(57)【要約】本発明は、抗体の分野に関する。特に本発明は、適応免疫応答を生じるための乳由来の抗原特異的抗体、その調製法およびその使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、該抗体が投与された個体において抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するために使用する方法。
【請求項２】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、Ｔ細胞への該抗原の効率的提示を促進するために使用する方法。
【請求項３】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、個体における非炎症性の抗原特異的ＩｇＡの産生を促進するために使用する方法。
【請求項４】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−α、を産生するために使用する方法。
【請求項５】
該抗原が該個体に存在する、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
該抗原が、該個体の胃腸管または気道に存在する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
該個体がヒトである、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
該個体の呼吸器官における非炎症性の免疫応答を促進する、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
該個体の腸における非炎症性の免疫応答を促進する、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
該抗体が、ヒトの消費に適する医薬組成物または栄養組成物中に配合されている、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
該組成物が乳幼児用処方物または成長用ミルクである、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
該組成物が機能性食品である、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
該個体が、アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症または炎症性疾患に罹っているまたは上記疾患に罹る危険がある、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
該抗原が該乳、乳製品、初乳または初乳製品に存在する、請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
収集された乳または初乳が、該抗原および／または該抗原特異的抗体の存在に関して試験されている、請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
収集された乳または初乳が、該抗原特異的抗体に富ませるための少なくとも１の処理工程に付されている、請求項１〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
反芻動物が、該乳または初乳を収集する前に、該抗原で免疫されていない、請求項１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
個体における適応免疫応答を高めるおよび／または誘発する方法であって、それを必要とする該個体に、反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および該抗原を一緒に投与することを含む前記方法。
【請求項１９】
該個体が、アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症および／または炎症性疾患に罹っているまたは上記疾患に罹る危険がある、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症および／または炎症性疾患から選択される疾患に罹る危険のある個体において、上記疾患の１以上の症状の開始を遅らせるまたは上記症状の重症度を低下させる方法であって、上記危険のある個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を付与することを含む前記方法。
【請求項２１】
該個体が、該抗原を一緒に投与される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
該抗原特異的抗体が、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる、請求項１８〜２１のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体であって、該抗体が投与された個体において該抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための前記抗原特異的抗体。
【請求項２４】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体であって、樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−α、を産生するための前記抗原特異的抗体。
【請求項２５】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を含む子供用栄養組成物、好ましくは乳幼児用処方物、であって、該抗体が投与された子供、好ましくは乳幼児、において該抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための前記子供用栄養組成物。
【請求項２６】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を含む子供用栄養組成物、好ましくは乳幼児用処方物、であって、樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−α、を産生するための前記子供用栄養組成物。
【請求項２７】
反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、該抗体が投与された個体において抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための薬剤の調製のために使用する方法。
【請求項２８】
該抗体が乳から得られる、請求項１〜１７および２７のいずれか１項記載の抗原特異的抗体の使用方法。
【請求項２９】
該抗体が乳から得られる、請求項２２記載の方法。
【請求項３０】
該抗体が乳から得られる、請求項２３または２４記載の抗原特異的抗体。
【請求項３１】
該抗体が乳から得られる、請求項２５または２６記載の子供用栄養組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体の分野に関する。特に、本発明は、適応免疫応答を引き起こすための、乳に由来する抗原特異的抗体、その調製法およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
高等生物、例えば哺乳類における免疫系は、異物または外部の生物学的影響への暴露の結果から生物を保護するために、特殊化されている。すなわち、免疫系は、例えば、細菌もしくはウイルス感染に対して、または癌細胞もしくは他の混入病原性物質の影響に対して体を防御し得る。免疫系は、先天性免疫および、感染または系への他の攻撃に適応し得る免疫の両方を提供する。先天性免疫は、生物が、混入微生物または異物への暴露に素早く応答することを可能にする。適応免疫系は、生物が、特異的微生物または異物への暴露に応答するための長期能力を発生することを可能にする。これら２つの系は、病原性微生物および異物への暴露から生じる攻撃から体を防御するために作用する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、個体における免疫応答、特に適応免疫応答、を高めるおよび／または誘発するための方法および組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の１の局面は、反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および、上記抗体が投与された個体における抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための上記抗体の使用を提供する。
【０００５】
本発明の別の局面は、Ｔ細胞への当該抗原の効率的提示を促進するために使用される、反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を提供する。
【０００６】
本発明の別の局面は、個体における非炎症性の抗原特異的ＩｇＡの産生を促進するために使用される、反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を提供する。好ましくは、抗原特異的抗体が、個体の呼吸器官における非炎症性の免疫応答を促進するために使用される。好ましくは、抗原特異的抗体が、個体の腸における非炎症性免疫応答を促進するために使用される。
【０００７】
本発明の別の曲面は、樹状細胞を活性化するために使用される、反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を提供する。好ましくは、樹状細胞が、１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−αを産生する。
【０００８】
本発明の別の局面は、ヒトにおける経口投与に適する、上記抗体を含む組成物を提供する。好ましくは、上記組成物が、子供用栄養組成物（child nutritional composition）、好ましくは乳幼児用処方物(infant formula)である。
【０００９】
本発明の別の局面は、個体における適応免疫応答を高めるおよび／または誘発する方法であって、それを必要としている個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および当該抗原を一緒に投与することを含む方法を提供する。
【００１０】
本発明の別の局面は、個体において、Ｔ細胞への当該抗原の効率的提示を促進する方法であって、それを必要としている個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および当該抗原を一緒に投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本発明の別の局面は、個体における非炎症性の抗原特異的ＩｇＡの産生を促進する方法であって、それを必要としている個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および当該抗原を一緒に投与することを含む方法を提供する。
【００１２】
本発明の別の局面は、個体における樹状細胞を活性化する方法であって、それを必要としている個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および当該抗原を一緒に投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
好ましくは、抗原特異的抗体が、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られる。好ましくは、抗原が個体に存在し、より好ましくは個体の胃腸管または気道に存在する。
【００１４】
好ましくは、個体がヒトである。好ましくは、抗体が、ウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる。好ましくは、抗体が、ヒトの消費に適する医薬組成物または栄養組成物中に配合される。好ましくは、組成物が、乳幼児用処方物または成長用ミルク（growing-up milk）である。好ましくは、組成物が、機能性食品である。好ましくは、個体が、アレルギー疾患、感染症、自己免疫疾患、または炎症性疾患に罹っているまたは罹る危険がある。好ましくは、抗原が、上記乳、乳製品、初乳、または初乳製品中に存在する。
【００１５】
好ましくは、収集された乳または初乳が、抗原および／または抗原特異的抗体の存在に関して試験される。好ましくは、収集された乳または初乳が、抗原特異的抗体で富ませるための少なくとも１の処理工程に付される。好ましくは、反芻動物が、乳または初乳を収集する前に当該抗原で免疫されていない。
【００１６】
本発明の１局面では、アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症および／または炎症性疾患から選択される疾患に罹る危険のある個体において、上記疾患の１以上の症状の始まりを遅くしまたは当該症状の重症度（severity）を低下させるための方法であって、上記危険のある個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を与えることを含む方法が提供される。好ましくは、個体が、当該抗原を一緒に投与される。好ましくは、上記抗原特異的抗体が、反芻動物の、より好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる。
【００１７】
本発明は、さらに下記の実施態様を提供する。
１．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、当該抗体が投与された個体において抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するために使用する方法。
２．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、Ｔ細胞への当該抗原の効率的提示を促進するために使用する方法。
３．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、個体における非炎症性の抗原特異的ＩｇＡの産生を促進するために使用する方法。
４．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−α、を産生するために使用する方法。
５．抗原が個体中に存在する、実施態様１〜４および２７のいずれかの方法。
６．抗原が、個体の胃腸管または気道に存在する、実施態様５の方法。
７．個体がヒトである、実施態様１〜６および２７のいずれかの方法。
８．個体の呼吸器官における非炎症性の免疫応答を促進するための、実施態様１〜７および２７のいずれかの方法。
９．個体の腸における非炎症性の免疫応答を促進するための、実施態様１〜７および２７のいずれかの方法。
１０．抗体が、ヒトの消費に適する医薬組成物または栄養組成物中に配合されている、実施態様１〜９および２７のいずれかの方法。
１１．組成物が乳幼児用処方物または成長用ミルクである、実施態様１０および２７のいずれかの方法。
１２．組成物が機能性食品である、実施態様１０の方法。
１３．個体が、アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症または炎症性疾患に罹っているまたは罹る危険がある、実施態様１〜１２および２７のいずれかの方法。
１４．抗原が当該乳、乳製品、初乳または初乳製品中に存在する、実施態様１〜１３および２７のいずれかの方法。
１５．収集された乳または初乳が、抗原および／または抗原特異的抗体の存在に関して試験されている、実施態様１〜１４および２７のいずれかの方法。
１６．収集された乳または初乳が、抗原特異的抗体で富ませるための少なくとも１の処理工程に付されている、実施態様１〜１５および２７のいずれかの方法。
１７．反芻動物が、当該乳または初乳を収集する前に当該抗原で免疫されていない、実施態様１〜１６および２７のいずれかの方法。
１８．個体において適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための方法であって、それを必要とする個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体および当該抗原を一緒に投与することを含む方法。
１９．個体がアレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症および／または炎症性疾患に罹っているまたは罹る危険がある、実施態様１８の方法。
２０．アレルギー疾患、自己免疫疾患、感染症および／または炎症性疾患から選択される疾患に罹る危険のある個体において、上記疾患の１以上の症状の始まりを遅くしまたは当該症状の重症度を低下させるための方法であって、上記危険のある個体に反芻動物の、好ましくはウシの抗原特異的抗体を付与することを含む方法。
２１．個体が、当該抗原を一緒に投与される、実施態様２０の方法。
２２．抗原特異的抗体が、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる、実施態様１８〜２１のいずれかの方法。
２３．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体であって、当該抗体が投与された個体において当該抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための抗体。
２４．樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ-α、を産生するための、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体。
２５．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を含む、子供用栄養組成物、好ましくは乳幼児用処方物であって、当該抗体が投与された子供、好ましくは乳幼児、において当該抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するための組成物。
２６．樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ-α、を産生するための、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を含む子供用栄養組成物、好ましくは乳幼児用処方物。
２７．反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳、または初乳製品から得られる抗原特異的抗体を、ａ）当該抗体が投与された個体において抗原に対する適応免疫応答を高めるおよび／または誘発すること、ｂ）Ｔ細胞への当該抗原の効率的提示を促進すること、ｃ）当該個体において非炎症性の抗原特異的ＩｇＡの産生を促進すること、およびｄ）樹状細胞を活性化して１以上のサイトカイン、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ−α、を産生することの１以上のための薬剤の調製のために使用する方法。
２８．組成物が、炭水化物を好ましくは２５〜５０重量％、より好ましくは２８〜４６重量％の量で、脱脂粉乳を好ましくは１２〜２０重量％、より好ましくは１５〜１８重量％の量で、脂肪を好ましくは２２〜３０重量％、より好ましくは２４〜２７重量％の量で、およびＷＰＣ−３５を好ましくは５〜２０重量％、より好ましくは８〜１８重量％の量で含む、実施態様２５〜２５の子供用栄養組成物。
２９．フコシルラクトースを好ましくは０．０１〜０．５重量％、より好ましくは０．１５〜０．３重量％の量で、シアリルラクトース、例えばヴィヴィナル（vivinal）シアリルラクトースを好ましくは１〜６重量％、より好ましくは２〜５重量％の量で、および／またはガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、例えばヴィヴィナル（vivinal）ガラクトオリゴ糖を好ましくは８〜１５重量％、より好ましくは１０〜１３重量％の量でさらに含む、実施態様２８の子供用栄養組成物。
３０．初乳、好ましくは１〜５重量％の初乳、より好ましくは２〜４重量％の初乳を含む、実施態様２８または２９の子供用栄養組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】図１Ａは、初乳（灰色）および精製されたウシ免疫グロブリン（黒色）からのウシＩｇＧの、ヒト単球由来の未熟ＤＣ上での結合を示す。点線は、バックグランド染色を表わす。２つのうちの１つの代表的ドナーのデータを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、初乳（灰色）および精製されたウシ免疫グロブリン（黒色）からのウシＩｇＡの、ヒト単球由来の未熟ＤＣ上での結合を示す。点線は、バックグランド染色を表わす。２つのうちの１つの代表的ドナーのデータを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、初乳（灰色）および精製されたウシ免疫グロブリン（黒色）からのウシＩｇＭの、ヒト単球由来の未熟ＤＣ上での結合を示す。点線は、バックグランド染色を表わす。２つのうちの１つの代表的ドナーのデータを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ヒト単球ＩｇＧ（灰色）およびヒト凝集ＩｇＧ（免疫複合体を模倣、黒色）のヒト単球由来の未熟ＤＣ上での結合を示す。点線は、バックグランド染色を表わす。
【図２Ｂ】図２Ｂは、遮断抗ＣＤ３２抗体（１０μｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＣＤ３２クローンＦＬ１８．２６、ＢＤ  Pharmingen）によるプレインキュベーションの、ヒト凝集ＩｇＧの結合に対する影響を示す（黒色が抗ＣＤ３２を伴わない場合であり、灰色が抗ＣＤ３２を伴う場合である）。黒の点線（抗ＣＤ３２を伴わない）および黒の実線（抗ＣＤ３２を伴う）はバックグランド染色を表わす。
【図３Ａ】図３Ａは、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを伴うまたは伴わない、初乳、精製されたウシ免疫グロブリンおよびヒト単球ＩｇＧの、ヒト単球由来の未熟ＤＣからの２日後のＩＬ−１０の産生に対する影響を示す。非刺激未熟ＤＣおよび１００μｇ／ｍＬのポリＩ：Ｃで処理された未熟ＤＣはそれぞれ、陰性および陽性の対照として行われた（棒（ｅ）および（ｇ）を参照）。３つのうちの１つの代表的ドナーのデータを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを伴うまたは伴わない、初乳、精製されたウシ免疫グロブリンおよびヒト単球ＩｇＧの、ヒト単球由来の未熟ＤＣからの２日後のＴＮＦ−αの産生に対する影響を示す。非刺激未熟ＤＣおよび１００μｇ／ｍＬのポリＩ：Ｃで処理された未熟ＤＣはそれぞれ、陰性および陽性の対照として行われた（棒（ｅ）および（ｇ）を参照）。３つのうちの１つの代表的ドナーのデータを示す。
【図４】図４は、ヒトＧＩ管の状態を模倣するインビトロ消化実験後のウシ免疫グロブリンの生存を示す。ＩｇＧおよびＩｇＡの％が、乳幼児の消化を模倣する処理の０、１２０、１８０および２４０分後（ｔ＝時間）に測定された。ＩｇＧおよびＩｇＡの％が、成人の消化を模倣する処理の０、６０、１２０および１８０分後に測定された。
【図５】図５は、乳幼児用処方物の調製のための組成の例示を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
母乳およびウシの乳は、広範囲の潜在的な病原性微生物、ウイルスおよび他の抗原に特異的である抗体を含む。これらの抗体は、母乳がすでに曝された感染性因子に対する有効な免疫応答をまだ開始することができない乳幼児を防御する。ＩｇＡは、ヒトの乳中の主な抗体であるが、ＩｇＧ１は、ウシの初乳および乳中に見つけられる主な抗体アイソタイプである。ヒトの乳中のＩｇＡは、腸においてその効果を発揮することが一般に知られている一方で、母親は、出生の前に胎盤を経由して赤ちゃんへＩｇＧを移す。
【００２０】
反芻動物は、抗体を含む乳を産生するので、当該乳またはその抗体調製物が、母乳の機能を補うまたは置換するための、ヒトにおける使用のために考慮される。反芻動物抗体は、当該抗体を摂取する個体の腸においてヒトの病原体に結合しそして中和しまたは病原体を別のやり方で弱め、そして受動免疫を伝えることが意図される。
【００２１】
短寿命の受動免疫と対照的に、適応免疫応答は、その病原体による感染に対する適応として個体の一生を通じて起こり、多くの場合には、同じ病原体による再感染に対して一生の保護免疫を与える。適応免疫応答は、Ｔ細胞およびＢ細胞と名付けられた２つの主なタイプのリンパ細胞の活性化、選択およびクローン増殖を包含する。抗原に遭遇すると、Ｔ細胞は、増殖しそして抗原特異的エフェクター細胞に分化し、一方、Ｂ細胞は、増殖しそして抗体分泌細胞に分化する。
【００２２】
適応免疫応答は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による抗原提示の後、ＣＤ４+Ｔヘルパー細胞の活性化によって開始される。ＡＰＣは、ピノサイトーシスまたは受容体依存性エンドサイトーシスにより上記細胞の環境から外因性（タンパク質）抗原を取り込み、それらをペプチドに分解し、そしてこれらのペプチドをＭＨＣクラスＩＩ分子との関連において抗原特異的Ｔ細胞に提示する。
【００２３】
促進された抗原提示が、プロフェショナルの抗原提示細胞上の細胞表面発現されたＦｃ受容体に関して記載されている。Ｆｃ受容体は、循環する免疫グロブリンの一定領域に特異的に結合する経膜（transmembrane）タンパク質である。Ｆｃ受容体は、細菌およびウイルスならびに循環する血清免疫グロブリンによって結合されるタンパク質抗原を自己の一部とすることができ、その結果、病原性微生物を死滅させ、そして抗原を提示して免疫応答を開始する。
【００２４】
低いおよび中程度のアフィニティーのＦｃ受容体は、単体免疫グロブリンに対して低いアフィニティーを有するが、免疫複合体に対しては高いアフィニティーを有する。その結果、これらの受容体は、これらが認識する抗原と一緒に複合体を形成しているときに免疫グロブリンを結合するだけであろう。実際、Ｆｃγ受容体（Celisら、Proc Natl Acad Sci USA. 1984;81:6846-50, Gosselinら、J Immunol. 1992;149:3477-81）、Ｆｃα受容体（Shenら、Blood.2001;97:205-13）、およびＦｃε受容体（Santamariaら、Hum Immunol. 1993;37:23-30）に関して、免疫複合体の方が、抗原単独よりも効率的に抗原提示細胞によって取り込まれることが示されている。これらの研究は、ＣＤ４+Ｔヘルパー細胞の抗原特異的応答が、抗原提示細胞上のＦｃ受容体を介して取り込まれた特異的抗原によって強く促進され、その結果、より効率的な免疫応答が得られ、低い抗原量のときには特にそうであることを示している。
【００２５】
２つの他の非古典的Ｆｃ受容体はポリマーＩｇＡ受容体（ｐＩｇＲ）および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲＮ）である。両方の受容体は、上皮組織部位上での免疫グロブリンの輸送を専門とする。ｐＩｇＲはＭ細胞上および上皮細胞上で発現し、ＦｃＲＮは上皮細胞上で発現するが、抗原提示細胞上でも発現する。最近の証拠は、これらの受容体が、免疫複合体のための腸管のサンプリングにおいておよびこれらの免疫複合体を下にあるリンパ組織（ここでは管腔中に存在する免疫グロブリンに結合した病原体に対して効率的な免疫応答が開始される）に運ぶために、重要な役割を果たすことを示唆している。
【００２６】
腸のリンパ構造にルミナル（luminal）抗原を運ぶことができる別のＦｃ受容体はＣＤ２３、すなわち低アフィニティーＩｇＥ受容体である。ＣＤ２３は、腸の上皮組織上で発現し、動物モデルにおける食物アレルゲンの内在化において役割を果たすことが示されている（Yangら、J Clin Invest.2000;106:879-86）。
【００２７】
本発明は、部分的に、ウシの免疫グロブリンが、抗原の存在下でヒトの未熟な樹状細胞（ＤＣ）に結合しそして活性化することができるという発見に基づく（実施例１および２）。腸粘膜ＤＣは、上皮細胞間の堅い結合を開き、それらの樹状突起を上皮組織の外へ送って腸をサンプリングすることが報告されている。さらに、抗原提示細胞上の古典的および非古典的Ｆｃ受容体を介して内在化される免疫複合化された抗原は、複合化されていない抗原よりもはるかに効率的にＴリンパ球に提示されることが知られている（いわゆる「ワクチン効果」）。
【００２８】
理論に縛られることを望まないが、本発明者は、ヒトの粘膜ＤＣが、活反芻動物の抗原特異的抗体および例えば摂取された有害な微生物病原体からの抗原を含む免疫複合体によって性化され得ることを提案する。
【００２９】
すなわち、本発明の１局面は、反芻動物の、好ましくはウシの乳由来の抗原特異的抗体を使用して個体の適応免疫を高めるおよび／または誘発する方法を提供する。好ましくは、抗原特異的抗体が、抗原、例えば病原性微生物、ウイルス、食物アレルゲンまたは吸入アレルゲンの攻撃を受けた後にヒト免疫グロブリンの産生を促進する。好ましくは、抗原特異的抗体が、Ｔ細胞への抗原の効率的提示を促進する。個体は、哺乳類であり得るが、ヒトが好ましい。好ましくは、抗原特異的抗体が変性されていない。
【００３０】
乳から単離されたウシ免疫グロブリンは特に、グラム陰性病原性バクテリア、例えば大腸菌（E. coli）およびサルモネラ（Salmonella）、ならびに一般的なアレルゲン、例えばチリダニ（house dustmite）、カバノキ花粉（birch pollen）および草花粉（grass pollen）、のＬＰＳを認識し得る（国際公開第２００８／１２７１０５号パンフレットを参照、この文献は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに、乳から単離されたウシ免疫グロブリンはまた、グラム陽性微生物、胃腸ウイルスおよびバクテリア毒のペプチドグリカンを認識し得る。
【００３１】
上気道の病原体は、かなりの量が飲み込まれ、したがって、腸において利用され得る。理論に縛られないが、抗原は、飲み込まれるか気道に存在するかのいずれにしても、ウシ免疫グロブリンによって結合され、古典的または非古典的Ｆｃ受容体を介して、抗原−免疫グロブリン複合体の目標とする取り込みおよび提示をもたらすと考えられる。抗原の提示は、これらの抗原に対する免疫応答、例えば腸および気道の粘膜におけるＩｇＡ免疫グロブリンの産生、をもたらす。その結果、ウシ免疫グロブリンを例えば経口投与によって投与された個体は、これら腸および気道の病原体に対して防御するＩｇＡの産生においてより効率的であり得る。ウシＩｇＧの予防的投与は従って、特定の抗原に対する適応免疫を誘発する。
【００３２】
好ましくは、抗原特異的抗体は、例えば、当該抗体が投与された個体の呼吸器管および／または胃腸管（好ましくは腸）において、非炎症性免疫応答の産生を促進する。反芻動物抗体は、任意のタイプのヒト免疫グロブリンの産生を促進し得る。好ましくは、ＩｇＡの産生が促進される。
【００３３】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載された抗体が、ヒトの樹状細胞（ＤＣ）を活性化し、好ましくは、上記ヒトＤＣにおいてサイトカイン産生、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ-α、を誘発する。いつくかの実施態様では、本明細書に記載された抗体が、ヒトＤＣを活性化し、好ましくは、抗原、例えばＬＰＳ、の存在下で上記ヒトＤＣにおいてサイトカイン産生、好ましくはＩＬ−１０および／またはＴＮＦ-α、を誘発する。
【００３４】
好ましい実施態様では、上記反芻動物抗体が、タイプＩｇＧ１、ＩｇＡまたはそれらの組合せである。好ましくは、上記抗体が、当該抗原に特異的なＩｇＧ１タイプまたはＩｇＧ１およびＩｇＡの両方を含む組成物である。
【００３５】
好ましくは、反芻動物抗体によって認識される抗原が、上記抗体が投与される個体に存在する。すなわち、個体は、上記抗原に曝されていてもよく、例えば病原体、病原体の破片またはアレルゲンを飲み込むおよび／または吸入することによって曝されている。
【００３６】
いくつかの実施態様では、抗原が個体に投与され得る。例えば、抗体を含む収集された乳が抗原を含み得、または抗原が、抗体を含む調製物、例えば栄養または医薬組成物、に添加され得る。好ましくは、抗原が個体の胃腸管または気道に存在する。
【００３７】
本発明の１局面は、したがって、個体における適応免疫応答を高めるおよび／または誘発する方法を提供し、上記方法は、反芻動物の抗原特異的抗体および当該抗原を、それを必要とする当該個体に一緒に投与することを含む。いくつかの実施態様では、当該個体が、アレルギー疾患、感染症、自己免疫疾患および／または炎症性疾患に罹っている、または罹る危険がある。
【００３８】
本明細書で使用されるとき、「一緒に投与する」は、２種類以上の化合物の、先に投与された化合物が体内でまだ有効である間に第二の化合物が投与される（例えば、２つの化合物が患者において同時に有効であり、それは、当該２つの化合物の相乗効果を包含し得る）ような投与の形態を意味する。例えば、異なる化合物が、同一の調製物で投与され、または別個の調製物で随伴してまたは逐次に投与され得る。
【００３９】
本発明の別の局面は、個体における、アレルギー疾患、感染症、自己免疫疾患、および／または炎症性疾患から選択される疾患の１以上の症状の始まりを遅らせるまたは上記症状の重症度を低下させる方法を提供し、上記方法は、当該個体に反芻動物の抗原特異的抗体を提供することを含む。いくつかの実施態様では、上記方法が、当該個体が、アレルギー疾患、感染症、自己免疫疾患、および／または炎症性疾患から選択される疾患に罹るのを防ぎ、および／または上記疾患に罹る危険を低下させる。いくつかの実施態様では、個体が、上記疾患に罹る危険がある。上記疾患に罹る危険がある個体は、年配者、成人、青年、子供および乳幼児を包含する。いくつかの実施態様では、個体が、当該抗原を一緒に投与される。理論に縛られることを望まないが、反芻動物の抗原特異的抗体の投与は、当該抗原に対する適応免疫応答を誘発する。当該抗原に対する抗体、特にＩｇＡ抗体、の個体による産生は、続く暴露後の当該抗原の影響を中和すると考えられる。
【００４０】
本発明の１つの局面では、本明細書に記載された方法に有用な反芻動物抗体が、アレルギー抗原に特異的である。理論に縛られることを望まないが、非炎症性免疫応答の産生、好ましくは抗原特異的ＩｇＡを介する上記産生は、アレルゲンの影響を中和すると考えられる。いくつかの実施態様では、抗原特異的抗体が、食物アレルギーに関連する抗原、好ましくは乳、例えば雌ウシの乳、大豆、ヘーゼルナッツ、卵またはリンゴ、由来の食物アレルギー関連抗原、に特異的である。特に好ましい実施態様では、上記アレルギー抗原が、アレルギー関連ピーナッツ抗原である。別の実施態様では、上記アレルゲンが、草花粉アレルゲン、木花粉（tree pollen）アレルゲン、チリダニアレルゲン、ネコアレルゲン、カビまたは真菌アレルゲン（mold or fungus allergen）、刺咬昆虫（stinging insect）の毒の群から選ばれるがこれに限定されない吸入アレルゲンまたは毒アレルゲンである。上記吸入および毒アレルゲンは、呼吸器官を介してまたはミツバチ（bee）もしくはスズメバチ（wasp）などの昆虫の針を介してヒトの体に入ることができる。
【００４１】
好ましい実施態様では、反芻動物抗体を投与された個体が、食物アレルギー、鼻炎、結膜炎、喘息または毒アレルギーの群から選択されるアレルギー疾患に罹っているまたは罹る危険がある。
【００４２】
本発明の１局面では、個体における適応免疫応答を高めるおよび／または誘発するために提供された方法が、感染症の症状の始まりまたは重症度を治療する、予防するまたは低下させるために有用である。いくつかの実施態様では、本明細書に記載された方法のために有用な反芻動物抗体が、微生物またはウイルス、好ましくは腸または呼吸器管のための親和性（tropism）を有するもの、に特異的である。
【００４３】
好ましくは、上記微生物が、Eschericia属のメンバー、好ましくはEscherichia coli、Salmonella属のメンバー、好ましくはSalmonella typhimurium、Campylobacter属のメンバー、好ましくはCampylobacter jejuni、Helicobacter属のメンバー、好ましくはHelicobacter pilori、Bordotella属のメンバー、好ましくはBordotella pertussis、Clostridium属のメンバー、Shigella属のメンバー、Streptococcus属のメンバー、好ましくはStreptococcus pneumoniae、Staphylococcus属のメンバー、好ましくはStaphylococcus aureus、Haemophilus属のメンバー、好ましくはHaemophilus influenzae、Pseudomonas属のメンバー、好ましくはPseudomonas aeruginosa、Moraxella属のメンバー、好ましくはMoraxella catarrhalis、Chlamydia属のメンバー、好ましくはChlamydia pneumoniae、Mycoplasma属のメンバー、好ましくはMycoplasma pneumoniaeまたはLegionell属のメンバー、好ましくはLegionella pneumophilaから選択される。好ましいウイルス特異的抗体は、インフルエンザ属のメンバー、好ましくはインフルエンザウイルスＡまたはインフルエンザウイルスＢ、パラインフルエンザウイルスのメンバー、呼吸器合包体（respiratory synctial）ウイルスのメンバー、ロタウイルスのメンバー、ノロウイルスのメンバー、エンテロウイルスのメンバー、サイトメガロウイルスのメンバー、またはアデノウイルスのメンバーに対して向けられる。
【００４４】
いくつかの実施態様では、反芻動物抗体が、個体の免疫細胞によって産生され、自己免疫疾患、炎症性疾患または他の過剰活性な免疫系の症状の維持および／または重症度に寄与する炎症反応を促進するサイトカインまたは刺激シグナル化因子に特異的である。すなわち、好ましくは、本発明の抗体が、免疫細胞によって分泌される因子に特異的である。特に好ましい実施態様では、本発明の方法において有用な反芻動物抗体が、ヒトＴＮＦ−α、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γまたはヒトＩＬ−２３に特異的である。別の実施態様では、上記抗体が、治療されるべき個体の免疫細胞、上皮細胞、上皮内細胞、抗原提示細胞、またはＭ細胞、好ましくはＴ細胞、Ｂ細胞または樹状細胞、に特異的である。好ましい実施態様では、個体が、炎症性の腸疾患に苦しんでいる。さらに好ましい実施態様では、上記ウシ抗体が、上記自己免疫疾患に関連する微生物の抗原に特異的である。
【００４５】
本明細書に記載された反芻動物抗体は、任意の年齢のヒトに投与され得る。いくつかの実施態様では、個体が、０〜２４カ月齢、好ましくは０〜１２カ月齢、より好ましくは６〜２４カ月齢である（典型的には、固形食物が食餌に含まれるとき）。抗体は、より年長の子供および成人と比較して、０〜１２カ月齢の乳幼児の胃腸管においてより長い半減期を有する。いくつかの実施態様では、個体が、少なくとも１６歳、少なくとも２０歳、少なくとも３０歳、少なくとも４０歳、少なくとも５０歳、または少なくとも６０歳である。
【００４６】
本明細書に記載された方法に有用な反芻動物抗体は、個体における疾患の全身治療および／または予防のための薬物の調製において提供され得る。いくつかの実施態様では、上記薬物が、予防治療のためであり、上記疾患の１以上の症状の重症度を低下させおよび／または上記症状の始まりを遅くする。好ましくは、当該個体がヒトである。好ましくは、上記薬物が、経口投与用である。
【００４７】
本明細書に記載された方法に有用な反芻動物抗体は、適する組成物または調製物で提供され得る。好ましくは、上記抗原特異的抗体が、上記組成物中の抗体の全量の１％未満を含む。より好ましくは、上記抗原特異的抗体が、上記組成物中の抗体の全量の０．１％未満を含む。好ましい実施態様では、抗体の少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも３５％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７５％、さらにより好ましくは少なくとも８０％がＩｇＧ１、ＩｇＡまたはそれらの組合せである。好ましくは、上記組成物は、ＩｇＡよりもＩｇＧ１に富む。本発明の別の好ましい実施態様では、組成物が、ＩｇＧ１よりもＩｇＡに富む。
【００４８】
いくつかの実施態様では、組成物が、当該組成物中のタンパク質の合計量の０．００１〜１００％である量で反芻動物抗体を含む。好ましくは、上記抗体が、上記組成物中のタンパク質の合計量の０．１〜５０％の量で存在する。好ましくは、上記抗体が、タンパク質の合計量の約５〜３０％、より好ましくは１０〜３０％の量で存在する。
【００４９】
好ましい実施態様では、抗体の少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも３５％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７５％、さらにより好ましくは少なくとも８０％がＩｇＧ１、ＩｇＡまたはそれらの組合せである。好ましくは、上記組成物は、ＩｇＡよりもＩｇＧ１に富む。本発明の別の好ましい実施態様では、組成物が、ＩｇＧ１よりもＩｇＡに富む。
【００５０】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載された反芻動物抗体が、筋肉注射による、静脈内投与による、または直腸もしくは膣を介する投与に適する調製物として提供される。
【００５１】
好ましくは、本明細書に記載された反芻動物抗体が、経口投与のための調製物として提供される。反芻動物抗体は、任意の栄養または医薬組成物、例えば食餌、食物、健康サプリメント；濃厚物（concentrate）；および機能性食品（乳または他の乳製品、プロテインバー、スポーツ栄養、飲料、食物サプリメント、医療目的のための食物、臨床栄養、および好ましくは子供の栄養のための製品）において使用され得る。機能性食品は、食品の消費者に生理学的な利益を提供する１以上の成分を含む任意の新鮮なまたは加工された食品を意味する。いくつかの実施態様では、上記１以上の成分が、機能性食品に通常は存在しない。いくつかの実施態様では、上記１以上の成分が機能性食品に通常存在するが、より高いレベルで存在する。本明細書で定義されるとき、例えば、生乳は機能性食品でないが、加工されて免疫グロブリンを濃縮した乳または免疫グロブリンが補充された乳は機能性食品である。生理学的利益は、上記１以上の成分単独の結果、または上記１以上の成分および食品の他の成分の組合せの結果であり得る。好ましくは、本発明に従うウシ抗体を含む機能性食品が乳製品であり、特に、チーズ、バター、ヨーグルト、ケフィール、クォークチーズ、発酵乳、バターミルク、クリーム、エバミルク、粉乳、ホエー、乳糖、乳タンパク質、フレーバーミルク、低脂肪乳、フレーバードホエー（flavored whey）または乳脂肪製品もしくは調製物である。いくつかの実施態様では、機能性食品が乳、加工された初乳製品、または加工乳製品である。いくつかの実施態様では、機能性食品が、少なくとも１００μｇ／ｍｌ、少なくとも２００μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも５００μｇ／ｍｌ、少なくとも７００μｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも２ｍｇ／ｍｌの抗原特異的ウシ免疫グロブリンを含む。
【００５２】
加工乳製品は、乳から得られた食品であり、加工されていない食品と比較して、製品中の生きた病原体の数を減少させるところの少なくとも１の処理工程（例えば、当業者に公知の任意の低温殺菌法）に付されているものを意味する。
【００５３】
子供の栄養は、乳幼児用処方物（formula）、後続の（follow-on）処方物、乳幼児用のシリアル製品または成長用ミルク（growing-up milk）、すなわち１〜３歳の子供のために適する調整乳または粉乳、を包含する。本明細書で使用される用語「乳幼児」は、一般に約２歳未満の子供、最も典型的には約１歳未満の子供を意味し、用語「乳幼児用処方物」は、乳幼児の唯一の、主要な、または補助の栄養要求を満たすために乳幼児に投与される組成物を意味する。乳幼児用処方物は、脂質（例えば、トリ、ジ、およびモノグリセリド、ホスホリピド、スフィンゴリピド、および脂肪酸）、タンパク質および炭水化物（例えば、二糖類、単糖類、マルトデキストリンおよびデンプン）および好ましくはビタミンおよび鉱物をさらに含む。乳幼児用処方物およびそれを作る方法は、当業者に周知であり、例えば米国特許第７０９０８６２号明細書に記載されている。
【００５４】
好ましくは、乳幼児用処方物はまた、ホエータンパク質濃厚物３５（ＷＰＣ３５；ホエータンパク質濃厚物、乾燥物基準で３５％タンパク質）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、（好ましくは、９：１の割合のＧＯＳ：ＦＯＳ）シアリルラクトース（ＳＬ）、フコシルラクトース（ＦＬ）、長鎖ポリ不飽和脂肪酸、リノール酸、α―リノレン酸、オレイン酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、および加水分解されたタンパク質の１以上を含む。タンパク質の合計量の０．１％〜５０％、好ましくは５％〜３０％、さらにより好ましくは１０％〜２０％の量で存在する反芻動物抗体を含む乳幼児用処方物が提供される。いくつかの実施態様では、ウシ抗体が、乾燥重量の０．５％〜５％、好ましくは乾燥重量の１％〜２％の量で存在する。いくつかの実施態様では、再構成された乾燥の乳幼児用処方物または液体の乳幼児用処方物が、０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１〜２ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは０．５〜１ｍｇ／ｍｌ、のウシ抗体を含む。好ましい実施態様では、乳幼児用処方物が、１００ｇの乳幼児用処方物粉末につき、１〜１０ｇ、好ましくは２〜５ｇ、より好ましくは３〜４ｇの初乳を含む。
【００５５】
本発明は、炭水化物、脱脂粉乳（fat free milk solids）、脂肪およびＷＰＣ−３５の組成物に基づく、反芻動物の、好ましくはウシの乳、乳製品、初乳または初乳製品から得られた抗原特異的抗体を含む子供用栄養組成物、好ましくは乳幼児用処方物、をさらに提供する。好ましくは、炭水化物が、２５〜５０重量％、好ましくは２８〜４６重量％で存在し、脱脂粉乳が１２〜２０重量％、好ましくは１５〜１８重量％で存在し、脂肪が２２〜３０重量％、好ましくは２４〜２７重量％で存在し、ＷＰＣ−３５が５〜２０重量％、好ましくは８〜１８重量％で存在する。これらの濃厚物は、当業者によって、必要に応じて調整され得る。組成物は、初乳、好ましくは１〜５重量％の初乳、より好ましくは２〜４重量％の初乳；フコシルラクトース、好ましくは０．０１〜０．５重量％、より好ましくは０．１５〜０．３重量％；シアリルラクトース、例えばヴィヴィナル（vivinal）シアリルラクトース、好ましくは１〜６重量％、より好ましくは２〜５重量％；またはガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、例えばヴィヴィナルガラクトオリゴ糖、好ましくは８〜１５重量％、より好ましくは１０〜１３重量％、を単独でまたは任意の組合せでさらに含み得る。
【００５６】
好ましくは、組成物が初乳を含み、かつ以下の組成：４２〜４８重量％の炭水化物、好ましくは４３〜４７重量％の炭水化物；１４〜１８重量％の脱脂粉乳、好ましくは１５〜１７重量％の脱脂粉乳；２３〜２８重量％の脂肪、好ましくは２４〜２７重量％の脂肪；５〜１５重量％のＷＰＣ−３５、好ましくは８〜１２重量％のＷＰＣ−３５；および１〜５重量％の初乳、好ましくは２〜４重量％の初乳を有する。
【００５７】
好ましくは、組成物が初乳およびＧＯＳを含み、かつ以下の組成：３０〜３５重量％の炭水化物、好ましくは３２〜３５重量％の炭水化物；１４〜１８重量％の脱脂粉乳、好ましくは１５〜１７重量％の脱脂粉乳；２３〜２８重量％の脂肪、好ましくは２４〜２７重量％の脂肪；５〜１５重量％のＷＰＣ−３５、好ましくは８〜１２重量％のＷＰＣ−３５；１〜５重量％の初乳、好ましくは２〜４重量％の初乳；および８〜１５重量％、好ましくは１０〜１３重量％のＧＯＳを有する。
【００５８】
好ましくは、組成物が初乳、フコシルラクトース、シアリルラクトースおよびＧＯＳを含み、かつ以下の組成：２５〜３５重量％の炭水化物、好ましくは２８〜３２重量％の炭水化物；１４〜１８重量％の脱脂粉乳、好ましくは１４〜１７重量％の脱脂粉乳；２３〜２８重量％の脂肪、好ましくは２４〜２７重量％の脂肪；５〜１５重量％のＷＰＣ−３５、好ましくは８〜１２重量％のＷＰＣ−３５；１〜５重量％の初乳、好ましくは２〜４重量％の初乳；０．０１〜０．５重量％、好ましくは０．１５〜０．３重量％のフコシルラクトース；１〜６重量％、好ましくは２〜５重量％のシアリルラクトース；および８〜１５重量％、好ましくは１０〜１３重量％のガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）を有する。組成物の例が図５に示される。
【００５９】
本明細書に開示された重量％の定義は、合計乾燥重量に基づく。組成物はしたがって、固体、例えば粉末であり得、または液体、例えばすぐに使用できる乳幼児用処方物であり得る。
【００６０】
本明細書に開示された子供用栄養組成物を調製するために、ＩｇＧの任意の源が使用され得る。上述した組成物における初乳は、部分的にまたは全体的に、他のＩｇＧ源、例えば乳またはホエーによって、または精製されたＩｇＧによって置き換えられてもよい。実施例５の表２に示されるように、生乳は、２００μｇ／ｍｌより多くのＩｇＧ１を含む。すなわち、４リットルの生乳は、約０．７８ｇ／リットルのＩｇＧ含量を有する組成物を調製するために十分なＩｇＧを含む。好ましくは、組成物が、液体として調製されるときまたは液体として再構成されるとき、３５〜６０ｇ／リットル、より好ましくは３７〜５８ｇ／リットル、さらにより好ましくは４８〜５８ｇ／リットルの炭水化物；１０〜１５ｇ／リットル、より好ましくは１１〜１３ｇ／リットルのタンパク質；２３〜２９ｇ／リットル、好ましくは２５〜２７ｇ／リットルの脂肪；３〜１０重量％、好ましくは４〜９ｇ／リットルのミネラルおよび他の成分、および０．１〜５ｇ／リットルを含む。これらの組成物はまた、シアリルラクトースを好ましくは０．１〜０．３ｇ／リットルの量で、フコシルラクトースを好ましくは０．１〜０．３ｇ／リットルの量で、およびＧＯＳを好ましくは３〜６ｇ／リットルの量で含み得る。
【００６１】
経口的に送達される反芻動物抗体調製物は、水溶液、乳、ヨーグルトなどの流体中に配合され得、または噴霧乾燥または凍結乾燥されたタンパク質調製物として調製され得、または抗体を胃において保護するためにカプセル化され得る。好ましくは、そのような抗体が、乳幼児用処方物またはヒトの消費のための乳製品に添加される。本発明の別の好ましい実施態様では、本明細書に記載された組成物が、プロバイオティック細菌またはプレバイオティック（prebiotic）を含む。プロバイオティックは、例えば、乳酸菌、例えばStreptococcus lactis、Streptococcus cremoris、Streptococcus diacetylactis、Streptococcus thermophilus、Lactobacillus bulgaricus、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus bifidus、Lactobacillus casei、Lactobacillus lactis、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus delbruekii、Lactobacillus thermophilus、Lactobacillus fermentii、Lactobacillus salivarius、Bifidobacterium longum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium bifidum、およびPediococcus cerevisiae、またはそれらの混合物であり得る。上記プレバイオティックは、任意のプレバイオティックオリゴ糖、例えばガラクトオリゴ糖、フルクトオリゴ糖、フコオリゴ糖、シアロオリゴ糖、ならびにイヌリン、βグリカン、イナゴマメ粉、ガム、ペクチン、シアリルラクトン、ガラクタンおよびヌクレオチドであり得る。
【００６２】
反芻動物抗体は、ヒト胃腸管における分解に比較的耐性であるが、経口投与のための調製物は、上記抗原特異的抗体を含む輸送ビヒクルを含むのが好ましい。ここで、上記輸送ビヒクルは、上記抗体のビヒクルからの目標とされる腸での放出を可能にする。封入された物質の腸管での特定の放出を可能にする種々の輸送ビヒクルは従来公知である。好ましくは、上記ビヒクルが、小腸での放出を可能にする。ウシ免疫グロブリンは、例えば、酸性条件での分解に耐える溶腸性コーティングでコーティングされるように調製され得る。胃のｐＨでは不溶であるが腸のｐＨでは溶解する腸溶性Ｊコーティングのための薬学的に許容され得る賦形剤は、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニルアセテートフタレートおよびアクリル酸ポリマーを包含する。
【００６３】
反芻動物の免疫グロブリン組成物の放出プロファイルは、コーティングの厚さおよびコーティングの組成を変えることにより変えられ得る。ウシ免疫グロブリンの持続放出が望ましいならば、徐放性コーティングまたは徐放性コーティングと腸溶性コーティングとの混合物が適用され得る。徐放性コーティングのための薬学的に許容され得る賦形剤は、セルロース誘導体およびメタクリル酸エステルのコポリマー、例えばエチルセルロースならびにオイドラギット（Eudragit）ＮＥ、オイドラギットＲＬおよびオイドラギットＲＳを包含する。いくつかの実施態様では、徐放性組成物が、５〜２０重量％の活性物質を１時間以内に放出し、２３〜２７重量％を２時間以内に、３３〜４２重量％を３時間以内に、７５〜８２重量％を５時間以内に、９３〜９７重量％を７時間以内に、および１００重量％を１２時間以内に放出する。処置されるべき疾患に基づいて放出ブロファイルを変えることは当業者の理解の範囲内である。
【００６４】
好ましくは、反芻動物抗体が、一日に５ｍｇ〜１００ｇが投与されるような量で組成物中に存在する。いくつかの実施態様では、ウシ抗体が、一日に２０ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜２ｇの量で投与されるところの子供用栄養組成物、例えば乳幼児用処方物に存在する。好ましくは、子供用栄養組成物が液体であり、一日に２０ｍｌ〜１０００ｍｌの量で投与されるであろう。投与量は、個体の年齢および体重に依存するであろう。
【００６５】
いくつかの実施態様では、反芻動物の免疫グロブリンが、本明細書に記載された、免疫応答、好ましくは炎症性またはアレルギー性免疫応答の調節において使用するための抗炎症サイトカイン、例えばＴＧＦ−β、好ましくはウシＴＧＦ−β、との組み合わせで提供される。いくつかの実施態様では、反芻動物の免疫グロブリンおよびＴＧＦ−βが共に単一組成物中に一緒に配合される。
【００６６】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載された医薬組成物または栄養組成物が、抗原特異的抗体および抗原を含む。好ましくは、抗原が、本明細書に記載されたアレルゲンまたは病原体に特異的である。
【００６７】
好ましくは、本明細書に記載された反芻動物抗体が、ウシ抗原特異的抗体である。
【００６８】
抗原に対して予め免疫されていない反芻動物からの乳は、上記抗原と特異的に反応し得ることが先に示された（国際公開第２００８／１２７１０５号パンフレットおよびCollinsら、Int Arch Allergy Appl Immunol1991;96:362-267）。これは、反芻動物が当該抗原に対して免疫されていなかったという事実にも関わらず、当該乳が、当該抗原を特異的に結合した抗体を含んでいることを示した。本発明では、この局面が、多量の乳が処理されるところの工業的環境において利用される。いくつかの実施態様では、本発明はしたがって、乳、初乳、またはそれらの加工されたものからの反芻動物抗原特異的抗体を提供し、当該乳が、乳を収集する前に当該抗原で免疫されていない哺乳類由来であることを特徴とする。
【００６９】
本発明の文脈における用語「抗原」は、ヒトの抗原を意味し、例えばヒトにおいて感染しそして病気を引き起こすことができる病原体由来の抗原およびヒトがアレルギーになり得るところのアレルゲンである。「抗原に対する免疫法」は、当該抗原および典型的にアジュバントを含む組成物を哺乳類に投与することを意味し、上記抗原、上記アジュバントまたはそれらの組合せに対する免疫応答を上記哺乳類において得ることを目的とする。上記投与は、組成物の成分と哺乳類の免疫細胞との間の集中的な接触の促進を包含する。そのような投与は典型的に、皮膚層を破壊することにより哺乳類内に組成物を沈着させることを包含する。従って、免疫法は、反芻動物を、ヒトの抗原、ヒトに感染しそして病気を引き起こし得る病原体、ヒトがアレルギーになり得るところのアレルゲン、またはそれらの組合せによって免疫にすることを意味する。したがって、反芻動物の病原体の抗原のために反芻動物にワクチン接種して当該反芻動物における病気を治療または予防することは、本発明の文脈における免疫法とみなされない。例えば当該反芻動物の食物（の一部）として、抗原を経口投与することは、哺乳類における当該抗原のための耐性の誘発としばしば関係し、したがって、本発明における免疫法とみなされない。
【００７０】
本明細書に記載された反芻動物抗体は、乳から直接収集され得、またはより後の工程で、乳製品、例えばホエー（例えば乳ホエー、初乳ホエー、チーズホエーおよび酸（カゼイン）ホエー）、スキムミルクもしくは発酵乳、または再構成されたホエータンパク質濃厚物もしくは粉末などからの乳処理中に収集され得る。反芻動物抗体はまた、全ての工程での初乳から収集され得、例えば生まれる前に、生まれた直後に、または生まれて１か月以内に産生された初乳、ならびに初乳製品、例えば初乳粉末または初乳ホエータンパク質濃厚物、から収集され得る。
【００７１】
好ましい実施態様では、本明細書に記載された抗体を得る方法が、乳を分泌する反芻動物から乳または初乳を収集すること、および上記乳または初乳から当該抗体を収集することを含む。好ましくは、同じ種の少なくとも２個体の反芻動物の乳または初乳が、抗体を収集する前にプールされる。こうして、十分でない抗体も十分な量で収集され得る。この目的のために、好ましくは同じ種の、少なくとも１０個体、より好ましくは少なくとも１００個体の反芻動物の乳または初乳から抗体を収集することが好ましい。好ましくは、上記反芻動物がウシであり、好ましくはウシ（Bos)属のウシである。ウシ属のうち、商業的に利用されている種が好ましい。好ましくは、上記反芻動物が、ガヤル（Gayal）種、Bos frontalis種(家畜ガウル（domestic gaur）)、Bos mutus種（ヤク（Yak））またはBos taurus種（家畜のウシ）である。別の好ましい実施態様では、反芻動物が、ヤギまたはヒツジであり、好ましくはヤギ亜科のものである。この亜科のうち、Ovis属またはCapra属が好ましい。Ovis属のうち、Ovis aries種 (家畜のヒツジ)が好ましい。Capra属のうち、Capra aegagrus hircus種（家畜化されたヤギ）が好ましい。別の好ましい実施態様では、反芻動物がラクダ、ロバ、バッファロー、ウマまたはラマである。
【００７２】
免疫されたまたは免疫されていない反芻動物からの抗体は、好ましくは、アレルゲン抗原、ヒト成長因子、ヒト抗原、胃腸または呼吸器官ウイルス、胃腸または呼吸器官細菌、寄生虫、または他の関連する病気に関係する抗原に特異的である。１実施態様では、上記抗体が、免疫された反芻動物由来である。好ましくは、抗体が、免疫されていない反芻動物由来である。
【００７３】
乳がいくつかの成分、特に脂肪、油脂、非抗体タンパク質および炭水化物を含むとき、抗体を収集する前に、この乳を処理工程に付すことが好ましい。抗体を収集するための適する出発調製物は、生乳または初乳である。熱で処理されて細菌の対数的死滅を達成する（低温殺菌と呼ばれる処理）ところの乳または初乳も使用され得る。低温殺菌は典型的に、沸点よりも低い温度を使用する。なぜならば、乳の沸点よりも高い温度では、カゼインミセルが不可逆的に凝集する（または「カードになる」）からである。現在、２つの主なタイプの低温殺菌が使用されている。高温／短時間（ＨＴＳＴ）処理および賞味期限延長（Extended Self Life：ＥＳＬ）処理である。ＨＴＳＴ法では、乳が、熱水で外側を加熱された金属板の間にまたはパイプ中に集められ、そして１５〜２０秒間、７１．７℃（１６１°Ｆ）に加熱される。ＥＳＬ乳は、微生物濾過工程およびＨＴＳＴよりも低い温度を有する。単に「低温殺菌された」とラベルされた乳は通常、ＨＴＳＴ法で処理されたものである。乳はまた、７１．７℃より低い温度で、高められた圧力と組み合わせて殺菌され得る。これは、細菌の対数的死滅において、より高温でより低圧の場合と同等に有効である。
【００７４】
乳処理工程は好ましくは、分離工程を含む。好ましい分離工程は、乳または初乳の脂肪が（部分的に）枯渇されるところの工程を含む。すなわち、抗体の収集のための別の好ましい出発調製物は、脂肪枯渇工程を受けた乳または初乳を含む。好ましい実施態様では、分離工程が、乳を少なくとも２つの部分に分離することを含み、その少なくとも１の部分は、タンパク質に富む部分である。バッチ処理された乳または初乳からの抗体の収集が可能であるが、上記処理工程は、（半）連続工程の一部であるのが好ましい。特に好ましい実施態様では、ホエー画分が、上記乳から調製され、上記抗体が上記ホエーから収集される。すなわち、好ましい実施態様では、抗体の収集のための出発調製物が、ホエーを含む。さらに別の実施態様では、抗体の収集のための出発調製物が、発酵乳を含む。出発点は、上述した通りであり得るが、そこから製造される再構成された濃厚物または乾燥粉末からであってもよい。
【００７５】
好ましい実施態様では、反芻動物が、乳の収集のための基準に基づいて選択される。この基準は、乳の分泌サイクルにおける時間を包含する。１実施態様では、反芻動物が、正常乳を産生しており初乳を産生していないことに基づいて選択される。別の実施態様では、反芻動物が、初乳を産生していることに基づいて選択される。
【００７６】
さらに好ましい実施態様では、上記基準が、乳の抗体含量、収集された乳における抗体特異性、反芻動物による食物摂取または食物サプリメント摂取の種類、哺乳類の病原体の抗原のためのワクチン接種（すなわち、前述したワクチン接種、例えば動物疾患に対するワクチン接種）、またはこれらの２以上の組合せを含む。
【００７７】
好ましい実施態様では、上記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＡ、ＩｇＧ２またはＩｇＭ抗体である。好ましくは、上記抗体が、乳から得られた、抗体に富む画分から収集される。好ましくは、上記方法が、上記抗体に富む画分に存在する他のタンパク質と比較されるときにＩｇＧ１、ＩｇＡ、またはそれらの組合せのレベルを高める工程をさらに含む。好ましくは、β−ラクトグロブリンの量が、少なくとも５０％減少している。これは、例えば、β−ラクトブロブリンの特異的加水分解によって、またはサイズ分離によるもしくはβ−ラクトグロブリンに特異的な抗体を使用する除去によるβ−ラクトグロブリンの除去によって、行われ得る。すなわち、好ましくは、ウシ抗体を収集する方法が、抗体に富む画分におけるβ−ラクトグロブリンの量を低下させる工程および／または上記抗原特異的抗体に富む抗体画分を得るためのアフィニティー精製工程をさらに含む。同じ種の種々の反芻動物の大きい集まりから抗原特異的抗体を収集する可能性を有することは、各個体の乳サンプルにおける抗体のありうる低い保有率にもかかわらず、アフィニティー精製された抗原特異的抗体のかなりの量のアフィニティー精製を可能にする。
【００７８】
好ましい実施態様では、収集された乳または初乳が、抗原の存在または抗原特異的抗体の存在のいずれかに関して試験される。乳または初乳中の免疫グロブリンの全含量および／または特定の抗体に特異的な抗体の存在が決定され得る。乳または初乳は、処理工程中の任意の時点で、好ましくは収集後に試験され得る。
【００７９】
抗原特異的抗体を得るために使用される方法に関係なく、本明細書に記載された方法において有用な抗体は、「機能的」である、すなわち、抗原を結合することができる変性されていない抗体である。従って、抗体を得るための好ましい方法は、抗体を有意に変性しない。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、「含む」およびその活用型は、その非制限的意味において、上記用語に続く事項が包含されることを意味するが、具体的に言及されていない事項が排除されるものではない。さらに、動詞「から成る」は、本明細書で定義された化合物または付加化合物が具体的に特定されたもの以外の追加の成分を含み得ることを意味する「から本質的に成る」によって置き換えられ得る。ここで、上記追加の成分は、本発明の独自の特徴を変えない。
【００８１】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、上記冠詞の文法上の対象の１つまたは１より多くを（すなわち少なくとも１を）意味するために本明細書で使用される。例えば、「元素」は、１つの元素または１より多い元素を意味する。
【００８２】
用語「処理する」は、予防および／または治療のための処理を包含する。用語「予防または治療のための」処理は、従来認識されており、１以上の対象組成物の受容者への投与を包含する。好ましくない状態（例えば、宿主動物の病気または他の好ましくない状態）の臨床的症状の前に投与されるならば、その処理は予防である（すなわち、それは、宿主が好ましくない状態になるのを防ぐ）。一方、好ましくない状態の症状の後に投与されるならば、その処理は治療である（すなわち、既存の好ましくない状態またはその副作用を少なくする、改善するまたは安定化することが意図される）。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、疾患または病気を「防ぐ」ところの治療に役に立つものは、統計サンプルにおいて、処理されていない対照サンプルに対して、処理されたサンプルにおける疾患また病気の発生を減少させ、または、処理されていない対照サンプルに対して、疾患または病気の１以上の症状の開始を遅らせまたは上記症状の重症度を低下させる化合物を意味する。
【００８４】
本明細書において引用された全ての特許文献および非特許文献は、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００８５】
本発明を下記実施例においてさらに説明する。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明を単に明らかにするものに過ぎない。
【実施例１】
【００８６】
ウシ免疫グロブリンの未熟樹状細胞上での結合能
【００８７】
ウシ免疫グロブリンが、ＡＦＦＩ−Ｔ（商品名）カラム、次いでプロテインＧカラムを使用して、ウシ初乳から精製された。この精製されたウシ免疫グロブリン物質は、ＩｇＧ１に富むが、ＩｇＭおよびＩｇＡをなおも含んでいた。ウシ初乳および精製されたウシ免疫グロブリンの調製物は、ＩｇＧ１＞ＩｇＭ＞ＩｇＡ＞ＩｇＧ２を含んでいた（表１）。
【００８８】
【表１】
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【００８９】
ＣＤ３２／ＦｃγＲ−ＩIを発現するヒト単球由来の未熟ＤＣが、ウシ初乳または精製されたウシ免疫グロブリンと共に代謝不活性条件下（４℃および無毒性濃度のＮａＮ３）でインキュベートされて、ありうる異種間のＦｃＲ／免疫グロブリン相互作用が決定された。
【００９０】
未熟ＤＣ上における初乳および精製された免疫グロブリンの両方の調製物からのウシＩｇＧ（２５０μｇ／ｍｌ）の結合は明らかに増加した（図１参照）。このウシＩｇＧ結合は、容量依存性であった。ウシＩｇＡおよびＩｇＭの結合は最少量にすぎなかった。
【００９１】
単球ヒトＩｇＧ（２５０μｇ／ｍｌ）は、ＣＤ３２発現ヒト未熟ＤＣに結合できなかったが、凝集したヒトＩｇＧ（２５０μｇ／ｍｌ）は明らかにこれらの細胞に結合した（図２Ａ参照）。この観察は、ＩｇＧのみがＣＤ３２と架橋後に相互作用するという考えと一致し、そして、ウシＩｇＧの未熟ＤＣ上での上記結合はＩｇＧ免疫複合体または凝集体の結果であることを示唆する。
【００９２】
ヒトおよびウシＩｇＧの未熟ＤＣ上での結合がＣＤ３２特異的であるかどうかを決定する試みにおいて、未熟ＤＣが、公知の遮断マウス抗ヒトＣＤ３２抗体（１０μｇ／ｍｌ、ＢＤ  PharmingenからのクローンＦＬ１８．２６）で前処理された。この抗ＣＤ３２前処理は、ヒト凝集ＩｇＧの結合を明らかに減少させた（図２Ｂ参照）。抗ＣＤ３２による遮断後のヒトＩｇＧの残りの結合は、ＦｃＲＮなどの他の受容体がまた、凝集／複合化されたＩｇＧ（ヒトだけでなくウシも）のヒトＤＣへの結合において役割を果たし得ることを示唆する。
【実施例２】
【００９３】
免疫グロブリンの未熟樹状細胞上での生物学的活性
【００９４】
可溶免疫複合体を模倣する試みにおいて、ＬＰＳ非感受性（ＴＬＲ−４lowおよびＣＤ１４low）未熟ＤＣが、Escherichia coliからの微量のＬＰＳを伴ってまたは伴わないで、ウシ初乳および精製されたウシ免疫グロブリンに暴露された。暴露の２日後に、ＤＣ活性化が、サイトカイン産生（すなわちＩＬ−１０およびＴＮＦ−α）を調べることによりモニターされた。
【００９５】
ウシ初乳は、ヒトＤＣを強く活性化した。これは、２日の処理後に未熟ＤＣによって放出されたＩＬ−１０およびＴＮＦ−αの再現可能な高いレベルによって実証された（図３参照）。この効果は、容量依存性であった（すなわち、２５０μｇ／ｍＬ＞５０μｇ／ｍＬ）。精製されたウシ免疫グロブリンも用量依存性ヒトＤＣ活性化を示した（すなわち、２５０μｇ／ｍＬ＞５０μｇ／ｍＬ）。
【００９６】
本発明者は先に、乳中の細菌特異的ウシ抗体（ＬＰＳに対するものを包含する）の存在を実証した（国際公開第２００８／１２７１０５号パンフレット参照）。１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳとウシ初乳とのおよび特に精製ウシ免疫グロブリンとの組み合わせが、ヒト未熟ＤＣからのＩＬ−１０およびＴＮＦ−α分泌に関して強い相乗効果をもたらした（図３参照）。１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳのみでは、サイトカイン産生に影響を及ぼさなかった。この観察は、ウシ抗ＬＰＳ特異的免疫グロブリンおよびＬＰＳから成る免疫複合体が、ＦｃＲ信号経路（signalling pathway）を介してヒト未熟ＤＣを活性化することを示す。
【実施例３】
【００９７】
ヒトＧＩ管におけるウシ免疫グロブリンの生存
【００９８】
インビトロ消化実験を行って、ウシ免疫グロブリンに関する胃および小腸における消化の影響を決定した。この目的のために、初乳におけるウシＩｇＧ１およびＩｇＡの安定性に関する乳幼児および成人のインビトロ消化プロトコルの影響が調べられた。
【００９９】
図４に示されるように、乳幼児消化プロトコルは、小腸処理の後、元のウシＩｇＧ１およびＩｇＡの約４０〜６０％を残した。より活発である成人プロトコルは、元のＩｇＧ１およびＩｇＡの約１０〜２０％を残す。別の独立した実験では、成人の胃および小腸処理によって＜５％の免疫グロブリンが生存した。乳幼児と成人との間に見られる違いの少なくとも一部は、ｐＨの相違の結果であり得る。年少乳幼児の胃相のｐＨは４であり（成人プロトコルではｐＨ３である）、胃相の持続期間は年少乳幼児が１時間であり、成人が２時間である。本発明者は最近、ウシＩｇＧ１およびＩｇＡがｐＨ４で６時間安定であるが、ｐＨ３．５以下への暴露では、短い時間ですらかなり敏感であることを見出した。全体に、これらのデータは、経口的に消化された免疫グロブリンのかなりの量が、ヒトの腸にわたって存在し、したがって、機能性を保持することが期待され得ることを示す。
【０１００】
これらの実験は、先に発表された結果を確認する。１９７９年からの初期の研究は、活性なE.coli ＥＰＥＣ特異的Ｉｇまたはその活性Ｉｇ断片が、ＧＩ管を通った後の免疫された雌ウシからの免疫グロブリンで処理された乳幼児の糞便に存在すること、およびこれらの糞便から調製された抽出物が、マウスをE. coliによるインビボ攻撃に対して防御し得ることを示した（Hilpert H.ら、Nestle Res. News, 134-138. 1974）。同様に、Hilpertらは先に、乳幼児における腸通過ののち、１０〜２０％の免疫グロブリンが生存し得ることを示し（Hilpert, H.ら、1987. J. Infect. Dis. 156:158-166）、Pacynaらは、抗ロタウイルス免疫グロブリン活性が、ロタウイルス誘発された下痢に罹った子供の糞便において検出され得ることを示した（Pacyna, J.ら、2001. J. Pediatr. Gastroenterol.Nutr. 32:162-167）。
【０１０１】
別の研究は、初乳からの約２０％のＩｇＧおよびＩｇＭが（ＩｇＡでない）、成人において、腸骨を通って生存することを示した（Roos, Nら、1995. J. Nutr. 125:1238-1244）。これは、Kellyらの研究と一致する。Kellyらは、経口的に消化されたウシＩｇＧの３％までが、健康な成人において口から肛門までＧＩ管を通って生存できたことを記載した（Kelly, C.P.ら、1997. Antimicrob.Agents Chemother. 41:236-241）。免疫グロブリンが、ｐＨ６以上で溶解するカプセル中にあるとき、３０％さえも、糞便中に検出できた。断食後に初乳を採った個体では、約２倍より多くのＩｇＧが、腸を通って生存した。同様の研究において、全ての経口投与されたＩｇＧ１の５０％が、小腸の最も近位部分である腸骨を通って生存することが示された（Warny, Mら、1999. Gut 44:212-217）。初乳と低いｐＨに対して防御するための制酸剤またはオメプラゾール（omeprazole）との組み合わせによる高められた生存は見られなかった。腸溶性カプセルは、腸骨においてほとんど損なわれなかった。これは、腸溶性カプセル中で投与された免疫グロブリンは、結腸に入るまでは放出されないことを示唆している。これらのデータは、経口的に消化された免疫グロブリンのかなりの量が、乳幼児の胃および小腸を通って存在し、したがって機能性を保持することが期待され得るという本発明者の結果を支持する。
【実施例４】
【０１０２】
乳、ホエー、初乳および乳由来タンパク質調製物におけるウシＩｇＧ１、ＩｇＭおよびＩｇＡの測定
【０１０３】
ＥＬＩＳＡアッセイが、実施例１に記載されたように行われて、乳を包含する種々の源からのウシ免疫グロブリンの量を測定した。表２に示されるように、生乳は、かなりの量のＩｇＧを含む。
【０１０４】
【表２】
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ホエー、初乳、乳およびタンパク質調製物中のウシ免疫グロブリンの測定値
データは、特に断らない限り、２つの別個のＥＬＩＳＡの平均を示す。
＊：標準曲線がＯＫでなかったので、単一測定からのＩｇＡサンプル
＊＊：単一ＩｇＧ１測定値
＊＊＊：未知の粉末のタンパク質含量
＃：単一測定値、下記第二のＥＬＩＳＡ検出におけるサンプル
ｎｄ：決定されなかった
【０１０５】
実施例において使用された材料および方法
ウシ初乳由来の免疫グロブリンの精製
【０１０６】
初乳サンプルを、０．７５Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４を含むバッファーで希釈した（２倍希釈）。追加の（ＮＨ４）２ＳＯ４を添加して０．７５Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４の最終濃度を得た。サンプルをＡＦＦI-Ｔ（商品名）カラム（Kem-en-Tec）に充填した。サンプルを０．０５Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．９）溶離バッファーで溶離した。サンプルを０．０２ＭのＮａＰi（ｐＨ７．０）を含むバッファーで希釈した（４倍希釈）。サンプルをプロテインＧカラムに充填した（５ｍｌ、Amersham）。サンプルを０．１Ｍのグリシン−ＨＣｌ（ｐＨ２．７）溶離バッファーで溶離した。サンプルを１Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ９．０）中和バッファーで中和した。ＰＢＳに対して透析した（３ｘ１Ｌ）。精製されたＩｇｓサンプルを濾過して無菌性（sterility）を得た（０．２μｍフィルター）。Ａ２８０（GeneQuant、Amersham）を測定してタンパク質濃度を決定した。４℃で貯蔵した。
【０１０７】
ウシ初乳ＢＣＰＬＦ２００、精製されたウシ免疫グロブリン、および消化サンプルにおけるウシサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡおよびＩｇＭの決定
【０１０８】
ＥＬＩＳＡプレート（Corning）を、１００μＬ／ウェルのコーティング抗体（すなわち、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で希釈された１．２５〜２．５０μｇ／ｍＬのヒツジ抗ウシＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（Bethyl））で被覆した。加湿された環境において４℃で一夜インキュベートした。ウェルごとに３００μＬの洗浄バッファー（０．０５％Tween-20（ICN）／ＰＢＳ）でプレートを３回洗浄した。ウェルごとに２００μＬの１：１０ブロックバッファー（Roche）でプレートをブロックした。加湿された環境において３７℃で１時間インキュベートした。洗浄バッファーで３回洗浄した。１００μＬ／ウェルの標準物質（ウシ参照血清、Bethyl）、ならびにウシ初乳および精製されたウシ免疫グロブリン（ブロックバッファーで希釈されたもの）を添加した。加湿された環境において３７℃で１時間インキュベートした。洗浄バッファーで３回洗浄した。パーオキシダーゼに結合した検出抗体（すなわち、ブロックバッファーで希釈された０．０２μｇ／ｍＬのヒツジ抗ウシＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡまたはＩｇＭ（AbD Serotec））１００μＬ／ウェルを添加した。加湿された環境において３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで５回洗浄した。１００μＬ／ウェルのＴＭＢ溶液（Biosource）を添加した。ＲＴで１５分インキュベートした。１ＭのＨ２ＳＯ４を添加することにより（１００μＬ／ウェル）、反応を停止した。マイクロプレートリーダーを使用して二重波長４５０ｎｍ／６５５ｎｍ（６５５ｎｍは参照として）での吸光度を測定した。
【０１０９】
ヒト未熟単球由来ＤＣの産生および活性化
【０１１０】
ヒト単球が、Lymphoprep（１，０７７ｇ／ｍｌ）上での密度勾配遠心法によって、次いでPercoll勾配（３つの密度：１，０７６ｇ／ｍｌ、１，０５７ｇ／ｍｌおよび１，０５４ｇ／ｍｌ）上での密度勾配遠心法によってバッフィーコート（buffy coats）から単離された。細胞を洗浄しそして、Gentamycinで補充された無血清培地（CellGro DC培地、CellGenix）に再懸濁した後、上記細胞を、細胞表面フラスコの表面に１．５時間接着させ、非接着細胞を取り除き、新鮮な培地を添加した。２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（PeproTech）および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４（PeproTech）を接着された単球に添加した。単球を５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で５日間インキュベートした（２日目に「新鮮な」２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦおよび２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４を添加）。５日後に、培養未熟ＤＣ（culture immature DC）が採取され、ポリプロピレンチューブ（Greiner）ごとに２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦおよび２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４で補充されたCellGro DC培地/ゲンタマイシン中で１．０×１０６ＤＣ／ｍＬに調整された。Escherichiacoli （セロタイプ０５５：Ｂ５、Sigma）からの１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを伴ってまたは伴わないで、初乳および精製されたウシ免疫グロブリンからの２５０μｇ／ｍＬまたは５０μｇ／ｍＬのウシＩｇＧ１をＤＣに添加した。さらに、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを伴ってまたは伴わないで、２５０μｇ／ｍＬまたは５０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch）について行い、そして非刺激ＤＣおよび１００μｇ／ｍＬのポリＩ：Ｃ（Sigma）処理されたＤＣ（PeproTech）をそれぞれ陰性および陽性の対照として行った。５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２日間インキュベートした。２日後に、上清を収集して（−２０℃で貯蔵）、サイトカイン量を決定した。
【０１１１】
ウシ初乳、精製されたウシ免疫グロブリンおよびヒトＩｇＧの未熟ＤＣ上での結合
【０１１２】
未熟ＤＣをＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ／０．０５％ＮａＮ３（Acros Organics）で４℃で洗浄し、チューブごとに４℃で１×１０５細胞／１００μＬ  ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３に調整した。初乳および精製されたウシ免疫グロブリンからの２５０μｇ／ｍＬのウシＩｇＧ１、および２５０μｇ／ｍＬの天然の（単球）または変性された（６５℃で２０分、免疫複合体を模倣するため）ヒトＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch）を添加した。４℃で３０分間インキュベートした。細胞（３分５００ｇ）を４℃で過剰（４ｍＬ／チューブ）のＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で３回洗浄した。４℃で再懸濁して１×１０５細胞／１００μＬ  ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３にした。１０μｌの１：１０ヒツジ抗ウシＩｇＧ（Bethyl）、１０μｌの１：１０ヒツジ抗ウシＩｇＡ（Bethyl）、１０μｌの１：１０ヒツジ抗ウシＩｇＭ（Bethyl）、または１０μｌの１：１０ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Jackson ImmunoResearch ）を添加した。４℃で３０分間インキュベートした。細胞（３分５００ｇ）を４℃で過剰（４ｍＬ／チューブ）のＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で洗浄した。４℃で再懸濁して１×１０５細胞／１００μＬ  ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３にした。１０μｌの１：１０ロバ抗ヒツジＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Jackson ImmunoResearch ）を添加した。４℃で３０分間インキュベートした。細胞（３分５００ｇ）を４℃で過剰（４ｍＬ／チューブ）のＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３で洗浄した。４℃で再懸濁して１×１０５細胞／２００μＬ  ＰＢＳ／ＢＳＡ／ＮａＮ３／２％ホルムアルデヒドにした。４℃で３０分間インキュベートした。フローサイトメーター（Becton & Dickinson）を使用してＭＦＩを測定して（１０，０００事象／チューブ）、Ｉｇ結合を決定した。
【０１１３】
免疫グロブリン安定性に対する消化（胃および小腸）の影響
【０１１４】
免疫グロブリン含有サンプルの消化のために使用された消化プロトコルは、年少乳幼児および成人における上部ＧＩ管の条件に基づく。これら２つのプロトコルは、幾つかの点で異なる。年少乳幼児の消化の胃相のｐＨは４であり、成人プロトコルではｐＨ３である。また、胃相の持続時間が年少乳幼児では１時間であり、成人では２時間である。ペプシン濃度は、成人では８０ｍｇであり、年少乳幼児では２８ｍｇである。小腸の消化は同じである。
【０１１５】
ａ）乳幼児での胃および小腸における消化を模倣するプロトコル：
５０ｍｌの水に溶解された１ｇの初乳が、２０ｍｌの胃液（２８ｍｇのペプシンを含む、Sigma P-6887）とともに３７℃およびｐＨ４．０で１２０分間、バッチ式でインキュベートされた。この後、ｐＨが重炭酸塩によってｐＨ６．５に高められた。次いで、２５ｍｌの小腸液（１００ｍｇのパンクレアチンを含む、Sigma P-1750）が添加され、サンプルが３７℃でさらに１２０分間インキュベートされた。消化後すぐに、サンプルが、ＩｇＧ１およびＩｇＡの測定まで、−２０℃で貯蔵された。
【０１１６】
ｂ）成人での胃および小腸における消化を模倣するプロトコル：
５０ｍｌの水に溶解された１ｇの初乳が、２０ｍｌの胃液（８０ｍｇのペプシンを含む、Sigma P-6887）とともに３７℃およびｐＨ３．０で６０分間、バッチ式でインキュベートされた。この後、ｐＨが重炭酸塩によってｐＨ６．５に高められた。次いで、２５ｍｌの小腸液（１００ｍｇのパンクレアチンを含む、Sigma P-1750）が添加され、サンプルが３７℃でさらに１２０分間インキュベートされた。消化後すぐに、サンプルが、ＩｇＧ１およびＩｇＡの測定まで、−２０℃で貯蔵された。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2013517268.tif 000010
【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【国際調査報告】
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