(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、一般式１Ａで表される化合物及びその塩を、トランスシアリダーゼ反応によって合成する方法に関する。2013532470.tif 000075（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｘ１は炭水化物リンカーを表し、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｍは０又は１である。）【選択図】なし
2013532470.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式１Ａで表される化合物及びその塩を合成する方法であって、
【化１】
2013532470.tif 000057
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｘ１は炭水化物リンカーを表し、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｍは０又は１である。）
下記式で表されるシアリルドナー又はその塩と、
式  ＳＡ−ＯＲ２
（式中、Ｒ２は単糖、二糖又はオリゴ糖、糖脂質、糖タンパク質、又は糖ペプチドであってもよく、環状又は非環状脂肪族基、又はアリール残基であってもよく、ＳＡはα−シアリル部分である。）
下記一般式２Ａで表されるシアリルアクセプター又はその塩を、
【化２】
2013532470.tif 000058
（式中、Ｘ１、Ａ、ｍ及びＲ１は、上記で規定したものと同様である。）
トランスシアリダーゼ活性を有する酵素の触媒作用下で反応させることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記トランスシアリダーゼ活性を有する酵素が、ビフィドバクテリウム属菌由来のシアリダーゼ、及びクルーズトリパノソーマ由来のトランスシアリダーゼから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記トランスシアリダーゼ活性を有する酵素が、操作した酵素であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記シアリルドナーが、２−Ｏ−（ｐ−ニトロフェニル）−α−Ｄ−シアロシド、２−Ｏ−（４−メチルウンベリフェリル）−α−Ｄ−シアロシド、フェチュイン及び３’−Ｏ−シアリル−ラクトースからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記一般式１Ａで表される化合物及びその塩が、下記一般式１−３Ａで表される化合物及びその塩であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の方法。
【化３】
2013532470.tif 000059
（式中、ＳＡはα−シアリル部分であり、Ｒ１、Ａ、Ｘ１及びｍは請求項１で規定されているものと同様である。）
【請求項６】
前記一般式１−３Ａで表される化合物及びその塩が、下記一般式１−３Ｂ又は一般式１−３Ｃで表される化合物及びその塩であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【化４】
2013532470.tif 000060
【化５】
2013532470.tif 000061
（式中、Ｒ３はフコシル又はＨであり、Ｂは、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表し、前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有し、Ｒ１及びＡは、請求項１に規定されているものと同様である。）
【請求項７】
前記一般式１−３Ｂ又は１−３Ｃで表される化合物及びその塩が、下記一般式１−３Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖及びその塩であることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【化６】
2013532470.tif 000062
（式中、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’は、下記一般式３−３及び４−３で表される基から選択され、Ｒ５’はＨ、α−シアリル部分、及び前記一般式３−３及び一般式４−３の基から選択される。）
【化７】
2013532470.tif 000063
（式中、Ｒ６は、Ｈ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡはα−シアリル部分である。）
【請求項８】
前記一般式１−３Ｂ、１−３Ｃ又は１−３Ｄで表される化合物及びその塩が、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体及びこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ１が、フェニル、アルキル又はハロゲンからなる群より選択される少なくとも一つの基で任意に置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
下記一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩。
【化８】
2013532470.tif 000064
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、整数ｍは０又は１であり、Ｘｌは炭水化物リンカーを表す。但し、３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル及び１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル配糖体、及び６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル配糖体を除く）
【請求項１２】
前記一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩が、下記一般式１’−３Ａで表される化合物及びその塩であることを特徴とする、請求項１１に記載の化合物。
【化９】
2013532470.tif 000065
（式中、ＳＡはα−シアリル部分であり、Ｒ１、Ａ、Ｘ１及びｍは、請求項１１で規定されているものと同様である。）
【請求項１３】
前記一般式１’−３Ａで表される化合物及びその塩が、下記一般式１’−３Ｂ又は一般式１’−３Ｃで表される化合物及びその塩であることを特徴とする、請求項１２に記載の化合物。
【化１０】
2013532470.tif 000066
【化１１】
2013532470.tif 000067
（式中、Ｒ３はフコシル又はＨであり、Ｂは、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表し、前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有し、Ｒ１及びＡは、請求項１１に規定されているものと同様である。）
【請求項１４】
前記一般式１’−３Ｂ又は１’−３Ｃで表される化合物及びその塩が、下記一般式１’−３Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖及びその塩であることを特徴とする、請求項１３に記載の化合物。
【化１２】
2013532470.tif 000068
（式中、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’は、下記一般式３−３及び４−３で表される基から選択され、Ｒ５’は、Ｈ、α−シアリル部分、及び前記一般式３−３及び一般式４−３の基から選択される。）
【化１３】
2013532470.tif 000069
（式中、Ｒ６は、Ｈ又はフコシル 残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡはα−シアリル部分である。）
【請求項１５】
前記一般式１’−３Ｂ、１’−３Ｃ又は１’−３Ｄで表される化合物及びその塩が、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体及びこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１が、フェニル、アルキル又はハロゲンからなる群より選択される少なくとも一つの基で任意に置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１１乃至１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
下記一般式２Ａ’で表される化合物及びその塩。
【化１４】
2013532470.tif 000070
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘ１は炭水化物リンカーを表し、整数ｍは、０又は１である。但し、ａ）ｍが０の場合、Ａ基はフコシルで置換され、ｂ）１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴ、１−Ｏ−β−（４−ヒドロキシメチルベンジル）−ＬＮｎＴ及び１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮｎＴは除く。）
【請求項１９】
前記一般式２Ａ’で表される化合物及びその塩が、下記一般式２Ｂ’又は一般式２Ｃ’で表される化合物及びその塩であることを特徴とする、請求項１８に記載の化合物。
【化１５】
2013532470.tif 000071
【化１６】
2013532470.tif 000072
（式中、Ｒ３はフコシルであり、Ｂは、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表し、前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有し、Ｒ１及びＡは、請求項１８に規定されているものと同様である。）
【請求項２０】
前記一般式２Ｂ’又は２Ｃ’で表される化合物及びその塩が、下記一般式２Ｄ’で表されるヒト乳オリゴ糖誘導体又はその塩である、請求項１９に記載の化合物。
【化１７】
2013532470.tif 000073
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３は、Ｈ又はフコシル単位であり、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ８は、下記一般式５及び一般式６の基から選択され、Ｒ９は、Ｈ、α−シアリル部分、前記一般式５及び一般式６の基から選択される。）
【化１８】
2013532470.tif 000074
（式中、Ｒ６は、Ｈ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分である。）
【請求項２１】
前記一般式２Ｂ’、２Ｃ’又は２Ｄ’で表される化合物及びその塩が、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、非置換の末端ガラクトシル残基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１９又は２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記化合物が、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシルラクトース）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＴ）、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ  （ＬＮｎＴ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩＩ）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  Ｖ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴｂ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＧａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩＩ）のＲ１−配糖体又はこれらの塩からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１８乃至２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ１が、フェニル、アルキル又はハロゲンからなる群より選択される少なくとも一つの基で任意に置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１８乃至２２のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シアロオリゴ糖配糖体の酵素的合成、及び該合成に関与する新規の前駆体及び生成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シアル酸は、９炭糖であるノイラミン酸の誘導体であり、３つの親分子、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）、Ｎ−グリコリル−ノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）及びデアミノ−ノイラミン酸（３−デオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクトノヌロソン酸、ＫＤＮ）を含み、それらはさまざまな部分でＣ−４、Ｃ−７、Ｃ−８及びＣ−９において置換することができる。シアル酸は、胚形成から神経可塑性、病原体相互作用に及ぶ、多くの重要な生物学的役割を持つ。シアル酸は遊離型で存在することはほとんどないが、通常、糖タンパク質や糖脂質のオリゴ糖側鎖の非還元末端又は内部位置における化学的共有結合に存在する。ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン及びＮ−アセチル−グルコサミンなどの末端から二番目の糖と結合するシアル酸の結合は、通常、α−２、３−及びα−２、６−ケトシド結合である。
【０００３】
シアロ複合糖質の中で、抗菌性、抗ウイルス性、免疫システム及び認知発達促進活性などの特有の生物学的活性に直接関連するシアル化ヒト乳オリゴ糖は、非常に重要である。シアル化ヒト乳オリゴ糖は、腸内細菌叢の発達及び維持に寄与するヒト腸内システムでプレバイオティクスとして作用することが分かっっている。さらに、シアル化ヒト乳オリゴ糖には、抗炎症性があることも証明されている。従って栄養産業において、この化合物は、合成及び天然型化合物及びその塩のいずれもが、乳児用粉ミルク、乳児用シリアル、乳児用臨床栄養製品、幼児用粉ミルクなどの生産において、又は、子供、大人、高齢者又は授乳中の女性向けの栄養補助食品もしくは機能的健康食品として、魅力的な成分である。同様に、該化合物は、医薬産業においても治療法を開発する上で関心を集めている。ヒト乳オリゴ糖において、シアル酸残基は、α−グリコシル結合を介して、常にＤ−ガラクトースの末端３−Ｏ−及び／又は６−Ｏ−位に結合する。
【０００４】
天然由来のシアル化ヒト乳オリゴ糖を得ることには限りがある。ヒトの成熟乳は、最高濃度の乳オリゴ糖（１２〜１４ｇ／ｌ）を含む天然の乳源であり、その他の乳源には、ウシのミルク（０．０１ｇ／ｌ）、ヤギのミルク及び他の哺乳動物のミルクがある。この天然で入手できる可能性が低いこと及び単離方法が難しいことが、この魅力的な化合物製造のためのバイオテクノロジー及び化学的方法の開発の重要なモチベーションとなっている。
【０００５】
マイクロチップ液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＰＬＣ  Ｃｈｉｐ／ＭＳ）及びマトリックス支援レーザー脱離イオン化フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＦＴ  ＩＣＲ  ＭＳ）等の技術の組み合わせることにより、これまでに約２００種のヒト乳オリゴ糖（ＨＭＯ）が人乳から発見されており（非特許文献１）、これまでに少なくとも１１５種のオリゴ糖の構造が特定されている（非特許文献２）。これらのヒト乳オリゴ糖は、１３のコアユニットにグループ化することができ（表１）、約４分の１のオリゴ糖がシアル酸を含んでいる。
【０００６】
【表１】
2013532470.tif 000003
【０００７】
多数の同様なオリゴ糖が存在するため、たとえミリグラム単位であっても、ヒト及び他の哺乳動物のミルクからシアロオリゴ糖を単離することは、かなり難しい。これまで、天然源から何種かのシアロオリゴ糖を単離するために開発されてきたのは、ＨＰＬＣ分析法のみである。
【０００８】
複合シアロオリゴ糖の合成は、保護及び脱保護戦略を用いる多段階合成経路に従う。立体選択的化学合成工程は、保護基を広く使用することにより非常に複雑になり得る。これらの戦略は、ハロゲン化グリコシル、チオグリコシド又は亜りん酸ジエチルドナー活性化を用い、適当な保護グリコシルアクセプターの立体選択的Ｏ−シアリル化を介して、シアル化オリゴ糖をもたらす。シアリル化のために非常に高価な又は非常に毒性のある化学物質（例えばシアン化水銀、臭化水銀及び炭酸銀）を使用することは、これらの方法を魅力ないものにしている理由のひとつである。同様に、非効率的な立体制御及び／又は低収率が、これらの戦略をさらなる開発に適さないものとしている。さらに、これら戦略は、精製がひどく困難であることを特徴とする。
【０００９】
シアロオリゴ糖の酵素生成の場合、好ましく使用される酵素はシアル酸転移酵素及びシアリダーゼである。複合酵素システムを用いた手法は、大規模製を非常に高価なものにし、同様に、困難な精製プロトコールはさらなる技術開発の妨げとなる。シアリダーゼは、低収率及び、位置選択性や立体選択性の欠如により、大量生産方法にうまく使用できなかった。例えばシアル酸転移酵素が、複合シアロオリゴ糖の合成（例えば、３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル配糖体の合成：特許文献１、３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−（４、５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル配糖体の合成：非特許文献３）に有効であることが分かった場合もあるが、シアル酸部分をアクセプターオリゴ糖へ転移するために、シアリルドナー（実際、利用可能性は多少限定される）としてＣＭＰ−活性化シアル酸（シチジン５’−一リン酸）を必要とすることは、その有用性を制限する。
【００１０】
トランスシアリダーゼ反応において基質として作用するクルーズトリパノソーマ由来のムチンオリゴ糖のＮ−アセチル−ラクトサミンベンジル配糖体及びベンジル配糖体の能力が研究されている（非特許文献４、非特許文献５）。
【００１１】
シアリダーゼを用いた無保護又はアノマー的に置換されたガラクトース、ラクトース又はＮ−アセチル−ラクトサミン誘導体の低収率なレギオ選択的シアリデーションが報告されている（非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８）。
【００１２】
いくつかのバイオテクノロジー的手法は、遺伝子組み換え細菌、酵母菌又はその他微生物を用いることが知られている。そのような手法には、制限された商業化機会による規制プロセスで深刻な欠点がある。
【００１３】
シアロ複合糖質は、ある反応条件下（例えば酸及び塩基）では不安定であることが知られている。実際に、シアロ複合糖質は自己加水分解することができる。従ってこの化合物の調製及び精製の条件は、注意深く選択しなければならない。
【００１４】
要するに、天然起源プール（例えばヒトミルク）中に多数のオリゴ糖が存在するため、単離技術では、多量のシアロオリゴ糖を得ることができなかった。さらに、極めて似た構造を有する位置異性体が存在するため分離技術はうまくいかなかった。酵素を用いた手法では、酵素の入手性の低さ、糖ヌクレオチドドナーの極めて高い価格、及び遺伝子組み換え微生物で産生された酵素を用いることによる規制上の困難さといった問題がある。バイオテクノロジーによるオリゴ糖の調製は、異常なグリコシル化生成物産生の可能性があることから、多くの規制上の障壁がある。一般的に、シアロオリゴ糖を合成するために開発された全ての化学的方法にはいくつか欠点があり、数グラムの量の目標化合物の調製をも困難としていた（例えば、対応するベンジル配糖体による３’−Ｏ−及び６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル)−ラクトースの合成を参照：非特許文献９）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】ＷＯ９６／３２４９２
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｎｉｎｏｎｕｅｖｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．５４、７４７１（２００６）
【非特許文献２】Ｕｒａｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．：  Ｍｉｌｋ  Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ、Ｎｏｖａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｏｏｋｓ、ＮＹ、２０１１
【非特許文献３】Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６５、６１４５（２０００）
【非特許文献４】Ｌｕｂｉｎｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．３００、１６１（１９９７）
【非特許文献５】Ａｇｕｓｔｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５、２６１１（２００７）
【非特許文献６】Ｔｈｉｅｍ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．３０、１５０３（１９９１）
【非特許文献７】Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．１９１９（２０００）
【非特許文献８】Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６５、８５１８（２０００）
【非特許文献９】Ｒｅｎｃｕｒｏｓｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．  Ｒｅｓ．３３７、４７３（２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
この数十年の間、シアル化ヒト乳オリゴ糖の調製及び製品化に対する関心は絶えず高まりつつあるが、今もなお、調製の簡素化が可能で、なおかつ、従来の方法で直面している精製の問題の克服又は回避が可能な新規の方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
１つのアスペクトにおいて、本発明は、下記一般式１Ａで表される化合物及びその塩を合成する方法であって、
【００１９】
【化１】
2013532470.tif 000004
【００２０】
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｘ１は炭水化物リンカーを表し、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｍは０又は１である。）
以下の式で表されるシアリルドナー又はその塩と、
式  ＳＡ−ＯＲ２
（式中、Ｒ２は単糖、二糖又はオリゴ糖、糖脂質、糖タンパク質、又は糖ペプチドであってもよく、環状又は非環状脂肪族基、又はアリール残基であってもよく、ＳＡはα−シアリル部分である。）
下記一般式２Ａで表されるシアリルアクセプター又はその塩を、
【００２１】
【化２】
2013532470.tif 000005
【００２２】
（式中、Ｘ１、Ａ、ｍ及びＲ１は、上記で規定したものと同様である。）
トランスシアリダーゼ活性を有する酵素の触媒作用で反応させることを特徴とする方法に関する。
【００２３】
その他のアスペクトにおいて、本発明は、下記一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩を提供する。
【００２４】
【化３】
2013532470.tif 000006
【００２５】
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、整数ｍは０又は１であり、Ｘ１は炭水化物リンカーを表す。但し、３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル及び１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル配糖体、及び６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル配糖体を除く。）
【図面の簡単な説明】
【００２６】
以下、本発明を、図を用いて詳細に説明する。
【図１】本発明のベンジル  ３’’’−Ｏ−シアリル−β−ＬＮｎＴの４００ＭＨｚ１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
オリゴ糖の合成にどのような経路をとったとしても、最終目的物である非保護オリゴ糖は水にしか溶解せず、そのことは合成の後の工程における難題となる。合成製造工程に通常用いる有機溶媒は、オリゴ糖合成の最終段階の反応に適していない。
【００２８】
本発明は、アノマー位で保護された新規のシアロオリゴ糖とその製造に適する方法を提供する。本発明は、トランスシアリデーション反応における水溶性１−Ｏ−保護オリゴ糖中間体の利用に基づき、選ばれた１−Ｏ−保護基は、水素化分解により除去されてもよい。前記１−Ｏ−保護基は、前記オリゴ糖中間体に、強力な精製方法を助ける物理的特性及び化学的特性を提供することが好ましい。例えば、疎水性部分としてベンジル又は置換ベンジル基などの芳香族基を導入することにより、水溶性も残しながら、誘導体をアルコールなどの有機プロトン性溶媒に溶解可能にする。これにより、サイズ排除クロマトグラフィーや逆相クロマトグラフィーなどの分離／精製技法に採用できる、幅広い水とアルコールの割合を有する移動相を使用することができる可能性が生まれる。また、芳香族基における置換基を注意深く設計することにより、場合によっては結晶化合物を実現することができ、生成物精製に結晶化のみを用いた強力な製造方法の開発が可能となる。さらに、前記ベンジル１−Ｏ−保護基は、副生物生成を防ぐ穏和で繊細な条件下における最終工程において、触媒還元（水素化分解）によって除去することができ、それは少なくとも１つのシアリル基が目標オリゴ糖に存在する場合、明らかに利点である。触媒還元は、水溶液中で発生し得る。
【００２９】
（一般用語）
本明細書中、シアリルドナー中、及び一般式１で表される化合物中の用語「α−シアリル部分」又は「シアリル部分」は、下記スキーム１のＮ−アセチルノイラミン酸の例で示したような、α−グリコシド結合を有する天然型若しくは修飾ノイラミン酸誘導体又はシアル酸誘導体及びその類似体のグリコシル部分を意味する。ノイラミン酸としては、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）、Ｎ−グリコリル−ノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）及びデアミノ−ノイラミン酸（３−デオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロソン酸、ＫＤＮ）が好ましい。また、リンカー、反応性官能基、検出可能な標識、又は標的化部分で誘導体化された、及び／又は、アシルオキシ、アルコキシ、ハロゲン又はアジドでＣ−４、Ｃ−７、Ｃ−８及び／又はＣ−９（特にＣ−９）が置換されたＮｅｕ５Ａｃ誘導体、Ｎｅｕ５Ｇｃ誘導体及びＫＤＮ誘導体が好ましい。より好ましいＯ−置換基は、アセチル（Ｃ−４、Ｃ−７、Ｃ−８及び／又はＣ−９において）、ラクチル（Ｃ−９において）、メチル（Ｃ−８において）、硫酸塩（Ｃ−８において）又はリン酸塩（Ｃ−８において）である。アミノ基における好ましい置換基としては、グリコリル、アセトアセチルを含むアシルが挙げられる。
【００３０】
【化４】
2013532470.tif 000007
【００３１】
「水素化分解により除去可能な保護基」とは、触媒量のパラジウム、ラネーニッケル又は水素化分解で用いられるその他の適切な金属触媒の存在下で水素を添加することにより、１−酸素と結合した炭素−酸素結合が切断でき、その結果ＯＨ基を再生できる基を意味する。このような保護基は、当業者にはよく知られており、「Protective Groups in Organic Synthesis(PGM Wuts and TW Greene，John Wiley & Sons 2007)」に記載されている。好適な保護基としては、ベンジル、ジフェニルメチル（ベンズヒドリル）、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル又はトリフェニルメチル（トリチル）基が挙げられ、いずれもアルキル、アルコキシ、フェニル、アミノ、アシルアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ、Ｎ−ジアルキルカルバモイル、アジド、ハロゲンアルキル、又はハロゲンから選択される１以上の基で任意に置換されてもよい。置換基は、もし存在するならば、１または複数の芳香環上にあることが好ましい。特に好適な保護基としては、フェニル、アルキル又はハロゲンから選択される１以上の基で任意に置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基が挙げられる。より好ましくは、保護基は非置換ベンジル、非置換２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル及び４−メチルベンジルから選択される。これらの特に好適でより好ましい保護基は、それぞれ、水素化分解の副生成物が、もっぱらトルエン、２−メチルナフタレン、置換トルエン誘導体又は２−メチルナフタレン誘導体であるという利点を有する。このような副生成物は、数トンの規模でも、水溶性オリゴ糖産物から蒸発及び／又は抽出過程を介して容易に除去することができる。 
【００３２】
本明細書中、用語「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどの、炭素数１から６の直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を意味する。
【００３３】
用語「アリール」は、フェニル又はナフチルなどのホモ芳香族基を意味する。
【００３４】
本明細書において、用語「アシル」は、Ｒ’−Ｃ（＝Ｏ）−基であって、Ｒ’がＨ、アルキル（上記参照）、又はアリール（上記参照）であるものを意味する（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ピバロイル、ベンゾイルなど）。該アルキルもしくはアリール残基は、非置換であってもよく、アルキル（アリール残基のみ）、ハロゲン、ニトロ、アリール、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ、Ｎ−ジアルキルカルバモイル、アジド、ハロゲンアルキル又はヒドロキシアルキルから選択される１以上の基で置換されていてもよく、アシル基、例えば、クロロアセチル、トリクロロアセチル、４−クロロベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、４−フェニルベンゾイル、４−ベンズアミドベンゾイル、４−（フェニルカルバモイル）−ベンゾイル、グリコリル、アセトアセチルなどを生じる。
【００３５】
用語「アルキルオキシ」又は「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分と結合しているアルキル基（上記参照）、例えばメトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシなどを意味する。
【００３６】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
【００３７】
「アミノ」は、−ＮＨ２基を意味する。
【００３８】
「アルキルアミノ」は、−ＮＨ−基を介して親分子部分と結合しているアルキル基（上記参照）、例えばメチルアミノ、エチルアミノなどを意味する。
【００３９】
「ジアルキルアミノ」は、窒素原子を介して親分子部分と結合している同じか又は異なる２つのアルキル基（上記参照）、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノなどを意味する。
【００４０】
「アシルアミノ」は、−ＮＨ−基を介して親分子部分と結合しているアシル基（上記参照）、例えばアセチルアミノ（アセトアミド）、ベンゾイルアミノ（ベンズアミド）などを表す。
【００４１】
「カルボキシル」は、−ＣＯＯＨ基を意味する。
【００４２】
「アルキルオキシカルボニル」は、−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して親分子部分と結合しているアルキルオキシ基（上記参照）、例えばメトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどを意味する。
【００４３】
「カルバモイル」は、Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−基である。
【００４４】
「Ｎ−アルキルカルバモイル」は、−ＨＮ−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して親分子部分と結合しているアルキル基（上記参照）、例えばＮ−メチルカルバモイルなどを意味する。
【００４５】
「Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル」は、＞Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−基を介して親分子部分と結合している同じ又は異なる２つのアルキル基（上記参照）、例えばＮ，Ｎ−メチルカルバモイルなどを意味する。
【００４６】
本明細書中、用語「塩」（少なくとも１つのシアリル残基を含み、一般式１、２、及び式ＳＡ−ＯＲ２で表される化合物に関連するもの）は、化学量論比にある負電荷を有する酸残基及び１以上のカチオンからなる結合イオン対を意味し、この比はいかなる化学量論比であってもよい。本発明の文脈で使用されるカチオンは、正電荷を有する原子又は分子である。該カチオンは、無機カチオンでも有機カチオンでもよい。無機カチオンとしては、アンモニウムイオン、アルカリ金属、アルカリ土類金属、及び遷移金属イオンが好ましく、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｂａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、及びＣｕ２＋がより好ましく、さらに好ましくは、Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｂａ２＋、Ｆｅ２＋、及びＺｎ２＋である。正電荷を帯びた塩基性有機化合物は、関連性のある有機カチオンであってもよい。このような正電荷を帯びたカウンターパートとしては、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、イミダゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ベンジルアミン、エチレンジアミン、メグルミン、ピロリジン、コリン、トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）モルホリン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン又はＬ−リジン単位を有するオリゴペプチド、又はＮ−末端に遊離アミノ基を有するオリゴペプチドなど（これらは全てプロトン化されたもの）が好ましい。このような塩の形成は、安定性、添加剤との相溶性、溶解性及び結晶形成能力などの複合分子全般の性質の改変に使用することができる。
【００４７】
（トランスシアリデーション反応）
本発明によって、下記一般式１（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｘは炭水化物リンカーを表し、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｎは０又は１である）で表されるシアロオリゴ糖及びその塩を合成するプロセスであって、式ＳＡ−ＯＲ２（式中、Ｒ２は単糖、二糖又はオリゴ糖、糖脂質、糖タンパク質、又は糖ペプチドであってもよく、環状又は非環状脂肪族基、又はアリール残基であってもよく、ＳＡはα−シアリル部分である）で表されるシアリルドナー又はその塩と、下記一般式２で表されるシアリルアクセプター又はその塩を、トランスシアリダーゼ活性を有する酵素の触媒作用下で反応させるプロセスが提供される。このプロセスをスキーム２に表す。
【００４８】
【化５】
2013532470.tif 000008
【００４９】
一般式１で表される化合物を提供する利点は、非グリコシル化シアロオリゴ糖に比べて、シアル化オリゴ糖１−Ｏ−保護配糖体をより容易に精製できることである。副生成物として遊離シアル酸が形成されないため、及び反応化合物の極性が異なるため、逆相クロマトグラフィー又はサイズ排除クロマトグラフィーによる生成物の単離が可能である。水を使用する逆相クロマトグラフィーの場合、一般式１で表される化合物は、反応混合物中の高極性化合物に比べてかなりゆっくり移動するため、該極性化合物を簡単に溶出することができる。そして、一般式１で表される化合物は、例えばアルコールなどでカラム上から洗浄することができる。
【００５０】
（トランスシアリダーゼ活性を有する酵素）
本明細書に記載されている、トランスシアリダーゼ活性を有し、シアロオリゴ糖を生成する方法の目的に適した酵素は、シアリダーゼ及びトランスシアリダーゼ酵素から選択することができる。
【００５１】
ＧＨ３３ファミリーに分類されるシアリダーゼ（ＥＣ３．２．１．１８）は、さまざまなシアロ複合糖質の末端シアル酸のα−結合（主にα−２−３又はα−２−６結合でガラクトースと結合しているもの）を加水分解する能力を有する保持酵素である。それらは、特にさまざまなウイルス科及び細菌、また原虫、無脊椎動物及び哺乳動物中に存在する。いくつかの細菌性シアリダーゼは、細菌の細胞増殖に必要な養分のために、シアル化糖タンパク質、糖脂質又は他の複合糖質からシアル酸を除去することに使用することができる。
【００５２】
シアリダーゼはその加水分解活性が特徴であるが、適切な反応条件下では、トランスシアリデーション反応によりシアル酸単位のアシアロアクセプターへの転移反応を触媒することができ、シアロ複合糖質を形成することができる。病原菌又は病原性ウイルス（例えばバクテロイデスフラジリス、クロストリジウム属菌（例えば、ウェルシュ菌)、ジフテリア菌、ブタパラインフルエンザ菌、パスツレラ・ムルトシダ、緑膿菌、ネズミチフス菌、肺炎レンサ球菌、タネレラフォーサイシア、コレラ菌又はニューキャッスル病ウイルス）、及び非病原菌又は非病原性ウイルス（例えばアクチノマイセス・ビスコーズス、アルスロバクター属菌又はミクロモノスポラビリジファシエンス）由来のシアリダーゼは、α−２−３及び／又はα−２−６特異性のトランスシアリダーゼ活性を有するため、シアリル化反応のための触媒として働くことができる。レギオ選択性については、α−２−３結合産物とα−２−６結合産物の割合は、前記酵素及び／又は前記アクセプターにより異なる。例えば、アルスロバクター・ウレアファシエンス、ウェルシュ菌及びコレラ菌由来のシアリダーゼは、優れたα−２−６特異性を有し、一方、ネズミチフス菌及びニューキャッスル病ウイルス由来のシアリダーゼは、α−２−３結合を形成する良好ないし極めて優れた選択性を有する。
【００５３】
近年、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム及びビフィドバクテリウムロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスのようなビフィドバクテリウム属菌由来のシアリダーゼが特定され、クローンが生成され、特性解析されている。これらのシアリダーゼは、α−２−３結合及びα−２−６結合のシアロシドを開裂することができ、両方を認識することができる。ビフィドバクテリウムロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス由来のシアリダーゼは、α−２−６結合を一貫して好み、一方、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム由来のシアリダーゼは、一貫してα−２−３結合を好む。
【００５４】
トランスシアリデーション反応のレギオ選択性及び／又は転換を高めるために、さまざまな工学的手法により、シアリダーゼを変異させてもよい。
【００５５】
合理的エンジニアリングにおいて、新規の変異酵素（突然変異体）は、点突然変異により産生される。前記点突然変異は、通常、酵素の活性部位に影響を及ぼす。トランスグリコシル化に必要な反応性ホスト−ゲスト錯体形成のための適切な環境がないため、触媒的求核試薬を非求核性残基で置換することで、トランスグリコシル化活性の低い不活性突然変異体又は変異酵素が形成される。しかしながら、天然のシアリダーゼのシアリルドナーに比べ活性の高いシアリルドナーの存在下においては、突然変異酵素は、シアリル残基を適切なアクセプターへ効率的に転移することができる。酵素の合理的エンジニアリングは、通常、静的タンパク質立体構造への依存を必要とし、これらの変異酵素は生成物の加水分解活性が欠けていてもよい。
【００５６】
定方向進化戦略と呼ばれる第二手法は、選択された天然シアリダーゼ酵素のランダム変異導入法を含み、それぞれが単一又は複数の位置で変異させられた酵素変異体のライブラリが創られる。前記酵素変異体は、わずかに変異した特性を持つ組み換え変異体の産生に適している微生物（例えば大腸菌又は出芽酵母）に挿入される。改良された酵素を発現するクローンは、迅速かつ信頼できるスクリーニング法で同定され、選択され、突然変異プロセスの次のラウンドに持ち込まれる。繰り返される突然変異、組み換え及び選択のサイクルは、所望の活性及び／又は特異性を有する突然変異体が得られるまで続けられる。
【００５７】
トランスシアリダーゼに関しては、上記第一のトランスシアリダーゼ酵素は、シャーガス病を引き起こす原虫である、クルーズトリパノソーマ中で発見された。それ以来、トランスシアリダーゼは、他のいくつかのトリパノソーマ類（例えばガンビアトリパノソーマ 、ローデシアトリパノソーマ、ブルーストリパノソーマ及びコンゴトリパノソーマ）中で検出されている。さらに、トランスシアリダーゼの存在はエンドトリパヌム類中、ジフテリア菌中、及びヒトの血漿中でも認められている。
【００５８】
シアリダーゼがシアル酸に対する加水分解活性を有する点に加え、トランスシアリダーゼとシアリダーゼの違いは、トランスシアリダーゼがかなりのシアル酸転移活性を有する点である。トランスシアリダーゼは、シアル酸、好ましくはα−２、３−結合シアル酸を、ドナー分子からアクセプター誘導体、好ましくはβ−グリコシド間結合を有する末端ガラクトース部分、に転移することができる。その転移の結果、α−グリコシル結合が、前記シアル酸と前記アクセプターの間に形成される。しかしながら、適当なアクセプターが存在しない場合、トランスシアリダーゼは、シアル酸を加水分解する。
【００５９】
トランスシアリダーゼ作用のためにヒドロラーゼ活性を除去する（例えばアミノ酸配列の変異）定方向性のトランスシアリダーゼ酵素突然変異体を産生することが可能である。変異導入法及び／又は組み換えにより、変異遺伝子のライブラリを創った後、変異遺伝子を、わずかに変異した特性を持つ組み換え変異体の産生に適している微生物（例えば大腸菌又は出芽酵母）に挿入する。そして、改良された酵素を発現するクローンは、同定され、単離され、所望の目的に使用することができる。例えば、配列や構造の比較を基に、ランゲルトリパノソーマ由来のシアリダーゼを６位で突然変異させてもよく、得られた突然変異体は、高水準のトランスシアリダーゼ活性を発揮することができる（Ｐａｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３４５、９２３（２００５））。
【００６０】
好ましくは、トランスシアリダーゼ活性を有する酵素は、ビフィドバクテリウムロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス  ＡＴＣＣ１５６９７、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＪＣＭ１２５４、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  Ｓ１７、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＰＲＬ２０１０、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＮＣＩＭＢ４１１７１、クルーズトリパノソーマなどが由来のシアリダーゼ又はトランスシアリダーゼから選択してもよい。
【００６１】
より好ましくは、トランスシアリダーゼ活性を有する酵素は、下記寄託番号で定義されるシアリダーゼ又はトランスシアリダーゼから選択することができる。ｇｉ｜２１３５２４６５９（ビフィドバクテリウムロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスＡＴＣＣ１５６９７、配列番号１）、ｇｉ｜２１３５２３００６（ビフィドバクテリウムロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス  ＡＴＣＣ１５６９７、配列番号２）、ｇｉ｜３０９２５２１９１（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＳ１７、配列番号３）、ｇｉ｜３０９２５２１９０（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＳ１７、配列番号４）、ｇｉ｜３１０８６７４３７（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＰＲＬ２０１０、配列番号５）、ｇｉ｜３１０８６７４３８（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＰＲＬ２０１０、配列番号６）、ｇｉ｜２２４２８３４８４（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＮＣＩＭＢ４１１７１、配列番号７）、ｇｉ｜２２４２８３４８５（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＮＣＩＭＢ４１１７１、配列番号８）、ｇｉ｜３３４２８３４４３  ｇｉ｜４７２５２６９０（ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム  ＪＣＭ１２５４、配列番号９）、ｇｉ｜４７２５２６９０（クルーズトリパノソーマ、配列番号１０）、ｇｉ｜４３２４８５（クルーズトリパノソーマ、配列番号１１）。特に好ましいトランスシアリダーゼ活性を有するシアリダーゼ/トランスシアリダーゼを下記表２に列挙する。
【００６２】
【表２】
2013532470.tif 000009
【００６３】
トランスシアリダーゼ活性を保持し、かつ、トランスシアリダーゼ活性を有する上述した酵素配列の配列との配列類似性／一致度（配列ホモロジー）が、アミノ酸レベルの全ての野生型配列と比べて、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、あるいはそれ以上に好ましくは９７％、９８％又は９９％であるシアリダーゼ／トランスシアリダーゼ酵素突然変異体が考えられる。
【００６４】
配列類似性は、少なくとも９０％であることが好ましく、より好ましくは９５％、９７％又は９８％、さらに好ましくは９９％である。前記トランスシアリダーゼ活性は、天然型酵素活性の少なくとも７５％であることが好ましく、より好ましくは少なくとも９０％であり、さらに好ましくは少なくとも１００％である。
【００６５】
シアリダーゼ及びトランスシアリダーゼは、従来技術の方法で用いられるシアリルトランスフェラーゼに比べて広いドナー及びアクセプターの特異性を有し、特に広範囲の反応に使用されうる。したがって、シアリダーゼ／トランスシアリダーゼは、以前より使用されているシアリルトランスフェラーゼに比べて、工業的利用に有利である。
【００６６】
（シアリダーゼ／トランスシアリダーゼのドナー）
クルーズトリパノソーマに微生物が感染すると、クルーズトリパノソーマ中のトランスシアリダーゼは、宿主生物のシアロ複合糖質からシアル酸を除去し、自身のエピトープをマスクするために、自身の表面のムチンを効率的にシアル化することが知られている。
【００６７】
多くの徹底的な調査の後、誘導体を含む天然及び合成シアル酸の多くは、トランスシアリデーション反応においてシアリルドナーとして作用することが分かった。従って、上記一般式ＳＡ−ＯＲ２で表されるシアリルドナー化合物は、トランスシアリダーゼによってアクセプターへ転移される基質を提供することができる。トランスシアリダーゼは、純然たるシアル酸又はＣＭＰ−シアル酸（つまり、β−シアリダーゼ）をアクセプターへ転移せず、α−アノマーアグリコン又はα−アノマー置換基を有するシアル酸の存在はトランスシアリダーゼ反応には不可欠である。典型な天然シアリルドナーは限定されるものではないが、３‘−Ｏ−シアリル−ラクトース、フェチュイン、ガングリオシド、Ｏ−又はＮ−結合型糖ペプチド（これらはすべて、末端β−ガラクトシド残基にα−２，３−結合したシアル酸を含む）、又はα−２，８−結合を有するポリシアル酸から選択することができる。合成シアロシドの中でも、２−Ｏ−（４−メチルウンベリフェリル））−α−Ｄ−シアロシド又は２−Ｏ−（任意に置換されたフェニル）−α−Ｄ−シアロシド、より一般的には２−Ｏ−（ｐ−ニトロフェニル）−α−Ｄ−シアロシドが好ましい。
【００６８】
（シアリダーゼ／トランスシアリダーゼのアクセプター）
上記記載のトランスシアリデーション反応に用いるトランスシアリダーゼアクセプターは一般式２及びその塩で表され、Ｒ１−ガラクトピラノシド（ｎが０である場合）、又は、非還元末端の末端糖部分がガラクトピラノースであるオリゴ糖Ｒ１−配糖体（ｎが１に等しい場合）である。末端ガラクトピラノシル単位は、好ましくは、β−グリコシド結合と結合する。
【００６９】
一般式２で表される化合物のアノマー性水酸基は、水素化分解により除去可能なＲ１基に保護されている。上述したように、このような基は任意に置換されたベンジル及びナフチルメチル基を含む。任意にフェニル、アルキル又はハロゲンで置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基は、好ましいＲ１−基であり、中でも、非置換ベンジル、非置換２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル又は４−メチルベンジル基が特に好ましい。
【００７０】
ｎが１の場合、構造要素Ｘは、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。
【００７１】
好ましい方法において、ｎは１であり、リンカーＸは、式−（Ｘ１）ｍ−Ａ−に対応し、下記一般式２Ａで表されるアクセプター又はその塩を形成する。
【００７２】
【化６】
2013532470.tif 000010
【００７３】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【００７４】
ｍが０の場合、末端Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式２Ｂで表される化合物を形成する。
【００７５】
【化７】
2013532470.tif 000011
【００７６】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それによりラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【００７７】
ｍが１の場合、構造要素 Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式２Ｃで表される化合物又はその塩を形成する。
【００７８】
【化８】
2013532470.tif 000012
【００７９】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、末端ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、ラクト−Ｎ−ビオシル又はＮ−アセチル−ラクトサミニル末端二糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。 
【００８０】
より好ましい方法においては、Ｘ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式２Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体又はその塩を形成する。
【００８１】
【化９】
2013532470.tif 000013
【００８２】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ８は、下記一般式５及び６で特徴づけられる基から選択され、Ｒ９はＨ、α−シアリル部分、上記一般式５で表される基及び上記一般式６で表される基から選択される。）
【００８３】
【化１０】
2013532470.tif 000014
【００８４】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分である。）
【００８５】
さらに好ましい方法によると、上記一般式２Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基（ｐ＝２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合している。
・一般式５で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式６で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【００８６】
他のアスペクトにおいて、上記一般式２Ｂ、２Ｃ又は２Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、非置換の末端ガラクトシル残基を有する）のＲ１−配糖体を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【００８７】
特に好ましくは、上記一般式２Ｂ、２Ｃ又は２Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ラクトース）、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシルラクトース）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＴ）、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮｎＴ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩＩ）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−４）Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  Ｖ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴｂ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＧａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩＩ）のＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【００８８】
一般式２で表される化合物の典型的な合成は、以下を含む。まず、ガラクトース、又は非還元末端にガラクトピラノシル単位を有するオリゴ糖を５０〜１２５℃にて、無水酢酸及び酢酸ナトリウムで処理し、ついで、ＤＣＭ、トルエン、ＴＨＦなどの有機溶媒中、Ｒ１−ＯＨ、好ましくはベンジル／置換ベンジルアルコールを用い、ルイス酸触媒によるグリコシル化を行う。その後、グリコシル化生成物の最終Ｚｅｍｐｌｅｎ脱保護を経て、一般式２で表される化合物が得られる。
【００８９】
他の典型的なアノマーＯ−保護方法によると、双極性の非プロトン性溶媒中（例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、Ｎ、Ｎ’−ジメチルヘキサヒドロピリミジン−２−オン（ＤＭＰＵ）、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、又はその混合物）、遊離アノマーＯＨで完全にもしくは部分的に保護されたガラクトース又は非還元末端にガラクトピラノシル単位を有するオリゴ糖は、強塩基及びＲ１−Ｘ（Ｘは、ハロゲン、メシル、トリフリルのようなアルキルスルホニルオキシ、及びベンゼンスルホニル、トシルのようなアリールスルホニルから選択される脱離基である）の存在下、Ｏ−アルキル化される。好ましいアルキル化剤は、任意にフェニル、アルキル又はハロゲンから選択される１以上の基で置換されたベンジル、又は１−もしくは２−ナフチルメチルハロゲン化物である。前記強塩基は、同量もしくはわずかに多い量の（１〜１．５当量）の塩基を使用した際、そのより酸性な性質により、前記アノマーＯＨを化学選択的に脱プロトン化することができる。アノマーＯＨを活性化するのに適した強塩基は、通常、ＮａＨ、ＫＨ、ＣａＨ２、ＮａＯＭｅ、ＮａＯｔＢｕ、ＫＯｔＢｕ、無機水酸化物、炭酸カリウムなどのアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水素化物又はアルコキシドからなる群より選択される。アルキル化剤は、同量もしくはわずかに多い量（１〜１．５当量）で加える。反応は、−１０〜８０℃にて行い、反応の全過程中は低い温度、又は試薬／反応剤の添加中は低い温度、及び反応の後半では昇温して反応を行うことが好ましい。一般式２で表されるベンジル／置換ベンジル配糖体は、通常の工程後に得ることができる。
【００９０】
他のアスペクトにおいて、本発明は、下記一般式２Ａ’で表される化合物及びその塩を提供することに関する。
【００９１】
【化１１】
2013532470.tif 000015
【００９２】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１である。但し、ａ）ｍが０の場合、Ａ基はフコシルで置換され、ｂ）前記化合物は、１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴ、１−Ｏ−β−（４−ヒドロキシメチルベンジル）−ＬＮｎＴ及び１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮｎＴとは異なる。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【００９３】
ｍが０の場合、末端Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式２Ｂ’で表される化合物及びその塩を形成する。
【００９４】
【化１２】
2013532470.tif 000016
【００９５】
（式中、Ｒ３は、フコシルである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それによりラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【００９６】
ｍが１の場合、構造要素Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式２Ｃ’で表される化合物及びその塩を形成する。
【００９７】
【化１３】
2013532470.tif 000017
【００９８】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、末端ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、ラクト−Ｎ−ビオシル又はＮ−アセチル−ラクトサミニル末端二糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。 
【００９９】
より好ましい方法においては、Ｘ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖残基で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式２Ｄ’で表されるヒト乳オリゴ糖誘導体又はその塩を形成する。
【０１００】
【化１４】
2013532470.tif 000018
【０１０１】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位であり、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ８は、下記一般式５及び６で特徴づけられる基から選択され、Ｒ９はＨ、α−シアリル部分、下記一般式５で表される基及び下記一般式６で表される基から選択される。）
【０１０２】
【化１５】
2013532470.tif 000019
【０１０３】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分である。）
【０１０４】
さらに好ましい態様によると、上記一般式２Ｄ’で表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合している。
・一般式５で表される基は、Ｙと結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式６で表される基は、Ｙと結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０１０５】
他のアスペクトにおいて、上記一般式２Ｃ’又は２Ｄ’で表される化合物及びその塩は、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、非置換の末端ガラクトシル残基を有する）のＲ１−配糖体を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０１０６】
特に好ましくは、上記一般式２Ａ’で表される化合物及びその塩は、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシルラクトース）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＴ）、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮｎＴ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  ＩＩＩ）、Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＦＰ  Ｖ）、Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴｂ）、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＧａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＬＮＤＦＨ  ＩＩＩ）のＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０１０７】
（トランスシアリデーション反応生成物）
上述したように、本明細書に記載されているトランスシアリデーション反応は、一般式２で表される化合物及びその塩から、下記一般式１で表される化合物及びその塩を生成する。
【０１０８】
【化１６】
2013532470.tif 000020
【０１０９】
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｘは炭水化物リンカーを表し、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｎは０又は１である。）
Ｒ１基は、任意に置換されたベンジル及びナフチルメチル基を含み、中でも、任意にフェニル、アルキル又はハロゲンで置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基が好ましいＲ１−基であり、その中でも、非置換のベンジル、非置換の２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル又は４−メチルベンジル基が、特に好ましい。
【０１１０】
ｎが１の場合、構造要素Ｘは、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。
【０１１１】
好ましい方法において、ｎは１であり、リンカーＸは、式−（Ｘ１）ｍ−Ａ−に対応し、下記一般式１Ａで表されるシアル化生成物及びその塩を形成する。
【０１１２】
【化１７】
2013532470.tif 000021
【０１１３】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０１１４】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１Ｂで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１１５】
【化１８】
2013532470.tif 000022
【０１１６】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【０１１７】
ｍが１の場合、構造要素 Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式１Ｃで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１１８】
【化１９】
2013532470.tif 000023
【０１１９】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、シアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。 
【０１２０】
シアリルオリゴ糖誘導体を合成するより好ましい方法においては、一般式１Ｃで表される化合物及びその塩中のＸ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０１２１】
【化２０】
2013532470.tif 000024
【０１２２】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位であり、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４は、下記一般式３及び４で特徴づけられる基から選択され、Ｒ５は、Ｈ、α−シアリル部分、下記一般式３で表される基及び下記一般式４で表される基から選択される。）
【０１２３】
【化２１】
2013532470.tif 000025
【０１２４】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、Ｒ基のひとつはα−シアリル部分であり、その他はＨである。）
【０１２５】
さらに好ましい方法によると、上記一般式１Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合している。
・一般式３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０１２６】
他のアスペクトにおいて、上記一般式１Ｂ、１Ｃ又は１Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨ又は６−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０１２７】
特に好ましくは、上記一般式１Ｂ、１Ｃ又は１Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、  Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−４）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−��Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０１２８】
選択的α−２−３シアリデーションの場合、本明細書に記載されているトランスシアリデーション反応は、一般式２で表される化合物及びその塩から、下記一般式１−３で表される化合物及びその塩を生成する。
【０１２９】
【化２２】
2013532470.tif 000026
【０１３０】
（式中、ＳＡは、α−シアリル部分であり、Ｘは炭水化物リンカーを表し、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｎは０又は１である。）
Ｒ１基は、任意に置換されたベンジル及びナフチルメチル基を含み、中でも、任意にフェニル、アルキル又はハロゲンで置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基が好ましいＲ１−基であり、その中でも、非置換のベンジル、非置換の２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル又は４−メチルベンジル基が、特に好ましい。
【０１３１】
ｎが１の場合、構造要素Ｘは、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。
【０１３２】
好ましい方法において、ｎは１であり、リンカーＸは、式−（Ｘ１）ｍ−Ａ−に対応し、下記一般式１−３Ａで表されるシアル化生成物及びその塩を形成する。
【０１３３】
【化２３】
2013532470.tif 000027
【０１３４】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０１３５】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１−３Ｂで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１３６】
【化２４】
2013532470.tif 000028
【０１３７】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位中に存在する。
【０１３８】
ｍが１の場合、構造要素Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式１−３Ｃで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１３９】
【化２５】
2013532470.tif 000029
【０１４０】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、シアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。
【０１４１】
シアリルオリゴ糖誘導体を合成するより好ましい方法においては、一般式１−３Ｃで表される化合物及びその塩中のＸ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１−３Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０１４２】
【化２６】
2013532470.tif 000030
【０１４３】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’は、下記一般式３−３及び４−３で特徴づけられる基から選択され、Ｒ５’は、Ｈ、α−シアリル部分、上記一般式３−３で表される基、及び上記一般式４−３で表される基から選択される。）
【０１４４】
【化２７】
2013532470.tif 000031
【０１４５】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡは、α−シアリル部分である。）
【０１４６】
さらに好ましい態様によると、上記一般式１−３Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合している。
・一般式３−３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４−３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０１４７】
他のアスペクトにおいて、上記一般式１−３Ｂ、１−３Ｃ又は１−３Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０１４８】
特に好ましくは、上記一般式１−３Ｂ、１−３Ｃ又は１−３Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０１４９】
選択的α−２−６シアリデーションの場合、本明細書に記載されているトランスシアリデーション反応は、一般式２で表される化合物及びその塩から、下記一般式１−６で表される化合物及びその塩を生成する。
【０１５０】
【化２８】
2013532470.tif 000032
【０１５１】
（式中、ＳＡはα−シアリル部分であり、Ｘは炭水化物リンカーを表し、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、整数ｎは０又は１である。）
Ｒ１基は、任意に置換されたベンジル及びナフチルメチル基を含み、中でも、任意にフェニル、アルキル又はハロゲンで置換されたベンジル又は２−ナフチルメチル基が好ましいＲ１−基であり、その中でも、非置換のベンジル、非置換の２−ナフチルメチル、４−クロロベンジル、３−フェニルベンジル又は４−メチルベンジル基が、特に好ましい。
【０１５２】
ｎが１の場合、構造要素Ｘは、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。
【０１５３】
好ましい方法において、ｎは１であり、リンカーＸは式−（Ｘ１）ｍ−Ａ−に対応し、下記一般式１−６Ａで表されるシアル化生成物及びその塩を形成する。
【０１５４】
【化２９】
2013532470.tif 000033
【０１５５】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０１５６】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１−６Ｂで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１５７】
【化３０】
2013532470.tif 000034
【０１５８】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。 さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【０１５９】
ｍが１の場合、構造要素 Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式１−６Ｃで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１６０】
【化３１】
2013532470.tif 000035
【０１６１】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、シアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。 
【０１６２】
シアリルオリゴ糖誘導体を合成する、より好ましい方法においては、一般式１−６Ｃで表される化合物及びその塩中のＸ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１−６Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０１６３】
【化３２】
2013532470.tif 000036
【０１６４】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位であり、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’’は、下記一般式３−６及び４−６で特徴づけられる基から選択され、、Ｒ５’’は、Ｈ、α−シアリル部分、下記一般式３−６で表される基及び下記一般式４−６で表される基から選択される。）
【０１６５】
【化３３】
2013532470.tif 000037
【０１６６】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡは、α−シアリル部分である。）
【０１６７】
さらに好ましい態様によると、上記一般式１−６Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式３−６で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４−６で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０１６８】
他のアスペクトにおいて、上記一般式１−６Ｂ、１−６Ｃ又は１−６Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の６−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０１６９】
特に好ましくは、上記一般式１−６Ｂ、１−６Ｃ又は１−６Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０１７０】
上記一般式１で表される化合物及びその塩、及び本明細書に記載されているトランスシアリデーション反応で得られる化合物は、新規であることを強調する。本発明は、下記一般式１Ａ’で表される新規の化合物及びその塩を提供することに関する。
【０１７１】
【化３４】
2013532470.tif 000038
【０１７２】
（式中、Ｒ基の１つはα−シアリル部分であり、その他はＨであり、Ｒ１は水素化分解により除去可能な保護基であり、Ａは任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、整数ｍは０又は１であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表す。但し、３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル及び１−Ｏ−β−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ）−ベンジル配糖体、及び６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトースナトリウム塩の１−Ｏ−β−ベンジル配糖体は除く。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０１７３】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１Ｂ’で表される化合物及びその塩を形成する。
【０１７４】
【化３５】
2013532470.tif 000039
【０１７５】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【０１７６】
ｍが１の場合、構造要素Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、それにより下記一般式１Ｃ’で表される化合物及びその塩を形成する。
【０１７７】
【化３６】
2013532470.tif 000040
【０１７８】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、シアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。
【０１７９】
より好ましい態様においては、一般式１Ｃ’で表される化合物及びその塩中のＸ２基は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１Ｄ’で表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０１８０】
【化３７】
2013532470.tif 000041
【０１８１】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４は、下記一般式３及び４で特徴づけられる基から選択され、Ｒ５は、Ｈ、α−シアリル部分、下記一般式３で表される基及び下記一般式４で表される基から選択される。）
【０１８２】
【化３８】
2013532470.tif 000042
【０１８３】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、Ｒ基のひとつはα−シアリル部分であり、その他はＨである。）
【０１８４】
さらに好ましい態様によると、上記一般式１Ｄ’で表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０１８５】
他のアスペクトにおいて、上記一般式１Ｂ’、１Ｃ’又は１Ｄ’で表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨ又は６−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択される。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０１８６】
特に好ましくは、上記一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、  Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−４）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−４）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０１８７】
一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩からなる群の一形態においては、本発明は、下記一般式１’−３Ａで表されるα−２−３−シアル化化合物及びその塩に関する。
【０１８８】
【化３９】
2013532470.tif 000043
【０１８９】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０１９０】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１’−３Ｂで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１９１】
【化４０】
2013532470.tif 000044
【０１９２】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【０１９３】
ｍが１の場合、構造要素Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式１’−３Ｃで表される化合物及びその塩を形成する。
【０１９４】
【化４１】
2013532470.tif 000045
【０１９５】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、シアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。 
【０１９６】
より好ましい態様においては、一般式１’−３Ｃで表される化合物及びその塩中の基Ｘ２は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１’−３Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０１９７】
【化４２】
2013532470.tif 000046
【０１９８】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位であり、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’は、下記一般式３−３及び４−３で特徴づけられる基から選択され、Ｒ５’は、Ｈ、α−シアリル部分、下記一般式３−３で表される基及び下記一般式４−３で表される基から選択される。）
【０１９９】
【化４３】
2013532470.tif 000047
【０２００】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡは、α−シアリル部分である。）
【０２０１】
さらに好ましい態様によると、上記一般式１’−３Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式３−３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４−３で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０２０２】
他のアスペクトにおいて、上記一般式１’−３Ｂ、１’−３Ｃ又は１’−３Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の３−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩からなる群より選択される。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０２０３】
特に好ましくは、上記一般式１’−３Ｂ、１’−３Ｃ又は１’−３Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（３−Ｏ−フコシル−３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ａ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＤＳＬＮＴ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  Ｉ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＤＳＬＮＴ  ＩＩ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０２０４】
一般式１Ａ’で表される化合物及びその塩からなる群の他の形態においては、本発明は、下記一般式１’−６Ａで表されるα−２−６−シアル化化合物及びその塩に関する。
【０２０５】
【化４４】
2013532470.tif 000048
【０２０６】
（式中、Ａは、任意にフコシルで置換されたＤ−グルコピラノシル単位であり、Ｘｌは、炭水化物リンカーを表し、整数ｍは０又は１であり、−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。）
【０２０７】
ｍが０の場合、Ｄ−ガラクトピラノシル単位が、グリコシド間結合を介してＡ基に直接結合する。前記グリコシド間結合は、好ましくは１−４結合であり、下記一般式１’−６Ｂで表される化合物及びその塩を形成する。
【０２０８】
【化４５】
2013532470.tif 000049
【０２０９】
（式中、Ｒ３は、フコシル又はＨである。）
ガラクトースとグルコース部分との間のグリコシド間結合は、より好ましくはβであり、それにより３’−Ｏ−シアリル−ラクトース誘導体が生じる。さらに好ましい態様においては、アグリコン−ＯＲ１もまたβ位に存在する。
【０２１０】
ｍが１の場合、構造要素Ｘ１は、炭水化物リンカーとして、直線又は分岐構造を示す、単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記炭水化物リンカーの単糖ビルディング単位は、天然型５−、６−又は９−炭素含有糖誘導体であってよく、最も頻繁に発生する単位は、グルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸である。好ましくは、リンカーＸ１は、式−Ｂ−Ｘ２−で表され、下記一般式１’−６Ｃで表される化合物及びその塩を形成する。
【０２１１】
【化４６】
2013532470.tif 000050
【０２１２】
（式中、Ｂ基は、任意にフコシル及び／又はシアリルで置換されたＮ−アセチル−グルコサミノピラノシル単位であり、リンカーＸ２は、直線又は分岐構造を示す単糖、二糖、三糖、四糖、五糖又はオリゴ糖を表す。前記リンカーはグルコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、ガラクトース、フコース及びシアル酸から選択される単糖ビルディング単位を有する。）
−ＯＲ１基は、Ｄ−グルコピラノシル環のアノマー炭素（Ｃ１）原子と結合する（好ましくはβ位で）。好ましくは、シアリル−ガラクトシル基は、１−３又は１−４グリコシド間結合を介してＢ基と結合し、それによりシアリル−ラクト−Ｎ−ビオシル又はシアリル−Ｎ−アセチル−ラクトサミニル末端三糖部分をそれぞれ形成する。さらに好ましい方法において、フコシル置換基は、ユニットＢの３−ＯＨ又は４−ＯＨ基、及び／又はユニットＡの３−ＯＨ基と結合してもよく、及び／又はシアリルは、ユニットＢの６−ＯＨと結合してもよい。
【０２１３】
より好ましい態様においては、一般式１’−６Ｃで表される化合物及びその塩中の基Ｘ２は、Ｎ−アセチル−ラクトサミン、ラクト−Ｎ−ビオース、フコース及びシアル酸から選択されるサッカライドビルディング単位を有する直線又は分岐構造を示すシアリル又はオリゴ糖で任意に置換されたガラクトースであり、下記一般式１’−６Ｄで表されるヒト乳オリゴ糖誘導体及びその塩を形成する。
【０２１４】
【化４７】
2013532470.tif 000051
【０２１５】
（式中、Ｒ１は、水素化分解により除去可能な基であり、Ｒ３はＨ又はフコシル単位、Ｙは、独立にシアリル及び／又はフコシル残基で任意に置換されたＮ−アセチル−ラクトサミニル基であり、整数ｐは、独立に０、１又は２であり、Ｒ４’’は、下記一般式３−６及び４−６で特徴づけられる基から選択され、Ｒ５’’は、Ｈ、α−シアリル部分、下記一般式３−６で表される基及び下記一般式４−６で表される基から選択される。）
【０２１６】
【化４８】
2013532470.tif 000052
【０２１７】
（式中、Ｒ６はＨ又はフコシル残基であり、Ｒ７は、Ｈ又はα−シアリル部分であり、ＳＡは、α−シアリル部分である。）
【０２１８】
さらに好ましい方法によると、上記一般式１’−６Ｄで表される化合物及びその塩は、その結合及び結合部分で特徴づけられる。
・Ｙ基（ｐ＝２）におけるＮ−アセチル−ラクトサミニル基は、他のＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式３−６で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・一般式４−６で表される基は、Ｙ（ｐ＝１、２）と結合している場合、１−３グリコシド間結合で結合。
・フコシル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、１−３グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のＮ−アセチル−グルコサミンと結合。
・α−シアリル残基は、Ｙに存在するＮ−アセチル−ラクトサミニル基と結合している場合、２−６グリコシド間結合でＮ−アセチル−ラクトサミニル基のガラクトースと結合。
【０２１９】
他の形態において、上記一般式１’−６Ｂ、１’−６Ｃ又は１’−６Ｄで表される化合物及びその塩は、ラクトース、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース 、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース、パラ−ラクト−Ｎ−オクタオース、及びラクト−Ｎ−ネオオクタオース、及びラクト−Ｎ−テトラオース 、ラクト−Ｎ−ヘキサオース、ラクト−Ｎ−オクタオース、イソ−ラクト−Ｎ−オクタオース、ラクト−Ｎ−デカオース、及びラクト−Ｎ−ネオデカオース（任意に１以上のシアリル及び／又はフコシル残基で置換され、末端ガラクトシル残基の６−ＯＨにシアリル置換基を有する）のＲ１−配糖体、及びこれらの塩を表す。好ましくは、前記シアリル置換基は、Ｎ−アセチルノイラミニル基である。
【０２２０】
特に好ましくは、上記一般式１’−６Ｂ、１’−６Ｃ又は１’−６Ｄで表される化合物及びその塩は、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（６’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−ラクトース）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ（ＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）（Ｆｕｃα１−４）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ（ＦＬＳＴ  ｃ）、Ｎｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）Ｇｌｃ、及びＮｅｕ５Ａｃα２−６Ｇａｌβ１−４（Ｆｕｃα１−３）ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃのＲ１−配糖体、又はこれらの塩からなる群より選択される。前記Ｒ１−配糖体は、アルファ又はベータアノマーであってもよく、ベータアノマーであることが好ましい。
【０２２１】
本発明のその他の特徴は、以下実施例の説明において明らかにされるものである。該実施例は例証のみを目的としているものであり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２２２】
＜１．シアリルアクセプターの合成＞
Ａ）一般的方法：室温で、ラクトース（５ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．２ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を一度に、ＤＭＦ（２０ｍｌ）及びベンズアルデヒドジメチルアセタール（５．５ｍｌ、３５．４ｍｍｏｌ、２．４当量）の混合物に加えた。該反応混合物を、防湿下、７０℃で１時間強撹拌した。 冷却後、トリエチルアミン（０．１５ｍｌ）を加え、揮発性成分（ＭｅＯＨ、トリエチルアミン、残存ベンズアルデヒドジメチルアセタール）を真空で除去した。この反応混合物に、ベンジルブロミド誘導体（１．５当量；試薬が固体の場合、予め５〜１０ｍｌのＤＭＦに溶解したもの）を加え、該混合物を２０分間０℃で冷却した。更に冷却中、ＮａＨ（０．８ｇ、５５％鉱油分散液、１．３当量）を一度に加え、該混合物を冷却下、水素の形成が停止するまで撹拌し、その後室温で２〜３時間、撹拌した。メタノール（２ｍｌ）を注意深く加え、該反応混合物をさらに５分撹拌した。該反応混合物を、１００ｍｌのＤＣＭと１００ｍｌの水に分け、抽出した。水層は、１００ｍｌのＤＣＭで二回逆抽出した。混合有機相を濃縮した、残留物を１００ｍｌのアセトニトリルに溶解し、１００ｍｌのヘキサンで抽出した。アセトニトリルを蒸留除去し、５０℃にて、残留物をイソプロパノール（１０ｍｌ）及びイソプロピルエーテル（５０ｍｌ）に溶解した。透明溶液を−２０℃まで一晩冷却させた。得られた結晶をろ過し、ＴＢＭＥで二回洗浄し、乾燥させた。ＴＢＭＥ（〜５０ｍｌ）及びエタノール（〜２０ｍｌ）の混合物から再結晶化を行ってもよい。
【０２２３】
４−クロロベンジル４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−β−ラクトシド
収量：１．７１ｇ
【０２２４】
４−メチルベンジル４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−β−ラクトシド
収量：３．２０ｇ
【０２２５】
３−フェニルベンジル４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−β−ラクトシド
収量：２．７０ｇ
【０２２６】
２−ナフチルメチル４’，６’−Ｏ−ベンジリデン−β−ラクトシド
収量：１．７７ｇ
【０２２７】
Ｂ）室温で、メタノール（１０ｍｌ）及び水（０．５ｍｌ）中の上記ベンジリデンアセタール（５００ｍｇ）の１つの混合物に、ＴＦＡを加え、防湿下で該反応混合物を２〜４時間撹拌し、その後濃縮した。残存する物質を、エタノールで３〜４回共蒸発させ、粗固体を得た。乾燥後、得られた粗固体を、メタノール（〜１０−３５ｍｌ）及び水（〜０−２ｍＬ）の混合物から再結晶化してもよい。
【０２２８】
４−クロロベンジルβ−ラクトシド
収量：３３３ｍｇ
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５．１ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ＝１３５．２５、１３３．６７、１３０．３０、１２８．７０、１０３．００、１０１．１３、７８．３９、７５．４４、７４．８９、７４．４９、７２．８８、７２．５８、７１．０３、７０．８３、６８．６２、６１．１１、６０．１３
【０２２９】
４−メチルベンジルβ−ラクトシド
収量：４３９ｍｇ
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５．１ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ＝１３８．９１、１３３．５０、１２９．３７、１２９．０７、１０３．０１、１００．９６、７８．４３、７５．４４、７４．８７、７４．５２、７２．９０、７２．５９、７１．４７、７１．０３、６８．６３、６１．１１、６０．１７、２０．３４
【０２３０】
３−フェニルベンジルβ−ラクトシド
収量：４３８ｍｇ
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５．１ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ／ｄ４−ＭｅＯＨ／Ｄ２Ｏ  ８：１：１）：δ＝１４０．２９、１４０．２４、１３８．８８、１２９．１３、１２９．０２、１２７．６６、１２６．８８、１２６．８３、１２６．０３、１２５．９０、１０３．９５、１０２．０３、８０．７６、７５．６５、７５．０７、７５．００、７３．３４、７３．２８、７０．６６、６９．８１、６８．２７、６０．５６
【０２３１】
２−ナフチルメチルβ−ラクトシド
収量：３７８ｍｇ
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５．１ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ／ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝１３４．９６、１３３．２４、１３３．１２、１２８．５９、１２８．３１、１２８．０８、１２７．４６、１２６．９８、１２６．９０、１２６．７９、１０３．２６、１０１．５９、７８．８９、７５．６２、７５．０９、７４．８１、７３．１４、７２．８１、７１．３３、７１．１４、６８．７５、６１．２２、６０．３９
【０２３２】
Ｃ）
【０２３３】
【化４９】
2013532470.tif 000053
【０２３４】
アルゴン下、１０ｇ（８．１３ｍｍｏｌ）のベンジル２，３，６，２’，６’−ペンタ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−４’−Ｏ−ベンゾイル−β−ラクトシド、及び１０ｇ（１．６当量）のメチル  Ｎ−トリクロロアセチル−３，６，２’，３’，４’６’−ヘキサ−Ｏ−アセチル−１−チオ−ラクトサミニドを、３５ｍｌの乾燥ＣＨＣｌ３に溶解した。室温でこの溶液に、３．７ｇのＮＩＳ及び４９０ｍｇのＡｇＯＴｆを加え、約２０分撹拌し続けた。トリエチルアミン（５ｍｌ）をスラリーに加え、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍｌ）で希釈し、その後２回チオ硫酸ナトリウム溶液（１０％）で抽出した。その後、有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮し、得られたシロップを、ＣＨ２Ｃｌ２：アセトン（９８：２→９５：５）の勾配を用いて、シリカゲルのカラムでクロマトグラフィーにかけた。
収量：１２．７ｇ、８０％．ＭＳ（ＥＳＰ）：１９７２．１［Ｍ＋Ｎａ］＋、１９８８．１［Ｍ＋Ｋ］＋、１９４８．２［Ｍ−Ｈ］−、１９８４．０［Ｍ＋Ｃｌ］−．
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１０１．２、１００．７、１００．０、９８．８（アノマー炭素）
【０２３５】
【化５０】
2013532470.tif 000054
【０２３６】
上記で調製した１０ｇ（５．１ｍｍｏｌ）の四糖を、ＭｅＯＨ（１１０ｍｌ）に溶解し、ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨにおいて１Ｍ）の溶液を、ｐＨが１０になるまで加えた。該溶液を、４０℃で５時間撹拌し、次にＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ  １２０  Ｈ＋樹脂を加えて中和し、該樹脂をろ過し、濾液を蒸発させ乾燥した。残留物を、温かいＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、ｉＰｒ２Ｏ（１５０ｍｌ）に滴下し、懸濁液をさらに３時間撹拌した。沈殿物をろ過し、ｉＰｒ２Ｏ（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥させて、４．２ｇのオフホワイト粉末状の生成物を得た（９１％）。
ＭＳ（ＥＳＰ）：９００．１［Ｍ−Ｈ］−．
１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１０５．６、１０５．５、１０４．２、１０３．７（アノマー炭素）
【０２３７】
【化５１】
2013532470.tif 000055
【０２３８】
上記で調製した四糖の３５ｇの化合物を、１１０ｍｌのＭｅＯＨ及び１１０ｍｌのＫＯＨ水溶液（７．５ｇ）に溶解し、該混合物を室温で１日撹拌した。次に、該混合物を氷浴で冷却し、ＨＣｌ−ガスで中和し、濃縮して乾燥した。 得られた粗製の茶褐色のガラスを、室温で１日間、ピリジン（１５０ｍｌ）及び無水酢酸（１５０ｍｌ）を用いてアセチル化した。溶液を濃縮し、得られたシロップをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、有機相を１ＭのＨＣｌ溶液、次いで飽和ＮａＨＣＯ３溶液で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過及び濃縮し、４３ｇの茶褐色の泡を得た。その茶褐色の泡を、溶離剤としてＣＨ２Ｃｌ２：アセトン（８：２）の勾配を用いて、カラムクロマトグラフィーにかけた。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１０１．２、１００．８、１００．４、９９．２（アノマー炭素）
【０２３９】
【化５２】
2013532470.tif 000056
【０２４０】
上記で調製された１４０ｇ（１０７．５ｍｍｏｌ）の過アセチル化四糖を、１．５ＬのＭｅＯＨに溶解し、ＮａＯＭｅ溶液（１Ｍ）をｐＨが１０になるまで加え、次いで該混合物を５０℃で一晩撹拌した。該反応混合物から生成物を結晶化した。該混合物を室温まで冷却し、さらに冷却し、ろ過した。濾液（filtrate）を、冷たいＥｔＯＨで洗浄し、乾燥させ、６９ｇの白色粉末状ベンジルβ−ＬＮｎＴ（８６．５ｍｍｏｌ、８０％）を得た。
１３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１０５．６、１０５．５、１０５．４、１０３．６（アノマー炭素）
融点：２８４〜２８６℃
【０２４１】
Ｄ）中性ＨＭＯベンジル/置換ベンジル配糖体を調製する一般的な手順
選択された中性ＨＭＯ（１当量）を、１〜１０容量（ｇ／ｍＬ）のＤＭＦ、ＤＭＳＯ、またはこれらの混合物に溶解／懸濁した。該反応混合物を０℃に冷却し、ベンジルブロミド/置換ベンジルブロミド（１．２〜１．４当量）を加えた。強塩基（例えば、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化カルシウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド）（１．２〜１．４当量）を０〜４０℃で加え、該反応混合物を０〜６０℃で６〜２４時間撹拌した。次いで、水を加えて過剰な塩基を減衰させ、反応混合物を室温で３０分撹拌した。得られた反応混合物を濃縮し、逆相クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなどで精製し、又は結晶化し、収率７０〜８０％で、目的とするベンジル化/置換ベンジル化中性ＨＭＯ化合物を得た。
【０２４２】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−ＬＮｎＴ
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：７．３（ｄｄ、４Ｈ）、４．８８（ｄ、１Ｈ）、４．７（ｍ）、４．５４（ｄ、１Ｈ）、４．４８（ｄ、１Ｈ）、４．４２（ｄ、１Ｈ）、４．３４（ｄ）、４．０−３．５（ｍ）、３．３４（ｄｄ、１Ｈ）
１３ＣＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１８４．２、１７７．６、１７３．７、１４１．５、１３６．１、１３１．９、１３１．４、１０５．６、１０５．５、１０５．４、１０３．６、９３．２、８４．７、８１．５、８１．０、８０．８、７８．０、７７．６、７７．４、７７．１、７５．５、７５．２、７４．８、７４．０、７３．６、７２．９、６３．７、６２．８、５８．９、５６．４、２５．９、２２．９
【０２４３】
１−Ｏ−β−（４−クロロベンジル）−ＬＮｎＴ
１ＨＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：７．４（ｓ、４Ｈ）、４．９（ｄ、１Ｈ）、４．７２（ｍ）、４．５２（ｄ、１Ｈ）、４．８（ｄ、１Ｈ）、４．４２（ｄ、１Ｈ）、４．１６（ｄ、１Ｈ）、４．０−３．５２（ｍ）
１３ＣＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：１３８．９、１７７．６、１３８．３、１３７．９、１３６．２、１３１．３、１０５．６、１０５．５、１０５．４、１０３．７、９３．２、８６．１、８４．７、８１．５、８１．０、８０．８、７８．０、７７．５、７７．４、７７．２、７７．１、７５．５、７５．２、７４．９、６３．７、５８．９、５７．８、５６．４、２４．８
【０２４４】
１−Ｏ−β−ベンジル−ＬＮＴ
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、４００ＭＨｚ）δ２．０３（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３ＣＯＮＨ）、３．３５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１  ８．５Ｈｚ、Ｈ−２）、３．４９（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５’’）、３．５３（ｍ、Ｈ−２’’’）、３．６５（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３’’’）、３．５７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１  ９．０Ｈｚ、Ｈ−４’’）、３．５８（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５）、３．５９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７  １０．０Ｈｚ、Ｈ−２’）、３．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ−３）、３．６３（ｍ、１Ｈ、Ｈ−４）、３．７１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５’）、３．７１（ｍ、１Ｈ、Ｈ−５’’’）、３．７３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．３  １０．０Ｈｚ、Ｈ−３’）、３．７６（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６ａｂ’’’）、３．７６（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６ａｂ’）、３．８０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６ａ’’）、３．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．０  １２．２Ｈｚ、Ｈ−６ａ）、３．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１  １０．５Ｈｚ、Ｈ−３’’）、３．９０（ｍ、１Ｈ、Ｈ−６ｂ’’）、３．９０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４  １０．５Ｈｚ、Ｈ−２’’）、３．９２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、Ｈ−４’’’）、３．９８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６  １２．２Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、４．１５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、Ｈ−４’）、４．４４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、Ｈ−１’）、４．４５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、Ｈ−１’’’）、４．５６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、Ｈ−１）、４．７３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ−１’’）、４．７６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、４．９４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ、ＣＨ２Ｐｈ）、７．４０−７．５０（ｍ、５Ｈ、Ｐｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、１００ＭＨｚ）δ２４．９（ＣＨ３ＣＯＮＨ）、５７．４（Ｃ−２’’）、６２．８（Ｃ−６）、６３．２（Ｃ−６’’）、６３．７（Ｃ−６’’’）、６３．７（Ｃ−６’）、７１．０（Ｃ−４’）、７１．２（Ｃ−４’’’）、７１．３（Ｃ−４’’）、７２．７（Ｃ−２’）、７３．４（Ｃ−２’’’）、７４．２（ＣＨ２Ｐｈ）、７５．２（Ｃ−３’’’）、７５．５（Ｃ−２）、７７．１（Ｃ−３）、７７．５（Ｃ−５’）、７７．６（Ｃ−５’’’）、７７．９（Ｃ−５）、７８．０（Ｃ−５’’）、８１．１（Ｃ−４）、８４．７（Ｃ−３’）、８４．８（Ｃ−３’’）、１０３．７（Ｃ−１）、１０５．３（Ｃ−１’’）、１０５．６（Ｃ−１’）、１０６．２（Ｃ−１’’’）、１３１．１（Ｐｈ）、１３１．４（２Ｃ、Ｐｈ）、１３１．５（２Ｃ、Ｐｈ）、１３９．２（Ｐｈ）、１７７．７（ＣＨ３ＣＯＮＨ）
融点：２４５℃（分解）
［α］Ｄ２２＝−１０．３（ｃ＝１、Ｈ２Ｏ）
【０２４５】
１−Ｏ−β−（４−メチルベンジル）−ＬＮＴ
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、３００ＭＨｚ）δ１．９７（ｓ、３Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、３．２７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１  ８．５Ｈｚ）、３．３９−３．８７（ｍ、２１Ｈ）、３．９２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．８  １２．３Ｈｚ）、４．０９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．３Ｈｚ）、４．３７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、４．３８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、４．４７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、４．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ）、４．６７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、４．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．７Ｈｚ）、７．２２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、７．３０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ、７５．４ＭＨｚ）δ２３．１、２５．０、５７．７、６２．８、６３．２、６３．７、６３．８、７１．０、７１．１、７１．３、７２．７、７３．４、７４．１、７５．２、７５．５、７７．１、７７．５、７７．６、７７．９、７８．０、８１．１、８４．７、８４．８、１０３．６、１０５．３、１０５．７、１０６．２、１３１．７（２Ｃ）、１３２．０（２Ｃ）、１３６．２、１４１．５、１７７．７
【０２４６】
＜２．トランス−シアリル化反応＞
一般的方法：２−Ｏ−（ｐ−ニトロフェニル）−α−Ｄ−シアロシド の溶液（２５μｍｏｌ）及び脱気培養緩衝液（１．０ｍｌ、１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５０ｍｇＢＳＡ、０．０２％ＮａＮ３）中の適当なシアリルアクセプター（３５μｍｏｌ）を、クルーズトリパノソーマ由来の組み換えトランスシアリダーゼ（８０μｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ）で、２３℃にて２４時間培養した。この反応は、ＴＬＣ（ブタノール／酢酸／水  ５：２：２）で観察した。反応の完了後、酵素は変性され、上清が凍結乾燥する前まで遠心分離した。乾燥残渣を、水に溶解し、水を用いたバイオゲルクロマトグラフィー（Ｐ−２  Ｂｉｏｇｅｌ、１６ｘ９００ｍｍ）、又は逆相クロマトグラフィーで精製した。収率は、４５〜８５％の間であった。
【０２４７】
４−クロロベンジル  ３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−β−ラクトシド
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝７．４６−７．４２（ｍ、４Ｈ、Ｈ（ａ／ｂ）ａｒｏｍ）；４．９１（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ａ−Ｂｎ）；４．７４（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ｂ−Ｂｎ）；４．５５−４．５２（ｍ、２Ｈ、Ｈ−１／Ｈ−１’）；４．１１（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’）；２．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ｅｑ）；２．０４（ｓ、３Ｈ、ＣＯＣＨ３）；１．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ａｘ）
Ｊ（ａ、ｂ）−Ｂｎ＝１１．８；Ｊ２’、３’＝９．９；Ｊ３’、４’＝２．９；Ｊ３’’ａｘ、３’’ｅｑ＝１２．４；Ｊ３’’ａｘ、４’’＝１２．１；Ｊ３’’ｅｑ、４’’＝４．５Ｈｚ
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６  ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝１３５．２、１３３．５（ｑｕａｒｔ．Ｃａｒｏｍ）；１３０．２（ＣＨａ−ａｒｏｍ）；１２８．６（ＣＨｂ−ａｒｏｍ）；１０２．６（Ｃ−１’）；１０１．１（Ｃ−１）；５１．７（Ｃ−５’’）；３９．６（Ｃ−３’’）；２２．０（ＣＯＣＨ３）
【０２４８】
４−メチルベンジル  ３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−β−ラクトシド
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝７．３６（ｄ、２Ｈ、Ｈ−ａａｒｏｍ）；７．２８（ｄ、２Ｈ、Ｈ−ｂａｒｏｍ）；４．８９（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ａ−Ｂｎ）；４．７２（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ｂ−Ｂｎ）；４．５４−４．５２（ｍ、２Ｈ、Ｈ−１／Ｈ−１’）；４．１２（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’）；２．７６（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ｅｑ）；２．３５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３−Ｔｏｌ）；２．０４（ｓ、３Ｈ、ＣＯＣＨ３）、１．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ａｘ）
Ｊ（ａ、ｂ）ａｒｏｍ＝７．９；Ｊ（ａ、ｂ）−Ｂｎ＝１１．５；Ｊ２’、３’＝９．９；Ｊ３’、４’＝３．０；Ｊ３’’ａｘ、３’’ｅｑ＝１２．５；Ｊ３’’、４’’＝１２．２；Ｊ３’’ｅｑ、４’’＝４．６Ｈｚ
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝１３８．８、１３３．４（ｑｕａｒｔ．Ｃａｒｏｍ）；１２９．３（ＣＨａ−ａｒｏｍ）；１２９．０（ＣＨｂ−ａｒｏｍ）；１０２．６（Ｃ−１’）；１００．９（Ｃ−１）；９９．８（Ｃ−２’’）、５１．７（Ｃ−５’’）；３９．６（Ｃ−３’’）；２２．０（ＣＯＣＨ３）；２０．２（ＣＨ３−Ｔｏｌ）
【０２４９】
２−ナフチルメチル  ３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−β−ラクトシド
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝７．９９−７．９７（ｍ、４Ｈ、Ｈ−ａｒｏｍ）；７．６２−７．５９（ｍ、３Ｈ、Ｈ−ａｒｏｍ）；５．１０（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ａ−Ｂｎ）；４．９５（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ｂ−Ｂｎ）；４．６０（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１）；４．５３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１’）；４．１２（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’）；２．７７（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ｅｑ）；２．０４（ｓ、３Ｈ、ＣＯＣＨ３）；１．８１（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ａｘ）
Ｊ（ａ、ｂ）−Ｂｎ＝１１．９；Ｊ１、２＝８．０；Ｊ１’、２’＝７．９；Ｊ２’、３’＝９．９；Ｊ３’、４’＝３．０；Ｊ３’’ａｘ、３’’ｅｑ＝１２．５；Ｊ３’’ａｘ、４’’＝１２．１；Ｊ３’’ｅｑ、４’’＝４．６Ｈｚ
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝１２８．３、１２７．９、１２７．７、１２７．６、１２６．６、１２６．５（ＣＨａｒｏｍ）；１０２．６（Ｃ−１’）；１０１．１（Ｃ−１）；５１．７（Ｃ−５’’）；２２．０（ＣＯＣＨ３）
【０２５０】
３−フェニルベンジル３’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−β−ラクトシド
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝７．７５−７．４４（ｍ、９Ｈ、Ｈ−ａｒｏｍ）；４．９９（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ａ−Ｂｎ）；４．８２（ｄ、１Ｈ、ＣＨ２ｂ−Ｂｎ）；４．５７（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１）；４．５３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１’）；４．１３（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’）；２．７８（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ｅｑ）；２．０５（ｓ、３Ｈ、ＣＯＣＨ３）；１．８２（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３’’ａｘ）
Ｊ（ａ、ｂ）−Ｂｎ＝１１．８；Ｊ１、２＝８．０；Ｊ１’、２’＝７．９；Ｊ２’、３’＝９．９；Ｊ３’、４’＝３．１；Ｊ３’’ａｘ、３’’ｅｑ＝１２．５；Ｊ３’’ａｘ、４’’＝１２．０；Ｊ３’’ｅｑ、４’’＝４．６Ｈｚ
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ［ｐｐｍ］＝１４０．９、１４０．３、１３７．５（ｑｕａｒｔ．Ｃａｒｏｍ）；１２９．４、１２９．２、１２７．９、１２７．８、１２７．１、１２７．０、１２６．９、（ＣＨａｒｏｍ）；１０２．７（Ｃ−１’）；１０１．２（Ｃ−１）；９９．６（Ｃ−２’’）；５１．８（Ｃ−５’’）；３９．７（Ｃ−３’’）；２２．１（ＣＯＣＨ３）
【０２５１】
ベンジル３’’’−Ｏ−（Ｎ−アセチル−ノイラミノシル）−β−ＬＮｎＴ
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：図３参照
【図１】
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【配列表】
2013532470000001.app
【国際調査報告】
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2013532470.tif 000078
2013532470.tif 000079
2013532470.tif 000080