(57)【要約】粘膜炎治療のための単離カリクレイン阻害剤を含む方法、キットおよび組成物を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
粘膜炎の治療または予防方法であり、前記方法は、
粘膜炎を呈するまたは粘膜炎の発現リスクのある対象に有効量の単離カリクレイン阻害剤を投与すること、
を含む。
【請求項２】
前記カリクレイン阻害剤が血漿カリクレイン阻害剤である、請求項１の方法。
【請求項３】
前記血漿カリクレイン阻害剤がアミノ酸配列：Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｃｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｘａａ２０  Ｘａａ２１  Ｘａａ２２  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｘａａ２５  Ｘａａ２６  Ｘａａ２７  Ｘａａ２８  Ｘａａ２９  Ｃｙｓ  Ｘａａ３１  Ｘａａ３２  Ｐｈｅ  Ｘａａ３４  Ｘａａ３５  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｘａａ３９  Ｘａａ４０  Ｘａａ４１  Ｘａａ４２  Ｘａａ４３  Ｘａａ４４  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｘａａ４７  Ｘａａ４８  Ｘａａ４９  Ｘａａ５０  Ｃｙｓ  Ｘａａ５２  Ｘａａ５３  Ｘａａ５４  Ｃｙｓ  Ｘａａ５６  Ｘａａ５７  Ｘａａ５８（配列番号１）を含むポリペプチドを含み、
ここでＸａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４、Ｘａａ５６、Ｘａａ５７もしくはＸａａ５８はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であるかもしくは存在せず；
Ｘａａ１０は、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１１は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、ＡｌａおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１３は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＬｙｓおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１５は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＡｓｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１７は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、ＧｌｎおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、ＧｌｎおよびＡｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１９は、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、ＡｓｎおよびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２１は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＨｉｓおよびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２３は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３２は、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、ＧｌｙおよびＶａｌからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３４は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ａｓｎ、ＧｌｙおよびＬｅｕからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３５は、Ｔｙｒ、ＴｒｐおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３９は、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、ＳｅｒおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４０は、ＧｌｙおよびＡｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４３は、ＡｓｎおよびＧｌｙからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４５は、ＰｈｅおよびＴｙｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに
前記ポリペプチドがカリクレインを阻害する、
請求項２の方法。
【請求項４】
Ｘａａ１０がＡｓｐである、請求項３の方法。
【請求項５】
Ｘａａ１１がＡｓｐである、請求項３の方法。
【請求項６】
Ｘａａ１３がＰｒｏであり、Ｘａａ１５がＡｒｇであり、Ｘａａ１６がＡｌａであり、Ｘａａ１７がＡｌａであり、Ｘａａ１８がＨｉｓであり、およびＸａａ１９がＰｒｏである、請求項３の方法。
【請求項７】
Ｘａａ２１がＴｒｐである、請求項３の方法。
【請求項８】
Ｘａａ３１がＧｌｕである、請求項３の方法。
【請求項９】
Ｘａａ３２がＧｌｕである、請求項３の方法。
【請求項１０】
Ｘａａ３４がＩｌｅである、請求項３の方法。
【請求項１１】
Ｘａａ３５がＴｙｒである、請求項３の方法。
【請求項１２】
Ｘａａ３９がＧｌｕである、請求項３の方法。
【請求項１３】
前記ポリペプチドが、Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）を含む、請求項３の方法。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが、さらにアミノ末端Ｍｅｔ残基の前にＧｌｕ−Ａｌａ配列を含む、請求項１３の方法。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが、Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）からなる、請求項３の方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドが、Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）を含む、請求項３の方法。
【請求項１７】
前記ポリペプチドが、Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）からなる、請求項３の方法。
【請求項１８】
血漿カリクレイン阻害剤が、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列および免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列を含む血漿カリクレイン結合タンパク質を含み、
前記免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列が、本明細書に記載のタンパク質の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、ならびに
前記免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列が、本明細書に記載のタンパク質の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、
前記タンパク質が血漿カリクレインと結合する、
請求項２の方法。
【請求項１９】
免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列が、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、ならびに
免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列が、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を（それぞれ）含む、請求項１８の方法。
【請求項２０】
前記重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域がＸ８１−Ｂ０１由来であり、前記軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域がＸ８１−Ｂ０１由来である、請求項１８の方法。
【請求項２１】
前記重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域がＸ６７−Ｄ０３由来であり、前記軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域がＸ６７−Ｄ０３由来である、請求項１８の方法。
【請求項２２】
前記粘膜炎が、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される、請求項１の方法。
【請求項２３】
前記粘膜炎が口腔粘膜炎である、請求項２２の方法。
【請求項２４】
パリフェルミンを投与することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項２５】
請求項１の治療有効量の単離カリクレイン阻害剤および治療有効量のパリフェルミンを含む組成物。
【請求項２６】
キットであり、前記キットが以下、
単離カリクレイン阻害剤を含む容器；および
粘膜炎治療用の前記カリクレイン阻害剤の使用説明書、
を含むキット。
【請求項２７】
さらにパリフェルミンを含む容器を含む、請求項２６のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００９年１月６日に出願された米国仮出願第６１／１４２，７４６号の優先権を主張する。先の出願の開示は本出願の開示の一部である（および参照することにより本出願の開示に組み込まれる）とみなされる。
【背景技術】
【０００２】
粘膜炎は、高用量化学療法（ＣＴ）および／または放射線療法（ＲＴ）レジメンの普遍的かつ重篤な副作用であり、しばしば口、食道、咽頭および消化管の紅斑および有痛性潰瘍性病変として顕在化し、世界中で少なくとも６００，０００人の治療の成功を脅かす。癌細胞の死滅を目的としたこれらの細胞減少治療は、他の急増殖細胞（口および咽頭の内側ならびに消化管など）も無差別に破壊し得る。
【０００３】
粘膜炎の発現過程は複合的である。典型的には、粘膜炎症状はＣＴ投与後５〜８日に発現し、約７〜１４日間持続する。現在、粘膜炎の病理生物学は５相過程：開始、メッセンジャー生成を伴うシグナル伝達、増幅、潰瘍形成、および最終的な治癒として定義されている。
【０００４】
口腔および胃腸（ＧＩ）粘膜炎は、高用量化学療法および造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）施行患者の最大１００％、放射線療法を施行する頭頸部悪性腫瘍患者の８０％、ならびに化学療法を施行する広範囲の患者に影響を及ぼし得る。ほとんどの癌治療において、粘膜炎にかかる患者は約５〜１５％である。しかしながら、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）により最大４０％が粘膜炎となり、１０〜１５％が３〜４グレードの口腔粘膜炎にかかる。イリノテカン治療は、２０％を超える患者において重度のＧＩ粘膜炎に関連している。７５〜８５％の骨髄移植レシピエントが粘膜炎を発現し、そのうち口腔粘膜炎が、特にメルファラン使用時、最も普遍的であり、最も衰弱をもたらす。３グレードの口腔粘膜炎では、患者は固形食の食事ができず、４グレードの患者では摂飲もできない。頭頸部に対するまたは腹部や骨盤に対する放射線療法は３グレードおよび４グレードの口腔粘膜炎またはＧＩ粘膜炎にそれぞれ関連しており、しばしば患者の５０％を超える。頭頸部放射線療法を施行する患者間では、疼痛および口腔機能低下が療法終了後も長く持続し得る。分割線量では、ほとんどの試験において、７０％を超える患者の粘膜炎リスクが上昇する。
【０００５】
口腔粘膜炎は、造血幹細胞移植のための骨髄毒性療法施行中に口腔粘膜炎を発現した患者により抗癌療法の最も衰弱させる副作用として確認されており、口腔粘膜炎患者の７０％〜８０％の最も重症な粘膜毒性に関連している。結果として生じる重度の口腔粘膜炎の罹患率は、オピオイド鎮痛薬を必要とするほど重度の疼痛、口および咽頭内潰瘍形成に起因する嚥下困難または嚥下不能（重症な場合、完全非経口栄養法（ＴＰＮ）および再水和を必要とし得る）、患者の意思伝達能力を妨げ得る会話困難または会話不能を含み得る。重要点は、口腔粘膜炎の発現は、しばしば、疾患が可能な治療上の処置の潜在的な完全な便益を頻繁に限定するように、腫瘍学者による化学療法または放射線療法の完全用量およびレジメンの処方を妨げる。口腔粘膜炎という負担の発現は、病院費用を頭頸部癌患者で４，０００米ドル、骨髄移植施行患者で４３，０００米ドル上乗せすると推定されている。
【０００６】
口腔粘膜炎の管理は主に支持的である。疼痛緩和を補助するには、角氷を吸うこと、抗酸化剤、およびうがい薬を含む多くの異なる方法がある。抗ヒスタミン剤、麻酔薬、抗炎症剤（コルチコステロイドなど）、抗生剤、および抗真菌剤を配合したいくつかのうがい薬が利用可能である。麻薬性鎮痛剤も疼痛緩和を補助することを示し得る。他の方法としては、抗菌剤、抗炎症剤、および良好な口腔ケアが挙げられる。
【０００７】
パリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（商標））（ヒトケラチン生成細胞増殖因子（ＫＧＦ））が口腔粘膜炎に対して承認されている唯一の薬剤であり、造血幹細胞支持／移植を必要とする骨髄毒性療法を受けている血液悪性腫瘍患者における重度の口腔粘膜炎の発現および期間を低減することが示されている。しかしながら、ＨＳＣＴが示すのは癌集団の小さな部分集合であり、ほとんどの固形癌がＫＧＦ受容体を保有するため、この薬剤は潜在的に望ましくないアゴニスト作用を有し得る。したがって、癌のより大きな市場およびその治療に起因して生じる口腔粘膜炎に対してパリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（商標））が適応となる見込みは非常に低い。ＨＳＣＴ以外のさらなる適応症試験が現在進行中であり、移植片対宿主疾患、頭頸部癌、結腸癌２／３期、多発性骨髄腫、リンパ腫および白血病、ならびに小児ＨＳＣＴ集団における薬剤の使用を含む。
【０００８】
したがって、粘膜炎の治療において満たされていない重要な必要性が残っている。
【発明の概要】
【０００９】
本明細書では、粘膜炎、特に口腔粘膜炎の治療方法を開示する。１つの態様では、本発明は、パリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（商標））（ヒトケラチン生成細胞増殖因子（ＫＧＦ））などの別の薬剤と任意に併用した、治療有効量の単離カリクレイン阻害剤の投与を含む粘膜炎の治療方法を提供する。本明細書に記載の方法は、有効量のカリクレイン阻害剤を投与することを含む。かかる量は、検出可能な改善を生じるのに十分な量であることもでき、少なくとも１つの症状を低減もしくは寛解するのに十分な量であることもでき、少なくとも１つの生理的パラメータを調節（例えば、改善）するのに十分な量であることもでき、またはより重度の疾病の発現を統計的に有意な程度予防するのに十分な量であることもできる。
【００１０】
本明細書では、粘膜炎（特に、口腔粘膜炎）の予防方法を開示する。１つの態様では、本発明は、（例えば、粘膜炎発現リスクのある対象において）、パリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（商標））（ヒトケラチン生成細胞増殖因子（ＫＧＦ））などの別の薬剤と任意に併用した、予防有効量の単離カリクレイン阻害剤の投与を含む粘膜炎の予防方法を提供する。本明細書に記載の方法は、有効量のカリクレイン阻害剤を投与することを含む。かかる量は、少なくとも１つの症状または１つの生理的パラメータを低減または遅延化または寛解するのに十分な量であることができる。粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、化学療法（例えば、高用量化学療法）および／または放射線療法レジメンを施行予定の、施行中の、または施行予定の対象であり得る。別の例では、粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、癌（例えば、頭頸部癌）と診断された対象であり得る。
【００１１】
本方法、組成物およびキットにおいて有用なカリクレイン阻害剤は、例えば、血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）であってもよいし、または組織カリクレイン阻害剤であってもよい。いくつかの実施形態では、阻害剤は血漿カリクレイン阻害剤である。
【００１２】
本方法、組成物およびキットにおいて有用なカリクレイン阻害剤は、本明細書に記載の任意のＫｕｎｉｔｚドメインのポリペプチドであってもよいし、標準的なアッセイにおいて決定した場合にカリクレイン阻害剤ポリペプチドがカリクレインと結合するおよびカリクレインを阻害するのであれば、任意のかかるＫｕｎｉｔｚドメインを含むより大きなポリペプチドであってもよいし、カリクレイン結合タンパク質（例えば、抗体、例えば、抗血漿カリクレイン抗体）であってもよいし、または本明細書に記載の他のカリクレイン阻害剤であってもよい。
【００１３】
いくつかの実施形態では、カリクレイン阻害剤は、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）もしくはその断片（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸など）を含むまたはそれらからなる。
【００１４】
いくつかの実施形態では、カリクレイン阻害剤は、アミノ酸配列Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）を含むまたはそれらからなる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、カリクレイン阻害剤は、血漿カリクレイン結合タンパク質（例えば、抗体、例えば、本明細書に記載の抗血漿カリクレイン抗体）を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体、例えば、ヒト抗体）は、本明細書に記載のタンパク質と同一エピトープと結合するまたは結合について競合する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１と同一エピトープと競合するまたは結合する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３と同一エピトープと競合するまたは結合する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、プレカリクレイン（例えば、ヒトプレカリクレイン）と結合しないが、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）の活性形態と結合する。
【００２１】
ある実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレイン、またはその断片の触媒ドメインの活性部位またはその付近と結合するか、血漿カリクレインの活性部位と重複するエピトープと結合する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレインの触媒三連構造：Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、および／またはＳｅｒ５７８（ヒト配列に基づいてナンバリング）を形成するアミノ酸１個以上と結合する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｓｅｒ４７９、Ｔｙｒ５６３、および／またはＡｓｐ５８５（ヒト配列に基づいてナンバリング）のアミノ酸１個以上と結合する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニン産生を、基準値、例えば、タンパク質が存在しないことを除いて同一条件下の第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニン産生と比較して約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％超低減する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、１０００、５００、１００、または１０ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【００２６】
１つの実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は同一ポリペプチド鎖の成分である。
【００２７】
別の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は異なるポリペプチド鎖の成分である。例えば、血漿カリクレイン結合タンパク質は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）である。血漿カリクレイン結合タンパク質は、可溶性Ｆａｂ（ｓＦａｂ）であり得る。
【００２８】
他の実施では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、小体、ｓｃＦｖ：：Ｆｃ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ融合物、ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、または本明細書の結合タンパク質の１つの抗原結合部位を含む他の分子を含む。これらＦａｂのＶＨおよびＶＬ領域は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ、ＰＥＧ化ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ２、ＶＨ：：ＣＨ１：：ＨＳＡ＋ＬＣ、ＨＳＡ：：ＶＨ：：ＣＨ１＋ＬＣ、ＬＣ：：ＨＳＡ＋ＶＨ：：ＣＨ１、ＨＳＡ：：ＬＣ＋ＶＨ：：ＣＨ１、または他の適切な構築物として提供できる。
【００２９】
１つの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、ヒト抗体またはヒト化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上のヒト抗体フレームワーク領域（例えば、すべてのヒトフレームワーク領域）を含む。
【００３０】
１つの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、ヒトＦｃドメイン、またはヒトＦｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。
【００３１】
１つの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、霊長類抗体または霊長類化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上の霊長類抗体フレームワーク領域、例えば、すべての霊長類フレームワーク領域を含む。
【００３２】
１つの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、霊長類Ｆｃドメイン、または霊長類Ｆｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。「霊長類」は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）、チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓおよびＰａｎ  ｐａｎｉｓｃｕｓ（ボノボ））、ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａ  ｇｏｒｉｌｌａ）、テナガザル、サル、キツネザル、アイアイ（Ｄａｕｂｅｎｔｏｎｉａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、およびメガネザルを含む。
【００３３】
１つの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、ヒトフレームワーク領域、またはヒトフレームワーク領域と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるフレームワーク領域を含む。
【００３４】
ある実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、マウスまたはウサギ由来の配列を含まない（例えば、マウスまたはウサギ抗体ではない）。
【００３５】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は口腔粘膜炎である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本方法は、さらにパリフェルミンを投与することを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体、例えば、ヒト抗体）は重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、
前記免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列は本明細書に記載のタンパク質の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域を含み、ならびに／または
前記免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列は本明細書に記載のタンパク質の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域を含み、
前記タンパク質は、血漿カリクレインと結合する（例えば、および阻害する）。
【００３９】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列はＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域を含み、ならびに／または
免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列はＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域を（それぞれ）含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域はＸ８１−Ｂ０１由来であり、および／または軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域はＸ８１−Ｂ０１由来である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域はＸ６７−Ｄ０３由来であり、および／または軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３（例えば、３）つのＣＤＲ領域はＸ６７−Ｄ０３由来である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列は本明細書に記載のタンパク質の重鎖可変ドメインを含み、および／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列は本明細書に記載のタンパク質の軽鎖可変ドメインを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列はＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の重鎖可変ドメインを含み、ならびに／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列はＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の軽鎖可変ドメインを（それぞれ）含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列はＸ８１−Ｂ０１の重鎖可変ドメインを含み、および／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列はＸ８１−Ｂ０１の軽鎖可変ドメインを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列はＸ６７−Ｄ０３の重鎖可変ドメインを含み、および／または免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列はＸ６７−Ｄ０３の軽鎖可変ドメインを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、本明細書に記載のタンパク質の重鎖、および／または本明細書に記載のタンパク質の軽鎖を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の重鎖、ならびに／またはＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、もしくはＸ６７−Ｇ０４の軽鎖を（それぞれ）含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の重鎖、および／またはＸ８１−Ｂ０１の軽鎖を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の重鎖、および／またはＸ６７−Ｄ０３の軽鎖を含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、１つ以上の以下の特徴を含む：（ａ）ヒトＣＤＲもしくはヒトフレームワーク領域；（ｂ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であるＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、もしくは３つ）含むこと；（ｃ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であるＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、もしくは３つ）含むこと；（ｄ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であること（例えば、全体もしくはフレームワーク領域もしくはＣＤＲにおいて）；（ｅ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であること（例えば、全体もしくはフレームワーク領域もしくはＣＤＲにおいて）；（ｆ）タンパク質が、本明細書に記載のタンパク質によって結合したエピトープと結合する、もしくは本明細書に記載のタンパク質と結合について競合すること；（ｇ）霊長類ＣＤＲもしくは霊長類フレームワーク領域；（ｈ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１個、かつ２もしくは３個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ１を含む；（ｉ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、６、７、もしくは８個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ２を含む；（ｊ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、もしくは６個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ３を含む；（ｋ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１個、かつ２、３、４、もしくは５個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ１を含む；（ｌ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１個、かつ２、３、もしくは４個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ２を含む；（ｍ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１個、かつ２、３、４、もしくは５個のみアミノ酸が異なるＣＤＲ３を含む；（ｎ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメイン由来の少なくとも１つ、だが２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のみアミノ酸が異なる（例えば、全体もしくはフレームワーク領域もしくはＣＤＲにおいて）；ならびに（ｏ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメイン由来の少なくとも１つ、だが２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のみアミノ酸が異なる（例えば、全体もしくはフレームワーク領域もしくはＣＤＲにおいて）。
【００５１】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、１０００、５００、１００、または１０ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【００５２】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖および重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５３】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５４】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５５】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖および重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５６】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５７】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５８】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる重鎖の群の対応するＣＤＲから選択される重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００５９】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる軽鎖の群の対応するＣＤＲから選択される軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６０】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる重鎖の群の対応するＣＤＲから選択される重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）ならびにＭ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる軽鎖の群の対応するＣＤＲから選択される軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）（それぞれ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６１】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の軽鎖および重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６２】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６３】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の軽鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６４】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１から選択される抗体の軽鎖および重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６５】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６６】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の軽鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６７】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の重鎖の対応するＣＤＲ由来の重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６８】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の軽鎖の対応するＣＤＲ由来の軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００６９】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ８１−Ｂ０１の重鎖由来の重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）およびＸ８１−Ｂ０１の軽鎖の対応するＣＤＲ由来の軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７０】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の軽鎖および重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７１】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７２】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の軽鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７３】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３から選択される抗体の軽鎖および重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７４】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７５】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の軽鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７６】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の重鎖の対応するＣＤＲ由来の重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７７】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の軽鎖の対応するＣＤＲ由来の軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７８】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｘ６７−Ｄ０３の重鎖由来の重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）およびＸ６７−Ｄ０３の軽鎖の対応するＣＤＲ由来の軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、プレカリクレイン（例えば、ヒトプレカリクレイン）とは結合しないが、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）の活性形態と結合する。
【００８０】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、基準値、例えば、タンパク質が存在しないことを除いて同一条件下の第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニン産生と比較して、第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニン産生を約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％超低減する。
【００８１】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、１０００、５００、１００、または１０ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【００８２】
１つの実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は同一ポリペプチド鎖の成分である。
【００８３】
別の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は異なるポリペプチド鎖の成分である。例えば、タンパク質は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）である。タンパク質は、可溶性Ｆａｂ（ｓＦａｂ）であり得る。
【００８４】
他の実施では、タンパク質は、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、小体、ｓｃＦｖ：：Ｆｃ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ融合物、ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、または本明細書の結合タンパク質の１つの抗原結合部位を含む他の分子を含む。これらＦａｂのＶＨおよびＶＬ領域は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ、ＰＥＧ化ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ２、ＶＨ：：ＣＨ１：：ＨＳＡ＋ＬＣ、ＨＳＡ：：ＶＨ：：ＣＨ１＋ＬＣ、ＬＣ：：ＨＳＡ＋ＶＨ：：ＣＨ１、ＨＳＡ：：ＬＣ＋ＶＨ：：ＣＨ１、または他の適切な構築物として提供できる。
【００８５】
１つの実施形態では、タンパク質は、ヒト抗体またはヒト化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上のヒト抗体フレームワーク領域（例えば、すべてのヒトフレームワーク領域）を含む。
【００８６】
１つの実施形態では、タンパク質は、ヒトＦｃドメイン、またはヒトＦｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。
【００８７】
１つの実施形態では、タンパク質は、霊長類抗体または霊長類化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上の霊長類抗体フレームワーク領域、例えば、すべての霊長類フレームワーク領域を含む。
【００８８】
１つの実施形態では、タンパク質は、霊長類Ｆｃドメイン、または霊長類Ｆｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。「霊長類」は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）、チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓおよびＰａｎ  ｐａｎｉｓｃｕｓ（ボノボ））、ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａ  ｇｏｒｉｌｌａ）、テナガザル、サル、キツネザル、アイアイ（Ｄａｕｂｅｎｔｏｎｉａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、およびメガネザルを含む。
【００８９】
１つの実施形態では、タンパク質は、ヒトフレームワーク領域、またはヒトフレームワーク領域と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるフレームワーク領域を含む。
【００９０】
ある実施形態では、タンパク質は、マウスまたはウサギ由来の配列を含まない（例えば、マウスまたはウサギ抗体ではない）。
【００９１】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は口腔粘膜炎である。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本方法はパリフェルミンを投与することをさらに含む。
【００９４】
１つの態様では、本発明は、粘膜炎治療用キットを提供する。キットは、単離カリクレイン阻害剤、および粘膜炎を呈するまたは粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）に阻害剤を投与するための説明書を含む。１つの実施形態では、キットは、さらに粘膜炎治療のためのさらなる治療用物質（例えば、パリフェルミン）投与の説明書を含み、任意に追加の治療用物質を含み得る。１つの実施形態では、説明書は、さらなる治療用物質の非存在下のカリクレイン阻害剤の投与レジメン、投与スケジュールおよび／または投与経路とは異なるカリクレイン阻害剤の投与レジメン、投与スケジュールおよび／または投与経路を提供する。粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、化学療法（例えば、高用量化学療法）および／または放射線療法レジメンを施行予定の、施行中の、または施行予定の対象であり得る。別の例では、粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、癌（例えば、頭頸部癌）と診断された対象であり得る。
【００９５】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される。
【００９６】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は口腔粘膜炎である。
【００９７】
いくつかの様相では、本開示はキットを特徴とし、ここでキットは、
単離カリクレイン阻害剤を含む容器；および
粘膜炎治療用の前記カリクレイン阻害剤の使用説明書
を含む。
【００９８】
いくつかの実施形態では、キットはさらにパリフェルミンを含む容器を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、粘膜炎は口腔粘膜炎である。
【０１０１】
いくつかの様相では、本開示は、治療有効量の本明細書に記載の単離カリクレイン阻害剤および治療有効量のパリフェルミンを含む組成物を特徴とする。
【０１０２】
別の様相では、粘膜炎の治療および／または予防用の薬物製造用の単離カリクレイン阻害剤の使用を本明細書に提供する。
【０１０３】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細について、添付の図面および以下の説明に記載する。本発明の他の特徴、目的、および利点は、本明細書および図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかであろう。
【０１０４】
本出願を通して引用されたすべての引例、係属特許出願および公開特許の内容は参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】プラスミドｐＰＩＣ−Ｋ５０３中の例示的なカリクレイン阻害剤ポリペプチドに関するＤＮＡおよびそれに応じて推測されたアミノ酸の一部を示す。挿入されたＤＮＡは、囲み枠内のアミノ酸配列を有するＰＥＰ−１（ＤＸ−８８）ポリペプチドのアミノ末端に融合した、サッカロミセス・セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のｍａｔαプレプロシグナルペプチドをコードする（下線）。囲み枠内に示したＰＥＰ−１ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号２であり、それに対応するヌクレオチドのコード配列は配列番号３である。破線の矢印は、シークエンシング鋳型を産生するのに用いたＡＯＸ領域中の２種のＰＣＲプライマー配列の位置および方向を示す。図の完全ヌクレオチド配列に関するＤＮＡ配列は、融合タンパク質に関する構造的なコード配列を含み、配列番号２７と指定されている。配列の二重下線部分は、診断プローブ配列を示す。ＢｓｔＢＩおよびＥｃｏＲＩは、この配列中におけるそれら個々のパリンドロームの六量体制限エンドヌクレアーゼ部位の位置を示す。星印は、翻訳終止コドンを示す。詳細については、本文を参照されたい。
【図２Ａ】例示的なアミノ酸配列、これらの変異体が誘導された天然型のＬＡＣＩ配列（配列番号３２）、および他の既知のＫｕｎｉｔｚドメイン（配列番号２９〜３１および３３〜５３）の整列を示す。システイン残基を示す。
【図２Ｂ】例示的なアミノ酸配列、これらの変異体が誘導された天然型のＬＡＣＩ配列（配列番号３２）、および他の既知のＫｕｎｉｔｚドメイン（配列番号２９〜３１および３３〜５３）の整列を示す。システイン残基を示す。
【図３】非生殖系列化（Ｘ６３−Ｇ０６）およびＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体の生殖系列化、コドン至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンの軽鎖ＤＮＡ配列の整列を示す。星印（＊）で示した位置は保存的であるのに対し、空白はＸ８１−Ｂ０１中でコドン至適化または生殖系列化のいずれかのために変異した塩基に相当する。
【図４】非生殖系列化（Ｘ６３−Ｇ０６）およびＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体の生殖系列化、コドン至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンの軽鎖アミノ酸配列の整列を示す。星印（＊）で示した位置は保存的であるのに対し、空白はＸ８１−Ｂ０１中で生殖系列化のために変異したアミノ酸に相当する。総計１１個のアミノ酸が非生殖系列化（Ｘ６３−Ｇ０６）および生殖系列化、コドン至適化抗体（Ｘ８１−Ｂ０１）間で異なる。
【図５】非生殖系列化（Ｘ６３−Ｇ０６）およびＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体の生殖系列化、コドン至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンの重鎖ＤＮＡ配列の整列を示す。星印（＊）で示した位置は保存的であるのに対し、空白はＸ８１−Ｂ０１中でコドン至適化のために変異したＤＮＡ塩基に相当する。
【図６】非生殖系列化（Ｘ６３−Ｇ０６）およびＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体の生殖系列化、コドン至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンの重鎖アミノ酸配列の整列を示す。星印（＊）で示した位置は保存的である。２つの抗体は重鎖中に同一のアミノ酸配列を有する。
【図７Ａ】Ｘ８１−Ｂ０１結合ｐＫａｌに対するＥＰＩ−ＫＡＬ２の競合を示す。Ｘ８１−Ｂ０１（ＩｇＧ）を、ＣＭ５  ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）チップの抗ヒトＦｃ断片特異的な表面上で捕獲した。１μＭのＥＰＩ−ＫＡＬ２の存在下（図の下センサーグラム）または非存在下（図の上センサーグラム）で、ｐＫａｌ（１００ｎＭ）を表面上に流した。
【図７Ｂ】Ｘ６７−Ｄ０３結合ｐＫａｌに対するＥＰＩ−ＫＡＬ２の競合を示す。Ｘ６７−Ｄ０３（ＩｇＧ）を、ＣＭ５  Ｂｉａｃｏｒｅチップの抗ヒトＦｃ断片特異的な表面上で捕獲した。１μＭのＥＰＩ−ＫＡＬ２の存在下（図の下センサーグラム）または非存在下（図の上センサーグラム）で、ｐＫａｌ（１００ｎＭ）を表面上に流した。
【図８】表１５に列挙する抗体のＣＬＩＰＳエピトープマッピング結果を示す。
【図９Ａ】異種由来のｐＫａｌ配列のＣｌｕｓｔａｌＷ整列を示す。「＊」で示した位置は間で保持された位置であり、対して「：」で示した位置は種間の保存的置換を示す。「．」で示した位置は一部の種における非保存的置換を有する。溶媒接触表面積の計算により、記号「＠」で示したアミノ酸伸長は溶媒に高度に露出していることが示された。「＋」で示したアミノ酸伸長を、表１５に列挙する抗体の潜在的エピトープとして同定した。溶媒接触表面積の計算により、灰色で強調したアミノ酸は、Ｋｕｎｉｔｚドメイン活性部位阻害剤と複合体を形成時に埋め込まれることを見出した。下線位置は触媒三連構造（Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、およびＳｅｒ５７８、ヒト配列に基づいてナンバリング）を形成するアミノ酸である。
【図９Ｂ】異種由来のｐＫａｌ配列のＣｌｕｓｔａｌＷ整列を示す。「＊」で示した位置は間で保持された位置であり、対して「：」で示した位置は種間の保存的置換を示す。「．」で示した位置は一部の種における非保存的置換を有する。溶媒接触表面積の計算により、記号「＠」で示したアミノ酸伸長は溶媒に高度に露出していることが示された。「＋」で示したアミノ酸伸長を、表１５に列挙する抗体の潜在的エピトープとして同定した。溶媒接触表面積の計算により、灰色で強調したアミノ酸は、Ｋｕｎｉｔｚドメイン活性部位阻害剤と複合体を形成時に埋め込まれることを見出した。下線位置は触媒三連構造（Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、およびＳｅｒ５７８、ヒト配列に基づいてナンバリング）を形成するアミノ酸である。
【図９Ｃ】異種由来のｐＫａｌ配列のＣｌｕｓｔａｌＷ整列を示す。「＊」で示した位置は間で保持された位置であり、対して「：」で示した位置は種間の保存的置換を示す。「．」で示した位置は一部の種における非保存的置換を有する。溶媒接触表面積の計算により、記号「＠」で示したアミノ酸伸長は溶媒に高度に露出していることが示された。「＋」で示したアミノ酸伸長を、表１５に列挙する抗体の潜在的エピトープとして同定した。溶媒接触表面積の計算により、灰色で強調したアミノ酸は、Ｋｕｎｉｔｚドメイン活性部位阻害剤と複合体を形成時に埋め込まれることを見出した。下線位置は触媒三連構造（Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、およびＳｅｒ５７８、ヒト配列に基づいてナンバリング）を形成するアミノ酸である。
【発明を実施するための形態】
【０１０６】
本発明者らは、粘膜炎の（例えば、単離カリクレイン阻害剤の投与による口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および／または胃腸粘膜炎の）新規の治療方法を本明細書に提示する。
【０１０７】
定義
便宜上、本発明をさらに詳述する前に、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で使用する特定の用語をここに定義する。
【０１０８】
単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈においてはっきりと別段の指摘がされない限り、複数形の指示対象を含む。
【０１０９】
「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書でＶＨと略す）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書でＶＬと略す）を含むことができる。別の例では、抗体は２本の重（Ｈ）鎖可変領域および２本の軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、およびドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（ｄｅ  Ｗｉｌｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９６；  ２６（３）：６２９−３９．））ならびに完全抗体を包含する。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにこれらのサブタイプ）の構造特性を有し得る。抗体は、あらゆる供給源に由来し得るが、霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）抗体および霊長類化抗体が好ましい。
【０１１０】
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるさらに保存的な領域と共に散在する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変領域にさらに細分できる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２，  ａｎｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７を参照されたい。ｗｗｗ．ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋも参照されたい）。本明細書ではＫａｂａｔ（カバット）の定義を使用する。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置している。
【０１１１】
抗体のＶＨまたはＶＬ鎖は、重鎖または軽鎖定常領域のすべてまたは一部をさらに含み、それにより、免疫グロブリン重鎖または軽鎖をそれぞれ形成できる。１つの実施形態では、抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖の四量体であり、ここで、免疫グロブリン重鎖および軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合によって相互に連結している。ＩｇＧの場合、重鎖定常領域は、３つの免疫グロブリンドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。軽鎖定常領域は、ＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、典型的には、宿主組織または因子（免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および従来の補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む）への抗体の結合を媒介する。免疫グロブリン軽鎖は、κ型またはλ型であり得る。１つの実施形態では、抗体は、グリコシル化されている。抗体は、抗体依存性細胞傷害性および／または補体媒介細胞傷害性に機能的であり得る。
【０１１２】
抗体の１つ以上の領域はヒトでもあり得、事実上ヒトでもあり得る。例えば、１つ以上の可変領域はヒトでもあり得、事実上ヒトでもあり得る。例えば、１つ以上のＣＤＲは、ヒト（例えば、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、およびＬＣ  ＣＤＲ３）であり得る。各軽鎖ＣＤＲはヒトであり得る。ＨＣ  ＣＤＲ３はヒトであり得る。１つ以上のフレームワーク領域は、ヒト（例えば、ＨＣまたはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）であり得る。例えば、Ｆｃ領域はヒトであり得る。１つの実施形態では、すべてのフレームワーク領域はヒトであり、例えば、ヒト体細胞（例えば、免疫グロブリンを産生する造血細胞または非造血細胞）由来である。１つの実施形態では、ヒト配列は（例えば、生殖系列核酸によってコードされる）生殖系列配列である。１つの実施形態では、選択されたＦａｂのフレームワーク（ＦＲ）残基を、ほとんどの類似する霊長類生殖系列遺伝子（特に、ヒト生殖系列遺伝子）中の対応する残基のアミノ酸種類に変換できる。１つ以上の定常領域はヒトでもあり得、事実上ヒトでもあり得る。例えば、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９８、または１００％の免疫グロブリン可変ドメイン、定常領域、定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＬ１）、または完全抗体はヒトでもあり得、事実上ヒトでもあり得る。
【０１１３】
抗体のすべてまたは一部は、免疫グロブリン遺伝子またはそのセグメントによってコードすることができる。例示的なヒト免疫グロブリン遺伝子としては、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、εおよびμ定常領域遺伝子、ならびに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。完全長の免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ＫＤａまたは約２１４個のアミノ酸）はＮＨ２末端（約１１０個のアミノ酸）における可変領域遺伝子、およびＣＯＯＨ末端におけるκまたはλ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長の免疫グロブリン「重鎖」（約５０ＫＤａまたは約４４６個のアミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸）および他の上記の定常領域遺伝子の１つ、例えば、γ（約３３０個のアミノ酸をコードする）によってコードされる。ＨＣ  ＣＤＲ３が約３個のアミノ酸残基から３５個超のアミノ酸残基まで異なるので、ヒトＨＣの長さは大きく変動する。
【０１１４】
完全長抗体の「抗原結合断片」という用語は、目的の標的に特異的に結合する能力を保持した完全長抗体の１つ以上の断片を指す。完全長抗体の「抗原結合断片」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合により結合した２個のＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）機能性を保持する単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価分子を形成するタンパク質単鎖として作製されることを可能にする合成リンカーにより、組換え方法を用いて結合できる。例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、同第４，９４６，７７８号、および同第４，８８１，１７５号；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；ならびにＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。
【０１１５】
抗体断片は、当業者に知られている従来技術を含む、適切なあらゆる技術を用いて得ることができる。「単一特異性抗体」という用語は、特定の標的（例えば、エピトープ）に対して単一の結合特異性および親和性を示す抗体を指す。この用語は「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」を含み、本明細書で使用する場合、抗体がどのように生成されたかを問わず、単一の分子組成物の抗体またはその断片の調製物を指す。
【０１１６】
阻害定数（Ｋｉ）は、阻害効力の測定値を提供する；それは酵素活性を半分に減らすために必要であり、酵素または基質の濃度に依存しない阻害剤の濃度である。見かけのＫｉ（Ｋｉ，ａｐｐ）は、反応（例えば、酵素活性）の程度に対する異なる濃度の阻害剤（例えば、阻害結合タンパク質）の阻害効果を測定することにより異なる基質濃度で得られる；モリソン式（式１）に阻害剤濃度の関数として擬１次速度定数の変化を当てはめることにより、見かけのＫｉの概算値が得られる。Ｋｉは、Ｋｉ，ａｐｐ対基質濃度プロットの線形回帰分析から導いたｙ切片から得られる。
【数１】
2013516389.tif 000002
式中、ｖは測定した速度；ｖ０は阻害剤なしの速度；Ｋｉ，ａｐｐは見かけの阻害定数；Ｉは総阻害剤濃度；およびＥは総酵素濃度。
【０１１７】
本明細書で使用する「結合親和性」とは、見かけ上の結合定数つまりＫａを指す。Ｋａは、解離定数（Ｋｄ）の逆数である。結合タンパク質は、例えば、特定の標的分子に対する結合親和性が少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０および１０１１Ｍ−１であり得る。第二の標的と比較して第一の標的への結合タンパク質のより高い親和性の結合は、第二の標的への結合に対するＫａ（またはＫｄ値）より高い第一の標的への結合に対するＫａ（またはより小さいＫｄ値）によって示すことができる。かかる場合、結合タンパク質は、第二の標的（例えば、第二の高次構造のタンパク質もしくはその模倣物；または第二のタンパク質）と比較して第一の標的（例えば、第一の高次構造のタンパク質またはその模倣物）に対して特異性を有する。（例えば、特異性または他の比較における）結合親和性の相違は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、または１０５倍であり得る。
【０１１８】
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲルろ過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例えば、蛍光アッセイを使用する）を含む様々な方法により決定できる。結合親和性の例示的評価条件は、ＴＲＩＳ緩衝液（５０ｍＭのＴＲＩＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．５）である。これらの技術を使用して、結合タンパク質（または標的）濃度の関数として結合した結合タンパク質および遊離結合タンパク質の濃度を測定できる。結合した結合タンパク質の濃度（［結合］）は、以下の式：
［結合］＝Ｎ・［遊離］／（（１／Ｋａ）＋［遊離］）
（式中、（Ｎ）は標的分子当たりの結合部位数である）によって遊離結合タンパク質の濃度（［遊離］）および標的上の結合タンパク質の結合部位の濃度と関連付けられる。
【０１１９】
しかしながら、Ｋａは常に正確に決定する必要はない。なぜなら、時によっては、Ｋａに比例する親和性の定量的測定値（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を用いて決定する）を得れば十分であり、したがって、比較のため（より高い親和性が、例えば、２倍高いかどうかの決定など）に使用して、例えば、機能アッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ）における活性によって親和性の定性的測定値を得るか親和性の推定値を得ることができるからである。
【０１２０】
「結合タンパク質」という用語は、標的分子と相互作用し得るタンパク質を指す。この用語を「リガンド」と同義的に使用する。「血漿カリクレイン結合タンパク質」とは、血漿カリクレインと相互作用（例えば、結合）し得るタンパク質を指し、特に優先的にまたは特異的に血漿カリクレインと相互作用するおよび／または血漿カリクレインを阻害するタンパク質を含む。タンパク質は、タンパク質のない同一条件下の血漿カリクレイン活性と比較して血漿カリクレイン活性を低減する場合、血漿カリクレインを阻害する。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は抗体である。
【０１２１】
「カリクレイン阻害剤」という用語は、カリクレインを阻害する任意の物質または分子を指す。
【０１２２】
「併用」という用語は、同一患者を治療するための２つ以上の薬剤または療法の使用を指し、これらの薬剤または療法の使用または作用は時間的に重複する。これらの薬剤または療法は（例えば、患者に投与する単一製剤としてまたは同時投与する２つの別々の製剤として）同時投与することも、任意の順序で順次投与することもできる。
【０１２３】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。
【０１２４】
結合タンパク質の１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲのアミノ酸残基が、本明細書に記載の結合タンパク質と比較して１つ以上の変異（例えば、置換（例えば、非必須アミノ酸の保存的置換または置換）、挿入、または欠失）を含むことが可能である。血漿カリクレイン結合タンパク質は、変異（例えば、置換（例えば、非必須アミノ酸の保存的置換または置換）、挿入、または欠失）（例えば、少なくとも１、２、３、もしくは４、ならびに／または１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、もしくは２個未満の変異）、本明細書に記載の結合タンパク質と比較して、例えば、タンパク質機能に対して大幅な影響を及ぼさない変異を有し得る。変異はフレームワーク領域、ＣＤＲ、および／または定常領域に存在し得る。いくつかの実施形態では、変異はフレームワーク領域に存在する。いくつかの実施形態では、変異はＣＤＲに存在する。いくつかの実施形態では、変異は定常領域に存在する。特定の置換が容認できるかどうか、すなわち、結合活性などの生体特性に悪影響を及ぼさないかどうかについては、例えば、変異が保存的であるかどうかを評価することによって、またはＢｏｗｉｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０の方法によって予想できる。
【０１２５】
「事実上ヒトの」免疫グロブリン可変領域とは、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないように十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「事実上ヒト」抗体とは、抗体が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないように十分な数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。
【０１２６】
「エピトープ」とは、結合タンパク質（例えば、Ｆａｂまたは完全長抗体などの抗体）によって結合される標的化合物上の部位を指す。標的化合物がタンパク質である場合、この部位は、完全にアミノ酸成分から構成されるか、完全にタンパク質のアミノ酸の化学修飾（例えば、グリコシル部分）から構成されるか、またはそれらの組み合わせから構成され得る。重複エピトープは、少なくとも１つの共通のアミノ酸残基、グリコシル基、リン酸基、硫酸基、または他の分子の特徴を含む。
【０１２７】
第一結合タンパク質（例えば、抗体）は、第二結合タンパク質（例えば、抗体）が結合する標的化合物上の同一部位と結合する場合、または例えば、第二結合タンパク質が結合する部位を有するアミノ酸配列または他の分子の特性（例えば、グリコシル基、リン酸基、または硫酸基）に関して重複（例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％重複）部位と結合する場合、第二結合タンパク質と「同一エピトープと結合する」。
【０１２８】
第一結合タンパク質（例えば、抗体）は、第一結合タンパク質のエピトープに対する結合が第二結合タンパク質（例えば、抗体）のエピトープに対する結合量を（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、または１００％超）低減する場合、第二結合タンパク質と「結合について競合する」。競合は、直接的（例えば、第一結合タンパク質は第二結合タンパク質が結合するエピトープと同一であるか、または重複するエピトープと結合する）でもあり得、間接的（例えば、第一結合タンパク質のエピトープ結合は、標的化合物において、第二結合タンパク質のエピトープへの結合能を低減する立体的な変化を引き起こす）でもあり得る。
【０１２９】
２配列間の「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書において同義的に使用する）の計算を、以下のように行う。至適に比較できるように配列を整列させる（例えば、至適に整列するために第一および第二のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方にギャップを導入し、比較するために非相同配列を無視することができる）。ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を使用したＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリング行列を有するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して、至適なスコアとして至適な整列を決定する。次いで、対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第一の配列中の位置が第二の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、その位置で分子は同一である（本明細書で使用する、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と同義である）。２配列間の同一率（％）は、配列が共有する同一の位置の数の関数である。
【０１３０】
１つの好ましい実施形態では、比較のために整列させた基準配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、よりさらに好ましくは少なくとも６０％、よりさらに好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または１００％である。例えば、基準配列は、免疫グロブリン可変ドメイン配列の長さであり得る。
【０１３１】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないように十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾された免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの説明としては、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号および米国特許第５，６９３，７６２号が挙げられる。
【０１３２】
本明細書で使用する「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または超高ストリンジェンシー条件下のハイブリッド形成」という用語は、ハイブリッド形成および洗浄の条件を説明する。ハイブリッド形成反応を実施するためのガイダンスは、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８９），  ６．３．１−６．３．６に見出すことができる。水性方法および非水性方法は、その参考文献に記載されており、いずれをも使用することができる。本明細書で参照する特異的ハイブリッド形成条件は以下のとおりである：（１）約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、続いて少なくとも５０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で２回洗浄する低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件（洗浄温度は、低ストリンジェンシー条件では５５℃に上昇させることができる）、（２）約４５℃での６×ＳＳＣ、続いて６０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回以上洗浄する中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件、（３）約４５℃での６×ＳＳＣ、続いて６５℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回以上洗浄する高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件、および（４）６５℃での０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、続いて６５℃の０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで１回以上洗浄する超高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件。超高ストリンジェンシー条件（４）が好ましい条件であり、他で明記しない限り、これを使用すべきである。本開示には、低、中、高、または超高ストリンジェンシーで本明細書に記載の核酸またはその相補物（例えば、本明細書に記載の結合タンパク質をコードする核酸）とハイブリッド形成する核酸が含まれる。核酸は、基準核酸と同一の長さであり得るか、基準核酸の長さの３０、２０、または１０％以内であり得る。核酸は、本明細書に記載の免疫グロブリン可変ドメイン配列をコードする領域に対応し得る。
【０１３３】
「単離組成物」とは、単離組成物を得ることができる天然試料の少なくとも１つの成分の少なくとも９０％から取り出された組成物を指す。人工的または天然に産生された組成物は、目的の種または種の集団が重量−重量ベースで少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８、または９９％の純度である場合、「少なくとも一定の純度の組成物」であり得る。
【０１３４】
「単離」タンパク質とは、単離タンパク質を得ることができる天然試料の成分の少なくとも９０％から取り出されたタンパク質を指す。目的の種または種の集団が重量−重量ベースで少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８、または９９％の純度である場合、「少なくとも」一定の純度のタンパク質であり得る。
【０１３５】
「粘膜炎」という用語は、口から肛門まで下っている消化管内側の任意の粘膜の炎症を指す。粘膜炎は、任意の部分の消化管に関与する化学療法および放射線療法の共通の副作用である。「口腔粘膜炎」とは、口内粘膜に影響する粘膜炎を指す。「食道粘膜炎」とは、食道粘膜に影響する粘膜炎を指すのに対し、「咽頭粘膜炎」とは、咽頭粘膜に影響する粘膜炎を指す。「胃腸粘膜炎」とは、消化管粘膜に影響する粘膜炎を指す。
【０１３６】
「必須」アミノ酸残基の変化が実質的な活性損失に至るのに対して、「非必須」アミノ酸残基は生体活性を消失せずまたはさらに好ましくは実質的に改変せず、結合剤（例えば、抗体）の野生型配列から改変できる残基である。
【０１３７】
主題の方法により治療されるべき「患者」、「対象」または「宿主」（これらの用語を同義的に使用する）とは、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかを意味し得る。
【０１３８】
「カリクレイン」（例えば、組織および血漿カリクレイン）という用語は、ペプチダーゼ（タンパク質中のペプチド結合を切断する酵素）、セリンプロテアーゼファミリーのサブ群を指す。１５個の既知の組織カリクレイン（ＫＬＫ１、ＫＬＫ２、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ９、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４およびＫＬＫ１５）および単一の血漿カリクレイン（ＫＬＫｂ１）がある。血漿カリクレインおよび組織カリクレイン１（ＫＬＫ１）の両方ともキニノゲンを切断して、強力な炎症促進性ペプチドであるキニンを生成する。ＤＸ−８８（本明細書において「ＰＥＰ−１」とも呼ぶ）は、強力な（Ｋｉ＜１ｎＭ）および特異的な血漿カリクレイン阻害剤（ＮＰ＿０００８８３）である。（例えば、ＷＯ９５／２１６０１号またはＷＯ２００３／１０３４７５号も参照されたい）。
【０１３９】
ＫＬＫｂ１（血漿カリクレイン）のアミノ酸配列は以下のとおりである。
ＫＬＫｂ１
＞ｇｉ｜７８１９１７９８｜基準｜ＮＰ＿０００８８３．２｜血漿カリクレインＢ１前駆体［ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）］
ＭＩＬＦＫＱＡＴＹＦＩＳＬＦＡＴＶＳＣＧＣＬＴＱＬＹＥＮＡＦＦＲＧＧＤＶＡＳＭＹＴＰＮＡＱＹＣＱＭＲＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦＳＦＬＰＡＳＳＩＮＤＭＥＫＲＦＧＣＦＬＫＤＳＶＴＧＴＬＰＫＶＨＲＴＧＡＶＳＧＨＳＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡＣＨＲＤＩＹＫＧＶＤＭＲＧＶＮＦＮＶＳＫＶＳＳＶＥＥＣＱＫＲＣＴＳＮＩＲＣＱＦＦＳＹＡＴＱＴＦＨＫＡＥＹＲＮＮＣＬＬＫＹＳＰＧＧＴＰＴＡＩＫＶＬＳＮＶＥＳＧＦＳＬＫＰＣＡＬＳＥＩＧＣＨＭＮＩＦＱＨＬＡＦＳＤＶＤＶＡＲＶＬＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩＣＴＹＨＰＮＣＬＦＦＴＦＹＴＮＶＷＫＩＥＳＱＲＮＶＣＬＬＫＴＳＥＳＧＴＰＳＳＳＴＰＱＥＮＴＩＳＧＹＳＬＬＴＣＫＲＴＬＰＥＰＣＨＳＫＩＹＰＧＶＤＦＧＧＥＥＬＮＶＴＦＶＫＧＶＮＶＣＱなどＴＫＭＩＲＣＱＦＦＴＹＳＬＬＰＥＤＣＫＥＥＫＣＫＣＦＬＲＬＳＭＤＧＳＰＴＲＩＡＹＧＴＱＧＳＳＧＹＳＬＲＬＣＮＴＧＤＮＳＶＣＴＴＫＴＳＴＲＩＶＧＧＴＮＳＳＷＧＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶＫＬＴＡＱＲＨＬＣＧＧＳＬＩＧＨＱＷＶＬＴＡＡＨＣＦＤＧＬＰＬＱＤＶＷＲＩＹＳＧＩＬＮＬＳＤＩＴＫＤＴＰＦＳＱＩＫＥＩＩＩＨＱＮＹＫＶＳＥＧＮＨＤＩＡＬＩＫＬＱＡＰＬＮＹＴＥＦＱＫＰＩＣＬＰＳＫＧＤＴＳＴＩＹＴＮＣＷＶＴＧＷＧＦＳＫＥＫＧＥＩＱＮＩＬＱＫＶＮＩＰＬＶＴＮＥＥＣＱＫＲＹＱＤＹＫＩＴＱＲＭＶＣＡＧＹＫＥＧＧＫＤＡＣＫＧＤＳＧＧＰＬＶＣＫＨＮＧＭＷＲＬＶＧＩＴＳＷＧＥＧＣＡＲＲＥＱＰＧＶＹＴＫＶＡＥＹＭＤＷＩＬＥＫＴＱＳＳＤＧＫＡＱＭＱＳＰＡ
【０１４０】
ＤＸ−２３００および関連抗体は、組織カリクレイン１（ＡＡＨ０５３１３．１）の強力かつ特異的な阻害剤である。ＤＸ−２３００（「Ｍ０１３１−Ｆ０７」とも呼ぶ）は米国特許第７，３２９，７３７号に記載されている。
ＫＬＫ１
＞ｇｉ｜１３５２９０５９｜ｇｂ｜ＡＡＨ０５３１３．１｜カリクレイン１［ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）］
ＭＷＦＬＶＬＣＬＡＬＳＬＧＧＴＧＡＡＰＰＩＱＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＱＨＳＱＰＷＱＡＡＬＹＨＦＳＴＦＱＣＧＧＩＬＶＨＲＱＷＶＬＴＡＡＨＣＩＳＤＮ
ＹＱＬＷＬＧＲＨＮＬＦＤＤＥＮＴＡＱＦＶＨＶＳＥＳＦＰＨＰＧＦＮＭＳＬＬＥＮＨＴＲＱＡＤＥＤＹＳＨＤＬＭＬＬＲＬＴＥＰＡＤＴＩＴＤＡＶＫＶＶ
ＥＬＰＴＱＥＰＥＶＧＳＴＣＬＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＮＦＳＦＰＤＤＬＱＣＶＤＬＫＩＬＰＮＤＥＣＫＫＶＨＶＱＫＶＴＤＦＭＬＣＶＧＨＬＥＧＧＫＤＴＣ
ＶＧＤＳＧＧＰＬＭＣＤＧＶＬＱＧＶＴＳＷＧＹＶＰＣＧＴＰＮＫＰＳＶＡＶＲＶＬＳＹＶＫＷＩＥＤＴＩＡＥＮＳ
【０１４１】
本明細書で使用する「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、経腸および局所投与以外の投与方法を意味し、通常、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内への注射および点滴が挙げられるが、これらに限定されない注射による。
【０１４２】
対象の疾患の「予防」という用語は、対象に薬物治療を供すること（例えば、薬剤投与）を指し、疾患の少なくとも１つの症状が予防されるように、すなわち、望ましくない容態（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない容態）の発現から宿主を保護するように望ましくない容態の臨床的顕在化の前に投与されることである。疾患の少なくとも疾患の「予防」は「予防法」または「予防治療」とも呼び得る。
【０１４３】
「予防有効量」とは、所望の予防成果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。典型的には、予防用量は疾患の前または初期段階の対象に使用されるため、予防有効量は治療有効量より少ない。
【０１４４】
本明細書で使用する「実質的に同一」（または「実質的に相同」）という用語は、第一および第二のアミノ酸または核酸配列が類似の活性（例えば、結合活性、結合優先性、または生体活性）を有する（またはこれらを有するタンパク質をコードする）ように第二のアミノ酸または核酸配列と同一または等価な（例えば、類似の側鎖、例えば、保存的アミノ酸置換を有する）アミノ酸残基またはヌクレオチドを十分な数で含む第一のアミノ酸または核酸配列を指すために本明細書で使用する。抗体の場合、第二の抗体は、同一の抗原に対して同一の特異性を有し、少なくとも５０％、少なくとも２５％、または少なくとも１０％の親和性を有する。
【０１４５】
本明細書に開示の配列と類似または相同な（例えば、少なくとも約８５％配列同一性）配列も本出願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超え得る。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、本明細書に記載の結合タンパク質と約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％超の配列同一性を有し得る。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、本明細書に記載の結合タンパク質とＨＣおよび／またはＬＣフレームワーク領域（例えば、ＨＣおよび／またはＬＣ  ＦＲ１、２、３、および／または４）において約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％超の配列同一性を有し得る。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、本明細書に記載の結合タンパク質とＨＣおよび／またはＬＣ  ＣＤＲ（例えば、ＨＣおよび／またはＬＣ  ＣＤＲ１、２、および／または３）において約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％超の配列同一性を有し得る。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、本明細書に記載の結合タンパク質と定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および／またはＣＬ１）において約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％超の配列同一性を有し得る。
【０１４６】
さらに、核酸セグメントが選択的ハイブリッド形成条件下（例えば、高ストリンジェントなハイブリッド形成条件下）で鎖の相補物とハイブリッド形成する場合、実質的な同一性が存在する。核酸は、完全細胞、細胞溶解物、部分精製形態、または実質的に純粋な形態で存在し得る。
【０１４７】
生体ポリマーのモチーフ配列は、アミノ酸が異なり得る位置を含み得る。例えば、かかる文脈中の記号「Ｘ」は、一般に、別段の指定のない限り、任意のアミノ酸（例えば、２０種の天然アミノ酸のいずれか）を指し、例えば、システイン以外の任意のアミノ酸を指す。他の許容されるアミノ酸を、例えば、丸括弧および斜線を用いて示すこともできる。例えば、「（Ａ／Ｗ／Ｆ／Ｎ／Ｑ）」とは、アラニン、トリプトファン、フェニルアラニン、アスパラギン、およびグルタミンが、その特定の位置で許容されることを意味する。
【０１４８】
統計的有意性は当該技術分野で既知の任意の方法により決定できる。例示的な統計的検定としては、スチューデントＴ検定、マンホイットニーＵのノンパラメトリック検定、およびウィルコクソンのノンパラメトリック統計検定が挙げられる。いくつかの統計的に有意な関係は０．０５または０．０２未満のＰ値を有する。特定の結合タンパク質は、（例えば、特異性または結合において）統計的有意差（例えば、Ｐ値＜０．０５または０．０２）を示し得る。例えば、２つの状態間の識別可能な定性的または定量的差異を示す、「誘発する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇する」、「増大する」、「低減する」などの用語は、２つの条件間の差異（例えば、統計的有意差）を指し得る。
【０１４９】
「治療有効量」とは、所望の治療成果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。組成物の治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体の所望の応答を誘発するタンパク質の能力などの要因に応じて変わり得る。治療有効量はまた、組成物のいかなる毒性作用または有害作用よりも治療に有利な効果が勝る量である。
【０１５０】
「治療有効投与量」は、好ましくは、測定可能なパラメータ（例えば、視覚的に評価した粘膜炎の程度）を統計的に有意な程度調節する。例えば、治療有効投与量は、治療前の症状と比較して、粘膜炎症状の程度を少なくとも約２０％、さらに好ましくは少なくとも約４０％、よりさらに好ましくは少なくとも約６０％、それよりさらに好ましくは少なくとも約８０％低減し得る。測定可能なパラメータ（例えば、疾患関連パラメータ）を調節する化合物の能力は、ヒトの障害および容態における有効性を予想する動物モデル系（例えば、ハムスターまたは齧歯類モデルにおける口腔粘膜炎）で評価できる。あるいは、組成物のこの特性は、化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのパラメータ調節能力を検討することにより評価できる。
【０１５１】
対象における粘膜炎の「治療」または粘膜炎を呈する対象の「治療」とは、対象を医薬治療（例えば、疾患の少なくとも１つの症状が治癒、緩和または低減するような薬剤投与）に供することを指す。粘膜炎の「治療」は、以下のパラメータの任意の１つにより評価し得る。
・粘膜炎の発現頻度の低下（または）
・任意の所定の疾患重症度レベルにおける粘膜炎の持続期間の短縮（または）
・治療中の任意の経過時点における粘膜炎発現の重症度（１〜４グレード）の低減（または）
・粘膜炎の、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない任意の関連兆候もしくは症状の低減：
ｏ疼痛
ｏ浮腫
ｏ紅斑
ｏ続発性細菌性コロニー形成
ｏ食物消費（固形物、液体）の制限
ｏ疲労
ｏ非治療患者集団と比較した、治療集団における化学療法もしくは放射線療法のより高用量もしくは反復用量に対する耐容能
【０１５２】
カリクレイン阻害剤
Ｋｕｎｉｔｚドメイン阻害剤。いくつかの有用なカリクレイン阻害剤（組織カリクレインおよび／または血漿カリクレインのいずれか）は、Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む。
【０１５３】
本明細書で使用する「Ｋｕｎｉｔｚドメイン」とは、少なくとも５１個のアミノ酸を有し、少なくとも２個、好ましくは３個のジスルフィドを含むポリペプチドドメインである。このドメインは折りたたまれて、１番目と６番目のシステイン、２番目と４番目、３番目と５番目のシステインがジスルフィド結合を形成する（例えば、５８個のアミノ酸を有するＫｕｎｉｔｚドメインでは、以下に提示するＢＰＴＩ相同配列の番号によれば、５、１４、３０、３８、５１、および５５位のアミノ酸に相当する位置にシステインが存在し得、５〜５５位、１４〜３８位、および３０〜５１位のシステイン間でジスルフィドが形成され得る）か、または、２個のジスルフィドが存在する場合には、それらは、対応するシステインの部分集合の間で形成され得る。それぞれのシステインの間隔は、以下に提示するＢＰＴＩ配列の番号によれば、５〜５５位、１４〜３８位、および３０〜５１位に相当する位置で、７、５、４、３、２、１または０個以内のアミノ酸の間隔であり得る。ＢＰＴＩ配列は、任意の一般的なＫｕｎｉｔｚドメインにおける特定の位置を示すための参照として使用することができる。目的のＫｕｎｉｔｚドメインとＢＰＴＩとの比較は、整列したシステインの数が最大になる至適な整列を同定して実施できる。
【０１５４】
ＢＰＴＩのＫｕｎｉｔｚドメインの３Ｄ構造が（高解像度で）分かっている。Ｘ線構造の１つが、ブルックヘブンタンパク質データバンク（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ）に「６ＰＴＩ」として寄託されている。いくつかのＢＰＴＩホモログの３Ｄ構造（Ｅｉｇｅｎｂｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９０）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  ３（７）：５９１−５９８；  Ｈｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９０）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２９：１００１８−１００２２）が知られている。少なくとも８１種類のＫｕｎｉｔｚドメイン配列が知られている。既知のヒトホモログとしては、ＬＡＣＩの３つのＫｕｎｉｔｚドメイン（Ｗｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６３（１３）：６００１−６００４；  Ｇｉｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３８：５１８−２０；  Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ，  （１９８９）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６４（３１）：１８８３２−１８８３７）、インター−α−トリプシン阻害剤ＡＰＰ−Ｉの２つのＫｕｎｉｔｚドメイン（Ｋｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６３（３４）：１８１０４−１８１０７）、コラーゲンのＫｕｎｉｔｚドメイン、ＴＦＰＩ−２の３つのＫｕｎｉｔｚドメイン（Ｓｐｒｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ９１：３３５３−３３５７）、肝細胞増殖因子活性化因子阻害剤の第一のＫｕｎｉｔｚ型ドメイン、肝細胞増殖因子活性化因子阻害剤の第二のＫｕｎｉｔｚ型ドメイン、米国特許出願公開第２００４−０１５２６３３号に記載のＫｕｎｉｔｚドメインが挙げられる。ＬＡＣＩは、３つのＫｕｎｉｔｚドメインを含む、分子量３９ｋＤａ（表１のアミノ酸配列）のヒト血清リン糖タンパク質である。
【表１】
2013516389.tif 000003
【０１５５】
上記のＫｕｎｉｔｚドメインは、ＬＡＣＩ−Ｋ１（５０〜１０７位の残基）、ＬＡＣＩ−Ｋ２（１２１〜１７８位の残基）、およびＬＡＣＩ−Ｋ３（２１３〜２７０位）と呼ばれる。ＬＡＣＩのｃＤＮＡ配列は、Ｗｕｎ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  １９８８，  ２６３（１３）：６００１−６００４）で報告されている。Ｇｉｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｎａｔｕｒｅ，  １９８９，  ３３８：５１８−２０）は、これら３つのＫｕｎｉｔｚドメインそれぞれのＰ１残基が改変された変異試験を報告している。ＬＡＣＩ−Ｋ１は、第ＶＩＩａ因子（Ｆ．ＶＩＩａ）が組織因子と複合体を形成するとＦ．ＶＩＩａを阻害し、ＬＡＣＩ−Ｋ２は、第Ｘａ因子を阻害する。
【０１５６】
例示的なＫｕｎｉｔｚドメインを含むタンパク質には以下のものがある。括弧内は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ寄託番号である：
Ａ４＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ０５０６７）、Ａ４＿ＭＡＣＦＡ（Ｐ５３６０１）、Ａ４＿ＭＡＣＭＵ（Ｐ２９２１６）、
Ａ４＿ＭＯＵＳＥ（Ｐ１２０２３）、Ａ４＿ＲＡＴ（Ｐ０８５９２）、Ａ４＿ＳＡＩＳＣ（Ｑ９５２４１）、
ＡＭＢＰ＿ＰＬＥＰＬ（Ｐ３６９９２）、ＡＰＰ２＿ＨＵＭＡＮ（Ｑ０６４８１）、ＡＰＰ２＿ＲＡＴ（Ｐ１５９４３）、
ＡＸＰ１＿ＡＮＴＡＦ（Ｐ８１５４７）、ＡＸＰ２＿ＡＮＴＡＦ（Ｐ８１５４８）、ＢＰＴ１＿ＢＯＶＩＮ（Ｐ００９７４）、
ＢＰＴ２＿ＢＯＶＩＮ（Ｐ０４８１５）、ＣＡ１７＿ＨＵＭＡＮ（Ｑ０２３８８）、ＣＡ３６＿ＣＨＩＣＫ（Ｐ１５９８９）、
ＣＡ３６＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ１２１１１）、ＣＲＰＴ＿ＢＯＯＭＩ（Ｐ８１１６２）、ＥＬＡＣ＿ＭＡＣＥＵ（Ｏ６２８４５）、
ＥＬＡＣ＿ＴＲＩＶＵ（Ｑ２９１４３）、ＥＰＰＩ＿ＨＵＭＡＮ（Ｏ９５９２５）、ＥＰＰＩ＿ＭＯＵＳＥ（Ｑ９ＤＡ０１）、
ＨＴＩＢ＿ＭＡＮＳＥ（Ｐ２６２２７）、ＩＢＰ＿ＣＡＲＣＲ（Ｐ００９９３）、ＩＢＰＣ＿ＢＯＶＩＮ（Ｐ００９７６）、
ＩＢＰＩ＿ＴＡＣＴＲ（Ｐ１６０４４）、ＩＢＰＳ＿ＢＯＶＩＮ（Ｐ００９７５）、ＩＣＳ３＿ＢＯＭＭＯ（Ｐ０７４８１）、
ＩＭＡＰ＿ＤＲＯＦＵ（Ｐ１１４２４）、ＩＰ５２＿ＡＮＥＳＵ（Ｐ１０２８０）、ＩＳＣ１＿ＢＯＭＭＯ（Ｐ１０８３１）、
ＩＳＣ２＿ＢＯＭＭＯ（Ｐ１０８３２）、ＩＳＨ１＿ＳＴＯＨＥ（Ｐ３１７１３）、ＩＳＨ２＿ＳＴＯＨＥ（Ｐ８１１２９）、
ＩＳＩＫ＿ＨＥＬＰＯ（Ｐ００９９４）、ＩＳＰ２＿ＧＡＬＭＥ（Ｐ８１９０６）、ＩＶＢ１＿ＢＵＮＦＡ（Ｐ２５６６０）、
ＩＶＢ１＿ＢＵＮＭＵ（Ｐ００９８７）、ＩＶＢ１＿ＶＩＰＡＡ（Ｐ００９９１）、ＩＶＢ２＿ＢＵＮＭＵ（Ｐ００９８９）、
ＩＶＢ２＿ＤＡＢＲＵ（Ｐ００９９０）、ＩＶＢ２＿ＨＥＭＨＡ（Ｐ００９８５）、ＩＶＢ２＿ＮＡＪＮＩ（Ｐ００９８６）、
ＩＶＢ３＿ＶＩＰＡＡ（Ｐ００９９２）、ＩＶＢＢ＿ＤＥＮＰＯ（Ｐ００９８３）、ＩＶＢＣ＿ＮＡＪＮＡ（Ｐ１９８５９）、
ＩＶＢＣ＿ＯＰＨＨＡ（Ｐ８２９６６）、ＩＶＢＥ＿ＤＥＮＰＯ（Ｐ００９８４）、ＩＶＢＩ＿ＤＥＮＡＮ（Ｐ００９８０）、
ＩＶＢＩ＿ＤＥＮＰＯ（Ｐ００９７９）、ＩＶＢＫ＿ＤＥＮＡＮ（Ｐ００９８２）、ＩＶＢＫ＿ＤＥＮＰＯ（Ｐ００９８１）、
ＩＶＢＴ＿ＥＲＩＭＡ（Ｐ２４５４１）、ＩＶＢＴ＿ＮＡＪＮＡ（Ｐ２０２２９）、ＭＣＰＩ＿ＭＥＬＣＰ（Ｐ８２９６８）、
ＳＢＰＩ＿ＳＡＲＢＵ（Ｐ２６２２８）、ＳＰＴ３＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ４９２２３）、ＴＫＤ１＿ＢＯＶＩＮ（Ｑ２８２０１）、
ＴＫＤ１＿ＳＨＥＥＰ（Ｑ２９４２８）、ＴＸＣＡ＿ＤＥＮＡＮ（Ｐ８１６５８）、ＵＰＴＩ＿ＰＩＧ（Ｑ２９１００）、
ＡＭＢＰ＿ＢＯＶＩＮ（Ｐ００９７８）、ＡＭＢＰ＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ０２７６０）、ＡＭＢＰ＿ＭＥＲＵＮ（Ｑ６２５７７）、
ＡＭＢＰ＿ＭＥＳＡＵ（Ｑ６０５５９）、ＡＭＢＰ＿ＭＯＵＳＥ（Ｑ０７４５６）、ＡＭＢＰ＿ＰＩＧ（Ｐ０４３６６）、
ＡＭＢＰ＿ＲＡＴ（Ｑ６４２４０）、ＩＡＴＲ＿ＨＯＲＳＥ（Ｐ０４３６５）、ＩＡＴＲ＿ＳＨＥＥＰ（Ｐ１３３７１）、
ＳＰＴ１＿ＨＵＭＡＮ（Ｏ４３２７８）、ＳＰＴ１＿ＭＯＵＳＥ（Ｑ９Ｒ０９７）、ＳＰＴ２＿ＨＵＭＡＮ（Ｏ４３２９１）、
ＳＰＴ２＿ＭＯＵＳＥ（Ｑ９ＷＵ０３）、ＴＦＰ２＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ４８３０７）、ＴＦＰ２＿ＭＯＵＳＥ（Ｏ３５５３６）、
ＴＦＰＩ＿ＨＵＭＡＮ（Ｐ１０６４６）、ＴＦＰＩ＿ＭＡＣＭＵ（Ｑ２８８６４）、ＴＦＰＩ＿ＭＯＵＳＥ（Ｏ５４８１９）、
ＴＦＰＩ＿ＲＡＢＩＴ（Ｐ１９７６１）、ＴＦＰＩ＿ＲＡＴ（Ｑ０２４４５）、ＹＮ８１＿ＣＡＥＥＬ（Ｑ０３６１０）
【０１５７】
様々な方法を用いて、配列データベースからＫｕｎｉｔｚドメインを同定することができる。例えば、あるＫｕｎｉｔｚドメインの既知のアミノ酸配列、コンセンサス配列またはモチーフ（例えば、ＰｒｏＳｉｔｅのモチーフ）を、ＧｅｎＢａｎｋ配列データベース（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ）に対して、例えば、ＢＬＡＳＴを用いて；ＨＭＭ（隠れマルコフモデル（Ｈｉｄｄｅｎ  Ｍａｒｋｏｖ  Ｍｏｄｅｌ））のＰｆａｍデータベースに対して（例えば、Ｐｆａｍ検索の初期設定パラメータを用いて）；ＳＭＡＲＴデータベースに対して；または、ＰｒｏＤｏｍデータベースに対して検索することができる。例えば、Ｐｆａｍリリース９のＰｆａｍ寄託番号ＰＦ０００１４は、多数のＫｕｎｉｔｚドメインと、Ｋｕｎｉｔｚドメインを同定するためのＨＭＭを提示している。Ｐｆａｍデータベースについての説明は、Ｓｏｎｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ２８（３）：４０５−４２０に見出すことができ、ＨＭＭの詳細な説明は、例えば、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３：１４６−１５９；  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８４：４３５５−４３５８；  Ｋｒｏｇｈ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２３５：１５０１−１５３１；およびＳｔｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  ２：３０５−３１４に見出すことができる。ＨＭＭのＳＭＡＲＴデータベース（調節因子構造研究用簡易ツール（Ｓｉｍｐｌｅ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ，  ＥＭＢＬ，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，  ＤＥ）は、Ｓｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：５８５７およびＳｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：２３１に記載のとおりである。ＳＭＡＲＴデータベースは、ＨＭＭｅｒ２検索プログラム（Ｒ．  Ｄｕｒｂｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ：  ｐｒｏｂａｂｉｌｉｓｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）の隠れマルコフモデルを用いてプロファイリングすることによって同定されたドメインを含む。また、このデータベースは、註釈が付され、また追跡調査されている。ＰｒｏＤｏｍタンパク質ドメインデータベースは、相同性ドメインを自動的に編集したものからなる（Ｃｏｒｐｅｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９），  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２７：２６３−２６７）。ＰｒｏＤｏｍの最新バージョンは、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ３８およびＴＲＥＭＢＬタンパク質データベースの帰納的ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ検索（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４��２；  Ｇｏｕｚｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２３：３３３−３４０．）を用いて構成されている。このデータベースは、各ドメインのコンセンサス配列を自動的に作成している。ＰｒｏＳｉｔｅは、Ｋｕｎｉｔｚドメインをモチーフとして列挙し、Ｋｕｎｉｔｚドメインを含むタンパク質を同定している。例えば、Ｆａｌｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３０：２３５−２３８（２００２）を参照されたい。
【０１５８】
Ｋｕｎｉｔｚドメインは、主に、２つのループ領域（「結合ループ」）中のアミノ酸を用いて、標的となるプロテアーゼと相互作用する。第一のループ領域は、ＢＰＴＩの約１３〜２０位のアミノ酸に相当する残基の間にある。第二のループ領域は、ＢＰＴＩの約３１〜３９位のアミノ酸に相当する残基の間にある。例示的なＫｕｎｉｔｚドメインのライブラリーは、第一および／または第二のループ領域内で１個以上のアミノ酸の位置を変更している。変更するのに特に有用な位置は、カリクレインと相互作用するＫｕｎｉｔｚドメインをスクリーニング時、または改善された親和性変異体のために選択時、ＢＰＴＩ配列の１３、１５、１６、１７、１８、１９、３１、３２、３４、および３９位が挙げられる。これらの位置の少なくとも一部は、標的プロテアーゼと密接すると予期される。他の位置、例えば、３次元構造において上記の位置に隣接している位置を変更することも有用である。
【０１５９】
Ｋｕｎｉｔｚドメインの「フレームワーク領域」は、Ｋｕｎｉｔｚドメインの一部の残基であると定義されるが、具体的には、第一および第二の結合ループ領域内の残基、すなわち、ＢＰＴＩのアミノ酸の１３〜２０位および３１〜３９位に相当する残基を除外している。逆に言えば、結合ループにない残基は、より広範なアミノ酸置換（例えば、保存的置換および／または非保存的置換）を許容し得る。
【０１６０】
１つの実施形態では、これらのＫｕｎｉｔｚドメインは、ヒトリポタンパク質結合性凝固阻害剤（ＬＡＣＩ）タンパク質のＫｕｎｉｔｚドメイン１を含むループ化された構造の変異型である。ＬＡＣＩは、パラダイムＫｕｎｉｔｚドメインである３種の内部の特定のペプチドループ構造を含む（Ｇｉｒａｒｄ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３８：５１８−５２０）。本明細書に記載のＬＡＣＩのＫｕｎｉｔｚドメイン１の変異体は、スクリーニングされて単離されており、これらは、カリクレインと強化された親和性および特異性で結合する（例えば、米国特許第５，７９５，８６５号および同第６，０５７，２８７号を参照されたい）。これらの方法は、カリクレイン（例えば、血漿カリクレイン）と相互作用する他のＫｕｎｉｔｚドメインを得るために、他のＫｕｎｉｔｚドメインのフレームワークに適用することもできる。カリクレインの結合および阻害アッセイを用いて決定したところ、カリクレイン機能の有用な調節因子は、典型的には、カリクレインと結合するおよび／またはカリクレインを阻害する。
【０１６１】
血漿カリクレインを阻害するＫｕｎｉｔｚドメインを含む例示的なポリペプチドは、配列番号２の３〜６０位のアミノ酸で定義されたアミノ酸配列を有するまたは含む。血漿カリクレインを阻害するＫｕｎｉｔｚドメインを含む別の例示的なポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を有するまたは含む。
【０１６２】
例示的なポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、
Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｃｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｘａａ２０  Ｘａａ２１  Ｘａａ２２  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｘａａ２５  Ｘａａ２６  Ｘａａ２７  Ｘａａ２８  Ｘａａ２９  Ｃｙｓ  Ｘａａ３１  Ｘａａ３２  Ｐｈｅ  Ｘａａ３４  Ｘａａ３５  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｘａａ３９  Ｘａａ４０  Ｘａａ４１  Ｘａａ４２  Ｘａａ４３  Ｘａａ４４  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｘａａ４７  Ｘａａ４８  Ｘａａ４９  Ｘａａ５０  Ｃｙｓ  Ｘａａ５２  Ｘａａ５３  Ｘａａ５４  Ｃｙｓ  Ｘａａ５６  Ｘａａ５７  Ｘａａ５８（配列番号１）を含む。
【０１６３】
「Ｘａａ」とは、ペプチド鎖中の位置を指し、多数の異なるアミノ酸のいずれであることもできる。最初の例では、Ｘａａは、システイン以外の任意のアミノ酸であり得る。別の例では、１つ以上の以下が適用される：Ｘａａ１０はＡｓｐまたはＧｌｕであり得；Ｘａａ１１はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、ＡｌａまたはＴｈｒであり得；Ｘａａ１３はＰｒｏ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＬｙｓまたはＧｌｎであり得；Ｘａａ１５はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、ＡｓｎまたはＧｌｎであり得；Ｘａａ１６はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＡｓｎであり得；Ｘａａ１７はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、ＧｌｎまたはＴｈｒであり得；Ｘａａ１８はＨｉｓ、Ｌｅｕ、ＧｌｎまたはＡｌａであり得；Ｘａａ１９はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、ＡｓｎまたはＩｌｅであり得；Ｘａａ２１はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＨｉｓまたはＩｌｅであり得；Ｘａａ３１はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＴｈｒであり得；Ｘａａ３２はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、ＧｌｙまたはＶａｌであり得；Ｘａａ３４はＩｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ａｓｎ、ＧｌｙまたはＬｅｕであり得；Ｘａａ３５はＴｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅであり得；Ｘａａ３９はＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、ＳｅｒまたはＡｓｐであり得る。アミノ酸Ｘａａ６、Ｘａａ７、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ２０、Ｘａａ２４、Ｘａａ２５、Ｘａａ２６、Ｘａａ２７、Ｘａａ２８、Ｘａａ２９、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４４、Ｘａａ４６、Ｘａａ４７、Ｘａａ４８、Ｘａａ４９、Ｘａａ５０、Ｘａａ５２、Ｘａａ５３およびＸａａ５４は任意のアミノ酸であり得る。
【０１６４】
加えて、配列番号１の最初の４個（Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４）および最後の３個（Ｘａａ５６、Ｘａａ５７またはＸａａ５８）のアミノ酸はそれぞれ、任意に存在することも存在しないこともでき、存在する場合は、任意のアミノ酸（例えば、システイン以外の任意のアミノ酸）であり得る。
【０１６５】
１つの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上の以下の特徴を有する配列を有する：Ｘａａ１１はＡｓｐ、Ｇｌｙ、ＳｅｒもしくはＶａｌであり得；Ｘａａ１３はＰｒｏ、Ａｒｇ、ＨｉｓもしくはＡｓｎであり得；Ｘａａ１５はＡｒｇもしくはＬｙｓであり得；Ｘａａ１６はＡｌａもしくはＧｌｙであり得；Ｘａａ１７はＡｌａ、Ａｓｎ、ＳｅｒもしくはＩｌｅであり得；Ｘａａ１８はＨｉｓ、ＬｅｕもしくはＧｌｎであり得；Ｘａａ１９はＰｒｏ、ＧｌｎもしくはＬｅｕであり得；Ｘａａ２１はＴｒｐもしくはＰｈｅであり得；Ｘａａ３１はＧｌｕであり；Ｘａａ３２はＧｌｕもしくはＧｌｎであり得；Ｘａａ３４はＩｌｅ、ＴｈｒもしくはＳｅｒであり得；Ｘａａ３５はＴｙｒであり；ならびにＸａａ３９はＧｌｕ、ＧｌｙもしくはＡｌａであり得る。
【０１６６】
例示的なポリペプチドは、以下のアミノ酸を含み得る：Ｘａａ１０はＡｓｐであり；Ｘａａ１１はＡｓｐであり；Ｘａａ１３はＰｒｏもしくはＡｒｇであり得；Ｘａａ１５はＡｒｇであり；Ｘａａ１６はＡｌａもしくはＧｌｙであり得；Ｘａａ１７はＡｌａであり；Ｘａａ１８はＨｉｓであり；Ｘａａ１９はＰｒｏであり；Ｘａａ２１はＴｒｐであり；Ｘａａ３１はＧｌｕであり；Ｘａａ３２はＧｌｕであり；Ｘａａ３４はＩｌｅもしくはＳｅｒであり得；Ｘａａ３５はＴｙｒであり；ならびにＸａａ３９はＧｌｙである。
【０１６７】
本明細書に記載のポリペプチドの一部を使用することも可能である。例えば、ポリペプチドは、特定のカリクレインエピトープに関する結合ドメインを含み得る。例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメインの結合ループは、環化して別々に使用することもでき、別のドメイン（例えば、別のＫｕｎｉｔｚドメインのフレームワーク）にグラフト化することもできる。本明細書に記載のアミノ酸配列のＮ末端から１、２、３、もしくは４個のアミノ酸、ならびに／または本明細書に記載のアミノ酸配列のＣ末端から１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸を除去することも可能である。
【０１６８】
配列番号１に包含される配列の例は、以下のとおりである（特に指定のない限り、「Ｘａａ」とはシステイン以外の任意のアミノ酸を指す）。
【０１６９】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ａｒｇ  Ｘａａ２１  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｘａａ３１  Ｘａａ３２  Ｐｈｅ  Ｘａａ３４  Ｘａａ３５  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｘａａ３９  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号３３）、
【０１７０】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）、
【０１７１】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号４）、
【０１７２】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号５）、
【０１７３】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｎ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号６）、
【０１７４】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号７）、
【０１７５】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号８）、
【０１７６】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号９）、
【０１７７】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１０）、
【０１７８】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１１）、
【０１７９】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１２）、
【０１８０】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１３）、
【０１８１】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１４）、
【０１８２】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１５）、
【０１８３】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１６）、
【０１８４】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１７）、
【０１８５】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１８）、
【０１８６】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号１９）、
【０１８７】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２０）、
【０１８８】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｉｌｅ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２１）、
【０１８９】
Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２２）、
【０１９０】
Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）。
【０１９１】
配列のさらなる例としては、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、上に提示したアミノ酸配列）と比較して少なくとも１個、かつ７、６、５、４、３、または２個未満のアミノ酸が異なる配列が挙げられる。１つの実施形態では、結合ループの一方において、３、２個未満、または１個が異なっている。例えば、第一の結合ループは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、上に提示したアミノ酸配列）と比較して異なっていなくてもよい。別の例では、第一の結合ループも第二の結合ループも、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、上に提示したアミノ酸配列）と異なっていない。
【０１９２】
図２Ａおよび２Ｂは、これらの配列のアミノ酸配列整列、これらの変異体が誘導された天然型のＬＡＣＩ配列（配列番号３２）、および他の既知のＫｕｎｉｔｚドメイン（配列番号２９〜３１および３３〜５３）を提示する。さらに、血漿カリクレインを阻害する他のポリペプチドは、配列番号２の約５８個（３〜６０位のアミノ酸）のアミノ酸配列、または配列番号２の６０個のアミノ酸配列を有するＰＥＰ−１ポリペプチドを含む。本明細書で使用する「ＰＥＰ−１」および「ＤＸ−８８」という用語は、両方とも配列番号２の６０個のアミノ酸配列を指す。配列番号２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を配列番号３に提示する（例えば、図１の３０９〜４８８位のヌクレオチドを参照されたい）。配列番号３のヌクレオチド配列の縮重形態は、既知の遺伝子コードに基づいて、単に、そのヌクレオチド配列によってコードされた各アミノ酸を１種以上の既知の縮重コドンと置換することにより得ることができることが理解される。配列番号３の７〜１８０位のヌクレオチド、およびそれらの縮重形態は、配列番号２の３〜６０位のアミノ酸の５８個のアミノ酸配列、それらの関連配列または機能的な断片を含む非天然Ｋｕｎｉｔｚドメインのポリペプチドをコードする。
【０１９３】
１つの実施形態では、ポリペプチドは、アプロチニン以外のポリペプチドであり、例えば、アプロチニンと少なくとも１、２、３、５、１０、または１５個のアミノ酸が異なる。
【０１９４】
本明細書に記載のポリペプチドは、あらゆる標準的なポリペプチド合成プロトコールおよび器具を用いて合成できる。例えば、ポリペプチドの段階的合成は、最初の（すなわち、カルボキシ末端の）アミノ酸からアミノ（Ｎ）末端の保護基を除去し、それらに、そのポリペプチド配列において次のアミノ酸のカルボキシ末端を結合させることによって実施することができる。このアミノ酸も、適切に保護される。その後に続くアミノ酸のカルボキシル基は活性化されて、カルボジイミド、対称な酸無水物、または「活性エステル」基（ヒドロキシベンゾトリアゾールまたはペンタフルオロフェニルエステルなど）に形成されるなど、反応基に形成されることによって、結合したアミノ酸のＮ末端と反応し得る。好ましい固相ペプチド合成方法としては、Ｉ−アミノ保護基としてｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを使用するＢＯＣ方法、および９−フルオレニルメトキシカルボニルを使用してアミノ酸残基のαアミノを保護するＦＭＯＣ方法が挙げられる。両方法とも当業者に周知である（Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，  Ｊ．，  Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  １９８９）；  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  Ｊ．，  １９６３．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５：２１４９−２１５４；  Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，  Ａ．，  Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８４））。所望の場合、ポリペプチド合成中に、さらなるアミノ末端および／またはカルボキシ末端のアミノ酸を設計してアミノ酸配列に付加することができる。
【０１９５】
ポリペプチドは、組換え技術を用いて産生することもできる。組換え方法には、任意の多数の細胞およびそれに対応する発現ベクター（細菌発現ベクター、酵母発現ベクター、バキュロウイルス発現ベクター、哺乳動物ウイルス発現ベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない）のいずれも使用できる。本明細書に記載のポリペプチドは、トランスジェニック動物によって（例えば、トランスジェニック動物の乳腺で）産生できる。一部の場合、発現ベクター中でカリクレインを阻害するポリペプチド（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメインを含むポリペプチド）に関するコード配列を別のコード配列に融合させて、宿主細胞中で容易に発現する融合ポリペプチドを形成することが必要または有利であり得る。追加配列の一部またはすべてを（例えば、プロテアーゼ消化によって）除去できる。
【０１９６】
カリクレインを阻害するポリペプチド（例えば、Ｋｕｎｉｔｚドメインを含むポリペプチド）を産生するための例示的な組換え発現系は、酵母発現ベクターであり、これは阻害剤ポリペプチドに関するアミノ酸配列をコードする核酸配列を、同一読み枠内で、サッカロミセス・セレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のＭＡＴαプレプロリーダーペプチド配列をコードするヌクレオチド配列と結合させ、これを順に、作動可能な酵母プロモーターの制御下に置くことを可能にする。生成した組換え酵母発現プラスミドは、標準的な方法によって適切かつ適合性の酵母宿主の細胞に形質転換することができ、この細胞は組換え酵母発現ベクターから組換えタンパク質を発現することができる。好ましくは、かかる組換え発現ベクターで形質転換された宿主の酵母細胞は、融合タンパク質をプロセシングして、活性阻害剤ポリペプチドを提供することもできる。組換えポリペプチドを産生するための他の例示的な酵母宿主は、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）である。
【０１９７】
上記のように、カリクレインを阻害するポリペプチドは、本明細書に記載のＫｕｎｉｔｚドメインのポリペプチドを含むことができる。一部のポリペプチドは、アミノ末端および／またはカルボキシ末端において、追加の隣接配列を、好ましくは１〜６個のアミノ酸の長さで（かかる追加のアミノ酸が、本明細書に記載の方法および組成物における使用を妨げるほどカリクレインの結合親和性またはカリクレインの阻害活性を有意に低減しない限り）含み得る。かかる追加のアミノ酸は、特定の組換え宿主細胞中でポリペプチドが発現するように意図的に付加することもでき、追加の機能が提供される（例えば、別の分子へのリンカーが提供される、またはポリペプチドの精製を容易にする親和性部分が提供される）ように付加することもできる。好ましくは、追加のアミノ酸（１個または複数）はＫｕｎｉｔｚドメインのジスルフィド結合に干渉し得るシステインを含まない。
【０１９８】
例示的なＫｕｎｉｔｚドメインのポリペプチドは、配列番号２の３〜６０残基のアミノ酸配列を含む。酵母の融合タンパク質発現系（例えば、組み込み発現プラスミドｐＨＩＬ−Ｄ２をベースとしたもの）中で発現されプロセシングされた場合、かかるＫｕｎｉｔｚドメインのポリペプチドは、Ｓ．セレビジエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のＭＡＴαプレプロリーダーペプチド配列との融合による追加のアミノ末端Ｇｌｕ−Ａｌａジペプチドを保持する。酵母宿主細胞から分泌される場合、ほとんどのリーダーペプチドは融合タンパク質からプロセシングされ、配列番号２のアミノ酸配列を有する機能的なポリペプチド（本明細書において「ＰＥＰ−１」と呼ぶ）を得る（図１の囲み枠を参照されたい）。
【０１９９】
典型的なＫｕｎｉｔｚドメイン（例えば、配列番号１を含むＫｕｎｉｔｚドメイン）は、いくつかの不変の位置を含む。例えば、ＢＰＴＩの番号付けスキームによれば、５、１４、３０、３３、３８、４５、５１および５５位に相当する位置はシステインである。これらの位置の間隔は、Ｋｕｎｉｔｚドメインの折り畳み内部で許容できる程度に様々であってよく、例えば、３個のジスルフィド結合が形成される程度の間隔である。その他の位置（例えば、６、７、８、９、２０、２４、２５、２６、２７、２８、２９、４１、４２、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５２、５３および５４位、またはそれらの位置に相当する位置など）は、任意のアミノ酸（非遺伝学的にコードされて生じるアミノ酸も含む）であり得る。特に好ましい実施形態では、１個以上のアミノ酸が天然型の配列を有するアミノ酸に相当する（例えば、配列番号３２、図２Ａおよび２Ｂを参照されたい）。別の実施形態では、少なくとも１つの可変の位置が、天然型の配列の可変の位置とは異なる。さらに別の好ましい実施形態では、アミノ酸は、保存的または非保存的アミノ酸置換によってそれぞれ個々に置換されていることもでき、または集合的に置換されていることもできる。
【０２００】
保存的アミノ酸置換は、アミノ酸を類似の化学的性質を有する別のアミノ酸で置き換え、タンパク質の機能に影響を及ぼさない可能性がある。非保存的アミノ酸置換は、アミノ酸を類似していない化学構造を有する別のアミノ酸で置き換える。保存的アミノ酸置換の例としては、例えば、ＡｓｎのＧｌｎでの置換、ＡｒｇのＬｙｓでの置換およびＳｅｒのＴｈｒでの置換が挙げられる。１つの好ましい実施形態では、これらのアミノ酸のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０および／または２１個を独立してまたは集合的に、あらゆる組み合わせで、配列番号２の対応する位置に一致するように選択することができる。
【０２０１】
その他の位置、例えば、１０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２１、２２、２３、３１、３２、３４、３５、３９、４０、４３および４５位、またはそれらの位置に相当する位置は、選択されたアミノ酸群のいずれでもあり得る。例えば、配列番号１は、可能な配列群を定義する。この群の各要素は、例えば、５、１４、３０、５１および５５位にシステインを含み、ならびに１０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２１、２２、２３、３１、３２、３４、３５、３９、４０、４３および４５位、またはそれらの位置に相当する位置に特定のアミノ酸群のいずれか一種を含む。１つの好ましい実施形態では、これらのアミノ酸のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８および／または１９個を独立してまたは集合的に、あらゆる組み合わせで、配列番号２の対応する位置に一致するように選択することができる。このポリペプチドは、好ましくは、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５、９７、９８、または９９％の同一性を有する。
【０２０２】
配列の比較および２つの配列間の相同率（％）の決定は、数学アルゴリズムを用いて達成することができる。１つの好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間の相同率（％）は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  （１９７０），  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：４４４−４５３に記載のアルゴリズムを用いて、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、もしくは４のギャップウェイト、ならびに１、２、３、４、５、もしくは６のレングスウェイトを用いて決定される（このアルゴリズムは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムに組み込まれている）。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の相同率（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを用いて、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、ならびに４０、５０、６０、７０、もしくは８０のギャップウェイト、ならびに１、２、３、４、５、もしくは６のレングスウェイトを用いて決定される。特に好ましいパラメータ群（および分子が相同性の限定の範囲内であるかどうかを決定するためにどのパラメータを適用すべきか専門家が分からない場合に使用すべきパラメータ群）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を使用したＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリング行列である。
【０２０３】
結合タンパク質阻害剤。他の実施形態では、カリクレイン阻害剤は結合タンパク質（抗体など）である。
【０２０４】
１つの態様では、本開示は、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）と結合し、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域を含むタンパク質（例えば、単離タンパク質）を特徴とする。例えば、タンパク質は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および／または軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。タンパク質は、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）と結合できるおよび血漿カリクレインを阻害できる。
【０２０５】
タンパク質は、１つ以上の以下の特徴を含み得る：（ａ）ヒトＣＤＲまたはヒトフレームワーク領域；（ｂ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であるＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含むこと；（ｃ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であるＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）含むこと；（ｄ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であること（例えば、全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；（ｅ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であること（例えば、全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；（ｆ）タンパク質が、本明細書に記載のタンパク質によって結合したエピトープと結合する、もしくは本明細書に記載のタンパク質と結合について競合すること；（ｇ）霊長類ＣＤＲもしくは霊長類フレームワーク領域；（ｈ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１個、かつ２または３個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ１を含む；（ｉ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、６、７、もしくは８個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ２を含む；（ｊ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、もしくは６個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３を含む；（ｋ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１個、かつ２、３、４、もしくは５個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ１を含む；（ｌ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１個、かつ２、３、もしくは４個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ２を含む；（ｍ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１個、かつ２、３、４、もしくは５個以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３を含む；（ｎ）免疫グロブリンＬＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＬＣ可変ドメインと、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個以下のアミノ酸が異なる（例えば、全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；ならびに（ｏ）免疫グロブリンＨＣ可変ドメイン配列が、本明細書に記載のＨＣ可変ドメインと、少なくとも１個、かつ２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個以下のアミノ酸が異なる（例えば、全体またはフレームワーク領域もしくはＣＤＲにおいて）。
【０２０６】
血漿カリクレイン結合タンパク質は、単離タンパク質であり得る（例えば、他のタンパク質を少なくとも７０、８０、９０、９５、または９９％含まない）。
【０２０７】
血漿カリクレイン結合タンパク質は、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）を阻害し得る。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、プレカリクレイン（例えば、ヒトプレカリクレイン）とは結合しないが、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）の活性形態と結合する。
【０２０９】
ある実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレイン、またはその断片の触媒ドメインの活性部位またはその付近と結合するか、血漿カリクレインの活性部位と重複するエピトープと結合する。
【０２１０】
いくつかの様相では、タンパク質は、本明細書に記載のタンパク質と同一エピトープと結合するまたは結合について競合する。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、またはＸ６７−Ｇ０４と同一エピトープと競合するまたは結合する。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、（例えば、以下に相当する血漿カリクレイン上の位置）ＣＬＩＰＳペプチドＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、もしくはＣ７、またはこれらのペプチドの２つ以上と結合し、例えば、タンパク質は、Ｃ５およびＣ６と結合する。ＣＬＩＰＳペプチドＣ１〜Ｃ７は、ＣＬＩＰＳエピトープマッピングにより同定される血漿カリクレイン中のペプチドである（図８および９Ａ〜９Ｃを参照されたい）。Ｃ１は触媒ドメインの５５〜６７位に対応し、Ｃ２は８１〜９４位に、Ｃ３は１０１〜１０８位に、Ｃ４は１３７〜１５１位に、Ｃ５は１６２〜１７８位に、Ｃ６は１８６〜１９７位に、およびＣ７は血漿カリクレインの２１４〜２１７位に相当する。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、図８に示すエピトープと結合する。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレインの触媒三連構造：Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、および／またはＳｅｒ５７８（ヒト配列に基づいてナンバリング）を形成する１個以上のアミノ酸と結合する。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｓｅｒ４７９、Ｔｙｒ５６３、および／またはＡｓｐ５８５（ヒト配列に基づいてナンバリング）のアミノ酸の１個以上と結合する。
【０２１６】
血漿カリクレインの活性部位の間隙は、触媒三連構造（Ｈｉｓ４３４、Ａｓｐ４８３、およびＳｅｒ５７８）を形成する３個のアミノ酸を含み、結合した基質の酵素的加水分解に至る（触媒三連構造残基は図９Ａ〜９Ｃの下線である）。ＣＬＩＰＳエピトープマッピング分析用に選択したペプチドは接近可能な表面であり、活性部位の近傍を形成するか囲むかのいずれかであることを確定した。ペプチドＣ１は活性部位ヒスチジン４３４を含む。ペプチドＣ３は活性部位アスパラギン酸４８３を含む。ペプチドＣ６は活性部位セリン５７８を含む。抗体は、アミノ酸配列中で不連続的なアミノ酸の露出した複数の表面に結合することが可能である。例えば、ＣＬＩＰＳ分析により、Ｘ８１−Ｂ０１はＣ２、Ｃ３、Ｃ５およびＣ６ペプチドと結合すると思われる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＣＬＩＰＳペプチドＣ１、ペプチドＣ２、ペプチドＣ３、ペプチドＣ４、ペプチドＣ５、ペプチドＣ６、またはペプチドＣ７由来のアミノ酸を１個以上含むエピトープと結合する。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＣＬＩＰＳペプチド由来（例えば、少なくとも２個のペプチドＣ１、ペプチドＣ２、ペプチドＣ３、ペプチドＣ４、ペプチドＣ５、ペプチドＣ６、またはペプチドＣ７由来）の少なくとも２個の異なるアミノ酸を含むエピトープと結合する。
【０２１９】
タンパク質は、血漿カリクレイン、例えば、ヒト血漿カリクレインと、少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０および１０１１Ｍ−１の結合親和性で結合できる。１つの実施形態では、タンパク質は、ヒト血漿カリクレインと１×１０−３、５×１０−４ｓ−１、または１×１０−４ｓ−１より遅いＫｏｆｆで結合する。１つの実施形態では、タンパク質は、ヒト血漿カリクレインと１×１０２、１×１０３、または５×１０３Ｍ−１ｓ−１より速いＫｏｎで結合する。１つの実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレインと結合するが、組織カリクレインおよび／または血漿プレカリクレインとは、血漿カリクレインと結合するほど結合しない（例えば、タンパク質は、組織カリクレインおよび／または血漿プレカリクレインと結合する効果が低い（例えば、陰性対照と比較して、例えば、５、１０、５０、１００、もしくは１０００倍低いまたはまったくない））。
【０２２０】
１つの実施形態では、タンパク質は、ヒト血漿カリクレイン活性を、例えば、１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、および１０−１０Ｍ未満のＫｉで阻害する。タンパク質は、例えば、１００ｎＭ、１０ｎＭまたは１ｎＭ未満のＩＣ５０を有し得る。例えば、タンパク質は、血漿カリクレイン活性、ならびに第ＸＩＩａ因子（例えば、第ＸＩＩ因子由来）および／またはブラジキニン（例えば、高分子キニノーゲン（ＨＭＷＫ）由来）の産生を調節し得る。タンパク質は、血漿カリクレイン活性、および／または第ＸＩＩａ因子（例えば、第ＸＩＩ因子由来）および／またはブラジキニン（例えば、高分子キニノーゲン（ＨＭＷＫ）由来）の産生を阻害し得る。タンパク質のヒト血漿カリクレインに対する親和性は１００ｎｍ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫＤを特徴とし得る。１つの実施形態では、タンパク質は、血漿カリクレインを阻害するが、組織カリクレインについては血漿カリクレインを阻害するほど阻害しない（例えば、タンパク質は組織カリクレインを阻害する効果が低い（例えば、陰性対照と比較して、例えば、５、１０、５０、１００、もしくは１０００倍低いまたはまったくない））。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、１０００、５００、１００、または１０ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【０２２２】
血漿カリクレイン結合タンパク質は抗体であり得る。血漿カリクレイン結合抗体は単一のポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）中、または異なるポリペプチド（例えば、ＩｇＧまたはＦａｂ）上に含まれるＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列を有し得る。
【０２２３】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖および重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２４】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の重鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２５】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２６】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖および重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２７】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の重鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２８】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる群から選択される抗体の軽鎖抗体可変領域を有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２２９】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる重鎖の群の対応するＣＤＲから選択される重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２３０】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる軽鎖の群の対応するＣＤＲから選択される軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２３１】
１つの好ましい実施形態では、タンパク質は、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、およびＸ６７−Ｇ０４からなる軽鎖の群の対応するＣＤＲから選択される重鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）および軽鎖ＣＤＲを１つ以上（例えば、１、２、または３つ）有する抗体（例えば、ヒト抗体）である。
【０２３２】
１つの実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は同一ポリペプチド鎖の成分である。別の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は異なるポリペプチド鎖の成分である。例えば、タンパク質は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）である。タンパク質は、可溶性Ｆａｂであり得る。他の実施では、タンパク質は、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、小体、ｓｃＦｖ：：Ｆｃ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ融合物、ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、または本明細書の結合タンパク質の１つの抗原結合部位を含む他の分子を含む。これらＦａｂのＶＨおよびＶＬ領域は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ、ＰＥＧ化ｓｃＦｖ、ＰＥＧ化Ｆａｂ２、ＶＨ：：ＣＨ１：：ＨＳＡ＋ＬＣ、ＨＳＡ：：ＶＨ：：ＣＨ１＋ＬＣ、ＬＣ：：ＨＳＡ＋ＶＨ：：ＣＨ１、ＨＳＡ：：ＬＣ＋ＶＨ：：ＣＨ１、または他の適切な構築物として提供できる。
【０２３３】
１つの実施形態では、タンパク質は、ヒト抗体またはヒト化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上のヒト抗体フレームワーク領域、例えば、すべてのヒトフレームワーク領域、またはヒトフレームワーク領域と少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であるフレームワーク領域を含む。１つの実施形態では、タンパク質は、ヒトＦｃドメイン、またはヒトＦｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。
【０２３４】
１つの実施形態では、タンパク質は、霊長類抗体または霊長類化抗体であるか、ヒトで非免疫原性を示す。例えば、タンパク質は、１つ以上の霊長類抗体フレームワーク領域、例えば、すべての霊長類フレームワーク領域、または霊長類フレームワーク領域と少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であるフレームワーク領域を含む。１つの実施形態では、タンパク質は、霊長類Ｆｃドメイン、または霊長類Ｆｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％同一であるＦｃドメインを含む。「霊長類」は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）、チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓおよびＰａｎ  ｐａｎｉｓｃｕｓ（ボノボ））、ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａ  ｇｏｒｉｌｌａ）、テナガザル、サル、キツネザル、アイアイ（Ｄａｕｂｅｎｔｏｎｉａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、およびメガネザルを含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、ヒト血漿カリクレインに対する霊長類抗体の親和性は、１０００、５００、１００または１０ｎＭ未満、例えば、１０ｎＭ未満または１ｎＭ未満のＫＤを特徴とする。
【０２３６】
ある実施形態では、タンパク質は、マウスまたはウサギ由来の配列を含まない（例えば、マウスまたはウサギ抗体ではない）。
【０２３７】
いくつかの様相では、本開示は、粘膜炎の治療（または予防）方法における、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレイン）に結合し、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域を含むタンパク質（例えば、結合タンパク質、例えば、抗体）（例えば、本明細書に記載のタンパク質）の使用を提供する。例えば、血漿カリクレイン結合タンパク質は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。いくつかの例示的な血漿カリクレイン結合タンパク質を本明細書に記載する。
【０２３８】
抗体は、カリクレイン標的を用いたライブラリーのスクリーニングによりならびに他の方法により見出し得る。例えば、カリクレインタンパク質またはその領域は、非ヒト動物（例えば、齧歯動物）における抗原として使用できる。ヒト化抗体は、ヒトＦｖ可変領域由来の等価配列と結合する抗原に直接関与しないＦｖ可変領域配列を置換することにより生成できる。ヒト化抗体を生成するための一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．  Ｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７により、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４により、ならびにＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号および米国特許第５，６９３，７６２号により提示されている。それらの方法は、少なくとも１つの重鎖または軽鎖由来の免疫グロブリンＦｖ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列の単離、操作、および発現を含む。かかる核酸の多数の供給源が利用可能である。例えば、核酸は、上記のように、予定の標的に対して抗体を産生するハイブリドーマから取得し得る。次いで、ヒト化抗体、またはその断片をコードする組換えＤＮＡを適切な発現ベクター内にクローニングできる。
【０２３９】
免疫グロブリンカリクレイン結合タンパク質（例えば、ＩｇＧまたはＦａｂカリクレイン結合タンパク質）を、免疫原性を減少するように修飾し得る。免疫原性の減少は、対象が治療分子に対する免疫応答を生じる可能性が減少するので、治療薬としての使用を意図するカリクレイン結合タンパク質において望ましい。カリクレイン結合タンパク質の免疫原性の減少に有用な技術としては、潜在的なヒトＴ細胞エピトープの欠失／修飾およびＣＤＲの外側の配列（例えば、フレームワークおよびＦｃ）の「生殖系列化」が挙げられる。
【０２４０】
カリクレイン結合抗体は、ヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失またはＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に開示の方法による「脱免疫化」により修飾し得る。簡単に述べると、抗体の重鎖および軽鎖可変領域をＭＨＣクラスＩＩと結合するペプチドについて分析し、これらのペプチドが、潜在的Ｔ細胞エピトープを提示する（ＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に定義）。潜在的なＴ細胞エピトープの検出のために、「ペプチドトレッディング（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」と呼ばれるコンピュータモデリングアプローチを適用し、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースに加えて、ＷＯ９８／５２９７６号およびＷＯ００／３４３１７号に記載のように、ＶＨおよびＶＬ配列中に存在するモチーフを検索できる。これらのモチーフは、１８個の主要ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのいずれかと結合することにより、潜在的なＴ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的なＴ細胞エピトープは、可変領域中の少数のアミノ酸残基を置換することにより、または好ましくは単一アミノ酸の置換により排除できる。可能な保存的置換を行う限り、ヒト生殖系列抗体配列のこの位置に共通のアミノ酸を頻繁に使用し得るが、これは他を排除しない。ヒト生殖系列配列については、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７７６−７９８；  Ｃｏｏｋ，  Ｇ．  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｏｄａｙ  Ｖｏｌ．  １６  （５）：  ２３７−２４２；  Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏ．  ２２７：７９９−８１７に開示されている。Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的ディレクトリを提供している（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫによって編纂されている）。脱免疫化の変化を同定後、ＶＨおよびＶＬをコードする核酸を、変異誘発または他の合成方法（例えば、ｄｅ  ｎｏｖｏ合成、カセット置換など）により構築できる。変異誘発した可変配列は、任意に、ヒト定常領域（例えば、ヒトＩｇＧ１）またはκ定常領域と融合できる。
【０２４１】
一部の場合、潜在的Ｔ細胞エピトープは、抗体機能にとって重要であることが知られているまたは予想される残基を含む。例えば、潜在的Ｔ細胞エピトープは、通常、ＣＤＲに偏っている。さらに、潜在的Ｔ細胞エピトープは、抗体の構造および結合に重要なフレームワーク残基で生じ得る。これらの潜在的エピトープを排除するために変化させるには、一部の場合、例えば、変化した鎖および変化していない鎖の作製および試験によりさらに精査する必要がある。可能な場合、ＣＤＲと重複する潜在的Ｔ細胞エピトープを、ＣＤＲの外側の置換により排除した。一部の場合、ＣＤＲ内の改変は唯一の選択肢であるので、置換を含むか含まない変異型を試験すべきである。他の場合、潜在的Ｔ細胞エピトープを排除するのに必要な置換は、抗体結合にとって重要であり得るフレームワーク内の残基位置で行う。これらの場合、置換を含む変異型および含まない変異型を試験すべきである。したがって、一部の場合、至適な脱免疫化抗体を同定するために、重鎖および軽鎖可変領域を脱免疫化したいくつかの変異型を設計し、様々な重／軽鎖の組み合わせを試験した。次いで、脱免疫化の範囲（すなわち、可変領域に残る潜在的Ｔ細胞エピトープ数）と併せて異なる変異型の結合親和性を考慮することにより最終的な脱免疫化抗体を選択することができる。脱免疫化を用いて、任意の抗体、例えば、非ヒト配列を含む抗体（例えば、合成抗体）、マウス抗体、他の非ヒトモノクローナル抗体、またはディスプレイライブラリーから単離した抗体を修飾できる。
【０２４２】
結合特性が実質的に保持される限り、フレームワーク領域の１つ以上の非生殖系列アミノ酸を抗体の対応する生殖系列アミノ酸に戻すことによりカリクレイン結合抗体を「生殖系列化」する。類似の方法を、定常領域（例えば、定常免疫グロブリンドメイン）中で使用することもできる。
【０２４３】
カリクレインと結合する抗体（例えば、本明細書に記載の抗体）は、１つ以上の生殖系列配列にさらに類似する抗体の可変領域を作製するために修飾し得る。例えば、抗体は、基準生殖系列配列にさらに類似させるために、１、２、３、または４個以上のアミノ酸置換を、例えば、フレームワーク、ＣＤＲ、または定常領域中に含むことができる。１つの例示的な生殖系列化方法は、単離抗体の配列に類似する（例えば、特定のデータベースで最も類似する）生殖系列配列を１つ以上同定することを含み得る。次いで、単離抗体を、漸進的に、または他の変異との組み合わせのいずれかにより（アミノ酸レベルで）変異させる。例えば、一部のまたはすべての可能な生殖系列変異をコードする配列を含む核酸ライブラリーを作製する。次いで、変異抗体を評価し、例えば、単離抗体と比較して１つ以上のさらなる生殖系列残基を有し、かつ依然として有用な（例えば、機能活性を有する）抗体を同定する。１つの実施形態では、単離抗体に可能な限り多くの生殖系列残基を導入する。
【０２４４】
１つの実施形態では、変異誘発を用いて、フレームワークおよび／または定常領域に１つ以上の生殖系列残基を置換または挿入する。例えば、生殖系列フレームワークおよび／または定常領域の残基は、修飾される非可変領域と類似する（例えば、最も類似する）生殖系列配列に由来し得る。変異誘発後、抗体の活性（例えば、結合または他の機能活性）を評価して、１つまたは複数の生殖系列残基が耐容性を示す（すなわち、活性を無効にしない）かどうかを決定できる。類似の変異誘発をフレームワーク領域中で実施できる。
【０２４５】
生殖系列配列の選択は、異なる方法で実施できる。例えば、生殖系列配列が選択性または類似性について所定の基準（例えば、少なくとも一定の同一率（％）、例えば、少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または９９．５％同一）を満たす場合に生殖系列配列を選択できる。この選択は、少なくとも２、３、５、または１０個の生殖系列配列を用いて実施できる。ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の場合、類似の生殖系列配列の同定は、１つのかかる配列の選択を含むことができる。ＣＤＲ３の場合、類似の生殖系列配列の同定は、１つのかかる配列の選択を含むことができるが、アミノ末端部分およびカルボキシ末端部分に別々に関わる２つの生殖系列配列の使用を含み得る。他の実施では、１つを超えるまたは２つを超える生殖系列配列を使用して、例えば、コンセンサス配列を形成する。
【０２４６】
１つの実施形態では、特定の基準可変ドメイン配列（例えば、本明細書に記載の配列）に関して、関連可変ドメイン配列は、基準ＣＤＲ配列中の残基（ヒト生殖系列配列（すなわち、ヒト生殖系列核酸によってコードされるアミノ酸配列）中の対応する位置の残基と同一の残基）と同一ではないＣＤＲアミノ酸位置の少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５または１００％を有する。
【０２４７】
１つの実施形態では、特定の基準可変ドメイン配列（例えば、本明細書に記載の配列）に関して、関連可変ドメイン配列は、ヒト生殖系列配列（例えば、基準可変ドメイン配列と関連する生殖系列配列）由来のＦＲ配列と同一のＦＲ領域の少なくとも３０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％を有する。
【０２４８】
したがって、所与の目的の抗体と類似の活性を有するが、１つ以上の生殖系列配列、特に１つ以上のヒト生殖系列配列とさらに類似する抗体を単離することが可能である。例えば、抗体は、ＣＤＲの外側領域（例えば、フレームワーク領域）中の生殖系列配列と少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または９９．５％同一であり得る。さらに、抗体は、修飾される可変領域に類似する（例えば、最も類似する）生殖系列配列由来の生殖系列残基をＣＤＲ領域中に少なくとも１、２、３、４、または５つ含むことができる。主な目的の生殖系列配列は、ヒト生殖系列配列である。抗体の活性（例えば、ＫＡにより測定した結合活性）は、元の抗体の係数内、すなわち１００、１０、５、２、０．５、０．１、および０．００１であり得る。
【０２４９】
ヒト免疫グロブリン遺伝子の生殖系列配列は決定されており、いくつかの供給源（ワールドワイドウェブのｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒで利用可能なｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（商標）（ＩＭＧＴ）およびＶ  ＢＡＳＥディレクトリ（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫによって編纂され、ワールドワイドウェブのｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋで利用可能）を含む）から利用可能である。
【０２５０】
Ｖκについての例示的な生殖系列基準配列は、Ｏ１２／Ｏ２、Ｏ１８／Ｏ８、Ａ２０、Ａ３０、Ｌ１４、Ｌ１、Ｌ１５、Ｌ４／１８ａ、Ｌ５／Ｌ１９、Ｌ８、Ｌ２３、Ｌ９、Ｌ２４、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｏ１１／Ｏ１、Ａ１７、Ａ１、Ａ１８、Ａ２、Ａ１９／Ａ３、Ａ２３、Ａ２７、Ａ１１、Ｌ２／Ｌ１６、Ｌ６、Ｌ２０、Ｌ２５、Ｂ３、Ｂ２、Ａ２６／Ａ１０、およびＡ１４を含む。例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １４（１８）：４６２８−３を参照されたい。
【０２５１】
ＨＣ可変ドメインの生殖系列基準配列は、特定の標準構造（例えば、Ｈ１およびＨ２超可変ループ中の１〜３つの構造）を有する配列に基づくことができる。Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７９９−８１７；  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７７６−７９８）；およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １４（１８）：４６２８−３８に記載のように、免疫グロブリン可変ドメインの超可変ループの標準構造は、その配列から推測できる。１〜３つの構造を有する例示的配列は、ＤＰ−１、ＤＰ−８、ＤＰ−１２、ＤＰ−２、ＤＰ−２５、ＤＰ−１５、ＤＰ−７、ＤＰ−４、ＤＰ−３１、ＤＰ−３２、ＤＰ−３３、ＤＰ−３５、ＤＰ−４０、７−２、ｈｖ３００５、ｈｖ３００５ｆ３、ＤＰ−４６、ＤＰ−４７、ＤＰ−５８、ＤＰ−４９、ＤＰ−５０、ＤＰ−５１、ＤＰ−５３、およびＤＰ−５４を含む。
【０２５２】
有用なポリペプチドは、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸にハイブリッド形成する核酸によってもコードできる。核酸は中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または超高ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる。本明細書で使用する「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または超高ストリンジェンシー条件下のハイブリッド形成」という用語は、ハイブリッド形成および洗浄の条件を説明する。ハイブリッド形成反応を実施するためのガイダンスは、参照により組み込まれるＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９８９），  ６．３．１−６．３．６に見出すことができる。水性方法および非水性方法は、この参考文献に記載されており、いずれをも使用することができる。本明細書で参照する特異的ハイブリッド形成条件は以下のとおりである：（１）約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、続いて少なくとも５０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで２回洗浄する低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件（洗浄温度は、低ストリンジェンシー条件では５５℃に上昇させることができる）、（２）約４５℃での６×ＳＳＣ、続いて６０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回以上洗浄する中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件、（３）約４５℃での６×ＳＳＣ、続いて６５℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで１回以上洗浄する高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件、および（４）６５℃での０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、続いて６５℃の０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳで１回以上洗浄する超高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件。
【０２５３】
タンパク質産生。標準的な組換え核酸法を使用して、血漿カリクレインと結合するタンパク質を発現させることができる。一般に、タンパク質をコードする核酸配列を核酸発現ベクターにクローニングする。勿論、タンパク質が複数のポリペプチド鎖を含む場合、各鎖を、同一または異なる細胞中で発現する発現ベクター（例えば、同一または異なるベクター）にクローニングし得る。
【０２５４】
抗体産生。いくつかの抗体（例えば、Ｆａｂ）は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞）中で産生できる。例えば、Ｆａｂが、ディスプレイ実体とバクテリオファージタンパク質（またはその断片）との間の抑制可能な終止コドンを含むファージディスプレイベクター中の配列によりコードされる場合、ベクター核酸を、終止コドンを抑制できない細菌細胞に移入できる。この場合、Ｆａｂは遺伝子ＩＩＩタンパク質に融合せず、周辺質および／または培地に分泌される。
【０２５５】
抗体は真核細胞中で産生することもできる。１つの実施形態では、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）を、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ２５１：１２３−３５を参照されたい）、ハンセウラ属（Ｈａｎｓｅｕｌａ）、またはサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）などの酵母菌細胞中で発現させる。
【０２５６】
１つの好ましい実施形態では、抗体を哺乳動物細胞中で産生する。クローン抗体またはその抗原結合断片を発現するために好ましい哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，  １９８２，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５９：６０１  ６２１に記載のＤＨＦＲ選択マーカーを使用したＵｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  １９８０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が挙げられる）、リンパ球細胞系、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  （２００４）  ２８９（１−２）：６５−８０）、およびトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）由来の細胞が挙げられる。例えば、細胞は、哺乳動物上皮細胞である。
【０２５７】
組換え発現ベクターは、多様な免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、宿主細胞中でベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子などの追加配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞にＧ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬剤耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅を有するｄｈｆｒ−宿主細胞用）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）が挙げられる。
【０２５８】
抗体またはその抗原結合部分の組換え発現のための例示的な系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介形質移入によりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体の重鎖および軽鎖遺伝子を、エンハンサー／プロモーター調節因子（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、およびアデノウイルスなどに由来する、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節因子またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節因子など）にそれぞれ作動可能に連結して、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を用いてベクターで形質移入したＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。選択された形質転換宿主細胞を培養して、抗体の重鎖および軽鎖を発現させ、培養培地からインタクトな抗体を採集する。標準的な分子生物学的技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を採集する。例えば、一部の抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧ結合マトリックスを用いた親和性クロマトグラフィーにより単離できる。
【０２５９】
Ｆｃドメインを含む抗体のために、抗体産生系は、Ｆｃ領域がグリコシル化された抗体を産生し得る。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインを、ＣＨ２ドメイン中のアスパラギン２９７位でグリコシル化する。アスパラギンは、二分岐型オリゴ糖での修飾のための部位である。グリコシル化は、Ｆｃｇ受容体および補体Ｃ１ｑによって媒介されるエフェクター機能に必要であることが実証されている（Ｂｕｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｏｆ，  １９９２，  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５１：１−８４；  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １６３：５９−７６）。１つの実施形態では、Ｆｃドメインは、アスパラギン２９７位に相当する残基を適切にグリコシル化する哺乳動物発現系で産生される。Ｆｃドメインはまた、他の真核生物翻訳後修飾も含み得る。
【０２６０】
抗体は、トランスジェニック動物によって産生することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号には、トランスジェニック哺乳動物の乳腺中の抗体の発現方法について記載されている。乳汁特異的プロモーター、目的の抗体をコードする核酸、および分泌のためのシグナル配列を含む導入遺伝子を構築する。かかるトランスジェニック哺乳動物の雌により産生された乳汁は、そこで分泌される目的の抗体を含む。抗体は、乳汁から精製することもでき、一部の適用のために直接使用することもできる。
【０２６１】
血漿カリクレイン
血漿カリクレイン結合タンパク質が発現し得る例示的な血漿カリクレイン配列は、ヒト、マウス、またはラット血漿カリクレインアミノ酸配列、これらの配列、またはそれらの断片の１つと８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列（例えば、以下に提示する配列）を含み得る。
【０２６２】
選択に使用したヒト血漿カリクレイン配列および続く結合タンパク質のスクリーニングを以下に示す（寄託番号ＮＰ＿０００８８３．２）。使用したヒト血漿カリクレイン（８６ｋＤａ）をヒト血漿から精製し、市販のベンダーにより第ＸＩＩａ因子と活性化させた。第ＸＩＩａ因子は、ポリペプチド配列を１箇所（Ａｒｇ３７１とＩｌｅ３７２との間であり、以下の配列中「／」で印を付けた切断部位）で切断することによりプレカリクレインを活性化し、２個のジスルフィド結合ポリペプチド（約５２ｋＤａの重鎖および約３４ｋＤａの触媒ドメイン）からなる活性血漿カリクレインを生成する［Ｃｏｌｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｃｈｍａｉｅｒ，  （１９９７）  “Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｓｙｓｔｅｍ：  Ａ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  Ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ，  Ｐｒｏｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ，  Ａｎｔｉａｄｈｅｓｉｖｅ，  ａｎｄ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ”  Ｂｌｏｏｄ，  ９０，  ３８１９−３８４３］
ＧＣＬＴＱＬＹＥＮＡＦＦＲＧＧＤＶＡＳＭＹＴＰＮＡＱＹＣＱＭＲＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦＳＦＬＰＡＳＳＩＮＤＭＥＫＲＦＧＣＦＬＫＤＳＶＴＧＴＬＰＫＶＨＲＴＧＡＶＳＧＨＳＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡＣＨＲＤＩＹＫＧＶＤＭＲＧＶＮＦＮＶＳＫＶＳＳＶＥＥＣＱＫＲＣＴＳＮＩＲＣＱＦＦＳＹＡＴＱＴＦＨＫＡＥＹＲＮＮＣＬＬＫＹＳＰＧＧＴＰＴＡＩＫＶＬＳＮＶＥＳＧＦＳＬＫＰＣＡＬＳＥＩＧＣＨＭＮＩＦＱＨＬＡＦＳＤＶＤＶＡＲＶＬＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩＣＴＹＨＰＮＣＬＦＦＴＦＹＴＮＶＷＫＩＥＳＱＲＮＶＣＬＬＫＴＳＥＳＧＴＰＳＳＳＴＰＱＥＮＴＩＳＧＹＳＬＬＴＣＫＲＴＬＰＥＰＣＨＳＫＩＹＰＧＶＤＦＧＧＥＥＬＮＶＴＦＶＫＧＶＮＶＣＱＥＴＣＴＫＭＩＲＣＱＦＦＴＹＳＬＬＰＥＤＣＫＥＥＫＣＫＣＦＬＲＬＳＭＤＧＳＰＴＲＩＡＹＧＴＱＧＳＳＧＹＳＬＲＬＣＮＴＧＤＮＳＶＣＴＴＫＴＳＴＲ／ＩＶＧＧＴＮＳＳＷＧＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶＫＬＴＡＱＲＨＬＣＧＧＳＬＩＧＨＱＷＶＬＴＡＡＨＣＦＤＧＬＰＬＱＤＶＷＲＩＹＳＧＩＬＮＬＳＤＩＴＫＤＴＰＦＳＱＩＫＥＩＩＩＨＱＮＹＫＶＳＥＧＮＨＤＩＡＬＩＫＬＱＡＰＬＮＹＴＥＦＱＫＰＩＣＬＰＳＫＧＤＴＳＴＩＹＴＮＣＷＶＴＧＷＧＦＳＫＥＫＧＥＩＱＮＩＬＱＫＶＮＩＰＬＶＴＮＥＥＣＱＫＲＹＱＤＹＫＩＴＱＲＭＶＣＡＧＹＫＥＧＧＫＤＡＣＫＧＤＳＧＧＰＬＶＣＫＨＮＧＭＷＲＬＶＧＩＴＳＷＧＥＧＣＡＲＲＥＱＰＧＶＹＴＫＶＡＥＹＭＤＷＩＬＥＫＴＱＳＳＤＧＫＡＱＭＱＳＰＡ
【０２６３】
ヒト、マウス、およびラットのプレカリクレインアミノ酸配列、ならびにそれらをコードするｍＲＮＡ配列を下に示す。プレカリクレイン配列は、活性血漿カリクレイン（ｐｋａｌ）の単ポリペプチド鎖が（「／」で示した）１箇所で切断されて２本鎖を生成している点を除き、血漿カリクレインと同一である。以下に提示する配列はシグナル配列を含む完全配列である。発現細胞からの分泌時、シグナル配列は除去されることが予期される。
【０２６４】
ヒト血漿カリクレイン（寄託番号ＮＰ＿０００８８３．２）
＞ｇｉ｜７８１９１７９８｜基準｜ＮＰ＿０００８８３．２｜血漿カリクレインＢ１前駆体［ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）］
ＭＩＬＦＫＱＡＴＹＦＩＳＬＦＡＴＶＳＣＧＣＬＴＱＬＹＥＮＡＦＦＲＧＧＤＶＡＳＭＹＴＰＮＡＱＹＣＱＭＲＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦＳＦＬＰＡＳＳＩＮＤ
ＭＥＫＲＦＧＣＦＬＫＤＳＶＴＧＴＬＰＫＶＨＲＴＧＡＶＳＧＨＳＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡＣＨＲＤＩＹＫＧＶＤＭＲＧＶＮＦＮＶＳＫＶＳＳＶＥＥＣＱＫＲ
ＣＴＳＮＩＲＣＱＦＦＳＹＡＴＱＴＦＨＫＡＥＹＲＮＮＣＬＬＫＹＳＰＧＧＴＰＴＡＩＫＶＬＳＮＶＥＳＧＦＳＬＫＰＣＡＬＳＥＩＧＣＨＭＮＩＦＱＨＬＡ
ＦＳＤＶＤＶＡＲＶＬＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩＣＴＹＨＰＮＣＬＦＦＴＦＹＴＮＶＷＫＩＥＳＱＲＮＶＣＬＬＫＴＳＥＳＧＴＰＳＳＳＴＰＱＥＮＴＩＳＧＹＳ
ＬＬＴＣＫＲＴＬＰＥＰＣＨＳＫＩＹＰＧＶＤＦＧＧＥＥＬＮＶＴＦＶＫＧＶＮＶＣＱＥＴＣＴＫＭＩＲＣＱＦＦＴＹＳＬＬＰＥＤＣＫＥＥＫＣＫＣＦＬＲ
ＬＳＭＤＧＳＰＴＲＩＡＹＧＴＱＧＳＳＧＹＳＬＲＬＣＮＴＧＤＮＳＶＣＴＴＫＴＳＴＲＩＶＧＧＴＮＳＳＷＧＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶＫＬＴＡＱＲＨＬＣＧ
ＧＳＬＩＧＨＱＷＶＬＴＡＡＨＣＦＤＧＬＰＬＱＤＶＷＲＩＹＳＧＩＬＮＬＳＤＩＴＫＤＴＰＦＳＱＩＫＥＩＩＩＨＱＮＹＫＶＳＥＧＮＨＤＩＡＬＩＫＬＱ
ＡＰＬＮＹＴＥＦＱＫＰＩＣＬＰＳＫＧＤＴＳＴＩＹＴＮＣＷＶＴＧＷＧＦＳＫＥＫＧＥＩＱＮＩＬＱＫＶＮＩＰＬＶＴＮＥＥＣＱＫＲＹＱＤＹＫＩＴＱＲ
ＭＶＣＡＧＹＫＥＧＧＫＤＡＣＫＧＤＳＧＧＰＬＶＣＫＨＮＧＭＷＲＬＶＧＩＴＳＷＧＥＧＣＡＲＲＥＱＰＧＶＹＴＫＶＡＥＹＭＤＷＩＬＥＫＴＱＳＳＤＧ
ＫＡＱＭＱＳＰＡ
【０２６５】
ヒト血漿カリクレインｍＲＮＡ（寄託番号ＮＭ＿０００８９２）
＞ｇｉ｜７８１９１７９７｜基準｜ＮＭ＿０００８９２．３｜ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）カリクレインＢ、血漿（フレッチャー因子）１（ＫＬＫＢ１）、ｍＲＮＡ
ＡＧＡＡＣＡＧＣＴＴＧＡＡＧＡＣＣＧＴＴＣＡＴＴＴＴＴＡＡＧＴＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＴＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＧＣＡＡＴＴＧＴＧＴＴＴＴＣＡＧ
ＡＡＴＧＡＴＴＴＴＡＴＴＣＡＡＧＣＡＡＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＴＣＡＴＴＴＣＣＴＴＧＴＴＴＧＣＴＡＣＡＧＴＴＴＣＣＴＧＴＧＧＡＴＧＴＣＴＧＡＣＴ
ＣＡＡＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＡＣＧＣＣＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＧＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＣＴＴＣＣＡＴＧＴＡＣＡＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＡＴＡＣＴ
ＧＣＣＡＧＡＴＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＧＴＧＴＴＴＧＣＴＡＴＴＣＡＧＴＴＴＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＴＣＡＡＴＧＡ
ＣＡＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＡＧＡＴＡＧＴＧＴＴＡＣＡＧＧＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＡＡＡＧＴＡＣＡＴＣＧＡＡＣＡ
ＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＣＴＧＧＡＣＡＴＴＣＣＴＴＧＡＡＧＣＡＡＴＧＴＧＧＴＣＡＴＣＡＡＡＴＡＡＧＴＧＣＴＴＧＣＣＡＴＣＧＡＧＡＣＡＴＴＴＡＴＡ
ＡＡＧＧＡＧＴＴＧＡＴＡＴＧＡＧＡＧＧＡＧＴＣＡＡＴＴＴＴＡＡＴＧＴＧＴＣＴＡＡＧＧＴＴＡＧＣＡＧＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＡＧ
ＧＴＧＣＡＣＣＡＧＴＡＡＣＡＴＴＣＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＣＧＣＡＡＡＣＡＴＴＴＣＡＣＡＡＧＧＣＡＧＡＧＴＡＣＣＧＧ
ＡＡＣＡＡＴＴＧＣＣＴＡＴＴＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＣＣＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＧＣＴＡＴＡＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＧＴＡＡＣＧＴＧＧＡＡＴ
ＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＣＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＧＧＴＴＧＣＣＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡＴＣＴＴＧＣ
ＧＴＴＣＴＣＡＧＡＴＧＴＧＧＡＴＧＴＴＧＣＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣＣＡＧＡＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＴＧＴＣＧＧＡＣＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＴＡＴ
ＣＡＣＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＴＡＴＡＣＡＡＡＴＧＴＡＴＧＧＡＡＡＡＴＣＧＡＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＧＴＴＴＧＴＣ
ＴＴＣＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＴＧＡＡＡＧＴＧＧＣＡＣＡＣＣＡＡＧＴＴＣＣＴＣＴＡＣＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＴＡＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＧ
ＣＣＴＴＴＴＡＡＣＣＴＧＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＴＴＡＣＣＴＧＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＴＴＣＴＡＡＡＡＴＴＴＡＣＣＣＧＧＧＡＧＴＴＧＡＣＴＴＴＧＧＡ
ＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＡＡＡＧＧＡＧＴＧＡＡＴＧＴＴＴＧＣＣＡＡＧＡＧＡＣＴＴＧＣＡＣＡＡＡＧＡＴＧＡＴＴＣ
ＧＣＴＧＴＣＡＧＴＴＴＴＴＣＡＣＴＴＡＴＴＣＴＴＴＡＣＴＣＣＣＡＧＡＡＧＡＣＴＧＴＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＧＴＴＴＣＴＴＡＡＧ
ＡＴＴＡＴＣＴＡＴＧＧＡＴＧＧＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＧＧＡＴＴＧＣＧＴＡＴＧＧＧＡＣＡＣＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣＴＴＴＧＡＧＡ
ＴＴＧＴＧＴＡＡＣＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣＴＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＡＣＧＣＡＴＴＧＴＴＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＡＣＴ
ＣＴＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧＣＣＣＴＧＧＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧ
ＡＧＧＧＴＣＡＣＴＣＡＴＡＧＧＡＣＡＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＣＴＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＴＧＡＴＧＧＧＣＴＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＴ
ＧＴＴＴＧＧＣＧＣＡＴＣＴＡＴＡＧＴＧＧＣＡＴＴＴＴＡＡＡＴＣＴＧＴＣＡＧＡＣＡＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＡＣＡＡＡＴＡＡ
ＡＡＧＡＧＡＴＴＡＴＴＡＴＴＣＡＣＣＡＡＡＡＣＴＡＴＡＡＡＧＴＣＴＣＡＧＡＡＧＧＧＡＡＴＣＡＴＧＡＴＡＴＣＧＣＣＴＴＧＡＴＡＡＡＡＣＴＣＣＡ
ＧＧＣＴＣＣＴＴＴＧＡＡＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＡＴＡＴＧＣＣＴＡＣＣＴＴＣＣＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＣＡＡＴＴ
ＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＧＴＴＧＧＧＴＡＡＣＣＧＧＡＴＧＧＧＧＣＴＴＣＴＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＴＧＡＡＡＴＣＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＡＡ
ＡＧＧＴＡＡＡＴＡＴＴＣＣＴＴＴＧＧＴＡＡＣＡＡＡＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＡＡＡＡＧＡＴＡＴＣＡＡＧＡＴＴＡＴＡＡＡＡＴＡＡＣＣＣＡＡＣＧ
ＧＡＴＧＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＡＴＡＡＡＧＡＡＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＡＴＧＣＴＴＧＴＡＡＧＧＧＡＧＡＴＴＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＣＴＴＡＧＴＴ
ＴＧＣＡＡＡＣＡＣＡＡＴＧＧＡＡＴＧＴＧＧＣＧＴＴＴＧＧＴＧＧＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＧＧＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＣＧＣＡＧＧＧＡＧＣ
ＡＡＣＣＴＧＧＴＧＴＣＴＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＣＧＣＴＧＡＧＴＡＣＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＴＴＴＴＡＧＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＧ
ＡＡＡＡＧＣＴＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＣＡＣＣＡＧＣＡＴＧＡＧＡＡＧＣＡＧＴＣＣＡＧＡＧＴＣＴＡＧＧＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＡＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＡ
ＡＧＴＣＡＡＡＴＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＴＣＡＴＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＧＡＧＴＧＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＧＣＡＴＣＣＴＡＡＧ
ＧＡＣＧＡＡＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＣＡＣＴＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＡＴＧＴＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＣＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＣＧＣＣＧＴ
ＡＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＣＡＡＴＧＣＧＡＧＧＴＣＧＣＡＡＣＴＧＡＧＡＴＣＴＣＣＡＴＧＡＣＴＧＴＧＴＧＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＡＡＡＴＧＧＴＧＡ
ＡＡＧＡＴＣＡＡＡＡＡＡ
【０２６６】
マウス血漿カリクレイン（寄託番号ＮＰ＿０３２４８１．１）
＞ｇｉ｜６６８０５８４｜基準｜ＮＰ＿０３２４８１．１｜カリクレインＢ、血漿１［ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）］
ＭＩＬＦＮＲＶＧＹＦＶＳＬＦＡＴＶＳＣＧＣＭＴＱＬＹＫＮＴＦＦＲＧＧＤＬＡＡＩＹＴＰＤＡＱＹＣＱＫＭＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦＳＦＬＡＶＴＰＰＫＥ
ＴＮＫＲＦＧＣＦＭＫＥＳＩＴＧＴＬＰＲＩＨＲＴＧＡＩＳＧＨＳＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡＣＨＲＤＩＹＫＧＬＤＭＲＧＳＮＦＮＩＳＫＴＤＮＩＥＥＣＱＫＬ
ＣＴＮＮＦＨＣＱＦＦＴＹＡＴＳＡＦＹＲＰＥＹＲＫＫＣＬＬＫＨＳＡＳＧＴＰＴＳＩＫＳＡＤＮＬＶＳＧＦＳＬＫＳＣＡＬＳＥＩＧＣＰＭＤＩＦＱＨＳＡ
ＦＡＤＬＮＶＳＱＶＩＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩＣＴＦＨＰＮＣＬＦＦＴＦＹＴＮＥＷＥＴＥＳＱＲＮＶＣＦＬＫＴＳＫＳＧＲＰＳＰＰＩＰＱＥＮＡＩＳＧＹＳ
ＬＬＴＣＲＫＴＲＰＥＰＣＨＳＫＩＹＳＧＶＤＦＥＧＥＥＬＮＶＴＦＶＱＧＡＤＶＣＱなどＴＫＴＩＲＣＱＦＦＩＹＳＬＬＰＱＤＣＫＥＥＧＣＫＣＳＬＲ
ＬＳＴＤＧＳＰＴＲＩＴＹＧＭＱＧＳＳＧＹＳＬＲＬＣＫＬＶＤＳＰＤＣＴＴＫＩＮＡＲＩＶＧＧＴＮＡＳＬＧＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶＫＬＶＳＱＴＨＬＣＧ
ＧＳＩＩＧＲＱＷＶＬＴＡＡＨＣＦＤＧＩＰＹＰＤＶＷＲＩＹＧＧＩＬＳＬＳＥＩＴＫＥＴＰＳＳＲＩＫＥＬＩＩＨＱＥＹＫＶＳＥＧＮＹＤＩＡＬＩＫＬＱ
ＴＰＬＮＹＴＥＦＱＫＰＩＣＬＰＳＫＡＤＴＮＴＩＹＴＮＣＷＶＴＧＷＧＹＴＫＥＱＧＥＴＱＮＩＬＱＫＡＴＩＰＬＶＰＮＥＥＣＱＫＫＹＲＤＹＶＩＮＫＱ
ＭＩＣＡＧＹＫＥＧＧＴＤＡＣＫＧＤＳＧＧＰＬＶＣＫＨＳＧＲＷＱＬＶＧＩＴＳＷＧＥＧＣＧＲＫＤＱＰＧＶＹＴＫＶＳＥＹＭＤＷＩＬＥＫＴＱＳＳＤＶ
ＲＡＬＥＴＳＳＡ
【０２６７】
マウス血漿カリクレインｍＲＮＡ（寄託番号ＮＭ＿００８４５５．２）
＞ｇｉ｜２３６４６５８０４｜基準｜ＮＭ＿００８４５５．２｜ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）  カリクレインＢ、血漿１（Ｋｌｋｂ１）、ｍＲＮＡ
ＡＧＡＣＣＧＣＣＣＴＣＧＧＴＧＣＣＡＴＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧＣＴＴＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＴＣＡＴＧＴＧＡＡＧＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＧＡ
ＡＣＣＡＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＴＴＣＡＡＣＣＧＡＧＴＧＧＧＴＴＡＴＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＴＧＴＴＴＧＣＴ
ＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧＴＡＴＧＡＣＴＣＡＡＣＴＧＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＣＣＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＧＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＧＣＴＧＣＣＡ
ＴＣＴＡＣＡＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＧＡＴＧＴＧＣＡＣＴＴＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＣＴＴ
ＴＣＴＣＧＣＣＧＴＧＡＣＴＣＣＡＣＣＣＡＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＴＡＡＡＣＧＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＴＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＧＣＡＴＴＡＣＡＧＧＧ
ＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＣＡＴＴＴＣＴＧＧＴＣＡＴＴＣＴＴＴＡＡＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＡＡＴＡＡ
ＧＴＧＣＴＴＧＣＣＡＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＴＡＴＧＡＧＡＧＧＧＴＣＣＡＡＣＴＴＴＡＡＴＡＴＣＴＣＴＡＡＧＡＣＣＧＡ
ＣＡＡＴＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＣＡＡＡＴＡＡＴＴＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＴＴＴＴＴＣＡＣＡＴＡＴＧＣＴＡＣＡＡＧＴ
ＧＣＡＴＴＴＴＡＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＴＡＣＣＧＧＡＡＧＡＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＧＣＡ
ＴＡＡＡＧＴＣＡＧＣＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＡＣＴＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＣＧＣＴＴＴＣＧＧＡＧＡＴＡＧＧＴＴＧＣＣＣ
ＣＡＴＧＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＴＴＴＧＣＡＧＡＣＣＴＧＡＡＴＧＴＡＡＧＣＣＡＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＣＧＡＴＧＣＣＴＴＴ
ＧＴＧＴＧＴＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＣＡＴＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＣＡＣＧＴＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＴＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡ
ＣＡＧＡＡＴＣＡＣＡＧＡＧＡＡＡＴＧＴＴＴＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡＧＡＣＧＴＣＴＡＡＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＣＴＡＴＴＣＣＴＣＡ
ＡＧＡＡＡＡＣＧＣＴＡＴＡＴＣＴＧＧＡＴＡＴＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＡＣＴＣＧＣＣＣＴＧＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＴＴＣＣＡＡＡ
ＡＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＴＧＡＣＴＴＴＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＣＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＴＣＴＧＣＣ
ＡＡＧＡＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＴＣＣＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＣＴＣＣＴＴＡＣＴＣＣＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡＧＧＡ
ＧＧＡＧＧＧＧＴＧＴＡＡＡＴＧＴＴＣＣＴＴＡＡＧＧＴＴＡＴＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＣＣＣＡＡＣＴＡＧＧＡＴＣＡＣＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＧ
ＧＧＧＡＧＣＴＣＣＧＧＴＴＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＡＴＴＧＴＧＴＡＡＡＣＴＴＧＴＧＧＡＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＧ
ＣＡＣＧＴＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＡＣＧＣＴＴＣＴＴＴＡＧＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＴＧＧＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＣＡＡＧＴＧＡＡＧＣＴ
ＧＧＴＡＴＣＴＣＡＧＡＣＣＣＡＴＴＴＧＴＧＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＡＴＣＡＴＴＧＧＴＣＧＣＣＡＡＴＧＧＧＴＡＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＣ
ＴＴＴＧＡＴＧＧＡＡＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＴＧＴＧＧＣＧＴＡＴＡＴＡＴＧＧＣＧＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧＴＣＴＧＴＣＣＧＡＧＡＴＴＡＣＧＡ
ＡＡＧＡＡＡＣＧＣＣＴＴＣＣＴＣＧＡＧＡＡＴＡＡＡＧＧＡＧＣＴＴＡＴＴＡＴＴＣＡＴＣＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＡＧＴＣＴＣＡＧＡＡＧＧＣＡＡＴＴＡ
ＴＧＡＴＡＴＴＧＣＣＴＴＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＡＴＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＡＴＡＴＧＣＣＴＧＣＣＴ
ＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＡＡＴＡＣＡＡＴＴＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＧＴＴＧＧＧＴＧＡＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＧＡＡＧＧＡＡＣＡＡＧ
ＧＴＧＡＡＡＣＧＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＡＡＡＧＧＣＴＡＣＴＡＴＴＣＣＴＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡ
ＣＡＧＡＧＡＴＴＡＴＧＴＴＡＴＡＡＡＣＡＡＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＧＧＣＧＧＡＡＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＴＡＡＧ
ＧＧＡＧＡＴＴＣＣＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＴＡＧＴＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＡＣＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＧＧＴＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＧＧ
ＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＣＧＣＣＣＧＣＡＡＧＧＡＣＣＡＡＣＣＡＧＧＡＧＴＣＴＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＴＴＣＴＧＡＧＴＡＣＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＴＡＴＴ
ＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＧＧＣＴＧＧＧＴＡＣＣＡＡＧＧ
ＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＧＣＴＴＴＡＣＣＡＣＣＴＧＣＣＣＴＣＡＡＧＧＣＡＡＡＣＴＡＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＡＴＴＣＴＣＧＧＣＴＧＴＡＡＡ
ＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＧＧＴＧＴＣＴＡＣＣＴＣＡＣＡＴＣＣＧＴＡＴＣＡＴＴＧＧＡＴＴＧＡＡＡＡＴＴＣＡＡＧＴＧＴＡＧＡＴＡＴＡＧＴＴＧＣＴＧ
ＡＡＧＡＣＡＧＣＧＴＴＴＴＧＣＴＣＡＡＧＴＧＴＧＴＴＴＣＣＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＣＡＣＡＧＧＡＧＣＴＣＣＡＡＴＧＧＧＡＧＣＡＴＴＡＣＡＡＡＧＡ
ＴＣＡＣＣＡＡＧＣＴＴＧＴＴＡＧＧＡＡＡＧＡＧＡＡＴＧＡＴＣＡＡＡＧＧＧＴＴＴＴＡＴＴＡＧＧＴＡＡＴＧＡＡＡＴＧＴＣＴＡＧＡＴＧＴＧＡＴＧＣ
ＡＡＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＣＴＡＧＣＡＣＡＧＴＣＣＴＴＧＧＧＡＣＣＡＴＴＣＴＣＡＴＧＴＡＡＣＴＧＴＴＧＡＣＴＣＴＧＧＡＣ
ＣＴＣＡＧＣＡＧＡＴＣＴＣＡＧＡＧＴＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＴＴＧＴＴＴＡＴＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＡ
ＧＴＧＧＡＧＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
【０２６８】
ラット血漿カリクレイン（寄託番号ＮＰ＿０３６８５７．２）
＞ｇｉ｜１６２１３８９０５｜基準｜ＮＰ＿０３６８５７．２｜カリクレインＢ、血漿１［ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）］
ＭＩＬＦＫＱＶＧＹＦＶＳＬＦＡＴＶＳＣＧＣＬＳＱＬＹＡＮＴＦＦＲＧＧＤＬＡＡＩＹＴＰＤＡＱＨＣＱＫＭＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦＳＦＬＡＶＳＰＴＫＥ
ＴＤＫＲＦＧＣＦＭＫＥＳＩＴＧＴＬＰＲＩＨＲＴＧＡＩＳＧＨＳＬＫＱＣＧＨＱＬＳＡＣＨＱＤＩＹＥＧＬＤＭＲＧＳＮＦＮＩＳＫＴＤＳＩＥＥＣＱＫＬ
ＣＴＮＮＩＨＣＱＦＦＴＹＡＴＫＡＦＨＲＰＥＹＲＫＳＣＬＬＫＲＳＳＳＧＴＰＴＳＩＫＰＶＤＮＬＶＳＧＦＳＬＫＳＣＡＬＳＥＩＧＣＰＭＤＩＦＱＨＦＡ
ＦＡＤＬＮＶＳＨＶＶＴＰＤＡＦＶＣＲＴＶＣＴＦＨＰＮＣＬＦＦＴＦＹＴＮＥＷＥＴＥＳＱＲＮＶＣＦＬＫＴＳＫＳＧＲＰＳＰＰＩＩＱＥＮＡＶＳＧＹＳ
ＬＦＴＣＲＫＡＲＰＥＰＣＨＦＫＩＹＳＧＶＡＦＥＧＥＥＬＮＡＴＦＶＱＧＡＤＡＣＱなどＴＫＴＩＲＣＱＦＦＴＹＳＬＬＰＱＤＣＫＡＥＧＣＫＣＳＬＲ
ＬＳＴＤＧＳＰＴＲＩＴＹＥＡＱＧＳＳＧＹＳＬＲＬＣＫＶＶＥＳＳＤＣＴＴＫＩＮＡＲＩＶＧＧＴＮＳＳＬＧＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶＫＬＶＳＱＮＨＭＣＧ
ＧＳＩＩＧＲＱＷＩＬＴＡＡＨＣＦＤＧＩＰＹＰＤＶＷＲＩＹＧＧＩＬＮＬＳＥＩＴＮＫＴＰＦＳＳＩＫＥＬＩＩＨＱＫＹＫＭＳＥＧＳＹＤＩＡＬＩＫＬＱ
ＴＰＬＮＹＴＥＦＱＫＰＩＣＬＰＳＫＡＤＴＮＴＩＹＴＮＣＷＶＴＧＷＧＹＴＫＥＲＧＥＴＱＮＩＬＱＫＡＴＩＰＬＶＰＮＥＥＣＱＫＫＹＲＤＹＶＩＴＫＱ
ＭＩＣＡＧＹＫＥＧＧＩＤＡＣＫＧＤＳＧＧＰＬＶＣＫＨＳＧＲＷＱＬＶＧＩＴＳＷＧＥＧＣＡＲＫＥＱＰＧＶＹＴＫＶＡＥＹＩＤＷＩＬＥＫＩＱＳＳＫＥ
ＲＡＬＥＴＳＰＡ
【０２６９】
ラット血漿カリクレインｍＲＮＡ（寄託番号ＮＭ＿０１２７２５）
＞ｇｉ｜１６２１３８９０４｜基準｜ＮＭ＿０１２７２５．２｜ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）カリクレインＢ、血漿１（Ｋｌｋｂ１）、ｍＲＮＡ
ＴＧＡＡＧＡＣＴＡＧＣＴＴＣＡＴＧＴＧＡＡＧＡＣＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＡＧＧＡＴＧＡＴＴ
ＴＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＧＴＧＧＧＴＴＡＴＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＴＧＴＴＣＧＣＴＡＣＡＧＴＴＴＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧＴＣＴＧＴＣＡＣＡＡＣＴＧＴ
ＡＴＧＣＡＡＡＴＡＣＣＴＴＣＴＴＣＡＧＡＧＧＴＧＧＧＧＡＴＣＴＧＧＣＴＧＣＣＡＴＣＴＡＣＡＣＣＣＣＧＧＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡ
ＧＡＴＧＴＧＣＡＣＧＴＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣＴＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＣＣＡＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＴ
ＡＡＡＡＧＧＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＴＣＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＧＣＡＴＴＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＡＣＣＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＣＡ
ＴＴＴＣＴＧＧＴＣＡＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＡＴＴＡＡＧＴＧＣＴＴＧＣＣＡＣＣＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＧＡＡＧＧＡＣＴ
ＧＧＡＴＡＴＧＡＧＡＧＧＧＴＣＣＡＡＣＴＴＴＡＡＴＡＴＡＴＣＴＡＡＧＡＣＣＧＡＣＡＧＴＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＴＧＣＡＣＡ
ＡＡＴＡＡＴＡＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＴＴＴＴＴＣＡＣＡＴＡＴＧＣＴＡＣＡＡＡＡＧＣＡＴＴＴＣＡＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＴＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＴＴ
ＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＡＧＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＣＧＣＣＣＡＣＣＡＧＴＡＴＡＡＡＧＣＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＴＴ
ＣＴＣＡＣＴＧＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＣＴＣＴＣＴＣＡＧＡＧＡＴＣＧＧＴＴＧＣＣＣＣＡＴＧＧＡＴＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＧＣＣＴＴＴＧＣＡ
ＧＡＣＣＴＧＡＡＴＧＴＡＡＧＣＣＡＴＧＴＣＧＴＣＡＣＣＣＣＣＧＡＴＧＣＣＴＴＣＧＴＧＴＧＴＣＧＣＡＣＣＧＴＴＴＧＣＡＣＣＴＴＣＣＡＴＣＣＣＡ
ＡＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＡＣＡＴＴＣＴＡＣＡＣＧＡＡＴＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＧＧＡＡＴＣＡＣＡＧＡＧＧＡＡＴＧＴＴＴＧＴＴＴＴＣＴＴＡＡ
ＧＡＣＡＴＣＴＡＡＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＣＴＡＴＴＡＴＴＣＡＡＧＡＡＡＡＴＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＴＣＴＣＴＴＣ
ＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＧＣＴＣＧＣＣＣＴＧＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＴＴＴＣＡＡＧＡＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＡＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧ
ＡＡＣＴＧＡＡＣＧＣＧＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＡＧＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＣＧＴＧＣＣＡＡＧＡＧＡＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＣＧＣＴＧＴＣＡ
ＧＴＴＴＴＴＴＡＣＴＴＡＣＴＣＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＧＧＴＧＴＡＡＡＴＧＴＴＣＣＴＴＡＡＧＧＴＴＡＴＣＣ
ＡＣＧＧＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＧＧＡＴＣＡＣＣＴＡＴＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＧＧＡＧＣＴＣＴＧＧＴＴＡＴＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＧＴＡ
ＡＡＧＴＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＴＡＣＧＡＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＧＣＡＣＧＴＡＴＴＧＴＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＣＴＴＴ
ＡＧＧＡＧＡＧＴＧＧＣＣＡＴＧＧＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＣＡＡＧＴＡＡＡＧＴＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＧＡＡＴＣＡＴＡＴＧＴＧＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣ
ＡＴＣＡＴＴＧＧＡＣＧＣＣＡＡＴＧＧＡＴＡＣＴＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＣＡＴＴＧＣＴＴＴＧＡＴＧＧＧＡＴＴＣＣＣＴＡＴＣＣＡＧＡＣＧＴＧＴＧＧＣ
ＧＴＡＴＡＴＡＴＧＧＣＧＧＧＡＴＴＣＴＴＡＡＴＣＴＧＴＣＡＧＡＧＡＴＴＡＣＡＡＡＣＡＡＡＡＣＧＣＣＴＴＴＣＴＣＡＡＧＴＡＴＡＡＡＧＧＡＧＣＴ
ＴＡＴＴＡＴＴＣＡＴＣＡＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＡＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＣＡＧＴＴＡＣＧＡＴＡＴＴＧＣＣＴＴＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＣＡＧＡＣＡＣＣＧ
ＴＴＧＡＡＴＴＡＴＡＣＴＧＡＡＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＡＴＡＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＡＡＴＡＣＡＡＴＴＴＡＴＡＣＣＡ
ＡＣＴＧＣＴＧＧＧＴＧＡＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＣＴＡＣＡＣＡＡＡＧＧＡＡＣＧＡＧＧＴＧＡＧＡＣＣＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＡＡＡＧＧＣＡＡＣ
ＴＡＴＴＣＣＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＧＡＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＡＡＡＡＡＡＴＡＴＡＧＡＧＡＴＴＡＴＧＴＴＡＴＡＡＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣ
ＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＴＡＧＡＴＧＣＴＴＧＴＡＡＧＧＧＡＧＡＴＴＣＣＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＴＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＣ
ＡＴＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＧＧＴＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＡＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＣＧＣＡＡＧＧＡＧＣＡＡＣＣＡＧＧ
ＡＧＴＣＴＡＣＡＣＣＡＡＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＴＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＧＡＴＡＴＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＡＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＡＧＧＡＡＡＧＡＧＣＴ
ＣＴＧＧＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＧＡＧＧＡＧＧＣＴＧＧＧＴＡＣＴＧＡＴＧＧＧＧＡＡＧＡＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＴＡＣＣＡ
ＣＣＴＧＣＣＣＴＣＡＡＧＴＣＣＴＡＣＴＡＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＣＴＣＴＴＣＴＧＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＡＴＡＧＴＧＧＴＧＴＣＴＡＣＣＴＣＧＣ
ＡＴＣＣＴＴＡＣＣＡＴＡＧＧＡＴＴＡＡＡＡＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＧＴＴＧＣＴＡＡＡＧＡＣＡＧＣＧＣＣＡＴＧＣＴＣＡＡＧＣＧＴＧＣ
ＴＴＣＣＴＧＣＣＴＴＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＡＡＣＧＣＣＡＡＴＧＡＧＡＡＣＴＡＴＣＣＡＡＡＧＡＴＴＡＣＣＡＡＧＣＣＴＧＴＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
ＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＧＧＴＡＧＴＧＡＡＡＴＴＡＧＧＴＡＧＴＴＧＴＣＣＴＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＣＴＣＡＴＧＴＡＡＣＴＧＴＴＧ
ＡＣＴＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＡＴＣＡＣＡＧＴＴＡＣＣＴＴＣＴＧＴＣＣＡＣＴＴＣＴＧＡＣＡＴＴＴＧＴＧＴＡＣＴＧＧＡＡＣＣＴＧＡＴＧＣＴ
ＧＴＴＣＴＴＣＣＡＣＴＴＧＧＡＧＣＡＡＡＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＴＧＧＧＡＡＡＡＡＧＡＧＡＴＣＴＴＴＧＴＡＡＣＡ
ＴＴＴＣＣＴＴＴＡＣＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＴＧＴＴＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
【０２７０】
修飾
カリクレインを阻害するポリペプチドを様々な方法で修飾することが可能である。例えば、ポリペプチドは、１種以上のポリエチレングリコール部分に結合してその化合物を安定化させたり、または保持時間を、例えば、少なくとも２、４、５、８、１０、１５、２０、５０、１００、５００または１０００倍延長させたりすることができる。
【０２７１】
１つの実施形態では、カリクレイン結合タンパク質を、循環中（例えば、血液、血清、リンパ液、または他の組織内）でのその安定性および／または保持を、例えば、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍改善する部分と物理的に結合する。
例えば、カリクレイン結合タンパク質を、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性のポリマー（ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドなど）と結合し得る。適切なポリマーの重量は大幅に変化する。約２００〜約３５，０００（または約１，０００〜約１５，０００、および２，０００〜約１２，５００）の範囲の数平均分子量を有するポリマーを使用できる。例えば、カリクレイン結合タンパク質は、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えばポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンと結合できる。１個のポリペプチドに複数のポリマー部分、例えば、少なくとも２、３、または４個のかかる部分（例えば、約２，０００〜７，０００ダルトンの平均分子量）が結合できる。かかるポリマーの一覧としては、ポリアルキレンオキシドホモポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなど）、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーおよびそれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持される場合）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７２】
例えば、ポリペプチドは、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えばポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンと結合できる。かかるポリマーの一覧としては、ポリアルキレンオキシドホモポリマー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなど）、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーおよびそれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持される場合）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン（ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）など）；ポリメタクリル酸；カルボマー類；糖類の単量体Ｄ−マンノース、Ｄ−およびＬ−ガラクトース、フコース、フルクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルクロン酸、シアル酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例えば、ポリマンヌロン酸、またはアルギン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコースおよびノイラミン酸を含む分枝状または非分枝状の多糖類（ホモ多糖類およびヘテロ多糖類（ラクトース、アミロペクチン、澱粉、ヒドロキシエチル澱粉、アミロース、硫酸デキストラン、デキストラン、デキストリン、グリコーゲン、または酸性ムコ多糖類の多糖類サブユニット、例えばヒアルロン酸など）を含む）；糖アルコールのポリマー（ポリソルビトールおよびポリマンニトールなど）；ヘパリンまたはヘパランが挙げられる。
【０２７３】
他の化合物（例えば、細胞毒素、標識、または別の標的となる物質もしくは関連のない物質）も、上記と同一のポリマーと結合できる。架橋を形成するためには、モノ活性化アルコキシ末端ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、例えば、モノメトキシ末端ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）；Ｃ１〜４アルキル末端ポリマー；およびビス活性化ポリエチレンオキシド（グリコール）を使用できる。例えば、米国特許第５，９５１，９７４号を参照されたい。
【０２７４】
カリクレイン結合タンパク質は、担体タンパク質、例えば、血清アルブミン（ヒト血清アルブミンなど）と結合することもできる。例えば、翻訳融合を使用して、担体タンパク質とカリクレイン結合タンパク質とを結合させることができる。
【０２７５】
方法
本明細書において、粘膜炎を呈する、または粘膜炎を呈することが疑われる、または粘膜炎を呈するリスクのある対象に単離カリクレイン阻害剤を投与することによる粘膜炎の治療および／または予防のための方法および組成物を提供する。粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、化学療法（例えば、高用量化学療法）および／または放射線療法レジメンを施行予定の、施行中の、または施行予定の対象であり得る。別の例では、粘膜炎の発現リスクのある対象（例えば、患者）は、例えば、癌（例えば、頭頸部癌）と診断された対象であり得る。
【０２７６】
本方法は、粘膜炎治療を必要とするヒト対象においてまたは非ヒト対象において実施できる。
【０２７７】
１つの実施形態では、治療方法は、カリクレイン阻害剤としての、Ｋｕｎｉｔｚドメインを含む単離ポリペプチドの投与を含む。本方法の１つの実施形態では、広範なセリンプロテアーゼの親和性よりもカリクレインに対する親和性が約３０倍以上高い配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを使用し、このようなポリペプチドは、例えばアプロチニンであり、これはウシの肺から単離されたものであり、現在のところ冠動脈バイパス移植術法での使用に承認されている（ＴＲＡＳＹＬＯＬ（商標登録）、Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，  Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ，  Ｃｏｎｎ．）。
【０２７８】
単離カリクレイン阻害剤の投与により、粘膜炎の少なくとも１つの症状（疼痛、浮腫、紅斑、続発性細菌性コロニー形成、または食物消費の制限など）の改善、重症度の低減、予防、または安定化に至る。粘膜炎の治療または予防のかかる方法の成功および／または進行は、以下のパラメータの任意の１つにより評価し得る。
・粘膜炎の発現頻度の低下（または）
・任意の所定の疾患重症度レベルにおける粘膜炎の持続期間の短縮（または）
・治療中の任意の経過時点における粘膜炎発現の重症度（１〜４グレード）の低減（または）
・粘膜炎の、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない任意の関連兆候もしくは症状の低減：
ｏ疼痛
ｏ浮腫
ｏ紅斑
ｏ続発性細菌性コロニー形成
ｏ食物消費（固形物、液体）の制限
ｏ疲労
ｏ非治療患者集団と比較した、治療集団における化学療法もしくは放射線療法のより高用量もしくは反復用量に対する耐容能
【０２７９】
併用療法
単離カリクレイン阻害剤は、粘膜炎のための併用療法の一部として別の治療物質と共に投与してよい。他の治療は支持療法、または治療薬（パリフェルミン（ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（商標））（ヒトケラチン生成細胞増殖因子（ＫＧＦ））など）であってよい。支持療法としては、角氷を吸うこと、抗酸化剤、およびうがい薬（例えば、ＧＥＬＣＬＡＩＲ（商標）、ＣＡＰＨＯＳＯＬ（商標）、ＭＵＧＡＲＤ（商標））が挙げられる。抗ヒスタミン剤、麻酔薬、抗炎症剤（コルチコステロイドなど）、抗生剤、および抗真菌剤を配合したいくつかのうがい薬が利用可能である。麻薬性鎮痛剤も疼痛緩和を補助することを示し得る。他の支持療法としては、抗菌剤、抗炎症剤、および良好な口腔ケアが挙げられる。
【０２８０】
カリクレイン阻害剤と別の治療薬との併用療法は、複数の異なる形態で提供し得る。カリクレイン阻害剤を関節内注射によって投与する状況下において、カリクレイン阻害剤と治療薬を単一の組成物として共投与してもよいし、またはそれらを別々に注射投与してもよい。いくつかの状況では、カリクレイン阻害剤と治療薬を、併用療法の２成分の所望の投与スケジュールに応じて、時間的に近接して（例えば、同一治療セッション中などの短期間の注射間隔で）投与するか、またはさらに間隔をあけて投与する。カリクレイン阻害剤を全身（非経口）投与により投与する場合、カリクレイン阻害剤と治療薬を、併用療法の２成分の集中投与スケジュールに応じて、時間的に近接して投与してもよいし、より間隔をあけて投与してもよい。
【０２８１】
投与
カリクレイン阻害剤（単独または併用療法の一部として）は、粘膜炎の臨床症状の発現前、発現中、および／または発現後に患者に投与できる。患者は、一般にヒトであるが、非ヒト哺乳動物であってもよい。ヒト患者には、成人患者、例えば、１９〜２５歳、２６〜４０歳、４１〜５５歳、５６〜７５歳、および７６歳以上の患者、および小児患者、例えば、０〜２歳、３〜６歳、７〜１２歳、および１３〜１８歳の患者が含まれる。
【０２８２】
「医薬上許容可能な」組成物という用語は、本明細書に記載のカリクレイン阻害剤と共に患者に投与してよい非毒性の担体または賦形剤を指す。この担体または賦形剤は、組成物の生体活性または薬理活性に適合するように選別される。本明細書に記載のカリクレイン阻害剤（および、併用療法の場合は、他の治療薬）は、阻害剤および／または他の治療薬の阻害的な量を患者に送達するためのあらゆる適切な手段によって、局所的に投与することもでき、または全身に投与することもできる（例えば、静脈内投与および吸入などの全身投与が挙げられるが、これに限定されない）。非経口投与がカリクレイン阻害剤において特に好ましい。
【０２８３】
非経口投与の場合、カリクレイン阻害剤は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下に注射できる。皮下注射および静脈内投与が非経口投与の好ましい経路である。局所（関節内）注射も有用である。
【０２８４】
典型的には、注射投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液（例えば、ナトリウム／カリウムリン酸緩衝生理食塩水）中の溶液である。他の医薬上許容可能な担体としては、滅菌水、生理食塩水、および緩衝生理食塩水（リン酸塩または酢酸塩などの緩衝剤を含む）、アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、パラフィンなどが挙げられるが、これらに限定されない。必要に応じて、組成物は、活性化合物と有害反応を起こさない限り、可溶化剤および注射部位の疼痛を軽減するための局所麻酔薬（リドカインなど）、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、塩、潤滑剤などを含むこともできる。同様に、組成物は、従来の賦形剤、例えば、非経口、経腸または鼻腔内への適用に適した、活性化合物と有害反応を起こさない医薬上許容可能な有機または無機担体物質を含むことができる。一般に、これらの成分は、別々とされるか、単位投与量形態で混合されるか（例えば、活性物質の量を活性単位で示したアンプル、サシェ、またはバイアルなどの密封容器内で、乾燥した凍結乾燥粉末剤または水分を含まない濃縮物として）のいずれかで供給される。組成物を点滴によって投与しようとする場合、滅菌した医薬品グレードの「注射液」または生理食塩水を含む点滴ボトルを用いて分配することができる。組成物を注射によって投与しようとする場合、成分が投与前に混合できるように、滅菌注射液または生理食塩水の容器（例えば、アンプルまたはバイアル）を提供することができる。
【０２８５】
単離カリクレイン阻害剤の皮下投与用の例示的な製剤は、緩衝剤（例えば、ヒスチジンまたはリン酸緩衝液）を含む緩衝液および凍結保護物質（例えば、スクロース、またはスクロースおよびマンニトール、任意にデキストラン４０などのデキストランを含む）を含み、米国特許出願公開第２００７−０２１３２７５号（米国特許第１１／７１６，２７８号、２００７年３月９日出願）に記載のように、保管および分配用に凍結乾燥し得る。
【０２８６】
１つの実施形態では、カリクレイン阻害剤を、承認されているあらゆる手順にしたがい、点滴静注として患者に投与する。別の実施形態では、カリクレイン阻害剤を、皮下ボーラスとして患者に投与する。別の実施形態では、カリクレイン阻害剤を、患者に関節内注射によって投与する。静脈内投与および関節内投与は、典型的には、医療専門家により臨床環境（例えば、病院、救急課、または医師の診療室）において行われるが、皮下注射は自己投与であってもよいし、または医療専門家による投与であってもよい。
【０２８７】
全身投与用カリクレイン阻害剤の用量を決定するために評価できるパラメータを、以下でＤＸ−８８（非天然カリクレイン阻害剤、配列番号２）に関して記載する。血漿中の循環プレカリクレインの総量は、約５００ｎＭ〜６００ｎＭであると報告されている（Ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔｈｅ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，”  ｉｎ  Ｂｌｏｏｄ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  Ｈａｎｄｉｎ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ，  Ｊ  Ｂ  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  １９９５）。すべてのプレカリクレインが活性化された場合、カリクレインを化学量論的に阻害するのに約５２０ナノモル／ＬのＤＸ−８８（ＤＸ８８）を用いることができる。５Ｌの血漿を有する個体は、２．６マイクロモル、またはＤＸ−８８の分子量が７，０５４ダルトンであることに基づいて約１８ｍｇの用量のＤＸ−８８を必要とすると予想される。これは、以下のようにして計算した：ＤＸ８８のＫｉは、０．０４４ｎＭである。血漿カリクレイン（ＰＫ）の濃度が、例えば、１ｎＭであることが望ましい場合、式Ｋｉ＝０．０４４ｎＭ＝［ＤＸ８８］×［ＰＫ］／［ＤＸ８８−ＰＫ］＝［ＤＸ８８］×１ｎｍ／４９９ｎＭから、遊離したＤＸ−８８の濃度は２２．０ｎＭであることが示される。したがって、必要なＤＸ−８８の総量は４９９＋２２、つまり５２１ｎＭと予想される。この用量は、すべてのプレカリクレインが活性化されたとは限らない場合、またはカリクレインの一部が内因性の阻害剤（例えば、Ｃ１エステラーゼ阻害剤（Ｃ１ＩＮＨ））によって不活性化された場合、比例的に減少する可能性がある。したがって、ある実施形態では、約５、１０、１５、２０、３０、４０、６０、８０、１２０、２５０、５００、６００、７００、８００、１０００ｍｇのＤＸ−８８を、単回投与で、または１回以上の用量を２４時間にわたって分割して対象に投与できる。他のいくつかの要因（患者の年齢、体重、ならびに粘膜炎の重症度および関連症状など）を考慮することによって、実際に必要なＤＸ−８８の用量をより正確に推定できる可能性がある。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、カリクレイン阻害剤ポリペプチドを、約１〜５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約１〜２５０ｍｇ／ｍ２、１〜１００ｍｇ／ｍ２の用量で投与する。
【０２８９】
機器およびキット
カリクレイン阻害剤を含む医薬組成物は、医療機器を用いて投与できる。この機器は、病院または救急室／救急施設以外の環境において（例えば、在宅または医師の診療室で患者または介護士が）使用できるように、携帯性、室温保管性、および使用の容易性などの特徴を備えるように設計することができる。機器は、例えば、単離カリクレイン阻害剤を含む医薬配合物保管用のハウジングを１つ以上含み得、単位用量の物質（１種または複数）を１回以上送達するように設計することができる。
【０２９０】
静脈内投与は、ボーラスで行ってもよいし、または適切な注射器もしくは点滴器（例えば、カテーテル、点滴ポンプ、インプラントなど）を用いた点滴で行ってもよい。皮下注射は、例えばカテーテルおよび点滴ポンプまたは埋め込み型機器を用いた点滴として行ってよい。他の多くの機器、インプラント、送達系、およびモジュールも知られている。
【０２９１】
カリクレイン阻害剤を凍結乾燥粉末剤として分配する場合、それらを使用前に還元しなければならない。手作業での還元（例えば、希釈剤を、凍結乾燥製剤を含む容器内へ注入ポートを介して注入することによって、凍結乾燥製剤に手作業で添加すること）を用いてもよいし、またはカリクレイン阻害剤を自動での還元（例えば、凍結乾燥製剤への希釈剤の自動添加）用に設計された機器（ＢＥＣＴＯＮ−ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ  ＢＤ（商標登録）Ｌｉｑｕｉｄ  Ｄｒｙ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒなど）により提供してもよい。
【０２９２】
単離カリクレイン阻害剤は、キット中に提供できる。１つの実施形態では、キットは（ａ）単離カリクレイン阻害剤を含む組成物を含む容器、および（ｂ）本明細書に記載の方法および／または治療便益のための薬剤の使用に関する情報資料を含む。
【０２９３】
ある実施形態では、キットには、別の治療薬も含まれる。例えば、キットには、単離カリクレイン阻害剤を含む組成物を含む第一の容器、および他の治療薬を含む第二の容器が含まれる。単離カリクレイン阻害剤および他の治療薬は、カリクレイン阻害剤と治療薬を単一の組成物として投与する方法における使用用に同一容器内で供給し得る。
【０２９４】
キットの情報資料は、その形態が限定されない。１つの実施形態では、情報資料は、化合物の産生、化合物の分子量、濃度、有効期限、バッチまたは産生部位情報などの情報を含むことができる。１つの実施形態では、情報資料は、例えば、粘膜炎を呈する対象を治療するのに適した用量、投与形態、または投与方法（例えば、本明細書に記載の用量、投与形態、または投与方法）での単離カリクレイン阻害剤の投与方法に関する。これらの情報は、印刷物、コンピュータ媒体資料、録画、または録音、または実体的資料へのリンクもしくはアドレスを提供する情報を含む様々な形態で提供できる。
【０２９５】
キット中の組成物は、単離カリクレイン阻害剤（および、存在する場合、追加の治療薬（１つまたは複数））に加えて、他の成分（溶媒もしくは緩衝液、安定剤、または保存剤など）を含み得る。単離カリクレイン阻害剤（および、存在する場合、他の治療薬）は、あらゆる形態（例えば、液体、乾燥形態または凍結乾燥形態）で提供できるが、実質的に純粋および／または無菌であることが好ましい。これらの物質を溶液中に提供する場合、溶液は好ましくは水溶液である。これらの物質を乾燥形態で提供する場合、一般に還元は適切な溶媒の添加によって行う。溶媒（例えば、滅菌水または滅菌緩衝液）は任意にキット中に提供できる。
【０２９６】
キットは、物質を含む組成物（１つまたは複数）用の容器を１つ以上含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、組成物および情報資料用に別々の容器、仕切りまたは区画を含む。例えば、組成物を、瓶、バイアル、またはシリンジに含めることもでき、情報資料をプラスチックシートまたは小箱に含めることもできる。他の実施形態では、キットの個別の要素を単一の非分割容器内に含める。例えば、組成物を、ラベルの形態で情報資料を添付した瓶、バイアルまたはシリンジ中に含める。いくつかの実施形態では、キットは、個別の容器を複数（例えば、パックで）含み、各容器は１つ以上の単位投与形態（例えば、本明細書に記載の投与形態）の物質を含む。容器は、単位投与量（例えば、単離カリクレイン阻害剤および別の治療薬の両方を、例えば、所望の比率で含む単位）の組み合わせを含み得る。例えば、キットは、複数のシリンジ、アンプル、金属箔の包み、ブリスターパック、または医療機器を含み、例えば、これらはそれぞれが単一の単位用量の組み合わせを含む。キットの容器は、気密性、防水性（例えば、湿気または蒸発の変化を防止する）、および／または遮光性であり得る。
【０２９７】
キットは、組成物の投与に適した機器、例えば、シリンジ、または他の適切な送達機器を任意に含む。機器は、上記物質の一方または両方を予め充填して提供することもでき、または空だが充填に適した状態で提供することもできる。
【実施例】
【０２９８】
以下の実施例は、さらなる例証を提示するが、これらに限定されない。
【実施例１】
【０２９９】
［予想実施例１］
口腔粘膜炎の予防および治療におけるＤＸ−８８の有効性の決定
この前臨床発現計画の主な目的は、癌治療に使用される化学療法または放射線療法により誘発された口腔粘膜炎に対する介入としての、ＤＸ−８８（および／または関連化合物）至適製剤の有効性およびスケジュールの確立である。この計画は、本容態の検証したおよび予測的動物モデル（下記）において実施される論理的につながっている実験群からなる。
【０３００】
有効性スクリーニング（工程１）。急性放射線誘発性の粘膜炎を化合物および製剤のスクリーニングに使用する。このモデルでは、動物に単回高線量の放射線を単離したほお粘膜に対して照射する。発現する潰瘍性粘膜炎の動力学および程度は一貫したコースにしたがう。潰瘍性粘膜炎の弱毒化は、ＤＸ−８８の有効性を定義するために使用するロバストエンドポイントである。このモデルを使用して、ＤＸ−８８の皮下、腹腔内および局所的処方を用量範囲形態において評価する。
【０３０１】
用量範囲至適化およびスケジュールのスクリーニング（工程２）。工程１において確立したリード製剤を様々なスケジュールスキーム（例えば、放射線照射前および連続７日間、放射線照射後および連日１４日間など）に適用した追加用量を用いて評価する。
【０３０２】
臨床的決定点：製品標的集団（サイクル化学療法、放射線療法、ＨＳＣＴ）の決定。続く前臨床的試験は、予測された製品クレーム／市場優先順位について設計した。
【０３０３】
投与スケジュール決定（工程３）。放射線療法誘発性の粘膜炎が主要な適応症である場合、分割放射線モデルにおいて、ヒトにおける投与スケジュールを模したスケジュール試験を実施する。一方、サイクル化学療法を主な適応として選択した場合、化学療法（おそらくは５−フルオロウラシル）モデルを使用する。元の試験の観察結果を確認するために、至適プロトコールに注目した本試験の小規模バージョンの試験を行い得る。
【０３０４】
注記：支持的腫瘍製品はいずれも、正常組織の保護が細胞障害療法に対する腫瘍反応を改変しないことが必要とされる。したがって、並行して、ＤＸ−８８の不活発な腫瘍増殖調節因子としてまたは療法に対する反応を実証する試験を実施する。
【０３０５】
試験１．粘膜炎の急性放射線。これは２〜３製剤を比較する用量範囲試験である。これは８群（６４匹の動物）を用いた３０日間試験である。投与は−１日目から２０日目まで行う。１つ以上の治療群において有効性が観察された場合、至適化試験に直接移ることができる。有効性が観察されなかった場合、増量または変更した製剤を用いて本試験を反復する必要があり得る。
【０３０６】
試験２．粘膜炎の急性放射線。これは至適製剤の用量範囲試験である。本試験では、用量範囲を拡大し、代替的な投与スケジュールを評価する。これは８群（６４匹の動物）を用いた３０日間試験である。両試験が順調で至適用量／スケジュールプロトコールが決定された場合、改変試験に移り、特定の臨床的集団に取り組む。最初の２件の試験において用量およびスケジュールに関するすべての疑問点が解決できない可能性がある。その場合、第三の試験が必要となり得る。
【０３０７】
試験３．粘膜炎の急性放射線（必要性は試験１＋２結果に依存）。本実験では、最初の２件の試験後に残っている至適用量、処方および／またはスケジュールに関するあらゆる不明確な疑問点に取り組む。これは８群（６４匹の動物）を用いた３０日間試験である。本試験は依然として解決すべき疑問点に応じて、より大規模でも、より小規模でもよい。
【０３０８】
試験４．臨床的集団を対象とした粘膜炎試験。本試験は、Ｄｙａｘの発現優先度に応じて分割放射線試験または併用化学療法／放射線試験のいずれかである。本試験の目的は、特定の臨床適応症のための至適用量およびスケジュールの決定である。本試験では、我々は、至適用量およびスケジュールを一括して至適化する。化学／放射線試験には４０日間かかると予想され、７つの実験群（７０匹の動物）を評価する。分割放射線試験も終了までに４０日間かかると予想され、類似規模であると予想される。
【０３０９】
試験５．臨床的集団を対象とした粘膜炎試験。本試験は、試験４の確証試験である。本試験の目的は、特定の臨床適応症のための至適用量およびスケジュールの確認である。本試験では、我々は、至適用量およびスケジュールを一括して至適化する。本試験は試験４より小規模であり、経費は使用した動物数に応じる。
【実施例２】
【０３１０】
［予想実施例２］
口腔粘膜炎の予防および治療におけるＥｐｉ−ＫＡＬ２の有効性の決定
試験目的
本試験の目的は、急性放射線により誘発した口腔粘膜炎の頻度、重症度および期間に対するＥＰＩ−ＫＡＬ２の有効性の実証である。ＥＰＩ−ＫＡＬ２は、組織因子経路阻害剤の第一ドメインに基づくｐＫａｌの強力な（Ｋｉ，ａｐｐ＝０．１ｎＭ）活性部位阻害剤かつＫｕｎｉｔｚドメイン阻害剤である（Ｍａｒｋｌａｎｄ  （１９９６）  Ｉｔｅｒａｔｉｖｅ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ．  ２．  Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ３５（２４）：８０５８−６７）。
【０３１１】
ＥＰＩ−ＫＡＬ２配列は：
ＥＡＭＨＳＦＣＡＦＫＡＤＤＧＰＣＲＡＡＨＰＲＷＦＦＮＩＦＴＲＱＣＥＥＦＳＹＧＧＣＧＧＮＱＮＲＦＥＳＬＥＥＣＫＫＭＣＴＲＤ
（斜体のアミノ酸は、ＴＦＰＩと異なるアミノ酸である）
である。
【０３１２】
第一試験では、２つの投与経路を試験する。本試験の主な目的は、各投与経路の有効性のシグナルの取得である。本試験の結果は、口腔粘膜炎治療における用量およびスケジュールの両方の将来的な至適化の基礎を提供する。
【０３１３】
材料および方法
【表２】
2013516389.tif 000004
【表３】
2013516389.tif 000005
【表４】
2013516389.tif 000006
【０３１４】
実験設計
０日目、２４匹の雄Ｓｙｒｉａｎ  Ｇｏｌｄｅｎハムスターに急性線量４０Ｇｙを左口内のほお袋に対して照射する。これは動物に麻酔をかけ、左口内袋を裏返して行い、その間、残りの動物は鉛のシールドで保護する。被験物質を局所投与、またはＩＰ注射により左ほお袋に対して投与する。粘膜炎評価を６日目に臨床的に開始し、２８日目まで隔日で継続する。
【０３１５】
２８日目、すべての動物をＣＯ２吸入で安楽死させ、ＵＳＤＡガイドラインにしたがった心拍のモニタリングにより死亡を確認する。剖検にて、左右のほお袋を採集して液体窒素で瞬間凍結する。これらの試料を−８０℃で保存し、生体マーカー分析用に乾燥氷上で輸送する。
【表５】
2013516389.tif 000007
【０３１６】
実験手順
粘膜炎の誘発
０日目、すべての動物に単回放射線量（４０Ｇｙ／用量）を照射して粘膜炎を誘発する。放射線を１６０キロボルトの潜在的（１５ｍａ）源で焦点距離２１ｃｍで生成して、３．０ｍｍのＡｌろ過系で硬化する。左口内袋粘膜を標的として２．５Ｇｙ／分の速度で照射する。照射前、ケタミン（１６０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（８ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射で動物に麻酔をかける。左口内袋を裏返し、固定して鉛のシールドを用いて単離する。
【０３１７】
粘膜炎スコアリング
６日目に開始し、その後隔日（８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、および２８日目）で継続し、各動物を撮影して粘膜炎スコアリングを評価する。測定すべきパラメータとしては、粘膜炎スコア、体重変動および生存率が挙げられる。粘膜炎評価のため、動物を吸入麻酔薬で麻痺させ、左袋を裏返す。粘膜炎を、正常な場合の０から重度の潰瘍形成の場合の５までの範囲（臨床的スコアリング）で、検証した写真尺度と比較して視覚的にスコアリングする。この尺度を記述的に以下のように定義する。
スコア：説明：
０  袋は完全に健常。紅斑も血管拡張もなし。
１  軽度〜重度の紅斑および血管拡張。粘膜びらんなし。
２  重度の紅斑および血管拡張。露出領域を残した粘膜の表在性様相のびらん。低減した粘膜点描。
３  １箇所以上においてオフホワイト色の潰瘍形成。潰瘍は偽膜のために黄色／灰色の外見を呈し得る。潰瘍の累積サイズは袋の約１／４に相当する。重度の紅斑および血管拡張。
４  潰瘍の累積サイズは袋の約１／２に相当する。柔軟性喪失。重度の紅斑および血管拡張。
５  実質的にすべての袋が潰瘍化した。柔軟性喪失（袋は部分的にしか口から抽出できない）
【０３１８】
スコア１〜２は軽度の疾患期を示すものとみなし、スコア３〜５は中等度〜重度の粘膜炎を示すものとみなす。この予備臨床的スコアリングの後、標準化技術を用いて各動物の粘膜を写真撮影した。実験終了時、フィルムを現像し、写真を無作為化スコアリングのために無作為にナンバリングした。その後、２人の互いに依存しない訓練を受けた観察者が、盲検式で上記の尺度を用いて写真を段階付けた。各写真において、実際の無作為化スコアは、評価者のスコアの平均値に基づく。この盲検的な写真評価によるスコアのみを統計分析し、最終試験報告において報告した。
【０３１９】
粘膜炎評価
盲検写真を用いて、粘膜炎グレードをスコア化する（６日目に開始し、その後隔日で、２８日目まで）。各薬剤治療の粘膜炎に対する効果をビヒクル対照と比較して、以下のパラメータに応じて評価する。
【０３２０】
各群のハムスターが重度（スコア≧３）の粘膜炎を呈する日数差。
【０３２１】
連日、動物をスコア化し（評価日）、各薬剤治療群における盲検粘膜炎スコア≧３の動物数をビヒクル対照群と比較する。相違を連日ならびに累積的に分析する。薬剤治療群におけるスコア＞３のハムスター数が対照に対して統計的に有意に少ないことがχ二乗分析により決定された場合に、治療が成功したものとみなす。
【０３２２】
連日の粘膜炎スコアにおけるランク総計の相違。
【０３２３】
各評価日に、非パラメトリックランク総計分析を用いて、ビヒクル対照群のスコアを治療群のスコアと比較する。６日目から２８日目まで２日間以上、治療群におけるスコアが統計的に有意に低下した場合に、治療が成功したものとみなす。
【０３２４】
粘膜炎の消散に対する被験薬の効果を評価するため、試験と対照との間で治癒までの時間を比較する。消散は潰瘍性病変の不在（スコア＜３）と定義する。
【０３２５】
体重
治療に起因する粘膜炎の重症度および／または可能な毒性の指標として、治療群間の動物の体重の可能な相違を評価するため、試験期間中、毎日、各動物の体重を測定して生存率を記録する。
【０３２６】
死亡または瀕死をみとめた動物
このモデルにおける動物死は一般に麻酔の過投与または薬物毒性の結果として生じる。動物を連日モニタリングし、体重低下が２０％超示された動物を安楽死させる。副作用または予期しない死はいずれも迅速に報告する。
【０３２７】
データ分析および報告
統計分析  治療群間の統計的な差をスチューデントＴ検定、マンホイットニーＵ検定および臨界値０．０５のχ二乗分析を用いて決定する。最大１０％の動物死が主に麻酔薬投与の結果として生じ得ることが予期される。しかしながら、２８日目に生存し続けていることが予期される動物数（６匹／治療群）は統計的評価のために許容できるとみなされる。
【実施例３】
【０３２８】
阻害抗血漿カリクレイン結合タンパク質
我々は、いくつかの抗体阻害剤および血漿カリクレイン結合剤（ｐＫａｌ）を見出した。これらのうち最も強力なものをさらに特徴化し、見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）＜１０ｎＭを有すること、他の被験セリンプロテアーゼに関して特異的なｐＫａｌ阻害剤であること、およびプレカリクレインと結合しないことが示された。阻害剤のＣＤＲアミノ酸配列を表６に示す。
【表６】
2013516389.tif 000008
2013516389.tif 000009
【０３２９】
使用した略語：「Ｔ／Ｂ」とは、「背景」（ストレプトアビジン）のＥＬＩＳＡシグナルにより分割した「標的」（ビオチン化血漿カリクレイン）を用いて得られたＥＬＩＳＡシグナルである；この両方をマイクロタイタープレート上でコーティングした。「ｎｄ」とは、未決定のことである。記号「ｑ」とは、アンバー抑制可能な終了コドン（ＴＡＧ）を指し、これはＥ．ｃｏｌｉ（Ｆａｂ断片を発現するために使用したＴＧ１細胞など）の菌株中のグルタミン（Ｑ）として翻訳される。
【０３３０】
ｐＫａｌ抗体阻害剤の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）可変ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。
【化１】
2013516389.tif 000010
2013516389.tif 000011
2013516389.tif 000012
2013516389.tif 000013
2013516389.tif 000014
2013516389.tif 000015
【０３３１】
注記：Ｘ８１−Ｂ０１の可変配列はＸ６３−Ｇ０６（Ｘ８１−Ｂ０１のＦａｂバージョンであり、これはＩｇＧである）と同一であり、これを表１１に示す。
【実施例４】
【０３３２】
主要な抗体阻害剤
見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）、他のセリンプロテアーゼの阻害の欠如、ブラジキニン生成の阻害、および血漿プレカリクレインへの結合の欠如に関する特異性に基づき、主要な血漿カリクレイン阻害剤としての抗体を選択した（表７）。血漿カリクレインは、約５００ｎＭの濃度の不活性酵素前駆体（プレカリクレイン）として血漿中を循環する。プレカリクレインと結合した抗体は活性血漿カリクレインを阻害し難くなり得、効力に要するｉｎ  ｖｉｖｏ用量が大幅に上昇し得る。そのため、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して、プレカリクレインと結合しない抗体を同定した（データは示していない）。特異的に、ヒトＩｇＧ（Ｘ８１−Ｂ０１、Ｍ１６２−Ａ０４（Ｒ８４−Ｈ０５）；Ｍ１６０−Ｇ１２（Ｒ８４−Ｄ０２）；およびＭ１４２−Ｈ０８）を抗ヒトＦｃ表面および１００ｎＭの血漿カリクレインまたは１００ｎＭもしくは５００ｎＭのプレカリクレインを用いてＣＭ５チップ上で捕獲した。プレカリクレインをアプロチニン−セファロースで治療して活性血漿カリクレインを除去した。Ｘ８１−Ｂ０１に使用したプレカリクレインは、試験した他の３つの抗体：Ｍ１６２−Ａ０４（Ｒ８４−Ｈ０５）；Ｍ１６０−Ｇ１２（Ｒ８４−Ｄ０２）；およびＭ１４２−Ｈ０８により観察された屈折指標の移行を回避するためにＳＰＲ流れる緩衝液（ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水）の正確な調製物に変換した緩衝液であった。
【０３３３】
表７に列挙した抗体のうち、Ｍ１４２−Ｈ０８のみがヒト血漿カリクレインをナノモル以下のＫｉ，ａｐｐで阻害した。しかしながら、Ｍ１４２−Ｈ０８がＩｇＧとして産生された場合、それは重鎖のＣＤＲＪ内で切断されることが見出された。したがって、我々は、親和性を改善するために２つのアプローチ：１）ＲＯＬＩＣ（軽鎖の急速至適化（Ｒａｐｉｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎｓ））と呼ばれる新規形態の軽鎖混合を用いた、Ｍ１６２−Ａ０４およびＭ１６０−Ｇ１２の親和性成熟（例えば、ＷＯ２００９／１０２９２７号および米国特許第２００９−０２１５１１９号を参照されたい）；ならびに２）Ｍ１４２−Ｈ０８の結合および阻害特性を保持しつつ生じるＩｇＧ切断を防止するためのＭ１４２−Ｈ０８の配列至適化、を施行することを決定した。
【表７】
2013516389.tif 000016
【実施例５】
【０３３４】
Ｍ１４２−Ｈ０８の配列至適化
表７に列挙した抗体のうち、Ｍ１４２−Ｈ０８のみがヒトｐＫａｌをナノモル以下のＫｉ，ａｐｐで阻害する。しかしながら、Ｍ１４２−Ｈ０８がＩｇＧとして産生された場合、それは重鎖のＣＤＲ３中で切断されることが見出された。Ｍ１４２−Ｈ０８は、質量分析によりＨＣ−ＣＤＲ３配列（ＧＧＬＬＬＷＦＲＥＬＫＳＮＹＦＤＹ）の「ＷＦＲ」配列のアルギニン後に切断されることが見出された。この切断により、抗体（ＣＨＯおよび２９３Ｔヒト腎細胞の両方）を発現するために使用された細胞由来のプロテアーゼは、単一の特異的部位で抗体を酵素的に切断することが示唆される。我々は、Ｍ１４２−Ｈ０８の結合および阻害特性を保持しつつ生じるＩｇＧの切断を防止するアミノ酸置換を同定するために、Ｍ１４２−Ｈ０８のＨＣ−ＣＤＲ３配列を変異させた。同様に「切り取られた」抗体を用いた先の実験により、宿主細胞プロテアーゼにより切り取られずに標的となる酵素の強力な阻害を保持する抗体を同定するためには、単に推定Ｐ１位（プロテアーゼのサブサイト１、表８を参照されたい）に注目することは不十分であり得ることが示唆された。そのため、我々は、切り取られていないが依然として強力なｐＫａｌ阻害剤であるＭ１４２−Ｈ０８変異体を同定するために、切断部位の周辺領域内の単一点変異の小さなライブラリーを作製した。我々は、このライブラリーを「設計によるＣＤＲ３」ライブラリーと呼ぶ。この小さなライブラリーは、Ｐ３、Ｐ２、Ｐ１、またはＰ１’部位のいずれかに無作為のコドンＮＮＫを含むＰＣＲプライマーを用いて構築した。これにより、各４位が任意の２０種のアミノ酸（２０＋２０＋２０＋２０＝８０メンバー）を含み得る小さなライブラリーが得られる。ＰＣＲを用いて、このライブラリーを、標準的なファージミドベクターであるｐＭｉｄ２１ベクター中のＭ１４２−Ｈ０８  Ｆａｂ配列にクローニングした。
【表８】
2013516389.tif 000017
【０３３５】
ＤＮＡシークエンシングにより、我々は、可能な８０個の抗体中６１個を採集した（表９）。これらの抗体を小サイズ（〜２０μｇ）のＦａｂ断片として産生し、Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−アミノメチルクマリンを合成ペプチド基質として用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏプロテアーゼ切断アッセイにおけるヒトｐＫａｌに対する阻害について試験した。ヒトｐＫａｌ阻害剤であることが見出されたＦａｂを、完全長ヒトＩｇＧ１抗体への変換のために我々のｐＢＲＨ１ｆベクター（２９３Ｔ細胞中のＩｇＧの一過性発現ベクター）中にサブクローニングした。次いで、５個の抗体が２９３Ｔ細胞中で発現し、タンパク質Ａセファロースクロマトグラフィーにより精製された。抗体をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析して、どの阻害剤変異体が宿主細胞プロテアーゼ（１つまたは複数）により切断されていないか決定した（データは示していない）。切断された抗体（５５９Ａ−Ｘ６７−Ｇ０５、５５９Ａ−Ｘ６７−Ｈ０１、５５９Ａ−Ｘ６７−Ｇ０９）は３８〜４９ｋＤａ分子量マーカーで転位された余分なバンドを有した。このバンドは５５９Ａ−Ｘ６７−Ｈ０４および５５９Ａ−Ｘ６７−Ｄ０３抗体中では存在せず、これらの抗体はインタクトであることが示される。
【０３３６】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより切断されていないことが示されたもののＫｉ，ａｐｐ値を定常状態の酵素動力学により決定した（表９）。興味深いことに、Ｐ２位は、アミノ酸置換によりｐＫａｌのインタクトな抗体阻害剤が得られた唯一の位置であった。Ｐ３位で採集した１４個の異なる変異（表９）のうち、１個の変異（ＷからＬ）のみがＦａｂとしてのｐＫａｌ阻害剤であることが見出されたが、ＩｇＧとして切り取られたことが続いて示された。Ｐ１位の１６個の異なる変異（表９）のいずれもｐＫａｌ阻害剤ではないことが見出された。Ｐ１位の１５個の異なる変異中８個がＦａｂとしてｐＫａｌ阻害剤であることが見出されたが、すべてＩｇＧとして切り取られた。したがって、Ｐ２位の変異のみが発現中に切り取られなかった抗体阻害剤に至った。Ｐ２位で採集した１６個の異なる変異（表９）のうち、８個の変異体はＦａｂとしてのｐＫａｌ阻害剤であることが見出されたが、ＩｇＧとして切り取られたことが続いて示された。Ｐ２位の４個の変異体：Ｘ６７−Ｇ０４（ＦからＡ）、Ｘ６７−Ｃ０３（ＦからＭ）、Ｘ６７−Ｆ０１（ＦからＱ）およびＸ６７−Ｄ０３（ＦからＮ）は、ナノモル以下のＫｉ，ａｐｐ値を有することが見出された。最高効力の抗体はＸ６７−Ｄ０３（Ｋｉ，ａｐｐ＝０．１ｎＭ）である。表１０に示した２つの抗体はＩｇＧとして発現時に切断されず、ナノモル以下のＫｉ，ａｐｐでｐＫａｌを阻害することが見出された。
【０３３７】
非生殖系列（Ｘ６３−Ｇ０６）および生殖系列の軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列整列、ＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体のコドン至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンを図３および４にそれぞれ示す。非生殖系列（Ｘ６３−Ｇ０６）および生殖系列の重鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列整列、ＲＯＬＩＣ親和性成熟を用いて見出された同一抗体のコドンの至適化（Ｘ８１−Ｂ０１）バージョンを図５および６にそれぞれ示す。
【表９】
2013516389.tif 000018
2013516389.tif 000019
2013516389.tif 000020
【０３３８】
指定のＨＣ  ＣＤＲ３を有するｐＫａｌ抗体の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）可変ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。
【化２】
2013516389.tif 000021
2013516389.tif 000022
2013516389.tif 000023
2013516389.tif 000024
2013516389.tif 000025
2013516389.tif 000026
2013516389.tif 000027
2013516389.tif 000028
2013516389.tif 000029
2013516389.tif 000030
2013516389.tif 000031
【表１０】
2013516389.tif 000032
【表１１】
2013516389.tif 000033
【０３３９】
ＲＯＬＩＣを用いて見出されたｐＫａｌの親和性成熟抗体阻害剤の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）可変ドメインのアミノ酸配列を以下に示す。
【化３】
2013516389.tif 000034
上に示したように、Ｘ８１−Ｂ０１はＸ６３−Ｇ０６  ＦａｂのＩｇＧバージョンである。
【実施例６】
【０３４０】
親和性成熟
切り取られた抗体（Ｍ１４２−Ｈ０８）配列の至適化に加えて、我々は、ファージディスプレイにより同定した２つの抗体（Ｍ１６２−Ａ０４およびＭ１６０−Ｇ１２）上で親和性成熟も実施した。これらの抗体の両方が１桁のナノモル効力でヒトｐＫａｌを阻害し、ｐＫａｌ特異的であると思われ、プレカリクレインと結合しない（表７）。最初に、我々は、ＲＯＬＩＣ（軽鎖の急速至適化（Ｒａｐｉｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎｓ））と呼ばれる新規形態の軽鎖混合をＭ１６２−Ａ０４およびＭ１６０−Ｇ１２上で実施した（例えば、ＷＯ２００９／１０２９２７号および米国特許第２００９−０２１５１１９号を参照されたい）。ＲＯＬＩＣにより見出された抗体のスクリーニングにより、我々は、Ｍ１６０−Ｇ１２と同一の重鎖を共有するナノモル以下の効力（Ｘ６３−Ｇ０６）を有する１つの抗体を同定した。次いで、我々は、Ｍ１６２−Ａ０４およびＸ６３−Ｇ０６中のＣＤＲ３配列に基づきＨＶ−ＣＤＲ３スパイキング親和性成熟ライブラリーを構築した（下記）。
【０３４１】
ＲＯＬＩＣによる親和性成熟。我々は、表７のうち切断されなかった２つのリード（Ｍ１６２−Ａ０４およびＭ１６０−Ｇ１２）の親和性成熟にＲＯＬＩＣを使用した。この過程により、ナノモル以下のＫｉ，ａｐｐでｐＫａｌを阻害する１つの抗体を同定した（表１１）。Ｘ６３−Ｇ０６はＦａｂ断片としてｐＫａｌを約０．４ｎＭのＫｉ，ａｐｐで阻害する。この抗体を、生殖系列化しかつＣＨＯ細胞発現のために配列を至適化したＩｇＧ（Ｘ８１−Ｂ０１）に変換時、約０．２ｎＭのＫｉ，ａｐｐでｐＫａｌを阻害することが見出された。
【実施例７】
【０３４２】
重鎖ＣＤＲ１／２およびＣＤＲ３の親和性成熟
我々は、２つの異なる親抗体阻害剤リード：Ｍ１６２−Ａ０４およびＸ６３−Ｇ０６に基づく非常に強力な抗体を同定するために、さらに２つの親和性成熟戦略を用いた。一方のアプローチは、追加のＣＤＲ１／２多様性に対して２つの異なる親抗体阻害剤リード（Ｍ１６２−Ａ０４およびＸ６３−Ｇ０６）のＨＣのＣＤＲ１／２を混ぜたライブラリーの生成であった。もう一方のアプローチは、これらのリードに基づく重鎖ＣＤＲ３スパイキングライブラリーの作製であった。
【０３４３】
８２個の抗体がＣＤＲ１／２およびＣＤＲ３領域のいずれかにおける修飾に起因するＭ１６２−Ａ０４の改善に基づき見出され、これを表１２に示す。１０ｎＭの抗体（Ｆａｂ断片として）を用いた阻害スクリーニングにより、３３個の抗体がｐＫａｌ活性を９０％超阻害したことが明らかになった。いくつかの抗体は、ヒトｐＫａｌのナノモル以下の阻害剤であることが示された。
【０３４４】
ＣＤＲ１／２およびＣＤＲ３領域のいずれかにおける修飾に起因するＸ６３−Ｇ０６中の改善に基づき見出された６２個の抗体を表１３に示す。１０ｎＭの抗体（Ｆａｂ断片として）を用いた阻害スクリーニングにより、２４個の抗体がｐＫａｌ活性を９０％超阻害したことが明らかになった。いくつかの抗体がヒトｐＫａｌのナノモル以下の阻害剤として示された。
【表１２】
2013516389.tif 000035
2013516389.tif 000036
2013516389.tif 000037
2013516389.tif 000038
2013516389.tif 000039
2013516389.tif 000040
【０３４５】
Ｍ１６２−Ａ０４に基づくＣＤＲ１／２およびＣＤＲ３スパイキング親和性成熟ライブラリーから得られたｐＫａｌ抗体の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）可変ドメインのアミノ酸配列。
【化４】
2013516389.tif 000041
2013516389.tif 000042
2013516389.tif 000043
2013516389.tif 000044
2013516389.tif 000045
2013516389.tif 000046
2013516389.tif 000047
2013516389.tif 000048
2013516389.tif 000049
2013516389.tif 000050
2013516389.tif 000051
2013516389.tif 000052
2013516389.tif 000053
2013516389.tif 000054
【表１３】
2013516389.tif 000055
2013516389.tif 000056
2013516389.tif 000057
【０３４６】
Ｘ６３−Ｇ０６に基づくＣＤＲ１／２およびＣＤＲ３スパイキング親和性成熟ライブラリーから得られたｐＫａｌ抗体の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）可変ドメインのアミノ酸配列。
【化５】
2013516389.tif 000058
2013516389.tif 000059
2013516389.tif 000060
2013516389.tif 000061
2013516389.tif 000062
2013516389.tif 000063
2013516389.tif 000064
2013516389.tif 000065
2013516389.tif 000066
2013516389.tif 000067
2013516389.tif 000068
【実施例８】
【０３４７】
血漿カリクレインの選択された抗体阻害剤の評価
選択された至適化抗体（Ｘ８１−Ｂ０１およびＸ６７−Ｄ０３）の評価を表１４に示す。いずれの抗体も、いかなる推定脱アミド、異性化、または酸化部位も有さない。
【表１４】
2013516389.tif 000069
【実施例９】
【０３４８】
エピトープマッピング
選択された抗ｐＫａｌ抗体が結合したｐＫａｌ領域をいくつかの方法を用いて調査した。第一に、競合アッセイを用いて、抗体がｐＫａｌ結合について既知の活性部位指向阻害剤と競合するかどうかを決定した。第二に、ｐＫａｌ阻害剤であったか単にｐＫａｌ結合剤であったかに応じて抗体を分類した。第三に、ｐＫａｌの配列および３次元構造に基づく合成ペプチドおよびペプチド構造を用いてエピトープを調査した。これらのペプチド構造を「ＣＬＩＰＳ」（足場上の化学的結合ペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ））と呼び、Ｐｅｐｓｃａｎという名のサービス会社のための報酬によって試験を実施した。
【０３４９】
第四に、抗体の（ヒト以外の）他種由来のｐＫａｌの阻害能力を試験した（阻害における相違を説明し得るアミノ酸を同定するためにｐＫａｌのアミノ酸配列は決定済である）。
【０３５０】
競合アッセイ
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ＳＰＲアッセイを用いて、目的の抗体とｐＫａｌの既知の活性部位阻害剤との競合について試験した。ＥＰＩ−ＫＡＬ２は、組織因子経路阻害剤の第一ドメインに基づくｐＫａｌの強力な（Ｋｉ，ａｐｐ＝０．１ｎＭ）活性部位阻害剤かつＫｕｎｉｔｚドメイン阻害剤である（Ｍａｒｋｌａｎｄ  （１９９６）  Ｉｔｅｒａｔｉｖｅ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ．  ２．  Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５（２４）：８０５８−６７）。Ｋｕｎｉｔｚドメインは、セリンプロテアーゼの既知の活性部位阻害剤（ｐＫａｌなど）である。
【０３５１】
ＥＰＩ−ＫＡＬ２配列は、
ＥＡＭＨＳＦＣＡＦＫＡＤＤＧＰＣＲＡＡＨＰＲＷＦＦＮＩＦＴＲＱＣＥＥＦＳＹＧＧＣＧＧＮＱＮＲＦＥＳＬＥＥＣＫＫＭＣＴＲＤ
（斜体のアミノ酸は、ＴＦＰＩと異なるアミノ酸である）
である。
【０３５２】
図７Ａ〜７Ｂに示すように、抗体Ｘ８１−Ｂ０１およびＸ６７−Ｄ０３は、ＥＰＩ−ＫＡＬ２の存在下、ｐＫａｌ結合について競合した。この結果により、これらの抗体は、活性部位近傍と結合するか、またはｐＫａｌ−ＥＰＩ−ＫＡＬ２錯体の高次構造をアロステリック変化させるかのいずれかにより、抗体の結合を防止することが示される。
【０３５３】
抗体の結合剤と阻害剤との比較
ｐＫａｌの活性を阻害する抗体は、活性部位付近に結合して基質相互作を防止する（競合的阻害剤）か、または活性部位から離れて結合して活性部位構造にアロステリック変化を誘発する（非競合的阻害剤）かのいずれかである。表１５に、列挙した抗体が阻害剤としてマウスｐＫａｌと交差反応するかどうか、およびプレカリクレインと結合するかどうかの実証を示す。
【表１５】
2013516389.tif 000070
【０３５４】
ＣＬＩＰＳを用いたエピトープマッピング
表１５に列挙した抗ｐＫａｌ抗体と、１つの陰性対照（Ａ２）およびｐＫａｌと結合したがｐＫａｌを阻害しなかった３つの抗体の５０００個の異なる合成ＣＬＩＰＳ（足場上の化学的結合ペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ））に対する結合について、以下のＣＬＩＰＳ方法項目に記載のようにＰｅｐｓｃａｎにより試験した。この分析により、ｐＫａｌ中ペプチド領域は、各被験抗体の抗体エピトープの一部分である可能性が高いという確認に至った（図８）。
【０３５５】
ＣＬＩＰＳ方法
標的となるタンパク質のアミノ酸配列に基づき、標準的なＦｍｏｃ化学を用いて線形およびＣＬＩＰＳペプチドを合成し、三フッ素酸をスカベンジャーと共に用いて保護を外した。高次構造的エピトープを還元するために、足場上の化学的結合ペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）（ＣＬＩＰＳ）技術を用いて、化学的足場の上で拘束ペプチドを合成した（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）。例えば、単一ループ式ペプチドはジシステインを含むように合成し、α、α’−ジブロモキシレンで処理することによってそのジシステインを環化した。間隔が変化する位置にシステイン残基を導入することによってループのサイズを変化させた。新たに導入したシステイン以外にシステインが存在している場合には、そのシステインをアラニンで置換した。クレジットカード形式のポリプロピレン製ＰＥＰＳＣＡＮカード（４５５ペプチド形式／カード）の上でＣＬＩＰＳ鋳型の０．５ｍＭ溶液（１，３−ビス（ブロモメチル）ベンゼンを含む炭酸水素アンモニウム溶液（２０ｍＭ、ｐＨ７．９）／アセトニトリル（１：１（ｖ／ｖ））など）と反応させることにより、ペプチド中に複数あるシステインの側鎖をＣＬＩＰＳ鋳型と結合させた。カードを溶液で完全に覆いつつ、溶液中で３０〜６０分間穏やかに撹拌した。最後に、カードを過剰なＨ２Ｏで徹底的に洗浄し、１パーセントＳＤＳ／０．１パーセントβ−メルカプトエタノールのＰＢＳ溶液（ｐＨ７．２）を含む中断緩衝液の中で７０℃にて３０分間にわたって超音波処理後、Ｈ２Ｏの中でさらに４５分間にわたって超音波処理した。ＰＥＰＳＣＡＮをベースとしたＥＬＩＳＡによって各ペプチドへの抗体の結合を試験した。共有結合ペプチドを含む４５５ウェルのクレジットカード形式ポリプロピレン製カードを、一次抗体溶液、例えば、ＳＱ（４％ウマ血清、５％卵白アルブミン（ｗ／ｖ）のＰＢＳ／１％Ｔｗｅｅｎ溶液中で、またはＰＢＳ溶液で希釈した、例えば、２０％ＳＱ）と呼ばれるブロッキング溶液で希釈した１マイクログラム／ｍＬからなる一次抗体溶液で一晩インキュベートした。洗浄後、ペプチドを１／１０００希釈のウサギ抗ヒト抗体ペルオキシダーゼまたはヤギ抗ヒトＦＡＢペルオキシダーゼで２５℃にて１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質である２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンツチアゾリンスルホン酸（ＡＢＴＳ）および２マイクロリットルの３パーセントＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、色の展開を測定した。この色の展開を電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラおよび画像処理システムを用いて（Ｓｌｏｏｔｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６に最初に記載されたように）定量化した。
【０３５６】
データ計算
生データ：光学濃度（任意ＯＤ単位）
生データはＣＣＤカメラにより得られた光学値である。この値はほぼ０〜３０００の範囲であり、対数尺度は標準的な９６ウェルプレートｅｌｉｓａリーダーの１〜３に類似する。最初に、ペルオキシダーゼの着色前にＣＣＤカメラによりカードの写真を作製し、次いでペルオキシダーゼ着色後に再度写真を作製する。これら２枚の写真を互いに差し引き、生データと呼ばれるデータを得る。これをＰｅｐｌａｂ（商標登録）データベース中にコピーする。次いで、この値をエクセルにコピーし、このファイルを生データファイルとしてラベリングする。１つの追跡操作が可能である。時折、ウェルには偽陽性値に至る気泡が含まれ、カードを手作業で検査し、気泡により生じた値をいずれも０としてスコア化する。
【０３５７】
通常、アッセイは反復しない（顧客の要求に応じてのみ）。反復試験は通常、非常に類似している。加えて、数千のペプチドデータセットには類似したペプチドが多くの含まれるため、結果は決して１つのペプチドの認識に基づかず、類似したペプチドファミリーに基づく。１個もしくは数個のペプチドが結合しない場合、またはより低い結合を示す場合、反復実験において、通常、異なるエピトープマッピングに起因しない。
【０３５８】
Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｍｉｍｉｃｒｙ  ｏｆ  ａ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｕｓｉｎｇ  ＣＬＩＰＳ（トレードマーク）  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ２０：２８３−９９
【０３５９】
Ｓｌｏｏｔｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｍａｌｌ  ｒａｎｄｏｍ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，１，  ８７−９６。
【実施例１０】
【０３６０】
異種由来のｐＫａｌ配列分析
すべての利用可能なｐＫａｌ配列を公開データベースから得て、ＣｌｕｓｔａｌＷを用いて整列し、領域は溶媒露出度に基づいて強調され、活性部位Ｋｕｎｉｔｚ阻害剤およびＣＬＩＰＳ分析により同定したペプチドと接触した（図９Ａ〜９Ｃ）。これらの種のそれぞれに由来するクエン酸血漿を得て、市販のプレカリクレイン活性化因子（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから）を製造業者の説明書にしたがって用いて活性化した。次いで、Ｘ８１−Ｂ０１の存在または非存在下において各試料中のカリクレイン活性を測定した。
【０３６１】
Ｘ８１−Ｂ０１は、ブタｐＫａｌ以外のすべての種由来のｐＫａｌを阻害したことが見出された。ＣＬＩＰＳ分析によりＸ８１−Ｂ０１がＣ２（８１〜９４位）、Ｃ３（１０１〜１０８位）、Ｃ５（１６２〜１７８位）およびＣ６（１８６〜１９７位）と結合するｐＫａｌの４つのペプチドが同定されたため、これらのペプチドに相当するブタｐＫａｌ配列における相違を評価して、Ｘ８１−Ｂ０１によるブタｐＫａｌの阻害の欠如を説明する潜在的なアミノ酸変化を同定した。ペプチドＣ２およびＣ３は配列中で近接しており、両方とも異種間の配列が非常に類似している。しかしながら、４７９位が異なる。ブタ、カエル、およびイヌを除いたすべての種の４７９位がセリンである。カエルおよびイヌのｐＫａｌ配列の４７９位は、それぞれアラニンおよびトレオニンであり、これらの両方がセリンの保存的置換とみなされる。対して、ブタｐＫａｌ配列の４７９位はロイシンであり、これはセリンの保存的置換である可能性は非常に低い。ブタｐＫａｌにおけるペプチドＣ５は他種由来の配列に非常に類似している。しかしながら、５６３位については、ヒスチジンが存在しているのはブタｐＫａｌのみである（図９Ｃの太字）。カエル以外のすべての他種において、この位置はチロシンである。Ｘ８１−Ｂ０１により阻害されるカエルｐＫａｌにおいて、この位置はトレオニンである。ブタｐＫａｌ中のペプチドＣ６も他の配列に非常に類似している。しかしながら、ブタｐＫａｌ配列中のみ、５８５位がグルタミン酸塩である（図９Ｃの太字）。すべての他種において、この位置はアスパラギン酸塩である。この分析はＸ８１−Ｂ０１と相互作用するｐＫａｌ中の潜在的臨界残基を示し得る。
【０３６２】
参考文献
本出願を通して引用した文献参照、出願特許、公開または非公開特許出願ならびに以下の列挙を含むすべての引用した参考文献の内容は、それらの全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。矛盾する場合、本明細書における任意の定義を含む本出願を優先する。
１．  Ｓｏｎｉｓ  ＳＴ，  Ｔｒａｃｅｙ  Ｃ，  Ｓｈｋｌａｒ  Ｇ，  Ｊｅｎｓｏｎ  Ｊ，  Ｆｌｏｒｉｎｅ  Ｄ．  １９９０．  Ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｏｒａｌ  Ｓｕｒｇ  Ｏｒａｌ  Ｍｅｄ  Ｏｒａｌ  Ｐａｔｈｏｌ．  ６９：４３７−４３．
２．  Ｓｏｎｉｓ  ＳＴ，  Ｅｉｌｅｒｓ  ＪＰ，  Ｅｐｓｔｅｉｎ  ＪＢ，  ＬｅＶｅｑｕｅ  ＦＧ，  Ｌｉｇｇｅｔｔ  ＷＨ  Ｊｒ，  Ｍｕｌａｇｈａ  ＭＴ，  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＤＥ，  Ｒｏｓｅ  ＡＨ，  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  ＭＭ，  Ｓｐｉｊｋｅｒｖｅｔ  ＦＫ，  Ｗｉｔｔｅｓ  ＪＰ．  １９９９．  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｏｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．  Ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．  Ｃａｎｃｅｒ．  ８５：２１０３−１３．
【０３６３】
均等物
本発明のいくつかの実施形態が記載されている。それにも関わらず、本発明の真意および範囲から逸脱することなく様々な修正を行い得ることが理解されるであろう。したがって、他の実施形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
2013516389.tif 000071
【図２Ａ】
2013516389.tif 000072
【図２Ｂ】
2013516389.tif 000073
【図３】
2013516389.tif 000074
【図４】
2013516389.tif 000075
【図５】
2013516389.tif 000076
【図６】
2013516389.tif 000077
【図７Ａ】
2013516389.tif 000078
【図７Ｂ】
2013516389.tif 000079
【図８】
2013516389.tif 000080
【図９Ａ】
2013516389.tif 000081
【図９Ｂ】
2013516389.tif 000082
【図９Ｃ】
2013516389.tif 000083
【手続補正書】
【提出日】平成25年1月7日(2013.1.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粘膜炎を呈するまたは粘膜炎の発現リスクのある対象において、粘膜炎の治療または予防に使用するための、単離カリクレイン阻害剤。
を含む。
【請求項２】
前記カリクレイン阻害剤が血漿カリクレイン阻害剤である、請求項１に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項３】
前記血漿カリクレイン阻害剤がアミノ酸配列：Ｘａａ１  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｃｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｘａａ８  Ｘａａ９  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｘａａ２０  Ｘａａ２１  Ｘａａ２２  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｘａａ２５  Ｘａａ２６  Ｘａａ２７  Ｘａａ２８  Ｘａａ２９  Ｃｙｓ  Ｘａａ３１  Ｘａａ３２  Ｐｈｅ  Ｘａａ３４  Ｘａａ３５  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｘａａ３９  Ｘａａ４０  Ｘａａ４１  Ｘａａ４２  Ｘａａ４３  Ｘａａ４４  Ｘａａ４５  Ｘａａ４６  Ｘａａ４７  Ｘａａ４８  Ｘａａ４９  Ｘａａ５０  Ｃｙｓ  Ｘａａ５２  Ｘａａ５３  Ｘａａ５４  Ｃｙｓ  Ｘａａ５６  Ｘａａ５７  Ｘａａ５８（配列番号１）を含むポリペプチドを含み、
ここでＸａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ４、Ｘａａ５６、Ｘａａ５７もしくはＸａａ５８はそれぞれ独立して任意のアミノ酸であるかもしくは存在せず；
Ｘａａ１０は、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１１は、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、ＡｌａおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１３は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＬｙｓおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１５は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１６は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＡｓｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１７は、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、ＧｌｎおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、ＧｌｎおよびＡｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１９は、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、ＡｓｎおよびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２１は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＨｉｓおよびＩｌｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２２は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ２３は、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３１は、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３２は、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、ＧｌｙおよびＶａｌからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３４は、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ａｓｎ、ＧｌｙおよびＬｅｕからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３５は、Ｔｙｒ、ＴｒｐおよびＰｈｅからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３９は、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、ＳｅｒおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４０は、ＧｌｙおよびＡｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４３は、ＡｓｎおよびＧｌｙからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４５は、ＰｈｅおよびＴｙｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに
前記ポリペプチドがカリクレインを阻害する、
請求項２に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項４】
（ｉ）Ｘａａ１０がＡｓｐである、
（ｉｉ）Ｘａａ１１がＡｓｐである、
（ｉｉｉ）Ｘａａ１３がＰｒｏであり、Ｘａａ１５がＡｒｇであり、Ｘａａ１６がＡｌａであり、Ｘａａ１７がＡｌａであり、Ｘａａ１８がＨｉｓであり、且つＸａａ１９がＰｒｏである、
（ｉｖ）Ｘａａ２１がＴｒｐである、
（ｖ）Ｘａａ３１がＧｌｕである、
（ｖｉ）Ｘａａ３２がＧｌｕである、
（ｖｉｉ）Ｘａａ３４がＩｌｅである、
（ｖｉｉｉ）Ｘａａ３５がＴｙｒである、又は、
（ｉｘ）Ｘａａ３９がＧｌｕである、
請求項３に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）を含む、請求項３に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、さらにアミノ末端Ｍｅｔ残基の前にＧｌｕ−Ａｌａ配列を含む、請求項５に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２の３〜６０位のアミノ酸）からなる、請求項３に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）を含む、請求項３に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項９】
前記ポリペプチドが、Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｍｅｔ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｔｒｐ  Ｐｈｅ  Ｐｈｅ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ（配列番号２）からなる、請求項３に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項１０】
血漿カリクレイン阻害剤が、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列および免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列を含む血漿カリクレイン結合タンパク質を含み、
前記免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列が、本明細書に記載のタンパク質の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、ならびに
前記免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列が、本明細書に記載のタンパク質の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、
前記タンパク質が血漿カリクレインと結合する、
請求項２に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項１１】
免疫グロブリン重鎖可変ドメイン配列が、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、Ｘ６７−Ｇ０４、Ｍ２９−Ｄ０９、Ｍ１４５−Ｄ１１、Ｍ３５−Ｇ０４もしくはＭ１９９−Ａ０８の重鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を含み、ならびに
免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン配列が、Ｍ１６２−Ａ０４、Ｍ１６０−Ｇ１２、Ｍ１４２−Ｈ０８、Ｘ６３−Ｇ０６、Ｘ８１−Ｂ０１、Ｘ６７−Ｄ０３、Ｘ６７−Ｇ０４、Ｍ２９−Ｄ０９、Ｍ１４５−Ｄ１１、Ｍ３５−Ｇ０４もしくはＭ１９９−Ａ０８の軽鎖可変ドメイン由来の１、２、もしくは３つのＣＤＲ領域を（それぞれ）含む、請求項１０に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項１２】
前記粘膜炎が、口腔粘膜炎、食道粘膜炎、咽頭粘膜炎および胃腸粘膜炎からなる群から選択される、請求項１に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項１３】
パリフェルミンを投与することをさらに含む、請求項１に記載の単離カリクレイン阻害剤。
【請求項１４】
請求項１に記載の治療有効量の単離カリクレイン阻害剤および治療有効量のパリフェルミンを含む組成物。
【請求項１５】
キットであり、前記キットが以下、
単離カリクレイン阻害剤を含む容器；および
粘膜炎治療用の前記カリクレイン阻害剤の使用説明書、
を含むキット。
【請求項１６】
さらにパリフェルミンを含む容器を含む、請求項１５に記載のキット。
【国際調査報告】
2013516389.tif 000084
2013516389.tif 000085