(57)【要約】カテプシンＳの不適切な発現または活性化を特徴とする障害の予防または治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物［式中：Ｒ１ａはＨであり；Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ６アルキル、炭素環またはＨｅｔであり；あるいはＲ１ａとＲ１ｂは一緒に３〜６個の環原子をもつ飽和環状アミンを規定しており；Ｒ２ａおよびＲ２ｂは独立してＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシであり、あるいはＲ２ａおよびＲ２ｂはそれらが結合している炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成しており；Ｒ３は分枝Ｃ５−Ｃ１０アルキル鎖、Ｃ２−Ｃ４ハロアルキルまたは−ＣＨ２Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルであり；Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノまたはＣ１−Ｃ６ジアルキルアミノである］。2013513598.tif 000036【選択図】なし
2013513598.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2013513598.tif 000035
［式中：
Ｒ１ａは、Ｈであり；
Ｒ１ｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、独立して下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく：ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アジド、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、炭素環およびＨｅｔ；あるいは
Ｒ１ｂは、炭素環またはＨｅｔであり；あるいは
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、３〜６個の環原子をもつ飽和環状アミンを規定しており；
その際、炭素環、Ｈｅｔまたは環状アミンは、独立して下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく：ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アジド、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ＲｘＯＯＣ−Ｃ０−Ｃ２アルキレン（ここで、ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ１−Ｃ４ハロアルキルである）、フェニル、ベンジルまたはＣ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレン；
その際、フェニル、ベンジルまたはシクロアルキル部分は、独立してハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシ）から選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立してＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシから選択され、あるいはＲ２ａおよびＲ２ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成しており；
Ｒ３は、Ｃ５−Ｃ１０アルキルであり、独立してハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；あるいは
Ｒ３は、少なくとも２個のクロロまたは３個のフルオロ置換基をもつＣ２−Ｃ４アルキル鎖であり；あるいは
Ｒ３は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルメチルであり、独立してＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノまたはＣ１−Ｃ６ジアルキルアミノであり；
Ｈｅｔは、独立してＯ、ＳおよびＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む安定な単環式または二環式、飽和、部分飽和または芳香族の環系であり、各環は５または６個の環原子をもち；
炭素環は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルケニルまたはフェニルである］
またはその医薬的に許容できる塩、水和物もしくはＮ−オキシド。
【請求項２】
Ｒ１ｂは、メチル、シクロプロピル、１−フェニルエチル、または１〜３個の窒素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む５もしくは６員複素環式環であり、これらのシクロプロピル、フェニルまたは複素環式環は、独立して下記のものから選択される最高３個の置換基で置換されていてもよい：
Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４−ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ＲｘＯＯＣ−Ｃ０−Ｃ２アルキレン（ここで、ＲｘはＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである）またはＣ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレンまたはベンジル（シクロアルキル、またはベンジルのフェニル環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい）
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
複素環式環は、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルであり、これらはいずれもＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ６シクロアルキルメチルで置換されていてもよい、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
複素環式環はピラゾール−１−イルであり、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはシクロプロピルで置換されていてもよい、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ピラゾリルは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、たとえばエチルまたはメチルでＮ−置換されている、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは両方ともＦである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂのうち一方はＨであり、他方はＣｌ、Ｆ、Ｆ３ＣまたはＭｅＯである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは両方ともＨである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３は、ｔ−ブチルメチル、シクロブチルメチル、１−メチルシクロブチルメチルまたは１−メチルシクロペンチルメチルであり、これらはいずれも１または２個のＦまたはＭｅＯで置換されていてもよい、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３は、１−メチルシクロペンチルメチルまたは１−フルオロシクロペンチルメチルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４はＣ１−Ｃ６アルキル、特にメチルまたはエチルである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４はＣ１−Ｃ６ハロアルキル、特にクロロアルキルまたはフルオロアルキルである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、およびそれのための医薬的に許容できるビヒクルを含む、医薬組成物。
【請求項１４】
カテプシンＳの不適切な発現または活性化を特徴とする障害の予防または治療のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
障害が
ａ）乾癬；
ｂ）自己免疫性適応症：特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレーブス病および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む；または
ｃ）非自己免疫性適応症：アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性疼痛を含む；
から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
カテプシンＳの不適切な発現または活性化を特徴とする障害を予防または治療する方法であって、有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物を、その障害に罹患しているかまたはそのリスクをもつヒトまたは動物に投与することを含む方法。
【請求項１７】
障害が
ａ）乾癬；
ｂ）自己免疫性適応症：特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレーブス病および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群から選択される；または
ｃ）非自己免疫性適応症：アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性疼痛からなる群から選択される；
である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
医薬として使用するための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
カテプシンＳの不適切な発現または活性化を特徴とする障害の予防または治療に使用するための、請求項１８に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カテプシンＳの阻害薬、およびカテプシンＳに関連する障害、たとえば自己免疫障害、アレルギーおよび慢性疼痛状態を処置する方法におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
パパインスーパーファミリーのシステインプロテアーゼは、哺乳動物、無脊椎動物、原生動物、植物および細菌を含めた多様な種に広く分布している。カテプシンＢ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｏ、ＳおよびＷを含めた多数の哺乳動物カテプシン酵素がこのスーパーファミリーに属するとされ、それらの活性の不適切な調節は、関節炎、筋ジストロフィー、炎症、腎炎および腫瘍浸潤を含めた多数の代謝障害に関与することが示唆されている。病原性カテプシン様酵素には、細菌性ジンジパイン（ｇｉｎｇｉｐａｉｎ）類、マラリア性ファルシパイン（ｆａｌｃｉｐａｉｎ）Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩなど、ならびにニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、トリパノソーマ・クルージおよびブルーセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｅｉ、ｂｒｕｃｅｉ）、クリチジア・フシキュラータ（Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ  ｆｕｓｉｃｕｌａｔａ）、住血吸虫属の種（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｓｐｐ．）由来のシステインプロテアーゼが含まれる。
【０００３】
ＷＯ  ９７／４００６６には、カテプシンＳに対する阻害薬の使用が記載されている。この酵素の阻害薬はプロテアーゼ活性により引き起こされる疾患を予防または治療すると示唆されている。カテプシンＳは、パパインスーパーファミリーに属する高活性システインプロテアーゼである。それの一次構造は、ヒトカテプシンＬおよびＨならびに植物システインプロテアーゼであるパパインと、それぞれ５７％、４１％および４５％相同であるが、カテプシンＢとは３１％相同であるにすぎない。それは主にＢ細胞、樹状細胞およびマクロファージ中にみられ、この限定された存在はこの酵素が変性性疾患の発病に関与している可能性を示唆する。さらに、ＭＨＣクラスＩＩ分子が抗原性ペプチドを結合するためには、また生成した複合体を細胞表面へ輸送するためには、タンパク質分解によるＩｉの分解が必要であることが見出された。さらに、クラスＩＩ分子がペプチド結合能をもつようにするのに必要な効果的Ｉｉタンパク質分解のためには、カテプシンＳがＢ細胞に必須であることが見出された。したがって、この酵素の阻害はクラスＩＩ限定の免疫応答を調節するのに有用な可能性がある（ＷＯ９７／４００６６）。カテプシンＳの関与が示唆される他の障害は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、子宮内膜症および慢性疼痛である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ９７／４００６６
【発明の概要】
【０００５】
本発明の第１観点によれば、式Ｉの化合物：
【０００６】
【化１】
2013513598.tif 000003
【０００７】
［式中：
Ｒ１ａは、Ｈであり；
Ｒ１ｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、独立して下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく：ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アジド、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、炭素環およびＨｅｔ；あるいは
Ｒ１ｂは、炭素環またはＨｅｔであり；あるいは
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、それらが結合しているＮ原子と一緒に、３〜６個の環原子をもつ飽和環状アミンを規定しており；
その際、炭素環、Ｈｅｔまたは環状アミンは、独立して下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく：ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アジド、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ＲｘＯＯＣ−Ｃ０−Ｃ２アルキレン（ここで、ＲｘはＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ１−Ｃ４ハロアルキルである）、フェニル、ベンジルまたはＣ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレン；
その際、フェニル、ベンジルまたはシクロアルキル部分は、独立してハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立してＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシから選択され、あるいはＲ２ａおよびＲ２ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成しており；
Ｒ３は、Ｃ５−Ｃ１０アルキルであり、独立してハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；あるいは
Ｒ３は、少なくとも２個のクロロまたは３個のフルオロ置換基をもつＣ２−Ｃ４アルキル鎖であり；あるいは
Ｒ３は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルメチルであり、独立してＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノまたはＣ１−Ｃ６ジアルキルアミノであり；
Ｈｅｔは、独立してＯ、ＳおよびＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む安定な単環式または二環式、飽和、部分飽和または芳香族の環系であり、各環は５または６個の環原子をもち；
炭素環は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ６シクロアルケニルまたはフェニルである］
またはその医薬的に許容できる塩、水和物もしくはＮ−オキシドが提供される。
【０００８】
ある態様において、Ｒ１ａはＨであり、Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ４アルキル、たとえばメチル、エチル、イソプロピル、ｔ−ブチルであり、または好ましくはメチルであり、これらは前記に定めた１以上の置換基、好ましくは１〜３個のハロ（たとえば、Ｆ）またはＣ１−Ｃ４アルコキシ（たとえば、メトキシ）基で置換されていてもよい。
【０００９】
他の態様において、Ｒ１ａはＨであり、Ｒ１ｂはメチル、シクロプロピル、１−フェニルエチル、または１〜３個の窒素原子および０もしくは１個の硫黄原子を含む５もしくは６員複素環式環であり、これらのシクロプロピル、フェニルまたは複素環式環は、独立して下記のものから選択される最高３個の置換基で置換されていてもよい：
Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４−ジアルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ＲｘＯＯＣ−Ｃ０−Ｃ２アルキレン（ここで、ＲｘはＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである）またはＣ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレンまたはベンジル（シクロアルキル、またはベンジルのフェニル環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい）。
【００１０】
Ｒ１ｂに関する５または６員芳香族複素環の例には、ピリジルまたはピリミジル、および特にピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリルまたはテトラゾリルが含まれ、これらはいずれもＣ１−Ｃ４アルキル（たとえば、Ｍｅ）、ハロ（たとえば、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（たとえば、ＣＦ３）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（たとえば、ＭｅＯ）、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ１アルキレン（たとえば、シクロプロピルまたはシクロプロピルメチル、ベンジル）、またはＣ０−Ｃ２アルキレンＣＯＯＨおよびそれのＣ１−Ｃ４アルキルエステルで置換されていてもよい。例示種は１−メチル−ピラゾール−５−イルである。
【００１１】
一般にこの態様によれば、複素環式環はピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルであり、これらはいずれもＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ６シクロアルキルメチルで置換されていてもよい。
【００１２】
一般にこの態様によれば、複素環式環はピラゾール−１−イルであり、これはＣ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、またはシクロプロピル、好ましくはＣ１−Ｃ４アルキル、たとえばエチルまたは好ましくはメチルで置換されていてもよい。
【００１３】
Ｒ１ｂについて好ましい意味は、ピラゾール−１−イルであり、これはＣ１−Ｃ４アルキル、たとえばエチルまたはメチルでＮ−置換されている。
この態様によるＲ１ｂについて他の一般的な意味は、メチルまたはシクロプロピルである。
【００１４】
他の態様において、Ｒ１ａはＨであり、Ｒ１ｂはメチルまたはエチルであり、これは１−位において環式基、たとえばフェニルで置換されており、あるいはＲ１ｂは単環式複素環、たとえばピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、インドリニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオピラニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、テトラゾリル、ピラゾリル、インドリルなどである。これらのフェニルまたは複素環は、たとえば独立してヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミンなどから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい。例示種は１−フェニルエチルである。
【００１５】
他の態様において、Ｒ１ａはＨであり、Ｒ１ｂは前記に定めたように置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル、好ましくはシクロブチルまたはシクロプロピルである。好ましくは、このシクロアルキルは置換されていないか、あるいは下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されている：ハロ（たとえば、１または２個のフルオロ）、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル（たとえば、１または２個のメチル）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（たとえば、ＣＦ３基）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（たとえば、ＭｅＯ基）、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン（たとえば、ＭｅＮＨ−基）、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン（たとえば、（Ｍｅ）２Ｎ−基）など。例示種はシクロプロピル、またはモノフルオロ−もしくはｇｅｍ−ジフルオロシクロプロピルである。
【００１６】
ある態様において、Ｒ１ａはＨであり、Ｒ１ｂは１〜３個の窒素原子および０または１個の硫黄原子を含み、前記に定めたように置換されていてもよい、６員または好ましくは５員芳香族複素環式環である。好ましくは、この複素環式環はアルファケトアミド基の隣接窒素原子に複素環式環の炭素原子により連結している。置換基の例には、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボニル、アミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン、ジＣ１−Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニルアミノ、アミノカルボニル、アミノスルホニル、ＲｘＯＣ（＝Ｏ）Ｃ０−Ｃ２アルキレン（ここで、ＲｘはＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである）もしくはＣ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレンまたはベンジル（シクロアルキル、またはベンジル基のフェニル環は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルコキシから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい）が含まれる。
【００１７】
ある態様において、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂおよびそれらが結合しているＮ原子は３〜６員環状アミン、たとえばアジリジン、アゼチジン、ピロリジン、および好ましくはモルホリン、ピペラジンまたはピペリジンを形成している。これらの環状アミンは置換されていなくてもよく、あるいは前記のように、好ましくは下記のものから選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい：ハロ（たとえば、１または２個のフルオロ）、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキル（たとえば、１または２個のメチル）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（たとえば、ＣＦ３基）、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ（たとえば、ＭｅＯ−基）、Ｃ１−Ｃ４アルキルアミン（たとえば、ＭｅＮＨ−基）、Ｃ１−Ｃ４ジアルキルアミン（たとえば、（Ｍｅ）２Ｎ−基）など。
【００１８】
本発明の１態様は、式ＩにおいてＲ２ａおよびＲ２ｂが両方とも水素である化合物を含む。
別態様において、Ｒ２ａおよびＲ２ｂのうち少なくとも一方はハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシである。一般にこれらの態様によれば、Ｒ２ａおよびＲ２ｂのうち一方はＨであり、他方はＣｌ、Ｆ、ＣＦ３またはＭｅＯ；特にＦまたはＭｅＯである。
【００１９】
好ましい態様において、Ｒ２ａおよびＲ２ｂのうち一方はＨであり、他方はＦである。この態様による特に好ましいものは、式（Ｉａ）に示す立体化学をもつ化合物である：
【００２０】
【化２】
2013513598.tif 000004
【００２１】
ある態様において、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは両方ともＦであり、したがって式（Ｉｂ）の化合物を提供する：
【００２２】
【化３】
2013513598.tif 000005
【００２３】
他の態様において、Ｒ２ａおよびＲ２ｂはそれらが結合している炭素原子と一緒にＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成している。
ある態様において、Ｒ３はシクロアルキルアルキルであり、これはたとえばハロ（たとえば、Ｆ）またはアルコキシ（たとえば、ＭｅＯ）で置換されていてもよい。例示種には、１−メチルシクロペンチルメチル、１−メチルシクロヘキシルメチル、１−メチルシクロブチルメチル、１−メチル−３，３−ジフルオロシクロブチルメチル、１−メチル−４，４−ジフルオロシクロヘキシルメチル、シクロプロピルメチルまたは１−メチル−３，３−ジフルオロシクロペンチルメチルが含まれる。
【００２４】
好ましいＲ３種には、ｔ−ブチルメチル、シクロブチルメチル、１−メチルシクロブチルメチルおよび１−メチルシクロペンチルメチルが含まれ、これらはいずれも１または２個のＦまたはＭｅＯで置換されていてもよい。代表的な種には、１−フルオロシクロブチルメチルおよび１−フルオロシクロペンチルメチルが含まれる。
【００２５】
さらに他の代表的なＲ３種には、１−メチルシクロペンチルメチルおよび１−フルオロシクロペンチルメチルが含まれる。
他の態様は、Ｃ原子５〜１０個の直鎖または分枝鎖アルキルとしてのＲ３をもち、これは１〜３個のハロ（たとえば、ＣｌまたはＦ）、またはＣ１−Ｃ４アルコキシ（たとえば、ＭｅＯ）で置換されていてもよい。例示種には、２，２−ジメチルプロピル、３，３−ジメチルペンチル、２，２，３，３−テトラメチルブチルが含まれる。ハロゲン化アルキルの例示種には、２，２−ジクロロエチル、３，３，３−トリフルオロプロピル、２，２−トリフルオロメチルエチル、または２，２，２−トリフルオロエチルが含まれる。
【００２６】
本発明の１態様には、Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキル、たとえばメチルまたはエチルである化合物が含まれる。
他の態様には、Ｒ４がＣ１−Ｃ６ハロアルキル、たとえばＣ１−Ｃ６クロロアルキルまたはＣ１−Ｃ６フルオロアルキルである化合物が含まれる。
【００２７】
式Ｉの化合物は種々の有利な医薬特性を特徴とし、先行技術の化合物からみて少なくとも１つの改良された特性を示す。特に、本発明の阻害薬は、下記の薬理関連特性、すなわち力価、低い細胞毒性、改良された薬物動態、許容できる投与量および丸剤装填量のうち１以上において卓越している。
【００２８】
理論、または特定の可変部分についての暫定的な結合様式の属性によって拘束されることを決して望むわけではなく、本明細書中で用いるＰ１、Ｐ２およびＰ３は便宜上提示されるにすぎず、それらの一般的な意味をもち、それぞれ酵素のＳ１、Ｓ２およびＳ３サブサイトを埋めると考えられる阻害薬部分を表わす；その際、Ｓ１は開裂部位に隣接し、Ｓ３は開裂部位から離れている。
【００２９】
本発明のさらに他の観点は、カテプシンの異常な発現または活性化により引き起こされる疾患、すなわちカテプシンＳの阻害によって軽減または改善される疾患または状態を、好ましくは実質的にパパインスーパーファミリーの他のメンバーを同時に阻害することなく予防または治療するために、式Ｉの化合物を使用する方法を含む。
【００３０】
本発明のさらに他の観点は、カテプシンの異常な発現または活性化により引き起こされる疾患、すなわちカテプシンＳの阻害によって軽減または改善される疾患または状態を、好ましくは実質的にパパインスーパーファミリーの他のメンバーを同時に阻害することなく予防または治療する際の、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００３１】
本発明のさらに他の観点は、カテプシンＳの異常な発現または活性化により引き起こされ疾患、すなわちカテプシンＳの阻害によって軽減または改善される疾患または状態を、好ましくは実質的にパパインスーパーファミリーの他のメンバーを同時に阻害することなく予防または治療する医薬を調製するための、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００３２】
カテプシンＳの不適切な発現または活性化を特徴とする障害、すなわちカテプシンＳの阻害によって軽減または改善される疾患または状態を、好ましくは実質的にパパインスーパーファミリーの他のメンバーを同時に阻害することなく予防または治療する際などに医薬として使用するための、式Ｉの化合物も提供される。
【００３３】
上記４節に定めた疾患または状態の例には、ＷＯ９７／４００６６に列挙されたもの、たとえば自己免疫疾患、アレルギー、たとえば喘息および枯草熱、多発性硬化症、リウマチ性関節炎などが含まれる。さらに他の例は、ＷＯ０３／２０２８７に開示される子宮内膜症、および特に慢性疼痛の処置である。本発明はさらに、カテプシンＳの阻害によって軽減または調節される疾患または状態の処置のための療法および医薬の調製における、式Ｉまたは式Ｉのいずれかのサブグループの化合物の使用を提供する。
【００３４】
一連の態様において、本発明方法は、自己免疫疾患のリスクをもつかまたはそれに罹患している哺乳動物、特にヒトを処置するために用いられる。自己免疫疾患とは、ホストの免疫応答がそれ自身の構成部分に対して向けられ、その結果として病的状態になる現象を意味する。多くのヒト自己免疫疾患が特定のクラスＩＩ  ＭＨＣ複合体と関連する。この関連が起きる理由は、Ｔ細胞、すなわち自己免疫を引き起こす細胞により認識される構造体がクラスＩＩ  ＭＨＣ分子と抗原性ペプチドから構成される複合体だからである。Ｔ細胞が、ホスト自身の遺伝子産物に由来するペプチドと複合体形成したホストのクラスＩＩ  ＭＨＣ分子と反応した場合に、自己免疫疾患が生じる可能性がある。これらのクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が形成されるのを阻害すれば、自己免疫応答は軽減または抑制される。クラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原複合体が役割をもつ自己免疫疾患はいずれも、本発明の方法に従って処置することができる。
【００３５】
そのような自己免疫疾患には、たとえば若年型糖尿病（インスリン依存性）、多発性硬化症、尋常性天疱瘡、グレーブス病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎および橋本甲状腺炎が含まれる。
【００３６】
他の一連の態様において、本発明方法は、アレルギー反応のリスクをもつか、またはそれに罹患している哺乳動物、特にヒトを処置するために用いられる。“アレルギー反応”とは、特定の抗原に対するホストの免疫応答が不必要または不均衡であって病的状態になる現象を意味する。アレルギーは当技術分野で周知であり、用語“アレルギー反応”は本明細書中で医学分野における標準的用法に従って用いられる。
【００３７】
アレルギーの例には、花粉、“ブタクサ”、貝、家畜（たとえば、ネコおよびイヌ）、蜂毒、イエダニアレルゲンなどに対するアレルギーが含まれるが、これらに限定されない。特に考慮される他のアレルギー反応は、喘息を引き起こすものである。アレルギー反応は、ヒトにおいてＴ細胞が特定のクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体を認識するという理由で起きる可能性がある。これらのクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が形成されるのを阻害すれば、アレルギー反応は軽減または抑制される。クラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体が役割をもつアレルギー反応はいずれも、本発明の方法に従って処置することができる。本発明の方法による免疫抑制は、一般に、喘息発作またはアナフィラキシーショックに際して起きる可能性がある重篤または致命的なアレルギー反応に対する予防処置または治療処置であろう。
【００３８】
他の一連の態様において、本発明方法は、臓器移植または組織移植を受けた、または受けようとしている哺乳動物、特にヒトを処置するために用いられる。組織移植（たとえば、腎臓、肺、肝臓、心臓）または皮膚移植に際して、ドナーとレシピエントのクラスＩＩ  ＭＨＣ表現型（ＨＬＡ型）の間に不適合があれば、ドナー組織に対する重篤な“同種異系”免疫応答の可能性がある；これは、ドナー細胞の表面に抗原性ペプチドを提示している非自己または同種異系クラスＩＩ  ＭＨＣ分子の存在から生じる。この応答がクラスＩＩ  ＭＨＣ／抗原性ペプチド複合体の形成に依存する限り、カテプシンＳの阻害はこの応答を抑制し、組織拒絶を緩和することができる。カテプシンＳの阻害薬を単独で、または他の療法薬と併せて、たとえばサイクロスポリンＡおよび／または抗リンパ球ガンマグロブリンに対する補助薬として用いて、免疫抑制を達成し、移植片生存を増進することができる。好ましくは、投与は外科処置の前および／または後にホストへの全身適用により行なわれる。代替または追加として、臓器移植または組織移植の前または後でのドナーの臓器または組織の潅流が有効な可能性がある。
【００３９】
前記の態様をＭＨＣクラスＩＩ機序について説明したが、本発明はこの作用機序に限定されない。たとえば、ＣＯＰＤまたは慢性疼痛の処置としてのカテプシンＳの抑制はＭＨＣクラスＩＩに全く関係しない可能性がある。
【００４０】
関連する本発明の観点は、その療法が患者に免疫応答、好ましくは有害な免疫応答を引き起こす療法を受けている患者を処置する方法であって、患者に式Ｉの化合物またはその医薬的に許容できる塩、Ｎ−オキシドまたは水和物を投与することを含む方法に関する。一般に、その免疫応答はＭＨＣクラスＩＩ分子により仲介される。本発明の化合物は、その療法の前、それと同時またはその後に投与できる。一般に、その療法は生物製剤、たとえばタンパク質、好ましくは抗体、より好ましくはモノクローナル抗体による処置を伴う。より好ましくは、生物製剤はＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｒｅｆａｃｔｏ（登録商標）、ＲｅｆｅｒｏｎＡ（登録商標）、ＶＩＩＩ因子、ＶＩＩ因子、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）、インターフェロンベータ、Ｂｏｔｏｘ（登録商標）、Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（登録商標）、Ｍｙｏｂｌｏｃ（登録商標）、Ａｌｄｕｒａｚｙｒｎｅ（登録商標）、Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標）、インターフェロンアルファ、Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）またはＯＫＴ３である。あるいは、その処置はヘパリン、低分子量ヘパリン、プロカインアミドまたはヒドララジンの使用を伴う。
【００４１】
神経障害性疼痛または炎症性疼痛を含めた慢性疼痛の処置におけるカテプシンＳ阻害薬の評価のためのアッセイ法は、ＷＯ０３／２０２８７に記載されている。
本発明に従って処置できる現在好ましい適応症には下記のものが含まれる：
乾癬；
自己免疫性適応症：特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、シェーグレン症候群、グレーブス病および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む；
非自己免疫性適応症：アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性疼痛を含む。
【００４２】
本発明の化合物は塩類を形成することができ、それは本発明の他の観点を形成する。本発明化合物の医薬的に許容できる適切な塩類には下記のものが含まれる：有機酸、特にカルボン酸の塩類：これには下記のものが含まれるが、これらに限定されない：酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、パントテン酸塩、イセチオン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、シュウ酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、ニコチン酸塩、パルモエート（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、ラクトビオ酸塩、ピボレート（ｐｉｖｏｌａｔｅ）、ショウノウ酸塩、ウンデカン酸塩およびコハク酸塩、有機スルホン酸塩、たとえばメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ショウノウスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩；ならびに無機酸の塩類、たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、ヘミ硫酸塩、チオシアン酸塩、過硫酸塩、リン酸塩およびスルホン酸塩。
【００４３】
本発明の化合物は、場合により水和物として単離できる。水和物は一般に水性溶媒／有機溶媒混合物から、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールなどの有機溶媒を用いて再結晶により調製される。水和物は対応するケトン類を患者に投与することにより、インサイチュー生成することもできる。
【００４４】
本発明化合物のＮ−オキシドは、当業者に既知の方法により製造できる。たとえば、Ｎ−オキシドは、酸化されていない形の本発明化合物を酸化剤（たとえば、トリフルオロ酢酸、過マレイン酸、過安息香酸、過酢酸、メタ−クロロ過安息香酸など）で、適切な不活性有機溶媒（たとえば、ハロゲン化炭化水素、たとえばクロロメタン）中、ほぼ０℃において処理することにより製造できる。あるいは、本発明化合物のＮ−オキシドは、適宜な出発物質のＮ−オキシドから製造できる。
【００４５】
酸化されていない形の本発明化合物は、対応する本発明化合物のＮ−オキシドから、還元剤（たとえば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、二塩化リン、三臭化物など）で、適切な不活性有機溶媒（たとえば、アセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど）中、０〜８０℃において処理することにより製造できる。
【００４６】
本発明には、式Ｉまたは式Ｉのいずれかのサブグループの同位体標識化合物も含まれ、それらにおいては１以上の原子がその原子の同位体、すなわち自然界で一般にみられる原子（単数または複数）と同一の原子番号であるけれども異なる原子質量をもつ原子により置き換えられている。式Ｉまたは式Ｉのいずれかのサブグループの化合物に取り込ませることができる同位体の例には下記の同位体が含まれるが、それらに限定されない：水素、たとえば２Ｈおよび３Ｈ（それぞれ、ジュウテリウムについてはＤ、トリチウムについてはＴとも表記される）、炭素、たとえば１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ、窒素、たとえば１３Ｎおよび１５Ｎ、酸素、たとえば１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏ、リン、たとえば３１Ｐおよび３２Ｐ、硫黄たとえば３５Ｓ、フッ素、たとえば１８Ｆ、塩素、たとえば３６Ｃｌ、臭素、たとえば７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒおよび８２Ｂｒ、ならびにヨウ素、たとえば１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉ。
【００４７】
同位体標識化合物に含有させる同位体の選択は、その化合物の個々の用途に依存するであろう。たとえば、薬物または基質の組織分布アッセイのためには、３Ｈまたは１４Ｃなどの放射性同位体が取り込まれた化合物が一般に最も有用であろう。放射線イメージング用途、たとえば陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）には、陽電子放射同位体、たとえば１１Ｃ、１８Ｆ、１３Ｎまたは１５Ｏが有用であろう。より重い同位体、たとえばジュウテリウム、すなわち２Ｈの取込みは、より大きな代謝安定性を式Ｉまたは式Ｉのいずれかのサブグループの化合物に付与し、その結果、たとえば化合物のインビボ半減期が延長され、または投与要求量が少なくなる可能性がある。たとえば、２Ｈ同位体（単数または複数）を一般に代謝不安定な傾向のある位置（単数または複数）に取り込ませる。本発明の化合物において、２Ｈ同位体を取り込ませるのに適切な位置は、たとえばシクロブチレン基に対する置換基としてであり、すなわちＲ２ａおよびＲ２ｂのうち一方または両方が２Ｈである。
【００４８】
同位体標識した式Ｉまたは式Ｉのいずれかのサブグループの化合物は、後記のスキームおよび／または実施例に記載したものと類似の方法により、同位体標識した適宜な試薬または出発物質を同位体標識していない対応する試薬または出発物質の代わりに用いて、あるいは当業者に既知の常法により製造できる。
【００４９】
定義中で用いるいずれかの分子部分上の基の位置は、それが化学的に安定である限りそのような部分上のいかなる位置であってもよいことを留意すべきである。
本明細書中で用いる下記の用語は以下に定義する意味をもつ：
Ｃｍ−Ｃｎアルキルは、それ自体で、または複合表記、たとえばＣｍ−Ｃｎハロアルキル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルカルボニル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルアミン、Ｃｍ−Ｃｎアルキルスルホニル、Ｃｍ−Ｃｎアルキルスルホニルアミノなどで用いる場合、ｍおよびｎにより指示した数の炭素原子をもつ直鎖または分枝鎖アルキル基を表わし、たとえばＣ１−Ｃ４アルキルは１個から４個までの炭素原子をもつアルキル基を意味する。本発明に用いるのに好ましいアルキル基はＣ１−Ｃ４アルキルであり、これにはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−ブチルおよびイソブチルが含まれる。メチルおよびｔ−ブチルが一般に好ましい。Ｃ１−Ｃ６アルキルは、ペンチルおよびヘキシルのすべての直鎖および分枝鎖異性体も含めた対応する意味をもつ。Ｃｍ−Ｃｎアルキルの他の記述、たとえばＣ５−Ｃ１０アルキルはそれに対応する意味をもつ。
【００５０】
用語Ｍｅはメチルを意味し、ＭｅＯはメトキシを意味し、Ｅｔはエチルを意味し、Ａｃはアセチルを意味する。
Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルＣ０−Ｃ２アルキレンなどの複合表記中に用いるＣ０−Ｃ２アルキレンは、メチル基またはエチル基から誘導される二価の基を表わし、あるいはＣ０の場合、用語Ｃ０−Ｃ２アルキレンは結合を意味する。
【００５１】
Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルは、Ｃ１−Ｃ４アルキル基において少なくとも１つのＣ原子がハロゲン、好ましくはクロロまたはフルオロで置換されたものを表わす。トリフルオロメチルが一般に好ましい。
【００５２】
Ｃ１−Ｃ４アルコキシは、基Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｏ（ここでＣ１−Ｃ４アルキルは前記に定義したものである）を表わし、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ブトキシおよびイソブトキシを含む。メトキシおよびイソプロポキシが一般に好ましい。Ｃ１−Ｃ６アルコキシは、ペントキシおよびヘキソキシのすべての直鎖および分枝鎖異性体を含むように拡張された、対応する意味をもつ。Ｃｍ−Ｃｎアルコキシの他の記述、たとえばＣ５−Ｃ１０アルコキシは、対応する意味をもつ。
【００５３】
本明細書中で用いるＣ１−Ｃ４ハロアルコキシは、Ｃ１−Ｃ４アルコキシにおいて少なくとも１つのＣ原子が１以上のハロゲン原子、一般にクロロまたはフルオロで置換されたものを含むものとする。多くの場合、トリフルオロメチルが好ましい。
【００５４】
Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニルは、基Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）を意味する。
炭素環には、シクロペンチル、シクロヘキシル、ならびに特にシクロプロピルおよびシクロブチルが含まれる。炭素環にはさらに、それぞれの場合１つの二重結合をもつシクロペンテニルおよびシクロヘキセニルが含まれる。炭素環についてしばしば好ましい意味はフェニルである。
【００５５】
環状アミンには、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンが含まれる。
Ｈｅｔは、独立してＯ、ＳおよびＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を含む安定な単環式または二環式、飽和、部分飽和または芳香族の環系であり、各環は５または６個の環原子をもつ。芳香族Ｈｅｔの例には、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、インダゾールなどが含まれる。不飽和Ｈｅｔの例には、テトラヒドロフラン、ピラン、ジヒドロピラン、１，４−ジオキサン、１，３−ジオキサン、ピペリジン、ピロリジン、モルホリン、テトラヒドロチオピラン、テトラヒドロチオフェン、２−Ｈ−ピロール、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリン、チアゾリジン、イソオキサゾリジンなどが含まれる。
【００５６】
本発明の化合物は、一般的なプロドラッグ部分を付与できる多数のハンドル、たとえばＯＨ、ＮＨまたはＣＯＯＨ基を含む。プロドラッグは一般にインビボで加水分解されて親化合物を血漿、肝臓または腸壁中へ放出する。好ましいプロドラッグは、ヒドロキシル基、たとえばＲ４にあるフェノール性ヒドロキシル基の、またはアミン官能基、たとえばスルホンアミドのアミン官能基のエステルである。医薬的に許容できる好ましいエステルには、Ｃ１−Ｃ６カルボン酸から誘導されるもの、たとえばアセチルもしくはピバロイル、または置換されていてもよい安息香酸エステル、好ましくは置換されていないか、またはＲ１ａについて広く記載した置換基、一般に１〜３個のハロ（たとえば、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４アルキル（たとえば、Ｍｅ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（たとえば、ＣＦ３）またはＣ１−Ｃ４アルキルオキシ（たとえば、ＭｅＯ）基で置換されたものが含まれる。好ましいスルホンアミドプロドラッグには、Ｃ１−Ｃ６カルボン酸から誘導されるアミノアシル、たとえばアセチルもしくはピバロイル、または置換されていてもよい安息香酸エステル、好ましくは置換されていないか、または可変基Ｒ１ａについて広く記載した置換基、一般に１〜３個のハロ（たとえば、Ｆ）、Ｃ１−Ｃ４アルキル（たとえば、Ｍｅ）、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル（たとえば、ＣＦ３）またはＣ１−Ｃ４アルキルオキシ（たとえば、ＭｅＯ）基で置換されたものが含まれる、。
【００５７】
別に言及または指示しない限り、化合物の化学表記には、その化合物がもつ可能性のあるすべての可能な立体化学的異性体の形態の混合物が含まれる。その混合物は、その化合物の基本分子構造のすべてのジアステレオマーおよび／または鏡像異性体を含むことができる。本発明化合物の純粋な形態または相互に混合したものの両方のすべての立体化学的異性体の形態が本発明の範囲に含まれるものとする。
【００５８】
本明細書中に述べる純粋な立体異性体の形態の化合物および中間体は、それらの化合物または中間体と同じ基本分子構造の鏡像異性体またはジアステレオマー形態を実質的に含まない異性体と定義される。特に、用語“立体異性体として純粋”は、少なくとも８０％の立体異性体過剰率（すなわち、１異性体が最低９０％、可能性のある他の異性体は最高１０％）から１００％の立体異性体過剰率（すなわち、１異性体が１００％、可能性のある他の異性体はゼロ）までをもつ化合物または中間体、より特別には９０％から１００％までの立体異性体過剰率をもつ、よりさらに特別には９４％から１００％までの立体異性体過剰率をもつ、最も特別には９７％から１００％までの立体異性体過剰率をもつ、化合物または中間体に関する。用語“鏡像異性体として純粋”および“ジアステレオマーとして純粋”も同様に解釈すべきであるが、その場合はその混合物のそれぞれ鏡像異性体過剰率およびジアステレオマー過剰率を考慮する。
【００５９】
本発明の化合物は、その化合物のラセミ混合物を光学活性分割剤と反応させて一対のジアステレオ異性体化合物を形成し、それらのジアステレオマーを分離して光学的に純粋な鏡像異性体を回収することにより、それらの個々の立体異性体として製造できる。鏡像異性体の分割は式Ｉの化合物の共有結合ジアステレオマー誘導体を用いて実施できるが、解離しうる複合体（たとえば、結晶質；ジアステレオマー塩類）が好ましい。ジアステレオマーは異なる物理的特性（たとえば、融点、沸点、溶解度、反応性など）をもち、これらの相異点を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィー、たとえばＨＰＬＣにより、または好ましくは溶解度の差に基づく分離／分割法により分離できる。次いで光学的に純粋な鏡像異性体を分割剤と共に、ラセミ化を生じないいずれかの実用的手段で回収する。化合物の立体異性体をそれらのラセミ混合物から分割するために適用できる方法のより詳細な記述は、Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons, Inc. (1981)中にある。
【００６０】
前記の有効薬剤を単独で投与することができるが、それを医薬配合物の一部として提供することが好ましい。そのような配合物は、前記に定めた有効薬剤を１種類以上の許容できるキャリヤー／賦形剤、および場合により他の療法成分と共に含むであろう。キャリヤー（単数または複数）は、配合物の他の成分と適合性でありかつレシピエントに対して有害でないという意味で、許容できるものでなければならない。
【００６１】
配合物には、直腸、鼻、局所（口腔および舌下を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に適切なものが含まれるが、好ましくは配合物は経口投与配合物である。配合物は好都合には単位剤形、たとえば錠剤および持続放出カプセル剤として提供でき、医薬技術分野で周知のいずれかの方法により製造できる。そのような方法には、前記に定めた有効薬剤をキャリヤーと混和する工程が含まれる。一般に配合物は、有効薬剤を液体キャリヤーもしくは微粉砕した固体キャリヤーまたは両方と均一かつ密に混和し、次いで必要ならば生成物を造形することにより調製される。本発明は、医薬組成物を調製するための方法であって、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容できる塩を医薬的に許容できるキャリヤーまたはビヒクルと組み合わせまたは混和する方法に及ぶ。医薬配合物の調製が医薬賦形剤と塩形の有効成分との密な混合を伴う場合、塩基性ではない、すなわち酸性または中性の賦形剤を用いることがしばしば好ましい。
【００６２】
本発明において経口投与するための配合物は、それぞれ前決定量の有効薬剤を含有する個別の単位、たとえばカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤として；散剤もしくは顆粒剤として；水性液体もしくは非水性液体中の有効薬剤の液剤もしくは懸濁液剤として；または水中油型の乳液もしくは油中水型の乳液として；およびボーラス剤などとして提供できる。
【００６３】
経口投与用組成物（たとえば、錠剤およびカプセル剤）に関して、適切なキャリヤーという用語には、ビヒクル、たとえば一般的な賦形剤、たとえば結合剤、たとえばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、ポリビニルピロリドン（Ｐｏｖｉｄｏｎｅ）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ショ糖およびデンプン；増量剤およびキャリヤー、たとえばトウモロコシデンプン、ゼラチン、乳糖、ショ糖、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸；ならびに滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムおよび他のステアリン酸金属塩、ステアリン酸グリセロール、ステアリン酸、シリコーン油、タルク、ろう、油およびコロイドシリカが含まれる。矯味矯臭剤、たとえばペパーミント、ウィンターグリーン油、チェリーフレーバーなども使用できる。剤形を容易に識別できるように、着色剤を添加するのが望ましい場合がある。錠剤は当技術分野で周知の方法によりコートすることもできる。
【００６４】
錠剤は、場合により１種類以上の補助成分と共に圧縮または成形することにより製造できる。圧縮錠は、粉末または顆粒のようにさらさらした形態の有効薬剤を、場合により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、界面活性剤または分散剤と混合して、適切な装置内で圧縮することにより製造できる。成形錠は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を、適切な装置内で成形することにより製造できる。錠剤は、場合によりコートされ、または割線を施されてもよく、また有効成分を徐放または制御放出するように配合されてもよい。
【００６５】
経口投与に適した他の配合物には、着香した基剤、通常はショ糖およびアラビアゴムまたはトラガント中に有効薬剤を含むトローチ剤；不活性基剤、たとえばゼラチンおよびグリセリン、またはショ糖およびアラビアゴム中に有効薬剤を含む香錠；ならびに有効成分を適切な液体キャリヤー中に含むマウスウォッシュが含まれる。
【００６６】
すべての医薬と同様に、本発明の化合物または配合物に適切な投与量は、適応症、疾患の重症度、体格および代謝活力および患者、投与様式に依存し、一般的な動物試験によって容易に決定される。０．０１〜１００μＭ、より好ましくは０．０１〜１０μＭ、たとえば０．１〜５μＭのオーダーの細胞内（パパインスーパーファミリーの生理的プロテアーゼの阻害のために）濃度を供給する投与量が一般に望ましくかつ達成可能である。
【００６７】
本発明の化合物は、多様な液相および固相化学により製造される。
典型的な第１工程は、式ＶのＰ１構築ブロックの製造である：
【００６８】
【化４】
2013513598.tif 000006
【００６９】
式中のＲ２ａおよびＲ２ｂは前記に定めたものであり、ＰＧは一般的なＮ保護基、たとえばＢｏｃ、ＣＢｚまたはＦｍｏｃであり、ＰＧ＊はＨまたは一般的なカルボキシ保護基、たとえばＣ１−Ｃ４アルキルまたはベンジルである。これらの構築ブロックは新規であり、本発明のさらに他の観点を構成する。
【００７０】
式Ｖの構築ブロックは一般に下記のスキーム１の記載に従って製造される：
【００７１】
【化５】
2013513598.tif 000007
【００７２】
適切な出発物質はＮ−保護されたシクロブチルアミノ酸であり、それらのうち幾つかは市販されており、あるいは後記の実施例に示すように、またはAllan et al. J. Med. Chem., 1990 33(10) 2905-2915の記載に従って製造できる。
【００７３】
カルボン酸（１ａ）はワインレブ（Ｗｅｉｎｒｅｂ）合成によりＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキサム酸（１ｂ）に変換され、これは対応するアルデヒド（１ｃ）を与える。このアルデヒドは、シクロブチルアミノ酸のカルボキシル官能基の還元、およびデス−マーチン（Ｄｅｓｓ  Ｍａｒｔｉｎ）条件下での酸化によっても得られる。アルデヒド（１ｃ）を次いでパッセリニ（Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ）反応で適宜なイソシアン化物と反応させると、必要なα-ヒドロキシＲ１ａＲ１ｂアミド（１ｄ）になる。しかし、適切なイソシアン化物を容易に入手できない場合は代わりにイソシアン化ｔ−ブチルを使用し、こうしてｔ−ブチルアミドにすることができ、これはアミドの加水分解後にα−ヒドロキシカルボン酸Ｐ１構築ブロック（１ｅ）を与える。一般に、このアミドを加水分解するのに必要な強酸性条件は、ＮＢｏｃ保護を用いる場合にはそれも失わせるので、このアミンをＰ２構築ブロックへのカップリングにそのまま用いるか、あるいはそれを保存する必要がある場合はアミンを再保護することができる。
【００７４】
こうして得られたＰ１構築ブロックを、次いでＣおよびＮ末端で延長して式Ｉの化合物を得ることができる。スキーム２に、Ｒ４がＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである全般的な経路。
【００７５】
【化６】
2013513598.tif 000008
【００７６】
一般に、式Ｖの構築ブロック（２ａ）とＲ１ａ＊Ｒ１ｂ＊アミンの反応によりまずＣ末端を延長する；ここで、Ｒ１ａ＊およびＲ１ｂ＊はそれぞれＲ１ａおよびＲ１ｂまたはそれに対するシントンである（後記に概説するように、Ｐ３延長条件に対するＲ１ｂ官能基の感受性を考慮して選択される）。この反応は、後記に述べる一般的なペプチド化学に従って進行する。こうして製造されたＰ１−プライムサイドユニット（ｐｒｉｍｅ  ｓｉｄｅ  ｕｎｉｔ）（２ｂ）を、その後、一般的なペプチド化学によりＮ末端において脱保護し、Ｐ２構築ブロックで延長するとＮ−保護された中間アミン２ｃが得られ、続いてＰ３構築ブロックで延長するとアミド２ｄが得られる。たとえば、Ｐ２残基はＢｏｃＰ２−ＯＨにより、標準的なカップリング条件、たとえばＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡを用いてＤＭＦ中で導入することができる。末端Ｂｏｃ−保護を塩化アセチルでメタノールまたは同等物中において再び除去し、標準的なペプチドカップリング法を用いて、たとえばＤＭＦ中のＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡなどの条件を用いた適宜なＰ３−酸との反応により、またはＰ３−酸ハロゲン化物、たとえば酸塩化物などとの反応により、Ｐ３残基を導入する。最終工程は一般に、Ｒ１ａ＊／Ｒ１ｂ＊シントン（存在する場合には）をそれらの最終形態に変換し、最後にアルファヒドロキシアミド官能基をデス−マーチン条件下により酸化して目的とするアルファケトアミド化合物２ｅにすることを含む。
【００７７】
Ｐ２構築ブロックに適した適宜保護された広範なＬ−アミノ酸、ならびにＰ３構築ブロックに適したカルボン酸、カルボン酸ハロゲン化物およびカルバモイルハライドは市販されているか、あるいは簡単な化学的方法またはＷＯ０６／０６４２８６の記載に従って得られる。あるいはＰ３およびＰ２構築ブロックをまずカップリングさせ、次いでＰ１−プライムサイドユニットと反応させてもよい。
【００７８】
延長は一般に適切なカップリング剤、たとえばベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジノホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−ｌ−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、または１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下で、場合によりｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、および塩基、たとえばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンなどの存在下で行なわれる。この反応は、一般に２０〜３０℃、好ましくは約２５℃で実施され、完了するために２〜２４時間を必要とする。適切な反応溶媒は、不活性有機溶媒、たとえばハロゲン化有機溶媒（たとえば、塩化メチレン、クロロホルムなど）、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、エーテル系溶媒、たとえばテトラヒドロフラン、ジオキサンなどである。
【００７９】
あるいは、上記の延長カップリング工程は、まずＰ３／Ｐ２構築ブロックを活性酸誘導体、たとえばスクシンイミドエステルに変換し、次いでそれをＰ１アミンと反応させることにより実施できる。この反応は、完了するために一般に２〜３時間を必要とする。この反応に用いる条件は、活性酸誘導体の性質に依存する。たとえば、それが酸塩化物誘導体であれば、その反応は適切な塩基（たとえば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンなど）の存在下で実施される。適切な反応溶媒は、極性有機溶媒、たとえばアセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、またはそのいずれかの適切な混合物である。
【００８０】
本明細書中で用いる用語“Ｎ−保護基”または“Ｎ−保護された”は、合成操作中の不都合な反応に対してアミノ酸もしくはペプチドのＮ−末端を保護することまたはアミノ基を保護することを目的とする基を表わす。一般に用いられるＮ−保護基は、Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”(JohnWiley & Sons, New York, 1981)に示されており、それを本明細書に援用する。Ｎ−保護基には下記のものが含まれる：アシル基、たとえばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなど；スルホニル基、たとえばベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；カルバメート形成基、たとえばベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンゾヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニルｌ−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど；アルキル基、たとえばベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど；およびシリル基、たとえばトリメチルシリルなど。好ましいＮ−保護基には、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル（ｂｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）が含まれる。
【００８１】
ヒドロキシおよび／またはカルボキシ保護基も前掲のGreeneに広く概説されており、下記のものを含む：エーテル類、たとえばメチルエーテル、置換メチルエーテル、たとえばメトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチルなど、シリルエーテル、たとえばトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリベンジルシリル、トリフェニルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなど、置換エチルエーテル、たとえば１−エトキシメチル、１−メチル−１−メトキシエチル、ｔ−ブチル、アリル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチルなど、アラルキル基、たとえばトリチル、およびピキシル（ｐｉｘｙｌ）（９−ヒドロキシ−９−フェニルキサンテン誘導体、特にクロリド）。エステルヒドロキシ保護基には、エステル、たとえばホルメート、ベンジルホルメート、クロロアセテート、メトキシアセテート、フェノキシアセテート、ピバロエート、アダマントエート、メシトエート、ベンゾエートなどが含まれる。カーボネートヒドロキシ保護基には、メチル、ビニル、アリル、シンナミル、ベンジルなどが含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００８２】
本発明の種々の態様を下記の例に関連して記載するが、それらは説明のためのものにすぎない。
以下の例において、一般に下記のシステムを用いる：
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルをＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ７  Ｔｅｓｌａ  ３００ＭＨｚ計測器またはＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚ計測器により、指示した溶媒中で記録した。化学シフトをテトラメチルシラン（ＴＭＳ）から下方および上方のｐｐｍで示す。共鳴多重度を、一重線、二重線、三重線、多重線、幅広い、および見掛けについて、それぞれｓ、ｄ、ｔ、ｍ、ｂｒおよびａｐｐで表示する。質量分析（ＭＳ）スペクトルをＦｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７０００  ＴＳＰまたはＦｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７１０  ＤＩ／ＥＩ計測器により記録した。ＬＣ−ＭＳを、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ（商標）ＭＳ  Ｃ８  ２．５μｍ  ２．１×３０ｍｍカラム、Ｗａｔｅｒｓ  ９９６フォトダイオードアレイ検出器およびＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤを備えたＷａｔｅｒｓ  ２７９０  ＬＣ−システムで求めた。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定を、ＺｏｒｂａｘカラムＳＢ−Ｃ８  ４．６ｍｍ×１５ｃｍを備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  １１００シリーズＨＰＬＣシステムにより実施した。カラムクロマトグラフィーをシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ  ＡＳＴＭ，Ｍｅｒｃｋ）を用いて実施し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をＴＬＣプレコートプレート、シリカゲル６０  Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ）により実施した。
【００８３】
構築ブロック１、Ｐ１構築ブロックの製造
【００８４】
【化７】
2013513598.tif 000009
【００８５】
工程ａ）［１−（メトキシ−メチル−カルバモイル）−シクロブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ１−ａ）
１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブタンカルボン酸（３ｇ，１３．９４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（５０ｍＬ）中における溶液に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン×ＨＣｌ（１．３６ｇ，１３．９４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（９．２１ｍＬ，５５．７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応フラスコを０℃に冷却し、１０分後にＨＡＴＵ（５．３０ｇ，１３．９４ｍｍｏｌ）を溶液に添加した（添加すると溶液は黄色になった）。２時間後、ＤＭＦを減圧下での回転蒸発により除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、１０％クエン酸（水性）および飽和ＮａＨＣＯ３（水性）溶液で２回洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカ上で蒸発させた。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル（１：１））により精製して、生成物を徐々に結晶化する無色の油（３．１３ｇ）として８７％の収率で得た。
【００８６】
工程ｂ）（１−ホルミル−シクロブチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ１−ｂ）
ＬｉＡｌＨ４（２０２ｍｇ，５．３３ｍｍｏｌ）を、乾燥ジエチルエーテル（３５ｍＬ）に溶解したワインレブ（Ｗｅｉｎｒｅｂ）アミドＢＢ１−ａ（１．１０ｇ，４．２７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。溶液を１５分間撹拌した後、酒石酸水素カリウム（飽和，水性）を徐々に添加して１０分間撹拌することにより反応を停止した。溶液を分液ろうとに注入し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機相を合わせて０．５Ｍ  ＨＣｌ（３回）、ＮａＨＣＯ３（水性）（２回）およびブライン（１回）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカ上で蒸発させた。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル（４：１→３：１））により精製して、生成物を白色結晶（０．６４７ｇ）として７６％の収率で得た。
【００８７】
工程ｃ）［１−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−ヒドロキシ−メチル）−シクロブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ１−ｃ）
ＢＢ１−ｂ（１．７５ｇ，８．７８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１８ｍＬ）に溶解し、氷浴内で不活性ガス下に冷却した。ピリジン（２．８５ｍＬ）、続いてイソシアン化ｔ−ブチル（１．５０ｍＬ，１３．３ｍｍｏｌ）を添加した。トリフルオロ酢酸（１．３５ｍＬ，１７．５ｍｍｏｌ）を次いで３０分間かけて滴下した。この黄色溶液を室温で一夜撹拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、順に１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２×５０ｍＬ）で洗浄した。乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。得られた粗生成物をＴＨＦ（２．５ｍＬ）および３／１  ＭｅＯＨ−水中の１Ｍ  ＬｉＯＨ（２．５ｍＬ）で室温において処理した。ＴＬＣ（３／１  石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）は１５分後にエステル加水分解の完了を示した。４５分間の反応時間後、１Ｎ  ＨＣｌ（２．５ｍＬ）、水（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を添加し、層を分離した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＣｌ（２×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（７５ｇシリカ，５／１−１／１  石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）により白色固体を得た（２．３６ｇ，８９％）。
【００８８】
工程ｄ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブチル）−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ１）
ＢＢ１−ｃ（１．３０ｇ，４．３３ｍｍｏｌ）を６Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）と共に、ＬＣＭＳによりモニターしてアミドの加水分解が完了するまで還流した。混合物を蒸発させ、数回、水と同時蒸発させた。１Ｍ  ＮａＯＨ（１５ｍＬ）を残留物に添加し、この塩基性溶液を真空下で１５分間撹拌した。ジオキサン（１０ｍＬ）中のＢｏｃ２Ｏ（１．９２ｇ，８．８０ｍｍｏｌ）を、ｐＨを１０〜１１に維持しながら添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、氷浴内において１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、次いでＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ，次いで３０ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させて、粗製Ｐ１構築ブロックＢＢ１を得た（０．６４９ｇ）；
1HNMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 6.88 (br s, 1H), 4.15 (s, 1H), 2.40 (br m, 2H), 1.98 (br m, 2H), 1.80 (br m, 2H), 1.35 (s, 9H); ms ES+ m/z 146 (100 %), 190 (50 %)。
【００８９】
構築ブロック２、Ｐ１構築ブロックの製造；
【００９０】
【化８】
2013513598.tif 000010
【００９１】
工程ａ）（（１−ブロモ−３−クロロプロパン−２−イルオキシ）メチル）ベンゼン（ＢＢ２−ａ）
臭化ベンジル（１８５ｇ，１．０８ｍｏｌ）および塩化水銀（Ｉ）（１．５ｇ）の撹拌混合物に、エピクロロヒドリン（１００ｇ，１．０８ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で１２時間加熱した。ＴＬＣ分析により生成物の形成が確認された。生成物を暗褐色の反応混合物からカラムクロマトグラフィーにより石油エーテルを溶離剤として用いて分離した。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．７。収量；１４８ｇ，５１％。
【００９２】
工程ｂ）３−ベンジルオキシ−シクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチルエステル（ＢＢ２−ｂ）
水素化ナトリウム（２２．５ｇ，０．５６２ｍｏｌ）の乾燥ジオキサン８００ｍＬ中における撹拌懸濁液に、マロン酸ジエチル（９０ｇ，０．５６２ｍｏｌ）を２０分間かけて滴加した。この添加が終了した後、ＢＢ２−ａ（１４８ｇ，０．５６ｍｏｌ）を２０分間かけて滴加した。混合物を次いで２４時間、加熱還流した。室温に冷却した後、少量のジオキサン（約２０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２２．５ｇ，０．５６２ｍｏｌ）を混合物に添加し、加熱還流をさらに４８時間継続した。溶媒を減圧下で部分的に除去し、混合物を８００ｍＬの水で処理した。この混合物を次いで酢酸エチル（５００ｍＬ×３）で抽出し、抽出液を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより石油エーテル：酢酸エチル（１０％）を用いて精製し、これにより表題化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量；１００ｇ，５８％。
【００９３】
工程ｃ）３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｃ）
化合物ＢＢ２−ｂ（４０ｇ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）中における溶液に、チャコール上１０％パラジウム（４ｇ）を添加し、混合物を５０ｐｓｉで室温において３．５時間、水素化した。触媒を濾過により除去し、酢酸エチル、ＥｔＯＨで洗浄し、溶媒を次いで減圧下で除去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として用いて精製して、表題化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量；１８ｇ，６４％。
【００９４】
工程ｄ）３−オキソシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｄ）
化合物ＢＢ２−ｃ（１８ｇ，０．０８３３ｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中における溶液に、ＰＣＣ（３７ｇ，０．１７６ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で４時間撹拌した。溶液をシリカゲルカラムにより濾過し、残留物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９８／２で洗浄し、次いで同様なカラムにより濾過した。画分を合わせて減圧下で蒸発させて、目的化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（９：１），ＲＦ＝０．３。収量；１１ｇ，６２％。
【００９５】
工程ｅ）３，３−ジフルオロシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ２−ｅ）
化合物ＢＢ２−ｄ（１１ｇ，０．０５１３ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中における冷却溶液に、ＤＡＳＴ（１８．７２ｇ，０．１１６ｍｏｌ）溶液を滴加し、混合物を室温で一夜撹拌した。混合物を氷水に添加し、ＤＣＭで３回抽出した。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として用いて精製して、表題化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（７：３），ＲＦ＝０．５。収量；７．７ｇ，６４％。
【００９６】
工程ｆ）１−（エトキシカルボニル）−３，３−ジフルオロシクロブタンカルボン酸（ＢＢ２−ｆ）
化合物ＢＢ２−ｅ（７．７ｇ，０．０３２５ｍｏｌ）を、氷冷した０．５Ｍ水酸化カリウム  エタノール溶液（３０ｍＬ）および水（６ｍＬ）に溶解した。混合物を室温で一夜撹拌した。水を添加し、大部分のエタノールを減圧下で除去した。混合物を２Ｍ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、目的化合物を得た。ＴＬＣ系：石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．３。収量；５．８ｇ，８６％。
【００９７】
工程ｇ）１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３，３−ジフルオロシクロブタンカルボン酸エチル（ＢＢ２−ｇ）
化合物ＢＢ２−ｆ（５．８ｇ，０．０２７３ｍｏｌ）の乾燥ジオキサン（１００ｍＬ）中における溶液に、ｔｅｒｔ−ブタノール（２４．４ｍＬ）、ＤＰＰＡ（７．８７ｇ，０．０２７ｍｏｌ）およびＴＥＡ（２．８７ｇ，０．０２８４ｍｏｌ）を添加し、混合物を５時間還流した。酢酸エチル（約２００ｍＬ）を添加し、有機相を５％クエン酸および飽和炭酸水素ナトリウムで２回洗浄した。溶液を乾燥させ、減圧下で蒸発させた。目的生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン／酢酸エチルを用いて単離した。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．５。収量；４ｇ，５１．４％。
【００９８】
工程ｈ）３，３−ジフルオロ−１−（ヒドロキシメチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｈ）
化合物ＢＢ２−ｇ（４ｇ，０．０１４３ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中における氷冷溶液に、２Ｍ水素化ホウ素リチウム溶液（３０ｍＬ）を徐々に添加し、混合物を室温まで上昇させた。混合物を室温で３時間撹拌した。氷水および５％クエン酸を添加し、混合物をＤＣＭで３回抽出した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させ、これにより表題化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．３。収量；３．１ｇ，９１％。
【００９９】
工程ｉ）３，３−ジフルオロ−１−ホルミルシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｉ）
化合物ＢＢ２−ｈ（３．１ｇ，０．０１３０ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）中における溶液に、デス−マーチン・ペルヨージナン（Ｄｅｓｓ  Ｍａｒｔｉｎ  Ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（１９．９ｇ，０．０４７０ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加し、有機相を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液で２回、０．５Ｍ  ＮａＯＨで２回、およびブラインで洗浄した。有機相を乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として用いて精製し、これにより表題化合物を得た。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．４。収量；２．７ｇ，８７％。
【０１００】
工程ｊ）１−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３，３−ジフルオロシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ２−ｊ）
化合物ＢＢ２−ｉ（１．５ｇ，０．００６４ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）中における氷冷溶液に、イソシアン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８１ｇ，０．００９ｍｏｌ）およびピリジン（２．０４ｇ，０．０２７ｍｏｌ）を添加した。トリフルオロ酢酸（１．５８ｇ，０．０１５ｍｏｌ）を１０分間かけて添加した。混合物を室温で５時間撹拌した。酢酸エチルを添加し、有機相を５％クエン酸およびブラインで２回洗浄した。有機相を蒸発させ、ジオキサン（５０ｍＬ）に溶解した。１Ｍ  ＬｉＯＨ溶液（１００ｍＬ）を添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。５％クエン酸を添加し、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させた。生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによりヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として用いて精製した。ＴＬＣ系；石油エーテル：酢酸エチル（１：１），ＲＦ＝０．４。収量；１．０ｇ，４６％。
【０１０１】
工程ｋ）２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３，３−ジフルオロシクロブチル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ２）
化合物ＢＢ２−ｊ（１ｇ）を６Ｎ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）に溶解し、２４時間、加熱還流した後、ＴＬＣは反応が完了に達したことを示した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（７：３，５０ｍＬ）に溶解し、ＴＥＡ（１．８ｍＬ，０．０１２ｍｏｌ）およびＢｏｃ無水物（２．６ｇ，０．０１２ｍｏｌ）の両方を添加した。混合物を室温で８時間撹拌した時点で、反応は完了に達したことがＴＬＣにより確認された。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーによりクロロホルム中５％メタノールを用いて精製し、これにより表題化合物を得た。ＴＬＣ系；ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３（１：９），ＲＦ＝０．４。収量；０．６ｇ，７２％；
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.30 (br s, 1H), 4.11 (s, 1H), 2.90 (br m, 2H), 2.61 (br m, 2H), 1.35 (s, 9H); ms ES+ m/z 281 (100 %)。
【０１０２】
構築ブロック３  −  Ｐ１構築ブロックの製造
【０１０３】
【化９】
2013513598.tif 000011
【０１０４】
工程ａ）（（１−ブロモ−３−クロロプロパン−２−イルオキシ）メチル）ベンゼン（ＢＢ３−ａ）
臭化ベンジル（４６．０ｇ，０．２６９ｍｏｌ）およびエピクロロヒドリン（２４．９ｇ，０．２６９ｍｏｌ）および塩化水銀（Ｉ）（０．０４ｇ，０．０８５ｍｍｏｌ）の混合物を、１５０℃で１２時間加熱した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中１％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を粘稠な液体として得た（５０ｇ，収率７０％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中１０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．６。
【０１０５】
工程ｂ）３−（ベンジルオキシ）シクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｂ）
撹拌機、添加ろうとおよび還流冷却器を備えた三つ口フラスコに、乾燥ジオキサン（１５０ｍＬ）中のＮａＨ（４．６ｇ，０．１９２ｍｏｌ）を入れた。この撹拌した反応混合物に、マロン酸ジエチル（３０．７５ｇ，０．１９２ｍｏｌ）を３０分間かけて滴加した。添加が終了した後、化合物ＢＢ３−ａ（５０ｇ，０．１９ｍｏｌ）を３０分間かけて滴加した。反応混合物を２４時間還流した。室温に冷却した後、ＮａＨ（４．６ｇ，０．１９２ｍｏｌ）および乾燥ジオキサン（４０ｍＬ）を反応混合物に添加し、さらに４８時間、さらに撹拌した。溶媒を減圧下で部分的に除去し、混合物を水（１５０ｍＬ）で処理した。生成物をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中２％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を粘稠な液体として得た（３３ｇ，収率５７％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中１５％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．５。
【０１０６】
工程ｃ）３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｃ）
化合物ＢＢ３−ｂ（３３ｇ，０．１０８ｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３００ｍＬ）中における溶液に、チャコール上１０％パラジウム（１０ｇ）を添加し、混合物を５０ｐｓｉの圧力で室温において４８時間、水素化した。セライト（ｃｅｌｉｔｅ）床を通した濾過により触媒を除去し、ＥｔＯＡｃで十分に洗浄した。溶媒を減圧下で除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を粘稠な液体として得た（１２ｇ，収率５１％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中３０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１０７】
工程ｄ）３−フルオロシクロブタン−１，１−ジカルボン酸ジエチル（ＢＢ３−ｄ）
化合物ＢＢ３−ｃ（０．８ｇ，０．００３７ｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１６ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＤＡＳＴ（１．８ｇ，０．０１１ｍｏｌ）をこの冷溶液に滴加した。反応混合物を室温まで上昇させて１２時間撹拌した。反応混合物を低温の飽和ＮａＨＣＯ３溶液で停止した。粗生成物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を１０％  ＮａＨＣＯ３溶液、水、続いてブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中１−２％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を淡黄色液体として得た（４６０ｍｇ，収率５７％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中１０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１０８】
工程ｅ）１−（エトキシカルボニル）−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ＢＢ３−ｅ）
化合物ＢＢ３−ｄ（０．４６ｇ，０．００２１ｍｏｌ）を、氷冷したＥｔＯＨ中０．５Ｍ水酸化カリウム溶液（４．２ｍＬ）および水（１．４ｍＬ）に溶解した。混合物を室温で一夜撹拌した。水を添加し、大部分のエタノールを減圧下で除去した。混合物を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮すると、粗製の表題化合物（０．３５ｇ，粗製）が得られ、これをそのまま次の工程に用いた。ＴＬＣ系：石油エーテル中５０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１０９】
工程ｆ）１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−フルオロシクロブタンカルボン酸エチル（ＢＢ３−ｆ）
化合物ＢＢ３−ｅ（０．３５ｇ，０．００１８ｍｏｌ）の乾燥ジオキサン（６ｍＬ）中における溶液に、ｔｅｒｔ−ブタノール（１．８ｍＬ）、ジフェニルホスホリルアジド（０．５６ｇ，０．００２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２ｇ，０．００２ｍｏｌ）を添加し、混合物を５時間還流した。反応の終了後、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）を反応混合物に添加し、有機層を５％クエン酸（２×２０ｍＬ）、続いて飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄した。有機溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物にＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加し、有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中５−１０％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を白色結晶として得た（０．２７ｇ，収率５６％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１１０】
工程ｇ）３−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｇ）
化合物ＢＢ３−ｆ（０．２７ｇ，０．００１ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中における氷冷溶液に、２Ｍ水素化ホウ素リチウム溶液（２ｍＬ，０．００４ｍｏｌ）を徐々に添加し、混合物を室温まで上昇させた。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を氷水（２ｍＬ）および５％クエン酸（５ｍＬ）で停止し、粗生成物をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中１５−１８％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を白色固体として得た（９０ｍｇ，収率３９％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中５０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．５。
【０１１１】
工程ｈ）３−フルオロ−１−ホルミルシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｈ）
化合物ＢＢ３−ｇ（９０ｍｇ，０．０００４ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（４．５ｍＬ）中における脱ガス溶液に、デス−マーチン・ペルヨージナン（０．２１ｇ，０．０００５ｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）を添加し、有機層を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（２×１０ｍＬ）、０．５Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  石油エーテル中１０−１５％  ＥｔＯＡｃ）により精製し、これにより表題化合物を白色結晶質固体として得た（７５ｍｇ，収率８７％）．ＴＬＣ系：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．４。
【０１１２】
工程ｉ）１−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−フルオロシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ３−ｉ）
化合物ＢＢ３−ｈ（１．３ｇ，０．００５９ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２５ｍＬ）中における氷冷溶液に、イソシアン化ｔｅｒｔ−ブチル（０．７５ｇ，０．００８９ｍｏｌ）および乾燥ピリジン（２．６ｍＬ）を添加した。トリフルオロ酢酸（０．９ｍＬ，０．０１１８ｍｏｌ）を１０分間かけて、温度を０℃に維持しながら添加した。反応混合物を徐々に室温まで上昇させ、１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を添加し、有機相を５％クエン酸およびブラインで２回洗浄した。有機相を蒸発させ、粗生成物をＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解した。ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（３：２  ｖ／ｖ）中の１Ｍ  ＬｉＯＨ溶液（２．６ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を５％クエン酸で停止し、混合物を酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空中で蒸発させて、次の工程に用いるのに十分なほど純粋な表題化合物を得た（１．６ｇ，収率８４％）。ＴＬＣ系：石油エーテル中２０％  ＥｔＯＡｃ，Ｒｆ＝０．３。
【０１１３】
工程ｊ）２−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−フルオロシクロブチル）−２−ヒドロキシ酢酸（ＢＢ３）
化合物ＢＢ３−ｉ（１．６ｇ，０．００５ｍｏｌ）を６Ｎ  ＨＣｌ（６０ｍＬ）と共に１６時間、アミド加水分解が完了するまで還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、数回、水と同時蒸発させた。生成物をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（７：３  ｖ／ｖ，５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（２．１ｍＬ，０．０１５ｍｏｌ）、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．１８ｇ，０．０１ｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一夜撹拌した（ｐＨを定期的間隔でモニターし、反応全体を通して約１１に維持した）。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌで中和し、生成物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、続いてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０〜１２０メッシュ，溶離剤  ＣＨＣｌ３中５％  ＭｅＯＨ）により精製し、これにより表題のＰ１構築ブロックを固体として得た（０．６５ｇ，収率５０％）。ＴＬＣ系：ＣＨＣｌ３中３０％  ＭｅＯＨ，Ｒｆ＝０．３；
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 7.01 (br s, 1H), 5.16 (br m, 1H), 4.97 (br m, 1H), 2.49 (br m, 5H), 1.36 (s, 9H); ms ES+ m/z 262 (100 %)。
【０１１４】
構築ブロック４  −  Ｐ１−プライムサイド構築ブロック
【０１１５】
【化１０】
2013513598.tif 000012
【０１１６】
工程ａ）１−（ヒドロキシメチル）−３−メトキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ４−ａ）
５００ｍｇ（１．５１ｍｍｏｌ）の１−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−３−ヒドロキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１−［［（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル］アミノ］−３−ヒドロキシシクロブタン−１−カルボン酸エチルをJ. Med. Chem.,1990 33(10) 2905-2915の記載に従って還元することにより製造）およびプロトンスポンジ（ｐｒｏｔｏｎ  ｓｐｏｎｇｅ）（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルナフタレン−１，８−ジアミン）（１．６３ｇ，６．０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１８ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、４４７ｍｇ（３．０２ｍｍｏｌ）の四フッ化ホウ素トリメチルオキソニウムを一度に固体として激しい撹拌下で添加した。反応混合物を３時間撹拌し、激しい撹拌下に添加したＤＣＭ（５０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で希釈した。有機相を炭酸水素ナトリウム、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、短いシリカカラム（ＤＣＭを溶離剤として）で精製した。得られた生成物をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、ＴＨＦ中のフッ化テトラブチルアンモニウム溶液（１Ｍ，４．５ｍＬ）を添加し、反応物を室温で４．５時間撹拌した。反応をＴＬＣによりモニターし、完了に達したと思われた時点でそれをシリカに吸収させ、シリカ上で精製して（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：１から生ＥｔＯＡｃまで）、表題化合物を得た（２５１ｍｇ，７２％）。ＬＣ／ＭＳ  ２３２（Ｍ＋１）。
【０１１７】
工程ｂ）１−ホルミル−３−メトキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ４−ｂ）
アルコールＢＢ４−ａをＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、デス−マーチン試薬を一度に添加した。反応物を２．５時間撹拌した。反応が完了に達したと思われた時点でそれを５０ｍＬのＤＣＭで希釈し、２０ｍＬの１０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を添加した。混合物を撹拌し、炭酸水素ナトリウム、ブラインで洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させた。シリカ上での精製（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：１生ＥｔＯＡｃまで）により表題化合物を得た（５００ｍｇ，５９％）。
【０１１８】
工程ｃ）１−（２−（シクロプロピルアミノ）−１−ヒドロキシ−２−オキソエチル）−３−メトキシシクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ４）
アルデヒドＢＢ４−ｂ  ４９８ｍｇ（１．５６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（８ｍＬ）に溶解した。ピリジン（０．５２ｍＬ）を撹拌条件下で添加し、続いてシクロプロピルイソニトリルを添加した。反応物を氷浴に入れ、ＴＦＡ（０．２５ｍＬ）を２０分間で滴加した。反応混合物を一夜撹拌した。反応はその時点で完了に達したと思われ、１Ｍ  ＨＣｌ、炭酸水素ナトリウム、ブラインで洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残った残留物をジオキサンに溶解し、水酸化リチウム溶液と共に一夜撹拌し、次いでクエン酸で中和した。得られた溶液から生成物をＥｔＯＡｃで抽出し、シリカ上で精製し（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン  １：３−１：１）、これにより２６３ｍｇの表題化合物を得た（５４％）。ＬＣ／ＭＳ  ３１４（Ｍ＋１）。
【０１１９】
構築ブロック５（ＢＢ５）−  Ｐ２構築ブロック
【０１２０】
【化１１】
2013513598.tif 000013
【０１２１】
工程ａ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−クロロ−プロピオン酸メチルエステル（ＢＢ５−ａ）
トリフェニルホスフィン（６５．８ｇ，０．２５１ｍｏｌ）およびヘキサクロロエタン（５９．４ｇ，０．２５１ｍｏｌ）のジクロロメタン（８５０ｍＬ）中における溶液を一度に、Ｎ−Ｂｏｃ−セリンメチルエステル（５０ｇ，０．２２８ｍｏｌ）のジクロロメタン（１７０ｍＬ）中における溶液に、アルゴン雰囲気下で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで反応を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍＬ）で停止した。有機生成物をジクロロメタン（２ｘ３００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせてブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、次いでＥｔ２Ｏ（５００ｍＬ）で摩砕処理した。濾過および溶媒の蒸発後、粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーにより精製し（石油エーテル中６−８％  ＥｔＯＡｃで溶離）、これにより表題化合物を得た（４２ｇ，７８％）。
【０１２２】
工程ｂ）（２−クロロ−１−ヒドロキシメチル−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｂ）
水素化ホウ素リチウム（４．３ｇ，０．１９５ｍｏｌ）を少量ずつ、ＢＢ５−ａ（４２ｇ，０．１７７ｍｏｌ）のＥｔＯＨ−ＴＨＦ  ９：１中における撹拌溶液に、０℃でアルゴン雰囲気下に添加した。反応物を室温で８時間撹拌し、次いで飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）で停止した。生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ３００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせてブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させて、得られた粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーにより石油エーテル中１５％  ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、これにより表題化合物を得た（２７．５ｇ，７４％）。
【０１２３】
工程ｃ）［２−クロロ−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｃ）
（２−クロロメトキシ−エチル）−トリメチル−シラン（２６．１８ｇ，０．１５７ｍｏｌ）を、化合物ＢＢ５−ｂ（２７．５ｇ，０．１３１ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２７．４ｍＬ，０．１５７ｍｏｌ）のジクロロメタン（３５０ｍＬ）中における撹拌溶液に、０℃でアルゴン雰囲気下に滴加した。反応物を室温まで到達させ、１８時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈した。生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ２００ｍＬ）で抽出し、有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーにより石油エーテル中５％  ＥｔＯＡｃで溶離して精製し、これにより表題化合物を得た（２５．５ｇ，５７％）。
【０１２４】
工程ｄ）［２−（１−ヒドロキシ−シクロブチル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｄ）
ｎ−ＢｕＬｉ（１０ｍＬ，０．０１６ｍｏｌ，ヘキサン中１．６Ｍ溶液）を、化合物ＢＢ５−ｃ（２ｇ，５．８８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７０ｍＬ）中における撹拌溶液に、−７８℃でアルゴン雰囲気下に滴加した。撹拌を１５分間継続し、続いてＬｉＮｐ（１０４ｍＬ，ＴＨＦ中０．４２Ｍ溶液，０．０４４ｍｏｌ）を５分間かけて滴加した。暗色溶液を−７８℃で１時間撹拌し、次いでシクロブタノン（０．８８ｍＬ，１１．７７ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を−７８℃で１６時間撹拌し、次いで飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）で停止し、室温まで上昇させた。反応物をエーテル（１００ｍＬ）および飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層をエーテル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーによりヘプタン：エーテル  ３：２で溶離して精製し、これにより表題化合物を得た（１．５４ｇ，７０％）。
【０１２５】
工程ｅ）［２−（１−フルオロ−シクロブチル）−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシメチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｅ）
ＢＢ５−ｄ（０．５ｇ，１．３３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（過剰）およびピリジン（過剰）中の５０％  Ｄｅｏｘｏｆｌｕｏｒを、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中で混合した。得られた混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を１０％クエン酸（水性）および飽和ＮａＨＣＯ３（水性）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーによりヘキサン：ＥｔＯＡｃ（７：１−２：１）を溶離剤として用いて精製し、これにより表題化合物を得た（１９２ｍｇ，３８％）。
【０１２６】
工程ｆ）［２−（１−フルオロ−シクロブチル）−１−ヒドロキシメチル−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ５−ｆ）
ＢＢ５−ｅ（１９２ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中０．１Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）中における溶液を、３時間撹拌し、次いでトリエチルアミン（１ｍＬ）を添加し、溶液を濃縮した。得られた粗生成物をシリカカラム上でのクロマトグラフィーによりヘキサン：ＥｔＯＡｃ（２：１）を溶離剤として用いて精製し、これにより表題化合物（６９．３ｍｇ，５５％）を白色固体として得た。
【０１２７】
工程ｇ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（１−フルオロ−シクロブチル）−プロピオン酸（ＢＢ５）
ＢＢ５−ｆ（６９ｍｇ，０．２７９ｍｍｏｌ）および重クロム酸ピリジン（１．１５ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。５時間後、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加し、生成物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させた。粗製物質をシリカカラム上でのクロマトグラフィーにより、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（１：１）、続いてＥｔＯＨ（１００％）を溶離剤として用いて精製した。これにより表題化合物を白色固体として得た（２２．３ｍｇ，３１％）。２６２．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２８】
構築ブロック６（ＢＢ６）−  Ｐ１−プライムサイド構築ブロック
【０１２９】
【化１２】
2013513598.tif 000014
【０１３０】
工程ａ）アセトキシ−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブチル）−酢酸ＢＢ６−ａ
（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノシクロブチル）−ヒドロキシ酢酸（２０１．５ｍｇ，０．８２２ｍｍｏｌ）を、無水酢酸（９５μＬ）と共にピリジン（１．５ｍＬ）中で２４時間撹拌した。混合物をまず真空下で濃縮し、次いで５ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈した。この有機溶液を１Ｎ  ＨＣｌ（２ｍＬ）、続いて飽和水性ＮａＣｌ（２ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で蒸発させ、これにより表題化合物を得た。ＬＣ−ＵＶ／ＭＳ  ＡＰＩ−ＥＳ−ｍ／ｚ  ２８６［Ｍ−Ｈ］−；
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.11 (s, 1H), 5.00 (s, 1H, CHOAc), 2.28 (m, 2H), 2,07 (s, 3H, Me), 2.04 (m, 2H), 1.81 (m, 1H), 1.67 (m, 1H), 1.35 (s, 9H, Boc)。
【０１３１】
工程ｂ）酢酸（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−シクロブチル）−（４−メチル−チアゾール−２−イルカルバモイル）−メチルエステル（ＢＢ６−ｂ）
α−アセトキシカルボン酸ＢＢ６−ａ（０．２３ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボジイミダゾール（８７ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（５．６ｍＬ）中における混合物を、室温で撹拌した。１８時間後、４−メチル−２−アミノチアゾール塩酸塩（０．２８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（２０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（０．５ｍｇ）を添加し、室温で撹拌を継続した。２６時間後、形成されたアミドはごく少量であったので、混合物を６５℃で４時間加熱し、次いで真空下で濃縮した。残留物を１０ｍＬのＥｔＯＡｃと１０ｍＬの飽和水性ＮａＣｌの間で分配した。水相をさらにＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させると、１５２ｍｇの油が粗製物質として得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ，８０／２０  ＣＨ２Ｃｌ２−アセトン）により、表題化合物を白色固体として得た（６２．８ｍｇ，７１％の収率）；
TLC Rf (9/1 CH2Cl2-アセトン) 0.70, LC-UV/MS 97% DAD, API-ES+ m/z 384 [M+H]+；
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.95 (s, 1H), 6.76 (s, 1H, チアゾール), 5.16 (s, 1H, CHOAc), 2.26 (s, 3H, チアゾールMe), 2.14 (s, 3H, Ac), 2.4-2.1 (m, 4H), 1.8-1.6 (m, 2H), 1.33 (m, 9H)。
【０１３２】
工程ｃ）｛１−［ヒドロキシ−（４−メチル−チアゾール−２−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ６）
ＢＢ６−ｂ（５６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を水性ＬｉＯＨ（１Ｎ，０．３０ｍＬ）と共に１ｍＬのメタノール中において室温で１時間撹拌することにより、アセチル基を加水分解した。反応混合物を濃縮し、次いで各５ｍｌのＥｔＯＡｃと飽和水性ＮａＣｌの間で分配した。水相をさらにＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で蒸発させると、３９．６ｍｇの固体が粗製物質として得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ，９５／５  ＣＨ２Ｃｌ２−アセトン）により表題化合物を白色固体として得た（３６．２ｍｇ，７１％の収率）。ＬＣ−ＵＶ／ＭＳ  １００％  ＤＡＤ，ＡＰ−ＥＳ＋ｍ／ｚ  ３４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３３】
構築ブロック７（ＢＢ７）−  Ｐ１構築ブロック
【０１３４】
【化１３】
2013513598.tif 000015
【０１３５】
工程ａ）３−フルオロ−１−（１−ヒドロキシ−２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ７）
炭酸カリウム（１４７．５ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）をＰ１−構築ブロックＢＢ３（２５４ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中における溶液に添加し、続いてヨウ化メチル（７２μＬ，１．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２．５時間撹拌し、次いでＤＣＭと水性ＮａＨＣＯ３（飽和）の間で分配した。相を分離し、有機層を水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。形成されたメチルエステルの粗製残留物をエタノール中のメチルアミン溶液（３３％（ｗ／ｗ），１０ｍＬ）に溶解し、６０℃で２日間加熱し、次いで濃縮すると、α−ヒドロキシアミドＢＢ７が得られ、これはさらに精製することなく次の工程に用いるのに十分なほど純粋であった。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７７．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３６】
構築ブロック８  −  Ｐ１−プライムサイド構築ブロック（ＢＢ８）
【０１３７】
【化１４】
2013513598.tif 000016
【０１３８】
工程ａ）［１−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル−ヒドロキシ−メチル）−３−メトキシ−シクロブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ８−ａ）
アルデヒドＢＢ４−ｂ、４．４５ｍｍｏｌを、ＢＢ４−ｃの製造について記載した方法に従い、ただしイソシアン化ｔｅｒｔ−ブチル（６．６８ｍｍｏｌ）をシクロプロピルイソニトリルの代わりに用いて反応させ、これにより表題化合物を得た（８５０ｍｇ，５８％）（ＴＬＣ：ｒｆ＝０．６１（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン  １：１）。
【０１３９】
工程ｄ）（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−メトキシ−シクロブチル）−ヒドロキシ−酢酸（ＢＢ８−ｂ）
化合物ＤＪ１４（８５０ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）を６Ｎ  ＨＣｌ（６０ｍＬ）と共に１６時間、アミド加水分解が完了するまで還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、水と同時蒸発させた。生成物をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（７：３  ｖ／ｖ，５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（１．４ｍＬ，１０．２ｍｍｏｌ）、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．２５ｇ，１０．２ｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、続いて１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、これにより表題のＰ１構築ブロックを固体として得た（３６０ｍｇ，収率５１％）。
【０１４０】
工程ｅ）｛１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−３−メトキシ−シクロブチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＢＢ８）
ヒドロキシ酸ＢＢ８−ｂを、実施例１、工程ａに記載した方法に従って１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンと反応させ、これにより表題化合物を得た（２３２ｍｇ，収率５０％）。
【０１４１】
構築ブロック９  −  Ｐ１−プライムサイド構築ブロック（ＢＢ９）
【０１４２】
【化１５】
2013513598.tif 000017
【０１４３】
（１Ｒ，３Ｓ）−３−フルオロ−１−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−（１−Ｄ３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソエチル）シクロブチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（ＢＢ９）
Ｄ３−ヨウ化メチル（４．４２ｍｍｏｌ，０．２８１ｍＬ）を、３−ニトロピラゾール（４．４２ｍｍｏｌ，５００ｍｇ）およびＤＢＵ（０．７５ｍＬ）のＤＭＦ中における撹拌溶液に添加した。１６時間後、水性ＮａＨＣＯ３を添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。有機相を慎重に濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭで溶離して精製した。得られた残留物をＭｅＯＨに溶解し、Ｐｄ／Ｃ−１０％上で水素化し、セライトにより濾過し、濃縮し、これにより１−（Ｄ３−メチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンを得た。１−（Ｄ３−メチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンを実施例１、工程ａに記載した方法に従ってＢＢ３と反応させ、これにより表題化合物を得た。
【実施例】
【０１４４】
実施例Ａ１
【０１４５】
【化１６】
2013513598.tif 000018
【０１４６】
工程ａ）｛３−フルオロ−１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ａ１−ａ）
１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１当量）およびＤＩＥＡ（４当量）を、ＤＭＦに溶解したＰ１−構築ブロックＢＢ３（１当量）の溶液に添加した。溶液を０℃に冷却し、１０分間後にＨＡＴＵ（１当量）を添加した。室温で約２時間後、ＬＣ−ＭＳは生成物を示し、出発物質はみられなかったので、溶媒を回転蒸発により除去した。粗生成物を４０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、２５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３（水性）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物を２５ｇシリカカラムでＢｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒにより精製し、これにより表題生成物を得た。
【０１４７】
工程ｂ）２−（１−アミノ−３−フルオロ−シクロブチル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アセトアミド（Ａ１−ｂ）
化合物Ａ１−ａ（３６３ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を、７．５ｍＬのＴＦＡ：ＤＣＭ：ＴＩＳ：水（２０：８０：１：１）混合物で処理した。室温で２時間後、ＬＣ／ＭＳ分析によりＢｏｃ基の除去の完了が確認されたので、溶液を真空中で濃縮し、ジクロロメタン（３×）と共沸させて、過剰のＴＦＡを除去した。粗生成物（３３９ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、２−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオンアミド（ＷＯ２００６／０６４２８６の例１の記載に従って製造）（１．２当量）、ＰｙＢＯＰ（１．２当量）およびジイソプロピルエチルアミン（４当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）中における溶液を室温で５分間撹拌したものに添加した。ＬＣ／ＭＳ分析がアミド形成の完了を示すまで、混合物を室温で撹拌した（約３０分間）。ＤＣＭを反応物に添加し、有機相を０．１Ｍ  ＨＣｌ（水性）（２×）および１０％  ＮａＨＣＯ３（水性）（２×）で洗浄した。有機相を乾燥させ、真空中で濃縮すると表題化合物が得られ、これをさらに精製せずに後続工程に用いた。
【０１４８】
工程ｃ）Ｎ−｛３−フルオロ−１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−３−（１−メチル−シクロペンチル）−２−プロピオニルアミノ−プロピオンアミド（Ａ１−ｃ）
化合物Ａ１−ｂ（０．９ｍｍｏｌ）を、７．５ｍＬのＴＦＡ：ＤＣＭ：ＴＩＳ：水（２０：８０：１：１）混合物で処理した。室温で２時間後、ＬＣ／ＭＳ分析によりＢｏｃ基の除去の完了が確認されたので、溶液を真空中で濃縮し、ジクロロメタン（３×）と共沸させて、過剰のＴＦＡを除去した。残留物をＤＣＭに溶解し、０．１Ｍ  ＨＣｌ（水性）（３×）で抽出した。プールした水層をＮａＯＨ（水性）でｐＨ１０に塩基性化し、生成物をＤＣＭ（３×）で抽出した。プールした有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。得られた粗製化合物（３３ｍｇ，８３μｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（３当量）および塩化プロピオニル（９１．３μｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳ分析はアシル化の完了を示した。メタノール（０．５ｍＬ）の添加により反応を停止し、反応物を真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、有機相を０．１Ｍ  ＨＣｌ（水性）（２×）および１０％  ＮａＨＣＯ３（水性）（２×）で洗浄し、疎水相分離器を通して溶離し、真空中で濃縮し、これにより表題化合物を得た。
【０１４９】
工程ｄ）Ｎ−［３−フルオロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチル］−３−（１−メチル−シクロペンチル）−２−プロピオニルアミノ−プロピオンアミド（Ａ１）
工程ｃで得られた残留物をＤＣＭ（１．５ｍＬ）に再溶解し、デス−マーチン・ペルヨージナン（９１．３μｍｏｌ）を室温で一度に添加した。反応物を室温で２時間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳ分析は酸化の完了を示した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、溶液を１０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（水性）と１０％  ＮａＨＣＯ３（水性）の１：１混合物で洗浄した。有機層を疎水相分離器を通して溶離し、真空中で濃縮した。残留物を分取ＬＣ／ＭＳにより精製して、目的化合物を得た（収率：４７％，ＬＣ／ＭＳ：ｔＲ＝４．５５分，４５０．２［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【０１５０】
実施例Ａ２〜Ａ１０
下記の表に示す化合物は、実施例１に概説した方法と同様にして、適宜なＲ１ａＲ１ｂアミン類、Ｐ１／Ｐ２およびＰ３構築ブロック酸を用い、続いてデス−マーチン酸化して目的生成物α−ケトアミドにすることにより製造された：
【０１５１】
【表１】
2013513598.tif 000019
【０１５２】
１  工程ｂにおけるＢｏｃ基の除去は、ジオキサンおよび／またはＭｅＯＨ中の４Ｍ  ＨＣｌを用いて行なわれた。
２  工程ｂおよびｃにおけるＢｏｃ基の除去は、ジオキサンおよび／またはＭｅＯＨ中の４Ｍ  ＨＣｌを用いて行なわれた；
３  Ｐ２構築ブロックをＰ１−Ｐ１’構築ブロックに、溶媒としてのＤＭＦおよびカップリング試薬としてのＨＡＴＵを用いてカップリングさせた；
４  Ｐ１’−アミンをＰ１構築ブロックに、ＨＡＴＵをカップリング剤として用いてカップリングさせた；
５  工程ｂおよびｃにおけるＢｏｃ基の除去はＭｅＯＨ：ＡｃＣｌ  ９：１を用いて行なわれた。
【０１５３】
実施例Ａ１１
【０１５４】
【化１７】
2013513598.tif 000020
【０１５５】
工程ａ）｛３，３−ジフルオロ−１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ａ１１−ａ）
１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１５８ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．０８ｍＬ，６．５２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３，３−ジフルオロ−シクロブチル）−ヒドロキシ−酢酸（１．６３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶液を０℃に冷却し、１０分後にＨＡＴＵ（６２０ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で約２時間後、ＬＣ−ＭＳは生成物を示し、出発物質はみられなかったので、溶媒を回転蒸発により除去した。粗生成物を４０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、２５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３（水性）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物を２５ｇシリカカラムでＢｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒにより精製し、これにより表題化合物を白色固体（９２％）として得た。ＴＬＣ  ｒｆ：０．０７，ヘプタン：酢酸エチル  １：１中。
【０１５６】
工程ｂ）［１−｛３，３−ジフルオロ−１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチルカルバモイル｝−２−（１−メチル−シクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ａ１１−ｂ）
Ａ１１−ａ（０．６２９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶解した。ジオキサン中のＨＣｌ溶液（４Ｍ，１．５ｍＬ）を添加した。溶液を室温で１６時間撹拌し、次いで濃縮し、トルエンと同時蒸発させた。得られた残留物（０．６３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、次いで０℃で２−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオンアミド（ＷＯ２００６／０６４２８６の例１の記載に従って製造）（１８７．５ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２６３ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中における冷溶液に添加した。ＤＩＥＡ（５５０μＬ，３．１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で３０分間、次いで室温で２時間、撹拌した。溶液を真空濃縮し、残留物をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、シリカカラム（１０ｇ）に装入した。化合物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル  ７５：２５−２５：７５）により精製し、これにより表題化合物（９０％）を２つのクロマトグラフィーピークとして得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ４７８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
工程ｃ）［１−［３，３−ジフルオロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチルカルバモイル］−２−（１−メチル−シクロペンチル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ａ１１−ｃ）
α−ヒドロキシアミドＡ１１−ｂを、実施例Ａ１、工程ｄに記載した方法に従って酸化した。分取ＬＣＭＳ（５０−７０％の勾配，移動相：アセトニトリル−水，１％  ＮＨ４ＯＨ）により精製して、表題化合物を得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ４７６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。分析用ＬＣＭＳにより評価した純度９９．４％。
【０１５８】
工程ｄ）２−アセチルアミノ−Ｎ−［３，３−ジフルオロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチル］−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオンアミド（Ａ１１）
カルバメートＡ１１−ｃ（１９６ｍｇ，０．３８３ｍｍｏｌ）を、メタノールおよび塩化アセチル  ９：１の予備調製混合物（１０ｍＬ）に溶解した。混合物を６時間撹拌した後、溶媒を除去し、粗生成物を高真空下で一夜乾燥させた。粗生成物をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、ＡｃＣｌ（２７μＬ，０．３８３ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（２５３μＬ，１．５３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で約２時間後、ＬＣ−ＭＳは生成物を示し、出発物質はみられなかったので、溶媒を回転蒸発により除去した。粗生成物を４０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、２５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３（水性）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカ上で蒸発させた。粗生成物を充填済み１０ｇシリカカラム上でヘプタン：ＥｔＯＡＣ  １：１から純ＥｔＯＡｃ、純アセトンまでの勾配を用いて精製し、これにより表題化合物を得た（１０９ｍｇ，６３％収量）。［Ｍ＋Ｈ］＋  ４５４。
【０１５９】
下記の表に示す化合物は、実施例Ａ１１に概説した方法に従い、適宜なＲ１ａＲ１ｂアミン、Ｐ１−、Ｐ２−構築ブロック、および酸塩化物を用いて製造された：
【０１６０】
【表２−１】
2013513598.tif 000021
【０１６１】
【表２−２】
2013513598.tif 000022
【０１６２】
１  Ｒ２ａおよびＲ２ｂが結合している立体中心の立体化学は決定していない；
２  カルバメートのＢｏｃ基はジオキサン中の２Ｍ  ＨＣｌを用いて除去された；
３  Ｐ３部分は適宜な酸無水物を用いて導入された；
４  Ｐ３部分は、ＨＡＴＵ促進カップリングにおいて適宜な酸を用いて導入された。
【０１６３】
実施例Ａ２８
【０１６４】
【化１８】
2013513598.tif 000023
【０１６５】
工程ａ）アセチル−シクロヘキシルグリシン（Ａ２８−ａ）
Ｌ−Ｂｏｃ−シクロヘキシルグリシン（０．５００ｇ，１．９４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＴＦＡ（５ｍＬ）を添加し、反応物を３０分間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、残留物を数ｍＬのトルエンに再懸濁し、混合物を回転蒸発により蒸発させ（操作を３回反復した）、続いて真空下で乾燥させた。粗製ＴＦＡ塩をＨ２Ｏ（６ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ＮａＯＨ（７７６ｍｇ，１９．４ｍｍｏｌ）を添加した。均質な溶液が得られるまで撹拌を続けた。無水酢酸（３．８８ｍｍｏｌ，０．３８８ｍＬ）を添加し、反応物を２時間撹拌した。混合物を１Ｍ  ＮａＯＨ（２５ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をＥｔ２Ｏで洗浄し、次いで３Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、１２０ｍｇの表題化合物を高純度で得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ２００．２  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６６】
工程ｂ）２−［１−（２−アセチルアミノ−２−シクロヘキシル−アセチルアミノ）−シクロブチル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アセトアミド（Ａ２８−ｂ）
２−（１−アミノ−シクロブチル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アセトアミド（実施例１，工程ａに記載した方法に従って製造（５０ｍｇ，０．１５４ｍｍｏｌ）を、２ｍＬのジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌで処理し、凍結乾燥後に遊離アミンの二塩酸塩を得た。これを実施例Ｃ９工程ｂに記載したカップリング法に従って化合物Ａ２８−ａと反応させ、生成物を勾配カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１−１０％  ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物を得た（３０ｍｇ，４８％）。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ４０６．３  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６７】
工程ｃ）２−［１−（２−アセチルアミノ−２−シクロヘキシル−アセチルアミノ）−シクロブチル］−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−２−オキソ−アセトアミド（Ａ２８）
化合物Ａ２８−ｂを実施例１工程ｄに従って酸化し、生成物をＰｈｅｎｏｍｅｎｅ×Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸカラムで分取ＨＰＬＣにより精製した。溶離剤：Ａ  Ｈ２Ｏ中０．０１Ｍ  ＮＨ３；Ｂ  ４５％  ＭｅＣＮ，４５％  ＴＨＦ，１０％  Ｈ２Ｏ，勾配１５−２８％  Ｂ。これにより、凍結乾燥後に１５ｍｇの表題化合物を得た（５０％の収率）。純度＞９９％（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ），ＬＣ−ＭＳ  ＥＳ＋  ４０３．１。
【０１６８】
実施例Ａ２９
【０１６９】
【化１９】
2013513598.tif 000024
【０１７０】
２−アセチルアミノ−３−（１−フルオロ−シクロペンチル）−Ｎ−［１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチル］−プロピオンアミド（Ａ２９）
実施例１に記載した方法に従い、適宜な構築ブロックを用いて表題化合物を製造した。工程ｂおよびｃにおけるＢｏｃ基の除去をジオキサン／ＭｅＯＨ中の４Ｍ  ＨＣｌで処理することにより実施した。収率：１６％，ＬＣ／ＭＳ：ｔＲ＝４．０分，４２１．２  ［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【０１７１】
実施例Ｕ１
【０１７２】
【化２０】
2013513598.tif 000025
【０１７３】
工程ａ）３−（１−メチル−シクロペンチル）−２−［（ピロリジン−１−カルボニル）−アミノ］−プロピオン酸リチウム塩（Ｕ１−ａ）
（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１−メチルシクロペンチル）プロパン酸（ＷＯ２００６／０６４２８６の例１の記載に従って製造）（２７２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解した。ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（３ｍＬ）を室温で滴加した。約３時間後、溶媒を回転蒸発により除去し、ＭｅＯＨ（２×）と同時蒸発させて過剰のＨＣｌを除去した。得られた粗製化合物をさらに精製せずに下記の工程に用いた。
【０１７４】
工程ｂ）２−（３，３−ジエチル−ウレイド）−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸リチウム塩（Ｕ１−ｂ）
化合物Ｕ１−ａ（１９ｍｇ，８６μｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（３当量）およびジエチルカルバモイルクロリド（１当量）を添加した。反応物を密閉チューブ内で５０℃に１６時間加熱した。ＬＣ／ＭＳ分析は９０％の転化率を示した。ＥｔＯＡｃを反応溶液に添加し、有機相を０．１Ｍ  ＨＣｌ（水性）（３×）で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で除去した。得られた粗製メチルエステルをＴＨＦ（ｍＬ）に溶解し、メタノール中１Ｍ  ＬｉＯＨ（３当量）を添加し、溶液を室温で１６時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳ分析はエステル加水分解の完了を示し、溶液を真空中で除去するとリチウム塩が得られ、これをさらに精製せずに後続工程に用いた。
【０１７５】
工程ｃ）２−（３，３−ジエチル−ウレイド）−Ｎ−｛３−フルオロ−１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオンアミド（Ｕ１−ｃ）
化合物１ａを、７．５ｍＬのＴＦＡ：ＤＣＭ：ＴＩＳ：水（２０：８０：１：１）混合物で処理した。室温で２時間後、ＢＯＣ基の除去が完了したことがＬＣ／ＭＳにより確認されたので、溶液を真空中で濃縮し、ジクロロメタン（３×）と共沸させて過剰のＴＦＡを除去した。得られた粗製ＴＦＡ塩（６４μｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、Ｕ１−ｂ（１．２当量）  ＰｙＢＯＰ（１．２当量）のＤＣＭ（２ｍＬ）中における溶液を室温で１０分間予め撹拌したものに添加した。混合物を室温で１６時間撹拌した後、反応を停止した。ＤＣＭを反応物に添加し、有機相を０．１Ｍ  ＨＣｌ（水性）（２×）および１０％  ＮａＨＣＯ３（水性）（２×）で洗浄した。有機相を乾燥させ、真空中で濃縮し、残留物を分取ＬＣ／ＭＳにより精製した。
【０１７６】
工程ｄ）２−（３，３−ジエチル−ウレイド）−Ｎ−［３−フルオロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチル］−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオンアミド（Ｕ１）
アルコールＵ１−ｃをＤＣＭ（１．５ｍＬ）に溶解し、デス−マーチン・ペルヨージナン（１．５当量）を室温で一度に添加した。反応物を室温で２時間撹拌した後、ＬＣ／ＭＳ分析は酸化の完了を示した。反応物をＤＣＭで希釈し、溶液を１０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（水性）と１０％  ＮａＨＣＯ３（水性）の１：１混合物で洗浄した。有機層を疎水相分離器を通して溶離し、真空中で濃縮した。残留物を分取ＬＣ／ＭＳにより精製し、これにより表題化合物を得た（収量：４．２ｍｇ，ＬＣ／ＭＳ：ｔＲ＝５．５分，４９３．１６  ［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【０１７７】
実施例Ａ３０〜Ａ３８
下記の表に示す化合物は、実施例１に概説した方法と同様にして、適宜なＲ１ａＲ１ｂアミン、Ｐ１−およびＰ２−構築ブロック、ならびに酸塩化物を用い、続いてデス−マーチン酸化して目的生成物α−ケトアミドにすることにより製造された：
【０１７８】
【表３】
2013513598.tif 000026
【０１７９】
１  工程ｂにおけるＢｏｃの除去は、ジオキサンおよび／またはＭｅＯＨ中の４Ｍ  ＨＣｌを用いて行なわれた；
２  工程ｂおよびｃにおけるＢｏｃ基の除去は、ジオキサンおよび／またはＭｅＯＨ中の４Ｍ  ＨＣｌを用いて行なわれた；
３  Ｐ２構築ブロックをＰ１−Ｐ１’構築ブロックに、溶媒としてのＤＭＦおよびカップリング試薬としてのＨＡＴＵを用いてカップリングさせた；
４  Ｐ１’−アミンをＰ１構築ブロックに、ＨＡＴＵをカップリング剤として用いてカップリングさせた；
５  工程ｂおよびｃにおけるＢｏｃ基の除去はＭｅＯＨ：ＡｃＣｌ  ９：１を用いて行なわれた；
６  Ｒ２ａ／Ｒ２ｂ中のＯＭｅの異性体比は１：１である；
７  工程ｃで、Ｐ３構築ブロックはＨＡＴＵ促進カップリングにおいて適宜な酸を用いて導入された。
【０１８０】
実施例Ｕ２
【０１８１】
【化２１】
2013513598.tif 000027
【０１８２】
工程ａ）３−（１−フルオロ−シクロペンチル）−Ｎ−［３−フルオロ−１−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノオキサリル）−シクロブチル］−２−（３−イソプロピル−ウレイド）−プロピオンアミド（Ｕ２）
カルバメートＣ１８のα−ヒドロキシアミド前駆物質を、ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌで０．５時間処理し、次いで凍結乾燥した。こうして得たＨＣｌ塩をＤＩＥＡ（２当量）およびイソシアン酸イソプロピル（１．１当量）でＣＨ２Ｃｌ２中において処理した。０．５時間後、ＬＣ／ＭＳ分析は転換の完了を示したので、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、有機層を１０％クエン酸（２×）および１０％  ＮａＨＣＯ３（２×）で洗浄し、疎水フリットを通して乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗製化合物を実施例１、工程ｄに記載した方法に従って酸化し、これにより表題化合物を得た。残留物を分取ＬＣ／ＭＳにより精製して、目的化合物を得た。Ｍ／Ｚ  ４８３．４  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８３】
実施例Ｕ３〜Ｕ５
下記の表に示す化合物は、実施例Ｕ２に概説した方法と同様にして、適宜なα−ヒドロキシアミドおよびイソシアン酸エチルを用いて製造された：
【０１８４】
【表４】
2013513598.tif 000028
【０１８５】
実施例Ａ３９
【０１８６】
【化２２】
2013513598.tif 000029
【０１８７】
工程ａ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  １−（１−ヒドロキシ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソエチル）シクロブチルカルバメート（Ａ３９−ａ）
｛１−［ヒドロキシ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−メチル］−シクロブチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２０９ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ，５ｍＬ）で一夜処理し、次いで濃縮した。得られた塩酸塩を、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２３２ｍｇ，０．８９ｍｍｏｌ）のジオキサン：水  ２：３中における溶液に添加し、その後ＮａＨＣＯ３（１８１ｍｇ，２．２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、４０分後に溶液をＤＣＭで希釈し、抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＮａＳＯ４）、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／イソ−ヘキサン，４：６−６：４）により精製して、表題化合物を白色固体として得た（２５７ｍｇ，９０％）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４６．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８８】
工程ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル  １−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソアセチル）シクロブチルカルバメート（Ａ３９−ｂ）
デス−マーチン・ペルヨージナン（６６８ｍｇ，１．５７ｍｍｏｌ）を、アルコールＡ３９−ａ（５０３ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＥ（７ｍｌ）中における溶液に添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでＮａ２Ｓ２Ｏ３（１０％水性）およびＮａＨＣＯ３（水性，飽和）で停止した。相を分離し、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮すると表題化合物が得られ、これをさらに精製せずに次の工程に用いた。ＭＳ  ｍ／ｚ  ４４４．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８９】
工程ｃ）（Ｚ）−４−（（２−（１−（１−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）シクロブチル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソエチリデン）ヒドラジンカルボキサミド）メチル）シクロヘキサン−カルボン酸（Ａ３９−ｃ）
ウェブの酸リンカー（Ｗｅｂｂ’ｓ  ａｃｉｄ  ｌｉｎｋｅｒ）（５９３ｍｇ，１．７８ｍｍｏｌ）を、ケトンＡ３９−ｂ（１．１２ｍｍｏｌ，粗製）のメタノール（２５ｍＬ）中における溶液に添加した。反応混合物を室温で一夜撹拌し、次いで濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ，０：１−１：９）により精製して、表題化合物を得た（０．６１ｇ，８５％）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ６４２．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９０】
工程ｄ）樹脂結合（Ｚ）−４−（（２−（１−（１−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）シクロブチル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソエチリデン）ヒドラジンカルボキサミド）メチル）シクロヘキサン−カルボン酸（Ａ３９−ｄ）
アミン樹脂（ＴＧ樹脂ＮｏｖａＳｙｎ，０１−６４−００４３，０．２５ｍｍｏｌ／ｇ，２ｇ，０．５ｍｍｏｌ）を、酸Ａ３９−ｃ（５４６ｍｇ，０．８５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（７６０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０６ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（５５０μＬ，４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１３ｍＬ）中における溶液に添加した。このスラリーを室温で一夜撹拌した。樹脂を濾過し、次いでＤＭＦ、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで交互に数回洗浄した。
【０１９１】
工程ｅ）樹脂結合４−（（（Ｚ）−２−（１−（１−（３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（１−メチルシクロペンチル）−２−オキソブチル）シクロブチル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソエチリデン）ヒドラジンカルボキサミド）メチル）シクロヘキサンカルボン酸（Ａ３９−ｅ）
樹脂Ａ３９−ｄ（０．５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（３０ｍＬ）で１時間処理し、次いで濾過し、ＤＭＦ（３×２０ｍＬ）で洗浄し、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで交互に数回洗浄した。得られたアミン樹脂をＤＭＦに懸濁したものを、Ｆｍｏｃ保護した２−アミノ−３−（１−メチル−シクロペンチル）−プロピオン酸（２９４ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３８０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１５３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（３５０μＬ，２ｍｍｏｌ）に添加した。このスラリーを室温で一夜撹拌した。樹脂を濾過し、前記に従って洗浄し、真空下で乾燥させた。
【０１９２】
工程ｆ）樹脂結合（Ｓ，Ｚ）−４−（（２−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−１−（１−（４−（１−メチルシクロペンチル）−２−オキソ−３−プロピオンアミドブチル）シクロブチル）−２−オキソエチリデン）ヒドラジンカルボキサミド）メチル）シクロヘキサンカルボン酸（Ａ３９−ｆ）
樹脂結合した化合物Ａ３９−ｅ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液（６ｍＬ）で１時間処理し、濾過し、ＤＭＦ（３×２０ｍＬ）で洗浄し、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで交互に数回洗浄した。得られたアミン樹脂をＤＭＦに懸濁したものに、カルボン酸エチル（１５μＬ，０．２ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（７６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（５５μＬ，０．４ｍｍｏｌ）を添加した。このスラリーを室温で一夜撹拌した。樹脂を濾過し、前記に従って洗浄し、真空下で乾燥させた。
【０１９３】
工程ｇ）（Ｓ）−Ｎ−（４−（１−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−２−オキソアセチル）シクロブチル）−１−（１−メチルシクロペンチル）−３−オキソブタン−２−イル）プロピオンアミド（Ａ３９）
樹脂結合したアミドＡ３９−ｅ（０．０５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ  ９５：５溶液（４ｍＬ）で４時間処理した。樹脂を濾過し、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３×５ｍＬ）で洗浄した。濾液および洗液をプールし、濃縮し、得られた粗生成物をＲＰ−ＬＣ−ＭＳ（アセトニトリル中０．１％  ＮＨ４ＯＨ−０．１％  水性ＮＨ４ＯＨ，９分間かけて４０−６５％）により精製した。全収率４％．ＭＳ  ｍ／ｚ  ４３１．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９４】
生物学的実施例
カテプシンＫタンパク質分解触媒活性の測定
カテプシンＫの簡便なアッセイは、ヒト組換え酵素、たとえばＰＤＢに記載されるものを用いて実施される。
【０１９５】
ＩＤ  ＢＣ０１６０５８  標準品；ｍＲＮＡ；ＨＵＭ；１６９９  ＢＰ
ＤＥ  ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）カテプシンＫ（濃化異骨症（ｐｙｃｎｏｄｙｓｏｓｔｏｓｉｓ）），ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡクローンＭＧＣ：２３１０７
ＲＸ  ＭＥＤＬＩＮＥ；ＲＸ  ＰＵＢＭＥＤ；１２４７７９３２
ＤＲ  ＲＺＰＤ；ＩＲＡＬｐ９６２Ｇ１２３４
ＤＲ  ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ；Ｐ４３２３５；
組換えカテプシンＫは、大腸菌（Ｅ  ｃｏｌｉ）、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）およびバキュロウイルス（Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）を含めた多様な市販の発現系において発現させることができる。精製された酵素はプロ配列を常法により除去することによって活性化される。
【０１９６】
反応速度定数の測定のための標準的なアッセイ条件は、蛍光源ペプチド基質、一般にＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを用い、下記のいずれかにおいて測定された：１００ｍＭ  Ｍｅｓ／Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．０；下記を含有：１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、または１００ｍＭリン酸ナトリウム，ｉｍＭ  ＥＤＴＡ，０．１％ＰＥＧ４０００  ｐＨ６．５、または１００ｍＭ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．５；下記を含有：５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび２０ｍＭシステイン；それぞれの例において場合により安定剤として１Ｍ  ＤＴＴを含有する。用いた酵素濃度は５ｎＭであった。基質原液はＤＭＳＯ中に１０ｍＭで調製された。スクリーニングは６０μＭの固定した基質濃度で実施され、詳細な反応速度試験は２５０μＭからの基質の倍数希釈液を用いて実施された。アッセイにおける全ＤＭＳＯ濃度を３％未満に保持した。すべてのアッセイを周囲温度で実施した。生成物の蛍光（３９０ｎｍで励起、４６０ｎｍで発光）をＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ蛍光プレートリーダーでモニターした。ＡＭＣ生成物の生成後１５分間にわたって生成物増加曲線を作成した。
【０１９７】
カテプシンＳのＫｉの測定
このアッセイ法はバキュロウイルス発現ヒトカテプシンＳおよびｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ蛍光基質（Ｂａｃｈｅから入手）を３８４ウェルプレート様式で用い、その際７種類の被験化合物を既知のカテプシンＳ阻害薬の比較品（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）を含む陽性対照と並行して試験できる。
【０１９８】
基質の希釈
２８０μＬ／ウェルの１２．５％  ＤＭＳＯを、９６ディープウェルポリプロピレンプレートの縦２列の横列Ｂ〜Ｈに添加する。７０μＬ／ウェルの基質を横列Ａに添加する。２×２５０μＬ／ウェルのアッセイ用緩衝液（１００ｍＭリン酸ナトリウム，１００ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ６．５）を横列Ａに添加し、混合し、プレートを横列Ｈまで倍数希釈する。
【０１９９】
阻害薬の希釈
１００μＬ／ウェルのアッセイ用緩衝液を、９６ウェルＶ底ポリプロピレンプレートの横４列の縦列２〜５および７〜１２に添加する。２００μＬ／ウェルのアッセイ用緩衝液を縦列１および６に添加する。
【０２００】
ＤＭＳＯ中に調製した第１被験化合物を、横最上列の縦列１に、一般に最初に測定したおおまかなＫｉの１０〜３０倍になる容量で添加する。このおおまかなＫｉは、予備試験から計算され、その際、１ｍＭ  ｂｏｃ−ＶＬＫ−ＡＭＣ（ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ原液をアッセイ用緩衝液中に１／１０希釈したもの）１０μＬ／ウェルを９６ウェルＭｉｃｒｏｆｌｕｏｒ（商標）プレートの横列Ｂ〜Ｈに、２０μｌ／ウェルを横列Ａに、分注する。各２μｌの１０ｍＭ被験化合物を、横列Ａ、縦列１〜１０の個別のウェルに添加する。１ｍＭ  ＤＴＴおよび２ｎＭカテプシンＳを含有する９０μｌのアッセイ用緩衝液を横列Ｂ〜Ｈの各ウェルに、１８０μｌを横列Ａに添加する。横列Ａをマルチチャンネルピペットで混合し、横列Ｇまで倍数希釈する。横列Ｈを混合し、蛍光分光光度計で読み取る。これらの読みは、Ｋｉの推定値を最大１００μＭまで求めるための競合阻害方程式に当てはめたＰｒｉｓｍデータである；設定Ｓ＝１００μＭおよびＫＭ＝１００μＭ。
【０２０１】
第２被験化合物を横最上列の縦列６、第３被験化合物を横第２列の縦列１などに添加する。１μＬの比較品を横最下列の縦列６に添加する。縦列１を混合し、縦列５まで倍数希釈する。縦列６を混合し、縦列１０まで倍数希釈する。
【０２０２】
５×１０μＬに設定した８チャンネル多段ピペットを用いて、１０μＬ／ウェルの基質を３８４ウェルのアッセイプレートに分配する。基質希釈プレートの第１縦列を、横列Ａから始めてアッセイプレートの全縦列へ分配する。マルチチャンネルピペットのティップ間隔は横列を１つ置きに正確にスキップするであろう。縦第２列を横列Ｂから始めて縦全列へ分配する。
【０２０３】
４×１０μＬに設定した１２チャンネル多段ピペットを用いて、１０μＬ／ウェルの阻害薬を３８４ウェルのアッセイプレートに分配する。阻害薬希釈プレートの横第１列を、Ａ１から始めてアッセイプレートの横列１つ置きに分配する。マルチチャンネルピペットのティップ間隔は縦列を１つ置きに正確にスキップするであろう。同様に、横第２、３および４列を、それぞれＡ２、Ｂ１およびＢ２から始めて横列および縦列へ１つ置きに分配する。
【０２０４】
２０ｍＬのアッセイ用緩衝液および２０μＬの１Ｍ  ＤＴＴを混合する。最終濃度２ｎＭになるのに十分なカテプシンＳを添加する。
Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ３８４などの分配器を用いて、３０μＬ／ウェルをアッセイプレートの全ウェルに添加し、Ａｓｃｅｎｔなどの蛍光分光光度計で読み取る。
【０２０５】
阻害薬に関係なく蛍光基質の酵素開裂の程度を反映する蛍光の読み（励起および発光の波長はそれぞれ３９０ｎｍおよび４６０ｎｍ；バンドパスフィルターを用いて設定）は、各ウェルに線速度適合する。
【０２０６】
各阻害薬につき全ウェルに適合した速度をＳｉｇｍａＰｌｏｔ  ２０００により競合阻害方程式に当てはめて、Ｖ、ＫｍおよびＫｉ値を決定する。
カテプシンＬのＫｉ
上記の操作に下記の修正を加えてカテプシンＬのＫｉの測定に用いる。
【０２０７】
酵素は市販のヒトカテプシンＬ（たとえば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）である。基質はＢａｈｃｅｍから入手できるＨ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣである。アッセイ用緩衝液は、１００ｍＭ酢酸ナトリウム  １ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ５．５）である。ＤＭＳＯ原液（１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）をアッセイ用緩衝液中に１０％に希釈する。酵素を、使用直前にアッセイ用緩衝液＋１ｍＭジチオトレイトール中に５ｎＭ濃度で調製する。１００％ＤＭＳＯ中に調製した１０ｍＭ阻害薬２μＬを、横列Ａ中へ分配する。１０μＬの５０μＭ基質（＝ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ原液の１／２００希釈液）。
【０２０８】
阻害試験
変動濃度の被験化合物につき上記のアッセイ法を用いて、潜在阻害薬をスクリーニングする。基質および阻害薬の緩衝化溶液に酵素を添加することにより反応を開始した。方程式１に従ってＫｉ値を計算した。
【０２０９】
【数１】
2013513598.tif 000030
【０２１０】
式中のν０は反応速度であり、Ｖは最大速度であり、Ｓは基質濃度であり、ミカエリス定数をＫＭとし、Ｉは阻害薬の濃度である。
選択した本発明化合物が示したカテプシンＳ、カテプシンＫおよびカテプシンＬの阻害をＫｉ値（ｎＭ）で表わしたものを表１に示す。
【０２１１】
【表５】
2013513598.tif 000031
【０２１２】
したがって、式Ｉの化合物はカテプシンＳの有効な阻害薬であり、しかも近縁のカテプシンＫおよびＬより選択的である。
透過性
この実験は、ヒト胃腸内腔の細胞を通した阻害薬の輸送を測定する。このアッセイ法は、継代数４０〜６０の周知のＣａｃｏ−２細胞を用いる。
【０２１３】
頂端側から側底側への輸送
一般に各化合物を２〜４ウェル内で試験する。側底側（ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ）および頂端側（ａｐｉｃａｌ）ウェルは、それぞれ１．５ｍＬおよび０．４ｍＬの輸送用緩衝液（ＴＢ）を収容し、被験物質の標準濃度は１０μＭである。さらに、試験溶液および緩衝液はすべて１％のＤＭＳＯを含有するであろう。実験の前に、輸送プレートを１０％の血清を含有する培地で３０分間プレコートして、プラスチック材料への非特異的結合を避ける。フィルター支持体上での２１〜２８日間の培養後に、細胞は透過性実験できる状態になる。
【０２１４】
輸送プレートｎｏ  １は、各４ウェルの横３列を含む。横列１を洗浄（ｗａｓｈ）、横列２を“３０分”、横列３を“６０分”と表示する。輸送プレートｎｏ  ２は４ウェルの横３列を含み、１つを横列４“９０分”、横列５“１２０分  と表示し、残りの横列は無表記とする。
【０２１５】
頂端側ウェルからの培地を取り出し、これらの装入物（ｉｎｓｅｒｔ）を、既に１．５ｍＬの輸送用緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４）を横列１〜５に入れて調製した装入物なしの２プレートのうち輸送プレート（プレートｎｏ．１）内の洗浄横列（Ｎｏ．１）へ移す。Ａ→Ｂスクリーニングに際して、側底側ウェル中のＴＢは１％のウシ血清アルブミンをも含有する。
【０２１６】
０．５ｍＬの輸送用緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭ  ＭＥＳ，ｐＨ６．５）を装入物に添加し、細胞単層をｐｏｌｙｍｉｘ振とう器内で輸送用緩衝液系中において３７℃で３０分間平衡化する。緩衝液系に対して平衡化した後、経表皮電気抵抗値（Ｔｒａｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｖａｌｕｅ）（ＴＥＥＲ）をＥＶＯＭチョップスティック（ｃｈｏｐ  ｓｔｉｃｋ）計測器により各ウェルにおいて測定する。ＴＥＥＲ値は通常は４００〜１０００Ω／ウェルである（用いる継代数に依存する）。
【０２１７】
輸送用緩衝液（ＴＢ，ｐＨ６．５）を頂端側から取り出し、この装入物を３０分の横列（Ｎｏ．２）へ移し、被験物質を含有する新たな４２５μＬのＴＢ（ｐＨ６．５）を頂端側（供与）ウェルに添加する。プレートをｐｏｌｙｍｉｘ振とう器内で３７℃において約１５０〜３００ｒｐｍの低い振とう速度でインキュベートする。
【０２１８】
横列２で３０分間のインキュベーション後、装入物を新たな予熱した側底側（受容）ウェルへ３０分毎に移す；横列３（６０分）、４（９０分）および５（１２０分）。
２５μＬの試料を頂端側溶液から約２分後および実験終了時に採取する。これらの試料は、実験開始時および終了時からの供与試料である。
【０２１９】
３００μＬを側底側（受容）ウェルから各計画時点で採取し、実験終了時にＴＥＥＲの実験後値を測定する。採集した試料全部に、試料中５０％の最終濃度になるようにアセトニトリルを添加する。採取した試料をＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳによる分析まで−２０℃で保存する。
【０２２０】
側底側から頂端側への輸送
一般に各化合物を２〜４ウェル内で試験する。側底側および頂端側のウェルは、それぞれ１．５ｍＬおよび０．４ｍＬのＴＢを収容し、被験物質の標準濃度は１０μＭである。さらに、被験溶液および緩衝液はすべて１％のＤＭＳＯを含有するであろう。実験の前に、輸送プレートを１０％の血清を含有する培地で３０分間プレコートして、プラスチック材料への非特異的結合を避ける。
【０２２１】
フィルター支持体上での２１〜２８日間の培養後に、細胞は透過性実験できる状態になる。頂端側ウェルからの培地を取り出し、これらの装入物を、装入物なしの新たなプレート（輸送プレート）内の洗浄横列（Ｎｏ．１）へ移す。
【０２２２】
輸送プレートは、４ウェルの横３列を含む。横列１を“洗浄”と表示し、横列３は“実験横列”である。輸送プレートは、洗浄横列Ｎｏ．１においては１．５ｍＬのＴＢ（ｐＨ７．４）で、実験横列Ｎｏ．３においては被験物質を含有する１．５５ｍＬのＴＢ（ｐＨ７．４）で予め調製されている（供与側）。
【０２２３】
０．５ｍＬの輸送用緩衝液（ＨＢＳＳ，２５ｍＭ  ＭＥＳ，ｐＨ６．５）を横列Ｎｏ．１の装入物に添加し、細胞単層をｐｏｌｙｍｉｘ振とう器内で輸送用緩衝液系中において３７℃で３０分間平衡化する。緩衝液系に対して平衡化した後、ＴＥＥＲ値をＥＶＯＭチョップスティック計測器により各ウェルにおいて測定する。
【０２２４】
輸送用緩衝液（ＴＢ，ｐＨ６．５）を頂端側から取り出し、この装入物を横列３へ移し、新たな４００μＬのＴＢ，ｐＨ６．５を装入物に添加する。３０分後、２５０μＬを頂端側（受容）ウェルから取り出して新たな輸送用緩衝液で置き換える。その後、１２０分間の実験終了時まで３０分毎に２５０μＬの試料を取り出して新たな輸送用緩衝液で置き換え、最後に実験終了時にＴＥＥＲの実験後値を測定する。２５μＬの試料を側底側（供与）コンパートメントから約２分後および実験終了時に採取する。これらの試料は、実験開始時および終了時からの供与試料である。
【０２２５】
採集した試料全部に、試料中５０％の最終濃度になるようにアセトニトリルを添加する。採取した試料をＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳによる分析まで−２０℃で保存する。
計算
時間に対する累積吸収画分（ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ａｂｓｏｒｂｅｄ）ＦＡｃｕｍの決定。ＦＡｃｕｍは下記から計算される：
【０２２６】
【数２】
2013513598.tif 000032
【０２２７】
ここで、ＣＲｉは期間ｉの終了時の受容側濃度であり、ＣＤｉは期間ｉの開始時の供与側濃度である。直線関係が得られるはずである。
透過係数（Ｐａｐｐ，ｃｍ／ｓ）の測定値は下記により計算される：
【０２２８】
【数３】
2013513598.tif 000033
【０２２９】
ここで、ｋは時間（分）の関数としての累積吸収画分（ＦＡｃｕｍ）の一次回帰により得た傾きとして規定した輸送速度（ｍｉｎ−１）であり、ＶＲは受容チャンバー内の容量（ｍＬ）であり、Ａはフィルター面積（ｃｍ２）である。
【０２３０】
基準化合物
【０２３１】
【表６】
2013513598.tif 000034
【０２３２】
胃腸組織の透過性が大きいほど、より多量投与した、より低い透過性の化合物と同様な曝露レベルを達成するために、より少ない用量の使用が可能になるという点で有利である。低い用量は、１日量の物品のコストが抑えられるという点で有利であり、これは長期間服用される薬物において必須のパラメーターである。
【０２３３】
特許および特許出願を含めて本出願において参照したすべての参考文献を、可能な限り完全に本明細書に援用する。
本明細書および特許請求の範囲の全体を通して、内容から別のことが要求されない限り、‘含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）’という語、ならびにその変形、たとえば‘ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ’および‘ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ’は、記載した整数、工程、整数のグループまたは工程のグループを含むけれども他のいずれかの整数、工程、整数のグループまたは工程のグループを除外しないことを表わすのは理解されるであろう。
【０２３４】
本明細書および特許請求の範囲が一部を形成する出願をいずれか後続出願において優先権の基礎として採用できる。そのような後続出願の特許請求の範囲は、本明細書に記載するいずれかの特徴または特徴の組合わせに関するものであってもよい。それらは生成物、組成物、方法または用途請求項の形をとることができ、例示であって限定ではないが、本特許請求の範囲を内包することができる。
【国際調査報告】
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