(57)【要約】  本発明は、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含み、少なくとも２００ｍＭ、好ましくは２５０ｍＭ±５０ｍＭのグリシン、および、２０から１００mg/lの非イオン性界面活性剤を含み、４.８以下のｐＨを有する液体医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含み、少なくとも２００ｍＭのグリシン、好ましくは２５０ｍＭ±５０ｍＭのグリシン、および、２０から１００mg/lの非イオン性界面活性剤を含む、４.８以下のｐＨを有することを特徴とする、液体医薬組成物。
【請求項２】
４.４から４.８、好ましくは４.６のｐＨを有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
マンニトールを含まないことを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
免疫グロブリンＧの濃度が、１００g/l±２０g/lであることを特徴とする、請求項１〜３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５】
３５mg/l±１５mg/l、好ましくは５０mg/lの非イオン性界面活性剤を含む、請求項１〜４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６】
添加物が、グリシンおよび非イオン性界面活性剤のみであることを特徴とする、請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項７】
非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート 20、ポリソルベート 80および／またはポリエチレン−ポリプロピレン グリコール、例えばPluronic(登録商標) F68から選択されることを特徴とする、請求項１〜６の何れか１項に記載の組成物。
【請求項８】
１００g/lのＩｇＧ
２５０ｍＭのグリシン
５０mg/lのポリソルベート 80
を含む、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
１００g/lのＩｇＧ
２５０ｍＭのグリシン
２０mg/lのポリソルベート 20
を含む、請求項７記載の組成物。
【請求項１０】
免疫グロブリンＧがヒトの血漿の分画によって得られることを特徴とする、請求項１〜９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
凍結乾燥生成物から水で再構成することによって得られる、請求項１〜１０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１０の何れか１項に記載の液体組成物を乾燥、好ましくは凍結乾燥することによって得られる、固体組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療に有用なヒト免疫グロブリンＧの製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、多くの病態が、免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)組成物で処置されている。例えば、抗体産生欠損を伴う原発性免疫不全、川崎病、小児および成人免疫性血小板減少性紫斑病、抗体産生欠損を伴う続発性免疫不全、特に反復感染に関連した慢性リンパ性白血病または骨髄腫、ＨＩＶの小児の細菌関連感染症の感染、多巣性運動ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、パルボウイルスＢ１９の慢性または重度急性感染、後天性または体質性免疫不全症、コルチコ耐性皮膚筋炎、急性筋無力症、特発性慢性神経根炎、免疫性血小板減少性紫斑病、例えばＨＩＶ感染に関連したもの、全身硬直症候群、自己免疫性好中球減少症、抵抗性自己免疫性赤芽球減少症、自己抗体誘発後天性抗凝血症候群、関節リウマチなどが挙げられる。
【０００３】
ここ数年、欧州および米国において、ＩｇＧに対する非常に高い需要が供給について極度の緊張状態を生じさせ、品薄の状態へと広がっている。
この状況において、静脈内経路によって注射できる、例えばヒトの血漿由来のＩｇＧ組成物を生産する必要性が増大している。これらのＩｇＧについての要請の増大に伴い、その治療上の使用および保存の点から、これらの静脈内経路によって注射できるＩｇＧ組成物(ＩｇＧIV)の安定化が重大である。
【０００４】
この点において、特に、アナフィラキシー反応、頭痛、発熱、痣、血圧低下に関連したリスクを有する補体系を活性化できる凝集体(オリゴマーおよびポリマー)の形成を避けるために、ＩｇＧIVを安定化させることが必要であることが知られている(Bolli et al., Biologicals, 2010, 38:150-157)。さらに、ＩｇＧIV中のダイマーの存在は、インビボで血圧低下と相関している。また、他の物理化学的分解、とりわけ酸化および加水分解が、ＩｇＧの保存の間に起こり得る。
【０００５】
従って、ＩｇＧの安定化は、治療上の使用に適切な非分解ＩｇＧ組成物のみならず、保存の間の安定性を増加させたＩｇＧ組成物を得るために、糖類およびアミノ酸類から慣用的に選択される化合物の添加を必要とする。
【０００６】
静脈内投与を意図されたヒト免疫グロブリンの幾つかの製剤が提案されている(特に米国特許第5 945 098号、国際公開第2005/049078号または第96/07429号)。免疫グロブリン組成物を安定化させるのに特に有効な製剤が、本出願人により出願された国際特許出願の国際公開第2004/091656号に記載されている。この特許明細書は、５０g/lのＩｇＧ、５０g/lのマンニトール、１０g/lのグリシンおよび５０ppmの界面活性剤(５０ppmの界面活性剤は５０mg/lの界面活性剤の濃度に対応)を含む組成物を開示している。
【０００７】
凍結乾燥したＩｇＧIV組成物は、例えば商品名Polygam(商標)(American Red Cross)、Gammar IV(商標)(Armour Pharmaceutical Company)およびVenoglobulin(商標)(Alpha)で市販されており、それぞれ２％  グルコース、５％  ショ糖および２％  Ｄ−マンニトールを安定剤として含む。
【０００８】
１０％  マルトース、０.１６〜０.２４Ｍのグリシンおよび５％  Ｄ−ソルビトールを安定剤として含むＩｇＧIVの液体組成物は、それぞれ、商品名Octagam(商標)(Octapharma)、Gamunex(商標) 10% (Talecris)およびVenoglobulin(商標)(Alpha)で知られている。
【０００９】
しかし、良好な耐容性を示し、かつ最適な保存に十分に安定であり、その使用を容易にするＩｇＧIV製剤に対する必要性が未だ存在する。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の概要
本出願人は、４.８以下のｐＨでグリシンおよび非イオン性界面活性剤と共に製剤化されたヒト免疫グロブリンＧを含む医薬組成物を開発した。
本発明者らは、より具体的に、この製剤を安定化させるための低ｐＨの重要性を示した。
【００１１】
本発明の対象は、従って、４.８以下のｐＨを有することを特徴とする、少なくとも２００ｍＭのグリシン、好ましくは２５０ｍＭ±５０ｍＭのグリシン、および、２０から１００mg/l、好ましくは３５mg/l±１５mg/l、さらに好ましくは５０mg/lの非イオン性界面活性剤を含み、ヒト免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)を含む医薬組成物である。
【００１２】
好ましくは、本組成物は、４.４から４.８のｐＨを有する。好ましくは、ｐＨは４.６である。
【００１３】
本発明の組成物は、好都合には、液体の形態である。それを直接製造しても、凍結乾燥生成物から水で再構成することによって得てもよい。
【００１４】
本発明の他の対象は、本明細書で定義される液体組成物の乾燥によって、好ましくは凍結乾燥によって得られた固体組成物である。
【００１５】
詳細な説明
＜定義＞
用語“ヒト免疫グロブリンＧ”または“ヒトＩｇＧ”は、本発明の内容において、本質的にＩｇＧであり、所望によりＩｇＭを含む多価免疫グロブリンを意味すると理解される。それらは、免疫グロブリン全体、または、Ｆ(ａｂ')２またはＦ(ａｂ)などのフラクション、または、多価免疫グロブリンを製造する方法において得られる何れかの中間体フラクションであってもよい。
【００１６】
用語“安定性”は、ＩｇＧの物理的および／または化学的安定性に対応する。
用語“物理的安定性”は、二量体、オリゴマーまたはポリマー形態の免疫グロブリンの不溶性または可溶性凝集体の形成が少ないまたは無いこと、ならびに、分子の何らかの構造的変性が少ないまたは無いことを言う。
【００１７】
用語“化学的安定性”は、固体状態または溶解された形態でのＩｇＧの何らかの化学的修飾が、加速条件下で、少ないまたは無いことを言う。例えば、加水分解、脱アミノ化および／または酸化の現象を、避けるまたは遅らせる。硫黄含有アミノ酸の酸化は制限される。
【００１８】
製剤：
好ましくは、ＩｇＧ濃度は１００g/l±２０g/lである。
本濃度は、乾燥前または注射可能な製剤の形態に再構成された後、液体の形態の組成物に関して決定される。
【００１９】
好ましい態様によると、本組成物は、マンニトールを含まない。実際、マンニトールは製剤の安定化に必須ではないことが示された。
より具体的には、好ましい態様において、添加物は、グリシンおよび非イオン性界面活性剤のみである。
【００２０】
本発明の組成物で用いられる適切な非イオン性界面活性剤は、好都合には、ポリソルベート 80 (またはポリオキシエチレンソルビタン モノオレートであるTween(登録商標) 80)、ポリソルベート 20 (またはポリオキシエチレンソルビタン モノラウレートであるTween(登録商標) 20)、Triton(登録商標) X 100 (オクトキシノール 10)、ポロキサマー、ポリオキシエチレン アルキル エーテル、エチレン／ポリプロピレン ブロック コポリマーおよびPluronic(登録商標)F68 (ポリエチレン−ポリプロピレン グリコール)から選択される。非イオン性界面活性剤は、好ましくは、ポリソルベート 20、ポリソルベート 80および／またはポリエチレン−ポリプロピレン グリコール、例えばPluronic(登録商標) F68から選択される。
また、非イオン性界面活性剤を互いに組み合わせてもよい。
【００２１】
本発明の組成物はまた、他の添加物を含んでもよい。このような添加物は、本発明の技術分野で慣用的に用いられる種々のカテゴリーの安定剤、例えば界面活性剤、糖類およびアミノ酸から選択される化合物、ならびに、ｐＨ、イオン強度などを調節するために製剤に添加される添加物を表し得る。あるいは、本発明の組成物は、グリシンおよび非イオン性界面活性剤を除く他の添加物を含まない。このような組成物は、免疫グロブリン組成物の良好な安定化、および、最小数の効果的な添加物の存在および最少量の効果的な添加物の存在のために工業スケールでの製造時間の長さおよび製造コストの減少をもたらす点で利点を有している。
【００２２】
本発明の好ましい組成物は、
１００g/lのＩｇＧ
２５０ｍＭのグリシン
５０mg/lのポリソルベート 80
を含む。
【００２３】
他の本発明の好ましい組成物は、
１００g/lのＩｇＧ
２５０ｍＭのグリシン
２０mg/lのポリソルベート 20
を含む。
【００２４】
免疫グロブリンＧは、一般的に、ヒトの血漿の分画によって得られ、水性媒体中で提供される。水性媒体は、薬学的に許容され、ＩｇＧと相容性である添加物を含んでいてよい注射用水で構成される。ＩｇＧ組成物は、事前にウイルス不活性化／除去工程、例えば界面活性剤溶媒処理、低温殺菌および／またはナノ濾過に付されてよい。本発明の組成物は、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよいＩｇＧを含む。ＩｇＧは、ヒトまたは動物の血液から単離されても、分子生物学の技術による他の方法、例えば当業者に周知の細胞系で製造されてもよい。本発明の組成物は、高度に精製されたＩｇＧにおいて、特に適当である。好都合には、本発明のＩｇＧは、ヒトの血漿を分画することによって得られる。ヒトの血漿を分画する好ましい方法は、Cohn et al. (J. Am. Chem. Soc., 68, 459, 1946)、Kistler et al. (Vox Sang., 7, 1962, 414-424)、Steinbuch et al. (Rev. Franc. Et. Clin. et Biol., XIV, 1054, 1969)、および、国際公開第94/9334号の特許明細書(これらの文献は、その全体が言及することによって組み込まれる)に記載されている。免疫グロブリンＧ組成物を製造する方法はまた、国際公開第02/092632号の特許明細書(その全体が言及することによって組み込まれる)に記載されている。
【００２５】
本発明の液体組成物は、より長く保存できて、輸送および商品化により都合のよい固体形態を得るために、乾燥させてもよい。乾燥は、大量の水を除去する工程である。それは、できる限り多くの水を除去することを目的とする脱水を含む。この現象は、自然であっても強制的であってもよい。この乾燥は、凍結乾燥法、スプレー乾燥法および低温スプレー乾燥法を用いて行ってもよい。薬学的使用のための固体形態の本発明の組成物を製造する好ましい方法は、凍結乾燥である。凍結乾燥法は、当業者に周知である。例えば [Wang et al., Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals, International Journal of Pharmaceutics, Vol 203, p 1-60, 2000]を参照のこと。本組成物の水分含量または含水率を減らす他の適切な方法を考えてもよい。好ましくは、水分含量は、３重量％以下、好ましくは２.５％以下、好ましくは２％以下、好ましくは１.５％以下である。
【００２６】
本発明の組成物について、好都合には、例えば凍結乾燥生成物の加熱乾燥による、感染物質を除去または不活性化する方法を行ってもよい。
【００２７】
本発明の固体組成物、好ましくは凍結乾燥された形態のものを、治療に使用するための製剤を得るために、注射用水(ＷＦＩ)に溶解してもよい。
【００２８】
投与経路：
本発明の組成物は、特に、注射可能な形態の、好ましくは静脈内経路による治療に有用である。本組成物は液体の形態である。
下記の図面および実施例は、その範囲を限定することなく本発明を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、種々のｐＨ値でのグリシン中の免疫グロブリン製剤での動的状態(図１Ａ)または静止状態(図１Ｂ)の光散乱測定を示すヒストグラムを表す。
【図２】図２は、熱ストレス条件(５７℃)下での、種々のｐＨ値での免疫グロブリン製剤の濁度測定(４００nmでのＯＤ)をモニターした結果を示すグラフである。
【図３】図３は、回転撹拌ストレス条件(フラスコの反転)下での、免疫グロブリン製剤の濁度に対するｐＨの影響を示したグラフである。
【実施例】
【００３０】
実施例１：免疫グロブリンの挙動に対するｐＨの影響の試験
非変性条件下でｐＨを調節した、すなわち調節されたｐＨを有する緩衝液の透析により標的ｐＨとした１００ｍＭ  グリシン緩衝液中１０％  濃縮ヒト免疫グロブリンＧ製剤に対するｐＨの影響を試験する。幾つかのｐＨ値で試験する：４.６；５.２；５.７；６.４；６.８。
【００３１】
ｐＨの調節後(ｔ＝０)、免疫グロブリンの凝集状態を光散乱試験(角度９０°)によってモニターする。調節後、製剤にストレスを加えなければ、溶液は異なる凝集状態を示す。
実際、静止状態および動的状態の光散乱測定は、ｐＨの上昇に伴い、ミクロン未満の凝集の増大を示す(図１Ａおよび１Ｂ)。
【００３２】
タンパク質溶液は、約５〜９の範囲の等電点(ｐＩ)について異種性を示す免疫グロブリン(Ｉｇ１、Ｉｇ２、Ｉｇ３およびＩｇ４)の種々のサブクラスで構成される。事実、ｐＨは、低ｐＩ(＜７．０)を有するものにおいて、免疫グロブリン(Ｉｇ)の有効電荷に直接影響すると考えられる。このｐＨ領域において、幾つかの免疫グロブリンは、全正電荷から全負電荷へと変わり、そのことが他の免疫グロブリンとの静電相互作用の性質を変化させる。ｐＨ調節後にここで観察された凝集は、オリゴマー化に類似している。
【００３３】
試験は、反発して全体を安定化させる相互作用を有するために、約４.６のｐＨが好ましいことを示す。
【００３４】
図２は、免疫グロブリンの巨視的な凝集に対するｐＨの影響を示す熱的ストレス条件(５７℃)下での濁度(４００nmのＯＤ)のモニター測定の結果を説明している。ここでも、４.６のｐＨが最も好ましく、ｐＨの増大が、凝集現象を促進する。
【００３５】
回転撹拌ストレス(フラスコの反転)はまた、水−空気界面の凝集に対するｐＨの役割を証明するために行う。可能性のある微小気泡を除くために、遠心分離し再度懸濁した後、濁度測定を行う。図３は、界面での免疫グロブリンの凝集が、ｐＨによって大きく影響されることを示す。
【００３６】
実施例２：免疫グロブリンの製剤
濃度１０％のヒト免疫グロブリンの幾つかの製剤を、下記の添加物を伴って、ｐＨ  ４.６で調製した。
表１：試験した製剤
【表１】
2013528637.tif 000002
【００３７】
用いられた免疫グロブリンは、ｐＨ＝４.７で、何れの製剤添加物も含まない、ヒトの血漿の分画およびタンジェンシャル限外濾過により得られた１６８g/Lの濃縮溶液から得られる。GT80およびGT20製剤は、１００g/lのタンパク質力価および望ましい添加物濃度を得るために、製剤緩衝液に免疫グロブリンを希釈することによって調製した。ｐＨを調節するために塩酸を用いた。
【００３８】
２５℃または４０℃で、６週間、１３週間または１９週間製剤を保存することによって、製剤について、いわゆる“加速”安定性試験を行った。
【００３９】
ダイマー／オリゴマーおよびポリマーをモニターするためのＨＰＳＥＣによる凝集現象の分析、ミクロン未満の凝集についてのＤＬＳ(動的光散乱、光散乱の測定)、肉眼不可視の粒子(１０〜５０μｍのサイズ)の計数および視覚的観察(サイズ＞５０μｍ)によって、物理的分解をモニターした。
【００４０】
フラグメンテーションをモニターするためのＨＰＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および、Ｆａｂ機能安定性の指標を提供する抗ＨＢｓ抗体(Ｂ型肝炎表面抗原に対する抗体)のアッセイによって化学安定性をモニターした。
【００４１】
免疫グロブリンによる補体の非特異的捕捉を測定することによって、抗−補体活性(ＡＣＡ)を測定した。この試験は免疫グロブリンが補体系を活性化する能力を記載するものであり、補体系の過剰に高い活性化は、その注射中の製品耐容性を損い得る。
【００４２】
IgNG、GT80およびGT20製剤は、全体を通して最も良い結果を与えた。
界面活性剤(Tween)は、製剤の物理的安定を促進した。
驚くべきことに、マンニトールの存在は必須でないことが証明され、製剤GT80およびGT20(マンニトールなし)は、製剤IgNG (マンニトールあり)と少なくとも同程度の安定性を示した。
【００４３】
従って、下記の製剤は、最も好都合なものとして認識される：
−製剤GT80：グリシン  ２５０ｍＭ、Tween(登録商標) 80  ５０ppm、ｐＨ＝４.６
−製剤GT20：グリシン  ２５０ｍＭ、Tween(登録商標) 20  ２０ppm、ｐＨ＝４.６。
【００４４】
実施例３：製剤GT80の安定性(ｐＨ＝４,６)
２５℃および４０℃で１２月後の製剤GT80の安定性を、製剤IgNGと比較する。
表２：製剤GT80およびIgNG (１０％のヒト免疫グロブリンIgIV)
【表２】
2013528637.tif 000003
【００４５】
T0で、２５℃および４０℃の恒温チャンバー中にフラスコを置いて、加速安定性プロトコルにより、その安定性を以下のスケジュールに従ってモニターする。
表３：加速安定性スケジュール
【表３】
2013528637.tif 000004
* 最も区別される分析のみ
【００４６】
２５℃および４０℃で１２月後、製剤GT80およびIgNGは、匹敵する安定性を示す：
−安定化された製剤は、化学的分解の点で同じ挙動を有する。すなわち、ＨＰＳＥＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、４０℃でフラグメンテーションが観察され、４０℃でＦａｂ活性の喪失が観察される；
−製剤は、ＤＬＳおよびＨＰＳＥＣによって、４０℃で観察されるミクロン未満の凝集に関して同じである；
−４０℃で巨視的凝集が観察され、黄色の発生が観察される。製剤GT80およびIgNGについて、この色は同じである。２５℃で、２つの製剤は無色である。
−観察されたＡＣＡの差異は小さい。２つの製剤は、２５℃および４０℃で、同様に変化する。ＡＣＡ試験に関して、マンニトールはIgNGの安定性に寄与しない。
【００４７】
これらの１２月での安定性の結果により、マンニトールの添加が、IgNGの安定性に効果を有しないことが確認される。
最後に、グリシン(２５０ｍＭ)およびTween 80 (５０ppm)からなる製剤GT80は、商業的な治療的使用に適当な安定な製剤である。２５℃で１２月後、全ての分析は、欧州薬局方に従って行った。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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