(57)【要約】  本発明は、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者において決定されたコントロールレベルに対して、ニューロピリンの発現レベルを決定することにより、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を用いて治療する胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者での治療効果を改善する方法を提供する。改善された治療効果は、改善された全生存率又は改善された無増悪生存率でありうる。また、本発明は、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者において決定されたコントロールレベルに対して、ニューロピリンの発現レベルを決定することにより、化学療法レジメンと併用されるベバシズマブ（アバスチン（登録商標））に対する患者の感受性又は応答性を評価する方法をさらに提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法レジメンにベバシズマブを加えることにより、胃癌に罹患している患者における治療効果を改善するための方法であって、
（ａ）患者試料中のニューロピリンの発現レベルを決定し；
（ｂ）胃癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対してニューロピリンレベルが低下した患者に、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブを投与する
ことを含む方法。
【請求項２】
化学療法レジメンへのベバシズマブ治療の追加に対する患者の応答性又は感受性を同定するためのインビトロ法であって、胃癌への罹患が疑われているか又は罹患しやすい患者からの試料におけるニューロピリンの発現レベルを決定することを含み、胃癌に罹患した患者群において決定されたコントロールレベルに対するニューロピリンレベルの低減度合いが、該レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である方法。
【請求項３】
前記治療効果が全生存率である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記治療効果が無増悪生存率である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記胃癌が、胃の腺癌又は胃食道接合部の腺癌である請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ニューロピリンの発現レベルが、免疫組織化学的方法（ＩＨＣ）により検出される請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記試料が、胃組織切除又は胃組織生検からなる群から選択される請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記化学療法レジメンが、カペシタビンベース化学療法レジメン又は５-フルオロウラシルベース化学療法レジメンである請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記カペシタビンベース化学療法レジメンが、シスプラチンと併用したカペシタビンのレジメンである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンが、シスプラチンと併用した５-フルオロウラシルのレジメンである請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者が一又は複数の抗癌治療で同時治療される請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗癌治療が放射線照射である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ニューロピリンの発現レベルが、ネオアジュバント又はアジュバント療法の前に決定される請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ニューロピリンの発現レベルを決定可能なオリゴヌクレオチド又はポリペプチドを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法を実施するために有用なキット。
【請求項１５】
請求項１から１３のいずれか一項に記載のニューロピリンの発現レベルを決定するためのオリゴヌクレオチド又はポリペプチドの使用。
【請求項１６】
ニューロピリンの発現レベルを決定可能なポリペプチドを含み、該ポリペプチドが、免疫組織化学的方法での使用に適しており、及び／又はニューロピリンに対して特異的な抗体である請求項１４に記載のキット又は請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
胃癌に罹患している患者の治療効果を改善するためのベバシズマブの使用であって、
（ａ）患者試料におけるニューロピリンの発現レベルを決定し；
（ｂ）胃癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対してニューロピリンのレベルが低下した患者に、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブを投与する
工程を含む使用。
【請求項１８】
前記治療効果が全生存率である請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記治療効果が無増悪生存率である請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記胃癌が、胃の腺癌及び／又は胃食道接合部の腺癌である請求項１７から１９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対してのニューロピリンの発現レベルを決定することにより、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を用いた処置による、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者における治療効果を改善する方法を提供する。改善された治療効果は、改善された全生存率又は改善された無増悪生存率でありうる。また本発明は、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対するニューロピリンの発現レベルを決定することにより、化学療法レジメンと併用されるベバシズマブ（アバスチン（登録商標））に対する患者の感受性（感度）又は応答性（反応性）を評価する方法をさらに提供する。
【０００２】
従って、本発明は、化学療法レジメン、例えばカペシタビン−又は５−フルオロウラシルベースの化学療法と併用される血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））に対する感受性又は応答性を相関付ける、胃癌、特に胃又は胃食道接合部（「ＧＥＪ」）の腺癌の一又は複数のバイオマーカーの同定及び選択に関する。ある態様では、本発明は、標準的化学療法へ、血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を加えることに対する患者の感受性又は応答性を同定するために、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者群において確立されたコントロールに対して決定されるニューロピリンの腫瘍特異的発現の使用に関する。また本発明は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者群において確立されたコントロールに対する、ニューロピリンの腫瘍特異的発現レベルを決定することにより、標準的化学療法、例えばカペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法への血管新生阻害剤、例えばベバズマブ(アバスチン(登録商標))の追加による胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者における治療効果を改善する方法に関する。さらに本発明は、血管新生阻害剤、特にベバシズマブ(アバスチン(登録商標))に対する患者群の感受性又は応答性を同定するためのキット及び組成物を提供するものであり、ここで患者群は、ここに記載の方法に従って決定され、定義される。
【背景技術】
【０００３】
血管新生は癌の発達に必要であり、原発腫瘍のサイズ及び増殖を調節するだけでなく、浸潤及び転移の可能性に影響を及ぼす。従って、血管新生過程を媒介する機序は、指向性(directed)抗癌療法に対して可能性のある標的として研究されている。血管新生調節剤の研究初期に、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）シグナル伝達経路が、複数の癌タイプにおいて血管新生活性を優先的に調節することが発見され、複数の治療剤が、様々なポイントでこの経路を調節するように開発されている。これらの治療剤には、とりわけ、ベバシズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、及びバタラニブが含まれる。クリニックにおける血管新生阻害剤の使用は成功しているが、必ずしも全ての患者が血管新生阻害剤療法に反応するわけでも、十分に反応するのに失敗しているわけでもない。このような不完全な応答の根底にある機構は知られていない。よって、抗血管新生癌療法に対して感受性又は応答性の患者のサブグループの同定に対する必要性がますます増加している。
【０００４】
多くの血管新生阻害剤が知られているが、最も好ましい血管新生阻害剤はベバシズマブ（アバスチン（登録商標））である。ベバシズマブは、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）に特異的に結合し、その生物学的効果をブロックする組換えヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。ＶＥＧＦは、腫瘍の血管新生−腫瘍の増殖及び転移、すなわち体の他の部分への腫瘍の転移(dissemination)に必要とされる必須のプロセスの、キーとなるドライバーである。アバスチン（登録商標）は、合計で毎年２５０万人以上の人の死亡原因である４つの一般的な癌タイプ：結腸直腸癌、乳癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び腎臓癌の進行段階の治療に対して欧州で承認されている。これまで５０万を超える患者がアバスチン（登録商標）で治療されており、４５０を超える臨床治験を用いた包括的臨床プログラムで、異なるセッティング（例えば、進行した又は初期段階の疾患）での複数の癌タイプ（結腸直腸、乳房、非小細胞肺、脳、胃、卵巣及び前立腺を含む）の治療におけるアバスチンのさらなる使用が研究されている。重要なことに、アバスチン（登録商標）は、広い範囲の化学療法及び他の抗癌治療法と組み合わせたときに効果を示す同時療法剤として有望であったことである。標準的な化学療法レジメンとベバシズマブを組み合わせる有用な効果を示す第ＩＩＩ相治験が刊行されている（例えば、Kangら, 2010, J. Clin. Oncol., 28:18s (追補、要約LBA4007); Saltzら, 2008, J. Clin. Oncol., 26:2013-2019; Yangら, 2008, Clin. Cancer Res., 14:5893-5899; Hurwitzら, 2004, N. Engl. J. Med., 350:2335-2342を参照）。しかしながら、血管新生阻害剤の以前の研究におけるように、これらの第ＩＩＩ相研究のいくつかは、患者群の一部が、それらの化学療法レジメンへのベバシズマブ（アバスチン（登録商標））の追加に対して不完全奏効を被ることを示している。
【０００５】
従って、血管新生阻害剤、特にベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を含む併用治療に応答するか又は応答すると思われる患者を決定する方法が必要とされている。よって、本発明の根底にある技術的課題は、例えばカペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンへの血管新生阻害剤、特にベバシズマブ（アバスチン（登録商標））の追加から恩恵を受けうる、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか又は罹患しやすい患者（群）を同定するための方法及び手段の提供である。
【０００６】
該技術的課題は、特許請求の範囲において特徴付けられる実施態様の提供により解決される。
【発明の開示】
【０００７】
よって、本発明は、化学療法レジメンにベバシズマブを加えることにより、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者における治療効果を改善するための方法であって、
（ａ）患者試料中のニューロピリンの発現レベルを決定し；
（ｂ）胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対してニューロピリンのレベルが低下した患者に、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブを投与する
ことを含む方法を提供する。
改善される治療効果は臨床パラメーター全生存率（overall survival）又は無増悪生存率（progression free survival）でありうる。
【０００８】
他の実施態様では、本発明は、化学療法レジメンへのベバシズマブの追加に対して応答性又は感受性の患者を同定するためのインビトロ法であって、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌への罹患が疑われているか又は罹患しやすい患者からの試料におけるニューロピリンの発現レベルを決定することを含み、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患した患者群において決定されたコントロールレベルに対するニューロピリンの低減レベルが、該レジメンへのベバシズマブの追加に対する患者の感受性の指標である方法に関する。
【０００９】
従って、本発明は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌と診断された患者群において決定されたコントロールレベルに対しての、与えられた患者におけるニューロピリンの腫瘍特異的発現レベルが、化学療法レジメンと組合せて血管新生阻害剤を投与した患者における治療効果と相関することが驚くべきことに示された点で、特定された技術的問題を解決するものである。ニューロピリンの腫瘍特異的発現レベルの変動が、驚くべきことに、カペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンへのベバシズマブ（アバスチン（登録商標））の添加に応答した、胃癌患者の改善された無憎悪生存率及び／又は改善された全生存率に対するマーカー／予測因子として特定された。すなわち、化学療法レジメンへのベバシズマブ（アバスチン（登録商標））の追加に対して応答性又は感受性を示す胃癌患者は、胃癌、特に胃又はＧＥＪに罹患しているか又は診断されている患者群から得られた試料において確立されたコントロールレベルに対して、ニューロピリンの発現が低減していることが同定された。「マーカー」及び「予測因子」は交換可能に使用され、ここに記載され定義されるニューロピリンの発現レベルを意味する。
【００１０】
本発明の文脈において、「ニューロピリン」は、図３に示されるアミノ酸配列番号：１により例証され、ＮＲＰ-１としても知られているＩ型膜タンパク質であるニューロピリン-１タンパク質を意味する（ＮＲＰ-１前駆体アミノ酸配列はまたＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｏ１４７８６で入手可能である）。ここで使用される場合、「ニューロピリン」は、当該技術分野で知られているようにＮＲＰ-１とおよそ４４％の相同性を共有するニューロピリン-２（ＮＲＰ-２としても知られている）もまた意味しうる。従って、本発明の方法は、ＮＲＰ-１とＮＲＰ-２とを区別しない。本発明の文脈において、「ニューロピリン」なる用語は、ＮＲＰ-１及び／又はＮＲＰ-２の相同体、変異体及びアイソフォームを、ここに開示され、及び／又は当該技術分野で知られているように、該相同体、変異体及びアイソフォームが一又は複数の抗ニューロピリン抗体により特異的に認識される限り、また包含する。さらに「ニューロピリン」なる用語は、配列番号：１のアミノ酸配列に対して、あるいはＮＲＰ-１及び／又はＮＲＰ-２相同体、変異体及びアイソフォーム（スプライシングアイソフォームを含む）の一又は複数の配列並びに配列の断片に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の相同性を有するタンパク質を、該変異体タンパク質（アイソフォームを含む）、相同タンパク質及び／又は断片が、一又は複数のＮＲＰ-１及び／又はＮＲＰ-２特異的抗体、例えばＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（Minneapolis, Minnesota, U.S.A.）から入手可能なクローン４４６９１５、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（Santa Cruz, California, U.S.A.）からカタログ番号ｓｃ-５３０７で入手可能であるもの、又は当該技術分野で知られている他のものにより認識される限り、包含する。
【００１１】
従って、本発明は、限定しないがここに記載されたアミノ酸配列を含むタンパク質の発現レベルの決定（測定）を包含する。所定の態様では、本発明は、ニューロピリンの相同体、変異体及びアイソフォームの検出を包含し；該変異体又はアイソフォームは、とりわけ、対立遺伝子変異体又はスプライスバリアントを含む。また考えられるものは、ここに記載のニューロピリン又はその断片に対して相同であるタンパク質、すなわち、配列番号：１のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するタンパク質の検出である。あるいは又は加えて、本発明は、配列番号：１をコードする核酸配列又はその断片、変異体又はアイソフォームに対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である核酸配列又はその断片によりコードされるタンパク質の発現レベルの検出を包含する。この文脈において、「変異体」なる用語は、ニューロピリンアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列をコードする核酸配列が、変異、例えば、欠失、付加、置換、反転などにより、配列番号：１により同定され、及び／又は上述のＵｎｉＰｏｒｔ受託番号下で入手可能な区別可能な配列とは異なることを意味する。さらに、「相同体」なる用語は、配列番号：１に示される一又は複数のポリペプチド又はその断片（群）に対して、少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有する分子に言及するものである。
【００１２】
アミノ酸又は核酸配列が、ここに記載したようなアミノ酸又は核酸配列とある程度の同一性を有しているかどうかを決定するために、当業者は、当該技術分野でよく知られている手段及び方法、例えばアラインメント手法を、手作業か又は当該技術分野で知られ又はここに記載されたコンピュータプログラムを使用することにより、使用することができる。
【００１３】
本発明によれば、２又はそれ以上のアミノ酸又は核酸配列の文脈における「同一」又は「パーセント同一性」なる用語は、比較ウインドウ上で又は当該技術分野で知られている配列比較アルゴリズムを使用して測定して指定領域上で比較し最大一致になるように整列させたときに、又は手作業のアラインメント及び目視検査により、同一であるか、又は同一である特定された割合（例えば、配列番号：１のアミノ酸配列と６０％又は６５％同一性、好ましくは７０−９５％同一性、より好ましくは少なくとも９５％同一性）のアミノ酸残基又はヌクレオチドを有している２又はそれ以上の配列又はサブ配列を意味する。例えば、６０％から９５％、又はそれ以上の配列同一性を有する配列は、実質的に同一であると考えられる。このような定義はまた試験配列の相補鎖にも適用される。好ましくは、記載された同一性は、少なくとも約１５〜２５のアミノ酸又はヌクレオチド長である領域にわたって、より好ましくは約５０〜１００のアミノ酸又はヌクレオチド長の領域にわたって存在する。当業者であれば、アルゴリズム、例えば当該技術分野で知られているＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータプログラム（Thompson, Nucl. Acids Res. 2(1994) 4673-4680）又はＦＡＳＴＤＢ（Brutlag Comp. App. Biosci. 6(1990) 237-245）に基づくものを使用し、如何にして配列間の同一性を決定するかを知っているであろう。
【００１４】
ＦＡＳＴＤＢアルゴリズムは、典型的には、その計算では配列内部の非適合欠失又は付加、すなわちギャップを考慮しないが、これは手作業で訂正して％同一性の過大評価を回避することができる。しかしながら、ＣＬＵＳＴＡＬＷは、その同一性の計算において配列ギャップを考慮する。また当業者が利用可能であるのはＢＬＡＳＴ（Basic Local Alignment Search Tool）及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズム（Altschul, 1997, Nucl. Acids Res. 25：3389-3402; Altschul, 1993 J. Mol. Evol. 36：290-300; Altschul, 1990, J. Mol. Biol. 215：403-410）である。核酸配列についてのＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとして、ワード長(Ｗ)１１、期待値(Ｅ)１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び双方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列では、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長(Ｗ)３、及び期待値(Ｅ)１０を使用する。ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Henikoff(1989) PNAS 89：10915）は、アラインメント(Ｂ)５０、期待値(Ｅ)１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び双方の鎖の比較を使用する。
【００１５】
上で検討したように、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、アミノ酸配列とヌクレオチド配列の双方のアラインメントを作って配列類似性を決定する。アラインメントの局所的性質のため、ＢＬＡＳＴは、正確な一致の決定又は類似配列の同定に特に有用である。ＢＬＡＳＴアルゴリズム出力の基本ユニットは、ハイスコアリングセグメントペア（ＨＳＰ）である。ＨＳＰは、そのアラインメントが局所的に最大であり、アラインメントスコアが、ユーザーにより設定された閾値又はカットオフスコアに一致するか又はこれを超える、任意ではあるが、等しい長さの２つの配列断片からなる。ＢＬＡＳＴアプローチは、クエリー配列とデータベース配列間のＨＳＰを検索し、見いだされた任意の一致の統計的有意性を評価し、有意性のあるユーザー選択閾値を満たす一致のみをレポートするものである。パラメータＥは、データベース配列の一致をレポートするための統計的に有意な閾値を確定する。Ｅは、全データベース検索の文脈内で、ＨＳＰ（又はＨＳＰのセット）のチャンス発生の期待される頻度の上限として解釈される。その一致がＥを満たすあらゆるデータベース配列がプログラム出力にレポートされる。
【００１６】
ＢＬＡＳＴを使用する類似のコンピューター技術を、タンパク質又はヌクレオチドデータベース、例えばＧｅｎＢａｎｋ又はＥＭＢＬにおいて、同一又は関連する分子を検索するために使用することができる。この分析は多重膜ベースのハイブリダイゼーションよりもかなり速い。さらに、コンピューター検索の感度を変更し、任意の特定の一致が正確又は類似として分類されるかどうかを決定することができる。探索の基本は、
(％配列同一性×％最大ＢＬＡＳＴスコア)／１００
として定義される積スコアであり、２つの配列間の類似の度合いよ配列一致の長さの双方を考慮する。例えば、積スコア４０では、一致は１−２％の誤差内で正確であり、７０では、一致は正確であろう。類似の分子は、低スコアが関連分子を同定しうるが、通常は、１５〜４０の積スコアを示すものを選択することにより特定される。配列アラインメントを生成可能なプログラムの他の例は、当該技術分野で知られているように、ＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータプログラム（Thompson, 1994, Nucl. Acids Res. 2：4673-4680）又はＦＡＳＴＤＢ（Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6：237-245）である。
【００１７】
本発明によれば、驚くべきことに、より大なるベバシズマブ治療効果が、より低い腫瘍特異的ニューロピリン発現に関連していたことが、ＡＶＡＧＡＳＴ集団（例えば、Kangら, 2010, J. Clin. Oncol., 28：18(追補、要約ＬＢＡ４００７)）において発見された。すなわち、比較的低い腫瘍特異的ニューロピリン発現が、化学療法レジメンに加えてベバシズマブを投与された患者における改善された全生存率及び／又は改善された無増悪生存率に連関していた。
【００１８】
ニューロピリン（例えば、ＮＲＰ-１、ＮＲＰ-２、又はその変異体、相同体、切断体又は断片）の発現レベルは、患者試料中における特定のタンパク質レベルの決定に適した当該技術分野で知られている任意の方法により評価することができ、好ましくは、ニューロピリンに対して特異的な抗体を用いる免疫組織化学的（「ＩＨＣ」）方法により決定される。このような方法はよく知られており、当該技術分野で常套的に実施され、対応する市販抗体及び／又はキットが容易に入手可能である。例えば、ここに記載され、定義されたニューロピリンに対して特異的な市販抗体は、クローン４４６９１５としてＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（Minneapolis, Minnesota, U.S.A.）から、またカタログ番号ｓｃ-５３０７としてＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（Santa Cruz, California, U.S.A.）から得ることができる。好ましくは、本発明のマーカー／指標タンパク質の発現レベルは、抗体又はキットの製造者から推奨される試薬及び／又はプロトコルを使用して評価される。また当業者であれば、ＩＨＣ方法によりニューロピリンの発現レベルを決定するためのさらなる手段を知っているであろう。よって、ニューロピリン及び／又は当該技術分野で知られている他のマーカー／指標の発現レベルは、過度の負担なく、当業者により、常套的かつ再現可能に決定され得る。しかしながら、正確で再現可能な結果を担保するために、本発明は、試験手順の検証を可能にしうる専門の研究所における患者試料の試験もまた包含する。
【００１９】
好ましくは、ニューロピリンの発現レベルは、癌細胞を含んでいるか又は含んでいることが疑われる生物学的試料において評価され、腫瘍特異的な形で決定される。試料は、癌細胞、つまり腫瘍細胞と、非癌性細胞、例えば内皮又は非悪性細胞の双方を含みうる。いくつかの態様では、ニューロピリンの腫瘍特異的発現の決定は、腫瘍試料中に存在している可能性のある他の細胞型、例えば内皮又は非癌性／非悪性細胞とは対照的に、排他的に癌細胞の発現レベルを決定することに関する。他の態様では、ニューロピリンの腫瘍特異的発現の決定は、癌細胞並びに腫瘍試料中に存在している可能性のある任意の他の細胞型、例えば内皮細胞の発現レベルの決定に関する。当業者、例えば病理学者は、非癌細胞、例えば内皮細胞から癌細胞を容易に識別することができる。試料は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか罹患していると疑われているか、又はそのように診断された患者から得られる胃組織切除部又は胃組織生検でありうる。また試料は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか罹患していると疑われているか、又はそのように診断された患者からの転移巣の切除部又は生検でありうる。好ましくは、試料は、胃組織、又は胃食道接合部組織の試料、又は胃又は胃食道接合部の腺癌の切除部又は生検である。また、試料は既知又は疑われている転移性胃癌病巣又は切片の試料、又は血液試料、例えば既知又は胃癌等の循環癌細胞を含むことが疑われている末梢血試料でありうる。本発明の方法に係る試料の分析は、当該技術分野で知られているように、病理学者等の当業者によって手作業で実施されてもよいし、あるいは病態画像の加工及び解析、例えば組織生検又は切除部の解析に設計された市販のソフトウェアを使用して自動化されてもよい（例えば、MIRAX SCAN、Carl Zeiss AG, Jena, Germany）。癌／腫瘍細胞を含む組織切除部、生検及び体液を含む生物学的試料、例えば血液試料を得る方法は当該技術分野でよく知られている。
【００２０】
本発明の文脈において、ベバシズマブは、当該技術分野で知られている標準的な化学療法レジメンの一部として投与される一又は複数の化学治療剤を用いた同時療法又は同時治療として又はこれに加えて投与される。このような化学療法剤の例には、５-フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゲンシタビン-エルロチニブ、カペシタビン及び白金ベースの化学療法剤、例えばパクリタキセル、カルボプラチン、シスプラチン及びオキサリプラチンが含まれる。添付の実施例において例証されるように、カペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンへのベバシズマブの添加は、特に、類似した状況の患者群で確定されたコントロールレベルに対して、腫瘍試料におけるニューロピリンの発現が低い患者でのニューロピリンの発現レベルに従って定められ、選択された胃癌患者群及び／又は患者集団において、無増悪生存率の増加をなし、全生存率と相関した。
【００２１】
ベバシズマブは、カペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンと組合せられうる。カペシタビンと５-フルオロウラシルとの間の選択は、当該技術分野で十分に確立されている標準に基づいて処置医により最も好ましく決定される。カペシタビンベースの化学療法レジメンの例には、シスプラチンと組合せて投与されるカペシタビン（又は５-フルオロウラシル）の組合せが含まれる。カペシタビン／シスプラチン療法の典型的なサイクルは、１〜１４日にわたって経口的に１日２回（ｂｉｄ）１０００ｍｇ／ｍ２の用量でカペシタビンを投与し、続いて１週間休み、過量輸液及び前投薬（ステロイド及び制吐剤）を伴ってのサイクル１日目の２時間の点滴として、８０ｍｇ／ｍ２の用量でシスプラチンを静脈内投与し；シスプラチン及びカペシタビンのサイクルは、疾患進行又は手に負えない毒性まで続け、シスプラチン投与は最大６サイクルが限界とされる。従って、本発明の所定の態様では、ここでの方法に従って同定された患者は、カペシタビン／シスプラチンと組合せてベバシズマブで治療される。ベバシズマブの一般的な投与態様は、ボーラス投与として又は設定された時間にわたる点滴としての非経口的投与、例えば１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、３時間、４時間、５時間又は６時間にわたる全１日用量の投与を含む。例えば、７．５ｍｇ／ｋｇのベバシズマブ（アバスチン（登録商標））が、上述の各カペシタビンサイクルの１日目に１５〜３０分かけて静脈内注入として胃癌患者に投与されうる。当業者であれば、特定の患者及び化学療法レジメンにより決定されるベバシズマブのさらなる投与態様が本発明に包含され、特定の投与態様及び治療投与量は、当該技術分野で知られている方法に従って、処置医により、最も好ましく決定されることを認識しているであろう。
【００２２】
本発明の方法に従って選択される患者は、化学療法レジメンと組合せて、ベバシズマブで治療され、一又は複数のさらなる抗癌療法でさらに処置されうる。ある態様では、一又は複数の付加的な抗癌療法は放射線照射である。
【００２３】
好ましい実施態様では、患者から得られる試料は、任意の他の化学療法レジメン又は治療、例えば癌の治療、又はその徴候を管理又は寛解するための治療の前に収集される。よって、好ましい実施態様では、試料は、化学療法剤の投与前又は化学療法レジメンの開始時に収集される。
【００２４】
また本発明は、ニューロピリンの腫瘍特異的発現レベルの決定に適したオリゴヌクレオチド又はポリペプチドを含む診断用組成物又はキットに関する。ここで詳細に述べるように、オリゴヌクレオチド、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡとＲＮＡプローブの混合物は、マーカー／指標タンパク質、特にニューロピリンのｍＲＮＡレベルの検出に使用されうる一方、ポリペプチドが、特定のタンパク質-タンパク質相互作用を介してマーカー／指標タンパク質のタンパク質レベルを直接的に検出するのに使用されうる。本発明の好ましい態様では、ニューロピリンの発現レベル用のプローブとして包含され、ここに記載のキット又は診断用組成物に含められるポリペプチドは、ニューロピリンに対して特異的な、又はその相同体、変異体及び／又は切断体に対して特異的な抗体である。
【００２５】
従って、本発明のさらなる実施態様は、ニューロピリンの発現レベルを決定することができるオリゴヌクレオチド又はポリペプチドを含む、ここに記載の方法を実施するために有用なキットを提供する。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、ここで定義され記載されたニューロピリンをコードするｍＲＮＡに特異的なプライマー及び／又はプローブを含み、ポリペプチドは、ニューロピリンとの特異的な相互作用が可能なタンパク質、例えばマーカー／指標特異的抗体又は抗体断片を含む。
【００２６】
さらなる実施態様では、本発明は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者における治療効果を改善するためのベバシズマブの使用であって、
（ａ）患者試料中のニューロピリンの発現レベルを決定し；
（ｂ）胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者群において決定されたコントロールレベルに対してニューロピリンのレベルが低下した患者に、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブを投与する
工程を含む使用を提供する。
改善される治療効果は、改善された全生存率又は改善された無増悪生存率でありうる。
【００２７】
添付の実施例において実証されているように、本発明は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌と診断された患者群において決定されたコントロールレベルに対しての、与えられた患者におけるニューロピリンの発現レベルが、カペシタビン-又は５-フルオロウラシルベースの化学療法レジメンと組合せてベバシズマブが投与された患者における治療効果と相関していることが、驚くべきことに示されている点で、特定された技術的問題を解決するものである。
【００２８】
本発明の文脈における「応答性である」なる語句は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか、罹患していると疑われているか又は罹患しやすいか、又はそのように診断されている被験者／患者が、ベバシズマブの添加を含む化学療法レジメンに対して応答性を示すことを示している。当業者であれば、容易に、本発明の方法に従ってベバシズマブで治療された人が応答を示すかどうかを測定することができるであろう。例えば、応答は、胃癌への罹患度の低減、例えば腫瘍増殖の低下及び／又は停止、腫瘍サイズの減少、胃癌の一又は複数の徴候、例えば胃腸出血、疼痛、貧血の寛解により反映されうる。好ましくは、応答は、胃癌の転移転換の低減又は低下、例えば転移の形成の防止、又は転移の数又は大きさの低減により反映されうる。
【００２９】
本発明の文脈における「感受性である」なる語句は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか、罹患していると疑われているか又は罹患しやすいか、又はそのように診断されている被験者／患者が、化学療法レジメンと組合せて、ベバシズマブを用いた治療に対して何らかの形でポジティブな反応を示すことを示している。患者の反応は、上述したように「応答性である」患者と比較した場合に、それほど顕著でない場合がありうる。例えば、腫瘍の増殖又は転移の指標の低減が測定されず、及び／又は化学療法レジメンと組合せたベバシズマブに対する患者の反応が、一時的な性質のものに過ぎない、すなわち腫瘍の増殖及び／又は転移が、一時的に低減又は停止しているだけかもしれないが、患者は疾患に関連した苦痛をあまり受けていない場合がある。
【００３０】
本発明に係る「罹患している患者」なる語句は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌の臨床的徴候を示す患者を意味する。胃癌は、転移性、手術不能及び／又は局所的に進行した、胃又は胃食道接合部(「ＧＥＪ」)の腺癌でありうる。胃癌において、「疑われている」又は「しやすい」なる語句は、可能な遺伝的素因、危険及び／又は発癌性化合物への前曝露又は最終的な暴露、又は発癌性のある物理的危険、例えば放射線への暴露に基づく、患者における徴候疾患を意味する。
【００３１】
本発明の文脈における「治療効果」なる語句は、「無増悪生存率」及び「全生存率」なる語句を包含する。
【００３２】
本発明の文脈における「無増悪生存率」なる語句は、処置医又は研究者の評価に従い、その間は患者の疾患が悪化しない、すなわち進行しない、処置中及び処置後の時間の長さを意味する。当業者ならば理解するように、疾患が、類似した状況にある患者群のコントロール群の平均無増悪生存率と比較して疾患が進行していない時間がより長いならば、患者の無増悪生存率が改善され又は亢進される。
【００３３】
本発明の「全生存率」なる語句は、患者群における患者の平均生存率を意味する。当業者が理解するように、患者が、患者の他のサブグループと比較して平均生存率が統計的に有意に長くなっている患者のサブグループに属しているならば、患者の全生存率は改善され又は亢進される。改善された全生存率は、患者の一又は複数のサブグループにおいては明らかでありうるが、患者集団が全体として分析される場合には明らかではない。
【００３４】
ここで使用される「投与」又は「投与する」なる用語は、血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、及び／又は血管新生阻害剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））を含有する薬学的組成物／治療レジメンを、治療用抗体の投与について当該技術分野で知られている任意の適切な手段により、そのような処置又は医療行為の必要な患者に投与することを意味する。非限定的な投与経路には、経口、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、皮内、鼻腔内又は気管支内投与（例えば、吸入によりなされる）が含まれる。本発明の文脈で特に好ましいものは、非経口投与、例えば静脈内投与である。結腸直腸癌の治療のためのベバシズマブ（アバスチン（登録商標））に関して、ＥＭＥＡに従う好ましい用量は、２週間毎に１回の５ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は３週間毎に１回の７．５ｍｇ／ｋｇ体重又は１５ｍｇ／ｋｇ体重である（詳細は、http://www.emea.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/avastin/emea-combined-h852en.pdfを参照）。
【００３５】
「抗体」なる用語は、ここでは最も広義で使用され、限定されるものではないが、モノクローナル及びポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化(camelized)抗体、単鎖抗体及び抗体断片及び断片コンストラクト、例えばＦ(ａｂ')２断片、Ｆａｂ-断片、Ｆｖ-断片、単鎖Ｆｖ-断片(ｓｃＦｖｓ)、二重特異性ｓｃＦｖｓ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）及びミニボディ(minibodies)で、所望の生物学的活性を示すもの、特にＶＥＧＦＡ、ＨＥＲ２、ニューロピリン及びＣＤ３１の一又は複数、又はその相同体、変異体、断片及び／又はアイソフォームへの特異的結合性を示すものが含まれる。
【００３６】
ここで使用される場合、「化学療法剤」には、抗癌治療効果をもたらし得、特に癌又は腫瘍細胞に干渉可能な化学的薬剤又は生物学的薬剤でありうる任意の活性剤が含まれる。好ましい活性剤は、悪性細胞の発達、成熟又は増殖を阻害し又は防止する抗腫瘍（化学毒性又はケモスタティック）剤として作用するものである。化学療法剤の非限定的な例には、アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロランブシル）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロリムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル-ＣＣＮＵ）、エチレンイミン／メチルメラミン（例えば、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、トリエチレン、チオホスホラミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン））、アルキルスルホネート類（例えば、ブスルファン）、及びトリアジン類（例えば、ダカルバジン（ＤＴＩＣ））、代謝拮抗剤、例えば葉酸アナログ（例えば、メトトレキセート、トリメトトレキセート）、ピリミジンアナログ（例えば、５-フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５-アザシチジン、２,２'-ジフルオロデオキシシチジン、及びピリミジンアナログプロドラッグ、例えばカペシタビン）、プリンアナログ（例えば、６-メルカプトプリン、６-チオグアニン、アゼチオプリン、２'-デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビン、及び２-クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２-ＣｄＡ））；天然物から得られた有糸分裂阻害剤（例えば、パクリタキセル、ビンカアルカロイド類（例えば、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、及びビノレルビン）、タキソテール、エストラムスチン、及びリン酸エストラムスチン）、エピポドフィロトキシン類(epipodophyllotoxins)（例えば、エトポシド、テニポシド）、抗生物質（例えば、アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、マイトマイシンＣ、アクチノマイシン）、酵素（例えば、Ｌ-アスパラキナーゼ)、及び生物学的応答調節物質(例えば、インターフェロン-アルファ、ＩＬ-２、Ｇ-ＣＳＦ、ＧＭ-ＣＳＦ）；種々の薬剤、例えば白金配位錯体(例えば、シスプラチン、カルボプラチン)、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、置換尿素（すなわちヒドロキシ尿素）、メチルヒドラジン誘導体（例えば、Ｎ-メチルヒドラジン（ＭＩＨ）、プロカルバジン）、副腎皮質抑制剤（例えば、ミトタン(ｏ,ｐ-ＤＤＤ)、アミノグルテチミド)；ホルモン類及びアンタゴニスト類、例えば副腎皮質ステロイドアンタゴニスト類（例えば、プレドニゾン及び等価物、デキサメタゾン、アミノグルテチミド）、プロゲスチン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲステロール）、エストロゲン類（例えば、ジエチルスチルベステロール、エチニルエストラジオール及び等価物）；抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、アンドロゲン類���例えば、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、及びその等価物）、抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド、生殖腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログ、リュープロリド）、及び非ステロイド性抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド）が含まれる。
【００３７】
本発明の文脈において、アミノ酸配列に対する「相同性」とは、ここに提供される配列番号により定まる配列の全長に対して、少なくとも８０％、特に少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を意味すると理解される。本発明の文脈においては、当業者であれば、相同性は、異なった集団及び民族におけるマーカー／指標タンパク質のさらなる対立遺伝子変異を包含することを理解しているであろう。
【００３８】
ここで使用される場合、「ポリペプチド」なる用語は、与えられた長さのアミノ酸鎖を含むペプチド、タンパク質、オリゴペプチド又はポリペプチドに関し、そこでは、アミノ酸残基は共有ペプチド結合により結合している。しかしながら、このようなタンパク質／ポリペプチドのペプチド模倣剤も本発明に含まれ、そこでは、アミノ酸(群)及び／又はペプチド結合(群)が、機能的アナログ、例えばセレノシステイン等の２０の遺伝子コードアミノ酸のもの以外のアミノ酸残基により置き換えられている。ペプチド、オリゴペプチド及びタンパク質はポリペプチドと称されうる。ポリペプチド及びタンパク質なる用語は、ここでは交換可能に使用される。また、ポリペプチドなる用語はポリペプチドの修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化等をも意味し、排除するものではない。このような修飾は基本的なテキスト及びより詳細なモノグラフ、並びに大量の研究文献に十分に記載されている。
【００３９】
ここで使用される「治療（処置）する」及び「治療（処置）」なる用語は、疾患又はその任意のパラメーター又は徴候の修復、改善、その重篤度の緩和、又は時間的過程における低減を意味する。好ましくは、上記患者はヒト患者であり、治療される疾患は胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌である。このような患者を「評価する」又は「評価」なる用語は、ニューロピリンの発現レベルを決定し、及び／又は転移性結腸直腸癌と診断された患者において確定されたコントロールレベルに対するこのようなマーカー／指標タンパク質の発現レベルに基づき、そのような患者を選択する方法に関する。
【００４０】
上述の方法に加えて、本発明は、ウエスタンブロット及びＥＬＩＳＡベース検出等による、ニューロピリンの発現レベルを評価するためのさらなる免疫組織化学的方法をまた包含する。当該技術分野で理解されているように、本発明のマーカー／指標タンパク質の発現レベルは、ノーザンブロット、リアルタイムＰＣＲ、及びＲＴ ＰＣＲ等の当該技術分野で知られている任意の適切な方法により、ｍＲＮＡレベルでまた評価されうる。免疫組織化学ベース及びｍＲＮＡベースの検出法及びシステムは当該技術分野でよく知られており、標準的なテキスト、例えばＬｏｔｔｓｐｅｉｃｈ（Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998）、又はＳａｍｂｒｏｏｋ及びＲｕｓｓｅｌｌ（Molecular Cloning：A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A., 2001）から演繹されうる。記載された方法は、例えば胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか又は診断された類似した状況にある集団において確定されたコントロールレベルに対する、患者又は患者群におけるニューロピリンの発現レベル、例えば腫瘍特異的発現レベルを決定するために特に使用される。
【００４１】
ニューロピリンの発現レベルは、免疫凝集、免疫沈降（例えば、免疫拡散、免疫電気泳動、免疫固定）、ウエスタンブロット技術（例えば、（インサイツ）免疫組織化学、（インサイツ）免疫細胞化学、アフィニティークロマトグラフィー、酵素免疫アッセイ等）を利用して、タンパク質レベルで決定することもまたできる。溶液中の精製ポリペプチドの量は、物理的方法、例えば測光法により測定することができる。混合物中の特定のポリペプチドの定量方法は、通常、例えば抗体の特異的結合に依存する。抗体の特異性を利用する特異的検出及び定量方法には、例えば免疫組織化学（インサイツ）が含まれる。例えば、細胞又は組織における本発明のマーカー／指標タンパク質（例えば、ＮＲＰ-１、ＮＲＰ-２及び／又はその変異体、相同体又は切断体）の濃度／量は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定することができる。あるいは、ウエスタンブロット分析又は免疫組織化学染色を実施することもできる。ウエスタンブロットは、電気泳動によるタンパク質の分離と抗体での特異的検出を組み合わせている。電気泳動は、例えば２Ｄ電気泳動のように多次元でありうる。通常、ポリペプチドは、１次元に沿ったそれらの見かけの分子量と他の次元に沿ったそれらの等電点によって２Ｄ電気泳動において分離される。
【００４２】
上述のように、本発明に係るマーカー／指標タンパク質の発現の減少は、（ここに記載され定義された）ニューロピリンの対応する遺伝子(群)の発現の減少にまた反映されうる。よって、翻訳前の遺伝子産物（例えば、スプライシング、非スプライシング又は部分的なスプライシングｍＲＮＡ等）の定量的評価が、対応する遺伝子（群）の発現を評価するために実施されうる。当業者は、この文脈で使用される標準的な方法を知っており、又は標準的なテキスト（例えば、Sombrook, 2001, loc. cit.）からこれらの方法を演繹することもできる。例えば、ニューロピリンをコードするｍＲＮＡのそれぞれの濃度／量に対する量的データは、ノーザンブロット、リアルタイムＰＣＲ等から得ることができる。
【００４３】
本発明のさらなる態様では、本発明のキットを、本発明の方法を実施するために好適に使用することができ、とりわけ、種々の用途、例えば診断分野に又は研究ツールとして使用することができる。本発明のキットのパーツは、バイアル中に個々に、又は容器もしくは多容器ユニットに組合せて、包装することができる。キットの製造は当業者に知られている標準的手順に従うのが好ましい。キット又は診断用組成物は、本発明のここに記載の方法に従い、例えば免疫組織化学技術を使用し、（ここに記載され定義された）ニューロピリンの発現レベルの検出に使用することができる。
【００４４】
ベバシズマブの使用により例示されているが、本発明は、標準的な化学療法レジメンと組合せて使用される、当該技術分野で知られている他の血管新生阻害剤の使用を包含する。ここで使用される「血管新生阻害剤」なる用語は、血管新生（例えば、血管を形成するプロセス）を変える全ての薬剤を指し、血管の形成をブロックし、及び／又はその成長を停止又は遅延化させる薬剤を含む。血管新生阻害剤の非限定的例には、ベバシズマブ、ペガプタニブ、スニチニブ、ソラフェニブ及びバタラニブが含まれる。好ましくは、本発明の方法で使用される血管新生阻害剤はベバシズマブである。ここで使用される場合、「ベバシズマブ」なる用語は、アメリカ合衆国、欧州及び日本からなる国の群から選択される国又は地域において、同一又はバイオシミラー製品として製造承認を得るために必要な要件を満たす、全ての対応する抗ＶＥＧＦ抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体断片を包含する。
【００４５】
ここに記載した検出方法の使用においては、当業者は、本発明によって包含されるポリペプチド又はオリゴヌクレオチドを標識する能力を有している。当該技術分野で常套的に実施されるているように、ｍＲＮＡレベルの検出に使用されるハイブリダイゼーションプローブ及び／又はＩＨＣ法に使用される抗体又は抗体断片は、当該技術分野で知られている標準的方法に従い、標識され、可視化されうる。一般的に使用されるシステムの非限定的例には、放射性標識、酵素標識、蛍光タグ、ビオチン-アビジン複合体、化学発光等の使用が含まれる。
【００４６】
当業者、例えば主治医は、ここで選択され、定義された患者／患者群に、化学療法レジメンと組合せて、ベバシズマブを直ぐに投与する準備ができている。ある事情においては、主治医は、自身の専門的経験に従い、化学療法レジメンとベバシズマブの投与スキームを、改変、変更又は修正してもよい。よって、本発明の所定の態様では、化学療法レジメンと組合せてベバシズマブを用い、胃癌に罹患しているか又は罹患していると疑われている患者において、治療効果（すなわち、無増悪生存率又は全生存率）を改善する方法が提供され、ここで、該患者／患者群は、生物学的試料（特に、胃組織切除部、胃組織生検、及び／又は転移巣）の評価で特徴づけられ、該試料が、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している及び／又はそのように診断された患者群において確定されたコントロールレベルに対して、ニューロピリンの発現レベルの低下を示す。また本発明は、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患しているか罹患していると疑われている患者を治療するための薬学的組成物の調製におけるベバシズマブの使用を提供するものであり、ここで、患者は、ここで開示したタンパク質マーカー／指標の状態（すなわち、胃癌、特に胃又はＧＥＪの腺癌に罹患している患者において確定されたコントロールレベルに対してのニューロピリンの発現レベルの低下）により選択され又は特徴付けられる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ニューロピリン発現の全生存率との相関（中央値カットオフ）。長い破線はプラシーボ、化学療法及びニューロピリン発現で、中央値より上；短い破線はベバシズマブ治療、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値より上；実線はベバシズマブ治療、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値以下；中間／短破線はプラシーボ、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値以下。
【図２】ニューロピリン発現の進行又は死亡までの時間との相関（中央値カットオフ）。長い破線はプラシーボ、化学療法及びニューロピリン発現で、中央値より上；短い破線はベバシズマブ治療、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値より上；実線はベバシズマブ治療、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値以下；中間／短破線はプラシーボ、化学療法、バイオマーカー発現で、中央値以下。
【図３】配列番号：１、ニューロピリン-１の代表的アミノ酸配列。
【図４】ニューロピリン発現と全生存率、進行又は死亡までの時間、及び奏効率（ＯＲＲ）との相関。
【実施例】
【００４８】
転移性又は手術不能な、局所的に進行した胃又はＧＥＪの腺癌を処置するための化学療法レジメンと組合せて、第一選択カペシタビン（カペシタビンが禁忌である場合、５-フルオロウラシルが許容された）／シスプラチンにベバシズマブを添加する結果と比較する、無作為化された第ＩＩＩ相研究に参加した患者から、組織試料を得た(AVAGAST研究、Kangら, 2010, J. Clin. Oncol. 28：18(補足、要約ＬＢＡ４００７)(「Kang」)を参照)。血管新生及び腫瘍形成に関するバイオマーカーの状態の研究には、全患者集団で決定されたコントロールレベルに対し、ニューロピリンの発現レベルが低下していると、全生存率及び／又は無増悪生存率が改善されることを示している。
【００４９】
患者及び免疫組織化学的方法
ＡＶＡＧＡＳＴ研究に参加した、全体で７７４人の患者、及び６２９及び７２７人の参加者からの腫瘍試料を、特異的バイオマーカーに依存して、バイオマーカー分析用に入手した。処置群を計量した。約９５％の患者が転移性であった。患者の約２／３が男性であり、４９％がアジア／太平洋出身、３２％が欧州出身、１９％がアメリカ出身であった(Kang参照)。
【００５０】
組織ブロック又は予め調製されたスライドとして、組織試料を入手した。免疫組織化学的分析を、ホルマリン固定されたパラフィン埋設組織試料(ブロック)の５μｍ切片、又は予め調製されたスライドにおいて実施した。脱パラフィン及び再水和後、抗原回復を、Benchmark-XY(Ventana, Tucson, AZ, USA)におけるＣＣ１バッファー、又はＰＴモジュールにおいて、９５℃で３０分、ｐＨ６．０のクエン酸バッファーにおいて実施した。
【００５１】
ニューロピリンを含む最初のバイオマーカーを、知られている腫瘍形成及び血管新生活性に基づき、免疫組織化学的分析用に選択した。特に、カタログ番号ｓｃ-５３０７として、Santa Cruz Biotechnology, Inc.(Santa Cruz, California, U.S.A.)から入手可能な抗-ヒトニューロピリンマウスモノクローナル抗体を使用して、ニューロピリンを分析した。
【００５２】
切片をAutostainer又はBenchmark-XY(ＶＥＧＦＲ-１用)において染色し、一次抗体を１時間インキュベートした。Sana Cruz抗体に対する特異性について、この抗-ニューロピリン抗体を１／５０ダルトンで使用した。一次抗体の結合性をEnvisionシステム(DAKO, Glostrup, Denmark)又はUltraview(Ventana, Tucson, AZ USA)を使用して可視化した。全ての切片をメイヤーヘマトキシリンで対比染色した。
【００５３】
正確性、特異性、直線性、及び精度(再現性及び繰返性)を示す検証報告を、各ＩＨＣアッセイについて作製した。外部対照スライドと固有の対照エレメントの染色を記録した。
【００５４】
統計的分析
バイオマーカーの全体分布を、腫瘍マーカー用のＨスコアを使用して記載した。研究されるマーカーの数には制限があり、それぞれを生物学的論拠により支持し；複数のテストで形式上の補正はなかった。タンパク質発現レベル：中央値(下、上)及び四分位数(≦２５、２５＜ｘ≦５０、５０＜ｘ≦７５、＞７５)に対して推測的カットオフを使用した。
【００５５】
治療効果を、バイオマーカーレベルにより定められる患者のサブグループにおいて推定した。全生存率(「ＯＳ」)及び／又は無増悪生存率(「ＰＦＳ」)を、一次エンドポイントとして選択した；一次記述的分析をサブグループ分析を使用して実施した。バイオマーカー相互作用による処置テスト(中央値カットオフ)も二次分析として提供した。
【００５６】
結果
腫瘍マーカー
ニューロピリンについての腫瘍試料の分析結果を表１に提供する。
2013539460.tif 000002
次の分析に使用されるニューロピリン発現の中央値Ｈスコアは９０であり、第１四分位数及び第３四分位数スコアはそれぞれ４０及び１２０であった。
【００５７】
全生存率とのバイオマーカー相関
中央値又は四分位値ニューロピリンＨスコアにより分けられた患者の全生存率について、ハザード比を決定した。
2013539460.tif 000003
【００５８】
2013539460.tif 000004
【００５９】
算出されたハザード比は、標準的化学療法と組合せてベバシズマブを投与した場合、ニューロピリンの腫瘍特異的発現の相対的な低下を示す患者において全生存率を改善することを示している。特に表２において、腫瘍特異的ニューロピリン発現が低い（≦中央値）患者のサブセットでの治療ハザード比の９５％信頼区間の上限は１以下である。これは、患者のサブグループにおいて観察される治療効果（全生存率）の統計的関連性を裏付けている。
【００６０】
全生存率に対してベバシズマブ処置及びニューロピリン発現を相関付けるカプラン−マイヤー曲線を図１に提供する（中央値カットオフ）。ハザード比で示される、ベバシズマブを化学療法に加えた場合における、ニューロピリン発現が比較的低い患者に対する全生存率の改善もまた図１から分かる。中央値全生存率は、中央値より上の腫瘍特異的ニューロピリン発現を有する患者では０．８ヶ月だけだったのに比較して、腫瘍特異的ニューロピリン発現が比較的低い（≦中央値）患者では１．８ヶ月と改善されていた。該結果は、治療効果（全生存率）が、比較的低レベルのニューロピリンの患者サブセットにおいて改善されていること証明している。
【００６１】
無増悪生存率とのバイオマーカーの相関
中央値又は四分位値ニューロピリンＨスコアにより分けられた患者の無増悪期間又は死亡までの期間に対してハザード比を決定した。
2013539460.tif 000005
【００６２】
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【００６３】
算出されたハザード比は、ニューロピリンの腫瘍特異的発現が低下しているので、標準的化学療法と組合せてベバシズマブを投与した患者において、無増悪生存率が改善することを示している。表４において、腫瘍特異的ニューロピリン発現が低い（≦中央値）患者のサブセットでの治療ハザード比の９５％信頼区間の上限は１以下である。これは、患者のこのサブグループにおいて観察される治療効果（無増悪生存率）の統計的関連性を裏付けている。
【００６４】
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【００６５】
表５は、主要プロトコル違反のある患者を排除したプロトコル毎の集団で作成した。表６は、全ての無作為化患者を含む包括解析集団において作製した。よって、表６はより正確な分析を提供する。
【００６６】
無増悪生存率に関する、ニューロピリン発現及びベバシズマブ処置と相関するカプラン-マイヤー曲線を図２に提供する(中央値カットオフ)。ハザード比に示される、ベバシズマブを化学療法に添加した場合に、ニューロピリン発現が比較的低い患者についての無増悪生存率における改善性を、図２に表した。中央無増悪生存率は、中央値より上の腫瘍特異的ニューロピリン発現を有する患者では１．３ヶ月だけだったのに対して、腫瘍特異的ニューロピリン発現が比較的低い(≦中央値)患者では、２．１ヶ月と改善されていた。結果は、治療効果(無増悪生存率)が、比較的低レベルのニューロピリンを有する患者のサブセットにおいて改善されていること示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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