(57)【要約】  抗増殖作用を有する化合物が提供される。また、ＥＧＦＲなどの、二量化アームおよびドメイン内テザーを含む複数のドメイン蛋白の活性を制御しうる化合物も提供され、ここでテザー化されていない伸長された構造は活性状態であり、テザー化された構造は不活性状態であり、自己抑制された配置がもたらされる。かかる化合物を同定するための方法およびファーマコフォアも提供される。他の態様は、増殖正疾患、障害または症状、例えばＥＧＦＲと関連するものを治療的に処置する方法を提供する。
2013516479.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2013516479.tif 000346
式（２）（１５０５類Ａ型）
［式中
Ｘ１は、水素、２−メチル、５−クロロ、５−ニトロおよび６−ヒドロキシルからなる群より選択され；
Ｒ１は
（ｉ）式（３）：
【化２】
2013516479.tif 000347
式（３）
｛式中
Ｒ２３は水素；フルオロ；クロロ；トリフルオロメチル；メチル；エチル；およびメトキシからなる群より選択され；
Ｒ３は水素；フルオロ；クロロ；メチル；エチル；メトキシ；直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より選択され；
Ｒ２４は水素；フルオロ；クロロ；およびトリフルオロメチルからなる群より選択され；および
Ｒ４は水素；メチル；直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より選択される｝
で示される２−ピリジル環；
（ｉｉ）式（４）：
【化３】
2013516479.tif 000348
式（４）
｛式中、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有するヘテロアリールを含むアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（ここで、Ｒ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される｝
で示される３−ピリジル環；
（ｉｉｉ）式（５）：
【化４】
2013516479.tif 000349
式（５）
｛式中、Ｒ８およびＲ９は、直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有するヘテロアリールを含むアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より独立して選択される｝
で示される４−ピリジル環；
（ｉｖ）不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有するヘテロアリールを含むアリール；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；トリフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；ジフルオロメトキシ；３,４−メチレンジオキシ；２,３−メチレンジオキシ；ニトロ；およびハロゲンから選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
（ｖ）置換されていない１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環；および
（ｖｉ）不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より選択される１または複数の基で置換される、１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員の置換ヘテロアリール環；
からなる群より選択され；
Ｒ２は、
（ｉ）置換されていないフェニル環、あるいはその２−、３−、４−、５−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；２,３−メチレンジオキシ；３,４−メチレンジオキシ；式：−ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；トリフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；ジフルオロメトキシ；３,４−メチレンジオキシ；２,３−メチレンジオキシ；ニトロ；およびハロゲンより独立して選択される）で示されるジアルキルアミノからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
（ｉｉ）式（８）：
【化５】
2013516479.tif 000350
式（８）
｛式中、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される、２−チオフェン環；
（ｉｉｉ）式（９）：
【化６】
2013516479.tif 000351
式（９）
｛式中、Ｒ１８、Ｒ１９およびＲ２０は、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される３−チオフェン環；
（ｉｖ）置換されていない２−ピリジル環、あるいはピリジン環の４−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている２−ピリジル環；
（ｖ）置換されていない３−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−、４−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている３−ピリジル環；および
（ｖｉ）置換されていない４−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている４−ピリジル環；
からなる群より選択される］
で示される化合物またはその立体異性体もしくは医薬上許容される塩：ただし、式（Ｉ）：
【化７】
2013516479.tif 000352
で示される化合物を除く。
【請求項２】
式（２）のＲ１が：
（ｉ）式（６）：
【化８】
2013516479.tif 000353
式（６）
［式中、Ｒ１１およびＲ１２は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される］
で示される２−（１,３−チアゾイル）；および
（ｉｉ）式（７）：
【化９】
2013516479.tif 000354
式（７）
の２−（４,５−ジメチル−１,３−チアゾイル）
からなる群より独立して選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環であって
Ｒ２４がクロロであるか；または
Ｒ２３がメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環であって；そして
Ｒ４が水素、Ｒ２４がフルオロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がフルオロであるか；
Ｒ４がメチル、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がフルオロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３がエチル、およびＲ２３がフルオロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がフルオロ、Ｒ３がメチル、およびＲ２３がフルオロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がエチルであるか；
Ｒ４がメチル、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がクロロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３がメチル、およびＲ２３がフルオロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がトリフルオロメチル、Ｒ３が水素、およびＲ２３が水素であるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がメチルであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３が水素、およびＲ２３がクロロであるか；
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３がメチル、およびＲ２３が水素であるか；または
Ｒ４が水素、Ｒ２４がクロロ、Ｒ３がクロロ、およびＲ２３が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環であって：そして
Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３がクロロまたはメチルであるか、またはＲ２３がクロロまたはメチルであるか；
Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３が水素であり、Ｒ２３がメチルであるか；
Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ２３がフルオロであるか；
Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３がクロロであり、Ｒ２３が水素であるか；
Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３が水素であり、Ｒ２３がクロロである、
請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が
その２および４位にて置換されているフェニル環；
４−トリフルオロメチルフェニル；
２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル；および
２,４−ジクロロフェニル
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が４−クロロフェニル；２−フルオロ−４−トリフルオロメチルフェニル；３−フルオロ−４−クロロフェニル；２−フルオロ−４−クロロフェニル；２,３−ジクロロフェニル；２,３,５−トリクロロフェニル；２,４−ジクロロフェニル；３,４−ジクロロフェニル；および３,５−ジクロロフェニルからなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が
その４位にてクロロで置換されており、２または３位でクロロまたはフルオロで置換されているフェニル環；
２,４−ジクロロフェニル；および
２−クロロ−４−フルオロフェニル
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
式（２）が１または複数の以下の：
【化１０】
2013516479.tif 000355
で示される化合物以外の化合物である、請求項１−８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
式：
【化１１】
2013516479.tif 000356
式（１０）（１５０５類Ｂ型）
［式中
Ｘ１は、水素、２−メチル、５−クロロ、５−ニトロおよび６−ヒドロキシルからなる群より選択され；
Ｒ２は、
（ｉ）置換されていないフェニル環、あるいはその２−、３−、４−、５−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；２,３−メチレンジオキシ；３,４−メチレンジオキシ；式：−ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；トリフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；ジフルオロメトキシ；３,４−メチレンジオキシ；２,３−メチレンジオキシ；ニトロ；およびハロゲンより独立して選択される）で示されるジアルキルアミノからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
（ｉｉ）式（８）：
【化１２】
2013516479.tif 000357
式（８）
｛式中、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される、２−チオフェン環；
（ｉｉｉ）式（９）：
【化１３】
2013516479.tif 000358
式（９）
｛式中、Ｒ１８、Ｒ１９およびＲ２０は、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される３−チオフェン環；
（ｉｖ）置換されていない２−ピリジル環、あるいはピリジン環の４−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている２−ピリジル環；
（ｖ）置換されていない３−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−、４−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている３−ピリジル環；および
（ｖｉ）置換されていない４−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている４−ピリジル環；
からなる群より選択され；および
Ｒ２１が
（ｉ）不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；
（ｉｉ）不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；
（ｉｉｉ）置換されていないフェニル環、あるいはその２−、３−、４−、５−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；２,３−メチレンジオキシ；３,４−メチレンジオキシ；式：−ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；トリフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；ジフルオロメトキシ；３,４−メチレンジオキシ；２,３−メチレンジオキシ；ニトロ；およびハロゲンより独立して選択される）で示されるジアルキルアミノからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
（ｉｖ）置換されていない２−ピリジル環、あるいはピリジン環の４−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている２−ピリジル環；
（ｖ）置換されていない３−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−、４−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている３−ピリジル環；
（ｖｉ）置換されていない４−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている４−ピリジル環；および
（ｖｉｉ）１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環
からなる群より選択される］
で示される化合物またはその立体異性体もしくは医薬上許容される塩。
【請求項１１】
式：
【化１４】
2013516479.tif 000359
式（１１）（１５０５類Ｃ型）
［式中
Ｘ１は、水素、２−メチル、５−クロロ、５−ニトロおよび６−ヒドロキシルからなる群より選択され；
Ｒ２は、
（ｉ）置換されていないフェニル環、あるいはその２−、３−、４−、５−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；２,３−メチレンジオキシ；３,４−メチレンジオキシ；式：−ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；トリフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；ジフルオロメトキシ；３,４−メチレンジオキシ；２,３−メチレンジオキシ；ニトロ；およびハロゲンより独立して選択される）で示されるジアルキルアミノからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
（ｉｉ）式（８）：
【化１５】
2013516479.tif 000360
式（８）
｛式中、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７は、水素；不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される、２−チオフェン環；
（ｉｉｉ）式（９）：
【化１６】
2013516479.tif 000361
式（９）
｛式中、Ｒ１８、Ｒ１９およびＲ２０は、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；ジアルキルアミノ；トリフルオロメチル；ジフルオロメチル；トリフルオロメトキシ；およびハロゲンからなる群より独立して選択される｝
で示される３−チオフェン環；
（ｉｖ）置換されていない２−ピリジル環、あるいはピリジン環の４−または６−位が、不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている２−ピリジル環；
（ｖ）置換されていない３−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−、４−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている３−ピリジル環；および
（ｖｉ）置換されていない４−ピリジル環、あるいはピリジン環の２−または６−位が不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルおよび不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されている４−ピリジル環；
からなる群より選択され；および
Ｒ２２は
（ｉ）置換されていないフェニル環、および
（ｉｉ）２−、３−、４−、５−または６−位が、（ａ）不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；（ｂ）不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；（ｃ）フェニルを含むアリールあるいは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む５または６員環のヘテロアリール；（ｄ）アルコキシ  −ＯＲ１０（ここでＲ１０は直鎖または分岐した不飽和結合を含有してもよいＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）；（ｅ）２,３−メチレンジオキシ；（ｆ）３,４−メチレンジオキシ；（ｇ）式：−ＮＲ１３Ｒ１４（式中、Ｒ１３およびＲ１４は、水素および不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルより独立して選択される）で示されるジアルキルアミノ；（ｈ）トリフルオロメチル；（ｉ）トリフルオロメトキシ；（ｊ）ジフルオロメトキシ；（ｋ）３,４−メチレンジオキシ；（ｌ）２,３−メチレンジオキシ；（ｍ）ニトロ；および（ｎ）ハロゲンからなる群より独立して選択される１または複数の基で置換されているフェニル環；
からなる群より選択される少なくとも１つの基でＣ−１またはＣ−２が置換されていてもよいＣ−１ないしＣ−６低級アルキルを意味する］
で示される化合物またはその立体異性体もしくは医薬上許容される塩。
【請求項１２】
スキームＩの１５０５類ファーマコフォアの官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９のうち６個以上を含む、ＥＧＦＲ活性を阻害する、請求項１−１１のいずれか一項に記載の化合物であって、
ここで
官能基Ｆ（Ｉ）１はＨ−結合を表すか、または配列番号：１の受容体Ａｓｐ５５３のカルボキシレート側鎖に対する塩橋を形成し、ｒ＝５６.３６３、θ（シータ）＝９４.３６８、およびφ（ファイ）＝−１７.７５２の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）２は配列番号：１の受容体Ｔｈｒ５７０の主鎖のカルボニルに対するＨ−結合を表し、ｒ＝５３.２９０、θ（シータ）＝１０１.４９４およびφ（ファイ）＝−２３.２４４の座標および約１.０Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）３は配列番号：１の受容体Ｖａｌ５６８の側鎖と、受容体Ｈｉｓ５６６のイミダゾール側鎖と、および受容体Ｐｒｏ５５２のイミダゾリジン環と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.７２６、θ（シータ）＝９７.８３０およびφ（ファイ）＝−１８.３７８の座標および約１.７Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）４はＨ−結合を表すか、配列番号：１の受容体Ａｓｐ５６３のカルボキシレート側鎖と塩橋を形成し、ｒ＝５６.１０３、θ（シータ）＝９９.５３６ぷｐのφ（ファイ）＝−２１.０８０の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）５は配列番号：１の受容体Ｐｒｏ５７２のイミダゾリン環およびＭｅｔ２５３の側鎖と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.６４７、θ（シータ）＝１０３.８４４およびφ（ファイ）＝−２０.９９０の座標および約１.４Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）６は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５１.０８８、θ（シータ）＝１０４.２４１およびφ（ファイ）＝−２５.５５２の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）７は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５２.３４０、θ（シータ）＝１０３.９８０およびφ（ファイ）＝−２７.４６１の座標および約１.５Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）８は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５１.３８３、θ（シータ）＝１０６.４５５およびφ（ファイ）＝−２４.３１９の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）９は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５２.８６１、θ（シータ）＝１０７.６９２およびφ（ファイ）＝−２５.４４７の座標および約１.５Åの球体半径を有し；
実質的にＥＧＦＲの非伸長テザー不活性配置を維持するか、実質的にＥＧＦＲの伸長テザー活性配置を防止する、化合物。
【請求項１３】
その必要とする対象に、治療的に効果的な量の：
（ｉ）請求項１−１２のいずれか一項に記載の化合物；
（ｉｉ）式（１）：
【化１７】
2013516479.tif 000362
ＡＤ４−１５０５    式（１）
の化合物；
（ｉｉｉ）
【化１８】
2013516479.tif 000363
からなる群より選択される化合物；あるいはその立体異性体または医薬上許容される塩；
および医薬上許容される担体または賦形剤を含む組成物を投与することを含む、増殖性疾患、障害または症状を治療する方法。
【請求項１４】
増殖性疾患、障害または症状が、ＥＧＦＲと関連するか、または癌；血管増殖性障害；繊維障害；メサンギウム細胞増殖性障害；乾癬；光線角化症：脂漏性角化症；疣贅；ケロイド瘢痕；湿疹；およびウイルス感染により惹起される過剰増殖性疾患からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤を同定する方法であって、
３次元データベースへの入力データとしてファーマコフォアを含むスキームＩを準備し；
候補化合物の３次元構造をファーマコフォアの３次元構造と比較し；
スキームＩ（ＡＤＳ−１５０５類）の６個以上の官能基と実質的に合致する３次元構造を有する候補化合物を選択し；
ここで、
候補化合物の３次元構造と、ファーマコフォアの３次元構造の間の類似性は、ＥＧＦＲのテザー化された不活性配置を実質的に維持することで、あるいはＥＧＦＲのテザー化されていない活性配置の安定化を実質的に防止することで、候補化合物のＥＧＦＲを阻害する能力の指標となり；
スキームＩ（ＡＤＳ−１５０５類）は官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９を含み；ここで
官能基Ｆ（Ｉ）１はＨ−結合を表すか、または配列番号：１の受容体Ａｓｐ５５３のカルボキシレート側鎖に対する塩橋を形成し、ｒ＝５６.３６３、θ（シータ）＝９４.３６８、およびφ（ファイ）＝−１７.７５２の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）２は配列番号：１の受容体Ｔｈｒ５７０の主鎖のカルボニルに対するＨ−結合を表し、ｒ＝５３.２９０、θ（シータ）＝１０１.４９４およびφ（ファイ）＝−２３.２４４の座標および約１.０Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）３は配列番号：１の受容体Ｖａｌ５６８の側鎖と、受容体Ｈｉｓ５６６のイミダゾール側鎖と、および受容体Ｐｒｏ５５２のイミダゾリジン環と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.７２６、θ（シータ）＝９７.８３０およびφ（ファイ）＝−１８.３７８の座標および約１.７Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）４はＨ−結合を表すか、配列番号：１の受容体Ａｓｐ５６３のカルボキシレート側鎖と塩橋を形成し、ｒ＝５６.１０３、θ（シータ）＝９９.５３６ぷｐのφ（ファイ）＝−２１.０８０の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）５は配列番号：１の受容体Ｐｒｏ５７２のイミダゾリン環およびＭｅｔ２５３の側鎖と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.６４７、θ（シータ）＝１０３.８４４およびφ（ファイ）＝−２０.９９０の座標および約１.４Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）６は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５１.０８８、θ（シータ）＝１０４.２４１およびφ（ファイ）＝−２５.５５２の座標および約１.２Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）７は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５２.３４０、θ（シータ）＝１０３.９８０およびφ（ファイ）＝−２７.４６１の座標および約１.５Åの球体半径を有し；
官能基Ｆ（Ｉ）８は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５１.３８３、θ（シータ）＝１０６.４５５およびφ（ファイ）＝−２４.３１９の座標および約１.２Åの球体半径を有し；および
官能基Ｆ（Ｉ）９は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５２.８６１、θ（シータ）＝１０７.６９２およびφ（ファイ）＝−２５.４４７の座標および約１.５Åの球体半径を有する；
ところの、方法。
【請求項１６】
アミノピリジン中間化合物、アルデヒド中間化合物およびヒドロキシキノリン中間化合物を、エタノール中、請求項１に記載の化合物を形成するのに十分な条件下で合わせことを含む、請求項１に記載の化合物を形成する方法であって；
ここで、
該アミノピリジン中間化合物がＲ２−ＣＨＯを含み、ここでＲ２は請求項１の記載と同意義であり；
該アルデヒド中間化合物がＲ１−ＮＨ２を含み、ここでＲ１は請求項１の記載と同意義であり；および
該ヒドロキシキノリン中間化合物がＸで置換されていてもよい８−ヒドロキシキノリンを含み、ここでＸは請求項１の記載と同意義である、方法。
【請求項１７】
アミノピリジン 中間化合物が２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン；２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン；２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジン；２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン；２−アミノ−３,５−ジクロロ−４−メチルピリジン；２−アミノ−３,５−ジクロロ−４,６−ジメチルピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン；および２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジン、または請求項１８の記載に従って形成されるアミノピリジン化合物からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１８】
（ｉ）置換または置換されていない２−アミノピリジンおよびＮ−クロロスクシンイミドを、酢酸エチルまたはジメチルホルムアミドからなる溶媒中、２−アミノ−５−クロロピリジン誘導体を形成するのに十分な条件下で合わせるか；または
（ｉｉ）無水酢酸を氷酢酸中で３−位および５−位がフルオロ、クロロまたはブロモで置換されている２−アミノピリジンと合わせ、対応するアセトアミド誘導体を形成し；該アセトアミド誘導体と、ジイソプロピルアミンおよびブチルリチウムとをテトラヒドロフラン中、約−７０℃で合わせ、該アセトアミド誘導体を脱プロトン化し；該脱プロトン化アセトアミド誘導体および低級アルキルハライドを合わせ、該アセトアミド誘導体の４−位をアルキル化し；該アルキル化アセトアミド誘導体と濃塩酸をメタノール溶媒中約５０℃で合わせ、アセトアミド基を除去し、２−アミノ−３，５−ジハロ−４−アルキルアミノピリジンを形成することを含む、アミノピリジン化合物の形成方法。
【請求項１９】
（ｉ）反応（ｉ）の２−アミノピリジンが式（１２）：
【化１９】
2013516479.tif 000364
式（１２）
の化合物を含み、ここでＲ２３、Ｒ３およびＲ４は請求項１の記載と同意義であり、Ｒ２４は水素であり；および２−アミノ−５−クロロピリジン誘導体が式（１２）を含み、ここでＲ２３、Ｒ３およびＲ４は２−アミノピリジンについての記載と同意義であり、Ｒ２４はクロロであるか；または
（ｉｉ）置換された２−アミノピリジンが式（１２）の化合物を含み、ここでＲ２３はフルオロ、クロロまたはブロモであり；Ｒ３は水素であり；Ｒ４は請求項１の記載と同意義であり；Ｒ２４はフルオロ、クロロまたはブロモである、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン；
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン；
２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン；および
２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジン
からなる群より選択されるアミノピリジン化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、その内容を出典明示により本願明細書の一部とする、２０１０年１月６日付け出願の米国仮出願番号第６１／２９２,７７６号からの優先権を主張する。
【０００２】
（配列表の参照による組み込み）
本願の開示の一部である配列表は、本願発明のヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列を含む、コンピュータに読み込み可能な形式を包含する。配列表の内容は参照により本願明細書に組み込まれる。
【０００３】
（発明の分野）
本願発明は、一般に、疾患の処置に用いるための新規な化合物に、かかる化合物およびその中間体を製造する方法に、および擬似合理的薬物設計に用いるためのリード分子を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
合理的な薬物開発は、所望の活性を示す分子を見つけるとの気まぐれな希望にて数千の分子を無作為にスクリーニングするのではなく、むしろ標的の活性部位を推測し、適当な方法で該部位と相互作用する化合物を創作することにより、リード化合物を開発する工程である。
【０００５】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）はＥｒｂＢ（ＨＥＲ）ファミリー、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のメンバーであり、細胞増殖および分化を調節し、多くのヒト癌と関連付けられる。ＥＧＦＲの活性化および二量体化は、例えば、Burgessら（2003）Molecular Cell 12, 541-552およびFergusonら（2003）Molecular Cell 11, 507-517にて論じられている。
【０００６】
ＥＧＦはＥＧＦＲの細胞外領域の二量化を誘発することによりその受容体を活性化する。ＥＧＦＲの活性化はジスルフィド結合の地図作成の結果ならびにＸ線結晶構造を介して説明される。リガンド結合したｓＥＧＦＲの結晶構造は二量体化が二量体に存在する２つの個々のリガンド分子で受容体媒介されることを示した。活性化されたＥＧＦＲの二量体化界面は、分子内相互作用により完全に塞がれ、自己抑制された配置である。受容体を活性化するのに、この塞がれた界面を暴露する大きなドメイン配列はＥＧＦ結合を伴わなければならず、ＥＧＦはＥＧＦＲ二量体界面に関与しない。ＥＧＦＲ機構は他の大部分の、結合リガンドが受容体二量化界面に直接寄与し、受容体チロシンキナーゼの細胞外領域の配置を劇的に改変しない受容体チロシンキナーゼ活性化機構と著しく異なる。
【０００７】
ＥＧＦＲは４種のサブドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶを包含する。ＥＧＦＲの結晶構造にて観察されるほとんどすべての受容体／受容体の接触はドメインＩＩで媒介される。二量体の中心での界面は、各ドメインＩＩの第２のＣ１モジュール（モジュール５）から伸長し、その界面を横切って二量化パートナーのドメインＩＩと主として相互作用するまでに達する、隆起したループ（ＥＧＦＲの残基２４２−２５９）である。ＥｒｂＢ受容体に特異的である、このドメインＩＩループは、「二量化アーム」である。ドメインＩＩの二量化アームはドメインＩＶとの分子内相互作用により完全に閉塞される（すなわち、自己抑制された配置である）。該二量体には、ドメインＩＩの第２および第６ジスルフィド結合モジュールからの側鎖を含む、２つの小さな相互作用部位がある。そして、二量体の界面はドメインＩＶの中にまで伸長するかもしれない。２つの受容体分子はドメインＩＶのＣ−末端に向かって相互に極めて密接に近づくが、明確に定義された、明瞭な界面は観察されない。
【０００８】
ＥＧＦおよびＴＧＦ−αが二量体界面に架からないのは明らかであるが、リガンドは、各々、同時に同じＥＧＦＲ分子における２つの別々の結合面と接触する。結合したＥＧＦまたはＴＧＦ−α分子はドメインＩおよびＩＩＩの間のくさびのようである。ドメインＩとＩＩの間の関係は、基本的には、ＩＧＦ−１Ｒにて、および活性化されたｓＥＧＦＲ二量体にて見られる関係と同じであり、リガンドの結合はこれら２つのドメインの相対配向に全く影響を及ぼさないことを暗示する。しかし、ドメインＩＩとＩＩＩの関係は、活性化構造と非活性化構造において、劇的に異なる。システインに富むドメインＩＩおよびＩＶの間の直接的分子内相互作用は、非活性化配置を特徴とする、ドメインＩＩ／ＩＩＩを抑制する。このドメイン内「テザー」は、不活性なｓＥｒｂＢ３およびｓＥＧＦＲにおける２つのシステインに富むドメイン（ＩＩおよびＩＶ）の間の同じ相互作用により安定化される。
【０００９】
分子内ドメインＩＩ／ＩＶテザーは、ドメインＩＩのドメインＩＶに対する二量化アームを正確に覆い、その結果、テザー化されたｓＥｒｂＢ３およびｓＥＧＦＲの配置は二量化できず、かくして自己抑制されるようである。その上、ドメインＩおよびＩＩＩ上の２つのリガンド結合面は、一のリガンドが同時に両方に結合するにはテザー化された配置にて離れすぎている。結果として、テザー化された配置はリガンドと低アフィニティの相互作用を形成しうるに過ぎず、一度にそのリガンド結合面の一つだけを用いるに過ぎない。
【００１０】
ｓＥＧＦＲの活性化されていない配置と活性化された配置の切り替えはドメインＩおよびＩＩＩが一の平面にて剛性ドメインＩ／ＩＩ対の１３０°回転およびもう一つの平面での２０°の回転を介して相互に引き合うことを必要とする。この伸長したｓＥＧＦＲの配置だけが高アフィニティリガンド結合および効果的な二量体化の両方を可能とする。
【００１１】
エネルギー計算に基づいて、現在では、所定の時間で、約９５％のｓＥＧＦＲ分子がテザー化され、残りの５％がテザー化されないであろうと考えられている。リガンドの存在およびその後のテザー化されていない形態のドメインＩおよびＩＩＩへの結合がテザー化されていない形態に対する平衡を推し進め、二量化しうる伸長した状態にて受容体分子を捕獲するである。
【００１２】
二量化アームの暴露はＥＧＦＲ二量化を推し進めるのに単独では十分ではない。ドメインＩＩＩのモジュール２および６にある付加的な接触部位も必要とされる。これら２つの接触部位および二量化アールがその二量体界面で協力する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＥＧＦＲ阻害の既知の方法は、ドメインＩＩＩに結合し、必要とされる配置変換の立体障害を提供する抗体（例えば、エルビタックス（Erbitux））を対象とする。他の慣用的方法は、二量化を防止するために、ドメインＩＩ、具体的には二量化アームに結合する抗体（例、pertuzumab）を対象とする。さらに別の慣用的方法は細胞内テザーに関与するドメインＩＶ残基に結合する抗体（例、trastuzumab、Herceptin）を対象とする。しかしながら、活性化のテザリング機構を対象とする方法は未だ存在しない。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
抗増殖作用を有する化合物および組成物が、かかる化合物を用いる治療的処置法と一緒に本願明細書に記載されている。また、かかる化合物を見出す方法も提供される。ＥＧＦＲなどの、二量化アームおよびドメイン内テザーを含む複数のドメイン蛋白の活性のモジュレータを同定する方法であって、ここでテザー化されていない伸長した構造は活性状態であり、テザー化されている構造は不活性状態であって、自己抑制された配置をもたらす、方法が本願明細書にて記載されている。
【００１５】
本願発明の一の態様は、式２の化合物を含む、小分子化合物を提供することである。ある実施態様に置いて、小分子化合物は実質的にスキーム１のファーマコフォアに一致する。
【００１６】
もう一つ別の態様は、増殖性疾患、障害または症状を本願明細書に記載の化合物および組成物で処置することを提供する。ある実施態様において、該方法はその必要とする対象に治療上有効量の式Ｉの化合物または化合物ＡＤ４−１５０５、その立体異性体または医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体または賦形剤からなる組成物を投与することを含む。ある実施態様において、増殖性疾患、障害または病態はＥＧＦＲと関連する。ある実施態様において、増殖性疾患、障害または病態は、癌；血管増殖性障害；繊維障害；メサンギウム細胞増殖性障害；乾癬；光線角化症：脂漏性角化症；疣贅；ケロイド瘢痕；湿疹；およびウイルス感染により惹起される過剰増殖性疾患からなる群より選択される。
【００１７】
もう一つ別の態様は、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤を同定する方法を提供する。ある実施態様において、該方法は、三次元データベースへの入力データとしてスキームＩを含むファーマコフォアを準備し；候補化合物の三次元構造をファーマコフォアの三次元構造と比較し；スキームＩ（ＡＤＳ−１５０５など）の６またはそれ以上の官能基と実質的に合致する三次元構造を有する候補化合物を選択することを含み、ここで候補化合物の三次元構造と、ファーマコフォアの三次元構造の間の類似性は、テザー化されている不活性なＥＧＦＲの配置を実質的に維持することで、あるいはテザー化されていない活性なＥＧＦＲの配置の安定化を実質的に防止することで、候補化合物のＥＧＦＲを阻害する能力の指標である。
【００１８】
もう一つ別の態様は、式２の化合物などの、本願明細書に記載の化合物の形成方法を提供する。ある実施態様において、該方法は、アミノピリジン中間化合物、アルデヒド中間化合物、およびヒドロキシキノリン中間化合物を、エタノール中、上記の化合物を形成するのに十分な条件下で合わせることを含む。ある実施態様においては、アミノピリジン中間化合物はＲ２ＣＨＯを含み、ここでＲ２は式２について定義されるとおりであり；アルデヒド中間化合物はＲ１−ＮＨ２を含み、ここでＲ１は式２について定義されるとおりであり；およびヒドロキシキノリン中間化合物は所望によりＸで置換されていてもよい８−ヒドロキシキノリンを含み、ここでＸは式２について定義されるとおりである。
【００１９】
もう一つ別の態様はアミノピリジン化合物を形成する方法を提供する。ある実施態様において、該反応は、置換または置換されていない２−アミノピリジンおよびＮ−クロロスクシンイミドを、酢酸エチルまたはジメチルホルムアミドを含む溶媒中、２−アミノ−５−クロロピリジン誘導体を形成するのに十分な条件下で合わせることを含む。ある実施態様において、該反応は無水酢酸を氷酢酸中で３−位および５−位がフルオロ、クロロまたはブロモで置換されている２−アミノピリジンと合わせ、対応するアセトアミド誘導体を形成し；該アセトアミド誘導体と、ジイソプロピルアミンおよびブチルリチウムとをテトラヒドロフラン中、約−７０℃で合わせ、該アセトアミド誘導体を脱プロトン化し；該脱プロトン化アセトアミド誘導体および低級アルキルハライドを合わせ、該アセトアミド誘導体の４−位をアルキル化し；該アルキル化アセトアミド誘導体と濃塩酸をメタノール溶媒中約５０℃で合わせ、アセトアミド基を除去し、２−アミノ−３，５−ジハロ−４−アルキルアミノピリジンを形成することを含む。
【００２０】
もう一つ別の態様は、２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン；および２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジンからなる群より選択されるアミノピリジン化合物を提供することである。
【００２１】
他の目的および特徴は、一部明らかであり、一部以下に指摘されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
当業者は以下に記載の図面が単に説明を目的とすることを理解するであろう。図面は何ら本願の教示の範囲を限定することを意図とするものではない。
【００２３】
図１は、ＭＯＥの部位ファインダーで決定されるような、不活性な形態のＥＧＦｒ（１ＮＱＬ．ｐｄｂ）のドメインＩＩおよびドメインＩＶの界面にある結合部位を示す。ドメインＩＩ残基の炭素原子が赤色で特定されており、ドメインＩＶ残基の炭素原子が青色で特定されている。
【００２４】
図２はヒットしたＡＤ４−１５０５に配置させたＰｈａｒｍ−１ｎｑｌ−ｇｌｕｅ−５を示す。
【００２５】
図３は不活性ＥＧＦＲでドッキングされたＡｄ４−１５０５およびＡＤ４−１５０５類（like）化合物の一連の二次元表示である。化合物ＡＤ４−１５０５のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ａで図示される。化合物ＡＤ４−１０９６３（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ｂで図示される。化合物ＡＤ４−１０９６１（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ｃで図示される。化合物ＡＤ４−１０９４５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ｄで図示される。化合物ＡＤ４−１０３１５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ｅで図示される。化合物ＡＤ４−１０９６５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲとのドッキングが、例えば、図３Ｆで図示される。
【００２６】
図４は、単独でまたはＡＤ４−１０６２８と組み合わせて、タイケルブ（Tykerb）（図４Ａ）またはイレッサ（Iressa）（図４Ｂ）の濃度の関数としてＥＧＦＲの阻害％を示す、一連の線散布図である。用量応答曲線の左側へのシフトはより強力な応答を示す。
【００２７】
図５は、ＤＲＩ  タイケルブおよびＤＲＩ  ＡＤ４−１０６２８についてのＦａの関数としての用量減少指数（ＤＲＩ）を示す散布図である。
【００２８】
図６は、タイケルブと組み合わせた一連のＡＤ４化合物について９０％阻害（ＥＤ９０）の組み合わせ指数（ＣＩ）を要約して示す棒グラフである。化合物４はイレッサである。化合物５はタイケルブである。残りの化合物は本願明細書に記載のＡＤ４化合物である。中央の暗線より下の応答（すなわち、ＣＩ＜０．９）は相乗効果を示す。
【００２９】
図７はＥＧＦＲの構造を図示するものである。図７Ａはテザー化されたモノマーとしてのＥＧＦＲを示す。図７Ｂはテザー化されていないモノマーとしてのＥＧＦＲを示す。図７Ｃはリガンド安定化伸長配座にあるＥＧＦＲを示す。図７Ｄはリガンド誘発の活性化二量体としてのＥＧＦＲを示す。
【００３０】
図８はリガンド誘発の二量化およびＥＧＦＲのキナーゼドメインの活性化を図示するものである。
【００３１】
図９はＡ５４９細胞のＭＴＴ細胞増殖アッセイを示す一連の散布線図である。図９Ａは化合物（ＡＤ４−１０６２８、ＡＤ４−１３２１８、ＡＤ４−１３２１９、ＡＤ４−１３２２０、ＡＤ４−１３２２１）濃度の関数としてのＯＤ５６０ｍＡｂを示す。図９Ｂは化合物（カンプトテシン、ＡＤ４−１０９５２、ヌトリン（Nutlin）（−））濃度の関数としてのＯＤ５６０ｍＡｂを示す。方法論に関するさらなる情報が実施例７で提供される。
【００３２】
図１０はＨ１９７５細胞のＭＴＴ細胞増殖アッセイを示す一連の散布線図である。図１０は化合物ＡＤ４−１０４６０のｌｏｇＭ（μＭ）の関数としての吸光度５６０ｎｍを示す。方法論に関するさらなる情報が実施例７で提供される。
【００３３】
図１１はＨＴ−２９細胞についてのＭＴＴ細胞増殖を示す散布線図である。図１１はタイケルブおよびタルセバ（Tarceva）の、そのＩＣ５０値が、各々、２．７μＭおよび１２μＭとして計算される、対数濃度（Ｍ）の関数としての平均パーセント阻害（アベレージ％阻害）を示す。方法論に関するさらなる情報が実施例７で提供される。
【００３４】
図１２はカスパーゼ３，７アッセイについて細胞密度比較を示す散布線図である。ＲＬＵは細胞／ウェルの関数として知られている。方法論に関するさらなる情報が実施例８で提供される。
【００３５】
図１３はカスパーゼ３，７アッセイにおけるＡＤ４−１３１９２のタルセバとの相加作用を示す棒グラフである。タルセバ（０.５、１、２、４、８または１６μＭ）、ＡＤ４−１３１９２（１、２、４、８、１６または３２μＭ）またはタルセバ＋ＡＤ４−１３１９２（タルセバ／ＡＤ４−１３１９２）での処置が含まれる。アポトーシスの割合をタルセバまたはＡＤ４−１３１９２の関数として示す。方法論に関するさらなる情報が実施例８で提供される。
【００３６】
図１４は、ＤＮＡ断片化における増加により測定される、細胞をウェルに対して５０００、１００００および１５０００細胞でプレート培養した場合に、６時間（図１４Ａ）、２４時間（図１４Ｂ）および４８時間（図１４Ｃ）で測定される、スタウロスポリン（５μＭ）またはタルセバ（１０μＭまたは１μＭ）のアポトーシスを誘発しうる能力を示す棒グラフである。方法論に関するさらなる情報が実施例８で提供される。
【００３７】
図１５ＤＮＡ断片化アッセイに従ってＡ５４９細胞にてアポトーシスを誘発する化合物の能力を示す棒グラフである。４００ｎｍ−４９２ｎｍでの吸光度が各化合物および濃度について示されている。方法論に関するさらなる情報が実施例８で提供される。
【００３８】
図１６はアネキシン（Annexin）Ｖアッセイを示すドットプロットおよび棒グラフである。図１６ＡはＦＩＴＣ−Ａの関数としての７−ＡＡＤ−Ａに対するフローサイトメトリーのドットプロットであり、クワドラント３＝下左側＝生細胞；クワドラント４＝下右側＝初期アポトーシス；クワドラント２＝上右側＝後期アポトーシス；クワドラント１＝上左側＝死滅細胞である。図１６Ｂはアポトーシス合計のパーセント（％）（図１６Ａの初期（グワドラント４）＋後期（グワドラント２））およびアポトーシスの割合のパーセント（％）（実験−非処理／正対照）＊１００を示す棒グラフである。方法論に関するさらなる情報が実施例８で提供される。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本願明細書には、抗増殖性作用を有する化合物を用いる治療的処置の方法と共に、かかる化合物および組成物、およびかかる化合物を見出す方法が記載される。ここに記載の種々の小分子化合物は、テザー化された不活性な状態にて、複数のドメインを一緒に有する蛋白を保持しうる。また、かかる阻害剤の構造的要件を同定する方法、効果的な阻害剤をスクリーンする方法、同定された候補の構造を最適化する方法、および治療的処置計画にて同定された小分子化合物を利用する方法も提供される。
【００４０】
本願発明の一の態様は、増殖性疾患または症状を処置するにおいて効果的である小分子化合物を対象とする。ここに記載の化合物の種々の実施態様は抗増殖性作用を有し得る。ここに記載の化合物の種々の実施態様は、テザー化された不活性な状態にて、複数のドメイン蛋白を保持しうる。ここに記載の化合物の種々の実施態様は、ＥＧＦＲに対して阻害作用を有し得る。ここに記載の化合物は、増殖性疾患および症状の処置にて経験的に効果的であることが明らかにされた。
【００４１】
本願発明の一の態様は、ここに記載の化合物および組成物を用いる、増殖性疾患および障害の治療的処置を対象とする。
【００４２】
本願発明の一の態様は、１または複数の標的療法のための１または複数の薬物の開発のための化合物、方法および装置を対象とする。より具体的には、ここに記載の方法は、二量化アームおよびドメイン内テザーを含むマルチドメイン蛋白の活性のモジュレータを同定し、ここでテザー化されていない伸長された配座は活性状態であり、テザー化された配座は不活性状態であり、自己抑制された配置がもたらされる。ここに記載のファーマコフォアの方法は、配座依存性蛋白受容体の活性化機構の機構的理解に基づくものであり、通常のコンビナトリアルケミストリーおよびハイスループットスクリーニング法を回避するものである。
生体分子の標的選択
【００４３】
望ましい標的酵素は、リガンド結合、活性化および／または二量化機構を識別するのに十分な結晶学的データを含む、酵素を包含する。本願発明の種々の方法は、活性化状態に関連するドメイン内テザーを有する種々のマルチドメイン蛋白標的についてのファーマコフォアモデル（リガンドを含む／含まない結晶化）を生成するのに使用され得る。かくして、伸長配座の非テザー化および安定化を防止し得る化合物、およびかかる化合物の同定方法が提供される。
【００４４】
本願発明の方法によって生成されるリード分子に対する生体分子標的の型は、１または複数のＥＧＦＲ（すなわち、ＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ２／ｃ−ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２）、Ｈｅｒ ３（ＥｒｂＢ−３）およびＨｅｒ ４（ＥｒｂＢ−４）を包含しうる。
ＥＧＦＲ
【００４５】
テザー化されていない伸長された配座の安定化を防止するように、ＥＧＦＲのドメインの種々の部分を標的することがここに記載されている。言い換えれば、小分子阻害剤はドメインＩＩおよびＩＶの蛋白をテザー化された不活性な状態にて保持するのに使用され得る。この方法は、ＥＧＦＲシグナル伝達の基底レベルを保持すること、ＥＧＦ応答を保持すること、および／またはＥＧＦ−非依存性二量化を軽減することを提供しうる。かかる治療的効果は、癌細胞（ＥＧＦＲの発現レベルの増加により感受的である）の迅速な増殖を遅くするが、正常な組織機能のために不可欠な基底ＥＧＦＲの少なくとも一部を保持する。
【００４６】
ＥＧＦＲ阻害の既知の方法は、ドメインＩＩＩに結合し、必要とされる配座変化の立体障害を提供する抗体（例、エルビタックス）を対象とする。他の一般的方法は、ドメインＩＩ、具体的には二量化アームに結合し、二量化を防止する、抗体（例、ペルツズマブ（pertuzumab））を対象とする。さらに別の一般的方法は、分子内テザーに関与する、ドメインＩＶ残基に結合する抗体（例、トラスツズマブ（trastuzumab）、ヘルセプチン（Herceptin））を対象とする。しかし、ここに記載の方法とは別に、上記した一般的方法は伸長配座の非テザー化または安定化を防止しない。
【００４７】
上記したように、ＥＧＦＲは、ドメインＩＶとの分子内相互作用により、ドメインＩＩの二量化アームが完全に塞がれる、自己抑制された配置を有する（例、図７を参照のこと）。ＥＧＦはＥＧＦＲの細胞外領域の二量化を誘発することによりその受容体を活性化する（例、図７Ｄを参照）。ＥＧＦＲの結晶構造にて観察されたほとんどすべての受容体／受容体の接触は、ドメインＩＩ、具体的には、ドメインＩＩの第２のＣ１モジュール（モジュール５）（すなわち、二量化アーム）より伸長する、突出したループ（ＥＧＦＲの残基２４２−２５９）により媒介される。その不活性化された配置は、ドメインＩＩ／ＩＩＩの関係を制限する、システインに富むドメインＩＩおよびＩＶの間の直接的分子内相互作用により特徴付けられる（例、図７Ａを参照）。このドメイン間「テザー」は、不活性なｓＥＧＦＲにおける２つのシステインに富むドメイン（ＩＩおよびＩＶ）の間の本質的に同一の相互作用により安定化される。ｓＥＧＦＲの不活性化および活性化配置の間のスイッチは、一の面の固定したドメインＩ／ＩＩ対の１３０°回転、およびもう一つ別の面での２０°の回転を介して、ドメインＩおよびＩＩＩが相互に引き寄せられることを必要とする（例、図７Ｂを参照）。この伸長したｓＥＧＦＲの配置だけが高アフィニティのリガンド結合（例、図７Ｃを参照）および効果的な二量化（例、図７Ｄを参照）の両方を可能とする。その活性化および二量化された配置において、ドメインＩＩの二量化アームは界面を通過して到達し、その二量化パートナーの対応するドメインＩＩアームと主に相互作用する（例、図７Ｄを参照）。ＥＧＦＲの二量化はまた、ドメインＩＩＩのモジュール２および６における定常部位の相互作用を必要とする。ＥＧＦリガンドの存在およびテザー化されていない形態のドメインＩおよびＩＩＩへのその後の結合は、その平衡をテザー化されていない形態へと向かわせ、伸長された状態にある受容体分子をトラップし、それは二量化され得る。
【００４８】
ここに記載の方法は、ＥＧＦＲシグナル伝達の基底レベルを保持することを提供する。健康な個体においては、増殖に必要な基底のＥＧＦＲからのシグナルが存在し、例えば、損傷からの回復を必要とする場合には増殖を促すのにＥＧＦレベルが高められる。しかし、癌細胞はより多くのＥＧＦＲを示し、それはテザーされている配座の可能性を増大させ、その後でＥＧＦが閉鎖されていないドメインＩ／ＩＩＩリガンドの結合部位に結合し、それによりＥＧＦＲを活性化させることとなる。テザーされている不活性な状態にあるＥＧＦＲの複数のドメイン蛋白をホールドする阻害剤はＥＧＦＲのシグナル伝達を基底レベルにあることを可能とする。
【００４９】
さらには、ＥＧＦＲのテザー化されていない状態の安定化を防止する小分子阻害剤（例、図１４Ｂはテザー化されていない状態を記載し、図１４Ｃは安定化されているテザー化された状態を記載する、を参照）は、他の抗−ＥＧＦＲ治療剤と一緒に使用され得る。他の抗−ＥＧＦＲ治療剤と一緒での小分子阻害剤の使用は、用量の減少および／または最大阻害の増加を可能とする。例えば、かかる小分子阻害剤の使用はエルビタックス（ドメインＩＩＩと結合し、ＥＧＦを遮断する）と一緒に使用することができ、それでエルビタックスの用量を下げ、および／または最大阻害を増加させることができる。
【００５０】
種々の実施態様において、ＥＧＦＲのドメインＩＩは、テザー化されている状態にて存在するとして、オープニングを防止するために標的とされる（すなわち、テザー化された状態からオープンな状態への配置の変換、例、テザー化されている配座とテザー化されていない配座を記載する図７Ａ−Ｂを参照）。種々の実施態様において、ドメインＩＩとドメインＩＶの間の裂け目は、オープニングを防止するために標的とされる（すなわち、テザー化された状態からオープンな状態への配置の変換）。単一の小分子を用いて２つのドメインをスパンすることができる。また、数種のコンパートメント中の一連の小分子（例、少なくとも２個の小分子）を一緒に用いて、２つのドメインをスパンすることもできる。種々の実施態様において、テザー化されていない状態として存在するとして、ＥＧＦＲのドメインＩＩは、テザー化されていない状態の安定化を防止するために、標的とされる（例、テザー化されておらず、安定化されている配座を示す、図７Ｂ−Ｃを参照）。種々の実施態様において、ＥＧＦＲのドメインＩＩＩは、テザー化されていない状態の安定化を防止するために、標的とされる（例、ドメインＩＩＩのモジュール２および６、これらはＥＧＦＲの二量化に必要とされる接触部位を相互作用させる）。
ファーマコフォアの方法
【００５１】
一の態様は、活性化状態に伴うドメイン間テザーを有する複数のドメイン蛋白を標的とする薬物を開発するためのファーマコフォアの方法を対象とする。目的とする生体分子の活性化および二量化機構に基づいて、結合標的が同定かつ特徴付けられる。機構および／または結合標的は、例えば、結晶学データを介して特徴付けることができる。標的結合ドメインは、１または複数のファーマコフォア特性として発現され得、および／または１または複数のファーマコフォア特性を含むファーマコフォアモデルにおいてコンパイルされ得る。
【００５２】
ファーマコフォアは、かかる作業用に設計されたソフトウェアに従って生成され得る。候補分子（例えば、１または複数の化学ライブラリーからの分子）は、該ファーマコフォアモデルに協調するそれら分子から選択され得る。好ましくは、候補分子を、コンピュータ内で標的結合ドメインと相互作用させるために、ドッキングかつスコアリングさせる。再び、ドッキングおよびスコアリングを一の作業用に設計されたソフトウェアに従って行うことができる。１または複数のファーマコフォアモデルと協調する分子を選択した後に、コンピュータ内で任意にドッキングおよびスクリーニングを行い、選択された分子を、例えば、化学合成により、または市販供給源より得ることができる。その選択された分子は結合アフィニティおよび／または標的分子の機能に対する作用について測定され得る。かかる評価は生物学的アッセイに従ってなされうる。試験分子はさらに所望の測定されたパラメータに従って選択され得る。選択された分子および／またはさらに選択された分子は、所望により、さらに最適化され得る。
構造的空間位置の決定
【００５３】
標的生体分子の活性化および二量化モデルより、標的領域を同定することができ、３Ｄ結合ドメインが限定され得る。結合ドメインの限定は、一般に、活性化および二量化機構にて一の役割を果たす標的生体分子の部分の原子の特定の空間位置を決定することを含む。
【００５４】
結合部分の空間位置の決定は、コンピュータ内の種々の技法により達成され得る。例えば、結合表面の構造を形作り、それを標的の活性表面のモデルとマッチングさせ、適合性のレベルを評価する、ソフトウェアパッケージを使用することができる。かかるソフトウェアはC AMALを包含する。
【００５５】
結合部分の空間位置の決定はＸ線結晶学により達成され得る。Ｘ線結晶学は、その活性化および二量化機構にて一の役割を果たすことが分かっており、ついでこの構造情報を用いてこれらの１または複数の成分に結合し、配置の変更および／または安定化を干渉する、構造内にある原子の構造を決定するのに使用され得る。構造決定のためにＸ線結晶学を利用する方法は、当該分野にて公知である（例、Messerschmidt (2007) X-Ray Crystallography of Biomacromolecules：A Practical Guide, John Wiley & Sons, ISBN-10：3527313966；Woolfson (2003) An Introduction to X-ray Crystallography, 2d Ed., Cambridge University Press, ISBN-10:  0521423597を参照）。Ｘ線結晶構造の創作はまた当該分野にて公知である（例、米国特許第６９３１３２５号（Wall）および米国特許第６９１６４５５号（Segelke）を参照、その各々を出典明示により本願明細書の一部とする）。従って、ここ記載する場合を除き、本願発明の方法はかかる方法に従って実施され得る。
【００５６】
Ｘ線結晶学にて観察される回折データより誘導されるパラメータは、限定されるものではないが、水素結合体、非極性疎水性接触、塩橋相互作用、ドメインの極性表面積、ドメインの非極性表面積、抗体−標的の複合体に対する形状相補的スコアおよび明確に配置される水分子を包含する。また、原子間の結合の特徴付けも有用である。単結合である２つの原子間の距離は約１.４５から約１.５５Åの範囲にある。一緒になって二重結合を形成する原子は、典型的には、約１.２から約１.２５Å離れている。単結合と二重結合の間で共鳴する結合は、典型的には、約１.３０ないし約１.３５Åの距離がある。
ファーマコフォアの構築
【００５７】
ファーマコフォアモデルは、原子位置を限定することを含め、活性化および二量化にて一定の役割を果たす生体分子成分の構造的情報から構築され得る。活性化および二量化にて一の役割を果たす成分などの、標的生体分子の成分に対して相補的特徴を有する小分子は、活性化および二量化に不可欠な配置変化および／または安定化に干渉し、かくして治療的有用性を有する可能性がある。
【００５８】
種々の実施態様にて、接触統計学、３Ｄ表面モデルおよび鋳型としてのドッキングされたリガンドを利用するフラグメントをベースとする方法でデノボにて構造を設計するのにコンピュータ内での方法を用いることができる。空間位置情報から、および／または上記した他のパラメータから、３Ｄリガンド−受容体モデル（例、相互作用パターン、ファーマコフォアスキーム）、表面地図（例、トポグラフィー／形状、静電気プロフィール、疎水性、蛋白適合性）およびドッキングモデル（例、リガンド結合についてのスコアリングシステム、最低エネルギー計算）を駆動しうる。
【００５９】
ファーマコフォアモデルを構築するための方法は当該分野にて公知であり、本願明細書にて広く記載されている（例、実施例４を参照）。従って、本願明細書に特に記載される場合を除き、本願発明の方法はかかる方法に従って実施され得る。
【００６０】
ファーマコフォアモデルまたはスキームは、一般に、受容体部位でのリガンド認識に、およびその生物学的活性に関連付けられ、好ましくは直接関連付けられる、リガンドにおける構造的特性のセットである。ファーマコフォアの特徴は、対応するドナー、アクセプター、芳香族、疎水性および／または対応する標的生体分子の酸性または塩基性部分、特に二量化および活性化機構に関与するドメイン上のこれらの特徴より誘導され得る。ファーマコフォアスキームにて使用される標的生体分子における原子の特性に関する情報であって、原子の単なる空間的位置ではない、付加的な情報は、新しいリード化合物をモデル化する方法を助成しうる。これらの特徴付けは、限定されるものではないが、原子のｐＫａ値、原子を適所に保持する結合の回転剛性、結合それ自体の特性（単、二重、三重結合など）、水素結合ドナーおよびアクセプターの予測される方向性等を包含する。
【００６１】
ファーマコフォアスキームを作成するのに有用な成分の典型的な特性は、限定されるものではないが、原子位置；結合半径；水素結合特性；水素結合アクセプター特性；芳香族特性；ドナー特性；アクセプター特性；アニオン特性；カチオン特性；アクセプターおよびアニオン特性；ドナーおよびカチオン特性；ドナーおよびアクセプター特性；酸およびアニオン特性；疎水性特性、水素結合方向性、および金属リガンド（例、実施例４を参照）を包含する。かかる特性は、例えば、単一原子、原子の重心または空間的に予測される方向位置で決定され得る。
【００６２】
多数のファーマコフォアクエリーが所定の標的生体分子について設計され得ると考えられる。さらには、これらのファーマコフォアクエリーは、二量化および活性化と関与する部位で標的生体分子と相互作用し、特にテザー化されている不活性な配座を維持することに対する、小分子リガンドを同定するのに有用であろうと考えられる。
【００６３】
そのようなモデリングおよびクエリーに関与する典型的な供給源は、限定されるものではないが、ＭＯＥ（ＣＧＧ）（ファーマコフォアクエリーおよび可視化の提供）、Ｇｌｉｄｅ（Schrodinger）（ドッキングおよびスコアリングの提供）、エクセル用アコード（Accord for Excel）（Accelrys）（化学構造および化学式を含む、分子情報の組織化の提供）およびＺＩＮＣデータベース（ＵＣＳＦ）（市販の化合物のライブラリーの提供）を包含する。免疫系蛋白−標的生体分子の構造的結合の特徴付けからファーマコフォアを作成するための一の設計装置がＭＯＥ（またはMolecular Operating Environment）（Chemical Computing Group）である。モデル作成は免疫系蛋白に対応する特性の３Ｄ位置を決定するのに幾何学的かつ電子的制限を用いる。これらの実施態様のモデルは３Ｄ空間での球状特性からなる。球形の半径は（例、約０.５から約３.０Å）に調整可能である。かかるモデルは該特性の適合および／または部分適合を可能とする。
【００６４】
ファーマコフォアの構造的特性は間隔を介して標識された点で示されうる。各リガンドには、リガンドファーマコフォアに起因する構造的特性のセットとしての、注釈を付けることができる（例、実施例を参照）。種々の実施態様において、注釈を付されたリガンドのデータベースは、ファーマコフォアを仮定とするクエリーでサーチされ得る（例、実施例５を参照）。かかるサーチの結果がクエリーのファーマコフォア特性をサーチされたデータベースのリガンドにあるファーマコフォア特性と調整して並べる一連の適合である（例、実施例５、表８を参照）。データベース内でのヒットの数は、少なくとも部分的には、データベースの大きさおよびファーマコフォアクエリーの制限（例、部分適合、特性の数等）に依存する。サーチデータベース内にある分子の特性およびパラメータを用いてクエリーの結果に焦点を当てる。例えば、所定の範囲の分子量（ＭＷ）または親油性（ｌｏｇＰ）を有する化合物は化合物のライブラリーデータベースのサーチされたセクションに存在しうる。
候補分子
【００６５】
該方法は種々の異なる候補分子（例、潜在的に治療可能な候補分子）のスクリーニングにて有用であることをわかる。上記したように、候補分子はファーマコフォアクエリーを用いて調査され得る. 候補分子は、典型的には有機分子であり、好ましくは小有機化合物であって、５０ダルトンより大きく、約２５００ダルトン未満の分子量を有するが、多数の化学クラスを包含する。候補分子は蛋白との構造的相互作用、特に水素結合に対する官能基を含むことができ、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボニル基、好ましくは少なくとも２つの官能基を含み得る。候補分子は１または複数の上記した官能基で置換される循環的炭素環式またはヘテロ環式構造および／または芳香族またはポリ芳香族構造を含み得る。
【００６６】
好ましい実施態様において、候補分子は化合物のライブラリーデータベースの化合物である。当業者は、一般に、例えば、スクリーニングに対する市販の化合物についての多数のデータベースに熟知しているであろう（例、ZINC database、UCSF、１２種のサブセットの分子に対して２.７百万の化合物；IrwinおよびShoichet（２００５） J Chem Inf Model 45、177-182）。当業者また、商業的供給源または望ましい化合物ならびにさらなる試験を行うための種々の化合物（例、ZINCデータベース；eMolecules.com；およびベンダーにより提供される市販の化合物の電子図書館、例えば：ChemBridge, Princeton BioMolecular, Ambinter SARL, Enamine, ASDI, Life Chemicals等）を同定するためのサーチエンジンに熟知してもいるであろう。
【００６７】
ここで記載の方法によればスクリーニングの候補分子は、リード類化合物および薬物類化合物の両方を包含する。リード類化合物は、一般に、比較的少ない特性（例、約３よりも少ない水素ドナーおよび／または約６より少ない水素アクセプター；疎水性ｘ約−２ないし約４の対数Ｐ）（例、Angewante（1999）Chemie Int. ed. Engl. 24、3943-3948）と比較的小さな足場類構造（例、約１５０ないし約３５０Ｄの分子量）を有すると理解される。反対に、薬物類化合物は、一般に、比較的多くの特性（約１０よりも少ない水素アクセプターおよび／または約８より少ない回転結合；疎水性ｘ約５より小さい対数Ｐ）（例、Lipinski (2000) J. Pharm. Tox. Methods 44, 235-249）と比較的大きな足場類構造（例、約１５０ないし約５００Ｄの分子量）を有すると理解される。好ましくは、最初のスクリーニングはリード類化合物で行われる。
【００６８】
空間的定位データからリード化合物を設計する場合、特定の分子構造は「薬物類」として特徴付けられることを理解するのが有用であり得る。かかる特徴付けは、薬局方にある既知の薬物の幅を越えて類似性を比較することで経験的に認識される誘導化される一連の特性に基づく。薬物では、これらすべての、あるいはいずれかの特徴付けを満たす必要はないが、それが薬物類である場合に、薬物の候補が臨床的に成功を収める可能性はその場合には小さい。
【００６９】
これらの「薬物類」の特徴付けのいくつかは、Lipinskiの４規則に要約されている（一般に、「５つの規則」として知られている。というのも、そのうちのナンバー５は有病率に関するからである）に要約されている。これらの規則は一般に経口吸収に関するものであり、リード分子を最適化する間に化合物の生体利用能を予測するのに用いられるが、合理的薬物を設計する間にリード分子を構成するための効果的なガイドラインとして供することができ、本願発明の方法を用いることにより達成され得る。
【００７０】
４つの「５つの規則」は、候補の薬物類の化合物は以下の特徴付けの少なくとも３つを有する必要があると記載する：（ｉ）５００ダルトンより小さな分子量；（ｉｉ）５より小さなＰの対数；（ｉｉｉ）わずか５の水素結合ドナー（ＯＨおよびＮＨの合計として表される）；および（ｉｖ）わずか１０の水素結合アクセプター（ＮおよびＯ原子の合計）。また、薬物類分子は、典型的には、約８Å〜約１５Åのスパン（幅）を有する。候補分子あるいは選択される分子は、これらすべての、あるいはいずれかの特徴付けを満たす必要はないことを理解するであろう。にもかかわらず、上記したガイドラインは薬物のスクリーニングおよび設計を補助する。
【００７１】
上記したように、ファーマコフォアへのヒットとして同定される分子の数は、少なくとも部分的に、データベースの大きさおよびファーマコフォアクエリーの制限に依存する。ファーマコフォアクエリーからのヒットとして同定される分子の数は、標的生体分子の結合部位への適合のさらなるモデリングにより減少させることができる。かかるモデリングは、上記したように、ドッキングおよびスコアリング法に従ってなされ得る。
ドッキングおよびスコアリング
【００７２】
ファーマコフォアモデル（例、上記したファーマコフォアクエリーを介して）と比較して、標的生体分子の特定の特性に相補的であるとして同定された候補分子は、標的生体分子についてドッキングアフィニティに従ってさらに選択され得る（例、実施例５を参照のこと）。データベースクエリーのファーマコフォアモデルの生成に加えて、化合物を同定し、設計するための第２の連続的かつ相補的方法が利用され得る。ファーマコフォアクエリーは化合物を迅速に除去し、ドッキングおよびスコアリングはリガンド−標的生体分子の結合をより正確に判断できる。蛋白または酵素の標的生体分子の場合には、不活性配座にある異なるドメインのアミノ酸残基を利用してドッキング部位を定めることができる。
【００７３】
種々の実施態様において、ファーマコフォアクエリーより選択された化合物はかかる分析用に設計されたソフトウェア（例、Glide Schrodinger、NY）を用いて標的結合部位にドッキングされる。ドッキングアフィニティは、例えば、分子と蛋白との相互作用で得られるエネルギー（例、「g_score」）および／または最も低いエネルギー配座と関連したドッキングされた配座を得るのに必要とされるエネルギー（例、「e_model」）（例、実施例５を参照）を基礎として数値（例、「Glide score」）として計算され得る。これらの例では、スコアが負になるほど、ドッキングは大きくなる。好ましくは、g_scoreは約−５よりも小さい。好ましくは、e_model scoreは約−３０よりも小さい。望ましいドッキングの数値定量化は異なる標的生体分子間で変化しうると考えられる。
【００７４】
種々の実施態様において、ドッキングスコアの閾値（例、g_scoreおよび／またはe_modelスコア）は、獲得のための、およびさらに試験するための、分子の数を管理するために選択され得る。例えば、ドッキングの実験にて、負の５．０のg−score（または負の方向により大きな値）は、望ましいドッキングスコアであると考えられ、したがってカットオフを調整する。もう一つ別の例として、ドッキング実験にて、負の７．５のg−score（または負の方向により大きな値）は、望ましいドッキングスコアであると考えられ、したがってカットオフを調整する。かくして、g_scoreの大きさを用いて、獲得でき、試験できる操作可能な数にヒットした数を調整することができる。一例として、ファーマコフォアクエリーより同定される化合物の総数は約１,０００ないし約３,０００であり、ドッキングスコアを用いてかかる化合物をランク付し、さらに試験するための約１００ないし約２００を選択することができる。さらに試験するために選択される化合物の数はこれらの目算よりも少ないか多いかである。好ましくは、g_scoreの大きさは選択基準として使用されるが、特にe_modelスコアが低い値である場合に、e_modelスコアも同様に使用されうると考えられる。さらには、選択基準はg_scoreおよびe_modelスコアの両方を基礎とすることができ、g_scoreに重みをつけることが好ましいと考えられる。
【００７５】
ドッキングおよびスコアリングに付すことで、複数の配座異性体を有する一群の化合物を得ることができる。適当なモデリングソフトウェア（例、ＭＯＥ）を用い、３Ｄ構造を２Ｄと複写物に変換され、それにより取り出すことが可能となる。例えば、かかる役割について設計されたサーチエンジン（例、eMolecules.com）を用いて市販のベンダーを調査するのに、得られた好ましい化学構造のリストを用いることができる。
標的生体分子に対する作用
【００７６】
ファーマコフォアクエリーに従って選択される候補分子および／またはドッキング分析に従ってさらに選択される候補分子は、標的生体分子に対する作用について試験され得る。一の分子の生体分子機能（例、酵素活性の阻害）に対する作用の評価は当該分野にて公知の種々の方法（例、実施例１−３を参照）により評価され得る。例えば、一の候補分子の標的酵素の触媒活性に対する阻害作用は、標的酵素に特異的な既知の活性アッセイにより評価され得る（例、Reymond, ed. (2006) Enzyme Assays：High-throughput Screening, Genetic Selection and Fingerprinting, John Wiley & Sons, 386 p., ISBN-10：3527310959; Eisenthall and Danson, Ed. (2002) Enzyme Assays, 2d edition, Oxford University Press, 384 p., ISBN-10：0199638209を参照）。本願明細書に記載されるin-cell Western（ＩＣＷ）スクリーニングプロトコルを用いて候補化合物を評価できる（例、実施例１；Chenら（2005） Analytical Biochemistry 338、136-142を参照）。本願明細書にも記載されるように、ＭＴＴ細胞増殖アッセイを用いて候補化合物を評価できる（例、実施例２を参照）。本願明細書にも記載されるように、ＥＧＦ阻害剤アッセイを用いて候補化合物を評価できる（例、実施例３；Mukku（1984） J. Biol. Chem. 269、6543-6546；Duhら（1990） World J. Surgery 14、410-418；Lokeshwarら（1989） J. Biol. Chem. 264（32）、19318-19326）。
さらなる精密化
【００７７】
候補分子のさらなる精密化を行うことができる。例えば、生物学的アッセイからのデータは、リード類分子および／または薬物類分子をさらに精密化するように、そのドッキングモデルで修正され得る。種々のソフトウェアパッケージ（例、ＭＯＥ）を利用して活性化合物と標的生体分子との相互作用を可視化し、デノボ設計による修飾に適する鋳型上での部位を同定することができる。活性化合物のアナログは類似性およびサブストラクチャーサーチを同定され得る（例、SciFinder；eModelを参照）。利用可能なアナログは上記したドッキングおよびスコアリング操作に従って分析され得る。望ましいドッキングスコアを有するアナログが獲得され、ここに記載の方法に従って標的生体分子に対する生物学的作用についてさらに試験され得る。当業者はこれらの、および他の、精密化方法を、およびここに記載の方法により同定される候補分子を開発する方法を理解するであろう。
ファルマコフォア
【００７８】
ＥＧＦＲの伸長されないテザー不活性な配置を実質的に維持しうるか、またはＥＧＦＲの伸長したテザー活性な配置を実質的に防止しうる小分子を同定するのに用いることができる、一連のファルマコフォアが本願発明にて提供される。ファルマコフォアは、限定されるものではないが、スキームＩのファルマコフォア（ＡＤ４−１５０５類）を包含する。
【００７９】
スキームＩのファルマコフォア（ＡＤ４−１５０５類）
【００８０】
スキームＩのファルマコフォア（ＡＤ４−１５０５類）は、官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９を含み得る。
【００８１】
官能基Ｆ（Ｉ）１はＨ−結合を表すか、または配列番号：１の受容体Ａｓｐ５５３のカルボキシレート側鎖に対する塩橋を形成し、ｒ＝５６.３６３、θ（シータ）＝９４.３６８、およびφ（ファイ）＝−１７.７５２の座標および約１.２Åの球体半径を有する。
【００８２】
官能基Ｆ（Ｉ）２は配列番号：１の受容体Ｔｈｒ５７０の主鎖のカルボニルに対するＨ−結合を表し、ｒ＝５３.２９０、θ（シータ）＝１０１.４９４およびφ（ファイ）＝−２３.２４４の座標および約１.０Åの球体半径を有する。
【００８３】
官能基Ｆ（Ｉ）３は配列番号：１の受容体Ｖａｌ５６８の側鎖と、受容体Ｈｉｓ５６６のイミダゾール側鎖と、および受容体Ｐｒｏ５５２のイミダゾリジン環と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.７２６、θ（シータ）＝９７.８３０およびφ（ファイ）＝−１８.３７８の座標および約１.７Åの球体半径を有する。
【００８４】
官能基Ｆ（Ｉ）４はＨ−結合を表すか、配列番号：１の受容体Ａｓｐ５６３のカルボキシレート側鎖と塩橋を形成し、ｒ＝５６.１０３、θ（シータ）＝９９.５３６およびφ（ファイ）＝−２１.０８０の座標および約１.２Åの球体半径を有する。
【００８５】
官能基Ｆ（Ｉ）５は配列番号：１の受容体Ｐｒｏ５７２のイミダゾリン環およびＭｅｔ２５３の側鎖と疎水的接触を形成し、ｒ＝５３.６４７、θ（シータ）＝１０３.８４４およびφ（ファイ）＝−２０.９９０の座標および約１.４Åの球体半径を有する。
【００８６】
官能基Ｆ（Ｉ）６は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５１.０８８、θ（シータ）＝１０４.２４１およびφ（ファイ）＝−２５.５５２の座標および約１.２Åの球体半径を有する。
【００８７】
官能基Ｆ（Ｉ）７は配列番号：１の受容体Ｃｙｓ５７１の主鎖のカルボニルとのＨ−結合を表し、ｒ＝５２.３４０、θ（シータ）＝１０３.９８０およびφ（ファイ）＝−２７.４６１の座標および約１.５Åの球体半径を有する。
【００８８】
官能基Ｆ（Ｉ）８は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５１.３８３、θ（シータ）＝１０６.４５５およびφ（ファイ）＝−２４.３１９の座標および約１.２Åの球体半径を有する。
【００８９】
官能基Ｆ（Ｉ）９は配列番号：１のＡｌａ５７３の受容体の主鎖のＮＨからのＨ−結合を受け入れ、ｒ＝５２.８６１、θ（シータ）＝１０７.６９２およびφ（ファイ）＝−２５.４４７の座標および約１.５Åの球体半径を有する。
【００９０】
選択された候補化合物は、実質的に、少なくとも１つの官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９と合致し得る。例えば、選択された候補化合物は、実質的に、少なくとも２つの、少なくとも３つの、少なくとも４つの、少なくとも５つの、少なくとも６つの、少なくとも７つの、少なくとも８つの、または少なくとも９つの官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９と合致し得る。好ましくは、選択された候補化合物は、実質的に、少なくとも６つの官能基Ｆ（Ｉ）１、Ｆ（Ｉ）２、Ｆ（Ｉ）３、Ｆ（Ｉ）４、Ｆ（Ｉ）５、Ｆ（Ｉ）６、Ｆ（Ｉ）７、Ｆ（Ｉ）８およびＦ（Ｉ）９と合致し得る。
【００９１】
一の態様は、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤を同定する方法であって、
３次元データベースへの入力データとしてファーマコフォアを含むスキームＩを準備し；候補化合物の３次元構造をファーマコフォアの３次元構造と比較し；スキームＩ（ＡＤＳ−１５０５類）の６個以上の官能基と実質的に合致する３次元構造を有する候補化合物を選択する方法であって；ここで、候補化合物の３次元構造と、ファーマコフォアの３次元構造の間の類似性は、ＥＧＦＲのテザー化された不活性配置を実質的に維持することで、あるいはＥＧＦＲのテザー化されていない活性配置の安定化を実質的に防止することで、候補化合物のＥＧＦＲを阻害する能力の指標となる、方法を提供する。
【００９２】
ある実施態様において、該方法はさらには、不安定配座にあるＥＧＦＲのドメインＩＩおよびＩＶのテザー化されている配置を安定化することに伴うＥＧＦＲの原子の少なくとも一部の同一性および空間的定位を測定し；ファーマコフォアを構築することを含む方法であって、ここで該ファーマコフォアは、ファーマコフォアの構造的特性が不活性なＥＧＦＲ配置に対して相補的であるような、不活性な配座のＥＧＦＲのドメインＩＩおよびドメインＩＶのテザー化されている配置の安定化に伴うＥＧＦＲの原子の少なくとも一部の同一性および空間的定位と近似する複数のファーマコフォアの特徴を含む。
【００９３】
ある実施態様において、不活性配座にあるＥＧＦＲのドメインＩＩおよびＩＶのテザー化されている配置を安定化することに伴うＥＧＦＲの原子の少なくとも一部の同一性および空間的定位の測定は、不活性なテザー化されている配座のＥＧＦＲの結晶形態より誘導されるＸ−線結晶学的データを分析することを含む。
【００９４】
ある実施態様において、少なくとも一のファーマコフォアの特徴は、テザー化されている不活性な配座のＥＧＦＲのドメインＩＩの原子の少なくとも一部の同一性および空間的定位と近似する。ある実施態様において、少なくとも一のファーマコフォアの特徴は、テザー化されている不活性な配座のＥＧＦＲのドメインＩＩおよびドメインＩＶの間の裂隙領域の少なくとも一部の原子の同一性および空間的定位と近似する。
【００９５】
ある実施態様において、該方法はさらには、不活性な配座のＥＧＦＲのドメインＩＩおよびドメインＩＶのテザー化されている配置の安定化に伴うＥＧＦＲの原子の少なくとも一部について候補分子のドッキングアフィニティを特定することを含み方法であって、ここでドッキングアフィニティは、最も低いエネルギー配座またはその組み合わせに対してドックした配座を得るのに必要なエネルギーと、候補分子と標的生体分子との相互作用で得られるエネルギーとから定量される。
化合物
【００９６】
本願発明のもう一つ別の態様は、ここに記載の方法によって同定される小分子化合物を包含する。ここに記載の化合物は、例えば、増殖性疾患、障害または症状を処置するのに有用な抗増殖性作用を有し得る。ここに記載の化合物は、本願発明に従って同定される標的生体分子と関連する、疾患、障害または症状の治療に有用であり得る。ここに記載の化合物の種々の実施態様は、複数のドメインの蛋白をテザー化された不活性な状態で保持しうる。例えば、成長因子蛋白が腫瘍学におけるある種の症状の治療に効果的であることは周知である。もう一つ別の例として、ＥＧＦＲの阻害は、以下にさらに記載されるように、ＥＧＦＲに関連するある種の症状の処置にて利益を有する。ここに記載の化合物は、例えば、ＥＧＦＲに関与する増殖性疾患または障害を処置するのに有用なＥＧＦＲ阻害作用を有し得る。ここに記載の化合物は経験的に増殖性疾患および症状の処置に効果的であることが明らかにされた。
【００９７】
ＡＤ４−１５０５を含め、種々の化合物が、ここに記載のファーマコフォアの方法を介してＥＧＦＲ阻害剤として同定された（例、実施例４を参照のこと）。かかる化合物およびその誘導体は、増殖性疾患および症状の処置のための治療用剤としての有用性を有する。例えば、ここに記載の化合物は、ＥＧＦＲ−関連疾患、障害または症状の処置のための治療剤として使用され得る。かかる化合物のアナログおよび誘導体は同じまたは同様の抗増殖性作用および有用性を有すると考えられる（例、実施例５を参照のこと）。同定された合物およびそのアナログおよび誘導体がさらに以下に記載される。
【００９８】
発症機序を提供する義務もなければ、そうすることで本願発明を限定するものではないが、ここに記載の化合物の活性の少なくとも一部がＥＧＦＲの阻害から生じると考えられる。さらには、本願発明の化合物は増殖性疾患、障害または症状を処置するにおいてその効能にて付加的な作用モードを有すると考えられる。作用機序と関係なく、ここに記載の化合物は、増殖性疾患および症状の処置にて経験的に効果的であることが明らかにされた。
【００９９】
以下の定義は本願発明の開示をより規定するように提供される。特記しない限り、用語は、関連する分野における当業者により通常の使用に従うと理解されるべきである。
【０１００】
特記しない限り、「アルキル」なる語は、Ｃ１−１２アルキル基、適当にはＣ１−６アルキル基、例えば、Ｃ１−４アルキル基をいう。アルキル基は直鎖であっても、分岐してもよい。適当なアルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロピル（例、ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（例、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチルおよびtert−ブチル）、ペンチル（例、ｎ−ペンチル）、ヘキシル（例、ｎ−ヘキシル）、ヘプチル（例、ｎ−ヘプチル）およびオクチル（例、ｎ−オクチル）を包含する。例えば、「アルコキシ」、「ハロアルキル」および「チオアルキル」なる語の中の「アルク」なる語は、「アルキル」なる定義に従うと解釈されるべきである。典型的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例、ｎ−プロポキシ）、ブトキシ（例、ｎ−ブトキシ）、ペントキシ（例、ｎ−ペントキシ）、ヘキソキシ（例、ｎ−ヘキソキシ）、ヘプトキシ（例、ｎ−ヘプトキシ）およびオクトキシ（例、ｎ−オクトキシ）を包含する。
【０１０１】
「シクロアルキル」なる語は、特記しない限り、Ｃ３−１０のシクロアルキル基（すなわち、３ないし１０個の環炭素原子）、より適当にはＣ３−８のシクロアルキル基、例えばＣ３−６シクロアルキル基をいう。典型的なシクロアルキル基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを包含する。環炭素原子の好ましい数は３ないし６である。
【０１０２】
「アリール」なる語は、特記しない限り、Ｃ６−１２アリール基、適当にはＣ６−１０アリール基、より適当にはＣ６−８アリール基をいう。アリール基は少なくとも１つの芳香族環（例、単環、二環または三環）を含有するであろう。１つの芳香族環を有する典型的なアリール基の一例がフェニルである。２つの芳香族環を有する典型的なアリール基の一例がナフチルである。
【０１０３】
「ヘテロアリール」なる語は、特記しない限り、アリール残基を意味し、ここで１または複数の（例、１、２、３または４、適当には１、２または３個の）環原子は、Ｎ、ＳおよびＯより選択されるヘテロ原子により置換されるか、またはＮ、ＳおよびＯより選択される１または複数の（例、１、２、３または４、適当には１、２または３個の）環原子を含有する５−員の芳香族環である。１個のヘテロ原子を有する典型的な単環式ヘテロアリール基は：５員環（例、ピロール、フラン、チオフェン）；および６員環（例、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イルおよびピリジン−４−イルなどのピリジン）を包含する。２個のヘテロ原子を有する典型的な単環式ヘテロアリール基は：６員環（例、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イルなどのイミダゾール）；６員環（例、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン）を包含する。３個のヘテロ原子を有する典型的な単環式ヘテロアリール基は：１,２,３−トリアゾールおよび１,２,４−トリアゾールを包含する。４個のヘテロ原子を有する典型的な単環式ヘテロアリール基は、テトラゾールを包含する。典型的な二環式ヘテロアリール基は：インドール（例、インドール−６−イル）、ベンゾフラン、ベンズチオフェン、キノリン、イソキノリン、インダゾール、ベンズイミダゾール、ベンズチアゾール、キナゾリンおよびプリンを包含する。
【０１０４】
飽和基は、一般に、二重または三重結合を有しないものとして理解される。例えば、飽和した鎖状炭化水素において、該鎖の両端にて、３個の水素原子を担持するものを除き、炭素原子は各々２個の水素原子に結合する。例えば、不飽和炭化水素は、一般に、１または複数の二重または三重結合を有する炭素構造物として理解される。
【０１０５】
「ハロゲン」または「ハロ」なる語は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）またはヨウ素（Ｉ）を包含する。
【０１０６】
「アミノ」なる語は基 −ＮＨ２をいう。
【０１０７】
本願発明の開示には特許請求の範囲に記載の化合物で可能性のあるすべての立体異性体が含められる。ここに記載の化合物は少なくとも１つのキラル中心を有し、したがって、エナンチオマーとして存在してもよい。化合物が２またはそれ上のキラル中心を有する場合には、付加的に、ジアステレオマーとして存在してもよい。かかるすべての異性体およびその混合物は本願発明の開示の範囲内に含まれると理解されるべきである。
【０１０８】
遊離形態の化合物およびその塩の形態の化合物との間の密接な関係を考慮して、本願明細書にて化合物と称される場合には、対応する塩も、ある環境下で可能または適当であることを条件として、意図されるものである。医薬上許容される塩は、塩基性側鎖が無機または有機酸でプロトン化される形態をとり得る。代表的な有機または無機酸は塩化水素酸、臭化水素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、パーモ酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、サッカリン酸またはトリフルオロ酢酸を包含する。また、酸性側鎖が金属イオン（例、ナトリウム、カリウムイオン等）またはアンモニウムなどの他の陽イオンとの塩を形成する形態を取ってもよい。ここに記載の化合物のすべての医薬上許容される酸付加塩の形態も本願発明の開示の範囲に含まれることを意図とするものである。
【０１０９】
化合物の結晶形態のいくつかは１種より多くの多形態にて存在してもよく、そのようなすべての形態は本願発明の開示に含まれることを意図とする。加えて、化合物のいくつかは水との溶媒和物（すなわち、水和物）または通常の有機溶媒との溶媒和物を形成してもよく、かかる溶媒和物も本願発明の開示の範囲内に含まれることを意図とするものである。
その塩を含む化合物はまた、その水和物の形態にて得ることができ、またはその結晶化に使用される他の溶媒を含み得る。
【０１１０】
本願発明の開示はさらにはここに記載の化合物のプロドラッグをその範囲内に含む。一般に、かかるプロドラッグは望ましい治療的に活性な化合物にインビボにて容易に変換可能な化合物の機能的誘導体であろう。かくして、本願発明のこれらの治療法のケースにて、「投与」なる語は、対象に投与した後にインビボにて上記した化合物に変わる、１または複数の本願発明の化合物のプロドラッグで、記載される種々の障害を治療することを包含するであろう。
【０１１１】
本願明細書で使用される「組成物」なる語は、請求項に係る化合物を治療上有効量にて含む生成物、ならびに請求項に係る化合物を組み合わせて、直接または間接的に、もたらされる生成物を包含することを意図とする。
【０１１２】
ＡＤ４−１５０５はその受容体に結合する表皮成長因子の阻害剤として同定される（例えば、実施例４を参照のこと）。
【化１】
2013516479.tif 000003
ＡＤ４−１５０５、式（１）
【０１１３】
本願明細書に記載されるファーマコフォア実験はＡＤ４−１５０５類である小分子を同定するのに利用された。
［Ａ型  ＡＤ４−１５０５類］
【０１１４】
ＡＤ４−１５０５類ファーマコフォアより誘導される一の構造は次のとおりである：
【化２】
2013516479.tif 000004
式（２）
【０１１５】
上記した構造にて、式（２）のＸ１は、次の水素原子、２−メチル、５−クロロ、５−ニトロまたは６−ヒドロキシル基からの１または複数の官能基を示しうる。
【０１１６】
式（２）のＲ１は：
【０１１７】
式（３）の２−ピリジル環であり、ここでＲ２３は水素；フルオロ；クロロ；トリフルオロメチル；メチル；エチル；およびメトキシからなる群より選択され；Ｒ３は水素；フルオロ；クロロ；メチル；エチル；メトキシ；所望により不飽和結合を含んでもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；所望により不飽和結合あるいは１個の酸素または窒素原子を含んでもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールの５または６員の環からなるアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（Ｒ１０は所望により不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より選択され；Ｒ２４は：水素；フルオロ；クロロ；およびトリフルオロメチルからなる群より選択され；およびＲ４は水素；メチル；所望により不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキル；所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキル；フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールの５または６員の環からなるアリール；およびアルコキシ  −ＯＲ１０（Ｒ１０は所望により不飽和結合を含有してもよい直鎖または分岐したＣ−１ないしＣ−４低級アルキルあるいは所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６シクロアルキルである）からなる群より選択され；
【化３】
2013516479.tif 000005
式（３）
【０１１８】
式（４）の３−ピリジル環であり、ここでＲ５、Ｒ６およびＲ７は、独立して、Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖、分岐した、または所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールからなるアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）からなる群より選択され（例、ＡＤ４−１２９０８、ＡＤ４−１３０５１、ＡＤ４−１３０２１、ＡＤ４−１３０２１、ＡＤ４−１３０６３、ＡＤ４−０１３０６４、ＡＤ４−１３０６５、ＡＤ４−１３０６６、ＡＤ４−１３１０１）；
【化４】
2013516479.tif 000006
式（４）
【０１１９】
式（５）の４−ピリジル環であり、ここでＲ８およびＲ９は、独立して、Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールからなるアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）からなる群より選択され；
【化５】
2013516479.tif 000007
式（５）
【０１２０】
置換されていないフェニル環、あるいは好ましくは１または複数の以下の基：Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールからなるアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、３,４−メチレンジオキシ、２,３−メチレンジオキシ、ニトロまたはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置換されているフェニル環であるか；または
【０１２１】
置換されていない１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環、あるいは１または複数の以下の基：Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環を含むアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）として定義される置換基で１または複数回置換されている、１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環
を示しうる。
【０１２２】
Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環であり、Ｒ２４がクロロであり、Ｒ２３がメチルである場合に、得られる化合物が安定性の強化を示しうることが見出された（実施例１０を参照のこと）。
【０１２３】
Ｒ１がハロゲンおよびアルキル基の組み合わせで置換されている式（３）の２−ピリジル環である場合に、得られる化合物が抗増殖活性の亢進を示しうることが見出された（実施例１０を参照のこと）。例えば、Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環である場合、次の置換が亢進された抗増殖活性を提供しうる：Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝フルオロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝フルオロ；Ｒ４＝メチル、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝フルオロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝エチルおよびＲ２３＝フルオロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝フルオロ、Ｒ３＝メチルおよびＲ２３＝フルオロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝エチル；Ｒ４＝メチル、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝クロロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝メチルおよびＲ２３＝フルオロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝トリフルオロメチル、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝水素；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝メチル；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝クロロ；Ｒ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝メチルおよびＲ２３＝水素；あるいはＲ４＝水素、Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝クロロおよびＲ２３＝水素（例えば、実施例１０を参照のこと）。
【０１２４】
Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環であり、Ｒ２４がクロロであり、Ｒ３またはＲ２３の一方または両方に付加的にクロロまたはメチルがある場合に、得られる化合物がアポトーシスの亢進を示しうることが見出された（実施例１０を参照のこと）。例えば、Ｒ１が式（３）の２−ピリジル環である場合、以下の置換がアポトーシスの亢進を提供しうる：Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝メチル；Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝メチルおよびＲ２３＝フルオロ；Ｒ２４＝クロロ、Ｒ３＝クロロおよびＲ２３＝水素；ならびにＲ２４＝クロロ、Ｒ３＝水素およびＲ２３＝クロロ。
【０１２５】
式（２）のＲ１が式（３）の２−ピリジル環であり、アミノピリジンのＲ２４にある基が肝細胞の培養にて代謝作用を遮断しうることが見出された。
【０１２６】
好ましい一例として、式（２）のＲ１は、置換されていない２−（１,３−チアゾイル）環（式（６）を参照のこと）または該チアゾール環の４−または５−位に基を有する２−（１,３−チアゾイル）環、例えば、２−（４,５−ジメチル−１,３−チアゾイル）環（式（７）を参照のこと）：
【化６】
2013516479.tif 000008
【０１２７】
式（２）のＲ２は：
【０１２８】
置換されていないフェニル環あるいは２−、３−、４−、５−または６−位で１または複数の以下の基：Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールからなるアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）、２,３−メチレンジオキシまたは３,４−メチレンジオキシ基、ジアルキルアミノ（−ＮＲ１３Ｒ１４、ここでＲ１３およびＲ１４は、独立して、水素原子または上記した低級アルキル基より選択される）；トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、３,４−メチレンジオキシ、２,３−メチレンジオキシ、ニトロまたはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置換されているフェニル環；
【０１２９】
式（８）の２−チオフェン環であって、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７が、独立して、水素、低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメトキシまたは上記したようなハロゲンからなる群より選択され；
【化７】
2013516479.tif 000009
【０１３０】
式（９）の３−チオフェン環であって、ここでＲ１８、Ｒ１９およびＲ２０が、独立して、低級アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメトキシまたは上記したようなハロゲンからなる群より選択され；
【化８】
2013516479.tif 000010
【０１３１】
置換されていない２−ピリジル環、またはピリジン環の４−または６−位で１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている２−ピリジル環；
【０１３２】
置換されていない３−ピリジル環、またはピリジン環の２−、４−または６−位で１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている３−ピリジル環；または
【０１３３】
置換されていない４−ピリジル環、またはピリジン環の２−または６−位で１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている４−ピリジル環
を示しうる。
【０１３４】
Ｒ２がその２−および４−位で置換されているフェニル環である場合に、得られる化合物は安定性の強化を示しうることが見出された（実施例１０を参照のこと）。例えば、Ｒ２が４−トリフルオロメチルフェニル；２−フルオロ,４−トリフルオロメチルフェニル；または２,４−ジクロロフェニルである場合、得られる化合物は安定性の強化を示しうる（実施例１０を参照のこと）。
【０１３５】
Ｒ２がハロゲンおよびトリフルオロメチル基の組み合わせで置換されているフェニル環である場合、得られる化合物は抗増殖活性の亢進を示しうることが見出された（実施例１０を参照のこと）。例えば、Ｒ２が４−クロロフェニル；２−フルオロ,４−トリフルオロメチルフェニル；３−フルオロ,４−クロロフェニル；２−フルオロ,４−クロロフェニル；２,３−ジクロロフェニル；２,３,５−トリクロロフェニル；２,４−ジクロロフェニル；３,４−ジクロロフェニル；または３,５−ジクロロフェニルである場合、得られる化合物は抗増殖活性の亢進を示しうる（実施例１０を参照のこと）。
【０１３６】
Ｒ２がその４位でクロロにより置換されており、２−または３−位でクロロまたはフルオロで付加的に置換されているフェニル環である場合、得られる化合物はアポトーシスの亢進を示すことが見出された（実施例１０を参照のこと）。例えば、Ｒ２が２,４−ジクロロフェニルまたは２−クロロ,４−フルオロフェニルである場合、得られる化合物はアポトーシスの亢進を示しうる（実施例１０を参照のこと）。
【０１３７】
ある実施態様において、化合物は式（２）のエナンチオマー異性体である。
【０１３８】
ある実施態様において、式（２）の化合物は、Ｒ１およびＲ２に従って、以下の表１−４にて提供される：
表１：Ｒ１およびＲ２置換の組み合わせ（Pyr＝ピリジン；Ani＝アニリン）
【表１】
2013516479.tif 000011
表２：Ｒ１およびＲ２置換の組み合わせ（Pyr＝ピリジン；Ani＝アニリン）
【表２】
2013516479.tif 000012
【表３】
2013516479.tif 000013
表３：Ｒ１およびＲ２置換の組み合わせ（Pyr＝ピリジン；Ani＝アニリン）
【表４】
2013516479.tif 000014
表４：Ｒ１およびＲ２置換の組み合わせ（Pyr＝ピリジン；Ani＝アニリン）
【表５】
2013516479.tif 000015
【０１３９】
ある実施態様において、式（２）の化合物はＡＤ４−１５０５である。
【化９】
2013516479.tif 000016
ＡＤ４−１５０５、式（１）
【０１４０】
ある実施態様において、式（２）の化合物は表５の化合物より選択される。
表５：式（２）の化合物
【表６】
2013516479.tif 000017
【表７】
2013516479.tif 000018
【表８】
2013516479.tif 000019
【表９】
2013516479.tif 000020
【表１０】
2013516479.tif 000021
【表１１】
2013516479.tif 000022
【表１２】
2013516479.tif 000023
【表１３】
2013516479.tif 000024
【表１４】
2013516479.tif 000025
【表１５】
2013516479.tif 000026
【表１６】
2013516479.tif 000027
【表１７】
2013516479.tif 000028
【表１８】
2013516479.tif 000029
【表１９】
2013516479.tif 000030
【表２０】
2013516479.tif 000031
【表２１】
2013516479.tif 000032
【表２２】
2013516479.tif 000033
【表２３】
2013516479.tif 000034
【表２４】
2013516479.tif 000035
【表２５】
2013516479.tif 000036
【表２６】
2013516479.tif 000037
【０１４１】
ある実施態様において、式（２）の化合物は、式（Ｉ）の化合物ＡＤ４−１５０５を除く。
【０１４２】
ある実施態様において、式（２）の化合物は以下の：
【化１０】
2013516479.tif 000038
で示される１または複数の化合物を除く。
【０１４３】
ある実施態様、例えば治療方法において、式（２）の化合物は上記した１または複数の化合物を包含しうる。
［Ｂ型  ＡＤ４−１５０５類］
【０１４４】
ＡＤ４−１５０５類ファーマコフォアより誘導されるもう一つ別の構造は次のとおりである：
【化１１】
2013516479.tif 000039
式（１０）
【０１４５】
上記した構造中、式（１０）のＸ１およびＲ２は、構造的に下位群のＡ型の式（２）について記載されているとおりである。
【０１４６】
式（１０）のＲ２１は：
【０１４７】
炭素数１ないし６（Ｃ−１ないしＣ−６）の、直鎖、分岐した、または所望により不飽和結合を含有してもよい低級アルキル基、あるいは不飽和結合を含んでいてもよい５または６員の脂肪族環（Ｃ−５またはＣ−６）として定義されるシクロアルキル；
【０１４８】
置換されていないフェニル環、あるいはその２−、３−、４−、５−または６−位が１または複数の以下の基：Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義されるシクロアルキル、フェニルまたは１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含むヘテロアリールからなるアリール、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）、２,３−メチレンジオキシまたは３,４−メチレンジオキシ基、ジアルキルアミノ（−ＮＲ１３Ｒ１４、ここでＲ１３およびＲ１４は、独立して、水素原子または上記されている低級アルキル基より選択される）；トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、３,４−メチレンジオキシ、２,３−メチレンジオキシ、ニトロまたはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置換されているフェニル環；
【０１４９】
置換されていない２−ピリジル環、あるいはピリジン環のその４−または６−位が１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている２−ピリジル環；
【０１５０】
置換されていない３−ピリジル環、あるいはピリジン環のその２−、４−または６−位が１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている３−ピリジル環；
【０１５１】
置換されていない４−ピリジル環、あるいはピリジン環のその２−または６−位が１または複数の以下の基：上記されている低級アルキル基、上記されているシクロアルキル基で置換されている４−ピリジル環；あるいは
【０１５２】
１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有する５または６員のヘテロアリール環
を示しうる。
【０１５３】
ある実施態様において、式（１０）の化合物はエナンチオマー異性体である。
【０１５４】
ある実施態様、式（１０）の化合物はＡＤ４−１０９５０である。
【化１２】
2013516479.tif 000040
ＡＤ４−１０９５０
【０１５５】
ある実施態様、式（１０）の化合物はＡＤ４−１０９６０である。
【化１３】
2013516479.tif 000041
ＡＤ４−１０９６０
【０１５６】
ある実施態様において、式（１０）の化合物は式（１）のＡＤ４−１５０５を除く。
［Ｃ型  ＡＤ４−１５０５類］
【０１５７】
ＡＤ４−１５０５類ファーマコフォアから誘導されるもう一つ別の構造は以下のとおりである：
【化１４】
2013516479.tif 000042
式（１１）
【０１５８】
上記した構造式中、式（１１）ののＸ１およびＲ２は、構造的に下位群のＡ型の式（２）について記載されているとおりである。
【０１５９】
式（１１）のＲ２２は
炭素数１ないし６（Ｃ−１ないしＣ−６）の低級アルキルであって、直鎖、分岐した、または所望により不飽和結合を含有してもよく、あるいはＣ−１またはＣ−２炭素が１または複数の以下の置換基：置換されていないフェニル環またはその２−、３−、４−、５−または６−位が１または複数の以下の基：Ｃ−１ないしＣ−４の直鎖または分岐した、あるいは所望により不飽和結合を含有してもよいものとして定義される低級アルキル、所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよいＣ−１ないしＣ−６として定義されるシクロアルキル、１ないし４個のＮ、ＯまたはＳ原子を含有するヘテロアリール、ヒドロキシル（−ＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ１０、ここでＲ１０は上記した低級アルキル基またはシクロアルキル基として定義される）、ジアルキルアミノ（−ＮＲ１３Ｒ１４、ここでＲ１３およびＲ１４は、独立して、水素原子または上記される低級アルキル基より選択される）；トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシまたはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置換されている、低級アルキルを示しうる。
【０１６０】
シクロアルキルは所望により不飽和結合または１個の酸素または窒素原子を含有してもよい５または６員の脂肪族環（Ｃ−５ないしＣ−６）として定義される。
【０１６１】
ある実施態様において、化合物は式（１１）のエナンチオマー異性体である。
【０１６２】
ある実施態様において、式（１１）の化合物はＡＤ４−１０５３５である。
【化１５】
2013516479.tif 000043
ＡＤ４−１０５３５
【０１６３】
ある実施態様において、式（１１）の化合物は式（１）の化合物ＡＤ４−１５０５を除く。
構造および機能
【０１６４】
本願明細書に記載の組成物は、１または複数の望ましい機能、例えば安定性、抗増殖活性およびアポトーシス活性と関連する構造的特性を有しうる。
【０１６５】
本願明細書に記載の化合物のアミノピリジンの５−位にある基が、安定性の強化（例えば肝ミクロソームインキュベーションに対してより安定している）をもたらすアナログを提供することが見出された（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、アミノピリジンの５−位が置換された化合物は安定性の強化を示しうる。本願明細書に示されるように、ＡＤ４−１３０５３およびＡＤ４−１３０４１（共に、アミノピリジンの５−位に塩素原子を有する）はＡＤ４−１０６２８よりも強化された安定性を示す（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、アミノピリジンの５−位が塩素原子で置換されている化合物は安定性の強化を示し、安定性を増加させうる。
【０１６６】
本願明細書に記載の化合物のアミノピリジン上でのハロゲンとアルキル基の組み合わせは、抗増殖活性が亢進された化合物を提供する（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、次のアミノピリジン環で置換された化合物は、抗増殖活性の増加を提供する：３,５−ジＦ；３−Ｆ、５−Ｃｌ、６−Ｍｅ；３−Ｆ、５−Ｃｌ、６−Ｍｅ；３−Ｆ、５−Ｃｌ、４−Ｅｔ；および３,５−ジＦ、４−Ｍｅ。ある実施態様において、次のアミノピリジン環で置換された化合物はさらなる抗増殖活性の増加を提供する：３−Ｅｔ、５−Ｃｌ；３,５−ジＣｌ、６−Ｍｅ；３−Ｆ、５−Ｃｌ、４−Ｍｅ；および５−ＣＦ３。ある実施態様において、次のアミノピリジン環を置換させた化合物はその上さらなる抗増殖活性を亢進させる：３−Ｍｅ,５−Ｃｌ；３,５−ジＣｌ；４−Ｍｅ,５−Ｃｌ；および４,５−ジＣｌ。
【０１６７】
本願明細書に記載の化合物のアミノピリジン環の５−位にあるクロロ基、さらに該アミノピリジン環の３−または４−位にあるクロロまたはメチル基は、アポトーシス活性が亢進された化合物を提供することが見出された（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、次のアミノピリジン環を置換させた化合物はアポトーシス活性の亢進を提供することが見出された：３−Ｍｅ,５−Ｃｌ；３−Ｆ,５−Ｃｌ,４−Ｍｅ；４,５−ジＣｌ；および３,５−ジＣｌ。
【０１６８】
本願明細書に記載の化合物のベンゼン環の２−および４−位にある基が安定性の強化したアナログ（例、肝ミクロソームインキュベーションに対してより安定したアナログ）を提供することが見出された（実施例１０）。ある実施態様において、化合物のベンゼン環の２−および４−位が置換された化合物は安定性の強化を示しうる。本願明細書に記載されるように、ＡＤ４−１３０４１、ＡＤ４−１３０４２、ＡＤ４−１３１６５およびＡＤ４−１３２０６は安定性の強化を示す（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、アミノピリジンのベンゼン環の２−または４−位がハロゲン原子で置換された化合物は安定性の強化を示し、安定性を増加させうる。例えば、アミノピリジンのベンゼン環の２−および４−位が塩素原子で置換された化合物は安定性の強化を示し、安定性を増加させうる。もう一つ別の例として、アミノピリジンのベンゼン環の２−および４−位がフッ素原子で置換された化合物は安定性の強化を示し、安定性を増加させうる。もう一つ別の例として、アミノピリジンのベンゼン環の４−位がトリフルオロメチルで、あるいは２−位がフッ素原子および４−位がトリフルオロメチルで置換された化合物は安定性の強化を示し、安定性を増加させうる。
【０１６９】
本願明細書に記載の化合物のベンゼン環でのハロゲンおよびトリフルオロメチル基の組み合わせは抗増殖活性の亢進した化合物を提供することが見出された（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様において、次のベンゼン環の置換を有する化合物は抗増殖活性の亢進を提供する：４−Ｃｌ；２−Ｆ、４−ＣＦ３；および３−Ｆ、４−Ｃｌ。ある実施態様において、次のベンゼン環の置換を有する化合物は、さらなる抗増殖活性の亢進を提供する：２−Ｆ、４−Ｃｌ；２,３−ジＣｌ；および２,３,５−トリＣｌ。ある実施態様において、次のベンゼン環の置換を有する化合物は、その上さらなる抗増殖活性の亢進を提供する：２,４−ジＣｌ；３,４−ジＣｌ；および３,５−ジＣｌ。
【０１７０】
本願明細書に記載の化合物のベンゼン環の４−位にあるクロロ基および該ベンゼン環の２−または３−位にある付加的なクロロまたはフルオロ基が、アポトーシス活性の亢進した化合物を提供することが見出された（実施例１０を参照のこと）。ある実施態様、次のベンゼン環の置換を有する化合物はアポトーシス活性の亢進を提供する：２,４−ジＣｌ（例、ＡＤ４−１３１３０、ＡＤ４−１３１７８を参照）；および２−Ｃｌ、４−Ｆ（例、ＡＤ４−１３１８５を参照）。
合成
【０１７１】
一の態様は本願明細書に記載の化合物の合成方法を提供する。
ＡＤ４−１５０５類化合物
【０１７２】
本願明細書に示されるように、ＡＤ４−１５０５類化合物は、アミノピリジン中間化合物、アルデヒド中間化合物およびヒドロキシキノリンを反応させることにより合成され得る（実施例１２を参照のこと）。中間化合物の合成方法もまた本明細書に記載されている（実施例１１を参照のこと）。
【０１７３】
ある実施態様において、該反応はアミノピリジン中間化合物、アルデヒド中間化合物およびヒドロキシキノリンをエタノール（例、無水エタノール）中で合わせることを含みうる。
【０１７４】
アミノピリジン中間化合物は、本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物のアミノピリジン環に相当する官能基を有しうる。例えば、２−アミノ−６−ピコリンのアミノピリジン中間化合物はＡＤ４−１２９０２の合成に使用され得、ここで式（２）のＲ１は式（３）の２−ピリジル環であり、Ｒ４はメチルであり、およびＲ２４、Ｒ３およびＲ２３は水素である（実施例１２参照）。実施例１１および実施例１２にガイダンスが設けられており、当業者は式（２）のＡＤ４−１５０５類化合物についてのアミノピリジン中間化合物の構造を決定できる。アミノピリジン中間化合物の合成は実施例１１に従いうる。
【０１７５】
アルデヒド中間化合物は、本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物のベンズアルデヒド誘導化環に相当する官能基を有しうる。例えば、アルデヒド中間化合物の４−トリフルオロメトキシベンズアルデヒドはＡＤ４−１２９０２の合成に用いられ得、ここで式（２）のＲ２は１位が−ＣＨＯ（例、ベンズアルデヒド）で、４位がトリフルオロメトキシで置換されたフェニル環である（実施例１２を参照）。 実施例１１および実施例１２にガイダンスが設けられており、当業者は式（２）のＡＤ４−１５０５類化合物の対するアルデヒド中間化合物の構造を決定し得る。アルデヒド中間化合物の合成は実施例１１に従いうる。
【０１７６】
ヒドロキシキノリン中間化合物は本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物のヒドロキシキノリン部分に対応する官能基を有しうる。例えば、ヒドロキシキノリン中間化合物の８−ヒドロキシキノリンはＡＤ４−１２９０２の合成に用いることができ、ここで式（２）のＸは水素である（実施例１２を参照のこと）。例えば、ヒドロキシキノリン中間化合物の５−クロロ−８−ヒドロキシキノリンはＡＤ４−１２９１０の合成に用いることができ、ここで式（２）のＸは５−クロロである（実施例１２を参照のこと）。実施例１１および実施例１２にガイダンスが設けられており、当業者は式（２）のＡＤ４−１５０５類化合物の対するヒドロキシキノリン中間化合物の構造を決定することができる。ヒドロキシキノリン中間化合物は市販されており、あるいは当該分野にて公知の方法に従って合成することもできる。
【０１７７】
反応はアルコール溶媒などの溶媒中で起こり得る。例えば、該反応はエタノール、イソプロパノールまたはブタノール（例、ｎ−ブタノール、tert−ブタノール、sec−ブタノール、イソブタノール）中で起こり得る。溶媒は無水物と、あるいは少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％などのある純度とすることができる。反応は溶媒がなくても、あるいは実質的になくても起こり得る。１または複数の中間体は室温で、または室温よりいくらか高い温度で液体であり得る。反応が１または複数の中間体が液体である温度より高い温度で起こる場合、該反応は付加的な溶媒なしで行われうる。例えば、アミノピリジン中間化合物、アルデヒド中間化合物およびヒドロキシキノリン（そのうちの少なくとも１つは反応温度で液体である）は溶媒なしで、または実質的になしで混合され得、したがって反応は進行しうる。もう一つ別の例として、少なくとも１の中間体が５０℃以上で液体である場合、該反応は、溶媒がなくても、または実質的になくても起こり得る。
【０１７８】
反応は約室温で起こり得る。該反応は成分を一定期間（例、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０日間またはそれ以上）混合すること（例、攪拌すること）を含みうる。
【０１７９】
反応生成物の単離および精製は当該分野にて公知の適当な方法によるものであり得る。例えば、反応生成物の単離および精製は、反応混合物からの結晶化、溶媒フラクション（例、ヘキサン／酢酸エチル；ヘキサン／アセトン）からの結晶化、蒸発濃縮、分留、濾過、カラムクロマトグラフィー（例、シリカゲル固定相）、高性能液体クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせによるものであり得る。反応生成物の単離および精製は実施例１２に記載のプロトコルによるものであり得る。
【０１８０】
上記した反応は実施例１２−１３に開示される条件または条件の組み合わせを包含しうる。
アミノピリジン中間化合物
【０１８１】
もう一つ別の態様はアミノピリジン中間化合物およびその製造方法である。アミノピリジン中間化合物は本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物のアミノピリジン環に相当する官能基を有しうる。
【０１８２】
アミノピリジン化合物は、置換または置換されていない２−アミノピリジンとＮ−クロロスクシンイミドを、例えば酢酸エチルまたはジメチルホルムアミドを含む溶媒中、２−アミノ−５−クロロピリジン誘導体を形成するのに十分な条件下、合わせることで形成され得る（例、実施例１１を参照）。置換または置換されていない２−アミノピリジンは本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物の一部のアミノピリジン部分に相当し得る。例えば、置換または置換されていない２−アミノピリジンは式（２）の化合物のアミノピリジン部分に相当し得、ここでＲ１は式（３）を含む。上記した反応の２−アミノピリジンは式（１２）の構造を有し得、ここでＲ２３、Ｒ３およびＲ４は上記に定義されている通りであり得（式（３）を参照）、Ｒ２４は水素であり得る。上記した反応の２−アミノ−５−クロロピリジン誘導体は、式（１２）の構造を有し得、ここでＲ２３、Ｒ３およびＲ４は該反応の２−アミノピリジンについての記載されているとおりであり、Ｒ２４はクロロであり得る。上記した反応は実施例１２−１３に開示される条件または条件の組み合わせを包含しうる。
【０１８３】
【化１６】
2013516479.tif 000044
式（１２）
【０１８４】
アミノピリジン化合物は、ハロゲン化２−アミノピリジンアセトアミド誘導体の４−位をアルキル化し、その後でアセトアミドを除去することで形成され得る（例、実施例１１を参照）。フルオロ、クロロまたはブロモ基を３−位および５−位に有する２−アミノピリジンは、例えば、無水酢酸／氷酢酸で処理することにより対応するアセトアミド誘導体に変換され得る。該アセトアミド誘導体は、例えば、ジイソプロピルアミンおよびブチルリチウム／テトラヒドロフランを用い、約−７０℃などの適当な温度で脱プロトン化し、その後でヨードメタンまたはヨードエタンなどの低級アルキルハライドで処理することにより、ハロゲン間の位置でアルキル化され得る。アセトアミド基は、濃縮酸、例えば濃塩酸で、メタノールなどの適当な溶媒中、約５０℃などの適当な温度で処理することにより除去され、２−アミノ−３,５−ジハロ−４−アルキルアミノピリジンを提供することができる。上記した反応の置換２−アミノピリジンは式（１２）の構造を有し、ここでＲ２３はフルオロ、クロロまたはブロモであり得；Ｒ３は水素であり得；Ｒ４は請求項１に記載されているとおりとすることができ；およびＲ２４はフルオロ、クロロまたはブロモであり得る。上記した反応の置換２−アミノピリジンは式（１２）の構造を有し得、ここでＲ２３はフルオロ、クロロまたはブロモであり得；Ｒ３は水素であり得；Ｒ４は上記と同意義であり得（式（３）を参照）；およびＲ２４はフルオロ、クロロまたはブロモであり得る。上記した反応は実施例１２−１３に開示される条件または条件の組み合わせを包含しうる。
【０１８５】
また、その生物学的活性について有用なアミノピリジン中間化合物、ならびに本願明細書に開示の他の化合物を形成するための出発物質も提供される。アミノピリジン中間化合物は、２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン；２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン；２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジン；２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン；２−アミノ−３,５−ジクロロ−４−メチルピリジン；２−アミノ−３,５−ジクロロ−４,６−ジメチルピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン；および２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジン、または上記した反応に従って形成されるアミノピリジン化合物であり得る。例えば、アミノピリジン化合物は２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン；２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン；または２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジンであり得る。
医薬処方
【０１８６】
本願発明の組成物の実施態様は本願明細書に記載の種々の化合物の医薬処方を包含する。本願明細書に記載の化合物は、純粋な形態にて、またはそのような形態が存在する場合、医薬上許容される塩の形態にて、医薬上許容される賦形剤と共にまたはなしで、利用され得る。本願明細書に記載の化合物は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences（A.R. Gennaro編）、第２１版、ＩＳＢＮ：０７８１７４６７３６（２００５）に記載されるように、１または複数の医薬上許容される担体および／または賦形剤を用いる一般的方法により処方され得る。かかる処方は、治療的に有効な量の薬剤を、好ましくは純粋な形態にて、患者に適切に投与するための形態を提供するように、適量の担体と共に含有するであろう。該処方は投与経路に適する必要がある。本願発明で使用される薬剤は、限定されるものではないが、非経口、肺、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、眼、頬および直腸を含む、数種の経路を用いて対象に投与するための既知の方法により処方され得る。個々の薬剤は本願発明の１または複数の付加的な薬剤と組み合わせて、および／または他の生物学的に活性なもしくは生物学的に不活性薬剤と一緒に投与されてもよい。かかる生物学的に活性または不活性な薬剤は、イオン、共有、ファン・デア・ワールス力、疎水性、親水性または他の物理的力により、薬剤と流体または機械連絡していてもよく、あるいは該薬剤に付着されていてもよい。
【０１８７】
制御放出（または徐放）製剤は、薬剤の活性を広げ、および投与頻度を減らすように処方されてもよい。放出制御製剤はまた、薬剤の作用開始時間または薬剤の血中濃度などの他の特性に影響を及ぼし、その結果として、副作用の出現に影響を及ぼすように使用され得る。
キナーゼ阻害剤との併用
【０１８８】
本願明細書に記載の化合物は、既知の治療用化合物と一緒に使用または処方され得る。併用療法は、例えば、本願明細書に記載の抗増殖性化合物と第２薬剤とを含む、治療法として理解される。抗増殖性化合物および第２薬剤は、別々の投与用に処方され得るし、同時投与用に処方されてもよい。
【０１８９】
本願明細書に記載の化合物は、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、タイケルブ、イレッサおよびタルセバなどのもう一つ別の抗増殖性化合物、またはエルビタックス、ＥＧＦ受容体に対するヒト化モノクローナル抗体と合わせ、薬剤単独よりもより大きな治療効果を生成しうる。本願明細書に示されるように、ＡＤ４化合物をタイケルブ、イレッサ、タルセバまたはエルビタックスとの細胞増殖アッセイにて評価する場合、薬剤を併用して細胞増殖を阻害する効果は、いずれかの薬剤単独での効果よりも大きい（例、実施例６を参照）。具体的には、本願明細書に記載の化合物は、タイケルブ、イレッサ、タルセバまたはエルビタックスと一緒に、固定された濃度比で評価され、それを各薬剤単独での用量応答曲線を結果より確認した。
【０１９０】
ＥＧＦＲ阻害剤などの本願明細書に記載の化合物は、腫瘍の血管形成を阻害する第２薬剤と一緒に用いるか、または一緒に処方して用いられ得る。充実性腫瘍の血管形成は、一般に、充実性腫瘍における血管の形成をいう。腫瘍の血管形成を阻害する薬剤は、血管の新生開始、成長または維持を阻害し、例えば、腫瘍における血管の数または密度の減少をもたらしうる。
【０１９１】
本願明細書に記載の化合物は、充実性腫瘍の浸透性を修飾、例えば増大させる第２薬剤と一緒に用い、または一緒に処方して用いられ得る。充実性腫瘍の浸透性は、一般に、充実性腫瘍の治療薬への浸透性をいう。仮に治療剤が腫瘍の中心にある細胞に達し得るならば、充実性腫瘍は治療剤に対して浸透性であると言える。
【０１９２】
本願明細書に記載の化合物は、第２化学療法剤と一緒に使用され得るか、または該化学治療剤と一緒に処方され、使用され得る。化学療法剤は、悪性腫瘍を治療するのに使用される分子または組成物をいう。かかる剤は本願明細書に記載の化合物と組み合わせて、または本願明細書に記載の併用療法で使用され得る。化学療法剤は本願明細書に記載の化学物とコンジュゲートされ得る、またはコンジュゲートされない形態にて併用療法と組み合わせて使用され得る剤を包含する。
【０１９３】
本願明細書に記載の化合物は、生物剤である、第２薬剤と一緒に使用され得る、または該薬剤と一緒に処方され、使用され得る。生物製剤とも称される、生物剤は、一般に、生体系の物質、例えば、有機体、細胞または組換えシステムとして理解される。かかる生物剤の例が、限定されるものではないが、核酸分子（例、アンチセンス核酸分子）、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、抗体（例、モノクローナル抗体）およびサイトカインを包含する。
【０１９４】
本願明細書に記載の化合物は、ＥＧＦＲ−関連症状または障害の治療に承認されているＥＧＦＲ阻害剤と一緒に使用または処方され得る。例えば、本願明細書に記載の化合物は１または複数のタイケルブ、イレッサ、タルセバまたはエルビタックスと一緒に使用または処方され得る。タイケルブ、イレッサおよびタルセバはＥＧＦＲチロシンキナーゼ活性を遮断するキナーゼ阻害剤である。エルビタックスはＥＧＦＲ上の細胞外エピトープと結合するヒト化モノクローナル抗体である。エルビタックスはリガンド結合および受容体の二量化の両方を防止することにより受容体の活性化を遮断する。種々の実施態様において、本願明細書に記載の化合物はＥＧＦＲを二量化インコンピテント構造に固定し得る。かくして、本願明細書に記載の化合物および既知のＥＧＦＲ阻害剤、例えば上記したものは、相補的または相乗的形式にて作用し得る。
【０１９５】
ＡＤ４−１５０５類化合物などの本願明細書に記載の化合物は、タイケルブと一緒に使用または処方され得る。ＡＤ４−１５０５類化合物などの本願明細書に記載の化合物は、イレッサと一緒に使用または処方され得る。ＡＤ４−１５０５類化合物などの本願明細書に記載の化合物は、タンセバと一緒に使用または処方され得る。
治療的使用
【０１９６】
もう一つ別の態様は増殖性疾患、障害または症状を本願明細書に記載の化合物で治療する方法である。種々の実施態様において、増殖性疾患、障害または症状は、ＥＧＦＲなどの活性化状態に伴うドメイン内テザーを有する標的生体分子と関連付けられる。治療法は治療的に効果的な量の本願発明の化合物をその必要とする対象に投与することを含み得る。ある実施態様において、該化合物は抗増殖性作用を有する本願明細書に記載の化合物である。ある実施態様において、該化合物はＥＧＦＲ阻害活性を有する本願明細書に記載の化合物である。ある実施態様において、該化合物は、テザー拡張を防止し、不活性な配座を維持するように、ＥＧＦＲの１または複数のドメインと結合して作用する、ＥＧＦＲ阻害剤である。
【０１９７】
種々の実施態様において、該治療法は本願明細書に記載の１または複数の化合物を投与することを包含する。
【０１９８】
例えば、該治療法は表５に記載の１または複数の化合物、あるいはその立体異性体または医薬上許容される塩を投与することを包含し得る。もう一つ別の例として、該治療法は式（２）、式（５）または式（１１）の１または複数の化合物、あるいはその立体異性体または医薬上許容される塩を投与することを包含し得る。
【０１９９】
もう一つ別の例として、治療法は以下のＡＤ４−１５０５（式（１））より選択される１または複数の化合物、あるいはその立体異性体または医薬上許容される塩を投与することを包含し得る。
【０２００】
もう一つ別の例として、治療法は以下：
【化１７】
2013516479.tif 000045
で示される化合物より選択される１または複数の化合物、あるいはその立体異性体または医薬上許容される塩を投与することを包含し得る。
【０２０１】
個々に記載の方法は、一般に、その必要とする対象に対してなされる。例えば、ここに記載の療法を必要とする対象は、増殖性疾患、障害または症状、あるいはその危険があると診断され得る。もう一つ別の例として、ここに記載の療法を必要とする対象はＥＧＦＲに付随する疾患、障害または症状、あるいはその危険があると診断され得る。治療の必要性の決定は、病歴および治療中の疾患、障害または症状に伴う身体検査により評価され得る。ここに記載の方法により治療され得る種々の症状の診断は当該分野の範囲内にある。対象は動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはウマ、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、マウス、ラット、サル、モルモットおよびトリ、最も好ましくはヒトであり得る。
【０２０２】
ここに記載の組成物で治療できる増殖性疾患または症状の例は、限定されるものではないが、癌；血管増殖性障害；繊維障害；メサンギウム細胞増殖性障害；乾癬；光線角化症：脂漏性角化症；疣贅；ケロイド瘢痕；湿疹；およびパピローマウイルス感染などのウイルス感染により惹起される過剰増殖性疾患を包含する。
【０２０３】
発症機序を提供する義務はなく、そのことを行うことで本願発明を限定するものではないが、現在において、ここに記載の化合物の活性の少なくとも一部はＥＧＦＲの阻害から生じていると考えられる。さらには、本願発明の化合物は増殖性疾患、障害または症状を治療する際のその効能にて付加的な作用機序を有するかもしれない。発症機序と関係なく、ここに記載の化合物は増殖性疾患および症状を治療するにおいて経験的に効果的であることが明らかにされた。
【０２０４】
ここに記載の種々の化合物はＥＧＦＲを阻害するのに効果的であり、かくして、増殖性疾患などの、限定されるものではないが、包含する、ＥＧＦＲに伴う疾患または障害に対して効果的であり得る。ある実施態様において、ここに記載の化合物により治療される増殖性疾患は、ＥＧＦＲファミリーの受容体のメンバーを発現する癌または非癌細胞の過剰増殖により惹起される症状である。増殖性疾患により産生される過剰細胞は、ＥＧＦＲを正常なレベルで発現し得、あるいはＥＧＦＲを過剰発現し得る。ＥＧＦＲに付随する特に適する疾患または症状は、ＥＧＦＲのリガンドまたはかかるリガンドの変異により刺激される疾患または症状であり得る。ＥＧＦＲを刺激するかかるリガンドの例は、限定されるものではないが、ＥＧＦ、ＴＧＦ−アルファ、ヘパリン−結合成長因子（ＨＢＧＦ）、β−セルリンおよびクリプト−１を包含する。ＥＧＦＲに伴う増殖性疾患の例は、限定されるものではないが、癌；血管増殖性障害；繊維障害；メサンギウム細胞増殖性障害；乾癬；光線角化症：脂漏性角化症；疣贅；ケロイド瘢痕；湿疹；およびパピローマウイルス感染などのウイルス感染により惹起される過剰増殖性疾患を包含する。
【０２０５】
癌または新生物は、一般に、悪性新生物または細胞の自発的成長または増殖のいずれかをいう。「癌」を患う対象は、例えば、白血病、リンパ腫または血液細胞の他の悪性腫瘍を有するかもしれない。ある実施態様においては、当該方法が充実性腫瘍の治療に使用される。典型的な充実性腫瘍は、限定されるものではないが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、精巣癌、肺癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、膵臓癌、結腸癌（ＣＲＣ）、乳癌、ならびに前立腺、胃、皮膚、胃、食道および膀胱癌を包含する。
【０２０６】
癌の処置または癌を患っている対象の治療は、癌細胞の複製の阻害、癌の拡張の阻害、腫瘍の大きさの減少、対象の体内にある癌細胞の数を少なくするか、減らすこと、あるいは癌の徴候の緩和または抑制を包含し得る。死亡率または罹患率が減少するならば、処置は治療的であると考えられ、予防的または治療的に行われ得る。
【０２０７】
ここに記載の方法は確立された腫瘍を治療（例、腫瘍の大きさの減少、血管新生の減少および／または浸透性の増加）するのに使用され得る。確立された腫瘍は、一般に、栄養素、例、酸素がもはや浸透により対象の血管構造より腫瘍の中心に浸透できず、したがって腫瘍がそれ自体の血管供給源から栄養素を受けることを要求するような、十分な大きさの充実性腫瘍として理解される。ここに記載の方法は、休眠していなくて、活発に指数的に成長している充実性腫瘍を治療するのに使用され得る。
【０２０８】
治療的プロトコルは充実性腫瘍の透過性に従って修飾され得る。充実性腫瘍の透過性は、一般に、充実性腫瘍の治療薬への透過性をいう。治療薬が腫瘍中心にある細胞に達することができるならば、充実性腫瘍は治療薬に対して透過性であると言えるかもしれない。腫瘍の透過性を増大させる薬剤は、例えば、充実性腫瘍の血管構造を正常化、例えば維持するかもしれない。腫瘍の血管形成または腫瘍の浸透性は、例えば、生検標体の免疫組織学的化学分析によるなどの当該分野にて既知の種々の方法により、または腫瘍の超音波検査、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンなどの画像技術により測定され得る。
【０２０９】
異なる型の乾癬は、膿様水疱（膿疱性乾癬）、重度の皮膚の腐肉形成（乾癬性紅皮症）、滴状ドット（点滴薬乾癬）および滑らかな炎症性病変（逆乾癬）などの特徴を示す。すべての型の乾癬（例、尋常性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、乾癬性関節症、類乾癬、掌蹠膿疱症の治療が本願発明により意図される。
【０２１０】
血管増殖性障害は、一般に、血管の異常増殖をもたらす血管新生および血管性障害をいう。血管形成および拡張、または脈管新生および血管新生は、各々、胚発生、黄体形成、損傷治癒および臓器再生などの種々の生理プロセスにて重要な役割を果たす。それらはまた、癌発生にて重要な役割を果たす。血管増殖性障害の他の例は、限定されるものではないが、関節炎（新たな毛細血管が関節に侵入し、軟骨を破壊する）および糖尿病性網膜症などの眼病（網膜にある新たな毛細血管が硝子体に侵入し、出血および失明の原因となる）を包含する。血管の収縮、縮小または再狭窄などの閉塞に関連する障害も含まれる。
【０２１１】
繊維障害は細胞外マトリックスの異常形成をいう。繊維障害の例として、限定されるものではないが、肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性障害が挙げられる。肝硬変は肝瘢痕の形成をもたらす細胞外マトリックス成分の増加により特徴付けられる。肝硬変は肝臓の瘢痕などの疾患を惹起しうる。肝瘢痕をもたらす細胞外マトリックスの増加はまた、肝炎などのウイルス感染により惹起され得る。脂肪細胞は肝硬変にて重要な役割を果たすようである。他の意図する繊維障害はアテローム性動脈硬化症を包含する。
【０２１２】
メサンギウム細胞増殖性障害はメサンギウム細胞の異常増殖によってもたらされる障害をいう。メサンギウム細胞増殖性障害は、限定されるものではないが、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症症候群、移植片拒絶反応および糸球体症などの種々のヒト腎疾患を包含する。
【０２１３】
ＥＧＦＲ（Tuziら、1991, Br. J. Cancer 63:227-233；Torpら、1992, APMIS 100:713-719）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Slamonら、1989, Science 244:707-712）およびＰＤＧＦ−Ｒ（Kumabeら、1992, Oncogene 7:627-633）は、多くの腫瘍にて過剰発現され、および／またはオートクリンループにて永続的に活性化されることが知られている。受容体およびオートクリンループの過剰発現は最も一般的で重度の癌にて実証された（例えば、AkbasakおよびSuner-Akbasakら、1992, J. Neurol. Sci. 111：119-133；Dicksonら、1992, Cancer Treatment Res. 61：249-273；Korcら、1992, J. Clin. Invest. 90：1352-1360；LeeおよびDonoghue、1992, J. Cell. Biol. 118：1057-1070を参照のこと）。ＥＧＦＲの過剰発現が、膀胱、脳、頭頚部、膵臓、肺、乳部、卵巣、結腸、前立腺および腎臓の癌に付随することが知られている（例えば、Atalayら、2003, Ann. Oncology 14：1346-1363；HerbstおよびShin、2002, Cancer 94：1593-1611；Modjtahediら、1996, Br. J. Cancer 73：228-235を参照のこと）。ＥＧＦＲの過剰発現は患者の予後不良と相関されるか、または関連付けられる（例えば、HerbstおよびShin、2002, Cancer 94：1593-1611；Modjtahediら、1996, Br. J. Cancer 73：228-235を参照のこと）。ＨＥＲ２は乳癌、卵巣癌、胃癌、肺癌、膵臓癌および膀胱癌と関連付けられる。
【０２１４】
ここに記載の化合物である阻害剤は、外因性材料または内因性材料のいずれかとして治療的に使用され得る。外因性剤は体外で産生または製造され、体内に投与されるものである。内因性剤は、体内に、または体の他の臓器にデリバリーするためのある型の装置（生物または他の装置）によって体内で産生または製造されるものである。
【０２１５】
ここに記載の方法によれば、投与は非経口、肺、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、眼、頬または直腸投与であり得る。
【０２１６】
ここに記載の化合物の有効量は、一般に、処置された症状が改善されるような程度まで、抗増殖作用を発揮しうる量である。例えば、ここに記載の化合物の有効量は、処置された症状が改善されるような程度までＥＧＦＲを阻害するかもしれない。ある実施態様において、有効量は、限定されるものではないが、例えば、腫瘍の大きさの減少、腫瘍体積の減少、充実性腫瘍の血管新生の減少あるいはインビトロまたはインビボのいずれかにおける充実性腫瘍の薬剤への浸透性の増加を含む、癌細胞または腫瘍に対する望ましい結果に影響を与えるのに十分である療法（または併用療法）における量である。ある実施態様において、療法（または併用療法）における量は、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％よりも大きな腫瘍阻害％をもたらす量である。ある実施態様において、療法（または併用療法）における有効量は、限定されるものではないが、例えば、疾患を改善し、対象を安定化し、対象における癌の発生または進行を防止または遅らせることを含む、望ましい臨床結果を得るのに十分である。療法（または併用療法）における有効量は、単回投与または反復投与に基づいて測定され得る。上記した指標の検出および測定方法は当業者に公知である。かかる方法は、限定されるものではないが、腫瘍組織量の減少、腫瘍の大きさの減少、腫瘍の体積の減少、第二腫瘍の増殖の減少、充実性腫瘍の血管新生の減少、腫瘍組織における遺伝子の発現、バイオマーカーの存在、リンパ節の関与、組織学的等級および核等級を測定することを包含する。
【０２１７】
ある実施態様において、腫瘍組織量が測定され得る。腫瘍負荷とも称される腫瘍組織量は、一般に、対象の体全体に分布している腫瘍物質の総量をいう。腫瘍組織量はまた、リンパ節および骨髄を含む体全体を通しての、癌細胞の総数または腫瘍の全体の大きさをいい得る。腫瘍組織量は、例えば、対象より取り出した後に、例えばキャリパーを用いて腫瘍の寸法を測定するか、あるいは体内にある間に、画像技術、例えば超音波、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または核磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンを用いるなどの当該分野にて公知の種々の方法により測定され得る。腫瘍の大きさは、例えば、腫瘍の重量または腫瘍の体積を測定することで決定され得る。
【０２１８】
本願発明の方法を用いる場合、ここに記載の化合物の治療的に効果的な量は、純粋な形態にて、または存在するならば、医薬上許容される塩の形態にて、および医薬上許容される賦形剤と共にまたはなしで利用され得る。例えば、本願発明の薬剤は、適用可能な利益／危険の合理的な割合を考慮して、該化合物が標的生体分子に付随する疾患、障害または症状を治療または予防するのに特異的である標的生体分子を阻害するのに十分な量にて投与され得る。
【０２１９】
かかる化合物およびその試薬製剤の毒性および治療作用は、細胞培養における標準的薬理操作および／またはＬＤ５０（母集団の５０％に致死の用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％にて薬理学的に効果的な用量）を決定するための動物実験により測定されうる。毒性および治療作用の間の用量割合は、ＬＤ５０／ＥＤ５０の割合として表されうる治療指標である。治療指標は大きいほど好ましい。
【０２２０】
単回剤形を製造するのに医薬上許容される担体と合わせることのできる、ここに記載の化合物の量は、処置される宿主および個々の投与経路に応じて変化するであろう。各剤形の個々の用量に含まれる薬剤の単位含量はそれ自体が薬理学的に効果的な量を構成する必要はなく、複数の個々の用量を投与することで必要とされる薬理学的に効果的な量が得られ得ることが当業者であれば認識するであろう。
【０２２１】
ここに記載の化合物の投与は単事象、定期事象として、あるいは治療期間にわたった存在しうる。例えば、モジュレータは毎日、毎週、隔週または毎月投与され得る。
もう一つ別の例として、化合物は複数の治療期間、例えば２週間投与し、２週間投与せず、それを２回繰り返し；または３日毎に３週間にて投与され得る。当業者はこれらの計画が例示であり、他の適当な定期的方法を設計しうることを理解するであろう。急性の症状の場合、その治療期間は通常少なくとも数日であろう。特定条件で治療を数日から数週間に伸ばすことができる。例えば、治療を１週間、２週間または３週間に広げることができる。より慢性の症状の場合、数週間から数ヶ月に、あるいは１年またはそれ以上にさえ広げることができる。
【０２２２】
個々の対象についての具体的な治療的に効果的なレベルは、治療される障害および該障害の重篤性；使用される特定の化合物の活性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的健康、性別および食事；投与期間；投与経路；使用される組成物の排出割合；治療期間；使用される化合物と併用してまたは同時に使用される薬物；および医学分野にて周知の同様の因子（例えば、Koda-Kimbleら、(2004) Applied Therapeutics：The Clinical Use of Drugs, Lippincott Williams & Wilkins, ISBN 0781748453；Winter、(2003) Basic Clinical Pharmacokinetics, 4th ed., Lippincott Williams & Wilkins, ISBN 0781741475；Sharqel、(2004) Applied Biopharmaceutics & Pharmacokinetics, McGraw-Hill/Appleton & Lange, ISBN 0071375503を参照のこと）を含む、種々の因子に依存するであろう。例えば、所望の治療的作用を得るのに必要とされるレベルよりも低いレベルで組成物の用量を開始し、その用量を所望の作用が得られるまで徐々に上げることは当業者の範囲内にある。要すれば、有効な日用量は投与のために複数の用量に分割されてもよい。結果的に、単回用量の組成物はそのような量またはその約数となる量を含有し、集計して日用量となってもよい。しかし、本願発明の化合物および組成物を用いる日用量は、正当な医学的判断の範囲内で、顧問医により決定されるであろう。
【０２２３】
標的生物分子を阻害する本願発明の化合物はまた、他の治療モダリティと組み合わせて使用され得る。かくして、ここに記載の療法に加えて、標的の生物分子に連結される特定の症状に効果的であることが分かっている他の治療剤を対象に提供してもよい。ここに記載の方法による治療は、該化合物が特異的である標的生体分子に伴う疾患、障害または症状に対する通常の治療モダルティの前に、同時に、または後で実施され得る。
キット
【０２２４】
キットも提供される。かかるキットは、本願発明の組成物を、特定の実施態様において、投与用指示書を含みうる。かかるキットは、ここに記載の方法、例えば、治療方法またはスクリーニング方法の実施を容易にしうる。キットとして供給される場合、組成物の異なる成分は別々の容器に入れられ、使用直前に混合され得る。成分は、限定されるものではないが、ここに記載の１または複数の化合物、ベクター、診断試薬、アッセイ試薬、および／またはその組合せを包含する。別々に包装されているかかる成分は、要すれば、組成物を含有する１または複数の剤形を含有してもよいパックまたはディスペンサー装置にて提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックホイルを含んでもよい。成分をこのように別々に包装することで、ある場合には、該成分の活性を失うことなく、長期間の貯蔵を可能とすることができる。
【０２２５】
キットはまた、例えば、別々に包装された凍結乾燥された活性成分に添加される、滅菌水またはセイラインなどの物質を別々の容器に含んでもよい。例えば、密封されたガラスアンプルは凍結乾燥された成分を含有してもよく、別のアンプルには、滅菌水または滅菌セイラインが含められ、その各々が窒素などの不活性気体の下で包装されていてもよい。アンプルは適当な材料、例えば、ガラス、有機ポリマー、例、ポリカーボネート、ポリスチレン、セラミック、金属または試薬を入れるのに一般的に使用される他の材料からなっていてもよい。適当な容器の別の例は、アンプルと同様の物質より組み立てられてもよいボトル、およびアルミニウムまたは合金などのホイルラインドインテリアから構成されるエンベロープを含む。他の容器は、試験管、バイアル、フラスコ、ボトル、シリンジ等を含む。容器は、皮下注射針により穿刺され得るストッパーを有するボトルなどの滅菌アクセス部分を有していてもよい。他の容器は取り外しが容易な膜で分離された２つのコンパートメントでできており、膜を取り外すことにより成分の混合を可能となる。取り外し可能な膜はガラス、プラスチック、ラバー等であってもよい。
【０２２６】
特定の実施態様において、キットは教材と一緒に提供されうる。教材は紙または他の材料上に印刷されていても、および／または電子可読媒体、例えばフロッピーディスク、ミニ−ＣＤ−ＲＯＭ、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、Ｚｉｐディスク、ビデオテープ、オーディオテープ等として提供され得る。詳細な教材は該キットと物理的に一緒にされていなくてもよく、使用者はキットの製造業者または販売者により特定されるインターネットウェブサイトに導かれてもよい。
【０２２７】
ここに記載の組成物および方法は、当該分野に既知の種々の標準的方法に従って分子生物学的プロトコルを利用するものである（例えば、SambrookおよびRussel (2006) Condensed Protocols from Molecular Cloning：A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN-10：0879697717；Ausubelら(2002) Short Protocols in Molecular Biology, 5th ed., Current Protocols, ISBN-10：0471250929；SambrookおよびRussel (2001) Molecular Cloning：A Laboratory Manual, 3d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, ISBN-10：0879695773；Elhai, J.およびWolk, C. P. 1988. Methods in Enzymology 167, 747-754；Studier (2005) Protein Expr Purif. 41(1), 207-234；Gellissenら(2005) Production of Recombinant Proteins：Novel Microbial and Eukaryotic Expression Systems, Wiley-VCH, ISBN-10：3527310363；Baneyx (2004) Protein Expression Technologies, Taylor & Francis, ISBN-10：0954523253を参照のこと）。
【０２２８】
ここに記載の定義および方法は、本願発明をより詳細に定義し、当業者を本願発明の実施に導くように提供される。特記しない限り、用語は関連する分野の当業者による通常の使用に従って認識されるべきである。
【０２２９】
ある実施態様において、本願発明の特定の実施態様にて記載および特許請求するのに使用される、成分の数発現量、分子量などの特性、反応条件などは、ある場合には、「約」なる語により修飾されると理解されるべきである。ある実施態様において、「約」なる語は、一の値がその値を測定するのに利用される装置または方法に対して平均値の標準偏差を含むことを示すのに使用される。ある実施態様において、明細書の記載および添付されている特許請求の範囲に示される数値パラメータは、特定の実施態様により得られるように求められる所望の特性に依存して変化しうる近似値である。ある実施態様において、数値パラメータは、報告された有効数字の数を考慮して、四捨五入法を適用することで解釈されるべきである。本願発明の実施態様の広い範囲で示される数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に記載される数値は実施可能な限りできるだけ正確に報告されている。本願発明の実施態様にて示される数値は、必然的に、その個々の試験測定にて認められる標準偏差から生じる、ある種の誤差を含んでいるかもしれない。ここでの数値範囲の記述はその範囲内にある個々の数値に言及する簡易な方法として示されているに過ぎない。
【０２３０】
ある実施態様において、「a」および「an」および「the」および特定の実施態様を記載するのに本願明細書にて使用される同様の単語（特に特許請求の範囲における）は、特記しない限り、単数または複数の両方を含むと解釈できる。ある実施態様において、特許請求の範囲の含む、本願明細書にて使用される「or」なる語は、特記しない限り、「and／or」を意味するのに使用される。
【０２３１】
「含む」、「有する」および「包含する」なる語は、オープンエンドの連結動詞である。これら動詞の１または複数の形態または時制、例えば、「含む」、「含んでいる」、「有する」、「有している」、「包含する」および「包含している」もまたオープンエンドである。例えば、１または複数の工程を「含む」、「有する」または「包含する」方法は、これら１または複数の工程を有するものだけに限定されず、他の限定されない工程を含みうる。同様に、１または複数の特性を「含む」、「有する」または「包含する」組成物または装置は、これら１または複数の特性を有するものだけに限定されず、他の限定されない特性をも含みうる。
【０２３２】
ここに記載の方法は、本願明細書にて特記されない限りまたは明らかに相反しない限り、適当な順序で実施され得る。本願明細書に記載の特定の実施態様について提供される、いずれか、またはすべての例示、または例示的用語（例「など」）の使用は、本願発明の開示の理解を容易にするために使用されるに過ぎず、特に請求する場合を除いて、本願発明の範囲を限定するものではない。本願明細書に定義がない場合、その語は本願発明を実施するにおいて必須でない、限定する必要のない構成要素を意味するものと解釈されるべきである。
【０２３３】
本願明細書に開示されている別の要素または実施態様の基は限定するものと解釈されるべきではない。各基は、個別に、または他の基と組み合わせたものに言及され得る。
【０２３４】
本願明細書に記載の引例は本願発明の先行文献として了解されるものと解釈されるべきではない。
【０２３５】
本願発明は細部に亘って記載されているが、特許請求の範囲に記載の開示の範囲を逸脱することなく、修飾、変形および均等な態様が可能である。さらには、本願明細書に記載の実施例も、本願発明を限定するものではないことを理解すべきである。
【実施例】
【０２３６】
次に実施例を用いて本願発明を説明する。本願発明者が見出した発明に付随する実施例に開示されている方法が本願発明を実施するにおいて十分に機能を発揮することは当業者であれば理解されるはずであり、その実施のための例示的方法を構成すると考えることができる。しかしながら、当業者は、本願明細書の開示を考慮して、開示されている具体的な実施態様にて多くの変更をなすことができ、本願発明の精神および範囲を逸脱することなく同様の結果をもたらすであろう。
【０２３７】
実施例１： ＥＧＦＲ阻害アッセイ
次の実施例は、一般的なＥＧＦＲのインセルウェスタン（in-cell Western）（ＩＣＷ）スクリーニングプロトコルを記載する。特記する場合を除いて、Chenら (2005) Analytical Biochemistry 338, 136-142（出典明示により本願明細書の一部とする）の方法によるものである。
【０２３８】
細胞プレート：Ａ４３１細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５５５）を、１０％ウシ胎仔血清、１０５単位／ｍｌのｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（Invitrogen番号１５１４０１５５）および２．１ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＡＴＣＣ番号３０−２２１４）を補足したダルベッコ修飾イーグル培地（DMEM；ＡＴＣＣ番号３０−２００２）にて培養した。細胞を９６ウェル組織培養プレート（BD Falcon番号３５３９４８）に３００００細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃で５％ＣＯ２で一夜インキュベートした。化合物のプレートの各々について２つの細胞プレートを調製した。
【０２３９】
血清飢餓：化合物を添加する前に、細胞を血清飢餓させた。培地を吸引により除去し、細胞をＰＢＳ（２００μｌ／ウェル：Invitrogen 番号２００１２−０２７）で洗浄した。ＰＢＳを吸引により取り除き、１０５単位／ｍｌのｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（Invitrogen番号１５１４０１５５）および２．１ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＡＴＣＣ番号３０−２２１４）と置き換えた。細胞プレートを３７℃／５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。
【０２４０】
化合物プレート調製：試験化合物を１００％ＤＭＳＯ（Sigma番号４７２３０１−２Ｌ） に２５ｍＭの濃度で溶媒和させた。１００％ＤＭＳＯに全く可溶化でないことが判明した、２５ｍＭでの化合物を、１００％ＤＭＳＯおよびＴＦＡ（Fluka番号９１６９９）で１０ｍＭに希釈し、０.２％の最終濃度にまで添加した。４０μｌの試験化合物を９６ウェルプレート（Falcon番号３５１１９０）の適当なプレートに加えた。対照として、１０％ＤＭＳＯ中６μＭ  ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤ＰＤ１６８３９３（EMD／Calbiochem番号５１３０３３）およびＤＭＳＯ単独を種々のウェルに添加した。調製した化合物のプレートを使用前には室温で、４℃で長期間にわたって貯蔵した。
【０２４１】
化合物の希釈プレート調製：２５０μｌの１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（SigmaＡ３０５９−１０Ｇ）を補足したＤＭＥＭを９６ウェルプレートの適当なウェルに添加し、化合物の希釈プレートを調製した。マルチチャネルピペッターを用い、化合物プレートからの１.２５μｌの化合物を化合物の希釈プレオートに移した。この希釈率により、１２５μＭのアッセイにおける化合物濃度が得られるであろう。
【０２４２】
化合物の添加：飢餓培地を吸引により細胞プレートより取り除いた。マルチチャネルピペッターを用いて、化合物の希釈プレートを３回前後ピペット処理に付して混合した。５０μｌの混合、希釈した化合物を２つの細胞プレートの各々の各２列に加えた。細胞プレートを化合物と一緒に３７℃／５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。
【０２４３】
ＥＧＦの添加：２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ（Upstate番号０１−１０７）を１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを補足したＤＭＥＭ中で調製した。５０μｌの２０または０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦを、化合物を取り除くことなく、適当なウェルに添加した。化合物およびＥＧＦを３回前後ピペット処理に付すことで混合した。該ペレットを３７℃／５％ＣＯ２で１０分間インキュベートした。ある種のスクリーニングアッセイにて、シミュレーションに使用されるＥＧＦの最終濃度は６.６または１０ｎｇ／ｍｌというよりも１２.５ｎｇ／ｍｌであった。
【０２４４】
固定およびトリトン洗浄：ＥＧＦ＋化合物を吸引により除去し、１５０μｌの新たに調製された固定溶液（１ｘＰＢＳ、SigmaＰ３８１３−１０ＰＫ、および４％ホルムアルデヒド、Pierce番号２８９０８）を直ちに添加した。プレートを室温で２０分間振盪することなくインキュベートした。固定溶液を吸引により除去し、該プレートを４回各々２００μｌのトリトン洗浄溶液（１ｘＰＢＳ、SigmaＰ３８１３−１０ＰＫ、および０.１％トリトンＸ−１００、Ｔ８７８７−５０ＭＬ）で５分間緩やかに振盪しながら洗浄した。
【０２４５】
遮断およびプローブ化：最終トリトン洗浄の後に、プレートを１.５時間室温で振盪しながら１５０μｌのOdyssey Blocking Buffer（ＬＩ−ＣＯＲ番号９２７−４００００）を用いて遮断した。遮断物を吸引により除去し、５０μｌの希釈された第一Ａｂミックスを添加した。プレートを４℃で一夜緩やかに振盪しながらインキュベートした。プレートを２００μｌのＰＢＳＴ（１ｘＰＢＳ、SigmaＰ３８１３−１０ＰＫおよび０.１％Tween-20、SigmaＰ９４１６−５０ＭＬ）で各々５分間振盪しながら洗浄した。５０μｌの希釈された第二Ａｂミックスを添加し、プレートを室温で１時間振盪しながらインキュベートした。プレートを５ｘ２００μｌのＰＢＳＴと各々５分間振盪しながら洗浄した。スチャンする前に、振盪しながら５分間２００μｌのＰＢＳ（SigmaＰ３８１３−１０ＰＫ）で１回の最終洗浄を行った。
【０２４６】
第一Ａｂミックス：０.１％Tween-20（SigmaＰ９４１６−５０ＭＬ）；１／５００希釈の抗−全体ＥＧＦＲ（Invitrogen番号ＡＨＲ５０６２）；１／８００希釈の抗−ホスホＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１１７３；Cell Signalling番号４４０７）；およびOdyssey Blocking Buffer（ＬＩ−ＣＯＲ番号 ９２７−４００００）を含有した。スクリーニングアッセイは１／１００希釈の、上記した抗−ホスホＥＧＦＲＡｂよりもむしろ抗−ホスホＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０４５；Cell Signalling番号２２３７）を用いた。
【０２４７】
第二Ａｂミックス：０.２％１０％Tween-20（SigmaＰ９４１６−５０ＭＬ）；１／１２００の抗−マウスＩＲ６８０コンジュゲート（ＬＩ−ＣＯＲ ９２６−３２２２０）；１／１２００希釈の抗−ウサギＩＲ８００ＣＷコンジュゲート（ＬＩ−ＣＯＲ ９２６−３２２１１）；およびOdyssey Blocking Buffer（ＬＩ−ＣＯＲ番号９２７−４００００）を含有した。あるスクリーニングアッセイにて、第二Ａｂコンジュゲートの希釈は１／１２００よりもむしろ１／８００であった。
【０２４８】
プレートスキャンニング：プレートをLI-COR BiosciencesからのOdyssey Infrared Imaging Systemでスキャンした。フォーカスオフセットを３．５ｍｍでセットし、スキャン強度を７００チャネルで３に、８００チャネルで７にセットした。
【０２４９】
データ分析：最大％および％阻害値を以下のように計算した。７００チャネル＝全体ＥＧＦＲのシグナル（細胞数の変数の対照として使用）；８００チャネル＝リン酸化ＥＧＦＲのシグナル；８００−ＥＧＦ＝基底レベルＥＧＦＲリン酸化＋非特異的シグナル（化合物なし）；８００＋ＥＧＦ＝８００−ＥＧＦ＋ＥＧＦ依存性ＥＧＦＲ受容体リン酸化（化合物なし）；７００／８００ｃｏｍ＝７００または８００チャネルシグナル（化合物を含む）。％最大＝{［（８００ｃｏｍ／７００ｃｏｍ）-（８００−ＥＧＦ／７００−ＥＧＦ）］／［（８００＋ＥＧＦ／７００＋ＥＧＦ）-（８００−ＥＧＦ／７００−ＥＧＦ）］}ｘ１００％。％阻害＝１００％−（％最大）。
【０２５０】
実施例２：ＭＴＴアッセイ
次の実施例はＭＴＴ細胞増殖アッセイを記載する。ＭＴＴ細胞増殖アッセイは、上記したＩＣＷスクリーニングプロトコルをベースに、第一細胞から活性化合物を評価するための第二スクリーンとして供された。ＭＴＴアッセイを用いて、生存性を介する毒性および増殖作用を評価し、上皮癌Ａ４３１細胞株（American Type Culture Collections（ＡＴＣＣ）カタログ番号ＣＲＬ−１５５）および化合物で処理し、インキュベートした３日後に健康なウシ腎臓より誘導されるＭＤＢＫ株（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＣＬ−２２）の増殖を比較する。
【０２５１】
ＭＴＴ細胞増殖アッセイは、生存細胞のミトコンドリアにより産生される、テトラゾリウム塩ＭＴＴ（３−（４、５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）の不溶性ホルマザン結晶への還元を測定する比色分析アッセイシステムである。細胞をＭＴＴと一緒にインキュベーションした後、形成されたホルマザン結晶は界面活性剤またはＤＭＳＯ（ＡＣＳ試薬等級、Sigmaカタログ番号４７２３０１）を添加することで可溶化される。ついで、色相は分光光度手段により定量され得る。薬物過敏性、増殖因子に対する細胞傷害応答および細胞活性化にも、該方法が適用される。テトラゾリウム塩の還元は、今では、放射分析試験に対する安全かつ正確な代替法として理解されている。
【０２５２】
方法は、特に注記がなければ、ＭＴＴ細胞増殖アッセイ、ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−１０１０Ｋの製造指示書に従う。
【０２５３】
ＭＴＴアッセイは、 各々、１１種の化合物および１の標体を、５つの濃度と、２．５倍希釈で、用量応答曲線にて試験した。各細胞プレートで２つのレプリケートおよび２つのデュプリケートプレートで、各細胞株にて各濃度で４つの個々のレプリケートを得た。濃度を１００％ＤＭＳＯにて２５ｍＭのストック溶液より希釈した。使用した最初の濃度および試験した最終濃度は次のとおりであった：２０ｍＭから１００μＭ；８ｍＭから４０μＭ；３.２ｍＭから１６μＭ；１.３ｍＭから６.４μＭ；および０.５１ｍＭから２.６μＭ。
【０２５４】
１２個の９６ウェルプレートにて各細胞株をプレート培養した。継代プロトコルのように、細胞を取り除き、血球計にて計数し、標準成長培地に再懸濁させ、マルチチャネルピペッターを用いてプレートに入れることにより、プレート培養を行った。
【０２５５】
標体：ＡＤ４−１０２８９を用量応答標体として用い、試験化合物よりも低い１の濃度；４０、１６、６.４、２.６および１.０μＭの最終濃度で行った。１０２８９を１の試験化合物の代わりに同じ数の反復を行った。１６μｌの２５ｍＭストック＋３４μｌのＤＭＳＯ＝８ｍＭ出発濃度、および同じプレートにて試験化合物と同様にして連続希釈した。これらの濃度を各プレートで用いて１００％とし、Ａ４３１にて１００％より低い活性とし、その一方でまたＤＭＢＫ細胞にて５０％および０活性より低い活性とした。各濃度の２回の反復を各細胞プレートに対して行った。すべての化合物の添加および細胞の処理は、層流無菌フードの下で無菌技術を用いて行った。
【０２５６】
対照：処理媒体中０.５％ＤＭＳＯを対照として用いた。 該アッセイでは、顕著な増殖の差異はなく、１.０％までのＤＭＳＯを許容することが明らかにされた。
【０２５７】
ＭＴＴ色素（Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide、Sigmaカタログ番号Ｍ５６５５）ストックを多量に調製し、４℃で使用まで貯蔵した：５ｍｇ／ｍｌ滅菌ＰＤＳ、光遮断。４μｌのこのストック／１００μｌの処理媒体／ウェルを用いた。１３０ｍｌのＭＴＴ／処理を新たに調製し、１２のプレートを着色した；１２４.８ｍｌの処理媒体＋５２２ｍｌの ＭＴＴストック。
【０２５８】
細胞（９５％密集成長したフラスコより採取）を７５００細胞／ウェルの密度でプレート培養した。プレートを、処理の前に、処理日＝０日目で、一夜インキュベートした。最終の吸引の後に細胞を室温で乾燥させる時間を最小にするために、細胞を洗浄する前に化合物の処理を調製した。化合物を１００％ＤＭＳＯにて９６ウェルのポリプロピレンプレートにて希釈した：４０μｌの２５ｍＭストック＋１０μｌのＤＭＳＯ＝２０ｍＭ；２０μｌの２０ｍＭ＋３０μｌのＤＭＳＯ＝８ｍＭ；２０μｌの８ｍＭ＋３０μｌのＤＭＳＯ＝３.２ｍＭ；２０μｌの３.２ｍＭ＋３０μｌのＤＭＳＯ＝１.３ｍＭ；２０μｌの１.３ｍＭ＋３０μｌのＤＭＳＯ＝０.５１ｍＭ。
【０２５９】
５.０μｌ／ｍｌを２.２ ｍｌの滅菌した処理培地に加え、深いウェルプレート＝０.５％ＤＭＳＯ最終。１０μｌの各ＤＭＳＯ濃度を２.０ｍｌの処理媒体に加え、ついで１２００μｌのマルチチャネルピペッターを用いて混合した。細胞プレートを深いウェルプレートより処理した。処理媒体は０.５％ＦＢＳおよび標準添加物を含有する標準増殖培地であった。このＦＢＳ濃度の低下は細胞での遅い増殖速度を可能とした。各細胞株のプレート１にて、標体ＡＤ４−１０２８９をレーン３にて試験した（速度について上記を参照のこと）。
【０２６０】
媒体を細胞プレートより吸引し、２００μｌ／ウェルの滅菌ＰＢＳで洗浄した。ＰＢＳ洗浄液を吸引し、細胞プレートをウェル当たり２００μｌの化合物／処理媒体で処理し、３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。
【０２６１】
採取する前に、肉眼観察を倒立顕微鏡の下で行った。増殖媒体を吸引し；逆ＭＴＴ色素／１００μｌ処理媒体を添加し；およびプレートを３７℃で１時間インキュベートすることでプレートを採取した。１００μｌ／ウェルのＤＭＳＯを加え、ついでBellco plate shaker上で５分間、４．５にセットして振盪させた。
【０２６２】
プレートをTecan Sunrize UV plate readerにて５６０ｎｍにて読み取った。セッティング：読み取りモード、Outside Normal ２秒；Shake settle time ３秒。データは個々のプレートより由来の対照値を用い、該プレートについて計算される阻害％として報告される。
【０２６３】
実施例３：ＥＧＦＲ阻害についてファーマコフォアモデルより同定された化合物の試験
種々のファーマコフォアモデルを表すと同定された化合物を２５μＭでＥＧＦＲを阻害する能力について試験した。
【０２６４】
ＡＤ４−化合物がファーマコフォアモデルを用いて同定され（実施例３を参照）、ついでセツキシマブのＣＤＲを限定することにより認識されるＥＧＦＲ（配列番号：１）の結合部位と結合される。ついで、ＡＤ４−化合物による表皮増殖因子の結合の阻害を測定した（NovaScreen BioSciences、Hanover、MD）。ＥＧＦ結合の阻害を２５μＭ濃度で測定した。
【０２６５】
阻害剤アッセイの場合、ＫＤ（結合アフィニティ）は１．０４ｎＭであり、その一方でＢｍａｘ（受容体の数）は４３．０ｆｍｏｌ（湿重量）であった。受容体源はラット肝膜であった。放射性リガンドは０．３６ｎＭの最終リガンド濃度の［１２５Ｉ］ＥＧＦ（１５０−２００Ｃｉ／μｇ）であった。非特異的決定因子をＥＧＦ−［１００ｎＭ］として用いた。標準化合物および正対照はＥＧＦであった。反応は０．１％ＢＳＡを含有する１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７.４）にて２５℃で６０分間実施された。ガラスファイバー濾過での急速真空濾過により反応を停止させた。フィルターに捕獲された放射能を測定し、対照値と比較し、試験化合物とＥＧＦ結合部位との相互作用を確認した。ＥＧＦ阻害剤アッセイは、例えば、Mukku (1984) J. Biol. Chem. 259, 6543-6546；Duhら(1990) World J. Surgery 14, 410-418；Lokeshwarら (1989) J. Biol. Chem. 264(32), 19318-19326より修飾された。
【０２６６】
実施例４：不活性なＥＧＦＲ結晶構造からの標的阻害についてファーマコフォアの生成
次の実施例は標的蛋白結晶構造の分析およびＥＧＦＲ阻害についてのファーマコフォアの生成を記載する。この方法により認められるリガンドはＥＧＦＲのＤｏｍＩＩおよびＤｏｍＩＶからの残基と相互作用し、それにより不活性な形態の受容体が得られる。
【０２６７】
ＥＧＦＲの不活性な構造の蛋白結晶構造が、Fergusonら（Ferguson, K.M.、Berger, M.B.、Mendrola, J.M.、Cho, H.、Leahy, D.J.、Lemmon, M.A.  (2003) EGF activates its receptor by removing interactions that auto-inhibit ectodomain dimerization  Mol. Cell 11： 507-517）にて報告されている。ＭＯＥソフトウェアのサイト・ファインダー・モジュールを用いて結合部位を決定した。ドメインＩＩからの残基のインターフェースからなる（２３残基、Ｌｙｓ２２７、Ｐｈｅ２２８、Ｌｙｓ ２３５、Ａｓｐ２３６、Ｔｈｒ２３７、Ｃｙｓ２３８、Ｐｒｏ２３９、Ｐｒｏ２４０、Ｌｅｕ２４１、Ｍｅｔ２４２、Ｔｙｒ２４４、Ｔｙｒ２４９、Ｇｌｎ２５０、Ｍｅt２５１、 Ｇｌｙ２５７、Ｌｙｓ２５８、Ｔｙｒ２５９、Ｓｅｒ２６０、Ｃｙｓ２６５、Ｖａｌ２７５、Ｈｉｓ２７８、Ｇｌｙ２７９およびＳｅｒ２８０）およびドメインＩＶ（１６残基、Ａｒｇ５４８、Ｇｌｙ５４９、Ｐｒｏ５５０,Ａｓｐ５５１、Ａｓｎ５５２、Ａｓｐ５６１、Ｈｉｓ５６４、Ｖａｌ５６６、Ｔｈｒ５６８、Ｃｙｓ５６９、Ｐｒｏ５７０、Ａｌａ５７１、Ｇｌｙ５７２、Ｖａｌ５７３、Ｍｅｔ５７４およびＬｅｕ５８０）（例えば図１を参照）。
【０２６８】
Chemical Computing Group（ＣＣＧ）（Montreal、Quebec、Canada）からのMolecular Operating Environment（ＭＯＥ）ソフトウェアのファーマコフォア特性の作成およびファーマコフォアの仮想スクリーニングモジュールを下記のファーマコフォアの定義にて使用した。ＭＯＥのファーマコフォアのアプリケーションは、受容体部位でのリガンドの認識およびその生物学的活性に直接関連するリガンド中の一連の構造的特性であるファーマコフォアの一般的概念を使用する。
【０２６９】
ＭＯＥにおいて、ファーマコフォアの構造的特性は間隔を介して標識された点で示されうる。各リガンドには、リガンドファーマコフォアに起因する構造的特性のセットである、注釈を付す。注釈を付されたリガンドのデータベースは、ファーマコフォアを仮定とするクエリーでサーチされ得る。かかるサーチの結果がクエリーのファーマコフォア特性をサーチされたデータベースのリガンドにあるファーマコフォア特性と調整して並べる一連の適合である。一連のＭＯＥソフトウェアは、相互作用的な修飾（位置、半径ならびにファーマコフォアのクエリーの他の特徴は相互作用的に調整され得る）；全体適合（リガンドとクエリーの可能性のあるすべての適合を体系的に試験する）；部分適合（サーチアルゴリズムはクエリーの一部とのみ適合するリガンドを見つけることができる）；および容量濾過（クエリーは制限を加えることで適合した一連の容量の形態のリガンドの形状に焦点を当てることができる）を提供する。
【０２７０】
この例のファーマコフォア特性はＭＯＥにてPharmacophore Query Editorを用いて作成された。水素結合したドナー特性はすべて半径１．２Åの球体で、紫色に着色される。水素結合したアクセプター特性はすべて半径１．２Åの球体で、青緑色に着色される。芳香族特性はすべて半径１．２Åの球体で、緑色に着色される。アクセプター−アニオンを合わせたファーマコフォア特性はすべて半径１．２Åの球体で、灰色に着色される。ドナー−アクセプターを合わせた特性はすべて半径１．２Åの球体で、桃色に着色される。ドナー−カチオンを合わせた特性はすべて半径１．２Åの球体で、赤色に着色される。ドナー、アクセプター、芳香族、酸−アニオンの組み合わせ、およびドナー−アクセプターの組み合わせの方向性の特性はすべて半径１．５Åの球体で、ドナーで暗灰色に、アクセプターで暗青緑色に、芳香族で暗緑色に、酸−アニオンの組み合わせで暗青緑色に、およびドナー−アクセプターの組み合わせで暗灰色に着色される。ファーマコフォアクエリーで絶対に必要な特性は、そのリガンドがヒットするように、ファーマコフォアクエリーがリガンドにて含まれていなければならないことである。
【０２７１】
受容体の３Ｄ原子座標を用いて接触統計を計算し、好ましくは疎水性および親水性リガンド原子の位置を統計的方法を用いて計算した。この方法を用いると、疎水性−芳香族およびＨ−結合の特性が、個々のファーマコフォアの定義に示されるように、プレースされる。
ＭＯＥプログラムにて接触統計学およびＭＦＳＳより誘導される構造的情報を用い、同じような位置に同様の原子を有する小分子を同定するのに使用されるファーマコフォアモデルを構築した。
【０２７２】
MultiFragment Search（ＭＦＳＳ）は、本質的に、比較的多数のフラグメントのコピー（例、エタンの２００コピー）を一の受容体の活性部位に入れる。フラグメントは無作為に活性部位の原子の周辺に置かれ、互いに相互作用しないと仮定し；フラグメントが重なることに関心は支払われない。次に、特別なエネルギー最小限化プロトコルを用いて初期の置換を精密化する：受容体の原子はフラグメントの平均的な応力を感知し、その一方で各フラグメントは、他のフラグメントではなく、受容体のすべての応力を感知する。この方法を用いて、疎水性、Ｈ−結合のドナー、アクセプターおよびアニオンおよびカチオンをＭＯＥファーマコフォア特性として用いるための受容体内にある好ましい位置に置くことが可能であった。
【０２７３】
ＭＯＥソフトウェアにて提供される方法は、ＡＤ４−１５０５のヒットに相当するファーマコフォア特性を設置するのに使用される。これらは上記した接触的統計学およびＭＦＳＳである。接触統計学およびＭＦＳＳのアルゴリズムは共に、ＥＧＦｒの不活性化形態のドメインＩＩ−ドメインＩＶ界面にある結合部位に適用された（１ＮＱＬ.ｐｄｂ、上記した図面を参照）。
【０２７４】
上記したドメインＩＩおよびドメインＩＶ界面での結合部位の受容体残渣を選択し、ＭＯＥにてファーマコフォアアクエリーエディターから「ユニオン」を選択することで排斥される体積をＭＯＥにて生成した。排斥される体積は、リガンド原子が受容体との衝突を回避するために排除されなければならない場合の、空間的位置による。
【０２７５】
以下に記載の個々のファーマコフォアの定義において、略語は次のとおりであった：Ｆ＝ファーマコフォア特性；Ｄｏｎ＝ドナー、Ａｃｃ＝アクセプター、Ａｎｉ＝アニオン、Ｃａｔ＝カチオン、Ａｃｃ＆Ａｎｉ＝アクセプターおよびアニオン、Ｄｏｎ＆Ｃａｔ＝ドナーおよびカチオン、Ｄｏｎ＆ＡＣＣ＝ドナーおよびアクセプター、Ａｒｏ＝芳香族、Ｈｙｄ＝疎水性物質。
【０２７６】
ファーマコフォアモデル・ファーム−１ｎｑｌ−ｇｌｕｅ−５（表６および表７；図２を参照）はＡＤ４−１５０５のヒットを与えた。これは部分適合モデルである。リガンドは少なくとも６のファーマコフォア特性と適合しなければならない。
【０２７７】
以下に記載の個々のファーマコフォアの定義において、略語は次のとおりであった：Ｆ＝ファーマコフォア特性；Ｄｏｎ＝ドナー、Ａｃｃ＝アクセプター、Ａｎｉ＝アニオン、Ｃａｔ＝カチオン、Ａｃｃ＆Ａｎｉ＝アクセプターおよびアニオン、Ｄｏｎ＆Ｃａｔ＝ドナーおよびカチオン、Ｄｏｎ＆ＡＣＣ＝ドナーおよびアクセプター、Ａｒｏ＝芳香族、Ｈｙｄ＝疎水性物質。
表６
【表２７】
2013516479.tif 000046
表７：ファーマコフォア・ファーム−１ｎｑｌ−Ｇｌｕｅ−５の特性の直交および球面座標
【表２８】
2013516479.tif 000047
【０２７８】
実施例５：リガンドの不活性ＥＧＦＲ蛋白とのドッキングおよびスコアリング
標的蛋白であるＥＧＦｒ（ＰＤＢ受入番号１ＮＱＬ）の不活性な折り畳まれた配座とのドッキングのために選択される化合物は、ＭＯＥモデリングソフトウェアにて生成されるファーマコフォアモデルと協調することが判明した。これらの化合物はＭＯＥデータフォーマットにて得られた。これらの化合物の３次元原子座標を、水素を添加することなく、ＭＯＥデータベースウィンドにおいてエクスポートコマンドを用いて、構造データフォーマット（＊ｓｄｆ）ファイルに書いた。
【０２７９】
次に、MaestroモデリングソフトウェアのLigPrepソフトウェアモジュール（Schrodinger LLC、NY、NY）を利用し、ドッキングのための化合物を調製した。＊ｓｄｆファイルをLipPrepを用いてMaestroフォーマットに変換した。ついで、水素を添加し、中和された基を充填した。７.０＋／−１.０ｐＨ単位のリガンドについてのイオン化状態を生成した。この後で、必要ならば、互変異性体を生成し、別のキラリティを生成し、低エネルギーの環配座異性体を生成した。つづいて、問題の構造物を取り出し、MacroModelソフトウェアモジュールを用いて得られたリガンドでエネルギーが最小となるようにした。最後に、Maestroファイル（＊ｍａｅ）はドッキングのために was written of the ligands which were now ready for docking. これらの工程はすべてSchrodinger,LLCにより供給されるパイソンスクリプトを介して自動的に操作された。
【０２８０】
次に蛋白調製を記載する。不活性な状態のＥＧＦｒの蛋白結晶構造（１ＮＱＬ．ＰＢＤ）をＰＤＢフォーマットのMaestroに取り込んだ。水素を加え、不完全な残基などの誤りを修正した。蛋白構造を金属イオンおよびコファクターについてチェックした。必要ならば帯電および原子の型をメタルイオンおよびコファクターについてセットした。要すれば、リガンドの結合次数および形式電荷を調節した。ＭＯＥにより、Maestro（Glide）にてファーマコフォアでヒットすることが判明した、一つであるリガンド、ＺＩＮＣ３３０４８０２をピッキングすることで、結合部位が決定された。該プログラムにより、ピッキングされたリガンドの重心を決定し、２０Åのボックスであって、該ボックスの中心にリガンドの重心をデフォルト設定したボックスを描く。該ボックスはドッキングされるリガンドについての結合部位であった。Glideにて自動化されている蛋白調製の容易性は、２つの構成要素、調製と精密化とからなる。調製の構成要素は水素を添加し、結合部位の近辺になく、塩橋に関係しない側鎖を中和することであった。精密化は、その要素として、側鎖のヒドロキシル基を再度方向付け、立体衝突の可能性を軽減し、共結晶化される複合体の抑制を最小とするために実施された。
【０２８１】
次に受容体の格子生成を記載する。Glideは１または複数のリガンド分子と受容体分子、通常は、蛋白の間の好ましい相互作用をサーチする。受容体の形状および特性は、水素結合、クーロン力（すなわち、電荷−電荷）相互作用、疎水性相互作用、およびリガンドと蛋白との静電的衝突を含む、数種の異なる場により格子上に現れる。第一の工程にて、受容体が決定されなければならない。このことはリガンドをピッキングすることでなされた。該構造物のピッキングされていない部分が受容体であった。リガンドは格子計算に含まれないが、上記したように結合部位を定めるのに使用された。受容体の非極性原子のスケーリングはこのドッキング操作に含まれなかった。格子それ自体は境界ボックスの空間の範囲内で計算された。これは上記のボックスであり、リガンド原子のすべてがこのボックス内に含まれなければならない。ファーマコフォア制限は使用されなかった。というのもGlideの超正確性スコアリング機能はこれらの制限なしでも優れた機能を発揮するからである。
【０２８２】
Glideを使用するために、各リガンドは単一分子でなければならず、その一方で受容体は１個より多くの分子、例えば、蛋白およびコファクターを含んでもよい。Glideは固定した、または柔軟なドッキングモードで行われうる：後者は自動的に各インプットリガンドのための配座を生成する。リガンドの受容体に対する位置と配向性の組み合わせは、その柔軟なドッキングの配座と一緒になって、リガンドポーズと称される。すべてのドッキング操作は柔軟なドッキングモードを用いて行われる。Glideが生成する、リガンドポーズは、リガンドの受容体との相互作用を評価する一連の階層フィルターを通過する。最初のフィルターはリガンドの所定の活性部位との空間的適合を試験し、格子を基礎とする方法を用いてリガンド−受容体の相互作用の相補性を試験する。これらの初期のスクリーンを通過するポーズはアルゴリズムの最終段階に入り、それはＯＰＬＳ−ＡＡの非結合リガンド−受容体の相互作用のエネルギーに接近する格子の評価および最小限化を含む。ついで、最終スコアリングはエネルギー最小限化ポーズに実施される。デフォルトでは、Schroedinger   プロプライタリーGlideScore複数のリガンドのスコアリング機能を用い、ポーズを評点化する。GlideScoreはスコアリング機能として選択されるならば、次に複合的E-モデルスコアを用いて各リガンドのポーズをランク付けし、該ポーズを使用者に報告されるように選択する。E-モデルはGlideScore、非結合相互作用エネルギー、および、柔軟なドッキングについて、生成されたリガンド配座の過剰内部エネルギーを合わせた。配座柔軟性は、広い配座のサーチによりGlideにて取り扱われており、不適当な立体配座、例えば長期内部水素結合を有する配座を迅速に排除する発見的スクリーンにより増補される。
【０２８３】
この例のドッキング操作にて用いられるセッティングは次のとおりである。Gridファイルを読み込んだ。超正確性（ＸＰ）スコアリング機能を用いた。配座柔軟性を用いてドッキングした。初期Glideスクリーンのための５０００ポーズ／リガンドを保持した（デフォルト）。初期のポーズを維持するためのスコアリングウィンドウは１００.０（デフォルト）であった。エネルギーを最小にするために最高の８００ポーズ／リガンドを保持した（デフォルト）。エネルギーを最小とするため、２．０の距離依存性誘電定数を用い、最大数のコンジュゲート勾配工程は１００（デフォルト）であった。ついで、リガンドファイルをロードした。１２０を越える原子を有し、および／または２０を越える回転可能な結合を有する分子はドッキングされなかった（デフォルト）。０．１５より小さな部分チャージを有するリガンド原子のファンデルワールス半径は０．８０倍で縮小した。これは受容体柔軟性を真似て行われた。制限および類似性は使用されなかった。クーロン＋ファンデルワールスのエネルギーが０．０より大きいポーズは除外された。各分子についてのポーズが配座的に異なることを保証するために、ＲＭＳ偏差が０．５より小さく、および／または最大原子転位が１.３Åであるポーズは排除した。
【０２８４】
以下はGlideスコアリングを記載する。各リガンドについての最良のドッキング構造の選択は、エネルギー格子スコア、GlideScoreにより予測される結合アフィニティ、および（柔軟ドッキングでは）配座−サーチアルゴリズムを対象とするのに使用される可能性のあるモデルの内部歪みエネルギーを合わせる、モデルエネルギースコア（Emodel）を用いてなされた。Glideはまた、空間的に構築された、チャージ−ダイポールおよびダイポール−ダイポール相互作用を犠牲にして、過度に報酬のよいチャージ−チャージ相互作用を回避するのに処方された、クーロン−ファンデルワールス相互作用エネルギースコア（ＣｖｄＷ）をコンピュータ処理した。このスコアは「生の」クーロン−ファンデルワールス相互作用エネルギーである異なるリガンドの結合アフィニティと比較するのにより適する。最終データの後処理において、コンピュータ処理されたGlideScoreおよび「修飾された」クーロン−ファンデルワールススコア値を組み合わせ、データベーススクリーニングにて改善された濃縮係数を助成しうる複合的スコアを付与しうる。Glideスコアの数学的形態は：
【０２８５】
Gスコア＝０.０６５*EvdW + ０.１３０*Coul + Lipo + Hbond +Metal + BuryP + RotB + Site
【０２８６】
ここで、EvdWはファンデルワールスエネルギー（金属、カルボキシレートおよびグニジニウムなどの形式電荷を有する基で、ネットイオン電荷を減じることで計算される）であり；Coulはクーロンエネルギー（金属、カルボキシレートおよびグニジニウムなどの形式電荷を有する基で、ネットイオン電荷を減じることで計算される）であり；Lipoは親油性接触（好ましい疎水的相互作用のリワード）であり；HBondは水素結合（ドナーおよびアクセプターが中性であるか、一方が中性で他方が帯電しているか、または両方が帯電しているかどうかに依存して、重量が異なる成分に分けられる）であり；Metalは金属結合（アニオン性アクセプター原子が含まれている場合のみの相互作用であり；アポ蛋白にある金属の電荷が正である場合、アニオンリガンドが含まれていることが好ましく；正味の電荷が０である場合、抑制されることが好ましい）であり；BuryPは埋設された極性基に対するペナルティーであり；RotBは回転可能な結合を固定することに対するペナルティーであり；およびSiteは活性部位にある極性相互作用（疎水性領域にて非水素結合であるが、極性原子が報酬される）である。
【０２８７】
次はスクリーンされた仮想化合物ライブラリーの生成を記載する。市販の化合物のフリーな仮想のデータベースからのリード類化合物をＺＩＮＣデータベース（IrwinおよびShoichet (2005) J. Chem. Inf. Model. 45(1), 177-182）から構造データフォーマット（sdf、Molecular Design Limited）にダウンロードした。リード類データベースは約８９００００化合物からなり、３３種のセグメントに分類される。これはＭＯＥによりスクリーニングするための配座異性体のデータベースを生成するのに使用された。ついで、水素を添加した。ファーマコフォアサーチの場合、低エネルギー配座異性体のデータベースが生成されなければならない。配座取り込みコマンドを上記したｓｄｆファイルに適用した。配座異性体が生成された後、配座異性体のデータベースを前処理に付す。特性の注釈と称される、この工程は、各分子／配座およびその幾何学的関係におけるファーマコフォアの特性の型を決定する。ついで、これをクエリーと比較し、所定の耐性の範囲内でクエリーと適合するそれらの分子／配座をヒットとして供した。
【０２８８】
上記した方法に従って蛋白ＥＧＦＲの１ＮＱＬ．ＰＤＢ結晶構造から同定されるファーマコフォアに対するＺＩＮＣデータベースからの化合物を分析し、化合物ＡＤ４−１５０５を同定した。
【化１８】
2013516479.tif 000048
ＡＤ４−１５０５、式（１）
【０２８９】
次の表中のＡＤ４−１５０５類化合物は、構造の類似性をサーチして同定され、１ＮＱＬ．ＰＤＢ結晶部位にドッキングされてそのGlideおよびEmodelスコアを得た。
【０２９０】
表８の化合物はＡＤ４−１５０５の構造の類似性をサーチして同定され、１ＮＱＬ．ＰＤＢ結晶部位にドッキングされてそのGlideおよびEmodelスコアを得た。また、表８にはＩＣＷアッセイおよびＭＴＴアッセイの結果が記載される（実施例１、実施例２、実施例５を参照）。
表８：ＡＤ４−１５０５類化合物について、Glideスコア、E−Modelスコア、ＩＣＷアッセイ、およびＭＴＴアッセイの結果
【表２９】
2013516479.tif 000049
【表３０】
2013516479.tif 000050
【表３１】
2013516479.tif 000051
【表３２】
2013516479.tif 000052
【表３３】
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【表３４】
2013516479.tif 000054
【表３５】
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【表３６】
2013516479.tif 000056
【表３７】
2013516479.tif 000057
【表３８】
2013516479.tif 000058
【表３９】
2013516479.tif 000059
【表４０】
2013516479.tif 000060
【表４１】
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【表４２】
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【表４３】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【表４７】
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【表４８】
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【表４９】
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【表５０】
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【表５１】
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【表５２】
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【表５３】
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【表５４】
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【表５５】
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【表５６】
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【表５７】
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【表５８】
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【表５９】
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【表６０】
2013516479.tif 000080
【０２９１】
ＡＤ４−１５０５化合物の、ＡＤ４−１５０５類化合物にドッキングされたポーズの二元表示を生成した。化合物ＡＤ４−１５０５のＥＧＦＲへのドッキングが、例えば、図３Ａに記載される。化合物ＡＤ４−１０９６３（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲへのドッキングが、例えば、図３Ｂに記載される。化合物ＡＤ４−１０９６１（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲへのドッキングが、例えば、図３Ｃに記載される。化合物ＡＤ４−１０９４５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲへのドッキングが、例えば、図３Ｄに記載される。化合物ＡＤ４−１０３１５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲへのドッキングは、例えば、図３Ｅに記載される。化合物ＡＤ４−１０９６５（ＡＤ４−１５０５類化合物）のＥＧＦＲへのドッキングは、例えば、図３Ｆに記載される。
【０２９２】
実施例６：コンビナトリアル実験
ここに開示される種々の化合物の、細胞増殖性アッセイ（ＭＴＴアッセイ）にてＥＧＦ受容体の機能を阻害することが分かっている数種の化合物との相乗的効果を評価する実験が開始された。これらの化合物はタルセバ、タイケルブ（ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２チロシンキナーゼの非選択性阻害剤）、イレッサ（ＥＧＦＲキナーゼの選択的阻害剤）およびエルビタックスに相補的なマウス抗体（クローン２２５；ＥＧＦのＥＧＦ受容体との結合を阻害する）を包含する。この仮定の根拠は、ＡＤ４化合物がＥＧＦＲ抗体、エルビタックスとは異なる部位と相互作用し、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、タイケルブ、イレッサまたはタルセバとは異なる作用機序を有するとの考えに基づくものである。
【０２９３】
特記した場合を除き、方法は実施例に従う。
【０２９４】
既知のＥＧＦＲ阻害剤、タイケルブ（ＡＤ４−０００３）、イレッサ（ＡＤ４−０００４）、タルセバ（ＡＤ４−０００５）およびクローン２２５（エルビタックスを誘導）をＡＤ４化合物の固定濃度の不在または存在下で滴定した。ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤およびＡＤ４ 化合物を必要ならば１００％ＤＭＳＯ（ＡＤ４ １０３８１についてＤＭＳＯ＋０.２％ＴＦＡ）にて予め希釈し、ＤＭＥＭ＋ＢＳＡへの１／２００希釈で望ましい２ｘ最終濃度とした。クローン２２５を、予備希釈をＤＭＳＯよりもＤＭＥＭ＋ＢＳＡにて行う以外、同様に希釈した。ＥＧＦＲ阻害剤およびＡＤ４化合物の希釈体を９６ウェルプレートにて１：１で混合した。ついで、５０μｌの混合物を細胞プレートに添加した。
【０２９５】
クローン２２５の組み合わせ実験の場合、クローン２２５（Lab Vision／Thermo Scientific；番号ＭＳ−２６９）を１、０.５、 ０.２５、 ０.１２５、 ０.０６２５および０ μｇ／ｍｌの濃度で試験した。刺激のために使用されたＥＧＦの濃度は１０ｎｇ／ｍｌであった。タルセバの組み合わせ実験の場合、タルセバを１５６、６３、２５、１０、４および０ｎＭの濃度で試験した。刺激のために用いられたＥＧＦ濃度は５ｎｇ／ｍｌであった。タイケルブの組み合わせ実験では、タイケルブは７８、３１.２５、１２.５、５、２および０ｎＭの濃度で試験された。刺激のために用いられるＥＧＦの濃度は５ｎｇ／ｍｌであった。イレッサの組み合わせ実験の場合、イレッサは１５６、６３、２５、１０、４および０ｎＭの濃度で試験された。刺激のために使用されたＥＧＦ濃度は５ｎｇ／ｍｌであった。
【０２９６】
各実験に使用されるＡＤ４化合物の濃度はグラフおよびデータ表にて提供されている。インジゲータ曲線の左側へのシフトは、ＡＤ４−化合物の効能の増加を示す。
【０２９７】
これらの実験にて、単独または固定された一定割合での組み合わせでの、ＡＤ４化合物および既知の化合物（例、タイケルブ）を、ＭＴＴアッセイにて細胞増殖を阻害するその能力について評価した。これらの実験から、以下の値：ＡＤ４化合物単独について、タイケルブ（または他の試験化合物）単独について、および組み合わされる各化合物についてのＩＣ５０値；拮抗作用または相乗的作用の程度を反映する、組み合わせ指数（ＣＩ）（以下の表９を参照）；および相乗的組み合わせでの薬物の用量が各薬物を単独で取得した場合と比べて所定の効果レベルでどのくらい減少するかの指数である、用量減少指数（ＤＲＩ）が計算された。。
表９：組み合わせ指数
【表６１】
2013516479.tif 000081
【０２９８】
結果は次のことを示した。一連のＡＤ４−ファルマ（Pharma）化合物はタイケルブ、イレッサおよびエルビタックスとの相乗的作用を惹起し、細胞増殖アッセイにてそれらの作用を強化する。これらの相乗的作用は用量減少指数、組み合わせ指数および用量応答曲線のシフトにおける有意な変化により明らかにされた。
【０２９９】
多くの化合物の作用は、その作用が化合物の濃度の増加と共に大きくなるため、正の協同性があるようである。最大の正の協同性を示した化合物は、一般に、高いＤＲＩ値を示した。最大の正の協同性を示す化合物のいくつかはまた、低ＣＩ値により明らかにされるように、相乗的作用を示す。イレッサおよびタルセバ、ＥＧＦＲキナーゼのもう一つ別の選択的阻害剤はタイケルブとの相乗的作用を惹起しなかった。同じ標的で作用する化合物（すなわち、ＥＧＦＲキナーゼ）は相乗的でなかった。
【０３００】
用量応答曲線のシフトの一例が図４に図示されており、ＡＤ４−１０６２８はタイケルブおよびイレッサの両方についての用量応答曲線にて左側シフト（より高い効能）を生成した。該効果は化合物のより高い濃度でより明らかであり、正の協同作用が化合物の作用に関与している可能性のあることを示す。
【０３０１】
より強力ないくつかの化合物の結果を表１０にて要約する。ＡＤ４−１０６２８、ＡＤ４−１５０５およびＡＤ４−１１５１１は、タイケルブの用量応答曲線にて左側シフト（すなわち、より高い効能）をもたらし、非常に高いＤＲＩ値を示す。ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤についての用量応答曲線にて有意なシフトが得られているが、該ＡＤ４化合物ではより高い濃度でより高い段階にある作用が観察されないため、これらの作用はＩＣ５０値（５０％阻害）での有意なシフトに変換されない。
表１０：５０％作用分析実験の要約
【表６２】
2013516479.tif 000082
【０３０２】
ＤＲＩ値を、試験化合物のタイケルブに対する作用について、ならびにタイケルブの試験化合物に対する作用について評価した。一般に、大部分の化合物は、高ＤＲＩで示されるように、タイケルブの作用を強化し、それに対してタイケルブは、通常、試験化合物に対して最小作用を有した。結果として、報告されているＤＲＩは試験化合物のタイケルブに対する作用についてのものである。このことは、最良には、ＤＲＩをＦａの関数として、または５％から９７％の範囲にある％作用として、プロットすることにより観察され得る（例、図５を参照）。ＡＤ４−１０６２８はタイケルブの活性に対して有意な作用を有し、それは活性レベル（または用量）が高くなればなるほど大きくなるのに対して、タイケルブはＡＤ４−１０６２８に対してあまり効果を有しない（例、図５を参照）。表１０に示されるように、ＡＤ４−１０６２８、ＡＤ４−１５０５およびＡＤ４−１１５１１はすべて、タイケルブおよびイレッサの両方に対して極めて高いＤＲＩをもたらした。
【０３０３】
化合物を合わせた効果が５０％、９０％、９５％および９７％（すなわち、ＥＤ５０、ＥＤ９０、ＥＤ９５およびＥＤ９７）の細胞増殖の阻害をもたらすＣＩ値を計算した。９０％阻害でのＣＩ値を示すグラフを図６に示す。赤線より下の応答（すなわち、ＣＩ＜０.９）は相乗的であることを示す。図６に示されるように、多数の化合物は相乗的作用を示した。例えば、ＡＤ４−１０６２８およびＡＤ４−１５０５についてのＣＩ値（表１０を参照）はタイケルブとの有意な相乗的作用を示した。反対に、ＡＤ４−１５０５だけがＣＩ値に基づいてイレッサと相乗的作用を示す。イレッサおよびタイケルブは同様の作用機序を有するため、これら２つの化合物の間の相互作用は最低であることが期待される。表１０に示されるように、イレッサについてのＤＲＩおよびＣＩ値に基づいて、相互作用はほとんど観察されない。
【０３０４】
これらの結果は、ＡＤ４化合物が、ＥＧＦ受容体キナーゼまたはＥＧＦ受容体のいずれかとは異なる部位を介して、ＥＧＦ受容体介在の細胞増殖に対して有意な作用をもたらすことを示す。さらには、その相乗的作用に基づいて、該化合物は、市販の化合物、タイケルブ、イレッサまたはエルビタックスを治療的により少ない用量で使用しながら、同等または強化された治療的作用を得るための独特な方法を提供する。
【０３０５】
実施例７： 細胞増殖性アッセイ
以下の実施例は、Ａ５４９、Ｈ１９７５およびＨＴ−２９細胞に基づく、細胞増殖性アッセイを記載する。Ａ５４９、Ｈ１９７５およびＨＴ−２９細胞増殖性アッセイは、各々、生存細胞の数を測定するためのＭＴＴアッセイを利用する。細胞増殖性アッセイは、化合物が癌細胞増殖に対して一の作用を有するか、有しないを決定するのに利用され得る。最初に、ＭＴＴアッセイを記載し、つづいてＡ５４９、Ｈ１９７５およびＨＴ−２９細胞増殖性アッセイを記載する。この実施例では、細胞増殖性アッセイの各々の暫定的結果が、後記する化合物のさらなる試験結果と一緒に報告されている。
【０３０６】
ＭＴＴアッセイ.
【０３０７】
細胞増殖はＭＴＴアッセイを用いて測定された。ＭＴＴ細胞増殖性アッセイは、生存細胞のミトコンドリアによる、テトラゾリウム成分（ＭＴＴ）の不溶性ホルマザン生成物への還元を測定する、比色分析アッセイシステムである。細胞をＭＴＴ試薬と一緒にインキュベートした後、ＤＭＳＯを添加して、着色した結晶を溶かし、サンプルを５６０ｎｍの波長で読み取った。生成した色相の量を生存細胞の数と比例関係にある。
【０３０８】
３−（４,５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）染料（Aesar、カタログ番号Ｌ１１９３９）をＰＢＳ中で５ｍｇ／ｍｌで調製した。各ウェルに、２０μｌのＭＴＴ溶液を従来の培地に加え、室温で穏やかに５分間振とうしながら十分に混合した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で約２時間混合した。２−３時間インキュベートした後、培地を吸引し、プレートを軽く押さえて水分を取った。２００μｌ／ウェルの１００％ＤＭＳＯ（Sigma、カタログ番号４７２３０１）を添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１０分間インキュベートし、室温で穏やかに５分間振とうしながら十分に混合したプレートをPolarStarプレートリーダーで５６０ｎｍで読み取った。パーセント（％）阻害は、１００％−（ＯＤ５６０ｎｍでの実験値−ブランク値）ｘ１００％／ＯＤ５６０ｎｍでの対照値−ブランク値として計算された。ブランク＝ウェル＋血清不含培地＋０.５％ＤＭＳＯ；実験＝ウェル＋細胞＋処理＋０.５％ＤＭＳＯ；対照＝ウェル＋細胞＋０.５％ＤＭＳＯ。ＩＣ５０値は非線形回帰曲線適合法を用いてGraphPad Prismにて計算した。すべての統計的分析はGraphPad PrismまたはMicrosoft Excelのいずれかで行った。
【０３０９】
Ａ５４９ 細胞増殖アッセイ.
【０３１０】
Ａ５４９細胞増殖アッセイは、化合物の、Ａ５４９非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株での細胞増殖を阻害する能力を測定する（例、Tangら 2008 Br J Cancer 99, 911-922；de La Motte Rouge 2007 Cancer Res 67, 6253-6262；Mageshら2009 Phytother Res 23, 1385-1391を参照）。簡単には、化合物を９６−ウェルプレートに配置した細胞に添加する。細胞をＭＴＴ処理の前に７２時間増殖させる。化合物の細胞増殖に対する効果をGraphPad Prismを用いて分析する。
【０３１１】
Ａ５４９細胞は、野生型ＥＧＦＲおよびｐ５３を有する非小細胞肺癌細胞株であるが、ＫＲＡＳ遺伝子にて点突然変異を有し、それを癌遺伝子に形質転換する。Ａ５４９細胞の増殖を阻害する化合物は肺癌患者のための可能性のある治療的処置として供される。これらの新規な化合物は単独でまたは従来の分子との組み合わせにて使用され、相乗的効果の組み合わせを生成し得る。
【０３１２】
Ａ５４９細胞増殖アッセイの場合、１日目に、Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−１８５、ロット番号７５０２５４６）を、８,０００細胞／ウェルで、０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Hyclone、カタログ番号ＳＨ３００７１.０３、ロット番号ＡＴＢ３１５００）、１％Pen Strep（Gibco、カタログ番号１５１４０）および１％Ｌ−グルタミン（Gibco、カタログ番号２５０３０）を含有する２００μｌの培地の、９６ウェルの組織培養処理のプレート（BD、カタログ番号３５３９１６）に播種した。プレートを組織培養インキュベーター中３７℃、５％ＣＯ２、８５％湿度で一夜インキュベートした。２日目に、化合物の溶液を２００ｘで調製した。２００μｌの培地に、１μｌの２００ｘの化合物を１００％ＤＭＳＯで希釈し、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度とした。プレートを７２時間インキュベートし、それをＭＴＴ（上記したとおり）で分析した。各処理より生成されるＩＣ５０値は細胞の生存能を半分だけ（すなわち、最大生存能力の５０％を）減少させるのに必要な薬物の濃度をいう。
【０３１３】
Ａ５４９細胞増殖アッセイにおける暫定的結果は、化合物がＭＴＴアッセイを用いてＡ５４９ＮＳＣＬＣ細胞株にて細胞増殖を阻害したことを示した（例、図９を参照）。Ａ５４９細胞増殖アッセイは化合物の細胞増殖を阻害する能力を容易に区別する。この実験において、最も強力な化合物と最も弱い化合物の間の違いは１００倍以上あった。
【０３１４】
Ｈ１９７５ 細胞増殖アッセイ.
【０３１５】
Ａ５４９細胞増殖アッセイは、化合物の、Ｈ１９７５細胞にて細胞増殖を阻害する能力を測定する（例、Naumovら 2009 Clin Cancer Res 15, 3484-3494）。簡単には、化合物を９６−ウェルプレートに置かれた細胞に加える。細胞をＭＴＴ処理の前に７２時間増殖させる。化合物の細胞増殖に対する効果をGraphPad Prismを用いて分析する。
【０３１６】
Ｈ１９７５細胞は、タルセバなどのＥＧＦ受容体阻害剤に耐性とする変異を発展させる、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株である。Ｈ１９７５細胞の増殖を阻害する化合物は、タルセバまたは他のＥＧＦ受容体阻害剤に対する耐性を発展させた肺癌患者の治療的処置の可能性として供される得る。
【０３１７】
Ｈ１９７５細胞増殖アッセイの場合、１日目に、Ｈ１９７５細胞を２０００細胞／ウェルで５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Hyclone、カタログ番号ＳＨ３００７１.０３、ロット番号ＡＴＢ３１５００）、１％Pen Strep（Gibco、カタログ番号１５１４０）および１％Ｌ−グルタミン（Gibco、カタログ番号２５０３０）を含有する２００ｍｌの培地での９６ウェル組織培養処理のプレート（BD、カタログ番号３５３９１６）に播種する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一夜インキュベートした。２日目に、化合物の溶液を２００ｘで調製した。２００μｌ培地に、１μｌの２００ｘ混合物を１００％ＤＭＳＯで希釈し、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度とした。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートし、それをＭＴＴ（上記したとおり）で５日目に分析した。各処理より生成されるＩＣ５０値は細胞の生存能を半分だけ（すなわち、最大生存能力の５０％を）減少させるのに必要な薬物の濃度をいう。
【０３１８】
Ｈ１９７５細胞増殖アッセイでの暫定結果は、化合物で処理した後に７２時間培養した細胞の生存能における化合物のＡＤ４−１０４６０の作用を示した（例、図１０を参照）。Ｈ１９７５細胞増殖性アッセイによれば、ＡＤ４−１０４６０についてのＩＣ５０値は０.３μＭ（図１０からの最大適合値：最低値０.３８９８、最大値３.６９２、対数ＩＣ５０ −６.５１７、HillSlope −１.９３１、ＩＣ５０ ３.０３９ｅ−００７、Span ３.３０２）であった。
【０３１９】
ＨＴ−２９細胞増殖アッセイ
【０３２０】
ＨＴ−２９細胞増殖アッセイは、化合物の、ＨＴ−２９細胞における細胞増殖を阻害する能力を測定する（例、Zhangら2006 Worl J Gastroenterol 12, 3581-3584；Tangら2007 Postgrad Med J 83, 338-343）。簡単には、化合物を９６−ウェルプレートに置いた細胞に添加する。細胞を７２時間増殖させ、ＭＴＴ処理に付す。化合物の細胞増殖に対する効果をGraphPad Prismを用いて分析する。
【０３２１】
ＨＴ−２９細胞は、化合物の、結腸の腫瘍における細胞の増殖を阻害する能力を評価するのに利用される結腸癌細胞株である。
【０３２２】
ＨＴ−２９細胞増殖性アッセイの場合、１日目に、ＨＴ−２９細胞を３０００細胞／ウェルで１０％ＦＢＳ、１ｘPen Strepおよび１ｘＬ−グルタミンを含有する１００μｌの培地での９６ウェル組織培養処理のプレートに播種する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２、８５％湿度で、組織培養インキュベータ中、一夜インキュベートした。２日目に、完全培地を２．５％ＦＢＳ（１８０μｌ／ウェル）含有の培地と置き換えた。化合物の溶液を調製した（４００ｘ、１００％ＤＭＳＯ）。２００μｌ培地に、２０μｌの５ｘ化合物（プレイン培地で希釈）を添加し、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度とした。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で、８５％湿度にて７２時間インキュベートした。５日目に、プレートをＭＴＴアッセイを用いて細胞増殖について分析した。各処理より生成されるＩＣ５０値は細胞の生存能を半分だけ（すなわち、最大生存能力の５０％を）減少させるのに必要な薬物の濃度をいう。
【０３２３】
ＨＴ−２９細胞増殖アッセイにおける暫定的結果は、ＨＴ−２９細胞株における細胞密度およびウシ胎仔血清の効果を示した（例、表１１、表１２を参照）。結果は５％濃度のＦＢＳを用いる５０００細胞／ウェルが、常に、３種のＥＧＦ受容体キナーゼ阻害剤−タイケルブ、イレッサおよびタルセバでの優れた結果が得られることを示した（例、表１１を参照）。
表１１：ＨＴ−２９細胞増殖アッセイの結果
【表６３】
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【０３２４】
さらには、表１２に示されるように、ＨＴ−２９細胞を４８または７２時間インキュベートすると、タイケルブまたはタルセバについてのＩＣ５０値には違いはなかった。
表１２：ＨＴ−２９細胞増殖アッセイにおけるインキュベーション時間の比較
【表６４】
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【０３２５】
ＥＧＦ受容体キナーゼ阻害剤、タイケルブおよびタルセバについて、ＨＴ−２９細胞増殖アッセイを用いる用量応答曲線が図１１に示されている。タイケルブおよびタルセバについてのＩＣ５０は、各々、２.７μＭおよび１２μＭとして計算された。
【０３２６】
ＡＤ４−１５０５類シリーズの化合物は、肺および結腸癌細胞を含む、数種の異なる臓器からの癌細胞の増殖を阻害する。実験により、この化学シリーズの化合物がＡ５４９非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞、Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ細胞（ＥＧＦ受容体キナーゼ阻害剤、タルセバに耐性である細胞）、およびＨＴ−２９結腸癌細胞にて細胞増殖を阻害すること明らかになる。表１３は、Ａ５４９細胞増殖アッセイにて２００ｎＭよりも小さいＩＣ５０を有するこれらの化合物の要約を提供する。
表１３：細胞増殖データ
【表６５】
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【表６６】
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【表６７】
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【０３２７】
表１３に示されるように、このシリーズからの最も強力な化合物はＡ５４９またはＨ１９７５細胞にて、ＩＣ５０が１００ｎＭ以下の、細胞増殖を阻害する。これらの化合物はＡＤ４−１３１２４、ＡＤ４−１３１３０、ＡＤ４−１３１３１、ＡＤ４−１３１７８、ＡＤ４−１３２０２、ＡＤ４−１３２０６、ＡＤ４−１３２１１およびＡＤ４−１３２１８を包含する。
【０３２８】
Ａ５４９およびＨ１９７５細胞における細胞増殖性アッセイの結果に基づいて、この化学シリーズの化合物は非小細胞肺癌の処理について治療的利益を有すると期待される。これらの化合物はまた、タルセバなどのＥＧＦ受容体キナーゼ阻害剤に対して耐性である、Ｈ１９７５細胞にて細胞増殖を阻害するのに効果的でもあるため、これらの化合物はタルセバに対してもはや反応性でないＮＳＣＬＣの処理にて治療的利益を有する期待される。さらには、このシリーズからの化合物は、ＨＴ−２９細胞における細胞増殖を阻害する能力に基づいて、結腸癌にて治療的利益を有し得る。
【０３２９】
実施例８：アポトーシスアッセイ
以下の実施例は、カスパーゼ３,７アッセイ、ＤＮＡ断片化アッセイ、およびアネキシンＶアッセイを含む、細胞アポトーシスアッセイを示す。癌細胞の増殖または成長を阻害することに加えて、もう一つ別の望ましい活性はアポトーシス、または細胞死を誘発する化合物の能力である。ＡＤ４−１５０５類シリーズの化合物のアポトーシスを誘発する能力は３種の異なるアッセイ：Ａ４３１細胞でのカスパーゼ３,７活性の誘発；Ａ５４９細胞でのＤＮＡ断片化の誘発；およびＡ５４９細胞におけるアネキシンＶ発現の誘発、にて同定された。各細胞アポトーシスアッセイの暫定的結果をこの実施例にて後記される化合物のさらなる試験と共に報告する。
【０３３０】
カスパーゼ３,７アッセイ
【０３３１】
カスパーゼ３,７アッセイは、化合物の、細胞アポトーシスの初期のインジケーターである、カスパーゼ３,７活性誘発能を測定する（例、Garcio-Calvoら1999 Cell Death Differ. 6, 362-369；NicholsonおよびThornberry 1997 Trends Biochem. Sci. 22, 299-306；Thornberryら1997 J. Biol. Chem. 272, 17907-17911；ThornberryおよびLazebnik 1998 Science 281, 1312-1316；Bayascasら2002 Cell Death Differ. 9, 1078-1089；Leら2002 Proc. Natl. Acad. Sci USA 99, 15188-15193；Mooneyら2002 Br. J. Cancer 87, 909-917；Karvinenら2002 J. Biomol. Screening 7, 223-231；Gopalakrishnanら2002 , J. Biomol. Screening 7, 317-323；Preaudatら2002 J. Biomol. Screening 7, 267-274；Zhangら1999 J. Biomol. Screening 4, 67-73；Farfanら2004 Cell Notes 10 15-17；LarsonおよびWorzella 2005 Cell Notes 12, 13-16；Weisら1995 Exp. Cell Res. 219, 699-708；Schlegelら1996 J. Biol. Chem. 271,1841-1844を参照）。次に記載されるように、カスパーゼ３,７アッセイはPromega Caspase-Glo３／７アッセイキット（カタログ番号Ｇ８０９２）を用いる。
【０３３２】
Caspase-Glo（登録商標）３／７アッセイは、精製された酵素調製物あるいは接着細胞または懸濁細胞の培養基にて、カスパーゼ−３および−７の活性を測定する発光アッセイである。該アッセイは、テトラペプチド配列、ＤＥＶＤを含有する、プロルミネセンスカスパーゼ−３／７基質を用意する。この基質は切断されて、光の生成に用いられるルシフェラーゼの基質、アミノルシフェリンを放出する。Caspase-Glo（登録商標）３／７試薬はカスパーゼ活性、ルシフェラーゼ活性および細胞溶解のために最適化された。単一のCaspase-Glo（登録商標）３／７試薬の「add-mix-measure」フォーマットへの添加は細胞溶解を、つづいて基質のカスパーゼ切断および「glow-type」発光シグナルの生成をもたらす。Caspase-Glo（登録商標）３／７アッセイは、カスパーゼ活性またはアポトーシスのハイスループットスクリーニングを自動的で理想的なものとするのに、複数のウェルのプレートフォーマットで使用するように設計されている。
【０３３３】
簡単に言えば、カスパーゼ３,７アポトーシスアッセイは、細胞滴定実験（３８４−ウェルコスター（Costar）プレートにて１,０００、３,０００、５,０００および１０,０００細胞／ウェルで播種された細胞）を行い、化合物の暴露時間を変え（２、４、６および２４時間）、および検出試薬を添加した後の読み取り時間を変える（３０、６０、９０、１２０および１８０分）ことで有効であった。スタウロスポリンを正対照として用いた。これら実験からの結果は、最適結果が、２０００細胞／ウェルの密度で播種された細胞を、化合物の存在下で、２時間インキュベートし、プレートを検出試薬と共に６０分間インキュベートした後に読み取った場合に得られることを示した。
【０３３４】
カスパーゼ３,７アッセイの組織培養の部分では、１日目に、Ａ４３１細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−１５５５、ロット番号４３２３８１７）を２,０００細胞／ウェルで２５μｌ／ウェルで、１％ピリビン酸ナトリウム（Sigma、カタログ番号Ｓ８６３６）、１％Pen-Strep（Gibco、カタログ番号１５１４０）、１％Ｌ−グルタミン（Gibco、カタログ番号２５０３０）および１０％ＦＢＳ（Hyclone、カタログ番号ＳＨ３００７１.０３、ロット番号ＡＴＢ３１５００）を含むＤＭＥＭ（Cellgro、カタログ番号１０−０１７−ＣＶ）中、コスター３８４ウェルの組織培養処理されたプレートに播種した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一夜インキュベートした。２日目に、培地をプレートから除去し、２５μｌのＦＢＳを除いたＤＭＥＭを添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一夜インキュベートした。３日目に、培地を取り除き、ＦＢＳ不含で、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（Sigma、カタログ番号Ａ３０５９）を含むＤＥＭに希釈した２５μｌの化合物と置き換えた。すべてのウェルにてＤＭＳＯ（Sigma、カタログ番号Ｄ２６５０）の最終濃度は０.５％であった。細胞培養はカスパーゼ３,７アッセイに従った。
【０３３５】
カスパーゼ３,７アッセイの場合、細胞を５.５時間３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。プレートをインキュベータより取り出し、室温で平衡にした。３０分後、２５μｌのカスパーゼ３／７検出試薬（Promega Caspase-Glo３／７アッセイキット、カタログ番号Ｇ８０９２）を各ウェルに添加した。プレートをスズ箔で覆い、プレート振盪器でスピード４にて３分間振盪した。ついで、該プレートをさらに６０分間室温でインキュベートした。PolarStarプレートリーダを用いて発光を検出した。
【０３３６】
１０μＭタルセバに対するアポトーシス刺激のパーセント（％）は１００ｘ（（実験のＲＬＵ値−細胞のみのＲＬＵ値）／（１０μＭタルセバのＲＬＵ値−細胞のみのＲＬＵ値））として計算された。１０μＭスタウロスポリンが１００％アポトーシスを示す、１０μＭスタウロスポリンに対するアポトーシス刺激のパーセント（％）は１００ｘ（（実験のＲＬＵ値−細胞のみのＲＬＵ値）／（１０μＭスタウロスポリンのＲＬＵ値−細胞のみのＲＬＵ値））として計算された。統計分析はすべてGraphPad Prismを用いて行った。
【０３３７】
上記されるように、カスパーゼ３,７活性は未処理のＡ４３１細胞および３μＭスタウロスポリンで６時間処理した細胞にて、種々の細胞密度で評価した。これらの結果（例、図１２を参照）に基づき、２,０００細胞／ウェルの細胞密度を選択した。経時変化の実験は、スタウロスポリンによるカスパーゼ３,７誘発についてのシグナルが４または２時間（図示せず）よりも６時間でより大きいことを示した。
【０３３８】
カスパーゼ３,７アッセイを用いるタルセバとの相加作用
【０３３９】
カスパーゼ３,７アッセイにて、化合物のタルセバとの相加作用と産生する能力を試験した。２０００細胞／ウェルでプレートに播いたＡ４３１細胞をタルセバ単独（０.５、１、２、４、８または１６μＭ）、ＡＤ４−１３１９２化合物単独（１、２、４、８、１６または３２μＭ）またはタルセバ＋ＡＤ４化合物（タルセバ／ＡＤ４−１３１９２）の存在下でインキュベートした。該アッセイを６時間後に停止し、カスパーゼの存在をPromega Caspase-Glo（登録商標）３／７アッセイを用いて測定した。結果はＡＤ４−１３１９２がタルセバについて相乗的（相加的よりも大きい）効果を産生し、カスパーゼ３,７活性を強化することを示した（例、図１３を参照）。
【０３４０】
かくして、カスパーゼ３,７アッセイは、所定の薬物の、カスパーゼ３／７活性、初期のマーカの細胞アポトーシス活性に対する効果を示す。加えて、化合物の相乗性を生成する能力（例、タルセバとＡＤ４−１３１９２）はカスパーゼ３,７アッセイにて容易に検出できる。
【０３４１】
ＡＤ４−１５０５類シリーズの化合物のいくつかは、Ａ４３１細胞にて、カスパーゼ３,７活性を誘発し、ＥＧＦ受容体を過剰発現することが明らかにされた。該化合物の作用を表１４にて要約する。
表１４：化合物の、Ａ４３１細胞での、カスパーゼ３,７活性を誘発する効果
【表６８】
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【０３４２】
１６および８μＭ濃度の両方で、カスパーゼ３,７活性における増加％が、このアッセイにて使用される対照化合物である、０．５μＭのスタウロスポリンのよって産生される最大応答の％として示される（表１４を参照）。さらには、化合物は、各々、ＥＧＦ受容体キナーゼ阻害剤である、タルセバの、カスパーゼ３,７活性の強化により測定されるように、アポトーシスを誘発する能力を、相加作用よりも大きく、強化する（表１４を参照）。これらの結果はＡＤ４−１５０５類シリーズの化合物がタルセバのある型の癌におけるアポトーシスの誘発能を強化しうることを示す。
【０３４３】
ＤＮＡ断片化アッセイ.
【０３４４】
ＤＮＡ断片化アッセイは、化合物の、細胞アポトーシスのインジゲータである、ＤＮＡ断片化を誘発する能力を測定する。２種の異なる形態の真核細胞死は形態学的および生化学的基準により：壊死とアポトーシスに分類され得る（Wyllieら 1980 Int. Rev. of Cytol. 68, 251-306；DuvallおよびWyllie 1986 Immunol. Today 7, 115-119）。壊死は細胞膜のイオン透過性の増加と関連付けられ；細胞が膨潤し、細胞膜が数分以内に破裂する（浸透圧溶解）。アポトーシスは膜ブレブ形成（zeiosis）、細胞質の凝縮、および内在的エンドヌクレアーゼの活性化により特徴付けられる。このＣａ２＋およびＭｇ２＋依存性ヌクレアーゼは、最もアクセスしやすいヌクレオソーム内のリンカー領域にある二本鎖ＤＮＡを切断し、モノ−およびオリゴ−ヌクレオソームを生成する。反対に、該ヌクレオソームのＤＮＡは核となるヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３およびＨ４と密に複合化し、それでエンドヌクレアーゼによる切断から保護される（Burgoyneら1974 Biochem. J. 14, 67-72；Stachら1979 J Neurochem 33, 257-261）。生成されたＤＮＡフラグメントは１８０ｂｐのサブユニットの別個の集合体であり、フラグメント化されたＤＮＡを抽出および分離した後で、アガロースゲル上で「ＤＮＡラダー」として検出される。アポトーシス細胞の細胞質でのモノ−およびオリゴヌクレオソームの富化は、ＤＮＡ分解が細胞膜崩壊の数時間前に起こることによるものである（DukeおよびCohen 1986 Lymphokine Res. 5, 289-299）。アポトーシスは真核細胞死の最も一般的な形態である。それは（例えば、胚形成の間に）胸腺が変異する間で、好中球多形体の老化にて、および特定の成長因子、ＩＬ−２などが除去された後の自己反応性Ｔ細胞の欠失と、あるいは生理学的刺激様壊死因子およびグルココルチコイドの添加と、並行して起こる（Scanlonら 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 182-186；Arendsら 1990 Am. J. Pathol. 136, 593-608）。アポトーシスはまた細胞傷害性Ｔリンパ球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（Sanderson 1981 Biol. Rev. 56, 53-196；Wyllie 1987 Int. Rev. Cytol. 17(Suppl.), 755）により、およびイオン化放射（YamadaおよびOhyama 1988 Int. J. Radiat. Biol. 53, 65）およびモノクローナル抗体様抗−Ｆａｓ(Yoneharaら 1989 J. Exp. Med. 169, 1747-1756）および抗−ＡＰＯ−１（Trauthら 1989 Science 245, 301-305；Oehmら1992 J. Biol. Chem. 267, 10709-10715）により誘発される。
【０３４５】
以下に記載のＤＮＡ断片化アッセイは、Roche Cell Death Detection ELISAキット（カタログ番号１１９２０ ６８５ ００１）を用いる。ＤＮＡ断片化アッセイは、各々、ＤＮＡおよびヒストンに対するマウスモノクローナル抗体を用いる定量的サンドイッチ−酵素−免疫アッセイの原理に基づく。ＤＮＡ断片化アッセイは、以下の工程を含む：抗ヒストン抗体の吸着によるマクロプレートモジュールの壁上への固定；インキュベーションバッファー（＝ブロッキング溶液）で処理することによる壁上での非特異的結合部位の飽和化；サンプル中に含まれるヌクレオソームのそのヒストン成分を介する固定化された抗ヒストン抗体との結合；ヌクレオソームのＤＮＡ部分と結合する抗−ＤＮＡ−ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）の添加；洗浄工程による非結合ペルオキシダーゼコンジュゲートの除去；基質としてのＡＢＴＳ（２,２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンズチアゾリンスルホナート（６）］）＊との免疫複合体中に保持されるペルオキシダーゼの量の測定。
【０３４６】
ＤＮＡ断片化アッセイの組織培養の部分では、１日目に、Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＣＬ−１８５、ロット番号７５０２５４６）を１０,０００細胞／ウェルで、２００μｌ／ウェルで、１％ピリビン酸ナトリウム、１％Pen-Strep（Gibco、カタログ番号２５０３０、ロット番号５６８１７７）、１％Ｌ−グルタミン（Gibco、カタログ番号１１９２０６８５００１）および１０％ＦＢＳ（Hyclone、カタログ番号ＳＨ３００７１０３、ロット番号ＡＴＢ３１５００）を含むＲＰＭＩ−１６４０（Gibco、カタログ番号１１８７５、ロット番号ＡＴＢ３１５００）中、９６−ウェルの組織培養処理されたプレートに播種した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一夜インキュベートした。２日目に、培地をプレートから除去し、５％ＦＢＳ含有の１６０μｌの培地を加えた。５ｘの投与濃度で調製された１００％ＤＭＳＯに試験化合物を含有する４０μｌの培地を、次に、ＤＭＳＯが０．５％の最終濃度で存在する培地に加えた。ついで、細胞を化合物と一緒に３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
【０３４７】
ＤＮＡ断片化アッセイでは、２４時間後に、プレートを２００ｘｇで１０分間遠心分離に付した。ゆっくりと反転させ、ペーパータオルでドロップを受けることで培地を除去した。プレートをゆっくりとタップし、過剰な培地を除去した。２００μｌの溶解緩衝液を各ウェルに加え、３００ｒｐｍで振盪させ、つづいて室温で３０分間インキュベートさせた。プレートを２００ｘｇで１０分間遠心分離に付し、２０μｌの溶菌上澄をＥＬＩＳＡ分析用にゆっくりと取り出した。２０μｌの溶菌上澄をストレプトアビジンを被覆したプレートに２０μｌの正対照および２０μｌのインキュベーション緩衝の負対照と一緒に置いた。８０μｌの免疫試薬ＤＮＡフラグメント検出液（Roche、カタログ番号１１９２０ ６８５ ００１）を各ウェルに添加した。ウェルを吸着剤の箔で覆い、３００ｒｐｍで２時間室温にて振盪させた。溶液を除去し、各ウェルを３００μｌのインキュベーション緩衝液で３回洗浄した。１００μｌのＡＢＴＳ検出基質（Roche、カタログ番号１１９２０ ６８５ ００１）を各ウェルに添加した。該プレートをプレート振盪器を用いて２５０ｒｐｍで約１０−２０分間インキュベートした。１００μｌのＡＢＴＢ停止緩衝液を添加した。プレートを４００および４９２ｎｍにてPolarStarプレートリーダーで読み取った。細胞基線に対するアポトーシス刺激割合（％）を、１００ｘ（（実験の４００−４９２ｎｍでの吸光度−細胞のみの４００−４９２ｎｍでの吸光度）／（細胞のみの４００−４９２ｎｍでの吸光度））として計算した。１μＭスタウロスポリンが１００％アポトーシスを示す、１μＭスタウロスポリンに対するアポトーシス刺激のパーセント（％）は１００ｘ（（実験の４００−４９２ｎｍでの吸光度−細胞のみの４００−４９２ｎｍでの吸光度）／（１μＭスタウロスポリンの４００−４９２ｎｍでの吸光度−細胞のみの４００−４９２ｎｍでの吸光度））として計算された。統計分析はすべてGraphPad Prismを用いて行った。
【０３４８】
ＤＮＡ断片化アッセイを用い、細胞を５，０００、１０，０００および１５，０００細胞／ウェルでプレートした場合に、化合物のアポトーシスを誘発する能力を測定した。加えて、該化合物の効果を６、２４および４８時間で評価した。対照となる化合物、スタウロスポリンにより得られる結果に基づいて（例、図１４Ａ−Ｃを参照）、１０,０００細胞／ウェルおよび２４時間の処理時間（図１４Ｂを参照）を選択した。
【０３４９】
ＤＮＡ断片化アッセイの一連の試験化合物から活性を検出する能力を評価した。ＡＤ４−１３１６５、ＡＤ４−１３１７６およびＡＤ４−１３１７９を含む数種の化合物は、１０μＭの濃度でＡ５４９細胞（例、図１５を参照）にてアポトーシスを誘発することが明らかにされた。
【０３５０】
ＡＤ４−１５０５類シリーズのいくつかの化合物は、Ａ５４９細胞の、非小細胞肺癌細胞株にてＤＮＡ断片化を誘発することが分かった。該化合物のデータを表１５にて要約する。
【表６９】
2013516479.tif 000089
【０３５１】
結果は、背景技術と比べて、および該アッセイにて使用される対照化合物である、０．５μＭのスタウロスポリンにより産生される最大応答と比較して、該化合物のＤＮＡ断片化を増加させる効果を示す（表１５を参照）。化合物が、１０または１μＭの濃度で、スタウロスポリンに対して、各々、５０％または２０％のＤＮＡ断片化を改善する場合には、該化合物は活性であると考えられた（表１５を参照）。これらの結果に基づき、この化学シリーズの化合物は非小細胞肺癌の処置にて治療的利点を有すると期待される。
【０３５２】
アネキシンＶアッセイ
【０３５３】
アネキシンＶアッセイは、化合物の、細胞のアポトーシスの尺度である、アネキシンＶ活性を増加させる能力を示す（例、Hotzら 1994 Cytometry 15, 237-244；Telfordら 1992  Cytometry 13, 137-143；Vermesら 1995 J. Immun. Meth. 184, 39-51を参照）。アポトーシスを測定するアッセイは、化合物が癌細胞にてプログラムされた細胞死を誘発しうるかどうかを決定するのに利用される。アネキシンＶは、死亡または生存細胞の膜上で発現されるホスファチジルセリンに結合することでアポトーシスを検出するのに使用される蛋白である。ＦＩＴＣで蛍光タグ化されると、それは７−アミノアクチノマイシンＤと共同して使用され、フローサイトメトリーを介してアポトーシスを経験している細胞の割合を決定することができる。初期のアポトーシスにある細胞はＦＩＦＣシグナルを発するであろうし、それは最終的には、近赤外７−ＡＤＤシグナルにより置き換えられ、そのシグナルは壊死による細胞膜浸透性と関連付けられる。
【０３５４】
簡単には、アネキシンＶアッセイの場合、化合物は６−ウェルプレートに置かれた細胞に加えられた。処理された細胞をアネキシンＶの存在を検出する蛍光細胞マーカープローブを添加する前の３０時間までインキュベートした。アポトーシスおよび壊死を受けている細胞の割合をフローサイトメトリーで決定した。試験化合物は、正対照のカンプトテシンまたはスタウロスポリンに等しい、またはわずかに優れたアポトーシスを誘発した。
【０３５５】
アネキシンＶアッセイの組織培養の部分では、１日目に、Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−１８５、ロット番号７５０２５４６）を１０,０００細胞／ウェルで、５％ＦＢＳ（Hyclone、カタログ番号ＳＨ３００７１.０３、ロット番号ＡＴＢ３１５００）、１％Pen-Strep（Gibco、カタログ番号１５１４０、ロット番号８４１３８３）および１％Ｌ−グルタミン（Gibco、カタログ番号２５０３０、ロット番号５６８１７７）を含有する２．０ｍｌの培地の、６ウェルに播種し、組織培養基でプレートを処理した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および８５％相対湿度で一夜インキュベートした。２日目に、化合物の溶液（１０００ｘ）を調製した。２.０ｍｌの培地／ウェルに、２μｌの１０００ｘの化合物を加え、１００％ＤＭＳＯにて０．１％の最終濃度のＤＭＳＯに希釈した。３日目に、プレートを３０時間インキュベートした。３０時間後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ついで細胞を３７℃で８分間トリプシン処理に付した（CellGro、カタログ番号２５−０５３０Ｃｌ、ロット番号２５０５３２５３）。細胞を３００ｘｇで５分間遠心分離に付すことで集めた。
【０３５６】
アネキシンＶアッセイでは、細胞ペレットを、０.１５μｇ／ウェルのアネキシンＶ  ＦＩＴＣ（BioVision、カタログ番号１００１−２００、ロット番号５０６０１）および０.２５μｇの７−ＡＡＤ（eBioscience、カタログ番号００−６９９３−５０、ロット番号５０６０１）を補足した５００μｌのＰＢＳ／２.５ｍＭ塩化カルシウムに再度懸濁させた。細胞を２０分間室温で暗所にてインキュベートし、ついでＰＢＳ／ＣａＣｌ２で１回洗浄し、５００μｌのＰＢＳ／ＣａＣｌ２、２％ｖ／ｖホルムアルデヒド（ThermoScientific、カタログ番号２８９０８、ロット番号ＪＧ１１４１２７２）、０.１％ｖ／ｖ  プルロニックＦ−６８（MP、カタログ番号２７５００４９、ロット番号８２１−４Ｋ）および１０μｇ／ｍｌのアクチノマイシンＤ（Acros、カタログ番号２９４９４００５０、ロット番号Ａ０２５７０１０）に再び懸濁さえた。再懸濁細胞をフローサイトメトリー分析に付すまで４℃の暗所にて貯蔵した。
【０３５７】
アネキシンＶアッセイのフローサイトメトリー分析の場合、サンプルの獲得はBD Biosciences、San Jose、CAで製造されたBD LSR IIに関するものであった。アネキシンを５０ｍＷのCoherent Sapphire固相CW青色レーザー（Coherent Inc.、Santa Clara、CA）を用いて４８８ｎｍの波長で励起させ、５３０／３０バンドパスフィルターを用いて集めた。７−ＡＡＤを５０ｍＷのCoherent Sapphire固相CW黄色レーザーを用いて５６１ｎｍで励起させ、放出シグナルを６３０／３０バンドパスフィルターを用いて集めた。１０,０００ events werer collected based on a stopping gate of forward scatter vs side scatter light. 獲得はBD FACS DiVaソフトウェアのバージョン６.１.１で高流速（６０μＬ／分）でなされた。計算は次のとおりであった：クワドラント３＝下左側＝生細胞；クワドラント４＝下右側＝初期アポトーシス；クワドラント２＝上右側＝後期アポトーシス；クワドラント１＝上左側＝死滅細胞である。アポトーシス合計のパーセント（％）は初期（グワドラント４）＋後期（グワドラント２）として計算される。アポトーシスの割合のパーセント（％）は（実験−非処理／正対照）＊１００として計算された。すべての統計学的分析はGraphPad PrismまたはMicrosoft Excelを用いてなされる。
【０３５８】
アネキシンＶアッセイの結果は、アネキシンＶの利用、本願発明の化合物のリード分子に対するアポトーシスの可能性を決定するためのフローサイトメトリー方法を示す。ＡＤ４化合物は、処理の２９時間後に、Ａ５４９細胞にて対照化合物、カンプトテシンと同等またはより大きな程度でアポトーシスを誘発することが明らかにされた（例、図１６Ｂを参照）。１μＭの濃度で、ＡＤ４−１３１３０およびＡＤ４−１３１８５は共に細胞集団の５０％より多くの割合にてアポトーシスを誘発する（例、図１６Ｂを参照）。１０μＭの濃度で、これらの化合物はまた、細胞集団の２０％までの割合にて後期アポトーシスを刺激する（例、図１６Ｂを参照）。ＡＤ４−１３１９２は同様であるが、わずかに減少した応答を惹起した（例、図１６Ｂを参照）。
【０３５９】
ＡＤ４−１５０５類シリーズのうちいくつかの化合物は、アネキシンＶの、Ａ５４９細胞、非小細胞胚癌細胞株での発現を誘発することが明らかにされた。該化合物についてのデータを表１６にて要約する。
表１６：化合物の、Ａ４３１細胞における、カスパーゼ３,７活性を誘発する効果
【表７０】
2013516479.tif 000090
【０３６０】
結果を、アネキシンＶの発現により指示される、初期および後期アポトーシス（すなわち、アポトーシス全体）にある細胞の割合として示し、該化合物の効果を、該アッセイにて使用される対照化合物である、４．０μＭのカンプトテシンまたは１．０μＭのスタウロスポリンのいずれかで生成される最大応答と比較した割合として示す（表１６を参照）。アポトーシスが全体として２０％より多く誘発される場合には、化合物は活性であると考えられた（表１６を参照）。これらの結果に基づいて、この化学シリーズにある化合物は非小細胞肺癌の処置にて治療的利点があると考えられる。
【０３６１】
実施例９：薬物動態
この実施例において、１および５ｍｇ／ｋｇの静脈内および経口用量の、雄のＣＤ−１マウスにて、ＡＤ４−１３１３０およびＡＤ４−１３１９２の経口的生体利用能を、各々、調査した。試験化合物の血漿中濃度を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定した。データをWinNonlin を用いることで非コンパートメント薬物動態モデルにより分析した。結果を表１７にて要約する。
表１７：ＡＤ４−１３１３０およびＡＤ４−１３１９２についての薬物動態パラメータ
【表７１】
2013516479.tif 000091
【０３６２】
１ｍｇ／ｋｇの用量のＡＤ４−１３１３０およびＡＤ４−１３１９２を静脈内投与すると、各々、平均Ｃｍａｘが６６９±４５および３５５０±５７１ｎｇ／ｍＬに達した（表１７）。平均クリアランスおよび分配容量は、ＡＤ４−１３１３０について、各々、１.６４Ｌ／時間／ｋｇおよび３.２４Ｌ／ｋｇ、およびＡＤ４−１３１９２について、各々、０.７２Ｌ／時間／ｋｇおよび０.５６Ｌ／ｋｇであった（表１７を参照）。半減期の平均は、ＡＤ４−１３１９２およびＡＤ４−１３１３０について、各々、１.４７ないし１.８６時間の範囲と同じようであるらしかった（表１７を参照）。５ｍｇ／ｋｇで経口投与すると、ＡＤ４−１３１３０およびＡＤ４−１３１９２は、各々、１および０.５時間で、１３１±５１および５９±２１ｎｇ／ｍＬの平均Ｃｍａｘに達した（表１７を参照）。試験化合物は共に経口生体利用能（％）を示した：ＡＤ４−１３１３０（１０.１）およびＡＤ４−１３１９２（１.７）（表１７を参照）。
実施例１０：１５０５類化合物の構造および機能
【０３６３】
以下の実施例は、アミノピリジン環およびベンズアルデヒド誘導化環について、安定性、抗増殖活性およびアポトーシスと関連する１５０５類化合物の構造を示す。
【０３６４】
アミノピリジン環の安定性
【０３６５】
ヒドロキシキノリンアナログの安定性を測定した（例、表１８を参照）。ＭＬＭはマウス肝ミクロソームと一緒に３０分間インキュベートした後に残っている割合を示す。ＨＬＭはヒト肝ミクロソームと一緒に３０分間インキュベートした後に残っている割合を示す。
【化１９】
2013516479.tif 000092
【０３６６】
結果はアミノピリジンの５−位での塩素原子による置換により安定性の強化が得られることを示した。アミノピリジンの３−位でのメチル基による付加的な置換により、安定性がさらに強化されることを示した。
【０３６７】
アミノピリジン環の抗増殖活性.
【０３６８】
アミノピリジン環上でハロゲンとアルキル基の種々の組み合わせを有する化合物についての抗増殖活性（すなわち、癌細胞のインビトロでの増殖の抑制）を測定した。
【０３６９】
結果は以下の置換パターンが良好な抗増殖活性を有することを示した：
【化２０】
2013516479.tif 000093
【０３７０】
結果は以下の置換パターンが極めて良好な抗増殖活性を有することを示した：
【化２１】
2013516479.tif 000094
【０３７１】
次の置換パターンが試験した化合物の最高の抗増殖活性を示した：
【化２２】
2013516479.tif 000095
【０３７２】
アミノピリジン環のアポトーシス活性.
【０３７３】
アミノピリジン環上で置換されている化合物についてのアポトーシス活性（すなわち、カスパーゼ、ＤＮＡ断片化、アネキシン−Ｖ）を測定した。
【０３７４】
結果は、アミノピリジン環の５−位にクロロ基を有するアナログおよび３−または４−位に付加的にクロロまたはメチル基を有するアナログがアポトーシスの亢進を示すことを明らかにした。アミノピリジン環の５−位にクロロ基を有し、３−または４−位に付加的にクロロまたはメチル基を有するアナログの例は：
【化２３】
2013516479.tif 000096
を包含する。
【０３７５】
ベンズアルデヒド誘導化環の安定性
【０３７６】
ベンズアルデヒド誘導化環を有するアナログの安定性を測定した（例、表１８を参照）。ＭＬＭはマウス肝ミクロソームと一緒に３０分間インキュベートした後に残っている割合を示す。ＨＬＭはヒト肝ミクロソームと一緒に３０分間インキュベートした後に残っている割合を示す。
【０３７７】
結果はベンゼン環の２−および４−位にある基が肝ミクロソームインキュベーションに対して安定しているアナログを提供することを示した。
【化２４】
2013516479.tif 000097
【０３７８】
典型的な結果は次のとおりである：
【化２５】
2013516479.tif 000098
【０３７９】
結果はまた、２,４−ジクロロ置換パターンが次のＡＤ４−１３１６５およびＡＤ４−１３２０６の例により示されるような良好な安定性を提供することを示した：
【化２６】
2013516479.tif 000099
【０３８０】
ベンズアルデヒド誘導化環の抗増殖活性
【０３８１】
ベンゼン環上でハロゲンとトリフルオロメチル基の種々の組み合わせを有する化合物についての抗増殖活性（すなわち、癌細胞のインビトロにおける増殖の抑制）を測定した。ベンゼン環上の望ましい置換パターンの例が以下に提供される。
【０３８２】
結果は次の置換パターンが良好な抗増殖活性を有することを示した：
【化２７】
2013516479.tif 000100
【０３８３】
結果は次の置換パターンが極めて良好な抗増殖活性を有することを示した：
【化２８】
2013516479.tif 000101
【０３８４】
次の置換パターンが試験した化合物の最高の抗増殖活性を示した：
【化２９】
2013516479.tif 000102
【０３８５】
ベンズアルデヒド誘導化環のアポトーシス活性
【０３８６】
ベンズアルデヒド環上で置換されている化合物についてのアポトーシス活性（すなわち、カスパーゼ、ＤＮＡ断片化、アネキシン−Ｖ）を測定した。
【０３８７】
結果は、ベンゼン環の４−位にクロロ基を有するアナログおよび２−または３−位に付加的にクロロまたはフルオロ基を有するアナログがアポトーシスの亢進を示すことを明らかにした。アポトーシス活性の亢進を示すアナログの例はＡＤ４−１３１３、ＡＤ４−１３１８５およびＡＤ４−１３１７８を包含する。
【化３０】
2013516479.tif 000103
表１８：化合物の安定性
【表７２】
2013516479.tif 000104
【表７３】
2013516479.tif 000105
【表７４】
2013516479.tif 000106
【０３８８】
実施例１１：中間化合物の合成
以下の実施例は本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物の合成に用いられる中間化合物の合成を記載する。
【０３８９】
ＢＢＭ−００１−０６５
【０３９０】
２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン（ＣＡＳで同定されていない）の調製：
【０３９１】
工程１：
【化３１】
2013516479.tif 000107
【０３９２】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Wonda Science、カタログ番号０１０６０、ＣＡＳ［２４６８４７−９８−３］；１４.６ｇ、０.１モル）を、少量のＦｅＣｌ３（５０ｍｇ）を含む、ＡｃＯＨ（１０ｇ）中のＡｃ２Ｏ（１５ｇ）で処理する。該混合物を室温で３時間攪拌し、その間に白色固体を形成する。水（３００ｍｌ）を加え、該混合物を室温で１時間攪拌する。該混合物を濾過し、固体を水（３ｘ５００ｍｌ）で洗浄する。該固体を風乾させ、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶化させ、Ｎ−（３−フルオロ−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジンを白色固体として得る（融点１６５−１６６℃）。
【０３９３】
工程２：
【化３２】
2013516479.tif 000108
【０３９４】
Ｎ−（３−フルオロ−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジン（１４.６ｇ、０.１０モル）およびジイソプロピルアミン（２５.３ｇ、０.２５モル）を無水ＴＨＦ（２００ｍｌ）に溶かし、攪拌し、ドライアイス−アセトン浴にて−７０℃に冷却する。ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ、１００ｍｌ、０.２５モル）を滴下し、内部温度を−６０℃より下に維持し、その一方で攪拌を２時間続ける。ついでヨードメタン（２８.４ｇ、０.２０モル）を滴下する。反応混合物を−６０℃と−７０℃の間で付加的に２時間攪拌する。ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液をゆっくりと−７０℃で反応物に添加する。混合物を攪拌し、室温に加温する。該混合物をＥｔＯＡｃ（３ｘ１００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出液を水およびブラインで洗浄し、次にＭｇＳＯ４上で乾燥させて濾過する。溶媒をロトバップ（rotovap）を用いて蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。適当なフラクションをロトバップ上で蒸発させ、残渣をヘキサンでトリチュレートして白色固体を形成させる。該固体を濾過し、Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジンを白色固体として得る（融点１２４−１２５℃）。
【０３９５】
工程３：
【化３３】
2013516479.tif 000109
【０３９６】
Ｎ−（３−フルオロ−４−メチル−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジン（１３.６ｇ、０.０８５ミリモル）をＭｅＯＨ（３０ｍｌ）に溶かし、濃ＨＣｌ（２０ｍｌ）で処理する。混合物を攪拌し、還流温度で４時間加温する。該混合物を室温に冷却し、溶媒をロトバップを用いて除去する。該残渣に氷および３Ｎ  ＮａＯＨを加えてｐＨを９−１０に調整する。混合物をＥｔ２Ｏで抽出し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させる。溶液を濾過し、溶媒をロトバップ上で除去する。残渣をヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃで溶出するフラッシュシリカゲルカラムを用いて精製し、２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジンを白色固体として得る（融点１３６−１３８℃）。
【０３９７】
ＢＢＭ−００１−０７２
【０３９８】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＣＡＳで同定されていない）の調製：
【化３４】
2013516479.tif 000110
【０３９９】
２−アミノ−３−エチルピリジン（Wonda Science、ＣＡＳ［４２７５３−６７−３］；１２.２ｇ、０.１モル）を、１０ｍｌのＤＭＦを含む、５００ｍｌの酢酸エチル中で攪拌することで溶解させる。温度計を該溶液に入れ、温度をモニターする。Ｎ−クロロスクシンイミド（１３.３ｇ、０.１モル）を数回に分けて添加し、該溶液を室温に維持する。該溶液の色相が暗くなり、それを室温で一夜攪拌する。上澄を形成された暗色固体よりデカントし、分離漏斗に移す。有機溶液を５００ｍｌの重亜硫酸ナトリウム飽和水溶液で、ついで５００ｍｌのブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ロトバップで濃縮させる。暗褐色粗生成物を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するフラッシュシリカゲル（５００ｇ）上のクロマトグラフィーに付す。適当なフラクションをロトバップ上で濃縮し、明黄褐色油を得る。該油をヘキサンに溶かし、活性炭を用いて脱色する。該溶媒を−２０℃に冷却し、形成する固体を濾過で単離し、生成物をフレーク状の灰白色固体として得る（融点６７−６８℃）。
【０４００】
ＢＢＭ−００１−０１１
【０４０１】
２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン（ＣＡＳ１２４２３３６−５３−３）の調製：
【化３５】
2013516479.tif 000111
【０４０２】
３−メトキシ−２−アミノピリジン（Wonda Science、カタログ番号０１６８３；１２.４ｇ、０.０１モル）を５００ｍｌの酢酸エチル中に攪拌することで溶解させる。温度計を該溶液中に置き、温度をモニターする。Ｎ−クロロスクシンイミド（１３.３ｇ、０.０１モル）を数回に分けて添加し、該溶液を室温で維持する。該溶液の色相が暗くなり、室温で一夜攪拌する。上澄を形成された暗色固体よりデカントし、分離漏斗に移す。有機溶液を５００ｍｌの重亜硫酸ナトリウム飽和水溶液で、ついで５００ｍｌのブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ロトバップ上で濃縮させる。暗褐色粗生成物を３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するフラッシュシリカゲル（５００ｇ）上のクロマトグラフィーに付す。適当なフラクションをロトバップ上で濃縮し、明色固体を得る。該固体をヘキサンに懸濁させ、攪拌して濾過し、該生成物を山吹色固体として得る（融点９３−９４℃）。
【０４０３】
ＢＢＭ−００１−０４９
【０４０４】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＣＡＳ１８８５７７−６８−６）の調製：
【化３６】
2013516479.tif 000112
【０４０５】
４−クロロ−２−アミノピリジン（Matrix Scientific）、カタログ番号２３８０９；１.２９ｇ、０.０１モル）を撹拌することで５００ｍｌの酢酸エチルに溶かす。温度計を該溶液に入れ、温度をモニターする。Ｎ−クロロスクシンイミド（１３.３ｇ、０.０１モル） を数回に分けて添加し、該溶液を室温に維持する。該溶液の色相が暗くなり、室温で一夜撹拌する。上澄を形成された暗色固体よりデカントし、分離漏斗に移す。有機溶液を５００ ｍｌの 重亜硫酸ナトリウム飽和水溶液で、ついで５００ ｍｌのブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ロトバップで濃縮する。暗褐色粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２で溶出する５００ｇのフラッシュシリカゲル上のクロマトグラフィーに付す。適当なフラクションをロトバップで濃縮し、明黄褐色固体を得る。該固体をＥｔＯＡｃに溶かし、活性炭で脱色する。ＥｔＯＡｃをロトバップを用いて取り除き、得られた固体を氷冷したＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、濾過し、白色固体として生成物を得る（融点１４２−１４３℃）。
【０４０６】
ＢＢＭ−００１−０７４
【０４０７】
２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン（ＣＡＳで同定されていない）の調製：
【０４０８】
工程１：
【０４０９】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５にて上記されるように
【化３７】
2013516479.tif 000113
を行う。
【０４１０】
工程２：
【化３８】
2013516479.tif 000114
【０４１１】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、Ｎ−（３−フルオロ−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジン（１４.６ｇ、０.１０モル）およびジイソプロピルアミン（２５.３ｇ、０.２５モル）を合わせ、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ、１００ ｍｌ、０.２５モル）で処理し、ついでヨードエタン（３１.２ｇ、０.２モル）で処理し、Ｎ−（３−フルオロ−４−エチル−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジンを白色固体として得た（融点１１２−１１３℃）。
【０４１２】
工程３：
【化３９】
2013516479.tif 000115
【０４１３】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、Ｎ−（３−フルオロ−４−エチル−５−クロロ）−２−アセトアミドピリジン（１６.０ｇ、０.０９２ミリモル）をＭｅＯＨ（３０ ｍｌ）および濃ＨＣｌ（２０ ｍｌ）で処理し、２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジンを白色固体として得た（融点７１−７２℃）。
【０４１４】
ＢＢＭ−００１−０６４
【０４１５】
２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジン（ＣＡＳで同定されていない）の調製：
【０４１６】
工程１：
【０４１７】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５にて上記されるように
【化４０】
2013516479.tif 000116
を行う。
【０４１８】
Ｎ−（３,５−ジフルオロ）−２−アセトアミドピリジンをＥｔＯＡｃ／ヘキサンより結晶化させ、白色固体を単離する（融点１４２−１４４℃）。
【０４１９】
工程２：
【化４１】
2013516479.tif 000117
【０４２０】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、Ｎ−（３,５−ジフルオロ）−２−アセトアミドピリジン（１３.０ｇ、０.１０モル）およびジイソプロピルアミン（２５.３ｇ、０.２５モル）を合わせ、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ、１００ ｍｌ、０.２５モル）で、ついでヨードメタン（２８.４ｇ、０.２０モル）で処理し、Ｎ−（３,５−ジフルオロ−４−メチル）−２−アセトアミドピリジンを白色固体として得る（融点９２−９３℃）。
【０４２１】
工程３：
【化４２】
2013516479.tif 000118
【０４２２】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、Ｎ−（３,５−ジフルオロ−４−メチル）−２−アセトアミドピリジン（１３.０ｇ、０.０９モル）をＭｅＯＨ（３０ ｍｌ）および濃ＨＣｌ（２０ ｍｌ）で処理し、２−アミノ−４−メチル−３,５−ジフルオロピリジンを白色固体として得る（融点９２−９３℃）。
【０４２３】
ＩＪＴ−００１−０９０
【０４２４】
２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジン（ＣＡＳ３６９３６−２３−９）の調製：
【化４３】
2013516479.tif 000119
【０４２５】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）をＮ−クロロスクシンイミドで処理し、２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジンを明黄色固体として得る（融点７３−７４℃）。
【０４２６】
ＢＢＭ−００１−０７１
【０４２７】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（ＣＡＳ１１７３０１９−４５−８）の調製：
【０４２８】
実施例ＢＢＭ−００１−０６５において上記されている方法にて、２−アミノ−３−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.０８ｇ、０.０１モル）をＮ−クロロスクシンイミドで処理し、２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジンを白色固体として得る（融点６３−６４℃）。
【０４２９】
ＢＢＭ−００１−００９
【０４３０】
２,３,５,６−テトラフルオロ−４−（２’２’２’−トリフルオロエトキシ）ベンズアルデヒドの調製：
【化４４】
2013516479.tif 000120
【０４３１】
ペンタフルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products、カタログ番号００２８３５、１９.６ｇ、０.１モル）および硫酸水素テトラブチルアンモニウム、Ｂｕ４ＮＨＳＯ４（５０ ｍｇ、０.００１５モル）を５００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶かす。２,２,２−トリフルオロエタノール（１０.０ｇ、０.０１モル）を添加し、該混合物を撹拌し、氷浴にて冷却する。水酸化ナトリウムペレット（４.０ｇ、０.０１モル）を１００ ｍｌの水に溶かし、滴下漏斗を用いて該混合物にゆっくりと添加する。該混合物の温度をモニターする。５℃未満に維持するように添加速度を調整する。添加終了後、該混合物を５℃でさらに２時間撹拌し、ついで分離漏斗に移す。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒をロトバップを用いて蒸発させ、残りの油を短経路器具を用いて部分的に蒸留させる。沸点が１０５−１０８℃の範囲にあるフラクションは所望の化合物を含有する。
【０４３２】
ＩＪＴ−００２−０５９
【０４３３】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−４−メチルピリジン（ＣＡＳ３１４３０−４７−４）の調製：
【化４５】
2013516479.tif 000121
【０４３４】
２−アミノ−４−ピコリン（Wonda Science、カタログ番号１１２４、７.１３ｇ、０.０５モル）を撹拌することで２５ ｍｌのＤＭＦに溶かす。温度計を該溶液に入れて温度をモニターする。Ｎ−クロロスクシンイミド（６.６８ｇ、０.０５モル）を直ちにすべて添加する。該混合物を５０℃で３時間加熱する。暗色溶液を氷水に注ぎ、固体を分離し、濾過で集め、５００ｍｌの水で洗浄した。固体を一夜風乾させた。固体生成物をエーテル／ヘキサン（２：１）に溶かし、活性炭で処理した。該溶液を濾過し、溶媒をロトバップで除去した。得られた明黄褐色固体を５０ｍｌのヘキサン中にて撹拌し、濾過し、減圧下で乾燥させた（融点１２６−１２７℃）。
【０４３５】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−４,６−ジメチルピリジン（ＣＡＳ３１４３０−４７−４）の調製：
【０４３６】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−４,６−ジメチルピリジンは、出発物質として、２−アミノ−４,６−ジメチルピリジンを用いるが、２−アミノ−３,５−ジクロロ−４,６−メチルピリジンについて記載されるように調製され得る。
【０４３７】
実施例１２：ＡＤ４−１５０５類化合物の合成
【０４３８】
以下の実施例は、本願明細書に記載のＡＤ４−１５０５類化合物の合成を記載する。特記しない限り、実施例１１の中間化合物である。
【０４３９】
ＡＤ４−１３０２１の調製：
【化４６】
2013516479.tif 000122
【０４４０】
２−アミノ−４−ピコリン（１.０８ｇ、０.０１モル）および４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（２.０８ｇ、０.０１モル）を１００ ｍｌの丸底フラスコ中で評量し、５０ｍｌの無水ＥｔＯＨと一緒に撹拌して溶かす。８−ヒドロキシキナルジン（１.５９ｇ、０.０１モル）を加え、透明な黄色がかった溶液が得られるまで、該混合物を室温で２、３分撹拌する。ついで、該反応混合物をプラスチック製栓で蓋をし、室温で１４日間撹拌する。ＴＬＣ（シリカゲル、２：１  ヘキサン／アセトン）は、８−ヒドロキシキナルジンスポットのわずか下にある大きな新たなスポットに加えて、出発物質がいくらか残っていることを示す。該粗物質を２−２５％アセトン／ヘキサンで溶出する５００ｍｌのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーに付す。溶出溶媒は次のとおりである：１リットルの２％アセトン／ヘキサン；１リットルの３％アセトン／ヘキサン；１リットルの５％アセトン／ヘキサン；１リットルの７.５％アセトン／ヘキサン；１リットルの１０％アセトン／ヘキサン；１リットルの１５％アセトン／ヘキサン；１リットルの２０％アセトン／ヘキサンおよび１リットルの２５％アセトン／ヘキサン。１５０ ｍｌのフラクションを集める。フラクション１−３は未反応の８−ヒドロキシキナルジンを含有する。生成物を含有するフラクション１１−１３をロトバップで濃縮し、明緑色油を得る。該油を２、３ｍｌのアセトンを含む２００ｍｌのヘキサンに溶かす。得られた溶液を室温で一夜放置する。２.９ｇの生成物が灰白色結晶固体として形成し、濾過により単離する。
【０４４１】
ＴＬＣ：
【０４４２】
２,３−ジフルオロ−４−メチルベンズアルデヒド  Ｒｆ＝０.８
【０４４３】
８−ヒドロキシキナルジン  Ｒｆ＝０.７
【０４４４】
生成物  Ｒｆ＝０.５５
【０４４５】
２−アミノ−４−ピコリン  Ｒｆ＝０.２
【０４４６】
８−ヒドロキシキナルジンおよび生成物は共に長波長（３６６ｎＭ）ＵＶ光の下で明黄色の蛍光を発し、生成物は短波長（２５４ｎＭ）ＵＶ光の下でも明黄色の蛍光を発する。空気中で数時間放置した後、８−ヒドロキシキナルジンおよび生成物の両方からのＴＬＣスポットは、染色することなく、黄色に、ついで褐色に変化する。
【０４４７】
ＡＤ４−１３０２２の調製：
【化４７】
2013516479.tif 000123
【０４４８】
２−アミノ−４−ピコリン（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３−ジフルオロ−４−メチルベンズアルデヒド（１.５６ｇ、０.０１モル）を１００ｍｌの丸底フラスコ中で評量し、ついで５０ｍｌの無水ＥｔＯＨと一緒に撹拌して溶かした。８−ヒドロキシキナルジン（１.５９ｇ、０.０１モル）を加え、該混合物を、透明な黄色がかった溶液が得られるまで、室温で２、３分の間撹拌した。ついで、該反応混合物をプラスチック製栓で蓋をし、室温で１４日間撹拌した。撹拌を停止し、フラスコを室温で一夜保持して、白色固体を観察した。ＴＬＣ（シリカゲル、２：１  ヘキサン／アセトン）は、８−ヒドロキシキナルジンスポットのわずか下にある大きな新たなスポットに加えて、出発物質がいくらか残っていることを示した。上澄をデカントし、該白色固体を１００ｍｌのＥｔ２Ｏと一緒に撹拌し、ついで濾過した。白色固体を５００ｍｌのエルレンマイヤーフラスコに移し、２００ｍｌのアセトンと一緒に撹拌した。緩やかに約５０℃で加温し、明黄色透明溶液を生成し、それを１ｇのDarco-G-60脱色チャコールで処理した。該チャコールをセライトを介する濾過により除去し、その後で該セライトを付加的な５０ｍｌのアセトンで洗浄した。ついで、該アセトン溶液を等容量（２５０ｍｌ）のヘキサンと合わせ、室温で４時間放置した。１.５ｇの生成物は白色結晶固体を形成し、濾過により実質的に純粋な形態（９９％）にて単離した。
【０４４９】
ＴＬＣ：
【０４５０】
２,３−ジフルオロ−４−メチルベンズアルデヒド  Ｒｆ＝０.８
【０４５１】
８−ヒドロキシキナルジン  Ｒｆ＝０.７
【０４５２】
生成物  Ｒｆ＝０.４５
【０４５３】
２−アミノ−４−ピコリン  Ｒｆ＝０.２
【０４５４】
８−ヒドロキシキナルジンおよび生成物は共に長波長（３６６ｎＭ）ＵＶ光の下で明黄色の蛍光を発し、生成物は短波長（２５４ｎＭ）ＵＶ光の下でも明黄色の蛍光を発する。空気中で数時間放置した後、８−ヒドロキシキナルジンおよび生成物の両方からのＴＬＣスポットは、染色することなく、黄色に、ついで褐色に変化する。
【０４５５】
ＡＤ４−１２９０２の調製：
【化４８】
2013516479.tif 000124
【０４５６】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４５７】
２−アミノ−６−ピコリン（１.０８ｇ、０.０１モル）および４−トリフルオロメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９０ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応（Betti condensation）生成物を灰白色固体として得る（融点１３０−１３１℃）。生成物を濾過により単離する。
【０４５８】
ＡＤ４−１２９０３の調製：
【化４９】
2013516479.tif 000125
【０４５９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０４６０】
２−アミノ−６−ピコリン（１.０８ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１５９−１６０℃）。生成物を濾過により単離する。
【０４６１】
ＡＤ４−１２９０４の調製：
【化５０】
2013516479.tif 000126
【０４６２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４６３】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点２１１−２１２℃）。
【０４６４】
ＡＤ４−１２９０５の調製：
【化５１】
2013516479.tif 000127
【０４６５】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４６６】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９５−１９６℃）。
【０４６７】
ＡＤ４−１２９０６の調製：
【化５２】
2013516479.tif 000128
【０４６８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４６９】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７６−１７７℃）。
【０４７０】
ＡＤ４−１２９０７の調製：
【化５３】
2013516479.tif 000129
【０４７１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４７２】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点１７６−１７９℃）。
【０４７３】
ＡＤ４−１２９０８の調製：
【化５４】
2013516479.tif 000130
【０４７４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０４７５】
３−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点１１９−１２１℃）。
【０４７６】
ＡＤ４−１２９０９の調製：
【化５５】
2013516479.tif 000131
【０４７７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０４７８】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７９−１８１℃）。
【０４７９】
ＡＤ４−１２９１０の調製：
【化５６】
2013516479.tif 000132
【０４８０】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４８１】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８９−１９１℃）。
【０４８２】
ＡＤ４−１２９１１の調製：
【化５７】
2013516479.tif 000133
【０４８３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４８４】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９４−１９６℃）。
【０４８５】
ＡＤ４−１２９１２の調製：
【化５８】
2013516479.tif 000134
【０４８６】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４８７】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８５−１８７℃）。
【０４８８】
ＡＤ４−１２９１３の調製：
【化５９】
2013516479.tif 000135
【０４８９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４９０】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１８０−１８２℃）。
【０４９１】
ＡＤ４−１２９１４の調製：
【化６０】
2013516479.tif 000136
【０４９２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４９３】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４１−１４２℃）。
【０４９４】
ＡＤ４−１２９１５の調製：
【化６１】
2013516479.tif 000137
【０４９５】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４９６】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６９−１７０℃）。
【０４９７】
ＡＤ４−１２９１６の調製：
【化６２】
2013516479.tif 000138
【０４９８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０４９９】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１７５−１７６℃）。
【０５００】
ＡＤ４−１２９１７の調製：
【化６３】
2013516479.tif 000139
【０５０１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５０２】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６１−１６４℃）。
【０５０３】
ＡＤ４−１２９１８の調製：
【化６４】
2013516479.tif 000140
【０５０４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５０５】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１７１−１７３℃）。生成物を濾過により単離する。
【０５０６】
ＡＤ４−１２９５４の調製：
【化６５】
2013516479.tif 000141
【０５０７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５０８】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８９−１９１℃）。
【０５０９】
ＡＤ４−１２９５５の調製：
【化６６】
2013516479.tif 000142
【０５１０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５１１】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７３−１７４℃）。
【０５１２】
ＡＤ４−１２９５８の調製：
【化６７】
2013516479.tif 000143
【０５１３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５１４】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１９３−１９５℃）。
【０５１５】
ＡＤ４−１２９５９の調製：
【化６８】
2013516479.tif 000144
【０５１６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５１７】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１８３−１８４℃）。
【０５１８】
ＡＤ４−１３０１９の調製：
【化６９】
2013516479.tif 000145
【０５１９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５２０】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７２−１７５℃）。
【０５２１】
ＡＤ４−１３０２０の調製：
【化７０】
2013516479.tif 000146
【０５２２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５２３】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６４−１６６℃）。
【０５２４】
ＡＤ４−１３０２３の調製：
【化７１】
2013516479.tif 000147
【０５２５】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５２６】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１８４−１８６℃）。
【０５２７】
ＡＤ４−１３０２４の調製：
【化７２】
2013516479.tif 000148
【０５２８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５２９】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１８２−１８５℃）。
【０５３０】
ＡＤ４−１３０２５の調製：
【化７３】
2013516479.tif 000149
【０５３１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５３２】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１７７−１８０℃）。
【０５３３】
ＡＤ４−１３０２６の調製：
【化７４】
2013516479.tif 000150
【０５３４】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５３５】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６３−１６５℃）。
【０５３６】
ＡＤ４−１３０２７の調製：
【化７５】
2013516479.tif 000151
【０５３７】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０５３８】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６２−１６６℃）。
【０５３９】
ＡＤ４−１３０２８の調製：
【化７６】
2013516479.tif 000152
【０５４０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５４１】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点８２−９４℃）。
【０５４２】
ＡＤ４−１３０２９の調製：
【化７７】
2013516479.tif 000153
【０５４３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５４４】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジフルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１２４−１３４℃）。
【０５４５】
ＡＤ４−１３０３０の調製：
【化７８】
2013516479.tif 000154
【０５４６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５４７】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点８６−８７℃）。
【０５４８】
ＡＤ４−１３０３１の調製：
【化７９】
2013516479.tif 000155
【０５４９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５５０】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１２６−１３２℃）。
【０５５１】
ＡＤ４−１３０３２の調製：
【化８０】
2013516479.tif 000156
【０５５２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５５３】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点８１−９６℃）。
【０５５４】
ＡＤ４−１３０３３の調製：
【化８１】
2013516479.tif 000157
【０５５５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５５６】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１３１−１４３℃）。
【０５５７】
ＡＤ４−１３０３４の調製：
【化８２】
2013516479.tif 000158
【０５５８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５５９】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１１０−１１７℃）。
【０５６０】
ＡＤ４−１３０３５の調製：
【化８３】
2013516479.tif 000159
【０５６１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５６２】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１３７−１５５℃）。
【０５６３】
ＡＤ４−１３０３６の調製：
【化８４】
2013516479.tif 000160
【０５６４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５６５】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジフルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１３６−１３８℃）。
【０５６６】
ＡＤ４−１３０３７の調製：
【化８５】
2013516479.tif 000161
【０５６７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５６８】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１１７−１２０℃）。
【０５６９】
ＡＤ４−１３０３８の調製：
【化８６】
2013516479.tif 000162
【０５７０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５７１】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix）（１.９２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１２６−１２７℃）。
【０５７２】
ＡＤ４−１３０３９の調製：
【化８７】
2013516479.tif 000163
【０５７３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５７４】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点９９−１０２℃）。
【０５７５】
ＡＤ４−１３０４０の調製：
【化８８】
2013516479.tif 000164
【０５７６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５７７】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１） を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点８２−８５℃）。
【０５７８】
ＡＤ４−１３０４１の調製：
【化８９】
2013516479.tif 000165
【０５７９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５８０】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１０８−１１０℃）。
【０５８１】
ＡＤ４−１３０４２の調製：
【化９０】
2013516479.tif 000166
【０５８２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５８３】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１０６−１０９℃）。
【０５８４】
ＡＤ４−１３０４３の調製：
【化９１】
2013516479.tif 000167
【０５８５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５８６】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１２８−１３１℃）。
【０５８７】
ＡＤ４−１３０４４の調製：
【化９２】
2013516479.tif 000168
【０５８８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５８９】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１５４−１５５℃）。
【０５９０】
ＡＤ４−１３０４５の調製：
【化９３】
2013516479.tif 000169
【０５９１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５９２】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジフルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１７１−１７３℃）。
【０５９３】
ＡＤ４−１３０４６の調製：
【化９４】
2013516479.tif 000170
【０５９４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５９５】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１６４−１６５℃）。
【０５９６】
ＡＤ４−１３０４７の調製：
【化９５】
2013516479.tif 000171
【０５９７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０５９８】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１３６−１４０℃）。
【０５９９】
ＡＤ４−１３０４８の調製：
【化９６】
2013516479.tif 000172
【０６００】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６０１】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１１０−１３４℃）。
【０６０２】
ＡＤ４−１３０４９の調製：
【化９７】
2013516479.tif 000173
【０６０３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６０４】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１４５−１５９℃）。
【０６０５】
ＡＤ４−１３０５０の調製：
【化９８】
2013516479.tif 000174
【０６０６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６０７】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジフルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点８８−９３℃）。
【０６０８】
ＡＤ４−１３０５１の調製：
【化９９】
2013516479.tif 000175
【０６０９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６１０】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を褐色固体として得る（融点９９−１１１℃）。
【０６１１】
ＡＤ４−１３０５２の調製：
【化１００】
2013516479.tif 000176
【０６１２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６１３】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１６３−１６５℃）。
【０６１４】
ＡＤ４−１３０５３の調製：
【化１０１】
2013516479.tif 000177
【０６１５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６１６】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１１５−１３０℃）。
【０６１７】
ＡＤ４−１３０５４の調製：
【化１０２】
2013516479.tif 000178
【０６１８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６１９】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点９６−１２５℃）。
【０６２０】
ＡＤ４−１３０５５の調製：
【化１０３】
2013516479.tif 000179
【０６２１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６２２】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１３３−１３４℃）。
【０６２３】
ＡＤ４−１３０５６の調製：
【化１０４】
2013516479.tif 000180
【０６２４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６２５】
２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（Acros Organics）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６２６】
ＡＤ４−１３０５７の調製：
【化１０５】
2013516479.tif 000181
【０６２７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６２８】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.０９ｇ、０.０１モル）８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点７３−８８℃）。
【０６２９】
ＡＤ４−１３０５８の調製：
【化１０６】
2013516479.tif 000182
【０６３０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６３１】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６３２】
ＡＤ４−１３０５９の調製：
【化１０７】
2013516479.tif 000183
【０６３３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６３４】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物をワックス状緑色固体として得る。
【０６３５】
ＡＤ４−１３０６０の調製：
【化１０８】
2013516479.tif 000184
【０６３６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６３７】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物をワックス状緑色固体として得る。
【０６３８】
ＡＤ４−１３０６１の調製：
【化１０９】
2013516479.tif 000185
【０６３９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６４０】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix）（１.１２ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６４１】
ＡＤ４−１３０６２の調製：
【化１１０】
2013516479.tif 000186
【０６４２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６４３】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Matrix）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６４４】
ＡＤ４−１３０６３の調製：
【化１１１】
2013516479.tif 000187
【０６４５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６４６】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および４−（トリフルオロメチル）ベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６４７】
ＡＤ４−１３０６４の調製：
【化１１２】
2013516479.tif 000188
【０６４８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６４９】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６５０】
ＡＤ４−１３０６５の調製：
【化１１３】
2013516479.tif 000189
【０６５１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６５２】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６５３】
ＡＤ４−１３０６６の調製：
【化１１４】
2013516479.tif 000190
【０６５４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６５５】
３−アミノ−６−（トリフルオロメチル）ピリジン（Matrix）（１.６２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６５６】
ＡＤ４−１３０６７の調製：
【化１１５】
2013516479.tif 000191
【０６５７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６５８】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６５９】
ＡＤ４−１３０６８の調製：
【化１１６】
2013516479.tif 000192
【０６６０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６６１】
２−アミノ−５−クロロ−３−メチルピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジフルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【０６６２】
ＡＤ４−１３０６９の調製：
【化１１７】
2013516479.tif 000193
【０６６３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６６４】
２−アミノ−４−クロロピリジン（Matrix）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色固体として得る（融点１１８−１２１℃）。
【０６６５】
ＡＤ４−１３０７０の調製：
【化１１８】
2013516479.tif 000194
【０６６６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６６７】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点８７−９０℃）。
【０６６８】
ＡＤ４−１３０７１の調製：
【化１１９】
2013516479.tif 000195
【０６６９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０６７０】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix）（１.１２ｇ、０.０１モル）および３−（トリフルオロメチル）−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点７６−８６℃）。
【０６７１】
ＡＤ４−１３０７２の調製：
【化１２０】
2013516479.tif 000196
【０６７２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６７３】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７０−１７３℃）。
【０６７４】
ＡＤ４−１３０７３の調製：
【化１２１】
2013516479.tif 000197
【０６７５】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６７６】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６５−１６７℃）。
【０６７７】
ＡＤ４−１３０７４の調製：
【化１２２】
2013516479.tif 000198
【０６７８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６７９】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２４７−２５０℃）。
【０６８０】
ＡＤ４−１３０７５の調製：
【化１２３】
2013516479.tif 000199
【０６８１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６８２】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１２６−１２９℃）。
【０６８３】
ＡＤ４−１３０７６の調製：
【化１２４】
2013516479.tif 000200
【０６８４】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６８５】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２３０−２３２℃）。
【０６８６】
ＡＤ４−１３０７７の調製：
【化１２５】
2013516479.tif 000201
【０６８７】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６８８】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２２１−２２３℃）。
【０６８９】
ＡＤ４−１３０７８の調製：
【化１２６】
2013516479.tif 000202
【０６９０】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６９１】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５７−１５９℃）。
【０６９２】
ＡＤ４−１３０７９の調製：
【化１２７】
2013516479.tif 000203
【０６９３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６９４】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２１７−２１８℃）。
【０６９５】
ＡＤ４−１３０８０の調製：
【化１２８】
2013516479.tif 000204
【０６９６】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０６９７】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４９−１５０℃）。
【０６９８】
ＡＤ４−１３０８１の調製：
【化１２９】
2013516479.tif 000205
【０６９９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７００】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点２１４−２１６℃）。
【０７０１】
ＡＤ４−１３０８２の調製：
【化１３０】
2013516479.tif 000206
【０７０２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７０３】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５５−１５９℃）。
【０７０４】
ＡＤ４−１３０８３の調製：
【化１３１】
2013516479.tif 000207
【０７０５】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７０６】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点２０１−２０２℃）。
【０７０７】
ＡＤ４−１３０８４の調製：
【化１３２】
2013516479.tif 000208
【０７０８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７０９】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９１−１９７℃）。
【０７１０】
ＡＤ４−１３０８５の調製：
【化１３３】
2013516479.tif 000209
【０７１１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７１２】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロ−４−（２,２,２−トリフルオロエトキシ）ベンズアルデヒド（ＢＢＭ−００１−００９；２.７６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１３１−１３３℃）。
【０７１３】
ＡＤ４−１３０８６の調製：
【化１３４】
2013516479.tif 000210
【０７１４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７１５】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５５−１５６℃）。
【０７１６】
ＡＤ４−１３０８７の調製：
【化１３５】
2013516479.tif 000211
【０７１７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７１８】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１９４−１９７℃）。
【０７１９】
ＡＤ４−１３０８８の調製：
【化１３６】
2013516479.tif 000212
【０７２０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７２１】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６６−１６９℃）。
【０７２２】
ＡＤ４−１３０８９の調製：
【化１３７】
2013516479.tif 000213
【０７２３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７２４】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８１−１８３℃）。
【０７２５】
ＡＤ４−１３０９０の調製：
【化１３８】
2013516479.tif 000214
【０７２６】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７２７】
２−アミノ−６−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５９−１６１℃）。
【０７２８】
ＡＤ４−１３０９１の調製：
【化１３９】
2013516479.tif 000215
【０７２９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７３０】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０４−１０８℃）。
【０７３１】
ＡＤ４−１３０９２の調製：
【化１４０】
2013516479.tif 000216
【０７３２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７３３】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロ−４−（２,２,２−トリフルオロエトキシ）ベンズアルデヒド（ＢＢＭ−００１−００９；２.７６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４５−１４６℃）。
【０７３４】
ＡＤ４−１３０９３の調製：
【化１４１】
2013516479.tif 000217
【０７３５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７３６】
２−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロ−４−（２,２,２−トリフルオロエトキシ）ベンズアルデヒド（ＢＢＭ−００１−００９；２.７６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０６−１０９℃）。
【０７３７】
ＡＤ４−１３０９４の調製：
【化１４２】
2013516479.tif 000218
【０７３８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７３９】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１２３−１２６℃）。
【０７４０】
ＡＤ４−１３０９５の調製：
【化１４３】
2013516479.tif 000219
【０７４１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７４２】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９７−２０４℃）。
【０７４３】
ＡＤ４−１３０９６の調製：
【化１４４】
2013516479.tif 000220
【０７４４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７４５】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１６０−１６１℃）。
【０７４６】
ＡＤ４−１３０９７の調製：
【化１４５】
2013516479.tif 000221
【０７４７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７４８】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５５−１５６℃）。
【０７４９】
ＡＤ４−１３０９８の調製：
【化１４６】
2013516479.tif 000222
【０７５０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７５１】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４０−１４１℃）。
【０７５２】
ＡＤ４−１３０９９の調製：
【化１４７】
2013516479.tif 000223
【０７５３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７５４】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１２６−１２８℃）。
【０７５５】
ＡＤ４−１３１０１の調製：
【化１４８】
2013516479.tif 000224
【０７５６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７５７】
３−アミノピリジン（Acros Organics）（０.９４ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロ−４−（２,２,２−トリフルオロエトキシ）ベンズアルデヒド（ＢＢＭ−００１−００９；２.７６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を褐色固体として得る（融点７２−７６℃）。
【０７５８】
ＡＤ４−１３１０２の調製：
【化１４９】
2013516479.tif 000225
【０７５９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７６０】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１９３−１９５℃）。
【０７６１】
ＡＤ４−１３１０３の調製：
【化１５０】
2013516479.tif 000226
【０７６２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７６３】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１４８−１５０℃）。
【０７６４】
ＡＤ４−１３１０４の調製：
【化１５１】
2013516479.tif 000227
【０７６５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７６６】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４０ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄色固体として得る（融点１４４−１４５℃）。
【０７６７】
ＡＤ４−１３１０５の調製：
【化１５２】
2013516479.tif 000228
【０７６８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７６９】
２−アミノ−４−ピコリン（Acros Organics）（１.０８ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明橙色固体として得る（融点７４−７６℃）。
【０７７０】
ＡＤ４−１３１０６の調製：
【化１５３】
2013516479.tif 000229
【０７７１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７７２】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６７−１６８℃）。
【０７７３】
ＡＤ４−１３１０７の調製：
【化１５４】
2013516479.tif 000230
【０７７４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７７５】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および３−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１１０−１１２℃）。
【０７７６】
ＡＤ４−１３１０８の調製：
【化１５５】
2013516479.tif 000231
【０７７７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７７８】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および３−トリフルオロメチル−４−クロロbenzaldhyde（Oakwood Products）（２.０８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１７６−１７７℃）。
【０７７９】
ＡＤ４−１３１０９の調製：
【化１５６】
2013516479.tif 000232
【０７８０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７８１】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２０２−２０４℃）。
【０７８２】
ＡＤ４−１３１１０の調製：
【化１５７】
2013516479.tif 000233
【０７８３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７８４】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１１３−１１４℃）。
【０７８５】
ＡＤ４−１３１１１の調製：
【化１５８】
2013516479.tif 000234
【０７８６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７８７】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６３−１６５℃）。
【０７８８】
ＡＤ４−１３１１２の調製：
【化１５９】
2013516479.tif 000235
【０７８９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７９０】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１３５−１３６℃）。
【０７９１】
ＡＤ４−１３１１３の調製：
【化１６０】
2013516479.tif 000236
【０７９２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０７９３】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１１４−１１６℃）。
【０７９４】
ＡＤ４−１３１１４の調製：
【化１６１】
2013516479.tif 000237
【０７９５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７９６】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１３２−１３３℃）。
【０７９７】
ＡＤ４−１３１１５の調製：
【化１６２】
2013516479.tif 000238
【０７９８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０７９９】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６３−１６５℃）。
【０８００】
ＡＤ４−１３１１６の調製：
【化１６３】
2013516479.tif 000239
【０８０１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８０２】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６６−１６８℃）。
【０８０３】
ＡＤ４−１３１１７の調製：
【化１６４】
2013516479.tif 000240
【０８０４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８０５】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を 明黄色固体として得る（融点１６６−１６８℃）。
【０８０６】
ＡＤ４−１３１１８の調製：
【化１６５】
2013516479.tif 000241
【０８０７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８０８】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点２０９−２１６℃）。
【０８０９】
ＡＤ４−１３１１９の調製：
【化１６６】
2013516479.tif 000242
【０８１０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８１１】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４０−１４１℃）。
【０８１２】
ＡＤ４−１３１２０の調製：
【化１６７】
2013516479.tif 000243
【０８１３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０８１４】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６０−１６１℃）。
【０８１５】
ＡＤ４−１３１２１の調製：
【化１６８】
2013516479.tif 000244
【０８１６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８１７】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１５５−１５８℃）。
【０８１８】
ＡＤ４−１３１２２の調製：
【化１６９】
2013516479.tif 000245
【０８１９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８２０】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１９２−１９４℃）。
【０８２１】
ＡＤ４−１３１２３の調製：
【化１７０】
2013516479.tif 000246
【０８２２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８２３】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４７−１５０℃）。
【０８２４】
ＡＤ４−１３１２４の調製：
【化１７１】
2013516479.tif 000247
【０８２５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８２６】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,４−ビストリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（２.４２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１２２−１２７℃）。
【０８２７】
ＡＤ４−１３１２５の調製：
【化１７２】
2013516479.tif 000248
【０８２８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８２９】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１７４−１７５℃）。
【０８３０】
ＡＤ４−１３１２６の調製：
【化１７３】
2013516479.tif 000249
【０８３１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８３２】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１６４−１６５℃）。
【０８３３】
ＡＤ４−１３１２７の調製：
【化１７４】
2013516479.tif 000250
【０８３４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８３５】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４１−１４２℃）。
【０８３６】
ＡＤ４−１３１２８の調製：
【化１７５】
2013516479.tif 000251
【０８３７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８３８】
２−アミノ−４−メチル−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.２６ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点８７−９４℃）。
【０８３９】
ＡＤ４−１３１２９の調製：
【化１７６】
2013516479.tif 000252
【０８４０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８４１】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１６１−１６２℃）。
【０８４２】
ＡＤ４−１３１３０の調製：
【化１７７】
2013516479.tif 000253
【０８４３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８４４】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１５８−１６０℃）。
【０８４５】
ＡＤ４−１３１３１の調製：
【化１７８】
2013516479.tif 000254
【０８４６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８４７】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１４６−１４８℃）。
【０８４８】
ＡＤ４−１３１３２の調製：
【化１７９】
2013516479.tif 000255
【０８４９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０８５０】
２−アミノ−５−フルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.１２ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.１０ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点９６−１０４℃）。
【０８５１】
ＡＤ４−１３１３３の調製：
【化１８０】
2013516479.tif 000256
【０８５２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０８５３】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１５９−１６１℃）。
【０８５４】
ＡＤ４−１３１３４の調製：
【化１８１】
2013516479.tif 000257
【０８５５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８５６】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１３８−１３９℃）。
【０８５７】
ＡＤ４−１３１３５の調製：
【化１８２】
2013516479.tif 000258
【０８５８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８５９】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１８１−１８２℃）。
【０８６０】
ＡＤ４−１３１３６の調製：
【化１８３】
2013516479.tif 000259
【０８６１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８６２】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１８０−１８２℃）。
【０８６３】
ＡＤ４−１３１３７の調製：
【化１８４】
2013516479.tif 000260
【０８６４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８６５】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（０.５８ｇ、０.００３３モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１４８−１５０℃）。
【０８６６】
ＡＤ４−１３１３８の調製：
【化１８５】
2013516479.tif 000261
【０８６７】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０８６８】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７４−１７６℃）。
【０８６９】
ＡＤ４−１３１３９の調製：
【化１８６】
2013516479.tif 000262
【０８７０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８７１】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１６２−１６３℃）。
【０８７２】
ＡＤ４−１３１４０の調製：
【化１８７】
2013516479.tif 000263
【０８７３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８７４】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−６−フルオロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１８３−１８６℃）。
【０８７５】
ＡＤ４−１３１４１の調製：
【化１８８】
2013516479.tif 000264
【０８７６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８７７】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６９−１７３℃）。
【０８７８】
ＡＤ４−１３１４２の調製：
【化１８９】
2013516479.tif 000265
【０８７９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８８０】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン,ＢＢＭ−００１−０７１（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２２１−２２３℃）。
【０８８１】
ＡＤ４−１３１４３の調製：
【化１９０】
2013516479.tif 000266
【０８８２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８８３】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１２７−１２８℃）。
【０８８４】
ＡＤ４−１３１４４の調製：
【化１９１】
2013516479.tif 000267
【０８８５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８８６】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.９２ｇ、０.０１）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０１−１０８℃）。
【０８８７】
ＡＤ４−１３１４５の調製：
【化１９２】
2013516479.tif 000268
【０８８８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８８９】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および３−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点９３−９６℃）。
【０８９０】
ＡＤ４−１３１４６の調製：
【化１９３】
2013516479.tif 000269
【０８９１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８９２】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１２０−１２４℃）。
【０８９３】
ＡＤ４−１３１４７の調製：
【化１９４】
2013516479.tif 000270
【０８９４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８９５】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点８８−９３℃）。
【０８９６】
ＡＤ４−１３１４８の調製：
【化１９５】
2013516479.tif 000271
【０８９７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０８９８】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,６−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１９１−１９３℃）。
【０８９９】
ＡＤ４−１３１４９の調製：
【化１９６】
2013516479.tif 000272
【０９００】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９０１】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２２５−２２７℃）。
【０９０２】
ＡＤ４−１３１５０の調製：
【化１９７】
2013516479.tif 000273
【０９０３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９０４】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（０.８８ｇ、０.００５モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点９０−９５℃）。
【０９０５】
ＡＤ４−１３１５１の調製：
【化１９８】
2013516479.tif 000274
【０９０６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９０７】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および３−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４８−１４９℃）。
【０９０８】
ＡＤ４−１３１５２の調製：
【化１９９】
2013516479.tif 000275
【０９０９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９１０】
２−アミノ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.２９ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４４−１４８℃）。
【０９１１】
ＡＤ４−１３１５３の調製：
【化２００】
2013516479.tif 000276
【０９１２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９１３】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５４−１５６℃）。
【０９１４】
ＡＤ４−１３１５４の調製：
【化２０１】
2013516479.tif 000277
【０９１５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９１６】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１、１.４３ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１３６−１４４℃）。
【０９１７】
ＡＤ４−１３１５５の調製：
【化２０２】
2013516479.tif 000278
【０９１８】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９１９】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（０.４４ｇ、０.００３３モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１３０−１３１℃）。
【０９２０】
ＡＤ４−１３１５６の調製：
【化２０３】
2013516479.tif 000279
【０９２１】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９２２】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７５−１８１℃）。
【０９２３】
ＡＤ４−１３１５７の調製：
【化２０４】
2013516479.tif 000280
【０９２４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９２５】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１５９−１６３℃）。
【０９２６】
ＡＤ４−１３１５８の調製：
【化２０５】
2013516479.tif 000281
【０９２７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９２８】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１９５−１９９℃）。
【０９２９】
ＡＤ４−１３１５９の調製：
【化２０６】
2013516479.tif 000282
【０９３０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９３１】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１３８−１４１℃）。
【０９３２】
ＡＤ４−１３１６０の調製：
【化２０７】
2013516479.tif 000283
【０９３３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９３４】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５７−１６４℃）。
【０９３５】
ＡＤ４−１３１６１の調製：
【化２０８】
2013516479.tif 000284
【０９３６】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９３７】
２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジン（ＩＪＴ−００１−０９０；１.４３ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４３−１４６℃）。
【０９３８】
ＡＤ４−１３１６２の調製：
【化２０９】
2013516479.tif 000285
【０９３９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９４０】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および４−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０６−１０９℃）。
【０９４１】
ＡＤ４−１３１６３の調製：
【化２１０】
2013516479.tif 000286
【０９４２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９４３】
２−アミノ−３−フルオロ−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４７ｇ、０.０１モル）および２,３,５,６−テトラフルオロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７８ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６１−１６３℃）。
【０９４４】
ＡＤ４−１３１６４の調製：
【化２１１】
2013516479.tif 000287
【０９４５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９４６】
２−アミノ−５−トリフルオロメチルピリジン（Matrix Scientific）（１.６２ｇ、０.０１モル）および３−トリフルオロメチルベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７４ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１２７−１２８℃）。
【０９４７】
ＡＤ４−１３１６５の調製：
【化２１２】
2013516479.tif 000288
【０９４８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９４９】
２−アミノ−３−フルオロ−５−トリフルオロメチルピリジン（Matrix Scientific）（１.８０ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明灰色固体として得る（融点１３７−１３９℃）。
【０９５０】
ＡＤ４−１３１６６の調製：
【化２１３】
2013516479.tif 000289
【０９５１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９５２】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４２ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５８−１６０℃）。
【０９５３】
ＡＤ４−１３１６７の調製：
【化２１４】
2013516479.tif 000290
【０９５４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９５５】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン,ＢＢＭ−００１−０７１（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点９５−１０４℃）。
【０９５６】
ＡＤ４−１３１７２の調製：
【化２１５】
2013516479.tif 000291
【０９５７】
実施例１０に記載の方法と同様の方法にて；
【０９５８】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ g 、０.００８モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８０−１８２℃）。
【０９５９】
ＡＤ４−１３１７３の調製：
【化２１６】
2013516479.tif 000292
【０９６０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９６１】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および３−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点５６−６０℃）。
【０９６２】
ＡＤ４−１３１７４の調製：
【化２１７】
2013516479.tif 000293
【０９６３】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９６４】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点１３２−１３８℃）。
【０９６５】
ＡＤ４−１３１７５の調製：
【化２１８】
2013516479.tif 000294
【０９６６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９６７】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点８８−９２℃）。
【０９６８】
ＡＤ４−１３１７６の調製：
【化２１９】
2013516479.tif 000295
【０９６９】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【０９７０】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点６８−７０℃）。
【０９７１】
ＡＤ４−１３１７７の調製：
【化２２０】
2013516479.tif 000296
【０９７２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９７３】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ g 、０.００８モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１４５−１４７℃）。
【０９７４】
ＡＤ４−１３１７８の調製：
【化２２１】
2013516479.tif 000297
【０９７５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９７６】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ｇ、０.００８モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１５３−１５５℃）。
【０９７７】
ＡＤ４−１３１７９の調製：
【化２２２】
2013516479.tif 000298
【０９７８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９７９】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ｇ、０.００８モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９５−１９７℃）。
【０９８０】
ＡＤ４−１３１８０の調製：
【化２２３】
2013516479.tif 000299
【０９８１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９８２】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ｇ、０.００８モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１９２−１９５℃）。
【０９８３】
ＡＤ４−１３１８１の調製：
【化２２４】
2013516479.tif 000300
【０９８４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９８５】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点７９−８６℃）。
【０９８６】
ＡＤ４−１３１８２の調製：
【化２２５】
2013516479.tif 000301
【０９８７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９８８】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点６０−６８℃）。
【０９８９】
ＡＤ４−１３１８３の調製：
【化２２６】
2013516479.tif 000302
【０９９０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９９１】
２−アミノ−３,５−ジフルオロピリジン（Matrix Scientific）（１.３０ｇ、０.０１モル）および２−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１４０−１４１℃）。
【０９９２】
ＡＤ４−１３１８４の調製：
【化２２７】
2013516479.tif 000303
【０９９３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９９４】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.３０ｇ、０.００８モル）および３−トリフルオロメチル−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）、（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１６５−１６６℃）。
【０９９５】
ＡＤ４−１３１８５の調製：
【化２２８】
2013516479.tif 000304
【０９９６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【０９９７】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒド（Oakwood Products）（１.５９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５７−１５８℃）。
【０９９８】
ＡＤ４−１３１８６の調製：
【化２２９】
2013516479.tif 000305
【０９９９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０００】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（０１.４２ｇ、０.０１モル）および３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０３−１０５℃）。
【１００１】
ＡＤ４−１３１８７の調製：
【化２３０】
2013516479.tif 000306
【１００２】
実施例ＡＤ４−１３０２２に記載の方法と同様の方法にて：
【１００３】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１４０−１４１℃）。
【１００４】
ＡＤ４−１３１８８の調製：
【化２３１】
2013516479.tif 000307
【１００５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１００６】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および３−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１１６−１２１℃）。
【１００７】
ＡＤ４−１３１８９の調製：
【化２３２】
2013516479.tif 000308
【１００８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１００９】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５５−１５９℃）。
【１０１０】
ＡＤ４−１３１９０の調製：
【化２３３】
2013516479.tif 000309
【１０１１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０１２】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点８８−９２℃）。
【１０１３】
ＡＤ４−１３１９１の調製：
【化２３４】
2013516479.tif 000310
【１０１４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０１５】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.７５ｇ、０.０１モル）および３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１０４−１０５℃）。
【１０１６】
ＡＤ４−１３１９２の調製：
【化２３５】
2013516479.tif 000311
【１０１７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０１８】
２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０６５；１.６１ｇ０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７９−１８０℃）。
【１０１９】
ＡＤ４−１３１９３の調製：
【化２３６】
2013516479.tif 000312
【１０２０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０２１】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３,４−ジメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.６６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点４８−５３℃）。
【１０２２】
ＡＤ４−１３１９４の調製：
【化２３７】
2013516479.tif 000313
【１０２３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０２４】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および３,４−ジメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.６６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色油として得る。
【１０２５】
ＡＤ４−１３１９５の調製：
【化２３８】
2013516479.tif 000314
【１０２６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０２７】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および３,４−ジメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.６６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色油として得る。
【１０２８】
ＡＤ４−１３１９６の調製：
【化２３９】
2013516479.tif 000315
【１０２９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０３０】
２−アミノ−４−メチル−５−クロロピリジン（Matrix Scientific）（１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６５−１６６℃）。
【１０３１】
ＡＤ４−１３１９７の調製：
【化２４０】
2013516479.tif 000316
【１０３２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０３３】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１８７−１９０℃）。
【１０３４】
ＡＤ４−１３１９９の調製：
【化２４１】
2013516479.tif 000317
【１０３５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０３６】
２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０６５；１.６１ｇ０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６４−１６５℃）。
【１０３７】
ＡＤ４−１３２００の調製：
【化２４２】
2013516479.tif 000318
【１０３８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０３９】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキナルジン（Acros Organics）（１.５９ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点２１５−２１７℃）。
【１０４０】
ＡＤ４−１３２０２の調製：
【化２４３】
2013516479.tif 000319
【１０４１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０４２】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および３,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１５９−１６０℃）。
【１０４３】
ＡＤ４−１３２０３の調製：
【化２４４】
2013516479.tif 000320
【１０４４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０４５】
２−アミノ−３−フルオロ−４−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０６５；１.６１ｇ０.０１モル）および３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.５２ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点８７−９０℃）。
【１０４６】
ＡＤ４−１３２０６の調製：
【化２４５】
2013516479.tif 000321
【１０４７】
実施例に記載の方法と同様の方法にて；
【１０４８】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７１−１７５℃）。
【１０４９】
ＡＤ４−１３２０８の調製：
【化２４６】
2013516479.tif 000322
【１０５０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０５１】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１７８−１７９℃）。
【１０５２】
ＡＤ４−１３２０９の調製：
【化２４７】
2013516479.tif 000323
【１０５３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０５４】
２−アミノ−５−クロロ−６−メチルピリジン（ＩＪＴ−００１−０９０；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点９９−１０１℃）。
【１０５５】
ＡＤ４−１３２１０の調製：
【化２４８】
2013516479.tif 000324
【１０５６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０５７】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１３５−１４２℃）。
【１０５８】
ＡＤ４−１３２１１の調製：
【化２４９】
2013516479.tif 000325
【１０５９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０６０】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２１１−２１６℃）。
【１０６１】
ＡＤ４−１３２１２の調製：
【化２５０】
2013516479.tif 000326
【１０６２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０６３】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を５−クロロ−８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.８０ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄褐色固体として得る（融点１５６−１５８℃）。
【１０６４】
ＡＤ４−１３２１３の調製：
【化２５１】
2013516479.tif 000327
【１０６５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０６６】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点２００−２０２℃）。
【１０６７】
ＡＤ４−１３２１４の調製：
【化２５２】
2013516479.tif 000328
【１０６８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０６９】
２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０１１；１.５９ｇ、０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点８２−８６℃）。
【１０７０】
ＡＤ４−１３２１５の調製：
【化２５３】
2013516479.tif 000329
【１０７１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０７２】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７２；１.５７ｇ、０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１６０−１６３℃）。
【１０７３】
ＡＤ４−１３２１６の調製：
【化２５４】
2013516479.tif 000330
【１０７４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０７５】
２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０１１；１.５９ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点１８０−１８３℃）。
【１０７６】
ＡＤ４−１３２１７の調製：
【化２５５】
2013516479.tif 000331
【１０７７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０７８】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７２；１.５７ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明緑色固体として得る（融点１７０−１７１℃）。
【１０７９】
ＡＤ４−１３２１８の調製：
【化２５６】
2013516479.tif 000332
【１０８０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０８１】
２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７４；１.７５ｇ０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄色固体として得る（融点６２−７０℃）。
【１０８２】
ＡＤ４−１３２１９の調製：
【化２５７】
2013516479.tif 000333
【１０８３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０８４】
２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７４；１.７５ｇ０.０１モル）および２,３,４−トリメトキシベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.９６ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を緑色油として得る。
【１０８５】
ＡＤ４−１３２２０の調製：
【化２５８】
2013516479.tif 000334
【１０８６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０８７】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点５８−６２℃）。
【１０８８】
ＡＤ４−１３２２１の調製：
【化２５９】
2013516479.tif 000335
【１０８９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０９０】
２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０１１；１.５９ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄褐色固体として得る（融点２５０−２６７℃）。
【１０９１】
ＡＤ４−１３２２２の調製：
【化２６０】
2013516479.tif 000336
【１０９２】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０９３】
２−アミノ−３−フルオロ−４−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７４；１.７５ｇ０.０１モル）および２,３−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明黄褐色固体として得る（融点７３−７９℃）。
【１０９４】
ＡＤ４−１３２２３の調製：
【化２６１】
2013516479.tif 000337
【１０９５】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０９６】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１２８−１３０℃）。
【１０９７】
ＡＤ４−１３２２４の調製：
【化２６２】
2013516479.tif 000338
【１０９８】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１０９９】
２−アミノ−４,５−ジクロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０４９；１.６３ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）、（１.５９ｇ０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を 明灰色固体として得る（融点１０６−１１０℃）。
【１１００】
ＡＤ４−１３２２５の調製：
【化２６３】
2013516479.tif 000339
【１１０１】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１０２】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７２；１.５７ｇ、０.０１モル）および４−クロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.４１ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明灰色固体として得る（融点１０８−１１１℃）。
【１１０３】
ＡＤ４−１３２２６の調製：
【化２６４】
2013516479.tif 000340
【１１０４】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１０５】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７２；１.５７ｇ、０.０１モル）および３,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を灰白色固体として得る（融点１４５−１４７℃）。
【１１０６】
ＡＤ４−１３２２７の調製：
【化２６５】
2013516479.tif 000341
【１１０７】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１０８】
２−アミノ−３−エチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７２；１.５７ｇ、０.０１モル）および２,５−ジクロロベンズアルデヒド（Matrix Scientific）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を明灰色固体として得る（融点６５−６９℃）。
【１１０９】
ＡＤ４−１３２２８の調製：
【化２６６】
2013516479.tif 000342
【１１１０】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１１１】
２−アミノ−３−メトキシ−５−クロロピリジン、（ＢＢＭ−００１−０１１；１.５９ｇ、０.０１モル）および２,３,５−トリクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（２.０９ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点１８７−１９０℃）。
【１１１２】
ＡＤ４−１３２２９の調製：
【化２６７】
2013516479.tif 000343
【１１１３】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１１４】
２−アミノ−３−メチル−５−クロロピリジン（ＢＢＭ−００１−０７１；１.４３ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）、（１.５９ｇ０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を黄褐色固体として得る（融点７９−８５℃）。
【１１１５】
ＡＤ４−１３２３０の調製：
【化２６８】
2013516479.tif 000344
【１１１６】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１１７】
２−アミノ−３,５−ジクロロ−６−メチルピリジン（Matrix Scientific）（１.７７ｇ、０.０１モル）および３−フルオロ−４−クロロベンズアルデヒド（Oakwood Products）、（１.５９ｇ０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１０１−１０８℃）。
【１１１８】
ＡＤ４−１３２３１の調製：
【化２６９】
2013516479.tif 000345
【１１１９】
実施例ＡＤ４−１３０２１に記載の方法と同様の方法にて：
【１１２０】
２−アミノ−３,５−ジクロロピリジン（Wonda Science）（１.６３ｇ、０.０１モル）および２,４−ジクロロベンズアルデヒド（Acros Organics）（１.７５ｇ、０.０１モル）を８−ヒドロキシキノリン（Acros Organics）（１.４５ｇ、０.０１モル）と５０ｍｌの無水ＥｔＯＨ中で合わせ、所望のベティ縮合反応生成物を白色固体として得る（融点１２６−１２７℃）。
【１１２１】
【図３Ａ】
2013516479.tif 000365
【図３Ｂ】
2013516479.tif 000366
【図３Ｃ】
2013516479.tif 000367
【図３Ｄ】
2013516479.tif 000368
【図３Ｅ】
2013516479.tif 000369
【図３Ｆ】
2013516479.tif 000370
【図９Ａ】
2013516479.tif 000371
【図１６Ａ】
2013516479.tif 000372
【図１】
2013516479.tif 000373
【図２】
2013516479.tif 000374
【図４Ａ】
2013516479.tif 000375
【図４Ｂ】
2013516479.tif 000376
【図５】
2013516479.tif 000377
【図６】
2013516479.tif 000378
【図７】
2013516479.tif 000379
【図８】
2013516479.tif 000380
【図９Ｂ】
2013516479.tif 000381
【図１０】
2013516479.tif 000382
【図１１】
2013516479.tif 000383
【図１２】
2013516479.tif 000384
【図１３】
2013516479.tif 000385
【図１４Ａ】
2013516479.tif 000386
【図１４Ｂ】
2013516479.tif 000387
【図１４Ｃ】
2013516479.tif 000388
【図１５】
2013516479.tif 000389
【図１６Ｂ】
2013516479.tif 000390
【配列表】
2013516479000001.app
【国際調査報告】
2013516479.tif 000391
2013516479.tif 000392
2013516479.tif 000393