(57)【要約】  本発明は、アルツハイマー病のようなアミロイドもしくはタウ病変、またはそれらの症状を治療または改善する方法に用いられる、式（Ｉ）の化合物に関する。また、本発明は、式（Ｉ）の新規化合物、下位の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の新規化合物に関する。  【化１】2013526597.tif 000032
2013526597.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドもしくはタウ病変またはそれらの症状を治療または改善する方法において用いられる、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2013526597.tif 000019
（式中、
Ｒ１は、水素または−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−（ＣＨ２）ｘ−Ｒ２（ここでＲ２は、場合により−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、もしくはＣ３−Ｃ８シクロアルキルによって置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であるか、あるいはＲ２は、置換もしくは非置換フェニル基によって、または置換もしくは非置換の５−もしくは６−員環ヘテロアリール基によって場合により置換されていてもよい複素環基であり；ｗは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｘは０、１、２、または３から選択される整数であり；そしてｙは０または１である。）からなる群から選択され；
Ａｒは、場合により置換されていてもよいフェニル、または場合により置換されていてもよい５−もしくは６−員環ヘテロアリール基であり；
Ａが−Ｃ（Ｈ）−であり；Ｂが、−（ＣＨ２）−Ｏ−、−（ＣＨ２）−Ｓ−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；かつＣが、場合により置換されていてもよいフェニル基、場合により置換されていてもよいベンジル基、または場合により置換されていてもよいナフチル基であるか；または
Ａが−Ｃ（＝）−であり；Ｂが＝Ｃ（Ｈ）−であり；かつＣが、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）、および−Ｏ（Ｃ７−Ｃ１０−アリールアルキル）からなる群から選択されるか、または場合により置換されていてもよいフェニル基もしくは場合により置換されていてもよいナフチル基であり；そして
ｎは、０、１、または２から選択される整数である。）
またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【請求項２】
Ａが−Ｃ（Ｈ）−であり、そしてＢが−Ｏ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｃが、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルケニル、Ｃ１−Ｃ３ペルフルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルケニル、−ＣＮ、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ７−Ｃ１０アリールアルキルから各々独立して選択される１つ以上の基によって場合により置換されていてもよいフェニル基であり、ここで前記Ｃ１−Ｃ３アルキルおよび前記Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル基のアルキル基が、Ｃ６−Ｃ１０ヘテロアリール基によって置換されていてもよい、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】
Ａｒがフェニル基である、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ａｒが、フラン、チオフェン、および−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉにより置換されたフェニルからなる群から選択されるものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ｎがゼロである、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が水素である、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
下記からなる群： 
【化２】
2013526597.tif 000020
【化３】
2013526597.tif 000021
【化４】
2013526597.tif 000022
【化５】
2013526597.tif 000023
【化６】
2013526597.tif 000024
【化７】
2013526597.tif 000025
【化８】
2013526597.tif 000026
【化９】
2013526597.tif 000027
から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【請求項９】
式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、または式（Ｖ）の化合物：
【化１０】
2013526597.tif 000028
（式中、各式に適切な場合に、
Ｒ１は先行する請求項のいずれか一項に定義されているものであり、好ましくはＲ１は、水素または−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、もしくはＣ３−Ｃ８シクロアルキルによって場合により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ａｒは、場合により置換されていてもよいフェニル基、または場合により置換されていてもよい５−もしくは６−員環ヘテロアリール基であり；
Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−（ＣＨ２）ｘ−Ｒ２であり、ここでＲ２は、置換もしくは非置換フェニル基によって、または置換もしくは非置換の５−または６−員環ヘテロアリール基によって場合により置換されていてもよい複素環基であり；ｗは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｘは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｙは０または１であり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ７−Ｃ１０−アリールアルキル、およびＣ６−Ｃ１０−アリールからなる群から選択され；
Ｊは、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、チオフェン、フラン、ピロール、ピリミジン、イソチアゾール、イミダゾール、インドール、プリン、キノリン、およびチアジアゾールからなる群から選択される、場合により置換されていてもよい５−または６−員環ヘテロアリール基であり；
ハロは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり；
Ｒ３は、水素、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルケニル、Ｃ１−Ｃ３ペルフルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルケニル、−ＣＮからなる群から選択され；
ｍは、１、２、または３であり；そして
ｐは、０または１である。）
またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【請求項１０】
Ｒ３が水素である、請求項９に記載の式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の化合物。
【請求項１１】
Ｊが、フランまたはチオフェンである、請求項９に記載の式（Ｖ）の化合物。
【請求項１２】
下記からなる群：
【化１１】
2013526597.tif 000029
【化１２】
2013526597.tif 000030
【化１３】
2013526597.tif 000031
から選択される化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【請求項１３】
請求項９〜１１のいずれか一項に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、もしくは（Ｖ）の化合物、または請求項１２に定義される化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物と、少なくとも１つの医薬的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
薬剤として用いられる、請求項９〜１１のいずれか一項に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の化合物、または請求項１２に定義される化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【請求項１５】
アミロイドもしくはタウ病変、またはそれらの症状を治療または改善する方法において用いられる、請求項９〜１１のいずれか一項に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の化合物、または請求項１２に定義される化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病のようなアミロイドもしくはタウ病変の治療および／またはその症状の改善に有用なフルフェノキシン（ｆｌｕｆｅｎｏｘｉｎｅ）誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は最も広く研究されているアミロイド病変であり、高齢者の認知症の最も一般的な原因である。全世界でおよそ１千５百万人、８５歳を超える人口の４０パーセントがＡＤを発症している。この疾患は患者の全体的不能を伴う、記憶、発話、運動の進行性喪失により特徴付けられ、患者は最終的に死亡する。
【０００３】
現在、アミロイド病変の治癒は望めない。今日の薬物療法はせいぜい症状および様々な病期を制御することに焦点が合わせられている。例えば、軽度から中程度のＡＤは、Ｃｏｇｎｅｘ（登録商標）（タクリン）、Ａｒｉｃｅｐｔ（ドネペジル）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）（リバスチグミン）、またはＲａｚａｄｙｎｅ（登録商標）（ガランタミン）のようなコリンエステラーゼ阻害剤による治療を伴い得るが、中程度から重度のＡＤはＮａｍｅｎｄａ（登録商標）（メマンチン）により治療され得る。これらの薬物療法はＡＤの症状の悪化を一定期間遅延または阻止するために役立ち得る。
【０００４】
従って、アミロイド病変、例えばＡＤの治療および／または改善のためのさらなる薬物の提供が必要とされている。これらの薬物は、例えば増大した効能、少ない毒性、改善されたバイオアベイラビリティーなどの好ましく改善された性質を有していなければならない。
【０００５】
剖検時の脳組織検査では、ＡＤにおける二つの主要な特徴である、細胞外のアミロイド斑の沈着および細胞内の神経原線維変化（ＮＦＴ）が同定された。
【０００６】
アミロイド斑は主に、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解に由来する凝集したアミロイドベータ（Ａβ）ペプチドから構成される。４０アミノ酸の単量体（Ａβ４０）は、凝集傾向があり、かつ損傷性のＡβ４２種よりもかなり一般的である。産生と排泄の間の不均衡がＡβを蓄積させる原因となり、このような過剰がＡＤを発病させる因子であり得る。このような見解は、早発性家族型ＡＤ変異の分析およびそれに続くトランスジェニック動物モデルにおける検証によって強く支持されている。従って、ヒトＡＰＰ遺伝子の変異型を発現するトランスジェニックマウスは、空間学習の障害を伴う線維性アミロイド斑およびアルツハイマー様脳病変を発症する。
【０００７】
さらに、ＡＤに対する主要な遺伝的危険因子であるＡＰＯＥ４（アポリポタンパク質Ｅ）は、ＡＤ症状の発現前に脳に過剰なアミロイドの蓄積を引き起こし得ると仮定されている。従って、Ａβ沈着は臨床上のＡＤに先立つと考えられる。
【０００８】
従って、脳におけるアミロイドの蓄積は、神経変性疾患（Ｔｅｂｂｅｎｋａｍｐ  ＡＴ，Ｂｏｒｃｈｅｌｔ  ＤＲ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９；５６６：８５−９１）、例えばアルツハイマー病（Ｄｅ  Ａｒａｉ，Ｔ，Ｉｋｅｄａ，Ｋ，Ａｋｉｙａｍａ，Ｈ，Ｔｓｕｃｈｉｙａ，Ｋ，Ｉｒｉｔａｎｉ，Ｓ，Ｉｓｈｉｇｕｒｏ，Ｋ，Ｙａｇｉｓｈｉｔａ，Ｓ，Ｏｄａ，Ｔ，Ｏｄａｗａｒａ，Ｔ，Ｉｓｅｋｉ，Ｅ（２００３）ＡＣＴＡ  ＮＥＵＲＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ  １０５：４８９−４９８）、パーキンソン病（Ｂｕｒａｃｋ  ＭＡ，Ｈａｒｔｌｅｉｎ  Ｊ，Ｆｌｏｒｅｓ  ＨＰ，Ｔａｙｌｏｒ−Ｒｅｉｎｗａｌｄ  Ｌ，Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ  ＪＳ，Ｃａｉｒｎｓ  ＮＪ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２０１０  Ｊａｎ  ５；７４（１）：７７−８４）、クロイツフェルト・ヤコブ病またはレビー小体認知症（Ｄｕｐｉｅｒｅｕｘ  Ｉ，Ｚｏｒｚｉ  Ｗ，Ｑｕａｄｒｉｏ  Ｉ，Ｐｅｒｒｅｔ−Ｌｉａｕｄｅｔ  Ａ，Ｋｏｖａｃｓ  ＧＧ，Ｈｅｉｎｅｎ  Ｅ，Ｅｌｍｏｕａｌｉｊ  Ｂ．Ｃｅｎｔ  Ｎｅｒｖ  Ｓｙｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００９  Ｍａｒ；９（１）：２−１１）に直接関連する。
【０００９】
ＮＦＴは、ＰＨＦ（対になったらせん状フィラメント）の束を含み、ＰＨＦの主成分は微小管結合タンパク質であるタウが過剰にリン酸化されたものである。過剰にリン酸化されたタウは別のタウの線維と対になり始めるとも仮定されている。これらは最終的に神経細胞体の内部に神経原線維変化を形成するが、これが起こると微小管は分解し、神経細胞の輸送系は崩壊する。これは最初に神経細胞間の生化学的伝達の機能不全を起こし、後に細胞死を起こし得る。
【００１０】
従って、タウの過剰なリン酸化は、神経変性病変（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，ＲＡ，Ｌａｎｔｏｓ，ＰＬ，Ｃａｉｒｎｓ，ＮＪ（２００５）Ｎｅｕｒｏｐａｔｏｌｏｇｉａ  ２５：１１１−１２４；Ａｖｉｌａ，Ｊ，Ｌｉｍ，Ｆ，Ｍｏｒｅｎｏ，Ｆ，Ｂｅｌｍｏｎｔｅ，Ｃ，Ｃｕｅｌｌｏ，ＡＣ（２００２）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ２５：２１３−２３１；Ａｖｉｌａ，Ｊ，Ｐｅｒｅｚ，Ｍ，Ｌｉｍ，Ｆ，Ｇｏｍｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ａ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｆ，Ｌｕｃａｓ，ＪＪ（２００４）Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｄａｄ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｃｉｏｎ  ６：４７７−４８２）、例えばアルツハイマー病（Ｄｅ  Ａｒａｉ，Ｔ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＡＣＴＡ  ＮＥＵＲＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ  １０５：４８９−４９８）、パーキンソン病（Ｍｏｒｉｓｈｉｍａ−Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７０：３９２−４０１）、ピック病（Ｂｉｒｄ，Ｔ，ｅｔ  ａｌ（２００３）Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５４：Ｓ２９−Ｓ３１）、進行性核上麻痺（Ｂｅｒｒｙ，ＲＷ，ｅｔ  ａｌ（２００４）ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＮＥＵＲＯＣＹＴＯＬＯＧＹ  ３３：２８７−２９５），ＤＣＢ（Ｗｅｅｋｓ，ＲＡ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＭＯＶＥＭＥＮＴ  ＤＩＳＯＲＤＥＲＳ  １８：３３１−３３６）、前頭側頭型認知症（Ｂｉｎｅｔｔｉ，Ｇ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＮＥＵＲＯＳＣＩＥＮＣＥ  ＬＥＴＴＥＲＳ３３８：８５−８７）、前頭葉症候群（Ｍ，Ｌａｒｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ７４：８６７−８７１）、ダウン症候群（Ｂａｒｂｉｅｒｏ，Ｌ，  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １８２：３３５−３４５）、認知症（Ｂｏｒｎｅｂｒｏｅｋ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３：３４９−３６１）、前頭側頭型軽度認知機能障害（ｄｅ  Ｍｅｎｄｏｎｃａ，Ａ，ｅｔ  ａｌ（２００４）ＲＥＶＩＳＴＡ  ＤＥ  ＬＡ  ＥＮＦＥＲＭＥＤＡＤ  ＤＥ  ＡＬＺＨＥＩＭＥＲ  ６：１−９）、大脳皮質基底核変性症（Ｇｒａｈａｍ，ＮＬ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＭＯＶＥＭＥＮＴ  ＤＩＳＯＲＤＥＲＳ  １８：１２２４−１２３２  ＴＲＡＳＴＯＲＮＯＳ  ＤＥＬ  ＭＯＶＩＭＩＥＮＴＯ  １８：１２２４−１２３２、進行性原発性失語症（Ｓｏｂｒｉｄｏ，ＭＪ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＮＥＵＲＯＬＯＧＩＡ  ６０：８６２−８６４）、筋萎縮性側索硬化症（７３．Ｌｏｍｅｎ−Ｈｏｅｒｔｈ，Ｃ，ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｔｈｅ  ｏｖｅｒｌａｐ  ｏｆ  ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ．ＮＥＵＲＯＬＯＧＹ  ５９：１０７７−１０７９）、多系統萎縮症（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ（２００４）ＡＣＴＡ  ＮＥＵＲＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ  １０７：４８９−４９６）、進行性初老期認知症、両側頭骨萎縮症（Ｏｓｔｏｊｉｃ，Ｊ，ｅｔ  ａｌ（２００４）ＧＥＲＩＡＴＲＩＣＡ  １７：２９８−３０１���クロイツフェルト・ヤコブ病（Ｓｈｉｍａｍｕｒａ，Ｍ，Ｕｙａｍａ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＩＮＴＥＲＮＡＬ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ  ４２：１９５−１９８  ＭＥＤＩＣＩＮＡ  ＩＮＴＥＲＮＡ  ４２：１９５−１９８）、大脳アミロイド血管障害（Ｗｅｅｋｓ，ＲＡ，ｅｔ  ａｌ（２００３）ＭＯＶＥＭＥＮＴ  ＤＩＳＯＲＤＥＲＳ  １８：３３１−３３６）にも関連づけられてきた。
【００１１】
従って、タウのリン酸化の阻害および／またはベータアミロイドの沈着の阻害が可能な化合物の探索は、それらがアミロイドおよびタウ病変の治療に有用であり得ることから大きな関心が寄せられている。
【００１２】
国際公開第２００５／１０５７６３号には、ノルエピネフリン再取り込み阻害薬として、およびアルツハイマー病の潜在的治療薬として、置換モルホリン環により特徴付けられる化合物ファミリーの有用性について開示されている。
【００１３】
フルフェノキシン（ｆｌｕｆｅｎｏｘｉｎｅ）およびその塩は、セロトニンおよび／またはノルアドレナリン取り込みを阻害することが知られており、かつ抗うつ特性を有することが知られている。Ｏｒｊａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００３，４６，５５１２−５５３２には、フルフェノキシン（ｆｌｕｆｅｎｏｘｉｎｅ）誘導体がセロトニン輸送体に対して（そのほとんどはノルエピネフリン輸送体に対しても）高親和性の化合物であると記載されているが、アルツハイマー病のようなアミロイド病変の治療に有用であり得ることは示されていない。
【００１４】
米国特許第６５１８２８４号には、式（Ｉ）の化合物について、アルツハイマー病のようなアミロイド病変の治療に対する何らずれの有用性も示すことなく開示されている。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】表示化合物により処置した小脳顆粒神経細胞から得た可溶性細胞抽出物中のタウ−１の相対レベルについて独立した３実験を行い、これらの平均をタウリン酸化として示す。化合物６は参照化合物である。
【図２】化合物３による、トランスジェニック細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１からのアミロイドペプチド（β１−４０）の分泌レベルの変化を示す。
【図３】化合物１０による、トランスジェニック細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１からのアミロイドペプチド（β１−４０）の分泌レベルの変化を示す。
【図４】化合物９（＋）による、トランスジェニック細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１からのアミロイドペプチド（β１−４０）の分泌レベルの変化を示す。
【図５】化合物４による、トランスジェニック細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１からのアミロイドペプチド（β１−４０）の分泌レベルの変化を示す。
【図６】化合物３、化合物１０、および化合物４による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【図７】化合物９（＋）による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【図８】化合物３１および化合物４１による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【図９】化合物３４、化合物２９、および化合物３７による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【図１０】化合物２、化合物３６、および化合物３５による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【図１１】化合物５（−）および化合物５（＋）による、Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルの変化を示す。
【００１６】
本明細書中の「化合物（ＣＯＭＰＯＵＮＤ）」および「化合物（ＣＯＭＰ．）」は同じ意味をもち、互換性がある。
【発明の概要】
【００１７】
本発明者らは、幾つかの既知および新規のフルフェノキシン（ｆｌｕｆｅｎｏｘｉｎｅ）誘導体が、驚くべきことに、アミロイドおよびタウ病変の治療に有用である可能性があり、例えば増大した効力、少ない毒性、および／または改善されたバイオアベイラビリティーを示すことを見出した。該化合物は驚くほど有効である。これらは、アミロイドおよびタウ病変の組織病理学的マーカーである、アミロイド沈着およびタウ過剰リン酸化の両方において生物学的活性を示した。この二重の活性は、ＡＤのようなアミロイドまたはタウ病変の進行を真に変化させ得る薬物を誘導する可能性がある。
【００１８】
従って、第１の態様によれば、本発明は、アミロイドもしくはタウ病変またはそれらの症状を治療または改善する方法において用いられる、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2013526597.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、水素または−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−（ＣＨ２）ｘ−Ｒ２（ここでＲ２は、場合により−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、もしくはＣ３−Ｃ８シクロアルキルによって置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であるか、あるいはＲ２は、置換もしくは非置換フェニル基によって、または置換もしくは非置換の５−もしくは６−員環ヘテロアリール基によって場合により置換されていてもよい複素環基であり；ｗは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｘは０、１、２、または３から選択される整数であり；そしてｙは０または１である。）からなる群から選択され；
Ａｒは、場合により置換されていてもよいフェニル、または場合により置換されていてもよい５−もしくは６−員環ヘテロアリール基であり
Ａが−Ｃ（Ｈ）−であり；Ｂが、−（ＣＨ２）−Ｏ−、−（ＣＨ２）−Ｓ−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；かつＣが、場合により置換されていてもよいフェニル基、場合により置換されていてもよいベンジル基、または場合により置換されていてもよいナフチル基であるか；または
Ａが−Ｃ（＝）−であり；Ｂが＝Ｃ（Ｈ）−であり；かつＣが、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）、および−Ｏ（Ｃ７−Ｃ１０−アリールアルキル）からなる群から選択されるか、または場合により置換されていてもよいフェニル基もしくは場合により置換されていてもよいナフチル基であり；そして
ｎは、０、１、または２から選択される整数である。）
またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物。
【００１９】
アミロイドまたはタウ病変の治療に共通して有用な幾つかの誘導体は、新規な化学化合物である。従って、本発明のさらなる態様は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、または式（Ｖ）の化合物：
【化２】
2013526597.tif 000004
（式中、各式に適切な場合に、
Ｒ１は上に定義されているものであり、好ましくはＲ１は、水素または−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、もしくはＣ３−Ｃ８シクロアルキルによって場合により置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
Ａｒは、場合により置換されていてもよいフェニル基、または場合により置換されていてもよい５−もしくは６−員環ヘテロアリール基であり；
Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｗ−（Ｃ＝Ｏ）ｙ−（ＣＨ２）ｘ−Ｒ２であり、ここでＲ２は、置換もしくは非置換フェニル基によって、または置換もしくは非置換の５−または６−員環ヘテロアリール基によって場合により置換されていてもよい複素環基であり；ｗは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｘは０、１、２、または３から選択される整数であり；ｙは０または１であり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ７−Ｃ１０−アリールアルキル、およびＣ６−Ｃ１０−アリールからなる群から選択され；
Ｊは、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、チオフェン、フラン、ピロール、ピリミジン、イソチアゾール、イミダゾール、インドール、プリン、キノリン、およびチアジアゾールからなる群から選択される、場合により置換されていてもよい５−または６−員環ヘテロアリール基であり；
ハロは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり；
Ｒ３は、水素、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルケニル、Ｃ１−Ｃ３ペルフルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルケニル、−ＣＮからなる群から選択され；
ｍは、１、２、または３であり；そして
ｐは、０または１である。）
またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００２０】
本発明のさらなる態様は、下記からなる群：
【化３】
2013526597.tif 000005
【化４】
2013526597.tif 000006
から選択される誘導体、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、上に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、もしくは（Ｖ）の化合物、または上に定義される誘導体、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物と、少なくとも１つの医薬的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物である。
【００２２】
本発明のさらなる態様は、薬剤として用いられる、上に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、もしくは（Ｖ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００２３】
本発明のさらなる態様は、アミロイドもしくはタウ病変またはそれらの症状を治療または改善する方法において用いられる、上に定義される式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、もしくは（Ｖ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明に関しては、次の用語は以下に詳述する意味を有する。
【００２５】
用語「Ｃ１−６アルキル」または「Ｃ１−Ｃ６−アルキル」は、不飽和結合を含まず、１ないし６、好ましくは１ないし３（「Ｃ１−３アルキル」または「Ｃ１−Ｃ３−アルキル」）の炭素原子を有し、この炭素原子が当該分子の残りの部分に単結合によって結合している、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖基を指し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
用語「シクロアルキル」は、３ないし８、好ましくは３ないし６の炭素原子を有し、この炭素原子が当該分子の残りの部分に単結合によって結合している、飽和もしくは部分飽和の単環式または多環式の脂肪族基を指し、例えばシクロプロピル、シクロヘキシル、シクロペンチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
用語「アリール」は、１または２の芳香族核を含む、６ないし１０、好ましくは６ないし８の炭素原子を有し、炭素−炭素結合または縮合により結合している芳香族基を指し、例えばフェニル、ナフチル、ジフェニル、インデニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、「アリール」はフェニルを指す。
【００２８】
用語「アリールアルキル」は、アルキル基を通して当該分子の残りの部分に結合してなるアリール基、例えばＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ２−アルキルを指す。
【００２９】
用語「ペルフルオロアルキル」は、可能な全ての位置が−Ｆによって置換されたアルキル基を指す。
【００３０】
用語「Ｃ１−６アルケニル」または「Ｃ１−Ｃ６−アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和結合を含み、１ないし６、好ましくは１ないし３（「Ｃ１−３アルケニル」または「Ｃ１−Ｃ３−アルケニル」）の炭素原子を有し、この炭素原子が当該分子の残りの部分に単結合によって結合している、炭素原子および水素原子からなる直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖基を指し、例えばエテニル、ｎ−プロペニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
「ヘテロシクリル」は、炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択される１から５のヘテロ原子からなり、部分的にまたは完全に飽和し得る安定な３−ないし１０−員環基を指す。本発明の目的のためには、複素環は、単環、二環、または三環系であることができ、縮合環系を含むこともでき；ヘテロシクリル基の窒素、炭素、または硫黄原子は場合により酸化型であってもよく；そして窒素原子は場合により四級化されていてもよい。このような複素環の例には、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、テトラヒドロフランが含まれるが、これらに限定されない。一つの実施形態によれば、ヘテロシクリル基は５−または６−員環である。さらなる実施形態によれば、ヘテロシクリル基は６ないし１０の炭素原子（Ｃ６−Ｃ１０）を有する。
【００３２】
「ヘテロアリール」は、炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択される１から５のヘテロ原子からなる、安定な５−または６−員芳香族環を指す。本発明の目的のためには、ヘテロアリールは、単環、二環、または三環系であることができ、縮合環系を含むこともでき；ヘテロアリール基の窒素、炭素、または硫黄原子は場合により酸化型であってもよく；そして窒素原子は場合により四級化されていてもよい。このようなヘテロアリールの例には、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、フラン、ピロール、ピリジン、ピリミジン、イソチアゾール、イミダゾール、インドール、プリン、キノリン、チアジアゾールが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、「ヘテロアリール」はチオフェンを指す。
【００３３】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、ブロモ、クロロ、ヨード、またはフルオロを指す。
【００３４】
本技術分野において理解されるように、先に定義された基はある程度の置換を有し得る。従って、本発明の任意の基にも置換が存在し得る。本発明の基における置換基について、本明細書では、特定の基における１以上の置換可能な位置が１以上の置換基によって置換され得ることを示している。前記置換基には、例えばＣ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、−Ｎ（Ｒａ）（Ｒｂ）、−ＯＲｃ、−ＳＲｄ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｅ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｇ）（Ｒｈ）、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｉが含まれるがこれらに限定されず；ここでＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｈ、およびＲｉは各々独立して水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、およびトリフルオロメチルから選択される。
【００３５】
本発明の一つの実施形態によれば、Ａは−Ｃ（Ｈ）−であり、かつＢは−Ｏ−である。
【００３６】
本発明の一つの実施形態によれば、Ｃは−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、Ｃ１−Ｃ３アルキル（例えばメチル）、Ｃ１−Ｃ３アルケニル、Ｃ１−Ｃ３ペルフルオロアルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル（例えばメトキシ）、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルケニル、−ＣＮ、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ７−Ｃ１０アリールアルキルから独立して選択される１以上の基によって場合により置換されていてもよいフェニル基であり、ここで前記Ｃ１−Ｃ３アルキルおよび前記Ｏ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル基のアルキル基は、−Ｏ−Ｃ６−Ｃ１０ヘテロアリール基によって置換されていてもよい。さらなる実施形態によれば、Ｃは少なくとも−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ、さらに詳細には−Ｆまたは−Ｃｌによって置換されたフェニル基である。
【００３７】
さらなる実施形態によれば、Ｃは式（ＶＩＩ）
【化５】
2013526597.tif 000007
（式中、ハロ、Ｒ３、およびｍは、上に定義されたものである。）
のフェニル基である。
【００３８】
本発明の一つの実施形態によれば、Ａｒはフェニル基である。本発明の一つの実施形態によれば、Ａｒは、フラン、チオフェン、および−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉにより置換されたフェニル基からなる群から選択される。
【００３９】
本発明の一つの実施形態によれば、ｎはゼロである。
【００４０】
本発明の一つの実施形態によれば、Ｒ１は水素である。
【００４１】
さらなる実施形態によれば，Ｒ１は、−ＮＨ２、−ＳＨ、または−ＯＨにより置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基である。
【００４２】
さらなる実施形態によれば，Ｒ１は、式（ＶＩＩＩ）
【化６】
2013526597.tif 000008
（式中、ｘ、ｙ、およびｗは上に定義されたものであり、ｘ、ｙ、またはｗのうち少なくとも１つは０ではなく、Ｑは、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、および−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキルからなる群から選択される１つまたは２つの基によって置換されていてもよいフェニル基であるか、あるいはＱは、２個の窒素原子のうち１つを環内に有する６−員ヘテロアリール基である。）
の基である。より具体的な実施形態によれば、Ｑは、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、およびメトキシからなる群から選択される１つまたは２つの基によって置換されたフェニル環である。さらにより具体的な実施形態によれば、Ｑは、１つのフルオロ、１つのクロロ、または１つのメトキシによって置換されたフェニル基である。さらにより具体的な実施形態によれば、Ｑは、ｐ−フルオロフェニル、ｍ−クロロフェニル、ｐ−クロロフェニル、またはｏ−メトキシフェニルである。
【００４３】
さらなる実施形態によれば、ｘ、ｙ、およびｗは上に定義されたものであり、ｘ、ｙ、またはｗのうち少なくとも１つは０ではなく、Ｑはピペラジニルまたはピリジニルであり、好ましくはピペラジン−２−イルである。
【００４４】
さらなる実施形態によれば、ピペリジン基は３位を通して当該分子の残りの部分に結合する。さらなる実施形態によれば、ピペリジン基は４位を通して当該分子の残りの部分に結合する。
【００４５】
本発明の別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、好ましくは下記群：
【化７】
2013526597.tif 000009
【化８】
2013526597.tif 000010
【化９】
2013526597.tif 000011
【化１０】
2013526597.tif 000012
【化１１】
2013526597.tif 000013
【化１２】
2013526597.tif 000014
【化１３】
2013526597.tif 000015
【化１４】
2013526597.tif 000016
【化１５】
2013526597.tif 000017
から選択される化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００４６】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００４７】
本発明のさらなる実施形態は、化合物１０、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００４８】
本発明のさらなる実施形態は、化合物４、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００４９】
本発明のさらなる実施形態は、化合物９（＋）、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５０】
本発明のさらなる実施形態は、化合物５（−）、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５１】
本発明のさらなる実施形態は、化合物５（＋）、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５２】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３１、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５３】
本発明のさらなる実施形態は、化合物４１、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５４】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３４、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５５】
本発明のさらなる実施形態は、化合物２９、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５６】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３７、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５７】
本発明のさらなる実施形態は、化合物４０、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５８】
本発明のさらなる実施形態は、化合物２７、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００５９】
本発明のさらなる実施形態は、化合物２４、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６０】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３２、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６１】
本発明のさらなる実施形態は、化合物１８、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６２】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３６、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６３】
本発明のさらなる実施形態は、化合物３５、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６４】
本発明のさらなる実施形態は、化合物２１、またはその医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物である。
【００６５】
本発明の一つの実施形態によれば、式（ＩＩＩ）の化合物のＲ５はメチルである。本発明の一つの実施形態によれば、式（ＩＩＩ）の化合物のＲ５は水素である。本発明の一実施形態によれば、式（ＩＩＩ）の化合物のＲ５はベンジルである。
【００６６】
本発明の一実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物のＲ４は、アミノ基により場合により置換されていてもよいＣ２−Ｃ４−アルキル基である。
【００６７】
本発明の一つの実施形態によれば、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の化合物のＲ３は水素である。
【００６８】
本発明の一つの実施形態によれば、式（Ｖ）の化合物の「Ｊ」はフランまたはチオフェンである。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物は、塩、好ましくは医薬的に許容される塩の形態、または溶媒和物の形態であってよい。レシピエントに投与する際に、本明細書に記載するような化合物は、前記塩または溶媒和物によって（直接的または間接的に）提供される。それにもかかわらず、医薬的に許容されない塩であっても、医薬的に許容される塩の調製に有用となり得ることから、本発明の範囲内にあることが認められるであろう。塩は、当該技術分野における既知の方法によって調製できる。「医薬的に許容される」は、好ましくはヒトまたは動物に投与した際に生理的に許容され、かつアレルギー性反応、または胃疾患、浮動性めまいなどの同様の好ましくない反応を典型的に引き起こさない分子種および組成物に関する。用語「医薬的に許容される」は、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または動物に、さらに具体的にはヒトに用いられる、米国薬局方もしくは別の一般に認識されている薬局方に含まれるものであることを意味する。
【００７０】
本発明による用語「溶媒和物」は、非共有結合で別の分子（大概は極性溶媒）に結合する当該別の分子を有する、本発明による任意の形態の有効化合物を意味するものとして理解される。溶媒和物の例には、水和物およびアルコラート、例えばメタノラートが挙げられる。好ましくは、溶媒和物は医薬的に許容される溶媒和物である。
【００７１】
塩および溶媒和物の調製は、当該技術分野において公知の方法によって行うことができる。例えば、本明細書で提供される化合物の医薬的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、基本部分を含む親化合物から合成される。一般にこのような塩は、例えば、水中もしくは有機溶媒中またはそれら２つの混合液中で、適切な塩基または酸を用いてこれらの化合物の遊離塩基型を反応させることにより調製される。一般には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。酸付加塩の例には、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩の単塩および二塩のような鉱酸付加塩、ならびに例えば酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩の単塩および二塩のような有機酸付加塩が挙げられる。好ましい実施形態によれば、塩はジクロロハイドレート塩、ヘミ硫酸塩、またはメタンスルホン酸塩である。
【００７２】
医薬的に許容される好ましい一つの形態は結晶形であり、医薬組成物におけるこのような形態が含まれる。塩および溶媒和物の場合、追加されるイオン性成分および溶媒成分もまた無毒でなければならない。本発明の化合物は様々な多形性の形態で存在する可能性があり、本発明はこのような形態を全て包含することが意図される。
【００７３】
本特許出願における「立体異性体」は、同じ配列の結合によって結合された同じ原子から形成されているが、互換性のない異なる三次元構造を有する化合物について言及するものであり、これらには所定の化合物または式の鏡像異性体およびジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）が含まれる。
【００７４】
本発明の化合物はまた、１つ以上の、同位体が濃縮された原子の存在のみによって異なる化合物を含むことも意図される。例えば、本構造を有するが、水素が重水素もしくはトリチウムにより置換されているか、または炭素が１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−濃縮炭素により置換されているか、または窒素が１５Ｎ−濃縮窒素により置換されている化合物は、本発明の範囲内である。
【００７５】
上に記載した式（Ｉ）により表される本発明の化合物は、キラル中心の存在に応じて鏡像異性体を含んでよいし、または多重結合の存在に応じて異性体（例えばＺ、Ｅ）を含んでよい。単一異性体、鏡像異性体、またはジアステレオ異性体、およびそれらの混合物は本発明の範囲内である。
【００７６】
本明細書に関しては、用語「治療」または「治療するための」は、疾患またはこの疾患に関連する１以上の症状を予防、改善、または除去するための、本発明による化合物または製剤の投与を意味する。「治療」はまた、疾患の生理的な続発症の予防、改善、または除去をも包含する。
【００７７】
本発明に関しては、用語「改善する」は、治療される患者の、主観的な（患者の気持ち、または患者の感覚）または客観的な（測定されたパラメータ）状態における任意の改善を意味するものとして理解される。
【００７８】
医薬組成物
本発明のさらなる態様は、上に定義した式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、もしくは（Ｖ）の化合物、または上に定義した誘導体、またはそれらの医薬的に許容される塩、立体異性体および／または溶媒和物と、少なくとも１つの医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物である。
【００７９】
用語「担体」は、有効成分と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、例えば水および油などの滅菌液体であってよく、ピーナッツ油、大豆油、ミネラルオイル、胡麻油などのような、石油，動物、植物、または合成に由来する滅菌液体を含む水または生理食塩水溶液ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液が担体として、特に注射用溶液のために好ましく用いられる。適切な医薬担体については、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００５に記載されている。好ましくは、本発明の担体は、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されている、または動物に、さらに具体的にはヒトに用いられる米国薬局方もしくはその他の一般に認識されている薬局方に挙げられている。
【００８０】
本発明の医薬組成物の投与に望ましい医薬製剤の製造に必要な担体および補助物質は、投与に選ばれた医薬製剤に特に依存し得る。医薬組成物の投与のための前記医薬製剤は、当業者に既知の従来の方法に従って製造され得る。様々な有効成分の投与法、用いられる賦形剤、およびそれらの作製方法についての総説は、「Ｔｒａｔａｄｏ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｉａ  Ｇａｌｅｎｉｃａ」Ｃ．  Ｆａｕｌｉ  ｉ  Ｔｒｉｌｌｏ，Ｌｕｚａｎ  ５，Ｓ．Ａ．ｄｅ  Ｅｄｉｃｉｏｎｅｓ，１９９３、または「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」Ｒｏｗｅ  Ｃ．Ｒ．；Ｐａｕｌ  Ｊ．Ｓ．；Ｍａｒｉａｎ  Ｅ．Ｑ．，ｓｉｘｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎに見出される。
【００８１】
医薬組成物の例には、経口、局所、または非経口投与のための、いずれの固体（錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤など）または液体（液剤、懸濁剤、または乳剤）の組成物も含まれる。
【００８２】
好ましい実施形態によれば、医薬組成物は経口用形態である。経口投与のために適切な用量形態は、錠剤およびカプセル剤であってよく、そして当該技術分野において公知の従来の賦形剤である、結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン；フィラー、例えばラクトース、糖類、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、またはグリシン；打錠潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム；崩壊剤、例えばデンプン、ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、または微結晶セルロース；またはラウリル硫酸ナトリウムのような医薬的に許容される湿潤剤を含んでいてよい。
【００８３】
経口用固体組成物は、混合、充填、または打錠という従来の方法によって調製されてよい。大量のフィラーを用いたこれらの組成物中に有効薬剤をまんべんなく分配するため、混合操作が繰り返し行われ得る。このような操作は当該技術分野においては標準的である。例えば錠剤は、湿式または乾式造粒により調製されてよく、場合により通常の薬務において公知の方法に従い、特に腸溶コーティングによってコートされる。
【００８４】
医薬組成物は、適切な単位剤形において、滅菌溶液、懸濁液、または凍結乾燥製品のように、非経口投与にも適応させてよい。増量剤、緩衝剤、または界面活性剤のような、適した賦形剤を用いることができる。
【００８５】
言及した製剤は、スペインおよび米国薬局方ならびに同様の参考文献に記載または照会されているような標準法を用いて調製され得る。
【００８６】
本発明の化合物または組成物は、静脈内点滴、経口用製剤、ならびに腹腔内および静脈内投与のようないずれの適した方法によって投与されてよい。患者の便宜と、治療される疾患の多くは慢性であることから、経口投与が好ましい。
【００８７】
一般に、本発明の化合物の有効投与量は、選択した化合物の相対的な効力、治療される障害の重症度、および患者の体重に依存し得る。しかしながら、有効化合物は、典型的には１日１回以上、例えば１日に１、２、３、または４回、０．０１ないし１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の典型的な総一日用量が投与される。
【実施例】
【００８８】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）の化合物を含む本発明の化合物は，第９８０２４２０号、欧州特許第１００２７９４Ａ１号、米国特許第６，５１８，２８４号、またはＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５３５８２号に記載される一般法に従って調製できる。
【００８９】
式（Ｖ）の化合物または関連化合物もまた、以下のスキーム１に従い、対応するケトンをＭｅ３Ｓ（Ｏ）ＩまたはＭｅＯＣＨ２ＰＰｈ３によって処理（Ｐ．Ｊ．Ｇｉｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９２，３５，２３，４３４９）した後、還元することによって調製できる。得られたアルコールは、対応するベンジルまたはフェニル誘導体によってアルキル化してもよい。
【化１６】
2013526597.tif 000018
さらなる代表的な実施例を以下に示す。
【００９０】
実施例１
（＋／−）−４−［（ナフタレン−１−オキシ）（４−クロロフェニル）メチル］ピペリジンヘミ硫酸塩  化合物３１の調製
以下の手順は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，Ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載される化合物１５ａｕの調製に同様である。
【００９１】
ヘキサン洗浄したＮａＨ（０．２ｇ、６０％油分散液）を、１０ｍＬ無水ＤＭＳＯ中で撹拌した懸濁液に、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１４ｂ（１．６ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、安息香酸カリウム（０．７ｇ）を加え、３０分間撹拌を続けた。ナフタレン（５．９ｍｍｏｌ）を加えて反応液を８５℃で１５時間加熱した後、室温まで冷却した。水および塩水の混合液を加え、ジエチルエーテルによって油抽出した。有機相を真空中で濃縮した後、メタノール（３５Ｍｌ）および１０％ＨＣｌ水溶液（３０ｍＬ）によって、１．５時間撹拌しながら還流した。溶媒除去後、残渣を１０％ＨＣｌ水溶液とＣＨＣｌ３の間に分配した。酸性水溶液を５％ＮａＯＨ水溶液でｐＨ＞９になるまで処理し、分離した油をＣＨＣｌ３で抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、そして溶媒を減圧下で除去して琥珀色の油を得た。粗生成物を水中（２０ｍＬ）でＨ２ＳＯ４溶液（０．４ｍＬ）と共に３０分間撹拌した。形成しさわずかに茶色の固体を濾過し、水で洗浄し、１．２ｇの表題化合物を得た（収率：６７％）。
【００９２】
実施例２
（＋／−）−４−［３−フルオロ−５−［（３，４−メチレンジオキシ）フェノキシ］メチル］フェノキシ］メチル］ピペリジン塩酸塩  化合物３２の調製
アセトニトリル（５０ｍＬ）中の３，４−（メチレン）ジオキシフェノール（セサモール、すなわち５−ベンゾジオキソール）（３．４ｇ、２５ｍｍｏｌ）溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（４．２ｇ）を加え、続いて３，５−ジフルオロベンジルブロミド（４．２ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を６時間還流した後、室温まで冷却し、溶媒を減圧下で除去した。残渣に５％ＮａＯＨ水溶液を加え、混合液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、そして真空中で濃縮して、わずかに黄色の固体である１−［（３，４−メチレンジオキシ）フェノキシ］メチル−３，５−ジフルオロベンゼンを得た（ｍｐ  ５３〜５６℃、収率：７８％）。
【００９３】
ヘキサン洗浄したＮａＨ（０．６ｇ、６０％油分散液）を、２０ｍＬ無水ＤＭＳＯ中で撹拌した懸濁液に、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１４ｊ（２．０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、安息香酸カリウム（０．２ｇ）を加え、３０分間撹拌を続けた。５ｍＬ無水ＤＭＳＯ中の１−［（３，４−メチレンジオキシ）フェノキシ］メチル−３，５−ジフルオロベンゼン（３．０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）溶液を加え、混合液を室温で２０時間撹拌した後、水および１０％ＨＣｌ水溶液で処理し、ＣＨＣｌ３で抽出した。有機相を１０％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して琥珀色の油（２．９ｇ、収率：７０％）を得て、これをジエチルエーテル中のＨＣｌ飽和溶液と共に３０分間撹拌し、わずかに茶色の固体である表題化合物を得た（ｍｐ  ５５℃（ｄ））。
【００９４】
実施例３
（＋／−）−４−［（３−フルオロフェノキシ）（２−チオフェニル）メチル］ピペリジンシュウ酸塩  化合物３９の調製
１−アセチル−ピペリジン−４−カルボン酸（４．３ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）に、８５％リン酸（２ｍＬ）およびチオフェン（４ｍＬ）の混合液を加えた。反応混合液に無水トリフルオロ酢酸を滴下して処理し（１５ｍＬ、発熱反応が観察された）、８０〜９０℃で４時間加熱した。反応液を室温まで冷却し、水とＣＨＣｌ３の間に分配した。有機相を１０％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、そして溶媒を減圧下で除去して、わずかに黄色の固体である（１−アセチルピペリジン−４−イル）（２−チオフェニル）メタノンを得た（６．２ｇ、収率：９８％、ｍｐ  １１２〜１１６℃）。
【００９５】
（１−アセチルピペリジン−４−イル）（２−チオフェニル）メタノン（６．１ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）とメタノール（５０ｍＬ）の混合液に、ＮａＢＨ４（０．７ｇ）の水溶液（５ｍＬ）を滴下して処理した。反応混合液を６０℃で３時間加熱し、室温まで冷却し、３５０ｍＬの水で処理した後、ＣＨＣｌ３で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、わずかに黄色の油である（＋／−）−（１−アセチルピペリジン−４−イル）（２−チオフェニル）メタノールを得た（５．６ｇ、収率：９３％）。
【００９６】
ヘキサン洗浄したＮａＨ（１．１ｇ、６０％油分散液）を、３０ｍＬ無水ＤＭＳＯ中で撹拌した懸濁液に、（＋／−）−（１−アセチルピペリジン−４−イル）（２−チオフェニル）メタノール（３．５ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、安息香酸カリウム（０．３ｇ）を加え、３０分間撹拌を続けた。１，３−ジフルオロベンゼン（２．２ｍＬ）を加え、反応混合液を室温で２０時間撹拌した。次に、反応混合液を水および１０％ＨＣｌ水溶液で処理し、ＣＨＣｌ３で抽出した。有機相を５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、そして真空中で濃縮して、琥珀色の油を得た（４．０ｇ、収率：７７％）。粗生成物（２．０ｇ）を５ｍＬのエタノールに溶解してシュウ酸（０．９ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を真空中で濃縮して、わずかに黄色の固体を得て、これをジオキサン（４０ｍＬ）中で結晶化させて、無色の結晶である表題化合物（２．２ｇ、収率：８５％、ｍｐ  １４２〜１４３℃）を得た。
【００９７】
実施例４
（＋／−）−３−［４−（３−クロロフェニル）ピペリジン−１−イル］−１−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］プロパノン塩酸塩  化合物２８の調製
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１５ｊ（３．０ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を０〜５℃に冷却し、３−クロロプロピオニルクロリド（１．５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４ｍＬ）溶液を滴下して加えた。反応混合液を室温で２０時間撹拌し、次に５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、わずかに黄色の油を得た（３．６５ｇ）。粗生成物の試料（１．９ｇ）を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン  ６／４）によって精製して、（＋／−）−３−クロロ−１−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］プロパノンを得た。
【００９８】
アセトニトリル（３５ｍＬ）中の（＋／−）−３−クロロ−１−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］プロパノン（１．７ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（０．９ｇ）、ＫＩ（１０ｍｇ）、および１−（３−クロロフェニル）ピペラジン（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を８５℃で２４時間加熱し、室温まで冷却し、減圧下で溶媒を除去した。残渣に水を加え、混合液をＣＨＣｌ３で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、残渣を得て、これをシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／メタノール／イソプロピルアミン  ９５／５／５）によって精製して、（＋／−）−３−［４−（３−クロロフェニル）ピペラジン−１−イル］−１−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］プロパノンを油として得て、これをジエチルエーテル中のＨＣｌ飽和溶液で処理して、わずかに茶色の固体である表題化合物を得た（０．７５ｇ、ｍｐ  １５０〜１５２℃）。
【００９９】
実施例５
（＋／−）−４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］エチルアミンシュウ酸塩  化合物３７の調製
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１５ｊ（２．９ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、無水Ｋ２ＣＯ３（６ｇ）、２−（２−ブロモエチル）−１，３（２Ｈ）−イソインドリノン（３．２ｇ、１３ｍｍｏｌ）、およびジオキサン（４０ｍＬ）の混合物を、１１５℃で２４時間加熱した。反応混合液を室温まで冷却し、減圧下で溶媒を除去した。残渣に水を加え、３．５％ＨＣｌ水溶液でｐＨを７．５に調整した。混合液をＣＨＣｌ３で抽出し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、残渣を得て、これをシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ８／２）によって精製して、オレンジ色の油である（＋／−）−２−［２−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］エチル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオンを得た（２．８ｇ、収率：６０％）。
【０１００】
（＋／−）−２−［２−［４−［（３−フルオロフェノキシ）フェニルメチル］ピペリジン−１−イル］エチル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン（２．５ｇ）の７０ｍＬエタノール中の溶液に、ヒドラジン水和物（９８％、２ｍＬ）を加え、白色の固体を観察した。室温で２０時間経過後、白色固体を濾過し、５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、わずかに黄色の油を得た。粗生成物の試料（０．８ｇ）を５ｍＬのエタノールに溶解し、シュウ酸（０．３ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。わずかに茶色の固体を得て、これを濾過し、ジエチルエーテルで洗浄して、０．９ｇの表題化合物を得た（ｍｐ  １０８℃（ｄ））。
【０１０１】
実施例６
（Ｚ）−４−［（１−フェニル）−２−（４−クロロフェニル）エテン−１−イル］ピペリジン  化合物３６の調製
ＮａＨＣＯ３（１７３ｇ）と水（１．５Ｌ）の混合物に、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１１ａ（１１９．３ｇ、０．６３ｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１５分間撹拌した後、（Ｂｏｃ）２Ｏを加えた。室温で１５時間撹拌した後、白色の固体を濾過し、水で洗浄して、１６４ｇの４−ベンゾイル−１−［（１，１−ジメチルエチルオキシ）カルボニル］ピペリジンを得た（収率：９０％、ｍｐ  ９１〜９３℃）。
【０１０２】
削り屑状マグネシウム（１．０ｇ）の無水ジエチルエーテル（４０ｍＬ）中の懸濁液を調製し、無水ジエチルエーテル（４０ｍＬ）中の４−クロロベンジルクロリド（４．６ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）溶液の１／３およびヨウ素結晶で処理した。混合液を、還流が滑らかになり、かつ無色になるまで加熱した。残りの４−クロロベンジルクロリド溶液を加えた。還流を３．５時間継続し、反応混合液を室温まで冷却した。無水ジエチルエーテル（５０ｍＬ）中の４−ベンゾイル−１−［（１，１−ジメチルエチルオキシ）カルボニル］ピペリジン（６．４ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、反応液を３時間還流した。ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（５０ｍＬ）を加え、ジエチルエーテルを蒸発させて、混合液をＣＨＣｌ３で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、固体を得て、これをヘキサンで洗浄した。この固体をクロロホルム（１００ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）で処理し、１５時間還流した。反応混合液を室温まで冷却し、１０％ＮａＯＨ水溶液で処理して、クロロホルムで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、Ｅ／Ｚ異性体の混合物を得た。シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（ジエチルエーテル：イソプロピルアミン  １０／０．５）によって精製し、表題化合物のＺ異性体を１．６ｇ得た（収率：２２％、ｍｐ  １２１〜１２４℃）。
【０１０３】
実施例７
（Ｅ，Ｚ）−４−（１−フェニル−２−メトキシビニル）ピペリジン塩酸塩  化合物３０の調製
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１１ａ（１．０ｇ、５．３ｍｍｏｌ）、水（２０ｍＬ）、および酢酸ナトリウム（４ｇ）の混合物に、メトキシアミン塩酸塩（３．０ｇ）を加えた。反応混合液を８０℃で３時間加熱し、室温まで冷却し、１０％ＫＯＨ水溶液でｐＨ＞９になるまで処理し、クロロホルムで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて油を得て、これをジエチルエーテル中のＨＣｌ飽和溶液で処理して、表題化合物の異性体のＥ／Ｚ混合物を白色の固体として得た（１．１ｇ、ｍｐ  ２０２〜２０４℃）。
【０１０４】
実施例８
（Ｅ，Ｚ）−４−［１−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシビニル］ピペリジン塩酸塩  化合物２３の調製
Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２００３，ｖｏｌ  ４６，２５，５５１２−５５３２に記載の化合物１１ｃ（０．５ｇ）、水（１０ｍＬ）、および酢酸ナトリウム（４ｇ）の混合物に、メトキシアミン塩酸塩（２．０ｇ）を加えた。反応混合液を８０℃で２時間加熱し、室温まで冷却し、１０％ＮａＯＨ水溶液でｐＨ＞９になるまで処理し、クロロホルムで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、油を得て、これをジエチルエーテル中のＨＣｌ飽和溶液で処理して、表題化合物の異性体のＥ／Ｚ混合物を白色の固体として得た（０．６ｇ、ｍｐ  ２０１〜２０６℃）。
【０１０５】
実施例９
（＋／−）−４−［２−（４−フルオロフェノキシ）−１−フェニルエチル］ピペリジン  化合物５９の調製
化合物２−フェニル−２−ピペリジン−４−イルエタノール（２．６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中の溶液を、トリフェニルホスフィン（２．７ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）および４−フルオロフェノール（１．３ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）で処理した。次に、ＤＥＡＤ（１．７ｍＬ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液を滴下して加えた。反応混合液を室温で１５時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去した。残渣に５％ＮａＯＨ水溶液を加え、混合液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、残渣を得て、これをメタノール（２０ｍＬ）および１０％ＨＣｌ水溶液（６０ｍＬ）で８時間還流処理した。反応混合液を室温まで冷却し、水（１００ｍＬ）で処理した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相を５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、残渣を得て、これをシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／イソプロピルアミン  ９／０．２）によって精製して、（＋／−）−４−［２−（４−フルオロフェノキシ）−１−フェニルエチル］ピペリジンを黄色の油として得た（２．０ｇ、収率：６３％）。
【０１０６】
生物学的アッセイ
初代細胞培養
ａ）−マウス皮質神経細胞：１６〜１８日齢の胚から脳を得た。２つの大脳半球、嗅球、および脳幹を分離した。髄膜を除いて切り出した組織を５０ｍｌのフラスコ内に移した。ＣａおよびＭｇを含まない（フェノールレッドを含まない）、１０ｍｌのＨＢＳＳを加えた。３ｍｌのＨＢＳＳでさらに２回洗浄し、３７℃でトリプシン−ＤＮａｓｅを用いて消化した。様々な厚さのガラスピペットを通すことによって、懸濁物を破砕させた。細胞を切り出し、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％ＦＣＳ中で培養した。３時間後、最終培地をＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地＋Ｂ２７補助剤＋ＫＣｌ＋グルタミン＋抗生物質中へ入れた。
【０１０７】
ｂ）ＣＧＮ：６日齢の野生型またはトランスジェニックマウスから、小脳顆粒神経細胞を採取した。基本的な方法は先のものと同様であった：組織の採取および破砕は同様であり、最終培地中での培養および維持は同一であった。小脳をトリプシン−ＥＤＴＡで約１５〜２０分間処理して破砕させ、続いてポリ−Ｌ−リジン（５０マイクログラム／ｍｌ）で処理したプレートで培養した。神経細胞を、無血清培地である、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地＋Ｂ２７補助剤＋ＫＣｌ＋グルタミン＋抗生物質中で維持した。
【０１０８】
毒性および細胞生存率
本発明の化合物の存在下での、異なる株の細胞生存率について調べた。従って、細胞生存率は以下のように調べた。
【０１０９】
−  ＣＧＮと、化合物３、化合物１０、化合物４、化合物９（＋）、化合物４１、化合物３４、化合物３５、化合物２９、化合物３６；化合物３１、および化合物３７との初代培養では、最後の２つの化合物が特定濃度においてのみ若干の毒性を示した。
【０１１０】
−  細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１と、化合物３、化合物１０、および化合物４との培養では、どの化合物も統計学的に関連する毒性を示さなかった。
【０１１１】
−  Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１マウス由来の神経細胞と、化合物３、化合物１０、化合物４、化合物５（＋）、および化合物５（−）との初代培養では、後の化合物が特定濃度においてのみ毒性を示した。
【０１１２】
毒性アッセイでは、細胞（神経細胞または確立された株）を２４ウェルプレートに接種し、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％  ＦＣＳ中で、または初代神経細胞を用いた場合には、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地＋Ｂ２７補助剤＋ＫＣｌ＋グルタミン＋抗生物質中で、様々な濃度の薬物に曝露した。２４または４８時間後に、細胞を４％パラホルムアルデヒドで３０分間固定することによって処理を停止した。固定した細胞を、１０％酢酸／４０％メタノール中の０．２％クマシーブリリアントブルーＲ−２５０により、周囲温度で１時間染色した。染色した細胞を蒸留水で十分に洗浄し、一旦乾燥させて、取り込まれた色素を５０％メタノール中の０．１Ｎ  ＮａＯＨで抽出した。次に、これを１０％トリクロロ酢酸で酸性化し、細胞数をＥｌｉｓａリーダーで、５９５ｎｍの吸光度にて測定した。ＤＭＳＯ（１０μｌ／ウェル）を対照として用いた。
【０１１３】
アミロイドペプチド放出の測定
ＡＰＰ−ＰＳ１を安定的にトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）株を用い、これを、１０％不活化ウシ胎児血清、グルタミン（２ｍＭ）ならびに抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）およびＧ−４１８抗生物質の混合物（２００μｇ／ｍｌ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で維持した。細胞は持続的な増殖状態で維持し、アッセイする薬物を添加する前に、培地を新しいものに交換した。その後、様々な処理における培地を回収したが、常にこれらに対応する溶媒対照を用意した。６時間の間培地を回収し、その後これを５倍希釈し、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  ＥＬＩＳＡキット（ｈ  １−４０  β  Ａｍｙｌｏｉｄ−参照番号ＫＨＢ３４８２）を用いて二重分析した。
【０１１４】
ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウス由来の小脳の初代培養を、この種の培養に対応する培地（ＮＢ−Ｂ２７）を用い、培地は化合物の添加または未添加後２４時間目に回収したこと以外は同様の方法により行った。分泌されたβアミロイドのミリリットルあたりの濃度についての最終データを表すために、キットのβアミロイド検量線における補間によって最終データを得た。
【０１１５】
実施例１０
マウス（野生型）由来の小脳顆粒神経細胞（ＣＧＮ）および／または大脳皮質の初代培養における、タウリン酸化のレベルを変化させる能力
タウリン酸化のレベルを変化させる能力についての試験に基づき、化合物３、化合物１０、化合物４、および化合物９（＋）はタウリン酸化を変化させると結論できる。化合物５（−）、化合物５（＋）、化合物３１、化合物４１、化合物３４、化合物２９、化合物３７、化合物４０、化合物２７、化合物２４、化合物３２、化合物１８、化合物３６、化合物３５、および化合物２１もまた、５および／または１０マイクロモル濃度でタウリン酸化を変化させる。
【０１１６】
データは、表示する化合物によって処理した小脳顆粒神経細胞または大脳皮質神経細胞から得られた可溶性細胞抽出物中のタウ−１の相対レベルについての独立した３つの実験の平均に関して得た。結果を図１に示す。
【０１１７】
ラットの皮質神経細胞または小脳顆粒におけるタウリン酸化のレベルを変化させる能力を、一連のリン酸化エピトープ（タウ１、ＰＨＦ１）に対する特異的抗体を用いたウェスタンブロットによって、１、２、および３時間のインキュベーション後に分析した。アクチンを対照（総質量の指標）として用いた。
【０１１８】
実施例１１
トランスジェニック細胞株ＣＨＯ−ＡＰＰ−ＰＳ１における、アミロイドペプチド（β１−４０）の分泌レベルを変化させる能力
測定値は培地中に分泌されたｎｇ／ｍｌとして得て、次にこれを対照に対して標準化した。対照は、それぞれの場合において１００％であるとみなした溶媒である。５つ〜６つの実験において得られたデータを、一つのアッセイあたり二重に示しているが、化合物９（＋）の場合はｎ＝３であった。結果を図２（化合物３）、図３（化合物１０）、図４（化合物９（＋））、および図５（化合物４）に示す。
【０１１９】
実施例１２
Ｔｇ−ＡＰＰ−ＰＳ１トランスジェニックマウスに由来する小脳神経細胞の初代培養におけるペプチドβ１−４０の分泌レベルを変化させる能力
化合物を最初に、２４および４８時間の２回、２μＭおよび５μＭの２つの濃度においてアッセイした。データは、２４時間目に行った異なる３つの実験の平均を表す。結果を図６（化合物３、化合物１０、および化合物４）、図７（化合物９（＋））、図８（化合物３１および化合物４１）、図９（化合物３４、化合物２９、および化合物３７）、図１０（化合物２、化合物３６、および化合物３５）、および図１１（化合物５（−）および化合物５（＋））に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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2013526597.tif 000045
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