(57)【要約】  栄養組成物並びに該栄養組成物を調製及び使用する方法が提供される。一般的な実施形態において、本開示は、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を提供する。該栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される追加成分をさらに含んでもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症の影響を調節する方法であって、
それを必要とする患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記外因性ビタミンＫ２は、ＭＫ−４、ＭＫ−７及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記外因性ビタミンＫ２はＭＫ−７である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
外因性ビタミンＫ２の前記有効量は約１μｇ〜約１００μｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
外因性ビタミンＫ２の前記有効量は約２０μｇ〜約９０μｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
外因性ビタミンＫ２の前記有効量は約５０μｇ〜約８０μｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記栄養組成物は、医薬製剤、栄養製剤、経管栄養製剤、栄養補助食品、機能性食品及び飲料製品からなる群から選択される投与可能な形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記栄養組成物は、プレバイオティクス、プロバイオティクス、シンバイオティクス、アミノ酸、タンパク質、ヌクレオチド、魚油、非海産性ω３脂肪酸を含有する食物脂肪源、植物栄養素、抗酸化剤、及びこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記アミノ酸は、プロリン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシチロシン、ヒドロキシリシン、ヒドロキシセリン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の栄養組成物。
【請求項１０】
炎症の影響の前記調節は炎症の影響の軽減である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
炎症の影響の前記調節は炎症の影響の予防である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
炎症の影響の前記調節は、炎症条件下で血漿ＴＮＦ−αの上昇を抑制することである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
炎症の影響の前記調節は、炎症条件下でリン酸化によるＩＫＫα／β及びＮＦκＢ  ｐ６５の誘導が低下することを緩和することである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
炎症の影響の前記調節は、炎症条件下で４Ｅ−ＢＰ１（Ｔｈｒ−３７）及びリボソームタンパク質Ｓ６のリン酸化の低下を抑制することである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
炎症の影響の前記調節は、炎症条件下で混合筋タンパク質の分別合成速度を保持することである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ａ）患者の遺伝的素因を決定して、外因性ビタミンＫ２による治療の推定効力を決定するステップと、
ｂ）有効と決定した場合、それを必要とする子供に、有効量の外因性ビタミンＫ２と、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分と、を含む栄養組成物を投与するステップと、
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記遺伝的素因は遺伝子型の決定である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記遺伝的素因は、前記外因性ビタミンＫ２の投与量を決定するために使用される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者は子供である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者は、発育遅延、成長障害、炎症性腸疾患、クローン病、クローン病に関連する骨減少症、大腸炎、潰瘍性大腸炎、小児脂肪便症、グルテン不耐症、神経筋機能障害、嚢胞性線維症、腎機能障害、アンドロゲン欠乏症、重度の食物アレルギー、短腸症候群、又はこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを有する、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
[0001]本出願は、２００９年９月１４日出願の米国特許仮出願第６１／２４２０８７号（代理人整理番号１０３５８−ＵＳ−Ｐ１）、２００９年１０月１２日出願の米国特許仮出願第６１／２５０８４７号（代理人整理番号１０３５８−ＵＳ−Ｐ２）、２０１０年５月２５日出願の米国特許仮出願第６１／３４７９４５号（代理人整理番号１０３５８−ＵＳ−Ｐ３）及び２０１０年８月９日出願の米国特許仮出願第６１／３７１８４６号（代理人整理番号１０３５８−ＵＳ−Ｐ４）の優先権を主張するものであり、本出願と共に出願された「外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物」というタイトルの出願の同時係属出願である。
【背景】
【０００２】
[0002]本開示は、概して健康及び栄養に関する。より詳細には、本開示は、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物並びに該栄養組成物を調製及び使用する方法に関する。
【０００３】
[0003]現在、多くの種類の栄養組成物が市場に出回っている。栄養組成物は、栄養組成物の特定の成分に基づいて、ある種の消費者の種類、例えば若者、高齢者、運動競技者などを対象とすることができる。栄養組成物は、栄養組成物が治療又は改善することを意図するある種の生理的状態に基づいて配合することもできる。
【０００４】
[0004]栄養補給の１つの目標は、骨の密度及び強度を増大させ、かつ骨折の危険率を低減することによって、骨の健康を改善することである。正常な成長及び発達の間に子供の骨密度が急速に変化するため、又は基礎疾患のため、子供は、骨の健康指標を改善し、骨成長及び骨質を改善する栄養組成物を必要とすることがある。
【概要】
【０００５】
[0005]外因性ビタミンＫ２を有する栄養組成物並びに該栄養組成物を調製及び使用する方法が提供される。一般的な実施形態において、本開示は、外因性Ｋ２を含む栄養組成物を提供する。該栄養組成物は、完全栄養でも、経口栄養補助剤として（不完全栄養）でもよい。該栄養組成物は、人間又は動物などの任意の哺乳動物用に設計された配合物中にあってもよい。該栄養組成物中の活性成分を、モジュール製品として提供することもできる。モジュール製品は、少なくとも１種の特定の栄養素を補助剤として送達する方法として定義することができ、唯一の栄養摂取源のために使用されることは意図されていない。
【０００６】
[0006]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）をさらに含む。プレバイオティクスは、フラクトオリゴ糖、イヌリン、ラクツロース、ガラクトオリゴ糖、アラビアゴム、大豆オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、乳果オリゴ糖、グルコオリゴ糖、ペクチンオリゴ糖、グアーガム、部分加水分解グアーガム、糖アルコール、αグルカン、βグルカン、又はこれらの組み合わせであってもよい。
【０００７】
[0007]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のプロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ）をさらに含む。プロバイオティクスは、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、デバロマイセス属（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、トルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、クモノスカビ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ケカビ属（Ｍｕｃｏｒ）、アオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メリソコッカス属（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレポコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ワイセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、アエロコッカス属（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、又はこれらの組み合わせであってもよい。
【０００８】
[0008]別の実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のアミノ酸をさらに含む。アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシセリン、ヒドロキシチロシン、ヒドロキシリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ＨＩＣＡ（α−ヒドロキシイソカプロン酸）、ＨＩＶＡ（α−ヒドロキシイソ吉草酸）、ＨＩＭＶＡ（α−ヒドロキシメチル吉草酸）、又はこれらの組み合わせであってもよい。
【０００９】
[0009]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のタンパク質をさらに含む。
【００１０】
[0010]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のヌクレオチドをさらに含む。
【００１１】
[0011]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種の、シンバイオティクス（ｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ）、魚油、非海産性ω３脂肪酸を含有する食物脂肪源、植物栄養素、及び／又は抗酸化剤をさらに含む。該抗酸化剤は、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、カロテノイド、セレン、フラボノイド、ラクトウルフベリー（Ｌａｃｔｏｗｏｌｆｂｅｒｒｙ）、ゴジ（枸杞）、ポリフェノール、リコペン、ルテイン、リグナン、補酵素Ｑ１０（「ＣｏＱ１０」）、ヘスペリジン及びグルタチオンであってもよい。
【００１２】
[0012]一実施形態において、該栄養組成物は、医薬製剤、栄養製剤、経管栄養製剤、栄養補助食品、機能性食品、飲料製品、又はこれらの組み合わせなどの投与可能な形態である。
【００１３】
[0013]別の実施形態では、本開示は、栄養組成物を調製する方法を提供する。該方法は、外因性ビタミンＫ２と、リン、マグネシウム、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分とを、栄養組成物に添加するステップを含む。
【００１４】
[0014]別の実施形態において、本開示は、栄養組成物を調製する方法を提供する。該方法は、外因性ビタミンＫ２と、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分とを、栄養組成物に添加するステップを含む。
【００１５】
[0015]さらに別の実施形態において、本開示は、小児患者において骨の健康（すなわち、成長、石灰化（ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）、微細構造、骨有機基質成分、密度、弾力性及び強度）を改善する方法を提供する。該方法は、それを必要とする子供に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。該栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含むことができる。
【００１６】
[0016]さらに別の実施形態において、本開示は、基礎疾患を有する小児患者において骨成長及び骨質を改善する方法を提供する。該方法は、基礎疾患を有する小児患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。
【００１７】
[0017]別の実施形態において、本開示は、小児患者において骨折の危険性を低減する方法を提供する。該方法は、骨折の危険性がある小児患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。
【００１８】
[0018]別の実施形態において、本開示は、骨格筋の健康（すなわち、代謝機能、除脂肪体重及び運動性）を改善するための方法を提供する。該方法は、骨格筋の健康の改善によって利益を得ることができる患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。
【００１９】
[0019]本開示の利点は、外因性ビタミンＫ２を有する改善された栄養組成物を提供することである。
【００２０】
[0020]本開示の別の利点は、改善された栄養組成物を調製する方法を提供することである。
【００２１】
[0021]本開示のまた別の利点は、骨の健康を改善する栄養組成物を提供することである。
【００２２】
[0022]本開示の別の利点は、基礎疾患を有する患者において骨成長及び骨質を改善する栄養組成物を提供することである。
【００２３】
[0023]本開示のさらに別の利点は、骨折の危険性を最小限にする栄養組成物を提供することである。
【００２４】
[0024]さらなる特徴及び利点は本明細書に記載されており、以下の詳細な説明から明らかになろう。
【詳細な説明】
【００２５】
[0025]骨の健康の維持は運動性に必須であり、骨基質は必要不可欠な無機物の重要な貯蔵所である。平均すると、女性では１８才、男性では２０才までに、最大骨量の９０パーセントが得られる。そのため、こうした年齢以前の子供の正常な成長及び発達の期間中に、適正な骨の健康、骨成長及び骨質を改善することが重要である。骨量増加速度が青年期に速まることを考えると、必須栄養素を与えることで骨形成プロセスが最適に機能することが確実となる。さらに、この極めて重要な期間に骨塩密度を改善することができないと、骨強度及び骨組織微細構造の減少を招き、それにより当該小児集団の脆弱性骨折の発症を誘発するおそれがある。
【００２６】
[0026]小児期には、骨の内側で吸収（骨を破壊するプロセス）が起こる一方で骨の外側（骨膜）表面で新生骨の形成が起こるので、骨が成長する。思春期には、外側及び内側（骨内膜）表面の両方で形成が起こり得るので、骨が太くなる。このリモデリングプロセスは一生を通して起こり、骨がその最大量に達する頃（典型的には２０代前半まで）には主要なプロセスとなる。リモデリングでは、骨梁の表面上の又は皮質の内側にある少量の骨が除去され、次いで同じ部位で入れ替わる。リモデリングプロセスは骨の形状を変化させないが、それでも骨の健康に不可欠である。モデリング及びリモデリングは一生を通して続くので、成人の骨格の大部分は約１０年毎に入れ替わる。リモデリングが成人早期までに優勢となるが、モデリングは、特に骨の弱化に応じて引き続き起こり得る。
【００２７】
[0027]カルシウム及びビタミンＤが骨の無機基質の発達のための重要な栄養素である一方で、骨の有機基質の正常な発達のためには幾つかの栄養素が必要である。詳細には、適切なビタミンＫと、亜鉛、銅、鉄などの微量無機物の栄養状態が、オステオカルシン、オステオポンチンなどの非コラーゲン性タンパク質の正常な代謝に必要とされる。こうした栄養素を、急速に成長する間に与えると、人生の後年での骨軟化症及び骨粗鬆症を防ぐことができる。これにより、生活の質が向上し、また股関節骨折に関係する医療費の節約にもなろう。
【００２８】
[0028]ビタミンＫは、共通の化学的な環構造（ナプトキノン（ｎａｐｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ））を有する、脂溶性で疎水性の一群の必須ビタミンを意味する。ビタミンＫの最も重要な２種の型は、ビタミンＫ１、すなわちフィロキノン又はフィトメナジオンとして知られる単一の化合物、及びビタミンＫ２、すなわちメナキノン又はメナテトレノンとして知られる一連のビタマーである。合成型のビタミンＫも幾つかあり、例えばビタミンＫ３、Ｋ４、Ｋ５が挙げられる。
【００２９】
[0029]ビタミンＫ１は、通常の食事におけるビタミンＫの主要な型であり、例えばある種の植物油を含むアブラナ及びダイズなどの植物により合成され、また、ホウレンソウ、フダンソウ、ブロッコリ、キャベツ、カリフラワー、ケール、芽キャベツなどの緑色葉野菜に存在する。
【００３０】
[0030]ビタミンＫ２は、メナキノン（「ＭＫ」）と呼ばれ、様々な数の不飽和イソプレノイド残基からなる側鎖を有し、一般にＭＫ−ｎ（ｎはイソプレノイドの数を明記する）として表される、一群の化合物である。最も一般的なＭＫは、ＭＫ−４及びＭＫ−７である。ＭＫ−４は典型的には動物の臓器及び筋肉により合成され、一方ＭＫ−７は典型的には細菌により発酵中に合成される。したがって、ＭＫ−７は、チーズ、凝乳チーズ及び納豆（発酵大豆）を含めた、発酵製品に特に豊富であり、ビタミンＫ１と比べると特に長い半減期を有する。
【００３１】
[0031]米国における１〜１８才の子供のビタミンＫ推定平均必要量は、成人のビタミンＫ摂取量の中央値に基づいている。こうしたレベルは、オステオカルシンなどの他のビタミンＫ依存性タンパク質ではなく、正常な血液凝固に必要とされるビタミンＫレベルに適合するように設計されている。低カルボキシル化（すなわち不活性）対カルボキシル化オステオカルシンの比率は、ビタミンＫ状態の代替マーカーとなり得る。最近の証拠が示唆するところでは、６〜１８才の子供は、成人に対して低カルボキシル化オステオカルシンのレベルが高い。ビタミンＫ１摂取量の増加により摂取レベルを上げようとするのではなく、ビタミンＫ２により、高効力型のビタミンＫを、抗凝固パラメータに悪影響を与えることなく投与することができる。
【００３２】
[0032]ビタミンＫ１と比べると、ビタミンＫ２の方が、吸収が良く、半減期の長期化を通してより安定した血清レベルが得られる。また、肝外組織に対するビタミンＫ２の生体利用能が改善されていることにより、正常な成長及び発達中の骨の健康（すなわち、石灰化、微細構造及び強度）に、より大きな影響を与える可能性がある。よって、ビタミンＫ２により、その生体利用能の増強が正常な成長及び発達中の骨の健康に影響を与えることができる、高効力型のビタミンが得られる。
【００３３】
[0033]加えて、小児患者において骨成長及び骨質を低下させ得る、幾つかの病状が存在する。そうした状態には、例えば、発育遅延、成長障害、神経筋機能障害、重度の食物アレルギー及び炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）などを含むことができる。例えば、炎症性腸疾患（「ＩＢＤ」）を有する子供における低骨量の発生率は、約３０〜５０％にわたる。この集団における栄養不足にビタミンＫが挙げられており、ビタミンＫの生体利用能が限られると、オステオカルシンのカルボキシル化が減少するだけではなく、骨強度、骨石灰化及び骨微細構造が減少するおそれがある。したがって、上述の病状のいずれかを患う子供は、より有効な用量のビタミンＫにより利益を得ることができる。
【００３４】
[0034]ビタミンＫ１摂取量の増加により摂取レベルを上げようとするのではなく、ビタミンＫ２により、抗凝固パラメータに悪影響を及ぼすことなく、高効力型のビタミンＫが可能となる。詳細には、フィロキノン（ビタミンＫ１）と比べると、ビタミンＫ２の方が、吸収が良く、半減期の長期化を通してより安定した血清レベルが得られる。肝外組織に対するビタミンＫ２の生体利用能が改善されていることにより、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病及び大腸炎）を有する患者、特に小児患者における筋骨格の健康の改善に、より大きな影響を与える可能性がある。ＩＢＤを有する子供における低骨量の発生率は３０〜５０％の範囲にわたる。この集団における栄養不足にビタミンＫが挙げられており、ビタミンＫの利用能が限られると、オステオカルシンのカルボキシル化が減少するだけではなく、骨強度、骨石灰化及び骨微細構造が減少するおそれがある。加えて、低ビタミンＫ状態は、クローン病に関連する骨減少症の原因因子になる可能性がある。一部のクローン病患者に認められる骨減少症及び骨吸収率の上昇は多因子プロセスであり、ビタミンＫ欠乏は確かにこのプロセスの１つの因子に過ぎない。低ビタミンＫレベルは、骨形成率を補償的に増加させることなく、骨吸収率を増加させる可能性がある。クローン病患者において、骨代謝率の増加は骨量減少の危険性の増加と関連している。
【００３５】
[0035]さらに、ビタミンＫ２は、例えば副腎皮質ステロイド、ビスホスホネート、又は抗凝固薬（ａｎｔｉ−ｃｏａｇｕｌａｔｉｖｅ  ｄｒｕｇ）を含めた、併用薬治療を受ける小児患者における骨の健康にも有効であり得る。同様に、例えば短腸症候群、潰瘍性大腸炎、小児脂肪便症、嚢胞性線維症、腎機能障害及びアンドロゲン欠乏症、グルテン不耐症、クローン病又は重度のアレルギーを含めた、生物学的療法を受ける又は消化管（「ＧＩ」）障害の状態を有する小児患者も、外因性ビタミンＫ２を有する栄養組成物の投与から利益を得ることができる。
【００３６】
[0036]出願人は、驚くべきことに、外因性ビタミンＫ２を栄養製剤の一部として投与すると、子供において正常な成長及び発達中にオステオカルシンのカルボキシル化が向上し、かつ骨の健康指標が向上することになることを見出した。加えて、ビタミンＫ２を補給すると、骨成長及び骨質を低下させ得る基礎疾患を有する小児患者において、骨成長及び骨質を改善することもできる。結果として、出願人は、外因性ビタミンＫ２を投与すると、小児患者の骨密度が増加し、かつ骨組織微細構造が向上し、それにより骨折危険率が低下することを見出した。末梢骨用定量的コンピュータ断層法（「ｐＱＣＴ」）又は二重エネルギーＸ線吸収法（「ＤＥＸＡ」）で測定すると、微細構造形態、石灰化、密度、弾力性及び機械的剛性に関与する、骨の有機基質中タンパク質の形成を調節するようなビタミンＫ２の効果を、骨質に関して直接認めることができる。ビタミンＫ２は、併用薬治療を受ける患者における骨の健康にも有効である可能性がある。
【００３７】
[0037]一般的には、骨密度は、骨量（骨を通過する光子の減衰度、又は骨塩量（ＢＭＣ）として表される）とフィルム上の骨の画像（すなわち面積）の関係として表される（ＢＭＣ／ｃｍ２として表される）。加えて、ｐＱＣＴは、末梢骨を３次元（体積）で評価する手法であり、前腕又は脛骨に一般的に適用される。放射線源（典型的にはＸ線）及び感知器が検査中に骨の周囲を回転し、次に（ｔｈｅｍ）骨がコンピュータ画面上に３次元（３−Ｄ）画像として再構築される。ｐＱＣＴは、評価する部位によって感度が変動するものの、骨形状を評価するための最適な技法である。他の大多数の技法とは異なり、ｐＱＣＴは、検査する骨の投影面積ではなく体積に由来する骨塩量を正規化するので、ｐＱＣＴは真の骨密度（体積骨塩密度（ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｂｏｎｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ））を測定する。ｐＱＣＴは、捻れに対する骨の抵抗指標である、ＳＳＩを算出するのにも使用することができる。該指標は、骨形状及び骨塩特性を考慮に入れる。Ｇｅｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ、Ｒａｄｅｔｔｉ，Ｇ．ら、Ｐａｎｍｉｎｅｒｖａ  Ｍｅｄ  ２００６；４８：１８１〜６を参照されたい。
【００３８】
[0038]ＤＥＸＡはＸ線分光法に基づいており、ＤＥＸＡの基本原理は、２つの異なるエネルギー源から放射されるＸ線の減衰度に基づく。ＤＥＸＡは通常、腰椎又は近位大腿骨の石灰化を評価するために使用される。ＤＥＸＡの精度は４〜１０％であり、変動係数は１〜１．５％である。同上の文献を参照されたい。
【００３９】
[0039]したがって、本開示は、外因性Ｋ２を含む栄養組成物並びに該栄養組成物を調製及び使用する方法に関する。本開示はまた、骨密度及び骨組織微細構造を測定するためのｐＱＣＴ及びＤＥＸＡの使用に関する。本開示の栄養組成物の実施形態によって、血液凝固及び骨折の危険性に対する潜在的に負の影響を最小限に抑えながら、骨密度、石灰化、及び機械的剛性の増加だけでなく、骨組織微細構造の向上も促進することができる。よって、外因性ビタミンＫ２を使用すると、小児患者において骨の健康の増加及びそれに伴う利益をもたらすことができる。ｐＱＣＴ及びＤＥＸＡを上述の通りに使用すると、骨密度及び骨微細構造を正確に測定することにより、本件で請求する栄養組成物の効果を実証することができる。
【００４０】
[0040]一般的な実施形態において、本開示は、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を提供する。該栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含むことができる。
【００４１】
[0041]本明細書において、用語「栄養組成物」には、それだけには限らないが、完全栄養組成物、部分的又は不完全栄養組成物、及び疾患又は状態特異的な栄養組成物が含まれる。完全栄養組成物（すなわち、必須な主要及び微量栄養素を全て含有するもの）は、患者のための唯一の栄養摂取源として使用することができる。患者は、かかる完全栄養組成物から自分の栄養要求量を１００％取ることができる。部分的又は不完全栄養組成物は必須な主要及び微量栄養素の全てを含有しておらず、患者のための唯一の栄養摂取源として使用することができない。部分的又は不完全栄養組成物は、栄養補助剤として使用することができる。疾患又は状態特異的な栄養組成物は、栄養素又は医薬品を送達する組成物であり、完全又は部分的栄養組成物であってもよい。
【００４２】
[0042]外因性ビタミンＫ２は、骨成長及び骨質を改善するために、他の成分と組み合わせることができる。例えば、外因性ビタミンＫ２は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分と組み合わせて使用すると、小児患者において骨の健康を支持するのにより有効に機能することができると思われる。外因性ビタミンＫ２は、アミノ酸（例えばロイシン）、含硫アミノ酸含有量が低いタンパク質、脂質（ｎ３：ｎ６）、生理活性ペプチド、プロテアーゼ阻害剤、クレアチンなどと組み合わせて使用しても、骨の健康を支持するのにより有効に機能することができる。
【００４３】
[0043]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含む。本明細書において、プレバイオティクスは、組成物及び／又は消化管ミクロフローラの活性の両方を特異的に変化させ、宿主の幸福及び健康に利益をもたらす、選択的に発酵する成分である。プレバイオティクスの非限定的例には、フラクトオリゴ糖、イヌリン、ラクツロース、ガラクトオリゴ糖、アラビアゴム、大豆オリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、乳果オリゴ糖、グルコオリゴ糖、ペクチンオリゴ糖、グアーガム、部分加水分解グアーガム、糖アルコール、αグルカン、βグルカン、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【００４４】
[0044]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のプロバイオティクスをさらに含む。本明細書において、プロバイオティック微生物（以下「プロバイオティクス」）は、適量を投与したときに宿主に健康上の利益をもたらすことができるような、より詳細には、宿主の腸内の微生物のバランスを改善することによって宿主に対し有益な影響を与え、宿主の健康又は幸福に効果をもたらす、微生物（半生存可能（ｓｅｍｉ−ｖｉａｂｌｅ）若しくは弱体化、及び／又は非複製的を含む生菌）、代謝物、微生物細胞調製物又は微生物細胞の構成成分であることが好ましい。一般に、こうした微生物は、腸管内の病原菌の増殖及び／又は代謝を阻害する又はそれに影響を与えると考えられている。プロバイオティクスは、宿主の免疫機能を活性化することもできる。こうした理由から、プロバイオティクスを食物製品に含めるための様々な手法が多く存在している。プロバイオティクスの非限定的例には、サッカロミセス属、デバロマイセス属、カンジダ属、ピキア属、トルロプシス属、アスペルギルス属、クモノスカビ属、ケカビ属、アオカビ属、ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス属、クロストリジウム属、フソバクテリウム属、メリソコッカス属、プロピオニバクテリウム属、ストレプトコッカス属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、スタフィロコッカス属、ペプトストレポコッカス属、バチルス属、ペディオコッカス属、ミクロコッカス属、ロイコノストック属、ワイセラ属、アエロコッカス属、オエノコッカス属、ラクトバチルス属、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【００４５】
[0045]別の実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のアミノ酸をさらに含む。アミノ酸の非限定的例には、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシセリン、ヒドロキシチロシン、ヒドロキシリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ＨＩＣＡ（α−ヒドロキシイソカプロン酸）、ＨＩＶＡ（α−ヒドロキシイソ吉草酸）、ＨＩＭＶＡ（α−ヒドロキシメチル吉草酸）、又はこれらの組み合わせが含まれる。好ましい一実施形態において、アミノ酸の非限定的例には、プロリン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシチロシン、ヒドロキシリシン、ヒドロキシセリン及びこれらの組み合わせが含まれる。
【００４６】
[0046]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のタンパク質をさらに含む。
【００４７】
[0047]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種のヌクレオチドをさらに含む。
【００４８】
[0048]一実施形態において、該栄養組成物は、少なくとも１種の、シンバイオティクス、魚油、非海産性ω３脂肪酸を含有する食物脂肪源、ボーマンバーク阻害剤、植物栄養素、及び／又は抗酸化剤をさらに含む。本明細書において、シンバイオティクスは、腸のミクロフローラを改善するために共に機能するプレバイオティクス及びプロバイオティクスをいずれも含有する補助剤である。魚油の非限定的例には、ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）及びエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）が含まれる。植物栄養素の非限定的例には、ケルセチン、クルクミン及びリモニンが含まれる。抗酸化剤は、他の分子の酸化を遅延させる又は防止する能力がある分子である。抗酸化剤の非限定的例には、ビタミンＡ、カロテノイド、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレン、フラボノイド、ラクトウルフベリー、ゴジ（枸杞）、ポリフェノール、リコペン、ルテイン、リグナン、補酵素Ｑ１０（「ＣｏＱ１０」）、ヘスペリジン及びグルタチオンが含まれる。
【００４９】
[0049]別の実施形態において、本開示は栄養組成物を調製する方法を提供する。該方法は、例えば、小児患者の骨の健康を改善するために、有効量の外因性ビタミンＫ２と、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分とを、栄養組成物に添加するステップを含む。該栄養組成物は、医薬製剤、栄養製剤、経管栄養製剤、栄養補助食品、機能性食品、飲料製品、又はこれらの組み合わせなどの投与可能な形態であってもよい。
【００５０】
[0050]別の実施形態において、本開示は、ビタミンＫ２が骨の健康に影響を与える可能性を決定するときに判断するパラメータとしての遺伝的素因に基づいて、治療又は投与量を患者に合わせる方法を提供する。独特な遺伝子型を持つ個体においては、ビタミンＫ２の補給がより有効である可能性がある。
【００５１】
[0051]本明細書において、「経管栄養」製剤は、経口投与を介してではなく、それだけには限らないが、経鼻胃管、経口胃管、胃管、空腸瘻管（Ｊチューブ）、経皮内視鏡的胃瘻造設術（ＰＥＧ）、ポート（胃、空腸にアクセスできるようにする胸壁ポート、及び他の適切なアクセスポートなど）を介して、動物の消化管系に投与される、完全又は不完全栄養製品であることが好ましい。
【００５２】
[0052]本明細書において、「有効量」は、個体において、欠乏を予防し、疾患若しくは病状を治療する量、或いはより一般的には、症状を軽減し、疾患の進行を管理し、又は個体に栄養的な、生理的な、若しくは医学的な利益をもたらす量であることが好ましい。治療は、患者又は医者に関係がある可能性がある。加えて、用語「個体」及び「患者」は、本明細書ではヒトを指すために使用されることが多いが、本発明はそのように限定されない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、治療から利益を得ることができる病状を有する又はその危険性がある、任意の動物、哺乳動物又はヒトを指す。
【００５３】
[0053]本明細書において、動物には、それだけには限らないが、哺乳動物が含まれ、哺乳動物には、それだけには限らないが、齧歯類、水生哺乳動物、飼育動物（イヌ、ネコ等）、農場飼育動物（ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ等）、ヒトが含まれる。動物若しくは哺乳動物又はその複数形なる用語が使用される場合、該用語は、一節の文脈が示す又は示すことを意図する効果を有することができる任意の動物にも適用されることが企図される。
【００５４】
[0054]本明細書において、「完全栄養」は、投与されている動物にとって唯一の栄養摂取源であるのに足りる、十分な種類及びレベルの主要栄養素（タンパク質、脂肪及び炭水化物）及び微量栄養素を含有する栄養製品であることが好ましい。
【００５５】
[0055]本明細書において、「不完全栄養」は、投与されている動物にとって唯一の栄養摂取源であるのに足りる、十分なレベルの主要栄養素（タンパク質、脂肪及び炭水化物）又は微量栄養素を含有しない栄養製品であることが好ましい。
【００５６】
[0056]本明細書において、「長期投与」は、６週間を超える継続的な投与であることが好ましい。
【００５７】
[0057]本明細書において、哺乳動物には、それだけには限らないが、齧歯類、水生哺乳動物、飼育動物（イヌ、ネコ等）、農場飼育動物（ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ等）、ヒトが含まれることが好ましい。哺乳動物なる用語が使用される場合、該用語は、哺乳動物が示す又は示すことを意図する効果を有することができる他の動物にも適用されることが企図される。
【００５８】
[0058]用語「微生物」は、細菌、酵母菌及び／若しくは真菌、微生物を有する細胞増殖培地、又は微生物が培養された細胞増殖培地が含まれることを意味する。
【００５９】
[0059]本明細書において、「プレバイオティクス」は、腸内で選択的に有益な細菌の増殖を促進する又は病原菌の増殖を阻害する食物物質であることが好ましい。プレバイオティクスは、これを摂取した人の胃及び／又は腸上部で不活性化されることも消化管に吸収されることもないが、消化管のミクロフローラ及び／又はプロバイオティクスによって発酵する。プレバイオティクスは、例えば、Ｇｌｅｎｎ  Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ及びＭａｒｃｅｌ  Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ、Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｅｐｔ  ｏｆ  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５  １２５：１４０１〜１４１２によって定義される。
【００６０】
[0060]本明細書において、「短期投与」は、６週間未満の継続的な投与であることが好ましい。
【００６１】
[0061]本明細書において、用語「治療」、「治療する」及び「緩和する」は、好ましくは、（標的とする病態又は障害の発症を予防する及び／又は遅延させる）予防的又は防止的治療と治癒的、治療的又は疾患修飾的治療との両方を指す。診断された病態又は障害の症状を治す、遅くする、軽減する、及び／又は診断された病態又は障害の進行を停止させる治療的手段が包含されるし、また、病気の患者又は疾患に罹っていると診断された患者の治療だけでなく、疾患に罹る危険性がある患者又は疾患に罹っている疑いがある患者の治療も包含される。用語「治療」及び「治療する」は、疾患を患っていないが、窒素平衡失調（ｎｉｔｏｒｏｇｅｎ  ｉｍｂａｌａｎｃｅ）、筋喪失等の不健康な状態を発症しやすい個体における健康の維持及び／又は増進も指す。用語「治療」、「治療する」及び「緩和する」は、少なくとも１種の主要な予防的又は治療的手段の強化又は増強を包含する。
【００６２】
[0062]本明細書において、シンバイオティクスは、腸のミクロフローラを改善するために共に機能するプレバイオティクス及びプロバイオティクスをいずれも含有する補助剤である。
【００６３】
[0063]本明細書において、「正常な骨成長」には、好ましくは以下が含まれる：小児期及び青年期に骨はモデリングにより造形され、モデリングにより、新生骨をある部位で形成し、古い骨を別の部位から除去することができる。
【００６４】
[0064]本明細書において、「ヌクレオチド」は、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）又はリボ核酸（「ＲＮＡ」）のサブユニットであると理解されたい。ヌクレオチドは、窒素塩基、リン酸分子、及び糖分子（ＤＮＡではデオキシリボース、ＲＮＡではリボース）から構成される有機化合物である。個々のヌクレオチドのモノマー（単一ユニット）は、互いに結合してポリマー、すなわち長鎖を形成する。外因性ヌクレオチドは、詳細には食事補給により得られる。外因性ヌクレオチドは、例えば、５’アデノシン一リン酸（「５’−ＡＭＰ」）、５’−グアノシン一リン酸（「５’−ＧＭＰ」）、５’−シトシン一リン酸（「５’−ＣＭＰ」）、５’−ウラシル一リン酸（「５’−ＵＭＰ」）、５’−イノシン一リン酸（「５’−ＩＭＰ」）、５’−チミン一リン酸（「５’−ＴＭＰ」）、又はこれらの組み合わせなどの、モノマー型であってもよい。外因性ヌクレオチドはまた、例えば無傷なＲＮＡなどの、ポリマー型であってもよい。ポリマー型には複数の供給源、例えば酵母ＲＮＡなどがあり得る。
【００６５】
[0065]栄養製品は、例えば、少なくとも１種の、ビタミン、無機物、糖、医薬として許容される担体、賦形剤、香味剤、又は着色料を含めた、任意の数の付加成分をさらに含むと理解されたい。
【００６６】
[0066]用語「タンパク質」、「ペプチド」、「オリゴペプチド」、又は「ポリペプチド」は、本明細書においてに、単一のアミノ酸（モノマー）、ペプチド結合で互いに結合した２つ以上のアミノ酸（ジペプチド、トリペプチド、又はポリペプチド）、コラーゲン、前駆体、相同体、類似体、模倣体、塩、プロドラッグ、代謝物、若しくはこれらの断片、又は組み合わせを含む任意の組成物を指すと理解されたい。理解を容易にするために、上記の用語のいずれかは、別段の指定がない限り互換的に使用できる。ポリペプチド（又はペプチド又はタンパク質又はオリゴペプチド）は、一般に２０種の天然アミノ酸と呼ばれる、２０種のアミノ酸以外のアミノ酸を含有することが多く、末端アミノ酸を含めた多くのアミノ酸は、グリコシル化及び他の翻訳後修飾などの天然のプロセスによって、又は当分野で周知である化学修飾技法によって、所与のポリペプチド中で修飾されていてもよいことが認識されよう。本発明のポリペプチド中に存在することができる公知の修飾の中には、それだけには限らないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラバノイド又はヘム部分の共有結合、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリケーション、グリコシル化、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）膜アンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解性プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などのポリペプチドへの転移ＲＮＡ媒介によるアミノ酸付加、及びユビキチン化が含まれる。用語「タンパク質」には、ペプチドの交互の繰り返しからなる直鎖状又は非直鎖状ポリペプチドを指す「人工タンパク質」も含まれる。
【００６７】
[0067]本明細書において、「植物性化学物質」又は「植物栄養素」は多くの食物に見出される非栄養化合物である。植物性化学物質は、基本的な栄養補給を超えた健康上の利益を有する機能性食品であり、植物源に由来する健康増進化合物である。本明細書において、「植物性化学物質」及び「植物栄養素」は、使用者に１つ又は複数の健康上の利益を与える、植物から産生された任意の化学物質を指す。植物性化学物質は、局所的、経腸的、及び／又は非経口的を含めた、任意の手段によって投与することができる。本明細書において、植物性化学物質及び植物栄養素としては以下のものが挙げられる（これらに限定されない）。
１．フェノール化合物（例えば以下のもの）：
モノフェノール（アピオール、カルノソール、カルバクロール、ジラピオール、ローズマリノール（Ｒｏｓｅｍａｒｉｎｏｌ）等）；フラボノイド（ポリフェノール）［例えば、フラボノール（ケルセチン、ギンゲロール、ケンペロール、ミリセチン、ルチン、イソラムネチン等）、フラバノン（ヘスペリジン、ナリンゲニン、シリビン、エリオジクチオール等）、フラボン（アピゲニン、タンゲリチン、ルテオリン等）、フラバン−３−オール（カテキン、（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピカテキン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキンガラート（ＥＧＣＧ）、（−）−エピカテキン３−ガラート、テアフラビン、テアフラビン−３−ガラート、テアフラビン−３’−ガラート、テアフラビン−３，３’−ジガラート、テアルビジン等）、アントシアニン（フラボナール（ｆｌａｖｏｎａｌ））、アントシアニジン（ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペツニジン等）、イソフラボン（植物エストロゲン）（ダイゼイン（ホルモノネチン）、ゲニステイン（ビオカニンＡ）、グリシテイン等）、ジヒドロフラボノール、カルコン、クメスタン（植物エストロゲン）、クメストロール］；フェノール酸（エラグ酸、没食子酸、タンニン酸、バニリン、クルクミン等）；ヒドロキシ桂皮酸（コーヒー酸、クロロゲン酸、桂皮酸、フェルラ酸、クマリン等）；リグナン（植物エストロゲン）（シリマリン、セコイソラリシレシノール、ピノレジノール、ラリシレシノール等）；チロソールエステル（チロソール、ヒドロキシチロソール、オレオカンタール、オレウロペイン等）；スチルベノイド（レスベラトール、プテロスチルベン、ピセタノール等）；プニカラギン
２．テルペン（イソプレノイド）（例えば以下のもの）：
カロテノイド（テトラテルペノイド）［例えば、カロテン（αカロテン、βカロテン、γカロテン、δカロテン、リコペン、ノイロスポレン、フィトフルエン、フィトエン等）、キサントフィル（カンタキサンチン、クリプトキサンチン、ゼアキサンチン、アスタキサンチン、ルテイン、ルビキサンチン等）］；モノテルペン（リモネン、ペリリルアルコール等）；サポニン；脂質［例えば、植物ステロール（カンプエステロール、βシトステロール、γシトステロール、スチグマステロール等）、トコフェロール（ビタミンＥ）、及びω−３、６及び９脂肪酸（γリノレン酸等）］；トリテルペノイド（オレアノール酸、ウルソル酸、ベツリン酸、モロン酸等）
３．ベタレイン（例えば以下のもの）：
ベタシアニン（ベタニン、イソベタニン、プロベタニン（ｐｒｏｂｅｔａｎｉｎ）、ネオベタニン等）；ベタキサンチン（非グリコシド型）（インジカキサンチン、ブルガキサンチン等）
４．有機スルフィド（例えば以下のもの）：
ジチオールチオン（イソチオシアネート）（スルフォラファン等）；チオスルホナート（アリウム属化合物）（アリルメチルトリスルフィド及びジアリルスルフィド等）；インドールグルコシノレート（インドール−３−カルビノール等）；スルフォラファン；３，３’−ジインドリルメタン；シニグリン；アリシン；アリイン；アリルイソチオシアネート；ピペリン；ｓｙｎ−プロパンチアール−Ｓ−オキシド
５．タンパク質阻害剤（例えばプロテアーゼ阻害剤）
６．他の有機酸（例えば、シュウ酸、フィチン酸（イノシトール６リン酸）、酒石酸、アナカルジン酸）
７．これらの組み合わせ
【００６８】
[0068]本明細書において、用語「抗酸化剤」には、酸化或いは活性酸素種（ＲＯＳ）及び他のラジカル・非ラジカル種により促進される反応を阻害する様々な物質（例えば、βカロテン（ビタミンＡ前駆体）、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレン）のうちの任意の少なくとも１種が含まれると理解されたい。
【００６９】
[0069]本明細書において、用語「ビタミン」には、正常な体の成長及び活動に微量が必須である、植物性及び動物性食品から自然に得られる又は合成により得られる様々な脂溶性又は水溶性の有機物質（非限定的例には、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥが含まれる）のうちのいずれかが含まれ、かつこれらのプロビタミン、誘導体及び類似体が含まれると理解されたい。
【００７０】
[0070]本明細書及び添付の特許請求の範囲において、文脈から明らかにそうでないことが示されていない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には複数の指示物が含まれる。よって、例えば「ポリペプチド（ａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」には、２つ以上のポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）の混合物が含まれる、などである。
【００７１】
[0071]本明細書において、「約」は、数値範囲内の数値を指すと理解されたい。さらに、本明細書における全ての数値範囲には、該範囲内の全ての整数、自然数又は分数が含まれると理解されるべきである。
【００７２】
[0072]別の実施形態において、本開示は、栄養組成物を調製する方法を提供する。該方法は、外因性ビタミンＫ２と、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、ビタミン類似体、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分とを、栄養組成物に添加するステップを含む。さらに別の実施形態において、本開示は、小児患者において骨の健康（すなわち、成長、石灰化、微細構造、骨有機基質成分、密度、弾力性及び強度）を改善する方法を提供する。該方法は、それを必要とする子供に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。該栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含むことができる。さらに別の実施形態において、本開示は、基礎疾患を有する小児患者において骨成長及び骨質を改善する方法を提供する。該方法は、基礎疾患を有する小児患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。別の実施形態において、本開示は、小児患者において骨折の危険性を低減する方法を提供する。該方法は、骨折の危険性がある小児患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。
【００７３】
[0073]該栄養組成物は、外因性ビタミンＫ２を約１μｇ／日〜約１００μｇ／日の範囲の投与すべき量で含むことができる。該外因性ビタミンＫ２は、約１０μｇ／日〜約９５μｇ／日、又は約２０μｇ／日〜約９０μｇ／日、又は約３０μｇ／日〜約８５μｇ／日、又は約５０μｇ／日〜約８０μｇ／日、又は１μｇ／日、５μｇ／日、又は１０μｇ／日、又は１５μｇ／日、又は２０μｇ／日、又は２５μｇ／日、又は３０μｇ／日、又は３５μｇ／日、又は４０μｇ／日、又は４５μｇ／日、又は５０μｇ／日、又は５５μｇ／日、又は６０μｇ／日、又は６５μｇ／日、又は７０μｇ／日、又は７５μｇ／日、又は８０μｇ／日、又は８５μｇ／日、又は９０μｇ／日、９５μｇ／日、又は１００μｇ／日の範囲の量で投与することもできる。
【００７４】
[0074]本開示の実施形態における栄養組成物を使用することによって、子供における正常な成長及び発達の間に、オステオカルシンのカルボキシル化が向上し、かつ骨の健康指標が向上すると、骨折の危険性を低減するのに役立つこととなろう。同様に、本栄養組成物を投与すると、ビタミンＫの生体利用能も増加し、それにより、オステオカルシンのカルボキシル化、骨強度、骨石灰化及び骨微細構造を増大させることができる。
【００７５】
[0075]別の実施形態において、本発明は、骨格筋の健康（すなわち、代謝機能、除脂肪体重及び運動性）を改善するための方法を提供する。クレアチンキナーゼの骨格筋のアイソザイムは、ビタミンＫ欠乏に感受性がある。クレアチンキナーゼは、無酸素性エネルギー産生に不可欠な反応である。ビタミンＫ状態が向上すると、筋肉疲労を最小限に減らし、エネルギー産生を最適化して、筋肉量増加のためのタンパク質合成などの同化プロセスを支持することができる。除脂肪体重を保持すると、機能的運動性を維持しやすくすることができる。該方法は、骨格筋の健康の改善から利益を得ることができる患者に、有効量の外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む。
【００７６】
[0076]別の実施形態において、本発明は、ビタミンＫ２を投与することによって炎症を軽減するための方法を提供する。
【００７７】
Ｋ２及び炎症：
[0077]タンパク質合成の全体的な速度の急性制御は、様々な真核生物翻訳開始因子（ｅＩＦ）の調節を用いて、主に翻訳開始レベルで行われる。成長因子及びアミノ酸から翻訳開始のｍＲＮＡ結合段階へのシグナル伝達の収束点としての役割を果たす、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）と呼ばれるタンパク質キナーゼは、真核生物翻訳開始因子４Ｅへの結合タンパク質、すなわち４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化の調節に関与する。ｍＴＯＲは、７０−ｋＤａリボソームタンパク質Ｓ６キナーゼ（Ｓ６Ｋ１）のリン酸化状態を制御するためにも作用する。こうした翻訳開始事象を調節することで、タンパク質合成をより速やかに制御することができ、かつ急性の代謝的又は栄養的な変動に関連する変化に対する反応性が得られる。
【００７８】
[0078]正規のＮＦ−κＢ経路は、ｐ６５−ｐ５０ヘテロ二量体の核内輸送を含む。ＮＦ−κＢの活性化は、ＩκＢがＩκＢキナーゼ複合体によってリン酸化されると起こり、それにより、ＩκＢのユビキチン化及び分解が生じ、ＮＦ−κＢ二量体が核内移行する。ＴＮＦ−αなどのサイトカインは、正規のＮＦ−κＢヘテロ二量体の強力な活性化因子であり、この活性化は筋タンパク質の喪失に関連する。
【００７９】
方法：
[0079]雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１７５ｇ）を、餌（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｃｈｏｗ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）及び水を自由に与えて、１２時間の明暗周期で維持する。動物に、一日量のビタミンＫ２（ＭＫ−７）又は生理食塩水（対照）を、経口胃管を通して７日間にわたり投与する。緩衝液Ａ（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５）中に３．５ｇ／ＬのＨＣＯ−６０及び１ｇ／ＬのＭ＆−７を含有する、ビタミンＫ２の原液を調製する。Ｋ２を、振幅６ｐｍで５回５パルスのソニケーションによって溶解させる。このようにして得られた溶液は、透明、均質、かつ安定である。ビタミンＫを投与する直前に、原液を緩衝液Ａで５回希釈し、０．７ｇ／Ｌの最終ＨＣＯ−６０濃度とする。（必要に応じて）さらなる希釈を、緩衝液Ａ中の０．７ｇ／Ｌ  ＨＣＯ−６０を用いて行う。各希釈段階の次に上述の通りのソニケーションを行う。全ての場合において、ビタミンＫ２は、２５又は５０マイクログラムの経口投与量を有する、０．５ｍＬの試料でラットに投与する。
【００８０】
[0080]最終日（７日目）に、齧歯動物にビタミンＫ２を投与し、２時間後にＩＰ用量のＬＰＳ（大腸菌血清型Ｏ１１１：Ｂ４、Ｌ２６３０、Ｓｉｇｍａ）を腹腔内に与えた（０．５ｍｇ／ｋｇ体重）。４時間後に動物を屠殺する。
【００８１】
[0081]タンパク質合成の測定−分別合成速度（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）（Ｋｓ）を、前駆体プールを表すものとしての血清中の放射性フェニルアラニンの比放射能を使用した、前記フェニルアラニンの全混合筋タンパク質への取り込み率から推定する。放射性標識フェニルアラニンのタンパク質への取り込みにかかる実時間を、注入から液体窒素中で筋肉凍結するまでに経過した時間として見なす。
【００８２】
[0082]ｅＩＦへのｍＴＯＲシグナル伝達の分析−腓腹筋を秤量し、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  塩化カリウム、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、５０ｍＭ  フッ化ナトリウム、５０ｍＭ  グリセロリン酸、０．１ｍＭ  フッ化フェニルメチルスルホニル、１ｍＭ  ベンズアミジン、１ｍＭ  ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及び０．５ｍＭ  バナジン酸ナトリウムを含有する、７容量の緩衝液中で均質化する。残ったホモジネートを、１０，０００×ｇで１０分間、４℃で遠心分離する。得られた上清を等容量のＳＤＳ試料緩衝液と混合し、次にタンパク質免疫ブロット分析にかける。試料を、４Ｅ−ＢＰ１（Ｔｈｒ３７）及びリボソームタンパク質Ｓ６（Ｓｅｒ  ２３５／２３６）のリン酸化状態について分析する。抗リン酸化特異的抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡから入手した。加えて、試料を、リン酸化されたＩＫＫα／β（Ｓｅｒ１７６／１８０；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、及びリン酸化されたｐ６５（Ｓｅｒ５３６；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）について分析する。
【００８３】
結果：
[0083]齧歯動物をＫ２で処理すると、ＬＰＳ処理動物と比べて、血漿ＴＮＦ−αの上昇が有意に減少する。加えて、ビタミンＫ２は、ＬＰＳ処理と比べて、リン酸化によるＩＫＫα／β及びＮＦκＢ  ｐ６５の誘導が低下することを有意に緩和する。結局、ＬＰＳ処理と比べるとＫ２の方が、炎症性敗血症条件下で、４Ｅ−ＢＰ１（Ｔｈｒ−３７）及びリボソームタンパク質Ｓ６のリン酸化の低下を抑制すると共に、混合筋タンパク質の分別合成速度をより高く保持する。
【００８４】
[0084]別の実施形態において、本発明は、炎症を軽減するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００８５】
[0085]別の実施形態において、本発明は、炎症の影響を軽減するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００８６】
[0086]別の実施形態において、本発明は、炎症の影響を予防するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００８７】
[0087]別の実施形態において、本発明は、炎症条件下で血漿ＴＮＦ−αの上昇を抑制するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００８８】
[0088]別の実施形態において、本発明は、炎症条件下でリン酸化によるＩＫＫα／β及びＮＦκＢ  ｐ６５の誘導が低下することを緩和するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００８９】
[0089]別の実施形態において、本発明は、炎症条件下で４Ｅ−ＢＰ１（Ｔｈｒ−３７）及びリボソームタンパク質Ｓ６のリン酸化の低下を抑制するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００９０】
[0090]別の実施形態において、本発明は、炎症条件下で混合筋タンパク質の分別合成速度を保持するための方法であって、それを必要とする患者に、外因性ビタミンＫ２を含む栄養組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の実施形態において、本栄養組成物は、リン、マグネシウム、亜鉛、鉄、銅、マンガン、カルシウム、ビタミンＤ、オステオポンチン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される構成成分をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の抗酸化剤をさらに含む。別の実施形態において、本栄養組成物は、少なくとも１種の植物栄養素をさらに含む。別の実施形態において、該患者は子供である。
【００９１】
[0091]本明細書に記述する現時点での好ましい実施形態への様々な変更及び修正が当業者には明らかであろうことが理解されるべきである。かかる変更及び修正は、本主題の趣旨及び範囲から逸脱することなく、かつ本主題の意図する利点を減ずることなく行うことができる。したがって、かかる変更及び修正は添付の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【国際調査報告】
2013504572.tif 000002
2013504572.tif 000003
2013504572.tif 000004
2013504572.tif 000005