(57)【要約】本発明は、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸、バシトラシン等のペプチドの生成におけるその使用方法、及びそれを生成する方法に関する。
2013509366.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸。
【請求項２】
（２Ｓ，３Ｓ）配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
（２Ｒ，３Ｓ）配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
（２Ｓ，３Ｒ）配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
（２Ｒ，３Ｒ）配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
アミノ基が保護されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
カルボキシル基が保護されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ペプチドを生成するための、請求項１に記載の化合物の使用方法。
【請求項９】
前記ペプチドがバシトラシンである、請求項８に記載の使用方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物を含む組成物。
【請求項１１】
ビニルグリニャール試薬をハロゲン化アルキルとクロスカップリングさせることを含む、請求項１に記載の化合物を生成する方法。
【請求項１２】
反応が、Ｌｉ２ＣｕＣｌ４により触媒される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ハロゲン化アルキルが、４位にハロゲン化物を有するバリンの誘導体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記誘導体が、４−ヨード−Ｎ−ファタロイルバリンメチルエステルである、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のアミノ酸化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
大多数のタンパク質は、２０種の異なるα−アミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンで作られている。
【０００３】
しかしながら、ホモシステイン、オルニチン、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、セレノシステイン、ホルミルメチオニン、ホスホセリン、アセチルセリン、メチルアルギニン等の他のアミノ酸を含む生物学的に活性なペプチドが多数存在する。
【０００４】
Ｄ配置のアミノ酸は、非リボソーム的に合成された細菌ペプチドで一般的であり、リボソーム的に合成されたタンパク質ではあまり一般的ではない。例えば、非リボソーム的に合成されたバシトラシンでは、４位、７位、９位、及び１１位のアミノ酸残基は、通常Ｄ配置である（Ｇｌｕ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、及びＡｓｐ）。
【０００５】
バシトラシンは、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）により天然で産生されるペプチド抗生物質である。幾つかのバシトラシンが特定されており、それらの中でもバシトラシンＡが最も重要であり、高い活性を有する（非特許文献１）。バシトラシンＡの一次構造は、ＮＨ２−Ｌ−ＩＩｅ１−Ｌ−チアゾリン２−Ｌ−Ｌｅｕ３−Ｄ−Ｇｌｕ４−Ｌ−Ｉｌｅ５−Ｌ−Ｌｙｓ６−Ｄ−Ｏｒｎ７−Ｌ−Ｉｌｅ８−Ｄ−Ｐｈｅ９−Ｌ−Ｈｉｓ１０−Ｄ−Ａｓｐ１１−Ｌ−Ａｓｎ１２−ＣＯＯＨであり、Ｌ−Ｌｙｓ６のε−アミノ基とＬ−Ａｓｎ１２のＲ−カルボキシル基との間で環化されている。
【０００６】
従来技術
幾つかの非リボソーム的に合成されたペプチドは、異常アミノ酸を含む。例えば、サイクロスポリンＡは、２（Ｓ）−アミノ−３（Ｒ）−ヒドロキシ−４（Ｒ）−メチル−６（Ｅ）−オクテン酸を含み、これは、サイクロフィリンの細胞内受容体に結合するために重要であり、したがってその免疫抑制活性にとって重要である（非特許文献２）。
【０００７】
幾つかの非通常アミノ酸は、イソロイシンの構造に似ている：
・新規のメチオニン類似体である２−アミノ−５−メチル−５−ヘキセン酸は、ストレプトミセスの発酵ブロスから単離された（非特許文献３）。
【０００８】
・４メチレン−ノルロイシン及び２−アミノヘプタ−６−エン酸は、式：Ｃ７Ｈ１３ＮＯ２を有する化合物である。
・４メチル−ノルロイシンは、組換えタンパク質に組み込むことができるイソロイシン誘導体である（非特許文献４）。
【０００９】
・２−アミノ−３−メチル−４−ペンテン酸は、タンパク質に組み込むことができる不飽和イソロイシン類似体である（非特許文献５）。
・アマニタ・ソリタリア（Ａｍａｎｉｔａ  ｓｏｌｉｔａｒｉａ）の不飽和ノルロイシン。化学的及び薬理学的研究（非特許文献６）。
【００１０】
・セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）により産生される抗代謝剤であるベータ−メチルノルロイシン、（非特許文献７）。
・特許文献１には、多次元コンビナトリアル化学ライブラリーに使用されるアミノ酸の種々のアリル誘導体が記載されている。
【００１１】
・アリルグリシン及びクロチルグリシンは、非特許文献８に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第６１６８９１２号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｅｐｐｅｒｓｏｎ及びＭｉｎｇ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３９巻、１４号、２０００年、４０３７〜４５頁
【非特許文献２】Ｏｆｆｅｎｚｅｌｌｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２６８巻、３５号、１９９３年
【非特許文献３】Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ３２巻  １１号、１１１８〜１１２４頁、１９７９年
【非特許文献４】Ｍｕｒａｍａｔｓｕら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ、３１巻、５号、２００３年、９７９〜９８７頁
【非特許文献５】Ｍｏｃｋら、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ  ７巻  １号、２００６年、８３〜８７頁
【非特許文献６】Ｃｈｉｌｔｏｎら、Ｌｌｏｙｄｉａ  ３６巻  ２号、１９７３年、６９〜７３頁
【非特許文献７】Ｓｕｇｉｕｒａら、Ｊ  Ａｎｔｉｂｉｏｔ、３４巻  １０号、１９８１年  １２７８〜８２頁
【非特許文献８】Ｋｕｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１４８巻、１号、１９８１年
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、化合物２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸に関する。
本発明者らは、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸という名称を使用するが、それは、２−アミノ−３−メチル−５−ヘキセン酸と同じ化合物を包含する。
【００１５】
このアミノ酸化合物の遊離形態での構造は、式Ｉにより表される。
【００１６】
【化１】
2013509366.tif 000003
式Ｉは、フィッシャー投影式として解釈されるべきではなく、むしろ立体化学を特定しない化合物として解釈されるべきである。
【００１７】
式Ｉのアミノ酸は、２個のキラル炭素原子を含む。本発明は、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸の４つの立体異性体を包含する：
（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸、
（２Ｒ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸、
（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸、及び
（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸。
【００１８】
更に、本発明は、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸の塩及びイオンを包含する。
更に、本発明は、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸のアミノ保護及びカルボキシ保護誘導体を包含する。
【００１９】
本発明者らは、２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸について、５−メチレン−イソロイシンという名称を提案し使用する。したがって、５−メチレン−イソロイシン側鎖は、以下の式で表すことができる構造−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２を有する。
【００２０】
【化２】
2013509366.tif 000004
また、本発明は、バシトラシンを生成するための５−メチレン−イソロイシンの使用方法、及び５−メチレン−イソロイシンを生成するためのプロセスに関する。
【００２１】
５−メチレン−イソロイシンは、バシトラシンＪ１、バシトラシンＪ２、バシトラシンＪ３、バシトラシンＫ１、バシトラシンＫ２、バシトラシンＫ３、及びバシトラシンＬを生成するために使用することができる。
【００２２】
本発明の態様は、下記の本発明の説明及び／又は添付の特許請求の範囲に示されている特徴により得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ】５−メチレン−イソロイシン残基を５位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＪ１）の構造を示す図である。
【図１Ｂ】５−メチレン−イソロイシン残基を８位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＪ２）の構造を示す図である。
【図１Ｃ】５−メチレン−イソロイシン残基を１位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＪ３）の構造を示す図である。
【図１Ｄ】５−メチレン−イソロイシン残基を５位及び８位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＫ１）の構造を示す図である。
【図１Ｅ】５−メチレン−イソロイシン残基を１位及び５位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＫ２）の構造を示す図である。
【図１Ｆ】５−メチレン−イソロイシン残基を１位及び８位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＫ３）の構造を示す図である。
【図１Ｇ】５−メチレン−イソロイシン残基を１位、５位、及び８位に有するバシトラシン（＝バシトラシンＬ）の構造を示す図である。
【図２】実施例で開示されている５−メチレン−イソロイシンの生成経路を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
幾つかの高活性バシトラシンは、以下の構造を有する非通常アミノ酸側鎖を含む：
【００２５】
【化３】
2013509366.tif 000005
本発明者らは、上記の構造を含むバシトラシンについて、バシトラシンＪ、Ｋ、又はＬという名称を提案し使用する。これらのバシトラシンの構造は、図１Ａ〜Ｇに表されている。
【００２６】
定義
「バシトラシン」は、以下の構造（アミノ酸残基は上付きで付番されている）を含むペプチド化合物である。
【００２７】
【化４】
2013509366.tif 000006
式中、Ｘは、以下の式であり、
【００２８】
【化５】
2013509366.tif 000007
Ｒは、イソロイシン、バリン、又は５−メチレン−イソロイシンのアミノ酸残基の側鎖であり、
Ｙ及びＺは、独立して、イソロイシン、バリン、又は５−メチレン−イソロイシンのアミノ酸残基であり、
Ｔｈｚは、以下のチアゾリン環であり、
【００２９】
【化６】
2013509366.tif 000008
２’は、Ｘに結合されており、４’は、Ｌｅｕのα炭素に結合されており、
Ｌｅｕは、ロイシンアミノ酸残基であり、
Ｇｌｕは、グルタミンアミノ酸残基であり
Ｌｙｓは、Ｙ及びＯｒｎとペプチド結合を形成するリジンアミノ酸残基であり、そのε−アミンは、ペプチド結合によりアスパラギンのα−カルボキシル基に結合されており、
Ｏｒｎは、オルニチンアミノ酸残基であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニンアミノ酸残基であり、
Ｈｉｓは、ヒスチジンアミノ酸残基であり、
Ａｓｐは、アスパラギン酸アミノ酸残基であり、
Ａｓｎは、Ａｓｐとペプチド結合を形成するアスパラギンアミノ酸残基であり、そのα−カルボキシル基は、ペプチド結合によりリジンのε−アミンに結合されている。
【００３０】
本出願で使用される場合、「バシトラシン」は、生成方法に関わらず、上記の一次構造を有するあらゆる化合物を包含することが意図されている。したがって、用語「バシトラシン」には、バチルス・リケニフォルミスにより天然で産生される抗生物質化合物が含まれるが、上記の一次構造を有するｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成化合物（合成物）及び半合成化合物も含まれる。また、「バシトラシン」は、ｐＨに応じて変化する電荷に関わらず、上記の一次構造を有するあらゆる化合物を包含することが意図されている。また、「バシトラシン」は、立体化学に関わらず、上記の一次構造を有するあらゆる化合物を包含することが意図されている。また、「バシトラシン」は、上記の一次構造を有する化合物の塩及び水和物を包含することが意図されている。
【００３１】
「少なくとも１つの５−メチレン−イソロイシン残基を含むバシトラシン」は、イソロイシン又はバリン残基（複数可）が、１位及び／又は５位及び／又は８位で５−メチレン−イソロイシン残基と置換される場合に生成されることになる構造を含むあらゆるバシトラシンを包含することが意図されている。
【００３２】
バシトラシンのＮ末端アミノ基及び／又はチアゾリン環が酸化されると、相当量の抗菌活性が失われる。例えば、低活性化合物バシトラシンＦは、アミノ−チアゾリン部分の代りにケト−チアゾール部分を含む（Ｃｒａｉｇら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ、２２巻、１９５７年、１３４５〜１３５３頁）。
【００３３】
「アミノ酸」は、アミン基及びカルボキシル基を両方とも含むあらゆる化合物である。ほとんどのタンパク質は、２０種の異なるＬ配置の標準的アミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンで構築されている。
【００３４】
「アミノ酸残基」は、以下のものを含むペプチドの単位である：
−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ（Ｃ末端）
又は
ＮＨ２−ＣＨＲ−ＣＯ−（Ｎ末端）
又は
−ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯ−（内部）
式中、Ｒは、
グリシンの場合は、Ｈであり、
アラニンの場合は、ＣＨ３であり、
セリンの場合は、ＯＨであり、
システインの場合は、ＣＨ２ＳＨであり、
イソロイシンの場合は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり、
ロイシンの場合は、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
バリンの場合は、ＣＨ（ＣＨ３）２、などである。
【００３５】
「アミノ酸側鎖」は、「アミノ酸残基」のＲ基である。例えば、Ｒ基は、
イソロイシンの場合は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり、
ロイシンの場合は、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
バリンの場合は、ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【００３６】
「抗菌活性」は、細菌の増殖、代謝、若しくは生殖を阻害するか、細菌の死滅を増加させるか、又は細菌の病原性を低減するあらゆる活性である。
バシトラシンのアミノ酸残基の「位置」は、イソロイシン、バリン、又は５−メチレン−イソロイシンであってもよい１位のＮ末端（本出願では、バシトラシンを示す図の全てにおいて左端にある）から付番されている。したがって、Ｌｙｓは位置番号６であり、Ａｓｎは位置番号１２である。
【００３７】
バシトラシンでは、「１位」は、このアミノ酸残基が部分的にチアゾリン環に組み込まれているため、特別である。したがって、バシトラシンの１位のアミノ酸残基は、以下の通常のＮ末端単位：
【００３８】
【化７】
2013509366.tif 000009
を含んでいないが、その代りに、チアゾリンに結合された
【００３９】
【化８】
2013509366.tif 000010
を含む。
【００４０】
「組成物」とは、２つ以上の異なる化合物を含む任意の混合物であり、例えば、２つの活性医薬成分の混合物、又は１つの活性医薬成分及び１つ若しくは複数の医薬賦形剤の混合物である。
【００４１】
「医薬組成物」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好適な任意の組成物である。したがって、そのような組成物は、皮膚、皮下、静脈内、非経口的等に投与することができる。
５−メチレン−イソロイシンは、独立してＲ又はＳ配置であってもよい２つのキラル炭素原子を含む。
【００４２】
少なくとも１つの５−メチレン−イソロイシン残基を１位、５位、又は８位に含むバシトラシンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、望ましくない細菌増殖を阻害するために使用することができる。したがって、これら化合物は、細菌感染症を有する動物又はヒトに投与すると、治療効果を示すことができる。
【００４３】
本発明は、新規のバシトラシンの生成、例えばバシトラシンＪ１〜３、Ｋ１〜３、又はＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成に使用することができる化合物５−メチレン−イソロイシンに関する。
【００４４】
ＬｅｅらによるＪ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ、６１巻、１２号、１９９６年、３９８３〜３９８６頁、又は国際公開第１９９７４７３１３号に記載の方法で、イソロイシン又はバリンを５−メチレン−イソロイシンに置換することにより、抗菌活性を有するバシトラシンを生成することができる。
【００４５】
本発明は、以下の例示的な例によってではなく、特許請求の範囲により規定される。
（実施例）
実施例１：
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル、及び（２Ｓ，３Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル
ＴＨＦ中の臭化ビニルマグネシウム（１．０Ｍ、８３．６４ｍＬ、８３．６４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中（２Ｓ，３Ｓ）及び（２Ｓ，３Ｒ）−４−ヨード−Ｎ−ファタロイルバリン（ｐｈａｔａｌｏｙｌｖａｌｉｎｅ）メチルエステル（２６．９６ｇ、６９．６８ｍｍｏｌ）、ＣｕＣｌ２（０．４７ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、乾燥ＬｉＣｌ（０．２９ｇ、７．０ｍｍｏｌ）の予冷却（−１０℃）混合物に添加する。反応混合物をこの温度で一晩撹拌する。反応混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液（水溶液）（３００ｍＬ）に添加する。相を分離させ、水相をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出する。混合した有機相を、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳ０４）、溶媒を減圧下で除去する。１０ｇの生成混合物を単離する。（２Ｓ，３Ｓ）及び（２Ｓ，３Ｒ）生成物を、カラムクロマトグラフイーにより分離する。
【００４６】
実施例２：
（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸
（２Ｓ，３Ｒ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（２．０１ｇ、７．００ｍｍｏｌ）を、６Ｎ塩酸及び氷酢酸（６２．５ｍＬ）の２：１混合液に溶解し、溶液を還流しながら４時間加熱する。溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。生成物を水で処理し、溶液をろ過する。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を水に溶解し、その後溶液を、アンバーライトＩＲ１２０陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）のカラムにアプライする。カラムを水（２．５Ｌ）で洗浄し、その後アンモニア水溶液（２．５Ｌ）で溶出する。溶出液を、アンモニアが検出できなくなるまで沸騰させ、その後減圧下で濃縮して、表題の化合物を得た（０．５ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）。
【００４７】
実施例３：
（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸
（２Ｓ，３Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（２．０１ｇ、７．００ｍｍｏｌ）を、６Ｎ塩酸及び氷酢酸（６２．５ｍＬ）の２：１混合液に溶解し、溶液を還流しながら４時間加熱する。溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。生成物を水で処理し、溶液をろ過する。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を水に溶解し、その後溶液を、アンバーライトＩＲ１２０陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）のカラムにアプライする。カラムを水（２．５Ｌ）で洗浄し、その後アンモニア水溶液（２．５Ｌ）で溶出する。溶出液を、アンモニアが検出できなくなるまで沸騰させ、その後減圧下で濃縮して、表題の化合物を得た（０．５ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）。
【００４８】
実施例４：
（２Ｒ，３Ｒ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル、及び（２Ｒ，３Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル
ＴＨＦ中の臭化ビニルマグネシウム（１．０Ｍ、８３．６４ｍＬ、８３．６４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中（２Ｓ，３Ｓ）及び（２Ｓ，３Ｒ）−４−ヨード−Ｎ−ファタロイルバリンメチルエステル（２６．９６ｇ、６９．６８ｍｍｏｌ）、ＣｕＣｌ２（０．４７ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、乾燥ＬｉＣｌ（０．２９ｇ、７．０ｍｍｏｌ）の、予冷却（−１０℃）混合物に添加する。反応混合物をこの温度で一晩撹拌する。反応混合物を、飽和塩化アンモニウム溶液（水溶液）（３００ｍＬ）に添加する。相を分離させ、水相をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出する。混合した有機相を、飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳ０４）、溶媒を減圧下で除去する。１０ｇの生成混合物を単離する。（２Ｒ，３Ｓ）及び（２Ｒ，３Ｒ）生成物を、カラムクロマトグラフイーにより分離する。
【００４９】
実施例５：
（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸
（２Ｒ，３Ｒ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（２．０１ｇ、７．００ｍｍｏｌ）を、６Ｎ塩酸及び氷酢酸（６２．５ｍＬ）の２：１混合液に溶解し、溶液を還流しながら４時間加熱する。溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。生成物を水で処理し、溶液をろ過する。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を水に溶解し、その後溶液を、アンバーライトＩＲ１２０陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）のカラムにアプライする。カラムを水（２．５Ｌ）で洗浄し、その後アンモニア水溶液（２．５Ｌ）で溶出する。溶出液を、アンモニアが検出できなくなるまで沸騰させ、その後減圧下で濃縮して、表題の化合物を得た（０．５ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）。
【００５０】
実施例６：
（２Ｒ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸
（２Ｒ，３Ｓ）−２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−３−メチル−ヘキサ−５−エン酸メチルエステル（２．０１ｇ、７．００ｍｍｏｌ）を、６Ｎ塩酸及び氷酢酸（６２．５ｍＬ）の２：１混合液に溶解し、溶液を還流しながら４時間加熱する。溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。生成物を水で処理し、溶液をろ過する。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を水に溶解し、その後溶液を、アンバーライトＩＲ１２０陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）のカラムにアプライする。カラムを水（２．５Ｌ）で洗浄し、その後アンモニア水溶液（２．５Ｌ）で溶出する。溶出液を、アンモニアが検出できなくなるまで沸騰させ、その後減圧下で濃縮して、表題の化合物を得た（０．５ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）。
【図１Ａ】
2013509366.tif 000011
【図１Ｂ】
2013509366.tif 000012
【図１Ｃ】
2013509366.tif 000013
【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
2013509366.tif 000017
【図２】
2013509366.tif 000018
【国際調査報告】
2013509366.tif 000019
2013509366.tif 000020