(57)【要約】  本発明は、筋萎縮性側索硬化症を治療するための低用量での医薬として用いるための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジアゾキシド遊離塩基の１日投与量がｍｇ／ｍ２／日として表され、該１日投与量が０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日とされるように用いられる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した哺乳動物の治療における医薬として用いられるための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項２】
遊離塩基の形態のジアゾキシドが用いられる、請求項１に記載の使用のための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１または２に記載の使用のための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項４】
前記医薬が、経口投与用に作製される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項５】
前記医薬が、０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日のジアゾキシドの１日投与量の投与用に作製される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項６】
前記医薬が、２．４０ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日のジアゾキシドの１日投与量の投与用に作製される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項７】
前記医薬が、０．１５ｍｇ／ｍ２／日、２．２２ｍｇ／ｍ２／日、２．４０ｍｇ／ｍ２／日、２．９６ｍｇ／ｍ２／日、３．００ｍｇ／ｍ２／日、および１１．１ｍｇ／ｍ２／日から選択されるジアゾキシドの１日投与量の投与用に作製される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項８】
前記医薬が、ジアゾキシドを単一の治療剤として含んでなる、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項９】
前記医薬が、ジアゾキシドと、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤との併用投与用に作製される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項１０】
前記医薬が、ジアゾキシドと、ＣＫ‐２０１７３５７、オレソキシム（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、リルゾール、トレチノインおよびピオグリタゾンＨＣｌ、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、サリドマイド、オランザピン、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、タモキシフェン、クレアチン一水和物、コエンザイムＱ１０、ＹＡＭ８０、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、Ｒ（＋）プラミペキソール二塩酸塩一水和物、ビタミンＥ、ミノサイクリン、トピラマート、ガバペンチン、ＡＥＯＬ‐１０１５０、幹細胞注射、ＳＢ‐５０９、自己骨髄由来幹細胞、セフトリアキソン、Ｅ０３０２（メコバラミン）、ＭＣＩ‐１８６、酢酸グラチラマー、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ‐Ｉ）、ＩＳＩＳ３３３６１１、ｓＮＮ００２９、ＧＳＫ１２２３２４９、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、および抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体から選択される筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の追加の治療剤とを含んでなる、請求項９に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項１１】
ジアゾキシドおよび前記追加の治療剤が、単一の剤形に含有される、請求項９に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項１２】
ジアゾキシドおよび前記追加の治療剤が、別々の剤形に含有される、請求項９に記載の使用のためのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩。
【請求項１３】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療における使用のための、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、請求項１３に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１５】
１．２ｍｇ、１．６ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、４．８ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇから選択される量でジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、請求項１３に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
技術分野
本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための低用量での医薬として用いるための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩、ならびにＡＬＳに罹患した哺乳動物の治療に用いるためのジアゾキシドを低用量で含む組成物に関する。
【０００２】
背景技術
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、脳および脊髄における運動ニューロンの変性を反映する進行性の筋麻痺を特徴とする神経変性症候群のスペクトラムをカバーするために用いられる用語である。しかし、この疾患の最も一般的な形態を示すために最近の診療で用いられる用語は、古典型（シャルコー）ＡＬＳであり、現在米国では、ルー・ゲーリック病としての方がよく知られている。欧州、オーストラリア、ニュージーランド、およびアジアでは、より一般的に用いられる用語は、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）である。この障害のスペクトラムに関連するその他の症候群としては、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、および多系統が関与するＡＬＳが挙げられる（Wijesekera LC and Leigh PN. Amyotrophic lateral sclerosis. Orphanet Journal of Rare Disease 2009, 4:3）。
【０００３】
ＡＬＳは、１００，０００人あたり１から２人の罹患率および１００，０００人あたり４から６人の有病率である、最も一般的な神経変性障害の１つであり；常時３０，０００人もの米国人がこの疾患に罹患している（Worms PM. The epidemiology of motor neuron disease: a review of recent studies. J Neurol Sci 2001, 191:3-9）。罹患率は、男性の方が女性よりも高い（１．６：１）。患者のうちの５〜１０％がＡＬＳの陽性家族歴を有しており、常染色体優性遺伝様式を有することが最も一般的である。ＡＬＳは、成熟成人の疾患であり、メジアン発症年齢は５５歳、その頻度は７５歳まで年齢と共に増加する。全体として、患者の５０％が、最初の臨床症状から最初の３年以内に死亡する。年齢および陽性の家族歴以外にも、数多くの因子および環境トキシンが、リスク因子としてさらに研究されている。喫煙者、サッカー選手、特にイタリア人、および湾岸戦争の兵役経験者のリスクが相対的に高いとの報告がある。
【０００４】
散発性および家族性ＡＬＳ（それぞれ、ＳＡＬＳおよびＦＡＬＳ）は、臨床的および病理学的に類似しており、共通の病原であることが示唆される。両方の形態共に、進行性の筋力低下、萎縮症、および痙縮を含む類似の病理学的特徴が現れ、これらの各々は、上位および下位運動ニューロンの変性および死滅を反映している。呼吸筋および横隔膜の除神経は、一般的に、致死イベントである。実際、現在の診療では、「球発症型ＡＬＳ」および「脊髄発症型ＡＬＳ」の用語が、ＰＢＰおよびシャルコーＡＬＳの用語の代わりに用いられている。典型的なＡＬＳを有する患者のおよそ３分の２が、この疾患の脊髄型を（四肢発症型）を有し、局所的な筋力低下および筋消耗に関連する症状を呈し、ここで、この症状は、上肢および下肢の遠位または近位から始まり得る。次第に、痙縮が、弱った萎縮肢で起こり得るものであり、手の起用さおよび歩行が影響を受ける。球発症型ＡＬＳを有する患者は、通常、構音障害および固体または液体に対する嚥下障害を呈し、四肢症状は、球症状とほぼ同時に起こり得るものであり、大多数のケースでは、１〜２年以内に発症する（Mitchell JD and Borasio GD. Amyotrophic lateral sclerosis. Lancet 2007, 369:2031-41）。麻痺は、進行性であり、球発症型のケースでは２〜３年以内に、四肢発症型ＡＬＳのケースでは３〜５年以内に、呼吸不全によって死に至る。
【０００５】
ＡＬＳのケースのおよそ１０％が家族性である。残りの９０％は、環境的および遺伝的要素の両方が疾患の感受性に寄与する多因子性ではあるが、散発性である。ＦＡＬＳおよびＳＡＬＳのいずれも、その遺伝学は複雑なものである。常染色体優性ＦＡＬＳのケースの２０％およびＳＡＬＳを有する患者の２％が、２１番染色体上の銅／亜鉛スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ１）遺伝子における突然変異を示す。この遺伝子の突然変異は、ＳＯＤ１酵素の抗酸化剤機能の不全を引き起こすのではなく、毒性機能獲得を通して疾患を引き起こすものと考えられる。ａｌｓｉｎ（ＡＬＳ２）、ｓｅｎａｔａｘｉｎ（ＡＬＳ４）、またはＡｎｇｉｏｇｅｎｉｎを含むＳＯＤ１以外の遺伝子が、家族性ＡＬＳと関連付けられているが、大部分のケースにおいて、遺伝子欠陥は識別されていない（Pasinelli P and Brown RH. Molecular biology of amyotrophic lateral sclerosis: insight from genetics. Nat Rev Neurosci 2006, 7:710-723）。
【０００６】
ＡＬＳは、遺伝因子、タンパク質のミスフォールディングおよび凝集、酸化損傷およびミトコンドリア機能不全、細胞骨格異常、ならびに軸索輸送異常を含む複数の病原性細胞機構間の複雑な相互作用を伴う多因子性疾患である。運動ニューロン損傷は、隣接する非神経細胞（星状およびミクログリア細胞）から発せられる侵害シグナルによって増大され、ここで、変異体ＳＯＤ１が、疾患の進行を促進する興奮毒性、不適切な成長因子シグナル伝達、および炎症応答を誘発する（Cozzolino M et al. Amyotrophic Lateral Sclerosis: From current developments in the laboratory to clinical implications. Antiox Redox Sign 2008, 10:406-43）。変異体ＳＯＤ１の発現の結果として損なわれた細胞機能が、散発性ＡＬＳにおいてその他の毒性因子によって活性化され得る経路上に集中することを示す証拠が増えており、変異体ＳＯＤ１動物モデルにおいて効果的である治療法が、散発性ＡＬＳおよび非ＳＯＤ１関連ＡＬＳ（non-SOD1-linked ALS）へ変換されることが期待される。
【０００７】
いくつかの研究により、ＡＬＳ患者において炎症反応が非常に顕著であることが明らかとなった。このような患者において、健康なコントロールには存在しないミクログリア活性化が、ＣＮＳ病態の主たる構成要素であり、疾患の重篤度と共に増加する。損傷したニューロンおよびその周囲の星状細胞から発せられるシグナルに反応して、ミクログリア細胞は、休止状態のニューロンを維持する神経栄養因子の産生を下方調節し、炎症性サイトカインの産生を開始する。ミクログリア活性化が進行する限りにおいて、炎症性サイトカインは、活性酸素（ＲＯＳ）および窒素（ＲＮＳ）種と共に、蓄積される。結果としての炎症性環境は、運動ニューロンの変性および疾患の進行に寄与する（Turner MR et al. Evidence of widespread cerebral microglial activation in amyotrophic lateral sclerosis: an [11C](R)-PK11195 positron emission tomography study. 2004, Neurobiol Dis 15:601-609）。
【０００８】
ＡＬＳの研究における大きな進展は、約２０％のＦＡＬＳケースが、変異体ＳＯＤ１に起因することの発見であった。１９９４年、ヒトＡＬＳの原因であることが示されたヒトＣｕ／Ｚｎ  ＳＯＤの遺伝子中に突然変異を有するトランスジェニック動物が開発された（Gurney ME et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu/Zn superoxide dismutase mutation. 1994, Science 264: 1772-5）。最初に作製された突然変異は、９３位でのグリシンのアラニンへの置換（Ｇ９３Ａ）および４位でのアラニンのバリンへの置換（Ａ４Ｖ）であった。その他のＳＯＤ１突然変異も、トランスジェニックマウスにて発現された。Ｇ９３ＡおよびＡ４Ｖに加えて、最も一般的なものは、グルタメートのアルギニンへの３７位（Ｇ３７Ｒ）および８５位（Ｇ８５Ｒ）での置換である。このような動物は、後肢脱力、下肢伸展障害、および歩幅長低下を伴う進行性の前角細胞疾患を発症し、数日の内に、四肢、主として後肢の完全な麻痺へと続き、呼吸不全で死亡した。
【０００９】
現在、トランスジェニックＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデルが、依然として、疾患修飾薬候補の前臨床評価のためのＡＬＳ／ＭＮＤに対する確立された最良のモデルである（Ludolph AC et al. Guidelines for the preclinical in vivo evaluation of pharmacological active drugs for ALS/MND: Report on the 142nd ENMC international workshop. 2007, Amyothr Lat Sclerosis 8:217-223）。このモデルにおいて、細胞の変化は、初期ステージでの運動ニューロンの液胞変性、およびそれらのプロセス、ならびにこれに続く、後期ステージでの脊髄におけるニューロン喪失、および前角の萎縮を主として特徴とする。ＦＡＬＳおよびＳＡＬＳの間には、症状または病態イベントに違いが存在しないことから、両方の疾患型の基礎となる機構は共通であると仮定される。従って、トランスジェニックＳＯＤ１動物は、それらが提示する表現型が、この疾患の唯一の実証済みの原因によって引き起こされることを主たる理由として、ＡＬＳに関する数多くの研究に広く用いられてきた。このモデルはまた、実験段階で試験される薬物および治療法に対する絶対基準ともされてきた。
【００１０】
ＡＬＳの治癒法は存在しない。現在、この疾患の進行に大きな影響を与えることができる治療はなく、症状を改善することだけを目的とする対症療法が存在するだけである。ＡＬＳに対する仮想の疾患修飾法の多くが臨床試験で試験されてきたが、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）によってこれまでに承認された薬物は、リルゾール（Ｒｉｌｕｔｅｋ、サノフィ‐アベンティス）の１つだけである。リルゾールの作用機構は、完全に確かではないが、シナプス前終末からのグルタミン酸遊離の阻害、および細胞外グルタミン酸取り込みの増加を含むと考えられる。しかし、初期の試験では、非常に僅かな生存期間の延長しか示されなかった（平均３ヶ月）。リルゾールの導入以来、１０を超えるプラセボコントロール試験が実施されてきたが、疾患の進行に対するさらなる有益な効果は示されなかった。この薬物は、一般的に忍容性を示し、最も一般的な副作用は、無力感および悪心である。最近、リチウムがＡＬＳの進行を非常に劇的に遅延させることが示された。ＡＬＳにおけるリチウムの大スケールでの試験が現在進行中である。その他の現時点での多施設臨床試験としては、中でも：オレソキシム（Olesoxime）（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル（Talampanel）、オランザピン、セフトリアキソン、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、抗酸化剤（コエンザイムＱ１０、ビタミンＥなど）、ピリメタミン  ミノサイクリン、およびタモキシフェンが挙げられる（Kollewe K et al. Amyotrophic lateral sclerosis: Current clinical trials and underlying pathomechanisms. 2008, Nervenartz. 79:653-61）。
【００１１】
従って、ＡＬＳ治療の主力は、依然として対症的であり、生活の質を向上し、可能な限り患者の自律性を維持する手助けとなるようあらゆる努力が払われるべきである。ＡＬＳで直面する主たる症状およびそれらの医学的管理について、表Ｉに示す。
【００１２】
表Ｉ．ＡＬＳの対症療法に関する提案
【表１】
2013537545.tif 000002
【００１３】
まとめると、ＡＬＳの治療のためであって、この疾患のすべての臨床症状に適用可能であり、投与が容易であり、短期間および長期間治療での使用において副作用のない、新しい治療薬を提供することが非常に望ましい。
【００１４】
ＡＬＳ炎症に関与する要素の１つである活性化されたミクログリアは、ＫＡＴＰチャネルを発現することが示されており（Ramonet D et al. Putative glucosensing property in rat and human activated microglia. Neurobiol Dis 2004, 17: 1-9）、これが、新しい治療標的となる可能性が示唆されている。
【００１５】
国際公開第２００６／０００６０７Ａ１号では、哺乳動物の疾患に伴うＣＮＳ慢性炎症の治療におけるＫＡＴＰチャネル開口剤（ＫＣＯ）の使用の可能性が開示されている。この出願ではまた、適切な用量は、医師または獣医によって決定されるべきであるが、０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内に入ることになるということも開示された。
【００１６】
ジアゾキシドは、ＫＡＴＰチャネル開口剤として作用するベンゾチアジアジンであり（Mannhold R. KATP channel openers: structure-activity relationships and therapeutic potential. Med Res Rev 2004, 24:213-66）、ヒトの高血圧症および低血糖症に対してこれまで用いられてきた。ジアゾキシドは、高血圧緊急症の治療のために、単一の注入による１〜３ｍｇ／ｋｇ（３７〜１１１ｍｇ／ｍ２）から最大１５０ｍｇ（１８５ｍｇ／ｍ２）までのミニボーラスの形態にて、５〜１５分ごとに非経口投与され（Ｈｙｐｅｒｓｔａｔ（商標））、また、治療抵抗性悪性高血圧症に対応するために、１日あたり６００〜８００ｍｇ（３７０〜４９３ｍｇ／ｍ２／日）の範囲の用量にて経口でも使用される（Fang P, MacDonald I, Laver M, Hua A, Kincaid-Smith P. Oral diazoxide in uncontrolled malignant hypertension. Med J Aust. 1974 Oct 26;2(17):621-4）。低血糖症の治療のための成人における有効経口用量は、３〜８ｍｇ／ｋｇ／日（１１１〜２９６ｍｇ／ｍ２／日）である（Ｐｒｏｇｌｙｃｅｍ（商標））。しかし、これらの用量は、浮腫および多毛症などの重篤な副作用を引き起こす場合が多い。
【００１７】
これまでのところ、ジアゾキシドのＡＬＳにおける効果を調べた研究はない。加えて、種々の脳損傷の状況におけるジアゾキシドの用量‐応答効果に関連する研究により、ある程度の有益な効果を得るためには、高用量が必要であることが示された。Gantenbein et al.は、ブピバカインによって引き起こされる痙攣の潜伏期間を伸ばすことによってマウスのブピバカイン誘発急性ＣＮＳ毒性を低減するためには、１００ｍｇ／ｋｇ（３００ｍｇ／ｍ２）のジアゾキシドが必要であることを示した（Gantenbein M et al. 1995. Life Sciences, 57: 113-116）。Farkas E et al.は、ラットにおける５ｍｇ／日（１４３ｍｇ／ｍ２／日）のジアゾキシド、およびジメチルスルホキシドが、脳過灌流関連の学習障害、および頚動脈閉塞後の脳損傷を防止することを示した（Farkas E et al. Brain Research. 2004, 1008:252-260）。Lenzser G et al.は、ジアゾキシドによるプレコンディショニングが、ラットへ２０ｍｇ／ｋｇ／日（１２０ｍｇ／ｍ２／日）で投与した場合に、全脳虚血誘発血液脳関門透過性を減衰させることができるが、６ｍｇ／ｋｇ／日（３６ｍｇ／ｍ２／日）では効果がないことを示した（Lenzser G et al. Brain Research. 2005, 1051:72-80）。
【発明の概要】
【００１８】
上記にも関わらず、高血糖症などのＫＣＯの使用に伴う望ましくない副作用を起こさない筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療法を開発することは非常に重要であろう。
【００１９】
発明者らは、驚くべきことに、ジアゾキシドでの治療が可能であるその他の治療状態の治療にこれまで用いられてきたものよりも十分に低いジアゾキシドの１日投与量が、ジアゾキシドが治療法においてこれまでに用いられてきた用量で投与される場合に通常存在する高血糖症などのＡＬＳのみに罹患する患者にとって望ましくない治療効果を含む所望されない副作用を引き起こすことなく、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の臨床症状および生存率を改善することによる予想外の有利な効果をもたらすことを見出した。
【００２０】
１つの態様では、本発明は、ジアゾキシド遊離塩基の１日投与量がｍｇ／ｍ２／日として表され、該１日投与量が０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日とされる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した哺乳動物の治療における医薬として用いられるための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩に関する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる医薬組成物に関する。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日の範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を投与することを含む、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した哺乳動物の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】１ヶ月の処理期間における、マウスへのジアゾキシド投与の６０分後の血中グルコースレベル（ｍｇ／ｄＬで表す）を示すグラフである。Ａ：ジアゾキシド用量１ｍｇ／ｋｇ／日（３ｍｇ／ｍ２／日）；Ｂ：ジアゾキシド用量０．０５ｍｇ／ｋｇ／日（０．１５ｍｇ／ｍ２／日）。結果は、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。
【図２】媒体、およびジアゾキシド１ｍｇ／ｋｇ／日（３ｍｇ／ｍ２／日）、０．１ｍｇ／ｋｇ／日（０．３ｍｇ／ｍ２／日）、または０．０５ｍｇ／ｋｇ／日（０．１５ｍｇ／ｍ２／日）による処理後、２１週齢にて生存しているＳＯＤ１変異マウスのパーセントを示すグラフである。
【図３】１００日の処理期間における、トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスへのジアゾキシド投与の６０分後の血中グルコースレベル（ｍｇ／ｄＬで表す）を示すグラフである。Ａ：ジアゾキシド用量４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）；Ｂ：ジアゾキシド用量０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）；Ｃ：コントロール媒体グループ。結果は、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表す。
【図４】媒体、およびジアゾキシド８ｍｇ／ｋｇ／日（２４ｍｇ／ｍ２／日）、４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）、または０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）による処理後における、生後１２週齢であるＳＯＤ１変異マウスの前脛骨ＣＭＡＰ振幅を示すグラフである。結果は、平均値±標準偏差（ＳＤ）として表す。各カラム内の数値は、野生型コントロールグループの平均前脛骨ＣＭＡＰ振幅に対する各実験グループの前脛骨ＣＭＡＰ振幅のパーセントを示す。
【発明の具体的説明】
【００２４】
発明者らは、驚くべきことに、ヒトにおける低血糖症などのその他の状態の治療に用いられる用量よりも十分に低い１日投与量にて、ジアゾキシドが筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に有効であり、従って、低血糖症に通常は罹患していない神経変性疾患を有する患者を治療する場合に望ましくない高血糖効果が回避されることを見出した。このことは、先行技術が、ＣＮＳにおける治療効果を達成するためには、非常により高い用量のジアゾキシドが必要であることを示唆していることから、特に驚くべきことである。
【００２５】
本発明の１つの態様は、０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．７０ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜２．６０ｍｇ／ｍ２／日、より好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜２．４０ｍｇ／ｍ２／日、さらにより好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１．５０ｍｇ／ｍ２／日、最も好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜０．７５ｍｇ／ｍ２／日の１日投与量での、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した哺乳動物の治療における医薬として用いるための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩である。本発明の１つの実施形態では、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩は、２．４０ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日の１投与日量での医薬として用いられる。この医薬は、０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜０．３７ｍｇ／ｍ２／日のジアゾキシドの１日投与量の投与用として作製されることがさらに好ましい。これらの量は、ジアゾキシド遊離塩基の量として表される。
【００２６】
具体的な実施形態では、この医薬は、０．１５ｍｇ／ｍ２／日、１．８５ｍｇ／ｍ２／日、２．２２ｍｇ／ｍ２／日、２．４０ｍｇ／ｍ２／日、２．９６ｍｇ／ｍ２／日、３．００ｍｇ／ｍ２／日、および１１．１ｍｇ／ｍ２／日から選択されるジアゾキシドの１日投与量の投与用として作製される。
【００２７】
「薬学上許容される」の用語は、薬理学的／毒物学的観点から患者にとって、ならびに組成、製剤、安定性、患者許容性、および生体利用度に関する物理学的／化学的観点から製薬化学者にとって許容可能である特性ならびに／または物質を意味する。
【００２８】
「薬学上許容される塩」の用語は、薬学上許容される酸または塩基との塩を包含する。薬学上許容される酸としては、限定されないが、塩酸、硫酸、リン酸、二リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、および硝酸を例とする無機酸、ならびに限定されないが、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、アスコルビン酸、シュウ酸、コハク酸、酒石酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸（シクラミン酸）、またはｐ‐トルエンスルホン酸を例とする有機酸の両方が挙げられる。薬学上許容される塩基としては、アルカリ金属（例：ナトリウムまたはカリウム）およびアルカリ土類金属（例：カルシウムまたはマグネシウム）の水酸化物、ならびに限定されないが、アルキルアミン、アリールアルキルアミン、およびヘテロ環式アミンを例とする有機塩基が挙げられる。
【００２９】
「医薬」の用語は、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる医薬組成物を意味する。医薬は、経口的に、注射により、吸入もしくは吹送（insuflation）により、または直腸内経路により投与してよい。このような医薬組成物はすべて、薬学上許容される賦形剤と共に従来の手段によって作製される。経口および非経口製剤が好ましい。
【００３０】
本発明の１つの実施形態では、医薬は、経口投与用に作製される。経口投与用の医薬組成物は、シロップ、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル、ロゼンジ、徐放性製剤、速溶性製剤などのいずれかの適切な剤形で投与されるか、または、使用前に水もしくはその他の適切な媒体で再構築するための乾燥製品として提供されてもよい。
【００３１】
懸濁液、溶液、油性または水性媒体中のエマルジョン、ペースト、および埋め込み型の持効性または生分解性製剤を含む注射用（皮下、皮内、筋肉内、静脈内など）の医薬組成物。そのような製剤は、さらに、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤を含む１つ以上の追加の成分を含んでなっていてよい。非経口投与用製剤の１つの実施形態では、活性成分は、適切な媒体（例：滅菌パイロジェンフリー水）で再構築した後に再構築された組成物を非経口投与するための、乾燥（すなわち、粉末または顆粒）形態で提供される。ジアゾキシドは、ボーラス注射または連続注入による非経口投与用に製剤されてよい。
【００３２】
有用であるその他の非経口投与用製剤としては、活性成分を、微結晶の形態で、リポソーム製剤で、または生分解性ポリマー系の成分として含んでなるものが挙げられる。持効性または埋め込みのための組成物は、エマルジョン、イオン交換樹脂、低溶解性ポリマー、または低溶解性塩などの薬学上許容されるポリマーまたは疎水性物質を含んでなっていてよい。
【００３３】
医薬製剤は、単位剤形で提供されてよいことが都合良く、薬学の技術分野で公知のいかなる方法で作製されてもよい。方法はすべて、（１もしくは複数の）活性剤を担体と会合させる工程を含む。
【００３４】
一般的に、製剤は、活性成分を、液体担体または微細に粉砕された固体担体またはこれらの両方と均一におよび密接に会合させ、次に、必要に応じて、生成物を所望される製剤に成形することによって作製される。
【００３５】
経口投与に適する本発明の製剤は、各々が所定量の活性成分を含有するカプセル剤、カシェ剤、もしくは錠剤などの別個の単位として、粉末もしくは顆粒として、水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、または、水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして提供されてよい。活性成分はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして提供されてもよい。
【００３６】
シロップ製剤は、一般的に、香味剤、甘味剤、および／または着色剤を含む、天然、合成、もしくは半合成オイル、または水を例とする液体担体中の化合物または塩の懸濁液または溶液からなる。
【００３７】
組成物が錠剤の形態である場合、固体製剤を作製するために通常用いられるいかなる医薬担体を用いてもよい。
【００３８】
錠剤は、所望に応じて含んでよい１つ以上の副成分と共に、圧縮または成型によって作製されてよい。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの易流動性形態の活性成分を、所望される場合はバインダー、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤、または分散剤と混合して、適切な機械により圧縮することで作製されてよい。成型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤され、所望される場合は乾燥および篩い分けされた活性化合物を含んでなる粉末ブレンドの混合物を、適切な機械により成型することで作製されてよい。錠剤は、所望される場合は、コーティングまたはケガキが行われてよく、およびその中の活性成分の調節された（すなわち、遅延または制御）放出が提供されるように製剤されてもよい。
【００３９】
組成物がカプセルの形態である場合、通常のいかなるカプセル化も適しており、例えば、硬質ゼラチンカプセルに上述の担体が用いられる。組成物が軟質ゼラチンカプセルの形態である場合、分散液または懸濁液の作製に通常用いられるいかなる医薬担体も考慮されてよい。
【００４０】
注射用製剤は、単位剤形として（例：アンプルにて）、または保存剤が添加されたマルチドーズ容器により提供されてよい。
【００４１】
治療の用語は、臨床徴候が現れる前またはその後に疾患の進行を制御するための、ジアゾキシドもしくはその薬学上許容される塩、またはその組成物の投与を示すために用いられる。疾患の進行を制御するとは、症状の軽減、疾患の期間の短縮、病理学的状態の安定化（具体的には、さらなる悪化の回避）、疾患の進行の遅延、病理学的状態の改善、および寛解（部分的および完全の両方）を含むがこれらに限定されない有益なまたは所望される臨床結果を示すことを意味する。「疾患の進行の制御」はまた、治療が施されない場合の期待生存期間と比較して延長された生存期間の意味も含み得る。本発明の特定の実施形態では、ジアゾキシドは、疾患の臨床徴候の少なくとも１つが現れた際に、疾患の進行を制御するために用いられる。
【００４２】
「哺乳動物」の用語は、家用および農業用の哺乳動物、霊長類、およびヒト、例えば人間、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、またはげっ歯類を含むがこれらに限定されない。好ましい実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００４３】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、随意筋運動を制御する中枢神経系の神経細胞である運動ニューロンの変性に起因する、進行性で致死性の神経変性疾患である。散発性および家族性ＡＬＳ（それぞれ、ＳＡＬＳおよびＦＡＬＳ）が知られている。いずれも臨床的および病理学的に類似しており、共通の病原であることが示唆される。
【００４４】
本発明に関して、「筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）」の用語は、古典型（シャルコー）ＡＬＳ、ルー・ゲーリック病、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、進行性球麻痺（ＰＢＰ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、球発症型ＡＬＳ、脊髄発症型ＡＬＳ、および多系統が関与するＡＬＳの名称で知られる神経変性症候群のスペクトラムを含む（Wijesekera LC and Leigh PN. Amyotrophic lateral sclerosis. Orphanet Journal of Rare Disease 2009, 4:3）。
【００４５】
トランスジェニックＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスは、ＳＯＤ１遺伝子にＧ９３Ａ変異を有することを特徴とする容認されたＡＬＳの動物モデルである（Ludolph AC et al. Guidelines for the preclinical in vivo evaluation of pharmacological active drugs for ALS/MND: Report on the 142nd ENMC international workshop. 2007, Amyothr Lat Sclerosis 8:217-223）。前記変異体マウスにおいて、変異体ＳＯＤ１の凝集体は、疾患組織にのみ見られ、運動ニューロン変性の過程においてより多くの量が検出された。
【００４６】
市販の形態のトランスジェニックＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスの平均余命の相違は、１４０から１６０日の間であり、明らかな運動麻痺は、死亡の１０〜１５日前に見られる。
【００４７】
これまでのところ、ＡＬＳ‐ＳＯＤ１マウスが、依然として前臨床研究のための最良の疾患モデルである。従って、本発明の実験は、トランスジェニックＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデルで行われた。
【００４８】
本発明の実施形態では、医薬は、単一の治療剤としてジアゾキシドを含んでなる。しかし、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である２つ以上の治療剤を用いた多重手法でＡＬＳを治療することが有利である場合もある。哺乳動物における筋萎縮性側索硬化症の治療におけるジアゾキシドの有益な使用はまた、この疾患またはその症状に対する別の治療と組み合わせる場合にも、高い有用性を示し得る。従って、本発明の別の実施形態では、医薬は、ジアゾキシドと、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤との併用投与用に作製される。
【００４９】
「筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である治療剤」の用語は、筋萎縮性側索硬化症の治療に用いられるのに適する薬剤を意味する。筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である治療剤としては、ＣＫ‐２０１７３５７、オレソキシム（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、リルゾール、トレチノインおよびピオグリタゾンＨＣｌ、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、サリドマイド、オランザピン、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、タモキシフェン、クレアチン一水和物、コエンザイムＱ１０、ＹＡＭ８０、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、Ｒ（＋）プラミペキソール二塩酸塩一水和物、ビタミンＥ、ミノサイクリン、トピラマート、ガバペンチン、ＡＥＯＬ‐１０１５０、幹細胞注射、ＳＢ‐５０９、自己骨髄由来幹細胞、セフトリアキソン、Ｅ０３０２（メコバラミン）、ＭＣＩ‐１８６、酢酸グラチラマー、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ‐Ｉ）、ＩＳＩＳ３３３６１１、ｓＮＮ００２９、ＧＳＫ１２２３２４９、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
「併用投与」は、ジアゾキシドが、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である治療剤と共に、一緒にまたは別々に、同時に、並行して、または順次に、任意の順序で投与されてよいことであると理解される必要があり、例えば、ジアゾキシドがまず投与されて、続いて筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤が投与されてよく；または、ジアゾキシドは最後に投与され、その前に筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤が投与されてよく；または、ジアゾキシドの投与が、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤を伴なって行われてもよい。
【００５１】
当業者であれば、本発明に関して、ジアゾキシドおよび筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である追加の治療剤の併用投与のための医薬は、単一の剤形、または別々の剤形の形態であってよいと理解される。本発明の実施形態では、医薬は、ジアゾキシドと、ＣＫ‐２０１７３５７、オレソキシム（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、リルゾール、トレチノインおよびピオグリタゾンＨＣｌ、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、サリドマイド、オランザピン、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、タモキシフェン、クレアチン一水和物、コエンザイムＱ１０、ＹＡＭ８０、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、Ｒ（＋）プラミペキソール二塩酸塩一水和物、ビタミンＥ、ミノサイクリン、トピラマート、ガバペンチン、ＡＥＯＬ‐１０１５０、幹細胞注射、ＳＢ‐５０９、自己骨髄由来幹細胞、セフトリアキソン、Ｅ０３０２（メコバラミン）、ＭＣＩ‐１８６、酢酸グラチラマー、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ‐Ｉ）、ＩＳＩＳ３３３６１１、ｓＮＮ００２９、ＧＳＫ１２２３２４９、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、および抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体；好ましくは、リルゾール、アリモクロモル、抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体、ＡＶＰ‐９２３、炭酸リチウム、セフトリアキソン、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、ＫＮＳ‐７６０７０４、幹細胞注射、およびＧＳＫ１２２３２４９から選択される筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の追加の治療剤と、を含んでなる。
【００５２】
本発明の別の実施形態では、ジアゾキシドおよび追加の治療剤は、単一の剤形に含有される。単一の剤形でのジアゾキシドとの併用に適する追加の治療剤は、ＣＫ‐２０１７３５７、オレソキシム（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、リルゾール、トレチノインおよびピオグリタゾンＨＣｌ、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、サリドマイド、オランザピン、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、タモキシフェン、クレアチン一水和物、コエンザイムＱ１０、ＹＡＭ８０、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、Ｒ（＋）プラミペキソール二塩酸塩一水和物、ビタミンＥ、ミノサイクリン、トピラマート、ガバペンチン；好ましくは、リルゾール、アリモクロモル、ＡＶＰ‐９２３、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、およびＯＮＯ‐２５０６ＰＯである。
【００５３】
本発明の別の実施形態では、ジアゾキシドおよび追加の治療剤は、別々の剤形に含有される。別々の剤形でのジアゾキシドとの併用治療に適する追加の治療剤は、ＡＥＯＬ‐１０１５０、幹細胞注射、ＳＢ‐５０９、自己骨髄由来幹細胞、セフトリアキソン、Ｅ０３０２（メコバラミン）、ＭＣＩ‐１８６、酢酸グラチラマー、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ‐Ｉ）、ＩＳＩＳ３３３６１１、ｓＮＮ００２９、ＧＳＫ１２２３２４９、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体；好ましくは、抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体、セフトリアキソン、幹細胞注射、およびＧＳＫ１２２３２４９である。
【００５４】
本発明によると、ジアゾキシドは、１３ｍｇ／ｍ２／日（ヒトでは０．３５１ｍｇ／ｋｇ／日）未満の用量にて、ＡＬＳの治療に有効であることが見出され、これは、低血糖症および高血圧症の治療に現在用いられている用量（それぞれ、３〜８ｍｇ／ｋｇ／日および６００〜８００ｍｇ／日）と比べて非常に低いものである。
【００５５】
ジアゾキシドは、ヒト患者の治療に用いられる場合、０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．３５１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０，１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０８１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０７ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０６５ｍｇ／ｋｇ／日、さらにより好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０４１ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０２０ｍｇ／ｋｇ／日、なお最も好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の量で投与される。本発明の１つの実施形態では、ジアゾキシドまたは薬学上許容される塩は、０．０６５ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０８１ｍｇ／ｋｇ／日の１日投与量にて、ヒト患者の治療のための医薬として用いられる。これらの用量は、平均体重が６０Ｋｇの患者の場合、０．２４ｍｇ／日〜２１．１ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜６ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜４．８６ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜４．２２ｍｇ／日、より好ましくは０．２４ｍｇ／日〜３．８９ｍｇ／日、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ／日〜２．４３ｍｇ／日、最も好ましくは０．２４ｍｇ／日〜１．２２ｍｇ／日、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ／日〜０．６０ｍｇ／日の範囲の１日投与量に相当する。本発明の１つの実施形態では、ヒト患者の治療のためのジアゾキシドまたは薬学上許容される塩の１日投与量は、３．８９ｍｇ／日〜４．８６ｍｇ／日である。これらの量は、ジアゾキシド遊離塩基の量として表される。
【００５６】
これらの１日投与量は、１日１回投与されてよく、または１日の中で投与される２もしくは３回分の用量に等分されてもよい。医薬組成物中のジアゾキシドの含有量は、１日の投与回数に応じて変更できる。
【００５７】
従って、別の態様によると、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための１日３回投与用に製剤された単位用量組成物を提供し、それは、０．０８ｍｇ〜７．０３ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜１．６２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜１．４１ｍｇ、より好ましくは０．０８ｍｇ〜１．３０ｍｇ、さらにより好ましくは０．０８ｍｇ〜０．８１ｍｇ、最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．４１ｍｇ、なお最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．２０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含有する。本発明の１つの実施形態では、１日３回投与用に製剤された単位用量組成物は、１．３０ｍｇ〜１．６２ｍｇを含有できる。
【００５８】
別の態様によると、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための１日２回投与用に製剤された単位用量組成物を提供し、それは、０．１２ｍｇ〜１０．５５ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．４３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．１１ｍｇ、より好ましくは０．１２ｍｇ〜１．９５ｍｇ、さらにより好ましくは０．１２ｍｇ〜１．２１ｍｇ、最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．６１ｍｇ、なお最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．３０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含有する。本発明の１つの実施形態では、１日２回投与用に製剤された単位用量組成物は、１．９４ｍｇ〜２．４３ｍｇを含有できる。
【００５９】
さらに別の態様によると、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための１日１回投与用に製剤された単位用量組成物を提供し、それは、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．２２ｍｇ、より好ましくは０．２４ｍｇ〜３．８９ｍｇ、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ〜２．４３ｍｇ、最も好ましくは０．２４ｍｇ〜１．２２ｍｇ、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ〜０．６０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含有する。本発明の１つの実施形態では、１日１回投与用に製剤された単位用量組成物は、３．８９ｍｇ〜４．８６ｍｇを含有できる。
【００６０】
好ましい実施形態では、ジアゾキシドは、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、および０．３ｍｇ／ｋｇ／日；好ましくは、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日および０．０８ｍｇ／ｋｇ／日；最も好ましくは、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、から選択される量にて、ヒト患者の治療のために用いられる。これらの用量は、平均体重が６０Ｋｇの患者の場合、それぞれ、３．６ｍｇ、４．８、および１８ｍｇの１日投与量に相当する。これらの量は、ジアゾキシド遊離塩基の量として表される。
【００６１】
特定の実施形態では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための、１．２ｍｇ、１．６ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、４．８ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；好ましくは、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；より好ましくは、１．６ｍｇ、２．４ｍｇ、および４．８ｍｇ；最も好ましくは、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、および３．６ｍｇから選択される量でジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる単位用量組成物を提供する。
【００６２】
本発明において、「医薬組成物」の用語は、本明細書で用いられる場合、「医薬」の用語と同等である。
【００６３】
医薬組成物は、１日１回または１日２回投与を意図する経口剤形であってよい。これにより、患者が治療計画に従うことが容易となり、従って、この計画へのコンプライアンスが促進される。
【００６４】
別の態様では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患する哺乳動物の治療方法に関し、それは、０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．７０ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日、好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜２．６０ｍｇ／ｍ２／日、より好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜２．４０ｍｇ／ｍ２／日、より好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１．９０ｍｇ／ｍ２／日、さらにより好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１．５０ｍｇ／ｍ２／日、最も好ましくは０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜０．７５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩の投与を含んでなる。０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜０．３７ｍｇ／ｍ２／日の範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を投与することがさらに好ましい。
【００６５】
ジアゾキシドがヒト患者の治療に用いられる場合、この治療方法は、０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．３５１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０，１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０８１ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０７ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０６５ｍｇ／ｋｇ／日、さらにより好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０４１ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０２０ｍｇ／ｋｇ／日、なお最も好ましくは０．００４ｍｇ／ｋｇ／日〜０．０１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩の投与を含んでなる。これらの用量は、平均体重が６０Ｋｇの患者の場合、０．２４ｍｇ／日〜２１．１ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜６ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜４．８６ｍｇ／日、好ましくは０．２４ｍｇ／日〜４．２２ｍｇ／日、より好ましくは０．２４ｍｇ／日〜３．８９ｍｇ／日、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ／日〜２．４３ｍｇ／日、最も好ましくは０．２４ｍｇ／日〜１．２２ｍｇ／日、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ／日〜０．６０ｍｇ／日の範囲の１日投与量に相当する。これらの量は、ジアゾキシド遊離塩基の量として表される。
【００６６】
好ましい実施形態では、ジアゾキシドは、ヒト患者の治療のために用いられ、ここで、治療の方法は、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、０．０８ｍｇ／ｋｇ／日、および０．３ｍｇ／ｋｇ／日；好ましくは、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日および０．０８ｍｇ／ｋｇ／日；最も好ましくは、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、から選択される量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩の投与を含んでなる。これらの用量は、平均体重が６０Ｋｇの患者の場合、それぞれ、３．６ｍｇ、４．８、および１８ｍｇの１日投与量に相当する。これらの量は、ジアゾキシド遊離塩基の量として表される。
【００６７】
これらの１日投与量は、１日１回投与されてよく、または１日の中で投与される２もしくは３回分の用量に等分されてもよい。投与されるジアゾキシドの量は、１日の投与回数に応じて変更できる。
【００６８】
従って、別の態様によると、本発明は、０．０８ｍｇ〜７．０３ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇから１．６２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜１．４１ｍｇ、より好ましくは０．０８ｍｇ〜１．３０ｍｇ、さらにより好ましくは０．０８ｍｇ〜０．８１ｍｇ、最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．４１ｍｇ、なお最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．２０ｍｇの範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を、１日３回投与することを含んでなる治療の方法を提供する。
【００６９】
さらに別の態様では、本発明は、０．０８ｍｇ〜７．０３ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜１．６２ｍｇ、好ましくは０．０８ｍｇ〜１．４１ｍｇ、より好ましくは０．０８ｍｇ〜１．３０ｍｇ、さらにより好ましくは０．０８ｍｇ〜０．８１ｍｇ、最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．４１ｍｇ、なお最も好ましくは０．０８ｍｇ〜０．２０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療において１日３回投与するための医薬組成物を提供する。
【００７０】
別の態様によると、本発明は、０．１２ｍｇ〜１０．５５ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．４３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．１１ｍｇ、より好ましくは０．１２ｍｇ〜１．９５ｍｇ、さらにより好ましくは０．１２ｍｇ〜１．２１ｍｇ、最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．６１ｍｇ、なお最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．３０ｍｇの範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を、１日２回投与することを含んでなる治療の方法を提供する。
【００７１】
さらに別の態様では、本発明は、０．１２ｍｇ〜１０．５５ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．４３ｍｇ、好ましくは０．１２ｍｇ〜２．１１ｍｇ、より好ましくは０．１２ｍｇ〜１．９５ｍｇ、さらにより好ましくは０．１２ｍｇ〜１．２１ｍｇ、最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．６１ｍｇ、なお最も好ましくは０．１２ｍｇ〜０．３０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療において１日２回投与するための医薬組成物を提供する。
【００７２】
さらに別の態様によると、本発明は、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．２２ｍｇ、より好ましくは０．２４ｍｇ〜３．８９ｍｇ、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ〜２．４３ｍｇ、最も好ましくは０．２４ｍｇ〜１．２２ｍｇ、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ〜０．６０ｍｇの範囲の量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を、１日１回投与することを含んでなる治療の方法を提供する。
【００７３】
さらに別の態様では、本発明は、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．２２ｍｇ、より好ましくは０．２４ｍｇ〜３．８９ｍｇ、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ〜２．４３ｍｇ、最も好ましくは０．２４ｍｇ〜１．２２ｍｇ、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ〜０．６０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療において１日１回投与するための医薬組成物を提供する。
【００７４】
さらに別の態様では、本発明は、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇ、好ましくは０．２４ｍｇ〜４．２２ｍｇ、より好ましくは０．２４ｍｇ〜３．８９ｍｇ、さらにより好ましくは０．２４ｍｇ〜２．４３ｍｇ、最も好ましくは０．２４ｍｇ〜１．２２ｍｇ、なお最も好ましくは０．２４ｍｇ〜０．６０ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなることを特徴とする、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための医薬組成物を提供する。
【００７５】
特定の実施形態では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療において投与するための、１．２ｍｇ、１．６ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、４．８ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；好ましくは、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；より好ましくは、１．６ｍｇ、２．４ｍｇ、および４．８ｍｇ；最も好ましくは、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、および３．６ｍｇ、から選択される量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００７６】
特定の実施形態では、本発明は、１．２ｍｇ、１．６ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、４．８ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；好ましくは、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇ；より好ましくは、１．６ｍｇ、２．４ｍｇ、および４．８ｍｇ；最も好ましくは、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、および３．６ｍｇ、から選択される量のジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなることを特徴とする、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療に用いるための医薬組成物を提供する。
【００７７】
特定の実施形態では、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩は、２．２２ｍｇ／ｍ２／日、２．９６ｍｇ／ｍ２／日、および１１．１ｍｇ／ｍ２／日から選択される量で投与される。
【００７８】
１つの実施形態では、方法は、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩が経口投与されることを特徴とする。
【００７９】
本発明の１つの実施形態では、方法は、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩が、単一の治療剤として投与されることを特徴とする。他の実施形態では、方法は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に有用である１つ以上の治療剤と組み合わせて、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩のある量を投与することを含んでなる。好ましい実施形態では、ジアゾキシドおよび追加の治療剤は、単一の剤形に含有される。他の好ましい実施形態では、ジアゾキシドおよび追加の治療剤は、別々の剤形に含有される。
【００８０】
本発明の１つの実施形態では、方法は、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩が、１日１回投与が意図される剤形として投与されることを特徴とする。別の実施形態では、１日２回の投与が意図される。
【００８１】
本発明の好ましい実施形態では、方法は、ヒトを治療するために用いられる。
【実施例】
【００８２】
マウスで実施した本発明の実験により、ジアゾキシドは、１３ｍｇ／ｍ２／日未満の様々な１日投与量にて有効であることが示された。
【００８３】
ジアゾキシドの用量は、体重１ｋｇあたりのジアゾキシドのｍｇとして、または体表面積１平方メートルあたりのジアゾキシドのｍｇとして表されてよい。Reagan-Shaw S. "Dose translation from animal to human studies revisited". FASEB J 2007, 22:659-661、の論文が、ｍｇ／ｋｇからｍｇ／ｍ２への変換に用いられる標準変換係数を提供している。
用量（ｍｇ／ｋｇ）×Ｋｍ＝用量（ｍｇ／ｍ２）
【００８４】
この論文はまた、この変換が、第一の動物種における用量を第二の動物種における用量へ変換する基礎であることも説明している（非比例的用量換算（allometric dose translation））。従って、ｍｇ／ｋｇ単位の動物の用量（ＡＤ）を、ｍｇ／ｋｇ単位のヒトに相当する用量（ＨＥＤ）へ、以下の式を用いて変換することができ：
【００８５】
【数１】
2013537545.tif 000003
ここで、各々の種に対するＫｍを表ＩＩに示す（データは、Reagan-Shaw S. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J 2007, 22:659-661より抽出）。
【００８６】
【表２】
2013537545.tif 000004
【００８７】
従って、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、および４ｍｇ／ｋｇ／日の用量によるマウスでの実験は、哺乳動物での一般的用量、０．１５ｍｇ／ｍ２／日、０．３ｍｇ／ｍ２／日、２．４ｍｇ／ｍ２／日、３ｍｇ／ｍ２／日、および１２ｍｇ／ｍ２／日に相当する。
【００８８】
本発明の利点は、以下の実施例を参照することでより十分に説明される。
【００８９】
実施例１：低用量のジアゾキシドはマウスにおいて高血糖症を引き起こさない
非常に低用量のジアゾキシドによる糖血症への影響を生体内で調べるために、ジアゾキシドをマウスに毎日投与して測定した。１１週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスをチャールズリバー（Charles River）より購入し、標準的な食餌および水の自由な摂食が可能な状態で１２：１２時間の明暗サイクルにて飼育した。実験は１１：００時に開始した。ジアゾキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）を、４日間の初期期間中、１ｍｇ／ｋｇ（３ｍｇ／ｍ２）（図１Ａ）および０．０５ｍｇ／ｋｇ（０．１５ｍｇ／ｍ２）（図１Ｂ）（ｎ＝６／グループ）の用量にて経管栄養法（ｐ．ｏ．）により毎日経口投与した。この期間は、血漿中ジアゾキシド濃度の定常状態を作り出すのに必要であると考えた。第４日以降、３０日間の処理期間にわたって、３〜４日ごとに血中グルコースレベルを測定した。測定は、薬物投与直前（時間０）および６０分の時点に行った。血液サンプルは伏在静脈から採取し、グルコースレベルはグルコメーターおよびグルコース試験紙（Ａｃｃｕ‐Ｃｈｅｋ（商標）Ａｖｉｖａ、ロシェダイアグノスティック（Roche Diagnostics）、インディアナポリス，インディアナ州，米国）を用いて測定した。各グループについて、グルコース濃度が１７６ｍｇ／ｄＬ以上の場合に、高血糖症であると見なした。図１に示すように、本研究で試験した２つの用量のいずれも、３０日間のジアゾキシド処理後、高血糖症を示さなかった。
【００９０】
実施例２：低用量のジアゾキシドは、筋萎縮性側索硬化症のＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌトランスジェニックマウスモデルにおいて高血糖症を引き起こさない
非常に低用量のジアゾキシドによる糖血症への影響を生体内で調べるために、トランスジェニックマウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌに、ジアゾキシドまたは媒体（コントロールグループ）を毎日投与して測定した。トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスは、元はジャクソンラボラトリー（Jackson Laboratories）（バーハーバー，メイン州）から購入したものであり、ＰＣＲ増幅によって早期の生後齢において導入遺伝子の陽性担体として通常の方法で識別されたものである（Garney et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science 1994. 264(5166): 1772-5）。制御された温度（２２±２℃）、湿度（４０〜６０％）、および光（１２時間サイクル）の下、動物のコロニーを飼育し、動物の保護に関するヨーロッパ共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って処理した。
【００９１】
生後４０日齢にて、ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ導入遺伝子の陽性担体として識別されたマウスを、ジアゾキシド処理またはコントロールグループへランダムに振り分けた。処理は生後第４５日に開始し、生後第１４５日まで継続した。薬物は、投与体積２００μＬにて、経管栄養法（ｐ．ｏ．）により毎日経口投与した。ジアゾキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）を、４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）（図３Ａ）および０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）（図３Ｂ）の用量で投与した。１つのコントロールグループでは、９０％の水と１０％のジメチルスルホキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）からなる、ジアゾキシドの溶解に用いた媒体を毎日経口投与した（図３Ｃ）。各グループは３体の動物からなる。
【００９２】
生後第１０５、１１５、および１４５日に血中グルコースレベルを測定した。測定は、薬物投与直前（時間０）および６０分の時点に行った。血液サンプルは伏在静脈から採取し、グルコースレベルはグルコメーターおよびグルコース試験紙（Ａｃｃｕ‐Ｃｈｅｋ（商標）Ａｖｉｖａ、ロシェダイアグノスティック、インディアナポリス，インディアナ州，米国）を用いて測定した。各グループについて、グルコース濃度が１７６ｍｇ／ｄＬ以上の場合に、高血糖症であると見なした。図３に示すように、本研究で試験した２つの用量のいずれも、１００日間のジアゾキシド処理後、高血糖症を示さなかった。
【００９３】
実施例３：低用量のジアゾキシドは、筋萎縮性側索硬化症のＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌトランスジェニックマウスモデルにおいて生存率を改善する
トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスは、元はジャクソンラボラトリー（バーハーバー，メイン州）から購入したものであり、ＰＣＲ増幅によって早期の生後齢において導入遺伝子の陽性担体として通常の方法で識別されたものである（Garney et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science 1994. 264(5166): 1772-5）。制御された温度（２２±２℃）、湿度（４０〜６０％）、および光（１２時間サイクル）の下、動物のコロニーを飼育し、動物の保護に関するヨーロッパ共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って処理した。
【００９４】
生後７０日齢にて、ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ導入遺伝子の陽性担体として識別されたマウスを、ジアゾキシド処理またはコントロールグループへランダムに振り分けた。野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊから構成される追加のグループも、自然死に対する絶対コントロールとして用いた。処理は生後第７０日に開始し、動物を屠殺するまで継続した。薬物は、投与体積２００μＬにて、経管栄養法（ｐ．ｏ．）により毎日経口投与した。ジアゾキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）を、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日（０．１５ｍｇ／ｍ２／日）、０．１ｍｇ／ｋｇ／日（０．３ｍｇ／ｍ２／日）、および１ｍｇ／ｋｇ／日（３ｍｇ／ｍ２／日）の用量で投与した。１つのコントロールグループでは、９８．５％の水と１．５％のジメチルスルホキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）からなる、ジアゾキシドの溶解に用いた媒体を毎日経口投与した。各グループは１４体の動物からなる。
【００９５】
生後およそ７５日にて、処理および未処理マウスは、探索行動および摂食行動の低下、ならびに体重の減少を示し始めた。２０〜３０日後、運動の欠乏が明らかに観察可能となり、筋肉量および体重は継続して減少した。生後第１３７日から１７２日までの間に、動物は、いずれの側に横たえた状態からも３０秒以内に立ち上がることができなくなり始め、これが動物の生存期間の最後であった。各マウスについて、死亡した日付と原因を記録した。人道的理由により、動物を密接に測定し、重篤な瀕死状態に対する基準を用いて、実際に死亡する前に瀕死状態にて屠殺を行った。確実におよび人道的に生存期間を決定するために、用いた瀕死状態は、マウスが横たえた状態から３０秒以内に立ち上がれない状態として定めた。瀕死のマウスは「死亡」と見なし、二酸化炭素を用いて安楽死させた。動物がこの「瀕死」段階に達すると、それから２４時間を超えて生存することができないことは公知である。
【００９６】
生後第２１週には、媒体で処理したＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスの僅かに４６．２％のみが生存し、一方、１ｍｇ／ｋｇ／日（３ｍｇ／ｍ２／日）のジアゾキシドで処理した動物は、８５．７％が依然として生存していた。０．１ｍｇ／ｋｇ／日（０．３ｍｇ／ｍ２／日）および０．０５ｍｇ／ｋｇ／日（０．１５ｍｇ／ｍ２／日）の用量の場合は、この週齢での生存パーセントは、それぞれ７１．４％および７８．６％であった（図２および表ＩＩＩ）。野生型‐非トランスジェニックコントロールグループの場合、この週齢での生存率は１００％であった。
【００９７】
【表３】
2013537545.tif 000005
【００９８】
試験したジアゾキシド用量はすべて、コントロールグループと比較して、良好な生存のメジアン値を示した。媒体コントロールグループのメジアン生存期間は、１４７日間であり、ジアゾキシド１ｍｇ／ｋｇ／日（３ｍｇ／ｍ２／日）の場合は、それは１５６日間、０．１ｍｇ／ｋｇ／日（０．３ｍｇ／ｍ２／日）の場合は、それは１５２日間、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日（０．１５ｍｇ／ｍ２／日）の場合は、それは１５３日間であった（表ＩＶ）。
【００９９】
【表４】
2013537545.tif 000006
【０１００】
実施例４：低用量のジアゾキシドは、筋萎縮性側索硬化症のＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌトランスジェニックマウスモデルにおいて疾患発症を改善する
トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスは、元はジャクソンラボラトリー（バーハーバー，メイン州）から購入したものであり、ＰＣＲ増幅によって早期の生後齢において導入遺伝子の陽性担体として通常の方法で識別されたものである（Garney et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science 1994. 264(5166): 1772-5）。制御された温度（２２±２℃）、湿度（４０〜６０％）、および光（１２時間サイクル）の下、動物のコロニーを飼育し、動物の保護に関するヨーロッパ共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って処理した。
【０１０１】
生後４０日齢にて、ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ導入遺伝子の陽性担体として識別されたマウスを、ジアゾキシド処理またはコントロールグループへランダムに振り分けた。処理は生後第４５日に開始し、生後第１４５日まで継続した。薬物は、投与体積２００μＬにて、経管栄養法（ｐ．ｏ．）により毎日経口投与した。ジアゾキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）を、４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）および０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）の用量で投与した。１つのコントロールグループでは、９０％の水と１０％のジメチルスルホキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）からなる、ジアゾキシドの溶解に用いた媒体を毎日経口投与した。各グループは３０体の動物からなる。
【０１０２】
疾患発症は、マウスがそのピーク体重に達した時点として決定した。
【０１０３】
試験したジアゾキシド用量はすべて、コントロールグループと比較して、良好な疾患発症日齢メジアン値を示した。媒体コントロールグループのメジアン疾患発症日齢は、１１１日であり、ジアゾキシド４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）の場合は、それは１１６日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）の場合は、それは１２１日であった（表Ｖ）。
【０１０４】
【表５】
2013537545.tif 000007
【０１０５】
実施例５：低用量のジアゾキシドは、筋萎縮性側索硬化症のＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌトランスジェニックマウスモデルにおいて神経伝導を改善する
トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６Ｊ‐ＴｇＮ（ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒｄｌマウスは、元はジャクソンラボラトリー（バーハーバー，メイン州）から購入したものであり、ＰＣＲ増幅によって早期の生後齢において導入遺伝子の陽性担体として通常の方法で識別されたものである（Garney et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science 1994. 264(5166): 1772-5）。制御された温度（２２±２℃）、湿度（４０〜６０％）、および光（１２時間サイクル）の下、動物のコロニーを飼育し、動物の保護に関するヨーロッパ共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って処理した。
【０１０６】
生後４０日齢にて、ＳＯＤ１‐Ｇ９３Ａ導入遺伝子の陽性担体として識別されたマウスを、ジアゾキシド処理またはコントロールグループへランダムに振り分けた。野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊから構成される追加のグループも、神経伝導測定に対する絶対コントロールとして用いた。処理は生後第４５日に開始し、生後第８５日まで継続した。薬物は、投与体積２００μＬにて、経管栄養法（ｐ．ｏ．）により毎日経口投与した。ジアゾキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）を、８ｍｇ／ｋｇ／日（２４ｍｇ／ｍ２／日）、４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）、および０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）の用量で投与した。１つのコントロールグループでは、９０％の水と１０％のジメチルスルホキシド（シグマアルドリッチ、セントルイス，ミズーリ州，米国）からなる、ジアゾキシドの溶解に用いた媒体を毎日経口投与した。各グループは８体の動物からなる。
【０１０７】
生後８５日齢にて、動物に神経伝導測定のための試験を行った。運動神経伝導試験については、坐骨神経を、坐骨切痕に配置した１対のニードル電極を通して送られる長さ０．０２ｍｓの単パルスにより（Ｇｒａｓｓ  Ｓ８８）経皮刺激した。複合筋活動電位（ＣＭＡＰ、Ｍ波）を、前脛骨（ＴＡ）からマイクロニードル電極によって記録した。記録された電位を増幅し、ベースラインから最大ネガティブピークまでの振幅測定に適するように設定したデジタルオシロスコープ上（Ｔｅｋｔｒｏｎｉｘ  ４５０Ｓ）に表示した。再現性を確保するために、記録用ニードルを顕微鏡下に置き、解剖学的目印をガイドとして、すべての動物に対して確実に同じ配置とした。試験の間、サーモスタット付の保温パッドにより、マウスの体温を一定に維持した。
【０１０８】
神経伝導の研究は、下位運動ニューロンの機能喪失を評価するために行った。野生型コントロールグループからの平均ＣＭＡＰ振幅を１００％として図４に示すように、０．８ｍｇ／ｋｇ／日（２．４ｍｇ／ｍ２／日）および４ｍｇ／ｋｇ／日（１２ｍｇ／ｍ２／日）のジアゾキシド用量は、媒体コントロールグループと比較して、それぞれ前脛骨ＣＭＡＰの振幅の１７．１％および３．４％の増加を示した。８ｍｇ／ｋｇ／日（２４ｍｇ／ｍ２／日）のジアゾキシド用量では、媒体コントロールグループと比較した場合の差異は観察されなかった。
【図１Ａ】
2013537545.tif 000008
【図１Ｂ】
2013537545.tif 000009
【図２】
2013537545.tif 000010
【図３】
2013537545.tif 000011
【図４】
2013537545.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成25年4月22日(2013.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジアゾキシド遊離塩基の１日投与量がｍｇ／ｍ２／日として表され、該１日投与量が０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜１３．００ｍｇ／ｍ２／日とされるように用いられる、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患した哺乳動物の治療のための、ジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２】
遊離塩基の形態のジアゾキシドが用いられる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物が、経口投与用に作製される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
０．１５ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日のジアゾキシドを１日投与量とされるように用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
２．４０ｍｇ／ｍ２／日〜３．００ｍｇ／ｍ２／日のジアゾキシドを１日投与量とされるように用いられる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
０．１５ｍｇ／ｍ２／日、２．２２ｍｇ／ｍ２／日、２．４０ｍｇ／ｍ２／日、２．９６ｍｇ／ｍ２／日、３．００ｍｇ／ｍ２／日、および１１．１ｍｇ／ｍ２／日から選択されるジアゾキシドを１日投与量とされるように用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が、ジアゾキシドを単一の治療剤として含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が、ジアゾキシドと、筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の治療剤との組み合わせを含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、ジアゾキシドと、ＣＫ‐２０１７３５７、オレソキシム（ＴＲＯ１９６２２）、アリモクロモル、リルゾール、トレチノインおよびピオグリタゾンＨＣｌ、ＡＶＰ‐９２３、メマンチン、タランパネル、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、サリドマイド、オランザピン、ＫＮＳ‐７６０７０４、炭酸リチウム、ＮＰ００１、ＯＮＯ‐２５０６ＰＯ、タモキシフェン、クレアチン一水和物、コエンザイムＱ１０、ＹＡＭ８０、フェニル酪酸ナトリウム、ピリメタミン、Ｒ（＋）プラミペキソール二塩酸塩一水和物、ビタミンＥ、ミノサイクリン、トピラマート、ガバペンチン、ＡＥＯＬ‐１０１５０、幹細胞注射、ＳＢ‐５０９、自己骨髄由来幹細胞、セフトリアキソン、Ｅ０３０２（メコバラミン）、ＭＣＩ‐１８６、酢酸グラチラマー、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ‐Ｉ）、ＩＳＩＳ３３３６１１、ｓＮＮ００２９、ＧＳＫ１２２３２４９、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、および抗‐ＣＤ４０Ｌ抗体から選択される筋萎縮性側索硬化症の治療に有用である１つ以上の追加の治療剤とを含んでなる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ジアゾキシドおよび前記追加の治療剤が、単一の剤形に含有される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ジアゾキシドおよび前記追加の治療剤が、別々の剤形に含有される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹患したヒトの治療のための、０．２４ｍｇ〜２１．１ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
０．２４ｍｇ〜４．８６ｍｇのジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
１．２ｍｇ、１．６ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、４．８ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、および１８ｍｇから選択される量でジアゾキシドまたはその薬学上許容される塩を含んでなる、請求項１３に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2013537545.tif 000013
2013537545.tif 000014