(57)【要約】  患者にｍＴＯＲＣ１／Ｃ２、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの阻害薬を投与することを含む、癌の処置のための方法および組成物。ある観点において、ｍＴＯＲＣ１／Ｃ２阻害薬とＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害薬の組合わせを使用する。他の観点は明細書中に記載されている。【選択図】  図１
2013522215.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置するための、第１薬剤と第２薬剤を同時または任意順序で投与することができる、療法有効量の、Ｃ１およびＣ２  ｍＴＯＲキナーゼの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第１有効薬剤とＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第２有効薬剤との組合わせの使用。
【請求項２】
癌の細胞がＩＧＦ−１Ｒおよびインスリン受容体（ＩＲ）を発現する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
癌の癌細胞が活性化型のＫ−ＲＡＳまたはＢ−ＲＡＦ遺伝子変異のうち少なくとも１つを有する、請求項１〜２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
癌の癌細胞が活性化型のＰＩ３Ｋ変異またはＰＴＥＮ喪失のうち少なくとも１つを有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
第１有効薬剤によるｍＴＯＲ阻害が、第２有効薬剤の不存在下であればｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲのレベルを上昇させる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
癌の癌細胞がＯＳＩ−９０６に対して感受性であり、かつＯＳＩ−０２７に対して非感受性である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
癌の癌細胞がＯＳＩ−０２７に対して感受性であり、かつＯＳＩ−９０６に対して非感受性である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
第１薬剤と第２薬剤が相乗活性を生じる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
癌の細胞においてアポトーシスを誘導する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
第２有効薬剤がＯＳＩ−９０６を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
第１有効薬剤がＯＳＩ−０２７を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
癌の癌細胞が間葉性表現型を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
ＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６を投与することからなる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６が相乗的に挙動する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６が超相加的に挙動する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
癌の細胞がＰＩ３Ｋ軸の異常調節を伴う、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
癌が、卵巣癌、頭頸部癌、乳癌、大腸癌、膵臓癌、小細胞性肺癌、非小細胞性肺癌、リンパ腫、前立腺癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、神経膠芽細胞腫、ユーイング肉腫、副腎皮質癌、胃癌、多発性骨髄腫、未分化甲状腺癌または骨転移を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
癌が、卵巣癌または非小細胞性肺癌を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
ＯＳＩ−９０６を第２薬剤として投与日に１日当たり約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの量で投与する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
ＯＳＩ−０２７を第１薬剤として投与日に１日当たり約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの量で投与する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
少なくとも約８週間の安定疾患または腫瘍退縮をもたらす、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
さらに少なくとも１種類の追加の有効抗癌薬を投与することを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
容器、ＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６を含む組成物、ならびに腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置するのに使用するための指示を含むパッケージ挿入物を含むキット。
【請求項２４】
患者においてその細胞がＰＩ３Ｋ軸の異常調節を伴う腫瘍または腫瘍転移を処置するための、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、およびｍＴＯＲ（ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方）の触媒サブユニットを一緒に効果的に直接阻害する療法有効量の１種類以上の有効薬剤の使用であって、その際、ｍＴＯＲ阻害はｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲのレベルを上昇させるものである使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は先のUS Appl. No. 61/311,832(2010年3月9日出願)に基づく優先権を主張し、その内容全体を本明細書に援用する。
本発明は、少なくとも一部は抗癌処置、特定の化合物および抗癌薬、ならびにその妥当な組合わせを含むそれらの化合物で腫瘍および癌を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
他の多数のキナーゼにより仲介されるシグナル伝達経路の異常調節は、ヒトの疾患の発症において鍵となる要因である。良性および悪性の増殖性疾患、障害、たとえばアレルギー性接触皮膚炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺障害、乾癬、多発性硬化症、喘息、糖尿病合併症関連の障害、および心血管系の炎症性合併症、たとえば急性冠動脈症候群を含めた多くの疾患状態で、異常または過度のプロテインキナーゼ活性または発現が観察されている。
【０００３】
ＩＧＦ−１Ｒは膜貫通ＲＴＫであり、主にＩＧＦ−１に結合するが、より低い親和性でＩＧＦ−ＩＩおよびインスリンにも結合する。ＩＧＦ−１がそれの受容体に結合すると、受容体オリゴマー化、チロシンキナーゼ活性化、分子間受容体自己リン酸化、および細胞性基質（主要な基質はＩＲＳ１およびＳｈｃである）のリン酸化が生じる。リガンド活性化されたＩＧＦ−１Ｒは正常細胞において有糸分裂活性を誘発し、異常な成長において重要な役割を果たす。
【０００４】
ＩＧＦ−１Ｒは細胞の分裂、発生および代謝において重要な役割を演じ、それの活性化状態で発癌およびアポトーシス抑制において役割を果たす。ＩＧＦ−１Ｒは多数の癌細胞系において過剰発現することが知られている（ＩＧＦ−１Ｒの過剰発現は先端巨大症および前立腺癌に関連づけられている）。これに対し、ＩＧＦ−１Ｒ発現のダウンレギュレーションは腫瘍形成の阻害および腫瘍細胞アポトーシスの増大をもたらすことが示された。
【０００５】
ＩＧＦ−１経路はヒトの腫瘍発症において重要な役割をもつ：１）ＩＧＦ−１Ｒの過剰発現が種々の腫瘍（乳癌、大腸癌、肺癌、肉腫）に頻繁にみられ、攻撃性表現型としばしば関連する。２）高い循環ＩＧＦ１濃度は、前立腺癌、肺癌および乳癌のリスクと強く相関する。さらに、ＩＧＦ−１Ｒはインビトロおよびインビボでのトランスフォームした表現型の樹立および維持のために必要である（Baserga R., Exp. Cell. Res., 1999, 253, 1-6）。ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性は幾つかの癌遺伝子のトランスフォーミング活性に必須である：ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＳＶ４０  Ｔ抗原、活性化されたＲａｓ、Ｒａｆおよびｖ−Ｓｒｃ。正常な線維芽細胞におけるＩＧＦ−１Ｒの発現は新生物表現型を誘導し、これが次いでインビボで腫瘍を形成する可能性がある。ＩＧＦ−１Ｒ発現は足場依存性成長において重要な役割を果たす。ＩＧＦ−１Ｒは細胞を化学療法−、放射線−およびサイトカイン−誘導性アポトーシスから保護することも示されている。逆に、内在性ＩＧＦ−１Ｒを優性ネガティブＩＧＦ−１Ｒ、三重らせん形成、またはアンチセンス発現ベクターにより阻害すると、インビトロでのトランスフォーミング活性および動物モデルにおける腫瘍成長を抑制することが示された。
【０００６】
ＩＧＦシグナル伝達経路のターゲティングは抗癌療法の開発における戦略である。抗腫瘍薬として使用するために、ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性を直接阻害する化合物、およびＧＦ−１Ｒ活性化の遮断によりＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性を低下させる抗体、またはＩＧＦ−１Ｒ発現を遮断するアンチセンスオリゴヌクレオチドの開発は、著しい研究努力の領域である。相同性の高いインスリン受容体は、ＩＧＦ経路をターゲティングする際の複雑さをさらに追加する。ＩＲ−ＡおよびＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲハイブリッド活性は増殖作用をもつ可能性がある。Ulanet et al., PNAS, 107(24), 10791-10798 (2010)。ＯＳＩ−９０６はＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの小分子阻害薬であり、現在は臨床開発中である。US 2006/0235031にはＯＳＩ−９０６の製造および使用が記載されている(例31)。Mulvihill et al., Future Med. Chem., 1(6), 1153-1171 (2009)も参照。
【０００７】
Ｔｏｒ遺伝子は最初は酵母において薬物ラパマイシン(rapamycin)の標的として同定された。酵母ＴＯＲの構造的および機能的に保存された哺乳動物カウンターパートであるｍＴＯＲがその後に発見された。ｍＴＯＲはホスホイノシチドキナーゼ関連キナーゼ（ＰＩＫＫ）ファミリーのメンバーであるが、ホスホイノシチドをリン酸化するよりむしろタンパク質をセリンまたはトレオニン残基においてリン酸化する。遺伝学的研究により、ｍＴＯＲはショウジョウバエ、線虫および哺乳動物において細胞の成長および発生にとって必須であり、ｍＴＯＲをコードする遺伝子の破壊はすべての種において致命的となることが示された。幾つかの研究により、ｍＴＯＲは細胞の成長、増殖および代謝の制御において中枢的役割をもつことが証明された。ｍＴＯＲは、翻訳、転写、ｍＲＮＡの代謝回転、タンパク質の安定性、アクチン細胞骨格の組織化、および自食作用を含めた、広範な細胞機能を調節する。哺乳動物細胞中には２種類のｍＴＯＲ複合体がある。ｍＴＯＲ複合体Ｉ（ｍＴＯＲＣ１）はラプター（raptor）−ｍＴＯＲ複合体であり、これは主にラパマイシン感受性様式で細胞の成長を調節する；これに対し、ｍＴＯＲ複合体ＩＩ（ｍＴＯＲＣ２）はリクター（rictor）−ｍＴＯＲ複合体であり、これはラパマイシン非感受性様式で細胞骨格の組織化を調節する。
【０００８】
ｍＴＯＲ経路の異常調節が多様なヒト疾患における共通のテーマとして浮上しており、したがってｍＴＯＲをターゲティングする薬物は療法価値をもつ。最も明瞭にｍＴＯＲＣ１の脱調節と関連する疾患は結節硬化症候群（tuberous sclerosis complex）（ＴＳＣ）およびリンパ管平滑筋腫（Lymphangioleiomyomatosis）（ＬＡＭ）であり、両者ともＴＳＣ１またはＴＳＣ２腫瘍サプレッサーの変異により引き起こされる。ＴＳＣを伴う患者は良性腫瘍を発症するが、これは脳に存在する場合には発作、精神発育遅滞および死亡を引き起こす可能性がある。ＬＡＭは重篤な肺疾患である。ｍＴＯＲＣ１の阻害は、ＬＫＢ１変異により引き起こされるポイツ-ジェガース癌傾性症候群(Peutz-Jeghers cancer-prone syndrome)、およびＰＴＥＮ喪失から生じるカウデン病(Cowden’s disease)を含めた、ｍＴＯＲ軸の過剰活性化をもたらす遺伝性障害を伴う患者を助ける可能性がある。ｍＴＯＲＣ１は散在性癌の発生においても役割をもつ可能性もある。幾つかの腫瘍サプレッサー、特にＰＴＥＮ、ｐ５３、ＶＨＬおよびＮＦ１の不活性化がｍＴＯＲＣ１活性化に関連づけられている。ラパマイシンおよびそれのアナログ（たとえば、ＣＣＩ−７７９、ＲＡＤ００１およびＡＰ２３５７３）はＴＯＲＣ１を阻害し、第ＩＩ相臨床試験で中等度の抗癌活性を示した。しかし、Ｓ６Ｋ１からインスリン／ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路への負のシグナルのため、ラパログ（rapalog）のようなｍＴＯＲＣ１阻害薬はＰＫＢ／Ａｋｔを活性化する可能性があることを留意するのが重要である。この作用が長期ラパマイシン処置と共に持続するならば、それは増強した生存シグナルを伴う癌細胞を生じる可能性があり、これは臨床的に望ましくないであろう。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路は多数の癌において活性化される。活性化されたＡｋｔは、ＢＡＤ、ＦＯＸＯ、ＮＦ−κＢ、ｐ２１Ｃｉｐ１、ｐ２７Ｋｉｐ１、ＧＳＫ３βその他のタンパク質をリン酸化することにより細胞生存、細胞増殖および代謝を調節する。ＡｋｔはＴＳＣ２をリン酸化することによっても細胞成長を促進する可能性がある。Ａｋｔ活性化は、おそらく成長、増殖および生存を全体的に促進し、一方ではアポトーシス経路を阻害することにより、細胞のトランスフォーメーションおよびアポトーシス抵抗性を促進するのであろう。ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２両方の阻害薬は亢進したＡｋｔリン酸化を伴う腫瘍の処置に有益なはずであり、細胞成長、細胞生存および細胞増殖をダウンレギュレートするはずである。
【０００９】
ｍＴＯＲの上流または下流にあるシグナル伝達経路が、乳癌、肺癌、腎癌、前立腺癌、血液癌、肝癌、卵巣癌、甲状腺癌、胃腸管癌およびリンパ腫を含めた多様な癌においてしばしば脱調節される。高レベルの異常調節されたｍＴＯＲ(mammalian target of rapamycin、ラパマイシンの哺乳動物標的）活性は、結節硬化症候群、ＰＴＥＮ関連過誤腫性症候群(hamartoma syndrome)およびポイツ-ジェガース症候群を含めた、多様なヒト癌および幾つかの過誤腫性症候群と関連する。
【００１０】
過剰発現または異常調節された受容体型チロシンキナーゼおよび構成性活性化された変異型受容体を含めた癌遺伝子は、ＰＩ３Ｋ仲介シグナル伝達経路を活性化する。ヒト癌におけるＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲ経路のさらに他の変化には、ＰＩ３Ｋのｐ１１０触媒サブユニットの増幅、ｐ８５  ＰＩ３Ｋ調節サブユニットの変異、ＰＴＥＮホスファターゼ機能の喪失、ＩＮＰＰ４Ｂホスファターゼ機能の喪失、ＡＫＴの増幅または変異、ＴＳＣ１またはＴＳＣ２の変異、およびｅＩＦ４ＥまたはＳ６Ｋ１の過剰発現または増幅が含まれる。ＴＳＣ１およびＴＳＣ２におけるヘテロ接合性の変異または喪失は、結節硬化症（ＴＳＣ）症候群を発症させる場合が最も多い。ＴＳＣ異常調節は大部分が過誤腫を付随する頻度が高いが、ＴＳＣを伴う患者は明細胞組織性の悪性腎癌のリスクをもつ。ＴＳＣの不活性化が悪性疾患自体を生じるのではないかもしれないが、この経路の脱調節は悪性疾患発症に際して血管新生のために決定的であると思われる。ＴＳＣ２はｍＴＯＲ−依存性および−非依存性の様式によりＶＥＧＦ産生を調節する。
【００１１】
マクロライド系の抗真菌性抗生物質であるラパマイシンは、インビトロおよびインビボの両方においてｍＴＯＲＣ１複合体のアロステリック阻害薬である。エベロリムス(Everolimus)（ＲＡＤ００１，Ａｆｉｎｉｔｏｒ）およびテムシロリムス(temsirolimus)（ＣＣＩ−７７９）は両方とも特定の適応症の処置用として承認されている。テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）は、乳癌、腎癌およびマントル細胞リンパ腫の第ＩＩ相臨床試験で中等度の抗腫瘍活性を示した。ラパマイシンアナログはｍＴＯＲ阻害薬として癌に対して臨床開発中であるが、ＣＣＩ−７７９による臨床結果は乳癌および腎癌の患者においてかなり控えめである。その理由は、おそらくラパマイシンがラプター−ｍＴＯＲ複合体（ｍＴＯＲＣ１）を介してｍＴＯＲ機能を部分的に阻害するからであろう。乳癌患者の２／３および腎癌患者の１／２がラパマイシン療法に対して抵抗性であることも見出された。Cloughesyらは、ラパマイシン処置したＧＢＭ患者の半数が応答せず、それらの患者からの腫瘍切片はラパマイシンに応答したＡｋｔ過剰活性化を示すことを証明し、これはｍＴＯＲＣ２複合体活性の亢進を指摘する(Cloughesy TF, et al. 2008 Antitumor Activity of Rapamycin in a Phase I Trial for Patients with Recurrent PTEN-Deficient Glioblastoma. PLoS Med 5(1): e8. doi:10.1371/journal.pmed.0050008。
【００１２】
リクター−ｍＴＯＲ複合体（ｍＴＯＲＣ２）の最近の知見で、それはＡＫＴ（Ｓ４７３）のリン酸化に関与し、細胞生存の調節およびＰＫＣαの変調に際して重要であり、ラパマイシン非依存性様式でアクチン細胞骨格組織化の調節において主要な役割を果たし、これらのｍＴＯＲ活性の阻害はおそらくより広域の抗腫瘍活性およびより良好な効力にとって重要であろう。したがって、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２を阻害するｍＴＯＲ阻害薬の使用が望ましい可能性がある。
【００１３】
特定のｍＴＯＲＣ１機能、たとえば複数部位での４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化は、ラパマイシンに対して非感受性であることが証明された。さらに、ラパマイシンはｍＴＯＲＣ２複合体を急激には阻害しないので、ラパマイシンはｍＴＯＲシグナル伝達の部分的阻害をもたらすにすぎない。したがって、より広域の抗腫瘍活性およびより良好な効力のためにはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２両方の機能を完全に阻害する直接的ｍＴＯＲキナーゼ阻害薬の使用が要求される可能性がある。
【００１４】
ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴおよびｍＴＯＲの阻害薬を同定するための努力が行なわれている。 Courtenay et al., J. Clin. Oncol., 28, 1075-1083 (2010); Workman et al., Cancer Res., 70, 2146-2157 (2010)。ＯＳＩ−０２７は小分子の二重ｍＴＯＲＣ１／Ｃ２阻害薬であり、それの製造および使用は最初にUS 2007/0112005、例258に記載された。ＯＳＩ−０２７の好ましい塩類はWO 2009/117482に記載されている。ＯＳＩ−０２７は現在、臨床開発中である。
【００１５】
組合わせ療法は、療法関連用量の各薬剤を単独で使用するのと比較してより大きな効力および副作用軽減をもたらす可能性がある方法である。ある例では薬物組合わせの効力は相加的である（その組合わせの効力が、各薬剤の単独の効果の和とほぼ等しい）が、他の例では効果は相乗的である（その組合わせの効力が、単独で投与した各薬剤の効果の和より大きい）。
【００１６】
R.T. Kurmashevaらは、非転移性横紋筋肉腫を処置するためにｍＴＯＲの阻害薬とＩＧＦ−１Ｒを阻害する抗体とを組み合わせることを提唱した。ASCO Educ. Book 2008: 460-464。Bertrandらは、アルファＩＧＦ−１Ｒ抗体Ａ１２の有効性をＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の小分子阻害薬で増強できたと報告している。Leukemia, 20(7):1254-60 (July 2006)。X. Wanらは、横紋筋肉腫細胞系を抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体で前処理するとラパマイシン誘発によるＡｋｔ活性化が遮断されると報告している。Oncogene, 26, 1932-1940 (2007)。Di Cosimoらは、ＲＡＤ００１が乳癌細胞系においてｐＡｋｔおよびＩＲＳ−１の両方を誘導すること、またＲＡＤ００１とＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼ阻害薬およびモノクローナル抗体との組合わせがＲＡＤ００１によるｐＡｋｔ誘導を阻止してインビトロおよび異種移植体において超相加的な成長阻害を生じたことを報告している。J. Clin. Onc., 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol. 25, No. 18S (June 20 Suppl.), 2007: 3511。
【００１７】
Rosenらは、ＡＫＴ阻害はＨＥＲ３、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲを含めて保存された一連のＲＴＫ類を誘導し、これは一部はｍＴＯＲＣ１阻害によると報告した。Cancer Cell, 19, 58-71 (2011)。
【００１８】
ＡＲＩＡＤ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓは、ｍＴＯＲ阻害薬デフォロリムス(deforolimus)をＩＧＦ−１Ｒ阻害抗体であるＭＫ−０６４６と組み合わせて非小細胞性肺癌その他の充実性腫瘍において臨床試験することを発表した。ＩｍｃｌｏｎｅのＩＭＣＡ１２はテムシロリムス(temsirolimus)との組合わせで臨床試験中であると考えられる。抗ＩＧＦ−１Ｒモノクローナル抗体であるフィギツムマブ(Figitumumab)（Ｐｆｉｚｅｒ）とｍＴＯＲ阻害薬エベロリムス(everolimus)（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は組み合わせて第Ｉ相試験され、最良の臨床効果は部分的応答であった。これらの組合わせ方法はそれぞれ、ＩＲを同時ターゲティングしない選択的ＩＧＦ−１Ｒ阻害薬と、ｍＴＯＲＣ２を効果的にターゲティングしないアロステリックｍＴＯＲＣ１阻害薬とを組み合わせた。WO 2010/120599には、ある癌を抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体とある特定されたｍＴＯＲ阻害薬のひとつとの組合わせで処置することが述べられている。WO 2009/126304、290-291ページには、ＩＧＦ−１Ｒ活性化がＰＩ３Ｋ生存経路を誘導すると述べられており、ＮＳＣＬＣおよび膵臓細胞系におけるＭ１３−Ｃ０６とＰＩ−１０３の組合わせが記載されている。WO 2009/009016; WO 2009/008992; WO 2007/280928も参照。
【００１９】
ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．は、ラパマイシンがＩＧＦ−１ＲからＰＩ３Ｋへのカップリングを増強することにより腫瘍細胞をＯＳＩ−９０６に対して感受性にすると報告した。Buck, et al., International Conference on Molecular Targets and Cancer Therapeutics (Abstract # PR1)。BarrらはAACR April 2010 meetingで、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７が細胞増殖を相乗的に阻害し、ある例では相乗的にアポトーシスを誘導したという所見を発表した。ｍＴＯＲはＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの下流にあるが、本発明者らはこの相乗作用がＩＧＦ−１Ｒ、ＩＲおよびｍＴＯＲのオーバーラップしない機能から生じると提唱する。したがって、単剤としてのＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲまたはｍＴＯＲの阻害薬に対して制限された感受性をもつ細胞は、この組合わせに対してより大きい感受性をもつ可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】US 2006/0235031
【特許文献２】US 2007/0112005
【特許文献３】WO 2009/117482
【特許文献４】WO 2010/120599
【特許文献５】WO 2009/126304
【特許文献６】WO 2009/009016
【特許文献７】WO 2009/008992
【特許文献８】WO 2007/280928
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Baserga R., Exp. Cell. Res., 1999, 253, 1-6
【非特許文献２】Ulanet et al., PNAS, 107(24), 10791-10798 (2010)
【非特許文献３】Mulvihill et al., Future Med. Chem., 1(6), 1153-1171 (2009)
【非特許文献４】Cloughesy TF, et al. 2008 Antitumor Activity of Rapamycin in a Phase I Trial for Patients with Recurrent PTEN-Deficient Glioblastoma. PLoS Med 5(1):e8. doi:10.1371/journal.pmed.0050008
【非特許文献５】Courtenay et al., J. Clin. Oncol., 28, 1075-1083 (2010); Workman et al., Cancer Res., 70, 2146-2157 (2010)
【非特許文献６】R.T. Kurmasheva et al. ASCO Educ. Book 2008: 460-464
【非特許文献７】Bertrand et al. Leukemia, 20(7):1254-60 (July 2006)
【非特許文献８】X. Wan et al. Oncogene, 26, 1932-1940 (2007)
【非特許文献９】Di Cosimo et al. J. Clin. Onc., 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol. 25, No. 18S (June 20 Suppl.), 2007: 3511
【非特許文献１０】Rosen et al. Cancer Cell, 19, 58-71 (2011)
【非特許文献１１】Buck, et al., International Conference on Molecular Targets and Cancer Therapeutics (Abstract # PR1)
【非特許文献１２】Barr et al. AACR April 2010 meeting
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
相加的および相乗的な組合わせを含めて、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒおよび両方のｍＴＯＲ複合体をターゲティングする組合わせを含む改良された抗癌療法、分子標的療法、および合理的な組合わせが求められている。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
ある観点において、患者において腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置する方法であって、Ｃ１およびＣ２  ｍＴＯＲキナーゼの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第１有効薬剤ならびにＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第２有効薬剤を含む療法有効な方式を投与することを含み、その際、第１薬剤と第２薬剤を同時または任意順序で投与することができる方法が提供される。
【００２４】
ある観点において、本発明は、少なくとも一部がＰＩ３Ｋ経路により仲介される腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置する方法であって、その必要がある患者に、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ｍＴＯＲ（Ｃ１とＣ２の両方）を一緒に効果的に阻害する１種類以上の有効薬剤を含む療法有効な方式を投与することを含む方法に関するものであり、その際、ｍＴＯＲ阻害は、ＩＲおよび／またはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達を活性化し、あるいはｐＩＧＦ−１Ｒを増加させる傾向をもつ。ある態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７の組合わせを投与する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１Ａ、１Ｂ：卵巣細胞系は、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６に対して感受性の差を示す。卵巣細胞系のパネルを単剤としての種々の用量のＯＳＩ−０２７またはＯＳＩ−９０６で処理し、処理後７２時間目に細胞生存性を調べた。各薬物が細胞増殖に及ぼす効果をビヒクル処理対照に対するフラクションとしてグラフで示す。変異Ｋ−Ｒａｓを発現する２細胞系に注目すると、これらはｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２阻害よりＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害に対してより大きい感受性を示す。変異ＰＩ３ＫまたはＰＴＥＮを発現する細胞系に注目すると、これらはＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲ阻害よりｍＴＯＲ阻害に対してより大きい感受性を示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｄ：ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは相乗的に作用して、ＫＲＡＳ変異体とＫＲＡＳ野生型の両方において細胞増殖を阻害し、アポトーシスを誘導する。（２Ａ−２Ｃ）種々の用量のＯＳＩ−０２７が単独で細胞増殖に及ぼす効果を、用量応答曲線により中実丸で示す。破線は、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせの効果につき、相加性に関するＢｌｉｓｓアルゴリズムにより判定して、これら２薬物が純粋に相加的であった場合の推定を表わす。種々の用量のＯＳＩ−０２７と５ｕＭのＯＳＩ−９０６の組合わせについての実験結果を、用量応答曲線により中空丸で示す。それぞれの細胞系、Ｏｖｃａｒ  ３（図２Ａ）、ＭＤＡＨ２７７４（図２Ｂ）およびＯｖｃａｒ  ５（図２Ｃ）について、ＫＲＡＳ変異状態が注目される。ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、Ｏｖｃａｒ  ５細胞において相乗的にアポトーシスを誘導する（図２Ｄ）。カスパーゼ３／７活性の誘導により測定したアポトーシスを処理後４８時間目に測定した。アポトーシスを、ＤＭＳＯ処理細胞と対比したカスパーゼ活性増加倍率として表わす。ＯＳＩ−０２７が単独でカスパーゼ３／７活性に及ぼす効果を、用量応答曲線により中実丸で示す。ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせについての算術推定を、前記と同様に破線で示す。細胞アポトーシスに対する種々の用量のＯＳＩ−０２７と５ｕＭのＯＳＩ−９０６の組合わせについての実験結果を、用量応答曲線により中空丸で示す。
【図３】図３Ａ〜３Ｂ：ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、いずれかの単一薬剤の単剤療法と比較してインビボで卓越した腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）をもたらす。Ｈ４６０肺癌異種移植体におけるＯＳＩ−０２７またはＯＳＩ−９０６の単剤療法および組合わせのインビボ有効性試験（図３Ａ）。１日１回投与した（ｑｄ）種々の薬物処理が１４日間の投与期間にわたってＨ４６０腫瘍の成長に及ぼす効果をグラフで示す（図３Ａ）。表（図３Ｂ）に各処理をまとめる：腫瘍成長阻害率％（％ＴＧＩ）、退縮率％（％  ｒｅｇ．）、処理前の体重に対する減少率パーセントとしての体重減少（ＢＷＬ）、および８匹の動物のグループにおける死亡数（死亡率／致死率）。
【図４】図４Ａ〜４Ｂ：ＯＳＩ−０２７による処理は、ＫＲＡＳｗｔおよびＫＲＡＳ変異細胞系の両方においてＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒの過剰リン酸化を生じる。ＤＭＳＯ、３ｕＭのＯＳＩ−０２７、３ｕＭのＯＳＩ−９０６、または２薬剤の組合わせが、ＩＲのリン酸化（図４Ａ，Ｏｖｃａｒ  ３細胞）またはＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒのリン酸化（図４Ｂ，ＭＤＡＨ２７７４細胞）に及ぼす効果を示す。前記のように、Ｏｖｃａｒ  ３細胞は野生型Ｋ−Ｒａｓを発現し、一方、ＭＤＡＨ２７７４細胞は変異Ｋ−Ｒａｓを発現する。各受容体についての２つのテクニカルレプリケートのイメージを個々の沈降抗体スポットとして示す。より濃いスポットはリン酸化された受容体の増加を示す。各試料についてのピクセル密度をＤＭＳＯ処理対照と対比して計算し、パーセントとして表わす。黒色棒はＩＲについての相対ピクセル密度を表わし、白色棒はＩＧＦ−１Ｒを表わす。
【図５】図５Ａ〜５Ｂ：ＯＳＩ−０２７またはエルロチニブ（erlotinib）による処理は、ＫＲＡＳｗｔおよびＫＲＡＳ変異の両方のＨ４６０細胞においてＩＧＦ−１Ｒの過剰リン酸化をもたらす。ＤＭＳＯ、３ｕＭのＯＳＩ−０２７または３ｕＭのエルロチニブがＩＧＦ−１Ｒのリン酸化に及ぼす効果を示す。４２のユニーク受容体型チロシンキナーゼ（二重）および対照を含む、スポットした抗体アレイ全体のイメージを示す。陽性対照は２つの濃いスポットとしてアレイのそれぞれの隅にある。エルロチニブまたはＯＳＩ−０２７で処理した後のリン酸化の最大増加を示すスポットは、ＩＧＦ−１Ｒに対応する一対のテクニカルレプリケートである（図５Ａ）。各試料についてのピクセル密度をＤＭＳＯ処理対照と対比して計算し、パーセントとして表わす。黒色棒はＩＧＦ−１Ｒについての相対ピクセル密度を表わす（図５Ｂ）。
【図６】図６Ａ〜６Ｂ：ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、いずれの単剤よりも大きいＰＲＡＳ４０リン酸化阻害をもたらす。３００ｎＭのＯＳＩ−０２７、３００ｎＭのＯＳＩ−９０６、または組合わせで２時間処理した細胞の溶解物をＳＤＳ  ＰＡＧＥにより分離し、Ａｋｔの下流基質であるＰＲＡＳ４０のリン酸化に及ぼす効果をウェスタンブロットにより測定した。多重ウェスタンブロットの代表的イメージを、ホスホ−特異的ＰＲＡＳ４０、総ＰＲＡＳ４０、および装填対照としてのＢ−アクチンについて示す（図６Ａ）。ホスホ−ＰＲＡＳ４０についてのピクセル密度を定量し、ＤＭＳＯ処理対照に対するパーセントとしてグラフで表わす（図６Ｂ）。
【図７】図７Ａ〜７Ｂ：ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、いずれの単剤よりも大きい４Ｅ−ＢＰ１リン酸化阻害をもたらす。３００ｎＭのＯＳＩ−０２７、３００ｎＭのＯＳＩ−９０６、または組合わせで２時間処理した細胞の溶解物をＳＤＳ  ＰＡＧＥにより分離し、ｍＴＯＲ軸の下流エフェクターである４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化に及ぼす効果をウェスタンブロットにより測定した。多重ウェスタンブロットの代表的イメージを、ホスホ特異的４Ｅ−ＢＰ１、総４Ｅ−ＢＰ１、および装填対照としてのＢ−アクチンについて示す（図７Ａ）。ホスホ−４Ｅ−ＢＰ１についてのピクセル密度を定量し、ＤＭＳＯ処理対照に対するパーセントとしてグラフで表わす（図７Ｂ）。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｃ：ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、広域アレイの腫瘍タイプに由来する細胞系において相乗作用する。表に各細胞系についてまとめる：腫瘍タイプ、分かっている場合はＫＲＡＳまたはＢＲＡＦ変異状態（Ｎ／Ｄはその状態が分かっていないことを示す）、ＯＳＩ−０２７についてのＥＣ５０、１０ｕＭのＯＳＩ−０２７の存在下で７２時間培養した細胞の最大成長阻害をＤＭＳＯのみで処理した細胞に対するパーセントとして表わしたもの、ＯＳＩ−０２７＋ＯＳＩ−９０６の組合わせについてのＥＣ５０、および１０ｕＭのＯＳＩ−０２７＋５ｕＭのＯＳＩ−９０６の存在下で７２時間培養した細胞の最大成長阻害。
【図８Ｂ】同上。
【図８Ｃ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
ある観点において、本発明は、第１薬剤と第２薬剤を同時または任意順序で投与することができる、患者において腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置するための、療法有効量の、Ｃ１およびＣ２  ｍＴＯＲキナーゼの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第１有効薬剤とＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第２有効薬剤との組合わせの使用を提供する。
【００２７】
ある観点において、本発明は、患者において癌、腫瘍または腫瘍転移を処置する方法であって、Ｃ１およびＣ２  ｍＴＯＲキナーゼの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第１有効薬剤ならびにＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの触媒サブユニットに結合して直接阻害する第２有効薬剤を含む療法有効な方式を投与することを含み、その際、第１薬剤と第２薬剤を同時または任意順序で投与することができる方法を提供する。
【００２８】
本発明によれば、触媒サブユニットはそれの基質を結合する受容体の構造ペプチド単位を意味する。したがって、本発明によれば、第１および第２薬剤はモノクローナル抗体ではない。さらに、第１薬剤はｍＴＯＲＣ２を阻害しないラパログまたは薬剤ではない。
【００２９】
理論により拘束されるのではなく、前記の有効薬剤は、第１薬剤（ｍＴＯＲ）がｐＩＲおよびｐＩＧＦ−１Ｒを上昇させる傾向をもち、これに対し第２薬剤がＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒを阻害するという点で、協同作用する。したがって、部分的にオーバーラップしている関係するシグナル伝達経路の関与を示唆することができる。したがって、多様な設定でこの組合わせは相乗的である。
【００３０】
ある観点において、癌の細胞はＩＧＦ−１Ｒおよびインスリン受容体（ＩＲ）を発現する。ある観点において、癌の癌細胞は活性化型のＫ−ＲＡＳおよび／またはＢ−ＲＡＦ遺伝子変異をもつ。たとえば、Ｋ−ＲＡＳ変異（たとえば、Ｇ１３Ｄ）はｐＩＲおよびｐＩＧＦ−１Ｒを増加させる可能性がある。ある観点において、癌の癌細胞は活性化型ＰＩ３Ｋ変異および／またはＰＴＥＮ喪失をもつ。ある観点において、第１有効薬剤によるｍＴＯＲ阻害は、第２有効薬剤の不存在下ではｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲレベルを上昇させる傾向があり、あるいは上昇させるであろう。ある観点において、ｍＴＯＲ阻害はｐＡｋｔの上昇を避けるのに十分なものである。
【００３１】
ｍＴＯＲＣ１に加えてｍＴＯＲＣ２を阻害するｍＴＯＲ阻害薬は（たとえば、ｍＴＯＲＣ１のみを阻害するラパマイシンと異なり）、腫瘍細胞における活性リン酸化型ＡＫＴのレベルを低下させ、したがって腫瘍細胞の生存を低下させる。これは、ｍＴＯＲＣ２がＡＫＴを残基Ｓ４７３においてリン酸化し、これはＰＤＫ１によるＡＫＴの活性化を増強し、したがって細胞生存を促進するという事実による。試験した腫瘍細胞の大部分においてラパマイシンはＡＫＴを活性化し、したがって腫瘍細胞生存を促進するので、これはラパマイシンのようにｍＴＯＲＣ１のみを阻害するｍＴＯＲ阻害薬と対比して有利である。後者は臨床でラパマイシンについてみられた失望する結果における重要な要因であったと考えられる(たとえば、Fan, QW et al. 2007, Cancer Res. 67(17):7960-7965, attached, at page 7960, second column, lines 17-21を参照)。したがって、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方を直接阻害するｍＴＯＲ阻害薬とＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬の組合わせは、各薬剤が相補的機序でＡＫＴの阻害を促進し、したがって腫瘍細胞のアポトーシスを促進するので、有効になることができる。さらに、ｍＴＯＲ阻害薬はｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方により、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬はＰＩ−３キナーゼ経路によりタンパク質合成経路を阻害するため、両薬剤は抗増殖効果をもつはずである。これに対し、ＡＫＴを活性化するラパマイシンのようなｍＴＯＲＣ１阻害薬は、少なくとも部分的にＡＫＴを阻害することにより作用するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬と潜在的に拮抗する可能性がある。
【００３２】
ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２キナーゼの両方に結合して直接阻害することによりｍＴＯＲを阻害する抗癌化合物は、ｍＴＯＲＣ１のみを直接阻害するラパマイシンまたはそのアナログのような化合物に優る多数の重要な利点をもつことが見出された。これらには、下記が含まれる：（ａ）卓越したｐＡｋｔ阻害と同時に腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘導する、（ｂ）４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化をより完全に阻害し、その結果、より大きい抗増殖効果が得られる、（ｃ）すべての腫瘍細胞においてｐＡｋｔ（Ｓ４７３）を阻害し、これによって卓越したアポトーシス促進効果が生じる（ラパマイシンはｐＡｋｔ（Ｓ４７３）を約２０％の癌細胞系において阻害するにすぎない）、（ｄ）試験したいずれの癌細胞タイプにおいても処理がｐＡｋｔ（Ｓ４７３）を増加させず、したがって腫瘍細胞の生存を促進しない（ｐＡｋｔ（Ｓ４７３）を約６５％の細胞系において増加させるラパマイシン処理と異なる）、および（ｅ）はるかに広域スペクトルの腫瘍細胞における抗増殖活性。ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方を直接阻害するｍＴＯＲ阻害薬の利点は、Barr, S. et al. 2009, AACR Annual Meeting, poster #1839 and Yu K. et al. Cancer Res. 69(15): 6232-6240, at p6232 (Introduction) and p6238-9 (Discussion))にも考察されている。
【００３３】
種々の化学構造をもつ多数の“ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２キナーゼの両方に結合して直接阻害するｍＴＯＲ阻害薬”がこの機能活性をもつことが知られている。これは、この機能が本明細書に記載する式Ｉの化合物だけの特別な特性ではないこと、また本発明方法を実施するために重要なのはいずれか特定の化学構造ではなくこの機能であることを指摘する。ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２キナーゼの両方に結合して直接阻害するｍＴＯＲ阻害薬”には、たとえば下記のものが含まれる：（ａ）ＰＩ−１０３：たとえばKnight, ZA et al. 2006, Cell 125:733-747；（ｂ）ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55；（ｃ）ＸＬ−７６５：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55, page 52；（ｄ）ＧＳＫ２１２６４５８：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55；（ｅ）ＰＰ２４２：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55, at page 52；（ｆ）ＫＵ−００６３７９４：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55, at page 52；（ｇ）Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００９６−２７：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55, page 53；（ｈ）ＧＤＣ−０９４１：Lui, Q et al. 2009, Drug Discovery Today 6(2): 47-55, page 51；および（ｉ）本明細書WO 07/061737に記載する式ＩのＯＳＩ化合物。上記に挙げた薬剤および文献は、多様な化学構造体がｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２キナーゼの両方に結合して直接阻害することができ、それらはすべて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬と組み合わせて使用した場合に前記の機能活性のような利点をもつであろうということを示す。
【００３４】
二重ＩＲ／ＩＧＦ−１Ｒ阻害薬とＣ１／Ｃ２  ｍＴＯＲ阻害薬の組合わせは、ＩＲをも阻害するものでない他のＩＧＦ−１Ｒ阻害薬を含む組合わせより、下記の事実のため同様に有利である：たとえば抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体によるＩＧＦ−１Ｒのみの阻害はＩＲシグナル伝達経路のアップレギュレーションを生じことが示され、これは癌細胞の増殖を促進する機能をもつ可能性がある。Buck et al., Mol. Cancer. Ther., 9, 2652-2664 (2010)。二重ＩＲ／ＩＧＦ−１Ｒ阻害薬はＩＲシグナル伝達経路の活性化を阻害するであろう。
【００３５】
ある観点において、癌の癌細胞はＯＳＩ−９０６に対して感受性であり、かつＯＳＩ−０２７に対して非感受性である。ある観点において、癌の癌細胞はＯＳＩ−０２７に対して感受性であり、かつＯＳＩ−９０６に対して非感受性である。
【００３６】
ある観点において、第１薬剤と第２薬剤は相乗活性を生じる。
ある観点において、本方法は癌の細胞においてアポトーシスを誘導する。
ある観点において、第２有効薬剤はＯＳＩ−９０６を含む。ある観点において、第１有効薬剤はＯＳＩ−０２７を含む。
【００３７】
ある観点において、癌の癌細胞は間葉性表現型を含む。
ある観点において、本方法はＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６を投与することからなる。ある観点において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６は相乗的に挙動する。ある観点において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６は超相加的に挙動する。
【００３８】
ある観点において、癌の細胞はＰＩ３Ｋ軸の異常調節をもつ。ある経路の異常調節は、細胞のシグナル伝達が不適切に作動してしばしば腫瘍細胞の無制御な成長および拡散を生じることを意味するのは当業者に理解される。特定の経路または軸について、関連する１種類以上のシグナル伝達成分が活性化される可能性がある。ホスファチジルイノシトール−３−ＯＨキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）軸またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ軸は種々の癌における関与が示唆されているシグナル伝達カスケードとして当業者に知られている。たとえば、Bioorg. & Med. Chem., 20, 4308-4312 (2010)を参照。
【００３９】
ある観点において、癌は、卵巣癌、頭頸部癌、乳癌、大腸癌、膵臓癌、小細胞性肺癌、非小細胞性肺癌、リンパ腫、前立腺癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、神経膠芽細胞腫、ユーイング肉腫、副腎皮質癌、胃癌、多発性骨髄腫、未分化甲状腺癌または骨転移を含む。ある観点において、癌は卵巣癌または非小細胞性肺癌を含む。
【００４０】
ある観点において、ＯＳＩ−９０６を投与日に１日当たり約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの量で投与する。
ある観点において、ＯＳＩ−０２７を投与日に１日当たり約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの量で投与する。
【００４１】
ある観点において、本方法は、少なくとも約４、８または１６週間の安定疾患または腫瘍の退縮もしくは部分的応答をもたらす。
ある観点において、本方法はさらに少なくとも１種類の追加の有効抗癌薬を投与することを含む。
【００４２】
ある観点において、容器、ＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６の組成物、ならびに腫瘍または腫瘍転移を含む癌を処置するのにキットを使用するための指示を含むパッケージ挿入物を含むキットが提供される。
【００４３】
ある観点において、その細胞がＰＩ３Ｋ経路の異常調節をもつ腫瘍または腫瘍転移を含む癌を伴う患者において癌を処置する方法であって、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、およびｍＴＯＲ（ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方）を一緒に効果的に直接阻害する１種類以上の有効薬剤を含む療法有効な方式を投与することを含む方法が提供され、その際、ｍＴＯＲ阻害はｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲのレベルを上昇させる。
【００４４】
ある観点において、患者においてその細胞がＰＩ３Ｋ軸の異常調節を伴う腫瘍または腫瘍転移を処置するための、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、およびｍＴＯＲ（ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方）を一緒に効果的に直接阻害する療法有効量の１種類以上の有効薬剤の使用が提供され、その際、ｍＴＯＲ阻害はｐＩＧＦ−１ＲおよびｐＩＲのレベルを上昇させる。
【００４５】
ある観点において、約０．２：１〜約５０：１の質量比のＯＳＩ−９０６：ＯＳＩ−０２７を含む医薬組成物が提供される。
ある観点において、本発明は、少なくとも一部がＰＩ３Ｋ経路により仲介される癌を処置する方法であって、その必要がある患者に、ＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ｍＴＯＲ（Ｃ１とＣ２の両方）を一緒に効果的に阻害する１種類以上の有効薬剤を含む療法有効な方式を投与することを含む方法に関するものであり、その際、ｍＴＯＲ阻害はＩＲおよび／またはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達を活性化する傾向をもつ。
【００４６】
ある観点において、癌は少なくとも一部がＰＩ３ＫおよびＩＧＦ−１両方の経路により推進される。ある観点において、ｍＴＯＲ阻害は癌の癌細胞においてＩＧＦ−１Ｒを上昇させる傾向をもつ。ある観点において、癌は活性化型のＫ−ＲＡＳおよび／またはＢ−ＲＡＦ遺伝子変異をもつ癌細胞を含む。ある観点において、その状態の癌細胞は間葉性表現型を含む。
【００４７】
ある観点において、その状態の癌細胞はＯＳＩ−０２７またはＯＳＩ−９０６のうち一方に対して相対的に非感受性または治療抵抗性である。ある観点において、その状態の癌細胞はＯＳＩ−０２７に対比してＯＳＩ−９０６に感受性である。ある観点において、その状態の癌細胞はＯＳＩ−９０６に対比してＯＳＩ−０２７に感受性である。
【００４８】
ある観点において、１種類より多い有効薬剤を投与して相乗活性をもたらす。
ある観点において、本方法は癌細胞においてアポトーシスを誘導する。
ある観点において、有効薬剤はＯＳＩ−９０６を含む。ある観点において、有効薬剤はＯＳＩ−０２７を含む。ある観点において、有効薬剤はＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６を含む。ある観点において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６は相乗的に挙動する。ある観点において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６は超相加的に挙動する。
【００４９】
ある観点において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６を異なる日に投与する。ある観点において、ＯＳＩ−９０６を投与日に１日当たり約１〜１５ｍｇ／ｋｇの量で投与する。ある観点において、ＯＳＩ−０２７を投与日に１日当たり約０．２〜６ｍｇ／ｋｇの量で投与する。
【００５０】
ある観点において、少なくとも１種類の追加の有効抗癌薬を投与する。
ＩＧＦ−１Ｒ薬およびＩＲ薬
本発明によるインスリン受容体（ＩＲ）およびＩＧＦ−１Ｒの阻害は、選択的薬剤または両方のキナーゼを阻害する薬剤により達成できる。ＩＲおよび／またはＩＧＦ−１Ｒを阻害する薬剤は、本発明による投与に適切となることができる。ある態様において、薬剤は、安全かつ有効であることが示されて少なくとも１つの規制当局からの市販承認をもつものである。
【００５１】
本明細書中で用いる用語“ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬”は、当技術分野で既知のいずれかのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬を表わし、患者に投与すると、患者におけるＩＧＦ−１Ｒ受容体の活性化と特異的に関連する阻害であってＩＧＦ−１Ｒにそれの天然リガンド（単数または複数）が結合することからもたらされる生物活性の阻害をもたらす、いずれかの化学物質を含む。そのようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬には、患者の癌の処置に関係するＩＧＦ−１Ｒ活性化およびＩＧＦ−１Ｒ活性化の下流の生物学的作用を遮断することができる、いずれかの薬剤が含まれる。
【００５２】
そのような阻害薬は、その受容体の細胞内触媒ドメインに直接結合してそれのキナーゼ活性を阻害することにより作用することができる。あるいは、そのような阻害薬は、ＩＧＦ−１受容体のリガンド結合部位またはその一部を占有し、これによってその受容体がそれの天然リガンドに到達できないようにすることにより作用することができ、したがってそれの正常な生物活性が阻止または減弱される。あるいは、そのような阻害薬は、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドの二量体化またはＩＧＦ−１Ｒポリペプチドと他のタンパク質との相互作用を変調させることにより、あるいはＩＧＦ−１Ｒのユビキチン化およびエンドサイトーシス分解を増強することにより、作用することができる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬は、ＩＧＦ−１Ｒの活性化に使われるＩＧＦ−１の量を減少させることにより作用することもできる；たとえば、ＩＧＦ−１がそれの受容体に結合するのに拮抗することによるか、ＩＧＦ−１のレベルを低下させることによるか、あるいはＩＧＦ−１がＩＧＦ−１Ｒ以外のタンパク質、たとえばＩＧＦ結合タンパク質（たとえば、ＩＧＦＢＰ３）と会合するのを促進することによる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬には、低分子量阻害薬、抗体または抗体フラグメント、アンチセンス構築体、阻害性小分子ＲＮＡ（すなわち、ｄｓＲＮＡによるＲＮＡ干渉；ＲＮＡｉ）、およびリボザイムが含まれるが、これらに限定されない。好ましい態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬は、ヒトＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する小型の有機分子または抗体である。
【００５３】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬には、たとえばイミダゾピラジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、キナゾリン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、ピリド−ピリミジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、ピリミド−ピリミジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、ピロロ−ピリミジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、ピラゾロ−ピリミジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、フェニルアミノ−ピリミジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、オキシインドール系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、インドロカルバゾール系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、フタラジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、イソフラボン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、キナロン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、およびチルホスチン(tyrphostin)系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、ならびにそのようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬のすべての医薬的に許容できる塩類および溶媒和物が含まれる。
【００５４】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬の他の例には、下記の中のものが含まれる：WO 05/097800、これには６，６−二環式環置換されたヘテロ二環式プロテインキナーゼ阻害薬が記載されている；WO 05/037836、これにはイミダゾピラジン系ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬が記載されている；WO 03/018021およびWO 03/018022、これらにはＩＧＦ−１Ｒ関連障害を処置するためのピリミジン類が記載されている；WO 02/102804およびWO 02/102805、これらにはシクロリグナン類およびＩＧＦ−１Ｒ阻害薬としてのシクロリグナン類が記載されている；WO 02/092599、これにはＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの阻害に応答する疾患の処置のためのピロロピリミジン類が記載されている；WO 01/72751、これにはチロシンキナーゼ阻害薬としてのピロロピリミジン類が記載されている；ならびにWO 00/71129、これにはピロロトリアジン系のキナーゼ阻害薬が記載されている；ならびにWO 97/28161、これにはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン類およびチロシンキナーゼ阻害薬としてのそれらの使用が記載されている；ParrizasらはインビトロおよびインビボＩＧＦ−１Ｒ阻害活性をもつチルホスチン類を記載している(Endocrinology, 138:1427-1433 (1997))；WO 00/35455、これにはＩＧＦ−１Ｒ阻害薬としてのヘテロアリール−アリール尿素が記載されている；WO 03/048133,、これにはＩＧＦ−１Ｒの調節薬としてのピリミジン誘導体が記載されている；WO 03/024967、WO 03/035614、WO 03/035615、WO 03/035616およびWO 03/035619、これらにはキナーゼタンパク質に対して阻害活性をもつ化合物が記載されている；WO 03/068265、これには過増殖状態を処置するための方法および組成物が記載されている；WO 00/17203、これにはプロテインキナーゼ阻害薬としてのピロロピリミジン類が記載されている；JP 07/133280、これにはセフェム系化合物、それの製造および抗微生物性組成物が記載されている；Albert, A. et al., Journal of the Chemical Society, 11: 1540-1547 (1970)、これにはプテリジン類の研究および４−位が置換されていないプテリジン類が記載されている；ならびにA. Albert et al., Chem. Biol. Pteridines Proc. Int. Symp., 4th, 4: 1-5 (1969)、これにはプテリジン類（４−位が置換されていない）を、ピラジン類から３−４−ジヒドロプテリジン類を経て合成することが記載されている。
【００５５】
ある好ましい態様において、有効薬剤はＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの触媒サブユニットに結合して直接阻害する。
本発明のこの態様において、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬は、これらの受容体型チロシンキナーゼの両方を阻害するいずれのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬であってもよく、その医薬的に許容できる塩類または多型を含む。ある態様において、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬は小分子ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬である。ある態様において、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬は、キナーゼ触媒部位においてＡＴＰ競合性である小分子ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬である。ある態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ対ＩＲキナーゼについての阻害薬のＩＣ５０（インビトロ生化学的キナーゼアッセイ法を用いて測定したもの、たとえばMulvihill, M.J. et al. (2008) Bioorganic & Medicinal Chemistry, Volume 16, Issue 3, 1359-1375を参照)の比（すなわち、ＩＣ５０  ＩＧＦ−１Ｒ：ＩＣ５０  ＩＲ）は、１：１０〜１０：１の範囲である。他の態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ対ＩＲキナーゼについての阻害薬のＩＣ５０の比は、１：５〜５：１；１：３〜３：１；１：２〜１：３；１：２〜１：５；または１：２〜１：１０から選択される範囲にある。ある態様において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬はＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するが、インビトロ生化学的アッセイで他のいずれかのキナーゼに対してはほとんど阻害活性をもたず、または有意の阻害活性をもたない。
【００５６】
ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するキナーゼ阻害薬の例には、US 2006/0235031に公開されているものが含まれる。特に、化合物シス−３−［８−アミノ−１−（２−フェニルキノリン−７−イル）−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］−１−メチルシクロブタノール（ＯＳＩ−９０６としても知られる）がそこに記載されている。本明細書中で用いるＯＳＩ−９０６という表記または記載には、そのいずれかの塩類、溶媒和物、水和物、および他の物理的形態、結晶質または非晶質が含まれる。選択的経口活性ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬でありかつインスリン受容体（ＩＲ）に対しても活性をもつＯＳＩ−９０６は、現在、臨床開発中である。予備臨床活性が報告された。ＯＳＩ−９０６は、US 2006/0235031、例31に従って製造できる。
【００５７】
ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害するキナーゼ阻害薬の例には、下記のものが含まれるが、それらに限定されない：ＯＳＩ−９０６、ＢＭＳ−５５４４１７(Haluska P, et al. Cancer Res 2006;66(1):362-71)；ＢＭＳ  ５３６９２４(Huang, F. et al. (2009) Cancer Res. 69(1):161-170))。
【００５８】
他の阻害薬には、ＢＭＳ−７５４８０７、ＢＭＳ−５３６９２４、ＢＭＳ−５５４４１７、ＡＧ５３８、Ａ−９４７８６４、ＫＷ−２４５０、ＡＸＬ−１７１７、ＸＬ−２２８、ＩＮＳＭ−１８が含まれる。他の阻害薬には、ＣＰ−７５１８７１、ＩＭＣ−Ａ１２、ＭＫ−０６４６、ＡＭＧ−４７９、ＭＥＤＩ−５７３、ＢＩＩＢ−０２２，リンファベート(rinfabate)、ｒｈｕＭａｂ  ＩＧＦＲ、ＳＣＨ−７１７４５４が含まれる。他の阻害薬には、ＮＶＰ−ＡＥＷ５４１、ＮＶＰ−ＡＤＷ７４２が含まれる。他の阻害薬は、US2007/0203143, Hubbard, R.D. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., doi:10.1016/j.bmcl.2009.01.086 (2009)に引用されている。US 2010/0048552; WO 2009/158431; WO 2010/0002655; WO 2009/140128; WO 2009/ 126304; US 2009/0258365; WO 2008/0073687; WO 2009/032668; US 2008/017688; WO 2009/020990; US 2009/0239924; US 2009/0312321; US 2007/0129364; WO 2007/056151; WO 2007/056170; US 2009/0099133; US 2009/0099229; US 2007/0032512; US 2009/0054508; US 2006/0211678; US 2006/0019957; US 2007/0129399; WO 2005/068452も参照。
【００５９】
有効なＩＲおよび／またはＩＧＦ−１Ｒ活性について化合物をプロファイリングする方法を当業者は理解しているであろう。
本明細書に記載するいずれかの方法、組成物またはキットにおいて、用語“小分子ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬”は、酵素のキナーゼドメインに結合することによりＩＧＦ−１Ｒキナーゼを阻害する低分子量（すなわち、５０００ダルトン未満；好ましくは１０００ダルトン未満、より好ましくは３００〜７００ダルトン）化合物を表わす。
【００６０】
ｍＴＯＲ薬
ある好ましい態様において、ｍＴＯＲ  Ｃ１およびＣ２の阻害は、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方の触媒活性を直接阻害するいずれか適切な薬剤を用いて達成できる。ある態様において、有効薬剤は、安全かつ有効であることが示されて少なくとも１つの規制当局からの市販承認をもつものである。
【００６１】
ある態様において、ｍＴＯＲＣ１およびＣ２阻害薬は、トランス−４−［４−アミノ−５−（７−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］シクロヘキサンカルボン酸（ＯＳＩ−０２７としても知られる）である。ＯＳＩ−０２７の好ましい塩類は、トロメタミン塩を含めて、WO 2009/117482に記載されている。本明細書中で用いるＯＳＩ−０２７という表記または記載には、そのいずれかの塩類、溶媒和物、水和物、および他の物理的形態、結晶質または非晶質が含まれる。ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方の触媒活性の選択的経口活性二重阻害薬であるＯＳＩ−０２７は、現在、臨床開発中である。ＯＳＩ−０２７は、US 2007/0112005、例258に従って製造できる。
【００６２】
ある態様において、ｍＴＯＲＣ１およびＣ２阻害薬はＯＸＡ−０１である。下記に示すイミダゾピラジン構造をもつＯＸＡ−０１（ＯＳＩ−９５０としても知られる）によるｍＴＯＲ阻害はｐＩＧＦ−１Ｒリン酸化をもたらし、これはｍＴＯＲおよびＩＧＦ−１ＲをＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６でターゲティングすることの理論的根拠を示す：
【００６３】
【化１】
2013522215.tif 000003
【００６４】
ある態様において、ｍＴＯＲ阻害薬はFeldman et al., PLoS Biol., 7(2): e1000038. doi:10.1371/journal.pbio.1000038 (2009)に記載のものであってもよく、あるいはＰＰ−２４２、ＰＰ−３０、またはその誘導体であってもよい。
【００６５】
他の二重阻害薬には、ＡＺＤ８０５５、ＩＮＫ−１２８、Ｔｏｒｉｎ−１およびＷＹＥ−１３２が含まれる。他の薬剤にはＧＳＫ−２１２６４５８が含まれる。他の阻害薬は下記に記載されている: US 2010/0048547; WO2010/006072; US 2009/0312319; US 2010/0015140; US 2007/0254883; US 2007/0149521; Drug Disc. Today Ther. Strateg., 6(2): 47-55 (2009)。
【００６６】
本発明の多重標的法を補足するために論理的に他の薬剤を適宜使用できる。有効なｍＴＯＲＣ１およびＣ２活性について化合物をプロファイリングする方法を当業者は理解しているであろう。
【００６７】
本発明はさらに、患者において腫瘍または腫瘍転移を処置するための本明細書に記載するいずれかの方法であって、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害する療法有効量のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬患者に投与し、それに加えてそれらの薬剤の効果を増強する１種類以上の他の細胞毒薬、化学療法薬または抗癌薬を同時または逐次投与することを含む方法を提供する。そのような薬剤には、好ましくは規制または市販の承認をもつ細胞毒性化学療法薬、ＥＧＦＲ阻害薬、ＶＥＧＦＲ阻害薬、またはＰＤＧＦＲを含めることができる。
【００６８】
組成物
本発明のある観点において、有効薬剤を共配合または個別配合することができる。たとえば、希望する設計法に応じてＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６を共配合または個別配合することができる。
【００６９】
本発明は、場合により医薬的に許容できるキャリヤーおよび／または賦形剤、ならびに有効成分としてのＯＳＩ−９０６および／またはＯＳＩ−０２７、ならびに場合により１種類以上の他の抗癌薬を含む、医薬組成物をも提供する。それらの医薬組成物は相乗的な抗腫瘍効果をもたらすことができる。
【００７０】
上記の医薬組成物には、経口、直腸、局所および非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に適した組成物が含まれるが、いずれか特定の場合に最も適した経路は、個々のホスト、ならびにそのために有効成分を投与する状態の性質および重症度に依存するであろう。医薬組成物は好都合には単位剤形で提供でき、医薬技術分野で周知のいずれかの方法により調製できる。
【００７１】
医薬組成物の有効成分を、一般的な配合技術に従って医薬用キャリヤーとの密な混合物として組み合わせることができる。キャリヤーは、投与、たとえば経口または非経口（静脈内を含む）のために希望する製剤の形態に応じて多種多様な形態をとることができる。たとえば、本発明の医薬組成物は経口投与に適した個別の単位、たとえばそれぞれ前決定量の有効成分を含有するカプセル剤、カシェ剤または錠剤として提供できる。さらに、組成物を散剤として、顆粒剤として、液剤として、水性液体中の懸濁液剤として、非水性液体として、水中油型乳剤として、または油中水型液状乳剤として提供できる。上記に述べた一般的な剤形のほかに、組成物の有効成分またはその医薬的に許容できる塩を制御放出手段および／または送達デバイスにより投与してもよい。組成物はいずれかの製剤方法により調製できる。一般にそのような方法は、有効成分を、１種類以上の必要成分を構成するキャリヤーと一緒にする工程を含む。一般に組成物は、有効成分を液状キャリヤーもしくは微粒状固体キャリヤーまたは両方と均一かつ密に混合することにより調製される。次いで生成物を好都合に付形して目的製品にすることができる。
【００７２】
使用する医薬用キャリヤーは、たとえば固体、液体または気体であってもよい。固体キャリヤーの例には、乳糖、白土(terra alba)、ショ糖、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸が含まれる。液体キャリヤーの例は、ショ糖シロップ、ラッカセイ油、オリーブ油および水である。気体状キャリヤーの例には、二酸化炭素および窒素が含まれる。
【００７３】
本発明の組成物を含有する錠剤は、場合により１種類以上の補助成分または佐剤と共に圧縮または成形することにより製造できる。圧縮錠は、さらさらした形態、たとえば粉末または顆粒状の有効成分を、場合により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤または分散剤と混合して、適切な装置で圧縮することにより製造できる。成形錠は、適切な装置で、不活性液状希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を成形することにより作成できる。錠剤はそれぞれ好ましくは約０．０５ｍｇから約５ｇまでの有効成分を含有し、カシェ剤またはカプセル剤はそれぞれ好ましくは約０．０５ｍｇから約５ｇまでの有効成分を含有する。
【００７４】
ヒトに経口投与するための配合物は約０．５ｍｇから約５ｇまでの有効成分を適切かつ好都合な量のキャリヤー材料と配合して含有することができ、キャリヤー材料は全組成物の約５パーセントから約９５パーセントの範囲であってもよい。単位剤形は、一般に約１ｍｇから約２ｇまで、一般に２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇまたは１０００ｍｇの有効成分を含有するであろう。
【００７５】
ある態様において、ＯＳＩ−９０６およびＯＳＩ−０２７を約０．５：１〜約５０：１のＯＳＩ−９０６：ＯＳＩ−０２７の質量比で含む医薬組成物が提供される。
ある態様において、容器、ＯＳＩ−０２７およびＯＳＩ−９０６、ならびに腫瘍または腫瘍転移状態を処置するのにキットを使用するための指示を含むパッケージ挿入物を含むパーツのキットが提供される。
【００７６】
本発明の化合物は、高純度、たとえば少なくとも９０％、９５％または９８％（重量）の純度での配合のために提供できる。
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、水中における有効成分の液剤または懸濁液剤として調製できる。適切な界面活性剤、たとえばヒドロキシプロピルセルロースを含有させることができる。分散液剤は油中のグリセロール、液状ポリエチレングリコールおよびその混合物中に調製できる。さらに、微生物の有害な成長を阻止するために保存剤を含有させることができる。
【００７７】
注射用に適した本発明の医薬組成物には、無菌の水性液剤または分散液剤が含まれる。さらに、組成物はそのような無菌の注射用液剤または分散液剤を即時調合するための無菌粉末の形態であってもよい。すべての場合、最終的な注射用形態は無菌でなければならず、かつ容易に注射できるように効果的に流体でなければならない。医薬組成物は製造および貯蔵の条件下で安定でなければならない；したがって、好ましくは細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存処理すべきである。キャリヤーは、たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、ポリプロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコール）、植物油、およびその適切な混合物を含有する、溶剤または分散媒質であってもよい。
【００７８】
本発明の医薬組成物は、局所用に適した形態、たとえばエアゾール剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、散粉剤などであってもよい。さらに、組成物は経皮デバイスに使用するのに適した形態であってもよい。これらの配合物は一般的な加工法により調製できる。一例として、クリーム剤または軟膏剤は、親水性材料および水を約５重量％〜約１０重量％の化合物と一緒に混合して、希望する稠度をもつクリーム剤または軟膏剤を調製することにより製造される。
【００７９】
本発明の医薬組成物は、直腸投与に適した形態であってもよく、その際、キャリヤーは固体である。混合物が単位量の坐剤を形成することが好ましい。適切なキャリヤーには、カカオ脂、および当技術分野で慣用される他の材料が含まれる。坐剤は、まず組成物を軟化または融解したキャリヤー（単数または複数）と混合し、続いて冷却し、型内で付形することによって、好都合に作成できる。
【００８０】
上記のキャリヤー成分のほかに、前記の医薬配合物は、適宜、１種類以上の追加のキャリヤー成分、たとえば希釈剤、緩衝剤、着香剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤（抗酸化剤を含む）などを含有してもよい。さらに、配合物を意図するレシピエントの血液と等張にするために、他の佐剤を含有させることができる。組成物は粉末または濃縮物の形態で調製することもできる。
【００８１】
患者および適応症
本発明の方法は、それに対してＩＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の阻害が有用である癌状態、腫瘍または腫瘍転移の処置に使用できる。そのような状態は少なくとも一部はＩＧＦおよび／またはＰＩ３Ｋ軸の異常調節により仲介または推進される可能性があり、それには本方法のｍＴＯＲ阻害がＩＲおよび／またはＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達を活性化する傾向があるものが含まれる。
【００８２】
ある態様において、処置される患者は、単剤としてのＯＳＩ−９０６もしくはＯＳＩ−０２７または他のＩＧＦ−１ＲもしくはｍＴＯＲ阻害薬による処置に対して非感受性または治療抵抗性であってもよい。
【００８３】
ある態様において、患者は、癌、前癌の状態もしくは病変、または他の形態の異常な細胞成長の処置を必要とするヒトであってもよい。癌はたとえば下記のものであってもよい：非小細胞性肺（ＮＳＣＬ）癌、乳癌、大腸癌、膵臓癌、肺癌、細気管支−肺胞細胞肺癌、骨癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌(stomach cancer, gastric cancer)、子宮癌、ファロピウス管癌、子宮内膜癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織癌、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱癌、尿管癌、腎癌、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、慢性または急性の白血病、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊柱腫瘍、脳幹神経膠腫、多形性神経膠芽腫、星状細胞腫、シュヴァン鞘腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫；上記のいずれかの癌の治療抵抗型、あるいは上記癌のうち１種類以上の組合わせを含む。前癌の状態または病変には、たとえば口腔白板、紫外線角化症（日光性角化症）、結腸または直腸の前癌性ポリープ、胃上皮形成異常、腺腫様形成異常、遺伝性非ポリポーシス大腸癌症候群（ＨＮＰＣＣ）、バレット食道、膀胱形成異常、および前癌性子宮頚状態からなるグループが含まれる。癌／腫瘍の好ましい態様には、卵巣癌、前立腺癌、非小細胞性肺癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、または膵臓癌が含まれる。
【００８４】
ある態様において、状態には卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、乳癌、大腸癌、膵臓癌、小細胞性肺癌、非小細胞性肺癌、リンパ腫、前立腺癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、神経膠芽細胞腫、ユーイング肉腫、副腎皮質癌、胃癌、多発性骨髄腫、未分化甲状腺癌、または骨転移が含まれる。
【００８５】
ある態様において、状態には卵巣癌が含まれる。
使用方法および結果
本発明による投与処置の厳密な方式が担当医の裁量によることは当業者に認識されるであろう。投与量、他の抗癌薬との組合わせ、投与のタイミングおよび頻度などを含めた投与様式は、患者の応答の可能性の診断、ならびに患者の状態および病歴によって影響される可能性がある。本明細書に記載する処置方法のいずれかの処置の有効性は、たとえば新生物状態を伴う患者に存在する腫瘍のサイズの縮小を測定することにより、あるいは腫瘍細胞の増殖度の決定分子をアッセイすることにより、判定できる。
【００８６】
ある態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を同一配合物中において患者に共投与することができる。ある態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を異なるまたは個別の配合物中において患者に共投与することができる。ある態様において、患者へのＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７の投与は同時であってもよい。ある態様において、患者へのＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７の投与は逐次であってもよい。
【００８７】
本発明の処置方法を実施する際には、ＯＳＩ−９０６およびＯＳＩ−０２７を当技術分野で既知のいずれか有効な方法で、たとえば処置される癌のタイプ、およびたとえば公開された臨床試験の結果に基づく処方医の医学的判断に応じて、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、皮下、鼻内、眼内、膣、直腸、または皮内経路で投与することができる。
【００８８】
ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を、同一または異なる経路で個別または一緒に、多種多様な剤形で投与することができる。両方とも好ましくは経口による。両方とも単回または多数回投与で投与することができる。
【００８９】
１態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を同一経路で患者に共投与することができる。他の態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を異なる経路で患者に共投与することができる。
【００９０】
ＯＳＩ−９０６およびＯＳＩ−０２７は、当技術分野で知られているように、また以下に開示するように、一般に、患者をそれに対して処置する癌の最も有効な処置（有効性と安全性の両方の見地から）を提供する投与計画で患者に投与することができる。
【００９１】
ＯＳＩ−９０６およびＯＳＩ−０２７の投与量および投与のタイミングは、処置される患者のタイプ（種、性別、年齢、体重など）および状態、処置される疾患または状態の重症度、ならびに投与経路に依存するであろう。たとえば、ＯＳＩ−９０６およびＯＳＩ−０２７をそれぞれ１日または１週当たり約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲の投与量で１回量または分割量で患者に投与することができる。
【００９２】
前記方法の１態様において、ＯＳＩ−９０６とＯＳＩ−０２７を異なる日に投与する。他の態様において、ある日にはＯＳＩ−９０６またはＯＳＩ−０２７のいずれかを投与しない。
【００９３】
ある態様において、処置方法は約４、８、１６、３２週間またはそれ以上の週の間、安定疾患をもたらす。
前記方法のある態様において、処置はＲＥＣＩＳＴ基準に従って５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、またはそれ以上の腫瘍サイズ縮小をもたらす。
【実施例】
【００９４】
実験
細胞系：ヒト癌細胞系をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection)（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞系Ｏｖｃａｒ−３、ＭＤＡＨ２７７４、Ｃａｏｖ３、Ｉｇｒｏｖ−１、およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１を、ＡＴＣＣが処方した１０％のＦＣＳを含有する培地で成長させた。ＨＮＳＣＣ  １４８３、ＨＮＳＣＣ  １３８６、ＨＮＳＣＣ  １１８６はＭｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇからの贈与であり、１０％のＦＣＳを含む１：１  ＤＭＥＭ：Ｈａｍｓ  Ｆ１２で培養された。Ｏｖｃａｒ−４、Ｏｖｃａｒ−５、およびＯｖｃａｒ−８をＮＣＩから入手し、１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩで成長させた。
【００９５】
増殖の測定：Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ワイオミング州マディソン）を用いて増殖の阻害を測定した。細胞系を９６ウェルプレートにウェル当たり３０００細胞の密度で接種した。接種の２４時間後に、細胞に種々の濃度の薬物を単剤または組合わせとして投与した。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏの信号を投与の２４時間後に測定し、ビヒクル処理対照に対して正規化した。ビヒクル処理対照に対比した増殖阻害を、１のフラクションとして表わし、ＰＲＩＳＭ（登録商標）ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いてグラフにした。
【００９６】
アポトーシスの測定：カスパーゼ３／７活性の増大として測定したアポトーシスの誘導を、Ｃａｓｐａｓｅ  ３／７  Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，，ワイオミング州マディソン）により測定した。細胞系を９６ウェルプレートにウェル当たり３０００細胞の密度で接種した。接種の２４時間後に、細胞に種々の濃度の薬物を単剤または組合わせとして投与した。Ｃａｓｐａｓｅ  ３／７  Ｇｌｏの信号を投与の２４時間後に測定した。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ワイオミング州マディソン）で処理した並行プレートを用いて、カスパーゼ３／７活性をウェル当たりの細胞数に正規化した。各ウェルについての信号を次式を用いて正規化した：Ｃａｓｐａｓｅ  ３／７  Ｇｌｏ発光単位／ＤＭＳＯ対照のＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏフラクション。すべてのグラフがＰＲＩＳＭ（登録商標）ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて作成された。
【００９７】
相乗性の分析：Ｂｌｉｓｓ相加性モデルを用いてＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせの効果を相加性、相乗性または拮抗性として分類した。組合わせ阻害について次式を用いて理論曲線を計算した：Ｅｂｌｉｓｓ＝ＥＡ＋ＥＢ−ＥＡ＊ＥＢ、ここでＥＡおよびＥＢは特定濃度の薬物Ａ単独および薬物Ｂ単独により得られた阻害フラクション(fractional inhibition)である。ここで、Ｅｂｌｉｓｓは２薬物の組合わせが厳密に相加的であった場合に予想される阻害フラクションである。実験により測定した阻害フラクションがＥｂｌｉｓｓ未満であれば、その組合わせは相乗的であるとされた。実験により測定した阻害フラクションがＥｂｌｉｓｓより大きければ、その組合わせは拮抗的であるとされた。用量応答曲線を得るために、種々の用量の薬物Ａを一定用量の薬物Ｂと組み合わせた場合についてｂｌｉｓｓ相加性を計算した。これにより、薬物Ｂが薬物Ａの力価に影響を与えたか、あるいはそれの固有活性をシフトさせたかについて評価することができた。すべてのプロットをＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより作成した。
【００９８】
リン酸化された受容体型チロシンキナーゼの測定：市販の膜ベースの抗体アレイ（Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  Ａｒｒａｙ，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州ミネアポリス）を用いて４２の異なる受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を二重で同時に共免疫沈降させ、それぞれにおける特異的ホスホ−エピトープを調べた。ホスホ−エピトープを化学発光により検出し、各対のスポットについてピクセル密度に基づいて定量し、ビヒクル処理対照と対比して表わした。ＡｌｐｈａＥａｓｅＦＣソフトウェア（Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ，カリフォルニア州サンレアンドロ）を用いてピクセル密度を測定した。
【００９９】
タンパク質溶解物の調製およびウェスタンブロット法：界面活性剤溶解（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１％  ＮＰ−４０，０．５％デオキシコール酸ナトリウム，０．１％  ＳＤＳ，プロテアーゼ阻害剤（Ｐ８３４０，Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州セントルイス）およびホスファターゼ阻害剤（Ｐ５７２６，Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州セントルイス）を含有）カクテルにより、細胞抽出物を調製した。可溶性タンパク質濃度をｍｉｃｒｏ−ＢＳＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）により測定した。ＡｌｐｈａＥａｓｅＦＣソフトウェア（Ａｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ，カリフォルニア州サンレアンドロ）を用いてピクセル密度を測定した。
【０１００】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分離したタンパク質を電気泳動によりニトロセルロースへ移行させ、抗体と共にインキュベートし、化学発光による第２工程検出（ＰｉｃｏＷｅｓｔ；Ｐｉｅｒｃｅ，イリノイ州ロックフォード）することにより、タンパク質免疫検出を実施した。抗体は下記を含有していた：４Ｅ−ＢＰ１、ｐ−４Ｅ−ＢＰ１（Ｔ３７／４６）、ＰＲＡＳ４０、およびｐＰＲＡＳ４０（Ｔ２４６）。抗体はＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（マサチュセッツ州ダンバース）から入手された。薬剤が下流のシグナル伝達タンパク質のリン酸化に及ぼす効果を分析するために、細胞系を約８０％の集密度にまで成長させ、この時点で、指示した薬剤を指示した濃度で添加し、細胞を３７℃で２時間インキュベートした。培地を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、前記に従って細胞を溶解した。
【０１０１】
インビボでの腫瘍成長阻害の評価：インビボでの腫瘍成長の評価は、American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care（ＡＡＡＬＡＣ）認定された動物飼育施設内の、Institutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）の承認を得たＯＳＩ施設で、Institute of Laboratory Animal Research (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals,ＮＩＨ，米国メリーランド州ベテスダ）に従って実施された。この試験のために、雌無胸腺ヌードｎｕ／ｎｕ  ＣＤ−１マウス（６〜８週，２０〜２８ｇ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，米国マサチュセッツ州ウィルミントン）を、試験開始前の最低１週間、順化させた。腫瘍成長阻害を評価するために、細胞を細胞培養フラスコから対数成長期に採集し、無菌ＰＢＳで２回洗浄し、計数し、ＰＢＳ中に適切な濃度に再懸濁した後、ｎｕ／ｎｕ  ＣＤ−１マウスの右わき腹に皮下移植した。腫瘍を２００±５０ｍｍ３のサイズになるまで樹立させた後、各８匹のマウスの処理グループにランダムに分けた。
【０１０２】
ＴＧＩ試験を、ＯＳＩ−０２７に対するビヒクルとしての２０％  ＴｒａｐｐｓｏｌおよびＯＳＩ−９０６に対するビヒクルとしての２５ｍＭ酒石酸を用いて実施した。両薬物を１日１回、連続１４日間、経口投与した。体重を週２回測定し、それと共に腫瘍体積（Ｖ＝［長さ×（幅）２］／２）をノギスで測定した。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を種々の時点で次式により判定した：
【０１０３】
【数１】
2013522215.tif 000004
【０１０４】
式中：Ｔｔ＝処理の時点ｔにおける腫瘍体積中央値；Ｔ０＝処理の時点０における腫瘍体積中央値；Ｃｔ＝対照の時点ｔにおける腫瘍体積中央値；およびＣ０＝対照の時点０における腫瘍体積中央値。次いで投与期間にわたる平均ＴＧＩを計算して報告した。
【０１０５】
腫瘍の退縮率を下記のように次式を用いて測定および計算した：退縮率％＝１００（Ｗ０−Ｗｉ）／Ｗ０；式中のＷ０は処理グループについての処理開始時における平均腫瘍重量であり、Ｗｉはそのグループについての時点ｘにおける平均腫瘍重量である。
【０１０６】
卵巣癌細胞系のパネルを、単剤としての、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）の触媒部位阻害薬であるＯＳＩ−０２７、またはインスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）およびインスリン受容体（ＩＲ）の二重阻害薬であるＯＳＩ−９０６に対する感受性について評価した。これらの薬剤それぞれに対するインビトロ感受性の差を観察した（図１Ａおよび１Ｂ）。単剤ＯＳＩ−０２７に対して最も感受性であった細胞系、たとえばＩｇｒｏｖ１およびＯｖｃａｒ３は、ＯＳＩ−９０６に対して最も感受性が低いものに含まれていた。逆に、ＯＳＩ−０２７に対して比較的非感受性であった細胞系、たとえばＭＤＡＨ２７７４およびＯｖｃａｒ−５は、ＯＳＩ−９０６に対して最も感受性の細胞系であった。明らかに、ＫＲＡＳ変異を宿したこれらの細胞系ＭＤＡＨ２７７４およびＯｖｃａｒ−５は、ＯＳＩ−９０６に対して感受性であり、ＯＳＩ−０２７に対しては感受性でなかった。細胞系がＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６に対して感受性の差を示したという所見は、これらの選択的阻害薬それぞれが独自の経路または部分的にオーバーラップした経路をターゲティングする可能性があることを示唆した。本発明者らは、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせ処置はＩＧＦ−１Ｒ／ＩＲおよびｍＴＯＲの多重の下流エフェクターをターゲティングして相乗的な増殖阻害をもたらすことができると理由づけした。
【０１０７】
種々の濃度のＯＳＩ−０２７がＯＳＩ−９０６の存在下および不存在下で増殖阻害に及ぼす効果を図２Ａ〜２Ｄに示す。各細胞系について、種々の用量のＯＳＩ−０２７の効果を中実丸により表わす。ｂｌｉｓｓ相加性モデルを用いて相乗性を評価した。破線は、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせについて、これら２薬物が純粋に相加的であった場合の算術推定をグラフで表わす。種々の用量のＯＳＩ−０２７と一定用量（５ｕＭ）のＯＳＩ−９０６の組合わせについての実験結果を、中空丸で示す。図２Ａ〜２Ｃは、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせについての用量応答曲線が相加性についての推定より有意に下側になることを証明し、これはこの組合わせがＫＲＡＳｗｔおよびＫＲＡＳ両方の変異細胞系において相乗的に増殖を阻害することを指摘する。Ｏｖｃａｒ  ５細胞において、ＯＳＩ−０２７は、カスパーゼ３／７活性の誘導により測定したアポトーシスを有意には誘導しなかった（図２Ｄ、中実丸）。ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせは、用量依存性のカスパーゼ３／７活性増大を生じ（図２Ｄ、中空丸）、この誘導は相加性についての算術推定値（図２Ｄ、破線）より有意に大きく、これはＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせがアポトーシスの誘導に対して相乗的に作用しうることを指摘する。
【０１０８】
ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせに対する、卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、乳癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、膵臓癌、および非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍に由来する１５の細胞系の感受性を図８に示す。ＯＳＩ−９０６と組み合わせると、ＯＳＩ−０２７は大部分の被験細胞系において細胞増殖を相乗的に阻害する。相乗性がみられたあらゆる被験細胞系においてこの組合わせはＥＣ５０の低下をもたらし、しばしば最大効力を改善した。前記のようにＢｌｉｓｓ相加性モデルを用いて相乗性を評価した。被験細胞系において、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせが拮抗性であるものはなかった。
【０１０９】
ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせをインビボでＨ４６０  ＮＳＣＬＣ異種移植モデルにおいて評価した。図３Ａ〜３Ｂに示すように、ＯＳＩ−０２７を５０ｍｇ／ｋｇで１日１回、１４日間、経口投与すると、６６％の中等度の平均腫瘍成長阻害が得られた。ＯＳＩ−９０６を単剤として６０ｍｇ／ｋｇで１日１回、１４日間、経口投与すると、６９％のＴＧＩが得られた。組合わせグループでは、すべてのマウスにＯＳＩ−０２７を５０ｍｇ／ｋｇで１日１回、毎日経口投与し、ＯＳＩ−９０６を５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで同時に投与した。ＯＳＩ−０２７と５ｍｇ／ｋｇのＯＳＩ−９０６との組合わせは、１００％の有意のＴＧＩ（ＯＳＩ−０２７またはＯＳＩ−９０６の単剤と対比してＰ＜０．００６）および１８％の最大退縮をもたらした。この組合わせは平均体重減少率(body weight loss)９％で良好に耐容された。ＯＳＩ−０２７と１０ｍｇ／ｋｇのＯＳＩ−９０６との組合わせは、同様な腫瘍成長阻害（１００％ＴＧＩ，ＯＳＩ−０２７またはＯＳＩ−９０６の単剤と対比してＰ＜０．００１）および退縮（１５％）をもたらした。この組合わせは平均１２％の体重減少率で耐容された。これらのデータは、ＯＳＩ−０２７と低用量のＯＳＩ−９０６との組合わせが、最大耐量のいずれかの単剤と比較して卓越した腫瘍成長阻害および腫瘍退縮をもたらすことを指摘する。
【０１１０】
受容体型チロシンキナーゼのパネルの活性化状態の評価は、ｍＴＯＲの触媒部位阻害薬、たとえばＯＳＩ−０２７またはＯＸＡ−０１が、ＩＧＦ−１ＲまたはＩＲの阻害薬、たとえばＯＳＩ−９０６の作用に対して細胞を増感させる機序を指摘する。図４Ａに示すように、ＩＲの免疫沈降に続いて汎−抗ホスホチロシン抗体による検出は、ＯＳＩ−０２７で処理したＯｖｃａｒ−３卵巣癌細胞においてＩＲが過剰リン酸化されることを指摘する。この亢進したリン酸化状態は、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの両方について活性が増大したことの指標である(Lopaczynski et al., 2000; Baserga et al., 1999)。それぞれ一対のテクニカルレプリケートとしてスポットした抗体アレイ上で、４２の異なるリン酸化された受容体型チロシンキナーゼのパネルとして実験した免疫沈降反応のイメージを示す。ピクセル密度を計算し、ビヒクル処理対照に対するパーセントとして下部の棒グラフにグラフで示す。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒの選択的阻害薬であるＯＳＩ−９０６は、ホスホル−ＩＲをＤＭＳＯ処理試料において検出された基礎レベルより低く完全に減弱させる。ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６との組合わせもｐ−ＩＲの完全な減少をもたらす。同様に、ＭＤＡＨ２７７４卵巣癌細胞において（図４Ｂ）、ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲの両方のリン酸化がＯＳＩ−０２７による２時間の処理後に増大し、これがＯＳＩ−９０６またはＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６との組合わせによる処理によって低下する。増殖の相乗阻害がＯｖｃａｒ３およびＭＤＡＨ２７７４の両方の細胞にみられた。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒのリン酸化に対するこの効果はＯＳＩ−０２７に独特ではなく、ＯＸＡ−０１で処理したＨ４６０肺癌細胞にもみられる（図５Ａ，５Ｂ）。選択的ＥＧＦＲ阻害薬であるエルロチニブは代償性シグナル伝達機序によりホスホル−ＩＧＦ−１Ｒを増加させることが以前に示され(Buck et al., 2008)、本発明者らは今回、ＯＸＡ−０１処理がこの細胞モデルにおいてｐ−ＩＧＦ−１Ｒをエルロチニブより大幅に増加させることを証明する。
【０１１１】
本発明者らは、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６との組合わせがＡｋｔシグナル伝達軸において下流エフェクターをより良好に阻害するであろうという仮説を立てた。ＯＳＩ−０２７に対して比較的非感受性である卵巣癌細胞ＭＤＡＨ２７７４において、３００ｎＭのＯＳＩ−０２７による処理は、Ａｋｔの直接基質であるホスホル−ＰＲＡＳ４０を部分的に阻害し、これはＡｋｔ活性化の強固な尺度である（図６Ａ）。ＯＳＩ−９０６はホスホル−ＰＲＡＳ４０をより大幅に阻害し、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６との組合わせはいずれの単剤よりも大きな阻害をもたらす。バンド密度を計算し、棒グラフとして示す（図６Ｂ）。４Ｅ−ＢＰ１はｍＴＯＲシグナル伝達の下流エフェクターであり、かつＣＡＰ依存性タンパク質翻訳の鍵となる調節因子である。４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化はＯＳＩ−０２７処理によって低下する（図７Ａ〜７Ｂ）。ＯＳＩ−９０６処理では有意の低下はみられないが、ＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせはいずれかの単剤と比較して卓越したｐ４Ｅ−ＢＰ１阻害を生じる。
【０１１２】
ｍＴＯＲ阻害薬、たとえばＯＳＩ−０２７と、ＩＧＦ−１ＲまたはＩＲの阻害薬、たとえばＯＳＩ−９０６との組合わせは、インビトロで多数の腫瘍タイプに由来する細胞系において相乗作用して増殖を阻害することができる。これらの薬剤は相乗作用して腫瘍細胞アポトーシスを誘導することができ、したがってこの組合わせは有意に低下した用量ですら、いずれの薬剤についての単剤療法よりも優れている。ＯＳＩ−０２７またはＯＸＡ−０１（両方ともｍＴＯＲの触媒部位阻害薬である）およびエルロチニブ（選択的ＥＧＦＲ阻害薬）による処理は、ＩＧＦ−１受容体またはインスリン受容体の活性化を増強させることができ、これが起きると相乗的な増殖阻害もみられる。これらのデータは、ＩＧＦ−１ＲまたはＩＲのリン酸化を増大させる薬剤による処理が細胞をＯＳＩ−９０６の作用に対して増感させるという概念を支持する。これと一致して、本発明者らはＯＳＩ−０２７とＯＳＩ−９０６の組合わせがいずれの単剤よりもＡｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達軸の下流エフェクターをより大きく阻害するという証拠を提示し、これは観察された相乗的な増殖阻害と一致する。
【０１１３】
参考文献: Lopaczynski, W. et al. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun., 279, 955-960; Baserga, R. et al. (1999) Exp. Cell Res. 253, 1-6; Buck et al. (2008) Cancer Res. 68, 8322-32。
【０１１４】
定義
本明細書中の言語および用語は、別に明記しない限り、当業者が受け入れている最も広い意味が与えられるものとする。
【０１１５】
ヒトを含めた動物における用語“癌”は、癌を引き起こす細胞に典型的な特徴、たとえば無制御な増殖、不死性、転移ポテンシャル、急速な成長および増殖速度、ならびにある特徴的な形態学的特徴をもつ細胞の存在を表わす。しばしば癌細胞は腫瘍の形態であるが、それらの細胞は動物内に単独で存在する場合があり、あるいは白血病細胞のように独立した細胞として血流中を循環している場合がある。
【０１１６】
本明細書中でたとえば“腫瘍細胞成長”に関連して用いる“細胞成長”は、別に指示しない限り腫瘍学において一般的に用いられるように用いられ、その際この用語は原則として細胞数の成長と関連し、これは細胞の複製（すなわち増殖）によって細胞複製の速度が細胞死（たとえば、アポトーシスまたは壊死による）の速度より大きい場合に起き、細胞集団のサイズの増大が生じる；ただし、その成長の小部分は、ある状況では個々の細胞の細胞サイズまたは細胞質体積の増大によるものである可能性もある。したがって、細胞の成長を阻害する薬剤は増殖の阻害もしくは細胞死の刺激または両方により阻害を行なう可能性があり、これによってこれら２つの対向するプロセス間の平衡が変化する。
【０１１７】
本明細書中で用いる“腫瘍成長”または“腫瘍転移成長”は、別に指示しない限り腫瘍学において一般的に用いられるように用いられ、その際この用語は原則として、主に腫瘍細胞の成長の結果としての腫瘍または腫瘍転移の質量または体積の増加と関連する。
【０１１８】
本明細書中で用いる“異常な細胞成長”は、別に指示しない限り、正常な調節機序とは無関係な細胞成長（たとえば、接触阻害の喪失）を表わす。これには下記の異常な成長が含まれる：（１）変異チロシンキナーゼの発現または受容体型チロシンキナーゼの過剰発現により増殖する腫瘍細胞（腫瘍）；（２）異常なチロシンキナーゼ活性化が起きる他の増殖性疾患の良性および悪性細胞；（４）受容体型チロシンキナーゼにより増殖するいずれかの腫瘍；（５）異常なセリン／トレオニンキナーゼ活性化により増殖するいずれかの腫瘍；ならびに（６）異常なセリン／トレオニンキナーゼ活性化が起きる他の増殖性疾患の良性および悪性細胞。
【０１１９】
本明細書中で用いる用語“処置する”は、別に指示しない限り、患者において腫瘍、腫瘍転移、または他の癌原因細胞もしくは新生細胞の成長の進行を反転、軽減、阻害し、または部分的もしくは完全に阻止することを意味する。本明細書中で用いる用語“処置”は、別に指示しない限り、処置する行為を表わす。
【０１２０】
“処置する方法”という句またはそれの均等物は、たとえば癌に適用した場合、動物において癌細胞の数を減少させもしくは癌細胞を排除しまたは癌の症状を軽減するために企画された行動の手順または経過を表わす。癌または他の増殖性障害を“処置する方法”は、必ずしも癌細胞もしくは他の障害が実際に排除されること、細胞数もしくは障害が実際に低減すること、または癌もしくは他の障害の症状が実際に軽減することを意味するわけではない。しばしば、癌を処置する方法は、成功の可能性が低い場合ですら、ただしそれにもかかわらず動物の病歴および推定生存期待が全般的にみて有益な行動経過を予測させれば、実施されるであろう。
【０１２１】
本明細書中で用いる“薬剤”または“生物学的に有効な薬剤”は、生物学的、医学的もしくは化学的な化合物または他の部分を表わす。限定ではない例には、簡単もしくは複雑な有機分子もしくは無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、または化学療法用化合物が含まれる。種々の化合物、たとえば小分子およびオリゴマー（たとえば、オリゴペプチドおよびオリゴヌクレオチド）、ならびに種々のコア構造を基礎とする合成有機化合物を合成できる。さらに、種々の天然源が、スクリーニング用の化合物、たとえば植物または動物の抽出物などを供給できる。本発明の薬剤の構造性質について制限がないことを当業者は容易に認識できるであろう。
【０１２２】
本明細書中で用いる用語“アゴニスト”は、標的タンパク質の活性または発現を阻害することにより標的タンパク質の生物学的機能を開始または増強する能力をもつ化合物を表わす。したがって用語“アゴニスト”は、標的ポリペプチドの生物学的役割に関連して定義される。本発明において好ましいアゴニストは標的と特異的に相互作用する（それに結合する）が、そのシグナル伝達経路（標的ポリペプチドがそのメンバーである）の他のメンバーと相互作用することにより標的ポリペプチドの生物活性を開始または増強する化合物も、具体的にこの定義に含まれる。
【０１２３】
用語“アンタゴニスト”と“阻害薬”は互換性をもって用いられ、それらは、標的タンパク質の活性または発現を阻害することにより標的タンパク質の生物学的機能を阻害する能力をもつ化合物を表わす。したがって、用語“アンタゴニスト”および“阻害薬”は標的タンパク質の生物学的役割に関連して定義される。本発明において好ましいアゴニストは標的と特異的に相互作用する（それに結合する）が、そのシグナル伝達経路（標的タンパク質がそのメンバーである）の他のメンバーと相互作用することにより標的タンパク質の生物活性を阻害する化合物も、具体的にこの定義に含まれる。アンタゴニストにより阻害される好ましい生物活性は、腫瘍の発症、成長もしくは拡散、または自己免疫疾患において現われる望ましくない免疫応答に関連する。
【０１２４】
“抗癌薬”、“抗腫瘍薬”、または“化学療法薬”は、新生物状態の処置に有用ないずれかの薬剤を表わす。１クラスの抗癌薬は、化学療法薬を含む。“化学療法”は、１種類以上の化学療法薬および／または他の薬剤を、静脈内、経口、筋肉内、腹腔内、嚢内、皮下、経皮、口腔、もしくは吸入により、または坐剤の形態を含めた種々の方法で癌患者に投与することを意味する。
【０１２５】
用語“有効量”または“療法有効量”は、限定ではなく下記に定める疾患の処置を含めた意図する用途を果たすのに十分な本明細書に記載する化合物の量を表わす。療法有効量は意図する用途（インビトロまたはインビボ）または処置される対象および疾患状態、たとえば対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与様式などに応じて異なる可能性があり、これらは当業者が容易に決定できる。この用語は、標的細胞において特定の応答、たとえば血小板付着および／または細胞移動の低下を誘導する用量にも適用される。具体的な用量は、選択した個々の化合物、行なわれる投与計画、それが他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それを投与する組織、およびそれが運ばれる物理的送達システムに応じて異なるであろう。
【０１２６】
生物活性薬剤に適用される“選択的阻害”または“選択的に阻害する”は、その薬剤が標的との直接または相互の相互作用により、標的外のシグナル伝達活性と比較して標的シグナル伝達活性を選択的に低下させる能力を表わす。
【０１２７】
本発明の目的に関して、“の共投与”および“共投与する”は、２種類の有効薬剤を個別または一緒に投与することを表わし、その際、それら２種類の有効薬剤は組合わせ療法の有益性を得るために企画された適宜な投与計画の一部として投与される。たとえば、２種類の有効薬剤を同一の医薬組成物の一部として、または個別の医薬組成物中において投与することができる。ＯＳＩ−９０６をＯＳＩ−０２７の投与の前、同時、もしくは後に、またはそのある組合わせで投与することができる。
【０１２８】
用語“医薬を製造するための方法”または“医薬を製造するための使用”は、本明細書中に特定した適応症に使用するための、特に腫瘍、腫瘍転移、または癌全般に使用するための、医薬の製造に関する。この用語は、特定した適応症におけるいわゆる“スイス型”クレーム方式に関する。
【０１２９】
本発明に関して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬ＯＳＩ−９０６に対する腫瘍細胞成長の感受性は、腫瘍細胞が１μＭ未満のＥＣ５０（半最大有効濃度）で阻害されるならば高い（“感受性”）と定義され、腫瘍細胞が１０μＭより大きいＥＣ５０で阻害されるならば低い（すなわち、抵抗性）と定義される。これらの数値の間の感受性を中間的とみなす。ＩＧＦ−１ＲおよびＩＲキナーゼの両方を阻害する他のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬、特に本明細書に記載する式Ｉの化合物について、それらは同じシグナル伝達経路を阻害することにより腫瘍細胞の増殖を阻害するので、量的に類似の結果が予想される；ただし、ＯＳＩ−９０６に対比した他の阻害薬の相対的細胞力価に応じて量的にＥＣ５０値は異なる可能性がある。たとえば、ＯＳＩ−９０６より効力の高いＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬に対する腫瘍細胞成長の感受性はそれに相応してより低いＥＣ５０で腫瘍細胞が阻害される場合に高いと定義されるであろう。インビトロ培養ですべてＯＳＩ−９０６に対する高い感受性をもつ多様な腫瘍細胞タイプの腫瘍細胞を用いた腫瘍異種移植試験で、腫瘍はインビボで一貫して高いパーセントの腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）で阻害される（本明細書中の実験のセクションを参照）。これに対し、インビトロ培養でＯＳＩ−９０６に対する低い感受性をもつ腫瘍細胞を用いた同様な試験で、腫瘍はインビボで低いパーセントの腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）で阻害されるにすぎない。これらのデータは、ＯＳＩ−９０６などのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害薬の腫瘍細胞培養における感受性がインビボでの腫瘍感受性を予測させることを指摘する。
【０１３０】
本発明に関して、ＯＳＩ−０２７に対する腫瘍細胞成長の感受性は、腫瘍細胞が１μＭ未満のＥＣ５０（半最大有効濃度）で阻害されるならば高い（“感受性”）と定義され、腫瘍細胞が１０μＭより大きいＥＣ５０で阻害されるならば低い（すなわち、抵抗性）と定義される。これらの数値の間の感受性を中間的とみなす。
【０１３１】
用語ＥＣ５０（半最大有効濃度）は、特定した曝露時間についてベースラインと最大の間の半分の応答を誘導する化合物濃度を表わし、その化合物の力価の尺度として用いられる。
【図１】
2013522215.tif 000005
【図２】
2013522215.tif 000006
【図３】
2013522215.tif 000007
【図４】
2013522215.tif 000008
【図５】
2013522215.tif 000009
【図６】
2013522215.tif 000010
【図７】
2013522215.tif 000011
【図８Ａ】
2013522215.tif 000012
【図８Ｂ】
2013522215.tif 000013
【図８Ｃ】
2013522215.tif 000014
【国際調査報告】
2013522215.tif 000015
2013522215.tif 000016
2013522215.tif 000017