(57)【要約】  本発明は、ベータ−セクレターゼ（またベータ−サイトアミロイド開裂酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤である新規な４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル−アミン誘導体に関する。本発明はまたそのような化合物を含有して成る製薬学的組成物、そのような化合物および組成物の製造方法およびそのような化合物および組成物をベータ−セクレターゼが関与する障害、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症などを予防および治療する目的で用いることにも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2013540740.tif 000118
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、フルオロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびＣ３−６シクロアルキルから成る群より選択されるか、或はＲ１とＲ２がこれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３−６シクロアルカンジイル環を形成していてもよく、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−３アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールから成る群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、独立して、Ｃ（Ｒ４）またはＮであるが、但しＮを表すのはそれらの中の２つ以下であることを条件とし、各Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキル、シアノ、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択され、
Ｌは、結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５は水素またはＣ１−３アルキルであり、
Ｒ６は、水素またはトリフルオロメチルであり、
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリルおよびオキサジアゾリルから成る群より選択される］
で表される化合物またはこれの互変異性体もしくは立体異性形態物、またはこれの付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が独立して水素およびＣ１−３アルキルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４が独立してＣ（Ｒ４）でありかつ各Ｒ４が水素およびハロから選択され、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがフェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジルおよびピラジルから成る群より選択される、
請求項１記載の化合物またはこれの付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が水素であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４がＣＨであり、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがクロロで置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジルおよびピリミジルから成る群より選択される、
請求項１記載の化合物またはこれの付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項４】
Ｒ３で置換されている炭素原子がＲ配置を有する請求項１記載の化合物。
【請求項５】
製薬学的に許容される担体および請求項１から４のいずれか１項記載の化合物を治療的に有効な量で含有して成る製薬学的組成物。
【請求項６】
請求項５記載の製薬学的組成物の製造方法であって、製薬学的に許容される担体を治療的に有効な量の請求項１から４のいずれか１項記載の化合物と密に混合することを特徴とする方法。
【請求項７】
アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症の治療、防止または予防で用いるための請求項１から４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症から成る群より選択される障害を治療する方法であって、それを必要としている被験体に請求項１から４のいずれか１項記載の化合物または請求項５記載の製薬学的組成物を治療的に有効な量で投与することを含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベータ−セクレターゼ（またベータ−サイトアミロイド開裂酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤としての新規な４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル−アミン誘導体に関する。本発明はまたそのような化合物を含有して成る製薬学的組成物、そのような化合物および組成物の製造方法およびそのような化合物および組成物をベータ−セクレターゼが関与する障害、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症などを予防および治療する目的で用いることにも関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は加齢に関連した神経変成性疾患である。ＡＤ患者は認知欠損および記憶障害に加えて行動的問題、例えば不安などに苦しむ。ＡＤにかかった患者の９０％以上が散発型の障害を示す一方で家族性または遺伝性はその症例の１０％未満である。米国では６５歳でＡＤにかかるのは１０人中約１人であるが、８５歳でＡＤにかかるのは２人に１人である。最初に診断されてからの平均余命は７−１０年であり、そしてＡＤ患者は非常に費用のかかる介護付住宅または家族いずれかによる広範な介護を必要とする。老齢者人口の数が増えるにつれてＡＤの医療的懸念が増している。現在利用可能なＡＤ療法は単にその病気の症状を取り扱うだけであり、それには認知性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に加えてこの病気に関連した行動問題を制御するための抗不安薬および抗精神病薬が含まれる。
【０００３】
ＡＤ患者の脳に顕著な病理学的特徴は神経原線維のもつれであり、これはタウ蛋白質の過燐酸化およびアミロイド班によって生じ、それらはベータ−アミロイド１−４２（Ａｂｅｔａ  １−４２）ペプチドの凝集によって生じる。Ａｂｅｔａ  １−４２はオリゴマーを形成した後に原線維を形成しそして最終的アミロイド班を形成する。そのオリゴマーおよび原線維が特に神経毒を示すと考えられており、それによってＡＤに関連した神経学的障害の大部分が引き起こされる可能性がある。Ａｂｅｔａ  １−４２の産生を防止する薬剤は、ＡＤを治療するための予防維持薬になる可能性がある。Ａｂｅｔａ  １−４２は、７７０個のアミノ酸で構成されるアミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）から生じる。Ａｂｅｔａ  １−４２のＮ末端をベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）が開裂させた後、ガンマ−セクレターゼがＣ末端を開裂させる。ガンマ−セクレターゼはＡｂｅｔａ  １−４２に加えてまたＡｂｅｔａ  １−４０（これが主要な開裂生成物である）ばかりでなくＡｂｅｔａ  １−３８およびＡｂｅｔａ  １−４３も遊離させる。これらのＡｂｅｔａ形態物もまた凝集してオリゴマーおよび原線維を生じ得る。このように、ＢＡＣＥの阻害剤はＡｂｅｔａ  １−４２ばかりでなくＡｂｅｔａ  １−４０、Ａｂｅｔａ  １−３８およびＡｂｅｔａ  １−４３の産生も防止すると期待されることで、ＡＤ治療における治療薬になる可能性がある。
【発明の概要】
【０００４】
発明の要約
本発明は、式（Ｉ）
【０００５】
【化１】
2013540740.tif 000002
【０００６】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、フルオロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびＣ３−６シクロアルキルから成る群より選択されるか、或はＲ１とＲ２がこれらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３−６シクロアルカンジイル環を形成していてもよく、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−３アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールから成る群より選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、独立して、Ｃ（Ｒ４）またはＮであるが、但しＮを表すのはそれらの中の２つ以下であることを条件とし、各Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキル、シアノ、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択され、
Ｌは、結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５は水素またはＣ１−３アルキルであり、
Ｒ６は、水素またはトリフルオロメチルであり、
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルおよびモノ−およびポリハロ−Ｃ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリルおよびオキサジアゾリルから成る群より選択される］
で表される化合物またはこれの互変異性体もしくは立体異性形態物、またはこれの付加塩もしくは溶媒和物に向けたものである。
【０００７】
本発明の実例は、製薬学的に許容される担体およびこの上に記述した化合物のいずれかを含有して成る製薬学的組成物である。本発明の実例は、この上に記述した化合物のいずれかと製薬学的に許容される担体を混合することで生じさせた製薬学的組成物である。本発明の実例は、この上に記述した化合物のいずれかと製薬学的に許容される担体を混合することを含んで成る製薬学的組成物製造方法である。
【０００８】
本発明の実例は、ベータ−セクレターゼ酵素が媒介する障害を治療する方法であり、この方法は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。
【０００９】
本発明のさらなる実例は、ベータ−セクレターゼ酵素を阻害する方法であり、この方法
は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。
【００１０】
本発明の一例は、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症から成る群より選択される障害、好適にはアルツハイマー病を治療する方法であり、この方法は、それを必要としている被験体にこの上に記述した化合物または製薬学的組成物のいずれかを治療的に有効な量で投与することを含んで成る。
【００１１】
本発明の別の例は、この上に記述した化合物のいずれかを下記の治療を必要としている被験体に用いる例である：（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老衰、（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）卒中に関連した認知症、（ｈ）パーキンソン病に関連した認知症および（ｉ）ベータアミロイドに関連した認知症。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
本発明は、本明細書の上で定義した如き式（Ｉ）で表される化合物およびこれらの製薬学的に許容される塩および溶媒和物に向けたものである。前記式（Ｉ）で表される化合物はベータ−セクレターゼ酵素（またベータ−サイト開裂酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤であり、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、卒中に関連した認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に関連した認知症またはベータアミロイドに関連した認知症、好適にはアルツハイマー病、軽度認知障害または認知症、より好適にはアルツハイマー病の治療で用いるに有用である。
【００１３】
本発明の１つの態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、
Ｒ１およびＲ２が独立して水素およびＣ１−３アルキルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４が独立してＣ（Ｒ４）でありかつ各Ｒ４が水素およびハロから選択され、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがフェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−３アルキルおよびＣ１−３アルキルオキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジル、ピリミジルおよびピラジルから成る群より選択される。
【００１４】
本発明の別の態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、Ｒ１およびＲ２が水素であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４がＣＨであり、
Ｌが結合または−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５が水素であり、
Ａｒがホモアリールまたはヘテロアリールであり、
ホモアリールがクロロで置換されているフェニルであり、
ヘテロアリールが各々が場合によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチルおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されていてもよいピリジルおよびピリミジルから成る群より選択される。
【００１５】
別の態様では、Ｒ３で置換されている炭素原子がＲ配置を有する。
【００１６】
本発明の別の態様またはこれの付加塩もしくは溶媒和物では、Ｒ１およびＲ２が水素であり、
Ｘ１がＣＨまたはＣＦでありそしてＸ２、Ｘ３、Ｘ４がＣＨであり、
Ｌが−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−であり、かつＲ５が水素であり、
Ａｒが１または２個のハロ原子で置換されているピリジニルまたはメトキシで置換されているピラジニルである。
【００１７】
定義
「ハロ」はフルオロ、クロロおよびブロモを表し、「Ｃ１−３アルキル」は炭素原子数が１、２または３の直鎖もしくは分枝飽和アルキル基、例えばメチル、エチル、１−プロピルおよび２−プロピルなどを表し、「Ｃ１−３アルキルオキシ」はＣ１−３アルキルがこの上で定義した通りであるエーテル基を表し、「モノ−およびポリハロＣ１−３アルキル」は１、２、３または可能ならばそれ以上のハロ原子（この上で定義した如き）で置換されているこの上で定義した如きＣ１−３アルキルを表し、「モノ−およびポリハロＣ１−３アルキルオキシ」はモノ−およびポリハロＣ１−３アルキルがこの上で定義した通りであるエーテル基を表し、「Ｃ３−６シクロアルキル」はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを表し、「Ｃ３−６シクロアルカンジイル」はシクロプロパンジイル、シクロブタンジイル、シクロペンタンジイルおよびシクロヘキサンジイルなどの如き二価基を表す。
【００１８】
本明細書で用いる如き用語「被験体」は、治療、観察または実験の対象であるか或はであった動物、好適には哺乳動物、最も好適にはヒトを指す。
【００１９】
本明細書で用いる如き用語「治療的に有効な量」は、研究者、獣医、医者または他の臨床医が探求している組織、動物またはヒトにおける生物学的または医学的反応（治療すべき病気または障害の症状の軽減を包含）を引き出す活性化合物もしくは薬剤の量を意味する。
【００２０】
本明細書で用いる如き用語「組成物」は、特定材料を特定量で含有して成る製品ばかりでなく特定材料を特定量で組み合わせることによって直接または間接的にもたらされる生成物のいずれも包含することを意図する。
【００２１】
式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩、水和物および溶媒和物のいくつかはキラリティーの中心を１個以上含有していることで立体異性形態物として存在する可能性があることは理解されるであろう。
【００２２】
本明細書の上または以下で用いる如き用語「立体異性形態物」は、式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩が取り得る可能な立体異性形態物の全部を定義するものである。別の方法で記述もしくは表示しない限り、化合物の化学的表示はあらゆる可能な立体化学的異性形態物の混合物［前記混合物は基本的分子構造を有するあらゆるジアステレオマーおよび鏡像異性体を含有する］ばかりでなく他の異性体を実質的に含有しない、即ち伴う他の異性体の含有量が１０％未満、好適には５％未満、特に２％未満、最も好適には１％未満の式（Ｉ）に従う個々の異性形態物の各々およびこれらの塩、溶媒和物を表す。
【００２３】
本発明に従う化合物がキラル中心を少なくとも１個有する場合、相当して、それらは鏡像異性体として存在する可能性がある。本化合物がキラル中心を２個以上有する場合、それらは追加的にジアステレオマーとして存在する可能性もある。そのような異性体およびこれらの混合物の全部が本発明の範囲内に含まれると理解されるべきである。本化合物が鏡像異性体として存在する場合、その鏡像異性体は好適には鏡像異性体過剰度が約８０％
に等しいか或はそれ以上、より好適には鏡像異性体過剰度が約９０％に等しいか或はそれ以上、更により好適には鏡像異性体過剰度が約９５％に等しいか或はそれ以上、更により好適には鏡像異性体過剰度が約９８％に等しいか或はそれ以上、最も好適には鏡像異性体過剰度が約９９％に等しいか或はそれ以上の状態で存在する。同様に、本化合物がジアステレオマーとして存在する場合、そのジアステレオマーはジアステレオマー過剰度が約８０％に等しいか或はそれ以上、より好適にはジアステレオマー過剰度が約９０％に等しいか或はそれ以上、更により好適にはジアステレオマー過剰度が約９５％に等しいか或はそれ以上、更により好適にはジアステレオマー過剰度が約９８％に等しいか或はそれ以上、最も好適にはジアステレオマー過剰度が約９９％に等しいか或はそれ以上の状態で存在する。
【００２４】
更に、本発明の化合物が示す結晶形態のいくつかは多形体としても存在する可能性があり、このように、それらを本発明に包含させることを意図する。加うるに、本発明の化合物のいくつかは水と一緒に溶媒和物（即ち水和物）または一般的有機溶媒と一緒に溶媒和物を生じる可能性があり、そのような溶媒和物もまた本発明の範囲内に含めることを意図する。
【００２５】
本発明の化合物の塩を薬剤で用いる場合、それは無毒の「製薬学的に許容される塩」を指す。しかしながら、本発明に従う化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を製造しようとする時には他の塩も有用であり得る。本化合物の適切な製薬学的に許容される塩には、例えば本化合物の溶液と製薬学的に許容される酸、例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、こはく酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸または燐酸などの溶液を混合することなどで生じ得る酸付加塩が含まれる。更に、本発明の化合物が酸部分を持つ場合、それの適切な製薬学的に許容される塩にはアルカリ金属の塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩など、アルカリ土類金属の塩、例えばカルシウム塩またはマグネシウム塩など、および適切な有機配位子を用いて生じさせた塩、例えば第四級アンモニウム塩などが含まれ得る。
【００２６】
製薬学的に許容される塩を生じさせようとする時に使用可能な代表的な酸には、これらに限定するものでないが、下記が含まれる：酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、樟脳スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、蟻酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルコロン酸、Ｌ−グルタミン酸、ベータ−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、しゅう酸、パルミチン酸、パモ酸、燐酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、こはく酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸およびウンデシレン酸。製薬学的に許容される塩を生じさせようとする時に使用可能な代表的な塩基には、これらに限定するものでないが、下記が含まれる：アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、第二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノー
ルアミン、トロメタミンおよび水酸化亜鉛。
【００２７】
本発明の化合物の化学名はＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅが同意する命名規則に従って生じさせたものである。式（Ｉ）に従う化合物はまた互変異性形態としても存在し得る。そのような形態をこの上に示した式に明確には示していないが、それらも本発明の範囲内に包含させることを意図する。
【００２８】
Ａ．  最終的化合物の調製
実験手順１
式（Ｉ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩ）で表される中間体化合物と適切なアンモニア源、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水溶液などを反応スキーム（１）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えば水またはメタノールなど中で熱条件、例えば反応混合物を６０℃に例えば６時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（１）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。
【００２９】
【化２】
2013540740.tif 000003
【００３０】
実験手順２
Ｌが−Ｎ（Ｒ５）ＣＯ−である式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＩＶ）で表される中間体を反応スキーム（２）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど中で適切な塩基、例えばＫ３ＰＯ４など、銅触媒、例えばＣｕＩなどおよびジアミン、例えば（１Ｒ，２Ｒ）−（−）−１，２−ジアミノシクロヘキサンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１８０℃に例えば１３５分間加熱することなどで実施する。反応スキーム（２）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。
【００３１】
【化３】
2013540740.tif 000004
【００３２】
実験手順３
加うるに、式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される中
間体化合物と式（Ｖ）で表される中間体を反応スキーム（３）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で適切な塩基、例えばトリエチルアミンなどを存在させ、縮合剤、例えばヘキサフルオロ燐酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム［ＨＡＴＵ、ＣＡＳ  １４８８９３−１０−１］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を２５℃に例えば２時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（３）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。
【００３３】
【化４】
2013540740.tif 000005
【００３４】
実験手順４
加うるに、式（Ｉ−ａ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ｂ）で表される中間体化合物と式（ＶＩ）で表される中間体を反応スキーム（４）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で適切な塩基、例えばピリジンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物を２５℃に例えば２時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（４）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＹはハロである。
【００３５】
【化５】
2013540740.tif 000006
【００３６】
実験手順５
Ｌが結合である式（Ｉ−ｂ）に従う最終的化合物の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＶＩＩ）で表される中間体を反応スキーム（５）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な適切な溶媒、例えば不活性溶媒の混合物、例えば１，４−ジオキサン／エタノールなど中で適切な塩基、例えばＫ３ＣＯ３水溶液など、Ｐｄ錯体触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［ＣＡＳ  １４２２１−０１−３］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１５０℃に１０分から３０分間加熱することなどで実施する。反応スキーム（５）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ７およびＲ８は水素またはアルキルであってもよいか或は一緒になって例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ま
たは−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−などで表される二価基を形成していてもよい。
【００３７】
【化６】
2013540740.tif 000007
【００３８】
この上の調製に示した数多くの中間体および出発材料は公知化合物（これらの調製は当該技術で公知の前記もしくは同様な化合物の調製方法に従って実施可能である）であり、そしていくつかの中間体は新規である。そのような数多くの調製方法を本明細書の以下により詳細に記述する。
【００３９】
Ｂ．  中間体化合物の調製
実験手順６
式（ＩＩ）に従う中間体の調製は、式（ＶＩＩＩ）で表される中間体化合物とチオアミドの合成に適した硫黄供与反応体、例えば五硫化燐または２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジフォスフェタン２，４−ジスルフィド［Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬、ＣＡＳ  １９１７２−４７−５］などを反応スキーム（６）に従って反応させることで実施可能であり、反応を反応に不活性な溶媒、例えばテトラヒドロフランまたはトルエンなど中で適切な塩基、例えばピリジンなどを存在させて熱条件、例えば反応混合物を９０℃に例えば１８時間加熱することなどで実施する。反応スキーム（６）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。
【００４０】
【化７】
2013540740.tif 000008
【００４１】
実験手順７
Ｌが結合である式（ＶＩＩＩ）に従う中間体の調製は、式（ＩＸ−ａ）で表される中間体化合物と式（ＶＩＩ）で表される中間体を反応スキーム（７）に従って反応させることで実施可能であり、反応を不活性な溶媒の適切な混合物、例えば１，４−ジオキサン／水など中で適切な塩基、例えばＮａ２ＣＯ３水溶液など、Ｐｄ錯体触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）［ＣＡＳ  １４２２１−０１−３］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１５０℃に１５分間加熱することなどで実施する。反応ス
キーム（７）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ７およびＲ８は水素またはアルキルであってもよいか或は一緒になって例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−または−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−などで表される二価基を形成していてもよい。
【００４２】
【化８】
2013540740.tif 000009
【００４３】
実験手順８
式（ＩＩＩ−ｂ）に従う中間体の調製は、式（ＩＩＩ−ａ）で表される相当する中間体化合物を用いて反応スキーム（８）に従って当該技術分野で公知のＢｕｃｈｗａｌｄ−Ｈａｒｔｗｉｇ型カップリング手順に従うことで実施可能である。前記カップリングは式（ＩＩＩ−ａ）で表される中間体化合物に式（Ｘ）で表される中間体を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばエタノールまたは不活性溶媒の混合物、例えばエタノールまたは不活性溶媒の混合物、例えば１，２−ジメトキシエタン／水／エタノールなど中で適切な塩基、例えばＫ３ＰＯ４水溶液またはＣｓ２ＣＯ３など、Ｐｄ錯体触媒、例えば［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）［ＣＡＳ  ７２２８７−２６−４］または二酢酸トランス−ビス（ジシクロヘキシルアミン）パラジウム［ＤＡＰＣｙ、ＣＡＳ  ６２８３３９−９６−８］などを存在させて熱条件、例えば反応混合物を８０℃に例えば２０時間加熱するか或は例えば反応混合物をマイクロ波照射下で１３０℃に例えば１０時間加熱することなどで実施可能である。反応スキーム（８）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りでありそしてＷはハロである。Ｒ５は水素またはＣ１−３アルキルである。
【００４４】
【化９】
2013540740.tif 000010
【００４５】
実験手順９
加うるに、Ｒ５が水素である式（ＩＩＩ−ｂ）に従う中間体の調製は、式（ＩＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体を用いて反応スキーム（９）に従って当該技術分野で公知のニトロからアミノを生じさせる還元手順に従うことで実施可能である。前記還元は便利に当該技術分野で公知の接触水添手順に従って実施可能である。例えば、前記還元は反応体を水素雰囲気下で適切な触媒、例えば炭に担持されているパラジウム、炭に担持されてい
る白金、ラネーニッケルなどの触媒を存在させて撹拌することで実施可能である。適切な溶媒は、例えば水、アルカノール、例えばメタノール、エタノールなど、エステル、例えば酢酸エチルなどである。前記還元反応速度を速めようとする場合には、反応混合物の温度を高くしそして／または圧力を高くするのが有利であり得る。反応体および反応生成物が有する特定の官能基の好ましくないさらなる水添を防止しようとする場合には、触媒毒、例えばチオフェンなどを反応混合物に添加することでそれを行うことができる。反応スキーム（９）に示す変項は全部式（Ｉ）で定義した通りである。
【００４６】
【化１０】
2013540740.tif 000011
【００４７】
実験手順１０
式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に以下の反応スキーム（１０）、（１１）、（１２）および（１３）に示す反応段階に従って実施可能である。
【００４８】
反応スキーム（１０）に示す式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）で表されるアミジン誘導体の調製は便利に式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表される相当するチオアミド誘導体を用いて当該技術分野で公知のチオアミドからアミジンを生じさせる変換手順（反応段階Ａ）に従うことで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表される中間体化合物にアンモニア源、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水溶液などを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えば水またはメタノールなど中で熱条件、例えば反応混合物を６０℃に例えば６時間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。
【００４９】
反応スキーム（１０）に示す式（ＸＩ−ａ）および（ＸＩ−ｃ）で表されるチオアミド誘導体の調製は、式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表されるアミド誘導体を用いて当該技術分野で公知のチオン化手順（反応段階Ｂ）に従うことで実施可能である。前記変換は便利に式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物にチオン化剤、例えば五硫化燐または２，４−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジフォスフェタン２，４−ジスルフィド［Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬、ＣＡＳ  １９１７２−４７−５］などを用いた処理を反応に不活性な溶媒、例えばテトラヒドロフランまたは１，４−ジオキサンなど中で熱条件、例えば反応混合物を５０℃に例えば５０分間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。
【００５０】
反応スキーム（１０）に示す式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）で表されるアミド誘導体の調製は、式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知の環化手順（反応段階Ｃ）に従うことで実施可能である。前記環化は便利に式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物に適切な塩基、例えば水素化ナトリウムなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で−８０℃から１００℃、好適には−１５℃から２５℃で３０分か
ら１００時間、好適には１時間から２４時間受けさせることで実施可能である。
【００５１】
【化１１】
2013540740.tif 000012
【００５２】
前記反応スキーム（１０）に示す式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は、式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知のＮ−アシル化手順（反応段階Ｄ）に従うことで実施可能である。前記Ｎ−アシル化は便利に式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）
で表される中間体化合物に式（ＸＩＶ）で表される中間体化合物を用いた処理を塩基、例えば重炭酸ナトリウムなど、または塩基混合物、例えば重炭酸ナトリウム／Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばエタノールまたは不活性溶媒混合物、例えばエタノール／ジクロロメタンなど中で−８０℃から１００℃、好適には−１５℃から２５℃で３０分から１００時間、好適には１時間から２４時間受けさせることで実施可能である。
【００５３】
反応スキーム（１１）に示す式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、Ｚ１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などでありそしてＺ２がアミンの適切な保護基、例えばｔ−ブタンスルフィニル基などである式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物を用いて当該技術分野で公知のＮ−脱保護手順（反応段階Ｅ）に従うことで実施可能である。前記Ｎ−脱保護は便利に式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切な酸性作用剤、例えば塩酸などを用いた処理を適切な不活性溶媒、例えば１，４−ジオキサンなど中で中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば１時間受けさせることで実施可能である。
【００５４】
反応スキーム（１１）に示す式（ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のイミンからアルキルアミンへの変換手順（反応段階Ｆ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＹがハロである式（ＸＶＩ）で表される中間体化合物を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば０℃などで例えば２時間受けさせることで実施可能である。
【００５５】
【化１２】
2013540740.tif 000013
【００５６】
前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のケトンからイミンへの変換手順（反応段階Ｇ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＺ２がアルキルスルフィニル基、例えばｔ−ブタンスルフィニル基などである式（ＸＶＩＩＩ）で表される中間体化合物を用いた処理を適切なルイス
酸触媒、例えばチタン（ＩＶ）イソプロポキサイドなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばトルエンなど中で熱条件、例えば反応混合物を１１０℃に例えば２４時間加熱することなどで受けさせることで実施可能である。
【００５７】
前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順（反応段階Ｈ）に従って起こさせることで実施可能である。前記酸化は便利に式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に酸化剤、例えばＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン［ＣＡＳ：８７４１３−０９−０］を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で低温、例えば０℃などで例えば１０分間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば１時間受けさせることで実施可能である。
【００５８】
前記反応スキーム（１１）に示す式（ＸＸ−ａ）および（ＸＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のオルト−リチオ化−アルキル化手順（反応段階Ｉ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切な有機リチウム反応体、例えばｎ−ブチルリチウムなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば−７８℃で例えば４５分間受けさせた後に式（ＸＸＩ−ａ）および（ＸＸＩ−ｃ）で表される中間体化合物を用いた処理を低温、例えば−７８℃で例えば４５分間受けさせることで実施可能である。
【００５９】
Ｚ１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などである式（ＸＸＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に文献に記述されている当該技術分野で公知のＮ−保護型の手順に従って実施可能である。
【００６０】
【化１３】
2013540740.tif 000014
【００６１】
加うるに、前記反応スキーム（１２）に示すＲ６が水素である式（ＸＩＸ−ａ）および（ＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のＷｅｉｎｒｅｂアミドからケトンへの変換手順（反応段階Ｊ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＹがハロである式（ＸＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物を用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば−７８℃で例えば１時間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば５時間受けさせることで実施可能である。
【００６２】
前記反応スキーム（１２）に示す式（ＸＸＩＶ−ａ）および（ＸＸＩＶ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のＷｅｉｎｒｅｂアミド生成手順（反応段階Ｋ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される相当する中間体化合物にＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンを用いた処理を適切な塩基、例えばイソプロピルマグネシウムクロライドなどを存在させて反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で低温、例えば−７８℃などで例えば１時間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃などで例えば２４時間受けさせることで実施可能である。
【００６３】
Ｚ１がピラゾール系の適切な保護基、例えばジメチルスルファモイル基などである式（ＸＸＶ−ａ）および（ＸＸＶ−ｃ）で表される中間体化合物は商業的に入手可能である。
【００６４】
加うるに、前記反応スキーム（１３）に示すＲ６が水素である式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、Ｚ３がアミンの保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニル基などである式（ＸＸＶＩ−ａ）および（ＸＸＶＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物（反応段階Ｅ）を用いて当該技術分野で公知のＮ−脱保護手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順と同じ手順などに従うことで実施可能である（反応段階Ｅ）。
【００６５】
前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩ−ａ）および（ＸＸＶＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のピラゾール環形成手順（反応段階Ｌ）に従って起こさせることで実施可能である。前記ピラゾール環形成は便利に式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に処理を適切な不活性溶媒、例えばエタノールなど中でヒドラジンを存在させて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば１時間受けさせることで実施可能である。
【００６６】
前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩＩ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順などに従って起こさせることで実施可能である（反応段階Ｈ）。
【００６７】
【化１４】
2013540740.tif 000015
【００６８】
前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＸＶＩＩＩ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルデヒドからヒドロキシアルキニルへの変換手順（反応段階Ｍ）に従って起こさせることで実施可能である。前記変換は便利に式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）で表される相当する中間体化合物に適切なマグネシウム反
応体、例えばエチニルマグネシウムブロマイドなどを用いた処理を反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなど中で低温、例えば０℃で例えば１０分間に続いて中程度に高い温度、例えば２５℃で例えば３０分間受けさせることで実施可能である。
【００６９】
前記反応スキーム（１３）に示す式（ＸＸＩＸ−ａ）および（ＸＸＩＸ−ｃ）に従う中間体の調製は、式（ＸＸＸ−ａ）および（ＸＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の反応を当該技術分野で公知のアルコールからカルボニルへの酸化手順、例えば反応スキーム（１１）に記述した手順などに従って起こさせることで実施可能である（反応段階Ｈ）。
【００７０】
Ｚ３がアミンの保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニル基などである式（ＸＸＸ−ａ）および（ＸＸＸ−ｃ）で表される中間体化合物の調製は一般に文献に記述されている当該技術分野で公知のＳｔｒｅｃｋｅｒ型手順に従って実施可能である。
【００７１】
製薬学的組成物
本発明は、また、ベータ−セルレターゼの阻害が有益である病気、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、卒中に関連した認知症、パーキンソン病に関連した認知症およびベータアミロイドに関連した認知症などを予防または治療するための組成物も提供する。前記組成物は治療的に有効な量の式（Ｉ）に従う化合物および製薬学的に許容される担体または希釈剤を含有して成る。
【００７２】
本有効成分を単独で投与することも可能ではあるが、それを製薬学的組成物として存在させる方が好適である。従って、本発明は、更に、本発明に従う化合物を製薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒に含有して成る製薬学的組成物も提供する。そのような担体または希釈剤は本組成物に含める他の材料と適合しかつそれの受益者にとって有害ではない意味で「許容される」べきである。
【００７３】
本発明の製薬学的組成物の調製は薬学的技術で良く知られている方法のいずれかを用いて実施可能である。治療的に有効な量の個々の化合物を有効成分として塩基形態または付加塩形態で製薬学的に許容される担体との密な混合物として一緒にするが、前記担体に持たせる形態は投与に望まれる製剤の形態に応じて幅広く多様であり得る。本製薬学的組成物を好ましくは単位投薬形態物、好適には全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどの形態にする。例えば、本組成物を経口投薬形態物として調製する時、通常の製薬学的媒体のいずれも使用可能であり、例えば液状の経口用製剤、例えば懸濁液、シロップ、エリキシルおよび溶液などの場合には水、グリコール、油、アルコールなど、または粉末、ピル、カプセルおよび錠剤の場合には固体状担体、例えば澱粉、糖、カオリン、滑剤、結合剤、崩壊剤などを用いてもよい。投与が容易なことから錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形態物に相当し、この場合には明らかに固体状の製薬学的担体を用いる。非経口用組成物の場合の担体は少なくとも大部分が一般に無菌水を含んで成るが、他の材料、例えば溶解性を補助する材料などを含有させることも可能である。例えば、注射可能溶液を調製することも可能であり、その場合の担体は食塩水溶液、グルコース溶液、または食塩水とグルコース溶液の混合物を含んで成る。また、注射可能懸濁液を調製することも可能であり、この場合には適切な液状担体、懸濁剤などを用いてもよい。経皮投与に適した組成物の場合、その担体に場合により浸透促進剤および／または適切な湿潤剤を含めてもよく、それらを場合によりいずれかの性質を有する適切な添加剤と少しの比率で組み合わせてもよく、そのような添加剤は、皮膚に対して有害な影響を大きな度合では引き起こさない添加剤である。前記添加剤は皮膚への投与を助長しそして／または所望組成物の調製に役立ち得る。そのような組成物はいろいろな様式で投与可能であり、例えば経皮パッチ、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）、軟膏などとして投与可能である。
【００７４】
上述した製薬学的組成物を投薬単位形態に構築するのが特に有利である、と言うのは、その方が投与が容易でありかつ投薬が均一であるからである。本明細書および本明細書の請求項で用いる如き「投薬単位形態物」は、各単位が要求される製薬学的担体と一緒に所望治療効果をもたらすように計算して前以て決めておいた量の有効成分を含有する単位投薬物として用いるに適した物理的に個々別々の単位を指す。そのような投薬単位形態物の例は錠剤（切り目が入っている錠剤または被覆されている錠剤を包含）、カプセル、ピル、粉末パケット、ウエハース、注射可能溶液もしくは懸濁液、茶サジ１杯、テーブルスプーン１杯など、そしてそれらを複数に分割したものである。
【００７５】
投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）で表される個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。
【００７６】
本製薬学的組成物の有効成分含有量を投与様式に応じて０．０５から９９重量％、好適には０．１から７０重量％、より好適には０．１から５０重量％にしかつ製薬学的に許容される担体の含有量を１から９９．９５重量％、好適には３０から９９．９重量％、より好適には５０から９９．９重量％にする（パーセントは全部当該組成物の総重量を基準）。
【００７７】
本化合物は全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどで使用可能である。本化合物を好適には経口投与する。投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）に従う個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。
【００７８】
単一の投薬形態物を生じさせる目的で担体材料と一緒にすることが可能な式（Ｉ）で表される化合物の量は、治療すべき病気、哺乳動物種および個々の投与様式に応じて変わるであろう。しかしながら、一般的指針として、本発明の化合物の適切な単位用量に含める活性化合物の量は好適には例えば０．１ｍｇから約１０００ｍｇであり得る。好適な１単位用量は１ｍｇから約５００ｍｇの範囲である。より好適な１単位用量は１ｍｇから約３００ｍｇの範囲である。更により好適な１単位用量は１ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。そのような単位用量を日に２回以上、例えば日に２、３、４、５または６回、好適には日に１または２回投与することで７０ｋｇの成人の総投薬量が被験者の体重１ｋｇ当たり投与毎に０．００１から約１５ｍｇの範囲内になるようにしてもよい。好適な投薬量は被験者の体重１ｋｇ当たり投与毎に０．０１から約１．５ｍｇであり、そのような治療を数週間または数カ月、ある場合には数年延長してもよい。しかしながら、個々の患者いずれかに特定の投与量は様々な要因に依存すると理解し、そのような要因には、当該分野の技術者が充分に理解するように、用いる具体的化合物が示す活性、治療すべき個人の年齢、体重、一般的健康状態、性および食事、投与時間および経路、排泄率、以前に投与されていた他の薬剤、および治療を行う個々の病気のひどさが含まれる。
【００７９】
当業者に明らかであろうように、ある場合には前記範囲外の投薬量を用いる必要もあり得る。その上、臨床医または治療を行う医者は個々の患者の反応に関連させて治療を開始
、中断、調整または終える方法および時を認識するであろうことを特記する。
【００８０】
以下に示す実施例は例示を意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものでない。
【実施例】
【００８１】
実験部分
本明細書の以下に示す「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ａｑ．」は水溶液を意味し、「ｒ．ｍ．」は反応混合物を意味し、「ｒ．ｔ．」は室温を意味し、「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを意味し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＡｃＯＥｔ」は酢酸エチルを意味し、「ＡｃＯＨ」は酢酸を意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ｒａｃ」はラセミを意味し、「ｓａｔ．」は飽和を意味し、「ＳＦＣ」は超臨界液クロを意味し、「ＳＦＣ−ＭＳ」は超臨界液クロ／質量分析を意味し、「ＬＣＭＳ」は液クロ／質量分析を意味し、「ＨＰＬＣ」は高性能液クロを意味し、「ＤＭＴＭＭ」は４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライドを意味し、「ＨＡＴＵ」はヘキサフルオロ燐酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニイウムを意味する。
【００８２】
Ａ．中間体の製造
実施例Ａ１
中間体１：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロパンニトリルの製造
【００８３】
【化１５】
2013540740.tif 000016
【００８４】
３−ブロモアセトフェノン（２０ｇ、１００ミリモル）とＮＨ４Ｃｌ（１１ｇ、２００ミリモル）をＮＨ３／ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにトリメチルシリルシアニド（２０ｇ、２００ミリモル）を加えた。その混合物を室温で４日間撹拌した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で取り上げた。固体を濾過で除去した後、その濾液に蒸発を真空下で受けさせることでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロパンニトリル（２０ｇ、８６％の収率）を得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【００８５】
実施例Ａ２
中間体２：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロピオン酸メチルの製造
【００８６】
【化１６】
2013540740.tif 000017
【００８７】
ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）−プロピオニトリル（２０ｇ、８８．９ミリモル）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解させた後、その混合物を４日間還流させた。室温に冷却した後、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を加えて、その混合物にＡｃＯＥｔ（２ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を受けさせた。その水層を一緒にしてアンモニア水溶液でｐＨが８になるまで塩基性にした後、ＡｃＯＥｔ（５ｘ１００ｍＬ）を用いた抽出を実施した。その有機層を一緒にして乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（１０．６ｇ、４６％の収率）を油として得た。
【００８８】
実施例Ａ３
中間体３：ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールの製造
【００８９】
【化１７】
2013540740.tif 000018
【００９０】
ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（７．５ｇ、２９．１ミリモル）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−１５℃で撹拌しながらこれに水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、２２ｍＬ、２２ミリモル）を滴下した。その混合物を放置して１時間かけてゆっくりと０℃になるまで温めた。次に、更にＴＨＦ（１５０ｍＬ）を加えた後、飽和Ｎａ２ＳＯ４を水素がそれ以上生じなくなるまで滴下した。次に、無水Ｎａ２ＳＯ４を加えた後、室温で一晩撹拌したままにした。その混合物の濾過をケイソウ土を用いて行い、ＴＨＦで濯いだ後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（５．７０ｇ、８５％の収率）を油として得た。
【００９１】
実施例Ａ４
中間体４：（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールの製造
【００９２】
【化１８】
2013540740.tif 000019
【００９３】
ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オールのサンプル（１５．４ｇ）を調製用ＳＦＣ［Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（商標）Ｄａｉｃｅｌ  ＡＤ  ｘ  ２５０ｍｍを使用、可動相（ＣＯ２、ｉＰｒＮＨ２が０．２％のＭｅＯＨ］で相当する鏡像異性体に分離することで（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（７．２１ｇ、４０％の収率）を得た。
αＤ：−１４．９゜（５８９ｎｍ、ｃ  ０．２９４６％（重量／体積）、ＭｅＯＨ、２０
℃）
【００９４】
実施例Ａ５
中間体５：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【００９５】
【化１９】
2013540740.tif 000020
【００９６】
ラセミ−２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）プロパン−１−オール（１．７ｇ、７．３９ミリモル）を飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）とＴＨＦ（１５ｍＬ）の混合物に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれにジ−ｔ−ブチルジカーボネート（４．８４ｇ、２２．１６ミリモル）を分割して加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１５時間撹拌した。その混合物を氷水浴で冷却しそして撹拌しながらＫＨＳＯ４でｐＨが１−２になるまで酸性にした。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＡｃＯＥｔを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．３６ｇ、９３％の収率）を無色の油として得た。
【００９７】
実施例Ａ６
中間体６：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【００９８】
【化２０】
2013540740.tif 000021
【００９９】
ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．３ｇ、６．９７ミリモル）を無水ＤＣＭ（４５ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（３．５５ｇ、８．３６ミリモル）を分割して５分かけて加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に続いてＮａＨＳＯ３（飽和水溶液）で消滅させた。次に、Ｅｔ２Ｏを加えた後の混合物を室温で３０分間撹拌した。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＥｔ２Ｏを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２ｇ、８８％の収率）を無色の油として得た。
【０１００】
実施例Ａ７
中間体７：ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１０１】
【化２１】
2013540740.tif 000022
【０１０２】
ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．９６ｇ、５．９７ミリモル）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に窒素下でＴＨＦ中０．５Ｍのエチニルマグネシウムブロマイド（２３．８９ｍＬ、１１．９４ミリモル）を滴下した。その混合物を０℃で１５分間そして室温で３０分間撹拌した。その混合物にＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）を用いた希釈そしてＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．１１ｇ、９９％の収率）を油として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１０３】
実施例Ａ８
中間体８：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１０４】
【化２２】
2013540740.tif 000023
【０１０５】
ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（２．１２ｇ、５．９７ミリモル）を無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（３．０４ｇ、７．１６ミリモル）を分割して５分かけて加えた。その混合物を０℃で１０分間そして室温で１時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）に続いてＮａＨＳＯ３（飽和水溶液）で消滅させた。次に、Ｅｔ２Ｏを加えた後の混合物を室温で３０分間撹拌した。有機層を分離した後、水層にさらなる抽出をＥｔ２Ｏを用いて受けさせた。その有機層を一緒にして分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．８９ｇ、９０％の収率）を油として得た。
【０１０６】
実施例Ａ９
中間体９：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−
イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１０７】
【化２３】
2013540740.tif 000024
【０１０８】
ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．８ｇ、５．１１ミリモル）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に水加ヒドラジン（２．４８ｇ、５１．１０ミリモル）を加えた後、その混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、その残留物をＤＣＭに溶解させた後、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から５０／５０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．６２ｇ、８７％の収率）を白色の固体として得た。
【０１０９】
実施例Ａ１０
中間体１０：ラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造
【０１１０】
【化２４】
2013540740.tif 000025
【０１１１】
ラセミ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルエステル（１．６５ｇ、４．５１ミリモル）に室温でジオキサン中４Ｍの塩酸（７．８８ｍＬ、３１．５４ミリモル）を加えた。その混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させた後、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１．２ｇ、１００％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１１２】
実施例Ａ１１
中間体１１：ラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミドの製造
【０１１３】
【化２５】
2013540740.tif 000026
【０１１４】
ラセミ−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１．２ｇ、４．５１ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＤＩＰＥＡ（１．１８ｍＬ、６．７７ミリモル）を加えた後、その混合物を氷浴で冷却した。次に、クロロアセチルクロライド（０．４０ｍＬ、４．９６ミリモル）を加えた後の混合物を０℃で３時間撹拌した。その混合物にＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）を用いた希釈そしてＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）（１ｍＬ）に溶解させた後、その混合物を室温で３０分間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を一緒にして真空下で濃縮することでラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミド（１．２２ｇ、７９％の収率）を無水の油として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１１５】
実施例Ａ１２
中間体１２：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０１１６】
【化２６】
2013540740.tif 000027
【０１１７】
水素化ナトリウム（０．２８ｇ、７．１２ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の懸濁液に窒素下でラセミ−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］２−クロロ−アセトアミド（１．２２ｇ、３．５６ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を滴下した。その混合物を０℃で１時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに５０／５０から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．７ｇ、６４％の収率）を白色の固体として得た。
【０１１８】
実施例Ａ１３
中間体１３：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０１１９】
【化２７】
2013540740.tif 000028
【０１２０】
ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．７ｇ、２．２９ミリモル）をピリジン（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（１．０２ｇ、４．５７ミリモル）を加えた後、その混合物を９５℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．４５ｇ、６１％の収率）を白色の固体として得た。
【０１２１】
実施例Ａ１４
中間体１４：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０１２２】
【化２８】
2013540740.tif 000029
【０１２３】
ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．４５ｇ、１．４０ミリモル）をＥｔＯＨ（５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにＮＨ４Ｃｌ（０．１５ｇ、２．７９ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に２８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに溶解させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．４２ｇ、９９％の収率）を黄色の固体として得た。
【０１２４】
実施例Ａ１５
中間体１５：ラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０１２５】
【化２９】
2013540740.tif 000030
【０１２６】
窒素下の密封型管内でラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３９ｇ、１．２８ミリモル）とトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１２ｇ、０．１３ミリモル）とラセミ−２、２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０．２４ｇ、０．３８ミリモル）とナトリウムｔ−ブトキサド（０．２２ｇ、２．３ミリモル）の混合物に室温でトルエン（１０ｍＬ）を加えた。その混合物を窒素で数分間フラッシュ洗浄した後、ベンゾフェノンイミン（０．４３ｍＬ、２．５６ミリモル）を加えて、その混合物を１００℃で２時間撹拌した。その混合物を冷却した後、水で希釈しそしてＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３７ｇ、７０％の収率）を黄色の発泡体として得た。
【０１２７】
実施例Ａ１６
中間体１６：ラセミ−４−（３−アミノフェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０１２８】
【化３０】
2013540740.tif 000031
【０１２９】
ラセミ−４−［３−（ベンゾヒドリリデンアミノ）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（０．３７ｇ、０．９ミリモル）をイソプロパノール（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＨ２Ｏ中３７％の塩酸（０．１４ｍＬ）を加えた。その混合物を室温で３時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏを加えた後の混合物を１５分間撹拌した。沈澱してきた固体を濾過で取り出し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した後、真空下で乾燥させた。その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させた後、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで白色の固体（０．２１ｇ、９７％の収率）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１３０】
実施例Ａ１７
中間体１７：１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の製造
【０１３１】
【化３１】
2013540740.tif 000032
【０１３２】
３−メチルピラゾール（４．２ｇ、５．１５ミリモル）を水（１００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に過マンガン酸カリウム（１６．１７ｇ、１０２．３１ミリモル）を水（１５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を加えた後、その混合物を一晩還流させた。室温に冷却した後、不溶な物質を濾過で除去した。その濾液を濃縮して３０ｍＬにした後、２ＮのＨＣｌを固体が沈澱するまで加えた。その固体を濾過で取り出し、冷水で洗浄した後、真空下で乾燥させることで１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３．１ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１３３】
実施例Ａ１８
中間体１８：１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルの製造
【０１３４】
【化３２】
2013540740.tif 000033
【０１３５】
１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（１ｇ、８．９２ミリモル）をＭｅＯＨ（６５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれに硫酸（５．８ｍＬ）を滴下した。この滴下が終了した後の混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を真空下で濃縮した後、その残留物を水に溶解させそしてＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で塩基性にした。その混合物にＡｃＯＥｔを用いた抽出を受けさせた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（０．７ｇ、６２％の収率）を白色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１３６】
実施例Ａ１９
中間体１９：１−（ジメチルスルファモイル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルの製造
【０１３７】
【化３３】
2013540740.tif 000034
【０１３８】
１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（３．４５ｇ、２７．３６ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に水素化ナトリウム（１．５７ｇ、４１．０３ミリモル）を加えた。その混合物を０℃で３０分間撹拌した。次に、塩化ジメチルスルファモイル（４．４１ｍＬ、４１．０３ミリモル）を加えた後の混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で
蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４．８ｇ、７５％の収率）を無色の油として得た。
【０１３９】
実施例Ａ２０
中間体２０：１−（ジメチルスルファモイル）−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレートの製造
【０１４０】
【化３４】
2013540740.tif 000035
【０１４１】
１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４ｇ、１７．１５ミリモル）と塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（２．１８ｇ、２２．２９ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れて撹拌した。その混合物を窒素でフラッシュ洗浄した後、−７８℃に冷却した。次に、イソプロピルマグネシウムクロライドの溶液（ＴＨＦ中２Ｍ）（２４．０１ｍＬ、４８．０２ミリモル）を滴下した。この滴下が終了した後の混合物を室温に温めて一晩撹拌した。その混合物の反応をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（３．２ｇ、７１％の収率）を淡黄色の油として得た。
【０１４２】
実施例Ａ２１
中間体２１：３−（３−クロロフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０１４３】
【化３５】
2013540740.tif 000036
【０１４４】
１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（１．６０ｇ、６．１１ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下で３−クロロフェニルマグネシウムブロマイドの溶液（ＴＨＦ中０．５Ｍ）（１５．８９ｍＬ、７．９５ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で１時間撹拌した後、更に室温で５時間撹拌した。その混合物の反応をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−（３−クロロ−ベンゾイル
）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（１．６８ｇ、８８％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０１４５】
実施例Ａ２２
中間体２２：３−｛［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］（３−クロロフェニル）メチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０１４６】
【化３６】
2013540740.tif 000037
【０１４７】
３−（３−クロロ−ベンゾイル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（１．６８ｇ、５．３５ミリモル）と２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（０．７１ｇ、５．８９ミリモル）をトルエン（３２ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物に窒素下でチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（３．２２ｍＬ、１０．７１ミリモル）を加えた。その混合物を１１０℃で２４時間撹拌した。その混合物を冷却した後、食塩水を急速撹拌しながらこれに注ぎ込んだ。その混合物の濾過をケイソウ土に通して行った後、その濾過ケーキをＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液を分液漏斗に移して、有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−［（３−クロロ−フェニル）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルイミノ）−メチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．１７ｇ、９７％の収率）を黄色の油として得た。
【０１４８】
実施例Ａ２３
中間体２３：３−［１−（ｔ−ブチルスルフィニルアミノ）−１−（３−クロロフェニル）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０１４９】
【化３７】
2013540740.tif 000038
【０１５０】
３−［（３−クロロ−フェニル）−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルイミノ）−メチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２ｇ、５．２８ミリモル）をＴＨＦ（２５ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に窒素下でメチルマグネシウムブロマイド（１５．０８ｍＬ、２１．１１ミリモル）を加えた。その混合物を０℃で２時間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で反応を消滅させた後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔを
ＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで３−［１−（３−クロロ−フェニル）−１−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−エチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２８ｇ、９９％の収率）を無色の油として得たが、これを放置すると固化した。
【０１５１】
実施例Ａ２４
中間体２４：ラセミ−１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造
【０１５２】
【化３８】
2013540740.tif 000039
【０１５３】
３−［１−（３−クロロ−フェニル）−１−（２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−エチル］−ピラゾール−１−スルホン酸ジメチルアミド（２．２９ｇ、５．２８ミリモル）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にジオキサン中４Ｍの塩酸（１９．７９ｍＬ、７９．１５ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて８０℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることでラセミ−１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチルアミン（１ｇ、８６％の収率）を淡黄色の固体として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１５４】
実施例Ａ２５
中間体２５：ラセミ−２−クロロ−Ｎ−［１−（３−クロロフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］−アセトアミドの製造
【０１５５】
【化３９】
2013540740.tif 000040
【０１５６】
中間体２５の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体２４（１ｇ、４．５１ミリモル）を用いて出発することで中間体２５を白色の固体として得た（０．７３ｇ、５４％の収率）。
【０１５７】
実施例Ａ２６
中間体２６：ラセミ−４−（３−クロロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０１５８】
【化４０】
2013540740.tif 000041
【０１５９】
中間体２６の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体２５（０．７３ｇ、２．４３ミリモル）を用いて出発することで中間体２６を白色の固体として得た（０．４５ｇ、７１％の収率）。
【０１６０】
実施例Ａ２７
中間体２７：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０１６１】
【化４１】
2013540740.tif 000042
【０１６２】
ラセミ−４−（３−クロロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１３ｇ、０．５０ミリモル）とピリミジン−５−ボロン酸（０．１９ｇ、１．４９ミリモル）と２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０６１ｇ、０．１４９ミリモル）と燐酸カリウム（０．２１ｇ、０．９９ミリモル）をトルエン（５ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下で酢酸ジパラジウム（ＩＩ）（０．０１７ｇ、０．０７５ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、ＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液に蒸発を真空下で受けさせた。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．０９ｇ、５９％の収率）を白色の固体として得た。
【０１６３】
実施例Ａ２８
中間体２８：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０１６４】
【化４２】
2013540740.tif 000043
【０１６５】
ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．０９ｇ、０．３０ミリモル）をピリジン（２ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を室温で撹拌しながらこれにＬａｗｅｓｓｏｎ試薬（０．１４ｇ、０．３５ミリモル）を加えた。その混合物を９５℃で１８時間加熱した。溶媒を真空下で蒸発させた後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．０２ｇ、２１％の収率）を白色の固体として得た。
【０１６６】
実施例Ａ２９
中間体２９：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０１６７】
【化４３】
2013540740.tif 000044
【０１６８】
ラセミ−４−（３−クロロ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１７ｇ、０．６５ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．１５ｇ、０．９７ミリモル）と２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０８０ｇ、０．１９５ミリモル）と燐酸カリウム（０．２８ｇ、１．３０ミリモル）をトルエン（２ｍＬ）とＥｔＯＨ（０．２ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下で酢酸ジパラジウム（ＩＩ）（０．０２２ｇ、０．０９７ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、ＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液に蒸発を真空下で受けさせた。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１１ｇ、５１％の収率）を白色の固体として得た。
【０１６９】
実施例Ａ３０
中間体３０：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０１７０】
【化４４】
2013540740.tif 000045
【０１７１】
ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（０．１１ｇ、０．３１ミリ
モル）と五硫化燐（０．０７ｇ、０．３１ミリモル）の混合物にピリジン（３ｍＬ）を加えた後、その混合物を８０℃に５時間加熱した。次に、更に五硫化燐（０．０７ｇ、０．３１ミリモル）を加えた後の混合物を１００℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨをＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）フェニル］−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（０．１ｇ、９３％の収率）を白色の固体として得た。
【０１７２】
実施例Ａ３１
中間体３１：ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０１７３】
【化４５】
2013540740.tif 000046
【０１７４】
ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オン（３ｇ、８．７７ミリモル）［中間体ラセミ−４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンに関してこの上で記述した手順と同じ手順に従って調製］をピリジン（３０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（２．５３ｇ、１１．４０ミリモル）を加えた後、その混合物を９５℃に１８時間加熱した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から４０／６０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（２．４ｇ、７６％の収率）を白色の固体として得た。
【０１７５】
実施例Ａ３２
中間体３２：ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０１７６】
【化４６】
2013540740.tif 000047
【０１７７】
ラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（２．４ｇ、６．７ミリモル）をＥｔＯＨ中２Ｍのアンモニア（６７ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらこれにＮＨ４Ｃｌ（０．７２ｇ、１３．４ミリモル）を加えた後、その混合物を８５℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させそ
して水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することでラセミ−４−（５−ブロモ−２，４−ジフルオロフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イルアミン（１．８ｇ、７８％の収率）を黄色の固体として得た。
【０１７８】
実施例Ａ３３
中間体３３：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチルエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１７９】
【化４７】
2013540740.tif 000048
【０１８０】
中間体３３の合成を実施例Ａ５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オール（４．７ｇ、２０．４３ミリモル）を用いて出発することで中間体３３を無色の油（６．４ｇ、９５％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。
【０１８１】
実施例Ａ３４
中間体３４：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１８２】
【化４８】
2013540740.tif 000049
【０１８３】
中間体３４の合成を実施例Ａ６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３３（６．４ｇ、１９．３８ミリモル）を用いて出発することで中間体３４を無色の油（５．７ｇ、９０％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。
【０１８４】
実施例Ａ３５
中間体３５：（１Ｒ，２Ｒ）と（１Ｒ，２Ｓ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−ブト−３−ニイル］カルバミン酸ｔ−ブチルのジアステレオ異性体混合物の製造
【０１８５】
【化４９】
2013540740.tif 000050
【０１８６】
中間体３５の合成を実施例Ａ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３４（５．７ｇ、１７．３８ミリモル）を用いて出発することで中間体３５をジアステレオ異性体混合物（５．４ｇ、８８％の収率）として油の状態で得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１８７】
実施例Ａ３６
中間体３６：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−メチル−２−オキソ−ブト−３−イニル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１８８】
【化５０】
2013540740.tif 000051
【０１８９】
中間体３６の合成を実施例Ａ８に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３５（５．４ｇ、１５．２４ミリモル）を用いて出発することで中間体３６を淡黄色の油（５．３ｇ、９９％の収率）として得た。
【０１９０】
実施例Ａ３７
中間体３７：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０１９１】
【化５１】
2013540740.tif 000052
【０１９２】
中間体３７の合成を実施例Ａ９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３６（５．３ｇ、１５．０５ミリモル）を用いて出発することで中間体３７を発泡体（５ｇ、９１％の収率）として得た。
【０１９３】
実施例Ａ３８
中間体３８：（Ｒ）−１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタンアミンの製造
【０１９４】
【化５２】
2013540740.tif 000053
【０１９５】
中間体３８の合成を実施例Ａ１０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体
３７（５ｇ、１３．６５ミリモル）を用いて出発することで中間体３８を白色の固体（３．５ｇ、９６％の収率）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０１９６】
実施例Ａ３９
中間体３９：（Ｒ）−Ｎ−［１−（３−ブロモフェニル）−１−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−エチル］−２−クロロ−アセトアミドの製造
【０１９７】
【化５３】
2013540740.tif 000054
【０１９８】
中間体３９の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３８（３．５ｇ、１３．１５ミリモル）を用いて出発することで中間体３９を無色の油（３．５ｇ、７８％の収率）として得た。
【０１９９】
実施例Ａ４０
中間体４０：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−エチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０２００】
【化５４】
2013540740.tif 000055
【０２０１】
中間体４０の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３９（３．５ｇ、１０．２２ミリモル）を用いて出発することで中間体４０を白色の固体（２．１５ｇ、６９％の収率）として得た。
【０２０２】
実施例Ａ４１
中間体４１：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０２０３】
【化５５】
2013540740.tif 000056
【０２０４】
中間体４１の合成を実施例Ａ１３に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体４０（２．１ｇ、６．８６ミリモル）を用いて出発することで中間体４１を発泡体（１．８ｇ、８１％の収率）として得た。
【０２０５】
実施例Ａ４２
中間体４２：（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０２０６】
【化５６】
2013540740.tif 000057
【０２０７】
（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオン（１．８ｇ、５．５９ミリモル）をメタノール中７Ｎのアンモニア溶液（１１．９７ｍＬ、８３．７９ミリモル）に入れることで生じさせた混合物を密封型管内で撹拌しながらこれに３２％のアンモニア水溶液（１１．９ｍＬ、２０１．１ミリモル）を加えた。その混合物を６０℃で９０分間撹拌した。室温に冷却した後の混合物を水およびＮａ２ＣＯ３（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８から３／９７から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで（Ｒ）−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−４，５−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミン（１．４ｇ、８２％の収率）を黄色の固体として得た。
【０２０８】
実施例Ａ４３
中間体４３：Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２０９】
【化５７】
2013540740.tif 000058
【０２１０】
３−（トリフルオロメチル）ピラゾール（５．５ｇ、４０．４２ミリモル）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（５．４４ｇ、４８．５ミリモル）およびジメチルスルファモイルクロライド（４．７６ｍＬ、４４．４６ミリモル）を加えた。その混合物を室温に温めて１８時間撹拌した。その混合物を真空下で濃縮した後、その残留物を水で希釈した。生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４３（９．４ｇ、９５％の収率）を無色の油として得た。
【０２１１】
実施例Ａ４４
中間体４４：５−［（３−ブロモフェニル）（ヒドロキシル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２１２】
【化５８】
2013540740.tif 000059
【０２１３】
中間体４３（８．４ｇ、３４．５４ミリモル）をＴＨＦ（１２５ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下でブチルリチウムの溶液（ヘキサン中２．５Ｍ）（１５．２ｍＬ、３７．９ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で４５分間撹拌した後、２−ブロモベンズアルデヒド（６ｍＬ、５１．８ミリモル）を滴下した。その反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌した後、室温に温めて１時間撹拌した。その混合物の反応をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＡｃＯＥｔで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭをヘプタンに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４４（１３．２ｇ、８９％の収率）を無色の油として得た。
【０２１４】
実施例Ａ４５
中間体４５：５−［（３−ブロモフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２１５】
【化５９】
2013540740.tif 000060
【０２１６】
中間体４４（１４．５ｇ、３３．８６ミリモル）を１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に二酸化マンガン（１５．４ｇ、１６９．３ミリモル）を加えた。その混合物を１２０℃で３時間撹拌した。その反応混合物を４０℃に冷却した後、ケイソウ土に通して濾過した。溶媒を真空下で蒸発させることで中間体４５（２５．６ｇ、９７％の収率）を白色の固体として得て、これをそのまま次の段階で用いた。
【０２１７】
実施例Ａ４６
中間体４６：５−［（３−ブロモフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２１８】
【化６０】
2013540740.tif 000061
【０２１９】
中間体４５（１０ｇ、２３．４６ミリモル）と２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（３．１２８ｇ、２５．８１ミリモル）をトルエン（１４０ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物に窒素下でチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（１１．３５ｍＬ、４６．９ミリモル）を加えた。その混合物を１１０℃で８時間撹拌した。その混合物を冷却した後、食塩水に急速撹拌しながら注ぎ込んだ。その混合物をケイソウ土に通して濾過した後、濾過ケーキをＡｃＯＥｔで洗浄した。その濾液を分液漏斗に移し、その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４６（４ｇ、３２％の収率）を黄色の油として得た。
【０２２０】
実施例Ａ４７
中間体４７：ラセミ−５−［１−（３−ブロモフェニル）−１−［（ｔ−ブチルスルフィニル）アミノ］エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２２１】
【化６１】
2013540740.tif 000062
【０２２２】
中間体４６（４ｇ、７．５６ミリモル）をＴＨＦ（５６ｍＬ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液に窒素下でメチルマグネシウムブロマイド（ジエチルエーテル中３Ｍ、６．３ｍＬ、１８．８９ミリモル）を加えた。その混合物を−７８℃で３０分間撹拌した後、室温に温めて１８時間撹拌した。その反応混合物の反応をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で消滅させた後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４７（３．６ｇ、８７％の収率）を無色の油として得たが、これは放置すると固化した。
【０２２３】
実施例Ａ４８
中間体４８：ラセミ−５−［１−アミノ−１−（３−ブロモフェニル）エチル］−Ｎ，Ｎ
−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２２４】
【化６２】
2013540740.tif 000063
【０２２５】
中間体４７（３．６ｇ、６．６ミリモル）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にジオキサン中４Ｍの塩酸（２４．７ｍＬ、９９ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて８０℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノールをＤＣＭに０／１００から２／９８）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４８（１．５ｇ、５４％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０２２６】
実施例Ａ４９
中間体４９：ラセミ−Ｎ−｛１−（３−ブロモフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エチル｝−２−クロロアセトアミドの製造
【０２２７】
【化６３】
2013540740.tif 000064
【０２２８】
中間体４８（１．５ｇ、４．４９ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＤＩＰＥＡ（１．９ｍＬ、１１．２ミリモル）を加えた後、その混合物を氷浴で冷却した。次に、クロロアセチルクロライド（０．４２９ｍＬ、５．３８ミリモル）を加えた後の混合物を０℃で３時間撹拌した。その混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から３０／７０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体４９（１．１ｇ、６０％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０２２９】
実施例Ａ５０
中間体５０：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０２３０】
【化６４】
2013540740.tif 000065
【０２３１】
水素化ナトリウム（０．２１４ｇ、５．３６ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた０℃の懸濁液に窒素下で中間体４９（１．１ｇ、２．６８ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を滴下した。その混合物を０℃で１時間撹拌した。その混合物を水で希釈した後、生成物をＤＣＭで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５０（０．９２ｇ、９２％の収率）を白色の固体として得た。
【０２３２】
実施例Ａ５１
中間体５１：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０２３３】
【化６５】
2013540740.tif 000066
【０２３４】
中間体５０（０．９２ｇ、２．４６ミリモル）をピリジン（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（０．８２ｇ、３．６９ミリモル）を加えた後、その混合物を９０℃に１８時間加熱した。その反応混合物を真空下で濃縮した後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔをＤＣＭに０／１００から１００／０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５１（０．２７ｇ、２８％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０２３５】
実施例Ａ５２
中間体５２：ラセミ−４−（３−ブロモフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０２３６】
【化６６】
2013540740.tif 000067
【０２３７】
中間体５１（０．２７ｇ、０．６９ミリモル）をＥｔＯＨ中２Ｍのアンモニア（６ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を撹拌しながらこれにＮＨ４Ｃｌ（０．１４８ｇ、２．７７ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに入れて懸濁させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体５２（０．１９５ｇ、７５％の収率）をベージュ色の固体として得た。
【０２３８】
実施例Ａ５３
中間体５３：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２３９】
【化６７】
2013540740.tif 000068
【０２４０】
中間体５３の合成を実施例Ａ４４に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体４３（１７ｇ、６９．９ミリモル）を用いて出発することで中間体５３を無色の油（２８ｇ、７６％の収率）として得た。
【０２４１】
実施例Ａ５４
中間体５４：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）カルボニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２４２】
【化６８】
2013540740.tif 000069
【０２４３】
中間体５４の合成を実施例Ａ４５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５３（２８ｇ、５３．３ミリモル）を用いて出発することで中間体５４を白色の固体（２５．６ｇ、９７％の収率）として得て、これをそのまま次の段階で用いた。
【０２４４】
実施例Ａ５５
中間体５５：ラセミ−５−［（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２４５】
【化６９】
2013540740.tif 000070
【０２４６】
中間体５５の合成を実施例Ａ４６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５４（２５．６ｇ、５７．６ミリモル）を用いて出発することで中間体５５を淡黄色の固体（２１ｇ、６７％の収率）として得た。
【０２４７】
実施例Ａ５６
中間体５６：ラセミ−５−［１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［（ｔ−ブチルスルフィニル）アミノ］エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−スルホンアミドの製造
【０２４８】
【化７０】
2013540740.tif 000071
【０２４９】
中間体５６の合成を実施例Ａ４７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５５（２１ｇ、３８．３６ミリモル）を用いて出発することで中間体５６を無色の油（１９ｇ、８８％の収率）として得たが、これは放置すると固化した。
【０２５０】
実施例Ａ５７
中間体５７：ラセミ−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エタンアミンの製造
【０２５１】
【化７１】
2013540740.tif 000072
【０２５２】
中間体５６（１８．７ｇ、３３．２ミリモル）にメタノール中１．２５Ｍの塩酸（１５９ｍＬ、１９９ミリモル）を加えた後、その混合物を密封型管に入れて６０℃で３時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）の中に注ぎ込んだ後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで中間体５７（１１．５ｇ、９８％の収率）を淡黄色の固体として得て、これをさらなる精製なしにそのまま次の段階で用いた。
【０２５３】
実施例Ａ５８
中間体５８：ラセミ−Ｎ−｛１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−［３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］エチル｝−２−クロロアセトアミドの製造
【０２５４】
【化７２】
2013540740.tif 000073
【０２５５】
中間体５８の合成を実施例Ａ４９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５７（１１．５ｇ、３２．６６ミリモル）を用いて出発することで中間体５８を淡黄色の固体（６．６ｇ、４７％の収率）として得た。
【０２５６】
実施例Ａ５９
中間体５９：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０２５７】
【化７３】
2013540740.tif 000074
【０２５８】
中間体５９の合成を実施例Ａ５０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体５８（６．６ｇ、１５．４ミリモル）を用いて出発することで中間体５９を白色の固体（６ｇ、９９％の収率）として得た。
【０２５９】
実施例Ａ６０
中間体６０：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０２６０】
【化７４】
2013540740.tif 000075
【０２６１】
中間体５９（４ｇ、１０．２ミリモル）をジオキサン（８０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液に五硫化燐（２．２７ｇ、１０．２ミリモル）を加えた後、その混合物を８０℃に１８時間加熱した。その反応混合物をケイソウ土に通して濾過した。次に、その濾液に蒸発を真空下で受けさせた後、その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６０（２．３ｇ、５５％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０２６２】
実施例Ａ６１
中間体６１：ラセミ−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０２６３】
【化７５】
2013540740.tif 000076
【０２６４】
中間体６１の合成を実施例Ａ５２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６０（２ｇ、４．９ミリモル）を用いて出発することで中間体６１を白色の固体（１．５ｇ、７８％の収率）として得た。
【０２６５】
実施例Ａ６２
中間体６２：ラセミ−４−［５−（ベンズヒドリリデンアミノ）−２−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０２６６】
【化７６】
2013540740.tif 000077
【０２６７】
中間体６２の合成を実施例Ａ１５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６１（０．６７ｇ、１．５９ミリモル）を用いて出発することで中間体６２を淡黄色の固
体（０．５３ｇ、６７％の収率）として得た。
【０２６８】
実施例Ａ６３
中間体６３：ラセミ−４−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０２６９】
【化７７】
2013540740.tif 000078
【０２７０】
中間体６３の合成を実施例Ａ１６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６２（０．５２５ｇ、１．０７ミリモル）を用いて出発することで中間体６３を淡黄色の固体（０．２２５ｇ、６４％の収率）として得た。
【０２７１】
実施例Ａ６４
中間体６４：（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（オキソ）酢酸の製造
【０２７２】
【化７８】
2013540740.tif 000079
【０２７３】
５’−ブロモ−２’−フルオロアセトフェノン［（ＣＡＳ  １９８４７７−８９−３）、７０ｇ、３２２ミリモル）および二酸化セレン（７１．６ｇ、６４５ミリモル）をピリジン（５２０ｍＬ）に溶解させた。その反応混合物を１００℃で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、１ＮのＨＣｌ水溶液を加えた。その水層にＥｔＯＡｃを用いた抽出を受けさせた。その有機層を一緒にして乾燥（Ｍｇ２ＳＯ４）させ、濾過した後、真空下で濃縮することで中間体６４（６２ｇ、７８％の収率）を得て、これをそのまま次の反応で用いた。
【０２７４】
実施例Ａ６５
中間体６５：（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）（オキソ）酢酸ｔ−ブチルの製造
【０２７５】
【化７９】
2013540740.tif 000080
【０２７６】
中間体６４（５０ｇ、２０２ミリモル）をトルエン（５００ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で撹拌しながらこれに塩化チオニル（７２ｇ、６０７ミリモル）を滴下した。その混合物を６０℃で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。ＤＣＭを加えた後の混合物を再び真空下で濃縮した。粗生成物をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解させた。ｔ−ブタノール（３０ｇ、４０４ミリモル）、ピリジン（１６ｍＬ、２０２ミリモル）および無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）を注意深く加えた。その混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６５（４５．５ｇ、７４％の収率）を得た。
【０２７７】
実施例Ａ６６
中間体６６：（Ｓ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）［（ｔ−ブチルスルフィニル）イミノ］酢酸１−メチルエチルの製造
【０２７８】
【化８０】
2013540740.tif 000081
【０２７９】
中間体６５（４３ｇ、１４２ミリモル）と（Ｓ）−２−メチル−２−プロパンスルフィンアミド（２５．８ｇ、２１２ミリモル）をｎ−ヘプタン（１０００ｍＬ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながらこれにチタン（ＩＶ）イソプロポキサイド（８５ｍＬ、２８３ミリモル）を加えた。その混合物を８０℃で１８時間撹拌した。その混合物に濃縮を真空下である程度受けさせた後、ＥｔＯＡｃによる希釈を受けさせた。その混合物を室温に冷却した後、水を加えた。その結果として得た混合物の濾過をケイソウ土の詰め物を用いて行った後、ＥｔＯＡｃそして水で濯いだ。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、真空下で濃縮した。その残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；溶離剤：ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃを９０／１０から８０／２０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６６（４４ｇ、７９％の収率）を得た。
【０２８０】
実施例Ａ６７
中間体６７：（２Ｒ）−２−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−［［（Ｓ）−ｔ−ブチルスルフィニル］アミノ］−２−シクロプロピル酢酸イソプロピルの製造
【０２８１】
【化８１】
2013540740.tif 000082
【０２８２】
中間体６６をＤＣＭ（３８８ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−７８℃で撹拌しながらこれにシクロプロピルマグネシウムブロマイド（０．５Ｍ、１７４ｍＬ、８７ミリ
モル）を滴下した。その混合物を前記温度で３０分間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液に続いて水を添加することで反応を消滅させた。その混合物にＤＣＭを用いた抽出を受けさせた。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させることで中間体６７（２６．４ｇ、９８％の収率）を黄色がかった油として得て、それをそのまま次の段階で用いた。
【０２８３】
実施例Ａ６８
中間体６８：（２Ｒ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−シクロプロピル酢酸イソプロピルの製造
【０２８４】
【化８２】
2013540740.tif 000083
【０２８５】
中間体６７（２３．９ｇ、５５ミリモル）をジオキサン中４ＭのＨＣｌ溶液（２７ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を室温で１５分間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃに溶解させた後、飽和ＮａＨＣＯ３を加えた。その混合物を１時間撹拌した。有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、真空下で濃縮することで中間体６８（１６．６ｇ、９１％の収率）を黄色がかった油として得て、それをそのまま次の段階で用いた。
【０２８６】
実施例Ａ６９
中間体６９：（２Ｒ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−シクロプロピル−エタノールの製造
【０２８７】
【化８３】
2013540740.tif 000084
【０２８８】
中間体６８（１６．６ｇ、５０．２ミリモル）をＴＨＦ（３４６ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を−１５℃で撹拌しながらこれに水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、３８ｍＬ、３８ミリモル）を滴下した。その混合物を１時間撹拌しながらゆっくりと０℃に温めた。この混合物に固体状のＮａ２ＳＯ４十水化物を気体の発生がそれ以上観察されなくなるまで加えた。その混合物を室温で３０分間撹拌した。その混合物の濾過をケイソウ土の詰め物を用いて行った後、ＴＨＦで濯いだ。有機層を集めて真空下で蒸発乾固させた後、その結果として得た粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ中７ＭのＮＨ３／ＤＣＭを０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体６９（１３．７ｇ、定量的収率）を黄色の油として得た。
【０２８９】
実施例Ａ７０
中間体７０：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０２９０】
【化８４】
2013540740.tif 000085
【０２９１】
中間体７０の合成を実施例Ａ５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６９（４．３５ｇ、６．０３ミリモル）を用いて出発することで中間体７０を黄色の油（３．２９ｇ）として得たが、これは放置すると固化した。
【０２９２】
実施例Ａ７１
中間体７１：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−オキソエチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０２９３】
【化８５】
2013540740.tif 000086
【０２９４】
中間体７１の合成を実施例Ａ６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７０（４．５２ｇ、１２．０８ミリモル）を用いて出発することで中間体７１を淡黄色の油（４ｇ、８９％の収率）として得た。
【０２９５】
実施例Ａ７２
中間体７２：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシブト−３−イン−１−イル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０２９６】
【化８６】
2013540740.tif 000087
【０２９７】
中間体７２の合成を実施例Ａ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７１（４ｇ、１０．７５ミリモル）を用いて出発することで中間体７２をジアステレオ異性体混合物（３．９ｇ、９１％の収率）として油の状態で得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０２９８】
実施例Ａ７３
中間体７３：［（１Ｒ）−１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−１−シクロプロピル−２−オキソブト−３−イン−１−イル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０２９９】
【化８７】
2013540740.tif 000088
【０３００】
中間体７３の合成を実施例Ａ８に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７２（３．９ｇ、９．８ミリモル）を用いて出発することで中間体７３を黄色の油（３．４ｇ、８８％の収率）として得た。
【０３０１】
実施例Ａ７４
中間体７４：Ｎ−［（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］カルバミン酸ｔ−ブチルの製造
【０３０２】
【化８８】
2013540740.tif 000089
【０３０３】
中間体７４の合成を実施例Ａ９に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７３（３．４ｇ、８．５８ミリモル）を用いて出発することで中間体７４を発泡体（３．４５ｇ、９８％の収率）として得た。
【０３０４】
実施例Ａ７５
中間体７５：（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メタンアミンの製造
【０３０５】
【化８９】
2013540740.tif 000090
【０３０６】
中間体７５の合成を実施例Ａ１０に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７４（３．４５ｇ、８．４１ミリモル）を用いて出発することで中間体７５を黄色の発泡体（２．８５ｇ）として得て、これをさらなる精製なしに次の段階で用いた。
【０３０７】
実施例Ａ７６
中間体７６：Ｎ−［（Ｒ）−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−シクロプロピル−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−クロロ−アセトアミドの製造
【０３０８】
【化９０】
2013540740.tif 000091
【０３０９】
中間体７６の合成を実施例Ａ１１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７５（２．８ｇ、９．０３ミリモル）を用いて出発することで中間体７６を固体（１．０３ｇ、３０％の収率）として得た。
【０３１０】
実施例Ａ７７
中間体７７：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−オンの製造
【０３１１】
【化９１】
2013540740.tif 000092
【０３１２】
中間体７７の合成を実施例Ａ１２に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７６（０．７６５ｇ、１．９８ミリモル）を用いて出発することで中間体７７を白色の固体（０．５２ｇ、７５％の収率）として得た。
【０３１３】
実施例Ａ７８
中間体７８：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−チオンの製造
【０３１４】
【化９２】
2013540740.tif 000093
【０３１５】
中間体７８の合成を実施例Ａ１３に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７７（０．６２ｇ、１．７７ミリモル）を用いて出発することで中間体７８を淡赤色の固体（０．４６ｇ、７０％の収率）として得た。
【０３１６】
実施例Ａ７９
中間体７９：（Ｒ）−４−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，５−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３１７】
【化９３】
2013540740.tif 000094
【０３１８】
中間体７８（０．４６ｇ、１．２６ミリモル）をメタノール中７Ｎのアンモニア溶液（７ｍＬ、４９ミリモル）に入れることで生じさせた混合物を密封型管内で撹拌しながらこれに３２％のアンモニア水溶液（３ｍＬ、５０．７ミリモル）を加えた。その混合物を７０℃で８時間撹拌した。室温に冷却した後の混合物を水およびＮａ２ＣＯ３（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から２／９８から３／９７から１０／９０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで中間体７９（０．３４ｇ、７８％の収率）を黄色の発泡体として得た。
【０３１９】
実施例Ａ８０
中間体８０：（Ｒ）−４−［５−（ベンズヒドリリデンアミノ）−２−フルオロフェニル］−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３２０】
【化９４】
2013540740.tif 000095
【０３２１】
中間体８０の合成を実施例Ａ１５に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体７９（０．３４ｇ、０．９７４ミリモル）を用いて出発することで中間体８０を黄色の固体（０．３８ｇ、６１％の収率）として得た。
【０３２２】
実施例Ａ８１
中間体８１：（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３２３】
【化９５】
2013540740.tif 000096
【０３２４】
中間体８１の合成を実施例Ａ１６に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体８０（０．３８ｇ、０．８４５ミリモル）を用いて出発することで中間体８１を淡黄色の固体（０．１６ｇ、６６％の収率）として得た。
【０３２５】
最終的化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１：ラセミ−４−メチル−４−（３−ピリミジン−５−イルフェニル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３２６】
【化９６】
2013540740.tif 000097
【０３２７】
中間体２８（０．０２６ｇ、０．０８１ミリモル）をＥｔＯＨ（３ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を撹拌しながらこれにＮＨ４Ｃｌ（０．００７ｇ、０．１２１ミリモル）を加えた後、その混合物を７５℃に１８時間加熱した。溶媒を真空下で除去した後、その残留物をＤＣＭに溶解させて、水で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＡｃＯＥｔに０／１００から２０／８０）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物１（０．０２ｇ、８１％の収率）を淡黄色の固体として得た。
【０３２８】
実施例Ｂ２
化合物２：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３２９】
【化９７】
2013540740.tif 000098
【０３３０】
化合物２の合成を実施例Ｂ１に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体３０（０．１ｇ、０．２８５ミリモル）を用いて出発することで化合物２を白色の固体（０．０６ｇ、６３％の収率）として得た。
【０３３１】
実施例Ｂ３
化合物３：ラセミ−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）フェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドの製造
【０３３２】
【化９８】
2013540740.tif 000099
【０３３３】
５−クロロ−２−ピリジンカルボン酸（０．１５ｇ、０．９６ミリモル）とＨＡＴＵ（０．４０ｇ、１．０４ミリモル）をＤＣＭ（１５ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液にＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（０．２４ｍＬ、１．９２ミリモル）を加えた。その混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、中間体１６（０．２１ｇ、０．８７ミリモル）を加えた後の混合物を室温で１８時間撹拌した。その混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物３（０．０７０ｇ、２１％の収率）を白色の固体として得た。
【０３３４】
実施例Ｂ４
化合物４：ラセミ−４−（２，４−ジフルオロ−５−ピリミジン−５−イル−フェニル）−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３３５】
【化９９】
2013540740.tif 000100
【０３３６】
中間体３２（０．１５ｇ、０．４４ミリモル）とピリミジン−５−ボロン酸（０．１６ｇ、１．３２ミリモル）と炭酸カリウム（０．１８ｇ、１．３２ミリモル）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とエタノール（０．４ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２５ｇ、０．０２ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物４（０．０８１ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得た。
【０３３７】
実施例Ｂ５
化合物７：（Ｒ）−４−（３’−メトキシビフェニル−３−イル）−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３３８】
【化１００】
2013540740.tif 000101
【０３３９】
中間体４２（０．１５ｇ、０．４９ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．２３ｇ、１．４８ミリモル）と炭酸カリウム（０．２０ｇ、１．４８ミリモル）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）とエタノール（０．４ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０２８ｇ、０．０２５ミリモル）を加えた。その混合物をマイクロ波照射下において１５０℃で３０分間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮することで化合物７（０．１２ｇ、７３％の収率）を白色の固体として得た。
【０３４０】
実施例Ｂ６
化合物１０：（Ｓ＊）−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロフェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物１１：（Ｒ＊）−Ｎ−［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロフェニル］−５−クロロピリジン−２−カルボキサミドアミンの製造
【０３４１】
【化１０１】
2013540740.tif 000102
【０３４２】
ラセミ−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（６−アミノ−４−メチル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドのサンプル（０．１８２ｇ）にＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ  Ｄａｉｃｅｌカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣによる分離を３５℃で流量を３．０ｍｌ／分にして受けさせることで相当する鏡像異性体を得た。可動相をＣＯ２、５０％のエタノール、５０％のＥｔＯＨ（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）にして７分間保持することで化合物１１（０．０７ｇ、３８％の収率）と化合物１０（０．０６ｇ、３３％の収率）を得た。
【０３４３】
実施例Ｂ７
化合物２１：ラセミ−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２２：（Ｒ＊）−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イ
ル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２３：（Ｓ＊）−４−［３−（５−メトキシピリジン−３−イル）−フェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３４４】
【化１０２】
2013540740.tif 000103
【０３４５】
中間体５２（０．２ｇ、０．５４ミリモル）と５−メトキシピリジン−３−ボロン酸（０．１６３ｇ、１．０７ミリモル）と炭酸カリウム（０．２２２ｇ、１．６１ミリモル）を１，４−ジオキサン（６ｍＬ）とエタノール（０．６ｍＬ）に入れることで生じさせた懸濁液を室温で撹拌しながらこれに窒素下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０３１ｇ、０．０２７ミリモル）を加えた。その混合物を８０℃で２４時間撹拌した。次に、その混合物を水で希釈した後、ＤＣＭを用いた抽出を実施した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液をＤＣＭに０／１００から３／９７）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をジエチルエーテルと一緒にしてすり潰し、音波処理し、濾過した後、真空下５０℃で乾燥させることで化合物２１（０．１３ｇ、６０％の収率）を白色の固体として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ２、ｉＰｒＮＨ２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２２（０．０４７ｇ、２２％の収率）と化合物２３（０．０５１ｇ、２４％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。
【０３４６】
実施例Ｂ８
化合物２４：ラセミ−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２５：（Ｒ＊）−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンと化合物２６：（Ｓ＊）−４−［５−（５−クロロピリジン−３−イル）−フルオロフェニル］−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−アミンの製造
【０３４７】
【化１０３】
2013540740.tif 000104
【０３４８】
化合物２４の合成を実施例Ｂ７に記述した方策と同じ方策に従って実施した。中間体６１（０．３ｇ、０．７７ミリモル）を用いて出発することで化合物２４を白色の固体（０．２１ｇ、６４％の収率）として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ２、ｉＰｒＮＨ２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２５（０．０８９ｇ、２７％の収率）と化合物２６（０．０９２ｇ、２８％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。
【０３４９】
実施例Ｂ９
化合物２７：ラセミ−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物２８：（Ｒ＊）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドと化合物２９：（Ｓ＊）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−メチル−２−（トリフルオロメチル）−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−３，５−ジクロロピリジン−２−カルボキサミドの製造
【０３５０】
【化１０４】
2013540740.tif 000105
【０３５１】
３，５−ジクロロ−２−ピリジンカルボン酸（０．５４ｇ、０．８１ミリモル）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解させた後、ＤＭＴＭＭ（０．２２３ｇ、０．８１ミリモル）を加えた。その混合物を５分間撹拌した後、中間体６３（０．２２ｇ、０．６７ミリモル）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で加えて、その混合物を更に４時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液／ＤＣＭを０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物をＤＩＰＥから結晶化させることで化合物２７（０．１２４ｇ、３７％の収率）を白色の固体として得た。次に、このラセミ化合物に精製をＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ−Ｈカラム（２０ｘ２５０ｍｍ）使用調製用ＳＦＣで可動相（ＣＯ２、ｉＰｒＮＨ２が０．３％のｉＰｒＯＨ）を用いて受けさせることで化合物２８（０．０３８ｇ、１１％の収率）と化合物２９（０．０３６ｇ、１１％の収率）を高純度の鏡像異性体（両方とも固体状化合物）として得た。
【０３５２】
実施例Ｂ１０
化合物３３：（Ｒ）−Ｎ−｛３−［６−アミノ−４−シクロプロピル−４，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イル］−４−フルオロフェニル｝−５−クロロ−３−フルオロピリジン−２−カルボキサミドの製造
【０３５３】
【化１０５】
2013540740.tif 000106
【０３５４】
５−クロロ−３−フルオロピリジン−２−カルボン酸（０．０５２ｇ、０．２６ミリモル）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解させた後、ＤＭＴＭＭ（０．０８６ｇ、０．３１ミリモル）を加えた。その混合物を５分間撹拌した後、中間体８１（０．０７４ｇ、０．２６ミリモル）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液を０℃で加えて、その混合物を更に２４時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；メタノール中７Ｍのアンモニア溶液／ＤＣＭを０／１００から５／９５）で精製した。所望画分を集めた後、真空下で濃縮した。その残留物を真空下で乾燥させることで化合物３３（０．０８４ｇ、７３％の収率）を白色の固体として得た。
【０３５５】
【表１】
2013540740.tif 000107
【０３５６】
【表２】
2013540740.tif 000108
【０３５７】
【表３】
2013540740.tif 000109
【０３５８】
【表４】
2013540740.tif 000110
【０３５９】
Ｃ．分析部分
ＬＣＭＳ
本発明の化合物が示す（ＬＣ）ＭＳ特徴付けに関しては下記の方法を用いた。
【０３６０】
一般的手順Ａ
脱気装置付きポンプ（４式または２式）、オートサンプラー、カラムオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＨＰ
１１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）装置を用いてＨＰＬＣ測定を実施した。ＭＳ検出器にはエレクトロスプレーイオン化源が備わっていた。源の温度を１４０℃または１００℃のいずれかに維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。
【０３６１】
一般的手順Ｂ
サンプラーオーガナイザー、脱気装置付き２式ポンプ、４個のカラム用のオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）装置を用いてＵＰＬＣ（超性能液クロ）測定を実施した。ＭＳ検出器にはＥＳＣＩ二重イオン化源（大気圧化学イオン化と組み合わされたエレクトロスプレー）が備わっていた。窒素をネブライザーガスとして用いた。源の温度を１４０℃に維持した。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。
【０３６２】
一般的手順Ｃ
脱気装置付き２式ポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および以下の個々の方法に指定する如きカラム（カラムを４０℃の温度に保持）を含有して成るＵＰＬＣ（超性能液クロ）Ａｃｑｕｉｔｙ  （Ｗａｔｅｒｓ）装置を用いてＬＣ測定を実施した。カラムから出てきた流れをＭＳ検出器に送った。ＭＳ検出器にはエレクトロスプレーイオン化源が備わっていた。毛細管針の電圧を３ｋＶにしそしてＱｕａｔｔｒｏ（Ｗａｔｅｒｓの三連四重極質量分析計）の源の温度を１３０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて実施した。
【０３６３】
方法１：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−
Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施した。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル）が５％から５．０分かけてＢが１００％にして５．１５分間維持しそして５．３分の時に初期条件に平衡状態にして７．０分間置く。注入体積２μｌ。０．３秒の滞留時間を用いて１００から７５０まで０．５秒で走査することによって高解像度質量スペクトル（飛行時間、ＴＯＦ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を正イオン化モードの場合には２．５ｋＶにしそして負イオン化モードの場合には２．９ｋＶにした。コーン電圧を正および負両方のイオン化モードで２０Ｖにした。ロイシン−エンケファリンがロック質量校正で用いた標準物質であった。
【０３６４】
方法２：方法１と同じＨＰＬＣ勾配
０．１秒の滞留時間を用いて１００から７５０まで０．５秒で走査することによって高解像度質量スペクトル（飛行時間、ＴＯＦ検出器）を正イオン化モードでのみ取得した。毛細管針の電圧を正イオン化モードの場合には２．５ｋＶにしそしてコーン電圧を２０Ｖにした。ロイシン−エンケファリンがロック質量校正で用いた標準物質であった。
【０３６５】
方法３：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル／メタノールが１／１の混合物）が５％を２分間維持し、３．０分かけてＢが１００％にして３．１５分間維持しそして３．３０分の時に初期条件に平衡状態にして５．０分間置く。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２０Ｖと５０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。
【０３６６】
方法４：
一般的手順Ｂに加えて、逆相ＵＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＲＲＨＤ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（１．８μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして５０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル）が５％を３．８分かけてＡが４０％でＢが６０％にし、４．６分かけてＡが５％でＢが９５％にして５分間維持した。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２５Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。
【０３６７】
方法５：方法４と同じ勾配、使用カラム：ＡｇｉｌｅｎｔのＲＲＨＤ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８（１．８μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）。
【０３６８】
方法６：
一般的手順Ｃに加えて、逆相ＵＰＬＣをＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ（橋状エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌカラム（１．７μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ）を用いて流量を０．３４３ｍｌ／分にして実施した。２種類の可動相（可動相Ａ：７ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％／アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリルが１００％）を用いてＡが８４．２％でＢが１５．８％（０．４９分間維持）から２．１８分かけてＡが１０．５％でＢが８９．５％にして１．９４分間維持し
そして０．７３分かけて初期条件に戻して０．７３分間維持する勾配条件で流した。２ｍｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正および負イオン化モードで２０Ｖにした。０．１秒の走査間遅延を用いて１００から１０００まで０．２秒で走査することで質量スペクトルを取得した。
【０３６９】
方法７：
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔのＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ３０ｍｍ）を用いて流量を１．０ｍｌ／分にして６０℃で実施したが、ＭＳ検出器への分割を行わなかった。用いた勾配条件は下記である：Ａ（０．５ｇ／ｌの酢酸アンモニウム溶液＋５％のアセトニトリル）が９５％でＢ（アセトニトリル／メタノールが１／１の混合物）が５％から５．０分かけてＢが１００％にして５．１５分間維持しそして５．３０分の時に初期条件に平衡状態にして７．０分間置く。注入体積２μｌ。０．０８秒のチャンネル間遅延を用いて１００から１０００まで０．１秒で走査することによって低解像度質量スペクトル（単一四重極、ＳＱＤ検出器）を取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにした。コーン電圧を正イオン化モードの場合には２０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。
【０３７０】
融点
値はピーク値または溶融範囲のいずれかであり、そして得る値はこの分析方法に通常関連した実験不確かさを伴う。
【０３７１】
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置（表３中にＦＰ９０で示す）
いろいろな化合物が示す融点の測定をＭｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置に備わっている開放毛細管内で実施した。融点の測定を１、３、５または１０℃／分の温度勾配で実施した。最大温度を３００℃にした。融点をデジタルディスプレーで読み取った。
【０３７２】
【表５】
2013540740.tif 000111
【０３７３】
【表６】
2013540740.tif 000112
【０３７４】
旋光
旋光の測定をナトリウムランプが備わっているＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１偏光計を用いて実施した。
【０３７５】
【表７】
2013540740.tif 000113
【０３７６】
ＳＦＣＭＳ−方法：
ＳＦＣ−ＭＳ方法の一般的手順
ＳＦＣ測定をＢｅｒｇｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ、ＵＳＡ）のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＳＦＣ装置を用いて実施したが、それには、二酸化炭素（ＣＯ２）および修飾剤を送るためのＦＣＭ−１２００２式ポンプ流体制御モジュール、ＣＴＣ
Ａｎａｌｙｔｉｃｓ自動液体サンプラー、カラムを室温から８０℃にまで加熱するためのＴＣＭ−２００００熱制御モジュールが備わっていた。４００バールまで耐える高圧フローセルが備わっているＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＵＶ光ダイオードアレー検出器を用いた。カラムから出る流れを分割してＭＳ分光計に送った。ＭＳ検出器には大気圧イオン化源が備わっていた。Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分光光度計では下記のイオン化パラメーターを用いる：コロナ：９μａ、源の温度：１４０℃、コーン：３０Ｖ、プローブの温度：４５０℃、抽出器：３Ｖ、脱溶媒和ガス：４００Ｌ／時、コーンガス：７０Ｌ／時。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムを用いて実施した。
【０３７７】
方法１：
一般的手順に加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ  ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ２であり、エタノールが５０％でＥｔＯＨ（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）が５０％を７分間保持。
【０３７８】
方法２：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ  ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ２であり、メタノール（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）が２０％を７分間保持。
【０３７９】
方法３：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ  ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ２であり、イソプロパノール（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）が２５％を７分間保持。
【０３８０】
方法４：
一般的手順Ａに加えて、ＳＦＣにおけるキラル分離をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ  ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６ｘ２５０ｍｍ）を用いて流量を３．０ｍｌ／分にして３５℃で実施した。可動相はＣＯ２であり、エタノール（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）が３０％を７分間保持。
【０３８１】
【表８】
2013540740.tif 000114
【０３８２】
薬理学的実施例
本発明に示す化合物はβ−サイトＡＰＰ開裂酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。ＢＡＣＥ１、即ちアスパラギン酸プロテアーゼの阻害はアルツハイマー病（ＡＤ）の治療に関係していると考えている。β−アミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）からβ−アミロイドペプチド（Ａβ）が生成して蓄積すると、それはＡＤの発症および進行で鍵となる役割を果たすと考えている。アミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）のＡβドメインのＮ末端およびＣ末端のそれぞれがβ−セクレターゼおよびγ−セクレターゼによって逐次的に開裂するとＡβが生じる。式（Ｉ）で表される化合物はその酵素の活性を阻害する能力を有するお陰で実質的にＢＡＣＥ１に影響を与えると予測している。生化学的蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）が基になった検定およびＳＫＮＢＥ２細胞を用いた細胞αｌｉｓａ検定［以下に記述しかつそのような化合物、より特別には式（Ｉ）に従う化合物の同定で用いるに適切である］を用いてそのような阻害剤を試験した時の挙動を表１に示す。
【０３８３】
生化学的ＦＲＥＴが基になった検定
この検定は蛍光共鳴エネルギー移動検定（ＦＲＥＴ）が基になった検定である。この検定用の基質はＡＰＰから誘導された１３個のアミノ酸から成るペプチドであり、これはアミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ開裂部位の「Ｓｗｅｄｉｓｈ」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有する。この基質はまた２個の蛍光団：（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）［これは励起波長が３２０ｎｍで発光波長が４０５ｎｍの蛍光ドナーである］および２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）［これは特許で守られたクエンチャーアクセプターである］を含有する。これらの２つの基の間の距離を光で励起させた時にドナーの蛍光エネルギーが共鳴エネルギー移動でアクセプターによって有意に消光されるように選択した。蛍光団ＭｃａはＢＡＣＥ１で開裂を受けると消光基Ｄｎｐから分離することで、そのドナーの完全な蛍光収率が回復する。蛍光の増大は蛋白分解速度と直線関係にある（Ｋｏｉｋｅ  Ｈ他、Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９、１２６、２３５−４２）。
【０３８４】
簡単に述べると、３８４穴フォーマットに組換え型ＢＡＣＥ１蛋白質を１μｇ／ｍｌの最終濃度になるように入れて、それを１０μｍの基質と一緒にして、インキュベーション
用緩衝液（４０ｍＭのクエン酸塩緩衝剤、ｐＨ５．０、０．０４％のＰＥＧ、４％のＤＭＳＯ）中で化合物の存在有り無しで室温で１２０分間インキュベートする。次に、Ｔ＝０およびＴ＝１２０の時の蛋白分解の量を蛍光測定（３２０ｎｍで励起させて４０５ｎｍで発光）で直接測定する。結果をＴ１２０とＴ０の間の差としてＲＦＵで表す。最小二乗和方法を用いて最良適合曲線を化合物の濃度と対比させたＣｏｎｔｒｏｌｍｉｎ（％）のプロットに適合させる。これを用いてＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
【０３８５】
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：酵素なし反応
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：酵素あり反応
効果％＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
対照％＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ％＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
【０３８６】
以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。
【０３８７】
【表９】
2013540740.tif 000115
【０３８８】
ＳＫＮＢＥ２細胞を用いた細胞αｌｉｓａ検定
２つのαｌｉｓａ検定で、生じてヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地の中に分泌されるＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の濃度を量化する。この検定は、野生型アミロイド前駆体蛋白質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２が基になって
いる。当該化合物を希釈し、前記細胞に加え、１８時間インキュベートした後、Ａβ４２およびＡβｔｏｔａｌの測定値を得る。ＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の測定をサンドイッチαｌｉｓａで実施する。αｌｉｓａはストレプトアビジン被覆ビードに結合させておいたビオチニル化抗体ＡｂＮ／２５およびそれぞれＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２を検出するための抗体Ａｂ４Ｇ８またはＡｂ４２／２６と接合させておいた受容体ビードを用いたサンドイッチ検定である。ＡβｔｏｔａｌまたはＡβ４２を存在させると前記ビードが近くに寄ってくる。ドナービードを励起させると一重項酸素分子の放出が誘発され、それが受容体ビード内で起こるエネルギー移動のカスケードの引き金になり、その結果として発光が起こる。インキュベーションを１時間行った後に発光を測定する（６５０ｎｍで励起させて６１５ｎｍで発光）。
【０３８９】
最小二乗和方法を用いて最良適合曲線を化合物の濃度と対比させたＣｏｎｔｒｏｌｍｉｎ（％）のプロットに適合させる。これを用いてＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
【０３９０】
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：αｌｉｓａで化合物もビオチニル化Ａｂも用いないで予備インキュベートした細胞
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：化合物なしに予備インキュベートした細胞
効果％＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
対照％＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ％＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
【０３９１】
以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。
【０３９２】
【表１０】
2013540740.tif 000116
【０３９３】
インビボ効力の立証
本発明のＡβペプチド減少剤を用いて哺乳動物、例えばヒトにおけるＡＤを治療するこ
とができるか或はヒトモデル、例えばこれらに限定するものでないが、マウス、ラットまたはモルモットなどにおける効力を立証することができる。その哺乳動物がＡＤにかかっていると診断することは不可能であり、またその哺乳動物にＡＤの遺伝的素因を持たせることも不可能であるが、ＡＤに感染したヒトに見られる様式と同様な様式でＡβが過剰に生成して最終的に沈着するように遺伝子導入することは可能である。
【０３９４】
Ａβペプチド減少剤を標準的方法のいずれかを用いて標準的形態のいずれかで投与することができる。例えば、これらに限定するものでないが、Ａβペプチド減少剤の形態を経口または注射で投与する液体、錠剤またはカプセルの形態にしてもよい。Ａβペプチド減少剤を血液、血漿、血清、脳髄液（ＣＳＦ）または脳内のＡβペプチドの濃度が有意に減少するに充分ないずれかの量で投与してもよい。
【０３９５】
Ａβ４２ペプチド減少剤を急性投与した時にインビボでＡβペプチド濃度が減少するか否かを測定する目的で、遺伝子導入をしていない齧歯類、例えばマウスまたはラットなどを用いた。Ａβペプチド減少剤で処置した動物を検査して、未処置または媒体で処置した動物と比較して、可溶Ａβ４２および総Ａβの脳内濃度を標準的技術、例えばＥＬＩＳＡなどを用いて量化した。処置時間は数時間（時）から数日間に及んで多様であり、効果開始時間経過が確立できた時点でＡβ４２減少の結果を基にして処置時間を調整した。
【０３９６】
Ａβ４２の減少をインビボで測定する典型的なプロトコルを示すが、それは、検出可能Ａβの濃度を最適にする目的で使用可能な数多くの変法のほんの１つである。例えばＡβペプチド減少用化合物を２０％のヒドロキシプロピルβシクロデキストリンに配合してもよい。一晩絶食させておいた動物にＡβペプチド減少剤を１回分の経口投与（ｐ．ｏ．）または１回分の皮下投与（ｓ．ｃ．）として投与した。一定の時間が経過、通常は２または４時間（表１９に示すように）経過した後、その動物を屠殺してＡβ４２濃度を分析した。
【０３９７】
断頭術およびＥＤＴＡで処理しておいた採取用管を用いた放血によって血液を採取した。血液を１９００ｇの遠心分離に４℃で１０分間かけることで血漿を回収した後、後で分析する目的で瞬間凍結した。頭蓋および後脳から脳を取り出した。小脳を取り出した後、左脳半球と右脳半球を分離した。左脳半球を試験化合物濃度の定量的分析の目的で−１８℃で保存した。右脳半球を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で濯いだ後、直ちにドライアイスで凍結して、生化学的検定の目的で均一化を行うまで−８０℃で保存した。
【０３９８】
遺伝子導入をしていない動物から取り出したマウス脳を８倍体積の０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）／５０ｍＭのＮａＣｌ［プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ−１１８７３５８０００１または０４６９３１５９００１）を入れておいた］に入れて懸濁させた［例えば０．１５８ｇの脳の場合には組織１グラム当たりに０．４％ＤＥＡを１．２６４ｍｌ加えた］。あらゆるサンプルに均一化をＦａｓｔＰｒｅｐ−２４装置（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）内で溶解用マトリクスＤ（ＭＰＢｉｏ＃６９１３−１００）を用いて６ｍ／秒で２０秒間受けさせた。ホモジネートを２２１．３００ｘｇの遠心分離に５０分間かけた。次に、その結果として得た高速上澄み液を新鮮なエッペンドルフ管に移した。９部の上澄み液を１部の０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）で中和した後、それを用いてＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の量化を実施した。
【０３９９】
脳ホモジネートの可溶画分に入っているＡβｔｏｔａｌおよびＡβ４２の量を量化する目的で酵素免疫測定法を用いた。簡単に述べると、標準［合成Ａβ１−４０およびＡβ１−４２（Ｂａｃｈｅｍ）の希釈液］の調製を１．５ｍｌのエッペンドルフ管内でＵｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅを用いて最終濃度が１００００から０．３ｐｇ／ｍｌの範囲になるように実施した。サンプルおよび標準をＡβ４２検出の場合にはＨＲＰＯ標識Ｎ末端抗体と一
緒にインキュベートしそしてＡβｔｏｔａｌ検出の場合にはビオチニル化中間ドメイン抗体４Ｇ８と一緒にインキュベートした。次に、抗体被覆プレートに接合体／サンプルまたは接合体／標準混合物を５０μｌ加えた［捕捉用抗体は選択的にＡβ４２のＣ末端（Ａβ４２検出の場合には抗体ＪＲＦ／ｃＡβ４２／２６）およびＡβのＮ末端（Ａβｔｏｔａｌ検出の場合には抗体ＪＲＦ／ｒＡβ／２）を認識する］。抗体−アミロイド複合体が生じるように前記プレートを４℃で一晩インキュベートした。このインキュベーションに続く洗浄段階の後にＱｕａｎｔａ  Ｂｌｕ蛍光性ペルオキシダーゼ基質を製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌ）の指示に従って添加することでＡβ４２量化のためのＥＬＩＳＡを終了した。１０から１５分後に読み取りを実施した（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。
【０４００】
Ａβｔｏｔａｌの検出では、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ接合体を添加し、６０分後に追加的洗浄段階そしてＱｕａｎｔａ  Ｂｌｕ蛍光性ペルオキシダーゼ基質の添加を製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌ）の指示に従って実施した。１０から１５分後に読み取りを実施した（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。
【０４０１】
このモデルでＡβ４２が未処置動物に比べて少なくとも２０％減少するならば、それは有利なことである。
【０４０２】
以下の例示化合物に試験を本質的に上述したようにして受けさせた結果、それらは下記の活性を示した。
【０４０３】
【表１１】
2013540740.tif 000117
【国際調査報告】
2013540740.tif 000119
2013540740.tif 000120
2013540740.tif 000121