(57)【要約】  個体の第１集団にエアロゾル吸入を介して試験化合物を投与するステップと；個体の第２集団にエアロゾル吸入を介してリボフラビン５’−リン酸から成るプラセボを投与するステップと；前記２つの集団の生物学的マーカーを比較するステップとを具えるエアロゾル化試験化合物の評価方法である。リボフラビン５’−リン酸（フラビンモノヌクレオチドとしても知られている）から成るエアロゾルは臨床試験におけるプラセボ、又は治療的に使用しうる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験化合物を評価する方法において：
個体の第１集団にエアロゾル吸入を介して試験化合物を投与するステップと；
個体の第２集団にエアロゾル吸入を介してリボフラビン５’−リン酸を含むプラセボを投与するステップと；
試験化合物を投与した少なくとも１の個体における生物学的マーカーとプラセボを投与した少なくとも１の個体における生物学的マーカーを比較するステップと；
を具えることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記試験化合物の前記投与が前記試験化合物をエアロゾル化した溶液を送達するステップを具えていることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記投与が肺内又は鼻腔内へのものであることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記試験化合物又はプラセボが肺送達装置によって送達されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法において、前記肺送達装置が噴霧器又は定量吸入器であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、前記生物学的マーカが治療効果に関連するマーカ、副作用に関連するマーカ、毒作用に関連するマーカ、薬力学的なパラメータに関連するマーカから成る群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法において、前記試験化合物が抗生物質、抗アレルギー薬、抗がん剤、抗真菌剤、抗悪性腫瘍薬、鎮痛薬、気管支拡張薬、抗ヒスタミン薬、抗ウイルス薬、鎮咳薬、アンギナール製剤、抗炎症薬、免疫調節薬、５−リポキシゲナーゼ阻害薬、ロイコトリエン拮抗薬、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害剤、ペプチド類、タンパク質、ステロイド及びワクチン製剤から成る群の少なくとも１種類を含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法において、前記プラセボがリボフラビン５’−リン酸の溶液を含むことを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法において、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度を有すること特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項８に記載の方法において、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．００１ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項８に記載の方法において、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．００５ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項８に記載の方法において、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．０２ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項８に記載の方法において、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．０６ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項８に記載の方法において、前記リボフラビン５’−リン酸エアロゾルが約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の方法において、前記ボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法において、前記ボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約０．１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の方法において、前記ボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約０．２ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の方法において、前記ボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日を超える投与量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法において、前記ボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約０．１ｍｇ／ｋｇ／日を超える投与量を含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の方法において、前記リボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約１．０ｍｇ／ｋｇ／日を超える投与量を含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の方法において、前記リボフラビン５’−リン酸のエアロゾルが約２．０ｍｇ／ｋｇ／日を超える投与量を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の方法において、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が３．０μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の方法において、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が２．７μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の方法において、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が２．４μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法において、前記プラセボが少なくとも毎日投与されることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の方法において、前記個体が動物であることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法において、前記動物が哺乳類であることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法において、前記哺乳類がラット、犬及び人から成る群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２９】
試験化合物を評価する方法において：個体集団における試験化合物とプラセボの治験を実施するステップを具え、当該プラセボがエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とする方法。
【請求項３０】
エアロゾルがリボフラビン５’−リン酸を含むエアロゾル。
【請求項３１】
請求項３０に記載のエアロゾルがリボフラビン５’−リン酸の溶液を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項３２】
請求項３１に記載のエアロゾルおいて、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．１ｍｇ／ｍＬを超える濃度を有すること特徴とするエアロゾル。
【請求項３３】
請求項３１に記載のエアロゾルおいて、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．００１ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とするエアロゾル。
【請求項３４】
請求項３１に記載のエアロゾルおいて、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．００５ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とするエアロゾル。
【請求項３５】
請求項３１に記載のエアロゾルおいて、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．０２ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とするエアロゾル。
【請求項３６】
請求項３１に記載のエアロゾルおいて、リボフラビン５’−リン酸の前記溶液が約０．０６ｍｇ／Ｌを超える濃度を有すること特徴とするエアロゾル。
【請求項３７】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．００１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項３８】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．０１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項３９】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．１ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４０】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．２ｍｇ／ｋｇ／日を超える呼吸送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４１】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．０１ｍｇ／ｋｇ／日を超える用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４２】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが０．１ｍｇ／ｋｇ／日を超える用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４３】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが１．０ｍｇ／ｋｇ／日を超える用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４４】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾルが２．０ｍｇ／ｋｇ／日を超える用量のリボフラビン５’−リン酸を含むことを特徴とするエアロゾル。
【請求項４５】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が３．０μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とするエアロゾル。
【請求項４６】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が２．７μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とするエアロゾル。
【請求項４７】
請求項３０又は３１に記載のエアロゾルおいて、前記エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸が２．４μｍよりも小さい又は同等の幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径から成ることを特徴とするエアロゾル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００９年８月１９日に出願された「慢性閉塞性肺疾の治療用のエアロゾル化レボフロキサシンの使用」と題した米国仮出願第６１／２３５，３１９号、及び２００９年１０月６日に出願された米国仮出願第６１／２４９，２２８号の利益を主張するものであり全体を参照することによって組み込まれている。
【０００２】
技術分野
本発明は、エアロゾル化した試験化合物を評価する方法及び化合物に関連している。特に、リボフラビン５’−リン酸の使用に関連する方法と化合物を提供する。
【背景技術】
【０００３】
様々な治療用化合物が経口的、又は非経口的に、例えば静脈注射、筋肉注射又は皮下注射などで投与されている。薬剤の注射は効果的であるものの、患者への不快感や不便さによって患者がアドバイスに従わないという特徴がある。その結果、注射の代替品又は代用品として治療化合物を経口組成物で提供するのが望ましいとしばしば考えられている。しかし、経口組成物は、吸収が悪く、肝臓における初回通過代謝が速く、有効血漿レベルに達するのが遅く、及びその他の問題によってしばしば特徴づけられる。更に、経口、非経口投与は一般的に薬物を全身に送達する。疾病の局所のみに薬剤が必要な場合、局所投与により全身投与で生じ得る副作用を防ぐことができる。
【０００４】
いくつかのエアロゾル化組成物は、鼻腔内又は口内吸入を通した鼻腔、副鼻腔洞及び呼吸器区画への直接的な投与に使用されてきた。エアロゾル投与は、例えば薬物送達の非呼吸経路に関連する非呼吸性毒性のリスクを低減し、部位への高い薬物送達濃度を可能にする複数の利点を有している。鼻腔内又は経口吸入を介した特定の化合物と組成物を投与する前の有効性の評価については継続した必要性がある。
【発明の概要】
【０００５】
本発明はエアロゾル化した試験化合物を評価する方法及び組成物に関連している。特に感染者の個体の第一集団についてのリボフラビン５’−リン酸の使用に関連する方法及び組成物に関連している。
【０００６】
本発明の一部の実施態様は、試験化合物を評価する方法を含んでいる。このような方法の一部は、エアロゾルの吸入を介したリボフラビン５’−リン酸を第１集団の個体に投与するステップ；エアロゾルの吸入を介した第２集団の個体にリボフラビン５’−リン酸を投与するステップ；及び試験試薬を投与した少なくとも１の個体の生物学的マーカーとプラセボを投与した少なくとも１の個体の生物学的マーカーの比較するステップ；を具えている。
【０００７】
一部の実施態様において、試験化合物の投与は、試験化合物のエアロゾル化溶液を送達するステップを含んでいる。
【０００８】
一部の実施態様において、投与は肺内投与、又は経鼻投与である。
【０００９】
一部の実施態様において、試験化合物又はプラセボは肺内送達装置によって送達される。このような一部の実施態様において肺内送達装置は、噴霧器又は定量吸入器である。
【００１０】
一部の実施態様において、生物学的なマーカーは、治療効果に関連するマーカー、副作用に関連するマーカー、毒作用に関連するマーカー、薬力学的パラメーターに関連するマーカーを含んでいる。
【００１１】
一部の実施態様において、試験化合物は、抗生物質、抗アレルギー薬、抗がん剤、抗真菌剤、抗悪性腫瘍薬、鎮痛薬、気管支拡張薬、抗ヒスタミン薬、抗ウイルス薬、鎮咳薬、アンギナール製剤、抗炎症薬、免疫調節薬、５−リポキシゲナーゼ阻害薬、ロイコトリエン拮抗薬、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害剤、ペプチド類、タンパク質、ステロイド及びワクチン製剤から成る群の少なくとも１つのメンバー（種類）を含んでいる。
【００１２】
一部の実施態様において、プラセボは、リボフラビン５’−リン酸の溶液から成る。このような実施態様の一部において、この溶液は、約０．１ｍｇ／ｍＬより高く、約０．００１ｍｇ／Ｌより高く、約０．００５ｍｇ／Ｌより高く、約０．０２ｍｇ／Ｌより高く、及び約０．０６ｍｇ／Ｌよりも高いリボフラビン５’−リン酸の濃度から成る。
【００１３】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾルは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く及び、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い吸入可能送達用量から成る。
【００１４】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾルは約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約１．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約２．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い量から成る。
【００１５】
一部の実施態様において、エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸は、３．０μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成る。
【００１６】
一部の実施態様において、エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸は、２．７μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成る。
【００１７】
一部の実施態様において、エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸は、エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸は、２．４μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径から成る。
【００１８】
一部の実施態様において、プラセボは少なくとも毎日投与する。
【００１９】
一部の実施態様において、個体は動物である。このような一部の実施態様において、動物は哺乳類である。このような一部の実施態様において、哺乳類はラット、犬、及び人間を含んでいる。
【００２０】
本発明の一部の実施態様は、同様に試験化合物又はプラセボを集団の個体に投与して試験化合物を評価する方法も含み：集団の個体において試験化合物とプラセボの治験を実施するステップを具え、プラセボはエアロゾル化したリボフラビン５’−リン酸である。
【００２１】
前述の記載に加えて、本発明の一部の実施態様は、リボフラビン５’−リン酸から成るエアロゾルを含んでいる。一部の実施態様において、エアロゾルはリボフラビン５’−リン酸の溶液を含んでいる。
【００２２】
一部の実施態様において、この溶液は約０．１ｍｇ／ｍＬよりも高く、約０．００１ｍｇ／Ｌよりも高く、約０．００５ｍｇ／Ｌよりも高く、約０．０２ｍｇ／Ｌよりも高く、及び約０．０６ｍｇ／Ｌよりも高い濃度のリボフラビン５’−リン酸から成る。
【００２３】
一部の実施態様において、エアロゾルは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、及び約０．２ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い吸入可能送達量のリボフラビン５’−リン酸を含んでいる。
【００２４】
一部の実施態様において、エアロゾルは約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約１．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、及び約２．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高いリボフラビン５’−リン酸の用量を含んでいる。
【００２５】
一部の実施態様において、エアロゾルは３．０μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成り、２．７μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成り、又は２．４μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸から成るエアロゾルを含んでいる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、雄又は雌ラットにおける２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸の後の平均血漿濃度−時間のプロファイルのグラフを示している。
【図２Ａ】図２Ａは、雄ラットにおける２８日間のリボフラビン５’−リン酸エアロゾル化投与後の平均リボフラビンＣｍａｘ（最高血中濃度）と平均リボフラビンＡＵＣ（０−Ｔ）（薬物血中濃度−時間曲線下面積）を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、雌ラットにおける２８日間のリボフラビン５’−リン酸エアロゾル化投与後の平均リボフラビンＣｍａｘ平均リボフラビンとＡＵＣ（０−Ｔ）のグラフを示している。
【図３】図３は、雄又は雌の犬における２８日間のリボフラビン５’−リン酸エアロゾル化投与後の平均リボフラビン血漿濃度−時間のプロファイルのグラフを示している。
【図４Ａ】図４Ａは犬における２８日間のリボフラビン５’−リン酸エアロゾル化投与後の平均リボフラビンＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ）のグラフを示している。
【図４Ｂ】図４Ｂは犬における２８日間のリボフラビン５’−リン酸エアロゾル化投与後の平均リボフラビンＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ）のグラフを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、エアロゾル化試験化合物を評価する方法及び化合物に関連している。特に、リボフラビン５’−リン酸の使用に関連する方法及び化合物を提供する。一部の実施態様は、試験化合物又はプラセボを個体の集団に投与するステップを具え、プラセボはリボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液を含み、及び試験化合物を投与した少なくとも１の個体の生物学的マーカーとプラセボを投与した少なくとも１の個体の生物学的マーカーとを比較するステップを具える試験化合物の評価方法を含んでいる。更なる実施態様は、個体の集団において試験化合物とプラセボの治験を実施するステップを具える、プラセボはリボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液から成る試験化合物の評価方法を含んでいる。
【００２８】
出願人は、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液の吸入投与により臨床所見上の副作用は検出されず、哺乳類モデルシステムにおいて局所、又は全体的な毒性を示さず、忍容性が良好であることを発見した。例えば、犬では１．３４ｍｇ／ｋｇ／日のリボフラビン５’−リン酸を２８日間の連続して口鼻投与した後に副作用は確認されなかった。ラットでは２．４ｍｇ／ｋｇ／日のリボフラビン５’−リン酸を２８日間連続して鼻からのみエアロゾル投与した後に副作用は確認されなかった。リボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液は、臨床所見上の副作用がなく、局部性又は全身性の毒性が顕れていないため試験化合物を評価する方法におけるプラセボ対照として良く適している。従って、本発明の一部の実施態様では、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液を対照として使用する試験化合物の評価方法を提供している。
【００２９】
試験化合物を評価する一部の方法は治験を含んでよい。治験は、新規治療化合物、新規組成物、及び治療化合物の新たな使用についての安全性と有効性のデータを集めるために実施する。治験は、無作為、盲検及び／又はプラセボ対照をするように設計された無作為化比較試験を含んでよい。無作為化試験において、各試験対照は研究治療又はプラセボを受けるように無作為に割り当てられる。盲検に関連する試験の対象は、試験治療又はプラセボのいずれを受けるかを知らず、試験が二重盲検の場合は、同様に研究者も所定の対象がいずれの治療を受けているかを知らない。そして、プラセボ対照試験において、ある対象の群は試験治療を受け、別の対照群がプラセボを受ける。
【００３０】
プラセボ群の１つの目的は、治療自体に依存していないプラセボ効果を明らかにすることである。そのような因子は、ヘルスケアの専門家による治療を受けていることへの認知や進行中の試験研究に対する治療効果に対する期待を含んでいる。プラセボ群と別の群を比較をしなければ、治療効果自体が何らかの効果を有しているか否かを知ることができない。従って、プラセボの使用は治療化合物、及び／又は治療の有効性についての何らかの定量的評価を作成を試みる殆どの臨床試験の標準的な対照コンポーネントである。
【００３１】
一部の実施態様は、プラセボとしてリボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化溶液の使用を含んでいる。このような一部の実施態様において、試験化合物又はプラセボは個体の集団に投与できる。試験化合物の有効性は試験化合物を投与した少なくとも１個体の生物学的マーカーとプラセボを投与した少なくともｌ個体の生物学的マーカーとを比較することで確認できる。
【００３２】
生物学的なマーカーの例は、治療効果に関連するマーカー、副作用に関連するマーカー、毒作用に関連するマーカー、薬力学的パラメーターに関連するマーカーを含んでいる。一般的に、治療効果は治療効果は望ましく及び／又は有益であり、一方で副作用は有害及び／又は望ましくない。両タイプの効果は、個体における生理学的又は行動の変化を含みうる。薬力学的パラメータは、試験化合物の個体の身体への生理作用に関連している。薬物動態パラメータは、試験化合物の身体への効果に関連している。
【００３３】
本明細書に使用する「個体」は動物を含んでいる。「動物」という用語は、例えば哺乳類、霊長類、ネズミ、ラット、犬、及び人間といった通常の意味と最も幅広い意味に使用し、無脊椎動物を含む。
【００３４】
一部の実施態様は、リボフラビン５’−リン酸又はその塩を使用している。リボフラビン５’−リン酸は、フラビンモノヌクレオチド及びビタミンＢ２リン酸塩としても知られている。リボフラビン５’−リン酸は下記の構造を有している。
2013502579.tif 000002
【００３５】
一般的に、試験化合物を評価する一部の方法において、プラセボは試験化合物の組成に実質的に類似する組成を含み得る。プラセボの組成は一般的には試験化合物を含んでいないと解釈すべきである。逆に言えば、試験化合物を含んでいる組成は一般的にプラセボを含んでいない。試験化合物及びプラセボの組成は、投与のモードに応じて、同様に試験化合物またはプラセボの特性に応じて様々である。化合物のエアロゾル送達の例は米国特許出願公報第２００６−０２７６４８３号に開示されており、全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。
【００３６】
リボフラビン５’−リン酸の一部の溶液は、黄色／橙色／赤色を有する。リボフラビン５’−リン酸溶液の色はリボフラビン５’−リン酸溶液の濃度などの要素によって多様になり得る。一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸溶液は試験化合物に含まれる溶液の色を都合よく隠すことができる。このような実施態様の一部において、試験化合物を含んでいる組成は同様にリボフラビン５’−リン酸を含みうる。それによって、試験化合物を含んでいる溶液のうち欠如している色をプラセボ溶液に適合させうる。
【００３７】
試験化合物を評価する一部の方法は、例えば約０．００１ｍｇ／ｍＬ、約０．００２ｍｇ／ｍＬ、約０．００３ｍｇ／ｍＬ、約０．００４ｍｇ／ｍＬ、約０．００５ｍｇ／ｍＬ、約０．００６ｍｇ／ｍＬ、約０．００７ｍｇ／ｍＬ、約０．００８ｍｇ／ｍＬ、約０．００９ｍｇ／ｍＬ、及び約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０２ｍｇ／ｍＬ、約０．０３ｍｇ／ｍＬ、約０．０４ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、及び約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、及び約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、及び約１０ｍｇ／ｍＬよりも高い濃度から成るリボフラビン５’−リン酸の溶液含んでよい。
【００３８】
試験化合物を評価する一部の方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約１ｍｇ／ｋｇ／日、約２ｍｇ／ｋｇ／日、約３ｍｇ／ｋｇ／日、約４ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日、約６ｍｇ／ｋｇ／日、約７ｍｇ／ｋｇ／日、約８ｍｇ／ｋｇ／日、約９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約１０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い吸入送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含んでよい。
【００３９】
試験化合物を評価する一部の方法は約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日、約０．３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約１ｍｇ／ｋｇ／日、約２ｍｇ／ｋｇ／日、約３ｍｇ／ｋｇ／日、約４ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日、約６ｍｇ／ｋｇ／日、約７ｍｇ／ｋｇ／日、約８ｍｇ／ｋｇ／日、約９ｍｇ／ｋｇ／日、及び約１０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い用量のリボフラビン５’−リン酸を含んでよい。
【００４０】
試験化合物を評価する一部の方法は、３．０μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成るエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸を含んでよい。試験化合物を評価する更なる方法は、２．７μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成るエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸を含んでよい。化合物を評価する更なる方法は、２．４μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径から成るエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸を含んでよい。
【００４１】
投与のモード
試験化合物とプラセボは、肺及び鼻腔送達モードを含む多様な送達モードによって投与することができる。
【００４２】
肺内投与
一部の実施態様は、試験化合物又はプラセボは肺送達で行うことができる。試験化合物又はプラセボは吸入によって肺に送達することができ、肺上皮層を横断して血流へ載る。治療薬の肺送達用に設計された当業者に周知な噴霧器、定量式吸入器、及び粉末吸入器を含む様々な機械装置を使用することができるが、これらに限定されない。これらの装置は試験試薬又はプラセボの調剤に適した組成で行う。一般的には、各組成は、使用する装置のタイプに特異的であり、適切な噴射材料、治療に有効な希釈液に加えてアジュバント及び／又は担体の使用を含めることができる。
【００４３】
一般的に、吸入粒子は大きな粒子で主要な原因を占める固着（ｉｍｐａｃｔｉｏｎ）と小さな粒子で一般的にみられる堆積（ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ）の、２つのメカニズムのうち、いずれかにより沈着（ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）する。固着は、吸入粒子のモメンタムが気流に乗らないほど大きく、物理的な表面に衝突した際に生ずる。対照的に、堆積は、吸入気流によって移動する非常に小さな粒子が気流のランダムな拡散の結果として、主に肺の深い部分の物理的表面に衝突した祭に生じる。
【００４４】
肺内投与では、中間と下気道が選ばれ、上気道は阻止される。肺内薬剤送達は、口や喉を通したエアロゾルの吸入によって達成しうる。約５μｍを超える空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する粒子は一般的に肺に到達しない。そのかわり、これらは喉の後部に衝突し飲み込まれ、口腔内吸収も可能である。約２乃至約５μｍの直径を有する粒子は上及び中肺内領域に到達（気流送達により）するには十分小さいが、肺胞に到達するには大きすぎる。微粒子、すなわち約０．５乃至約２μｍは、肺胞に到達することができる。同様に約０．５μｍよりも小さい粒径を有する粒子も堆積により肺胞に沈着するが、非常に小さな粒子は息に吐き出されうる。粒径の測定は、容積平均直径（ＶＭＤ）、質量中央径（ＭＭＤ）又はＭＭＡＤを参照できる。これらは衝突（ＭＭＤ及びＭＭＡＤ）又はレーザー（ＶＭＤ）によって測定することができる。液体粒子では、例えば湿度標準などの環境条件が保たれればＶＭＤ、ＭＭＤ及びＭＭＡＤは一定になりうる。しかし、ＭＭＤ及びＭＭＡＤ測定で湿度が保たれなければ、衝突体（ｉｍｐａｃｔｏｒ）計測の間の脱水によりＶＭＤよりも小さくなる。しかし、この記載の目的は、ＶＭＤ、ＭＭＤ及びＭＭＡＤ計測は、ＶＭＤ、ＭＭＤ及びＭＭＡＤが比較できるように標準環境下で行うように考慮すべき点にある。ＭＭＤ及びＭＭＡＤによる乾燥粉末粒子サイズの計測も同様に比較できるように考慮すべきである。
【００４５】
エアロゾルの粒子サイズは空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）と表現しうる。大型（例えばＭＭＡＤ＞５μｍ）の粒子は上気道の湾曲を通り過ぎるには大きすぎて上気道に沈着しうる。微粒子（例えばＭＭＡＤ＜２μｍ）は低気道にあまり沈着せず、息に吐き出されることで、上気道への更なる沈着の機会を提供している。したがって、吸入による大型粒子の固着、及び微粒子の繰り返しの吸入と呼気の間の堆積によって不忍容（例えば、咳及び気管支けいれん）が生じうる。したがって、ある実施態様では、中気道部分の沈着を最大化し、上気道の沈着に関連している不忍容を最小化する適切な粒子サイズ（例えばＭＭＡＤ＝２乃至５μｍ）を使用する。更に、幾何標準偏差（ＧＳＤ）に限定した規定粒子サイズの生成により、適切な沈着と忍容性になりうる。狭いＧＳＤは所望のＭＭＡＤサイズの範囲外の粒子を制限する。ある実施態様では、約２．５μｍよりも小さく又は同等のＧＳＤである約２μｍ乃至約５μｍのＭＭＡＤを有し、本明細書に開示されている１又はそれ以上の化合物を含むエアロゾルを提供する。別の実施態様では、約２μｍのＧＳＤよりも小さく又は同等である約２．８μｍ乃至約４．３μｍのＭＭＡＤを有するエアロゾルを提供する。別の実施態様では、約１．８μｍよりも小さく又は同等のＧＳＤである約２．５μｍ乃至約４．５μｍのＭＭＡＤを有するエアロゾルを提供する。
【００４６】
試験化合物又はプラセボ及び／又は他の選択的な活性成分は平均粒子サイズが０．１μｍから又は１０μｍよりも小さく又は大きい粒子を都合よく調整でき、より好ましくは約０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、又は０．９μｍ乃至、約１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、又は９．５μｍまでである。試験化合物又はプラセボの肺送達用の薬学的に許容可能な担体はトレハロース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、及びソルビトールといった炭化水素が含まれる。処方に使用する他の成分はＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、及びＤＯＰＣを含めることができる。シクロデキストリンなどポリエチレングリコールやデキストランを含む天然又は合成界面活性剤を使用できる。胆汁酸塩と他の関連する増進剤と同様にセルロースとセルロース誘導体、アミノ酸を使用できる。リポソーム、マイクロカプセル、ミクロスフェア、包接錯体、及び他のタイプの担体を使用してもよい。
【００４７】
ある実施態様において、噴霧器は、本明細書に開示する試験化合物又はプラセボの主に約２乃至約５μｍのＭＭＡＤを有するエアロゾルの形成を可能にする基準で選択される。水性及び非加圧液体システムでは、様々な噴霧器（小型量噴霧器を含む）によって組成物のエアロゾル化が可能である。コンプレッサ駆動型の噴霧器はジェット技術を組み込んでおり、圧縮空気を使用して液体エアロゾルを生成する。このような装置は、例えばＨｅａｌｔｈｄｙｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｉｎｖａｃａｒｅ社、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ社、Ｐａｒｉ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ社、Ｍａｄａ  Ｍｅｄｉｃａｌ社Ｐｕｒｉｔａｎ−Ｂｅｎｎｅｔ社、Ｓｃｈｕｃｏ社、ＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ社及びＨｏｓｐｉｔａｋ社で市販されている。超音波噴霧器は吸入可能な液滴を生成する圧電性結晶の振動型の機械エネルギーに依存しており、例えばＯｍｒｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社やＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ社で市販されている。振動メッシュ噴霧器は、吸入可能な液滴を生成するような圧電物質又は機械的パルスのいずれかに依存している。本明細書に記載されている試験化合物又はプラセボに使用する噴霧器の例は米国特許番号第４，２６８，４６０号、第４，２５３，４６８号、第４，０４６，１４６号、第３，８２６，２５５号、第４，６４９，９１１号、第４，５１０，９２９号、第４，６２４，２５１号、第５，１６４，７４０号、第５，５８６，５５０号、第５，７５８，６３７号、第６，６４４，３０４号、第６，３３８，４４３号、第５，９０６，２０２号、第５，９３４，２７２号、第５，９６０，７９２号、第５，９７１，９５１号、第６，０７０，５７５号、第６，１９２，８７６号、第６，２３０，７０６号、第６，３４９，７１９号、第６，３６７，４７０号、第６，５４３，４４２号、第６，５８４，９７１号、第６，６０１，５８１号、第４，２６３，９０７号、第５，７０９，２０２号、第５，８２３，１７９号、第６，１９２，８７６号、第６，６４４，３０４号、第５，５４９，１０２号、第６，０８３，９２２号、第６，１６１，５３６号、第６，２６４，９２２号、第６，５５７，５４９号、及び第６，６１２，３０３号に記載されており、全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。本明細書に記載のフルオロキノロン抗生物質に使用できる市販の噴霧器の例は、Ａｅｒｏｇｅｎ社により製品化されているＲｅｓｐｒｇａｒｄ  ＩＩ（登録商標）、Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）、Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）Ｐｒｏ、及びＡｅｒｏｎｅｂ（登録商標）Ｇｏ、Ａｒａｄｉｇｍ社により製品化されているＡＥＲｘ（登録商標）及びＡＥＲｘ  Ｅｓｓｅｎｃｅ（商標）、Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ社により製品化されているＰｏｒｔａ−Ｎｅｂ（登録商標）、Ｆｒｅｅｗａｙ  Ｆｒｅｅｄｏｍ（商標）、Ｓｉｄｅｓｔｒｅａｍ、Ｖｅｎｔｓｔｒｅａｍ及びＩ−ｎｅｂ、及びＰＡＲＩ，ＧｍｂＨにより製品化されているＰＡＲＩ  ＬＣ−Ｐｌｕｓ（登録商標）、ＰＡＲＩ  ＬＣ−Ｓｔａｒ（登録商標）、及びｅ−Ｆｌｏｗ（商標）などである。更に非限定的な実施例は米国特許第６，１９６，２１９号は全体を参照する���とにより本明細書に組み込まれている。噴霧器を使用した更なる方法が米国特許出願公報第２００６−０２７６４８３号に開示されており、全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。
【００４８】
ジェット技術又は超音波の噴霧器に使用する適切な製剤処方は、一般的に水に溶解又は懸濁した試験化合物又はプラセボは、溶液１ｍＬ当たり約０．０１又は１００ｍｇよりも少なく、又はそれよりも高い阻害剤濃度から成り、好ましくは約０．１、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｍＬ乃至約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、又は９０ｍｇ／ｍＬまでの溶液である。組成には緩衝液と単糖（例えばタンパク質安定剤と浸透圧調整用）を含んでよい。噴霧器の組成には、エアロゾル形成における溶液の噴霧化により引き起こされる界面の凝集を減少させ、阻害する界面活性剤を含んでよい。
【００４９】
一部の実施態様は定量式吸入器（ＭＤＩ）を利用している。噴射剤駆動型の吸入器（ｐＭＤＩ）は作動ごとに定量の試験化合物又はプラセボを放出する。試験化合物又はプラセボはハロゲン化炭化水素といった適切な噴射剤に試験化合物又はプラセボの懸濁液又は溶液として組成されている。ｐＭＤＩｓは、例えばＮｅｗｍａｎ，Ｓ．Ｐ．，Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｌｕｎｇ，Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ，ｐｐ．１９７−２２４（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９８４）に記載されている。  
【００５０】
一部の実施態様において、ＭＤＩにおける試験化合物又はプラセボの粒子サイズは最適に選択しうる。一部の実施態様では、活性成分の粒子は５０μｍよりも小さい直径を有する。一部の実施態様において、約１０μｍよりも小さい直径を有する。一部の実施態様において、粒子は約１μｍ乃至約５μｍの直径を有する。一部の実施態様において、粒子は約１μｍよりも小さい直径を有している。一部の有利な実施態様において、直径は約２μｍ乃至約５μｍの直径を有している。  
【００５１】
定量式吸入器に使用する組成は、一般的に界面活性剤を用いて噴射剤に懸濁させた活性成分を含む微粉から成る。噴射剤は、クロロフルオロカーボン類、ヒドロクロロフルオロカーボン類、ヒドロフルオロカーボン類及び炭化水素類を含む通常の噴射剤を含んでいる。好ましい噴射剤はトリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、及びこれらの組み合わせである。ヒドロフルオロアルカン類をを含んでいる医薬品エアロゾルの調整は米国特許番第６，５８５，９５８号、米国特許番第２，８６８，６９１号、及び米国特許番第３，０１４，８４４号に存在しており全体を参照することによって本明細書に組み込まれている。適切な界面活性剤はソルビタン、トリオレイン、大豆レシチン及びオレイン酸を含んでいる。
【００５２】
一部の実施態様では、乾燥粉末吸入器を利用している。乾燥粉末吸入器は主に２つの設計がある。１つの設計は、試験化合物又はプラセボのリザーバが装置内に配置されており、ある量の試験化合物又はプラセボが吸入チャンバに入れられる定量装置である。２つめは、工場内で定量化した装置であり、各噴霧量は異なるコンテナで製造されたものである。両システムは、質量中央径が約１乃至５μｍの微粒子の試験化合物又はプラセボの組成に依存しており、通常は、より大きい添加粒子（一般的には１００μｍのラクトース粒子）との共組成を伴っている。試験化合物又はプラセボの粉末は吸入チャンバに入れられ（定量装置又は工場で定量化の開封により）、個体の吸気流によって加速することで粉末は装置外に放出され口腔に送り込まれる。粉末経路に特徴づけられる非層流によって、添加−試験化合物又はプラセボの凝集は解消し、大型添加粒子の大部分は喉の奥に固着し、一方でプラセボ粒子は肺の深部に沈着する。
【００５３】
液体噴霧器とＭＤＩｓによって試験化合物又はプラセボのエアロゾル形成についての粒子径は適切になされる。ＭＭＡＤが約５μｍよりも大きい粒子径の場合、粒子は上気道に沈着する。エアロゾルが約１μｍの粒子径よりも小さい場合、肺胞に送達され、全身の血液循環に移動しはじめる。
【００５４】
本明細書で使用する乾燥粉末吸入器についての更なる例は、米国特許第４，８１１，７３１号、第５，１１３，８５５号、第５，８４０，２７９号、第３，５０７，２７７号、第３，６６９，１１３号、第３，６３５，２１９号、第３，９９１，７６１号、第４，３５３，３６５号、第４，８８９，１４４号、第４，９０７，５３８号、第５，８２９，４３４号、第６，６８１，７６８号、第６，５６１，１８６号、第５，９１８，５９４号、第６，００３，５１２号、第５，７７５，３２０号、第５，７４０，７９４号、及び第６，６２６，１７３号に記載されており、全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。
【００５５】
粉末吸入装置から分配される組成物は、一般的に試験化合物又はプラセボから成る乾燥微粉であり、選択的にラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース又はキシリトールなど装置内からの粉末の分散を促進する量の充填剤を含み、一般的には組成物中に１重量％から又は９９重量％よりも少なく又は大きく、好ましくは組成物中の約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０重量％乃至約５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、又は９０重量％までである。  
【００５６】
一部の実施態様は、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾルを含んでいる。エアロゾルは、空気中に固体粒子の懸濁液と液体の懸濁液を含んでいる。一部の実施態様では、エアロゾルはリボフラビン５’−リン酸の溶液を含んでいる。
【００５７】
一部の実施態様では、リボフラビン５’−リン酸の溶液は約０．１ｍｇ／ｍＬよりも高く、約０．００１ｍｇ／Ｌよりも高く、約０．００５ｍｇ／Ｌよりも高く、約０．０２ｍｇ／Ｌよりも高く、及び約０．０６ｍｇ／Ｌよりも高い濃度である。
【００５８】
一部の実施態様において、エアロゾルは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、及び約０．２ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い吸入送達用量のリボフラビン５’−リン酸を含んでいる。
【００５９】
一部の実施態様において、エアロゾルは約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約０．１ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、約１．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高く、及び約２．０ｍｇ／ｋｇ／日よりも高い量のリボフラビン５’−リン酸を含んでいる。
【００６０】
一部の実施態様においてエアロゾルは３．０μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約０．５μｍ乃至約４．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成り、２．７μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．０μｍ乃至約３．５μｍの空気動力学的中央粒子径から成り、又は２．４μｍよりも小さい又は同等な幾何標準偏差を有する約１．１μｍ乃至約３．１μｍの空気動力学的中央粒子径から成るエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸を含んでいる。
【００６１】
エアロゾルを添加する更なる方法は米国特許公報第２００６−０２７６４８３号に記載されており、全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。
【００６２】
経鼻内投与
経鼻送達は、直接、肺に製品の沈着をさせる必要もなく、鼻に治療製品を投与した後、血流へのプラセボ及び／又は試験化合物の移動を可能にする。一部の実施態様において、試験化合物とプラセボを噴霧型点鼻薬又は点鼻薬により投与できる。噴霧型点鼻薬は液体又は固体の噴霧型点鼻薬でよい。噴霧型点鼻薬はエアロゾル又は非エアロゾルの噴霧型点鼻薬でよい。経鼻送達システムは：１）エアロゾル化計量ポンプ、２）手動計量ポンプ及び３）圧力型噴霧型計量瓶を含んでよい。これらは、対象の血流中へ試験化合物の迅速な吸収を提供するのに有効である。
【００６３】
エアロゾルは適切な機械装置を使用して吹き込んでよい。一部の実施態様において、この器具は、噴霧の形式で薬剤量を放出するように適合させた装置であるリザーバと噴霧器を具えている。複数回投与する試験化合物又はプラセボはリザーバに含まれており、選択的に溶液又は懸濁体又は固体粒子剤型、若しくは固形粒子混合物などでよい。
【００６４】
一部の実施態様において、器具は計量ポンプを具えるポンプ噴霧器である。一部の実施態様において、器具は圧力噴霧器であり、この噴霧器は、計量バルブと推定上の医薬組成物を具え、更に、薬剤的に許容可能な噴射剤から成る圧力型噴霧装置を具えている。本明細書に開示する例示的な噴射剤は、１，１，１，２−テトラフルオロエタン及び１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンなどのハイドロフルオロカーボン類だけでなくジクロロジフロロメタンなどのクロロフルオロカーボン類の１つまたは混合物である。適切な圧力型スプレー装置は、当該技術分野において周知で慣用なものである。
【００６５】
一部の実施態様において、粉末は経鼻吸入器を使用して投与できる。一部の実施態様において、粉末は吸入器に装填するカプセル中に収容されている。カプセルは針によって穴をあけることでカプセルの上と下に開口部を作る。次いで空気又は他の薬剤上許容可能な噴射剤が針を通して粉末粒子を放出する。一部の実施態様において、薬剤上許容可能な噴射剤は、例えば塩化エチル、ブタン、プロパン、ジクロロジフロロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、及びトリクロロモノフルオロメタンを含む。
【００６６】
一部の試験化合物は、非常に水に溶けにくい化合物であり、ある量の水性溶媒に推定上の治療効果量を溶解できなないためエアロゾル又は非エアロゾルによる経鼻注入に影響を与える。経鼻投与に適した注入量は評価する化合物の性質によって様々である。一部の実施態様において、経鼻投与に適した注入量は、鼻腔につき約２５μｌ乃至約２５０μｌの幅でよく、好ましくは鼻腔につき約５０μｌ乃至約１５０μｌであり、特に鼻腔につき約５０μｌ乃至約１００μｌである。固体又は液体粒子は微細ポンプ、エアロゾル化注入ガス気流等の作動により気流中に浮遊する。
【００６７】
試験化合物
試験化合物は、個体における治療効果を評価する化合物を含んでよい。本明細書で記載するように、「試験化合物」とは疾病の診断、治療、緩和、処置又は予防、若しくは身体の構造又は機能に影響を与える物質を含み、慣用的及び最大限広範な意味として使用する。試験化合物の例は、抗生物質、抗アレルギー薬、抗がん剤、抗真菌剤、抗悪性腫瘍薬、鎮痛薬、気管支拡張薬、抗ヒスタミン薬、抗ウイルス薬、鎮咳薬、アンギナール製剤、抗炎症薬、免疫調節薬、５−リポキシゲナーゼ阻害薬、ロイコトリエン拮抗薬、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホジエステラーゼＩＶ阻害剤、ペプチド類、タンパク質、ステロイド及びワクチン製剤として有用である化合物を含めることができる。
【００６８】
好ましくは、試験化合物は口腔及び／又は鼻腔吸入に適している。一部の実施態様において、試験化合物はエアロゾル投与に適した組成物中に存在している。本明細書で開示する添加剤の実施例は、共溶媒（例：エタノール、水）、界面活性剤（例：オレイン酸、ソルビタンエステル類、ポリオキシエチレン類、グリコール類、オリゴ乳酸類）及び当該技術分野で周知な添加剤を含める。
【００６９】
リボフラビン５’−リン酸の治療的な使用
一部の実施態様は、エアロゾル化リボフラビン５’−リン酸の使用を含んでいる。このような一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は本明細書記載の任意の方法によって、リボフラビン５’−リン酸を必要とする対象に投与できる。例えば、一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸溶液はエアロゾル化溶液として対象に投与することができる。このような方法によりリボフラビンの迅速な送達と吸収が可能になる。対象は例えば人間などの哺乳類を含む。用量は経験的に決定できる。リボフラビン５’−リン酸は様々な適応症の治療に使用できる。
【００７０】
一部のこのような実施態様において、リボフラビン５’−リン酸はβ遮断薬と併用して片頭痛の治療又は緩和に使用できる。頻発性偏頭痛の病歴がある５４人の男女を無作為化プラセボ対照試験によって３ヶ月にわたり４００ｍｇ／日のリボフラビンを投与して偏頭痛の予防効果を調べた（Ｓｃｈｏｅｎｅｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ  ｉｎ  ｍｉｇｒａｉｎｅ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ．Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．１９９８；５０（２）：４６６−４７０）。リボフラビンは、プラセボよりも有意に良好であった。有益な効果の殆どは第３月目に報告されているが、リボフラビンはプラセボよりも発作の頻度と頭痛日数を著しく減少させることができる。同じ研究者による最近の研究では、β遮断薬と呼ばれる薬剤又は高用量のリボフラビンは臨床改善がみられたが、β遮断薬は皮質情報処理に働き、リボフラビンは脳ミトコンドリアエネルギーの貯蓄を低下させるため、各治療薬は異なる病理的メカニズムに作用していると推定される（Ｓａｎｄｏｒ  ＰＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｇｒａｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｂｅｔａ−ｂｌｏｃｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｅｖｏｋｅｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ．Ｈｅａｄａｃｈｅ．２０００；４０（ｌ）：３０−３５）。２３人の患者の小規模試験において、毎日４００ｍｇのリボフラビンを３月にわたって投与したところ偏頭痛発作の頻度の低下が報告された。（Ｂｏｅｈｎｋｅ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｓ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｉｎ  ｍｉｇｒａｉｎｅ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ：ａｎ  ｏｐｅｎ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ａ  ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｃａｒｅ  ｃｅｎｔｒｅ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００４；１１（７）：４７５−４７７）。
【００７１】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は新生児黄疸の治療に使用できる。例えば、リボフラビン５’−リン酸は新生児黄疸の光線治療の一部として使用できる。幼児に放射する光の使用によって黄疸により生ずる毒素であるビリルビンだけでなく、幼児の血中に自然に存在するリボフラビンも分解するため追加的な補給が必要である。
【００７２】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸はリボフラビン欠乏の治療に使用することができる。例えば、リボフラビン５’−リン酸はリボフラビン欠乏（例：リボフラビン欠乏症）の患者に有益である。例えばリボフラビン欠乏症は、虚弱、咽喉腫脹／痛、舌炎（例：舌腫脹）、口角びらん症／炎、（口角の皮膚のひび割れ、又は痛み）、皮膚炎（かぶれ）、又は貧血を生ずる。特定の群は高齢、これらに伴う慢性疾患、貧困、及びこれらに伴うアルコール依存症を含むリボフラビン欠乏に影響を受けやすい。
【００７３】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は鉄欠乏貧血と鎌状赤血球貧血の治療に使用することができる。鉄欠乏貧血と鎌状赤血球貧血において、リボフラビンのレベルは低くなりうる。リボフラビン欠乏と鉄欠乏である個体においてリボフラビン欠乏の修正は鉄治療への応答を改善できる。
【００７４】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は認知機能の促進に使用できる。一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は認識機能の促進に使用できる。リボフラビンを伴う適切な栄養補給は認知機能の維持に必要である。三環系抗鬱薬を処方している患者において、リボフラビンを含むビタミンＢ群の治療は、鬱と認知機能のスコアを改善することが報告されている。これは三環系抗鬱薬によって生じるリボフラビン量の枯渇に関連している。
【００７５】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は鬱の治療に使用できる。リボフラビンを伴う適切な栄養補給は、認知機能の維持に必要である。三環系抗鬱薬を処方している患者において、リボフラビンを含むビタミンＢ群の治療は、鬱のスコアを改善することが報告されている。これは三環系抗鬱薬によって生じるリボフラビン量の枯渇に関連している。  
【００７６】
一部の実施態様において、リボフラビン５’−リン酸は子癇前症の治療に使用できる。子癇前症は妊娠期間中の血圧の上昇、尿中のたんぱく質、及び浮腫（実質的な膨張）として定義できる。子癇前症を伴う女性の約５％が子癇に発展し、妊産婦死亡の大きな原因に進行する可能性がある。子癇は発作に加えて高血圧と出血（大量出血）の高いリスクにより特徴づけられる（Ｃｒｏｍｂｌｅｈｏｌｍｅ  ＷＲ．Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ．Ｉｎ：Ｔｉｅｒｎｅｙ  ＬＭ，ＭｃＰｈｅｅ  ＳＪ，Ｐａｐａｄａｋｉｓ  ＭＡ，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．３７ｔｈ  ｅｄ．Ｓｔａｍｆｏｒｄ：Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ；１９９８：７３１−７３４）。１５４人の妊婦による子癇前症のリスク増加に関する研究では、リボフラビン欠乏の妊婦は、リボフラビンが充分な栄養状態の者に対して、子癇前症に発展する可能性が４．７倍高いことが発見された。細胞内のフラボコエンザイムレベルの減少はミトコンドリアの機能不全を引き起こし、酸化的ストレスの増加及び酸化窒素の放出を妨げ、それによって血管拡張を妨害する。全てのこれらの変化は子癇前症に関連している（Ｗａｃｋｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ａｎｄ  ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．２０００；９６（ｌ）：３８−４４）。
【００７７】
実施例
後述する実施例は、本発明の様々な態様の実施についてのベストモードの記載を意図するだけでなく、上記の発明の使用様式をより完全に記述する役割を果たしている。これらの実施例はいかなる方法においても本発明の真の範囲を制限するためではなく、むしろ例証目的のために存在していると解釈すべきである。これらの全体を参照することにより本明細書に組み込まれている。
【００７８】
実施例１−リボフラビン５’−リン酸：ＳＤラットにおける２８日間のエアロゾル化液体吸入毒性試験
本試験の目的は、試験物であるリボフラビン５’−リン酸を２８日間連続してラットに吸入（鼻のみ）投与して毒性と毒物動態プロファイルを測定することである。表１は各群の呼吸送達用量を示している。
2013502579.tif 000003
【００７９】
試験物：リボフラビン５’−リン酸ナトリウム塩水和物；代替名称：ビタミンＢ２リン酸塩；性状：黄結晶：力価；７４％。賦形剤：生理食塩水（０．９％（ｗ／ｖ）注射用食塩水）；性状：無色透明溶液。試験システム：ラット（ドブネズミ）；系統：スプラグダウリー系統：ＣＤ（ＳＤ）。
【００８０】
試験物と対照物組成の調整
各群の試験（０．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ）及び／又は、賦形剤対照組成物を毎日新たに生理食塩水に溶解し調整した。調整した全ての試験組成物は遮光し、室温（ＲＴ）で保存した。
【００８１】
処置
暴露システムへの順応
動物を暴露大気に供する前に全動物を（対照を含む）３日にわたる拘束処理に順応させた。動物は暴露の間最長１時間にわたって使用する投与チューブの拘束に徐々に慣れていった。
【００８２】
エアロゾル生成の特質及び理論的用量レベル
処置：鼻腔からのみの暴露を６０分間、連日吸入させた。処理期間：２８日。予測エアロゾル濃度と用量レベルを表２に示している。
2013502579.tif 000004
達成用量の推定
ＤＬ＝（Ｅｃ×ＲＭＶ×Ｔ）／ＢＷ
ＤＬ＝達成用量レベル（ｍｇ／ｋｇ／日）
Ｅｃ＝動物へ送達された有効濃度（ｍｇ／Ｌ空気）  
ＲＭＶ＝毎分呼吸量（Ｌ／分）、下記に詳細に記載するＢｉｄｅ、Ａｒｍｏｕｒ及びＹｅ        ｅ２０００の理論に基づいて計算している。
ＲＭＶ（Ｌ  ）＝０．４９９×体重（ｋｇ）０．８０９  
Ｔ＝時間、すなわち、暴露時間（分）
ＢＷ＝暴露期間中の平均体重（ｋｇ）
【００８３】
この達成用量の推定は、呼吸器内に１００％沈着すると仮定している。（Ｂｉｄｅ  Ｒ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｌｌｏｍｅｔｒｉｃ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ／Ｂｏｄｙ  Ｍａｓｓ  Ｄａｔａ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｔｏ  ｂｅ  Ｕｓｅｄ  ｆｏｒ  Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｔｏ  Ｙｏｕｎｇ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｕｍａｎｓ．Ｊ．Ａｐｐ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，２０００  Ｖｏｌ．２０，全体を参照することによって本明細書に組み込まれている。）  
【００８４】
吸入暴露システム
エアロゾルは、高速度空気流（各噴霧器へ１０Ｌ／分）に連結した３つの医療用噴霧器（側流）で試験物又は対照物を計量して生成した。生成したエアロゾルは直径４０ｍｍのチューブを通して貫流吸入暴露システムに充填した。エアロゾル発生の間、暴露システムを通過する空気流量をモニターし、手動で記録した。暴露システムへの空気流量はエアロゾル生成器から供給する空気の絶対量を広域流量計を使用して制御した。
【００８５】
動物暴露システムからのエアロゾル排気流の調整は排気バルブを使用して達成し、暴露システムにおける空気流の総バランスは圧力計を使用してモニターした。このシステムは最小１．０Ｌ／分の空気を各動物の暴露ポートに供給し、動物の暴露サイトにおいて確実に若干の陽圧になるように調整した。これにより生成エアロゾルは確実に希釈されない。システムに取り付けて各個体に同一の暴露位置で分配するネットワークを使用して企図した各暴露位置へエアロゾルの等量送達を達成した。
【００８６】
エアロゾル濃度の分布、粒子サイズ分布、酸素濃度、相対湿度及び温度の決定は、暴露システムの代表的なポートから流速１Ｌ／分の試験空気サンプルを採取して行った。サンプルの流量は、使用する前に第一空気流キャリブレータを使用して調整した広域流量メータを用いて厳密に制御した。各エアロゾル濃度試料の絶対量は、湿式ガスメータを用いて測定した。
【００８７】
エアロゾル濃度の決定
ラットに投与する前に暴露システムの群２乃至群４の上層、中層、底層の複数のエアロゾルサンプルを収集して、暴露システム内の大気の均質性を試験した。各層間の変動係数が２０％よりも下であることを確認した。治療期間は、連日、エアロゾル生成のたびに対照群を含む全ての群から複数のエアロゾル濃度のサンプルをフィルター上に採取した。採取したフィルターは、ＩＴＲ分析化学研究所に移し、有効な分析法（ＩＴＲ  ＳｔｕｄｙＮｏ．４０２４１）を使用してリボフラビン５’−リン酸濃度の化学測定をした。
【００８８】
粒子サイズ分布の測定
治療期間中は毎週、群２乃至４の生成エアロゾルの粒子サイズ分布を７−段階マーサーカスケードインパクター（７−Ｓｔａｇｅ  Ｍｅｒｃｅｒ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ）でサンプルを採取し、得られたサンプル物質をＩＴＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｃａｎａｄａ社の分析化学研究所に移し、有効な分析法を使用してエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸の粒子径を化学的に測定した（ＩＴＲ  Ｓｔｕｄｙ  Ｎｏ．４０２４１）。群１の生成エアロゾルの粒子サイズ分布は、毎週重量分析によって測定した。空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）と幾何標準偏差（ＧＳＤ）はインパクタ（衝突式採集器）から得られた結果に基づきログプロビット変換を使用して算出した。
【００８９】
死亡率、臨床症状、体重、食事消費量、眼科学、機能性観察バッテリー（ＦＯＢ法）及び臨床化学、血液学、血液凝固及び検尿の調査を行った。試験の初日と最終日に、試験設計した動物から採取した血液サンプルから血漿を調整しリボフラビン５’−リン酸の含有量と毒物動態評価の分析を行った。全ての、毒性試験（主研究）用の動物は、処理期間の２８日が完了した後に安楽死させ、特定の臓器を採取し、計量し、顕微鏡で評価した。毒物動態用の動物は血液サンプリング完了の後に安楽死させ、剖検検査又は組織採取は行わなかった。下記の表は血液試験（表３）、血液凝集試験（表４）、臨床化学試験（表５）、及び尿検査（表６）において使用した試験、方法及び略記を要約している。
2013502579.tif 000005
2013502579.tif 000006
2013502579.tif 000007
2013502579.tif 000008
2013502579.tif 000009
2013502579.tif 000010
2013502579.tif 000011
【００９０】
結果
投与組成物の分析  
分析により、全ての組成物が承認基準範囲内（±１０％）にあることが決定した。この組成物濃度の調製濃度は９４．４乃至１０６．４％の濃度であるため許容できると考えられる。正式な組成物は安定条件又は４℃で利用可能であったが、分析の少なくとも４８時間前から冷蔵保存した組成物、又は調整した日に室温保存した組成物の結果から、全ての組成物の濃度は安定であったことが示された。
【００９１】
試験大気濃度と推定達成用量レベル
表７は達成試験大気濃度を示している。
2013502579.tif 000012
【００９２】
群２乃至４の達成エアロゾル濃度の全てが標的リボフラビン５’−リン酸濃度の１０％範囲内である。７．３乃至９．０％の変動係数を有するリボフラビン５’−リン酸群の生成大気は安定であった。
2013502579.tif 000013
【００９３】
群２乃至群４の上層、中層、下層の大気から得られたエアロゾルは均質であると考えられた。
2013502579.tif 000014
【００９４】
全ての群の全推定達成用量は許容可能であり、予測用量レベルに対して３．３％以内であった。毒物動態（ＴＫ）評価には、各ＴＫ日における平均体重と達成リボフラビン５’−リン酸エアロゾル濃度を使用して達成用量レベルを算出した。表１０はリボフラビン５’−リン酸の達成用量レベルを示している。
2013502579.tif 000015
【００９５】
表１１は、リボフラビン５’−リン酸の達成用量レベルを示している。
2013502579.tif 000016
【００９６】
粒子サイズ分布
リボフラビン５’−リン酸の粒子サイズ分布の測定が表１２に要約されている。
2013502579.tif 000017
【００９７】
粒子サイズ分布の計測により、リボフラビン５’−リン酸のエアロゾル化組成物はラットに呼吸可能であり、呼吸器に１００％沈着するとことが確認された。対応する質量測定した対照エアロゾルは呼吸可能であると考えられ、リボフラビン５’−リン酸処理群との比較は可能である。
【００９８】
毒物動態学
リボフラビン５’−リン酸に単一又は反復暴露後、ごく一部の動物からしかリボフラビン５’−リン酸濃度は検出されず、計測濃度は一般的に定量限界より僅か上にある程度で、毒物動態パラメータは算出できない。
【００９９】
第１日目
対照群の１日目（群１）において、計測可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸又は代謝物質（リボフラビン）はなかった。また、１日目のリボフラビン５’−リン酸の低用量群において、２４時間目に０．８２９μｇ／ｍＬのリボフラビン濃度を有する１匹の雌ラットが記録された以外は計測可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸又はリボフラビンはされなかった。中用量及び高用量群においては雌雄ともに、リボフラビンの血漿濃度の若干の増加が観察された。Ｃｍａｘ値については雄では中用量及び高用量において、それぞれ０．０７８２μｇ／ｍＬと０．１４６μｇ／ｍＬであり、雌では０．０４９１μｇ／ｍＬと０．１２４μｇ／ｍＬであった。関連するＡＵＣ（０−ｔ）値については、雄ではそれぞれ０．０１５９μｇ．時／ｍＬと０．１０４μｇ．時／ｍＬ、及び雌では０．００９６μｇ．時／ｍＬと０．０８４２μｇ．時／ｍＬであった。１日目の濃度値は雌よりも雄が若干高かった。雄と雌のＣｍａｘ比とＡＵＣ（０−ｔ）比は中用量では１．５９と１．１８であり、高用量では１．６５と１．２４であった。
【０１００】
第２８日目
対照群１（群１）の２８日目において、計測可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸又は代謝物質（リボフラビン）はなかった。また、低用量グループにおいて計測可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸又はリボフラビンは検出されなかった。Ｃｍａｘの値については、雄の中用量及び高用量群では、それぞれ０．２６６μｇ／ｍＬと０．１１７μｇ／ｍＬであり、雌では０．０７３５μｇ／ｍＬと０．１４５μｇ／ｍＬであった。ＡＵＣ（０−ｔ）値については、雄の高用量では０．１１７μｇ．時／ｍＬであり、雌の中用量と高用量ではそれぞれ０．０１２１μｇ．時／ｍＬと０．０５６６μｇ．時／ｍＬであった。全体的にリボフラビンの血漿濃度（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−ｔ））は、リボフラビン５’−リン酸の投与用量に応じて雌雄ともに増加しなかった。同様に、雌雄共に２８日間の連日投与の後にリボフラビンの蓄積は確認されなかった。２８日目対１日目のＣｍａｘ比とＡＵＣ（０−ｔ）比は雄の高用量において、それぞれ０．８０１と０．４３３であった。雌の２８日目対１日目のＣｍａｘ比とＡＵＣ（０−ｔ）比は中用量及び高用量において、それぞれ１．５０と１．１７、及び１．２５と０．６７２であった。
【０１０１】
図１は、２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸後の雄又は雌における平均リボフラビン血漿濃度−時間プロファイルのグラフを示している。図２Ａは、２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸投与後の雄ラットにおける平均リボフラビンＣｍａｘとＡＵＣ（０−ｔ）のグラフを示している。図２Ｂは、２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸投与後の雌ラットにおける平均リボフラビンＣｍａｘとＡＵＣ（０−ｔ）のグラフを示している。表１３は、２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸投与後のリボフラビンの毒物動態パラメータを要約している。
2013502579.tif 000018
【０１０２】
機能性観察バッテリー（ＦＯＢ法）
本試験期間の処置に関連すると考えられる機能性観察バッテリーのパラメータ変化は記録されなかった。一部のパラメータにおいて、対照群との間に統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、賦形剤対照群との差は雌雄間の間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことが示され、これらは偶発的であり処置に関連していないと考えられた。
【０１０３】
血液学パラメータ
全ての動物において試験期間の処置に関連すると考えられるいかなる血液学パラメータの変化は記録されなかった。一部のパラメータにおいて対照群との間に統計的に有意な差（ｐ≦０．０５）がいくつか記録された。しかし、賦形剤対照群との間の変化は雌雄間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられる。
【０１０４】
凝固
凝固時間は治療によって影響を受けない。
【０１０５】
臨床化学
全ての動物において試験期間の処置に関連すると考えられるいかなる臨床化学パラメータの変化は記録されなかった。いくつかのパラメーターに関して対照群との間に統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、賦形剤対照群との間の変化は雌雄間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられる。
【０１０６】
検尿
処置による影響を受けると考えられる全検尿パラメータの評価に変化はなかった。
【０１０７】
臓器重量
全ての動物において、試験期間の処置に関連すると考えられるいかなる臓器重量（絶対又は体重に対する相対）の変化は記録されなかった。群２と群３の雄の動物で心臓（相対）と前立腺（絶対と相対）で対照群との間の統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。さらに、いくつかの他の臓器についても統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、賦形剤対照群との間の変化は雌雄間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられる。
【０１０８】
肉眼的所見
試験物の投与に起因する所見はなく、死検の観察による全所見は偶発的原因であり、生物学的重要性がないと考えられる。
【０１０９】
顕微鏡所見
試験物に関連すると考えられる顕微鏡所見はなかった。全ての変化は、死によるものであり、用量に関連しておらず、発生率又は重症度が低く、対照と処置動物で発生しており、又は試験ラットの齢と系統に付随的であるため、毒性学的に重要ではないと考えられた。
【０１１０】
考察
本試験の第一の目的は、試験物であるリボフラビン５’−リン酸のラットへの２８日間の連日吸入投与（鼻のみ）後に、毒性と毒物動態プロファイルの測定をすることである。リボフラビン５’−リン酸は、機能的観察バッテリーの評価と臨床病理学的パラメータ又は下記の全主要臓器の組織病理学的試験調査により忍容性が高く、有害な臨床観察がないことが発見された。脾臓、胸腺、リンパ節、リンパ組織、下顎リンパ節及び腸間膜リンパ節を含むリンパ組織と鼻腔、気道組織、上咽頭、喉頭気、気管支リンパ節、気管分岐部、気管、肺及び気管支を含む気道組織を組織学的に評価し、局所又は全身毒性の兆候はなかった。
【０１１１】
０．２４４ｍｇ／ｋｇ／日を投与した一匹の雄ラットの死亡が１２日目に確認された。死亡は、一匹の低用量ラットに限定されているため試験物によるものではなく、死因は偶然であり、拘束方法に関連していると考えられる。処置動物において測定可能な血漿濃度のリボフラビン５’−リン酸不足のため、動態は算定していない。雌雄ともに血漿中の代謝物（リボフラビン）濃度は測定可能であり、暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−ｔ））は用量に比例しているように見える。リボフラビン５’−リン酸の２８日間の反復投与後にリボフラビン暴露において性差はなく、リボフラビン５’−リン酸の２８日間の反復投与後に蓄積はなかった。
【０１１２】
結果的に、試験物のリボフラビン５’−リン酸を毎日一回の２８日の連続吸入投与の後、ＳＤラットにおける無毒性量（ＮＯＥＬ）は高用量グループの２．４７９ｍｇ／ｋｇ／日であると考えられた。実施例２−リボフラビン５’−リン酸：ビーグルにおける２８日エアロゾル化吸入毒性試験。
【０１１３】
試験設計  
本試験の目的は、試験物のリボフラビン５’−リン酸を２８日間連日で犬に吸入（口鼻）投与した後に毒性と毒性動態プロファイルを測定することである。
2013502579.tif 000019
【０１１４】
試験物：リボフラビン５’−リン酸ナトリウム塩水和物；代替名称：ビタミンＢ２リン酸塩；性状：黄結晶：力価；７４％。賦形剤：生理食塩水（０．９％（ｗ／ｖ）注射用食塩水）；性状：無色透明溶液。暴露方法：口腔鼻フェイスマスクによる吸入。
【０１１５】
各群の試験（０．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ）及び／又は賦形剤対照組成物（０ｍｇ／ｍＬ）を毎日新たに生理食塩水に溶解し調整した。調整した全ての試験組成物は遮光し、室温（ＲＴ）で保存した。
【０１１６】
処置
処置の期間：２８日：試験システム：犬（ケイネス・ファミリアリス）；系統：ビーグル
2013502579.tif 000020
予測エアロゾル濃度と用量レベルは表１５に要約している。
【０１１７】
達成用量レベルの推定
暴露期間の達成用量レベルは実施例１に記載の方法を使用して推定した。
【０１１８】
吸入システム
エアロゾルは３つの噴霧器で臨床試験物と対象物組成物の流量を計量して生成した。生成したエアロゾルは４０ｍｍのチューブを通して貫流吸入暴露システムに充填した。暴露システムを通過する空気流量は、エアロゾル生成の間、モニターし、手動で記録した。暴露システムへの空気流量はエアロゾル生成器から供給する空気の絶対量を広域流量計を使用して制御した。動物暴露システムからのエアロゾル排気流の調整は排気バルブを使用することで達成した。このシステムは最小６Ｌ／分のエアロゾルを各動物の暴露ポートに供給し、周囲からの空気の流入によって動物の暴露サイトの生成エアロゾルが確実に希釈されないように若干の陽圧になるように調整した。流量の多少のばらつきはバルーンリザーバによってバッファした。システムに取り付けて各個体に同一の暴露位置に分配するネットワークを使用して企図した暴露位置へエアロゾルの等量送達を達成した。
【０１１９】
吸入システムのモニタリング
エアロゾル濃度の分布、粒子サイズ分布、酸素濃度、相対湿度と温度の決定は、暴露システムの代表的なポートから流速１Ｌ／分の試験空気サンプルを採取して行った。サンプルの流量は、使用する前に第一空気流キャリブレータを使用し調整した広域流量メータを用いて厳密に調整した。
【０１２０】
エアロゾル濃度の決定  
治療期間は連日、エアロゾル生成のたびに対照群を含む全ての群から複数のエアロゾル濃度のサンプルをフィルター上に収集した。
【０１２１】
粒子サイズ分布と空気動力学的中央粒子径
処置期間中は毎週、群２乃至４の生成エアロゾルの粒子サイズ分布は、７−段階マーサーカスケードインパクター（７−Ｓｔａｇｅ  Ｍｅｒｃｅｒ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ）でサンプルを採取し、有効な分析法を使用してエアロゾル化したリボフラビン５’−リン酸の粒子サイズを測定した。群１の生成エアロゾルの粒子サイズ分布は、重量分析によって毎週、算定した。ＭＭＡＤと幾何標準偏差（ＧＳＤ）はインパクタ（衝突式採集器）から得られた結果に基づきログプロビット変換を使用して計算した。
【０１２２】
生存中の観察
処置期間直前の前処置期間の１週間のみのデータを収集した。
【０１２３】
死亡率
死亡率の確認は順応と前処置期間に１日１回、そして試験の処置期間に１日２回（午前と午後）行った。
【０１２４】
臨床所見
ケージ越しでの臨床的兆候（健康障害、行動変化等）は順応期間に１日１回、処置期間は詳細な臨床試験日を除き、１日２回（暴露前と暴露後）記録した。各犬の詳細な臨床診察は前処置に少なくとも１回、第１日目の１日前、処置期間に週１回及び死検の前に（ケージ内での臨床的兆候観察に代えて朝に）行った。
【０１２５】
体重
群割り付けの前に少なくとも１回、処置開始の約１週間前に全動物の体重を記録した。全動物の体重は第１日目の１日前と処置期間に週１回、及び最後に記録した。
【０１２６】
食料消費
全動物の各食餌量は前処置の最後の１週間と処置期間を通して記録した。
【０１２７】
検眼
全動物の眼底検査（間接検）と生体顕微鏡（細隙灯）検査は前処置期間に１回と処置期間の第４週目に行った。
【０１２８】
心電図記録法（ＥＣＧ）と血圧
全犬の心電図（四肢誘導Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩとＶＲ、ＶＬ、及びＶＦによる増高誘導）を前処置に１回と、処置期間の第１日目と第４週目の処置後、少なくとも９０分間（９０乃至１２０分）に得た。更に、非観血的血圧はＴａｉｌ−ｃｕｆｆ方式を使用してＥＣＧと同じ機会に計測した。透写図により心臓電気活動障害の全体的な変化の指標を調べ、心拍（誘導ＩＩ）、静脈洞及び房室調律又は伝導性を含む潜在的異常の存在を測定した。心拍、ＰＲ間隔、ＱＲＳ時間、ＱＴ及びＱＴｃ間隔値を表にして試験記録に組み込んだ。ＥＣＧの記録中は各動物を拘束するつり鎖を使用した。ＥＣＧは獣医循環器の獣医が評価した。
【０１２９】
循環器パラメータ測定
全動物の循環器パラメータ（１回換気量、呼吸数及び分時拍出量）を前処置の間に１回少なくとも１５分間と処置期間の第４週目の期間に暴露の終了から９０分（平均１５分のインターバルで記録した）までに得た。一部の動物では、ハードウェア調整の間に生じた動物の発声／動物の過剰な行動のため、データの獲得はターゲットである暴露終了から１５分の代わりに、暴露終了後の３５分以内に開始している。呼吸器計測期間のこのような騒動は一般的で、不可避であり、試験設計の完成度、又は総合的なデータ解釈の逸脱に影響はない。このデータはＮＯＴＯＣＯＲＤ社／ＬｉｆｅＳｈｉｒｔ  Ｗｉｒｅｌｅｓｓ  ｓｙｓｔｅｍを使用して得た。データ収集の前に、これらの犬をＬｉｆｅＳｈｉｒｔと保護ジャケットに最大９０分間を３日間徐々に順応させた。
【０１３０】
毒物動態  
９つの一連の血液サンプル（各約２．０ｍＬ）を各犬の処置期間のそれぞれ第１日目と第２８日目に取り除いた。この目的のために、各犬を静脈穿刺により採血し、ヘパリンナトリウム、抗凝血剤を含むチューブに収集した。試験管に採取した後、即座に濡れた氷の上に３０分以内放置した。どの試験でも、サンプルは、投与前、暴露直後（ＩＰＤ）、暴露後１５分及び３０分、１、２、４、６及び２４時間に収集した。収集の後、サンプルを遠心分離（約４℃）し、生じた血漿を採取し、輸送中（ドライアイス上で）の光から保護するラベル付きのチューブ入れＩＴＲ（約−２０℃）で凍結保存した。  
【０１３１】
臨床病理
血液／尿サンプリング
室内試験（血液、凝固、臨床化学及び検尿）は全動物の処置の開始前と処置の終了時（第２９日目）に行った。血液サンプルは、少なくとも１２時間から成る一晩の摂食制限期間後に静脈せん刺によって採取した。尿は一晩（少なくとも１６時間、２０時間未満）の摂食及び摂水制限した動物から採取した。
【０１３２】
血液学パラメータ
ＥＤＴＡ抗凝固剤中にサンプル（名目上１ｍＬ）を含む試験管に採取し、下記のパラメータについて計測した。
赤血球細胞算定                    血小板算定
平均赤血球ヘモグロビン量（算定）  ＷＢＣ分析（絶対数）
ヘマトクリット（算定）            網状赤血球（絶対数とパーセンテージ）
平均赤血球容積                    平均赤血球ヘモグロビン量  
ヘモグロビン濃度（算定）          ハインツ小体細胞の形態（血液塗抹染色標本）＊
白血球細胞計数
＊血液塗抹染色標本スライドは、その後の評価に必要ではなく、将来的に可能な分析のために保持した。
【０１３３】
凝固
血液サンプル（名目上１．３ｍＬ）をクエン酸塩抗凝血剤を含む試験管に採取し、下記のパラメータについて計測した。
活性化部分トロンボプラスチン時間  
プロトロンビン時間  
【０１３４】
臨床化学
以下のパラメーターは、凝固活性剤を含む血液サンプル（名目上１．１ｍＬ）試験管についての測定である。
Ａ／Ｇ比（算定）                      アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ    グロブリン（算定）                    カリウム
アラニンアミノトランスフェラーゼ      ビリルビン（総合、直接、間接）
ブドウ糖                              ナトリウム
アルブミン                            カルシウム
乳酸脱水素酵素                        総タンパク質
アルカリ性ホスファターゼ              塩化物
マグネシウム                          トリグリセリド
アミラーゼ                            コレステロール（総合）
リン（無機）                          尿素  
クレアチニン  
【０１３５】
検尿
尿サンプルで下記のパラメータを測定した。
ビリルビン                            グルコース
タンパク質                            ウロビリノーゲン
血液                                  ケトン
沈渣鏡検                              体積
色及び外観                            ｐＨ
比重
【０１３６】
データ評価と統計
研究の実施の間に得られた数値データを群平均と標準偏差の算定に供し、全個体の数値を非数値の結果と共に記録した。分散の同質性にはＬｅｖｅｎｅＭｅｄｉａｎ検定を、標準化にはコルモゴルフ・スミルノフ検定を使用してデータ（ＥＣＧを除く）を解析した。同種のデータは、分散分析を使用して解析し、グループ間の有意差はダネット検定を使用して解析した。
異種データはクラスカル−ワリス検定を使用して解析し、対照群と処理群のグループ間の有意差はダン検定を使用して評価した。ｐ≦０．０５の有意水準で報告した。対照  との比較、すなわち群１と群２乃至４を比較する統計解析を行った。数値データをグループ平均と標準偏差の算定に供した。
【０１３７】
結果
用量組成の解析
解析によって全組成物が許容基準範囲内（±１０％）であることが決定した。調整濃度の薬剤濃度範囲は９４．９乃至１０４．５％であるため許容可能と考えられる。正式な組成物安定条件又は４℃での使用は可能でなかったが、分析の少なくとも４８時間前から冷蔵保存した組成物、又は調整した日に室温保存した組成物の結果から、全ての組成物の濃度は安定であったことが示された。
2013502579.tif 000021
表１６は試験大気濃度と推定薬剤レベルを要約している。
【０１３８】
群２乃至群４の全ての達成エアロゾル濃度はターゲットのリボフラビン５’−リン酸濃度に対して６．７％内であった。全リボフラビン５’−リン酸群の生成空気は８．１％乃至１０．７％の変動係数であり、２８日間通して安定であった。表１７は主研究の動物における全ての推定達成用量レベルを示している。
2013502579.tif 000022
【０１３９】
全リボフラビン５’−リン酸処理群の全ての推定達成用量は許容可能であり、予測用量レベルの１１．７％内であった。各毒物動態日の毒物動態評価、平均体重、及び達成リボフラビン５’−リン酸エアロゾル濃度を達成用量レベルの算定に使用した。表１８は、第１日目の達成リボフラビン５’−リン酸濃度を要約している。
2013502579.tif 000023
【０１４０】
表１９は、第２８日目の達成リボフラビン５’−リン酸用量を要約している。
2013502579.tif 000024
【０１４１】
粒子サイズ分析
表２０では、粒子サイズ分布の測定を要約している。
2013502579.tif 000025
【０１４２】
粒径分布測定によりエアロゾル化組成物を犬が吸入できることを確認した。呼吸器への沈着は１００％であると考えられる。
【０１４３】
相対湿度、温度、及び酸素濃度
試験期間の暴露大気の酸素濃度、温度、及び相対湿度を表２１に要約している。
2013502579.tif 000026
【０１４４】
暴露大気酸素濃度、温度及び相対湿度の幅は許容可能であると考えられる。
【０１４５】
生前観察
死亡率
本試験の経過で早期の死亡はなかった。
【０１４６】
医学的兆候
処置期間にリボフラビン５’−リン酸に関連する医学的兆候は見られなかった。暴露期間、発声、呼吸数の増加、活動及び唾液の増加は治療群と対照群で記録された。これらの医学的兆候は過渡期間であり、吸入暴露の拘束に関連したストレスの結果として一般的に観察される。したがって、これらの医学的所見は試験物に関連していると考えられない。臨床観察は、偶発的であり処置に関連していない。
【０１４７】
体重
リボフラビン５’−リン酸の処置に関連すると考えられる体重変化はなかった。
【０１４８】
食料消費
処置に関連すると考えられる食料消費の変化は記録されなかった。賦形剤の間に統計的な有意差（ｐ≦０．０５）は多くの日で記録された。しかし、賦形剤対照群との差は雌雄間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられる。
【０１４９】
眼科医学
治療に関連する眼球の変化は記録されなかった。持続性乳頭状の膜、絨毯組織の染色変化、核内の点状不透体及び隆起後眼会合線（ｐｒｏｍｉｎｅｎｔ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｓｕｔｕｒｅ  ｌｉｎｅｓ）等の所見が片方又は両方の眼について処置の終了時にあった。しかし、これらの所見は前処置の眼科評価に観察され、偶発的であり犬群集では通常であると考えられ、リボフラビン５’−リン酸の処置に関連はしていない。
【０１５０】
心電図検査
リボフラビン５’−リン酸の処置で心電図波形は、影響を受けなかった。このパラメータから得られたデータは、対照群又は試験物（リボフラビン５’−リン酸）のいずれの処置に関連する効果も支持していない。リボフラビン５’−リン酸の処置に関連すると考えられる血圧の変化はなかった。
【０１５１】
呼吸器パラメータ測定
リボフラビン５’−リン酸の処置によって影響すると考えられた呼吸器パラメータの評価（呼吸数、一回換気量、及び分時換気量）に変化はなかった。２処理群での呼吸数において賦形剤対照群との間に統計的に有意な差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、統計的に有意な変化は生物学的に重要ではないと考えられ、想定範囲内であった。
【０１５２】
毒物動態
リボフラビン５’−リン酸の一回又は複数回の反復暴露の後、処置動物（群２）の一匹からのみリボフラビン５’−リン酸の濃度が検出された。リボフラビン５’−リン酸は他の処理動物で検出されていないため動態は算出できなかった。
【０１５３】
第１日目
第１日目の対照群（群１）において、計測可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸はなく、その代謝物質（リボフラビン）については検出限界の僅か上にある６つのみが計測可能な濃度であった。リボフラビンのＴｍａｘ中央値が０．１２５時間を示した群２の雄を除き、全ての群で０時間（すなわち投与時点直後にＣｍａｘに到達した）であった。リボフラビンの平均Ｃｍａｘ値は、雄では低、中、高用量で、それぞれ０．０５８８μｇ／ｍＬ、０．２０５μｇ／ｍＬ及び０．３５８μｇ／ｍＬであり、雌では０．０５６６μｇ／ｍＬ、０．１６１μｇ／ｍＬ及び０．３９１μｇ／ｍＬであった。関連するＡＵＣ（０−Ｔ）値は、雄ではそれぞれ０．０３４４μｇ・時／ｍＬ、０．２９５μｇ・時／ｍＬ及び０．５８８μｇ・時／ｍＬであり、雌では、０．１５１μｇ・時／ｍＬ、０．４３０μｇ・時／ｍＬ及び０．６２５μｇ・時／ｍＬであった。第１日目の血漿のリボフラビンの暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ））は、雌雄共にリボフラビン５’−リン酸の投与用量に相関しており、リボフラビン５’−リン酸の一回投与を受けたリボフラビン血漿の暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ））については性に関連する明らかな違いはなかった。
【０１５４】
第２８日目
第２８日目の対照群において、検出限界の僅か上に３つの測定可能な濃度のリボフラビン５’−リン酸と、８つの測定可能な濃度のその代謝物（リボフラビン）があった。第２８日目のリボフラビンのＣｍａｘ値は雄では低、中、高用量でそれぞれ０．０６２３μｇ／ｍＬ、０．１４０μｇ／ｍＬ及び０．３８２μｇ／ｍＬであり、雌では０．０４９８μｇ／ｍＬ、０．１４７μｇ／ｍＬ及び０．２８９μｇ／ｍＬであった。関連するＡＵＣ（０−Ｔ）値は雄では、それぞれ０．０５８２μｇ・時／ｍＬ、０．２４３μｇ・時／ｍＬ及び０．５５４μｇ・時／ｍＬであり、雌では０．０８４６μｇ・時／ｍＬ、０．７７３μｇ・時／ｍＬ及び０．５０９μｇ・時／ｍＬであった。第１日目の血漿のリボフラビンの暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ））は、雌雄共にリボフラビン５’−リン酸に相関しており、リボフラビン５’−リン酸の一回投与を受けたリボフラビン血漿の暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ））については雌雄に関連する明らかな違いはなかった。第２８日目と第１日目のリボフラビンＣｍａｘ比は雄では低、中、高用量群において、それぞれ１．０６、０．６８３及び１．０７であり、雌では０．８８０、０．９１３及び０．７３９であった。関連するリボフラビンのＡＵＣ（０−Ｔ）比は、雄ではそれぞれ１．６９、０．８２４及び０．９４２であり、雌では０．５６０、１．８０及び０．８１４であった。
【０１５５】
図３は、２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸投与後の雄犬と雌犬における平均リボフラビン血漿濃度−時間プロファイルのグラフを示している。図４Ａ及び図４Ｂは２８日間のエアロゾル化リボフラビン５’−リン酸投与後の平均リボフラビンＣｍａｘ及びＡＵＣ（０−Ｔ）を示すグラフである。下の表は、２８日間のリボフラビン５’−リン酸のエアロゾル投与後のリボフラビンの毒物動態のパラメータを要約している。
2013502579.tif 000027
【０１５６】
血液学パラメータ
処置期間の処置に関連すると考えられる血液パラメータの変化はなかった。測定パラメータは実施例１に列挙したものと同じである。対照群との統計的な有意差（ｐ≦０．０５）は複数のパラメータで記録された。しかし、賦形剤対照群との差は雌雄の間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられた。
【０１５７】
凝集時間
凝集時間は処置によって変化しなかった。凝固計法を使用したプロトロンビン時間（ＰＴＴ）及び凝固計法を使用した活性部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を含む複数のパラメータを測定した。下記の表は処置前と第２９日目の凝集を要約している。
【０１５８】
臨床化学
処置期間の処置に関連すると考えられる臨床化学パラメータの変化は記録されなかった。複数のパラメータで対照群との間に統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、賦形剤対照群との差は雌雄の間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられた。
【０１５９】
尿検
処置に影響したと考えられる尿検パラメータ評価の変化はなかった。複数のパラメータで対照群との間に統計的な有意差（ｐ≦０．０５）が記録された。しかし、賦形剤対照群との差は雌雄の間で一貫しておらず、用量レベルに関連していないことを示しており、これらは偶発的であり、処置に関連していないと考えられた。
【０１６０】
臓器重量
脾臓重量の若干の増加が群４の雄（絶対と相対重量）と群３の雄（絶対又は体重に対する相対）において試験終了時に観察された。しかし、重量は想定の範囲内であり、統計的な有意差は、対照の３匹の雄の記録対照重量の全てが比較的軽かったことによるものと考えられ、雌ではそのように対応する重量変化は記録されなかった。他の組織についても偶然に統計的有意になった対照重量との差が記録され、同様に処置に無関係であり生物学的に重要でないと考えられた。
【０１６１】
肉眼的所見
試験物に関連すると考えられる肉眼での所見はなかった。対照群を含む治療群の殆どで散発性の所見がまれに記録され、試験物に関連していると考えられなかった。小型の前立腺と胸腺は年齢に関連した偶発的な所見であり、試験化合物に関連していないと考えられた。他の変化は方法に関連したもの、死によるもの、又は偶然によるものであり、試験物と関連していなかった。
【０１６２】
顕微鏡所見
処置期間の終了時に試験化合物に関連する病理組織学的所見の証拠はなかった。肺性慢性活動性炎症と気管支肺胞上皮炎症は異物型肉芽腫と頻繁に関連しており、対照群を含む殆どの処置群群で見られ、試験物に関連しているとは考えられなかった。毒物学的に重要である他の変化は犬の死によるものであり、用量に関連しておらず、発生率又は重症度が低く、対照動物と処置動物で発生しており、又は、ビーグルの齢と系統に付随的であるため、毒性学的に重要ではないと考えられた。
【０１６３】
考察
試験の目的は試化合物、リボフラビン５’−リン酸をビーグル犬に２８日間の口鼻吸入投与し、毒性と毒性動態プロファイルを測定することであった。ビーグル犬においてリボフラビン５’−リン酸の吸入暴露は忍容性が良好であり、本試験の経過で早期の死亡はなかった。臨床的観察、眼作用、心電図パターン、間接血圧計、呼吸測定又は全身性についての臨床病理の評価により有害な効果の検出は、いずれの群においても記録されなかった。試験物のリボフラビン５’−リン酸に関連していると考えられる肉体的所見又は顕微鏡的所見はなかった。処置動物において測定可能な血漿濃度のリボフラビン５’−リン酸がなかったため、動態は算定していない。雌雄ともに血漿中の代謝物（リボフラビン）濃度は測定可能であり、暴露量（ＣｍａｘとＡＵＣ（０−Ｔ）は用量に比例しているように見える。リボフラビン暴露において性差はなく、リボフラビン５’−リン酸の２８日間の連続投与後に蓄積はなかった。結果的に、リボフラビン５’−リン酸の試験物を最大６０分／日、２８日連続して吸入（口鼻）投与した後、ビーグル犬における無毒性量（ＮＯＥＬ）は高用量群で試験した１．３４１ｍｇ／ｋｇ／日であると考えられた。
【０１６４】
実施例３−治験第２相：レボフロキサシンと塩化マグネシウム組成物、又はリボフラビン５’−リン酸を含むプラセボのＣＯＰＤ患者への投与
塩化マグネシウムと組成したレボフロキサシンの安全性、忍容性、効果を評価する臨床試験を慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者に対して行った。本試験は第２層、多施設、無作為、二重盲検、プラセボ対照試験である。患者は、２４０ｍｇＢＩＤレボフロキサシンと塩化マグネシウムの組成物又はリボフラビン５’−リン酸を含むプラセボの投与を行った。表２３に試験薬とプラセボの組成を示す。
【０１６５】
試験薬とプラセボは改変ＰＡＲＩ  ｅＦｌｏｗ（登録商標）噴霧器を使用して投与した。本試験は少なくとも６回、１２回よりも少ない連続する治療サイクルを含む。各治療サイクルは２８日であった。各治療サイクルでは２４０ｍｇＢＩＤレボフロキサシンと塩化マグネシウムの組成物又はプラセボを５日間連続投与した。
2013502579.tif 000028
【０１６６】
患者集団
約３００の患者を試験した。本試験に含まれる患者は：（１）非増悪時でも殆ど毎日、粘液膿性痰（黄色、緑又は茶／黄褐色）の生産を有するＣＯＰＤの病歴があり；（２）測定努力呼気量（ＦＥＶ１）が予測ＦＥＶ１（気管支拡張薬投与後）の７０％未満であり、年齢、背丈、性を用いたＨａｎｋｉｎｓｏｎとＮ．Ｈａｎｅｓ基準を使用したスクリーニングべ―スの１秒率（ＦＥＶ１／ＦＶＣ）の予測値が０．７未満であり；（３）サイクル１の第１日目の１２か月前に、少なくとも２回の急性増悪の記録があり、抗生物質、全身性コルチコステロイド、入院又はこれらの治療の組み合わせの期間を含む急性増悪の期間を含み；（４）サイクル１の第１日目の３０日前に治療が必要な急性増悪期間がなく；（５）患者が慢性治療に長期間作用型の気管支拡張剤の吸入、及び／又は全身性ステロイドの吸入を受けた場合、サイクル１の第１日目の３０日前は安定的な治療病歴であり；及び（６）生涯喫煙量が少なくとも１０パックイヤーである；基準を有する者を含む。例えば、喘息、気管支癌、肺結核、嚢胞性線維症又は拡散気管支拡張症の一次診断の病歴といった臨床上関連性があると考えられるＣＯＰＤ以外の何らかの呼吸器障害を有する患者を本試験から除外する基準を含んでいる。
【０１６７】
患者集団は、有効性評価可能（ＥＥ）集団、改良治療意図（ＭＩＴＴ）集団、及び薬物動態（ＰＫ）集団が含まれている。ＥＥ集団は、主要なプロトコル違反することなく、治療サイクルの８０％を完了する試験に登録した全ての患者が含まれている。このＭＩＴＴ集団は、試験に登録した全ての患者が含まれ、少なくとも１用量の試験薬を受ける。ＰＫ集団は、少なくとも１用量の試験薬を受け、少なくとも１回のＰＫサンプルの採取を受ける全患者が含まれている。
【０１６８】
試験終点
有効性は：（１）全ての増悪事象の期間と深刻度合；（２）痰の微生物；（３）肺機能テスト；（４）生活の質  ／症状と兆候；（５）ＢＯＤＥ指標：を使用して評価した。
【０１６９】
増悪
ＣＯＰＤの急性発作は本試験の第一終点である。症候性呼吸器の劣化を含む急性発作は、抗生物質、全身性コルチコステロイド、入院、又はこれらの治療の組み合わせを含む。更に増悪は、痰生産の増加、膿性の高い痰、痰の色の変化、咳の増加、喘鳴の増加、胸部絞扼感、運動耐性の減少、疲労の増加、水分貯留、急性錯乱、呼吸困難の悪化によって特徴づけられる。    
【０１７０】
急性発作の深刻度合を測定には例えば、必要な薬物治療、必要な薬物治療の用量、急性発作の発症の日、及び急性発作の期間を含む基準を使用する。第一効果の分析は、レボフロキサシン治療群とプラセボ処置群の間の急性発作の度合の比較、及び／又はレボフロキサシン治療群とプラセボ処置群との全ての急性発作の深刻度の比較を含む。
【０１７１】
微生物評価
微生物評価は患者の痰のバクテリアを同定して定量した。塩化マグネシウムを配合したレボフロキサシン投与したＣＯＰＤ患者の痰はプラセボ投与の患者と比較して肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、β溶血性レンサ球菌（Ｂ−ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、カタル球菌（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びその他のバクテリアを含む低いバクテリア密度を有していた。レボフロキサシンを投与した患者では低いバクテリア密度が確認された。
【０１７２】
肺機能評価
全ての患者は強制肺活量（ＦＶＣ）及び努力性呼気（ＦＥＶ１）を測定して肺機能試験を行った。次いでＦＥＶ１／ＦＶＣ比、ＦＶＣパーセント、ＦＥＶ１パーセンを算定した。肺機能試験はアメリカ胸部疾患学会／ヨーロッパ呼吸器学会（ＡＴＳ／ＥＲＳ）の肺活量測定基準（２００５）によって行い、全てを参照することにより本明細書に組み込まれている。
【０１７３】
生活の質（ＱＯＬ）／兆候と症状
患者は兆候及び症状のアンケートである聖ジョージ呼吸器質問表（ＳＧＲＱ）に記入した。（Ｍｅｇｕｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ，ＣＯＰＤ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｔ  Ｇｅｏｒｇｅ’ｓ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ”Ｃｈｅｓｔ  １３２：４５６−６３全体を参照することによって本明細書に組み込まれている。）ＳＧＲＱは総合的な健康、日常生活、及び生活状態が与える影響を測定する疾病特異的な形式で設計されており、通常性（ｆｉｘｅｄ）、及び可逆性気道閉塞の患者用に開発されてきた。これら構成要素のスコアと略式スコアは１００点基準に基づいている。
【０１７４】
ＢＯＤＥインデックス
ＢＯＤＥインデックスは疾病の類型化に優れており、ＣＯＰＤの呼吸、認知及び全身の特徴を評価する多次元の等級システムである。肥満指数（Ｂ）気流閉塞（Ｏ）呼吸困難（Ｄ）及び運動能力（Ｅ）（Ｂ−Ｏ−Ｄ−Ｅ）に関連する指標である（Ｃｅｌｌｉ  ＢＲ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｂｏｄｙ−ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ，ａｉｒｆｌｏｗ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ｄｙｓｐｎｅａ，ａｎｄ  ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００４  Ｍａｒ  ４；３５０（１０）：１００５−１２，全体を参照することにより本明細書に組み込まれている）。従って、ＣＯＰＤの重症度とＣＯＰＤ患者の死のリスクを一定時間の短距離歩行による測定からＦＥＶ１、低酸素血症又は高二酸化炭素血症の存在を含む様々な指標を使用して等級化しうる。
【０１７５】
患者の６分の歩行試験（６ＭＷＴ）を含むＢＯＤＥ指標の測定した要素を評価をした。６ＭＷＴは測定表面を、患者が彼／彼女のペースで６分間歩ける距離を測定した。
【０１７６】
本明細書に示し、記載した本発明の好ましい実施態様は、単なる実施例としてとして提供しておりこれらの当業者には自明である。本発明から離れることなく多数の変形、変化、及び置換が当業者により行われるであろう。本明細書記載の本発明についての様々な代替的な実施態様が本発明の実施に使用されうると解釈すべきである。本発明の範囲を規定する下記の請求は発明の範囲を定義し、それによって、これらの特許請求の範囲及びその均等物の範囲内でメソッドや構造体がカバーされることを意図している。
【０１７７】
本明細書に同程度に参照され、組み込まれている全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願を特定し、指示するように参照され、組み込まれている。
【図１】
2013502579.tif 000029
【図２Ａ】
2013502579.tif 000030
【図２Ｂ】
2013502579.tif 000031
【図３】
2013502579.tif 000032
【図４Ａ】
2013502579.tif 000033
【図４Ｂ】
2013502579.tif 000034
【国際調査報告】
2013502579.tif 000035
2013502579.tif 000036
2013502579.tif 000037
2013502579.tif 000038
2013502579.tif 000039