(57)【要約】  約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブおよび約２〜約１３％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリンを含む医薬組成物、ならびにその製造方法を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、
約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリンであって、該修飾シクロデキストリンによって、該修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより低くなるように選択された、修飾シクロデキストリン、
ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、
重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および
水
を含んでなる医薬組成物であって、
少なくとも２ヶ月間安定である、医薬組成物。
【請求項２】
ｐＨが約４〜約４．５である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
重量オスモル濃度が約２７０〜約３３０ｍＯｓｍである、請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記修飾シクロデキストリンが、前記修飾シクロデキストリンによって、前記修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより少なくとも０．４低くなり、前記修飾シクロデキストリンによって、１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ水溶液中でのパゾパニブのｐＫａがもたらされるように選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記修飾シクロデキストリンが、前記修飾シクロデキストリンによって、前記修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより少なくとも０．８低くなるように選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
修飾シクロデキストリンの量が約６．０〜約１０．０％ｗ／ｗである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記修飾シクロデキストリンがβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
少なくとも６ヶ月間安定である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
少なくとも１２ヶ月間安定である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記緩衝剤がリン酸緩衝剤である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ｐＨ調整剤が、水酸化ナトリウム、塩酸およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１から請求項１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適している、請求項１から請求項１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ヒトへの投与に適した点眼用処方物である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、
約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、および
ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、
重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、ならびに
水
を含んでなる医薬組成物であって、
ＵＣＤ値が温度２５℃において０．０００２〜０．６の範囲であり、少なくとも２ヶ月間安定である、医薬組成物。
【請求項１７】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記修飾シクロデキストリンがβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである、請求項１６または請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記修飾シクロデキストリンの量が約６．０％〜約１０．０％ｗ／ｗの範囲である、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
重量オスモル濃度が２７０〜３３０ｍＯｓｍの範囲である、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記緩衝剤がリン酸緩衝剤である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記ｐＨ調整剤が、水酸化ナトリウム、塩酸およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１６から請求項２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記眼科用組成物のｐＨが４．０〜４．５の範囲である、請求項１６から請求項２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
少なくとも６ヶ月間安定である、請求項１６から請求項２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
少なくとも１２ヶ月間安定である、請求項１６から請求項２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適している、請求項１６から請求項２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ヒトへの投与に適した点眼用処方物である、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、
約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、および
ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、
重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、ならびに
水
を含んでなる医薬組成物であって、
パゾパニブの過飽和水溶液であり、少なくとも２ヶ月間安定である、医薬組成物。
【請求項３１】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記修飾シクロデキストリンがβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである、請求項３０または請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記修飾シクロデキストリンの量が約６．０％〜約１０．０％ｗ／ｗの範囲である、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
重量オスモル濃度が２７０〜３３０ｍＯｓｍの範囲である、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記緩衝剤がリン酸緩衝剤である、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記ｐＨ調整剤が、水酸化ナトリウム、塩酸およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３０〜３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記眼科用組成物のｐＨが約４．０〜約４．５の範囲である、請求項３０〜３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
少なくとも６ヶ月間安定である、請求項３０〜３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
少なくとも１２ヶ月間安定である、請求項３０〜３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適している、請求項３０〜４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
ヒトへの投与に適した点眼用処方物である、請求項３０〜４１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、
約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、
ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、
重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および
水
を含んでなる、医薬組成物。
【請求項４４】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記修飾シクロデキストリンがβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである、請求項４３または請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記修飾シクロデキストリンの量が約６．０％〜約１０．０％ｗ／ｗの範囲である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
重量オスモル濃度が２７０〜３３０ｍＯｓｍの範囲である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
緩衝剤をさらに含んでなる、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記緩衝剤がリン酸緩衝剤である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記ｐＨ調整剤が、水酸化ナトリウム、塩酸およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記眼科用組成物のｐＨが約４．０〜約４．５の範囲である、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適している、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
ヒトへの投与に適した点眼用処方物である。請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、
約９％のβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテル、
ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、
重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および
水
を含んでなる、医薬組成物。
【請求項５５】
ヒトへの投与に適した点眼用処方物である、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
パゾパニブの過飽和溶液の製造方法であって、
眼科用処方物における使用に適した、パゾパニブ酸付加塩と修飾シクロデキストリンとの水溶液を形成すること、および
該溶液のｐＨを３．５〜５．７の間に調整して、パゾパニブ過飽和溶液を得ることを含み、該過飽和溶液中に可溶化されたパゾパニブ酸付加塩の濃度がパゾパニブ約１０ｍｇ／ｍｌに相当する、方法。
【請求項５７】
前記パゾパニブ酸付加塩がパゾパニブ塩酸塩である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記修飾シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項５６または請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記修飾シクロデキストリンがβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記修飾シクロデキストリンの量が約２．０％〜約１３．０％ｗ／ｗの範囲である、請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記修飾シクロデキストリンの量が約６．０％〜約１０．０％ｗ／ｗの範囲である、請求項５６〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物およびその製造方法、特に、眼投与に適した医薬処方物に関する。
【背景技術】
【０００２】
パゾパニブは、高度に生物学的に利用可能な、血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）−１、−２、−３、血小板由来因子受容体（ＰＤＧＦＲ）−α、−β、サイトカイン受容体（ｃＫｉｔ）、インターロイキン−２受容体誘導性Ｔ細胞キナーゼ（Ｉｔｋ）、白血球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（Ｌｃｋ）および膜貫通糖タンパク質受容体チロシンキナーゼ（ｃ−Ｆｍｓ）のマルチチロシンキナーゼ阻害剤である。ＷＯ２００７／０６４７５２には、加齢性黄斑変性症を治療するためのパゾパニブの使用が記載されている。パゾパニブの安定な点眼用処方物を提供することが望ましく、そのような処方物ではパゾパニブがその処方物中に可溶化されている。パゾパニブは難水溶性薬物であり、リン酸バッファーへの溶解度はｐＨ５．０および温度およそ２５℃においておよそ０．０００００６ｍｇ／ｍＬ（１．３７×１０−８ｍｏｌ／Ｌ）である。
【０００３】
シクロデキストリンは、他の難水溶性薬物と水溶性包接錯体を形成する能力から、溶解促進剤として薬物処方物に用いられる。薬物とシクロデキストリンとの間の相互作用の強さを表す基本的特性は結合定数（または安定度定数）Ｋである。シクロデキストリン有用度数(The cyclodextrin utility number)（ＵＣＤ）は、投与形におけるシクロデキストリン使用の実現可能性を評価するために用いられ得る無次元数である。処方設計者は、このＵＣＤによって、難水溶性薬物の処方物におけるシクロデキストリンの使用により大きな可溶化利益がもたらされる可能性があるかどうかを判定することができるようになる。ＵＣＤは、次の式を用いて計算される：
ＵＣＤ＝（ＫＳｏ／１＋ＫＳｏ）（ｍＣＤ／ｍＤ）（ＭＷＤ／ＭＷＣＤ）
（式中、
ｍＤは薬物の用量であり、
ｍＣＤはシクロデキストリンの用量であり、
ＭＷＤは分子量薬物であり、
ＭＷＣＤは分子量シクロデキストリンであり、
Ｋｏは結合定数である）。
【０００４】
無次元数ＵＣＤが１以上である場合、可溶化は、シクロデキストリンと薬物との錯体形成によって十分にもたらされる。無次元数が１未満である場合、完全可溶化には錯体形成だけでは不十分である。眼科用処方物では、シクロデキストリンの有効な量、ｍＣＤは、その溶液の所望の浸透圧に依存し得る。V.M. Rao & V.J. Stella, When Can Cyclodextrins Be Considered for Solubilization Purposes?, J. Pharm. Sci., Vol. 92, No. 5 (2003)参照。
【０００５】
２００９年５月６日に、視覚と眼科学研究協会会議(the Association for Research in Vision and Ophthalmology)（ＡＲＶＯ）の年次総会で発表された「A Multi-Targeted Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor for the Treatment of Neovascular AMD: Preclinical Support of Clinical Development of Pazopanib Eye Drops」と題するポスター（「ＡＲＶＯポスター」）によって、イヌおよびウサギの眼毒性研究に用いる点眼用処方物が報告された。そのポスターには、その処方物はｐＨ５で７％修飾シクロデキストリン、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよび０．０１％塩化ベンザルコニウムを含むことが報告されている（塩化ベンザルコニウムは本臨床処方物には含まれないことを特筆しておく）。そのポスターには、２ｍｇ／ｍｌおよび５ｍｇ／ｍｌ濃度のパゾパニブが報告されている。
【０００６】
前臨床毒性研究では、その処方物は有効成分の毒作用を変えない（遮蔽しないまたは増強しない）ものであることが重要である。最終臨床処方物は動物での安全性評価に用いられた投与形と組成が全く異なる場合が多いため、そういったことが非常に重要である。例えば、最終臨床処方物は、それが製造され、目録に記載され、薬局に納入され、患者に調剤され、指定処方についての全治療過程の間患者によって投与されることが可能な期間にわたって安定性を示す必要があるであろう。この期間は、１ヶ月または２ヶ月くらいと短い場合もあり、６ヶ月〜１年以上くらいと長い場合もある。これに対して、前臨床毒性研究に用いられる処方物は、長期安定性を示す必要はないが、その代わりに、数日の投与量内で調製すればよい。
【０００７】
いくつかの仮定条件を用いることにより、ＵＣＤ数は、ＡＲＶＯポスターにおいて提示された毒性研究処方物に基づいて計算することができる。パゾパニブは分子量が４３７．５であり、修飾シクロデキストリン、例えば、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル）は分子量が２，２００である。パゾパニブの結合定数、Ｋの値はおよそ１０，０００であると決定された。上記のとおり、ｐＨ５および温度およそ２５℃におけるリン酸バッファーへのパゾパニブの溶解度は０．０００００６ｍｇ／ｍＬであり、これは１．３７×１０−８ｍｏｌ／Ｌに相当する。７％ｗ／ｗのＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（スルホブチルエーテル−シクロデキストリン）を用いたパゾパニブの２ｍｇ／ｍＬ処方物では、ＵＣＤ値はｐＨ５において０．００１となる。７％ｗ／ｗ  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（スルホブチルエーテル−シクロデキストリン）を用いたパゾパニブの５ｍｇ／ｍＬ処方物では、ＵＣＤ値はｐＨ５において０．０００４となる。Raoの論文に関して上に記載のとおり、処方設計者は、このＵＣＤによって、難水溶性薬物の処方物におけるシクロデキストリンの使用により大きな可溶化利益がもたらされる可能性があるかどうかを判定することができるようになる。無次元数が１未満である場合、完全可溶化には錯体形成だけでは不十分である。これらの前臨床毒性研究処方物の非常に低いＵＣＤ値を考慮すると、これらのような処方物は臨床試験処方物としての使用に必要な安定性を示さないと考えられる。
【０００８】
１０ｍｇ／ｍＬパゾパニブ遊離塩基に相当するパゾパニブ酸付加塩の量が可溶化されている、安定な点眼用処方物を提供することが望ましい。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の一態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリンであって、該修飾シクロデキストリンによって、該修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより低くなるように選択された、修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００１０】
本発明のもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。該組成物はヒトの眼への投与に適しており、そのＵＣＤ値は温度およそ２５℃において０．０００２〜０．６の範囲である。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００１１】
本発明のさらにもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含み、該組成物はパゾパニブの過飽和水溶液である。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００１２】
本発明のさらにもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。
【００１３】
本発明のもう１つの態様において、過飽和組成物の製造方法は、パゾパニブ酸付加塩と修飾シクロデキストリンとの水溶液を形成すること、および該溶液のｐＨを約４〜約５の間に調整して、少なくとも２ヶ月間安定であるパゾパニブ過飽和溶液を得ることを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】
【図２】
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本明細書において、「過飽和溶液」とは、温度および圧力の一定条件下での飽和溶液の場合より多くの溶質を含有する溶液を意味する。
【００１６】
本明細書において、「安定な」とは、組成物が、ブランクフローラップアルミホイル(blank flow wrap aluminum foil)を用いてオーバーラッピングされた成形同時充填の使い捨て容器にパッケージングされ、そのパッケージングされた処方物の温度が５℃に維持された場合に、その組成物は米国薬局方(United States Pharmacopeia)（ＵＳＰ）＜７８９＞「Particulate Matter in Ophthalmic Solutions」に準じて物理学的に安定しているということを意味する。
【００１７】
本発明の一態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリンであって、該修飾シクロデキストリンによって、該修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより低くなるように選択された、修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００１８】
本発明のこの態様によるいくつかの実施形態において、前記修飾シクロデキストリンは、前記修飾シクロデキストリンによって、前記修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａが単独でのパゾパニブの水中でのｐＫａより少なくとも０．４低くなるように選択される。本発明のこの態様による他の実施形態において、前記修飾シクロデキストリンは、前記修飾シクロデキストリンによって、所定量の修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａがパゾパニブの水中でのｐＫａより少なくとも０．８低くなるように選択される。
【００１９】
所定量の修飾シクロデキストリンを加えた場合のパゾパニブの水中でのｐＫａは、実施例７に記載のとおり、電位差測定によって測定することができる。当業者には明らかなように、１０ｍｇ／ｍＬ水溶液中でのパゾパニブのｐＫａは、ＡＣＤ予測ソフトウェアを用いて理論的に決定することができる。
【００２０】
本発明のもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。該組成物はヒトの眼への投与に適しており、そのＵＣＤ値は温度およそ２５℃において０．０００２〜０．６の範囲である。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００２１】
本発明のさらにもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含み、該組成物はパゾパニブの過飽和水溶液である。該組成物は少なくとも２ヶ月間安定である。
【００２２】
本発明のさらにもう１つの態様において、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬのパゾパニブ、約２．０〜約１３．０％ｗ／ｗの修飾シクロデキストリン、ｐＨ３．５〜５．７を与えるために必要なｐＨ調整剤、重量オスモル濃度２００〜４００ｍＯｓｍを与えるために必要な浸透圧調整剤、および水を含む。
【００２３】
本発明のもう１つの態様において、過飽和組成物の製造方法は、パゾパニブ酸付加塩と修飾シクロデキストリンとの水溶液を形成すること、および該溶液のｐＨを約４〜約５の間に調整して少なくとも２ヶ月間安定であるパゾパニブ過飽和溶液を得ることを含む。
【００２４】
本明細書において記載する本発明の様々な態様による医薬組成物は、ヒトの眼への局所投与に適していることが好ましい。いくつかの実施形態において、本明細書において記載する本発明の様々な態様による医薬組成物は、ヒトの眼への点眼薬としての局所投与に適している。当業者ならば、該組成物がヒトの眼への局所投与に適しており、点眼薬としてのヒトの眼への局所投与に適しているかどうかを判定するために、種々の利用可能な方法のいずれか１つを用いることができる。
【００２５】
本明細書において、化学名「パゾパニブ」とは、化合物５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミドを指し、この化合物は構造Ｉによって表される。
【化１】
2013525501.tif 000002
【００２６】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は塩酸塩である。特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は、式（Ｉ’）によって示される一塩酸塩である。
【化２】
2013525501.tif 000003
【００２７】
式（Ｉ）の化合物の一塩酸塩は、化学名５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩を有する。
【００２８】
他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は式（Ｉ）の化合物の一塩酸塩一水和物・溶媒和物である。式（Ｉ）の化合物の一塩酸塩一水和物・溶媒和物は、化学名５−（｛４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル｝アミノ）−２−メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩一水和物を有し、これは式（Ｉ’’）によって示されるとおりである。
【化３】
2013525501.tif 000004
【００２９】
式（Ｉ）の化合物の遊離塩基、塩および溶媒和物は、例えば、２００１年１２月１９日出願の、２００２年８月１日にＷＯ０２／０５９１１０として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／４９３６７、および２００３年６月１７日出願の、２００３年１２月２４日にＷＯ０３／１０６４１６として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０３／１９２１１の手順に従って、または本明細書において示す方法に従って調製し得る。
【００３０】
本明細書において、「酸付加塩」という用語は、式（Ｉ）の化合物の置換基における１個以上の窒素から誘導された塩である。典型的な塩としては、以下の塩が挙げられる：酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン(hydrabamine)、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、マレイン酸一カリウム、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミン、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、カリウム、サリチル酸塩、ナトリウム、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、トリメチルアンモニウムおよび吉草酸塩。
【００３１】
パゾパニブは難水溶性薬物であり、２５℃におけるリン酸バッファーへの近似溶解度は以下のとおりである：ｐＨ５．０では０．０００００６ｍｇ／ｍＬ（１．３７×１０−８ｍｏｌ／Ｌ）、ｐＨ４．５では０．００００２５ｍｇ／ｍＬ（５．７１×１０−８ｍｏｌ／Ｌ）；ｐＨ４．２５では０．０００５３４ｍｇ／ｍＬ（１．２２×１０−６ｍｏｌ／Ｌ）；ｐＨ４．０では０．００１０４３ｍｇ／ｍＬ（２．３８×１０−６；およびｐＨ３．５では０．０２ｍｇ／ｍＬ（４．５７×１０−５ｍｏｌ／ｍＬ）。
【００３２】
シクロデキストリン有用度数、ＵＣＤは、投与形におけるシクロデキストリン使用の実現可能性を評価するために用いられる無次元数である。ＵＣＤは、薬物の用量、ＣＤの有効な量、結合定数、およびＣＤの不在下での薬物溶解度からなるランプトパラメーター(a lumped parameter)である。ＵＣＤは、イオン化および錯体形成により溶解度の相乗的増大を示すイオン性薬物の溶解度を予測するために用いられ得る。Rao, V.M., Stella, V.J., J Pharm Sci, 92, 5 927, May 2003参照。ＵＣＤは、次の式を用いて計算される：
ＵＣＤ＝（ＫＳｏ／１＋ＫＳｏ）（ｍＣＤ／ｍＤ）（ＭＷＤ／ＭＷＣＤ）
（式中、
ｍＤは薬物の用量であり、
ｍＣＤはシクロデキストリンの用量であり、
ＭＷＤは分子量薬物であり、
ＭＷＣＤは分子量シクロデキストリンであり、
Ｋｏは結合定数である）。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ＵＣＤ値は、温度２５℃において下限約０．０００２、０．０００３、０．０００４、０．０００５、０．０００６、０．０００７、０．０００８、０．０００９、０．００１、０．００１５、０．００２、０．００２５、０．００３、０．００３５、０．００４、０．００４５、０．００５、０．００５５、０．００６、０．００６５、０．００７、０．００７５、０．００８、０．００８５、０．００９、０．００９５、０．０１、０．０１５、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０３５、０．０４、０．０４５、０．０５、０．０５５、０．０６、０．０６５、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０８５、０．０９、０．０９５、０．１、０．１０５、０．１１、０．１１５、０．１２、０．１２５、０．１３、０．１３５、０．１４、０．１４５、０．１５、０．１５５、０．１６、０．１６５、０．１７、０．１７５、０．１８、０．１８５、０．１９、０．１９５、０．２、０．２０５、０．２１、０．２１５、０．２２、０．２２５、０．２３、０．２３５、０．２４、０．２４５、０．２５、０．２５５、０．２６、０．２６５、０．２７、０．２７５、０．２８、０．２８５、０．２９、０．２９５、０．３、０．３０５、０．３１、０．３１５、０．３２、０．３２５、０．３３、０．３３５、０．３４、０．３４５、０．３５、０．３５５、０．３６、０．３６５、０．３７、０．３７５、０．３８、０．３８５、０．３９、０．３９５または０．４から上限約０．２、０．２０５、０．２１、０．２１５、０．２２、０．２２５、０．２３、０．２３５、０．２４、０．２４５、０．２５、０．２５５、０．２６、０．２６５、０．２７、０．２７５、０．２８、０．２８５、０．２９、０．２９５、０．３、０．３０５、０．３１、０．３１５、０．３２、０．３２５、０．３３、０．３３５、０．３４、０．３４５、０．３５、０．３５５、０．３６、０．３６５、０．３７、０．３７５、０．３８、０．３８５、０．３９、０．３９５、０．４、０．４０５、０．４１、０．４１５、０．４２、０．４２５、０．４３、０．４３５、０．４４、０．４４５、０．４５、０．４５５、０．４６、０．４６５、０．４７、０．４７５、０．４８、０．４８５、０．４９、０．４９５、０．５、０．５０５、０．５１、０．５１５、０．５２、０．５２５、０．５３、０．５３５、０．５４、０．５４５、０．５５、０．５５５、０．５６、０．５６５、０．５７、０．５７５、０．５８、０．５８５、０．５９、０．５９５または０．６までの範囲である。
【００３４】
前記修飾シクロデキストリンは、眼用医薬組成物に含められる場合に、前記修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適しているように選択されることが好ましい。修飾シクロデキストリンがヒトの眼への投与に適しているかどうかは、組成物および成分がヒトの眼への投与に適しているかどうかを判定するための当業者に公知の種々の利用可能な方法および手順のいずれか１つを用いて判定することができる。
【００３５】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記修飾シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルおよびそれらの組合せからなる群から選択される。他の実施形態において、前記修飾シクロデキストリンはβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテルである。β−シクロデキストリンスルホブチルエーテルはＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）という商品名で販売されている。
【００３６】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記修飾シクロデキストリンの量は、下限約２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９または９．０％ｗ／ｗから上限約８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．６、１１．７、１１．８、１１．９、１２．０、１２．１、１２．２、１２．３、１２．４、１２．５、１２．６、１２．７、１２．８、１２．９または１３．０％ｗ／ｗの範囲である。
【００３７】
「Pharmaceutical Dosage Forms Ophthalmic Preparations」と題する米国薬局方（ＵＳＰ）＜１１５１＞には、点眼液の等張性に関する次の指針が提供されている。
【００３８】
等張度に関して、ＵＳＰ＜１１５１＞では、涙液は、血液と等張であり、その等張度は０．９％塩化ナトリウム溶液のものに相当するとされている。理想的には、点眼液はこの等張度を有するべきである。しかし、眼は著しい不快感なく、０．６％塩化ナトリウム溶液のものくらいに低く、２．０％塩化ナトリウム溶液のものくらいに高い等張度にも耐え得る。これらの等張度は、０．６％ｗ／ｖ  ＮａＣｌ水溶液の場合には重量オスモル濃度値２００ｍＯｓｍ、０．９％ｗ／ｖ  ＮａＣｌ水溶液の場合には２９０ｍＯｓｍ、２．０％ｗ／ｖ  ＮａＣｌ水溶液の場合には６３１ｍＯｓｍにおおむね相当する。しかしながら、Ｔｉｍｏｐｔｉｃ−Ｘｅ（登録商標）（チミロールマレイン酸塩(timilol maleate)ゲル形成点眼液）、Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標）（ジクロフェナクナトリウム点眼液）、Ａｐｈａｇｅｎ（登録商標）（ブリモニジン酒石酸塩点眼液）、Ｏｃｕｆｅｎ（登録商標）（フルルビプロフェンナトリウム点眼液、ＵＳＰ）、Ｔｒａｖａｔａｎ  Ｚ（登録商標）（トラバプロスト(travaprost)点眼液）、Ｖｉｔｏｐｔｉｃ（登録商標）（トリフルリジン点眼液）、Ａｌａｍａｓｔ（登録商標）（ペミロラストカリウム点眼液）、Ｖｉｇａｍｏｘ（登録商標）（モキシフロキサシン塩酸塩点眼液）、およびＰｏｌｙ−Ｐｒｅｄ（登録商標）（酢酸プレドニゾロン、ネオマイシン硫酸塩、ポリミキシンＢ硫酸塩点眼液、ＵＳＰ）を含むＦＤＡ認可済眼科用製品の調査から、これらの認可済製品は重量オスモル濃度が最低２４０ｍＯｓｍ〜最高３５０ｍＯｓｍの範囲であり、大部分が２９０ｍＯｓｍ前後に集中していることが明らかになる。よって、重量オスモル濃度が約２００〜約４００ｍＯｓｍの範囲である眼科用処方物を得ることが望ましい。
【００３９】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記組成物の重量オスモル濃度は、下限約２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０または３３０ｍＯｓｍのから上限約２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０または４００ｍＯｓｍの範囲である。修飾シクロデキストリンは前記医薬組成物の浸透圧に寄与する。例えば、出願者らは、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル）が以下のように溶液の重量オスモル濃度に寄与することを見出した。
【００４０】
【表１】
2013525501.tif 000005
修飾シクロデキストリンが重量オスモル濃度に寄与し、重量オスモル濃度は４００ｍＯｓｍ以下である必要があるという事実によって、前記医薬組成物中にパゾパニブを可溶化するために使用することができる修飾シクロデキストリンの量に関して上限が課される。
【００４１】
浸透圧は、有効重量オスモル濃度であり、膜を通過する浸透力をもたらす能力を有する溶質の濃度の合計に等しい。本発明の実施形態において用いる浸透圧調整剤は、ヒト眼への眼投与用組成物中に含めるのに適していることが当業者に公知の様々なかかる薬剤のいずれかであってよい。例えば、米国薬局方２９−ＮＦ−２４には、デキストロース、グリセリン、マンニトール、塩化カリウムおよび塩化ナトリウムを含む、「等張化」剤として分類される５種の賦形剤が記載されている。当業者ならば、当然、他の賦形剤も浸透圧調整剤としてその処方物に使用可能であることが分かるであろう。例えば、リン酸バッファー（例えば、リン酸ナトリウムバッファーまたはリン酸カリウムバッファー）などの緩衝剤は、溶液のｐＨを安定させるだけでなく、浸透圧調整剤としても作用する。いくつかの実施形態において、前記浸透圧調整剤は、デキストロース、グリセリン、マンニトール、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびリン酸バッファーからなる群から選択される。一般的に、前記等張化剤の量は、下限２００ｍＯｓｍから上限４００ｍＯｓｍまでの前記医薬組成物の重量オスモル濃度を提供するのに十分なものであろう。いくつかの実施形態において、前記浸透圧調整剤は塩化ナトリウムである。いくつかの実施形態において、塩化ナトリウムの量は、下限０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ｍＭから上限約３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９または１５０ｍＭの範囲である。他の浸透圧調整剤の量は、記載量の塩化ナトリウムの場合と同様に重量オスモル濃度に寄与するのに必要な特定の浸透圧調整剤の量であり得る。いくつかの実施形態において、浸透圧調整剤の組合せが用いられる。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態において、前記医薬組成物はまた緩衝剤も含む。その緩衝剤は、眼科用処方物に有用であることが当業者に公知の様々な緩衝剤のいずれかであってよい。例えば、緩衝剤は、リン酸バッファー、例えば、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムなどであってよい。いくつかの実施形態において、前記緩衝剤の量は、下限１０、１１、１２、１３、１４、１５  １６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０ｍＭから上限約３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態において、緩衝剤の組合せが用いられる。
【００４３】
前記ｐＨ調整剤は、ヒト眼への眼投与用組成物中に含めるのに適していることが当業者に公知の様々なかかる薬剤であってよい。本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記ｐＨ調整剤は、水酸化ナトリウム、塩酸およびそれらの組合せからなる群から選択される。
【００４４】
「Pharmaceutical Dosage Forms Ophthalmic Preparations」と題する米国薬局方（ＵＳＰ）＜１１５１＞には、点眼液のｐＨに関する次の指針が提供されている。正常な涙液はｐＨが約７である。場合によっては、点眼液のｐＨは３．５〜８．５の間で異なってよい。よって、ｐＨが３．５〜８．５の範囲である眼科用処方物を得ることが望ましい。
【００４５】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記組成物のｐＨは、下限約３．５、３．５５、３．６、３．６５、３．７、３．７５、３．８、３．８５、３．９、３．９５  、４．０、４．０５、４．１、４．１５、４．２、４．２５、４．３、４．３５、４．４、４．４５、４．５、４．５５、４．６、４．６５、４．７、４．７５、４．８、４．８５、４．９、４．９５または５．０から上限約５．０、５．０５、５．１、５．１５、５．２、５．２５、５．３、５．３５、５．４、５．４５、５．５、５．５５、５．６、５．６５または５．７の範囲である。ＵＳＰ＜１１５１＞には、眼科用処方物ではｐＨ８．５まで用いることができると示されているが、パゾパニブの溶解度はｐＨによって変化し、ｐＨが大きくなるにつれて溶解度は低下する。例えば、ｐＨレベルが５．７より大きい場合にはパゾパニブの溶解度が低すぎるため、その処方物の浸透圧を所望の上位レベル４００ｍＯｓｍを上回るレベルまで上昇させずに、パゾパニブを可溶化させるのに十分なレベルまで修飾シクロデキストリンの量を増やすことはできない。
【００４６】
本明細書において記載する本発明の様々な態様によるいくつかの実施形態において、前記組成物は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上の間安定である。
【００４７】
以下の実施例は、単に例示を目的とするものであって本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００４８】
実施例１：組成
パゾパニブ一塩酸塩溶液の組成を下に表２に示す。ｐＨは、所望のｐＨ、例えば、ｐＨ約３．５〜約５．７の範囲などを提供するように調整することができる。
【００４９】
【表２】
2013525501.tif 000006
【００５０】
実施例２：１０ｍｇ／ｍＬ組成物パゾパニブ一塩酸塩溶液の製造方法
上の実施例１に記載の処方物を、この実施例２に記載の方法によって調製する。バルク溶液の製造をグレードＣ環境で行う。β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル（例えば、Cydex Pharmaceuticals, Inc., Lenexa, KSのＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標））を、注射水（ＷＦＩ）が入った適当な容器に加え、肉眼で見て溶けるまで穏やかに混合する。次いで、その容器に次の成分を個別に順番に加え、次の添加に進む前に穏やかに混合し溶解させる：有効成分（一塩酸塩形態のパゾパニブ）およびリン酸一ナトリウム、一水和物。その溶液にＷＦＩを加えて容量にし、穏やかに混合する。その溶液のｐＨを、必要に応じて、１Ｎ塩酸溶液または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて所望のｐＨ、例えば、ｐＨ約３．５〜約５．７などに調整する。得られた溶液を２つの無菌０．２２μｍ滅菌フィルター（直列）を用いて濾過し、その後、充填前に成形同時充填装置内で３つ目の０．２２μｍフィルターで行う。
パゾパニブ塩酸塩溶液、１０ｍｇ／ｍＬの製造工程の流れ図
2013525501.tif 000007
【００５１】
実施例３：１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ組成物の安定性の判定
この実施例３の目的で、１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ（「表示量」）のパゾパニブ一塩酸塩組成物、例えば、ブランクフローラップアルミホイルを用いてオーバーラッピングされた成形同時充填の使い捨て容器にパッケージングされた、上に実施例１に記載の組成物などの物理的安定性を、その組成物の透明性、色、ｐＨ、パゾパニブ含量（表示量に対する割合として）、粒子数≧１０μｍおよび粒子数≧２５μｍを測定することによって判定する。
【００５２】
方法
透明性および色
装置
ｉ．バイアル：無色透明の中性ガラスの同一バイアル、
ｉｉ．ピペット：ガラス、クラスＡまたはデジタル
ｉｉｉ．試験管：１３ｍｍ×１００ｍｍ、ボロシリケート、（Baxter社製Ｔ−１２９０−４）
ｉｖ．蛍光光源：Macbeth社製ＳｐｅｃｔｒａＬｉｇｈｔ  ＩＩ  Ｂｏｏｔｈ
ｖ．ホワイト／ブラックボード
【００５３】
試薬
ｉ．濃塩酸（ＨＣｌ）：分析用（３７％）
ｉｉ．塩化コバルト（ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）：試薬用
ｉｉｉ．硫酸銅（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ）：試薬用
ｉｖ．塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）：試薬用
ｖ．脱イオン水：Barnstead社製ＮａｎｏＰｕｒｅ
【００５４】
溶液
原液
１％ｗ／ｖ塩酸溶液：１３５ｍＬの濃ＨＣｌを水で５リットルに希釈する。
赤色溶液（塩化コバルト、ＣＳ）
青色溶液（硫酸銅、ＣＳ）
黄色溶液（塩化第二鉄、ＣＳ）
試薬、溶液、比色溶液（ＣＳ）に従って、現行のＵＳＰに準じて進める。それらの溶液を適切に耐久性のある気密容器に入れて保存し、暗所内５℃で保存する。ＣＳ溶液は１２ヶ月ごとに再標準化する。ＵＳＰ＜６３１＞Color and Achromicityによる色比較のための比色標準の調製にはこれらの溶液を用いる。
【００５５】
比色標準溶液
上記の３つのＣＳ原液を用いて、下に記載する５つの標準溶液を調製する。それらの標準溶液を密閉ガラス容器に入れて保存する。これらの溶液は、暗所内５℃で保存した場合、１２ヶ月間安定である。
【００５６】
【表３】
2013525501.tif 000008
【００５７】
参照溶液
下の表に定義するとおり、第４．２節（上記）に記載した５つの標準溶液の１つのアリコートを各々５０ｍＬメスフラスコに入れる。１％ＨＣｌで５０ｍＬに希釈する。参照溶液を密閉ガラス容器に入れて保存する。これらの参照溶液は、室温で１２ヶ月間安定である。
【００５８】
【表４】
2013525501.tif 000009
【００５９】
【表５】
2013525501.tif 000010
【００６０】
【表６】
2013525501.tif 000011
【００６１】
【表７】
2013525501.tif 000012
【００６２】
【表８】
2013525501.tif 000013
【００６３】
方法
全ての投与単位を目視検査し、サンプル全体にわたる均一性に注目する。サンプル全体が均一に見える場合には、１つのサンプルを精密検査のために選択する。サンプル全体が均一でない場合には、各々の観測された変動範囲の極値を示す２つのサンプルを精密検査のために選択する。
【００６４】
透明性
白色背景および黒色背景の両方を用いて同様の容器に入った等容量の水と溶液のサンプルを比較して、溶液の透明性の程度を判定する。
【００６５】
色
薬局方の試験に規定される色の比較を、好ましくは、適合比色管または好適な比色計において、比色参照溶液および供試試料のものを総ての点において同様に処理することを保証する条件下で行う。色の比較は、同じ深さの層で行うことが最善であり、蛍光灯の下で白色背景を用いて側方から観察する。溶液を同じ温度、好ましくは２５℃で比較することが特に重要である。同様の容器に入った等容量の水と溶液のサンプルを比較して、溶液の色を判定する。差異がない場合には、その溶液を無色と報告する。その溶液が水と差異がある場合には、それを参照溶液Ｂ９、ＢＹ７、Ｙ７、ＧＹ７およびＲ７と比較し、そのサンプルがこれらの参照溶液より薄い場合には無色と報告する。そうでない場合には、試料溶液に相当する参照溶液を選択し、同じ群の他の参照溶液（例えば、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５、Ｙ６およびＹ７）と比較してその供試溶液を分類する。そのサンプルに最も近い参照溶液の特性を報告する。そのサンプルの色が２つの参照溶液の間である場合には、その結果をそれら２つの参照溶液の評価の中間として報告する。
【００６６】
「無色」は、色を呈さない（水と同じ）または参照溶液Ｂ９、ＢＹ７、Ｙ７、ＧＹ７またはＲ７より薄い色を呈する溶液に対して報告している。
【００６７】
ｐＨ
当業者に自明の好適な方法によってｐＨを測定する。
【００６８】
パゾパニブ含量（％表示量）
装置
天秤：Mettler社製ＭＴ５またはＭＸ５
クロマトグラフィー：可変波長ＵＶ検出器を装備した勾配溶出実施可能なＨＰＬＣシステム
カラム：Phenomenex社製Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＲＰＡｑｕｅｏｕｓ−３、Ｃ−３０、３ｕｍ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ
データ収集システム：ＡｔｌａｓまたはＥｍｐｏｗｅｒ
フィルター：Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ  ＰＶＤＦ、０．２２μｍ、３３ｍｍ直径、滅菌シリンジフィルター；またはＡｃｒｏｄｉｓｃ  ナイロン、０．２μｍ、２５ｍｍ直径シリンジフィルター
シリンジ：Becton and Dickinson社製１０ｍＬプラスチック
【００６９】
試薬
パゾパニブ：分析参照標準
アセトニトリル（ＡＣＮ）：ＨＰＬＣ用
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：ＨＰＬＣ用
水：脱イオン水、Ｍｉｌｌｉ−ＱまたはＨＰＬＣ用
【００７０】
溶液の調製
溶解溶媒の調製
容量比５０：５０：０．１のＡＣＮ：水：ＴＦＡ混合物を調製する。例えば、１ｍＬのＴＦＡおよび５００ｍＬの水をよく混合する。５００ｍＬのアセトニトリルを加え、よく混合する。
【００７１】
移動相Ａの調製
容量比９０．５：９．５：０．１の水：ＡＣＮ：ＴＦＡ混合物を調製する。例えば、１ｍＬ  ＴＦＡおよび９０５ｍＬの水をよく混合する。９５ｍＬ  ＡＣＮを加え、よく混合する。使用前に脱気する。
移動相Ｂの調製
【００７２】
容量比４０．５：５９．５：０．１の水：ＡＣＮ：ＴＦＡ混合物を調製する。例えば、１ｍＬ  ＴＦＡおよび４０５ｍＬの水をよく混合する。５９５ｍＬ  ＡＣＮを加え、よく混合する。使用前に脱気する。
【００７３】
標準溶液（二反復用）の調製
およそ１０．８±１．１ｍｇのＧＷ７８６０３４Ｂ分析参照標準（必要に応じて純度に合わせて重量を調整する）を入れることによって、溶解溶媒中、０．１ｍｇ／ｍＬ（遊離塩基として）のＧＷ７８６０３４Ｂ参照標準溶液を調製し、１００ｍＬメスフラスコへ正確に秤量する。秤量皿をフラスコ内に入れない。溶解溶媒で全容量のおよそ２／３に希釈し、少なくとも５分または溶解するまで超音波処理する。室温に平衡化し、その後、溶解溶媒で容量に希釈する。この標準溶液は、実験室光からの保護なく５℃または室温のいずれかで少なくとも４０日間安定である。
【００７４】
注：同等の終濃度となる他の調製法を用いてもよい。
【００７５】
感受性検査用溶液の調製
５ｍＬの標準溶液を溶解溶媒で１００ｍＬに希釈する。この溶液の１ｍＬアリコートをメスフラスコで１００ｍＬにさらに希釈して、０．０５％（ｖ／ｖ）感受性検査用標準溶液を得る。この溶液は、実験室光からの保護なく室温で少なくとも８日間安定である。
【００７６】
注：同等の終濃度となる他の調製法を用いてもよい。
【００７７】
研究実薬試料溶液およびプラセボ試料溶液の調製
別々の原液を用いて二反復用の試料溶液を調製する。
【００７８】
点眼用溶液の調製
サンプル調製法
【表９】
2013525501.tif 000014
【００７９】
研究試料溶液の２ｍｇ／ｍＬ調製物は、実験室光からの保護なく室温で少なくとも２日間安定である。研究試料溶液の５ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬおよび１２ｍｇ／ｍＬ調製物は、実験室光からの保護なく室温で少なくとも７日間安定である。
【００８０】
注：同じ終濃度または前記方法の線形範囲内の濃度となる他の同等の試料溶液調製手順を用いてもよい。
【００８１】
試験手順
【表１０】
2013525501.tif 000015
【００８２】
アッセイ手順
ブランク溶液、標準、および試料溶液を注入する。分析後、カラムは、５０：５０  アセトニトリル：水混合物で少なくとも３０分間フラッシした後に保存する必要がある。カラムは５０：５０  アセトニトリル：水中で保存する必要がある。可能ならば、ニードル洗浄バイアルを用いて、注入毎のパゾパニブのキャリーオーバーを最小限に抑える必要がある。ＨＰＬＣブランクのクロマトグラムにおいて見られるピークはいずれも、報告対象となるピークの積分を妨げるものではなく、サンプルのクロマトグラムから除外されるべきものである。ブランククロマトグラムにおけるパゾパニブのキャリーオーバーは０．１％以下であるはずである。大量のキャリーオーバーが続く場合には、ＨＰＬＣシステムならびにＨＰＬＣインジェクターの総てのラインをイソプロピルアルコールですすぐ。
【００８３】
特性解析試験
サンプルの特性は、試料溶液におけるパゾパニブピークの保持時間が参照標準のクロマトグラムにおけるパゾパニブピークの保持時間の±３％以内である場合に確認される。プラセボ溶液の特性は、パゾパニブ参照材料のクロマトグラムにおいて主要なピークが見られる同じ保持時間にピークが存在しないこと、またはプラセボサンプルにおける算出含量が２ｍｇ／ｍＬ実薬用量の０．１％以下であるかどうかのいずれかによって確認される。
【００８４】
パゾパニブ含量の計算
応答値、Ｋ
Ｋ＝（ＰｘＳｘＣＳ）／ＡＳ
式中、
ＡＳ＝標準溶液の１回の注入についてのピーク面積応答
Ｐ＝ＧＷ７８６０３４Ｂ参照標準の純度（十進記数法で）
Ｓ＝パゾパニブの塩酸塩の遊離塩基等価物への換算係数（すなわち、０．９２３）
Ｃｓ＝標準溶液中のパゾパニブの濃度（ｍｇ／ｍＬ）
％表示量
ＡｕｘＫａｖｘＤｕｘ（１／Ｌ）×１００＝％表示量
式中、
Ａｕ＝試料溶液のピーク面積応答
Ｋａｖ＝標準溶液の全注入についての平均応答値
Ｄｕ＝試料溶液の希釈係数
Ｌ＝表示量
【００８５】
粒子数
方法Ａ
粒子数を、米国薬局方（ＵＳＰ）＜７８９＞「Particulate Matter in Ophthalmic Solutions」に準じて決定する。
【００８６】
方法Ｂ
装置
粒子計数器：ＨＩＡＣ−Ｒｏｙｃｏ  ９７０３
データ収集システム：ＰｈａｒｍＳｐｅｃ
【００８７】
試薬
水：粒子を含まない脱イオン水
【００８８】
溶液の調製
サンプル調製手順の総てについては、ＵＳＰ＜７８９＞、Particulate Matter in Ophthalmic Solutionsを参照する。
【００８９】
点眼用溶液の気泡除去手順
下の手順に続いて、微粒子試験の前に、各点眼用試料溶液を真空デシケーターによって脱気する必要がある。
【００９０】
１．バルクサンプル容器に軽く蓋をし、真空デシケーターに入れる。
２．デシケーターの蓋をし、排気バルブが開かれていることを確認する。
３．デシケーターに目盛付ゲージを取り付け、そのデシケーターを真空タップに取り付ける。
４．真空タップを、ゲージ圧−２０〜−２５インチＨｇに達するまで開け、その後、真空タップを閉める。真空適用の間、減圧を−２０〜−２５インチＨｇの範囲で維持するために、周期的に真空タップを開閉する必要のある場合がある。
５．５分後、慎重に真空を解放する。
６．常圧に戻ったら、デシケーターの蓋を開ける。
７．直ちに微粒子試験を行う。
粒子数の結果は、１ｍＬ当たりの粒子の数として報告する必要がある。
粒子数／ｍＬ＝（粒子（≧１０μｍまたは≧２５μｍ）の数の平均）／容量
（式中、容量＝５ｍＬ）
【００９１】
方法Ｃ
方法Ｃは、サンプル調製中の粒子混入やサンプリングニードルへの空気導入を避けるために細心の注意を払う（例えば、サンプル調製前に粒子を含まない水で手袋をすすがなければならない、サンプル容器は粒子を含まない水でしかすすいではならない、サンプリングニードルは未使用時には粒子を含まない水に浸漬する）ことを除いて、上の方法Ｂと同じである。
【００９２】
結果
１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ（「表示量」）のパゾパニブ一塩酸塩組成物、例えば、ｐＨ４．０の、実施例１において上に記載した組成物などの物理的安定性を表４に示す。
【００９３】
【表１１】
2013525501.tif 000016
2013525501.tif 000017
【００９４】
１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ（「表示量」）のパゾパニブ一塩酸塩組成物、例えば、ｐＨ４．２５の、実施例１において上に記載した組成物などの物理的安定性を表５に示す。
【００９５】
【表１２】
2013525501.tif 000018
2013525501.tif 000019
【００９６】
１０ｍｇパゾパニブ／ｍＬ（「表示量」）のパゾパニブ一塩酸塩組成物、例えば、ｐＨ４．５の、実施例１において上に記載した組成物などの物理的安定性を表６に示す。
【００９７】
【表１３】
2013525501.tif 000020
2013525501.tif 000021
【００９８】
実施例４：パゾパニブの結合定数Ｋｂの決定
方法
製剤原料と錯化剤との間の結合定数は、Connorsの著書およびその参考文献（Kenneth A. Connors: 「Binding Constants」, Wiley-Interscience; 第１版（１９８７年４月））によって概説されている分光技術を用いて決定することができる。
【００９９】
パゾパニブ（下に示す式１中の０３４）製剤原料とβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテル（例えば、Cydex Pharmaceuticals, Inc., Lenexa, KSのＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標））との間での錯体形成の単純平衡は、式１（式中、Ｋｄは解離定数であり、Ｋｂは結合定数であり、０３４（ｓ）はパゾパニブの固体沈殿物であり、０３４（ａｑ）は結合していないパゾパニブ（錯体形成のない遊離状態）の水中濃度であり、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ａｑ）は初期Ｃａｐｔｉｓｏｌ濃度と、製剤原料、すなわちパゾパニブとの錯体形成状態のＣａｐｔｉｓｏｌの濃度との間の差異である）として示されている。Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ａｑ）はパゾパニブとの間での錯体、すなわち０３４・Ｃａｐｔｉｓｏｌ（錯体形成状態）の濃度である。
【数１】
2013525501.tif 000022
【０１００】
パゾパニブ（およそ０．０５ｍｇ／ｍｌ、１０−４Ｍ）溶液を用い、β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル溶液の濃度を変化させ、得られた溶液の蛍光強度（３４２ｎｍで励起、３７５ｎｍで発光）を測定することによって滴定試験を行う。滴定曲線全体を適切に描き、溶液中でのパゾパニブの核生成および沈殿を防ぐように、初期Ｃａｐｔｉｓｏｌ濃度を選択する。典型的には、初期Ｃａｐｔｉｓｏｌ濃度はおよそ０．０５ｍｇ／ｍｌ以下から少なくともおよそ３．５ｍｇ／ｍｌまでに及ぶ。
【０１０１】
錯体形成していないパゾパニブ０３４（ａｑ）およびＣａｐｔｉｓｏｌ  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ａｑ）の蛍光収率はごくわずかであるため、測定蛍光強度は錯体形成状態０３４・Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ａｑ）の濃度と直接関係する。非線形シンプレックスフィッティングルーチンを用いて測定蛍光強度を当てはめて、結合定数Ｋｂの値を決定する。ベネシ・ヒルデブランド法により、蛍光強度をβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテル濃度の関数としてプロットして、結合化学量論を決定する。これらの決定は、特定のｐＨおよび温度値の溶液で行う。
【０１０２】
計装：
１ｃｍキュベットおよび直交検出配置によるVarian社製Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ蛍光分光計（ＳＮ：ＥＬ０５０４３８０１）または等価物。溶液の温度は、キュベットホルダーの温度を制御し、十分な接触を確保することによって制御する。
【０１０３】
結果
ｐＨ４および温度４０℃における蛍光強度をβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテル濃度の関数として図１に示し、それにより結合定数、Ｋｂは９７６３ｍｏｌ−１となる。
ｐＨ５および温度２５℃における蛍光強度をβ−シクロデキストリンスルホブチルエーテル濃度の関数として図２に示し、それにより結合定数、Ｋｂは９１３０ｍｏｌ−１となる。
【０１０４】
実施例５：ｐＨに応じたパゾパニブの溶解度の決定
方法
１）２５ｍＭリン酸バッファー（リン酸一ナトリウム、一水和物を用いる）を調製し、そのバッファー溶液を、１Ｎ  ＮａＯＨ／ＨＣｌを用いて異なる目標ｐＨに調整する。
２）上の溶液に過剰のパゾパニブ遊離塩基を加え（１０ｍＬバッファー溶液当たり約２０ｍｇ遊離塩基）、その溶液をボルテックスにかけ、よく混合する。溶解溶液のｐＨを測定し、必要に応じてそのｐＨを目標値に調整する。
３）その溶解溶液を一定温度５℃のチャンバーに入れる。その溶液を、撹拌しながら５日間平衡化する。
４）５日後、直ちに溶解溶液のｐＨを測定し、そのｐＨを記録し、その溶液を、０．２２ｕｍ  ＰＶＤＦフィルターを用いて試験管中に濾過して入れる。
５）その溶液を５０：５０：０．１  水：アセトニトリル：ＴＦＡ（ｖ／ｖ／ｖ）希釈液で１：１（ｖ／ｖ）に希釈し、よく混合する。
６）その溶液の溶解度をＨＰＬＣにより検出波長２６８ｎｍで分析する。
ＨＰＬＣパラメーター：
移動相Ａ：１００：０．１（ｖ／ｖ）水：ＴＦＡ
移動相Ｂ：１００：０．１（ｖ／ｖ）アセトニトリル：ＴＦＡ
カラム：Phenomenex社製Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＲＰＡｑｕｅｏｕｓ−３、Ｃ−３０、３ｕｍ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ
カラム温度：３５℃
流速：１．０ｍＬ／分で定組成、Ａ／Ｂ＝６０／４０
検出器波長：２６８ｎｍ
注入容量：１０μＬ
総実行時間：４分
【０１０５】
結果
２５℃での溶解度を、上記と同じまたは類似の手順を用いて以下のとおり決定した：ｐＨ５．０では０．０００００６ｍｇ／ｍＬ（１．３７×１０−８ｍｏｌ／Ｌ）；ｐＨ４．５では０．００００２５ｍｇ／ｍＬ（５．７１×１０−８ｍｏｌ／Ｌ）；ｐＨ４．２５では０．０００５３４ｍｇ／ｍＬ（１．２２×１０−６ｍｏｌ／Ｌ）；ｐＨ４．０では０．００１０４３ｍｇ／ｍＬ（２．３８×１０−６；およびｐＨ３．５では０．０２ｍｇ／ｍＬ（４．５７×１０−５ｍｏｌ／ｍＬ）。
【０１０６】
実施例６：ＵＣＤの計算
Rao, V.M., Stella, V.J., J Pharm Sci, 92, 5 927, May 2003から
ＵＣＤ＝（ＫＳｏ／１＋ＫＳｏ）（ｍＣＤ／ｍＤ）（ＭＷＤ／ＭＷＣＤ）
薬物の用量、ｍＤ
シクロデキストリンの用量、ｍＣＤ
分子量薬物、ＭＷＤ
分子量シクロデキストリン、ＭＷＣＤ
結合定数、Ｋ、上の実施例４に記載のとおりである。
溶解度、Ｓｏ、上の実施例５に記載のとおりである。
１０ｍｇ／ｍＬパゾパニブおよび９％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル）溶液の様々なｐＨレベルでのＵＣＤ計算値を下に表７に示す。
【０１０７】
【表１４】
2013525501.tif 000023
【０１０８】
１０ｍｇ／ｍＬパゾパニブおよび１３％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル）溶液の様々なｐＨレベルでのＵＣＤ計算値を下に表８に示す。
【０１０９】
【表１５】
2013525501.tif 000024
【０１１０】
１０ｍｇ／ｍＬパゾパニブおよび２％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル）溶液の様々なｐＨレベルでのＵＣＤ計算値を下に表９に示す。
【０１１１】
【表１６】
2013525501.tif 000025
【０１１２】
Raoの論文に関して背景に記載のとおり、処方設計者は、このＵＣＤによって、難水溶性薬物の処方物におけるシクロデキストリンの使用により大きな可溶化利益がもたらされる可能性があるかどうかを判定することができるようになる。ＵＣＤ無次元数が１未満である場合、完全可溶化には錯体形成だけでは不十分である。１０ｍｇ／ｍＬ組成物の低いＵＣＤ値を考慮すると、これらのような組成物が臨床試験処方物としての使用に必要な安定性を示すとは考えられなかった。
【０１１３】
実施例７  電位差滴定法によるパゾパニブｐＫａ２の測定
材料
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンスルホブチルエーテル(β-cyclodextrin suflobutyl ether)）は、Cydex Pharmaceuticals, Inc., Lenexa, KSから入手した。パゾパニブＨＣｌは、GlaxoSmithKline, Pennsylvania, PAから入手した。水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）滴定標準は、Ｔｉｔｒｉｓｏｌ（登録商標）０．１ｍｏｌ／Ｌ標準から調製し、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ、ロット番号Ｋ４０８１７９０４０１２）は、Merck Chemicals (Darmstadt, Germany)から入手した。安息香酸熱化学的標準錠剤は、BDH Limited (Poole, England)のものであった。安息香酸ＡＣＳ試薬およびフェニルアラニンメチルエステルＨＣｌは、Sigma-Aldrich (St Louis, USA)のものであった。総ての固体をデシケーター内で保存した。校正用ｐＨ標準は、Metrohm AG (Zofigen, Switzerland)から使い捨ての小袋で購入した。アルゴンガス（グレード５．０）は、BOC gases (North Ryde, NSW, Australia)から入手した。
【０１１４】
装置
総ての電位差滴定では、Metrohm AG社製９０７  Ｔｉｔｒａｎｄｏ（商標）電位差自動滴定システム(potenitometric autotitrator system)を使用した。Ｔｉｔｒａｎｄｏ（商標）には、８００  Ｄｏｓｉｎｏ（商標）注入ユニットと、３ｍｏｌ／Ｌ  ＫＣｌ内部電解質が充填されたｉＵｎｉｔｒｏｄｅ  ｐＨ電極（非常に低いナトリウム応答）を装着した。そのシステムは、Ｔｉａｍｏ（商標）ライトバージョン２．２自動滴定装置用ソフトウェアによって制御した。
【０１１５】
総ての滴定およびｐＨ電極校正は、Metrohm AGから入手した二層ガラス製サーモスタット付滴定容器（最大容量、９０ｍＬ）中で行った。滴定容器は、外部から、Heto社製ＨＭＴ  ２００サーモスタットポンプを装着したHeto社製ＣＢＮ  ８−３０水浴を使用して、測定温度にサーモスタット調節した。総ての接続ホースを断熱して、周囲との熱伝達を最小限に抑えた。滴定容器の内容物は、Metrohm AG社製８０２プロペラ撹拌機を用いて撹拌した。
【０１１６】
方法
ｐＫａ決定用滴定標準の調製
電位差滴定法による正確なｐＫａ決定には、０．１０００Ｎ  ＮａＯＨ標準滴定剤を慎重に調製することが重要である。さらに、滴定精度には、ＮａＯＨ標準からの二酸化炭素（ＣＯ２）の除去も重要である。従って、滴定標準は、炭酸塩を含まない水を用いてアルゴン下で調製し、アルゴン下で保存する必要がある。
【０１１７】
炭酸塩を含まない水を調製するために、１Ｌガラス瓶に９００ｍＬのＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水を満たし、３０分間撹拌しながら沸騰させた。その瓶のヘッドスペースにアルゴンガスを満たした後、軽く蓋をして水を冷却させた。冷却したら、ヘッドスペースにアルゴンを満たし、しっかりと蓋を締めた。
【０１１８】
脱炭酸水の温度が室温（２５℃前後またはそれ未満）に近くなったときに、ＮａＯＨ滴定標準を調製した。アルゴンブランケット下で、Ｔｉｔｒｉｓｏｌ（登録商標）溶液が入ったプラスチックアンプルを１Ｌメスフラスコの口に挿入し、製造業者の使用説明書に従ってその溶液を入れた。脱炭酸水を用いて、アンプルに残っているＮａＯＨ溶液を洗い流した。ＮａＯＨ溶液および脱炭酸水の両方の温度２０℃に達したときに、脱炭酸水を用いてＮａＯＨ溶液を容量とし、その後、完全に混合した。瓶のヘッドスペースにアルゴンを満たした後、それをＤｏｓｉｎｏ滴定用注入ユニットに接続し、その注入ユニットにソーダ石灰管を装着した。未使用のＮａＯＨ溶液はアルゴン下で保存して、そのシステムによるＣＯ２吸収を防いだ。
【０１１９】
ｐＨ電極の校正
校正手順は、各滴定の前に行い、滴定試験を実施する温度で行った。試料溶液もまた、滴定開始前におよび滴定中に測定温度に平衡化した。
【０１２０】
各校正標準溶液（公称ｐＨ４およびｐＨ７）の小袋を、別々の清浄な乾燥したサーモスタット付滴定容器に入れた。それらの標準溶液には、試験温度に平衡化する時間を割り当てた。校正は、ｐＨ４標準溶液が入った容器をまず自動滴定装置に移すことにより開始した。ゆっくりとしたアルゴンガス流を、ガス注入口を通して滴定容器中へ流入させた。Ｔｉａｍｏ（商標）ソフトウェアを用いて、撹拌機を速度１（低速撹拌、任意）に設定した。ｐＨ測定値が安定した後（ソフトウェアにより自動検出）、ｐＨ４溶液を除去し、電極をＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水ですすいだ後、Ｋｉｍｗｉｐｅ（登録商標）ティッシュペーパーで慎重に乾燥させた。次いで、ｐＨ７校正標準を用いて、これらの工程を繰り返した。ｐＨ４参照標準のｐＨを「測定」モードで測定することによって校正をクロスチェックした。滴定の開始前には、Ｄｏｓｉｎｏ（商標）中の標準の容量をチェックして、滴定を完了するのに十分な０．１０００Ｎ  ＮａＯＨ標準が確実に入っているようにした。ＮａＯＨ標準調製の詳細については、第０節を参照。
【０１２１】
対照化合物を用いた電位差滴定法によるｐＫａ決定の検証
安息香酸（ｐＫａ＝４．２０）（一次標準）およびフェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（ｐＫａ＝７．１１）（二次標準）は、ｐＫａ値が文献により正確に報告されている化合物である。１  Ｔｉｔｒａｎｄｏ（登録商標）自動滴定システムを使用した、精度±０．０３での、これら２つの対照化合物のｐＫａ値の決定は、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の存在下でのパゾパニブのｐＫａ２の電位差定量に対しての好適な検証となる。滴定開始前に総ての試験溶液を試験温度に平衡化する必要があることには留意すべきである。温度は、滴定容器中で参照水銀温度計適合対の一方で測定し、露出部補正をした。
【０１２２】
安息香酸標準の調製
安息香酸（熱化学的標準）錠剤を、メノウ乳鉢と乳棒を使用して粉砕した。その安息香酸粉末をシェルバイアルに移した。粉砕した粉末を、活性シリカゲルを入れたデシケーター内で一晩保存した。清浄なガラスビーカーにおよそ６１．５ｍｇの粉末安息香酸を秤量して入れた。その粉末を慎重にサーモスタット付ガラス製滴定容器中にあけ、そのビーカーを再び秤量して、サーモスタット付滴定容器に移った重量を計算した。滴定容器に入った材料の重量をＴｉａｍｏ（商標）ソフトウェアに記録した。安息香酸粉末にエタノール２滴を加えて、溶解を促進した。Ａグレードの５０ｍＬガラスメスピペットを使用して、５０．０ｍＬのＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水を滴定容器に入れた。容器の内容物を、安息香酸が完全に溶解するまで撹拌した。
【０１２３】
電位差滴定の前に、上記のとおりｐＨ電極を校正した。安息香酸溶液を測定温度に平衡化したところで、安息香酸溶液が入った容器を自動滴定装置に配置した。Ｔｉａｍｏソフトウェアを撹拌速度１（低撹拌速度、任意単位）に設定し、ＮａＯＨアリコートの添加間隔を６０秒とした。滴定の終点をｐＨ６に設定した。次の滴定の前に、上記のとおりｐＨ電極を再校正した。
【０１２４】
フェニルアラニンメチルエステルＨＣｌ標準の調製
清浄なガラスビーカーにおよそ１０７ｍｇのフェニルアラニンメチルエステルＨＣｌを秤量して入れた。その粉末を慎重にサーモスタット付ガラス製滴定容器中にあけ、そのビーカーを再び秤量して、滴定容器に移った重量を計算した。滴定容器に入った材料の重量をＴｉａｍｏ（商標）ソフトウェアに記録した。
【０１２５】
５０ｍＬガラスメスピペットを使用して、５０．０ｍＬのＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水を滴定容器に入れた。容器の内容物を、フェニルアラニンメチルエステルＨＣｌが溶解するまで撹拌した。
【０１２６】
次いで、電位差滴定の前に、第０節に従ってｐＨ電極を校正した。フェニルアラニンメチルエステルＨＣｌ溶液を測定温度に平衡化したところで、フェニルアラニンメチルエステルＨＣｌが入った容器を自動滴定装置に移し、ゆっくりとしたアルゴンガス流を、滴定容器のガス注入口に流入させた。Ｔｉａｍｏ（商標）ソフトウェアを撹拌速度１（低速）に設定し、ＮａＯＨアリコートの添加間隔を６０秒とした。滴定の終点をｐＨ＝９に設定した。
【０１２７】
次の滴定の前に、第０節で概説した方法に従ってｐＨ電極を再校正した。
【０１２８】
電位差滴定法によるパゾパニブｐＫａ２の測定
パゾパニブ含有Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）溶液の調製
清浄な乾燥した１Ｌメスフラスコ中に公称７０ｇのＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）を秤取することにより７０ｍｇ／ｍＬ  Ｃａｐｔｉｓｏｌ溶液を調製した。そのフラスコに全容量の２／３までＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水を加えた。そのフラスコを撹拌することによりＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）を溶解した後、ＭｉｌｌｉＱ（登録商標）水を用いて最終容量とした。総てのＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）溶液の調製においてＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）粉末を秤量する際には、カール・フィッシャー滴定（別のプロトコール）によって決定されるＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の水分含有量（７〜８％ｗ／ｗ）を考慮した。
【０１２９】
清浄な乾燥した２５０ｍＬメスフラスコで、およそ１．３５４ｇのパゾパニブＨＣｌを秤量した（パゾパニブ塩酸塩の実重量を記録して、パゾパニブ塩酸塩終濃度を計算した）。そのパゾパニブＨＣｌに７０ｍｇ／ｍＬＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）溶液を加え、フラスコの全容量のおよそ２／３まで満たした。次いで、パゾパニブＨＣｌを超音波処理により溶解し、溶解していない粒子を慎重にチェックした。続いて、３６５．２５ｍｇのＮａＣｌを加え、溶解するまで撹拌した。その溶液を容量とし、すぐに使用しない場合には冷蔵庫で保存した。溶液の目標パゾパニブＨＣｌ終濃度は５．４１７ｍｇ／ｍＬであり、溶液の目標ＮａＣｌ終濃度は１．４６１ｍｇ／ｍＬであった。
【０１３０】
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）の存在下でのパゾパニブｐＫａ２の決定
ｐＨ校正で使用した温度と同じ温度に保持した、独立したジャケット付容器に加える。２０．００ｍＬおよび２５．００ｍＬのＡグレードガラスピペットを使用して、４５．０ｍＬの７０ｍｇ／ｍＬ  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）−パゾパニブＨＣｌ溶液（第０節に記載のとおり調製）をサーモスタット付ガラス製滴定容器に入れ、測定温度に平衡化した。Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）−パゾパニブＨＣｌ溶液を平衡化しながら、ｐＨ電極校正を行った
【０１３１】
滴定は、Ｔｉａｍｏソフトウェアを用いて実施し、撹拌速度を１（低速）に設定し、アリコート添加間の待ち時間を６０秒に設定した。滴定の終点はｐＨ＝７．５であった。次の滴定の前に、第０節で概説した方法に従ってｐＨ電極を再校正した。
【０１３２】
Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）−パゾパニブＨＣｌ溶液の電位差滴定は５、１０、１５、２０、２５、３０および３５℃で実施した。測定は、三反復でまたはｐＫａ２結果の再現性が±０．０３以内となるまで繰り返した。
【０１３３】
データ解析およびパゾパニブｐＫａ２の計算
電位差滴定データ（添加したＮａＯＨアリコートの関数としてのｐＨ値）の解析は、Albert and Serjeant２によって概説され、他の場所でさらに論じたとおり、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式を用い、ヒドロニウムイオン濃度、ヒドロキシルイオン濃度および平均イオン活量係数を総て補正した。
【数２】
2013525501.tif 000026
【０１３４】
平均イオン活量係数を、完全なデバイ・ヒュッケルの式(the full Debye-Huckel equation)を用いて計算した。
【数３】
2013525501.tif 000027
（式中、Ｉはイオン強度であり、ＡおよびＢは集計した定数(tabulated constants)であり、それらの値は温度および誘電率にのみ依存し、ａｏはイオンサイズパラメーターであり、３Å単位で設定した）。リファレンス１に記載のとおり、［Ｈ＋］およびイオン強度（Ｉ）の相互依存的計算を５回繰り返して、確実に収束が達成されるようにした；これは通常３回目の反復後に起こった。計算はMS社製Ｅｘｃｅｌ（登録商標）を用いて行った。
【参照文献】
【０１３５】
1. Prankerd, R.J., Critical compilation of Ionisation Constants. In: Brittain, H.B. Ed. Profiles of drug substances, exipients and related methodology. San Diego: Academic Press-Elsevier; Vol 33, 2007.
2. Albert AA, Serjeant EP, The Determination of Ionisation Constants, 3rd Ed., Chapman and Hall, London UK (1984), Chs. 2 and 3) 
【０１３６】
本発明の特定の実施形態を本明細書に例示し、詳細に記載しているが、本発明はそれらに限定されない。上の詳細な説明は本発明の例示として示しており、本発明を限定するものと解釈するべきではない。当業者には改変は自明であり、本発明の精神から逸脱しない総ての改変は、添付の特許請求の範囲に含まれるものとする。
【図１】
2013525501.tif 000028
【図２】
2013525501.tif 000029
【国際調査報告】
2013525501.tif 000030
2013525501.tif 000031