(57)【要約】  本発明は、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリン並びにそれを含む組成物に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリン。
【請求項２】
緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のための請求項１に記載のシチコリン並びに１以上の担体及び／又は希釈剤及び／又は賦形剤を含む組成物。
【請求項３】
前記シチコリンが、組成物１グラム又は１ｍｌ当たり５〜３０ｍｇの濃度を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記シチコリンが、投薬単位当たり０．００３５〜１．５ｍｇ／日の濃度を有する、請求項２〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
前記担体がヒアルロン酸である、請求項２〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
前記賦形剤が塩化ベンザルコニウムである、請求項２〜５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項７】
緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のための１以上の活性成分をさらに含む、請求項２〜６のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項８】
溶液、軟膏、懸濁液、点眼剤、ゲル、クリーム、フォーム、スプレー、リニメント剤、粉末の群から選択される形態である、請求項２〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
前記シチコリンが、０．５〜３％ｗ／ｖに含まれる濃度を有する、請求項８に記載の点眼剤の形態の組成物。
【請求項１０】
塩化ベンザルコニウムを０．００５〜０．０２％ｗ／ｖの濃度で、ヒアルロン酸を０．１％〜０．３％ｗ／ｖの濃度で含む、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリン並びにそれを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑内障は、網膜神経節細胞の進行性喪失及び視神経円板の構造変化を特徴とする慢性神経変性病態である。緑内障は、世界で失明原因の第２位を占める。最もよく見られるタイプである原発開放隅角緑内障には、主要な危険因子として眼圧（ＩＯＰ）上昇があり、従って、第１の治療的アプローチは局所降圧剤で代表される。しかしながら、３分の１以上の患者においては、眼圧調節が十分であるにもかかわらず、視力障害の進行は遅れるが停止しないため、眼圧に依存しない他の機序の関与が考えられている（Ｇｒｉｅｂ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ２００２）。特に、高血圧性の初回発作に続いて神経細胞アポトーシスが引き起こされ、それによって、この構造の毛細血管領域レベルにおいて正常な血液供給が妨げられ、神経節細胞の生存に不可欠な代謝物及びニューロトロフィンの正規な順行性及び逆行性軸索輸送に障害が生じる。アポトーシスによって、アポトーシス細胞から放出されるグルタミン酸によるＮＭＤＡ受容体の過剰刺激による局所興奮毒性機序と関連する二次発作が説明できる。実際、グルタミン酸は、細胞外間隙に過剰濃度で存在する場合、周囲のニューロンの表面のＮＭＤＡ受容体を過剰刺激し、それによりＣａ＋＋チャネルが開口する。これらの細胞におけるＣａ＋＋イオンの過剰流入は、神経細胞自身のアポトーシスをもたらす生化学的カスケードの引き金となり、初回発作の非存在下においても自給できる機序を構成する。アポトーシス過程における細胞損傷機序のもう１つの重要なステップは、その主要成分であるホスファチジルコリンというリン脂質の細胞膜を異化作用によって不安定化し分解することができる酵素であるホスホリパーゼＡ２の過剰活性化で説明される（Ｂｕｒｇｏｙｎｅ  Ｆ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ  ．，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００５；２４）。損傷の進行を説明できる真の死のカスケードである二次発作に対して、眼圧低下は不十分な効果しか示さないことは明らかである。神経保護の分野においては、シチコリン（シチジン−５’−ジホスホコリン）分子に対して、その作用機序及び、実験的研究から緑内障患者に対する臨床試験に移る科学的根拠のために、特別な興味が向けられている。
【０００３】
シチコリン（シチジン−５’−ジホスホコリン）は、神経膜及びミトコンドリア膜の主要成分であるホスファチジルコリンの天然前駆体である。経口摂取されると、シチコリンは迅速に吸収されて、その１％未満が便中に排出される。摂取１時間後に血漿ピークに達し、次いで２４時間後により大きなピークに達する。シチコリンは腸壁及び肝臓で代謝される。その分子の加水分解に由来するコリン及びシチジンは、体循環によって吸収され、別々に血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して脳レベルでシチコリン（シチジン−５’−ジホスホコリン）に再合成される。排出は、主として呼吸経路及び尿中排出によって行われ、これらは２つの血漿ピーク、すなわち最初の迅速な排出及びそれに続くより緩慢な排出に反映されている（Ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ，  ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｖ  ２００８）。
【０００４】
脳レベルにおいては、シチコリンは、主としてホスファチジルコリン生成の基質及びホスホリパーゼＡ２阻害薬として機能し、従ってその時でもまだ生存している神経細胞の膜損傷に対して直接作用を有する。さらに、この分子は、主にドーパミン作動系レベルにおいて神経調節作用を示し、そのことがパーキンソン病の治療ばかりではなく、緑内障の治療においてもシチコリンの使用の理論的根拠を与えている。なぜなら、ドーパミンは、網膜及び網膜後部レベルの両方において視覚シグナルの伝達に関与する主要な神経伝達物質の１つだからである。
【０００５】
文献中の多数の研究において、視野に関してはコンピュータ中心視野測定（Ｐｅｃｏｒｉ  Ｇｉｒａｌｄｉ  ｅｔ  ａｌ  １９８９）によって、全視覚路に関してはパターン網膜電図（ＰＥＲＧ）及び視覚誘発電位（ＶＥＰ）の使用（Ｐａｒｉｓｉ  ｅｔ  ａｌ  １９９９，  ２００５，  ２００８，  Ｒｅｊａｄａｋ  ｅｔ  ａｌ  ２００３）によって、共に緑内障患者に対するシチコリンのプラス効果が明らかにされている。
【０００６】
特に、Ｐａｒｉｓｉ及び共同研究者による試験によって、眼圧低下療法のみで治療した緑内障患者に対して眼圧低下療法に加えてシチコリンを筋肉内（１０００ｍｇ／日（ｄｉｅ））及び経口（１６００ｍｇ／日）の両方で投与した緑内障患者において同様な結果と、視覚機能を維持するためにその処置を周期的に繰り返す必要性が確認された（全試験期間；８年間）。
【０００７】
Ｃｈａｎらは、２００９年に、ラットにおける緑内障の実験モデルに対する磁気共鳴分光法（プロトン磁気共鳴分光法  １Ｈ  ＭＲＳ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの使用結果を公表し、緑内障はまた、視覚皮質レベルにおけるコリン代謝の変化を特徴とし、これは神経膜の構造的完全性の侵害を反映していることを明らかにした。
【０００８】
緑内障を治療するためのシチコリンの筋肉内投与は、明らかに患者にとって大変不快であり、試験によって陽性結果を得るために必要な長期間にわたってその物質を使用することは可能ではない。筋肉内投与は、自己投与ではない不便のほかにも、患者に自分で筋注できるようにするために伴う要求は、とりわけ老齢の患者には満たすことは困難であり、長期治療後の感染合併症のリスクにさらされる恐れがある。
【０００９】
緑内障を治療するためのシチコリンの経口投与は、筋注療法に対しては一歩前進であるが、胃又は腸に病態を有する被験者に使用することが不可能であることによる問題点と、肝臓における代謝によって、緑内障病態によって主として損傷を受ける神経構造である視神経円板のレベルに到達する濃度が低いという問題点がある。
【００１０】
Ｏｓｈｉｔａｒｉら（Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ２００２）は、外稙されたマウス網膜由来の培養網膜神経節細胞（ＲＧＣ）にシチコリンを添加することによって得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏでの神経突起再生効果を評価した。
【００１１】
従って、前述を考慮して、緑内障を治療するための神経保護タイプの新規な治療戦略を提案する必要性を痛切に感じた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らによって行われたｉｎ  ｖｉｖｏ実験モデルでの試験によって、驚くべきことに、眼表面へのシチコリン投与は、活性成分の後眼部（硝子体眼房）への移動と、網膜及び視神経円板への到達を確実にするのに理想的であることが明らかとなった。
【００１３】
本発明の本質的特徴の１つは、網膜及び視神経に対して神経保護活性を有するシチコリンのような物質は、局所に用いられたことがないという事実で示される。実際、今日まで、シチコリンはもっぱらＩＭ（筋肉内）、ＩＶ（静脈内）又は経口投与されてきただけであり、眼表面に投与されたシチコリンが、角膜上皮、結膜、強膜及び線維柱帯の細胞を相互に連結しているギャップ結合の存在によって多くの活性成分が不透過性にされている角膜内のバリアを横切ることができ、それによって網膜及び視神経円板に到達することは決して予見できなかったことは、考慮されなければならない。
【００１４】
従って、本発明の目的は、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリンである。
【００１５】
本発明の目的はまた、シチコリン並びに１以上の担体及び／又は希釈剤及び／又は賦形剤を含む、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のための組成物である。
【００１６】
本発明は、緑内障（世界で主要な失明原因の１つである）及び高眼圧症に対する治療において一連の利点をもたらす：
・シチコリンに関して現在知られている製剤と比較して投与が容易であること；
・治療標的である網膜及び視神経に到達させるために低い濃度の活性成分しか必要としないこと（共に、作用部位に直接に到達するため、特に、この方法によって、活性成分の大部分が代謝されそれによって顕著に薬理活性が低下する肝臓及び腎臓フィルターを避けられるため）。
・本発明のさらなる利点は、１日に活性成分を複数回投与できることであり、それによって、活性成分を網膜レベルに高い数値で到達させることができるばかりでなく、そこに容易に維持することもでき、その数値はまた、今日用いられている投与経路では達成することが不可能であることで示される。実際、筋肉内経路では、１日の間に反復注射によって長期持続性治療を行うことは考えられないことは容易に理解できることであるし、経口経路では、患者のコンプライアンスの問題以外にも、長期治療による消化管合併症の恐れに関連する問題がある。
【００１７】
本発明の利点、特徴及び使用方法は、その実施形態に関する以下の詳細な説明において明らかにされるが、それらは例としてのみ与えられるものであって、本発明を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
図面の詳細な説明
【図１】実施例に記載されているシチコリン（２％）、ヒアルロン酸（０．２％）及びＢＡＫ（０．０１％）に基づく溶液で処置したマウスの右眼試料を分析することによって得られたＨＰＬＣプロフィールである。分析された試料のプロフィールは、溶出時間１．３６分にシチコリンに対応するピークの存在を示している。本実験において、処置された眼の後房においてかなりな量のシチコリンが存在することが明らかにされた。
【図２】実施例に記載されているシチコリン（２％）、ヒアルロン酸（０．２％）及びＢＡＫ（０．０１％）に基づく溶液で処置したマウスの左（対側の）眼試料の分析によって得られたＨＰＬＣプロフィールである。分析された試料のプロフィールは、溶出時間０．９５分にシチコリンに対応するピークの存在を示している。本実験において、対側の眼の後房のおけるかなりな量のシチコリンの存在が明らかにされ、それによって、線維柱帯を介した全身吸収が想定された。
【図３】実施例に記載されているシチコリン（１％）、ヒアルロン酸（０．２％）及びＢＡＫ（０．０１％）に基づく溶液で処置されたマウスの（処置された）右眼試料の分析によって得られたＨＰＬＣプロフィールである。分析された試料のプロフィールは、溶出時間１．０４分にシチコリンに対応するピークの存在を示す。本実験において、処置された眼の後房にかなりな量のシチコリンが存在することが明らかにされた。
【図４】実施例に記載されているシチコリン（１％）、ヒアルロン酸（０．２％）及びＢＡＫ（０．０１％）に基づく溶液で処置されたマウスの（対側の）左眼試料を分析することによって得られたＨＰＬＣプロフィールである。分析された試料のプロフィールではシチコリンの存在が強調されず、従って、本実験においては、全身経路を介して対側の眼に通過することができない。
【図５】陰性対照（未処置）として用いたマウスの左眼（対側の、右眼は失った）の試料を分析することによって得られたＨＰＬＣプロフィールである。シチコリンは観察されない。
【図６】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者１の視野測定結果を示す図である。
【図７】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者１の視野測定結果を示す図である。
【図８】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者２の視野測定結果を示す図である。
【図９】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者２の視野測定結果を示す図である。
【図１０】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者３の視野測定結果を示す図である。
【図１１】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者３の視野測定結果を示す図である。
【図１２】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者１の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【図１３】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者１の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【図１４】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者２の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【図１５】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者１の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【図１６】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療前の患者３の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【図１７】例２に記載されているシチコリンベース組成物を用いた治療後の患者３の視野測定において得られた平均偏差（ＭＤ）（左側パネルにおいて標準偏差で示される）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（右側パネルにおいてパターンからの偏差で示される）である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明によれば、シチコリン（シチジン−５’−ジホスホコリン）−購入するか、又は公知技術に記載されているプロトコル、例えばＫｙｏｗａの製造プロトコル（Ｄｒｕｇ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｆｉｌｅ  シチコリン  Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ）などによって製造する−が、緑内障及び／又は高眼圧症を患っている患者の眼表面に投与される。
【００２０】
局所使用のためのシチコリンは、すべての種々の緑内障の形、例えば先天性緑内障、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障及び正常眼圧緑内障などの治療に用いることができる。
【００２１】
本発明の目的は、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリンを含む組成物である。
【００２２】
このような組成物は、もちろん、眼科用組成物の製造に適した１以上の担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含まなければならない。眼に認容性のすべての担体、希釈剤又は賦形剤は眼科用組成物の製造に適している。前記組成物に使用できる賦形剤の例は、ポリソルベート８０、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ４００）デキストランなどである。
【００２３】
前記組成物は、活性成分のバイオアベイラビリティー、安定性及び認容性を増加させやすい担体を含むこともできる。例えば、ヒアルロン酸、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの増粘剤を用いることができる。
【００２４】
前記組成物は、角膜透過性を増加させることによってシチコリンのバイオアベイラビリティーを改善する担体、例えばジメチルスルホキシド、膜リン脂質及び界面活性剤などを含むことができる。
【００２５】
汚染を防ぐために、前記組成物は、例えば塩化ベンザルコニウム（短縮形でＢＡＫ）などの抗菌活性を有する１以上の防腐薬を含むことができる。
【００２６】
前記組成物におけるシチコリン濃度は、好ましくは、組成物１グラム又は１ｍｌ当たり５〜３０ｍｇで含まれる。
【００２７】
本発明によれば、シチコリンは、好ましくは、約０．００３５〜約１．５ｍｇ／日の投薬単位当たり濃度で用いられる。
【００２８】
「投薬単位」とは、毎回患者に投与される１回量を意味し、１日複数回投与に分割された単位であることもでき、１日１回の単位であることもでき、数日間隔の単位であることもできる。
【００２９】
ここで説明する組成物は、シチコリン以外にも、緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のための他の活性成分、例えば局所降圧薬などを含むこともできる。
【００３０】
局所使用のための前記組成物は、眼表面に直接に塗布するのに適切であると当業者によって考えられる任意の形態、例えば溶液、軟膏、懸濁液、点眼剤、ゲル、クリーム、フォーム、スプレー、リニメント剤、粉末などであることができる。
【００３１】
このような組成物は、当業者に公知の技術に従って製造することができる。
【００３２】
点眼剤は、リン酸二水素ナトリウム・１水和物、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物、塩化ナトリウム又はそれらの組み合わせなどの塩を含むことができ、好ましくは、ＮａＣｌを０．９％含み、生理学的なｐＨ（ｐＨ７．０〜７．４）及び生理学的浸透圧（２９０〜３１０ｍＯｓｍ）を有する生理学的溶液であることができる。
【００３３】
好ましい実施形態において、点眼剤は、シチコリンを０．５％〜３％ｗ／ｖ、好ましくは２％で、ヒアルロン酸を０．１％〜０．３％に含まれる濃度で、好ましくは０．２％の濃度で、塩化ベンザルコニウムを０．００５〜０．０２％に含まれる濃度で、好ましくは０．０１％の濃度で含む。
【００３４】
本発明者らは、実施例のセクションに詳細に説明されているように、驚くべきことに、好ましくは点眼剤の形態で、かつここで説明する濃度で、ヒアルロン酸及び塩化ベンザルコニウムと共にシチコリンを眼表面に投与することによって、後眼部（硝子体眼房）において活性成分の最適の吸収が引き起こされることを見出した。
【００３５】
エマルションの形態の組成物は、Ｏ／Ｗ（油／水）又はＷ／Ｏ又はＷ／Ｏ／Ｗ及びＯ／Ｗ／Ｏであることができ、マイクロエマルション又はナノエマルションが好ましいが、コロイド分散液又はコロイド溶液であることもできる。ゲル、クリーム又はフォームの形態までものマイクロエマルションを提案することができる。すべての既知の界面活性剤、例えばシリコーン界面活性剤、グルコシド界面活性剤及びリン脂質界面活性剤などをエマルションの製造のために使用することができる。
【００３６】
本発明はまた、本明細書記載の組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、緑内障及び／又は高眼圧症の治療方法を提供する。
【００３７】
前記緑内障の形は、先天性緑内障、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障及び正常眼圧緑内障からなる群から選択することができる。
【００３８】
この治療方法において、正確な１回量及び組成物の投与頻度は、治療される特定の疾患の重症度、特定の患者の年齢、体重及び一般身体状態によって決まり、これは当業者に公知である。
【００３９】
投与できる有効量の一部を以下に示す。有効量は、場合により緑内障を治療するための１以上の化合物、例えば投薬単位が緑内障の療法に一般的に用いられる投薬単位に対して約１００％、約９０％、約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％又はそれ以下であることができる局所降圧薬などと組み合わせて、約０．００３５〜約１．５ｍｇ／日に含まれる投薬単位で投与できる
【００４０】
下文において、以下の実施例で詳細な説明を行うが、それらは単に例示を目的として示されるものであって、付与される保護の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００４１】
例１．シチコリンを１％ｗ／ｖ含む点眼剤の製造プロトコル
以下の濃度で成分を適当量の水に溶解した：リン酸二水素ナトリウム・１水和物（０．０１％）、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物（０．１％）、塩化ナトリウム（０．７％）、ヒアルロン酸（０．２％）、精製水（適当量、１００％にする）。各成分を、前の成分の溶解後に加え、次いで、シチコリンを１％加えた。７０℃に加熱した少量の蒸留水にＢＡＫ（塩化ベンザルコニウム）を０．０１％溶解し、この溶液を、前もって調製した溶液に加えた。自然ｐＨを調節した。このｐＨは所望の数値内、すなわち７．０〜７．２で安定した。次いでこの溶液を所定の量にした。
【００４２】
例２．シチコリンを２％ｗ／ｖ含む点眼剤の製造プロトコル
以下の濃度で成分を適当量の水に溶解した：リン酸二水素ナトリウム・１水和物（０．０１％）、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物（０．１％）、塩化ナトリウム（０．６５％）、ヒアルロン酸（０．２％）、精製水（適当量、１００％にする）。各成分を、前の成分の溶解後に加え、次いで、シチコリンを２％加えた。７０℃に加熱した少量の蒸留水にＢＡＫ（塩化ベンザルコニウム）を０．０１％溶解し、この溶液を、前もって調製した溶液に加えた。自然ｐＨを調節した。このｐＨは所望の数値内、すなわち７．０〜７．２で安定した。次いでこの溶液を所定の量にした。
【００４３】
例３．シチコリンの眼組織通過に関する研究
マウスへのシチコリン投与
以下のように分割したＣＤ−１系マウス５匹（各マウスの体重：約３０ｇ）に関して本実験を行った：
ａ）シチコリンを１％含む、例１の記載に従って製造した点眼剤でマウス２匹を処置した。
ｂ）シチコリンを２％含む、例２の記載に従って製造した点眼剤でマウス２匹を処置した。
ｃ）１匹を無処置対照マウスとした。
各マウスの右眼を、１日２回、３日間、点眼液２滴で処置した。
【００４４】
分析試料の調製
４日目に、動物を屠殺後、その動物の眼を採取し、生理学的溶液ですすぎ、次いで氷冷保存した：
群ａ）：マウス１：全ＲＥ（ＲＥ＝右眼）／ＰＢＳ（リン酸緩衝液）溶液；全ＬＥ（ＬＥ＝左眼）／ＰＢＳ溶液；マウス２：ＲＥ／懸濁液（ＰＢＳ１，５ｍＬで洗浄）；ＬＥ／懸濁液（ＰＢＳ１，５ｍＬで洗浄）。
群ｂ）：マウス１：全ＲＥ／ＰＢＳ溶液；全ＬＥ／ＰＢＳ溶液；マウス２：ＲＥ／懸濁液（ＰＢＳ１，５ｍＬで洗浄）；ＬＥ／懸濁液（ＰＢＳ１．５ｍＬで洗浄）。
群ｃ）全ＲＥ／ＰＢＳ溶液；全ＬＥ／ＰＢＳ溶液。
実験室では、懸濁液は、過度の希釈を要するため分析には役に立たないと考えられたため、次のとおりに全眼のみを用いた：
・１００μＬ  ＳＧＥタイプシリンジで目の硝子体液を吸出し、蒸留水２０μＬで希釈した；
・希釈した目の硝子体液を遠心分離した；
・採取した上清に水５０％／メタノール５０％溶液５０μＬを加えた；
・ボルテックスを行った；
次いで、このように調製した試料を液体クロマトグラフィー及び質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によって分析した。
【００４５】
試料中でのシチコリンの存在の質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）による分析
試料を質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によって分析し、以下の結果を得た：
試料１）シチコリン２％で処置したマウスのＲＥ＝分子が認識できる（図１）
試料２）シチコリン２％で処置したマウスのＬＥ＝分子が認識できる（図２）
試料３）シチコリン１％で処置したマウスのＲＥ＝分子が認識できる（図３）
試料４）シチコリン１％で処置したマウスのＬＥ＝分子が認識できない（図４）
試料５）対照ＬＥ（ＲＥは失った）＝分子が認識できない（図５）。
ＨＰＬＣプロフィールにおけるシチコリン−マッチングピークの同定は、質量分析法を用い、得られたＨＰＬＣプロフィール（図１〜５）と標準シチコリン試料を用いて得られたものとを比較することによって行った。
得られた結果：
・用いた４つの条件のすべてにおいて、シグナルが常に同じ時間に存在するため、この機械はこの分子を高い精度で測定している；
・汚染を防ぐために、試料の間で常にブランクの測定を行った；
・１％と２％の濃度の間で、全身吸収に関して差異があり、左眼においては認識できなかったため、低い方の濃度ではより低い。
・溶液で組織に塗布された分子は目の硝子体液に到達する。
【００４６】
臨床試験
慢性単性緑内障を患っており、眼圧低下療法を行っている患者に局所経眼経路により投与したシチコリンベース組成物の作用を評価した。これらの患者において、標準的な眼圧低下療法に、点眼１回を１日３回、少なくとも１ヶ月という用法・用量で例２に記載の点眼剤におけるシチコリンベース組成物を加えた。眼圧は何ら変化しなかったにもかかわらず、治療わずか１ヶ月後に、治療を受けたすべての患者において視野の著明改善が見られた。特に、治療を受けた３例のすべてにおいて著明改善が見られたが、これは感度スケール（グレースケール、図６〜１１参照）の視野測定、平均偏差（ＭＤ）及びパターン標準偏差（ＰＳＤ）（表１及び図１２〜１７参照）の結果から明らかである。これらのパラメータの定義及び解釈は当業者に公知である。
【００４７】
【表１】
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【００４８】
臨床試験により得られたデータに関する議論
眼圧の変化は認められなかったので、視野の顕著な変化は、視神経に対するシチコリンの直接作用によるものと考えられる。このデータは、全身経路よりも４０倍高い１回量でこの薬物が投与されたときに観察されたもので、点眼剤による局所投与ではこれまで認められたことのないデータである。要約すれば、これらの患者における点眼剤によるシチコリンの投与は、緑内障を患っている患者の視野を改善し、このような臨床上の有用性は、視神経円板に対するその作用に起因するということことができる。この作用は、ＩＭ投与、ＩＶ投与及び経口投与に関して文献中に見られる１回量／効果比を著しく超えるものであり、その効果はより迅速である。
【００４９】
リファレンス
１．  Ｇｒｉｅｂ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｒｅｌｅｖａｎｔ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ２００２；６７：１４３−１４８
２．  Ｂｕｒｇｏｙｎｅ  ＦＣ  ｅｔ  ａｌ，  Ｔｈｅ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｈｅａｄ  ａｓ  ａ  ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：  ａ  ｎｅｗ  ｐａｒａｄｉｇｍ  ｆｏｒ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＯＰ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｓｔｒａｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｈｅａｄ  ｄａｍａｇｅ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００５；２４（１）：３９−７３
３．  Ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ，  ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｖ  ２００８；１３（１）：５０−５７
４．  Ｏｓｈｉｔａｒｉ  Ｔ，  Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  Ｎ，  Ａｄａｃｈｉ−Ｕｓａｍｉ  Ｅ．，  Ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｈａｓ  ａ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｄａｍａｇｅｄ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｒｅｔｉｎａ．  Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ２００２；１３（１６）：２１０９−２１１１
５．  Ｐｅｃｏｒｉ  Ｇｉｒａｌｄｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ，  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ  （ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  ａｎｄ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｐｅｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）．  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｏｐｈｔｈ  １９８９；１３：１０９−１１２
６．  Ｐａｒｉｓｉ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃｙｔｉｄｉｎｅ−５’−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  （ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ）  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｏｐｈｔｈ  １９９９；１０６：１１２６−１１３４
７．  Ｒｅｊａｄａｋ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ｏｒａｌ  ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｖｉｓｕａｌ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ  ２００３；９（３）：Ｐ１２４−２８
８．  Ｐａｒｉｓｉ  Ｖ，  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ  ｖｉｓｕａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｃｙｔｉｄｉｎｅ−５’−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  （ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ）：  ａ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ８  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ．
９．  Ｐａｒｉｓｉ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ，  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｐｒｏｇ  ｉｎ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ２００８；１７３：５４１−５４
１０．  Ｒｅｊａｄａｋ  Ｒ，  Ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓ  ２００２；３４：１４６−４９
１１．  Ｃｈａｎ  ＫＣ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｔｏｎ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｖｉｓｕａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ｉｎ  ａｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００９；８８：６５−７０
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【手続補正書】
【提出日】平成23年10月17日(2011.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のためのシチコリン並びに１以上の担体を含む組成物。
【請求項２】
さらに１以上の希釈剤及び／又は賦形剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記シチコリンが、組成物１グラム又は１ｍｌ当たり５〜３０ｍｇの濃度を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記シチコリンが、投薬単位当たり０．００３５〜１．５ｍｇ／日の濃度を有する、請求項２〜３のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項５】
前記担体がヒアルロン酸である、請求項２〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項６】
前記賦形剤が塩化ベンザルコニウムである、請求項２〜５のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項７】
緑内障及び／又は高眼圧症の治療における局所使用のための１以上の活性成分をさらに含む、請求項２〜６のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項８】
溶液、軟膏、懸濁液、点眼剤、ゲル、クリーム、フォーム、スプレー、リニメント剤、粉末の群から選択される形態である、請求項２〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【請求項９】
前記シチコリンが、０．５〜３％ｗ／ｖに含まれる濃度を有する、請求項８に記載の点眼剤の形態の組成物。
【請求項１０】
塩化ベンザルコニウムを０．００５〜０．０２％ｗ／ｖの濃度で、ヒアルロン酸を０．１％〜０．３％ｗ／ｖの濃度で含む、請求項９に記載の組成物。
【国際調査報告】
2013520406.tif 000021