(57)【要約】  本発明は、配列番号１を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、及び随意に配列番号２３を含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド（但し、配列番号１及び配列番号２３の１つ以上の特定の残基が異なる残基に置換されている）を含む、単離されたＩＬ−１７結合剤に関する。本発明は、ベクター、組成物、及びＩＬ−１７介在疾患を治療するためのＩＬ−１７結合剤の使用方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたＩＬ−１７結合剤であって、以下の一方又は両方を含む剤：
（ａ）配列番号１（但し、配列番号１の残基３２、５３及び５９の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、並びに
（ｂ）配列番号２３（但し、配列番号２３の残基９、１０、１１、１３、１７、２０、２１及び２２の１つ以上が異なる残基に置換されている）又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
【請求項２】
該免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は該免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３】
該免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び該免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項４】
（ａ）配列番号１の残基３２がＨ、Ｓ若しくはＦ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号１の残基５３がＥ若しくはＨ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号１の残基５９がＨ残基に置換されているか、又は
（ｄ）（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組み合わせである、
免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項５】
免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが配列番号２を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項６】
配列番号１の残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項７】
（ａ）配列番号１の残基３０がＮ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号１の残基３１がＮ若しくはＤ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号１の残基３５がＴ、Ｎ若しくはＤ残基に置換されているか、
（ｄ）配列番号１の残基４０がＴ残基に置換されているか、
（ｅ）配列番号１の残基５０がＡ、Ｓ、Ｉ若しくはＧ残基に置換されているか、
（ｆ）配列番号１の残基５２がＮ若しくはＲ残基に置換されているか、
（ｇ）配列番号１の残基５３がＥ若しくはＨ残基に置換されているか、
（ｈ）配列番号１の残基５９がＨ残基に置換されているか、
（ｉ）配列番号１の残基６２がＧ残基に置換されているか、
（ｊ）配列番号１の残基６６がＶ残基に置換されているか、
（ｋ）配列番号１の残基６９がＩ残基に置換されているか、
（ｌ）配列番号１の残基７５がＤ残基に置換されているか、
（ｍ）配列番号１の残基７９がＶ残基に置換されているか、
（ｎ）配列番号１の残基８８がＶ残基に置換されているか、
（ｏ）配列番号１の残基９７がＶ、Ｔ、Ｌ若しくはＦ残基に置換されているか、又は
（ｐ）（ａ）から（ｏ）の任意の組み合わせ
である、請求項６に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項８】
免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが配列番号３〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６又は配列番号７７のいずれか１つを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項９】
（ａ）配列番号２３の残基９がＹ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号２３の残基１０がＲ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号２３の残基１１がＴ残基に置換されているか、
（ｄ）配列番号２３の残基１３がＬ若しくはＩ残基に置換されているか、
（ｅ）配列番号２３の残基１７がＧ残基に置換されているか、
（ｆ）配列番号２３の残基２０がＫ残基に置換されているか、
（ｇ）配列番号２３の残基２１がＶ残基に置換されているか、
（ｈ）配列番号２３の残基２２がＤ残基に置換されているか、又は
（ｉ）（ａ）から（ｉ）の任意の組み合わせである、
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１０】
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号８０又は配列番号８１を含む、請求項９に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１１】
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、配列番号２３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１２】
免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、配列番号２３と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１３】
抗体、抗体複合体又はそれらの抗原結合性フラグメントである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１４】
Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ及び単鎖結合ポリペプチドからなる群から選択される抗体フラグメントである、請求項１３に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１５】
ヒト抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体である、請求項１３又は請求項１４に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１６】
配列番号２〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６又は配列番号７７のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１７】
配列番号２〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６又は配列番号７７のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の１つのＣＤＲを含む、請求項１６に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１８】
配列番号２〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６又は配列番号７７のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の２つのＣＤＲを含む、請求項１６に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項１９】
配列番号２〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６又は配列番号７７のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む、請求項１６に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２０】
配列番号２４〜２８、配列番号８０又は配列番号８１のいずれか１つを含む免疫グロブリン軽鎖可変領域の少なくとも１つのＣＤＲを含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２１】
配列番号２４〜２８、配列番号８０又は配列番号８１のいずれか１つを含む免疫グロブリン軽鎖可変領域の１つのＣＤＲを含む、請求項２０に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２２】
配列番号２４〜２８、配列番号８０又は配列番号８１のいずれか１つを含む免疫グロブリン軽鎖可変領域の２つのＣＤＲを含む、請求項２０に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２３】
配列番号２４〜２８、配列番号８０又は配列番号８１のいずれか１つを含む免疫グロブリン軽鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む、請求項２０に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２４】
配列番号１（但し、配列番号１の５０位の残基がＳ、Ａ又はＩ残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３１、３２、３５、４０、５２、６２、６６、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２５】
配列番号１の残基３１、３２、３５、４０、５２、６２、６６、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている、請求項２４に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２６】
（ａ）配列番号１の残基３１がＮ若しくはＤ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号１の残基３５がＮ、Ｔ若しくはＤ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号１の残基４０がＴ残基に置換されているか、
（ｄ）配列番号１の残基５２がＮ若しくはＲ残基に置換されているか、
（ｅ）配列番号１の残基６２がＧ残基に置換されているか、
（ｆ）配列番号１の残基６６がＶ残基に置換されているか、
（ｇ）配列番号１の残基８８がＶ残基に置換されているか、
（ｈ）配列番号１の残基９７がＶ、Ｔ、Ｌ若しくはＦ残基に置換されているか、又は
（ｉ）（ａ）から（ｈ）の任意の組み合わせ
である、請求項２５に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２７】
免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、配列番号６、配列番号９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号７４又は配列番号７５を含む、請求項２５又は２６に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２８】
配列番号６、配列番号９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号７４又は配列番号７５のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項２９】
配列番号１（但し、配列番号１の残基１０４、１０９及び１１５の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８及び１１１の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３０】
（ａ）配列番号１の残基１０４がＶ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号１の残基１０9がＶ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号１の残基１１5がＮ若しくはＥ残基に置換されているか、又は
（ｄ）（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の任意の組み合わせ
である、請求項２９に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３１】
配列番号１の残基１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８及び１１１の１つ以上が異なる残基に置換されている、請求項２９又は請求項３０に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３２】
（ａ）配列番号１の残基１００がＨ残基に置換されているか、
（ｂ）配列番号１の残基１０１がＨ若しくはＦ残基に置換されているか、
（ｃ）配列番号１の残基１０２がＥ残基に置換されているか、
（ｄ）配列番号１の残基１０６がＮ残基に置換されているか、
（ｅ）配列番号１の残基１０７がＳ残基に置換されているか、
（ｆ）配列番号１の残基１０８がＨ若しくはＦ残基に置換されているか、
（ｇ）配列番号１の残基１１１がＳ残基に置換されているか、又は
（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組み合わせ
である、請求項３１に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３３】
免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号７３を含む、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３４】
配列番号２１、配列番号２２又は配列番号７３のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖可変領域の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３５】
配列番号１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、請求項１、２４又は２９のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３６】
配列番号１と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、請求項３５に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３７】
配列番号３２、配列番号３３、配列番号７８若しくは配列番号７９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３８】
配列番号２３（但し、配列番号２３の残基９、１０、１１、１３、１７、２０、２１及び２２の１つ以上が異なる残基に置換されている）又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを更に含む、請求項２４〜３７のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤。
【請求項３９】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤をコードする核酸配列を含むベクター。
【請求項４０】
請求項３９に記載のベクターを含む、単離された細胞。
【請求項４１】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１７結合剤又は請求項３９に記載のベクター及び医薬上許容される担体を含む、組成物。
【請求項４２】
哺乳動物におけるＩＬ−１７介在疾患の治療方法であって、該方法は、ＩＬ−１７介在疾患を有する哺乳動物に請求項４１に記載の組成物を投与することを含み、その結果、該哺乳動物においてＩＬ−１７介在疾患が治療される、方法。
【請求項４３】
哺乳動物におけるＩＬ−１７介在疾患の予防方法であって、該方法は、ＩＬ−１７介在疾患に罹患しやすい哺乳動物に請求項４１に記載の組成物を投与することを含み、その結果、該哺乳動物においてＩＬ−１７介在疾患が予防される、方法。
【請求項４４】
哺乳動物におけるＩＬ−１７介在疾患の診断方法であって、該方法は、ＩＬ−１７介在疾患を有することが疑われる哺乳動物に請求項４１に記載の組成物を投与することを含み、その結果、ＩＬ−１７に結合しているＩＬ−１７結合剤の検出が、該哺乳動物がＩＬ−１７介在疾患を有することを示す、方法。
【請求項４５】
ＩＬ−１７介在疾患が、気道炎症、喘息、関節リウマチ（ＲＡ）、骨関節炎、骨粗しょう症、骨びらん、腹腔内膿瘍及び癒着、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、円形脱毛症、セリアック病、シャーガス病、特発性肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、同種移植片拒絶（例、腎臓）、乾癬性関節炎、ぶどう膜炎、ベーチェット病、特定の種類の癌、血管新生、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス、敗血症、敗血症又は内毒素ショック、アレルゲン曝露に対する反応、ヘリコバクターピロリ関連胃炎、気管支喘息、強直性脊椎炎、ループス腎炎、乾癬、虚血、全身性硬化症及び脳卒中からなる群から選択される、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳動物におけるＩＬ−１７結合剤の半減期が、５〜２８日である、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＩＬ−１７結合剤が、１ナノモーラー以下のＫＤでＩＬ−１７に結合する、請求項４２〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ＩＬ−１７結合剤が、２００ピコモーラー以下のＫＤでＩＬ−１７に結合する、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１０年８月５日に出願された米国仮特許出願第61/370,978号（参照により組み込まれる）の利益を主張する。
【０００２】
電子的に提出された資料の参照による組み込み
コンピュータで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表が、参照により、その全体として本明細書に組み込まれ、当該配列表は、本明細書と同時に提出され、かつ、２０１１年８月１日に作成された「708661_ST25.TXT」という名前の一つの１１９，４１４バイトのＡＳＣＩＩ（Ｔｅｘｔ）ファイルとして識別されるものである。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）は、活性化Ｔ細胞によって分泌される炎症性サイトカインである。ＩＬ−１７ファミリーのサイトカインとしては、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５とも呼ばれる）、及びＩＬ−１７Ｆが挙げられ、該ファミリーのプロトタイプメンバーは、ＩＬ−１７Ａと命名されている（例えば、Moseley et al., Cytokine Growth Factor Rev., 14(2): 155-74 (2003)参照）。ＩＬ−１７ファミリーの全てのメンバーは、同様のタンパク質構造を有し、それらの三次元形状に重要な４つの高度に保存されたシステイン残基を有するが、それらは、いかなる他の公知のサイトカインとも配列類似性を有さない。しかしながら、ＩＬ−１７Ａのウイルスホモログが、Herpesvirus saimiriのオープンリーディングフレーム１３において見出されており（例えば、Yao et al., Immunity, 3: 811 (1995)参照）、ヒトＩＬ−１７Ａと７２％アミノ酸残基同一性を有する。
【０００４】
ＩＬ−１７ファミリーメンバーについて、複数の機能が報告されており、それらは主に免疫応答の調節を含む。例えば、ＩＬ−１７は、接着分子の上方調節、及び種々の細胞型（滑膜細胞、軟骨細胞、線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、ケラチノサイト及びマクロファージを含む）からの複数の炎症性サイトカイン及びケモカインの産生の誘導に関与する。また、ＩＬ−１７は、ケモカイン放出の誘導を介して炎症部位への好中球の動員を誘導し、プロスタグランジン類及びメタロプロテイナーゼの産生を刺激し、プロテオグリカン合成を阻害する。ＩＬ−１７は、造血前駆細胞の成熟において重要な役割を果たし、ＩＬ−１７は、様々な器官及び組織（肺、関節軟骨、骨、脳、造血細胞、腎臓、皮膚及び腸を含む）においてシグナル伝達の役割を有するように見える（例えば、Kolls and Linden, Immunity, 21: 467-476 (2004)及びFossiez, et al., Int. Rev. Immunol., 16: 541 (1998)参照）。ＩＬ−１７はまた、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）産生を誘導し、メタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）を下方調節し（例えば、Jovanovic et al., J. Rheumatol., 28: 712-718 (2001)参照）、ＩＬ−１及びＩＬ−１７の阻害は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける炎症及び骨破壊において相乗効果を有する（例えば、Chabaud et al., Arthritis Rheum., 44: 1293-1303 (2001)参照）。
【０００５】
ＩＬ−１７（即ち、ＩＬ−１７Ａ）の不適切な産生又は産生の増加は、いくつかの疾患（気道炎症、喘息、関節リウマチ（ＲＡ）、骨関節炎、骨粗しょう症、骨びらん、腹腔内膿瘍及び癒着、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、円形脱毛症、セリアック病、シャーガス病、特発性肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、同種移植片拒絶（例えば、腎臓）、乾癬性関節炎、ぶどう膜炎、ベーチェット病、特定の種類の癌、血管新生、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス、敗血症、敗血症又は内毒素ショック、アレルゲン曝露に対する反応、ヘリコバクターピロリ関連胃炎、気管支喘息、強直性脊椎炎、ループス腎炎、乾癬、虚血、全身性硬化症、脳卒中及び他の炎症性疾患など）と関連付けられている（例えば、Witowski et al., Cell Mol. Life Sci., 61: 567-579 (2004); Antonysamy et al., J. Immunol., 162: 577-584 (1999), van Kooten et al., J. Am. Soc. Nephrol., 9: 1526-1534 (1998); Molet et al., J. Allergy Clin. Immunol., 108: 430-438 (2001); Teunissen et al., J. Invest. Dermatol., 111: 645-649 (1998);及びKurasawa et al., Arthritis Rheum., 43: 2455-2463 (2000)参照）。
【０００６】
前述の内容に基づけば、ＩＬ−１７は、いくつかの炎症性又は自己免疫疾患の治療のための標的となるように見える。この目的のために、ＩＬ−１７に結合する抗体が、ＩＬ−１７介在疾患及び障害の治療における使用のために提案されている（例えば、国際特許出願公開第WO 2006/013107号及び第WO 2007/117749号;並びに米国特許出願公開第2008/0269467 A1号及び第2009/0280131 A1号参照）。また、ＩＬ−１７特異的抗体又はＩＬ−１７に結合する可溶性受容体によるＩＬ−１７生物活性の阻害は、種々の動物関節炎モデルにおいて炎症及び骨びらんを減少させる（例えば、Lubberts et al., Arthritis & Rheumatism, 50: 650-659 (2004)参照)。しかしながら、現在入手可能なＩＬ−１７抗体の治療上の有用性は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける最適状態に及ばないそれらの薬物動態、安定性及び薬効により限定される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、高い親和性でＩＬ−１７に結合し、向上した安定性及び改善された薬物動態を示し、且つｉｎ ｖｉｖｏにおいてＩＬ−１７活性を効果的に中和する、ＩＬ−１７結合剤（例えば、抗体）が必要とされている。本発明は、そのようなＩＬ−１７結合剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の概要
本発明は、単離されたＩＬ−１７結合剤であって、以下の一方又は両方を含む剤を提供する：（ａ）配列番号１（但し、配列番号１の残基３２、５３及び５９の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）又は少なくとも５アミノ酸を含むそのフラグメントを含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、及び（ｂ）配列番号２３（但し、配列番号２３の残基９、１０、１１、１３、１７、２０、２１及び２２の１つ以上が異なる残基に置換されている）又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
【０００９】
本発明は、配列番号１（但し、配列番号１の５０位の残基がＳ、Ａ又はＩ残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３１、３２、３５、４０、５２、６２、６６、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤も提供する。
【００１０】
本発明は、配列番号１（但し、配列番号１の残基１０４、１０９及び１１５の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８及び１１１の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤を更に提供する。
【００１１】
本発明は、配列番号３２、配列番号３３、配列番号７８若しくは配列番号７９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、１、３及び１０μｇ用量／マウスでのｈＩＬ−１７皮下投与後の、時間に対するＫＣ（ＣＸＣＬ１）プロファイルの変化を示すグラフである。
【図２】図２は、抗ＩＬ１７抗体（配列番号２４と組み合わせた配列番号４）による、マウスにおけるｈＩＬ−１７の投与の２時間後の血清中ＫＣレベルの用量依存的抑制を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例２に記載されたＨＣ及びＬＣの組み合わせについてのＢＩＡＣＯＲＥＴＭ Ａ１００解離曲線を示す図である。
【図４】図４は、実施例３に記載されたヒトＲＡ滑膜線維芽細胞におけるＩＬ−６放出アッセイの結果を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例４に記載された抗ＩＬ１７ａ抗体による受容体−リガンド結合の阻害を測定するために使用されたＥＬＩＳＡアッセイの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
発明の詳細な説明
本発明は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、或いはそのフラグメント（例えば、免疫原性フラグメント）を含む、単離されたＩＬ−１７結合剤を提供する。「ＩＬ−１７結合剤」とは、サイトカインＩＬ−１７に特異的に結合する分子（好ましくはタンパク質性分子）を意味する。好ましくは、ＩＬ−１７結合剤は、抗体又はそのフラグメント（例えば、免疫原性フラグメント）である。用語「免疫グロブリン」又は「抗体」は、本明細書中で使用される場合、脊椎動物の血液又は他の体液中に認められるタンパク質をいい、それは細菌及びウイルスなどの異物を特定し中和するために免疫系によって使用される。全長の免疫グロブリンは、典型的には、４つのポリペプチドからなる：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一のコピー及び軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一のコピー。各々の重鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域及び３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）領域を含み、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域及び１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含む。抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの異なる型の一方（カッパ（κ）又はラムダ（λ）のいずれか）に割り当てられ得る。典型的な免疫グロブリンにおいて、各軽鎖は、ジスルフィド結合により重鎖に連結され、２つの重鎖は、ジスルフィド結合により互いに連結される。軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域と整列し、軽鎖定常領域は、重鎖の第１の定常領域と整列する。重鎖の残りの定常領域は、互いに整列する。
【００１４】
軽鎖及び重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨ及びＶＬ領域は、同じ全体的構造を有し、各領域は、４つのフレームワーク領域（その配列は比較的保存されている）を含む。フレームワーク領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により連結されている。３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として知られている）は、抗体の「超可変領域」を形成し、抗原結合に関与する。４つのフレームワーク領域（ＦＷ又はＦＲ）は、主としてβシートコンフォメーションをとり、ＣＤＲは、βシート構造を連結し、場合によってはその一部を構成するループを形成する。軽鎖及び重鎖の定常領域は、抗原への抗体の結合に直接には関与しないが、種々のエフェクター機能（エフェクター分子及び細胞との相互作用を介した抗体依存性細胞傷害性への関与など）を示す。
【００１５】
本発明のＩＬ−１７結合剤は、望ましくは、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７又はＩＬ−１７Ａ）に結合する。ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７ファミリーと呼ばれるサイトカインの一群の創設メンバーである。ＩＬ−１７Ａは、元々はげっ歯類Ｔ細胞ハイブリドーマ由来の転写産物として同定され、げっ歯類においてはＣＴＬＡ８として知られている（Rouvier et al., J. Immunol., 150 (12): 5445-5456 (1993)）。ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ｒと呼ばれるＩ型細胞表面受容体に結合し、その中には少なくとも３つの変異体ＩＬ１７ＲＡ、ＩＬ１７ＲＢ及びＩＬ１７ＲＣがある（Starnes et al., J. Immunol., 169 (2): 642 -646 (2002)）。ＩＬ−１７Ａに加えて、ＩＬ−１７ファミリーは、サイトカインＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５とも呼ばれる）及びＩＬ−１７Ｆを含む。ＩＬ−１７ファミリーの全てのメンバーは、同様のタンパク質構造を有し、それらの三次元形状に重要な４つの高度に保存されたシステイン残基を有するが、それらは、いかなる他の公知のサイトカインとも配列類似性を有さない。
【００１６】
上記のように、ＩＬ−１７タンパク質ファミリーのメンバーは、非常に多くの免疫調節機能を示し、それらは、主として、免疫シグナル伝達分子を誘導するそれらの能力に起因する。特に、ＩＬ−１７は、炎症反応を誘導及び媒介することが示されており、一般にアレルギー反応に関連する。ＩＬ−１７は、多くの細胞型（例えば、線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、ケラチノサイト及びマクロファージ）からの、サイトカイン（ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１β、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ケモカイン（例えば、ＩＬ−８、ＧＲＯ−α及びＭＣＰ−１)及びプロスタグランジン類（例えば、ＰＧＥ２）など）の産生を誘導する。サイトカインの放出は、気道リモデリング（ＩＬ−１７応答の特徴である）などの多くの作用を引き起こす。ケモカインの発現増加は、好中球を含む他の細胞を引きつけるが、好酸球は引きつけない。ＩＬ−１７の機能は、Ｔヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞と呼ばれるＣＤ４＋ Ｔ細胞のサブセットにも必須である。従って、ＩＬ−１７ファミリーのタンパク質は、いくつかの免疫及び自己免疫関連疾患（関節リウマチ、喘息、ループス、同種移植片拒絶及び抗腫瘍免疫が挙げられるが、これらに限定されない）の病態に関連付けられてきた（例えば、Aggarwal et al., J. Leukoc. Biol., 71 (1): 1-8 (2002)参照）。本発明のＩＬ−１７結合剤は、本明細書中に記載されたＩＬ−１７タンパク質ファミリーの任意のメンバー（例えば、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆなど）に結合し得る。好ましい実施形態において、ＩＬ−１７結合剤は、ＩＬ−１７Ａタンパク質に結合する。別の実施形態において、ＩＬ−１７結合剤は、ＩＬ−１７Ａのヒト及び／又は非ヒトオーソログに結合するか、又は交差反応し得る。
【００１７】
本発明の単離されたＩＬ−１７結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド若しくは少なくとも５アミノ酸を含むそのフラグメント、及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド若しくは少なくとも５アミノ酸を含むそのフラグメントを含む。一実施形態において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む。別の実施形態において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む。ＩＬ−１７タンパク質ファミリーの１つ以上のメンバーに結合するいくつかの免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は、当該分野において公知である（例えば、国際特許出願公開第WO 2006/013107号及び第WO 2007/117749号；並びに米国特許出願公開第2008/0269467 A1号及び第2009/0280131 A1号参照）。
【００１８】
ＩＬ−１７に結合する免疫グロブリン重鎖ポリペプチドの一例は、配列番号１又はそれと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一である）を含む。本発明の文脈において、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１（但し、配列番号１の残基の１つ以上が異なるアミノ酸残基に置換されている）を含む。これに関して、配列番号１の残基３２、５３及び５９の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている。配列番号１のアミノ酸残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７のそれぞれは、各位置において同一又は異なり得る任意の適切なアミノ酸残基に置換され得る。アミノ酸「置換（replacement）」又は「置換（substitution）」とは、ポリペプチド配列内の、所定の位置又は残基における１つのアミノ酸の、同じ位置又は残基における別のアミノ酸による置換をいう。
【００１９】
アミノ酸は、「芳香族」又は「脂肪族」として大きく分類される。芳香族アミノ酸は、芳香環を含む。「芳香族」アミノ酸の例としては、ヒスチジン（Ｈ又はＨｉｓ）、フェニルアラニン（Ｆ又はＰｈｅ）、チロシン（Ｙ又はＴｙｒ）及びトリプトファン（Ｗ又はＴｒｐ）が挙げられる。非芳香族アミノ酸は、「脂肪族」として大きく分類される。「脂肪族」アミノ酸の例としては、グリシン（Ｇ又はＧｌｙ）、アラニン（Ａ又はＡｌａ）、バリン（Ｖ又はＶａｌ）、ロイシン（Ｌ又はＬｅｕ）、イソロイシン（Ｉ又はＩｌｅ）、メチオニン（Ｍ又はＭｅｔ）、セリン（Ｓ又はＳｅｒ）、スレオニン（Ｔ又はＴｈｒ）、システイン（Ｃ又はＣｙｓ）、プロリン（Ｐ又はＰｒｏ）、グルタミン酸（Ｅ又はＧｌｕ）、アスパラギン酸（Ａ又はＡｓｐ）、アスパラギン（Ｎ又はＡｓｎ）、グルタミン（Ｑ又はＧｌｎ）、リジン（Ｋ又はＬｙｓ）及びアルギニン（Ｒ又はＡｒｇ）が挙げられる。
【００２０】
脂肪族アミノ酸は、４つのサブグループに下位分類され得る。「大きな脂肪族非極性サブグループ」は、バリン、ロイシン及びイソロイシンからなる。「脂肪族微極性サブグループ」は、メチオニン、セリン、スレオニン及びシステインからなる。「脂肪族極性／荷電サブグループ」は、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン及びアルギニンからなる。「小さな残基サブグループ」は、グリシン及びアラニンからなる。荷電／極性アミノ酸のグループは、３つのサブグループ：リジン及びアルギニンからなる「正荷電サブグループ」、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる「負荷電サブグループ」、並びにアスパラギン及びグルタミンからなる「極性サブグループ」、に下位分類され得る。
【００２１】
芳香族アミノ酸は、２つのサブグループ：ヒスチジン及びトリプトファンからなる「窒素環サブグループ」並びにフェニルアラニン及びチロシンからなる「フェニルサブグループ」、に下位分類され得る。
【００２２】
用語「保存的アミノ酸置換」又は「保存的変異」とは、１つのアミノ酸の、共通の特性を備えた別のアミノ酸による置換をいう。個々のアミノ酸間の共通の特性を定義する機能的な方法は、相同的な生物の対応するタンパク質間のアミノ酸変化の正規化された頻度を分析することである（Schulz, G. E. and R. H. Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York(1979)）。そのような分析により、グループ内のアミノ酸が優先的に互いに交換し、それ故、タンパク質の全体構造への影響において互いに最も類似するアミノ酸のグループが定義され得る（Schulz, G. E. and R. H. Schirmer、上記）。
【００２３】
保存的アミノ酸置換の例としては、上記サブグループ中でのアミノ酸の置換、例えば、アルギニンについてリジン及びその逆（正電荷が維持され得る）；アスパラギン酸についてグルタミン酸及びその逆（負電荷が維持され得る）；スレオニンについてセリン（遊離−ＯＨが維持され得る）；アスパラギンについてグルタミン（遊離−ＮＨ２が維持され得る）、が挙げられる。
【００２４】
「半保存的変異」としては、上記の同一のグループを有し、同一のサブグループは共有しないアミノ酸のアミノ酸置換が挙げられる。例えば、アスパラギンについてのアスパラギン酸、又はリジンについてのアスパラギンの変異は、それぞれ、同一のグループ内であるが、サブグループが異なるアミノ酸を伴っている。「非保存的変異」は、異なるグループ間のアミノ酸置換、例えば、トリプトファンについてリジン、又はセリンについてフェニルアラニンなどを含む。
【００２５】
一実施形態において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、配列番号１（但し、配列番号１の残基３２がＨ（ヒスチジン）、Ｓ（セリン)若しくはＦ（フェニルアラニン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５３がＥ（グルタミン酸）若しくはＨ（ヒスチジン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５９がＨ（ヒスチジン）残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである）を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む。
【００２６】
上記のアミノ酸置換に加えて、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、随意に、追加のアミノ酸置換を含み得る。一実施形態において、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１（但し、配列番号１の残基３０、３１、３５、４０、５０、５２、５３、５９、６２、６６、６９、７５、７９、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）を含む。別の実施形態において、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１（但し、配列番号１の残基３０がＮ（アスパラギン）残基に置換されているか、配列番号１の残基３１がＮ（アスパラギン）若しくはＤ（アスパラギン酸）残基に置換されているか、配列番号１の残基３５がＴ（スレオニン）、Ｎ（アスパラギン)若しくはＤ（アスパラギン酸）残基に置換されているか、配列番号１の残基４０がＴ（スレオニン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５０がＡ（アラニン）、Ｓ（セリン）、Ｉ（イソロイシン)若しくはＧ（グリシン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５２がＮ（アスパラギン）若しくはＲ（アルギニン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５３がＥ（グルタミン酸）若しくはＨ（ヒスチジン）残基に置換されているか、配列番号１の残基５９がＨ（ヒスチジン）残基に置換されているか、配列番号１の残基６２がＧ（グリシン）残基に置換されているか、配列番号１の残基６６がＶ（バリン）残基に置換されているか、配列番号１の残基６９がＩ（イソロイシン）残基に置換されているか、配列番号１の残基７５がＤ（アスパラギン酸）残基に置換されているか、配列番号１の残基７９がＶ（バリン）残基に置換されているか、配列番号１の残基８８がＶ（バリン）残基に置換されているか、配列番号１の残基９７がＶ（バリン）、Ｔ（スレオニン）、Ｌ（ロイシン）若しくはＦ（フェニルアラニン）残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである）を含む。
【００２７】
典型的な免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：配列番号２、配列番号３〜５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０〜２０、配列番号３５〜７２、配列番号７６及び配列番号７７、のいずれか１つを含み得る。
【００２８】
本発明は、配列番号１（但し、配列番号１の５０位の残基が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基３１、３２、３５、４０、５２、６２、６６、８８及び９７の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤も提供する。この関連で、配列番号１の５０、３１、３２、３５、４０、５２、６２、６６、８８及び９７位のアミノ酸残基は、本明細書中に記載されるような任意の適切なアミノ酸残基に置換され得る。一実施形態において、配列番号１の５０位の残基がＳ、Ａ若しくはＩ残基に置換されている。他の実施形態において、配列番号１の残基３１がＮ若しくはＤ残基に置換されているか、配列番号１の残基３５がＮ、Ｔ若しくはＤ残基に置換されているか、配列番号１の残基４０がＴ残基に置換されているか、配列番号１の残基５２がＮ若しくはＲ残基に置換されているか、配列番号１の残基６２がＧ残基に置換されているか、配列番号１の残基６６がＶ残基に置換されているか、配列番号１の残基８８がＶ残基に置換されているか、配列番号１の残基９７がＶ、Ｔ、Ｌ若しくはＦ残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである。例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号６、配列番号９、配列番号３１、配列番号３４、配列番号７４又は配列番号７５のいずれか１つを含み得る。
【００２９】
本発明は、配列番号１（但し、配列番号１の残基１０４、１０９及び１１５の１つ以上が異なる残基に置換されており、且つ随意に配列番号１の残基１００、１０１、１０２、１０６、１０７、１０８及び１１１の１つ以上が異なる残基に置換されている）のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤を更に提供する。この関連で、配列番号１の１００、１０１、１０２、１０４、１０６、１０７、１０８、１０９、１１１及び１１５位のアミノ酸残基は、本明細書中に記載されるような任意の適切なアミノ酸残基に置換され得る。一実施形態において、配列番号１の残基１０４がＶ残基に置換されているか、、配列番号１の残基１０９がＶ残基に置換されているか、配列番号１の残基１１５がＮ若しくはＥ残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである。他の実施形態において、配列番号１の残基１００がＨ残基に置換されているか、配列番号１の残基１０１がＨ若しくはＦ残基に置換されているか、配列番号１の残基１０２がＥ残基に置換されているか、配列番号１の残基１０６がＮ残基に置換されているか、配列番号１の残基１０７がＳ残基に置換されているか、配列番号１の残基１０８がＨ若しくはＦ残基に置換されているか、配列番号１の残基１１１がＳ残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである。例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２１、配列番号２２又は配列番号７３を含み得る。
【００３０】
別の実施形態において、ＩＬ−１７結合剤は、配列番号１（但し、１つ以上のアミノ酸残基が配列番号１に挿入される）のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを含み得る。任意の数のアミノ酸残基が配列番号１に挿入され得る。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸残基（例えば、２つ以上、３つ以上、５つ以上又は８つ以上のアミノ酸残基）であるが２０個未満のアミノ酸残基（例えば、１８個以下、１５個以下、１２個以下又は１０個以下のアミノ酸残基）が配列番号１に挿入される。好ましくは、約３〜約２０個のアミノ酸残基（例えば、約３〜５個のアミノ酸残基、約５〜１０個のアミノ酸残基、約１０〜１５個のアミノ酸残基若しくは約１５〜２０個のアミノ酸残基、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）が配列番号１に挿入される。好ましい実施形態において、８つ以下のアミノ酸残基が配列番号１に挿入される。例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号７８又は配列番号７９を含み得る。
【００３１】
ＩＬ−１７に特異的である免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの一例は、配列番号２３又はそれと少なくとも８５％同一である（例えば、それと少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一である）アミノ酸配列を含む。本発明の文脈において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、配列番号２３（但し、配列番号２３の１つ以上の残基が異なるアミノ酸残基に置換されている）を含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む。これに関して、配列番号２３の残基９、１０、１１、１３、１７、２０、２１及び２２の１つ以上が異なる残基に置換されている。配列番号２３のアミノ酸残基９、１０、１１、１３、１７、２０、２１及び２２は、本明細書中に記載されるような任意の適切なアミノ酸残基に置換され得る。
【００３２】
一実施形態において、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号２３（但し、配列番号２３の残基９がＹ（チロシン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基１０がＲ（アルギニン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基１１がＴ（スレオニン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基１３がＬ（ロイシン）若しくはＩ（イソロイシン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基１７がＧ（グリシン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基２０がＫ（リジン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基２１がＶ（バリン）残基に置換されているか、配列番号２３の残基２２がＤ（アスパラギン酸）残基に置換されているか、又は前記置換の任意の組み合わせである）を含む。例えば、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号８０又は配列番号８１のアミノ酸配列を含み得る。
【００３３】
本発明は、本明細書中に開示された特定のアミノ酸残基の置換を有する免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤に限定されない。実際、ＩＬ−１７結合剤の生物活性がアミノ酸置換又は挿入の結果として増強されるか又は改善される限り、配列番号１又は配列番号２３の任意のアミノ酸残基は、任意の組み合わせで、異なるアミノ酸残基と置換され得るか、或いは任意の数のアミノ酸残基が配列番号１又は配列番号２３に挿入され得る。ＩＬ−１７結合剤の「生物活性」とは、例えば、特定のＩＬ−１７エピトープに対する結合親和性、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＩＬ−１７活性の中和（例えば、ＩＣ５０）、ｉｎ ｖｉｖｏにおける安定性（熱安定性及びタンパク質分解安定性を含むがこれらに限定されない）、薬物動態、ＩＬ−１７結合剤の免疫原性、及び交差反応性（例えば、ＩＬ−１７の非ヒトホモログ若しくはオーソログとの、又は他のタンパク質若しくは組織との）をいう。当該分野において認識された抗原結合剤の他の生物学的特性又は特徴としては、例えば、結合活性、選択性、溶解性、フォールディング、免疫毒性、発現、剤形及び触媒活性が挙げられる。上記の特性又は特徴は、標準技術（ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ又はＫＩＮＥＸＡ表面プラズモン共鳴分析、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏ中和アッセイ、受容体結合アッセイ、サイトカイン又は成長因子産生及び／又は分泌アッセイ、並びにシグナル伝達及び免疫組織化学アッセイが挙げられるが、これらに限定されない）を使用して、観察され、測定され、及び／又は評価され得る。
【００３４】
用語「阻害する」又は「中和する」とは、ＩＬ−１７結合剤の活性に関して本明細書中で使用される場合、例えば、ＩＬ−１７の生物活性又はＩＬ−１７に関連する疾患若しくは状態の進行又は重症度を、実質的に拮抗、防止、予防、制限、緩徐化、中断、排除、停止、又は逆転させる能力をいう。本発明の単離されたＩＬ−１７結合剤は、好ましくは、ＩＬ−１７の活性を少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲まで阻害又は中和する。
【００３５】
本発明の単離されたＩＬ−１７結合剤は、本明細書中に記載されるような全長抗体、又は抗体フラグメントであり得る。用語「抗体のフラグメント」、「抗体フラグメント」又は「抗体の機能的フラグメント」は、本明細書中、互換的に使用され、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを意味する（通常、Holliger et al., Nat. Biotech., 23(9): 1126-1129 (2005)参照）。単離されたＩＬ−１７結合剤は、任意のＩＬ−１７結合抗体フラグメントを含み得る。抗体フラグメントは、望ましくは、例えば、１つ以上のＣＤＲ、可変領域（又はその一部）、定常領域（又はその一部）、又はそれらの組み合わせを含み得る。抗体フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；並びに（ｉｉｉ）抗体の単腕のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
本発明の一実施形態において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、（ａ）配列番号２〜２２若しくは配列番号３１〜７９のいずれか１つのアミノ酸配列又はそのフラグメントを含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、及び（ｂ）配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号８０若しくは配列番号８１のアミノ酸配列又はそのフラグメントを含む免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、抗体又は抗体フラグメントである。単離されたＩＬ−１７結合剤が免疫グロブリン重鎖又は軽鎖ポリペプチドのフラグメントを含む実施形態において、該フラグメントは、該フラグメントがＩＬ−１７に結合し、好ましくはＩＬ−１７の活性を阻害する限り、任意の大きさのものであり得る。これに関して、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのフラグメントは、望ましくは、約５個から１８個のアミノ酸（例えば、約５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）を含む。同様に、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドのフラグメントは、望ましくは、約５個から１８個のアミノ酸（例えば、約５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）を含む。ＩＬ−１７結合剤が抗体又は抗体フラグメントである場合、該抗体又は抗体フラグメントは、任意の適切なクラスの定常領域（Ｆｃ）を含む。好ましくは、抗体又は抗体フラグメントは、野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４抗体、又はその変異体に基づく定常領域を含む。
【００３７】
ＩＬ−１７結合剤はまた、単鎖抗体フラグメントであり得る。単鎖抗体フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（即ち、ＶＬ及びＶＨ）が単一ポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって連結された、該２つのドメインからなる一価の分子である単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988);及びOsbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)参照）並びに（ｉｉ）ポリペプチド鎖の二量体であって、各ポリペプチド鎖はペプチドリンカーによってＶＬに結合されたＶＨを含み、該ペプチドリンカーは同一ポリペプチド鎖上のＶＨとＶＬとの間で対合させるためには短すぎるものであり、それにより、異なるＶＨ−ＶＬポリペプチド鎖上の相補的なドメインとの間での対合を促し、２つの機能的な抗原結合部位を有する二量体の分子を生み出す、二量体である、ダイアボディが挙げられるが、これらに限定されない。抗体フラグメントは、当該分野において公知であり、例えば、米国特許出願公開公報第2009/0093024 A1号に、より詳細に記載されている。
【００３８】
単離されたＩＬ−１７結合剤はまた、イントラボディ又はそのフラグメントであり得る。イントラボディは、発現し、細胞内で機能する抗体である。イントラボディは、典型的には、ジスルフィド結合を欠き、それらの特異的な結合活性により標的遺伝子の発現又は活性を調節することができる。イントラボディは、単離されたＶＨ及びＶＬドメイン並びにｓｃＦｖsなどの単一ドメインのフラグメントを含む。イントラボディは、標的タンパク質がある細胞内コンパートメントにおいて高濃度で発現させるために、イントラボディのＮ又はＣ末端に付加された細胞内輸送シグナルを含み得る。標的遺伝子と相互作用すると、イントラボディは、標的タンパク質の分解の促進及び非生理的細胞内コンパートメントにおける標的タンパク質の捕捉などの機構により、標的タンパク質の機能を調節し、及び／又は表現型／機能ノックアウトを達成する。イントラボディ媒介性遺伝子不活性化の他の機構は、イントラボディが対象とするエピトープに依存し得る（標的タンパク質上の触媒部位への結合、又はタンパク質−タンパク質、タンパク質−ＤＮＡ若しくはタンパク質−ＲＮＡ相互作用に関与するエピトープへの結合など）。
【００３９】
単離されたＩＬ−１７結合剤は、ヒト抗体、非ヒト抗体若しくはキメラ抗体であり得るか、又はそれから取得され得る。「キメラ」とは、ヒト及び非ヒト領域の両方を含む抗体又はそのフラグメントを意味する。非ヒト抗体としては、例えば、げっ歯類（例えば、マウス又はラット）などの任意の非ヒト動物から単離された抗体が挙げられる。ＩＬ−１７結合剤の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドがヒト抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体から取得されるか否かとは無関係に、ＩＬ−１７結合剤の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、ヒト抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体から取得され得る。換言すれば、例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、ヒト抗体から取得され得、且つ免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、非ヒト抗体から取得され得る。逆に、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、非ヒト抗体から取得され得、且つ免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、ヒト抗体から取得され得る。或いは、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、げっ歯類抗体又はそのフラグメントから取得され得、且つ免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、ヒト抗体又はそのフラグメントから取得され得る。このシナリオは、例えば、抗体のヒト化のために有用であり得る。別の実施形態において、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、両方ともヒト抗体又は非ヒト抗体から取得される。或いは、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、両方ともキメラ抗体である。
【００４０】
ヒト抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ資源（例えば、ハイブリドーマ又は組換えで抗体を産生する細胞株）及びｉｎ ｖｉｖｏ資源（例えば、げっ歯類）を介することを含む、任意の手段によって取得され得る。抗体を作り出す方法は、当該分野において公知であり、例えば、Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976); Harlow and Lane（eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988);及びC.A. Janeway et al.（eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)）に記載されている。特定の実施形態において、ヒト抗体又はキメラ抗体は、１つ以上の内因性免疫グロブリン遺伝子が１つ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子に置換されているトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して作り出され得る。内因性抗体遺伝子がヒト抗体遺伝子に効果的に置換されているトランスジェニックマウスの例としては、ＨＵＭＡＢ-ＭＯＵＳＥＴＭ、Ｋｉｒｉｎ ＴＣ ＭＯＵＳＥＴＭ及びＫＭ−ＭＯＵＳＥＴＭ（例えば、Lonberg, Nat. Biotechnol., 23(9): 1117-25 (2005)及びLonberg, Handb. Exp. Pharmacol., 181: 69-97 (2008)参照）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
本発明の別の実施形態において、単離されたＩＬ−１７結合剤は、「代替スカフォールド（alternative scaffold）」又はそのフラグメントの一部であり得る。「代替スカフォールド」とは、抗体のそれと同様の、目的の抗原に対する親和性及び特異性を示す非抗体ポリペプチド又はポリペプチドドメインを意味する。典型的な代替スカフォールドとしては、フィブロネクチン（例えば、アドネクチン）、リポカリン（例えば、アンチカリン）、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、チオレドキシン（例えば、ペプチドアプタマー）、プロテインＡ（例えば、ＡＦＦＩＢＯＤＹＴＭ分子）、アンキリンリピート（例えば、ＤＡＲＰｉｎｓ）、γ−β−クリスタリン又はユビキチン（例えば、ＡＦＦＬＩＮＴＭ分子）、ＣＴＬＤ３（例えば、テトラネクチン）及び多価複合体（例えば、ＡＴＲＩＭＥＲＴＭ分子又はＳＩＭＰＴＭ分子）など由来のβサンドイッチドメインが挙げられる。代替スカフォールドは、例えば、Binz et al., Nat. Biotechnol., 23: 1257-1268 (2005); Skerra, Curr. Opin. Biotech., 18: 295-304 (2007);及び米国特許出願公開公報第2009/0181855 A1号に記載されている。
【００４２】
一実施形態において、代替スカフォールドは、ＡＶＩＭＥＲＴＭ分子であり得る。ＡＶＩＭＥＲＴＭ分子は、抗体及び抗体フラグメントと関連しないヒト由来の治療タンパク質の一クラスであり、Ａ−ドメインと呼ばれる（クラスＡモジュール、補体型リピート又はＬＤＬ受容体クラスＡ−ドメインとも呼ばれる）いくつかのモジュラー式且つ再利用可能な結合ドメインから構成されるものである。ＡＶＩＭＥＲＴＭ 分子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏエクソンシャッフリング及びファージディスプレイによって、ヒトの細胞外受容体ドメインから開発された（Silverman et al., Nat. Biotechnol., 23: 1493-94 (2005)及びSilverman et al., Nat. Biotechnol., 24: 220 (2006)）。ＡＶＩＭＥＲＴＭ分子は、単一エピトープ結合タンパク質と比べて、改善された親和性（場合によってはサブナノモーラー）及び特異性を示し得る、複数の独立した結合ドメインを含み得る（例えば、米国特許出願公開公報第2005/0221384 A1号; 第2005/0164301 A1号; 第2005/0053973 A1号; 第2005/0089932 A1号; 第2005/0048512 A1号;及び第2004/0175756 A1号参照）。公知の２１７個のヒトＡ−ドメインの各々は、約３５アミノ酸（約４ｋＤａ）を含む。ネイティブのＡ−ドメインは、主にカルシウムの結合及びジスルフィドの形成に介在されて、均一で安定な構造へと、素早く且つ効率よく折りたたまれる。１２アミノ酸のみの保存されたスカフォールドモチーフが、この共通構造のために必要である。ＡＶＩＭＥＲＴＭ分子は、平均５アミノ酸長のリンカーによって互いから分離された複数のＡ−ドメインを含む。最終的な結果として、その各々が別個の機能を表す複数のドメインを含む、単一のタンパク質鎖となる。ＡＶＩＭＥＲＴＭ分子の各ドメインは、独立して抗原と結合し、各ドメインのエネルギー的な寄与は相加的である。
【００４３】
本発明の単離されたＩＬ−１７結合剤は、目的の抗原に結合する新規の分子を作り出すために他の分子（例えば、ポリペプチド）へと挿入され得る。この関連で、本発明は、ＩＬ−１７に結合するポリペプチドの製造方法を含み、該方法は、ＩＬ−１７結合剤を異なるポリペプチドに挿入することを含む。そのような新規の抗原結合分子は、当該分野において公知の通常の分子生物学の技術を使用して作り出され得る。例えば、ＩＬ−１７結合剤、又はＩＬ−１７結合剤をコードする核酸配列は、ＩＬ−１７に結合する組換え分子を作り出すために、異なる分子（例えば、ポリペプチド又はポリヌクレオチド）へと挿入され得る。一実施形態において、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）又は可変領域は、タンパク質化学又は組換えＤＮＡ技術のいずれかを使用して、抗体又は非抗体ポリペプチドなどの別の分子へと移植（transplanted）（即ち、移植（grafted））され得る。この関連で、本発明は、本明細書中に記載されるような免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖ポリペプチドの少なくとも１つのＣＤＲを含む、単離されたＩＬ−１７結合剤を提供する。単離されたＩＬ−１７結合剤は、本明細書中に記載されるような免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖可変領域の１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含み得る。この関連で、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣＤＲ１は、配列番号２〜２２及び配列番号３１〜７９のアミノ酸残基２５から３５（両端含む）の間に位置する。本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣＤＲ２は、配列番号２〜２２、配列番号３１〜７９のアミノ酸残基５０〜６７（両端含む）の間に位置する。本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣＤＲ３は、配列番号２〜２２及び配列番号３１〜７９のアミノ酸残基９９から１０２（両端含む）の間に位置する。本明細書中に記載された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの各々のＣＤＲの位置は、表１に記載される。
【００４４】
【表１】
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【００４５】
別の実施形態において、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの可変領域全体は、別の抗体のＬＣ及び／又はＨＣの可変領域の代わりに移植され得る。
【００４６】
上記の方法及び分子は、異なるアイソタイプのＦｃ領域、又はタンパク質若しくは非タンパク質部分（例えば、蛍光タグ若しくは化学療法剤）に結合されているＦｃ領域を含む抗体を作り出すために、有用であり得る。本発明は、（１）抗体、代替スカフォールド又はそれらのフラグメント、及び（２）ＩＬ−１７結合剤を含むタンパク質又は非タンパク質部分、の複合体も提供する。例えば、ＩＬ−１７結合剤は、ペプチド、蛍光分子又は化学療法剤に結合された抗体の部分であり得る。
【００４７】
本発明は、単離されたＩＬ−１７結合剤（例えば、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド）をコードする核酸配列を含むベクターを更に提供する。「核酸」は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、即ち、ポリヌクレオチドを包含するよう意図されており、一本鎖又は二本鎖であり得、非天然のヌクレオチド又は改変されたヌクレオチドを含み得る。核酸は、典型的には、リン酸結合を介して結合されて核酸又はポリヌクレオチドを形成するが、多くの他の結合が当該分野において公知である（例えば、ホスホロチオエート、ボラノリン酸など）。
【００４８】
ベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルス又はアデノウイルス）又はファージであり得る。適切なベクター及びベクター調製の方法は、当該分野において周知である（例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994)参照）。
【００４９】
ＩＬ−１７結合剤をコードする核酸に加えて、ベクターは、好ましくは、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）などの、宿主細胞におけるコード配列の発現を与える発現制御配列を含む。典型的な発現制御配列は、当該分野において公知であり、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Vol. 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)に記載されている。
【００５０】
種々の異なる由来からの、構成的、誘導性及び抑制性プロモーターを含む多数のプロモーターが当該分野において周知である。プロモーターの代表的な由来としては、例えば、ウイルス、哺乳動物、昆虫、植物、酵母及び細菌が挙げられ、これらの由来からの適切なプロモーターは、容易に入手可能であるか、或いは、例えばＡＴＣＣなどの寄託機関並びに他の商業的又は個人的なソースから一般に入手可能な配列に基づいて合成により作製され得る。プロモーターは、一方向性（即ち、一方向で転写を開始させる）又は二方向性（即ち、３’又は５’のいずれの方向でも転写を開始させる）であり得る。プロモーターの非限定的な例としては、例えば、Ｔ７バクテリア発現系、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）バクテリア発現系、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターとしては、例えば、Ｔｅｔ系（米国特許第5,464,758号及び第5,814,618号）、エクダイソン誘導系（No et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 93: 3346-3351 (1996)）、Ｔ−ＲＥＸＴＭ系（Invitrogen、Carlsbad、CA）、ＬＡＣＳＷＩＴＣＨＴＭ系（Stratagene、San Diego、CA）並びにＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼ系（Indra et al., Nuc. Acid. Res., 27: 4324-4327 (1999); Nuc. Acid. Res., 28: e99 (2000); 米国特許第7,112,715号; 及びKramer & Fussenegger, Methods Mol. Biol., 308: 123-144 (2005)）が挙げられる。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、用語「エンハンサー」とは、例えば、それが作動可能に連結されている核酸配列の転写を増加させるＤＮＡ配列をいう。エンハンサーは、核酸配列のコード領域から何キロベースも離れて位置していてもよく、調節因子の結合、ＤＮＡメチル化パターン、又はＤＮＡ構造の変化を仲介し得る。種々の異なる由来からの多数のエンハンサーが当該分野において周知であり、クローニングされたポリヌクレオチドとして、又はクローニングされたポリヌクレオチド内で、（例えば、ＡＴＣＣなどの寄託機関並びに他の商業的若しくは個人のソースから）入手可能である。プロモーター（一般に使用されるＣＭＶプロモーターなど）を含む多数のポリヌクレオチドは、エンハンサー配列も含む。エンハンサーは、コード配列の上流、内部、又は下流に位置し得る。用語「Ｉｇエンハンサー」とは、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座内にマップされたエンハンサー領域に由来するエンハンサーエレメントをいう（そのようなエンハンサーとしては、例えば、重鎖（ミュー）５’エンハンサー、軽鎖（カッパ）５’エンハンサー、カッパ及びミューのイントロンエンハンサー、並びに３’エンハンサーが挙げられる（一般的にはPaul W.E.（ed), Fundamental Immunology, 3rd Edition, Raven Press, New York (1993), 第353-363頁;及び米国特許第5,885,827号参照）。
【００５２】
ベクターは、「選択マーカー遺伝子」も含み得る。本明細書中で使用される場合、用語「選択マーカー遺伝子」とは、核酸配列であって、該核酸配列を発現する細胞が、対応する選択試薬の存在下で、特異的に選択されるように又はされないようにすることを可能にするものをいう。適切な選択マーカー遺伝子は、当該分野において公知であり、例えば、国際特許出願公開第WO 92/08796号及び第WO 94/28143号; Wigler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527 (1981); Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072 (1981); Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150: 1 (1981); Santerre et al., Gene, 30: 147 (1984); Kent et al., Science, 237: 901-903 (1987); Wigler et al., Cell, 11: 223 (1977); Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 2026 (1962); Lowy et al., Cell, 22:817 (1980); 並びに米国特許第5,122,464号及び第5,770,359号に記載されている。
【００５３】
いくつかの実施形態において、ベクターは、「エピソーム発現ベクター」又は「エピソーム」であり、宿主細胞において複製可能であり、適切な選択圧の存在下で、宿主細胞内において、ＤＮＡの染色体外セグメントとして存続する（例えば、Conese et al., Gene Therapy 11: 1735-1742 (2004)参照）。代表的な市販のエピソーム発現ベクターとしては、エプスタイン・バー核抗原１（ＥＢＮＡ１）及びエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）複製起点（ｏｒｉＰ）を利用するエピソームプラスミドが挙げられるがこれに限定されない。Invitrogen（Carlsbad、CA）のベクターｐＲＥＰ４、ｐＣＥＰ４、ｐＲＥＰ７及びｐｃＤＮＡ３．１、並びにStratagene（La Jolla、CA）のｐＢＫ−ＣＭＶは、ＥＢＮＡ１及びｏｒｉＰの代わりにＴ抗原及びＳＶ４０複製起点を使用するエピソームベクターの非限定的な例を示す。
【００５４】
他の適切なベクターとしては、宿主細胞のＤＮＡ中にランダムに繰み込まれ得るか、又は発現ベクターと宿主細胞染色体との間の特異的組換えを可能にする組換え部位を含み得る、組込み発現ベクターが挙げられる。そのような組込み発現ベクターは、所望のタンパク質の発現をもたらすために、宿主細胞染色体の内因性発現制御配列を利用し得る。部位特異的な様式で組み込まれるベクターの例としては、例えば、Invitrogen（Carlsbad、CA）のｆｌｐ−ｉｎ系（例えば、ｐｃＤＮＡＴＭ５／ＦＲＴ）又はｃｒｅ−ｌｏｘ系（例えば、Stratagene（La Jolla、CA）のｐＥｘｃｈａｎｇｅ−６ Ｃｏｒｅ Ｖｅｃｔｏｒｓ中に見出され得るものなど）の成分が挙げられる。宿主細胞染色体中にランダムに組み込まれるベクターの例としては、例えば、Invitrogen（Carlsbad、CA）のｐｃＤＮＡ３．１（Ｔ抗原の非存在下で導入される場合）、及びPromega（Madison、WI）のｐＣＩ又はｐＦＮ１０Ａ（ＡＣＴ）ＦＬＥＸＩＴＭが挙げられる。
【００５５】
ウイルスベクターも使用され得る。代表的な市販のウイルス発現ベクターとしては、Crucell, Inc.（Leiden、オランダ）から入手可能なアデノウイルスベースのＰｅｒ．Ｃ６系、Invitrogen（Carlsbad、CA）から入手可能なレンチウイルスベースのｐＬＰ１、並びにStratagene（La Jolla、CA）から入手可能なレトロウイルスベクターｐＦＢ−ＥＲＶ及びｐＣＦＢ−ＥＧＳＨが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
ＩＬ−１７結合剤の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドをコードする核酸配列及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドをコードする核酸配列は、同じベクター上で（即ち、ｃｉｓで）細胞に与えられ得る。両方の核酸配列の発現を制御するために、二方向性プロモーターが使用され得る。別の実施形態において、一方向性プロモーターは、両方の核酸配列の発現を制御し得る。或いは、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドをコードする核酸配列及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドをコードする核酸配列は、別々のベクター上で（即ち、ｔｒａｎｓで）細胞の集団に与えられ得る。免疫グロブリン重鎖ポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターは、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターと、同じか又は異なる発現制御配列を含み得る。別々のベクターは、同時に又は逐次的に与えられ得る。
【００５７】
ＩＬ−１７結合剤をコードする核酸（複数可）を含むベクター（複数可）は、それによってコードされるポリペプチドを発現することが可能な宿主細胞（任意の適切な原核又は真核細胞を含む）へと導入され得る。好ましい宿主細胞は、容易且つ確実に増殖でき、合理的に速い増殖速度を有し、充分特徴付けられた発現系を有し、容易且つ効率的に形質転換又はトランスフェクトされ得るものである。
【００５８】
適切な原核細胞の例としては、Bacillus属（Bacillus subtilis及びBacillus brevisなど）、Escherichia属（E. coliなど）、Pseudomonas属、Streptomyces属、Salmonella属、及びErwinia属由来の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特に有用な原核細胞としては、Escherichia coliの種々の株（例えば、K12、HB101（ATCC No. 33694）、DH5瘁ADH10、MC1061（ATCC No. 53338)及びCC102）が挙げられる。
【００５９】
好ましくは、ベクターは、真核細胞へと導入される。適切な真核細胞は、当該分野において公知であり、例えば、酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞が挙げられる。適切な酵母細胞の例としては、Hansenula属、Kluyveromyces属、Pichia属、Rhino-sporidium属、Saccharomyces属、及びSchizosaccharomyces属由来のものが挙げられる。好ましい酵母細胞としては、例えば、Saccharomyces cerivisae及びPichia pastorisが挙げられる。
【００６０】
適切な昆虫細胞は、例えば、Kitts et al., Biotechniques, 14: 810-817 (1993); Lucklow, Curr. Opin. Biotechnol., 4: 564-572 (1993); 及びLucklow et al., J. Virol., 67: 4566-4579 (1993)に記載されている。好ましい昆虫細胞としては、Ｓｆ−９及びＨＩ５（Invitrogen、Carlsbad、CA）が挙げられる。
【００６１】
好ましくは、哺乳動物細胞が本発明において利用される。多数の適切な哺乳動物宿主細胞が当該分野において公知であり、多くがAmerican Type Culture Collection（ATCC、Manassas、VA）から入手可能である。適切な哺乳動物細胞の例としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ATCC No. CCL61）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 4216-4220 (1980)）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ATCC No. CRL1573）及び３Ｔ３細胞（ATCC No. CCL92）が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な哺乳動物細胞株は、サルＣＯＳ−１（ATCC No. CRL1650）及びＣＯＳ−７細胞株（ATCC No. CRL1651）、並びにＣＶ−１細胞株（ATCC No. CCL70）である。更なる典型的な哺乳動物宿主細胞としては、霊長類細胞株及びげっ歯類細胞株（形質転換された細胞株を含む）が挙げられる。正常な二倍体細胞、初代組織のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物由来の細胞株、並びに初代外植片も適切である。他の適切な哺乳動物細胞株としては、マウス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、及びＢＨＫ又はＨａＫハムスター細胞株（これら全て、ATCCから入手可能である）が挙げられるが、これらに限定されない。適切な哺乳動物宿主細胞の選択方法並びに細胞の形質転換、培養、増幅、スクリーニング及び精製の方法は、当該分野において公知である。
【００６２】
ＩＬ−１７結合剤をコードする核酸配列は、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」により細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」とは、物理的又は化学的な方法を使用して、宿主細胞に１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを導入することをいう。多くのトランスフェクション技術が当該分野において公知であり、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈殿（例えば、Murray E.J.（ed.), Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Expression Protocols, Humana Press (1991)参照）；DEAE-デキストラン；エレクトロポレーション；カチオン性リポソーム介在トランスフェクション；タングステン粒子促進性の微粒子照射（Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)）；及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈殿（Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)）が挙げられる。ファージ又はウイルスベクターは、適切なパッケージング細胞（その多くが市販されている）内での感染粒子の増殖後に、宿主細胞に導入され得る。
【００６３】
本発明は、本明細書中に記載された単離されたＩＬ−１７結合剤又はＩＬ−１７結合剤をコードするベクターを含む組成物を提供する。好ましくは、該組成物は、医薬上許容される（例えば、生理学的に許容される）組成物であり、担体、好ましくは医薬（例えば、生理学的に許容される）担体及びＩＬ−１７結合剤を含む。任意の適切な担体が本発明の文脈において使用され得、そのような担体は当該分野において周知である。担体の選択は、部分的には、組成物が投与され得る特定の部位及び組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定される。組成物は、随意に無菌であり得る。組成物は、保存のために凍結又は凍結乾燥され得、使用前に適切な無菌の担体で再構成され得る。組成物は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2001)に記載されている従来技術に従って作り出され得る。
【００６４】
本発明は、哺乳動物におけるＩＬ−１７介在疾患の治療方法を更に提供する。該方法は、上記組成物をＩＬ−１７介在疾患を有する哺乳動物に投与することを含み、その結果、該哺乳動物においてＩＬ−１７介在疾患が治療される。本明細書中で使用される場合、用語「ＩＬ−１７介在疾患」とは、ＩＬ−１７の存在が疾患の病理作用を引き起こすか又はそれに寄与し、或いはＩＬ−１７レベル又は活性の減少が哺乳動物、好ましくはヒトにおいて治療効果を有する、任意の疾患又は障害をいう。ＩＬ−１７介在疾患の例としては、気道炎症、喘息、関節リウマチ（ＲＡ）、骨関節炎、骨粗しょう症、骨びらん、腹腔内膿瘍及び癒着、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、円形脱毛症、セリアック病、シャーガス病、特発性肺線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、同種移植片拒絶（例えば、腎臓）、乾癬性関節炎、ぶどう膜炎、ベーチェット病、特定の種類の癌、血管新生、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス、敗血症、敗血症又は内毒素ショック、アレルゲン曝露に対する反応、ヘリコバクターピロリ関連胃炎、気管支喘息、強直性脊椎炎、ループス腎炎、乾癬、虚血、全身性硬化症、脳卒中及び他の炎症性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
本明細書中で使用される場合、用語「治療」、「治療すること」などとは、所望の薬理及び／又は生理効果を得ることをいう。好ましくは、該効果は治療的であり、即ち、該効果は、疾患及び／又は該疾患に起因する有害な症状を部分的に又は完全に治癒する。このために、本発明の方法は、「治療有効量」のＩＬ−１７結合剤を投与することを含む。「治療有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の治療結果を達成するために有効な量をいう。治療有効量は、個体の疾患の状態、年齢、性別及び体重などの要因、並びにＩＬ−１７結合剤が個体における所望の応答を引き起こす能力によって変化し得る。例えば、本発明のＩＬ−１７結合剤の治療有効量は、（例えば、ＩＬ１７Ｒへの結合を阻害することにより）ヒトにおいてＩＬ−１７生物活性を減少させる量である。
【００６６】
或いは、薬理及び／又は生理効果は予防的であり得、即ち、該効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に予防する。これに関して、本発明の方法は、ＩＬ−１７介在疾患に罹患しやすい哺乳動物に「予防有効量」のＩＬ−１７結合剤を投与することを含む。「予防有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の予防結果（例えば、疾患発症の予防）を達成するために有効な量をいう。
【００６７】
典型的な投与量は、例えば、０．００１から１０００μｇの範囲内であり得る；しかしながら、この典型的な範囲より少ない又は多い投与量は、本発明の範囲内である。一日の非経口投与量は、約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ（全体重）（例えば、約５μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）、好ましくは約０．３μｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ（全体重）（例えば、約０．５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）、より好ましくは約１μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ（全体重）（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）、なおより好ましくは１日当たり約０．５から１０ｍｇ／ｋｇ（体重）（例えば、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）であり得る。治療又は予防効果は、治療された患者の定期的な評価によって観察され得る。数日以上にわたる反復投与のために、状態によっては、治療は、病徴の所望の抑制が起こるまで、繰り返される。しかしながら、他の投与レジメンが有用なこともあり、本発明の範囲内である。所望の投与量は、組成物の１回のボーラス投与により、組成物の複数回のボーラス投与により、又は組成物の継続的注入投与により送達され得る。
【００６８】
本発明のＩＬ−１７結合剤を含む組成物は、標準的な投与技術（経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺内、経皮、筋肉内、鼻腔内、口腔、舌下又は坐剤投与を含む）を使用して、哺乳動物に投与され得る。組成物は、好ましくは、非経口投与に適している。本明細書中で使用される場合、用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣内及び腹腔内投与を含む。より好ましくは、組成物は、静脈内、腹腔内又は皮下注射による末梢全身送達を使用して哺乳動物に投与される。
【００６９】
哺乳動物（例えば、ヒト)に投与されると、本発明のＩＬ−１７結合剤の生物活性は、当該分野において公知の任意の適切な方法によって測定され得る。例えば、生物活性は、特定のＩＬ−１７結合剤の安定性を決定することによって評価され得る。本発明の一実施形態において、ＩＬ−１７結合剤（例えば、抗体）は、約５から２８日の間（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有する。好ましくは、ＩＬ−１７結合剤は、約２１日から２８日の間（例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８日）のｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を有する。特定のＩＬ−１７結合剤の生物活性は、ＩＬ−１７又はそのエピトープへのその結合親和性を決定することによっても評価され得る。用語「親和性」とは、２つの剤の可逆的結合についての平衡定数をいい、解離定数（ＫＤ）として表される。リガンドへの結合剤の親和性（エピトープに対する抗体の親和性など）は、例えば、約１００ナノモーラー（ｎＭ）から約０．１ｎＭ、約１００ｎＭから約１ピコモーラー（ｐＭ）、約１ｎＭから約１ｐＭ、又は約１ｎＭから約１フェムトモーラー（ｆＭ）であり得る。本発明の方法の文脈において、ＩＬ−１７結合剤は、１ナノモーラー以下（例えば、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）、好ましくは２００ピコモーラー以下（例えば、１９０ｐｍｏｌ、１７５ｐｍｏｌ、１５０ｐｍｏｌ、１２５ｐｍｏｌ、１１０ｐｍｏｌ、１００ｐｍｏｌ、９０ｐｍｏｌ、８０ｐｍｏｌ、７５ｐｍｏｌ、６０ｐｍｏｌ、５０ｐｍｏｌ、４０ｐｍｏｌ、３０ｐｍｏｌ、２５ｐｍｏｌ、２０ｐｍｏｌ、１５ｐｍｏｌ、１０ｐｍｏｌ、５ｐｍｏｌ、１ｐｍｏｌ、又は前記値のいずれか２つによって規定される範囲）のＫＤでＩＬ−１７に結合する。目的の抗原又はエピトープに対する免疫グロブリンの親和性は、当該分野において認識されている任意のアッセイを使用して測定され得る。そのような方法としては、例えば、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、分離可能なビーズ（例えば、磁気ビーズ）、抗原パニング、及び／又はＥＬＩＳＡが挙げられる（例えば、Janeway et al.（eds.), Immunobiology, 5th ed., Garland Publishing, New York, NY, 2001参照）。
【００７０】
本発明のＩＬ−１７結合剤は、単独で、又は他の薬物と組み合わせて（例えば、アジュバントとして）投与され得る。例えば、ＩＬ−１７結合剤は、本明細書中に開示されたＩＬ−１７介在疾患の治療又は予防のための、免疫抑制剤若しくは免疫調節剤又は他の抗炎症剤と組み合わせて投与され得る。これに関して、ＩＬ−１７結合剤は、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（例えば、金塩、スルファサラジン、抗マラリア薬、メトトレキサート、Ｄ−ペニシラミン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ミノサイクリン、レフルノミド及びグルココルチコイド）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンＡ又はＦＫ ５０６）、リンパ球再循環のモジュレーター（例えば、ＦＴＹ７２０及びＦＴＹ７２０類似物）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８、ＡＰ２３５７３又はＴＡＦＡ−９３）、免疫抑制特性を有するアスコマイシン（例えば、ＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など）、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン（azathioprene）、メトトレキサート、レフルノミド、ミゾリビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、又はその免疫抑制ホモログ、アナログ若しくは誘導体、免疫抑制モノクローナル抗体（例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６などの白血球受容体又はそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体）、他の免疫調節化合物、接着分子阻害剤（例えば、ＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１若しくは−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニスト又はＶＬＡ−４アンタゴニスト）、化学療法剤（例えば、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、ドキソルビシン又は５−フルオロウラシル）、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、ＣＤＰ８７０などのＴＮＦに対するモノクローナル抗体、又はＥＮＢＲＥＬＴＭ（エタネルセプト）若しくはＰＥＧ−ＴＮＦ−ＲＩなどのＴＮＦ−ＲＩ若しくはＴＮＦ−ＲＩＩに対する受容体コンストラクト）、炎症性サイトカインのブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー（例えば、ＫｉｎｅｒｅｔＴＭ（アナキンラ）又はＩＬ−１トラップ、ＡＡＬ１６０、ＡＣＺ ８８５及びＩＬ−６ブロッカー）、ケモカインブロッカー（例えば、プロテアーゼの阻害剤又は活性化剤）、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＩＬ−６抗体、抗ＣＤ２０抗体、ＮＳＡＩＤ、及び／又は抗感染剤と組み合わせて使用され得る。
【００７１】
治療的使用に加えて、本明細書中に記載されたＩＬ−１７結合剤は、診断応用又は研究応用において使用され得る。これに関して、ＩＬ−１７結合剤は、ＩＬ−１７介在疾患又は障害を診断するための方法において使用され得る。例えば、本発明は、哺乳動物におけるＩＬ−１７介在疾患の診断方法であって、該方法は、ＩＬ−１７介在疾患を有することが疑われる哺乳動物にＩＬ−１７結合剤を投与することを含み、その結果、ＩＬ−１７に結合しているＩＬ−１７結合剤の検出が、該哺乳動物がＩＬ−１７介在疾患を有することを示す、方法を提供する。同様に、ＩＬ−１７結合剤は、ＩＬ−１７関連疾患又は障害について試験される対象においてＩＬ−１７レベルを観察するためのアッセイにおいて使用され得る。研究応用としては、ＩＬ−１７結合剤及び標識を利用して、試料中の（例えば、ヒト体液中又は細胞若しくは組織抽出物中の）ＩＬ−１７を検出する方法が挙げられる。ＩＬ−１７結合剤は、修飾（検出可能な部分との共有結合又は非共有結合標識など）されるか又はされないで使用され得る。例えば、検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ）、蛍光若しくは化学発光化合物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン）、又は酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、竅|ガラクトシダーゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼ）であり得る。抗原結合剤（例えば、抗体）を検出可能な部分に個々に結合するための、当該分野において公知の任意の方法が、本発明の文脈において用いられ得る（例えば、Hunter et al., Nature, 144: 945 (1962); David et al., Biochemistry, 13: 1014 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth., 40: 219 (1981); 及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407 (1982)参照）。
【００７２】
ＩＬ−１７レベルは、本発明のＩＬ−１７結合剤を使用して、当該分野において公知の任意の適切な方法によって測定され得る。そのような方法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ)及びＦＡＣＳが挙げられる。ＩＬ−１７の正常又は標準の発現値は、任意の適切な技術を使用して、例えば、抗原−抗体複合体を形成するために適切な条件下で、ＩＬ−１７ポリペプチドを含む（又は含むことが疑われる）試料をＩＬ−１７特異的抗体と合せることにより確立され得る。抗体は、結合した抗体又は結合していない抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接又は間接的に標識される。適切な検出可能な物質としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質が挙げられる（例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)参照）。次いで、試料中で発現されたＩＬ−１７ポリペプチドの量は、標準値と比較される。
【００７３】
ＩＬ−１７結合剤は、キット、即ち、診断アッセイを実施するための説明書を備える、所定の量の試薬の包装された組み合わせ、で提供され得る。ＩＬ−１７結合剤が酵素で標識される場合、キットは、望ましくは、酵素によって必要とされる基質及び補因子（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。また、安定化剤、バッファー（例えば、ブロッキングバッファー又は溶解バッファー）などの他の添加剤がキットに含まれ得る。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するために、変動し得る。試薬は、溶解の際に、適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む、乾燥粉末（典型的には、凍結乾燥されたもの）として提供され得る。
【００７４】
以下の実施例は本発明を更に説明するが、勿論、いかなる意味においてもその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００７５】
実施例１
本実施例は、本発明に従うＩＬ−１７結合剤が、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてヒトＩＬ−１７の活性を阻害することができることを実証する。
【００７６】
ヒトＩＬ−１７（ｈＩＬ−１７）は、マウスＩＬ−１７受容体に結合し刺激することが可能であり、その後のＫＣ（ＣＸＣＬ１）ケモカインの放出をもたらす。時間及び用量を変動させる実験を行ない、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるマウスＫＣの最大の誘導をもたらすｈＩＬ−１７の最適な用量を特定した。ヒトＩＬ−１７を、１、３及び１０μｇ／マウスで、マウスに皮下投与した。ｈＩＬ−１７投与後の種々の時点（図１)で、マウスを屠殺し、市販のキットを製造者の説明書に従って使用して（KC Quantikine、R&D Systems、Minneapolis、MN）、ＥＬＩＳＡによりＫＣレベルを決定した。これらの実験は、ヒトＩＬ−１７の１０μｇ／マウスの皮下用量が、ヒトサイトカインの投与の２時間後に、マウス血清中のＫＣの最大レベルをもたらすことを示した（図１)。
【００７７】
配列番号４を含む重鎖ポリペプチド及び配列番号２４を含む軽鎖ポリペプチドを含む全長ＩｇＧ１抗体を、ｈＩＬ−１７の皮下注射の２時間前に１、１０及び１００μｇ／マウスで、マウスに静脈内投与した。ヒトＩＬ−１７投与の２時間後、マウスを屠殺し、市販のキットを使用して、ＥＬＩＳＡによりＫＣレベルを決定した。ネガティブコントロール（ＮＣ）としてアイソタイプを合わせた（ＩｇＧ１）抗体を使用した。図２に示すように、配列番号４及び配列番号２４を含む抗体は、用量依存的に、マウスＩＬ−１７受容体を刺激するｈＩＬ−１７の能力を阻害する。１００μｇ／マウスの用量において、該抗体は、ビヒクル及びＮＣ抗体（効果がなかった）と比較して、平均ＫＣレベルをおよそ７５から８０％減少させた。
【００７８】
本実施例の結果は、配列番号４及び配列番号２４を含むＩＬ−１７特異的抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてＩＬ−１７の活性を阻害することができることを実証している。
【００７９】
実施例２
本実施例は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＩＬ−１７に結合する抗体を形成することができることを実証する。
【００８０】
以下のものを合せることにより、本明細書中に記載されるような種々の免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドをコードするＤＮＡ試料を調製した：２０μｌ マキシプレップした（maxi-prepped）ＤＮＡ（０．２μｇ ＨＣ及び０．２μｇ ＬＣプラスミドからなる）、９．８μｌ ＯＰＴＩＭＥＭＴＭ（Invitrogen、Carlsbad、CA）、１．２μｌ ＧＥＮＥＪＵＩＣＥＴＭトランスフェクション試薬（Novagen、Gibbstown、NJ）、及び１３．８μｌ ＯＰＴＩＭＥＭＴＭ（予熱した）。ＤＮＡ調製物の徹底的な混合及びインキュベーション（室温）の後、３５μｌの試薬／ＤＮＡ混合物を、５ｘ１０４ ＨＥＫ２９３−ｃ１８細胞に添加した。トランスフェクションの１８時間前に、細胞を、９６ウェルマイクロタイターディッシュの１ウェル当たり１５０μｌのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ培地に播き、８％ ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７でインキュベートした。トランスフェクション後、細胞を８％ ＣＯ２中３７に戻した。試験した重鎖及び軽鎖配列の組み合わせを、表２に記載する。
【００８１】
【表２】
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【００８２】
トランスフェクションの５〜７日後に、９６ウェルプレート中の上清を回収した。ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ Ａ１００及び／又はＢＩＡＣＯＲＥＴＭ ４０００（GE Healthcare、Buckinghamshire、イギリス）にロードする前に、プレートを１５００ｒｐｍで５分間スピンダウンし、気泡を除去した。ポジティブコントロール、ネガティブコントロール及び培地コントロールを空のウェルに加えた。抗ヒトＦｃ特異的ＩｇＧを、２対２（2 over 2）分析のために、所定のフローセルの２点上に２つの異なる密度で、Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５表面にアミン架橋した。目的のＩｇＧを両方の密度で捕捉した。２つの濃度の抗原（ヒトＩＬ−１７）を、各密度（「ゼロ濃度」サンプリングを含む）の各抗体上に流し、結合相互作用を観察した。表面を、ｐＨ １．７の１０ｍＭグリシンで再生させ、捕捉抗体に結合した物質を除去した。マストランスポートを伴う１：１相互作用Ｌａｎｇｅｌｉｅｒモードを用いてデータセットを分析した。試験した重鎖及び軽鎖ポリペプチドは、ヒトＩＬ−１７に結合する抗体を形成した（図３参照）。
【００８３】
本実施例の結果は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含むＩＬ−１７結合剤が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒトＩＬ−１７に結合することができることを実証している。
【００８４】
実施例３
本実施例は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒトＩＬ−１７に結合する抗体を形成することができることを実証する。
【００８５】
以下の抗ＩＬ１７ａ抗体についての結合親和性の順位を、ホモジニアス時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイにより決定した：（ａ）配列番号５５を含む重鎖ポリペプチド及び配列番号２４を含む軽鎖ポリペプチドを含む抗体（「ＡＰＥ５０８」）、（ｂ）配列番号７８を含む重鎖ポリペプチド及び配列番号２４を含む軽鎖ポリペプチドを含む抗体（「ＡＰＥ７５５」）、（ｃ）第１の基準抗ＩＬ１７a抗体（国際特許出願公開第WO 2006/013107号に記載されている）、並びに（ｄ）第２の基準抗ＩＬ１７a抗体（米国特許第7,838,738号に記載されている）。該アッセイにおいて、ワサビ蛍光タンパク質（ＷＦＰ)（例えば、Ai et al., BMC Biol., 6:13 (2008)参照）に連結したＩＬ−１７抗原（ＡＰＥ３４９−配列番号８２）を、製造者のプロトコールに従ってＨＴＲＦ（登録商標）クリプテートラベリングキット（Cisbio US、Bedford、MA）を使用して、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化クリプテート（Ｅｕ３＋−ＴＢＰ−ＮＨＳクリプテート）で標識した。第２の基準抗体のビオチン化したバージョンを、ストレプトアビジン−ＸＬ６６５（Cisbio US、Bedford、MA）に連結し、続いて種々の濃度で上記の抗ＩＬ１７ａ抗体の各々と混合した。次いで、抗体を、一晩室温で、標識した抗原とインキュベートした。アッセイの最後に、反応を、ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌプレートリーダー（PerkinElmer、Waltham、MA）を使用してＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ−３８４ Ｐｌｕｓ（Perkin Elmer、Waltham、MA）で読んだ。標識した抗原と基準抗体との結合を、６２０ｎＭに対する６６５ｎＭの比として決定した。該比を、試験した抗体の濃度に対してプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（GraphPad Software, Inc.、La Jolla、CA）を使用する阻害曲線フィッティングにより、試験した各抗体についてＩＣ５０を決定した。このアッセイの結果は、ＡＰＥ７５５及びＡＰＥ５０８抗体が、基準抗ＩＬ１７ａ抗体と同じＩＬ−１７上のエピトープに結合することを実証している。
【００８６】
ＨＴ１０８０細胞、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞、又は関節リウマチ患者（ＲＡ ＳＦＢ）細胞由来の初代滑膜線維芽細胞を使用するサイトカイン放出アッセイも使用して、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドがヒトＩＬ−１７に結合する抗体を形成することができることを実証した。ＮＩＨ３Ｔ３及びＨＴ−１０８０細胞からのＩＬ−６放出を、ＥＬＩＳＡにより定量した。細胞を、１ｘ１０４細胞／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに播種し、次いで、（ｉ）精製したヒトＭｙｃ−ＩＬ−１７ａ（ＡＰＥ２８０、ＮＩＨ３Ｔ３細胞について５２ｐＭ又はＨＴ１０８０細胞について２００ｐＭ）、（ｉｉ）ヒト組換えＴＮＦα（R&D Systems, Inc.、Minneapolis、MN、０．５ｎｇ／ｍＬ；ＮＩＨ３Ｔ３細胞のみ）、及び（ｉｉｉ）種々の濃度の上記の抗ＩＬ１７ａ抗体（全て１００μｌ ＤＭＥＭ／１０％ＦＣＳ中）で２４時間処理した。処理後、各ウェルからの上清１０μｌを、マウスＩＬ−６定量のためのＥＬＩＳＡ（eBioscience, Inc.、San Diego、CA）により、製造者のプロトコールに従って分析した。ＩＬ−６レベルをネガティブコントロール（処理中、抗ＩＬ−１７ａ抗体を存在させなかった）に対して標準化した。標準化したＩＬ−６レベルを抗体濃度に対してプロットし、各抗体についてのＩＣ５０をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用する阻害曲線フィッティングにより決定した。ＨＴ−１０８０細胞からのＩＬ−１７ａによって刺激されたＩＬ−８放出を、８００ｐＭ Ｍｙｃ−ＩＬ−１７ａ及び０．０５ｎｇ／ｍＬのヒト組換えＴＮＦαを使用したことを除いて上記のように測定した。ＩＬ−８の定量は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＥＬＩＳＡキット（San Diego、CA）を使用して、製造者のプロトコールに従って実施した。
【００８７】
ＡＰＥ７５５抗体は、第１の基準抗ＩＬ１７ａ抗体よりも５〜１０倍高い強度で、ヒトＩＬ−１７によって刺激された細胞株からのＩＬ−６放出を阻害した。ＡＰＥ７５５抗体は、第１の基準抗ＩＬ１７ａ抗体よりも２倍高い強度で、ヒトＩＬ−１７によって刺激された細胞株からのＩＬ−８放出を阻害した。
【００８８】
ＲＡ ＳＦＢ細胞からのＩＬ−６及びＩＬ−８放出をＥＬＩＳＡにより定量した。２〜４継代したＲＡ ＳＦＢ細胞（Asterand、MI、関節リウマチを有する６３歳の白人女性由来の膝の病変領域から単離した）を、５ｘ１０３細胞／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに播種した。一晩培養後、細胞を、ヒトＩＬ−１７ａ（Humanzyme、IL、２００ｐＭ）及び種々の濃度の以下の抗ＩＬ１７ａ抗体の１つで２４時間処理した：（ａ）ＡＰＥ５０８、（ｂ）ＡＰＥ７５５、（ｃ）第１の基準抗ＩＬ１７a抗体（国際特許出願公開第WO 2006/013107号に記載されている）、（ｄ）第２の基準抗ＩＬ１７a抗体（米国特許第7,838,738号に記載されている）、及び（ｅ）神経成長因子（ＮＧＦ)に特異的な抗体（「ＡＰＥ４０９」)（これをネガティブコントロールとした）（全て１００μｌ ＤＭＥＭ／Ｆ−１２／１０％ＦＢＳ中）。処理後、各ウェルからの１０μｌ又は２０μｌの上清を、製造者のプロトコールに従って、それぞれヒトＩＬ−６（eBioscience, Inc.、San Diego、CA）又はヒトＩＬ−８（BioLegend, San Diego、CA）ＥＬＩＳＡに供した。ＩＬ−６及びＩＬ−８レベルを、ネガティブコントロール（即ち、処理中、抗ＩＬ−１７ａ抗体を存在させなかった）に対して標準化した。標準化したレベルを上記のようにプロットした。
【００８９】
ＡＰＥ７５５抗体は、基準抗ＩＬ−１７ａ抗体よりも５倍高い強度で、ＩＬ−１７によって刺激された初代ヒトＲＡ滑膜線維芽細胞からのＩＬ−６及びＩＬ−８放出を阻害した（図４参照）。
【００９０】
本実施例の結果は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含むＩＬ−１７結合剤が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒトＩＬ−１７に結合することができることを実証している。
【００９１】
実施例４
本実施例は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＩＬ−１７の活性を阻害する抗体を形成することができることを実証する。
【００９２】
抗ＩＬ１７ａ抗体による受容体−リガンド結合の阻害を、競合ＥＬＩＳＡにより定量した。９６ウェルアッセイプレートを、１００μｌコーティングバッファー中５ｎＭ ｍｙｃ−ＩＬ−１７ａ（ＡＰＥ２８０）（eBioscience, Inc.、Sand Diego、CA）でコートした。１ｎＭビオチン化ＩＬ−１７受容体Ａ（ＩＬ−１７ＲＡ)（R&D Systems, Inc.、Minneapolis、MN）を、種々の濃度の実施例３に記載した抗ＩＬ１７ａ抗体と混合し（全て１００μｌブロッキングバッファー（eBioscience, Inc.、San Diego、CA)中）、ＩＬ−１７Ａをコートしたプレート中で２４時間インキュベートした。捕捉されたビオチン化ＩＬ−１７ＲＡを、標準的なＥＬＩＳＡプロトコールに従って、アビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を使用して定量した。シグナルを、ネガティブコントロール（結合を阻害するための抗ＩＬ１７a抗体を存在させなかった）に対して標準化した。標準化した受容体−リガンド結合シグナルを抗体の濃度に対してプロットし、各抗体についてのＩＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用する阻害曲線フィッティングにより決定した。抗体ＡＰＥ７５５は、ＩＬ−１７／ＩＬ−１７ＲＡ相互作用の阻害において、第１の基準抗ＩＬ−１７ａ抗体よりも４０倍強力であり、第２の抗ＩＬ−１７ａ基準抗体と同等であった（図５）。
【００９３】
本実施例の結果は、配列番号７８を含む重鎖ポリペプチド及び配列番号２４を含む軽鎖ポリペプチドを含むＩＬ−１７特異的抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＩＬ−１７の活性を阻害することができることを実証している。
【００９４】
実施例５
本実施例は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドが、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒトＩＬ−１７に結合する抗体を形成することができることを実証する。
【００９５】
本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドを含む種々の抗体の結合親和性を、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ及びＫＩＮＥＸＡ（登録商標）アッセイを使用して評価した。
【００９６】
ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ１００ＴＭを使用して、抗体−抗原結合キネティクス及び親和性を決定する。該技術は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（デキストランバイオセンサーマトリクス内でリアルタイムで、標識なしでの相互作用の検出を可能にする光学現象）に基づく。従って、会合（ｋｏｎ）並びに解離（ｋｏｆｆ）の速度定数の測定に適している。全ての試薬及び材料は、GE Healthcare（Buckinghamshire、イギリス）から購入した。抗ＩＬ１７ａ抗体は、ＣＭ５センサーチップ（GE Healthcare; カタログ番号BR-1005-30）上にアミン架橋化学を使用して共有結合により固定化した抗ヒトＦｃ抗体（GE Healthcare; カタログ番号BR-1008-39）によって捕捉された。３０００応答単位（ＲＵ）の捕捉抗体をデキストラン表面に付着させ、その後３０〜５０ＲＵの５００ｎｇ／ｍＬ 抗ＩＬ−１７ａ抗体が捕捉された。１Ｘ ＨＢＳ−ＥＰ＋バッファー（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ポリソルベート、ｐＨ７．６）を使用して、種々の濃度（５０ｎＭから始めて、２倍段階希釈で各濃度とした）で抗原を再構成した。２１０μＬの各抗原濃度を、捕捉された抗体に対して３０μＬ／分の流速で注入し、次いで、１０分間解離させた。各サイクルの後、表面を６０μＬの３Ｍ ＭｇＣｌ２で再生させ、ベースラインを確立した。会合及び解離速度定数（ｋａ及びｋｄ）を、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ Ｔ１００評価ソフトウェアにおける「マストランスポートを伴う１：１」結合モデルを用いて評価した。ＢＩＡＣＯＲＥＴＭアッセイについての結合の程度は、「＋＋」（強い結合）、「＋」（結合）、又は「＋／−」（バックグラウンドに近い）として測定した。ＢＩＡＣＯＲＥＴＭアッセイの結果を表３に記載する。
【００９７】
【表３】
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【００９８】
＜１００ｐＭに最適化された抗体も、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）３０００アッセイ（Sapidyne Instruments、Boise、ID）を使用して特徴付けた。ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）技術は、溶液相中で未結合の／遊離の受容体分子を測定する。表面積の最大化のためのマイクロビーズを用いて溶液相中で結合事象を測定することは、固相への結合を測定する方法に内在するマストランスポートリミテーション及び移動度効果を回避する。各実験について、５０μｇのＩＬ−１７ａを、５０ｍｇのＵｌｔｒａＬｉｎｋ Ｂｉｏｓｕｐｐｏｒｔビーズ（Thermo Scientific、Waltham、MA; カタログ番号53110）にアミン架橋した。（０．８Ｖ〜１．２Ｖのシグナルを生じさせるのに十分な）一定濃度の抗体を、サンプルバッファー（１Ｘ ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％ ＮａＮ３、０．１％ ＢＳＡ）中で、量を決定した（titrated）抗原と、平衡に近づくか又は達するために十分な時間（インキュベーションの時間は、各抗体について異なり、親和性に依存する）インキュベートした。次いで、抗体−抗原溶液を、０．２５ｍＬ／分の速度で抗原結合ビーズに対して流した。ビーズによって捕捉された遊離の抗体を、Ｃｙ５結合ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ)（Jackson ImmunoResearch; カタログ番号709-175-149）を使用して検出した。抗体のＫｄ及び／又はＡＢＣ（活性結合濃度（active binding concentration））を、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）Ｐｒｏソフトウェアにおける１部位（one-site）ホモジニアス結合モデルを使用して非線形回帰分析から取得した。各抗体について最も正確な測定を達成するために、Ｎ曲線分析において、各「Ｋｄ制御曲線」（ここで、抗体濃度はＫｄより低い）を「受容体制御曲線」（ここで、抗体濃度はＫｄより十分高い）と組み合わせた。ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）アッセイの結果を表４に記載する。
【００９９】
【表４】
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【０１００】
本実施例の結果は、本明細書中に記載された免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含むＩＬ−１７結合剤が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒトＩＬ−１７に結合することができることを実証している。
【０１０１】
本明細書中に引用された全ての参考文献（刊行物、特許出願、及び特許を含む）は、各参考文献が参照により組み込まれることが個々に且つ具体的に示され、またその全体が本明細書中で説明されたのと同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０２】
本発明（特に添付の特許請求の範囲に関して）を記載することに関して、用語「a」及び「an」及び「the」並びに同様の指示語の使用は、本明細書中に別途示されない限り、又は文脈に明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を含むと解釈されるべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、及び「含有する（containing）」は、別途言及されない限り、オープンエンドの用語（即ち、「含むが、それに限定されない」を意味する）と解釈されるべきである。本明細書中の値の範囲の列挙は、本明細書中に別途示されない限り、この範囲内に入る各個別の値に個々に言及する簡略化された方法として機能することを意図するに過ぎず、各個別の値は、それが本明細書中に個々に列挙されたかのように、本明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中に別途示されない限り、又はさもなくば文脈に明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施され得る。本明細書中に提供されるあらゆる全ての例、又は例示的表現（例えば、「など（such as）」）の使用は、本発明をより良く説明することを意図するに過ぎず、別途主張されない限り、本発明の範囲を限定しない。本明細書中のいかなる表現も、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須なものとして示していると解釈されるべきではない。
【０１０３】
本発明を実施するための本発明者らが知る最良の形態を含めて、本発明の好ましい実施形態が本明細書に記載されている。これらの好ましい実施形態のバリエーションは、前述の記載を読めば、当業者に明らかになり得る。本発明者らは、当業者がそのようなバリエーションを適宜採用することを予期し、また本発明者らは、本明細書に具体的に記載されたもの以外の方法で、本発明が実施されることを意図する。従って、本発明は、適用法により許容される、本明細書に添付された特許請求の範囲に列挙された主題の全ての改変物及び均等物を含む。更に、上記要素の全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組み合わせが、本明細書中に別途示されない限り、又はさもなくば文脈に明らかに矛盾しない限り、本発明に包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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