(57)【要約】揮発性硫黄化合物およびそれらのアミノ酸前駆体の酸化消耗および不活性化を通じて、安定化二酸化塩素を口臭の治療および予防のための、口腔内微生物に対する殺菌剤として使用するための組成物および方法が開示された。本発明の安定化二酸化塩素の好ましい濃度は０．００５％から２．０％（ｗ／ｖ）の範囲である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
モニタリング可能な誘導間隔を伴うことも、余分な口腔内の酸性化源を使用することもなく、口腔内で二酸化塩素ガス組成物を生成するための安定化二酸化塩素溶液の使用。
【請求項２】
他の望ましくないオキシクロリン類が相当量生成されることのない、請求項１に規定の使用。
【請求項３】
モニタリング可能な誘導期なしで、二酸化塩素ガスの速やかな形成をもたらす、スルフェン酸およびスルホン酸付加物の連続的な生成を伴う段階的なＳ−酸化工程を伴う機序によって、唾液生体分子の酸化が進行する、請求項１に規定の使用。
【請求項４】
安定化二酸化塩素溶液の濃度が約０．０５％から約２．０％（ｗ／ｖ）の範囲であり、二酸化塩素ガス組成物が、口腔内のピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンを酸化消耗する、請求項２に規定の使用。
【請求項５】
前記二酸化塩素ガス組成物が口腔に存在する口臭および口腔疾患を低下させるために、揮発性硫黄化合物を酸化消耗し、前記二酸化塩素ガス組成物が口腔に存在するアミノ酸前駆体との相互作用により生成され、安定化二酸化塩素の溶液の濃度が約０．０５％から約２．０％（ｗ／ｖ）である、請求項１に規定の使用。
【請求項６】
安定化二酸化塩素の濃度が約０．４％（ｗ／ｖ）である、請求項５に規定の使用。
【請求項７】
安定化二酸化塩素の濃度が約０．１％（ｗ／ｖ）である、請求項６に規定の使用。
【請求項８】
前記二酸化塩素ガス組成物が口腔に存在する揮発性硫黄化合物および口腔疾患の存在を低下させる、請求項２に規定の使用。
【請求項９】
前記二酸化塩素ガス組成物が、ピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンから成る群から選択される唾液生体分子を酸化消耗する、請求項５に規定の使用。
【請求項１０】
ピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンから成る群から選択される唾液生体分子を酸化消耗し、口腔に存在する口腔疾患の低下を促すために、二酸化塩素ガス（ＣｌＯ２）の即時形成をもたらす、スルフェン酸およびスルホン酸付加物の連続的な生成を伴う、段階的なＳ−酸化工程で、口腔内で二酸化塩素ガス組成物を生成するための、約０．００５％から約２．０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度を有する安定化二酸化塩素溶液の使用であって、モニタリング可能な誘導間隔が必要とされず、他の望ましくないオキシクロリン類が相当量生成されることのない使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年２月１３日に出願され、出願第６１／１５２，３３６号を付与された「唾液中生体分子の酸化消耗」と題され、本譲受人に譲渡された仮特許出願に公開された主題を含み、その優先権を請求する。
【０００２】
本発明は、唾液中生体分子の酸化消耗に関し、特に、安定化二酸化塩素組成物による口腔内の抗菌作用のための二酸化塩素の生成に関する。
【背景技術】
【０００３】
口腔疾患は、多種多様な原因による、一般に予防可能な数多くの口腔の症状を指す。歯垢は、口腔疾患の最も認識可能な前触れである。歯垢は歯を洗浄後、数時間以内に歯の上に形成されるバイオフィルムである。歯の主要ミネラル成分はヒドロキシアパタイト（ＨＡＰ）であり、歯を洗浄すると、ＨＡＰが口腔環境にさらされるようになる。ムチン、プロリンに富むタンパク質、スタテリン、ヒスタチンおよびシスタチンなどの唾液タンパク質は、ＨＡＰに対して強い親和性を有する。これらのタンパク質は、歯の露出したＨＡＰに素早く結合または吸着し、獲得被膜と呼ばれる薄い被膜を形成する。口腔内の特定の細菌は、この被膜に選択的に付着し、分裂してコロニーを形成する。初期には、被膜で覆われた歯の表面にコロニーを作る細菌の約８０％は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ（ストレプトコッカス・サングイス）（旧名はＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｎｇｕｉｓ）のような、通性、グラム陽性、非運動性の球菌である。残りの２０％には、ベイヨネラ属などの多種多様なグラム陰性菌が含まれる。コロニーが成長するにつれ、これらの早期にコロニーを作った細菌の代謝活性およびバイオフィルム（歯垢）塊への他の多種多様な細菌群の付加により、環境は変化する。歯垢バイオフィルムにおける重要な環境変化は、嫌気性細菌のコロニー形成および増殖を促進する低酸素環境である。バイオフィルム中の微生物は、口腔環境に存在する豊富な多糖、糖タンパク質および食事性糖質（例、蔗糖）からスライムマトリクス（slime matrix）またはグリコカリックスを合成する。最終的に、歯垢は、遺伝子発現が重度に改変されている、高度に構造化され、マトリクスに埋め込まれた多様な微生物群が生息する特徴的なバイオフィルムになる。作成されたバイオフィルムの量と構造は、抗菌剤の効能を潜在的に低下させ、バイオフィルム内に生息する細菌に防護を与える。結果として、歯垢のバイオフィルムの分解は、通常、機械的な手法（例えば、歯磨き、フロッシング、専門家による歯のクリーニング）によって達成される。バイオフィルムの予防の目的に、特定の歯垢防止および消毒薬の使用が提案されたが、これらの治療法は、通常、寒天で培養された純粋な細菌株を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでテストされる。このようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件は、バイオフィルム環境を適切にシミュレートしていないため、テスト結果の意義を制限する可能性がある。
【０００４】
バイオフィルムの内部では、細菌の継続的な代謝活動により、歯のエナメル質および象牙質を脱灰できる酸が生成され、虫歯および進行性の虫歯につながることがある。脱灰は歯科医療従事者による早期の介入がない限り、元に戻すことは不可能であり、歯科医療従事者は毎日の歯の手入れの手順にフッ素を含有した特定の口腔ケア製品を使用することを推奨することがあり得る。脱灰を放置したままにすると、歯の内部層にまで進行する可能性があり、激しい痛みに通じ、歯の喪失の可能性が増す。.
【０００５】
歯垢をそのままにしておくと、歯垢バイオフィルムのより深い部分が石化し、歯石の形成につながる。歯石には、有機物質と無機物質の2つの主要成分がある。歯石の有機部分は、主に細菌の死体から成る。歯石の無機部分は、口腔環境に存在するカルシウムおよびリン酸塩から派生する複数の鉱物から成る。歯石には、歯肉縁下歯石（歯肉線より下）と歯肉縁上歯石（歯肉線より上）の2種類がある。歯肉縁上歯石は、高度に組織化されており、多孔質で、目で確認できる。いったん形成されると、歯石は通常の歯磨きやフロッシングでは除去できない。一般に、歯科医療従事者による介入が必要となる。歯石をそのままにしておくことは、バイオフィルムを形成する細菌を寄生させることになり、歯周（歯肉）感染の発病に通じる可能性があるため、口腔衛生上、問題がある。
【０００６】
口臭 (臭い息）は、吐いた息の中に揮発性硫黄化合物（ＶＳＣ）が存在することが主な原因である。口から吐いた息の嫌な臭いの約９０％は、２つの主要なＶＳＣである、硫化水素（Ｈ２Ｓ）およびメチルメルカプタン（ＣＨ３ＳＨ、別名メタンチオール）の存在が原因である。これらのＶＳＣ中の硫黄は、唾液、歯垢および剥がれた上皮細胞に由来する硫黄含有タンパク質の細菌による分解が原因で生じる。いずれのタンパク質源の産生または蓄積の増加も、口内の空気におけるＶＳＣ濃度の増加に通じる。.
【０００７】
ＶＳＣ産生の増加に通じる既知の状況は多数存在する。例えば、適切な口腔衛生を実行しない人は、歯肉縁上および歯肉縁下で歯に歯垢バイオフィルムが大量に蓄積する。これは隣接歯間領域などの、洗浄しにくい場所に特に当てはまる。さらに、義歯を支える天然の歯も洗浄しにくい。最後に、舌の背面はザラザラして、不規則であり、大量の微生物が寄生する。一般に、常在する口腔内バイオフィルム内の微生物は、大量のＶＳＣを生成する。
口臭の主要原因となるだけでなく、ＶＳＣは潜在的に刺激性があり、既に存在する歯肉炎を悪化させる可能性がある。ＶＳＣの濃度が高いと、上皮細胞が死ぬ可能性があり、歯肉組織の浸透性および潰瘍形成の増加につながり得る。開いている傷が存在していて、さらに歯肉組織の浸透性が増加すると、細菌の血流への進入を促進する可能性がある（例えば、菌血症）。慢性的な菌血症は、心臓発作、脳卒中および悪い出産結果など、無数の全身的な問題に発展するリスクを高める恐れがある。.
【０００８】
歯肉炎は、結合組織の連結を失わない歯肉の炎症の存在として定義される。歯肉炎の前兆は、放置された歯垢バイオフィルムである。口腔衛生の実践を中止し、歯垢を蓄積するまま放置しておくと、１０〜２１日以内で歯肉炎を発症すると、研究は示している。歯肉炎の臨床的兆候は赤み、腫れ（浮腫）および歯肉の出血である。
【０００９】
歯周炎は、結合組織および骨などの歯の支持組織が歯垢が原因の炎症により破壊される一群の感染である。最も一般的な型は、米国の成人人口の約２０％に影響する慢性歯周炎
である。慢性歯周炎の兆候としては、歯肉炎に関連する症状すべて（すなわち、赤み、腫れ、出血）に加えて、深い歯周ポケット（プロービング値の増加）の形成、歯肉退縮、歯のぐらつきの増加、およびレントゲン写真で検出される骨の喪失が含まれる。慢性歯周炎は治療せずに放置しておくと、歯の喪失につながる可能性がある。
【００１０】
数十種類の口腔細菌の中には、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（ポルフィロモナス・ジンジバリス）、Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ（アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス）、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａ（タネレラ・フォーサイシア）、Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ  ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ（エイケネラ・コローデンス）、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（プレボテラ・インターメディア）およびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｒｅｃｔｕｓ（カンピロバクター・レクタス）などのグラム陰性細菌が含まれ、歯周病の病原菌と推定されている。重要なグラム陽性細菌には、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ   ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ（ストレプトコッカス・インターメディウス）、Ｍｉｃｒｏｍｏｎａｓ  ｍｉｃｒｏｓ（ミクロモナス・ミクロス）およびＥｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ユーバクテリウム）属が含まれる。Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ（トレポネーマ・デンティコラ,）などのスピロヘータも重要である。これらの病原菌のほとんどは濃度が低ければ、健康な口から単離することができる。これらの細菌は、成人歯の歯垢バイオフィルム中にそのまま放置されていたときに限り問題になる。最後に、慢性歯周炎は、バイオフィルム中で複数の細菌が一緒に活動して、疾患を引き起こす複数菌感染である。
【００１１】
歯肉炎と慢性歯周炎のどちらの治療も、歯の歯垢バイオフィルムの頻繁の除去と破壊を容易にすることを目的としている。歯肉炎の場合、毎日の有効な口腔衛生の実践で通常は十分である。これは、歯ブラシを使って歯の前面および舌面から徹底して歯垢を除去することと、デンタルフロスまたはその他の適切なデバイス（例えば、つまようじ）を使って十分に歯間ケアをすることが含まれる。石化した歯垢（すなわち歯石）の除去には、口腔衛生ケアの提供者による定期的な歯の洗浄が必要である。慢性歯周炎の治療は、この疾患の原因となる歯垢が通常、歯肉縁下の部位および深い歯周ポケット内にあるため、より困難である。標準的な介入は、通常、口腔衛生の指導とそれに続く徹底的な歯肉縁下壊死組織切除（すなわち、歯石除去およびルートプレーニング）が含まれる。感染が続くようならば、ポケットの深さを減らし、根の表面に堆積した歯石を徹底的に除去するための進入経路を得られるように外科的介入が推奨されることもある。場合によっては、喪失した歯周付着および支持骨の一部を取り戻すための試みとして、再建的外科手術が実施されることもある。感染をコントロール下に置くことができたら、感染再発の可能性を減らすために、患者を厳格な保守／想起（recall）プログラムのもとに置く。非侵襲性の市販製品が、歯の表面上での歯垢バイオフィルムの再形成を遅らせるのに特に役立つのは、治療のこの保守段階の間である。.
【００１２】
二酸化塩素
公衆衛生の用途で二酸化塩素を使用するようになったのは、１９４８年にＥｒｉｃ  Ｗｏｏｄｗａｒｄが、海老の不快な味の発生率を減らす目的で提案したのが最初だった。そのとき以来、二酸化塩素の使用が他の数多くの産業に波及した。木材パルプの製造において、ＣｌＯ２の酸化力は、セルロース繊維の漂白剤として利用される。水処理では、ＣｌＯ２は水衛生の目的で広く利用されるようになった。この場合、ＣｌＯ２は、廃水処理に関連する細菌量、藻量および臭いを減らす上で有効であることが明らかになった。さらに、飲料水の処理目的でのＣｌＯ２
の活用は、飲料水の味に悪い影響を及ぼすことなく、有効である。例えば、オゾンまたは漂白剤を活用する他の方法に比べて、ＣｌＯ２ の利点は、コストが低く、毒性が低く、塩化副生成物の生成が少ないことである。
【００１３】
１９９９年、ＥＰＡは「Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｘｉｄａｎｔｓ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ」を出版し、ＣｌＯ２
の殺菌剤としての用途を記述し、ＣｌＯ２の生成機序、用途および標準ならびにＣｌＯ２およびその他の殺菌剤の使用を管理する規制に関する情報を記載した。このマニュアルの第４．８．２節の表４−５に列挙された主要な用途は、次の通りである：一次または二次の消毒薬、
味の調節、臭いの調節、ＴＴＨＭ／ＨＡＡの低下（総トリハロメタンは、塩素化有機物、クロロホルム［ＣＨＣｌ３］およびジクロロブロモメタン［ＣＨＣｌ２Ｂｒ］
である。例えば、 ハロゲン基からの原子、例えば塩素が酢酸分子の水素を置換すると、ハロ酢酸が作られる）、ＦｅおよびＭｎの抑制、色の除去、硫化物破壊、フェノール破壊、およびゼブラマッセルの抑制［ＥＰＡ  １９９９, ｐ．４〜３４］。これらは、水中で見つかる様々な物質の酸化により達成される。例えば、不快な味および臭い（硫化物、フェノール、その他）は、植物の腐敗および含有する藻量を原因として、水中で存在している可能性がある。ＣｌＯ２は、その発生源（藻）を除去するか、または原因となる味または臭いの分子を酸化することにより、このような味を低下させる。鉄およびマンガンの抑制では、ＣｌＯ２
は、溶解した鉄を溶液から引き出し、沈殿を形成させ、濾過および／または沈降によって除去できるようにする。ゼブラマッセルの抑制は、水域の自然のエコロジーを維持するのに役立つため、重要である。ゼブラマッセルは、湖または河川に群棲し、そこから栄養物を奪い、水底に擬似的な糞便の粘液層を作り出す生物である。水衛生およびパルプ加工の目的でＣｌＯ２
を使用する場合は、一般に、現場でＣｌＯ２を発生させ、その直後に使用することが必要である。
【００１４】
他方、「安定化二酸化塩素」という用語は、ＣｌＯ２の生成と、それに続くＣｌＯ２の金属イオン封鎖を指す。金属イオン封鎖により、ＣｌＯ２は貯蔵可能になり、後で使用できるようになる。特許で安定化二酸化塩素に初めて言及したのは、ＣｌＯ２を貯蔵のために粉末で安定化させる米国特許第２，４８２，８９１号である。その応用のために、ＣｌＯ２を水と混合し、
二酸化塩素を「遊離」させる。消毒目的で水溶性安定化二酸化塩素を使用するための方法および組成物は、米国特許第３，２７１，２４２号に記述されている。１９７９年のテキスト、Ｃｈｌｏｒｉｎｅ  Ｄｉｏｘｉｄｅ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓは、（水溶性）安定化二酸化塩素について以下のように記述している：
【００１５】
「過ホウ酸塩および過炭酸塩の利用による水溶液中での二酸化塩素の安定化が提案された。したがって、ＣｌＯ２の安定化溶液は、ＣｌＯ２ガスを１２％  Ｎａ２ＣＯ３・３Ｈ２Ｏ２を含有する水溶液に通すことにより、ｐH６から８で得ることができる。その他の型も可能である。現実に、これらの方法では、二酸化塩素はほぼ完全に亜塩素酸塩に変化する。酸性化と同時に、二酸化物が放出される・・・」［Ｍａｓｓｃｈｅｌｅｉｎ、１９７９］
【００１６】
過炭酸塩および過ホウ酸塩に言及している箇所は、「ペルオキシ化合物」という用語で置き換えることもできる。「ペルオキシ化合物」は、ｐＨを維持するのに適し、したがって溶液中のＣｌＯ２の安定性を維持するのにも適した任意の緩衝液を指す。ＣｌＯ２は、ｐＨが低いと不安定になるため、この緩衝液は必要な要素である。溶液のｐＨが低くなるか、または低いｐＨの領域に入ると、安定化ＣｌＯ２が溶液から放出され、衛生および酸化に利用できるようになる。
【００１７】
口腔ケア製品において、活性成分としての安定化ＣｌＯ２の使用は、以下の数多くの特許で提案されてきた：米国特許第４，６８９，２１５号；第４，６９６，８１１号；第４，７８６，４９２号；第４，７８８，０５３号；第４，７９２，４４２号；第４，７９３，９８９号；第４，８０８，３８９号；第４，８１８，５１９号；第４，８３７，００９号；
第４，８５１，２１３号；第４，８５５，１３５号；第４，８８６，６５７号；第４，８８９，７１４号；第４，９２５，６５６号；第４，９７５，２８５号；第 ５，２００，１７１号；第５，３４８，７３４号；第５，４８９，４３５号；第５，６１８，５５０号。さらに、米国特許第６，１３６，３４８号では、アミノ酸の分解の目的に安定化ＣｌＯ２の使用を提案している。これらの成果物の根拠は、安定化二酸化塩素は、ｐＨの局所化された低下に遭遇するまでは現状のままを維持するということにある。ｐＨレベルの低下は、唾液または口腔粘膜のｐＨが低い、口腔疾患を引き起こす細菌が堆積している、または歯および上皮細胞に歯垢バイオフィルムが存在していることの結果として起こり得る。放出されると、活性化した二酸化塩素は細菌の殺傷およびＶＳＣの酸化に効果的である。米国特許第４，６８９，２１５号が規定しているように、データは、暴露から早くも１０秒後に細菌が劇的に低下したことを示している。補足データは、口から吐いた空気中のＶＳＣの顕著な低下を示している；この機序は、スルフィド結合の亀裂を通じて、ＶＳＣが酸化されるものと信じられている。
【００１８】
二酸化塩素の有効性は、溶液を酸性化したときに安定化二酸化塩素から放出されるＣｌＯ２の量に恐らくは依存する。放出されるＣｌＯ２の量は、溶液の初期の濃度、そのｐＨ、および使用する安定化緩衝液または緩衝剤に依存する。口腔ケア製品としての二酸化塩素の効能は、安定化二酸化塩素溶液から放出されるＣｌＯ２の量に依存すると理解できる。結果として、安定化ＣｌＯ２の濃度および溶液からのＣｌＯ２放出濃度が測定できるように、正確かつ精密な測定が行なうことが欠かせない。溶液の効能を定量化する必要に加えて、製品の安全性を確実にするために、濃度を理解しなければならない。
【００１９】
米国特許第 ５，７３８，８４０号では、塩化物［Ｃｌ−］または塩素酸塩［ＣｌＯ３−］を指すことのできる「その他のオキシ塩素種」を含めることに言及して、安定化ＣｌＯ２の安定性に関する懸念を述べている。作用機序に疑問を表明し、６．２から７．０のｐＨでは、「亜塩素酸塩の分解により形成する任意の二酸化塩素分子は、残留している安定剤との反応により、亜塩素酸塩に戻る」ことを示唆した。前述したように、口の中の細菌を含んだ標的領域はｐＨが他より低いため、この逆反応は起こりにくい。米国特許第６，２３１，８３０号では、米国特許第５，７３８，８４０号で提示された製剤の化学量論および安全性について疑問を喚起している。記述された製剤は、「・・・望ましくない副産物である塩素酸イオンの蓄積」が起きる可能性のある「クロリネーター」であることが主張されている。
【００２０】
従来の技術
従来の発明は、歯肉炎の治療のための殺菌剤ならびに口臭の治療のための脱臭剤として、安定化二酸化塩素の使用を考えている（Ｒａｔｃｌｉｆｆ、米国特許第４，６８９，２１５号；Ｍａｄｒａｙ、米国特許第６，２３１，８３０号Ｂ１；Ｒｉｃｈｔｅｒ、米国特許第５，７３８，８４０号；Ｗｉｔｔ、米国特許第６，３５０，４３８号Ｂ１）二酸化塩素が殺菌性を有することおよび二酸化塩素はスルフィド結合を開裂することにより、悪臭を放つ、口中の揮発性硫黄化合物を攻撃するのに有用であることを示唆する大量の裏付けが存在する（Ｌｙｎｃｈら、１９９７；Ｓｉｌｗｏｏｄら、２００１）。
【００２１】
Ｇｒｏｏｔｖｅｌｄら（２００１）は、オキシハロゲンオキシダントである亜塩素酸塩と二酸化塩素との混合物は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ（ストレプトコッカス・ミュータンス）およびｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ（ラチトバチリ）の数を大幅に低下することを示した。Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（カンディダ・アルビカン）は減少を示したが、統計的に有意ではなかった。この研究は、33名の歯科患者から、混合したオーラルリンスを使って口をすすぐ前と後で唾液試料を採取し、各細菌の濃度を測定した。
【００２２】
Ｌｙｎｃｈら（１９９７）によって完成した研究では、安定したフリーラジカルである二酸化塩素と亜塩素酸塩陰イオンとの混合物を含むオーラルリンス調製物による唾液中生体分子の酸化消耗が測定された。１ＨＮＭＲスペクトロスコピーを使って、歯周病および虫歯の治療におけるオーラルリンスの作用の多成分評価を得た。唾液試料はすすぎの前後に10名の志願者から採取し、１ＨＮＭＲを使って分析した。結果は、唾液ピルビン酸塩の酸化的脱炭酸ならびに尿酸塩、チオシアン酸陰イオンおよびアミノ酸のシステインとメチオニンの酸化消耗を示唆した。生体分子における還元は、以下の成分に限定されないが、短鎖で不揮発性のカルボン酸陰イオンが含まれる。研究により、安定したフリーラジカルの二酸化塩素と亜鉛素酸陰イオンとから成るオーラルリンス成分は、オーラルリンスとして使用されると、病原体となる微生物を低下し、除去することが明らかになった。
【００２３】
発明者、ＲａｔｃｌｉｆｆおよびＬｙｎｃｈは、米国特許第６，１３６，３４８号で、安定化二酸化塩素の使用によるアミノ酸の分解を示唆した。該特許に記述された組成物の前提は、安定化二酸化塩素が、中性またはアルカリ性のｐＨで亜塩素酸ナトリウムとして安定化した二酸化塩素であることにある。この組成物は、唾液中のように、局所的なｐＨの低下に遭遇するまで、現状を維持する。二酸化塩素の形成は、ゆっくりした工程であり、二酸化塩素の有効性は、安定化二酸化塩素から放出される量に恐らく依存する。システインのような一部のアミノ酸間の弱い結合は、酸化消耗により破壊され易いことが記述されている。
【００２４】
従来の技術は、口腔衛生に関して安定化二酸化塩素の多種多様な組成物を教えてくれるが、安定化二酸化塩素を使って、唾液中生体分子を酸化消耗し、口臭および口腔疾患に関係する口腔細菌および微生物の増殖と成長を二酸化塩素の生成により低下するための抗菌効果を生み出す方法は教えてくれない。
【００２５】
本発明の要約
安定化二酸化塩素には、うがい薬、リンス、ソーク（soak）、ペースト、ゲル、エアロゾル・スプレーまたはその他の適切な送達系の形態で溶液を使用し、口腔疾患の原因となる細菌を除去することに加えて、口腔疾患に関連する分子を酸化することにより、口腔疾患の数多くの要因を予防する傾向があるという有益な効果がある。
【００２６】
中性からアルカリ性のｐＨでは溶液中、水溶性亜塩素酸ナトリウムの緩衝液は、酸性化されるまで、二酸化塩素を放出しないため、安定化二酸化塩素とみなされる。安定化二酸化塩素の濃度測定は、実際は、溶液中に含まれる二酸化塩素（ＣｌＯ２）の測定ではなく、溶液中の（水溶性）亜塩素酸塩（ＣｌＯ２−）の濃度の定量化であることが理解される。酸性化された後、放出されるＣｌＯ２の量は、ＣｌＯ２−の濃度により制限され、ＣｌＯ２−濃度の直接の結果である。
【００２７】
マウスウォッシュのような液体の場合、濃度を表現するときの測定の標準単位は、重量−容量のパーセント値である。すなわち、固体、液体または溶媒に溶解した成分の一定の重量が、マウスウォッシュ全体の一定の容量に存在する。本発明における好ましい安定化二酸化塩素の濃度は、０．００５％から２．０％（ｗ／ｖ（重量／容量））の範囲である。 
【００２８】
口臭の原因は揮発性の硫黄成分の存在である。それにより、硫黄成分が口腔内の口腔細菌および菌類およびウイルスの形態も含む、その他の微生物から生成され、そのまま放置しておくか、または除去しないと、歯垢および歯肉炎および歯周炎を含む口腔疾患の発症に通じる可能性がある。口腔および歯垢の多様なエコロジーの内部で、微生物が機能するために必要な複雑な唾液中生体分子が増殖し、成長する。これらの唾液中生体分子は、再製のための構成要素として働き、口腔中の微生物および揮発性硫黄化合物の数を増加し、口臭へと通じる。
安定化二酸化塩素を使って唾液中生体分子の存在を低下または除去することで、口腔中の微生物の増殖および数が低下または除去され、したがって、口臭の治療または予防になる。
【００２９】
したがって、本発明の主たる目的は、唾液中生体分子の酸化消耗により二酸化塩素を生成することで、口腔内微生物に対する抗菌剤として、安定化二酸化塩素を提供することである。
【００３０】
本発明のもう1つの目的は、揮発性硫黄化合物およびそれらのアミノ酸前駆体の酸化消耗および不活性化により、口臭を緩和するための口臭の治療および予防として安定化二酸化塩素を提供することである。
【００３１】
本発明のまたもう1つの目的は、ピルビン酸塩、メチオニン、
トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中のタウリン、乳酸塩およびリジンを含め、唾液中生体分子を酸化消耗および不活性化することである。
【００３２】
本発明のさらにもう1つの目的は、微生物から増殖および成長に必要な化合物としての唾液中生体分子を奪うために、溶液またはうがい薬、リンス、ソーク、ペースト、ゲルまたはエアロゾールスプレイの形態などのその他の送達ベヒクルで安定化二酸化塩素組成物を提供することである。
【００３３】
本発明のさらなる目的は、微生物を口腔内から除去し、口腔内で増殖および成長するのを防ぐために、唾液中生体分子を酸化消耗することで、安定化二酸化塩素により口臭を予防することである。
【００３４】
本発明のまたさらなる目的は、微生物を口腔内から除去し、口腔内で増殖および成長するのを防ぐために、唾液中生体分子を酸化消耗することで、安定化二酸化塩素により口臭を治療することである。.
【００３５】
本発明のさらにもう１つの目的は、唾液中生体分子を酸化消耗する生成物として二酸化塩素を生成することにより、口腔細菌に対する安定化二酸化塩素の抗菌作用を提供することである。
【００３６】
本発明の上記およびその他の目的は、その記述が進むにつれて、当業者には明白になっていくであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】（ａ）および（ｂ）は、「材料および方法」の節で概略を述べる手順に従って、オーラルリンスＩでの治療の前（ａ）および後（ｂ）に採取したヒト唾液の上清試料（ｐH値６．７８）の６００．１３Ｍｈｚ単一パルス１Ｈ  ＮＭＲスペクトルの拡張した０．８０〜４．２５ｐｐｍ領域を示している。略語：Ａは、酢酸−ＣＨ３；Ａｌａ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、アラニン−ＣＨ３基および−ＣＨ基のプロトン；Ｂｕ  Ｉは、β−ヒドロキシブチレートプロトンγ−ＣＨ３基のプロトン；Ｂｕ  ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶは、それぞれ、β−ヒドロキシブチレートβ、β’およびαプロトン（ＡＢＸ共役系）；ｉｓｏ−Ｂｕｔ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、イソブチレート−ＣＨ３基および−ＣＨ基のプロトン；ｎ−Ｂｕｔ  Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは、それぞれ、ｎ−ブチレートのγ、βおよびαプロトン；Ｃｈｏｌは、コリン−Ｎ＋（ＣＨ３）３；Ｃｉｔは、クエン酸塩−ＡＢ−ＣＨ２−ＣＯ２−；ＤＭｅＮは、ジメチルアミン−ＣＨ３；Ｅｔｈ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、エタノール−ＣＨ３基および−ＣＨ２基のプロトン；Ｆｏｒｍは、ギ酸塩−Ｈ；Ｇｌｙは、グリシン−ＣＨ；Ｈｉｓ  ＩおよびＩＩは、ヒスチジンＡＢＸ系βプロトン；Ｌａｃ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、乳酸塩−ＣＨ３および−ＣＨのプロトン；Ｌｅｕ  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶは、それぞれ、ロイシンδ、γ、βおよびαプロトン；ＭｅＧｕは、メチルグアニジン−ＣＨ３；ＭｅＮは、メチルアミン−ＣＨ３；Ｍｅｔｈは、メタノール−ＣＨ３；Ｎ−Ａｃは、Ｎ−アセチル糖のアセトアミドメチル基のスペクトル領域；Ｐｈｅ  ＩおよびＩＩは、フェニルアラニンＡＢＸ  βプロトン；Ｐｒｏｐ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、プロピオン酸塩−ＣＨ３基および−ＣＨ２基のプロトン；Ｐｒｙは、ピルビン酸塩−ＣＨ３；Ｓａｒ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、サルコシン−ＣＨ３基および−ＣＨ２基のプロトン；Ｓｕｃは、コハク酸塩−ＣＨ２；Ｔａｕ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、タウリン−ＣＨ２ＮＨ３＋および−ＣＨ２ＳＯ３−プロトン；ＴＭｅＮは、トリメチルアミン−ＣＨ３；Ｔｙｒ  ＩおよびＩＩは、チロシンＡＢＸβプロトン；Ｔｙｒ  ＩＩＩは、チロシンＡＢＸ  αプロトン；ｎ−Ｖａｌ  ＩおよびＩＩは、それぞれ、ｎ−吉草酸塩δおよびγプロトン。
【図２】１．６０〜８．００  ｍＭの濃度範囲における一連の校正標準について、亜塩素酸塩の濃度と照らして、２６２  ｎｍ（Ａ２６２）にての吸光度のプロットを示す図である。
【図３（ａ）】１．００ｍＭの亜塩素酸塩標準溶液の逆相（ＲＰ）イオン対（ＩＰ）クロマトグラムを示す図である。ＣｌＯ２−の保持時間は、６．９０分だった。
【図３（ｂ）】オーラルリンスＩの調製物（分析の前に、２回蒸留水で１／４に希釈した）の逆相（ＲＰ）イオン対（ＩＰ）クロマトグラムを示す図である。ＣｌＯ２−の保持時間は、６．９０分だった。
【図３（ｃ）】上記オーラルリンスＩを０．５０ｍ使って事前に処理した代表的な唾液試料（０．１０ｍｌ）の逆相（ＲＰ）イオン対（ＩＰ）クロマトグラムを示す図である。ＣｌＯ２−の保持時間は、６．９０分だった。
【図４】一連の校正標準について、亜塩素酸塩の濃度と照らして、ＨＰＬＣ分析から得た亜塩素酸塩のピーク領域（μＶ．ｓ−１）のプロットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、口腔内の唾液中生体分子を酸化消耗し、口臭および口腔疾患に関係する口腔細菌および微生物に対する抗菌作用を作り出すことにより増殖および成長を低下する、安定化二酸化塩素組成物による二酸化塩素の生成のための組成物および方法の研究を通じた発見に関する。二酸化塩素は強力な酸化剤として知られており、アミノ酸を酸化することが可能である。Ｌｙｎｃｈらの研究は、安定したフリーラジカルの二酸化塩素と亜塩素酸塩陰イオンとの混合物の存在下で、システインおよびメチオニンをピルビン酸に分解することで、それを証明した（１９９７）。これは、唾液中生体分子の酸化消耗および亜塩素酸塩としての安定化二酸化塩素とヒト唾液中生体分子との相互作用を示唆する以下の研究の証拠によって、裏付けられた。安定化二酸化塩素組成物による膵液中のピルビン酸塩の酸化的脱炭酸は、本発明が抗菌剤として唾液中生体分子と相互作用する作用機序を示唆する。
【００３９】
口腔内微生物および生体分子に対する「安定化」二酸化塩素（特に、亜塩素酸塩陰イオン）の具体的な作用機序は、まだ十分に研究されていない。本発明の研究の裏付けは、安定化二酸化塩素は、唾液中生体分子を酸化消耗し、口腔細菌の細胞に対し、最終的に細胞死を引き起こす殺菌作用および静菌作用を発揮し得る生成物を作り出すことを示唆している。これらの作用は、口腔疾患の主要原因である、細菌性歯垢の形成および悪臭を放つ、揮発性硫黄化合物の望ましくない生成に対する抑制に通じ得る。
【００４０】
唾液中生体分子の酸化消耗を調べるために、本研究では、次を求めることを目的とした：（１）ヒトの唾液の代謝プロファイルおよび唾液中生体分子が安定化二酸化塩素オーラルリンスと反応する能力、（２）オーラルリンスが唾液と混ざったときに、亜塩素酸塩から生じる二酸化塩素の量、および消耗された二酸化塩素または残存する亜塩素酸塩の量、（３）唾液中での二酸化塩素の活性をモニタリングし、さらに安定化二酸化塩素リンスで処理された後の揮発性硫黄化合物の濃度を測定するためのアッセイ技法。オーラルリンス組成物は、０．１％（ｗ／ｖ）および０．４％（ｗ／ｖ）の濃度で安定化二酸化塩素を含有した。これらの調製物を、それぞれ、オーラルリンスＩおよびＩＩと命名した。
【００４１】
本研究は、安定化二酸化塩素組成物には、揮発性硫黄化合物およびそれらのアミノ酸前駆体の直接の酸化的不活化により、口臭を臨床的に緩和する機能があることが示唆した。これらの結果は、安定化二酸化塩素（亜塩素酸塩）、特に、ヒトの唾液中生体分子との反応による二酸化塩素の生成の新しい作用機序も明らかにした。
【００４２】
材料および方法
オーラルリンス調製物での亜塩素酸塩濃度の分光光度測定
オーラルリンスＩの１．００ｍｌアリコートを２回蒸留水で希釈し、総容量を３．００ｍｌとし、これらの溶液の電子吸収スペクトルをＵｎｉｃａｍ  ＵＶ−２分光光度計で、１９０〜４００ｎｍ波長範囲で記録した。同様に、容量０．２０ｍｌのオーラルリンスＩＩを最終容量が３．００ｍｌになるまで、２回蒸留水で希釈し、この方法で電子吸収スペクトルを得た。亜塩素酸塩の濃度は、２６２ｎｍにて、その吸光度を測定することを通じて求めた［この研究で求められ結果は、ε＝１６０Ｍ−１ｃｍ−１］。さらに一連のこれらのオーラルリンス液をアミノ酸のＬ−グリシンで予め処理し（最終濃度２．００ｍM）、次亜塩素酸／次亜塩素酸塩（ＨＯＣｌ／ＯＣｌ−）および二酸化塩素（ＣｌＯ２●）を取り除き、前者は等式Ａを通じて、
グリシンモノクロロアミンを生成した。
Ｈ３Ｎ＋−ＣＨ２−ＣＯ２−  ＋  ＯＣｌ−  →  Ｃｌ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＯ２−  ＋  Ｈ２Ｏ    （Ａ）
【００４３】
得た結果はグリシン処理の前後で得たスペクトルに違いはないことを明らかにし、これらの潜在的に干渉する、さらなるオキシハロゲンオキシダントは、調査したオーラルリンス調製剤には存在しなかったことを示唆した。.
【００４４】
志願者の募集および試料の採取
いかなる形態の活動中の歯周病も活動中の虫歯もない、医学的に障害のない志願者を本研究に参加するように次々と募集した（ｎ＝２０）。口腔環境に外因性の要因が導入されることから生じる干渉を避けるために、志願者には、予め選択された日の朝、起床した直後にプラスチックの万能チューブにあるだけの唾液をすべて（すなわち、口から吐いた「全」唾液）を採取するように要求した。
【００４５】
さらに、各志願者には、起床から試料採取までの短い期間（約５分）、口腔活動（すなわち、飲食、歯磨き、うがい、喫煙など）を完全に控えることも要求した。各採取チューブには、試料の調製中および／または保管中に、全唾液に存在する微生物またはそれらの酵素の活動により、代謝物が生成または消耗されることがないようにするために、十分なフッ化ナトリウム（１５μmol.）が含まれていた。
【００４６】
唾液試料を冷蔵して検査ラボに輸送し、到着直後に（１５分間、３，０００ｒｐｍで）遠心分離し、細胞および細片を除去し、得た上清を分析の前に最高で18時間、−７０℃で保管した。１Ｈ  ＮＭＲ分析の前に、各上清のｐＨ値を測定した。
【００４７】
オーラルリンス／唾液上清混合物における残留（未反応の）亜塩素酸塩陰イオン（ＣｌＯ２−）の分光光度分析
平衡で生体分子による消耗のレベルを測定するために、採取した唾液上清の各々に残留する亜塩素酸塩をＡＴＩ  Ｕｎｉｃａｍ  ＵＶ−ＶＩＳ  ＵＶ−２分光光度計を使用して測定した。
【００４８】
０．０９ｍｌアリコートの各唾液上清試料を０．４５０ｍｌのオーラルリンスＩで処理した。この混合物を完全にロータミックス（rotamix）し、最終容量１．２０ｍｌに希釈し、２６２ｎｍにて吸光度値約１を得た。基準細胞には、２回蒸留Ｈ２Ｏで最終容量１．２０ｍｌに希釈した対応する唾液上清が同量含まれていた。最初に、１９０〜３００ｎｍの波長領域に渡って走査した。
【００４９】
オーラルリンスＩＩは、ＣｌＯ２−を正確に４倍濃度［０．４％（ｗ／ｖ）］含んでいたため、０．１０ｍｌアリコートの各唾液上清試料を０．５００ｍｌのこの生成物で処理し、完全にロータミックスした後、この混合物０．１３５ｍｌアリコートをＨ２Ｏで最終容量１．２０ｍｌに希釈した。基準細胞には、Ｈ２Ｏで１．２０ｍｌに希釈した唾液上清２２．５μｌが含まれた。
【００５０】
ＣｌＯ２−は、２６２ｎｍにて最大吸光度（λｍａｘ）の波長（ε＝１６０Ｍ−１ｃｍ−１）を有するため、したがって、添加した各オーラルリンスの容量（と同時にＣｌＯ２−
の濃度）で容易に検出可能だった。.
【００５１】
必要な場合には、試料のｐＨ値を１．００に調節し、その後、本アッセイ系の感度を向上するために［ＣｌＯ２●は、可視領域（３６０ｎｍ）でλｍａｘを有し、ε＝１15０Ｍ−１ｃｍ−１］、試料を２４時間の期間、室温で平衡化した（残留するＣｌＯ２−の各モルが相当する０．５０のＣｌＯ２●に確実に変換されるようにするため）。
【００５２】
オーラルリンスのオキシハロゲンオキシダントの無傷ヒト唾液との相互作用のＨＰＬＣモニタリング
各唾液上清試料に残留する亜塩素酸塩の濃度も、新規高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法を使用し、移動相に存在するイオン対試薬ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＨＴＢ）を装填したＣ１８逆相カラムを使って測定した。
使用したオペレーティングシステムは、Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  ＨＰＬＣシステムで、Ｗａｔｅｒｓ固有のＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍソフトウェアで遠隔操作されるＷａｔｅｒｓ  ６２６ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ  ９９６フォトダイオードアレイ検知器およびＷａｔｅｒｓインライン脱気装置（デガッサ）から成る。
【００５３】
１／４に希釈したオーラルリンスＩおよびＩＩの０．５０ｍｌアリコートで、０．１０ｍｌ容量の唾液上清を処理することにより、試料を調製した。完全にロータミックスした後、得た溶液の１０μｌアリコートを、インジェクター付きの、遠隔操作による自動化オートサンプラーを使って、Ｃ１８逆相ＯＤＳカラム（４．６ｘ７５ｍｍ）に注入した。Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ  Ｓ５−ＯＤＳ  １ガードカラムを使って、分析カラムの潜在的な汚染物質をすべて除去した。
【００５４】
移動相をインライン脱気装置を使って脱気した。移動相は、２％（ｖ／ｖ）ブタン−１−オールおよび１２％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを含む、２％（ｗ／ｖ）
のホウ酸塩／グルコン酸塩緩衝液（最終ｐＨ７．２）から成り、流速毎分１．１０ｍｌで動作した。ＣｌＯ２−を干渉する唾液成分から容易に分離できるようにするために、最終濃度５０．００ｍＭにて、イオン対試薬（ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド）を添加した。この分析物は、フォトダイオードアレイ検知器により生成されるそのピークの吸収スペクトル（λｍａｘ  ２６２ｎｍ）を真正の亜塩素酸塩標準のものと比較することにより分離した。
【００５５】
１Ｈ  ＮＭＲ分析のためのヒト唾液上清試料の調製
個々の唾液上清試料を等量（０．６０ｍｌ）に３分割した。合計で3つの別々の試料反応混合物が出来上がった：３．０ｍｌのオーラルリンスＩおよびＩＩをそれぞれ第１および第２の唾液上清試料に添加し、第３の試料には、３．０ｍｌのＨ２０を元の容量０．６ｍｌの唾液上清に添加して、処理しないコントロールとして使った。その後、試料を完全にロータミックスし、均一な混合物になるようにした後、３０秒の期間、３７℃で平衡化した。
【００５６】
調査する各試料０．６０ｍｌに、２H２Ｏ中の０．０５ｍｌの酸化重水素（２Ｈ２Ｏ、フィールド周波数ロックを提供する）および０．０５ｍｌの３−（トリメチルシリル）［２，２，３，３−２Ｈ４］プロピオン酸ナトリウム［ＴＳＰ、化学シフトの基準（δ＝０．００ｐｐｍ）および測定の内部基準物質］５．０ｍＭ溶液を添加することにより、試料を調製した。
【００５７】
次に、酸化消耗またはその他を通じて、ＣｌＯ２−および／またはＣｌＯ２●と反応する唾液中生体分子、ならびにそのような反応系で生成される生成物の性質を明らかにするために、各試料を多成分高分解能１Ｈ  ＮＭＲ分析にかけた。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ測定
Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ−６００分光器（ＵＬＩＲＳ、英国ロンドン大学クイーン・メアリー）を周波数６００．１３ＭＨｚ、プローブ温度２９８Ｋで操作し、１次元（１Ｄ）１Ｈ  ＮＭＲを得た。パルス間の遅延中にゲート付きデカップリングで事前飽和することにより、強い水の信号（δ＝４．８０ｐｐｍ）を抑制した。
【００５９】
唾液上清およびオーラルリンス試料で得た１Ｄスペクトルのパルシング条件は、以下の通りである：自由誘導減衰（ＦＩＤ）１２８；データポイント１６，３８４；３〜７μｓパルス；パルス繰返し率１．０秒。実験ＮＭＲデータの処理には、通常、０．３０Ｈｚの線を広げる関数（line-broadening functions）が利用された。存在するときには、乳酸塩（δ＝１．３３０ｐｐｍ）およびアラニン（δ＝１．４８１ｐｐｍ）のメチル基の共鳴がコントロールおよび調査対象のオーラルリンスで処理した唾液上清の二次的な内部基準として役割を果たした。
【００６０】
結果
オーラルリンス製剤ＩおよびＩＩの１Ｈ  ＮＭＲ分析
オーラルリンスＩの製剤で得た１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、緩衝剤として使われたクエン酸塩に起因する明瞭で、顕著な共鳴［−ＣＨ２ＣＯ２−プロトン、δ＝２．６５ｐｐｍ（ｄｄ、ＡＢカップリング系）］を含み、より低い強度の信号が、酢酸塩［−ＣＨ３基、一重項（ｓ）は１．９２ｐｐｍに位置していた］およびギ酸塩［−Ｏ２Ｃ−Ｈ一重項（ｓ）、δ＝８．４６ｐｐｍ］から生じた。エタノール［−ＣＨ３および−ＣＨ２ＯＨ基のプロトンは、それぞれ、δ＝１．２１（ｔ）３．６６（ｑ）］も微量レベルで検知可能だった。
【００６１】
オーラルリンスＩＩ生成物で得たスペクトルも、クエン酸塩に起因する共鳴［−ＣＨ２ＣＯ２−プロトン、δ＝２．６５ｐｐｍ（ｄｄ、ＡＢカップリング系）］および酢酸塩［−ＣＨ３基、一重項（ｓ）は１．９２ｐｐｍに位置していた］およびギ酸塩［−Ｏ２Ｃ−Ｈ一重項（ｓ）、δ＝８．４６ｐｐｍ］から生じるより低い強度の信号を含んでいた。
【００６２】
ＣｌＯ２−を含むオーラルリンス製剤とヒト唾液上清試料との相互作用の１Ｈ  ＮＭＲ分析
調査対象の唾液上清試料（すなわち、２０人の志願者の各々から１日１回、３日間採取した、合計６０の試料）のそれぞれに対し、６００ＭＨｚでの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを得た。ヒト唾液上清試料の典型的な１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを図２（ａ）に示す；同じ唾液試料をオーラルリンスＩで事前処理した場合の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを図２（ｂ）に表示する。テストの対象としたオーラルリンスＩおよびＩＩに存在するオキシハロゲンオキシダント（主にＣｌＯ２−）による唾液中生体分子の酸化消耗の］これらの１Ｈ  ＮＭＲ調査の結果、
以下が明らかになった：
１．  ピルビン酸塩は、酸化的脱炭酸により酢酸塩およびＣＯ２に変換された。
２．  揮発性硫黄化合物（ＶＳＣ）前駆体のメチオニンは、酸化されて、対応するスルホキシドになった。
３．  悪臭を放つトリメチルアミン（ｓ、δ＝２．９１ｐｐｍ）は強度が低下した（恐らくは酸化トリメチルアミンへの変換をもたらす工程）。
４．  チロシンが酸化された（恐らくはキノン類へと変化した）。
５．  グリシンα−ＣＨ２基の共鳴の強度が弱まった。この計測結果は、オーラルリンスに存在する微量レベルの次亜鉛素酸塩／次亜塩素酸（モノクロロアミンおよび／またはジクロロアミン類を生成する）に恐らくは起因する。
６．  各オーラルリンスでの処理に続いて、クレアチニンおよび３−Ｄ−ヒドロキシブチレートの濃度が低下した。この計測結果は、その中に存在するオキシハロゲン類によりそれらが酸化消耗されたことと一致する。
７．  処理後、唾液中タウリンの濃度が低下した。
８．  処理後、乳酸塩−ＣＨ３および−ＣＨの信号は強度が弱まった。
９．  処理後、リジンに起因する共鳴は強度が弱まった。
【００６３】
得た以上の１Ｈ  ＮＭＲ分析の結果に関し、亜塩素酸塩による唾液中メチオニンの消耗は、ＣＨ３ＳＨおよびＨ２Ｓのどちらもグラム陰性微生物で使用できる代謝経路を通じて、このアミノ酸から生成されるため、口腔衛生および臨床歯周病学にとって非常に重要である。したがって、ここで得たデータは、調査対象としたオーラルリンスには、ＶＳＣおよびそのアミノ酸前駆体の直接的な酸化的不活性化により、口臭を臨床的に緩和する効力があることを示している。
【００６４】
ここで示されているように、用いた技法は、亜塩素酸塩のヒト唾液中生体分子との相互作用の多成分評価に関して非常に価値があり、このオキシハロゲンオキシダントによる唾液中ピルビン酸の酸化的脱炭酸化は、このことの重要な例の１つとしての役割を果たしており、その作用機序に、ある程度関係している可能性がある。
【００６５】
亜塩素酸塩校正標準の分光光度分析
オーラルリンスＩおよびＩＩの分光光度分析の前に、亜塩素酸塩（ＣｌＯ２−）の吸光係数を２６２ｎｍでの値として測定した。これは、真正のＣｌＯ２−の校正標準（１．６０〜８．００ｍＭ、表１および図２）を分析することにより実施した。得たデータの再現性を確実にするために、測定は３回ずつ実施した。亜塩素酸塩の濃度と対照した、２６２ｎｍでの吸光度（Ａ２６２）のプロットは、明確に直線状になった：吸光係数は、ε＝１６０Ｍ−１ｃｍ−１と求められ、表１に示すプロットの相関係数（ｒ）は、０．９９５５だった。
【表１】
2013532118.tif 000002
【００６６】
最大で２０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む水の希釈による処理は、得た最終的な吸光度値に全く影響を及ぼさなかった。この測定結果は、この潜在的な汚染物質がこの方法で実施される亜塩素酸塩の分光光度法によるアッセイに全く影響を及ぼさなかったことを裏付けた（すなわち、われわれの実施した実験条件下で、これらの物質間に作用は認識されなかった）。
【００６７】
ヒト唾液上清試料によるオーラルリンス中亜塩素酸塩の消耗の分光光度法による測定
（その一連の校正標準に対する電子吸収スペクトルの獲得を通じて）ＣｌＯ２−の吸光係数を確定した後、唾液上清／オーラルリンス混合物の各々の中の亜塩素酸塩を別々に分光光度分析し、平衡状態でその中に存在する生体分子によるその消耗濃度を測定した。このように、方法で概略を示した手順に従って、ヒト唾液上清とのオーラルリンス製剤の平衡化の後に観察された２６２ｎｍでの吸光度の低下を利用して、この生体液で消耗されたオーラルリンスの亜塩素酸塩（ＣｌＯ２−）の濃度を概算した。表２（ａ）は、オーラルリンス：唾液上清を容量比５：１で含む反応混合物に対して消耗された亜塩素酸塩の濃度（唾液１ｍｌ当たり）を示している。
【表２】
2013532118.tif 000003
2013532118.tif 000004
2013532118.tif 000005
【００６８】
唾液中生体分子によるＣｌＯ２−の消耗の測定に関する示差分光光度法によるデータの多因子分散分析
唾液中生体分子によるＣｌＯ２−の消耗の示差分光光度法による測定に関して得たデータの統計的分析［すなわち、分散の多因子分析（ＡＮＯＶＡ）］によって、（１）調査対象の各オーラルリンスのＣｌＯ２−含有量（ｐ＜＜０．００１）、（２）志願者（ｐ＜０．０１）、および（３）「志願者の中に入れ子になっている日にち」（ｐ＜０．００１）の間の極めて顕著な差が明らかになった。実に、オーラルリンス ：ヒト唾液上清の含有率が５：１（ｖ／ｖ）の反応混合物に対して測定したＣｌＯ２−の消耗の全体平均の概算値は、オーラルリンスＩおよびＩＩに対する唾液上清１ｍｌ当たり、それぞれ６．３３４ｘ１０−２と１．６２６ｘ１０−１μｍｏｌ  ＣｌＯ２−だった。「再現間」二乗平均値は、わずか１．２６６ｘ１０−４であり、テストした各サンプルに実施した反復（３回）測定に高いレベルの再現性があることを示唆している。表２（ｂ）に完全なＡＮＯＶＡ表を示す。
【表３】
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【００６９】
オーラルリンス中の亜塩素酸塩 消耗および唾液中生体分子とのその酸化的相互作用をモニタリングするための新規ＨＰＬＣ方法の開発
この節では、ヒトの唾液試料におけるＣｌＯ２−の測定（すなわち、オーラルリンス製剤によるその処理の前後）のためのＨＰＬＣ方法の開発について記述する。
【００７０】
各唾液上清試料に残存している亜塩素酸塩濃度を、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ）技法を使い、移動相に存在するイオン対試薬ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＨＴＢ）を装填したＣ１８逆相カラムを用いて測定した。
【００７１】
イオン対試薬濃度の５．００から５０．００ｍＭへの変化に関する実験では、５０．００ｍＭの濃度では、調査対象としたすべての試料の唾液成分からＣｌＯ２−の良好な分解能を生じることが示された。ＣｌＯ２−のピークの同定は、その保持時間（６．９分）およびそのＨＰＬＣピーク（λｍａｘ２６２分）のダイオードアレイスペクトルに基いて行なった。真正の亜塩素酸ナトリウム校正標準（１．００〜１０．００ｍＭ）の注入は、ピーク強度と濃度との間に明瞭な直線関係があることを示した。１．００ｍＭの亜塩素酸塩標準溶液、オーラルリンスＩ製剤（分析の前に２回蒸留水で１／４に希釈）および０．５０ｍＭの上記のオーラルリンス（Ｉ）で事前処理した代表的な唾液上清試料（０．１０ｍｌ）の代表的なクロマトグラムを、それぞれ図３（ａ）、（ｂ）および（ｃ）に示す。ＣｌＯ２−の保持時間は６．９０分だった。
【００７２】
亜塩素酸塩ピーク領域（表３）をその濃度と対照してプロットしたら、明確な直線になった（図４）。
【表４】
2013532118.tif 000007
【００７３】
結論
ここでテストしたオーラルリンス（主にオキシダントとしてＣｌＯ２−を含有する）によるグリシン、アラニンおよびタウリンなどの（比較的）単純なアミノ酸の消耗について得た結果は、以下に概略を示すように、このような生体分子と（ＣｌＯ２−を含め）オキシハロゲンオキシダントとの反応の速度論および機序について実施したこれまでの研究で説明することが可能である。
【００７４】
本研究で調査したオーラルリンスによる唾液中タウリンの消耗の相当な範囲に非常に関係するのは、（中性から酸性のｐＨ値、すなわち口腔環境に関係するｐＨ値での）ＣｌＯ２−によるこのβアミノ酸の酸化について、Ｃｈｉｎａｋｅおよび
Ｓｉｍｏｙｉが報告した実験（１９９７）である。実に、この反応系の化学量論は、タウリン１モル当たり、３モル当量のＣｌＯ２−の消耗を必要とし、タウリンのＮ−モノクロロアミン［Ｃｌ（Ｈ）ＮＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ］１分子およびＣｌＯ２●２分子を生成することが明らかになった（Ｎ−モノクロロタウリンの産生は、ＣｌＯ２●の蓄積と比較して表現すると、速度が速い）；調査した比較的低いｐＨ値では、Ｎ−モノクロロタウリンはタウリンとＮ−ジクロロタウリンとに解離する。この反応系の重要な特性は、ＨＯＣｌと反応中間体のＨ（ＯＨ）ＮＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈの両方が生成される重大な誘導期に関係し、工程はＮ−クロロタウリンおよびＣｌＯ２●の自己触媒的な形成へと通じる。ＣｌＯ２−が関与する酸化還元反応に予想されるように、この自己触媒作用はＣｌ２Ｏ２中間体種によって媒介され、興味深いことに、強力なオキシダントＨＯＣｌが利用可能であるにも関わらず、タウリンのＣ−Ｓ結合は開裂されない。
【００７５】
したがって、これらの以前に報告されていた研究は、テストしたオーラルリンスのＣｌＯ２−によるヒト唾液上清試料の処理で観察された唾液中タウリンにおける実質的な１Ｈ  ＮＭＲで検知可能な還元を明確に説明する。これらの研究は、この調査でも検知されたこの生体液中に存在する様々なα−アミノ酸、具体的には、遊離（タンパク質に組み込まれていない）アラニン、アルギニン、
アスパラギン酸塩、システイン、グルタミン酸塩、グルタミン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、チロシンおよびバリンのオーラルリンス誘導による酸化消耗もこの機序により進行することも示唆している。
【００７６】
しかし、このようにして生成される多くのＮα−モノクロロアミンは、生理的温度（３７℃）では不安定であり（Ｈａｚｅｎら（１９９８））、対応するアルデヒドに分解する（式１）ため、これを実証するには、α−アミノ酸の側鎖に対応するこのような種（例えば、唾液中グリシンからのホルムアルデヒド、アラニンからのアセトアルデヒドなど）の検知および定量化に焦点を絞ったさらなる研究が要求される。
Ｃｌ（Ｈ）Ｎ−ＣＨＲ−ＣＯ２−＋Ｈ２Ｏ →
ＲＣＨＯ＋ＮＨ３＋ＣＯ２＋Ｃｌ−  （１）
【００７７】
興味深いことに、アルデヒドが強力な殺菌剤として働くこと、そして、上記の工程から生じる物質は、したがって、口腔環境においてもこの作用を発揮し得ることがよく知られている。実際に、この薬剤の２．０％（ｗ／ｖ）溶液は、消毒剤として頻繁に用いられている（Ｆｏｌｌｅｎｔｅら）。
【００７８】
同様に、ここで言及したγ−アミノブチレート（ＧＡＢＡ）の酸化消耗は、同様の機序で進行する可能性が高い。しかし、アミノ酸のシステイン、メチオニンおよびチロシンは、それぞれが酸化還元活性のある側鎖を有しており、当然、ＣｌＯ２−（さらに、ＧＡＢＡおよび特にタウリンと一緒に、これらのα−アミノ酸および／またはさらなるα−アミノ酸との反応を通じて生成されるＣｌＯ２●およびＨＯＣｌ／ＯＣｌ−）によって酸化的に修飾され、それぞれ、システインスルホン酸（およびシスチン）、メチオニンスルホキシド（式２）およびチロシン誘導キノン類に変換されることもあり得る。
Ｈ３Ｎ＋ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３）ＣＯ２−＋ＣｌＯ２−→
Ｈ３Ｎ＋ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＳＯＣＨ３）ＣＯ２−＋ＯＣｌ−   （２）
【００７９】
テストしたオーラルリンス中に存在するＣｌＯ２−による、唾液中のα−ケト酸陰イオン、特にピルビン酸塩およびα−ケトグルタル酸の酸化消耗はわれわれの研究でも観察されたが、これに関して、ＣｌＯ２−ピルビン酸塩との反応（式３）により、強い緑のＣｌ２／ＯＣｌ−の着色が生じることが以前に言及されている［Ｌｙｎｃｈら、１９９７］。したがって、このような反応系は、ＨＯＣｌ／ＯＣｌ−を明確に生成し、生成されたＨＯＣｌ／ＯＣｌ−は、当然、後で遊離アミノ酸からまたは選択された事例ではタンパク質に組み込まれたアミノ酸から、Ｎ−モノクロロアミンおよびＮ−ジクロロアミンを生成することができ、前者は生理学的条件下で対応するアルデヒドに分解する。
ＣＨ３ＣＯＣＯ２− ＋ＣｌＯ２−  →  ＣＨ３ＣＯ２−＋ＣＯ２＋ＯＣｌ−    （３）
【００８０】
したがって、ＣｌＯ２−とβ−アミノ酸タウリンとの反応中に観察される誘導期間の反応性ＨＯＣｌ／ＯＣｌ−の産生（ＣｈｉｎａｋｅおよびＳｉｍｏｙｉ（１９９７））（および恐らくは、テストしたオーラルリンスのＣｌＯ２−との反応で消耗した唾液中α−アミノ酸およびγ−アミノブチレート）も、ヒト唾液のアミノ酸濃度をさらに低下させる役割を果たすことに留意べきである。実際、この機序工程が選択した遊離アミノ酸とＣｌＯ２−（または唾液タンパク質のＮ−末端に位置するもの）との反応でのみ進行するならば、生成されたＨＯＣｌ／ＯＣｌ−は、当然、（相対的に）非選択的な形で、遥かに広い範囲のこのようなＨＯＣｌ／ＯＣｌ−「捕捉剤」種との反応に利用可能となり、（遊離またはタンパク質に組み込まれた）リジン残基のＮε−モノクロロおよび−ジクロロアミンと一緒に、Ｎα−モノクロロアミンおよびジクロロアミンを形成する。上記のように、それぞれの親アミノ酸Ｎα−モノクロロアミン前駆体の分解から生じる特定のアルデヒドは、これらの反応系から生じるＨＯＣｌ／ＯＣｌ−（ＲＣＨＯ、ただしＲはアミノ酸の側鎖部分を表す）の活性の貴重な標識としての役割を果たす。
【００８１】
唾液中のα−アミノ酸とのＨＯＣｌ／ＯＣｌ−の相互作用および一次Ｎα−モノクロロアミン生成物の分解から生じるアルデヒドは、ＣｌＯ２−と反応することもでき、このオキシハロゲンオキシダントによるホルムアルデヒド（ＨＣＨＯ）の酸化は、弱酸性およびアルカリ性の媒質の両方でＣｈｉｎａｋｅらが批判的に研究した。この反応では、生成物としてＣＯ２およびＣｌＯ２●を生じ、後者はほぼ定量的収量で生じ、次亜塩素酸／次亜塩素酸塩（ＨＯＣｌ／ＯＣｌ− ）に対して、自己触媒的だった。実際、この工程の主要相では、ＨＯＣｌが生成され、ＣｌＯ２●の産生およびギ酸／ギ酸塩（ＨＣＯ２Ｈ／ＨＣＯ２−）のさらなる酸化を容易にした（触媒した）；ＣｌＯ２●は、ＨＣＨＯおよびＨＣＯ２Ｈ／ＨＣＯ２−のどちらに対しても反応性が（相対的に）欠如していたことを考えると、急速に蓄積した。ＨＣＨＯが過剰な場合、本工程の化学量論は、３ＣｌＯ２−  ＋  ＨＣＨＯ  →  ＨＣＯ２Ｈ＋２ＣｌＯ２●（液体）＋Ｃｌ−＋２Ｈ２Ｏであることが確定したが、ＣｌＯ２−が大量に過剰に存在するとき［テストしたオーラルリンス：ヒト唾液上清の５：１（ｖ／ｖ）混合物の場合に、当然、予期される状態］、化学量論プロファイルは、ＣｌＯ２●を４分子、Ｃｌ−を２分子およびＣＯ２を１分子生成するために、ＨＣＨＯモルにつき、６モル当量のＣｌＯ２−の消耗に関与した。
【００８２】
ここで（および以前に実施された化学モデル研究（Ｌｙｎｃｈら、１９９７）で観察された唾液システイン共鳴強度のオーラルリンスが仲介する低下に関して、Ｄａｒｋｗａら（２００３）は、ＣｌＯ２−によるＮ−アセチルシステインの酸化消耗を研究し、この反応系から生成される最終生成物は、Ｎ−アセチルスルホネートであることおよびその工程の化学量論は３ＣｌＯ２−
＋  ２ＲＳＨ  →  ３Ｃｌ−  ＋  ２ＲＳＯ３Ｈであることを明らかにした；予期されたとおり、Ｎ−クロロアミン誘導体の生成の証拠はなかった。この酸化は、スルフェン酸およびスルホン酸付加物の連続的な生成を伴う段階的なＳ−酸化工程を伴う機序により進行する。興味深いことに、この反応の特筆すべき特性は、モニタリング可能な誘導期なしで、二酸化塩素（ＣｌＯ２●）を速やかかつ直ちに形成することであり、それはこのフリーラジカルのオキシハロゲンによるチオールの酸化は、一般に、ＣｌＯ２−による有機硫黄化合物の酸化の特徴である時間差を伴わずに、二酸化塩素を蓄積できるのに十分なだけゆっくり進むためである。この系の「グローバル」力学の完全な記述は、省略機序で８つの反応を必要とする。
【００８３】
結論として、われわれの研究で提供した根拠は、口腔環境でのＣｌＯ２−からのＣｌＯ２●の生成は、後者がそこでアシドーシス性環境に入ることに完全には依存しない（式４および５、ＣｌＯ２−／ＨＣｌＯ２系のｐＫａ値は２．３１（Ｌｙｎｃｈら、１９９７））ことを明確に示している。この生体液の平均ｐＨ値は、口腔刺激を受けていないとき（すなわち「休息中」）は、約７であるが、より低いｐＨ値（約ｐＨ４）の飲料を比較的大量に摂取すると、このパラメタに明確に顕著な影響が生じる可能性がある。しかし、主要な根面齲蝕部位のｐＨ値は、４．５の限界に到達することがあり得、したがって、これは生成されるＨＣｌＯ２の濃度の著しい上昇（すなわち、利用可能な全部のオキシハロゲンオキシダントがｐＨ７．００にて０．００２０％からｐＨ４．５０にて０．６４％へと上昇）が予期される環境を表していることにも留意すべきである。ただし、ＣｌＯ２−／ＨＣｌＯ２カップルのｐＫａ値を考慮すれば、利用可能なオキシハロゲン酸化物の合計量に比較して表すと、この値は依然として非常に低いことにも留意すべきである（利用可能なα−、β−およびγ−アミノ酸とのＣｌＯ２−の相互作用から、ＣｌＯ２●、またはＨＯＣｌ／ＯＣｌ−を生成する代替手段が存在しない状態では、残るのはＣｌＯ２−である）。もちろん、式５の化学量論から、２モル当量のＣｌＯ２●が４分子のＨＣｌＯ２につき生成され、したがって、ＨＣｌＯ２生成の上記の数字は、産生可能な全ＣｌＯ２●の数値の２倍を表す（すなわち、ｐＨ７．００および４．５０での全オキシハロゲンオキシダントの最大パーセント値は、それぞれ０．００１０％および０．３２％である）。ＨＣｌＯ２からのＣｌＯ２●生成速度も、われわれの研究に伴ったオーラルリンス−唾液上清の短い平衡化時間に照らして、考慮すべきであることは明白である。.
ＣｌＯ２−  ＋  Ｈ＋  →  ＨＣｌＯ２（ｐＫａ＝２．３１）  （４）
４ＨＣｌＯ２  →  ２ＣｌＯ２●   ＋  ＣｌＯ３−  ＋  Ｃｌ−  ＋  Ｈ２Ｏ    （５）
【図１】
2013532118.tif 000008
【図２】
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【図３（ａ）】
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【図３（ｂ）】
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【図３（ｃ）】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年6月7日(2013.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化二酸化塩素の薬学的溶液の使用であって、口腔内に、モニタリング可能な誘導期がなく、または口腔衛生の改良のための唾液中生体分子を消耗する前記口腔内の余分な酸性化源を使用することなく、二酸化塩素薬学的組成物ガスを生成する、使用。
【請求項２】
他の望ましくないオキシ塩素種を相当量生成することのない、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記唾液中生体分子の酸化が、スルフェン酸およびスルホン酸付加物の連続的な生成を伴う段階的なＳ−酸化工程を伴い、モニタリング可能な誘導期なしに二酸化塩素ガスの即時形成をもたらす機序を介して進行する、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記安定化二酸化塩素薬学的組成物が、約０．０５％から約２．０％（液体またはスプレーの場合は、ｗ／ｖ％、ペーストまたはゲルの場合は、ｗ／ｇ％）の範囲内の濃度を有し、前記二酸化塩素組成物ガスが、前記口腔内のピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンを酸化消耗する、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
揮発性硫黄化合物を酸化消耗する前記二酸化塩素薬学的組成物ガスが、前記口腔内に存在する口臭および口腔疾患を低下させ、前記二酸化塩素薬学的組成物ガスが、前記口腔内に存在するアミノ酸前駆体との相互作用により生成され、前記安定化二酸化塩素の溶液が、約０．０５％から約２．０％（液体またはスプレーの場合は、ｗ／ｖ％、ペーストまたはゲルの場合は、ｗ／ｇ％）の範囲内の濃度を有する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記安定化二酸化塩素ガスの濃度が、約０．４％（液体またはスプレーの場合は、ｗ／ｖ％、ペーストまたはゲルの場合は、ｗ／ｇ％）である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記安定化二酸化塩素薬学的溶液の濃度が、約０．１％（液体またはスプレーの場合は、ｗ／ｖ％、ペーストまたはゲルの場合は、ｗ／ｇ％）である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記二酸化塩素薬学的組成物ガスが、前記揮発性硫黄化合物の存在および前記口腔内に存在する口腔疾患を低下させる、請求項２に記載の使用。
【請求項９】
前記二酸化塩素薬学的組成物ガスが、ピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンから成る群から選択される唾液中生体分子を酸化消耗する、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
約０．００５％から約２．０％（液体またはスプレーの場合は、ｗ／ｖ％、ペーストまたはゲルの場合は、ｗ／ｇ％）の範囲内の濃度を有する安定化二酸化塩素溶液の使用であって、
スルフェン酸およびスルホン酸付加物の連続的な生成を伴う段階的なＳ−酸化工程において、前記口腔内にて二酸化塩素薬学的組成物を生成し、  前記二酸化塩素ガス（ＣｌＯ２）の即時形成をもたらす、
使用であり、
モニタリング可能な誘導期が必要とされず、
他の望ましくないオキシ塩素種が相当量生成することがなく、
ピルビン酸塩、メチオニン、トリメチルアミン、チロシン、グリシン、クレアチン、３−Ｄ−ヒドロキシブチレート、唾液中タウリン、乳酸塩およびリジンから成る群から選択される唾液生体分子を酸化消耗し、かつ前記口腔内に存在する口臭の存在を低下させ、前記口腔内に存在する前記口腔疾患の低下を促すことを目的とする、
使用。
【国際調査報告】
2013532118.tif 000014