(57)【要約】  コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）抽出物及び抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソーム（polymersome）を有効成分として含有する皮膚弾力改善用化粧料組成物を提供する。本発明の化粧料組成物は、皮膚のシワ改善、皮膚の弾力性回復、及び皮膚の水分含有量増大の効能を含む、皮膚弾力を改善する効果がある。
2013540715.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）抽出物及び抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソーム（polymersome）を有効成分として含有する皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項２】
前記抗老化ペプチドは、パルミトイルトリペプチド‐５（Palmitoyl Tripeptide‐5）又はジアミノプロピオノイルトリペプチド３３（Diaminopropionoyl Tripeptide‐33）であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項３】
前記抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソームは、アブセル（ABcell（登録商標））であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項４】
前記組成物は、ペルレカン（Perlecan）遺伝子の発現を増加させることにより、表皮と真皮の再生及び表皮と真皮の付着力向上を促進して、皮膚構造を維持させることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項５】
前記組成物は、ペルレカンタンパク質の生成を増加させることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項６】
前記組成物は、ＵＶによるペルレカンタンパク質の生成低下を回復させることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【請求項７】
前記組成物は、皮膚のシワ改善、皮膚の弾力性回復、及び皮膚の水分含有量増大の効能を有することを特徴とする、請求項１に記載の皮膚弾力改善用化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚弾力改善用化粧料組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮、真皮などの構造が変化した場合、皮膚が弾力性を失い、垂れて見えるようになる。
【０００３】
真皮の厚さは漸次的に減少するが、真皮層のコラーゲン（膠原質）の総量は、成人になった後、１年に１％ずつ消失し、また残っているコラーゲン繊維は漸次厚くなるとともに、架橋（cross‐linking）が増加することになって溶解度、膨張力等が低下する。
【０００４】
さらに、弾力繊維も厚くなり、架橋も増加することになる。その他、真皮内では、線維芽細胞の増殖活性が低下し、コラーゲンの合成能は低下、分解能は増加する。
【０００５】
表皮や真皮等の再生が遅くなり、表皮と真皮との間の付着力が低下するようになるにつれ、皮膚の弾力度は急速に低下するようになる。
【０００６】
このような女性の皮膚弾力の現状等を改善するために、コラーゲンの増加や、エラスチンの増加といった方法を通じた弾力改善を応用していたのに対し、表皮と真皮の付着と関連した研究はほとんど行われていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】韓国公開特許第１０−２０１０−２３３７２号
【特許文献２】米国特許出願公開第１０−２０１０−２３３７２号明細書
【特許文献３】特開２００６−６２９９１号公報
【特許文献４】韓国公開特許第１０−２００４−５９００４号
【特許文献５】特開平８−１２５６６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、前述した問題点を解決するために、コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）抽出物及び抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソームを有効成分として含有する、皮膚のシワ改善及び皮膚の弾力性回復効能を有する皮膚弾力改善用化粧料組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）抽出物及び抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソームを有効成分として含有する皮膚弾力改善用化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の化粧料組成物は、皮膚のシワ改善、皮膚の弾力性回復、及び皮膚の水分含有量増大の効能を有するので、皮膚の弾力を改善させる効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】コミカンソウ抽出物及びABcell（登録商標）を処理したときの、正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）におけるペルレカン遺伝子の変化を示した結果である。
【図２】コミカンソウ抽出物を処理したときの、正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）におけるペルレカンタンパク質の変化を示したものである。
【図３】２０代から分離した正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）におけるペルレカンタンパク質の変化を、免疫蛍光染色して蛍光強度で示したものである。
【図４】４０代から分離した正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）におけるペルレカンタンパク質の変化を、免疫蛍光染色して蛍光強度で示したものである。
【図５】ABcell（登録商標）を処理したときの、４０代から分離した正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）におけるペルレカンタンパク質の変化を、免疫蛍光染色して蛍光強度で示したものである。
【図６】コミカンソウ抽出物及びABcell（登録商標）を含有した化粧品剤形を通じて、外部臨床試験機関（DERMAPRO Co.,LTD.）でシワに対する臨床遂行を実施した結果を示したものである。
【図７】コミカンソウ抽出物及びABcell（登録商標）を含有した化粧品剤形を通じて、外部臨床試験機関（DERMAPRO Co.,LTD.）で弾力性増加に対する臨床遂行を実施した結果を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明は、コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）抽出物及び抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソーム（polymersome）を有効成分として含有する皮膚弾力改善用化粧料組成物を提供する。
【００１４】
コミカンソウ（Phyllanthus urinaria）は、真珠草又は珍珠草も呼ばれ、主に畑や草地で育つ。コミカンソウは、腸炎、赤痢、伝染性肝炎及び腎炎による水腫、尿路感染、 明目、小児栄養失調、眼の炎症又は角膜混濁、口腔内潰瘍及び無名腫毒に対する治療効果があり、化粧料に添加されて美白効能を示し得ることが知られている。特許文献４には、珍珠草抽出物、尖尾芋抽出物及びこれらの混合物からなる群から選択された１種以上を有効成分として含有するメラニン生成抑制活性を有する植物抽出物を含有する皮膚美白用組成物が開示されている。また、特許文献５には、珍珠草抽出物（Phyllanthus niruri L.）、マチコ（Piper elongatum Vahl. & Piper ungustifolium）及び西洋イラクサ（Urtica urens）になる群から選択された１種又は２種以上を配合して含有するチロシナーゼ活性阻害剤が開示されている。
【００１５】
前記抗老化ペプチドは、抗老化効能を示すペプチドをいい、たとえば、パルミトイルトリペプチド‐５（Palmitoyl Tripeptide‐5）又はジアミノプロピオノイルトリペプチド３３（Diaminopropionoyl Tripeptide‐33）であってよい。前記抗老化ペプチドが内部に安定化されたポリマーソームは、アブセル（ABcell）（登録商標、アモーレパシフィック社）であってよい。
【００１６】
ポリマーソームとは、疎水性ブロックと親水性ブロックとを合わせ持っている多様な両親性高分子の合成を通じた効果的なナノ構造体で、ヴェシクル（vesicle）形態の構造体である。水溶液内において、こうした両親性高分子は、疎水性ブロックがシステムの自由エネルギーを下げるために水を避け、自己同士で会合しようとする性質によって会合体を形成し、親水性ブロックが水溶液内で均一に溶解されるため、水溶液内において熱力学的に安定した構造体を維持することができるようになる。前記ポリマーソームは、皮膚への浸透及び有効成分の捕集性に優れ、水溶液中において著しく安定的であるため、体内投与の際、相当期間中その構造を維持することができる。
【００１７】
本発明の組成物は、ペルレカン（Perlecan）遺伝子の発現を増加させてよく、ペルレカン蛋白質の生成を増加させてよい。ペルレカンは、表皮と真皮に存在するプロテオグリカン（proteoglycan）で、多様な成長因子（growth factor）が付いていて、表皮細胞の増殖及び分化、付着に影響を与えることを発見した。本発明の組成物は、ペルレカン（Perlecan）遺伝子の発現を増加させるため、表皮と真皮の再生及び表皮と真皮の付着力の向上を促進して、皮膚の構造を維持させる。そうして、皮膚の弾力を改善させて、皮膚の弾力性を回復させることができる。
【００１８】
また、前記組成物は、ＵＶによるペルレカンタンパク質生成の低下を回復させる。
【００１９】
本発明の組成物は、皮膚のシワ改善、皮膚の弾力性回復、及び皮膚の水分含有量を増大させる。
【００２０】
［試験例１］ペルレカン遺伝子の増加実験（ＲＮＡ分離及びＲＴ‐ＰＣＲ）
新生児の線維芽細胞を、１０％血清の入っているＤＭＥＭ培地を使用して、６０ｍｍ細胞培養ディッシュ（cell culture dish）に１．２５×１０６cells/dishの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２培養器で８０％程度の密集度（confluency）まで培養した。その後、細胞を２４時間飢餓（starvation）状態とした後、ＰＢＳで２回洗浄したコミカンソウ抽出物及びABcellＴＭを各濃度別に処理して２日間培養した。培養後、培地を除去し、トリゾール（Trizol）（Invitrogen社）１ｍｌを添加して、Invitrogen社のＲＮＡ分離法に従いＲＮＡを分離した。紫外線検出器（HEWLETT PACKARD社）を利用して２６０ｎｍでＲＮＡを定量した後、ＲＴ‐ＰＣＲ（Reverse transcription‐polymerase chain reaction）を実施した。各サンプルに対する遺伝子解析のため、相補的な遺伝子である３６Ｂ４を基準に補正した。ペルレカンプライマー配列は、次のとおりである。
【００２１】
センス：５´‐ｃｔｇａｇｔｇａｔｇｃａｇｇｃａｃｃｔａ‐３´（配列番号１）
アンチセンス：５´‐ｃｔｃｔｃｔｇｇｇｃｔｃａｃｔｔｇｇａｃ‐３´（配列番号２）
図１の結果を見ると、線維芽細胞において、コミカンソウ抽出物とABcell（登録商標）によってペルレカンが増加したことを確認することができる。
【００２２】
［試験例２］免疫蛍光染色によるペルレカン変化
正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）を、１０％血清の入っているＤＭＥＭ培地を使用して、６０ｍｍ細胞培養ディッシュに１．２５×１０６cells/dishの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２培養器で８０％程度の密集度（confluency）まで培養した。その後、細胞を２４時間飢餓（starvation）状態とした後、ＰＢＳで２回洗浄した後、紫外線Ｂを照射するとともに、コミカンソウ抽出物を処理して２日間培養して、細胞状態におけるペルレカンタンパク質の増加現象を把握した。
【００２３】
線維芽細胞（Human Dermal Fibroblast‐adult、ＨＤＦａ）は、米国Cascade Biologics社から購入して実験に使用し、Ｍ１０６培地（Cascade Biologics社、ＵＳＡ）を利用して、３７℃、５％ＣＯ２培養器で培養した。
【００２４】
免疫蛍光染色用スライドガラスに細胞を塗布し、４８時間物質を処理した後、免疫蛍光染色を行った。詳細な免疫蛍光染色の方法は、次のとおりである。細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、３．５％パラホルムアルデヒド（paraformaldehyde）で１０分間処理して固定させた。固定された細胞をＤＰＢＳで１０分ずつ３回洗浄し、０．１％トリトンＸ‐１００（Triton X‐100）を５分間処理して細胞に浸透させた。ＰＢＳで１０分間洗浄し、５％ヤギ血清（Goat serum）で３０分間ブロッキングした。ブロッキングが終わった細胞に、一次抗体が添加された５％ヤギ血清を処理し、常温で１時間反応させて一次抗体（anti‐Perlecan antibody、Santa Cruz Biotechnology、ＵＳＡ）が対抗抗体に結合するようにした。ＤＰＢＳで１０分ずつ３回洗浄して余分な一次抗体を除去し、二次抗体を室温で３０分間処理した。ＰＢＳで１０分ずつ３回洗浄して余分な二次抗体を完全に削除した。スライドガラス上にマウンティングソリューション（mounting solution）を一滴落とし、カバースリップで覆った。カバースリップ外に出てきた余分なマウンティングソリューションを削除し、カバースリップをシーリングした。
【００２５】
その後、共焦点顕微鏡（confocal microscope）を利用して、各実験群間の蛍光差を観察した。
【００２６】
実験の結果、紫外線Ｂによってペルレカンが減少し、コミカンソウ抽出物は、紫外線によるペルレカンの生成低下を回復させる効果を示した（図２）。
【００２７】
［試験例３］  ABcell（登録商標）のペルレカン免疫蛍光染色実験
正常ヒト線維芽細胞（Normal Human fibroblast）（２０歳と４０歳の成人から分離）を１０％血清の入っているＤＭＥＭ培地を使用して、６０ｍｍ細胞培養ディッシュに１．２５×１０６cells/dishの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２培養器で８０％程度の密集度（confluency）まで培養した。培養後、細胞をさらに、１％ＦＢＳ培地＋Cytokinol  １００ｐｐｍ＋１０％ＢＡＳＦ処理４８時間の後、ペルレカン染色後に観察した。ABcell（登録商標）は１０μｇ／ｍｌを処理した。試験方法は、試験例４と類似する。
【００２８】
その蛍光強度（intensity）を表１と図３〜図５に示した。その結果を見ると、４０ｙｒ  ＮＨＦのペルレカンが２０ｙｒに比べて減少しており（図３及び図４）、減少した４０ｙｒ  ＮＨＦのペルレカンがHERA（登録商標）  ABcell（登録商標）によって２０ｙｒ  ＮＨＦ水準に回復することを確認した（図４及び図５）。
【００２９】
【表１】
2013540715.tif 000003
【００３０】
［試験例４］シワ及び弾力性増加
コミカンソウ抽出物及びABcell（登録商標）を含有した化粧品剤形を通じて、外部臨床試験機関であるDERMAPRO社（韓国、城南）でシワ及び弾力性増加に対する臨床遂行を実施した。３０〜４０代の女性４０人をそれぞれ２０人ずつ２組に分けて、毎日朝夕２回ずつ、１２週間、顔面に塗布した後、計８週を進行した。シワに対する評価として、レプリカを利用した一般的な皮膚状態値であるＲ１〜Ｒ５の値を通じて平均シワ及び弾力性の減少を評価した。
【００３１】
平均シワ、深いシワ及び弾力性が、剤形を塗布した後、４週から改善されることを知ることができる（図６及び図７）。
【００３２】
［試験例５］皮膚水分量の評価
下記表２の比較例１及び実施例１の皮膚保湿力を調べるために、次のように評価した。３０〜４０代の女性４０人をそれぞれ２０人ずつ２組に分けて、毎日朝夕２回ずつ、１２週間、顔面に塗布した後、皮膚表面水分測定器（Corneometer、Germany）を利用して皮膚の水分含有量を測定し、その結果を下記の表３に示した。表３の結果値は、皮膚の水分含有量を意味する。
【００３３】
【表２】
2013540715.tif 000004
【００３４】
【表３】
2013540715.tif 000005
【００３５】
以下に、本発明に係る化粧料組成物及び薬学組成物の剤形例を説明するが、下記例示以外にも、様々な剤形で応用可能であり、これは、本発明を限定しようとするものではなく、ただ単に具体的に説明しようとするものである。
【００３６】
［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
下記表４に記載された組成に従い、通常の方法で柔軟化粧水を製造した。
【００３７】
【表４】
2013540715.tif 000006
【００３８】
［剤形例２］栄養化粧水（ミルクローション）
下記表５に記載された組成に従い、通常の方法で栄養化粧水を製造した。
【００３９】
【表５】
2013540715.tif 000007
【００４０】
［剤形例３］栄養クリーム
下記表６に記載された組成に従い、通常の方法で栄養クリームを製造した。
【００４１】
【表６】
2013540715.tif 000008
【００４２】
［剤形例４］マッサージクリーム
下記表７に記載された組成に従い、通常の方法でマッサージクリームを製造した。
【００４３】
【表７】
2013540715.tif 000009
【００４４】
［剤形例５］パック
下記表８に記載された組成に従い、通常の方法でパックを製造した。
【００４５】
【表８】
2013540715.tif 000010
【００４６】
［剤形例６］パッチ
下記表９に記載された組成に従い、通常の方法でパッチを製造した。
【００４７】
【表９】
2013540715.tif 000011
【００４８】
本発明の属する分野における通常の知識を有する者であれば、前記内容を基に、本発明の範疇内において多様な応用及び変形を行うことが可能であろう。
【００４９】
以上、本発明の特定の部分について詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者にとって、かかる具体的な記述はただ単に好ましい具現例であるに過ぎず、これに本発明の範囲が制限されるものでないという点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とその等価物によって定義されると言えよう。
【図１】
2013540715.tif 000012
【図２】
2013540715.tif 000013
【図３】
2013540715.tif 000014
【図４】
2013540715.tif 000015
【図５】
2013540715.tif 000016
【図６】
2013540715.tif 000017
【図７】
2013540715.tif 000018
【配列表】
2013540715000001.app
【国際調査報告】
2013540715.tif 000019
2013540715.tif 000020
2013540715.tif 000021
2013540715.tif 000022