(57)【要約】  第４世代イムノアッセイデバイスは、第一、第二、第三、及び第四の水平流路を画定する第一、第二、第三、及び第四の吸着剤又は吸湿性材料を含む。第一及び第二の流路は、第一及び第二のコンジュゲートの移動用である一方で、第三及び第四の流路は、液体サンプルの移動用である。一又は複数の異なる抗体の存在を検出するための第一の試験領域は、第一及び第三の流路の合流部に位置し、一又は複数の異なる抗原の存在を検出するための第二の試験領域は、第二及び第四の流路の合流部に位置する。ハウジングは、任意で、サンプルを受容するための開口部、バッファ溶液、受容するための一若しくは複数の開口部、又はコンジュゲート−バッファのサブ複合体とともに吸着材料に提供される。ハウジングはまた、検出領域の上部に観察窓を有してもよい。
2013519899.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプルを試験するためのイムノアッセイデバイスであって、
第一、第二、第三及び第四の水平流路を画定する第一、第二、第三及び第四の吸着剤又は吸湿性材料を含み、ここで、第一及び第二の流路は、第一及び第二のコンジュゲートの移動を提供し、第三及び第四の流路は、サンプルの移動を提供し、ここで、サンプル中の一つ又は複数の異なる抗体の存在を検出するための第一の試験領域が、第一及び第三の流路の合流部に位置し、サンプル中の一つ又は複数の異なる抗原の存在を検出するための第二の試験領域が、第二及び第四の流路の合流部に位置する、イムノアッセイデバイス。
【請求項２】
前記第一、第二、第三、及び第四の吸着剤又は吸湿性材料を含むハウジングであって、サンプルを受容するための第一のホール、及び前記第一及び第二のコンジュゲートの移動を引き起こす液体を受容するための少なくとも一つの第二のホールを有するハウジングを更に含む、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項３】
前記の少なくとも一つの第二のホールが、一つの第二のホールである、請求項２に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項４】
前記の第一及び第二の吸着剤又は吸湿性材料が、互いに一体である、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項５】
前記第三及び第四の吸着剤又は吸湿性材料が、互いに一体である、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項６】
前記第一、第二、第三、及び第四の吸着剤又は吸湿性材料が、「Ｈ」形状及び「Ａ」形状のうちの何れかの形状で配置される、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項７】
前記第一の試験領域が、複数の異なる抗体の存在を検出するための複数の検出ラインを含む、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項８】
前記第二の試験領域が、複数の異なる抗原の存在を検出するための複数の検出ラインを含む、請求項７に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項９】
前記第一の吸着剤又は吸湿性材料が第一の孔径を有し、前記第二の吸着剤又は吸湿性材料が第二の孔径を有し、前記第二の孔径が、前記第一の孔径よりも大きい、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１０】
前記第三の吸着剤又は吸湿性材料が第三の孔径を有し、前記第三の孔径が、前記第二の孔径よりも大きい、請求項９に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１１】
前記第一の試験領域が、ＨＩＶ抗原を含む第一の試験ラインを含み、前記第二の試験領域が、ＨＩＶ抗体を含む第二の試験ラインを含む、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１２】
前記第一の試験領域が、ＩｇＭ抗体を含む第一の試験ラインを含み、前記第二の試験領域が、ＩｇＧ抗体を含む第二の試験ラインを含み、前記第一のコンジュゲートが、マーカーとともにデング抗原を含む、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１３】
前記第二の試験領域が、デング抗体を含む第三の試験ラインを含む、請求項１２に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１４】
前記第一の試験領域が、ＨＩＶ抗原又は合成ペプチドを含む第一の試験ライン、及びＴＢ抗原を含む第二の試験ラインを含み、前記第二の試験領域が、ＨＩＶ抗体を含む第三の試験ライン、及びリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）抗体を含む第四の試験ラインを含む、請求項１に記載のイムノアッセイデバイス。
【請求項１５】
前記第二のコンジュゲートが、第一のマーカーとコンジュゲート化した抗−ＨＩＶ．Ｐ２４モノクローナル又はポリクローナル抗体、及び第二のマーカーとコンジュゲート化したＬＡＭ抗体のコンジュゲートの混合物を含む、請求項１４に記載のイムノアッセイデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００９年２月１６日に出願された米国仮出願第６１／３３８，３０３号、及び２０１０年１２月１０日に出願された米国出願第１２／９６５，２５８号に対する優先権を主張する。
【０００２】
この発明は、イムノアッセイデバイス及びそれらの使用のための方法に広く関する。より具体的には、この発明は、体液中のリガンドの検出のためのクロマトグラフィー迅速試験ストリップに関する。さらにより具体的には、この発明は、臨床診断目的のための抗原及び抗体の同時検出を可能にする「第４世代アッセイ」に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの種類のリガンド−受容体アッセイは、体液、例えば血液、尿、又は唾液中の、一般的にはしばしばリガンドと呼ばれる様々な物質の存在を検出するために用いられる。これらのアッセイは、抗原抗体反応、放射性の、酵素的に、蛍光の、又は視覚的に観察可能なポリスチレン又は金属ゾルタグを含む合成コンジュゲート、及び特別にデザインされた反応チャンバーを含む。これらの全てのアッセイでは、選択されたリガンド又は抗原に特異的である受容体、例えば抗体、並びにリガンド−受容体反応生成物の存在、及び場合によっては量を検出するための手段が存在する。いくつかの試験は、定量的な測定を行なうためにデザインされるが、多くの場合、必要とされるのは陽性／陰性の定性的な指標のみである。斯かる定性的なアッセイの例としては、血液型の判定、多くの種類の検尿、妊娠検査、及びＡＩＤＳ検査が挙げられる。これらの検査のために、視覚的に観察可能な指標、例えば凝集又は色変化の出現は好ましい。
【０００４】
対象のリガンドの試験溶液中のしばしば低い濃度のために、定性的なアッセイであっても、非常に高感度でなければならない。擬陽性はまた、特に凝集、及び他の迅速な検出方法、例えばディップスティック（dipstick）及び色変化試験を併用する場合、問題を生じる場合がある。これらの問題のために、いわゆる「サンドイッチ」アッセイ、及び金属ゾル又は他の種類の着色された粒子を用いる他の高感度な検出機構は開発されている。
【０００５】
「サンドイッチ」アッセイでは、標的検体、例えば抗原は、標識された抗体と固体支持体上に固定化された抗体との間で「サンドイッチ」される。アッセイは、結合した抗原−標識された抗体複合体の存在及び／又は量を観察することにより読み取られる。「競合」イムノアッセイでは、固体表面に結合した抗体を、未知の量の抗原検体を含むサンプルと、及び同様の種類の標識された抗原と接触させる。固体表面上に結合した標識された抗原の量はその後測定され、サンプル中の抗原検体の量の間接的な量は与えられる。
【０００６】
これらの及び他のアッセイが抗体及び抗原の双方を検出し得るので、それらは、一般的に、免疫化学的なリガンド−受容体アッセイ、又は単純にイムノアッセイと称される。
【０００７】
固相イムノアッセイデバイスは、サンドイッチ型又は競合型であろうとなかろうと、生体液体サンプル、例えば血液、尿、又は唾液中の検体の高感度な検出を提供する。固相イムノアッセイデバイスは、リガンド−受容体対の一つのメンバー、通常、抗体、抗原、又はハプテンが結合する固体支持体を包含する。固体支持体の一般的な初期の形態は、ラジオイムノアッセイ及び酵素イムノアッセイの分野でよく知られているプレート、チューブ、又はポリスチレンビーズであった。ここ１０年、多数の多孔質材料、例えば、ナイロン、ニトロセルロース、酢酸セルロース、ガラスファイバー、及び他の多孔質ポリマーは、固体支持体として用いられている。
【０００８】
免疫化学成分、例えば抗原、ハプテン、又は抗体の固相担体として多孔質材料を用いる多数の内蔵型のイムノアッセイキットは、記載されている。これらのキットは、デザインにおいて、通常、ディップスティック、フロースルー、又は移動である。
【０００９】
家庭用妊娠及び排卵検出キットにより分類されるようなディップスティックアッセイのより一般的な形態では、免疫化学成分、例えば抗原は、固相に結合される。アッセイデバイスは、インキュベーションのために、未知の抗原検体を含むことが疑われるサンプルに「浸される（dipped）」。酵素標識された抗体は、同時に、又はインキュベーション期間後のいずれかに添加される。デバイスはその後洗浄され、酵素の基質を含む第二溶液に入れられる。酵素標識は、存在する場合、基質と相互作用し、固相上に沈着物として堆積する、又は基質溶液中に可視的な色変化を生成する、着色された生成物の形成を引き起こす。
【００１０】
フロースルー型イムノアッセイデバイスは、試験紙アッセイに付随する、長時間のインキュベーション及び面倒な洗浄ステップの必要性を取り除くために、デザインされた。Valkirsらの米国特許第４，６３２，９０１号明細書は、液体サンプルが添加される多孔質膜又はフィルターに結合する抗体（標的抗原検体に特異的な）を含むデバイスを開示する。液体が膜を流れる間に、標的検体は抗体と結合する。サンプルの添加に続いて、標識された抗体は添加される。標識された抗体の可視的な検出は、サンプル中の標的抗原検体の存在の指標を提供する。
【００１１】
Koromらの欧州特許出願公開第０２９９３５９号明細書は、標識された抗体が試薬送達システムとして作用する膜に組み込まれるフロースルーデバイスにおけるバリエーションを開示する。
【００１２】
ディップスティック型及びフロースルー型イムノアッセイデバイスに伴う複数の添加及び洗浄ステップの要求は、最小限に訓練された個人及び家庭の使用者が誤りのあるアッセイ結果を得る可能性を増加させる。
【００１３】
移動型アッセイでは、膜に、アッセイを実行するために必要とされる試薬が染み込んでいる。標識された検体が結合する、及び兆候が読まれる検体検出ゾーンは、提供される。例えば、Tomらの米国特許第４，３６６，２４１号明細書、及びZukらの米国特許第４，５９６，２７５号明細書を参照のこと。移動型アッセイの感度は、しかしながら、標識された検体の検出ゾーンまでの経路が遮断されるサンプル中における望ましくない固体成分の存在又は形成により、しばしば減少する。アッセイ感度はまた、移動アッセイデバイスが多すぎる液体サンプルで溢れた場合、減少する。
【００１４】
移動アッセイデバイスは、通常、それらの中に、着色された標識に結合される試薬（即ち、コンジュゲート）を含み、それ故、さらなる物質を添加することなく、アッセイ結果の視覚的な検出を可能にする。例えば、Bernsteinの米国特許第４，７７０，８５３号明細書を参照のこと。斯かる標識としては、例えばLeuveringによる米国特許第４，３１３，７３４号明細書に記載される金ゾル粒子、例えばGribnauらによる米国特許第４，３７３，９３２号明細書に記載される染料ゾル粒子、例えばMayらによる国際公開第８８／０８５３４号に記載される染色されたラテックス、及び例えばCampbellらの米国特許第４，７０３，０１７号明細書によるリポソーム中のカプセル化染料等が挙げられる。これらの着色された標識は、好適である固定化方法の観点において、一般的に限られている。さらに、それらは比較的大量のリガンド分子を要求し、高価な試薬を含み得、従って、コストを増加させる。
【００１５】
つい近年、「第４世代」迅速検出イムノアッセイデバイスは導入されている。「第４世代」デバイスは、特定の疾患のための抗原及び抗体の双方を検出することを意図する。しかしながら、「第４世代」デバイスは、前述のデバイスの同様の問題に悩まされる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、検体がコンジュゲートを運ぶバッファと異なる経路を通って移動する、第４世代迅速検出イムノアッセイデバイスを提供する。本発明のイムノアッセイデバイスは、少ないサンプル容量を用いつつ、高感度であり、正確な結果を提供する。本発明のデバイスは、体液の様々な種類で用いられてもよく、多数の様々な疾患の検出との併用に有用である。
【００１７】
下記で詳細に述べられるこれらの目的に従って、乾燥及び液体の双方のコンジュゲートイムノアッセイデバイスシステムは提供される。本発明のシステムは、バッファ溶液を受容する第一のバッファ受容位置、及び第一のバッファ溶液のための第一の水平流路を画定する第一の吸着材料、第一のバッファ受容位置又は第二のバッファ受容位置に提供される同一又は異なるバッファ溶液のための前記第一の水平流路と異なる第二の水平流路を画定する第二の吸着材料、サンプル受容位置において提供されるサンプルのための第三の水平流路を画定する第三の吸着材料（前記第三の水平流路は、前記第一及び第二の水平流路と異なる）、サンプル受容位置において提供されるサンプルのための第四の水平流路（前記第四の水平流路は、前記第一、第二、及び第三の水平流路と区分される（distinct））、第一と第三の吸着材料の合流点における第一の試験ゾーンに位置する固定化された抗原又は抗体の一つを含む第一の試験ライン又は部位、及び第二と第四の吸着材料の合流点における第二の試験ゾーンに位置する固定化された抗原又は抗体の他方を含む第二の試験ライン又は部位、を有する試験セルを含む。本明細書の目的において、用語「区分される」（distinct）は、語句「流路」又は「移動経路」と併せて用いる場合、「（ｉ）試験ゾーンを介した連結、又は（ｉｉ）バッファ受容又はサンプル受容位置における連結のいずれかを除いて、流体連結にないこと」を意味すると理解するべきである。
【００１８】
本発明の試験セルがハウジングで提供される場合、ハウジングには、第一のバッファ受容位置に隣接した第一の開口部、及びサンプル受容位置に隣接したサンプル受容開口部が提供される。第二のバッファ受容位置が用いられる場合、第二のバッファ受容開口部は、ハウジングの第二のバッファ受容位置に隣接して提供される。第一の観察窓は、ハウジングの第一の試験ラインの上部に提供され、第二の観察窓は、ハウジングの第二の試験ラインの上部に提供される。
【００１９】
本発明の好ましい実施形態では、第三の吸着材料及び第四の吸着材料は、単一のサンプル受容パッドと連結する別の部分である。あるいは、必要に応じて、第三及び第四の吸着材料は、互いに一体化することができる。また、本発明の好ましい実施形態では、第一の吸着材料及び第二の吸着材料は、同一のバッファ受容パッド又は二つの異なるバッファ受容パッドと連結し得る別の部分である。しかしながら、必要に応じて、単一のバッファ受容パッドが用いられる実施形態では、第一及び第二の吸着材料は、互いに一体化することができる。好ましい実施形態では、対照ライン又は部位は、各試験部位に隣接して提供される。
【００２０】
本発明の一つの実施形態では、第一、第二、第三、及び第四の吸着物質の材料、厚み、及び長さは、試験部位に達する液体サンプル及び液体バッファに関するタイミングを調節するために選択される。
【００２１】
本発明の乾燥コンジュゲートシステムでは、第一の乾燥コンジュゲートは、第一の開口部と試験部位との間に提供される。第一の乾燥コンジュゲートは、バッファが第一の開口部に添加される場合に、バッファにより第一の試験部位に運ばれる第一のコンジュゲートまで、第一の吸着材料がバッファを導くように、第一の吸着材料上に、又は内に支持される。第二の乾燥コンジュゲートは、同様に、バッファが第一の又は（提供される場合）第二の開口部に添加される場合に、バッファにより第二の試験部位に運ばれる第二のコンジュゲートまで、第二の吸着材料がバッファを導くように、第二の吸着材料上に、又は内に支持される。本発明の液体コンジュゲートシステムでは、第一のバッファ−コンジュゲート液体サブシステムは提供され、第一の開口部に適用される。第一の吸着材料は、その後、第一のバッファ−コンジュゲートサブシステムを第一の試験部位に導く。第二のバッファ−コンジュゲート液体サブシステムは、提供され、第二の開口部に適用される。第二の吸着材料は、その後、第二のバッファ−コンジュゲートサブシステムを第二の試験部位に導く。
【００２２】
本発明のシステムは、様々な種類のサンプル、例えば血液、尿、唾液、及び糞便とともに用いられ得、任意のリガンドの存在について試験するために用いられ得ることは、理解される。血液、唾液又は糞便が提供される場合、血液、唾液又は糞便は、サンプル受容ホールを通して添加される前に、希釈、又はバッファと混合されてもよい。あるいは、場合によっては、サンプルを、サンプル受容ホールを通して添加してもよく、その後希釈液を同一のホールを通して添加してもよい。
【００２３】
本発明の試験セルが、比較的大きな検体、例えば細菌又は凝集したウイルスのための従来のクロマトグラフィーイムノアッセイにおける重要な問題である、サンプル中のコンジュゲート（単数又は複数）と検体の間の凝集（aggregation）／凝集（agglutination）を克服するので、本発明の試験セルは、先行技術よりも有利である。特に、従来のクロマトグラフィーイムノアッセイでは、細菌とコンジュゲート化した抗体との複合体は、試験ライン（単数又は複数）までの移動が困難性であり、試験ストリップの底部、又はパッドに残りやすいという傾向がある。この発明では、検体がそのそれ自身の経路を介して試験部位に適用される一方で、コンジュゲートはそれら自身により移動するので、サンプルが試験部位（単数又は複数）に達するまで、検体とコンジュゲートとの複合体結合は存在しない。結果として、本発明のシステムは、極めて高感度であり、特異的である。
【００２４】
本発明のさらなる目的及び有利な点は、提供される図面と併せて与えられる詳細な説明への参照に際し、当業者に明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、本発明の第一の実施形態の平面図である。
【００２６】
【図１Ａ】図１Ａは、図１の第一の実施形態の抗体試験部分の概略図である。
【００２７】
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１の第一の実施形態の抗原試験部分の概略図である。
【００２８】
【図２】図２は、ハウジング中に含まれる本発明の第一の実施形態の平面図である。
【００２９】
【図３】図３は、本発明の第二の実施形態の概略平面図である。
【００３０】
【図４】図４は、ハウジング中に含まれる本発明の第二の実施形態の平面図である。
【００３１】
【図５】図５は、デング熱抗体及び抗原のための試験に適合し、ハウジング中に含まれる、本発明の第二の実施形態の平面図である。
【００３２】
【図６】図６は、ＨＩＶ及び結核の抗体及び抗原のための試験に適合し、ハウジング中に含まれる、本発明の第二の実施形態の平面図である。
【００３３】
【図７】図７は、複数の抗体及び抗原のための試験に適合し、ハウジング中に含まれる、本発明の第二の実施形態の平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
次に図１、１Ａ及び１Ｂを見てみると、第４世代イムノアッセイ試験デバイス４１０は提供される。試験デバイス４１０は、ＨＩＶ１／２抗体及びＰ２４抗原を試験するための試験デバイスとして示され（即ち、ＨＩＶ検出デバイスである）、下記の図５〜７に関して述べられるが、多くの他の種類の抗体／抗原試験は、本発明を用いて提供されてもよい。試験デバイス４１０は、示されるように、第一、第二、第三、及び第四の水平流路を画定する第一、第二、第三、及び第四の吸着剤又は吸湿性材料４１２ａ、４１２ｂ、４１４ａ、４１４ｂを含む。第一の吸着材料４１２ａは、少なくとも２つ、好ましくは３つ又は４つのゾーンを好ましくは含み、複数の材料から作られてもよい。第一のゾーン４３１ａ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、ストリップ４１２ａの第一の末端に位置し、第二の吸着材料４１４ａとの合流点に位置する第二のゾーン４３３ａ（試験ゾーンと呼ぶ場合もある）まで伸びる。第一のゾーン４３１ａは、付属のフィルター（図示せず）を構成しても、又は有してもよく、或いは、付属の着色マーカーとともに所望の抗原（例えばプロテインＡ）を有するコンジュゲート４３９ａを有してもよい。コンジュゲート４３９ａは、第一のゾーン４３１ａ上に配置及び固定化されるか、或いは、第一のゾーン４３１ａ上に設けられたコンジュゲートパッド（図示せず）上に配置及び固定化される。第一の吸着材料は、典型的には、プラスチックバッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる、吸着剤又は吸湿性材料の薄膜を構成してもよい。第一のゾーン４３１ａは、バッファ溶液を受容し、バッファ溶液をコンジュゲートと接触させ、従って、コンジュゲートを動かし、コンジュゲートを運ぶバッファ溶液を第二のゾーン４３３ａに導くように適合される。第二の（試験）ゾーン４３３ａは、好ましくは、当該技術分野においてよく知られているように、膜上に固定化された抗原を有する試験ライン４５０ａ（図１Ａ）が印刷された薄膜の第二の部分を含む。薄膜の第三の部分を含む任意の第三のゾーン４３５ａ（対照ゾーンと呼ぶ場合もある）はまた、当該技術分野においてよく知られているように、典型的に、コンジュゲート抗原に対する抗体を含む対照ライン４６０ａ（図１Ａ）が印刷されてもよい。必要であれば、任意の第四のゾーン４３７ａ（リザーバーゾーンと呼ぶ場合もある）は、当該技術分野においてよく知られているように、導く（wicking）リザーバーとして提供されてもよい。第四のゾーン４３７ａは、比較的厚い吸収性紙（図示せず）を含んでもよい。好ましくは、下層の及び／又は覆っている全てのゾーンは、所定の位置に吸着材料を維持する接着剤を有する、薄い、好ましくは、透明なプラスチックフィルム又はカード（図示せず）である。カードは、第一の吸着剤ストリップ４１２ａへの液体アクセスを妨げないように、ストリップ４１２ａの末端における開口部で切断されてもよい。
【００３５】
第二の吸着材料４１２ｂは、同様に、好ましくは、少なくとも２つ、好ましくは、３つ又は４つのゾーンを含み、同様に、複数の材料から作られてもよい。第一のゾーン４３１ｂ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、ストリップ４１２ａの第一の末端に位置し、第二の吸着材料４１４ｂとの合流点に位置する第二のゾーン４３３ｂ（試験ゾーンと呼ぶ場合もある）まで伸びる。第一のゾーン４３１ｂは、付属のフィルター（図示せず）を構成しても、又は有してもよく、或いは、付属の着色マーカーとともに、所望の抗体を有するコンジュゲート４３９ｂを有してもよい。コンジュゲート４３９ｂは、第二のゾーン４３１ｂ上に配置及び固定化されるか、或いは、第二のゾーン４３１ｂ上に設けられたコンジュゲートパッド（図示せず）上に配置及び固定化される。第一の吸着材料は、典型的には、プラスチックバッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる、吸着剤又は吸湿性材料の薄膜を構成してもよい。第一のゾーン４３１ｂは、バッファ溶液を受容し、バッファ溶液をコンジュゲートと接触させ、従って、コンジュゲートを動かし、コンジュゲートを運ぶバッファ溶液を第二のゾーン４３３ｂに導くように適合される。第二の（試験）ゾーン４３３ｂは、好ましくは、当該技術分野においてよく知られているように、膜上に固定化されたＰ２４抗体を有する試験ライン４５０ｂ（図１Ｂ）が印刷される薄膜の第二の部分を含む。薄膜の第三の部分を含む任意の第三のゾーン４３５ｂ（対照ゾーンと呼ぶ場合もある）はまた、当該技術分野においてよく知られているように、典型的に、抗−マウス抗体（コンジュゲート４３９がマウス抗体を用いる場合）を含む対照ライン４６０ｂ（図１Ｂ）が印刷されてもよい。必要であれば、任意の第四のゾーン４３７ｂ（リザーバーゾーンと呼ぶ場合もある）は、当該技術分野においてよく知られているように、導くリザーバーとして提供されてもよい。第四のゾーン４３７ｂは、比較的厚い吸収性紙（図示せず）を含んでもよい。好ましくは、下層の及び／又は覆っている全てのゾーンは、所定の位置に吸着材料を維持する接着剤を有する薄い、好ましくは、透明なプラスチックフィルム又はカード（図示せず）である。カードは、第一の吸着剤ストリップ４１２ｂへの液体アクセスを妨げないように、ストリップ４１２ｂの末端における開口部で切断されてもよい。
【００３６】
第三の吸着材料４１４ａは、複数の材料から作られてもよく、好ましくは、２つのゾーン４６１ａ、４６３ａを含む。第一のゾーン４６１ａ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、フィルター又はパッド（図示せず）、及び典型的に、バッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる薄膜、又は吸着剤若しくは吸湿性材料の第一の部分を含んでもよい。第一のゾーン４６１ａは、その第一の末端においてサンプルを受容することを意図し、第一のゾーンは、第二のゾーン４６３ａまで伸びる。第二のゾーン４６３ａは、第一の吸着材料４１２ａの第二のゾーン４３３ａと接触する薄膜の第二の部分を含む。図１及び１Ａに提案されるように、第一の吸着材料４１２ａ及び第三の吸着材料４１４ａは、膜が互いに接触し（それらは合流部を形成する）、試験ライン４５０ａが膜間に効率的に位置するように（膜と接触するバッキングに対向して、又は互いに）配置される。従って、試験ライン４５０ａは、第一の吸着材料４１２ａの第二のゾーン４３３ａの代わりに、又は加えて、第三の吸着材料４１４ａの第二のゾーン４６３ａ上に印刷されてもよい。必要に応じて、所定の位置に第三の吸着材料を維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルム、又はカード（図示せず）は用いられてもよい。
【００３７】
第四の吸着材料４１４ｂはまた、複数の材料から作られてもよく、好ましくは、２つのゾーン４６１ｂ、４６３ｂを含む。第一のゾーン４６１ｂ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、フィルター又はパッド（図示せず）、及び典型的に、バッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる薄膜、又は吸着剤若しくは吸湿性材料の第一の部分を含んでもよい。第一のゾーン４６１ｂは、その第一の末端においてサンプルを受容することを意図し、第一のゾーンは、第二のゾーン４６３ｂまで伸びる。第二のゾーン４６３ｂは、第二の吸着材料４１２ｂの第二のゾーン４３３ｂと接触する薄膜の第二の部分を含む。図１及び１Ｂに提案されるように、第二の吸着材料４１２ｂ及び第四の吸着材料４１４ｂは、膜が互いに接触し（膜と接触するバッキングに対向して、又は互いに）、試験ライン４５０ｂが膜間に効率的に位置するように、配置される。従って、試験ライン４５０ｂは、第二の吸着材料４１２ｂの第二のゾーン４３３ｂの代わりに、又は加えて、第四の吸着材料４１４ｂの第二のゾーン４６３ｂ上に印刷されてもよい。必要に応じて、所定の位置に第三の吸着材料を維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルム、又はカード（図示せず）は用いられてもよい。
【００３８】
吸着材料４１２ａ、４１２ｂ、４１４ａ、４１４ｂが、バッキングを有する標準型ニトロセルロース膜から作られる場合、サンプル移動及びバッファ−コンジュゲート移動膜が異なる孔径を有することは望ましい。例えば、ストリップ４１２ａ（コンジュゲート移動用）が３μの孔径を有し、膜４１４ａ（サンプル移動用）が１５μの孔径を有する場合、膜４１４ａに適用されるサンプルは、サンプル膜４１４ａ中で、移動し、留まる傾向があり、コンジュゲート膜４１２ａ中で移動する傾向にない。さらに、膜４１２ａ及び４１２ｂが、異なる孔径を有することは、望ましい。従って、例えば、抗体コンジュゲートを運ぶ膜は、抗原コンジュゲートを運ぶ膜よりも大きくてもよい。
【００３９】
図１に見られるように、４つの吸着材料は、「Ｈ」の側面を形成する第一及び第二の吸着材料、並びに「Ｈ」の中央の横棒を形成する第三及び第四の吸着材料を有する「Ｈ」形状を想定する。４つの吸着材料は、他の配置にレイアウトされてもよいことは理解される。
【００４０】
次に図２を見てみると、図１、１Ａ、及び１Ｂの試験デバイス４１０は、ハウジング４７０内に提供されてもよいことは理解される。ハウジング４７０は、サンプル（及び必要であればバッファ）を受容するためのサンプル受容ホール４７１、及び二つのバッファ受容ホール４７２ａ、４７２ｂが提供される。ホール４７１は、ホール４７１に置かれたサンプルが、吸着剤ストリップ４１４ａ及び４１４ｂの双方の上を流れるように、吸着剤ストリップ４１４ａ、４１４ｂの第一のゾーン４６１ａ、４６１ｂの真上に位置する。同様に、ホール４７２ａ、４７２ｂは、ホール４７２ａ、４７２ｂに置かれたバッファが、それぞれの吸着剤ストリップ４１２ａ、４１２ｂの上を流れるように、吸着剤ストリップ４１２ａ、４１２ｂの第一のゾーン４３１ａ、４３１ｂの真上に位置する。加えて、ハウジング４７０は、窓４７５ａ、４７５ｂが提供される。窓４７５ａ、４７５ｂは、試験ラインを、窓を通して見ることできるように、それぞれ試験ライン４５０ａ、４５０ｂの上部に位置する。必要であれば、窓は、透明なプラスチックで構成されてもよい。第三のゾーン４３５ａ、４３５ｂが提供される場合、窓４７５ａ、４７５ｂは、好ましくは、それぞれの対照ライン４６０ａ、４６０ｂの上部まで拡張される。
【００４１】
同一のサンプルが、吸着材料４１４ａ、４１４ｂに提供されるので、吸着材料４１４ａ、４１４ｂは任意で単一の（一体化した）部材から作られてもよいことは理解されるべきである。必要であれば、サンプル受容パッド（図示せず）は、サンプルを受容し、吸着材料４１４ａ及び４１４ｂを構成する単一の部材、又は個別の部材にサンプルを提供するために提供されてもよい。
【００４２】
図１のイムノアッセイ４１０は、好ましくは、次の通りに用いられる。最初に、抗体及び／又は抗原を場合により含む所望の量のサンプル（例えば１０マイクロリットル−図示せず）は、第三及び第四の吸着材料４１４ａ、４１４ｂに提供され（ハウジング４７０が用いられる場合、ホール４７１を通して）、第三及び第四の吸着材料４１４ａ、４１４ｂを通ってそれらのそれぞれの第二のゾーン４６３ａ、４６３ｂに移動され、それは、第一及び第二の吸着材料４１２ａ、４１２ｂの第二のゾーン４３３ａ、４３３ｂとそれぞれ接触する。任意で、サンプルを第三及び第四の吸着材料に提供後、好ましくは測定された量の液体、例えばバッファ溶液は、サンプルの移動を助けるために、（ハウジング４７０が用いられる場合、ホール４７１を通して）添加されてもよい。添加されるバッファの量は、用いられるサンプルの種類（例えば血液、尿、唾液等）に依存してもよい。いずれにしても、サンプルは、第一及び第二の吸着材料の第二のゾーン４３３ａ、４３３ｂの上に印刷される、又はそれらの中に注入される試験ライン４５０ａ、４５０ｂに到達する。サンプル中のＨＩＶ抗体（存在する場合）が試験ライン４５０ａに固定化されたＨＩＶ抗原と結合する機会を有し、サンプル中のＨＩＶ抗原（存在する場合）が試験ライン４５０ｂにおいて固定化されたＨＩＶ  Ｐ２４抗体と結合する機会を有する所望の時間後、好ましくは、測定された量の液体、例えばバッファ溶液（図示せず）は、第一及び第二の吸着材料４１２ａ、４１２ｂに添加される（ハウジング４７０が用いられる場合、ホール４７２ａ、４７２ｂを通して）。異なる種類のバッファ溶液がそれぞれのホールを通って添加されてもよく、それにより、最適化されたシステムの感度を可能にすることは注目すべきである。コンジュゲート４３９ａ、４３９ｂが試験部位４５０ａ、４５０ｂ（及び対照部位４６０ａ、４６０ｂ、提供される場合）まで移動することを可能にする十分な別の期間後、試験部位４５０ａ、４５０ｂ（及び対照部位４６０ａ、４６０ｂ、提供される場合）は、サンプルが「陽性」であるかないかを決定するために（ハウジング４７０が用いられる場合、窓４７５ａ、４７５ｂを介して）、検査される。典型的に、試験部位４５０ａ及び対照部位４６０ａの双方が色のラインを示す場合、サンプル中のＨＩＶ１又はＨＩＶ２抗体の存在を示す「陽性」試験は得られる。対照部位４６０ａのみが色のラインを示す場合、サンプル中の抗体の不存在を示す「陰性」試験は得られる。同様に、試験部位４５０ｂ及び対照部位４６０ｂの双方が色のラインを示す場合、サンプル中のＨＩＶｐ２４抗原の存在を示す「陽性」試験は得られる一方で、対照部位４６０ｂのみが色のラインを示す場合、サンプル中のｐ２４抗原の不存在を示す「陰性」試験は得られる。
【００４３】
本発明の方法は、ホール４７１がサンプルを受容するためのものであり、最初に用いられるものであり、ホール４７２ａ、４７２ｂがバッファ溶液受容するためのものであり、二番目に用いられるものでありことを示すための番号付け及び／又は文字付けを含むハウジング４７０を提供することにより、速く処理されてもよい。
【００４４】
当業者は、イムノアッセイ４１０が以下のように機能することを理解する。試験ライン４５０ａには、膜上に固定化された抗原が供給されるので、試験サンプルが抗原に対する抗体を含む場合、抗体は、試験ラインにおいてそれら自身と抗原と結合する。その後、着色マーカーと結合した抗体に対する抗原を含むコンジュゲート４３９ａが、試験ラインまで移動する時、試験サンプルが試験ライン４５０ａにおいて直ちに拘束される抗体を含む場合、コンジュゲートの抗原は、それ自身と抗体と結合し、着色マーカーは、試験部位４５０ａに着色されたラインを出現させる。試験サンプルが抗体を含まない場合、コンジュゲートは、試験ライン４５０ａにおいて結合する抗体を有さず、着色されたラインは、試験部位４５０ａにおいて現われない。他方で、対照ライン４６０ａには抗体が提供されるので、コンジュゲートの抗原は、対照ライン４６０ａ中で抗体と常に結合し、コンジュゲートが対照部位４６０ａに達する場合、それにより、対照部位４６０ａにおいて着色されたラインを出現させる。従って、十分なバッファ溶液が試験セルに提供される場合、着色されたラインは対照部位４６０ａにおいて常に出現するべきであり、それにより、試験のための対照は提供される。同様に、試験ライン４５０ａには膜上に固定化された抗体が提供されるので、試験サンプルが抗体に対する抗原を含む場合、抗原は、試験ライン４５０ｂにおいてそれら自身と抗体と結合する。その後、着色マーカーと結合した抗原に対する抗体を含むコンジュゲート４３９ｂが、試験ラインまで移動する時、試験サンプルが試験ライン４５０ｂにおいて直ちに拘束される抗原を含む場合、コンジュゲート４３９ｂの抗体は、それら自身と抗原と結合し、着色マーカーは、試験部位４５０ｂに着色されたラインを出現させる。試験サンプルが抗原を含まない場合、コンジュゲートは、試験ライン４５０ｂにおいて結合する抗原を有さず、着色されたラインは、試験部位４５０ｂに現われない。他方で、対照ライン４６０ｂに、コンジュゲート中の抗体として異なる種類の中から選択される選択された抗体（例えばマウス抗体）が提供されるので、コンジュゲートの抗体は、対照ライン４６０ｂにおいて選択された抗体と常に結合し、コンジュゲートが対照部位４６０ｂに達する場合、それにより、対照部位４６０ｂにおいて着色されたラインを出現させる。従って、十分なバッファ溶液が試験セルに提供される場合、着色されたラインは、対照部位４６０ｂにおいて常に出現するべきであり、それにより、試験のための対照は提供される。
【００４５】
本発明の他の実施形態によれば、試験セル（例えば、吸着材料４１２ａ、４１２ｂ上）において付随する着色マーカーを含む所望の抗原又は抗体を有する乾燥コンジュゲート付着物４３９ａ、４３９ｂを提供する代わりに、試験セルは乾燥コンジュゲートを全く含まない。むしろ、（湿式）バッファ−コンジュゲートサブシステムは用いられる。従って、サンプルが吸着材料４１４ａ、４１４ｂ上に置かれた後、第一のバッファ−コンジュゲートサブシステム（抗原を含むコンジュゲートに加えてバッファを用いる）は、吸着材料４１２ａ上に置かれ、試験ライン４５０ａまで移動することを可能にする一方で、第二のバッファ−コンジュゲートサブシステム（抗体を含むコンジュゲートに加えてバッファを用いる）は、吸着材料４１２ｂ上に置かれ、試験ライン４５０ｂまで移動することを可能にする。
【００４６】
本発明のさらなる実施形態によれば、ハウジングの上部に提供される観察窓の代わりに、窓はハウジングの下部に提供される。
【００４７】
次に図３を見てみると、本発明の別の実施形態が見られる。示されるように、試験デバイス５１０は、第一、第二、第三、及び第四の水平流路を画定する第一、第二、第三、及び第四の吸着剤又は吸湿性材料５１２ａ、５１２ｂ、５１４ａ、５１４ｂを含む。第一の吸着材料５１２ａは少なくとも２つ、好ましくは、３つ、又は４つのゾーンを好ましくは含み、複数の材料から作られてもよい。第一のゾーン５３１ａ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、ストリップ５１２ａの第一の末端に位置し、第二の吸着材料５１４ａとの合流点に位置する第二のゾーン５３３ａ（試験ゾーンと呼ぶ場合もある）まで伸びる。第一のゾーン５３１ａは、付属のフィルター（図示せず）を構成しても、又は有してもよく、或いは、付属の着色マーカーとともに所望の抗原（例えばプロテインＡ）を有するコンジュゲート５３９ａを有してもよい。コンジュゲート５３９ａは、第一のゾーン５３１ａ上に配置及び固定化されるか、或いは、第一のゾーン５３１ａ上に設けられたコンジュゲートパッド（図示せず）上に配置及び固定化される。第一の吸着材料は、典型的には、プラスチックバッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる、吸着剤又は吸湿性材料の薄膜を構成してもよい。第一のゾーン５３１ａは、バッファ溶液を受容し、バッファ溶液をコンジュゲートと接触させ、従って、コンジュゲートを動かし、コンジュゲートを運ぶバッファ溶液を第二のゾーン５３３ａに導くように適合される。第二の（試験）ゾーン５３３ａは、好ましくは、当該技術分野においてよく知られているように、膜上に固定化された抗原を有する試験ライン５５０ａ（図４）が印刷される薄膜の第二の部分を含む。薄膜の第三の部分を含む任意の第三のゾーン５３５ａ（対照ゾーンと呼ぶ場合もある）はまた、当該技術分野においてよく知られているように、典型的にコンジュゲート抗原に対する抗体を含む対照ライン５６０ａ（図４）が印刷されてもよい。必要であれば、任意の第四のゾーン５３７ａ（リザーバーゾーンと呼ぶ場合もある）は、当該技術分野においてよく知られているように、導くリザーバーとして提供されてもよい。第四のゾーン５３７ａは、比較的厚い吸収性紙（図示せず）を含んでもよい。好ましくは、下層の及び／又は覆っている全てのゾーンは、所定の位置に吸着材料を維持する接着剤を有する薄い、好ましくは、透明なプラスチックフィルム又はカード（図示せず）である。カードは、第一の吸着剤ストリップ５１２ａへの液体アクセスを妨げないように、ストリップ５１２ａの末端における開口部で切断されてもよい。
【００４８】
第二の吸着材料５１２ｂは、同様に、少なくとも２つ、好ましくは、３つ又は４つのゾーンを好ましくは含み、同様に、複数の材料から作られてもよい。第一のゾーン５３１ｂ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、ストリップ５１２ｂの第一の末端に位置し、第二の吸着材料５１４ｂとの合流点に位置する第二のゾーン５３３ｂ（試験ゾーンと呼ぶ場合もある）まで伸びる。第一のゾーン５３１ｂは、付属のフィルター（図示せず）を構成しても、又は有してもよく、或いは、付属の着色マーカーとともに所望の抗体を有するコンジュゲート５３９ｂを有してもよい。コンジュゲート５３９ｂは、第一のゾーン５３１ｂ上に配置及び固定化されるか、或いは、第一のゾーン５３１ｂ上に設けられたコンジュゲートパッド（図示せず）上に配置及び固定化される。第一の吸着材料は、典型的には、プラスチックバッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる、吸着剤又は吸湿性材料の薄膜を構成してもよい。第一のゾーン５３１ｂは、バッファ溶液を受容し、バッファ溶液をコンジュゲートと接触させ、従って、コンジュゲートを動かし、コンジュゲートを運ぶバッファ溶液を第二のゾーン５３３ｂに導くように適合される。第二の（試験）ゾーン５３３ｂは、好ましくは、当該技術分野においてよく知られているように、膜上に固定化されたＰ２４抗体を有する試験ライン５５０ｂ（図４）が印刷される薄膜の第二の部分を含む。薄膜の第三の部分を含む任意の第三のゾーン５３５ｂ（対照ゾーンと呼ぶ場合もある）はまた、当該技術分野においてよく知られているように、典型的に抗−マウス抗体を含む対照ライン５６０ｂ（図４）が印刷されてもよい。必要であれば、任意の第四のゾーン５３７ｂ（リザーバーゾーンと呼ぶ場合もある）は、当該技術分野においてよく知られているように、導くリザーバーとして提供されてもよい。第四のゾーン５３７ｂは、比較的厚い吸収性紙（図示せず）を含んでもよい。好ましくは、下層の及び／又は覆っている全てのゾーンは、所定の位置に吸着材料を維持する接着剤を有する薄い、好ましくは、透明なプラスチックフィルム又はカード（図示せず）である。カードは、第一の吸着剤ストリップ５１２ｂへの液体アクセスを妨げないように、ストリップ５１２ｂの末端における開口部で切断されてもよい。
【００４９】
第一及び第二の吸着材料５１２ａ、５１２ｂは、それらが接触し得るように、カーブ又は角度を有する形状であることは理解される。後述のように、これは、バッファ（又はバッファに加えてコンジュゲートサブ複合体）が、図１及び２を参照して記述されるように、二つの位置よりはむしろ一つの位置に添加されることを許容する。従って、吸着材料５１４ａ、５１４ｂは、任意で単一の（一体化した）部材から作られる。
【００５０】
第三の吸着材料５１４ａは、複数の材料から作られてもよく、好ましくは、２つのゾーン５６１ａ、５６３ａを含む。第一のゾーン５６１ａ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、フィルター又はパッド（図示せず）、及び典型的に、バッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる薄膜又は吸着剤若しくは吸湿性材料の第一の部分を含んでもよい。第一のゾーン５６１ａは、その第一の末端においてサンプルを受容することが意図され、第一のゾーンは、第二のゾーン５６３ａまで伸びる。第二のゾーン５６３ａは、第一の吸着材料５１２ａの第二のゾーン５３３ａと接触する薄膜の第二の部分を含む。図３に提案されるように、第一の吸着材料５１２ａ及び第三の吸着材料５１４ａは、膜が互いに接触し（膜と接触するバッキングに対向して、又は互いに）、試験ライン５５０ａが膜間に効率的に位置するように配置される。従って、試験ライン５５０ａは、第一の吸着材料５１２ａの第二のゾーン５３３ａの代わりに、又は加えて、第三の吸着材料５１４ａの第二のゾーン５６３ａ上に印刷されてもよい。必要に応じて、所定の位置に第三の吸着材料を維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルム、又はカード（図示せず）は用いられてもよい。
【００５１】
第四の吸着材料５１４ｂは、複数の材料から作られてもよく、好ましくは、２つのゾーン５６１ｂ、５６３ｂを含む。第一のゾーン５６１ｂ（フィルターゾーンと呼ぶ場合もある）は、フィルター又はパッド（図示せず）、及び典型的に、バッキング（図示せず）を有するニトロセルロースからなる薄膜又は吸着剤若しくは吸湿性材料の第一の部分を含んでもよい。第一のゾーン５６１ｂは、その第一の末端においてサンプルを受容することが意図され、第一のゾーンは、第二のゾーン５６３ｂまで伸びる。第二のゾーン５６３ｂは、第二の吸着材料５１２ｂの第二のゾーン５３３ｂと接触する薄膜の第二の部分を含む。図１及び１Ｂに提案されるように、第二の吸着材料５１２ｂ及び第四の吸着材料５１４ｂは、膜が互いに接触し（膜と接触するバッキングに対向して、又は互いに）、試験ライン５５０ｂが膜間に効率的に位置するように配置される。従って、試験ライン５５０ｂは、第二の吸着材料５１２ｂの第二のゾーン５３３ｂの代わりに、又は加えて、第四の吸着材料５１４ｂの第二のゾーン５６３ｂ上に印刷されてもよい。必要に応じて、所定の位置に第三の吸着材料を維持する接着剤を有する薄いプラスチックフィルム、又はカード（図示せず）は用いられてもよい。
【００５２】
吸着材料５１２ａ、５１２ｂ、５１４ａ、５１４ｂが、バッキングを有する標準型ニトロセルロース膜から作られる場合、サンプル移動及びバッファ−コンジュゲート移動膜が異なる孔径を有することは望ましい。例えば、ストリップ５１２ａ（コンジュゲート移動用）が３μの孔径を有し、膜５１４ａ（サンプル移動用）が１５μの孔径を有する場合、膜５１４ａに適用されるサンプルは、サンプル膜５１４ａ中で、移動し、留まる傾向があり、コンジュゲート膜５１２ａ中で移動する傾向にない。
【００５３】
図３に見られるように、４つの吸着材料は、「Ａ」の側面を形成する第一及び第二の吸着材料、及び「Ａ」の中央の横棒を形成する第三及び第四の吸着材料を有する「Ａ」形状を想定する。４つの吸着材料は、他のアレンジメントにおいて、レイアウトされてもよい。
【００５４】
次に図４を見てみると、図３の試験デバイス５１０は、ハウジング５７０内で提供されてもよいことは理解される。ハウジング５７０には、サンプル（及び必要であればバッファ）を受容するためのサンプル受容ホール５７１、及び一つのバッファ受容ホール５７２が提供される。ホール５７１は、ホール５７１に置かれたサンプルが、吸着剤ストリップ５１４ａ及び５１４ｂの双方の上を流れるように、吸着剤ストリップ５１４ａ、５１４ｂの第一のゾーン５６１ａ、５６１ｂの真上に位置する。同様に、ホール５７２は、ホール５７２に置かれたバッファが、それぞれの吸着剤ストリップ５１２ａ、５１２ｂの上を流れるように、吸着剤ストリップ５１２ａ、５１２ｂの第一のゾーン５３１ａ、５３１ｂの真上に位置する。加えて、ハウジング５７０には、窓５７５ａ、５７５ｂを提供される。窓５７５ａ、５７５ｂは、試験ラインを、窓を通して見ることできるように、それぞれ試験ライン５５０ａ、５５０ｂの上部に位置する。必要であれば、窓は、透明なプラスチックで構成されてもよい。第三のゾーン５３５ａ、５３５ｂが提供される場合、窓５７５ａ、５７５ｂは、好ましくは、それぞれの対照ライン５６０ａ、５６０ｂの上部まで拡張される。
【００５５】
同一のサンプルが、吸着材料５１４ａ、５１４ｂに提供されるので、吸着材料５１４ａ、５１４ｂは任意で一つの（一体化した）部材から作られてもよいことは理解されるべきである。必要であれば、サンプル受容パッド（図示せず）は、サンプルを受容し、吸着材料５１４ａ及び５１４ｂを構成する一つの材料、又は個別の材料にサンプルを提供するために提供されてもよい。
【００５６】
図３のイムノアッセイ５１０は、好ましくは、次の通りに用いられる。最初に、抗体及び／又は抗原を場合により含む所望の量のサンプル（例えば、１０マイクロリットル−図示せず）は、第三及び第四の吸着材料５１４ａ、５１４ｂに提供され（ハウジング５７０が用いられる場合、ホール５７１を通して）、第三及び第四の吸着材料５１４ａ、５１４ｂを通ってそれらのそれぞれの第二のゾーン５６３ａ、５６３ｂに移動され、それは、第一及び第二の吸着材料５１２ａ、５１２ｂの第二のゾーン５３３ａ、５３３ｂとそれぞれ接触する。任意で、サンプルを第三及び第四の吸着材料に提供後、好ましくは測定された量の液体、例えばバッファ溶液は、サンプルの移動を助けるために、（ハウジング５７０が用いられる場合、ホール５７１を通して）添加されてもよい。添加されるバッファの量は、用いられるサンプル（例えば血液、尿、唾液等）の種類に依存してもよい。いずれにしても、サンプルが、第一及び第二の吸着材料の第二のゾーン５３３ａ、５３３ｂの上に印刷される、又はそれらの中に注入される試験ライン５５０ａ、５５０ｂに到達する。サンプル中のＨＩＶ抗体（存在する場合）が試験ライン５５０ａに固定化されたＨＩＶ抗原と結合する機会を有し、サンプル中のＨＩＶ抗原（存在する場合）が試験ライン５５０ｂに固定化されたＨＩＶ  Ｐ２４抗体と結合する機会を有する所望の時間後、好ましくは測定された量の液体、例えばバッファ溶液（図示せず）は、第一及び第二の吸着材料５１２ａ、５１２ｂ（ハウジング５７０が用いられる場合、ホール５７２を通して）に添加される。コンジュゲート５３９ａ、５３９ｂが試験部位５５０ａ、５５０ｂ（及び対照部位５６０ａ、５６０ｂ、提供される場合）まで移動することを可能にする十分な別の期間後、試験部位５５０ａ、５５０ｂ（及び対照部位５６０ａ、５６０ｂ、提供される場合）は、サンプルが「陽性」であるかないかを決定するために（ハウジング５７０が用いられる場合、窓５７５ａ、５７５ｂを介して）、検査される。典型的に、試験部位５５０ａ及び対照部位５６０ａの双方が色のラインを示す場合、サンプル中のＨＩＶ１又はＨＩＶ２抗体の存在を示す「陽性」試験は得られる。対照部位５６０ａのみが色のラインを示す場合、サンプル中の抗体の不存在を示す「陰性」試験は得られる。同様に、試験部位５５０ｂ及び対照部位５６０ｂの双方が色のラインを示す場合、サンプル中のＨＩＶ  ｐ２４抗原の存在を示す「陽性」試験は得られる一方で、対照部位５６０ｂのみが色のラインを示す場合、サンプル中のｐ２４抗原の不存在を示す「陰性」試験は得られる。
【００５７】
本発明の方法は、ホール５７１がサンプル（及び場合によりいくつかのバッファ）を受容するためのものであり、最初に用いられるものであり、ホール５７２がバッファ溶液を受容するためのものであり、二番目に用いられるものでありことを示すための番号付け及び／又は文字付けを含むハウジング５７０を提供することにより、速く処理されてもよい。
【００５８】
本発明の実施形態が、多くの様々な材料を用いて実現されてもよいことは、当業者により理解される。例えば、典型的に、大変薄く、不活性のフィルム、ストリップ、シート又は膜を含む吸着材料（単数又は複数）は、ニトロセルロース、濾紙、シリカから、又は例えば、微小孔の若しくは微粒状の織物若しくは不織布又はそれらの組み合わせから形成されてもよい。多くの種類の好適な材料、及びそれらの組み合わせは、Gordonらの米国特許第４，９６０，６９１号明細書、及びZukらの米国特許第４，９５６，２７５号明細書に記載され、その双方は、それらの全体において参照により本明細書に援用される。しばしば、ニトロセルロース又は他の吸着材料には、先述のような、薄く、非孔性の、不活性なプラスチックバッキングが提供される。
【００５９】
従って、本発明のさらに別の実施形態によれば、第一、第二、第三、及び第四の吸着材料の材料、厚さ、及び長さは、試験部位に達する液体サンプル及び液体バッファ（又はバッファ−コンジュゲートサブシステム）に関するタイミングを調節するために選択される。サンプル／検体及びバッファ又はバッファ−コンジュゲートサブシステムのための別の移動経路を提供することにより、材料はまた、システムの感度を増大させるために選択されてもよい。
【００６０】
同様に、吸着材料が多くの手法のいずれかで形状化され得、当該技術分野において知られるように、多くの寸法（dimensions）のいずれかをとることは、理解される。従って、導き（wicking）を早めるために、吸着材料は、バッファ溶液を受容するホールにおいて、及び試験部位及び対照部位において小さい幅を、リザーバーゾーンにおいて広い幅を有するストリップを有する鍵状であり得る。斯かるアレンジメントは、Charltonらの米国特許第５，９８９，９２１号明細書に示され、それは、それらの全体において参照により本明細書に援用される。いずれにしても、一般的に、試験ストリップは、大体は、幅よりも長さの方が大きく、大体は、厚さよりも幅の方が大きい。実際、少なくとも本発明の特定の実施形態では、試験ゾーンにおけるストリップは、試験及び対照ラインが試験ストリップを通して容易に見ることができるように、紙のように薄く（例えば、厚さ１ｍｍ）、十分に半透明であるべきである。
【００６１】
さらに、ハウジング及び吸着材料は、開放側方フロープラットフォーム（open lateral flow platform）において一体化し得、ここで射出成形されたポリマーには、微小支柱（micro pillars）間の高さ、直径、形状、及び／又は距離を変更することにより、フローを正確に制御し得る微小支柱が提供される。斯かるプラットフォームは、原則的に、材料を導くハウジング及び吸着剤と同一の材料を用い、Amic AB（Uppsala, Sweden）により販売される。例えばwww.amic.se.を参照のこと。射出成形されたポリマーは一般的に透明であるので、ハウジング全体を、試験及び対照ライン／部位がそれを通して観察されてもよい「窓」と考えてもよい。
【００６２】
構成される試験の種類（例えば妊娠、ＨＩＶ、結核（ＴＢ）、プリオン、尿−分析／薬物、心臓病マーカー、癌マーカー、シャガース病、クラミジア、口腔内細菌（ＳＭ／ＬＣ）、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、アデノウイルス、ロタウイルス、連鎖球菌Ａ、他の細菌又はウイルス等、及びさらに獣医学適用、例えばＣＰＶ（イヌパルボウイルス）、ＦＩＶ（ネコ免疫不全ウイルス）、ＦｅＬＶ（ネコ白血病ウイルス）、及び犬糸状虫）に応じて、対照の抗体及び抗原は異なり、それ故試験ラインに用いられる抗体及び抗原を、適宜適合させる必要があることはまた、理解される。同様に、コンジュゲートの抗原又は抗体も、適宜適合させる必要がある。一部の場合（例えばＨＩＶ）では、ＨＩＶ抗体の結合部位が、試験部位においてＨＩＶ抗原と結合し、さらに、抗原−コンジュゲートと結合するための更なる結合部位を提供するので、同一の抗原が、コンジュゲートにおいてのように、試験ストリップに用いられてもよく、一方で、他の場合では、異なる抗原が要求されてもよい。同様に、構成される試験の種類に応じて、提供される対照部位を、適宜適合させる必要があることは理解される。従って、例えば、試験ゾーンにおいて同定されるリガンドがＨＩＶ１及び／又はＨＩＶ２抗体であるＨＩＶ抗体検出試験において、試験ゾーンの抗原は、ＨＩＶ１（例えばｇｐ４１／ｇｐｌ２０）及びＨＩＶ２（ｇｐ３６）ペプチド及び／又は組み換え抗原の混合物であり得る。コンジュゲートは、プロテインＡ、プロテインＡ／Ｇ、抗−ヒトＩｇＧ／ＩｇＭ、ペプチド、又は組み換え抗原とコンジュゲート化した着色されたラテックス又はコロイド状の金であり得る。
【００６３】
試験の様々な種類は、図５〜７に示される。図５は、デング（熱）のための第４世代アッセイを示す。図５に表されるデバイス６１０は、デバイス６１０について、用いられる試験ライン及びコンジュゲートが異なり、ハウジング上のマーキングが異なってもよいことを除いて、図４の実施形態に用いられるものと同様のハウジング６７０を含む第二の実施形態（図３）の試験デバイス５１０と同様に構成される。より具体的には、デバイス６１０は、サンプル中のデング抗体（デングＡｂ）を検出するために、第一の一組の試験ライン６５０ａ１、６５０ａ２を用いる。試験ライン６５０ａ１は、抗−ヒトＩｇＭ抗体が提供される一方で、試験ライン６５０ａ２は、抗−ヒトＩｇＧ抗体が提供される。当業者に理解されるように、試験サンプル中のＩｇＭ及びＩｇＧ抗体は、抗体がデング抗体であるか、又は他の感染症についての抗体であるかに関わらず、試験ライン６５０ａ１及び６５０ａ２においてそれぞれ捕捉される。しかしながら、デバイス６１０において提供される第一のコンジュゲートは、デング抗体とのみ結合する金マーカーを含む組み換えデング抗原である。結果として、デングＩｇＭ又はデングＩｇＧ抗体が試験ライン６５０ａ１及び６５０ａ２で捕捉される場合に限り、コンジュゲートは捕捉され、図５に示されるような陽性試験を示す。ＩｇＧは典型的に感染の後半のステージにおいて初めて現われるのに対して、ＩｇＭ抗体は感染の初期において生じる初期マーカーであるので、図５のデング試験は、デングＩｇＭ及び／又はデングＩｇＧ抗体を検出するための別の試験ライン６５０ａ１及び６５０ａ２が提供される。しかしながら、識別が要求されない場合、一つの試験ラインは、組み換えデング抗原が提供され得、コンジュゲートは、試験ラインにおいて捕捉されるデングＩｇＭ及びデングＩｇＧ抗体と結合する任意の所望のコンジュゲートであり得る。好ましくは、第一の対照ライン６６０ａは、試験ライン６５０ａ１、６５０ａ２の下流に提供される。
【００６４】
図５に示されるように、試験デバイス６１０はまた、デング抗原（デングＡｇ）検出試験ライン６５０ｂを含む。試験ライン６５０ｂは、ＮＳ１（非構造的糖タンパク質）抗原を捕捉する抗−デングＮＳ１モノクローナル抗体が提供される。デバイス６１０のための第二のコンジュゲートは、好ましくは、マーカー、例えば金ゾルとコンジュゲート化された、ＮＳ１抗原に対する同一の又は異なるモノクローナル抗体である。第二の対照ライン６６０ｂは、好ましくは、同様に提供される。
【００６５】
図６は、ＨＩＶ及び結核（ＴＢ）のための第４世代アッセイを示す。図６に表されるデバイス７１０は、デバイス７１０について、用いられる試験ライン及びコンジュゲートが異なり、ハウジング上のマーキングが異なってもよく、抗原検出が第一及び第三の吸着剤ストリップと併せて行なわれる一方で、抗体検出が第二及び第四の吸着剤ストリップと併せて行なわれることを除いて、図４の実施形態に用いられるものと同様のハウジング７７０を含む第二の実施形態（図３）の試験デバイス５１０と同様に構成される。より具体的には、デバイス７１０は、サンプル中のＨＩＶ１／２及びＴＢ抗体を検出するために、第一の一組の試験ライン７５０ａ１、７５０ａ２を用いる。試験ライン７５０ａ１は、ＨＩＶ１及びＨＩＶ２組み換え抗原又は合成ペプチドが提供される一方で、試験ライン７５０ａ２は、組み換えＴＢ抗原混合物又は融合物が提供される。抗体検出試験のための第一のコンジュゲートは、好ましくは、金ゾルを含むプロテインＡ及び／又は抗−ヒトＩｇＭコンジュゲートである。結果として、サンプル中にＨＩＶ１又はＨＩＶ２抗体が存在する場合、抗体は、試験ライン７５０ａ１において抗原又は合成ペプチドにより捕捉され、サンプル中にＴＢ抗体が存在する場合、それらは、試験ライン７５０ａ２において、抗原混合物又は融合物により、捕捉される。バッファが試験デバイス７１０に添加され、プロテインＡ及び／又は抗−ヒトＩｇＭコンジュゲートが試験ライン７５０ａ１、７５０ａ２まで移動する場合、コンジュゲートは、それらが試験ライン７５０ａ１において存在する場合、ＨＩＶ１又はＨＩＶ２抗体により捕捉され、それらが試験ライン７５０ａ２において存在する場合、ＴＢ抗体により捕捉される。好ましくは、第一の対照ライン７６０ａは、試験ライン７５０ａ１、７５０ａ２の下流に提供される。
【００６６】
試験デバイス７１０はまた、ＨＩＶ．Ｐ２４抗原及びＴＢ−ＬＡＭ（リポアラビノマンナン）抗原についてそれぞれ試験するための、試験ライン７５０ｂ１、７５０ｂ２を含む。より具体的には、試験ライン７５０ｂ１は、ｐ２４ＨＩＶ抗原を捕捉する抗−ＨＩＶ．Ｐ２４モノクローナル及び／又はポリクローナル抗体が提供される一方で、抗原試験ライン７５０ｂ２は、ＴＢ  ＬＡＭ抗原を捕捉するＬＡＭ抗体が提供される。試験デバイス７１０において抗原検出に用いられる「第二のコンジュゲート」は、マーカー、例えば金ゾルとコンジュゲート化された抗−ＨＩＶ．Ｐ２４モノクローナル又はポリクローナル抗体のコンジュゲート、及び抗−ＨＩＶ．Ｐ２４モノクローナル又はポリクローナルコンジュゲートに用いられる同一又は異なるマーカーとコンジュゲート化されたＬＡＭ抗体のコンジュゲートを含むコンジュゲートの混合物である。異なるマーカーがＬＡＭ抗体コンジュゲートについて用いられる場合、試験ライン７５０ｂ２において現われる色は、ＨＩＶ及びＴＢ抗原の双方が存在する場合、試験ライン７５０ｂ１において現われる色と異なり得る。第二の対照ライン６６０ｂは、好ましくは、同様に提供される。
【００６７】
複数の抗体及び複数の光源試験のための第４世代アッセイは、一般的に、図７に示される。試験デバイス８１０は、デバイス８１０について、用いられる試験ライン及びコンジュゲートが異なり、ハウジング上のマーキングが異なってもよいことを除いて、図４の実施形態に用いられるものと同様のハウジング８７０を含む第二の実施形態（図３）の試験デバイス５１０と同様に構成される。図７に見られるように、５つの試験ライン８５０ａ１、８５０ａ２、８５０ａ３、８５０ａ４、８５０ａ５は、異なる抗体を検出するために、異なる抗原が提供される一方で、５つの更なる試験ライン８５０ｂ１、８５０ｂ２、８５０ｂ３、８５０ｂ４、８５０ｂ５は、異なる抗原を検出するために、異なる抗体が提供される。試験デバイス８１０は、アレルギー又は複数の感染症を検出するための試験として用いられ得る。
【００６８】
本発明の全ての実施形態に関して、コンジュゲートのマーカーが様々な種類の金属ゾル、着色されたラテックス、任意の様々な酵素等を含む多くの形態を取ってもよいことは、当業者により理解される。本発明の好ましい実施形態が、肉眼で容易に見ることのできる検出信号を提供する一方で、本発明は、紫外線放射又は蛍光透視法のような他の技術により検出され得る他のマーカーを含むことは理解される。従って、自動的なリーダーにより読み取られる本発明の試験セルを用いるシステム、例えば、蛍光透視又はデジタルリーダーが提供されてもよいことは、理解される。
【００６９】
本発明は、アッセイの特異性を損なうことなく、改善された感度を提供する。感度の改善についての主な要因は、異なる移動経路によるサンプルの試験ゾーンまでの改善された移動、及びコンジュゲート化されたマーカーと試験ゾーン複合体との反応の前の、試験ゾーンにおける検体と結合部位との効果的な結合である。例えば、ＨＩＶ試験の場合、第三の吸着剤ストリップに適用される血液血清サンプル中のＨＩＶ特異的抗体は、第一の試験ゾーンに移動され、ＨＩＶ試験ラインと結合する。血液中の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、試験ゾーンにおいて固定化されたＨＩＶ抗原と結合しない。バッファ溶液が第一の吸着剤ストリップに添加され、ラテックス又は金とのプロテインＡコンジュゲートが試験ゾーンに移動される場合、プロテインＡコンジュゲートは、試験ラインにおいてＨＩＶペプチドによりすでに捕捉されるＨＩＶ抗体のＦＣ部分と結合する。プロテインＡとＨＩＶ抗体のＦＣ部分との結合は大変強いので、少量のＨＩＶ抗体のみが、検出するために存在する必要がある。これは、プロテインＡが非特異的に全てのＩｇＧと結合するので、試験ラインまでの移動前に、血液サンプル中の全てのヒトＩｇＧ（ＨＩＶ抗体を含む）がプロテインＡと結合する従来の側方フローＨＩＶ試験システムと対照的である。従って、完全なプロテインＡ、ＩｇＧ、金／ラテックス複合体は、ＨＩＶ抗原を含む試験ラインまで移動する。ＨＩＶ抗体、プロテインＡ、金／ラテックスコンジュゲートのみは、その結果、ＨＩＶ抗原と結合する。しかしながら、サンプル中の大量の無関係なＩｇＧ、及び少量のＨＩＶ抗体の存在のために、ＨＩＶ抗体がプロテインＡと十分に結合せず、着色されたラインを、見ることができないというリスクが存在する。同様に、ＨＩＶ特異的抗原が血液血清サンプル中に存在する場合、第四の吸着剤ストリップに移動する抗原は、第二の試験ゾーンに達し、ＨＩＶ  Ｐ２４抗体を含む第二の試験ラインと結合する。バッファ溶液が第二の吸着剤ストリップに添加され、抗体／マーカーコンジュゲートが第二の試験ゾーンに移動される場合、コンジュゲート中の抗体は、第二の試験ラインにおいてすでに捕捉された抗原と結合する。
【００７０】
本明細書では、いくつかのイムノアッセイの実施形態及びそれらの使用の方法が記載され、説明された。本発明の特定の実施形態は、記載される一方で、本発明の範囲は当該技術が許容するのと同程度の広さであり、明細書は同様に読まれることを意図するので、本発明がそれらに限定されることを意図しない。従って、明細書は、抗原／抗体反応を用いたリガンド結合を説明する一方で、他のリガンド結合機構、例えば、アプタマー結合、核酸結合、酵素的結合等が、用いられてもよい。また、試験セルは、一つのリガンドを試験するための一つのライン、二つのリガンドを試験するための二つのライン、及び五つのリガンドを試験するための五つのラインを有するとして説明される一方で、様々な数のラインは、様々な数のリガンドを試験するために用いられてもよいことは、理解される。さらに、試験セルが、サンプル及びバッファ−溶液、又はバッファ−コンジュゲートサブシステムを受容するために、ハウジングの上壁においてホールを有するとして記載される一方で、一つ又は双方のホールは、ハウジングの端壁又は側壁に提供されてもよいことは理解される。同様に、吸着材料が、好ましくは、薄いプラスチックバッキングを含むとして記載される一方で、プラスチックバッキングが特定の位置においてのみ提供されてもよい、又は全く提供され得ないことは理解される。部分的バッキングのみ提供される、又はバッキングが提供されない場合、試験及び対照部位は、吸着材料のいずれか、又は双方に位置し得る。さらになお、試験領域及び対照領域は、試験及び対照ラインを含むとして示される一方で、試験及び対照部位が異なって、例えば、円、四角、楕円、破線等で構成されてもよいことは理解される。実際、試験部位及び対照部位は、互いと異なって構成されてもよい。また、本発明は、互いに垂直である吸着材料を用いるとして説明される一方で、異なる移動経路が検体／サンプル及びバッファ−コンジュゲートサブシステムのために提供される場合、吸着材料は互いに垂直である必要はないことは、理解される。当業者はまた、ハウジングが各試験ラインについての別々の窓を含む更なる方法に変更されてもよいことを、理解する。また、本発明は、コンジュゲートの移動経路に、及び任意でサンプルの移動経路に添加されるバッファ溶液の使用と併せて述べられる一方で、一又は複数のバッファが、又は実行される試験（単数）又は試験（複数）に応じて、要望通り、移動経路に添加されるために選択されてもよいことは理解される。従って、バッファ、例えばリン酸バッファ、又はＴＲＩＳ（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）バッファはしばしば用いられる。しかしながら、本発明は、水を含む任意の希釈液の使用を含むことを意図する。加えて、希釈液は、必要であれば、吸着材料にサンプルを添加する前に、サンプルに添加、及びサンプルと混合されてもよく、サンプルは、最初に置かれても、その後に希釈液が添加されてもよい。同様に、コンジュゲートの移動を引き起こし得る任意の希釈液は用いられてもよく、液体コンジュゲートシステムにおいてコンジュゲートと予め混合されてもよく、又は乾燥コンジュゲートシステムにおいて、コンジュゲートのための移動経路に提供されてもよい。さらに、本明細書で開示されるアッセイ及び方法の側面は、予め援用される米国特許出願公開第１１／９０８０７１号明細書に含まれる任意の側面及び技術と併せて用いられてもよい。さらに他の修飾は、特許請求の範囲に示される趣旨及び範囲から逸脱することなく提供された発明になされ得ることは当業者により理解される。
【図１】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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