(57)【要約】  ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した障害（例えば骨粗しょう症、腎不全や糖尿病性腎症）を、ＩＬ−２０受容体活性を抑制する薬剤、例えばＩＬ−２０Ｒ１への結合によりＩＬ−２０受容体を中和する抗体、ＩＬ−２０Ｒ１の発現を抑制するアンチセンス核酸、ＩＬ−２０受容体活性を阻害する小分子、またはＩＬ−１９、ＩＬ−２０もしくはＩＬ−２４のドミナントネガティブ突然変異体、を用いて治療すること。
2013525307.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した障害を治療する方法であって、ＩＬ−２０受容体の活性を抑制する剤の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
障害が、骨粗しょう症、腎不全、糖尿病性腎症、関節リウマチ、口腔がん、食道がん、乳がん、がん誘導性の骨溶解、または虚血性脳卒中である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
剤が、ＩＬ−２０受容体に結合し中和する抗体、ＩＬ−２０受容体のアンチセンス核酸、ＩＬ−２０受容体を阻害する小分子、またはＩＬ−１９、ＩＬ−２０もしくはＩＬ−２４であるサイトカインのドミナントネガティブ突然変異体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
障害が、骨粗しょう症、腎不全、または糖尿病性腎症である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
剤が、ＩＬ−２０Ｒ１に結合する抗体である、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、免疫グロブリン分子全体、その抗原結合断片、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはｓｃＦｖである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抗体が、ＩＬ−２０Ｒ１とＩＬ−１９またはＩＬ−２０との双方に結合する二重特異性抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷモノクローナル抗体の重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）と同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ７ＧＷの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体の重鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ５１Ｄの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域、を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷの重鎖可変領域および軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄの重鎖可変領域および軽鎖可変領域、を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
抗体が、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄのヒト化抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
薬剤が、ＩＬ−２０Ｒ１を標的にするアンチセンスＲＮＡである、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項１２】
アンチセンスＲＮＡが、ＩＬ−２０Ｒ１の発現を抑制するｓｉＲＮＡである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
障害が、骨粗しょう症である、請求項１、２または４に記載の方法。
【請求項１４】
抗体が、ＩＬ−２０Ｒ１に結合する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
抗体が、免疫グロブリン分子全体、その抗原結合断片、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはｓｃＦｖである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷモノクローナル抗体の重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）と同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ７ＧＷの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体の重鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ５１Ｄの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域、を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷの重鎖可変領域および軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄの重鎖可変領域および軽鎖可変領域、を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗体が、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄのヒト化抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ＩＬ−２０Ｒ１に結合する、単離された抗体であって、
該抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷモノクローナル抗体の重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）と同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ７ＧＷの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体の重鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む重鎖可変領域およびｍＡｂ５１Ｄの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域、を含む、前記抗体。
【請求項２０】
抗体が、（ｉ）ｍＡｂ７ＧＷの重鎖可変領域および軽鎖可変領域；または（ii）ｍＡｂ５１Ｄの重鎖可変領域および軽鎖可変領域、を含む、請求項１９に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
抗体が、ｍＡｂ７ＧＷもしくはｍＡｂ５１Ｄ、またはそれらの抗原結合断片である、請求項２０に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
抗体が、キメラ抗体または一本鎖抗体である、請求項１９に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
ＩＬ−２０Ｒ１に結合する、単離された抗体であって、該抗体が、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄのヒト化抗体である、前記単離された抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法(35 U.S.C.)第119条の下、2010年4月16日に出願された米国仮出願第61/324,820号の利益を主張し、該仮出願の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、組織傷害によって引き起こされる、一連の非特異的な局所的免疫応答である。一方、炎症反応は、傷害性物質（injurious agent）と傷害組織との双方を破壊、希薄化、または隔離（sequester）する働きを有することから、保護的である。他方、炎症反応は、ほとんどすべての疾患／障害において、寄与因子または疾患の症候群のいずれかとして観察される。
【０００３】
骨粗しょう症は、少ない骨量と骨組織のロスとで特徴付けられる疾患であり、骨粗しょう症によって骨が弱く、もろくなる。腎不全は、腎臓が正常に機能しない障害である。糖尿病性腎症は、長年の糖尿病に関連した進行性の腎臓の疾患である。炎症反応は、これら３つの疾患のすべてで見られる。
【０００４】
ＩＬ−２０受容体は、ダイマー複合体（dimeric complex）であるが、Ｒ１とＲ２とのサブユニット（ＲＡおよびＲＢとしても知られている）を含むものである。機能が異なる３つのサイトカイン、すなわち、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、およびＩＬ−２４の共通の受容体である。これは、ＩＬ−２０受容体が、異なるサイトカインで活性化されたとき、異なるシグナリング経路を始動させることができることを示唆している。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、ＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウス（すなわちＩＬ−２０受容体ヌルマウス)の骨粗しょう症、腎不全、および糖尿病性腎症の発症が、その対応する野生型と比較して、それほど重度ではなかったこと、ならびに、２つの抗ＩＬ−２０Ｒ１モノクローナル抗体が、破骨細胞の分化と、ＩＬ−１９に誘導されるＣＥ８１Ｔ細胞の増殖とを、首尾良く阻害したこと、という予期せぬ発見に基づいている。
【０００６】
したがって、本開示は、ＩＬ−２０受容体の活性を抑制する剤の有効量を、それを必要とする対象に投与することによって、ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した障害（例えば、骨粗しょう症、腎不全、糖尿病性腎症、関節リウマチ、口腔がん、乳がん、および食道がんなどのがん、がん誘導性の骨溶解、ならびに虚血性の再かん流または脳卒中）を治療する方法を提供するものである。前記剤は、ＩＬ−２０受容体に結合し中和する抗体、ＩＬ−２０受容体のアンチセンス核酸、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、もしくはＩＬ−２４のドミナントネガティブ突然変異体、またはＩＬ−２０受容体の活性を阻害する小分子であり得る。ＩＬ−２０受容体を中和する（すなわち、ＩＬ−２０受容体に結合し、該受容体を介するシグナル伝達を遮断する）ことができる抗体は、ＩＬ−２０Ｒ１抗体であり得る。それは、免疫グロブリン全体、その抗原結合断片、または遺伝子操作された抗体（例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体）であり得る。
【０００７】
いくつかの態様において、本明細書で開示されている治療で使用される抗ＩＬ−２０Ｒ１抗体は、ｍＡｂ７ＧＷモノクローナル抗体、ｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体、それらの抗原結合断、または機能的にそれらと均等なものである。抗ＩＬ−２０Ｒ１抗体は、（ａ）ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体の重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）と同じものを含む重鎖可変領域、および（ｂ）ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄの軽鎖可変領域のＣＤＲと同じものを含む軽鎖可変領域を有することができる。一例において、それは、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄと同じ重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【０００８】
ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄ抗体、それらの抗原結合断片ならびに機能的な均等物も、本開示の範囲内である。ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄの機能的な均等物には、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄと同じ重鎖と軽鎖とのＣＤＲを有する抗体が含まれる。いくつかの態様において、これらの機能的な均等物は、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄに由来する遺伝子操作された抗体、例えば、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはヒト化抗体である。
【０００９】
アンチセンス核酸は、ＩＬ−２０Ｒ１を標的にするアンチセンスＲＮＡ、例えば、ＲＮＡ干渉を介してＩＬ−２０Ｒ１の発現を抑制するｓｉＲＮＡまたはマイクロＲＮＡであり得る。
本明細書で使用される用語「治療する」とは、ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した障害／疾患、該疾患／障害の兆候、もしくは該疾患／障害になりやすい傾向を、癒す、修復する、軽減する、緩和する、変更する、救済する、改善する、向上する、または影響を及ぼす目的で、１種もしくは２種以上の活性剤を含む組成物を対象に塗布または投与することをいい、前記対象は、前記疾患／障害、前記疾患／障害の兆候、または前記疾患／障害になりやすい傾向を有する。
【００１０】
（ａ）ＩＬ−２０受容体を介する障害（例えば、骨粗しょう症、腎不全、糖尿病性腎症、口腔がんおよび乳がんなどのがん、関節リウマチ、ならびにがん誘導性の骨溶解）の治療に使用するための、ＩＬ−２０受容体活性を抑制する１種または２種以上の剤を含む医薬組成物、ならびに（ｂ）前記に掲載された治療のための医薬の製造におけるそれらの使用もまた、この開示の範囲内である。
【００１１】
本開示の１種または２種以上の態様の詳細を以下に説明する。本開示の他の特徴または利点は、下記図面およびいくつかの例の詳細な説明から、そして添付の請求項からも、明らかになるだろう。
まずは図面から説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスの末梢血単核細胞におけるＩＬ−１０の誘導を示すグラフである。
【図２】図２は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスにおける、ＯＶＸで誘導した骨粗しょう症の骨量のロスを示す図である。パネルａ：ＯＶＸマウスの脛骨における骨ミネラル密度（それぞれのタイプのマウスに対してｎ＝５）。パネルｂ：ＴＲＡＰ染色切片における骨表面あたりの破骨細胞数（それぞれのタイプのマウスに対してｎ＝５）。数値は平均±標準偏差である。データは、３回の独立した実験の代表である。
【００１３】
【図３】図３は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスにおける腎不全の重症度を示す図である。パネルＡ：ＨｇＣｌ２で処置したＩＬ−２０Ｒ１＋／＋（ｎ＝５）、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−（ｎ＝５）、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−（ｎ＝５）マウスの血清ＢＵＮレベルを３日目に分析した。数値は平均±標準誤差である。Ｐ＜０．０１を、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較した。パネルＢ：４日後にＨｇＣｌ２で処置した、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋（ｎ＝５）、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−（ｎ＝５）、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−（ｎ＝５）マウスの尿細管細胞の損傷した面積の定量分析。数値は平均±標準誤差である。＊Ｐ＜０．０５をＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較した。
【００１４】
【図４】図４は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスにおけるＳＴＺで誘導した糖尿病性腎症の重症度を示す図である。パネルＡ：血中グルコースレベル。パネルＢ：生存率。パネルＣ：ＳＴＺ処置後４９日目の血清ＢＵＮレベル。パネルＤ：ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウス（ｎ＝７）、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−マウス（ｎ＝７）、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−（ｎ＝５）マウスにおけるＳＴＺ処置後６日目および４９日目に決定された糸球体の面積。数値は平均±標準誤差である。＊Ｐ＜０．０５をＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較した。生理食塩水緩衝液で処置したマウスをコントロールとして使用した。
【００１５】
【図５】図５は、ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体による、破骨細胞の分化の阻害を示すグラフである。
【図６】図６は、ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体による、ヒト食道がん細胞（ＣＥ８１Ｔ細胞）のＩＬ−１９誘導性増殖の阻害を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
本明細書には、ＩＬ−２０受容体活性を抑制する剤を使用して、ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した対象の障害を治療する方法が記載されている。いくつかの態様において、該障害は、過剰なＩＬ−２０受容体を介するシグナリングに関する。かかる障害としては、限定されずに、骨粗しょう症（エストロゲン欠乏、閉経、または炎症に誘導される骨粗しょう症を含む）、腎不全（例えば急性の腎不全または慢性の腎臓病)、糖尿病性腎症、がん（例えば、口腔がん、食道がん、および乳がん）、関節リウマチ、がん（例えば、骨転移を伴う、乳がん、前立腺がん、肺がん、腎細胞がん、骨巨細胞腫、または多発性骨髄腫）に誘導される骨溶解、ならびに虚血性再かん流（脳卒中）が挙げられる。本明細書で使用される用語「ＩＬ−２０受容体」は、サブユニットであるＩＬ−２０Ｒ１とＩＬ−２０Ｒ２との二分子から形成される複合体を指す。ヒトのＩＬ−２０Ｒ１とＩＬ−２０Ｒ２とのサブユニットはそれぞれ、NP_055247（タンパク質）／NM_014432.2（ｍＲＮＡ）およびNP_653318（タンパク質）／NM_144717（ｍＲＮＡ）のＧｅｎＢａｎｋ受入番号で開示されている。
【００１７】
ＩＬ−２０受容体活性を抑制する剤は、（ｉ）例えばＩＬ−２０Ｒ１への結合を介してＩＬ−２０受容体活性を中和する抗体、（ii）ＩＬ−２０受容体サブユニットの一つに対するアンチセンス核酸、（iii）ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、もしくはＩＬ−２４のドミナントネガティブ突然変異体、または（iv）ＩＬ−２０受容体を阻害する小分子、であり得る。
【００１８】
（ｉ）ＩＬ−２０受容体の中和抗体
ＩＬ−２０受容体の活性を中和する抗体は、該受容体に結合（すなわち、Ｒ１またはＲ２のいずれかのサブユニットに結合）することができ、該受容体を介するシグナル伝達を抑制する（例えばＩＬ−２０受容体を介するシグナリングを、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上低減する）ことができる。本明細書で使用される用語「抗体」には、完全な免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＭ）、その抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、およびＦｖ）、ならびに遺伝子操作された抗体分子（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ｓｃＦｖ（一本鎖抗体）、ｄＡｂ（ドメイン抗体；Ward, et. al. (1989) Nature, 341: 544を参照）、および二重特異性抗体）が包含される。
【００１９】
本明細書で記載の治療で使用される抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであり得る。「モノクローナル抗体」とは、均質(homogenous)な抗体の集団をいい、「ポリクローナル抗体」とは、不均質(heterogenous)な抗体の集団をいう。これら二つの用語は、抗体の供給源やそれが作製されたやり方に限定されない。
【００２０】
一例において、ＩＬ−２０受容体を中和する抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体には、抗原結合に関与する領域／残基（例えば相補性決定領域、特にその特異性決定残基）が非ヒト免疫グロブリン（すなわちドナー抗体）由来のそれらに置換されたヒト免疫グロブリン（すなわちレシピエント抗体）が含まれる。抗体の重鎖および軽鎖の領域／残基を同定する方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)；およびChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987) を参照。いくつかの場合において、レシピエント抗体のフレームワーク領域内の１または２以上の残基も、ドナー抗体由来のそれらに置換されている。ヒト化抗体には、レシピエント抗体およびドナー抗体のいずれに由来する残基も含まれなくてもよい。抗体の性能をさらに洗練、最適化するためには、これらの残基も含まれる。
【００２１】
いくつかの態様において、ＩＬ−２０受容体を中和する抗体は、ｍＡｂ７ＧＷもしくはｍＡｂ５１Ｄモノクローナル抗体、その抗原結合断片、またはｍＡｂ７ＧＷもしくはｍＡｂ５１Ｄいずれかの機能的な均等物である。ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列、ならびにそれらをコードするヌクレオチド配列を以下に示す。
【００２２】
ｍＡｂ７ＧＷの重鎖：
アミノ酸配列（配列番号１）
【化１】
2013525307.tif 000003
（斜字体の領域は重鎖定常領域を指す。）
【００２３】
ヌクレオチド配列（配列番号２）
【化２】
2013525307.tif 000004
（斜字体の領域は重鎖定常領域をコードする。）
【００２４】
ｍＡｂ７ＧＷの軽鎖：
アミノ酸配列（配列番号３）
【化３】
2013525307.tif 000005
（斜字体の領域は軽鎖定常領域を指す。）
【００２５】
ヌクレオチド配列（配列番号４）
【化４】
2013525307.tif 000006
（斜字体の領域は軽鎖定常領域をコードする。）
【００２６】
ｍＡｂ５１Ｄの重鎖：
アミノ酸配列（配列番号５）
【化５】
2013525307.tif 000007
（斜字体の領域は重鎖定常領域を指す。）
【００２７】
ヌクレオチド配列（配列番号６）
【化６】
2013525307.tif 000008
（斜字体の領域は重鎖定常領域をコードする。）
【００２８】
ｍＡｂ５１Ｄの軽鎖：
アミノ酸配列（配列番号７）
【化７】
2013525307.tif 000009
（斜字体の領域は軽鎖定常領域を指す。）
【００２９】
ヌクレオチド配列（配列番号８）
【化８】
2013525307.tif 000010
（斜字体の領域は軽鎖定常領域をコードする。）
【００３０】
ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄの機能的な均等物は、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄと同じエピトープに結合する特異性を有し、かつ、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄと比較して、ＩＬ−２０受容体を中和する活性の少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）を呈する。いくつかの態様において、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄの機能的な均等物には、抗原結合に関与する、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄと同じ領域／残基（前記ＣＤＲまたは前記ＣＤＲ全体の同じ特異性決定残基など）が含まれる。当該技術分野において知られた方法により、ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄの重鎖／軽鎖配列のアミノ酸配列（前記に示した）から、抗原結合に関与する領域／残基を同定することができる。例えば、www.bioinf.org.uk/abs；Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)；およびChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987) を参照。ｍＡｂ７ＧＷまたはｍＡｂ５１Ｄの機能的な均等物は、該モノクローナル抗体の一つに由来する遺伝子操作された抗体（例えば、キメラ、一本鎖、またはヒト化）であり得る。
【００３１】
他の一例において、ＩＬ−２０受容体を中和する抗体は、ＩＬ−２０Ｒ１と、ＩＬ−１９およびＩＬ−２０のうちの一つとの双方に結合することができる二重特異性抗体である。かかる二重特異性抗体には、２つの重鎖−軽鎖の対、ＩＬ−２０Ｒ１に結合する一対とサイトカインの一種に結合する他の一対が含まれる。
モノクローナルおよびポリクローナル抗体ならびにその断片を動物で作製する方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照。
【００３２】
一般に、タンパク質（例えばＩＬ−２０Ｒ１もしくはＩＬ−２０Ｒ２）に対する抗体を産生するには、該タンパク質またはその断片を、任意に担体タンパク質（ＫＬＨなど）に連結させて、アジュバントとともに混合し、宿主動物に注射することができる。該動物で産生された抗体は、その後、ペプチド親和性クロマトグラフィにより精製することができる。一般的に使用される宿主動物としては、ウサギ、マウス、モルモット、およびラットが挙げられる。免疫応答を増大させるのに使用することができる様々なアジュバントは、宿主種によって決まり、フロイントアジュバント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムなどのゲル状鉱物(mineral gel)、ＣｐＧ、リゾレシチンなどの界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイル、エマルション、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノールが挙げられる。有用なヒトアジュバントとしては、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびCorynebacterium parvumが挙げられる。
【００３３】
ポリクローナル抗体は、免疫対象の血清中に存在する。モノクローナル抗体は、標準的なハイブリドーマ技術（例えば、Kohler et al. (1975) Nature 256, 495；Kohler et al. (1976) Eur. J. Immunol. 6, 511；Kohler et al. (1976) Eur J Immunol 6, 292；およびHammerling et al. (1981) Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, Elsevier, N.Y.）を使用して調製できる。特に、モノクローナル抗体は、Kohler et al. (1975) Nature 256, 495および米国特許第4,376,110号などに記載の培養下の連続細胞株；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kosbor et al. (1983) Immunol Today 4, 72；Cole et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 2026）；および、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Cole et al. (1983) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96）による抗体分子の産生を提供する任意の技術により得られる。このような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤを含む免疫グロブリンクラスのいずれか、およびそれらのサブクラスのいずれかであり得る。本明細書に開示されているモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養してもよい。インビボにおいて高力価のモノクローナル抗体を産生する能力によって、特に有用な産生方法となる。
【００３４】
ＩＬ−２０Ｒ１またはＩＬ−２０Ｒ２のいずれかに特異的な抗体を入手した後、それらのＩＬ−２０受容体の中和能を、所定のやり方で決定することができる。例えば、末梢血の単核細胞においてＩＬ−１９により誘導されたＩＬ−１０の分泌レベルは、ＩＬ−２０受容体活性の指針として使用できる。下記の例１を参照。一例において、ＩＬ−２０受容体活性は、腎上皮細胞におけるＩＬ−１９で誘導されたカスパーゼ３およびカスパーゼ９の開裂を調べることによって決定する。ＩＬ−２０受容体に特異的に結合し、その活性を抑制する（すなわちＩＬ−２０受容体を中和する）抗体は、本明細書に開示された方法における使用のために、選択される。
【００３５】
今言及したＩＬ−２０受容体を中和する抗体の抗原結合断片は、所定の方法を介して調製できる。例えば、Ｆ(ａｂ’)２断片は、抗体分子のペプシン消化により産生でき、Ｆａｂ断片は、Ｆ(ａｂ’)２断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成することができる。
【００３６】
ＩＬ−２０受容体を中和する抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、および一本鎖抗体を含む遺伝子操作された抗体を調製するための基盤としても使用することができる。「キメラ抗体」産生のために開発された技術を使用することができる。例えば、Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 6851；Neuberger et al. (1984) Nature 312, 604；およびTakeda et al. (1984) Nature 314:452を参照。キメラ抗体とは、別の部分が別の動物種に由来する分子、例えば、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有するものである。抗体は、当該技術分野において知られた方法により、ヒト化することもできる。例えば、所望の結合特異性を有するモノクローナル抗体は、商業的にヒト化することが可能である。
【００３７】
完全なヒト抗体、例えばトランスジェニック動物で発現されたものも、この開示の特徴である（例えば、Green et al. (1994) Nature Genetics 7, 13；ならびに米国特許第5,545,806号および第5,569,825号を参照）。代わりに、完全なヒト抗体は、抗原（例えばＩＬ−２０Ｒ１）に対して、ヒト抗体ライブラリ（例えばファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリ）をスクリーニングすることによって、入手することができる。
【００３８】
一本鎖抗体は、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列とを繋ぐことによる組み換え技術を介して調製することができる。好ましくは、曲がりやすいリンカーを２つの可変領域の間に組み込む。代わりに、ファージｓｃＦｖライブラリを生成するために、一本鎖抗体の産生について説明している技術（米国特許第4,946,778号および第4,704,692号）を適合させることができ、ＩＬ−２０Ｒ１またはＩＬ−２０Ｒ２に特異的なｓｃＦｖクローンを、所定の手順に続いて該ライブラリから同定することができる。ＩＬ−２０受容体活性を抑制するものを同定するために、陽性のクローンを、さらなるスクリーニングに供することができる。
【００３９】
（ii）ＩＬ−２０受容体のアンチセンス核酸
ＩＬ−２０受容体のアンチセンス核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであるが、ＩＬ−２０Ｒ１またはＩＬ−２０Ｒ２の遺伝子（センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれか）と塩基対を形成することができ、それによって、その発現が抑制される。好ましくは、該オリゴヌクレオチドは、最大長が１５０（例えば、１００、８０、６０、または４０）ヌクレオチドである。
【００４０】
アンチセンス核酸は、ＲＮＡ干渉を介してＩＬ−２０Ｒ１またはＩＬ−２０Ｒ２の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であり得る。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、ｄｓＲＮＡがメッセンジャーＲＮＡの相同配列特異的分解に向かう工程である。哺乳動物細胞において、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である21ヌクレオチド二重鎖は、その宿主のインターフェロン応答を活性化せずに、ＲＮＡｉを引き起こすことができる。本明細書に開示されている方法に使用されるｄｓＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ（解離した２つの相補的なＲＮＡ鎖を含む）または低分子ヘアピン型ＲＮＡ（すなわち締まったヘアピン構造を形成するＲＮＡ鎖）であり得る。いずれも、標的遺伝子の配列に基づき設計することができる。代わりに、それはマイクロＲＮＡであり得る。
【００４１】
好ましくは、前記アンチセンス核酸には、天然に存在しない核酸塩基、糖、またはヌクレオシド内の共有結合（主鎖）が含まれる。かかる修飾オリゴヌクレオチドには所望の特性があり、例えば、細胞内取込みの増強、標的核酸との親和性の向上、およびインビボでの安定性の上昇である。
【００４２】
一例において、アンチセンス核酸は修飾された主鎖を有し、該主鎖は、リン原子を保持するもの（例えば、米国特許第3,687,808号；第4,469,863号；第5,321,131号；第5,399,676号；および第5,625,050号を参照）と、リン原子を持たないもの（例えば、米国特許第5,034,506号；第5,166,315号；および第5,792,608号を参照）とを含む。リンを含む修飾された主鎖の非限定例としては、ホスホロチオエート、キラルなホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、３'−アルキレンホスホネートと５'−アルキレンホスホネートとキラルなホスホネートとを含むメチルホスホネートおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３'−アミノホスホロアミデートとアミノアルキルホスホロアミデートとを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、３'−５'連結または２'−５'連結を有するセレノホスフェートおよびボラノホスフェートが挙げられる。かかる主鎖には、方向性が反転したもの、すなわち、３'と３'、５'と５'、または２'と２'の連結も含まれる。リン原子を含まない修飾された主鎖は、ヌクレオシド間の短鎖アルキルもしくはシクロアルキルの連結、ヌクレオシド間の、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルとが混合された連結、あるいはヌクレオシド間の、１種もしくは２種以上の短鎖ヘテロ原子のまたは複素環の連結によって形成されている。このような主鎖としては、モルホリノ連結を有するもの（ヌクレオシドの糖部分から一部形成されている）；シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン主鎖；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；リボアセチル主鎖；アルケンを含む主鎖；スルファメート主鎖；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖；スルホネートおよびスルホンアミド主鎖；アミド主鎖；ならびに、Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２の構成部分が混合した他のものが挙げられる。
【００４３】
他の一例として、開示された方法に使用されるアンチセンス核酸には、１種または２種以上の置換された糖部分が含まれる。かかる置換された糖部分は、それら２’の位置で、以下の基を１つ含むことができる：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ−アルケニル；Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ−アルキニル、およびＯ−アルキル−Ｏ−アルキル。これらの基において、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。それらはまた、２’の位置で、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ開裂基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬理動態特性を向上する基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学特性を向上する基を含んでもよい。好ましい置換糖部分としては、２'−メトキシエトキシ、２'−ジメチルアミノオキシエトキシ、および２'−ジメチルアミノエトキシエトキシが挙げられる。Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504を参照。
【００４４】
さらなる他の一例として、アンチセンス核酸には、１種または２種以上の修飾された天然の核酸塩基（すなわち、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、およびウラシル）が含まれる。修飾された核酸塩基としては、米国特許第3,687,808号；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. I., ed. John Wiley & Sons, 1990；Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613；およびSanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289-302, CRC Press, 1993に記載されているものが挙げられる。これら核酸塩基のいくつかは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの、その標的核酸に対する結合親和性を上昇させるのに特に有用である。これらとしては、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピル−アデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシン）が挙げられる。Sanghvi, et al., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278を参照。
【００４５】
アンチセンス核酸のいずれも、当該技術分野において知られた方法により合成することができる。例えば、Caruthers et al., 1992, Methods in Enzymology 211, 3-19；Wincott et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23, 2677-2684；Wincott et al., 1997, Methods Mol. Bio. 74, 59；Brennan et al., 1998, Biotechnol Bioeng., 61, 33-45；およびBrennan、米国特許第6,001,311号を参照。それは、発現ベクターから転写され、標準技術を使用して単離することもできる。
【００４６】
（iii）ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、またはＩＬ−２４のドミナントネガティブ突然変異体
ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、またはＩＬ−２４のドミナントネガティブ突然変異体は、その野生型と同等物の受容体への結合活性は保持しているが、ＩＬ−２０受容体の活性化が弱くなっているか、または該受容体の活性化能がない。いくつかの態様において、該ドミナントネガティブ突然変異体は、ＩＬ−２０受容体の活性が、その野生型と同等物に比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低い。よって、このような突然変異体は、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、または ＩＬ−２４の受容体への結合により引き起こされるシグナリング経路を遮断することができる。典型的には、該突然変異体は、これら野生型のサイトカインと少なくとも７０％（例えば、８０％、８５％、９０％、および９５％）の配列同一性を有する。
【００４７】
二つのアミノ酸配列の「パーセント同一性」は、Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993に記載されているように修正された、Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990に記載のアルゴリズムを使用して決定される。このようなアルゴリズムは、Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990に記載のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、着目するタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワードレングス＝３で、実行することができる。二つの配列間にギャップが存在する場合、Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997に記載されているようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラム（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。
【００４８】
前記のドミナントネガティブ突然変異体は、受容体の活性化に関与するＩＬ−１９（例えばＧｅｎＢａｎｋ受入番号AF453946；16-OCT-2002）、ＩＬ−２０（例えばＧｅｎＢａｎｋ受入番号AF224266；24-JAN-2001、もしくはNM_018724；05-APR 2010）、またはＩＬ−２４（例えばＧｅｎＢａｎｋ受入番号BC009681；6-Apr 2010）のある位置に1種あるいは2種以上の突然変異を導入することによって調製することができる。
【００４９】
（iv）ＩＬ−２０受容体を阻害する小分子
ＩＬ−２０受容体活性を阻害する小分子は、典型的には、２，０００ｋＤaの分子量を有する。このような小分子は、当該技術分野において知られた任意の方法によりスクリーニングすることができる。代表的な一例は次の通りである。サイトカイン−受容体の結合を可能とする好適な条件下で、ＩＬ−２０受容体をディスプレイする細胞を、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、またはＩＬ−２４の存在下で試験化合物とともにインキュベートする。好適な時間が経過した後、培地を回収し、サイトカインが受容体に結合することにより誘導を可能とする分子（例えば、ＩＬ−１９に応答するＩＬ−１０、またはＩＬ−２０に応答するＴＮＦ−アルファ）のレベルを決定するために試験を行う。試験化合物の存在下で前記分子の分泌レベルが低下することは、該化合物がＩＬ−２０受容体活性を阻害することを示している。
【００５０】
前述の小分子は、化合物ライブラリから得られる。該ライブラリは、空間的にアドレス可能な並列の固相または液相ライブラリであり得る。例えば、Zuckermann et al. J. Med .Chem. 37, 2678-2685, 1994；およびLam Anticancer Drug Des. 12:145, 1997を参照。化合物ライブラリの合成方法は当該技術分野において周知であり、例えば、DeWitt et al. PNAS USA 90:6909, 1993；Erb et al. PNAS USA 91:11422, 1994；Zuckermann et al. J. Med. Chem. 37:2678, 1994；Cho et al. Science 261:1303, 1993；Carrell et al.  Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33:2059, 1994；Carell et al. Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061, 1994；およびGallop et al. J. Med. Chem. 37:1233, 1994。化合物のライブラリは、溶液中（例えばHoughten Biotechniques 13:412-421, 1992）、またはビーズ上（Lam Nature 354:82-84, 1991）、チップ上（Fodor Nature 364:555-556, 1993）、細菌上（米国特許第5,223,409号）、孔上（米国特許第5,223,409号）、プラスミド上（Cull et al. PNAS USA 89:1865-1869, 1992）、もしくはファージ上（Scott and Smith Science 249:386-390, 1990；Devlin Science 249:404-406, 1990；Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382, 1990；Felici J. Mol. Biol. 222:301-310, 1991；および米国特許第5,223,409号）に存在していてもよい。
【００５１】
必要とする対象（例えば以下３つの疾患のいずれかで苦しむヒト患者）の骨粗しょう症、腎不全、または糖尿病性腎症の治療において使用するための医薬組成物を形成するために、前記薬物の１種または２種以上を、薬学的に許容し得る担体とともに混合することができる。「許容し得る」とは、前記担体が、前記組成物の活性成分と相溶可能でなければならず（そして任意に活性成分を安定化することができ）、かつ、治療される対象にとって有毒ではないことを意味する。好適な担体としては、微結晶性セルロース、マンニトール、グルコース、脱脂乳粉末、ポリビニルピロリドン、およびデンプン、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００５２】
本明細書に開示されている治療を実行するために、前記医薬組成物の有効量を、該治療が必要な対象（例えばヒト）に、好適な経路を介して投与することができる。治療を必要とするヒトである対象は、ＩＬ−２０受容体を介するシグナリング経路に関連した障害を有する（そのリスクがある）か、または有することを疑われるヒトの患者であってもよい。かかる患者は、所定の健康診断により同定することができる。
【００５３】
本明細書で使用される「有効量」とは、対象に治療効果をもたらすのに必要なそれぞれの活性剤の量を指し、該活性剤は、単独で、または１種もしくは２種以上の他の活性剤と併用する。当業者に認識されているとおり、治療される特定の疾患、該疾患の重症度、年齢、体調、体格、性別および体重を含む個々の患者のパラメータ、該治療の期間、併用療法（もしあれば）の性質、投与の特別な経路ならびに医療関係者の知識および見解に含まれる同様な要因に応じて、有効量は変化する。これらの要因は、当業者に周知であり、所定の実験程度で対処することができる。個々の成分またはそれらの組み合わせの最大投与量を使用することが一般に好ましく、すなわち、妥当な医学的判断に従う最高の安全投与量である。しかしながら、医学的な理由、心理学的な理由、または実際上の任意の他の理由から、患者がより少ない投与量または許容投与量を要求してもよいことを、当業者には理解されているだろう。
【００５４】
いくつかの態様において、ＩＬ−２０受容体の活性を抑制する剤を、ＩＬ−２０受容体を介するシグナリングのレベルを少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上）低減させるのに十分な量で、治療を必要とする対象に投与する。
【００５５】
従来の方法は、医薬の当業者には知られているが、治療される疾患のタイプや該疾患の部位に応じて、対象に医薬組成物を投与するために使用することができる。この組成物は、他の従来の経路を介して投与、例えば、経口で、非経口で、吸入噴霧で、局所的に、直腸内に、経鼻的に、口腔に、経膣的に、または埋め込み形タンクを介して、投与することもできる。本明細書で使用される用語「非経口」には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、および頭蓋内の注射または点滴の技術が含まれる。さらに、１、３、もしくは６ヶ月のデポー(depot)注射可能の、または生分解性の材料および方法を使用するなどして、注射可能のデポー(depot)経路の投与を介して対象にそれを投与することもできる。
【００５６】
注射可能の組成物には、植物油、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、およびポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、液体のポリエチレングリコール等）などの様々な担体が含まれてもよい。静脈内注射では、ドリップ方法により水溶性の抗体を投与することができ、それによって、該抗体と生理学的に許容し得る賦形剤とを含む医薬製剤が点滴される。生理学的に許容し得る賦形剤としては、例えば、５％ブドウ糖、０．９％生理食塩水、リンガー溶液、または他の好適な賦形剤を挙げてもよい。筋肉内調製物、例えば抗体の好適な可溶性塩形態の滅菌製剤は、Water-for-Injection、０．９％生理食塩水、または５％グルコース溶液などの医薬賦形剤中に溶解し、投与することができる。
【００５７】
ＩＬ−２０受容体のアンチセンス核酸を使用する場合、例えばAkhtar et al., 1992, Trends Cell Bio. 2, 139に記載されている方法により、対象に、その核酸またはそれを発現しているベクターを送達することができる。例えば、リポソーム、ヒドロゲル、シクロデキストリ、生分解性ナノカプセル、または生体接着性ミクロスフェアを使用して細胞内にそれを導入することができる。代わりに、直接注射により、または点滴ポンプの使用により、核酸またはベクターを局所的に送達することができる。他のやり方には、例えば接合体や生分解性重合体の使用を介して、様々な輸送システムおよび担体システムを採用することが含まれる。
【００５８】
送達を容易にするために、ＩＬ−２０受容体を抑制する剤のいずれも、シャペロン剤(shaperon agent)と接合することができる。本明細書で使用される「接合される」とは、好ましくは二つの実体の間の結びつきからなる治療的有用性が認識されるのに十分な親和性をもって、該二つの実体が結びつくことを意味する。接合される、には、共有結合または非共有結合、および結びつきの他の形態、例えば一方の実体上または内への他方の捕捉や、第三の実体（例えばミセル）上もしくは内へのいずれか一方または双方の捕捉、が含まれる。
【００５９】
シャペロン剤は、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、低比重リポタンパク質、もしくはグロブリン）、炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、もしくはヒアルロン酸）、または脂質などの、天然に存在する物質であり得る。それはまた、組み換え分子または合成重合体などの合成分子（例えば合成ポリアミノ酸）でもあり得る。ポリアミノ酸の例としては、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン−無水マレイン酸の共重合体、ポリ(Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)の共重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸の共重合体、Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミドの重合体（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ(２−エチルアクリル酸)、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド重合体、およびポリホスファゼンが挙げられる。
【００６０】
一例において、シャペロン剤は、ミセル、リポソーム、ナノ粒子、またはミクロスフェアであり、これらにはオリゴヌクレオチド／干渉ＲＮＡが封入される。かかるミセル、リポソーム、ナノ粒子、またはミクロスフェアを調製する方法は、当該技術分野において周知である。例えば、米国特許第5,108,921号；第5,354,844号；第5,416,016号；および第5,527,5285号を参照。
他の一例として、シャペロン剤は、１種もしくは２種以上の融合誘導剤または縮合剤に付着するための物質として働く。
【００６１】
融合誘導剤は局所的なｐＨに応答する。例えば、エンドソーム内でｐＨに遭遇すると、それは、その現在置かれている環境で物理的変化（例えばエンドソーム膜の透過性を妨害するかまたは増大させる浸透圧特性における変化）を引き起こし、それによって、宿主細胞の細胞質へのアンチセンスオリゴヌクレオチドの放出が容易になる。好ましい融合誘導剤は、例えば生理学的レンジより低いｐＨで（例えばｐＨ４．５〜６．５で）プロトン化されるようになる電荷を変化させる。融合誘導剤は、特定のｐＨレンジに晒されたときに電荷の変化（例えばプロトン化）を生じさせることができるアミノ基を含む分子であり得る。かかる融合誘導剤としては、ポリアミノ鎖を有する重合体（例えばポリエチレンイミン）および膜破壊剤（例えばメリチン）が挙げられる。他の例としては、ポリヒスチジン、ポリイミダゾール、ポリピリジン、ポリプロピレンイミン、およびポリアセタール物質（例えばカチオン性ポリアセタール）が挙げられる。
【００６２】
縮合剤はアンチセンスオリゴヌクレオチドと相互作用し、それを濃縮させる（例えばオリゴヌクレオチドの大きさを小さくする）ことによって、それが分解から保護される。好ましくは、縮合剤には、例えばイオン相互作用を介して、オリゴヌクレオチドと相互作用する部分（例えば帯電した部分）が含まれる。縮合剤の例としては、ポリリシン、スペルミン、スペルミジン、ポリアミンまたはその第四級塩、擬ペプチド−ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、およびアルファへリックスのペプチドが挙げられる。
【００６３】
さらに詳細な説明をせずとも、当業者は、前記説明に基づき、最大限に本開示を利用することができるものと考えられる。したがって、以下の具体的な態様は、単なる例示として解釈すべきであり、いかなることがあっても以下の開示を限定するものではない。本明細書中で引用したすべての刊行物は、本明細書で参照される目的または主題に対し、参照によって組み込まれる。
【実施例】
【００６４】
例１：ＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウスにおける骨粗しょう症の骨量ロスの軽減
ＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウスを生み出すために、従来の相同組み換え技術により、マウスＩＬ−２０Ｒ１遺伝子のエキソン２を欠失させた。エキソン２の３’末端にハイブリダイゼーション可能なＤＮＡプローブを使用するサザンブロットで、エキソン２の欠失を確認した。
【００６５】
ＩＬ−２０受容体の発現を決定するために、免疫共沈降分析により、ＩＬ−２０Ｒ１の野生型（＋/＋）、ヘテロ接合体（＋/−）、およびノックアウト（−/−）のマウスの肺組織を調べた。簡単に言うと、ＩＬ−２０／ＩＬ−２０受容体の結合を可能にする好適な条件下で、肺組織の溶解物をＨｉｓで標識したＩＬ−２０とともにインキュベートした。その後、溶解物を抗Ｈｉｓ標識抗体とともにインキュベートし、その結果得られたペレットを、ＩＬ−２０、ＩＬ−２０Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２、およびＩＬ−２２Ｒ１の有無を検出するために、これらのタンパク質に特異的な抗体を使用して、免疫ブロット法により分析した。ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスの肺溶解物からはＩＬ−２０Ｒ１タンパク質が検出されなかった。これは、ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスがＩＬ−２０Ｒ１を発現していないことを示している。
【００６６】
ＩＬ−２０Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２受容体ヘテロ二量体にしか結合しないＩＬ−１９を、ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスから単離された細胞に機能的なＩＬ−２０Ｒ１タンパク質がないことを確認するために、使用した。ＩＬ−１９が二量体の受容体に結合することによって、ＩＬ−１０の発現が刺激される。
ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスから、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製し、ＩＬ−１９で処置した。処置した細胞から分泌されたＩＬ−１０のレベルを、ＥＬＩＳＡで決定した。ＩＬ−２０Ｒ１＋／−およびＩＬ−２０Ｒ１−／−のいずれのマウスから単離された細胞においてではなく、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスから単離された細胞において、ＩＬ−１０の誘導が観察されたことを、この研究で得られた結果が示している。図１を参照。これは、ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスには機能的なＩＬ−２０受容体が発現されなかったことを、実証している。
【００６７】
骨粗しょう症発症に対するＩＬ−２０Ｒ１欠損の影響を調べるために、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスを、閉経後の骨粗しょう症を誘導するためのペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ体重；Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）を使用する全身麻酔下で、背側の卵巣摘出に供した。卵巣が摘出されたマウス（ＯＶＸマウス）を、それらの骨ミネラル密度を決定するために、ミクロＣＴ分析で調べた。ＩＬ−２０Ｒ１−／−のＯＶＸマウスの骨ミネラル密度は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋のＯＶＸマウスのそれより大いに高かった。図２のパネルａを参照（Ｐ＜０．０５）。さらに、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較して、ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスでは、破骨細胞（ＯＣ）数が有意に低減していた。図２のパネルｂを参照。ＩＬ−２０Ｒ１−／−のＯＶＸマウスと比べて、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋のＯＶＸマウスでは、骨量（ＢＶ/ＴＶ、％）、骨梁の厚さ（Ｔｂ．Ｔｈ、μｍ）、および骨梁の数（Ｔｂ．Ｎ、1/ｍｍ）が有意に減少していたことが卵巣摘出により引き起こされていたことを、骨の組織形態計測的なパラメータの分析が示していた。ＩＬ−２０Ｒ１−／−のＯＶＸマウスはまた、骨梁の分離（Ｔｂ．Ｓｐ、ｎｍ）レベルが、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋のＯＶＸマウスより低下していたことも示した（Ｐ＜０．０５）。ＩＬ−２０Ｒ１のノックアウトによりＩＬ−２０受容体活性を取り除くことによって、マウスの骨粗しょう症の発症が防御されることを、この結果が示した。
【００６８】
例２：ＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウスにおけるＨｇＣｌ２に誘導される腎不全の重症度の軽減
Li HH, et al., Genes Immun. 2008 Jul; 9(5):395-404に記載の方法に従って、前記のＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスを、急性腎不全（ＡＲＦ）を誘導するＨｇＣｌ２処置に供した。
【００６９】
典型的に、ＨｇＣｌ２処置マウスが、上昇したＢＵＮレベルと尿細管損傷とを示した。双方とも腎機能障害の指針となっている。この研究において、ＨｇＣｌ２で処置されたＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスで、上昇したＢＵＮレベルが観察された。別様では、処置されたＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスのＢＵＮレベルは、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスより顕著に低下していた。図３のパネルＡを参照（Ｐ＜０．０５）。尿細管損傷のレベルも、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較して、ＨｇＣｌ２で処置されたＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスで顕著に低下していた。図３のパネルＢを参照。ＨｇＣｌ２で誘導された腎不全の重症度は、正常マウスよりＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウスで顕著に低下していることを、これらの結果が明確に示している。したがって、ＩＬ−２０受容体活性を抑制することは、急性腎不全の治療において有効であろう。
【００７０】
例３：ＩＬ−２０Ｒ１ノックアウトマウスにおけるＳＴＺで誘導された糖尿病性腎症の重症度の軽減
Rossini AA, et al., Proc Natl Acad Sci U S A 74:2485-2489, 1977に記載の方法に従い、例１で前述したＩＬ−２０Ｒ１＋／＋、ＩＬ−２０Ｒ１＋／−、およびＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスに、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）で糖尿病を誘導した。典型的には、ＳＴＺ処置マウスは、上昇したグルコースレベル、血清ＢＵＮレベル、および肥大した糸球体を示す。ここで、ＳＴＺ処置ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスは、ＳＴＺ処置ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較して、血中グルコースレベルが顕著に低いことを示した。図４のパネルＡを参照（Ｐ＜０．０５）。ＳＴＺ処置後２７日目において、ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスの生存率は、ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスのそれより、有意に高かった。図４のパネルＢを参照。ＳＴＺ処置ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスの血清ＢＵＮレベルが、ＳＴＺ処置ＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスのそれより低いことは、腎機能が改善したことを示している。図４のパネルＣを参照。
【００７１】
糖尿病中の糸球体肥大は腎損傷を示している。ここで、６日目および４９日目で、ＳＴＺ処置ＩＬ−２０Ｒ１−／−マウスは、ＳＴＺで処置された野生型のＩＬ−２０Ｒ１＋／＋マウスと比較して、平均糸球体面積が小さかった。図４のパネルＤを参照。
要するに、ＩＬ−２０Ｒ１をノックアウトすることによって（それによってＩＬ−２０受容体の活性が除かれる）、血中グルコースレベルおよび糖尿病性腎症の重症度が予想外に軽減することが、この研究から得られた結果からわかる。したがって、ＩＬ−２０受容体活性を抑制することは、糖尿病性腎症の改善に有効であろう。
【００７２】
例４：ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１Ｄが破骨細胞の分化を阻害した
マウス脛骨の骨髄細胞（ＢＭＣ）を１２時間インキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２）。付着しなかった細胞を回収し、２４ウェルプレートに播種し（１ウェルあたり２×１０６細胞）、３０ｎｇ／ｍｌの組み換えマウスマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）（PeproTech）を補充した同じ培地で培養した。４８時間後に、Ｍ−ＣＳＦに由来する破骨前駆細胞を、マウスＭ−ＣＳＦ（４０ｎｇ／ｍｌ）とｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ）（PeproTech）とともに、この実験が終わるまで培養した。破骨細胞の分化におけるＩＬ−２０Ｒ１モノクローナル抗体の効果を分析するために、Ｍ−ＣＳＦとｓＲＡＮＫＬとを有するα−ＭＥＭ中のｍＡｂ７ＧＷ（１もしくは２μｇ／ｍｌ）または５１Ｄ（１もしくは２μｇ／ｍｌ）あるいは陰性コントロールとしてｍＩｇＧ（２μｇ／ｍｌ）で、Ｍ−ＣＳＦに由来する破骨前駆細胞を８日間処置した。分化実験のすべてにおいて２日毎に培地を交換した。破骨細胞数を算出するために、細胞をアセトン中で固定し、酸ホスファターゼを使用するＴＲＡＰキット（Sigma-Aldrich）で染色した。３つまたは４つ以上の核を含む、ＴＲＡＰ陽性の多核細胞を破骨細胞と見なした。
【００７３】
図５に示すように、ｍＡｂ７ＧＷとｍＡｂ５１Ｄとはともに、破骨細胞の分化を首尾良く阻害した。これは、これら２つのモノクローナル抗体が、骨粗しょう症、および骨吸収またはがん誘導性の骨溶解を含む他の代謝性骨疾患の治療に使用可能であることを示している。
【００７４】
例５：ｍＡｂ７ＧＷおよびｍＡｂ５１ＤがＩＬ−１９で誘導されるＣＥ８１Ｔの細胞増殖を阻害した
ヒト食道がん細胞株ＣＥ８１Ｔ（３×１０４細胞）を、高グルコースと１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）とを有するＤＭＥＭ培地中に播種して１２時間経過後、ＦＢＳなしの飢餓状態で８時間インキュベートした。その後、抗ＩＬ−２０Ｒ１モノクローナル抗体であるｍＡｂ７ＧＷ（４μｇ／ｍｌ）またはｍＡｂ５１Ｄ（４μｇ／ｍｌ）とともに、ヒトＩＬ−１９（４００ｎｇ／ｍｌ）で細胞を処置して、４８時間インキュベートした。陽性コントロール群を５％ＦＢＳだけで処置した。ＭＴＴ（０．３５ｍｇ／ｍｌ）を添加し、その３時間後にＤＭＳＯを添加することによって細胞増殖を分析した。５５０ｎｍでの吸光度を測定し、コントロールと比較した。
【００７５】
図６に示すとおり、ｍＡｂ７ＧＷとｍＡｂ５１Ｄとはともに、ＩＬ−１９で誘導されるＣＥ８１Ｔ細胞増殖を阻害した。これは、双方のモノクローナル抗体が、ＩＬ−２０Ｒ１に結合することによって、ＩＬ−１９に引き起こされるシグナリング経路を遮断することができることを示している。
【００７６】
他の態様
この明細書に開示されている特徴のすべては、いかなる組み合わせで組み合わされてもよい。この明細書に開示されているそれぞれの特徴は、同一の、同等の、または類似の目的に適う、代わりの特徴で置き換えてもよい。よって、明示的に別段の定めをした場合を除き、開示されたそれぞれの特徴は、包括的な一連の同等のまたは類似の特徴の一例でしかない。
【００７７】
前記の説明から、当業者は、本開示の基本的な特徴を容易に確認することができ、そして、その精神と範囲とから逸脱することなく、様々な利用および条件にそれを適合させるために、本開示の様々な変更および修飾を行うことができる。よって、他の態様もまた請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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