(57)【要約】本発明は、ネコの炎症を診断、抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、特定の炎症バイオマーカーを測定することを含む方法に関する。本発明はさらに、炎症を治療または抑制する方法であって、増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含む食餌を与えることを含む方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネコの炎症状態を検出する方法であって、ＩＮＤＯ、ＡＮＸＡ１、ＭＭＰ８、ＣＤ７９ａ、ＯＤＣ１、およびＳＴＸＢＰ２のうち１種類以上から選択される遺伝子の血中レベルを測定することを含み、その際、発現の増大を炎症状態と相関させる方法。
【請求項２】
増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含む食餌を与えることにより炎症状態を治療または抑制する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記の食餌を少なくとも２週間の期間与える、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
食餌が、増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含むネコ用食餌である、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
食餌が、乾燥重量基準で０．２５〜５％のＤＨＡ＋ＥＰＡを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
食餌が、乾燥重量基準で
ＤＨＡ＋ＥＰＡ：０．５〜２．５％
メチオニン：１〜３％  ｍｇ／ｋｇ
マンガン：５０〜２００ｐｐｍ
ビタミンＣ：７５〜１０００ｍｇ／ｋｇ
ビタミンＥ：５００〜２５００ｍｇ／ｋｇ
Ｌ−カルニチン：１００〜１５００ｍｇ／ｋｇ
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
食餌がほぼ実施例１の被験食の栄養素組成を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抑制または治療される状態が骨関節炎である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本発明は、ネコの炎症を診断、抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、特定の炎症バイオマーカーを測定することを含む方法に関する。本発明はさらに、炎症を治療または抑制する方法であって、増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含む食餌を与えることを含む方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  ネコの変性性関節疾患（ＤＪＤ）または骨関節炎（ＯＡ）は、イヌの場合より認識が低い。しかし、数人の著者らが、ネコ集団における四肢ＤＪＤの発症率は高齢のネコの１６．５％から６４％までの範囲に及ぶと推定している。ネコＤＪＤの病因および素因についてはほとんど分かっていない。ゲノミクスおよびプロテオミクス技術の利用は、疾患プロセスを洞察し、かつ治療がどのようにこの疾患の抑制を補助できるかを理解するのに役立つ可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
[0003]  骨関節炎は、１以上の関節の軟骨、骨、および軟組織の進行性炎症および劣化により引き起こされる慢性変性性関節疾患である。リウマチ性関節炎は、関節に炎症および損傷を引き起こす自己免疫状態である。両方とも慢性炎症状態である。関節に対する損傷は進行性でありかつ大部分は不可逆性であるので、炎症プロセスを事前に確認して対処することが望ましい。残念ながら血中のバイオマーカー発現と組織における発現の相関性を求めるのは困難であることが証明されており、このためこの疾患が重篤な痛みおよび不可逆的な組織損傷を生じる前に診断するのは難しい。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
[0004]  ＯＡを伴うネコにおいて正常な高齢のネコと比較してアップレギュレートされた６種類の遺伝子を同定した。これらの遺伝子を、次いで同じ関節炎ネコを用いて被験食摂取後に測定した。これら６種類の遺伝子の発現低下と相関する臨床的有益性を提供する食餌も同定した。
【０００５】
[0005]  したがって本発明は、第１態様において、ネコの炎症状態を検出する方法であって、ＩＮＤＯ、ＡＮＸＡ１、ＭＭＰ８、ＣＤ７９ａ、ＯＤＣ１、およびＳＴＸＢＰ２のうち１種類以上から選択される遺伝子の血中レベルを測定することを含み、その際、発現の増大を炎症状態と相関させる方法を提供する。
【０００６】
[0006]  他の態様において、本発明は、ネコの炎症を抑制および／または予防し、あるいは炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、ＩＮＤＯ、ＡＮＸＡ１、ＭＭＰ８、ＣＤ７９ａ、ＯＤＣ１、および/またはＳＴＸＢＰ２の血中発現レベルを測定することによりその状態を確認し、そして増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含む食餌を、たとえば２週間の期間与えることを含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
[0007]  本発明の方法に使用するための食餌には、たとえば増加したレベルのＤＨＡ、ＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、および／またはＬ−カルニチンのうち１種類以上を含む、たとえば乾燥重量基準で０．２５〜５％の量のＤＨＡ＋ＥＰＡを含むネコ用食餌、たとえば乾燥重量基準で
ＤＨＡ＋ＥＰＡ：０．５〜２．５％
メチオニン：１〜３％  ｍｇ／ｋｇ
マンガン：５０〜２００ｐｐｍ
ビタミンＣ：７５〜１０００ｍｇ／ｋｇ
ビタミンＥ：５００〜２５００ｍｇ／ｋｇ
Ｌ−カルニチン：１００〜１５００ｍｇ／ｋｇ
を含む食餌、たとえばほぼ実施例１の被験食の栄養素組成をもつ食餌、たとえば乾燥重量基準でほぼ表１に示す量＋／−１０％の成分を含む食餌が含まれる。
【実施例】
【０００８】
実施例１−食餌が関節炎のネコの炎症バイオマーカーに及ぼす効果
[0008]  この試験は、四肢変性性関節疾患（ＤＪＤ）を伴うネコに与えた場合に被験食が全血中の遺伝子発現プロフィールに及ぼす効果を評価するために実施された。跛行およびＤＪＤに一致するＸ線像の変化を伴う３１匹のショートヘア家猫（初期体重４．２±１．２７ｋｇ、年齢１２．１±２．９８歳）を試験に含めた。すべてのネコに対照食を２８日間与えた後、被験食を与えた。被験食は増加したレベルのＤＨＡおよびＥＰＡ、メチオニン、マンガン、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびにＬ−カルニチンを含有していた。対照食の最終日および被験食摂取１４日後に全血試料を採集した。被験食を１４日間摂取した後、ＤＪＤを伴うネコでは、ＤＪＤのネコにおいて健康な高齢のネコと対比してアップレギュレートされることが確認された６種類の遺伝子（ＩＮＤＯ、ＡＮＸＡ１、ＭＭＰ８、ＣＤ７９ａ、ＯＤＣ１、およびＳＴＸＢＰ２）の発現が低下していた。これらの遺伝子は軟骨分解、Ｂ細胞機能、ポリアミン合成、およびタンパク質転送と関連する。まとめると、ＤＪＤを伴うネコに被験食を与えることにより、健康な高齢のネコと対比してＤＪＤを伴うネコの血中に先にみられた遺伝子発現パターンが１４日後に復帰した。
【０００９】
[0009]  ３１匹の去勢／卵巣切除したショートヘア家猫をこの試験のために同定した。跛行を伴うネコをＸ線撮影して、変性性関節疾患と一致する変化を確認した。理学的検査および血清化学プロフィールにより、ネコは他の点では健康であるとみなされた。すべてのネコがネコ汎白血球減少症、カリチウイルスおよびヘルペスウイルス、ならびに恐水病に対して免疫化されており、理学的検査、完全血球計数、血清生化学分析、尿分析、および寄生虫に関する検便の結果に基づいて、慢性全身性疾患を伴うものはなかった。ネコは他のネコ１０〜１２匹と共に収容され、食餌はそれらの１日カロリー要求量が消費されるまで一日中連続して摂取できた。ネコは季節変化に伴って変化する自然光のある広い部屋に収容された。ネコは、相互交流、飼育者との毎日の交流や遊びの時間、自然の景色をながめるための大きな窓およびサンポーチ、ならびに玩具の利用によって、豊かな行動を経験していた。０日目の採集前２８日間、すべてのネコに維持用対照食を与え、その後、被験食を与えた。血液を採取してＰＡＸｇｅｎｅチューブに集め、評価するまで−２０℃で保存した。
【００１０】
[0010]  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｄａｔａソフトウェア(Partek Incorporated, 12747 Olive Blvd., Suite 205, St. Louis, Missouri 63141, U.S.A. http://www.partek.com/partekgs_geneexpression)用のＰａｒｔｅｋ（登録商標）ＧＳ(Partek Inc., St. Charles, MO)をデータ分析に用いた。Ｒｏｂｕｓｔ  Ｍｕｌｔｉｃｈｉｐ  Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）アルゴリズム（１）をＧｅｎｅＣｈｉｐ（登録商標）試料のバックグラウンド調整、標準化、およびプローブ−レベル要約に用いた。ＡＮＯＶＡ分析を実施して、いずれか２グループ間において０．１の最小ＦＤＲコントロールおよび各方向に１．３の変化倍率で有意差発現している遺伝子を見出した。さらに、偽所見率閾値０．１（観察のうち１０％が偶然によるものであることを意味する）を、許容できる統計的有意性の最小レベルとして選択した。マイクロアレイデータの証明のために、選択した７４の遺伝子のＲＴ−ＰＣＲ分析に同様なカットオフ値を用いた。
【００１１】
【表１−１】
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【００１２】
【表１−２】
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【００１３】
【表２】
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【００１４】
[0011]  ＯＡを伴うネコと健康な高齢のネコの０日目の比較に基づいて、ＯＡネコにおいて有意にアップレギュレートされた６種類の遺伝子を同定した。ＯＡネコを被験食に切り換えた後、これら６種類の遺伝子（ＣＤ７９ａ、ＩＮＤＯ、ＡＮＸＡ１、ＯＤＣ１、ＳＴＸＢＰ２、およびＭＭＰ８）は１４日後にダウンレギュレートされていた。事実上、現在はこれらの遺伝子は正常な高齢のネコにみられる発現とより近似すると思われていた。この試験の結果は、正常な高齢のネコと対比してＯＡネコにおいてアップレギュレートされることが確認された６種類の遺伝子が被験食摂取後にダウンレギュレートされたことを示した。これらの特異的遺伝子は、ＯＡもしくはＤＪＤまたは原疾患である関節炎状態の発症に際して本質的な役割を果たしている可能性がある。このデータは、関節炎ネコにおける被験食の有効性に対してゲノミクスによる支持を提供することができる。測定した臨床応答および活動応答と一致して、被験食を与えられた関節炎ネコをは、被験食摂取後に正常な高齢のネコとより類似する遺伝子発現を伴なっていた。
【国際調査報告】
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