(57)【要約】チアゾール環で置換された縮合二環式ヘテロ芳香環系を有する新規な化合物を開示する。該化合物は、いろいろなタイプの癌細胞の成長を阻害するので、癌を処置するのに有用である。これら化合物の効力は、それらが癌細胞の成長および／または移動の強力な阻害剤であることを示す、細胞成長／移動を監視するシステムで示されている。更に、本発明の化合物は、腫瘍の成長を in vivo で止めるおよび腫瘍のサイズを in vivo で減少させることが分かった。これら化合物を含む組成物およびこれら化合物および組成物を癌の処置に用いる方法を開示する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）：
【化１】
2013520439.tif 000016
（式中、Ｚは、次の置換されたフェニル環または複素環式環：
【化２】
2013520439.tif 000017
より選択されるが、これに制限されるわけではない）
を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
式（Ｉ）を有する化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩ）を有する化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
化合物であって、
【化３】
2013520439.tif 000018
より選択される、式（Ｉ）を有する化合物。
【請求項５】
化合物であって、
【化４】
2013520439.tif 000019
より選択される、式（ＩＩ）を有する化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容しうる賦形剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項７】
追加の活性剤を更に含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
癌を処置する、予防するまたは管理する方法であって、このような処置を必要としている対象に、有効量の請求項１〜５に記載の化合物または請求項６または請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項９】
癌が、肉腫、類表皮癌、線維肉腫、子宮頸癌、胃癌、皮膚癌、白血病、リンパ腫、肺癌、非小細胞性肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、乳癌、肝癌、頭部癌、頸部癌または膵癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
対象がヒトである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
癌を処置するのに用いるための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
癌の処置用の薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容しうる塩の使用。
【請求項１３】
癌が、肉腫、類表皮癌、線維肉腫、子宮頸癌、胃癌、皮膚癌、白血病、リンパ腫、肺癌、非小細胞性肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、乳癌、肝癌、頭部癌、頸部癌または膵癌である、請求項１１または請求項１２に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のクロス・リファレンス
本出願は、２０１０年２月１９日出願の米国仮特許出願第６１／３０６，４１６号および２０１０年３月１６日出願の同第６１／３１４，５１０号に優先権を主張するが、それらの開示は、本明細書中にそのまま援用される。
【０００２】
本発明の分野は、複素環式化合物、医薬組成物および方法であって、特に、癌および関連疾患の処置および予防のための組成物および方法に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
癌は、先進諸国において二番目に大きい死因である。したがって、癌は、依然として、人類への最も重要な未だかなえられていない医学的挑戦の一つである。腫瘍を処置するには、外科手術、放射線、化学療法またはこれらアプローチのいずれかの組み合わせを含めた多数の選択肢が利用可能である。これらの中で、化学療法は、全てのタイプの癌に、具体的には、手術不能のものまたは転移特性を有するものに広く用いられる。異なったヒト癌の生存率の改善のために臨床で用いられているいろいろな化学療法用化合物にもかかわらず、化学療法は、概して、治癒的ではなく、疾患進行を遅らせるだけである。
【０００４】
一般的に、腫瘍およびそれらの転移は、腫瘍細胞が多剤耐性の能力を発現するにつれて、化学療法に不応性になる。いくつかの場合、腫瘍は、本質的に、いくつかのクラスの化学療法薬に耐性である。他の場合、化学療法薬に対して獲得される耐性は、化学療法的介入中に発現する。したがって、異なったクラスの腫瘍を処置する場合、利用可能な化学療法用化合物の効力への有意の限界が、依然として存在する。更に、腫瘍の化学療法的処置に用いられる多くの細胞障害性剤または細胞分裂抑制性剤は、重症の副作用を有して、幾人かの患者に化学療法の停止をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、癌を処置するための新しい化学療法薬への要求が、依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、アニリン置換チアゾール環に連結した二環式ヘテロアリール環系を有する新規な化合物、これら化合物を含有する医薬組成物、およびこれら化合物および組成物を使用する方法に関する。本明細書中に記載の化合物は、抗腫瘍、抗癌、抗炎症、抗感染および抗増殖の活性を示す。それらは、多くの異なったタイプの癌を含めた癌細胞への選択的毒性によって示されるように、癌の処置に特に有用である。本発明は、更に、腫瘍、癌、および感染性および／または増殖性疾患を処置するのに用いることができるこのような化合物を含有する医薬組成物に関する。
【０００７】
本発明の内容の一つの側面において、新規な複素環式化合物は、式Ｉまたは式ＩＩ：
【０００８】
【化１】
2013520439.tif 000002
【０００９】
［式中、Ｚは、次の置換されたフェニル環または複素環式環（これら構造中の破線が交差している結合は、式Ｉまたは式ＩＩ中のＮＨへのＺ基の結合点である）：
【００１０】
【化２】
2013520439.tif 000003
【００１１】
より選択されるが、これに制限されるわけではない］
に従う構造を有するか、またはその薬学的に許容しうる塩若しくはアシル化プロドラッグである。
【００１２】
本明細書中に記載のそれらに似ている化合物は、癌を処置するためのこのような化合物の使用を含めて、報告された（ＷＯ２００９／０２３４０２号）。しかしながら、本明細書中に記載の新規な化合物は、当該技術分野において知られている化合物よりも予想外に優れている。
【００１３】
式Ｉ〜ＩＩの化合物は、中性化合物として、または無機および有機対イオンを含むそれらの薬学的に適する塩として用いることができる。それら塩には、ハロゲン化物（Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−）、ニトレート、メシレート、ｐ−トルエンスルホネート／トシレート、オキサレート、シトレート、マレート、マレエート、タータレート、フマレート、ホルメート、アセテートおよびこれらクラスの類似の陰イオンなどがあるがこれに制限されるわけではない薬学的に許容しうる対イオンを含む酸付加塩が含まれる。
【００１４】
上記の複素環式化合物には、それら化合物自体、更には、適用可能ならば、それらの塩およびそれらのプロドラッグが含まれる。このような塩は、例えば、化合物上の陽電荷置換基（例えば、プロトン化されている複素環式環または芳香環上のアミノ基）と薬学的に適する陰イオンとの間で、または式Ｉまたは式ＩＩの化合物の塩基性複素環式基への酸の付加によって形成することができる。適する陰イオンには、塩化物、臭化物、ヨウ化物、スルフェート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、ベンゼンスルホネート、メタンスルホネート、トリフルオロアセテート、マレイエートおよびアセテートが含まれるが、これに制限されるわけではない。同様に、化合物上の陰電荷置換基（例えば、複素環式環または芳香環上のカルボン酸基）は、薬学的に許容しうる陽イオンと塩を形成することができる。適する陽イオンの非制限例は、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびテトラメチルアンモニウムイオン、テトラブチルアンモニウムイオンなどの有機アンモニウムイオンおよび他の有機陽イオンである。
【００１５】
適するプロドラッグは、式Ｉまたは式ＩＩのＮＨ基のアシル化によって形成することができる。代表的なプロドラッグには、ＮＨがＮＣ（Ｏ）−Ｒ＊へアシル化された式Ｉまたは式ＩＩの化合物が含まれるが、この場合、Ｃ（Ｏ）Ｒ＊は、ホルミル、アセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチル等などの置換されていてよいアシル基である。他のプロドラッグには、ＮＨがスルホニル化されて、例えば、Ｎ−ＳＯ２−Ｒ’を形成した式Ｉの化合物が含まれるが、この場合、Ｒ’は、例えば、メチル、フルオロメタンスルホニルまたはトリフルオロメタンスルホニル（trifluormethanesulfonyl）でありうる。
【００１６】
本発明の化合物は、光学異性体、幾何異性体、互変異性体、およびアトロプ異性体を含めた回転異性体を含めた異性体として存在してよい。本発明は、式Ｉ〜ＩＩの化合物のこのような異性体各々およびそれらの混合物を包含する。化合物が、例えば、キラル中心を有する場合、本発明は、各々の個々の異性体、更には、等量の双方の異性体を有するラセミ混合物を含めた、いろいろな量の双方の異性体の混合物を包含する。本発明の化合物は、ビアリールであるので、それらは、ビアリール結合についての回転異性体として存在することもでき、そして各々の異性体並びにこのような異性体の混合物は、本発明の範囲内に包含される。
【００１７】
本発明の化合物およびそれら化合物を含む組成物は、望ましくない細胞増殖を特徴とする状態を処置するのに有用である。具体的には、それら化合物は、肉腫、類表皮癌、線維肉腫、子宮頸癌、胃癌、皮膚癌、白血病、リンパ腫、肺癌、非小細胞性肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、乳癌、肝癌、頭頸部癌、膵癌および他のタイプの増殖性疾患を処置するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、免疫不全ヌードマウスの皮下植込みによって異種移植片移植されたＭＫＮ４５ヒト胃腸癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗腫瘍効力を示す。
【図２】図２は、免疫不全ヌードマウスの皮下植込みによって異種移植片移植されたＨ４６０ヒト非小細胞性肺癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗腫瘍効力を示す。
【図３】図３は、免疫不全ヌードマウスの皮下植込みによって異種移植片移植されたＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗腫瘍効力を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、Real-Time Cell Electronic Sensing（Roche 製のｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステムと同じである、ＡＣＥＡ Biosciences 製のＲＴ−ＣＥＳシステム）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、Real-Time Cell Electronic Sensing（Roche 製のｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステムと同じである、ＡＣＥＡ Biosciences 製のＲＴ−ＣＥＳシステム）で決定される、異なった濃度のパクリタキセルへのＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、Real-Time Cell Electronic Sensing（Roche 製のｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステムと同じである、ＡＣＥＡ Biosciences 製のＲＴ−ＣＥＳシステム）で決定される、異なった濃度のビンクリスチンへのＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図５】図５は、Real-Time Cell Electronic Sensing（ＲＴ−ＣＥＳ）システム（ＡＣＥＡ Biosciences）と同じであるｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ５９６ヒト腺扁平上皮肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図６】図６は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ２９２ヒト肺性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図７】図７は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ４６０ヒト大細胞肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図８】図８は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ１９９３ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図９】図９は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ１８３８ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１０】図１０は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨ２３４７ヒト非小細胞性肺癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１１】図１１は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＳＷ６２０ヒト結腸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１２】図１２は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＧＴＬ１６ヒト胃癌細胞系（ＭＫＮ４５ヒト胃癌細胞系に由来した）の動的応答プロフィールを示す。
【図１３】図１３は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨＴ２９ヒト結腸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１４】図１４は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＡ１７２ヒト脳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１５】図１５は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＵ１３８ＭＧヒト脳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１６】図１６は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＵ１１８ＭＧヒト脳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１７】図１７は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＳＷ１０８８ヒト脳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１８】図１８は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨＴ１０８０ヒト結合組織癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図１９】図１９は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＢｘＰＣ３ヒト膵癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２０】図２０は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＨｅｐＧ２ヒト肝癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２１】図２１は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＳＫＯＶ３ヒト卵巣癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２２】図２２は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＭＣＦ７ヒト乳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２３】図２３は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ａ】図２４Ａは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＫＢヒト子宮頸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のパクリタキセルへのＫＢヒト子宮頸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｃ】図２４Ｃは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のビンブラスチンへのＫＢヒト子宮頸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｄ】図２４Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のコルヒチンへのＫＢヒト子宮頸癌細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｅ】図２４Ｅは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯへのＫＢ２００ヒト子宮頸癌細胞系（多剤耐性ＭＤＲ遺伝子を発現する）の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｆ】図２４Ｆは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のパクリタキセルへのＫＢ２００ヒト子宮頸癌細胞系（多剤耐性ＭＤＲ遺伝子を発現する）の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｇ】図２４Ｇは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のビンブラスチンへのＫＢ２００ヒト子宮頸癌細胞系（多剤耐性ＭＤＲ遺伝子を発現する）の動的応答プロフィールを示す。
【図２４Ｈ】図２４Ｈは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のコルヒチンへのＫＢ２００ヒト子宮頸癌細胞系（多剤耐性ＭＤＲ遺伝子を発現する）の動的応答プロフィールを示す。
【図２５】図２５は、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）で決定される、異なった濃度のＣＯＰＭＯＵＮＤ  ＯへのＮＩＨ３Ｔ３正常組織細胞系の動的応答プロフィールを示す。
【図２６Ａ】図２６Ａは、ＭＡＰの多いチューブリンを用いた in vitro の微小管集合（assembly）へのＣＯＰＭＯＵＮＤ  Ｏの作用を示す。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンの２０時間処置によるＡ５４９細胞中の微小管体制の阻害作用を示す。
【図２６Ｃ】図２６Ｃは、スピンカラム検定を用いたコルヒチン結合部位を経るチューブリンとＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの相互作用を示す。
【図２７Ａ】図２７Ａは、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよび３７ｎＭパクリタキセルの２４時間、４８時間および７２時間処置によって誘発される、Ａ５４９ヒト肺癌細胞のアポトーシスを示す。
【図２７Ｂ】図２７Ｂは、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよび３７ｎＭパクリタキセルの７２時間処置によって誘発される、Ａ５４９、Ｈ５９６およびＨ２９２ヒト肺癌細胞のアポトーシスを示す。
【図２８Ａ】図２８Ａは、有糸分裂指数で定量される、パクリタキセルおよびＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯによるＡ５４９ヒト肺癌細胞の有糸分裂阻止の程度を示す。
【図２８Ｂ】図２８Ｂは、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏで２４時間処置後のＡ５４９ヒト肺癌細胞の細胞周期分布を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
開示の明快さのために、制限としてではなく、本発明の選択された態様について次の説明を与える。便宜上、次の小区分に分けるが、それら区分は、本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。
【００２０】
Ａ．定義
それ以外に定義されない限り、本明細書中で用いられる専門用語および科学用語は全て、本発明が属する当該技術分野の業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に挙げられる特許、出願、公開出願および他の公報は全て、そのまま援用される。この部分に示されている定義が、本明細書中に援用される特許、出願、公開出願および他の公報に示されている定義に反するまたはそれ以外にそれと一致しない場合、この部分に示されている定義は、本明細書中に援用される定義に優先する。
【００２１】
本明細書中で用いられる「ある（a または an）」は、「少なくとも一つ」または「一つまたはそれを超える」を意味する。
本明細書中で用いられる「アルキル」という用語は、直鎖状、分枝状または環状の立体配置の飽和炭化水素基を意味し、具体的に考えられるアルキル基には、低級アルキル基（すなわち、１０個またはそれ未満の炭素原子を有するもの）が含まれる。代表的なアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、第三級ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル等である。本明細書中で用いられる「アルケニル」という用語は、上に定義のような且つ少なくとも一つの二重結合を有するアルキルを意味する。したがって、具体的に考えられるアルケニル基には、２〜１０個の炭素原子を有する直鎖状、分枝状または環状のアルケニル基（例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル等）が含まれる。同様に、本明細書中で用いられる「アルキニル」という用語は、上に定義のような且つ少なくとも一つの三重結合を有するアルキルまたはアルケニルを意味する。特に考えられるアルキニルには、２〜１０個の全炭素原子を有する直鎖状、分枝状または環状のアルキン（例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル等）が含まれる。
【００２２】
本明細書中で用いられる「シクロアルキル」という用語は、好ましくは、３〜８個の炭素原子を包含する環状アルカン（すなわち、炭化水素の炭素原子鎖が環を形成しているもの）を意味する。したがって、代表的なシクロアルカンには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが含まれる。シクロアルキルは、更に、一つまたは二つの二重結合を包含し、それは、「シクロアルケニル」基を形成する。シクロアルキル基は、更に、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロおよび他の一般的な基で置換されてもいる。
【００２３】
本明細書中で用いられる「アリール」または「芳香族部分」という用語は、芳香族環系を意味し、それは、１個またはそれを超える非炭素原子を更に包含してよい。したがって、考えられるアリール基には、（例えば、フェニル、ナフチル等）およびピリジルが含まれる。更に考えられるアリール基は、一つまたは二つの５員または６員アリール基または複素環式基と縮合（すなわち、第一芳香環上の２原子と共有結合）していてよく、したがって、「縮合アリール」または「縮合芳香族」と称される。
【００２４】
本明細書中で更に用いられる「複素環」、「シクロヘテロアルキル」および「複素環式部分」という用語は、本明細書中において同じ意味に用いられ、複数の原子が複数の共有結合によって環を形成しているいずれかの化合物を意味し、この場合、その環は、炭素原子以外の少なくとも一つの原子を包含する。具体的に考えられる複素環式塩基には、非炭素原子として窒素、硫黄または酸素を含む５員および６員環（例えば、イミダゾール、ピロール、トリアゾール、ジヒドロピリミジン、インドール、ピリジン、チアゾール、テトラゾール等）が含まれる。更に考えられる複素環は、一つまたは二つの環または複素環に縮合（すなわち、第一複素環式環上の２個の原子と共有結合）していてよく、したがって、本明細書中で用いられる「縮合複素環」または「縮合複素環式塩基」または「縮合複素環式部分」と称される。
【００２５】
本明細書中で用いられる「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を意味する。
上に定義の基はいずれも、一つまたはそれを超える置換基で更に置換されていてよいし、それが順次、更に置換されていてよいということは更に理解されるはずである。例えば、アルキルまたはアリール中の水素原子は、アミノ、ハロまたは他の基で置換されている。
【００２６】
本明細書中で用いられる「置換された」という用語は、Ｈ原子の別の原子または基での代用を意味する。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、しばしば、このような置換が化学的に意味を成す程度に置換されている。典型的な置換基には、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲおよびＮＯ２が含まれるが、これに制限されるわけではなく、ここにおいて、Ｒは、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールであり、そしてＲは各々、ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’およびＮＯ２で置換されていてよく、ここにおいて、Ｒ’は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基は、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールで置換されていることもありうるし、それらは各々、具体的な基について適当である置換基で置換されうる。
【００２７】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」等は、該当するヒドロカルビル（アルキル、アルケニルおよびアルキニル）基と同様に定義されるが、「ヘテロ」という用語は、１〜３個のＯ、ＳまたはＮヘテロ原子またはその組み合わせを主鎖残基中に含有する基を意味する；したがって、該当するアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基の少なくとも一つの炭素原子は、指定のヘテロ原子の一つで代用されて、ヘテロアルキル基、ヘテロアルケニル基またはヘテロアルキニル基を形成する。アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基のヘテロ形に典型的な且つ好ましいサイズは、概して、該当するヒドロカルビル基の場合と同じであり、そしてヘテロ形上に存在してよい置換基は、ヒドロカルビル基について上に記載されたものと同じである。化学的安定性の理由で、特に断らない限り、このような基は、ニトロ基またはスルホニル基の場合のようにＮまたはＳ上にオキソ基が存在する場合を除いて、２個以下の隣接するヘテロ原子を包含するということも理解される。
【００２８】
本明細書中で用いられる「アルキル」が、シクロアルキル基およびシクロアルキルアルキル基を包含する場合、「シクロアルキル」という用語は、本明細書中において、環炭素原子によって連結している炭素環式非芳香族基を記載するのに用いることができ、そして「シクロアルキルアルキル」は、アルキルリンカーによって分子に連結している炭素環式非芳香族基を記載するのに用いることができる。同様に、「ヘテロシクリル」は、少なくとも一つのヘテロ原子を環員として含有する且つＣまたはＮであってよい環原子によって分子に連結している非芳香族環状基を記載するのに用いることができる；そして「ヘテロシクリルアルキル」は、リンカーによって別の分子に連結しているこのような基を記載するのに用いることができる。シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクリル基およびヘテロシクリルアルキル基に適するサイズおよび置換基は、アルキル基について上に記載されたものと同じである。本明細書中で用いられるように、これら用語は、その環が芳香族でない限り、一つまたは二つの二重結合を含有する環も包含する。
【００２９】
本明細書中で用いられる「アシル」は、カルボニル炭素原子の二つの利用可能な原子価位置の一つに付いたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルのラジカルを含む基を包含し、そしてヘテロアシルは、カルボニル炭素以外の少なくとも一つの炭素が、Ｎ、ＯおよびＳより選択されるヘテロ原子で代用された該当する基を意味する。したがって、ヘテロアシルには、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、更には、−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールが含まれる。
【００３０】
概して、いずれのアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基またはアリール基またはアリールアルキル基も、または置換基中にあるこれら基の一つのいずれのヘテロ形も、それ自体、追加の置換基で置換されていてもよい。これら置換基の性状は、それら置換基がそれ以外に記載されていない場合、本来の置換基自体に関して挙げられたものと似ている。したがって、例えば、Ｒ７の態様がアルキルである場合、このアルキルは、Ｒ７の態様として挙げられた残りの置換基で置換されていてもよく、この場合、これは、化学的意味を成し、そしてこれは、アルキル自体に与えられたサイズ限界を害することはない；例えば、アルキルまたはアルケニルで置換されたアルキルは、これら態様についての炭素原子の上限を簡単に広げると考えられ、包含されない。しかしながら、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏ等で置換されたアルキルは、本発明の範囲内に包含されると考えられ、これら置換基の原子は、アルキル、アルケニル等の基を記載するのに用いられる記載されている数に入れられない。置換基の数が指定されない場合、このようなアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基またはアリール基は各々、その利用可能な原子価にしたがった数の置換基で置換されていよい；具体的には、これら基はいずれも、例えば、その利用可能な原子価のいずれかまたは全てにおいてフッ素原子で置換されていよい。
【００３１】
具体的に考えられる官能基には、求核基（例えば、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＣ等）、求電子基（例えば、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ（Ｘ）ＯＨ等）、極性基（例えば、−ＯＨ）、無極性基（例えば、複素環、アリール、アルキル、アルケニル、アルキニル等）、イオン性基（例えば、−ＮＨ３＋）およびハロゲン（例えば、−Ｆ、−Ｃｌ）、ＮＨＣＯＲ、ＮＨＣＯＮＨ２、ＯＣＨ２ＣＯＯＨ、ＯＣＨ２ＣＯＮＨ２、ＯＣＨ２ＣＯＮＨＲ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＨ２ＣＯＮＨ２、ＮＨＳＯ２Ｒ、ＯＣＨ２−複素環、ＰＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｈ、アミノ酸、およびそれらの化学的に妥当な組み合わせ全てが含まれる。更に、「置換された」という用語は、置換の多重度も包含し、そして多数の置換基が開示されているまたは請求の範囲に記載されている場合、置換された化合物は、開示されたまたは請求の範囲に記載された一つまたはそれを超える置換基部分で独立して置換されうる。更に、本明細書中で用いられる「一置換／二置換／三置換／四置換された」という用語は、芳香族または複素環式部分上に置換されたまたは芳香族または複素環式部分に縮合した上記の１個または２個または３個または４個の官能基を意味し、ここにおいて、このような多官能基は、芳香族または複素環式部分のオルト位またはパラ位またはメタ位のいずれかの組み合わせに置換されている。
【００３２】
更に、本明細書中に与えられている式はいずれも、このような化合物の水和物、溶媒和化合物および多形およびそれらの組み合わせを示すものである。
本明細書中で用いられる「薬学的に許容しうる」または「薬理学的に許容しうる」とは、生物学的にまたはそれ以外に望ましくないことがない物質を意味し、例えば、その物質は、有意の望ましくない生物学的作用を全く引き起こすことなくまたはそれが入っている組成物の他の成分のいずれとも有害に相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物中に包含されていてよい。薬学的に許容しうる担体または賦形剤は、好ましくは、毒性試験および製造試験の必要な基準を満たしているおよび／または米国食品医薬品局（U.S. Food and Drug administration）が作成したInactive Ingredient Guide に包含される。「薬学的に許容しうる塩」は、遊離（非塩）化合物の生物活性を少なくとも若干保持する且つ薬物または医薬品として個体に投与することができるそれら塩である。薬学的に許容しうる塩は、イオン相互作用を表し、共有結合ではない。それとして、Ｎ−オキシドは、塩とは考えられない。このような塩には、例えば、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等などの無機酸で形成される；または酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸等などの有機酸で形成される酸付加塩；（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンまたはアルミニウムイオンで代用されているか；または有機塩基で配位している場合に形成される塩が含まれる。許容しうる有機塩基には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等が含まれる。許容しうる無機塩基には、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等が含まれる。薬学的に許容しうる塩の追加の例には、Berge et al, Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 66(1):1-19, 1977 に挙げられたものが含まれる。薬学的に許容しうる塩は、製造プロセス中に現場で、または遊離酸または塩基の形の本発明の精製済み化合物を適する有機または無機の塩基または酸とそれぞれ別々に反応させ、そしてこのようにして形成された塩を引き続きの精製中に単離することによって製造することができる。薬学的に許容しうる塩の意味が、その溶媒付加形または結晶形、具体的には、溶媒和化合物または多形を包含するということは理解されるはずである。溶媒和化合物は、化学量論的量かまたは非化学量論的量の溶媒を含有し、そしてしばしば、結晶化プロセス中に形成される。水和物は、溶媒が水である場合に形成され、またはアルコラートは、溶媒がアルコールである場合に形成される。多形には、ある化合物の同じ元素組成を有する異なった結晶充填配置が含まれる。多形は、通常、異なったＸ線回折図形、赤外スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形状、光学的および電気的性質、安定性および溶解性を有する。再結晶溶媒、結晶化速度および貯蔵温度などのいろいろな因子は、単結晶形を優勢にさせることがありうる。
【００３３】
本明細書中で用いられる「賦形剤」という用語は、本発明の化合物を活性成分として含有する錠剤などの薬物または医薬品の製造に用いることができる反応不活性または不活性（inert or inactive）物質を意味する。賦形剤という用語には、結合剤、崩壊剤、コーティング、圧縮／封入助剤、クリームまたはローション剤、滑沢剤、非経口投与用溶液、チュアブル錠用材料、甘味剤または着香剤、懸濁化／ゲル化剤、または湿式造粒剤として用いられるいずれの物質も制限されることなく含めたいろいろな物質を包含することができる。結合剤には、例えば、カルボマー、ポビドン、キサンタンガム等が含まれ；コーティングには、例えば、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゲランガム（gellan gum）、マルトデキストリン、腸溶コーティング等が含まれ；圧縮／封入助剤には、例えば、炭酸カルシウム、デキストロース、フルクトースｄｃ（ｄｃ＝「直接圧縮性（directly compressible）」、ハチミツｄｃ、ラクトース（無水物または一水和物；場合により、アスパルテーム、セルロースまたは微結晶性セルロースとの組み合わせで）、デンプンｄｃ、スクロース等が含まれ；崩壊剤には、例えば、クロスカルメロースナトリウム、ゲランガム、ナトリウムデンプングリコラート等が含まれ；クリーム剤またはローション剤には、例えば、マルトデキストリン、カラゲナン等が含まれ；滑沢剤には、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム等が含まれ；チュアブル錠用材料には、例えば、デキストロース、フルクトースｄｃ、ラクトース（一水和物、場合により、アスパルテームまたはセルロースとの組み合わせで）等が含まれ；懸濁化／ゲル化剤には、例えば、カラゲナン、ナトリウムデンプングリコラート、キサンタンガム等が含まれ；甘味剤には、例えば、アスパルテーム、デキストロース、フルクトースｄｃ、ソルビトール、スクロースｄｃ等が含まれ；そして湿式造粒剤には、例えば、炭酸カルシウム、マルトデキストリン、微結晶性セルロース等が含まれる。
【００３４】
本明細書中で用いられるように、そして特に断らない限り、「対象」という用語は、本明細書中において、霊長類（例えば、ヒト）、雌牛、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス等が含まれるがこれに制限されるわけではない哺乳動物などの動物を包含すると定義される。特定の態様において、対象はヒトである。
【００３５】
Ｂ．複素環式化合物およびそれらの医薬組成物
Ｂ．１．代表する化合物：
本発明のいくつかの代表する化合物を、表１に挙げる。
【００３６】
【表１Ａ】
2013520439.tif 000004
【００３７】
【表１Ｂ】
2013520439.tif 000005
【００３８】
Ｂ．２．代表的な合成方法
代表的な化合物を、スキームＩおよびスキームＩＩに示される経路によって合成した。当該技術分野により知られている方法は、当業者が用い且つ修飾して、利用可能な出発物質から本発明の化合物を製造することができる。いくつか有用な方法は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２００９／０２３４０２号に開示されている。本発明の範囲内の化合物を製造するのに有用でありうる追加の合成方法は、例えば、Hayakawa et al., Biorg. Med. Chem. Vol. 15, 403-12 (2007); Ermolat’ev, et al., J. Comb. Chem. Vol. 8, 659-63 (2006); Carballares, et al., Tetrahedron Lett. vol. 48, 2041-45 (2007); および Rupert, et al., Biorg. Med. Chem. Lett., vol. 13, 347-50 (2003) に開示されている。
【００３９】
下のスキームは、本明細書中に与えられている化合物の製造のための代表的な合成方法を与える。当業者は、類似の方法を用いて、本明細書中に与えられている化合物を製造することができるということを理解するであろう。言い換えると、当業者は、試薬、保護基、反応条件および反応配列順序への適する調整を用いて、所望の態様を製造することができるということを理解するであろう。それら反応は、製造される物質の量に適合するように規模を上向きまたは下向きにすることができる。
【００４０】
本明細書中に与えられている化合物を製造するための具体的なスキームを、下に示す。詳細な反応条件を、いろいろな具体的実施例について本明細書中の下に与える。当業者は、次のスキームを、適当な試薬、保護基、条件、出発物質または反応配列順序で修飾して、本明細書中に与えられている他の態様の製造に適合させることができるということを理解するであろう。
【００４１】
本明細書中に開示の参考文献は全て、そのまま援用される。
化合物名は、ChemDraw Ultra １０．０で得た；そして実施例中で用いられる中間体および試薬の名称も、ChemDraw Ultra １０．０で得た。
【００４２】
２ａ．式Ｉの化合物の一般的な合成スキーム／方法：
スキームＩ
【００４３】
【化３】
2013520439.tif 000006
【００４４】
チアゾール−２−アミン１を、ＥｔＯＨ中の３−クロロペンタン−２，４−ジオン２で、還流温度において処理して、環化生成物３を生じ、それを、ＨＯＡｃ中の臭素で更に臭素化して、α−ブロモケトン４を生じた。置換されたアニリン５を、アセトン中のイソチオシアン酸ベンゾイル６と反応させて、Ｎ−（フェニルカルバモチオイル）ベンズアミド７を生じ、それを、８０℃において５％水性ＮａＯＨで加水分解して、置換フェニルチオ尿素８を生じた。次に、二つの不可欠な中間体７および８を、ＥｔＯＨ中で加熱して、チアゾール９（式Ｉ）をＨＢｒ塩として高収率で形成させたが、それは、in vitro および in vivo 研究用に他の薬学的に許容しうる塩（例えば、ＨＣｌ塩）または遊離塩基形へ変換しうると考えられる。
【００４５】
本発明の化合物の製造に必要とされる式５の置換アニリンは、商業的に入手可能であるまたは既知の方法によって合成することができる。
２ｂ．式ＩＩの化合物の一般的な合成スキーム／方法：
スキームＩＩ
【００４６】
【化４】
2013520439.tif 000007
【００４７】
ピリミジン−２−アミン１０を、ＥｔＯＨ中の３−クロロペンタン−２，４−ジオン２で、還流温度において処理して、環化生成物１１を生じ、それを、ＨＯＡｃ中の臭素で更に臭素化して、α−ブロモケトン１２を生じた。置換アニリン５を、アセトン中のイソチオシアン酸ベンゾイル６と反応させて、Ｎ−（フェニルカルバモチオイル）ベンズアミド７を生じ、それを、８０℃において５％水性ＮａＯＨで加水分解して、置換フェニルチオ尿素８を生じた。次に、二つの不可欠な中間体１２および８を、ＥｔＯＨ中で加熱して、チアゾール１３（式ＩＩ）をＨＢｒ塩として高収率で形成させたが、それは、in vitro および in vivo 研究用に他の薬学的に許容しうる塩（例えば、ＨＣｌ塩）または遊離塩基形へ変換しうると考えられる。
【００４８】
本発明の化合物の製造に必要とされる式５の置換アニリンは、商業的に入手可能であるまたは既知の方法によって合成することができる。
【実施例】
【００４９】
Ｂ．３．実施例：
以下の実施例は、本発明を詳しく説明するために与えるが、制限するためではない。
スキームＩおよびスキームＩＩに記載の合成方法／スキームにしたがって、表１の化合物を合成した。いくつか代表的な合成を、本明細書中に与える。
【００５０】
実施例Ｂ（１）：２−（４−エトキシフェニルアミノ）−４−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）チアゾール一臭化水素酸塩（ａ）の合成：
化合物ａの合成を、スキームＩＩＩに示す：
スキームＩＩＩ
【００５１】
【化５】
2013520439.tif 000008
【００５２】
１−（２−メチルイミダゾール［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エタノン（４）の合成。
３−クロロ−２，５−ペンタンジオン（２）（１０６ｍＬ，１１９ｇ，８８７ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）を、６５０ｍＬの無水エタノール中に溶解させた。２−アミノピリミジン（１）（７１．５ｇｘ９７％＝６９．３６ｇ，７２９ｍｍｏｌ）を、上の撹拌溶液に加えた。得られた混合物を、１００〜１０５℃の油浴温度で４０時間還流した。黒色反応混合物を冷却し、減圧下で濃縮した。残留物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（約５００ｍＬ）で少量ずつ処理し、フラスコを波立たさせて十分に混合した。その混合物を、ジクロロメタン（ｘ６）で抽出した。抽出物を、重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した。有機相を乾燥させ、濃縮した。残留物を、シリカゲルカラム（７ｘ３０ｃｍ）上のフラッシュクロマトグラフィーにより、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（３：１、２：１、１：１、１：２および０：１）、そして次にジクロロメタン−メタノール（３０：１、２０：１、１０：１および５：１）を用いた勾配溶離で精製した。生成物画分を集め（ＴＬＣ、Ｒｆ０．３６、１００％酢酸エチル）、濃縮して、淡黒色固体を与えた。生成物が入っている他の画分を集め、再度同様に再精製した。２７．８４ｇ（２１．８％）の最終生成物を得た。生成物の一部分を、少量のアセトニトリルから再結晶させて、赤〜淡褐色結晶４、ｍ．ｐ．２５５．６〜２５６．６℃を生じた。
【００５３】
1H NMR (CDCl3) δ 2.65 (s, 3H, 3-COCH3), 2.86 (s, 3H, 2-CH3), 7.04-7.12 (m, 1H, 6-H), 7.70-7.74 (m, 1H), 9.96-10.00 (m, 1H)。
２−ブロモ−１−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エタノン一臭化水素酸塩（５）の合成（臭素化）。
【００５４】
１−（２−メチルイミダゾール［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エタノン（４）（１．７５ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬの氷酢酸中に、フラスコを静かに暖めることによって溶解させた後、それを室温に冷却した。４ｍＬの酢酸中の臭素（０．６ｍＬ，１．８５ｇ，１１．５ｍｍｏｌ，１．１５ｅｑ）の溶液を、上の撹拌反応混合物に室温で３０分間を超えて徐々に加えた。［注意：臭素は、極めて腐食性である。臭素の取り扱いは、十分に換気されたヒュームフード中で極めて注意深く行う必要がある。長手袋または二重手袋を操作に必要とする。皮膚上へ跳ねかけるまたは蒸気を吸うのを絶対に避けられたい］。若干の固体が、添加を終える前に析出した。反応混合物を、１００〜１１０℃の油浴温度で３時間撹拌後、室温で一晩撹拌した。固体を濾過し、そしてアセトンで数回洗浄し、アセトン洗浄の途中に時々、無水エタノールで洗浄した。淡褐色固体を、少量のエタノールを含有するアセトンで吸収させ、その混合物を、室温で５時間を超えて撹拌した。固体を濾過し、その固体を上述のように洗浄した（もう一回吸収させ、より大きい規模用に洗浄サイクルを提示する）。真空下で乾燥後、２．４３ｇ（７２．５％）の淡褐色粉末固体生成物５を、一臭化水素酸塩として得た。２５０℃より上で分解。
【００５５】
ＴＬＣ、Ｒｆ０．４２（１００％酢酸エチル）。
1HNMR (DMSO-d6) δ 2.82 (s, 3H, 2-CH3), 4.83 (s, 2H, CH2Br), 7.40-7.50 (m, 1H), 8.80-8.90 (m, 1H), 9.82-9.90 (m, 1H)。
【００５６】
１−ベンゾイル−３−［４−（エトキシフェニル）］チオ尿素（９）の合成。
［参考文献：ARKIVOC 2003, 434-442; Bioorg. Med. Chem. 2000, 2663］。塩化ベンゾイル（６）（１４．０ｍＬ，１６．９５ｇ，１２０ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのアセトン中のチオシアン酸アンモニウム（１０．２６  ｇ，１３５ｍｍｏｌ，１．１２５ｅｑ）の撹拌溶液に室温で滴加した。若干の白色固体を析出した。反応混合物を、加熱して５分間還流した（約６５〜７０℃の油温度）。このようにして得られたイソチオシアン酸ベンゾイル（７）を、精製することなく、次の工程に直接的に用いた。２５ｍＬのアセトン中の４−エトキシアニリン（８）（１７．０ｍＬ，１８．１ｇ，１３２ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ）の溶液を、油浴（６５〜７０℃）中に静置している上の撹拌反応混合物に徐々に加えた。添加は、発熱反応を考慮して、極めて徐々に約１時間行う必要がある。多量の白色固体が析出した。反応混合物を、手動で波立たせ、そして更に、５分間還流した。冷却した反応混合物を、氷水中に注いだ。固体を濾過し、水で３回洗浄した。その固体を、エタノール（約１．６Ｌ）から再結晶させて、所望の生成物９を淡黄色の長針状結晶、３６ｇ収量（９９％）、ｍ．ｐ．１５１．０〜１５３．５℃として与えた。
【００５７】
（ｐ−エトキシフェニル）チオ尿素（１０）の合成。
水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ，６０ｍＬ，６０ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）を、３５０ｍＬのエタノール中の１−ベンゾイル−３−［４−（エトキシフェニル）］チオ尿素（９）（１６．５ｇ，５５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に加えた。反応混合物を、１時間還流し、冷却し、濃縮した。その白色固体を、水（約２００ｍＬ）で処理した。固体を濾過し、水で洗浄した。粗製結晶性生成物を、エタノールから再結晶させ、濾過し、真空下で乾燥させて、７．６６ｇ（７１．０％）の所望の生成物１０、ｍ．ｐ．１７６．５〜１７８．５℃を与えた。
【００５８】
ＴＬＣ、Ｒｆ０．４５（ｎ−ヘキサン−酢酸：１：１）。
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.31 (t, 3H, J = 6.8Hz), 4.00 (q, 2H, J = 6.8Hz), 6.80-6.90 (m, 2H), 7.15-7.25 (m, 2H), 9.50 (s, 1H, NH)。
【００５９】
２−（４−エトキシフェニルアミノ）−４−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）チアゾール一臭化水素酸塩（ａ）の合成（チアゾール環への環化）。
１４０ｍＬの無水エタノール中の２−ブロモ−１−（２−メチルイミダゾ［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エタノン一臭化水素酸塩（５）（２．４３ｇ，７．２５ｍｍｏｌ）および（ｐ−エトキシフェニル）チオ尿素（１０）（１．４０ｇ，７．１ｍｍｏｌ）の混合物を、撹拌しながら１５時間還流した（約１０５℃の油浴温度）。次に、それを室温で６時間または一晩撹拌した。固体を濾過し、アセトンで洗浄した。粗製軟質結晶を、アセトン−エタノール（３：１）で吸収させ、室温で６時間を超えてまたは一晩撹拌した。固体を濾過し、上のように洗浄した。粗生成物を、アセトン−エタノール（３：１）で吸収させ、室温で６時間を超えて撹拌した。粗生成物を、濾過し、洗浄し、メタノールから再結晶させた。そのメタノール溶液を、熱い内に濾過して、黒色微粉を除去後、加熱して溶液とした。黄色結晶を濾過し、洗浄した。それを、メタノールから更に２回再結晶させ、真空下で乾燥させて、所望の生成物１１を長い軟質黄色針状結晶、１．５５ｇ収量（５０．５％）として与え、２４０℃より上で分解した。
【００６０】
ＴＬＣ  Ｒｆ０．３２（ジクロロメタン−メタノール：２０：１）；Ｒｆ０．４６（ジクロロメタン−メタノール含有：２０：１、１％水酸化アンモニウム水溶液を含有）；Ｒｆ０．３０（１００％酢酸エチルＸ２）。
【００６１】
ＨＰＬＣ純度：９９％。
1HNMR (DMSO-d6) δ 1.32 (t, 3H, J = 6.8Hz), 2.67 (s, 3H), 4.00 (q, 2H, J = 6.8Hz), 6.90-6.95 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.49-7.52 (m, 2H), 7.61-7.67 (m, 1H), 8.94-8.97 (m, 1H), 9.57 (d, 1H, J = 6.8Hz), 10.28 (s, 1H, NH)。
【００６２】
ＥＳＩ−ＭＳ，ｍ／ｚ３５２（Ｍ＋１）＋。
実施例Ｂ（２）：２−（４−ブロモフェニル）アミノ−４−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）−チアゾール一臭化水素酸塩（ｕ）の合成。
【００６３】
化合物ｕの合成を、スキームＩＶに示す。
スキームＩＶ
【００６４】
【化６】
2013520439.tif 000009
【００６５】
（ｐ−ブロモフェニル）チオ尿素（１４）の合成：ｐ−ブロモアニリンをｐ−エトキシルアニリンの代わりに用いる、化合物１０の合成と類似の方法。
１−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）エタノン（１７）の合成。２−アミノチアゾールを、無水エタノールから再結晶させ、濾過し、そして乾燥後に使用した。１８０ｍＬの無水エタノール中の２−アミノチアゾール（１６）（２０．９ｇ，２０２．４ｍｍｏＬ）および３−クロロ−２，５−ペンタンジオン（２）（３３．７ｇ，９７％，２４２．９ｍｍｏｌ，１．２ｅｑ）の溶液を、油浴中で７２時間還流した。黒色反応混合物を、冷却し、減圧下で濃縮した。残留物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で少量ずつ処理後、ジクロロメタンで抽出した。有機相を乾燥させ、濃縮した。残留物を、シリカゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン−メタノール（８０：１）を用いて精製した。生成物画分を集め（ＴＬＣ、Ｒｆ０．６０中性形；Ｒｆ＝０．５塩形、４０：１のジクロロメタン−メタノール）、濃縮して、白色固体生成物１７を、１１．７％収率、１．６ｇの中性形および３．２ｇの塩形で与えた。
【００６６】
1H NMR (CDCl3) δ 2.55 (s, 3H, 5-COCH3), 2.70 (s, 3H, 6-CH3), 6.78 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 8.39 (d, 1H, J = 4.8 Hz)。
２−ブロモ−１−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）エタノン臭化水素酸塩（１８）の合成。１−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）エタノン（１７）（０．５４ｇ，３．０ｍｍｏｌ）を、７ｍＬの氷酢酸中に溶解させた。３ｍＬの氷酢酸中の臭素（０．１８ｍＬ，０．５６ｇ，３．５ｍｍｏｌ）の溶液を、上の撹拌溶液に３０分間で徐々に加えた。若干の黄色固体が現れた。その混合物を、加熱して撹拌しながら３時間還流後、室温で一晩撹拌した。固体を濾過し、アセトンで３回洗浄し、そして各々の洗浄に３〜５時間の撹拌を必要とした。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、所望の生成物１８である０．７３ｇ（７１．６％）の白色固体を与えた。
【００６７】
２−（４−ブロモフェニル）アミノ−４−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）−チアゾール一臭化水素酸塩（ｕ）の合成。１０ｍＬの無水エタノール中の２−ブロモ−１−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）エタノン臭化水素酸塩（１８）（０．７３ｇ，２．０ｍｍｏｌ）および（ｐ−ブロモフェニル）チオ尿素（１４）（０．５０ｇ，２．０ｍｍｏｌ）の混合物を、撹拌しながら２０時間還流後、室温に冷却した。固体を濾過した。その粗製白色固体生成物を、メタノールから再結晶させた。メタノール溶液を、まだ熱い内に濾過して、可能性のある微粉を除去後、加熱して溶液とした。それを、メタノールから更に２回再結晶させ、真空下で乾燥させて、所望の生成物ｕを、白色固体、０．３４ｇ収量（３６％）、ＨＰＬＣ純度９８．４９％、ｍｐ＞２５０℃として与えた。
【００６８】
1HNMR (CD3OD) δ 2.68 (s, 3H), 7.45 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.18-7.47 (m, 2H), 7.54-7.66 (m, 2H), 7.66 (d, 1H, J = 4.4Hz), 8.94 (d, 1H, J = 4.4Hz)。
実施例Ｂ（３）：２−（４−エチルフェニル）アミノ−４−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）−チアゾール一臭化水素酸塩（ｏ）の合成。
【００６９】
化合物（ｏ）の合成は、スキームＩＶに示している。
（ｐ−ブロモフェニル）チオ尿素（２１）の合成：ｐ−エチルアニリンをｐ−エトキシルアニリンの代わりに用いる、化合物１０の合成と類似の方法。
【００７０】
２−（４−エチルフェニル）アミノ−４−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）−チアゾール一臭化水素酸塩（ｏ）の合成。４０ｍＬの無水エタノール中の２−ブロモ−１−（６−メチルイミダゾ［２，１−ｂ］チアゾール−５−イル）エタノン臭化水素酸塩（１８）（２０ｇ，９１％，５３．５ｍｍｏｌ）および（ｐ−エチルフェニル）チオ尿素（１０）（１０．１ｇ，５６．２ｍｍｏｌ）の混合物を、撹拌しながら３時間還流後、室温に冷却した。固体を濾過し、エタノールで洗浄した。粗製白色固体生成物を、メタノールから再結晶させた。メタノール溶液を、まだ熱い内に濾過して、可能性のある微粉を除去後、加熱して溶液とした。それを、メタノールからもう１回再結晶させ、真空下で乾燥させて、所望の生成物（ｏ）を白色固体として与えた。このＨＢｒ塩を、遊離塩基へ変換後、ＨＣｌ塩へ変換し、それを、５０％エタノール／水から再結晶させて、オフホワイト結晶生成物（１４．８ｇ，７３．４％）を生じた。
【００７１】
ＨＰＬＣ純度９９％、ｍｐ＝１８１〜１８３℃。
1HNMR (CD3OD) δ 1.11 (t, 3H, J = 7.6 Hz), 2.52 (s, 3H), 2.58 (m, 2H), 7.11 (d, 2H, J = 8Hz), 7.22 (s, 1H), 7.52 (d, 2H, J = 8.4Hz), 7.75 (d, 1H, J = 4.4Hz), 8.42 (d, 1H, J = 4.4Hz)。
【００７２】
ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚ３４１．５（Ｍ＋１）＋。
式Ｉまたは式ＩＩの化合物（ＨＢｒ塩）からの遊離塩基化合物の製造。
ＨＢｒ塩を、メタノール中に懸濁させ、過剰量の重炭酸ナトリウムを、懸濁した化合物塩が完全に溶解するまで激しく撹拌しながら加えた。過剰量の無機塩を濾去した。溶液を濃縮し、そして残留物を、メタノールまたはエタノールまたはエタノール／水またはいずれか他の一つまたは複数の有機溶媒または溶媒混合物から再結晶させて、結晶質を遊離塩基化合物として与えた。
【００７３】
異なった塩の製造。得られた遊離塩基化合物および１．１当量の選択された酸。その溶液を濃縮し、そして残留物を、メタノールまたはエタノールまたはエタノール／水またはいずれか他の一つまたは複数の有機溶媒または溶媒混合物から再結晶させて、上記のような選択された陰イオンを含む所望の塩の結晶質／多形物質を与えた。
【００７４】
記載の化合物の遊離塩基または塩の可能性のある結晶形／多形は全て、本発明に包含される。
Ｂ．３．追加の活性剤
本明細書中の化合物は、本発明の方法および組成物において、他の薬理学的に活性な化合物（「追加の活性剤」）と組み合わせることができる。特定の組み合わせは、特定のタイプの癌、および望ましくない血管新生に関連したまたはそれを特徴とする特定の疾患および状態の処置において共力的に働くと考えられる。免疫調節性化合物も、特定の二次活性剤に関連した副作用を軽減するように働くことができるし、そしていくつかの二次活性剤は、免疫調節性化合物に関連した副作用を軽減するのに用いることができる。
【００７５】
一つまたはそれを超える活性成分または活性剤は、本発明の方法および組成物において一緒に用いることができる。追加の活性剤は、高分子（例えば、タンパク質）または低分子（例えば、合成の無機分子または有機金属分子または有機分子）でありうる。
【００７６】
高分子活性剤の例には、造血増殖因子、サイトカイン、および単クローン性および多クローン性抗体が含まれるが、これに制限されるわけではない。典型的な高分子活性剤は、天然に存在するまたは人工的に作られたタンパク質などの生体分子である。本発明において特に有用であるタンパク質には、造血前駆細胞および免疫学的に活性な生産性細胞（poietic cell）の in vitro または in vivo の生存および／または増殖を刺激するタンパク質が含まれる。その他は、in vitro または in vivo の細胞における拘束された（committed）赤血球前駆体の分裂および分化を刺激する。具体的なタンパク質には、ＩＬ−２（リコンビナントＩＬ−ＩＩ（「ｒＩＬ２」）およびカナリア痘ＩＬ−２を含めた）、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８などのインターロイキン；インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−ｎ１、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンβ−Ｉａおよびインターフェロンγ−Ｉｂなどのインターフェロン；ＧＭ−ＣＦおよびＧＭ−ＣＳＦ；およびＥＰＯが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００７７】
本発明の方法および組成物において用いることができる具体的なタンパク質には、米国において Neupogen．ＲＴＭ．（Amgen, Thousand Oaks, Calif.）という商品名で販売されているフィルグラスティム；米国において Leukine．ＲＴＭ．（Immunex, Seattle, Wash.）という商品名で販売されているサルグラモスチン；および米国において Epogen．ＲＴＭ．（Amgen, Thousand Oaks, Calif.）という商品名で販売されているリコンビナントＥＰＯが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００７８】
ＧＭ−ＣＳＦのリコンビナントおよび突然変異形は、米国特許第５，３９１，４８５号；同第５，３９３，８７０号；および同第５，２２９，４９６号に記載のように製造することができる；それらは全て、本明細書中に援用される。Ｇ−ＣＳＦのリコンビナントおよび突然変異形は、米国特許第４，８１０，６４３号；同第４，９９９，２９１号；同第５，５２８，８２３号；および同第５，５８０，７５５号に記載のように製造することができる；それらは全て、本明細書中に援用される。
【００７９】
本発明は、自然のままの、天然に存在するおよびリコンビナントのタンパク質の使用を包含する。本発明は、更に、天然に存在するタンパク質の突然変異体および誘導体（例えば、修飾された形）であって、それらが基づいているタンパク質の少なくともいくつかの薬理活性を in vivo で示すものを包含する。突然変異体の例には、それらタンパク質の天然に存在する形の該当する残基とは異なる一つまたはそれを超えるアミノ残基を有するタンパク質が含まれるが、これに制限されるわけではない。「突然変異体」という用語によって更に包含されるのは、それら天然に存在する形（例えば、非グリコシル化形）に普通に存在する炭水化物部分を欠いているタンパク質が含まれる。誘導体の例には、ペグ化誘導体；およびＩｇＧ１またはＩｇＧ３をタンパク質または目的のタンパク質の活性部分に融合することによって形成されるタンパク質などの融合タンパク質が含まれるが、これに制限されるわけではない。例えば、Penichet, M. L. and Morrison, S. L., J. Immunol. Methods 248:91-101 (2001) を参照されたい。
【００８０】
本発明の化合物との組み合わせで用いることができる抗体には、単クローン性抗体および多クローン性抗体が含まれる。抗体の例には、トラスツズマブ（Herceptin．ＲＴＭ．）、リツキシマブ（rituximab）（Rituxan．ＲＴＭ．）、ベバシズマブ（bevacizumab）（Avastin．ＴＭ．）、ペルツズマブ（pertuzumab）（Omnitarg．ＴＭ．）、トシツモマブ（tositumomab）（Bexxar．ＲＴＭ．）、エドレコロマブ（edrecolomab）（Panorex．ＲＴＭ．）およびＧ２５０が含まれるが、これに制限されるわけではない。本発明の化合物は、更に、抗ＴＮＦ−α抗体と一緒にすることができるまたはそれと組み合わせて用いることができる。
【００８１】
高分子活性剤は、抗癌ワクチンの形で投与することができる。例えば、ＩＬ−２、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカインを分泌するまたは分泌を引き起こすワクチンは、本発明の方法、医薬組成物およびキットに用いることができる。例えば、Emens, L. A., et al., Curr. Opinion Mol. Ther. 3(1):77-84 (2001) を参照されたい。
【００８２】
本発明の一つの態様において、高分子活性剤は、免疫調節性化合物の投与に関連した副作用を減少させる、排除するまたは予防する。具体的な免疫調節性化合物および処置されている（begin treated）疾患または障害に依存して、副作用には、嗜眠状態および傾眠、めまい感および起立性低血圧、好中球減少症、好中球減少症に起因する感染、増加したＨＩＶウイルス量、徐脈、スティーブンズ−ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症、および発作（例えば、大発作痙攣）が含まれうるが、これに制限されるわけではない。具体的な副作用は、好中球減少症である。
【００８３】
低分子である追加の活性剤も、免疫調節性化合物の投与に関連した副作用を軽減するのに用いることができる。低分子活性剤の例には、抗癌剤、抗生物質、免疫抑制剤およびステロイドが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００８４】
抗癌剤の例には、アシビシン（acivicin）；アクラルビシン；アコダゾール（acodazole）塩酸塩；アクロニン（acronine）；アドゼレシン（adozelesin）；アルデスロイキン（aldesleukin）；アルトレタミン（altretamine）；アンボマイシン（ambomycin）；酢酸アメタントロン（ametantrone）；アムサクリン；アナストロゾール（anastrozole）；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン（asperlin）；アザシチジン；アゼテパ（azetepa）；アゾトマイシン（azotomycin）；バチマスタト（batimastat）；ベンゾデパ（benzodepa）；ビカルタミド（bicalutamide）；ビスアントレン（bisantrene）塩酸塩；ビスナフィド（bisnafide）ジメシレート；ビゼレシン（bizelesin）；硫酸ブレオマイシン；ブレキナル（brequinar）ナトリウム；ブロピリミン（bropirimine）；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン（calusterone）；カラセミド（caracemide）；カルベチマー（carbetimer）；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン（carubicin）塩酸塩；カルゼレシン（carzelesin）；セデフィンゴール（cedefingol）；セレコキシブ（celecoxib）（ＣＯＸ−２阻害剤）；クロラムブシル（chlorambucil）；シロレマイシン（cirolemycin）；シスプラチン（cisplatin）；クラドリビン（cladribine）；クリスナトール（crisnatol）メシレート；シクロホスファミド；シタラビン（cytarabine）；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン（decitabine）；デキソルマプラチン（dexormaplatin）；デザグアニン（dezaguanine）；デザグアニンメシレート；ジアジクオン（diaziquone）；ドセタキセル（docetaxel）；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン（droloxifene）；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；ドゥアゾマイシン（duazomycin）；エダトレキサート（edatrexate）；エフロルニチン（eflornithine）塩酸塩；エルサミトルシン（elsamitrucin）；エンロプラチン（enloplatin）；エンプロメート（enpromate）；エピプロピジン（epipropidine）；エピルビシン（epirubicin）塩酸塩；エルブロゾール（erbulozole）；エソルビシン（esorubicin）塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸ナトリウム；エタニダゾール（etanidazole）；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン（etoprine）；ファドロゾール（fadrozole）塩酸塩；ファザラビン（fazarabine）；フェンレチニド（fenretinide）；フロクスウリジン（floxuridine）；リン酸フルダラビン（fludarabine）；フルオロウラシル；フルオロシタビン（fluorocitabine）；ホスキドン（fosquidone）；ホストリエシン（fostriecin）ナトリウム；ジェムシタビン（gemcitabine）；ジェムシタビン塩酸塩；ヒドロキシ尿素；イダルビシン（idarubicin）塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン（ilmofosine）；イプロプラチン（iproplatin）；イリノテカン（irinotecan）；イリノテカン塩酸塩；酢酸ランレオチド（lanreotide）；レトロゾール（letrozole）；酢酸ロイプロリド；リアロゾール（liarozole）塩酸塩；ロメトレキソール（lometrexol）ナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン（losoxantrone）塩酸塩；マソプロコール（masoprocol）；メイタンシン；メクロレタミン（mechlorethamine）塩酸塩；酢酸メゲストロール（megestrol）；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル（menogaril）；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン���metoprine）；メツレデパ（meturedepa）；ミチンドミド（mitindomide）；ミトカルシン（mitocarcin）；ミトクロミン（mitocromin）；ミトジリン（mitogillin）；ミトマルシン（mitomalcin）；マイトマイシン；ミトスペル（mitosper）；ミトタン（mitotane）；ミトザントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール（nocodazole）；ノガラマイシン（nogalamycin）；オルマプラチン（ormaplatin）；オキシスラン（oxisuran）；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ（pegaspargase）；ペリオマイシン（peliomycin）；ペンタムスチン（pentamustine）；硫酸ペプロマイシン（peplomycin）；ペルホスファミド（perfosfamide）；ピポブロマン；ピポスルファン（piposulfan）；ピロキサントロン（piroxantrone）塩酸塩；プリカマイシン（plicamycin）；プロメスタン（plomestane）；ポルフィマー（porfimer）ナトリウム；ポルフィロマイシン（porfiromycin）；プレドニムスチン；プロカルバジン塩酸塩；ピュロマイシン；ピュロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン（riboprine）；サフィンゴール（safingol）；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン（simtrazene）；スパルホセート（sparfosate）ナトリウム；スパルソマイシン（sparsomycin）；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン（spiromustine）；スピロプラチン（spiroplatin）；ストレプトニグリン（streptonigrin）；ストレプトゾシン；スロフェヌル（sulofenur）；タリソマイシン（talisomycin）；テコガラン（tecogalan）ナトリウム；タキソテール（taxotere）；テガフル；テロキサントロン（teloxantrone）塩酸塩；テモポルフィン（temoporfin）；テニポシド（teniposide）；テロキシロン（teroxirone）；テストラクトン（testolactone）；チアミプリン（thiamiprine）；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン（tiazofurin）；チラパザミン（tirapazamine）；クエン酸トレミフェン（toremifene）；酢酸トレストロン（trestolone）；リン酸トリシリビン（triciribine）；トリメトレキサート（trimetrexate）；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン（triptorelin）；ツブロゾール（tubulozole）塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ（uredepa）；バプレオチド（vapreotide）；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン（vinepidine）；硫酸ビングリシネート（vinglycinate）；硫酸ビンロイロシン（vinleurosine）；酒石酸ビノレルビン（vinorelbine）；硫酸ビンロシジン（vinrosidine）；硫酸ビンゾリジン（vinzolidine）；ボロゾール（vorozole）；ゼニプラチン（zeniplatin）；ジノスタチン（zinostatin）；およびゾルビシン塩酸塩が含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００８５】
他の抗癌薬には、２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン（abiraterone）；アクラルビシン；アシルフルベン（acylfulvene）；アデシペノール（adecypenol）；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン（ambamustine）；アミドクス（amidox）；アミホスチン（amifostine）；アミノレブリン酸；アムルビシン（amrubicin）；アムサクリン；アナグレリド（anagrelide）；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリクス（antarelix）；抗背方化形態形成プロテイン−１（anti-dorsalizing morphogenetic protein-1）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシスレギュレーター；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン（asulacrine）；アタメスタン（atamestane）；アトリムスチン（atrimustine）；アクシナスタチン１（axinastatin 1）；アクシナスタチン２；アクシナスタチン３；アザステロン（azasetron）；アザトキシン（azatoxin）；アザチロシン（azatyrosine）；バカチンＩＩＩ（baccatin III）誘導体；バラノール（balanol）；バチマスタト；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン（benzochlorins）；ベンゾイルスタウロスポリン（benzoylstaurosporine）；βラクタム誘導体；β−アレチン（alethine）；βクラマイシンＢ（clamycin B）；ベツリン酸（betulinic acid）；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビスアントレン；ビスアジリジニルスペルミン（bisaziridinylspermine）；ビスナフィド；ビストラテン（bistratene）Ａ；ビゼレシン；ブレフレート（breflate）；ブロピリミン；ブドチタン（budotitane）；ブチオニンスルホキシイミン（buthionine sulfoximine）；カルシポトリオール（calcipotriol）；カルホスチンＣ（calphostin C）；カンプトテシン誘導体；カペシタビン；カルボキサミドアミノトリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；CaRest Ｍ３；ＣＡＲＮ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン（castanospermine）；セクロピンＢ；セトロレリクス（cetrorelix）；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト（cicaprost）；cis−ポルフィリン；クラドリビン（cladribine）；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ（collismycin A）；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４（combretastatin A4）；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン（conagenin）；クラムベシジン８１６（crambescidin 816）；クリスナトール；クリプトフィシン８（cryptophycin 8）；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ（curacin A）；シクロペンタアントラキノン（cyclopentanthraquinones）；シクロプラタム（cycloplatam）；シペマイシン（cypemycin）；シタラビンオクホスフェート（cytarabine ocfosfate）；細胞溶解性因子；シトスタチン（cytostatin）；ダクリキシマブ（dacliximab）；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ（dehydrodidemnin B）；デスロレリン（deslorelin）；デキサメタゾン；デキシホスファミド（dexifosfamide）；デクスラゾキサン（dexrazoxane）；デクスベラパミル（dexverapamil）；ジアジクオ���；ジデムニンＢ（didemnin B）；ジドクス（didox）；ジエチルノルスペルミン（diethylnorspermine）；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール、９−；ジオキサマイシン（dioxamycin）；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール（docosanol）；ドラセトロン（dolasetron）；ドキシフルリジン（doxifluridine）；ドキソルビシン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；ズオカルマイシンＳＡ（duocarmycin SA）；エブセレン（ebselen）；エコムスチン（ecomustine）；エデルホシン（edelfosine）；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン（elemene）；エミテフル（emitefur）；エピルビシン；エプリステリド（epristeride）；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エクセメスタン（exemestane）；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスティム；フィナステリド（finasteride）；フラボピリドール（flavopiridol）；フレゼラスチン（flezelastine）；フルアステロン（fluasterone）；フルダラビン；フルオロダウノルニシン（fluorodaunorunicin）塩酸塩；ホルフェニメクス（forfenimex）；ホルメスタン（formestane）；ホストリエシン；ホテムスチン（fotemustine）；ガドリニウムテキサフィリン（gadolinium texaphyrin）；硝酸ガリウム；ガロシタビン（galocitabine）；ガニレリクス（ganirelix）；ゼラチナーゼ阻害剤；ジェムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム（hepsulfam）；ヘレグリン（heregulin）；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸（ibandronic acid）；イダルビシン；イドキシフェン（idoxifene）；イドラマントン（idramantone）；イルモホシン；イロマスタト（ilomastat）；イマチニブ（例えば、Gleevec．ＲＴＭ．）、イミキモッド；免疫刺激ペプチド；インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン（iobenguane）；ヨードドキソルビシン；イポメアノール（ipomeanol）、４−；イロプラクト（iroplact）；イルソグラジン（irsogladine）；イソベンガゾール（isobengazole）；イソホモハリコンドリンＢ（isohomohalicondrin B）；イタセトロン（itasetron）；ジャスプラキノリド（jasplakinolide）；カハラリドＦ（kahalalide F）；ラメラリン（lamellarin）−Ｎトリアセテート；ランレオチド；リーナマイシン（leinamycin）；レノグラスチム（lenograstim）；硫酸レンチナン（lentinan）；レプトルスタチン（leptolstatin）；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；ロイプロレリン（leuprorelin）；レバミゾール；リアロゾール（liarozole）；直鎖状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リソクリナミド７（lissoclinamide 7）；ロバプラチン（lobaplatin）；ロムブリシン（lombricine）；ロメトレキソール；ロニダミン（lonidamine）；ロソキサントロン；ロクソリビン（loxoribine）；ルルトテカン（lurtotecan）；ルテチウムテキサフィリン（lutetium texaphyrin）；リソフィリン（lysofylline）；溶菌ペプチド；メイタンシン；マンノスタチンＡ（mannostatin A）；マリマスタト（marimastat）；マソプロコール（masoprocol）；マスピン（maspin）；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル��メルバロン（merbarone）；メテレリン（meterelin）；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン（miltefosine）；ミリモスチム（mirimostim）；ミトグアゾン（mitoguazone）；ミトラクトール（mitolactol）；マイトマイシン類似体；ミトナフィド（mitonafide）；マイトトキシン（mitotoxin）線維芽細胞増殖因子−サポリン（saporin）；ミトザントロン；モファロテン（mofarotene）；モルグラモスチム（molgramostim）；Erbitux、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（gonadotrophin）；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム（myobacterium）細胞壁ｓｋ；モピダモール（mopidamol）；マスタード抗癌剤；ミカペルオキシドＢ（mycaperoxide B）；ミコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン（myriaporone）；Ｎ−アセチルジナリン（N-acetyldinaline）；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン（nafarelin）；ナグレスチプ（nagrestip）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（napavin）；ナフテルピン（naphterpin）；ナルトグラスチム（nartograstim）；ネダプラチン（nedaplatin）；ネモルビシン（nemorubicin）；ネリドロン酸（neridronic acid）；ニルタミド（nilutamide）；ニサマイシン（nisamycin）；酸化窒素モジュレーター；ニトロオキシド抗酸化剤；ニトルリン（nitrullyn）；オブリメルセン（oblimersen）（Genasense．ＲＴＭ．）；Ｏ．ｓｕｐ．６−ベンジルグアニン；オクトレオチド（octreotide）；オキセノン（okicenone）；オリゴヌクレオチド；オナプリストン（onapristone）；オンダンセトロン（ondansetron）；オンダンセトロン；オラシン（oracin）；経口サイトカインインデューサー；オルマプラチン；オサテロン（osaterone）；オキサリプラチン（oxaliplatin）；オキサウノマイシン（oxaunomycin）；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン（palauamine）；パルミトイルリゾキシン（palmitoylrhizoxin）；パミドロン酸（pamidronic acid）；パナキシトリオール（panaxytriol）；パノミフェン（panomifene）；パラバクチン（parabactin）；パゼリプチン（pazelliptine）；ペガスパルガーゼ；ペルデシン（peldesine）；ペントサンポリスルフェートナトリウム；ペントスタチン（pentostatin）；ペントロゾール（pentrozole）；ペルフルブロン（perflubron）；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン（phenazinomycin）；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニル（picibanil）；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン（pirarubicin）；ピリトレキシム（piritrexim）；プラセチンＡ（placetin A）；プラセチンＢ；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニソン；プロピルビスアクリドン（propyl bis-acridone）；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡ基剤免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、ミクロアルガル（microalgal）；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド（raltitrexed）；ラモセトロン（ramosetron）；ｒａｓファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；��ａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチルレテリプチン（retelliptine demethylated）；レニウムＲｅ１８６エチドロネート（etidronate）；リゾキシン（rhizoxin）；リボザイム；ＲＩＩレチナミド（RII retinamide）；ロヒツキン（rohitukine）；ロムルチド（romurtide）；ロキニメクス（roquinimex）；ルビジノンＢ１（rubiginone B1）；ルボキシル（ruboxyl）；サフィンゴール；セイントピン（saintopin）；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ（sarcophytol A）；サルグラモスチン；Ｓｄｉ１模擬体；セムスチン；老化由来（senescence derived）阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シゾフィラン（sizofiran）；ソブゾキサン（sobuzoxane）；ナトリウムボロカプテート（borocaptate）；ナトリウムフェニルアセテート；ソルベロール（solverol）；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン（sonermin）；スパルホス酸（sparfosic acid）；スピカマイシンＤ（spicamycin D）；スピロムスチン；スプレノペンチン（splenopentin）；スポンジスタチン１（spongistatin 1）；スクアラミン（squalamine）；スチピアミド（stipiamide）；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン（sulfinosine）；スーパーアクティブバソアクティブインテスティナルペプチド（superactive vasoactive intestinal peptide）アンタゴニスト；スラジスタ（suradista）；スラミン（suramin）；スワインソニン（swainsonine）；タリムスチン（tallimustine）；タモキシフェンメチオジド（tamoxifen methiodide）；タウロムスチン（tauromustine）；タザロテン（tazarotene）
；テコガラン（tecogalan）ナトリウム；テガフル（tegafur）；テルラピリリウム（tellurapyrylium）；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン（tetrazomine）；タリブラスチン（thaliblastine）；チオコラリン（thiocoraline）；トロンボポエチン；トロンボポエチン模擬体；チマルファシン（thymalfasin）；チモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン（thymotrinan）；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン（tin ethyl etiopurpurin）；チラパザミン（tirapazamine）；二塩化チタノセン（titanocene bichloride）；トプセンチン（topsentin）；トレミフェン；翻訳阻害剤；トレチノイン（tretinoin）；トリアセチルウリジン；トリシリビン（triciribine）；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン（tropisetron）；ツロステリド（turosteride）；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン（tyrphostins）；ＵＢＣ阻害剤；ユベニメクス（ubenimex）；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ（variolin B）；ベラレソール（velaresol）；ベラミン（veramine）；ベルジン；ベルテポルフィン；ビノレルビン（vinorelbine）；ビンキサルチン（vinxaltine）；ビタキシン（vitaxin）；ボロゾール；ザノテロン（zanoterone）；ゼニプラチン；ジラスコルブ（zilascorb）；およびジノスタチンスティマラマー（zinostatin stimalamer）が含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００８６】
具体的な追加の活性剤には、オブリメルセン（Genasense．ＲＴＭ．）、レミケード（remicade）、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Decadron．ＲＴＭ．）、ステロイド、ジェムシタビン、シスプラチン、テモゾロミド（temozolomide）、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール（temodar）、カルボプラチン、プロカルバジン、グリアデル（gliadel）、タモキシフェン、トポテカン（topotecan）、メトトレキサート、Arisa．ＲＴＭ．、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、キセロダ（xeloda）、ＣＰＴ−１１、インターフェロンα、ペグ化インターフェロンα（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソームダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール（doxetaxol）、パシリタキセル（pacilitaxel）、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸（zoledronic acid）、パルミトロネート（palmitronate）、ビアキシン（biaxin）、ブスルファン、プレドニソン、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Doxil．ＲＴＭ．）、パクリタキセル、ガンシクロビル（ganciclovir）、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Emcyt．ＲＴＭ．）、スリンダクおよびエトポシドが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００８７】
Ｂ．４．製剤
本明細書中に記載の化合物の適する製剤はいずれも、製造することができる。化合物が、安定な無毒性の酸または塩基塩を形成するのに十分に塩基性または酸性である場合、それら化合物の塩としての投与は、適当でありうる。薬学的に許容しうる塩の例は、生理学的に許容しうる陰イオンを与える酸で形成される有機酸付加塩、例えば、トシレート、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩およびα−グリセロリン酸塩である。適する無機塩も形成することができ、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩および炭酸塩が含まれる。薬学的に許容しうる塩は、当該技術分野において周知の標準的な手順を用いて、例えば、アミンなどの十分に塩基性の化合物を、適する酸と接触させ、生理学的に許容しうる塩を与えることによって得られる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムまたはリチウム）塩またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩も包含され、慣用的な方法によって製造される。
【００８８】
本発明は、更に、医薬組成物であって、少なくとも一つの本発明の化合物を、少なくとも一つの薬学的に許容しうる賦形剤と混合した状態で含む医薬組成物を包含する。好ましくは、少なくとも一つのこのような賦形剤は、水以外の賦形剤またはＣ１−Ｃ３アルコールまたはジメチルスルホキシドである。
【００８９】
本発明の化合物は、経口、局所、経皮でまたは吸入または注射によるものを含めた慣用的な経路によって投与することができる。本発明の化合物は、当業者が、既知の方法を参照して製剤化することができ、そして製剤は、予定の投与経路にしたがって作ることができる。有機化合物を製剤化するのに適する方法は、例えば、REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th ed. (1990) に記載され、それは、本明細書中に援用される。
【００９０】
これら化合物を薬理学的組成物中で投与する場合、その化合物は、薬学的に許容しうる担体との混合物で製剤することができると考えられる。例えば、考えられる化合物は、薬理学的に許容しうる塩として経口でまたは生理食塩水溶液中で静脈内に投与することができる。リン酸塩、重炭酸塩またはクエン酸塩などの慣用的な緩衝剤は、この目的に用いることができる。当然ながら、当業者は、それら製剤を、本明細書の内容の範囲内で修飾して、特定の投与経路について多数の製剤を与えることができる。具体的には、考えられる化合物は、水または他のビヒクル中にそれらを一層可溶性にするように修飾することができるが、それは、例えば、当該技術の十分に範囲内である僅かな修飾（塩製剤化、エステル化等）で容易に達成することができる。患者の最大限有益な作用について本発明の化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路およびおよび投薬計画を修飾することも、当該技術の十分に範囲内である。
【００９１】
本明細書中に記載の式Ｉまたは式ＩＩを有する化合物は、概して、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、グリセロール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド等などの有機溶媒中に可溶性である。一つの態様において、本発明は、式Ｉ〜ＩＩを有する化合物を、薬学的に許容しうる担体と混合することによって製造された製剤を提供する。一つの側面において、その製剤は、（ａ）記載の化合物を、水溶性有機溶媒、非イオン性溶媒、水溶性脂質、シクロデキストリン、トコフェロールなどのビタミン、脂肪酸、脂肪酸エステル、リン脂質またはそれらの組み合わせ中に溶解させて、溶液を与え；そして（ｂ）１〜１０％の炭水化物溶液を含有する緩衝剤または生理食塩水を加えることを含む方法を用いて製造することができる。一例において、炭水化物は、デキストロースを含む。本方法を用いて得られた医薬組成物は、動物用途および臨床用途に安定且つ有用である。
【００９２】
本方法で用いるための水溶性有機溶媒の代表例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アルコール、アセトニトリル、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドまたはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。適するアルコールの例には、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリセロールまたはプロピレングリコールが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９３】
本方法で用いるための水溶性非イオン界面活性剤の代表例には、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ、ポリエチレングリコール修飾ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）（ポリオキシエチレングリセロールトリシノレート３５（polyoxyethyleneglyceroltriricinoleat 35））、水素化ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＲＨ４０、水素化ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＲＨ６０、ＰＥＧ−スクシネート、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標）ＨＳ（ポリエチレングリコール６６０  １２−ヒドロキシステアレート）、ソルビタンモノオレアート、ポロキサマー、ＬＡＢＲＡＦＩＬ（登録商標）（エトキシル化杏仁油）、ＬＡＢＲＡＳＯＬ（登録商標）（カプリルカプロイルマクロゴール−８−グリセリド（capryl-caproyl macrogol-8-glyceride））、ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）（グリセロールエステル）、ＳＯＦＴＩＧＥＮ（登録商標）（ＰＥＧ６カプリル酸グリセリド）、グリセリン、グリコールポリソルベートまたはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９４】
本方法で用いるための水溶性脂質の代表例には、植物油、トリグリセリド、プラント油またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。脂質油の例には、ヒマシ油、ポリオキシルヒマシ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油、ラッカセイ油、ハッカ油、ベニバナ油、ゴマ油、ダイズ油、水素化植物油、水素化ダイズ油、ヤシ油のトリグリセリド、パーム種子油およびそれらの水素化形またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９５】
本方法で用いるための脂肪酸および脂肪酸エステルの代表例には、オレイン酸、モノグリセリド、ジグリセリド、ＰＥＧの一または二脂肪酸エステル、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９６】
本方法で用いるためのシクロデキストリンの代表例には、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンまたはスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９７】
本方法で用いるためのリン脂質の代表例には、ダイズホスファチジルコリンまたはジステアロイルホスファチジルグリセロールおよびそれらの水素化形、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これに制限されるわけではない。
【００９８】
当業者は、それら製剤を、本明細書の内容の範囲内で修飾して、特定の投与経路について多数の製剤を与えることができる。具体的には、それら化合物は、水または他のビヒクル中にそれらを一層可溶性にするように修飾することができる。患者の最大限有益な作用について本発明の化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路およびおよび投薬計画を修飾することも、当該技術の十分に範囲内である。
【００９９】
Ｂ．５．医薬組成物
本発明は、更に、本発明の新規な処置方法で用いるのに適する局所、経口、全身および非経口用の医薬製剤を提供する目的を有する。本発明の化合物を活性成分として含有するそれら組成物は、経口、全身または標的部位投与用のビヒクル中の広範囲の治療的剤形で投与することができる。
【０１００】
本発明は、更に、一つまたはそれを超える本発明の化合物を、薬学的に許容しうる担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。好ましくは、これら組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下または直腸投与用の、または吸入または吹入による投与用の、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、懸濁剤、ゲル剤、軟ゲル剤、滅菌非経口液剤、乳剤、エアゾル剤、液状噴霧剤、滴剤、アンプル剤、自己注射装置または坐剤などの単位剤形である。
【０１０１】
錠剤またはカプセル剤などの固形組成物を製造するには、主要活性成分を、医薬担体、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムなどの慣用的な錠剤成形成分、および他の医薬希釈剤、例えば、水と混合して、本発明の化合物またはその薬学的に許容しうる塩の均一混合物を含有する固形組成物を形成する。更に、主要活性成分は、一つまたはそれを超える医薬担体と混合して、改善されたバイオアベイラビリティーまたは他の薬物動態学的性質を有する剤形を与えることができる。このような系の例には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒプロメロースアセテートスクシネート（hypromellose acetate succinate）（ＨＰＭＣＡＳ）などの成分を含む噴霧乾燥分散（Spray Dried Dispersion）固形剤形；低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（Low viscosity hydroxypropylcellulos）（ＨＰＣ−ＳＬ）、ドクセートナトリウム（docusate sodium）、プルロニク（pluronics）、ホスファチジルコリン、レシチンおよびコレステロールなどの成分を含むナノパーティクル（Nano-particles）製剤；ホスファチジルコリン、ポリビニルピロリドン、レシチンおよびコレステロールなどの成分を含む脂質基剤製剤（Lipid-base formulation）；スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢＥＣＤ）および２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）などの成分を含むシクロデキストリン製剤が含まれるが、これに制限されるわけではない。これら組成物を均一と言及する場合、それは、活性成分が、組成物中に一様に分散していることを意味するので、組成物は、錠剤、丸剤およびカプセル剤などの等しく有効な単位剤形および脂質基剤製剤中に容易に小分けすることができる。
【０１０２】
新規な組成物の錠剤または丸剤は、コーティングしてまたはそれ以外に配合して、持続性作用の利点を与える剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与成分および外部投与成分を含むことができるが、後者は、前者の上のエンベロープの形である。腸溶層は、それら二つの成分を隔てることができる。その腸溶層は、胃内の崩壊に耐えるのに役立ち且つ内部成分を十二指腸中に無傷で通過させるまたは放出を遅らせる。いろいろな材料を、このような腸溶層またはコーティングに用いることができ、このような材料には、シェラック、アセチルアルコールおよび酢酸セルロースのような、多数のポリマー性酸およびポリマー性酸とこのような材料との混合物が含まれる。
【０１０３】
本発明の新規な組成物を、経口または注射での投与用に包含することができる液状形には、水性液剤；好適に着香したシロップ剤；水性または油状懸濁剤；綿実油、ゴマ油、ヤシ油またはラッカセイ油などの食用油との乳剤；ポリソルベート８０、トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート（ＴＰＧＳ）、Cremophor、capmul ＭＣＭ、ポリエチレングリコールなどの界面活性剤または補助溶媒を含むマイクロエマルジョンまたは自己乳化性系；ホスファチジルコリン、コレステロール、レシチン、ＨＰＣ−ＳＬ、Docusate Soldium などの成分を含むリポソームまたはナノパーティクル製剤；溶解性を増強するＳＢＥＣＤ、ＨＰＣＤなどの成分を含むシクロデキストリン複合体製剤が含まれる。水性懸濁剤に適する分散助剤または懸濁化剤には、デキストラン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどの合成および天然のガムが含まれる。
【０１０４】
本発明の化合物は、前述の組成物のいずれでも、そして効力研究において有効である投薬計画にしたがって投与することができる。
本発明の化合物は、最適抗癌作用を得るために、常套試験によって規定される適当な投薬量で単独に用いることができる。更に、他の腫瘍学物質の共投与または連続投与が望まれる。
【０１０５】
Ｃ．新規な化合物および医薬組成物を使用する方法
Ｃ．１．新規な化合物を使用する方法
本発明の化合物は、癌または他のタイプの増殖性疾患を処置する場合に、細胞障害性剤および／または細胞分裂抑制性剤として用いることができる。これら化合物は、いずれかのタイプの作用機構によって機能することができる。例えば、それら化合物は、分子および／またはシグナル伝達経路を阻害して、Ｇ２／Ｍ期で細胞周期の阻止をもたらすことができるが、それは、ついには、腫瘍細胞のアポトーシスを引き起こすかもしれない（例えば、Weung et al. (1997) Biochim. Biophys. Res. Comm., vol: 263, pp 398-404 を参照されたい）。別の例において、それら化合物は、チューブリン集合／脱集合を妨げることができ、それは、細胞有糸分裂を阻害し且つ細胞アポトーシスを引き起こすことができる（例えば、Panda et al., (1997) Proc. Natl. Acad. Sci.  USA, vol: 94, 10560-10564 を参照されたい）。それら化合物は、更に、内皮細胞増殖および血管新生作用を阻害することができる（例えば、Witte et al., 1998, Cancer Metastasis Rev.  vol. 17: 155-161 を参照されたい）。本発明の化合物は、いろいろな癌細胞系に活性であることが分かっている。
【０１０６】
別の側面において、本発明は、哺乳動物の肉腫、類表皮癌、線維肉腫、子宮頸癌、白血病、リンパ腫、肺癌、非小細胞性肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、乳癌、頭頸部癌、膵癌および他のタイプの増殖性疾患が含まれるがこれに制限されるわけではない全ての組織または器官由来の癌の処置方法であって、このような処置を必要としている対象に、治療的有効量の式Ｉ〜ＩＩを有する化合物を細胞障害性剤および／または細胞分裂抑制性剤として少なくとも一つの処置で投与することを含む方法に関する。
【０１０７】
また別の側面において、本発明は、白血病、リンパ腫、肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎癌、前立腺癌または乳癌および他のタイプの増殖性疾患が含まれるがこれに制限されるわけではない全ての組織または器官由来の癌の処置用の医薬製剤を製造する方法であって、治療的有効量の式Ｉ〜ＩＩを有する化合物を、薬学的に許容しうる担体と混合することを含む方法に関する。
【０１０８】
本発明の方法を実施するために、式Ｉ〜ＩＩを有する化合物およびそれらの薬学的に許容しうる塩は、経口、非経口、吸入スプレーで、局所、直腸、鼻腔内、口腔内、膣内、植込みレザバーによって、または他の薬物投与方法で投与することができる。本明細書中で用いられる「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技法を包含する。いくつかの態様において、本発明の化合物は、注射によって、すなわち、非経口で送達される。いくつかの態様において、好ましい投与経路は、静脈内または腹腔内注射による。
【０１０９】
滅菌注射可能水性または油脂性懸濁剤などの滅菌注射可能組成物は、当該技術分野において知られている技法にしたがって、適する分散助剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化することができる。滅菌注射可能製剤は、無毒性の非経口に許容しうる希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能溶液または懸濁液であってもよい。用いることができる許容しうるビヒクルおよび溶媒の中には、マンニトール、水、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶液が含まれる。更に、滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒として好都合に用いられる（例えば、合成モノグリセリドまたはジグリセリド）。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはヒマシ油などの薬学的に許容しうる油剤であるような、特に、それらのポリオキシエチル化型の注射可能なものの製造において有用である。これら油状液剤または懸濁剤は、更に、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、またはカルボキシメチルセルロースまたは類似の分散助剤を含有することができる。薬学的に許容しうる固体、液体または他の剤形の製造において一般的に用いられるいろいろな乳化剤またはバイオアベイラビリティー増強剤も、製剤目的に用いることができる。
【０１１０】
経口投与用組成物は、錠剤、カプセル剤、乳剤および水性懸濁剤、分散剤および液剤が含まれるがこれに制限されるわけではないいずれかの経口に許容しうる剤形であってよい。経口使用のための錠剤の場合、一般的に用いられる担体には、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も、加えることができる。カプセル形での経口投与用に有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。水性懸濁剤または乳剤を経口投与する場合、活性成分は、乳化剤または懸濁化剤と混合した油状相中に懸濁させるまたは溶解させることができる。必要ならば、特定の甘味剤、着香剤または着色剤を加えることができる。鼻内エアゾールまたは吸入組成物は、当医薬製剤技術分野において周知の技法にしたがって製造することができるし、しかも液剤として、例えば、生理食塩水中で、適する保存剤（例えば、ベンジルアルコール）、バイオアベイラビリティーを増強する吸収促進剤、および／または当該技術分野において知られている他の可溶化剤または分散助剤を用いて製造することができる。
【０１１１】
本発明の化合物の有効量は、当該技術分野において知られている常套実験によって決定することができる。典型的に、これは、十分に許容されることが分かっている量の投与；および症状の減少、腫瘍サイズの減少または腫瘍成長の停止などの所望の作用が得られるまで投薬量を漸増することを必要とする。いくつかの態様において、約５〜１０ｍｇ／ｋｇの開始投薬量を用い、そしてその投薬量を、所望の作用が認められるまたは許容性問題が認められるまで、週に１回、約５０％ずつ漸増増加させる。いくつかの態様において、適する投薬量は、約５〜２５０ｍｇ／ｋｇ；または約１０〜１５０ｍｇ／ｋｇである。１０〜１００ｍｇ／ｋｇの投薬量は、時々好適である。投与は、１回、週に１回、１日１回または１日１回より多く行うことができる。いくつかの態様において、処置を必要としている対象に、１日に１〜４用量を送達する。
【０１１２】
更に、式Ｉ〜ＩＩを有する化合物は、いろいろな癌または状態の処置のために、単独でまたは他の抗癌剤との組み合わせで投与することができる。本発明による組み合わせ療法は、少なくとも一つの本発明の化合物またはその機能性誘導体および少なくとも一つの他の薬学的に活性な成分の投与を含む。一つまたは複数の活性成分および薬学的活性剤は、別々にまたは一緒に投与することができる。一つまたは複数の活性成分および一つまたは複数の薬学的活性剤の量および相対的な投与のタイミングは、所望の組み合わせの治療的作用を達成するために選択されるであろう。
【０１１３】
また別の側面において、本発明は、冠状動脈疾患の患者のための冠状ステント処置後の再狭窄の、式Ｉ〜ＩＩを有する化合物での処置方法に関する。
冠状動脈疾患の患者のための冠状ステント処置後の再狭窄の主因は、平滑筋細胞の増殖および移動および細胞外マトリックス生産によって生じる新生内膜増殖である（例えば、“Pathology of acute and chronic coronary stenting in humans”, by Farb, A., Sangiorgi, G., Certer, A.J., et al, in Circulation, vol. 99, pp 44-52, 1999 を参照されたい）。抗増殖能力を有する化合物は、このような化合物が適する手段で送達された時の臨床的および血管造影的再狭窄のリスクを減少させる場合に作用を有することができる（例えば、“A polymer-based, paclitaxel-eluting stent in patients with coronary artery disease”, by Stone, G.W., Ellis, S.G., Cox, D.A, et al, in New England Journal of Medicine, vol. 350: pp 221-231, 2004 を参照されたい）。したがって、腫瘍を処置する場合の式Ｉ〜ＩＸを有する化合物について、それらは、新生内膜増殖に関与する細胞の増殖を阻害する場合に、したがって、新生内膜増殖および再狭窄の発生を減少させる場合に、有用でもありうる。いろいろな方法を、それら化合物をこれら細胞へ有効に送達する場合に用いることができる。例えば、式Ｉ〜Ｘを有する上記の化合物を含む組成物は、経口、非経口または植込みレザバーによって投与することができる。他の例において、次の論文に記載のアプローチを用いることもできる。“A polymer-based, paclitaxel-eluting stent in patients with coronary artery disease”, by Stone, G.W., Ellis, S.G., Cox, D.A. et al, in New England Journal of Medicine, vol. 350: pp 221-231, 2004; “A randomized comparison of a sirolimus-eluting stent with a standard stent for coronary revascularization”, by Morice, M.-C., Serruys, P.W., Sousa, J.E., et al, in New England Journal of Medicine, vol. 346: pp 1773-1780, 2002; “Sirolimus-eluting stents versus standard stents in patients with stenosis in a native coronary artery”, by Moses, J.W., Leon, M.B., Popma, J.J., et al, in New England Journal of Medicine, vol. 349: pp 1315-1323, 2003。
【０１１４】
処置および予防の方法
本発明の方法は、いろいろなタイプの癌を処置する、予防するおよび／または管理する方法を包含する。本明細書中で用いられるように、特に断らない限り、「処置する」という用語は、本発明の化合物または他の追加の活性剤の投与を意味する。本明細書中で用いられるように、特に断らない限り、「予防する」という用語は、症状の開始前の、特に、癌のリスクがある患者への投与を意味する。「予防」という用語は、特定の疾患または障害の症状の阻害を包含する。癌の家族歴を有する患者は、予防計画に好ましい候補である。本明細書中で用いられるように且つ特に断らない限り、「管理する」という用語は、特定の癌に罹患した患者の癌の再発を予防すること、および／または癌に罹患した患者が寛解状態のままである期間を延長することを包含する。
【０１１５】
本明細書中で用いられる「癌」という用語には、充実性腫瘍および血液由来腫瘍が含まれるが、これに制限されるわけではない。「癌」という用語は、膀胱、骨または血液、脳、乳房、子宮頸部、胸部、結腸、子宮内膜（endrometrium）、食道、眼、頭部、腎、肝、リンパ節、肺、口、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、胃、精巣、咽頭および子宮の癌が含まれるがこれに制限されるわけではない、皮膚組織、器官、血液および血管の疾患を意味する。具体的な癌には、進行悪性疾患、アミロイドーシス、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管周囲細胞腫、多発性脳転移、多形性グリア芽細胞腫、グリア芽細胞腫、脳幹グリオーム、予後のよくない悪性脳腫瘍、悪性グリオーム、再発性悪性グリオーム（giolma）、退形成性星状細胞腫、退形成性希突起グリオーム、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、Dukes Ｃ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不可能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロータイプ（karotype）急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、低級濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、悪性胸膜浸出中皮腫症候群、腹膜癌、乳頭状漿液性癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、強皮症、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維異形成、ホルモン不応性前立腺癌、切除済みハイリスク軟組織肉腫、切除不可能な肝細胞癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無症候性骨髄腫、ファロピウス管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン不感性前立腺癌、化学療法不感性前立腺癌、乳頭状甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌および平滑筋腫が含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、癌は転移性である。別の態様において、癌は、化学療法または放射線に不応性または耐性である；具体的には、サリドマイドに不応性である。
【０１１６】
Ｃ．２．処置および予防の方法
本発明の方法は、いろいろなタイプの癌を処置する、予防するおよび／または管理する方法を包含する。本明細書中で用いられるように、特に断らない限り、「処置する」という用語は、本発明の化合物または他の追加の活性剤の投与を意味する。本明細書中で用いられるように、特に断らない限り、「予防する」という用語は、症状の開始前の、特に、癌のリスクがある患者への投与を意味する。「予防」という用語は、特定の疾患または障害の症状の阻害を包含する。癌の家族歴を有する患者は、予防計画に好ましい候補である。本明細書中で用いられるように且つ特に断らない限り、「管理する」という用語は、特定の癌に罹患した患者の癌の再発を予防すること、および／または癌に罹患した患者が寛解状態のままである期間を延長することを包含する。
【０１１７】
本明細書中で用いられる「癌」という用語には、充実性腫瘍および血液由来腫瘍が含まれるが、これに制限されるわけではない。「癌」という用語は、膀胱、骨または血液、脳、乳房、子宮頸部、胸部、結腸、子宮内膜（endrometrium）、食道、眼、頭部、腎、肝、リンパ節、肺、口、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、胃、精巣、咽頭および子宮の癌が含まれるがこれに制限されるわけではない、皮膚組織、器官、血液および血管の疾患を意味する。具体的な癌には、進行悪性疾患、アミロイドーシス、神経芽細胞腫、髄膜腫、血管周囲細胞腫、多発性脳転移、多形性グリア芽細胞腫、グリア芽細胞腫、脳幹グリオーム、予後のよくない悪性脳腫瘍、悪性グリオーム、再発性悪性グリオーム（giolma）、退形成性星状細胞腫、退形成性希突起グリオーム、神経内分泌腫瘍、直腸腺癌、Dukes Ｃ＆Ｄ結腸直腸癌、切除不可能な結腸直腸癌、転移性肝細胞癌、カポジ肉腫、カロータイプ（karotype）急性骨髄芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、低級濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、悪性胸膜浸出中皮腫症候群、腹膜癌、乳頭状漿液性癌、婦人科肉腫、軟組織肉腫、強皮症、皮膚血管炎、ランゲルハンス細胞組織球症、平滑筋肉腫、進行性骨化性線維異形成、ホルモン不応性前立腺癌、切除済みハイリスク軟組織肉腫、切除不可能な肝細胞癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、くすぶり型骨髄腫、無症候性骨髄腫、ファロピウス管癌、アンドロゲン非依存性前立腺癌、アンドロゲン依存性ＩＶ期非転移性前立腺癌、ホルモン不感性前立腺癌、化学療法不感性前立腺癌、乳頭状甲状腺癌、濾胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌および平滑筋腫が含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、癌は転移性である。別の態様において、癌は、化学療法または放射線に不応性または耐性である；具体的には、サリドマイドに不応性である。
【０１１８】
Ｃ．３．生物学的スクリーニングおよび抗癌活性：
リアルタイム細胞電子検知（Real-Time Cell Electronic Sensing）（ＲＴ−ＣＥＳ）を用いた in vitro の細胞に基づくスクリーニング
本明細書中に開示の化合物の生物学的活性を、ＡＣＥＡ Biosciences, Inc. 製の Real-Time Cell Electronic Sensing（ＲＴ−ＣＥＳ（登録商標））システムを用いて監視し且つプロフィールを集めた。ＲＴ−ＣＥＳシステムは、細胞−基質インピーダンス技術を利用して、微量滴定プレート形式の組織培養ウェル内部の細胞挙動を監視する。その技術は、ミクロ電子工学での分子・細胞生物学の組込みを特徴とし、生物学的検定法の電子検出に基づいている。この細胞電子検知技術および関連装置、システムおよび使用方法の詳細は、米国特許第７，１６７，５８５号；米国特許第７，４６８，２５５号；ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０１０１０２号；米国特許第７，４７０，５３３号；および米国特許第７，４５９，３０３号に記載されていて、それらは各々、本明細書中に援用される。ＲＴ−ＣＥＳ技術の更なる詳細は、米国特許第７，４６８，２５５号に更に開示されている。
【０１１９】
ＲＴ−ＣＥＳ技術を用いた細胞−基質または細胞−電極インピーダンスの測定には、適当な幾何学的形を有する微小電極を、微量滴定プレートまたは類似の装置の底面上に製作して、ウェル中に向ける。細胞を、それら装置のウェル中に入れ、電極表面に接触させ且つ付着させる。細胞の存在、不存在または性状の変化は、電極センサー表面上の電子およびイオンの通過に影響する。電極の間または中でのインピーダンスを測定することは、センサー上に存在する細胞の生物学的状態について重要な情報を与える。それら細胞の生物学的状態に変化がある場合、アナログ電子読み取りシグナルを、自動的に且つリアルタイムで測定し、そして処理用および分析用のディジタルシグナルへ変換する。ＲＴ−ＣＥＳシステムの場合、細胞指数（インピーダンス変化の任意表示）は、測定された電極インピーダンス値に基づいて自動的に導かれ且つ与えられる。一定のウェルについて得られた細胞指数は、（１）このウェル中の電極表面に、いかに多くの細胞が付着しているか；（２）このウェル中の電極表面に、いかに十分に細胞が付着しているかを反映している。したがって、同様の生理学的状態にある同じタイプの細胞が、より多く電極表面に付着してほど、細胞指数は大きい。そして、細胞が、より十分に電極表面に付着しているほど（例えば、細胞が、より大きい接触面積を有するように一層広がっている、または細胞が、よりしっかりと電極表面に付着しているほど）、細胞指数は大きい。
【０１２０】
ＲＴ−ＣＥＳシステムは、三つの成分、すなわち、電子センサー分析器、装置ステーションおよび１６Ｘまたは９６Ｘ微量滴定装置を含む。微小電極センサーアレイは、リソグラフィーによる微小製作方法でガラススライド上に製作したが、電極含有スライドは、プラスチックトレーへ組み立てられて、電極含有ウェルを形成している。装置ステーションには、１６Ｘまたは９６Ｘ微量滴定プレート装置を与え、それは、ウェルのいずれか一つを、インピーダンス測定用のセンサー分析器へ電子的に切り替えることができる。操作中に、ウェル中で培養された細胞を含む装置を、インキュベーター内部に位置する装置ステーション中に入れる。電気ケーブルは、装置ステーションをセンサー分析器へ連通する。ＲＴ−ＣＥＳソフトウェア制御下において、センサー分析器は、測定されるウェルを自動的に選択し且つ連続的にインピーダンス測定を行うことができる。分析器からのインピーダンスデータを、コンピューターへ転送し、組み込まれたソフトウェアで分析し且つ処理する。
【０１２１】
個々のウェル中の電極間で測定されたインピーダンスは、電極幾何学的形、ウェル中のイオン濃度、および電極に付着した細胞が存在するかどうかに依存する。細胞が不存在の場合、電極インピーダンスは、主に、電極／溶液界面およびバルク溶液中の双方におけるイオン環境によって決定される。細胞の存在下において、電極センサー表面に付着した細胞は、電極／溶液界面における局部イオン環境を変更して、インピーダンスの増加をもたらすであろう。電極上に存在する細胞が多いほど、細胞−電極インピーダンスの増加は大きい。更に、インピーダンス変化も、細胞形態、および細胞が電極に付着している程度に依存する。
【０１２２】
測定された細胞−電極インピーダンスに基づいて細胞状態を定量するために、細胞指数（Cell Index）と称するパラメーターを導く。細胞指数は、電極含有ウェル中の細胞の状態の定量的尺度である。同じ生理学的条件下において、電極上に付着したより多くの細胞は、より大きい細胞−電極抵抗値をもたらして、細胞指数についてより大きい値をもたらす。更に、ウェル中に存在する同数の細胞については、形態などの細胞状態の変化が、細胞指数の変化をもたらすであろう。例えば、細胞接着または細胞広がり（spreading）の増加は、より大きい細胞−電極接触面積をもたらし、それが、細胞−電極抵抗の増加を、したがって、細胞指数についてより大きい値をもたらすであろう。
【０１２３】
生物学的に活性な化合物と、Ｅプレートのウェル内部の細胞成長との相互作用は、化合物自体の生物学的機構、濃度、インキュベーション長さおよび細胞タイプに依存する独特の活性パターン（すなわち、化合物処置に応答した独特の細胞インピーダンス曲線または細胞指数曲線）を生じる。各々の化合物への「記名（signature）」細胞応答パターンは、細胞周期阻止、形態変化および細胞死などの特定の生物学的現象と相関する。ＲＴ−ＣＥＳシステムで細胞応答プロフィールを集めることは、有効であると証明されており、本発明者は、同様の作用機構を有する化合物が、同様のパターンを示すということを示した。したがって、化合物処置への細胞応答パターンの類似性は、作用機構、耐性の様式、そしておそらくは、分子標的の類似性を示すことができる。本発明者は、抗有糸分裂剤での処置に応答して有糸分裂阻止を行っている細胞について独特のＲＴ−ＣＥＳ記名パターンを識別した。一例として、図４Ｂおよび図４Ｃは、異なった濃度の周知の抗有糸分裂剤パクリタキセルおよびビンクリスチンで処置されたＡ５４９肺癌細胞の特異的プロフィールを示している。
【０１２４】
本発明者は、ＲＴ−ＣＥＳシステム（ＡＣＥＡ Biosciences）またはｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて、いくつかの新規な化合物への多数の癌細胞系の応答を評価した。ＲＴ−ＣＥＳシステムおよびｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステムは、本質的に同じであり、同じＡＣＥＡリアルタイム細胞インピーダンス測定技術を用いていることに注目されたい。いくつかの本発明の化合物の（特定の濃度での）時間依存性細胞応答パターンは、パクリタキセルおよびビンクリスチンの（特定の濃度での）それらと幾分同様であった。したがって、これら化合物は、パクリタキセルおよびビンブラスチンの場合と同様の抗癌作用機構を有することができる。もう一方において、これら化合物は、これら本発明の化合物の時間依存性細胞応答パターンが、パクリタキセルおよびビンクリスチンの場合と同様であるとしても、パクリタキセルおよびビンブラスチンの場合とは異なった他の作用機構によって癌細胞に作用することができる。これら化合物が、パクリタキセルおよびビンブラスチンの場合と同様の作用機構を含めた多数の作用機構によって癌細胞に作用するということも考えられる。
【０１２５】
本発明者は、本明細書中に記載のＲＴ−ＣＥＳ方法で測定される本発明の化合物の活性を調べた。そのデータは、それら化合物が、広範囲の癌細胞系に活性であり、そして正常細胞へは活性がはるかに少ないということを示している。ここで、本発明者は、一例として、活性化合物の一つであるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを用いる。図４〜２４は、いろいろな濃度でのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの添加前および後の多数のヒト癌細胞系の時間依存性細胞指数を示す。これら細胞系には、Ａ５４９（非小細胞性肺癌細胞系）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（大細胞肺癌細胞系）、Ｈ１９９３細胞（非小細胞性肺癌細胞系）、Ｈ１８３８細胞（非小細胞性肺癌細胞系）、Ｈ２３４７細胞（非小細胞性肺癌細胞系）、ＳＷ６２０細胞（結腸癌細胞系）、ＧＴＬ１６細胞（胃癌細胞系）、ＨＴ２９細胞（結腸癌細胞系）、Ａ１７２細胞（脳癌細胞系）、Ｕ１３８細胞（脳癌細胞系）、Ｕ１１８細胞（脳癌細胞系）、ＳＷ１０８８細胞（脳癌細胞系）、ＨＴ１０８０細胞（結合組織癌細胞系）、ＢｘＰＣ３細胞（膵癌細胞系）、ＨｅｐＧ２細胞（肝癌細胞系）、ＳＫＯＶ３細胞（卵巣癌細胞系）、ＭＣＦ７細胞（乳癌細胞系）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（乳癌細胞系）およびＫＢ（子宮頸癌細胞系）が含まれる。それら結果は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、これら癌細胞系の増殖に阻害剤作用を示したということを示している。これら細胞系に対するＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯのＩＣ５０は、慣用的な化学療法薬であるパクリタキセルおよびビンクリスチンのそれと同様である。
【０１２６】
本発明者は、更に、多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子を過発現するＫＢ２００へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの作用を調べた。この遺伝子は、臨床の化学療法薬、例えば、パクリタキセルおよびビンクリスチン／ビンブラスチンの耐性に応答性である。図２４Ａ〜Ｄは、親ＫＢ細胞系の成長が、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（ＩＣ５０＝３３．１ｎＭ）、パクリタキセル（ＩＣ５０＝７．１９ｎＭ）、ビンブラスチン（ＩＣ５０＝４．７４ｎＭ）およびコルヒチン（ＩＣ５０＝８．２０ｎＭ）によって阻害されたということを示している。これら４種類の化合物のＩＣ５０は、同様の範囲内である。図２４Ｅは、ＫＢ２００細胞の成長が、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（ＩＣ５０＝９．８４ｎＭ）による阻害に感受性であったことを示している。対照的に、ＫＢ２００細胞の成長は、パクリタキセル（ＩＣ５０＞１ｕＭ）、ビンブラスチン（ＩＣ５０＝１３５ｎＭ）およびコルヒチン（ＩＣ５０＝１１６ｎＭ）による阻害への感受性がはるかに少なかった（図２４Ｆ〜Ｈに示される）。これは、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、パクリタキセルおよびビンブラスチン処置に失敗した患者に対する大きなセカンドライン療法でありうるということを示唆している。
【０１２７】
図２５は、非癌性細胞系ＮＩＨ−３Ｔ３が、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（ＩＣ５０＝６ｕＭ）による阻害への感受性がはるかに少なかったことを示している。したがって、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、癌細胞に対して、正常細胞に対するよりも高い細胞障害作用を示す。
【０１２８】
抗癌活性についての in vivo スクリーニング
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌効力を評価するために、３種類のヒト腫瘍異種移植片モデルを用いた。それには、免疫不全ヌードマウスにおけるＭＫＮ４５ヒト胃腸癌、Ｈ４６０ヒト非小細胞性肺癌およびＡ５４９ヒト肺癌の異種移植片モデルが含まれた。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌効力の詳細を、実施例１〜３に与える。
【０１２９】
実施例１
ヌードマウスにおけるＭＫＮ４５ヒト胃腸癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌活性
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌効力を評価するために、免疫不全ヌードマウスにおけるＭＫＮ４５ヒト胃腸癌異種移植片モデルを調べた。マウスモデルは全て、Pharmacology Lab of ACEA Bio (Hangzhou) CO., Ltd. で維持する。ＢＡＬＢ／ｃ免疫不全ヌードマウスは、Shanghai SLAC Laboratory Animal、証明番号：ＳＣＸＫＡ（Shanghai）２００７−０００５より購入した。マウス体重は、１９±１ｇであった。雌マウスのみを、この研究に用いた。被験動物数は、次の通りであった。各用量群に７匹、正対照群に７匹、そして負対照群に７匹。
【０１３０】
試験対照。負対照には、各々のマウスに、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ試験に用いられたのと同容量および同濃度を有する溶媒のみを、１２０ｍｇ／ｋｇで１日おきに１回（ｑｏｄ）１８日間経口投与した。正対照には、経口抗癌化合物であるエトポシド（Etoposide）を、５０ｍｇ／ｋｇで４日毎に１回、１８日間経口投与した。
【０１３１】
試験化合物の調製・投与。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを、２５％リン脂質（Ｓ７５）および７５％ポリビニルピロリドン（ＰＬ−ＰＶＰ）中に溶解させた後、更に希釈して、０．９％ＮａＣｌ水溶液中に８ｍｇ／ｍｌとした。１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄ（１日おきに１回）〜１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ（３日毎に１回）の異なった投薬量のＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを、研究に用いた。
【０１３２】
移植および化合物効力決定のための腫瘍細胞の調製。ＭＫＮ４５ヒト胃腸癌異種移植片モデルのための腫瘍細胞を調製するために、急速成長した腫瘍を、被移植腫瘍マウスから最初に取り出し、それら腫瘍組織を、１〜２ｍｍ３寸法に切開した。次に、これら微小腫瘍を、各々のマウスの補助領域（右側）中に皮下注射した。接種された腫瘍が、ヌードマウスにおいて一定サイズ（６０〜８０ｍｍ３）に成長後、それらマウスを無作為化して、異なった投薬群とし、そして化合物処置を施した。最初の投薬後２〜３週間に、マウスを屠殺し、そして移植された腫瘍を、実験用マウスから取り出した。各々取り出された充実性腫瘍を秤量した；各々の投薬群の腫瘍阻害率を、次の式にしたがって計算した。
【０１３３】
腫瘍阻害率％＝（負対照群の平均腫瘍重量−化合物処置群の平均腫瘍重量）／負対照群の平均腫瘍重量ｘ１００      （１）
動物用飼料、動物用ケージ、支持材料および被験動物が接触する装置を含めた用いられる材料は全て、高圧滅菌した。ヌードマウスは、ＳＰＦ条件下の層流棚で維持した。腫瘍移植後、各々の化合物投薬群のマウス体重および腫瘍サイズを、動的に監視し且つプロットした。腫瘍サイズは、腫瘍の長軸（ａ）および短軸（ｂ）を測定することによって決定し、そして腫瘍体積は、次の式にしたがって計算した。
【０１３４】
腫瘍体積＝ａｘｂ２／２      （２）
結果。ヌードマウスのＭＫＮ４５ヒト胃腸癌異種移植片モデルにおいて、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄおよび１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ投薬群において、それぞれ、５８．０％および５５．７％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。同じ実験において、Etoposide は、５０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄの経路投与投薬量について４８．４％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。それら詳細を、表２に与える。腫瘍サイズの動的変化は、図１に要約する。キャリアマウスの体重の動的変化は、表３に要約する。ＭＫＮ４５異種移植片モデルにおけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄ）の抗癌作用は、同じ薬物投与経路の下での Etoposide（３０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ）の場合と同様である。
【０１３５】
【表２】
2013520439.tif 000010
【０１３６】
【表３】
2013520439.tif 000011
【０１３７】
実施例２
ヌードマウスにおけるＨ４６０ヒト非小細胞性肺癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌活性
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌効力を評価するために、免疫不全ヌードマウスにおけるＨ４６０ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルを用いた。細胞系およびマウスは、Pharmacology Lab of ACEA Bio (Hangzhou) CO., Ltd. で維持した。ＢＡＬＢ／ｃ免疫不全ヌードマウスは、Shanghai SLAC Laboratory Animal、証明番号：ＳＣＸＫＡ（Shanghai）２００７−０００５より購入した。マウス体重は、１９±２ｇの間であった。雌マウスのみを、この研究に用いた。被験動物数は、次の通りであった。各用量群に７匹、正対照群に７匹、そして負対照群に７匹。
【０１３８】
試験対照。負対照には、各々のマウスに、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ試験に用いられたのと同容量および同濃度を有する溶媒のみを、１２０ｍｇ／ｋｇで１日おきに１回（ｑｏｄ）２５日間経口投与した。正対照には、経口抗癌化合物である Etoposide を、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄで２５日間経口投与した。
【０１３９】
試験化合物の調製・投与。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを、２５％リン脂質（Ｓ７５）および７５％ポリビニルピロリドン（ＰＬ−ＰＶＰ）中に溶解させた後、更に希釈して、０．９％ＮａＣｌ水溶液中に８ｍｇ／ｍｌとした。各々のマウスに、化合物溶液を経口投与した。異なった投薬量のＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄおよび１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ）を、研究に用いた。
【０１４０】
移植および化合物効力決定のための腫瘍細胞の調製。Ｈ４６０ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルのための癌細胞を調製するために、フラスコ中の対数期増殖性細胞を、トリプシン処理し、そして細胞を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に１．５ｘ１０７個細胞／ｍｌで再懸濁させた。細胞懸濁液（３ｘ１０６個細胞）を、各々のマウスの補助領域（右側）中に皮下注射した。接種された癌細胞が、ヌードマウスにおいて一定サイズ（１５０ｍｍ３）の腫瘍に成長後、それらマウスを無作為化して、異なった投薬群とし、そして化合物処置を施した。最初の投薬後３〜４週間に、マウスを屠殺し、そして移植された腫瘍を、実験用マウスから取り出した。各々取り出された充実性腫瘍を秤量した；各々の投薬群の腫瘍阻害率を、実施例１の方程式（１）にしたがって計算した。
【０１４１】
動物用飼料、動物用ケージ、支持材料および被験動物が接触する装置を含めた用いられる材料は全て、高圧滅菌した。ヌードマウスは、ＳＰＦ条件下の層流棚で維持した。腫瘍移植後、各々の化合物投薬群のマウス体重および腫瘍サイズを、動的に監視し且つプロットした。腫瘍サイズは、腫瘍の長軸（ａ）および短軸（ｂ）を測定することによって決定し、そして腫瘍体積は、実施例１の式（２）にしたがって計算した。
【０１４２】
結果。ヌードマウスのＨ４６０ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルにおいて、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄおよび１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ３ｄ投薬群において、それぞれ、４７．１％および３１．３％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。同じ実験において、Etoposide は、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄの経路投与投薬量について４８．４％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。それら詳細を、表４に与える。腫瘍サイズの動的変化は、図２に要約する。キャリアマウスの体重の動的変化は、表５に要約する。Ｈ４６０ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルにおけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（１２０ｍｇ／ｋｇ）の抗癌作用は、同じ薬物投与手順の下での Etoposide（３０ｍｇ／ｋｇ）の場合と同様である。
【０１４３】
【表４】
2013520439.tif 000012
【０１４４】
【表５】
2013520439.tif 000013
【０１４５】
実施例３
ヌードマウスにおけるＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌活性
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの in vivo 抗癌効力を評価するために、免疫不全ヌードマウスにおけるＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルを用いた。細胞系およびマウスは、Pharmacology Lab of ACEA Bio (Hangzhou) CO., Ltd. で維持した。ＢＡＬＢ／ｃ免疫不全ヌードマウスは、Shanghai SLAC Laboratory Animal、証明番号：ＳＣＸＫＡ（Shanghai）２００７−０００５より購入した。マウス体重は、２１±１ｇの間であった。雌マウスのみを、この研究に用いた。被験動物数は、次の通りであった。各用量群に７〜８匹、正対照群に６匹、そして負対照群に７匹。
【０１４６】
試験対照。負対照には、各々のマウスに、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ試験に用いられたのと同容量および同濃度を有する溶媒のみを、１２０ｍｇ／ｋｇで１日おきに１回（ｑｏｄ）２５日間経口投与した。正対照には、経口抗癌化合物である Etoposide を、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄで２５日間経口投与した。
【０１４７】
試験化合物の調製・投与。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを、２５％リン脂質（Ｓ７５）および７５％ポリビニルピロリドン（ＰＬ−ＰＶＰ）中に溶解させた後、更に希釈して、０．９％ＮａＣｌ水溶液中に８ｍｇ／ｍｌとした。各々のマウスに、化合物溶液を経口投与した。異なった投薬量のＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄおよび１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ２＊２（２日間続けて投薬後、２日間続けて休む）を、研究に用いた。
【０１４８】
移植および化合物効力決定のための腫瘍細胞の調製。Ａ５４９ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルのための癌細胞を調製するために、フラスコ中の対数期増殖性細胞を、トリプシン処理し、そして細胞を、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中に２．５ｘ１０７個細胞／ｍｌで再懸濁させた。細胞懸濁液（５ｘ１０６個細胞）を、各々のマウスの補助領域（右側）中に皮下注射した。接種された癌細胞が、ヌードマウスにおいて一定サイズ（５０〜６０ｍｍ３）の腫瘍に成長後（接種後約１５日）、それらマウスを無作為化して、異なった投薬群とし、そして化合物処置を施した。最初の投薬後３〜４週間に、マウスを屠殺し、そして移植された腫瘍を、実験用マウスから取り出した。各々取り出された充実性腫瘍を秤量した；各々の投薬群の腫瘍阻害率を、実施例１の方程式（１）にしたがって計算した。
【０１４９】
動物用飼料、動物用ケージ、支持材料および被験動物が接触する装置を含めた用いられる材料は全て、高圧滅菌した。ヌードマウスは、ＳＰＦ条件下の層流棚で維持した。腫瘍移植後、各々の化合物投薬群のマウス体重および腫瘍サイズを、動的に監視し且つプロットした。腫瘍サイズは、腫瘍の長軸（ａ）および短軸（ｂ）を測定することによって決定し、そして腫瘍体積は、実施例１の式（２）にしたがって計算した。
【０１５０】
結果。ヌードマウスのＡ５４９ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルにおいて、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、１２０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄおよび１６０ｍｇ／ｋｇ  ｑ２＊２投薬群において、それぞれ、６７．８％および６２．５％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。同じ実験において、Etoposide は、３０ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄの経路投与投薬量について５９．９％の平均 in vivo 腫瘍阻害率を示した。それら詳細を、表６に与える。腫瘍サイズの動的変化は、図３に要約する。キャリアマウスの体重の動的変化は、表７に要約する。Ａ５４９ヒト非小細胞性肺癌異種移植片モデルにおけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ（１２０ｍｇ／ｋｇ）の抗癌作用は、同じ薬物投与手順の下での Etoposide（３０ｍｇ／ｋｇ）の場合と同様である。
【０１５１】
【表６】
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【０１５２】
【表７】
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【０１５３】
実施例４
Ａ５４９細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンによる細胞増殖の阻害
Ａ５４９細胞（ヒト肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ＲＴ−ＣＥＳシステム（ＡＣＥＡ Biosciences）を用いて監視した。ＲＴ−ＣＥＳシステムは、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche より現在入手可能）と同じである。図４Ａ〜Ｃは、化合物添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、１０．９ｎＭ、５．３ｎＭおよび６１．８ｎＭである。
【０１５４】
実施例５
Ｈ５９６細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｈ５９６細胞（ヒト腺扁平上皮肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステムは、ＡＣＥＡBiosciences 製のＲＴ−ＣＥＳシステムと同じである。図５は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて３７．９ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、１２．５ｎＭおよび３６．９ｎＭである。
【０１５５】
実施例６
Ｈ２９２細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｈ２９２細胞（ヒト肺性肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図６は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて１０．８ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、２．５９ｎＭおよび２．６３ｎＭである。
【０１５６】
実施例７
Ｈ４６０細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（ヒト大細胞肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図７は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて１０．９ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、２．６８ｎＭおよび１０．４ｎＭである。
【０１５７】
実施例８
Ｈ１９９３細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｈ１９９３細胞（ヒト非小細胞性肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図８は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて６０．２ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、５．１２ｎＭおよび２．４３ｎＭである。
【０１５８】
実施例９
Ｈ１８３８細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｈ１８３８細胞（ヒト非小細胞性肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図９は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて１１．８ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ビンクリスチンについて３．１６ｎＭである。
【０１５９】
実施例１０
Ｈ２３４７細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｈ２３４７細胞（ヒト非小細胞性肺癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１０は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて１．７６ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ビンクリスチンについて５．０５ｎＭである。
【０１６０】
実施例１１
ＳＷ６２０細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＳＷ６２０細胞（ヒト結腸癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１１は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて２．６５ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルについて０．９９８ｎＭである。
【０１６１】
実施例１２
ＧＴＬ１６細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＧＴＬ１６細胞（ＭＫＮ４５ヒト胃癌細胞系に由来したヒト胃癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１２は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて６７．０ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、１．０２ｎＭおよび３．７５ｎＭである。
【０１６２】
実施例１３
ＨＴ２９細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＨＴ２９細胞（ヒト結腸癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１３は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて２５．４ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、２．５２ｎＭおよび１２．７ｎＭである。
【０１６３】
実施例１４
Ａ１７２細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ａ１７２細胞（ヒト脳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１４は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、１１．６ｎＭ、４．４６ｎＭおよび１．３０ｎＭである。
【０１６４】
実施例１５
Ｕ１３８ＭＧ細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｕ１３８ＭＧ細胞（ヒト脳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１５は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、３．４１ｎＭ、１８．１ｎＭおよび０．６４１ｎＭである。
【０１６５】
実施例１６
Ｕ１１８ＭＧ細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
Ｕ１１８ＭＧ細胞（ヒト脳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１６は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、１３．１ｎＭ、１２．３ｎＭおよび４．３１ｎＭである。
【０１６６】
実施例１７
ＳＷ１０８８細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＳＷ１０８８細胞（ヒト脳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１７は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、２１．２ｎＭ、１３．１ｎＭおよび４．９６ｎＭである。
【０１６７】
実施例１８
ＨＴ１０８０細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＨＴ１０８０細胞（ヒト結合組織癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１８は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよびビンクリスチンについてそれぞれ、７．６３ｎＭおよび２．０１ｎＭである。
【０１６８】
実施例１９
ＢｘＰＣ３細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＢｘＰＣ３細胞（ヒト膵癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図１９は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて６．６０ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルおよびビンクリスチンについてそれぞれ、８．８６ｎＭおよび４．０６ｎＭである。
【０１６９】
実施例２０
ＨｅｐＧ２細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、１０，０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２０は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて２５．９ｎＭである。
【０１７０】
実施例２１
ＳＫＯＶ３細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＳＫＯＶ３細胞（ヒト卵巣癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、３０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２１は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて５．４７ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、パクリタキセルについて５．３４ｎＭである。
【０１７１】
実施例２２
ＭＣＦ７細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＭＣＦ７細胞（ヒト乳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２２は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて７４．４ｎＭである。比較において、計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、１１．３ｎＭパクリタキセルである。
【０１７２】
実施例２３
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（ヒト乳癌細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセルおよびビンクリスチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２３は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて３２．４ｎＭである。
【０１７３】
実施例２４
多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子を過発現するＫＢ２００細胞におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害。
【０１７４】
親としての子宮頸癌細胞系であるＫＢ細胞を、最初に調べた。ＫＢ細胞を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセル、ビンブラスチンおよびコルヒチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２４Ａ〜Ｄは、化合物添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセル、ビンブラスチンおよびコルヒチンについてそれぞれ、３３．１ｎＭ、７．１９ｎＭ、４．７４ｎＭおよび８．２０ｎＭである。
【０１７５】
これら化合物の効力を、多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子を過発現するＫＢ２００細胞に対して更に調べた。同様に、ＫＢ２００細胞を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、パクリタキセル、ビンブラスチンおよびコルヒチンを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２４Ｅ〜Ｈは、化合物添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ、ビンブラスチンおよびコルヒチンについてそれぞれ、９．８４ｎＭ、０．１３５μＭおよび０．１１６μＭである。パクリタキセルについて計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、＞１μＭである。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、慣用的な化学療法（例えば、パクリタキセルおよびビンブラスチン）に耐性である細胞系に対して十分な効力を示す。これは、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、パクリタキセルおよびビンブラスチン処置に失敗した患者に対する大きなセカンドライン療法でありうるということを示唆している。
【０１７６】
実施例２５
ＮＩＨ３Ｔ３正常組織細胞系におけるＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる細胞増殖の阻害
ＮＩＨ３Ｔ３細胞（正常組織細胞系）を、９６ウェルＥプレート装置（Roche）のウェル中に、５０００個／ウェルの初期播種細胞密度で播種し、そしてインキュベーター中において標準的な細胞培養条件下で約２４時間プレインキュベートした。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏを、ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、インキュベーション時間後にウェル中に加えた。細胞状態を、化合物添加の前・後に、ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅシステム（Roche）を用いて監視した。図２５は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ添加の前・後の時間の関数として規格化された細胞指数を示す。その細胞指数は、化合物添加直前の時点での細胞指数値に対して規格化した。計算されたＩＣ５０（化合物処置後７２時間）は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏについて６．０μＭである。対照的に、試験された癌細胞系全てに対するＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯのＩＣ５０は、低ｎＭ範囲内である。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、癌細胞に対して、正常細胞に対するよりも高い細胞障害性作用を示す。
【０１７７】
実施例２６
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる in vitro および in vivo チューブリン重合の阻害
微小管は、重複した染色体が、二つの娘細胞への細胞の開裂前に二つの同一のセットに分離する時の有糸分裂を含めた数多くの細胞過程において重要である。微小管の不可欠な役割、および有糸分裂および細胞分裂におけるそれらの動力は、微小管を、抗癌薬の重要な標的にする。間期中の細胞において、微小管は、それらのチューブリンを、約３分〜数時間のハーフタイムで、細胞質プール中の可溶性チューブリンと交換する。有糸分裂の開始で、間期微小管ネットワークは脱集合し、そして有糸分裂紡錘体を形成し且つ染色体を動かす極めて動的な微小管の集団によって置き換えられる。有糸分裂紡錘体微小管は、間期細胞中の微小管よりも２０〜５０倍動的であり、そしてより多くの紡錘体微小管が、それらのチューブリンを、１５秒もの速いハーフタイムで、可溶性プール中のチューブリンと交換する。
【０１７８】
有糸分裂紡錘体微小管の動力は、レギュレーターによるモジュレーションに、および微小管活性薬による破裂に、鋭く感受性である。微小管標的薬は、微小管重合および動力を広範囲の方法で変更することができる。ここで、本発明者は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの作用機構、すなわち、（１）それは、in vitro の微小管集合を阻害する、（２）それは、培養細胞中の微小管ネットワークに影響を与える、そして（３）それは、Colchicine と同様の機構によってチューブリン集合を阻害するということを証明する。
【０１７９】
方法
in vitro 微小管集合検定。微小管重合は、９６ウェル微量滴定プレート中において、ＭＡＰの多いチューブリンと、ＨＴＳ−チューブリン重合検定キットプロトコル（Cytoskeleton）に基づく、８０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ  ｐＨ６．９、０．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＧＴＰ、１０％グリセロールおよび４％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する緩衝液中のいろいろな濃度のＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏで行った。吸光度の増加は、３７℃において４０５ｎｍ、Beckman Multimode ＤＴＸ８８０プレートリーダーで測定し、６０秒毎に３０分間記録した。
【０１８０】
スピンカラム検定。チューブリンを、［［３Ｈ］ビンブラスチンまたは［３Ｈ］コルヒチンと一緒に、０．０５Ｍ  ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．９、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＧＴＰを含有する緩衝液中の異なった濃度の未標識ビンブラスチンか、コルヒチンかまたはＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの存在下でインキュベートした。反応混合物を、３７℃で１時間インキュベートした。それら試料を、緩衝溶液で予め平衡した illustraＴＭ MicroSpinＴＭＧ−５０カラム（ＧＥ Healthcare）上に装填した。それらカラムを、１．５ｍｌ管中に入れ、室温において７５０ｇで２分間回転させ、そしてフロースルー（flow-through）中の放射能を、シンチレーションカウンターによって分析した。
【０１８１】
結果
図２６Ａは、ＭＡＰの多いチューブリンを用いた in vitro の微小管集合へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの作用を示す。負対照試料において、４０５ｎＭでの吸光度（Ａ４０５）は、時間で増加した。Ａ４０５の増加は、１０分でプラトーに達する。５μＭビンクリスチンの存在下において、チューブリン重合は、対照試料の場合と比較して５０％を超えて阻害された。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの存在下において、チューブリン重合は、濃度依存方式で阻害された。０．０４μＭでのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、負対照の場合と同様である阻害を示さなかった。５μＭでのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、正対照（５μＭでのビンクリスチン）の場合と同様の阻害パターンを示した。５μＭパクリタキセル（チューブリン重合増強剤）の存在下において、チューブリン重合は、負対照の場合と比較して更に増強された。
【０１８２】
図２６Ｂは、Ａ５４９細胞中において、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの２０時間処置による微小管体制の阻害を示す。対照細胞における微小管ネットワークは、正常な体制および配置を示した（図２４Ｂ  ＤＭＳＯ）。対照的に、パクリタキセル処置は、細胞微小管の密度の増加を伴う微小管重合を引き起こした（図２４Ｂ Paclitaxel）。更に、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ処置は、ビンクリスチンで誘発される微小管変化の場合と同様の知見をもたらした（図２４Ｂ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ＆ビンクリスチン）。
【０１８３】
図２６Ｃは、スピンカラム検定を用いて、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、コルヒチン結合部位によってチューブリンと相互作用するということを示している。図２６Ｃ（上部パネル）に示されるように、未標識コルヒチンの存在下における［３Ｈ］コルヒチンとのチューブリンインキュベーションは、フロースルー中で見出される［３Ｈ］コルヒチンの量を濃度依存方式で減少させた。同様に、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、フロースルー中の［３Ｈ］コルヒチンの量を濃度依存方式で減少させた。負対照として、ビンブラスチンは、フロースルー中の［３Ｈ］コルヒチンの量に影響を与えなかった。本発明者は、更に、スピンカラム検定を用いて、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、チューブリン上のビンブラスチン結合部位へ結合することによってチューブリンと相互作用するかどうかを調べた。図２６Ｃ（下部パネル）に示されるように、未標識ビンブラスチンの存在下における［３Ｈ］ビンブラスチンとのチューブリンインキュベーションは、フロースルー中で見出される［３Ｈ］ビンブラスチンの量を濃度依存方式で減少させた。対照すると、コルヒチンもＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏも、フロースルー中の［３Ｈ］ビンブラスチンの量に影響することはなかった。
【０１８４】
実施例２７
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、癌細胞においてアポトーシスを誘発する
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏ化合物が、癌細胞においてアポトーシスを誘発するかどうかを調べるために、Ａ５４９ヒト肺癌細胞を、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよび３７ｎＭパクリタキセルで処置した。細胞アポトーシスおよび細胞死の検出は、Cell Death Detection ＥＬＩＳＡキット（Roche Applied Sciences）により、キットによる検定プロトコルにしたがって測定した。簡単にいうと、５０００個細胞を、９６ウェルプレートの各々のウェル中に播種した。２４時間インキュベーション後、それら細胞を、細胞増殖のＩＣ５０値に近い濃度である３７ｎＭのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよびパクリタキセルで処置した。細胞を採取し、そして薬物処置後２４時間、４８時間または７２時間に溶解させた。２０マイクロリットルの溶解産物を取り出し、ストレプトアビジン被覆マイクロプレートに移した後、抗ヒストン−ビオチン抗体および抗ＤＮＡ−ＰＯＤ抗体と一緒に２時間インキュベート後、発色用に２，２’−アジノビス−３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸基質を加えた。そのプレートを、Beckman Multimode ＤＴＸ８８０プレートリーダーにおいて４０５ｎｍおよび４９０ｎｍの吸光度で測定した。
【０１８５】
図２７Ａに示されるように、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよび３７ｎＭパクリタキセルで処置された細胞は、（薬物処置後４８時間から開始する）強いアポトーシスシグナルを示すが、ＤＭＳＯで処置されただけの対照細胞は、最小のシグナルを示した。これは、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、Ａ５４９肺癌細胞において時間依存性アポトーシスを誘発したことを示している。更に、本発明者は、二つの他の癌細胞系Ｈ５９６およびＨ２９２も調べた。図２７Ｂは、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、これら二つの細胞系において３７ｎＭパクリタキセルと同様のレベルのアポトーシスを引き起こしたことを示している。総合すると、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、癌細胞においてアポトーシスを誘発した。
【０１８６】
実施例２８
ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏは、癌細胞においてＧ２／Ｍ細胞周期停止を誘発する
微小管は、細胞の重複した染色体が、二つの娘細胞への細胞の開裂前に二つの同一のセットに分離する際の有糸分裂の過程において極めて重要である。パクリタキセルおよびビンブラスチンなどの、微小管を標的とする化合物は、微小管動力を抑制し且つ有糸分裂過程をブロックする。結果として、細胞は、Ｇ２／Ｍ期で阻止されるであろう。ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏが、癌細胞分裂の場合の有糸分裂過程に影響を与えるかどうかを調べるために、Ａ５４９ヒト肺癌細胞を、３３ｎＭのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏおよびパクリタキセルで、または負対照として役立つ０．２％ＤＭＳＯで処置した。被処置細胞を、有糸分裂および有糸分裂阻止を行う細胞についてのマーカーである、ホスホヒストンＨ３に対する抗体で染色した。図２８Ａは、パクリタキセルおよびＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏによる有糸分裂阻止の程度を有糸分裂指数で定量したものを示す。それは、パクリタキセル、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  ＯおよびＤＭＳＯで処置されたＡ５４９についてそれぞれ、４４±８％、４５±３％および３±１％であった。
【０１８７】
更に、本発明者は、フローサイトメトリーを用いて、細胞周期へのＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏの作用も調べた。簡単にいうと、Ａ５４９細胞を、６ウェル組織培養プレート中に４００，０００個／ウェルの細胞密度で播種した。約２４時間後、それら細胞を、３７ｎＭ  ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏで処置し、そして更に２４時間インキュベートさせた。細胞を、ＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン処理し、計数し、そして氷冷７０％メタノール中で固定し且つ４℃で貯蔵した。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、ヨウ化プロピジウムで染色し、そしてフローサイトメトリー分析まで氷上で保持した。図２８Ｂに示されるように、Ｇ２／Ｍ期での細胞集団は、ＣＯＭＰＯＵＮＤ  Ｏで処置された細胞において、ＤＭＳＯのみで処置された細胞と比較して有意に増加した。
【０１８８】
公報、特許、特許出願および公表された特許出願などの参考文献は、全てを通して、本明細書中にそのまま援用される。
前述の発明は、理解の明瞭さの目的で、図および実施例によってある程度詳細に記載してきたが、特定の僅かな変化および修飾が実施されるであろうということは当業者に明らかである。したがって、説明および実施例は、本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
2013520439.tif 000026
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２４Ｅ】
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【図２４Ｆ】
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【図２４Ｇ】
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【図２４Ｈ】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７Ａ】
2013520439.tif 000057
【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【国際調査報告】
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