(57)【要約】  本発明は、創傷治癒過程における再上皮化を刺激する方法及び組成物に関する。さらに具体的には、本発明は、創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤。
【請求項２】
エポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物、非エポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物及び非ステロイド系受容体アンタゴニスト化合物からなる群より選択される、請求項１に記載の鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト。
【請求項３】
スピロノラクトン、ドロスピレノン及びエプレレノンからなる群より選択される、請求項１又は２に記載の鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト。
【請求項４】
ＭＲアンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤を含む、創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための医薬組成物。
【請求項５】
局所送達のための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
皮膚処置のための、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
液剤、クリーム剤、軟膏、ゲル剤又は治療用包帯製剤（formulation healing bandage）である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
点眼製剤又は眼軟膏である、請求項４又は５に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＭＲアンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤を含む、経皮又はパッチデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷治癒過程において再上皮化を刺激するための方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚及び角膜の主な役割は、周囲環境に対して保護層として働くことである。損傷又は病気により皮膚又は角膜部位の完全性が失われると、重大な障害を引き起こすだけでなく、死に至る可能性さえある。米国では、毎年１２５万を超える人が熱傷を受傷しており、そして、６５０万人が圧迫、静脈鬱滞及び糖尿病により引き起こされる慢性皮膚潰瘍を患っている。角膜潰瘍、角膜びらん、角膜炎及びドライアイなどの様々な疾患で観察されるように、多くの角膜障害もまた角膜上皮の完全性の欠如により引き起こされる。また、薬物の局所投与及び手術状況により上皮の創傷治癒の遅延がもたらされる恐れもある。
【０００３】
創傷治癒は、可溶性メディエーター、血液細胞、細胞外マトリックス及び実質細胞が関与する動的な相互作用プロセスである。創傷治癒は、経時的にオーバーラップする３つの段階：血管相と炎症、再上皮化を含む新しい組織の形成及び組織再構築を有する。創傷は、現在、創傷部位に応急処置を施して、自己の生物学的な回復力により創傷が自然に治癒するまで待つことにより治療される。しかし、慢性的に不完全なままの再上皮化も確認され、これは、日和見感染、回復不能な瘢痕化、そして、最終的に角膜又は皮膚障害をもたらす恐れがある。従って、創傷治癒のための既存の薬剤は、再上皮化を刺激するための十分な作用を有していないため、短期間に創傷を完全に治癒することができない問題がある。
【０００４】
発明の概要
本発明は、創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤に関する。
【０００５】
発明の詳細な説明
本発明は、創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストに関する。
【０００６】
本明細書で使用される用語「創傷」は、術創ならびに事故の外傷による創傷を含むことを理解されたい。
【０００７】
典型的には、皮膚創傷は、糖尿病性足潰瘍、静脈鬱滞性潰瘍、熱傷から生じうる。この用語には、また、コルチコイド処置中に見られる創傷治癒の遅延、高齢者に見られる創傷治癒の遅延（加齢障害）、ストレス、糖尿病患者に見られる創傷治癒の遅延、手術痕又は皮膚移植後の上皮化不全、寒冷暴露後に生じる指のひび割れ、治癒遅延に伴う爪の病変、長期間の徒歩又は走行により生じる足の水膨れが含まれる。
【０００８】
角膜創は、角膜潰瘍、角膜びらん又は外傷、角膜炎及びドライアイなどの様々な疾患から生じうる。創傷は、また、薬物の局所投与及び手術状況、例えば、角膜移植及び角膜移植からの回復過程において生じうる。
【０００９】
本明細書で使用される用語「再上皮化」は、損傷した真皮上への角化細胞（ケラチノサイト）の遊走、及び創傷を徐々に覆って、バリア機能を修復する角化細胞の増殖／成熟を指し、同じ概念を角膜上皮の修復まで拡張することができる。
【００１０】
本明細書で使用される用語「鉱質コルチコイド受容体」又は「ＭＲ」は、当技術分野において一般的なその意味を有し、鉱質コルチコイドに高い親和性を有する受容体である核内受容体サブファミリー３、グループＣ、メンバー２（ＮＲ３Ｃ２）を指す。鉱質コルチコイド受容体は、また、アルドステロン受容体とも呼ばれる。化合物のＭＲアンタゴニスト又はアゴニスト活性は、J, Souque A, Wurtz JM, Moras D, Rafestin-Oblin ME.  Mol Endocrinol. 2000 Aug; 14(8): 1210-21; Fagart J, Seguin C, Pinon GM, Rafestin-Oblin ME. Mol Pharmacol. 2005 May; 67(5): 1714-22 or Hellal-Levy C, Fagart J, Souque A, Wurtz JM, Moras D, Rafestin-Oblin ME. Mol Endocrinol. 2000 Aug;14(8): 1210-21に記載されるような様々な方法を用いて決定することができる。典型的には、ヒト鉱質コルチコイド受容体をルシフェラーゼ発現受容体遺伝子と共にＣＯＳ細胞へトランスフェクションすることで、候補化合物の存在下でそのトランス活性化活性を測定することができる。
【００１１】
本発明の内容において、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、好ましくは、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体、糖質コルチコイド受容体、プロゲステロン受容体、甲状腺ホルモン受容体、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体、レチノイン酸受容体、ファルネソイドＸ受容体、プレグナンＸ受容体、肝臓Ｘ受容体、ビタミンＤ受容体、レチノイドＸ受容体及び構成的アンドロスタン受容体などの関連受容体と比較して、鉱質コルチコイド受容体に選択的である。「選択的」とは、鉱質コルチコイド受容体に対するアンタゴニストの親和性が、その関連受容体に対する親和性より少なくとも１０倍、好ましくは、２５倍、より好ましくは、１００倍、さらに好ましくは、５００倍高いことを意味する。
【００１２】
一実施態様においては、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、低分子量のアンタゴニスト、例えば、小さな有機分子である。用語「小さな有機分子」は、製薬分野で一般的に使用される有機分子と同程度のサイズの分子を指す。この用語は、生体高分子（例えば、タンパク質、核酸など）を除く。好ましい小さな有機分子は、約５０００Da以下、より好ましくは、２０００Da以下、最も好ましくは、約１０００Da以下の範囲のサイズである。
【００１３】
典型的には、本発明の鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、一般に、スピロラクトン型ステロイド化合物である。用語「スピロラクトン型」は、ステロイド核の通常はステロイド「Ｄ」環にスピロ結合配置を介して結合しているラクトン部分を含む構造を特徴とする。スピロラクトン型鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物のサブクラスは、エプレレノンなどのエポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物からなる。スピロラクトン型アンタゴニスト化合物の別のサブクラスは、スピロノラクトンなどの非エポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物からなる。
【００１４】
本発明の方法において使用されるエポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト化合物は、一般的に、エポキシ型部分で置換されたステロイド核を有する。用語「エポキシ型」部分は、２つの炭素原子間を架橋する酸素原子を有することを特徴とする任意の部分を包含することを意図する。
【００１５】
語句「エポキシステロイド系」で使用される用語「ステロイド系」は、従来の「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」及び「Ｄ」環を有するシクロペンテノ−フェナントレン部分により与えられる核を指す。エポキシ型部分は、シクロペンテノフェナントレン核に、任意の結合可能又は置換可能位置で結合していてもよく、すなわち、ステロイド核の環の１つに縮合しているか、又はその部分は、環系の環員上で置換されていてもよい。語句「エポキシステロイド系」は、１つ又は複数のエポキシ型分子が結合したステロイド系核を包含することを意図する。
【００１６】
本発明の方法において使用するために適切なエポキシステロイド鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、ステロイド核の「Ｃ」環に縮合したエポキシ部分を有する化合物ファミリーを含む。例には、例えば、下記の９α，１１α−置換エポキシ部分の存在を特徴とする２０−スピロキサン化合物が含まれる：
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン，メチルエステル（７α，１１α，１７β）、
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，ジメチルエステル（７α，１１α，１７β）、
−  ３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸，９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン（６β，７β，１１α，１７β）、
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，７−（１−メチルエチル）エステル，一カリウム塩（７α，１１α，１７β）、
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，７−メチルエチル）エステル，一カリウム塩（７α，１１α，１７β）、
−  ３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−１，４，６−トリエン−２１−カルボン酸，９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン（６β，７β，１１α）、
−  ３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸，９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，メチルエステル（６β，７β，１１α，１７β）、
−  ３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸，９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，一カリウム塩（６β，７β，１１α，１７β）、
−  ３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−１，４，６−トリエン−２１−カルボン酸，９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン（６β，７β，１１α，１７β）、
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン，エチルエステル（７α，１１α，１７β）、
−  プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン，１−メチルエチルエステル（７α，１１α，１７β）。
【００１７】
エプレレノンのような、エポキシステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストを使用する特定の利点は、鉱質コルチコイド受容体に対してこの鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストグループが高い選択性を有することにある。エプレレノンの優れた選択性は、アンドロゲン又はプロゲステロン受容体などの関連受容体に対して非選択的結合を示す鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストにより生じうる副作用を減少させる。
【００１８】
これらのエポキシステロイドは、Grob等の米国特許第4,559,332号に記載の方法により調製することができる。９，１１−エポキシステロイド系化合物及びその塩を調製するためのさらなる方法は、Ng等のWO97/21720及びNg等のWO98/25948に開示されている。
【００１９】
特に重要なものは、化合物エプレレノン（（プレグナ−４−エン−７，２１−ジカルボン酸，９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−，γ−ラクトン，メチルエステル（７α，１１α，１７β））（CAS No.107724-20-9）（エポキシメキシレノンとしても知られる）である。エプレレノンは鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストであり、鉱質コルチコイド受容体に対して、例えば、スピロノラクトンよりも高い選択性を有する。本発明の方法において、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてのエプレレノンの選択は、特異性が低い鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストを使用することにより生じる女性化乳房などの特定の副作用を減少させるために有益であろう。
【００２０】
本発明の方法において使用するために適切な非エポキシステロイド鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、式Ｉ：
【化１】
2013528636.tif 000002
[式中、
【化２】
2013528636.tif 000003
（Ｒは、５個以下の炭素原子の低級アルキルである）であり、そして
【化３】
2013528636.tif 000004
（低級アルキル残基は、分岐及び非分岐基、例えば、メチル、エチル及びｎ−プロピルを含む）である]
で定義されるスピロラクトン型化合物ファミリーを含む。
【００２１】
特定の重要な式Ｉの化合物は、
−  ７α−アセチルチオ−３−オキソ−４，１５−アンドロスタジエン−［１７（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  ３−オキソ−７α−プロピオニルチオ−４，１５−アンドロスタジエン−［１７（（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  ６β，７β−メチレン−３−オキソ−４，１５−アンドロスタジエン−［１７（（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  １５α，１６α−メチレン−３−オキソ−４，７α−プロピオニルチオ−４−アンドロステン［１７（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  ６β，７β，１５α，１６α−ジメチレン−３−オキソ−４−アンドロステン［１７（β−１’）−スピロ−５’］−ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  ７α−アセチルチオ−１５β，１６β−メチレン−３−オキソ−４−アンドロステン−［１７（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；
−  １５β，１６β−メチレン−３−オキソ−７β−プロピオニルチオ−４−アンドロステン−［１７（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オン；及び
−  ６β，７β，１５β，１６β−ジメチレン−３−オキソ−４−アンドロステン−［１７（β−１’）−スピロ−５’］ペルヒドロフラン−２’−オンである。
【００２２】
式Ｉの化合物を製造するための方法は、１９７８年１２月１２日に公開されたWiechart等の米国特許第4,129,564号に記載されている。
【００２３】
別の重要な非エポキシステロイド化合物ファミリーは、式ＩＩ：
【化４】
2013528636.tif 000005
[式中、Ｒ１は、Ｃ１−３−アルキル又はＣ１−３−アシルであり、Ｒ２は、Ｈ又はＣ１−３−アルキルである]
で定義される。
【００２４】
特定の重要な式ＩＩの化合物は、
−  １α−アセチルチオ−１５β，１６β−メチレン−７α−メチルチオ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−２１，１７−カルボラクトン；及び
−  １５β，１６β−メチレン−１α，７α−ジメチルチオ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−２１，１７−カルボラクトンである。
【００２５】
式ＩＩの化合物を製造するための方法は、１９８８年１２月６日に公開されたNickisch等の米国特許第4,789,668号に記載されている。
【００２６】
さらに別の重要な非エポキシステロイド化合物ファミリーは、式ＩＩＩ：
【化５】
2013528636.tif 000006
[式中、Ｒは、低級アルキルであり、その例には、メチル、エチル、プロピル及びブチルの低級アルキル基が含まれる]
の構造により定義される。
【００２７】
特定の重要な化合物は、
−  ３β，２１−ジヒドロキシ−１７α−プレグナ−５，１５−ジエン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；
−  ３β，２１−ジヒドロキシ−１７α−プレグナ−５，１５−ジエン−１７−カルボン酸γ−ラクトン３−アセテート；
−  ３β，２１−ジヒドロキシ−１７α−プレグナ−５−エン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；
−  ３β，２１−ジヒドロキシ−１７α−プレグナ−５−エン−１７−カルボン酸γ−ラクトン３−アセテート；
−  ２１−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；
−  ２１−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４，６−ジエン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；
−  ２１−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−１，４−ジエン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；
−  ７α−アシルチオ−２１−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−１７−カルボン酸γ−ラクトン；及び
−  ７α−アセチルチオ−２１−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−１７−カルボン酸γ−ラクトンを含む。
【００２８】
式ＩＩＩの化合物を製造するための方法は、１９６６年６月２１日に公開されたPatchettの米国特許第3,257,390号に記載されている。
【００２９】
さらに別の重要な非エポキシステロイド化合物ファミリーは、式ＩＶ：
【化６】
2013528636.tif 000007
[式中、Ｅ’は、エチレン、ビニレン及び（低級アルカノイル）チオエチレン基からなる群より選択され、Ｅ’’は、エチレン、ビニレン、（低級アルカノイル）チオエチレン及び（低級アルカノイル）チオプロピレン基からなる群より選択され；Ｒは、Ｅ’及びＥ’’が、それぞれエチレン及び（低級アルカノイル）チオエチレン基である場合を除きメチル基であり、その場合、Ｒは、水素及びメチル基からなる群より選択され；そして、Ｅ’及びＥ’’は、少なくとも１つの（低級アルカノイル）チオ基が存在するように選択される]
で表される。
【００３０】
式ＩＶの非エポキシステロイド化合物ファミリーの１つは、式Ｖ：
【化７】
2013528636.tif 000008
で表される。
【００３１】
式Ｖの別の化合物は、１−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−アンドロスタ−４−エン−３−オンラクトンである。
【００３２】
別の式ＩＶの非エポキシステロイド化合物ファミリーは、式ＶＩ：
【化８】
2013528636.tif 000009
で表される。
【００３３】
式ＶＩの例示化合物は、
−  ７α−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−アンドロスタ−４−エン−３−オンラクトン；
−  ７β−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−アンドロスタ−４−エン−３−オンラクトン；
−  １α，７α−ジアセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−アンドロスタ−４，６−ジエン−３−オンラクトン；
−  ７α−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−アンドロスタ−１，４−ジエン−３−オンラクトン；
−  ７α−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−１９−ノルアンドロスタ−４−エン−３−オンラクトン；及び
−  ７α−アセチルチオ−１７α−（２−カルボキシエチル）−１７β−ヒドロキシ−６α−メチルアンドロスタ−４−エン−３−オンラクトンを含む。
【００３４】
式ＩＶ〜ＶＩにおいて、用語「アルキル」は、１〜約８個の炭素を含有する直鎖及び分岐鎖アルキル基を包含することを意図する。用語「（低級アルカノイル）チオ」は、式：
【化９】
2013528636.tif 000010
の低級アルキル基を包含する。
【００３５】
特に重要なものは、下記の構造：
【化１０】
2013528636.tif 000011
を有する化合物スピロノラクトン（１７−ヒドロキシ−７α−メルカプト−３−オキソ−１７α−プレグナ−４−エン−２１−カルボン酸γ−ラクトンアセテート）である。
【００３６】
式ＩＶ〜ＶＩの化合物を製造するための方法は、１９６１年１２月１２日に公開されたCella等の米国特許第3,013,012号に記載されている。スピロノラクトンは、G. D. Searle & Co., Skokie, Ill.により、１錠あたり２５mg、５０mg及び１００mgの用量の錠剤の形態で「ALDACTONE」という商品名で販売されている。
【００３７】
別のステロイド鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストファミリーの例は、ドロスピレノン（６Ｒ−（６α，７α，８β，９α，１０β，１３β，１４α，１５α，１６α，１７β））−１，３’，４’，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，２０，２１−ヘキサデカヒドロ−１０，１３−ジメチルスピロ［１７Ｈ−ジシクロプロパ（６，７：１５，１６）シクロペンタ（ａ）フェナントレン−１７，２’（５’Ｈ）−フラン）−３，５’（２Ｈ）−ジオン）（ＣＡＳ登録番号67392-87-4）である。ドロスピレノンを製造及び使用するための方法は、ＧＢ特許1550568 1979（優先DE 2652761 1976）に記載されている。
【００３８】
鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストのエプレレノンについて、取り扱いが容易で、再現性のある形態であり、容易に調製される安定した非吸湿性の結晶形態が同定された。これらは、Ｈ型、Ｌ型、様々な結晶性溶媒和物及び非晶質のエプレレノンを含む。これらの形態、これらの形態を製造するための方法、ならびに組成物及び医薬の調製におけるこれらの形態の使用は、Barton等のWO 01/41535及びBarton等のWO 01/42272に開示されており、これらは共にその全体が本明細書に包含される。
【００３９】
本発明の鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとして使用することができる小さな有機分子は、また、非ステロイド系であってもよい。例えば、非ステロイド系ＭＲアンタゴニストのクラスは、最近数年間で現れ始めた（Meyers, Marvin J1; Hu, Xiao Expert Opinion on Therapeutic Patents, Volume 17, Number 1, January 2007 , pp. 17-23(7)）。最近、ジヒドロピリミジンがＭＲ拮抗作用を発揮することが示された（Activation of Mineralocorticoid Receptors by Exogenous Glucocorticoids and the Development of Cardiovascular Inflammatory Responses in Adrenalectomized Rats. Young MJ, Morgan J, Brolin K, Fuller PJ, Funder JW. Endocrinology. 2010 Apr 21）。さらに、Arhancet等は、他のクラスの非ステロイド系ＭＲアンタゴニストを開示している（Arhancet GB, Woodard SS, Dietz JD, Garland DJ, Wagner GM, Iyanar K, Collins JT, Blinn JR, Numann RE, Hu X, Huang HC. Stereochemical Requirements for the Mineralocorticoid Receptor Antagonist Activity of Dihydropyridines. J Med Chem. 2010 Apr 21）。非ステロイド系鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストの他の例には、米国特許出願公開公報US 20090163472、WO2004052847、WO 2008053300（参照することにより本開示に包含される）に開示されるものが含まれるが、これらに限定されない。例えば、WO 06/076202（２００６年７月２０日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてイミダゾールカルボキサミドのクラスを報告している。WO 06/012642（２００６年２月２日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてピロールカルボキサミドのクラスを報告している。WO 04/052847（２００４年６月２４日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてジベンゾスベランのクラスを報告している。WO 05/066161（２００５年７月２１日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてジベンゾスベランのクラスを報告している。WO 03/078394（２００３年９月２５日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとして３，３−ビスアリールオキシインドールのクラスを報告している。WO 05/097118（２００５年１０月２０日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとして４−アリール−１，４−ジヒドロピリジンのクラスを報告している。WO 04/067529（２００４年８月１２日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとして３−ベンジルインドールのクラスを報告している。WO 06/077821（２００６年７月２７日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてベンゾオキサジンチオン及びテトラヒドロキノリンのクラスを報告している。WO 06/010142（２００６年１月２６日公開）は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストとしてアリールベンゾオキサジノン／チオンのクラスを報告している。
【００４０】
別のアンタゴニストの例には、カンレノ酸の塩が含まれる。カンレノ酸は体内でカンレノンに代謝されるプロドラッグである。
【００４１】
あるいは、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、抗体（この用語は、「抗体フラグメント」を含む）から構成されていてもよい。特に、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、鉱質コルチコイド受容体を阻害するようにその受容体に対する抗体から構成されていてもよい。
【００４２】
抗体は、公知の方法に従って、適切な抗原又はエピトープを、とりわけ、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ及びマウスから選択される宿主動物に投与することにより作製することができる。抗体の産生を高めるために当技術分野で公知の様々なアジュバントを使用することができる。本発明の実施において有用な抗体はポリクローナルであってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。モノクローナル抗体は、連続培養細胞株により抗体分子を産生する任意の技術を用いて調製、単離することができる。産生及び単離技術には、ハイブリドーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術；及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術が含まれるが、これらに限定されない。あるいは、単鎖抗体を産生するための記載の技術（例えば、米国特許第4,946,778号参照）を抗鉱質コルチコイド受容体単鎖抗体の産生に適合することができる。
【００４３】
本発明の実施において有用な鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストには、また、非限定的に、インタクトな抗体分子のペプシン消化により生成しうるＦ（ａｂ’）２フラグメント、及びＦ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成しうるＦａｂフラグメントを含む、抗鉱質コルチコイド受容体の抗体フラグメントが含まれる。あるいは、鉱質コルチコイド受容体に対して所望の特異性を有するフラグメントの迅速な同定を可能にするために、Ｆａｂ及び／又はｓｃＦｖ発現ライブラリーを構築することができる。
【００４４】
ヒト化抗体及びその抗体フラグメントは、また、公知の技術に従って調製することができる。「ヒト化抗体」は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有する非ヒト（例えば、げっ歯類）キメラ抗体の形態である。大抵の場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性及び生産能力を有するマウス、ラット、ウサギ又はヒト以外の霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に見られない残基を含んでいてもよい。これらの改変は抗体の性能をさらに高めるために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変領域の実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、また、場合により、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。ヒト化抗体を製造するための方法は、例えば、Winter（米国特許第5,225,539号）及びBoss（Celltech、米国特許第4,816,397号）に記載されている。
【００４５】
上述のように抗体を作製した後、当業者は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストである抗体を容易に選択することができる。
【００４６】
別の実施態様においては、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、アプタマーである。アプタマーは、分子認識に関して抗体の代わりとなる分子のクラスである。アプタマーは、高い親和性及び特異性で実質的にあらゆるクラスの標的分子を認識する能力を有するオリゴヌクレオチド又はオリゴペプチド配列である。このようなリガンドは、Tuerk C.及びGold L.(1990年)に記載されるようなランダム配列ライブラリーの試験管内人工進化法（SELEX）により単離することができる。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡのコンビナトリアル化学合成により得ることが可能である。このライブラリーでは、それぞれのメンバーは固有配列の最終的に化学修飾された直鎖オリゴマーである。このクラスの分子の可能な改変、用途及び利点は、Jayasena S.D.（１９９９年）に概説されている。ペプチドアプタマーは、２種類のハイブリッド法によってコンビナトリアルライブラリーから選択される、E. coliのチオレドキシンＡなどのプラットフォームタンパク質により提示される立体構造的に制約された抗体可変領域から構成される（Colas等、１９９６年）。
【００４７】
上述のように鉱質コルチコイド受容体に対するアプタマーを作製した後、当業者は、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストであるアプタマーを容易に選択することができる。
【００４８】
本発明のさらなる目的は、創傷治癒の間の皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤に関する。
【００４９】
本発明において使用するための発現の阻害剤はアンチセンスオリゴヌクレオチド構築物ベースであってもよい。アンチセンスＲＮＡ分子及びアンチセンスＤＮＡ分子を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、鉱質コルチコイド受容体ｍＲＮＡに結合することによってその翻訳を直接阻害するように、すなわちタンパク質翻訳を抑制するか、又はｍＲＮＡの分解を増加させ、これにより細胞内の鉱質コルチコイド受容体レベル、すなわち活性を低下させるように作用する。例えば、少なくとも約１５塩基であり、鉱質コルチコイド受容体をコードするｍＲＮＡの転写配列の固有領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを、例えば、従来のホスホジエステル技術により合成することができ、これを、例えば、静脈内注射又は注入により投与することができる。配列が知られている遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するためにアンチセンス技術を使用する方法は、当技術分野においてよく知られている（例えば、米国特許第6,566,135号；第6,566,131号；第6,365,354号；第6,410,323号；第6,107,091号；第6,046,321号；及び第5,981,732号参照）。
【００５０】
小分子阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、また、本発明において使用するための発現の阻害剤として機能することができる。鉱質コルチコイド受容体の遺伝子発現は、対象又は細胞を小分子二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）又は小分子二本鎖ＲＮＡの産生を引き起こすベクターもしくは構築物と接触させることにより低下させ、鉱質コルチコイド受容体の遺伝子発現を特異的に阻害することができる（即ち、ＲＮＡ干渉又はＲＮＡｉ）。配列が知られている遺伝子について、適切なｄｓＲＮＡ又はｄｓＲＮＡコードベクターを選択する方法は当技術分野においてよく知られている（例えば、Tuschl, T. et al. (1999)；Elbashir, S. M. et al. (2001)；Hannon, GJ. (2002)；McManus, MT. et al. (2002)；Brummelkamp, TR. et al. (2002)；米国特許第6,573,099号及び第6,506,559号；ならびに国際特許公開第WO 01/36646、WO 99/32619及びWO 01/68836参照）。本発明のｓｉＲＮＡのホスホジエステル結合の全て又は一部を保護することが有利である。この保護は、一般的に、当技術分野において公知の方法を使用する化学的経路により実施される。ホスホジエステル結合は、例えば、チオールもしくはアミン官能基により又はフェニル基により保護することができる。本発明のｓｉＲＮＡの５’及び／又は３’末端は、また、例えば、ホスホジエステル結合を保護するための上述の技術を用いて保護するのが有利である。ｓｉＲＮＡ配列は、少なくとも１２個の連続したジヌクレオチド又はその誘導体を含むことが有利である。
【００５１】
本発明の核酸配列に関して、本明細書で使用される用語「ｓｉＲＮＡ誘導体」は、エリスロポエチン又はそのフラグメントと少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、一例として、少なくとも９８％、より好ましくは、少なくとも９８％の同一性パーセンテージを有する核酸を指す。
【００５２】
本明細書で使用される２つの核酸配列間の「同一性パーセンテージ」は、前記配列の最良のアラインメントで得られる比較される２つの配列間の同一の核酸のパーセンテージを意味し、このパーセンテージは純粋に統計的であって、これらの２つの配列間の相違は核酸配列にランダムに分布している。本明細書で使用される「最良のアラインメント」又は「最適なアラインメント」は、決定された同一性パーセンテージ（下記参照）が最も高いアラインメントを意味する。２つの核酸配列間の配列比較は、通常、最良のアラインメントに従ってアラインした後にこれらの配列を比較することによって実現される。この比較は類似性の局所領域を同定し、比較するために比較のセグメントによって実現される。比較を実施するために最良な配列アラインメントは、手作業で行うほかに、SMITH及びWATERMANより開発されたグローバルホモロジーアルゴリズム（Ad. App. Math., vol.2, p:482, 1981）を用いることにより、NEDDLEMAN及びWUNSCHにより開発されたローカルホモロジーアルゴリズム（J. Mol. Biol., vol.48, p:443, 1970）を用いることにより、PEARSON及びLIPMANにより開発された類似性検索法（Proc. Natl. Acd. Sci. USA, vol.85, p:2444, 1988）を用いることにより、このようなアルゴリズムを使用したコンピューターソフトウェア（GAP, BESTFIT, BLAST P, BLAST N, FASTA, TFASTA in the Wisconsin Genetics software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI USA）を用いることにより、MUSCLE多重アラインメントアルゴリズム（Edgar, Robert C., Nucleic Acids Research, vol. 32, p:1792, 2004）を用いることにより実現することができる。ローカルアラインメントを得るために、好ましくは、BLASTソフトウェアを使用することができる。２つの核酸配列間の同一性パーセンテージは、最適にアラインしたこれらの２つの配列を比較することによって決定され、この核酸配列は、これらの２つの配列間の最適なアラインメントを得るために参照配列に対して付加又は欠失を含むことができる。同一性パーセンテージは、これらの２つの配列間の同一位置の数を決定して、この数を比較位置の総数で割り、そして得られた数値に１００を掛けて、これらの２つの配列間の同一性パーセンテージを得ることにより算出される。
【００５３】
ｓｈＲＮＡ（低分子ヘアピンＲＮＡ）もまた、本発明において使用するための発現の阻害剤として機能することができる。
【００５４】
リボザイムもまた、本発明において使用するための発現の阻害剤として機能することができる。リボザイムは、ＲＮＡの特異的な開裂を触媒することが可能な酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムの作用機序は、リボザイム分子と相補的な標的ＲＮＡとの配列特異的ハイブリダイゼーション、それに続くエンドヌクレアーゼ切断を包含する。従って、鉱質コルチコイド受容体のｍＲＮＡ配列のエンドヌクレアーゼ切断を特異的かつ効果的に触媒する改変ヘアピン又はハンマーヘッドモチーフリボザイム分子は、本発明の範囲において有用である。任意の可能性のあるＲＮＡ標的内の特異的なリボザイム開裂部位は、最初に、典型的には、配列ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣを含む標的分子のリボザイム開裂部位をスキャニングすることにより同定される。同定した後、開裂部位を含有する標的遺伝子の領域に対応する約１５〜２０リボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列を、オリゴヌクレオチド配列を不適合にしうる二次構造などの予測される構造的特徴について評価することができる。
【００５５】
発現の阻害剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドとリボザイムの両方は、公知の方法により調製することができる。これらは、例えば、固相ホスホアミダイト化学合成などによる化学合成の技術を含む。あるいは、アンチセンスＲＮＡ分子は、そのＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のin vitro又はin vivo転写により生成しうる。このようなＤＮＡ配列は、Ｔ７又はＳＰ６ポリメラーゼプロモーターなどの適切なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含む様々なベクターに組み込むことができる。細胞内安定性及び半減期を増加させるために、本発明のオリゴヌクレオチドに様々な改変を導入することができる。可能な改変には、その分子の５’及び／又は３’末端へのリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドのフランキング配列の付加、又はオリゴヌクレオチド骨格内のホスホジエステラーゼ結合以外のホスホロチオエートもしくは２’−Ｏ−メチルの使用が含まれるが、これらに限定されない。
【００５６】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムは、in vivoに単独で又はベクターと組み合わせて送達してもよい。最も広い意味で、「ベクター」は、細胞、好ましくは、鉱質コルチコイド受容体を発現する細胞へのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸の輸送を促進することができる任意のビヒクルである。好ましくは、ベクターは、ベクターの非存在下において生じる分解度と比較して少ない分解で核酸を細胞に輸送する。一般的に、本発明において有用なベクターには、プラスミド、ファージミド、ウイルス、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸配列の挿入又は組み込みにより増幅したウイルス又は細菌由来の他のビヒクルが含まれるが、これらに限定されない。ウイルスベクターは好ましいベクタータイプであり、これには、下記ウイルス：モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳癌ウイルス及びラウス肉腫ウイルスなどのレトロウイルス；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン−バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；ならびにレトロウイルスなどのＲＮＡウイルス由来の核酸配列が含まれるが、これらに限定されない。当技術分野で命名されていないが公知の他のベクターを容易に用いることができる。
【００５７】
好ましいウイルスベクターは、非必須遺伝子が関心のある遺伝子で置換されている非細胞変性真核生物ウイルスをベースにしている。非細胞変性ウイルスには、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写、それに続く宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス組み込みを伴うライフサイクルのレトロウイルス（例えば、レンチウイルス）が含まれる。レトロウイルスは、ヒトの遺伝子治療試験に承認されている。複製欠損（即ち、所望のタンパク質を直接合成することが可能であるが、感染性粒子を産生することができない）レトロウイルスが最も有用である。このような遺伝子改変されたレトロウイルス発現ベクターは、一般的に、in vivoにおいて遺伝子の高効率形質導入に利用されている。複製欠損レトロウイルスを作製するための標準プロトコール（プラスミドへの外来性遺伝物質の組み込み、プラスミドによるパッケージング細胞株のトランスフェクション、パッケージング細胞株による組み換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の回収及びウイルス粒子の標的細胞への感染の工程を含む）は、Kriegler（１９９０年）及びMurry（１９９１年）により提供されている。
【００５８】
特定の適用に好ましいウイルスは、既にヒトの遺伝子治療用途に承認されている二本鎖ＤＮＡウイルスであるアデノウイルス及びアデノ随伴（ＡＡＶ）ウイルスである。実際に、１２個の異なるＡＡＶ血清型（ＡＡＶ１〜１２）が知られており、それぞれ異なる組織親和性を備えている（Wu, Z Mol Ther 2006; 14:316-27）。組み換えＡＡＶは、依存性パルボウイルスＡＡＶ２から得られる（Choi, VW J Virol 2005; 79:6801-07）。アデノ随伴ウイルス１型〜１２型は複製欠損になるように改変することができ、様々な細胞型及び種に感染させることが可能である（Wu, Z Mol Ther 2006; 14:316-27）。さらに、熱及び脂質溶媒安定性；造血細胞を含む多様な系統の細胞への高い形質導入頻度；及び複数の形質導入を可能にする重複感染阻害の欠如などの利点を有する。報告されているように、アデノ随伴ウイルスは、ヒトの細胞ＤＮＡに部位特異的に組み込むことができるため、レトロウイルス感染に特異的な挿入変異の可能性及び挿入された遺伝子の発現の変動を最小限にすることができる。さらに、野生型アデノ随伴ウイルスの感染は、組織培養において、選択圧が存在しない場合１００回超継代されるので、このことから、アデノ随伴ウイルスのゲノムへの組み込みは比較的安定な事象であることが示唆される。アデノ随伴ウイルスは、また、染色体外において機能することができる。
【００５９】
他のベクターには、プラスミドベクターが挙げられる。プラスミドベクターは当技術分野において広範に記載されており、当業者によく知られている。例えば、Sambrook等（１９８９年）を参照されたい。ここ数年、プラスミドベクターは、抗原コード遺伝子をin vivoで細胞に送達するためのＤＮＡワクチンとして使用されている。これらには多くのウイルスベクターと同様の安全上の問題がないため、この点において特に都合がよい。しかし、宿主細胞に適合するプロモーターを有するこれらのプラスミドは、プラスミド内に操作可能にコードされた遺伝子からペプチドを発現することができる。いくつかの通常使用されるプラスミドには、pBR322、pUC18、pUCl9、pRC/CMV、SV40及びpBlueScriptが含まれる。他のプラスミドも当業者によく知られている。さらに、制限酵素及びライゲーション反応を用いて、ＤＮＡの特異的フラグメントを除去及び付加してプラスミドを特別に設計してもよい。プラスミドは、様々な非経口、粘膜及び局所経路により送達することができる。例えば、ＤＮＡプラスミドは、筋肉内、皮内、皮下又は他の経路により注射することができる。プラスミドはまた、鼻腔内スプレー又は点鼻、肛門坐剤及び経口により投与することもできる。プラスミドはまた、遺伝子銃を使用して上皮又は粘膜表面に投与することもできる。プラスミドは、水溶液で、金粒子上に乾燥させて、あるいは、非限定的に、リポソーム、デンドリマー、コクリエート及びマイクロカプセル化を含む別のＤＮＡ送達システムと組み合わせた形態で投与してもよい。
【００６０】
好ましい実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はリボザイム核酸配列は、異種制御領域、例えば、異種プロモーターの制御下にある。プロモーターは、ミューラーグリア細胞、ミクログリア細胞、内皮細胞、周皮細胞及び星状細胞に特異的でありうる。例えば、ミューラーグリア細胞での特異的発現は、適切なグルタミン合成酵素遺伝子のプロモーターを介して得ることができる。プロモーターは、また、例えば、ＣＭＶプロモーターなどのウイルスプロモーター又は任意の合成プロモーターであってもよい。
【００６１】
本発明の活性成分（即ち、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト及び鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤）は、下記に記載するように医薬組成物の形態で投与してもよい。本発明の活性成分は、薬学的に許容しうる賦形剤、場合により、生物分解性ポリマーなどの徐放性マトリクスと併せて、治療組成物を作製してもよい。
【００６２】
従って、本発明のさらなる態様は、創傷治癒の間の皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法において使用するための、本発明の活性成分を含む医薬組成物に関する。
【００６３】
用語「薬学的に」又は「薬学的に許容しうる」は、必要に応じて、哺乳動物、特にヒトに投与されたときに、副作用、アレルギー又は他の有害反応を生じない分子エンティティ及び組成物を指す。薬学的に許容しうる担体又は賦形剤は、非毒性の固体、半固体もしくは液体増量剤、希釈剤、封入材料又は任意のタイプの製剤補助剤を指す。
【００６４】
本発明の医薬組成物において、本発明の活性成分は、単位投与形態で、従来の医薬支持剤との混合物として動物及びヒトに投与することができる。適切な単位投与形態には、錠剤、ゲルカプセル剤、粉剤、顆粒剤及び経口懸濁剤又は液剤などの経口投与形態、舌下及び口腔投与形態、エアロゾル、インプラント、皮下、経皮、局所、腹腔内、筋肉内、静脈内、皮下、経皮、髄腔内及び鼻腔内投与形態ならびに直腸投与形態が含まれる。
【００６５】
好ましい実施態様においては、本発明の活性成分を、局所用の薬学的又は化粧品学的に許容しうる担体との混合物で投与することが望ましい。局所用の薬学的に許容しうる担体は、皮膚又は角膜表面に直接適用された場合、本発明の活性成分が、安定かつ生物学的に利用可能であり続ける、医薬の局所投与に従来有用な任意の実質的に非毒性の担体である。例えば、皮膚の角質層へ浸透させるのに効果的な当技術分野において公知の担体は、本発明の活性成分を対象の領域に送達するのに有用でありうる。このような担体には、リポソームが含まれる。本発明の活性成分は、媒体に従来の方法で分散又は乳化させて、液体調製物を作製するか、又は半固体（ゲル）又は固体担体と混合して、ペースト剤、粉末剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤などを作製することができる。
【００６６】
適切な局所用の薬学的に許容しうる担体には、水、緩衝生理食塩水、ペトローリアムジェリー（ワセリン）、流動パラフィン、鉱油、植物油、動物油、有機及び無機ワックス、例えば、微晶質パラフィン及びオゾケライトワックス、天然高分子、例えば、キサンタン、ゼラチン、セルロース、コラーゲン、トウモロコシデンプン又はアラビアゴム、合成高分子、アルコール、ポリオールなどが含まれる。担体は水混和性の担体組成物であってもよい。このような水混和性の局所用の薬学的に許容しうる担体組成物は、治療の初期に、１つ又は複数の適切な成分と共に製造したものを含むことができる。
【００６７】
処置される皮膚疾患が目で確認することができるので、局所担体は、また、局所用の化粧品学的に許容しうる担体であってもよい。局所用の化粧品学的に許容しうる担体は、皮膚表面に直接適用された場合、本発明の活性成分が安定かつ生物学的に利用可能であり続ける、化粧品の局所投与に従来有用な任意の実質的に非毒性の担体である。適切な化粧品学的に許容しうる担体は当業者に公知であり、これには、化粧品学的に許容しうる液剤、クリーム剤、油剤、ローション剤、軟膏、ゲル又は固形剤、例えば、従来の化粧品ナイトクリーム、ファンデーションクリーム、日焼け止めローション、日焼け防止薬、ハンドローション、メイクアップ及びメイクアップ基剤、マスク剤などが含まれるが、これらに限定されない。局所用の化粧品学的に許容しうる担体は、上述の局所用の薬学的に許容しうる担体と類似又は同一の性質を有していてもよい。本組成物は、香料、エストロゲン、ビタミンＡ、ＣもしくはＥ、α−ヒドロキシ又はα−ケト酸、例えば、ピルビン酸、乳酸又はグリコール酸、ラノリン、ワセリン、アロエ、メチル又はプロピルパラベン、顔料などを含む化粧品分野で一般的な他の成分を含有することができる。
【００６８】
創傷への本発明の活性成分の放出を制御し、そして、創傷上でそれ自体を長期間付着又は維持して、創傷上での本発明の活性成分の接触時間を増加させる送達システムを有することが望ましい。本発明の活性成分の持続放出又は遅延放出は、本発明の活性成分の投与頻度の低下及び／又は用量の減少ならびに良好な患者コンプライアンスが得られるより効率的な投与を提供する。湿潤環境において持続放出又は遅延放出するための適切な担体の例には、ゼラチン、アラビアゴム、キサンタンポリマーが含まれる。処置される領域の任意の油性、脂肪性、ワックス性又は湿潤性環境に曝される場合の、本発明の活性成分を放出することができる医薬担体には、熱可塑性樹脂、例えば、ハロゲン化ポリビニル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニリデン及びハロゲン化ポリオレフィン、エラストマー、例えば、ブラジリエンシス、ポリジエン及びハロゲン化天然及び合成ゴムならびに可塑性の熱硬化性樹脂、例えば、ポリウレタン、エポキシ樹脂などを含む熱可塑性もしくは可塑性の熱硬化性樹脂又はエラストマーが含まれる。制御送達システムは、例えば、米国特許第5,427,778号に記載されており、これには本発明の活性成分を創傷部位へ送達するためのゲル製剤及び粘性液剤が提供されている。ゲルには、創傷を湿潤に保つための高い水分含量、創傷滲出液を吸収する能力、適用の容易さ及び洗浄による除去の容易さを有する利点がある。好ましくは、持続放出又は遅延放出担体は、ゲル、リポソーム、マイクロスポンジ又はマイクロスフェアである。
【００６９】
本発明の活性成分は、また、非限定的に、抗生物質、他の創傷治癒剤及び抗酸化物質を含む他の薬学的に効果的な薬剤と組み合わせて投与することができる。
【００７０】
本発明の活性成分の投与経路は、創傷の部位ならびに損傷の種類及び程度に依存する。有効量の本発明の活性成分が、再上皮化を必要とする領域に到達することができる範囲で任意の適切な適用方法を使用することができる。投与経路には、局所、経皮及び非経口が含まれるが、これらに限定されない。典型的には、本発明の成分は、局所又は経皮適用で投与される。
【００７１】
皮膚を処置するための局所投与は、液剤、クリーム剤、軟膏、ゲル剤又は他の適切な治療用包帯製剤（formulation healing bandage）を局所適用することにより達成され、これは、次に、本発明の組成物の活性成分を創傷に接触させるように創傷に適用することができる。適切な経皮デバイスの例は、例えば、米国特許第4,818,540号に記載されている。本発明の活性成分は、薬学的に許容しうるクリーム剤と混合して、創傷に適用し、そして、密封包帯で覆うことができる。あるいは、創傷領域を本発明の活性成分の溶液で洗浄又は浸漬することができる。その溶液は、１日に２〜１２回適用する。経皮適用の場合、本発明の活性成分は、本発明の活性成分を皮膚及び創傷部位に浸透させることが可能な組成物の形態で製剤化する。このような組成物は、直接皮膚に適用させるか、又は経皮もしくは「パッチ」デバイスなどの保護担体に含有させる。経皮投与のための本発明の活性成分の製剤は、吸収性のガーゼ包帯の繊維を被覆するように使用することができる。
【００７２】
特定の実施態様においては、角膜を処置するための本発明の医薬組成物は、点眼薬又は眼軟膏である。点眼剤は、一般的に使用される任意の製剤、例えば、水性点眼液剤、水性点眼懸濁剤、粘性点眼液剤、可溶化点眼液剤などの水性点眼剤の形態で、又は非水溶性点眼液剤、非水溶性点眼懸濁剤などの非水溶性点眼剤の形態で提供される。本発明の角膜を処置するための組成物が水性点眼剤として調製される場合、好ましくは、水性点眼剤で通常使用される添加剤を含有する。このような添加剤の例には、防腐剤、等張剤、緩衝剤、安定剤、ｐＨ調整剤などが含まれる。本組成物が眼軟膏の形態で使用される場合、通常使用される任意の製剤を含む。例えば、場合により、眼軟膏基剤を加熱し、本発明の活性成分と混合することにより容易に製造することができる。本発明の活性成分は、場合により、眼軟膏基剤と混合する前に、適切な溶媒、例えば、滅菌純水、注射用蒸留水、ヒマシ油などの植物油に溶解又は懸濁してもよい。眼軟膏基剤の例には、精製ラノリン、ワセリン、プラスチベース、液体パラフィンなどが含まれる。本発明の目的を損なわない限り、上記の防腐剤、安定剤などを場合により混合することができる。
【００７３】
本発明のさらなる目的は、創傷治癒過程における皮膚又は角膜の再上皮化を刺激する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト又は鉱質コルチコイド受容体遺伝子発現の阻害剤を投与することを含む方法に関する。
【００７４】
「治療有効量」とは、任意の医療に適用することができる妥当なリスク対効果比で創傷治癒の間の再上皮化を刺激するのに十分な活性成分量を意味する。
【００７５】
本発明の化合物及び組成物の全一日使用量は、担当医により適切な医学的判断の範囲内で決定されることが理解される。任意の特定の対象に対する特定の治療有効用量は、処置される障害及び障害の重症度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物、対象の年齢、体重、全体的な健康、性別及び食事；投与時間、投与経路及び用いられる特定の化合物の排泄速度；処置期間；用いられる特定のポリペプチドと組み合わせて又は同時に使用される薬物ならびに医学分野でよく知られている類似の要因を含む様々な要因に依存している。例えば、所望の治療効果を得るために必要な用量よりも低い化合物用量で開始し、所望の治療効果が得られるまで徐々に用量を増加させることは、十分に当技術分野の範囲内である。しかし、生成物の一日用量は、成人１日当たり０．０１〜１，０００mgの広範な範囲で変更してもよい。好ましくは、本組成物は、処置される対象に対して用量の対症調整のために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０及び５００mgの活性成分を含有する。医薬は、典型的に、約０．０１mg〜約５００mgの活性成分、好ましくは、１mg〜約１００mgの活性成分を含有する。有効量の薬物は、通常、１日当たり０．０００２mg/kg〜約２０mg/kg体重、特に、１日当たり約０．００１mg/kg〜７mg/kg体重の用量レベルで提供される。
【００７６】
本発明は下記実施例によりさらに説明される。しかし、これらの実施例は、いかなる場合も本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【００７７】
実施例
実施例１：皮膚の創傷治癒におけるＭＲ／アルドステロンの役割：
本発明者等は、皮膚の創傷治癒及び瘢痕形成におけるＭＲの役割を調べた。皮膚が損傷した後の瘢痕形成は、皮膚の欠損を修復するための高度に調節された相互依存的な連続的段階（炎症、増殖、組織再構築）を含む（Lau K, Paus R, Tiede S, Day P, Bayat A: Exploring the role of stem cells in cutaneous wound healing, Exp Dermatol 2009, 18:921-933）。本発明者等は、創傷治癒の後期で起こる再上皮化過程におけるアルドステロン／ＭＲの役割を検討する。この目的のために、本発明者等は、新生マウスから切除した皮膚における上皮の寄与を測定することができる創傷治癒モデルを使用した（Mazzalupo S, Wawersik MJ, Coulombe PA: An ex vivo assay to assess the potential of skin keratinocytes for wound epithelialization, J Invest Dermatol 2002, 118:866-870）。創傷治癒アッセイは、角化細胞が最初のパッチから遊走して増殖する（偏心成長）、皮膚移植片の器官型培養から構成されており、このアッセイは皮膚創傷の周辺における角化細胞のin vivo作用を模倣する。
【００７８】
本発明者等は、基底角化細胞においてＭＲを過剰発現するトランスジェニックマウスモデル（Ｋ５−ＭＲマウス）を使用して（Sainte Marie Y, Toulon A, Paus R, Maubec E, Cherfa A, Grossin M, Descamps V, Clemessy M, Gasc JM, Peuchmaur M, Glick A, Farman N, Jaisser F: Targeted skin overexpression of the mineralocorticoid receptor in mice causes epidermal atrophy, premature skin barrier formation, eye abnormalities, and alopecia, Am J Pathol 2007, 171:846-860）、新生児の皮膚の創傷治癒におけるＭＲの影響を調べた。簡潔に述べると、新生ダブルトランスジェニックマウス及びその対照同腹子（１日齢未満、即ち、Ｋ５−ＭＲ仔（pups）の出生後早期死亡の前段階）から皮膚を切除した。皮膚片を切り取り、４mmの無菌パンチ（sterile punch）を２４ウェル組織培養プレートのウェルに入れた。その後、２５０マイクロリッターの培地を加えて、Mazzalupo等（上記参照）に記載されるように移植片を７日間培養した。移植片培地は、１００ml培地当たり、ペニシリン−ストレプトマイシン１ml、非必須アミノ酸１ml、Ｌ−グルタミン１ml、２．１０−４Ｍアデニン、５ug/mlインスリン、２．１０−９Ｍ  Ｔ３、５ug/mlトランスフェリン、１０−１０Ｍコレラ毒素、１０−６Ｍヒドロコルチゾン、０．５μg/mLファンギゾン、１０％非働化ウシ胎仔血清、１０ng/ml上皮成長因子を添加したDMEM-HamF12(2/1)とした。１週間培養した後、皮膚移植片を４％パラホルムアルデヒド（１０分間）、次いでメタノール（５分間）で固定し、そして、試料のケラチン１７（Ｋ１７）又はＫ６について免疫組織化学処理を行って、角化細胞の成長領域を可視化した。角化細胞の成長の表面領域を定量した（Image J NIH software）。
【００７９】
この研究の主な知見は、Ｋ５−ＭＲ仔由来の皮膚パッチにおいて角化細胞の成長が、対照動物と比較して著しく低下したことである。正常な仔の場合では、移植片が成長している角化細胞により取り囲まれて、抗ケラチン抗体で染色される均一領域の成長を生じるが、本発明者等は、Ｋ５−ＭＲ仔から得られた角化細胞からは周縁が不規則な非常に小さな成長が生じたことを観察した。成長表面の定量化により対照とＫ５−ＭＲの皮膚作用の間で大きな相違が認められた。実際、角化細胞の成長領域は、ＣＴでは３０．６±１．３１mm２であるのに対し、Ｋ５−ＭＲでは１７．７±１．２２mm２であった（平均値及びＳＥＭ、ｐ＜０．０００１、１０匹の異なる同腹子から得たｎ＝２８と３０仔）。従って、基底角化細胞においてＭＲの過剰発現は、その上皮化作用を低下させる。Ｋ５−ＭＲマウスの皮膚移植片で観察された成長の変化とＭＲの過剰発現との間の関連性を立証するために、ＭＲアンタゴニストのカンレノ酸カリウムを培養培地に加え、その存在下でこのアッセイを繰り返した。皮膚パンチをカンレノ酸カリウム（０．１mM）とインキュベートした場合、Ｋ５−ＭＲ仔に由来する移植片の角化細胞の成長の低下が部分的ではあるが著しく改善したが、一方で、対照の仔由来の移植片ではアンタゴニストは効果を示さなかった。従って、マウスの皮膚で行ったこのex vivoアッセイにおいて、ＭＲの過剰発現が創傷治癒の上皮成分を制限すると結論付けることができる。従って、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニストは、創傷治癒の間の皮膚又は角膜の再上皮化を刺激すると考えられる。
【００８０】
実施例２：皮膚の創傷治癒におけるＭＲの標的としての上皮ナトリウムチャネルＥＮａＣ：
アルドステロン／ＭＲの活性化は、腎臓集合管などの古典的な鉱質コルチコイド標的組織においてナトリウム輸送に関与する遺伝子を制御する（Farman N, Rafestin-Oblin ME: Multiple aspects of mineralocorticoid selectivity, Am J Physiol Renal Physiol 2001, 280:F181-192 ; Viengchareun S, Le Menuet D, Martinerie L, Munier M, Pascual-Le Tallec L, Lombes M: The mineralocorticoid receptor: insights into its molecular and (patho)physiological biology, Nucl Recept Signal 2007, 5:e012）。腎臓のＭＲの活性化は、最終的にナトリウム輸送体又はチャネルの活性及び数量を増大させるいくつかの遺伝子の転写（又はリプレッション）を引き起こす。腎臓集合管主細胞などのアルドステロンの典型的な上皮標的細胞において、細胞へのナトリウム流入は、経上皮ナトリウム輸送の律速段階であるアミロライド感受性の頂端側ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ、上皮ナトリウムチャンネル）に依存している（Rossier BC, Pradervand S, Schild L, Hummler E: Epithelial sodium channel and the control of sodium balance: interaction between genetic and environmental factors, Annu Rev Physiol 2002, 64:877-897）。ＥＮａＣは、ナトリウム孔を形成する３つのサブユニット（α、β及びγ）から構成されている。膜へ輸送するチャネルサブユニットを制御する生理学的メカニズム（血清及び糖質コルチコイド誘導キナーゼｓｇｋ１の重要な役割を有する）、セリンプロテアーゼ（チャネル活性化プロテアーゼＣａｐ１及びＣａｐ３として）による活性化ならびに頂端膜からの取り込みが、ナトリウムの再吸収を制御するために特に重要である（Rossier BC, Stutts MJ: Activation of the Epithelial Sodium Channel (ENaC) by Serine Proteases, Annu Rev Physiol 2008 ; Rotin D, Schild L: ENaC and its regulatory proteins as drug targets for blood pressure control, Curr Drug Targets 2008, 9:709-716）。
【００８１】
本発明者等により、ナトリウムチャネルＥＮａＣがまた、角化細胞により発現されること（Brouard M, Casado M, Djelidi S, Barrandon Y, Farman N: Epithelial sodium channel in human epidermal keratinocytes: expression of its subunits and relation to sodium transport and differentiation, J Cell Sci 1999, 112 (Pt 19）:3343-3352 ; Roudier-Pujol C, Rochat A, Escoubet B, Eugene E, Barrandon Y, Bonvalet JP, Farman N: Differential expression of epithelial sodium channel subunit mRNAs in rat skin, J Cell Sci 1996, 109 ( Pt 2):379-385)、さらに、上皮のα−サブユニットのノックアウトが表皮過形成を生じさせることが明らかとなった（Mauro T, Guitard M, Behne M, Oda Y, Crumrine D, Komuves L, Rassner U, Elias PM, Hummler E: The ENaC channel is required for normal epidermal differentiation, J Invest Dermatol 2002, 118:589-594）。培養ヒト角化細胞の分化の間にβＥＮａＣ発現が増加することが報告された（Brouard M, Casado M, Djelidi S, Barrandon Y, Farman N: Epithelial sodium channel in human epidermal keratinocytes: expression of its subunits and relation to sodium transport and differentiation, J Cell Sci 1999, 112 ( Pt 19):3343-3352）。また、ＥＮａＣ阻害剤がコンフルエントな角化細胞単層においてドームの形成を減少させたことが観察された（Brouard M, Casado M, Djelidi S, Barrandon Y, Farman N: Epithelial sodium channel in human epidermal keratinocytes: expression of its subunits and relation to sodium transport and differentiation, J Cell Sci 1999, 112 (Pt 19):3343-3352）。結果として、これらのデータから、十分に解明されてはいないが、ＥＮａＣが上皮においてある役割を担っている可能性があることが示唆される。上皮は、また、アルドステロン感受性上皮においてＥＮａＣ活性を変化させるシグナル伝達系に属するいくつかのセリンプロテアーゼを高レベルで発現している。マトリプターゼ（ＭＴ／ＳＰ１又はＣａｐ３とも呼ばれる）は、不活性型プロスタシン（Ｃａｐ１又はＰＲＳＳ８）を開裂して、ＥＮａＣを活性化する活性プロテアーゼにする。興味深いことに、ＥＮａＣ活性化セリンプロテアーゼＣａｐ１のノックアウトは、皮膚バリア透過性に深刻な障害をもたらし、Ｃａｐ３ノックアウトは、また、表皮バリア機能を低下させる。しかし、創傷治癒にＥＮａＣが関与する可能性についての情報はない。
【００８２】
本発明者らは、ＥＮａＣの発現とその主な制御因子がＭＲの過剰発現により変化しうるかどうかを調べるためにＫ５−ＭＲマウスモデルを用いた。対照及びＫ５−ＭＲ新生児由来の皮膚試料について、遺伝子発現のリアルタイムＰＣＲ解析を実施した。本発明者らにより、上皮におけるＭＲの過剰発現がＥＮａＣの３つのサブユニット全てで皮膚のｍＲＮＡ発現を増加させたが、一方で、ｓｇｋ１、Ｃａｐ１及びＣａｐ３レベルは、対照マウスのレベルと同程度であったことが示された。この異常な発現パターンは、妊娠マウスがカンレノ酸を摂取した場合に弱まることから、Ｋ５−ＭＲ仔の上皮におけるＥＮａＣ発現の増加が、ＭＲ活性によるものであることが示される。
【００８３】
実施例３：角膜の創傷治癒におけるＭＲ／アルドステロンの役割：
上皮と同様に、角膜上皮は多層化したマルピーギ（malphigian）上皮である。これはいくつかの細胞層から形成されており、最終分化プログラムに進入するとき表面へ徐々に移動する基底増殖細胞を有する。本発明者らは、最近、マウス及びラットの角膜上皮において、免疫組織化学により上皮の基底層に位置している鉱質コルチコイド受容体を同定した。また、本発明者らは、アルドステロンがラットの角膜においてイオン／水チャネルの発現を制御することを示す予備データを持っている。皮膚との類似性から、角膜のＭＲが角膜上皮の創傷治癒に関与しうることを予測することができる。
【００８４】
参考文献：
本願全体を通して、様々な参考文献により本発明が関連する最新技術が記載されている。これらの参考文献の開示は、参照することにより本開示に包含される。
【国際調査報告】
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2013528636.tif 000013
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