩酸塩及び硫酸塩をイオンクロマトグラフィー、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）、ラマン、ＤＳＣ、及びＴＧＡにより分析した。全ての分析は結晶塩と一致した。粉末Ｘ線回折を、Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器を用いて、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  Ｋα１モノクロメーターを有するＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ−Ｐｒｏ  ＭＰＤで実施した。重要な操作パラメータは：放射線：Ｃｕ（Ｋα１）、１．５４０６０オングストローム（単色光）；検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ；電圧：４５ｋＶ；電流：４０ｍＡ；出発角：２．０°・２θ；最終角：５０．０°  ２θ；ステップサイズ：０．０２°；時間／ステップ：４０．０秒；スキャンスピード：０．０５°／秒；入射ビーム：２°固定散乱防止スリット、及びプログラム可能な発散スリット；回折ビーム：０．０２ｒａｄのソラースリット、及びプログラム可能な散乱防止スリット。サンプルをシリコンゼロバックグラウンドサンプルホルダー上で調製した。
【０３１０】
実施例２の化合物の二塩酸塩は、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、５．３（１６．５５）、９．９（８．９４）、１０．４（８．５４）、１３．３（６．６５）、１８．９（４．７０）、２０．３（４．３７）、２１．２（４．１８）、２２．５（３．９５）、２３．２（３．８４）、２３．７（３．７５）、２４．４（３．６５）、２６．３（３．３９）、２７．６（３．２３）の２シータ（°）及びｄ間隔（オングストローム）（括弧内に記載）の値で顕著なピークを有していた。実施例２の化合物の二塩酸塩のＴＧＡトレースは、無水形態と一致していた。実施例２の化合物の二塩酸塩のＤＳＣトレースは、約２６２℃で融解及び／又は分解の開始を示した。
【０３１１】
実施例２の化合物の硫酸塩は粉末Ｘ線回折パターンにおいて、５．６（１５．８７）、７．１（１２．３９）、８．０（１１．１０）、１０．５（８．４１）、１１．９（７．４１）、１２．６（７．０２）、１３．４（６．６１）、１４．３（６．１８）、１６．６（５．３３）、１７．５（５．０７）、１８．４（４．８１）、２０．０（４．４３）、２１．２（４．１９）、２３．８（３．７３）の２シータ（°）及びｄ間隔（オングストローム）値で顕著なピークを有していた。実施例２の化合物の硫酸塩のＴＧＡトレースは、様々な水和物形態と一致した。実施例２の化合物の硫酸塩のＤＳＣトレースは、約２４１℃で融解及び／または分解の開始を示した。
【国際調査報告】
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2013503867.tif 000159