(57)【要約】  本明細書には、ＨＥＲ３結合剤を前立腺治療のために使用する方法が記載されている。該ＨＥＲ３結合剤は、例えば、抗体であってもよく、また前立腺肥大（ＢＰＨ）及び前立腺癌の治療のために使用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ３結合剤の前立腺肥大（ＢＰＨ）治療のための使用。
【請求項２】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤が低分子化合物又はＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質である使用。
【請求項３】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、
配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１；配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２；及び配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列；並びに
配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１；配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２；及び配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項４】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；並びに（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項５】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項６】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列；並びに、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項７】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、及び配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、あるいは、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、及び配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項８】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項９】
請求項８に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項１０】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列；並びに、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項１１】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項１２】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項１３】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項１４】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む使用。
【請求項１５】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む使用。
【請求項１６】
請求項３〜１５のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が直接的にＨＥＲ３の細胞外ドメインに対するものである使用。
【請求項１７】
請求項３〜１５のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質のＨＥＲ３への結合が、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少、ＨＥＲリン酸化の減少、細胞増殖の減少、細胞遊走の減少、及びＨＥＲ３下方制御の増加からなる群から選択される１以上の効果を有する使用。
【請求項１８】
請求項３〜１７のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が抗体である使用。
【請求項１９】
請求項１８に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体がモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、又はその抗体断片である使用。
【請求項２０】
請求項１９に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体断片がＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、又は一本鎖抗体分子である使用。
【請求項２１】
請求項１８に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体がＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−又はＩｇＧ４−タイプである使用。
【請求項２２】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、該抗原結合タンパク質がエフェクター群に結合している使用。
【請求項２３】
請求項２２に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記エフェクター群が放射性同位元素若しくは放射性核種、毒素、又は治療薬若しくは化学療法剤群である使用。
【請求項２４】
請求項２３に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記治療薬若しくは化学療法剤群がカリケアマイシン、アウリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン及びそれらの誘導体からなる群より選択される使用。
【請求項２５】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、更に患者がＢＰＨを有することを同定することを含む使用。
【請求項２６】
請求項１に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、更に組成物投与後の患者における前立腺サイズをモニタリングすることを含む使用。
【請求項２７】
前立腺重量を減少させるためのＨＥＲ３結合剤の使用。
【請求項２８】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤が低分子化合物又はＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質である使用。
【請求項２９】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、
配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１；配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２；及び配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列；並びに
配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１；配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２；及び配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３０】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；並びに（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３１】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３２】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列；並びに、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３３】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、及び配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、あるいは、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、及び配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３４】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３５】
請求項３４に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３６】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列；並びに、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３７】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３８】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項３９】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含む使用。
【請求項４０】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む使用。
【請求項４１】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む使用。
【請求項４２】
請求項２９〜４１のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が直接的にＨＥＲ３の細胞外ドメインに対するものである使用。
【請求項４３】
請求項２９〜４１のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質のＨＥＲ３への結合が、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少、ＨＥＲリン酸化の減少、細胞増殖の減少、細胞遊走の減少、及びＨＥＲ３下方制御の増加からなる群から選択される１以上の効果を有する使用。
【請求項４４】
請求項２９〜４３のいずれか１項に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、抗原結合タンパク質が抗体である使用。
【請求項４５】
請求項４４に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体がモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、又はその抗体断片である使用。
【請求項４６】
請求項４５に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体断片がＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、又は一本鎖抗体分子である使用。
【請求項４７】
請求項４４に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記抗体がＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−又はＩｇＧ４−タイプである使用。
【請求項４８】
請求項２７に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、ＨＥＲ３結合剤がＨＥＲ３と結合する抗原結合タンパク質であり、かつ、該抗原結合タンパク質がエフェクター群に結合している使用。
【請求項４９】
請求項４８に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記エフェクター群が放射性同位元素若しくは放射性核種、毒素、又は治療薬若しくは化学療法剤群である使用。
【請求項５０】
請求項４９に記載のＨＥＲ３結合剤の使用であって、前記治療薬若しくは化学療法剤群がカリケアマイシン、アウリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン及びそれらの誘導体からなる群より選択される使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、前立腺疾患を治療するための物質及び方法に関し、より具体的には、前立腺組織におけるＨＥＲ３活性を減少させ、前立腺肥大（ＢＰＨ）及び前立腺癌などの疾患を治療するための物質及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国における前立腺癌患者は、局在する前立腺癌の治療のために、前立腺全摘出手術を受けるか、放射線治療を受ける。これらの患者のうち、１５〜２０％を超える患者が転移による腫瘍の再発を経験していると見積もられている（Ｍｅｌａｍｅｄら，“Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ：Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（２００４）参照）。再発した前立腺癌は典型的にはアンドロゲン除去療法により治療される。該治療方法は、当初は効果的であるが最終的には失敗に終わることが多く、このことはアンドロゲン非依存的前立腺癌（ＡＩＰＣ）が発症していることを示している（Ｐｅｔｒｙｌａｋ，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．Ｉｎｔ．９６（Ｓｕｐｐｌ  ２）：４１−４６（２００５）参照）。アンドロゲン除去療法による治療に失敗した患者の治療の選択肢は限られている（Ｊａｖｉｄａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．２３（６）：５２０−５２８（２００５）参照）。
【発明の概要】
【０００３】
本願は、その一部において、アンドロゲン除去がチロシンキナーゼレセプターＨＥＲ３のレベルの増加を伴い、それがＡｋｔのリン酸化を刺激し、アンドロゲン非存在下でも細胞の培地中へ伝播する能力を誘導することを見出したことに基づく。本願が提供する物質及び方法の一部は、ＨＥＲ３結合剤（例えば、Ｕ１−５９などの完全ヒト抗ＨＥＲ３モノクローナル抗体）をアンドロゲン除去の間に使用してＨＥＲ３を阻害し、それによってアンドロゲン非依存性を抑制することに関する。
【０００４】
本願はまた、その一部においてＨＥＲ３結合抗体などのＨＥＲ３結合剤を用いたラットの静脈注射（ｉ．ｖ．）治療が、前立腺量の減少を招くことを見出したことに基づく。よって、本願はＨＥＲ３結合剤を備える、前立腺量を減少させる（例えば、ＢＰＨ等の疾患を治療する）ための物質及び方法を提供する。
【０００５】
本願は、それを必要とする患者における前立腺肥大（ＢＰＨ）を治療するための方法であって、該患者に治療有効量のＨＥＲ３結合剤を含む組成物を投与することを備える方法を記載するものである。ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する、低分子化合物であってもよいし、抗原結合タンパク質であってもよい。
【０００６】
一態様において、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１；例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群から選択されるＣＤＲＨ２；及び、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群から選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、並びに、例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１；例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ２；及び、例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群から選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０００７】
他の態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ａ）例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列を含む。
【０００８】
更なる態様において、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ｄ）例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【０００９】
また更なる態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列；並びに、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【００１０】
また更なる態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、及び、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、又は、例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、及び、例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００１１】
他の態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。あるいは、抗原結合タンパク質は、例えば、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。一部の態様において、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列；並びに、例えば、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。ＨＥＲ３結合剤は、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよく、あるいは、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよく、あるいは、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００１２】
一部の態様において、ＨＥＲ３結合剤はＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む。他の態様では、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む。
【００１３】
いくつかの態様において、抗原結合タンパク質はＨＥＲ３の細胞外ドメインに対するものである。抗原結合タンパク質のＨＥＲ３への結合は、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少、ＨＥＲ３リン酸化の減少、細胞増殖の減少、細胞移動の抑制、及び、ＨＥＲ３のダウンレギュレーションの増加からなる群から選択される１以上の効果を有していてもよい。
【００１４】
いくつかの態様において、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質は抗体である。抗体はモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、又はそれらの抗体断片であり得る。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、又は一本鎖抗体分子であり得る。例えば、抗体はＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−又はＩｇＧ４−タイプである。
【００１５】
一部の態様において、抗原結合タンパク質はエフェクター群に結合している。エフェクター群は、放射性同位元素若しくは放射性核種、毒素、又は治療若しくは化学療法剤群であり得る。治療若しくは化学療法剤群は、カリケアマイシン、アウリスタチンＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン及びそれらの誘導体からなる群より選択されてもよい。
【００１６】
本発明の方法は、前記組成物投与後に、ＢＰＨを有する対象を同定すること、及び／又は対象における前立腺のサイズをモニターすることを含んでいてもよい
【００１７】
本願は、また、対象にＨＥＲ３結合剤を含む組成物の治療有効量を投与することを備える、対象における前立腺量を減少させる方法に関する。
【００１８】
一態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群から選択されるＣＤＲＨ１；例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群から選択されるＣＤＲＨ２；及び、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群から選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、並びに、例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群から選択されるＣＤＲＬ１；例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群から選択されるＣＤＲＬ２；及び、例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群から選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００１９】
他の態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ａ）例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列を含む。
【００２０】
更なる態様において、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ｄ）例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【００２１】
また更なる態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２に示されるＣＤＲＨ２；及び（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列；並びに、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４に示されるＣＤＲＬ２；及び（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【００２２】
また更なる態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２３６、２５１、２５２、及び２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、例えば、配列番号２５８、２７８、２８０、及び２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、及び、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、又は、例えば、配列番号３２０、３３４、３３７、及び３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、例えば、配列番号３４３、３５６、３５１、及び３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、及び、例えば、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２３】
他の態様においてＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含む。あるいは、抗原結合タンパク質は、例えば、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００２４】
ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号４２、５４、７０、９２、及び９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列；並びに、例えば、配列番号４４、５６、７２、９４、及び９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００２５】
ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいはＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよい。あるいはＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含んでいてもよい。
【００２６】
一部の態様において、ＨＥＲ３結合剤はＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、例えば、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、及び３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む。他の態様では、ＨＥＲ３結合剤は、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号３６０、３８１、３８５、及び３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む。
【００２７】
いくつかの態様において、抗原結合タンパク質はＨＥＲ３の細胞外ドメインに対するものである。抗原結合タンパク質のＨＥＲ３への結合は、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少、ＨＥＲ３リン酸化の減少、細胞増殖の減少、細胞移動の抑制、及び、ＨＥＲ３のダウンレギュレーションの増加からなる群から選択される１以上の効果を有していてもよい。
【００２８】
いくつかの態様において、ＨＥＲ３に結合する抗原結合タンパク質は抗体である。抗体はモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、又はそれらの抗体断片であり得る。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、又は一本鎖抗体分子であり得る。例えば、抗体はＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−又はＩｇＧ４−タイプである。
【００２９】
一部の態様において、抗原結合タンパク質はエフェクター群に結合している。エフェクター群は、放射性同位元素若しくは放射性核種、毒素、又は治療若しくは化学療法剤群であり得る。治療若しくは化学療法剤群は、カリケアマイシン、アウリスタチンＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシン及びそれらの誘導体からなる群より選択されてもよい。
【００３０】
特に定義しない限り、本明細書中で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載したものと類似の又は同等の方法及び物質は、本発明を実施するために使用することができるが、適切な方法及び物質が以下に記載される。本明細書で挙げた刊行物、特許出願、特許及び他の文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。不一致の場合には、定義を含め本明細書の記載が優先される。さらに、物質、方法、及び実施例は単なる例示であって、限定することを意図したものではない。
【００３１】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細が添付の図面及び以下の説明に明記される。本発明のその他の特徴、目的及び利点は、以下の説明及び図面から、並びに特許請求の範囲から明らかとなるものである。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１Ａ及び１Ｂは、様々な細胞株におけるＥｒｂレベルを示したブロット写真である。図１Ｃは、ＰＳＡプロモーターに結合したルシフェラーゼコンストラクトでトランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞におけるルシフェラーゼ活性のプロッティンググラフであり、活性炭処理済血清（ＣＳＳ）含有培地中の培養物のアンドロゲン受容体（ＡＲ）転写活性への効果を示している。図１Ｄは、ＣＳＳ含有培地中でＬＮＣａＰ細胞を培養した後の様々なタンパク質の発現レベルを示すブロット写真である。
【図２】図２Ａは、ＬＮＣａＰ細胞におけるＨＥＲ２及びＨＥＲ３の過剰発現後のいくつかのタンパク質のレベルを示すブロット写真である。ＨＥＲ３の過剰発現はＨＥＲ２の発現を増加させた。図２Ｂは、コントロール細胞、ＨＥＲ２又はＨＥＲ３過剰発現細胞、及び、アンドロゲン非依存的（ＡＩ）亜系について、ＣＳＳ含有培地中でのＬＮＣａＰ増殖速度をプロットしたグラフである。ＨＥＲ２及びＨＥＲ３の両方がＣＳＳ含有培地中、ＬＮＣａＰ細胞を増殖させた。図２Ｃは、コントロールｓｉＲＮＡ又はＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡ存在下、ウシ胎児血清又はＣＳＳと共に培養したＬＮＣａＰ  ＡＩ亜系の増殖速度をプロットしたグラフである。ＡＩ亜系におけるＨＥＲ３阻害はＣＳＳ含有培地での細胞増殖を抑制した。図２ＤはＨＥＲ３過剰発現有り又は無し、Ａｋｔ阻害剤の存在下又は非存在下における、ＬＮＣａＰ細胞の増殖をプロットしたグラフである。ＨＥＲ３誘導性の細胞増殖増加はＡｋｔ阻害によって抑制された。
【図３Ａ】図３Ａは、ｍｏｃｋを導入したＬＮＣａＰ細胞及びＣ４−２細胞（コントロール細胞はＬＯＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２０００単独で処理した）、あるいは、スクランブルド二本鎖ｓｉＲＮＡ又はＨＥＲ３特異的な二本鎖ｓｉＲＮＡを導入した細胞のＳ期の割合をプロットしたグラフである。棒線は、３回の独立した実験から得た平均値±標準誤差を示す。＊は、ｓｉＲＮＡ導入細胞対ｍｏｃｋ導入細胞において、Ｐ＜０．０１であることを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、スクランブルド二本鎖ｓｉＲＮＡ又はＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡと共に培養されたＬＮＣａＰ細胞及びＣ４−２細胞中における、ＨＥＲ３タンパク質レベルを示す、ウエスタンブロットの写真、及びバンドの強度をプロットしたグラフである。ＨＥＲ２（ＨＥＲ２）をローディングコントロールとして用いた。棒線は、ＨＥＲ２で標準化したＨＥＲ３のバンドの強度を定量化したものについて、３回の独立した実験から得た平均値±標準偏差で示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、空ベクター（ｐＣＤＮＡ３）又はｐＣＤＮＡ３−ＨＥＲ３−ｍｙｃ  ｃＤＮＡの導入、及びビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標）としてアストラゼネカ、ウィルミントン、デラウェア州より販売されている、ＡＲアンタゴニスト）又はＤＭＳＯ（コントロール）による処理後の、ＬＮＣａＰ細胞の割合をプロットしたグラフである。棒線は、３回の実験から得た平均値±標準偏差を示す。＊は、ビカルタミド処理細胞対未処理細胞において、Ｐ＜０．０１であることを示す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、コントロール（空ｐＣＤＮＡ３ベクター）又はｐＣＤＮＡ３−ＨＥＲ３−ｍｙｃ  ｃＤＮＡを導入したＬＮＣａＰ細胞又はＣ４−２細胞におけるＨＥＲ３タンパク質レベルのウエスタンブロット写真及びプロットグラフであり、適切な細胞におけるＨＥＲ３の過剰発現が確認できる。
【図４】図４Ａ及び図４Ｂは、示されるようにＩｇＧ、Ｕ１−５９、セツキシマブ、パニツムマブ、ｃ２Ｃ４ートラスツズマブ、又はそれらの組み合わせで処理したＤＵ−１４５前立腺癌細胞の細胞溶解物を用いたウエスタンブロット写真である。ブロットは、１２８９番目及び１１９７番目のチロシンがリン酸化されたＨＥＲ３に対する抗体でプローブした。コントロールとしてアクチンを用いた。図４Ａ及び４Ｂは別々の実験を示す。
【図５】図５は、示されるようにＩｇＧ，Ｕ１−５９又は二つの異なる抗ＨＥＲ３抗体（Ｕ１−５３及びＵ１−４９）のいずれかと培養したＰＣ−３前立腺癌細胞のコロニー数をプロットしたグラフである。
【図６】図６Ａ及び６Ｂは、示されるようにヘレグリン、Ｕ１−５９、ＩｇＧコントロール、又はそれらの組み合わせと共に培養した、ラットＲＧ２グリオーマ細胞（図６Ａ）及びカニクイザルＪＣＴ−１．Ｐ３細胞（図６Ｂ）におけるリン酸化ＨＥＲ３レベルを示すウエスタンブロット写真である。β−アクチンをローディングのコントロールとして使用した。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
１．一般的な概要
本願は、ＢＰＨや前立腺癌などの前立腺疾患を治療することに関連する物質及び方法を提供するものである。本明細書で特に定義しない限り、本出願に関連して用いられる科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈から特に要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００３４】
一般的に、本明細書に記載される細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学、並びにハイブリダイゼーションに関連して用いられる命名及びそれらの技術は、当技術分野で周知であって、一般に使用されているものである。本出願に記載された方法及び技術は一般的に、他に指定のない限り、当技術分野で周知の従来方法に従って、本明細書を通して引用され説明される各種の一般文献及び特定文献に記載されるように、実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）；及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照されたい；各文献の開示内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当技術分野で一般的に実施されるように、又は本明細書に記載されるように、行うことができる。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、医化学及び薬化学に関連して用いられる用語と、それらの実験手順及び技術は、当技術分野で周知であって、一般に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬品の調製、製剤化、送達、及び患者の治療に関しては、標準的な技術が用いられる。
【００３５】
本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコール、及び試薬などに限定されず、様々に変化しうるものである。本明細書で使用される用語は単に特定の実施形態を説明するためのものであって、開示した内容の範囲（特許請求の範囲によってのみ規定される）を限定するものではない。
【００３６】
実施例における場合、又は他に示される場合を除き、本明細書で用いられる成分の量又は反応条件を表す数字は、あらゆる場合において用語「約」によって修飾されるものである。パーセンテージと共に用いられる場合、用語「約」は±１％を意味しうる。
【００３７】
２．前立腺及びＨＥＲファミリメンバー
前立腺癌治療のためのアンドロゲン除去療法（ＡＷＴ）は細胞死を含まないが、細胞サイクルアレストをもたらす。アンドロゲン非依存性の進展はそのようなアレストからの解放を引き起こし、アンドロゲン非存在下であっても細胞サイクルの進行をもたらす（Ａｇｕｓら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９１（２１  ）：１８６９−１８７６  （１９９９）参照）。本願で記載する実験のいくつかはＡＷＴ治療の間のアポトーシスの誘導がアンドロゲン非依存的細胞サイクル進行を抑制するか否かを見極めるために行われた。
【００３８】
アンドロゲン除去は、細胞生存を促進するセリンスレオニンキナーゼである（Ｇｒａｆｆら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５（３２）：２４５００−２４５０５（２０００）；ａｎｄ  Ｘｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３（２０）：７７８９−７７９４（２００６）参照）Ａｋｔのリン酸化（活性化）の増加を伴う（Ｍｉｋｈａｉｌｏｖａら、ｉｎ：Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｖ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ．３９７−４０５（２００８）；及びＭｕｒｉｌｌｏら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４２（１１）：４７９５−４８０５（２００１）参照）。Ａｋｔは必須のキナーゼであることから、Ａｋｔリン酸化の直接的な阻害はいくらかは毒性を引き起こすことがある（Ｐｏｓａｄａｓら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４（１０）：１１３３−１１３７（２００５）；ａｎｄ  Ｃｈｅｅら，Ｃｌｉｎ．Ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ５（７）：４３３−４３７（２００７）参照）。本発明者らは、アンドロゲン除去の間、Ａｋｔリン酸化を刺激する経路を阻害することで、細胞生存を抑制し、最終的にはアンドロゲン非依存性細胞の発生を抑制できるのではないかと仮説を立てた。
【００３９】
前立腺上皮細胞中のＡｋｔを活性化するＨＥＲファミリのタンパク質は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１及びＥｒｂＢ１としても知られている）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２及びｎｅｕとしても知られている）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３としても知られている）、及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４としても知られている）を含む（Ｏｌａｙｉｏｙｅら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９：３１５９−３１６７（２０００）参照）。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２は細胞増殖、分化、血管新生、及び生存を調整している（Ｙａｒｄｅｎ  ａｎｄ  Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２（２）：１２７−１３７（２００１）参照）。ＨＥＲ３及びＨＥＲ４についてはそこまで知られてはいないが、マイクロアレイ分析により前立腺癌において、正常前立腺よりもＨＥＲ３遺伝子の発現が増加することが明らかとされており（ＣｈａｉｂらＮｅｏｐｌａｓｉａ  ３（１）：４３−５２（２００１））、前立腺がん組織の免疫組織化学分析により、９０％を超える細胞質ＨＥＲ３染色が明らかとなっている（Ｋｏｕｍａｋｐａｙｉら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１２（９）：２７３０−２７３７  （２００６））。更に、動物モデルにおけるＨＥＲ３の活性化はＡＲを誘導し、前立腺癌の再発を促進させている（Ｇｒｅｇｏｒｙら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１（５）：１７０４−１７１２（２００５））。よって、増加したＨＥＲ３レベルは前立腺がんの進行を促進させ得る。
【００４０】
ＨＥＲファミリ受容体はリガンド結合により活性化され、二量体化し、リン酸化される。ＨＥＲ２以外の各レセプターは特定のリガンドを有する（Ｏｌａｙｉｏｙｅら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９（１３）：３１５９−３１６７  （２０００））。ＨＥＲ２それ自体は、リン酸化及び活性化に他のＥｒｂＢ受容体とのヘテロ二量体化を必要とする。ＨＥＲ３もキナーゼ活性のためには他のＥｒｂＢ受容体との二量体化を必要とする。それにもかかわらずＨＥＲ３は下流の標的と特異的に結合し、活性化する複数のリン酸化部位を持つ。特に、ＨＥＲ３は、Ａｋｔのリン酸化及び活性化に必要な上流のアクチベーターであるフォスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）との結合部位を６か所有する。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２は同様に、ＨＥＲ３非依存的にＡｋｔを活性化するが、この活性化は間接的であり、ＳｒｃキナーゼによるＰＩ３Ｋの転写促進を介している。
【００４１】
ＢＰＨは前立腺の肥大であり、生涯を通じて前立腺が継続的に成長することから高年齢の男性に非常によくみられる。ＢＰＨは非癌性ではあるが、尿路感染、膀胱結石、血尿、及び、極端な場合には腎不全等の泌尿器系の問題を引き起こし得る。ＢＰＨの治療は、軽症では減量及び運動又は医薬の使用等から中等度の症例では過剰に成長した組織の除去、あるいは重症では外科的手術まで幅広く行われている。
【００４２】
３．ＨＥＲ３結合剤
本明細書に記載するように、ＨＥＲ３に結合する薬剤は、抗原結合タンパク質（抗体など）を含むがこれらに限らない生物学的化合物、又は低分子チロシンキナーゼ阻害剤であり得る。本明細書中で用いる「抗原結合タンパク質」又は「結合タンパク質」とは、特定の標的抗原、例えばＨＥＲファミリのメンバー（例えば、ＨＥＲ３）と特異的に結合するタンパク質を意味する。抗原結合タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が＜１０−８Ｍであるとき、その標的抗原と「特異的に結合する」とされる。抗体は、ＫＤが＜５×１０−９Ｍであるときに「高い親和性」で、そしてＫＤが＜５×１０−１０Ｍであるときに「非常に高い親和性」で、抗原と特異的に結合する。一実施形態では、抗体が＜１０−９ＭのＫＤ及び約１×１０−４／秒のオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有する。一実施形態では、オフ速度が約１×１０５／秒である。他の実施形態では、抗体がＨＥＲファミリの特定のメンバート約１０−８Ｍ〜１０−１０ＭのＫＤで結合し、さらに他の実施形態では、それがＫＤ＜２×１０−１０Ｍで結合する。さらに、本明細書中で用いる低分子化合物は、セリン、スレオニン又はチロシンキナーゼを含む１種以上のタンパク質キナーゼの酵素活性を阻害するように化学合成された低分子量化合物である。
【００４３】
ＨＥＲ３結合剤が生物学的化合物である場合、その薬剤は（抗ＨＥＲ３抗体などの）抗原結合タンパク質であってもよい。したがって、ＨＥＲ３関連疾患を治療する組成物及び方法において使用するために本明細書が提供するものは、抗ＨＥＲ３抗体を含むＨＥＲ結合タンパク質である。いくつかの実施形態ではＨＥＲ３を標的とする抗体はＨＥＲ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する抗体であり得る。例えば、本明細書に記載される抗ＨＥＲ３抗体は、ＨＥＲ３の細胞外部分にある少なくとも１つのエピトープと相互作用することができる。該エピトープは、アミノ末端Ｌ１ドメイン（１９−１８４アミノ酸）、Ｓ１（１８５−３２７アミノ酸）及びＳ２（５００−６３２アミノ酸）システインリッチドメイン、これら２つのシステインリッチドメインに挟まれたＬ２ドメイン（３２８−４９９アミノ酸）、又はＨＥＲ３ドメインの組合せに位置することができる。エピト−プはまた、これに限定されるものではないが、Ｌ１の一部とＳ１の一部により構成されるエピトープのように、ドメインの組合せに位置してもよい。
【００４４】
ＨＥＲ３結合タンパク質は、そのＨＥＲ３への結合がＨＥＲ３介在シグナル伝達を減少させることによってさらに特徴づけられてもよい。ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少は、例えば、細胞表面からのＨＥＲ３分子の少なくとも部分的な消失をもたらすＨＥＲ３のダウンレギュレーションによって、あるいは、細胞表面上のＨＥＲ３を実質的に不活性な形態（すなわち、非安定化形態に比べて低いシグナル伝達を示す形態）で安定化することによって、引き起こされてもよい。あるいは、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少はまた、リガンド又はＨＥＲファミリの別のメンバーのＨＥＲ３への結合に影響を与える（例えば、減少させる又は阻害する）ことによって引き起こされてもよい。例えば、ＨＥＲ３介在シグナル伝達の減少は、他のＨＥＲファミリメンバー（例えば、ＥＧＦ−Ｒ）と共にＨＥＲ３を含有する二量体の形成が減少することによって引き起こされてもよい。
【００４５】
ＨＥＲ３結合剤は、抗体様の結合活性を有する（例えば、抗ＨＥＲ３抗体と類似した活性を有する）骨格タンパク質、又は抗体、すなわち抗ＨＥＲ３抗体であり得る。本明細書中で用いる場合、用語「骨格タンパク質」（ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）とは、アミノ酸の挿入、置換又は欠失が高度に許容される、露出した表面領域を有するポリペプチド又はタンパク質を意味する。本方法に従って使用できる骨格タンパク質の例としては、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来のプロテインＡ、オオモンシロチョウ（Ｐｉｅｒｉｓ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）由来のビリン結合タンパク質又は他のリポカリン類、アンキリン反復タンパク質、及びヒトフィブロネクチンが挙げられる（Ｂｉｎｚ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：４５９−６９に概説される）。骨格タンパク質の工学的操作は、安定的に折りたたまれたタンパク質の構造骨組の上又は中に親和性機能をグラフト化し又は組み込むことで行われる。親和性機能とは、本発明においては、タンパク質結合親和性を意味する。骨格は結合特異性を付与するアミノ酸配列から構造的に分離することができる。一般的に、そのような人工親和性試薬の開発に適すると考えられるタンパク質は、合理的に、又は最も一般的には、コンビナトリアルのタンパク質工学的手法によって取得することができ、例えば、当分野で公知の技術である、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでディスプレイされた人工骨格ライブラリー中の結合薬剤について、ＨＥＲ３（精製タンパク質又は細胞表面にディスプレイされたタンパク質のいずれか）に対するパニング（ｐａｎｎｉｎｇ）によって得ることができる（例えば、Ｓｋｅｒｒａ（２０００）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇ．１３：１６７−８７；及びＢｉｎｚ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，前掲参照）。さらに、抗体様の結合活性をもつ骨格タンパク質は、骨格ドメインを含むアクセプター・ポリペプチドから誘導することができ、この骨格ドメインにドナー・ポリペプチドの結合ドメインをグラフト化して、アクセプター・ポリペプチドを含む骨格ドメインにドナー・ポリペプチドの結合特異性を付与することができる。挿入される結合ドメインは、例えば、抗体、特に抗ＨＥＲ３抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）であり得る。挿入は、例えば、ポリペプチド合成、コードアミノ酸の核酸合成を含めた当業者に公知の種々の方法、さらには当業者に周知の各種組換え法によって、達成することができる。
【００４６】
用語「抗体」には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６）、キメラ抗体（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ８１：６８５１−６８５５）、少なくとも２つの抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、又はそれらの抗体断片が含まれる。用語「抗体断片」は、上記抗体の任意の部分、例えばその抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ９０：６４４４−６４４８）、又は一本鎖抗体分子（Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ：  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ２６９−３１５（１９９４））、及びＨＥＲ３に結合する所望の能力を示す限りその他の断片が含まれる。
【００４７】
さらに、本明細書で用いる用語「抗体」には、抗体又は天然に存在する種々の抗体の改変サブドメインを含む抗体様分子が含まれる。これらの抗体様分子は、ラクダ科動物などの天然源から得られるか（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら（２００１）Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２）、又はヒト、ラクダ科動物若しくは他の種からのライブラリーのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイを通して得られる（Ｈｏｌｔら（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：４８４−９０）、ＶＨのみ又はＶＬのみのドメインなどの、単一ドメイン抗体であり得る。ある態様において、抗原結合タンパク質のポリペプチド構造は、これに限定されるものではないが、ミニボディ、合成抗体（「抗体模倣物」と呼ばれることがある）、ヒト抗体、抗体融合物（「抗体複合体」と呼ばれることがある）及びそれぞれのそれらの断片を含む抗体に基づいていてもよい。
【００４８】
「Ｆｖ断片」は、完全な抗原認識・結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが非共有結合で堅く結びついた二量体から成る。この構造においては、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を形成している。一緒になって、６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与している。しかし、単一可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、完全な結合部位よりも低い親和性であるものの、抗原を認識して、それと結合する能力を有する。「Ｆａｂ断片」は、さらに軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。「Ｆａｂ断片」は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数個の残基（抗体ヒンジ領域からの１個以上のシステインを含む）の付加されている「Ｆａｂ’断片」と相違する。「Ｆ（ａｂ’）２断片」はもともと「Ｆａｂ’断片」のペアとして作り出されたもので、それらの間にヒンジシステインを有する。パパイン又はペプシン消化などの、このような抗体断片の作製方法は当業者に公知である。
【００４９】
抗体は、これらに限定されるものではないが、ＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−、ＩｇＧ４−、ＩｇＭ１−及びＩｇＭ２−タイプなどの、ＩｇＧ−又はＩｇＭ−タイプを含む、ＩｇＡ−、ＩｇＤ−、ＩｇＥ−、ＩｇＧ−又はＩｇＭ−タイプであり得る。例えば、いくつかの場合において、抗体はＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−又はＩｇＧ４−タイプである。
【００５０】
いくつかの点で、例えばＨＥＲ３に対する治療薬候補としての抗体の生成との関連において、抗体は補体を固定して補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）に関与することが望ましい。そのようなことが可能な抗体のアイソタイプがいくつか存在し、例えば、マウスＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ３、及びヒトＩｇＡが含まれる。生成された抗体は当初そのようなアイソタイプをもつ必要がないと理解されるものであり、むしろ生成された抗体はどのようなアイソタイプであってもよい。抗体は、当技術分野で周知の分子生物学的手法を用いて、適切な発現ベクター中の分子クローニングされた定常領域遺伝子又はｃＤＮＡに、分子クローニングされたＶ領域遺伝子又はｃＤＮＡを付加し、その後、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内でその抗体を発現させることによって、アイソタイプスイッチを行うことができる。アイソタイプスイッチを行った抗体はまた、天然に存在する種々の抗体よりも優れたＣＤＣを有するように分子的に操作して（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１−２５７５）、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で組換え発現させた、Ｆｃ領域をもつこともできる。そうした技法には、他の方法に加えて、直接組換え法（例えば、米国特許第４，８１６，３９７号参照）、細胞−細胞融合法（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号及び第６，２０７，４１８号参照）の使用が含まれる。細胞−細胞融合法では、いずれか所望のアイソタイプの重鎖を有するミエローマ又は他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製され、そして軽鎖を有する別のミエローマ又は他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製される。これらの細胞がその後融合されて、完全な抗体を発現する細胞株が単離される。一例として、ＨＥＲ３抗原への所望の結合性を有するヒト抗ＨＥＲ３  ＩｇＧ４抗体は、同じ可変領域（抗体の特異性と若干の親和性を規定する）を保持させながら、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ３アイソタイプを生成するように、容易にアイソタイプスイッチを行うことができる。そのような分子は、補体を固定する能力があり、ＣＤＣに関与できる可能性がある。
【００５１】
さらに、抗体はまた、単球やナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのエフェクター細胞上のＦｃ受容体に結合して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与することができてもよい。そのようなことが可能な抗体アイソタイプがいくつか存在し、例えば、これに限定するものではないが、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ１及びヒトＩｇＧ３が含まれる。生成された抗体は当初そのようなアイソタイプをもつ必要がないと理解されるものであり、むしろ生成された抗体はどのようなアイソタイプであってもよい。抗体は、当技術分野で周知の分子生物学的手法を用いて、適切な発現ベクター中の分子クローニングされた定常領域遺伝子又はｃＤＮＡに、分子クローニングされたＶ領域遺伝子又はｃＤＮＡを付加し、その後当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で抗体を発現させることによって、アイソタイプスイッチを行うことができる。アイソタイプスイッチを行った抗体はまた、天然に存在する種々の抗体よりも優れたＡＤＣＣをもつように分子的に改変させて（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４）、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で組換え発現させた、Ｆｃ領域をもつことができる。そうした技法には、他の方法に加えて、直接組換え法（例えば、米国特許第４，８１６，３９７号参照）、細胞−細胞融合法（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号及び第６，２０７，４１８号参照）の使用が含まれる。細胞−細胞融合法では、いずれか所望のアイソタイプの重鎖を有するミエローマ又は他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製され、そして軽鎖を有する別のミエローマ又は他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製される。これらの細胞がその後融合されて、完全な抗体を発現する細胞株が単離される。一例として、ＨＥＲ３抗原への所望の結合性を有するヒト抗ＨＥＲ３  ＩｇＧ４抗体は、同じ可変領域（抗体の特異性と若干の親和性を規定する）を保持させながら、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ３アイソタイプを生成するように、容易にアイソタイプスイッチを行うことができる。そのような分子はその後、エフェクター細胞上のＦｃγＲに結合して、ＡＤＣＣに関与できる可能性がある。
【００５２】
本明細書中の表１は、ＨＥＲ３に対する抗体に含めることができる、いくつかのＣＤＲのアミノ酸配列を提供する。いくつかの実施形態においてＨＥＲ３を標的とする単離された結合タンパク質は、（ａ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６及び２３０に示されるＣＤＲＨ１、（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６及び２３０に示されるＣＤＲＨ２、並びに（ｃ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６及び２３０に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列、並びに／あるいは、（ｄ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８及び２３２に示されるＣＤＲＬ１、（ｅ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８及び２３２に示されるＣＤＲＬ２、並びに（ｆ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８及び２３２に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。  ここで参照するすべての配列は米国特許第７７０５１３０における配列表に示されている。これらの配列は参照によりその全てが本願に組み込まれる。
【００５３】
【表１】
2013540694.tif 000002
2013540694.tif 000003
2013540694.tif 000004
【００５４】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３を標的とする単離された結合タンパク質は、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６及び２３０からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列、並びに／あるいは、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８及び２３２からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。ここで参照する配列は米国特許第７７０５１３０における配列表に示されており、参照によりその全てが本願に組み込まれる。
【００５５】
いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ３抗体は、配列番号２及び４、６及び８、１０及び１２、１４及び１６、１８及び２０、２２及び２４、２６及び２８、３０及び３２、３６及び３８、４２及び４４、４６及び４８、５０及び５２、５４及び５６、６０及び５８、６２及び６４、６６及び６８、７０及び７２、７４及び７６、７８及び８２、８０及び８２、８４及び８６、８８及び９０、９２及び９４、９６及び９８、１００及び１０２、１０４及び１０６、１０８及び１１０、１１２及び１１４、１１６及び１１８、１２２及び１２４、１２６及び１２８、１３０及び１３２、１３４及び１３６、１３８及び１４０、１４２及び１４４、１４６及び１４８、１５０及び１５２、１５４及び１５６、１５８及び１６０、１６２及び１６４、１６６及び１６８、１７０及び１７２、１７４及び１７６、１７８及び１８０、１８２及び１８４、１８６及び１８８、１９０及び１９２、１９４及び１９６、１９８及び２００、２０２及び２０４、２０６及び２０８、２１０及び２１２、２１４及び２１６、２１８及び２２０、２２２及び２２４、２２６及び２２８、２３０及び２３２に示される重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列、あるいは、配列番号３４、４０、６０、６２及び１２０のいずれか１つに示される重鎖アミノ酸配列、又は配列番号５８及び６４のいずれかに示される軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。ここで参照する配列は米国特許第７７０５１３０における配列表に示されており、参照によりその全てが本願に組み込まれる。
【００５６】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３を標的とするタンパク質は、抗体様の結合活性をもつ（例えば、抗ＨＥＲ３抗体と類似の活性をもつ）骨格タンパク質、又は抗体、例えば抗ＨＥＲ３抗体であり得る。抗ＨＥＲ３抗体は、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、及びＵ１−６２と示す抗体、又はいずれか１つの前記抗体の少なくとも１つの重鎖若しくは軽鎖を有する抗体からなる群より選択することができる。Ｕ１−４９（配列番号４２／４４）、Ｕ１−５３（配列番号５４／５６）、及びＵ１−５９（配列番号７０／７２）で示す抗体、又はいずれか１つのこれらの抗体の少なくとも１つの重鎖若しくは軽鎖を有する抗体が、特に有用であり得る。ここで参照するすべての配列は米国特許第７７０５１３０における配列表に示されており、参照によりその全てが本願に組み込まれる。
【００５７】
本明細書で提供されるＨＥＲ３結合タンパク質のアミノ酸配列は、従来の２０種類のアミノ酸に限定されないべきである（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版，Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｇｒｅｎ編，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１）参照；その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、アミノ酸には、従来の２０種類のアミノ酸の立体異性体（例：Ｄ−アミノ酸）、非天然アミノ酸、例えばＩ−，Ｉ−ジ置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非従来型アミノ酸が含まれる。非従来型アミノ酸（本明細書で提供される結合タンパク質の適当な構成成分でもあり得る）の例としては、４−ヒドロキシプロリン、Ｋ−カルボキシグルタミン酸、Ｍ−Ｎ，Ｎ，Ｎートリメチルリシン、Ｍ−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、並びに他の同様のアミノ酸及びイミノ酸、例えば４−ヒドロキシプロリンが含まれる。
【００５８】
さらに、配列番号１〜３９０（本明細書に添付して提出された付属書類に記載される）に示されるアミノ酸配列のわずかな改変は、そのアミノ酸配列の改変体が配列番号１〜３９０に示される配列の少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、又は９９％）を維持するという条件で、本願に包含されるものである。改変はフレームワーク領域の内部（すなわち、ＣＤＲの外側）、ＣＤＲの内部、又はフレームワーク領域とＣＤＲの内部で起こり得る。いくつかの実施形態では、配列番号１〜３９０に示されるアミノ酸配列の改変、すなわち、少なくとも１個のアミノ酸の欠失、挿入及び／又は置換は、機能ドメインの境界付近であり得る。構造ドメインと機能ドメインは、塩基配列及び／又はアミノ酸配列データを、公開の又は私有の配列データベースと比較することによって同定することができる。コンピュータ化された比較方法を用いて、構造及び／又は機能が知られている他の結合タンパク質に存在する配列モチーフ又は予測タンパク質立体構造ドメインを同定することができる。既知の三次元構造に折りたためるタンパク質配列を同定する方法は当技術分野で公知である（例えば、Ｂｏｗｉｅら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４；Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編，Ｗ  Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｔｏｏｚｅ編，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ（１９９１）；及びＴｈｏｒｎｔｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５参照；これらの文献の内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、当業者であれば、本明細書に記載のタンパク質に応じて、構造及び機能ドメインを特定するために使用する配列モチーフ及び立体構造を認識することが可能である。
【００５９】
配列番号１〜３９０に示されるアミノ酸配列の改変には、結合タンパク質における、タンパク質分解若しくは酸化に対する感受性の低下、グリコシル化パターンの変更、結合親和性の変更、又は、他の物理化学的若しくは機能的特性を付与し若しくは変更させるような改変を含めることができる。特に、保存的アミノ酸置換を検討することができる。保存的置換とは、アミノ酸側鎖によって関連づけられるアミノ酸ファミリ内で起きる置換である。アミノ酸ファミリには次のものが含まれる：酸性ファミリ＝アスパラギン酸、グルタミン酸；塩基性ファミリ＝リシン、アルギニン、ヒスチジン；非極性ファミリ＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニンートリプトファン；及び非荷電極性ファミリ＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。別のファミリには次のものが含まれる：脂肪族ヒドロキシファミリ＝セリン及びスレオニン；アミド含有ファミリ＝アスパラギン及びグルタミン；脂肪族ファミリ＝アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；並びに芳香族ファミリ＝フェニルアラニンートリプトファン、及びチロシン。例えば、ロイシンのイソロイシン若しくはバリンによる、アスパラギン酸のグルタミン酸による、スレオニンのセリンによる単独置換、又は、あるアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸による同様の置換は、特にその置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、生じる結合タンパク質の結合性又は特性に大きな影響を及ぼさないと合理的に予想することができる。しかし、他のすべての可能なアミノ酸置換もまた、本明細書に包含される。アミノ酸改変がＨＥＲ３のシグナル伝達を減少させる機能性ＨＥＲ３結合タンパク質をもたらすかどうかは、生じる結合タンパク質の特異的ＨＥＲ３結合活性をＥＬＩＳＡ若しくはＦＡＣＳ、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ若しくはｉｎ  ｖｉｖｏ機能アッセイで分析することによって容易に確認することができる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３結合タンパク質はエフェクター群に結合させることができる。そのような結合タンパク質は治療用途に特に有用であり得る。本明細書中で用いる用語「エフェクター群」は、細胞傷害性群、例えば放射性同位元素若しくは放射性核種、毒素、治療薬群又は当技術分野で知られた他のエフェクター群を意味する。適したエフェクター群の例としては、放射性同位元素若しくは放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）又は非放射性同位元素（例えば、２Ｄ）、カリケアマイシン、アウリスタチン等のドラスタチン類似体、並びに、ゲルダナマイシン及びメイタンシン誘導体（ＤＭ１を含む）等の化学療法剤が挙げられる。よって、場合によっては、当該群は、標識群とエフェクター群の両方を兼ねることができる。例えば、これにはトキシン、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、又はＡＤＣとして用いるのに適した他の化合物（抗体医薬結合物）が含まれる。エフェクター群をポリペプチド又は糖ポリペプチド（例えば、抗体）に結合させる各種方法が当技術分野では知られており、本明細書に記載の組成物及び方法の製造及び実施に使用することができる。いくつかの実施形態では、例えば潜在的な立体障害を減らすために、エフェクター群と結合タンパク質とを、様々な長さのスペーサーアームによって結合させることが有利であり得る。
【００６１】
本発明はまた、単離されたＨＥＲ３結合タンパク質を調製する方法であって、該タンパク質を発現する宿主細胞から該タンパク質を調製するステップを含む方法に関する。使用できる宿主細胞には、これに限定されるものではないが、ハイブリドーマ、真核細胞（例えば、ハムスター、ウサギ、ラット、ブタ又はマウス細胞などの哺乳動物細胞）、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又はピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞）、原核細胞（例えば、大腸菌細胞）、及び結合タンパク質の生産に用いられる他の細胞が含まれる。骨格タンパク質や抗体などの結合タンパク質を宿主細胞から調製して単離する各種方法が当技術分野で知られており、本明細書に記載の方法を実施する際に使用することができる。さらに、結合タンパク質断片（例えば、骨格タンパク質断片又は抗体断片）を調製するための方法、例えばパパイン若しくはペプシン消化、現代的なクローニング技術、一本鎖抗体分子を調整する技法（Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，前掲）及びダイアボディを調製する技法（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，前掲）もまた、当業者に公知であり、本明細書に記載の方法を実施する際に使用することができる。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３結合タンパク質は、該タンパク質を分泌するハイブリドーマから調製することができる。例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５を参照されたい。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３結合タンパク質は、宿主細胞内での該結合タンパク質の発現を最適化及び／又は増幅し、該結合タンパク質を宿主細胞から単離することによって、組換え技術的に調製することができる。この目的のため、宿主細胞は、ＨＥＲ３結合タンパク質をコードするＤＮＡ（例えば、ベクター）で形質転換又はトランスフェクトされ、該結合タンパク質の産生に適する条件下で培養される。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい。有用な宿主細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ／０ミエローマ細胞、ヒト胚性腎２９３細胞、大腸菌細胞、及びサッカロミセス・セレビシエ細胞が挙げられる。
【００６４】
抗体であるＨＥＲ３結合タンパク質は、完全ヒト抗体を作るように遺伝子操作された動物から、又はバクテリオファージ、酵母、リボソーム若しくは大腸菌内に作製された抗体ディスプレイライブラリーから、調製することができる。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；Ｆｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０；Ｇｒｏｖｅｓ  ａｎｄ  Ｏｓｂｏｕｒｎ（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．５：１２５−１３５；及びＪｏｓｔｏｃｋ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ（２００５）Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  ８：１２７−１３３を参照されたい。これらの文献の内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体は、完全ヒト抗体又はヒト化抗体であり得る。ヒト抗体は、マウス又はラット可変領域及び／又は定常領域を保有する抗体などの異種抗体に関連した特定の問題を回避する。異種由来タンパク質の存在は、患者による該抗体に対する免疫応答を引き出し、その後該抗体の急速なクリアランス、抗体の中和による治療的有用性の低下、及び／又は、重症の、命を脅かすことさえある、アレルギー反応につながることがある。マウス又はラット由来の抗体の使用を回避するため、げっ歯類、他の哺乳類又は動物が完全ヒト抗体を産生するように、当該げっ歯類又は他の哺乳類若しくは動物に機能的なヒト抗体遺伝子座を導入することによって、完全ヒト抗体を作製することができる。
【００６６】
完全ヒト抗体を作製するための１つの方法は、２４５ｋｂ及び１９０ｋｂのサイズのヒト重鎖遺伝子座及びκ軽鎖遺伝子座の生殖系列配置断片を含むように操作されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統のマウスを利用することである。他のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス系統は、９８０ｋｂ及び８００ｋｂのサイズのヒト重鎖遺伝子座及びκ軽鎖遺伝子座の生殖系列配置断片を含む。さらに他のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス系統は、９８０ｋｂ及び８００ｋｂのサイズのヒト重鎖遺伝子座及びκ軽鎖遺伝子座の生殖系列配置断片に加えて、７４０ｋｂのサイズの生殖系列配置の完全ヒトλ軽鎖遺伝子座を含む。Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；及びＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５を参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統はＡｍｇｅｎ社（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）から入手可能である。
【００６７】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスの作出は、２００２年１１月２０日に出願された米国特許出願公開第２００３／０２１７３７３号；米国特許第５，９３９，５９８号、第６，０７５，１８１号、第６，１１４，５９８号、第６，１５０，５８４号、第６，１６２，９６３号、第６，６７３，９８６号、第６，８３３，２６８号、及び第７，４３５，８７１号；並びに日本国特許第３０６８１８０Ｂ２号、第３０６８５０６Ｂ２号、及び第３０６８５０７Ｂ２号において、さらに論述されて説明されている。また、ヨーロッパ特許第ＥＰ０４６３１５１号、国際公開公報ＷＯ９４／０２６０２、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９８／２４８９３、及びＷＯ００／７６３１０も参照されたい。上で引用した特許出願公開公報、及び特許のそれぞれの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６８】
あるいはまた、「ミニ遺伝子座」（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）のアプローチを用いることが可能である。ミニ遺伝子座のアプローチでは、外因性Ｉｇ遺伝子座がＩｇ遺伝子座からの小片（個々の遺伝子）を含めることによって模倣される。よって、１個以上のＶＨ遺伝子、１個以上のＤＨ遺伝子、１個以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域、及び第２の定常領域（例えば、γ定常領域）が、動物に挿入するための構築物内に形成される。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５４５，８０７号、第５，５６９，８２５号、第５，５９１，６６９号、第５，６１２，２０５号、第５，６２５，１２６号、第５，６２５，８２５号、第５，６３３，４２５号、第５，６４３，７６３号、第５，６６１，０１６号、第５，７２１，３６７号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，２１５号、第５，７８９，６５０号、第５，８１４，３１８号、第５，８７４，２９９号、第５，８７７，３９７号、第５，９８１，１７５号、第６，０２３，０１０号、第６，２５５，４５８号に記載されており、これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。さらに、ＥＰ特許第０５４６０７３号、並びに国際公開公報ＷＯ  ９２／０３９１８、ＷＯ  ９２／２２６４５、ＷＯ  ９２／２２６４７、ＷＯ  ９２／２２６７０、ＷＯ  ９３／１２２２７、ＷＯ  ９４／００５６９、ＷＯ  ９４／２５５８５、ＷＯ  ９６／１４４３６、ＷＯ  ９７／１３８５２、及びＷＯ  ９８／２４８８４も参照されたい；これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６９】
ヒト抗体はまた、微小核融合（ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ）により、大きな染色体片又は全染色体が導入されたマウスから生成することもできる。ＥＰ特許出願第７７３２８８号及び第８４３９６１号を参照されたい。これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。さらに、Ｋｉｒｉｎ社のＴｃマウスとＭｅｄａｒｅｘ社のミニローカス（Ｈｕｍａｂ）マウスの交配の結果得られたＫＭ（商標）マウスが作出されている。これらのマウスはＫｉｒｉｎマウスのＨＣトランスクロモソームとＭｅｄａｒｅｘマウスのκ鎖トランスジーンを保有する（Ｉｓｈｉｄａら，Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ４：９１−１０２（２００２）参照）。
【００７０】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法によっても得ることができる。適切な例には、これに限定されるものではないが、ファージディスプレイ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ社、Ｄｙａｘ社、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ社、Ｘｏｍａ社、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ社、Ａｌｅｘｉｏｎ社（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ社）、及びＡｆｆｉｍｅｄ社によって商品化）、リボソームディスプレイ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社によって商品化）、酵母ディスプレイなどが含まれる。
【００７１】
本明細書に記載されるように、抗体は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を用いて、後述するように調製した。この種のマウスはヒト免疫グロブリン分子及び抗体を産生することができ、そしてマウス免疫グロブリン分子及び抗体の産生能を欠損している。これを達成するために利用できる技術は、本明細書に開示した特許、出願、及び文献に記載されている。例えば、マウス及び当該マウスからの抗体のトランスジェニック生産は、現在取り下げられている１９９６年１２月３日に出願された米国特許出願第０８／７５９，６２０号、並びに１９９８年６月１１日に公開された国際公開公報ＷＯ９８／２４８９３及び２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ００／７６３１０に開示されており、これらの開示内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。また、Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６も参照されたい。その開示内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
本明細書に記載する技術を用いて、様々な抗原に対する完全ヒトモノクローナル抗体を生産することが可能である。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統のマウスを対象のＨＥＲ３抗原（例えば、ＨＥＲ３又はその断片）で免疫して、抗体を発現するマウスからリンパ球（例えば、Ｂ細胞）を回収し、回収した細胞株を骨髄型細胞株と融合させて、不死化ハイブリドーマ細胞株を得ることができる。これらのハイブリドーマ細胞株をスクリーニング及び選択して、対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定することができる。ＨＥＲ３に特異的な抗体を産生する複数のハイブリドーマ細胞株を作製するための方法が本明細書において提供されている。さらに、このような抗体の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド及びアミノ酸配列解析を含む、そのような細胞株により産生された抗体を特性解析するための方法が本明細書において提供されている。
【００７３】
一般的に、後述される融合ハイブリドーマにより産生される抗体は、完全ヒトκ軽鎖を有するヒトＩｇＧ１重鎖であるが、本明細書に記載する一部の抗体はＩｇＧ１重鎖のみならずヒトＩｇＧ４重鎖を保有する。抗体はまた、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３を含む他のヒトアイソタイプのものであってよい。抗体は一般に高い親和性を有し、固相及び細胞ベースの技法で測定したとき、典型的には約１０−６〜約１０−１３Ｍ又はそれ以下のＫＤを有する。
【００７４】
本発明はまた、本明細書に記載されたＨＥＲ３結合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供する。本明細書中で用いる用語「単離された核酸分子」とは、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成起源、又はこれらのいくつかの組合せのポリヌクレオチドであって、（１）「単離されたポリヌクレオチド」と一緒に自然界で見いだされるポリヌクレオチドの全部又は一部と結合していない、（２）自然界では連結されていないポリヌクレオチドと作動可能に連結されている、又は（３）より大きな配列の一部として自然界では存在しない、ポリヌクレオチドをさす。さらに、本明細書中で用いる用語「核酸分子」は、リボヌクレオチド若しくはデオキシヌクレオチドのいずれか、又はいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態（例えば、修飾又は置換された糖鎖基等を有するヌクレオチドなど）である、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドのポリマー形態を意味する。この用語はまた、ＤＮＡの一本鎖及び二本鎖形態をも含む。
【００７５】
いくつかの実施形態において、核酸分子は制御配列に作動可能に連結させることができる。本明細書中で用いる用語「制御配列」とは、それらが連結されるコード配列の発現及びプロセッシングを生じさせるために必要なポリヌクレオチド配列を意味する。このような制御配列の性質は宿主生物に応じて異なる。原核生物では、このような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、このような制御配列は、プロモータート転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、最小限においても、その存在が発現及びプロセッシングに不可欠なすべての成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列を含むこともできる。さらに、本明細書中で用いる用語「作動可能に連結された」とは、意図した形でそのように記載された成分を機能させる関係にある、そうした成分の位置関係をさす。さらに、コード配列を作動可能となるように連結されている発現制御配列は、コード配列の発現が該発現制御配列に適合する条件下で起こるように連結されている。
【００７６】
また、本明細書で開示される結合タンパク質をコードする核酸分子を含むベクターが本明細書で提供される。核酸分子は制御配列に作動可能に連結させることができる。さらに、ベクターは複製起点又は選択マーカー遺伝子を追加で含んでもよい。使用できるベクタートしては、例えば、プラスミド、コスミド、ファージ、及びウイルスが含まれる。
【００７７】
本発明はまた、本明細書に記載された核酸分子又はベクターで形質転換された宿主細胞をも提供する。形質転換は、ポリヌクレオチドをウイルス（又はウイルスベクター）にパッケージングして、そのウイルス（又はベクター）を用いて宿主細胞に形質導入する方法を含む、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するためのあらゆる公知の方法により、又は米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号、及び第４，９５９，４５５号に示されるような、当技術分野で公知のトランスフェクション法により実施することができる。異種ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は当技術分野で周知であり、これに限定されるものではないが、デキストラン介在トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、ポリブレン介在トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム内へのポリヌクレオチドのカプセル化、及び核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが含まれる。使用できる宿主細胞の例には、ハイブリドーマ、真核細胞（例えば、ハムスター、ウサギ、ラット、ブタ、マウスなどの哺乳動物細胞、又は他の動物細胞）、植物細胞（例えばートモロコシ細胞及びタバコ細胞）、真菌細胞（例えば、Ｓ．セレビシエ細胞及びＰ．パストリス細胞）、原核細胞（例えば、大腸菌）、及び抗体産生のために当技術分野で用いられる他の細胞が含まれる。発現用の宿主として利用できる哺乳動物細胞株は当技術分野で周知であり、例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手できる多くの不死化細胞株が含まれる。これらには、これに限定されるものではないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２細胞）、及び多くの他の細胞株が含まれる。
【００７８】
他の実施形態において、ＨＥＲ３に結合する薬剤は低分子化合物である。そのような化合物は、例えば低分子の物理的又はバーチャルライブラリーを用いて、同定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、有用な低分子化合物が、既知のＨＥＲ３阻害剤と、ＨＥＲ３の活性及び不活性状態の構造モデルに基づいた、コンセンサス・バーチャルスクリーニング法を用いて同定され得る。利用できそうな化合物は構造的新規性と望ましい物理化学的性質についてさらに解析することができる。バーチャルスクリーニングによって同定された候補化合物は、例えばＨＥＲ３を過剰発現する細胞の増殖を阻害する能力について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験することができる。他の実施形態では、有用な低分子化合物を低分子化合物のライブラリーから同定することができ、この場合（例えば、ＨＥＲ３を過剰発現する細胞において）ＨＥＲ３に結合する能力、及び／又はＨＥＲ３の活性を阻害する能力について大多数の化合物をスクリーニングするハイスループット法を用いる。低分子ＨＥＲ３阻害剤は、例えば標準的な化学合成法を用いて、合成可能である。
【００７９】
さらに別の実施形態において、ＨＥＲ３に結合する薬剤は、ＨＥＲ３の発現を妨げるｓｉＲＮＡであってもよい。ｓｉＲＮＡの一例はＥＺＮ−３９２０（ＨＥＲ３  ｍＲＮＡを標的とするアンチセンス）（Ｓａｎｔａｒｉｓ  Ｐｈａｒｍａ社，Ｈｏｅｒｓｈｏｌｍ，デンマーク）である。
【００８０】
さらに他の実施形態において、ＨＥＲ３に結合する薬剤は天然物質であり得る。例えば、海洋由来の薬剤であるカハラリド（Ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）Ｆは、ＨＥＲ３タンパク質発現とＡＫＴシグナル伝達を下方制御することによってＨＥＲ３発癌シグナル伝達（Ｊｉｍｅｎｏら（２００６）Ｊ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄ．４：３参照）を阻害することが示唆されている（Ｊａｎｍａａｔら（２００５）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６８：５０２−５１０参照）。
【００８１】
４．追加の薬剤
ある場合において、本願が提供する前立腺治療のための組成物及び方法はＨＥＲ３と結合する第１の薬剤と組み合わせて第２の薬剤を含有する。ある場合において、該第２の薬剤は、少なくとも一つの、ＦＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ２又はＨＥＲ４等のＨＥＲファミリーの他のメンバート結合しかつ／又はそれを阻害することができる。その様な第２の薬剤は、これに限定されるものではないが、生物学的医薬（例えば、該ＨＥＲファミリーのメンバート特異的に結合する抗体などの結合タンパク質）、ＨＥＲ３以外の（又はＨＥＲ３に加えて）ＨＥＲファミリーの少なくとも一つのメンバート結合し、かつ／又はその活性を変える（例えば、阻害する）低分子化合物、ｓｉＲＮＡ、又は天然物質であってもよい。本明細書で用いられる場合、「ＨＥＲファミリーの他のメンバー」及び「他のＨＥＲファミリーメンバー」とは、ＨＥＲファミリーメンバーであって、ＨＥＲ３でないものを示す。このような例として、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ２、及びＨＥＲ４を含むが、「ＨＥＲファミリーメンバー」はまだ同定されていないファミリーメンバーをも含む。
【００８２】
該第２の薬剤は、他のＨＥＲファミリメンバーに対する直接的な効果又は間接的な効果のいずれかによって、該ＨＥＲファミリメンバーの活性を変える（例えば、活性を増加させ又は減少させる）ことができる。しかし、本明細書で提供されるすべての第２の薬剤はＨＥＲファミリの機能と活性に影響を与えるものである。いくつかの場合には、例えば、第２の薬剤は、別のＨＥＲファミリメンバー（例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ２、又はＨＥＲ４）に結合できる抗体、又は他のＨＥＲファミリメンバーの活性に影響を与える別の分子に結合できる抗体であり得る。そのような抗体は、例えば、他のＨＥＲファミリメンバーの細胞外ドメイン又はそのいずれか他の適当なドメイン（例えば、キナーゼドメイン又は二量体形成領域）を標的とすることができる。
【００８３】
第２の薬剤は、別のＨＥＲファミリメンバーへのその影響がＨＥＲ介在シグナル伝達を減少させる点でさらに特徴づけられる。ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、例えば、標的ＨＥＲファミリメンバーの下方制御により、細胞からのＨＥＲ分子の少なくとも部分的な消失をもたらすことによって、又は実質的に不活性な形態でＨＥＲファミリメンバーを安定化することによって、引き起こされてもよい。あるいはまた、ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、ＨＥＲファミリメンバーへのリガンドの結合、ＨＥＲ３へのＨＥＲファミリメンバーの結合、ＨＥＲ２へのＧＲＢ２の結合、又は、ＳＨＣへのＧＲＢ２の結合に影響を与える（例えば、減少させ又は阻害する）ことによって、あるいは受容体チロシンリン酸化、ＡＫＴリン酸化、ＰＹＫ２チロシンリン酸化、若しくはＥＲＫ２リン酸化、又はＨＥＲファミリが介在するシグナル伝達経路に影響を与える他の細胞成分を阻害することによって、引き起こされてもよい。例えば、ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、ＨＥＲ３と別のＨＥＲファミリメンバー（例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ２、又はＨＥＲ４）を含む二量体の形成を減少させることによって引き起こされてもよい。その機能の背後にある作用機序にかかわらず、第２の薬剤は、ＨＥＲ３を標的とする第１の薬剤の効果を増幅させることに役立つものである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、別のＨＥＲファミリメンバーに結合する薬剤、又は別のＨＥＲファミリメンバーの活性に影響を与える別のタンパク質に結合する薬剤は、抗体様の結合活性を有する（例えば、抗−ＨＥＲ３抗体に類似した活性を有する）骨格タンパク質又は抗体（例えば、抗ＥＧＦ−Ｒ、抗ＨＥＲ２、又は抗ＨＥＲ４抗体）であり得る。この文脈における骨格タンパク質及び抗体は、ＨＥＲ３を標的とする薬剤について上で定義して説明したとおりである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３に結合する第１の薬剤と、別のＨＥＲファミリメンバーに結合し、かつ／又はそれを阻害する第２の薬剤とは、二重特異性抗体のような１つの化合物に組み合わされる。
【００８６】
また、上述したように、他のＨＥＲファミリメンバーに結合する、又は別のＨＥＲファミリメンバーの活性に影響を与える他のタンパク質に結合するタンパク質のアミノ酸配列は、従来の２０種類のアミノ酸に限定されない。さらに、本明細書に記載するＨＥＲ３結合タンパク質の場合と同様に、別のＨＥＲファミリメンバーに結合するか、さもなくばその活性に影響を与える薬剤は、エフェクター群に結合させることができる。
【００８７】
本発明はまた、例えば、他のＨＥＲファミリメンバーに結合可能な単離されたタンパク質（例えば、抗体）を調製する方法に関する。このような方法は、ＨＥＲ３結合タンパク質に関して上述において説明した方法を含む。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ抗ＨＥＲ、抗ＨＥＲ２、又は抗ＨＥＲ４抗体）は、完全ヒト抗体を作るように遺伝子操作された動物から、又はバクテリオファージ、酵母、リボソーム若しくは大腸菌内に作製された抗体ディスプレイライブラリーから、調製することができる。さらに、別のＨＥＲファミリメンバーを直接又は間接的に標的とする抗体は、上述したように、完全ヒト抗体又はヒト化抗体であり得る。
【００８８】
また、本願は、他のＨＥＲファミリメンバーに結合できるか、又は他のＨＥＲファミリメンバーの活性に影響を与える他のタンパク質に結合できる、タンパク質を発現する単離された核酸分子（例えば、ベクター）を提供する。そのような核酸分子内のタンパク質コード配列は、上述したように、１つ以上の制御配列と作動可能に連結され得る。さらに、核酸分子は、上述したように、宿主細胞に形質転換又はトランスフェクションすることができる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、第２の薬剤は、ＨＥＲ３以外の（又はＨＥＲ３に加えて）ＨＥＲファミリメンバーの活性に（直接又は間接的に）影響を及ぼすことができる低分子チロシンキナーゼ阻害剤である。そのような阻害剤は、例えば低分子の物理的又はバーチャルライブラリーを用いて、同定され得る。いくつかの実施形態では、例えば、有用な低分子化合物が、既知のチロシンキナーゼ阻害剤と、活性及び不活性状態のＨＥＲファミリメンバーの構造モデルに基づいた、コンセンサス・バーチャルスクリーニング法を用いて同定され得る。潜在的に関心があると最初に同定された化合物は、さらに構造的新規性と望ましい物理化学的性質について解析することができる。バーチャルスクリーニングによって同定された候補化合物は、例えばＨＥＲ３以外のＨＥＲファミリメンバーを過剰発現する細胞の増殖を阻害する能力について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験することができる。他の実施形態では、有用な低分子チロシンキナーゼ阻害剤は、（例えば、ＨＥＲタンパク質を過剰発現する細胞において）ＨＥＲ３以外の１種以上のＨＥＲファミリメンバーに結合する及び／又はその活性を阻害する能力について大多数の化合物をスクリーニングするハイスループット法を用いて、低分子化合物のライブラリーから同定することができる。低分子チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば標準的な化学合成法を用いて合成可能である。
【００９０】
ＥＧＦ−Ｒ（ＨＥＲ）の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ＡＥＥ−７８８（ノバルティス社，バーゼル，スイス）、ＢＩＢＷ−２９９２（Ｎ−［４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（ベーリンガーインゲルハイム社，インゲルハイム，ドイツ）、ＢＭＳ−５９９６２６（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＢＭＳ−６９０５１４（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、カネルチニブ二塩酸塩（Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド二塩酸塩）（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＣＮＸ−２２２（Ａｖｉｌａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、ＣＵＤＣ−１０１（Ｃｕｒｉｓ社，米国特許第７，５４７，７８１号）、ジメルセプト（Ｄｉｍｅｒｃｅｐｔ）（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ラパチニブ（ジトシル酸塩水和物（Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン  ビス（４−メチルベンゼンスルホナート）一水和物）（グラクソスミスクライン社，ロンドン，イギリス）、ＭＰ−４１２（田辺三菱製薬，大阪，日本）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（ワイス社，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、Ｓ−２２２６１１（塩野義製薬，大阪，日本）、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）（４−Ｎ−［３−クロロ−４−（チアゾール２−イルメトキシ）フェニル］−６−Ｎ−［（４Ｒ）−４−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾール２−イル］キナゾリン−４，６−ジアミン  ビス（４−メチルベンゼンスルホナート）（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、ＡＧＴ−２０００（ＡｒｍｅＧｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，Ｓａｎｔａ  Ｍｏｎｉｃａ，ＣＡ）、ＡＺＤ−４７６９（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス）、ＢＩＢＸ−１３８２（ベーリンガーインゲルハイム社，インゲルハイム，ドイツ）、ＣＧＰ−５２４１１（４，５−ビス（フェニルアミノ）−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン）（ノバルティス社，バーゼル，スイス）、ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）（ワイス社，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ＣＰ−２９２５９７（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＤＡＢ−１０５９（田辺三菱製薬，大阪，日本）、エルロチニブ塩酸塩（４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−キナゾリン塩酸塩）（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，米国特許第５，７４７，４��８号）、ゲフィチニブ（４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン）（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス，米国特許第５，８２１，２４６号）、ＨＭＰＬ−８１３（Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ  Ｃｈｉｎａ  ＭｅｄｉＴｅｃｈ社，香港）、ＭＤＰ−０１（Ｍｅｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ社，Ｐｌａｎ−Ｌｅｓ−Ｏｕａｔｅｓ，スイス）、ＭＴ−０６２（Ｍｅｄｉｓｙｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、ＯＮＣ−１０１（Ｏｎｃａｌｉｓ社，Ｓｃｈｌｉｅｒｅｎ，スイス）、ＰＤ−１５３０３５（４−（３−ブロモフェニルアミノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス）、ＰＤ−１６９５４０（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ペリチニブ（ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ）（ワイス  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ＰＦ−２９９８０４（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＰＫＩ−１６６（４−（Ｒ）−フェネチルアミノ−６−（ヒドロキシル）フェニル−７Ｈ−ピロロ［２．３−ｄ］−ピリミジン）（ノバルティス社，バーゼル，スイス）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）（Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン）（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス）、ＶＧＡ−１１０２（大正製薬，東京，日本）、ＷＨＩ−Ｐ１５４（４−（３’−ブロモ−４’−ヒドロキシフェニル）−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン）、ＺＤ−１８３８（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス）、セツキシマブ（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、パニツムマブ（Ａｍｇｅｎ社，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）。
【００９１】
ＨＥＲ２の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ＡＥＥ−７８８（ノバルティス社，バーゼル，スイス）、ＡＲＲＹ−３３３７８６（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、ＡＲＲＹ−３８０（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、ＢＩＢＷ−２９９２（Ｎ−［４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（ベーリンガーインゲルハイム社，インゲルハイム，ドイツ）、ＢＭＳ−５９９６２６（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＢＭＳ−６９０５１４（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、カルネチニブ（ｃａｒｎｅｔｉｎｉｂ）二塩酸塩（Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド二塩酸塩）（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＣＮＦ−２０１（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ社，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＣＮＸ−２２２（Ａｖｉｌａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、ＣＰ−６５４５７７（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、ＣＰ−７２４７１４（２−メトキシ−Ｎ−［３−［４−［３−メチル−４−（６−メチル−ピリジン−３−イルオキシ）フェニル−アミノ］キナゾリン−６−イル］−Ｅ−アリル］アセトアミド）（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、ＣＵＤＣ−１０１（Ｃｕｒｉｓ社，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，米国特許第７，５４７，７８１号）、Ｄ−６９４９１（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、ジメルセプト（Ｄｉｍｅｒｃｅｐｔ）（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ＥＨＴ−１０２（ＥｘｏｎＨｉｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，パリ，フランス）、ＨＥＲ２アンタゴニスト（Ｃｅｎｔｇｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＨＥＲ／ｎｅｕワクチン（Ｃｏｒｉｘａ社，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）、ハ−ザイム（Ｈｅｒｚｙｍｅ）（Ｓｉｒｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＨｕＭａｘ−Ｈｅｒ２（Ｇｅｎｍａｂ社，コペンハーゲン，デンマ−ク）、ＩＮＳＭ−１８（Ｉｎｓｍｅｄ社，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡ）、ラパチニブ（ジトシル酸塩水和物（Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチル−スルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン  ビス（４−メチルベンゼンスルホナート）一水和物）（グラクソスミスクライン社，ロンドン，イギリス）、ＭＰ−４１２（田辺三菱製薬，大阪，日本）、ｍｕ−４−Ｄ−５（ジェネンテック社，Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，ＣＡ）、ムブリチニブ（ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）（１−［４−［４−［［２−［（Ｅ）−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］オキサゾール４−イル］メトキシ］フェニル］ブチル］−１Ｈ−１，２，３ートリアゾール）（武田薬品工業，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（ワイス社，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、ペルツズマブ（ジェネンテック社，Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，ＣＡ）、ＰＸ−１０３．１（Ｐｈａｒｍｅｘａ社，コペンハーゲン，デンマ−ク）、ＰＸ−１０３．２（Ｐｈａｒｍｅｘａ社，コペンハーゲン，デンマ−ク）、ＰＸ−１０４．１（Ｐｈａｒｍｅｘａ社，コペンハーゲン，デンマ−ク）、Ｓ−２２２６１１（塩野義製薬，大阪，日本）、ＴＡＫ−２８５（武田薬品工業，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）ートラスツズマブ（ジェネンテック社，Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，ＣＡ）ートラスツズマブ−ＤＭ１（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ社，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）（４−Ｎ−［３−クロロ−４−（チアゾール２−イルメトキシ）フェニル］−６−Ｎ−［（４Ｒ）−４−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾール２−イル］キナゾリン−４，６−ジアミン  ビス（４−メチルベンゼンスルホナート））（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、ＶＭ−２０６（ＶｉｒｏＭｅｄ社，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）。
【００９２】
ＨＥＲ４の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ジメルセプト（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］アミノ］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（ワイス社，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）。
【００９３】
他のＨＥＲファミリメンバ−に結合し、かつ／又は、その活性を変更する薬剤であって、本明細書で提供される組成物及び方法で使用できる薬剤の特定の非限定的な例は以下に記載する通りである。
【００９４】
ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）として市販されているパニツムマブ（Ａｍｇｅｎ社，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）は、ＥＧＦ−Ｒに特異的な完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００９５】
ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）として市販されているエルロチニブ（ジェネンテック社，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ；ロッシュ社，バーゼル，スイス）は、ＮＳＣＬＣ、膵臓癌、及びいくつかの他のタイプの癌を治療するために使用されている医薬である。エルロチニブはＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼを特異的に標的とし、該レセプターのＡＴＰ結合サイトに可逆的に結合する。
【００９６】
ラパチニブ（グラクソスミスクライン社，ロンドン，イギリス）は、乳癌などの固形癌の治療のための経口活性低分子である。ラパチニブはＥＧＦ−Ｒ及びＨＥＲ２／ｎｅｕ（ヒトＥＧＦ−Ｒタイプ２）に関連するチロシンキナーゼ活性を阻害するデュアルチロシンキナーゼ阻害剤である。
【００９７】
トラスツズマブは、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（ジェネンテック社，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）としても知られたＨＥＲ２／ｎｅｕを阻害するヒト化モノクローナル抗体である。
【００９８】
Ｔ−ＤＭ１（ジェネンテック社，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；ロッシュ）はメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）由来の抗微小管薬としての効果がある（ＤＭ１）に科学的に結合したトラスツズマブを含む、抗体−医薬融合体である。メイタンシンは遊離薬物として使用されてきており、例えば乳癌及び肺癌患者において、その効果が示されてきている。非還元性チオエーテルＭＣＣリンカーがＴ−ＤＭ１で使用されており、これによりトラスツズマブとＤＭ１との間の安定な結合をもたらし、暴露を長期間化し、かつ、活性を維持する間のＴ−ＤＭ１の毒性を低減させる。
【００９９】
ペルツズマブは、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）（ジェネンテック社，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）として市販されており、ｃ２Ｃ４としても知られているＨＥＲ２のＨＥＲ受容体との二量体化を阻害するモノクローナル抗体である。
【０１００】
セツキシマブは、ＰＥＲＴＵＺＵＭＡＢ（登録商標）（ＩｍＣｌｏｎｅ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；及びブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）として市販されており、ＥＧＦ−Ｒに結合し、阻害するキメラ（マウス／ヒト）モノクローナル抗体である。
【０１０１】
ゲフィチニブは、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）（アストラゼネカ社，ロンドン，イギリス；及びＴｅｖａ社，Ｐｅｔａｈ  Ｔｉｋｖａ，イスラエル）として市販されており、エロニチブと同様な方法で作用する医薬である。ゲフェチニブはＥＧＦ−Ｒのチロシンキナーゼドメインを選択的に阻害する。
【０１０２】
ネラチニブ（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、はＨＥＲ２受容体チロシンキナーゼ阻害剤である。狙値二部はＨＥＲ２受容体に不可逆的に結合し、それにより細胞内の自己リン酸化を低減させるが、これは受容体のＡＴＰ結合ポケットのシステイン残基を標的とすることによるものと思われる。ネラニチブによる細胞の治療は、下流のシグナル変換イベント及び細胞周期調節経路を阻害し、細胞周期のＧ１−Ｓ期移行で停止させ、最終的に細胞増殖を減少させる。加えて、ネラニチブはＥＧＦ−Ｒキナーゼ及びＥＧＦ−Ｒ依存性細胞の増殖を阻害する。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための方法は、例えばＢＰＨ及び前立腺癌を含む前立腺疾患を治療するために、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、若しくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、若しくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３、若しくはＵ１−５９を上記薬剤のいずれかと組み合わせて（例えば、同時に又は別々に）投与することを含んでよく、あるいは、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、若しくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、若しくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３、若しくはＵ１−５９を上記薬剤のいずれか及び他の薬剤と組み合わせて（例えば、同時に又は別々に）投与することを含んでよい。上述のリストに記載された抗体のＣＤＲの配列の同定については、表１及び配列表、及び米国特許第７，７０５，１３０号（参照によりその全体が本願に引用される）を参照されたい。
【０１０４】
ある実施形態において、第２の薬剤は化学療法剤であってもよい。例えば、微小管刺激薬（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｓｔｉｍｕｌａｎｔ）として作用する薬剤としては、以下が挙げられる：ＮＫ−１０５（パクリタキセル）［（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナート］（ナノキャリア社，千葉，日本）、ミラタキセル（ｍｉｌａｔａｘｅｌ）（１，１０β−ジヒドロキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシ−３ζ−タキサ−１１−エン−２α，４，７β，１３α−テトライル  ４−アセテート  ２−ベンゾアート  １３−［（２Ｒ，３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（フラン−２−イル）−２−ヒドロキシプロパノアート］７−プロパノアート）（Ｔａｘｏｌｏｇ社，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）、ラウリマリド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）Ａ（３−（１−メチルイミダゾール４−イル）−２（Ｅ）−プロペン酸（１Ｒ，４ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１２ａＲ）−１１−メトキシカルボニル−７，１０−エポキシ−１０−ヒドロキシ−１−イソプロピル−４，７−ジメチル−１，２，４ａ，５，６，７，１０，１２ａ−オクタヒドロベンゾシクロドデセン−６−イルエステル）（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、シモタキセル（ｓｉｍｏｔａｘｅｌ）（（２ａＲ，４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ，９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ［３，４］ベンズ［１，２−ｂ］オキセート６，９，１２，１２ｂ−テトライル１２ｂ−アセタート１２−ベンゾアート  ６−シクロペンタンカルボキシラート９−［（２Ｒ，３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−［［（１−メチルエトキシ）カルボニル］アミノ］−３−（チオフェン−２−イル）プロパノアート］）（Ｔａｘｏｌｏｇ社，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）、ＳＹＮ−２００１（ＣＬＬ  Ｐｈａｒｍａ社，Ｎｉｃｅ，フランス）、ＴＬ−３１０（Ｔａｘｏｌｏｇ社，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）、ＴＬ１８３６（Ｔａｘｏｌｏｇ社，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）（２’−［（ジメチルアミノ）メチル］−１−ヒドロキシ−５β，２０−エポキシ−９α，１０α−ジヒドロ［１，３］ジオキソロ［４’，５’：９，１０］タキサ−１１−エン−２α，４，１３αートリイル４−アセタート２−ベンゾアート１３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−（３−フルオロピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロパノアート）（第一三共，東京，日本）、ＴＬ−１８９２（Ｔａｘｏｌｏｇ社，Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）、ＴＰＩ−２８７（（２’Ｒ，３’Ｓ）��２’−ヒドロキシ−Ｎ−カルボキシ−３’−アミノ−５’−メチル−ヘキサノイック，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，１３エステル５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，９α，１０α，１３α−ヘプタヒドロキシ−４，１０−ジアセタート２−ベンゾアート７，９−アクロレインアセタ−ル−タキサ−１１−エン（Ｔａｐｅｓｔｒｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、オルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）（２ａＲ−［２ａα，４β，４ａβ，６β，９α（２Ｒ，３Ｓ），１０β，１１β，１２α，１２ａα，１２ｂα］−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−ヒドロキシ−５−メチル−ヘキサン酸  ６，１２ｂ−ジアセトキシ−１２−ベンゾイルオキシ−１０，１１−カルボニルジオキシ−４−ヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−７，１１−メタノシクロデカ［３，４］ベンズ［１，２−ｂ］オキセタ−９−イルエステル）（Ｉｎｄｅｎａ社，Ｍｉｌａｎ，イタリア）、パクリタキセル・ポリグルメックス（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｏｌｉｇｌｕｍｅｘ）（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ベンゾイルアミノ）−１−［［［（２ａＲ，４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ，９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）−６，１２ｂ−ビス（アセチルオキシ）−１２−（ベンゾイルオキシ）−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ［３，４］ベンゾ［１，２−ｂ］オキセタ−９−イル］オキシ］カルボニル］−２−フェニルエチルで部分γエステル化されたＬ−ピログルタミルポリ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸）（Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）、タンパク結合パクリタキセル小粒子（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｂｏｕｎｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）（パクリタキセル：（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナート）（Ａｂｒａｘｉｓ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ社，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）、パクリタキセル（ＮＣＩ）（（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナート）（ＮＣＩ（ＮＩＨ））、パクリタキセル（ＮｅｏＰｈａｒｍ社，Ｌａｋｅ  Ｂｌｕｆｆ，ＩＬ）（（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミ���−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナート）（ＮｅｏＰｈａｒｍ社，Ｌａｋｅ  Ｂｌｕｆｆ，ＩＬ）、パツピロン（ｐａｔｕｐｉｌｏｎｅ）（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２，１６−ペンタメチル−３−［（１Ｅ）−１−（２−メチル−１，３−チアゾール４−イル）プロパ−１−エン−２−イル］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン）（米国特許公開公報第２００３／０１０４６２５号，ノバルティス社，バーゼル，スイス）、ＰＥＧ−パクリタキセル（Ｅｎｚｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）、ドセタキセル水和物（（−）−（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４−アセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７，１０ートリヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナート三水和物）（サノフィアベンティス社，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）、エリュテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）（３−（１−メチルイミダゾール４−イル）−２（Ｅ）−プロペン酸（１Ｒ，４ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１２ａＲ）−１１−（２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アラビノピラノシルオキシメチル）−７，１０−エポキシ−１−イソプロピル−１０−メトキシ−４，７−ジメチル−１，２，４ａ，５，６，７，１０，１２ａ−オクタヒドロベンゾシクロドデセン−６−イルエステル）（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＩＤＮ−５３９０（Ｉｎｄｅｎａ社，Ｍｉｌａｎ，イタリア）、イクサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２，１６−ペンタメチル−３−［（１Ｅ）−１−メチル−２−（２−メチルチアゾール４−イル）エテニル］−１７−オキサ−４−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン）（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＫＯＳ−１５８４（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、ＫＯＳ−１８０３（１７−イソ−オキサゾール  ２６ートリフルオロ−９，１０−デヒドロ−１２，１３−デスオキシ−エポチロンＢ）（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、ＫＯＳ−８６２（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社）；米国特許第６，２０４，３８８号及び第６，３０３，３４２号）、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）（１−ヒドロキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシ−７β，１９−シクロタキサ−１１−エン−２α，４，１０β，１３α−テトライル４，１０−ジアセタート２−ベンゾアート１３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノアート］無水物）（サノフィアベンティス社，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ；国際公開公報ＷＯ９５／２���９６１及びＷＯ９６／１２５９）、ＡＮＧ−１００５（アンジオペプ（Ａｎｇｉｏｐｅｐ）−２／パクリタキセルコンジュゲート）（ＡｎｇｉｏＣｈｅｍ社，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，カナダ；米国特許第７，５５７，１８２号）、ＢＭＳ−１８４４７６（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；欧州特許出願公開第６３９，５７７号）、ＢＭＳ−１８８７９７（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＢＭＳ−２７５１８３（３’−ｔｅｒｔ−ブチル−３’−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−４−デアセチル−３’−デフェニル−３’−Ｎ−デベンゾイル−４−Ｏ−メトキシカルボニル−パクリタキセル）（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＢＭＳ−３１０７０５（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、ＢＭＳ−７５３４９３（ブリストルマイヤーズスクイブ社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、カバジタキセル（ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）（１−ヒドロキシ−７β，１０β−ジメトキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシタキサ−１１−エン−２α，４，１３αートリイル  ４−アセタート  ２−ベンゾアート  １３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノアート］）（サノフィアベンティス社，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）、ＤＨＡ−パクリタキセル（Ｐｒｏｔａｒｇａ社，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ，タクサオプレキシン（ＴＡＸＯＰＲＥＸＩＮ：登録商標））、ジセルモリド（ｄｉｓｅｒｍｏｌｉｄｅ）（［３Ｓ−［３α，４β，５β，６α（２Ｒ＊，３Ｚ，５Ｒ＊，６Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｚ，１１Ｒ＊，１２Ｓ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１５Ｒ＊，１６Ｅ）］］−６−［１４［（アミノカルボニル）オキシ］−２，６，１２ートリヒドロキシ−５，７，９，１１，１３，１５−ヘキサメチル−３，８，１６，１８−ノナデカテトラエニル］テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−３，５−ジメチル−２Ｈ−ピラン−２−オン）（ノバルティス社，バーゼル，スイス；米国特許第４９３９１６８号及び第５６８１８４７号）。これらの微小管刺激薬の一部はそれらの化学構造中にタキサン環をもっている；こうした
タキサン環をもつ化合物は本明細書において「タキサン系」と呼ぶ。
【０１０５】
アントラサイクリンとしては、以下のようなアクチノマイシンが挙げられる：例えばアクチノマイシンＤ（ダクチノマイシン：２−アミノ−Ｎ，Ｎ’−ビス［（６Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１８ａＳ）−６，１３−ジイソプロピル−２，５，９ートリメチル−１，４，７，１１，１４−ペンタオキソヘキサデカヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｉ］［１，４，７，１０，１３］オキサテトラアザシクロヘキサデシン−１０−イル］−４，６−ジメチル−３−オキソ−３Ｈ−フェノキサジン−１，９−ジカルボキサミド）、ブレオマイシン（ブレオマイシン塩酸塩：（３−｛［（２’−｛（５Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−１５−｛６−アミノ−２−［（１Ｓ）−３−アミノ−１−｛［（２Ｓ）−２，３−ジアミノ−３−オキソプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］−５−メチルピリミジン−４−イル｝−１３−［｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−４−（カルバモイルオキシ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］オキシ｝−４，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］オキシ｝（１Ｈ−イミダゾール５−イル）メチル］−９−ヒドロキシ−５−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−８，１０−ジメチル−４，７，１２，１５−テトラオキソ−３，６，１１，１４−テトラアザペンタデカ−１−イル｝−２，４’−ビ−１，３−チアゾール４−イル）カルボニル］アミノ｝プロピル）（ジメチル）スルホニウム）、ダウノルビシン塩酸塩（ダウノルビシン：（８Ｓ−ｃｉｓ）−８−アセチル−１０−（（３−アミノ−２，３，６ートリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１ートリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）、ドキソルビシン塩酸塩（ドキソルビシン：（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６ートリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１ートリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）（Ａｌｚａ社，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）、イダルビシン塩酸塩（（７Ｓ，９Ｓ）−９−アセチル−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，７，９，１１−テトラヒドロキシ−７−Ｏ−（２，３，６ートリデオキシ−３−アミノ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）（ファイザー社，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；米国特許第４，０４６，８７８号及び第４，４７１，０５２号）、及びマイトマイシン（（１ａＳ，８Ｓ，８ａＲ，８ｂＲ）−６−アミノ−４，７−ジオキソ−１，１ａ，２，８，８ａ，８ｂ−ヘキサヒドロ−８ａ−メトキシ−５−メチルアジリノ［２，３：３，４］ピロロ［１，２−α］インド−ル−８−イルメチルカルバメート）（協和発酵キリン，東京，日本）。
【０１０６】
シスプラチンとゲムシタビンは更なる化学療法剤の例である。シスプラチン又はシス−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ）は、様々なタイプの癌の治療に用いられる白金ベ−スの薬剤である。シスプラチン白金錯体は生体内で反応し、ＤＮＡに結合してＤＮＡの架橋を引き起こし、最終的にアポト−シスを誘発する。ゲムシタビンは、デオキシシチジンの２’炭素上の水素原子がフッ素原子で置換されたヌクレオシド類似体である。フルオロウラシルや他のピリミジン類似体と同様に、ゲムシタビンはＤＮＡ複製中にシチジンに取って代わり、その「欠陥」ヌクレオシドにはさらなるヌクレオシドが結合できないことから、結果としてアポト−シスを引き起こし、腫瘍増殖を停止させる。ゲムシタビンはＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）からジェムザ−ル（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））として販売されている。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、及び／又は転移性乳癌を含む乳癌である癌を治療するための、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤及びシスプラチン又はゲムシタビン及び他の薬剤との併用であり得る。
【０１０７】
カペシタビン（ペンチル［１−（３，４−ジヒドロキシ−５−メチル−テトラヒドロフラン−２−イル）−５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−イル］アミノメタノアート、ゼロ−ダ（Ｘｅｌｏｄａ）、ロッシュ社）は、経口投与される化学療法剤である。カペシタビンは腫瘍内で５−フルオロウラシルに酵素的に変換されるプロドラッグであり、ＤＮＡ合成を阻害することで腫瘍組織の増殖を遅らせる。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、癌を治療するためのＵ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤（例えば、ラパチニブ）及びカペシタビンとの併用であり得る。ここで、このような癌は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、及び／又は転移性乳癌を含む乳癌である。いくつかの場合に、こうした併用投与は、例えばアントラサイクリン又はタキサンによる先行する治療が失敗した後で、行うことができる。
【０１０８】
ドセタキセル（（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，５，２０−エポキシ−１，２，４，７，１０，１３−ヘキサヒドロキシタキサ−１１−エン−９−オン４−アセタート２−ベンゾアートとの１３−エステルの三水和物）及びパクリタキセル（（２α，４α，５β，７β，１０β，１３α）−４，１０−ビス（アセチルオキシ）−１３−｛［（２Ｒ，３Ｓ）−３−（ベンゾイルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノイル］オキシ｝−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソ−５，２０−エポキシタキサ−１１−エン−２−イル）は化学療法剤である。ドセタキセルはサノフィアベンティス社からタキソテ−ル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）として販売されている。パクリタキセルはブリストルマイヤーズスクイブ社からタキソ−ル（Ｔａｘｏｌ）として販売されている。タキソ−ルの製剤では、パクリタキセルがデリバリ−剤としてのクレモホ−ルＥＬとエタノ−ルに溶解される。パクリタキセルをアルブミンに結合させた製剤は、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）として販売されている。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、癌を治療するためのＵ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤（例えばトラスツズマブ）及びドセタキセル又はパクリタキセル及び他の薬剤（例えばトラスツズマブ）との併用であり得る。ここで、このような癌は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、及び／又は転移性乳癌を含む乳癌である。
【０１０９】
ドキソルビシン塩酸塩リポソ−ム注射液は、ドキソルビシン塩酸塩を含むリポソ−ム製剤、ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）として販売されている。いくつかの実施形態において、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、及び扁平上皮細胞癌などの癌を治療するための、ＨＥＲ３関連疾患の併用療法は、パクリタキセル又は白金ベ−スの化学療法剤などの１種以上の他の薬剤を含む又は含まない、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤及びドキソルビシン塩酸塩リポソ−ム注射液とを併用して投与することを含むことができる。
【０１１０】
イリノテカン塩酸塩水和物（イリノテカン：（＋）−（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１−２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩三水和物）（ヤクルト社、ＥＰ公開第１３７，１４５号及び第５６，６９２号）はカンプト（Ｃａｍｐｔｏ）、カンプトサ−ル（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）及びイルカン（Ｉｒｃａｎ）として販売されている。いくつかの態様において、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、及び扁平上皮細胞癌などの癌を治療するための、ＨＥＲ３関連疾患の併用療法は、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と、本明細書に記載の第２の薬剤及びイリノテカン塩酸塩水和物との併用投与、あるいは、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３又はＵ１−５９と、本明細書に記載の第２の薬剤と、イリノテカン塩酸塩水和物と、１種以上の他の薬剤、例えば５−ＦＵ（５’−デオキシ−５−フルオロウリジン又は５−フルオロ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン）、ホリナートカルシウム（Ｎ−［４−［［（２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸カルシウム塩（１：１））、若しくはレボホリナートカルシウム（（−）−カルシウムＮ−［４−［［［（６Ｓ）−２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル］メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタマート）及びこれらの組合せとの併用投与を含むことができる。
【０１１１】
以下でさらに説明するように、これら及び他の薬剤は本明細書に提供される組成物に含めることができ、様々な異なる形態、組合せ及び投与量で投与することができる。
【０１１２】
５．組成物
本明細書に記載のＨＥＲ３結合剤は、ＢＰＨ又は前立腺癌などの前立腺疾患を治療するための組成物に含ませることができる。よって、本願は、例えばＢＰＨ又は前立腺癌を治療するための医薬の製造におけるＨＥＲ３結合剤の使用を提供するものである。組成物はさらに、例えば、第２の薬剤（他のＨＥＲファミリーメンバーに結合する薬剤、若しくは化学療法剤）、並びに、１以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／又はアジュバントを含むことができる。本明細書中で用いる用語「医薬組成物」とは、患者に適切に投与されたときに、所望の治療効果を引き出すことができる化合物又は組成物を意味する（Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ，Ｐａｒｋｅｒ編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））。本明細書で提供される医薬組成物の効力は一般的に、少なくとも１種の結合タンパク質のＨＥＲ３への結合に基づいている。いくつかの実施形態では、この結合がＨＥＲ３介在シグナル伝達を減少させることができる。
【０１１３】
「薬学的に許容される担体」（本明細書では「賦形剤」又は「キャリア」ともいう）は、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤、安定化剤、又は１種以上の治療用化合物（例えば、ＨＥＲ結合タンパク質）を被験者に送達するための他のいずれかの薬理学的に不活性なビヒクルであり、用いる投与量及び濃度でそれにさらされる細胞又は哺乳動物に対し無毒性のものである。薬学的に許容される担体は、液体又は固体とすることができ、所定の医薬組成物の１種以上の治療用化合物や他の任意の成分と一緒にしたとき、所望の容積、稠度、及び他の適切な輸送及び化学的性質を提供するように、予定した投与様式を考慮に入れて、選択することができる。アミノ酸との有害反応を起こさない、通常の薬学的に許容される担体としては、例えば、これに限定するものではないが、以下が挙げられる：水、生理食塩水、結合剤（例：ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロ−ス）、充填剤（例：乳糖及び他の糖類、ゼラチン、又は硫酸カルシウム）、滑沢剤（例：デンプン、ポリエチレングリコ−ル、又は酢酸ナトリウム）、崩壊剤（例：デンプン又はデンプングリコ−ル酸ナトリウム）、及び湿潤剤（例：ラウリル硫酸ナトリウム）。薬学的に許容される担体にはさらに、水性ｐＨ緩衝溶液又はリポソ−ム（哺乳動物への薬剤の送達に有用な、様々な種類の脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤から構成される小胞）が含まれる。薬学的に許容される担体のさらなる例としては、以下が挙げられる：緩衝剤、例えばリン酸、クエン酸、及び他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマ−、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン；単糖類、二糖類、及び他の炭水化物（グルコ−ス、マンノ−ス又はデキストリンを含む）；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコ−ル、例えばマンニト−ル又はソルビト−ル；塩形成対イオン、例えばナトリウム；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコ−ル（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）。
【０１１４】
リポソ−ムは、親油性材料から形成された膜と、送達される組成物を含有することができる水性内部とを有する小胞である。リポソ−ムは、その特異性及びそれが提供する作用持続期間のため、薬物送達の観点において特に有用である。リポソ−ム組成物は、例えば、ホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロ−ル、又はジオレオイルホスファチジルエタノ−ルアミンから形成することができる。リポフェクチン（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標））（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びエフェクテン（ＥＦＦＥＣＴＥＮＥ（商標））（Ｑｉａｇｅｎ社，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を含む多数の親油性薬剤が市販されている。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、医薬組成物に含まれる薬剤の少なくとも１つ（例えば、ＨＥＲ３結合剤又は別のＨＥＲファミリメンバ−に結合し、かつ／又はそれを阻害する薬剤）は、カリケアマイシン、デュオカルマイシン類、アウリスタチン類、メイタンシノイド類、放射性同位元素、又は、例えばゲルダナマイシン及びメイタンシンなどの毒性の化学療法剤、などのエフェクターに結合させることができる。この種のコンジュゲートは、ＨＥＲ３を発現している細胞（例えば、癌細胞）を標的とする場合に特に有用でありうる。
【０１１６】
結合タンパク質を放射性同位元素に連結することは、腫瘍の治療において有利である。化学療法や他の癌治療形態と違って、放射性免疫療法、又は放射性同位元素−結合タンパク質の組合せの投与は、癌細胞を直接タ−ゲットとして、周囲の正常で健康な組織へのダメ−ジを最小限に抑えることができる。この「特効薬」（ｍａｇｉｃ  ｂｕｌｌｅｔ）により、患者は、今日利用できる他の治療形態よりもはるかに少ない量の放射性同位元素を用いて治療され得る。適当な放射性同位元素としては、例えば、イットリウム９０（９０Ｙ）、インジウム１１１（１１１Ｉｎ）、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、放射性銀−１１１、放射性銀−１９９、及びビスマス２１３が挙げられる。放射性同位元素の結合タンパク質への連結は、例えば、慣用されている二官能性キレートを用いて、実施することができる。銀は一価であるため、放射性銀−１１１及び放射性銀−１９９の連結の場合には、硫黄ベ−スのリンカ−が用いられる（Ｈａｚｒａら（１９９４）Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４−２５：１−７参照）。放射性同位元素銀の連結は、免疫グロブリンのアスコルビン酸による還元が含まれていてもよい。さらに、チウキセタン（ｔｉｕｘｅｔａｎ）は、イブリツモマブ・チウキセタン（ゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ））を形成するためにイブリツモマブに結合されるＭＸ−ＤＴＰＡリンカ−キレート剤である（Ｗｉｔｚｉｇ（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４８（Ｓｕｐｐｌ  １）：９１−９５参照）。イブリツモマブ・チウキセタンは、インジウム１１１（１１１Ｉｎ）又は９０Ｙなどの放射性同位元素と反応して、それぞれ、１１１Ｉｎ−イブリツモマブ・チウキセタン及び９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンを形成することができる。
【０１１７】
本明細書に記載の結合タンパク質は、特に癌の治療に用いる場合、毒性を示す化学療法剤と融合させることができ、該化学療法剤としては、例えば、メイタンシノイド系（Ｈａｍａｎｎら（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１３：４０−４６参照）、ゲルダナマイシノイド系（Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２：１５４９−１５５１参照）、及びメイタンシノイド系、例えばメイタンシノイド薬ＤＭ１（Ｌｉｕら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ  ９３：８６１８−８６２３）が挙げられる。酸性若しくは還元条件下で、又は特定のプロテアーゼへの暴露時に、薬物を放出するリンカ−を、この技術と共に使用することができる。結合タンパク質は当技術分野で記載されるように融合させることができる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質がアウリスタチンＰＥと融合される。アウリスタチンＰＥは、例えば、海洋シェルレス（ｓｈｅｌｌ−ｌｅｓｓ）軟体動物のペプチド成分であるドラスタチン１０の構造修飾体である微小管阻害薬である。アウリスタチンＰＥは抗腫瘍活性と抗腫瘍血管活性の両方を有する（Ｏｔａｎｉら（２０００）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９１：８３７−４４参照）。例えば、アウリスタチンＰＥは、膵臓癌細胞株において細胞増殖を阻害し、細胞周期の停止とアポト−シスを誘導する（Ｌｉら（１９９９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．３：６４７−５３）。したがって、特定の腫瘍にアウリスタチンＰＥの抗腫瘍活性と抗腫瘍血管活性を特異的に標的化するために、アウリスタチンＰＥを本明細書で提供する結合タンパク質に融合させてもよい。
【０１１９】
本明細書で提供される医薬組成物はまた、少なくとも１種のさらなる活性薬剤を含むことができる。さらなる活性薬剤の例としては、ＩＧＦＲ−１及びｃ−ｍｅｔなどの他の受容体タンパク質キナーゼの抗体又は低分子量阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの受容体リガンド、ドキソルビシン、シスプラチン又はカルボプラチンなどの細胞毒性薬、サイトカイン、又は抗腫瘍薬が挙げられる。多くの抗腫瘍薬が当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍薬は、これらに限定されるものではないが、抗体及び免疫調節タンパク質を含む治療用タンパク質の群から選択することができる。いくつかの実施形態では、抗腫瘍薬は、以下からなる低分子阻害剤及び化学療法剤の群から選択することができる：有糸分裂阻害剤、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、挿入剤として用いる抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、抗生存薬、生物学的応答修飾因子、抗ホルモン剤（例えば、抗アンドロゲン類）、微小管刺激薬、アントラサイクリン、及び抗血管新生薬。抗腫瘍薬が放射線である場合、治療は内部源（例えば、小線源療法）又は外部源（例えば、体外照射療法）のいずれかで行うことができる。１種以上のさらなる活性薬剤は、ＨＥＲ３結合剤及び第２の薬剤と同時に又は別々に、単一の製剤で又は各活性薬剤の個別（単独）の製剤で、投与することができる。
【０１２０】
本明細書で提供される医薬組成物は、前立腺疾患（ＨＥＲファミリーシグナル伝達に関連する前立腺疾患など）の診断、予防又は治療に特に有用である。該疾患は、例えば、ＨＥＲ３リン酸化の増加、ＨＥＲ３と他のＨＥＲファミリメンバートの複合体形成の増加、ＰＩ３キナーゼ活性の増加、ｃ−ｊｕｎ末端キナーゼ活性及び／又はＡＫＴ活性の増加、ＥＲＫ２及び／又はＰＹＫ２活性の増加、又はこれらの組合せと関連づけられる。前立腺疾患は、例えば、ＢＰＨ又は前立腺癌であることができる。
【０１２１】
医薬組成物は、１種以上の活性薬剤を、１種以上の生理的に許容される担体、希釈剤及び／又はアジュバントと、場合により、輸送、送達、耐性などを改善するために製剤に通常配合される他の剤と、混合することによって製剤化することができる。医薬組成物は、例えば、凍結乾燥製剤、水溶液剤、分散液剤、又は錠剤、糖衣錠若しくはカプセル剤などの固形製剤に、製剤化することができる。多数の適切な製剤は、薬剤師に公知の処方集中で確認することができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９０））、特にその中のＢｌｏｃｋ，Ｌａｗｒｅｎｃｅによる第８７章。これらの製剤には、例えば、粉末、ペ−スト、軟膏、ゼリ−、ワックス、オイル、脂質、脂質（陽イオン性又は陰イオン性）含有小胞（リポフェクチン（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペ−スト、水中油型及び油中水型エマルション、エマルションカ−ボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコ−ル）、半固体ジェル、及びカ−ボワックスを含む半固体混合物が含まれる。上記の混合物はいずれも、製剤中の活性薬剤が製剤化によって不活性化されず、かつ製剤が投与経路と生理学的に適合しかつそれに耐えられることを条件として、本明細書に記載の治療及び治療法に適している。さらに、薬剤師には周知の製剤、賦形剤及び担体に関する追加の情報については、Ｂａｌｄｒｉｃｋ（２０００）Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２：２１０−２１８；Ｗａｎｇ（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３：１−６０；Ｃｈａｒｍａｎ（２０００）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８９：９６７−９７８；及びＰｏｗｅｌｌら（１９９８）ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１、並びにそれらの引用文献を参照されたい。
【０１２２】
治療用組成物を製剤化し、その後投与する方法は、当業者に周知である。投薬は一般に、治療すべき疾患状態の重症度と応答性に依存し、治療は数日から数ヶ月まで、又は治癒が得られるか、疾患状態の軽減が達成されるまで続く。当業者は最適用量、投与方法及び反復率をル−チンで決定できる。最適用量は個々のポリペプチドの相対的効力によって変化し、一般的にはｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルで有効と判明したＥＣ５０に基づいて推定される。典型的には、投与量は約０．０１μｇ〜約１００μｇ／ｋｇ体重であり、１日１回又はそれ以上、週２回、週１回、月１回、又はより少ない頻度でさえ、投与可能である。治療の成功に続いて、疾患状態の再発を防ぐために患者に維持療法を受けさせることが望ましいこともある。
【０１２３】
様々な態様において、投与量は、約０．０１〜約０．１μｇ／ｋｇ体重、約０．１〜約１μｇ／ｋｇ体重、約１〜約１０μｇ／ｋｇ体重、約１０〜約１００μｇ／ｋｇ体重、又は、約１００μｇ／ｋｇ体重よりも多い量とすることができる。
【０１２４】
医薬組成物は、局所治療又は全身治療が望まれているかに応じて、また、治療すべき領域に応じて、いくつかの方法で投与することができる。投与は、例えば、局所的（例えば、経皮的、舌下、点眼、鼻腔内）；経肺的（例えば、粉末又はエアロゾールの吸入又は吹送による）；経口的；又は非経口的（例えば、皮下、髄腔内、脳室内、筋肉内、若しくは腹腔内注射による、又は点滴による）であり得る。投与は急速に（例えば、注射により）、又はある期間に亘って（例えば、ゆっくり注入し又は徐放性製剤の投与により）行うことができる。中枢神経系の組織を治療する場合は、典型的には、ＨＥＲ３結合タンパク質を、ポリペプチドの血液脳関門通過を促進することができる１種以上の物質と共に、脳脊髄液に注射又は点滴することによって投与することが可能である。
【０１２５】
非経口、髄腔内又は脳室内投与用の組成物及び製剤には無菌の水溶液が含まれ、該水溶液は、緩衝剤、希釈剤及び他の適切な添加剤（例えば、浸透促進剤、キャリア化合物及び他の薬学的に許容される担体）をも含むことができる。
【０１２６】
医薬組成物は、これに限定されるものではないが、溶液、エマルション、水性懸濁液、及びリポソ−ム含有製剤が含まれる。これらの組成物は、例えば、予め作製した液体、自己乳化性固体、及び自己乳化性半固体を含む様々な成分から生成することができる。エマルションは、多くの場合、緊密に混合されて互いに分散された２つの不混和性の液相からなる二相系である；一般的に、エマルションは油中水（ｗ／ｏ）型又は水中油（ｏ／ｗ）型のいずれかである。エマルション製剤は、製剤化が容易であることと、可溶化、吸収、及びバイオアベイラビリティの効率のため、治療薬の経口送達に広く使用されている。
【０１２７】
ＨＥＲ結合薬剤は、薬学的に許容される塩、エステル、若しくはこのようなエステルの塩、又は、いずれか他の化合物であって、ヒトを含めた動物に投与したとき、生物学的に活性な代謝産物又はその残基を（直接的又は間接的に）与えることができる化合物をさらに含んでいてもよい。したがって、例えば、本願は、低分子及びポリペプチドの薬学的に許容される塩、プロドラッグ及びこのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、並びに他の生物学的均等物を提供するものである。用語「プロドラッグ」は、不活性な形態で調製される治療薬であって、内在性酵素若しくは他の化学物質の作用及び／又は条件によって、体内又は細胞内で活性形態（すなわち、薬物）に変換される治療薬のことである。用語「薬学的に許容される塩」とは、本明細書で提供されるポリペプチドの生理学的及び薬学的に許容される塩（すなわち、望ましくない毒物学的影響を与えることなく親ポリペプチドの所望の生物学的活性を保持する塩）を意味する。薬学的に許容される塩の例としては、これに限定されるものではないが、陽イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、又はスペルミンなどのポリアミン類）により形成される塩；無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、又は硝酸）により形成される酸付加塩；及び、有機酸（例：酢酸、クエン酸、シュウ酸、パルミチン酸、又はフマル酸）により形成される塩が含まれる。
【０１２８】
本明細書で提供するいくつかの実施形態は、１種以上の第２の薬剤（例えば、１種以上の別のＨＥＲファミリメンバ−に結合する剤又は１種以上の化学療法剤）を含む又は含まない、１種以上のＨＥＲ３結合剤、及び、異なる作用機序で機能する１種以上の他の薬剤を含有する医薬組成物を包含する。例えば、これらに限定されるものではないが、非ステロイド系抗炎症薬及びコルチコステロイドを含む抗炎症薬、並びに、これらに限定されるものではないが、リバビリン、ビダラビン、アシクロビル及びガンシクロビルを含む抗ウイルス薬が該組成物中に含まれていてもよい。他の非ポリペプチド薬剤（例えば、化学療法剤）もまた本願の範囲内である。このように組合せられた化合物は一緒に又は連続して用いることができる。
【０１２９】
組成物はさらに、医薬組成物中に通常見られる他の補助成分を含むことができる。よって、該組成物は、適合する薬学的活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂剤、局所麻酔薬若しくは抗炎症薬など；あるいは、本明細書で提供する組成物の様々な投与形態を物理的に製剤化する上で有用な追加の物質、例えば、色素、香味剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤及び安定剤などを含めることができる。さらに、該組成物は補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩類、緩衝剤、着色剤、香味剤、及び芳香物質と混合することができる。しかし、添加する場合は、そのような物質が本明細書で提供される組成物中のポリペプチド成分の生物学的活性を不当に妨げてはならない。製剤は所望により滅菌することができる。
【０１３０】
医薬製剤は、投与単位形態で利便性良く提示され、製薬業界で周知の従来技術に従って調製することができる。そのような技術は、活性成分（例えば、本明細書で提供されるＨＥＲファミリに結合する薬剤）を所望の薬学的担体又は賦形剤と会合させる工程を含む。典型的には、製剤は、活性成分を液状担体又は微細な固形担体又はその両方と均質かつ密接に会合させ、その後、必要であれば、該製品を成形することによって調製することができる。製剤は、その滅菌方法が製剤中に含まれるポリペプチドの有効性を妨げないことを条件として、必要に応じて滅菌することができる。
【０１３１】
本明細書に記載された組成物は、これに限定されるものではないが、錠剤、カプセル剤、液状シロップ剤、ソフトジェル剤、座剤、及び注腸剤などの多くの可能な剤形のいずれにも製剤化することができる。該組成物はまた、水性、非水性又は混合媒体中の懸濁剤として製剤化することもできる。水性懸濁剤はさらに、その懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロ−スナトリウム、ソルビト−ル、及び／又はデキストランを含むことができる。懸濁剤はまた、安定剤を含むこともできる。
【０１３２】
ＨＥＲ結合剤は、包装材料と組み合わせて、前立腺疾患を治療するためのキットとして販売することができる。製品を製造するための成分及び方法は周知である。該製品は上記セクションに記載した１種以上のポリペプチド及び化合物を組み合わせることができる。さらに、製品は、例えば、緩衝剤、又は免疫複合体の形成を減らすための若しくは免疫複合体形成の減少をモニタリングするための他のコントロ−ル試薬を含んでいてもよい。ポリペプチドがどのように前立腺疾患の治療に効果を奏するかに関する指示書がそのようなキットに含まれていてもよい。
【０１３３】
６．方法
本願はまた、患者の前立腺疾患（例えば、ＢＰＨ又は前立腺癌）を治療又は予防するための方法を提供する。例えば、該方法は、本明細書に記載するように、患者（例えば、ヒトなどの哺乳類）にＨＥＲ３結合剤又はＨＥＲ３結合剤を含有する組成物を投与することを含んでよい。該方法は、例えば、そのような治療を必要とする患者のＢＰＨを治療し又は予防し、患者の前立腺重量を減少させ、前立腺癌を治療又は予防し；前立腺癌細胞の成長を阻害し又は減少させ、あるいは、前立腺癌細胞のアンドロゲン非依存性成長及び／又は増殖を阻害し、減少させ、又は逆行させるために用いられてよい。
【０１３４】
本明細書中で用いる場合、用語「治療又は予防」とは、治療的処置と予防的又は阻止的処置の両方を意味し、これらは、標的とする疾患又は障害の影響を阻止し、遅延させ、又は軽減させるために使用することができる。予防又は治療が必要な者には、既に障害をもつ者に加え、障害を発症する可能性がある者、又は障害を予防すべき者が含まれる。予防又は治療が必要な患者は、哺乳類の患者（すなわち、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどの、ヒト、家畜、及び動物園用、スポ−ツ用又は愛玩用の動物を含む、哺乳類として分類される任意の動物）であり得る。いくつかの実施形態において、治療が必要な患者はヒト患者である。
【０１３５】
それを必要とする患者における前立腺疾患を予防又は治療するための方法は、本明細書に記載する少なくとも１種のＨＥＲ３結合剤の有効量該患者に投与することを含んでいてもよい。いくつかの態様において、該方法はまた、少なくとも１種の他の薬剤（上述のとおり、別のＨＥＲファミリーメンバーに対する薬剤又は化学療法化合物）を投与することを含むんでいてもよい。そのような治療は、例えば、異常な細胞増殖、移動又は浸潤を阻害することができる。薬剤の組み合わせが投与される場合、それらは、同時に（例えば、それらが同一の組成物中に含まれる場合、又は共通の輸液バッグに入れて混合することにより）、又は別々に（例えば、連続的に）投与することができる。
【０１３６】
本明細書中で用いる用語「有効量」とは、治療する前立腺疾患の１つ以上の症状又は臨床的特徴を低下又は安定化させる薬剤の量のことである。例えば、本明細書に記載の組成物の有効量の投与は、（例えば、重量又は直径で決定される）前立腺のサイズを減少させ、腫瘍の増殖を減速させ、腫瘍のサイズを縮小させ、又はＨＥＲ３若しくはＨＥＲ３応答性バイオマ−カ−（例えば、Ａｋｔ、ＨＥＲ２、ＥＲＫ、又はＥＧＦ−Ｒ）の活性化を減少させることができる。その減少又は減速は、以前の値と比較したいかなる低下（例えば、症状又は特徴の５％、１０％、２０％、２５％、又は２５％超の低下）であり得る。いくつかの実施形態では、「有効量」は安定した疾患をもたらしてもよい。
【０１３７】
潜在的な結合タンパク質治療薬の、例えば上述した製剤による、古典的な投与方式に加えて、新たに開発された投与様式も有用であり得る。例えば、外科的切除後の原発性脳腫瘍の治療のための１３１Ｉ標識モノクロ−ナル抗体の局所投与が報告されている。さらに、モノクロ−ナル抗体及びその断片の直接定位脳内注入もまた、臨床的に及び非臨床的に研究されている。頸動脈内高浸透圧注入は、薬物と融合したモノクロ−ナル抗体を用いて原発性脳悪性腫瘍をタ−ゲティングする実験的戦略である。
【０１３８】
上述したように、投与される薬剤の用量は様々な要因により依存することができる。それらには、例えば、薬剤の性質、腫瘍のタイプ、及び投与経路が含まれる。本発明の方法がどのような特定の用量にも限定されないことが強調される。適切な用量を決定するための方法は当技術分野で公知である。
【０１３９】
治療される疾患のタイプ及び重症度に応じて、約２０ｍｇ／ｋｇまでの各ＨＥＲ結合剤を、それを必要とする患者に、例えば１回以上の個別の投与により又は連続注入により、投与することができる。典型的な１日投与量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／日〜約１００ｍｇ／日又はそれ以上の範囲とすることができる。数日間又はそれ以上にわたる反復投与の場合は、治療すべき疾患に応じて、疾患症状の望ましい抑制が生じるまで治療を継続することができる。
【０１４０】
いくつかの場合において、本明細書で提供される方法は、処置の治療結果をモニタリングするための１つ以上のステップを含むことができる。例えば、患者をその疾患の症状についてモニタリングして、症状の軽減が起こっているかを判定することができる。また、例えば、起こり得る治療の副作用について、被験者をモニタリングすることもできる。モニタリングは投与ステップの後で行うことができ、いくつかの実施形態では、複数回（例えば、２回以上投薬される場合には、投与と投与の間に）行うことができる。こうした方法は、例えば、本明細書に記載の治療方法の有効性と安全性を評価するために使用することができる。
【０１４１】
本発明について以下の実施例でさらに説明するが、これらの実施例は特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１４２】
実施例１−アンドロゲン除去の間のＨＥＲ３発現の増加
Ｕ１−５９は、様々なタイプのヒトの癌において、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を有する完全ヒト抗−ＨＥＲ３モノクローナル抗体である（Ｔｒｅｄｅｒら、“Ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＨＥＲ３  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ｍＡｂｓ）ｉｎｈｉｂｉｔ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ”，ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（２００８）；及びＦｒｅｅｍａｎら、“Ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＨＥＲ３  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ｍＡｂｓ）ｈａｖｅ  ｕｎｉｑｕｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｖｅｒｓｕｓ  ｏｔｈｅｒ  ＨＥＲ  ｆａｍｉｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”，ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（２００８）参照）。この抗体は、様々な前立腺癌細胞株において、増殖及び移植腫瘍の成長を阻害し、また、アンドロゲン依存性を保持させるために用い得る。アンドロゲン依存性ＬＮＣａＰ細胞は低アンドロゲンレベルを含む培地中で長期間に亘って培養するとアンドロゲン非依存性（ＡＩ）となる（Ｍｕｒｉｌｌｏら，前掲（２００８）；Ｈｓｉｅｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３（１２）：２８５２−２８５７（１９９３）参照）。ＬＮＣａＰ細胞とそれらのＡＩ亜系であるＬＮＣａＰ−ＡＩ及びＣ４−２との比較により、ＡＩ亜種が、ＨＥＲ４レベルが非常に低いにもかかわらず（図１Ｂ）、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３を過剰発現しているが、ＥＧＦＲは過剰発現していないこと（図１Ａ）を示した。ＨＥＲ２及びＨＥＲ３の増加はアンドロゲン除去と関連していた。ＬＮＣａＰ細胞をＦＢＳ含有培地でプレートし、その後、活性炭処理済血清含有低アンドロゲン培地に切り替えた。図１Ｃに示す通り、この処理によりＰＳＡプロモータコンストラクトからのＡＲ転写活性の急激な減少が引き起こされ、ＡＲ発現についても同様であった（図１Ｄ、上部）。ＨＥＲ２（３番目のパネル）、ＨＥＲ３（４番目のパネル）の発現の顕著な増加がみられたが、ＥＧＦ−Ｒにおいてはそのような増加はみられなかった。更に、機能的ＰＴＥＮ（ＰＩ３Ｋ活性化の負の調節因子）が欠如しているにもかかわらず、ＬＮＣａＰ細胞はなおＡｋｔのリン酸化が増加されていた（５番目のパネル）。
【０１４３】
実施例２−ＨＥＲ３の過剰発現はアンドロゲン非存在下でもＬＮＣａＰ増殖を誘導する
ＬＮＣａＰ細胞は安定してＨＥＲ２又はＨＥＲ３をコードするｃＤＮＡ（ｐＣＤＮＡ３−ＨＥＲ２及びｐＣＤＮＡ３−ＨＥＲ３）で安定的に形質転換させ、安定細胞株ＬＮＣａＰ−ＨＥＲ２及びＬＮＣａＰ−ＨＥＲ３を生成した（図２Ａ）。複数のクローンをスクリーニングしてＨＥＲ２及びＨＥＲ３をＬＮＣａＰ−ＡＩ細胞におけるレベルに相当するレベルで発現する細胞を選択した。ＨＥＲ３の過剰発現は、顕著にＨＥＲ２の過剰発現をも誘導した。ＨＥＲ２及びＨＥＲ３の過剰発現は、形質転換していない細胞株と比べて低アンドロゲン培地中での増殖が増加していた（図２Ｂ）。一方で、ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡの形質転換は、ＦＢＳ及び活性炭処理済血清の両方のＬＮＣａＰ−ＡＩ細胞の増殖を阻害した（図２Ｃ）。Ａｋｔの疎外はＨＥＲ３過剰発現により引き起こされた増殖を阻止した（図２Ｄ）。したがって、ＨＥＲ３はＡｋｔ依存的な方法で細胞成長を制御する。
【０１４４】
実施例３−ＨＥＲ３は前立腺癌における増殖及びアンドロゲン依存性を制御する
Ｓ期の細胞の割合を評価するフローサイトメトリー分析により、ＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡによる形質転換はＬＮＣａＰ及びＣ４−２細胞の両方において増殖速度を減速させたが、スクランブルドｓｉＲＮＡはこのような減速を起こさないことが明らかとなり（図３Ａ）、ＨＥＲ３がこれらの細胞の増殖に必須であることが示された。従前どおり、Ｃ４−２細胞はＬＮＣａＰ細胞と比較して高レベル（凡そ２倍）のＨＥＲ３を発現しており、ＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡは両細胞株においてＨＥＲ３発現を下方制御した（図３Ｂ）。細胞は１０μＭｓｉＲＮＡで形質転換した。これは、この量のＨＥＲ３特異的二本鎖ｓｉＲＮＡがＣ４−２細胞におけるＨＥＲ３レベルを下方制御してＬＮＣａＰ細胞でみられるレベルまで戻すようであるからである。β−ガラクトシダーゼとの共形質転換の後、β−ｇａｌアッセイを行うことにより、全てのケースで同様なレベルの形質転換が行われていることが示された。同様に、ｐＣＤＮＡ３−ＨＥＲ３プラスミドを用いたＨＥＲ３の過剰発現はＣ４−２細胞（データ非図示）のみならずＬＮＣａＰ細胞（図３Ｃ）の増殖率を上昇させた。重要なことは、フローサイトメトリー分析により、空ベクターで形質転換されたＬＮＣａＰ細胞は、ＡＲアンタゴニストであるビカルタミド（５μＭ）で４８時間処理することにより成長が阻害されたことが明らかとなり、アンドロゲン非依存性を示したことである。対照的に、ビカルタミドはＨＥＲ３を過剰発現する細胞の増殖を県所に減少させず、アンドロゲン非依存性を示した（図３Ｃ）。ＨＥＲ３過剰発現はウエスタンブロットで確認し、２μｇのｐＣＤＮＡ−ＨＥＲ３でトランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞においてＨＥＲ３レベルがＣ４−２細胞並みに上層指定ことを示した（図３Ｄ）。従前どおり、形質転換効率はβ−ｇａｌとの共形質転換により決定し、β−ｇａｌアッセイにより全てのケースにおいて同様な形質転換効率が確認された。
【０１４５】
実施例４−ＨＥＲ３の阻害が増殖速度祖阻害し、アンドロゲン非依存性前立腺癌細胞にアンドロゲン依存性を付与するか？
ＨＥＲ３は正常前立腺と比較して前立腺癌において過剰発現している（Ｃｈａｉｂら、前掲（２００１）参照）。上述の実施例は、アンドロゲン依存性親ＬＮＣａＰ細胞株と比較して、ＬＮＣａＰ細胞のアンドロゲン非依存性クローンにおいてＨＥＲ３が過剰発現していることを示している。更に、ＬＮＣａＰ細胞におけるＨＥＲ３の過剰発現はアンドロゲン非依存性を付与し、ＨＥＲ３の阻害が増殖を減少させる。アンドロゲン非存在下（活性炭処理済血清を含有する培地中）での培養及び抗アンドロゲン剤であるビカルタミドによる処理はＬＮＣａＰ細胞のぞ細胞増殖を阻害するが、Ｃ２−４細胞の増殖は阻害しない（Ｍｉｋｈａｉｌｏｖａら，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．６１７：３９７−４０５（２００８）；及びＷａｎｇら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２６（４１  ）：６０６１  −６０７０（２００７）；及びＷａｎｇら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２７（５６）：７１０６−７１１７（２００８）参照）。ＨＥＲ３ｃＤＮＡのＬＮＣａＰ細胞への形質転換はこの阻害を阻止し、かつＬＮＣａＰ細胞のアンドロゲン非存在下での増殖を誘導したことから、ＨＥＲ３特異的ｓｉＲＮＡはＬＮＣａＰ細胞のアンドロゲン非依存的亜種におけるアンドロゲン非依存的成長を阻止した。
【０１４６】
完全ヒト抗ＨＥＲ３モノクローナル抗体Ｕ１−５９を用いたＨＥＲ３の阻害がアンドロゲン非依存性細胞の増殖を阻害し、アンドロゲン依存性フェノタイプに細胞を戻すか否かを決定するため、更なる試験を行う。ＬＮＣａＰ細胞又はアンドロゲン非依存性亜種Ｃ４−２及びＬＮＣａＰ−ＡＩ、並びに「正常様細胞」ＲＷＰＥ１及びｐＲＮＳ−１−１（Ｓｈｉら（２００７）Ｐｒｏｓｔａｔｅ６７（６）５９１−６０２参照）、及びＭＤＡ−ＰＣａ−２ｂ及びＣＷＲ２２Ｒｖ１等のアンドロゲン非依存性細胞を製造者推奨のプロトコルに従って様々な濃度のＵ１−５９又はビヒクルで処理し、ＨＥＲ３がん遺伝子シグナルを阻害するの必要な最適濃度を決定する。細胞成長速度はＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイにより決定し、増殖速度対アポトーシスをフローサイトメトリーで決定した後、細胞周期タンパク質（例えば、サイクリンＤ１，Ｅ，Ａ，ｃｄｋ２，及びｃｄｋ４／６のリン酸化、並びにｐ２７及びｐ２１の発現）並びにアポトーシス関連タンパク質（例えば、Ｂｃｌ２，ＢｃｌＸＬ，ＢＡＤ及びＢＡＸ）への医薬の影響をウエスタンブロットで決定する。
【０１４７】
Ｕ１−５９のＡＲ転写活性への影響を調べるため、ＰＳＡを発現する細胞内のＡＲ及びＰＳＡの発現レベルをウエスタンブロッティングで決定する。ＡＲ転写活性は、またｈＰＳＡ−ｌｕｃ（２つのＡＲ結合領域（ＡＲＥ）を発現するルシフェラーゼ標識ＰＳＡプロモーター領域）で形質転換することにより評価し、形質転換した細胞をビヒクル又は抗体で処理し、その後ルシフェラーゼアッセイによりＡＲ転写活性を決定した。アッセイはまた、細胞の運動性及び侵襲性への抗体の影響、ソフト寒天中の成長、並びにＨＥＲ３の下流エフェクター（例えば、Ａｋｔ及びＥＲＫシグナル経路）への影響を評価するように行う。
【０１４８】
Ｕ１−５９がアンドロゲン非依存性を遅らせるか否かを決定するため、ビカルタミド存在下又は非存在下、抗体又はビヒクルと共にＦＢＳ対活性炭処理済血清における細胞成長をアッセイする。ＨＥＲ３阻害は、既述（Ｇｈｏｓｈら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８（２８）：４１２０−４１３０（１９９９）；Ｇｈｏｓｈら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １３５９（１）：１３−２４（１９９７）；及び、Ｇｈｏｓｈら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７４（４）：５３２−５４３（１９９９）参照）のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４分画により得られた細胞膜画分のウエスタンブロッティングにより細胞内のＨＥＲ３阻害を検出した。新たに合成された活性ＨＥＲ３は膜に局在化するため、膜画分におけるＨＥＲ３の欠如はＨＥＲ３サイレンシング効果を示している（Ｗａｌｔｅｒｓら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２（２３）：３５９８−３６０７（２００３）参照）。細胞の他方の半分は７０％エタノール中で固定化され、ＰＩで染色され、Ｓ期の細胞のパーセントをフローサイトメトリーで検出する（Ｇｈｏｓｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２（９）：２６３０−２６３６（２００２）参照）。ＨＥＲ３の阻害が細胞をビカルタミド反応性にすることが期待される。
【０１４９】
実施例５−前立腺癌動物モデルにおいて、アンドロゲン除去の間のＨＥＲ３阻害がアンドロゲン非依存性腫瘍の発生を阻止できるか？
増加したＨＥＲ３発現はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてアンドロゲン非依存性に関連しており、アンドロゲン除去の間ＨＥＲ３レベルは増加する。アンドロゲン依存性細胞において、ＨＥＲ３レベルはアンドロゲン受容体により負に調節される。一方で、増加したＨＥＲ３レベルはアンドロゲンのＨＥＲ３の調節を阻止する。ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるアンドロゲン除去の間のＨＥＲ３の阻害がアンドロゲン非依存性の前立腺癌細胞の成長を阻止するか否かを決定するため実験を行う。前立腺癌再発の適切なモデル、ＣＷＲ２２モデルが、ｉｎ  ｖｉｖｏ実験のために入手可能である。ＣＷＲ２２腫瘍はヌードマウス内で容易に確立することができ、初期腫瘍状態ではアンドロゲン依存性であり、宿主の去勢により急速に退化する（Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６（１３）：３０４２−３０４６（１９９６）参照）。しかし、３〜４月以内に宿主動物内でアンドロゲン非依存性腫瘍が発生するため、ヒト患者でみられる効果を再現している。よって、ＣＷＲ２２再発モデルは腫瘍成長及び腫瘍退縮におけるＵ１−５９の効果を決定するために使用される。
【０１５０】
ＨＥＲ３の阻害が腫瘍発生を阻止するか否かを決定するため、４〜５週齢のヌード／ヌード胸腺欠損オスマウス（Ｈａｒｌａｎ社、インディアナポリス）にテストステロンペレットを前もって移植した後、５０％マトリゲルとの１：１混合物である、ＣＷＲ２２腫瘍から抽出した各２千万細胞を両脇腹に皮下注入する（ｎ＝４０）。移植から三週間後（又は、明白な腫瘍が観察されたら）、マウスを去勢する。これらの動物は手術の１２か月後まで観察を続ける。腫瘍は最初は退縮するが、８〜９か月後に５０％の動物で再発することが予想される。去勢されたマウスにおける腫瘍成長はホルモン耐性成長を示す。再発腫瘍を有するマウスは二つの群に分け（ｎ＝２０腫瘍／群）、それぞれ、ビヒクルまたはＵ１−５９の投与を受ける。治療は再発腫瘍のサイズが１５０ｍｍ３に達した時点で開始する。腫瘍サイズは隔日デジタルキャリパーで測定し、腫瘍容積を計算する。成長阻害は治療マウスの腫瘍容積をコントロールマウスの腫瘍容積で割って計算する（Ｔ／Ｃ）。腫瘍容積に対する抗体治療の効果は、治療開始から１２週間後まで続けられる。試験の最後に全ての残存腫瘍を回収し、再発腫瘍の重量を測定し、二等分する。一方の部分を免疫組織化学のために１０％ホルマリンで固定化し、残りは急速冷凍する（液体窒素中のイソプロパノール）。
【０１５１】
実験はまた、去勢ヌードマウスにおける前立腺癌細胞のアンドロゲン非依存性への進展がＵ１−５９による前治療によって阻止できるか否かを決定することにより、アンドロゲン除去の間のＨＥＲ３阻害が再発を阻止するかを決定するために行われる。上述のように、マウス（ｎ＝４０）にＣＷＲ２２細胞を皮下に左右対称に注入し、明白な腫瘍が観察されたら（凡そ注入から３週間後）該動物を去勢する。しかし、これらの実験において、去勢された動物は去勢後の日々、再発腫瘍の発生の十分前までに（ｉ）ビヒクル、又は（ｉｉ）Ｕ１−５９（ｎ＝２０／群）で処理される。このプロトコルは９カ月まで、あるいはコントロール動物が再発腫瘍が形成され始めるときまで続けられる。コントロール動物は、最終的には再発腫瘍が形成されるのに対し、治療動物では再発腫瘍が形成されないかコントロールと比較して遅い速度で再発腫瘍が形成されることが期待される。試験の最後に（例えば、治療の開始後９〜１０か月後）、動物は塗擦指定形成されたあらゆる腫瘍を上述の通り回収する。
【０１５２】
免疫組織化学は抗体のＨＥＲ３発現及びリン酸化、並びにＨＥＲ３の下流エフェクター（例えば、Ａｋｔ及びＥＲＫ）への影響を評価するために使用される。パラフィン包埋組織を薄片にして、全ＨＥＲ３、リン酸化ＨＥＲ３（Ｔｙｒ１１８９）、リン酸化ＨＥＲ３（Ｔｙｒ１２２２）、リン酸化ＨＥＲ３（Ｔｙｒ１２８９）、リン酸化Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）、及びリン酸化ＥＲＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）について免疫染色する。治療腫瘍対非治療腫瘍における染色強度を分析して抗体が所望の効果を有するか否かを決定する。スコアは、（１弱い染色強度、２中程度の染色、及び３強い染色、からなる１〜３スケールによる）染色強度と正に乗じた腫瘍染色の割合としての報告されており、０〜３００のスケールとなる。
【０１５３】
移植後の腫瘍発生時間、及び去勢後の腫瘍再発時間はカプラン−マイヤー生存及びハザード関数カーブ（１群あたりｎ＝２０）で調べることができ、治療の生存に対する効果はｌｏｇランクテストにより評価することができる（Ｄａｗｓｏｎ−Ｓａｕｎｄｅｒｓ及びＢａｔ，“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｚｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｄａｔａ，”Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，Ａｐｐｅｌｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＣＴ，ｐ．１８８（１９９４）参照）。比例ハザードモデルを用いる更なる分析により、この関係が腫瘍重量を介して仲介される程度を決定する。４つの比較群間の腫瘍容積における主要な相違は分散分析（ＡＮＯＶＡ）により評価することができる。４つの群間の分散の同等性はＬｅｖｅｎｅの分散の均一性検定を用いて評価する（Ｂｏｎｈａｍら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４（２１）：１６４１−１６４７（２００２））。全ての治療群とコントロール群を比較するため、（各１自由度の）コントラストを使用する。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較法も、全ての治療群とコントロール群との比較に使用することができる（Ｂｏｎｈａｎら、前掲）。Ｄｕｎｎｅｔｔの方法は、（複数比較で調節した）９５％同時信頼区間を構成するために使用する。Ｐ値は全ての有意性試験に洋子くされており、全ての統計的試験は二面性がある。有効な分析のための前提を確実としたのち、主要な効果、相互作用、及び複数比較を行う。必要に応じて、一般的なトランスフォーメーション及び／又はブートストラップ法が検討される。適切な平均値のコントラストは分散分析の日に特定の比較を行うことにより行うことができる。
【０１５４】
実施例６−Ｕ１−５９のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける前立腺癌細胞株への効果
ＤＵ−１４５前立腺癌細胞はＤＳＭＺ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）から入手し、ＩｇＧコントロール、Ｕ１−５９、抗ＥＧＦ−Ｒ抗体セツキシマブ、及びパニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ＨＥＲ２阻害剤ｃ２Ｃ４、又はそれらの組み合わせと共に２４時間培養し、ＨＥＲ３リン酸化への影響をウエスタンブロット分析で評価した。図４Ａ及び４Ｂに示すように、ＨＥＲ３の特定のリン酸化チロシン残基に対する抗体（ｐＨＥＲ３  Ｔｙｒ  １２８９及びｐＨＥＲ３  Ｔｙｒ  １１９７；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）を用いた細胞溶解物のウエスタンブロッティングにより、Ｕ１−５９単独で完全にＨＥＲ３のリン酸化を阻害することが示された。一方で、セツキシマブ及びパニツムマブはリン酸化を増加させ、ｃ２Ｃ４は部分的にリン酸化を阻害し、トラスツズマブはほとんど効果がなかった。Ｕ１−５９とセツキシマブ、ｃ２Ｃ４、及びトラスツズマブとの組み合わせは完全に又はほとんど完全にＨＥＲ３リン酸化を阻害した。
【０１５５】
別の実験において、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から取得したＰＣ−３前立腺癌細胞の足場非依存性成長に対するＵ１−５９の効果をコロニー形成アッセイ（ＣＦＡ）で評価した。ＰＣ−３細胞は各１０μｇ／ｍｌのＩｇＧコントロール、Ｕ１−５９、又は二つの抗ＨＥＲ３抗体（Ｕ１−５３及びＵ１−４９）と共に培養し、コロニー形成への影響を三層ソフト寒天システムで決定した。下層寒天はＩＭＤＭ中に０．７５％寒天及び２０％ＦＢＳを含み、フェノールレッドを含まない。上層寒天は０．４％寒天中に抗体前培養細胞を含む。上層は５０μＬのＩＭＤＭの液体フィーディングでカバーした。細胞は３７℃で１２日間培養し、コロニーはＭＴＴ（０．２１ｍｇ／ｍＬ）染色後に計数した。図５に示すように、ＰＣ−３細胞の足場非依存的成長は抗ＨＥＲ３抗体により有意に阻害された。コロニー形成における７８％阻害が、Ｕ１−５９、及び抗ＨＥＲ３抗体Ｕ１−５３存在下で得られた一方、抗ＨＥｒ３抗体Ｕ１−４９はコロニー形成を５２％阻害した。
【０１５６】
実施例７−Ｕ１−５９はリガンド誘導ＨＥＲ３リン酸化を阻害する
ラットＲＧ２グリオーマ細胞及びカニクイザルＪＴＣ−１２．Ｐ３腎細胞をアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ，Ｍｅｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。細胞は１０μｇ／ｍＬのＩｇＧコントロール又はＵ１−５９含有無血清培地中で１時間培養後、１００ｎｇ／ｍＬへレグリン又はコントロールタンパク質と共に１５分間培養した。処理後、細胞をＲＩＰＡバッファー中で溶解し、ＨＥＲ３リン酸化のレベルをウエスタンブロッティング（ｐＨＥＲ３  Ｔｙｒ  １２８９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｎｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で試験した。図６Ａ及び６Ｂに示す通り、へレグリンによって刺激されたＨＥＲ３リン酸化
はＵ１−５９によって阻害されたが、ＩｇＧコントロールは何の効果ももたらさなかった。
【０１５７】
実施例８−Ｕ１−５９のラット及びサルにおける毒性試験
ラット（ｎ＝１０／性／投与量）及びカニクイザル（ｎ＝５／性／投与量）に、週に１回４週間、Ｕ１−５９を、２０，６０又は２００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で静注することにより処置した。表２は５回投与後に確認された主要な知見及び処置第４週の間の暴露レベルを示す。ラット（性的に成熟した）において、唯一の顕著な知見は前立腺量の減少であった。ラット及びサルの何れにおいても副作用は全く確認されなかった。更に、睾丸重量に変化はなく、微細な変化も見られなかった。前立腺重量における統計的有意差は３カ月間の無処置期間終了後では確認されず、ラットにおける効果が可逆的であることを示していた。
【０１５８】
【表２】
2013540694.tif 000005
【０１５９】
他の実施態様
本発明は、その詳細な記載と一体となって記載されているが、上記記載は、添付したクレームの範囲によって定義される本発明の範囲を説明するものであり、限定するものではないと理解されるべきである。他の態様、利点及び変更もクレームの範囲内に含まれるものである。
【０１６０】
付属のコンパクトディスクにおける配列表、表、又はコンピュータプログラムの参照
配列表は、ＡＳＣＩＩ文字で米国特許法規則１．５２条（ｅ）に合致するフォーマットで、米国特許法規則１．９６条に合致する適切なラベルを付したＣＤに格納して提出されている。配列表のコピーも、コンピューターによる読み取りが可能な形式（ＣＲＦ）で１．８２４条の要件に従って提出されている。コンピュータによる読み取りが可能な形式で記録された配列表の情報は（紙又はコンパクトディスクに）記載された配列ものと同一である。
【図１】
2013540694.tif 000006
【図２】
2013540694.tif 000007
【図３Ａ】
2013540694.tif 000008
【図３Ｂ】
2013540694.tif 000009
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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