(57)【要約】カドヘリン１１アンタゴニストを用いてカドヘリン１１の機能を阻害することにより、特定の炎症性障害を処置するための方法が提供される。
2013528622.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非関節炎症性障害を有する対象を処置するための方法であって、かかる処置を必要とする対象に治療的有効量のカドヘリン１１アンタゴニストを投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
障害が、炎症性腸疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アンタゴニストが、腸に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
障害が、乾癬である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
障害が、アトピー性皮膚炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
障害が、火傷に関連する炎症である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
アンタゴニストが、皮膚に投与される、請求項４、５または６に記載の方法。
【請求項８】
障害が、グレーブス眼症である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アンタゴニストが、眼に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アンタゴニストが、点眼剤で提供される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アンタゴニストが、眼軟膏で提供される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
障害が、血管炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
アンタゴニストが、血管に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アンタゴニストが、血管ステントで投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
障害が、心房粘液腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
アンタゴニストが、心臓に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
障害が、固形臓器移植に関連する炎症である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
アンタゴニストが、移植される臓器または組織を通して潅流される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
障害が、多発性硬化症である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
アンタゴニストが、中枢神経系に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項２１】
障害が、糸球体腎炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
障害が、間質性腎炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
アンタゴニストが、透析を用いて投与される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
障害が、腹膜の炎症または憩室炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
腹膜の炎症が、手術、穿孔または感染に関連する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
アンタゴニストが、腹膜に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
障害が、胸膜の炎症である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
胸膜の炎症が、手術、外傷または感染に関連する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
アンタゴニストが、肺に投与される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
アンタゴニストが、吸入により投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
カドヘリン１１アンタゴニストが、カドヘリン１１結合ペプチドである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
カドヘリン１１結合ペプチドが、抗カドヘリン１１抗体または抗原結合性抗体断片である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
カドヘリン１１結合ペプチドが、カドヘリン１１融合タンパク質である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
カドヘリン１１結合ペプチドが、全長カドヘリンまたはその断片を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
カドヘリン１１アンタゴニストが、カドヘリン１１核酸アンタゴニストである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストが、カドヘリン１１ｓｉＲＮＡである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストが、カドヘリン１１リボザイムである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストが、カドヘリン１１アンチセンス分子である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストが、全長カドヘリン１１をコードする核酸またはその断片である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
カドヘリン１１アンタゴニストが、小分子である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
対象に免疫抑制剤を投与することをさらに含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
免疫抑制剤が、ステロイドである、請求項４１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、35 U.S.C. §119(e)のもとに、２０１０年６月４日に出願された米国仮特許出願第61/351505号、名称「TREATMENT OF INFLAMMATORY DISORDERS」の利益を主張する；この内容全体は、参照により組み込まれる。
【０００２】
政府の支援
本発明は部分的に、国立衛生研究所（National Institute of Health）からの認可番号AR 048114およびAI 065858のもとで政府の支援によりなされた。政府は本発明に対して特定の権利を有する。
【０００３】
発明分野
本発明は、炎症性障害、より具体的には、非関節炎症性障害の処置のための方法および組成物に関する。本方法は、対象にカドヘリン１１アンタゴニストを投与して、とくに線維芽細胞においてカドヘリン１１の機能を調節することに関与する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
細胞の間および細胞と細胞外マトリクスとの間の接着性相互作用は、例えば、免疫系の調節、発生プロセスの制御ならびに腫瘍進行および転移を含む多種多様なプロセスに関与し得る。これらの相互作用は、細胞外から細胞内マトリクスへ情報を伝達する接着分子により媒介される
【０００５】
これらの相互作用を媒介する４つのファミリーの接着分子：インテグリン、カドヘリン、セレクチン、およびイムノグロブリン関連分子が同定されている。通常、接着分子は、細胞外マトリクスまたは細胞構成成分と相互作用するための細胞外ドメイン、細胞膜にかかる膜貫通ドメイン、および１または２以上の細胞骨格または細胞質構成成分と相互作用するための細胞質ドメインを含有する膜貫通タンパク質である。
【０００６】
カドヘリンは、同じタイプの細胞の間の細胞間結合の確立および維持において重要な役割を果たす(Geiger B. et al. (1992) Annual Review of Cell Biology 8:307; Kemler R. (1993) Trends in Gastroenterology 9:317; Takeichi M. (1990) Annual Review of Biochem. 59:237; Takeichi M. (1991) Science 251:1451において、レビューされた)。カドヘリンは、Ｃａ＋２依存性同種親和性接着において機能する、構造的に関連する分子のスーパーファミリーである。カドヘリンは、固形組織を形成する細胞において発現され、胚発生中の細胞の分離および分類、細胞極性の確立、および組織形態の維持に関与する。構造的に、カドヘリンは、前駆体として合成され、翻訳後プロセシング中に開裂される単鎖ポリペプチドである。これらは、５つの相同なドメインから構成される大きい細胞外領域、単一の膜貫通セグメントおよび細胞質側末端を有する。
【０００７】
カドヘリンは、翻訳後プロセシング中に開裂される前駆体として合成される。成熟カドヘリンは、比較的大きな細胞外ドメイン（典型的には、５つのセクション、または「エクトドメイン」へ分けられる）、単一の膜貫通領域および細胞質側末端を含む単鎖分子である。古典的なカドヘリン（すなわち、Ｐ（胎盤）、Ｅ（上皮）、およびＮ（神経）カドヘリン）の間では、細胞質ドメインは最高程度の相同性を含有する。報告によれば、細胞質ドメインで観察されるこの高程度の相同性は、カテニンと呼ばれる、カドヘリン活性型コンフォメーションを安定化させる細胞内タンパク質の群とカドヘリンとの結びつきの反映であるという（Kemler R. (1993) Trends in Gastroenterology 9:317)。一般に、細胞外ドメインにおける配列は、同種親和性（すなわち、カドヘリンとカドヘリンとの）結合を媒介するために必要であると信じられている。文献のレビューは、カドヘリン媒介性接着の理解に対する研究が、カドヘリン媒介性同種親和性細胞接着の根底にあるメカニズムを解明するための努力について焦点をあててきたことを示唆する。異種親和性接着におけるカドヘリンが果たす役割があれば、それが何であるかについての理解に対する注目はほとんどなされてこなかった。インテグリンおよび他の接着分子が、例えば末梢リンパ球の内皮への接着およびリンパ節へのホーミングにおいて役割を果たす事によって、免疫系調節において機能することはしばらくの間知られていた一方で、リンパ球が血管内皮を通ってホーミングおよび移動し、特定の組織位置を特異的に標的化するメカニズムについては比較的わずかしか知られていない。
【０００８】
カドヘリンに共通する最も高度に保存された配列は、細胞質ドメイン内にある。細胞質カテニンタンパク質との相互作用を媒介するのがこの領域である（Hirano S. et al. Cell 70:293-301, 1992）。この領域の欠損はカテニン結合だけでなく細胞間接着も消滅させるため、細胞質ドメインの存在はカドヘリンの機能に必須である (Hulsken J, et al. J Cell Biol 127:1375-80, 1994)。カテニン（α，１０２ｋＤａ；β，８８−９３ｋＤａ，およびγ，８０−８３ｋＤａ）は、TX-100界面活性剤でも破壊されないような安定な形で、生合成の後ほぼすぐにカドヘリンと結びつき始め(Takeichi M. Curr Opin Cell Biol 7:619-27, 1995)、カドヘリンの細胞骨格への固定を媒介すると考えられている(Yap AS. et al. Annu Rev Cell Dev Biol 13:119-46, 1997)。機能的には、α−カテニンはカドヘリン媒介性同種親和性接着に必要である。カドヘリンを細胞表面に発現するが、α−カテニン発現を欠如する腫瘍細胞は、α−カテニン発現がトランスフェクションを通じて回復されない限り、細胞間接触に失敗する(Chen H. et al. J Cell Sci 1141345-56, 1997; and Knudsen KA. et al. J Cell Biol 130:67-77, 1995)。β−カテニンは、ショウジョウバエの体節極性タンパク質アルマジロおよびカドヘリン関連タンパク質プラコグロビンと相同である。γ−カテニンとも呼ばれるプラコグロビンは、カドヘリン／カテニン複合体とより弱く相互作用し、カドヘリン沈殿物において常にみられるわけではない。
【０００９】
数々の新たに同定されたカドヘリンｃＤＮＡクローンが、カドヘリン間で高度に保存される細胞質ドメイン配列に対応するコンセンサスオリゴヌクレオチドおよびＰＣＲクローニングを用いて単離されてきた(Suzuki S. et al. Cell Reg 2:261-70, 1991)。
【００１０】
カドヘリン機能は、古典的には同種親和性の細胞間接着（すなわち、Ｅカドヘリンは、Ｅカドヘリン、典型的には同型の別の細胞上のものに結合する）に関与するところ、表皮ケラチノサイト上に発現するマウスＥカドヘリンは、ランゲルハンス細胞のＥカドヘリンへの接着もまた媒介する (Tang A. et al. Nature 361:82-5, 1993)。Ｅカドヘリンの別のカウンターレセプター、すなわち、上皮内Ｔ細胞上に発現するインテグリンαＥβ７（Cepek KL. et al. Nature 372:190−3, 1994および米国特許第5,610,281号）、もまた同定された。これは、αＥβ７インテグリンカウンターレセプターへのＥカドヘリンの異種親和性結合の例を表す。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、炎症性障害、およびとくに炎症性関節障害ではない炎症性障害（本明細書においては、非関節炎症性障害、またはＮＪＩＤという）の処置（予防を含む）のための方法および組成物を提供する。炎症性障害は自己免疫障害であり得るが、そこまで限定されるものでもない。したがって、本発明によって処置される障害は、限定されるものではないが、炎症性腸疾患（例えば、重度の大腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病を含む大腸炎）、乾癬、グレーブス眼症、様々なタイプの血管炎、アトピー性皮膚炎などの湿疹、多発性硬化症、心房粘液腫、固形臓器移植（様々なタイプの組織）に関連する炎症、糸球体腎炎、間質性腎炎、手術後、穿孔後、および／または感染後の腹膜の炎症および憩室炎（および瘢痕）、手術後および／または胸膜腔における流血などの外傷後、および感染後の胸膜の炎症（および瘢痕）、ならびに火傷に関連する炎症（これもまた瘢痕へと導き得る）を含む。
【００１２】
任意の特定の理論に縛られることを意図するものではないが、線維芽細胞におけるカドヘリン１１発現が、とりわけ、サイトカインおよび成長因子、とくにかかる線維芽細胞からの炎症と関連するものの産生を低減させるために標的化することができることが推定される。標的線維芽細胞は、カドヘリン１１発現を上方制御しており、よってカドヘリン１１の機能を調節すること、好ましくは、アンタゴナイズすることによって標的化することができる。炎症がリンパ球、そしてとくに活性化されたリンパ球を伴うことが知られている一方で、線維芽細胞は、古典的には炎症性細胞とみなされない。本発明のアンタゴニストは、ＩＬ−６などのサイトカイン、ＭＣＰ−１およびＩＬ−８などのケモカイン、ＰＧＥ２などのプロスタグランジン、ならびに他の炎症性因子を作る線維芽細胞の能力を妨害することができる。いくつかの場合において、カドヘリン１１アンタゴニストはＴｈ２および／またはＴｈ１７免疫応答を、（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７などのＴｈ２および／またはＴｈ１７サイトカインの産生および／または分泌を低減させることによって）部分的にまたは完全に阻害する。いくつかの場合において、カドヘリン１１アンタゴニストは、（例えば、炎症部位へ動員される好酸球のレベルをを低減させることによって、またはエオタキシン−１を含むエオタキシンなどのケモカインの産生および／または分泌を低減させることによって）好酸球応答を部分的にまたは完全に阻害する。再び、任意の特定のメカニズムに縛られることを意図するものではないが、本発明のいくつかの側面および態様において、本発明のアンタゴニストを線維芽細胞の炎症性機能の阻害およびそれにより後続の炎症を阻害するのに有用にするのは、部分的に、サイトカイン、ケモカインおよび／または脂質メディエーター産生を遮断する本発明のアンタゴニストの能力によるものである。
【００１３】
本発明の一側面によって、炎症性関節障害ではない炎症性障害（すなわち、障害は非関節炎症性障害、またはＮＪＩＤである）を有する対象を処置するための方法が提供される。本方法は、かかる処置を必要とする対象へカドヘリン１１アンタゴニストの治療上有効な量を投与することを伴う。カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の機能を妨害する剤である。かかる妨害は、カドヘリン１１の機能の部分的または完全な阻害を導き得る。本発明の目的のための、重要なカドヘリン１１の機能は、好ましくはＮＪＩＤと関連する線維芽細胞からの成長因子またはサイトカインの産生である。しかしながら、カドヘリン１１アンタゴニストは、細胞−細胞接着、細胞−細胞外マトリクス接着およびアポトーシスを含むが、これらに限定されない他のカドヘリン１１の機能を妨害し得ることが理解される。好ましい態様において、対象はヒトである。好ましくは、対象は、関節炎などの炎症性関節障害を有しない。いくつかの態様において、対象は、肝臓または脳において生じる異常なカドヘリン１１媒介性接着を有しない。カドヘリン１１媒介性接着は、カドヘリン１１のそのカウンターレセプターへの結合であり、かかるカウンターレセプターは別のカドヘリン１１または全く別の分子であってもよい。
【００１４】
一態様において、ＮＪＩＤは自己免疫障害である。一態様において、ＮＪＩＤは大腸炎などの炎症性腸疾患であり、重度の大腸炎、潰瘍性大腸炎、またはクローン病を含む。一態様において、ＮＪＩＤは乾癬である。一態様において、ＮＪＩＤはグレーブス眼症である。一態様において、ＮＪＩＤは血管炎（すなわち、血管の炎症）である。一態様において、ＮＪＩＤは湿疹である。一態様において、ＮＪＩＤはアトピー性皮膚炎である。一態様において、ＮＪＩＤは多発性硬化症である。一態様において、ＮＪＩＤは心房粘液腫である。一態様において、ＮＪＩＤは固形臓器移植から生じる炎症である。一態様において、ＮＪＩＤは糸球体腎炎である。一態様において、ＮＪＩＤは間質性腎炎である。一態様において、ＮＪＩＤは火傷または他の皮膚損傷と関連する炎症である。一態様において、ＮＪＩＤは手術後，穿孔後、または感染後に生じる腹膜の炎症および憩室炎である。一態様において、ＮＪＩＤは手術後、外傷後、または感染後に生じる胸膜の炎症である。
【００１５】
別の側面において、本発明は、線維症を発症するリスクのある対象へカドヘリン１１アンタゴニストを投与することにより、対象における繊維症を予防するための方法を提供する。再度、任意の特定のメカニズムに縛られることを意図するものではないが、ある場合において、炎症性反応の低減または阻害は、後続の線維症を予防することができると信じられている。したがって、いくつかの場合において、対象は、線維症の症状(例えば、瘢痕)を現さない。
【００１６】
カドヘリン１１アンタゴニストは、例えば静脈内を含む、全身的に投与され得る。いくつかの態様において、カドヘリン１１は、対象の血管内に設置されたステントを介して投与され得る。この態様は、血管炎の処置にとくに適している。ステントは、心房粘液腫を処置するために心臓の近くに設置され得る。いくつかの態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、腸、皮膚、または眼を含む局所的に投与される。カドヘリン１１アンタゴニストはまた、組織または臓器移植の部位で対象に投与され得る。組織または臓器をカドヘリン１１アンタゴニストで潅流してもよいし、または組織または臓器が配置される空洞をカドヘリン１１アンタゴニストで洗浄することができる。代替的にまたは追加的に、カドヘリン１１アンタゴニストは、移植レシピエントにおいても同様に全身的に投与され得る。
【００１７】
なお他の態様において、アンタゴニストを、経口的、局所的、肺投与経路を介して、経鼻的、経皮的、皮下的、または静脈内に投与することができる。いくつかの場合において、カドヘリン１１アンタゴニストを、炎症性障害の性質にかかわらず、皮下または静脈経路などの全身経路によって投与する。
【００１８】
一態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１結合ペプチドである。一態様において、カドヘリン１１結合ペプチドは、抗カドヘリン１１抗体または抗原結合性抗体断片である。一態様において、カドヘリン１１結合ペプチドは、カドヘリン１１融合タンパク質である。一態様において、カドヘリン１１結合ペプチドは、全長カドヘリンまたはその断片を含む。
【００１９】
一態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１核酸アンタゴニストである。一態様において、カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、カドヘリン１１ｓｉＲＮＡである。一態様において、カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、カドヘリン１１リボザイムである。一態様において、カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、カドヘリン１１アンチセンス分子である。一態様において、カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、全長カドヘリン１１またはその断片をコードする核酸である。一態様において、カドヘリン１１核酸アンタゴニストはアプタマーである。
一態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは小分子である。
【００２０】
いくつかの態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは抗体であり、他の態様において、それらは抗体ではない。抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体を含むキメラ抗体、ラクダ科動物、単鎖抗体などでありえる。
【００２１】
本発明は、別の側面において、薬学的に許容し得る担体中に、またはステントなどのインプラントとして調製された有効な量のカドヘリン１１アンタゴニストを含む医薬組成物(すなわち、医薬製剤)もまた提供する。本発明は、薬学的に許容し得る担体におけるカドヘリン１１アンタゴニストを配置することによって、かかる組成物を作製する方法もまた提供する。医薬組成物製剤は、１または２以上のカドヘリン１１アンタゴニストおよび、任意に、処置される特定の障害の処置に有用な他の治療剤を含有してもよい。
【００２２】
本発明のこれらのおよび他の側面、ならびに様々な利点および有用性は、好ましい態様の詳細な説明および添付の図面への参照によってより明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
例は、様々な図の簡単な記載を参照し、またはこれを含む。図面または図は、図示のためだけのものであり、本明細書に記載の本発明の実施可能性にとって必要なものではないことが理解される。
【００２４】
【図１】ヒトカドヘリン１１−Ｆｃ融合タンパク質の構造の模式図。野生型カドヘリン１１の細胞外膜近傍領域の配列およびヒトＦｃ領域との融合から生じる変化が示されている。Ｆｃ部分に対応する領域は太字で示す。
【図２】ヒトカドヘリン１１のヌクレオチド配列（配列番号１）。
【図３】ヒトカドヘリン１１のアミノ酸配列（配列番号２）。
【図４】アレルギー性皮膚炎症のマウスモデルの抗カドヘリン１１のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）処置の計画。
【００２５】
【図５】抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置は皮膚炎症を抑制した。（Ａ）ＳＡＬおよびＯＶＡ感作皮膚からの切片のＨ＆Ｅ染色。（Ｂ）表皮および真皮の厚さが抗ｃａｄ１１ｍＡｂ処置により、未処置群に比べて有意に低下した。（Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞ではなく、好酸球は、炎症した皮膚へ有意により少なく動員された。
【図６】抗ｃａｄ１１ｍＡｂ処置群の感作皮膚において、Ｔｈ２型サイトカインは下方制御された。（Ａ）Ｔｈ２型サイトカイン（ＩＬ-４およびＩＬ-１３）、ＩＬ-１７、およびＩＦＮ-γ、ならびに（Ｂ）好酸球を動員するためのエオタキシン−１、ケモカインについて、感作皮膚から単離した全ＲＮＡを分析した。
【図７】体重（Ａ）、および結腸の長さ（Ｂ）における効果から立証されるとおり、カドヘリン１１欠損マウスは、炎症性腸疾患のデキストラン硫酸ナトリウムモデルにおいて、大腸炎から保護される。
【００２６】
本発明の詳細な説明
カドヘリン１１は、とくに、自身とのまたはそのカウンターレセプターとの相互作用を通じて、細胞が互いに結合することを媒介する膜貫通分子である。他のカドヘリンのように、カドヘリン１１はとりわけ、似た細胞を互いに接着すること、および、異なる系列の細胞を互いに接着することを媒介することが提案されている。ヒトおよびマウスカドヘリン１１遺伝子は、既に単離され、配列決定されている(Suzuki S. et al. Cell Reg 2:261-70, 1991)。また、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１７９７（配列番号１および配列番号２）を、それぞれヒトカドヘリン１１ｃＤＮＡおよび予想アミノ酸配列について、参照のこと。
【００２７】
本発明は、少なくとも部分的に、一定の炎症性障害において、線維芽細胞による因子またはサイトカイン分泌を調節するカドヘリン１１の能力に基づく。本発明は、対象の関節における炎症を伴わない特定の炎症性障害の処置におけるカドヘリン１１アンタゴニストの使用を包含する。
【００２８】
本方法は、カドヘリン１１アンタゴニストを対象へ投与することを含む。カドヘリン１１アンタゴニストは、存在するまたは少なくとも炎症と関連するカドヘリン１１発現細胞、そしてとくに、カドヘリン１１発現線維芽細胞の（１）細胞増殖、（２）ＩＬ-６、ＭＣＰおよびＴＮＦαなどの、ただしこれらに限定されない分子の分泌、（３）アポトーシス、（４）遊走ならびに／または（５）付着を妨害することができ、これは部分的にまたは完全に阻害することを含む。重要な態様において、かかるアンタゴニストは、ＩＬ-４、ＩＬ-６、ＩＬ-１３、ＩＬ-１５、ＩＬ-１７、ＩＬ-２３、タイプＩ  ＩＦＮｓ、ＩＬ-１βおよびＴＮＦαなどのサイトカイン、ＧＭ-ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＰＤＧＦおよびＳＣＦなどの成長因子、ＣＸＣＬ−１、−５、−６、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１３、ＣＣＬ−２、−３、−５、エオタキシン−１（ＣＣＬ１１）などのエオタキシンおよびＣＸ３ＣＬ１などのケモカイン、プロスタグランジンおよびロイコトリエンなどの生物活性脂質、ならびにＭＭＰおよびカテプシンなどの分解酵素などの、ただしこれらに限定されない分子の産生および／または分泌における低下に導く。いくつかの場合において、アンタゴニストは、先在するＴｈ２免疫応答を阻害するまたは低減させる。いくつかの場合において、アンタゴニストは、先在するＴｈ１７免疫応答を阻害するまたは低減させる。いくつかの場合において、アンタゴニストは、Ｔｈ２およびＴｈ１７免疫応答を阻害するまたは低減させる。いくつかの場合において、アンタゴニストは、炎症の部位での好酸球数を低減させる。アンタゴニストはまた、ＣＤ４０、ＶＣＡＭ-１、ＩＣＡＭ-１、ＴＬＲｓ、インテグリンおよびサイトカインおよびケモカインレセプターなどの線維芽細胞表面における細胞表面レセプターの発現（または過剰発現）を予防することまたは下方制御することもできる。
【００２９】
一側面において、本発明は、非関節炎症性障害を有する対象を処置するための方法に関する。本明細書で用られる非関節炎症性障害とは、関節に起こらないまたは関与しない炎症性障害である。炎症性障害は、典型的には、活性化された免疫細胞の存在および／またはマクロファージ、好中球および他の顆粒球、Ｔ細胞およびＮＫ細胞などの免疫細胞を刺激するサイトカイン環境などの炎症性マーカーの増大されたレベルを特徴とする。
【００３０】
本発明によって処置される炎症性障害は、自己免疫障害でありえる。自己免疫障害は、体の免疫系が１または２以上の体組織に対して反応し、よって、異種抗原または病原体であるように組織を攻撃するものである。
【００３１】
本発明によって処置される炎症性障害は、炎症性腸疾患(例えば、重度の大腸炎、潰瘍性大腸炎、クローン病などの大腸炎)、乾癬、グレーブス眼症、血管炎(すなわち、血管の炎症)、アトピー性皮膚炎などの湿疹、多発性硬化症、心房粘液腫、固形臓器移植(例えば、心臓、肝臓、腎臓、皮膚、肺、眼などの移植)から生じる炎症、糸球体腎炎、間質性腎炎、火傷または他の皮膚損傷と関連する炎症、手術後、穿孔後、または感染後に生じる腹膜の炎症および憩室炎、または手術後、外傷後、または感染後に生じる胸膜の炎症であり得る。
【００３２】
本明細書に記載の方法により処置される炎症性障害は、急性および慢性滑膜炎、乾癬性関節炎を含む関節炎、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎と関連する関節炎、全身性エリテマトーデスと関連する関節炎、および若年慢性関節炎、慢性ライム病、およびライター症候群を除く。
【００３３】
アンタゴニストは、処置される障害が全身性かまたは局所性かに依存して、全身的にまたは局所的に投与されてもよい。
【００３４】
カドヘリン１１アンタゴニストは、治療上有効な量で対象へ投与される。治療上有効な量は、医療的に所望される結果を提供するために十分なカドヘリン１１アンタゴニストの投与量である。本発明の処置方法において、カドヘリン１１アンタゴニストの治療上有効な量は、特定の局部でまたは全身的に(障害に依存する)、炎症(または、好酸球などの特定の細胞型あるいはＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７またはエオタキシン−１などのエオタキシンなどの特定のサイトカインまたはケモカインなどの、ただしこれらに限られない、炎症性マーカーのレベル)を低減させるため、または炎症性障害と関連する他の症状を緩和するために十分な量であり得る。本明細書において、処置とは、炎症性障害を有する対象における、および障害を発症するリスクにある対象におけるカドヘリン１１アンタゴニストの使用を包含する。
【００３５】
なお他の態様において、治療上有効な量は、対象において線維症の発病を予防するまたは遅延させる量である。線維症は、臓器または組織における過剰な線維性結合組織の発達を指す。線維症は、多様な組織または臓器において生じ得る。線維性条件は、肺線維症、肝線維症(例えば、アルコール消費、ウイルス性肝炎、および／または住血吸虫症と関連するもの)、肥大性瘢痕、ケロイド、火傷、ペイロニー病、デュピュイトラン拘縮、骨髄線維症、膵線維症、心筋梗塞後心線維症、糖尿病と関連する腎臓／腎（kidney/renal)線維症、炎症後腎線維症、ならびに薬物誘導線維症(例えば、化学療法および／または放射線暴露から生じるもの)を含む。いくつかの態様において、対象は、線維症を有しない。なお他の態様において、対象は、線維症を有しないし、炎症性関節障害を有しない。
【００３６】
本明細書で用いる対象は、前述の任意の非関節炎症性障害を有しやすいまたは現在有している任意の哺乳動物をさす。対象は、ヒトおよび非ヒト対象であってよい。非ヒト対象は、コンパニオン動物(例えば、イヌおよびネコ)、農業用または競争用動物（例えば、ウシ、ウマ、など)を含むがこれらに限定されない。好ましくは、対象は、これらの非関節炎症性障害のうちの１つを有するものである。他の態様において、対象は線維症を発達するリスクがあり、線維症を進行する炎症性障害を有し得るまたはいまだ有し得ない。ある態様において、対象は、脳および／または肝臓における異常なカドヘリン１１媒介性接着を有しない。
【００３７】
カドヘリン１１アンタゴニスト：
本明細書において、アンタゴニストの用語は、他の分子の機能、活性および／または発現を遮断、阻害、低減または中和する、任意のタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド模倣物、糖タンパク質、抗体、抗体断片、炭水化物、核酸、有機分子、無機分子、巨大分子、または小分子を指す。本明細書において、カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の機能、活性および／または発現を遮断、阻害、低減または中和する剤である。前述したように、カドヘリン１１は細胞の付着、相互作用および／または遊走に関与している。カドヘリン１１は、同種親和性または同型（ホモタイプ）結合と言及されるものにおいて、それ自体に結合することが知られている。カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１同型結合または異型結合（すなわち、カドヘリン１１の、カドヘリン１１ではないカウンターレセプターへの結合）を妨害し得る。カドヘリン１１アンタゴニストは、細胞が発現するカドヘリン１１の量を低減することにより、またはカドヘリン１１（またはそのカウンターレセプター）と相互作用し、これによりカドヘリン１１のその標的との相互作用を予防することにより、カドヘリン１１の機能を妨害し得る。したがって、カドヘリン１１アンタゴニストは、その全体または一部が、カドヘリン１１の転写、またはカドヘリン１１の翻訳を妨害し得（これによりカドヘリン１１の発現を妨害する）、またはカドヘリン１１の別のカドヘリン１１に、または別のカドヘリン１１カウンターレセプターに結合する能力を妨害し得る。カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の機能または活性を、ＰＢＳなどの対照と比べて約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％低減させることができる。カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の機能または活性をほぼこれらの量だけ低減させるような量で、使用してよいことが理解される。いくつかのカドヘリン１１アンタゴニストはin vitroで用いるのが好ましく、他のものは本明細書で提供されるin vivo方法により適していることが、さらに理解される。
【００３８】
いくつかのカドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の細胞外ドメインに結合し、いくつかはカドヘリン１１の細胞外ドメインの特定の領域に結合する。本明細書で論じるように、カドヘリン１１の細胞外ドメインは、それぞれがおよそ約１１０個のアミノ酸のサイズの５つのサブドメインから構成されている。（例えば、米国特許第7589074号およびYagi et al. Genes and Development, 14:1169-1180, 2000を参照）。本発明は、カドヘリン１１ＥＣ１に、またはカドヘリン１１ＥＣ１の断片（例えば、ＥＣ１の約最初の３３から最初の３７のアミノ酸を含む断片）に、またはＥＣ１（もしくはＥＣ１の最初の３３〜３７アミノ酸）を含むカドヘリン１１の断片に結合する、カドヘリン１１アンタゴニストの使用を意図する。いくつかの態様において、アンタゴニストは、アミノ酸配列：GWVWN QFFVI EEYTG PDPVL VGRLH SDIDS GDGN（配列番号３、ＥＣ１の最初の３４のアミノ酸）を有するＥＣ１の領域に結合する。代替的に、または追加的に、アンタゴニストは、このアミノ酸配列のいくつかまたは全部を含んでもよい。
【００３９】
カドヘリン１１アンタゴニストは、ペプチドまたはタンパク質であってよく、または核酸であってもよく、または有機または無機小分子であってもよい。アンタゴニストは、天然または非天然であってよい。これらは天然源から単離することができ、またはin vitroで合成してもよい。
【００４０】
カドヘリン１１アンタゴニストは、造影剤または細胞傷害剤などの他の剤に抱合させてもよい。造影剤は、in vitro（例えば、免疫組織化学的分析のために）またはin vivo（例えば、身体のイメージングのために）でのカドヘリン１１の発現を可視化するために用いることができる。例としては、放射性核種、造影剤、および医療用画像処理で日常的に使用される微粒子を含む。細胞傷害剤は、細胞に対して毒性の剤である。例としては、化学療法剤、毒素などが挙げられる。カドヘリン１１アンタゴニストに抱合されたこれらの剤の使用は、かかる剤を、炎症性障害と関連する線維芽細胞に標的化させる。これらの場合において、治療上の利点は、ＩＬ−６などの（ただしこれに限定されない）炎症性因子を分泌するカドヘリン１１の能力を妨害するカドヘリン１１アンタゴニストと、線維芽細胞に対して直接毒性である細胞傷害剤との組み合わせによって、提供され得る。
【００４１】
カドヘリン１１結合ペプチド：
天然においてペプチドまたはタンパク質であるカドヘリン１１アンタゴニストとしては、以下が挙げられる：（１）全長カドヘリン１１タンパク質、（２）全長タンパク質の断片、ここで断片は、カドヘリン１１の膜貫通ドメインまたは、例えばＥＣ１を含むかこれからなる断片（例えば、ＥＣ１を含む断片、ＥＣ１およびＥＣ２を含む断片、ＥＣ１〜ＥＣ３を含む断片、ＥＣ１〜ＥＣ４を含む断片、ＥＣ１〜ＥＣ５を含む断片、ＥＣ１およびＥＣ３を含む断片、ＥＣ１およびＥＣ４を含む断片、ＥＣ１およびＥＣ５を含む断片）などの細胞外ドメインの断片を含む、（３）全長タンパク質の断片、ここで断片は、１または２以上のカドヘリン１１細胞外サブドメイン（例えば、カドヘリン１１の５つの細胞外サブドメインのＥＣ１、ＥＣ２、ＥＣ３、ＥＣ４、もしくはＥＣ５、またはこれらの任意の組み合わせ）を含む、（４）全長カドヘリン１１またはその断片を含む融合タンパク質、および（５）抗体およびその断片。重要な態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１のＥＣ１ドメインまたはその断片（例えば、本明細書で提供される配列番号３など）に、結合するか、および／またはこれを含む。
【００４２】
天然でペプチドまたはタンパク質であるカドヘリン１１アンタゴニストは、好ましくはカドヘリン１１へ優先的（または選択的）に結合する。カドヘリン１１への優先的（または選択的）結合とは、ペプチドまたはタンパク質が、他のタンパク質に対するよりも大きい親和性でカドヘリン１１に結合することを意味する。いくつかの例において、ペプチドまたはタンパク質は、カドヘリン１１に対して、カドヘリン１１ではないタンパク質または任意の他の部分に対するよりも、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２５倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約１０００倍以上高い親和性で結合する。親和性におけるかかる差は、in vivoで生じるような生理学的条件下で現れるのが好ましい。いくつかの態様において、カドヘリン１１結合ペプチドは、カドヘリン１１のＥＣ１に結合し、任意に、本明細書に提供される配列番号２に示されるように、カドヘリン１１のＥＣ１の最初の３３〜３７のアミノ酸（最初の３３、最初の３４、最初の３５、最初の３６、または最初の３７のアミノ酸を含む）に結合する。カドヘリン１１のこの領域への結合は、カドヘリン１１のこの領域に結合することが知られており例えばWO2009/089062に記載されているような他の結合剤を用いて、競合結合アッセイを通して決定することができる。前述のアンタゴニストは、まとめてカドヘリン１１結合ペプチドと呼ばれる。カドヘリン１１結合ペプチドは、天然の源から収集して単離することができ、またはこれは、合成して、カドヘリン１１に結合する能力についてスクリーニングすることができる。
【００４３】
ペプチドおよびタンパク質に関して本明細書で用いる場合、用語「単離された」とは、その天然の環境から十分に純粋な形態で分離されて、本発明の目的のいずれかのために操作または使用できることを意味する。
【００４４】
結合ペプチドはまた、抗体技術以外の供給源に由来することができる。例えば、結合ペプチドは、変性ペプチド（degenerate peptide）ライブラリから提供することができ、これは、細菌の鞭毛ペプチドディスプレイライブラリとして、またはファージディスプレイライブラリとして、溶液中に固定化された形で容易に調製することができる。組み合わせライブラリも、１または２以上のアミノ酸を含有するペプチドから合成することができる。ペプチドおよび非ペプチド合成部分で構成されたライブラリも、作製することができる。
【００４５】
カドヘリン１１またはその断片はまた、他のカドヘリン１１結合ペプチドまたはパートナーを単離するために用いることができる。結合パートナーの単離は、周知の方法に従って行うことができる。例えば、カドヘリン１１またはその断片（例えば、細胞外断片）を基質に付着させ、次いで推定カドヘリン１１結合ペプチドを基質に適用することができる。カドヘリン１１結合ペプチドが存在すれば、これは基質に結合したカドヘリン１１に結合するので、次いで分離してさらに分析することができる。
【００４６】
全長カドヘリン１１およびカドヘリン１１断片：
カドヘリン１１の既知のヌクレオチドおよびアミノ酸配列に基づき、従来技術を用いて、カドヘリン１１の好適な断片を同定し生成することができる。参照としては、米国特許第5597725号、第5639634号、第5646250号、第6787136号、第6946768号、第7488478号、および第7589074号、ならびにＰＣＴ特許公開WO93/21302およびWO2009/089062が挙げられ、カドヘリン１１ヌクレオチドおよびアミノ酸配列および断片に関連するこれらの教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００４７】
好適な断片の例としては以下を含む：カドヘリンＥＣ１のアミノ酸１〜４０、１〜３９、１〜３８、１〜３７、１〜３６、１〜３５、１〜３４、１〜３３、１〜３２、１〜３１、または１〜３０からなるか、これを含む物、またはカドヘリンＥＣ１のアミノ酸１５〜３４、１５〜３５、１５〜３６、１５〜３７、１５〜３８、１５〜３９、または１５〜４０からなるか、これを含む物。本明細書に提供される配列番号２において、ＥＣ１の最初の４０個のアミノ酸には下線を引き、ＥＣ１の最初の３５個のアミノ酸は太字で示す。好適な断片の例はまた、WO2009/089062に提供され（アミノ酸配列番号３、１０、１２および１３により表され、US2009/0253200にも記載されている）、この配列は本明細書に参照により組み込まれる。その他の断片は、配列番号２のアミノ酸１〜１６０、または１〜２５９、または１〜２６９を含んでよく、任意に、ヒトカドヘリン１１のリーダーおよびプロ領域を表す、配列番号２のアミノ酸１〜５３を欠如していてよい。
【００４８】
カドヘリン１１結合ペプチドはまた、全長カドヘリン１１またはカドヘリン１１断片の変異体であってもよい。かかる変異体は、カドヘリン１１のアミノ酸配列とは一定程度異なってよい。例えば、変異体は、全長カドヘリン１１またはカドヘリン１１断片に対して、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一であることができる。変異体は、断片のアミノおよび／またはカルボキシ末端において、カドヘリン１１断片および追加の隣接する成分を含んでもよい。かかる成分は、本質的にアミノ酸であってもよい。すべての例において、変異体はカドヘリン１１に結合し、カドヘリン１１の機能または活性を妨害する。
【００４９】
カドヘリン１１結合ペプチドは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０のアミノ酸長またはそれ以上であってよい。例えば、これは約または少なくとも２２０、３３０、４４０、５５０のアミノ酸長であってよい。
【００５０】
いくつかの重要な態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１の機能的に等価なペプチドアナログである。本明細書において、用語「機能的に等価なペプチドアナログ」は、カドヘリン１１の例えばそれ自身への結合を阻害することができる、ペプチドアナログを指す。カドヘリン１１の機能的に等価なペプチドアナログは、例えば、in vitroの接着アッセイを用いて同定され、これは、カドヘリン１１を発現する細胞間の、または単離されたカドヘリン１１タンパク質間の、またはこれらのいくつかの組み合わせの間の、カドヘリン１１媒介性接着を阻害するペプチドアナログの能力を測定するアッセイである。したがって、カドヘリン１１の機能的に等価なペプチドアナログの例としては、全長カドヘリン１１またはカドヘリン１１断片のアナログであって、例えば、野生型配列に対する保存的アミノ酸置換を含むものが挙げられる。
【００５１】
さらに他のカドヘリン１１結合ペプチドは、ＰＣＴの公開された出願WO99/57149、WO2004/048411、およびWO2009/089062において提供され、カドヘリン１１結合ペプチドおよびアンタゴニストに関連するこれらの特定の教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５２】
カドヘリン１１融合タンパク質：
カドヘリン１１結合ペプチドは、融合タンパク質であることができる。融合タンパク質は、本明細書で使用する場合、少なくとも２つの異なるタンパク質からのペプチド領域を含むタンパク質である。例えば、カドヘリン１１融合タンパク質は、カドヘリン１１および少なくとも１つの非カドヘリン１１タンパク質のアミノ酸配列を含有する。かかる融合タンパク質は、カドヘリン１１からのコード配列を非カドヘリン１１タンパク質のコード配列に、通常ヌクレオチドレベルで融合させることにより形成することができる。カドヘリン１１融合タンパク質の例としては、カドヘリン１１ＧＳＴ融合タンパク質、カドヘリン１１Ｆｃ融合タンパク質、カドヘリン１１βガラクトシダーゼ融合タンパク質、カドヘリン１１ポリＨｉｓ融合タンパク質、およびカドヘリン１１ＧＦＰ融合タンパク質が含まれる。Ｆｃ融合タンパク質はＩｇ定常ドメインの領域を含んでもよく、これは限定することなく、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、および／またはＣＨ３ドメインを含み、これらは任意に、ヒンジドメインを介してカドヘリン１１断片に抱合されている。Ｆｃ部分は、ヒト抗体または非ヒト抗体に由来することができる。抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ２であってもよいが、しかしこれに限定はされない。Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法は当分野で知られており、少なくともEP0464533に記載されている。
【００５３】
いくつかの態様において、カドヘリン１１融合タンパク質は、カドヘリン１１の細胞外ドメイン全体を含む。いくつかの態様において、カドヘリン１１融合タンパク質は、カドヘリン１１の１または２以上の細胞外サブドメイン、例えばＥＣ１を含む。例としては、ＥＣ１、ＥＣ１／２、ＥＣ１〜３、ＥＣ１〜４、ＥＣ１／３、ＥＣ１／４、およびＥＣ１／５、またはＥＣ１の断片を含む、融合タンパク質が挙げられる。重要な態様において、融合タンパク質は、カドヘリン１１のＥＣ１ドメインに結合する。カドヘリン１１融合タンパク質の例としては、カドヘリン１１−ＥＣ１−Ｆｃ融合タンパク質（カドヘリン１１のＥＣ１ドメインを含む）、カドヘリン１１−ＥＣ１／２−Ｆｃ融合タンパク質（カドヘリン１１のＥＣ１およびＥＣ２ドメインを含む）、およびカドヘリン１１−ＥＣ１〜５−Ｆｃ融合タンパク質（カドヘリン１１のＥＣ１、ＥＣ２、ＥＣ３、ＥＣ４、およびＥＣ５ドメインを含む）が挙げられる。いくつかの融合タンパク質は、WO2009/089062に記載されているように、カドヘリン１１のＥＣ１ドメインの最初の４０の、最初の３９の、最初の３８の、最初の３７の、最初の３６の、最初の３５の、または最初の３４のアミノ酸を含んでよい。
【００５４】
カドヘリン１１融合タンパク質の合成方法は、少なくとも米国特許第5597725号、第5639634号、第5646250号、第6787136号、第6946768号、第7488478号、および第7589074号、ならびにＰＣＴ特許公開公報WO93/21302およびWO2009/089062に記載されており（例えば配列番号６および７を参照、これは、ヒトカドヘリン１１−ＥＣ１−ｈＩｇＧ２−Ｆｃ融合タンパク質のヌクレオチドおよびアミノ酸配列である）、カドヘリン１１融合タンパク質に関連するこれらの教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５５】
カドヘリン１１抗体および抗体断片：
カドヘリン１１結合ペプチドであるカドヘリン１１アンタゴニストは、抗体または抗原結合性抗体断片であってよい。抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であってよい。これらは、ヒト化抗体を含むキメラ抗体であってもよい。これらは、２つの重鎖と２つの軽鎖とから構成される４本鎖抗体であってもよく、または、２つの重鎖から構成される（例えばラクダ科動物抗体）、または１つの軽鎖に結合した１つの重鎖から構成される（例えば単鎖Ｆｖｓ）、２本鎖抗体であってもよい。これらは、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであることができる。後述するように、これらの様々な抗体形態は、従来の方法に従って調製することができる。抗体および抗体断片は天然であってよく、または、例えば組換え的に産生された抗体および断片を含む非天然であってもよい。
【００５６】
重要なのは、当該技術分野でよく知られているように、抗体分子の小さな部分であるパラトープのみが、抗体のそのエピトープへの結合に関与していることである（一般的に、Clark, W.R. (1986) The Experimental Foundations of Modern Immunology Wiley & Sons, Inc., New York；Roitt, I. (1991) Essential Immunology, 7th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxfordを参照）。例えばｐＦｃ’およびＦｃ領域は、補体カスケードのエフェクターであるが、抗原結合に関与していない。ｐＦｃ’領域が酵素的に切断された、またはｐＦｃ’領域なしで作製された抗体は、Ｆ（ａｂ’）２断片と呼ばれ、無傷の抗体の両方の抗原結合部位を保持している。同様に、Ｆｃ領域が酵素的に切断されたか、またはＦｃ領域なしに作製された、Ｆａｂ断片と呼ばれる抗体は、無傷の抗体分子の抗原結合部位の１つを保持している。さらに進むと、Ｆａｂ断片は、共有結合した抗体軽鎖とＦｄと呼ばれる抗体重鎖の部分からなる。Ｆｄ断片は、抗体特異性の主要な決定要因であり（単一のＦｄ断片は、抗体の特異性を変化させずに１０個までの異なる軽鎖と結びつくことができる）、Ｆｄ断片は、単独でエピトープ結合能力を保持する。
【００５７】
用語Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｃ、Ｆｄ、ｐＦｃ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｄＡｂは、標準的な免疫学的意味で用いられる［Klein, Immunology (John Wiley, New York, NY, 1982)；Clark, W.R. (1986) The Experimental Foundations of Modern Immunology (Wiley & Sons, Inc., New York)；Roitt, I. (1991) Essential Immunology, 7th Ed., (Blackwell Scientific Publications, Oxford)］。周知の機能的に活性な抗体断片としては、限定することなく、抗体のＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＦｄ断片が挙げられる。無傷の抗体のＦｃ断片が欠如しているこれらの断片は、循環からより迅速に取り除かれ、無傷の抗体よりも少ない非特異的組織結合を有し得る（(Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。例えば、単鎖抗体は、Ladnerらへの米国特許第4,946,778号に記載の方法に従って構成することができる。かかる単鎖抗体は、フレキシブルなリンカー部分により結合された軽鎖と重鎖の可変領域を含む。
【００５８】
単離された可変重鎖単一ドメインを含む、単一ドメイン抗体（「Ｆｄ」）を得るための方法も、報告されている（例えば、Ward et al., Nature 341:644-646 (1989)を参照、これには、抗体重鎖可変領域（ＶＨ単一ドメイン抗体）を、単離された形態においてそこに結合するための標的エピトープに対する十分な親和性を有して同定するために、スクリーニングする方法が開示されている）。既知の抗体重鎖および軽鎖可変領域配列に基づき、組み換えＦｖ断片を作製するための方法は当分野に知られており、例えば、Mooreらの米国特許第 4,462,334号に記載されている。抗体断片の使用および生成について記載するその他の参考文献としては、例えば、Ｆａｂ断片（Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Elsevieer, Amsterdam, 1985)）、Ｆｖ断片（Hochman et al., Biochemistry 12: 1130 (1973)；Sharon et al., Biochemistry 15: 1591 (1976)；Ehrilch et al., 米国特許第4,355,023号）、および抗体分子の一部（Audilore-Hargreaves, 米国特許第4,470,925号）がある。したがって当業者は、抗体の特異性を損なうことなく、無傷の抗体の種々の部分から抗体断片を作製することができる。
【００５９】
抗体の抗原結合部分内に、当分野において知られているように、抗原のエピトープと直接相互作用する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、パラトープの三次構造を維持するフレームワーク領域（ＦＲ）が存在する（一般的にClark, 1986; Roitt, 1991を参照）。重鎖Ｆｄ断片とＩｇＧ免疫グロブリンの軽鎖の両方において、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）によってそれぞれ区切られた４つのフレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）が存在する。ＣＤＲ、とくにＣＤ３領域、およびよりとくに重鎖ＣＤＲ３は、抗体特異性に大きく関与する。
【００６０】
現在当分野で十分に確立されているのは、哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域が、同種または異種抗体の類似領域で置き換えることができて、かつオリジナル抗体のエピトープ特異性を保持していることである。これは、非ヒトＣＤＲがヒトＦＲおよび／またはＦｃ／ｐＦｃ’領域に共有結合で結合されて、機能的抗体を生産する、「ヒト化」抗体の開発および使用において、最も明確に示されている。したがって、例えば、ＰＣＴ国際公開WO92/04381および公開された欧州特許出願EP0239400は、マウスＦＲ領域の少なくとも一部が、ヒト由来のＦＲ領域によって置き換えられたヒト化マウス抗体の産生および使用について教示する。抗原結合能を有する無傷の抗体の断片を含む、かかる抗体は、しばしば「キメラ」抗体と呼ばれている。米国の事業体においては、ヒト化抗体を特定のマウス抗体領域から商業的に合成する予定であり、例えばProtein Design Labs (Mountain View California)、Abgenix、およびMedarexなどがある。
【００６１】
したがって、当業者に明らかであるように、本発明は以下も提供する：Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＦｄ断片；Ｆｃおよび／またはＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が、相同なヒトまたは非ヒト配列によって置き換えられているキメラ抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が、相同なヒトまたは非ヒト配列によって置き換えられているキメラＦ（ａｂ’）２断片抗体；ＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ３領域が、相同なヒトまたは非ヒト配列によって置き換えられているキメラＦａｂ断片抗体；およびＦＲおよび／またはＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２領域が、相同なヒトまたは非ヒト配列によって置き換えられているキメラＦｄ断片抗体。本発明はまた、単鎖抗体も含む。
【００６２】
さらに、ヒトモノクローナル抗体は、当分野に知られている任意の方法により作製してよく、例えば、以下に記載の方法である：Borrebaeckらに発行された米国特許第5,567,610号、Ostbergに発行された米国特許第565,354号、Bakerらに発行された米国特許第5,571,893号、Kozber, J. Immunol. 133: 3001 (1984)、Brodeur, et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, p. 51-63 (Marcel Dekker, Inc, new York, 1987)、およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86-95 (1991)。ヒトモノクローナル抗体を調製するための従来方法に加えて、かかる抗体はまた、ヒト抗体を産生することのできる遺伝子導入動物を免疫化することによっても調製できる（例えば、Jakobovits et al., PNAS USA, 90: 2551 (1993)、Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993)、Bruggermann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993)およびLonbergに発行された米国特許第 5,569,825号）。
【００６３】
例示のカドヘリン１１およびかかる抗体を作製する方法は、米国特許第5597725号、第5639634号、第5646250号、第6787136号、第6946768号、第7488478号、および第7589074号、およびＰＣＴ特許公開WO 93/21302およびWO2009/089062に記載されており、カドヘリン１１抗体に関連するこれらの教示は、本明細書に参照により組み込まれる。カドヘリン１１抗体の例としては、以下が挙げられる：２３Ｃ６、１３Ｃ２、２７Ｆ３、５Ｆ８２（Lifespan Scienceより市販）、Ｈ１Ｍ１抗体（ＡＴＣＣアクセッション番号PTA-9699を有するハイブリドーマＨ１Ｍ１により産生されたカドヘリン１１ＥＣ１特異的抗体）、Ｈ１４抗体（ＡＴＣＣアクセッション番号PTA-9701を有するハイブリドーマＨ１４により産生されたカドヘリン１１ＥＣ１特異的抗体）、ＢＭ５０９６／１Ａ６（Acris Antibodies GmbHより市販）、２８３４１６（R&D Systemsより市販）、およびＭＡＢ２０１４（Milliporeより市販）。カドヘリン１１抗体断片の例としては、抗体２３Ｃ６、１３Ｃ２、２７Ｆ３、５Ｆ８２、Ｈ１Ｍ１抗体、Ｈ１４抗体、ＢＭ５０９６／１Ａ６、２８３４１６、およびＭＡＢ２０１４のＦａｂ断片が挙げられる。抗体または抗体断片は、US 2009/0253200に記載のようにＨ１Ｍ１またはＨ１４抗体などの既知の抗体からの１または２以上のＣＤＲを含むことができ、この文献のＣＤＲの開示は、本明細書に参照により組み込まれる。
【００６４】
カドヘリン１１のＥＣ１ドメインに結合する抗体および抗体断片は、US 2009/0253200およびWO2009/089062に記載されており、かかる開示は本明細書に参照により組み込まれる。
【００６５】
カドヘリン１１抗体はまた、２つの異なるエピトープにそれらの異なる抗原結合部位によって結合可能な、二重特異性または二機能性抗体であってよい。
【００６６】
さらに他のカドヘリン１１抗体は、ＰＣＴ公開WO 94/04678および米国特許公開第20080124324号に記載のラクダ科動物抗体、および、米国特許第5759808号にあるようなラクダナノバディの形態におけるそれらの誘導体である。ラクダ科動物抗体およびラクダナノバディは、Ablynx (Belgium)などの供給源から市販されている。カドヘリン１１ラクダ科動物抗体は、他の抗体タイプについて本明細書に記載されたものと同様の様式でヒト化可能であることが、理解される。
【００６７】
いくつかの態様において、アンタゴニストは、米国特許第5,597,725号およびＰＣＴ出願PCT/US93/03681（WO/93/21302）に記載の抗体を含まない。したがって、一定の関連する態様において、本発明の剤は３０Ｑ８Ａ（ＨＢ１１３１６）、３０Ｑ４Ｈ（ＨＢ１１３１７）、４５Ａ５Ｇ（ＨＢ１１３１８）、３０Ｓ２Ｆ（ＨＢ１１３１９）、４５Ｃ６Ａ（ＨＢ１１３２０）、３０Ｔ１１Ｇ（ＨＢ１１３２４）、６４Ｇ１１Ｆ（ＨＢ１１５２７）と呼ばれるハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体を包含しない。
【００６８】
カドヘリン１１核酸アンタゴニスト：
カドヘリン１１アンタゴニストはまた、核酸であってもよい。これらのアンタゴニストは、以下のような核酸を含む：（１）カドヘリン１１ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸；（２）上記核酸分子の転写又は翻訳を阻害するカドヘリン１１アンチセンス分子である核酸；（３）カドヘリン１１阻害性ＲＮＡである核酸（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）；（４）カドヘリン１１リボザイムである核酸；（５）アプタマーであって、天然で核酸であるが、結合ペプチドのようにカドヘリン１１に結合して、カドヘリン１１の別のカドヘリン１１のへの、または別のカドヘリン１１カウンターレセプターへの結合を妨害する、前記アプタマーである核酸。いくつかの態様において、カドヘリン１１アンタゴニストは、（１）配列番号１の配列を有する核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸、および（２）カドヘリン１１に特異的に結合することができるカドヘリン１１ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸である。
【００６９】
カドヘリン１１をコードする核酸：
カドヘリン１１アンタゴニストは、カドヘリン１１およびカドヘリン１１の断片をコードする核酸を含む。カドヘリン１１全長ヌクレオチド配列を、配列番号１として提供する。配列番号１のヌクレオチド配列を含む核酸は、一例として、アンタゴニストとして用いることができる。本発明のカドヘリン１１アンタゴニストは、配列番号１の配列を含む核酸分子のホモログおよび対立遺伝子も含む。
【００７０】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、可溶性カドヘリン１１ポリペプチド、膜結合ペプチド、またはＥＣ１もしくはその断片（例えば、ＥＣ１の最初の３３〜３７のアミノ酸）からなるかこれを含む断片などのカドヘリン１１断片であるポリペプチドをコードすることができる。可溶性カドヘリン１１ポリペプチドは膜貫通ドメインを欠いており、最適には、ポリペプチドを可溶性にするさらなるアミノ酸を含む（例えば、カドヘリン１１の別のカドヘリン１１への結合を阻害する、カドヘリン１１の全体または一部を含む融合タンパク質）。膜結合（または膜関連）であるカドヘリン１１断片は、好ましくは膜貫通ドメインを含む。カドヘリン１１核酸アンタゴニストはさらに、配列番号２（または例えば配列番号３）のアミノ酸配列を有するカドヘリン１１タンパク質をコードするが、遺伝コードの縮退のために配列番号１の配列とは異なってよい、核酸分子を包含する。
【００７１】
一定のカドヘリン１１核酸アンタゴニストは、従来技術により、例えば、カドヘリン１１をコードしストリンジェントな条件下で配列番号１の配列を有する核酸分子にハイブリダイズする核酸配列を同定することにより、同定することができる。本明細書において、用語「ストリンジェントな条件」とは、当分野で知られているパラメータを指す。より具体的には、本明細書で用いるストリンジェントな条件とは、６５℃のハイブリダイゼーション緩衝液中（３．５×ＳＳＣ、０．０２％ホルムアミド、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ウシ血清アルブミン、２．５ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ７）、０．５％ＳＤＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ）でのハイブリダイゼーションを指す。ＳＳＣは０．１５Ｍの塩化ナトリウム／０．１５Ｍのクエン酸ナトリウム、ｐＨ７であり；ＳＤＳはドデシル硫酸ナトリウムであり；ＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後、ＤＮＡが転移された膜は、室温にて２×ＳＳＣ、その後６５℃にて０．１×ＳＳＣ／０．１×ＳＤＳで洗浄する。
【００７２】
用いることのできる他の条件、試薬などがあり、同程度のストリンジェンシーが得られる。当業者はかかる条件に精通しており、したがってここには記載しない。しかし当業者には、本発明の核酸分子のホモログおよび対立遺伝子の明確な識別が可能となる様式で、条件を操作することができることが理解されるであろう。当業者はまた、単離および配列決定することができるさらなる核酸分子の発現のための、細胞のスクリーニングおよびライブラリのための方法論に精通している。例えばカドヘリン１１配列についてのスクリーニングでは、サザンブロット法を、放射性プローブと共に上記の条件を用いて行うことができる。ＤＮＡが最終的に転移された膜を洗浄した後、膜をＸ線フィルムに接して配置して、放射性シグナルを検出することができる。
【００７３】
一般に、カドヘリン１１ホモログおよび対立遺伝子は、典型的には、配列番号１と少なくとも７０％のヌクレオチド同一性を共有し；いくつかの例においては、少なくとも７５％のヌクレオチド同一性を共有し；さらに他の例においては、少なくとも８０％のヌクレオチド同一性を共有する。前述の核酸のワトソン・クリック補体もまた、本発明に包含される。好ましいカドヘリン１１ホモログは、配列番号１と少なくとも８５％の配列相同性を有する。さらに好ましくは、カドヘリン１１ホモログは、配列番号１と少なくとも９０％の、最も好ましくは少なくとも９５％の、配列相同性を有する。相同性は、インターネットを通して入手可能な、ＮＣＢＩ（Bethesda, Maryland）により開発された種々の公的に利用可能なソフトウェアツールを用いて、計算することができる。例示のツールとしては、ＮＣＢＩウェブサイトで入手可能なBLASTシステムが挙げられる。Pairwise and ClustalW alignments（BLOSUM30 matrix setting）、およびKyteDoolittle hydropathic analysisも、MacVector配列解析ソフトウェア（Oxford Molecular Group）を用いて得ることができる。
【００７４】
本発明はまた、代替的コドンを、例えばヒトカドヘリン１１ポリペプチドをコードする天然の核酸に存在するものの代わりに含んでいる、変性核酸も含む。当分野で知られているように、また例として、セリン残基は、コドンTCA、AGT、TCC、TCG、TCTおよびAGCによりコードされる。この６つのコドンの各々は、セリン残基をコードするという目的に対して等価である。したがって、当業者に明らかであるようにセリンをコードするヌクレオチドコドンの任意のものを用いて、in vitroまたはin vivoでタンパク質合成装置をセリン残基を組み込むように指向させることができる。同様に、他のアミノ酸残基をコードするヌクレオチド配列トリプレットとしては、限定されないが、CCA、CCC、CCGおよびCCT（プロリンコドン）；CGA、CGC、CGG、CGT、AGAおよびAGG（アルギニンコドン）；ACA、ACC、ACGおよびACT（スレオニンコドン）；AACおよびAAT（アスパラギンコドン）；およびATA、ATCおよびATT（イソロイシンコドン）が挙げられる。他のアミノ酸残基を、複数のヌクレオチド配列により同様にコードすることができる。
【００７５】
本明細書において核酸に関して、用語「単離された」とは、以下を意味する：（１）例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってin vitroで増幅される；（ｉｉ）クローニングにより組み換え的に産生される；（ｉｉｉ）切断およびゲル分離によるなどで、精製される；または（ｉｖ）例えば化学合成により合成される。単離された核酸は、当分野に知られた組換えＤＮＡ技術により容易に操作されるものである。したがって、５’または３’制限部位が知られているか、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマー配列が開示されているベクターに含まれるヌクレオチド配列は、単離されたと考えられるが、核酸配列であって、その天然の状態で天然の宿主に存在しているものは、単離されたとは考えられない。単離された核酸は、実質的に精製されていてもよいが、その必要はない。例えば、クローニングまたは発現ベクター中に単離された核酸は、それが存在する細胞において物質の小さなパーセンテージのみを含み得るという点で、純粋ではない。かかる核酸はしかし、本明細書において用いる場合、当業者に知られた標準技術により容易に操作されるので、単離されている。
【００７６】
一態様においてカドヘリン１１核酸アンタゴニストは、真核細胞などの細胞内でカドヘリン１１核酸アンタゴニストの発現を指向させる遺伝子発現配列に、動作可能に結合している。「遺伝子発現配列」は、任意の制限ヌクレオチド配列であり、例えばプロモーター配列またはプロモーター−エンハンサーの組み合わせであって、それが動作可能に結合しているカドヘリン１１核酸アンタゴニストの効率的な転写および翻訳を促進するものである。遺伝子発現配列は、例えば、哺乳動物またはウイルスプロモーター、例えば構成的または誘導的プロモーターであってよい。構成的哺乳動物プロモーターとしては、限定することなく、次の遺伝子に対するプロモーターが挙げられる：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、βアクチンプロモーターおよび他の構成的プロモーター。真核細胞において構成的に機能する例示的なウイルスプロモーターとしては、例えば、シミアンウイルス、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルスの長い末端反復配列（ＬＴＲ）、および他のレトロウイルス、および単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられる。他の構成的プロモーターは、当業者に知られている。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターは、誘導性プロモーターも含む。誘導性プロモーターは、誘導剤の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、ある金属イオンの存在下で転写および翻訳を促進するように誘導される。他の誘導性プロモーターは、当業者に知られている。
【００７７】
一般的に、遺伝子発現配列は、必要に応じて、転写及び翻訳の開始にそれぞれ関与する、５’非転写および５’非翻訳配列、例えばＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列などを含む。とくに、かかる５’非転写配列は、動作可能に結合されたカドヘリン１１核酸アンタゴニストの転写制御のためのプロモーター配列を含む、プロモーター領域を含む。遺伝子発現配列は任意に、必要に応じてエンハンサー配列または上流アクチベーター配列を含む。
【００７８】
カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、in vivoおよびin vitro法の両方で用いることができる。本発明の核酸分子は、in vitroで細胞に導入することができ、続いて細胞を線維症の部位へ移動させる。核酸分子を導入する細胞は、線維症の部位（例えば、線維芽細胞）から収集することができ、またはこれは、通常は炎症部位に存在しない細胞であってもよい。例えば肺などの、特定の組織（または細胞）内で核酸の発現を可能にする配列は、組織（または細胞）で選択的に転写活性なものであり、それによって組織（または細胞）での核酸の発現を引き起こす。当業者は、本明細書で述べたように、肺組織、肝臓組織、腎組織などでかかる核酸分子を発現することができる代替のプロモーターを、容易に識別することができる。あるいは、カドヘリン１１核酸アンタゴニストを形質導入した細胞を、カドヘリン１１タンパク質アンタゴニストを生成するためにin vitroで培養することができ、または、in vitroスクリーニングアッセイにおいて用いることができる。例えば、遺伝子発現配列は、本質的にはカドヘリン１１を発現しない細胞中でカドヘリン１１を発現するために用いることができる。
【００７９】
本発明の核酸分子配列および遺伝子発現配列は、これらが、遺伝子発現配列の影響または制御の下で、核酸アンタゴニスト（例えばカドヘリン１１コード配列）の転写および／または翻訳を配置するような様式で共有結合されている場合に、「動作可能に結合している」と言われる。核酸分子が機能的タンパク質に翻訳されることが望まれている場合、２つのＤＮＡ配列は、５’遺伝子発現配列でのプロモーターの誘導が核酸分子の転写をもたらし、および、２つのＤＮＡ配列の間の結合の性質が、（１）フレームシフト変異の導入をもたらさず、（２）核酸分子の転写を指向するプロモーター領域の能力を妨害せず、または（３）対応するＲＮＡ転写物の、ポリペプチドに翻訳される能力を妨害しない場合に、動作可能に結合していると言われる。したがって、遺伝子発現配列は、遺伝子発現配列がその核酸分子の転写に効力を及ぼすことができて、得られた転写物が所望のポリペプチドに翻訳され得る場合に、核酸分子に動作可能に結合されている。
【００８０】
カドヘリン１１ｓｉＲＮＡ：
本発明は、ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡなどのＲＮＡ干渉剤の、カドヘリン１１アンタゴニストとしての使用を意図する。ｓｉＲＮＡは、干渉を、したがって哺乳動物細胞を含む細胞内の特定遺伝子の転写後サイレンシングを引き起こすことができるＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡは、典型的には５〜５０塩基対の、より典型的には１０〜４０塩基対の、およびさらにより典型的には１５〜３０塩基対の長さの二本鎖領域を含む。 ｓｉＲＮＡは、２０〜５０、２５〜５０、または３０〜４０塩基対の長さであってもよい。これらのｓｉＲＮＡは、ＲＮａｓｅＩＩＩダイサーにより消化されて、より小さな１９〜２８塩基対（１９塩基対、２１塩基対、２３塩基対、２５塩基対、および２７塩基対の長さを含む）の範囲のｓｉＲＮＡを生成することができる。このサイズ範囲のｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる酵素複合体に組み込まれてこれにより作用することができ、標的ＲＮＡの分解および／またはそこからの任意のタンパク質翻訳の阻害という正味の結果を有することが知られている。同様の様式で、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）などの別の調節機能を有する二本鎖ＲＮＡも、用いることができる。ｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡを作製する方法の詳細については、Bass, Nature 411: 428-29 (2001)；Elbashir et al., Nature 411: 494-98 (2001)；Fire et al., Nature 391: 806-11 (1998)；WO 01/75164、および米国特許第6506559号、第7056704号、第7078196号、第7432250号を参照のこからカドヘリンに対するｓｉＲＮＡは、Dharmaconなどの供給源から市販されている。
【００８１】
ＲおよびＬ形態などのｓｉＲＮＡ形態は、一方または両方の末端に突出を有する場合がある。本明細書で議論されるように、Ｒ形態のｓｉＲＮＡは、そのアンチセンス鎖に３’突出を有する。これの他の末端は平滑であってよく、および／または他の末端において、ＤＮＡ残基を含有する突出を含む３’突出を有してもよい。代替的に、Ｌ形態ｓｉＲＮＡはそのセンス鎖に３’突出を有する。これの他の末端は平滑であってよく、および／または他の末端において、ＤＮＡ残基を含有する突出を含む３’突出を有してもよい。
【００８２】
ｓｉＲＮＡは、リボヌクレオチドから、またはリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの組み合わせから、いくつかの例においては１つまたは両方の修飾バージョンを含んで、構成されてよい。例としては、例えば５位において修飾されたウリジンおよび／またはシチジンなどの天然にない塩基を（天然の塩基の代わりに）含有するリボヌクレオチド、例えば５−（２−アミノ）プロピルウリジン、５−ブロモウリジン；または８位において修飾されたアデノシンおよび／またはグアノシン、例えば８−ブロモグアノシン；またはデアザヌクレオチド、例えば７−デアザ−アデノシン；またはＯ−およびＮ−アルキル化ヌクレオチド、例えばＮ６−メチルアデノシンは、ｓｉＲＮＡに組み込むことができる。別の例としては、糖修飾されたリボヌクレオチドであって、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮから選択される基によって置き換えられた２’ＯＨ基を有し、ここでＲは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、ハロはＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。さらに他の例として、骨格を修飾して、限定はしないがホスホロチオエートなどの修飾骨格結合を含むことができる。ｓｉＲＮＡは、塩基、糖、および／または骨格において修飾を含むことができ、これには多様なかかる修飾を含む。
【００８３】
したがって、ｓｉＲＮＡ分子は、１または２以上の単離された小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）二本鎖デュプレックスとして、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＮＲＡ）として、またはＤＮＡプラスミド中の転写カセットから転写されたｓｉＲＮＡまたはｄｓＲＮＡとしてのものを含む、１または２以上の形態として、および／またはこれに由来して、提供することができる。ｓｉＲＮＡ分子は、突出を有してよく（例えば、Elbashir et al., Genes Dev., 15:188 (2001)またはNykanen et al., Cell, 107:309 (2001)に記載されているような、３’または５’突出）、または、突出を欠いていてもよい（すなわち、平滑末端を有する）。当業者は、かかる出発供給源をいかにして修飾して、本明細書に記載のようなＲおよびＬ形態に到達できるかを認識し、理解する。
【００８４】
そのデュプレックス（または二本鎖）のヌクレオチド配列の全てまたは一部が、カドヘリン１１などの標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的である場合、ｓｉＲＮＡはin vivoまたはin vitroで遺伝子に標的化される。ｓｉＲＮＡは、タンパク質またはその他の遺伝子産物をコードする核酸の、既知の（または推定された）ヌクレオチド配列に基づいて合成され得る。配列は、標的における翻訳または非翻訳配列に相補的であってよい。ｓｉＲＮＡと標的の間の相補性の程度は、標的において標的特異的サイレンシングを媒介するのに十分な同一性が存在すれば、１００％または１００％未満であってよい。その標的に対して１００％未満相補的な、有効なｓｉＲＮＡは、当分野でよく知られている。
【００８５】
サイレンシングまたは干渉のレベルは、ｍＲＮＡ種および／またはタンパク質種の定量化を含む、任意数の方法により測定することができる。いくつかの例において、タンパク質が細胞内であるかまたはその他で観察および／またはアッセイが困難である場合にはとくに、ｍＲＮＡ定量化が好ましい。ｍＲＮＡレベルは、例えばＲＴ−ＰＣＲまたはＰＡＧＥを用いて測定してよい。タンパク質レベルは、免疫組織化学的染色を用いて測定してよい。ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルは、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％、低減してよい。用途に依存して、外因的に適用されるｓｉＲＮＡが不在の場合のレベルと比べて、部分的低減（すなわち１００％未満）でも十分な場合がある。いくつかの態様において、レベルは、外因的に適用されたｓｉＲＮＡに暴露されていない対照と比べて、８０％またはそれ以上、低減される。
【００８６】
カドヘリン１１リボザイム：
カドヘリン１１リボザイムは、カドヘリン１１ＲＮＡの特異的切断を触媒することができる、酵素ＲＮＡ分子である。カドヘリン１１リボザイムは、配列特異的様式でカドヘリン１１ＲＮＡに結合し（すなわち配列特異的ハイブリダイゼーションを介して）、これに続いてカドヘリン１１ＲＮＡのヌクレオチド鎖切断が生じる。リボザイムの例としは、改変されたヘアピンまたはハンマーヘッドモチーフリボザイムが挙げられる。カドヘリン１１などの標的に相補的なリボザイム配列は、リボザイム切断部位（例えばGUA、GUU、およびGUC）についての標的をスキャンすることにより同定することができ、次いで、切断部位にわたる約１５〜２０のリボヌクレオチドを有する配列が生成される。
【００８７】
カドヘリン１１アンチセンス：
カドヘリン１１核酸アンタゴニストは、アンチセンス分子（またはオリゴヌクレオチド）であってよい。カドヘリン１１ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸分子に選択的に結合して、カドヘリン１１活性または機能を低下させるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本発明により包含される。本明細書において、用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「アンチセンス」とは、オリゴリボヌクレオチド、オリゴデオキシリボヌクレオチド、修飾オリゴリボヌクレオチド、または修飾オリゴデオキシリボヌクレオチドであるオリゴヌクレオチドであって、生理学的条件下で特定遺伝子を含むＤＮＡまたはその遺伝子のｍＲＮＡ転写物にハイブリダイズして、これにより、その遺伝子の転写および／またはそのｍＲＮＡの翻訳を阻害する、前記オリゴヌクレオチドを指す。アンチセンス分子は、標的遺伝子または転写物とのハイブリダイゼ―ションにより、標的遺伝子の転写または翻訳を妨害するよう、デザインされる。当業者は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの正確な長さおよび標的に対する相補性の程度が、標的の配列およびその配列を含有する特定の塩基を含む、選択された特定の標的に依存することを認識する。アンチセンスオリゴヌクレオチドが、生理学的条件下で標的と選択的に結合するよう、構成および配置されることが好ましく、すなわち、生理学的条件下で標的細胞中の任意の他の配列よりも、実質的により多くの標的配列とハイブリダイズすることが好ましい。配列番号１に、または対立遺伝子もしくは相同な遺伝子および／もしくはｃＤＮＡの配列に基づいて、当業者は容易に、本発明に従って用いるための多くの適切なアンチセンス分子を選択および合成することができる。阻害のために十分に選択的で強力であるために、かかるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０、およびより好ましくは少なくとも１５の、標的に相補的な連続塩基を含むべきであるが、しかし一定のケースにおいては、７塩基長という短い修飾オリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドとして成功して用いられている（Wagner et al., Nat. Med. 1(11):1116-1118, 1995）。最も好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０〜３０塩基の相補配列を含む。
【００８８】
オリゴヌクレオチドは、遺伝子またはｍＲＮＡ転写物の任意の領域にアンチセンスであるように選ぶことができるが、好ましい態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、翻訳開始、転写開始またはプロモーター部位などのＮ末端または５’上流部位に対応する。さらに、３’非翻訳領域を、アンチセンスオリゴヌクレオチドにより標的化することができる。ｍＲＮＡスプライシング部位への標的化は当分野でも用いられているが、代替的なｍＲＮＡスプライシングが生じる場合にはあまり好ましくない。さらに、アンチセンスは、好ましくはｍＲＮＡ二次構造が推定されず（例えば、Sainio et al., Cell Mol. Neurobiol. 14(5):439-457, 1994を参照）、かつタンパク質が結合することが推定されない部位を標的とする。最後に、配列番号１はｃＤＮＡ配列を開示するが、当業者は容易に、この配列に対応するゲノムＤＮＡを誘導することができる。したがって、本発明はまた、配列番号１に対応するゲノムＤＮＡに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドも提供する。同様に、カドヘリン１１の対立遺伝子またはホモログに対するアンチセンス、または代替的に、カドヘリン１１カウンターレセプターｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡが、過度の実験なしに可能となる。
【００８９】
１セットの態様において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、「天然の」デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはこれらの任意の組み合わせから構成されてよい。すなわち、１つの天然のヌクレオチドの５’末端と、別の天然のヌクレオチドの３’末端を、天然の系におけるように、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を介して共有結合で結合することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、手動により、または自動合成器により実施することのできる、当分野で認識された方法によって調製してよい。これらはまた、ベクターにより組み換え的に産生してもよい。
【００９０】
好ましい態様においてはしかし、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、「修飾」オリゴヌクレオチドも含んでよい。すなわち、オリゴヌクレオチドは、これらをその標的にハイブリダイズすることを妨害しないが、その安定性または標的化を増強し、またはその治療的有効性をその他で増強する、多数の方法で修飾してもよい。
【００９１】
本明細書において用語「修飾オリゴヌクレオチド」は、（１）そのヌクレオチドの少なくとも２つが合成ヌクレオシド間結合（すなわち、１つのヌクレオチドの５’末端と別のヌクレオチドの３’末端の間のホスホジエステル結合以外の結合）を介して共有結合されており、および／または（２）通常は核酸と結びつかない化学基が、オリゴヌクレオチドに共有結合で結合している、オリゴヌクレオチドを記述する。好ましい合成ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、リン酸エステル、アルキルホスホノチオエート、ホスホルアミデート、カルバメート、カーボネート、リン酸トリエステル、アセトアミデート、カルボキシメチルエステルおよびペプチドである。
【００９２】
用語「修飾オリゴヌクレオチド」はまた、共有結合で修飾された塩基および／または糖を有するオリゴヌクレオチドも包含する。例えば、修飾オリゴヌクレオチドは、３’位のヒドロキシル基以外の、および、５’位のリン酸基以外の低分子量の有機基に、共有結合で結合している骨格糖を有するオリゴヌクレオチドを含む。したがって、修飾オリゴヌクレオチドは、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含むことができる。また、修飾オリゴヌクレオチドは、例えばリボースの代わりのアラビノースなどの糖類を含んでもよい。
【００９３】
ポリペプチドに関して本明細書で用いる場合、用語「単離された」とは、本発明の目的のいずれかのために操作または使用できるように、その天然の環境から十分に純粋な形態で分離されていることを意味する。よって、単離されたとは、（ｉ）抗体を産生および／または単離するために、（ｉｉ）アッセイにおける試薬として、または（ｉｉｉ）配列決定するため、などに使用できるほど十分に純粋であることを意味する。
【００９４】
核酸に関して本明細書で用いる場合、用語「単離された」とは：（ｉ）例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってin vitroで増幅された；（ｉｉ）クローニングによって組換え的に産生された；（ｉｉｉ）開裂およびゲル分離により精製された；または（ｉｖ）例えば、化学合成によって合成されたものである。単離された核酸とは、当該技術分野において周知の組換えＤＮＡ技術によって容易に操作されるものである。よって、５’および３’制限部位が知られている、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマー配列が開示されているベクターに含有されるヌクレオチド配列は、単離されたとみなされるが、その天然ホストにおいて天然状態で存在する核酸配列はそうではない。単離された核酸は、実質的に精製されていてもよいが、されている必要はない。例えば、クローニングまたは発現ベクター中で単離された核酸は、それが属する細胞内の僅かな割合の物質しか含み得ないという点で、純粋ではない。しかしながら、該用語が本明細書で用いられる場合、それは当業者にとって既知の標準的な技術によって容易く操作されることから、かかる核酸は単離されている。
【００９５】
一般に、本発明のアンタゴニストは２つのクラス、生物学的ベクターおよび化学的／物理的ベクターに分類される。生物学的ベクターは、標的細胞への／による、核酸の送達／取り込みのために有用である。生物学的ベクターとしては、限定はしないが以下が挙げられる：プラスミド、ファージミド、ウイルス、本発明の核酸配列の挿入または組み込みによって操作された、ウイルスまたは細菌の供給源に由来する他のビヒクル、および、本発明の核酸配列に結合させることができる追加の核酸断片（例えば、エンハンサー、プロモーター）。ウイルスベクターは、生物学的ベクターの好ましいタイプであり、限定することなく、以下のウイルスからの核酸配列が含まれる：アデノウイルス；アデノ随伴ウイルス；モロニーマウス白血病ウイルスなどのレトロウイルス；ハーベイマウス肉腫ウイルス；マウス乳腺腫瘍ウイルス；ラウス肉腫ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン・バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；およびレトロウイルスなどのＲＮＡウイルスである。名称を挙げていないが当分野で知られている他のベクターも、容易に用いることができる。
【００９６】
生物学的ベクターに加えて、化学的／物理的ベクターは、核酸またはポリペプチドの、標的細胞への／からの、送達／取り込みに有用である。本明細書において、「化学的／物理的ベクター」とは、細菌またはウイルス源に由来する以外の天然または合成分子であって、カドヘリン１１アンタゴニストを細胞に送達することができるものを指す。
【００９７】
本発明の好ましい化学的／物理的ベクターは、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系を含む。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、in vivoまたはin vitroの送達ベクターとして有用な人工の膜管（membrane vessel）である。０．２〜４．０μＭのサイズ範囲の大きな単層管（ＬＵＶ）は、大きな高分子をカプセル化することができる。ＲＮＡ、ＤＮＡおよび無傷のビリオンを水性の内部にカプセル化して、生物学的に活性な形態で細胞に送達することができる（Fraley, et al., Trends Biochem. Sci., v. 6, p. 77 (1981)）。リポソームが効率的な遺伝子導入ベクターであるためには、１または２以上の次の特性が存在しなければならない：（１）生物学的活性を保持しつつ、目的遺伝子を高効率でカプセル化；（２）非標的細胞と比較して、標的細胞への優先的かつ実質的な結合；（３）ベシクルの水性内容物の、標的細胞の細胞質への高効率での送達；および（４）遺伝情報の、正確かつ効果的な発現。
【００９８】
リポソームは、リポソームを特定のリガンドに、例えば、特定の組織または細胞型に特異的なモノクローナル抗体、糖、糖脂質、またはタンパク質などに結合することによって、特定の組織に標的化することができる。さらにベクターは核標的ペプチドに結合することができ、これによりカドヘリン１１調節核酸分子を、宿主細胞の核に指向させる。
【００９９】
リポソームは、Gibco BRLから、例えばLIPOFECTIN（商標）およびLIPOFECTACE（商標）として市販されており、Ｎ−［１−（２，３ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）などのカチオン性脂質から形成されている。リポソームを作製するための方法は当分野でよく知られており、多くの刊行物に記載されている。リポソームはまた、Gregoriadis, G. in Trends in Biotechnology, V. 3, p. 235-241 (1985)に概説されている。
【０１００】
本発明は、カドヘリン１１アンタゴニストを対象へ投与すること、ならびに対象からの細胞、とくに炎症性障害と関連する線維芽細胞と、カドヘリン１１アンタゴニストにex vivoでex vivo接触させ、次いで、対象へアンタゴニストを再導入することを意図する。
【０１０１】
本発明はさらに、対象においてカドヘリン１１の機能を調節するための医薬組成物（すなわち、医薬製剤）を提供する。組成物は、薬学的に許容し得る担体およびカドヘリン１１アンタゴニストを含む。
【０１０２】
前述のように、医薬製剤は有効な量で投与される。治療への応用のために、これは一般的に、医学的に望ましい結果を達成するのに十分な量である。一般に、治療上有効な量は、処置する特定の病態の発生を遅延させる、その進行を阻害する、またはこれ全体を停止させるのに十分な量である。例として、有効な量は、一般に、本明細書に記載される疾患の症状（例えば、痛み、炎症など）を軽減するのに役立つ量である。有効なは、投与の様式、処置される特定の病態および望ましい結果に依存する。また、病態のステージ、病態の重症度、処置される対象の年齢および身体状況、もしある場合は併用療法の性質、処置の持続時間、特定の投与経路および医師の知識および経験内の類似の因子にも依存する。予防的な用途に対しては、予防する特定の病態の発生を遅延させる、その進行を阻害する、またはこれ全体を停止させるのに十分な量であり、症状の発現を予防するのに必要な量によって測定することができる。
【０１０３】
一般に、本発明の活性化合物の用量は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、および最も好ましくは約０．２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇで、１または２日以上にわたり、毎日１または２以上の用量の投与である。１〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量、さらに好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が、好適であると予想される。好ましい量は、当業者により、剤の最適投与量レベルを決定するための標準的技法に従って決定することができる。健全な医学的判断に従った最大の安全用量である、カドヘリン１１アンタゴニストの最大用量を用いることが、一般に好ましい。
【０１０４】
本発明のカドヘリン１１アンタゴニストは、炎症性障害の処置のための併用療法と組み合わせて、かかる処置を必要とする対象に対して投与することができる。併用療法は、侵襲的であってもよく、または薬物療法を伴ってもよい。薬物療法は、例えば、本発明のカドヘリン１１アンタゴニストとの組み合わせで、生理学的目標（例えば、炎症を低減させること）を達成するのに有効な量で投与される。したがって、薬物療法が単独で投与された場合には炎症性障害の生理学的事象を予防または低減できないが、カドヘリン１１アンタゴニストと組み合わせて投与した場合には該事象を低減できるような量において、投与しえることが考えられる。
【０１０５】
カドヘリン１１アンタゴニストは、単独で、または上記の薬物療法と組み合わせて、医薬組成物の一部として投与してよい。かかる医薬組成物は、カドヘリン１１アンタゴニストを、当分野に知られている任意の標準の生理学的および／または薬学的に許容し得る担体と組み合わせて含むことができる。組成物は無菌であるべきであり、患者への投与に好適な重量または容積の単位において、治療上有効なのカドヘリン１１アンタゴニストを含むべきである。
【０１０６】
本明細書において、用語「薬学的に許容し得る担体」は、ヒトまたは他の動物への投与に好適な、１または２以上の適合的な固体または液体の増量剤、希釈剤または封入物質を意味する。用語「薬学的に許容し得る」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害しない、非毒性材料を意味する。薬学的に許容し得るとはさらに、細胞、細胞培養物、組織または生物などの生体系と適合的な、非毒性材料を意味する。用語「担体」は、有機または無機の成分であって、天然または合成の、これと活性成分が組み合わさって用途を促進するものを指す。担体の特徴は、投与経路に依存する。医薬組成物の成分はまた、望ましい医薬的有効性を実質的に損なう相互作用がないような様式で、本発明の剤と、および互いに混ざり合うこともできる。薬学的に許容し得る担体は、in vivoでの投与のために、無菌でなければならない。生理学的および薬学的に許容し得る担体は、希釈剤、増量剤、塩、緩衝液、安定剤、溶解剤、および当分野で知られているその他の材料を含む。
【０１０７】
非経口投与に適した組成物は、好ましくはレシピエントの血液と等張性である、カドヘリン１１アンタゴニストの無菌水性調製物を含む。この水性調製物は、公知の方法に従って、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて製剤化することができる。無菌の注射用製剤も、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば、１，３−ブタンジオール中の、無菌の注射用溶液または懸濁液であってよい。使用可能な許容し得るビヒクルおよび溶媒としては、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油は、溶媒または懸濁媒体として便利に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性の固定油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を、注射剤の調製に用いてよい。経口、皮下、静脈内、筋肉内等の投与に適した担体製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PAに見出すことができる。
【０１０８】
種々の投与経路が利用可能である。選択する特定の様式は、当然ながら、選択する特定の薬物、処置する病態の重症度、および治療的有効性に必要な投与量に依存する。本発明の方法は、一般的には、医学的に許容される投与の任意の様式を用いて実施することができ、すなわち、臨床的に許容し得ない副作用を引き起こすことなく、活性化合物の有効レベルを生成する任意の様式を意味する。かかる投与様式は、経口、直腸、局所、経鼻、皮内（interdermal）、または非経口経路を含む。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、または注入を含む。静脈内または筋肉内経路は、長期的な治療および予防にとってはとくに好適ではない。しかし、これらは、緊急状態において好ましいこともある。患者および投薬計画にとっての便宜のために、経口投与は予防的な処置に好適だろう。投与経路は、いくつかの場合において処置される症状に依存することもあることが理解されるだろう。例えば、症状が局所的(例えば、アトピー性皮膚炎または湿疹)である場合には、アンタゴニストを局所的、皮内または皮下的に適用し得る。局所投与は、興味のあるアンタゴニストを含むパッド、ガーゼ、包帯、圧迫帯、クリーム、ローション、スプレー、軟化剤などの使用を通じて達成し得る。
【０１０９】
医薬組成物は、単位剤形で便利に提供することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。すべての方法は、カドヘリン１１アンタゴニストを、１または２以上の副成分を構成する担体と関連させるステップを含む。一般に、組成物は、カドヘリン１１アンタゴニストを、液体担体、微粉化した固体担体、または両方と、均一におよび密接に関連させることにより、次いで必要に応じて産物を成形することにより、調製される。経口投与に適した組成物は、個別の単位として、例えば、それぞれが所定量のカドヘリン１１アンタゴニストを含有するカプセル、錠剤、トローチ剤として、提示することができる。その他の組成物としては、シロップ剤、エリキシル剤または乳剤などの、水性液体または非水性液体中の懸濁物を含む。
【０１１０】
特定の一態様において、本発明のカドヘリン１１アンタゴニストの送達のための好適なビヒクルは、レシピエントへまたはレシピエントにおける罹患組織または臓器の近傍における移植に適する生体適合性微粒子またはインプラントである。本方法にしたがって有用な生体内分解性インプラントの例は、ＰＣＴ国際出願PCT/US/03307（公開番号WO 95/24929、表題「Polymeric Gene Delivery System」、１９９４年３月１５日出願の米国特許出願第213668号の優先権を主張）に記載されている。PCT/US/0307には、適当なプロモーターの制御下で外来遺伝子を含有するための、生体適合性の、好ましくは生分解性のポリマーマトリックスが記載されている。ポリマーマトリックスは、対象において外来遺伝子の持続的放出を実現するために使用される。本発明によれば、本明細書に記載のカドヘリン１１アンタゴニストは、PCT/US/03307に開示された生体適合性、好ましくは生分解性のポリマーマトリックス内に封入または分散される。ポリマーマトリックスは、好ましくは、マイクロスフェア（ここでは例えば、カドヘリン１１アンタゴニストは固体ポリマーマトリックス中に分散されている）またはマイクロカプセル（ここでは例えば、カドヘリン１１アンタゴニストはポリマーシェルのコアに格納されている）などの、微粒子の形態である。カドヘリン１１アンタゴニストを含有するためのポリマーマトリックスの他の形態は、フィルム、コーティング、ゲル、インプラント、およびステントを含む。ポリマーマトリックスデバイスのサイズおよび組成は、マトリックスデバイスが移植される組織において、良好な放出動態が得られるように選択される。ポリマーマトリックスデバイスのサイズはさらに、用いられる送達方法、典型的には組織への注射である、にしたがって選択され、これには例えば、鼻および／または肺の領域へのエアロゾルによる懸濁液の投与を含む。ポリマーマトリックス組成物は、良好な分解速度を有し、かつ生体接着性のある材料で形成されるように、さらにデバイスが身体の特定の位置へ投与されるときの伝達効率を増加させるように、選択することができる。マトリックス組成物はまた、分解するためではなく、むしろ長期間にわたり拡散によって放出されるように、選択することができる。
【０１１１】
非生分解性及び生分解性両方のポリマーマトリックスを、カドヘリン１１アンタゴニストを送達するために用いることができる。生分解性マトリックスが好ましい。かかるポリマーは、天然または合成ポリマーであってよい。合成ポリマーが好ましい。ポリマーは、放出が所望される時間に基づいて、一般に数時間から１年間以上のオーダーで選択される。典型的には、数時間から３〜１２ヶ月の間の期間にわたる放出が最も望ましい。ポリマーは任意にはヒドロゲルの形態であって、これは水中でその重量の約９０％までを吸収することができ、さらに、任意に多価イオンまたは他のポリマーと架橋されるものである。
【０１１２】
一般に、本発明のカドヘリン１１アンタゴニストは、生体内分解性インプラントを用いて、ポリマーマトリックスの拡散により、またはより好ましくは分解により、送達される。生分解性送達システムを形成するために用いることができる例示の合成ポリマーとしては、以下が挙げられる：ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびその共重合体、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリル酸およびメタクリル酸エステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシルエチルセルロース、セルローストリアセテート、セルロース硫酸ナトリウム塩、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、およびポリビニルピロリドン。
【０１１３】
生分解性ポリマーの例としては、合成ポリマー、例えば、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）（butic acid）、ポリ（吉草酸）、およびポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）など；および天然ポリマー、例えば、アルギン酸および、デキストランを含む他の多糖類、セルロース、コラーゲン、これらの化学誘導体（例えばアルキル、アルキレンなどの、化学基の置換、付加、ヒドロキシル化、酸化、および当業者が通常行うその他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインおよび他のプロラミンおよび疎水性タンパク質、これらのコポリマーおよび混合物が挙げられる。一般に、これらの材料は、in vivoでの酵素加水分解または水への曝露のいずれかにより、表面又はバルク浸食によって分解する。
【０１１４】
とくに興味深い生体接着性ポリマーとしては、以下が挙げられる：生体内分解性ヒドロゲル（H.S. Sawhney, C.P. Pathak and J.A. Hubell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587に記載されており、この教示は本明細書に組み込まれる）、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）。
【０１１５】
非生分解性ポリマーの例としては、エチレンビニルアセテート、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、これらのコポリマーおよび混合物が挙げられる。
【０１１６】
他の送達システムとしては、時間放出、遅延放出または持続放出型の送達システムを含むことができる。かかるシステムは、上記のカドヘリン１１アンタゴニストの反復投与を避けることができ、対象および医師の利便性が向上される。多くのタイプの放出送達システムが利用可能であり、当業者に知られている。これらは、上記のポリマーシステムならびに、例えば、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート（copolyoxalates）、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ無水物などのポリマーベースシステムを含む。薬物を含有する前述のポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許第5075109号に記載されている。送達システムは非ポリマーシステムも含み、以下である：例えばコレステロール、コレステロールエステルなどのステロールを含む脂質、および、例えばモノ、ジ、およびトリグリセリドなどの脂肪酸または中性脂肪；ヒドロゲル放出システム；シラスティックシステム；ペプチドベースのシステム；ワックスコーティング：従来の結合剤および賦形剤を用いた圧縮錠剤；部分的融合インプラントなど。具体例としては、限定はされないが以下である：（ａ）カドヘリン１１アンタゴニストがマトリックス内の形態で含まれている浸食システム（erosional system）であり、例えば米国特許第4,452,775号、第4,675,189号および第5,736,152号に記載されているものなど、および（ｂ）活性成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散システムであり、例えば米国特許第3,854,480号、第5,133,974号および第5,407,686号に記載されているものなど。さらに、ポンプベースのハードウェア送達システムも用いることができ、これらの一部は、移植用に適合されている。
【０１１７】
長期持続放出インプラントの使用は、慢性疾患の治療のためにとくに適する可能性がある。本明細書において長期的放出とは、インプラントが、活性成分の治療レベルを少なくとも３０日間、好ましくは６０日間、送達するように構成および配置されていることを意味する。長期持続放出インプラントは当業者に周知であり、上記の放出システムのいくつかを含む。
【０１１８】
カドヘリン１１アンタゴニストはまた、例えば毒素(例えば、リシン)または検出可能な剤（例えば、放射標識、蛍光標識、酵素標識）を、カドヘリン１１カウンターレセプターまたはカドヘリン１１を発現する細胞に対して標的化するためにも用いることができる。in vivoおよびin vitroの適用のための、かかる毒素および／または剤をタンパク質および／または抗体にカップリングするための方法は、例えば、Killen およびLindstrom (1984)の、"Specific killing of lymphocytes that cause experimental Autoimmune Myestenia Gravis by toxin-acetylcholine receptor conjugates", J. Immun. 133:1335; Jansen, F.K., et al. (1982), "Immunotoxins: Hybrid molecules combining high specificity and potent cytotoxicity", Immunolog. Rev. 62:185-216に記載されており、これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第3,652,761号;4,478,946号および4,554,088号も参照すること、これら特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。 
【０１１９】
本発明は、以下の例の参照により、より完全に理解されるだろう。しかしながら、これらの例は、本発明の態様を例示することを意図するにすぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるものではない。また、参照図も例示にすぎず、特許請求の範囲に記載された発明の実施可能性に不可欠なものではないこともまた理解される。
【０１２０】
例
例１：抗カドヘリン１１モノクローナル抗体によるアトピー性皮膚炎の処置
カドヘリン１１が皮膚炎症を調節するかを決定するために、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）マウスモデルを用いた。このモデルにおいて、皮膚炎症は、慢性的に再発する炎症性皮膚障害であるヒトＡＤまたは湿疹の多くの特徴を示した。ＡＤの特徴は、乾燥した痒い皮膚である。掻きむしると、皮膚損傷を引き起こし、疾患の症状を悪化させる。したがって、モデルでは、マウスの背中を最初に剃り、次にテガダームテープを数回同じ領域に適用して除去することで、皮膚刺激を模倣した。マウスは、次いで、生理食塩水（ＳＡＬ）またはオバルブミン（ＯＶＡ）（１００μｇ／１００μｌの生理食塩水）浸漬ガーゼを、０、３、２２、２５、４３および４６日目にテープストリップした領域に適用して皮膚上に(epicutaneously)（ＥＣ）感作させた。ガーゼを、図４に示すように背中の皮膚に１週間貼る。この手順を２週間の間を空けて計３回繰り返すことで、慢性皮膚炎症を発症する（図４）。
【０１２１】
この皮膚炎症モデルにおけるカドヘリン１１を遮断する効果を決定するために、我々は、図４に示すように、第三サイクル中に、マウスを抗カドヘリン１１（ｃａｄ-１１）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）で処置した。ｍＡｂを、４３、４５、および４７日目にｉ．ｐ．注射した。５０日目にマウスを殺処理（sacrifice）して調べた。比較のために、最後のテープ接着および除去の後、皮膚組織を収集して、未処置および抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスの間でのＯＶＡに対する免疫応答を比較した。
【０１２２】
抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置は、対照（生理食塩水，ＳＡＬ）またはＯＶＡ感作された皮膚からの切片のＨ＆Ｅ染色において、表皮および真皮の厚さを有意に低減させた（図５Ａおよび５Ｂ）。病変に動員されたＣＤ４＋Ｔ細胞の総数は抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスにおいて有意に変化しなかったものの、好酸球動員は、未処置マウスに比べて抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスにおいて有意に低下した（図５Ｃ）。好酸球は、別のキーエフェクター細胞型である。これと一致して、エオタキシン（好酸球のためのキーケモカイン）のレベルは、抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスからのＯＶＡ感作皮膚において低減した。
【０１２３】
このＡＤマウスモデルの病状は、普通はＴｈ２および／またはＴｈ１７免疫応答によって支配されているので、我々は、抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置が患部皮膚における免疫応答を変更するかを決定した。我々は、対照または抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスからの生理食塩水（ＳＡＬ）またはオバルブミン（ＯＶＡ）感作皮膚において、定量的リアルタイムＰＣＲによって、Ｔｈ２型サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−１３）、Ｔｈ１７型サイトカイン（ＩＬ−１７）、ならびにＴｈ１型サイトカイン（ＩＦＮ−γ）を検出した。著しいことに、対照マウスに比べて抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置マウスからの患部皮膚において、ＩＬ-４およびＩＬ-１７の両方の有意により少ない産生がみられた（図６Ａ）。ＩＬ-１３の産生はまた、ＩＬ-４またはＩＬ-１７（図６Ａ）と類似のパターンを示した。対照的に、ＩＦＮ-γ（Ｔｈ１型サイトカイン）レベルは、抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置によって変化しなかった（図６Ａ）。よって、抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置は、感作皮膚において、抗原に対するＴｈ２および／またはＴｈ１７免疫応答を遮断した。
【０１２４】
これらのin vivoデータは、抗カドヘリン１１ｍＡｂ処置が局所のアレルギー性皮膚炎症を低減させることを示唆する。
【０１２５】
例２：カドヘリン１１欠損マウスは、実験的に誘導した炎症性腸疾患モデルにおいて、大腸炎から保護された。
炎症性腸疾患におけるカドヘリン１１の役割を、デキストラン硫酸ナトリウム誘導炎症性腸疾患マウスモデルを用いて分析した。野生型およびカドヘリン１１欠損（ｃａｄ-１１-／-）マウスは、０から６日目の間に２％のデキストラン硫酸ナトリウムをこれらの飲用水において不断に摂取した（各群＝６マウス）。大腸炎の発症に続き、開始時体重からの変化として表される、経時的な重度の重量減少があった（図７Ａ）。カドヘリン１１-／-マウスは、野生型マウスに比べて重量を減少せず、これは、ｃａｄ-１１-／-マウスにおいて大腸炎がそれほど重度ではないことを示唆する。さらに、９日目に、マウスを殺処理して、結腸の長さを測定した（図７Ｂ）。より短い結腸の長さは、より重度の大腸炎と相関する。ｃａｄ-１１-／-マウスにおけるより長い長さは、より少ない結腸疾患を反映する。これらの結果はカドヘリン１１欠損マウスが、このモデル系において、野生型マウスに比べて重度の大腸炎を発症しないことを示す。カドヘリン１１阻害、例えば抗カドヘリン１１抗体を介するものは、大腸炎などの炎症性腸疾患の発症（または維持）を妨害することもまた期待される。
【０１２６】
均等物
本明細書に本発明のいくつかの態様を記載し説明したが、当業者は容易に、本明細書に記載の機能を実行し、および／または結果および／または１もしくは２以上の利点を得るための、種々のその他の方法および／または構造を想起し、かかる変更および／または改変の各々は、本明細書に記載された発明の態様の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者は容易に、本明細書に記載されたすべてのパラメータ、寸法、材料及び構成は例示を意図し、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構成は、本発明の教示が使用されている特定の１または２以上の用途に依存することを理解する。当業者は、慣用の実験以上のものを用いることなく、本明細書に記載された特定の発明の態様の多くの均等物を認識し、または確認することができる。したがって、前述の態様は例としてのみ提示されており、添付のクレームおよびその均等物の範囲内で、本発明の態様は、具体的に記載されクレームされたもの以外でも実施できることが理解されるべきである。本開示の発明の態様は、本明細書に記載された個々の特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法に向けられる。さらに、かかる特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法が互いに矛盾しない場合には、かかる特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法の２または３以上の任意の組み合わせも、本開示の発明の範囲内に含められる。
【０１２７】
本明細書で定義されて使用されるすべての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文書中の定義、および／または定義された用語の通常の意味を支配すると理解されるべきである。
本明細書に開示された全ての参考文献、特許および特許出願は、それぞれが引用される主題に関して参照により援用され、いくつかの場合には文書全体を包含することができる。
明細書および特許請求の範囲において、本明細書中で使用される不定冠詞「a」および「an」は、明確に逆の指示がない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解すべきである。
【０１２８】
本明細書および特許請求の範囲で用いる用語「および／または」は、こうして連接された要素、すなわち、ある場合には接続的に存在し、他の場合には離接的に存在する要素の、「いずれかまたは両方」を意味すると理解されるべきである。「および／または」と共にリストされた複数の要素は、同様のやり方で、すなわち、１または２以上のかかる連接された要素として、解釈すべきである。「および／または」の節により具体的に同定された要素とは別のものも、具体的に同定されているものと関連するか関連しないかに関わらず、任意に存在してよい。したがって、非限定的例として、「含む」などのオープンエンドの用語と共に用いる場合に、「Ａおよび／またはＢ」の言及は、一態様においてＡのみであり（任意にＢ以外の要素を含む）；別の態様においてＢのみであり（任意にＡ以外の要素を含む）；さらに別の態様においては、ＡとＢの両方（任意に別の要素を含む）である；などである。
【０１２９】
明細書及び特許請求の範囲で用いる場合、「または」は、上記定義の「および／または」と同一の意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト内の項目を分離する場合、「または」または「および／または」は、包含的であると解釈すべきであり、すなわち、多数またはリストされた要素の、少なくとも１つを含むが、１つより多くもまた含み、および任意に、追加のリストされていない項目も含むと解釈される。明確に逆が指示されている用語のみが、例えば「ただ１つのみ」または「正確に１つ」、または特許請求の範囲で用いる場合は「〜からなる」が、多数またはリストされた要素のうち正確に１つの要素のみの包含を示す。本明細書において、一般に用語「または」は、その前に排他性の用語、例えば「いずれか」、「の１つ」、「１つのみ」、または「正確に１つ」などが先行する場合には、排他的な選択肢（すなわち、「両方ではなくどちらか一方」）としてのみ解釈されるべきである。特許請求の範囲で用いる場合の「本質的に〜からなる」は、特許法の分野で用いられる通常の意味を有するものとする。
【０１３０】
本明細書及び特許請求の範囲で用いる場合、フレーズ「少なくとも一つ」は、１または２以上の要素のリストを参照する場合、要素のリスト中の任意の１または２以上の要素から選択された少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであり、必ずしも、要素リスト内に具体的にリストされた全ての要素の各々を少なくとも１つ含む必要はなく、要素リスト中の要素の任意の組み合わせを除外しない。この定義はまた、フレーズ「少なくとも一つ」が参照する要素リスト中に具体的に同定されている要素以外に、具体的に同定された要素と関連するか関連しないかに関わらず、要素が任意に存在することを許容する。しがたって、非限定的例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または等価に「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または等価に「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ」）とは、一態様において、少なくとも１つの、および任意に２つ以上のＡで、Ｂはなし（および任意にＢ以外の要素を含む）であり；別の態様において、少なくとも１つの、および任意に２つ以上のＢで、Ａはなし（および任意にＡ以外の要素を含む）であり；さらに別の態様においては、少なくとも１つの、および任意に２つ以上のＡと、少なくとも１つの、および任意に２つ以上のＢの両方（および任意に別の要素を含む）である；などである。
【０１３１】
明確に反対の指示がない限り、１より多くのステップまたは行為を含む、本明細書にクレームされた任意の方法において、該方法のステップまたは行為の順序は必ずしも、提唱された方法のステップまたは行為の順序に限定されないこともまた、理解されるべきである。
特許請求の範囲において、また上の明細書において、「含む（comprising）」、「含む（including）」、「所有する」、「有する」、「含有する」、「関与する」、「保持する」、「構成される」などのすべての移行句は、オープンエンドであること、すなわち、これらを含むがそれに限定されないことが、理解されるべきである。「からなる」および「本質的に〜からなる」の移行句のみが、米国特許庁のManual of Patent Examining Proceduresのセクション2111.03に定めるように、それぞれ閉じた移行句または半閉鎖移行句とされる。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ−Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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