(57)【要約】  本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた卵巣癌患者の治療有効性を予測する診断方法を提供する。腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳを有するかどうかを評価することを含む、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測するための方法が提供される。従って本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を同定する方法を提供する。また、この方法論を包含するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて癌患者を治療するための改良方法も提供される。本発明はまた、遺伝子Ｋ−ＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮおよびＰＩＫ３ＣＡの突然変異の状態の決定に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた癌患者の治療の有効性を予測する診断方法も提供するものであり、ここでこのような突然変異の状態は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有すると予測される腫瘍の細胞型だけでなく非感受性と予想される腫瘍の細胞型も確認するのに利用できる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い卵巣癌患者を同定する方法であって、該方法は、
患者の腫瘍サンプルを得ること；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い患者であると同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項２】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の卵巣癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い卵巣腫瘍を有するかどうか決定することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する見込みがあるかどうかを診断する工程、
ここで該決定は：
患者の腫瘍サンプルを得て；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定し；そして、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、
によってなされる、および、
（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項３】
卵巣腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法であって、該方法は、
卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓを有する場合、予め決められた突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と前記高い感受性との相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること、
を含む、上記方法。
【請求項４】
患者の卵巣癌を治療する方法であって、
卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、卵巣腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓを有する場合、予め決められた突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と前記高い感受性との相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付ける工程；および、
卵巣腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測される場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程、
を含む、上記方法。
【請求項５】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が非常に高い卵巣癌患者を同定する方法であって、
患者の腫瘍サンプルを得ること；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が非常に高い患者であと同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項６】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の卵巣癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との併用に対して反応性を有する可能性があるかどうかを、患者がこのような組み合わせを用いた治療に応答する可能性が高い卵巣腫瘍を有するかどうかを決定することによって診断する工程、
ここで該決定は：
患者の腫瘍サンプルを得ること；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、
によってなされる、および、
（Ｂ）患者がこのような組み合わせに反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に化学療法剤を併用した治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項７】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い卵巣癌患者を同定する方法であって、該方法は、
患者の腫瘍サンプルを得ること；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有し、且つ、腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い患者であると同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項８】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の卵巣癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを、
患者の腫瘍サンプルを得て；
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定し、および、腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；そして、
腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有し、且つ腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者を、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
によって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い卵巣腫瘍を有するかどうか決定することによって診断する工程、および、
（Ｂ）腫瘍中に突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子が存在し、さらにＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する腫瘍細胞を有することにより、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項９】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い癌患者を同定する方法であって、該方法は、
患者の腫瘍サンプルを得ること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項１０】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを：
患者の腫瘍サンプルを得ること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること
によって、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによって診断する工程；および、
（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項１１】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い癌患者を同定する方法であって、
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項１２】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを：
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
によって、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによって診断する工程；および、
（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項１３】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が非常に高い癌患者を同定する方法であって、該方法は、
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
を含む、上記方法。
【請求項１４】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを：
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること、
によって、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによって診断する工程；および、
（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項１５】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が、非常に高いまたは、非常に低い、癌患者を同定する方法であって、該方法は、
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認すること、
を含む、上記方法。
【請求項１６】
以下の（Ａ）と（Ｂ）の工程を含む、患者の癌を治療する方法：
（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを：
患者の腫瘍サンプルを得ること、
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；
サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと同定すること；および、
患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと同定すること、
によって、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによって診断する工程；および、
（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程。
【請求項１７】
前記ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、ＯＳＩ−９０６である、請求項１〜１６および３０〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、または、抗体フラグメントである、請求項１〜１６および３０〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記化学療法剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、または、エルロチニブである、請求項５または６に記載の方法。
【請求項２０】
１種またはそれより多くの追加の抗癌剤が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と同時に、または、それと連続して共に投与される、請求項２、４、８、１０、１２、１４、１６または３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、コドン１２、１３、または、６１に活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｈ、または、Ｑ６１Ｋから選択される活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記活性化突然変異は、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、または、Ｑ６１Ｈから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、コドン６００、または、６０１に活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｇ、Ｖ６００Ａ、Ｖ６００Ｒ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｋ６０１Ｎ、または、Ｋ６０１Ｅから選択される活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記活性化突然変異は、Ｖ６００Ｅ、または、Ｋ６０１Ｎである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、コドン１１１、５４２、５４５、５４９、または、１０４７に活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｅ５４５Ｇ、Ｅ５４５Ｄ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｋ１１１Ｎ、Ｋ１１１Ｅ、または、Ｄ５４９Ｎから選択される活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である、請求項９〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記活性化突然変異は、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｋ１１１Ｎ、Ｋ１１１Ｅ、または、Ｄ５４９Ｎから選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
患者の腫瘍細胞が、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の非存在下で突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有することを決定することによって、
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、
前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与することを含む、患者の癌を治療する方法。
【請求項３１】
患者の腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓ遺伝子を有することを決定することによって、
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、
前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与することを含む、患者の卵巣癌を治療する方法。
【請求項３２】
腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する場合、予め決められた突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの存在と低い感受性との相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けることを含む、
腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法。
【請求項３３】
腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法であって：
腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、予め決められた突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦの存在と高い感受性との相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けることを含む、上記方法。
【請求項３４】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を同定する方法であって：
患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在し、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在せず、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む、上記方法。
【請求項３５】
前記腫瘍細胞は、骨髄腫、ＮＳＣＬＣ、ＡＣＣ、卵巣癌、ＨＮＳＣＣ、結腸癌、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、または、乳癌から選択される癌由来である、請求項９〜３０および３２〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
患者における腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法であって：
患者の腫瘍サンプルからの腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子または突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮまたは突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する場合、予め決められた突然変異型ＰＴＥＮまたは突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの存在と低い感受性との相関に基づいて、患者におけるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けること、を含む、上記方法。
【請求項３７】
患者の腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子または突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有さないという決定によって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与することを含む、患者の癌を治療する方法。
【請求項３８】
前記ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、シクスツムマブ、ＭＫ−０６４６、フィギツムマブ、ＡＭＧ−４７９、および、ロバツムマブからなる群より選択される抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体である、請求項１〜１６および３０〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[1]癌は、無秩序な増殖、分化しないこと、および、局所組織へ侵入し転移する能力を特徴とする様々な細胞の悪性腫瘍の一般名である。これらの新生物性の悪性腫瘍は、罹患率程度は様々であるが体内のあらゆる組織および臓器に影響を与える。本発明は、癌患者を診断および治療する方法を対象とする。具体的に言えば、本発明は、どの患者がインスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）キナーゼ阻害剤での治療によって最も利益（most benefit from treatment）を得るかを決定する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
[2]ＩＧＦ−１Ｒはインスリン受容体ファミリーに属するものであり、このファミリーには、インスリン受容体（ＩＲ）、ＩＧＦ−１Ｒ（ホモ二量体）、ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ（ハイブリッド受容体）およびＩＧＦ−２Ｒ（マンノース６−リン酸受容体）などが含まれる。ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲハイブリッドは、ＩＧＦと選択的に結合しシグナル伝達するホモ二量体として作用する。ＩＲは２種のアイソフォーム、すなわち：ＩＲ−Ｂ（従来のインスリン受容体）、および、ＩＲ−Ａ（胎児型、これは、選択された腫瘍で再発現されＩＧＦ−ＩＩと選択的に結合する）で存在する。ＩＧＦ−２Ｒは、ＩＧＦ−ＩＩのための「吸込み（sink）」として作用する非シグナル伝達受容体である（Pollak M.N., et al. Nat Rev Cancer 2004 4：505-18）。６種のよく特徴付けられたインスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ−１〜６）があり、これらは、ＩＧＦリガンドと会合して、ＩＧＦを安定化しそれらのＩＧＦ−ＩＲと結合する能力を調節する。
【０００３】
[3]ＩＧＦ−１Ｒは膜貫通ＲＴＫであって、これは、主にＩＧＦ−１と結合するが、ｌＧＦ−ＩＩおよびインスリンともそれより低い親和性で結合する。ＩＧＦ−１がその受容体に結合すると、受容体チロシンキナーゼ活性の活性化、分子間の受容体自己リン酸化、および、細胞基質（主要な基質はＩＲＳ１およびＳｈｃである）のリン酸化が起こる。リガンドによって活性化されたＩＧＦ−１Ｒは正常な細胞では分裂促進性の活性を誘導し、異常な増殖では重要な役割を果たす。ＩＧＦ−ｌ系の主要な生理学的な役割は、正常な増殖および再生の促進である。過剰発現させたＩＧＦ−１Ｒ（インスリン様増殖因子１受容体）は有糸分裂誘発を開始させてリガンド依存性の腫瘍形質転換を促進することができる。さらにＩＧＦ−１Ｒは悪性の表現型の確立と維持において重要な役割を果たす。上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体とは異なり、ＩＧＦ−１Ｒの腫瘍形成性の突然変異型は未だ同定されていない。しかしながら、数種の腫瘍遺伝子がＩＧＦ−１およびＩＧＦ−１Ｒ発現に影響を与えることが実証されている。ＩＧＦ−１Ｒ発現の減少と形質転換への耐性との相関が観察されている。細胞をＩＧＦ−１ＲのＲＮＡに対するｍＲＮＡアンチセンスに曝露することによって、ある種のヒト腫瘍細胞系の軟寒天での増殖が抑制される。ＩＧＦ−１Ｒは、インビボとインビトロの両方においてアポトーシスへの進行を阻害する。また、インビボにおいて、ＩＧＦ−１Ｒレベルが野生型レベルよりも低くなると腫瘍細胞のアポトーシスを引き起こすことも示されている。正常な非腫瘍形成性の細胞では、ＩＧＦ−１Ｒのアポトーシスを引き起こす破壊能力は小さくなるようである。
【０００４】
[4]ＩＧＦ−１経路はヒト腫瘍の発達において重要な役割を有する。ＩＧＦ−１Ｒの過剰発現は様々な腫瘍（乳房、結腸、肺、肉腫）で頻繁にみられ、高悪性度の表現型と関連することが多い。高い循環ＩＧＦ１濃度は、前立腺、肺および乳癌のリスクと強い相関を示す。さらにＩＧＦ−１Ｒは、インビトロおよびインビボにおいて形質転換した表現型の確立と維持に必要である（Baserga R. Exp. Cell. Res., 1999, 253, 1-6）。ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性は、数種の腫瘍遺伝子：ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＳＶ４０Ｔ抗原、活性化Ｒａｓ、Ｒａｆおよびｖ−Ｓｒｃの形質転換活性に必須である。正常な線維芽細胞におけるＩＧＦ−１Ｒの発現は腫瘍性の表現型を誘導し、続いてこれはインビボで腫瘍を形成する。ＩＧＦ−１Ｒ発現は、足場依存性増殖において重要な役割を果たす。またＩＧＦ−１Ｒは、化学療法、放射線およびサイトカインによって誘導されるアポトーシスから細胞を保護することも示されている。逆に、優性阻害ＩＧＦ−１Ｒによる内因性ＩＧＦ−１Ｒの阻害、三重らせん形成、または、アンチセンス発現ベクターは、インビトロでの動物モデルにおける腫瘍増殖で形質転換活性を抑制すること示されている。またＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路は、ＣＲＣにおける受容体およびリガンドの過剰発現、より悪性の表現型との関連、化学療法耐性および予後不良との相関を実証するデータによれば、結腸直腸癌（ＣＲＣ）における確固たる標的となる可能性がある（Saltz, L.B., et al. J Clin Oncol 2007；25（30）: 4793-4799; Tripkovic I., et al. Med Res. 2007 Jul；38（5）：519-25. Epub 2007 Apr 26; Miyamoto S., et al. Clin Cancer Res. 2005 May 1；11（9）：3494-502; Nakamura M., et al. Clin Cancer Res. 2004 Dec 15；10（24）：8434-41; Grothey A, et al. J Cancer Res Clin Oncol. 1999；125（3-4）：166-73）。
【０００５】
[5]タンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤は、哺乳動物の癌細胞の増殖の選択的な阻害剤として有用であることが認識されている。例えばＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子産物のキナーゼ活性を阻害するグリベック（GLEEVECＴＭ）（また、メシル酸イマチニブとして知られている）という２−フェニルピリミジンチロシンキナーゼ阻害剤は、米国食品医薬品局によってＣＭＬ治療用として承認されている。また４−アニリノキナゾリン化合物のタルセバ（TARCEVAＴＭ）（塩酸エルロチニブ）もＦＤＡによって承認されており、これは、選択的にＥＧＦ受容体キナーゼを高い効力で阻害するものである。ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性を直接阻害する化合物、加えてＩＧＦ−１Ｒ活性化をブロックすることによってＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性を減少させる抗体、または、ＩＧＦ−１Ｒ発現をブロックするアンチセンスオリゴヌクレオチドの抗癌剤として使用するための開発は、熱心な研究努力が続けられている分野である（例えば、Larsson, O. et al （2005） Brit. J. Cancer 92：2097-2101; Ibrahim, Y.H. and Yee, D. （2005） Clin. Cancer Res. 11：944s-950s; Mitsiades, C.S. et al. （2004） Cancer Cell 5：221-230; Camirand, A. et al. （2005）Breast Cancer Research 7：R570-R579 （DOI 10.1186/bcr1028）; Camirand, A. and Pollak, M. （2004） Brit. J. Cancer 90：1825-1829; Garcia-Echeverria, C. et al. （2004） Cancer Cell 5：231-239; Sachdev D, and Yee D., Mol Cancer Ther. 2007 Jan；6（1）：1-12; Hofmann F., and Garcia-Echeverria C., Drug Discov Today 2005 10：1041-7を参照）。ＩＧＦ−１Ｒ経路を阻害する物質は、インビトロとインビボの両方において複数のヒト癌モデルで、具体的にはユーイング肉腫および横紋筋肉腫の小児モデルで抗腫瘍性の有効性が実証されてきた（Manara MC, et al. Int J Oncol 2005 27：1605-16）。肉腫を有する患者で有効性があったという初期の示唆があったにもかかわらず、初期の臨床試験におけるＩＧＦ−１Ｒ阻害剤のこれまでの結果にめざましいものはなく、これは、このアプローチで前進するためには患者の選択法および合理的な組み合わせが必要であろうということを示唆している（Tolcher A.W., et al. Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S （June 20 Supplement）, 2007: 3002）。これまでに得られたデータは、ＩＧＦ−１Ｒ経路の構成要素の活性化、過剰発現または増幅が反応性を予測し得ることを示していない。
【０００６】
[6]ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲのシグナル伝達は、細胞毒性の化学療法剤などの様々なその他の抗癌剤、および、放射線治療薬、加えて分子標的治療薬（ＭＴＴ）の存在下で、細胞の生存の活性化に介在する可能性がある。前臨床条件におけるＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害剤のこれらの物質の有効性を増大させる能力が広範囲にわたり調査されており、現在でも臨床条件において活発に調査されている。放射線療法と細胞毒性の化学療法の双方に対する耐性は、ＡＫＴ生存経路を介した活性の増加に関連する可能性があり、このＡＫＴ生存経路は、ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲシグナル伝達によって駆動する可能性がある。インビボでの異種移植片モデルにおいて、放射線治療は、ＩＧＦ−１Ｒアンタゴニストを共投与すると増大された抗腫瘍活性を達成する。様々な条件下で、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、パクリタキセルやドキソルビシンなどの化学療法剤の細胞傷害効果を増大させることが示されている（Wang, Y. H.et al., Mol. Cell Biochem., 2009, 327, 257; Allen, G. W. et al. Cancer Res., 2007, 67, 1155; Zeng, X., et al. Clin. Cancer Res., 2009, 15, 2840; Martins, A. S. et al. Clin. Cancer Res., 2006, 12, 3532）。放射線を用いた場合の観察と同様に、腫瘍細胞はまた、細胞毒性の化学療法に応答してＡＫＴ生存シグナル伝達をアップレギュレートする可能性もある。近年の研究によれば、パクリタキセルなどの細胞毒性物質はＩＧＦ−１Ｒ  活性の特異的なアップレギュレーションを誘発する可能性があり、さらに、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤は、このような物質のアポトーシスを促進する潜在的な能力を増大させる可能性があることが示されている（P. Chinnaiyan, G. W. et al., (2006) Semin. Radiat. Oncol., 16, 59-64）。これらの前臨床データは、化学療法剤と組み合わせたＩＧＦ−１Ｒ阻害剤を評価する多数の臨床研究にとって強固な正当理由を提供するものであった。
【０００７】
[7]いくつかのグループが、タンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤に対する患者の応答を予測する見込みのあるバイオマーカーを調査または開示している（例えば、ＰＣＴ公報：ＷＯ２００４／０６３７０９、ＷＯ２００５／０１７４９３、ＷＯ２００４／１１１２７３、ＷＯ２００８／１０８９８６、ＷＯ２００７／００１８６８、および、ＷＯ２００４／０７１５７２；および、米国特許公開公報：ＵＳ２００５／００１９７８５、ＵＳ２００７／００６５８５８、ＵＳ２００９／００９２５９６、ＵＳ２００９／００９３４８８、ＵＳ２００６／０１４０９６０、および、ＵＳ２００４／０１３２０９７を参照）。結腸直腸癌における非反応性を予測するものとして突然変異型ＫＲＡＳなどのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤に対する応答を予測するために、数種のバイオマーカーが提案されている（例えば、Brugger, W. et al. (2009) J Clin Oncol 27:15s, (suppl; abstr 8020); Siena, S et al (2009) JNCI 101(19):1308-1324; Riely and Ladanyi (2008) J Mol Diagnostics 10(6):493; Jimeno, A. et al. (2009) Cancer J. 15(2):110-13を参照）。加えて、突然変異型ＫＲＡＳなどのいくつかのバイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の応答を予測する可能性を有することが開示されている（例えば、Rodon, J. et al (2008) Mol Cancer Ther. 7:2575-2588; T. Pitts et al. (2009) EORTC Conference, Boston, MA, abstract #2141; Huang, F. et al. (2009) Cancer Res. 69(1):161-170; Rodon, J. et al., (2008) Mol. Cancer Ther. 7:2575-2588を参照）。しかしながらほとんどの場合、このような阻害剤を用いた患者の治療において効果的に医師を導くことができる、または、どの腫瘍がこのような阻害剤と標準的な化学療法薬との併用に最も（とても）好適な応答を示す(respond most favorable)であろうかを医師に示すことができるＦＤＡ承認の診断テストはいまだ存在しない。
【０００８】
[8]ヒトＫＲＡＳ遺伝子は、結腸直腸癌の３０％より多く、および、その他の様々な腫瘍タイプで突然変異している。ＫＲＡＳ遺伝子における体細胞のミスセンス変異により、一つのアミノ酸置換が起こる。最も頻度の高い変更は、ＫＲＡＳ遺伝子のエキソン２におけるコドン１２および１３で検出されている。また、その他の位置、例えばコドン６１および１４６における突然変異も報告されているが、これらの変更はＫＲＡＳ突然変異のなかでもわずかな比率しか占めていない。コドン１２および１３におけるＫＲＡＳ突然変異は、結腸直腸癌の進行に主要な役割を果たすようである。ＫＲＡＳ遺伝子は、多くの受容体シグナル伝達経路（例えばＥＧＦＲ、ＩＧＦ−１Ｒ）において下流で機能する低分子量のＧタンパク質をコードする。このタンパク質は、細胞表面受容体からのシグナル伝達を、ＲＡＳ−ＭＡＰＫ経路などの数種のシグナル伝達カスケードを介して細胞内標的にカップリングすることに関与するＲＡＳタンパク質ファミリーに属する。ＲＡＳタンパク質は通常、活性なＧＴＰ結合型（ＲＡＳ−ＧＴＰ）コンフォメーションと不活性なＧＤＰ結合型（ＲＡＳ−ＧＤＰ）コンフォメーションとをいったりきたりする。ＲＡＳタンパク質は、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）によって活性化され、続いて活性化された受容体の細胞内ドメインでタンパク質複合体になる。ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）によってＲＡＳ−ＧＴＰが加水分解されて不活性な複合体であるＲＡＳ−ＧＤＰになると、シグナル伝達は終結する。生理学的条件下で、インビボでのＲＡＳ−ＧＴＰレベルは、ＧＥＦの活性とＧＡＰの活性とが互いに平衡化することによって強く制御されている。ＲＡＳタンパク質をコードする遺伝子における突然変異によってこのバランスは崩壊し、下流のシグナル伝達活性において混乱が起こる。ＫＲＡＳ突然変異によって、本来のＧＴＰアーゼ活性およびＧＡＰ耐性が不完全なために、永続的に活性なＧＴＰ結合型の状態であるＲＡＳタンパク質が生じる。短時間で不活性化される野生型ＲＡＳタンパク質とは異なり、このような異常なタンパク質は、上流におけるタンパク質−チロシンキナーゼ受容体の刺激がまったくなくても連続的にシグナル伝達経路を活性化することができる。ＲＡＳシグナル伝達経路の腫瘍形成性の活性化は、異常な細胞増殖、増殖および分化などの様々な形態の悪性腫瘍化に関与している。ＫＲＡＳ突然変異は、ほとんどの場合、結腸直腸癌の発症および進行において初期の現象である。この概念と一致して、いくつもの研究によって、ＫＲＡＳ突然変異の状態は、結腸直腸癌における重要な予後因子であることが実証されている。
【０００９】
[9]ヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子は、セリン／スレオニンプロテインキナーゼのｒａｆ／ｍｉｌファミリーに属するタンパク質をコードする。このタンパク質は、細胞分裂、分化および分泌に影響を与えるＭＡＰキナーゼ／ＥＲＫシグナル伝達経路の調節において役割を果たす。Ｂ−ＲＡＦ遺伝子の活性化突然変異は、非ホジキンリンパ腫、結腸直腸癌、悪性黒色腫、甲状腺乳頭癌、非小細胞肺癌および肺腺癌などの様々な癌種の発達において中心的な役割を果たす。ヒトＢ−ＲＡＦにおいて３０を超える単一の部位ミスセンス変異が同定されており、その大部分がキナーゼドメイン内に存在している。なかでも重要なものは、活性化突然変異の一つの、活性化セグメントの６００位の残基におけるバリン（Ｖ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換であり、これがヒト癌におけるＢ−ＲＡＦ突然変異の９０％を占めている。このＶ６００Ｅ突然変異体は極めて大きいキナーゼ活性を有し、インビボでＲＡＳとは独立してＭＡＰキナーゼ経路を構成的に刺激する。
【００１０】
[10]ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼまたはＰＩ３Ｋ）は、細胞増殖、増殖、分化、運動性、生存および細胞内のトラフィッキングなどの細胞機能に関与する酵素ファミリーである。クラスＩＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール３−リン酸生産に関与しており、ｐ１１０として知られている触媒サブユニットと調節サブユニットｐ８５とで構成されており、Ｇタンパク質共役受容体とチロシンキナーゼ受容体によって活性化される。ある種のヒトＰＩ３Ｋ触媒サブユニットは遺伝子ＰＩＫ３ＣＡによって発現され、この遺伝子ＰＩＫ３ＣＡは多くのヒト癌で突然変異している。体細胞ミスセンス変異は、Ｋ−ＲＡＳやＢ−ＲＡＦのようなその他の腫瘍遺伝子における活性化突然変異で観察されているように、特定のドメインに集中している。突然変異体ＰＩＫ３ＣＡは、野生型タンパク質と比較して高い脂質キナーゼ活性を有する。ＰＩＫ３ＣＡにおいて最も一般的な活性化突然変異は、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５ＫおよびＨ１０４７Ｒである。
【００１１】
[11]腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮ（ホスファターゼおよびテンシン相同体、また、ＭＭＡＣまたはＰＴＥＮ−１としても知られている）の生成物は、二重特異性を有するホスファターゼであり、これらはインビボでイノシトールリン脂質を脱リン酸化し、さらに、細胞増殖の制御、細胞周期の停止の誘導、アポトーシス促進、接着のダウンレギュレート付着、および、細胞移動の抑制において重要な役割を有することが示されている。悪性度の高い神経膠腫、加えてその他多くの腫瘍タイプ（例えば前立腺、脳、子宮内膜、甲状腺、乳房および肺における腫瘍など）の４０〜５０％において、第１０染色体（１０ｑ２３）の短いアームに存在するＰＴＥＮ遺伝子が突然変異および／または欠失しており、ＰＴＥＮの後生学的および遺伝学的な変化の役割が、子宮頚の扁平上皮癌（ＳＣＣ）の発達において実証されている。加えてＰＴＥＮは、カウデン病、レルミット−デュクロス病、および、バナヤン−ゾナナ症候群（Bannayan-Zonana syndrome）などの、いくつかのまれな常染色体優性の癌の素因を示す症候群において突然変異している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０６３７０９
【特許文献２】ＷＯ２００５／０１７４９３
【特許文献３】ＷＯ２００４／１１１２７３
【特許文献４】ＷＯ２００８／１０８９８６
【特許文献５】ＷＯ２００７／００１８６８
【特許文献６】ＷＯ２００４／０７１５７２
【特許文献７】米国特許公開公報ＵＳ２００５／００１９７８５
【特許文献８】米国特許公開公報ＵＳ２００７／００６５８５８
【特許文献９】米国特許公開公報ＵＳ２００９／００９２５９６
【特許文献１０】米国特許公開公報ＵＳ２００９／００９３４８８
【特許文献１１】米国特許公開公報ＵＳ２００６／０１４０９６０
【特許文献１２】米国特許公開公報ＵＳ２００４／０１３２０９７
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Pollak M.N., et al. Nat Rev Cancer 2004 4：505-18
【非特許文献２】Saltz, L.B., et al. J Clin Oncol 2007；25（30）: 4793-4799
【非特許文献３】Tripkovic I., et al. Med Res. 2007 Jul；38（5）：519-25. Epub 2007 Apr 26
【非特許文献４】Miyamoto S., et al. Clin Cancer Res. 2005 May 1；11（9）：3494-502
【非特許文献５】Nakamura M., et al. Clin Cancer Res. 2004 Dec 15；10（24）：8434-41
【非特許文献６】Grothey A, et al. J Cancer Res Clin Oncol. 1999；125（3-4）：166-73）。
【非特許文献７】Larsson, O. et al （2005） Brit. J. Cancer 92：2097-2101
【非特許文献８】Ibrahim, Y.H. and Yee, D. （2005） Clin. Cancer Res. 11：944s-950s
【非特許文献９】Mitsiades, C.S. et al. （2004） Cancer Cell 5：221-230
【非特許文献１０】Camirand, A. et al. （2005） Breast Cancer Research 7：R570-R579 （DOI 10.1186/bcr1028）
【非特許文献１１】Camirand, A. and Pollak, M. （2004） Brit. J. Cancer 90：1825-1829
【非特許文献１２】Garcia-Echeverria, C. et al. （2004） Cancer Cell 5：231-239
【非特許文献１３】Sachdev D, and Yee D., Mol Cancer Ther. 2007 Jan；6（1）：1-12
【非特許文献１４】Hofmann F., and Garcia-Echeverria C., Drug Discov Today 2005 10：1041-7
【非特許文献１５】Manara MC, et al. Int J Oncol 2005 27：1605-16
【非特許文献１６】Tolcher A.W., et al. Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S （June 20 Supplement）, 2007: 3002
【非特許文献１７】Wang, Y. H.et al., Mol. Cell Biochem., 2009, 327, 257
【非特許文献１８】Allen, G. W. et al. Cancer Res., 2007, 67, 1155
【非特許文献１９】Zeng, X., et al. Clin. Cancer Res., 2009, 15, 2840
【非特許文献２０】Martins, A. S. et al. Clin. Cancer Res., 2006, 12, 3532
【非特許文献２１】P. Chinnaiyan, G. W. et al., (2006) Semin. Radiat. Oncol., 16, 59-64
【非特許文献２２】Brugger, W. et al. (2009) J Clin Oncol 27:15s, (suppl; abstr 8020)
【非特許文献２３】Siena, S et al (2009) JNCI 101(19):1308-1324
【非特許文献２４】Riely and Ladanyi (2008) J Mol Diagnostics 10(6):493
【非特許文献２５】Jimeno, A. et al. (2009) Cancer J. 15(2):110-13
【非特許文献２６】Rodon, J. et al (2008) Mol Cancer Ther. 7:2575-2588
【非特許文献２７】T. Pitts et al. (2009) EORTC Conference, Boston, MA, abstract #2141
【非特許文献２８】Huang, F. et al. (2009) Cancer Res. 69(1):161-170
【非特許文献２９】Rodon, J. et al., (2008) Mol. Cancer Ther. 7:
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
[12]どのような癌患者にとっても最良の治療形態を決定する改良方法が緊急的に必要とされている。本発明は、腫瘍細胞が、突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮおよびＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーを有するかどうかに基づいて、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いたより効果的な癌患者治療計画にこのような決定を取り入れるために、どの腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に対して最も（非常に、とても、たいへん）効果的に応答する（respond most effectively）であろうかを決定する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
[13]本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて癌患者の治療の有効性を予測するための突然変異遺伝子のバイオマーカーを用いた新しい診断方法、および、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて癌患者を治療するための、薬物投与の前に前記診断方法を利用する改良方法を提供する。
【００１６】
[14]本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた卵巣癌患者の治療有効性を予測する診断方法を提供する。これらの方法は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する卵巣腫瘍細胞増殖の感受性が、このような腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかによって予測されるという驚くべき発見に基づいており、ここで、このような突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する腫瘍細胞は、野生型Ｋ−ＲＡＳを有する腫瘍細胞よりも阻害に対して高い感受性を有する。
【００１７】
[15]また、上記の方法論を包含する卵巣癌患者をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤で治療するための改良方法も提供される。従って、本発明はさらに、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを評価することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する見込み（有望な可能性）があることを診断する工程、および、該腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳを有する場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）を投与する工程、を含む。
【００１８】
[16]本発明はまた、遺伝子Ｋ−ＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦおよびＰＩＫ３ＣＡの突然変異の状態の決定に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた癌患者の治療の有効性を予測する診断方法も提供するものであり、ここでこのような突然変異の状態は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有すると予測される腫瘍の細胞型を同定するのに用いることもでき、さらに、それらのうちの多くは非感受性であると予測される。
【００１９】
[17]例えば本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い、または、利益を得る可能性が最も低い（who are most likely to benefit or not benefit from treatment with an IGR-1R inhibitor）癌の患者を同定する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの発現がない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認すること、を含む。本発明はまた、腫瘍細胞における突然変異型ＰＩＫ３ＣＡまたはＰＴＥＮ発現の存在の決定に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低い癌を有する患者を同定する方法も提供し、ここで突然変異型ＰＩＫ３ＣＡまたはＰＴＥＮ発現は、これらの細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性が相対的に低いことと相関がある。
【００２０】
[18]また、上記の方法を包含するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて癌患者を治療するための改良方法も提供される。従って、本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）を投与する工程を含む。本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子または突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有さないという決定によって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】[19]図１は、ＫＲＡＳ突然変異の状態は、ＯｖＣａ腫瘍細胞系におけるＯＳＩ−９０６感受性と相関があることを示す。８種の卵巣癌腫（ＯｖＣａ）腫瘍細胞系のパネルにおける細胞増殖に対する様々な濃度のＯＳＩ−９０６（ＩＧＦ−１Ｒ ＴＫＩ）の作用を示す。セルタイターＧｌｏ（プロメガ（Promega））を用いて増殖を分析しＯＳＩ−９０６投与の７２時間後に決定した。サンガー・ウェルカム・トラスト（Sanger Wellcome Trust）の報告に従って、ＫＲＡＳ突然変異の状態を記録した。３回以上行われた独立した実験の典型的な結果を示す。灰色の記号は、Ｋ−ＲＡＳ突然変異型（ｍｔ）細胞系ＯＶＣＡＲ−５およびＭＤＡＨ２７７４に関するデータを示す。黒色の記号は、Ｋ−ＲＡＳ野生型（ｗｔ）細胞系ＯＶＣＡＲ−４、ＳＫＯＶ−３、ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−８、ＣａＯＶ３−５および、ＩＧＲＯＶ−１に関するデータを示す。
【図２】[20]図２は、ＫＲＡＳ突然変異の状態およびＯＳＩ−９０６感受性は、ＩＧＦ２リガンドの高度な発現と相関があることを示す。ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲおよびＩＧＦ２の転写発現の活性化状態を、ＯＳＩ−９０６感受性腫瘍細胞系ＭＤＡＨ−２７７４、ならびにＯＳＩ−９０６非感受性細胞系ＯＶＫ１８およびＯＶＣＡＲ４について決定した。ｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲを、ＲＴＫキャプチャーアレイ（ＲＴＫプロテオーム・プロファイラー（RTK Proteome Profiler）, Ｒ＆Ｄシステムズ（R&D Systems））によって決定し、ＩＧＦ２のｍＲＮＡの発現を定量ＰＣＲによって決定した。３回以上行われた独立した実験の典型的な結果を示す。白抜きの矢印は、Ｋ−ＲＡＳ突然変異型（ｍｔ）細胞系ＭＤＡＨ２７７４の細胞系のデータを示す。その他２種の細胞系、ＯＶＫ１８およびＯＶＣＡＲ４（黒い矢印）は、野生型ＫＲＡＳを有する。
【図３】[21]図３は、ＯＳＩ−９０６をパクリタキセルと組み合わせたことによる相乗作用は、ＫＲＡＳ突然変異の状態によって予測できることを示す。８種のＯｖＣａ腫瘍細胞系を含むパネルについて、パクリタキセルと組み合わせたＯＳＩ−９０６の作用を決定した。相乗効果は、ブリス（BLISS）の薬剤の組み合わせの有効性モデルを用いて評価した場合、効果を加算して得られた予測値を超える最大の有効性が何倍増えたかで示される。定量ＰＣＲによって決定されたＩＧＦ２転写発現を示し、各細胞系におけるＫＲＡＳ突然変異の状態を示した。３回以上行われた独立した実験の典型的な結果を示す。白抜きの矢印は、Ｋ−ＲＡＳ突然変異型（ｍｔ）細胞系ＯＶＣＡＲ−５およびＭＤＡＨ２７７４についての細胞系のデータを示す。その他全ての細胞系（黒い矢印）は、野生型ＫＲＡＳを有する。
【図４】[22]図４は、パクリタキセルと組み合わせたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９０６は卵巣腫瘍細胞増殖を相乗的に阻害することを示す。図４Ａは、ＭＤＡＨ−２７７４卵巣腫瘍細胞増殖に対するＯＳＩ−９０６と組み合わせた３ｎＭまたは１０ｎＭのパクリタキセルの作用を示す。プロットにおける点線は、この組み合わせが自然状態で加算的である場合に計算された理論上の期待値を示したものであり、相加性についてはブリス（Bliss）のモデルを用いて決定した。図４Ｂは、ＭＤＡＨ−２７７４卵巣腫瘍細胞における１０ｎＭパクリタキセルによるアポトーシスの誘導に対するＯＳＩ−９０６の作用を示す。図４Ｃは、様々な濃度（左から右へ１００、３０、１０、３および１ｎＭ）のパクリタキセルでのＡｋｔのリン酸化に対する５μｍＭのＯＳＩ−９０６の作用を示す。
【図５】[23]図５は、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦのいずれかの腫瘍細胞における発現は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測することを示す。図５Ａは、１０種の腫瘍タイプから誘導された３２種の腫瘍細胞系を含むパネルについてのＯＳＩ−９０６に対する感受性を、ＥＣ５０値として示した。細胞系を、ＯＳＩ−９０６に対して感受性あり（ＥＣ５０＜１μＭ）または感受性なし（ＥＣ５０＞１０μＭ）のいずれかとして分類した。ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦおよびＰＩＫ３ＣＡについての突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・データベース（サンガー・ウェルカム・トラスト（Sanger Wellcome Trust）, ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス（Wellcome Trust Genome Campus），ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）、または、本明細書において以下で述べられるその他の文献ソースの報告に従って示される。報告されていない突然変異の状態は、網掛けの灰色で表示した。図５Ｂは、代表的な感受性を有する腫瘍細胞系５種を含むパネルについての細胞増殖に対する様々な濃度のＯＳＩ−９０６の作用を示す。
【図６】[24]図６は、ヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子（遺伝子ＩＤ：３８４５）によってコードされたｃ−Ｋ−ｒａｓ２タンパク質アイソフォームｂ前駆体［ヒト］のタンパク質配列、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００４９７６．２を示す。コドン１２、１３および６１によってコードされたアミノ酸残基を下線で示した。
【図７】[25]図７は、ヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子（遺伝子ＩＤ：６７３）によってコードされたＢ−Ｒａｆ［ヒト］のタンパク質配列、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００４３２４．２を示す。コドン６００および６０１によってコードされたアミノ酸残基を下線で示した。
【図８】[26]図８は、ヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子（遺伝子ＩＤ：５２９０）によってコードされた、ホスホイノシチド−３−キナーゼ、触媒性のアルファポリペプチド［ヒト］のタンパク質配列、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６２０９．２を示す。コドン１１１、５４２、５４５、５４９および１０４７によってコードされたアミノ酸残基を下線で示した。
【図９】[27]図９は、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における、突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦのいずれかの腫瘍細胞における発現は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測するものであり、突然変異型ＰＴＥＮまたはＰＩ３Ｋの腫瘍細胞における発現は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する非感受性を予測するものであることを示す。ＮＳＣＬＣ、ＣＲＣ、乳房、卵巣癌、肝細胞癌、多発性骨髄腫およびユーイング肉腫などの１２種の腫瘍タイプから誘導された５０種の腫瘍細胞系を含むパネルについてのＯＳＩ−９０６に対する感受性は、ＥＣ５０値として示される。細胞系を、ＯＳＩ−９０６に対して感受性あり（ＥＣ５０＜１μＭ）または感受性なし（ＥＣ５０＞１０μＭ）のいずれかとして分類した。ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮおよびＰＩＫ３ＣＡについての突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・データベース（サンガー・ウェルカム・トラスト，ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス，ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）、または、本明細書において以下で述べられるその他の文献ソースの報告に従って示される。報告されていない突然変異は、網掛けの灰色で表示した。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
[28]患者の「癌」という用語は、例えば制御不能な増殖、致死性、転移の可能性、急速な増殖および増殖率、ならびに所定の特徴的な形態学的特徴といった癌を引き起こす細胞に典型的な特徴を有する細胞が存在することを意味する。癌細胞は腫瘍の形態であることが多いと予想されるが、このような細胞は被検体内で単独で存在する場合もあるし、または、例えば白血病細胞のような独立した細胞として血流中に循環する場合もある。
【００２３】
[29]本明細書で用いられる「細胞増殖」は、例えば「腫瘍細胞増殖」に関して、特に他の指定がない限り腫瘍学において一般的に使用されるように用いられるが、ここで、この用語は、主として細胞の複製速度が（例えばアポトーシスまたは壊死による）細胞死の速度より速い場合の細胞の複製（すなわち増殖）によって起こる細胞数の増加に関して述べられており、それにより細胞群の大きさの増加がもたらされるが、そのような増殖のうちいくらかは、ある種の環境においては細胞の大きさの増加または個々の細胞の細胞質の体積によるものである可能性もある。従って、細胞増殖を阻害する物質は、増殖の阻害もしくは細胞死の刺激のいずれかまたはその両方によって、これらの２つの対立するプロセス間の平衡が変るように作用することができる。
【００２４】
[30]本明細書で用いられる「腫瘍増殖」または「腫瘍転移の増殖」は、特に他の指定がない限り腫瘍学において一般的に使用されるように用いられ、すなわちこれらの用語は、主として腫瘍細胞増殖の結果としての腫瘍または腫瘍転移の質量または体積の増加に関して述べられる。
【００２５】
[31]本明細書で用いられる「異常な細胞増殖」は、特に他の指定がない限り、正常な調節メカニズムから独立した細胞増殖（例えば接触阻止の喪失）を意味する。このような増殖としては、例えば（１）突然変異したチロシンキナーゼを発現すること、または、受容体チロシンキナーゼの過剰発現によって増殖する腫瘍細胞（腫瘍）；（２）異常なチロシンキナーゼの活性化が起こるその他の増殖性疾患の良性細胞および悪性細胞；（３）受容体チロシンキナーゼによって増殖するあらゆる腫瘍；（４）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化によって増殖するあらゆる腫瘍；および、（５）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化が起こるその他の増殖性疾患の良性細胞および悪性細胞の異常な増殖が挙げられる。
【００２６】
[32]本明細書で用いられる用語「〜を治療すること」は、特に他の指定がない限り、病気または状態を和らげる医療的な補助を施すことを意味する。「〜の治療方法」という成句またはそれと同等の表現は、癌に対して用いられる場合、患者における癌細胞数を減少させたり若しくは除去したり、または、癌の症状を緩和したりするように計画された手法または行動指針を意味する。癌またはその他の増殖性疾患の「治療方法」は必ずしも、そのような癌細胞またはその他の障害が実際に除去されたり、細胞数または障害が実際に低減されたり、または、癌またはその他の障害の症状が実際に緩和されたりするであろうということを意味するものではない。しばしば癌の治療方法は成功の見込みが低くても行われると予想されるが、患者の病歴と推定される生存見込みを考慮すれば、それでも全体的に有益な行動指針とみなされる。
【００２７】
[33]用語「治療上有効な物質」は、研究者、医師またはその他の臨床医が求めている組織、系またはヒトの生物学的または医学的な応答を惹起すると予想される組成物を意味する。
【００２８】
[34]用語「治療有効量」または「有効量」は、研究者、医師またはその他の臨床医が求めている組織、系またはヒトの生物学的または医学的な応答を惹起すると予想される対象の化合物または組み合わせの量を意味する。
【００２９】
[35]本明細書において用いられる用語「反応性を有する」または「反応性」は、ＩＧＦ−１ＲとＩＲキナーゼの両方を阻害するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与に対する患者の反応について述べられる場合、患者が利益を得る可能性が高い陽性の応答または有効な応答を意味する。
【００３０】
[36]用語「医薬品の製造方法」または「医薬品を製造するための〜の使用」は、本明細書において具体的に述べられているように使用するための医薬品の製造に関し、具体的には、一般的に腫瘍、腫瘍転移または癌において使用するための医薬品の製造に関する。この用語は、具体的に述べられた指標におけるいわゆる「スイス式」の特許請求の様式に関する。
【００３１】
[37]本明細書において列挙されるＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号は、ＮＣＢＩエントレッツ（Entrez）遺伝子データベース登録簿（国立バイオテクノロジー情報センター(NCBI), アメリカ国立医学図書館（U.S. National Library of Medicine）, 8600ロックビルパイク, ビルディング３８Ａ, ベセスダ, メリーランド州20894；インターネットアドレス: www.ncbi.nlm.nih.gov/）からの遺伝子の一意の識別子である。
【００３２】
[38]本明細書において以下に記載される実験の詳細説明の章で示されたデータは、卵巣腫瘍細胞は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）による増殖阻害に対して様々な感受性を示すことを実証するものであり、ここでＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞の感受性の程度は、腫瘍細胞における突然変異型Ｋ−ＲＡＳの存在または非存在を決定することによって評価することができ、すなわち、突然変異型Ｋ−ＲＡＳが存在する場合は、その細胞が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対して高い感受性を有する可能性が高いことを示し、または、逆に突然変異型Ｋ−ＲＡＳが存在しない場合（すなわち野生型Ｋ−ＲＡＳ）は、その細胞が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対して低い感受性しか有さないか、または、比較的耐性を有する可能性が高いことを示す。従って、これらの観察から、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の卵巣腫瘍増殖に対する作用の有用な新規の診断方法の基礎が形成され、さらに、患者それぞれに応じた最も適切な治療を選択する際に、このような診断方法を補助する追加のバイオマーカーを腫瘍学者に提供することができる。
【００３３】
[39]また本明細書において以下に記載される実験の詳細説明の章で示されたデータから、卵巣以外の腫瘍の細胞型において、Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異は、感受性を有することに加えてＩＧＦ−１Ｒ阻害剤に対して耐性を有する腫瘍細胞中に見出されるが、このような突然変異は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤感受性の腫瘍細胞系においてより高頻度で存在することも実証される。それに対して、ＰＩＫ３ＣＡにおける突然変異は、突然変異の状態が既知のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤非感受性の腫瘍細胞系の約半分で観察されているが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有する細胞系ではほとんど発生していないことから、これは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）に対する非感受性に関するバイオマーカーとして使用することができる。同様に、ＰＴＥＮにおける突然変異もまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）に対して感受性を有する腫瘍細胞が存在しないことに関連しており、感受性を有する腫瘍細胞では見出されていない。さらに、これらのデータから、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における、腫瘍細胞における突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦのいずれかの存在は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性と相関があることが示されており、従って、この突然変異遺伝子のバイオマーカーの痕跡は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）に対して感受性を有する腫瘍細胞の予測変数として用いることができる。従って、これらの観察から、腫瘍増殖に対するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の作用の有用な新規の診断方法の基礎が形成され、さらに、患者それぞれに応じた最も適切な治療を選択する際に、このような診断方法を補助する追加のバイオマーカーを腫瘍学者に提供することができる。
【００３４】
[40]本明細書で説明されている「突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子」は、既知のＫＲＡＳを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子（遺伝子ＩＤ：３８４５；例えばＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００４９７６で示されるタンパク質をコードする；図６を参照）を意味する。いくつかの典型的な活性化突然変異としては、コドン１２、１３および６１における活性化突然変異のいずれかが挙げられ、なかでも例えば、これらに限定されないが、活性化突然変異：Ｇ１２Ｄ（例えばＧＧＴ＞ＧＡＴ）、Ｇ１２Ａ（例えばＧＧＴ＞ＧＣＴ）、Ｇ１２Ｖ（例えばＧＧＴ＞ＧＴＴ）、Ｇ１２Ｓ（例えばＧＧＴ＞ＡＧＴ）、Ｇ１２Ｒ（例えばＧＧＴ＞ＣＧＴ）、Ｇ１２Ｃ（例えばＧＧＴ＞ＴＧＴ）、Ｇ１３Ｄ（例えばＧＧＣ＞ＧＡＣ）、Ｑ６１ＨおよびＱ６１Ｋ）が挙げられる。一実施態様において、突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子は、１つの活性化突然変異を有する。その代わりの実施態様において、突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子は、１またはそれより多くの活性化突然変異を有し、例えば１、２、３または４つの活性化突然変異を有する。この遺伝子から発現されるいくつかの典型的な突然変異型Ｋ−ＲＡＳタンパク質としては、これらに限定されないが、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、およびその他の細胞によって発現される天然の変異体が挙げられる。
【００３５】
[41]本明細書で説明されている「突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子」は、既知のＢＲＡＦを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子（遺伝子ＩＤ：６７３；例えばＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００４３２４で示されるタンパク質をコードする；図７を参照）を意味する。いくつかの典型的な活性化突然変異としては、コドン６００および６０１における活性化突然変異のいずれかが挙げられ、なかでも例えば、これらに限定されないが、活性化突然変異Ｖ６００Ｅ（例えばＴ１７９９Ａ）、Ｖ６００Ｇ（例えばＴ１７９９Ｇ）、Ｖ６００Ａ（例えばＴ１７９９Ｃ）、Ｖ６００Ｒ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｋ６０１ＮおよびＫ６０１Ｅが挙げられる。一実施態様において、突然変異型ＢＲＡＦ遺伝子は、１つの活性化突然変異を有する。その代わりの実施態様において、突然変異型ＢＲＡＦ遺伝子は、１またはそれより多くの活性化突然変異を有し、例えば１、２、３または４つの活性化突然変異を有する。この遺伝子から発現されるいくつかの典型的な突然変異型Ｂ−ＲＡＦタンパク質としては、これらに限定されないが、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、およびその他の細胞によって発現される天然の変異体が挙げられる。
【００３６】
[42]本明細書で説明されている「突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子」は、既知のＰＩＫ３ＣＡを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有する、ヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子（遺伝子ＩＤ：５２９０；例えばＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００６２０９で示されるタンパク質をコードしており、また、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼの１１０ｋＤａの触媒サブユニット、または、ｐ１１０−アルファとしても知られている；図８を参照）を意味する。いくつかの典型的な活性化突然変異としては、コドン１１１、５４２、５４５、５４９および１０４７における活性化突然変異のいずれかが挙げられ、なかでも例えば、これらに限定されないが、活性化突然変異Ｅ５４２Ｋ（例えばＧ１６２４Ａ）、Ｅ５４５Ｋ（例えばＧ１６３３Ａ）、Ｅ５４５Ｇ（例えばＡ１６３４Ｃ）、Ｅ５４５Ｄ（例えばＧ１６３５Ｔ）、Ｈ１０４７Ｒ（例えばＡ３１４０Ｇ）、Ｈ１０４７Ｌ（例えばＡ３１４０Ｔ）、Ｋ１１１Ｎ、Ｋ１１１ＥおよびＤ５４９Ｎが挙げられる。一実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、１つの活性化突然変異を有する。その代わりの実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、１またはそれより多くの活性化突然変異を有し、例えば１、２、３または４つの活性化突然変異を有する。この遺伝子から発現されるいくつかの典型的な突然変異型ＰＩＫ３ＣＡタンパク質としては、これらに限定されないが、対立遺伝子変異体、スプライス変異体、およびその他の細胞によって発現される天然の変異体が挙げられる。
【００３７】
[43]本明細書で説明されている「突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子」は、細胞中で酵素を不活性化する、または、酵素活性を減少させる突然変異を有する、ヒトＰＴＥＮ遺伝子（遺伝子ＩＤ：５７２８；例えばＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿０００３０５で示されるタンパク質をコードしており、また、ホスファターゼおよびテンシン同族体のＭＭＡＣ１またはＰＴＥＮ１としても知られている）を意味する。
【００３８】
[44]用語「活性化突然変異」は、構成的に活性なタンパク質が生じる突然変異を意味する。このような突然変異は、例えば膜貫通型受容体への活性化リガンドの結合による細胞外の刺激がない状態であっても、このようなタンパク質が連続的に活性化状態になるようなシグナル伝達経路を引き起こす可能性がある。
【００３９】
[45]用語「Ｘ＃Ｙ」は、ポリペプチド配列における突然変異に関して当分野で認められている用語であり、ここで「＃」は、ポリペプチドのアミノ酸番号に基づく突然変異の位置を示し、「Ｘ」は、野生型タンパク質配列におけるその位置で見出されたアミノ酸を示し、「Ｙ」は、突然変異体タンパク質におけるその位置におけるアミノ酸を示す。例えば、Ｂ−ＲＡＦポリペプチドに関して「Ｖ６００Ｅ」という表記は、野生型Ｂ−ＲＡＦ配列のアミノ酸番号６００位にはバリンが存在し、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ配列ではバリンがグルタミン酸で置換されていることを示す。一文字または三文字のアミノ酸暗号が使用できる。また、コーディング核酸配列における突然変異の位置やヌクレオチド中の変化を示すためにも類似の用語も用いられる。ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦおよびＰＩＫ３ＣＡポリペプチドのアミノ酸の番号付けは、ＮＣＢＩデータベースで用いられているものであり、図６〜８で突然変異が発見されたコドンのアミノ酸残基を示す。
【００４０】
[46]従って、本発明のいずれかの方法において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、既知のＫＲＡＳを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子であり得る。その代わりの実施態様において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子はコドン１２、１３または６１に活性化突然変異を有する、ヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である。さらなる実施態様において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、コドン１２に活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である。さらなる実施態様において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１ＨまたはＱ６１Ｋから選択される活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である。その他の実施態様において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３ＤまたはＱ６１Ｈから選択される活性化突然変異を有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である。その他の実施態様において、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子は、活性化突然変異Ｇ１２Ｖを有するヒトＫ−ＲＡＳ遺伝子である。
【００４１】
[47]従って、本発明のいずれかの方法において、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、既知のＢ−ＲＡＦを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子であり得る。その代わりの実施態様において、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、コドン６００または６０１に活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である。さらなる実施態様において、〆突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、Ｖ６００Ｅ、Ｖ６００Ｇ、Ｖ６００Ａ、Ｖ６００Ｒ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｋ、Ｋ６０１ＮまたはＫ６０１Ｅから選択される活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である。その他の実施態様において、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、Ｖ６００ＥまたはＫ６０１Ｎから選択される活性化突然変異を有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である。その他の実施態様において、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子は、活性化突然変異Ｖ６００Ｅを有するヒトＢ−ＲＡＦ遺伝子である。
【００４２】
[48]従って、本発明のいずれかの方法において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、既知のＰＩＫ３ＣＡを活性化する点変異部位のいずれかに活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子であり得る。その代わりの実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、コドン１１１、５４２、５４５、５４９または１０４７に活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である。さらなる実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、コドン１１１、５４５、５４９または１０４７に活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である。さらなる実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｅ５４５Ｇ、Ｅ５４５Ｄ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｋ１１１Ｎ、Ｋ１１１ＥまたはＤ５４９Ｎから選択される活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である。その他の実施態様において、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は、Ｅ５４５Ｋ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｋ１１１Ｎ、Ｋ１１１ＥまたはＤ５４９Ｎから選択される活性化突然変異を有するヒトＰＩＫ３ＣＡ遺伝子である。
【００４３】
[49]本発明に関して、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９０６に対する感受性は、腫瘍細胞が１μＭ未満のＥＣ５０（半数効果濃度）で阻害される場合は高いと定義され、腫瘍細胞が１０μＭより大きいＥＣ５０で阻害される場合は低い（すなわち相対的に耐性を有する）と定義される。これらの値の間の感受性は、中間とみなされる。その他のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、具体的には本明細書において以下で説明される式Ｉで示される化合物の場合、それらは、同じシグナル伝達経路を阻害することによって腫瘍細胞増殖を阻害するため、定性的に類似した結果が期待されるが、ＥＣ５０値は、定量的に、ＯＳＩ−９０６に対するその他の阻害剤の相対的な細胞の効力に応じて異なる可能性がある。従って、例えばより有効なＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性は、その腫瘍細胞がそれ相応に低いＥＣ５０で阻害される場合は高いと定義されると予想される。腫瘍の異種移植片の研究において、インビトロでの培養でいずれもＯＳＩ−９０６に高い感受性を有する様々な腫瘍細胞型の腫瘍細胞を用いたところ、これらの腫瘍は一貫して、インビボにおいて高い腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）で阻害される（本明細書に記載の実験の章を参照）。それとは対照的に、類似の研究において、インビトロでの培養でＯＳＩ−９０６に低い感受性しか有さない腫瘍細胞を用いたところ、このような腫瘍は、インビボにおいて低い腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）でしか阻害されない。これらのデータから、腫瘍細胞培養における例えばＯＳＩ−９０６のようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性は、インビボでの腫瘍の感受性を予測するものであるということが示される。
【００４４】
[50]ＥＣ５０（半数効果濃度）という用語は、特定の曝露時間中に基底値と最大値との間の半分まで応答を誘導する化合物の濃度を意味し、化合物の効力の尺度として用いられる。
【００４５】
[51]従って、本発明は、卵巣腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、腫瘍細胞増殖は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有する可能性が高いことを予測すること、を含む。この方法を単独で、または、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与に対する応答を予測するためのその他の診断テストと共に患者の腫瘍細胞サンプル（例えば、腫瘍生検、または、血液サンプルから単離した循環する腫瘍細胞）に適用することによって、この方法は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療的な投与により利益を得ると予測される癌患者を選択するのに利用することができる。従って、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い患者であることを確認（同定）すること、を含む。この方法の基礎となる認識は、卵巣腫瘍細胞における突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子の存在は、腫瘍細胞は野生型ＫＲＡＳを有する卵巣腫瘍細胞よりも増殖阻害に対してＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤により高い感受性を有することと互いに関係があるということである。
【００４６】
[52]従って、本発明は、卵巣腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓを有する場合、突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と高い感受性の予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００４７】
[53]従って、本発明は、患者の卵巣癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、卵巣腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓを有する場合、突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と高い感受性の予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けることによって、卵巣腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；および、卵巣腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測される場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００４８】
[54]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い患者であることを確認（同定）すること、を含む。
【００４９】
[55]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認（同定）すること、を含む。
【００５０】
[56]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルからの腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い患者であることを確認（同定）すること、を含む。
【００５１】
[57]本発明はまた、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の卵巣腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程、突然変異型Ｋ−ｒａｓが患者の卵巣腫瘍細胞中に存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いことを確認（同定）する工程、および、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００５２】
[58]本発明はまた、卵巣癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療に対してに反応性を有するかどうかを予測する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍中にＫ−ｒａｓ突然変異が存在するかどうかを決定することを含み、ここでＫ−ｒａｓ突然変異がコドン１２またはコドン１３中に存在し；さらにＫ−ｒａｓ突然変異が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療に対して反応性を有すると予測される。
【００５３】
[59]本発明はさらに、患者の卵巣癌の治療方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認（同定）することによってなされる）、および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００５４】
[60]本発明はさらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が高いと確認（同定）すること、を含む。
【００５５】
[61]本発明はさらに、患者の卵巣癌の治療方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との併用に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）、および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との併用に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に化学療法剤を併用した治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００５６】
[62]「ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤とを併用した治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する」工程を含む本発明の方法のいずれかに用いられる化学療法剤は、以下の物質：パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、または、エルロチニブから選択することができる。従って、一実施態様において、このような化学療法剤は、パクリタキセルまたはドセタキセルである。その他の実施態様において、化学療法剤は、ドキソルビシンである。その他の実施態様において、化学療法剤は、エルロチニブである。
【００５７】
[63]本発明はさらに、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、本明細書において説明される突然変異型ＫＲＡＳの存在を決定する方法のいずれかを用いて、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程、および、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。この方法について、好ましいＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の例は、ＯＳＩ−９０６、または、薬理学的に許容できる塩またはそれらの多形体など類似の特徴（例えば選択性、効力）を有する化合物である。この方法において、個々の患者に関するあらゆる追加の環境と合わせ考慮して、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるという予測のもとに、投与する医師によって適切であると判断された場合に、１種またはそれより多くの追加の抗癌剤または治療をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と同時に、または、それと連続して共に投与することができる。
【００５８】
[64]医療分野における当業者であれば当然のことながら、卵巣癌を有する患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する的確な方式、それに続く患者が有する可能性があるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する反応性の診断は、治療にあたる医師の裁量で行われると予想される。用量、その他の抗癌剤との組み合わせ、タイミングおよび投与頻度などの投与様式は、患者が有する可能性があるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する反応性の診断、加えて患者の状態および病歴の影響を受ける可能性がある。従って、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して比較的感受性が低いと予測された卵巣腫瘍を有すると診断された患者でさえも、具体的には腫瘍のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を変更する可能性があるその他の抗癌剤または物質と組み合わせれば、このような阻害剤での治療によっても利益を得る可能性がある。
【００５９】
[65]本発明はさらに、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、例えば本明細書において説明される腫瘍細胞中の突然変異型ＫＲＡＳの存在を決定する方法のいずれかによって、腫瘍細胞がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して感受性を有するかどうかを評価することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に対して有効な応答を示す可能性が高い患者であると確認する工程、および、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。一実施態様において、治療に使用されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、ＯＳＩ−９０６を含む。
【００６０】
[66]本発明はまた、患者の卵巣腫瘍細胞増殖を阻害する方法を提供するものであり、本方法は、本明細書において説明される腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法のいずれかを用いることによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に対して有効な応答を示す可能性が高い患者であると確認（同定）する工程、および、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。一実施態様において、治療に使用されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、ＯＳＩ−９０６を含む。
【００６１】
[67]本発明はさらに、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、本明細書において説明されるを決定する方法突然変異型ＫＲＡＳバイオマーカーのいずれかによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に対して有効な応答を示す可能性が低い、または、そのような可能性がない患者であると確認（同定）する工程、および、前記患者をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤以外の抗癌治療で治療する工程を含む。この方法の一実施態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤以外の抗癌治療は、卵巣癌の標準的な治療剤であり、例えばシスプラチンまたはカルボプラチンのいずれかと組み合わせたパクリタキセルである。
【００６２】
[68]本発明は、本明細書において説明されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）するあらゆる方法を提供するものであり、さらに、上述した通りの方法であって、患者の腫瘍におけるＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２（すなわちインスリン様増殖因子１および／または２）のレベルを評価する追加の工程をさらに含む方法も提供する。本発明はまた、本明細書において説明されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤でのあらゆる治療方法を提供するものであり、さらに、上述した通りの方法であって、患者にＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程の前に、患者の腫瘍におけるＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２（すなわちインスリン様増殖因子１および／または２）のレベルを評価する追加の工程をさらに含む方法も提供する。ＩＧＦ−１Ｒは、リガンド（すなわちＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２）が結合するときだけ活性化されることが報告されていることから、腫瘍中に存在するＩＧＦ−１Ｒリガンドがない場合、本発明の方法のうち１つまたはそれより多くにおいて腫瘍細胞がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して感受性を有することが予測されていたとしても、その腫瘍細胞は、このような環境下では増殖および生存にＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達経路を頼りにすることができず、従って、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は恐らく効果的な治療にはならないと予想される。多くの腫瘍において、高レベルのＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が発現されることがわかっており（Pollack, M.N. et al. (2004) Nature Reviews Cancer 4:505-518)、ここで、このようなＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２は、腫瘍細胞そのものに由来する場合もあるし、腫瘍中に存在する間質細胞に由来する場合もあるし、または、血管系を介して非腫瘍細胞（例えば肝臓細胞）に由来する場合もある。ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルの評価は当業界公知のあらゆる方法によって行うことができ、このような方法としては、例えば、バイオマーカーレベルを評価するための本明細書において説明されるあらゆる方法が挙げられ、例えばイムノアッセイによるＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２タンパク質レベルの決定；ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のｍＲＮＡ転写レベルの決定が挙げられる。その代わりの実施態様において、患者の腫瘍におけるＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２（すなわちインスリン様増殖因子１および／または２）のレベルを評価する工程は、患者の血液または血清中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２（すなわちインスリン様増殖因子１および／または２）のレベルを評価する工程で置き換えることもできる。この代替法は、腫瘍中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルの直接的な尺度ではないが、腫瘍中のＩＧＦ−１Ｒに対するリガンドの将来的な利用可能性の指標を得ることができ、さらに、より簡単でより安価な試験である。このようなＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の間接的な評価の起こり得る欠点は、腫瘍中でＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が、腫瘍細胞そのものまたは腫瘍内の間質細胞のいずれかによって局所的に生産されるような場合、腫瘍中のリガンドレベルの真の指標が得られ��い可能性があることである。このような追加のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２レベルを評価する工程を用いた方法において、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の存在は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高い、または、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断されることを確認するのに必要な追加の条件であり、従って、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する前に必要な追加の条件である。
【００６３】
[69]従って、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有しており、さらにＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い患者であることを確認すること、を含む。
【００６４】
[70]本発明はまた、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があることを診断する工程（ここで該診断は、腫瘍細胞中に突然変異型ＫＲＡＳが存在するかどうかを決定することによってなされ、ここで突然変異型ＫＲＡＳの存在は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する）；患者の腫瘍（または血液または血清）中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のレベルを評価する工程；および、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断され、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が腫瘍中に存在すると決定された場合（または血液または血清レベルが、腫瘍細胞に対してＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２は利用可能性を有することを示す場合）、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。一実施態様において、腫瘍中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の存在は、腫瘍細胞中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２タンパク質のレベルを（例えば免疫組織化学によって）評価することによって決定される。その他の実施態様において、腫瘍中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の存在は、腫瘍細胞中のＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２のＲＮＡ転写物レベルを（例えば定量ＲＴ−ＰＣＲによって）評価することによって決定される。
【００６５】
[71]本発明はまた、患者の卵巣腫瘍または腫瘍転移を治療する方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定し、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があることを診断する工程；および、腫瘍中に突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子とＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の存在とを示す腫瘍細胞を有することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００６６】
[72]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い卵巣癌患者を確認する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有し、腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い患者であることを確認すること、を含む。
【００６７】
[73]本発明はまた、患者の卵巣癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い卵巣腫瘍を有するかどうか決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定し、さらにＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２がそれらの腫瘍中に存在するかどうかを評価すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有し、腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認（同定）することによってなされる）、および、（Ｂ）腫瘍中に突然変異型ＫＲＡＳ遺伝子とＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２の存在とを示す腫瘍細胞を有することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００６８】
[74]前記の方法における治療有効性は、例えば患者に存在する卵巣腫瘍のサイズまたは卵巣腫瘍細胞の存在と相関性があるバイオマーカーの減少を測定すること、または、卵巣腫瘍細胞の増殖の程度の分子決定基を分析することによって決定することができる。
【００６９】
[75]本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００７０】
[76]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００７１】
[77]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００７２】
[78]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルからの腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子または突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００７３】
[79]本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得ること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが患者の腫瘍における細胞中に存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００７４】
[80]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００７５】
[81]本発明は、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得ること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが患者の腫瘍における細胞中に存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００７６】
[82]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００７７】
[83]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００７８】
[84]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い、または、利益を得る可能性が最も低い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認すること、を含む。
【００７９】
[85]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００８０】
[86]患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があることを評価するために、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ遺伝子および突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定することを含む、本明細書において説明される方法のいずれかに関して、本発明はまた、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせに対して反応性を有する可能性があることを評価するためのそれに相当する方法、および、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせを用いた治療方法を提供する。例えば本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせを用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせを用いた治療により利益を得る可能性が高い患者を確認（同定）すること、を含む。本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせに対して反応性を有する可能性があることを診断する工程（ここで該診断は、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせでの治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせを用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせに反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と化学療法剤との組み合わせを投与する工程を含む。
【００８１】
[87]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在し、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在せず、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること、を含む。
【００８２】
[88]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在し、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在せず、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００８３】
[89]本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い、または、利益を得る可能性が最も低い癌を有する患者を確認（同定）する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在し、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在せず、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認すること、を含む。
【００８４】
[90]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、（Ａ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して反応性を有する可能性があるかどうかを診断する工程（ここで該診断は、患者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に応答する可能性が高い腫瘍を有するかどうかを決定することによってなされ、ここで該決定は：患者の腫瘍サンプルを得て、サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；サンプルの腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在するかどうかを評価すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦが存在し、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在せず、さらに腫瘍中にＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２が存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が高いと確認すること；および、患者の腫瘍細胞中に突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在する場合、その患者は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が低いと確認することによってなされる）；および、（Ｂ）患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００８５】
[91]本発明は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００８６】
[92]本発明は、腫瘍を有する患者の治療方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での突然変異型Ｋ−ｒａｓの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること；および、腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測される場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００８７】
[93]本発明は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での突然変異型Ｂ−ＲＡＦの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００８８】
[94]本発明は、腫瘍を有する患者の治療方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定することによって腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；腫瘍細胞が、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定する工程；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での突然変異型Ｂ−ＲＡＦの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付ける工程；および、腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測される場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００８９】
[95]本発明は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの存在と低い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００９０】
[96]本発明は、腫瘍を有する患者の治療方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの存在と低い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付ける工程；および、腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されなかった場合（すなわち突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が見出されなかった場合）、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００９１】
[97]本発明は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮを有する場合、突然変異型ＰＴＥＮの存在と本明細書において説明されているような低い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００９２】
[98]本発明は、患者における腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：患者の腫瘍サンプルからの腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子または突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮまたは突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する場合、患者において、突然変異型ＰＴＥＮまたは突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの存在と本明細書において説明されているような低い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００９３】
[99]本発明は、腫瘍を有する患者の治療方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；および、腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮを有する場合、突然変異型ＰＴＥＮの存在と低い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されると結論付けること；および、腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する低い感受性が予測されなかった場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子を有するかどうかを決定することは、例えば本明細書において説明される方法のいずれかを用いて、患者からの腫瘍細胞サンプルで行ってもよい。
【００９４】
[100]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子を有さないと決定することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）を投与すること、を含む。
【００９５】
[101]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が突然変異型ＰＴＥＮ遺伝子または突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有さないと決定することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）を投与すること、を含む。
【００９６】
[102]本発明は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する方法を提供するものであり、本方法は：腫瘍細胞が、突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定すること；腫瘍細胞が突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定すること；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付けること、を含む。
【００９７】
[103]本発明は、腫瘍を有する患者の治療方法を提供するものであり、本方法は、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳ遺伝子を有するかどうかを決定することによって、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測する工程；腫瘍細胞が突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有するかどうかを決定する工程；腫瘍細胞が、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有するかどうかを決定する工程；および、腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦを有するが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有さない場合、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡがない状態における突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦの存在と高い感受性との予め決められた相関に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測されると結論付ける工程；および、腫瘍細胞のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による増殖阻害に対する高い感受性が予測される場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与する工程を含む。
【００９８】
[104]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の非存在下で突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有することを決定することによって、
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。
【００９９】
[105]本発明はまた、患者の癌を治療する方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の非存在下で突然変異型Ｋ−ｒａｓまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦ遺伝子を有する場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。
【０１００】
[106]本発明はさらに、患者の卵巣癌の治療方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓ遺伝子を有することを決定することによって、
患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があると診断された場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。
【０１０１】
[107]本発明はさらに、患者の卵巣癌の治療方法を提供するものであり、本方法は、患者の腫瘍細胞が突然変異型Ｋ−ｒａｓ遺伝子を有する場合、前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。
【０１０２】
[108]また本発明は、本明細書において説明される本発明の方法のいずれかを包含するものであり、ここで「患者の腫瘍サンプルを得る」工程は省略される。このようなケースにおいて、腫瘍バイオマーカーの発現（例えば突然変異型ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮ、または、ＰＩＫ３ＣＡ）を決定する工程を、例えば予備処理または調製した腫瘍サンプルに行ってもよく、このような腫瘍サンプルとしては、例えば、凍結させた腫瘍サンプル、固定した腫瘍標本、細胞抽出物、ＲＮＡ標本、タンパク質標本、または、バイオマーカー発現を評価することができる同種のもの、または、腫瘍サンプルそのものの代用品として、腫瘍バイオマーカーを検出することができる生体液（例えば生検）が挙げられる。
【０１０３】
[109]本明細書で示された実験の実施例はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤であるＯＳＩ−９０６に関するものであるが、本発明の方法は、いずれかの特定のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に応答するまたは応答しないと予測される患者または腫瘍の予測に限定されるものではなく、あらゆるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、例えばＩＧＦ−１ＲとＩＲキナーゼの両方を阻害するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６（ＯＳＩファーマシューティカルズ社）、ＢＭＳ−５５４４１７（Haluska P, et al. Cancer Res 2006; 66(1):362-71）；ＢＭＳ５３６９２４（Huang, F. et al.(2009) Cancer Res. 69(1):161-170）, ＢＭＳ−７５４８０７（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ（Bristol-Myers Squibb）））、低分子量の阻害剤（例えばＡＸＬ−１７１７（アクセラ社（Axelar AB））、ＸＬ−２２８（エクセリクス（Exelixus））、ＩＮＳＭ−１８（インスメッド社（Insmed Inc.）））、ペプチド、抗体（例えばＩＭＣＬ−Ａ１２（別名シクスツムマブ（cixutumumab）；イムクローン（Imclone））、ＭＫ−０６４６（メルク（Merck））、ＣＰ−７５１８７１（別名フィギツムマブ（figitumumab）；ファイザー（Pfizer））、ＡＭＧ−４７９（アムジェン（Amgen））、ＳＣＨ−７１７４５４（別名ロバツムマブ（robatumumab）；シェリング・プラウ／メルク（Schering-Plough/Merck））、抗体フラグメント、核酸またはその他のタイプのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の結果を予測するのにも利用される可能性がある。同様に、本明細書において説明されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療方法は、これらのタイプのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のどれを使用してもよい。さらに、本明細書において説明される方法のいずれかのその他の実施態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、政府の規制当局（例えば米国食品医薬品局（ＦＤＡ）；欧州医薬品庁；日本厚生労働省；英国医薬品庁（ＭＨＲＡ））によって承認されたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばすでにそのように承認された本明細書において開示されたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のいずれか）であってもよい。
【０１０４】
[110]本明細書において説明される本発明の方法、組成物またはキットのいずれかにおいて、用語「低分子量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤」は、低分子量（すなわち５０００ダルトン未満；好ましくは１０００ダルトン未満、および、より好ましくは３００〜７００ダルトン）の、酵素のキナーゼドメインに結合することによってＩＧＦ−１Ｒキナーゼを阻害する有機化合物を意味する。このような化合物の例としては、本明細書において説明される式（Ｉ）で示されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が挙げられる。式（Ｉ）で示されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、患者に投与されるとＩＧＦ−１Ｒキナーゼを阻害する式（Ｉ）に包含されるあらゆるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物であってよい。このような阻害剤の例は、米国特許公開公報ＵＳ２００６／０２３５０３１（これは、その全体が本明細書意包含される）で公開されており、例えば、本明細書において説明される実験で用いられるようなＯＳＩ−９０６、すなわち（シス−３−［８−アミノ−１−（２−フェニル−キノリン−７−イル）−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］−１−メチル−シクロブタノール）が挙げられる。
【０１０５】
[111]医療分野、特に診断テストの適用や治療剤での治療に関する医療分野における当業者であれば当然のことと思われるが、生物系は多少なりとも変動するものであり必ずしも完全に予想可能とは限らないため、多くの優れた診断テストまたは治療剤が場合によっては効果がないこともある。従って、個々の患者ごとの最適な治療方針を決定することは、最終的には、試験結果、患者の状態や病歴、および、医師自身の経験に基づいて治療にあたる医師の判断にゆだねられる。従って、腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して特定の感受性を有さないと予測される場合であっても、診断テストまたはその他の基準からのデータに基づいて、具体的にはその他の自明な治療の選択肢の全てまたはほとんどが失敗に終わった場合や、または、その他の治療を施した際にある程度の相乗効果が期待されるような場合、医師がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて患者を治療することを選択すると予想されることさえも起こり得る。癌治療で使用されるより一般的な化学療法剤または細胞毒性物質などのその他の多くの抗癌性化合物と比較して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、化合物の分類的に比較的よく許容されるという事実から、このような阻害剤はより実用性の高い選択肢となっている。また注目すべきことに、本明細書において開示された突然変異バイオマーカーは、どの腫瘍を有する患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤によって最も利益を得る可能性が高いかを予測するものであるが、これは、必ずしも感受性を予測する突然変異バイオマーカーの徴候を示さない腫瘍を有する患者は利益を受けないだろうということを意味するわけではなく、より適切な作用が期待されるということを意味する。
【０１０６】
[112]本明細書において説明したように、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性腫瘍を予測するための突然変異バイオマーカー遺伝子の状態を用いる方法を提供する。いずれの診断方法も起こり得る利点と不利益を有するものであり、最終的にどの方法が好ましいかの決定は患者それぞれの環境によって様々であると予想されるが、複数の診断方法を使用することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の使用を含む治療計画によって起こり得る結果を正確に予測する個人の能力を改善し得ると予想される。それゆえに、本発明はまた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測するための２種またはそれより多くの診断方法の使用を含む、癌を有する患者を診断または治療する方法を提供するものであり、該方法が治療方法の場合、２種またはそれより多くの診断方法によって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に反応性を有する可能性があることが示された場合、それに続いて前記患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、を含む。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測するための診断方法の一つは、本明細書で説明されているような、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を有する腫瘍を予測するための突然変異型ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮおよび／またはＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の状態を用いる方法であり得る。その他の診断方法は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性を予測するためのバイオマーカーを用いた当業界ですでによく知られているあらゆる方法であってもよく、このような方法としては、例えば腫瘍細胞のＥＭＴ状態を評価するための上皮または間充組織のバイオマーカーの発現レベルの決定（例えばＥ−カドヘリン；ＵＳ２００７／００６５８５８；ＵＳ２００９００９２５９６）；ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性または耐性を予測するバイオマーカー、例えばT. Pitts et al. (2009) EORTC Conference, マサチューセッツ州ボストン, 要約番号２１４１；ｐＥＲＫ、ｐＨＥＲ３またはＨＥＲ３（ＵＳ２００９／００９３４８８）（ＵＳ２００９／００９３４８８）で説明されているもの；ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測することが報告されているＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２またはその他のバイオマーカー（例えば、Huang F. H.W., et al. Identification of sensitivity markers for BMS-536924, an inhibitor for insulin-like growth factor-1 receptor. J Clin Oncol ASCO Ann Meet Proc Part I 2007;25:3506を参照）が挙げられる。
【０１０７】
[113]突然変異型ＫＲＡＳバイオマーカーの状態の決定は、当業界でよく知られている様々な異なるアプローチによって評価することができ、このようなアプローチとしては、ＫＲＡＳタンパク質の直接的な解析が挙げられ、例えば突然変異型ＫＲＡＳ特異的抗体を用いたイムノアッセイによる解析である（例えば米国特許第５，２６２，５２３号；５，０８１，２３０号；４，８９８，９３２号）。このアプローチの利点は、発現されたバイオマーカーが直接読み取れることである。しかしながらこのアプローチも、解析（例えば免疫組織化学）を行うためには十分な量の組織を必要とする。ＦＮＡ（穿刺吸引細胞診）などのある種の手法では、十分な量の組織を得ることが難しい場合がある。コア生検ではより大量の組織が得られるが、診断中に機械的に行えない場合がある。あるいは突然変異型ＫＲＡＳバイオマーカーは、定量ＰＣＲベースのアプローチを用いてＤＮＡまたはタンパク質をコードするＲＮＡ転写物から評価することもできる。このアプローチの利点は、この測定に必要な腫瘍細胞はほんの少量であり、ＦＮＡによって十分な材料が得られる可能性が極めて高いことである。類似の技術を用いて、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ、突然変異型ＰＴＥＮ、または、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーの状態を決定することができる。
【０１０８】
[114]本発明の方法において、突然変異型ＫＲＡＳ、突然変異型Ｂ−ＲＡＦ、突然変異型ＰＴＥＮ、または、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーは、好ましくは腫瘍生検を分析することによって評価される。しかしながら、その代わりの実施態様において、腫瘍または腫瘍細胞に由来する検出可能なレベルの突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーを含む体液または排泄物中の突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーを評価してもよい。本発明において有用な体液または排泄物としては、血液、尿、唾液、便、胸膜液、リンパ液、痰、腹水、前立腺液、髄液（ＣＳＦ）、または、その他のあらゆる体の分泌物もしくはそれらの誘導体が挙げられる。血液は、全血、血漿、血清、または、あらゆる血液の誘導体を含むこととする。このような体液または排泄物における突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡの評価は、侵襲的なサンプリング方法が不適切であるか、または、不便な環境において好ましい場合がある。
【０１０９】
[115]腫瘍細胞を含む患者サンプルまたは生検は、サンプル中の突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡバイオマーカーの量を評価する前に、周知の様々な回収後の分取および貯蔵技術（例えば、核酸および／またはタンパク質抽出、固定、貯蔵、凍結、限外ろ過、濃縮、蒸発、遠心分離など）で処理してもよい。同様に腫瘍生検も回収後の分取および貯蔵技術（例えば固定）で処理してもよい。マクロ解剖および／または顕微解剖法（例えばレーザー顕微解剖および圧力カタパルティング（Laser Microdissection and Pressure Catapulting : LMPC）、例えばＰＡＬＭ（Ｒ）マイクロビーム顕微鏡（Ｐ．Ａ．Ｌ．Ｍ．マイクロレーザーテクノロジーズ社（P.A.L.M. Microlaser Technologies AG）, ドイツ国ベルンリート）を用いた方法；ＳＬ−マイクロテストＵＶレーザー顕微解剖システム（モレキュラー・マシーンズ＆インダストリーズ（Molecular Machines & Industries), スイス国グラットブルグ））は、正常な組織細胞または間質細胞を除去することによって腫瘍サンプルの腫瘍細胞群を高濃度化するのに用いることができる（例えば、de Bruin EC. et al. BMC Genomics. 2005 Oct 14;6：142; Dhal, E. et al. Clinical Cancer Research July 2006 12; 3950; Funel, N. et al. Laboratory Investigation (2008) 88, 773-784, doi：10.1038/labinvest.2008.40, 2008年5月19日にオンラインで公開された）。また純粋な腫瘍細胞群を生産するために、原発腫瘍細胞の培養物を調製する場合もある。
【０１１０】
[116]本発明の方法において、腫瘍細胞のＫＲＡＳ突然変異の状態の評価は、当業界でよく知られており、十分な感度があり、特異的で信頼できることがわかっている十分に確立された様々な分子分析に基づいていてもよい。ＫＲＡＳ突然変異の状態の解析のために腫瘍サンプルを送ることができる多くの分子診断研究所がある。このようなサンプルは、用いられる方法に応じて新鮮なサンプル、凍結サンプル、または、パラフィン包埋組織サンプルであり得る。好ましくは、病理学者は、組織試料が癌細胞を含むことを確認して、試料中の腫瘍細胞の含量（存在する全ての核に対する腫瘍核のパーセンテージ）を推定すべきである。この腫瘍細胞含量の推定量は、ＫＲＡＳ分析が異なれば分析感度も異なるために重要であり、使用されている分析にとって許容できるレベルまで質を高める試みをすべきである。ほとんどの核酸ベースの分析の場合、腫瘍サンプル由来のＤＮＡを解析用に抽出する。
【０１１１】
[117]腫瘍サンプルをＫＲＡＳ突然変異について評価するために最も一般的に使用される方法のうち２つの方法は、リアルタイムＰＣＲと直接的な配列解析である。リアルタイムＰＣＲにおいて、コドン１２および１３における最も一般的な突然変異に特異的な蛍光プローブが利用される。突然変異が存在する場合、このようなプローブが結合し、蛍光が検出される。ＰＣＲ分析による明確なＫＲＡＳ遺伝子型解析のための主な要件は、様々な突然変異体の対立遺伝子と野生型とを区別する能力である。直接の配列解析において、ＫＲＡＳ突然変異は、ＫＲＡＳ遺伝子におけるエキソン２の直接的な配列解析を用いて同定される。この技術は、エキソン中の存在し得るあらゆる突然変異を同定する。直接的な配列解析は、一部のリアルタイムＰＣＲ分析よりも分析感度が低い。
【０１１２】
[118]非常に多くの方法がＫＲＡＳ遺伝子における突然変異を検出するのに利用することができ、このような方法としては、例えば、２種のＫＲＡＳ突然変異試験キット（DxS社(DxS Ltd., 英国マンチェスター）製のテラスクリーン（TheraScreen(R)）、および、TIB MolBiol（ドイツ国ベルリン）製のＫＲＡＳライトミックス（KRAS LightMix(R)））が挙げられる。このような市販の試験の利点は、それらが検証過程を経ている点である。ＫＲＡＳ遺伝子型解析に利用可能な方法としては、以下のものが挙げられる（概説としては、van Krieken J. H. J. M. et al. Virchows Arch (2008) 453:417-431, DOI 10.1007/s00428-008-0665-yを参照）。
【０１１３】
[119]（Ａ）ゲル電気泳動分析、例えば、経時的温度勾配ゲル電気泳動［例えば、Kressner U, et al. (1998) Eur J Cancer 34: 518- 521］、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動［例えば、Hayes VM, et al. ( 2000) Genes Chromosomes Cancer 29: 309- 314］、定常的変性キャピラリー電気泳動［例えば、Zhao C, et al. ( 2004) Biomed Chromatogr 18: 538- 541］、および、ＳＳＣＰ（一本鎖高次構造多型）分析［例えば、Chaubert P, et al. ( 1993). Biotechniques 15: 586］。
【０１１４】
[120]（Ｂ）配列解析方法、例えば、ジデオキシ配列解析［例えば、Khanna M, et al. ( 1999) Oncogene 18: 27- 38］、パイロシーケンシング［例えば、Ogino S, et al. ( 2005) J Mol Diagn 7: 413- 421; Poehlmann A, et al. ( 2007) Pathol Res Pract 203: 489- 497］、パイロマーク（PyroMarkTM）ＫＲＡＳ分析。
【０１１５】
[121]（Ｃ）対立遺伝子特異的ＰＣＲ分析、例えば、（ｉ）プライマー設計に基づく対立遺伝子の識別をベースとするもの、例えばＡＲＭＳ−ＰＣＲ［例えば、Fox JC, et al. ( 1998) Br J Cancer 77: 1267- 1274; van Heek NT, et al. ( 2005) J Clin Pathol 58: 1315- 1320]、テラスクリーン(TheraScreen(R))キット[例えば、Cross J. ( 2008) DxS Ltd. Pharmacogenomics 9: 463- 467]、ＫＲＡＳライトミックス（KRAS LightMix(R)）キット、ＲＥＭＳ−ＰＣＲ［例えば、Mixich F, et al. ( 2007) J Gastrointestin Liver Dis 16: 5- 10］、フラグ分析［例えば、Amicarelli G, et al. ( 2007) Nucleic Acids Res 35: e131］、エンリッチドＰＣＲ−ＲＦＬＰ［例えば、Kimura K, et al. ( 2007) J Int Med Res 35: 450- 457］；（ｉｉ）対立遺伝子特異的ライゲーション検出反応に基づく対立遺伝子の識別をベースとするもの、例えばＰＣＲ−ＬＤＲ［例えば、Hashimoto M, et al. ( 2007) Analyst 132: 913- 921］およびＰＣＲ−ＬＤＲｓｐＦＲＥＴ（単一対蛍光共鳴エネルギー移動）分析［例えば、Wabuyele MB, et al. ( 2003) J Am Chem Soc 125: 6937- 6945］；および、（ｉｉｉ）低い融解温度における増幅効率の識別に基づく対立遺伝子の識別をベースとするもの、例えばCOLD-PCR[例えば、Li J, et al. ( 2007) Anal Chem 79: 9030- 9038］。
【０１１６】
[122]突然変異型Ｋ−ＲＡＳを決定するその他の方法としては、表面連結反応、および、バイオメタライゼーション［例えば、Zhang P, et al. ( 2008) Biosens Bioelectron 23: 1435- 1441］；マルチターゲットＤＮＡ分析パネル［例えば、Syngal S, et al. (2006) Cancer 106: 277- 283］；および、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション（インヴィジーン（Invigene(R)））が挙げられる。
【０１１７】
[123]また、突然変異型Ｋ−ＲＡＳを決定するさらなる方法は、Krypuy M, et al. High resolution melting analysis for the rapid and sensitive detection of mutations in clinical samples: KRAS codon 12 and 13 mutations in non-small cell lung cancer. BMC Cancer 2006, 6: 295 doi: 10.1186/ 1471- 2407- 6- 295. www. biomedcentral. com/ 1471- 2407/ 6/ 295/; および、Ogino S, et al. Sensitive Sequencing Method for KRAS Mutation Detection by Pyrosequencing. J Mol Diagn 7: 413- 421, 2005. http//jmd. amjpathol. org/ cgi/ content/ abstract/ 7/ 3/ 413でも開示されている。
【０１１８】
[124]本明細書において説明されたＫＲＡＳ遺伝子における突然変異を検出するための方法の多くは、Ｂ−ＲＡＦ遺伝子、ＰＴＥＮ遺伝子またはＰＩＫ３ＣＡ遺伝子などのその他の遺伝子における突然変異の検出に容易に応用することもできる。
【０１１９】
[125]Ｂ−ＲＡＦ遺伝子における突然変異の検出に利用可能な具体的な方法およびキットとしては、例えば以下のものが挙げられる：（ａ）ＡＢ−ＲＡＦ突然変異試験キット（DxS社（英国マンチェスター）、現在はキアゲンＮ．Ｖ．（QIAGEN N.V.，ドイツ国フランクフルト）の一部）、これは、腫瘍細胞サンプル中の、最も一般的なＢ−ＲＡＦ突然変異であるＶ６００Ｅ変異を検出でき、ARMS(R)（対立遺伝子特異的ＰＣＲ）と、腫瘍細胞から抽出したＤＮＡに使用されるスコーピオンズ（Scorpions(R)）リアルタイムＰＣＲ技術との組み合わせをベースとするものである；（ｂ）ＢＦＡＦ遺伝子突然変異（Ｖ６００Ｅ）分析（エントロジェン（EntroGen），カリフォルニア州ターザナ）、これは、対立遺伝子特異的ＰＣＲ法を利用したＫＲＡＳ／ＢＲＡＦ突然変異パネルの一部である；（ｃ）フラグメント解析による突然変異検出を用いた、濃縮された突然変異シグナルのためのシフト終結ＰＣＲ分析（shifted-termination PCR assay）、これは、Ｖ６００Ｅ（Ｔ１７９９Ａ）、Ｖ６００Ｇ（Ｔ１７９９Ｇ）およびＶ６００Ａ（Ｔ１７９９Ｃ）突然変異に利用可能である（トリムジェン・ジェネティック・ダイアグノースティックス（Trimgen Genetic Diagnostics），メリーランド州スパークス）；および、（ｄ）突然変異検出のためのＢＲＡＦパイロシーケンシング分析（Spittle, C et al, (2007)Journal of Molecular Diagnostics 2007, Vol. 9, No. 4, 464-471; DOI: 10.2353/jmoldx.2007.060191）、これは、共通のＶ６００Ｅ突然変異とコドン６００または６０１に影響を及ぼす追加の突然変異（例えばＶ６００Ｋ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｒ、および、Ｋ６０１Ｅ）を容易に検出することができる。
【０１２０】
[126]ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における突然変異の検出に利用可能な具体的な方法およびキットとしては、例えば以下のものが挙げられる：（ａ）ＡＰＩＫ３ＣＡ突然変異試験キット、これは、腫瘍細胞サンプル中のＥ５４２Ｋ（Ｇ１６２４Ａ）、Ｅ５４５Ｋ（Ｇ１６３３Ａ）、Ｅ５４５Ｄ（Ｇ１６３５Ｔ）、および、Ｈ１０４７Ｒ（Ａ３１４０Ｇ）突然変異を検出することができ（ＤｘＳ社（英国マンチェスター）、現在はキアゲンＮ．Ｖ．（QIAGEN N.V., ドイツ国フランクフルト)の一部）、ARMS(R)（対立遺伝子特異的ＰＣＲ）と、腫瘍細胞から抽出したＤＮＡに使用されるスコーピオンズ（Ｒ）リアルタイムＰＣＲ技術との組み合わせをベースとするものである；および、（ｂ）フラグメント解析による突然変異検出を用いた、濃縮された突然変異シグナルのためのシフト終結ＰＣＲ分析、これは、Ｅ５４２Ｋ（Ｇ１６２４Ａ）、Ｅ５４５Ｋ（Ｇ１６３３Ａ）、Ｅ５４５Ｇ（Ａ１６３４Ｃ）、Ｈ１０４７Ｒ（Ａ３１４０Ｇ）、Ｈ１０４７Ｌ（Ａ３１４０Ｔ）突然変異に利用可能である（トリムジェン・ジェネティック・ダイアグノースティックス，メリーランド州スパークス）。
【０１２１】
[127]その代わりの実施態様において、突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡタンパク質は、突然変異型ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡタンパク質に特異的に結合する、抗体（例えば、放射標識した、発色団で標識した、蛍光標識した、または、酵素標識した抗体）、抗体誘導体（例えば、基質またはタンパク質−リガンド対（例えばビオチン−ストレプトアビジン）のタンパク質もしくはリガンドと結合した抗体）、または、抗体フラグメント（例えば、単鎖抗体、単離された抗体高度可変ドメインなど）を用いて評価される。
【０１２２】
[128]本発明のその他の実施態様において、突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮまたはＰＩＫ３ＣＡバイオマーカータンパク質が検出される。本発明のバイオマーカータンパク質を検出するのに好ましい物質は、突然変異型ＫＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦ、ＰＴＥＮ、または、ＰＩＫ３ＣＡタンパク質またはそれらのフラグメントに特異的に結合することができる抗体であり、好ましくは検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナルであってもよく、または、より好ましくはモノクローナルである。無傷抗体またはそれらのフラグメントもしくは誘導体（例えば、Ｆａｂ、または、Ｆ（ａｂ’）２）を用いてもよい。用語「標識された」は、プローブまたは抗体に関して用いられる場合、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリングすること（すなわち物理的に結合させること）によってプローブまたは抗体に直接標識を付けること、加えて、直接的に標識されるその他の試薬との反応によるプローブまたは抗体の間接的な標識付けを包含することとする。間接的な標識付けの例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および、ＤＮＡプローブの末端に、蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できるようにビオチンで標識付けすることが挙げられる。
【０１２３】
[129]腫瘍細胞由来のタンパク質は、当業者によく知られている技術を用いて単離することができる。用いられるタンパク質単離方法としては、例えば、HarlowおよびLane(Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）で説明されている方法が挙げられる。
【０１２４】
[130]サンプルが所定の抗体に結合するタンパク質を含むかどうかを決定するために様々な様式を用いることができる。このような様式の例としては、これらに限定されないが、酵素免疫検査法（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ウェスタンブロット解析、および、酸素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）が挙げられる。当業者であれば、腫瘍細胞が本発明の突然変異タンパク質バイオマーカーを発現するかどうかを決定する際に使用するための既知のタンパク質／抗体検出方法を容易に適合させることができる。
【０１２５】
[131]一つの様式において、発現されたタンパク質を検出するために、例えばウェスタンブロットまたは免疫蛍光技術のような方法で、抗体または抗体フラグメントまたは誘導体を用いることができる。このような使用において、一般的に、抗体またはタンパク質のいずれかを固体支持体に固定することが好ましい。適切な固相支持体またはキャリアーとしては、抗原または抗体と結合することができるあらゆる支持体が挙げられる。よく知られた支持体またはキャリアーとしては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、斑レイ岩、および、磁鉄鉱が挙げられる。
【０１２６】
[132]当業者であれば抗体または抗原と結合させるのに適したその他多くのキャリアーを認識しているものと予想され、さらにこのような支持体を本発明での使用に適合させることができるものと予想される。例えば腫瘍細胞から単離したタンパク質をポリアクリルアミドゲル電気泳動で泳動し、ニトロセルロースのような固相支持体に固定することができる。続いてこの支持体を適切な緩衝液で洗浄し、続いて検出可能に標識された抗体で処理することができる。続いてこの固相支持体を再度緩衝液で洗浄して未結合の抗体を除去することができる。続いて固体支持体に結合した標識の量を従来の手段で検出することができる。
【０１２７】
[133]ＥＬＩＳＡ分析の場合、特異的な結合対は、免疫型であってもよいし、または、免疫型でなくてもよい。免疫性の特異的な結合対としては、例えば、抗原−抗体系、または、ハプテン／抗ハプテン系が挙げられる。さらに、フルオレセイン／抗フルオレセイン、ジニトロフェニル／抗ジニトロフェニル、ビオチン／抗ビオチン、ペプチド／抗ペプチドなども挙げられる。特異的な結合対の抗体部分は、当業者によく知られている慣例的な方法によって生産することができる。このような方法は、動物を特異的な結合対の抗原部分で免疫化することを含む。特異的な結合対の抗原部分が例えばハプテンのように非免疫原性である場合、その抗原部分を免疫原性にするために、それらをキャリアータンパク質に共有結合でカップリングしてもよい。非免疫性の結合対としては、２種の構成要素が互いに天然の親和性を共有する系が挙げられる（ただし抗体ではない）。典型的な非免疫性の対は、ビオチン−ストレプトアビジン、内因子−ビタミンＢ１２、葉酸−葉酸結合タンパク質などである。
【０１２８】
[134]様々な方法を用いて、抗体を特異的な結合対の部分で共有結合によって標識することができる。特異的な結合対の部分の性質、望ましい結合のタイプ、および、様々な共役化学作用に対する抗体の寛容性に基づいて方法が選択される。ビオチンは、市販の活性誘導体を利用することによって、共有結合で抗体にカップリングさせることができる。このうちいくつかは、タンパク質のアミン基に結合するビオチン−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド；カルボジイミドカップリングによって炭水化物部分、アルデヒドおよびカルボキシル基に結合するビオチンヒドラジド；および、スルフヒドリル基に結合するビオチンマレイミドおよびヨードアセチルビオチンである。フルオレセインは、フルオレセインイソチオシアネートを用いてタンパク質のアミン基にカップリングさせることができる。ジニトロフェニル基は、硫酸２，４−ジニトロベンゼンまたは２，４−ジニトロフルオロベンゼンを用いてタンパク質のアミン基にカップリングさせることができる。モノクローナル抗体を特異的な結合対の部分にカップリングするために、その他の標準的な共役方法を使用することもでき、このような方法としては、ジアルデヒド、カルボジイミドカップリング、ホモ官能性の架橋を形成すること、および、ヘテロ二官能性の架橋を形成することが挙げられる。カルボジイミドカップリングは、ある物質上のカルボキシル基をその他の物質のアミン基にカップリングする有効な方法である。カルボジイミドカップリングは、市販の試薬１−エチル−３−（ジメチル−アミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＡＣ）を用いることによって促進される。
【０１２９】
[135]二官能性イミドエステルや二官能性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのホモ二官能性の架橋剤は市販されており、ある物質上のアミン基をその他の物質上のアミン基にカップリングするのに用いられる。ヘテロ二官能性架橋剤は、異なる官能基を有する試薬である。最も一般的な市販のヘテロ二官能性架橋剤は、１つの官能基としてアミン反応性のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを有し、第二の官能基としてスルフヒドリル反応性基を有する。最も一般的なスルフヒドリル反応性基は、マレイミド、ピリジル  ジスルフィド、および、活性ハロゲンである。一方の官能基は、放射線照射すると様々な基と反応する光活性を有するアリールニトレンであってもよい。
【０１３０】
[136]検出可能に標識された抗体または特異的な結合対の検出可能に標識された部分は、レポーターにカップリングすることによって製造され、ここでこのようなレポーターとしては、放射性同位体、酵素、蛍光原性、化学発光材料または電気化学材料が挙げられる。２種の一般的に使用される放射性同位体は、１２５Ｉおよび３Ｈである。標準的な放射性同位体の標識付け法としては、１２５Ｉの場合はクロラミンＴ、ラクトペルオキシダーゼ、および、ボルトン−ハンター法が挙げられ、３Ｈの場合は還元メチル化が挙げられる。用語「検出可能に標識された」は、標識固有の酵素活性によって、または、それ自身容易に検出することができるその他の構成要素の標識への結合によって容易に検出することができるように標識された分子を意味する。
【０１３１】
[137]本発明で使用するのに適した酵素としては、これらに限定されないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ルシフェラーゼ（例えばホタルおよびウミシイタケ）、β−ラクタマーゼ、ウレアーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、および、リゾチームが挙げられる。酵素の標識付けは、上記で抗体の特異的な結合対の部分でのカップリングで述べたようなジアルデヒド、カルボジイミドカップリング、ホモ二官能性の架橋剤、および、ヘテロ二官能性架橋剤を用いることによって促進される。
【０１３２】
[138]選択される標識付け法は、酵素に適用することができる官能基と標識しようとする材料、および、それら両方の共役状態に対する寛容性によって決定される。本発明で使用される標識付け法は、これらに限定されないが、現在使用されているあらゆる従来の方法が挙げられ、例えば、Engvall and Pearlmann, Immunochemistry 8, 871 (1971), AvrameasおよびTernynck, Immunochemistry 8, 1175 (1975), Ishikawa et al., J. Immunoassay 4(3)：209-327 (1983)、および、Jablonski, Anal. Biochem. 148：199 (1985)で説明されている方法が挙げられる。
【０１３３】
[139]標識付けは、例えばスペーサーまたは特異的な結合対の他の部分を用いるような間接的な方法によって達成することができる。この例としては、非標識ストレプトアビジンを用いたビオチン化抗体の検出、および、ストレプトアビジンを用いたビオチン化酵素の検出、および、連続的または同時に添加されたビオチン化酵素の検出が挙げられる。従って、本発明によれば、検出するのに用いられる抗体は、レポーターで直接的に検出可能に標識してもよいし、または、特異的な結合対の一方の部分で間接的に標識してもよいし。このような抗体が特異的な結合対の一方の部分でカップリングされる場合、検出は、抗体と一方の部分とが特異的に結合した複合体を、上述したように標識されたまたは非標識の結合対の第二の部分と反応させることによって実行される。
【０１３４】
[140]その上、非標識の検出抗体は、非標識の抗体を非標識の抗体に特異的な標識抗体と反応させることによって検出が可能である。この例において、上記で用いられる「検出可能に標識された」は、非標識抗体に特異的な抗体が結合することができるエピトープを含むことを意味するものとする。このような抗抗体は、上記で考察されたアプローチのいずれかを用いて直接的または間接的に標識することができる。例えば、上記で考察されたストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ系を反応させることによって検出が可能なビオチンに抗抗体をカップリングすることができる。
【０１３５】
[141]本発明の一実施態様において、ビオチンが利用される。ビオチン化抗体は、続いてストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ複合体と反応する。クロモジェニック検出を達成するために、オルトフェニレンジアミン、４−クロロ−ナフトール、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ＡＢＴＳ、ＢＴＳまたはＡＳＡを使用することができる。
【０１３６】
[142]本発明を実施するためのイムノアッセイの一つの様式において、従来の技術を用いて支持体表面に捕獲試薬が固定されているフォワードサンドイッチ分析が用いられる。分析に用いられる適切な支持体としては、合成ポリマー支持体、例えばポリプロピレン、ポリスチレン、置換ポリスチレン、例えばアミノ化またはカルボキシル化ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアミド、ポリ塩化ビニル、ガラスビーズ、アガロース、または、ニトロセルロースが挙げられる。
【０１３７】
[143]また本発明は、生体サンプル中の突然変異型ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦもしくはＰＩＫ３ＣＡタンパク質または核酸の存在を検出するためのキットも包含する。このようなキットは、被検体が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害の作用を受けやすいかまたは耐性を有する腫瘍に罹っているかかどうかを決定するのに用いることができる。例えば本キットは、生体サンプル中の突然変異タンパク質または核酸を検出することができる標識された化合物または物質、および、サンプル中のタンパク質またはｍＲＮＡの量を決定するための手段（例えば、タンパク質またはそれらのフラグメントに結合する抗体、または、そのようなタンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに結合するオリゴヌクレオチドプローブ）を含んでいてもよい。またキットは、キットを用いて得られた結果を解釈するための説明書を含んでいてもよい。
【０１３８】
[144]抗体ベースのキットの場合、本キットは、例えば：（１）バイオマーカータンパク質に結合する第一の抗体（例えば固体支持体に取り付けられた抗体）；および、任意に（２）上記タンパク質または第一の抗体のいずれかに結合しており、検出可能な標識に連結させた第二の異なる抗体を含んでいてもよい。
【０１３９】
[145]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の腫瘍もしくは腫瘍転移または癌を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に、治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて、１種またはそれより多くのその他の細胞毒性の物質、化学療法剤もしくは抗癌剤またはこのような物質の作用を強める化合物を同時にまたは連続的に投与することを含む。本発明に関して、その他の抗癌剤としては、例えば、その他の細胞毒性の物質、化学療法剤もしくは抗癌剤またはこのような物質の作用を強める化合物、抗ホルモン剤、血管新生阻害剤、ＥＭＴを阻害または逆行させる物質（例えばＴＧＦ−ベータ受容体阻害剤）、腫瘍細胞アポトーシス促進性またはアポトーシス刺激性物質、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ヒストンデメチラーゼ阻害剤、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、シグナル伝達阻害剤、増殖抑制剤、抗ＨＥＲ２抗体もしくは免疫治療活性を有するそれらのフラグメント、増殖抑制剤、ＣＯＸＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤、および、本明細書において説明されているような抗腫瘍性の免疫反応を強化することができる物質が挙げられる。
【０１４０】
[146]本発明に関して、追加のその他の細胞毒性の物質、化学療法剤もしくは抗癌剤またはこのような物質の作用を強める化合物としては、例えば、アルキル化剤またはアルキル化作用を有する物質、例えばシクロホスファミド（CTX；例えばシトキサン（CYTOXAN(R)））、クロラムブシル（CHL；例えばリューケラン（LEUKERAN(R)））、シスプラチン（CisP；例えばプラチノール（PLATINOL(R)））ブスルファン（例えばマイレラン（MYLERAN(R)））、メルファラン、カルムスチン（BCNU）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（TEM）、マイトマイシンＣなど；抗代謝産物、例えばメトトレキセート（MTX）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばベプシド（Vepesid(R)））、６−メルカプトプリン（6MP）、６−チオグアニン（6TG）、シタラビン（Ara-C）、５−フルオロウラシル（5-FU）、カペシタビン（例えばゼローダ（Xeloda(R)））、ダカルバジン（DTIC）など；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（DXR；例えばアドリアマイシン（adriamycin(R)））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンなど；アルカロイド、例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン（VCR）、ビンブラスチンなど；およびその他の抗癌剤、例えばパクリタキセル（例えばタキソール（taxol(R)））およびパクリタキセル誘導体、細胞増殖抑制性剤、糖質コルチコイド、例えばデキサメタゾン（DEX；例えばデカドロン（decadron(R)））、および、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、ヌクレオシド酵素阻害剤、例えばヒドロキシ尿素、アミノ酸枯渇酵素、例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリンおよびその他の葉酸酸誘導体、および、類似の様々な抗癌剤が挙げられる。また以下の物質も、追加の物質として用いることが可能である：アミホスチン（例えばエチオール（ETHYOL(R)））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（CCNU）、ドキソルビシンリポ（例えばドキシル（DOXIL(R)））、ゲムシタビン（例えばジェムザール（GEMZAR(R)））、ダウノルビシンリポ（例えばダウノキソーム（DAUNOXOME(R)））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばタキソテール（TAXOTERE(R)））、アルデスロイキン（アルデスロイキン）、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、CPT11（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトテシン（SN38）、フロクシウリジン、フルダラビン、イフォスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパラガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル、および、ペメトレキセド。
【０１４１】
[147]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くの抗ホルモン剤を同時にまたは連続的に投与することを含む。本明細書で用いられる用語「抗ホルモン剤」は、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する天然または合成の有機化合物またはペプチド化合物を含む。
【０１４２】
[148]抗ホルモン剤としては、例えば：ステロイド受容体アンタゴニスト、抗エストロゲン、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼを阻害する４（５）−イミダゾール、その他のアロマターゼ阻害剤、エキセメスタン、 アナストロゾール、 レトロゾール、 ボロゾール、 フォルメスタン、 ファドロゾール、 アミノグルテチミド、 テストラクトン、 ４２-ヒドロキシタモキシフェン、 トリオキシフェン、 ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、および、トレミフェン（例えばファレストン（FARESTON(R)））；抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、および、ゴセレリン；および、上記のいずれかのものの医薬的に許容される塩、酸または誘導体；例えば胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）ならびに黄体形成ホルモン（ＬＨ）、および、ＬＨＲＨ（黄体形成ホルモン放出ホルモン）のような糖タンパク質ホルモンのアゴニストおよび／またはアンタゴニスト；ゾラデックス（ZOLADEX(R)）（アストラゼネカ（AstraZeneca））として市販されているＬＨＲＨアゴニストの酢酸ゴセレリン；ＬＨＲＨアンタゴニストＤ−アラニンアミドＮ−アセチル−３−（２−ナフタレニル）−Ｄ−アラニル−４−クロロ−Ｄ−フェニルアラニル−３−（３−ピリジニル）−Ｄ−アラニル−１−セリル−Ｎ６−（３−ピリジニルカルボニル）−１−リシル−Ｎ６−（３−ピリジニルカルボニル）−Ｄ−リシル−１−ロイシル−Ｎ６−（１−メチルエチル）−１−リシル−１−プロリン（例えばアンタイド（ANTIDE(R)）、アレス−セロノ（Ares-Serono））；ＬＨＲＨアンタゴニスト酢酸ガニレリクス；ステロイド系抗アンドロゲン物質の酢酸シプロテロン（ＣＰＡ）、および、メゲース（MEGACE(R)）（ブリストル・マイヤーズ・オンコロジー（Bristol-Myers Oncology））として市販されている酢酸メゲストロール；オイレキシン（EULEXIN(R)）（シエーリング社（Schering Corp.））として市販されている非ステロイド系抗アンドロゲン物質のフルタミド（２−メチル−Ｎ−［４，２０−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルプロパンアミド）；非ステロイド系抗アンドロゲン物質のニルタミド、（５，５−ジメチル−３−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル−４’−ニトロフェニル）−４，４−ジメチル−イミダゾリジン−ジオン）；および、その他の非許容受容体に関するアンタゴニスト、例えばＲＡＲ、ＲＸＲ、ＴＲ、ＶＤＲなどのアンタゴニストが挙げられる。
【０１４３】
[149]上記の化学療法計画で述べられた細胞毒性の物質およびその他の抗癌剤の使用は、一般的に癌治療分野においてよく特徴付けられており、本発明においてそれらを使用することも、多少の調整を行うことで、寛容性および有効性のモニターと投与経路および投与量の制御についても同様に考慮される。例えば細胞毒性物質の実際の投与量は、組織培養法を用いることによって決定された患者の培養細胞の応答に応じて様々であってもよい。その用量は、一般的に、追加のその他の物質の非存在下で用いられる量と比較して少ないと予想される。
【０１４４】
[150]有効な細胞毒性薬の典型的な投与量は、製造元が推奨する範囲であってもよく、インビトロでの応答または動物モデルでの応答で特に指定された場合、約１桁の規模で濃度または量を減少させてもよい。従って、実際の用量は、医師の判断、患者の状態、および、初代培養の悪性細胞または組織培養された組織サンプルのインビトロでの反応性または適切な動物モデルで観察された応答に基づいた治療方法の有効性によって様々であると予想される。
【０１４５】
[151]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の腫瘍または腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くの血管新生阻害剤を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１４６】
[152]抗血管形成剤としては、例えば：ＶＥＧＦＲ阻害剤、例えばＳＵ−５４１６、および、ＳＵ−６６６８（スージェン社（Sugen Inc.），米国カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）、または、例えば国際特許出願ＷＯ９９／２４４４０、ＷＯ９９／６２８９０、ＷＯ９５／２１６１３、ＷＯ９９／６１４２２、ＷＯ９８／５０３５６、ＷＯ９９／１０３４９、ＷＯ９７／３２８５６、ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９８／５４０９３、ＷＯ９８／０２４３８、ＷＯ９９／１６７５５、および、ＷＯ９８／０２４３７、および、米国特許第５，８８３，１１３号、５，８８６，０２０号、５，７９２，７８３号、５，８３４，５０４号および６，２３５，７６４号で説明されているもの；ＶＥＧＦ阻害剤、例えばＩＭ８６２（サイトラン社（Cytran Inc.），米国ワシントン州カークランド）；スニチニブ（ファイザー（Pfizer））；アンギオザイム、リボザイム（Ribozyme）（コロラド州ボールダー）およびカイロン（Chiron）（カリフォルニア州エミリービル）製の合成リボザイム；および、ＶＥＧＦに対する抗体、例えばベバシズマブ（例えばアバスチン（AVASTINTM）、ジェネンテック（Genentech），カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）、ＶＥＧＦに対する組換えヒト化抗体；例えばαｖβ３、αｖβ５およびαｖβ６インテグリンおよびそれらのサブタイプに対するインテグリン受容体アンタゴニストおよびインテグリンアンタゴニスト、例えばシレンジタイド（cilengitide）（ＥＭＤ１２１９７４）、または、抗インテグリン抗体、例えばαｖβ３特異的ヒト化抗体（例えばバイタクシン（VITAXIN(R)））；例えばＩＦＮ−アルファのような因子（米国特許第４１５３０，９０１号、４，５０３，０３５号および５，２３１，１７６号）；アンギオスタチンおよびプラスミノゲンフラグメント（例えばクリングル１−４、クリングル５、クリングル１−３（O’Reilly, M. S. et al.(1994)Cell 79:315-328;Cao et al.(1996)J. Biol. Chem. 271: 29461-29467;Cao et al.(1997)J. Biol. Chem. 272:22924-22928）；エンドスタチン（O’Reilly, M. S. et al.(1997)Cell 88:277；および、国際特許公報ＷＯ９７／１５６６６）；トロンボスポンジン（TSP-1;Frazier,(1991)Curr. Opin. Cell Biol. 3:792）；血小板第４因子（ＰＦ４）；プラスミノゲン活性化因子／ウロキナーゼ阻害剤；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；ヘパリナーゼ；フマギリン類似体、例えばＴＮＰ−４７０１；スラミンおよびスラミン類似体；血管新生抑制性のステロイド；ｂＦＧＦアンタゴニスト；ｆｌｋ−１およびｆｌｔ−１アンタゴニスト；抗血管新生剤、例えばＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、および、ＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤が挙げられる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の例は、国際特許公報ＷＯ９６／３３１７２、ＷＯ９６／２７５８３、ＷＯ９８／０７６９７、ＷＯ９８／０３５１６、ＷＯ９８／３４９１８、ＷＯ９８／３４９１５、ＷＯ９８／３３７６８、ＷＯ９８／３０５６６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９９／５２９１０、ＷＯ９９／５２８８９、ＷＯ９９／２９６６７、および、ＷＯ９９／０７６７５、欧州特許公報第８１８，４４２号、７８０，３８６号、１，００４，５７８号、６０６，０４６号および９３１，７８８号；英国特許公報第９９１２９６１号および米国特許第５，８６３，９４９号および５，８６１，５１０号で説明される。好ましいＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９阻害剤は、ＭＭＰ−１を阻害する活性がほとんどないかまったくないものである。より好ましくは、その他のマトリックス−メタロプロテイナーゼ（すなわちＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、および、ＭＭＰ−１３）に対してＭＭＰ−２および／またはＭＭＰ−９を選択的に阻害するものである。
【０１４７】
[153]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くの腫瘍細胞アポトーシス促進性またはアポトーシス刺激性物質を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１４８】
[154]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くのシグナル伝達阻害剤を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１４９】
[155]シグナル伝達阻害剤としては、例えば：ｅｒｂＢ２受容体阻害剤、例えばｅｒｂＢ２受容体に結合する有機分子または抗体、例えばトラスツズマブ（例えばハーセプチン（HERCEPTIN(R)））；その他のタンパク質チロシン−キナーゼの阻害剤、例えばイマチニブ（例えばグリベック（GLEEVEC(R)））；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（本明細書の以下を参照）；Ｍｅｔキナーゼ阻害剤（例えばＰＦ−２３４１０６６）；ｒａｓ阻害剤；ｒａｆ阻害剤；ＭＥＫ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばｍＴＯＲＣ１とｍＴＯＲＣ２キナーゼの両方に結合してそれらを直接阻害するｍＴＯＲ阻害剤（例えばＯＳＩ−０２７，ＯＳＩファーマシューティカルズ（OSI Pharmaceuticals））；ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲキナーゼの二重阻害剤であるｍＴＯＲ阻害剤、例えばFan, Q-W et al (2006) Cancer Cell 9:341-349 and Knight, Z.A. et al. (2006) Cell 125:733-747で説明されているような化合物ＰＩ−１０３；ｍＴＯＲキナーゼの二重の阻害剤であるｍＴＯＲ阻害剤、および、１種またはそれより多くのその他のＰＩＫＫ（またはＰＩＫ関連）キナーゼファミリーに属するものが挙げられる。このようなファミリーに属するものとしては、ＭＥＣ１、ＴＥＬ１、ＲＡＤ３、ＭＥＩ−４１、ＤＮＡ−ＰＫ、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＴＲＲＡＰ、ＰＩ３ＫおよびＰＩ４Ｋキナーゼ；サイクリン依存性キナーゼ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤；ＰＩ−３キナーゼ阻害剤；および、ＰＤＫ−１阻害剤（このような阻害剤のいくつかの例および癌治療の臨床試験におけるそれらの使用の説明については、Dancey, J. and Sausville, E.A. (2003) Nature Rev. Drug Discovery 2:92-313を参照）が挙げられる。
【０１５０】
[156]ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、例えば、［６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリン−４−イル］−（３−エチニルフェニル）アミン（また、ＯＳＩ−７７４、エルロチニブ、または、タルセバ（TARCEVATM）（塩酸エルロチニブ）；ＯＳＩファーマシューティカルズ／ジェネンテック／ロシュ（Roche）としても知られている）（米国特許第５，７４７，４９８号；国際特許公報ＷＯ０１／３４５７４、および、Moyer, J.D. et al. (1997) Cancer Res. 57:4838-4848);CI-1033（以前は、ＰＤ１８３８０５；ファイザーとして知られている）（Sherwood et al., 1999, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 40:723）；ＰＤ−１５８７８０（ファイザー）；ＡＧ−１４７８（カリフォルニア大学）；ＣＧＰ−５９３２６（ノバルティス（Novartis））；ＰＫＩ−１６６（ノバルティス）；ＥＫＢ−５６９（ワイス（Wyeth））；ＧＷ−２０１６（また、ＧＷ−５７２０１６、または、二トシル酸ラパチニブ；ＧＳＫとしても知られている）；ゲフィチニブ（また、ＺＤ１８３９、または、イレッサ（IRESSATM）；アストラゼネカとしても知られている）（Woodburn et al., 1997, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 38:633）；および、抗体ベースのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が挙げられる。本発明に従って使用することができる特に好ましい低分子量のＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は、［６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリン−４−イル］−（３−エチニルフェニル）アミン（すなわちエルロチニブ）、その塩酸塩（すなわち塩酸エルロチニブ、タルセバ（TARCEVATM））、または、その他の塩の形態（例えばメシル酸エルロチニブ）である。抗体ベースのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、ＥＧＦＲの活性化をその天然リガンドによって部分的または完全にブロックすることができるあらゆる抗ＥＧＦＲ抗体または抗体フラグメントが挙げられる。抗体ベースのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤の例としては、これらに限定されないが、Modjtahedi, H., et al., 1993, Br. J. Cancer 67:247-253; Teramoto, T., et al., 1996, Cancer 77:639-645; Goldstein et al., 1995, Clin. Cancer Res. 1:1311-1318; Huang, S. M., et al., 1999, Cancer Res. 15:59(8):1935-40; and Yang, X., et al., 1999, Cancer Res. 59:1236-1243で説明されているものが挙げられる。従ってＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は、モノクローナル抗体のＭａｂＥ７．６．３（Yang, X.D. et al.(1999) Cancer Res. 59:1236-43）、または、ＭａｂＣ２２５（ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−８５０８）、または、それらの結合特異性を有する抗体または抗体フラグメントであってもよい。適切なモノクローナル抗体のＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、これらに限定されないが、ＩＭＣ−Ｃ２２５（また、セツキシマブまたはアービタックス（ERBITUXTM）；イムクローン・システムズ（Imclone Systems）としても知られている）、ＡＢＸ−ＥＧＦ（アブジェニックス（Abgenix））、ＥＭＤ７２０００（メルク社（Merck KgaA），ダルムシュタット）、ＲＨ３（ヨーク・メディカル・バイオサイエンス（York Medical Bioscience Inc.））、および、ＭＤＸ−４４７（メダレックス（Medarex）／メルク社）が挙げられる。
【０１５１】
[157]またＥＧＦＲキナーゼ阻害剤としては、例えば、ＥＧＦＲキナーゼに対して活性を有するマルチキナーゼ阻害剤、すなわちＥＧＦＲキナーゼと１種またはそれより多くの追加のキナーゼを阻害する阻害剤も挙げられる。このような化合物の例としては、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２阻害剤ＣＩ−１０３３（以前は、ＰＤ１８３８０５；ファイザーとして知られていた）；ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２阻害剤ＧＷ−２０１６（また、ＧＷ−５７２０１６、または、二トシル酸ラパチニブ；ＧＳＫとしても知られている）；ＥＧＦＲおよびＪＡＫ２／３阻害剤ＡＧ４９０（チルホスチン）；ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２阻害剤ＡＲＲＹ−３３４５４３（アレイ・バイオファーマ（Array BioPharma））；ＢＩＢＷ−２９９２、不可逆的な二重のＥＧＦＲ／ＨＥＲ２キナーゼ阻害剤（ベーリンガー・インゲルハイム社（Boehringer Ingelheim Corp.））；ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２阻害剤ＥＫＢ−５６９（ワイス）；ＶＥＧＦ−Ｒ２およびＥＧＦＲ阻害剤ＺＤ６４７４（また、ZACTIMATM；アストラゼネカ・ファーマシューティカルズ（AstraZeneca Pharmaceuticals）としても知られている）、および、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２阻害剤ＢＭＳ−５９９６２６（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ（Bristol-Myers Squibb））が挙げられる。
【０１５２】
[158]ＥｒｂＢ２受容体阻害剤としては、例えば、ＥｒｂＢ２受容体阻害剤、例えばラパチニブ、または、ＧＷ−２８２９７４（いずれもグラクソ・ウェルカム社（Glaxo Wellcome plc））、モノクローナル抗体、例えばＡＲ−２０９（アロネックス・ファーマシューティカルズ社（Aronex Pharmaceuticals Inc.），米国テキサス州ウッドランズ）、および、２Ｂ−１（カイロン）、および、ｅｒｂＢ２阻害剤、例えば国際公報ＷＯ９８／０２４３４、ＷＯ９９／３５１４６、ＷＯ９９／３５１３２、ＷＯ９８／０２４３７、ＷＯ９７／１３７６０、および、ＷＯ９５／１９９７０、および、米国特許第５，５８７，４５８号、５，８７７，３０５号、６，４６５，４４９号および６，５４１，４８１号で説明されているものが挙げられる。
【０１５３】
[159]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて抗ＨＥＲ２抗体（例えばトラスツズマブ、ジェネンテック）、または、免疫治療活性を有するそれらのフラグメントを同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１５４】
[160]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くの追加の増殖抑制剤を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１５５】
[161]追加の増殖抑制剤としては、例えば酵素ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼの阻害剤、および、受容体チロシンキナーゼＰＤＧＦＲの阻害剤、例えば、米国特許第６，０８０，７６９号、６，１９４，４３８号、６，２５８，８２４号、６，５８６，４４７号、６，０７１，９３５号、６，４９５，５６４号、６，１５０，３７７号、６，５９６，７３５号および６，４７９，５１３号および国際特許公報ＷＯ０１／４０２１７で開示され特許請求された化合物、および、ＦＧＦＲキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【０１５６】
[162]本発明に従って使用することができるＰＤＧＦＲキナーゼ阻害剤の例としては、イマチニブ（グリベック（GLEEVEC(R)）；ノバルティス）；ＳＵ−１２２４８（リンゴ酸スニチニブ、スーテント（SUTENT(R)）；ファイザー）；ダサチニブ（スプリセル（SPRYCEL(R)）；ＢＭＳ；また、ＢＭＳ−３５４８２５としても知られている）；ソラフェニブ（ネクサバール（NEXAVAR(R)）；バイエル（Bayer）；また、Ｂａｙ−４３−９００６としても知られている）；ＡＧ−１３７３６（アキシチニブ；ファイザー）；ＲＰＲ１２７９６３（サノフィ−アベンティス）；ＣＰ−８６８５９６（ファイザー／ＯＳＩファーマシューティカルズ）；ＭＬＮ−５１８（タンヅチニブ；ミレニアム・ファーマシューティカルズ（Millennium Pharmaceuticals））；ＡＭＧ−７０６（モテサニブ；アムジェン（Amgen））；アラバ（ARAVA(R)）（レフルノミド；サノフィ・アベンティス（Sanofi-Aventis））；また、ＳＵ１０１としても知られている）、および、ＯＳＩ−９３０（ＯＳＩファーマシューティカルズ）が挙げられ；さらに本発明に従って使用することができるＦＧＦＲキナーゼ阻害剤である低分子量ＰＤＧＦＲキナーゼ阻害剤の追加の好ましい例としては、ＸＬ−９９９（エクセリクシス（Exelixis））；ＳＵ６６６８（ファイザー）；ＣＨＩＲ−２５８／ＴＫＩ−２５８（カイロン）；ＲＯ４３８３５９６（ホフマン・ラ・ロシュ（Hoffmann-La Roche)）、および、ＢＩＢＦ−１１２０（ベーリンガー・インゲルハイム）が挙げられる。
【０１５７】
[163]本発明に従って使用することができるＦＧＦＲキナーゼ阻害剤の例としては、ＲＯ−４３９６６８６（ホフマン・ラ・ロシュ）；ＣＨＩＲ−２５８（カイロン；また、ＴＫＩ−２５８としても知られている）；ＰＤ１７３０７４（ファイザー）；ＰＤ１６６８６６（ファイザー）；ＥＮＫ−８３４、および、ＥＮＫ−８３５（いずれもエンカム・ファーマシューティカルズ社（Enkam Pharmaceuticals A/S））；および、ＳＵ５４０２（ファイザー）が挙げられる。さらに本発明に従って使用することができるＰＤＧＦＲキナーゼ阻害剤である低分子量ＦＧＦＲキナーゼ阻害剤の追加の好ましい例としては、ＸＬ−９９９（エクセリクシス）；ＳＵ６６６８（ファイザー）；ＣＨＩＲ−２５８／ＴＫＩ−２５８（カイロン）；ＲＯ４３８３５９６（ホフマン・ラ・ロシュ）、および、ＢＩＢＦ−１１２０（ベーリンガー・インゲルハイム）が挙げられる。
【０１５８】
[164]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与すること、それに加えて、ＣＯＸＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤を同時にまたは連続的に投与することを含む。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例としては、アレコキシブ（例えばセレブレックス（CelebrexTM））、バルデコキシブ、および、ロフェコキシブが挙げられる。
【０１５９】
[165]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて放射線または放射性医薬品での治療を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１６０】
[166]放射線源は、治療を受ける患者にとって外部のものであってもよいし、または、内部のものであってもよい。放射線源が患者にとって外部のものである場合、そのような治療は外部ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者にとって内部のものである場合、そのような治療はブラキー治療（ＢＴ）と呼ばれる。本発明に従って使用するための放射性原子は、これらに限定されないが、ラジウム、セシウム１３７、イリジウム１９２、アメリシウム２４１、金１９８、コバルト５７、銅６７、テクネチウム９９、ヨウ素１２３、ヨウ素１３１、および、インジウム１１１からなる群より選択することができる。本発明に係るＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が抗体である場合、抗体をこのような放射性同位体で標識することもできる。
【０１６１】
[167]放射線療法は、切除不能な腫瘍または手術不可能な腫瘍および／もしくは腫瘍転移を制御するための標準的な治療である。放射線療法を化学療法と組み合わせると、改善された結果がみられる。放射線療法は、標的領域に送達された高線量の放射線によって腫瘍と正常な組織両方の増殖可能な細胞を殺すという原理に基づく。放射線量は、一般的に放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間および分割に関して定義され、腫瘍学者による慎重な定義が必要である。患者が受ける放射線量は様々な考察によって決定されると予想されるが、最も重要な２点は、体の他の重要な構造または臓器に対する腫瘍の位置と、腫瘍が広がっている程度である。放射線療法を受ける患者の典型的な治療計画は、１〜６週間にわたる治療スケジュールで、患者に投与される合計線量は１０〜８０Ｇｙであり、１回の１日分割量は約１．８〜２．０Ｇｙであり、１週間のうち５日と予想される。本発明の好ましい実施態様において、人間の患者の腫瘍を本発明と放射線との併用療法で治療すれば、相乗効果がある。言い換えれば、本発明の組み合わせを含む物質を用いた腫瘍増殖の阻害は、放射線と組み合わせることによって強化され、さらに任意に追加の化学療法剤または抗癌剤を用いてもよい。アジュバントの放射線療法のパラメーターは、例えば国際特許公報ＷＯ９９／６００２３に記載されたものがある。
【０１６２】
[168]本発明はさらに、本明細書において説明される患者の癌または腫瘍もしくは腫瘍転移を治療するあらゆる方法を提供するものであり、本方法は、患者に治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を投与し、それに加えて１種またはそれより多くの抗腫瘍性の免疫反応を強化することができる物質での治療を同時にまたは連続的に投与することを含む。
【０１６３】
[169]抗腫瘍性の免疫反応を強化することができる物質としては、例えば、ＣＴＬＡ４（細胞障害性リンパ球抗原４）抗体（例えばＭＤＸ−ＣＴＬＡ４、イピリムマブ、ＭＤＸ−０１０）、および、ＣＴＬＡ４をブロックすることができるその他の物質が挙げられる。本発明において用いることができる特異的なＣＴＬＡ４抗体としては、米国特許第６，６８２，７３６号で説明されているものが挙げられる。
【０１６４】
[170]本発明に関して、物質または治療の「有効量」は上記で定義した通りである。物質または治療の「治療量未満の量（sub-therapeutic amount）」は、その物質または治療の有効量より少ない量であるが、有効量または治療量未満の量のその他の物質または治療と組み合わせた場合、例えば結果得られた有効な作用との相乗効果または副作用の減少のために医師が望む結果を得ることができる量である。
【０１６５】
[171]本明細書で用いられる用語「患者」は、好ましくは、癌（例えばその他の治療に応答しなかった癌の難治性の型も含む）についてＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療が必要な人間を意味する。本発明における癌または腫瘍および腫瘍転移としては、ＮＳＣＬ（非小細胞肺）、膵臓癌、頭頸部癌、口腔癌または鼻の扁平上皮癌、結腸癌、卵巣癌または乳癌、肺癌、細気管支肺胞上皮癌、骨癌、皮膚癌、頭頚部癌、ＨＮＳＣＣ、皮膚黒色腫または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌（stomach cancer）、胃癌（gastric cancer）、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、結腸直腸癌、内分泌癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、副腎皮質癌（ＡＣＣ）、軟部組織の肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、尿管癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆管癌、腎臓癌、腎細胞癌、慢性または急性白血病、リンパ球性リンパ腫、神経芽細胞腫、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、脊髄の軸の腫瘍、脳幹グリオーマ、多形性膠芽腫、星状細胞腫、神経鞘腫、脳室上皮腫、髄芽細胞腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫が挙げられ、さらに上記の癌のいずれか、または、上記の癌の１種またはそれより多くの組み合わせの難治性の型も含まれる。癌に加えて、本発明の方法はまた、前癌状態または病変、例えば口腔白板症、日光性角化症（日光性角化症）、結腸または直腸の前癌状態のポリープ、胃上皮細胞の異形成、腺腫の異形成、遺伝性非腺腫性大腸癌症候群（ＨＮＰＣＣ）、バレット食道、膀胱の異形成、肝硬変または瘢痕化、および、前癌状態の頚部の状態などに使用することもできる。
【０１６６】
[172]本明細書で用いられる用語「難治性」は、治療（例えば化学療法薬、生物学的に作用する物質、および／または、放射線療法）が効果のないことが証明されている癌を定義するために用いられる。難治性癌の腫瘍は収縮する場合もあるが、治療が有効であると決定されるほどではない。しかしながら、通常は腫瘍は治療前と同じ大きさを保つか（病勢安定）、または、成長する（進行性の病気）。本明細書で用いられるこの用語は、本明細書において説明される治療または物質のいずれにも適用することができ、これらが単一の物質として用いられる場合または組み合わせとして用いられる場合も適用することができる。
【０１６７】
[173]本発明の目的に関して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と追加の抗癌剤との「共投与」およびそれらを「共投与すること」（いずれの構成要素も、以下「２種の活性物質」と称する）は、２種の活性物質の、別々または一緒のあらゆる投与を意味し、ここで２種の活性物質は、併用療法の利点が得られるように設計された適切な薬剤投与計画の一部として投与される。従ってこれら２種の活性物質は、同じ医薬組成物の一部として、または、別々の医薬組成物で投与することができる。追加の物質は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与の前に、それと同時に、または、それに続いて投与してもよいし、または、それらをいくつかが組み合わせて投与してもよい。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が繰り返しのインターバルで、例えば標準的な治療期間の間に患者に投与される場合、追加の物質は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤それぞれの投与の前に、それと同時に、もしくはそれに続いて、または、それらをいくつか組み合わせて投与してもよいし、または、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に関して異なるインターバルで、または、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療期間の前に、その間のあらゆる時に、または、それに続いて単回投与することによって投与してもよい。
【０１６８】
[174]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、典型的には、当業界で知られた、例えば国際特許公報ＷＯ０１／３４５７４で開示されているような、患者を治療するための（有効性と安全性の見通しの両面から）最も有効な癌治療を提供する薬剤投与計画で患者に投与されると予想される。本発明の治療方法を行う際に、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、当業界でよく知られているあらゆる有効な方式で投与することができ、例えば、治療しようとする癌のタイプ、用いる予定のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のタイプ（例えば、低分子物質、抗体、ＲＮＡｉ、リボザイムまたはアンチセンスコンストラクト）、および、例えば公開された臨床的な研究の結果に基づく担当医師の医学的判断に応じて経口、局所、静脈内、腹膜内、筋肉内、関節内、皮下、鼻腔内、眼内、膣内、直腸内または皮内経路で投与することができる。
【０１６９】
[175]投与されたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の量とＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤投与のタイミングは、治療を受ける患者のタイプ（人種、性別、年齢、体重など）と状態、病気の重症度または治療しようとする状態、さらには投与経路によって決定されると予想される。例えば低分子量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、１日あたり、または、１週間あたり０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で、１回の用量または数回に分けた用量で、または、連続的な点滴によって患者に投与することができる（例えば国際特許公報ＷＯ０１／３４５７４を参照）。具体的に言えば、ＯＳＩ−９０６または類似の化合物のような化合物は、１日あたり５〜２００ｍｇ、または、１週間あたり１００−１６００ｍｇの範囲の用量で、１回の用量または数回に分けた用量で、または、連続的な点滴によって患者に投与することができる。抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤またはアンチセンスＲＮＡｉまたはリボザイムコンストラクトは、１日あたり、または、１週間あたり０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で、１回の用量または数回に分けた用量で、または、連続的な点滴によって患者に投与することができる。場合によっては、前述の範囲の下限より低い用量レベルでも適量よりも多い場合もあり、一方でその他のケースにおいて、なんら有害な副作用を引き起こすことなくさらにより高い用量が用いられる場合もあるが、このようなより高い用量はまず、一日かけて投与するために数回分の少ない用量に分割される。
【０１７０】
[176]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤およびその他の追加の物質は、別々にまたは一緒に、同一または異なる経路で、および、多種多様の異なる投薬形態で投与することができる。例えばＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、好ましくは経口投与または非経口投与される。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤がＯＳＩ−９０６またはこのような化合物と類似した化合物である場合、経口投与が好ましい。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤およびその他の追加の物質はいずれも、１回または複数回の用量で投与することができる。
【０１７１】
[177]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、様々な医薬的に許容される不活性キャリアーと共に、錠剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、ハードキャンディー、粉末、スプレー、クリーム、軟膏、坐剤、ゼリー、ゲル、ペースト、ローション、軟膏、エリキシル、シロップなどの形態で投与することができる。このような投薬形態の投与は、１回または複数回の用量で行うことができる。キャリアーとしては、固形の希釈剤または充填剤、滅菌水性媒体、および、様々な非毒性の有機溶媒などが挙げられる。経口用医薬組成物は、適切に加糖したり、および／または、フレーバーを付けたりすることができる。
【０１７２】
[178]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、スプレー、クリーム、軟膏、坐剤、ゼリー、ゲル、ペースト、ローション、軟膏などの形態で、様々な医薬的に許容される不活性キャリアーと共に組み合わせることができる。このような投薬形態の投与は、１回または複数回の用量で行うことができる。キャリアーとしては、固形の希釈剤または充填剤、滅菌水性媒体、および、様々な非毒性の有機溶媒などが挙げられる。
【０１７３】
[179]タンパク質様のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含むあらゆる調合物は、阻害剤の生物活性が変性および／または分解、ならびに損失しないように選択されるべきである。
[180]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む医薬組成物の製造方法は、当業界でよく知られており、例えば国際特許公報ＷＯ０１／３４５７４で説明されている。本発明の教示を考慮すれば、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む医薬組成物の製造方法は、上記で引用された出版物およびその他の既知の参考文献から、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, マック・パブリッシング社(Mack Publishing Company), ペンシルバニア州イーストン, 第１８版（１９９０）から明らかであると予想される。
【０１７４】
[181]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の経口投与の場合、一方または両方の活性物質を含む錠剤は、様々な賦形剤、例えば、微結晶性セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウムおよびグリシンのいずれかと、様々な崩壊剤、例えばデンプン（および好ましくはトウモロコシ、ジャガイモまたはタピオカデンプン）、アルギン酸およびある種の複合ケイ酸塩と共に、さらに顆粒結合剤（granulation binder)、例えばポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、および、アカシアと組み合わされる。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクなどの潤滑剤が、錠剤形成に極めて有用であることが多い。また、ゼラチンカプセルにおける充填剤として類似のタイプの固形組成物も用いることができ、これに関して好ましい材料としては、ラクトースまたは乳糖、加えて高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。経口投与に水性懸濁液および／またはエリキシルが望ましい場合、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、様々な甘味剤または矯味矯臭剤、着色性の物質または色素と組み合わせてもよく、さらに、必要に応じて、乳化剤および／または懸濁化剤、同様に水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、および、それらの組み合わせなどの様々なもののような希釈剤も組み合わせてもよい。
【０１７５】
[182]活性物質のいずれかまたはその両方を非経口投与する場合、ゴマ油もしくは落花生油の溶液、または水性プロピレングリコールの溶液のいずれかが用いられる可能性があり、加えて活性物質またはそれに相当するそれらの水溶性塩を含む滅菌水溶液が用いられる可能性もある。このような滅菌水溶液は好ましくは適切に緩衝化されており、さらに好ましくは例えば必要十分量の食塩水またはグルコースで等張にされている。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹膜内注射に特に適している。関節内、筋肉内および皮下注射には、油性溶液が適している。これら全ての溶液の滅菌条件下での調製は、当業者によく知られている標準的な製薬技術によって容易に達成される。タンパク質様のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与のために選択されたいずれの非経口製剤も、阻害剤の生物活性の変性および損失が防がれるように選択すべきである。
【０１７６】
[183]加えて、活性物質のいずれかまたはその両方を局所投与してもよく、これは、標準的な製薬上の実施に従って、例えばクリーム、ローション、ゼリー、ゲル、ペースト、軟膏、軟膏などによって局所投与される。例えば約０．１％（質量／体積）〜約５％（質量／体積）濃度のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む局所製剤を製造することができる。
【０１７７】
[184]本明細書で用いられる用語「ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤」は、目下当業界でよく知られているあらゆるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を意味するものであり、このような阻害剤としては、患者に投与すると、特に患者におけるＩＧＦ−１受容体の活性化に関与し、その天然のリガンドのＩＧＦ−１Ｒに結合した結果生じる生物活性の阻害を引き起こすあらゆる化学物質（例えばヒトの場合、遺伝子ＩＤ：３４８０によってコードされたタンパク質）が挙げられる。このようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、患者における癌の治療に関連するＩＧＦ−１Ｒ活性化をブロックし、さらにＩＧＦ−１Ｒ活性化の下流の生物学的作用をブロックすることができるあらゆる物質が挙げられる。このような阻害剤は、受容体の細胞内ドメインに直接結合し、そのキナーゼ活性を阻害することによって作用する可能性がある。あるいはこのような阻害剤は、ＩＧＦ−１受容体の正常な生物活性が妨害または低減されるように、ＩＧＦ−１受容体のリガンド結合部位またはそれらの一部を占有することによって受容体をその天然リガンドと接触不可能にすることによって作用する可能性がある。あるいはこのような阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドの二量体化またはＩＧＦ−１Ｒポリペプチドとその他のタンパク質との相互作用を調節するか、または、ＩＧＦ−１Ｒのユビキチン化およびエンドサイトーシスによる分解を強化することによって作用する可能性がある。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤はまた、ＩＧＦ−１Ｒを活性化することができるＩＧＦ−１の量を減少させることによって、例えばＩＧＦ−１のその受容体への結合を拮抗させることによって、ＩＧＦ−１のレベルを低くすることによって、または、ＩＧＦ−１と、ＩＧＦ−１Ｒ以外のタンパク質、例えばＩＧＦ結合タンパク質（例えばＩＧＦＢＰ３）との結合を促進することによっても作用する可能性がある。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、これらに限定されないが、低分子量の阻害剤、抗体または抗体フラグメント、アンチセンスコンストラクト、低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｄｓＲＮＡによるＲＮＡ干渉；ＲＮＡｉ）、および、リボザイムが挙げられる。好ましい実施態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、ヒトＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する有機小分子または抗体である。
【０１７８】
[185]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、例えば、イミダゾピラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、キナゾリンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピリド−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピリミド−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピロロ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピラゾロ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、フェニルアミノ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、オキシインドールＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、インドロカルバゾールＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、フタラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、イソフラボンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、キノロンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、および、チルホスチンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ならびにこのようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のあらゆる医薬的に許容される塩および溶媒和物が挙げられる
[186]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のさらなる例としては、国際特許公報ＷＯ０５／０９７８００（これは、６，６−二環の置換ヘテロ二環式プロテインキナーゼ阻害剤が説明されている）、国際特許公報ＷＯ０５／０３７８３６（これは、イミダゾピラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が説明されている）、国際特許公報ＷＯ０３／０１８０２１およびＷＯ０３／０１８０２２（これは、ＩＧＦ−１Ｒ関連疾患を治療するためのピリミジンが説明されている）、国際特許公報ＷＯ０２／１０２８０４およびＷＯ０２／１０２８０５（これは、シクロリグナンおよびＩＧＦ−１Ｒ阻害剤としてのシクロリグナンが説明されている）、国際特許公報ＷＯ０２／０９２５９９（これは、ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼ阻害に応答する病気を治療するためのピロロピリミジンが説明されている）、国際特許公報ＷＯ０１／７２７５１（これは、チロシンキナーゼ阻害剤としてのピロロピリミジンが説明されている）に記載されているもの、さらに、国際特許公報ＷＯ００／７１１２９（これは、キナーゼのピロロトリアジン阻害剤が説明されている）、および、国際特許公報ＷＯ９７／２８１６１（これは、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよびチロシンキナーゼ阻害剤としてのそれらの使用が説明されている）に記載されているもの、インビトロおよびインビボでのＩＧＦ−１Ｒ阻害活性を有するチルホスチンを説明しているParrizas等（Endocrinology, 138:1427-1433 (1997)）、国際特許公報ＷＯ００／３５４５５（これは、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤としてのヘテロアリール−アリール尿素が説明されている）、国際特許公報ＷＯ０３／０４８１３３（これは、ＩＧＦ−１Ｒのモジュレーターとしてのピリミジン誘導体が説明されている）、国際特許公報ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０３／０３５６１４、ＷＯ０３／０３５６１５、ＷＯ０３／０３５６１６およびＷＯ０３／０３５６１９（これは、キナーゼタンパク質に阻害作用を有する化学物質が説明されている）、国際特許公報ＷＯ０３／０６８２６５（これは、過剰増殖性の状態を治療するための方法および組成物が説明されている）、国際特許公報ＷＯ００／１７２０３（これは、プロテインキナーゼ阻害剤としてのピロロピリミジンが説明されている）、日本国特許公報ＪＰ０７／１３３２８０（これは、セフェム系化合物、その製造および抗菌性組成物が説明されている）、プテリジンの研究および４位が非置換のプテリジンを説明しているAlbert, A. et al., Journal of the Chemical Society, 11: 1540-1547 (1970)、および、ピラジンからの３−４−ジヒドロプテリジンを介したプテリジン（４位非置換）の合成を説明しているA. Albert et al., Chem. Biol. Pteridines Proc. Int. Symp., 4th, 4: 1-5 (1969)に記載されているものが挙げられる。
【０１７９】
[187]本発明において特に有用なＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、米国特許公開公報ＵＳ２００６／０２３５０３１で説明されているような式（Ｉ）で示される化合物（以下参照）が挙げられ、以下でそれらの製造を詳細に説明する。式（Ｉ）で示されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の代表的なものとしては、ＰＱＩＰ（シス−３−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロブチル］−１−（２−フェニル−キノリン−７−イル）−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−イルアミン）、および、ＯＳＩ−９０６（シス−３−［８−アミノ−１−（２−フェニル−キノリン−７−イル）−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］−１−メチル−シクロブタノール）が挙げられる。
【０１８０】
[188]ＯＳＩ−９０６は、以下のような構造を有する：
【０１８１】
【化１】
2013520998.tif 000003
【０１８２】
[189]ＰＱＩＰは、以下のような構造を有する：
[190]
【０１８３】
【化２】
2013520998.tif 000004
【０１８４】
[191]式（Ｉ）で示されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、米国特許公開公報ＵＳ２００６／０２３５０３１で説明されているように、以下に示す式で示される：
【０１８５】
【化３】
2013520998.tif 000005
【０１８６】
[192]またはそれらの医薬的に許容される塩であって、式中：
[193]Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、Ｎ、または、Ｃ−（Ｅ１）ａａであり；
[194]Ｘ５は、Ｎ、Ｃ−（Ｅ１）ａａ、または、Ｎ−（Ｅ１）ａａであり；
[195]Ｘ３、Ｘ４、Ｘ６およびＸ７は、それぞれ独立して、ＮまたはＣであり；
[196]ここでＸ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７のうち少なくとも１つは、独立してＮまたはＮ−（Ｅ１）ａａであり；
[197]Ｑ１は、
【０１８７】
【化４】
2013520998.tif 000006
【０１８８】
であり；
[198]Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５およびＸ１６は、それぞれ独立して、Ｎ、Ｃ−（Ｅ１１）ｂｂ、または、Ｎ＋−Ｏ−であり；
[199]ここでＸ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５およびＸ１６のうち少なくとも１つはは、ＮまたはＮ＋−Ｏ−であり；
[200]Ｒ１は、存在しないか、Ｃ０〜１０アルキル、シクロＣ３〜１０アルキル、ビシクロＣ５〜１０アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロビシクロＣ５〜１０アルキル、スピロアルキル、または、ヘテロスピロアルキルであり、これらはいずれも、１またはそれより多くの独立したＧ１１置換基で任意に置換されていてもよく；
[201]Ｅ１、Ｅ１１、Ｇ１およびＧ４１は、それぞれ独立して、ハロ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２、−ＮＲ２Ｒ３（Ｒ２ａ）ｊ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、−ＣＯ２Ｒ２、−ＣＯＮＲ２Ｒ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ１Ｒ２、−ＳＯ２ＮＲ２Ｒ３、−ＮＲ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−ＮＲ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３、−ＮＲ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３Ｒ２ａ、−ＮＲ２Ｓ（Ｏ）ｊ１Ｒ３、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２、−ＮＲ２Ｃ（＝ＮＲ３）ＮＲ２ａＲ３ａ、−ＮＲ２Ｃ（＝ＮＲ３）ＯＲ２ａ、−ＮＲ２Ｃ（＝ＮＲ３）ＳＲ２ａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２Ｒ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２Ｒ３、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、オキソ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２２２、−ＮＲ２２２Ｒ３３３（Ｒ２２２ａ）ｊ１ａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２２２、−ＣＯ２Ｒ２２２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（＝Ｏ）ｊ１ａＲ２２２、−ＳＯ２ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３３３Ｒ２２２ａ、−ＮＲ２２２Ｓ（Ｏ）ｊ１ａＲ３３３、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２２２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２２２、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＮＲ２２２ａＲ３３３ａ、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＯＲ２２２ａ、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＳＲ２２２ａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２２２、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２、または、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３置換基で置換されていてもよく；
[202]または、Ｅ１、Ｅ１１またはＧ１は、任意に−（Ｗ１）ｎ−（Ｙ１）ｍ−Ｒ４であってもよく；
[203]または、Ｅ１、Ｅ１１、Ｇ１またはＧ４１は、任意に、独立して、アリール−Ｃ０〜１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０〜１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニルであってもよく、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２２２、−ＮＲ２２２Ｒ３３３（Ｒ２２２ａ）ｊ２ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２２２、−ＣＯ２Ｒ２２２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ２ａＲ２２２、−ＳＯ２ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３３３、−ＮＲ２２２Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３３３Ｒ２２２ａ、−ＮＲ２２２Ｓ（Ｏ）ｊ２ａＲ３３３、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２２２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２２２、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＮＲ２２２ａＲ３３３ａ、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＯＲ２２２ａ、−ＮＲ２２２Ｃ（＝ＮＲ３３３）ＳＲ２２２ａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２２２、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２、または、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２Ｒ３３３置換基で置換されていてもよく；
[204]Ｇ１１は、ハロ、オキソ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２１、−ＮＲ２１Ｒ３１（Ｒ２ａ１）ｊ４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−ＣＯ２Ｒ２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ４Ｒ２１、−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ３１、ＮＲ２１（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３１、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３１、ＮＲ２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３１Ｒ２ａ１、ＮＲ２１Ｓ（Ｏ）ｊ４Ｒ３１、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２１、−ＮＲ２１Ｃ（＝ＮＲ３１）ＮＲ２ａ１Ｒ３ａ１、−ＮＲ２１Ｃ（＝ＮＲ３１）ＯＲ２ａ１、−ＮＲ２１Ｃ（＝ＮＲ３１）ＳＲ２ａ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２１、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２１、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２１Ｒ３１、−Ｐ（Ｏ）ＯＲ２１ＯＲ３１、Ｃ１〜１０アルキリデン、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、オキソ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２２２１、−ＮＲ２２２１Ｒ３３３１（Ｒ２２２ａ１）ｊ４ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２２２１、−ＣＯ２Ｒ２２２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ４ａＲ２２２１、−ＳＯ２ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３３３１Ｒ２２２ａ１、−ＮＲ２２２１Ｓ（Ｏ）ｊ４ａＲ３３３１、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２２２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２２２１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＮＲ２２２ａ１Ｒ３３３ａ１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＯＲ２２２ａ１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＳＲ２２２ａ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２２２１、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２１、−Ｐ（Ｏ）ＯＲ２２２１ＯＲ３３３１、または、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１置換基で置換されていてもよく；
[205]または、Ｇ１１は、アリール−Ｃ０〜１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０〜１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ２２２１、−ＮＲ２２２１Ｒ３３３１（Ｒ２２２ａ１）ｊ５ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２２２１、−ＣＯ２Ｒ２２２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ５ａＲ２２２１、−ＳＯ２ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ３３３１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ３３３１Ｒ２２２ａ１、−ＮＲ２２２１Ｓ（Ｏ）ｊ５ａＲ３３３１、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ２２２１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２２２１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＮＲ２２２ａ１Ｒ３３３ａ１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＯＲ２２２ａ１、−ＮＲ２２２１Ｃ（＝ＮＲ３３３１）ＳＲ２２２ａ１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ２２２１、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ２２２１、−Ｐ（Ｏ）ＯＲ２２２１ＯＲ３３３１、または、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ２２２１Ｒ３３３１置換基で置換されていてもよく；
[206]または、Ｇ１１はＣであり、それらが結合する炭素と一緒になって、Ｒ５およびＧ１１１で置換される二重結合Ｃ＝Ｃを形成し；
[207]Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ３、Ｒ３ａ、Ｒ２２２、Ｒ２２２ａ、Ｒ３３３、Ｒ３３３ａ、Ｒ２１、Ｒ２ａ１、Ｒ３１、Ｒ３ａ１、Ｒ２２２１、Ｒ２２２ａ１、Ｒ３３３１およびＲ３３３ａ１は、それぞれ独立して、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニル、アリール−Ｃ０〜１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、または、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０−１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、１個またはそれより多くの独立したＧ１１１置換基で任意に置換されていてもよく；
[208]または、−ＮＲ２Ｒ３（Ｒ２ａ）ｊ１、または、−ＮＲ２２２Ｒ３３３（Ｒ２２２ａ）ｊ１ａ、または、−ＮＲ２２２Ｒ３３３（Ｒ２２２ａ）ｊ２ａ、または、−ＮＲ２１Ｒ３１（Ｒ２ａ１）ｊ４、または、−ＮＲ２２２１Ｒ３３３１（Ｒ２２２ａ１）ｊ４ａ、または、−ＮＲ２２２１Ｒ３３３１（Ｒ２２２ａ１）ｊ５ａのケースにおいて、Ｒ２およびＲ３、または、Ｒ２２２およびＲ３３３、または、Ｒ２２２１およびＲ３３３１はそれぞれ、任意に、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜１０員環の飽和または不飽和の環を形成していてもよく、ここで前記環は、１個またはそれより多くの独立したＧ１１１１置換基で任意に置換されていてもよく、さらに、ここで前記環は、任意に、Ｒ２およびＲ３、または、Ｒ２２２およびＲ３３３、または、Ｒ２２２１およびＲ３３３１が結合している窒素以外の１個またはそれより多くのヘテロ原子を含んでいてもよく；
[209]Ｗ１およびＹ１は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−ＮＲ７−、−Ｓ（Ｏ）ｊ７−、−ＣＲ５Ｒ６−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＯＲ７）−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）−、−Ｎ（ＳＯ２Ｒ７）−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ７）−、−ＣＨ（ＮＲ７）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＯＲ７）−、−ＣＨ２Ｎ（ＳＯ２Ｒ７）−、−ＣＨ（ＮＨＲ７）−、−ＣＨ（ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ７）−、−ＣＨ（ＮＨＳＯ２Ｒ７）−、−ＣＨ（ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ７）−、−ＣＨ（ＯＣ（Ｏ）Ｒ７）−、−ＣＨ（ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ７）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（＝ＮＯＲ７）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＯＲ７）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２−  −ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｓ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ８）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯＮ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）−、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ７）ＳＯＮ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｒ８）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）Ｐ（ＯＲ８）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）Ｐ（ＯＲ８）−、−Ｎ（Ｒ７）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｐ（ＯＲ８）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｐ（ＯＲ８）−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ７）Ｐ（ＯＲ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＯＲ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（ＳＯ２Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）ＯＲ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（ＳＯ２Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｃ（＝ＮＯＲ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）ＣＨ（ＯＲ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）２−、−ＣＨ（Ｒ７）ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｓ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｓ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ８）Ｃ（Ｏ）−、−��Ｈ（Ｒ７）ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（Ｒ７）ＳＯＮ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）ＳＯ２Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）ＳＯＮ（Ｒ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）ＳＯ２Ｎ（Ｒ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｐ（ＯＲ７ａ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｐ（ＯＲ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７ａ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｒ８）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｐ（ＯＲ７ａ）Ｏ−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｐ（ＯＲ７ａ）−、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７ａ）Ｏ−、または、−ＣＨ（Ｒ７）Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｒ８）Ｐ（ＯＲ７ａ）−であり；
[210]Ｒ５、Ｒ６、Ｇ１１１およびＧ１１１１は、それぞれ独立して、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１−１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１−１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニル、アリール−Ｃ０〜１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０〜１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＲ７７、−ＮＲ７７Ｒ８７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７７、−ＣＯ２Ｒ７７、−ＣＯＮＲ７７Ｒ８７、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ５ａＲ７７、−ＳＯ２ＮＲ７７Ｒ８７、−ＮＲ７７Ｃ（＝Ｏ）Ｒ８７、−ＮＲ７７Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ８７、−ＮＲ７７Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７８Ｒ８７、−ＮＲ７７Ｓ（Ｏ）ｊ５ａＲ８７、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ７７、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ７７、−ＮＲ７７Ｃ（＝ＮＲ８７）ＮＲ７８Ｒ８８、−ＮＲ７７Ｃ（＝ＮＲ８７）ＯＲ７８、−ＮＲ７７Ｃ（＝ＮＲ８７）ＳＲ７８、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ７７、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ７７Ｒ８７、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ７７、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ７７、−Ｐ（Ｏ）ＯＲ７７ＯＲ８７、または、−ＳＣ（＝Ｏ）ＮＲ７７Ｒ８７置換基で置換されていてもよく；
[211]または、Ｒ５およびＲ６は、任意にそれらが結合する炭素原子と一緒になって、３〜１０員環の飽和または不飽和の環を形成してもよく、ここで前記環は、任意に１個またはそれより多くの独立したＲ６９置換基で置換されていてもよく、さらに、ここで前記環は、任意に、１個またはそれより多くの  ヘテロ原子を含んでいてもよく；
[212]Ｒ７、Ｒ７ａおよびＲ８は、それぞれ独立して、アシル、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、または、シクロＣ３〜１０アルキルであり、これらはいずれも、１個またはそれより多くの独立したＧ１１１置換基で任意に置換されていてもよく；
[213]Ｒ４は、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロＣ３〜１０アルキル、ヘテロシクリル、シクロＣ３〜８アルケニル、または、ヘテロシクロアルケニルであり、これらはいずれも、１個またはそれより多くの独立したＧ４１置換基で任意に置換されていてもよく；
[214]Ｒ６９は、ハロ、−ＯＲ７８、−ＳＨ、−ＮＲ７８Ｒ８８、−ＣＯ２Ｒ７８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７８Ｒ８８、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）ｊ８Ｒ７８、−ＳＯ２ＮＲ７８Ｒ８８、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、または、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、シアノ、ニトロ、−ＯＲ７７８、−ＳＯ２ＮＲ７７８Ｒ８８８、または、−ＮＲ７７８Ｒ８８８置換基で置換されていてもよく；
[215]または、Ｒ６９は、アリール−Ｃ０〜１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０〜１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニル、モノ（Ｃ１〜６アルキル）アミノＣ１〜６アルキル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノＣ１〜６アルキル、モノ（アリール）アミノＣ１〜６アルキル、ジ（アリール）アミノＣ１〜６アルキル、または、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）−Ｃ１〜６アルキル−アリールであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、シアノ、ニトロ、−ＯＲ７７８、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、ハロＣ１〜１０アルキル、ハロＣ２〜１０アルケニル、ハロＣ２〜１０アルキニル、−ＣＯＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７７８Ｒ８８８、−ＳＯ２ＮＲ７７８Ｒ８８８、または、−ＮＲ７７８Ｒ８８８置換基で置換されていてもよく；
[216]または、−ＮＲ７８Ｒ８８のケースにおいて、Ｒ７８およびＲ８８は、任意に、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜１０員環の飽和または不飽和の環を形成していてもよく、ここで前記環は、任意に１個またはそれより多くの独立したハロ、シアノ、ヒドロキシ、ニトロ、Ｃ１〜１０アルコキシ、−ＳＯ２ＮＲ７７８Ｒ８８８、または、−ＮＲ７７８Ｒ８８８置換基で置換されていてもよく、さらに、ここで前記環は、任意に、Ｒ７８およびＲ８８が結合している窒素以外の１個またはそれより多くのヘテロ原子を含んでいてもよく；
[217]Ｒ７７、Ｒ７８、Ｒ８７、Ｒ８８、Ｒ７７８およびＲ８８８は、それぞれ独立して、Ｃ０〜１０アルキル、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１−１０アルコキシＣ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルキルチオＣ２〜１０アルケニル、Ｃ１−１０アルキルチオＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルキル、シクロＣ３〜８アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ１〜１０アルキル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルケニル、シクロＣ３〜８アルキルＣ２〜１０アルキニル、シクロＣ３〜８アルケニルＣ２〜１０アルキニル、ヘテロシクリル−Ｃ０〜１０アルキル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルケニル、ヘテロシクリル−Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜１０アルキルカルボニル、Ｃ２−１０アルケニルカルボニル、Ｃ２〜１０アルキニルカルボニル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル、Ｃ１−１０アルコキシカルボニルＣ１−１０アルキル、モノＣ１〜６アルキルアミノカルボニル、ジＣ１−６アルキルアミノカルボニル、モノ（アリール）アミノカルボニル、ジ（アリール）アミノカルボニル、または、Ｃ１−１０アルキル（アリール）アミノカルボニルであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、シアノ、ヒドロキシ、ニトロ、Ｃ１〜１０アルコキシ、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ０−４アルキル）（Ｃ０−４アルキル）、または、−Ｎ（Ｃ０〜４アルキル）（Ｃ０〜４アルキル）置換基で置換されていてもよく；
[218]または、Ｒ７７、Ｒ７８、Ｒ８７、Ｒ８８、Ｒ７７８およびＲ８８８は、それぞれ独立して、アリール−Ｃ０−１０アルキル、アリール−Ｃ２〜１０アルケニル、アリール−Ｃ２〜１０アルキニル、ヘタリール−Ｃ０−１０アルキル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルケニル、ヘタリール−Ｃ２〜１０アルキニル、モノ（Ｃ１−６アルキル）アミノＣ１〜６アルキル、ジ（Ｃ１〜６アルキル）アミノＣ１〜６アルキル、モノ（アリール）アミノＣ１−６アルキル、ジ（アリール）アミノＣ１〜６アルキル、または、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）−Ｃ１〜６アルキル−アリールであり、これらはいずれも、任意に、１個またはそれより多くの独立したハロ、シアノ、ニトロ、−Ｏ（Ｃ０〜４アルキル）、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、ハロＣ１〜１０アルキル、ハロＣ２〜１０アルケニル、ハロＣ２〜１０アルキニル、−ＣＯＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、−ＣＯＮ（Ｃ０〜４アルキル）（Ｃ０〜１０アルキル）、−ＳＯ２Ｎ（Ｃ０−４アルキル）（Ｃ０−４アルキル）、または、−Ｎ（Ｃ０〜４アルキル）（Ｃ０〜４アルキル）置換基で置換されていてもよく；
[219]ｎ、ｍ、ｊ１、ｊ１ａ、ｊ２ａ、ｊ４、ｊ４ａ、ｊ５ａ、ｊ７およびｊ８は、それぞれ独立して０、１または２であり；および、ａａ、および、ｂｂは、それぞれ独立して０または１である。
【０１８９】
[220]本発明に従って使用することができるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の追加の具体例としては、以下のものが挙げられる：ｈ７Ｃ１０（ピエールファーブル研究所（Centre de Recherche Pierre Fabre））、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ＥＭ−１６４（イムノジェン社（ImmunoGen Inc.））、ＩＧＦ−１Ｒ調節因子；ＣＰ−７５１８７１（ファイザー社）、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ランレオチド（イプセン（Ipsen））、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ＩＧＦ−１Ｒオリゴヌクレオチド（リンクス・セラピューティクス社（Lynx Therapeutics Inc.））；ＩＧＦ−１オリゴヌクレオチド（国立癌研究所（National Cancer Institute））；ノバルティスが開発中のＩＧＦ−１Ｒタンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤（Novartis）（例えばＮＶＰ−ＡＥＷ５４１、Garcia-Echeverria, C. et al. (2004) Cancer Cell 5:231-239；または、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、Mitsiades, C.S. et al. (2004) Cancer Cell 5:221-230）；ＩＧＦ−１Ｒタンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤（オントジェン社（Ontogen Corp））；ＯＳＩ−９０６（ＯＳＩファーマシューティカルズ）；ＡＧ−１０２４（Camirand, A. et al. (2005) Breast Cancer Research 7:R570-R579(DOI 10.1186/bcr1028);Camirand, A. and Pollak, M. (2004) Brit. J. Cancer 90:1825-1829；ファイザー社）、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；チルホスチンＡＧ−５３８およびＩ−ＯＭｅ−ＡＧ  ５３８；ＢＭＳ−５３６９２４、低分子量のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤；ＰＮＵ−１４５１５６Ｅ（ファルマシア＆アップジョン社（Pharmacia & Upjohn SpA））、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ＢＭＳ５３６９２４、二重のＩＧＦ−１Ｒ、および、ＩＲ  キナーゼ阻害剤（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ；Huang, F. et al. (2009) Cancer Res. 69(1):161-170）；ＢＭＳ−５５４４１７、二重のＩＧＦ−１Ｒ、および、ＩＲ  キナーゼ阻害剤（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ；Haluska P, et al. Cancer Res 2006;66(1):362-71；ＥＷ５４１（ノバルティス）；ＧＳＫ６２１６５９Ａ（グラクソ・スミスクライン（Glaxo Smith-Kline））；ＩＮＳＭ−１８（インスメッド（インスメッド））；および、ＸＬ−２２８（エクセリクシス）。
【０１９０】
[221]抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、その天然リガンドによってＩＧＦ−１Ｒ活性化を部分的または完全にブロックすることができるあらゆる抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体または抗体フラグメントが挙げられる。さらに抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては、ＩＧＦ−１Ｒ活性化を部分的または完全にブロックすることができるあらゆる抗ＩＧＦ−１抗体または抗体フラグメントも挙げられる。抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の例としては、これらに限定されないが、Larsson, O. et al (2005) Brit. J. Cancer 92:2097-2101、および、Ibrahim, Y.H. and Yee, D. (2005) Clin. Cancer Res. 11:944s-950sで説明されているもの、または、イムクローン（Imclone）によって開発されたもの（例えばＡ１２）、または、シェリング・プラウ研究所（Schering-Plough Research Institute）によって開発されたもの（例えば１９Ｄ１２；または、米国公開特許公報ＵＳ２００５／０１３６０６３Ａ１、および、ＵＳ２００４／００１８１９１Ａ１で説明されているもの）が挙げられる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、モノクローナル抗体であってもよいし、または、それらの結合特異性を有する抗体または抗体フラグメントであってもよい。本発明で使用することができる具体的な追加の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体としては、IMCL-A１２（別名 シクスツムマブ；イムクローン（Ｉｍｃｌｏｎｅ））、 MK-０６４６（メルク（Ｍｅｒｃｋ））、 CP-７５１８７１（別名 フィギツムマブ（ｆｉｇｉｔｕｍｕｍａｂ）；ファイザー）、AMG-４７９（アムジェン（Ａｍｇｅｎ））、および、SCH-７１７４５４（別名。ロバツムマブ；シェリング・プラウ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）/メルク（Ｍｅｒｃｋ））が挙げられる。
【０１９１】
[222]追加の抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、周知の方法に従って、例えば、なかでもブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、ヤギ、ヒツジおよびマウスから選択された宿主動物に適切な抗原またはエピトープを投与することによって生産することができる。抗体産生を強化するために、当業界でよく知られている様々なアジュバントを用いることができる。
【０１９２】
[223]本発明の実施において有用な抗体はポリクローナルであってもよいが、好ましくはモノクローナル抗体である。ＩＧＦ−１Ｒに対するモノクローナル抗体は、連続した培養中の細胞系で抗体分子を生産させるあらゆる技術を用いて生産し単離することができる。生産および単離の技術としては、これらに限定されないが、最初にKohler and Milstein (Nature, 1975, 256: 495-497）で説明されたハイブリドーマ技術；ヒトＢ−細胞ハイブリドーマ技術（Kosbor et al., 1983, Immunology Today 4:72; Cote et al., 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030）；および、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Cole et al, 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96）が挙げられる。
【０１９３】
[224]あるいは、単鎖抗体の生産について説明した技術（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照）を、抗ＩＧＦ−１Ｒ単鎖抗体が生産されるように適合させてもよい。また本発明の実施において有用な抗体ベースのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としては抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体フラグメントも挙げられ、このような抗体フラグメントとしては、これらに限定されないが、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが挙げられ、これは無傷抗体分子のペプシン消化によって製造することができ、さらに、Ｆａｂフラグメントも挙げられ、これは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって製造することができる。あるいは、望ましいＩＧＦ−１Ｒに対する特異性を有するフラグメントを迅速に同定するために、Ｆａｂおよび／またはｓｃＦｖ発現ライブラリーを構築してもよい（例えば、Huse et al., 1989, Science 246: 1275-1281を参照）。
【０１９４】
[225]モノクローナル抗体および抗体フラグメントの生産および単離に関する技術は当業界公知であり、Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, and in J. W. Goding, 1986, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, Londonで説明されている。またヒト化抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体および抗体フラグメントは周知の技術に従って製造してもよく、このような技術としては、例えばVaughn, T. J. et al., 1998, Nature Biotech. 16:535-539で説明されているものおよびそこで引用された文献が挙げられ、このような抗体またはそれらのフラグメントもまた本発明の実施において有用なものである。
【０１９５】
[226]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、あるいは、アンチセンスオリゴヌクレオチドコンストラクトに基づいていてもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、アンチセンスＲＮＡ分子およびアンチセンスＤＮＡ分子が挙げられるが、このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＧＦ−１ＲのｍＲＮＡと結合することによってその翻訳を直接的にブロックするように作用し、それによりタンパク質の翻訳が阻害されるか、または、ｍＲＮＡ分解が増加し、従ってＩＧＦ−１Ｒキナーゼタンパク質のレベル、すなわち細胞中での活性が減少する。例えば少なくとも約１５塩基を有し、ＩＧＦ−１ＲをコードするｍＲＮＡ転写配列の特定の領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば従来のホスホジエステル技術によって合成することができ、さらに例えば静脈注射または点滴によって投与することができる。配列が既知の遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するためのアンチセンス技術の使用方法は当業界公知である（例えば、米国特許第６，５６６，１３５号；６，５６６，１３１号；６，３６５，３５４号；６，４１０，３２３号；６，１０７，０９１号；６，０４６，３２１号；および、５，９８１，７３２号を参照）。
【０１９６】
[227]低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としても機能する可能性がある。ＩＧＦ−１Ｒの発現が特異的に阻害される（すなわちＲＮＡ干渉またはＲＮＡｉ）ように腫瘍、被検体または細胞を低分子量二本鎖ＲＮＡの生産を引き起こす低分子量二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）またはベクターまたはコンストラクトと接触させることによって、ＩＧＦ−１Ｒの遺伝子発現を低減させることができる。配列が既知の遺伝子に適切なｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡをコードするベクターを選択する方法は当業界公知である（例えば、Tuschi, T., et al. (1999) Genes Dev. 13(24):3191-3197; Elbashir, S.M. et al. (2001) Nature 411:494-498; Hannon, G.J. (2002) Nature 418:244-251; McManus, M.T. and Sharp, P. A. (2002) Nature Reviews Genetics 3:737-747; Bremmelkamp, T.R. et al. (2002) Science 296:550-553；米国特許第６，５７３，０９９号および６，５０６，５５９号；および、国際特許公報ＷＯ０１／３６６４６、ＷＯ９９／３２６１９、および、ＷＯ０１／６８８３６を参照）。
【０１９７】
[228]リボザイムは、本発明で使用するのに適したＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤としても機能する可能性がある。リボザイムは、特異的なＲＮＡ切断を触媒することができる酵素的なＲＮＡ分子である。リボザイムの作用機序は、リボザイム分子の相補的標的ＲＮＡへの配列特異的なハイブリダイゼーション、それに続いてエンドヌクレアーゼによる切断を含む。従って、本発明の範囲において、ＩＧＦ−１ＲのｍＲＮＡ配列のエンドヌクレアーゼによる切断を特異的かつ効率的に触媒する加工されたヘアピンまたはハンマーヘッド型モチーフのリボザイム分子が有用である。まず、標的分子を典型的には以下の配列ＧＵＡ、ＧＵＵおよびＧＵＣを含むリボザイム切断部位に関してスキャンすることによってＲＮＡ標的内の存在し得るあらゆる特異的なリボザイム切断部位を同定する。それらが同定されたら、予測された構造的特徴（例えばオリゴヌクレオチド配列を不適合にすることができる二次構造）について、切断部位を含む標的の遺伝子領域に対応する約１５〜２０個のリボヌクレオチドの低分子ＲＮＡ配列を評価することができる。また候補標的の適性は、例えばリボヌクレアーゼ保護分析を用いてそれらの相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションの達成可能性を試験することによっても評価することもできる。
【０１９８】
[229]ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドとリボザイムはいずれも既知の方法によって製造することができる。このような方法は、例えば固相ホスホラミダイト化学合成による化学合成のための技術を含む。あるいは、アンチセンスＲＮＡ分子は、インビトロまたはインビボでのこのようなＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列の転写によって生成することができる。このようなＤＮＡ配列は、適切なＲＮＡポリメラーゼプロモーター、例えばＴ７またはＳＰ６ポリメラーゼプロモーターを包含する多種多様のベクターに包含させることができる。細胞内の安定性を高め半減期を長くするための手段として、本発明のオリゴヌクレオチドに様々な改変を導入することができる。可能性のある改変としては、これらに限定されないが、分子の５’および／または３’末端へのリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのフランキング配列の付加、または、オリゴヌクレオチド主鎖内に、ホスホジエステラーゼによる連結ではなくホスホ−チオエートまたは２’−Ｏ−メチルを使用することが挙げられる。
【０１９９】
[230]本発明の治療方法に関して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、医薬的に許容されるキャリアー、および、非毒性の治療有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）で構成される組成物として用いられる。
【０２００】
[231]用語「医薬的に許容される塩」は、医薬的に許容される非毒性の塩基または酸から製造された塩を意味する。本発明の化合物が酸性である場合、それに対応する塩は、無機塩基および有機塩基などの医薬的に許容される非毒性の塩基からうまく製造することができる。このような無機塩基から誘導された塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅（第二銅および第一銅）、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン（第二マンガンおよび第一マンガン）、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの塩が挙げられる。特に好ましいくは、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。医薬的に許容される有機性の非毒性の塩基から誘導された塩としては、第一、第二および第三アミンの塩、加えて環状アミンの塩、ならびに、置換アミンの塩、例えば天然に存在する置換アミンの塩および合成された置換アミンの塩が挙げられる。塩を形成することができるその他の医薬的に許容される有機性の非毒性の塩基としては、イオン交換樹脂、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどが挙げられる。
【０２０１】
[232]本発明で使用される化合物が塩基性である場合、それに対応する塩は、無機酸および有機酸などの医薬的に許容される非毒性の酸からうまく製造することができる。このような酸としては、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。特に好ましくは、クエン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、マレイン酸、リン酸、硫酸、および、酒石酸である。
【０２０２】
[233]本発明で使用される活性成分としてＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）を含む医薬組成物は、医薬的に許容されるキャリアーを含んでいてもよく、さらに任意にその他の治療用成分またはアジュバントを含んでいてもよい。その他の治療剤としては、上記で列挙したような細胞毒性の物質、化学療法剤もしくは抗癌剤、または、このような物質の作用を強める物質が挙げられる。本組成物は、経口投与、直腸投与、局所投与および非経口投与（例えば皮下投与、筋肉内投与および静脈内投与など）に適した組成物を含むが、最適な経路は、特定されたいずれのケースにおいても具体的な宿主、ならびに活性成分が投与されている状態の性質および重症度によって決定されると予想される。都合のよい形態としては、本医薬組成物は１回投与量で提供され、薬学分野において公知の方法のいずれかによって製造することができる。
【０２０３】
[234]実際には、本発明のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）は、活性成分として、従来の調剤技術に従って製剤用キャリアーと組み合わせて均一な混合状態にしてもよい。このようなキャリアーは、例えば経口または非経口投与（静脈内投与）などの投与に適した製剤の形態に応じて多種多様の形態であってよい。従って本発明の医薬組成物は経口投与に適した別々の単位として提供されてもよく、このような単位としては、例えば、予め決められた量の活性成分を含むカプセル、カシェ剤または錠剤が挙げられる。さらに本組成物は、粉末、顆粒、溶液、水性液体中の懸濁液、非水性の液体、水中油型エマルジョン、または、油中水型の液状エマルジョンとして提供されてもよい。上記の一般的な投薬形態に加えて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えばそれらの各成分の医薬的に許容される塩など）はまた、放出制御する手段および／または送達装置によって投与することもできる。このような組み合わせの組成物はあらゆる薬学的な方法を用いて製造することができる。このような方法は、一般的に、活性成分と１種またはそれより多くの必須成分を構成するキャリアーとを一緒にする工程を含む。一般的に、本組成物は、活性成分を、液体キャリアーもしくは微粉化した固体キャリアまたはその両方と均一によく混ざった状態に混合することによって製造される。続いて得られた生成物を、提供時の望ましい形態に都合よく成形することもできる。
【０２０４】
[235]また、本発明で用いられるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）を、１種またはそれより多くのその他の治療活性を有する化合物と組み合わせて医薬組成物に包含されていてもよい。その他の治療活性を有する化合物としては、上記で列挙したような細胞毒性の物質、化学療法剤もしくは抗癌剤、または、このような物質の作用を強める物質が挙げられる。
【０２０５】
[236]従って、本発明の一実施態様において、本医薬組成物は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物を抗癌剤と組み合わせて含んでいてもよく、ここで前記抗癌剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、微小管阻害剤、ポドフィロトキシン、抗生物質、ニトロソウレア、ホルモン治療剤、キナーゼ阻害剤、腫瘍細胞アポトーシスの活性化因子、および、抗血管新生剤からなる群より選択されるものである。
【０２０６】
[237]用いられる製剤用キャリアーは、例えば固体、液体または気体であってよい。固形キャリアーの例としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、および、ステアリン酸が挙げられる。液体キャリアーの例は、シュガーシロップ、落花生油、オリーブ油、および、水である。気体キャリアーの例としては、二酸化炭素、および、窒素が挙げられる。
【０２０７】
[238]経口用投薬形態の組成物を製造する場合、あらゆる便利な製薬媒体を用いることができる。懸濁液、エリキシルおよび溶液などの経口用液状製剤を形成するためには、例えば水、グリコール、油、アルコール、矯味矯臭剤、保存剤、着色剤などを用いることができる；一方で、粉末、カプセルおよび錠剤などの経口用固形製剤を形成するためには、例えばデンプン、糖類、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などのキャリアーを用いることができる。好ましい経口用の投与単位は、投与しやすさから錠剤およびカプセルであり、従って固形製剤用キャリアーが用いられる。任意に、標準的な水性の技術または非水性の技術で錠剤をコーティングしてもよい。
【０２０８】
[239]本発明で用いられる組成物を含む錠剤は圧縮または成形によって製造することもでき、このような錠剤は任意に１種またはそれより多くの補助的な成分またはアジュバントを含んでいてもよい。圧縮錠剤は、適切な装置で、任意に結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、表面活性剤または分散剤と混合された流動しやすい形態（例えば粉末または顆粒）の活性成分を圧縮することによって製造することもできる。成形錠剤は、適切な装置で、不活性な液体希釈剤で加湿した粉末状化合物の混合物を成形することによって製造してもよい。錠剤はそれぞれ、好ましくは約０．０５ｍｇ〜約５ｇの活性成分を含み、カシェ剤またはカプセルはそれぞれ、好ましくは約０．０５ｍｇ〜約５ｇの活性成分を含む。
【０２０９】
[240]例えばヒトへの経口投与を目的とした調合物は約０．５ｍｇ〜約５ｇの活性物質を含んでいてもよく、このような活性物質は適切で便利な量のキャリアー材料と配合され、このキャリアー材料の量は組成物全量の約５〜約９５パーセントの範囲の様々な量であり得る。１回投与量は、一般的には約１ｍｇ〜約２ｇの活性成分を含むと予想され、典型的には、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、または、１０００ｍｇの活性成分を含むと予想される。
【０２１０】
[241]本発明で使用される非経口投与に適切な医薬組成物は、活性化合物の水溶液または水懸濁液として調製することもできる。適切な界面活性剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。分散液はまた、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物で調製することもできる。さらに、有害な微生物増殖を防ぐために保存剤が含まれていてもよい。
【０２１１】
[242]本発明で使用される注射用途に適切な医薬組成物としては、滅菌水溶液または分散液が挙げられる。さらにこのような組成物は、このような滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための滅菌粉末の形態であってもよい。いずれのケースにおいても、最終的な注射可能な形態は、滅菌されていなければならなず、さらに注射器で操作しやすいように効果的に流動し得るものでなければならない。このような医薬組成物は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならなず、従って、好ましくは、細菌や菌類などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。キャリアーは、例えば水、エタノール、ポリオール、例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール、植物油、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。
【０２１２】
[243]本発明に係る医薬組成物は、例えばエアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、散粉剤または同種のもの等の局所的使用に適した形態であってもよい。さらに本組成物は、経皮送達のための装置で使用するのに適した形態であってもよい。このような調合物を、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）を利用して従来の加工方法によって調製することができる。一例として、クリームまたは軟膏は、親水性材料と水とを、望ましい粘稠度を有するクリームまたは軟膏が生産されるように約５質量％〜約１０質量％の上記化合物と共に混合することによって調製される。
【０２１３】
[244]本発明に係る医薬組成物は、直腸内投与に適した形態であってもよく、このような場合のキャリアーは固体である。好ましくは、このような混合物を単位用量の坐剤の形態にすることである。適切なキャリアーとしては、カカオバター、および、当業界において一般的に使用されているその他の材料が挙げられる。坐剤は、まずキャリアーを軟らかくするか融解させ、これを組成物とを混合し、続いて型の中で冷却し成形することによってうまく形成することができる。
【０２１４】
[245]上述のキャリアー成分に加えて、上述の医薬製剤は、必要に応じて１種またはそれより多くの追加のキャリアー成分を含んでいてもよく、このような追加のキャリアー成分としては、例えば希釈剤、緩衝液、矯味矯臭剤、結合剤、表面活性剤、増粘剤、潤滑剤、保存剤（例えば抗酸化剤）などが挙げられる。さらに調合物を対象の受容者の血液と等張にするためにその他のアジュバントが含まれていてもよい。またＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物（それらの医薬的に許容される塩なども含む）を含む組成物は、粉末または液状濃縮物の形態に調製することもできる。
【０２１５】
[246]本発明を実施するために用いられる化合物の用量レベルは、およそ本明細書において説明されている通りであるか、または、これらの化合物に関して当業界で説明されている通りであると予想される。しかし当然のことながら、個々の患者それぞれのにとっての特定の用量レベルは、例えば年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、経路、排泄の頻度、薬の組み合わせ、および、治療を受けている特定の病気の重症度などの様々な要因に応じて決定されると予想される。
【０２１６】
[247]本発明はさらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いていることを特徴とする、本明細書において説明されるあらゆる「治療方法」、治療方法について説明されているのと同じ指示、同一の条件または様式で使用するための、それに対応する「医薬品の製造方法」を提供するものであり、ここで、代替の治療方法の実施態様において追加の物質、阻害剤または状態のいずれかが特定されている場合、それらも、それに対応する医薬品の製造方法の代替の実施態様に包含されることとする。本発明はまた、本明細書において説明される癌の治療方法のいずれかで使用するためのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤も提供する。
【０２１７】
[248]当業界でよく知られている多くの代替の実験方法が、本明細書で本発明の実施において具体的に説明されたものの代わりにうまく利用できる場合があり、ここで、このような代替の実験方法としては、例えば本発明に関連する技術分野で利用可能な優れたマニュアルや教本の多くで説明されている方法（例えば、Using Antibodies, A Laboratory Manual, edited by Harlow, E. and Lane, D., 1999, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (例えばISBN 0-87969-544-7); Roe B.A. et. al. 1996, DNA Isolation and Sequencing (Essential Techniques Series), John Wiley & Sons.(例えばISBN 0-471-97324-0); Methods in Enzymology: Chimeric Genes and Proteins”, 2000, ed. J.Abelson, M.Simon, S.Emr, J.Thorner. Academic Press; Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2001, 3rd Edition, by Joseph Sambrook and Peter MacCallum, (以前のManiatis Cloning manual) (例えばISBN 0-87969-577-3); Current Protocols in Molecular Biology, Ed. Fred M. Ausubel, et. al. John Wiley & Sons (例えばISBN 0-471-50338-X); Current Protocols in Protein Science, Ed. John E. Coligan, John Wiley & Sons (例えばISBN 0-471-11184-8); and Methods in Enzymology: Guide to protein Purification, 1990, Vol. 182, Ed. Deutscher, M.P., Acedemic Press, Inc. (例えばISBN 0-12-213585-7)）、または、分子生物学における実験方法の説明を掲載している様々な大学や企業のウェブサイトで説明されている方法が挙げられる。
【０２１８】
[249]本発明は、以下に示す実験の詳細からよりよく理解されるものと思われる。しかしながら当業者であれば容易に理解するものと思われるが、考察された具体的な方法および結果は、以下に示される請求項をより十分に説明するために単に本発明の説明を示しただけであり、それらを限定するものとして解釈されないこととする。
【０２１９】
[250]実験の詳細：
[251]材料および方法
[252]ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤化合物
[253]ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤化合物ＯＳＩ−９０６を、ＯＳＩファーマシューティカルズ、（メルビル，ニューヨーク州）から得た。ＯＳＩＰ−９０６（シス−３−［８−アミノ−１−（２−フェニル−キノリン−７−イル）−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］−１−メチル−シクロブタノール）を特許出願番号ＷＯ２００５／０９７８００で説明されている方法によって合成した。化合物の同一性および純度（＞９９％）を、１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴、マススペクトロメトリー（ＭＳ）、および、高速液体クロマトグラフィーによってそれぞれブルカー（Bruker）のアドバンス４００（Advance 400）、ウォーターズの（Waters）マイクロマスＺＱ（Micromass ZQ）、および、ウォーターズのＬＣモジュールＩプラス（LC Module I Plus）装置を用いて検証した、さらに元素分析によっても検証した。インビトロでの生化学分析または細胞分析で使用するためのＯＳＩ−９０６を１０ｍｍｏｌ／Ｌストック溶液としてＤＭＳＯ中に溶解させた。
【０２２０】
[254]細胞系および培養。
ヒト癌細胞系をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection, ATCC, バージニア州マナッサス）または以下に指定する追加の供給元から得て、説明通りに倍地中で培養した。また腫瘍タイプも、以下に指定したものを用いた：Ｈ２９５Ｒ（副腎皮質癌；ＡＴＣＣ）、ＮＣＩ−Ｈ３２２（ＮＳＣＬＣ；ＥＣＡＣＣ）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（ＮＳＣＬＣ；ＡＴＣＣ）、ＳＷ１５７３（ＮＳＣＬＣ  ；ＡＴＣＣ）、Ｈ１７０３（ＮＳＣＬＣ；ＡＴＣＣ）、ＢｘＰＣ３（膵臓；ＡＴＣＣ）、ＯＶＣＡＲ５（卵巣；ＮＣＩ）、ＭＤＡＨ−２７７４（卵巣；ＡＴＣＣ）、Ｉｇｒｏｖ１（卵巣；ＮＣＩ）、ＧＥＯ（結腸；ロズウェルパーク癌研究所（Roswell Park Cancer Institute）（ＲＰＣＣ））、ＨＴ−２９（結腸；ＡＴＣＣ）、ＲＫＯ（結腸；ＡＴＣＣ）、Ｈ２２６（ＮＳＣＬＣ；ＡＴＣＣ）、８２２６（骨髄腫；ＡＴＣＣ）、Ｈ９２９（骨髄腫；ＡＴＣＣ）、Ｕ２６６（骨髄腫；ＡＴＣＣ）、ＳＫＥＳ１（ユーイング肉腫；ＡＴＣＣ）、ＲＤＥＳ（ユーイング肉腫；ＡＴＣＣ）、ＲＤ（横紋筋肉腫；ＡＴＣＣ）、ＤＵ４４７５（乳房；ＡＴＣＣ）、ＳＫＮＡＳ（神経芽細胞腫；ＡＴＣＣ）、２６５０（鼻の扁平上皮癌；ＡＴＣＣ）、ＯＶＣＡＲ４（卵巣；ＮＣＩ）、Ａ６７３（ユーイング肉腫；ＡＴＣＣ）、ＢＴ４７４（乳房；ＡＴＣＣ）、１３８６（口腔の扁平上皮癌；ＭＳＫＣＣ，ＮＹ）、１１８６（ＳＣＣＨＮ；ＭＳＫＣＣ，ＮＹ）、Ｃｏｌｏ２０５（結腸；ＡＴＣＣ）、ＨＣＴ−１５（結腸；ＡＴＣＣ）、Ｆａｄｕ（口腔の扁平上皮癌；ＡＴＣＣ）、ＳＫＢＲ３（乳房；ＡＴＣＣ）、１４８３（ＨＮＳＣＣ；ＭＳＫＣＣ，ＮＹ）、ＨＳＣ−２（ＨＮＳＣＣ；理研バイオリソースセンター（RIKEN BioResource Center）, 日本国305-0074茨城県つくば市）、ＳＫＯＶ−３（卵巣；ＡＴＣＣ）、ＯＶＣＡＲ−３（卵巣；ＮＣＩ）、ＯＶＣＡＲ−８（卵巣；ＮＣＩ）、ＣａＯＶ３（卵巣；ＡＴＣＣ）。細胞を、インキュベーター中で、５％ＣＯ２を含む雰囲気下で３７℃で維持した。細胞を、規定通りにマイコプラスマ（マイコアラート（MycoAlert）, キャンブレックス・バイオサイエンス（Cambrex Bio Science）, メリーランド州ボルチモア）の存在に関してスクリーニングした。増殖阻害分析のために、細胞を平板培養して、２４時間増殖させた。２４時間後、細胞がおよそ１５％のコンフルエントに達したときにＯＳＩ−９０６の連続希釈液を添加し、細胞をさらに７２時間増殖させた。セルタイター−Ｇｌｏ試薬（プロメガ社（Promega Corp.）, ウィスコンシン州マディソン）を用いて細胞の生存率を分析した。
【０２２１】
[255]増殖分析。
セルタイターＧｌｏ分析（プロメガ）を用いて増殖を分析し、ＯＳＩ−９０６投与から７２時間後に測定した。分析の基準は、細胞培養プレートウェル中に存在するＡＴＰの発光定量である。実質的に、ウェル中の生存可能な細胞の数が多ければ多いほど、存在するＡＴＰ量も多くなる。この分析は、ＡＴＰに結合して発光シグナルを生産する基質を利用しており、このシグナルはルミノメーターで読取ることができる。特に他の規定がない限り、製造元の説明書に従った。簡単に言えば、１日目に、白色のポリスチレン製９６ウェル分析プレートで、１０％血清を含む増殖培地（１２０μｌ）中で細胞を４０００細胞／ウェルの密度になるまで平板培養した。２日目に、細胞を、１０倍濃度のＩＧＦ−１Ｒ阻害剤（例えばＯＳＩ−９０６）またはＤＭＳＯ単独（１５μｌ）で処理し、最終的なウェル体積を１５０μｌにした。阻害剤で７２時間インキュベートした後、細胞を分析した。結果をＤＭＳＯコントロール細胞の分画として計算した。
【０２２２】
[256]
【０２２３】
【表１】
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【０２２４】
[257]腫瘍細胞における突然変異型Ｋ−ＲＡＳ状態の決定。
腫瘍細胞のＫＲＡＳ突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・トラストによって報告された通りである（表１を参照。ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス，ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）。
【０２２５】
[258]ＫＲＡＳ突然変異の状態が未知の追加の腫瘍細胞サンプルについて、突然変異型ＫＲＡＳの状態を決定するための周知の様々な方法のどれを用いてもよい。例えば、追加の腫瘍の細胞型について、ＤＮＡは、キアゲン（Qiagen）のＤＮＡ抽出キット（メリーランド州ジャーマンタウン）を用いて単離してもよい。ＫＲＡＳ突然変異は、例えば以下の方法のいずれかによって解析することができる。
【０２２６】
[259]腫瘍細胞サンプルは、ＤｘＳのスコーピオン（スコーピオン）法（ＤｘＳ，英国マンチェスター）で製造元の説明書を用いて分析してもよい。簡単に言えば、テラスクリーン（THERASCREEN(R)）ＫＲＡＳ突然変異検出キット（DxS Ltd., 英国マンチェスター）を用いて、コドン１２および１３における７種の既知のＫＲＡＳ点突然変異（すなわちＧ１２Ｄ（ＧＧＴ＞ＧＡＴ）、Ｇ１２Ａ（ＧＧＴ＞ＧＣＴ）、Ｇ１２Ｖ（ＧＧＴ＞ＧＴＴ）、Ｇ１２Ｓ（ＧＧＴ＞ＡＧＴ）、Ｇ１２Ｒ（ＧＧＴ＞ＣＧＴ）、Ｇ１２Ｃ（ＧＧＴ＞ＴＧＴ）およびＧ１３Ｄ（ＧＧＣ＞ＧＡＣ））のセットごとにテンプレートＤＮＡを解析した。反応および解析は、キット製造元が提供している色素較正キットを用いて較正されたライトサイクラー４８０（Lightcycler 480）リアルタイムＰＣＲ装置（ＬＣ４８０）で行った。反応は、９６ウェルプレートで、反応液２０μｌで、各ＤＮＡテンプレートをおよそ６０ｎｇ用いて行われた。８つの別々のプライマーセット（野生型配として１つのセット、および、７種の異なる点突然変異それぞれについて１つのセット）と内部スコーピオンレポータープローブとを用いてサンプルＤＮＡを増幅させた。ＬＣ４８０フィット−ポイントソフトウェア一式を用いてサイクルのクロスポイント（ＣＰ）値を計算し、各突然変異特異的プライマーセットのＣＰからコントロールＣＰを引いた。突然変異体テンプレートの非存在下では見せかけの低レベルの増幅がみられる可能性があるため、プライマーセットのほとんどについて増幅産物がみられるのは後半のサイクル数であることが多い。バックグラウンド増幅による偽陽性の結果を回避するために、この分析は、コントロールＣＰ値が３５サイクルの値未満またはそれに等しい場合のみ有効とみなした。ＣＰの閾値は、このバックグラウンド増幅を相殺して計算した。ＣＰが、統計学的に設定された５％の信頼できる閾値より低い場合、突然変異と称した（Franklin WA. et al.(2009) J Mol Diagn: jmoldx.2010.080131v1）。
【０２２７】
[260]あるいは、注文プライマーとロシュ（Roche）のＬＣ４８０リアルタイムＰＣＲ装置（ドイツ国マンハイム）とを用いた高解像度融解温度法（high resolution melting temperature method）を用いて腫瘍細胞サンプルをＫＲＡＳ突然変異について解析してもよい。簡単に言えば、ライトサイクラー４８０リアルタイムＰＣＲ（ロシュ・アプライド・サイエンス（Roche Applied Science)，インディアナ州インディアナポリス）を用いた高解像度融解曲線（ＨＲＭ）解析によってテンプレートＤＮＡを試験する。およそ６０ｎｇの腫瘍テンプレートＤＮＡ、野生型コントロールＤＮＡ、および、突然変異体コントロールＤＮＡを、ライトサイクラー４８０装置で、ＨＲＭマスターミックス（ロシュ，カタログ番号０４９０９６３１００１）を用いて、ＲＡＳＯ１およびＲＡＳＡ２プライマーおよび１．７５ｍＭのＭｇＣｌ２（１０μｌ）を用いて、９６ウェルプレートで、２工程のサイクルプログラム（９５°の溶融、７２°のアニーリングおよび伸長）を４５サイクル行うことによって増幅させる。ＰＣＲ産物を、ＨＲＭで、４０℃から９０℃に温度を高めるごとに２５回のデータ収集を行って解析する。これらの解析のために、ライトサイクラー４８０ジーンスキャニングソフトウェアを既知の野生型コントロールサンプルと共に用いて、基準を計算した。
【０２２８】
[261]腫瘍細胞における突然変異型Ｂ−ＲＡＦの状態の決定。
[262]腫瘍細胞のＢ−ＲＡＦ突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・トラストによって報告された通りである（表１を参照；ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス，ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）。
【０２２９】
[263]Ｂ−ＲＡＦ突然変異の状態が未知の追加の腫瘍細胞サンプルについて、突然変異型Ｂ−ＲＡＦの状態を決定するための周知の様々な方法のどれを用いてもよい。例えば、追加の腫瘍の細胞型について、ＤＮＡは、キアゲンＤＮＡ抽出キット（メリーランド州ジャーマンタウン）を用いて単離してもよい。Ｂ−ＲＡＦ突然変異は、例えば以下の方法のいずれかによって解析することができる。
【０２３０】
[264]ＢＲＡＦ突然変異は、上述したように生成物のＰＣＲ増幅と直接的な配列解析で解析することができる（Jhawer M, et al. Cancer Res 2008;68(6):1953-61）。例えばＢＲＡＦのエキソン１５を増幅させるのに適切なプライマーは、フォワード：AACACATTTCAAGCCCCAAA、および、リバース：GAAACTGGTTTCAAAATATTCGTTである。
【０２３１】
[265]腫瘍細胞における突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの状態の決定。
[266]腫瘍細胞のＰＩＫ３ＣＡ突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・トラストによって報告された通りである（表１を参照；ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス，ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）。加えてＧＥＯ細胞のＰＩＫ３ＣＡ突然変異の状態は、Jhawer, M. et al. (2008) Cancer Res. 68(6):1953-1961で報告された通りであり、Ｈ９２９細胞のＰＩＫ３ＣＡ突然変異の状態は、Muller, C.I. et al. (2007) Leukemia Res. 31:27-32で報告された通りである。
【０２３２】
[267]ＰＩＫ３ＣＡ突然変異の状態が未知の追加の腫瘍細胞サンプルについて、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡの状態を決定するための周知の様々な方法のどれを用いてもよい。例えば、追加の腫瘍の細胞型について、ＤＮＡは、キアゲンＤＮＡ抽出キット（メリーランド州ジャーマンタウン）を用いて単離してもよい。ＰＩＫ３ＣＡ突然変異は、例えば以下の方法のいずれかによって解析することができる。
【０２３３】
[268]ＰＩＫ３ＣＡ突然変異は、上述したように生成物のＰＣＲ増幅と直接的な配列解析で解析することができる（Jhawer M, et al. Cancer Res 2008;68(6):1953-61）。例えば、ＰＩＫ３ＣＡのエキソン９を増幅させるのに適切なプライマーは、フォワード：GCTTTTTCTGTAAATCATCTGTG、および、リバース：CTGAGATCAGCCAAATTCAGTであり、ＰＩＫ３ＣＡのエキソン２０を増幅させるのに適切なプライマーは、フォワード：CATTTGCTCCAAACTGACCA、および、リバース：TACTCCAAAGCCTCTTGCTC（コドン１０２３突然変異の場合）、ならびにフォワード：ACATTCGAAA-GACCCTAGCC、および、リバース：CAATTCCTATGCAATCGGTCT（コドン１０４７突然変異の場合）である。
【０２３４】
[269]腫瘍細胞のＰＴＥＮ突然変異の状態は、サンガー・ウェルカム・トラストによって報告された通りである（表１を参照；ウェルカム・トラスト・ゲノム・キャンパス，ヒンクストン，ケンブリッジ，ＣＢ１０１ＳＡ，英国；インターネットアドレス: www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/）。ＰＴＥＮ突然変異の状態が未知の追加の腫瘍細胞サンプルについて、突然変異型ＰＴＥＮの状態を決定するための周知の様々な方法のどれを用いてもよい。
【０２３５】
[270]ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲのリン酸化の測定。
ｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲを、ＲＴＫキャプチャーアレイ（ＲＴＫプロテオーム・プロファイラー，Ｒ＆Ｄシステムズ）によって決定した。プロテオーム・プロファイラーアレイを格納した４２種の異なるＲＴＫをＲ＆Ｄシステムズ（ミネソタ州ミネアポリス）から購入し、製造元のプロトコールに従って加工した。アレイ上に含まれるＲＴＫとしては、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２ａ、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、Ａｘｌ、Ｄｔｋ、Ｍｅｒ、ＨＧＦＲ、ＭＳＰＲ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＳＣＦＲ、Ｆｌｔ−３、Ｍ−ＣＳＦＲ、ｃ−Ｒｅｔ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、Ｔｉｅ−１、Ｔｉｅ−２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＭｕＳＫ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ６が挙げられる。このアレイをｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲレベルを決定するためのＲＴＫ捕捉分析として用いた。
【０２３６】
[271]ＩＧＦ２のｍＲＮＡレベルの決定。
ＩＧＦ２のｍＲＮＡの発現を定量ＰＣＲによって決定した。ｍＲＮＡ転写レベルを、以下のようにしてＲＴ−ＰＣＲによって決定した：ＩＧＦ２に関するタックマン（TaqMan）プローブおよびプライマーセットを、アプライド・バイオシステムズ（Applied Biosystems，カリフォルニア州フォスターシティー）から得た。相対的な遺伝子発現の定量を、製造元の説明通りに、３０ｎｇのテンプレートを用いて行った。細胞系全体にわたる相対的な発現を決定するために、特異的な遺伝子の増幅をＧＡＰＤＨに関する遺伝子の増幅にあわせて正規化した。ＩＧＦ−１ ｍＲＮＡは、ＩＧＦ１特異的なプローブおよびプライマーセットを用いた類似の手法によって決定してもよい。
【０２３７】
[272]アポトーシスの測定：
アポトーシスの誘導は、カスパーゼ３／７活性の増加によって測定されるが、これを、カスパーゼ３／７Ｇｌｏ分析（プロメガ社，ウィスコンシン州マディソン）を用いて決定した。９６ウェルプレートに１ウェルあたり３０００細胞の密度で細胞系を植え付けた。２４時間平板培養した後、細胞に化合物を投与した。投与の２４時間後にカスパーゼ３／７Ｇｌｏにシグナルを決定した。セルタイターＧｌｏ（プロメガ社，ウィスコンシン州マディソン）で処理したパラレルプレートを用いて、カスパーゼ３／７活性を１ウェルあたりの細胞数に合わせて正規化した。以下の式を用いて各ウェルごとのシグナルを正規化した：カスパーゼ３／７Ｇｌｏ発光単位／ＤＭＳＯコントロールのセルタイターＧｌｏ分画。全てのグラフをプリズム（ＰＲＩＳＭ（Ｒ））ソフトウェア（グラフパッド・ソフトウェア（Graphpad Software)，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて作製した。
【０２３８】
[273]相加および相乗効果の解析：
ブリス（Bliss）の相加性（additivism）モデルを用いて、ＯＳＩ−９０６とパクリタキセルとを併用する効果を、相加効果、相乗効果または拮抗効果として分類した。以下の方程式を用いて、併用による阻害の理論曲線を計算した：Ｅｂｌｉｓｓ＝ＥＡ＋ＥＢ−ＥＡ＊ＥＢ（式中、ＥＡおよびＥＢは、特定の濃度で薬物Ａ単独および薬物Ｂ単独により得られた阻害値の分画である）。ここでＥｂｌｉｓｓは、２種の薬物の組み合わせが厳密に相加性である場合に期待される阻害値の分画である。実験的に測定された阻害値の分画がＥｂｌｉｓｓより小さい場合、その組み合わせは相乗的と称する。実験的に測定された阻害値の分画がＥｂｌｉｓｓよりも大きい場合、その組み合わせは拮抗的と称する。用量反応曲線から、様々な用量の薬物Ａを一定用量の薬物Ｂと組み合わせた場合のブリス（Ｂｌｉｓｓ）の相加性の値を計算した。それにより、薬物Ｂが薬物Ａの効力に影響を与えるか、または、その本来の活性にシフトするかを評価した。全てのプロットを、プリズム（Ｒ）ソフトウェア（グラフパッド・ソフトウェア，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて作製した。
【０２３９】
[274]結果
[275]Ｋ−ＲＡＳ突然変異は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する卵巣癌細胞増殖の感受性を予測する。
【０２４０】
[276]ここで我々は、卵巣癌（ＯｖＣａ）腫瘍細胞系でのインビトロの増殖分析において、二重のＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害剤ＯＳＩ−９０６は、ＯＳＩ−９０６に対して多様な感受性を示すことを見出した。８種の腫瘍細胞系を含むパネルのなかでも、ＯＶＣＡＲ５とＭＤＡＨ−２７７４細胞が、１マイクロモル未満の濃度のＥＣ５０値でＯＳＩ−９０６に対して感受性を示したが、パネル中のその他の６種の細胞系はＯＳＩ−９０６に対して比較的感受性を示さなかった（図１）。このようなパネルについてのＯＳＩ−９０６の感受性は、ＫＲＡＳ活性化突然変異の存在と相関していた。ＯＶＣＡＲ５およびＭＤＡＨ−２７７４細胞はいずれもＫＲＡＳにおいて活性化突然変異を有していたが、その他の非感受性細胞系はＷＴＫＲＡＳを有していた。これらのデータから、ＫＲＡＳ突然変異は、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、または、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲ両方の二重阻害剤である物質に対して応答する可能性が最も高いＯｖＣａ腫瘍を同定するのに有用である可能性があることが示される。試験されたその他の腫瘍の細胞型（例えばＮＳＣＬ、ＣＲＣ、乳房）において、ＫＲＡＳ突然変異は、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤に感受性を有する腫瘍細胞で見出され、同様にＩＧＦ−１Ｒ阻害剤に耐性の腫瘍細胞でも見出された。
【０２４１】
[277]またＫＲＡＳ突然変異の状態とＯＳＩ−９０６感受性も、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲのリン酸化の増加と相関し、加えてＩＧＦ２転写物の発現の増加とも相関する。ＯＳＩ−９０６感受性細胞系ＭＤＡＨ−２７７４はＩＧＦ２転写物発現の増加を示し、さらにＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの両方について高度なリン酸化も示す（図２）。それに対して、２種のＯＳＩ−９０６非感受性細胞系ＯＶＫ１８およびＯＶＣＡＲ４はそれほど高いレベルのＩＧＦ２転写発現を示さず、ホスホ−ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲのレベルは検出レベル未満であった。我々はさらに、ＯＳＩ−９０６は、ＫＲＡＳおよびＩＧＦ２自己分泌発現において活性化突然変異を内包する選択されたＯｖＣａ腫瘍細胞系で、パクリタキセルのアポトーシス促進作用を強化する可能性があることを見出した（図３）。
【０２４２】
[278]パクリタキセルと組み合わせたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のＯＳＩ−９０６は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有する卵巣腫瘍細胞における腫瘍細胞増殖を相乗的に阻害する（図４Ａ）。この作用は、ＭＤＡＨ−２７７４卵巣腫瘍細胞増殖におけるＯＳＩ−９０６と組み合わせた３ｎＭおよび１０ｎＭパクリタキセル両方で実証される。プロットにおける点線は、この組み合わせが自然状態で加算的である場合に計算された理論上の結果を示したものであり、相加性についてはブリス（Bliss）のモデルを用いて決定した。これらの条件下で、ＭＤＡＨ−２７７４卵巣腫瘍細胞において、ＯＳＩ−９０６は、１０ｎＭパクリタキセルによってアポトーシスの誘導が強化される（図４Ｂ）。パクリタキセル（１００、３０、１０、３、１ｎＭ）の存在下または非存在下で５μｍＭのＯＳＩ−９０６を用いた場合、Ａｋｔのリン酸化（すなわちｐＡＫＴレベル）の減少が観察された（図４Ｃ）。
【０２４３】
[279]ＯＳＩ−９０６＋／−化学療法に対する感受性を予測するバイオマーカーを特徴付けることによって、我々は、ＯＳＩ−９０６によって最適に利益を得る可能性がある患者の腫瘍を選択しやすくなるものと予想される。このようなバイオマーカーの同定は、その他のＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害剤に対しても応用できるものと予想される。この研究において、我々は、ＫＲＡＳ突然変異の存在とＯＳＩ−９０６感受性との間に相関があることを示した。これまでに、このような相関は確立されていなかった。このことが見出されたことによって、ＯＳＩ−９０６＋／−化学療法（例えばパクリタキセル、または、ドキソルビシン）での治療により利益を得る可能性が最も高いＯｖＣａ患者を確認（同定）するのに使用できる診断剤の基礎を提供することができる。
【０２４４】
[280]突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での、腫瘍細胞における突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦのいずれかの存在は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測するものである。
【０２４５】
[281]我々は、ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ軸内の遺伝子の突然変異が、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの低分子量の二重阻害剤であるＯＳＩ−９０６に対する感受性を予測するものかどうかを決定することとした。ＯＳＩ−９０６はＩＧＦ−１Ｒ（ＩＣ５０＝３５ｎＭ）とＩＲ（ＩＣ５０＝７５ｎＭ）の両方を選択的に阻害し、追加のＲＴＫおよびその他のプロテインキナーゼを含む広範なパネル（ｎ＝１１６）に対する阻害の有効性ははるかに低い（１μＭでの阻害率は５０％未満）（Mulvihill MJ,, et al. Future Medicinal Chemistry 2009;1(6):1153-71）。細胞増殖分析でのＯＳＩ−９０６に対する差異的な感受性に基づいて、１０種の腫瘍タイプのうち代表的な３２種の腫瘍細胞系を含むパネルを選択した。細胞系を、ＯＳＩ−９０６に対して感受性あり（ＥＣ５０＜１μＭ）または感受性なし（ＥＣ５０＞１０μＭ）のいずれかとして分類した（図５Ａ）。感受性を有する腫瘍細胞系について、ＯＳＩ−９０６による増殖阻害は用量依存性であった（図５Ｂ）。
【０２４６】
[282]ＫＲＡＳまたはＢＲＡＦにおける突然変異は、抗ＥＧＦＲ抗体のセツキシマブに対する感受性を減少させることが報告されている。しかしながら、我々は、このような突然変異はＯＳＩ−９０６感受性腫瘍細胞系で頻繁に起こっていることを見出した。突然変異の状態がわかっているＯＳＩ−９０６感受性腫瘍細胞の３分の２より多くが、ＫＲＡＳまたはＢＲＡＦのいずれかにおける突然変異を有するが、突然変異の状態がわかっているＯＳＩ−９０６非感受性腫瘍細胞においては、これらの突然変異の出現頻度はそれよりもかなり低かった（約２７％）（図５Ａ）。それに対して、ＰＩＫ３ＣＡにおける突然変異は、突然変異の状態がわかっているＯＳＩ−９０６非感受性腫瘍細胞系の約半分（すなわち１０種の細胞系、例えば乳癌細胞系Ｔ４７Ｄ、ＢＴ２０およびＨＣＣ１９５４、図９に示さず）で観察され、ＯＳＩ−９０６に対して感受性を有する２種の細胞系（すなわち乳癌細胞系ＭＣＦ７および結腸癌細胞系ＬＳ１７４Ｔ）でしか生じていなかった。ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲはＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路に極めて強くカップリングし、それゆえに構成的に下流のシグナル伝達を発生させるＰＩＫ３ＣＡ突然変異は、ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲＲＴＫ阻害剤の活性を軽減する可能性がある。
【０２４７】
[283]結果の解析から、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での、腫瘍細胞における突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦいずれかの存在は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性と相関することが示される。従って、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態での、腫瘍細胞におけるＫ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異いずれかの存在は、腫瘍細胞増殖のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を予測するものであり、これは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療により利益を得る可能性が最も高い癌を有する患者を確認（同定）するための診断方法として利用することができる。重要なことに、Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異を有する腫瘍タイプであって、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡが存在しない状態でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に非感受性のものはみつかっていない。Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異を有しており、突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する腫瘍タイプは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に非感受性であり、Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異を有さないが突然変異型ＰＩＫ３ＣＡを有する腫瘍タイプも同様であった。しかしながら、少数の腫瘍細胞がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性であることが見出されたが、突然変異型Ｋ−ＲＡＳまたは突然変異型Ｂ−ＲＡＦは有していなかった。従って、Ｋ−ＲＡＳ、Ｂ−ＲＡＦおよびＰＩＫ３ＣＡ突然変異の状態の決定は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して明らかに感受性と予想される多数の腫瘍の細胞型だけでなく非感受性と予想されるもののほとんどを確認するのにも用いることが可能であるが、Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ突然変異がなかったとしても、必ずしもＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を否定するものではない。Ｋ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦのいずれかに突然変異を有する上記の腫瘍細胞はいずれも、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性を有することが見出されており、さらに、ＲＴ−ＰＣＲで腫瘍細胞増殖の自己分泌刺激を引き起こすｍＲＮＡ転写レベルを評価することによって、ＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−１を発現することも見出されている。
【０２４８】
[284]腫瘍の異種移植片研究において、インビトロでの培養中にＯＳＩ−９０６に対していずれも高い感受性を有する（ＥＣ５０＜１μＭ）様々な腫瘍の細胞型の腫瘍細胞を用いたところ、インビボにおいても、それらの腫瘍は一貫して高いパーセンテージの腫瘍増殖抑制（ＴＧＩ）で阻害された（例えば以下の腫瘍細胞について、示されたＴＧＩ％は、インビボで１０〜１４日間のＯＳＩ−９０６での治療の後に得られた：Ｈ２９５Ｒ：８５％；ＳＫＮＡＳ：７１％；ＢｘＰＣ３：５６％；Ｃｏｌｏ２０５：９０％）。それに対して、類似の研究で、インビトロでの培養中にＯＳＩ−９０６に対して低い感受性しか有さない腫瘍細胞を用いたところ（ＥＣ５０＞１０μＭ）、インビボでは、それらの腫瘍は低いパーセンテージの腫瘍増殖抑制（ＴＧＩ）でしか阻害されなかった（例えば以下の腫瘍細胞について、示されたＴＧＩ％は、インビボで１０〜１４日間のＯＳＩ−９０６での治療の後に得られた：ＦａＤｕ：＜３０％；Ｈ４６０：＜３０％）。これらのデータから、腫瘍細胞の培養におけるＯＳＩ−９０６のようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性は、インビボにおいて、腫瘍の感受性を予測することが示される。
【０２４９】
[285]８８種に増やした腫瘍細胞系パネルを用いたＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ経路の下流にあるタンパク質における突然変異がＯＳＩ−９０６に対する感受性を予測するかどうかの決定。
【０２５０】
[286]ＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ経路の下流にあるタンパク質における突然変異がＯＳＩ−９０６に対する感受性を予測するかどうかを決定するために、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＰＩＫ３ＣＡおよびＰＴＥＮにおける突然変異がサンガー・ウェルカム・トラストによって報告されているＯＳＩ−９０６に対する様々な感受性を有する８８種の腫瘍細胞系を含むパネルを確立した。ＯＳＩ−９０６に対する感受性を、投与の７２時間後における細胞増殖に対する様々な濃度のＯＳＩ−９０６の作用をセルタイターＧｌｏ（プロメガ）を用いて測定することによって決定した。ＢＲＡＦ内の活性化突然変異は、ピアソン（Pearson）の相関によればＯＳＩ−９０６感受性と陽性の相関を示す傾向にあることが見出されたが、これは統計的有意性にまでは達していなかった（表２）。ＰＩＫ３ＣＡ活性化突然変異は、ＯＳＩ−９０６感受性と陰性の相関を示す傾向にあるが、このれもまた統計的有意性にまでは達していなかった。ＫＲＡＳ中の活性化突然変異は、ピアソンの相関によればＯＳＩ−９０６感受性と統計学的に有意に陽性の相関を示した（Ｒ＝０．２２）。ＯＳＩ−９０６感受性腫瘍細胞系の３９％がＫＲＡＳ突然変異を有しており、それと比較して、ＯＳＩ−９０６非感受性細胞系における割合はわずか２７％であった。ＰＴＥＮにおける突然変異を不活性化することは、ピアソンの相関によればＯＳＩ−９０６感受性と統計学的に有意に陰性の相関を示した（Ｒ＝−０．２７）。パネルに含まれる９種全てのＰＴＥＮ突然変異を有する腫瘍細胞系は、ＯＳＩ−９０６に対して非感受性であった。これには、卵巣癌（Ａ２７８０、および、ＥＦＯ−２７）、ＳＣＣＨＮ（ＨＳＣ−４）、ＳＣＬＣ（ＮＣＩ−Ｈ４４６）、ＣＲＣ（ＫＭ１２）、リンパ腫（ＭＣ１１６）、乳癌（ＢＴ５４９、および、ＨＣＣ７０）、および、前立腺癌（ＰＣ３）を代表する細胞系が含まれる。まとめると、これらのデータから、ＫＲＡＳおよびＰＴＥＮ突然変異の状態はいずれも、診療所における腫瘍細胞のＯＳＩ−９０６感受性の有用な決定要素となる可能性があり、さらに、どの患者がＯＳＩ−９０６またはその他のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療により利益を得る可能性があるかを確認するのに役立つ可能性があることがわかる。
【０２５１】
[287]
【０２５２】
【表２】
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【０２５３】
[288]略語
[289]ＥＧＦ、上皮増殖因子；ＥＭＴ、上皮間葉移行；ＮＳＣＬＣ、非小細胞肺癌；ＳＣＬＣ、小細胞肺癌；ＳＣＣ、扁平上皮癌；ＨＮＳＣＣまたはＳＣＣＨＮ、頭頸部扁平上皮癌；ＣＲＣ、結腸直腸癌；ＭＢＣ、転移性乳癌；ＥＧＦＲ、上皮増殖因子受容体；ＥｒｂＢ３、「ｖ−ｅｒｂ−ｂ２赤芽球性白血病ウイルス腫瘍遺伝子同族体３」、また、ＨＥＲ−３としても知られている；ｐＨＥＲ３、リン酸化ＨＥＲ３；Ｅｒｋキナーゼ、細胞外シグナルによって調節されたプロテインキナーゼ、また、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼとしても知られている；ｐＥｒｋ、リン酸化Ｅｒｋ；Ｂｒｋ、乳房腫瘍キナーゼ（また、タンパク質チロシンキナーゼ６（ＰＴＫ６）としても知られている）；ＬＣ、液体クロマトグラフィー；ＭＳ、マススペクトロメトリー；ＩＧＦ−１、インスリン様増殖因子−１；ＩＧＦ−２、インスリン様増殖因子２；ＩＮＳＲまたはＩＲ、インスリン受容体；ＩＧＦ−１ＲまたはＩＧＦＲ、インスリン様増殖因子１受容体；ＴＧＦα、トランスフォーミング増殖因子アルファ；ＨＢ−ＥＧＦ、ヘパリン結合性上皮増殖因子；ＬＰＡ、リゾホスファチジン酸；ＴＧＦα、トランスフォーミング増殖因子アルファ；ＩＣ５０、半数最大阻害濃度；室温、室温；ｐＹ、ホスホチロシン；ｐＰＲＯＴＥＩＮ、ホスホ−タンパク質、ここで「タンパク質」は、リン酸化されるならばどのようなタンパク質でもよく、例えばＥＧＦＲ、ＥＲＫ、ＨＥＲ３、Ｓ６などである；ｗｔ、野生型；ＰＩ３Ｋ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ；ＧＡＰＤＨ、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ；ＴＫＩ、チロシンキナーゼ阻害剤；ＰＭＩＤ、ＰｕｂＭｅｄ、一意の識別子；ＮＣＢＩ、国立バイオテクノロジー情報センター；ＮＣＩ、国立癌研究所（National Cancer Institute)；ＭＳＫＣＣ、メモリアル・スローン・ケタリング癌センター（Memorial Sloan Kettering Cancer Center）；ＥＣＡＣＣ、ヨーロピアン・コレクション・オブ・セルカルチャーズ（European Collection of Cell Cultures）；ＡＴＣＣ、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）；Ｋ−ＲＡＳ、ｖ−Ｋｉ−ｒａｓ２キルステン（Kirsten）ラット肉腫ウイルス性腫瘍遺伝子の同族体；Ｂ−ＲＡＦ、ｖ−ｒａｆマウス肉腫ウイルス性腫瘍遺伝子の同族体Ｂ１；ＰＩＫ３ＣＡ、ホスホイノシチド−３−キナーゼ、触媒性のアルファポリペプチド；ＰＴＥＮ、ホスファターゼおよびテンシン同族体。
【０２５４】
[290]参考文献の援用
[291]本明細書において開示された全ての特許、公開された特許出願およびその他の参考文献は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２５５】
[292]等価物
当業者であれば、慣例的な実験を行うだけで、本明細書において具体的に説明されている本発明の具体的な実施態様と等価な多くのものを理解するか、または、確認できるものと思われる。このような等価体も以下の特許請求の範囲に含まれることとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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