(57)【要約】  本発明は、１−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル]−４−オキソブチル｝−５，５−ジフルオロピペリジン−２−オン酒石酸塩の１．５水和物、その製造方法及び前記化合物を有効成分として含有するＤＰＰ−ＩＶ阻害用の医薬組成物に関する。【選択図】  図１
2013540810.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水分含量が３．５〜５．５％の範囲である１−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）−５，８−ジヒドロ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル]−４−オキソブチル｝−５，５−ジフルオロピペリジン−２−オン酒石酸塩の１．５水和物。
【請求項２】
ＸＲＤディフラクトグラムの特性ピーク値（２θ）が、１５、１８、２０、２１及び２３゜である請求項１に記載の１．５水和物。
【請求項３】
１−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル]−４−オキソブチル｝−５，５−ジフルオロピペリジン−２−オン酒石酸塩を、水、アセトニトリル／水、エタノール／水、エタノール／ヘキサンまたは酢酸エチル／ヘキサン溶媒から再結晶することを特徴とする、請求項１に記載の１．５水和物を製造する方法。
【請求項４】
再結晶溶媒が水である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
薬学的に許容される担体と共に、請求項１に記載の１．５水和物を有効成分として含有するＤＰＰ−ＩＶ阻害用の医薬組成物。
【請求項６】
糖尿病または肥満の治療または予防のために使用される請求項５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、下記式（１）で表わされる１−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［２，４−ビス（トリフルオロメチル）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル]−４−オキソ−ブチル｝−５，５−ジフルオロピペリジン−２−オン（以下、‘化合物１’という）の酒石酸塩の１．５水和物、及びその製造方法に関するものである。
【０００２】
【化１】
2013540810.tif 000003
【背景技術】
【０００３】
化合物１は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれている特許文献１に開示されていて、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）に対して優れた阻害活性を示すので、糖尿病治療剤として有用な化合物である。ＤＰＰ−ＩＶによって誘発される疾患の代表的な例は、糖尿病、肥満などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。糖尿病の中でも、特に２型糖尿病の治療及び予防に有用である。上記“治療”とは、疾患の症状を呈する個体に用いたとき、疾患の進行を妨げるまたは遅延できることを意味し、上記“予防”とは、疾患の症状を呈していないが、疾患発症のリスクを有する個体に用いたとき、疾患の兆候を妨げるまたは遅延できることを意味する。
【０００４】
新しい薬物の物理的及び化学的性質の究明は、新薬の有効な、且つ成功裏な開発のために必要である。特に、薬物の多形体（polymorph）及び疑似多形（pseudopolymorph）の存在並びにそれぞれの多形間の物理的及び化学的性質の差を研究することによって、製薬面を考慮したより好ましい薬物の結晶形を選択することができる（非特許文献１、２）。多形体が溶液中に存在する時には、化学的に同じであるが、固体状態ではそれぞれにＸ線回折パターンが明確に異なり、多様な物理的及び化学的な性質の違いを示す。特に、それぞれの多形体の溶解速度の差により生物学的利用能に差を有し、そして熱力学的安定性の面で予測できない性質を示す可能性がある。
【０００５】
ある特定の薬物が多形体の形態で存在するとき、薬物の製造工程中の再結晶溶媒、薬物濃度、加熱及び冷却速度、温度、撹拌速度などの再結晶条件によって構造が異なる結晶形が得られる。従って、同じ結晶形を得るためには、製造工程管理に特別な注意が求められる。
【０００６】
疑似多形の一つである水和物は、薬物結晶内に水分子を含んでおり、無水物とは異なる結晶形を示す。結晶構造の差は、Ｘ線回折パターンにより区別できる。水和物では、薬理効果をもたらす化学的な性質を何ら変化させることなく、結晶化度、吸湿性、融点、溶解性、溶解速度などの物理的な性質だけが変わるので、それらは多形体と同様に、薬学的面で非常に重要な意味を有する（非特許文献３）。
【０００７】
現在まで、本発明が属する技術分野に関連する多様な文献から理解されている知識は、例えば、薬物の安定性、吸湿性などを含む薬学的特性の改善のために、水和物が無水物より優先される、又はその逆のような一般的な傾向が存在しないことである。最終的に、各化合物に対して最適の薬学的特性を有する形態の決定は、継続した研究を通して個別的に当業者により遂行されなければならない。
【０００８】
特に、特定薬物に対して考えられるあらゆる形態、即ち、遊離化合物、塩、無水物、及び水和物の中のどの形態が周辺湿度により変化しない吸湿性を有する安定性を示すかは決して予測することができない。さらにまた、水和物の中で、最も安定した水和数の予測は不可能である。そして、たとえ水和数が同じであっても、どの結晶形が最も安定しているかを予測することもできない。それは予測不可能であり、繰り返し実験を通してのみ確認できる実験的領域に属するので、これは一貫性なく明らかになる現象である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】韓国特許出願公開第１０−２００６−００２９１３８号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Remington’s Pharmaceutics, Chapter 75 Preformulation
【非特許文献２】Byrn, S.R., Solid State Chemistry of Drugs, Academic Press, New York, 1982
【非特許文献３】Morris, K. R. et al., Int. J. Pharm., 108, 1994, 15-206
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、本発明者らは、化合物１の安定な多形体または疑似多形を提供するために鋭意研究を行った。その結果、驚くべきことに、化合物１の酒石酸塩の１．５水和物が無水物または近接した水和数の他の水和物に比べて相対湿度変化に対して優れた安定性を示していることを見出し、本発明を完成させた。これまで、化合物１の結晶形は公開されていない。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従って、本発明は、化合物１の酒石酸塩の１．５水和物を提供する。
【００１３】
本発明は、また、化合物１の酒石酸塩の１．５水和物の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に従って開発が可能な結晶形として得られた化合物１の酒石酸塩の１．５水和物は、類似結晶形に比べて安定性、特に、貯蔵安定性の面で優れているので、化合物１を有効成分として含有する、医薬組成物の製造において非常に有利に使用できる。即ち、本発明に係る１．５水和物は、広範囲な相対湿度で結晶内の水分子を失うことも、それ以上の水分子を受け入れることもせずに、その水分含量を保持するので、湿度変化による重量変化を実質的に示さない。不安定な結晶形の場合、保管時及び製剤化工程中に環境や添加剤に伴ってその水分含量が変化する可能性がある。例えば、定量を目的とした標準品や試料の定量において、乾燥した部屋で実験しない場合、実験誤差を引き起こし、品質管理上の問題も招くことがある。しかし、本発明に係る１．５水和物は、広範囲な相対湿度で水分含量が環境によって敏感に変化することがないので、保管時及び製剤化工程中に、常に一定した規格の製品を得ることができ、さらにその品質管理上の誤差も非常に少ない。このように、取扱や品質管理の面で本発明の１．５水和物は大きな利点を示す。
【００１５】
また、本発明に係る化合物１の酒石酸塩１．５水和物は、湿度変化による結晶形の変化を示さない。反対に、本発明者らは、相対湿度が上昇すると、化合物１の酒石酸塩の０．５水和物及び無水物が水分を多量に吸収して、より安定な本発明による１．５水和物に変換されることを確認した。加速安定性実験（４０℃／７５％ＲＨ）でもいくらかの時間の経過後、０．５水和物が１．５水和物に変換されることを確認した。
【００１６】
さらに、本発明で提供される様々な方法によって、化合物１の酒石酸塩１．５水和物の製造を制御することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、化合物１の酒石酸塩１．５水和物である結晶形ＩのＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示す。
【図２】図２は、化合物１の酒石酸塩１．５水和物である結晶形Ｉの赤外線分光分析（ＦＴ−ＩＲ）スペクトルを示す。
【図３】図３は、化合物１の酒石酸塩１．５水和物である結晶形Ｉの示差走査熱量（ＤＳＣ）分析又は熱重量（ＴＧ）分析結果を示す。
【図４】図４は、化合物１の酒石酸塩１．５水和物である結晶形Ｉの動的水蒸気吸着／脱着等温線を示す。
【図５】図５は、化合物１の酒石酸塩０．５水和物である結晶形ＩＩのＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示す。
【図６】図６は、化合物１の酒石酸塩０．５水和物である結晶形ＩＩの赤外線分光分析（ＦＴ−ＩＲ）スペクトルを示す。
【図７】図７は、化合物１の酒石酸塩０．５水和物である結晶形ＩＩの示差走査熱量（ＤＳＣ）分析又は熱重量（ＴＧ）分析結果を示す。
【図８】図８は、化合物１の酒石酸塩０．５水和物である結晶形ＩＩの動的水蒸気吸着／脱着等温線を示す。
【図９】図９は、化合物１の酒石酸塩０．５水和物である結晶形ＩＩの吸湿検討過程におけるＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示す。
【図１０】図１０は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩのＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示す。
【図１１】図１１は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩの赤外線分光分析（ＦＴ−ＩＲ）スペクトルを示す。
【図１２】図１２は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩの示差走査熱量（ＤＳＣ）分析又は熱重量（ＴＧ）分析結果を示す。
【図１３】図１３は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩの動的水蒸気吸着／脱着等温線を示す。
【図１４】図１４は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩの常温常湿での時間経過による吸湿曲線を示す。
【図１５】図１５は、化合物１の酒石酸塩無水物である結晶形ＩＩＩの吸湿検討過程におけるＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示す。
【図１６】図１６は、試験例８の実験を遂行した後に得られたＸ線粉末回折（ＸＲＤ）スペクトルを示しており、下から順に、結晶形ＩＩのＸＲＤ、６０℃／５％ＲＨで８週間保管した後の結晶形ＩＩ試料のＸＲＤ、４０℃／７５％ＲＨで８週間保管した後の結晶形ＩＩ試料のＸＲＤ、結晶形ＩのＸＲＤを示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明によって、それぞれ特徴的な結晶形を有するものとして同定された化合物１の酒石酸塩１．５水和物を本明細書では、“結晶形Ｉ”と、０．５水和物を“結晶形ＩＩ”と、無水物を“結晶形ＩＩＩ”と名付けた。本明細書中で、１．５水和物は水分含量が３．０〜５．５％であり、０．５水和物は水分含量が１．０〜２．５％であり、無水物は水分含量が０〜１．０％である。
【００１９】
図１、５及び１０に示されたＸ線回折パターンから確認されるように、結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの結晶化度は互いに異なる。
【００２０】
結晶形Ｉに対する示差走査熱量測定を用いた分析を行った結果、９０〜１３０℃で結晶格子内に含まれる水分の放出に伴い生じる吸熱ピークは、その中に融点を含む広いセクションを有し、１３０〜１６０℃のセクションで化合物１の酒石酸塩の化学的脱水が起こり、吸熱ピークが再度生じる。また、熱重量分析法を用いた分析では、示差走査熱量測定の第１の吸熱セクションで格子内に含まれていた水分に相当する約４．０％の重量減少を示し、第２の吸熱セクションでは化合物１の酒石酸塩の構造からの脱水により取り除かれた水分に相当する約２．５％の重量減少を示す（図３）。結晶形ＩＩとＩＩＩに対する示差走査熱量測定を用いた分析では３つの吸熱点が現れる。具体的には、第１の吸熱点は格子内に含有される水分の放出に伴い生じ、第２の吸熱点は融点によって生じ、そして第３の吸熱点は化学的脱水反応により生じる。さらに、熱重量分析により、第１の吸熱セクションは格子内に含まれる水分に相当する重量の減少（結晶形ＩＩでは約１．３％、結晶形ＩＩＩでは約０．６％）を示し、第３の吸熱セクションは脱水反応により取り除かれた水分に相当する約２．４％の重量減少を示す（図７及び図１２）。上記のような化合物１の酒石酸塩の格子内の水分含量は、カール・フィッシャー法（Mettler Toledo DL37 KF Coulometer）により定量した水分含量と一致したので、吸熱ピークが水分子の蒸発によって生じたことが証明された。
【００２１】
以下、各結晶形の特徴をより具体的に比較することによって、本発明に係る結晶形Ｉがその他の結晶形ＩＩまたはＩＩＩに比べて、予想外の、優れた特徴を有していることを説明する。
【００２２】
結晶形Ｉ
本発明は、化合物１の酒石酸塩の１．５水和物の結晶形に関する。その特性を分析した結果、結晶形Ｉは以下の特徴を示す。
（ａ）結晶形Ｉの水分含量は、３．０〜５．５％の範囲である。
（ｂ）ＣｕＫα、４０ｋＶ、３０ｍÅで測定したＸＲＤスペクトルの特性ピーク値（２θ）は、１５、１８、２０、２１及び２３゜である。
（ｃ）赤外線（ＩＲ）スペクトルは、約３５９１、３４０１、３１２８、１７１２、１６５５、１６３６、１２２９、１２０５、１１２９、及び１０５８ｃｍ−１に特性吸収を示す。
（ｄ）示差走査熱量スペクトルは、約９０〜１３０℃と１３０〜１６０℃の二つの広い温度範囲で吸熱ピークを示す。
（ｅ）カール・フィッシャー法で測定した水分含量は約４．０％である。
（ｆ）２５℃から２５０℃まで温度を上昇させると、それぞれに７０〜１１０℃の範囲で約４．０％、１４０〜１７０℃の範囲で約２．５％の重量減少を生じる（これは、図３のＴＧから得られた結果である。エネルギー変化は重量変化より若干遅れて生じるので、一般にＤＳＣとＴＧの結果には差がある）。
（ｇ）化合物１の酒石酸塩は、水、アセトニトリル／水、エタノール／水、エタノール／ヘキサンまたは酢酸エチル／ヘキサン溶媒から結晶化させることができ、好ましくは水から結晶化できる。
（ｈ）結晶形Ｉは、結晶形ＩＩまたはＩＩＩを吸湿させて製造することができる。
（ｉ）５〜９５％ＲＨの外部湿度の変化による重量変化はないか、またはあっても０．８％又はそれ以下であり、湿度変化によって結晶形は変化しない。
【００２３】
結晶形ＩＩ
結晶形Ｉと異なる他の結晶形を調査するために、本発明者らは化合物１の酒石酸塩の０．５水和物（結晶形ＩＩ）を製造した。０．５水和物は、１．５水和物（結晶形Ｉ）と比較して、同じ化合物の同じ酒石酸塩であり、類似の水和数を有してはいるが、以下のような不安定な貯蔵安定性を示す。
（ａ）結晶形ＩＩの水分含量は、１．０〜２．５％の範囲である。
（ｂ）ＣｕＫα、４０ｋＶ、３０ｍＡで測定したＸＲＤスペクトルの特性ピーク値（２θ）は、１４、１５、１７、１８、１９、２１及び２３゜である。
（ｃ）赤外線（ＩＲ）スペクトルは、約３４５５、２８９１、１７２１、１６５５、１５７１、１２２８、１２０９、１１３１、１０８６及び１０５９ｃｍ−１に特性吸収を示す。
（ｄ）示差走査熱量スペクトルは、約８０〜１１５℃、１１５〜１３５℃及び１３５〜１７３℃の三つの広い温度範囲で吸熱ピークを示し、約１１７℃で融点を示す。
（ｅ）カール・フィッシャー法で測定した水分含量は約２．０％である。
（ｆ）２５℃から２５０℃まで温度を上昇させると、それぞれに７０〜１０４℃の範囲で約１.３％、１３７〜１６８℃の範囲で約２．４％の重量減少を生じる。
（ｇ）５〜９５％ＲＨの外部湿度変化にわたって４.０％又はそれ以上の重量変化が生じ、そして４５％ＲＨから急激に水分が吸収され、７５％ＲＨで重量が３．７％増加する。全体で４．０％又はそれ以上の水分を含むと、結晶形ＩＩは結晶形Ｉに変換される。約６０％ＲＨから結晶形ＩＩが結晶形Ｉに変換されることが示されている（図８及び９参照）。即ち、湿度変化に伴って結晶形が変化し、より安定した結晶形Ｉに達する。さらに、加速（４０℃／７５％ＲＨ）安定性試験では８週以内に結晶形Ｉに変換される。
【００２４】
結晶形ＩＩＩ
結晶形Ｉと異なる他の結晶形を調査するために、本発明者らは化合物１の酒石酸塩の無水物（結晶形ＩＩＩ）を製造した。無水物は１．５水和物（結晶形Ｉ）と比較して、以下のような不安定な貯蔵安定性を示す。
（ａ）結晶形ＩＩＩの水分含量は、０〜１．０％の範囲である。
（ｂ）ＣｕＫα、４０ｋＶ、３０ｍÅで測定したＸＲＤスペクトルの特性ピーク値（２θ）は、６、１７、２１、２３、２４、２６及び３０゜である。
（ｃ）赤外線（ＩＲ）スペクトルは、約３４７０、３１８７、２９４０、１６４０、１５７０、１２２９、１２０６、１１３０及び１０５６ｃｍ−１に特性吸収を示す。
（ｄ）示差走査熱量スペクトルは、約６５〜１００℃、１００〜１３０℃、及び１３２〜１７０℃の三つの広い温度範囲で吸熱ピークを示し、約１０４℃で融点を示す。
（ｅ）カール・フィッシャー法で測定した水分含量は約０．１％である。
（ｆ）２５℃から２５０℃まで温度を上昇させると、それぞれに６２〜１１０℃の範囲で約０．６％、１２０〜１７３℃の範囲で約２．４％の重量減少を生じる。
（ｇ）５〜９５％ＲＨの外部湿度変化にわたって３．５％又はそれ以上の重量変化が生じ、５％ＲＨから急激に水分が吸収され、それによって約１５％ＲＨから結晶形ＩＩＩは結晶形Ｉに変換される（図１３、１４及び１５参照）。即ち、湿度変化に伴って結晶形が変化して、より安定した結晶形Ｉに達する。
【００２５】
上記の結果は、通常、製剤が行われる相対湿度の範囲で、結晶形ＩＩとＩＩＩは不安定であり、よって結晶形Ｉに自動的に変換されることを示す。結晶形ＩＩＩの場合には、このような傾向がさらに顕著に示される。
【００２６】
本発明に係る化合物１の酒石酸塩１．５水和物は、特許文献１に開示されている相応する遊離塩基と同様に、強力なＤＰＰ−ＩＶ阻害活性を示す。また、本発明に係る１．５水和物は他の水和状態を有する結晶形と比較して、改善された物理的及び化学的性質を示す。従って、本発明に係る１．５水和物は、他の水和状態を有する結晶形に比べて、取扱、品質管理及び製剤が非常に容易である。
【００２７】
本発明に係る１．５水和物は、前述するように、ＤＰＰ−ＩＶ阻害活性を有しているので、医薬または獣医薬分野で好都合な投与のために製剤化することができる。製剤化は、他のＤＰＰ−ＩＶ阻害活性を有する製剤と関連する当該技術分野で公知の製剤化技術及び方法で行うことができ、特に、その内容全体が参照によって本明細書に取り込まれている特許文献１の開示を参照することができる。
【００２８】
従って、薬学的に許容される担体と共に、本発明に係る１．５水和物を有効成分として含有しているＤＰＰ−ＩＶ阻害用医薬組成物は、本発明の範囲に含まれる。本発明に係る組成物は、特に糖尿病または肥満の治療及び予防に使用されることを特徴とする。
【実施例】
【００２９】
本発明を下記実施例及び試験例に基づいて更に詳細に説明する。しかし、下記実施例及び試験例は本発明の理解を助けるためにのみ提供されていて、本発明の範囲はこれらの実施例及び試験例に決して限定されるものではない。
【００３０】
実施例１
化合物１の酒石酸塩の１．５水和物（結晶形Ｉ）の製造
【００３１】
【化２】
2013540810.tif 000004
【００３２】
約９Ｌのエタノールに１．８７ｋｇの化合物２を溶かした。０〜１０℃で、０．９４ｋｇのＳＯＣｌ２を加えた後、低温を保持しながら攪拌した。減圧濃縮した後、濃縮液を１１．２ＬのＭＴＢＥ（メチルｔ−ブチルエーテル）に溶かし、得られた混合液を１０ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨを７〜８に調整した。層分離後、水層を約３．７ＬのＭＴＢＥで抽出して、３．７ＬのＭＴＢＥで２回抽出した後、減圧濃縮した。得られた褐色の混濁液を１２Ｌのエタノールに溶かし、約１．５Ｌの水に溶解したＬ−酒石酸０．４７ｋｇをそこに加えた後、１時間攪拌した。得られた結晶性スラリーをろ過し、水とエタノール（１：８）で洗浄した後、乾燥して、１．１３ｋｇの標題化合物を得た（収率９７．５％）。
【００３３】
１Ｈ ＮＭＲ (500MHz, ＣＤ３ＯＤ) δ 
2.38（m，2H），2.59（m，2H），2.82−2.99（m，2H），3.11（bt，1H），
3.21（bt，1H），3.50−3.55（m，1H），3.72−3.91（m，5H），
3.98（t，J=5.2 Hz，1H），4.38（s，2H），4.97−5.00（m，2H）．
【００３４】
実施例２
化合物１の酒石酸塩の１．５水和物（結晶形Ｉ）の水からの再結晶
実施例１で得られた化合物１の酒石酸塩５０ｇを２５０〜５００ｍＬの水に加えた後、１０ＮのＮａＯＨで溶液をｐＨ６〜７に調整しながら、水に溶解した。２３.５ｍＬの水に溶解した１１．７ｇのＬ−酒石酸を加え、下記表１に示されるように温度、撹拌速度及び撹拌時間を変化させて結晶を得た。次いで、結晶をろ過、及び乾燥して、結晶形Ｉを得た。撹拌速度を５０〜４００ｒｐｍ範囲で、温度を５〜３２℃範囲内で変化させた。再結晶に用いた水の体積、撹拌速度、温度及び撹拌時間を下記表１に示す。
【００３５】
【表１】
2013540810.tif 000005
【００３６】
実施例３
化合物１の酒石酸塩の１．５水和物（結晶形Ｉ）の混合溶媒からの再結晶
化合物１の酒石酸塩５ｇを、異なる比の水とアセトニトリルからなる混合溶媒２５〜６０ｍＬに溶解した。温度を変化させ、撹拌有り又は無しで結晶を析出させて、ろ過及び乾燥して、化合物１の酒石酸塩を再結晶させた。再結晶に用いた条件を下記表２に示す。
【００３７】
【表２】
2013540810.tif 000006
【００３８】
試験例１
粉末Ｘ線回折法
約２０ｍｇの試料を試料ホルダーに装填し、粉末Ｘ線回折装置に取り付けた後、３〜４０゜／２θの範囲で回折パターンを得た。得られた回折パターンをそれぞれ図１、図５及び図１０として本明細書に添付する。具体的な分析条件は下記の通りである。
【００３９】
装置：Ｂｒｕｋｅｒ  ４Ｄ  Ｅｎｄｅａｖｏｒ
ステップ当たりの時間：０．３ｓ
ステップ幅：０．０３°
スキャンモード：ステップ
電圧／電流：４０ｋＶ／３０ｍＡ
Ｃｕ−ターゲット（Ｎｉ−ｆｉｌｔｅｒ）
発散スリット：０．３
検出器：ＰＳＤ：ＬｙｎｘＥｙｅ
【００４０】
装置：Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−ｒａｙ  Ｇｅｎｅｒａｔｏｒ（ＰＷ１７１０）
スッテプ当たりの時間：０．５ｓ
ステップ幅：０．０３°
スキャンモード：ステップ
電圧／電流：４０ｋＶ／３０ｍＡ
Ｃｕ−ターゲット（Ｎｉ−ｆｉｌｔｅｒ）
ソーススリット：１．０ｍｍ
検出スリット：０．１５ｍｍ，１．０ｍｍ
【００４１】
試験例２
赤外線分光法
ＤＴＧＳ検出器を備えたＺＡＳＣＯ  ＦＴ−ＩＲ  ４２００を用いて、本発明に係る各結晶形の赤外線スペクトルを得た。各スペクトルの分解能は４ｃｍ−１であり、スキャン数は１６であった。本試験例では１〜２ｍｇの試料をＡＴＲ（Attenuated Total Reflectance）の付属品に載置し、装置を操作してスペクトルを得た。バックグラウンドデータはＡＴＲに何も物質を含まない装置を操作して得た。このようにして得られたスペクトルをそれぞれ図２、図６及び図１１として本明細書に添付する。
【００４２】
試験例３
示差走査熱量法（ＤＳＣ）
示差走査熱量法（ＤＳＣ）をＭｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ社のＤＳＣ８２１ｅを用いて行った。約２〜３ｍｇの試料をアルミニウムパンに投入して、その重量を正確に記録した。パンを孔があけられた蓋でカバーした。パンを装置に取り付け、窒素ファジー下に、２５から２５０℃まで１０℃／分の速度で加熱した。インジウム金属を較正標準として用いた。このようにして得られたスペクトルをそれぞれ図３、図７及び図１２として本明細書に添付する。
【００４３】
試験例４
熱重量分析法（ＴＧ）
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ８５０を用いて、熱重量分析法（ＴＧ）を行った。約４〜５ｍｇのサンプルをアルミニウムパンに投入した。パンを装置に取り付け、次いで窒素ファジー下に２５から２５０℃まで１０℃／分の速度で加熱した。ニッケル及びアルミニウム（登録商標）を較正標準として用いた。得られたＴＧ分析結果を、前記試験例３のＤＳＣ分析結果と共に、それぞれ図３、図７及び図１２として本明細書に添付する。
【００４４】
試験例５
動的水蒸気吸着／脱着分析法
ＶＴＩ−ＳＡ  Ｖａｐｏｒ  Ｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｚｅｒ上で動的水蒸気吸着／脱着データを収集した。２５℃に保持しながら、相対湿度（ＲＨ）５〜９５％範囲内で５％ＲＨ間隔で水蒸気吸着と脱着を３回繰り返した。試料は分析前に乾燥しなかった。分析に用いる平衡標準は、２分以内の重量変化が０．０１％未満である。
【００４５】
分析の結果として、図４は結晶形Ｉの水蒸気吸着／脱着等温線の結果を示しており、これにより、結晶形Ｉが、５〜９５％ＲＨの範囲の外部湿度の変化によって０.８％又はそれ以下の重量変化を示すことが分かる。即ち、本発明に係る結晶形Ｉは、相対湿度の変化に対して非常に安定である。図８は、結晶形ＩＩの水蒸気吸着／脱着等温線の結果を示しており、これにより、最初の吸湿試験において９５％まで相対湿度を上昇させると、結晶形ＩＩにおいて重量が４．３％増加することが分かる。脱湿後には、結晶形ＩＩは、結晶形Ｉと同様の水分挙動グラフを示す。このような結果から、結晶形ＩＩが最初の吸湿過程の間に結晶形Ｉに変換されたことが確認できる。図１３は、結晶形ＩＩＩの水蒸気吸着／脱着等温線の結果を示しており、これにより、９５％まで相対湿度を上昇させると、結晶形ＩＩＩにおいて重量が３．６％増加することが分かる。さらに、湿度を下げると、０．６％又はそれ以下の脱湿が引き起こされ、結晶形ＩＩＩが結晶形Ｉと同様の水分を含有するようになることが分かる。
【００４６】
試験例６
結晶形ＩＩの吸湿中の粉末Ｘ線回折試験
結晶形ＩＩ約５０ｍｇをガラス製のバイアルに入れ、相対湿度１１％、３２％、５３％、６４％、７８％及び９７％下に、それぞれ２日又はそれ以上の間置いて吸湿を誘発した後、前記試験例１で提示した条件に従って粉末Ｘ線回折試験に付して、吸湿時の結晶形変化を確認した（図９参照）。
【００４７】
各相対湿度は、下記表３に示されるような塩の飽和水溶液を作り、溶液をデシケーターに入れて密封することにより提供された。
【００４８】
【表３】
2013540810.tif 000007
【００４９】
試験例７
結晶形ＩＩＩの吸湿中の粉末Ｘ線試験
結晶形ＩＩＩをＸＲＤホルダーに置いて、室温大気下で吸湿させながら、時間経過によって（３０分、１時間、及び５時間後）、ＸＲＤ試験を行った（図１５参照）。また、室温大気下で時間ごとに重量の変化を記録して、グラフを得た（図１４参照）。結晶形ＩＩＩは急速に水分を吸収して、約１時間以内に結晶形Ｉに変換されることが分かる。
【００５０】
試験例８
結晶形Ｉと結晶形ＩＩの熱安定性
結晶形Ｉと結晶形ＩＩのそれぞれ約５０ｍｇをＤｕｍａボトルに入れ、４０±２℃、７５±５％ＲＨまたは６０±２℃、５±５％ＲＨに保持した。２週、４週及び８週間後、各試料をＤｕｍａボトルから取り出し、結晶形変化を確認するためにＸＲＤを測定し、安定性を確認するためにＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣ分析に関して、試料をアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸＝３０／７０／０．１（ｖ／ｖ／ｖ）混合液に溶かして、分析した。ＨＰＬＣ分析条件は以下の通りである。
【００５１】
ＨＰＬＣ分析条件
カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ  ｄＣ１８
（４.６ｍｍＩ．Ｄ×２５０ｍｍＬ、粒径５μＭ、Waters）
カラム温度：１０℃
移動相：
移動相Ａ：ＭｅＣＮ／ＴＦＡ＝１００／０．１（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ：Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ＝１００／０．１（ｖ／ｖ）
勾配条件：
時間（分）  Ａ（％）      Ｂ（％）
初期        ３８          ６２    
２５        ３８          ６２    
３５        ８０          ２０    
４０        ３８          ６２    
５５        ３８          ６２    
流速：０．７ｍＬ／分
検出：２５６ｎｍ、ＵＶ
注入量：１０μＬ
全体分析時間：５５分
【００５２】
結晶形Ｉと結晶形ＩＩの安定性の結果を下記表４に示す。
【００５３】
【表４】
2013540810.tif 000008
【００５４】
表４に示されるように、結晶形Ｉと結晶形ＩＩを４０±２℃、７５±５％ＲＨまたは６０±２℃、５±５％ＲＨで保持すると、これらは８週間まで優れた安定性を示すことが確認された。しかし、ＸＲＤ分析の結果により、結晶形Ｉは８週間まで何ら変化を示さなかったが、結晶形ＩＩは４０℃／７５％ＲＨ条件下で８週目に結晶形Ｉに変換された（図１６参照）。
【００５５】
試験例９
結晶形Ｉと結晶形ＩＩの密度測定
結晶形Ｉと結晶形ＩＩのそれぞれ約２０〜３０ｍＬを５０ｍＬメスシリンダーに注入した。ここで、試料が互いに密着しないようにゆっくり注入した。メスシリンダーの目盛りを読んだ後、その重量を測定してかさ密度を計算した。かさ密度を測定した後、試料が入っているメスシリンダーをＥＲＷＥＫＡ密度測定器に載置し、次いで２５０回衝撃を与えてタップ密度を測定した（表５）。測定の結果は、結晶形Ｉのかさ密度とタップ密度が結晶形ＩＩのそれらよりも高かった。かさ密度とタップ密度からＣａｒｒ指数を計算した。その結果は、結晶形Ｉが結晶形ＩＩより低い値を示した。一般にＣａｒｒ指数値が低いほど流動性が良いと理解されているので、Ｃａｒｒ指数を比較することにより、結晶形Ｉが結晶形ＩＩに比べて打錠などの処理過程において、取扱が容易であることが確認できる。
【００５６】
【表５】
2013540810.tif 000009
【図１】
2013540810.tif 000010
【図２】
2013540810.tif 000011
【図３】
2013540810.tif 000012
【図４】
2013540810.tif 000013
【図５】
2013540810.tif 000014
【図６】
2013540810.tif 000015
【図７】
2013540810.tif 000016
【図８】
2013540810.tif 000017
【図９】
2013540810.tif 000018
【図１０】
2013540810.tif 000019
【図１１】
2013540810.tif 000020
【図１２】
2013540810.tif 000021
【図１３】
2013540810.tif 000022
【図１４】
2013540810.tif 000023
【図１５】
2013540810.tif 000024
【図１６】
2013540810.tif 000025
【国際調査報告】
2013540810.tif 000026
2013540810.tif 000027