(57)【要約】  本発明は、（ｉ）複数のビーズを該生体分子でコーティングすること；（ｉｉ）コーティングされたビーズを、液体安定化剤および／またはブロッキング剤と混ぜること；（ｉｉｉ）該液体安定化剤および／またはブロッキング剤を含む液相によってまだ実質的に取り囲まれているコーティングされたビーズを、少なくとも部分的に液体透過性である表面に分散すること；（ｉｖ）該表面上の該ビーズを乾燥し、実質的に該液相を除去すること；ならびに（ｖ）乾燥ビーズを該表面から除去することを含む、ビーズを生体分子でコーティングする方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビーズを生体分子でコーティングする方法であって、
（ｉ）複数のビーズを該生体分子でコーティングすること；
（ｉｉ）該コーティングされたビーズを、液体安定化剤および／またはブロッキング剤と混ぜること；
（ｉｉｉ）該液体安定化剤および／またはブロッキング剤を含む液相によってまだ実質的に取り囲まれている該コーティングされたビーズを、少なくとも部分的に液体透過性である表面に分散すること；
（ｉｖ）該表面上の該ビーズを乾燥し、実質的に該液相を除去すること；ならびに
（ｖ）該乾燥ビーズを該表面から除去することを含む方法。
【請求項２】
前記生体分子が、抗原または抗体に特異的に結合することができる抗体またはその断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも部分的に透過性である表面が紙である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記コーティングされたビーズを、前記少なくとも部分的に液体透過性である表面上に分散する前に、過剰な液体安定化剤および／またはブロッキング剤が除去される、請求項１〜３いずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記液体安定化剤および／またはブロッキング剤が、糖、多価アルコール、界面活性剤、塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリマー、金属イオン、タンパク質およびアミノ酸から選択される、１つ以上の化合物を含む、請求項１〜４いずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記安定化剤および／またはブロッキング剤が、スタビルコート（Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ）（商標）、スタビルガード（Ｓｔａｂｉｌｇｕａｒｄ）（商標）、蔗糖および乳糖から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記液体安定化剤および／またはブロッキング剤が、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む、請求項１〜６いずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ビーズが、直径０．５ｍｍ〜５ｍｍであり、特に１〜３ｍｍ、最も好ましくは、直径２ｍｍである、請求項１〜７いずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ビーズが、タンパク質または他のリガンドの受動的吸着用のポリスチレンビーズである、請求項１〜８いずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ビーズが、タンパク質または他のリガンドの共有結合のためのカルボキシル基またはアミノ基などの表面官能基をもつポリスチレンビーズである、請求項１〜９いずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ビーズが、タンパク質または他のリガンドの連結のためのプロテインＧなどの結合タンパク質、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ）またはビオチンをもつポリスチレンビーズである、請求項１〜１０いずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｉｖ）における前記ビーズが、真空下で乾燥される、請求項１〜１１いずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記乾燥工程（ｉｖ）が、−５℃〜３７℃で実施される、請求項１〜１２いずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３いずれか一項に記載の方法によって入手可能なビーズ。
【請求項１５】
生体分子でコーティングされ、安定化剤および／またはブロッキング剤を含む複数のビーズであって、前記ビーズが実質的に凝集しないことを特徴とする複数のビーズ。
【請求項１６】
直径０．５〜５ｍｍ、好ましくは、直径１〜３ｍｍ、最も好ましくは、直径２ｍｍである、請求項１５に記載の複数のビーズ。
【請求項１７】
前記ビーズがポリスチレンビーズである、請求項１５または１６に記載の複数のビーズ。
【請求項１８】
前記生体分子が、抗原または抗原に特異的に結合することができる抗体またはその断片である、請求項１４〜１７に記載の複数のビーズ。
【請求項１９】
前記液体安定化剤および／またはブロッキング剤が、糖、多価アルコール、界面活性剤、塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリマー、金属イオン、タンパク質およびアミノ酸から選択される、１つ以上の化合物を含む、請求項１５〜１８に記載の複数のコーティングされたビーズ。
【請求項２０】
前記安定化剤および／またはブロッキング剤が、スタビルコート（Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ）（商標）、スタビルガード（Ｓｔａｂｉｌｇｕａｒｄ）（商標）、蔗糖および乳糖から選択される、請求項１９に記載の複数のコーティングされたビーズ。
【請求項２１】
前記液体安定化剤および／またはブロッキング剤が、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む、請求項１５〜１９に記載の複数のコーティングされたビーズ。
【請求項２２】
請求項１４〜１９に記載の前記ビーズまたは複数のビーズを提供することを含む、免疫アッセイを実施する方法。
【請求項２３】
請求項１４〜１９に記載の前記ビーズまたは複数のビーズを含む免疫診断用装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビーズを生体分子でコーティングする方法、および生体分子でコーティングされたビーズに関する。
【背景技術】
【０００２】
酵素免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（非特許文献１、２）などの診断用免疫アッセイは、研究および産業で広く使用され、多くの診断、臨床、生化学、環境および遺伝学に利用される（非特許文献３、４）重要で感度の高い分析手法である。これらのアッセイは、発色、蛍光、放射性、および化学発光分子で標識された検出タンパク質、および／またはエンハンサーもしくはリポーター剤の基質として作用する酵素を含む他の生体分子と結合する検出タンパク質とともに、固体担体上に固定されたタンパク質（例えば、抗原および抗体）を使用する。
【０００３】
２〜３日間／週間を超える長期の保存可能期間をもつ免疫アッセイ固体担体の製造を成功するためには、固定された標的抗原または抗体の物理的な完全性を保持する必要がある。これは、湿気、温度、ｐＨ、塩、金属イオン、および他の混入物質を含む多くの外的因子によって影響される。例えば、タンパク質は、機能的な三次元構造をもつ、大きく柔軟な分子である（非特許文献５）。触媒部位および／または結合部位領域におけるアミノ酸の空間的配置は、アミノ酸の分子同士および他の周囲の分子との相互作用に依存する（非特許文献６〜８）。それは、タンパク質の安定性を決定する局所的な環境状態に従ったタンパク質の固有の構造である。この系における結合および他の分子の特質は、免疫アッセイにおける非特異的な結合の度合いに影響する。よって、この初期レベルにて使用される構成要素はすべて、厳密に評価され、非特異的な結合がないことが確認されなければならない。さらに、試料希釈剤、洗浄緩衝液および結合タンパク質を含む、アッセイ内で使用される他の構成要素が、同様にして評価される必要がある。ある特定のタンパク質および／または界面活性剤の添加は、望ましくない非特異的な結合を著しく減少させることができる。
【０００４】
ある特定の条件下では、タンパク質は、機能しない形に折り畳みがほどける（ｕｎｆｏｌｄ）ようになる。ある限界を超える温度に曝すことは、熱的に不安定なタンパク質が、折り畳みがほどけ、変性することを引き起こす。高濃度の溶質、極端なｐＨ、機械的な力および他の化学薬剤の存在が、潜在的な不活性化要因である。完全に変性したタンパク質は、三次構造および二次構造の両方を欠き、結果として、その結合能、または免疫アッセイ内の対応する反応物質に結合される能力を喪失または減少する。
【０００５】
タンパク質一次構造は、特定のアミノ酸の直鎖状配列からなる。ポリペプチド鎖が形成されて相互に作用しながら、二次、三次および最終的には四次構造を形成するように折り畳むことによって、複雑な構造が生み出される（非特許文献９）。アミノ酸構成要素は、親水性および疎水性であることができ、より疎水性のアミノ酸は、球状分子の内側に集まる一方で、親水性または極性アミノ酸は外側に集中し、この配置は結果として自発的な折り畳みをもたらす（非特許文献１０、１１）。さらに、静電相互作用、水素結合、およびファン・デル・ワールス力のすべてが、この折り畳みプロセスに関与する。正しい折り畳みは、タンパク質の生物学的活性を確実に適切にし、その天然の状態にあるタンパク質が、最も安定している（非特許文献１２、１３）。
【０００６】
従って、天然の構造を安定化および保持する環境において保存および使用されたタンパク質が、その機能および活性を保持することになるのは論理的に当然である。一般に、水
和状態における周囲の分子との、連続した相互作用により、溶液中に保存されたタンパク質は、乾燥された形と比べて短い保存可能期間を有する。的確な安定化条件が利用された場合、乾燥および凍結することは、この相互作用を最小限にするか、または停止するが、そうでなければ変性（ｄｅｎａｔｕｒｉｓａｔｉｏｎ）がさらに起こることになる。一般に、溶液中においてタンパク質は、高濃度および低温で、より安定である。低温にて、タンパク質相互作用は、より少ない運動エネルギーを有する。より高いタンパク質濃度では、容器表面への吸着、ならびに酵素の作用および他の低レベルの混入物質による不活化のために、喪失されるタンパク質活性がより少ない。典型的には、タンパク源に存在するタンパク質分解酵素（例えば、加水分解酵素および酸化酵素）はいずれも除去されるので、コーティングに使用される水および安定化溶液は、通常、高品質であるはずである。
【０００７】
このタイプの免疫アッセイを製造する会社の多くは、独占所有権のあるコーティング法および固体担体安定化法を有している。予期されるように幾つかのものは、他と比べて良好に機能し、一般的なＥＬＩＳＡ原理および応用について出版された書籍に一般的なガイダンスが記載されている（非特許文献１、２）。抗体および抗原が典型的にはマイクロウェルプレートのウェルの内側に結合し、約１２時間、室温または４℃でインキュベーションされ、その段階に過剰な非結合の結合しない物質が吸引され、ブロック／安定化剤が添加される。結合は、限定はされないが典型的には静電気力による結合である。必要に応じて、洗浄工程を途中に入れることができる。ブロック／安定化剤を、わずかばかり３０分間、室温でインキュベーションすると、反応物質が固体担体上のあらゆる非結合部位に結合することも、結合している抗体または抗原と合体することも可能になる。次の工程では、試薬の物理的な膜が結合タンパク質を覆うほどに過剰なブロック／安定化剤が除去される。次の工程は、その完全性を維持しながら、固体担体上の反応物質を乾燥するために設計されている。典型的には、これを達成するために使用される方法が２つあり、第１は、従来の実験室インキュベーターで３７℃にて１２〜２４時間インキュベーションすること、また別の方法としては、材料の容積に応じて１〜２４時間真空乾燥して乾燥することである。我々の経験では、後者の方法は活性の初期喪失が最小限となり、より長期的な安定性を得られるという著しい利点を持つ。
【０００８】
真空乾燥は、真空乾燥機において急速乾燥に必要な熱の量を減らして、材料を減圧環境で乾燥するプロセスであり、温度が上がらず、乾燥がより速い。この技術により、我々は非常に高いレベルの乾燥を達成でき、高温（３７℃）で２年を超える固体担体安定性を可能にする。我々が採用する真空乾燥と安定化試薬の組み合わせは、熱によってダメージを与えることなくタンパク質の完全性を保持する。
【０００９】
ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ社を含む市場には、独占所有権を持つ、すぐに使えるブロッキングおよび安定化溶液の製品が多くあり、また、これらは固体担体を効果的に安定化すると言われている。ＳｔａｂｉｌＣｏａｔ（登録商標）およびＳｔａｂｉｌＧｕａｒｄ（登録商標）（非特許文献１４）ならびにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）有りの蔗糖および／または乳糖、ならびにウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）無しの蔗糖および／または乳糖、さらにゼラチンおよび０．１〜３％ｗ／ｖのもどした脱脂粉乳を含む他のタンパク質ブロッキング剤が、一般的に使用される。
【００１０】
近年、ポリスチレンビーズ（２ｍｍ）などの大きなビーズからなる代替的な固相担体が利用可能になってきており、直径範囲は、より広範な０．５〜５ｍｍでありうる。これらのビーズは、抗体または抗原でコーティングされ、ブロッキング、安定化、乾燥され、生物学的に不活性なプラスチック、例えばポリプロピレンからなるマイクロプレートウェルに入れられ、非特異的な結合に対する、この構成要素のさらなるブロッキングを必要としない。一般に知られている方法の最初の適用により、乾燥したビーズの塊を生じ、この方法では、均一にコーティングされ、固形の塊を形成せず、自由に流動するビーズを得るこ
とが極めて重要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】David Geoffrey Wild, The Immunoassay Handbook published by Elsevier ISBN: 0- 08-044526-8 (2008)
【非特許文献２】John R. Crowther, The ELISA Theory and Practice. Humana Press ISBN:0-89603-279-5 (1995)
【非特許文献３】Park, J-W et al, Sensors and Actuators B, 91 : 158-162 (2003)
【非特許文献４】Engvall, E. And P. Perlmann, Immunochemistry, 8:871-873 (1971).
【非特許文献５】Sali, A. et al, Nature, 369:248-251 (1994)
【非特許文献６】Klotz, I., Archives Biochemistry & Biophysics, 116:92-96 (1966)
【非特許文献７】Asakura, T. et al, J. Bio Chem., 253:6423-6425 (1978)
【非特許文献８】Torchilin, V., Enzyme and Microbiological Technology, 1 :74-82 (1979)
【非特許文献９】Maish, M., http:/www.sparknotes.com/health/aminoacids (2005)
【非特許文献１０】anehisa, M. and T. Tsong, Biopolymers, 19:1617-1628 (1980)
【非特許文献１１】Burley, S. and G. Petsko, Science, 229:23-28 (1985)
【非特許文献１２】Wang, W., Intl. Jour, of Pharmaceutics, 185: 129-188 (1999)
【非特許文献１３】Wang, W., Intl. Jour, of Pharmaceutics, 289: 1-30 (2005)
【非特許文献１４】Lueng, W. et al, Jour, of Immunological Methods, 281 : 109-118 (2003).
【発明の概要】
【００１２】
出願人は、固形の塊を形成せず、自由に流動する均一にコーティングされたビーズを作り出す方法を見出した。
【００１３】
すなわち、該方法は、次を提供する：
【００１４】
ビーズを生体分子でコーティングする方法であって、
（ｉ）複数のビーズを該生体分子でコーティングすること；
（ｉｉ）該コーティングされたビーズを、液体安定化剤および／またはブロッキング剤と混ぜること、
（ｉｉｉ）該液体安定化剤および／またはブロッキング剤を含む液相によってまだ実質的に取り囲まれた該コーティングされたビーズを、少なくとも部分的に液体透過性である表面に分散すること；
（ｉｖ）該表面上の該ビーズを乾燥し、実質的に該液相を除去すること；ならびに、随意に、該乾燥ビーズを該表面から除去することを含む方法。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
生体分子は、例えば、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡなど）、リポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ）、多糖類、タンパク質またはペプチドでありうる。典型的には、生体分子は、タンパク質またはペプチドである。
【００１６】
好ましくは、生体分子は、抗原または抗体に特異的に結合することができる抗体またはその断片である。抗原は、タンパク質またはペプチド、核酸、リポ多糖類または単糖類などの生体分子でありうる。
【００１７】
コーティングされたビーズと混合するとき、安定化剤および／またはブロッキング剤は液体である。典型的には、過剰な液体安定化剤および／またはブロッキング剤が除去され
る。コーティングされたビーズは、液体安定化剤および／またはブロッキング剤を含む液相によってまだ実質的に取り囲まれている。コーティングされたビーズを取り囲んでいる保持液体の量は、典型的には、液体安定化剤および／またはブロッキング剤の最初の量の約２〜５％である。これは以下を形成する：
（ａ）結合した生物学的物質（抗原または抗体など）の表面に保護シェルを形成する安定化剤の物理的な層；および
（ｂ）ビーズの周りの余った液体と、部分的に液体透過性である表面との間に確実にウィック効果（ｗｉｃｋ  ｅｆｆｅｃｔ）を生じる液相。
【００１８】
典型的には、少なくとも部分的に液体透過性である表面により、液体が引き込まれるか、逃がされることが可能になる。存在する液体が不十分な場合、過剰な液体が逃がされず、隣接するビーズの周りの残留液体が乾燥するにつれて、塊の中で付着し合うことが観察されている。
【００１９】
典型的には、少なくとも部分的に液体透過性である表面は、紙または他の繊維タイプの表面である。典型的には、紙は、液体を吸収するその容量を許容する大きさである。
【００２０】
典型的には、紙は、Ｍａｃｈｅｒｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ社（Ｍａｃｈｅｒｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ  ＧｍｂＨ  ａｎｄ  Ｃｏ）製のＣｏｄｅＭＮ２１５などのろ紙である。そのような紙は、比較的高い流量（８５ｍｍ／１０分）および比較的なめらかな表面を有する。
【００２１】
典型的には、そのような材料は、免疫アッセイを妨げうる残留化学物質、特に、タンパク質分解酵素またはエンドヌクレアーゼ、エンドトキシン、界面活性剤、およびアジドなどの微量金属イオン、酵素を含有しない。
【００２２】
液体透過性表面の典型的な流量は、２０ｍｍ／１０分〜１００ｍｍ／１０分である。表面のウィッキング効果（ｗｉｃｋｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）は液体を引き離すので、濃縮または乾燥したときに、安定化化学物質が、隣接するビーズを互いに付着しない。
【００２３】
紙の代わりに、他の材料が使用されうる。
【００２４】
典型的には、紙は、木材パルプなどのセルロースから作られる。
【００２５】
典型的には、ビーズは表面上で、例えば、真空下で乾燥される。利用温度は、例えば、−５℃〜３７℃、例えば、−５℃〜３０℃、および典型的には、０℃〜室温でありうる。
【００２６】
出願人は、乾燥は真空下である必要はないことを見出している。乾燥は、周囲圧力下で、例えば室温（２０℃）〜３７℃で行われうる。
【００２７】
乾燥したビーズは、表面から除去されうる。次に、例えば、−４０℃または４℃で保全されうる。それらは、例えば、周囲の空気から湿気を除去し、安定性を維持するように、理想的には、密閉された容器にシリカゲル乾燥剤とともに保存されうる。
【００２８】
また、ビーズは、熱を加えることによって、または低湿度環境における室温で乾燥されうる。
【００２９】
液体安定化剤および／またはブロッキング剤は、糖、多価アルコール、界面活性剤、塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリマー、金属イオン、タンパク質およびアミノ酸から選択される、１つ以上の化合物でありうる。そのような化合物は、一般にＷａｎｇ，Ｗによる論文に記載されている１２，１３。タンパク質が、最も典型的に使用される。
【００３０】
他のブロッキング材料としては、Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ（商標）、精製牛乳タンパク質（雪印乳業株式会社、日本）、グリセリン、Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（商標）、日本油脂（日本）より入手可能な２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンの水溶性ポリマー（Ｐａｒｋ、Ｊ−Ｗ３を参照されたい）が挙げられる。さらに、他の安定化剤および／またはブロッキング剤としては、マンニトール、蔗糖、トレハロース、デキストロース、ソルビトール、サイクロデキストリン、ヒドロキシアルキルセルロースおよび乳糖が挙げられる。好ましくは、安定化剤および／またはブロッキング剤は、スタビルコート（Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ）（商標）（典型的には、生理食塩水に希釈されたウシタンパク質含有組成物）およびスタビルガード（Ｓｔａｂｉｌｇｕａｒｄ）（商標）（典型的には、生理食塩水に希釈された無タンパク質材料）から選択され、ともにＳｕｒＭｏｄｉｃｓ社（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ  Ｉｎｃ）（Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ、アメリカ合衆国）より入手可能である。また、蔗糖および乳糖も利用されうる。
【００３１】
典型的には、スタビルコート（Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ）（商標）またはスタビルガード（Ｓｔａｂｉｌｇｕａｒｄ）（商標）の５０％ｖ／ｖ溶液が使用される。
【００３２】
典型的には、液体安定化剤および／またはブロッキング剤は、ＢＳＡを含む。
【００３３】
ビーズは、ポリマーであっても、非ポリマーであってもよい。例えば、ビーズはシリカまたは最も好ましくはポリスチレンビーズであり、受動吸収のために誘導体化されておらず、または共有結合のための特定の官能基もしくは所望のリガンドに結合するように特定のリンカータンパク質を含有しうる。一般に、そのような誘導体化法は当該技術分野において公知である。典型的には、ビーズは、直径０．５ｍｍ〜５ｍｍ、１〜３ｍｍ、最も典型的には、直径２ｍｍである。
【００３４】
ビーズは、タンパク質または他のリガンドの共有結合のためのカルボキシル基またはアミノ基などの表面官能基をもつポリスチレンビーズでありうる。
【００３５】
ビーズが、タンパク質または他のリガンドの連結のためのプロテインＧなどの結合タンパク質、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ）またはビオチンをもつポリスチレンビーズでありうる。
【００３６】
また、本発明は、本発明の方法によって入手可能なビーズを提供する。
【００３７】
本発明のさらなる態様は、生体材料でコーティングされた複数のビーズを提供し、それらビーズは安定化剤および／またはブロッキング剤を含み、ビーズが実質的に凝集しないことを特徴とする。すなわち、ビーズは、実質的に自由流動であり、他のビーズに実質的に付着しない。
【００３８】
生体分子、安定化剤および／またはブロッキング剤、ならびにビーズは、典型的には、上で定義された通りである。
【００３９】
本発明のさらなる態様は、本発明にかかる１つのビーズまたは複数のビーズを提供することを含む免疫アッセイを実施する方法を提供する。
【００４０】
また、本発明にかかる１つのビーズまたは複数のビーズを含む免疫診断用装置も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
本発明を、実施例を単なる例示として、以下の図を参照して説明する。
【図１】図１は、ポリスチレンディッシュ中で乾燥したビーズを示し、これらビーズは塊になり、ディッシュや隣接するビーズに付着するのが観察された。
【図２】図２は、シリコン処理をした紙上で乾燥したビーズを示し、ビーズは塊になり、紙や隣接するビーズに付着した。
【図３】図３は、ろ紙上で乾燥したビーズを示し、ビーズは自由で流動的である。
【実施例】
【００４２】
ビーズのコーティングは、従来のもので、当該技術分野において一般に公知である。すなわち、所要の抗原または抗体を、（タンパク質に応じて）０．５〜２０μｇ／ｍＬの典型的な濃度で含有する、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水またはｐＨ９．６の炭酸塩などの適切な緩衝液を用いて、ポリスチレンビーズなどのビーズをコーティングし、８〜１２時間、室温で静かに混ぜた。バッファーの容積は、５μＬ／ビーズであり、１００，０００ビーズに対して、容量は５０００ｍＬである。典型的には次に、過剰なコート溶液（ｃｏａｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を吸引する。そして、ここでもやはり５０μＬ／ビーズを使用して、典型的に５０％スタビルコート（Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ）（商標）またはスタビルガード（Ｓｔａｂｉｌｇｕａｒｄ）（商標）を含有するブロッキング／安定化バッファーを加え、室温にて３０分間混ぜた。次に、大部分の残留ブロッキング／安定化バッファーを捨てた。しかし、典型的には、液体のごく一部、例えば、２〜５％が保持された。これは、安定化剤の層が、結合した抗原／抗体一面に保護シェルを形成可能にするのに必要であることがわかった。残留液と共にビーズを表面上に広げ、次に浅くてふたの無い（ｏｐｅｎ）トレイに入れ、そこで典型的には室温で真空乾燥した。表面がポリスチレンディッシュであった場合、ビーズは塊になり、ディッシュや隣接するビーズに付着するのが観察された（図１）。水分をはじくようにシリコンコーティングが施された、シリコン処理された紙上で乾燥したビーズが、紙や隣接するビーズに付着するのが観察された（図２）。しかし、ろ紙上で乾燥したビーズは、吸収性をいくらか有し、液体をビーズから逃がすことができ、自由で流動的であることが見出された（図３）。
【００４３】
典型的には、ビーズを、バッチサイズに応じて４〜１８時間真空乾燥した。次に、乾燥したビーズを、即時使用のために、好適なサイズの容器に注ぐか、でなければ、例えば、マイクロプレートに入れる前に−４０℃もしくは４℃で保存し、シリカゲル乾燥剤の小袋ともにホイルポーチ（ｆｏｉｌ  ｐｏｕｃｈ）に密封して、水分侵入を最小限にし、安定性を維持した。
【００４４】
また、熱または低湿度環境における室温などの代替的な乾燥方法もうまく機能するが、乾燥時間が長くなる。
【図１】
2013541018.tif 000003
【図２】
2013541018.tif 000004
【図３】
2013541018.tif 000005
【国際調査報告】
2013541018.tif 000006
2013541018.tif 000007