(57)【要約】本発明は、愛玩動物、たとえばイヌまたはネコの炎症を抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、リポ酸を含む食餌を与えることを含む方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
愛玩動物の炎症を抑制もしくは予防し、および／または炎症状態を緩和する方法であって、リポ酸を含む食餌を与えることを含む方法。
【請求項２】
前記の食餌を少なくとも２週間の期間与える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
食餌が１０〜１０，０００ｐｐｍのリポ酸を含有する食物を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
食餌が５０〜２００ｐｐｍのリポ酸を含有する乾燥食物を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
抑制、予防または緩和される状態が関節炎である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
抑制、予防または緩和される状態が骨関節炎である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
愛玩動物がイヌまたはネコである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
食餌が、少なくとも５００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ、少なくとも２００ｐｐｍのカルニチン、および少なくとも５０ｐｐｍのリポ酸を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
リポ酸が、遊離形態または栄養素として許容できる塩もしくはエステルの形態のＲ−（＋）−リポ酸（ＲＬＡ）またはラセミ混合物Ｒ／Ｓ−リポ酸（Ｒ／Ｓ−ＬＡ）である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
さらに、炎症バイオマーカーの発現を測定することを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
炎症バイオマーカーが、腫瘍壊死因子アルファ、ＧＭ−コロニー刺激因子、単球走化性タンパク質−１、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターフェロンガンマ誘導タンパク質−１０、およびＫＣケモカインから選択される１種類以上のバイオマーカーを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法に使用するためのペットフードの製造における、リポ酸の使用。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法に使用するためのリポ酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本発明は、愛玩動物、たとえばイヌまたはネコの炎症を抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、リポ酸を含む食餌を与えることを含む方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  リポ酸（ＬＡ）は、オクタン酸から誘導された有機硫黄化合物である。ＬＡは、ジスルフィド結合により結合した２つの隣接硫黄原子を含み（Ｃ６およびＣ８に）、したがって酸化されていると考えられる（ただし、いずれかの硫黄原子がより高い酸化状態で存在する可能性がある）。Ｃ６の炭素原子はキラルであり、この分子は２種類の鏡像異性体Ｒ−（＋）−リポ酸（ＲＬＡ）およびＳ−（−）−リポ酸（ＳＬＡ）として、またラセミ混合物Ｒ／Ｓ−リポ酸（Ｒ／Ｓ−ＬＡ）として存在する。Ｒ−（＋）−鏡像異性体のみが自然界に存在し、４種類のミトコンドリア酵素複合体の必須補因子である。ＲＬＡおよびＲ／Ｓ−ＬＡは両方とも一般用栄養補給剤として入手でき、１９５０年代以来、栄養および臨床用として多くの疾患および状態に用いられている。ＬＡは動物食、たとえばＨｉｌｌ’ｓ  Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｄｉｅｔ  ｃａｎｉｎｅ  ｂ／ｄ（登録商標）中に用いられており、これは特に高齢のイヌにおいて敏捷性および認知を増強すると考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
[0003]  骨関節炎は、１以上の関節の軟骨、骨、および軟組織の進行性炎症および劣化により引き起こされる慢性変性性関節疾患である。リウマチ性関節炎は、関節に炎症および損傷を引き起こす自己免疫状態である。両方とも慢性炎症状態であり、高齢のイヌおよびネコに一般的である。関節に対する損傷は進行性でありかつ大部分は不可逆性であるので、炎症プロセスを事前に確認して対処することが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
[0004]  本発明は、愛玩動物、たとえばイヌまたはネコの炎症を抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、リポ酸を含む食餌をたとえば少なくとも２週間の期間与えることを含み、たとえばその際、食餌が１０〜１０，０００ｐｐｍのリポ酸を含有する食物、たとえば５０〜２００ｐｐｍのリポ酸を含有する乾燥食物を含む方法を提供する。
【０００５】
[0005]  他の態様において、本発明は、愛玩動物、たとえばイヌまたはネコの炎症を抑制および予防し、炎症状態、特に関節炎および関節痛を緩和する方法であって、炎症バイオマーカーの発現を測定し、そして炎症バイオマーカーのうち１種類以上の発現を低下させるために、リポ酸を含む食餌をたとえば少なくとも２週間の期間与えることを含み、たとえばその際、食餌が１０〜１０，０００ｐｐｍのリポ酸を含有する食物、たとえば５０〜２００ｐｐｍのリポ酸を含有する乾燥食物を含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
[0006]  本発明方法に使用するための食餌には、５００ＩＵ／ｋｇ、たとえば５００〜２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ、少なくとも約４０ｐｐｍ、たとえば４０〜２００ｐｐｍのビタミンＣ、少なくとも５０ｐｐｍ、たとえば５０〜３００ｐｐｍのカルニチン、および少なくとも５０ｐｐｍ、たとえば５０〜２５０ｐｐｍのカルニチンを含むイヌ類の食餌、たとえば下記のものを含むイヌ用の食餌が含まれる：
【０００７】
【表１】
2013532128.tif 000002
【０００８】
[0007]  リポ酸は、たとえば遊離形態または栄養素として許容できる塩もしくはエステルの形態、好ましくは遊離形態またはナトリウム塩の形態のＲ−（＋）−リポ酸（ＲＬＡ）およびＳ−（−）−リポ酸（ＳＬＡ）またはラセミ混合物Ｒ／Ｓ−リポ酸（Ｒ／Ｓ−ＬＡ）、好ましくはＲＬＡまたはＲ／Ｓ−ＬＡである。
【０００９】
[0008]  炎症バイオマーカーには、たとえば下記のうちいずれか１種類以上が含まれる：腫瘍壊死因子アルファ、ＧＭ−コロニー刺激因子、単球走化性タンパク質−１、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターフェロンガンマ誘導タンパク質−１０、ＫＣケモカイン。
【実施例】
【００１０】
実施例１−リポ酸食が高齢のイヌの炎症バイオマーカーに及ぼす効果
[0009]  食物組成物が健康な高齢のイヌの炎症バイオマーカーおよび遺伝子発現に及ぼす効果を評価するために試験を実施した。２９匹の高齢のビーグル犬（初期体重１３．５１±１．６６ｋｇ、年齢１０．７±２．３３歳）を試験に含めた。すべてのイヌに対照である維持食を２８日間与えた後、被験食を与えた。被験食は高レベルのオメガ３脂肪酸、リポ酸、果実および野菜ブレンドからの抗酸化剤、ビタミンＣおよびＥ、ならびにＬ−カルニチンを含有する。対照食の最終日（０日目）および被験食摂取１４日後に、血清および全血試料を採集した。炎症およびホルモンのバイオマーカーならびに遺伝子発現の変化を測定した。ＲＮＡをＰＡＸｇｅｎｅ  Ｂｌｏｏｄ  ＲＮＡ  Ｋｉｔ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｑｉａｇｅｎ，カリフォルニア州バレンシア）に示された方法に従って抽出した。ＲＮＡをＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｃａｎｉｎｅ−２ゲノムアレイにハイブリダイズさせ、Ｒｏｂｕｓｔ  Ｍｕｌｔｉ−Ａｒｒａｙ  Ａｖｅｒａｇｅを用いて標準化した。Ｐ＜０．０５（偽所見率(fals discovery rate)調整値０．１による）および少なくとも１．３の変化倍率範囲をもつ転写体を差があるとみなした。被験食を摂取した後、被験食を与えた高齢のイヌはＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＫＣ、および総サイトカインがより低かった。ホルモンバイオマーカーには差が検出されなかった。また、被験食を与えた高齢のイヌには０日目と比較してアップまたはダウンレギュレートされた１１２３の遺伝子があった。これらのうちアミロイドベータ斑形成に関連する遺伝子はダウンレギュレートされ、一方、ベータアミロイド斑クリアランスに関連する遺伝子はアップレギュレートされていた。さらに、神経伝達物質シグナル伝達および細胞接着に関連する遺伝子は、高齢のイヌに被験食を与えた場合は対照食摂取０日目と比較して有意にアップレギュレートされた。この試験は、被験食を用いて先に示された記憶および行動関連の応答について高齢のイヌにみられた有益性を支持する遺伝子発現の証拠を提示する。
【００１１】
[0010]  被験食が作業および識別試験により測定した高齢のイヌの記憶および認知を若いイヌと同様なレベルまで改善することは示されていた。しかし、これらの改善がみられる原機序は決定されていなかった。炎症は通常の老化を含めた多くの疾患プロセスの発症に主要な役割を果たす。さらに、認知改善に関係する遺伝子発現などの生化学的測定は、イヌにおいては限られた利用がみられるにすぎない。
【００１２】
[0011]  この試験の目的は、高齢のイヌにおいて被験食が炎症およびホルモンのバイオマーカーならびに遺伝子発現の変化に及ぼす効果を判定することであった。
[0012]  ２９匹の去勢／卵巣切除したビーグル犬をこの試験のために同定し、被験食を２８日間与えた。理学的検査および血清化学的検査によりイヌは健康であるとみなされた。試験プロトコルはInstitutional Animal Care and Use Committeeにより審査され、承認された。すべてのイヌがイヌジステンパー、アデノウイルス、パルボウイルス、ボルデテラ(bordetella)、および狂犬病に対して免疫化されており、理学的検査、完全血球計数、血清生化学分析、尿分析、および寄生虫に関する検便の結果に基づいて、慢性全身性疾患を伴うものはなかった。イヌは、相互交流、飼育者との毎日の交流や遊びの時間、毎日の屋外での駆け足や運動の機会、および玩具の利用によって、豊かな行動を経験していた。０日目の試料採集前は、すべてのイヌに基礎的な維持用対照食を２８日間与えた。次いでイヌを被験食に切り換え、１４日後に試料を採集した。血液を採取してＰＡＸｇｅｎｅチューブに集め、評価するまで−８０℃で保存した。Ｃａｎｉｎｅ−２  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｇｅｎｅｃｈｉｐマイクロアレイを用いて、０日目と比較した１４日目の遺伝子差を同定した。
【００１３】
[0013]  血漿バイオマーカー−対ｔ−検定分析を用いて、ＳＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．０により食物に応答した炎症およびホルモンのバイオマーカーの変化を測定した。すべてのサイトカインを用いて総サイトカインを計算した。
【００１４】
[0014]  遺伝子−Ｒｏｂｕｓｔ  Ｍｕｌｔｉ−Ａｒｒａｙ  ａｖｅｒａｇｅを用いて遺伝子発現を標準化し、Ｐａｒｔｅｋ分析ツールを用いて差を判定した。Ｐ＜０．０５（偽所見率調整Ｑ＝０．１による）および少なくとも１．２５の変化倍率をもつ遺伝子を、２グループ間で差があるとみなした。アップレギュレートされた遺伝子を正の変化倍率として示す。ダウンレギュレートされた遺伝子を負の変化倍率として示す。
【００１５】
【表２】
2013532128.tif 000003
【００１６】
【表３−１】
2013532128.tif 000004
【００１７】
【表３−２】
2013532128.tif 000005
【００１８】
【表４−１】
2013532128.tif 000006
【００１９】
【表４−２】
2013532128.tif 000007
【００２０】
[0015]  臨床試験は、高齢のイヌへの被験食の給餌は若々しいエネルギーの回復を補助し、若い成犬と同様なレベルにまで記憶／作業能力を改善できることを示した。この試験で、健康な高齢のイヌを維持用対照食の給餌後に被験食に切り換えた後、炎症マーカーＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＫＣおよび総サイトカインの減少が立証された。さらに、アミロイドベータ斑形成に関連する遺伝子は減少し、一方、ベータアミロイド斑排除または神経伝達物質シグナル伝達に関連する他の遺伝子は増加していた。
【００２１】
[0016]  この試験は、被験食の給餌が、炎症バイオマーカーの減少によって、また潜在的に脳健康関連遺伝子の発現を変化させることによって、高齢のイヌの生活の質に正の効果を及ぼすことを示唆する。
【手続補正書】
【提出日】平成25年1月11日(2013.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イヌの炎症を抑制もしくは予防し、および／または炎症状態を緩和する方法であって、５０〜２００ｐｐｍのリポ酸、５００〜２０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ、４０〜２００ｐｐｍのビタミンＣ、５０〜３００ｐｐｍのカルニチン、および乾燥物質基準で１〜１０％の野菜ブレンドを含む食餌を与えることを含む方法。
【請求項２】
抑制、予防または緩和される状態が関節炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抑制、予防または緩和される状態が骨関節炎である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
リポ酸が、遊離形態または栄養素として許容できる塩もしくはエステルの形態のＲ−（＋）−リポ酸（ＲＬＡ）またはラセミ混合物Ｒ／Ｓ−リポ酸（Ｒ／Ｓ−ＬＡ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
さらに、炎症バイオマーカーの発現を測定することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
炎症バイオマーカーが、腫瘍壊死因子アルファ、ＧＭ−コロニー刺激因子、単球走化性タンパク質−１、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１０、インターロイキン−１５、インターロイキン−１８、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターフェロンガンマ誘導タンパク質−１０、およびＫＣケモカインから選択される１種類以上のバイオマーカーを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記の食餌を少なくとも２週間の期間与える、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法に使用するためのペットフードの製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の食餌の使用。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項の組成物。
【国際調査報告】
2013532128.tif 000008
2013532128.tif 000009
2013532128.tif 000010