(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の化合物：2013540154.tif 000053またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。また、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、または関節リウマチ、乾癬、および狼瘡などの自己免疫疾患を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とを含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
2013540154.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2013540154.tif 000050
（式中、
Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＯＣＨ２ＣＨ２−であり、
Ｒ１はＨ、Ｆ、またはＣｌであり、
Ｒ２はＨ、メチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１がＨもしくはＦである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ１がＦである、請求項１もしくは２に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ２がメチルもしくはエチルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ２がメチルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｚが−ＣＨ２ＣＨ２−もしくは−ＯＣＨ２−である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
以下の式：
【化２】
2013540154.tif 000051
を有する請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
以下の式：
【化３】
2013540154.tif 000052
を有する請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１０】
哺乳動物における腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、または狼瘡を治療する方法であって、そのような治療を必要とする前記哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
哺乳動物における腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、または狼瘡を治療する方法であって、そのような治療を必要とする前記哺乳動物に、治療有効量の請求項９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
治療に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１４】
腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、または狼瘡の治療に使用するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１５】
腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、または狼瘡を治療するための医薬を製造するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質分解酵素カテプシンＳの阻害化合物およびそれを投与することを含む治療方法に関する。具体的には、本発明は立体異性体に関する。より具体的には、本発明は、２つのキラル中心を有する、有力な、選択的および可逆的立体異性体阻害化合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
カテプシンＳはリソソームシステインプロテアーゼである。それは、Ｌ、Ｂ、Ｋ、ＶおよびＦを含む、カテプシンのより大きなファミリーに属する。カテプシンＳに対する選択性は副作用などの望ましくない結果を回避できる。カテプシンＳは、樹枝状細胞、Ｂリンパ球およびマクロファージなどの炎症細胞により生成される。それは、アテローム性動脈硬化症および腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）を含むいくつかの病態の病理学と関係する（非特許文献１）（非特許文献２）。
【０００３】
動脈壁の内皮細胞は、高レベルのコレステロール、ストレス、健康全般および遺伝を含む、動脈壁内のプラーク形成および蓄積を導くいくつかの要因に起因して正常に機能しなくなる場合がある。この機能不全により、損傷から保護するために動脈壁に侵入する血液から炎症細胞の産生および動員が生じる。これらの炎症細胞は最終的にカテプシンＳを産生する。カテプシンＳの効果は、動脈壁を構成するエラスチンおよびコラーゲンなどの細胞外マトリクスタンパク質を分解することである。細胞の細胞外再構成は、損傷した動脈壁を修復するために行われるが、マトリクスタンパク質の沈殿と比べてマトリクスの非常に多くのタンパク質分解が生じる場合、不均衡により、動脈壁内に形成されるプラークの不安定性を導く場合がある。非常に多くのプラーク不安定性は、プラーク破裂および起こり得る場合には血栓関連事象を生じる場合がある。したがって、カテプシンＳの阻害はアテローム性動脈硬化症を治療するための手段を提供する。
【０００４】
時折、腹部大動脈の細胞外マトリクスはまた、ＡＡＡとして公知の病態を生じる過剰な分解により弱められ得る。現在、ＡＡＡは、５５歳を超える男性の死因の第１０位である。ＡＡＡについて示されている公知の承認された薬物治療は存在していない。カテプシンＳの阻害は、この満たされていない医学的必要性を扱うための選択肢を提供する。
【０００５】
さらに、カテプシンＳは、免疫応答の開始に関与するその細胞内移動により、関節リウマチ、狼瘡および乾癬を含み得る自己免疫疾患に関係する（非特許文献３）（非特許文献４）。具体的には、カテプシンＳは、ＣＬＩＰ（クラス−ＩＩ関連Ｉｉ−ペプチド）を生成するためにＢリンパ球および樹枝状細胞においてＩｉｐ１０（ｐ１０）を開裂する。これにより、ペプチド断片、例えば自己抗原の負荷、およびその後の抗原提示細胞の細胞表面上のクラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の提示を可能にする。続いて未成熟Ｔ細胞の活性化の結果として、自己免疫反応を生じる。したがって、カテプシンＳの阻害は、ｐ１０プロセシングおよびＴ細胞抗原の表面提示を遮断し、それにより、関節リウマチ、乾癬、および狼瘡などの自己免疫関連疾患を治療するための手段を提供する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９９，１０４（９），１１９１−１１９７
【非特許文献２】Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．２００７，１７０（３），８０９−８１７
【非特許文献３】Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００１，１５，９０９−９１９
【非特許文献４】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，３５，２５５２−２５６２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
従って、本発明は式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2013540154.tif 000003
（式中、Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＯＣＨ２ＣＨ２−であり、
Ｒ１は、Ｈ、ＦまたはＣｌであり、
Ｒ２は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００８】
本発明の一態様は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とを含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによってＡＡＡを治療するための方法を提供する。本発明のさらなる態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによってヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、またはサルなどの哺乳動物においてＡＡＡを治療するための方法を提供する。本発明のさらなる態様は、大動脈直径が約３ｃｍの正常な直径より大きいが約５ｃｍ未満であり、外科的修復または血管内修復が必要とされないヒトにおいて、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、ＡＡＡを治療するための方法を提供する。本発明のなおさらなる態様は、大動脈直径が約５ｃｍより大きいが、外科的修復または血管内修復が治療選択ではないヒトにおいて、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、ＡＡＡを治療するための方法を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、またはサルなどの哺乳動物においてプラーク不安定性を治療するための方法を提供する。
【００１１】
本発明のさらなる態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、またはサルなどの哺乳動物においてアテローム性動脈硬化症を治療するための方法を提供する。
【００１２】
本発明のさらに別の態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、それを必要とするヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、またはサルなどの哺乳動物における自己免疫疾患を治療するための方法を提供する。本発明のさらなる態様は、治療有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩あるいは本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与することによって、ヒトにおける乾癬、関節リウマチ、または狼瘡を治療するための方法を提供する。
【００１３】
本発明のさらなる態様は、治療に使用するための化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明の別の態様は、腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、または関節リウマチ、乾癬、および狼瘡などの自己免疫疾患の治療に使用するための化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明のさらに別の態様は、腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、または関節リウマチ、乾癬、および狼瘡などの自己免疫疾患を治療するための医薬を製造するための化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用である。
【００１４】
本発明の別の態様は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、任意に１つ以上の他の治療剤とを組み合わせた本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明のさらに別の態様は、腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、および狼瘡の治療に使用するための本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１６】
本発明のさらに別の態様は、腹部大動脈瘤、プラーク不安定性、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、乾癬、および狼瘡を治療するための医薬を製造するための本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００１７】
本発明の阻害化合物およびその投与を含む治療方法の実施形態は、上記のＲ１、Ｒ２およびＺのいずれかの組み合わせを含む。具体的には、本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１はＨまたはＦである）に関する。より具体的には、本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１はＦである）に関する。
【００１８】
本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ２はメチルまたはエチルである）である。具体的には、本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ２はメチルである）である。
【００１９】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｚは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＯＣＨ２ＣＨ２−）に関する。具体的には、本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｚは−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＯＣＨ２−である）である。本発明のさらなる実施形態は、Ｒ１がＨまたはＦであり、Ｒ２がメチルまたはエチルであり、Ｚが−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＯＣＨ２−である組み合わせからなる。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書以下で例示するような本発明の好ましい化合物は以下である：
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フロオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート、
［（１Ｓ，２Ｓ）−１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］テトラリン−２−イル］Ｎ−メチルカルバメート、
［（１Ｓ，２Ｓ）−１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］インダン−２−イル］Ｎ−メチルカルバメート、
［（８Ｓ，９Ｓ）−９−［（４−フロオロベンゾイル）アミノ］−２−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−８−イル］Ｎ−メチルカルバメート、および
［（４Ｓ，５Ｓ）−５−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１−ベンゾオキセピン−４−イル］Ｎ−メチルカルバメート。
【００２１】
本発明のより好ましい化合物は以下である：
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート、
［（１Ｓ，２Ｓ）−１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］テトラリン−２−イル］Ｎ−メチルカルバメート、および
［（８Ｓ，９Ｓ）−９−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−８−イル］Ｎ−メチルカルバメート。
【００２２】
本発明の最も好ましい化合物は以下である：
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート。
【００２３】
上記および本発明の明細書全体を通して使用する場合、以下の用語は、他に示さない限り、以下の意味を有する。
【００２４】
本明細書で使用する「腹部大動脈瘤（または「ＡＡＡ」）」という用語は、腹部大動脈の少なくとも一部のサイズが、そうでないとみなされる正常な状態のサイズを超えて引き起こされる、哺乳動物における腹部大動脈の局在化した膨張または隆起を意味する。腹部大動脈は、限定されないが、内腔径、内腔周囲、および内腔面積を含むいずれかの測定次元に関して測定でき、比較できる。測定および診断のための手段は、超音波、ＣＴスキャン、または他の画像化技術の使用によってもよい。例えば、大動脈直径がその正常な直径より大きい、約３ｃｍである場合、ＡＡＡはヒトに存在する。しかしながら、大動脈直径が約５ｃｍより大きい場合、即時の外科的修復または血管内修復（ステントまたは移植）が、破裂および起こり得る死亡を防止する標準的な治療である。しかしながら、そのような治療が、いずれかの理由、例えば年齢に起因して実施可能でなくなるか、または選択肢にできない場合、この集団はまた、本発明を使用して治療されることができる。
【００２５】
本明細書で使用する「それを必要とする」という用語は、病態、例えばアテローム性動脈硬化症、ＡＡＡ、乾癬、狼瘡または関節リウマチなどの自己免疫疾患を有するか、またはそれらと診断され、治療を必要とすることを意味する。
【００２６】
本明細書で使用する「哺乳動物」という用語は、ヒトまたはイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、もしくはサルなどの非ヒト哺乳動物を意味する。
【００２７】
「その薬学的に許容可能な塩」という用語は本発明の化合物の塩を指す。それらを調製するための実施例および方法は当業者に周知である。例えば、Ｓｔａｈｌら，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」，ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２を参照のこと。
【００２８】
「治療有効量」という用語は、治療を達成するための式（Ｉ）の化合物または式（Ｉ）の化合物を含む組成物の量または用量を指す。治療有効量は、例えば、患者の体重、身長、年齢、全体的な健康、病態の重症度、投与様式、投与レジメンなどの当業者に公知の多くの要因を考慮することによって、当業者としての担当医により容易に決定できる。
【００２９】
本明細書で使用する「治療」という用語は、疾患状態の速度または進行を遅延させることを意味する。それはまた、疾患状態を中断することを含んでもよい。その用語はさらに、疾患を中断するだけでなく、既に発生しているいずれかの疾患状態もまた減少させることを含んでもよい。例えば、ＡＡＡに関して、「治療」という用語は、腹部大動脈瘤の膨張速度を遅延させることを意味する場合もある。それはまた、腹部大動脈瘤の膨張を停止させることを含んでもよい。さらに、それは、既に発生しているいずれかの膨張を減少させることを含んでもよい。
【００３０】
【化２】
2013540154.tif 000004
の記号は、ページの平面から前方に突出する結合を指す。
【００３１】
【化３】
2013540154.tif 000005
の記号は、ページの平面から後方に突出する結合を指す。
【００３２】
「Ｚ」の定義内の「−ＯＣＨ２−」および「−ＯＣＨ２ＣＨ２−」という用語は、酸素が縮合ベンゾ環に隣接することを意味すると理解される。
【００３３】
本発明の化合物は好ましくは医薬組成物として製剤化される。それらを調製するための実施例および方法は当業者に周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．１９ｔｈｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９５）を参照のこと。
【００３４】
式Ｉの化合物、またはその塩は、当業者に公知の種々の手順、ならびに以下のスキーム、調製例、および実施例に記載されている手順により調製できる。記載した経路の各々についての特定の合成工程は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を調製するために異なる方法で組み合わされてもよい。
【００３５】
以下の調製例および実施例はさらに本発明を例示し、概して上に記載したいずれかの新規化合物を含む、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を表す。試薬および出発物質は容易に利用可能であるか、または当業者により容易に合成できる。調製例および実施例は、例示の目的として記載され、限定されず、種々の修飾が当業者により行われてもよいことは理解されるべきである。
【００３６】
本発明の化合物のＲまたはＳ立体配置は、Ｘ線分析およびキラルＨＰＬＣ保持時間との相関などの標準的な技術により決定されてもよい。以下の調製例および実施例の命名は概して、Ｓｙｍｙｘ  Ｉｓｅｎｔｒｉｓ（登録商標）バージョン３．２．３のＩＵＰＡＣ命名特性を使用して行われる。
【００３７】
本明細書で使用する場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＡｃＯＨ」は酢酸を指し；「ＢＣＡ」はビシンコニン酸を指し；「ｂ．ｉ．ｄ．」は１日に２回を指し；「ブライン」は飽和ＮａＣｌ水溶液を指し；「ｃａｔ．」は触媒量を指し；「ＣＤ７４」は不変鎖（Ｉｉ）を指し；「ＣＤＩ」は１，１’−カルボニルジイミダゾールを指し；「ＤＭＡＰ」は４−ジメチルアミノピリジンを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し；「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し；「ｈｒ．」は時間を指し；「ＩＣ５０」は、薬剤に可能な５０％の最大阻害反応を生じるその薬剤の濃度、あるいは受容体に結合するリガンドの５０％置換を生じる薬剤の濃度を指し；「ＩＭＡＣ」は、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーを指し；「ＩＰＡ」は、イソプロピルアルコールを指し；「ＬＣ  ＥＳ／ＭＳ」は、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析計を指し；「ＭＣＰＢＡ」は、ｍｅｔａ−クロロ過安息香酸を指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ｍｉｎ．」は分を指し；「ＮＢＳ」はＮ−ブロモスクシンイミドを指し；「ＮＭＰ」はＮ−メチルピロリジンを指し；「Ｎ／Ａ」は利用可能でないことを指し；「ｐ１０」は不変鎖ＣＤ７４の断片を指し；「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し；「ＰＷＢＣ」は末梢白血球を指し；「ＲＦＵ」は相対蛍光単位を指し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し；「ＳＴＡＢ」はナトリウムトリアセトキシボロヒドリドを指し；「ＳＤＳ」はドデシル硫酸ナトリウムを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ｔ−ｂｏｃ」または「ｂｏｃ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを指し；「ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００」はポリエチレングリコールｐ−（１，１，３，３−トリメチルブチル）−フェニルエーテルを指す。
【００３８】
他に示さない限り、置換基は以前に定義したとおりである。
【００３９】
【化４】
2013540154.tif 000006
【００４０】
中間体（３）の式はスキーム１に記載した反応に従って実施できる。
【００４１】
スキーム１、工程Ａにおいて、６−ブロモ−２Ｈ−クロメンをＮＢＳで処理して、ブロモヒドリン（１）を形成する。好ましい条件は、約０〜５０℃であるが、より好ましくは室温においてＤＭＳＯ／水の溶媒混合物を使用する。
【００４２】
工程Ｂにおいて、ブロモヒドリン（１）を水酸化アンモニウムで処理してアミノアルコール（２）を得る。例えば、ブロモヒドリンを、室温〜６０℃にて４〜２４時間、ＴＨＦおよびＥｔＯＨの溶媒混合物中の水酸化アンモニウムと反応させる。
【００４３】
スキーム１、工程Ｃにおいて、ラセミ体アミノアルコールをその３Ｒ、４Ｓおよび３Ｓ、４Ｒ鏡像異性体に分割して、キラルアミノアルコール（３）を得る。分割のための方法は当業者に一般的に公知であり、キラル酸の塩としての結晶化、またはキラルクロマトグラフィーによる鏡像異性体の分離を含む。
【００４４】
６−ブロモ−２Ｈ−クロメンは商業的に入手可能であるか、または当業者に一般的に公知の方法により調製できる。例えば６−ブロモ−４−クロマノンをアルコールに還元し、続いて除去して、６−ブロモ−２Ｈ−クロメンを得ることができる。
【００４５】
【化５】
2013540154.tif 000007
【００４６】
スキーム２において、式（７）の中間体についての合成を示している。
【００４７】
スキーム２、工程Ａにおいて、式（４）の環状アルケンをＭＣＰＢＡで酸化させて、式（５）のエポキシドを得る。反応を、ジクロロメタンなどのハロゲン化溶剤および炭酸水素ナトリウムなどの塩基水溶液の二相混合物中で実施する。ＭＣＰＢＡを−１０〜１０℃にて少しずつ加え、１〜８時間攪拌しながら反応物を室温まで加温させる。必要な場合、さらなるＭＣＰＢＡを加える。
【００４８】
工程Ｂにおいて、式（５）のエポキシドをアンモニアで処理して、式（６）のラセミ体アミノアルコールを形成させる。好ましい条件は、ＴＨＦなどの不活性溶媒を含む密閉容器を使用し、ＭｅＯＨ中のアンモニアを添加している。反応物を１〜４日間５０〜１００℃にて加熱し、必要に応じてさらなるアンモニアを加える。
【００４９】
スキーム２、工程Ｃにおいて、ラセミ体アミノアルコール（６）を、スキーム１、工程Ｃにおいて以前に記載した式（７）のキラルアミノアルコールに分割する。例えば、１−アミノ−７−ブロモ−テトラリン−２−オール（Ｙ＝−ＣＨ２−）を、（＋）−ジ−１，４−トルオイル−Ｄ−酒石酸を用いて結晶化により分割する。（１Ｓ，２Ｓ）−アミノアルコール（式中、Ｙ＝−ＣＨ２−）を得るために水性塩基での塩の処理により遊離アミンを得ることができる。あるいは、ラセミ体物質（６）を、最終生成物およびキラルクロマトグラフィーにより分離される鏡像異性体にすることができる。
【００５０】
式（４）の環状アルケンは商業的にまたは文献に公知の方法のいずれかにより容易に得られ得ることは当業者により理解されるだろう。例えば、対応するケトンはアルコールに還元でき、続いてアルケンで除去できる。
【００５１】
【化６】
2013540154.tif 000008
【００５２】
中間体（１１）の形成はスキーム３に記載されるような反応に従って実施できる。
【００５３】
スキーム３、工程Ａにおいて、アミノインダン（９）は、１Ｒ，２Ｒ鏡像異性体（米国特許第７，３２６，７３１（Ｂ２）号）に関する文献に含まれる手順に従う５％パラジウム炭素上での水素化によりニトロインダン（８）から得られる。
【００５４】
工程Ｂにおいて、アミノインダン（９）を、ザンドマイヤー反応を使用してヨードインダン（１０）に変換する。ジアゾニウム塩は、ｐ−トルエンスルホン酸および亜硝酸ナトリウム水溶液を使用してアセトニトリルなどの溶媒中でその場で形成される。続いてジアゾニウム塩を０〜３０℃の温度にて０．５〜６時間、ヨウ化カリウム水溶液で処理して、ヨードインダン（１０）を得る。
【００５５】
工程Ｃにおいて、ｂｏｃ保護ヨードインダン（１０）は、ＨＣｌまたはトリフルオロ酢酸などの酸性条件下でヨードアミノインダン（１１）になる。窒素保護基を導入し、除去するための方法は当該技術分野において周知である（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄＥｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照のこと）。好ましい条件は、０〜２５℃にて０．５〜４時間、ジオキサン中のＨＣｌを使用する。
【００５６】
Ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−６−アミノ−２−ヒドロキシ−インダン−１−イル］カルバメート（８）は当該技術分野において公知の方法により調製できる。例えば、ラセミ−トランス−１−アミノ−６−ニトロインダン−２−オールは、インデンから６回の工程で得られ得る（Ａｄｖ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃａｔａｌ．２００５，３４７，２５５−２６５）。ラセミ物質は分割され、（＋）−Ｌ−マンデル酸の１Ｒ，２Ｒおよび１Ｓ，２Ｓ塩として単離される。１Ｓ，２Ｓ塩は１Ｓ，２Ｓ−トランス−１−アミノ−６−ニトロインダン−２−オールに遊離され、続いてアミンはｔｅｒｔ−ブチルカルバメートとして保護されて、キラルＨＰＬＣにより分析されるように９７％ｅｅ超で物質を得る。
【００５７】
【化７】
2013540154.tif 000009
【００５８】
式Ｉの本発明の化合物の形成はスキーム４に示した反応に従って実施できる。
【００５９】
スキーム４、工程Ａにおいて、式（１２）のアミノアルコール（キラルまたはラセミ体のいずれか）はアシル化されて、式（１３）のアミドを得る。カルボン酸または酸塩化物のいずれかを使用する種々のアシル化法は当該技術分野において周知である。好ましい条件は、０〜２５℃の温度にて１〜８時間、ＴＨＦおよび炭酸水素ナトリウム水溶液の溶媒混合物中の適切な塩化ベンゾイルを使用する。開始アミノアルコールがキラル酸の塩として使用される場合、十分な塩基が使用されて遊離アミンを生成する。
【００６０】
工程Ｂにおいて、式（１３）のブロモまたはヨードアミドを、ヨウ化銅（Ｉ）およびｓｙｍ−ジメチルエチレンジアミンなどのリガンドを使用して保護２−オキソ−ピペラジンと結合して、式（１４）のオキソピペラジンを得る。反応は好ましくは、炭酸カリウムなどの無機塩基の存在下、不活性雰囲気下で、密閉容器で実施する。反応は、８０〜１５０℃の温度で、ＮＭＰなどの不活性溶媒中で実施する。
【００６１】
スキーム４、工程Ｃにおいて、オキソピペラジンをベンズアミドの存在下で選択的に還元して、式（１５）のピペラジンを得る。反応は、０〜４０℃の温度にて１〜４時間、ＴＨＦなどの不活性溶媒中でボラン−硫化ジメチル複合体などの還元剤を使用して達成される。さらなるボラン−硫化ジメチル複合体を使用して反応を完了させてもよい。
【００６２】
あるいは、工程Ｄにおいて、ピペラジンを、カップリング反応中のＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジンを使用してヨードまたはブロモアミド（１３）と直接反応させる。反応は、アリルパラジウム（ＩＩ）クロリド二量体などのＰｄ触媒およびトリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレートなどのリガンドの存在下で進行する。２０〜１２０℃の温度にて０．５〜８時間、ＤＭＳＯなどの不活性溶媒中のナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基を使用して式（１５）のピペラジンを得る。
【００６３】
工程Ｅにおいて、ｂｏｃ保護基を除去して式（１６）の非保護ピペラジンを得る。ジオキサン中のＨＣｌなどのｂｏｃ基の除去のための酸性条件は当該技術分野において周知である。
【００６４】
続いて、工程Ｆにおいて、非保護アミン（１６）を、還元的アミノ化において３−オキセタノンと反応させて、式（１７）のオキセタニルピペラジンを得る。還元的アミノ化を達成するための種々の方法は当該技術分野において周知である。好ましい条件は、アセトニトリルなどの不活性溶媒中で、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドなどの還元剤を使用する。反応を０〜４０℃にて約０．５〜４時間実施する。さらなるナトリウムトリアセトキシボロヒドリドおよび３−オキセタノンを加えて、反応を完了させ得る。あるいは、反応は、分子篩の存在下、ＭｅＯＨおよび氷酢酸などの溶媒混合物中で、シアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を使用して達成できる。反応は０〜６０℃の温度にて約１〜２４時間進行する。
【００６５】
スキーム４、工程Ｇにおいて、オキセタニルピペラジン（１７）のアルコールを式Ｉのカルバメートに変換する。トリホスゲン／アミン、４−ニトロフェニルクロロホルメート／アミン、ＣＤＩ／アミンなどのカルバメートを合成するため、または適切に置換されたイソシアネートを用いた直接的な合成のための当業者に利用可能な種々の手段が存在する。本発明の化合物（式中、Ｚ＝−ＣＨ２−である）についての好ましい方法は適切なイソシアネート（Ｏ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ２）を使用する。例えば、ＤＭＡＰまたは好ましくは４−ピロリジノピリジンなどの有機塩基の存在下でジクロロメタン、ジオキサン、または好ましくはＴＨＦなどの非プロトン性溶媒中のアルコール（１７）をメチルイソシアネートで処理する。反応は、２０〜７０℃にて約２〜１６時間、密閉容器内で実施する。本発明の化合物（式中、カルバメート部分は主要なカルバメート（Ｒ２＝Ｈ）である）は、ＣＤＩ／アンモニア、シアン酸ナトリウム、またはクロロスルホニルイソシアネートを使用して合成できる。他の方法は非プロトン性溶媒中のトリクロロアセチルイソシアネートを使用する。続いて、トリクロロアセチル基は、中性Ａｌ２Ｏ３またはｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸を使用して開裂される。式Ｉのカルバメートを合成するための好ましい方法は、０〜２５℃にて４〜２０時間、ＴＨＦなどの不活性溶媒中でＣＤＩを使用して、その場でイミダゾールＮ−カルボン酸エステルを形成する。適切なアミン（Ｈ２ＮＲ２）とのその後の反応により、式Ｉのカルバメートが得られる。
【００６６】
上記の中間体は、ラセミ体混合物と共に実施され、好ましくはキラルＨＰＬＣにより最終工程として分割されて、鏡像異性的に純粋な化合物を得ることができることは当業者により理解されるだろう。
【実施例】
【００６７】
調製例１
６−ブロモクロマン−４−オール
【化８】
2013540154.tif 000010
エタノール（２０Ｌ）中の７−ブロモ−３，４−ジヒドロナフタレン−１（２Ｈ）−オン（３．９５ｋｇ，１７．４ｍｏｌ）の懸濁液に、室温で水素化ホウ素ナトリウム（２２１ｇ，５．８４ｍｏｌ）を少しずつ３時間にわたって加える。真っ赤な溶液を濃縮する。残留物を氷中（約３ｋｇ）に加えて懸濁液を形成し、その後、氷冷０．５Ｍ  ＨＣｌ（１０Ｌ）を上記懸濁液中に攪拌しながらゆっくりと加える。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０Ｌおよび５Ｌ）で抽出する。合わせた有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０Ｌ）およびブライン（２×１０Ｌ）で洗浄し、溶媒を減圧下で濃縮し、湿潤した固体を一晩空気乾燥して、標題化合物を淡黄色固体（４．１０ｋｇ，定量）として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ２１１［Ｍ−Ｈ−２Ｏ＋Ｈ］＋。
【００６８】
以下の表中のアルコールを、適切なケトンを用いる調製例１に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００６９】
【表１】
2013540154.tif 000011
【００７０】
調製例５
６−ブロモ−２Ｈ−クロメン
【化９】
2013540154.tif 000012
トルエン（１８Ｌ）中の６−ブロモクロマン−４−オール（３．９８ｋｇ，１７．４ｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（９５ｇ，４９９．４２ｍｍｏｌ）を室温で加える。ディーン・スターク装置を取り付け、３時間および５０分還流する。混合物を空気中で５０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０Ｌ）および氷（約３ｋｇ）中に攪拌しながら注ぐ。２つの層に分ける。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４Ｌ）で逆抽出する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム（１０Ｌ）およびブライン（１×１０Ｌ）で洗浄し、減圧下で溶媒を蒸発させて、標題化合物を茶色油（４．９０ｋｇ，＞１００％，トルエンを含む）として得る。ＬＣＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ）２０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７１】
以下の表中のアルケンを、適切なアルコールを用いる調製例５に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００７２】
【表２】
2013540154.tif 000013
【００７３】
調製例９
ラセミ−トランス−３，６−ジブロモクロマン−４−オール
【化１０】
2013540154.tif 000014
ＤＭＳＯ（１６Ｌ）および水（２．５Ｌ）の溶液に、室温で６−ブロモ−２Ｈ−クロメン（４．９０ｋｇ，２３．２ｍｏｌ）を加える。ＮＢＳ（３．４７ｋｇ，１９．５ｍｏｌ）を少しずつ３．５時間にわたって加える。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１２Ｌ）および水（１８Ｌ）中に注ぎ、２つの層に分ける。有機層を飽和重炭酸ナトリウム（７Ｌ）、水（８Ｌ）およびブライン（２×８Ｌ）で洗浄する。水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４Ｌ）で逆抽出し、合わせた有機層の溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を赤茶色固体（５．１０ｋｇ，７１％）として得る。
【００７４】
調製例１０
（３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−６−ブロモ−クロマン−３−オール
【化１１】
2013540154.tif 000015
テトラヒドロフラン（５．０Ｌ）およびエタノール（５．０Ｌ）中のラセミ−トランス−３，６−ジブロモクロマン−４−オール（５．１０ｋｇ，１６．６ｍｏｌ）の溶液に、室温で水酸化アンモニウム（１３．０Ｌ）を一度に加え、４３℃で２時間にわたってゆっくり加熱し、１４時間加熱し続ける。混合物を減圧下で濃縮して約９Ｌの溶媒を除去する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１０Ｌ）を、残留スラリーに加え、混合物を３時間２５℃で攪拌する。沈殿物を濾過により回収し、水（２×２Ｌ）で洗浄し、次いで、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×１．５Ｌ）で洗浄して、湿潤した固体を得る。室温にて空気中で一晩乾燥して、標題化合物を淡黄色固体（２．７８ｋｇ，６９％）として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ）２４４［Ｍ＋Ｈ］＋。鏡像異性体を、０．２％ジメチルエチルアミン（定常状態リサイクル精製）を有する１００％メタノールで溶出する１１×３３ｃｍ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ、２０μｍカラム上で、１００ｇずつ精製することで、３Ｓ，４Ｒ鏡像異性体（異性体１，１３６２．５ｇ，９７．４％ｅｅ）および標題化合物（異性体２，１３２３．７ｇ，９７．５％ｅｅ）を得る。分析的キラルＨＰＬＣ分析の条件：４．６×１５０ｍｍ  ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ５μｍカラム、０．２％ジメチルエチルアミンを含む１００％メタノール、流速０．５ｍＬ／分、異性体１  ＴＲ＝４．６９分、異性体２  ＴＲ＝６．２７分。
【００７５】
調製例１１
ラセミ−シス−６−ブロモ−１ａ，２，３，７ｂ−テトラヒドロナフト［１，２−ｂ］オキシレン
【化１２】
2013540154.tif 000016
ジクロロメタン（３．７５Ｌ）中の６−ブロモ−１，２−ジヒドロナフタレン（２５０ｇ，１．２０ｍｏｌ）の溶液に、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１２５０ｍＬ）を加え、０〜５℃まで冷却する。ＭＣＰＢＡ（７７％，２７５ｇ，１．２３ｍｏｌ，１．０３当量）を少しずつ加える。混合物を０〜５℃で１．５時間、機械的に攪拌し、室温まで温める。室温で約１．５時間攪拌し、追加のＭＣＰＢＡ（７７％，１５．０ｇ，６７ｍｍｏｌ，０．０５当量）を室温で加え、約１時間攪拌する。混合物をジクロロメタン（３７５０ｍＬ）で希釈し、層を分ける。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３Ｌ）で洗浄する。１０％亜硫酸水素ナトリウム水溶液（３７５０ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１２５０ｍＬ）を混合して、最終ｐＨが約７の溶液を調製する。この溶液にジクロロメタン層を加え、室温で約１０分間攪拌する。層を分け、有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３Ｌ）およびブライン（３Ｌ）で洗浄する。真空中で濃縮して、標題化合物を油（２６３ｇ，９８％）として得る。ＧＣ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２２４／２２６［Ｍ＋］。
【００７６】
以下の表中のエポキシドを、適切なアルケンを用いる調製例１１に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００７７】
【表３】
2013540154.tif 000017
【００７８】
調製例１４
ラセミ−トランス−１−アミノ−７−ブロモ−テトラリン−２−オール
【化１３】
2013540154.tif 000018
機械的スターラーを備えた２Ｌ圧力反応器中で、テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中にラセミ−シス−６−ブロモ−１ａ，２，３，７ｂ−テトラヒドロナフト［１，２−ｂ］オキシレン（６７．０ｇ，２９８ｍｍｏｌ）を溶解する。メタノール（３５０ｍＬ）中に７Ｍアンモニアを加え、反応器を密封し、７０℃で２日間攪拌する。メタノール（１４０ｍＬ）中に追加の７Ｍアンモニアを加え、反応器を密封し、７０℃で１日間攪拌する。反応スラリーを真空中で濃縮して残留物（６８．１ｇ）を得る。ジエチルエーテル（７６０ｍＬ）を加え、スラリーを室温で約５時間攪拌する。固体を濾過により回収し、ジエチルエーテル（２×２１５ｍＬ）でリンスし、一晩乾燥して、標題化合物（５８．１ｇ，８１％）を得る。ＧＣ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）２２４／２２６［Ｍ−ＮＨ２］＋。
【００７９】
以下の表中のアミノアルコールを、適切なエポキシドを用いて調製例１４に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００８０】
【表４】
2013540154.tif 000019
【００８１】
調製例１７
（１Ｓ，２Ｓ）−１−アミノ−７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−オール（２Ｓ，３Ｓ）−２，３−ビス（４−メチルベンゾイルオキシ）スクシネート
【化１４】
2013540154.tif 000020
（＋）−ジ−１，４−トルオイル−Ｄ−酒石酸（２．３０ｋｇ，５．９５ｍｏｌ）を一度に、アセトニトリル（１６．０Ｌ）および水（３．５０Ｌ）中のラセミ−トランス−１−アミノ−７−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−オール（１．４０ｋｇ，５．７８ｍｏｌ）の溶液に加える。濃厚懸濁液を窒素下で３０分間、加熱して還流させる（７７℃）。スターラーは約４６℃に達するまで攪拌を開始しない。オイルバスへの加熱を止め、混合物を攪拌しながら室温まで冷却する。５時間後、濃厚スラリーをブフナー漏斗で濾過し、アセトニトリル（２Ｌ）でリンスする。溶媒が回収されなくなるまで１時間濾過を続ける。湿潤ケーキを室温で一晩空気乾燥して、所望の塩を黄色固体（１．７０ｋｇ）として得る。固体をアセトニトリル（１５Ｌ）および水（３．３Ｌ）へ加え、得られた濃厚スラリーを窒素下で３０分間攪拌しながら、加熱して還流させる（７７℃）。オイルバスへの加熱を止め、攪拌しながら室温まで冷却する。５時間後、濃厚スラリーをブフナー漏斗で濾過し、アセトニトリル（２Ｌ）でリンスする。溶媒が回収されなくなるまで３０分間濾過を続ける。湿潤ケーキを室温で４８時間乾燥して、所望の塩を淡黄色固体（８００ｇ，２２％）として得る。遊離塩基についてＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ）２４２［Ｍ＋Ｈ］＋。９９．０％ｅｅ。超臨界液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）による鏡像異性体過剰率決定のための分析条件：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ（０．４６×２５０ｍｍ，５μｍ）、二酸化炭素流速：２．５５ｍＬ／分、共溶媒：０．１％ジエチルアミンを含むメタノール、共溶媒流速：０．４５ｍＬ／分，背圧：１５０バール、カラム温度：４０．９℃。異性体１  ＴＲ＝７．３６分、０．５％面積および異性体２（標題化合物）ＴＲ＝８．４６分、９９．５％面積。
【００８２】
調製例１８
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ，２Ｓ）−６−アミノ−２−ヒドロキシ−インダン−１−イル］カルバメート
【化１５】
2013540154.tif 000021
文献の手順（Ｋｏｚｈｕｓｈｋｏｖ，Ｓ．Ｉ．ら，Ａｄｖ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃａｔａｌ．２００５，３４７，２５５−２６５）に基本的に従って、９７％超ｅｅのｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−ニトロ−インダン−１−イル］カルバメートを得る。１Ｒ，２Ｒ鏡像異性体（米国特許第７，３２６，７３１（Ｂ２）号）について記載されているのと同じ手順を用いてニトロ基を還元して標題化合物を得る。
【００８３】
調製例１９
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−ヨード−インダン−１−イル］カルバメート
【化１６】
2013540154.tif 000022
氷槽内で３０分間、アセトニトリル（８００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ，２Ｓ）−６−アミノ−２−ヒドロキシ−インダン−１−イル］カルバメート（２５．０ｇ，９４．６ｍｍｏｌ）の懸濁液を冷却し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５３．９７ｇ，２８３．７ｍｍｏｌ）を一度に加える。水（３０ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（１３．０５ｇ，１８９．２ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間混合物に少しずつ加え、３０分間攪拌する。水（５０ｍＬ）中のヨウ化カリウム（３９．２５ｇ，２３６．５ｍｍｏｌ）の溶液を、混合物に１０分にわたって滴下して加え、氷槽内で２０分間攪拌する。混合物を室温まで温め、１．５時間攪拌する。１０％炭酸ナトリウム水溶液を含む濃赤色アルカリ性溶液を生成する。得られた混合物を真空中で濃縮して、アセトニトリルを除去する。濾過により茶色沈殿物を回収し、真空オーブン内で５０℃で一晩乾燥して、標題化合物（３３．９ｇ，９６％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８４】
調製例２０
Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−６−ブロモ−３−ヒドロキシ−クロマン−４−イル］−４−フルオロ−ベンズアミド
【化１７】
2013540154.tif 000023
テトラヒドロフラン（３．０Ｌ）および水（３．０Ｌ）中の（３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−６−ブロモ−クロマン−３−オール（６９２ｇ，２．８４）および重炭酸ナトリウム（４７６ｇ，５．６７ｍｏｌ）の懸濁液に、４−フルオロベンゾイルクロリド（３６９ｍＬ，３．１２ｍｏｌ）を１７℃で１５分にわたって、添加漏斗を介して滴下して加え、２時間攪拌する。水（２Ｌ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３．５Ｌ）を加え、５分間攪拌する。有機相を分け、それを水（２Ｌ）およびブライン（２Ｌ）で洗浄する。有機部分を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空中で濃縮して、淡黄色固体（２．３ｋｇ）を得る。固体を２５℃で３時間、ヘプタン（５Ｌ）中で粉砕する。濾過により回収し、５０℃で１２時間、オーブン内で乾燥して、標題化合物（９７５ｇ，９４％）を白色固体として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３６６／３６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８５】
以下の表中のアミドを、適切なラセミ体またはエナンチオピュアなアミノアルコール遊離塩基または塩を用いる調製例２０に記載された手順に基本的に従って調製する。アミノアルコール（調製例２１）の塩を用いる場合は、飽和重炭酸ナトリウムを塩基として用いる。
【００８６】
【表５】
2013540154.tif 000024
【００８７】
調製例２４
４−フルオロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−ヨード−インダン−１−イル］ベンズアミド
【化１８】
2013540154.tif 000025
１，４−ジオキサン（２００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−ヨード−インダン−１−イル］カルバメート（３９．６ｍｍｏｌ，１４．９ｇ）の溶液に、ジオキサン（１００ｍＬ）中の４Ｍ塩化水素の溶液を室温で加えて、２時間攪拌する。得られた懸濁液を真空中で濃縮して、真空オーブン内で４８時間乾燥する。残留物をＴＨＦ（２５ｍＬ）中に溶解し、氷槽中で３０分間冷却する。５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１７．４ｍＬ，８７．２ｍｍｏｌ）および４−フルオロベンゾイルクロリド（３．７８ｍＬ，４０．４ｍｍｏｌ）を滴下して加える。溶液を室温まで温め、１時間攪拌する。黒色溶液を真空中で濃縮し、水（５０ｍＬ）で希釈する。濾過により固体を回収し、真空オーブン内で４０℃で一晩乾燥し、標題化合物（１４．４ｇ，９１％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８８】
調製例２５
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］−３−オキソ−ピペラジン−１−カルボキシレート
【化１９】
2013540154.tif 000026
Ｎ−メチルピロリドン（１００ｍＬ）中の４−フルオロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−ヨード−インダン−１−イル］ベンズアミド（８．７０ｇ，２１．９ｍｍｏｌ）、４−Ｎ−ｂｏｃ−２−オキソ−ピペラジン（４．６１ｇ，２２．３ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（６．１２ｇ，４３．８）の混合物を、窒素ガスでパージする。ヨウ化銅（Ｉ）（２．１１ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）およびｓｙｍ−ジメチルエチレンジアミン（２．３４ｍＬ，２１．９ｍｍｏｌ）を加える。隔膜でフラスコを密閉し、１００℃で６時間攪拌する。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈する。有機部分を水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、次いでブラインで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮乾固する。残留物をカラムクロマトグラフィー（１２０ｇシリカ、２〜５％メタノール／クロロホルム）により精製して、標題化合物（７．６３ｇ、７４％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８９】
調製例２６
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−３−ヒドロキシ−テトラリン−６−イル］−３−オキソ−ピペラジン−１−カルボキシレート
【化２０】
2013540154.tif 000027
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］−３−オキソ−ピペラジン−１−カルボキシレートについての調製例２５に基本的に従って、Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−７−ブロモ−２−ヒドロキシ−テトラリン−１−イル］−４−フルオロ−ベンズアミドを用いて標題化合物を調製する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９０】
調製例２７
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート
【化２１】
2013540154.tif 000028
氷槽内で３０分間、無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］−３−オキソ−ピペラジン−１−カルボキシレート（８．８５ｇ，１８．９ｍｍｏｌ）の溶液を冷却し、窒素下でボラン−ジメチル硫化物錯体（２Ｍ，３７．７ｍＬ，７５．４０ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温まで温め、１．５時間攪拌する。ボラン−ジメチル硫化物錯体（２Ｍ，９．４２ｍＬ，１８．９ｍｍｏｌ）の第２部分を室温で加え、１時間攪拌する。氷槽内で１０分間冷却し、水を慎重に滴下して加え、その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を加える。得られた懸濁液を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈する。有機部分をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮する。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１２０ｇシリカ、４０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、標題化合物（６．８ｇ，７９％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９１】
調製例２８
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−３−ヒドロキシ−テトラリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート
【化２２】
2013540154.tif 000029
ｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］ピペラジン−１−カルボキシレートについての調製例２７に基本的に従って、ｔｅｒｔ−ブチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−３−ヒドロキシ−テトラリン−６−イル］−３−オキソ−ピペラジン−１−カルボキシレートを用いて標題化合物を調製する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９２】
調製例２９
４−フルオロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−７−ピペラジン−１−イル−テトラリン−１−イル］ベンズアミド塩酸塩
【化２３】
2013540154.tif 000030
１，４−ジオキサン（４３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−３−ヒドロキシ−テトラリン−６−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート（１９．４ｇ，４１．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン（１３５ｍＬ）中の４Ｍ塩化水素を室温で加える。得られたスラリーを５０℃で１３時間、機械的に攪拌する。反応物を真空中で濃縮して、標題化合物（２４．８ｇ，定量）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９３】
調製例３０
４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−ピペラジン−１−イル−クロマン−４−イル］ベンズアミド塩酸塩
【化２４】
2013540154.tif 000031
室温で攪拌しながら、ＤＭＳＯ（１．４０Ｌ）中のトリ−ｔ−ブチルホスホニウムテトラフルオロボレート（１６．０ｇ，５４．６ｍｍｏｌ）およびアリルパラジウム（ＩＩ）クロリド二量体（５．０７ｇ，２７．３ｍｍｏｌ）の懸濁液を脱気する（混合物を窒素で泡立てる）。Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン（３１５ｇ，１．６４ｍｏｌ，９７％純度）およびＮ−［（３Ｒ，４Ｓ）−６−ブロモ−３−ヒドロキシ−クロマン−４−イル］−４−フルオロ−ベンズアミド（２００．０ｇ，５４６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１５分間窒素下で攪拌し、次いで８０℃で加熱する。ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１７９ｇ，１．８０ｍｏｌ）を加え、９３〜９８℃で４５分間加熱する。混合物を１Ｍリン酸（２．７３Ｌ，２．７３ｍｏｌ，５０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝２．３に調整）および酢酸エチル（８００ｍＬ）の溶液に注ぎ、１０分間攪拌する。層を分け、水層を酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を半飽和ブライン（２×５００ｍＬ）で洗浄する。有機層を活性炭（２０ｇ）およびシリカゲル（２００ｇ）で処理し、３０分間攪拌する。珪藻土のパッドで濾過し、減圧下で濃縮して、ダーク油を得る。油をメタノール（８００ｍＬ）中に溶解し、ジオキサン（４１０ｍＬ）中の４Ｍ塩化水素を加え、溶液を４０℃で１時間攪拌する。真空中で溶媒を蒸発させ、残留物をアセトニトリル（１．６Ｌ）中に懸濁し、室温で１時間攪拌する。固体を窒素下で濾過により回収して、塩の水和を避ける。濾過物をアセトニトリル（５００ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥して、標題化合物（２６２ｇ，７３％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３７２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９４】
以下の表中のアミンを、適切なラセミ体またはエナンチオピュアな臭化物を用いて調製例３０に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００９５】
【表６】
2013540154.tif 000032
【００９６】
調製例３３
４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−４−イル］ベンズアミド
【化２５】
2013540154.tif 000033
ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２０ｇ，９４．４ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３００ｍＬ）中の４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−ピペラジン−１−イル−クロマン−４−イル］ベンズアミド塩酸塩（３２．０ｇ，７８．５ｍｍｏｌ）および３−オキセタノン（６．８７ｇ，９８．１ｍｍｏｌ）のスラリーに加える。スラリーを２０分間攪拌し、更なるナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２０ｇ，９４．４ｍｍｏｌ）を一度に加える。茶色混合物を２８℃で約２時間攪拌する。追加のナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１０ｇ，４７．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間攪拌する。３−オキセタノン（２ｇ，２８．６ｍｍｏｌ）を加え、２０分後、追加の３−オキセタノン（１ｇ，１４．３ｍｍｏｌ）を加える。３０分間攪拌し、混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１Ｌ）へ注ぎ、ジクロロメタン（１Ｌ）を加える。有機層を分け、真空中で濃縮して、薄灰色固体を得る。固体を、３〜６％イソプロパノール／ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を白色固体（１９．２ｇ，７３％）として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４２８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９７】
以下の表中のオキセタンを、適切なラセミ体またはエナンチオピュアなアミンを用いて調製例３３に記載された手順に基本的に従って調製する。
【００９８】
【表７】
2013540154.tif 000034
【００９９】
調製例３７
４−フルオロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］インダン−１−イル］ベンズアミド
【化２６】
2013540154.tif 000035
１，４−ジオキサン（５．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［（２Ｓ，３Ｓ）−３−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−ヒドロキシ−インダン−５−イル］ピペラジン−１−カルボキシレート（３００ｍｇ，０．６５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン（５．０ｍＬ）中の４Ｍ塩化水素を室温で加え、１時間攪拌する。懸濁液を真空中で濃縮する。残留飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）に加え、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮する。残留物をメタノール（２０ｍＬ）中に溶解し、３−オキセタノン（１４２ｍｇ，１．９８ｍｍｏｌ）、氷酢酸（１７０μＬ，２．９６ｍｍｏｌ）、および粉砕活性化４Å分子篩を加える。得られた懸濁液を５０℃で１時間攪拌する。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３１ｍｇ，１．９８ｍｍｏｌ）を室温で加え、一晩攪拌する。飽和重炭酸ナトリウム溶液（２０ｍＬ）を加え、２０分間攪拌する。ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水およびブラインで洗浄する。有機部分を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、標題化合物（２２０ｍｇ，８１％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１００】
調製例３８
ラセミ−トランス−３，６−ジブロモクロマン−４−オール
【化２７】
2013540154.tif 000036
トルエン（５００ｍＬ）中の６−ブロモクロマン−４−オール（２５．０ｇ，１０９．１ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃まで加熱する。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．１ｇ，５．５ｍｍｏｌ）を加え、ディーン・スターク装置を用いて水を回収し、１００℃で２時間攪拌する。熱源を除去し、反応混合物を氷冷０．５Ｎ  ＮａＯＨ（２５０ｍＬ）でクエンチする。更に反応混合物を５〜１０℃に冷却し、次いで層を分ける。有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、有機層を減圧下で濃縮して、その元の体積を約半分にする。ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）を加え、トルエン蒸留物がなくなるまで減圧下で濃縮し続ける。
【０１０１】
中間体オレフィンのＤＭＳＯ溶液を０〜５℃まで冷却し、水（１７ｍＬ）を加え、０〜５℃まで再冷却する。Ｎ−ブロモスクシンイミド（２１．７ｇ，１２０．０ｍｍｏｌ）を５回に分けて３０分にわたって加える。０〜５℃で１時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、層を分ける。水層を酢酸エチル（１００ｍＬ）で逆抽出する。合わせた有機層を１：１ブライン／水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、標題化合物を白色固体（３３．０ｇ，９９％）として得る。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）δ４．２６（ｍ，１Ｈ），４．３７（ｍ，２Ｈ），４．６５（ｍ，１Ｈ），６．２７（ｄ，１Ｈ），６．８０（ｄ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，１Ｈ），７．４６（ｂｄ，１Ｈ）。ＧＣ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ／８１Ｂｒ）３０８／３１０［Ｍ＋］。
【０１０２】
調製例３９
ラセミ−トランス−４−アミノ−６−ブロモ−クロマン−３−オール
【化２８】
2013540154.tif 000037
イソプロピルアルコール（３００ｍＬ）中のラセミ−トランス−３，６−ジブロモクロマン−４−オール（３０．０ｇ，９７．４ｍｍｏｌ）の溶液（５００ｍＬ）に周囲温度で、水酸化アンモニウム（２８〜３０％水溶液，１５０ｍＬ，２．２ｍｏｌ）を加える。１５時間ゆっくりと攪拌する。反応混合物を濾過し、濾過物を水（２００ｍＬ）で希釈する。得られた溶液を減圧下で濃縮して、その元の重量の半分にする。水（１００ｍＬ）を加え、混合物を周囲温度で１０分間攪拌し、次いで、０〜５℃に冷却し、さらに３０分間攪拌する。沈殿物を濾過により回収し、固体を水（２５ｍＬ）およびヘプタン（２５ｍＬ）で洗浄する。物質を４０℃で真空乾燥して、標題化合物を淡黄色固体（２１．２ｇ，８９．２％）として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．９６（ｂｓ，２Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｄｄ，１Ｈ），４．１１（ｄｄ，１Ｈ），５．１５（ｂｓ，１Ｈ），６．６６（ｄ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ）。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ）２４４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１０３】
調製例４０
（３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−６−ブロモ−クロマン−３−オール
【化２９】
2013540154.tif 000038
ラセミ−トランス−４−アミノ−６−ブロモクロマン−３−オール（２１．１ｇ，８６．４ｍｍｏｌ）、Ｄ−（＋）−ショウノウ酸（１７．３ｇ，８６．４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６３３ｍＬ）および水（４７．６ｍＬ）の混合物を、７０〜７５℃まで加熱し、１０分間攪拌する。溶液を周囲温度まで４時間にわたって冷却する。２４時間後、周囲温度で混合物を濾過する。固体をアセトニトリル（２×２０ｍＬ）中の７％Ｈ２Ｏでリンスする。濾過物を５０℃まで加熱し、１Ｎ  ＮａＯＨ（２１６．１ｍＬ）を加える。得られた混合物を減圧下で濃縮して、アセトニトリルを除去する。Ｈ２Ｏ（２１１ｍＬ）を加え、溶液を７０℃まで加熱する。周囲温度まで冷却し、沈殿物を濾過により回収する。水（２５ｍＬ）で洗浄し、５０℃で一晩真空乾燥し、標題化合物をオフホワイト固体（９．８ｇ，５０％のうち４６．４％の理論重量，９８．７％ｅｅ）として得る。
【０１０４】
粗（３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−６−ブロモクロマン−３−オール（１．５ｇ，６．１５ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１２．０ｍＬ）および水（３．０ｍＬ）を合わせ、７０〜７５℃まで加熱する。溶液を３０分間攪拌し、溶液を周囲温度まで冷却し、次いで、さらに１時間攪拌する。混合物を０〜５℃まで冷却し、３０分間攪拌する。固体を濾過し、冷４：１アセトニトリル：Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄する。固体を５０℃で一晩真空乾燥して、精製した標題化合物を白色固体（１．１ｇ，７４．６％，９９．７％ｅｅ）として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．９６（ｂｓ，２Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｄｄ，１Ｈ），４．１１（ｄｄ，１Ｈ），５．１５（ｂｓ，１Ｈ），６．６６（ｄ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ）．ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ（７９Ｂｒ）２４４［Ｍ＋Ｈ］。分析的キラルＨＰＬＣ分析の条件：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（１５０×４．６ｍｍ、４．６ミクロン）；流速０．６ｍＬ／分；波長２９０ｎｍ；溶離剤１００％ＭｅＯＨ＋０．２％ｖ／ｖジメチル−エチルアミン；実行時間１０分；カラム温度３０℃；アイソクラチック。
【０１０５】
調製例４１
４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（ピペラジン−１−イル）クロマン−４−イル］ベンズアミド
【化３０】
2013540154.tif 000039
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の（３Ｒ，４Ｓ）−４−アミノ−６−ブロモ−クロマン−３−オール（１０．０ｇ，４１．０ｍｍｏｌ）の懸濁液に、周囲温度で重炭酸ナトリウム（５．２ｇ，６１．４ｍｍｏｌ）および水（５０ｍＬ）を加える。５分間攪拌し、混合物を０〜５℃まで冷却する。４−フルオロ−ベンゾイルクロリド（６．５ｇ，４１．０ｍｍｏｌ）を添加漏斗で１０分にわたって滴下して加える。混合物を０〜５℃で３０分間攪拌し、混合物を１５〜２０℃まで温め、さらに２時間攪拌する。混合物をブライン（５０ｍＬ）およびＴＨＦ（５０ｍＬ）で洗浄し、２０分間攪拌する。層を分け、有機層を濃縮して、その元の体積の半分にする。ＴＨＦ（５０ｍＬ）の追加と濃縮を、その半量になるまで３回またはカールフィッシャー水分析により溶液が０．１％未満になるまで繰り返す。ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）を加え、ＴＨＦが蒸留しなくなるまで混合物を減圧下で５０℃で濃縮し続ける。
【０１０６】
得られたアミド中間体のＤＭＳＯ溶液を、ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）およびトルエン（４５ｍＬ）で希釈し、窒素ガスの表面下散布（ｓｕｂ−ｓｕｒｆａｃｅ  ｓｐａｒｇｅ）を用いて３０分間、脱気する。ピペラジン（１６．６ｇ，１９２．７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を３０分間脱気する。溶液を４０℃まで加熱し、アリルパラジウム（ＩＩ）クロリド二量体（０．７２ｇ，２ｍｍｏｌ）およびトリ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスホニウムテトラフルオロボレート（１．１９ｇ，４ｍｍｏｌ）を窒素ブランケット下で加える。混合物を１０分間攪拌し、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１３．０ｇ，１３５．３ｍｍｏｌ）を窒素ブランケット下で加える。内部温度を７０℃まで上昇させ、混合物を４時間攪拌する。反応器の内容物を２０℃まで冷却し、水（７５ｍＬ）を１５分にわたって加える。６Ｎ  ＨＣｌを用いて混合物のｐＨを６〜７に調整し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を加える。反応器の内容物を３０分間攪拌し、次いで、層を分ける。水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で逆抽出する。酢酸エチル抽出物を捨て、ＮａＯＨ（４０％水溶液）を用いて水層のｐＨを１１〜１２に調整する。水層を酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせ、減圧下で濃縮して、元の体積の約半分にする。活性炭（１．５ｇ）を加え、混合物を５０〜５５℃まで１時間加熱する。混合物を５０〜５５℃で１時間攪拌し、２０℃まで冷却し、濾過し、固体を除去する。濾過物をブライン（２×３００ｍＬ）で洗浄し、有機物を減圧下で濃縮して、約２容量（元の出発材料に基づく）にする。混合物を０〜５℃まで冷却し、さらに３時間攪拌する。固体を濾過により単離し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３０ｍＬ）で洗浄し、固体を５０℃で真空乾燥する。標題化合物をオフホワイト固体（７．９ｇ，５２％）として回収する。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．４０−２．８０（ｂｍ，８Ｈ），３．６５−３．９５（ｂｍ，２Ｈ），４．１３（ｄ，１Ｈ），４．９５（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｂｓ，１Ｈ），６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．６９（ｄ，１Ｈ），６．８０（ｄ，１Ｈ），７．２７（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｍ，２Ｈ），８．７２（ｂｄ，１Ｈ）。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ３７２［Ｍ＋Ｈ］。
【０１０７】
調製例４２
４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−４−イル］ベンズアミド
【化３１】
2013540154.tif 000040
ＴＨＦ（１６４ｍＬ）中で４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（ピペラジン−１−イル）クロマン−４−イル］ベンズアミド（８．２ｇ，２２．０ｍｍｏｌ）および３−オキセタノン（２．４ｇ，３３．０ｍｍｏｌ）を合わせる。酢酸（１．３ｍＬ，２２．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を３５〜４０℃まで加熱する。１時間後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８．４ｇ，３９．６ｍｍｏｌ）を加え、３５〜４０℃で４時間攪拌する。反応混合物を１５℃まで冷却し、２Ｎ  ＮａＯＨ（８１．６ｍＬ）を３０分にわたって加える。ブライン（８１．６ｍＬ）を添加し、混合物を３０分間攪拌する。層を分け、有機層を２Ｎ  ＮａＯＨ（８１．６ｍＬ）およびブライン（８１．６ｍＬ）で希釈する。得られた混合物を３０分間攪拌する。層を分け、水層を除去する。有機層に活性炭（１．０ｇ）を加え、温度を５０〜５５℃まで上昇させ、１時間攪拌する。混合物を濾過して、固体を除去し、濾過物を減圧下で濃縮して、元の体積の約１０分の１の量にする。酢酸エチル（１６４ｍＬ）を加え、減圧下で濃縮して、元の体積の約４分の１の量にする。このプロセスを酢酸エチル（２×１６４ｍＬ）で２回繰り返す。有機物を濃縮して、約３容量（元の出発材料に基づく）にし、内部温度を７０〜７５℃まで上昇させ、２時間攪拌する。混合物を１０℃まで冷却し、ヘプタン（８２ｍＬ）を１５分にわたって加え、さらに２時間攪拌する。工業グレードの標題中間体を濾過により単離し、固体を５０〜５５℃で真空乾燥する（１０．１ｇ回収した）。
【０１０８】
精製：アセトニトリル（７００ｍＬ）中に工業グレードの４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−４−イル］ベンズアミド（１０．０ｇ，２３．４ｍｍｏｌ）を懸濁し、混合物を加熱して還流する。２時間還流しながら攪拌し、５０〜５５℃まで冷却し、活性炭（１．０ｇ）を加える。２時間５０〜５５℃で攪拌し、濾過して、固体を除去する。濾過物を減圧下で濃縮して、工業グレードの出発材料に基づいて約５容量にする。内部温度を７５〜８０℃まで上昇させ、１時間攪拌する。混合物を２０℃に冷却し、さらに４時間攪拌する。標題化合物を濾過により単離して、白色固体（６．８ｇ，７２％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．３３（ｍ，４Ｈ），２．９４（ｍ，４Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｄ，１Ｈ），４．１４（ｄ，１Ｈ），４．４０（ｄｄ，２Ｈ），４．４９（ｄｄ，２Ｈ），４．９４（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｄ，１Ｈ），６．６５（ｄ，１Ｈ），６．７０（ｄ，１Ｈ），６．８４（ｄｄ，１Ｈ），７．２７（ｍ，２Ｈ），７．９７（ｍ，２Ｈ），８．７５（ｂｄ，１Ｈ）。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４２８［Ｍ＋Ｈ］。
【０１０９】
実施例１
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート
【化３２】
2013540154.tif 000041
ＴＨＦ（６４８ｍＬ）中の４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−４−イル］ベンズアミド（７２．０ｇ，１６８ｍｍｏｌ）の溶液に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（３５．５ｇ，２１９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で一晩攪拌する。混合物を５℃まで冷却し、ＴＨＦ（２１０ｍＬ，４２１ｍｍｏｌ，２．５当量）中の２Ｍメチルアミンの溶液を１５分にわたって滴下して加える。３０分間攪拌し、水（７２０ｍＬ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２１６ｍＬ）の混合物に注ぐ。混合物を３０分間攪拌し、層をデカントする。水層をジクロロメタン（３×２１６ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮する。残留物を酢酸エチル（７２０ｍＬ）中で懸濁し、２時間加熱して還流し、１０℃まで冷却する。固体を濾過により回収し、真空下で一晩乾燥して、標題化合物（６４．０ｇ，７８％）を白色固体として得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１０】
以下の表中のカルバメートを、適切なエナンチオピュアなアルコールを用いて実施例１に記載された手順に基本的に従って調製する。
【０１１１】
【表８】
2013540154.tif 000042
【０１１２】
実施例３
［（８Ｓ，９Ｓ）−９−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−８−イル］Ｎ−メチルカルバメート
【化３３】
2013540154.tif 000043
上記実施例１についての手順に基本的に従ってラセミ−トランス−４−フルオロ−Ｎ−［８−ヒドロキシ−２−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−９−イル］ベンズアミドを用い、ラセミカルバメートを調製する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４９７［Ｍ＋Ｈ］＋。ジクロロメタン（８ｍＬ）およびメタノール（３ｍＬ）中にラセミ−トランス−９−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−２−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−８−イル］Ｎ−メチルカルバメート（１．０３ｇ）を溶解する。鏡像異性体を、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈカラム（２．１×２５ｃｍ，５μｍ）上でのＳＦＣにより３００μＬ部分中で分離する。移動相：０．２％イソプロピルアミン／二酸化炭素を含む３０％イソプロパノール。流速：７０ｍＬ／分。検出：２２５ｎｍ。標題化合物を異性体１（３３３ｍｇ，９９％ｅｅ）として得て、８Ｒ，９Ｒ鏡像異性体を異性体２（３５９ｍｇ，９７．５％ｅｅ）として得る。鏡像異性過剰率を、０．２％イソプロピルアミン／二酸化炭素を含む３０％イソプロパノールを用いて、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ（４．６×１５０ｍｍ，５μｍ）カラム上でのＳＦＣにより決定する。流速：５ｍＬ／分。検出：２２５ｎｍ。異性体１（標題化合物）ＴＲ＝１．７６分。異性体２ＴＲ＝２．３０分。
【０１１３】
実施例４
［（４Ｓ，５Ｓ）−５−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１−ベンゾオキセピン−４−イル］Ｎ−メチルカルバメート
【化３４】
2013540154.tif 000044
上記実施例１についての手順に基本的に従ってラセミ−トランス−４−フルオロ−Ｎ−［４−ヒドロキシ−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１−ベンゾオキセピン−５−イル］ベンズアミドを用い、ラセミカルバメートを調製する。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４９９［Ｍ＋Ｈ］＋。メタノール（３ｍＬ）中にラセミ−トランス−［５−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−７−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１−ベンゾオキセピン−４−イル］Ｎ−メチルカルバメート（１００ｍｇ）を溶解し、不溶性固体を濾過する。鏡像異性体を、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈカラム（３×２５ｃｍ，５μｍ）上でのクロマトグラフィーにより１．５ｍＬ部分（２注入）中で分離する。移動相：９５％エタノール／５％アセトニトリル。流速：１８ｍＬ／分。検出：２２５ｎｍ。標題化合物を異性体１（４２ｍｇ，９９％ｅｅ）として得て、４Ｒ，５Ｒ鏡像異性体を異性体２（４０ｍｇ，９９％ｅｅ）として得る。鏡像異性体過剰率を、０．２％ジメチルエチルアミンを含む９５％エタノール／５％アセトニトリルを用いて、ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ（４．６×１５０ｍｍ，５μｍ）カラム上でのＨＰＬＣにより決定する。流速：１．０ｍＬ／分。検出：２２５ｎｍ。異性体１（標題化合物）ＴＲ＝３．５８分。異性体２ＴＲ＝５．１３分。
【０１１４】
実施例５
［（１Ｓ，２Ｓ）−１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］インダン−２−イル］Ｎ−メチルカルバメート
【化３５】
2013540154.tif 000045
テトラヒドロフラン（３．０ｍＬ）中の４−フルオロ−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］インダン−１−イル］ベンズアミド（２２０ｍｇ，０．５３５ｍｍｏｌ）の溶液に、４−ピロリジノピリジン（１６ｍｇ，０．１０７ｍｍｏｌ）を加え、圧力バイアル中で密閉する。メチルイソシアネート（９７μＬ，１．６０ｍｍｏｌ）をシリンジにより混合物に加え、６０℃で一晩攪拌する。得られた懸濁液を氷槽内で冷却し、白色固体を濾過により回収し、真空オーブン内で４０℃で３時間乾燥して、標題化合物（２００ｍｇ，８０％）を得る。ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４６９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１５】
実施例６
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート
【化３６】
2013540154.tif 000046
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中に４−フルオロ−Ｎ−［（３Ｒ，４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−４イル］ベンズアミド（１０．０ｇ，２３．４ｍｍｏｌ）を懸濁し、１，１カルボニルジイミダゾール（４．９ｇ，３０．４ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度で３時間攪拌する。反応混合物を−５℃まで冷却し、２Ｍメチルアミン（ＴＨＦ中，２１ｍＬ，４２．１ｍｍｏｌ）を１５分にわたって加える。得られた混合物を−５〜０℃で３時間攪拌する。２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）を加え、混合物を１時間１０〜３０℃で攪拌する。層を分け、有機物を２Ｎ  ＮａＯＨ（４×１００ｍＬ）で洗浄する。水（２００ｍＬ）を加え、混合物を減圧下で濃縮して、約２０容量（出発材料に基づく）にする。ＴＨＦ（２００ｍＬ）を加え、周囲温度で１時間攪拌する。混合物を濾過し、生成湿潤ケーキを無菌反応バイアルへ移す。ＴＨＦ（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）を加え、周囲温度で１時間攪拌する。工業グレードの標題化合物を濾過により単離し、８０℃で真空乾燥する（９．０ｇ，８０％）。
【０１１６】
実施例７
［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメートの結晶／固体形態変換
【０１１７】
ＴＨＦ（１５００ｍＬ）中に窒素雰囲気下で工業グレードの［（３Ｒ，４Ｓ）−４−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］−６−［４−（オキセタン−３−イル）ピペラジン−１−イル］クロマン−３−イル］Ｎ−メチルカルバメート（５０ｇ，１０３．２ｍｍｏｌ）を懸濁する。混合物を５０〜６０℃まで加熱し、１時間攪拌する。活性炭（５．０ｇ）を加え、５０〜６０℃で１時間攪拌し続ける。混合物を４０〜５０℃まで冷却し、濾過して固体を除去する。濾過物を減圧下で濃縮して、約５容量（出発材料に基づく）にする。アセトニトリル（１０００ｍＬ）を加え、減圧下で濃縮して、約５容量にする。４回繰り返して、全てのＴＨＦを除去し、次いで、混合物を濃縮して１０〜１５容量にする。混合物を７０〜７５℃まで加熱し、１８時間攪拌する。混合物を１５℃まで冷却し、４時間攪拌する。白色結晶体を濾過により単離し、５５〜６０℃で真空乾燥して、標題化合物（４２ｇ，８４％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．３２（ｍ，４Ｈ），２．５３（ｄ，３Ｈ），２．９６（ｍ，４Ｈ），３．３９（ｍ，１Ｈ），４．１１−４．２５（ｍ，２Ｈ），４．３９（ｄｄ，２Ｈ），４．５１（ｄｄ，２Ｈ），４．８６（ｍ，１Ｈ），５．０４（ｍ，１Ｈ），６．７０−６．７５（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｄｄ，１Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ）７．２８（ｍ，２Ｈ），７．９６（ｍ，２Ｈ），８．９０（ｂｄ，１Ｈ）．ＬＣ−ＥＳ／ＭＳｍ／ｚ４８５［Ｍ＋Ｈ］。キラル分析９９．９％ｅｅ。
【０１１８】
本発明の例示的な化合物を以下のインビトロおよびインビボアッセイにおいて試験する。
【０１１９】
インビトロ
ヒトカテプシンＳおよびマウスカテプシンＳについての効力アッセイならびにヒトカテプシンＬ、Ｂ、Ｋ、Ｖ、およびＦについての選択的アッセイを以下に記載する。各アッセイの実験条件および／または材料はわずかに異なるので、そのような相違は全体のアッセイ条件内に直接示すか、または全体のアッセイ条件の直後の表１における指定１ａ〜１ｇを使用してそれぞれの酵素アッセイに従ってコード化する。
【０１２０】
試験化合物をＤＭＳＯ中で調製して、１０ｍＭのストック溶液を作製する。ストック溶液をＤＭＳＯ中で連続希釈して、インビトロ酵素アッセイを実施する前に９６ウェル丸底プレート中の最終化合物濃度範囲１ａを用いて１０点希釈曲線を得る。本明細書以下すぐに記載しているアッセイバッファー（全アッセイについて使用した）中で化合物をさらに希釈する１ｂ：
ヒトカテプシンＳ、Ｌ、Ｂ、ＦおよびマウスカテプシンＳ：２．５ｍＭのＤＴＴおよび２．５ｍＭのＥＤＴＡとさらに０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００を含有する５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）
ヒトカテプシンＫおよびＶ：１００ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＤＴＴおよび２．５ｍＭのＥＤＴＡとさらに０．０１％のＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００を含有する１００ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）。
【０１２１】
１０μＬの各希釈液を、対応する低タンパク質結合ハーフエリアブラックプレート（Ｃｏｓｔａｒ３６９４）の列Ａ〜Ｈの各ウェルに加える。アッセイバッファー中で調製した、量１ｃの基質、ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アルギニン−４−メチル−クマリル−７−アミド（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を、最終濃度１ｄでプレートの各ウェルに加える。アッセイバッファー中で調製した、本明細書以下すぐに記載している量１ｅのそれぞれの酵素を、基質および試験化合物を含有するプレートの各ウェルに加え、反応を開始するために最終濃度１ｆを得る。
ヒトカテプシンＳ、Ｌ、Ｋ、およびＶ：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍから得た。
マウスカテプシンＳ：手短に述べると、マウスカテプシンＳを、ヒスチジンタグを含有するｍカテプシンＳ−ｐＡＮ５１（Ｔ７６０）構築物を使用してバキュロウイルス中でクローニングする。次いでＩＭＡＣを利用して活性タンパク質を精製する。
ヒトカテプシンＦ：手短に述べると、ヒト組換えカテプシンＦ酵素を以下のように実験室（ｈｏｕｓｅ）内で調製する。プロカテプシンＦを、ヒスチジンタグを含有するカテプシンＦ−ｐＡＮ６０（Ｔ−２１８８）構築物を使用して２９３Ｅ細胞中でクローニングする。次いでＩＭＡＣを利用してタンパク質を精製する。ペプシンを使用してプロカテプシンＦを設計し、Ｍｏｎｏ  Ｓカラムクロマトグラフィーを使用して再精製し、精製した活性化カテプシンＦを得る。
【０１２２】
混合物をプレートミキサー上で低速度にて手短に振盪する。室温でのインキュベーション時間１ｇの後、混合物のＲＦＵを、励起波長３５５ｎｍおよび発光波長４６０ｎｍにて０．１秒間、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ２１０３マルチラベルリーダーを使用して記録する。ＲＦＵを阻害濃度に対してプロットし、曲線を４パラメータロジスティック式を用いて適合し、Ａｃｉｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ（バージョン７．３．２．１）を使用してＩＣ５０値を得る。ヒトカテプシンＦについて、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ａｌｐｈａマイクロプレートリーダー（０．５秒読み取り／ウェル）を使用してＲＦＵを測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４．０３ソフトウェアを使用して、阻害濃度に対してＲＦＵをプロットする。
【０１２３】
【表９】
2013540154.tif 000047
【０１２４】
本質的に上記のプロトコルに従って、例示的な化合物は、ヒトカテプシンＳおよびマウスカテプシンＳ酵素阻害アッセイにおいてそれぞれ８００ｎＭ未満および４００ｎＭのＩＣ５０を示す。特に、実施例１および２の化合物は、ヒトカテプシンＳ酵素阻害アッセイにおいて、それぞれ約６．４ｎＭおよび１０．２ｎＭのＩＣ５０を示し、マウスカテプシンＳ酵素阻害アッセイにおいて、それぞれ約１．７ｎＭおよび３．９ｎＭのＩＣ５０を示し、それにより、本発明の範囲内の特定の化合物がヒトおよびマウスカテプシンＳの有効な阻害剤であることが実証される。
【０１２５】
ヒトカテプシンＬ、Ｂ、Ｋ、およびＶの酵素阻害アッセイに関して、実施例１の化合物は、それぞれ約１６７μＭ超、５．２μＭ、１００μＭ超、および３３μＭのＩＣ５０を示し、実施例２の化合物は、それぞれ約１６７μＭ超、９４μＭ、１００μＭ超、および１００μＭ超のＩＣ５０を示す。ヒトカテプシンＦに関して、実施例１の化合物は３０μＭまで阻害を示さない。これらの結果により、本発明の範囲内の特定の化合物はカテプシンＳの選択的阻害剤であることが実証される。
【０１２６】
インビボ
ＣａＣｌ２誘導性ＡＡＡ動物有効性モデル
ＡＡＡに対するカテプシンＳ阻害剤の効果を研究するためにＣａＣｌ２誘導を使用するＡＡＡ動物有効性モデル（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２００２，１１０（５），６２５−６３２）を以下に記載するように改変する。
【０１２７】
各群、１２匹のマウスを含む、実施例１について６群、および実施例２について５群に分けたＴａｃｏｎｉｃ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｉｔｙ，Ｉｎｄｉａｎａ）からの野生型オス１２９ＳｖＥｖマウス（１０週齢）を使用する。実施例１および２についての群１〜５にそれぞれビヒクル溶液１％ＮＡＴＲＯＳＯＬ（登録商標）（ヒドロキシエチルセルロース）／０．２５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（ポリソルベート８０）／０．０５％Ａｎｔｉｆｏａｍ−１５１０（登録商標）（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ）およびビヒクル溶液中の１、３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を、４週間ｂ．ｉ．ｄ．で強制経口投与により投与する。偽群（ＣａＣｌ２の代わりに大動脈に付与した０．９％の生理食塩水およびビヒクルを投与した）を表す群６（実施例１の研究において）をベースラインを規定するために含む。第１の用量を外科手術の１日前（ｐ．ｍ．）に与え、第２の用量を外科手術の朝に与える。外科手術の日のｐ．ｍ．に動物に用量を投与していない。ｂ．ｉ．ｄ．投与（ａ．ｍ．およびｐ．ｍ．）を外科手術後に２８日間継続する。
【０１２８】
外科手術の日に、動物に鎮痛剤（ＢＵＰＲＥＮＥＸ（登録商標）、０．１ｍｇ／ｋｇ）を手術の１０分前および手術の３時間後に皮下に与えた。マウスを２％のイソフランの吸入により麻酔し、開腹を実施する。腹部大動脈を、外科手術用の開創器を用いて腸を横方向に引っ込め、腹腔内に腸を残すことによって露出させる。腎動脈のレベルから腸骨分岐部までの腹部大動脈を、顕微鏡下手術を使用して下大動脈および周囲結合組織から分離する。分離してから、腹部大動脈の対象の領域を、０．２５ｎＭのＣａＣｌ２水溶液で浸した前処理した滅菌コットンガーゼで覆った。偽対照動物において、０．９％の生理食塩水をＣａＣｌ２に置換する。７分後、ガーゼを除去し、第２のＣａＣｌ２を浸したガーゼ（または偽動物において０．９％の生理食塩水を浸したガーゼ）を適用する。２回目の７分後、ガーゼを除去し、大動脈を０．９％の生理食塩水でリンスし、腹部を閉じる。動物を一般的な部屋に戻し、そこで動物を個々に収容し、自由に標準的な齧歯動物の食餌（Ｐｕｒｉｎａ２０１４）および水を与える。
【０１２９】
上記の投与の４週間後、大動脈内腔周囲、ガーゼで包んだ大動脈部分の面積および直径を超音波（Ｂｉｏｓｏｕｎｄ  Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ−７．５ＭＨｚ）により決定し、ＪＭＰ（登録商標）７ソフトウェア（Ｃａｒｙ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を用いて統計的に分析する。大動脈内腔周囲の測定により決定したＡＡＡの減少の割合（この場合、測定される大動脈部分に関連する不規則な形状に起因する腹部大動脈のより正確な測定を表す）を以下の表１に示し、平均±標準偏差として表す。実施例１に関して、ビヒクル群を偽群と比較し、試験化合物をビヒクルと比較する。実施例２に関して、試験化合物をビヒクルと比較する。
【０１３０】
【表１０】
2013540154.tif 000048
【０１３１】
本質的に上記のプロトコルに従って、実施例１および２の化合物は、用量依存的に大動脈内腔周囲を減少させるので、本発明の範囲内の特定の化合物がＡＡＡを減少させることが実証される。
【０１３２】
ｐ１０蓄積アッセイ
各群が３匹のマウスを有する、４群に分けたＴａｃｏｎｉｃ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｃｉｔｙ，Ｉｎｄｉａｎａ）からの野生型のオスＣ５７Ｂ６または１２９ＳｖＥｖマウス（１０週齢）を使用する。群１〜４にそれぞれ、ビヒクル溶液１％ＮＡＴＲＯＳＯＬ（登録商標）（ヒドロキシエチルセルロース）／０．２５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（ポリソルベート８０）／０．０５％Ａｎｔｉｆｏａｍ−１５１０（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ）およびビヒクル溶液中の３、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を強制経口により投与する。４時間後、全血（３００〜５００μＬ）を各マウスから吸引する。赤血球を除去する工程を、１ｍＬのフローサイトメトリー溶解溶液（商標）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）を添加することによって実施し、１０分間室温にて維持し、４０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、次いで上清を捨てる。この工程をもう１回反復して、赤血球を完全に除去する。ＰＷＢＣペレットを５０μＬのＣｙｔｏＢｕｓｔｅｒ（商標）試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ）で再懸濁し、５〜１０秒間、高出力で超音波処理する。ＢＣＡアッセイ（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８８，１７５，２３１−２３７）を使用してタンパク質濃度を決定する。
【０１３３】
ウェスタンブロットを使用してｐ１０量を決定する。試料（０．５μｇ／μｌタンパク質濃度）を５分間９６℃にて変性させ、２０μｌ／ウェルの試料（１０μｇ／ウェル）を４〜１２％ＮＵＰＡＧＥ（登録商標）ＮＯＶＥＸ（登録商標）Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｍｉｄｉ−ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に負荷する。ＮＵＰＡＧＥ（登録商標）ＭＥＳ  ＳＤＳランニングバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてゲルを６０分間１２０Ｖで流す。ＮＵＰＡＧＥ（登録商標）輸送バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および２０％のメタノール（ＥＭＤ）を用いてタンパク質を１００Ｖにて３０分間０．２μｍのニトロセルロース（ＢＩＯ−ＲＡＤ）に移す。ブロットをＰＢＳで手短にリンスし、室温にて６０分間、１０ｍＬのＯＤＹＳＳＥＹ（登録商標）遮断バッファー（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で遮断する。ｐ１０に関して、ブロットを、４℃にて一晩、遮断バッファー中のマウスＣＤ７４に対する一次抗体（１μｇ／ｍｌのラット抗ＣＤ７４抗体）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と共にインキュベートする。チューブリン対照に関して、ブロットを、４℃にて一晩、遮断バッファー中のウサギ抗ベータチューブリンｐＡｂ（０．２μｇ／ｍｌ）（Ａｂｃａｍ）と共にインキュベートする。ブロットを、０．０１％のポリソルベート２０を含む洗浄バッファー（ＨｙＣｌｏｎｅ製のＤＰＢＳ）で各々１０分間、４回洗浄する。次いでブロットを室温にて６０分間二次抗体と共にインキュベートする。ｐ１０に関して、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６８０ヤギ抗ラットＩｇＧ（１：５０００希釈）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用する。チューブリンに関して、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（登録商標）６８０ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：５０００希釈）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用する。ブロットを再び上記のように洗浄し、走査のためにＰＢＳ中に入れる。
【０１３４】
ＯＤＹＳＳＥＹ（登録商標）赤外線画像装置（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で走査することにより画像を捕捉する。ＯＤＹＳＳＥＹ（登録商標）ソフトウェアを用いてｐ１０量を分析し、チューブリン量で正規化する。ＪＭＰ（登録商標）７ソフトウェア（Ｃａｒｙ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を用いてデータを統計的に分析する。ビヒクルに対する相対ｐ１０蓄積（倍の増加）を表３に示す。平均±標準偏差として値を表す。
【０１３５】
【表１１】
2013540154.tif 000049
【０１３６】
上記のプロトコルに従って、実施例１および２の化合物はＰＷＢＣ中で用量依存的にｐ１０を増加させ、本発明の範囲内の特定の化合物が抗原提示を遮断することを実証する。
【国際調査報告】
2013540154.tif 000054
2013540154.tif 000055
2013540154.tif 000056