(57)【要約】  本発明は、放射線防護剤で安定化された99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物に関する。また、該放射性医薬組成物を調製するためのキット、並びにかかる組成物をキットから調製する方法も記載される。本発明はまた、該放射性医薬組成物を用いて哺乳動物体をイメージングする方法も含んでいる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）99mＴｃ−マラシクラチド、並びに
（ｉｉ）ｐ−アミノ安息香酸及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される放射線防護剤
を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤー中に含んでなる放射性医薬組成物。
【請求項２】
放射線防護剤がｐ−アミノ安息香酸ナトリウムである、請求項１記載の放射性医薬組成物。
【請求項３】
当該放射性医薬品が注射器に入れて供給される、請求項１又は請求項２記載の放射性医薬組成物。
【請求項４】
当該放射性医薬品がクロージャーを備えたバイアルに入れて供給される、請求項１又は請求項２記載の放射性医薬組成物。
【請求項５】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物を調製するためのキットであって、
（ｉ）マラシクラチド、
（ｉｉ）ｐ−アミノ安息香酸及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される放射線防護剤、
（ｉｉｉ）第一スズ還元剤、並びに
（ｉｖ）メチレンジホスホン酸又はその生体適合性陽イオンとの塩
を含んでなるキット。
【請求項６】
すべてのキット成分が一緒に凍結乾燥されている、請求項５記載のキット。
【請求項７】
さらに緩衝剤を含む、請求項５又は請求項６記載のキット。
【請求項８】
第一スズ還元剤が塩化第一スズである、請求項５乃至請求項７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項９】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物の調製方法であって、
（ｉ）請求項５乃至請求項８のいずれか１項に記載のキットを生体適合性キャリヤーの供給物で再構成し、続いて生体適合性キャリヤー中の99mＴｃの供給物を再構成されたキットに添加する段階、又は
（ｉｉ）請求項５乃至請求項８のいずれか１項に記載のキットを生体適合性キャリヤー中の99mＴｃの供給物で再構成する段階
を含んでなる方法。
【請求項１０】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物の調製における、請求項５乃至請求項８のいずれか１項に記載のキットの使用。
【請求項１１】
（ｉ）99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物、又は
（ｉｉ）99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物を調製するためのキット
を安定化するための放射線防護剤としての、ｐ−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩の使用。
【請求項１２】
哺乳動物体のイメージング方法における、請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物の使用。
【請求項１３】
哺乳動物体のイメージング方法であって、請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の放射性医薬組成物を予め投与した哺乳動物をイメージングする段階を含んでなる方法。
【請求項１４】
哺乳動物がインテグリンの発現を伴う疾患に罹患している、請求項１３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線防護剤で安定化された99mＴｃ−マラシクラチド（ｍａｒａｃｉｃｌａｔｉｄｅ）放射性医薬組成物に関する。また、該放射性医薬組成物を調製するためのキット、並びにかかる組成物をキットから調製する方法も記載される。本発明はまた、該放射性医薬組成物を用いて哺乳動物体をイメージングする方法も含んでいる。
【背景技術】
【０００２】
99mＴｃ−マラシクラチドは、99mＴｃ−ＮＣ１００６９２に関する推奨ＩＮＮ（米国承認名）である。99mＴｃ−ＮＣ１００６９２は、インビボでインテグリン受容体を標的化する放射性医薬品として、特許及び刊行物の両方に記載されている。
【０００３】
国際公開第０３／００６４９１号は、次の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を開示している。
【０００４】
【化１】
2013532674.tif 000002
式中、
Ｇはグリシンを表し、
Ｄはアスパラギン酸を表し、
Ｒ1は−（ＣＨ2）n−又は−（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−（式中、ｎは１〜１０の正の整数を表す。）を表し、
ｈは１又は２の正の整数を表し、
Ｘ1は酸又はアミンのような官能性側鎖を有するアミノ酸残基を表し、
Ｘ2及びＸ4は独立にジスルフィド結合を形成し得るアミノ酸残基を表し、
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体を表し、
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体を表し、
Ｘ6はチオール含有アミノ酸残基を表し、
Ｘ7は存在しないか、或いはバイオモディファイアー部分を表し、
Ｗ1は存在しないか、或いはスペーサー部分を表す。
【０００５】
国際公開第０３／００６４９１号は、好ましいキレート化部分が下記に示す式を有することを開示すると共に、そこに示す前記式Ｉのキレーターコンジュゲートの99mＴｃ錯体を含んでいる。
【０００６】
【化２】
2013532674.tif 000003
国際公開第０３／００６４９１号はキットを開示していない。
【０００７】
Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３５，３６５−３７５（２００８）］は、99mＴｃ−マラシクラチド（99mＴｃ−ＮＣ１００６９２）がキットから調製できることを開示している。Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌは、各凍結乾燥キットが約４４ｎｍｏｌのマラシクラチドと共に、緩衝剤、第一スズ還元剤及び（Ｓｎ2+可溶化剤として存在する）メチレンジホスホン酸を含む複数の賦形剤を含有すると述べている。Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌは、各再構成キットの放射化学純度（ＲＣＰ）を再構成から２０分後に測定し、９０％以上と判明したことを報告している。ＲＣＰは、再構成キットを使用した期間にわたって安定であることが判明した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第０３／００６４９１号
【発明の概要】
【０００９】
テクネチウム−９９ｍ（99mＴｃ）は、６．０２時間の半減期で崩壊してテクネチウム−９９（99Ｔｃ）になる放射性同位体である。この放射性崩壊は、最新のガンマカメラによる医用イメージングにほぼ理想的なエネルギーを有するγ線の放出を伴う。崩壊生成物99Ｔｃも放射性であり、２．１×１０5年の半減期でβ放射によって（安定同位体99Ｒｕへと）崩壊するが、99Ｔｃからの放射線放出は医用イメージングには不十分である。
【００１０】
通常の99mＴｃ「ジェネレーター」は放射性同位体99Ｍｏを含んでおり、これは６６．２時間の半減期で崩壊する。かかるジェネレーターから溶出されるテクネチウムの化学形態は過テクネチウム酸イオンである。約８６％の99Ｍｏ崩壊は99mＴｃを生成するが、約１４％の99Ｍｏ崩壊は直接に99Ｔｃを生成する。したがって、前回の溶出から非常に短い時間で99mＴｃジェネレーターを溶出すれば、99mＴｃ含量は低いが、全テクネチウム含量の約８６％となる。前回のジェネレーター溶出から時間が経過すると、99Ｍｏからだけでなく、99mＴｃから99Ｔｃへの崩壊によっても99Ｔｃが生成する。その結果、ジェネレーターの溶出間隔が長くなるほど、99Ｔｃ／99mＴｃ比は増大する。テクネチウム同位体99Ｔｃ及び99mＴｃは化学的に同一であり、そのために放射性医薬品製剤はジェネレーターの可使時間を通して有効に機能し得るように溶出液中の広範囲の99Ｔｃ化学含量に対処できるものでなければならない。また、新鮮な99mＴｃジェネレーターを用いた溶出では、放射線濃度が高くなり、したがって溶媒（水）の放射線分解で生じる反応性フリーラジカルの濃度も高くなる可能性があるというのが事実である。そのため、実用可能な99mＴｃ放射性医薬品製剤は、かかる反応性フリーラジカルが存在しても、十分なＲＣＰ性能を示し得ることが必要とされる。このような99mＴｃジェネレーターの特徴は多くの放射化学又は核化学の教科書に示されており、様々な溶出液の性質が99mＴｃキットに与え得る問題は、Ｓａｈａ，Ｇ．Ｂ．“Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇ”；Ｃｈａｐｔｅｒ  ６（ｐａｇｅｓ  ８０−１０８）  ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（３rd  Ｅｄｎ．）に記載されている。
【００１１】
本発明者らは、Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ（上記）によって報告されたマラシクラチドキットが以前には先行技術で認識されていなかった下記のような様々な問題を有することを見出した。
（ｉ）99mＴｃ−過テクネチウム酸イオンでキットを再構成した後の初期ＲＣＰが比較的低いこと、
（ｉｉ）再構成後の安定性が不十分であること、
（ｉｉｉ）キットの安定性及び性能を維持するため、キットを−１５〜−２０℃で貯蔵及び輸送する必要があること、並びに
（ｉｖ）キットからは１回分の患者用量しか得られないこと。
【００１２】
本発明は、より再現可能な初期放射化学純度（ＲＣＰ）及び向上した再構成後安定性を示す結果として再構成から６時間後に８５〜９０％のＲＣＰが維持される改良99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物を提供する。ある種の放射能レベル、放射線濃度又は再構成体積条件下で99mＴｃ−マラシクラチド製剤に関するＲＣＰが不十分になるという問題は、先行技術では認識されていなかった。かかる条件は、99mＴｃジェネレーターのような市販の放射性核種ジェネレーターの正常な使用条件下で起こり得るものである。
【００１３】
Ｂｅｒｇｅｒ［Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔｏｐ．，３３，１３４１−１３４４（１９８２）］は、99mＴｃ−放射性医薬品を安定化するために広範囲の酸化防止剤が使用できることを開示している。それ以来、メチレンブルー及びアスコルビン酸が特に好適な安定剤として注目されてきた［Ｗｅｉｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２０，６６１−６６６（１９９３）及びＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１４（４），１０５２−１０５６（２００３）］。
【００１４】
本発明者らはまた、公知の放射線防護剤でアスコルビン酸／アスコルビン酸塩が実際に99mＴｃ−マラシクラチドのＲＣＰに対して有害な効果を及ぼすことを立証した。さらなる公知放射線防護剤であるゲンチシン酸は、本発明組成物中におけるその使用を無効にする変色の問題を引き起こした。本発明は、このような以前には認識されていなかった問題を解決する放射線防護剤を含む組成物を提供する。本発明のキットは、より高い初期ＲＣＰを与え、再構成後の長い期間にわたってより頑健なＲＣＰを与え、一定範囲の溶出条件下で各種の市販99mＴｃ放射性医薬品ジェネレーターと適合性を有し、キット当たり２回分の患者用量を得ること（即ち、高レベルの放射能をもって成功裡に再構成すること）が容易であり、フリーザー温度（−１０〜２０℃）ではなく冷蔵庫温度（＋５±３℃）で貯蔵及び輸送するのに適した安定性並びに３年以上のキット貯蔵寿命安定性を有するという利点を有している。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
第１の態様では、本発明は、
（ｉ）99mＴｃ−マラシクラチド、並びに
（ｉｉ）ｐ−アミノ安息香酸及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される放射線防護剤
を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤー中に含んでなる放射性医薬組成物を提供する。
【００１６】
「マラシクラチド」という用語は、科学文献中においてＮＣ１００６９２として知られる化合物をいう［Ｄ．Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３５，３６５−３７５（２００８）］。化学名は、１，５−ペンタンジオン酸−（５−［２−ヒドロキシイミノ−１，１−ジメチル−プロピルアミノ］−３−（２−［２−ヒドロキシイミド−１，１−ジメチル−プロピルアミノ］−エチル）−ペンチル）−アミド５−［１３−ベンジル−１９−カルボキシメチル−２５−（３−グアニジノ−プロピル）−１０−（４，７，１０，１６−テトラオキサ−１４，１８−ジオキソ−１，１３，１９−トリアザノナデシル）−カルバモイル−３，６，１２，１５，１８，２１，２４，２７−オクタオキソ−８，２９，３０−トリチア−２，５，１１，１４，１７，２０，２３，２６−オクタアザ−ビシクロ［１４．１１．４］ヘントリアコント−４−イル］ペンチル−アミドである。マラシクラチドの化学構造は次の通りである。
【００１７】
【化３】
2013532674.tif 000004
マラシクラチドは遊離塩基形態又は塩形態（例えば、トリフルオロ酢酸塩の形態）で使用できる。
【００１８】
「放射性医薬品」という用語は、その通常の意味を有していて、診断又は治療に使用するため哺乳動物へのインビボ投与に適した放射性化合物をいう。
【００１９】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素フリーラジカルのような高反応性フリーラジカルを捕捉することにより、レドックス過程のような分解反応を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸）及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される。これらの放射性防護剤は、医薬品グレードの純度のものを含め、商業的に入手できる。好ましくは、医薬品グレードの物質が使用される。
【００２０】
「生体適合性陽イオン」（Ｂc）という用語は、イオン化して負に帯電した基と塩を形成する正に帯電した対イオンであって、前記正に帯電した対イオンも所要の用量において無毒であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適したものを意味する。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【００２１】
「生体適合性キャリヤー」とは、組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）放射性医薬品を懸濁又は好ましくは溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はリン酸緩衝液である。
【００２２】
「哺乳動物への投与に適した形態で」という語句は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害効果を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（本発明の薬剤に関してはｐＨ４．０〜４１．５、好ましくは６．５〜９．５）及び生理学的に適合した重量オスモル濃度で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性を有し得る粒状物質を含まないと共に、生物学的流体（例えば、血液）と接触した際に沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物はまた、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。
【００２３】
好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。好ましくは、放射性医薬品は最小限に侵襲的なやり方（即ち、職業的な医学専門技術の下で実施した場合に哺乳動物被験体に対して実質的な健康リスクのないやり方）で哺乳動物体に投与できる。かかる最小限に侵襲的な投与は、好ましくは、局所又は全身麻酔の必要なしに行われる、前記被験体の末梢静脈への静脈内投与である。
【００２４】
「含む」という用語は、本願全体を通してその通常の意味を有していて、組成物は記載された成分を有していなければならないが、それに加えて他の明記されない化合物又は化学種が存在してもよいことを意味する。「含む」という用語は、好ましい部分集合として、組成物が他の化合物又は化学種の存在なしに記載された成分を有することを意味する「から本質的になる」を包含する。
【００２５】
かかる医薬組成物は、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤、フィラー、可溶化剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加の任意賦形剤を含むことができる。
【００２６】
「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、使用する用量に応じて多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、医薬組成物中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、任意には投与に先立って前記組成物を調製するために使用されるキットの１種以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、エタノール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類又はエタノールである。
【００２７】
「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳動物への投与のために許容される範囲（本発明の組成物に関してはおよそｐＨ４．０〜１０．５、好ましくは６．５〜９．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩、酢酸塩又はＴＲＩＳ［即ち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。
【００２８】
「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。
【００２９】
「可溶化剤」という用語は、溶媒に対する放射性医薬品の溶解性を高める、組成物中に存在する添加剤を意味する。好ましいかかる溶媒は水性媒質であり、したがって可溶化剤は好ましくは水に対する溶解性を高める。好適なかかる可溶化剤には、Ｃ1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標））、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。
【００３０】
好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、Ｃ1-4アルコール、ポリソルベート及びＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）であり、さらに好ましくはシクロデキストリン及びＣ1-4アルコールである。可溶化剤がアルコールである場合、それは好ましくはエタノール又はプロパノールであり、さらに好ましくはエタノールである。エタノールは潜在的にいくつかの役割を有している。それは、生体適合性キャリヤー、放射線防護剤又は抗菌防腐剤としても機能し得るからである。可溶化剤がシクロデキストリンである場合、それは好ましくはγ−シクロデキストリンであり、さらに好ましくはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）である。シクロデキストリンの濃度は約０．１〜約４０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約５〜約３５ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは２０〜３０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは２５ｍｇ／ｍｌ付近であり得る。
【００３１】
好ましい特徴
本発明の放射性防護剤は、好ましくはｐ−アミノ安息香酸ナトリウムを含む。追加の放射線防護剤が存在していてもよい。かかる追加の放射線防護剤を使用する場合、それはアスコルビン酸又はゲンチシン酸或いはその塩でないことが好ましい。さらに好ましくは、本発明の放射性防護剤はｐ−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩から本質的になる。最も好ましくは、本発明の放射性防護剤はｐ−アミノ安息香酸ナトリウムから本質的になる。
【００３２】
第１の態様の放射性医薬組成物は、好適には、医薬品グレードの容器に入れて供給される。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかるクロージャーは、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したもの（例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャー）である。かかる容器は、（例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために）所望される場合にはクロージャーが真空に耐え得ると共に、酸素又は水蒸気のような外部大気ガスの侵入を許すことなしに減圧のような圧力変化にも耐え得るという追加の利点を有している。好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む（例えば、容積１０〜３０ｃｍ3の）単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードの注射器中に抜き取ることができる。
【００３３】
第１の態様の放射性医薬組成物はまた、注射器に入れて供給することもできる。予備充填注射器は１回分のヒト用量又は「単位用量」を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。放射性医薬品の注射器には、好ましくは施術者への放射線量を最小にするための注射器シールドが設けられる。
【００３４】
第２の態様では、本発明は、第１の態様の放射性医薬組成物を調製するためのキットであって、
（ｉ）マラシクラチド、
（ｉｉ）ｐ−アミノ安息香酸及びその生体適合性陽イオンとの塩から選択される放射線防護剤、
（ｉｉｉ）第一スズ還元剤、並びに
（ｉｖ）メチレンジホスホン酸又はその生体適合性陽イオンとの塩
を含んでなるキットを提供する。
【００３５】
「キット」という用語は、所望の放射性医薬組成物を調製するために必要な非放射性化学薬品を使用説明書と共に含んでなる１以上の医薬品グレード容器を意味する。キットは、99mＴｃで再構成することで、最小限の操作でヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。本発明のキットは、好ましくは単一の容器に入れた単一の凍結乾燥処方物中にすべてのキット成分を含む凍結乾燥組成物からなっている。
【００３６】
第２の態様のキットは非放射性である。キット中の放射線防護剤の好ましい態様は、第１の態様（上記）で記載した通りである。
【００３７】
「第一スズ還元剤」という用語は、99mＴｃ−放射性医薬品キットの分野におけるその通常の意味を有していて、Ｓｎ2+（即ち、Ｓｎ（ＩＩ）酸化状態のスズ）の塩をいう。好適なかかる塩は水和状態無水状態であってよく、塩化第一スズ、フッ化第一スズ及び酒石酸第一スズを包含する。好ましいかかる第一スズ還元剤は塩化第一スズである。
【００３８】
「メチレンジホスホン酸」という用語はその通常の化学的意味を有していて、下記に示す化学構造を有する。
【００３９】
【化４】
2013532674.tif 000005
キットは好ましくは凍結乾燥され、99mＴｃ放射性同位体ジェネレーターからの無菌の99mＴｃ−過テクネチウム酸イオン（ＴｃＯ4-）で再構成することで、それ以上の操作なしにヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。非放射性キットはさらに、第１の態様に関して上記に記載したように、トランスキレーター、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤又はフィラーのような追加成分を任意に含むことができる。
【００４０】
第２の態様のキットは、好ましくはさらに、炭酸水素ナトリウムと無水炭酸ナトリウムとの混合物からなる緩衝剤を含んでいる。最も好ましいキット処方は下記の通りである（実施例８の処方Ｃ）。
【００４１】
【表１】
2013532674.tif 000006
第３の態様では、本発明は、第１の態様の放射性医薬組成物の調製方法であって、
（ｉ）第２の態様のキットを生体適合性キャリヤーの供給物で再構成し、続いて生体適合性キャリヤー中の99mＴｃの供給物を再構成されたキットに添加する段階、又は
（ｉｉ）第２の態様のキットを生体適合性キャリヤー中の99mＴｃの供給物で再構成する段階
を含んでなる方法を提供する。
【００４２】
第３の態様におけるキットの好ましい態様は、第２の態様（上記）で記載した通りである。
【００４３】
99mＴｃの供給物は好適には無菌状態であり、好ましくは99mＴｃ放射性同位体ジェネレーターからの99mＴｃ−過テクネチウム酸イオン（ＴｃＯ4-）である。かかるジェネレーターは商業的に入手できる。
【００４４】
選択肢（ｉ）を使用する場合、それはまずキットを無菌状態の非放射性生体適合性キャリヤー（上記の通り、例えば食塩水）で再構成し、続いて99mＴｃを添加することを意味する。選択肢（ｉｉ）を使用する場合、それは生体適合性キャリヤー中の99mＴｃをキットに直接添加することでキットを再構成することを意味する。特に単一の凍結乾燥キット容器に関しては、選択肢（ｉｉ）が好ましい。これは、それ以上の操作なしにヒトへの投与に適した溶液を与えるからである。
【００４５】
第３の態様の方法は、好ましくは室温で実施される（即ち、加熱は不要である）。
【００４６】
第３の態様の方法は、好ましくは、第１の態様（上記）で記載したように放射性医薬組成物を臨床グレードの注射器中に抜き取ることで、単位患者用量を調製するために使用される。
【００４７】
第４の態様では、本発明は、第１の態様の放射性医薬組成物の調製における第２の態様のキットの使用を提供する。
【００４８】
第４の態様におけるキット及び放射性医薬組成物の好ましい態様は、それぞれ第２及び第１の態様（上記）で記載した通りである。
【００４９】
第５の態様では、本発明は、
（ｉ）99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物、又は
（ｉｉ）99mＴｃ−マラシクラチド放射性医薬組成物を調製するためのキット
を安定化するための放射線防護剤としての、ｐ−アミノ安息香酸又はその生体適合性陽イオンとの塩の使用を提供する。
【００５０】
第５の態様の放射性医薬組成物及びキット並びにこれらの好ましい実施形態は、好ましくはそれぞれ第１及び第２の態様（上記）で記載した通りである。第５の態様における放射線防護剤の好ましい実施形態は、第１の態様（上記）で記載した通りである。
【００５１】
第６の態様では、本発明は、哺乳動物体のイメージング方法における第１の態様の放射性医薬組成物の使用を提供する。第６の態様における放射性医薬組成物の好ましい態様は、第１の態様（上記）で記載した通りである。好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。イメージング方法は、好ましくは前記哺乳動物被験体の診断方法を支援するために使用される。
【００５２】
第７の態様では、本発明は、哺乳動物体のイメージング方法であって、第１の態様の放射性医薬組成物を予め投与した哺乳動物をイメージングする段階を含んでなる方法を提供する。第７の態様における放射性医薬組成物の好ましい態様は、第１の態様（上記）で記載した通りである。好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。
【００５３】
第６及び第７の態様のイメージングは、好ましくは血管新生、線維症又は炎症のようなインテグリンの発現を伴う疾患に罹患している哺乳動物被験体をイメージングするためのものである。
【実施例】
【００５４】
下記に詳述する非限定的な実施例によって本発明を例示する。実施例１〜３は、本発明のキレーター１（時にはカルバ−Ｐｎ２１６ともいう）の合成を示している。実施例４は、本発明のキレーター１Ａ（キレーター１の活性エステル官能化バージョン）の合成を示している。実施例５は、本発明の環状ペプチドの合成及びキレーターコンジュゲーションを示している。実施例６は、マラシクラチドの合成を示している。実施例７は、放射線防護剤の選択に関する試験を示している。実施例８は、放射線防護剤の使用量の最適化に関するデータを示している。実施例９は、先行技術キット処方に対する比較用キット処方を記載している。実施例１０は、本発明のキットに対する99mＴｃジェネレーター適合性試験を記載し、これらが一連の条件下で一連の市販ジェネレーターに適合し得ることを示している。実施例１１は、本発明のキットの貯蔵寿命安定性に関するデータを示している。
【００５５】
略語
通常の一文字又は三文字アミノ酸略語が使用される。
Ａｃ：  アセチル
Ｂｏｃ：  ｔ−ブチルオキシカルボニル
ｔＢｕ：  ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＦ：  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド
Ｆｍｏｃ：  ９−フルオレニルメチルオキシムカルボニル
ＨＡＴＵ：  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ：  Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：  高速液体クロマトグラフィー
ＮＭＭ：  Ｎ−メチルモルホリン
ｐＡＢＡ：  ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム塩
ＰＢＳ：  リン酸緩衝食塩水
ＰＥＧ：  ポリエチレングリコール、（ＯＣＨ2ＣＨ2）nの繰返し単位（ここで、ｎは整数である。）
ｔＢｕ：  ｔｅｒｔ−ブチル
ＲＣＰ：  放射化学純度
ＲＰ−ＨＰＬＣ：  逆相ＨＰＬＣ
ＴＦＡ    トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：  テトラヒドロフラン
ＴＩＳ：  トリイソプロピルシラン
ＴＬＣ：  薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｔ：  トリチル。
【００５６】
【表２】
2013532674.tif 000007
実施例１：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの合成
段階１（ａ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル
トルエン（６００ｍｌ）中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン（１６７ｇ、０．５ｍｏｌ）をジメチル３−オキソグルタレート（８７ｇ、０．５ｍｏｌ）で処理し、反応物を窒素雰囲気下において１２０℃の油浴上で１００℃に３６時間加熱した。次いで、反応物を真空中で濃縮し、油状残留物を４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル（１：１、６００ｍｌ）でトリチュレートした。トリフェニルホスフィンオキシドを析出させ、上澄み液をデカント／濾去した。真空中で蒸発させた後の残留物を高真空Ｂｐｔ（０．２トルでオーブン温度１８０〜２００℃）下でクーゲルロール蒸留し、３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９．０８ｇ、５３％）を得た。
【００５７】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3）：δ３．３１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2），３．７（９Ｈ，ｓ，３ｘＯＣＨ3），３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2），５．７９（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨ，）ｐｐｍ。
【００５８】
ＮＭＲ  13Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ３６．５６，ＣＨ3，４８．７，２ｘＣＨ3，５２．０９及び５２．５（２ｘＣＨ2）；１２２．３及び１４６．１６  Ｃ＝ＣＨ；１６５．９，１７０．０及び１７０．５  ３ｘＣＯＯ  ｐｐｍ。
【００５９】
段階１（ｂ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステルの水素化
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を、水素ガス雰囲気（３．５バール）下で（木炭上１０％パラジウム：５０％水）（９ｇ）と共に３０時間振盪した。溶液をケイソウ土で濾過し、真空中で濃縮することで、３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを油状物として得た。収量（８４．９ｇ、９４％）。
【００６０】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３ｘＣＨ2），２．７８（１Ｈ，六重線，Ｊ＝８ＨｚＣＨ，）３．７（９Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ3）．
ＮＭＲ  13Ｃ（ＣＤＣｌ3），δ２８．６，ＣＨ；３７．５０，３ｘＣＨ3；５１．６，３ｘＣＨ2；１７２．２８，３ｘＣＯＯ。
【００６１】
段階１（ｃ）：トリメチルエステルからトリアセテートへの還元及びエステル化
窒素雰囲気下で三ツ口の２Ｌ丸底フラスコ内において、ＴＨＦ（４００ｍｌ）中の水素化リチウムアルミニウム（２０ｇ、５８８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍｌ）中のトリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン（４０ｇ、２１２ｍｍｏｌ）で１時間かけて注意深く処理した。激しい発熱反応が起こり、溶媒が激しく還流した。反応物を９０℃の油浴上で３日間加熱還流した。水素の発生が止まるまで酢酸（１００ｍｌ）を注意深く滴下することで反応物を脱活した。撹拌した反応混合物を、穏やかな還流が生じる程度の速度で無水酢酸溶液（５００ｍｌ）で注意深く処理した。フラスコに蒸留装置を取り付け、撹拌し、次いで９０℃（油浴温度）で加熱してＴＨＦを留去した。追加の無水酢酸（３００ｍｌ）を添加し、反応物を還流配置に戻し、１４０℃の油浴中で５時間撹拌加熱した。反応物を放冷し、濾過した。酸化アルミニウムの沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を真空（５ｍｍＨｇ）中５０℃の水浴温度でロータリーエバポレーター上で濃縮して油状物を得た。油状物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、飽和炭酸カリウム水溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮して油状物を得た。油状物を高真空下でクーゲルロール蒸留することで、トリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、９５．９％）を油状物として得た。０．１ｍｍＨｇで沸点２２０℃。
【００６２】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ１．６６（７Ｈ，ｍ，３ｘＣＨ2，ＣＨ），２．０８（１Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ3）；４．１（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ2Ｏ）。
ＮＭＲ  13Ｃ（ＣＤＣｌ3），δ２０．９，ＣＨ3；２９．３４，ＣＨ；３２．１７，ＣＨ2；６２．１５，ＣＨ2Ｏ；１７１，ＣＯ。
【００６３】
段階１（ｄ）：トリアセテートからのアセテート基の除去
メタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、１６５ｍＭ）及び８８０アンモニア（１００ｍｌ）を８０℃の油浴上２日間で加熱した。反応物を追加の８８０アンモニア（５０ｍｌ）で処理し、油浴中８０℃で２４時間加熱した。追加の８８０アンモニア（５０ｍｌ）を添加し、反応物を８０℃で２４時間加熱した。次いで、反応物を真空中で濃縮し、すべての溶媒を除去して油状物を得た。これを８８０アンモニア（１５０ｍｌ）に溶解し、８０℃で２４時間加熱した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、すべての溶媒を除去して油状物を得た。クーゲルロール蒸留によってアセトアミド（沸点１７０〜１８０  ０．２ｍｍ）を得た。アセトアミドを含むバルブをきれいに洗浄し、蒸留を続行した。トリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（２２．５３ｇ、９２％）が沸点２２０℃  ０．２ｍｍで留出した。
【００６４】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ１．４５（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ2），２．２（１Ｈ，五重線，ＣＨ）；３．７（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ2ＯＨ）；５．５（３Ｈ，ｂｒｓ，３ｘＯＨ）。
【００６５】
ＮＭＲ  13Ｃ（ＣＤＣｌ3），δ２２．１３，ＣＨ；３３．９５，３ｘＣＨ2；５７．８，３ｘＣＨ2ＯＨ。
【００６６】
段階１（ｅ）：トリオールからトリス（メタンスルホネート）への転化
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のトリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（１０ｇ、０．０６７６ｍｏｌ）の撹拌氷冷溶液に、ジクロロメタン（５０ｍｌ）中の塩化メタンスルホニル（４０ｇ、０．３４９ｍｏｌ）の溶液を温度が１５℃を超えないような速度で窒素下でゆっくり滴下した。次いで、ジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解したピリジン（２１．４ｇ、０．２７ｍｏｌ、４当量）を発熱反応で温度が１５℃を超えないような速度で滴下した。反応物を室温で２４時間撹拌し続け、次いで５Ｎ塩酸溶液（８０ｍｌ）で処理し、層を分離した。水性層を追加のジクロロメタン（５０ｍｌ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮することで、過剰の塩化メタンスルホニルで汚染されたトリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタンを得た。理論収量は２５．８ｇであった。
【００６７】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ４．３（６Ｈ，ｔ，２ｘＣＨ2），３．０（９Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ3），２（１Ｈ，六重線，ＣＨ），１．８５（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ2）。
【００６８】
段階１（ｆ）：１，１，１−トリス（２−アジドエチル）メタンの製造
乾燥ＤＭＦ（２５０ｍｌ）中の［段階１（ｅ）からの、過剰の塩化メチルスルホニルで汚染された］トリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタン（２５．８ｇ、６７ｍｍｏｌ、理論量）の撹拌溶液を、窒素下においてアジ化ナトリウム（３０．７ｇ、０．４７モル）で少量ずつ１５分かけて処理した。発熱が観察され、反応物を氷浴上で冷却した。３０分後、反応混合物を５０℃の油浴上で２４時間加熱した。反応物は褐色になった。反応物を放冷し、希炭酸カリウム溶液（２００ｍｌ）で処理し、４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１０：１（３×１５０ｍｌ）で３回抽出した。有機抽出物を水（２×１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過した。石油／エーテル溶液にエタノール（２００ｍｌ）を添加してトリアジドを溶液状態に保ち、真空中で２００ｍｌを下回らないように容量を減少させた。エタノール（２００ｍｌ）を添加し、真空中で再濃縮して痕跡量の石油を除去することで、２００ｍｌを下回らない量のエタノール溶液を得た。トリアジドのエタノール溶液を段階１（ｇ）で直接使用した。
【００６９】
注意：アジドは潜在的に爆発性であるので、すべての溶媒を除去してはならず、常に希薄溶液状態に保つべきである。
【００７０】
０．２ｍｌ未満の溶液を真空中でで蒸発させてエタノールを除去し、この少量の試料でＮＭＲを実施した。ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ３．３５（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ2），１．８（１Ｈ，七重線，ＣＨ，），１．６（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ2）。
【００７１】
段階１（ｇ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの製造
エタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アジドエチル）メタン（１５．０６ｇ、０．０６７６ｍｏｌ）（前反応からの１００％収率を仮定）を木炭上１０％パラジウム（２ｇ、５０％水）で処理し、１２時間水素化した。反応器を２時間ごとに排気して反応から生じる窒素を除去し、水素を再充填した。ＮＭＲ分析用の試料を採取し、トリアジドからトリアミンへの完全な転化を確認した。
【００７２】
警告：還元しないアジドは蒸留で爆発することがある。反応物をセライトパッドで濾過して触媒を除去し、真空中で濃縮することで。トリス（２−アミノエチル）メタンを油状物として得た。これをクーゲルロール蒸留（０．４ｍｍ／Ｈｇで沸点１８０〜２００℃）によってさらに精製して無色の油状物（８．１ｇ、総合収率８２．７％）を得た。
【００７３】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ２．７２（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ2Ｎ），１．４１（Ｈ，七重線，ＣＨ），１．３９（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ2）。
【００７４】
ＮＭＲ  13Ｃ（ＣＤＣｌ3），δ３９．８（ＣＨ2ＮＨ2），３８．２（ＣＨ2），３１．０（ＣＨ）。
【００７５】
実施例２：３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの製造
２−メチルブト−２−エン（１４７ｍｌ、１．４ｍｏｌ）と亜硝酸イソアミル（１５６ｍｌ、１．１６ｍｏｌ）との混合物を、ドライアイス及びメタノールの浴中で−３０℃に冷却し、オーバヘッドエア撹拌機で激しく撹拌し、温度を−２０℃未満に維持するような速度で濃塩酸（１４０ｍｌ、１．６８ｍｏｌ）を滴下して処理した。かなりの発熱があり、過熱を防ぐために注意を払う必要があるので、これには約１時間を要する。エタノール（１００ｍｌ）を添加して、添加終了時に形成されるスラリーの粘度を低下させ、反応物を−２０〜−１０℃でさらに２時間撹拌して反応を完了させた。沈殿物を真空下で濾過して回収し、４×３０ｍｌの冷（−２０℃）エタノール及び１００ｍｌの氷冷水で洗浄し、真空乾燥することで、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンを白色の固体として得た。エタノール濾液及び洗液を合わせ、水（２００ｍｌ）で希釈し、冷却し、−１０℃で１時間放置したところ、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの追加クロップが晶出した。沈殿物を濾過して回収し、最小量の水で洗浄し、真空下で乾燥することで、総収量（１１５ｇ  ０．８５ｍｏｌ、７３％）の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（ＮＭＲによる純度＞９８％）を得た。
【００７６】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），異性体の混合物として（異性体１，９０％）１．５ｄ，（２Ｈ，ＣＨ3），１．６５ｄ，（４Ｈ，２ｘＣＨ3），５．８５，ｑ，及び５．９５，ｑ，共に１Ｈ。（異性体２，１０％），１．７６ｓ，（６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．０７（３Ｈ，ＣＨ3）。
【００７７】
実施例３：ビス［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン（キレーター１）の合成
乾燥エタノール（３０ｍｌ）中のトリス（２−アミノエチル）メタン（実施例１、４．０４７ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下で激しく撹拌しながら室温で添加した。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（実施例２、７．５６ｇ、５５．８ｍｏｌ、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくり滴下した。シリカ上でのＴＬＣ［プレートをジクロロメタン、メタノール、濃（０．８８ｓｇ）アンモニア（１００／３０／５）で展開し、ニンヒドリンを噴霧して加熱することでＴＬＣプレートを発色させた］によって反応を追跡した。モノ−、ジ−及びトリ−アルキル化生成物がその順序で増加するＲＦで認められた。３％アンモニア水中の７．５〜７５％アセトニトリル勾配でＰＲＰ逆相カラムを使用して分析ＨＰＬＣを実施した。反応物を真空中で濃縮してエタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）中に再懸濁した。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出して一部のトリアルキル化化合物及び親油性不純物を除去し、水層中にモノ及び所望のジアルキル化生成物を残存させた。良好なクロマトグラフィーを保証するため、水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）で緩衝した。水溶液を４℃で一晩貯蔵した後、自動化分取ＨＰＬＣによって精製した。
収量（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ、２３％）。
質量スペクトル；正イオン１０Ｖコーン電圧。実測値：３４４；計算値Ｍ＋Ｈ＝３４４。
【００７８】
ＮＭＲ  1Ｈ（ＣＤＣｌ3），δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ3），１．３（６Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ3），１．２５−１．７５（７Ｈ，ｍ，３ｘＣＨ2，ＣＨ），（３Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ2），２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｎ），２．８８（２Ｈ，ｔＣＨ2Ｎ），５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ2，２ｘＮＨ，２ｘＯＨ）。
【００７９】
ＮＭＲ  1Ｈ（（ＣＤ3）2ＳＯ）δ１．１４ｘＣＨ；１．２９，３ｘＣＨ2；２．１（４Ｈ，ｔ，２ｘＣＨ2）；
ＮＭＲ  13Ｃ（（ＣＤ3）2ＳＯ），δ９．０（４ｘＣＨ3），２５．８（２ｘＣＨ3），３１．０  ２ｘＣＨ2，３４．６  ＣＨ2，５６．８  ２ｘＣＨ2Ｎ；１６０．３，Ｃ＝Ｎ。
【００８０】
ＨＰＬＣ条件：２５ｍｍ  ＰＲＰカラム［Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水；Ｂ＝アセトニトリル］を用いて流量８ｍｌ／分。
【００８１】
【表３】
2013532674.tif 000008
各ランについて３ｍｌの水溶液を装填し、１２．５〜１３．５分の時間窓内で収集する。
【００８２】
実施例４：キレーター１−グルタル酸のテトラフルオロチオフェニルエステル（キレーター１Ａ）の合成
（段階４ａ）［キレーター１］−グルタル酸中間体の合成
【００８３】
【化５】
2013532674.tif 000009
キレーター１（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、無水グルタル酸（３３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を撹拌しながら少量ずつ添加した。反応物を２３時間撹拌することで、所望生成物への完全な添加を達成した。ＲＰ−ＨＰＬＣの後、純粋な酸が良好な収率で得られた。
【００８４】
（段階４ｂ）キレーター１Ａの合成
【００８５】
【化６】
2013532674.tif 000010
ＤＭＦ（２ｍｌ）中の［キレーター１］−グルタル酸（段階４ａから、３００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）に、ＨＡＴＵ（２４９ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１３２μＬ、１．３２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌し、次いでテトラフルオロチオフェノール（０．６６ｍｍｏｌ、１１９ｍｇ）を添加した。溶液を１０分間撹拌し、次いで反応混合物を２０％アセトニトリル／水（８ｍｌ）で希釈し、生成物をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製することで、凍結乾燥後に１１０ｍｇの所望生成物を得た。
【００８６】
実施例５：ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（キレーター１−グルタリル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【００８７】
【化７】
2013532674.tif 000011
（段階５ａ）ＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2の合成
【００８８】
【化８】
2013532674.tif 000012
ＡＢＩ  ４３３Ａ自動ペプチド合成装置上で、０．２５ｍｍｏｌスケールのＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＡＭ樹脂から始めて、１ｍｍｏｌアミノ酸カートリッジを用いてペプチドを合成した。アミノ酸は、カップリング前にＨＢＴＵを用いて予備活性化した。ＤＭＦ中のクロロ酢酸無水物溶液を用いて、Ｎ末端アミン基を３０分間クロロアセチル化した。樹脂からのペプチド及び側鎖保護基（ｔＢｕを除く）の同時除去を、ＴＩＳ（５％）、Ｈ2Ｏ（５％）及びフェノール（２．５％）を含むＴＦＡ中で２時間実施した。処理後、２９５ｍｇの粗ペプチドを得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で５〜５０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，６．４２分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１１１８．５、実測値は１１１８．６であった。
【００８９】
（段階５ｂ）チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【００９０】
【化９】
2013532674.tif 000013
２９５ｍｇのＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2を水／アセトニトリルに溶解した。混合物をアンモニア溶液でｐＨ８に調整し、１６時間撹拌した。処理後、２１７ｍｇの粗ペプチドを得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で５〜５０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，６．１８分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１８８２．５、実測値は１８８２．６であった。
【００９１】
（段階５ｃ）ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【００９２】
【化１０】
2013532674.tif 000014
２１７ｍｇのチオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2を、アニソール（５００μＬ）、ＤＭＳＯ（２ｍｌ）及びＴＦＡ（１００ｍｌ）の溶液で６０分間処理した。その後、ＴＦＡを真空中で除去し、ジエチルエーテルの添加でペプチドを沈殿させた。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μ  Ｃ１８（２）２５０×５０ｍｍカラム）により、６０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の勾配及び５０ｍｌ／分の流量を用いて粗物質（２０２ｍｇ）の精製を行った。凍結乾燥後、１１２ｍｇの純物質を得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で５〜５０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，５．５０分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は９６８、実測値は９７１であった。
【００９３】
（段階５ｄ）ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（キレーター１−グルタリル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2の合成
【００９４】
【化１１】
2013532674.tif 000015
９．７ｍｇのジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＮＨ2、９．１ｍｇのキレーター１Ａ（実施例５）、及び５μＬのＮＭＭをＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶解した。混合物を３時間撹拌した。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍカラム）により、４０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の勾配及び１０ｍｌ／分の流量を用いて反応混合物の精製を行った。凍結乾燥後、５．７ｍｇの純物質を得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，７．３２分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１４０７．７、実測値は１４０７．６であった。
【００９５】
実施例６：ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（キレーター１−グルタリル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2（マラシクラチド）の合成
（段階６ａ）１７−（Ｆｍｏｃ−アミノ）−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の合成
【００９６】
【化１２】
2013532674.tif 000016
Ｆｍｏｃ化学を用いて、この構成ブロックを固相にカップリングする。
【００９７】
１，１１−ジアジド−３，６，９−トリオキサウンデカン
乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の乾燥テトラエチレングリコール（１９．４ｇ、０．１００ｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（２５．２ｇ、０．２２０ｍｏｌ）の溶液をアルゴン下に保ち、氷／水浴中で０℃に冷却した。フラスコに、乾燥ＴＨＦ（２５ｍｌ）中のトリエチルアミン（２２．６ｇ、０．２２０ｍｏｌ）の溶液を４５分かけて滴下した。１時間後、冷却浴を取り除き、撹拌を４時間続けた。水（６０ｍｌ）を添加した。混合物に炭酸水素ナトリウム（６ｇ、ｐＨ８に）及びアジ化ナトリウム（１４．３ｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）をこの順序で添加した。ＴＨＦを留去し、水溶液を２４時間還流した（２つの層が生じた）。混合物を冷却し、エーテル（１００ｍｌ）を添加した。水性相を塩化ナトリウムで飽和させた。両相を分離し、水性相をエーテル（４×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２×５０ｍｌ）で洗浄し、（ＭｇＳＯ4で）乾燥した。濾過及び濃縮により、２２．１ｇ（９１％）の黄色油状物を得た。それ以上の精製なしに生成物を次の段階で使用した。
【００９８】
１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカンアミン
５％塩酸（２００ｍｌ）中の１，１１−ジアジド−３，６，９−トリオキサウンデカン（２０．８ｇ、０．０８５ｍｏｌ）の懸濁液を機械的に激しく撹拌しながら、エーテル（１５０ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン（１９．９ｇ、０．０７３ｍｏｌ）の溶液を室温で３時間かけて添加した。反応混合物をさらに２４時間撹拌した。両相を分離し、水性相をジクロロメタン（３×４０ｍｌ）で抽出した。水性相を氷／水浴中で冷却し、ｐＨをＫＯＨの添加で約１２に調整した。生成物をジクロロメタン（５×５０ｍｌ）中に抽出した。合わせた有機相を（ＭｇＳＯ4で）乾燥した。濾過及び蒸発により、１４．０ｇ（８８％）の黄色油状物を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法（マトリックス：α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）による分析の結果、予想通り２１９にＭ＋Ｈピークが得られた。1Ｈ（５００ＭＨｚ）及び13Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ分光法を用いた追加の特性決定により、構造が確認された。
【００９９】
１７−アジド−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸
ジクロロメタン（１００ｍｌ）中の１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカンアミン（１０．９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、無水ジグリコール酸（６．３８ｇ、５５．０ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。ＨＰＬＣ分析（カラム，Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ５４；溶媒，Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配，２０分で４〜１６％Ｂ；流量，１．０ｍｌ／分；２１４ｎｍ及び２８４ｎｍでＵＶ検出）は、出発原料が１８．３分の保持時間を有する生成物に完全に転化したことを示した。溶液を濃縮することで定量的収量の黄色シロップを得た。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳイオン化）で生成物を分析したところ、予想通り３３５に［ＭＨ］+が得られた。1Ｈ（５００ＭＨｚ）及び13Ｃ（１２５ＭＨｚ）ＮＭＲ分光法の結果は構造に一致していた。それ以上の精製なしに生成物を次の段階で使用した。
【０１００】
１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸
Ｈ2（ｇ）−Ｐｄ／Ｃ（１０％）を用いて、水（１００ｍｌ）中の１７−アジド−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸（８．３６ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）の溶液を還元した。反応は、ＬＣ−ＭＳ分析が出発原料の完全な転化を示すまで行った（カラム，Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ５４；溶媒，Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配，２０分で４〜１６％Ｂ；流量，１．０ｍｌ／分；２１４ｎｍ及び２８４ｎｍでＵＶ検出；ＥＳイオン化は出発原料について３３５及び生成物について３０９にＭ＋Ｈを与えた）。溶液を濾過し、次の段階で直接使用した。
【０１０１】
１７−（Ｆｍｏｃ−アミノ）−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸
（２５．０ｍｍｏｌのアミノ酸に相当する）上記１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の水溶液に、重炭酸ナトリウム（５．０４ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）及びジオキサン（４０ｍｌ）を添加した。ジオキサン（４０ｍｌ）中のＦｍｏｃクロリド（７．１１ｇ、０．２７５ｍｏｌ）の溶液を滴下した。反応混合物を一晩撹拌した。ジオキサンを蒸発させて除去し（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）、水性相を酢酸エチルで抽出した。水性相を塩酸の添加で酸性化し、沈殿した物質をクロロホルム中に抽出した。有機相を（ＭｇＳＯ4で）乾燥し、濾過し、濃縮することで、１１．３ｇ（８５％）の黄色シロップを得た。ＬＣ−ＭＳ分析（カラム，Ｖｙｄａｃ  ２１８ＴＰ５４；溶媒，Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ；勾配，２０分で４０〜６０％Ｂ；流量，１．０ｍｌ／分；２１４ｎｍ及び２５４ｎｍでＵＶ検出；ＥＳイオン化は５．８分の生成物ピークについて予想通り５３１にＭ＋Ｈを与えた）で構造を確認した。分析結果は極めて低い副生物含有量を示し、それ以上の精製なしにこの物質を使用した。
【０１０２】
（段階６ｂ）ＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2の合成
【０１０３】
【化１３】
2013532674.tif 000017
ＨＡＴＵ活性化を介して０．２５ｍｍｏｌスケールで開始し、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＡＭ樹脂にＰＥＧ単位を手作業でカップリングした。残りのペプチドは、１ｍｍｏｌアミノ酸カートリッジを用いてＡＢＩ  ４３３Ａ自動ペプチド合成装置上でアセンブルした。カップリング前に、ＨＢＴＵを用いてアミノ酸を予備活性化した。ＤＭＦ中のクロロ酢酸無水物溶液を用いて、Ｎ末端アミン基を３０分間クロロアセチル化した。
【０１０４】
樹脂からのペプチド及び側鎖保護基（ｔＢｕを除く）の同時除去を、ＴＩＳ（５％）、Ｈ2Ｏ（５％）及びフェノール（２．５％）を含むＴＦＡ中で２時間実施した。処理後、３２２ｍｇの粗ペプチドを得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で５〜５０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，６．３７分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１４０９、実測値は１４１５であった。
【０１０５】
（段階６ｃ）チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2の合成
【０１０６】
【化１４】
2013532674.tif 000018
３２２ｍｇのＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2を水／アセトニトリルに溶解した。混合物をアンモニア溶液でｐＨ８に調整し、１６時間撹拌した。
【０１０７】
処理後、粗ペプチドを得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で５〜５０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，６．２２分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１３７３、実測値は１３７８であった。
【０１０８】
（段階６ｄ）ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2の合成
【０１０９】
【化１５】
2013532674.tif 000019
チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2を、アニソール（２００μＬ）、ＤＭＳＯ（２ｍｌ）及びＴＦＡ（１００ｍｌ）の溶液で６０分間処理した。その後、ＴＦＡを真空中で除去し、ジエチルエーテルの添加でペプチドを沈殿させた。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍカラム）により、４０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の勾配及び１０ｍｌ／分の流量を用いて７０ｍｇの粗物質の精製を行った。凍結乾燥後、４６ｍｇの純物質を得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，６．８０分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１２５８．５、実測値は１２５８．８であった。
【０１１０】
（段階６ｅ）ジスルフィド［Ｃｙｓ2-6］チオエーテルシクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（キレーター１−グルタリル）−Ｃｙｓ2−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ6−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2の合成
【０１１１】
【化１６】
2013532674.tif 000020
１３ｍｇの［Ｃｙｓ2-6］シクロ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−（ＰＥＧ）3−ＮＨ2、９．６ｍｇのキレーター１Ａ及び８μＬのＮＭＭをＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶解した。混合物を２時間３０分撹拌した。分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍカラム）により、４０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の勾配及び１０ｍｌ／分の流量を用いて反応混合物の精製を行った。凍結乾燥後、１４．２ｍｇの純物質を得た（分析ＨＰＬＣ：勾配，１０分で０〜３０％Ｂ（ここで、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ3ＣＮ／０．１％ＴＦＡ）；カラム，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μ  Ｃ１８（２）５０×４．６ｍｍ；流量，２ｍｌ／分；検出，ＵＶ２１４ｎｍ；生成物の保持時間，７．８７分）。質量分析法を用いてさらに生成物の特性決定を行ったところ、Ｍ＋Ｈの予想値は１６９７．８、実測値は１６９７．９であった。
【０１１２】
実施例７：放射線防護剤の選択
放射性標識効率及び放射線安定化に対する３種の放射線防護剤（ｐＡＢＡ、ゲンチシン酸及びアスコルビン酸）の効果を、凍結乾燥キットに関して評価した。放射線防護剤を添加した点及びｐＨを９．３近くに維持するために炭酸ナトリウムの量を増加した点を除けば、処方は処方Ａ（実施例９参照）と全く同じであった。表２を参照されたい。
【０１１３】
【表４】
2013532674.tif 000021
処方Ａは、再構成から２０分後に約９０〜９１％のＲＣＰを有し、再構成から４時間後には８２〜８５％に低下し、８時間後には７５〜８２％に低下した。
【０１１４】
アスコルビン酸を含む凍結乾燥キットは放射性標識効率が悪く、ＲＣＰは再構成から２０分後及び４時間後のいずれでも８０％であった。
【０１１５】
ゲンチシン酸を含む凍結乾燥キットは、良好な放射性標識効率（再構成から２０分後に９４％）を示すと共に、良好な放射線安定化効果を示し、ＲＣＰは再構成から４時間後に９０％であった。しかし、再構成キット溶液はある時間後に変色した（ピンク色に変わった）。同様な変色は溶液化学実験においても観察された。
【０１１６】
ｐＡＢＡを含む凍結乾燥キットは良好な放射性標識効率を示し、ＲＣＰは安定化された。ＲＣＰ値は再構成から２０分後及び４時間後のいずれでも約９０％であり、安定性は再構成から８時間後でも維持された（実施例８参照）。処方Ａに比べて、新しい放射性不純物は認められなかった。
【０１１７】
実施例８：放射線防護剤の量の最適化
処方中のｐＡＢＡの量を最適化するため、３つのｐＡＢＡレベル［１００〜６００μｇ／バイアル］及び２つのｐＨレベル［８．７〜９．３］を有する要因デザインを作成した。キット成分のレベルは処方Ａの通りであった。炭酸ナトリウムレベルはｐＨを調整するために使用した。
【０１１８】
【表５】
2013532674.tif 000022
表３に示される要因デザインからの結果を分析したところ、初期ＲＣＰ及び放射線安定化能力に関する最適ｐＡＢＡ量は２００〜３５０μｇ／バイアルの範囲内にあることが示された。
【０１１９】
それぞれ２００μｇのｐＡＢＡ（バッチ＃９、６３０μｇ  Ｎａ2ＣＯ3、ｐＨ９．３）及び３００μｇのｐＡＢＡ（バッチ＃１０、８００μｇ  Ｎａ2ＣＯ3、ｐＨ９．３）を有する２種の追加バッチは、初期時点及び安定性期間中においてよく似たＲＣＰ値を与えた。かかる結果は、放射性標識効率又は放射線安定化能力に関しては、２００μｇ及び３００μｇのｐＡＢＡを含む凍結乾燥キットの間に有意差が存在しないことを示している。
【０１２０】
実施例９：比較用凍結乾燥キット処方
Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３５，３６５−３７５（２００８）］の先行技術キット及び本発明の安定化キットを比較するため、下記のような凍結乾燥キットを調製した。
【０１２１】
【表６】
2013532674.tif 000023
実施例１０：ジェネレーター適合性試験
処方Ｃの適合性を調べるため、２種のジェネレーター適合性試験を実施した。第１の試験で調べたジェネレーターは、Ｔｅｃｈｎｅｌｉｔｅ  Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ−９９ｍ，Ｓｔｅｒｉｌｅ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ［Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ社］，  Ｄｒｙｔｅｃ  Ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ−９９ｍ，Ｓｔｅｒｉｌｅ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ［ＧＥ  Ｈｅａｔｈｃａｒｅ社、英国］、Ｕｌｔｒａ−Ｔｅｃｈｎｅｋｏｗ（登録商標）ＤＴＥ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ［Ｔｙｃｏ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社、米国］及びＩＳＯＴＥＣ  Ｍｏ−９９−Ｔｃ−９９ｍ，Ｓｔｅｒｉｌｅ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ［Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｈｅａｌｔｈ社、ノルウェー］であった。試験試料は処方Ｃ（実施例８の＃９）であった。すべての試料は、３．１ＧＢｑ／６ｍｌのジェネレーター溶出液で再構成した。ジェネレーターに関して調べた変量は、ジェネレーターエージ（溶出間の時間）及び溶出液エージ（溶出後の時間）であった。
【０１２２】
第１の試験で試験した４種のジェネレーターはすべて、処方Ｃに適合していた。ＲＣＰ値にはほんの小さな差（１．６％）が存在していた。溶出液エージは、４種のジェネレーターのすべてに関し、ＲＣＰ及び再構成後安定性の両方に対してマイナスの効果を有していた。
【０１２３】
実施例１１：凍結乾燥キットの安定性
様々な温度［−２０℃、５℃及び２５℃］で１２ヶ月までの若干の期間にわたって貯蔵したキットの複数バッチに関して貯蔵寿命安定性試験を実施した。様々な温度条件下での貯蔵後にＲＣＰを測定した。
【０１２４】
処方Ａキット
５°で１２ヶ月間の貯蔵：再構成から４時間後のＲＣＰは８７％であった。
２５°で３ヶ月間の貯蔵：再構成から４時間後のＲＣＰは８７％であった。
【０１２５】
処方Ｃキット
５°で１２ヶ月間の貯蔵：再構成から４時間後のＲＣＰは９１．７％であった。
２５°で３ヶ月間の貯蔵：再構成から４時間後のＲＣＰは９１．５％であった。
２５°で６ヶ月間の貯蔵：再構成から４時間後のＲＣＰは＞９０％であった。
【０１２６】
処方Ｃは５℃で貯蔵した場合に５０ヶ月以上の貯蔵寿命を有するに対し、処方Ａは適切なキットのＲＣＰ性能を維持するためには−２０℃で貯蔵しなければならないであろう。
【国際調査報告】
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