(57)【要約】  本発明は式１の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、若しくはプロドラッグを提供する。さらに、式１の化合物又は薬学的に許容可能な誘導体、塩、若しくはプロドラッグの有効な量を投与することを含む被験者におけるがん治療方法を提供する。さらに、がんの治療のための薬剤の調製における、式１の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、若しくはプロドラッグの使用を提供する。さらに、本発明は、式１の化合物、薬学的に許容できるその誘導体、塩、若しくはプロドラッグを含む医薬組成物を提供する。
2013540778.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグ。
2013540778.tif 000068
（式１において、Ｅ及びＧはそれぞれ独立してＣ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
2013540778.tif 000069
は単結合又は二重結合を意味し、
2013540778.tif 000070
が単結合である場合、Ｋは独立してＣＨ及びＮから選択され、Ｊは独立してＮＨ及びＣＨ２から選ばれ、
2013540778.tif 000071
が二重結合である場合、ＫはＣであり、Ｊは独立してＮ及びＣＨから選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及びＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ４はＨ、ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４が−ＯＨである場合、もう一つのＲ４は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６がＯＨである場合、もう一つのＲ６はＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的にはＣ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、アリール、及びアルキルアリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。）
【請求項２】
請求項１に記載の式２の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグ。
2013540778.tif 000072
（式２において、Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及びＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ４はＨ、ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４がＯＨである場合、もう一つのＲ４はＯＨであり得ない、又はＮ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的にはＣ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６がＯＨである場合、もう一つのＲ６はＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的にはＣ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及びアリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。）
【請求項３】
請求項１に記載の式３の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグ。
2013540778.tif 000073
（式３において、Ｅ及びＧはそれぞれ独立してＣ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ４、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及びＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４がＯＨである場合、もう一つのＲ４はＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的にはＣ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及びＣＦ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６がＯＨである場合、もう一つのＲ６はＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的にはＣ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、及びアリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。）
【請求項４】
Ｅ及びＧは、それぞれ独立して−ＮＨＣ１−４アルキルから選択される、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｅ及びＧのヘテロ原子が両方トリアジン環に結合する、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１から２の置換基である、請求項１から５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１及びＲ２のそれぞれが、少なくとも一つのパラ置換基である、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
各置換基Ｒ１は、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から独立して選択される、請求項１から７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
各置換基Ｒ２は、−ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から独立して選択される、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３は、Ｈ、メチル、プロピル、ブチル、及びフェニルからなる群から選択される、請求項１から９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３は水素である、請求項１から１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
以下の式からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
2013540778.tif 000074
2013540778.tif 000075
2013540778.tif 000076
2013540778.tif 000077
【請求項１３】
以下の式からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
2013540778.tif 000078
【請求項１４】
被験者におけるがん治療方法であり、請求項１から１３のいずれかに記載の化合物又は薬学的に許容可能な誘導体、塩、若しくはプロドラッグの有効な量を被験者に投与する治療方法。
【請求項１５】
前記がんは結腸がん、非小肺がん、脳がん、又は乳がんである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１３のいずれかに記載の化合物、又は薬学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、結腸がん、肺がん、脳がん、及び乳がん等のがんの治療において有用な化合物群に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは、世界中で主要な死因である大病である。がんの治療の一つの重要な態様は、抗がん剤を用いた化学療法である。しかし、化学療法でのがんの治療が簡単に進むことは珍しく、一般に新規でかつ改良された、異なるメカニズム及び経路で働く抗がん剤を開発する必要がある。
【発明の概要】
【０００３】
【化１−１】
2013540778.tif 000003
第一の態様において、本発明は、式１の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグを提供し、
Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
2013540778.tif 000004
は単結合又は二重結合を意味し、
2013540778.tif 000005
が単結合である場合、Ｋは独立してＣＨ及びＮから選択され、Ｊは独立してＮＨ及びＣＨ２から選ばれ、
2013540778.tif 000006
が二重結合である場合、ＫはＣであり、Ｊは独立してＮ及びＣＨから選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及びＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４が−ＯＨである場合、もう一つのＲ４は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６が−ＯＨである場合、もう一つのＲ６は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、アリール、及びアルキルアリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。
【０００４】
第二の態様において、本発明は、被験者のがんの治療方法であって、本発明の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグの有効な量を被験者に投与することを含む方法である。
【０００５】
第三の態様において、本発明は、がんの治療のための薬剤の調製における、本発明の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグの使用である。
【０００６】
第四の態様において、本発明は、本発明の化合物又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、若しくはプロドラッグ、並びに薬学的に許容できる担体、希釈剤、若しくは賦形剤を含む組成物である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】Ｇ２／Ｍ阻害薬で処理された細胞内における安定化されたチューブリン対溶解性チューブリンの判定である。担体、タキソール、又は化合物３（１９８−０２）で処理されたＬＩＭ１２１５細胞を、ＮＰ−４０により可溶化した。浮遊物及び再懸濁された不溶性物質の同量を、ＳＤＳ／ＰＡＧＥを用いて解析し、β−チューブリンに対する抗体を用いて免疫ブロットした。Ｓ＝溶性、Ｐ＝重合チューブリン。ＢａＦ／３細胞株においても同じ結果が得られた。
【図２】「インビトロ」チューブリン重合に対する本発明の化合物の効果。Ｃａｒｙ  ５０分光光度計のキュベット中にチューブリン（ＰＩＰＥＳ／ＭｇＣｌ２／ＧＴＰ緩衝剤に１ｍｇ／ｍｌ）を事前に平衡化させ、その後、緩衝剤（Ａ）、タキソール（Ｂ）、トリアジン０．５  ｍＭ（Ｃ）又はトリアジン０．２  ｍＭ（Ｄ）を添加した（矢印）。３０分間、５秒の間隔でＯＤ［３４０］の測定を記録した。
【図３】抽出されたマウス血漿の代表的なクロマトグラムである。Ａ：正常なマウス血漿とＨＣである。Ｂ：標準曲線を得るための、化合物２（１５６−０１）でスパイクされた正常なマウス血漿である。Ｃ：化合物２（１５６−０１）の注入の二時間後に取得された血漿は、回収された化合物２のピーク及び他３つの推定上の代謝産物によるピークを示している。
【図４】推定上の代謝産物のピークのスペクトル解析。Ａは、血漿（点線）中の標準化合物２（１５６−０１）（実線）及び注入されたマウスの血漿（実線）の重ねクロマトグラムである。Ｂは、精製ピークのＵＶスペクトルである。
【図５】化合物２の注入後のマウス血漿から回収された代謝産物の抗有糸分裂効果。ＢＡＦ／３の細胞を、段階的に大きくなる量の各構成ピークとともに２４時間培養した。ヨウ化プロピジウムを用いてＦＡＣＳ解析で細胞周期の分布を評価した。ＭｏｄＦｉを用いて細胞周期のＧ２／Ｍ期にいる細胞のパーセンテージを判定した。
【図６】マウスに５０ｍｇ／ｋｇの皮下単回投与後の化合物２の血漿中濃度のプロット。各点は一つのマウスに対応する。Ａ：ピーク１の値の算出濃度の片対数プロット。Ｂ：代謝産物のピークを全て含む値の片対数プロット。Ｃ：ピーク１のみを全てのピークと比較した平均及びＳＥの値。
【図７】ヌードマウスにおけるＬＩＭ２５３７腫瘍の増殖。腫瘍の直径は、外部キャリパーを用いて、三日毎に測定され、式：π／６×（Ｌ×Ｗ２）を用いて腫瘍体積を計算した。賦形剤対象で治療された動物（黒線）と、実験の３日目に開始した週三回の１５ｍｇ／ｋｇの化合物２で治療された動物（赤線）との間に明らかな違いが見られる。
【図８】ヌードマウスにおけるＵ８７ＭＧ（Δ２−７）腫瘍の増殖。腫瘍の直径は、外部キャリパーを用いて、三日毎に測定され、式：π／６×（Ｌ×Ｗ２）を用いて腫瘍体積を計算した。賦形剤対象で治療された動物（黒線）と、実験の５日目に開始した週三回の２０ｍｇ／ｋｇの化合物２で治療された動物との間に明らかな違いが見られる。
【図９】化合物２で治療された動物（「１５６−０１」のラベル付き）（緑の棒）は、賦形剤対象で治療された動物（赤）に対して、腫瘍の重量が下がっていたが、肝臓及び脾臓の重量に関しては有意な差が見られなかった。
【図１０】ヌードマウスにおけるＨ１４３７腫瘍の増殖。腫瘍の直径は、外部キャリパーを用いて、三日毎に測定され、式：π／６×（Ｌ×Ｗ２）を用いて腫瘍体積を計算した。賦形剤対象で治療された動物（黒線）と、実験の５日目に開始した週三回の２０ｍｇ／ｋｇの化合物２で治療された動物（赤線）との間に明らかな違いが見られる。
【図１１】賦形剤対象で治療された動物（上３行）及び化合物２で治療したもの（２０ｍｇ／ｋｇ、週三回）（最下行）から取り出されたＨ１４３７の異種移植腫瘍の写真である。サイズにおける有意な違いが見える。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
Ｌｅｕｃｅｔｔａ海綿から抽出されるイミダゾールアルカロイドであるナアミジンＡが、上皮成長因子（ＥＧＦ）のシグナル伝達経路を選択的に阻害し、ＥＧＦ受容体を大幅に過剰に発現するヒトのがん細胞株を用いたマウスの異種移植モデルにおける腫瘍増殖を阻害することは報告されている（Ｃｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  １９９８，  ４１：３９０９）。
【０００９】
2013540778.tif 000007
【００１０】
ＥＧＦ受容体に特異的な小分子阻害剤の探索にかかった本発明者は、複数のナアジミンＡ類似体を合成し、それぞれの生物学的活性を調べた。
【００１１】
驚くべきことに、本発明者は、細胞増殖抑制作用及び／又は細胞毒性を示し、そしてＥＧＦシグナル伝達経路を介して作用しない、ナアジミンＡに関連する分子クラスを特定した。このトリアジン化合物のクラスは、ナノモル範囲の抗がん活性をもつ抗がん剤として有望である。
【００１２】
よって、第一の態様において、本発明は、式１の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグを提供し、
【化１−２】
2013540778.tif 000008
Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
2013540778.tif 000009
は単結合又は二重結合を意味し、
2013540778.tif 000010
が単結合である場合、Ｋは独立してＣＨ及びＮから選択され、Ｊは独立してＮＨ及びＣＨ２から選ばれ、又は
2013540778.tif 000011
が二重結合である場合、ＫはＣであり、Ｊは独立してＮ及びＣＨから選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基（つまり０、１、又は２個の置換基又はその整数のいずれか二つを含む範囲）であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４が−ＯＨである場合、もう一つのＲ４は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基（つまり０、１、又は２個の置換基又はその整数のいずれか二つを含む範囲）であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６が−ＯＨである場合、もう一つのＲ６は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、−アリール、及び−アルキルアリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００１３】
一つの実施態様において、
2013540778.tif 000012
は単結合であり、（ｉ）ＫはＣＨ及びＪはＮＨ、又は（ｉｉ）ＫはＮ及びＪはＣＨ２である。
【００１４】
さらに一つの実施態様において、
2013540778.tif 000013
は二重結合であり、ＫはＣＨ及びＪはＮＨである。
【００１５】
Ｒ３は好ましくは、水素、メチル、プロピル、ブチル、及びフェニルからなる群から選択される。
【００１６】
一つの実施態様において、Ｅは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｅのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００１７】
一つの実施態様において、Ｇは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｇのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００１８】
好ましくは、Ｅは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｅは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００１９】
好ましくは、Ｇは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｇは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００２０】
一つの実施態様において、Ｒ１は、−Ｃ１−４アルキルで置換されたピペラジニル基となる−Ｎ（Ｒ４）２であり、それは以下の式で表せる。
2013540778.tif 000014
【００２１】
好ましくは、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜２個の置換基であり、さらに好ましくは、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ１個の置換基である。
【００２２】
一つの実施態様において、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ少なくとも１個のパラ置換基である。
【００２３】
好ましくは、各Ｒ１の置換基は、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、さらに好ましくは、各Ｒ１の置換基は、−ＯＨ、−ＯＭｅ、及び−ＣＨ３からなる群から独立して選択される。
【００２４】
好ましくは、各Ｒ２の置換基は、−ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から独立して選択される。
【００２５】
さらに好ましくは、各Ｒ２の置換基は、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＣＨ２ＮＨ２、及び−ＣＨ２ＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ｔ−Ｂｕ）からなる群から独立して選択される。
【００２６】
好適な実施態様において、本発明は式２の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグを提供し、
【化２】
2013540778.tif 000015
Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４が−ＯＨである場合、もう一つのＲ４は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６が−ＯＨである場合、もう一つのＲ６は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−アリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００２７】
一つの実施態様において、Ｅは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｅのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００２８】
一つの実施態様において、Ｇは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｇのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００２９】
好ましくは、Ｅは−ＮＨＣ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｅは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００３０】
好ましくは、Ｇは−ＮＨＣ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｇは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００３１】
一つの実施態様において、本発明は式２の化合物を提供し、Ｒ１は１〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ４からなる群から独立して選択され、及びＲ２は１〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ６からなる群から独立して選択され、
Ｒ４は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から選択され、
Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００３２】
好ましくは、各Ｒ１の置換基は、−ＯＨ、−ＯＭｅ、及び−ＣＨ３からなる群から独立して選択され、各Ｒ２の置換基は、−ＯＨ、Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ６からなる群から独立して選択され、
Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００３３】
さらに好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＣＨ２ＮＨ２、及び−ＣＨＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ｔ−Ｂｕ）からなる群から選択される。
【００３４】
さらに一つの実施態様において、本発明は式２の化合物を提供し、Ｒ３は−Ｈ、メチル、プロピル、ブチル、及びフェニルからなる群から選択される。
【００３５】
一つの実施態様において、Ｒ３は直鎖アルキルである。
【００３６】
一つの実施態様において、本発明は式３の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグを提供し、
【化３】
2013540778.tif 000016
Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ４、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ４が−ＯＨである場合、もう一つのＲ４は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６が−ＯＨである場合、もう一つのＲ６は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及び−フェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−アリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００３７】
一つの実施態様において、Ｅは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｅのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００３８】
一つの実施態様において、Ｇは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｇのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００３９】
好ましくは、Ｅは−ＮＨＣ１−４アルキルであり、さらに好ましくはＥは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００４０】
好ましくは、Ｇは−ＮＨＣ１−４アルキルであり、さらに好ましくはＧは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００４１】
一つの実施態様において、本発明は式３の化合物であり、Ｒ１は１〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２からなる群から独立して選択され、及びＲ２は１〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から独立して選択され，
各Ｒ４は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択される。
【００４２】
好ましくは、Ｒ１は−ＯＭｅであり、Ｒ２は−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から選択され、
各Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択される。
【００４３】
さらに好ましくは、Ｒ２は、−ＯＭｅ、−ＣＨ２ＮＨ２、及び−ＣＨＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ｔ−Ｂｕ）からなる群から選択される。
【００４４】
好ましくは、Ｒ３は水素である。
【００４５】
一つの実施態様において、本発明は式４の化合物、又は薬学的に許容できるその誘導体、塩、又はプロドラッグを提供し、
【化４】
2013540778.tif 000017
Ｅ及びＧはそれぞれ独立して−Ｃ１−４アルキル−、−ＮＨ−、−Ｏ−、及びいずれかの配向の−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、
Ｒ１は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ１−４アルキルＮＨＲ４、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ４）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ５からなる群から独立して選択され、又は、−Ｎ（Ｒ４）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ２は０〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｃ３−６シクロアルキル−Ｎ（Ｒ６）２、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ベンジル、−ＮＯ２、ハロゲン、及び−ＣＦ３からなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルキル−ＯＲ７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ８からなる群から独立して選択され、ただし一つのＲ６が−ＯＨである場合、もう一つのＲ６は−ＯＨであり得ない、又は、−Ｎ（Ｒ６）２はピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、又はモルホリノ基であり、随意的には−Ｃ１−４アルキルで置換され、
Ｒ５及びＲ８はそれぞれ−Ｃ１−４アルキル及びフェニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−アリールからなる群から選択され、及び
Ｒ７は−Ｈ及び−Ｃ１−４アルキルからなる群から選択される。
【００４６】
一つの実施態様において、Ｅは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｅのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００４７】
一つの実施態様において、Ｇは−ＮＨ−Ｃ１−４アルキル−、−Ｎ（Ｃ１−４アルキル）−Ｃ１−４アルキル−、及び−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−からなる群から選択され、Ｇのヘテロ原子はトリアジン環に結合している。
【００４８】
好ましくは、Ｅは−ＮＨＣ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｅは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００４９】
好ましくは、Ｇは−ＮＨＣ１−４アルキル−であり、さらに好ましくは、Ｇは−ＮＨ−ＣＨ２−である。
【００５０】
一つの実施態様において、本発明は式４の化合物であり、Ｒ１は１〜２個の置換基であり、各置換基は−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ４）２からなる群から独立して選択され、及びＲ２は１〜２個の置換基であり、各置換基は、−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から独立して選択され、
各Ｒ４は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択され、
各Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択される。
【００５１】
好ましくは、Ｒ１は−ＯＭｅであり、及びＲ２は−Ｏ−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ１−４アルキルＮ（Ｒ６）２からなる群から選択され、
各Ｒ６は−Ｈ、−Ｃ１−４アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−４アルキルからなる群から独立して選択される。
【００５２】
さらに好ましくは、Ｒ２は、−ＯＭｅ、−ＣＨ２ＮＨ２、及び−ＣＨＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ｔ−Ｂｕ）からなる群から選択される。
【００５３】
さらに一つの実施態様において、本発明は式４の化合物を提供し、Ｒ３は−Ｈ、メチル、プロピル、ブチル、及びフェニルからなる群から選択される。好ましくは、Ｒ３は水素である。
【００５４】
一つの実施態様において、本発明は
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からなる群から選択される化合物を提供する。
【００５５】
好ましくは、化合物は
2013540778.tif 000022
からなる群から選択される。
【００５６】
Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （ＵＳ  ２００４／０１２２００９）は、ミオセべリンと同様の抗増殖効果を有するトリアジン化合物を合成した。Ｃｈａｎｇの化合物は、本発明の化合物と構造的に違う化合物であり、がん細胞株に対する作用は桁違いに小さい。さらに、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．に開示された化合物は、本発明の化合物とは著しく異なる生物活性を有する。Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．の研究において、彼らの化合物はチューブリン重合とＵ９３７ヒト白血病細胞の増殖阻害とに必要なＩＣ５０値の間に密接な相関を見出した（２５頁、表１を参照）。一方、本発明者は、本発明の化合物の場合、チューブリン重合に必要な濃度は、細胞増殖分析によるＩＣ５０よりも１０００倍よりも高いことを見出した。
【００５７】
ここで使われる「ハロ」又は「ハロゲン」は、フッ素（フルオロ）、塩素（クロロ）、臭素（ブロモ）、及びヨウ素（ヨード）を意味する。
【００５８】
ここで単独で、又はＮＨ（アルキル）及びＮ（アルキル）２等の化合物に関して使われる「アルキル」は、一価直鎖炭化水素基又は分岐炭化水素基を意味する。例えば、適切なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔｅｒｔ−ブチルを含み、ただしこれらに限定されない。
【００５９】
当業者に理解されるように、「Ｃ１−４アルキル」とは、１、２、３、又は４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖、又は１、２、３、又は４のいずれか二つの整数を含む範囲の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖である。
【００６０】
ここで使われる「アリール」とは、フェニルやナフチル等のＣ６−Ｃ１０芳香族炭化水素基を意味する。
【００６１】
ここで使われる「シクロアルキル」とは、環状炭化水素基を意味する。適切なシクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロへキシルを含み、ただしこれらに限定されない。
【００６２】
当業者に理解されるように、「Ｃ３−６シクロアルキル」とは、３、４、５、又は６個の炭素原子を有する、又は３、４、５、又は６のいずれか二つの整数を含む範囲の炭素原子を有するシクロアルキル基である。
【００６３】
「アルキルアリール」とは、例えば、ベンジルを含む。
【００６４】
アミン窒素は、適切な窒素保護基により保護されてもよい（”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｅｔｅｒ  Ｗｕｔｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９９を参照）。
【００６５】
式１の化合物の塩は、好ましくは薬学的に許容できるものであるが、薬学的に許容できるものの準備の際に有用であるため、薬学的に許容できない塩も本発明の範囲内であることが理解される。
【００６６】
「薬学的に許容できる誘導体」とは薬学的に許容できる塩、水和物、又はプロドラッグ、又は、被験者への投与の際に、式１の化合物又はその抗菌作用をもつ代謝産物又は残留物を、直接又は間接的に提供できる他の化合物であるどのようなものでも含む。
【００６７】
適切な薬学的に許容できる塩は、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸、及び臭化水素酸等の薬学的に許容できる無機酸の塩、及び酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸、及びバレリン酸等の薬学的に許容できる有機酸の塩を含むが、これらに限定されない。
【００６８】
塩基塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、アンモニウム、アルキルアンモニウム（トリエチルアミンで生成された塩等）及びアルコキシアンモニウム（エタノールアミンで生成された塩等）等の薬学的に許容できるカチオンで生成されたものを含むが、これらに限定されない。塩基塩はさらに、エチレンジアミン、コリン、及びアミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン等から生成された塩を含む）。薬学的に許容できる塩又はその生成についての一般的な情報は当業者に知られ、及び「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ、Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ、第１版、２００２、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ等の一般的な本において説明されている。
【００６９】
塩基性の窒素含有基は、塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、臭化ブチル、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、及びヨウ化ブチル等の低級アルキルハロゲン化物、及び硫酸ジメチル又は硫酸ジエチル等の硫酸ジアルキルにより四級化されてもよい。
【００７０】
ヒドロキシル基は、酢酸及び２，２−ジメチルプロピオン酸等の低級アルキルカルボン酸を含む基によりエステル化、又はメチルスルホン酸等のアルキルスルホン酸を含む基によりスルホン化、又はグルクロニド誘導体を生成するようにグリコシル化されてもよい。
【００７１】
本発明はさらに式１の化合物のプロドラッグを含む医薬組成物を含む。さらに、本発明は式１の化合物のプロドラッグ投与による被験者のがんの治療又は予防方法を含む。遊離アミノ基、アミド基、ヒドロキシ基又はカルボン酸基を有する式１による化合物は、プロドラッグに変換されてもよい。
【００７２】
プロドラッグは、そのアミノ酸残基、又は２個以上の（例えば２、３、又は４）アミノ酸残基のポリペプチド鎖が式１の化合物の遊離アミノ基、ヒドロキシ基、及びカルボン酸基に共有結合している化合物を含む。アミノ酸残基は、一般に３文字略号によって表される天然に存在する２０種アミノ酸を含み、また４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルブリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン、及びメチオニンスルホンを含む。プロドラッグはさらにカルボン酸塩、カルバミン酸塩、アミド、及びアルキルエステルが、カルボニル炭素プロドラッグ側鎖を介して上記式１の置換基に共有結合している化合物も含む。プロドラッグはさらに、式１の化合物の遊離ヒドロキシル基に、リン−酸素結合により結合された式１の化合物のリン酸塩誘導体（例えば酸、酸の塩、又はエステル）も含む。
【００７３】
式１の化合物は、不斉中心を有する可能性があり、よって一つ以上の立体異性体として存在し得ることも理解される。従って、この発明はさらに、一つ以上の不斉中心における実質的に純粋な異性体化合物、例えば９５％又は９７％ｅｅ等の約９０％ｅｅより多く含むもの、及び例えばラセミ混合物等のその混合物にも関する。
【００７４】
このような異体性は、不斉合成、例えばキラル中間体を用いた合成、又はキラル分割によって生成されてもよい。
【００７５】
一つの実施態様において、本発明は、本発明の化合物、又はその薬学的に許容できる誘導体、塩、又はプロドラッグの有効な量を被験者に投与することによる被験者におけるがんの治療方法を提供する。
【００７６】
別の実施態様において、本発明はがんの治療のための薬剤の調製における本発明の化合物の使用を提供する。
【００７７】
さらに、別の実施態様において、本発明はがんの治療のために使用される化合物を提供する。
【００７８】
好ましくは、がんは結腸がん、非小肺がん、脳がん、又は乳がんである。
【００７９】
本発明者は、本発明のトリアジンは、最適濃度では、少なくともタキソール（Ｔａｘｏｌ）に等しいＧ２／Ｍ抑制を誘導する有効性をもつことを見出した。しかし、タキソールはチューブリン重合を安定化させるところ、さらなる実験により示されたのは、トリアジンに誘導されたチューブリン重合は最小限であり、それも分裂阻止剤としての効能を示す濃度をはるかに超える投与量で現れたことである。
【００８０】
従って、一つの実施態様において、がんはパクリタキセル、ドセタキセル、及びカルバジタキセル（Ｃａｒｂａｚｉｔａｘｅｌ）等のタキサンに対して対抗力のあるがんである。
【００８１】
一つの実施態様において、がんはチューブリンの形成及び分解を直接阻害する分裂抑制剤に耐久性のあるものである。
【００８２】
一つの実施態様において、本発明は本発明の化合物及び薬学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００８３】
本発明の組成物は下記の別の治療剤を含んでもよく、例えば医薬品の調整技術に関して周知な従来の固体又は液体の担体又は希釈剤、及び望まれた投与方法に適切な種類の医薬品添加物（例えば、賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤、香味料等）を用いて調整されてもよい。
【００８４】
本発明の化合物は適切な方法により投与可能であり、例えば皮下、静脈内、又は筋肉内方法、又は嚢内注入、又は点滴技術（例えば、無菌の注入可能な水性又は不水性な溶液又は懸濁液）等の非経口方法であってもよい。
【００８５】
薬学的製剤には、経口、直腸、経鼻、局所（口腔及び舌下を含む）、膣内、及び非経口（筋肉内、皮下、及び静脈内を含む）投与用のものが含まれ、及び吸入及び吹送による投与用のものが含まれる。本発明の化合物は、従来の補助剤、担体、又は希釈剤と合わせて、薬学的組成物及びその単位投与量として生成可能であり、それは錠又は詰められたカプセル等の固体状、又は溶液、懸濁液、エマルジョン剤、エリキシル剤等の液体状、又はそれで詰められたカプセルとして形成されてもよく、その全ては経口使用可能であり、又は直腸投与のために坐剤として、又は無菌注入可能な溶液として非経口（皮下を含む）使用可能である。
【００８６】
ヒト等の霊長類に加えて、様々な種の哺乳類も本発明の方法により治療可能である。例えば、牛、羊、ヤギ、馬、犬、猫、モルモット、ネズミ、又は他のウシ属、羊属、ウマ属、イヌ属、ネコ属、齧歯類、又はネズミ属等、ただしこれらに限定されない、他の哺乳類も治療可能である。しかし、この方法は、鳥類（例えば鶏）など、他の種においても実践可能である。
【００８７】
上記の方法により治療される被験者は哺乳類であり、牛、羊、ヤギ、馬、犬、猫、モルモット、ネズミ、又は他のウシ属、羊属、ウマ属、イヌ属、ネコ属、齧歯類、又はネズミ属を含むが、これらに限定されなく、好ましくは雄又は雌のヒトである。
【００８８】
「有効な量」とは、研究者、獣医、医師、又は他の臨床医に求められる組織、システム、動物、又はヒトによる生物的又は医療的反応を及ぼす、対象組成物の量を意味する。
【００８９】
がん治療技術に熟達した者に理解されるように、「治療」とは、必然的にがんを完全に治すことを意味する表現ではない。「治療」とは、被験者における、いかなるがん細胞の複製の阻害及び／又は腫瘍サイズの減少を含む。
【００９０】
ここで使われる「組成物」は、特定された量の特定された材料を含む製品、及び特定された量の特定された材料の組み合わせから、直接又は間接的に得られる製品を含む表現である。「薬学的に許容できる」とは、担体、希釈剤、又は賦形剤が、製剤の他の材料と適合し、製剤の受容者に対して有害なものではないことを意味する。
【００９１】
化合物「の投与」又は化合物「を投与する」とは治療を必要とする個人に本発明による化合物を提供することとして理解される。
【００９２】
本発明の化合物の投与のための医薬品組成物は、単位投与量として提供可能であり、薬学技術分野における周知の方法を用いて調製可能である。全ての方法は、有効成分を、一つ以上の付属成分からなる担体と組み合わせるステップを含む。一般的には、医薬組成物は、均一に、かつ密接に有効成分を液体の担体又は細かく分割された固体の担体、又はその両方と組み合わせて、そして必要であれば、製品を求められた製剤として成形することで調製する。医薬組成物においては、病気の過程又は病状に対して求められた効果を及ぼすために必要な有効成分の量が含まれる。ここで使われる「組成物」は、特定された量の特定された材料を含む製品、及び特定された量の特定された材料の組み合わせから、直接又は間接的に得られる製品を含む表現である。
【００９３】
医薬組成物は、無菌注入可能な水性又は油性の懸濁液であってもよい。この懸濁液は、上記の適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を用いて周知の技術により調製可能である。無菌注入可能な製剤は、１，３−ブタンジオール等の非毒性な非経口使用可能な希釈剤又は溶剤中の無菌の注入可能な溶液又は懸濁液であってもよい。可能な担体及び溶媒には、水、リンゲル溶液、及び等張塩化ナトリウム溶液が含まれる。そして、従来は、無菌な固定油が溶剤、又は懸濁化用の媒体として使用されている。このため、いかなる無菌の固定油、例えば合成モノグリセリドや合成ジグリセリド等を使用してもよい。尚、注入可能剤の調製において、オレイン酸等の脂肪酸も用いられる。
【００９４】
本発明の医薬品組成物及び方法はさらに、上記の病的状態の治療の際に応用される他の治療的に有効な化合物を含んでもよい。併用療法において用いられる具体的な物質の選択は、従来の薬学的原則に従い、当業者により可能である。治療剤の併用は、上記の様々な疾患の治療又は予防に関して相乗効果を与えるように働く可能性もある。このアプローチにより、各物質の投与量を減らして治療効能を得られる可能性もあり、よって有害な副作用を抑える可能性もある。
【００９５】
他の治療剤を本発明の化合物と併用に用いる場合には、例えば医師用卓上参考書（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ＰＤＲ）に記載の量、又は当業者により判断された量を用いてもよい。
【００９６】
がん細胞の複製の阻害、及び／又は腫瘍サイズの低減を必要とする疾患の治療又は予防において、適切な投与量は、一般に、１日当たり、患者の体重１ｋｇに当たり約０．０１ｍｇから５００ｍｇであり、これは単回投与又は複数回投与として投与可能である。好ましくは、投与量は１日当たり約０．１から約２５０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１日当たり約０．５から約１００ｍｇ／ｋｇである。適切な投与量としては、１日当たり約０．０１から２５０ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．０５から１００ｍｇ／ｋｇ、又は１日当たり約０．１から５０ｍｇ／ｋｇが可能である。この範囲内において、投与量は１日当たり０．０５から０．５、０．５から５、又は５から５０ｍｇ／ｋｇであってもよい。治療対象の患者の症状に関する調節のために、経口投与において、好意的には組成物は錠型として提供され、有効成分を１．０から１０００ｍｇ、特に１．０、５．０、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、５０．０、７５．０、１００．０、１５０．０、２００．０、２５０．０、３００．０、４００．０、５００．０、６００．０、７５０．０、８００．０、９００．０、及び１０００．０ｍｇを含むものを提供する。化合物は、１日当たり１から４回の計画、好ましくは１日当たり１回又は２回の計画で投与可能である。
【００９７】
しかし、具体的な投与量及び投薬頻度は、各患者によって異なり、具体的に応用される化合物の活性、該化合物の代謝的安定性及び活性時間、年齢、体重、全体的健康、性別、食生活、投与方法及び時間、排出率、薬の組み合わせ、及び具体的な疾患の重篤度等、及び治療を受ける患者等、様々な因子に依存することは理解される。
【００９８】
この明細書で使われる「含む」、又はその変形した「含まれる」、「含んでいる」は、記載の要素、整数、ステップ、又は要素、整数、及びステップの群を含むように理解され、ただし他の要素、整数又はステップ、及び要素、整数又はステップの群を除外するように解釈されない。
【００９９】
本明細書に含まれる文献、行為、材料、装置、及び品等の記載は、それらは本願の各クレームの優先日以前に存在し、先行技術を形成するもの、又は本発明に関する技術領域の一般常識であるものの認識としては理解されない。
【０１００】
本発明の特性をより理解しやすくするために、次には本発明の好ましい態様を、以下の限定とならない実施例を参照しながら説明する。
【実施例】
【０１０１】
実施例１．合成化学
トリアジンで置換された一連の誘導体を生成するために、１，３，５−トリアジン骨格の修飾を可能とする急速、そして高収率の合成プロトコルが開発された。
【０１０２】
実施例１．１  −  １−［４，６−ビス−（４−メトキシベンジルアミノ）−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１）の調製のための合成方法
【０１０３】
ＰＡＲＴ  Ａ    １−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ）−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000023
【０１０４】
１−アミノヒダントイン塩酸塩（４５７ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）、塩化シアヌル（５００ｍｇ，２．７３ｍｍｏｌ）、及び重炭酸ナトリウム（５０５ｍｇ，６ｍｍｏｌ）のよく冷えた懸濁液を、アセトニトリル（５ｍＬ）中に、そして窒素雰囲気下で２時間かき混ぜ、それから室温で２０時間かき混ぜた。反応混合物を、減圧蒸発乾固させ、酢酸エチルを用いて残留物を抽出し、酢酸エチルを分離して乾かした（ＭｇＳＯ４）。粗生成物（７７０ｍｇ）は、薄層クロマトグラフィー［シリカ；ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１）］において、一つの点を与え、粗生成物はさらなる精製をなしに次のステップに用いられた。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＣＮ）：  δ  ＝  ４．１１  （ｓ，  ２Ｈ）；  ８．７１  （ｓ，  １Ｈ）；  ８．８５  （ｓ，  １Ｈ）．
【０１０５】
ＰＡＲＴ  Ｂ  １−［４，６−ビス−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１）の調製
2013540778.tif 000024
【０１０６】
室温で、アセトニトリル（２０ｍＬ）中の、かき混ぜられた１−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ）−イミダゾリジン−２，４−ジオン（７７０ｍｇ，２．９３ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２．４２ｇ，１７．６ｍｍｏｌ）の懸濁液に、４−メトキシベンジルアミン（０．９６ｍＬ，７．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、室温及び窒素雰囲気下で２４時間かき混ぜ、そして減圧下で溶媒を除去した。残留物は酢酸エチルを用いて抽出し、酢酸エチルは乾かし（ＭｇＳＯ４）、蒸発させたことにより粗生成物が得られ、粗生成物は、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（５０：１→１０：１）を用いてシリカ上のフラッシュ・クロマトグラフィーによって精製した。純生成物は、無色の固体（５８７ｍｇ，４３％）として分離された。１Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６  ＤＭＳＯ）：  δ  ＝  ３．６７  （ｓ，  ６Ｈ）；  ３．９６及び４．０５  （２ｓ，  合計  ２Ｈ）；  ４．２０及び４．３２  （２ｓ，  合計  ４Ｈ）；  ６．８０  （ｂｓ，  ４Ｈ）；  ７．１３−７．３９  （ｍ，  ６Ｈ）；  ８．６７，  ８．８５及び８．９９  （２ｓ，  合計  １Ｈ）；  １１．０  （ｂｓ，  １Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳ＋）  ４６５  （Ｍ＋Ｈ）．
【０１０７】
実施例１．２  −  １−［４−（４−アミノメチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン、ＨＣｌ塩（化合物２）の調製のための合成方法
【０１０８】
ＰＡＲＴ  Ａ  １−［４−クロロ−６−（４−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−ベンジルアミノ−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000025
【０１０９】
乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，１０ｍＬ）中の、１−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ）−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１，ＰＡＲＴ  Ａ）（５９０ｍｇ，２．２４ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（６８１ｍｇ，４．９４ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、４−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−ベンジルアミン（５８２ｍｇ，２．４７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、室温で２０時間かき混ぜ、水と酢酸エチルの混合液に注いだ。結果として得られたエマルジョンをろ過し、有機質の層を分離し、乾燥し、そして蒸発させた結果、黄色い固体の粗生成物が得られた（５７６ｍｇ，５５％）。マススペクトル（ＥＳＩ＋）：９４６（２Ｍ＋Ｎａ），９２４（２Ｍ＋Ｈ）。
【０１１０】
ＰＡＲＴ  Ｂ  １−［４−（４−アミノメチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン、ＨＣｌ塩（化合物２）の調製
2013540778.tif 000026
【０１１１】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の、１−［４−クロロ−６−（４−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−ベンジルアミノ−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．２、ＰＡＲＴ  Ａ）（２００ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１３１ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、４−メトキシベンジルアミン（０．０６ｍＬ，０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を、３５℃で１８時間かき混ぜ、水に注ぎ、酢酸エチルを用いて抽出した。結果として得られたエマルジョンをろ過し、酢酸エチルの層を分離し、蒸発した結果、油性残留物としてＮ−Ｂｏｃ生成物が得られた（９０ｍｇ，３７％）。マススペクトル（ＥＳＩ＋）：１１２７（２Ｍ＋Ｈ），５６４（Ｍ＋Ｈ）。Ｎ−Ｂｏｃ物質（９０ｍｇ）を、ジクロロメタン／トリフルオロ酢酸（１：１，３ｍＬ）に溶かし、室温で、窒素雰囲気下で２時間かき混ぜた。溶媒及び過剰ＴＦＡは減圧下で除去し、残留物をメタノール（５ｍＬ）に溶かし、ジエチルエーテル中の塩化水素溶液（２Ｍの溶液を０．０８ｍＬ）で処理した。メタノールは減圧下で除去し、残留物はメタノール／アセトニトリルから再結晶してオフホワイトの固体として粗塩酸塩が得られた（４９ｍｇ，６２％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （ｄ６  ＤＭＳＯ）：  δ  ＝  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ）；  ３．９６−４．１２  （ｍ，  ６Ｈ）；  ４．３２−４．５２  （ｍ，  ４Ｈ）；  ６．８４  （ｂｒｓ，  ２Ｈ）；  ７．１６−７．５１  （ｍ，  ６Ｈ）；  ８．４  ａｎｄ  ８．５  （ｂｒｄ，  ６Ｈ）；  １１．３  （ｓ，  １Ｈ）．  マススペクトル（ＥＳ＋）：  ４６４  （Ｍ＋Ｈ）．
【０１１２】
実施例１．３  −  トリアジン−イミダゾリジン−ジオン類の調製のための合成方法
【０１１３】
５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物３）の調製
【０１１４】
ＰＡＲＴ  Ａ  １−メチル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンの調製
2013540778.tif 000027
【０１１５】
乾燥テトラヒドロフラン（６ｍＬ）中の１−メチル尿素（２００ｍｇ，２．７０ｍｍｏｌ）のよく冷えた溶液に、塩化オキサリル（０．２６ｍＬ，２．９７ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下で滴下した。反応混合液は、０〜５℃で２時間かき混ぜ、水で希釈する前に１時間、室温まで温めた。生成物は酢酸エチルで抽出し、抽出物は水で洗い、乾燥し、蒸発した結果、オフホワイトの固体として生成物が得られた（３２６ｍｇ，９４％），ｍｐ１４６〜１４９℃（ｌｉｔ．１４５〜１４８℃）。
【０１１６】
ＰＡＲＴ  Ｂ  ５−ベンジルアミノ−３−メチル−イミダゾル−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000028
【０１１７】
クロロホルム（１３ｍＬ）中の、１−メチル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ａ）（８００ｍｇ，６．２５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（４６７ｍｇ，６．８７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（触媒量）及びトリエチルアミン（１．８２ｍＬ，１３．１ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロトリメチルシラン（１．６７ｍＬ，１３．１ｍｍｏｌ）を、室温で、窒素雰囲気下で滴下し、反応溶液を２時間かき混ぜた。ベンジルアミン（０．７５ｍＬ，６．８７ｍｍｏｌ）を加え、さらに２２．５時間混合液をかき混ぜた。反応溶液は、クロロホルム及び水で希釈し、クロロホルムの抽出物は乾燥し、蒸発させた。粗生成物はカラム・クロマトグラフィー（ＰＳ、  ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ  ３：１までの勾配溶離液）により精製し、無色の固体として生成物が得られた（８３８  ｍｇ，  ６２％），  ｍｐ  １５２−１５４℃． δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）  ７．９５  （ｖ  ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．４１−７．２７  （ｍ，  ５Ｈ，  ＰｈＨ），  ４．６４  （ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２），  ２．９５  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）。マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ２１８  （Ｍ＋Ｈ）．
【０１１８】
ＰＡＲＴ  Ｃ  ５−アミノ−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000029
【０１１９】
エタノール／酢酸エチル（５０ｍＬ，１：１）中の、５−ベンジルアミノ−３−メチル−イミダゾール−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｂ）（４００ｍｇ，１．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ触媒を加えた（１９５ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）。フラスコから気体を抜き、三回水素を満たし、そして２３時間室温でかき混ぜた。その後、反応混合物をセライトを通してろ過し、ろ過された液体は蒸発し、無色の固体の生成物を得た（２１４ｍｇ，９０％），ｍｐ  １２２−１２５℃． δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）  ６．３１  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ４．６８  （ｄ，  Ｊ  １．５  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ２．８７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）．  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  ４．９５  （ｓ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ２．９６  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）．  δＣ  （７５  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  １７５．６，  １５８．５，  ６４．０  （ＣＨ），  ２４．３  （ＣＨ３）。
【０１２０】
ＰＡＲＴ  Ｄ  ５−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ）−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000030
【０１２１】
アセトニトリル（１５ｍＬ）中の、５−アミノ−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｃ）（２６６ｍｇ，２．０６ｍｍｏｌ）、塩化シアヌル（４１５ｍｇ，２．２７ｍｍｏｌ）及び重炭酸ナトリウム（１９１ｍｇ，２．２７ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、及び氷水上で１時間かき混ぜ、そして２２時間室温でかき混ぜた。溶媒は蒸発し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、粗生成物はカラム・クロマトグラフィー（ＰＳ、  ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ  １：１までの勾配溶離液）を用いて精製し、クリームの固体として生成物を得た（４４８  ｍｇ，  ７８％）。 δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）  ７．５０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．５６  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ５．６０  （ｄｄ，  Ｊ  ７．８，  １．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ２．９７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ３）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ２５９  ［Ｍ＋Ｈ  （ＯＨでＣｌが交換されたイオン）］．
【０１２２】
ＰＡＲＴ  Ｅ  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物３）の調製
2013540778.tif 000031
【０１２３】
５℃のアセトニトリル（１５ｍＬ）中の、５−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ）−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｄ）（１９３ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２１２ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、４−メトキシベンジルアミン（０．１０ｍＬ，０．７７ｍｍｏｌ）を滴下した。懸濁液は、氷温で１時間かけ混ぜ、それから室温で２４時間かき混ぜた。反応混合液に水を加え、酢酸エチルを用いて抽出した。粗生成物は、シリカカラムにかけ、ジクロロメタン：酢酸エチル（１０：１）の混合物で始め、それから５：１、そして最終的にジクロロメタン：メタノール（２０：１）で溶出させた。早期の留分は一置換の５−［４−クロロ−６−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（１３３ｍｇ，５１％）、そして後の留分はジベンジルアミノの生成物（１１２ｍｇ，３４％）を生み出した。（Ｆｏｕｎｄ：  Ｃ，  ５５．４６；  Ｈ，  ４．６６；  Ｎ，  １８．３９％．  Ｃ２１Ｈ２０Ｎ６Ｏ６  はＣ，  ５５．７５；  Ｈ，  ４．４６；  Ｎ，  １８．５８）を要求）。  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）：  ７．１９  （ｂｒ  ｄ，  ４Ｈ，  Ａｒ），  ６．８４  （ｂｒ  ｄ，  ４Ｈ，  Ａｒ），  ６．３５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ５．９−５．８  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＨ），  ５．４６  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．３６  （ｓ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ３．７４  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＭｅ），  ２．９−２．８  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＭｅ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４７９  ［Ｍ＋Ｈ］．  
【０１２４】
実施例１．４  −  ５−［４−（４−アミノメチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物４）の調製
【０１２５】
ＰＡＲＴ  Ａ  ５−［４−クロロ−６−（Ｎ−Ｂｏｃ−｛４−アミノメチル｝−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000032
【０１２６】
室温で、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の、５−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ）−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｄ）（３００ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（３２９ｍｇ，２．３８ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、Ｎ−Ｂｏｃ−（４−アミノメチル）−ベンジルアミン（２８１ｍｇ，１．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液は、室温で４時間かき混ぜ、そして水と酢酸エチルで希釈した。酢酸エチル層は、分離し、乾燥し、蒸発して次のステップに直接用いられた粗生成物を得た。
【０１２７】
ＰＡＲＴ  Ｂ  ５−［４−｛（Ｎ−Ｂｏｃ−４−アミノメチル）−ベンジルアミノ｝−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物４（Ｂ））の調製
2013540778.tif 000033
【０１２８】
３０℃で、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の、５−［４−クロロ−６−（Ｎ−Ｂｏｃ−｛４−アミノメチル｝−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．４，ＰＡＲＴ  Ａ）（３７７ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２４０ｍｇ，１．７４ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、４−メトキシベンジルアミン（０．１２ｍＬ，０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液は、３０℃で１８時間かき混ぜ、そして水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルの層は、希塩酸で洗い、それから分離し、乾燥し、そして凝縮して粗生成物を得、生成物は、初期の溶離液としてジクロロメタンを用いて、シリカゲル上のクロマトグラフィーで精製し、極性を徐々にジクロロメタン：メタノール（２０：１）まで高めた。生成物は白い固体として得られた（７１ｍｇ，１６％）。ＮＭＲスペクトルδＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）：  ７．１６  （ｂｒ  ｓ，  ６Ｈ，  Ａｒ），  ６．８２  （ｂｒ  ｄ，  ２Ｈ，  Ａｒ），  ６．５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．１−５．７  （ｂｒ  ｍ，  ４Ｈ，  ＮＨ），  ５．４７  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．５−４．３  （ｂｒ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ４．１５  （ｄ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）  ３．７３  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＭｅ），  ２．９−２．７  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＭｅ），  １．３９  （ｓ，  ９Ｈ，  Ｂｏｃ）．
【０１２９】
ＰＡＲＴ  Ｃ  ５−［４−（４−アミノメチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物４）の調製
2013540778.tif 000034
【０１３０】
室温で、ジクロロメタン（２ｍＬ）中の、５−［４−｛（Ｎ−Ｂｏｃ−４−アミノメチル）ベンジルアミノ｝−６−（４−メトキシベンジルアミノ−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ｝−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．４，ＰＡＲＴ  Ｂ）（６３ｍｇ，０．１１ｍｏｌ）のかき混ぜられた溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を加えた。３時間後に、ＴＦＡおよび溶媒は減圧下の蒸発により除去し、追加のジクロロメタンを加え、再度除去することにより残っている余分のＴＦＡを取り除いた。粗生成物は乾燥メタノールに溶かし、エーテル中の塩化水素溶液（２Ｍ，０．０５ｍＬ）を加えた。反応混合物は室温において１５分間かき混ぜ、そして濃縮し、残留物は氷を用いて冷やしながらメタノール／アセトニトリルを用いて粉末にすること（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｎｇ）により結晶化させた。結果として得られた淡いピンクの固体は、ろ過により集め、ＨＣｌ塩（４８ｍｇ，８６％）の生成物が得られた。ＮＭＲスペクトルδＨ  （３００  ＭＨｚ，  ｄ６−ＤＭＳＯ）：  ８．９−８．２  （ｂｒ  ｍ，  ６Ｈ，  ＮＨ），  ７．４−７．１  （ｂｒ  ｍ，  ６Ｈ，  Ａｒ），  ６．８５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ａｒ），  ５．６  （ｂｒ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．５−４．２  （ｂｒ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ３．９５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）  ３．７０  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＭｅ），  ２．８−２．６  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＭｅ）；  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４７８  ［Ｍ＋Ｈ］．
【０１３１】
実施例１．５  −  ５−［４−（４−メチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチルイミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物５）の調製
【０１３２】
ＰＡＲＴ  Ａ  ５−［４−クロロ−６−（４−メチル−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000035
【０１３３】
室温において、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の、５−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ）−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｄ）（２００ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２１９ｍｇ，１．５９ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた溶液に，４−メチル−ベンジルアミン（０．１ｍＬ，０．７９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物は３５℃において２４時間かき混ぜ、そして水及び酢酸エチルで希釈した。酢酸エチル層は分離し、乾燥し、そして蒸発させ、次のステップに直接用いる粗生成物を得た。
【０１３４】
ＰＡＲＴ  Ｂ  ５−［４−（４−メチル−ベンジルアミノ）−６−（４−メトキシベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物５）の調製
2013540778.tif 000036
【０１３５】
３５℃における、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の５−［４−クロロ−６−（４−メチル−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．５，ＰＡＲＴ  Ａ）（８０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（６７ｍｇ，０．４９ｍｍｏｌ）のかき混ぜられた懸濁液に、４−メトキシベンジルアミン（０．０３ｍＬ，０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液は３５℃において２０時間かき混ぜ、そして水で希釈し、酢酸エチルを用いて抽出した。酢酸エチル層は乾燥し、濃縮して、泡（７９ｍｇ，７７％）として粗生成物を得た。ＮＭＲ  スペクトル  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）：  ７．２−７．０  （ｂｒ  ｍ，  ７Ｈ，  Ａｒ  ＋  ＮＨ），  ６．８  （ｂｒ  ｄ，  ２Ｈ，  Ａｒ），  ６．５  （ｂｒ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．１−５．８  （ｂｒ  ｍ，  ２Ｈ，  ＮＨ），  ５．４５  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．５−４．３  （ｂｒ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ４．１５  （ｄ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）  ３．７４  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＭｅ），  ２．９−２．７  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＭｅ），  ２．３  （ｓ，  ３Ｈ，  Ｍｅ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４６３  ［Ｍ＋Ｈ］．
【０１３６】
実施例１．６  −  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−ｎ−ブチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物６）の調製
2013540778.tif 000037
【０１３７】
表題化合物は基本的に、実施例１．３、ＰＡＲＴ  ＢからＥの記載と同じ反応シーケンス及び条件を用いて調製され、ただし１−メチル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンの代わりに１−（ｎ−ブチル）−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンを用いた。最終ステップから得られた生成物はクロマトグラフィーを用いて精製し、ＮＭＲ及びマススペクトルによって特性を解析した。ＮＭＲ  スペクトル  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）：  ７．１９  （ｂｒ  ｄ，  ４Ｈ，  Ａｒ），  ６．８４  （ｂｒ  ｄ，  ４Ｈ，  Ａｒ），  ６．３８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．０−５．７  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＨ），  ５．５  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．３６  （ｓ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ３．７４  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＭｅ），  ３．３８  （ｔ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ２）；  １．５２  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）；  １．２８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）；  ０．８９  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｍｅ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２１  ［Ｍ＋Ｈ］．  
【０１３８】
実施例１．７  −  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−ｎ−プロピル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物７）の調製
2013540778.tif 000038
【０１３９】
表題化合物は基本的に、実施例１．３、ＰＡＲＴ  ＢからＥの記載と同じ反応シーケンス及び条件を用いて調製され、ただし１−メチル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンの代わりに１−（ｎ−プロピル）−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンを用いた。最終ステップから得られた生成物はクロマトグラフィーを用いて精製し、ＮＭＲ及びマススペクトルによって特性を解析した。ＮＭＲ  スペクトル  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ｄ６ＤＭＳＯ）：  ８．３１  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  ７．５  （ｂｒ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  ７．１−７．３  （ｂｒ，  ６Ｈ，  Ａｒ＋ＮＨ），  ６．８３  （ｂｒ  ｄ，  ４Ｈ，  Ａｒ），  ５．５  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．３２  （ｓ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ３．７８  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＭｅ），  ３．３４  （ｂｒ，  ２Ｈ，  ＮＣＨ２）；  １．４６  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ２）；  ０．７９  （ｂｒ，  ３Ｈ，  Ｍｅ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５０７  ［Ｍ＋Ｈ］．  
【０１４０】
実施例１．８  −  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−ベンジルアミノ）−［１，３，５］−トリアジン−２−イルアミノ］−３−フェニル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物８）の調製
2013540778.tif 000039
【０１４１】
表題化合物は基本的に、実施例１．３、ＰＡＲＴ  ＢからＥの記載と同じ反応シーケンス及び条件を用いて調製され、ただし１−メチル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンの代わりに１−フェニル−イミダゾリジン−２，４，５−トリオンを用いた。最終ステップから得られた生成物はクロマトグラフィーを用いて精製し、ＮＭＲ及びマススペクトルによって特性を解析した。ＮＭＲ  スペクトル  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）：  ８．０７  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ）；  ７．４−７．０  （ｂｒ，  ９Ｈ，  Ａｒ＋ＮＨ）；  ６．９−６．６  （ｂｒ，  ５Ｈ，  Ａｒ＋ＮＨ），  ６．２−５．５  （ｂｒ，  ３Ｈ，  ＮＨ＋ＣＨ），  ５．５  （ｂｒ  ｄ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ４．３８  （ｓ，  ４Ｈ，  ＣＨ２），  ３．７３  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＭｅ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５４１  ［Ｍ＋Ｈ］．  
【０１４２】
実施例１．９  −  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−フェノキシ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物９）の調製
2013540778.tif 000040
【０１４３】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の５−アミノ−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｃ）（８０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）、ｐ−メトキシフェノール（３９ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（８８ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温において、窒素雰囲気下で１８時間かき混ぜた。反応混合液は酢酸エチル及び水を用いて希釈し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、粗生成物はカラム・クロマトグラフィーを用いて精製し（シリカ；ジクロロメタン：酢酸エチル、溶媒比率は１０：１から１：２へと高めた）、そしてアセトニトリルから再結晶化し、無色の固体（１７ｍｇ，１３％）として表題化合物を得た。（Ｆｏｕｎｄ：  Ｃ，  ５５．５；  Ｈ，  ４．７；  Ｎ，  １８．４％．  Ｃ２１Ｈ２０Ｎ６Ｏ６  はＣを要求，  ５５．８；  Ｈ，  ４．５；  Ｎ，  １８．６％）．  δＨ  （３００  ＭＨｚ，  （ＣＤ３）２ＣＯ）  ７．８１  （ｄ，  Ｊ  ８．１  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．４０  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．０８  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （ＯＰｈ結合のオルト位）），  ７．０７  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （ＯＰｈ結合のオルト位）），  ６．９２  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ４Ｈ，  ＡｒＨ  （ＯＣＨ３結合のオルト位）），  ５．７３  （ｄ，  Ｊ  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ３．８１  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＣＨ３），  ２．７７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ３）．  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４５３  （７２％，  ＭＨ＋）．
【０１４４】
実施例１．１０  −  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１０）の調製
ＰＡＲＴ  Ａ  ５−［４−クロロ−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000041
【０１４５】
アセトニトリル（７ｍＬ）中の５−アミノ−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．３，ＰＡＲＴ  Ｃ）（２２８ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ），ｐ−メトキシアニリン（１１１ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）及び重炭酸ナトリウム（７６ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温において、窒素雰囲気下で２５時間かき混ぜた。溶媒は蒸発し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、粗生成物はカラム・クロマトグラフィーを用いて精製し（シリカ；ジクロロメタン：酢酸エチルを、１０：１の溶媒比率で始め、極性をジクロロメタン：メタノール，１０：１まで高めた）、表題化合物はクリーム色の固体として得られた（２８８ｍｇ，９６％）。δＨ  （３００  ＭＨｚ，  （ＣＤ３）２ＣＯ）  ８．８８  （ｂｒ  ｓ，  ０．５Ｈ，  ＮＨ），  ８．８４  （ｂｒ  ｓ，  ０．５Ｈ，  ＮＨ），  ７．８７  ａｎｄ  ７．７０  （２  ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．６１  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ７．５１  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （ＮＨ結合のオルト位）），  ６．９１  及び  ６．８９  （２  ｄ，  Ｊ  ８．７，  ６．６  Ｈｚ，  ２Ｈ  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ５．８２  （ｂｒ  ｄ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ３．７９  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），  ２．９５  （ｓ，  １．４Ｈ，  ＮＣＨ３），  ２．７３  （ｓ，  １．６Ｈ，  ＮＣＨ３）．  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ３６４  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１４６】
ＰＡＲＴ  Ｂ  ５−［４，６−ビス−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１０）の調製
2013540778.tif 000042
【０１４７】
無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の５−［４−クロロ−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１０，ＰＡＲＴ  Ａ）（５０ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）、ｐ−メトキシアニリン（２５ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（４８ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）の懸濁液を、窒素雰囲気下で１８．５時間かき混ぜた。反応混合液は水で希釈し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、粗生成物はカラム・クロマトグラフィーを用いて精製し（シリカ；ジクロロメタン：酢酸エチルを、１０：１の溶媒比率で始め、極性をジクロロメタン：メタノール，１０：１まで高めた）、生成物（３６ｍｇ，５８％）は淡い黄色い固体として得た。δＨ  （３００  ＭＨｚ，  （ＣＤ３）２ＣＯ）  ８．１４  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ，  ＮＨ），  ７．６０  （ｂｒ  ｓ，  ４Ｈ，  ＡｒＨ  （ＮＨ結合のオルト位）），  ７．４３  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．９１  （ｄ，  Ｊ  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．８５  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ４Ｈ，  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ５．９１  （ｄ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ３．７７  （ｓ，  ６Ｈ，  ＯＣＨ３），  ２．８６  （ｂｒ  ｓ，  ２．０Ｈ，  ＮＣＨ３），  ２．７３  （ｂｒ  ｓ，  １．０Ｈ，  ＮＣＨ３）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４５１  （３７％，  ＭＨ＋）．
【０１４８】
実施例１．１１  −  ５−［４−（４−ヒドロキシ−フェニルアミノ）−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１１）の調製
2013540778.tif 000043
【０１４９】
無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５−［４−クロロ−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１０，ＰＡＲＴ  Ａ）（７６ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、ｐ−アミノフェノール（５０ｍｇ，０．４６ｍｏｌ）及び酢酸カリウム（２５ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、窒素雰囲気下で、油浴上の３５℃で２２時間かき混ぜた。反応混合液は水で希釈し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、カラム・クロマトグラフィーを用いて精製し（シリカ；ジクロロメタン：酢酸エチルを、１０：１の溶媒比率で始め、極性をジクロロメタン：メタノール，１０：１まで高めた）、生成物は淡黄褐色の固体（２４ｍｇ，３３％）として得た。（Ｆｏｕｎｄ：  Ｃ，  ５４．１；  Ｈ，  ４．９；  Ｎ，  ２４．３％．  Ｃ２０Ｈ２０Ｎ８Ｏ４．ＭｅＯＨは  Ｃを要求，  ５３．８；  Ｈ，  ５．２；  Ｎ，  ２３．９％）．δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）  ７．４９  （ｂｒ  ｄ，  Ｊ  ８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （ＮＨ結合のオルト位）），  ７．３７  （ｂｒ  ｓ，  ４Ｈ，  ＮＨ  及び  ＡｒＨ  （ＮＨ結合のオルト位）），  ６．８７  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ６．７５  （ｄ，  Ｊ  ９．０  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ６．７０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＯＨ），  ６．４８  （ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．１０  （ｂｒ  ｄ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ５．６７  （ｄ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ３．７８  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），  ２．８８  （ｂｒ  ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ３）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４３７  （３６％，  ＭＨ＋）．
【０１５０】
実施例１．１２  −  ５−［４−（４−ベンジルオキシ−フェニルアミノ）−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１２）の調製
2013540778.tif 000044
【０１５１】
無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の５−［４−クロロ−６−（４−メトキシ−フェニルアミノ）−［１，３，５］トリアジン−２−イルアミノ］−３−メチル−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１０，ＰＡＲＴ  Ａ）（９３ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）、塩酸ｐ−ベンジルオキシアニリン（１３２ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１８４ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、窒素雰囲気下で、油浴上の３０℃で１９時間かき混ぜた。反応混合液は水で希釈し、粗生成物は酢酸エチルを用いて抽出した。有機層は乾燥し、蒸発し、粗生成物はカラム・クロマトグラフィーを用いて精製した（シリカ；ジクロロメタン：酢酸エチルを、１０：１の溶媒比率で始め、極性をジクロロメタン：メタノール，２０：１まで高めた）。ＰＳ／ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃから再結晶化した結果、生成物はクリーム色の固体（９０ｍｇ，６２％）として得た。（Ｆｏｕｎｄ：  Ｃ，  ６１．５；  Ｈ，  ５．１；  Ｎ，  ２１．２％．  Ｃ２７Ｈ２６Ｎ８Ｏ４  はＣを要求，  ６１．６；  Ｈ，  ５．０；  Ｎ，  ２１．３％）．    δＨ  （３００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＣＮ）  ７．５８−７．３０  （ｍ，  １１Ｈ，  ＡｒＨ  （ＮＨ結合のオルト位），  ＰｈＨ  及び  ２  ＮＨ），  ６．９４  （ｄ，  Ｊ  ８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ６．８７  （ｄ，  Ｊ  ８．７  Ｈｚ，  ２Ｈ，  ＡｒＨ  （Ｏ結合のオルト位）），  ６．４９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ６．１４  （ｍ，  １Ｈ，  ＮＨ），  ５．６７  （ｄ，  Ｊ  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ），  ５．０９  （ｓ，  ２Ｈ，  ＣＨ２），  ３．７８  （ｓ，  ３Ｈ，  ＯＣＨ３），  ２．８８  （ｂｒ  ｓ，  ３Ｈ，  ＮＣＨ３）．  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２７  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１５２】
実施例１．１３  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（ピぺリジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１３）の調製
【０１５３】
ＰＡＲＴ  Ａ  １−［４−クロロ−６−（４−メトキシベンジル）アミノ−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオンの調製
2013540778.tif 000045
【０１５４】
ＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中の、１−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ）−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１，ＰＡＲＴ  Ａ）（３．８４ｇ，１４．６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．４ｇ，３１．８ｍｍｏｌ）の混合物に、（４−メトキシフェニル）−メタンアミン（２．０ｇ，１４．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。混合物は室温で一晩中かき混ぜた。ＴＬＣによって、反応の完了が示された。混合物はろ過し、ケーキを水及びＥｔＯＡｃの間で分けた。有機層は分離し、水性層はＥｔＯＡｃを用いて抽出した。組み合わせた有機層は塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空内で濃縮して、予期された化合物（３．５０ｇ，収率：６６％）を、白い固体として得た。さらなる精製をせずに次のステップに用いた。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．３０−１１．２３  （ｍ，  １Ｈ），  １０，０６−９．８３  （ｍ，  １Ｈ），  ８．６７−８．６０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２４−７．１３  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９０−６．８３  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．４０−４．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．２６−４．０５  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．７３  （ｓ，  ３Ｈ）．  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ３６４  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１５５】
ＰＡＲＴ  Ｂ  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（ピぺリジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１３）の調製
2013540778.tif 000046
【０１５６】
ＴＨＦ（８．０ｍＬ）中の、１−［４−クロロ−６−（４−メトキシベンジル）アミノ−｛１，３，５｝−トリアジン−２−イル−アミノ］−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１３，ＰＡＲＴ  Ａ）（１５０ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）、４−ピぺリジニルメチレン−ベンジルアミン（１０１ｍｇ，０．４９ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１７１ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）の混合物は、一晩中還流下で加熱した。ＴＬＣによって反応の完了が示された。混合物は室温まで冷まし、水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで繰り返し抽出した。組み合わせた有機層は、塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空内で濃縮した。残留物の固体は、フラッシュ・クロマトグラフィーにより精製し（シリカゲル；ＣＨ２Ｃｌ２  ：  ＭｅＯＨ＝  ２０  ：１，  ｖ／ｖ）、オフホワイトな固体として化合物１３を得た（６５ｍｇ，収率：３０％）。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１３  （ｂｒ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．６６−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ３．９１  （ｓ，  １Ｈ），  ３．７２−３．４５  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．３８  （ｓ，２Ｈ），  １．５３−１．２４  （ｍ，  ６Ｈ）．  マススペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５３２．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１５７】
実施例１．１４  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（モルホリノメチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１４）の調製
2013540778.tif 000047
【０１５８】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１４を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１，１４−１１，０４  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５０−５．５０  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４１−３．８０  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５６  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．４１  （ｓ，  ４Ｈ），  ２．３３  （ｓ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５３４．２  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１５９】
実施例１．１５  −  １−（（４−（（４−（（ジエチルアミノ）メチル）ベンジル）アミノ）−６−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１５）の調製
2013540778.tif 000048
【０１６０】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１５を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１２−１１．０４  （ｍ，  １Ｈ），  ９．０２−８．９２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．６２−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４２−４．２３  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．０９，  ３．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５３  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５５−３．５２  （ｍ，  ４Ｈ），  ０．９９  （ｂｒ  ｓ．，  ６Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２０．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１６１】
実施例１．１６  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１６）の調製
2013540778.tif 000049
【０１６２】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１６を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．０７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０４−８．８９  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４９−６．７２  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４２−４．２１  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．０９−３．９４  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．４０  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．３４  （ｂｒ  ｓ，  ８Ｈ），  １．９２  （ｓ，  ３Ｈ）．    マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５４７．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１６３】
実施例１．１７  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（ピぺリジン−１−イル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１７）の調製
2013540778.tif 000050
【０１６４】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１７を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１４−１１．０３  （ｍ，  １Ｈ），  ８．９０−  ８．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５６−６．８４  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３５−４．０２  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．０７  （ｓ，  ４Ｈ），  １．６０−１．５１  （ｍ，  ６Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５１８．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１６５】
実施例１．１８  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ−６−（（４−モルホリノベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１８）の調製
2013540778.tif 000051
【０１６６】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１８を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １０．９４  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ８．８９−８．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．７５−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３４−４．０６  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７４−３．７２  （ｍ，  ７Ｈ），  ３．０４  （ｓ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２０．２  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１６７】
実施例１．１９  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物１９）の調製
2013540778.tif 000052
【０１６８】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物１９を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ８．８９−８．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．４０−６．８１  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３５−４．０１  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．３９  （ｂｒ  ｓ，  ４Ｈ），  ３．１０  （ｓ，  ４Ｈ），  ２．２７  （ｓ，  ３Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５３３．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１６９】
実施例１．２０  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（３−（ピぺリジン−１−イル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２０）の調製
2013540778.tif 000053
【０１７０】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２０を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１２−１１．０４  （ｍ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７１  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５９−６．６０  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３７−３．９８  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７１  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．０９  （ｓ，  ４Ｈ），  １．５９−１．５１  （ｍ，  ６Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５１８．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１７１】
実施例１．２１  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（３−モルホリノベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２１）の調製
2013540778.tif 000054
【０１７２】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２１を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１３−１１．０３  （ｍ，  １Ｈ），  ９．０４−８．７２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５８−６．６６  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３７−３．９８  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ７Ｈ），  ３．０７  （ｓ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２０．２  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１７３】
実施例１．２２  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２２）の調製
2013540778.tif 000055
【０１７４】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２２を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．０７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７１  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５６−６．６１  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３６−３．９８  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｂｒ  ｓ，  ７Ｈ），  ３．１２  （ｓ，  ４Ｈ），  ２．２７  （ｓ，  ３Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５３３．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１７５】
実施例１．２３  −  １−（（４−（（４−（２−（ジエチルアミノ）エトキシ）ベンジル）アミノ）−６−（（４−メトキシベンジルアミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２３）の調製
2013540778.tif 000056
【０１７６】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２３を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．０７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７１  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５７−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３５−３．９８  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．８１  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６０−２．５１  （ｍ，  ４Ｈ），  ０．９９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ６Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５５０．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１７７】
実施例１．２４  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（２−モルホリノエトキシ）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２４）の調製
2013540778.tif 000057
【０１７８】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２４を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．１６−１１．０６  （ｍ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７２  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５７−６．８１  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．３５−３．９９  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５８  （ｓ，  ４Ｈ），  ２．６７  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５２−２．４６  （ｍ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５６４．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１７９】
実施例１．２５  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２５）の調製
2013540778.tif 000058
【０１８０】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２５を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １０．７８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０３−８．７３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．６５−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４１−３．９５  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．６０  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５５  （ｂｒ  ｓ，  ４Ｈ），  １．７１  （ｓ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５１８．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１８１】
実施例１．２６  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（（（２−メトキシエチル）アミノ）メチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２６）の調製
2013540778.tif 000059
【０１８２】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２６を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  ９．０３−８．７３  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５２−６．７７  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４０−４．０９  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．６７  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３９  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２３  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．６３  （ｓ，  ２Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５２２．２  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１８３】
実施例１．２７  −  １−（（４−（（４−（（ジメチルアミノ）メチル）ベンジル）アミノ）−６−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物２７）の調製
2013540778.tif 000060
【０１８４】
実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて化合物２７を生成した。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）：  １１．０７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ），  ９．０４−８．７５  （ｍ，  １Ｈ），  ７．６６−６．７４  （ｍ，  １０Ｈ），  ４．４４−３．９１  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．７２  （ｓ，  ５Ｈ），  ２．３４  （ｓ，  ６Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ４９２．２  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１８５】
実施例１．２８  −  １−（（４−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−６−（（４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）イミダゾリジン−２，４−ジオン  ２，２，２−トリフルオロ酢酸塩（化合物２８）の調製
2013540778.tif 000061
【０１８６】
化合物２８は、実施例１．１３、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法を用いて生成した対応するＢｏｃ保護された４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ誘導体の脱保護より得られた。δＨ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）：  ７．４２−６．８３  （ｍ，  ８Ｈ），  ４．６４−４．４７  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．２０−３．９３  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７９  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．３４−３．３２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．１２−３．０１  （ｍ，  ４Ｈ）．  マススペクトル  （ＥＳＩ）  ｍ／ｚ  ５３３．３  （１００％，  ＭＨ＋）．
【０１８７】
実施例１．２９  −  ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（（（４−（（２，４−ジオキソイミダゾリジン−１−イル）アミノ）−６−（（４−メトキシベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）メチル）ベンジルカルバミン酸塩（化合物２９）の調製
2013540778.tif 000062
【０１８８】
実施例１．４、ＰＡＲＴ  Ａ及びＢにより説明された合成方法及び出発原料として１−（４，６−ジクロロ−［１，３，５］−トリアジン−２−イル−アミノ）−イミダゾリジン−２，４−ジオン（実施例１．１，ＰＡＲＴ  Ａ）を用いて化合物２７を生成した。
【０１８９】
実施例１．３０  −  ５−（（４，６−ビス（（４−ヒドロキシベンジル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）−３−メチルイミダゾリジン−２，４−ジオン（化合物３０）の調製
2013540778.tif 000063
【０１９０】
化合物３０は上記の合成方法を適合させて生成した。
【０１９１】
実施例２  −  生物学的検査
実施例２．１  −  がん細胞株における増殖の阻害および阻害期間
本発明のトリアジン化合物はＧ２／Ｍで細胞周期を阻害することを示した。トリアジンは、腫瘍細胞株のインビトロ増殖に対する阻害活性に関して検査された。初期研究では、二つの結腸がん細胞株（ＬＩＭ１２１５及びＳＷ４８０）及び二つの乳がん細胞株（  ＭＤＡ−ＭＢ−２３１及びＭＣＦ−７）を使用した。これらの実験では、比較対象としてタキソールを用いた（表１）。
【０１９２】
検査された全てのトリアジンは、最適の濃度で、Ｇ２／Ｍ阻害を誘導することに関しては、少なくともタキソールと同等の効果を示した（表１）。
【０１９３】
表１：  がん細胞株におけるトリアジンの抗有糸分裂効果。２４時間の対数的な増殖期を示した細胞に、阻害剤を加えた。細胞周期の分布は、ＤＮＡ染色により監視し、ＭｏｄＦｉｔにより解析した。（ａ）細胞周期の進行についてのＩＣ５０、（ｂ）１μＭのタキソールへの暴露の後の、Ｇ２／Ｍ期にある細胞の割合を基準とした；トリアジンの効能はＧ２Ｍにある細胞の割合（実験）／Ｇ２Ｍにある細胞の割合（タキソール）として表現した。この実験では、Ｇ２／Ｍにある細胞の最高数は：ＬＩＭ１２１５＝７８．５％；ＳＷ４８０＝７２％；ＭＤＡ−ＭＢ−２３１＝５５％；ＭＣＦ−７＝６２％。ＮＴ＝非実験。
【表１】
2013540778.tif 000064
【０１９４】
実施例２．２  −  インビトロにおけるがん細胞増殖に対するトリアジンの効果
増殖の阻害はさらにＭＴＴアッセイを用いて腫瘍細胞株のパネルにおいて測定した（一般プロトコル、実施例２．６を参照）。細胞増殖を測定するこのアッセイにより認定されたＩＣ５０は、Ｇ２／ＭブロックのＦＡＣＳ解析より計算された値とよく一致し、実にＧ２／Ｍの停止は細胞の増殖を防ぐことを示した。薬剤との細胞の培養後、ウォッシュアウト実験の結果、乳がん細胞株においては増殖の復元が見え、一つの結腸直腸がん細胞株においては完全な停止が見え、少なくともいくつかの細胞株に関しては、薬剤は細胞毒性をもつことを示している。
【０１９５】
実施例２．３．１  −  腫瘍細胞増殖におけるトリアジンの生物学的効果
活性及び選択性を確定するために、化合物２を一連の細胞株において検査した（表２）。細胞増殖は阻害剤とともに、三日間の培養後にＭＴＴアッセイ（プロトコルは実施例２．６を参照）を用いて測定した。
【０１９６】
表２：  化合物２による腫瘍細胞株の増殖の阻害：（ａ）マウスＢ細胞前駆株；（ｂ）ヒト結腸直腸がん；及び（ｃ）ヒト乳がん。
【表２】
2013540778.tif 000065
【０１９７】
それぞれ異なる細胞株のＩＣ５０はよく似て、化合物２は、Ｇ２／Ｍの完了に必要な共通経路を狙うことを示している。
【０１９８】
実施例２．３．２  −  「インビトロ」及び「インビボ」におけるチューブリン重合に対するトリアジンの効果
「インビトロ」及び「インビボ」におけるチューブリン重合に対するトリアジンの効果を実験した。この実験は、トリアジンに誘導されたチューブリン重合は最小限であり、有糸分裂ブロッカーとしての能力をはるかに超える投与量で見えた。
【０１９９】
チューブリンに対するトリアジンの効果を監視するために、本発明者は、薬物への暴露後の無傷細胞におけるチューブリン重合を検査した。
【０２００】
タキソール及び化合物３により処理された細胞は、０．５％  ＮＰ−４０を含む低張緩衝液中で溶解し、細胞の抽出物は、高速度で遠心分離機にかけた。重合されたチューブリンは界面活性剤不溶性である：従って、この処理後は、浮遊物（ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ，Ｓ）中に溶性チューブリンを回収し、細胞ペレット（Ｐ）中に重合したチューブリンを回収した。この二つの形態の相対的比率は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ及びチューブリンに特異的な抗体を用いた免疫ブロット法により監視した。
【０２０１】
この実験において、タキソールは用量依存的にチューブリンを安定化し、一方トリアジンは高濃度を用いてもほとんど影響を及ぼさないことを示した（図１）。
【０２０２】
トリアジン及びチューブリンの直接的な相互作用を調べようとするために、「インビトロ」のチューブリン重合アッセイを使用した（図２）。これらのアッセイにおいてトリアジンは、小さいとはいえ重要なチューブリン重合の増加を起こした。しかし、チューブリン重合に必要なトリアジンの濃度は、細胞増殖アッセイにおけるＩＣ５０の１０００倍より高い濃度であった。
【０２０３】
実施例２．３．４  −  マウスにおける投与量の増加
最初に、化合物１はマウスにおける忍容性及び毒性に関して検査された。増量の化合物１を、一定の量のＤＭＳＯとともにＣ５７Ｂ１／６マウス（生後８−１２週間）に皮下注射した。注射２４時間後にマウスを犠牲にした。このタイムフレームにおいては、８０ｍｇ／ｋｇの投与量までは悪影響はなかった。従って、化合物は「インビトロ」において観察されたＩＣ５０をはるかに超える投与量で化合物は忍容された。
【０２０４】
化合物２に関しては、６４．５ｍｇ／ｋｇの投与量までは、４日間外見上の健康状態及び行動に関する悪影響は示されなかった。２１．５及び６４．５ｍｇ／ｋｇの場合、注射部位において皮膚薄化が示された。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおいて、化合物２は、２０ｍｇ／ｋｇでいくつかの皮膚損傷を起こした。この軽い皮膚損傷は２−３日内で、容易に治った。
【０２０５】
実施例２．４  −  薬物動態
化合物２の薬物動態パラメータは、マウスへの注射後に検査された。
【０２０６】
水溶液中の５０ｍｇ／ｋｇの投与量で与えられた場合、薬剤は血中６０μＭのプラトー濃度に達し、６〜１０時間の間は６μＭ以上のレベルを維持する。排出半減期は約１．５時間である。「インビトロ」においてＧ２／Ｍ細胞周期ブロックを誘導する少なくとも二つの活性代謝物も血漿から検出され、それらの構造はマススペクトルにより確認された。薬物動態計算に活性代謝物を含む場合、活性薬剤の総濃度は、血漿から除去し始められる前に、６時間まで３０μＭの平均を持っていた。
【０２０７】
実施例２．４．１  −  マウス血液からトリアジンの抽出及び定量
マウス血漿から活性トリアジンの抽出及び抽出薬剤のＲＰ−ＨＰＬＣ定量のために開発されたプロトコル、及び代謝物の特性の解析及び化合物の薬物動態的特性を以下に説明する。
【０２０８】
実施例２．４．１．１  −  マウス血漿からのトリアジンの抽出
マウス血液を、ＣＯ２ガスによる麻酔後に、心穿刺により回収した。その後マウスは安楽死させた。血塊形成を防ぐために、血はＥＤＴＡチューブに移し、そして血漿は遠心分離による分離後に回収した。各サンプルにおいて、７５μｌの０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を２５μｌ血漿に加え、内部標準として５μＭヒドロコルチゾン（ＨＣ）を用いた。このように処理されたサンプルは必要時までに−２０℃で保管した。溶かした場合は、遠心分離により澄まし、抽出物をＲＰ−ＨＰＬＣを用いて解析した。
【０２０９】
実施例２．４．１．２  −  マウス血漿におけるトリアジン定量
各１００μｌの血漿抽出物は、Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８，２．１Ｘ１５０ｍｍ，５μのカラムにおいて分離し、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ中のアセトニトリルの５０分かけての直線的勾配、及び一分間につき０．１ｍｌの流速で用い、４５℃のカラム温度を用いた。検出は２５０ｎｍ。代表的なクロマトグラム２は図３において示す。
【０２１０】
実施例２．４．１．３  −  化合物２の代謝物の解析
化合物２で注射されたマウスの血漿のクロマトグラムは、小さいピークを示したが、比較対象のマウスのクロマトグラムは小さいピークを示さない。このピークは化合物２の注射の後に現れ、恐らく代謝物である。このピークの正体を明らかにするためには、それらの吸収スペクトルを化合物２の標準と比べた。
【０２１１】
図４に示されるように、全てのピークは、２５０ｎｍの特性ピークを示し、関連化合物のようである。マウス血漿はＲＰ−ＨＰＬＣにより断片化し、上に示したピークを回収した。合わせてためたピークサンプルは凍結乾燥により濃縮した。各ピークサンプルの一部はバイオアッセイのために、培地において再構成した（図５）。残りは質量及び構造を確認するために、ＬＣ−ＭＳを用いて解析した。
【０２１２】
回収した化合物２（ピーク１）、ピーク２、及びピーク３のＩＣ５０はそれぞれ、０．１μＭ、０．２μＭ、及び＞１μＭであった。微量のため、回収ピークの正確な濃度を計ることは難しいが、アッセイは、すべての回収ピークがある程度の生物学的活性を有することを示す。
【０２１３】
回収された化合物のＬＣ−ＭＳ解析の結果を表３に示す。
【０２１４】
表３:化合物２の注射後のマウス血漿から回収された代謝物のＬＣ−ＭＳ解析の結果
【表３】
2013540778.tif 000066
【０２１５】
出発原料の化合物２の解析は、遊離塩基化合物の分子量を４６４Ｄａであることを確認した。ピーク１は同じ質量をもち、血漿から回収された化合物と同じであることを確認した。ピーク３は４７９Ｄａの質量をもち、ヒドロキシルの誘導体であることを示唆した。ピーク２は６５５Ｄａの質量をもつ、より大きい化合物であった。付加的な質量は、ヒドロキシル誘導体のグルクロニド誘導体であることを示す。
【０２１６】
これらの結果は、回収された化合物は化合物２の活性代謝物であることを明確にし、血漿における薬剤の活性度の計算に含むべきであること、及び化合物の排出半減期を明らかにした。
【０２１７】
実施例２．４．１．４  −  化合物２の薬物動態的解析
血漿における薬剤の濃度は、内部標準方法により決定し、知られている標準に対して薬剤及びＨＣピーク領域の比率を比較することにより決定した。一つの薬物動態的実験のマウスにおける血漿中の化合物２の濃度は、図６において描いている。
【０２１８】
これらの結果は、治療的に有意な化合物２の濃度は血清において達成可能であること、及び１０時間まで維持することも可能であることを示唆する。
【０２１９】
実施例２．５  −  異種移植実験における抗腫瘍薬としての効能
腫瘍増殖の抑制に関する化合物２の効能を認定するために、異種移植実験を用いた。初期実験において、確定された腫瘍モデルを結腸直腸がん細胞株ＬＩＭ２５３７とともに用い、化合物２は腫瘍の増殖速度を有意に抑えた。
【０２２０】
実施例２．５．１  −  ＬＩＭ２５３７細胞（結腸直腸細胞株）を用いた腫瘍異種移植実験
方法：
結腸がん細胞株ＬＩＭ２５３７は、増殖が化合物２により阻害されることが示されたため、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおける腫瘍異種移植実験のために選択された（「腫瘍細胞増殖におけるトリアジンの生物学的効果」を参照）。
【０２２１】
マウスは１００μｌＰＢＳ中の各腫瘍につき３×１０６細胞、各脇腹に一つの腫瘍を皮下に（ＳＣ）植菌された。担体対象（ＶＣ）又は１５ｍｇ／ｋｇの投与量となる、水溶液中に３ｍｇ／ｍｌの薬剤を１００μｌ用いた治療を植菌後三日目に始めた。マウスは実験の期間中、週に３回腹部においてＳＣで注射された。マウスは体重、腫瘍体積及び外観、及び薬剤に関する悪影響について監視された。実験は３３日時点で停止し、対象群では腫瘍組織量が許容された最大量を達したため、その群を安楽死させた。残りのマウスはそして、腫瘍増殖の復旧を監視するために、さらに９日間治療無でおいた。
【０２２２】
結果：
マウスの体重は薬剤での治療により影響を受けなかった。対象群及び薬剤群における腫瘍のサイズの差は１２日時点で見られ、そして３３日目、対象群を安楽死させた時点では、はっきりとした差が見えた。それぞれの群内では、対象群の内では一つのゆっくり増殖する腫瘍があり、治療を受けた群の内に一つの早く増殖する腫瘍があった。この異常腫瘍が大きい標準偏差の原因である（図７）。
【０２２３】
この実験からは、この治療のスケジュール（化合物２を１５ｍｇ／ｋｇの投与量で週に３回注射）はＬＩＭ２５３７細胞の増殖を遅くすることに成功したことが認定される。この投与量及び組成物に関しては、長期的な悪影響はない。
【０２２４】
実施例２．５．２  −  Ｕ８７ＭＧ（Δ２−７）−（脳がん細胞株）を用いた腫瘍異種移植研究
方法：
マウス：Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ  雄；対象８匹及び治療８匹。
植菌された細胞：Ｕ８７ＭＧ（Δ２−７）を腫瘍毎に２．１３×１０６細胞；マウス毎に腫瘍２つ。
投与量：化合物２を２０ｍｇ／ｋｇ＝マウス２０ｇにつき水中の４ｍｇ／ｍｌを１００μｌ注射。対象マウスに注射用水を１００μｌ注射した。
治療及び監視：治療は植菌後５日目に開始した。マウスは週に３回（月、水、金）両体側に交互に腹部においてＳＣ注射した。
マウスを犠牲にした後：腫瘍を解剖し、重さを計った；脾臓及び肝臓の重さも計った。
【０２２５】
結果：
腫瘍は動物間、急速に、及び一貫に増殖した。対象マウスのほとんどが許容される腫瘍組織量を達し、そしていくつかの腫瘍が潰瘍を生じたため、実験は植菌後１４日目に終了させた。実験の最後には、対象と治療された腫瘍との間に有意な差が見えた（図８）。
【０２２６】
肝臓及び脾臓の重さも死後に計った。図９にこの臓器の平均重さを、腫瘍の平均重さとともに比較した。
【０２２７】
２０ｍｇ／ｋｇを週３回、化合物２を用いるＵ８７ＭＧ（Δ２−７）腫瘍の治療は、担体対象を注射したマウスに比べて腫瘍の増殖を減らした。
【０２２８】
実施例２．５．３  −  Ｈ１４３７を用いた腫瘍異種移植検査（非小細胞肺がん細胞株）
方法：
マウス：Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ  雄；対象８匹及び治療８匹；生後５週間。
植菌された細胞：Ｈ１４３７（非小細胞肺がん細胞株）を腫瘍毎に２×１０６細胞；マウス毎に腫瘍２つ。
投与量：化合物２を２０ｍｇ／ｋｇ＝マウス２０ｇにつき水中の４ｍｇ／ｍｌを１００μｌ注射。対象マウスに注射用水を１００μｌ注射した。
治療及び監視：治療は植菌後５日目に開始した。マウスは週に３回両体側に交互に腹部においてＳＣ注射した。マウスの重さを計った；腫瘍の直径は二次元で計り、マウスの健康を監視した。注射はプロットのデータ点に対応し、そして測定をしていない１４日目に追加の治療をした。
【０２２９】
結果：
対象群における腫瘍は急速に増殖したが、動物間にある程度の変異をみた。腫瘍の測定体積は２１日後に安定化し、他の細胞株を用いて以前の実験でみえたような増殖速度の増加はなかった。この腫瘍は一般に動物の脇腹に広がるよりも、高い、丸い球として成長した。対象マウスのほとんどが許容される腫瘍組織量を達したため、実験は２６日目に終了させた。皮下に残った腫瘍において、潰瘍形成はなく、特に血管が発達していたようには見えなかった。一方、治療群における腫瘍は２６日間にかけて非常に小さく、硬いままであった。実験の最後には、対象と治療された腫瘍との間に有意な差が見えた（図１０）。
【０２３０】
マウスを犠牲にした後、腫瘍を解剖し、重さを計った。解剖後に、２つの群の腫瘍を比較した。２つの群の腫瘍の間に、腫瘍の観測サイズに著しい差がみえた（図１１）。
【０２３１】
当業者は、具体的な実施態様に示された発明に、いくつかの変化及び／又は変更を与えても、広く説明された発明の範囲から離れるとは限らないことを理解する。本実施態様は、つまり、全ての面にたいして、実例として理解され、限定するものとしては理解されない。
【０２３２】
実施例２．６
全ての細胞及び阻害剤のためのＭＴＴ及びＭＴＳアッセイのプロトコル
【０２３３】
実施例２．６．１  −  一般概要
●細胞は１００μｌ培地＋５％ＦＣＳ（＋Ａｄｄｓ１）中１０４／ウェルでプレート。
●細胞は一晩かけて培養。
●新たなプレートに、１５０μｌ媒体中で阻害剤をを用量設定。
●細胞プレートの対応するウェルに１００μｌの用量設定された化合物を移す。
●さらに４日間培養。
●１０μｌＭＴＳ２又はＭＴＴ３を１．５から２時間加え、マルチスキャナーで計る（波長４９２／６９０）
【０２３４】
１ＬＩＭ細胞株の培養のための添加物（Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）：チオグリセロール１０μＭ、インシュリン０．０２５Ｕ／ｍｌ、ヒドロコルチゾン１μｇ／ｍｌ。２３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム。３臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム。
【０２３５】
実施例２．６．２  −  ＭＴＳアッセイに用いられる細胞株
●ＲＰＭＩにおいて増殖させたＬＩＭ２５３７ヒト結腸がん細胞株＋Ａｄｄｓ１＋５％ＦＣＳ
【０２３６】
実施例２．６．３  −  細胞のプレート化：一プレートにつき一つの細胞株
細胞をトリプシン処理し、２回培地＋５％ＦＣＳで洗い位、ウェル当たり１００μｌ中１０４の細胞でプレートした。
プレートをｏ／ｎ３７℃及び５％−１０％ＣＯ２で培養器で培養
【０２３７】
実施例２．６．４  −  阻害剤
阻害剤はＤＭＳＯに溶かして１０ｍＭのストックを作り、テストプレートのためのストックとして使用するために９６ウェルのプレートに複製して用量設定した。用量設定の範囲は１／２の希釈で４０μＭから０．０１μＭまでで、各希釈段階の１００μｌを（１００μｌ中に）細胞を含むテストプレートの適切なウェルに写し、最終的な阻害剤の濃度は複製の例にわたって２０μＭから０．０１μＭである。この阻害剤はプレートごとに検査した（列Ａ〜Ｆ）。
【０２３８】
各プレートは以下を有する：
列Ａ、Ｂ：阻害剤１の希釈物、１ウェルにつき２００μｌ
列Ｃ、Ｄ：阻害剤２の希釈物、１ウェルにつき２００μｌ
列Ｅ、Ｆ：阻害剤３の希釈物、１ウェルにつき２００μｌ
対象列Ｇ１〜６：培地＋５％ＦＣＳ（最高増殖のため）
対象列Ｇ７〜１２：タキソール（最高阻害のため２５０ｍＭ）
対象列Ｈ：細胞から培地を取り除き、無血清条件での増殖率のため、２００μｌの無血清培地で交換
【０２３９】
実施例２．６．５  −  培養
プレートを培養器において４日間培養させた。下記の通りにＭＴＳ又はＭＴＴで処理した。
【０２４０】
実施例２．６．６  −  ＭＴＳアッセイ
各ウェルに１０μｌのＭＴＳ（シグマ）溶液を加えた。ＭＴＳを１．５から２時間、ＭＴＴは４時間培養した。１０μｌ  １０％ＳＤＳを各ウェルに加えて反応を停止させる。マルチスキャン（４９２／６９０）プレートリーダーで解析し、色変化対阻害剤の濃度を描いてＩＣ５０を確定した。
【０２４１】
実施例２．６．７  −  ＭＴＴアッセイ
ＭＴＴ溶液
ＭＴＴ（シグマＭ−２１２８）−ＰＢＳに５ｇを溶かし、５ｍｇ／ｍｌで、フィルター殺菌し、−２０℃において保管する。必要に応じて解かす。
【０２４２】
ＭＴＴ溶媒（酸性化イソプロパノール）
ａ．  １Ｍ  ＨＣｌ：
４４．６ｍｌの濃ＨＣｌ（１１．２Ｍ）を５００ｍｌ  ＤＤＷと混ぜる。
ｂ．  酸性化イソプロパノール（０．０４Ｎ  ＨＣｌを含むイソプロパノール）：
２０ｍｌ  １Ｍ  ＨＣｌを４８０ｍｌイソプロパノール（プロパン−２−オール、イソプロピル  アルコール）と混ぜる
【０２４３】
ＭＴＴ付加
各ウェルに１０μｌＭＴＴ溶液を加え、３７℃の培養器において４時間培養した。
プレートを、１５００ｒｐｍで５分間スピンし、結晶を刺激しないように注意深く培地を取り除いた。各ウェルにつき２００μｌの酸性化イソプロパノール（ＭＴＴ溶液）を加えた。
プレート振とう機の上に、室温で、６．５の速度で１０〜３分間おいた。
Ｔｈｅｒｍｏ  Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  Ｅｘで５６０／６９０ｎｍでプレートのＯＤを読み取った。
【０２４４】
実施例２．６．８  −  ＬＩＭ２５３７ヒト結腸がん細胞株を用いた本発明の選択化合物のＭＴＳアッセイの結果
表４：ＬＩＭ２５３７ヒト結腸がん細胞株を用いた本発明の選択化合物のＭＴＳアッセイの結果
【表４】
2013540778.tif 000067
【図１】
2013540778.tif 000079
【図２】
2013540778.tif 000080
【図３】
2013540778.tif 000081
【図４】
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【図５】
2013540778.tif 000083
【図６】
2013540778.tif 000084
【図７】
2013540778.tif 000085
【図８】
2013540778.tif 000086
【図９】
2013540778.tif 000087
【図１０】
2013540778.tif 000088
【図１１】
2013540778.tif 000089
【国際調査報告】
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2013540778.tif 000091
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