(57)【要約】本発明は、式Ｉの化合物を、任意にその薬学的に許容される塩、溶媒和物、および／または水和物として、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３を標的とする阻害物質と組み合わせて投与することによって、癌を治療する方法を提供する。【化１】2013539453.tif 000187
2013539453.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における癌を治療するための方法であって、治療上有効量の式Ｉの化合物およびＨＥＲ３を標的とする治療上有効量の機能性核酸を、前記患者に共投与することを含む、方法。
【請求項２】
患者における癌を治療するための方法であって、治療上有効量の式Ｉの化合物ならびに治療上有効量のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を、前記患者に共投与することを含む、方法。
【請求項３】
前記式Ｉの化合物は、表１に具体的に列挙される化合物である、請求項１および２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記式Ｉの化合物は、化合物Ａである、請求項１、２、および３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質は、ラパチニブ、機能性核酸、抗ＨＥＲ２抗体、または抗ＨＥＲ３抗体である、請求項１、２、３、および４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記機能性核酸は、ｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ分子、またはアンチセンス核酸分子である、請求項１、２、３、４、および５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ｓｉＲＮＡは、１８〜３０個のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを含み、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡに結合するように作動可能である、請求項１、２、３、４、５、および６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ｍＲＮＡは、配列番号１に提供されるヌクレオチド配列を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ｓｉＲＮＡは、配列番号３、４、６、７、または８のポリヌクレオチド配列を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｓｉＲＮＡは、裸であるか、連結されているか、あるいは、封入されている、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記アンチセンス核酸は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３ポリペプチドをコードする、２本鎖ｃＤＮＡ分子に相補的であるか、またはｍＲＮＡ配列に相補的である、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記２本鎖ｃＤＮＡ分子は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＥＲ２ポリペプチド、またはその断片もしくはその変異体をコードするように作動可能である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＥＲ２ポリペプチドをコードする前記ｍＲＮＡ配列は、配列番号１のポリヌクレオチド配列またはその断片もしくはその変異体を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記機能性核酸は、組換えベクターにおいて被検体に投与され、前記ベクターは、腫瘍中または腫瘍の部位の近くで前記機能性核酸を発現し、前記腫瘍中のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の発現および／または活性を阻害するように作動可能である、請求項５、６、７、８、９、１０、１１、１２、および１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、４Ｄ５、５２０Ｃ９、４５２Ｆ２、７３６Ｇ９、７４１Ｆ８、７５８Ｇ５、７６１Ｂ１０、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、４Ｄ５−８、またはそれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＨＥＲ３阻害物質が投与され、前記ＨＥＲ３阻害物質が抗ＨＥＲ３抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、配列番号９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１０を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号１２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１３を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号１４を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、配列番号１５を含む重鎖可変領域および配列番号１６を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、ＭＭ−１２１である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＨＥＲ３抗体は、ＭＭ−１２１であり、前記式Ｉの化合物は、化合物Ａである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
治療上有効量の式Ｉの化合物ならびに治療上有効量のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を前記患者に共投与することは、前記式Ｉの化合物を前記ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質と同時に、あるいは前記ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与する前あるいは後に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者に投与される前記式Ｉの化合物の量は、１日当たり約０．０１〜約１，０００ｍｇの式Ｉの化合物を投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
投与される前記式Ｉの化合物の量は、１日につき体重１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇの範囲の式Ｉの化合物の量を投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与することは、１日につき体重１キログラム当たり約０．００１〜約１００ｍｇの前記ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記癌は、心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍａｔｏｕｓ  ｈａｎｌａｒｔｏｍａ）、中皮腫（ｉｎｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）；乳：非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌、髄様癌、浸潤性小葉腺癌、管状癌、粘液癌、炎症性乳癌；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（膵管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍  脊索腫、骨軟骨腫（ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｆｒｏｍａ）（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形膠芽腫、乏突起神経膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頚部（子宮頚癌、前腫瘍性子宮頚部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胚性横紋筋肉腫］、卵管（癌腫）；血液系：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒子異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；副腎：神経芽細胞腫を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌は、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮体癌、胃癌（胃腸カルチノイド腫瘍および消化管間質腫瘍を含む）、膠芽腫、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、および甲状腺癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌は、ＨＥＲ２過剰発現癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＥＲ２過剰発現癌は、ＨＥＲ２過剰発現乳癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌は、ＨＥＲ２非過剰発現癌を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌は、非ＨＥＲ２増幅腫瘍を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
治療上有効量の化合物Ａが、治療上有効量のＭＭ−１２１と共投与される、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記組み合わせは、前記癌の治療における治療的相乗効果を示す、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記組み合わせは、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ１０細胞死滅を達成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌は、肺癌である、請求項３０〜３４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の説明
本出願は、２０１０年７月９日に出願された米国仮出願第６１／３６３，０７４号、および２０１０年１２月１０日に出願された米国仮出願第６１／４２１，９２９号に対する優先権を主張し、これらの両方は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、参照によりその全体として、２０１１年７月８日に作成され、２０１１年７月８日に本明細書と共に出願された「ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」（２８．２ＫＢ）と題される配列表を組み込む。
【０００３】
本発明は、キナゾリン（ｑｕｉｎａｘｏｌｉｎｅ）ＰＩ３Ｋ阻害物質により、１つ以上の更なるキナーゼ阻害物質と組み合わせて、癌を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
癌、代謝性疾患、および炎症性疾患等の種々の病状を治療するために使用される薬剤の特異性における改善は、これらの薬剤の投与に関連する副作用が低減され得る場合に実現されるであろう治療上の便益から、相当に興味深い。伝統的に、癌の治療における劇的な改善は、新規の機構を通じて作用する治療剤の特定に関連する。
【０００５】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、１１０ｋＤａ触媒サブユニット（ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子によってコードされる）および８５ｋＤａ調節サブユニットから構成される。触媒サブユニットは、ＰｔｄＩｎｓ、ＰｔｄＩｎｓ４Ｐ、およびＰｔｄＩｎｓ（４，５）Ｐ２をリン酸化して、第２メッセンジャーＰｔｄＩｎｓ３Ｐ、ＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２、およびＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３（ＰＩＰ３）を作り出すために、ＡＴＰを使用する。多数の機構を通じて細胞増殖を阻害する腫瘍抑制因子であるＰＴＥＮは、ＰＩＫ３ＣＡの主産物であるＰＩＰ３を脱リン酸化することができる。ＰＩＰ３は、今度は、タンパク質キナーゼＢ（ＡＫＴ１、ＰＫＢ）の細胞膜への転座に要求され、そこで、上流キナーゼによってリン酸化および活性化される。細胞死に対するＰＴＥＮの効果は、ＰＩＫ３ＣＡ／ＡＫＴ１経路を通じて媒介される。
【０００６】
ＰＩ３Ｋαは、細胞骨格再構築、アポトーシス、小胞輸送、増殖、および分化プロセスの制御に関係付けられている。ＰＩＫ３ＣＡの増加されたコピー数および発現またはＰＩＫ３ＣＡにおける活性化突然変異は、卵巣癌（Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４，７６７８−７６８１、Ｌｅｖｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５，１１，２８７５−２８７８、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ  ２００５，２５，３２２、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  ２００５，９７，２６−３４）、子宮頸癌、乳癌（Ｂａｃｈｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００４，３，７７２−７７５、上記のＬｅｖｉｎｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ２００６，９６，９１−９５、Ｓａａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５，６５，２５５４−２５５９、Ｓａｍｕｅｌｓ  ａｎｄ  Ｖｅｌｃｕｌｅｓｃｕ，Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ２００４，３，１２２１−１２２４）、結腸直腸癌（Ｓａｍｕｅｌｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００４，３０４，５５４、Ｖｅｌｈｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００５，４１，１６４９−１６５４）、子宮内膜癌（Ｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００５，６５，１０６６９−１０６７３）、胃癌（Ｂｙｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００３，１０４，３１８−３２７、上記のＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，、上記のＶｅｌｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００５，２４，１４７７−１４８０）、肝細胞癌（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｄ．）、小細胞および非小細胞肺癌（Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６，５１，１８１−１９１、Ｍａｓｓｉｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００４，１７０，１０８８−１０９４）、甲状腺癌（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２００５，９０，４６８８−４６９３）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（Ｓｕｊｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １９９７，１０６，１０６３−１０６６）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（Ｈｉｃｋｅｙ  ａｎｄ  Ｃｏｔｔｅｒ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００６，２８１，２４４１−２４５０）、ならびに膠芽腫（Ｈａｒｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ（Ｂｅｒｌ）２００５、１０９、６３９−６４２、上記のＳａｍｕｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，）等の幾つかの悪性腫瘍に関連する。生物学的過程および病状におけるＰＩ３Ｋ−αの重要な役割を考慮して、この脂質キナーゼの阻害物質および／または調節物質が望ましい。
【０００７】
加えて、治療を異なる作用の機構と組み合わせることは、単独で投与される単一の治療と比較して、強化された抗腫瘍活性をもたらし得る。例えば、ＰＩ３Ｋ経路の活性化は、タキソール（Ｂｒｏｇｎａｒｄ，Ｊ．，ｅｔ．ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１，６１，３９８６−３９９７、Ｃｌａｒｋ，Ａ．Ｓ．，ｅｔ．ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００２，１，７０７−７１７、Ｋｒａｕｓ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ．ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００２，２１，８６８３−８６９５、Ｋｒｙｓｔａｌ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ．ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００２，１，９１３−９２２、およびＹｕａｎ，Ｚ．Ｑ．，ｅｔ．ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００３，２７８，２３４３２−２３４４０）のような微小管安定化剤等の、ある種の化学療法剤に対するヒト腫瘍細胞の抵抗性に寄与し得る。
【０００８】
したがって、ＰＩ３Ｋ−αの阻害物質を他の薬剤と組み合わせる治療が望ましく、かつ必要とされる。
【発明の概要】
【０００９】
以下は、本発明のある種の態様を要約するにすぎず、本質的に限定するようには意図されない。これらの態様ならびに他の態様および実施形態は、下記により完全に記載される。本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書の明白な開示と参照により組み込まれる参照文献との間に矛盾がある場合は、本明細書の明白な開示が優先されるものとする。
【００１０】
本発明の組成物は、異常なおよびまたは無秩序な細胞活性に関連する疾患を治療するために使用される。本明細書に提供される方法および組成物によって治療することができる病状には、癌が含まれる。本発明は、式ＩまたはＩ（ａ）の化合物を１つ以上の治療と組み合わせて投与することによって、これらの疾患を治療する方法を対象とする。
【００１１】
本発明の一態様は、癌を治療する方法を対象とし、その方法は、患者に、治療上有効量の式Ｉ：
【化１】
2013539453.tif 000003
Ｉの化合物、
またはその単一の異性体を投与することを含み、ここで化合物は、任意にその薬学的に許容される塩として、更に任意に水和物として、および更に任意に溶媒和物としてのものであるか、あるいは治療上有効量の式Ｉの化合物および薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含み、ここで式Ｉの化合物は、
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４が−Ｃ（Ｒ１）＝であるか、またはＷ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４のうちの１つもしくは２つが独立して、−Ｎ＝であり、残りのものが−Ｃ（Ｒ１）＝であり、ここで各Ｒ１が独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノであり、
Ｒ５１が水素またはアルキルであり、
Ｒ５２が水素またはハロであり、
Ｒ５０、Ｒ５３、およびＲ５４が独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、Ｒ５５およびＲ５５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４が、それらが結合される炭素と一緒になって、５員もしくは６員のヘテロアリールまたは５員もしくは６員のヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｂが、Ｒ３ａで置換され、かつ１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に更に置換されるフェニルであるか、あるいは
Ｂが、１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に置換されるヘテロアリールであり、
Ｒ３ａが、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、ハロアルコキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであるか、あるいは
ａ）−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、式中、Ｒ７が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、またはアリールアルキルオキシであり、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリール環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルキルチオ、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｂ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａであり、式中、Ｒ８が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ８ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、シアノアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ８ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニル、および−Ｃ（Ｏ）Ｈから独立して選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｃ）−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａであり、式中、Ｒ９が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ９ａが水素、Ｃ２−Ｃ６アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ９ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アリール（任意に１個または２個のハロで置換される）、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シロアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌ）アルキルアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌａｌｋｙｌ）、およびシクロアルキルカルボニルから独立して選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｄ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、式中、Ｒ１０ａが水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、Ｒ１０およびＲ１０ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであるか、
ｅ）−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂであり、式中、Ｒ１１ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、Ｒ１１およびＲ１１ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであるか、
ｆ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２であり、式中、Ｒ１２が、アルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、およびヘテロシクロアルキルアルキルから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるヘテロシクロアルキルであるか、
ｇ）−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａであり、式中、Ｒ１３が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１３ａがアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリール、またはアリールアルキルであるか、
ｈ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）であり、式中、Ｒ１４、Ｒ１４ａ、およびＲ１４ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｉ）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂであり、式中、Ｒ１５、Ｒ１５ａ、およびＲ１５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａであり、式中、Ｒ１６が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１６ａがアルキルまたはアルケニルであるか、
ｋ）１個または２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリールであるか、
ｌ）−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）であり、式中、Ｒ１７、Ｒ１７ａ、Ｒ１７ｂ、Ｒ１７ｃ、およびＲ１７ｄが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｍ）−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａであり、式中、Ｒ１８ａが水素、アルキル、アルケニル、またはアルコキシであり、Ｒ１８およびＲ１８ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｎ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａであり、式中、Ｒ１９が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１９ａがアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはヘテロシクロアルキルであるか、
ｏ）−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、式中、Ｒ２０が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２０ａがシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであるか、
ｐ）−ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒ２１ａであり、式中、Ｒ２１が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２１ａおよびＲ２１ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｑ）−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）であり、式中、Ｒ２２、Ｒ２２ａおよびＲ２２ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｒ）−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａであり、式中、Ｒ２３、Ｒ２３ａおよびＲ２３ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、あるいは
ｓ）−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、式中、Ｒ２４が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２４ａが、１個または２個のハロまたはアルキルで任意に置換されるアルコキシアルキルまたはアリールであり、
式中、Ｒ３ａにおけるアルキレンの各々が独立して、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、かつ
各Ｒ３（Ｒ３が存在するとき）は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、アルコキシ、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、ハロアルコキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであるか、あるいは
ａ）−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、式中、Ｒ７が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、またはアリールアルキルオキシであり、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリール環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルキルチオ、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｂ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａであり、式中、Ｒ８が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ８ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、シアノアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ８ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニル、および−Ｃ（Ｏ）Ｈから独立して選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｃ）−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａであり、式中、Ｒ９が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ９ａが水素、Ｃ２−Ｃ６アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ９ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アリール（任意に１個または２個のハロで置換される）、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シロアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌ）、シロアルキルアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌａｌｋｙｌ）、およびシクロアルキルカルボニル独立してから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｄ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、式中、Ｒ１０ａが水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、Ｒ１０およびＲ１０ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはヒドロキシアルキルであるか、
ｅ）−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂであり、式中、Ｒ１１ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、Ｒ１１およびＲ１１ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル（ａｌｋｙｌａｍｉｎｏｏａｌｋｙｌ）、またはジアルキルアミノアルキルであるか、
ｆ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２であり、式中、Ｒ１２が、アルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、およびヘテロシクロアルキルアルキルから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるヘテロシクロアルキルであるか、
ｇ）−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａであり、式中、Ｒ１３が水素、アルキル、またはアルケニルおよびＲ１３ａは、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリール、またはアリールアルキル）であるか、
ｈ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）であり、式中、Ｒ１４、Ｒ１４ａ、およびＲ１４ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｉ）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂであり、式中、Ｒ１５、Ｒ１５ａ、およびＲ１５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａであり、式中、Ｒ１６が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１６ａがアルキルまたはアルケニルであるか、
ｋ）１個または２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリールであるか、
ｌ）−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）であり、式中、Ｒ１７、Ｒ１７ａ、Ｒ１７ｂ、Ｒ１７ｃ、およびＲ１７ｄが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｍ）−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａであり、式中、Ｒ１８ａが水素、アルキル、アルケニル、またはアルコキシであり、Ｒ１８およびＲ１８ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｎ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａであり、式中、Ｒ１９が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１９ａがアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはヘテロシクロアルキルであるか、
ｏ）−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、式中、Ｒ２０が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２０ａがシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであるか、
ｐ）−ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒ２１ａであり、式中、Ｒ２１が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２１ａおよびＲ２１ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｑ）−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）であり、式中、Ｒ２２、Ｒ２２ａおよびＲ２２ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｒ）−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａであり、式中、Ｒ２３、Ｒ２３ａおよびＲ２３ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、あるいは
ｓ）−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、式中、Ｒ２４が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２４ａが、１個または２個のハロまたはアルキルで任意に置換されるアルコキシアルキルまたはアリールであり、
式中、Ｒ３におけるアルキレンの各々がハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換されるが、
Ｒ５０およびＲ５２が水素であり、Ｒ５１が水素またはメチルであり、Ｒ５３が水素またはメトキシであり、かつＲ５４が水素またはメトキシであるとき、Ｂが、１つのＲ３（Ｒ３はハロである）で置換される、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル（ｂｅｎｚｏｄｉｏｘｉｎｙｌ）、チエン−２−イル、またはチエン−２−イルでないことを条件とする、化合物である。
【００１２】
一態様では、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、またはＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体の阻害物質は、機能性核酸である可能性がある一方で、別の態様では、それは、抗体またはタンパク質ディスプレイ足場である可能性がある。
【００１３】
別の態様では、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、またはＦＧＦＲ２の阻害物質は、機能性核酸、ラパチニブである可能性がある一方で、別の態様では、それは、抗体またはタンパク質ディスプレイ足場である可能性がある。
【００１４】
一態様では、患者に治療上有効量の化合物Ａおよび治療上有効量のＭＭ−１２１を投与することを含む、ＨＥＲ２非過剰発現癌を有する患者を治療するための方法が提供される。一実施形態では、癌は、非ＨＥＲ２増幅腫瘍を含む。幾つかの実施形態では、組み合わせは、ＨＥＲ２非過剰発現癌の治療における治療的相乗効果を示す。他の実施形態では、組み合わせは、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ１０細胞死滅を達成する。
【００１５】
別の態様では、癌は、ＨＥＲ２非過剰発現癌を含む。
【００１６】
別の態様では、癌は、非ＨＥＲ２増幅腫瘍を含む。
【００１７】
別の態様では、治療上有効量の化合物Ａは、治療上有効量のＭＭ−１２１と共投与される。
【００１８】
別の態様では、化合物ＡおよびＭＭ１２１の組み合わせは、癌の治療における治療的相乗効果を示す。
【００１９】
別の態様では、化合物ＡおよびＭＭ１２１の組み合わせは、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ１０細胞死滅効果を示す。
【００２０】
別の態様では、癌は、肺癌である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
本特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面（複数可）を含めた本特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要手数料の支払いに応じて、特許庁によって提供されるであろう。
【図１Ａ】ＰＩ３Ｋ阻害を潜在的に補償するキナーゼを特定するためのｓｉＲＮＡスクリーニング。ＨＣＣ１９３７乳癌細胞を、示される量の化合物Ａで、６、２４、または７２時間、２．５％ＦＢＳを含有する培地中で処置した。細胞ライセートを、免疫ブロット法によって、示される抗体により分析。
【図１Ｂ】ＰＩ３Ｋ阻害を潜在的に補償するキナーゼを特定するためのｓｉＲＮＡスクリーニング。ＨＣＣ１９３７細胞を、９６ウェルプレート中に三重で播種し、ＤＭＳＯまたは示される濃度の化合物Ａで７２時間処置した。細胞生存率を、アラマーブルーアッセイによって測定した。
【図２】ＲＮＡｉスクリーニングのスキーム。７７９個のキナーゼを標的とするＳＭＡＲＴプールｉＲＮＡを含有する、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  ＲＴＦタンパク質キナーゼｓｉＲＮＡライブラリを使用した。ＨＣＣ１９３７細胞を、９６ウェルプレート中、５ｐｍｏｌ  ｓｉＲＮＡ／ウェルでリバーストランスフェクトした。プレートを１：６に分割し、ＤＭＳＯまたは１０μＭ化合物Ａで７２時間処置した。細胞生存率を、アラマーブルーアッセイを使用して測定した。スクリーニングは、２回行われた。
【図３】ＰＩ３Ｋ阻害は、ＲＴＫおよび細胞内キナーゼのリン酸化を誘導する。ＨＣＣ１９３７細胞を、１０μＭ化合物Ａで、２．５％ＦＢＳを含有する培地中、０、８、２４、または４８時間処置した。培地および薬物を２４時間毎に補充した。ライセートを使用して、ホスホＲＴＫアレイ（図３Ａ）またはホスホキナーゼアレイ（図３Ｂ）（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を探索した。角のスポットは、陽性対照である。化合物Ａでの処置時に同様にリン酸化されるｓｉＲＮＡスクリーニングからの候補キナーゼは、赤色で示される。
【図４】ＨＣＣ１９３７細胞を、１０μＭ化合物Ａで、２．５％ＦＢＳを含有する培地中、０、８、２４、または４８時間処置した。培地および薬物を２４時間毎に補充した。ライセートを使用して、ホスホＲＴＫアレイ（Ａ）またはホスホキナーゼアレイ（Ｂ）（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を探索した。角のスポットは、陽性対照である。化合物Ａでの処置時に同様にリン酸化されるｓｉＲＮＡスクリーニングからの候補キナーゼは、赤色で示される。
【図５】ＨＣＣ１９３７細胞を、１０μＭ化合物Ａで、２．５％ＦＢＳを含有する培地中、０、２、８、または２４時間処置した。ＲＮＡをトリゾールで単離し、ＲＮｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製した。３つの独立した実験からの遺伝子発現を、Ｇｅｎｅ  ｔｉｔａｎ  ３’マイクロアレイを使用して測定した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対０時間。
【図６Ａ】ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡは、ＰＩ３Ｋ阻害物質の抗増殖効果を強化する。ＢＴ４７４細胞を対照またはＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドでトランスフェクトし、続いて２．５％ＦＢＳを含有する培地中、６μＭ化合物Ａでの処置を行った。細胞を増殖アッセイ（Ａ）のために採取した。
【図６Ｂ】ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡは、ＰＩ３Ｋ阻害物質の抗増殖効果を強化する。トランスフェクション後６日目のクリスタルバイオレット染色。
【図７】ＢＴ−４７４細胞を、６μＭ化合物Ａで処置した。新鮮な培地および阻害物質を２４時間毎に補充した。示される時間に、細胞を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害物質を含有するＮＰ−４０溶解緩衝液中に採取した。ライセートを調製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、示される抗体での免疫ブロット分析に供した。
【図８】ＭＤＡ−４５３（Ａ）およびＳＫＢＲ−３（Ｂ）細胞を、図７に記載されるように、１０ｎＭ  ＨＥＲ３または対照ｓｉＲＮＡ二重鎖で、リポフェクトアミンＲＮＡｉＭＡＸの存在下でトランスフェクトした。左パネル：トランスフェクションに続いて、細胞を、５％血清±２μＭ化合物Ａを含有する培地中に維持し、２４時間後に採取した。細胞ライセートを調製し、示される抗体での免疫ブロット分析に供した。アクチンを対照として使用した。右パネル：トランスフェクションに続いて、２．５ｘ１０４細胞／ウェルを１２ウェルプレート上に播種し、５％ＦＣＳ±２μＭ化合物Ａを含有する培地中に維持した。トランスフェクション後６日目、細胞をトリプシン処理し、それらの数をコールターカウンターにおいて定量化した。各棒は、３ウェルの平均細胞数±ＳＥ（＊ＭＤＡ−４５３についてｐ＜０．００１、ＳＫＢＲ−３についてｐ＜０．０１）を表す。
【図９Ａ】化合物Ａの存在下でのＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、ＨＣＣ１９３７、ＭＤＡＭＭＢ４５３、ＨＣＣ１９５４、ＵＡＣＣ８９３、およびＳＵＭ１９０細胞の増殖を表す棒グラフを図示する。
【図９Ｂ】マトリゲル中、０〜２０μＭ化合物Ａの不在および存在下で培養したＢＴ４７４、ＨＣＣ１９３７、ＭＤＡ４５３、およびＨＣＣ１９５４細胞の顕微鏡写真を図示する。
【図１０Ａ】上の図９Ａに提供されるように、示される濃度の化合物Ａで処置した各乳癌細胞株について算出した、プレートされた細胞の最初の量に対する、細胞数のパーセントの棒グラフを図示する。１００％を下回る数（黒色直線）は、アポトーシスを示す。
【図１０Ｂ】細胞を０〜２０μＭ化合物Ａで２４時間処置した免疫ブロットを図示する。細胞ライセートを調製し、パネルの左に示される抗体での免疫ブロット法に供した。上部矢印は、総ＰＡＲＰを示し、下部矢印は、開裂ＰＡＲＰを示す。
【図１１】無血清培地中、０〜２０μＭ化合物Ａで一晩処置した種々の細胞株の免疫ブロットを図示する。細胞を採取し、ライセートを、示される抗体での免疫ブロット分析のために使用した。
【図１２Ａ】ＲＮＡ単離およびＨＥＲ３特異的プライマーでのリアルタイムｑＰＣＲ分析前に、６μＭ化合物Ａで、示される時間にわたって処置した、ＢＴ４７４細胞中の時限ＨＥＲ３  ｍＲＮＡ転写の棒グラフを図示する。
【図１２Ｂ】ＲＮＡ単離およびＨＥＲ３特異的プライマーでのｑＰＣＲ分析前に、２μＭ  ５Ｊ８、２０μＭ  ＬＹ２９４００２、および５０ｎＭラパマイシンで１０時間処置した、ＢＴ４７４細胞中の時限ＨＥＲ３  ｍＲＮＡ転写の棒グラフを図示する。
【図１２Ｃ】ＲＮＡ単離およびＨＥＲ３特異的プライマーでのｑＰＣＲ分析前に、６μＭ化合物Ａで、示される時間経過にわたって最大４８時間処置した、ＭＤＡ４５３およびＳＫＢＲ３細胞中のＨＥＲ３  ｍＲＮＡ転写の棒グラフを図示する。
【図１２Ｄ】ＤＭＳＯ（対照）、６μＭ化合物Ａ、または２μＭ  ５Ｊ８で４時間処置した、ＢＴ４７４およびＭＤＡ４５３細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。核（Ｎｕ）および細胞質（Ｃｙ）抽出物を単離し、ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａ抗体での免疫ブロット法に供した。ローディングコントロールは、Ｎｕに対して：ＨＤＡＣ３；Ｃｙに対して：ＲｈｏＡ（ＢＴ４７４）およびＭＥＫ１／２（ＭＤＡ４５３）。矢印は、ＦｏｘＯ３ａ特異的バンドを示す。
【図１２Ｅ】対照またはＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａ特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖のいずれかでトランスフェクトした、ＢＴ４７４、ＭＤＡ４５３、およびＳＫＢＲ３細胞を表す棒グラフを図示する。トランスフェクションの２日後、細胞を、採取、ＲＮＡ調製、およびＨＥＲ３についてのｑＰＣＲ分析前に、化合物Ａで６時間処置した。
【図１２Ｆ】対照またはＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａ特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖のいずれかでトランスフェクトした、ＢＴ４７４、ＭＤＡ４５３、およびＳＫＢＲ３細胞を表す棒グラフを図示する。トランスフェクションの２日後、細胞を、採取、ＲＮＡ調製、およびＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａについてのｑＰＣＲ分析前に、化合物Ａで６時間処置した。
【図１３Ａ】６μＭ化合物で、時間経過にわたって最大７２時間処置し、Ｙ軸上に列挙された種々の抗体を使用して免疫ブロット法に供した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。化合物Ａおよび培地を２４時間毎に補充した。
【図１３Ｂ】６μＭまたは２０μＭ化合物Ａで０〜４８時間処置した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを、示される抗体での免疫ブロット法に供した。
【図１３Ｃ】０〜２０μＭ化合物Ａで２４時間処置した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞を次いで溶解させ、０．５ｍｇのライセートを、ｐ８５抗体、続いてｐ８５およびｐＴｙｒでの免疫沈降（ＩＰ）に供した。
【図１３Ｄ】０〜２０μＭ化合物Ａで２４時間処置した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞を次いで溶解させ、０．５ｍｇのライセートを、ｐ８５抗体、続いてｐ８５およびＨＥＲ３での免疫沈降（ＩＰ）に供した。
【図１３Ｅ】対照またはＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて６μＭ化合物Ａでの処置を２４時間行った、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、０．５ｍｇをｐ８５抗体でのＩＰに供した。免疫複合体をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ｐ８５およびＨＥＲ３抗体で免疫ブロットした。
【図１３Ｆ】対照またはＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて６μＭ化合物Ａでの処置を２４時間行った、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、０．５ｍｇをｐ８５抗体でのＩＰに供した。免疫複合体をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ｐ８５およびｐＨＥＲ３Ｙ１１９７抗体で免疫ブロットした。
【図１３Ｇ】ＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、トランスフェクションの１日後、ＤＭＳＯまたは２μＭ化合物Ａで処置した、ＢＴ４７４細胞を表す棒グラフを図示する。増殖培地および阻害物質を３日毎に補充した。細胞を６日目、計数のために採取した。
【図１３Ｈ】ＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、トランスフェクションの１日後ＤＭＳＯまたは２μＭ化合物Ａで処置した、ＢＴ４７４細胞を表す顕微鏡写真を図示する。増殖培地および阻害物質を３日毎に補充した。細胞を６日目にクリスタルバイオレット染色し、撮影した。
【図１４Ａ】ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡまたは対照二重鎖でのトランスフェクションを行い、次いで６μＭ化合物Ａで３日間処置した後の、ＰＩ染色ＢＴ４７４細胞の数を表す棒グラフを図示する。このとき、細胞を洗浄し、採取し、細胞周期分析のために調製した。
【図１４Ｂ】対照またはＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて６μＭ化合物Ａでの処置を行い、次いでＨＥＲ３およびＰＡＲＰ抗体で免疫ブロットした、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。
【図１５Ａ】対照またはＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて６μＭ化合物Ａでの処置を２４時間行った、ＭＤＡ４５３細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、Ｙ軸上で示される抗体での免疫ブロット法に供した。
【図１５Ｂ】図７Ａに示されるＭＤＡ４５３細胞の増殖または減少を例証する棒グラフを図示するが、細胞を、新鮮な培地および化合物Ａ（２μＭ）を３日毎に補充しながら増殖させ、１０日目に計数したことを除く。
【図１５Ｃ】対照またはＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて６μＭ化合物Ａでの処置を２４時間行った、ＳＫＢＲ３細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、Ｙ軸上で示される抗体での免疫ブロット法に供した。
【図１５Ｄ】図７Ｃに示されるＳＫＢＲ３細胞の増殖または減少を例証する棒グラフを図示するが、細胞を、新鮮な培地および化合物Ａ（２μＭ）を３日毎に補充しながら増殖させ、１０日目に計数したことを除く。
【図１６Ａ】単独で、または０．１μＭラパチニブ（Ｌａｐ）と組み合わせて、２μＭ化合物Ａの不在または存在下で処置した、ＢＴ４７４細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１６Ｂ】単独で、または１０μｇ／ｍＬトラスツズマブ（Ｔｒａｓ）と組み合わせて、２μＭ化合物Ａの不在または存在下で処置した、ＢＴ４７４細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１６Ｃ】示される阻害物質で７２時間処置したＢＴ４７４細胞からのライセートを用いた、アポトーシスおよびＧ１〜Ｓ期移行のバイオマーカーについての免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。
【図１６Ｄ】化合物Ａ（６μＭ）、ラパチニブ（１μＭ）、トラスツズマブ（１０μｇ／ｍＬ）、または示される組み合わせで１０時間処置した細胞中の、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡのリアルタイムｑＰＣＲ分析を示す棒グラフを図示する。
【図１６Ｅ】化合物Ａ（６μＭ）、ラパチニブ（１μＭ）、トラスツズマブ（１０μｇ／ｍＬ）、または示される組み合わせでの時間経過にわたる（０〜２４時間）処置後の、細胞ライセート中のＨＥＲ３およびリン酸化ＨＥＲ３の存在を測定した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートの免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。
【図１７Ａ】単独で、または示される組み合わせでのいずれかで、０．１μＭラパチニブ、または２μＭ化合物Ａで総計６日間処置した、ＨＥＲ２依存性ＭＤＡＭＢ４５３細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１７Ｂ】単独で、または示される組み合わせでのいずれかで、１０μｇ／ｍＬトラスツズマブ、または２μＭ化合物Ａで総計６日間処置した、ＨＥＲ２依存性ＭＤＡＭＢ４５３細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１７Ｃ】単独で、または示される組み合わせでのいずれかで、０．１μＭラパチニブ、または２μＭ化合物Ａで総計６日間処置した、ＨＥＲ２依存性ＳＫＢＲ３細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１７Ｄ】単独で、または示される組み合わせでのいずれかで、１０μｇ／ｍＬトラスツズマブ、または２μＭ化合物Ａで総計６日間処置した、ＨＥＲ２依存性ＳＫＢＲ３細胞の細胞増殖または阻害を例証する棒グラフを図示する。
【図１８Ａ】方法に記載されるようにエストロゲンを補充したメス胸腺欠損マウス中に皮下注射した、ＢＴ４７４細胞の抑制を例証するグラフを図示する。一旦、腫瘍が容積≧２００ｍｍ３に到達すると、マウスをビヒクル（対照）、化合物Ａ、ラパチニブ、トラスツズマブ、または示される組み合わせに対して２８日間無作為化した。腫瘍容積を週２回記録した。各データ点は、タイプの治療当たり８匹のマウスのｍｍ３±ＳＥ単位の平均腫瘍容積を表す。ＣＲ＝治療に対する完全奏功。
【図１８Ｂ】ホルマリン固定し、バラフィン包埋した腫瘍ブロックからの免疫組織化学切片の顕微鏡写真を図示する。２８日目、ラパチニブおよび／または化合物Ａの最後の投薬の１時間後に異種移植片を採取した。使用した抗体は、ＨＥＲ３、ｐＨＥＲ３Ｙ１２８９、およびｐＡＫＴＳ４７３に対するものであった。写真を４００ｘ倍率で撮った（スケールバー：５０μｍ）。
【図１８Ｃ】図１８Ｂに提供される免疫染色切片のヒストスコア（Ｈスコア）分析を表す棒グラフを図示する。
【図１９Ａ】ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、化合物Ａで２４時間処置した、ＢＴ４７４細胞を表す免疫ブロットの顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、０．５ｍｇをｐ８５抗体で免疫沈殿させた。免疫複合体を次に、パネルの右に示される抗体での免疫ブロット法に供した。１μＭラパチニブを用いておよび用いずに６時間処置した、ＢＴ４７４細胞からの細胞ライセートを対照として使用した（列１および２）。
【図１９Ｂ】示されるように６μＭ化合物Ａで時間経過にわたって最大２４時間処置した、ＢＴ４７４細胞の顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、２００μｇの総タンパク質を、チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の４２個の異なる受容体に対するプローブを含有するアレイとハイブリッド形成させた。矢印は、ＰＩ３Ｋ阻害物質での処置時にリン酸化が上方調節された、ＲＴＫを示す。
【図１９Ｃ】示されるように６μＭ化合物Ａで時間経過にわたって最大２４時間処置した、ＢＴ４７４細胞の顕微鏡写真を図示する。細胞ライセートを調製し、５００μｇの総タンパク質を、４２個の異なるチロシンキナーゼ受容体（ＲＴＫ）に対するプローブを含有するアレイとハイブリッド形成させた。矢印は、ＰＩ３Ｋ阻害物質での処置時にリン酸化を上方調節した、ＲＴＫを示す。
【図１９Ｄ】ＤＭＳＯまたは１０μＭ化合物Ａのいずれかで６時間処置したＢＴ４７４細胞から収集したＲＮＡ中での、示されるＲＴＫのリアルタイムｑＰＣＲ分析を使用して特定した、ＲＴＫ  ｍＲＮＡの量を表す棒グラフを図示する。
【図１９Ｅ】ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａ  ｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、次いで１０μＭ化合物Ａで６時間処置したＢＴ４７４細胞から抽出したＲＮＡ中での、リアルタイムｑＰＣＲを使用して特定した、ＩＧＦ−ＩＲ、ＩｎｓＲ、およびＦＧＦＲ２  ｍＲＮＡの量を表す棒グラフを図示する。
【図２０Ａ】ＩＧＦ−ＩＲ  ｓｉＲＮＡまたは対照二重鎖でトランスフェクトしたＢＴ４７４、ＭＤＡ４５３、およびＭＣＦ７細胞中の、ＩＧＦ１Ｒ  ｍＲＮＡレベルを表す棒グラフを図示する。４８時間後、ＲＮＡを単離し、ＩＧＦ−ＩＲｍＲＮＡレベルについてのｑＰＣＲ分析に供した。
【図２０Ｂ】ＩｎｓＲ  ｓｉＲＮＡまたは対照二重鎖でトランスフェクトしたＢＴ４７４、ＭＤＡ４５３、およびＭＣＦ７細胞中の、ＩｎｓＲ  ｍＲＮＡレベルを表す棒グラフを図示する。４８時間後、ＲＮＡを単離し、ＩｎｓＲ  ｍＲＮＡレベルについてｑＰＣＲ分析に供した。
【図２０Ｃ】ＩＧＦ−ＩＲ  ｓｉＲＮＡもしくはＩｎｓＲ  ｓｉＲＮＡまたは対照二重鎖のいずれかでトランスフェクトした、ＢＴ４７４細胞の阻害を表す棒グラフを図示する。４８時間後、それらを１０μＭ化合物Ａで総計４日間処置した。このとき、細胞を計数した。
【図２０Ｄ】ＩＧＦ−ＩＲ  ｓｉＲＮＡ、ＩｎｓＲ  ｓｉＲＮＡ、または対照二重鎖のいずれかでトランスフェクトした、ＭＤＡＭＢ４５３細胞の阻害を表す棒グラフを図示する。４８時間後、それらを１０μＭ化合物Ａで総計４日間処置した。このとき、細胞を計数した。
【図２０Ｅ】ＩＧＦ−ＩＲ  ｓｉＲＮＡ、ＩｎｓＲ  ｓｉＲＮＡ、または対照二重鎖のいずれかでトランスフェクトした、ＭＣＦ７細胞の阻害を表す棒グラフを図示する。４８時間後それらを、１０μＭ化合物Ａで総計４日間処置した。このとき、細胞を計数した。
【００２２】
詳細な説明
略語および定義
次の略語および用語は、全体を通じて示された意味を有する。
2013539453.tif 000004
2013539453.tif 000005
【００２３】
定義
記号「−」は、単結合を意味し、「＝」は、二重結合を意味し、「≡」は、三重結合を意味し、「−−−」は、単結合および任意に二重結合を意味する。化学構造が図示または記載される場合、別途明記されない限り、全ての炭素は、４の原子価に一致するように水素置換を有することが想定される。
【００２４】
本発明の化合物を参照した「投与」およびその変形（例えば、化合物を「投与すること」）は、化合物または化合物のプロドラッグを、治療を必要とする動物の体系に導入することを意味する。本発明の化合物またはそのプロドラッグが、１つ以上の他の活性薬剤（例えば、外科手術、放射線、および化学療法等）と組み合わせて提供されるとき、「投与」およびその変形は各々、化合物またはそのプロドラッグおよび他の薬剤の同時導入および順次導入を含むことが理解される。
【００２５】
「アルケニル」または「低級アルケニル」は、２〜６個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する、直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。代表的な例としては、エテニル、プロペニル、１−ブタ−３−エニル、１−ペンタ−３−エニル、１−ヘキサ−５−エニル等が挙げられる。
【００２６】
「アルケニルカルボニル」は、Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルケニルである。
【００２７】
「アルケニルオキシ」または「低級アルケニルオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルケニルである。代表的な例としては、メトキシ、エトキシ、１−メトキシプロパ−１−エン−３−イル、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。
【００２８】
「アルコキシ」または「低級アルコキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルである。代表的な例としては、メトキシ、エトキシ、１−メトキシプロパ−１−エン−３−イル、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。
【００２９】
「アルコキシアルキル」は、本明細書で定義される１個、２個、または３個のアルコキシ基で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。
【００３０】
「アコキシカルボニル（Ａｋｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルである。
【００３１】
「アルコキシカルボニルアルキル（Ａｌｋｏｘｙｙｃａｒｂｏｎｙｌａｌｋｙｌ）」は、本明細書で定義される１個、２個、または３個のアルコキシカルボニル基で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。
【００３２】
「アルキル」または「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖炭化水素基を意味する。低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル等が挙げられる。「Ｃ０」アルキル（「Ｃ０−Ｃ６アルキル」にあるような）は、共有結合である。「Ｃ６アルキル」は、例えば、ｎ−ヘキシル、イソ−ヘキシル等を指す。
【００３３】
「アルキルアミノ」は、−ＮＨＲラジカルを意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルであるか、またはそのＮ−オキシド誘導体、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−、イソ−プロピルアミノ、ｎ−、イソ−、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、メチルアミノ−Ｎ−オキシド等である。
【００３４】
「アルキルアミノアルキル」は、本明細書で定義される１個または２個のアルキルアミノ基で置換されるアルキル基を意味する。
【００３５】
「アルキルアミノアルキルオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルアミノアルキルである。
【００３６】
「アルキルカルボニル」は、Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルである。
【００３７】
「アルキルカルボニルアミノ」は、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ’基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義される水素またはアルキルであり、Ｒ’は、本明細書で定義されるアルキルである。
【００３８】
「アルキレン」は、不飽和を含有せず、かつ２個から８個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖二価炭化水素を指す。アルキレンの例としては、エタ−ジイル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロパ−１，３−ジイル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、２，２−ジメチルプロパ−１，３−ジイル（−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−）等が挙げられる。
【００３９】
「アルキルスルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルである。
【００４０】
「アルキルチオ」は、−ＳＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアルキルである。アルキルチオの例としては、メチルチオ、エチルチオ等が挙げられる。
【００４１】
「アルキルチオアルキル」は、本明細書で定義される１個または２個のアルキルチオ基、例えば、２−（メチルチオ）−エチルおよび２−（エチルチオ）−エチルで置換される、アルキル基を意味する。
【００４２】
「アルキニル」または「低級アルキニル」は、２〜６個の炭素原子および少なくとも１つの三重結合を有する、直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。代表的な例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチン−２−イル等が挙げられる。
【００４３】
「アミノ」は、−ＮＨ２基を意味する。
【００４４】
「アミノアルキル」は、少なくとも１個、例えば、１個、２個、または３個のアミノ基で置換される、アルキル基を意味する。
【００４５】
「アミノアルキルオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアミノアルキルである。
【００４６】
「アンチセンス」または「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、転写物とハイブリッド形成し、その翻訳を遮断することができる特定の遺伝子転写物の一部分に相補的な核酸分子を指す。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡを含んでもよい。
【００４７】
「アリール」は、一価６員〜１４員の、単環式または多環式の炭素環式環を意味し、ここで単環式環は、芳香族であり、二環式環における環のうちの少なくとも１つは、芳香族である。代表的な例としては、フェニル、ナフチル、およびインダニル等が挙げられる。
【００４８】
「アリールアルキル」は、本明細書で定義される１個または２個のアリール基で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。例としては、ベンジル、フェネチル、フェニルビニル、フェニルアリル等が挙げられる。
【００４９】
「アリールオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアリールである。
【００５０】
「アリールアルキルオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアリールアルキルである。
【００５１】
「アリールスルホニル」は、−ＳＯ２Ｒ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるアリールである。
【００５２】
「カルボキシアルキル」は、１個、２個、または３個の−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。
【００５３】
「カルボキシエステル」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ基を意味し、ここでＲは、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、シクロアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、それらの各々は、本明細書で定義される。代表的な例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル等が挙げられる。
【００５４】
「化合物Ａ」は、式Ｉのおよび表Ｉの化合物であり、構造：
【化２】
2013539453.tif 000006
を有する。
【００５５】
「シアノアルキル」は、少なくとも１個、例えば、１個、２個、または３個のシアノ基で置換される、本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、またはアルキニルラジカルを意味する。
【００５６】
「シクロアルキル」は、３〜１３個の炭素原子を有する、単環式または多環式炭化水素ラジカルを意味する。シクロアルキルは、飽和または部分的に不飽和であり得るが、芳香族環を含有することはできない。シクロアルキルは、縮合、架橋、およびスピロ環系を含む。かかるラジカルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００５７】
「シクロアルキルアルキル」は、本明細書で定義される１個または２個のシクロアルキル基で置換されるアルキル基を意味する。代表的な例としては、シクロプロピルメチル、２−シクロブチル−エチル等が挙げられる。
【００５８】
「シクロアルキルカルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるシクロアルキルである。
【００５９】
「ジアルキルアミノ」は、−ＮＲＲ’ラジカルを意味し、ここでＲおよびＲ’は独立して、本明細書で定義されるアルキルであるか、またはそのＮ−オキシド誘導体、もしくは保護誘導体、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ，Ｎ−メチルプロピルアミノ、Ｎ，Ｎ−メチルエチルアミノ等である。
【００６０】
「ジアルキルアミノアルキル」は、本明細書で定義される１個のまたは複数のジアルキルアミノ基で置換されるアルキル基を意味する。
【００６１】
「ジアルキルアミノアルキルオキシ」は、−ＯＲ基を意味し、ここでＲは、本明細書で定義されるジアルキルアミノアルキルである。
【００６２】
「縮合環系」および「縮合環」は、架橋または縮合環を含有する、つまり、２つの環がそれらの環構造において１個を超える共有の原子を有する場合の、多環式環系を指す。本出願において、縮合多環および縮合環系は、必ずしも全て芳香族環系ではない。必ずしもそうでないが、典型的には、縮合多環は、近隣位の一連の原子、例えば、ナフタレンまたは１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレンを共有する。スピロ環系は、この定義によれば縮合多環式でないが、本発明の縮合多環式環系は、それら自体が、縮合多環の単環原子を介してそこに結合されたスピロ環を有してもよい。幾つかの例では、当業者によって理解されるように、芳香族系上の２個の隣接した基は、一緒に縮合されて、環構造を形成してもよい。縮合環構造は、ヘテロ原子を含有してもよく、１つ以上の基で任意に置換されてもよい。かかる縮合基の飽和炭素（すなわち、飽和環構造）は、２個の置換基を含有する可能性があることに更に留意すべきである。
【００６３】
「ハロアルコキシ」は、−ＯＲ’基を意味し、ここでＲ’は、本明細書で定義されるハロアルキル、例えば、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ等である。
【００６４】
「ハロアルコキシアルキル」は、本明細書で定義される１個、２個、または３個のハロアルコキシで置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。
【００６５】
「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００６６】
「ハロアルケニルは、１つ以上のハロゲン、例えば、１〜５個のハロ原子で置換される、本明細書で定義されるアルケニル基を意味する。
【００６７】
「ハロアルキル」は、１つ以上のハロゲン、例えば、１〜５個のハロ原子で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。代表的な例としては、２，２−ジフルオロエチル、トリフルオロメチル、２−クロロ−１−フルオロエチル等が挙げられる。
【００６８】
「ヘテロアリール」は、独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは、０、１、または２である）、−Ｎ−、−Ｎ（Ｒｘ）−から選択される、１つ以上の、例えば、１個、２個、３個、または４個の環ヘテロ原子を含有し、残りの環原子が炭素である、５〜１４個の環原子の単環式、縮合二環式、または縮合三環式の一価ラジカルを意味し、ここで単環式ラジカルを含む環は、芳香族であり、かつ二環式または三環式ラジカルを含む縮合環のうちの少なくとも１つは、芳香族である。二環式または三環式ラジカルを含む任意の非芳香族環の１個または２個の環炭素原子は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、または−Ｃ（＝ＮＨ）−基によって置換されてもよい。Ｒｘは、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アシル、またはアルキルスルホニルである。縮合二環式ラジカルは、架橋環系を含む。別途定めのない限り、原子価は、原子価則が許容する限り、ヘテロアリール基の任意の環の任意の原子上に位置してもよい。特に、原子価の点が窒素上に位置するとき、Ｒｘは、不在である。別の実施形態では、ヘテロアリールという用語には、１，２，４−トリアゾリル、１，３，５−トリアゾリル、フタルイミジル、ピリジニル、ピロリル、イミダゾリル、チエニル、フラニル、インドリル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２−イルまたは２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル等を含む）、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾジオキソール−４−イル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インドリジニル、ナフチリジン−３−イル、フタラジン−３−イル、フタラジン−４−イル、プテリジニル、プリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、テトラゾイル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル（例えば、テトラヒドロイソキノリン−４−イルまたはテトラヒドロイソキノリン−６−イル等を含む）、ピロロ［３，２−ｃ］ピリジニル（例えば、ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルまたはピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−７−イル等を含む）、ベンゾピラニル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、およびそれらの誘導体、またはそれらのＮ−オキシドもしくは保護誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
「ヘテロアリールアルキル（Ｈｅｔｅｒｅｏａｒｙｌａｌｋｙｌ）」は、本明細書で定義される１個または２個のヘテロアリール基で置換されるアルキル基を意味する。
【００７０】
「ヘテロシクロアルキル」は、３〜８個の環原子の飽和もしくは部分的に不飽和の一価単環式基、または５〜１２個の環原子の飽和もしくは部分的に不飽和の一価縮合二環式基を意味し、ここで１つ以上の、例えば、１個、２個、３個、または４個の環ヘテロ原子は、独立して−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは、０、１、または２である）、−Ｎ＝、−Ｎ（Ｒｙ）−（式中、Ｒｙは、水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アシル、またはアルキルスルホニルである）から選択され、残りの環原子は、炭素である。１個または２個の環炭素原子は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、または−Ｃ（＝ＮＨ）−基によって置換されてもよい。縮合二環式ラジカルは、架橋環系を含む。別途定めのない限り、基の原子価は、原子価則が許容する限り、ラジカル内の任意の環の任意の原子上に位置してもよい。特に、原子価点が窒素原子上に位置するとき、Ｒｙは、不在である。別の実施形態では、ヘテロシクロアルキルという用語には、アゼチジニル、ピロリジニル、２−オキソピロリジニル、２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、モルホリニル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、テトラヒドロピラニル、２−オキソピペリジニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、パーヒドロアゼピニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ジヒドロピリジニル、テトラヒドロピリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、デカヒドロイソキノリル、テトラヒドロフリル、およびテトラヒドロピラニル、ならびにそれらの誘導体、ならびにそれらのＮ−オキシドまたは保護誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
「ヘテロシクロアルキルアルキル」は、本明細書で定義される１個または２個のヘテロシクロアルキル基で置換される、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。
【００７２】
「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個、例えば、１個、２個、または３個のヒドロキシ基で置換される、本明細書で定義されるアルキルラジカルを意味するが、２個のヒドロキシ基が存在する場合、それらは、両方が同じ炭素原子上にないことを条件とする。代表的な例としては、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、３−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシブチル、３，４−ジヒドロキシブチル、および２−（ヒドロキシメチル）−３−ヒドロキシプロピル、例えば、２−ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−ヒドロキシエチル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
「ヒドロキシアミノ」は、−ＮＨ（ＯＨ）基を意味する。
【００７４】
「核酸分子」という語句および「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれにせよ、任意の長さのヌクレオチドのポリマー型を意味する。これらには、１本鎖、２本鎖、もしくは多重鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリン塩基およびピリミジン塩基または他の天然の、化学的にもしくは生化学的に修飾された、非天然の、もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれる。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基（ＲＮＡもしくはＤＮＡに典型的に見出され得るように）、または修飾もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含む可能性がある。代替的に、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホロアミダイト等の合成サブユニットのポリマーを含む可能性があり、故に、オリゴデオキシヌクレオシドホスホロアミデートまたは混合ホスホロアミデート−ホスホジエステルオリゴマーである可能性がある。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体等の修飾ヌクレオチド、ウラシル、他の糖類、ならびにフルオロリボースおよびチオエート等の結合基、ならびにヌクレオチド分岐（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｂｒａｎｃｈ）を含んでもよい。ポリヌクレオチドは、標識構成成分との共役等によって更に修飾されてもよい。他のタイプの修飾には、キャップ、天然産ヌクレオチドのうちの１つ以上の類似体での置換、およびポリヌクレオチドをタンパク質、金属イオン、標識構成成分、他のポリヌクレオチド、または固体支持体に結合するための手段の導入が含まれる。
【００７５】
「任意」または「任意に」は、その後に説明される事象または状況が生じても生じなくてもよく、かつその説明が、該事象または状況が生じる事例およびそれが生じない事例を含むことを意味する。当業者であれば、１個以上の任意の置換基を含有すると記載されるいずれの分子に関しても、立体的に実用的および／または合成的に実行可能な化合物のみが含まれることが意図されることを理解するであろう。「任意に置換される」は、用語内の後続の修飾語句を指す。したがって、例えば、「任意に置換されるアリールＣ１−８アルキル」という用語において、分子の「Ｃ１−８アルキル」部分および「アリール」部分の両方は、置換されてもされなくてもよい。例示的な任意置換の一覧は、「置換される」の定義において下に提示される。
【００７６】
「任意に置換されるアルキル」は、１つ以上の基、例えば、独立してアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、シアノ、シアノアルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルコキシ、カルボキシ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルオキシ、アルキル−Ｓ（Ｏ）０−２−、アルケニル−Ｓ（Ｏ）０−２−、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニル−ＮＲｃ−（ここでＲｃは、水素、アルキル、任意に置換されるアルケニル、任意に置換されるアルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、またはシアノアルキルである）、アルキルアミノカルボニルオキシ、ジアルキルアミノカルボニルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、ジアルキルアミノカルボニルアミノ、アルコキシアルキルオキシ、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ（ここでＲａおよびＲｂは独立して、水素、アルキル、任意に置換されるアルケニル、任意に置換されるアルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、またはシアノアルキルである）から選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に置換される、本明細書で定義されるアルキルラジカルを意味する。
【００７７】
「任意に置換されるアルケニル」は、１つ以上の基、例えば、独立してアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、シアノ、シアノアルキルアミノカルボニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルコキシ、カルボキシ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルカルボニルオキシ、アルキル−Ｓ（Ｏ）０−２−、アルケニル−Ｓ（Ｏ）０−２−、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニル−ＮＲｃ−（ここでＲｃは、水素、任意に置換されるアルキル、任意に置換されるアルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、またはアルケニルオキシである）、アルキルアミノカルボニルオキシ、ジアルキルアミノカルボニルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニルアミノ、ジアルキルアミノカルボニルアミノ、アルコキシアルキルオキシ、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ（ここでＲａおよびＲｂは独立して、水素、任意に置換されるアルキル、アルケニル、任意に置換されるアルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、またはアルケニルオキシである）から選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換される、本明細書で定義されるアルケニルラジカルを意味する。
【００７８】
「任意に置換されるアリール」は、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシエステル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、任意に置換されるシクロアルキル、任意に置換されるヘテロシクロアルキル、任意に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ’（ここでＲ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールである）から選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に置換される、本明細書で定義されるアリール基を意味する。
【００７９】
「任意に置換されるヘテロアリール」は、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、アルコキシ、ヒドロキシ、オキソ（原子価則が許容する限り）、カルボキシ、カルボキシエステル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、任意に置換されるシクロアルキル、任意に置換されるヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、任意に置換されるアリール、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ’（ここでＲ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールである）から選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に置換される、本明細書で定義されるヘテロアリール基を意味する。
【００８０】
「任意に置換されるヘテロシクロアルキル」は、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、オキソ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、アルコキシ、任意に置換されるシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、任意に置換されるアリール、任意に置換されるヘテロアリール、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、カルボキシ、カルボキシエステル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ”（ここでＲ’は、水素またはアルキルであり、Ｒ”は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルである）、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、および−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ’（ここでＲ’は、アルキル、アリール、またはヘテロアリールである）から選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に置換される、本明細書で定義されるヘテロシクロアルキルを意味する。
【００８１】
「飽和架橋環系」は、芳香族でない二環式または多環式環系を指す。かかる系統は、単離または共役した不飽和を含有してもよいが、そのコア構造において芳香族またはヘテロ芳香族環でない（しかしその上に芳香族置換を有してもよい）。例えば、ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］フラン、２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−インデン、７−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、および１，２，３，４，４ａ，５，８，８ａ−オクタヒドロ−ナフタレンは全て、「飽和架橋環系」のクラスに含まれる。
【００８２】
「短干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介することが可能である、一般に約１０〜約３０ヌクレオチド長の、２本鎖ＲＮＡ分子を指す。
【００８３】
「スピロシクリル」または「スピロ環式環」は、別の環の特定の環状炭素に由来する環を指す。例えば、下に図示されるように、橋頭原子ではなく、飽和架橋環系の環原子（環ＣおよびＣ’）が、飽和架橋環系とそれに結合されるスピロシクリル（環Ｄ）との間の共有の原子であり得る。スピロシクリルは、炭素環式または複素脂環式であり得る。
【化３】
2013539453.tif 000007
【００８４】
本明細書に記載される反応の各々についての「収率」は、理論的収量の百分率として表される。
【００８５】
「抗体」には、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を通じて、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質等の標的を認識し、それに特異的に結合する、いずれの免疫グロブリン分子も含まれる。本明細書で使用されるとき、この用語は、最も広義に使用され、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片等の）、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）突然変異体、少なくとも２つの無傷の抗体から生成される二重特異性抗体等の多特異性抗体、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗体が所望の生物学的活性を示す限りにおける、抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと称される、それらの重鎖定常ドメインの素性に基づいて、免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラス、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のうちのいずれかであり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造および３次元構成を有する。抗体は、裸であるか、または細胞毒性物質、毒素、放射性同位体等の他の分子に共役させられる可能性がある。
【００８６】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部分を指す可能性がある。抗体断片の例としては、線状抗体、１本鎖抗体分子、ＦｃまたはＦｃ’ペプチド、ＦａｂおよびＦａｂ断片、ならびに抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、および能力を有する、哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体の可変領域に対応する一方で、定常領域は、その種における免疫反応を引き出すことを回避するために、別の種（通常はヒト）に由来する抗体中の配列と相同である。
【００８８】
非ヒト（例えば、ウサギ）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する、最小配列を含有するか、または何の配列も含有しないキメラ抗体を含む。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置換される、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中またはドナー抗体中に見出されない残基を含む可能性がある。最も頻繁には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを可能性があり、ここで超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応し、ＦＲ残基の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のそれらである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を含む可能性がある。ヒト化抗体を生成するために使用される方法は、免疫学および分子生物学の分野で周知である。
【００８９】
「ハイブリッド抗体」は、異なる抗原決定領域を有する抗体からの重鎖および軽鎖の対が一緒に組み立てられ、その結果、２つの異なるエピトープまたは２つの異なる抗原が、結果として生じる四量体によって認識および結合され得る、免疫グロブリン分子を含む可能性がある。
【００９０】
「エピトープ」または「抗原決定」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、特定の抗体によって認識され、特異的に結合されることが可能な抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドであるとき、エピトープは、隣接するアミノ酸、およびタンパク質の三次折畳みによって並置される隣接しないアミノ酸の両方から形成され得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは典型的に、タンパク質変性時に保持される一方で、三次折畳みによって形成されるエピトープは典型的に、タンパク質変性時に喪失される。エピトープは典型的に、固有の空間的立体配座において、少なくとも３〜５個、より一般的には、少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を含む。
【００９１】
「タンパク質ディスプレイ足場」という用語は、参照により本明細書に組み込まれるＨｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，１５（１）：１４−２７（２００６）に記載されるような、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ）、免疫タンパク質、デフェンシンＡ、Ｔ細胞受容体等の結合試薬を指す。
【００９２】
エピトープに「特異的に結合する」またはエピトープに対する「特異的結合」を示すとは、抗体が、代替的な材料よりもエピトープと、より頻繁に、および／またはより迅速に、および／またはより長い持続期間で、および／またはより大きい親和性で、反応または会合することを意味する。
【００９３】
ＨＥＲ２（ＮＥＵ、ＮＧＬ、ヒト上皮成長因子受容体２（またはＥｒｂＢ２）、ｐ１８５、およびＣＤ３４０としても知られる）、ＨＥＲ３（ｃ−ＥｒｂＢ３としても知られる）、ＥＲＢＢ４（ＨＥＲ４、ｐ１８０ｅｒｂＢ４としても知られる）、マクロファージ刺激タンパク質受容体（ＭＳＰＲ）、ＡＸＬ受容体チロシンキナーゼ（Ａｘｌ）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ３Ｋ）、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、Ｃ−ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）、ｐ３８マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ｐ３８ＭＡＰＫ）、ＭＥＫキナーゼ−１（ＭＥＫＫ）、インスリン成長因子１受容体（ＩＧＦ−ＩＲ、またはＣＤ２２１）、インスリン受容体１（ＩｎｓＲまたはＩＮＳ−ＩＲ）、ＥｐｈＡ１（エフリンＡ型受容体１、ＥＰＨ受容体Ａ１、ＥＰＨ、ＥＰＨＴ１、チロシン−タンパク質キナーゼ受容体ＥＰＨ、ＥＰＨＴとしても知られる）、線維芽細胞成長因子受容体２（ＦＧＦＲ２）、および線維芽細胞成長因子受容体３（ＦＧＦＲ３）の阻害物質は、一般には、次のものを含む、目的の特異的キナーゼまたはキナーゼ受容体の発現および／または活性を阻害する能力を有する分子を指す：ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２。これらの阻害物質は、種特異的であり得るか、または本質的に異種であってもよい。
【００９４】
「癌」は、次のものが含まれるが、これらに限定されない細胞増殖病状を指す：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍａｔｏｕｓ  ｈａｎｌａｒｔｏｍａ）、中皮腫（ｉｎｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）；乳：非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌、髄様癌、浸潤性小葉腺癌、管状癌、粘液癌、炎症性乳癌；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（膵管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍  脊索腫、骨軟骨腫（ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｆｒｏｍａ）（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形膠芽腫、乏突起神経膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頚部（子宮頚癌、前腫瘍性子宮頚部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胚性横紋筋肉腫］、卵管（癌腫）；血液系：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒子異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；副腎：神経芽細胞腫。故に、本明細書に提供される「癌性の細胞」という用語は、上記に特定される病態に罹患した細胞が含まれる。
【００９５】
理論に拘束されることを望むものではないが、ホスファターゼもまた、キナーゼの同族として、「キナーゼ依存性疾患または病態」における役割を果たす可能性があり、それはつまり、キナーゼリン酸化およびホスファターゼ脱リン酸化、例えば、脂質基質である。したがって、本発明の化合物はまた、本明細書に記載されるキナーゼ活性を調節しながら、直接または間接であれ、ホスファターゼ活性を調節してもよい。この更なる調節は、存在する場合、関連するあるいは相互依存性のキナーゼまたはキナーゼファミリーに向けた、本発明の化合物の活性に相乗的である（またはそうでない）場合がある。いずれにせよ、前述のように、本発明の化合物は、他のキナーゼ受容体阻害物質の組み合わせにより使用されるとき、一部には、異常なレベルの細胞増殖（すなわち、腫瘍増殖）、プログラム細胞死（アポトーシス）、細胞遊走および浸潤、ならびに腫瘍増殖に関連する血管新生を特徴とする疾患を治療するために有用である。
【００９６】
ＨＥＲ受容体を「過剰発現する」癌は、その細胞表面で、同じ組織タイプの非癌性の細胞と比較して、有意により高度なレベルのＨＥＲ２等のＨＥＲ受容体を有するものである。かかる過剰発現は、遺伝子増幅によって、または増加された転写もしくは翻訳によって引き起こされる場合がある。ＨＥＲ受容体過剰発現は、診断的または予後判定的アッセイにおいて、細胞の表面上に存在する増加されたレベルのＨＥＲタンパク質を評価することによって（例えば、免疫組織化学アッセイ、すなわちＩＨＣを介して）決定されてもよい。代替的に、または更に、細胞中のＨＥＲコード核酸のレベルを、例えば、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ、１９９８年１０月に公開された国際公開第９８／４５４７９号を参照されたい）、サザンブロッティング、またはリアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）等のポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）技法を介して測定してもよい。また、血清等の生体液中の脱落（ｓｈｅｄ）抗原（例えば、ＨＥＲ細胞外ドメイン）を測定することによって、ＨＥＲ受容体過剰発現を研究してもよい（例えば、１９９０年６月１２日に発行された米国特許第４，９３３，２９４号、１９９１年４月１８日に公開された国際公開第９１／０５２６４号、１９９５年３月２８日に発行された米国特許第５，４０１，６３８号、およびＳｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １３２：７３−８０（１９９０）を参照されたい）。上記のアッセイの他に、種々の体内アッセイが当業者にとって利用可能である。例えば、患者の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で任意に標識される抗体に曝露してもよく、患者における抗体の細胞への結合を、例えば、放射能についての外部走査によって、または抗体に事前に曝露された患者から採られる生検を分析することによって、評価することができる。
【００９７】
腫瘍過剰発現ＨＥＲ２は、１細胞当たりに発現されるＨＥＲ２分子のコピー数に対応する免疫組織化学的スコアによって格付けすることができ、生化学的に決定することができる：０＝０  １０，０００コピー／細胞、１＋＝少なくとも約２００，０００コピー／細胞、２＋＝少なくとも約５００，０００コピー／細胞、３＋＝少なくとも約２，０００，０００コピー／細胞。チロシンキナーゼのリガンド非依存性活性化をもたらす、３＋レベルでのＨＥＲ２の過剰発現（Ｈｕｄｚｉａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：７１５９  ７１６３［１９８７］）は、乳癌のおよそ３０％において生じ、これらの患者において、再発のない生存率および全体的な生存率は、減少する（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：７０７  ７１２［１９８９］、Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５：１７７  １８２［１９８７］）。
【００９８】
「非ＨＥＲ２増幅」腫瘍は、本質的に、ＨＥＲ２遺伝子の正常な（すなわち、野生型）コピー数を有する細胞からなる。
【００９９】
本発明の目的のために、「患者」には、ヒトおよび他の動物、特に哺乳動物、ならびに他の生物が含まれる。故に、本方法は、ヒトの治療および獣医学用途の両方に適用可能である。別の実施形態では、患者は、哺乳動物であり、別の実施形態では、患者は、ヒトである。
【０１００】
化合物の「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容され、かつ親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。薬学的に許容される塩は、非毒性であることが理解される。好適な薬学的に許容される塩についての更なる情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５、またはＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７；６６：１−１９に見出すことができ、これらの両方は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０１】
薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ならびに酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１、２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等の有機酸で形成されるものが挙げられる。
【０１０２】
薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、親化合物中に存在する酸性プロトンが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等の金属イオンによって置換されるときに形成されるものが挙げられる。好ましい塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。薬学的に許容される有機非毒性塩基に由来する塩には、一級、二級、および三級アミン、天然産置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂が含まれるが、これらに限られない。有機塩基の例としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、ポリアミン樹脂等が挙げられる。例示的な有機塩基には、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインが含まれる。
【０１０３】
「プロドラッグ」は、例えば、血中の加水分解によって、体内で形質転換されて（典型的に迅速に）、上記の式の親化合物を産出する化合物を指す。一般的な例としては、カルボン酸部分を担持する活性型を有する化合物の、エステルおよびアミド型が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物の薬学的に許容されるエステルの例としては、アルキルエステル（例えば、約１個〜約６個の炭素を有する）が挙げられるが、これらに限定されず、アルキル基は、直鎖または分岐鎖である。許容されるエステルにはまた、ベンジル等であるが、これらに限定されない、シクロアルキルエステルおよびアリールアルキルエステルが含まれる。本発明の化合物の薬学的に許容されるアミドの例としては、一級アミド、ならびに二級および三級アルキルアミド（例えば、約１個〜約６個の炭素を有する）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物のアミドおよびエステルは、従来の方法に従って調製されてもよい。プロドラッグの完全な考察は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ｖｏｌ  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ、およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ    ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７に提供され、これらの両方は、参照により全目的で本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
「治療的相乗効果」という用語は、所与の用量での２つの産物の組み合わせが、同じ用量を考慮して、２つの産物単独の最高の効果よりも有効であるとき、使用される。一態様では、治療的相乗効果は、組み合わせを、二元配置分散分析によって得られる推定を使用して、パラメータ腫瘍容積についての反復測定（時間因子）を用いて、最高の単一薬剤と比較することによって評価することができる。他の態様では、組み合わせの最大許容用量を、考慮中の研究において、単離された構成物質の各々の最大許容用量と比較することができる。この有効性は、例えば、次の方程式に従って決定される、ｌｏｇ１０細胞死滅によって定量化することができる：
ｌｏｇ１０細胞死滅＝Ｔ−Ｃ（日間）／３．３２×Ｔｄ
式中、Ｔ−Ｃは、細胞の増殖における遅延を表し、それは、処置群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍についての、既定の値（例えば１ｇ）に到達するまでの日数単位の平均時間であり、Ｔｄは、対照動物において腫瘍の容積が倍増するために必要な、日数単位の時間を表す［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，４０，２６６０．２６８０（１９７７）、Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ  Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７，３−５１，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．（１９７９）］。産物は、ｌｏｇ１０細胞死滅が０．７以上である場合、活性であると見なされる。産物は、ｌｏｇ１０細胞死滅が２．８超である場合、非常に活性であると見なされる。構成物質の各々が一般にその最大許容用量以下の用量で存在する組み合わせは、その独自の最大許容用量で使用されるとき、ｌｏｇ１０細胞死滅が、それが単独で投与されるときの最高の構成物質のｌｏｇ１０細胞死滅の値を超えるとき、特に、少なくとも１ｌｏｇ細胞死滅の優位性を有するとき、治療的相乗効果を示すことになる。
【０１０５】
「治療上有効量」は、患者に共投与されるとき、疾患の症状を寛解させる、式Ｉの化合物および／またはキナーゼもしくは受容体の阻害物質、例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２の量である。「治療上有効量」を構成する、式Ｉの化合物、または本発明のキナーゼの阻害物質の量は、化合物、阻害物質、病状とその重症度、化合物および／または阻害物質の生物学的利用能特徴、治療対象の患者の年齢等に依存して異なるであろう。治療上有効量は、当業者が、彼らの知識および本開示を考慮して、日常的に決定することができる。治療上有効量を含む投薬量（単数または複数）は、毒性でなく、許容される医療行為に、適切な危険性／便益比率との釣り合いを与える。
【０１０６】
本明細書で使用される、疾患、障害、または症候群を「治療すること」またはそれらの「治療」には、次のことが含まれる：（ｉ）ヒトにおいて疾患、障害、もしくは症候群が生じるのを予防すること、すなわち、疾患、障害、もしくは症候群に曝露されるか、またはそれらの素因があり得るが、疾患、障害、もしくは症候群の症状を未だに経験もしくは呈示しない動物において、疾患、障害、もしくは症候群の臨床症状が発症されないようにすること、（ｉｉ）疾患、障害、もしくは症候群を阻害すること、すなわち、その進行を停止させること、ならびに（ｉｉｉ）疾患、障害、もしくは症候群を軽減すること、すなわち、疾患、障害、もしくは症候群の退縮を引き起こすこと。当該技術分野において既知であるが、全身対局所送達、年齢、体重、通常の健康状態、性別、食生活、投与時間、薬物相互作用、および病態の重症度に対する調整が必要であり得、それらは当業者によって日常的な実験により確認可能であろう。
【０１０７】
本明細書で利用される「共投与」、「組み合わせた投与」等は、単一患者への、選択された活性な治療剤の投与様式を含むことが意図（ｍｅａｎｔ）され、薬剤が必ずしも同じ投与経路によって、または同じ時間に投与されるわけではない治療レジメンを含むことが意図（ｉｎｔｅｎｄｅｄ）される。共投与はまた、「固定の組み合わせ」での活性成分の送達を含む可能性があり、例えば、式Ｉの化合物と、阻害物質（例えば、キナーゼまたはキナーゼ受容体：ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２のうちのいずれか１つに対する機能性核酸、ラパチニブ、および／または抗体との両方が、単一の主体または投薬の形態で、患者に同時に投与される。「非固定の組み合わせ」という用語は、活性成分、例えば、式Ｉの化合物と、キナーゼまたは受容体：ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２のうちのいずれか１つ以上に対する阻害物質（例えば、機能性核酸または抗体）との両方が、患者に別個の主体として、同時に、並行に、または順次のいずれかで、具体的な時限を伴わずに投与され、その結果、投与が、患者の体内において治療上有効なレベルの活性薬剤の組み合わせを提供することを意味する。
【０１０８】
本発明の実施形態
次の段落は、本発明の化合物の幾つかの実施形態を提示する。各事例において、実施形態は、列挙される化合物ならびに個々の異性体および異性体の混合物の両方を含む。加えて、各事例において、実施形態は任意に、列挙される化合物およびいずれの個々の異性体またはその異性体の混合物の、薬学的に許容される塩、水和物、および／または溶媒和物を含む。
【０１０９】
次の実施形態の各々について、例えば、式Ｉの化合物は、化合物Ａであるか、または表１の化合物から選択される可能性がある。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、およびＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌の腫瘍細胞の増殖および／または生存率は、少なくとも一部には、ＰＩ３Ｋの活性によって強化される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である。
【０１１１】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）およびＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮体癌、胃癌（胃腸カルチノイド腫瘍および消化管間質腫瘍を含む）、膠芽腫、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、および甲状腺癌から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である。
【０１１２】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、およびＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、前立腺癌、ＮＳＣＬＣ、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、および膠芽腫から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である。
【０１１３】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、およびＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、ＮＳＣＬＣ、乳癌、前立腺癌、膠芽腫、および卵巣癌から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である。
【０１１４】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、治療が、ＨＥＲ３受容体チロシンキナーゼの活性および／または発現を阻害するように作動可能である、治療上有効量の１つ以上の抗体を含む場合の治療と組み合わせて、投与することを含む、癌を治療する方法を対象とする。
【０１１５】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌の腫瘍細胞の増殖および／または生存率は、少なくとも一部には、ＰＩ３Ｋの活性によって強化される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸、またはラパチニブ（ｌａｐａｔａｎｉｂ）であり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である。
【０１１６】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質と組み合わせて投与することを含む。
【０１１７】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ２阻害物質と組み合わせて投与することを含む。
【０１１８】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質およびＨＥＲ２阻害物質と組み合わせて投与することを含む。
【０１１９】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ラパチニブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２０】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、トラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２１】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ラパチニブおよびトラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２２】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質およびラパチニブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２３】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質およびトラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２４】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ２阻害物質およびラパチニブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２５】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ２阻害物質およびトラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２６】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質、ＨＥＲ２阻害物質、およびラパチニブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２７】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質、ＨＥＲ２阻害物質、およびトラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２８】
別の態様では、本発明の方法は、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３阻害物質、ＨＥＲ２阻害物質、ラパチニブ、およびトラスツズマブと組み合わせて投与することを含む。
【０１２９】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、乳癌（ＨＥＲ２＋またはＨＥＲ２過剰発現乳癌を含む）、結腸癌、直腸癌、子宮体癌、胃癌（胃腸カルチノイド腫瘍および消化管間質腫瘍を含む）、膠芽腫、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、および甲状腺癌からなる群から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、阻害物質は、ラパチニブであり得る。別の実施形態では、それは、抗体である一方で、別の態様では、阻害物質は、機能性核酸の組み合わせ、および／またはラパチニブ、および／または抗体の組み合わせを含む可能性がある。
【０１３０】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、前立腺癌、ＮＳＣＬＣ、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、乳癌（ＨＥＲ２＋またはＨＥＲ２過剰発現乳癌を含む）、結腸癌、直腸癌、および膠芽腫からなる群から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得る一方で、別の態様では、阻害物質は、ラパチニブであり得る。別の実施形態では、それは、抗体である一方で、別の態様では、阻害物質は、機能性核酸の組み合わせ、および／またはラパチニブ、および／または抗体の組み合わせを含む可能性がある。
【０１３１】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とし、ここでの癌は、ＮＳＣＬＣ、乳癌、前立腺癌、膠芽腫、および卵巣癌からなる群から選択される。一態様では、阻害物質は、機能性核酸であり得、別の態様では、阻害物質は、ラパチニブであり得る一方で、別の態様では、それは、抗体である一方で、別の実施形態では、阻害物質は、機能性核酸の組み合わせ、および／またはラパチニブ、および／または抗体の組み合わせを含む可能性がある。
【０１３２】
別の実施形態では、本発明は、要約に既定されるように、患者に治療上有効量の式Ｉの化合物を、ＨＥＲ２受容体チロシンキナーゼの活性および／または発現を阻害するように作動可能である、治療上有効量の１つ以上の機能性核酸および／または治療上有効量の１つ以上の抗体を含む治療と組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を対象とする。
【０１３３】
式Ｉの化合物
前述の実施形態の各々について、式Ｉの化合物は、表１における代表的な化合物を含む、次の実施形態のいずれからも選択される。
【０１３４】
一実施形態は、式Ｉの化合物を対象とし、式中、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｒ１）＝であるか、またはＷ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４のうちの１つもしくは２つは独立して、−Ｎ＝であり、残りのものは、−Ｃ（Ｒ１）＝であり、ここで各Ｒ１は独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。別の実施形態では、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｒ１）＝であり、各Ｒ１は独立して、水素もしくはアルキルであるか、またはＷ１およびＷ４のうち一方は、−Ｎ＝であり、他方は、−Ｃ（Ｈ）＝である。更なる実施形態では、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｒ１）＝であり、ここで各Ｒ１は独立して、水素またはアルキルである。より詳細には、Ｒ１は、水素である。
【０１３５】
別の実施形態では、Ｒ５０は、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、ここでＲ５５およびＲ５５ｂは独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａは、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５０は、水素である。
【０１３６】
別の実施形態では、Ｒ５１は、水素またはアルキルであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５１は、アルキルである。より詳細には、Ｒ５１は、メチルである。
【０１３７】
別の実施形態では、Ｒ５２が水素またはハロであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５２は、水素またはフルオロである。より詳細には、Ｒ５２は、水素である。
【０１３８】
別の実施形態では、Ｒ５３は、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、ここでＲ５５およびＲ５５ｂは独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａは、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５３は、水素アルコキシ、ニトロ、アミノ、または−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂである。なおも別の実施形態では、Ｒ５３は、水素、メトキシ、ニトロ、アミノ、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２である。より詳細には、Ｒ５３は、水素またはメトキシである。
【０１３９】
別の実施形態では、Ｒ５４は、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、ここでＲ５５およびＲ５５ｂは独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａは、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５４は、水素、アルキル、アルコキシ、またはハロである。なおも別の実施形態では、Ｒ５４は、水素メチル、メトキシ、ブロモ、またはクロロである。より詳細には、Ｒ５４は、水素、メトキシ、またはクロロである。
【０１４０】
別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、あるいはＲ５０およびＲ５２は、水素であり、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、全ての他の基は、要約に既定される通りである。別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、クロロもしくはメトキシであるか、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、メトキシであるか、またはＲ５０およびＲ５２は、水素であり、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、ピリジニルを形成する。更なる実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、クロロもしくはメトキシであるか、またはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、メトキシである。より詳細には、Ｒ５１は、メチルである。
【０１４１】
一実施形態では、Ｂは、Ｒ３ａで置換され、かつ１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に更に置換されるフェニルであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｂは、Ｒ３ａで置換されるフェニルである。より詳細には、式Ｉの化合物は、式Ｉ（ａ）：
【化４】
2013539453.tif 000008
Ｉ（ａ）の化合物である。
別の実施形態では、Ｂは、式Ｉ（ａ）に図示される、Ｒ３ａで置換されるフェニルであり、Ｒ３では更に置換されない。
【０１４２】
別の実施形態では、Ｂは、１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に置換されるヘテロアリールである。更なる実施形態では、Ｂは、チエン−３−イル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、またはチアゾリルであり、それらの各々は、１つまたは２つのＲ３で任意に置換される。なおも別の実施形態では、Ｂは、チエン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、オキサゾール−２−イル、オキサゾール−４−イル、オキサゾール−５−イル、イソオキサゾール−３−イル、イソオキサゾール−４−イル、イソオキサゾール−５−イル、イミダゾール−２−イル、ピロール−２−イル、ピロール−３−イル、イミダゾール−４−イル、イミダゾール−５−イル、ピラゾール−３−イル、ピラゾール−４−イル、またはピラゾール−５−イルであり、それらの各々は、１つまたは２つのＲ３で任意に置換される。より詳細には、Ｂは、チエン−３−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、イソオキサゾール−４−イル、またはピラゾール−４−イルであり、それらの各々は、１つまたは２つのＲ３で任意に置換される。更なる実施形態では、Ｂは、ピリジン−３−イル、２−ヒドロキシ−ピリジン−５−イル、イソオキサゾール−４−イル、またはピラゾール−４−イルであり、それらの各々は、１つまたは２つのＲ３で任意に置換される。
【０１４３】
一実施形態では、Ｒ３ａは、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂであり、ここでＲ１１ａは、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａ、１個もしくは２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、もしくはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａ、または−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、ここでＲ３ａにおけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。
【０１４４】
別の実施形態では、Ｒ３ａは、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（アゼチジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ３））、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２シクロプロピル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−（ジメチルアミノ）−アゼチジン−１−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（モルホリン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（イミダゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノシクロペンタ−１−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−（イミダゾール−４−イルメチル）−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−エチル−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（Ｎ−メチル−ピロリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノ−シクロブタ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ピペリジン−１−イルアゼチジン−１イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−ヒドロキシシクロプロピル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピジダジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピペリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−シクロプロピルメチル−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）（イミダゾール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（イミダゾール−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１，２−オキサゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＦ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−オキソ−シクロペンタ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−ヒドロキシ−ピリジン−６−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−（フラン−２−イルメチル）−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリミジン−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メチル−１，２−オキサゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−ヒドロキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピロール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−アミノ−テトラヒドロピラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルアミノ−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピロリジン−２イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（チエン−３イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−（シクロプロピルカルボニル）アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−ベンジルアゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ベンジル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）［１−（Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３）−アゼチジン−３−イル］、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−［Ｃ（Ｏ）ＣＨ３］ピペリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチル−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フラン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ジメチルアミノ−アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−ベンジル−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フラン−２−イル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−メチル−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２［４−（３，４−ジクロロフェニル）−ピペラジン−１−イル］、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（テトラヒドロフラン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチル−シクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチル−４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチルピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−エチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（チエン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−ブロモ−チエン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−ジメチルアミノフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−ｎ−プロピルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピラジン２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（４−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−メチルカルボニル−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−アリル−ピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メチル−フラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−クロロフェニル）、−−ＮＨＣ（Ｏ）シクロブチル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−メチルシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−ジメチルアミノフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３，４−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２−メチルチオフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（チアゾール−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（チエン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（ピリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−クロロ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（シクロヘキシル）、−ＨＣ（Ｏ）（２−フェニル−シクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−フルオロ−４−メチル−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−フルオロ−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メトキシ−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，４−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−オキソ−シクロヘキサ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−クロロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２，４−ジメチルフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチル−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−オキソ−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−イソプロピルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フェニル−モルホリン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（アリル）シクロペンチル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）シクロプロピル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ｎ−プロピル）（シクロプロピルメチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−オキソ−シクロペンチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（４−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ピペリジン−１−イルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−シクロペンチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−フルオロ−６−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−６−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−フルオロ−３−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，３−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏフェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２，３−ジメチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロ−５−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯＣＨ２（４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ｎ−プロピルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（３−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（テトラヒドロフラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ヒドロキシメチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（シクロペンチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，５−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルカルボニルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）シクロヘキシル、−ＮＨＣ（Ｏ）（５−メチル−１，２−オキサゾール−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メチルピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３，５−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（チアゾリジン３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−［Ｃ（Ｏ）Ｈ］−ピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−ピリジン−４−イルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−［Ｃ（Ｏ）Ｈ］−ホモピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−フェニルシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２，６−ジメチルモルホリン−４−イル）−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フェニルピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピロリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピペリジン−２−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−メチルアゼチジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−メチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（１−メチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−エチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−メチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（１−エチルピロリジン−２−イル）、−Ｃ（Ｏ）（４−アミノ−３−オキソ−ピラゾリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノシクロブタ−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（３−オキソ−ピラゾリジン−４−イル）、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２（イミダゾール−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−ジメチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）（１−メチル−ピロリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−ジエチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピロール−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（モルホリン−４−イル）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（イミダゾール−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３
−（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ（ＣＨ３）２、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）（２−ジメチルアミノメチルピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）３Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２Ｃ（Ｏ）（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（４−メチルピペラジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（２−ピペリジン−１−イルメチル−ピペリジン−１−イル）、シアノ、−ＮＨＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２、５−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ［Ｎ（ＣＨ３）２］［＝Ｎ（ＣＨ３）２］、−ＯＣＨＦ２、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−ＯＣＦ３、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ジメチルアミノピペリジン−１−イル）である。
【０１４５】
別の実施形態では、Ｒ３ａは、ヒドロキシアミノ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａ、または
−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、ここでＲ３ａにおけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ３ａは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（アゼチジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、または−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−３−イル）である。
【０１４６】
別の実施形態では、Ｒ３ａ−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、Ｒ７は、水素またはアルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ３ａは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）である。
【０１４７】
一実施形態では、各Ｒ３は独立して、ハロ、シアノ、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂここでＲ１１ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、
−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａ、１個もしくは２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、もしくはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａ、または−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、ここでＲ３におけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。
【０１４８】
更なる実施形態では、各Ｒ３は独立して、メチル、ブロモ、クロロ、フルオロ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、
−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（アゼチジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ３））、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２シクロプロピル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−（ジメチルアミノ）−アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（モルホリン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（イミダゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノシクロペンタ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−（イミダゾール−４−イルメチル）−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−エチル−アゼチジン−３−イル）、
−ＮＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（Ｎ−メチル−ピロリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−アミノ−シクロブタ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ピペリジン−１−イルアゼチジン−１イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−ヒドロキシシクロプロピル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピジダジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピペリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−シクロプロピルメチル−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）（イミダゾール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（イミダゾール−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１，２−オキサゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＦ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−オキソ−シクロペンタ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−ヒドロキシ−ピリジン−６−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−（フラン−２−イルメチル）−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリミジン−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メチル−１，２−オキサゾール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−ヒドロキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピロール−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−アミノ−テトラヒドロピラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルアミノ−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−メチル−ピロリジン−２イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（チエン−３イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−（シクロプロピルカルボニル）アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｎ−ベンジルアゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ベンジル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）［１−（Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３）−アゼチジン−３−イル］、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−［Ｃ（Ｏ）ＣＨ３］ピペリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチル−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フラン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ジメチルアミノ−アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−ベンジル−ピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（フラン−２−イル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−クロロ−ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−メチル−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピリジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２［４−（３，４−ジクロロフェニル）−ピペラジン−１−イル］、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（テトラヒドロフラン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−フルオロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチル−シクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチル−４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチルピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−エチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（チエン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−ブロモ−チエン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−ジメチルアミノフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−ｎ−プロピルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピラジン２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（４−フルオロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）（１−メチルカルボニル−アゼチジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−アリル−ピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メチル−フラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）シクロブチル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−メチルシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−ジメチルアミノフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３，４−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２−メチルチオフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（チアゾール−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（チエン−２−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（ピリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−クロロ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−クロロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（２−メチルフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（シクロヘキシル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フェニル−シクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（３−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−フルオロ−４−メチル−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−フルオロ−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メトキシ−フェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ベンジル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，４−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−オキソ−シクロヘキサ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−クロロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（２，４−ジメチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチル−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−オキソ−ピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ（ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−イソプロピルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フェニル−モルホリン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（４−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（アリル）シクロペンチル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）シクロプロピル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ｎ−プロピル）（シクロプロピルメチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−オキソ−シクロペンチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（４−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ピペリジン−１−イルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−シクロペンチルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＣＨ２（３−フルオロ−６−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２−クロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−フルオロ−６−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（４−フルオロ−３−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，３−ジクロロフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏフェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（２，３−ジメチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−フルオロ−５−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨＯＣＨ２（４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−フルオロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシ−４−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ｎ−プロピルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｏ（３−メチルフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（テトラヒドロフラン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（３−ヒドロキシメチルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２（ピリジン−３−イル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）フェニル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２（シクロペンチル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２，５−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−メチルカルボニルピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）シクロヘキシル、−ＮＨＣ（Ｏ）（５−メチル−１，２−オキサゾール−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３−メチルピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシピリジン−３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（３，５−ジクロロフェニル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（チアゾリジン３−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−［Ｃ（Ｏ）Ｈ］−ピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−ピリジン−４−イルピペリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（２−メトキシフェニル）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−［Ｃ（Ｏ）Ｈ］−ホモピペラジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（１−フェニルシクロプロパ−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２，６−ジメチルモルホリン−４−イル）、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（２−フェニルピロリジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピロリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピペリジン−２−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−メチルアゼチジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−メチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（１−メチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（１−エチルピペリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−メチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（１−エチルピロリジン−２−イル）、−Ｃ（Ｏ）（４−アミノ−３−オキソ−ピラゾリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノシクロブタ−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（３−オキソ−ピラゾリジン−４−イル）、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２（イミダゾール−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−ジメチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）（１−メチル−ピロリジン−３−イル）、−Ｃ（Ｏ）（３−ジエチルアミノピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピロール−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）（３−アミノピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（モルホリン−４−イル）、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（イミダゾール−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ピリジン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、−Ｃ（Ｏ）（２−ジメチルアミノメチルピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）３Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３、
−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ（ＣＨ３）２Ｃ（Ｏ）（ピペリジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（４−メチルピペラジン−１−イル）、−Ｃ（Ｏ）（２−ピペリジン−１−イルメチル−ピペリジン−１−イル）、シアノ、−ＮＨＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２、５−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ［Ｎ（ＣＨ３）２］［＝Ｎ（ＣＨ３）２］、−ＯＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−ＯＣＦ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（４−ジメチルアミノピペリジン−１−イル）、またはメトキシである。
【０１４９】
別の実施形態では、各Ｒ３は独立して、ハロ、アルキル、ヒドロキシアミノ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａ、または−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、ここでＲ３におけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。より詳細には、各Ｒ３は独立して、メチル、クロロ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２（アゼチジン−１−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（ピロリジン−２−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）（アゼチジン−４−イル）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＮＨＯＨ、または−ＮＨＣ（Ｏ）（ピペリジン−３−イル）である。
【０１５０】
一実施形態では、Ｒ３は、アルキルまたは−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、Ｒ７は、水素またはアルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。より詳細には、各Ｒ３は独立して、メチル、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）である。
【０１５１】
別の実施形態では、Ｂは、フェニルであり、Ｒ３は、存在しないか、またはＲ３は、ハロ、アルキル、もしくはアルコキシであり、Ｒ３ａは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、ここでＲ３ａにおけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。
【０１５２】
更なる実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、あるいはＲ５０およびＲ５２は、水素であり、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、全ての他の基は、要約に既定される通りである。なおも別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシである。より詳細には、Ｒ５１は、メチルである。
【０１５３】
式Ｉ（ａ）：
【化５】
2013539453.tif 000009
Ｉ（ａ）の化合物の別の実施形態では、
式中、Ｒ３は、存在しないか、またはＲ３は、アルキルであり、Ｒ３ａは、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、ここでＲ３ａにおけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ３は、存在しないか、またはメチルである。より詳細には、Ｒ３は、存在しない。
【０１５４】
別の実施形態では、Ｒ７は、水素またはアルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであり、Ｒ８は、水素またはアルキルであり、Ｒ８ａは、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ９は、水素またはアルキルであり、Ｒ９ａは、水素、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ１０、Ｒ１０ａ、およびＲ１０ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルである。
【０１５５】
更なる実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、あるいはＲ５０およびＲ５２は、水素であり、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成する。なおも別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシである。より詳細には、Ｒ５１は、メチルである。
【０１５６】
一実施形態では、Ｂは、ヘテロアリールであり、１つのＲ３は、ハロ、アルキル、またはアルコキシであり、第２のＲ３は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、ここでＲ３におけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、全ての他の基は、要約に既定される通りである。
【０１５７】
更なる実施形態では、Ｒ７は、水素またはアルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであり、Ｒ８は、水素またはアルキルであり、Ｒ８ａは、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ９は、水素またはアルキルであり、Ｒ９ａは、水素、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ１０、Ｒ１０ａ、およびＲ１０ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルである。
【０１５８】
別の実施形態では、Ｂは、
【化６】
2013539453.tif 000010
であり、
各Ｒ３（Ｒ３が存在するとき）は独立して、ハロ、アルキル、アルコキシ、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、全ての他の基は、要約に既定される通りである。
【０１５９】
別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、あるいはＲ５０およびＲ５２は、水素であり、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、全ての他の基は、要約に既定される通りである。更なる実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシである。より詳細には、Ｒ５１は、メチルである。
【０１６０】
なおも別の実施形態では、Ｒ７は、水素またはアルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであり、Ｒ８は、水素またはアルキルであり、Ｒ８ａは、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ９は、水素またはアルキルであり、Ｒ９ａは、水素、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルアルキルであり、Ｒ１０、Ｒ１０ａ、およびＲ１０ｂは独立して、水素、アルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルである。
【０１６１】
一実施形態では、
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｈ）＝であるか、またはＷ２およびＷ３は、−Ｃ（Ｈ）＝であり、Ｗ１およびＷ４のうちの一方は、−Ｎ＝であり、他方は、−Ｃ（Ｈ）＝であり、
Ｒ５０は、水素であり、
Ｒ５１は、水素またはアルキルであり、
Ｒ５２は、水素であり、
Ｒ５３は、水素アルコキシ、ニトロ、アミノ、または−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂであり、Ｒ５４は、水素、アルキル、アルコキシ、またはハロであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、
Ｂは、Ｒ３ａで置換され、１つのＲ３で任意に更に置換されるフェニルであるか、あるいは
Ｂは、１つまたは２つのＲ３で任意に置換されるヘテロアリールであり、
Ｒ３ａは、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂここでＲ１１ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２；−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａ、１個もしくは２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、もしくはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａ、または−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、ここでＲ３ａにおけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換され、
各Ｒ３（Ｒ３が存在するとき）は独立して、ハロ、シアノ、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、ジアルキルアミノアルキルオキシ、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａ、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂ、−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂここでＲ１１ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂ、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａ、１個もしくは２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、もしくはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）、−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａ、−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）、−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａ、または−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、ここでＲ３におけるアルキレンの各々は独立して、ハロ、ヒドロキシ、およびアミノから選択される１個、２個、３個、４個、または５個の基で任意に更に置換されるが、
Ｒ５０およびＲ５２が水素であり、Ｒ５１が水素またはメチルであり、Ｒ５３が水素またはメトキシであり、かつＲ５４が水素またはメトキシであるとき、Ｂは、１つのＲ３（Ｒ３はハロである）で置換される、２，３−ヒジドロ−１，４−ベンゾジオキシニル（ｂｅｎｚｏｄｉｏｘｉｎｙｌ）、チエン−２−イル、またはチエン−２−イルでないことを条件とする。
【０１６２】
別の実施形態では、Ｒ５０、Ｒ５３、およびＲ５４は独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、ここでＲ５５およびＲ５５ｂは独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａは、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、５員もしくは６員のヘテロアリールまたは５員もしくは６員のヘテロシクロアルキルを形成する。
【０１６３】
より詳細には、Ｒ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、５員もしくは６員のヘテロアリールまたは５員もしくは６員のヘテロシクロアルキルを形成する。
【０１６４】
式Ｉ（ａ）：
【化７】
2013539453.tif 000011
Ｉ（ａ）の化合物の別の実施形態では、
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｈ）−であり、
Ｒ５０は、水素であり、
Ｒ５１は、メチルであり、
Ｒ５２は、水素であり、
Ｒ５３は、水素またはアルコキシであり、
Ｒ５４は、水素、アルキル、アルコキシ、またはハロであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、
Ｒ３は、ハロまたはメチルであり、
Ｒ３ａは、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、ここでＲ７は、水素であり、Ｒ７ａおよび
Ｒ７ｂは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルである。
【０１６５】
式Ｉ（ａ）の化合物の別の実施形態では、Ｒ５１は、メチルであり、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、またはその単一の立体異性体もしくは立体異性体の混合物であり、任意にその薬学的に許容される塩としてのものである。
【０１６６】
式Ｉ（ａ）の化合物の別の実施形態では、Ｒ３ａは、
−ＮＨＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、
−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、もしくは
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）であるか、またはその幾何異性体であり、任意にその薬学的に許容される塩としてのものである。
【０１６７】
別の実施形態では、式Ｉ（ａ）の化合物は、
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であるか、
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１６８】
別の実施形態では、式Ｉ（ａ）の化合物は、
【化８】
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であるか、
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１６９】
代表的な化合物
式Ｉおよび／またはＩ（ａ）の代表的な化合物は、下に図示される。例は、例証的であるにすぎず、本発明の範囲をいかなるようにも限定しない。本発明の化合物は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＵＰＡＣ）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＵＢＭＢ）、およびＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）によって合意された命名規約の体系的な適用に従って名付けられる。表１における名称は、ＡＣＤ／Ｌａｂｓ命名ソフトウェア８．００リリース、製品バージョン８．０８以降を使用して生成されたが、ＣｈｅｍＤｒａｗ  ｖ．９．０．１を使用して名付けられた３７４の化合物を例外とする。
【０１７０】
表１
代表的なＰＩ３Ｋ−アルファ阻害物質
表１における化合物は、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、および／または異性体として、調製することができる。表１における化合物の全てのかかる塩、溶媒和物、水和物、および異性体の組み合わせを使用して、本発明を実践することができる。特に、本発明は、表１の化合物の１つまたは２つの薬学的に許容される塩と共に実践することができ、ここで塩（複数可）は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１、２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸から独立して選択される１つまたは２つの酸により形成される。特に、本発明は、表１の化合物の１つまたは２つの薬学的に許容される塩と共に実践することができ、ここで塩（複数可）は、独立してナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンから選択される１個または２個の塩基により形成される。表１におけるいずれの個々の化合物（ならびにそのいずれの任意の塩、任意の溶媒和物、および任意の水和物）も、上記の実施形態のうちのいずれかと組み合わせて使用することができる。
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【０１７１】
阻害物質
本発明の式Ｉの化合物は、式Ｉ化合物の投与によって上方調節されるキナーゼ／キナーゼ受容体の阻害物質と共投与することができる。この点に関して、式Ｉ化合物に曝露される癌細胞は、化合物によって引き起こされるＰＩ３Ｋ阻害を明らかに補償しようとして、幾つかのキナーゼ経路のその後の上方調節を呈示することが発見されている。式Ｉ化合物の治療計画を用いるときに、これらの上方調節されたキナーゼを阻害することは、腫瘍細胞生存率を相乗的に阻害することになり、したがって、投与される化合物の有効性を改善する。したがって、本発明の一態様では、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体の阻害物質は、癌に対する治療を経ている患者に、式Ｉ化合物と共投与することができる。本発明の一態様では、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の阻害物質は、癌に対する治療を経ている患者に、式Ｉ化合物と共投与することができる。幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の阻害物質は、癌に対する治療を経ている患者に、式Ｉ化合物と共投与することができる。幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の阻害物質は、癌に対する治療を経ている患者に、式Ｉ化合物と共投与することができ、ここでの癌は、ＨＥＲ２を過剰発現する癌、例えば、ＨＥＲ２過剰発現乳癌である。
【０１７２】
幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２阻害物質は、ラパチニブ（Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］−６−［５−［（２−メチルスルホニルエチルアミノ）メチル］−２−フリル］
キナゾリン−４−アミン、例えば、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）の商標名の下に市販される、ラパチニブジトシレートの形態である。ラパチニブは、化学構造：
【化９】
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を有する。
【０１７３】
使用されるラパチニブ投薬量は、処方医師によって、当該技術分野で日常的な技術を使用して直接に決定することができる。幾つかの実施形態では、式Ｉの化合物と組み合わせて投与されるラパチニブの投薬量は、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば、１日当たり約１００、または２００、または３００、または５００、または６００、または７００、または８００、または９００、または１，０００〜約１，５００、または約１，６００、または約２，０００ｍｇの範囲の１日の用量である可能性がある。
【０１７４】
一実施形態では、阻害物質は、機能性核酸であり得る。本明細書で使用されるとき、「機能性核酸」のカテゴリーは、ｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ分子、およびアンチセンス核酸分子を包含する。「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する、低分子阻害性ＲＮＡ二重鎖を指す。これらの分子は、長さにおいて異なる可能性があり（一般に１８〜３０塩基対）、アンチセンス鎖中のそれらの標的ｍＲＮＡに対する異なる度合いの相補性を含有する。全てではないが、幾つかのｓｉＲＮＡは、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の５’または３’末端上に、不対のオーバーハング塩基を有する。「ｓｉＲＮＡ」という用語には、２つの別個の鎖の二重鎖、ならびに二重鎖領域を含むヘアピン構造を形成することができる１本鎖が含まれる。
【０１７５】
一例では、機能性核酸は、リガンド結合が生じる細胞外ドメイン等の、キナーゼ受容体の遺伝子または転写物を標的とする。別の例では、機能性核酸は、細胞内タンパク質キナーゼドメインを標的とする。別の例では、機能性核酸は、ヘテロ二量体結合部位を標的とする（すなわち、リガンド結合を安定化し、下流シグナル伝達経路のキナーゼ媒介型活性化を強化するように作動可能なＨＥＲ２とヘテロ二量体を形成する他のＥＧＦ受容体ファミリー成員との結合に関与する、アミノ酸配列。多数の好適な機能性核酸が、市販されている。例えば、Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡを参照されたい。代替的に、機能性核酸は、当該分野で周知の方法を使用した標的キナーゼ／受容体についてのヌクレオチド配列情報に基づいて、実験を通じてまたは合理的設計を通じて、特定および／または合成することができる。配列は、目的の特定のキナーゼ（標的）、すなわち、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２を発現することが知られる遺伝子のコード領域を開示する、バイオインフォマティクスデータベース（例えば、ＧＥＮＢＡＮＫ、ＮＣＢＩ、ＰＫＲ等）を参照することによって決定することができる。純粋に例証目的のために、ＨＥＲ２についてのバイオインフォマティクス配列が下に提供される。本明細書で阻害が企図される、他のキナーゼおよびキナーゼ受容体ｍＲＮＡならびにアミノ酸配列、例えば、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２はまた、上記に参照されるデータベースを使用して特定することもできる。
【０１７６】
幾つかの実施形態では、複数の機能性ＨＥＲ２ポリペプチドのうちの１つをコードするｍＲＮＡとハイブリッド形成することができる機能性核酸の生成は、配列番号１に提供される。下記のｍＲＮＡ配列は、例示的なＨＥＲ２  ｍＲＮＡ配列であり、例えば、ＮＭ＿００４４４８．１、ＧＩ：４７５８２９７等の、ヒトＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の他のアイソフォームをコードする、他の変異体配列（スプライシング変異体を含む）が当業者に既知であり、また、本明細書で企図されることに留意する。ＨＥＲ２  ｍＲＮＡを発現するように作動可能なｃＤＮＡクローンは、ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ（商標）から、製品番号Ｂ００１７として市販されている。下に提供されるように、配列番号１は、ｍＲＮＡ転写物変異体ＮＭ  ００４４４８  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ＮＭ  ００４４４８．２、ＧＩ  ５４７９２０９５である。
【０１７７】
ｓｉＲＮＡＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の阻害物質
合理的設計プロセスは、１８〜３０塩基対のあらゆる配列、または固定された長さ、例えば、１９塩基対の配列のみについての基準を評価するために、コンピュータプログラムの使用を伴う可能性がある。好ましくは、コンピュータプログラムは、それが、どの配列が最高値を生成するかに従って順位付けされる、可能性のあるｓｉＲＮＡ１８〜３０塩基対の全ての報告順位を提供するように設計される。より高い値は、特定の標的遺伝子に対してより効率的なｓｉＲＮＡを指す。使用され得るコンピュータプログラムは、ヌクレオチド配列をスコア化するために有用であることが知られる、任意のコンピュータ言語で開発されてもよく、またはそれは、マイクロソフトのｐｒｏｄｕｃｔ．ｎｅｔ等の市販の製品の補助により開発されてもよい。更に、１つのおよび／または別の式を通じてあらゆる配列を実行するよりもむしろ、配列のサブセットを比較してもよく、それは例えば、サブセットのみが利用可能である場合に、望ましい場合がある。例えば、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）検索を最初に行い、他の標的との相同性を有さない配列を特定することが望ましい場合がある。代替的に、配列を走査し、中程度のＧＣコンテキストの領域を特定し、次いで、これらの領域についての上述の式のうちの１つを使用して、意義のある算出を行うことが望ましい場合がある。これらの算出は、手動でまたはコンピュータの補助により、行うことができる。
【０１７８】
幾つかの実施形態では、標的とされるキナーゼは、ＨＥＲ２および／もしくはＨＥＲ３、ＨＥＲ２および／もしくはＨＥＲ３突然変異体、またはそれらの、特にヒトＨＥＲ２および／もしくはＨＥＲ３の、代替的なスプライス変異体である。
【０１７９】
「標的」という用語は、本開示全体を通じて、多様な異なる形態で使用され、それが使用される文脈によって規定される。「標的ｍＲＮＡ」は、所与のｓｉＲＮＡが対象とすることができるメッセンジャーＲＮＡを指す。「標的配列」および「標的部位」は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖が異なる度合いの相同性を示し、アンチセンス鎖が異なる度合いの相補性を示す対象である、ｍＲＮＡ内の配列を指す。「ｓｉＲＮＡ標的」という語句は、ｓｉＲＮＡが対象とする遺伝子、ｍＲＮＡ、またはタンパク質を指す可能性がある。同様に、「標的サイレンシング」は、遺伝子、または対応するｍＲＮＡもしくはタンパク質の状態を指す可能性がある。
【０１８０】
ｓｉＲＮＡは、部分的に精製されたＲＮＡ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、または組換えにより産生されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／もしくは変化によって天然産ＲＮＡから異なる、変化させられたＲＮＡを含む可能性がある。かかる変化は、ｓｉＲＮＡをヌクレアーゼ消化に対して抵抗性にする修飾を含む、ｓｉＲＮＡの末端（複数可）、もしくはｓｉＲＮＡの１つ以上の内部ヌクレオチド等への、非ヌクレオチド物質の付加を含む可能性がある。ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡ配列のいずれかにおけるおよそ１８〜３０隣接ヌクレオチド、例えば、各鎖中の１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチドのいずれの広がりも標的とすることができ、ここで鎖のうちの１つは、標的ｍＲＮＡ配列に実質的に相補的、例えば、例えば、３、２、１、または０ミスマッチヌクレオチド（複数可）を有して、少なくとも８０％（またはそれを超える、例えば、８５％、９０％、９５％、または１００％）相補的である。ｓｉＲＮＡのための標的配列を選択するための技法は、例えば、２００２年１０月１１日改訂されたＴｕｓｃｈｌ  Ｔら、「Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ」に提供され、その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。「Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ」は、ワールドワイドウェブ上で、Ｄｒ．Ｔｈｏｍａｓ  Ｔｕｓｃｈｌ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＡＧ  １０５，Ｍａｘ−Ｐｌａｎｃｋ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３７０７７  Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙによって維持されるウェブサイトで利用可能であり、Ｍａｘ  Ｐｌａｎｃｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトへアクセスし、キーワード「ｓｉＲＮＡ」で検索することによって見出すことができる。故に、本ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、標的ｍＲＮＡにおける約１８〜約３０ヌクレオチドのいずれの隣接する広がりとも同一のヌクレオチド配列を含む。
【０１８１】
幾つかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの１つまたは両方の鎖はまた、３’オーバーハングを含む可能性がある。本明細書で使用されるとき、「３’オーバーハング」は、二重鎖ＲＮＡ鎖の３’末端から伸長する少なくとも１つの不対ヌクレオチドを指す。幾つかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、１〜約６ヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドを含む）長、好ましくは１〜約５ヌクレオチド長、より好ましくは１〜約４ヌクレオチド長、および特に好ましくは約２〜約４ヌクレオチド長の、少なくとも１つの３’オーバーハングを含む。ｓｉＲＮＡ分子の両方の鎖が３’オーバーハングを含む場合の実施形態では、オーバーハングの長さは、各鎖について同じであるか、または異なる可能性がある。幾つかの実施形態では、３’オーバーハングは、ｓｉＲＮＡの両方の鎖上に存在し、２ヌクレオチド長である。例えば、ｓｉＲＮＡの各鎖は、ジチミジル酸（「ＴＴ」）またはジウリジル酸（「ｕｕ」）の３’オーバーハングを含む可能性がある。
【０１８２】
ｓｉＲＮＡは、当業者に既知の幾つかの技法を使用して得ることができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、Ｔｕｓｃｈｌらの米国公開出願第２００２／００８６３５６号に記載される体外系ショウジョウバエ等の、当該技術分野で既知の方法を使用して、化学的に合成するか、組換えにより産生することができ、その開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８３】
好ましくは、ｓｉＲＮＡは、適切に保護されたリボヌクレオシドホスホロアミダイトおよび従来のＤＮＡ／ＲＮＡ合成器を使用して、化学的に合成される。ｓｉＲＮＡは、２つの別個の相補的ＲＮＡ分子として、または２つの相補的領域を有する単一のＲＮＡ分子として、合成することができる。合成ＲＮＡ分子または合成試薬の商業的な供給業者には、Ｐｒｏｌｉｇｏ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｃｏｌｏ．ＵＳＡ）、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（ｐａｒｔ  ｏｆ  Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．ＵＳＡ）、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，Ｖａ．ＵＳＡ）、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ａｓｈｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．ＵＳＡ）、およびＣｒｕａｃｈｅｍ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）が含まれる。
【０１８４】
代替的に、ｓｉＲＮＡはまた、組換え環状または直鎖ＤＮＡプラスミドから、任意の好適なプロモーターを使用して、発現させることができる。プラスミドからｓｉＲＮＡを発現させるための好適なプロモーターには、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター配列およびサイトメガロウイルスプロモーターが含まれる。他の好適なプロモーターの選択は、当該技術分野の範囲内にある。本発明の組換えプラスミドはまた、特定の組織内または特定の細胞内環境におけるｓｉＲＮＡの発現のための、誘導性または調節性プロモーターを含む可能性がある。
【０１８５】
組換えプラスミドから発現されるｓｉＲＮＡは、標準的な技法によって培養された細胞発現系から単離することができるか、または体内血管新生の領域でもしくはその近くで、細胞内発現させることができるかのいずれかである。ｓｉＲＮＡを体内細胞に送達するための組換えプラスミドの使用は、下により詳細に考察される。
【０１８６】
ｓｉＲＮＡは、２つの別個の相補的ＲＮＡ分子として、または２つの相補的領域を有する単一のＲＮＡ分子としてのいずれかで、組換えプラスミドから発現させることができる。
【０１８７】
ｓｉＲＮＡを発現させるのに好適なプラスミドを選択する方法、ｓｉＲＮＡを発現させるための核酸配列をプラスミド中に挿入するための方法、および組換えプラスミドを目的の細胞に送達するための方法は、当該技術分野の範囲内にある。例えば、Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０：４４６−４４８、Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  Ｔ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３、Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７−５００、Ｐａｄｄｉｓｏｎ  Ｐ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１６：９４８〜９５８、Ｌｅｅ  Ｎ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００−５０５、およびＰａｕｌ  Ｃ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５−５０８を参照されたく、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。ｓｉＲＮＡを発現させるための核酸配列を含むプラスミドは、下の実施例７に記載される。ｐＡＡＶｓｉＲＮＡと呼ばれるそのプラスミドは、ヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下で、ポリＴ終結配列に作動可能に関連した（ｉｎ  ｏｐｅｒａｂｌｅ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｏｌｙＴ  ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）センスＲＮＡ鎖コード配列、およびヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下で、ポリＴ終結配列に作動可能に関連したアンチセンスＲＮＡ鎖コード配列を含む。プラスミドｐＡＡＶｓｉＲＮＡは、最終的に、ｓｉＲＮＡを発現させるための同じ核酸配列を含む、組換えアデノ関連ウイルスベクターを産生する際の使用が意図される。
【０１８８】
本明細書で使用されるとき、「ポリＴ終結配列に作動可能に関連した」とは、センスまたはアンチセンス鎖をコードする核酸配列が、５’方向のポリＴ終結シグナルに直接隣接していることを意味する。プラスミドからのセンスまたはアンチセンス配列の転写中、ポリＴ終結シグナルは、転写を終結させるように作用する。
【０１８９】
本明細書で使用されるとき、プロモーターの「制御下」とは、プロモーターがセンスまたはアンチセンスコード配列の転写を開始することができるように、センスまたはアンチセンス鎖をコードする核酸配列がプロモーターの３’側に位置することを意味する。
【０１９０】
ｓｉＲＮＡはまた、細胞内で組換えウイルスベクターから、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３遺伝子発現腫瘍の領域またはその近くにおいて、体内で発現させることができる。本発明の組換えウイルスベクターは、ｓｉＲＮＡをコードする配列、およびｓｉＲＮＡ配列を発現させるための任意の好適なプロモーターを含む。好適なプロモーターには、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター配列およびサイトメガロウイルスプロモーターが含まれる。他の好適なプロモーターの選択は、当該技術分野の範囲内にある。本発明の組換えウイルスベクターはまた、特定の組織内または特定の細胞内環境におけるｓｉＲＮＡの発現のための、誘導性または調節性プロモーターを含む可能性がある。
【０１９１】
幾つかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、組換えウイルスベクターから、２つの別個の相補的ＲＮＡ分子として、または２つの相補的領域を有する単一のＲＮＡ分子としてのいずれかで、発現させることができる。
【０１９２】
ｓｉＲＮＡ分子（複数可）を発現させるためのコード配列を受け入れることが可能な、任意のウイルスベクター、例えば、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス（例えば、レンチウイルス（ＬＶ）、レンチウイルス、マウス白血病ウイルス）、ヘルペスウイルス等に由来するベクターを使用することができる。ウイルスベクターの向性はまた、ベクターを、エンベロープタンパク質または他のウイルスからの他の表面抗原でシュードタイピングすることによって修飾することができる。例えば、本発明のＡＡＶベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、狂犬病、エボラ、モコラ等からの表面タンパク質でシュードタイピングすることができる。
【０１９３】
本発明における使用に好適な組換えウイルスベクターを選択するための方法、ｓｉＲＮＡを発現させるための核酸配列をベクター中に挿入するための方法、およびウイルスベクターを目的の細胞に送達するための方法は、当該技術分野の範囲内にある。例えば、Ｄｏｒｎｂｕｒｇ  Ｒ（１９９５），Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．２：３０１−３１０、Ｅｇｌｉｔｉｓ  Ｍ  Ａ（１９８８），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６０８６１４、Ｍｉｌｌｅｒ  Ａ  Ｄ（１９９０），Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．１：５−１４、およびＡｎｄｅｒｓｏｎ  Ｗ  Ｆ（１９９８），Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：２５−３０を参照されたく、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。場合によっては、市販のウイルス送達系を使用することができる（例えば、Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘ．から入手可能なｓｉＲＮＡ送達のためのベクター）。送達のための他の方法は、当業者に既知である（例えば、ｓｉＲＮＡ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｃｅｎｔｒｅ、ｓｉｒｎａ．ｄｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）。
【０１９４】
好ましいウイルスベクターは、ＡＶおよびＡＡＶに由来するものである。特に好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡは、２つの別個の相補的な１本鎖ＲＮＡ分子として、例えば、Ｕ６もしくはＨ１  ＲＮＡプロモーターのいずれか、またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターを含む、組換えＡＡＶベクターから発現される。
【０１９５】
ｓｉＲＮＡを発現させるための好適なＡＶベクター、組換えＡＶベクターを構築するための方法、およびベクターを標的細胞中に送達するための方法は、Ｘｉａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０に記載され、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９６】
ｓｉＲＮＡを発現させるための好適なＡＡＶベクター、組換えＡＡＶベクターを構築するための方法、およびベクターを標的細胞中に送達するための方法は、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：３０９６−３１０１、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、７０：５２０−５３２、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２６、米国特許第５，２５２，４７９号、米国特許第５，１３９，９４１号、国際特許出願第ＷＯ９４／１３７８８号、および国際特許出願第ＷＯ９３／２４６４１号に記載され、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９７】
所与の標的配列を含有するｓｉＲＮＡの、標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ媒介型分解を引き起こす能力は、細胞中のＲＮＡまたはタンパク質のレベルを測定するための標準的な技法を使用して評価することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、培養された細胞に送達することができ、標的ｍＲＮＡのレベルは、ノーザンブロットもしくはドットブロッティング技法によって、または定量ＲＴ−ＰＣＲによって測定することができる。代替的に、感染細胞中のＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２キナーゼ／キナーゼ受容体タンパク質のレベルは、ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロットによって測定することができる。本ｓｉＲＮＡの、標的ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルに対する効果を測定するための好適な細胞培養系は、下の実施例に記載される。
【０１９８】
幾つかの実施形態では、体外および／または体内で、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の活性および／または発現を下方調節するための、特異的ｓｉＲＮＡを合成することができる。ＨＥＲ２阻害のための例証的なｓｉＲＮＡ対には、次の配列対が含まれる可能性がある：配列番号３−：ＣＣＵＧＧＡＡＣＵＣＡＣＣＵＡＣＣＵＧｄＴｄＴ／配列番号４−ＣＡＧＧＵＡＧＧＵＧＡＧＵＵＣＣＡＧＧｄＴｄＴ、配列番号５−ＣＵＡＣＣＵＵＵＣＵＡＣＧＧＡＣＧＵＧｄＴｄＴ／配列番号６−ＣＡＣＧＵＣＣＧＵＡＧＡＡＡＧＧＵＡＧｄＴｄＴ、および配列番号７−ＧＡＵＣＣＧＧＡＡＧＵＡＣＡＣＧＡＵＧｄＴｄＴ／配列番号８−ＣＡＵＣＧＵＧＵＡＣＵＵＣＣＧＧＡＵＣｄＴｄＴ）を、化学的に合成およびアニーリングすることができる。これらの合理的に設計されたｓｉＲＮＡは、合成することができ、Ｄｈａｒｍａｃｏｎから市販されている。依然として他の実施形態では、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３発現および／または活性を阻害する際に有用な、ｓｉＲＮＡ  ｓｈＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡ配列を発現することが可能なレンチウイルスベクターは、カタログ番号ｓｃ−１５６０４８、およびｓｃ−２９４０５の下に、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されている。
【０１９９】
幾つかの実施形態では、本明細書で有用な機能性核酸の有効性は、機能性核酸、例えば、ｓｉＲＮＡが腫瘍を標的とし、全身に、反復して、かつ安全に送達されるとき、増加される可能性がある。低いトランスフェクション効率、ヌクレアーゼ変性、良好でない組織浸透、および非特異的免疫低下は、機能性核酸が保護的および機能性ビヒクル、例えば、ウイルスベクター、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体−２と連結したポリエチレンイミン（ＰＥＩ）と、遠位端でＲＧＤペプチドリガンドによりＰＥＧ化されたＰＥＩとで複合体化された、リポソーム、プロタミン−抗体融合タンパク質、ならびに腫瘍標的免疫リポソーム複合体中に組み込まれるとき克服される可能性がある。これらの戦略の任意の組み合わせは、第１世代の送達方法で従来見られた上述の問題を寛解させ、撤廃する可能性がある。幾つかの実施形態では、機能性核酸は、送達試薬と併せた裸ｓｉＲＮＡとして、またはｓｉＲＮＡを発現する組換えプラスミドもしくはウイルスベクターとしてのいずれかで、被検体に投与される。
【０２００】
本ｓｉＲＮＡと併せた投与に好適な送達試薬には、Ｍｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＴＫＯ親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクトアミン、セルフェクチン、もしくはポリカチオン（例えば、ポリリジン）、細菌ミニ細胞、またはリポソームが含まれる。好ましい送達試薬は、リポソームである。
【０２０１】
リポソームは、ｓｉＲＮＡの、腫瘍組織等の特定の組織への送達を補助する可能性があり、また、ｓｉＲＮＡの血中半減期を増加させる可能性もある。本発明における使用に好適なリポソームは、一般に、中性または負電荷性ホスホ脂質およびコレステロール等のステロールを含む、標準的な小胞形成脂質から形成される。脂質の選択は、一般に、所望のリポソームサイズおよび血流中のリポソームの半減期等の要因の考慮によって導かれる。リポソームを調製するための多様な方法が既知であり、例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０），Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、ならびに米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号、および第５，０１９，３６９号に記載される通りであり、それらの開示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０２】
幾つかの実施形態では、本ｓｉＲＮＡを封入するリポソームカプセルは、標的リポソームに、血管新生の部位のまたはその近くの特定の細胞または組織を標的とさせることができる、リガンド分子を含む。腫瘍抗原に結合するモノクローナル抗体等の、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３過剰発現腫瘍中で優勢な受容体に結合するリガンドが好ましい。例えば、本ｓｉＲＮＡを封入するリポソームカプセルは、例えば、構造の表面に結合されたオプソニン作用阻害部分を有することによって、単核マクロファージおよび細網内皮系によるクリアランスを回避するように修飾される。一実施形態では、本発明のリポソームは、オプソニン作用阻害部分およびリガンドの両方を含む可能性がある。本明細書で使用されるとき、本発明のリポソームを調製する際に使用するためのオプソニン作用阻害部分は、例証的に、膜に結合される大きい親水性ポリマーリポソームである。本明細書で使用されるとき、オプソニン作用阻害部分は、それが、例えば、脂溶性アンカーの膜自体へのインターカレーションによって、または膜脂質の活性基に直接に結合することによって、リポソーム膜に化学的にまたは物理的に結合されるとき、膜に「結合」する。これらのオプソニン作用阻害親水性ポリマーは、例えば、開示全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，９２０，０１６号に記載されるように、マクロファージ−単球系（「ＭＭＳ」）および細網内皮系（「ＲＥＳ」）によるリポソームの取り込みを有意に減少させる保護表面層を形成する。オプソニン作用阻害部分により修飾されるリポソームは、故に、非修飾リポソームよりもはるかに長く循環内に留まる。これらのリポソームは、時に、「隠蔽された（ｃｏｎｃｅａｌｅｄ）」リポソームと呼ばれる。
【０２０３】
隠蔽されたリポソームは、多孔質または「漏出性」微小血管によって補給される組織中に蓄積することが知られる。故に、かかる微小血管欠陥を特徴とする標的組織、例えば、固形腫瘍は、これらのリポソームを効率的に蓄積するであろう。加えて、細網内皮系による取り込みの低減は、肝臓および脾臓中の有意な蓄積を防止することによって、隠蔽されたリポソームの毒性を低下させる。故に、オプソニン作用阻害部分により修飾される本発明のリポソームは、本明細書に例示されるように、本ｓｉＲＮＡを腫瘍細胞に送達する可能性がある。
【０２０４】
リポソームを修飾するのに好適なオプソニン作用阻害部分は、好ましくは、約５００〜約４０，０００ダルトン、より好ましくは約２，０００〜約２０，０００ダルトンの数平均分子量を有する水溶性ポリマーである。かかるポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）誘導体；例えば、メトキシＰＥＧまたはＰＰＧ、およびステアリン酸ＰＥＧまたはＰＰＧ；ポリアクリルアミドまたはポリＮ−ビニルピロリドン等の合成ポリマー；直鎖、分岐鎖、またはデンドリマーポリアミドアミン；ポリアクリル酸；ポリアルコール、例えば、カルボキシル基またはアミノ基が化学的に連結されるポリビニルアルコールおよびポリキシリトール、ならびにガングリオシドＧＭ１等のガングリオシドが含まれる。ＰＥＧ、メトキシＰＥＧ、もしくはメトキシＰＰＧのコポリマー、およびそれらの誘導体もまた、好適である。加えて、オプソニン作用阻害ポリマーは、ＰＥＧとポリアミノ酸、多糖類、ポリアミドアミン、ポリエチレンアミン、またはポリヌクレオチドのいずれかのブロックコポリマーであり得る。オプソニン作用阻害ポリマーはまた、アミノ酸またはカルボン酸、例えば、ガラクツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ヒアルロン酸、ペクチン酸、ノイラミン酸、アルギン酸、カラギーナンを含有する天然多糖類、アミノ化多糖類もしくはオリゴ糖類（直鎖または分岐鎖）、または例えば、炭酸の誘導体と反応させられ、結果としてカルボキシル基の連結が生じる、カルボキシル化多糖類もしくはオリゴ糖類であり得る。
【０２０５】
好ましくは、オプソニン作用阻害部分は、ＰＥＧ、ＰＰＧ、またはその誘導体である。ＰＥＧまたはＰＥＧ誘導体により修飾されるリポソームは、時に、「ＰＥＧ化リポソーム」と呼ばれる。
【０２０６】
オプソニン作用阻害部分は、多数の周知の技法のいずれか１つによってリポソーム膜に結合される可能性がある。例えば、ＰＥＧのＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルは、ホスファチジル−エタノールアミン脂溶性アンカーに結合され、次いで膜に結合される可能性がある。同様に、デキストランポリマーは、ステアリルアミン脂溶性アンカーにより、還元的アミノ化を介して、Ｎａ（ＣＮ）ＢＨ３および６０℃で３０：１２比率でのテトラヒドロフランと水等の溶媒混合物を使用して誘導体化される可能性がある。
【０２０７】
ｓｉＲＮＡを発現することができる例証的な組換えプラスミドは、上述される。かかる組換えプラスミドはまた、直接に、またはＭｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＬＴ１親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクトアミン、セルフェクチン、ポリカチオン（例えば、ポリリジン）、細菌ミニ細胞、もしくはリポソームを含む、好適な送達試薬と併せて、投与することができる。ｓｉＲＮＡを発現する組換えウイルスベクターもまた上述され、かかるベクターを患者の固形腫瘍に送達するための方法は、当該技術分野の範囲内にある。幾つかの実施形態では、送達方法は、ベクターの、腫瘍または周囲の組織中への定位的（ｓｔｅｒｏｔａｃｔｉｃ）注射を含む可能性がある。
【０２０８】
ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを、腫瘍の場所のまたはその近くの腫瘍組織の細胞に送達するのに好適な任意の手段によって、被検体に投与することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、遺伝子銃、エレクトロポレーション、定位的注射によって、または他の好適な非経口もしくは経腸投与経路によって、投与することができる。好適な経腸投与経路には、経口、直腸、経皮、または鼻腔内送達が含まれる。
【０２０９】
好適な非経口投与経路には、血管内投与（例えば、静脈内ボーラス注射、静脈内注入、動脈内ボーラス注射、動脈内注入、および脈管構造中へのカテーテル滴下）、組織周囲および組織内投与（例えば、腫瘍周囲および腫瘍内注射）、皮下注入を含む皮下注射または蓄積（浸透ポンプ等による）、例えば、カテーテル、シリンジ、もしくは他の配置デバイス（例えば、多孔質、非多孔質、またはゼラチン質物質を含む埋め込み）による、腫瘍の部位のもしくはその近くの領域への直接（例えば、注射）適用、吸入、または定位的注射が含まれる。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの注射または注入は、ＨＥＲ２過剰発現腫瘍の部位でまたはその近くで与えられる。より好ましくは、ｓｉＲＮＡは、腫瘍へのまたは腫瘍に栄養分を供給する脈管構造（ｖａｓｃｕａｌｔｕｒｅ）中への注射によって、直接に投与される。
【０２１１】
ｓｉＲＮＡは、単回用量で、または複数回用量で投与することができる。ｓｉＲＮＡの投与が注入による場合、注入は、単回の持続的用量であり得るか、または複数回注入によって送達され得る。腫瘍組織中への直接の薬剤の注射は、ＨＥＲ２過剰発現腫瘍／癌、例えば、乳癌の部位でまたはその近くである。腫瘍組織中への、または腫瘍の部位でもしくはその近くでの薬剤の複数回注射が、特に好ましい。
【０２１２】
当業者はまた、ｓｉＲＮＡを所与の被検体に投与するための適切な投薬レジメンを、容易に決定することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、被検体に一回、腫瘍の部位で、その中へ、またはその近くでの単回注射または蓄積等によって、投与することができる。代替的に、ｓｉＲＮＡは、被検体に複数回、毎日または毎週投与することができる。例えば、ｓｉＲＮＡは、被検体に毎週一回、約３〜約２８週間、より好ましくは約７〜約１０週間の期間にわたって投与することができる。好ましい投薬レジメンにおいて、ｓｉＲＮＡは、腫瘍部位中へ、その部位で、またはその近くで（例えば、定位的注射）、週一回、数週間にわたって注射される。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、単回または複数回の、毎日、または毎週、または毎月用量を使用して、静脈内に投与される。無期限の長さの時間にわたるｓｉＲＮＡの周期的投与が、別の癌治療に未経験であるか、またはそれに難治性もしくは非反応性である、ＨＥＲ２過剰発現乳癌等の慢性ＨＥＲ２過剰発現癌疾患を患う被検体に対して必要な場合があることが理解される。
【０２１３】
投薬レジメンが複数回投与を含む場合、被検体に投与されるｓｉＲＮＡの有効量は、投薬レジメン全体にわたって投与されるｓｉＲＮＡの総量を含む可能性があることが理解される。
【０２１４】
ｓｉＲＮＡは、好ましくは、当該技術分野で既知の技法に従って、被検体に投与する前に薬学的組成物として製剤化される。本発明の薬学的組成物は、少なくとも、治療上有効で、滅菌され、パイロジェンフリーであること、および薬学的に有効であることが特徴付けられ、それは妥当な塩類溶液、０．４％食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸等が存在することを意味する。
【０２１５】
薬学的組成物はまた、従来の薬学的賦形剤および／または添加物を含む可能性がある。好適な薬学的賦形剤には、安定剤、酸化防止剤、重量オスモル濃度調整剤、緩衝液、およびｐＨ調整剤が含まれる。好適な添加物には、生理的に生体適合性の緩衝液（例えば、トロメタミン塩酸塩）、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビスアミド等）またはカルシウムキレート複合体（例えば、カルシウムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミド）の添加、および任意に、カルシウムまたはナトリウム塩（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、または乳酸カルシウム）の添加が含まれる。本発明の薬学的組成物は、液体形態での使用のためにパッケージ化することができ、または凍結乾燥させることができる。
【０２１６】
固体組成物については、従来の非毒性固形担体、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、ブドウ糖、スクロース、炭酸マグネシウム等を使用することができる。
【０２１７】
例えば、経口投与用の固体薬学的組成物は、上に列挙される担体および賦形剤のうちのいずれかと、１０〜９５％、好ましくは２５％〜７５％の１つ以上のｓｉＲＮＡとを含む可能性がある。エアロゾル（吸入）投与用の薬学的組成物は、上述のリポソーム中にカプセル封入された、０．０１〜２０重量％、好ましくは１％〜１０重量％の１つ以上のｓｉＲＮＡと、噴霧剤とを含む可能性がある。所望に応じて、担体、例えば、鼻腔内送達用のレシチンもまた含めることができる。
【０２１８】
ｓｈＲＮＡ阻害性分子
幾つかの実施形態では、ｓｈＲＮＡ核酸分子は、ステム−ループ構造を有し、相補的配列の第１および第２領域を含む、ＲＮＡ剤を指し、この領域の相補性および配向の度合いは、塩基対形成が領域間で生じるのに十分であり、第１および第２領域は、ループ領域によって結合され、ループは、ループ領域内のヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）間の塩基対形成の欠如からもたらされる。ｓｈＲＮＡ構造の二重鎖ステムの一部分またはセグメントは、アンチセンス鎖であるか、または標的遺伝子、例えば、ＨＥＲ２および／もしくはＨＥＲ３のｍＲＮＡの、約１８〜約４０以上のヌクレオチドの区分に相補的、例えば、完全に相補的である。ｓｉＲＮＡとは対照的に、ｓｈＲＮＡは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の天然前駆体を模倣する。ｍｉＲＮＡは、植物および動物発達中に転写後または翻訳後レベルで遺伝子発現を調節することができる、およそ２２ヌクレオチドの非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡの１つの共通の特色は、それらが全て、恐らくダイサー、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ型酵素、またはその相同体によって、プレ−ｍｉＲＮＡと称される、およそ７０ヌクレオチドの前駆体ＲＮＡステム−ループから切除されることである。天然産ｍｉＲＮＡ前駆体（プレ−ｍｉＲＮＡ）は、一般に相補的である２つの部分を含む二重鎖ステム、およびステムの２つの部分を結合するループを形成する、１本鎖を有する。典型的なプレ−ｍｉＲＮＡにおいて、ステムは、１つ以上のバルジ、例えば、ステムの一部分において単一のヌクレオチド「ループ」を作り出す、余剰のヌクレオチド、および／またはステムの２つの部分の相互とのハイブリダイゼーションにおいてギャップを作り出す、１つ以上の不対ヌクレオチドを含む。本発明の短ヘアピンＲＮＡ、または操作されたＲＮＡ前駆体は、これらの天然産プレ−ｍｉＲＮＡに基づくが、所望のＲＮＡｉ剤（例えば、本発明のｓｉＲＮＡ）を送達するように操作される、人工構築物である。プレ−ｍｉＲＮＡのステム配列を、標的ｍＲＮＡに相補的な配列で置換することによって、ｓｈＲＮＡが形成される。ｓｈＲＮＡは、細胞の遺伝子サイレンシング経路全体によってプロセスされ、それによってＲＮＡｉを効率的に媒介する。
【０２１９】
幾つかの実施形態では、本発明のｓｈＲＮＡ分子は、例えば、細胞内に存在するダイサーによって、細胞中でプロセスされるとき、上述のｓｉＲＮＡのいずれも産生するように設計される。ｓｈＲＮＡ分子の必須の要素には、アニーリングまたはハイブリッド形成して、二重鎖または２本鎖ステム部分を形成するために十分な相補性を有する、第１部分および第２部分が含まれる。２つの部分は、完全にまたは完璧に相補的である必要はない。第１および第２「ステム」部分は、ｓｈＲＮＡの他の部分とアニーリングまたはハイブリッド形成するには不十分な配列相補性を有する配列を有する部分によって結合される。この後者の部分は、ｓｈＲＮＡ分子中の「ループ」部分と称される。ｓｈＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡを生成するためにプロセスされる。ｓｈＲＮＡはまた、１つ以上のバルジ、すなわち、ステムの一部分において小さいヌクレオチド「ループ」、例えば１、２、３ヌクレオチドループを作り出す、余剰のヌクレオチドを含む可能性がある。ステム部分は、同じ長さであり得るか、または一部分が、例えば、１〜５ヌクレオチドのオーバーハングを含む可能性がある。オーバーハングヌクレオチドは、例えば、ウラシル（Ｕ）を含む、例えば、全てＵである可能性がある。かかるＵは、とりわけ、転写の終結をシグナル伝達するｓｈＲＮＡコードＤＮＡにおいて、チミジン（Ｔ）によってコードされる。
【０２２０】
ｓｈＲＮＡのステム部分の１つの鎖は更に、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３配列の標的ＲＮＡ（例えば、配列番号１に提供される、例えば、ＨＥＲ２のｍＲＮＡ）に対して、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を介して該標的ＲＮＡの分解または開裂を媒介するために十分に相補的（例えば、アンチセンス）である。アンチセンス部分は、ステムの５’または３’末端上にある可能性がある。ｓｈＲＮＡのステム部分は、好ましくは約１５〜約５０ヌクレオチド長である。好ましくは２つのステム部分は、約１８または１９〜約２５、３０、３５、３７、３８、３９、または４０以上のヌクレオチド長である。哺乳類細胞中で使用されるとき、ステム部分の長さは、インターフェロン経路等の非特異的応答を刺激することを回避するために、約３０ヌクレオチド未満であるべきである。非哺乳類細胞中では、ステムは、３０ヌクレオチドよりも長い可能性がある。実際、ステム部分は、標的ｍＲＮＡに相補的なはるかに大きい区分（最大でｍＲＮＡ全体を含む）を含む可能性がある。二重鎖ステムの２つの部分は、ハイブリッド形成して、二重鎖ステムを形成するために十分に相補的でなければならない。故に、２つの部分は、完全にまたは完璧に相補的であり得るが、その必要はない。
【０２２１】
ｓｈＲＮＡまたは操作されたＲＮＡ前駆体におけるループは、対形成ヌクレオチドの数を増加もしくは減少させるようにループ配列を修飾すること、またはループ配列の全てもしくは一部をテトラループもしくは他のループ配列と置換することによって、天然プレ−ｍｉＲＮＡ配列と異なる場合がある。故に、ｓｈＲＮＡにおけるループ部分は、約２〜約２０ヌクレオチド長、すなわち、約２、３、４、５、６、７、８、９、もしくはそれを超える、例えば、１５もしくは２０、またはそれを超えるヌクレオチド長であり得る。好ましいループは、「テトラループ」配列からなるか、またはそれらを含む。例示的なテトラループ配列には、配列ＧＮＲＡが含まれるが、これに限定されず、ここではＮは、任意のヌクレオチドであり、Ｒは、プリンヌクレオチド、ＧＧＧＧ、およびＵＵＵＵである。
【０２２２】
幾つかの実施形態では、本発明のｓｈＲＮＡは、上述の所望のｓｉＲＮＡ分子の配列を含む。他の実施形態では、ｓｈＲＮＡのアンチセンスの部分の配列は、本質的に上述のように、または一般に、標的ＲＮＡ（例えば、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡ）内から、例えば、翻訳の開始部分から１００〜２００または３００ヌクレオチド上流または下流の領域から、１８、１９、２０、もしくは２１ヌクレオチド、もしくはそれよりも長い配列を選択することによって、設計することができる。一般に、配列は、５’ＵＴＲ（非翻訳領域）、コード配列、または３’ＵＴＲを含む標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の任意の部分から選択することができるが、該部分が、機能獲得型突然変異の部位から離れていることを条件とする。この配列は、任意に、２つの隣接したＡＡヌクレオチドを含有する標的遺伝子の領域の直後に続く。そのヌクレオチド配列の最後の２つのヌクレオチドは、ＵＵとなるように選択される可能性がある。この２１程度のヌクレオチド配列は、ｓｈＲＮＡにおける二重鎖ステムの一部分を作り出すために使用される。この配列は、野生型プレ−ｍｉＲＮＡ配列のステム部分を、例えば、酵素的に、置換することができるか、または合成される完全な配列中に含まれる。例えば、操作されたＲＮＡ前駆体構築物を例えば、野生型プレ−ｍｉＲＮＡから築くための制限酵素を使用して、ステム−ループ操作されたＲＮＡ前駆体全体をコードする、または前駆体の二重鎖ステム中に挿入される予定の部分のみをコードする、ＤＮＡオリゴヌクレオチドを合成することができる。
【０２２３】
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡを標的とする特異的機能性核酸（例えば、ｓｈＲＮＡクローン）、例えば、ＨＥＲ２  ＮＭ＿  ００４４４８．１（製品番号Ｂ００１７に基づく）はまた、ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ（商標）（ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から、製品番号ＨＳＨ００４９６９として市販されており、それはｓｈＲＮＡ発現構築物である。ヘアピンは、標的ｍＲＮＡ受入番号ＮＭ＿００４４４８．２（配列番号１として示される）の特異的遺伝子配列に対して最適化された、７塩基ループおよび１９〜２９塩基ステムからなる。
【０２２４】
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３のアンチセンス阻害物質
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３ヌクレオチド配列に対してアンチセンスである、単離された機能性核酸分子は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの活性または発現を低減するために有用である。「アンチセンス」機能性核酸（アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的、例えば、２本鎖ｃＤＮＡ分子コード鎖に相補的、または例えば、配列番号１に提供されるｍＲＮＡ配列に相補的である、ヌクレオチド配列を含む可能性がある。アンチセンス核酸は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３コード鎖全体に、またはその部分のみに（例えば、ヒトＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３ヌクレオチド配列のコード領域）、相補的である可能性がある。別の実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」（例えば、５’または３’非翻訳領域）に対してアンチセンスである。
【０２２５】
アンチセンス核酸は、それが、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であるように設計することができるが、一般には、それはＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡのコードまたは非コード領域の一部分のみに対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡの翻訳開始部位を囲む領域、例えば、目的の標的遺伝子ヌクレオチド配列−１０〜＋１０領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５〜１００であるか、または約７、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、もしくは８０以上のヌクレオチド長である可能性がある。
【０２２６】
アンチセンス核酸は、化学合成および酵素連結反応を使用して、当該技術分野で既知の手順を使用して構築することができる。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然産ヌクレオチドか、分子の生物学的安定性を増加させるように、またはアンチセンス核酸とセンス核酸との間に形成された二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された、種々に修飾されたヌクレオチドを使用して、化学的に合成することができ、例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することができる（例えば、Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４、ならびに例えば、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ，Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ，ＵＳＡ．およびＡｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ．からの商業的に利用可能なサービスを参照されたい）。アンチセンス核酸はまた、核酸がアンチセンス配向で内部にサブクローン化された（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲＮＡは、目的の標的核酸に対してアンチセンス配向のものとなろう）発現ベクターを使用して、生物学的に産生することができる。アンチセンス核酸はまた、ホスホロアミダイト法、Ｈ−ホスホネート手法、および亜リン酸トリメスター法等の合成方法からも産生することができる。アンチセンス核酸はまた、ＰＣＲ法によって産生することもできる。かかる方法は、ｍＲＮＡに相補的なｃＤＮＡおよびｃＲＮＡ配列を産生する。
【０２２７】
幾つかの実施形態では、アンチセンス分子は、修飾または非修飾ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマーオリゴヌクレオチドであり得、主に、マッチング配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の阻害、例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２のうちの１つ以上の発現における阻害をもたらす。アンチセンス分子は、修飾または非修飾ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマーオリゴヌクレオチドであり得、主に、マッチング配列に特異的に結合することによって機能し、ペプチド合成の阻害、例えば、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の発現における阻害をもたらす。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ワトソン・クリック塩基対形成によって標的ＲＮＡに結合し、結合配列のリボソーム翻訳を立体遮断によってまたはＲＮａｓｅ  Ｈ酵素を活性化することによってのいずれかで防止することによって、遺伝子発現を遮断する。アンチセンス分子はまた、ＲＮＡプロセシングまたは核から細胞質中への輸送を干渉することによって、タンパク質合成を変化させることができる。
【０２２８】
アンチセンス核酸は、α−アノマー核酸分子であり得る。α−アノマー核酸分子は、通常のβ−ユニットとは対照的に鎖が相互に平行に走行する相補的ＲＮＡとの、特異的２本鎖ハイブリッドを形成する。アンチセンス核酸分子はまた、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドまたはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体を含む可能性があり、混合のヌクレオシド間結合を有する可能性がある（例えば、Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｔｏｔｏｗａ  Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４を参照されたい）。
【０２２９】
幾つかの実施形態では、癌を治療するための方法は、患者に化合物１およびアンチセンス核酸の組み合わせを投与することを含む。幾つかの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、典型的に、被検体に投与されるか（例えば、組織部位の直接注射によって）、あるいはそれらが、細胞ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ならびに／または例えば配列番号２に提供されるＨＥＲ２および／もしくはＨＥＲ３タンパク質かそのスプライス変異体をコードするゲノムＤＮＡと、ハイブリッド形成するか、またはそれに結合して、それによってタンパク質の発現を、例えば、転写ならびに／または翻訳を阻害することによって阻害するように、インサイツで生成される。代替的に、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的とするように修飾し、次いで全身投与することができる。全身投与については、アンチセンス分子は、例えば、アンチセンス核酸分子を、腫瘍細胞、例えば、ＨＥＲ２過剰発現腫瘍細胞上に存在する細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することによって、それらが選択された細胞表面上で発現される受容体または抗原に特異的に結合するように修飾することができる。アンチセンス核酸分子はまた、本明細書に記載されるベクターを使用して、腫瘍細胞に送達することもできる。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を達成するために、アンチセンス核酸分子が、強力なｐｏｌ  ＩＩまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下で配置される、ベクター構築物。アンチセンス核分子を投与する方法もまた、当該技術分野で既知である（例えば、Ｗａｃｈｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｂｙ  ＢＣＬ２  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｔｈｅｒａｐｙ（２０００）  Ｌａｎｃｅｔ  ３５６：１７２８−１７３３、Ｗｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ．ＢＣＬ−２  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ（１９９７）  Ｌａｎｃｅｔ  ３４９：１１３７−１１４１）。
【０２３０】
幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３遺伝子発現は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の調節領域（例えば、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的として、標的細胞中のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３遺伝子の転写を防止する三重螺旋構造を形成することによって、阻害することができる。一般には、Ｈｕｒｓｔ，Ｈ．Ｃ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１，３：３９５−３９８、Ｈｅｌｅｎｅ（１９９１）  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６（６）：５６９−８４、Ｈｅｌｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６、およびＭａｈｅｒ（１９９２）  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４：８０７−１５）を参照されたく、それらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。三重螺旋形成のために標的とされ得る潜在的配列は、いわゆる「スイッチバック」核酸分子を作り出すことによって増加させることができる。スイッチバック分子は、それらが最初に二重鎖の一方の鎖、次いで他方の鎖と塩基対形成するように、交互の５’〜３’、３’〜５’様態で合成され、プリンまたはピリミジンのいずれかの相当の広がりが二重鎖の一方の鎖上に存在することの必要性を排除する。
【０２３１】
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３機能性核酸分子は、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、または可溶性を改善するために、塩基部分、糖部分、またはリン酸塩骨格において修飾することができる。例えば、核酸分子のデオキシリボースリン酸塩骨格は、ペプチド核酸を生成するように修飾することができる（Ｈｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４：５−２３を参照されたい）。本明細書で使用されるとき、「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」という用語は、核酸模倣体、例えば、ＤＮＡ模倣体を指し、ここでデオキシリボースリン酸塩骨格は、偽ペプチド骨格によって置換され、４個の天然核酸塩基のみが保持される。ＰＮＡの中性骨格は、低イオン強度の条件下で、ＤＮＡおよびＲＮＡとの特異的ハイブリダイゼーションを可能にし得る。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６、上記を参照されたい）およびＰｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：１４６７０−１４６７５）に記載される標準的な固相ペプチド合成プロトコルを使用して、行うことができる。
【０２３２】
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３核酸分子のＰＮＡは、治療および診断用途に使用することができる。例えば、ＰＮＡは、例えば、転写もしくは翻訳停止を誘導すること、または複製を阻害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のために、アンチセンスまたは抗原薬剤として使用することができる。ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３核酸分子のＰＮＡはまた、遺伝子中の単一の塩基対突然変異の分析（例えば、ＰＮＡ指向性ＰＣＲクランプ法による）において、他の酵素と組み合わせて使用されるとき（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ（Ｈｙｒｕｐ（１９９６、上記を参照されたい））「人工制限酵素」として、またはＤＮＡ配列決定もしくはハイブリダイゼーションのためのプローブもしくはプライマーとして、使用することができる（Ｈｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６、上記を参照されたい）、Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６、上記を参照されたい））。
【０２３３】
ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の抗体阻害物質
別の実施形態では、阻害物質は、抗体またはその断片であり得る。抗体は、例えば、キナーゼ受容体の細胞外ドメインに結合することによって、上方調節されたキナーゼ活性を阻害することができる。多様な好適な抗体は、当該分野で既知であり、市販されている。例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）およびＭＥＫＫキナーゼの各々に対する抗体は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から得ることができる。例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔａｌｏｇ：ＭＳＰＲについて（カタログ番号ＡＦ６９１、ＦＡＢ６９１Ａ、ＢＡＦ６９１、ＦＡＢ６９１Ｆ、ＭＡＢ６９１、ＦＡＢ６９１Ｐ、ＤＹＣ１９４７Ｅ、ＤＹＣ１９４７−２、ＤＹＣ１９４７−５、ＤＹＣ６９１−２、ＤＹＣ６９１−５、ＡＦ４３１、ＢＡＦ４３１、１９４７−ＭＳ−０５０、および４３１−ＭＳ−１００）、Ａｘｌについて（カタログ番号ＡＦ１５４  ＢＡＦ１５４、ＤＹ１５４、ＭＡＢ１５４、およびＦＡＢ１５４１）、ＭＡＰ３ｋについて（カタログ番号４５４０−ＫＳ−０１０、ＭＡＢ４５４０、ＭＡＢ６０９５）、ＭＥＫＫについて（カタログ番号ＭＡＢ６０９５）、ＨＥＲ２について（カタログ番号ＡＦ１７６８、ＭＡＢ１１２９、ＡＦ１１２９、ＭＡＢ１１２９１、ＡＦ４４３８、ＭＡＢ４３６０）、ＨＥＲ３について（カタログ番号ＭＡＢ３４８２、ＭＡＢ３４８３、ＦＡＢ３４８１Ｐ、およびＭＡＢ３４８）、ＩＮＳＲについて（カタログ番号ＡＦ１５４４、ＭＡＢ１５４４、ＭＡＢ１５４４１、およびＡＦ２５０７）、ＩＧＦ−ＩＲについて（カタログ番号ＭＡＢ３９１、ＡＦ−３０５−ＮＡ、およびＦＡＢ３９１Ｃ）、およびＦＧＦＲ２について（カタログ番号ＭＡＢ６８４２、ＭＡＢ６８４、ＭＡＢ６６５、およびＭＡＢ６８４１）を参照されたい。Ｕ３−１２８７（Ｕ３  Ｐｈａｒｍａ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、および国際公開第０８／１００６２４号においてＡｂ第６抗体である、ＭＭ−１２１（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）は、周知の抗ＨＥＲ３抗体の更なる例である。更なる抗ＨＥＲ３抗体は、国際公開第９７／３５８８５号、欧州特許第１４１４４９４号、国際公開第０８／１００６２４号、米国第７７０５１３０号、米国第２０１０／００４７８２９号、およびＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：７６２０−７６２９（１９９６）に開示され、それらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３４】
一態様では、ＨＥＲ３阻害物質は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイを使用して測定すると、少なくとも４ｎＭのＫＤでＥｒｂＢ３に結合する抗ＥｒｂＢ３抗体である。一実施形態では、かかる抗体は、次のＣＤＲを含む：
ＶＨ  ＣＤＲ１−配列番号９：
2013539453.tif 000152
ＶＨ  ＣＤＲ２−配列番号１０：
2013539453.tif 000153
ＶＨ  ＣＤＲ３−配列番号１１：
2013539453.tif 000154
ＶＬ  ＣＤＲ１−配列番号１２：
2013539453.tif 000155
ＶＬ  ＣＤＲ２−配列番号１３：
2013539453.tif 000156
ＶＬ  ＣＤＲ３−配列番号１４：
2013539453.tif 000157
【０２３５】
別の実施形態では、かかる抗体は、配列番号１５：
2013539453.tif 000158
のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、
および配列番号１６：
2013539453.tif 000159
の配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０２３６】
別の実施形態では、かかる抗体は、ＭＭ−１２１、次のアミノ酸配列−配列番号１７：
１  ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ  ＨＹＶＭＡＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ
５１  ＩＳＳＳＧＧＷＴＬＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＴＲＧＬ
１０１  ＫＭＡＴＩＦＤＹＷＧ  ＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ  ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬ  ＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳ  ＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤ
１５１  ＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ  ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨ  ＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧ  ＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶ  ＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹ
２０１  ＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮ  ＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫ  ＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡ  ＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬ  ＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭ
２５１  ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶ  ＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥ  ＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶ  ＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ  ＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶ
３０１  ＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤ  ＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫ  ＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩ  ＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱ  ＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰ
３５１  ＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱ  ＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ  ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥ  ＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ  ＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧ
４０１  ＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶ  ＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶ  ＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ  ＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳ  ＬＳＰＧＫ
を有する重鎖、
および次のアミノ酸配列−配列番号１８：
１  Ｑ塩ＱＰＡＳＶ  ＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩ  ＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧ  ＳＹＮＶＶＳＷＹＱＱ  ＨＰＧＫＡＰＫＬＩＩ
５１  ＹＥＶＳＱＲＰＳＧＶ  ＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧ  ＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬ  ＱＴＥＤＥＡＤＹＹＣ  ＣＳＹＡＧＳＳＩＦＶ
１０１  ＩＦＧＧＧＴＫＶＴＶ  ＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶ  ＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬ  ＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬ  ＶＳＤＦＹＰＧＡＶＴ
１５１  ＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶ  ＫＶＧＶＥＴＴＫＰＳ  ＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳ  ＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷ  ＫＳＨＲＳＹＳＣＲＶ
２０１  ＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴ  ＶＡＰＡＥＣＳを有する軽鎖を含む。
【０２３７】
幾つかの実施形態では、抗体の阻害物質ＨＥＲ２は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、米国特許第５，８２１，３３７号）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）として市販されているトラスツズマブを含む可能性がある。幾つかの実施形態では、トラスツズマブは、式Ｉの化合物と組み合わせて、被検体に投与される。かかる投与のためのトラスツズマブの投薬量は、過度の実験を伴うことなく処方医師によって容易に決定され得る。例えば、式Ｉの化合物の組み合わせと共に投与されるべきトラスツズマブの毎週の投薬量は、１週当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である可能性があり、好ましくは静脈内に投与される。
【０２３８】
幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２抗体阻害物質には、１つ以上の用量で、１用量当たり約１００ｍｇ〜１用量当たり約１５００ｍｇの範囲の量で投与され、およそ毎週、およそ２週間毎、およそ３週間毎、またはおよそ４週間毎に投与される、抗体ペルツズマブが含まれる（米国特許第７，４４９，１８４号に開示され、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２３９】
マウス起源の抗ＨＥＲ２抗体ならびにそれらのヒト化およびキメラバージョンは、本発明の方法における使用に好適である。かかるＨＥＲ２抗体の例としては、４Ｄ５抗体（米国特許第５，６７７，１７１号および第５，７７２，９９７号に記載される）および５２０Ｃ９抗体、ならびに４５２Ｆ２、７３６Ｇ９、７４１Ｆ８、７５８Ｇ５、および７６１Ｂ１０と指定される（米国特許第６，０５４，５６１号に記載される）、その機能的同等物（国際公開第９３／２１３１９号）が挙げられるが、これらに限定されず、これらの特許および特許出願の全ては、参照により本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態では、ＨＥＲ２抗体阻害物質は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８２１，３３７号の表３に記載されるｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、および４Ｄ５−８、ならびにヒト化２Ｃ４抗体から選択される、１つ以上の抗体を含む可能性がある。代替的に、好適な抗体は、後述されるように、周知の技法を使用して容易に調製することができる。
【０２４０】
抗体の調製
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、動物中で、関連のある抗原およびアジュバントの複数回皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって産生される。代替的に、抗原は、動物のリンパ節中に直接に注射されてもよい（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１６：３８１−３８９，１９９７を参照されたい）。改善された抗体反応は、関連のある抗原を、免疫付与対象の種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害物質と、二機能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンジルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通じる共役）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（リジン残基を通じる）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、または当該技術分野で既知の他の薬剤を使用して、共役させることによって得られてもよい。
【０２４１】
動物を、例えば、１００μｇのタンパク質または共役体（マウスについて）を３容量のフロイント完全アジュバントと組み合わせることによって、および溶液を複数部位に皮下注射することによって、抗原、免疫原性共役体、または誘導体に対して免疫する。１ヵ月後、動物を、フロイント完全アジュバント中、元の量のペプチドまたは共役体の１／５〜１／１０で、複数部位の皮下注射によって追加免疫する。追加免疫注射後７〜１４日目、動物から採血し、血清を抗体力価についてアッセイする。動物を、力価プラトーに達するまで追加免疫する。好ましくは、動物は、同じ抗原の共役体で追加免疫されるが、異なる架橋結合試薬を通じて共役させられる。共役体はまた、組換え細胞培養において、タンパク質融合物として作製することができる。また、免疫反応を強化するために、ミョウバン等の凝集剤が好適に使用される。
【０２４２】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して、または組換えＤＮＡ法によって、作製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、またはラット、ハムスター、もしくはマカクサル等の他の適切な宿主動物を免疫して、免疫付与に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することが可能である、リンパ球を引き出す。代替的に、リンパ球は、体外で免疫されてもよい。リンパ球は次いで、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、融合されていない親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の材料を好ましくは含有する、好適な培養培地中に播種され、増殖させられる。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含むことになり、それらの材料は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
【０２４３】
好ましい骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの産生を支持し、培地に感受性がある細胞である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生のためにも記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。例示的なマウス骨髄腫株には、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰ−２１およびＭ．Ｃ．−１１マウス腫瘍に由来する株が含まれる、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞が含まれる。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、抗原に対して向けられるモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法によって、または放射免疫測定法（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等の体外結合アッセイによって決定される。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ｂｙ  ＢＩＡｃｏｒｅまたはスキャチャード解析（Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０））によって決定することができる。
【０２４４】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定された後、クローンは、希釈手順を限定することによってサブクローン化し、標準的な方法によって増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的のための好適な培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭＯまたはＲＰＭＩ  １６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍として体内で増殖させることができる。サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、培養培地、腹水液、または血清から、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって、好適に分離される。
【０２４５】
抗体の組換え産生
目的の免疫グロブリンのアミノ酸配列は、直接タンパク質配列決定によって決定することができ、好適なコードヌクレオチド配列は、普遍的コドン表に従って設計することができる。
【０２４６】
代替的に、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、ハイブリドーマ細胞から単離し、配列決定することができる。配列決定は、一般に、目的の遺伝子またはｃＤＮＡの少なくとも一部分の単離を要するであろう。通常、これは、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡをクローン化することを要する。クローン化は、標準的な技法を使用して行われる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｇｕｉｄｅ，Ｖｏｌｓ  １−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、ｃＤＮＡライブラリは、ポリＡ＋ｍＲＮＡ、好ましくは膜結合性ｍＲＮＡの逆転写によって構築することができ、ライブラリは、ヒト免疫グロブリンポリペプチド遺伝子配列に特異的なプローブを使用してスクリーニングされる。好ましい実施形態では、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）は、目的の免疫グロブリン遺伝子セグメント（例えば、軽鎖可変セグメント）をコードするｃＤＮＡ（または完全長ｃＤＮＡの部分）を増幅するために使用される。増幅された配列は、任意の好適なベクター、例えば、発現ベクター、ミニ遺伝子ベクター、またはファージディスプレイベクター中に、容易にクローン化することができる。使用されるクローン化の特定の方法は、目的の免疫グロブリンポリペプチドの何らかの部分の配列を決定することが可能である限り、重大でないことが理解されよう。
【０２４７】
クローン化および配列決定に使用されるＲＮＡのための１つの源は、トランスジェニックマウスからＢ細胞を得、そのＢ細胞を不死化細胞に融合することによって産生される、ハイブリドーマである。ハイブリドーマを使用する利点は、それらが簡便にスクリーニングされ、目的のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマが選択され得ることである。代替的に、ＲＮＡは、免疫動物のＢ細胞（または脾臓全体）から単離することができる。ハイブリドーマ以外の源が使用されるとき、特異的結合特徴を有する免疫グロブリンまたは免疫グロブリンポリペプチドをコードする配列について、スクリーニングすることが望ましい場合がある。かかるスクリーニングのための１つの方法は、ファージディスプレイ技術の使用である。ファージディスプレイは、例えば、Ｄｏｗｅｒら、国際公開第９１／１７２７１号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号、およびＣａｔｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６４５０−６４５４（１９９０）に記載され、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。ファージディスプレイ技術を使用する一実施形態では、免疫されたトランスジェニックマウスからのｃＤＮＡ（例えば、トータル脾臓ｃＤＮＡ）が単離され、ＰＣＲが、免疫グロブリンポリペプチドの一部分、例えば、ＣＤＲ領域をコードするｃＤＮＡ配列を増幅するために使用され、増幅された配列がファージベクター中に挿入される。目的のペプチド、例えば、所望の結合特徴を有する可変領域ペプチドをコードするｃＤＮＡは、パンニング等の標準的な技法によって特定される。増幅またはクローン化核酸の配列が次いで決定される。典型的には、免疫グロブリンポリペプチドの可変領域全体をコードする配列が決定されるが、時には、可変領域の一部分、例えば、ＣＤＲコード部分のみしか、配列決定する必要はない。典型的には、配列決定される部分は、少なくとも３０塩基長となろうが、より頻繁には、可変領域の長さの少なくとも約３分の１、または少なくとも約２分の１をコードする塩基が配列決定されるであろう。配列決定は、ｃＤＮＡライブラリから単離されたクローンに対して、またはＰＣＲが使用されるときは、増幅された配列をサブクローン化した後に、もしくは増幅されたセグメントの直接ＰＣＲ配列決定によって、行うことができる。配列決定は、標準的な技法を使用して行われる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｇｕｉｄｅ，Ｖｏｌｓ  １−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、およびＳａｎｇｅｒ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５４６３−５４６７を参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる）。クローン化核酸の配列を、ヒト免疫グロブリン遺伝子およびｃＤＮＡの公開された配列と比較することによって、当業者は、配列決定される領域に依存して、（ｉ）ハイブリドーマ免疫グロブリンポリペプチドの生殖細胞系セグメント利用（重鎖のアイソタイプを含む）ならびに（ｉｉ）Ｎ−領域付加および体細胞突然変異のプ���セスからもたらされる配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域の配列を容易に決定することができる。免疫グロブリン遺伝子配列情報１つの源は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄである。
【０２４８】
一旦、単離されると、ＤＮＡは、発現制御配列に操作可能に連結されても、または発現ベクター中に配置されてもよく、それは次いで、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞等の宿主細胞中にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞中でのモノクローナル抗体の合成を導く。
【０２４９】
発現制御配列は、特定の宿主生物中での操作可能に連結されたコード配列の発現ために必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に好適な制御配列は、例えば、プロモーター、任意にオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが知られる。
【０２５０】
核酸は、それが別の核酸配列との機能的関係へと配置されるとき、操作可能に連結される。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのためのＤＮＡに操作可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に操作可能に連結され、あるいはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置付けられる場合、コード配列に操作可能に連結される。一般に、操作可能に連結されるとは、連結されているＤＮＡ配列が隣接し、また、分泌リーダーの場合、隣接しておりかつリーディング相にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、隣接していなくてもよい。連結は、好都合な制限部位における連結によって遂行することができる。かかる部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを、従来の実務に従って使用することができる。
【０２５１】
細胞、細胞株、および細胞培養物は、しばしば交換可能に使用され、全てのかかる表記は、子孫を含む。形質転換体および形質転換細胞は、移入の数に関わらず、初代対象細胞およびそれに由来する培養物を含む。全ての子孫は、意図的なまたは偶然の突然変異に起因して、ＤＡＮ量において厳密に同一でない場合があることもまた理解される。元の形質転換細胞についてスクリーニングしたとき、同じ機能または生物学的活性を有する突然変異子孫が含まれる。
【０２５２】
特異的抗体をコードする単離された核酸もまた提供され、任意に、宿主細胞、ベクター、および核酸を含む宿主細胞によって認識される制御配列に操作可能に連結され、また、核酸が発現されるように宿主細胞を培養すること、および任意に、抗体を宿主細胞培養物または培養培地から回収することを含んでもよい、抗体の産生のための組換え技法。
【０２５３】
多様なベクターが当該技術分野で既知である。ベクター構成成分は、次のうちの１つ以上を含む可能性がある：シグナル配列（例えば、抗体の分泌を導くことができる）、複製の起源、１つ以上の選択マーカー遺伝子（例えば、抗体もしくは他の薬物抵抗性を与え、栄養要求不全を補完し、または培地中で入手可能でない必要不可欠な栄養分を供給することができる）、エンハンサー要素、プロモーター、および転写終結配列（これらの全ては、当該技術分野で周知である）。
【０２５４】
好適な宿主細胞には、原核生物、酵母、または高等真核細胞が含まれる。好適な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物等の真正細菌、例えば、エシェリキア属、例えば、大腸菌、エンテロバクター菌、エルウィニア菌、クレブシエラ菌、プロテウス菌、サルモネラ属、例えば、ネズミチフス菌、セラチア属、例えば、セラチア菌、および赤痢菌等の腸内細菌科、ならびに枯草菌およびＢ．リケニホルミス菌等のバチルス属、緑膿菌属、ならびにストレプトミセス属が含まれる。原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローン化または発現宿主である。出芽酵母、または一般的なパン酵母は、下等真核宿主微生物の中でも最も一般的に使用される。しかしながら、ピチア属、例えば、Ｐ．パストリス、シゾサッカロミセス・ポンベ；クルイベロミセス、ヤロウイア；カンジダ；トリコデルマレーシア；ニューロスポーラ・クラッサ；シュワンニオミセス・オシデンタリス等のシュワンニオミセス属；および例えば、ニューロスポーラ属、アオカビ属、トリポクラジウム属等の糸状菌、ならびにＡ．ニデュランスおよびＡ．ニガー等のアスペルギルス宿主等の、幾つかの他の属、種、および株が、一般的に利用可能である。
【０２５５】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株および変異体、ならびにヨトウガ（毛虫）、ネッタイシマカ（蚊）、ヒトスジシマカ（蚊）、キイロショウジョウバエ（ミバエ）、およびカイコガ等の宿主からの対応する許容昆虫宿主細胞が、特定されている。かかる細胞のトランスフェクションのための多様なウイルス株、例えば、キンウワバ科ＮＰＶのＬ−Ｉ変異体およびカイコガＮＰＶのＢｍ−５株が、一般に入手可能である。
【０２５６】
しかしながら、興味は、脊椎動物細胞において最大となっており、培養物（組織培養物）中での脊椎動物細胞の繁殖は、日常的となっている。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＣＨＯＫＩ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ６１）およびチャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＤＸＢ−１１、ＤＧ−４４；Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣細胞；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓株（懸濁培養物中での増殖のためにサブクローン化された２９３または２９３細胞、［Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）］；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（ＷＩ３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝癌細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ  ５細胞；およびＦＳ４細胞である。
【０２５７】
宿主細胞は、多様な培地中で培養することができる。Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（（ＭＥＭ），（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（（ＤＭＥＭ），Ｓｉｇｍａ）等の市販の培地が、宿主細胞を培養するのに好適である。加えて、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、第４，９２７，７６２号、第４，５６０，６５５号、または第５，１２２，４６９号、国際公開第９０１０３４３０号、国際公開第８７／００１９５号、または米国特許第３０，９８５号に記載される培地のうちのいずれも、宿主細胞のための培養培地として使用することができる。これらの培地のうちのいずれも、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩等）、緩衝液（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗体（ゲンタマイシン（商標）薬等）、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、ならびにブドウ糖または同等のエネルギー源で、必要に応じて補充することができる。当業者に既知であろう任意の他の必要な栄養補充剤もまた、適切な濃度で含めることができる。温度、ｐＨ等の培養条件は、発現のために選択された宿主細胞と共に以前に使用されたものであり、当業者に明らかとなろう。
【０２５８】
抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、あるいは好ましくは、親和性リガンドとして目的の抗原またはプロテインＡもしくはプロテインＧを使用した親和性クロマトグラフィーを使用して、精製することができる。プロテインＡを使用して、ヒトガンマ１、ガンマ２、またはガンマ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３））。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプのため、およびヒトガンマ３のために推奨される（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０  ＥＭＢＯ  Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースにより達成され得るそれらよりも早い流速および短いプロセシング時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，２５  ＮＪ．）が精製に有用である。エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿等のタンパク質精製のための他の技法もまた、回収対象の特異的結合剤または抗体に依存して可能である。
【０２５９】
抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体の断片は、それらが完全長抗体の所望の親和性を保持する限り、本発明の方法における使用に好適である。故に、抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体の断片は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３受容体タンパク質に結合する能力を保持するであろう。抗体の断片は、完全長抗体の一部分、一般にはその抗原結合または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、ならびに１本鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「１本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片とは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む断片が意図され、ここでこれらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、第５，２６０，２０３号、第５，４５５，０３０号、および第５，８５６，４５６号を参照されたく、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーを更に含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，ｅｄ．Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．），ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。
【０２６０】
抗体または抗体断片は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載される技法を使用して生成される抗体ファージライブラリから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７は、ファージライブラリを使用した、それぞれ、マウスおよびヒト抗体の単離を記載している。後続の刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、ならびに非常い大きいファージライブラリを構築するための戦略としてコンビナトリアル感染および体内組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）を記載している。故に、これらの技法は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技法に対する実行可能な代替手段である。
【０２６１】
ヒト化抗体は、非ヒトである源からその中に導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「ドナー」残基と称され、それは典型的に「ドナー」可変ドメインから採られる。ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）の方法に従って、ヒト抗体の対応する配列の代わりに齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で置換することによって、本質的に行うことができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，８５９，２０５号を参照されたい。したがって、かかる「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインよりも実質的に少ないもの（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ  ａｎ  ｉｎｔａｃｔ  ｈｕｍａｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ）が、非ヒト種からの対応する配列によって置換された抗体を含んでもよい。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、幾つかのＣＤＲ残基および潜在的に幾つかのフレームワーク残基が齧歯類抗体中の類似した部位からの残基によって置換される、ヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，８５９，２０５号を参照されたい。
【０２６２】
種々の技法が、抗体断片の産生のために開発されている。伝統的に、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク質分解消化を介して誘導されていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、今では、組換え宿主細胞によって直接に産生することができる。例えば、抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直接に回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接に単離することができる。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者に明らかとなろう。
【０２６３】
代替的に、低減された免疫原性反応を有するタンパク質を産生するための方法を使用して、本発明の方法における使用に好適な抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体を生成してもよい。例えば、国際公開第９８／５２９７６号に開示される方法を参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる。かかる方法を使用して生成される抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体は、本明細書で使用される「抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体」という用語によって包含される。
【０２６４】
更に、前述の抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体のうちのいずれも、本発明の方法における使用前に共役させられてもよい。かかる共役抗体は、当該技術分野で入手可能である。故に、抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体は、間接標識法または間接標識アプローチを使用して標識されてもよい。「間接標識法」または「間接標識アプローチ」とは、キレート剤が、抗体に共有結合され、少なくとも１つの放射性核種が、キレート剤に挿入されることが意図される。例えば、Ｓｒｉｖａｇｔａｖａ  ａｎｄ  Ｍｅａｓｅ（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．１８：５８９−６０３に記載されるキレート剤および放射性核種を参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる。代替的に、抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体は、「直接標識法」または「直接標識アプローチ」を使用して標識されてもよく、ここで放射性核種は、抗体に直接に共有結合される（典型的にはアミノ酸残基を介して）。好ましい放射性核種は、上記のＳｒｉｖａｇｔａｖａ  ａｎｄ  Ｍｅａｓｅ（１９９１）に提供される。間接標識アプローチが、特に好ましい。
【０２６５】
一般的投与
一態様では、本発明は、本発明によるＰＩ３Ｋの阻害物質を含む薬学的組成物、および薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を、同じまたは別個のビヒクル中で投与される抗体と組み合わせて提供する。ある種の他の具体的な実施形態では、投与は、具体的に、経口経路による。本発明の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の純粋な形態でまたは適切な薬学的組成物中での投与は、同様の有用性を提供するための許容される投与様式および薬剤を介して、行うことができる。故に、投与は、例えば、経口的、経鼻的、非経口的（静脈内、筋肉内、または皮下）、局所的、経皮的、膣内、膀胱内、大槽内、または直腸的であり、例えば、錠剤、座剤、丸薬、軟質カプセルおよび硬質ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、またはエアロゾル等の固体、半固体、凍結乾燥粉末の形態、または液体剤形で、特に、正確な投薬量の単純投与に好適な単位剤形であり得る。膠芽腫を含む脳の癌を治療するとき、投与は、具体的に、化学療法薬（特にＢＣＮＵ）を含有する分解性物質であるグリアデルを、手術中、脳腫瘍の中に直接に配置することであってもよい。
【０２６６】
組成物は、式ＩまたはＩａの化合物を、その／１つの活性剤として含むことになり、従来の薬学的担体または賦形剤を含む可能性があり、加えて、癌に対して治療されている患者に一般に投与される他の薬用品および医薬品を含んでもよい。
【０２６７】
アジュバントには、保存剤、湿潤剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、乳化剤、および調合剤が含まれる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等によって確実にすることができる。また、等張剤、例えば、糖類、塩化ナトリウム等を含むことが望ましい場合もある。注射用剤型の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の使用によってもたらすことができる。
【０２６８】
所望される場合、本発明の薬学的組成物はまた、例えば、クエン酸、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、ブチル化ヒドロキシトルエン等の、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、酸化防止剤等の少量の補助材料を含有してもよい。
【０２６９】
製剤の選択は、薬物投与様式（例えば、経口投与のために、錠剤、丸薬、またはカプセルの形態での製剤）および薬物材料の生物学的利用能等の、種々の要因に依存する。近年、特に、良好でない生物学的利用能を示す薬剤のために、表面積を増加させることによって、すなわち粒径を減少させることによって、生物学的利用能を増加させることができるという原則に基づいて、薬学的製剤が開発されている。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、活性物質が巨大分子の架橋マトリックスに支持された、１０〜１，０００ｎｍの範囲のサイズの粒子を有する薬学的製剤を記載している。米国特許第５，１４５，６８４号は、薬剤材料が表面改質剤の存在下でナノ粒子（平均粒径４００ｎｍ）に微粉砕され、次いで、著しく高い生物学的利用能を示す薬学的製剤をもたらすように液体媒体中に分散された薬学的製剤の製造を記載している。
【０２７０】
非経口注射に好適な組成物は、生理的に許容される水性または非水性の滅菌水溶液もしくは無水溶液、分散液、懸濁液、または乳剤、および滅菌注射用溶液もしくは分散液中に再構成するための滅菌粉末を含んでもよい。好適な水性もしくは非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、および注射用有機エステル、（オレイン酸エチル等）が挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合には要求される粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０２７１】
１つの具体的な投与経路は、治療対象の病状の重症度に従って調整することができる、好都合な毎日の投薬レジメンを使用する経口である。
【０２７２】
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、粉剤、および顆粒が含まれる。かかる固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム等の少なくとも一の不活性の慣習的な賦形剤（または担体）、または（ａ）例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、ブドウ糖、マンニトール、およびケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、（ｂ）例えば、セルロース誘導体、デンプン、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシアガム等の結合剤、（ｃ）例えば、グリセロール等の湿潤剤、（ｄ）例えば、寒天、炭酸カルシウム、ポテトもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、クロスカルメロースナトリウム、複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）例えば、パラフィン等の溶解抑制剤、（ｆ）例えば、四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコール、およびモノステアリン酸グリセロール、ステアリン酸マグネシウム等の湿潤剤、（ｈ）例えば、カオリンおよびベントナイト等の吸着剤、ならびに（ｉ）例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、またはそれらの混合物と混和される。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、剤形はまた、緩衝剤を含んでもよい。
【０２７３】
上述の固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティング、ならびに当該技術分野で周知の他のものを用いて調製することができる。それらは、鎮静剤を含有してもよく、また、それらが、遅延様式で、腸管のある部分で活性化合物（単数または複数）を放出するような組成でもあり得る。使用することができる包埋組成物の例は、ポリマー材料およびワックスである。活性化合物はまた、適切である場合、上述の賦形剤のうちの１つ以上と共に、マイクロカプセル封入型にすることができる。
【０２７４】
経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。かかる剤形は、例えば、本発明の化合物（複数可）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、およびに任意の薬学的アジュバントを、水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール等の担体；エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド等の可溶化剤および乳化剤；綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油等の油；グリセロール；テトラヒドロフルフリルアルコール；ポリエチレングリコール類；ならびにソルビタンの脂肪酸エステル；またはこれらの材料の混合物等に溶解または分散させること等によって、溶液または懸濁液を形成することにより調製される。
【０２７５】
活性化合物に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカント、またはこれらの材料の混合物等の懸濁剤を含んでもよい。
【０２７６】
直腸投与のための組成物は、例えば、本発明の化合物を、通常の温度では固体であるが、体温では液体であり、したがって好適な体腔内で溶解し、そこで活性構成成分を放出する、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、または座剤ワックス等の好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製することができる座剤である。
【０２７７】
本発明の化合物の局所投与のための剤形には、軟膏、粉末、スプレー、および吸入剤が含まれる。活性構成成分は、滅菌条件下で、生理的に許容される担体、および必要に応じて任意の保存料、緩衝液、または噴霧剤と混和される。眼用製剤、眼用軟膏、粉末、および溶液もまた、本発明の範囲内に入ることが企図される。
【０２７８】
圧縮ガスを使用して、本発明の化合物をエアロゾル形態で分散させてもよい。この目的に好適な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素等である。
【０２７９】
一般に、意図される投与様式に依存して、薬学的に許容される組成物は、本発明の化合物（複数可）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を約１重量％〜約９９重量％、ならびに好適な薬学的賦形剤を９９重量％〜１重量％含有するであろう。一例では、組成物は、本発明の化合物（複数可）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が約５重量％〜約７５重量％であり、残りが好適な薬学的賦形剤である。
【０２８０】
かかる剤形を調製するための実際の方法は、当業者に既知であるか、または明らかとなり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）を参照されたい。投与対象の組成物は、いずれにせよ、本発明の教示に従った病状の治療のために、治療上有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含有するであろう。
【０２８１】
本発明の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、用いられる具体的な化合物の活性、化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食生活、投与様式および時間、排泄率、薬物の組み合わせ、特定の病状の重症度、および治療を経ている宿主を含む多様な要因に依存して異なるであろう、治療上有効量で投与される。本発明の化合物は、患者に、１日当たり約０．１〜約１，０００ｍｇの範囲の投薬レベルで投与することができる。約７０キログラムの体重を有する正常なヒトの成人について、１日につき体重１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇの範囲の投薬量が例である。しかしながら、使用される具体的な投薬量は異なる可能性がある。例えば、投薬量は、患者の必要性、治療されている病態の重症度、および使用されている化合物の薬理学的活性を含む幾つかの要因に依存し得る。特定の患者のために最適な投薬量の決定法は、当業者に周知である。
【０２８２】
固定された用量として製剤化される場合、かかる組み合わせ製品は、本発明の化合物を上述の投薬量範囲内で、および他の薬学的活性剤（複数可）をその承認された投薬量範囲内で用いる。本発明の化合物は、代替的に、併用製剤が不適切であるときには既知の薬学的に許容される薬剤（複数可）と順次使用されてもよい。
【０２８３】
式ＩまたはＩａの化合物を含有する代表的な薬学的製剤は、薬学的組成物実施例において後述される。
【０２８４】
ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ−２キナーゼ／キナーゼ受容体の阻害物質は、上述のように、薬学的に許容される賦形剤を使用して、経口または非経口投与のために固体または液体形態へと製剤化することができる。機能性核酸を投与するための方法および剤形は、容易に知られ、例えば、これらは、問題の機能性核酸を投与する様式のために具体的に設計される滅菌水性試薬に製剤化されてもよい。本発明の一実施形態では、機能性核酸は、プロドラッグの形態であってもよい。オリゴヌクレオチドは、効力として、負電荷性イオンである。細胞膜の親油性性質に起因して、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みは、中性または親油性同等物と比較して低減される。この極性「妨害」は、プロドラッグアプローチを使用することによって回避することができる。このアプローチにおいて、オリゴヌクレオチドは、投与されるときオリゴが中性であるように、保護された様態で調製される。これらの保護基は、それらが除去され得、次いでオリゴが細胞によって取り込まれるような方法で設計される。かかる保護基の例としては、Ｓ−アセチルチオエチル（ＳＡＴＥ）またはＳ−ピバロイルチオエチル（ｔ−ブチル−ＳＡＴＥ）がある。これらの保護基は、ヌクレアーゼ抵抗性であり、細胞内で選択的に除去される。
【０２８５】
機能性核酸は、意図される標的部位への送達を促進し、機能性核酸の活性を強化するために、すなわち、機能性核酸の細胞取り込みを増加させるために、リガンド／共役体に連結することができる。この共役は、末端位置５’／３’−ＯＨで起こる可能性があるが、リガンドはまた、糖および／または塩基で起こる場合もある。共役体／リガンドの他の例としては、コレステロール部分、リポソーム、中性脂質、アクリジン、ポリ−Ｌ−リジン等の二重鎖挿入剤、１つ以上のヌクレアーゼ抵抗性結合基での「末端キャッピング」がある。
【０２８６】
幾つかの実施形態では、機能性核酸は、２つ以上の異なる機能性核酸を含む可能性がある。薬学的に許容される結合剤およびアジュバントは、製剤化された薬物の一部を含んでもよい。例えば、カプセル、錠剤、丸薬等は、次の化合物を含有してもよい：結合剤として微晶質セルロース、ガムまたはゼラチン；賦形剤としてデンプンまたはラクトース；滑沢剤としてステアリン酸；および種々の甘味剤または香味剤。カプセルについては、投薬単位は、脂肪油等の液体担体を含有してもよい。同様に、糖のコーティングまたは腸溶性薬剤が、投薬単位の一部であってもよい。オリゴヌクレオチド製剤はまた、ミセル乳剤を形成する、活性薬学的成分と脂質との乳剤であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、所望の作用を損なわない任意の物質と、または所望の作用を補充する物質と混合されてもよい。これらには、他のヌクレオチド化合物を含む他の薬物が含まれる可能性がある。
【０２８７】
非経口、皮下、皮内、または局所投与については、製剤は、滅菌希釈剤、緩衝液、張性の調節剤、および抗菌剤を含んでもよい。機能性核酸は、身体からの分解または即時の排除、例えば、アンチヌクレアーゼ（ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｓｅ）活性から保護する、制御放出特性を有するインプラントまたはマイクロカプセルを含む、担体と共に調製されてもよい。静脈内投与については、好ましい担体は、生理食塩水またはリン酸塩緩衝食塩水である。好ましくは、機能性核酸は、治療される患者における重大な副作用を引き起こすことなく、患者に治療上有効量を送達するために十分な量で、薬学的に許容される担体または希釈剤中等の単位製剤中に含まれる。
【０２８８】
本発明の式Ｉの化合物と共投与される機能性核酸は、局所治療それとも全身治療が所望されるか、および治療対象の領域に依存して、幾つかの方法で投与することができる。投与は、次のものであってもよい：（ａ）経口投与、（ｂ）例えば、噴霧器によるものを含む、粉末またはエアロゾルの吸入もしくは吹送による、肺投与、（ｃ）上皮投与、経皮投与、点眼、ならびに膣および直腸送達を含む粘膜への投与を含む、局所投与（ｄ）静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内注射もしくは注入を含む、非経口投与、あるいは（ｅ）頭蓋内投与、例えば、髄腔内または脳室内投与。一実施形態では、活性オリゴは、ＩＶ、ＩＰ、経口で、局所的に、ボーラス注射として投与されるか、または標的臓器に直接に投与される。幾つかの実施形態では、機能性核酸は、定位的（ｓｔｅｒｅａｏｔａｃｔｉｃ）注射を介して罹患組織中に直接に、または腫瘍内注射を介してＣＴスキャン、ＰＥＴ走査デバイス、およびＭＲＩ走査デバイス等の走査デバイスの補助を用いてもしくは用いずに、投与される。非経口、髄腔内、または腫瘍内投与のための組成物および製剤は、滅菌水溶液を含んでもよく、滅菌水溶液はまた、緩衝液、希釈剤、ならびに浸透増強剤、担体化合物、および他の薬学的に許容される担体または賦形剤等であるが、これらに限定されない他の好適な添加物を含有してもよい。
【０２８９】
本発明の抗体は、癌患者に、任意の標準的な医学的に許容される方法で投与することができる。かかる組成物は、単位用量で好都合に投与されてもよく、薬学技術分野で既知の方法に従って調製されてもよい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．，（１９８０））を参照されたい。「単位用量」という用語により、ヒト等の霊長類のための単位の投薬（ｕｎｉｔａｒｙ  ｄｏｓａｇｅ）として好適な、物理的に個別的な単位で用いられる本発明の治療組成物が意図され、この各単位は、要求される希釈剤または担体に関連して所望の治療効果を生み出すように算出される、既定の量の活性物質を含有する。単位用量は、治療対象の癌のタイプおよび重症度、被検体の血液が抗体を送達する能力、許容し得ない副作用を伴わずに患者が十分に高い用量を許容する能力を含む、多様な要因に依存するであろう。投与対象の抗体の正確な量は、典型的に、開業医の判断によって、高用量から、同等の殺腫瘍性活性を有する許容可能な低用量まで典型的に滴定して導かれるであろうが、単位用量は、一般に、投与経路に依存し、１日当たり１０ｎｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、より典型的には、１日当たり１００ｎｇ／ｋｇ体重〜約４０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であろう。追加免疫投与のための好適なレジメンもまた異なり得るが、典型的には、最初の投与に続いて、反復用量が、１時間以上の間隔をおいて、後続の注射または他の投与により与えられる。代替的に、連続的または間欠的静脈内注入は、少なくとも約１０ナノモル〜１０マイクロモルの抗体の血中濃度を維持するために十分に与えられてもよい。
【０２９０】
キット
幾つかの実施形態では、本発明は、次のものを含む第１の容器を含む、癌治療組成物を調製するためのキットを提供する：（ａ）治療上有効量の式Ｉの化合物、（ｂ）抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体等の治療上有効量の抗体の溶液を含む（代替的に凍結乾燥形態で）第２の容器、（ｃ）任意に、１つ以上の薬品送達デバイス、例えば、シリンジ等、（ｄ）任意に、抗ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３抗体を再懸濁するための希釈剤、ならびに（ｅ）患者における癌の治療のための組成物を調製するための一連の指示書。
【０２９１】
用途
式Ｉの化合物は、国際公開第２００７０４４７２９号の生物学的実施例１に記載されるアッセイを使用して試験され、ＰＩ３Ｋ阻害物質であることが決定されている。したがって、式Ｉの化合物は、疾患、特に、ＰＩ３Ｋ活性が疾患の病理および／または総体的症状に寄与する癌を治療するために有用である。例えば、ＰＩ３Ｋ活性が病理および／または総体的症状に寄与する癌には、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮体癌、胃癌、膠芽腫、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、および甲状腺癌等が含まれる。
【０２９２】
幾つかの実施形態では、代償性キナーゼ経路を特定するための方法を使用して、新規の癌治療を設計することができる。例えば、一実施形態では、本発明は、ＰＩ３Ｋ阻害物質の効果を減弱する癌細胞中の代償性キナーゼ経路を特定するための方法を提供する。本方法は、次のステップを含む：
（ａ）癌細胞を、式Ｉの化合物を含む組成物に接触させること、（ｂ）癌細胞の混合物を、組成物の存在または不在下でインキュベートすること、（ｃ）複数のキナーゼ酵素の発現を、組成物の存在または不在下で測定すること、および（ｄ）試験されたキナーゼ酵素の群内のキナーゼ酵素が、式Ｉの化合物を含有する組成物の不在下でインキュベートされた癌細胞中のキナーゼ酵素と比較したとき、キナーゼ発現またはキナーゼ活性のいずれかにおける増加を示すかどうかを決定すること。キナーゼ酵素活性または発現における増加が見出される場合、特定されたキナーゼ酵素は、ＰＩ３Ｋ阻害物質の効果を減弱する代償性キナーゼ経路に関与している特定キナーゼ酵素の指標である。
【０２９３】
化合物によるＰＩ３Ｋ活性およびその阻害を測定するための好適な体外アッセイは既知である。典型的には、アッセイは、ＰＩ３Ｋ誘導型ＡＴＰ消費を測定するであろう。ＰＩ３Ｋ活性を測定するための体外アッセイの更なる詳細については、下記の生物学的実施例、実施例１を参照されたい。細胞活性は、国際公開第２００７０４４７２９号の生物学的実施例２、３、および４に記載されるアッセイを使用して決定することができる。癌の好適な体内モデルは、当業者に既知である。体内アッセイの更なる詳細については、国際公開第２００７０４４７２９号の生物学的実施例５〜１０を参照されたい。式Ｉの化合物の、抗癌剤と組み合わせた投与を説明する実施例は、国際公開第２００７０４４７２９号の生物学的実施例１１〜１４に記載される。本明細書に開示される例、ならびに当該技術分野で開示される例に従って、当業者は、式Ｉの化合物および抗癌剤のどの組み合わせが、癌を治療するために有効であろうかを決定することができる。
【０２９４】
中間体および式Ｉの化合物の調製
本発明の化合物は、国際公開第２００７／０４４７２９号および国際公開第２００８／１２７５９４号に記載される合成手順によって作製することができ、それらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２９５】
これらの化合物を調製する際に使用される出発物質および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）もしくはＢａｃｈｅ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，Ｃａｌｉｆ．）等の商業的供給業者から入手可能であるか、またはＦｉｓｈｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−１７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）、Ｒｏｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４０（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１），Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、およびＬａｒｃｈ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＩＣＨＹ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）等の参考文献に述べられる手順に従った、当該技術分野で既知の方法によって調製されるかのいずれかである。これらのスキームは、本発明の化合物を合成することができる幾つかの方法を例証するものにすぎず、これらのスキームに対する種々の修正がなされ得、本開示を参照したとき当業者に示唆されるであろう。反応の出発物質および中間体は、所望される場合、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィー等を含むが、これらに限定されない、従来の技法を使用して、単離および精製されてもよい。かかる物質は、物理定数およびスペクトルデータを含む従来の手段を使用して特徴付けられてもよい。
【０２９６】
反対の規定がない限り、本明細書に記載される反応は、大気圧で、約−７８℃〜約１５０℃、別の実施形態では約０℃〜約１２５℃の温度範囲、より具体的には、約２０℃の室温（周囲温度）で起こる。別途定めのない限り（水素化の場合のように）、全ての反応は、窒素の大気下で行われる。
【０２９７】
プロドラッグは、当業者に既知の技法によって調製することができる。これらの技法は、一般に、所与の化合物中の適切な官能基を修飾する。これらの修飾された官能基は、日常的な操作によって、または体内で、元の官能基を再生する。本発明の化合物のアミドおよびエステルは、従来の方法に従って調製されてもよい。プロドラッグの完全な考察は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ｖｏｌ  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓに、およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７に提供され、これらの両方は、参照により全目的で本明細書に組み込まれる。
【０２９８】
本発明の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩は、それらの構造中に不斉炭素原子または四級化窒素原子を有してもよい。本明細書に記載される合成を通じて調製され得る式Ｉの化合物は、単一の立体異性体、ラセミ体として、ならびに鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物として存在してもよい。化合物はまた、幾何異性体として存在してもよい。全てのかかる単一の立体異性体、ラセミ体、およびそれらの混合物、ならびに幾何異性体は、本発明の範囲内にあることが意図される。本発明の化合物のうちの幾つかは、互変異性体として存在してもよい。例えば、ケトンまたはアルデヒドが存在する場合、分子は、エノール型で存在してもよく、アミドが存在する場合、分子は、イミド酸として存在してもよく、またエナミンが存在する場合、分子は、イミンとして存在してもよい。全てのかかる互変異性体は、本発明の範囲内にある。
【０２９９】
特に、本出願において、Ｂは、２−ヒドロキシ−ピリジニルであり得、それはまた、その構造：
【化１０】
2013539453.tif 000160
としても説明される。
２−ヒドロキシ−ピリジニルおよび上記の構造１４の両方は、ピリジン−２（１Ｈ）−オンおよびその構造１５：
【化１１】
2013539453.tif 000161
を含み、かつそれと同等である。
どの構造またはどの用語が使用されるかに関わらず、各互変異性体は本発明の範囲内に含まれる。
【０３００】
本発明はまた、式Ｉの化合物のＮ−オキシド誘導体および保護された誘導体を含む。例えば、式Ｉの化合物が酸化性の窒素原子を含有するとき、窒素原子は、当該技術分野で周知の方法によってＮ−オキシドに変換することができる。式Ｉの化合物が、ヒドロキシ、カルボキシ、チオール等の基、または窒素原子（複数可）を含有する任意の基を含有するとき、これらの基は、「保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ）基」または「保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）基」で保護することができる。好適な保護基の包括的な一覧は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９１に見出すことができ、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。式Ｉの化合物の保護された誘導体は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができる。
【０３０１】
ラセミ混合物もしくは非ラセミの混合物からの単一の立体異性体の調製ならびに／またはその分離および単離のための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、光学的活性Ｒ異性体およびＳ異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製されても、従来の技法を使用して分割されてもよい。鏡像異性体（Ｒ異性体およびＳ異性体）は、例えば、次のような、当業者に既知の方法によって分割されてもよい：例えば、結晶化によって分離され得るジアステレオマー塩もしくは複合体の形成、例えば、結晶化によって；１つの鏡像異性体の鏡像異性体特異的試薬との選択的反応、例えば、酵素的酸化もしくは還元、続いて修飾された、および修飾されていない鏡像異性体の分離によって分離され得るジアステレオマー誘導体の形成を介して；またはキラル環境下、例えば、結合したキラルリガンドを有するシリカ等のキラル支持体上、もしくはキラル溶媒の存在下での、ガス−液体もしくは液体クロマトグラフィー。所望の鏡像異性体が、上述の分離手順のうちの１つによって別の化学主体に変換される場合、所望の鏡像異性型を遊離させるために、更なるステップが要求され得ることが理解されよう。代替的に、具体的な鏡像異性体は、光学的に活性な試薬、基質、触媒、もしくは溶媒を使用した不斉合成によって、または不斉形質転換によって鏡像異性体上で他方に変換することによって合成されてもよい。特定の鏡像異性体で富化された鏡像異性体の混合物については、主要な構成成分の鏡像異性体が、結晶化によって更に富化（同時に収率は減少する）されてもよい。
【０３０２】
加えて、本発明の化合物は、非溶媒和型、ならびに水、エタノール等の薬学的に許容される溶媒との溶媒和型で存在することができる。一般に、溶媒和型は、本発明の目的のために、非溶媒和型と同等であると見なされる。
【０３０３】
式Ｉ：
【化１２】
2013539453.tif 000162
の化合物において、
−ＮＨＳ（Ｏ）２−基上の水素は、強酸性である。故に、式Ｉの化合物に至る中間体、ならびに式Ｉの化合物自体は、Ｂ環上での置換および反応条件に依存して、非荷電もしくは双性分子、またはナトリウムもしくはカリウムのようなカチオン塩として回収することができる。後に続く例において、別途明記されない限り、化合物の最終形態は、さもなければ決定していたであろう分析技法の不在下で、非荷電分子であることを想定した。
【０３０４】
式Ｉの化合物は、当業者に既知の方法を使用して調製することができる。別の実施形態では、１８０℃で、Ｋ２ＣＯ３および金属銅等の塩基の存在下での適切な試薬の融合は、式１の中間体を提供することが知られる（Ｓ．Ｈ．Ｄａｎｄｅｇａｏｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｋ．Ｍｅｓｔａ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９６５，８，８８４を参照されたい）。
【０３０５】
代替的に、式３の中間体は、下のスキームに従って調製することができ、式中、各ＬＧ１は、脱離基（一実施形態ではハロ、別の実施形態ではクロロ）であり、全ての他の基は、詳細な説明に定義される通りである。
スキーム１
【化１３】
2013539453.tif 000163
【０３０６】
スキーム１において、式３の中間体は、市販の２，３−ジクロロキノキサリンおよび式２の中間体（それらは、市販されているか、または当業者によって調製することができる）、ＤＭＦまたはＤＭＳＯ等の溶媒中のＫ２ＣＯ３等の塩基を簡潔に加熱することによって調製することができる。完了すると（約２時間）、反応混合物を次いで、水中に注ぎ、続いて２Ｎ  ＨＣｌを注ぐ。産物を次いで、酢酸エチル等の溶媒中に抽出し、水およびブラインで洗浄する。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウム等の乾燥剤上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮する。
【０３０７】
式３の中間体を次いで、式４の中間体で、ＤＭＦまたはｐ−キシレン等の溶媒中、還流温度で処置する。反応が完了すると（約１６時間以下）、反応物を冷却させ、ＤＣＭ中に抽出し、２Ｎ  ＨＣｌおよびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウム等の乾燥剤上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、式Ｉの化合物を得る。
【０３０８】
代替的に、キノキサリン誘導体を調製するための他の方法は、当業者に既知であり、Ｓ．Ｖ．Ｌｉｔｖｉｎｅｎｋｏ，Ｖ．Ｉ．Ｓａｖｉｃｈ，Ｄ．Ｄ．Ｂｏｂｒｏｖｎｉｋ，Ｃｈｅｍ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｏｍｐｄ．（Ｅｎｇｌ．Ｔｒａｎｓｌ），１９９４，３０，３４０およびＷ．Ｃ．Ｌｕｍｍａ，Ｒ．Ｄ．Ｈａｒｔｍａｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９８１，２４，９３を含むが、これらに限定されない。
【０３０９】
ＢがＲ３ａで置換されるフェニルであり、ここでＲ３ａがアルキルアミノまたはジアルキルアミノであるか、あるいはＢがＲ３で置換されるヘテロアリールであり、ここでＲ３がアミノ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノであり、全ての他の基が要約に既定される通りである、式Ｉの化合物は、スキーム２に従って調製することができる。
スキーム２
【化１４】
2013539453.tif 000164
ＬＧは、クロロ等の脱離基である。５は、ＮＨＲａＲｂまたはＨＯ−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＮＨＲａＲｂと反応させられ、ここでＲａおよびＲｂは独立して、水素またはアルキルである。反応は、ＫＨＣＯ３等の塩基の存在下において、ＤＭＦ等の溶媒中で行う。
【０３１０】
ＢがＲ３ａで置換されるフェニルであり、ここでＲ３ａがアミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであるか、あるいはＢがＲ３で置換されるヘテロアリールであり、ここでＲ３がアミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであり、全ての他の基が要約に既定される通りである、式Ｉの化合物は、スキーム３に従って調製することができる。
スキーム３
【化１５】
2013539453.tif 000165
反応は、ＮａＨ等の塩基の存在下において、ＤＭＦ等の溶媒中で行う。
【０３１１】
ＢがＲ３ａで置換されるフェニルであるか、またはＢがＲ３で置換されるヘテロアリールであり、ここでＲ３ａおよびＲ３が、
ｉ．−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）（ここでＲ７、Ｒ７ａ、およびＲ７ｂは、要約に既定される通りである）であるか、
ｉｉ．−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ（ここでＲ９は、要約に既定される通りである）であるか、
ｉｉｉ．−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂ（ここでＲ１１ａ、Ｒ１１ａ、およびＲ１１ｂは、要約に既定される通りである）であるか、
ｉｖ．−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ（ここでＲ１３およびＲ１３ａは、要約に既定される通りである）であるか、
ｖ．−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ（ここでＲ１８、Ｒ１８ａ、およびＲ１８ｂは、要約に既定される通りである）であるか、
ｖｉ．−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａ（ここでＲ２０およびＲ２０ａは、要約に既定される通りである）であるか、
ｖｉｉ．−ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒ２１ａ（ここでＲ２１、Ｒ２１ａ、およびＲ２１ｂは、要約に既定される通りである）であるか、
ｖｉｉｉ．−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）（ここでＲ２２、Ｒ２２ａおよびＲ２２ｂは、要約に既定される通りである）であるか、
ｉｘ．−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａ（ここでＲ２４およびＲ２４ａは、要約に既定される通りであり、
かつここでＲ３およびＲ３ａにおけるアルキレンが独立して、要約に記載されるように任意に置換される、式Ｉの化合物は、スキーム４に従って、次の式９（ａ）、９（ｂ）、９（ｃ）、９（ｄ）、９（ｅ）、９（ｆ）、または９（ｇ）の中間体と反応させることによって調製することができる：
９（ａ）      ＨＯＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）（ここでＲａは、Ｒ７ａであるか、またはＢｏｃもしくはＦｍｏｃ等のＮ−保護基である）、
９（ｂ）      ＨＯＣ（Ｏ）Ｒ９ａ、
９（ｃ）      ＨＯＣ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂ、
９（ｄ）      ＨＯＣ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、
９（ｅ）      ＨＯＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、
９（ｆ）      ＨＯＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａ、
９（ｇ）      ＬＧ−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒａ（ここでＲａは、Ｒ２１ａであるか、またはＢｏｃもしくはＦｍｏｃ等のＮ−保護基である）。
スキーム４
【化１６】
2013539453.tif 000166
スキーム４におけるＲ１００は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａ、または−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒａである。反応は、当業者に既知の標準的なアミドカップリングの条件下で行う。特に、反応は、ＨＡＴＵ等のカップリング剤、ＤＩＥＡ等の塩基の存在下において、ＤＭＦ等の溶媒中で行う。該当する場合、Ｎ−保護基を次いで、ＰＧがＢｏｃである酸での処置等の、当業者に既知の手順を使用して除去する。
【０３１２】
スキーム４について記載されるように進行して、ＢがＲ３ａで置換されるフェニルであるか、またはＢがＲ３で置換されるヘテロアリールであり、ここでＲ３ａおよびＲ３は、
ａ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａであるか、
ｂ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであるか、
ｃ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２（ここでＲ１２は、Ｎ−置換されるヘテロシクロアルキルである）であるか、
ｄ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）であるか、
ｅ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａであるか、または
ｆ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａであるか、あるいは
本発明の化合物は、必要に応じて出発物質を交換することによって調製することができる。特に、式１１：
【化１７】
2013539453.tif 000167
の中間体
は、８の代わりに使用される。
【０３１３】
ＢがＲ３ａで置換されるフェニルであるか、またはＢがＲ３で置換されるヘテロアリールであり、ここでＲ３ａおよびＲ３が−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＲ７ａＲ７ｂであり、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂが要約に既定される通りである、式Ｉの化合物は、スキーム５に従って調製することができる。
スキーム５
【化１８】
2013539453.tif 000168
ＬＧは、ブロモまたはクロロ等の脱離基である。１２は、ＮＨ（Ｒ７ｂ）Ｒ７ａと、ＤＩＥＡ等の塩基の存在下において、ＡＣＮ等の溶媒中で反応させられる。
【０３１４】
式Ｉの化合物は、スキーム６に従って調製することができる。
スキーム６
【化１９】
2013539453.tif 000169
スキーム６におけるＬＧは、クロロ等の脱離基である。反応は、ＤＭＡ等の溶媒中で照射することによって行うことができる。代替的に、反応は、酢酸の存在下において、ＤＭＡ等の溶媒中で加熱することによって行うことができる。
一般的なアルキル化手順１
【化２０】
2013539453.tif 000170
【０３１５】
２ドラムのバイアル中に、標準的な手順を使用して調製した２−ブロモ−Ｎ−（３−（Ｎ−（３−（３，５−ジメトキシ−フェニルアミノ）キノキサリン−２−イル）スルファモイル）フェニル）アセトアミド（８６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、２ｍＬのアセトニトリルと共に配置した。８当量（１．２ｍｍｏｌ）の所望のアミン、アニリン、ヒドラジン、またはアルコキシアミンを添加し、続いてＨｕｎｉｇ’ｓ  Ｂａｓｅ（４１μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）の添加を行った。反応物を次いで、５０℃で１時間撹拌した（アニリン試薬については一晩）。分取逆相ＨＰＬＣを使用して、所望の産物を粗反応混合物から直接に単離した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中、２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。
一般的なライブラリアシル化手順１
【化２１】
2013539453.tif 000171
【０３１６】
２ドラムのバイアル中に、標準的な手順を使用して調製した３−アミノ−Ｎ−（３−（３，５−ジメトキシ−フェニルアミノ）キノキサリン−２−イル）ベンゼンスルホンアミド（５４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡ（２ｍＬ）、および所望のカルボン酸（０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。ＤＩＥＡ（７０μＬ、０．４ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（５３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をバイアルに添加し、反応混合物を５０℃で一晩撹拌した。分取逆相ＨＰＬＣを使用して、所望の産物を粗反応混合物から直接に単離した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中、２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。
一般的なアミノ化手順１ａ
【化２２】
2013539453.tif 000172
【０３１７】
ＣＥＭマイクロ波反応槽を、標準的な手順を使用して調製したＮ−（３−（Ｎ−（３−クロロキノキサリン−２−イル）スルファモイル）フェニル）−２−（ジメチルアミノ）アセトアミド（３０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、所望のアニリン（１６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、２当量）、および０．５ｍＬのジメチルアセトアミドで充填した。槽を密閉し、反応混合物を、ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波器具中、マイクロ波放射下で７０分間、１４０℃で加熱した。溶媒を次いで回転蒸発によって除去した。最終産物の精製を分取逆相ＨＰＬＣによって、溶出液２５ｍＭ水性ＮＨ４ＯＡｃ／ＡＣＮを用いて遂行して、所望の産物を得た。
一般的なアミノ化手順１ｂ
【化２３】
2013539453.tif 000173
【０３１８】
ＣＥＭマイクロ波反応槽を、標準的な手順を使用して調製したＮ−（３−（Ｎ−（３−クロロキノキサリン−２−イル）スルファモイル）フェニル）−２−（ジメチルアミノ）アセトアミド（６２ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）、所望のアニリン（０．５６７ｍｍｏｌ、４当量）、および１．０ｍＬのトルエンで充填した。槽を密閉し、反応混合物を、ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波器具中、マイクロ波放射下で６０分間、１８０℃で加熱した。溶媒を回転式蒸発器上で除去した。最終産物の精製を分取ＨＰＬＣによって、溶出液としてＮＨ４ＯＡｃ／ＣＡＮを用いて行って、所望の産物を得た。
一般的なアシル化手順２
【化２４】
2013539453.tif 000174
【０３１９】
標準的な手順を使用して調製したＮ−（３−（Ｎ−（３−（３，５−ジメトキシ−フェニルアミノ）キノキサリン−２−イル）−スルファモイル）フェニル）アゼチジン−３−カルボキサミド（１２５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬ丸底フラスコ中の５ｍＬ  ＤＣＥ中に溶解させた。ＤＩＥＡ（１．１７ｍｍｏｌ、５．０当量）を次いで撹拌しながら添加し、続いて酸塩化物（０．４７ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を次いで、室温で１時間、またはＬＣＭＳによって示される完了状態まで撹拌した。溶媒をその後、減圧下で、回転式蒸発器上で除去した。粗物質を次いでメタノール中に再溶解させた。最終産物の精製を分取逆相ＨＰＬＣによって、溶出液２５ｍＭ水性ＮＨ４ＯＡｃ／ＣＡＮを用いて遂行した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中、２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。
一般的な還元的アミノ化手順１
【化２５】
2013539453.tif 000175
【０３２０】
３ｍＬのＤＣＥおよび２００μＬのＤＭＦ中、標準的な手順を使用して調製したＮ−（３−（Ｎ−（３−（３，５−ジメトキシ−フェニルアミノ）キノキサリン−２−イル）スルファモイル）フェニル）アゼチジン−３−カルボキサミド（１１０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、アルデヒド（０．７７ｍｍｏｌ、４．０当量）を緩徐に添加し、続いてテトラメチルアンモニウムトリアセトキシボロヒドリ（１．１６ｍｍｏｌ、６．０当量）を添加した。反応を室温で一晩撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、反応が完了したことが示された。溶媒をその後、減圧下で、回転式蒸発器上で除去した。粗物質を次いでメタノール中に再溶解させた。最終産物の精製を分取逆相ＨＰＬＣによって、溶出液２５ｍＭ水性ＮＨ４ＯＡｃ／ＣＡＮを用いて遂行した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中、２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。
一般的なアミド形成手順１ａ
【化２６】
2013539453.tif 000176
【０３２１】
小さい１ドラムバイアル中に、標準的な手順を使用して調製した３−（Ｎ−（３−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニルアミノ）−キノキサリン−２−イル）スルファモイル）安息香酸（６１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。酸をＤＭＡ（１ｍＬ）中に溶解させ、ＤＩＥＡ（４２μＬ、０．２４ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、次いで溶液に添加した。アミン試薬（ＤＭＡ中１ｍＬの０．１２Ｍ溶液）を溶液に撹拌しながら添加し、続いてＨＡＴＵ（６４ｍｇ、０．１７ｍＭｏｌ、１．４当量）を添加した。反応物を一晩、室温で撹拌した。ＬＣＭＳ分析によって示される完了時に、２ｍＬのメタノールを溶液に添加した。分取逆相ＨＰＬＣを使用して、所望の産物を単離した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。
一般的なアミド形成手順１ｂ
【０３２２】
一般的なアミド形成手順１ａに概説した手順を使用して、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメートとして保護された第２アミン基を含有する（すなわち、ＮＨＲ’Ｒ”内のＲ’がＢｏｃ保護されたアミン基を含有する）、幾つかのアミンを組み込んだ。Ｂｏｃ保護された前駆体のＨＰＬＣ精製後、脱保護を行った。
【０３２３】
小さい１ドラムバイアル中に、３−（Ｎ−（３−（２−クロロ−５−メトキシ−フェニルアミノ）キノキサリン−２−イル）スルファモイル）安息香酸（６１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。酸を１ｍＬのＤＭＡ中に溶解させ、ＤＩＥＡ（４２μＬ、０．２４ｍｍｏｌ、２当量）を次いで溶液に添加した。モノ−Ｂｏｃ保護されたジアミン試薬（ＤＭＡ中１ｍＬの０．１２Ｍ溶液、１当量）を溶液に撹拌しながら添加し、続いてＨＡＴＵ（６４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、１．４当量）を添加した。反応物を一晩、室温で撹拌した。ＬＣＭＳ分析によって示される完了時に、２ｍＬのメタノールを溶液に添加した。分取逆相ＨＰＬＣを使用して、所望の産物をこの粗反応溶液から直接に単離した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｌｙｎｘ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８、ＯＣＤ  ５μＭ、３０×７０ｍｍカラムを装着し、５〜１００％勾配で、水／アセトニトリル中２５ｍＭ酢酸アンモニウムの二元溶媒系を用いて実行）を使用して、精製を行った。産物分画を組み合わせ、減圧下で、回転蒸発によって濃縮乾固した。ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（２ｍＬ）の溶液を添加した。溶液を次いで、出発物質が検出されなくなるまで、室温で撹拌した。脱保護された産物を、ＨＣＬ塩として溶液から沈殿分離させ、濾過によって収集し、エーテルで洗浄し真空下で乾燥させた。
【実施例】
【０３２４】
生物学的実施例
【０３２５】
実施例１
乳癌細胞中のＰＩ３Ｋ阻害を補償するキナーゼの特定
【０３２６】
本研究の目的は、ヒト乳癌細胞中のＰＩ３Ｋ阻害を補償するキナーゼおよびキナーゼ調節性シグナル伝達経路を特定することである。この目的のために、特異的キナーゼの下方調節が、ＨＣＣ１９３７ヒト乳癌細胞の、式Ｉのおよび表１の化合物であるＰＩ３Ｋ阻害物質化合物Ａに対する感受性を増加させるかどうかを決定するために、７７９個のヒトキナーゼを標的とするｓｉＲＮＡスクリーニングを用いる。化合物Ａは、ＰＩ３Ｋのｐ１１０α触媒サブユニットを３９ｎＭの体外ＩＣ５０で阻害するＡＴＰ模倣体である。ＨＣＣ１９３７細胞は、ＰＩ３Ｋ経路の負の調節因子であるＰＴＥＮを欠き、増殖は化合物Ａによって１０μＭのＩＣ５０で阻害される。ｓｉＲＮＡライブラリでのリバーストランスフェクションに続いて、細胞をＤＭＳＯまたは１０μＭ化合物Ａのいずれかにより、２．５％ウシ胎児血清を含有する培地中で７２時間処置し（図１Ａおよび２）、アラマーブルーアッセイを使用して、細胞生存率を測定する図１Ｂ。並行して、ＰＩ３Ｋの阻害時にどのキナーゼおよび経路が上方調節されるかを決定するために、遺伝子発現を、マイクロアレイ、ホスホ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）アレイ、およびホスホ細胞内キナーゼアレイを使用して（図３および４）、ＲＮＡ、またはＨＣＣ１９３７細胞からのライセート±化合物Ａを使用して行う。化合物Ａ処置は、８〜４８時間以内で、多くのＲＴＫおよび細胞内キナーゼの増加された発現および／またはリン酸化をもたらす。化合物Ａでの８時間および２４時間の処置は、Ｓ４７３およびＴ３０８の両方でホスホ−Ａｋｔを抑制したが、４８時間で、Ｓ４７３におけるリン酸化が部分的に復元する。これらのアプローチから、化合物Ａによって上方調節される複数のキナーゼおよび経路が特定されるが、それはｓｉＲＮＡによって下方調節されるとき、化合物Ａに対する感受性を増加させた。これらには、ＨＥＲ３、ＭＳＰＲ、およびＡｘｌ等の複数のＲＴＫ、ならびに複数のＭＡＰ３Ｋ／ＭＥＫＫ等のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の成員が含まれる。ウエスタンブロッティングにより、化合物Ａ処置が、Ｓ４７３およびＴ３０８でホスホＡｋｔを減少させ、ホスホＨＥＲ３および総体ＨＥＲ３を増加させることが確認される。化合物Ａはまた、ＭＡＰキナーゼＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫのリン酸化を増加させる。ＨＣＣ１９３７細胞を、１０μＭ化合物Ａで、２．５％ＦＢＳを含有する培地中、０、２、８、または２４時間処置した。ＲＮＡをトリゾールで単離し、ＲＮｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製した。３つの独立した実験からの遺伝子発現を、Ｇｅｎｅ  ｔｉｔａｎ  ３’マイクロアレイを使用して測定した。図５に示されるように、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対０時間。化合物ＡおよびＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡでの組み合わせ処置は、ＨＣＣ１９３７細胞増殖を、単独の各介入よりも大幅に阻害し（図５）、それはホスホＨＥＲ３の上方調節が、ＰＩ３Ｋの薬理学的阻害の結果としての増殖阻害を補償することを示唆する。これらの結果により、ＰＩ３Ｋ阻害物質と共にこれらのキナーゼまたは経路を阻害する化合物を組み合わせることにより、ＰＩ３Ｋ阻害物質の抗腫瘍活性が改善され得ることが示唆される。
【０３２７】
結果は、表２および３に更に要約される。
表２ＨＣＣ１９３７細胞生存率に必須のキナーゼ
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表３化合物Ａでの処置時に上方調節またはリン酸化された候補キナーゼ
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【０３２８】
実施例２
ＰＩ３Ｋ阻害物質で処置した細胞中の、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）媒介型補償のｓｉＲＮＡ阻害
【０３２９】
ＰＩ３Ｋ阻害物質化合物Ａの抗腫瘍効果を、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の突然変異性活性化（ＰＩＫ３ＣＡ突然変異、ＰＴＥＮ喪失、および／またはＨＥＲ２遺伝子増幅の結果として）を有するヒト乳癌細胞のパネルにおいて検査する。阻害物質を２４時間毎に添加した、化合物Ａ処置されたＢＴ−４７４細胞での時間経過は、６時間時点で始まり、７２時間まで増加するＨＥＲ３  ＲＮＡおよびタンパク質の時間依存性上方調節を示す（図７）。部位特異的抗体は、ＨＥＲ３の６つのｐ８５結合部位のうちの２つである、Ｙ１１９７およびＹ１２８９におけるＨＥＲ３リン酸化を示す。Ｐ−ＨＥＲ３の回復は、Ｔ３０８およびＳ４７３  Ｐ−Ａｋｔの回復に一時的に相関し（図７）、それはＰＩ３Ｋが外来性阻害物質によって遮断されるとき、細胞がＰＩ３Ｋ上流の機構を上方調節することを示唆する。ＨＥＲ３  ＲＮＡおよびタンパク質の上方調節ならびにＰ−ＨＥＲ３およびＰ−Ａｋｔの部分的維持は、ＨＥＲ３およびＰＩ３Ｋの組み合わされた阻害が、腫瘍細胞生存率を相乗的に阻害する場合があることを示唆する。ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡでのトランスフェクションは、ＢＴ−４７４細胞を化合物Ａに対して感作した（図６Ａおよび図６Ｂ）。
【０３３０】
同様の結果が、ＳＫＢＲ−３およびＭＤＡ−４５３細胞で得られる。双方の細胞株は、ＨＥＲ２遺伝子増幅を示す。ＭＤＡ−４５３細胞はまた、ＰＩＫ３ＣＡおよびＰＴＥＮ突然変異対立遺伝子におけるＨ１０４７Ｒ（エクソン２０）突然変異を有する。双方の細胞株において、Ｐ−Ａｋｔ、Ｐ−Ｓ６、および増殖の阻害は、化合物Ａで処置し、またＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたとき、単独の各介入と比較して細胞中で強化される。ＢＴ−４７４細胞（図７）においてと同様に、Ｐ−Ｅｒｋは、化合物Ａで処置した細胞中で上方調節され、この上方調節は、ＳＫＢＲ−３においてＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡのトランスフェクション時に減衰するが、ＭＤＡ−４５３細胞においては減衰しない（図８）。
【０３３１】
図７および８に示される結果は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔの阻害活性がＨＥＲ３の転写を抑制することを示唆する。これらの転写機構に加えて、ＰＩ３Ｋの化合物Ａ媒介型阻害時のＰ−ＨＥＲ３の回復は、ＨＥＲ３をトランス活性化する上流チロシンキナーゼの関与が、今度は、ＰＩＰ３レベルを部分的に維持することを示唆する。ＨＥＲ３のこの代償性リン酸化は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔを部分的に維持し、ＰＩ３Ｋアンタゴニストの完全な作用に対向する。
【０３３２】
実施例３
ＰＩ３Ｋ阻害物質で処置した細胞中の、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）媒介型補償の抗体阻害の体外評価
【０３３３】
抗ＨＥＲ３  Ａｂが、ＰＩ３Ｋ阻害物質で処置されたヒト乳癌細胞中のＨＥＲ３のフィードバック上方調節を遅延または撤廃することを確証するために、ＨＥＲ２の過剰発現を有するまたは有さないヒト乳癌細胞を化合物Ａ±ＭＭ−１２１等の飽和濃度の抗ＨＥＲ３  Ａｂで処置する。実験のエンドポイントは次の通りである：（１）ｐ８５のＨＥＲ３との会合、（２）３Ｄ−マトリゲル中の増殖、（３）軟寒天中のコロニー形成、（４）無血清条件および懸濁液中の両方におけるアポトーシスアッセイ（アノイキスを誘導するため）、（５）創傷閉鎖およびトランスウェルアッセイにおける運動性、（６）体外ＰＩ３Ｋ反応に供したＨＡプルダウンにおけるＰＩ３Ｋ活性、ならびに（７）免疫ブロットによる総体ＨＥＲ３およびＰ−ＨＥＲ３、Ｐ−Ａｋｔ、Ｐ−Ｅｒｋ、Ｐ−Ｓ６、Ｐ−４ＥＢＰ−１。
【０３３４】
実施例４
ＰＩ３Ｋ阻害物質で処置した細胞中の、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）媒介型補償の抗体阻害の体内評価
【０３３５】
胸腺欠損マウスにおける異種移植片を、既知の方法に従って確立する。一旦、腫瘍が容積≧２５０ｍｍ３に到達すると、これらを次の４つの処置群に無作為化する：（１）対照ＩｇＧ１（３０ｍｇ／ｋｇ×２／週、腹腔内）、（２）化合物Ａ（経口胃強制飼養を介して１００ｍｇ／ｋｇ／日）、（３）ＭＭ−１２１（３０ｍｇ／ｋｇ×２／週、腹腔内）、および（４）化合物ＡとＭＭ−１２１等の抗ＨＥＲ３  Ａｂ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）。処置を最大５週間送達し、その後、腫瘍増殖を監視する。１週間および５週間の処置後、ならびに治療の中止に続いて、研究エンドポイントを査定する。１週間の処置後、幾つかの腫瘍を採取し、ホルマリン中に固定するか、または液体Ｎ２中に急速冷凍する。この時点を使用して、腫瘍反応の早期の分子前兆を特定することができる。ｍｍ３単位の腫瘍容積を次の式によって算出する：容積＝幅２×長さ／２。腫瘍が完全に排除されるマウスを、最大１年間追跡し、腫瘍再発について段階的に評価することになる。≧３ｍｍ３の測定値を示す再発腫瘍を、陽性としてスコア化し、収集することになる。
【０３３６】
生化学および分子分析。ホルマリン固定、バラフィン包埋腫瘍切片を、腫瘍悪性度の査定のためにＨ＆Ｅで染色する。腫瘍切片をＩＨＣに供して、総体ＨＥＲ３、Ｙ１２８９、Ｙ１１９７、およびＹ１２２２  Ｐ−ＨＥＲ３、Ｔ３０８  Ｐ−Ａｋｔ、Ｓ４７３  Ｐ−Ａｋｔ、ならびにＰ−Ｅｒｋ抗体を、確立された方法を使用して検出する。加えて、腫瘍ライセートの免疫ブロットを、同じ抗体で行うことができる。免疫沈降、続いて免疫ブロット分析を使用して、異種移植片中のｐ８５のＨＥＲ３との会合時の抗ＨＥＲ３  Ａｂの影響を決定することができる。ＨＥＲ３転写レベルを、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡレベルにおける何らかの増加を確認するために、瞬間冷凍腫瘍アリコートからのＲＮＡを使用して測定する。
【０３３７】
実施例５
細胞株および阻害物質
【０３３８】
全ての細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入した。培地およびウシ胎児血清（ＦＢＳ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）から購入した。次の増殖培地を使用した：ＨＣＣ１９３７、ＨＣＣ１９５４：ＲＰＭＩ−１６４０／１０％ＦＢＳ；ＢＴ４７４について：ＩＭＥＭ／１０％ＦＢＳ；ＳＫＢＲ３：ＭｃＣｏｙ’ｓ  ５Ａ／１５％ＦＢＳ；ＵＡＣＣ８９３：ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ；ＭＤＡ４５３：ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）／２０％ＦＢＳ；およびＳＵＭ１９０：ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）／５％ＦＢＳ。全ての細胞を加湿５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で増殖させた。次の試薬を使用した：ラパチニブ（ＧＷ−５７２０１６、ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ＬＹ２９４００２（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、アロステリックＡＫＴ１／２阻害物質５Ｊ８、ラパマイシン（ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、および式Ｉの化合物である化合物Ａ（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃ．）。
【０３３９】
実施例６
細胞増殖およびクリスタルバイオレットアッセイ
【０３４０】
細胞を、１２ウェルプレート中に、２．５％ＦＢＳ±阻害物質を含有する培地中、２．５〜３．５×１０４細胞／ウェルの密度で播種した。培地および阻害物質を３日毎に交換した。図に示される日に、細胞をトリプシン処理し、ベックマン・コールターカウンター中で計数した。クリスタルバイオレットアッセイのために、５×１０４細胞／ウェルを、６ウェルプレート中に播種し、化合物Ａの不在または存在下で６日間増殖させ、メタノール中に固定し、クリスタルバイオレットで染色し、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＤＰ１０カメラを使用して撮影した。
【０３４１】
実施例７
細胞周期分析
【０３４２】
細胞を、１００ｍｍの皿中、２．５％ＦＢＳ±化合物Ａを含有する培地中にプレートした。３日後、剥離細胞および接着細胞の両方をプールし、固定し、ＡＰＯ−ＢｒｄＵキット（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｆｌｏｗ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してヨウ化プロピジウムで標識した。標識化された細胞を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ系を使用して分析した。
【０３４３】
実施例８
細胞質および核分画
【０３４４】
細胞質および核抽出物を、Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆからの核抽出物キットを使用して調製した。簡潔に述べると、細胞を１００ｍｍの皿中にプレートし、阻害物質により示される濃度で３〜４時間処置し、氷冷ＰＢＳ／ホスファターゼ阻害物質で洗浄し、低張緩衝液中に溶解させ、１４，０００ｒｐｍで３０秒間、４℃で遠心分離して、上清（細胞質抽出物）を収集した。ペレット（核分画）を完全溶解緩衝液中に再懸濁させ、１４，０００ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離して、上清（核分画）を収集した。
【０３４５】
実施例９
癌細胞中のホスファチジルイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）シグナル伝達
【０３４６】
ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、細胞増殖、代謝、サイズ、運動性、および生存率を調節するリガンド誘導性受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）からのシグナルを、細胞内分子へと伝達する。多数のＰＩ３Ｋファミリーが、高等真核生物中に存在する。これまで、主にクラスＩＡ  ＰＩ３Ｋが癌に関連付けられている。クラスＩＡ  ＰＩ３Ｋは、調節性（ｐ８５）およびｐ１１０触媒サブユニットからなるヘテロ二量体である。ＰＩ３Ｋは、ｐ８５のＮ−ＳＨ２ドメインを関与させる、ＹＸＸＭモチーフを含有するリン酸化アダプターまたは受容体によって活性化される。この結合は、ｐ８５によるｐ１１０の阻害を軽減し、ｐ８５−ｐ１１０二量体を形質膜におけるホスファチジルイノシトール−４，５−ビスリン酸塩（ＰＩＰ２）に集める。ＰＩ３Ｋは、ＰＩＰ２をリン酸化させて、第２のメッセンジャーホスファチジルイノシトール−３，４，５−トリスリン酸塩（ＰＩＰ３）を産生する。この経路の負の調節は、ＰＩＰ３脂質ホスファターゼＰＴＥＮ（染色体１０におけるホスファターゼおよびテンシン相同体）によって媒介される。ＡＫＴおよびＰＤＫ１を含む、プレクストリン相同性（ＰＨ）ドメイン含有タンパク質のサブセットは、形質膜においてＰＩＰ３に結合する。ｍＴＯＲ／Ｒｉｃｔｏｒ（ＴＯＲＣ２）を伴う、ＰＤＫ１によるＴ３０８における、および複合体によるＳ４７３におけるＡＫＴのリン酸化は、この酵素の完全な活性化をもたらす。ＡＫＴは、生存率および細胞周期進入を促進するために、ＧＳＫ３α、ＧＳＫ３β、ＦｏｘＯ転写因子、ＭＤＭ２、ＢＡＤ、およびｐ２７ＫＩＰ１を含む、細胞タンパク質の宿主をリン酸化する。加えて、ＡＫＴは、Ｒａｓ相同体ＲｈｅｂのためのＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＧＡＰ）であるツベリンをリン酸化および不活性化する。ツベリンの不活性化は、ＧＴＰ結合−Ｒｈｅｂが、ｍＴＯＲ／Ｒａｐｔｏｒ（ＴＯＲＣ１）複合体を蓄積および活性化することを可能にし、それは最終的にタンパク質合成および細胞増殖を調節する。
【０３４７】
豊富な証拠により、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴは、ほぼ間違いなく、ヒト癌において最も一般的に変化させられるシグナル伝達経路ことが示される。第１に、ｐ１１０αをコードする遺伝子であるＰＩＫ３ＣＡにおける機能獲得型突然変異は、多数のヒト腫瘍において高頻度で存在する。第２に、ホスファターゼＰＴＥＮは、突然変異、遺伝子欠失、マイクロＲＮＡによる標的化、およびプロモーターメチル化によって頻繁に不活性化される腫瘍抑制遺伝子である。更に、ＰＩ３Ｋは、それ自体が突然変異性活性化および／または遺伝子増幅の標的である、突然変異体ＲａｓおよびＢｃｒ−Ａｂｌ、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）、ＭＥＴ、ＫＩＴ等の多くのチロシンキナーゼのような発癌遺伝子によって強力に活性化される。卵巣癌、膵臓癌、乳癌、および胃癌において、ＰＩ３Ｋ経路はまた、Ａｋｔ１またはＡｋｔ２遺伝子増幅によって活性化される。形質膜における構造的局在性および活性化をもたらす、ＡＫＴ１（Ｅ１７Ｋ）のＰＨドメインにおける形質転換突然変異は、僅かな割合の乳癌、結腸直腸癌、および卵巣癌において検出されている。合わせて、これらは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路における分子変化を有する腫瘍の幅広いレパートリーが、特異的阻害物質により治療的に標的化可能であることを示す。
【０３４８】
複数のＰＩ３Ｋ経路アンタゴニストが開発されており、それらは最近の概説の主題である。これらの化合物のうちの幾つかは、ｐ１１０のキナーゼドメインのＡＴＰ結合ポケットにおいて、競合的および可逆的に結合するＡＴＰ模倣体であり、また、この酵素の発癌性突然変異型に対して活性である。本実施例は、（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃからの）化合物Ａの効果を、ＨＥＲ２遺伝子増幅、ＰＩＫ３ＣＡ（ｐ１１０α）活性化突然変異、および／またはＰＴＥＮの喪失等のＰＩ３Ｋ依存性を示す分子変化を有する、ヒト乳癌細胞株のパネルに対して検査した。化合物Ａは、第Ｉ相臨床開発を完了したばかりの、３９ｎＭのｐ１１０αに対するＩＣ５０を有するＡＴＰ競合可逆的ＰＩ３Ｋ阻害物質である。
【０３４９】
ＨＥＲ２過剰発現ヒト乳癌細胞株のパネルにおいて、化合物Ａでの処置は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の２つの主要なエフェクターである、ＡＫＴおよびＳ６のリン酸化を撤廃した。この阻害はまた、ＨＥＲ３および他のＲＴＫの、発現およびリン酸化の両方の誘導にも関連した。これらのＲＴＫのｍＲＮＡ発現における増加は、ＡＫＴによって負の調節を受ける、フォークヘッド転写因子ＦｏｘＯ３ａおよびＦｏｘＯ１による転写に依存した。ＨＥＲ２＋細胞中で、上方調節されたＨＥＲ３共受容体のリン酸化は、ＨＥＲ２チロシンキナーゼによって維持されたが、それが今度は、ｐＡＫＴの部分的回復をもたらし、故に、ＰＩ３Ｋ阻害物質の抗腫瘍作用を限定する。ＨＥＲ３のｓｉＲＮＡによるノックダウン、またはＨＥＲ２阻害物質トラスツズマブもしくはラパチニブでの同時処置は、体外および体内の両方で、ＨＥＲ２＋乳癌細胞を化合物Ａに対して感作した。更に、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達を最大限に無能にするために、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３を標的とする療法が、ＨＥＲ２依存性細胞中のＰＩ３Ｋ阻害物質に追加されるべきである。
【０３５０】
実施例１０
癌細胞中の相乗効果
【０３５１】
本実施例は、構造的ＰＩ３Ｋ活性化を有するヒト乳癌細胞株に対する、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害物質、すなわち化合物Ａの、細胞および分子効果への洞察を提供している。化合物Ａでの処置は、細胞増殖、ならびにＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＴＯＲ経路におけるシグナルトランスデューサである、ｐＡＫＴおよびｐＳ６のレベルの用量依存性阻害をもたらした。ＨＥＲ２過剰発現細胞中で、ＰＩ３Ｋの阻害と同時に、ＨＥＲ３を含む多数のＲＴＫの発現およびリン酸化の上方調節が存在した。ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａタンパク質のノックダウンは、ＰＩ３Ｋの阻害時にＨＥＲ３、ＩｎｓＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ−２  ｍＲＮＡの誘導を抑制した。ＨＥＲ２＋細胞中で、ＨＥＲ３のｓｉＲＮＡによるノックダウンまたはＨＥＲ２阻害物質トラスツズマブもしくはラパチニブでの共処置は、ｐＡＫＴおよびｐＳ６の、化合物Ａ誘導型細胞死および化合物Ａ媒介型阻害を強化した。トラスツズマブおよびラパチニブは各々、ｐＡＫＴの阻害および確立されたＢＴ４７４異種移植片の増殖について、化合物Ａと協同した。これらのデータは、ＰＩ３ＫアンタゴニストがＡＫＴを阻害し、ＲＴＫ発現およびそれらの活性の抑制を軽減するであろうことを示唆する。このフィードバックの軽減は、その経路の持続的阻害を限定し、これらの薬剤に対する反応を減弱する。ＨＥＲ２＋乳癌を有する患者において、ＰＩ３Ｋ阻害物質は、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３アンタゴニストと組み合わせて使用されるべきである。
【０３５２】
実施例１１
３次元（３Ｄ）増殖
【０３５３】
細胞を、８ウェルのチャンバスライド中、増殖因子低減マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ＣＡ，ＵＳＡ）±化合物Ａ中に、公開された方法に従って播種した。新鮮な培地および薬物を３日毎に補充した。コロニーを、倒立光学顕微鏡により、１０倍の接眼レンズの倍率で、本明細書の図に列挙される日に撮影した。
【０３５４】
実施例１２
免疫沈降、免疫ブロット法、および受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）アレイ
【０３５５】
免疫沈降、免疫ブロット法、およびＲＴＫアッセイを公開された方法に従って行った。第一抗体には、ＡＫＴ、ｐＡＫＴＳ４７３、ｐＡＫＴＴ３０８、ＥＲＫ、ｐＥＲＫＴ２０２／Ｙ２０４、ｐＨＥＲ２Ｙ１２４８、ｐＨＥＲ３Ｙ１１９７、ｐＨＥＲ３Ｙ１２２２、ｐＨＥＲ３Ｙ１２８９、Ｓ６、ｐＳ６Ｓ２４０／２４４、ｐ２７、ｐＲｂＳ７８０、ＦｏｘＯ１、ＦｏｘＯ３ａ、ＭＥＫ１／２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ，ＵＳＡ）、ｐ８５、４Ｇ１０  ｐＴｙｒ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）、ＨＥＲ３、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＲｈｏＡ、ＨＤＡＣ３（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ＰＡＲＰ（ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、β−アクチン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）、およびＨＥＲ２（Ｎｅｏｍａｒｋｅｒｓ，ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｒｅｅｍｅｎｏｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）が含まれた。種特異的西洋ワサビペルオキシダーゼ共役第二抗体は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ，ＵＳＡ）からのものであった。免疫反応性シグナルを強化化学発光法（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）によって検出した。ホスホ−ＲＴＫアレイは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）からのものであり、総細胞ライセートを使用して、製造業者の指示に従ってアレイとハイブリッド形成した。
【０３５６】
実施例１３
ＲＮＡ干渉
【０３５７】
ミスマッチ対照およびヒトＨＥＲ３に対するｓｉＲＮＡ二重鎖は、以前に記載され（Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８：５６０５−５６２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、Ｈｕｍａｎ  ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）Ｓｅｌｅｃｔ  ｓｉＲＮＡ二重鎖は、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）（ＦｏｘＯ１センス鎖、配列番号１９：ＣＣＡＵＧＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＵＡＡｔｔ；ＦｏｘＯ３ａセンス鎖、配列番号２０：ＧＣＣＵＵＧＵＣＧＡＡＵＵＣＵＧＵＣＡｔｔ）から購入した。ヒトＩＧＦ−ＩＲおよびＩｎｓＲ  ｓｉＲＮＡ二重鎖は、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）（ＩＧＦ−ＩＲセンス鎖、配列番号２１：ＧＧＡＧＡＡＵＡＡＵＣＣＡＧＵＣＣＵＡｔｔ；ＩｎｓＲセンス鎖、配列番号２２：ＧＡＡＣＧＡＵＧＵＵＧＧＡＣＵＣＡＵＡｔｔ）から得た。トランスフェクションをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ    ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）により行った。
【０３５８】
実施例１４
異種移植片実験
【０３５９】
動物実験は、Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＶＵＭＣ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。マウスを、公認のＶＵＭＣのＡｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ中に収容した。１７β−エストラジオールペレット（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）を、各６週〜７週齢の胸腺欠損メスマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．）へ、腫瘍細胞注射の前日に皮下注射（ｓ．ｃ．）した。マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と１：１で混合したＢＴ４７４細胞（３×１０６）を各マウスの右脇腹中に皮下注射した。腫瘍直径を、カリパスで週２回測定し、ｍｍ３単位の容積を次の式により算出した：容積＝幅２×長さ／２。一旦、腫瘍が≧２００ｍｍ３に到達すると、処置を、次のものを用いて、単独または組み合わせのいずれかで開始した：トラスツズマブ３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内に週２回、ラパチニブ１００ｍｇ／ｋｇ経口胃強制飼養を介して毎日、化合物Ａ１００ｍｇ／ｋｇ経口胃強制飼養を介して毎日。２８日間の処置後、マウスを安楽死させた。
【０３６０】
実施例１５
免疫組織学
【０３６１】
全ての腫瘍試料（最後の処置の１時間以内に収集）を１０％中性緩衝ホルマリン中に室温で２４時間固定し、続いて脱水およびバラフィン包埋を行った。免疫染色を５μｍ組織切片に対して行った。キシレンおよび段階的アルコール中での脱パラフィン後、熱誘導型抗原取り込みをｐＨ６．０クエン酸塩緩衝液中で行い、続いて３％過酸化水素で２０分間、タンパク質ブロック（Ｄａｋｏ）で１０分間、および最後に第一抗体で一晩、４℃でインキュベーションを行った。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）、続いてクロマジェンとしてＤＡＢを使用し、ヘマトキシリンで対比染色した。腫瘍切片を光学顕微鏡上で、４００倍の接眼レンズの倍率で研究した。腫瘍細胞染色の平均百分率および強度をヒストスコア（Ｈスコア）として算出した（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｕｌｄｉｎｇ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５），Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２６：２９１−２９４に記載されるように）。切片をスコア化する専門の病理学者（ＭＧＫ）は、処置タイプに対して盲検化された。
【０３６２】
実施例１６
ＰＩ３Ｋの阻害は、ＨＥＲ３およびｐＨＥＲ３の誘導に関連する
【０３６３】
調節不全ＰＩ３Ｋ活性を有する乳癌細胞株のパネルを、漸増用量の化合物Ａにより、２次元および３次元（２Ｄおよび３Ｄ）増殖条件下で処置した。別途定めのない限り、全ての実験を２．５％ＦＢＳ含有培地中で行った。化合物Ａでの処置は、図９Ａに示されるように、全ての細胞株の２Ｄ増殖を用量依存性様態で阻害した。≦６μＭの同様のＩＣ５０を、図９Ｂに示されるように３Ｄで試験した細胞中で観察し、それは本実験において選択された細胞株の全てが、ＰＩ３Ｋ経路における分子変化を有するという事実と一貫していた。処置の開始時の細胞の最初の量をベースラインとして使用した増殖曲線の分析は、およそ６μＭのＩＣ５０で、化合物Ａの主要な効果が細胞増殖の阻害であることを示した。しかしながら、２０μＭで、化合物Ａは、図１０Ａに示されるように、ベースラインを下回る細胞数の低減によって示されるように細胞死を誘導した。これは更に、図１０Ｂに示されるように、化合物Ａで２４時間処置した細胞からのライセート中の細胞死およびＧ１−Ｓ細胞周期移行のバイオマーカーの免疫ブロット分析によって確認された。全ての細胞株中で、化合物Ａでの処置は、ｐＡＫＴＳ４７３によって測定したとき、ＰＩ３Ｋシグナル伝達の用量依存性阻害をもたらした。２０μＭを下回る濃度での細胞増殖の阻害と一貫して、化合物Ａは、サイクリンＤ１およびｐＲＢにおける低減ならびにＣＤＫ阻害物質ｐ２７ＫＩＰ１のレベルの増加を誘導したが、細胞死のバイオマーカーである総計または開裂ＰＡＲＰのレベルは変化しなかった（図１０Ｂを参照されたい）。
【０３６４】
ＰＩ３ＫおよびＴＯＲシグナル伝達経路における分子のより包括的なパネルに対する化合物Ａの効果を検査するために、実験を行った。全ての細胞株中で、化合物Ａでの処置は、ｐＡＫＴＳ４７３／Ｔ３０８およびｐＳ６Ｓ２４０／２４４における用量依存性低減をもたらした。驚くべきことに、６／７細胞株中で、化合物Ａはまた、２４時間で、総体ＨＥＲ３および／またはｐＨＥＲ３Ｙ１２８９レベルの上方調節を引き起こした。５／６  ＨＥＲ２過剰発現細胞株中で、総体ＨＥＲ２および／またはｐＨＥＲ２Ｙ１２４８はまた、ＰＩ３Ｋの阻害時に、中程度に上方調節されたが、その結果を図１１に例証する。
【０３６５】
実施例１７
ＨＥＲ３の化合物Ａ誘導型上方調節は、ＦｏｘＯ媒介型転写に依存する
【０３６６】
化合物Ａの不在および存在下でのＨＥＲ３タンパク質の半減期を、タンパク質合成の阻害物質であるシクロヘキシミドを使用して決定した。ＨＥＲ３の崩壊率は、ＢＴ４７４細胞の化合物Ａでの処置時に有意に変化しなかった（データ図示されず）。次に、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡのレベルを、ｑＰＣＲによってＰＩ３Ｋの阻害時に、時間経過にわたって、化合物ＡのおよそのＩＣ５０（６μＭ）を使用して検査した。ＢＴ４７４、ＳＫＢＲ３、およびＭＤＡ４５３細胞は、図１２Ａおよび１２Ｃに示されるように、６時間で極大であったと思われる、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡにおける増加を示し、それは、ｐ１１０α阻害物質の添加後最大４８時間維持された。他のＰＩ３Ｋ経路阻害物質は、同様の効果を誘導した：図１２Ｂに示されるように、ｍＴＯＲ阻害物質ラパマイシンではなく、ＡＫＴ１／２のアロステリック阻害物質である５Ｊ８、およびＰＩ３Ｋ阻害物質ＬＹ２９４００２がまた、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡレベルを上方調節した。
【０３６７】
ＨＥＲ３転写の上方調節の機構を描出するために、フォークヘッド転写因子のＦｏｘＯファミリーを検査したが、それはＡＫＴが、リン酸化によってこれらの分子の細胞下の局在性調節し、それによって、それらが核へ転座することを防止し、転写を調節するためである。ＦｏｘＯファミリーは、標的遺伝子のプロモーターにおけるコンセンサス配列ＴＴＧＴＴＴＡＣを通じてモノマーとして結合する、３つの成員、ＦｏｘＯ１、ＦｏｘＯ３ａ、およびＦｏｘＯ４（それぞれＦＫＨＲ、ＦＫＨＲ−Ｌ１、およびＡＦＸとしても知られる）からなる。ＡＫＴ活性の不在下で、ＦｏｘＯは、優勢的に核であると考えられ、したがって転写を活性化することができる。更に、ＰＲＯＭＯデータベース  （Ｆａｒｒｅ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００３），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１：３６５１−３６５３、およびＭｅｓｓｅｇｕｅｒ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １８：３３３−３３４）を使用して、ＨＥＲ３（ＥＲＢＢ３）プロモーター（転写開始部位の最大５０００ｂｐ上流）における多数の推定ＦｏｘＯ結合部位を特定した。
【０３６８】
第１に、ＰＩ３ＫおよびＡＫＴの、それぞれ化合物Ａおよび５Ｊ８での阻害に続く、ＦｏｘＯタンパク質の細胞内分布を決定した。ＦｏｘＯ４はほぼ検出不可能であり、故に、ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａに集中した。化合物Ａおよび５Ｊ８での処置は、図１２Ｄに実証されるように、ＢＴ４７４およびＭＤＡ４５３細胞の核における双方のＦｏｘＯ因子の蓄積をもたらし、時にサイトゾルのベースラインレベルにおける低減を伴った。ＦｏｘＯが、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの阻害の後のＨＥＲ３転写の増加に関与するかどうかを決定するために、細胞を、ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａに特異的なｓｉＲＮＡ二重鎖または対照ｓｉＲＮＡでトランスフェクトし、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡのレベルをｑＰＣＲによって検査した。ｓｉＲＮＡは、図１２Ｆに示されるように、全ての３つの細胞株中の双方のＦｏｘＯ  ｍＲＮＡのレベルを７０〜８０％低減した。最後に、ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３の同時ノックダウンは、ＢＴ４７４、ＳＫＢＲ３、およびＭＤＡ４５３細胞中のＨＥＲ３  ｍＲＮＡにおける化合物Ａ誘導型増加を撤廃した（図１２Ｅを参照されたい）。
【０３６９】
実施例１８
ＨＥＲ３に対する代償性フィードバックのノックダウンは、ＰＩ３Ｋ阻害物質に対して感作する
【０３７０】
６μＭ化合物Ａで０〜７２時間で処置したＢＴ４７４細胞の詳細な時間経過分析は、総体ＨＥＲ３、Ｙ１１９７およびＹ１２８９においてリン酸化されたＨＥＲ３、２つのＰＩ３Ｋ結合部位、ならびにそのＰＤＫ１部位およびそのＴＯＲＣ２部位Ｓ４７３においてリン酸化されたＡＫＴ  Ｔ３０８の時間依存性上方調節を示した。総体およびｐＨＥＲ３における増加と一致して、ｐＡＫＴ、およびｐＳ６レベルもまた、図１３Ａに示されるように、薬物処置の６時間内に回復し、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達の部分的復活を暗示した。ｐＨＥＲ３は、アダプタータンパク質Ｓｈｃを通じたその相互作用を介して細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ／ＭＡＰＫ）を活性化することが知られるが、ＨＥＲ３のフィードバック再活性化時のｐＥＲＫの回復は、図１３Ａに示されるように一貫しては検出されなかった。ｐＡＫＴの回復はより低かったが、総体ＨＥＲ３およびｐＨＥＲ３のフィードバック上方調節は、図１３Ｂに例証されるように、上記の２０ μＭの薬理学的用量でより顕著であり、ＰＩ３Ｋの阻害がＨＥＲ３のフィードバック活性化を引き起こすことを更に示唆した。これらのデータにより、ＰＩ３Ｋの、ｐ１１０αのＡＴＰ模倣体での阻害時に、細胞は、ＰＩＰ３の幾らかのレベルを維持するためにＨＥＲ３リン酸化を部分的に回復させ、それが今度は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路に対する化合物Ａの総阻害性効果に対向またはそれを限定することが示唆される。
【０３７１】
ＨＥＲ２過剰発現細胞中で、いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、ＰＩ３Ｋの活性化の主要な機構は、ｐＨＥＲ３の、ＰＩ３Ｋの調節サブユニットであるｐ８５のＮ末端におけるＳＨ２ドメインとのカップリングであると考えられる。これらの細胞中で、ｐ８５抗体で沈殿させた主要なチロシンリン酸化タンパク質は、ｐＨＥＲ３であり、ＨＥＲ３とｐ８５（ＰＩ３Ｋ）との間のこの会合は、それがＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害物質（ＴＫＩ）によって妨害されるため、ＨＥＲ２の触媒活性に依存する。上記の会合を所与として、ＰＩ３Ｋの阻害時に、かつｐＨＥＲ３の回復と一貫して、ＨＥＲ３とｐ８５との間の会合の維持または回復が存在するかどうかを検査した。ＢＴ４７４細胞を化合物Ａの漸増濃度で処置し、続いてｐ８５抗体でのプルダウン、ならびにその後のｐＴｙｒおよびＨＥＲ３免疫ブロット分析を行った。化合物Ａでの処置後に、図１３Ｃに示されるように、矢印でマークされる、およそ２００ｋＤａの主要なｐＴｙｒバンド、ならびに他のより小さいかつより少量のｐＴｙｒタンパク質の用量依存性増加が存在した。以前の研究と一貫して、ｐ８５関連のおよそ２００ｋＤａのバンドもまた、図１３Ｄおよび１３Ｆに示されるように、ＨＥＲ３およびｐＨＥＲ３Ｙ１１９７抗体により検出した。ＨＥＲ３のｓｉＲＮＡでのノックダウンは、図１３Ｅおよび１３Ｆに示されるように、化合物Ａ処置細胞からのライセートのｐ８５プルダウンにおけるＨＥＲ３およびｐＨＥＲ３Ｙ１１９７バンドを排除し、ＨＥＲ３をａｓｐ８５関連のおよそ２００ｋＤａ  ｐＴｙｒバンドとして更に確認した。
【０３７２】
ＰＩ３Ｋの阻害時の、総体ＨＥＲ３の代償性の上方調節ならびにｐＨＥＲ３およびｐＡＫＴの部分的維持は、ＰＩ３ＫおよびＨＥＲ３の組み合わされた阻害が、腫瘍細胞増殖および／または生存率を相乗的に阻害するであろうことを示唆した。したがって、我々は、ＢＴ４７４細胞を対照またはＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡ二重鎖のいずれかでトランスフェクトし、それらを化合物Ａで処置し、細胞増殖およびアポトーシスを測定した。単層での細胞増殖は、図１３Ｇおよび１３Ｈに示されるように、ＨＥＲ３ノックダウンおよび化合物Ａの組み合わせによって、いずれかの単独の介入と比較して有意に低減された。相乗アポトーシス促進性効果と一貫して、組み合わせのみが、図１４Ａおよび１４Ｂに示されるように、サブＧ１期ＤＮＡ分画（分解ＤＮＡ）におけるより高い割合の細胞、ならびにＰＡＲＰ開裂を誘導し、それは両方とも細胞死のバイオマーカーであった。同様の結果を、図１５Ｂおよび１５Ｄに示される、単層中にプレートしたＭＤＡ４５３およびＳＫＢＲ３細胞で得た。これらの細胞株の両方において、ＨＥＲ３ノックダウンおよび化合物Ａの組み合わせは、Ｔ３０８およびＳ４７３  ｐＡＫＴならびにｐＳ６を、各処置単独よりも有効に阻害した（図１５Ａおよび１５Ｃを参照されたい）。
【０３７３】
実施例１９
ＨＥＲ３リン酸化の回復は、ＨＥＲ２に依存し、ＨＥＲ２阻害物質によって限定される
【０３７４】
ＨＥＲ２遺伝子増幅を有する乳癌（ＨＥＲ２過剰発現乳癌）細胞中で、ＨＥＲ２受容体は、ＨＥＲ３をリン酸化する主要なチロシンキナーゼであり、それが今度は、ＰＩ３Ｋに直接に結合し、それを活性化する。化合物Ａは、ＨＥＲ２の触媒活性または自己リン酸化に影響を及ぼさないため（例えば、図１１を参照されたい）、ＨＥＲ２過剰発現細胞中で、ＨＥＲ２がチロシンキナーゼとして留まり、ＰＩ３Ｋの阻害時にＨＥＲ３のリン酸化を維持および／または増加させると憶測することは道理にかなっている。したがって、ＨＥＲ２抗体トラスツズマブまたはＨＥＲ２可逆的チロシンキナーゼ阻害物質ラパチニブと組み合わせた化合物Ａの効果を、細胞増殖およびＨＥＲ３リン酸化に関して検査した。ＢＴ４７４細胞中で、これらの組み合わせのうちのいずれかは、図１６Ａおよび１６Ｂに示されるように、化合物ＡまたはＨＥＲ２阻害物質の単独よりも、細胞増殖を阻害する際に有意により有効であった。（図１６に示されるように、Ｌａｐは、ラパチニブであり、Ｔｒａｓは、トラスツズマブである）。この結果と一貫して、ＰＡＲＰ開裂は、図１６Ｃに示される、単一の阻害物質で処置した細胞中ではなく、組み合わせで処置した細胞中のみで観察した。同様の結果を、図１７Ａ〜１７Ｄに示される、２つの他のＨＥＲ２過剰発現株であるＭＤＡ４５３およびＳＫＢＲ３細胞で得た。
【０３７５】
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、細胞増殖に対する化合物Ａのラパチニブまたはトラスツズマブと組み合わせた相乗作用は、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡ転写の阻害ではなくｐＨＥＲ３の回復における低減に起因すると考えられる。化合物Ａとラパチニブもしくは化合物Ａとトラスツズマブ、または各阻害物質単独で処置したＢＴ４７４細胞から単離したＲＮＡにおけるＨＥＲ３についての定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して、実験を行った。トラスツズマブ単独での処置は、図１６Ｄに示されるように、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡレベルにおいて増加しなかったが、化合物Ａとの組み合わせにおいて、ＰＩ３Ｋ阻害物質によって誘導されるＨＥＲ３  ｍＲＮＡの上方調節を強化した。ラパチニブ単独は、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡを顕著に誘導し、この作用は、化合物Ａにあるように、ＰＩ３Ｋ阻害、続いてＦｏｘＯ媒介型転写の抑制の結果である。ラパチニブの効果は、図１６Ｄに示されるように、恐らく、いずれかの薬剤単独と比較して、より著しいＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの阻害の結果として、化合物Ａと組み合わせて使用したときより顕著であった。ｍＲＮＡデータとは対照的に、化合物Ａとラパチニブまたは化合物Ａとトラスツズマブの組み合わせでの２４時間の処置は、図１６Ｅに示されるように、化合物Ａ単独で処置した細胞と比較して、ｐＨＥＲ３の回復を減弱したが、それはＨＥＲ２キナーゼのラパチニブでの阻害、またはリガンド非依存性ＨＥＲ２／ＨＥＲ３二量体のトラスツズマブでの阻害が、ＨＥＲ２のＨＥＲ３への活性化入力を限定することを示唆する。
【０３７６】
実施例２０
ＨＥＲ２およびＰＩ３Ｋの組み合わされた阻害は、ＨＥＲ２依存性異種移植片に対して相乗的である
【０３７７】
ＰＩ３Ｋの組み合わされた阻害およびｐＨＥＲ３のフィードバック回復が、ＨＥＲ２依存性異種移植片に対して相乗的であるかどうかを決定するために、実験を更に行った。故に、トラスツズマブまたはラパチニブの添加が、体内でのＢＴ４７４異種移植片に対する化合物Ａの抗腫瘍効果を強化するかどうかを試験するために、実験を行った。確立したＢＴ４７４異種移植片を担持する胸腺欠損マウスを、化合物Ａ、ラパチニブ、トラスツズマブ、または化合物Ａと各ＨＥＲ２アンタゴニスト／阻害物質での４週間の治療に対して無作為化した。各単剤療法は、腫瘍増殖を有意に遅延させ、このうちトラスツズマブが１／８マウスにおいて完全な腫瘍反応を誘導した唯一の薬剤であった。双方の組み合わせが、単独で与えられた薬物よりも優れていた。ラパチニブと化合物Ａの組み合わせは、腫瘍容積を有意に低減した一方で、化合物Ａおよびトラスツズマブの組み合わせは、完全な腫瘍退縮誘導した（図１８Ａ）。処置群のいずれにおいても、有意な薬物関連毒性はなかった。
【０３７８】
免疫組織学（ＩＨＣ）を使用して、２８日間の処置後の異種移植片中の標的不活性化の薬力学的バイオマーカーを検査するために、実験を行った。処置群のいずれにおいても、ＩＨＣによるＨＥＲ３のレベルは変化しなかった。しかしながら、図１６Ｅに示されるデータと一貫して、図１８Ｂおよび１８Ｃに示されるように、化合物Ａは、膜ｐＨＥＲ３を低減せず、ラパチニブは、腫瘍含量中のｐＨＥＲ３を低減することにおいてトラスツズマブよりも有効であり、化合物Ａとトラスツズマブの組み合わせは、ｐＨＥＲ３レベルについて、単独で与えられた各薬物よりも明らかにより阻害性であった。ＡＫＴの発癌性作用は、細胞質ｐＡＫＴＳ４７３および核ｐＡＫＴＳ４７３の両方のレベルと相関することが示されている。したがって、異種移植切片中の細胞質コンパートメントおよび核コンパートメントの両方におけるｐＡＫＴＳ４７３発現の差異を定量化するために、実験を行った。処置群の間の腫瘍増殖における差異と一致して、核ｐＡＫＴは、化合物Ａとラパチニブまたは化合物Ａとトラスツズマブで処置した異種移植片中で、各々、単一薬剤阻害物質で処置した腫瘍と比較して、より低かった。全ての３つの薬物のうち、化合物Ａは、核ｐＡＫＴレベルを統計的に阻害した唯一の薬物であった。図１８Ｂおよび１８Ｃに示されるように、ｐＡＫＴの細胞中質含量における検出可能な変化はなかった。全体的に、これらの結果は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路のシグナル伝達出力を最大限に阻害するために、ＨＥＲ２過剰発現異種移植片中のＨＥＲ２およびＰＩ３Ｋの組み合わされた阻害が要求されることを示唆する。図１８Ｂ、最上行に示されるように、２８日間の処置後に観察した総体ＨＥＲ３のレベルは、より短期間のアッセイ後の培養中の細胞中で示される、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡおよびタンパク質の上方調節を再生しなかった。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、これは異種移植片の分析の遅れたタイミング（２８日間）の結果であり得ると考えられる。
【０３７９】
実施例２１
ＰＩ３Ｋの阻害は、ＨＥＲ３以外のＲＴＫを誘導する
【０３８０】
図１３Ｃは、ＢＴ４７４細胞中のＰＩ３Ｋの化合物Ａ媒介型阻害時の、検出可能なレベルのｐ８５関連ｐＴｙｒタンパク質における増加を示す。本明細書に提供される結果はまた、ｐ８５（ＰＩ３Ｋ）と共沈殿する顕著なおよそ２００ｋＤａ  ｐＴｙｒのバンドが、図１３Ｄ〜１３Ｆに示されるように、ＨＥＲ３およびｐＨＥＲ３抗体によって認識され、図１３Ｅおよび図１３Ｆに示されるようにＨＥＲ３のｓｉＲＮＡでのノックダウン時に排除されることを実証する。しかしながら、ＰＩ３Ｋが阻害されるときの（図１３Ｃに示される）より低いＭＷ  ｐＴｙｒバンドにおける用量依存性増加は、ＨＥＲ３以外のｐ８５関連タンパク質における増加を示唆する。加えて、図１９Ａに提供される結果は、ＨＥＲ３のｓｉＲＮＡでのノックダウン時に、ｐ８５関連のおよそ２００ｋＤａバンドにおける増加が依然として存在することを示し、それはＰＩ３Ｋを活性に部分的に維持することを目的とした、他の代償性ｐ８５関連チロシンキナーゼおよび／またはアダプターの存在の憶測に更につながる。この仮説を試験するために、２４時間の時間経過にわたって化合物Ａで処置した、２つの異なる濃度（高濃度および低濃度）のＢＴ４７４細胞からのライセートを、チロシンキナーゼの４２個の異なる受容体（ＲＴＫ）に対するプローブを含有するアレイとハイブリッド形成させた。化合物Ａでの処置は、図１９Ｂおよび１９Ｃに示されるように、ＨＥＲ３だけでなく、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ４／ＨＥＲ４、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）−１、−２、−３、および−４、インスリン受容体（ＩｎｓＲ）、インスリン様成長因子−Ｉ受容体（ＩＧＦ−ＩＲ）、エフリン受容体Ａ１（ＥｐｈＡ１）、内皮細胞特異的受容体チロシンキナーゼ２（Ｔｉｅ２）、神経栄養性チロシンキナーゼ受容体１型（ＴｒｋＡ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３受容体（Ｆｌｔ３）、チロシン−タンパク質キナーゼＭｅｒ（ＭＥＲ）、ならびにマクロファージ刺激タンパク質受容体（ＭＳＰＲ）を含む、多数の他のＲＴＫにおける増加もまたもたらした。ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ４、およびＩｎｓＲ等の、これらのＲＴＫのうちの複数は、およそ２００ｋＤａで遊走し、図１９Ａに示されるように、ＨＥＲ３がノックダウンされた細胞中のｐ８５に関連する持続的な高ＭＷ  ｐＴｙｒバンドを説明し得る。これらのＲＴＫの上方調節が転写レベルで生じたかどうかを決定するために、ｑＰＣＲを行い、分析した。図１９Ｄに示されるように、化合物Ａでの処置に続いてＢＴ４７４細胞中で、ＥＲＢＢ４、ＩＧＦ−ＩＲ、ＩｎｓＲ、ＥｐｈＡ１、ＦＧＦＲ２、およびＦＧＦＲ３  ｍＲＮＡにおける増加が存在し、このうちＩＧＦ−ＩＲおよびＩｎｓＲが最も顕著であった。
【０３８１】
ＰＲＯＭＯデータベースを使用して、ＩｎｓＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２遺伝子プロモーター（転写開始部位の最大５０００ｂｐ上流）における多数の推定ＦｏｘＯ結合部位を特定した。ＦｏｘＯ媒介型調節と一貫して、ＦｏｘＯ１およびＦｏｘＯ３ａのｓｉＲＮＡでのノックダウンは、図１９Ｅに示されるように、化合物Ａで処置したＢＴ４７４細胞中のＩＧＦ−ＩＲ、ＩｎｓＲ、およびＦＧＦＲ２  ｍＲＮＡの誘導を限定した。このフィードバックの可能性のある治療上の妥当性を決定するために、これらのＲＴＫの除去が、細胞をＰＩ３Ｋ阻害物質に対して感作したかどうかを検査するための実験を行った。この目的のために、ＨＥＲ２過剰発現ＢＴ４７４およびＭＤＡ４５３細胞ならびにＰＩ３Ｋ−突然変異体ＭＣＦ７細胞を、ＩＧＦ−ＩＲおよびＩｎｓＲに対するｓｉＲＮＡ二重鎖でトランスフェクトし、続いて化合物Ａでの処置を行った。双方のＲＴＫのノックダウンは、図２０Ａおよび２０Ｂに示されるように、全ての３つの細胞株中で有効であった。いずれかのＲＴＫの除去は、図２０Ｃ〜２０Ｅに示されるように、全ての３つの細胞を、化合物Ａ媒介型増殖阻害に対して感作した。２０Ｃ−２０Ｅ．総合すると、これらのデータは、癌細胞が、ｐ８５を関与させ、故にＰＩ３Ｋを活性化することが可能な、多数のＲＴＫまたはアダプターを上方調節するフィードバック機構によって、ＰＩ３Ｋの阻害を限定することを示唆する。今度は、これらの分子は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達を部分的にかつ時間をかけて維持し、単独で与えられたＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の治療的阻害物質の抗腫瘍効果を限定する。
【０３８２】
実施例２２
式Ｉの化合物ならびにＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の阻害物質を用いた癌治療
【０３８３】
本発明は、特定の機構に限定されない。実際、機構の理解は、本発明を実践するために必要ではない。癌細胞株のパネルにおける小分子化合物ＡでのＰＩ３Ｋ阻害の細胞効果は、ＰＩ３Ｋ依存性を示唆する。本明細書に提供される例証的な実験では、ＨＥＲ２遺伝子増幅を有する乳癌細胞中のＰＩ３Ｋ阻害およびその細胞効果が検査されている。ｐＡＫＴ、ｐＳ６、および細胞増殖を撤廃した用量で、ＰＩ３Ｋの化合物Ａでの阻害は、時間依存性のＨＥＲ３発現およびリン酸化のフィードバック上方調節をもたらした。今度は、ｐＨＥＲ３は、図１１、１３、および１５に示されるように、ｐ８５を関与させ、ＰＩ３Ｋを活性化し、ｐＡＫＴおよびｐＳ６の部分的回復を誘導した。ＡＫＴは、転写因子のＦｏｘＯファミリーをリン酸化し、それによってそれらの核転座を防止することが示されている。したがって、ＡＫＴの最初の阻害は、図１２Ｄに示されるように、核中のＦｏｘＯ３ａおよびＦｏｘＯ１タンパク質の蓄積をもたらした。双方のＦｏｘＯタンパク質のノックダウンは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの化合物Ａでの阻害時に、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡの誘導を抑制した（図１２Ｅ）。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本明細書に提供される結果が、ＨＥＲ３がＰＩ３Ｋ／ＡＫＴによって下方調節されることを示唆していると考えられ、それは、ＨＥＲ３活性化リガンドヘレグリンでの処置時にＰＩ３Ｋ阻害物質ＧＤＣ−０９４１がＨＥＲ３  ｍＲＮＡの下方調節を遮断した、卵巣癌細胞における最近の観察と一貫している。
【０３８４】
ＨＥＲ３発現およびリン酸化の上方調節は、ＰＩ３Ｋ阻害物質の抗腫瘍効果を限定した。これは、図１４に示されるように、ＨＥＲ３のｓｉＲＮＡ媒介型ノックダウンが化合物Ａ誘導型細胞死に対して感作し、図１５Ａおよび１５Ｃに示されるように、ｐＡＫＴおよびｐＳ６の化合物Ａ媒介型阻害を強化したという事実によって支持される。この結果は、ＨＥＲ２過剰発現細胞に対して特に妥当性を有し、ここでキナーゼ欠損ＨＥＲ３共受容体は、一旦、ＨＥＲ２キナーゼと二量体化され、それによって活性化されると、ｐ８５を関与させ、ＰＩ３Ｋを活性化する主要な機構となる。実際、ＨＥＲ２増幅を有する乳癌細胞は、ＰＩ３Ｋ阻害物質によって誘導されるアポトーシスに特に感受性がある。更に、ｐ８５とのＨＥＲ２／ＨＥＲ３二量体のこの会合は、他の者によって、ＨＥＲ２依存性細胞の生存率に必須であることが見出されており、したがって、ＰＩ３Ｋに対するＨＥＲ２／ＨＥＲ３の出力の持続的阻害が、ＨＥＲ２阻害物質の抗腫瘍効果に要求される。
【０３８５】
ＰＩ３Ｋの阻害は、ＨＥＲ２キナーゼに影響を及ぼさなかったため、ＨＥＲ３リン酸化は、維持され、更に増加され、図１３Ｄ〜１３Ｆに示されるように、化合物Ａ処置細胞中でｐ８５と会合して留まった。ＨＥＲ２抗体トラスツズマブまたはＨＥＲ２  ＴＫＩラパチニブの添加は、図１６Ｅに示されるように、ＨＥＲ３転写が、阻害物質の組み合わせによって、各阻害物質単独と比較して更に増加されていても（例えば、図１６Ｄを参照されたい）、化合物Ａでの処置時にｐＨＥＲ３の反跳を減弱した。更に、化合物Ａの各ＨＥＲ２アンタゴニストとの両方の組み合わせは、図１８に示されるように、ＨＥＲ２過剰発現異種移植片中のｐＨＥＲ３およびｐＡＫＴレベルを低減すること、ならびにそれらの増殖を阻害することにおいて、各阻害物質単独よりも有効であった。これらのデータは強力に、ＨＥＲ２過剰発現細胞中で、ＰＩ３Ｋが阻害されるとき、ＨＥＲ２キナーゼのラパチニブでの阻害またはリガンド非依存性ＨＥＲ２／ＨＥＲ３二量体のトラスツズマブでの破壊が、上方調節されたＨＥＲ３共受容体に対するＨＥＲ２の活性化入力を限定することを示唆する。
【０３８６】
本明細書に提示されるデータは、ｍＴＯＲのラパマイシンまたはラパログでの阻害が、ＩＲＳ−１の上方調節を介してインスリンおよびＩＧＦ−Ｉシグナル伝達の抑制を軽減し、それによってＰＩ３Ｋ／ＡＫＴおよびＥＲＫを活性化するという報告を回想させる。更に、ＴＯＲＣ１およびＰＩ３Ｋの二重阻害物質もまた、ＨＥＲ３発現を誘導することが示されている。しかしながら、ＴＯＲＣ１阻害物質ラパマイシンは、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡに対する化合物ＡまたはＡＫＴ阻害物質５Ｊ８の効果を反映しなかった（図１１Ｂ）。同様に、ＴＯＲＣ１阻害物質ＲＡＤ００１での処置（エベロリムス）およびＭＥＫ阻害物質ＣＩ−１０４０は、ＨＥＲ３  ｍＲＮＡ／タンパク質またはｐＨＥＲ３を上方調節しなかった（データ図示されず）。これは、ＨＥＲ３のＦｏｘＯ媒介型フィードバック上方調節に対するＡＫＴ阻害の効果がＴＯＲＣ１によって媒介されないことを示唆する。
【０３８７】
本明細書に提供される実験的データは、ＨＥＲ２等のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴシグナル伝達に依存するＲＴＫの治療的阻害物質に当てはまる関連を有する。例えば、トラスツズマブは、単独で与えられるとき、図１８Ｂおよび１８Ｃに示されるように、ＡＫＴの弱い阻害物質であり、故に、ＦｏｘＯ誘導型ＨＥＲ３転写のＡＫＴ媒介型抑制を軽減しない。他方で、ｐＡＫＴのＴＫＩラパチニブでの迅速かつより強力な阻害は、図１６Ｄに示されるＢＴ４７４、ＳＫＢＲ３、およびＳＵＭ２２５細胞（データ図示されず）におけるＨＥＲ３発現の強力な上方調節をもたらす。ラパチニブおよび化合物Ａの組み合わせは、図１６Ａならびに図１６Ａおよび１６Ｃに示されるように体外で、また図１８Ａに示されるように体内で、相乗的であったが、それはまた、図１６Ｄに示されるようにＨＥＲ３  ｍＲＮＡを誘導することにおいて最も強力であった。トラスツズマブによるｐＡＫＴのより弱い阻害にもかかわらず、化合物Ａおよびトラスツズマブの組み合わせは、ｐＡＫＴおよびＢＴ４７４異種移植片の増殖を阻害することにおいて、化合物Ａおよびラパチニブの組み合わせよりも優れているようであった。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、これらの差異は、（１）トラスツズマブの、抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の免疫エフェクターを関与させる能力、および（２）トラスツズマブの、代償性ＨＥＲ３発現を抑制する相対的な能力欠如によって説明され得ると考えられる。
【０３８８】
本明細書に提供される実験証拠は、ＰＩ３Ｋの化合物Ａでの阻害時の、ｐ８５に関連するチロシンリン酸化タンパク質における増加を示唆する。実際、ＨＥＲ３と共遊走するｐ８５関連のおよそ２００ｋＤａのＰ−Ｔｙｒバンドは、図１９Ａに示されるように、ＨＥＲ３がｓｉＲＮＡでノックダウンされた後に、化合物Ａ処置されたＢＴ４７４細胞中で依然として検出可能であった。この結果は、ＰＩ３Ｋを活性に部分的に維持することを目的とした、他の代償性ｐ８５関連のＲＴＫおよび／またはアダプターの存在を示唆する。ＲＴＫアレイおよびｓｉＲＮＡノックダウン実験を使用して、データは、図１９Ｃ〜１９Ｅに示されるように、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの化合物Ａでの阻害時の、ＩｎｓＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２のＦｏｘＯ依存性上方調節の知見を提供した。複数の細胞株中で、ＩｎｓＲおよびＩＧＦ−ＩＲのノックダウンは、図２０Ｃ〜２０Ｅに示されるように、ＰＩ３Ｋ阻害物質に対して感作した。これらのうちの１つである、ＭＣＦ−７細胞株は、ＰＩＫ３ＣＡにおける活性化突然変異を有するが、ＨＥＲ２遺伝子増幅は有さない。興味深いことに、これらの３つのＲＴＫの遺伝子プロモーターは、推定ＦｏｘＯ結合部位を含有する（ＰＲＯＭＯ分析）。これらのデータは、ＰＩ３Ｋ阻害が、様々な腫瘍細胞にわたるＲＴＫの一群の発現およびリン酸化の誘導に関連する可能性があることを暗示する。
【０３８９】
これらの知見は、複数の臨床的関連を有する。癌細胞中で、ＰＩ３Ｋ経路の治療的アンタゴニストは、ＡＫＴを阻害し、ＲＴＫ発現およびそれらの活性の抑制を軽減するであろう。このフィードバックの軽減は、その経路の持続的阻害を限定し、これらの薬剤に対する治療反応を減弱する。このフィードバックの軽減は、ＡＫＴの阻害の大きさおよび強度に見合い、全てのタイプのＰＩ３Ｋ経路アンタゴニストに適用することはできない（すなわち、トラスツズマブ対ラパチニブ対化合物Ａ）。このフィードバックの軽減がまた、正常な組織においても生じ、かつ／または薬物関連毒性を寛解させるかどうかは、更なる研究を有する。いかなる具体的な理論にも拘束されるものではないが、ＨＥＲ２過剰発現細胞中で、ＨＥＲ３の上方調節発現およびＨＥＲ３のＨＥＲ２誘導型リン酸化は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴの阻害に対向する主要な機構であると考えられる。したがって、ＰＩ３Ｋ阻害物質は、このサブタイプの乳癌においてＨＥＲ２アンタゴニストと組み合わせて使用されるべきである。ＨＥＲ２遺伝子増幅を有さない他のＰＩ３Ｋ依存性癌においてＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ阻害物質と組み合わせるために最も適切な抗癌剤は、この経路の阻害時に活性化される主要な代償性フィードバック機構に依存するであろう。
【０３９０】
実施例２３
非ＨＥＲ２増幅腫瘍における化合物ＡおよびＭＭ−１２１の組み合わせの評価
【０３９１】
本研究は、非ＨＥＲ２増幅腫瘍を治療する際の化合物ＡおよびＭＭ−１２１の組み合わせの有効性を評価するために設計した。肺癌細胞株Ａ５４９をこの研究のために選択した。この点に関して、Ａ５４９細胞は、Ｂｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７：３２３９−３２５０（２００１）に示されるように、高度なＨＥＲ２レベルを発現しない。肺Ａ５４９細胞を、標準的な技法を使用して、メスＳｗｉｓｓヌードマウスの皮下に埋め込んだ。腫瘍が１５２．９±９４．７ｍｍ３の平均容量に到達したとき、Ａ５４９異種移植片を、４つの組み合わせ条件で、ＭＭ−１２１および化合物Ａの２つの投薬を用いて、１群当たり７匹のマウスを使用して処置した。対照群は、無処置のまま残した。化合物Ａを、１００または３０ｍｇ／ｋｇ／投与で、毎日経口投与によって、３２日間連続で投与した（Ｄ３７〜Ｄ６８：Ｑ１Ｄ×３２）。ＭＭ−１２１を、５または３０ｍｇ／ｋｇ／注射で、腹腔内経路によって、３日に１回投与した（Ｄ３７、Ｄ４０、Ｄ４３、Ｄ４６、Ｄ４９、Ｄ５２、Ｄ５５、Ｄ５８、Ｄ６１、Ｄ６４、およびＤ６７；Ｑ３Ｄ×１１）。４つの組み合わせ条件は、次の通りであった：化合物Ａを１００ｍｇ／ｋｇ／投与で毎日投与しながら、ＭＭ−１２１を３０ｍｇ／ｋｇで３日毎に１日１回；化合物Ａを１００ｍｇ／ｋｇ／投与で毎日投与しながら、ＭＭ−１２１を５ｍｇ／ｋｇで３日毎に１日１回；化合物Ａを３０ｍｇ／ｋｇ／投与で毎日投与しながら、ＭＭ−１２１を３０ｍｇ／ｋｇで３日毎に１日１回；および化合物Ａを３０ｍｇ／ｋｇ／投与で毎日投与しながら、ＭＭ−１２１を５ｍｇ／ｋｇで３日毎に１日１回。
【０３９２】
共役体の抗腫瘍活性の評価のために、動物を毎日計量し、腫瘍をカリパスによって週２回測定した。ナディア（群の平均）期の２０％体重減少もしくは３回連続した１５％体重減少（群の平均）、または薬物死をもたらした投薬を過度に毒性の投薬と見なした。動物体重は、腫瘍重量を含んだ。腫瘍重量を、質量式（ｍｇ）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２を使用して算出した。主要有効性エンドポイントは、ΔＴ／ΔＣ、中央値回帰パーセント、偏回帰および完全回帰（ＰＲおよびＣＲ）、ならびに無腫瘍生存対象（ＴＦＳ）であった。各々処置（Ｔ）および対照（Ｃ）についての腫瘍容積における変化を、各腫瘍につき、最初の処置日（開始日）の腫瘍容積を、具体的な観察日の腫瘍容積から差し引くことによって算出した。中央ΔＴを治療群について算出し、中央DＣを対照群について算出した。次いで、比率DＴ／ΔＣを算出し、百分率：ΔＴ／ΔＣ＝（デルタＴ／デルタＣ）×１００として表した。用量は、ΔＴ／ΔＣが４０％よりも低いとき治療的に活性と見なし、ΔＴ／ΔＣが１０％よりも低いとき非常に活性と見なす。ΔＴ／ΔＣが０よりも低い場合、その用量を高度に活性として見なし、回帰の百分率に日付を付ける。パーセント腫瘍退縮は、具体的な観察日での処置群における、最初の処置の初日のその容積と比較した腫瘍容積減少のパーセントとして定義する。具体的な時点で、各動物について、回帰パーセントを算出する。中央回帰パーセントを次いで、群について算出した。回帰％（ｔ値）＝［容積ｔ０−容積ｔ／容積ｎｔ０］×１００。偏回帰（ＰＲ）：回帰は、腫瘍容積が処置の開始時の腫瘍容積の５０％まで減少した場合、偏回帰として定義する。完全回帰（ＣＲ）：完全回帰は、腫瘍容積＝０ｍｍ３であるとき達成される（腫瘍容積が記録不可能であるときＣＲと見なされる）。ＴＦＳ：無腫瘍は、研究の終了時（最後の処置から＞１００日後）に腫瘍が検出不可能である動物として定義する。
【０３９３】
結果を表４に提示する。Ｄ３７〜Ｄ６８に算出した平均体重変化に基づいて、用量依存性体重減少を、３０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで処置したマウスについて観察した（それぞれ、ナディア期に−７．３および−１０．３％）。同じ様態で、用量依存性体重減少を、５および３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１で処置し、続いて間善意回復したマウスについて観察した（それぞれ、ナディア期に−３．９および−６．２％）。用量依存性体重減少を、同じそれぞれの用量で単独投与して化合物ＡまたはＭＭ−１２１で処置した（それぞれ、ナディア期に−８．４、−１１．４、−１２．４、および−１２．９％）マウスと比較したときの、５または３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせて３０および１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで処置したマウスについて観察した。５または３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａについて、同じ用量の化合物Ａ単独と比較して、体重減少に対する有意な際は観察されなかった。化合物ＡおよびＭＭ−１２１の組み合わせは、追加された毒性を誘導しなかった。
【０３９４】
ＭＭ−１２１は、３０ｍｇ／ｋｇで３１％のΔＴ／ΔＣを有して僅かに活性であり、５ｍｇ／ｋｇで６６％のΔＴ／ΔＣを有して不活性であった。化合物Ａは、３０ｍｇ／ｋｇで５％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．０５対対照）を有して非常に活性であり、１００ｍｇ／ｋｇで−４％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．００１）および１５％の腫瘍退縮を有して高度に活性であった。３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、−２０％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．００１対対照）および３９％の腫瘍退縮を有して高度に活性であった。この組み合わせは、最高の単一薬剤（１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｐ＜０．０１）よりも活性であり、これらの組み合わせ条件における治療的相乗効果を示した。５ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせた１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、−１７％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．００１対対照）および４１％の腫瘍退縮を有して高度に活性であった。３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせた３０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、−７％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．００１対対照）および１５％の腫瘍退縮を有して高度に活性であった。この組み合わせは、最高の単一薬剤（３０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｐ＜０．０１）よりも活性であり、これらの組み合わせ条件における治療的相乗効果を示した。５ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１と組み合わせた３０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、１６％のΔＴ／ΔＣ（ｐ＜０．０１対対照）および１６％の腫瘍退縮を有して活性であった。
【０３９５】
結論として、増幅または過剰発現されたＨＥＲ２を有さないＡ５４９腫瘍異種移植片を担持するマウスにおいて、治療用量で共投与される２つの薬剤の組み合わせは、死亡率および体重変化によって査定したとき、追加された毒性を示さなかった。ＭＭ−１２１単一薬剤は、３０ｍｇ／ｋｇで僅かな活性を示し、化合物Ａ単一薬剤は、３０および１００ｍｇ／ｋｇで高度な活性を示した。１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａおよび３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１の間の組み合わせで、ならびに３０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａおよび３０ｍｇ／ｋｇのＭＭ−１２１の間の組み合わせで、双方の条件についての最高の単一薬剤（それぞれ、１００ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０１の化合物Ａおよび３０ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０１の化合物Ａ）と比較して、治療的相乗効果を観察した。
【０３９６】
加えて、化合物ＡおよびＭＭ−１２１によるＨＥＲ３調節を、２つの用量での各化合物について、および１つの組み合わせ条件について、メスＳｗｉｓｓヌードマウスの皮下に埋め込まれた測定可能な肺Ａ５４９腫瘍に対して評価した。簡潔に述べると、皮下に埋め込まれた測定可能な肺Ａ５４９腫瘍を担持するマウスを無処置で残したか、あるいは単一薬剤としてのＭＭ１２１によって（５ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの用量で１回投与）、もしくは単一薬剤としての化合物Ａによって（３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与）、または両方の組み合わせによって（ＭＭ１２１について３０ｍｇ／ｋｇでおよび化合物Ａについて１００ｍｇ／ｋｇで）のいずれかで処置した。異種移植片腫瘍におけるＨＥＲ３発現レベルを、最大９６時間にわたって追跡した。
【０３９７】
表５における結果は、化合物ＡによるＰＩ３Ｋ阻害が、Ａ５４９肺モデルにおけるＨＥＲ３発現の若干の増加を誘導する一方で、ＭＭ−１２１治療が、ＨＥＲ３発現を有意に減少させることを示す。化合物ＡおよびＭＭ−１２１での組み合わせ処置は、ＨＥＲ３の有意な減少をもたらした。ＨＥＲ３レベルを下方調節することによって、ＭＭ−１２１は、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路の阻害、および故に、化合物Ａの抗腫瘍活性を強化する。
【表４】
2013539453.tif 000179
【表５】
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【０３９８】
実施形態
１．患者における癌を治療するための方法であって、治療上有効量の式Ｉの化合物ならびに治療上有効量のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を、該患者に共投与することを含む、方法。
【０３９９】
２．式Ｉの化合物は：
【化２７】
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Ｉの化合物、
またはその単一の異性体であり、ここで化合物は、任意にその薬学的に許容される塩として、更に任意に水和物として、および更に任意に溶媒和物としてのものである、実施形態１に記載の方法であるか、あるいは治療上有効量の式Ｉの化合物および薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む薬学的組成物を、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＭＳＰＲ、Ａｘｌ、ＭＡＰ３Ｋ（ＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８  ＭＡＰＫ）、ＭＥＫＫキナーゼ／キナーゼ受容体、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−ＩＲ、およびＦＧＦＲ２の１つ以上の阻害物質と組み合わせて投与する方法であり、ここで式Ｉの化合物は：
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４が−Ｃ（Ｒ１）＝であるか、またはＷ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４のうちの１つもしくは２つが独立して−Ｎ＝であり、残りのものが−Ｃ（Ｒ１）＝であり、ここで各Ｒ１が、独立して水素、アルキル、ハロアルキル、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキルアミノ、またはジアルキルアミノであり、
Ｒ５１が水素またはアルキルであり、
Ｒ５２が水素またはハロであり、
Ｒ５０、Ｒ５３、およびＲ５４が独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、−Ｎ（Ｒ５５）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ５５ａ）Ｒ５５ｂ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、シアノ、アルキルチオ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ５５Ｒ５５ａ、またはアルキルカルボニルアミノであり、Ｒ５５およびＲ５５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ５５ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４が、それらが結合される炭素と一緒になって、５員もしくは６員ヘテロアリールまたは５員もしくは６員ヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｂが、Ｒ３ａで置換され、かつ１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に更に置換されるフェニルであるか、あるいは
Ｂが、１つ、２つ、または３つのＲ３で任意に置換されるヘテロアリールであり、
Ｒ３ａが、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、ハロアルコキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであるか、あるいは
ａ）−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、式中、Ｒ７が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、またはアリールアルキルオキシであり、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリール環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルキルチオ、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｂ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａであり、式中、Ｒ８が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ８ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、シアノアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ８ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独でまたはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、任意に、独立してアルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニル、および−Ｃ（Ｏ）Ｈから選択される１個、２個、または３個の基で置換されるか、
ｃ）−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａであり、式中、Ｒ９が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ９ａが水素、Ｃ２−Ｃ６アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ９ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アリール（任意に１個または２個のハロで置換される）、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シロアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌ）アルキルアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌａｌｋｙｌ）、およびシクロアルキルカルボニルから独立して選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｄ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、式中、Ｒ１０ａが水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、Ｒ１０およびＲ１０ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであるか、
ｅ）−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂであり、式中、Ｒ１１ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、Ｒ１１およびＲ１１ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルであるか、
ｆ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２であり、式中、Ｒ１２が、アルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、およびヘテロシクロアルキルアルキルから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるヘテロシクロアルキルであるか、
ｇ）−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａであり、式中、Ｒ１３が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１３ａがアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリール、またはアリールアルキルであるか、
ｈ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）であり、式中、Ｒ１４、Ｒ１４ａ、およびＲ１４ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｉ）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂであり、式中、Ｒ１５、Ｒ１５ａ、およびＲ１５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａであり、式中、Ｒ１６が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１６ａがアルキルまたはアルケニルであるか、
ｋ）１個または２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリールであるか、
ｌ）−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）であり、式中、Ｒ１７、Ｒ１７ａ、Ｒ１７ｂ、Ｒ１７ｃ、およびＲ１７ｄが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｍ）−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａであり、式中、Ｒ１８ａが水素、アルキル、アルケニル、またはアルコキシであり、Ｒ１８およびＲ１８ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｎ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａであり、式中、Ｒ１９が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１９ａがアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはヘテロシクロアルキルであるか、
ｏ）−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、式中、Ｒ２０が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２０ａがシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであるか、−
ｐ）−ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒ２１ａであり、式中、Ｒ２１が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２１ａおよびＲ２１ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｑ）−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）であり、式中、Ｒ２２、Ｒ２２ａおよびＲ２２ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｒ）−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａであり、式中、Ｒ２３、Ｒ２３ａおよびＲ２３ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、あるいは
ｓ）−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、式中、Ｒ２４が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２４ａが、１個または２個のハロまたはアルキルで任意に置換されるアルコキシアルキルまたはアリールであり、
式中、Ｒ３ａにおけるアルキレンの各々が独立して、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、５個の基で任意に更に置換され、
各Ｒ３（Ｒ３が存在するとき）は、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、アルコキシ、シアノ、ヒドロキシアミノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、ハロアルコキシ、アルキルスルホニル、アミノアルキルオキシ、アルキルアミノアルキルオキシ、またはジアルキルアミノアルキルオキシであるか、あるいは
ａ）−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、式中、Ｒ７が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、またはアリールアルキルオキシであり、ここでＲ７ａおよびＲ７ｂにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリール環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、アルキルチオ、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｂ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ８ａであり、式中、Ｒ８が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ８ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、シアノアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ８ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独でまたはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、任意に、独立してアルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニル、および−Ｃ（Ｏ）Ｈから選択される１個、２個、または３個の基で置換されるか、
ｃ）−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ９ａであり、式中、Ｒ９が水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはハロアルコキシであり、Ｒ９ａが水素、Ｃ２−Ｃ６アルキル、アルケニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アリール、またはアリールアルキルであり、ここでＲ９ａにおけるアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキル環（単独で、またはアリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、およびヘテロアリールアルキルの一部としてのいずれか）が独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、アリール（任意に１個または２個のハロで置換される）、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シロアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌ）、シロアルキルアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌａｌｋｙｌ）、およびシクロアルキルカルボニル独立してから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるか、
ｄ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１０）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１０ａ）Ｒ１０ｂであり、式中、Ｒ１０ａが水素、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、Ｒ１０およびＲ１０ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、またはヒドロキシアルキルであるか、
ｅ）−ＮＲ１１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ａＲ１１ｂであり、式中、Ｒ１１ａが水素、アルキル、アルケニル、ヒドロキシ、またはアルコキシであり、Ｒ１１およびＲ１１ｂが独立して、水素、アルキル、アルケニル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル（ａｌｋｙｌａｍｉｎｏｏａｌｋｙｌ）、またはジアルキルアミノアルキルであるか、
ｆ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ１２であり、式中、Ｒ１２が、アルキル、オキソ、アミノ、アルキルアミノ、およびヘテロシクロアルキルアルキルから選択される１個、２個、または３個の基で任意に置換されるヘテロシクロアルキルであるか、
ｇ）−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３ａであり、式中、Ｒ１３が水素、アルキル、またはアルケニルおよびＲ１３ａは、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリール、またはアリールアルキル）であるか、
ｈ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１４）Ｎ（Ｒ１４ａ）（Ｒ１４ｂ）であり、式中、Ｒ１４、Ｒ１４ａ、およびＲ１４ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｉ）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１５）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１５ａ）Ｒ１５ｂであり、式中、Ｒ１５、Ｒ１５ａ、およびＲ１５ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１６ａであり、式中、Ｒ１６が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１６ａがアルキルまたはアルケニルであるか、
ｋ）１個または２個のアミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルで任意に置換されるヘテロアリールであるか、
ｌ）−Ｎ（Ｒ１７）−Ｃ（＝Ｎ（Ｒ１７ｂ）（Ｒ１７ａ））（ＮＲ１７ｃＲ１７ｄ）であり、式中、Ｒ１７、Ｒ１７ａ、Ｒ１７ｂ、Ｒ１７ｃ、およびＲ１７ｄが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｍ）−Ｎ（Ｒ１８）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ１８ｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１８ａであり、式中、Ｒ１８ａが水素、アルキル、アルケニル、またはアルコキシであり、Ｒ１８およびＲ１８ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｎ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１９）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ１９ａであり、式中、Ｒ１９が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ１９ａがアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはヘテロシクロアルキルであるか、
ｏ）−Ｎ（Ｒ２０）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０ａであり、式中、Ｒ２０が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２０ａがシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであるか、
ｐ）−ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２１ｂ）Ｒ２１ａであり、式中、Ｒ２１が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２１ａおよびＲ２１ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｑ）−Ｎ（Ｒ２２）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２２ｂ）−Ｎ（Ｒ２２ｃ）（Ｒ２２ａ）であり、式中、Ｒ２２、Ｒ２２ａおよびＲ２２ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、
ｒ）−Ｃ０−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ２３ｂ）Ｒ２３ａであり、式中、Ｒ２３、Ｒ２３ａおよびＲ２３ｂが独立して、水素、アルキル、またはアルケニルであるか、あるいは
ｓ）−ＮＲ２４Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−ＯＲ２４ａであり、式中、Ｒ２４が水素、アルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２４ａが、任意に１つまたは２つのハロまたはアルキルで置換されるアルコキシアルキルまたはアリールであり、
式中、Ｒ３におけるアルキレンの各々が独立して、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、およびジアルキルアミノから選択される１個、２個、３個、４個、５個の基で任意に更に置換されるが、
Ｒ５０およびＲ５２が水素であり、Ｒ５１が水素またはメチルであり、Ｒ５３が水素またはメトキシであり、かつＲ５４が水素またはメトキシであるとき、Ｂは、１つのＲ３（Ｒ３はハロである）で置換される、２，３−ヒジドロ−１，４−ベンゾジオキシニル（ｂｅｎｚｏｄｉｏｘｉｎｙｌ）、チエン−２−イル、またはチエン−２−イルでないことを条件とする、化合物である。
【０４００】
３．式Ｉの化合物は、表１に具体的に列挙される化合物である、実施形態１および２のいずれか１つに記載の方法。
【０４０１】
４．ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質は、ラパチニブ、機能性核酸、抗ＨＥＲ２、または抗ＨＥＲ３抗体である、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０２】
５．ＨＥＲ３阻害物質は、抗ＨＥＲ３抗体である、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０３】
６．癌は、ＨＥＲ２非過剰発現癌を含む、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０４】
７．癌は、非ＨＥＲ２増幅腫瘍を含む、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０５】
８．治療上有効量の化合物Ａは、治療上有効量のＭＭ−１２１と共投与される、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０６】
９．組み合わせは、癌の治療における治療的相乗効果を示す、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０７】
１０．組み合わせは、少なくとも２．８、少なくとも２．９、または少なくとも３．０のｌｏｇ１０細胞死滅を達成する、実施形態９に記載の方法。
【０４０８】
１１．癌は、肺癌である、実施形態１、２、および３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０９】
１２．機能性核酸は、ｓｉＲＮＡ分子、ｓｈＲＮＡ分子、ｍｉＲＮＡ分子、またはアンチセンス核酸分子である、実施形態１、２、３、および４のいずれか１つに記載の方法。
【０４１０】
１３．ｓｉＲＮＡは、１８〜３０個のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを含み、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３  ｍＲＮＡに結合するように作動可能である、実施形態１、２、３、４、および５のいずれか１つに記載の方法。
【０４１１】
１４．ｍＲＮＡは、配列番号１に提供されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１２に記載の方法。
【０４１２】
１５．ｓｉＲＮＡは、配列番号３、４、６、７、または８のポリヌクレオチド配列を含む、実施形態１２に記載の方法。
【０４１３】
１６．ｓｉＲＮＡは、裸であるか、連結されているか、あるいは、封入されている、実施形態１２に記載の方法。
【０４１４】
１７．アンチセンス核酸は、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３ポリペプチドをコードする、２本鎖ｃＤＮＡ分子に相補的であるか、またはｍＲＮＡ配列に相補的である、実施形態５に記載の方法。
【０４１５】
１８．２本鎖ｃＤＮＡ分子は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＥＲ２ポリペプチド、その断片、またはその変異体をコードするように作動可能である、実施形態１７に記載の方法。
【０４１６】
１９．ＨＥＲ２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ配列は、配列番号１のポリヌクレオチド配列、その断片、またはその変異体を有する、実施形態１７に記載の方法。
【０４１７】
２０．機能性核酸は、組換えベクターにおいて被検体に投与され、このベクターは、腫瘍中または腫瘍の部位の近くで機能性核酸を発現し、腫瘍中のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３の発現および／または活性を阻害するように作動可能である、実施形態５〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【０４１８】
２１．抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、４Ｄ５、５２０Ｃ９、４５２Ｆ２、７３６Ｇ９、７４１Ｆ８、７５８Ｇ５、７６１Ｂ１０、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、４Ｄ５−８、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態４に記載の方法。
【０４１９】
２２．抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブである、実施形態２１に記載の方法。
【０４２０】
２３．治療上有効量の式Ｉの化合物ならびに治療上有効量のＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を患者に共投与することは、式Ｉの化合物をＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質と同時に、あるいはＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与する前あるいは後に投与することを含む、実施形態１に記載の方法。
【０４２１】
２４．患者に投与される式Ｉの化合物の量は、１日当たり約０．０１〜約１，０００ｍｇの式Ｉの化合物を投与することを含む、実施形態２３に記載の方法。
【０４２２】
２５．投与される式Ｉの化合物の量は、１日につき体重１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇの範囲の式Ｉの化合物の量を投与することを含む、実施形態２４に記載の方法。
【０４２３】
２６．ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与することは、１日につき体重１キログラム当たり約０．００１〜約１００ｍｇのＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３阻害物質を投与することを含む、実施形態２５に記載の方法。
【０４２４】
２７．癌は、心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫、および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫；乳：非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌、髄様癌、浸潤性小葉腺癌、管状癌、粘液癌、炎症性乳癌；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（膵管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍  脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形膠芽腫、乏突起神経膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頚部（子宮頚癌、前腫瘍性子宮頚部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胚性横紋筋肉腫］、卵管（癌腫）；血液系：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒子異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；副腎：神経芽細胞腫を含む、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
【０４２５】
２７．癌は、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮体癌、胃癌（胃腸カルチノイド腫瘍および消化管間質腫瘍を含む）、膠芽腫、肝細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、および甲状腺癌である、実施形態２６に記載の方法。
【０４２６】
２８．癌は、ＨＥＲ２過剰発現癌である、実施形態２６に記載の方法。
【０４２７】
２９．ＨＥＲ２過剰発現癌は、ＨＥＲ２過剰発現乳癌である、実施形態２８に記載の方法。
【０４２８】
３０．化合物は、式Ｉ（ａ）：
【化２８】
2013539453.tif 000182
に従った化合物、
Ｉ（ａ）。
またはその単一立体異性体もしくは立体異性体の混合物であり、任意にその薬学的に許容される塩としてのものであって、式中、
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、およびＷ４は、−Ｃ（Ｈ）−であり、
Ｒ５０は、水素であり、
Ｒ５１は、メチルであり、
Ｒ５２は、水素であり、
Ｒ５３は、水素またはアルコキシであり、
Ｒ５４は、水素、アルキル、アルコキシ、またはハロであるか、あるいはＲ５３およびＲ５４は、それらが結合される炭素と一緒になって、６員のヘテロアリールを形成し、
Ｒ３は、ハロまたはメチルであり、
Ｒ３ａは、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６−アルキレン−Ｎ（Ｒ７ａ）（Ｒ７ｂ）であり、ここでＲ７は、水素であり、Ｒ７ａおよび
Ｒ７ｂは独立して、水素、アルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、またはジアルキルアミノアルキルである、実施形態１に記載の方法。
【０４２９】
Ｒ５１は、メチルであり、Ｒ５０、Ｒ５２、およびＲ５３は、水素であり、Ｒ５４は、ハロまたはアルコキシであるか、あるいはＲ５０、Ｒ５２、およびＲ５４は、水素であり、Ｒ５３は、アルコキシであるか、またはその単一の立体異性体もしくは立体異性体の混合物であり、任意にその薬学的に許容される塩としてのものである、実施形態３０に記載の化合物。
【０４３０】
Ｒ３ａは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＨ３、
−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、もしくは−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ（ＣＨ３）、またはその幾何異性体であり、任意にその薬学的に許容される塩としてのものである、実施形態３１に記載の化合物。
【０４３１】
2013539453.tif 000183
2013539453.tif 000184
2013539453.tif 000185
であるか、
またはその薬学的に許容される塩である、実施形態３１に記載の化合物。
【０４３２】
【化２９】
2013539453.tif 000186
であるか、
またはその薬学的に許容される塩である、実施形態３１に記載の化合物。
【０４３３】
上記の明細書で言及される全ての刊行物および特許は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、具体的な好ましい実施形態に関連して記載されているが、特許請求される本発明は、かかる具体的な実施形態に過度に限定されるべきでないことが理解されるべきである。実際、関連分野の専門家にとって明白である、本発明を行うための記載される様式の種々の修正は、次の特許請求の範囲内にあることが意図される。
【図１Ａ】
2013539453.tif 000188
【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
2013539453.tif 000195
【図６Ａ】
2013539453.tif 000196
【図６Ｂ】
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【図７】
2013539453.tif 000198
【図８Ａ】
2013539453.tif 000199
【図８Ｂ】
2013539453.tif 000200
【図９Ａ】
2013539453.tif 000201
【図９Ｂ】
2013539453.tif 000202
【図１０Ａ】
2013539453.tif 000203
【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
2013539453.tif 000206
【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
2013539453.tif 000217
【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
2013539453.tif 000221
【図１５Ａ】
2013539453.tif 000222
【図１５Ｂ】
2013539453.tif 000223
【図１５Ｃ】
2013539453.tif 000224
【図１５Ｄ】
2013539453.tif 000225
【図１６Ａ】
2013539453.tif 000226
【図１６Ｂ】
2013539453.tif 000227
【図１６Ｃ】
2013539453.tif 000228
【図１６Ｄ】
2013539453.tif 000229
【図１６Ｅ】
2013539453.tif 000230
【図１７Ａ】
2013539453.tif 000231
【図１７Ｂ】
2013539453.tif 000232
【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
2013539453.tif 000234
【図１８Ａ】
2013539453.tif 000235
【図１８Ｂ】
2013539453.tif 000236
【図１８Ｃ】
2013539453.tif 000237
【図１９Ａ】
2013539453.tif 000238
【図１９Ｂ】
2013539453.tif 000239
【図１９Ｃ】
2013539453.tif 000240
【図１９Ｄ】
2013539453.tif 000241
【図１９Ｅ】
2013539453.tif 000242
【図２０Ａ】
2013539453.tif 000243
【図２０Ｂ】
2013539453.tif 000244
【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
2013539453.tif 000246
【図２０Ｅ】
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【配列表】
2013539453000001.app
【国際調査報告】
2013539453.tif 000248
2013539453.tif 000249
2013539453.tif 000250