(57)【要約】本発明は、プロスタソームをインビトロで検出し、CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHC Iからなる群より選択される少なくとも1種の抗原のプロスタソームにおける発現を定量化する工程、ならびに定量化された発現値を健常対象に由来する各抗原についての基準値と比較する工程を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するかまたはその予後を提供する方法に関する。さらに、抗原間の商が使用されてもよい。検出は、フローサイトメトリーまたはELISAによってなされ得る。前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供において使用するためのキットが、さらに提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロスタソームをインビトロで検出し、少なくとも1種の抗原のプロスタソームにおける発現を定量化する工程、ならびに定量化された発現値を健常対象に由来する各抗原についての基準値と比較する工程を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するためまたはその予後を提供するための方法。
【請求項２】
前記少なくとも1種の抗原が、CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHC Iからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供が、前記基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD10、CD26、CD142、およびMHC Iのうちの少なくとも1種のアップレギュレーションに基づく、請求項2記載の方法。
【請求項４】
前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供が、前記基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD13およびCD59のうちの少なくとも1種のダウンレギュレーションに基づく、請求項2記載の方法。
【請求項５】
前記抗原のうちの少なくとも2種の間で商が算出され、該商が商の参照値と比較される、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
前記抗原のうちの少なくとも1種に特異的に結合することができる少なくとも1種類の抗体が、その発現を検出および定量化するために使用される、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも1種類の抗体が、区別可能な蛍光マーカーにより標識される、請求項6記載の方法。
【請求項８】
前記抗原のうちの少なくとも1種に結合した前記抗体が、フローサイトメトリーにより検出および定量化される、請求項7記載の方法。
【請求項９】
前記抗原のうちの少なくとも1種に結合した前記抗体が、ELISAにより検出および定量化される、請求項6記載の方法。
【請求項１０】
CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHC Iからなる群より選択される少なくとも1種の抗原に特異的に結合する少なくとも1種類の抗体を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供において使用するための、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供において使用するための方法およびキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
癌は、最も有病率の高い致死的な疾患のうちの一つであり、診断および処置における近年の進歩にも関わらず、未だ、年間死亡例のかなりの数を占めている。
【０００３】
一例として、前立腺癌は、限局性の腫瘍または腫瘍の転移拡散に由来する症状、例えば排尿機能障害または骨痛を呈する、男性において診断される10種類の癌疾患のうち最も有病率の高い癌疾患であり、この疾患は、診断の時点で進行期にあることが多い。直腸診においてまたは良性前立腺肥大症を有する男性の手術の際に入手された組織の組織診において、偶然発見される場合もある。
【０００４】
前立腺特異抗原（PSA）の測定により前立腺癌の診断のパターンが変化しており、初期に検出される症例が増え、進行期に検出される症例が減った。しかしながら、PSAは、血清中の前立腺癌特異的なマーカーではないため、理想的な診断マーカーでなく、かつ従って、前立腺癌のスクリーニングには適していない。PSA試験は、良性前立腺肥大症と初期の前立腺癌とを識別することができず、さらには、転移の可能性が高い前立腺癌（侵襲性前立腺癌）と、侵襲性がないかまたは弱いそのような癌（緩徐進行性前立腺癌）とを識別することができない。「不特定の」PSAの増加は、前立腺の複数回の生検につながることが極めて多いが、これは多くの場合、患者および社会の両方にとって不利益である。とりわけ、PSA試験は、追跡調査において生検を使用するために患者が敗血症となるリスクを負っている。
【０００５】
PSA試験のこの欠点はさらに、結果として切除術、即ち、前立腺全摘除術につながることが多い。この種の過剰処置は、患者にとってのみならず、余分な費用のため社会にとっても大きな不都合である。
【０００６】
エキソソームの一群としてのプロスタソームは、前立腺の分泌産物である。これらのオルガネラの膜構造は複雑であり、膜物質の二次元ゲル電気泳動により、100種を超える異なるタンパク質実体が明らかになっている。プロスタソームは、神経内分泌分子およびCD（表面抗原分類）分子を含有しており、多くの異なる酵素がプロスタソーム膜モザイクの一部となっている。プロスタソームは多くの異なる生物学的活性を有するとされているが、それらの生理学的機能は未だ不明である。
【０００７】
WO2007/015174（特許文献1）には、エキソソーム特異的リガンドおよびそれらを含む組成物が開示されている。US 7,083,796（特許文献2）は、ミコバクテリウム種抗原を少なくとも含有している組成物および融合タンパク質、ならびにそのような組成物および融合タンパク質をコードするRNAを開示している。US 6,620,922（特許文献3）には、前立腺癌のような癌の治療および診断のための組成物および方法が開示されている。US 6,107,090（特許文献4）は、前立腺特異的膜抗原の細胞外ドメインを認識するか、または前立腺特異的膜抗原に結合してそれと共に内部移行する、抗体もしくはその結合部分、プローブ、リガンド、またはその他の生物学的作用物質の使用を開示している。「Perspectives on the Biological Role of Human Prostasomes」（Lena Carlsson, 博士論文 2001）（非特許文献1）には、プロスタソームが強力な抗菌効果を有することが開示されている。「Flow cytometric technique for determination of prostasomal quantity, size and expression of CD10, CD13, CD26 and CD59 in human seminal plasma」（Lena Carlsson et al, international journal of andrology(2006)）（非特許文献2）には、CDマーカーのプロスタソームにおける発現が論じられている。上述のように、前立腺癌の検出のための改良された非侵襲性の診断ツールが必要とされている。法律により許容される最大の程度までその内容が本明細書に含まれる上記刊行物は、前立腺癌の検出のためのいかなる非侵襲性の診断ツールも開示していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO2007/015174
【特許文献２】US 7,083,796
【特許文献３】US 6,620,922
【特許文献４】US 6,107,090
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】「Perspectives on the Biological Role of Human Prostasomes」、Lena Carlsson, 博士論文 2001
【非特許文献２】「Flow cytometric technique for determination of prostasomal quantity, size and expression of CD10, CD13, CD26 and CD59 in human seminal plasma」、Lena Carlsson et al, international journal of andrology(2006)
【発明の概要】
【００１０】
発明の説明
本発明の第一の局面によると、プロスタソームをインビトロで検出し、少なくとも1種の抗原のプロスタソームにおける発現を定量化する工程、ならびに定量化された発現値を健常対象に由来する各抗原についての基準値と比較する工程を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するかまたはその予後を提供する方法が提供される。本明細書において健常対象とは、癌の主観的徴候および／または臨床徴候を有していない対象、例えば、前立腺癌を有していない対象と定義される。
【００１１】
新たな型のバイオマーカーとしてのプロスタソームのインビトロ検出、および少なくとも1種の抗原のプロスタソームにおける発現の定量化はそれぞれ、単一の工程で実施されてもよいし、または二つの個別の工程で実施されてもよい。プロスタソームのインビトロ検出のために使用される抗体は、その後の、プロスタソームにおける抗原発現の定量化において使用される抗体と同一であっても異なっていてもよい。例として、モノクローナル抗体mAb78（例えば、Floryk D et al., Differentiation of human prostate cancer PC-3 cells induced by inhibitors of inosine 5'-monophosphate dehydrogenase.Cancer Res.2004;64:9049-9056を参照のこと）およびmAb8H10は、プロスタソームのインビトロ検出のために有用であることが見出されている。
【００１２】
検出およびプロスタソームにおける発現の定量化の前の工程において、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象由来の試料を用意する。本発明の方法は非侵襲性である、即ち、生検を必要としない。試料は、天然形態または処理形態の、前立腺分泌物、尿、精漿、血液などの体液であり得る（表4を参照のこと）。試料の処理は、例えば、遠心分離であり得る。
【００１３】
本発明の一つの態様によると、試料の用意と、その後の検出およびプロスタソームにおける抗原発現の定量化の工程との間に、該試料を、プロスタソームについて濃縮する。この濃縮は、固体支持体上に、例えば、ニトロセルロース膜上に、ラジオイムノアッセイチューブ内に、ナノ粒子のような粒子上に、またはELISAプレート上に、プロスタソームを固定化することによって実施可能である。
【００１４】
本発明の一つの態様において、少なくとも1種の抗原は、CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHC Iからなる群より選択される。
【００１５】
本発明の一つの態様において、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するかまたはその予後を提供する方法は、基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD10、CD26、（Tissue Factorとしても公知の）CD142、およびMHC Iのうちの少なくとも1種のアップレギュレーションに基づく。従って、本発明によると、基準値（即ち、対照）と、前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいて発現されたCD26との間の商は、0.95以下であり得る。同様に、CD142について、基準値（即ち、対照）と、前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいて発現されたCD142との間の商は、0.75以下であり得る。MHC Iについても、前立腺癌を診断または予後判定するためには、基準値（即ち、対照）と、前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいて発現されたMHC Iとの間の商が、0.75以下であり得る。
【００１６】
別の態様において、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するかまたはその予後を提供する方法は、基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD13およびCD59のうちの少なくとも1種のダウンレギュレーションに基づく。従って、本発明によると、基準値（即ち、対照）と、前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいて発現されたCD13との間の商は、1.59以上であり得る。同様に、CD59について、基準値（即ち、対照）と、前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいて発現されたCD59との間の商は、1.30以上であるはずである。
【００１７】
使用される基準値は、PSAデータ、臨床データ、および病歴データの使用により前立腺癌に罹患していないことが確認された健常対象に由来し得る。
【００１８】
上記の抗原の発現は、抗原と反応した抗体を測定することにより測定可能である。抗体は検出のために標識されてもよい。例えば蛍光により、例えばフローサイトメトリーにおいて検出を実施し、ROC曲線により評価することができる。
【００１９】
当業者は、上記の商を算出するための蛍光強度平均値が、利用される分析装置によって変動し得ることを理解する。しかしながら、商は大きく変化しないままである可能性が高い。同様に当業者は、抗原の発現を測定するために、その他の方法が使用されてもよいことを理解する。その場合にも、上述の商は大きく変化しないままであろう。
【００２０】
本発明の一つの態様において、少なくとも2種の抗原の間で商が算出され、該商が商の参照値と比較される。商は、例えば、前立腺癌患者由来のダウンレギュレートされたプロスタソーム抗原を、同一前立腺癌患者由来のアップレギュレートされたプロスタソーム抗原により割ったものに基づいていてもよい。次いで、この商値を、前立腺癌を有しない正常患者由来の商の参照値と比較する。そのような商を使用することにより、本方法の予後値が改善される。
【００２１】
従って、本発明の一つの態様において、検出された抗原の量に基づいて商(CD13+CD59)/(CD10+CD26)が決定され、基準値と比較される。CD13およびCD59はどちらも前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいてダウンレギュレートされる一方、CD10およびCD26はどちらも前立腺癌患者由来のプロスタソームにおいてアップレギュレートされる。当業者は、本明細書に具体的に開示された1組の組み合わせとは別の組み合わせの抗原を用いた商を算出しかつ使用してよいことを理解する。
【００２２】
本発明のさらなる態様において、抗原のうちの少なくとも1種に特異的に結合することができる少なくとも1種類の抗体が、その発現を検出および定量化するために使用される。抗体はモノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。完全抗体の代わりに、Fab抗体、Fab2抗体、または単鎖Fv抗体が使用されてもよい。完全抗体またはその一部は全て、関連する抗原結合ドメインを保有しているものとする。
【００２３】
さらに本発明の一つの態様において、少なくとも1種類の抗体は、区別可能な蛍光マーカーにより標識される。該抗体を検出および定量化して発現パターンを得るため、フローサイトメトリーを使用することができる。別の態様において、該抗体を検出および定量化するため、ELISAが使用される。例えばユーロピウムおよびサマリウムを使用するDELPHIA分析も、本発明に従って利用可能である。
【００２４】
本発明の第二の局面によると、CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHC Iからなる群より選択される少なくとも1種の抗原に特異的に結合する少なくとも1種類の抗体を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供において使用するためのキットが提供される。抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよく、あるいは、Fab抗体、Fab2抗体、または単鎖Fv抗体が、キットの一部を形成していてもよい。
【００２５】
添付の図面と共に、以下の実施例において本発明をさらに説明するが、これらは、いかなる形であれ本発明の範囲を制限することを意図したものでは全くない。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】CD13とCD10の間の比率についてのROC曲線を示す。前立腺癌患者を（前立腺癌を有しない）正常な個人と区別するためのAUC（曲線下面積）は0.874であり、比率は、カットオフ限界2.04で、感度83.3％および特異度91.1％を有していた。
【図２】CD59とCD10の間の比率についてのROC曲線を示す。前立腺癌患者を（前立腺癌を有しない）正常な個人と区別するためのAUCは0.863であり、比率は、カットオフ限界5.32で、感度100％および特異度64.6％を有していた。
【実施例】
【００２７】
試料調製
PSA値および臨床情報および病歴情報により前立腺癌を有しないことが既知である患者79人ならびに前立腺癌が確認された患者10人由来の精液試料を用意した。
【００２８】
室温で約30分間インキュベーションし、精漿から精子を分離するために20℃で20分間、1000×gで遠心分離した後、ヒト精液から精漿を入手した。それにより、精漿は、下記のフローサイトメトリー分析のための用意ができた。
【００２９】
尿、前立腺分泌物、およびヘパリン処理血液試料をそれぞれ、20℃で10分間、2500×gで遠心分離した。前立腺分泌物、尿、およびヘパリン処理血液それぞれからの上清は、フローサイトメトリーによる分析のための用意ができた。遠心分離により入手した血漿を、プロスタソームに対する特異抗体を用いたELISAおよびニトロセルロース紙上でのドットブロット／免疫ブロットにより、固相上でさらに試験した（下記のELISAおよびイムノブロッティングの項を参照のこと）。
【００３０】
フローサイトメトリーのための試料の調製
30μLの希釈された精漿、または各上清（各々、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で25倍希釈）を、FITC標識抗体10μLを含有しているポリスチレンチューブに添加した。各抗体を別々のチューブに添加し、従ってその後、各マーカーを別々に分析した。
【００３１】
各タンパク質の細胞外ドメインに結合することができる以下のモノクローナル抗体を使用した（全ての抗体がSerotec（Kidlington, UK）から入手された）：
FITC-CD10（抗体MCA1556F、0.1mg/mL）、
FITC-CD13（抗体MCA1270F、0.1mg/mL）、
FITC-CD26（抗体MCA1317F、0.1mg/mL）、
FITC-CD59（抗体MCA1054F、0.1mg/mL）、
FITC-CD142（抗体MCA2548F、0.1mg/mL）、
FITC CD143（抗体MCA2057F、0.1mg/mL）。
【００３２】
試料を20℃で10分間インキュベートし、次いで、フローサイトメトリーにより分析した。洗浄工程は実施しなかった。
【００３３】
フローサイトメトリー
Epics Profile XL-MCLサイトメーター（Coulter Electronics, Hialeah, FL）を利用して、試料を分析した。このフローサイトメーターは、個別の細胞またはオルガネラを検出し、スキャッタープロットにおいて通常の様式でそれらを示す。各試料100μLを、プロスタソームの濃度およびサイズの決定のために分析した。CDマーカーの分析のため、各患者個人についてプロスタソーム5,000個のデータ処理を、XLソフトウェア（Coulter Electronics）を使用して実施した。光散乱特性に基づき、各プロスタソームを直交座標系で点により表した。ゲートの位置およびサイズは、プロスタソームが高度に精製されていることを考慮に入れて設定した。識別フレームは、前方散乱および側方散乱を使用して、プロスタソームクラスタおよびフローカウント（flow count）クラスタの周囲に配置した。
【００３４】
フローサイトメーターは、プロスタソームに結合した標識抗体からの蛍光シグナルを測定する。フローサイトメーターは、視野内の陽性染色されたプロスタソームの割合、蛍光強度（MFI）の中央値および平均値、複雑度（直角散乱）、ならびにプロスタソーム集団のサイズの中央値および平均値（前方散乱）を与える。MFIを測定するため、蛍光チャンネルに分析マーカーをセットした（FITCについて波長＝225nm）。ゲートは研究前にセットされた。
【００３５】
精漿に対するフローサイトメトリー
前立腺癌患者由来の試料は、対照と比較して相違するタンパク質パターンを示した。マーカーの感度ならびに特異度を、ROC曲線により評価した。マーカーCD13、CD59、ならびに比率CD13/CD10およびCD59/CD26は、それぞれ、前立腺癌に対する感度および特異度が最も高いマーカーであった。CD13/CD10が最も高い特異度（91.1％、図1）をもたらし、CD59/CD26が最も高い感度（100％）をもたらした。プロスタソームに典型的な側方散乱および前方散乱を有する粒子を検出した。
【００３６】
血清および尿に対するフローサイトメトリー
癌患者および対照由来の精漿10μLを、血清または尿100μLを含有しているポリスチレンチューブに添加し、試料をPBSにより25倍希釈した。希釈試料30μLおよびFITC標識抗体10μLを混合し、混合物を20℃で10分間インキュベートした後、フローサイトメトリーを使用して分析した。洗浄工程は実施しなかった。
【００３７】
高いPSAを有する2人の患者由来の血清100μLもまた、精製プロスタソームの添加なしに、上記のように分析した。プロスタソームに典型的な側方散乱および前方散乱を有する粒子を検出した。
【００３８】
フローサイトメトリー結果（血清および尿）
血清または尿に再懸濁させたプロスタソームのCD発現は、妨害されず、元の精漿と比較して変化なしの結果をもたらした。患者試料は、プロスタソームを表す前方散乱および側方散乱を有する、オルガネラを示した。それらの粒子はCD13陽性であり、このことから、該粒子がプロスタソームであることが示された（表4を参照のこと）。
【００３９】
精製プロスタソームの調製
フローサイトメーターの識別ゲートを設定するために、精製プロスタソームが必要であった。精漿試料をプールし（試料12〜15例）、可能性のある細胞片を除去するため、4℃で15分間、10000×gの超遠心分離に供した。次いで、プロスタソームをペレット化するため、上清を、再度、4℃で2時間、100000×gの超遠心分離に供した。プロスタソームを等張トリスHCl緩衝液（pH7.6）に再懸濁させ、Sephadex G 200ゲルカラム（Amersham Biosciences, Uppsala,Sweden）上でさらに精製した。溶出液を260/280nmでモニタリングした。UV吸光度が上昇した画分を収集し、プロスタソームに対する強力なマーカー酵素であるCD13について分析した。CD13活性の高い紫外吸光画分をプールし、4℃で2時間、100 000×gの超遠心分離に供した。精製プロスタソームを表すペレットを、等張トリスHCl緩衝液、pH7.6に再懸濁させ、適当なタンパク質濃度に調整した。
【００４０】
イムノブロッティング
精製した精液プロスタソーム1μLをニトロセルロース膜上にピペットで移し、1％BSAを含む0.02M Na2HPO4、0.15M NaCl、pH7.2（PBS）により、1時間、膜をブロッキングした。3回洗浄した後、ビオチン化ポリクローナルニワトリ抗プロスタソーム抗体（1％BSAを含むPBSで1000倍希釈）100μLと共に、20℃で1時間、膜をインキュベートした。PBS-T（0.05％Tween20を含むPBS）により3回新たに洗浄した後、1％BSAを含むPBSで2,000倍希釈されたストレプトアビジン-アルカリホスファターゼコンジュゲート（Zymed Laboratories, Inc., CA, USA）100μLを添加し、20℃で1時間インキュベートした。3回洗浄した後、ニトロセルロース膜を発色させた。
【００４１】
イムノブロッティング結果
抗体はニトロセルロース膜上のプロスタソームを認識し、紫色のドットが可視化された。このことは、固相（ここではニトロセルロース膜）上にプロスタソームを捕捉した後、抗体によって検出することが可能であることを示している。
【００４２】
ELISA
マイクロタイタープレート（F96, Polysorp, Nunc）を、4μg/mLの精製した精液プロスタソームを含む0.1M NaHCO3、pH9.5により、20℃で2時間コーティングした。プレートを、0.02M Na2HPO4、0.15M NaCl、0.05％Tween20、pH7.2（PBS-T）により3回洗浄し、プレートを、1％BSAを含む0.02M Na2HPO4、0.15M NaCl、pH7.2により2時間ブロッキングした。3回洗浄した後、プレートを、ポリクローナルニワトリ抗プロスタソーム抗体（PBSで1000倍希釈）100μLと共に、20℃で2時間インキュベートした。PBS-Tにより3回新たに洗浄した後、PBSで2,000倍希釈されたヤギ抗ニワトリIgG西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）結合抗体（Zymed Laboratories, Inc., CA, USA）100μLを添加し、20℃で2時間インキュベートした。プレートを、PBS-T 250μLにより3回洗浄し、遮光しながら20℃で15分間、基質（テトラメチルベンジジン、Zymed Laboratories, Inc.）と共にインキュベートした。1.8モル/Lの硫酸50μLを添加することにより、反応を停止させた。吸光度を、ELISAリーダーシステム（SPECTRA Max 250, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA）で450nmで測定した。
【００４３】
ELISA結果
抗プロスタソーム抗体（Immunsystem AB, Uppsala, Sweden）は、＞1.0の吸光度値で、ELISAプレートに結合したプロスタソームとの陽性反応を生じた。これにより、プロスタソームを固相（ここではマイクロタイタープレート）上で捕捉した後に、抗体によって、ここでは酵素標識抗体によって検出することが可能であることが示される。
【００４４】
実験結果
以下に、対照と前立腺癌に罹患している患者の間の比較結果を示す（表1、2、および3）。さらに、表4は、精漿、血清、および尿それぞれに対する測定を示す。
【００４５】
【表１】
2013525761.tif 000002
2013525761.tif 000003
2013525761.tif 000004
2013525761.tif 000005
【００４６】
【表２】
2013525761.tif 000006
【００４７】
【表３】
2013525761.tif 000007
【００４８】
【表４】
2013525761.tif 000008
【００４９】
ROC分析−本発明による前立腺癌発症の予後判定
受信者動作特性（ROC）曲線とは、決定閾値効果についての単純だが完全な経験的描写であり、これにより、診断決定における様々な種類の正しい決定と誤った決定の相対頻度についての全ての可能な組み合わせが示される。ROC曲線は、識別閾値の変動に伴う、二項分類システムに関する感度すなわち真陽性 対 (1-特異度)すなわち偽陽性についてのグラフ式プロットである。真陽性の画分（TPR＝真陽性率） 対 偽陽性の画分（FPR＝偽陽性率）をプロットすることによっても同等に、ROCを表すことができる。ROC分析は、コスト情況またはクラス分布とは無関係に（かつそれらの特定前に）、恐らく最適であるモデルを選択しかつ最適ではないものを廃棄するためのツールを提供する。ROC分析は、診断決定のコスト／利益分析と、直接的かつ自然に関係している。
【００５０】
結果
表1〜3に示されるように、前立腺癌患者由来のプロスタソームは、示された表面抗原の発現に関して異なる。従って、これらの表に示されたマーカー抗原は、前立腺癌対象と対照の対象を識別するために使用可能である。マーカーは、個別に使用されてもよく、アッセイの感度および特異度を改良するために組み合わせられてもよい（上記の「発明の説明」を参照のこと）。図1は、ROC曲線の形態で、CD13とCD10の間の比率を示し、図2は、CD59とCD10の間の比率を示している。1種の抗原マーカーのみの使用と比較して、感度および特異度が上昇している。
【００５１】
表4は、プロスタソームを様々な体液（血清、尿、および精漿）において分析したところ、類似の値が得られたことを示している。2人の前立腺癌患者由来の血清におけるプロスタソームのフローサイトメトリー検出は、プロスタソームが血清中にも存在し得ることを示している。
【００５２】
引用文献
2013525761.tif 000009
【図１】
2013525761.tif 000010
【図２】
2013525761.tif 000011
【国際調査報告】
2013525761.tif 000012
2013525761.tif 000013
2013525761.tif 000014
2013525761.tif 000015