(57)【要約】本発明は、前立腺特異的抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ、ＰＳＡ）に対する抗体を用いてヒト尿中のＰＳＡを検出するための前立腺癌診断用キット及び診断方法に関し、特に、ＰＳＡに対する抗体を含み、試料としてヒト尿が用いられる前立腺癌診断用キット、及びヒト尿試料をＰＳＡに対する抗体と接触させてＰＳＡを検出することを含む前立腺癌診断方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）対象の尿から得た試料中の前立腺特異的抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ、ＰＳＡ）の量を決定する段階と、
（ｂ）基準量と上記（ａ）段階で決定した量とを比較する段階と、
（ｃ）上記（ｂ）段階の結果に基づいて対象の前立腺癌の有無を診断する段階と、
を含む前立腺癌の診断方法。
【請求項２】
試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）段階のＰＳＡ量が、ＰＳＡ特異的抗体を用いて決定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
（ｂ）段階の基準量が、正常人の尿試料に対して決定されたＰＳＡの量である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）段階のＰＳＡ量が（ｂ）段階の基準量よりも少ない場合に前立腺癌と診断する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）段階のＰＳＡ量が約１０ｎｇ／ｍｌ以下である場合に前立腺癌と診断する、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか１項による前立腺癌診断方法に使用するための、ＰＳＡ特異的抗体を備え、試料として尿が用いられる、前立腺癌診断用キット。
【請求項８】
決定された尿試料中のＰＳＡ量に基づき前立腺癌であるか否かを判断できるようにする情報を含む使用者説明書をさらに備える、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
決定された尿試料中のＰＳＡ量が約１０ｎｇ／ｍｌ以下である場合に前立腺癌と診断することを示す使用者説明書をさらに備える、請求項７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前立腺特異的抗原に対する抗体を用いた前立腺癌診断用キット及び診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺癌は米国男性死亡率２位の癌と知られており、韓国でもその患者数は増加している実情である。前立腺癌患者は、１９８９年には韓国男性癌患者の１．２％しか占めなかったが、現在は男性癌患者の３％を占めている。韓国での死亡率も、１９９０年代には０．２％に過ぎなかったが、２０００年代には１．６％にも至ることになった。前立腺癌は、他の癌とは違い、極ゆっくり増殖する特徴がある。このことから、この癌を早期に診断さえできれば、治療の可能性を高めることができ、初期診断の重要性が台頭してきた。
【０００３】
前立腺特異的抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ、ＰＳＡ）は、分子量が約３３ｋＤａで、前立腺上皮において高いレベルで発現するセリンプロテアーゼとして精液に分泌され、その濃度は１〜３ｇ／Ｌである。正常人の場合、精液に分泌されたＰＳＡは精嚢特異的タンパク質を分解することで、凝結している精液を溶解する（Ｕｌｆ−Ｈａｋａｎ  Ｓｔｅｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，９：８３−９３，１９９９）。正常前立腺では、生成されたＰＳＡの極一部のみが血液に漏れる。しかし、前立腺が肥大化すると相当量が漏れてしまい、前立腺癌の場合は、多量のＰＳＡが漏れて血中ＰＳＡ数値が高まる。そのため、ＰＳＡは、前立腺癌の他、前立腺肥大症のような前立腺異常症状の重要な標識子になりうる。現在までＰＳＡ検査により前立腺癌の早期診断が急増したし、早期前立腺癌をはじめとして、存在していた癌が著しく除去された後に、血中ＰＳＡは急減する様相を示す（大韓泌尿器科学会誌、１９９９）。
【０００４】
正常人の血中ＰＳＡは、０〜４ｎｇ／ｍｌである。ＰＳＡが１〜１．５ｎｇ／ｍｌの場合には、１．０ｎｇ／ｍｌ以下の人に比べて２倍、２〜３ｎｇ／ｍｌの場合には、１．０ｎｇ／ｍｌ以下の人に比べて５倍程度の前立腺癌発病の危険が高まる。年を取るにつれて前立腺が大きくなるだけに、ＰＳＡ数値も年齢によって増加するが、５０代は０〜３．５ｎｇ／ｍｌ、６０代は０〜４．５ｎｇ／ｍｌ、７０代は０〜６．５ｎｇ／ｍｌ程度である。
【０００５】
現在、診断用キット製品は、血清中のＰＳＡ量が３ｎｇ／ｍｌ以上である患者を前立腺癌と分類している。ところが、これらの既存製品は採血を必要とし、病院で診断を行わなければならないという問題があった。
【０００６】
そこで、本発明者等は、上記のような既存製品の問題点を解消できるような新しい前立腺癌診断用キット及び診断方法に関して研究し続けた結果、前立腺癌患者の尿中のＰＳＡ量が、正常人のそれに比べて著しく少ないということを見出し、試料として血液の代わりに尿を用いた前立腺癌診断用キット及び診断方法を開発し、本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、対象からの採血を必要としない前立腺癌診断用キットを提供することにある。
【０００８】
本発明の他の目的は、対象からの採血を必要としない前立腺癌診断方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するために、本発明は、ＰＳＡに対する抗体を備え、且つ試料としてヒト尿が用いられる前立腺癌診断用キットを提供する。
【００１０】
また、本発明は、ヒト尿試料をＰＳＡに対する抗体と接触させてＰＳＡを検出することを含む前立腺癌診断方法を提供する。
【００１１】
本発明者等は、驚くべきことに、前立腺癌患者の尿中のＰＳＡ量が正常人の尿中のＰＳＡ量よりも顕著に少ないことを見出した。このように前立腺癌患者の尿中のＰＳＡ量が正常人のそれより減少する具体的なメカニズムは明らかになっていないが、正常人の場合は、前立腺で生成されたＰＳＡが尿道に正常に分泌され、尿から検出されるのに対し、前立腺に異常がある場合は、生成されたＰＳＡの尿道への分泌が円滑でないためと推測されている。
【００１２】
そのため、本発明の前立腺癌診断用キット及び診断方法は、試料として従来の血液の代わりに尿を使用し、ＰＳＡ特異的抗体により検出されたヒト尿中のＰＳＡ量が、正常人のそれよりも少ない場合を前立腺癌と診断することができる。
【００１３】
したがって、本発明の前立腺癌診断方法は、（ａ）対象の尿から得た試料中のＰＳＡ量を決定する段階、（ｂ）基準量と上の（ａ）段階で決定した量とを比較する段階、及び（ｃ）上の（ｂ）段階の結果に基づいて対象が前立腺癌であるか否かを診断する段階を含む。
【００１４】
上記方法は、生体外（ｅｘ  ｖｉｖｏ）または試験管内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で行われ、好ましくは、試験管内で行われる。また、上記方法は、手動でまたは自動化装置により実施することができる。
【００１５】
本願でいう「診断」は、前立腺癌の発病または進行の有無を評価することを指す。当業者に公知であるように、上記評価は、診断される対象の１００％に対して正確であることを意図するのではないが、統計的に有意な対象に対して正確に診断することができる。統計的に有意であるか否かは当業界に周知の方法を用いて、例えば、信頼区間の決定、ｐ値決定、ｔ検定、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定などを用いて、当業者が容易に決定することができる。好ましい信頼区間は、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％である。好ましいｐ値は、０．１、０．０５、０．０１、０．００５または０．０００１である。好ましくは、本発明による診断結果は、対象集団の６０％以上、７０％以上、８０％以上または９０％以上に対して正確であろう。
【００１６】
本願でいう「対象」は、動物、好ましくは、ほ乳動物、より好ましくはヒトを指す。
【００１７】
本願で用いられる試料は、対象から得た尿試料である。尿試料には、分析の前に、不純物の除去などのような予備処理過程を行うことができる。
【００１８】
本発明において、尿試料中のＰＳＡの量の決定は、当業界に公知である任意の方法によって行うことができる。尿試料中のＰＳＡ量の決定は、（ａ）試料中のＰＳＡをＰＳＡ特異的抗体と結合させ、（ｂ）任意選択で、結合していない抗体を除去し、（ｃ）結合しているＰＳＡ特異的抗体の量を測定する段階を含む。結合している抗体は、それ自体でまたはさらなる操作によって直接的にまたは間接的に特定信号を生成する。
【００１９】
本願でいう「量」は、ＰＳＡの絶対的な量だけでなく、相対的な量、濃度、及びその他これから誘導されたパラメータでよい。
【００２０】
本願でいう「比較」は、分析される尿試料中に含まれているＰＳＡの量と適宜の基準試料中のＰＳＡ量とを比較することを意味する。該「比較」は、対応するパラメータの比較のことを意味する。例えば、絶対的な量は適切な基準量と比較し、濃度は基準濃度と比較する。上記段階（ｂ）における比較は、手動でまたはコンピュータを用いて行うことができる。コンピュータを用いて比較する場合に、決定された量の値は、コンピュータプログラムによりデータベースに保存されている適宜の相応する基準値と比較することができる。
【００２１】
本願でいう「基準量」は、試験される対象が前立腺癌を持つか否かを診断することを可能にさせる量を指す。そのため、基準は、前立腺癌を持たない、正常の対象から得られる。試験対象の尿試料中のＰＳＡ量が、基準試料、すなわち、正常人の尿試料中のＰＳＡ量と同等または類似している、またはより高いレベルであると、対象は前立腺癌を持たないと評価する。一方、試験対象の尿試料中のＰＳＡ量が、基準試料、すなわち、正常人の尿試料中のＰＳＡ量よりも少ないまたは顕著に少ないと、試験対象は前立腺癌を持つと評価する。適宜の基準量は、基準試料から決定できる。このような好ましい様態として、後述する実施例では、正常人の尿中のＰＳＡ量は５０〜８０ｎｇ／ｍｌである反面、前立腺癌患者の尿中のＰＳＡ量は、僅か５ｎｇ／ｍｌ以下と測定された。また、正常人の血液中のＰＳＡ平均値は１．０６１５ｐｇ／ｍｌに過ぎないのに対し、前立腺癌患者のＰＳＡ量は２０ｐｇ／ｍｌから８００ｐｇ／ｍｌまでと様々であり、その平均値は３３２．５ｐｇ／ｍｌにも至った。この結果から、前立腺癌については、血中ＰＳＡは顕著に増加する反面、尿へのＰＳＡ分泌はむしろ減少する傾向を示し、よって尿中のＰＳＡ量が正常人の尿中のＰＳＡ量よりも顕著に少ないと、対象を前立腺癌と推定することができる。
【００２２】
したがって、本発明の具現例として、ＰＳＡ特異的抗体により検出された対象尿試料中のＰＳＡ量が約１０ｎｇ／ｍｌ以下である場合は前立腺癌と診断することができる。好ましくは、ＰＳＡに対する抗体により検出されたヒト尿中のＰＳＡ量が約７ｎｇ／ｍｌ以下である場合は、前立腺癌と診断することができる。
【００２３】
本発明の他の様態として、基準として前立腺癌患者を選択した場合に、対象から得た尿試料中のＰＳＡ量が、前立腺癌患者から得た尿試料中のＰＳＡの量と同等または類似のレベルであれば、対象は前立腺癌を持つと診断することができる。
【００２４】
本発明で用いられるＰＳＡ特異的抗体は、その種類に制限はなく、市販の抗ＰＳＡ抗体を用いる、または、公知の方法によって製造して用いることができる。好ましくは、ＨＢ−１０４９４、ＨＢ−９１１９、ＨＢ−１１４２６、ＨＢ−８０５１、ＨＢ−８５２５、ＨＢ−８５２７（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＶＡ，ＵＳＡ）及びａｎｔｉ−ＰＳＡ  Ａｂ（ｃａｔ  ｎｏ：ＭＯ−Ｃ４００８１Ｃ：Ｃ−ＰＳＡ１，Ａｂａｚｙｍｅ，Ｎｅｅｄｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）からなる群より選ばれる１種以上の抗体を用いることができる。また、該抗体は、ＰＳＡとの結合力を向上させるために修飾してもよく、単クローン抗体の他、多クローン抗体、及びＰＳＡに結合可能なそれらの断片でもよい。
【００２５】
本発明において、尿試料中のＰＳＡは、ＰＳＡ特異的抗体との抗原−抗体反応を通じて免疫学的複合体を形成する。形成された免疫学的複合体は免疫分析法により検出することができる。抗原の検出及び／または定量に用いられる多数の免疫分析法が当業者には公知であり、文献［Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８８、５５６−６１２］を参照する。免疫分析法の具体例には、免疫クロマトグラフィー法（ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫組織化学法（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、免疫細胞化学法（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）などがあるが、必ずしもこれらに制限されるわけではない。免疫学的分析に用いられる試薬としては、適宜の担体、検出可能な信号を生成できる検出標識剤、溶解剤、洗浄剤が含まれる。検出標識剤が酵素である場合は、酵素活性を測定できる基質及び反応停止剤を含むことができる。適宜の担体には、可溶性担体、例えば、当分野に公知である生理学的に許容される緩衝液（例えば、ＰＢＳ）または不溶性担体、例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、フッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカライド、ラテックスに金属をメッキした磁性微粒子のような高分子、その他紙、ガラス、金属、アガロース及びこれらの組み合わせが含まれる。
【００２６】
本発明において、ＰＳＡに対する抗体に、検出可能な信号を生成できる検出標識剤を結合させることができる。検出標識剤の例には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質などを用いる。検出標識剤は、当該技術の分野で公知の技術を用いて、ＰＳＡに対する抗体に直接的にカップリングまたは結合させる、中間体（例えば、当該分野で公知のリンカー）を介して間接的にカップリングまたは結合させる、或いはＰＳＡタンパク質を認識する他の多クローン抗体またはＰＳＡ抗体を認識する抗体である２次抗体にカップリングまたは結合させることができる。好適な酵素の例には、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）、アセチルコリンエステラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、インベルターゼなどを含み、好適な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み、好適な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、フィコエリトリンまたはフィコビリンタンパク質などを用い、発光物質の例には、ルミノール、イソルシノール、ルシゲニンを用い、生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを用い、好適な放射線物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ１４Ｃ、３Ｈなどを用いる。好適な発色物質の例には、ゴールド（ｇｏｌｄ）、カーボン（ｃａｒｂｏｎ）、ラテックス（ｌａｔｅｘ）を用いる。
【００２７】
本発明の前立腺癌診断用キットは、対象の前立腺癌診断のための上述した要素を備えることができる。すなわち、本発明の前立腺癌診断用キットは、ＰＳＡに対する抗体、適宜の担体、検出可能な信号を生成できる検出標識剤、溶解剤、洗浄剤を含む容器などを備えることができる。検出標識剤として酵素を用いる場合は、酵素活性を測定できる基質及び反応停止剤を含むことができ、検出標識剤は、ＰＳＡに対する抗体に直接的にまたはリンカーを介してカップリングまたは結合したり、ＰＳＡ抗体を認識する抗体である２次抗体にカップリングまたは結合するとよい。好ましくは、キットは指針書をさらに備える。すなわち、キットは、本発明の方法により提供された診断結果と関連して試験結果を解析するための使用者説明書を備える。使用者説明書は、決定されたＰＳＡの量を用いて前立腺癌の有無を判断できるようにする情報を含む。使用者説明書は、紙または電子ファイル（例、ＣＤ  ＲＯＭ）の形態でよい。
【００２８】
また、本発明の前立腺癌診断用キットは、免疫クロマトグラフィー法（ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｉｃ  ａｓｓａｙ）に基づいて考案された、現在市販されている前立腺癌診断用キットの原理をそのまま用いることができる。免疫クロマトグラフィー法は、免疫化学法（ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）とクロマトグラフィー法（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒｐｈｉｃ  ａｓｓａｙ）とを結合させた検査方法であり、抗原に対する抗体の特異的な免疫反応性、金粒子（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｇｏｌｄ）の発色特性及び移動性、並びに多孔性膜（ｐｏｒｏｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の毛細管現象による分子の移動を応用した検査方法である。免疫クロマトグラフィー法は、既存のマルチ−ステップ（ｍｕｌｔｉ−ｓｔｅｐ）免疫測定法で要求される検体希釈、洗浄、及び酵素結合体と基質との反応による発色過程を一つに統合してワン−ステップ（ｏｎｅ−ｓｔｅｐ）で速やかに検査できるといった便利性がある。また、特定の装備を使用することなく検査結果を判定できる容易性及び経済性、検査結果読取の迅速性といったメリットがある。
【００２９】
本発明の好ましい一例において、ＰＳＡに対する抗体でコートされているマイクロタイタープレートにヒト尿試料を添加して反応させ、酵素−２次抗体結合体を反応させた後に、当該酵素の基質で処理して吸光度を測定し、この吸光度を標準曲線と比較してヒト尿中のＰＳＡを定量することができる。上記酵素−２次抗体結合体において、２次抗体にビオチンを結合させて使用することができる。酵素はホースラディッシュペルオキシダーゼでよいが、これに限定されず、ＥＬＩＳＡ分析法で用いられるいかなる酵素及び基質も本発明に適用することができる。
【００３０】
ＥＬＩＳＡ分析は、抗体−抗原反応を用いて試料中に存在する抗原の存在有無及び定量を行う分析方法である。一つのＥＬＩＳＡキットに必要な抗体は２または３種である。ＰＳＡに対する抗体を用いたＥＬＩＳＡキットでは、２種の抗体で構成され、その構成と原理は次の通りである。
【００３１】
まず、９６ウェルプレートをＰＳＡに対する抗体（１次抗体）でコートし、このウェルに、ＰＳＡを含むヒト尿試料を添加して反応させ、酵素標識された多クローン抗体（２次抗体）を反応させ、この酵素標識と反応可能な基質で処理した後に、酵素−基質反応を探知し、標準曲線と比較して試料中に存在するＰＳＡを定量することができる。本発明の一具体例において、酵素と基質として、ビオチンとストレプトアビジンコンジュゲートされたホースラディッシュペルオキシダーゼを用いることができる。
【発明の効果】
【００３２】
本発明に係る前立腺癌診断用キット及び診断方法によれば、試料としてヒト尿を用いているため、従来の血液を用いた場合に比べて試料の採取が容易であり、対象の尿中のＰＳＡ量が正常人のそれより少ない場合は前立腺癌と診断でき、病院に行かなくとも家庭で容易に前立腺癌の有無を判定することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＰＳＡに対する抗体を用いてヒト尿中のＰＳＡを定量した結果である。
【図２】ＰＳＡに対する抗体を用いてヒト血液中のＰＳＡを定量した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下、本発明を下記実施例に基づいてより詳細に説明する。ただし、これらの実施例は、本発明に関する理解を助けるためのもので、本発明の範囲を制限するためのものではない。
【実施例】
【００３５】
実施例１：ＰＳＡに対する抗体を用いたヒト尿中のＰＳＡ定量
【００３６】
正常人２０名と前立腺癌患者１０名の尿をそれぞれ採取し、遠心分離して沈殿物を除去した。尿試料中のＰＳＡをＥＬＩＳＡ（Ａｂａｚｙｍｅ  ｃａｔ  ｎｏ  ＥＬ１０００５）を用いて次のように定量した。
【００３７】
１）ＥＬＩＳＡキット内のプレートを抗ヒトＰＳＡ単クローン抗体（ｃａｔ  ｎｏ：ＭＯ−Ｃ４００８１Ｃ：Ｃ−ＰＳＡ１，Ａｂａｚｙｍｅ，Ｎｅｅｄｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）でコートし、各ウェルに試料を５０μｌずつ入れた。
【００３８】
２）よく分散されるように混ぜた後、３７℃で３０分間保管した。
【００３９】
３）蒸溜水で各ウェルを５回洗浄した。
【００４０】
４）ホースラディッシュペルオキシダーゼの結合した２次抗体（Ａｂａｚｙｍｅ，Ｎｅｅｄｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）１００μｌで処理し、３７℃で３０分間放置した。
【００４１】
５）蒸溜水で各ウェルを５回洗浄した。
【００４２】
６）基質溶液１００μｌで処理した後に、３７℃で１５分間放置した。
【００４３】
７）反応が進行すると反応停止剤を入れて反応を停止させた。
【００４４】
８）ＥＬＩＳＡ  ｒｅａｄｅｒ  ４５０ｎｍ波長で、発色した度合いを読み取った。
【００４５】
測定の結果、正常人２０名のＰＳＡ量の平均値は５０〜８０ｎｇ／ｍｌであり、前立腺癌患者１０名の平均値は５ｎｇ／ｍｌ以下であった（図１）。
【００４６】
実施例２：ＰＳＡに対する抗体を用いたヒト血液中のＰＳＡ定量
【００４７】
正常人２０名と前立腺癌患者１０名の血液３ｍｌをそれぞれ採取し、遠心分離（１００００ｒｐｍ、５分）を用いて赤血球の塊（ｃｌｏｔ）を沈殿させ、上層の血清を分離した。血清中のＰＳＡをＥＬＩＳＡ（Ａｂａｚｙｍｅ  ｃａｔ  ｎｏ  ＥＬ１０００５）を用いて実施例１と同じ方法で定量した。測定の結果、正常人２０名の平均値は１．０６１５ｐｇ／ｍｌに過ぎなかったが、前立腺癌患者１０名のＰＳＡ数値は、２０ｐｇ／ｍｌから８００ｐｇ／ｍｌまでと様々であり、その平均値は３３２．５ｐｇ／ｍｌにも達した（図２）。
【００４８】
実施例１及び２の結果、前立腺癌については、血中ＰＳＡは顕著に増加する反面、尿へのＰＳＡ分泌はむしろ減少する傾向を示すことが観察された。したがって、対象の尿中のＰＳＡ量が正常人の尿中のＰＳＡ量よりも顕著に少ない場合は前立腺癌と診断することができる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2013513815.tif 000006
2013513815.tif 000007
2013513815.tif 000008
2013513815.tif 000009
2013513815.tif 000010