(57)【要約】細胞および組織に向けて標的化される多価の組成物に関する組成物および方法が開示される。開示される上記標的化は、癌、ならびに他の疾患および障害の処置に有用である。標的化された細胞および組織に、顕著な量の目的の化合物を送達するために有用な組成物および方法が開示される。開示される上記組成物および方法は、例えば、標的化された細胞および組織に、過度に毒性である化合物の有効量を送達するために有用である。例えば、開示されるのは、表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の積荷分子を含む組成物である。
2013525285.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の膜を混乱させる分子を含む組成物であって、ここで該ホーミング分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングする、組成物。
【請求項２】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的改変体を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
１種以上の前記ホーミング分子のうちのすべては、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体，（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）もしくはその保存的改変体，（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）もしくはその保存的改変体、または（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）もしくはその保存的改変体、あるいは組み合わせを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）、もしくは（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）、または組み合わせを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記ホーミング分子のうちの１種以上に結合体化される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
結合体化された前記膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、共有結合で結合される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
共有結合で結合される前記膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、融合ペプチドを含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ホーミング分子は、前記表面分子と結合体化される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
結合体化された前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記表面分子に間接的に結合体化される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
結合体化された前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記表面分子に直接的に結合体化される、請求項１３または１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記表面分子に共有結合で結合される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
共有結合で結合された前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記表面分子に間接的に共有結合で結合される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
共有結合で結合された前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記表面分子に直接的に共有結合で結合される、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記膜を混乱させる分子は、前記表面分子と結合体化される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
結合体化された前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記表面分子に間接的に結合体化される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
結合体化された前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記表面分子に直接的に結合体化される、請求項１９または２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記表面分子に共有結合で結合される、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
共有結合で結合された前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記表面分子に間接的に共有結合で結合される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
共有結合で結合された前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記表面分子に直接的に共有結合で結合される、請求項２２または２３に記載の組成物。
【請求項２５】
結合体化された前記ホーミング分子のうちの１種以上は、リンカーを介して前記表面分子に間接的に結合体化されるか、結合体化された前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、リンカーを介して前記表面分子に間接的に結合体化されるか、またはその両方である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物は、複数のリンカーをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記リンカーのうちの少なくとも１種は、ポリエチレングリコールを含む、請求項２５または２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物は、１種以上の内部移行エレメントをさらに含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、前記内部移行エレメントのうちの１種以上を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、前記内部移行エレメントのうちの１種以上を含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記表面分子は、前記ホーミング分子もしくは前記膜を混乱させる分子のいずれにも含まれない、前記内部移行エレメントのうちの１種以上を含む、請求項２８〜３０のうちのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物は、１種以上の組織浸透エレメントをさらに含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記組織浸透エレメントのうちの１種以上は、内部移行エレメントに含まれる、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記組織浸透エレメントは、ＣｅｎｄＲエレメントである、請求項３２または３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記組成物は、腫瘍血管の内側に結合する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記組成物は、細胞において内部移行される、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物は、組織に浸透する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物は、腫瘍増殖を低下させる、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記表面分子は、ナノ粒子を含む、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記表面分子は、ナノワームを含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記表面分子は、酸化鉄ナノワームを含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記表面分子は、酸化鉄ナノ粒子を含む、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記表面分子は、アルブミンナノ粒子を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記表面分子は、リポソームを含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
前記表面分子は、ミセルを含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
前記表面分子は、リン脂質を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記表面分子は、ポリマーを含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４８】
前記表面分子は、マイクロ粒子を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記表面分子は、フルオロカーボンマイクロバブルを含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５０】
前記組成物は、少なくとも１００個のホーミング分子を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記組成物は、少なくとも１０００個のホーミング分子を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記組成物は、少なくとも１０，０００個のホーミング分子を含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記組成物は、少なくとも１００個の膜を混乱させる分子を含む、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記組成物は、少なくとも１０００個の膜を混乱させる分子を含む、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
前記組成物は、少なくとも１０，０００個の膜を混乱させる分子を含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、改変されたホーミング分子である、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたホーミング分子を含む、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記メチル化されたホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、改変された膜を混乱させる分子である、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化された膜を混乱させる分子を含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記メチル化された膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含む、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記アミノ酸配列は、少なくとも１つの位置においてＮメチル化されているか、もしくはＣメチル化されている、請求項５６〜６１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６３】
１種以上の部分をさらに含む、請求項１〜６２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記部分は、抗脈管形成因子、脈管形成促進因子、癌化学療法剤、細胞傷害因子、抗炎症剤、抗関節炎因子、ポリペプチド、核酸分子、低分子、画像造影剤、蛍光団、フルオレセイン、ローダミン、放射性核種、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３からなる群より独立して選択される、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
前記部分のうちの少なくとも１種は、治療剤である、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６６】
前記治療剤は、ｉＲＧＤである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記治療剤は、アブラキサンである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
前記治療剤は、パクリタキセルである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６９】
前記治療剤は、タキソールである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項７０】
前記部分のうちの少なくとも１種は、検出可能な因子である、請求項６３に記載の組成物。
【請求項７１】
前記検出可能な因子は、ＦＡＭである、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み、前記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）を含み、結合体化された該ホーミング分子のうちの１種以上は、リンカーを介して前記表面分子に間接的に結合体化され、そして結合体化された該膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、リンカーを介して前記表面分子に間接的に結合体化される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記リンカーのうちの少なくとも１種は、ポリエチレングリコールを含む、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
請求項１〜７３のいずれか１項に記載の組成物を被験体に投与する工程を包含する方法であって、ここで該組成物は、該被験体における腫瘍血管系に選択的にホーミングし、該組成物は、該腫瘍血管系の部位において細胞へと内部移行される、方法。
【請求項７５】
前記組成物は、治療効果を有する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記治療効果は、腫瘍負荷の増大を遅延させることもしくは腫瘍負荷の低減である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記治療効果は、腫瘍サイズの増大を遅延させることもしくは腫瘍サイズの低減である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記被験体は、標的化されるべき１つ以上の部位を有し、前記組成物は、該標的化されるべき部位のうちの１つ以上にホーミングする、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記被験体は、腫瘍を有し、前記組成物は、該腫瘍に対して治療効果を有する、請求項７４〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記組成物は、組織に浸透する、請求項７４〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
前記組成物は、腫瘍組織に浸透する、請求項７４〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１０年４月８日に出願された米国仮特許出願第６１／３２２，２０７号、および２０１０年８月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／３７６，８５６号の利益を主張する。２０１０年４月８日に出願された米国仮特許出願第６１／３２２，２０７号、および２０１０年４月２５日に出願された米国仮特許出願第６１／３７６，８５６号は、その全体の内容が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）により授与された助成金番号５  Ｐ３０  ＣＡ  ３０１９９−２８、およびＰ０１  ＣＡ  １０４８９８−０１、ならびに国防総省（ＤＯＤ）により授与されたＤＯＤ／ＵＳＡＭＲＡＡ  助成金番号  ＰＣ  ０９３２８３の下、政府支援により成された。政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、一般に、分子医学分野、およびより具体的には、標的化された細胞および組織にホーミングする組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
癌の処置における進歩の大きなハードルは、癌を選択的に標的化し得る一方で正常組織に害を与えない薬剤が相対的に欠如していることである。例えば、放射線療法および手術（これは、一般に、局部に制限された処置である）は、処置領域の中の正常組織に実質的な損傷を引き起こし得、正常組織を損ないその喪失を生じ得る。化学療法は（比較すると、一般に、全身投与される）は、迅速な細胞ターンオーバーおよび連続する細胞分裂を受ける器官（例えば、骨髄、粘膜、皮膚および小腸）に実質的損傷を引き起こし得る。結果として、望ましくない副作用（例えば、悪心、毛髪喪失および血球数の低下）は、しばしば、癌患者が静脈内に、化学療法薬で静脈内に処置される場合に起こる。このような望ましくない副作用により、安全に投与され得る薬物の量が制限され得、それによって、生存率が妨げを受け患者のクオリティーオブライフが衝撃を受ける。
【０００５】
ナノ医学は、ナノ粒子を使用して、疾患の診断および処置を促進する、出現しつつある分野である。クリニックにおける顕著な初期の成功としては、ＭＲＩおよびナノ粒子ベースの処置システムにおいて造影剤としての超常磁性ナノ粒子の使用が挙げられる（Ｄｅｓａｉ  ２００６；Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ  １９９５）。腫瘍処置において使用される第１世代のナノ粒子は、腫瘍における優先的蓄積については腫瘍脈管の「漏出性」に依拠する；しかし、この浸透性および保持の増強（ＥＰＲ）は、腫瘍脈管の不断の特徴ではなく（Ｓｉｎｅｋ  ２００４）、それが存在する場合においてさえ、依然として、上記ナノ粒子が、腫瘍における高い間質液圧を切り抜けることにゆだねられる（Ｓｉｎｅｋ  ２００４；Ｂｏｕｃｈｅｒ  １９９０）。魅力的な代替手段は、ナノ粒子を血管中の特異的分子レセプターに標的化することである。なぜなら上記レセプターは、血流からの結合に容易に利用可能であり、かつ腫瘍脈管は、正常組織の脈管において顕著には発現されない多量の分子を発現するからである（Ｈｏｆｆｍａｎ  ２００３；Ｏｈ  ２００４；Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ  ２００２）。
【０００６】
多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）は、最も一般的であり、頭蓋内腫瘍の致死的形態である。それらは、毎年米国において成人で診断される、２２，５００の悪性原発性脳腫瘍の新たな症例のうちの約７０％を占める。比較的希であるとはいえ、悪性神経膠腫は、不相応に高い罹病率および死亡率と関連する（メジアン生存期間は、わずか１２〜１５ヶ月である）。悪性神経膠腫は、脈管性のヒト腫瘍のなかの一つである。しかし、神経膠腫は、処置するのが困難な癌の一つである。脳における神経膠腫の位置次第では、神経膠腫は多くの薬物および治療用組成物に接近不能になる。神経膠腫を効率的に標的とし得る処置が必要である。
【０００７】
腫瘍へのナノ粒子の特異的標的化は、種々の実験系において達成されてきた（ＤｅＮａｒｄｏ  ２００５；Ａｋｅｒｍａｎ  ２００２；Ｃａｉ  ２００６）が、送達の効率は、一般に低い。本質的に、増幅されたホーミングは、脈管損傷の部位において十分な血小板蓄積を確実にする重要な機構である。これは、標的結合、活性化、血小板−血小板結合、および血餅の形成に関わる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
標的化された細胞および組織に、顕著な量の目的の化合物を送達するために有用な組成物および方法が開示される。開示される上記組成物および方法は、例えば、標的化された細胞および組織に、過度に毒性である化合物の有効量を送達するために有用である。例えば、開示されるのは、表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の積荷分子（ｃａｒｇｏ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）を含む組成物である。上記積荷分子は、例えば、過度に毒性の分子であり得る。上記積荷分子は、例えば、膜を混乱させる分子（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｅｒｔｕｒｂｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）であり得る。別の例として、開示されるのは、表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の膜を混乱させる分子を含む組成物である。また開示されるのは、例えば、開示される上記組成物を被験体に投与する工程を包含する方法である。
【０００９】
上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）に選択的にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、標的化されるべき部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。上記組成物は、細胞において内部移行され得る。上記組成物は、組織に浸透し得る。上記組成物は、標的化された部位において細胞へと内部移行され得る。上記組成物は、上記標的化された部位において組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、癌細胞において内部移行され得る。上記組成物は、例えば、腫瘍組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、腫瘍血管の内側に結合し得る。
【００１０】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）もしくはその保存的改変体、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）もしくはその保存的改変体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）、もしくは組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）を含み得る。
【００１１】
いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、１種以上のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、複数のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、１種以上のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、複数のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、１種以上のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。
【００１２】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子おうおに複数の積荷分子を含み、ここで上記ホーミング分子のうちの１種以上および上記積荷分子のうちの１種以上は、上記表面分子と会合している。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み、ここで複数の上記ホーミング分子の複数および複数の上記積荷分子の複数は、上記表面分子と会合している。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み、ここで上記ホーミング分子および上記積荷分子は、上記表面分子と会合する。
【００１３】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、ホーミング分子および積荷分子に関して多価である。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、ホーミング分子に関して多価であり。１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、積荷分子に関して多価であり、１種以上のホーミング分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体のうちの１種以上は、１種以上のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体のうちの１種以上は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体のうちの１種以上は、ホーミング分子および積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体の各々は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体の各々は、ホーミング分子および積荷分子を含む。
【００１４】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、１種以上のホーミング分子および１種以上の１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、ホーミング分子および積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体の各々は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体の各々は、ホーミング分子および積荷分子を含む。
【００１５】
いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記ホーミング分子のうちの１種以上に結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、融合ペプチドを含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子は、上記表面分子と結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に結合体化され得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子は、上記表面分子と結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に結合体化され得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に共有結合で結合され得る。
【００１６】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の内部移行エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、上記ホーミング分子もしくは上記膜を混乱させる分子のいずれにも含まれない上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の組織浸透エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントのうちの１種以上は、内部移行エレメントに含まれ得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントは、ＣｅｎｄＲエレメントであり得る。
【００１７】
いくつかの形態において、上記表面分子は、ナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、ナノワームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、酸化鉄ナノワームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、酸化鉄ナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、アルブミンナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、リポソームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、ミセルを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、リン脂質を含む。いくつかの形態において、上記表面分子は、ポリマーを含む。いくつかの形態において、上記表面分子は、マイクロ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、フルオロカーボンマイクロバブルを含み得る。
【００１８】
いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０，０００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１００個の膜を混乱させる分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０００個の膜を混乱させる分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０，０００個の膜を混乱させる分子を含み得る。
【００１９】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、改変されたホーミング分子であり得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記メチル化されたホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、改変された膜を混乱させる分子であり得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化された膜を混乱させる分子を含む。いくつかの形態において、上記メチル化された膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含む。いくつかの形態において、そのアミノ酸配列は、少なくとも１つの位置においてＮ−メチル化もしくはＣ−メチル化されている。
【００２０】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の部分をさらに含み得る。いくつかの形態において、上記部分は、抗脈管形成因子、脈管形成促進因子、癌化学療法剤、細胞傷害因子、抗炎症剤、抗関節炎因子、ポリペプチド、核酸分子、低分子、画像造影剤（ｉｍａｇｅ  ｃｏｎｔｒａｓｔ  ａｇｅｎｔ）、蛍光団、フルオレセイン、ローダミン、放射性核種、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３からなる群より独立して選択され得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１つは、治療剤であり得る。いくつかの形態において、上記治療剤は、ｉＲＧＤ、ＲＧＤ、アブラキサン、パクリタキセル、タキソール、もしくは組み合わせであり得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１つは、検出可能な因子（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ａｇｅｎｔ）であり得る。いくつかの形態において、上記検出可能な因子は、ＦＡＭであり得る。
【００２１】
いくつかの形態において、上記組成物は、治療効果を有し得る。いくつかの形態において、上記組成物は、腫瘍増殖を低下させ得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍負荷の増大における遅延もしくは腫瘍負荷の低減であり得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍サイズの増大の遅延もしくは腫瘍サイズの低減であり得る。いくつかの形態において、上記被験体は、１つ以上の標的化された部位を有し得、ここで上記組成物は、上記標的化された部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。いくつかの形態において、上記被験体は、腫瘍を有し得、ここで上記組成物は、上記腫瘍に対して治療効果を有し得る。
【００２２】
開示される上記方法および組成物のさらなる利点は、以下の記載において一部示されるか、一部は、上記記載から理解されるか、または開示される上記方法および組成物の実施によって知らされ得る。開示される上記方法および組成物の利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘されるエレメントおよび組み合わせによって、実現され、得られる。前述の一般的記載および以下の詳細な記載はともに、例示であり説明に過ぎず、本願発明を限定しないことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
添付の図面は、本明細書に組み込まれ、その一部を形成し、開示される上記方法および組成物のいくつかの実施形態例示し、上記記載と一緒に、開示される上記方法および組成物の原理を説明するように働く。
【図１】図１は、アポトーシス細胞の模式図である。
【図２Ａ】図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、細胞系におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。図２Ａおよび図２Ｂは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ａ）およびＴ３（Ｂ）細胞におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、細胞系におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。図２Ａおよび図２Ｂは、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）（Ａ）およびＴ３（Ｂ）細胞におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。
【図２Ｃ】図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、細胞系におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。図２Ｃは、Ｕ８７細胞におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。培養細胞を、ＣＧＫＲＫ、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２、またはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドで処理した。上記細胞を、ペプチドとともに２４時間にわたってインキュベートし、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。スチューデントｔ検定で統計分析を行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図３Ａ】図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃは、ＨＵＶＥＣ細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。培養したＨＵＶＥＣ細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ）、もしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＣＧＫＲＫ）で処理した。上記細胞を、洗浄せずにＮＷとともに４８時間にわたってインキュベートした（ＡおよびＣ）か、または上記ＮＷを２０分後に洗浄し（Ｂ）、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。図３Ａは、迅速に増殖しているＨＵＶＥＣ細胞を使用した一方で、図３Ｃは、同期化したＨＵＶＥＣ細胞を使用した。統計分析を、スチューデントｔ検定で行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図３Ｂ】図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃは、ＨＵＶＥＣ細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。培養したＨＵＶＥＣ細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ）、もしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＣＧＫＲＫ）で処理した。上記細胞を、洗浄せずにＮＷとともに４８時間にわたってインキュベートした（ＡおよびＣ）か、または上記ＮＷを２０分後に洗浄し（Ｂ）、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。図３Ａは、迅速に増殖しているＨＵＶＥＣ細胞を使用した一方で、図３Ｃは、同期化したＨＵＶＥＣ細胞を使用した。統計分析を、スチューデントｔ検定で行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図３Ｃ】図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃは、ＨＵＶＥＣ細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。培養したＨＵＶＥＣ細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ）、もしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＣＧＫＲＫ）で処理した。上記細胞を、洗浄せずにＮＷとともに４８時間にわたってインキュベートした（ＡおよびＣ）か、または上記ＮＷを２０分後に洗浄し（Ｂ）、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。図３Ａは、迅速に増殖しているＨＵＶＥＣ細胞を使用した一方で、図３Ｃは、同期化したＨＵＶＥＣ細胞を使用した。統計分析を、スチューデントｔ検定で行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図４】図４は、Ｔ３細胞における、ＮＷと結合体化したＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２の細胞傷害性を示す。培養したＴ３細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ）、もしくはＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＣＧＫＲＫ）と結合体化したＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２で処理した。上記細胞を、ＮＷとともに４８時間にわたってインキュベートし、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した。
【図５】図５Ａおよび図５Ｂは、Ｕ８７細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。培養したＵ８７細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（グラフ上でＫＬＡＫＬＡＫ−ＮＷとして示される）、ＫＡＫＥＣ（配列番号１３５）結合体化ＮＷ（ＫＡＫＥＣ−ＮＷ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）、もしくはＮＷ（ＣＩＭＥＲＡ−ＮＷ）と結合体化したＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２で処理した。上記細胞を、ＮＷとともに２４時間もしくは４８時間にわたってインキュベートし、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した。これら結果は、Ｕ２５１で認められたものとほとんど同じ結果（これは、５０〜６０％の細胞生存を有した）である。
【図６】図６は、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチド  対  ナノワーム上のペプチドのＩＣ５０を示す。５−ｋＤａ  ＰＥＧ−リンカーを介してＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫで被覆したＮＷを、ＤＴＴを使用してその粒子から切断し、上記粒子上に存在するペプチドの量を計算して、上記ペプチド被覆ナノ粒子ＩＣ５０値に対して遊離ペプチドの量を比較した。
【図７−１】図７は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫがＨＵＶＥＣ細胞においてアポトーシスを誘導したことを示す。ＨＵＶＥＣ細胞は、未処置のまま（コントロール）であったか、または無関連のペプチド−ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ；配列番号９２）もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで２４時間、４８時間および７２時間にわたって処理した。細胞を、７−アミノ−アクチノマイシン（７−ＡＡＤ）を含む緩衝液中、アネキシンＶ−ＰＥとともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシンＶ陽性細胞（アポトーシス細胞＋末期アポトーシスもしくは既に死滅した細胞）のパーセンテージは、各グラフにおいて示される。
【図７−２】図７は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫがＨＵＶＥＣ細胞においてアポトーシスを誘導したことを示す。ＨＵＶＥＣ細胞は、未処置のまま（コントロール）であったか、または無関連のペプチド−ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ；配列番号９２）もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで２４時間、４８時間および７２時間にわたって処理した。細胞を、７−アミノ−アクチノマイシン（７−ＡＡＤ）を含む緩衝液中、アネキシンＶ−ＰＥとともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシンＶ陽性細胞（アポトーシス細胞＋末期アポトーシスもしくは既に死滅した細胞）のパーセンテージは、各グラフにおいて示される。
【図８】図８は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫがＴ３細胞においてアポトーシスを誘導したことを示す。Ｔ３細胞（腫瘍内皮細胞）は、未処理のまま（コントロール）であったか、または２４時間および４８時間にわたって、無関連のペプチド−ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ；配列番号９２）もしくは上記Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで処理した。細胞を、７−アミノ−アクチノマイシン（７−ＡＡＤ）を含む緩衝液中、アネキシンＶ−ＰＥとともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシンＶ陽性細胞（アポトーシス細胞＋末期アポトーシスもしくは既に死滅した細胞）のパーセンテージは、各グラフにおいて示される。
【図９】図９は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫがＨＵＶＥＣの毛細管様管形成をインビトロで阻害することを示す。初代ＨＵＶＥＣを、５％  ＦＣＳ培地単独（コントロール）、もしくはＣＧＫＲＫ−ＮＷ（配列番号９２）（１０μｇ／ｍｌ）、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ（５μｇ／ｍｌおよび１０μｇ／ｍｌ）を含む５％  ＦＣＳ培地中の増殖因子を低下させたマトリゲル上でプレート培養した。毛細管様構造のネットワークの形成を、プレート培養の２４時間後に、位相差顕微鏡法によって４０×倍率において調べた。
【図１０】図１０は、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで処理したＨＵＶＥＣ細胞によるカスパーゼ活性を示す。カスパーゼ−３活性を、カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７アッセイキットを使用して、３μｇもしくは１０μｇのＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷでの処理の２４時間後に、ＨＵＶＥＣ細胞において決定した。試薬を添加して２時間後に、発光をルミノメーターで記録した。
【図１１】図１１は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでの多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）処置（実験番号１）の模式図である。ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍（注射後３週間）を有するマウスに、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子を、１４日間にわたって隔日で投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総累積用量  ３５ｍｇ／ｋｇ）。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。
【図１２】図１２は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置（実験番号１）を示す。ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍（注射後３週間）を有するマウスに、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子を、１４日間にわたって隔日で投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総累積用量  ３５ｍｇ／ｋｇ）。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。
【図１３】図１３Ａおよび図１３Ｂは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置（実験番号２）を示す。ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍（右海馬への注射）を有するマウスに、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子単独もしくはｉＲＧＤとの同時注射を、６週間にわたって１週間に１回（ウイルス注射後１週間）もしくは２週間半（ｔｗｏ  ｗｅｅｋｓ  ａｎｄ  ａ  ｈａｌｆ  ｗｅｅｋｓ）にわたって隔日で（ウイルス注射後３週間）施行した。すべてのマウスを、ＩＶＩＳシステム（レンチベクターは、ルシフェラーゼレポーターを含む）を使用してルシフェラーゼシグナルについてモニターし、示された群からの１匹の代表マウスのみを、図に示す。上記マウスの生存は、現在記録している最中である（ｎ＝３／群）。
【図１４】図１４は、ナノワーム処置前および処置後のマウスにおけるＡＬＴ（Ｌ−アラニン−２−オキソグルタル酸アミノトランスフェラーゼ）レベルを示す。上記処置開始の１日前および上記２週間半の処置コースの１日後に、マウスから採血した。隔日で注射したマウス群については、処置の最後の日の２週間後に別の採血を行った。上記ＡＬＴのレベルを、すべてのマウスの血清において試験した。正常値は、１０〜４０Ｕ／Ｌになる。
【図１５Ａ】図１５Ａ、図１５Ｂおよび図１５Ｃは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置を示す。パネルＡは、上記実験の模式図を示す。００５脳腫瘍細胞を有するマウス（注射の１０日後）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。ｉＲＧＤなしの上記粒子、およびｉＲＧＤと同時注射する上記粒子を、１４日間にわたって隔日で投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総累積用量  ３５ｍｇ／ｋｇ）。パネルＢは、生存のグラフを示す。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。パネルＣは、３×１０５  ００５細胞を右海馬領域に注射することによって誘導された腫瘍を有するマウスの結果を示す。００５細胞系は、レンチウイルス（ＲＡＳ−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍由来であって（３）。その腫瘍細胞を注射した１０日後に、マウスに、ＮＷを静脈内注射した。上記ＮＷを、１４日間にわたって隔日で投与し、続いて、１週間の間隔を空けて、１４日間にわたって処置を継続した。２匹のコントロールマウスを除くすべてが、上記腫瘍で死滅したのに対して、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスのすべてが、明白な腫瘍の徴候なく生存する（上の線）（ｎ＝８／群）。上記コントロールは、以下であった：ＮＷなし（３５日目において約１５％生存を有する下の方の線）、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（３５日目において約４０％生存を有する真ん中の線）、およびＣＧＫＲＫ−ＮＷ（３５日目において約５０％生存を有する真ん中の線）。
【図１５Ｂ】図１５Ａ、図１５Ｂおよび図１５Ｃは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置を示す。パネルＡは、上記実験の模式図を示す。００５脳腫瘍細胞を有するマウス（注射の１０日後）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。ｉＲＧＤなしの上記粒子、およびｉＲＧＤと同時注射する上記粒子を、１４日間にわたって隔日で投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総累積用量  ３５ｍｇ／ｋｇ）。パネルＢは、生存のグラフを示す。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。パネルＣは、３×１０５  ００５細胞を右海馬領域に注射することによって誘導された腫瘍を有するマウスの結果を示す。００５細胞系は、レンチウイルス（ＲＡＳ−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍由来であって（３）。その腫瘍細胞を注射した１０日後に、マウスに、ＮＷを静脈内注射した。上記ＮＷを、１４日間にわたって隔日で投与し、続いて、１週間の間隔を空けて、１４日間にわたって処置を継続した。２匹のコントロールマウスを除くすべてが、上記腫瘍で死滅したのに対して、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスのすべてが、明白な腫瘍の徴候なく生存する（上の線）（ｎ＝８／群）。上記コントロールは、以下であった：ＮＷなし（３５日目において約１５％生存を有する下の方の線）、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（３５日目において約４０％生存を有する真ん中の線）、およびＣＧＫＲＫ−ＮＷ（３５日目において約５０％生存を有する真ん中の線）。
【図１５Ｃ】図１５Ａ、図１５Ｂおよび図１５Ｃは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置を示す。パネルＡは、上記実験の模式図を示す。００５脳腫瘍細胞を有するマウス（注射の１０日後）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。ｉＲＧＤなしの上記粒子、およびｉＲＧＤと同時注射する上記粒子を、１４日間にわたって隔日で投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総累積用量  ３５ｍｇ／ｋｇ）。パネルＢは、生存のグラフを示す。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。パネルＣは、３×１０５  ００５細胞を右海馬領域に注射することによって誘導された腫瘍を有するマウスの結果を示す。００５細胞系は、レンチウイルス（ＲＡＳ−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍由来であって（３）。その腫瘍細胞を注射した１０日後に、マウスに、ＮＷを静脈内注射した。上記ＮＷを、１４日間にわたって隔日で投与し、続いて、１週間の間隔を空けて、１４日間にわたって処置を継続した。２匹のコントロールマウスを除くすべてが、上記腫瘍で死滅したのに対して、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスのすべてが、明白な腫瘍の徴候なく生存する（上の線）（ｎ＝８／群）。上記コントロールは、以下であった：ＮＷなし（３５日目において約１５％生存を有する下の方の線）、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（３５日目において約４０％生存を有する真ん中の線）、およびＣＧＫＲＫ−ＮＷ（３５日目において約５０％生存を有する真ん中の線）。
【図１６】図１６は、標的化された治療診断的（ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃ）ＮＷの構造を示す。アミノ化ＮＷを、Ｐａｒｋら（４）に従って合成し、ＮＨＳ−ＰＥＧ（５Ｋ）−マレイミドと反応させた。その後、ペプチドを、上記ＰＥＧのマレイミド基と、上記ペプチドのシステインチオールとの間の反応を介して、上記ＮＷに被覆した。上記Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドにおける中心システインの側鎖を介するカップリングは、図に示されるＶ字型構造を与える。
【図１７】図１７は、非標識ペプチド（左パネル）およびコントロールペプチド（右パネル）の存在下でミトコンドリアに結合するＦＡＭ−ＣＧＫＲＫペプチドのグラフである。ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫを、漸増濃度の非標識ＣＧＫＲＫもしくはコントロールとしての無関連のペプチド（ＣＲＥＫＡ；配列番号９２）のいずれかの存在下で、精製ミトコンドリアとともにインキュベートした。
【図１８】図１８は、ミトコンドリアに結合するファージのグラフである。ＣＧＫＲＫファージおよびＣＲＥＫＡ（配列番号９２）ファージ（コントロールとして）を、精製ミトコンドリアとともにインキュベートした。結合したファージの力価測定から、上記ＣＧＫＲＫファージの結合が上記コントロールより約８０倍高いことが示される。スチューデントｔ検定（ｃ）、エラーバー、平均値±ＳＤ；ｎ．ｓ．，＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１９】図１９は、吸着（Ａ４５０ｎｍ）  対  ビオチン−ＣＧＫＲＫ濃度（μＭ）のグラフである。固定化ｐ３２タンパク質への漸増量のビオチン標識ＣＧＫＲＫペプチドの結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたストレプトアビジンで検出し、ｐ３２の非存在下での非特異的結合に対して正規化した。結合曲線から計算した上記ペプチドのｐ３２に対する親和性もまた、示す。示される飽和曲線は、３回の独立した実験の平均である。エラーバー，平均値±ＳＤ。
【図２０】図２０Ａおよび図２０Ｂは、添加される非標識ペプチドに対する阻害のパーセントのグラフである。図２０Ａは、ビオチン標識ＣＧＫＲＫの結果を示し、図２０Ｂは、ビオチン標識ＬｙＰ−１ペプチドの結果を示す。
【図２１】図２１は、種々のペプチド組成物で２４時間、４８時間および７２時間処理した場合のアネキシンＶ陽性細胞（％）を示す。ＨＵＶＥＣ細胞およびＴ３細胞は、未処理のまま（コントロール）にしておいたか、またはコントロールペプチド（ＣＲＥＫＡ；配列番号９２）、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２、もしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２のいずれかで被覆した１０μｇ／ｍｌの濃度のＮＷで処理した。上記細胞をアネキシンで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）の合計パーセンテージを示す。
【図２２】図２２は、種々のペプチド組成物で３０分間にわたって処理し（上記粒子を洗い流し）、インキュベーションを７２時間にわたって継続した場合のアネキシンＶ陽性細胞（％）を示す。上記細胞をアネキシンで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）の合計パーセンテージを示す。
【図２３】図２３は、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷもしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置した、レンチウイルス（Ｈ−ＲａｓＶ１２−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍を有するマウスの生存（％）  対  時間（日数）を示す。右海馬におけるレンチウイルス（Ｈ−ＲａｓＶ１２−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍を有するマウスに、ペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子を、ウイルス注射の３週間後に始まって、１８日間にわたって隔日で投与した。未処置マウスおよび処置マウスの生存曲線（ｎ＝８〜１０／群）。
【図２４】図２４は、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ、ＣＧＫＲＫ−ＮＷ、およびＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置した、００５腫瘍細胞を有するマウスの生存（％）  対  時間（日数）を示す。腫瘍を、３×１０５  ００５細胞をＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの右海馬に移植することによって発生させた。腫瘍細胞移植の１０日後に、上記マウスに、ＮＷを静脈内注射した。上記ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）を３週間にわたって隔日で投与したか、または同じ期間にわたって中断することなく投与した（ｎ＝８／群）。上記処置マウスの生存曲線を示す。
【図２５】図２５は、ｃＲＧＤもしくはｉＲＧＤの同時投与とともに、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置した、００５腫瘍細胞を有するマウスの生存（％）  対  時間（日数）を示す。１０日前に移植した同所性００５腫瘍を有するマウスに、３週間にわたって、隔日で４ｍｍｏｌ／ｋｇのｃＲＧＤもしくはｉＲＧＤと混合したＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）の静脈内注射を与えた。コントロールマウスおよびｉＲＧＤのみを投与したマウスの結果もまた、示す。生存曲線を示す（ｎ＝８〜１０／群）。
【図２６】図２６は、抗ｐ３２による、ｐ３２へのＣＧＫＲＫペプチド結合の阻害を示す。１μｇ／ｍｌのビオチン−ＣＧＫＲＫを、精製ｐ３２で被覆したマイクロタイターウェル中でインキュベートし、結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したストレプトアビジンで検出し、ｐ３２の非存在下での非特異的結合に正規化した。上記抗ｐ３２抗体を、全長ｐ３２タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に対して調製した。上記実験を三連で行った；類似の結果を有する２つの実験のうちの１つを示す。
【図２７Ａ】図２７Ａ、図２７Ｂ、および図２７Ｃは、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体が、アポトーシスによって細胞死を誘導することを示す。ＨＵＶＥＣ（Ａ）細胞およびＴ３（Ｂ）細胞は、未処理のままであったか（コントロール）、または４８時間（Ａ）もしくは７２時間（Ｂ）にわたってＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで被覆した１０μｇ／ｍｌのＮＷで処置した。２７Ｃにおいて、上記細胞を、示されたＮＷとともにインキュベートし、洗浄して、過剰なＮＷを３０分後に除去し、次いで、７２時間にわたってインキュベートした。アネキシン染色およびフロサイトメトリーによる分析を使用して、培養物におけるアポトーシスを測定した。代表的画像を示す。これは、アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）のパーセンテージを示す。対して調製した。上記実験を三連で行った；類似の結果を有する２つの実験のうちの１つを示す。
【図２７Ｂ】図２７Ａ、図２７Ｂ、および図２７Ｃは、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体が、アポトーシスによって細胞死を誘導することを示す。ＨＵＶＥＣ（Ａ）細胞およびＴ３（Ｂ）細胞は、未処理のままであったか（コントロール）、または４８時間（Ａ）もしくは７２時間（Ｂ）にわたってＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで被覆した１０μｇ／ｍｌのＮＷで処置した。２７Ｃにおいて、上記細胞を、示されたＮＷとともにインキュベートし、洗浄して、過剰なＮＷを３０分後に除去し、次いで、７２時間にわたってインキュベートした。アネキシン染色およびフロサイトメトリーによる分析を使用して、培養物におけるアポトーシスを測定した。代表的画像を示す。これは、アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）のパーセンテージを示す。対して調製した。上記実験を三連で行った；類似の結果を有する２つの実験のうちの１つを示す。
【図２７Ｃ−１】図２７Ａ、図２７Ｂ、および図２７Ｃは、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体が、アポトーシスによって細胞死を誘導することを示す。ＨＵＶＥＣ（Ａ）細胞およびＴ３（Ｂ）細胞は、未処理のままであったか（コントロール）、または４８時間（Ａ）もしくは７２時間（Ｂ）にわたってＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで被覆した１０μｇ／ｍｌのＮＷで処置した。２７Ｃにおいて、上記細胞を、示されたＮＷとともにインキュベートし、洗浄して、過剰なＮＷを３０分後に除去し、次いで、７２時間にわたってインキュベートした。アネキシン染色およびフロサイトメトリーによる分析を使用して、培養物におけるアポトーシスを測定した。代表的画像を示す。これは、アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）のパーセンテージを示す。対して調製した。上記実験を三連で行った；類似の結果を有する２つの実験のうちの１つを示す。
【図２７Ｃ−２】図２７Ａ、図２７Ｂ、および図２７Ｃは、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体が、アポトーシスによって細胞死を誘導することを示す。ＨＵＶＥＣ（Ａ）細胞およびＴ３（Ｂ）細胞は、未処理のままであったか（コントロール）、または４８時間（Ａ）もしくは７２時間（Ｂ）にわたってＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで被覆した１０μｇ／ｍｌのＮＷで処置した。２７Ｃにおいて、上記細胞を、示されたＮＷとともにインキュベートし、洗浄して、過剰なＮＷを３０分後に除去し、次いで、７２時間にわたってインキュベートした。アネキシン染色およびフロサイトメトリーによる分析を使用して、培養物におけるアポトーシスを測定した。代表的画像を示す。これは、アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）のパーセンテージを示す。
【図２８】図２８は、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスの毒性分析を示す。３週間の処置コースの前（処置前）、その完了後（処置後）、およびその後の２週間の回復期間後（処置の２週間後）に測定した血中Ｌ−アラニン−２−オキソグルタル酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを、示す。
【図２９】図２９Ａおよび図２９Ｂは、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスの毒性分析を示す。ＮＷに対して起こり得る活動性免疫応答および生得の免疫応答を、処置マウスに由来し、図２８におけるように集めた血清中の抗体レベル（２９Ａ）およびＩＬ−６レベル（２９Ｂ）を測定することによって試験した。
【図３０】図３０は、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置した頭蓋内Ｕ８７腫瘍を有するマウスの生存曲線を示す。腫瘍を、５×１０５  ＧＦＰ発現Ｕ８７細胞をマウスの右海馬に注射することによって誘導した。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびコントロールＮＷの静脈内注射での処置を、腫瘍細胞注射の１０日後に開始し、３週間にわたって隔日で継続した（ｎ＝５／群）。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
（発明の詳細な説明）
開示される上記方法および組成物は、以下の特定の実施形態の詳細な記載およびそこに含まれる実施例に、ならびに図面とそれらの先の記載および以下の記載に言及することによってより容易に理解され得る。
【００２５】
本発明の化合物、組成物、物品、デバイス、および／もしくは方法が開示され、そして記載される前に、それらは、別段特定されなければ、特定の合成法にも特定の組換え生物工学法にも、別段特定されなければ、特定の試薬にも限定されないことが理解されるべきである。なぜならそれらは、当然のことながら変動し得るからである。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみを記載する目的のものであり、限定するとは解釈されないこともまた、理解されるべきである。
【００２６】
（定義）
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別のことを指示しなければ、複数の参照を含む。従って、例えば、「薬学的キャリア」への言及は、２種以上のこのようなキャリアなどの混合物を含む。
【００２７】
範囲は、「約」ある特定の値から、および／もしくは「約」別の特定の値までのように、本明細書で表され得る。このような範囲が表される場合、別の実施形態は、上記ある特定の値から、および／もしくは他の特定の値までを含む。同様に、先行詞「約」の使用によって、値が近似値として表される場合、上記特定の値が、別の実施形態を形成することが理解される。上記範囲の各々の端点が、上記他の端点に関連してともに意味のあるものであり、そして上記他の端点とは独立していることはさらに理解される。多くの値が本明細書で開示され、そして各値がまた、本明細書においてその値自体に加えて「約」その特定の値として開示されることもまた、理解されるべきである。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」もまた、開示される。値が開示される場合、当業者に適切に理解されるように、上記値「以下」、上記値「以上」およびそれらの値の間の実行できる範囲もまた開示されることもまた、理解される。例えば、上記値「１０」が開示される場合、「１０以下」ならびに「１０以上」もまた、開示される。本願全体を通じて、データは、多くの異なる形式において提供され、このデータは、端点および出発点、ならびにデータ点の任意の組み合わせの範囲を代表することもまた、理解される。例えば、特定のデータ点「１０」および特定のデータ点１５が開示される場合、１０より大きい、および１５より大きい、１０以上、および１５以上、１０未満、および１５未満、１０以下、および１５以下、１０に等しいおよび１５に等しいということは、１０〜１５の間もまた開示されるとみなされることが理解される。２つの特定のユニットの間の各ユニットもまた開示されることが、また理解される。例えば、１０および１５が開示される場合、そのときは、１１、１２、１３、および１４もまた、開示される。
【００２８】
本明細書および以下の特許請求の範囲において、多くの用語が言及され、上記用語は、以下の意味を有すると定義されるものとする：
「任意選択の」もしくは「必要に応じて」とは、続いて記載される事象もしくは状況が、起こってもよいし起こらなくてもよいこと、ならびにその記載が、上記事象もしくは状況が起こる場合、上記事象もしくは状況が起こらない場合を含むことを意味する。
【００２９】
本願全体を通して、種々の刊行物が参照される。これら刊行物の開示は、それらの全体において、本願がが属する技術分野の現在の技術水準をより十分に記載するために、本明細書によって、本願に参考として援用される。開示される参考文献はまた、個々にかつ具体的に、そこに含まれる材料について、本明細書に参考として援用され、上記参考文献が依拠される文章において述べられる。
【００３０】
開示される上記方法および組成物が、別段特定されなければ、具体的合成法にも、具体的分析技術にも、特定の試薬にも限定されず、よって、変動し得ることは、理解されるべきである。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみを記載する目的のものであり、限定されるとは解釈されないこともまた、理解されるべきである。
【００３１】
（材料）
開示される上記組成物を調製するために使用される成分、ならびに本明細書で開示される方法内で使用されるべき上記組成物自体が開示される。これらおよび他の材料は、本明細書で開示され、これら材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などが開示される場合、これら化合物の各種々の個々のかつ集合的な組み合わせおよび順列の具体的な言及は、明示的に開示されていなくてもよい一方で、各々は、具体的に企図されかつ本明細書に記載されることが理解される。例えば、特定のペプチドが開示され、述べられ、上記ペプチドを含む多くの分子に対してなされ得る多くの改変が述べられる場合、具体的に企図されるのは、上記ペプチドの各々のおよびすべての組み合わせおよび順列、ならびに反対のことが具体的に示されない限り、実行できる改変である。従って、分子Ａ、Ｂ、およびＣのクラスが開示され、同様に、分子Ｄ、Ｅ、およびＦのクラス、ならびに組み合わせの分子Ａ−Ｄの例が開示される場合、そのときは、各々が個々に列挙されていなくても、各々が個々におよび集合的に組み合わせを意味することが企図されており、Ａ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−Ｅ、およびＣ−Ｆが開示されているとみなされる。同様に、これらの任意のサブセットもしくは組み合わせもまた、開示される。従って、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、およびＣ−Ｅの亜群は、開示されるとみなされる。この概念は、本願のすべての局面（開示される上記組成物を作製し使用する方法における工程が挙げられるが、これらに限定されない）に適用される。従って、行われ得る種々のさらなる工程が存在する場合、これらさらなる工程の各々が、開示される上記方法の任意の具体的実施形態もしくは実施形態の組み合わせとともに行われ得ることは、理解される。
【００３２】
標的化された細胞および組織に目的の化合物の顕著な量を送達するために有用な組成物が開示される。開示される上記組成物は、例えば、標的化された細胞および組織に、過度に毒性である化合物の有効量を送達するために有用である。例えば、表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の積荷分子を含む組成物が開示される。上記積荷分子は、例えば、過度に毒性の分子であり得る。上記積荷分子は、例えば、膜を混乱させる分子であり得る。別の例として、表面分子、１種以上のホーミング分子、および複数の膜を混乱させる分子を含む組成物が開示される。本明細書で使用される場合、過度に毒性の化合物は、毒性に関する以外は、治療上有効な量である非結合体化形態で被験体に投与する場合に、余りにも毒性のある化合物である。
【００３３】
上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）に選択的にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、標的化されるべき部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。上記組成物は、細胞において内部移行され得る。上記組成物は、組織に浸透し得る。上記組成物は、標的化された部位において細胞に内部移行され得る。上記組成物は、上記標的化された部位において組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、癌細胞において内部移行され得る。上記組成物は、例えば、腫瘍組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、腫瘍血管の内側に結合し得る。
【００３４】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）もしくはその保存的改変体、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）もしくはその保存的改変体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）、もしくは組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）を含み得る。
【００３５】
いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、１種以上のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、複数のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、１種以上のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の表面分子、複数のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、複数の表面分子、１種以上のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。
【００３６】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得、ここで上記ホーミング分子のうちの１種以上および上記積荷分子のうちの１種以上は、上記表面分子と会合される。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得、ここで複数の上記ホーミング分子および複数の上記積荷分子は、上記表面分子と会合される。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含み得、ここで上記ホーミング分子および上記積荷分子は、上記表面分子と会合される。
【００３７】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、ホーミング分子および積荷分子に関して多価である。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、ホーミング分子に関して多価であり、１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、積荷分子に関して多価であり。１種以上のホーミング分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体のうちの１種以上は、１種以上のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、上記結合体のうちの１種以上は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体のうちの１種以上は、ホーミング分子および積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体の各々は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、結合体に関して多価であり、ここで上記結合体の各々は、ホーミング分子および積荷分子を含む。本明細書で使用される場合、１種以上の他の成分「に関して多価」であるといわれる１つの成分は、第１の成分と会合されるか、これに結合体化され、そして／もしくは共有結合で結合される、複数の他の成分を有する成分を指す。
【００３８】
いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、１種以上のホーミング分子および１種以上の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体のうちの１種以上は、ホーミング分子および積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体の各々は、複数のホーミング分子および複数の積荷分子を含む。いくつかの形態において、上記組成物は、表面分子を含み得、ここで上記表面分子は、１種以上の結合体を含み、ここで上記結合体の各々は、ホーミング分子および積荷分子を含む。
【００３９】
いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記ホーミング分子のうちの１種以上に結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子およびホーミング分子のうちの１種以上は、融合ペプチドを含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子は、上記表面分子と結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に結合体化され得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子は、上記表面分子と結合体化され得る。いくつかの形態において、結合体化された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接結合体化される。いくつかの形態において、結合体化された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に結合体化され得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に直接的に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、共有結合で結合された上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記表面分子に間接的に共有結合で結合され得る。
【００４０】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の内部移行エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、上記ホーミング分子もしくは上記膜を混乱させる分子のいずれにも含まれない上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の組織浸透エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントのうちの１種以上は、内部移行エレメントに含まれ得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントは、ＣｅｎｄＲエレメントであり得る。
【００４１】
いくつかの形態において、上記表面分子は、ナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、ナノワームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、酸化鉄ナノワームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、酸化鉄ナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、アルブミンナノ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、リポソームを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、ミセルを含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、リン脂質を含む。いくつかの形態において、上記表面分子は、ポリマーを含む。いくつかの形態において、上記表面分子は、マイクロ粒子を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、フルオロカーボンマイクロバブルを含み得る。
【００４２】
いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０，０００個のホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１００個の膜を混乱させる分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０００個の膜を混乱させる分子を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、少なくとも１０，０００個の膜を混乱させる分子を含み得る。
【００４３】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、改変されたホーミング分子であり得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたホーミング分子を含み得る。いくつかの形態において、上記メチル化されたホーミング分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、改変された膜を混乱させる分子であり得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化された膜を混乱させる分子を含む。いくつかの形態において、上記メチル化された膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、メチル化されたアミノ酸セグメントを含む。いくつかの形態において、上記アミノ酸配列は、少なくとも１つの位置においてＮ−メチル化もしくはＣ−メチル化されている。
【００４４】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の部分をさらに含み得る。いくつかの形態において、上記部分は、抗脈管形成因子、脈管形成促進因子、癌化学療法剤、細胞傷害因子、抗炎症剤、抗関節炎因子、ポリペプチド、核酸分子、低分子、画像造影剤、蛍光団、フルオレセイン、ローダミン、放射性核種、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３からなる群より独立して選択され得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、治療剤であり得る。いくつかの形態において、上記治療剤は、ｉＲＧＤ、ＲＧＤ、アブラキサン、パクリタキセル、タキソール、もしくは組み合わせであり得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、検出可能な因子であり得る。いくつかの形態において、上記検出可能な因子は、ＦＡＭであり得る。
【００４５】
いくつかの形態において、上記組成物は、治療効果を有し得る。いくつかの形態において、上記組成物は、腫瘍増殖を低下させ得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍負荷の増大における遅延もしくは腫瘍負荷の低減であり得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍サイズの増大の遅延もしくは腫瘍サイズの低減であり得る。いくつかの形態において、上記被験体は、１つ以上の標的化された部位を有し得、ここで上記組成物は、上記標的化された部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。いくつかの形態において、上記被験体は、腫瘍を有し得、ここで上記組成物は、上記腫瘍に対して治療効果を有し得る。
【００４６】
開示される上記成分は、本明細書で開示されるように、組み合わせにおいて互いに会合され得る（もしくは、いくつかの形態においては、互いに会合されない）。例えば、ホーミング分子は、表面分子に共有結合で結合されてもよいし、非共有結合的に会合されてもよく、ホーミング分子は、膜を混乱させる分子に共有結合で結合されてもよいし、非共有結合的に会合されてもよく、膜を混乱させる分子は、表面分子に共有結合で結合されてもよいし、非共有結合的に会合されてもよいなどである。会合される成分はまた、結合体化されているということができる。結合体化は、直接的もしくは間接的であり得る。成分の直接的結合体化は、結合体化された上記成分の間に介在する他の分子が全くない、共有結合で結合された成分もしくは非共有結合的に会合された成分をを指す。間接的結合体化は、分子の任意の鎖および上記成分が直接的に結合体化されない（すなわち、上記成分の間に介在する、成分以外の少なくとも１個の別個の分子が存在する）成分を連結する共有結合もしくは非共有結合的会合を指す。
【００４７】
共有結合で結合されたとは、共有結合を介した成分の会合を指す。共有結合的な会合もしくは結合は、直接的もしくは間接的のいずれかであり得る。成分の直接的共有結合的な会合もしくは結合は、各々それぞれ、上記成分の一部である原子を必要とする共有結合を指す。従って、直接的共有結合的な会合もしくは結合において、会合された／結合された上記成分の間に介在する他の分子が存在しない。間接的な共有結合的会合もしくは結合が、上記成分が共有結合的に結合されていない（すなわち、共有結合を介して上記成分の間に介在する成分以外の少なくとも別個の分子が存在する）成分を連結する任意の分子の鎖ならびに共有結合を指す。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「共有結合で結合されていない」としての成分（例えば、ホーミング分子および表面分子）への言及は、上記成分が、共有結合を介してつながれていない（例えば、上記ホーミング分子および上記表面分子が、共有結合を介してつながれていない）ことを意味する。すなわち、例えば、上記ホーミング分子と上記表面分子との間の共有結合の連続鎖がない。
【００４９】
非共有結合的会合は、非共有結合的結合および相互作用を介した成分の会合を指す。非共有結合的会合は、直接的もしくは間接的のいずれかであり得る。直接的非共有結合的会合は、上記成分への共有結合の鎖を介して各々それぞれつながれている原子を必要とする非共有結合的結合を指す。従って、直接的非共有結合的会合において、会合された上記成分の間に介在する他の分子は存在しない。間接的非共有結合的会合とは、上記成分が共有結合で結合されない（すなわち、非共有結合を介して上記成分の間に介在する上記成分以外の少なくとも１個の別個の分子が存在する）上記成分を連結する、任意の分子の鎖および結合を指す。
【００５０】
「非共有結合的に会合し」ていないとして、成分（例えば、ホーミング分子および表面分子）へ言及することは、上記成分の間の直接的非共有結合的会合も間接的な非共有結合的会合もないことを意味する。すなわち、例えば、ホーミング分子に共有結合で結合される原子は、表面分子に共有結合で結合される原子との非共有結合的結合に関与しない。この意味の中で、ホーミング分子および表面分子は、組成物の中に一緒に存在し得、ここでそれらは、非共有結合的結合を妨げるまとまりを介して間接的に会合される一方で、その用語が本明細書で定義されるように、非共有結合的に会合されていない。例えば、ホーミング分子および表面分子は、キャリアの中で一緒に混合され得、ここでそれらは、直接的には、非共有結合的に会合されていない。間接的に非共有結合的に会合されていないといわれるホーミング分子および表面分子は、連続組成（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）において一緒に混合され得ない。「直接的に非共有結合的に会合して」いないとして、成分（例えば、ホーミング分子および表面分子）へ言及することは、上記成分の間の直接的非共有結合的会合がない（間接的な非共有結合的会合は存在し得る）ことを意味する。「間接的に非共有結合的に会合され」ないとして、成分（例えば、ホーミング分子および表面分子）へ言及することは、上記成分の間に直接的な非共有結合的会合も間接的な非共有結合的会合も存在しないことを意味する。
【００５１】
成分が、直接的および間接的な非共有結合的会合の両方を含む複数の鎖および路（ｐａｔｈ）を介して、非共有結合的に会合され得ることは、理解される。これら定義の目的で、単一の直接的非共有結合的会合の存在は、間接的非共有結合的会合も存在するとしても、上記会合を、直接的な非共有結合的会合にする。同様に、成分の間の共有結合的接続の存在は、上記成分が、非共有結合的会合もまた存在するとしても、共有結合で結合されることを意味する。互いとのいかなる非共有結合的会合をも偶然欠いている共有結合で結合される成分は、非共有結合的に会合されていない成分の定義の下に入るとみなされないこともまた、理解される。
【００５２】
開示される上記組成物の成分の会合は、分子、結合体および／もしくは組成物を介して、補助され得るかもしくは達成され得る。このような分子、結合体および／もしくは組成物が、表面分子、ホーミング分子、もしくは積荷分子（例えば、膜を混乱させる分子、内部移行エレメント、組織浸透エレメント、および部分）以外である場合、それらは、本明細書でリンカーということができる。このようなリンカーは、開示される上記組成物の成分を会合させるために使用され得る任意の分子、結合体、組成物などであり得る。一般に、リンカーは、表面分子以外の成分を表面分子に会合させるために使用され得る。有用なリンカーとしては、生体適合性であり、低い生体活性を有し、低い抗原性を有するなどの材料が挙げられる。すなわち、このような有用なリンカー材料は、開示される上記組成物に対して所望されない生体反応性を付与することなく、連結／会合機能に役立ち得る。多くのこのような材料は公知であり、類似の連結および会合機能に使用される。ポリマー材料は、リンカー材料の特に有用な形態である。例えば、ポリエチレングリコールが使用され得る。
【００５３】
リンカーは、表面分子上で上記成分（例えば、ホーミング分子および膜を混乱させる分子）の有用な数および密度を達成するために有用である。例えば、繊維性の形態のリンカーは、１表面分子あたりもしくは上記表面分子の所定の領域あたりの成分の数を増加させるために有用である。同様に、分枝形態を有するリンカーは、１表面分子あたりもしくは上記表面分子の所定の領域あたりの成分の数を増加させるために有用である。リンカーはまた、分枝状の繊維性の形態を有し得る。
【００５４】
上記組成物におけるホーミング分子の数および組成が十分であることは、上記標的へのホーミングおよび非ヒト動物における上記積荷分子の効率的送達を評価することによって決定され得る。上記組成物は、上記組成物が上記標的にホーミングし、上記積荷分子を効率的に送達するように、ホーミング分子（改変されているか、もしくはそうでない）の十分な数および組成を含み得る。一例において、改変されたおよび／もしくは改変されていないホーミング分子の数および組成が十分であることは、積荷送達および／もしくは上記標的に対する治療効果を評価することによって決定され得る。膜を混乱させる分子の数および組成が十分であることは、非ヒト動物における上記組成物の膜を混乱させる効果を評価することによって決定され得る。上記組成物は、上記組成物が、上記標的に対して膜を混乱させる効果を有するように、膜を混乱させる分子（改変されているかもしくはそうでない）の十分な数および組成を含み得る。一例において、改変されたおよび／もしくは改変されていない膜を混乱させる分子の数および組成が十分であることは、上記標的に対する膜破壊、アポトーシス、および／もしくは治療効果を評価することによって決定され得る。
【００５５】
上記組成物は、上記組成物が、上記標的にホーミングし、上記積荷分子を効率的に送達するように、ホーミング分子の十分な密度および組成を含み得る。上記ホーミング分子の密度および組成が十分であることは、非ヒト動物における積荷送達および／もしくは上記標的に対する治療効果を評価することによって決定され得る。上記組成物は、上記組成物が、上記標的に対する膜を混乱させる効果を有するように、膜を混乱させる分子の十分な密度および組成を含み得る。上記膜を混乱させる分子の密度および組成が十分であることは、非ヒト動物における膜破壊、アポトーシス、および／もしくは上記標的に対する治療効果を評価することによって決定され得る。
【００５６】
表面分子上のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の密度は、任意の適切な様式において記載され得る。例えば、上記密度は、上記表面分子の、例えば、所定の領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームなど、あたりのホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数として表され得る。上記密度はまた、上記表面分子全体の、例えば、上記領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームなど、または上記表面分子の一部の上記領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームなどに関連し得る。例えば、ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の十分な密度は、上記表面分子の一部に存在し得る。この密な部分の存在は、凝固を引き起こし得、上記組成物の蓄積を増幅し得る。従って、ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の十分な密度を有する組成物は、上記表面分子全体に関して、もしくは上記表面分子のちょうど１つ以上の部分に関して、閾値密度（もしくはそれを上回る）を有し得る。別段示されなければ、密度は、上記表面分子の指定された部分にわたる平均密度を指す。例えば、上記表面分子の１平方ｎＭあたりの１ホーミング分子という密度は、上記表面分子全体にわたる上記ホーミング分子の平均密度を指す。別の例として、上記表面分子の一部の１平方ｎＭあたりの１ホーミング分子という密度は、上記表面分子のちょうどその一部にわたる上記ホーミング分子の平均密度を指す。
【００５７】
上記密度は、任意の適切な様式において測定もしくは計算され得る。例えば、表面分子もしくは表面分子の群に存在するホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは量は、例えば、標識されたホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子によって生成されるシグナルのレベルもしくは強度を検出し、上記表面分子の構造的特徴に基づいて、上記密度を計算することによって、測定され得る。
【００５８】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の密度もしくは閾値密度は、上記表面分子の全体もしくは一部の１平方ｎＭあたり、例えば、少なくとも０．００１個、０．００２個、０．００３個、０．００４個、０．００５個、０．００６個、０．００７個、０．００８個、０．００９個、０．０１個、０．０２個、０．０３個、０．０４個、０．０５個、０．０６個、０．０７個、０．０８個、０．０９個、０．１個、０．２個、０．３個、０．４個、０．５個、０．６個、０．７個、０．８個、０．９個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２２０個、２４０個、２６０個、２８０個、３００個、３２０個、３４０個、３６０個、３８０個、４００個、４２０個、４４０個、４６０個、４８０個、５００個、５５０個、６００個、６５０個、７００個、７５０個、８００個、８５０個、９００個、９５０個、もしくは１０００個のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの密度の間の任意の密度を含み得る。
【００５９】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の密度もしくは閾値密度は、上記表面分子の全体もしくは一部の１平方μＭあたり、例えば、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２２０個、２４０個、２６０個、２８０個、３００個、３２０個、３４０個、３６０個、３８０個、４００個、４２０個、４４０個、４６０個、４８０個、５００個、５５０個、６００個、６５０個、７００個、７５０個、８００個、８５０個、９００個、９５０個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２００個、２４００個、２６００個、２８００個、３０００個、３２００個、３４００個、３６００個、３８００個、４０００個、４２００個、４４００個、４６００個、４８００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９００個、９５００個、１０，０００個のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの密度の間の任意の密度を含み得る。
【００６０】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の密度もしくは閾値密度は、上記表面分子の全体もしくは一部の１立方ｎＭあたり、例えば、少なくとも０．００１個、０．００２個、０．００３個、０．００４個、０．００５個、０．００６個、０．００７個、０．００８個、０．００９個、０．０１個、０．０２個、０．０３個、０．０４個、０．０５個、０．０６個、０．０７個、０．０８個、０．０９個、０．１個、０．２個、０．３個、０．４個、０．５個、０．６個、０．７個、０．８個、０．９個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２２０個、２４０個、２６０個、２８０個、３００個、３２０個、３４０個、３６０個、３８０個、４００個、４２０個、４４０個、４６０個、４８０個、５００個、５５０個、６００個、６５０個、７００個、７５０個、８００個、８５０個、９００個、９５０個、もしくは１０００個のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの密度の間の任意の密度を含み得る。
【００６１】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の密度もしくは閾値密度は、上記表面分子の全体もしくは一部の１立方μＭあたり、例えば、少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２２０個、２４０個、２６０個、２８０個、３００個、３２０個、３４０個、３６０個、３８０個、４００個、４２０個、４４０個、４６０個、４８０個、５００個、５５０個、６００個、６５０個、７００個、７５０個、８００個、８５０個、９００個、９５０個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２００個、２４００個、２６００個、２８００個、３０００個、３２００個、３４００個、３６００個、３８００個、４０００個、４２００個、４４００個、４６００個、４８００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９００個、９５００個、１０，０００個のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの密度の間の任意の密度を含み得る。
【００６２】
表面分子上のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数は、任意の適切な様式で記載され得る。例えば、上記数は、上記表面分子の、例えば、所定の領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームあたりなどのホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数として表され得る。上記数はまた、上記表面分子全体の、例えば、上記領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームなど、または上記表面分子の一部の上記領域、表面積、体積、ユニット、サブユニット、アームなどにも関連し得る。例えば、ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の十分な数は、上記表面分子の一部に存在し得る。この密な部分の存在は、凝固を引き起こし得、上記組成物の蓄積を増幅し得る。従って、ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の十分な数を有する組成物は、上記表面分子全体に関して、もしくは上記表面分子のちょうど１つ以上の部分に関して、閾値数（もしくはそれを上回る）を有し得る。
【００６３】
上記数は、任意の適切な様式において測定もしくは計算され得る。例えば、表面分子もしくは表面分子の群に存在するホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは量は、例えば、標識されたホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子によって生成されるシグナルのレベルもしくは密度を検出し、上記表面分子の構造的特徴に基づいて上記数を計算することによって測定され得る。
【００６４】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは閾値数は、上記表面分子上で、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４２０、４４０、４６０、４８０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２２００、２４００、２６００、２８００、３０００、３２００、３４００、３６００、３８００、４０００、４２００、４４００、４６００、４８００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９００、９５００、１０，０００のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００６５】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは閾値数は、上記表面分子の全体もしくは一部の１平方ｎＭあたり、例えば、少なくとも０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４２０、４４０、４６０、４８０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、もしくは１０００のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００６６】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは閾値数は、上記表面分子の全体もしくは一部の１平方μＭあたり、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４２０、４４０、４６０、４８０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２２００、２４００、２６００、２８００、３０００、３２００、３４００、３６００、３８００、４０００、４２００、４４００、４６００、４８００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９００、９５００、１０，０００のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００６７】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは閾値数は、上記表面分子の全体もしくは一部の１立方ｎＭあたり、例えば、少なくとも０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４２０、４４０、４６０、４８０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、もしくは１０００のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００６８】
ホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子の数もしくは閾値数は、上記表面分子の全体もしくは一部の１立方μＭあたり、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０、４００、４２０、４４０、４６０、４８０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２２００、２４００、２６００、２８００、３０００、３２００、３４００、３６００、３８００、４０００、４２００、４４００、４６００、４８００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９００、９５００、１０，０００のホーミング分子および／もしくは膜を混乱させる分子であり得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００６９】
いくつかの形態において、上記組成物は、腫瘍にホーミングするのみならず、それら自体のホーミングを増幅もする。凝固した血漿タンパク質を認識しかつ腫瘍へ選択的にホーミングするクロット結合化合物（ｃｌｏｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）であるホーミング分子が使用され得、ここで上記ホーミング分子は、脈管壁および腫瘍間質に結合する。上記クロット結合化合物と結合した表面分子は、腫瘍脈管にもしくは創傷部位に蓄積され得、そこでそれらは、さらなる局所的凝固を誘導し、それによって、より多くの粒子のための新たな結合部位を生じる。そのシステムは、同様に自由に循環するが、病的部位において蓄積し、かつその部位においてそれら自体の蓄積を増幅させる血小板を摸倣する。その凝固（ｃｌｏｔｔｉｎｇ）ベースの増幅は、積荷送達および腫瘍画像化を大いに増強する。
【００７０】
（Ａ．ホーミング分子）
ホーミング分子は、開示される上記組成物が標的化されかつ、所望の標的部位にホーミングすることを可能にする。ホーミング分子は、一般に、標的分子、細胞、組織などに優先的に結合し、従って、標的部位において上記ホーミング分子（およびそれらが会合される他の成分）の蓄積を生じる。
【００７１】
用語「ホーミング分子」とは、本明細書で使用される場合、インビボで、正常もしくは他の非標的部位、細胞、もしくは組織よりは寧ろ、特定の標的部位（例えば、細胞もしくは組織）へと選択的にホーミングする任意の分子を意味する。同様に、用語「ホーミングペプチド」もしくは「ホーミングペプチド摸倣物」とは、インビボで、正常もしくは他の非標的部位、細胞、もしくは組織よりは寧ろ、特定の標的部位（例えば、細胞もしくは組織）へと選択的にホーミングするペプチドを意味する。インビボで、例えば、腫瘍へと選択的にホーミングするホーミング分子は、すべて腫瘍にホーミングし得るか、または腫瘍タイプのうちの１つもしくはサブセットへの優先的なホーミングを示し得ることが理解される。
【００７２】
「選択的にホーミングする」とは、インビボで、上記ホーミング分子が非標的と比較して、上記標的に優先的に結合することを意味する。例えば、上記ホーミング分子は、特定の分子、タンパク質、細胞、組織などに、他の分子、タンパク質、細胞、組織などと比較して優先的に結合し得る。例えば、上記ホーミング分子は、非腫瘍組織と比較して、腫瘍血管系もしくは１種以上の腫瘍に優先的に結合し得る。このようなホーミング分子は、例えば、腫瘍に選択的にホーミングし得る。例えば、特定の分子、タンパク質、細胞、組織などへの選択的ホーミングは、一般に、他の特定の分子、タンパク質、細胞、組織などと比較して、上記分子、タンパク質、細胞、組織など（もしくは他の標的）の少なくとも２倍大きい局在によって特徴付けられる。ホーミング分子は、１種以上の非標的と比較して、上記標的への、例えば、５倍、１０倍、２０倍以上の優先的局在化によって特徴付けられ得る。例えば、ホーミング分子は、非腫瘍組織のうちのいくつかもしくは多くの組織タイプの血管系と比較して、または大部分のもしくはすべての非腫瘍組織の血管系と比較して、腫瘍血管系への、例えば、５倍、１０倍、２０倍以上の優先的局在化によって特徴付けられ得る。別の例として、ホーミング分子は、非腫瘍組織のいくつかもしくは多くの組織タイプと比較して、または大部分のもしくはすべての非腫瘍組織と比較して、腫瘍への、例えば、５倍、１０倍、２０倍以上の優先的局在化によって特徴付けられ得る。従って、いくらかの場合においては、ホーミング分子は、一部、上記標的組織へのホーミングに加えて、１種以上の正常器官へホーミングすることは、理解される。選択的ホーミングはまた、標的化ともいうことができる。ホーミング分子によって標的とされる分子、タンパク質、細胞、組織などは、標的化された分子、タンパク質、細胞、組織などということができる。
【００７３】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み得る。
【００７４】
上記組成物は、上記組成物が、上記標的にホーミングしかつ上記積荷分子を効率的に送達するように、ホーミング分子（改変もしくはそうでなくてもよい）の十分な数および組成物を含み得る。一例において、改変されたおよび／もしくは改変されていないホーミング分子の数および組成が十分であることは、積荷送達および／もしくは上記標的に対する治療効果を評価することによって決定され得る。
【００７５】
多くのホーミング分子およびホーミングペプチドは、上記標的組織の血管系にホーミングする。しかし、便宜上、ホーミングは、本明細書におけるいくつかの箇所において、上記ホーミング分子もしくはホーミングペプチドが実際にホーミングし得る血管系と関連した組織へのホーミングとして言及される。従って、例えば、腫瘍血管系にホーミングするホーミング分子は、腫瘍組織もしくは腫瘍細胞にホーミングするとして本明細書で言及され得る。ホーミング分子もしくはホーミングペプチドを含むか、またはこれらを、例えば、タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列、積荷分子、もしくはＣｅｎｄＲエレメントと会合させることによって、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列、積荷分子、もしくはＣｅｎｄＲエレメントは、上記ホーミング分子もしくはホーミングペプチドの標的に標的化され得るかまたはホーミングし得る。このようにして、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列、積荷分子、もしくはＣｅｎｄＲエレメントは、上記ホーミング分子もしくはホーミングペプチドの標的にホーミングするということができる。便宜上かつ別段示されなければ、タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列、積荷分子、ＣｅｎｄＲエレメントなどのホーミングへの言及は、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列、積荷分子、ＣｅｎｄＲエレメントなどが、適切なホーミング分子もしくはホーミングペプチドを含むか、またはこれらと会合されることを示すことが意図される。
【００７６】
上記ホーミング分子は、腫瘍に選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプに選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの血管系に選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージの血管系に選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の異なるステージの血管系に選択的にホーミングし得る。
【００７７】
上記組成物は、腫瘍に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、１種以上の特定の腫瘍タイプに選択的にホーミングし得る。上記組成物は、１種以上の特定の腫瘍タイプの血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記組成物は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージの血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記組成物は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の異なるステージの血管系に選択的にホーミングし得る。
【００７８】
上記積荷分子は、腫瘍に選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプに選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの血管系に選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージの血管系に選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記積荷分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の異なるステージの血管系に選択的にホーミングし得る。
【００７９】
上記表面分子は、腫瘍に選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプに選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの血管系に選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージの血管系に選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記表面分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の異なるステージの血管系に選択的にホーミングし得る。
【００８０】
上記膜を混乱させる分子は、腫瘍に選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプに選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの血管系に選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、腫瘍もしくは癌の１つ以上の特定のステージの血管系に選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の特定のステージに選択的にホーミングし得る。上記膜を混乱させる分子は、１種以上の特定の腫瘍タイプの１つ以上の異なるステージの血管系に選択的にホーミングし得る。
【００８１】
開示される上記組成物、表面分子、アミノ酸配列、積荷分子、タンパク質もしくはペプチドは、以下にホーミングし得る：例えば、脳細胞、脳幹細胞、脳組織、および／もしくは脳血管系、腎細胞、腎臓幹細胞、腎組織、および／もしくは腎血管系、皮膚細胞、皮膚幹細胞、皮膚組織、および／もしくは皮膚血管系、肺細胞、肺組織、および／もしくは肺血管系、膵臓細胞、膵臓組織、および／もしくは膵臓血管系、腸細胞、腸組織、および／もしくは腸血管系、副腎細胞、副腎組織、および／もしくは副腎血管系、網膜細胞、網膜組織、および／もしくは網膜血管系、肝細胞、肝臓組織、および／もしくは肝臓血管系、前立腺細胞、前立腺組織、および／もしくは前立腺血管系、子宮内膜細胞、子宮内膜組織、および／もしくは子宮内膜血管系、卵巣細胞、卵巣組織、および／もしくは卵巣血管系、腫瘍細胞、腫瘍、腫瘍血管、および／もしくは腫瘍血管系、骨細胞、骨組織、および／もしくは骨血管系、骨髄細胞、骨髄組織、および／もしくは骨髄血管系、軟骨細胞、軟骨組織、および／もしくは軟骨血管系、幹細胞、胚性幹細胞、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、成体幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、間葉系幹細胞、乳腺幹細胞、内皮幹細胞、嗅成体幹細胞（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ａｄｕｌｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、神経堤幹細胞、癌幹細胞、血球、赤血球、血小板、白血球、顆粒球、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ系細胞、リンパ球、単球、創傷血管系、損傷組織の血管系、炎症組織の血管系、アテローム性動脈硬化プラーク、または組み合わせ。
【００８２】
ホーミング分子およびホーミングペプチドの例は、公知である。例としては、以下が挙げられる：脳ホーミングペプチド（例えば：
【００８３】
【化１】
2013525285.tif 000003
）；腎臓ホーミングペプチド（例えば：
【００８４】
【化２】
2013525285.tif 000004
）；皮膚ホーミングペプチド（例えば：
【００８５】
【化３】
2013525285.tif 000005
）；肺ホーミングペプチド（例えば：
【００８６】
【化４】
2013525285.tif 000006
）；膵臓ホーミングペプチド（例えば：
【００８７】
【化５】
2013525285.tif 000007
）；腸ホーミングペプチド（例えば：ＹＳＧＫＷＧＷ（配列番号６４））；子宮ホーミングペプチド（例えば：ＧＬＳＧＧＲＳ（配列番号６５））；副腎ホーミングペプチド（例えば：ＬＭＬＰＲＡＤ（配列番号６６）、ＬＰＲＹＬＬＳ（配列番号６７））；網膜ホーミングペプチド（例えば：ＣＳＣＦＲＤＶＣＣ（配列番号６８）、ＣＲＤＶＶＳＶＩＣ（配列番号６９））；消化管ホーミングペプチド（例えば：
【００８８】
【化６】
2013525285.tif 000008
）；肝臓ホーミングペプチド（例えば：ＶＫＳＶＣＲＴ（配列番号８０）、ＷＲＱＮＭＰＬ（配列番号８１）、ＳＲＲＦＶＧＧ（配列番号８２）、ＡＬＥＲＲＳＬ（配列番号８３）、ＡＲＲＧＷＴＬ（配列番号８４））；前立腺ホーミングペプチド（例えば：ＳＭＳＩＡＲＬ（配列番号８５）、ＶＳＦＬＥＹＲ（配列番号８６）、ＲＧＲＷＬＡＬ（配列番号８７））；卵巣ホーミングペプチド（例えば：ＥＶＲＳＲＬＳ（配列番号８８）、ＶＲＡＲＬＭＳ（配列番号８９）、ＲＶＧＬＶＡＲ（配列番号９０）、ＲＶＲＬＶＮＬ（配列番号９１））；クロット結合／ホーミングペプチド（例えば：ＣＲＥＫＡ（配列番号９２）、ＣＬＯＴ１、およびＣＬＯＴ２）；心臓ホーミングペプチド（例えば：
【００８９】
【化７】
2013525285.tif 000009
）；腫瘍血管ホーミングペプチド（例えば：ＣＮＧＲＣ（配列番号１１５）およびＮＧＲモチーフを有する他のペプチド（米国特許第６，１７７，５４２号および同第６，５７６，２３９号；米国特許出願公開第２００９０２５７９５１号）；ＲＧＤペプチド、ならびにＲＧＲペプチド。他のホーミングペプチドとしては、
【００９０】
【化８】
2013525285.tif 000010
が挙げられる。
【００９１】
ホーミング分子はまた、それらの標的によって定義され得る。例えば、多くの抗原およびタンパク質は、標的化するために有用であり得ることが公知である。そのような標的分子）を結合する、選択的に結合する、選択的にホーミングする、標的とする、選択的に標的とするなどができる任意の分子は、ホーミング分子として使用され得る。例えば、抗体、核酸アプタマー、および標的分子に結合し得る化合物は、ホーミング分子として使用され得る。ホーミング分子に有用な標的分子の例としては、ανインテグリン、ανβ３インテグリン、ανβ５インテグリン、α５β１インテグリン、アミノペプチダーゼＮ、腫瘍内皮マーカー（ＴＥＭ）、エンドシアリン、ｐ３２、ｇＣ１ｑレセプター、アネキシン−１、ヌクレオリン、フィブロネクチンＥＤ−Ｂ、フィブリン−フィブロネクチン複合体、インターロイキン−１１レセプターα、およびプロテアーゼで切断されたコラーゲンＩＶが挙げられる。これらおよび他の例が開示され、Ｒｕｏｓｌａｈｔｉら，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０（ｄｏｉ：１０．１０８３／ｊｂｃ．２００９１０１０４）（これは、その全体において、ならびに標的分子についてのその記載のためにおよび標的分子への言及のために具体的に、本明細書に参考として援用される）に言及される。
【００９２】
上記組成物は、任意の数のホーミング分子を含み得る。例示に拠れば、上記組成物は、少なくとも１個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個、５２５個、５５０個、５７５個、６００個、６２５個、６５０個、６７５個、７００個、６２５個、７５０個、７７５個、８００個、８２５個、８５０個、８７５個、９００個、９２５個、９５０個、９７５個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２５０個、２５００個、２７５０個、３０００個、３５００個、４０００個、４５００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９０００個、９５００個、１０，０００個、１５，０００個、２０，０００個、２５，０００個、３０，０００個、３５，０００個、４０，０００個、４５，０００個、５０，０００個、７５，０００個、もしくは１００，０００個、またはより多くのホーミング分子を含み得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【００９３】
ホーミング分子は、種々の構成（ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）にある上記組成物と会合され得、その組成物中に整えられ得る。いくつかの形態において、ホーミング分子は、複数の表面分子と会合され得、複数の表面分子に結合体化され得、そして／または複数の表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、ホーミング分子は、複数の積荷分子と会合され得、複数の積荷分子に結合体化され得、そして／または複数の積荷分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、ホーミング分子は、複数の積荷分子と会合され得、複数の積荷分子に結合体化され得、そして／または複数の積荷分子に共有結合で結合され得、ここで上記積荷分子は、複数の表面分子と会合され得、複数の表面分子に結合体化され得、そして／または複数の表面分子に共有結合で結合され得る。これら組み合わせの組み合わせもまた、使用され得る。
【００９４】
（１．腫瘍ホーミング化合物）
開示される上記ホーミング分子は、腫瘍ホーミング化合物であり得る。腫瘍ホーミング化合物は、腫瘍および腫瘍関連組織に選択的にホーミングする化合物である。腫瘍を標的とし、腫瘍に結合し、そして／または腫瘍にホーミングする多くの化合物は、公知であり、これらの大部分は、開示される上記組成物中で腫瘍ホーミング化合物として使用され得る。腫瘍ホーミング化合物は、各々、任意の公知の腫瘍ホーミング化合物から独立して選択され得る。
【００９５】
腫瘍ホーミング化合物は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的誘導体、アミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）もしくはその保存的誘導体、または組み合わせを含み得る。腫瘍ホーミング化合物は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み得る。
【００９６】
腫瘍標的化に有用なペプチドとしては、例えば、腫瘍ホーミングＣｅｎｄＲペプチドであるｉＲＧＤ、ＬｙＰ−１、推定ＣｅｎｄＲエレメントを含みかつ腫瘍浸透特性を有するペプチド、およびＲＧＲペプチドが挙げられる。上記ＬｙＰ−１ペプチドは、腫瘍内の特有の標的を有する；それは、腫瘍の低酸素／低栄養領域に優先的に蓄積する（Ｌａａｋｋｏｎｅｎら，２００２；２００４；Ｋａｒｍａｌｉら，２００９）。ＣＲＧＲＲＳＴ（（配列番号１２２；ＲＧＲ；Ｊｏｙｃｅら，２００３）は、サイトカイン抗体の組み合わせを腫瘍の中に標的化することにおいて成功裏に使用されてきたペプチドである（Ｈａｍｚａｈら，２００８）。このペプチドは線状であり、これは、合成を単純化する。ＬｙＰ−１のように、ＲＧＲは、少なくともある程度は腫瘍タイプ特異的である（Ｊｏｙｃｅら，２００３）が、上記２種のペプチドによって認識される上記腫瘍タイプは、部分的に異なるようである。これは、全腫瘍（ｐａｎ−ｔｕｍｏｒ）ｉＲＧＤとの組み合わせをテストすることにおいて利点を有し得る。
【００９７】
腫瘍は、クロット関連タンパク質を含み得るので、いくらかのクロット結合化合物およびクロットホーミング化合物はまた、腫瘍ホーミング化合物でもあり得る。このような腫瘍ホーミングクロット結合化合物は、本明細書に記載されるように、腫瘍ホーミング化合物として使用され得る。腫瘍ホーミング化合物は、各々、例えば、アミノ酸配列ＲＥＫを含むアミノ酸セグメント、アミノ酸配列ＣＡＲを含むアミノ酸セグメント（例えば、ＣＡＲＳＫＮＫＤＣ（配列番号１２３））、アミノ酸配列ＣＲＫを含むアミノ酸セグメント（例えば、ＣＲＫＤＫＣ（配列番号１２４））、フィブリン結合ペプチド、クロットに結合するがフィブリンには結合しないペプチド（例えば、ＣＧＬＩＩＱＫＮＥＣ（ＣＬＴ１，配列番号１２５）およびＣＮＡＧＥＳＳＫＮＣ（ＣＬＴ２，配列番号１２６））、クロット結合抗体、およびクロット結合有機低分子から独立して選択され得る。複数の上記クロット結合化合物は、各々、アミノ酸配列ＲＥＫを含むアミノ酸セグメントを独立して含み得る。このようなペプチドはまた、米国特許出願公開第２００８／０３０５１０１号（これは、このようなペプチドの説明のために本明細書に参考として援用される）に記載される。アミノ酸配列ＣＡＲもしくはＣＲＫを含むペプチドはまた、米国特許出願公開第２００９／００３６３４９号（これは、このようなペプチドの説明のために本明細書に参考として援用される）に記載される。
【００９８】
ＬｙＰ−１は、正常リンパ血管系よりは寧ろ、腫瘍リンパ血管系（例えば、乳癌腫瘍および骨肉腫のリンパ血管系）に選択的にホーミングするホーミング分子である。ＬｙＰ−１は、例えば、扁平上皮癌のリンパ血管系に選択的にホーミングし得る。そのコアのＬｙＰ−１ペプチドは、アミノ酸配列ＣＧＮＫＲＴＲＧＣ（配列番号１２７）を有する。ＬｙＰ−１ペプチドは、米国特許出願第２００４−００８７４９９号、同第２００７−０２１９１３４号および同第２００８−００１４１４３号（これらは、その全体において、このようなペプチドの説明のために具体的に、本明細書に参考として援用される）に記載される。
【００９９】
上記クロット結合化合物はまた、フィブリン結合ペプチド（ＦＢＰ）を含み得る。フィブリン結合ペプチドの例は、当該分野で公知である（Ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  Ｎ，Ｓａｎｄｅｒｓ  Ａ（１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７４：８３−９３；Ｍｏｇｈｉｍｉ  ＳＭ，Ｈｕｎｔｅｒ  ＡＣ，Ｍｕｒｒａｙ  ＪＣ（２００１）  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５３：２８３−３１８；米国特許第５，７９２，７４２号（すべて、フィブリン結合ペプチドに関する教示のために、それらの全体において、本明細書に参考として援用される））。
【０１００】
クロット結合ペプチドはまた、フィブリン以外のタンパク質に結合し得る。例としては、クロットの中に組み込まれたフィブロネクチンに結合するペプチド（Ｐｉｌｃｈら，（２００６）  ＰＮＡＳ，１０３：２８００−２８０４（クロット結合ペプチドに関する教示のためにその全体において本明細書により援用される））が挙げられる。クロット結合ペプチドの例としては、ＣＧＬＩＩＱＫＮＥＣ（ＣＬＴ１，配列番号１２５）およびＣＮＡＧＥＳＳＫＮＣ（ＣＬＴ２，配列番号１２６）が挙げられるが、これらに限定されない。上記アミノ酸セグメントはまた、アミノ酸配列ＣＬＴ１もしくはＣＬＴ２またはその保存的改変体を含むアミノ酸セグメント、アミノ酸配列ＣＬＴ１もしくはＣＬＴ２を含むアミノ酸セグメント、あるいはアミノ酸配列ＣＬＴ１、もしくはＣＬＴ２からなるアミノ酸セグメントから独立して選択され得る。上記アミノ酸セグメントは、各々独立して、アミノ酸配列ＣＬＴ１もしくはＣＬＴ２またはその保存的改変体を含み得る。上記アミノ酸セグメントはまた、各々独立して、アミノ酸配列ＣＬＴ１もしくはＣＬＴ２を含み得る。上記アミノ酸セグメントはまた、アミノ酸配列ＣＬＴ１もしくはＣＬＴ２からなり得る。
【０１０１】
上記アミノ酸セグメントはまた、各々独立して、アミノ酸配列ＣＡＲＳＫＮＫＤＣ（配列番号１２８））、およびアミノ酸配列ＣＲＫ（例えば、ＣＲＫＤＫＣ（配列番号１２９）を含み得る。アミノ酸配列ＣＡＲもしくはＣＲＫを含むペプチドはまた、米国特許出願公開第２００９／００３６３４９号（これは、このようなペプチドの説明のために本明細書により参考として援用される）に記載される。
【０１０２】
上記組成物は、任意の数の腫瘍ホーミング化合物を含み得る。例示に拠れば、上記組成物は、少なくとも１個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個、５２５個、５５０個、５７５個、６００個、６２５個、６５０個、６７５個、７００個、６２５個、７５０個、７７５個、８００個、８２５個、８５０個、８７５個、９００個、９２５個、９５０個、９７５個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２５０個、２５００個、２７５０個、３０００個、３５００個、４０００個、４５００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９０００個、９５００個、１０，０００個、１５，０００個、２０，０００個、２５，０００個、３０，０００個、３５，０００個、４０，０００個、４５，０００個、５０，０００個、７５，０００個、もしくは１００，０００個、またはより多くの腫瘍ホーミング化合物を含み得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれらの数の間の任意の数を含み得る。
【０１０３】
表１は、腫瘍ホーミングＣｅｎｄＲペプチドの例を示す。
【０１０４】
【表１】
2013525285.tif 000011
腫瘍ホーミング化合物はまた、改変され得る。ホーミング分子に関して本明細書で記載される改変のうちのいずれかは、開示される上記腫瘍ホーミング化合物とともに使用され得る。
【０１０５】
（２．改変されたホーミング分子）
開示される上記ホーミング分子は、ホーミング分子の改変形態を含み得る。上記ホーミング分子は、任意の有用な改変を有し得る。例えば、いくつかの改変は、上記ホーミング分子を安定化し得る。例えば、開示される上記ホーミング分子は、メチル化されたホーミング分子を含む。メチル化されたホーミング分子は、上記ホーミング分子が、タンパク質、ペプチド、もしくはアミノ酸セグメントを含む場合に、特に有用である。例えば、ホーミング分子は、改変されたホーミング分子であり得る。ここでは、例えば、上記改変されたホーミング分子は、改変アミノ酸セグメントもしくは改変アミノ酸配列を含む。例えば、改変されたホーミング分子は、メチル化されたホーミング分子であり得、ここで例えば、上記メチル化されたホーミング分子は、メチル化されたアミノ酸セグメントもしくはメチル化されたアミノ酸配列を含む。他の改変は、単独でもしくは組み合わせのいずれかにおいて使用され得る。上記ホーミング分子がタンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントおよび／もしくはアミノ酸配列であるか、またはタンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントおよび／もしくはアミノ酸配列を含む場合、上記改変は、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列および／または上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントおよび／もしくはアミノ酸配列の中の任意のアミノ酸に対してであり得る。アミノ酸およびペプチド改変は、当業者に公知であり、そのうちのいくつかは、以下および本明細書のどこかに記載される。メチル化は、開示される上記ホーミング分子に特に有用な改変である。ホーミング分子の改変形態を使用すると、上記ホーミングおよび標的化の効率が増大し得、このことは、上記標的に対する効果を増大させ得る。
【０１０６】
複数の改変されたホーミング分子および／もしくは非改変ホーミング分子は、各々、例えば、ホーミングペプチドのアミノ酸配列の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメント、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメント、およびアミノ酸配列ＣＲＫＤＫＣ（配列番号２）の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメントから独立して選択され得る。複数の上記ホーミング分子は、各々独立して、ホーミングペプチドのアミノ酸配列の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメントを含み得る。
【０１０７】
上記組成物は、改変されたホーミング分子および／もしくは非改変ホーミング分子の任意の数を含み得る。例示に拠れば、上記組成物は、少なくとも１個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個、５２５個、５５０個、５７５個、６００個、６２５個、６５０個、６７５個、７００個、６２５個、７５０個、７７５個、８００個、８２５個、８５０個、８７５個、９００個、９２５個、９５０個、９７５個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２５０個、２５００個、２７５０個、３０００個、３５００個、４０００個、４５００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９０００個、９５００個、１０，０００個、１５，０００個、２０，０００個、２５，０００個、３０，０００個、３５，０００個、４０，０００個、４５，０００個、５０，０００個、７５，０００個、もしくは１００，０００個、またはより多くの改変されたホーミング分子および／あるいは非改変ホーミング分子を含み得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれら数の間の任意の数を含み得る。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などの「メチル化誘導体」とは、メチル化された上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などの形態を指す。文脈が別のことを示していない限り、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などのメチル化誘導体への言及は、メチル化以外に、基本タンパク質（ｂａｓｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などへのいずれの改変をも含まない。メチル化誘導体はまた、他の改変を有し得るが、このような改変は、一般に、注記される。例えば、アミノ酸配列の保存的改変体は、上記基本アミノ酸配列の保存的アミノ酸置換を含む。従って、例えば、特定のアミノ酸配列の「メチル化誘導体」および「その保存的改変体」への言及は、上記特定のアミノ酸配列のメチル化形態および上記特定のアミノ酸配列の保存的改変体のメチル化形態を含むが、いかなる他の派生物の改変をも含まない。別の例として、アミノ酸置換を含むアミノ酸セグメントのメチル化誘導体への言及は、上記アミノ酸セグメントの上記アミノ酸配列のメチル化形態を含み、上記アミノ酸セグメントの上記アミノ酸配列のメチル化形態は、アミノ酸置換を含む。
【０１０９】
（Ｂ．積荷分子）
開示される上記組成物は、１種以上の積荷分子を含む。一般に、開示される上記組成物は、複数の積荷分子を含み得る。開示される上記組成物は、単一のタイプの積荷分子もしくは複数の異なるタイプの積荷分子を含み得る。従って、例えば、開示される上記組成物は、複数の異なるタイプの積荷分子を含み得、ここで上記異なるタイプの積荷分子の１種以上のうちの複数が、存在し得る。
【０１１０】
積荷分子は、開示される上記組成物を使用して送達されることが望まれる任意の化合物、分子、結合体、組成物などであり得る。例えば、上記積荷分子は、治療剤、検出可能な因子、もしくは組み合わせであり得る。例えば、上記積荷分子は、膜を混乱させる分子、アポトーシス促進分子、孔生成分子、抗菌分子、ミトコンドリアに影響を及ぼす分子、ミトコンドリア標的化分子、もしくは組み合わせであり得る。いくつかの有用な積荷分子の例は、以下におよび本明細書のどこかに記載される。
【０１１１】
積荷分子は、上記組成物と会合され得、種々の構成にある上記組成物中に整えられ得る。いくつかの形態において、積荷分子は、複数の表面分子と会合され得るか、複数の表面分子に結合体化され得るか、そして／または複数の表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、積荷分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、複数のホーミング分子に結合体化され得るか、そして／または複数のホーミング分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、積荷分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、複数のホーミング分子に結合体化され得るか、そして／または複数のホーミング分子に共有結合で結合され得、ここで上記ホーミング分子は、複数の表面分子と会合され得るか、複数の表面分子に結合体化され得るか、そして／または複数の表面分子に共有結合で結合され得る。これらの組み合わせの組み合わせもまた、使用され得る。
【０１１２】
（１．膜を混乱させる分子）
積荷分子の有用な形態は、膜を混乱させる分子を含む。膜を混乱させる分子は、膜を破壊し得る、膜に孔を形成し得る、膜を漏出性にし得る、細胞内膜もしくはオルガネラ（例えば、ミトコンドリアもしくはリソソーム）に標的化され得るかもしくは影響を及ぼし得る、分子を含む。膜を混乱させる分子のうちのいくつかの形態は、アポトーシス促進性であり得る一方で、他のものは、非アポトーシス性であり得る。膜を混乱させる分子のうちのいくつかの形態は、いくつかの細胞タイプのみに対してアポトーシス促進性であり得る。
【０１１３】
いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列ＣＧＫＲＫ（配列番号１）を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）もしくはその保存的改変体、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）もしくはその保存的改変体、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）もしくはその保存的改変体、または組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）、もしくは組み合わせを含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）もしくはその保存的改変体を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）を含み得る。このタイプの膜を混乱させるペプチドは、Ｅｌｌｅｒｂｙ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５，１０３２−１０３８（１９９９）（これは、このようなペプチドの説明のために本明細書に参考として援用される）に記載される。
【０１１４】
複数の改変された膜を混乱させる分子および／もしくは／非改変の膜を混乱させる分子は、各々、例えば、ホーミングペプチドのアミノ酸配列の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメント、アミノ酸配列Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（配列番号３）、（ＫＬＡＫＫＬＡ）２（配列番号５）、（ＫＡＡＫＫＡＡ）２（配列番号６）、（ＫＬＧＫＫＬＧ）３（配列番号７）の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメント、または組み合わせから独立して選択され得る。複数の上記膜を混乱させる分子は、各々、ホーミングペプチドのアミノ酸配列の改変形態もしくは非改変形態を含むアミノ酸セグメントを独立して含み得る。
【０１１５】
上記組成物は、上記組成物が上記標的に対して膜を混乱させる効果を有するように、膜を混乱させる分子（改変されているかもしくはそうでない）の顕著な数および組成を含み得る。一例において、改変された膜を混乱させる分子および／もしくは非改変の膜を混乱させる分子の数および組成が十分であることは、膜破壊、アポトーシス、および／もしくは上記標的に対する治療効果を評価することによって決定され得る。
【０１１６】
上記組成物は、改変された膜を混乱させる分子および／もしくは非改変の膜を混乱させる分子の任意の数を含み得る。例示に拠れば、上記組成物は、少なくとも１個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個、５２５個、５５０個、５７５個、６００個、６２５個、６５０個、６７５個、７００個、６２５個、７５０個、７７５個、８００個、８２５個、８５０個、８７５個、９００個、９２５個、９５０個、９７５個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個、１８００個、１９００個、２０００個、２２５０個、２５００個、２７５０個、３０００個、３５００個、４０００個、４５００個、５０００個、５５００個、６０００個、６５００個、７０００個、７５００個、８０００個、８５００個、９０００個、９５００個、１０，０００個、１５，０００個、２０，０００個、２５，０００個、３０，０００個、３５，０００個、４０，０００個、４５，０００個、５０，０００個、７５，０００個、もしくは１００，０００個、またはより多くの改変された膜を混乱させる分子および／もしくは非改変の膜を混乱させる分子を含み得る。上記組成物はまた、上記に列挙されたそれら数の間の任意の数を含み得る。
【０１１７】
膜を混乱させる分子は、種々の任意の構成にある上記組成物と会合され得、その組成物中に整えられ得る。いくつかの形態において、膜を混乱させる分子は、複数の表面分子と会合され得るか、複数の表面分子に結合体化され得るか、そして／もしくは複数の表面分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、膜を混乱させる分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、複数のホーミング分子に結合体化され得るか、そして／もしくは複数のホーミング分子に共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、膜を混乱させる分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、複数のホーミング分子に結合体化され得るか、そして／もしくは複数のホーミング分子に共有結合で結合され得、ここで上記ホーミング分子は、複数の表面分子と会合され得るか、複数の表面分子に結合体化され得るか、そして／もしくは複数の表面分子に共有結合で結合され得る。これら組み合わせの組み合わせもまた、使用され得る。
【０１１８】
（ｉ．改変された膜を混乱させる分子）
開示される上記膜を混乱させる分子は、膜を混乱させる分子の改変形態を含み得る。上記膜を混乱させる分子は、任意の有用な改変を含み得る。例えば、いくつかの改変は、上記膜を混乱させる分子を安定化し得る。例えば、開示される上記膜を混乱させる分子は、メチル化された膜を混乱させる分子を含む。メチル化された膜を混乱させる分子は、上記膜を混乱させる分子がタンパク質、ペプチドもしくはアミノ酸セグメントを含む場合に、特に有用である。例えば、膜を混乱させる分子は、  改変された膜を混乱させる分子であり得、ここで例えば、上記改変された膜を混乱させる分子は、改変アミノ酸セグメントもしくは改変アミノ酸配列を含む。例えば、改変された膜を混乱させる分子は、メチル化された膜を混乱させる分子であり得、ここで例えば、上記メチル化された膜を混乱させる分子は、メチル化されたアミノ酸セグメントもしくはメチル化されたアミノ酸配列を含む。他の改変は、単独もしくは組み合わせのいずれかにおいて使用され得る。上記膜を混乱させる分子が、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントおよび／もしくはアミノ酸配列であるか、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントおよび／もしくはアミノ酸配列を含む場合、上記改変は、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメントならびに／または上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、および／もしくはアミノ酸配列中の任意のアミノ酸に対してであり得る。アミノ酸およびペプチド改変は、当業者に公知であり、そのうちのいくつかは、以下におよび本明細書のどこかに記載される。メチル化は、開示される上記膜を混乱させる分子に特に有用な改変である。膜を混乱させる分子の改変形態を使用すると、それらの有効性が増大し得る。
【０１１９】
（２．部分）
開示される上記組成物は、１種以上の部分をさらに含み得る。開示される上記組成物の上記積荷分子は、１種以上の部分を含み得る。例えば、上記部分は、抗脈管形成因子、脈管形成促進因子、癌化学療法剤、細胞傷害因子、抗炎症剤、抗関節炎因子、ポリペプチド、核酸分子、低分子、画像造影剤、蛍光団、フルオレセイン、ローダミン、放射性核種、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３からなる群より独立して選択され得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、治療剤であり得る。治療剤の例は、パクリタキセルおよびタキソールである。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、検出可能な因子であり得る。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、用語「部分」とは、一般に、連結されたかもしくは結合体化された分子に生物学的に有用な機能を付与する、物理的、化学的、もしくは生物学的な材料を意味するために広く使用される。本明細書で開示されるように、上記部分の特性は、表面分子においても見いだされ得るか、または上記表面分子および上記部分の両方が、本明細書で開示される特性のうちの１つを共有し得る。例えば、上記表面分子は、検出可能な因子を含み得る一方で、上記部分は、治療剤を含み得る。これは、上記ホーミング分子にも適用され、このことは、本明細書で開示される部分の特性のうちの１種以上を含み得る。本明細書の治療剤および検出可能な因子の説明は、開示される上記積荷分子、膜を混乱させる分子、部分、表面分子、もしくはホーミング分子のうちのいずれかに適用されると解釈される。従って、例えば、部分は、例えば、開示される上記表面分子、ホーミング分子、膜を混乱させる分子、もしくは表面分子、ホーミング分子、および膜を混乱させる分子を含む組成物または表面分子、ホーミング分子、および膜を混乱させる分子の結合体に結合体化され得るか、これらに共有結合で結合され得るか、またはこれらの一部であり得る。
【０１２１】
部分は、任意の天然のもしくは非天然の材料であり得る。これら材料としては、生物学的材料（例えば、細胞、ファージもしくは他のウイルス）；有機化学物質（例えば、低分子）；放射性核種；核酸分子もしくはオリゴヌクレオチド；ポリペプチド；またはペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。有用な部分としては、治療剤（例えば、癌化学療法剤、細胞傷害因子、アポトーシス促進因子、および抗脈管形成因子）；検出可能な標識および画像化剤；ならびにタグもしくは他の不溶性支持体が挙げられるが、これらに限定されない。有用な部分としてはさらに、ファージおよび他のウイルス、細胞、リポソーム、ポリマーマトリクス、非ポリマーマトリクス、もしくは粒子（例えば、金粒子、マイクロデバイスおよびナノデバイス、ならびにナノスケールの半導体材料）が挙げられるが、これらに限定されない。当該分野で公知のこれらおよび他の部分は、組成物の成分であり得る。
【０１２２】
いくつかの形態において、上記部分は、ＲＧＤペプチド（例えば、ｉＲＧＤ）であり得る。ｉＲＧＤペプチドおよびそれらの使用は、米国特許出願公開第２００９−０２４６１３３号（これは、その全体において、具体的にはｉＲＧＤの形態、構造および使用の説明のために本明細書に参考として援用される）に記載される。
【０１２３】
（ｉ．治療剤）
上記部分は、治療剤であり得る。本明細書で使用される場合、用語「治療剤」は、正常組織もしくは病的組織において１種以上の生物学的活性を有し得る分子を意味する。種々の治療剤が、部分として使用され得る。上記治療剤は、癌を処置するための化合物もしくは組成物を含み得る。上記治療剤は、プログラムされた細胞死もしくはアポトーシスを誘導するための化合物もしくは組成物を含み得る。膜を混乱させる分子は、治療剤の形態である。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、上記治療剤は、癌化学療法剤であり得る。本明細書で使用される場合、「癌化学療法剤」は、癌細胞の増殖、成長、寿命もしくは転移活性を阻害する化学的因子である。このような癌化学療法剤は、タキサン（例えば、ドセタキセル）；アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）；アルキル化剤；ビンカ・アルカロイド；代謝拮抗物質；白金剤（例えば、シスプラチンもしくはカルボプラチン）；ステロイド（例えば、メトトレキサート）；抗生物質（例えば、アドリアマイシン）；イホスファミド（ｉｓｏｆａｍｉｄｅ）；もしくは選択的エストロゲンレセプターモジュレーター；抗体（例えば、トラスツズマブ）がであり得るが、これらに限定されない。
【０１２５】
タキサンは、本明細書で開示される組成物で有用な化学療法剤である。有用なタキサンとしては、ドセタキセル（タキソテール；Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）およびパクリタキセル（タキソール；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｃｈａｎら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２３４１−２３５４（１９９９）、およびＰａｒｉｄａｅｎｓら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：７２４（２０００）を参照のこと。
【０１２６】
本明細書で開示される組成物で有用な癌化学療法剤はまた、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、イダルビシン、もしくはダウノルビシン）であり得る。ドキソルビシンは、  一般に使用される癌化学療法剤であり、例えば、乳癌を処置するために有用であり得る（Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｒａｔａｉｎ，  Ｉｎ：  「Ｃａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ」  第５版，第１９章（ｅｄｓ．  ＤｅＶｉｔａ，Ｊｒ．，ら；Ｊ．Ｐ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９７）；Ｈａｒｒｉｓら，Ｉｎ  「Ｃａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ」，前出，１９９７）。さらに、ドキソルビシンは、抗脈管形成活性を有する（Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５：５１０（１９９７）；Ｓｔｅｉｎｅｒ，  Ｉｎ  「Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：  Ｋｅｙ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ−Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ」，ｐｐ．４４９−４５４（ｅｄｓ．Ｓｔｅｉｎｅｒら；Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，１９９２））。このことは、癌を処置するにあたってその有効性に寄与し得る。
【０１２７】
アルキル化剤（例えば、メルファランもしくはクロラムブシル）はまた、有用な癌化学療法剤であり得る。同様に、ビンカ・アルカロイド（例えば、ビンデシン、ビンブラスチン、もしくはビノレルビン）；または代謝拮抗物質（例えば、５−フルオロウラシル、５−フルオロウリジンもしくはその誘導体）は、有用な癌化学療法剤であり得る。
【０１２８】
白金剤はまた、有用な癌化学療法剤であり得る。このような白金剤は、例えば、Ｃｒｏｗｎ，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２８：２８−３７（２００１）に記載されるように、例えば、シスプラチンもしくはカルボプラチンであり得る。他の有用な癌化学療法剤としては、メトトレキサート、マイトマイシン−Ｃ、アドリアマイシン、イホスファミドおよびアンサマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
乳癌および他のホルモン依存性癌の処置に有用な癌化学療法剤はまた、エストロゲンの効果を拮抗する因子（例えば、選択的エストロゲンレセプターモジュレーターもしくは抗エストロゲン）であり得る。上記選択的エストロゲンレセプターモジュレーターであるタモキシフェンは、乳癌の処置のための組成物において使用され得る癌化学療法剤である（Ｆｉｓｈｅｒら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔ．９０：１３７１−１３８８（１９９８））。
【０１３０】
上記治療剤は、抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体）であり得る。例として、抗上皮増殖因子レセプター２（ＨＥＲ２）抗体であるトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ過剰発現乳癌を処置するために有用な治療剤であり得る（Ｗｈｉｔｅら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５２：１２５−１４１（２００１））。
【０１３１】
有用な治療剤はまた、細胞傷害因子であり得る。これは、本明細書で使用される場合、細胞死を直接的にもしくは間接的に促進する任意の分子であり得る。有用な細胞傷害因子としては、低分子、ポリペプチド、ペプチド、ペプチド摸倣物、核酸分子、細胞およびウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。非限定的例として、有用な細胞傷害因子としては、細胞傷害性低分子（例えば、ドキソルビシン、ドセタキセルもしくはトラスツズマブ）；抗菌ペプチド（例えば、以下にさらに記載されるもの）；アポトーシス促進性ポリペプチド（例えば、カスパーゼおよび毒素（例えば、カスパーゼ−８））；ジフテリア毒素Ａ鎖、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、コレラ毒素、リガンド融合毒素（例えば、ＤＡＢ３８９ＥＧＦ、トウゴマ毒素（リシン）；ならびに細胞傷害性細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）が挙げられる。例えば、Ｍａｒｔｉｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２１８−３２２４（２０００）；Ｋｒｅｉｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｐａｓｔａｎ，Ｂｌｏｏｄ  ９０：２５２−２５９（１９９７）；Ａｌｌａｍら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：２６１５−２６１８（１９９７）；およびＯｓｂｏｒｎｅ  ａｎｄ  Ｃｏｒｏｎａｄｏ−Ｈｅｉｎｓｏｈｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ａｍ．２：１７５（１９９６）を参照のこと。当業者は、本明細書に記載されるかもしくは当該分野で公知のこれらおよびさらなる細胞傷害因子が、開示される上記組成物および方法において有用であり得ることを理解する。
【０１３２】
一実施形態において、治療剤は、治療的ポリペプチドであり得る。本明細書で使用される場合、治療的ポリペプチドは、生物学的に有用な機能を有する任意のポリペプチドであり得る。有用な治療的ポリペプチドは、サイトカイン、抗体、細胞傷害性ポリペプチド；アポトーシス促進性ポリペプチド；および抗脈管形成ポリペプチドを包含するが、これらに限定されない。非限定的例として、有用な治療的ポリペプチドは、サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦ−β）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子、（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）；インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、リンホタクチン（ＬＴＮ）もしくは樹状細胞ケモカイン１（ＤＣ−ＣＫ１）；抗ＨＥＲ２抗体もしくはそのフラグメント；毒素もしくはカスパーゼを含む細胞傷害性ポリペプチド（例えば、ジフテリア毒素Ａ鎖、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、コレラ毒素、リガンド融合毒素（例えば、ＤＡＢ３８９ＥＧＦ）もしくはリシン）；または抗脈管形成ポリペプチド（例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン、トロンボスポンジン、血小板因子４）；アナステリン；または本明細書でさらに記載されるかもしくは当該分野で公知のもののうちの１つ（以下を参照のこと）であり得る。生物学的活性を有するこれらおよび他のポリペプチドが、「治療的ポリペプチド」であり得ることは、理解される。
【０１３３】
治療剤はまた、抗脈管形成因子であり得る。本明細書で使用される場合、用語「抗脈管形成因子」とは、新脈管形成（これは、血管の成長および発生である）を低下もしくは妨げる分子を意味する。種々の抗脈管形成因子が、慣用的方法によって調製され得る。このような抗脈管形成因子としては、低分子；タンパク質（例えば、脈管形成因子、転写因子および抗体のドミナントネガティブ形態）；ペプチド；および核酸分子（リボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびに例えば、脈管形成因子およびレセプター、転写因子ならびに抗体およびその抗原結合フラグメントのドミナントネガティブ形態をコードする核酸分子を含む）が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｈａｇｅｄｏｒｎ  ａｎｄ  Ｂｉｋｆａｌｖｉ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３４：８９−１１０（２０００）、およびＫｉｒｓｃｈら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．５０：１４９−１６３（２０００）を参照のこと）。
【０１３４】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、癌の多くのタイプにおける新脈管形成（インビボでの乳癌新脈管形成（Ｂｏｒｇｓｔｒｏｍら，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：４２１３−４２１４（１９９９）を含む）にとって重要であることが示された。ＶＥＧＦの生物学的効果としては、内皮細胞増殖の刺激、生存、移動および管形成、ならびに血管透過性の調節が挙げられる。抗脈管形成因子は、ＶＥＧＦもしくは別の脈管形成因子の発現もしくはシグナル伝達を低下させる、例えば、インヒビターもしくは中和抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ中和モノクローナル抗体（Ｂｏｒｇｓｔｒｏｍら，前出，１９９９））であり得る。抗脈管形成因子はまた、別の脈管形成因子（例えば、線維芽細胞増殖因子ファミリーのメンバー（例えば、ＦＧＦ−１（酸性）、ＦＧＦ−２（塩基性）、ＦＧＦ−４もしくはＦＧＦ−５（Ｓｌａｖｉｎら，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．１９：４３１−４４４（１９９５）；Ｆｏｌｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈｉｎｇ，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１０９３１−１０９３４（１９９２））または脈管形成因子（例えば、アンジオポエチン−１（内皮細胞特異的Ｔｉｅ２レセプターチロシンキナーゼを介してシグナル伝達する因子）（Ｄａｖｉｓら，Ｃｅｌｌ  ８７：１１６１−１１６９（１９９６）；およびＳｕｒｉら，Ｃｅｌｌ  ８７：１１７１−１１８０（１９９６））、またはこれら脈管形成因子のうちの１つのレセプター））を阻害し得る。種々の機構が脈管形成因子の活性を阻害するように作用し得ることは、理解される。上記機構としては、レセプター結合の直接的阻害、細胞外空間への上記脈管形成因子の分泌を低下させることによる間接的阻害、または上記脈管形成因子の発現、機能もしくはシグナル伝達の阻害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
種々の他の分子もまた、抗脈管形成因子として機能し得る。これらとしては、アンジオスタチン；アンジオスタチンのクリングルペプチド；エンドスタチン；アナステリン、フィブロネクチンのヘパリン結合フラグメント；アンチトロンビンの改変形態；コラゲナーゼインヒビター；基底膜ターンオーバーインヒビター；血管新生抑制（ａｎｇｉｏｓｔａｉｃ）ステロイド；血小板因子４ならびにそのフラグメントおよびペプチド；トロンボスポンジンならびにそのフラグメントおよびペプチド；ならびにドキソルビシンが挙げられるが、これらに限定されない（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら，Ｃｅｌｌ  ７９：３１５−３２８（１９９４））；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら，Ｃｅｌｌ  ８８：２７７−２８５（１９９７）；Ｈｏｍａｎｄｂｅｒｇら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１２０：３２７−３３２（１９８５）；Ｈｏｍａｎｄｂｅｒｇら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８７４：６１−７１（１９８６）；およびＯ’Ｒｅｉｌｌｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１９２６−１９２８（１９９９））。市販の抗脈管形成因子としては、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン、メタスタチンおよび２ＭＥ２（ＥｎｔｒｅＭｅｄ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）；抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、アバスチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．））；およびＶＥＧＦＲ−２インヒビター（例えば、ＳＵ５４１６、ＶＥＧＦＲ−２の低分子インヒビター（ＳＵＧＥＮ；Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）およびＳＵ６６６８（ＳＵＧＥＮ））、ＶＥＧＦＲ−２の低分子インヒビター、血小板由来増殖因子および線維芽細胞増殖因子Ｉレセプターが挙げられる。これらおよび他の抗脈管形成因子が、慣用的方法によって調製され得、本明細書で使用される用語「抗脈管形成因子」によって包含されることは、理解される。
【０１３６】
本明細書で開示される組成物はまた、炎症もしくは損傷の部位において使用され得る。この目的に有用な部分は、炎症を妨げる抗炎症剤、組織増殖を妨げる再狭窄予防薬物、血栓の形成を阻害もしくは制御する抗血栓薬または血栓溶解剤、ならびに組織増殖を調節しかつ上記組織の治癒を増強する生体活性因子を含むいくつかの基本的な群に属する治療剤を含み得る。有用な治療剤の例としては、ステロイド、フィブロネクチン、抗凝固薬、抗血小板機能薬物、血管壁の内側表面での平滑筋細胞増殖を妨げる薬物、ヘパリン、ヘパリンフラグメント、アスピリン、クマジン、組織プラスミノゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、ウロキナーゼ、ヒルジン、ストレプトキナーゼ、抗増殖剤（メトトレキサート、シスプラチン、フルオロウラシル、アドリアマイシン）、抗酸化剤（アスコルビン酸、ベータカロテン、ビタミンＥ）、代謝拮抗物質、トロンボキサンインヒビター、非ステロイド性およびステロイド性の抗炎症薬、βブロッカーおよびカルシウムチャネルブロッカー、ＤＮＡフラグメントおよびＲＮＡフラグメントを含む遺伝物質、完全発現遺伝子、抗体、リンホカイン、増殖因子、プロスタグランジン、ロイコトリエン、ラミニン、エラスチン、コラーゲン、およびインテグリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
有用な治療剤はまた、抗菌ペプチドであり得る。従って、例えば、抗菌ペプチドを含む部分もまた開示され、ここでその組成物は、選択的に内部移行され、標的化された領域に高い毒性を示す。有用な抗菌ペプチドは、上記組成物へと組み込まれない場合に、哺乳動物細胞に対し低い毒性を有し得る。本明細書で使用される場合、用語「抗菌ペプチド」は、抗菌活性（１種以上の微生物を死滅させるかもしくはその増殖を遅らせる能力である）を有する天然に存在するペプチドもしくは合成ペプチドを意味する。抗菌ペプチドは、例えば、細菌（グラム陽性細菌もしくはグラム陰性細菌を含む）、または真菌もしくは原生動物のうちの１種以上の株を死滅させ得るか、またはその増殖を遅らせ得る。従って、抗菌ペプチドは、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａもしくはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのうちの１つ以上の株に対する例えば、静菌活性もしくは殺菌活性を有し得る。以下によって拘束されることは望まないが、抗菌ペプチドは、自己凝集の結果として膜二重層を介してイオンチャネルを形成する能力に起因して、生物学的活性を有し得る。
【０１３８】
抗菌ペプチドは、代表的には塩基性が高く、線状もしくは環状の構造を有し得る。以下でさらに述べられるように、抗菌ペプチドは、両親媒性のα-ヘリックス構造を有し得る（米国特許第５，７８９，５４２号；Ｊａｖａｄｐｏｕｒら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３１０７−３１１３（１９９６）；およびＢｌｏｎｄｅｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１：１２６８８−１２６９４（１９９２）を参照のこと）。抗菌ペプチドはまた、Ｍａｎｃｈｅｎｏら，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．５１：１４２−１４８（１９９８）に記載されるように、例えば、β−ストランド／シート形成ペプチドであり得る。
【０１３９】
抗菌ペプチドは、天然に存在するペプチドもしくは合成ペプチドであり得る。天然に存在する抗菌ペプチドは、生物源（例えば、細菌、昆虫、両生類、および哺乳動物）から単離されてきており、宿主生物を細菌感染から防御し得る誘導性防御タンパク質を表すと考えられる。天然に存在する抗菌ペプチドとしては、グラミシジン、マガイニン、メリチン、ディフェンシンおよびセクロピンが挙げられる（例えば、Ｍａｌｏｙ  ａｎｄ  Ｋａｒｉ，  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ３７：１０５−１２２（１９９５）；Ａｌｖａｒｅｚ−Ｂｒａｖｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０２：５３５−５３８（１９９４）；Ｂｅｓｓａｌｌｅら，ＦＥＢＳ  ２７４：−１５１−１５５（１９９０．）；およびＢｌｏｎｄｅｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ｉｎ  Ｂｒｉｓｔｏｌ（Ｅｄ．），Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｐａｇｅｓ  １５９−１６８  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏを参照のこと）。抗菌ペプチドはまた、天然ペプチドのアナログ（特に、両親媒性を保持するかもしくは増強するもの（以下を参照のこと））であり得る。
【０１４０】
本明細書で開示される組成物に組み込まれる抗菌ペプチドは、上記組成物に連結される場合に、哺乳動物細胞に対し低い毒性を有し得る。哺乳動物細胞に対する毒性は、慣用的なアッセイを使用して容易に評価され得る。例として、哺乳動物細胞に対する毒性は、Ｊａｖａｄｐｏｕｒら，前出，１９９６に記載されるように、インビトロでのヒト赤血球の溶解によってアッセイされ得る。哺乳動物細胞に対し低い毒性を有する抗菌ペプチドは、ヒト赤血球に対して溶解性でないか、または溶解活性に関して１００μＭより高い濃度、好ましくは、２００μＭ、３００μＭ、５００μＭもしくは１０００μＭより高い濃度を要する。
【０１４１】
一実施形態において、抗菌ペプチド部分が、真核生物細胞によって内部移行される場合にミトコンドリア膜の破壊を促進する組成物が開示される。特に、このような抗菌ペプチドは、真核生物膜と比較して、ミトコンドリア膜を優先的に破壊する。ミトコンドリア膜は、真核生物原形質膜とは対照的であることを除き、細菌膜と類似して、負に荷電したリン脂質の高い含有量を有する。抗菌ペプチドは、例えば、ミトコンドリア膨張についてのアッセイもしくは当該分野で周知の別のアッセイを使用して、ミトコンドリア膜を破壊する活性についてアッセイされ得る。
【０１４２】
例えば、５０μＭ、４０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１０μＭ、もしくはそれ未満において顕著なミトコンドリア膨張を誘導する抗菌ペプチドは、ミトコンドリア膜の破壊を促進するペプチドとみなされる。
【０１４３】
抗菌ペプチドは、一般に、薄い水性溶液中でランダムコイル構造を有するが、高いレベルのらせん性が、ヘリックス促進溶媒および両親媒性媒体（例えば、ミセル、合成二重層もしくは細胞膜）によって誘導され得る。α−ヘリックス構造は、当該分野で周知であり、理想的α−ヘリックスは、３．６残基／ターンおよび１．５Å／残基の平行移動（５．４Å／ターン；Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｗ．  Ｈ  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）を参照のこと）を有することによって特徴付けられる。両親媒性α-ヘリックス構造において、極性および非極性のアミノ酸残基は、両親媒性ヘリックスへと整列される。上記両親媒性ヘリックスは、上記ペプチドを、らせん軸に沿って検査したときに、疎水性アミノ酸残基が一方の表面に主に存在し、親水性残基が反対側の表面に主に存在するα-ヘリックスである。
【０１４４】
広く変動する配列の抗菌ペプチドが単離されてきており、共通する特徴として両親媒性α−ヘリックス構造を共有する（Ｓａｂｅｒｗａｌら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１９７：１０９−１３１（１９９４））。両親媒性およびらせん性を増強すると推定されるアミノ酸置換を有する天然ペプチドのアナログは、代表的には、増大した抗菌活性を有する。一般に、増大した抗菌活性を有するアナログはまた、哺乳動物細胞に対して増大した細胞傷害性を有する（Ｍａｌｏｙら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ３７：１０５−１２２（１９９５））。
【０１４５】
抗菌ペプチドに言及して本明細書で使用される場合、用語「両親媒性α−ヘリックス構造」とは、生理学的ｐＨにおいていくつかの極性残基を含む親水性表面および非極性残基を含む疎水性表面を有するα-ヘリックスを意味する。極性残基は、例えば、リジンもしくはアルギニン残基であり得る一方で、非極性残基は、例えば、ロイシンもしくはアラニン残基であり得る。両親媒性α-ヘリックス構造を有する抗菌ペプチドは、一般に、両親媒性ドメイン内に等価な数の極性残基および非極性残基を有し、中性ｐＨにおいて全体として正電荷を上記ペプチドに与えるための十分な数の塩基性残基を有する（Ｓａｂｅｒｗａｌら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１９７：１０９−１３１（１９９４））。当業者は、ヘリックス促進アミノ酸（例えば、ロイシンおよびアラニン）が、有利なことには、抗菌ペプチド中に含まれ得ることを理解する（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，前出，１９８４を参照のこと）。両親媒性α−ヘリックス構造を有する合成抗菌ペプチドは、例えば、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ａｎｄ  Ｂｅｃｋｅｒへの米国特許第５，７８９，５４２号に記載されるように、当該分野で公知である。
【０１４６】
これらおよび他の因子が、有用な治療剤であり、それらが開示される上記組成物および方法において別個にもしくは一緒に使用され得ることは、治療腫瘍学の当業者によって理解される。従って、本明細書で開示される組成物が、このような治療剤のうちの１種以上を含み得ること、および望ましい場合、上記組成物の一部としてさらなる成分が含まれ得ることは、理解される。非限定的例として、上記表面分子と上記ホーミング分子および／もしくは積荷分子との間でオリゴペプチドスペーサーを利用することは、いくらかの場合には望ましいことであり得る（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｇａｒｎｅｔｔ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．１０：１−９（１９９５））。
【０１４７】
他の有用な因子としては、血栓溶解剤、アスピリン、抗凝固剤、鎮痛剤および精神安定薬、β遮断薬、アンギオテンシン変換酵素（ａｃｅ）インヒビター、硝酸塩、リズム安定化薬（ｒｈｙｔｈｍ−ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｄｒｕｇ）、および利尿薬が挙げられる。心臓への損傷を制限する因子は、心臓発作の数時間内に与えられた場合に最もよく働く。血塊を破壊しかつ酸素が豊富な血液が閉塞した動脈を介して流れることを可能にする血栓溶解剤は、心臓発作後可能な限り早く与えられれば、患者の生存機会を増大させる。心臓発作後数時間内に与えられる血栓溶解剤は、最も有効である。静脈内に注射される、これらは、アニソイル化プラスミノゲンストレプトキナーゼアクチベーター複合体（ａｎｉｓｏｙｌａｔｅｄ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＡＰＳＡＣ）もしくはアニストレプラーゼ、組換え組織型プラスミノゲンアクチベーター（ｒ−ｔＰＡ）、およびストレプトキナーゼが挙げられる。開示される上記化合物は、これらもしくは類似の因子のうちのいずれかを使用し得る。
【０１４８】
有用な治療剤のいくつかの他の例としては、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン、アルカンスルホネート、テトラジン、白金化合物、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、代謝拮抗物質、葉酸アナログ、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、トポイソメラーゼインヒビターおよびホルモン剤が挙げられる。例示的な化学療法薬は、以下である：アクチノマイシン−Ｄ、アルケラン、Ａｒａ−Ｃ、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ＢｉＣＮＵ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルボプラチナム（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎｕｍ）、カルムスチン、ＣＣＮＵ、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（Ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、シスプラチン、クラドリビン、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタラビン、シトシンアラビノシド、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ＤＴＩＣ、エピルビシン、エストラムスチン、エチレンイミン、エトポシド、フルクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォテムスチン、ゲムシタビン、ハーセプチン、ヘキサメチルアミン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトーテン、ミトザントロン、ノベムビキン（Ｎｏｖｅｍｂｉｅｈｉｎ）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、フェネステリン（Ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プリカマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン、リツキシマブ、ステロイド、ストレプトゾシン、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テトラジン、チオグアニン、チオテパ、トムデクス（Ｔｏｍｕｄｅｘ）、トポテカン、トレオスルファン、トリメトレキサート、トロホスファミド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、およびゼローダ。アルキル化剤（例えば、チオテパ）および；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ、カルボコン（Ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドパ、およびウレドパ）；エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；ニトロソウレア（例えば、カルムススチン（Ｃａｎｎｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン）；抗生物質（例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（Ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（Ｃｈｒｏｍｏｉｎｙｃｉｎ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（Ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（Ｉｄａｍｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（Ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（Ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン）；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、およびトリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、および５−ＦＵ）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、ルネピチオスタン（Ｒｎｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、およびテストラクトン）；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、アミノグルテチミド、ミトーテン、およびトリロスタン）；葉酸補充物（ｆｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）（例えば、フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（Ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン；デメコルチン；ジアジコン；エフロルニチン（Ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトザントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ．ＲＴＭ．；ラゾキサン；シゾフィラン（Ｓｉｚｏｆｒｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標），Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標），Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ））；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトザントロン；ビンクリスチン；ビノレ���ビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラマイシン；カペシタビン；および薬学的に受容可能な上記のうちのいずれかの塩、酸もしくは誘導体。また、腫瘍に対するホルモン作用を調節もしくは阻害するように作用する抗ホルモン剤（例えば、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼを阻害する４（５）−イミダゾール、４  ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、およびトレミフェン（フェアストン）が挙げられる）；および抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン））；ならびに薬学的に受容可能な上記のうちのいずれかの塩、酸もしくは誘導体が含まれる。有用な積荷分子としては、例えば、ドキソルビシン、ハーセプチン、およびリポソームドキソルビシンが挙げられる。
【０１４９】
上記積荷分子はまた、ホウ素含有化合物を含み得る。ホウ素含有化合物は、過去数年間で治療剤として注目を浴びてきた。なぜなら有機合成の技術は、この原子を含めるように拡大されてきたからである（Ｂｏｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｈｏｒｉｚｏｎ，Ｇｒｏｚｉａｋ，Ｍ．Ｐ．；  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００１）  ８，３２１−３２８）。最も注目に値するホウ素含有治療剤は、ボロン酸ボルテゾミブである。これは、多発性骨髄腫の処置のために近年送り出された。この画期的成功は、ホウ素含有化合物を薬剤として使用するという実施可能性を実証している。ホウ素含有化合物は、種々の生物学的活性（除草剤（Ｏｒｇａｎｉｃ  ｂｏｒｏｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｓ  ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓ．  Ｂａｒｎｓｌｅｙ，Ｇ．Ｅ．；Ｅａｔｏｎ，Ｊ．Ｋ．；Ａｉｒｓ，Ｒ．Ｓ．；（１９５７）、ＤＥ  １０１６９７８  １９５７１００３）、ホウ素中性子捕捉療法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｂ−１０  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．；Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，（１９９１）  ６３，４２３−４２６）、セリンプロテアーゼ阻害（Ｂｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｓ  ｐｒｏｂｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｔ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ  Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ  ａｎｄ  ａｌｐｈａ−ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ．  Ｓｉｍｐｅｌｋａｍｐ，Ｊ．；  Ｊｏｎｅｓ，Ｊ．Ｂ．；  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，（１９９２），２（１１），１３９１−４；Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂｏｒｏｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｔｈｒｏｍｂｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．  Ｗｅｉｎａｎｄ，Ａ．；  Ｅｈｒｈａｒｄｔ，Ｃ．；  Ｍｅｔｔｅｒｎｉｃｈ，Ｒ．；  Ｔａｐｐａｒｅｌｌｉ，Ｃ．；  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（１９９９），７，１２９５−１３０７）、アセチルコリンエステラーゼ阻害（Ｎｅｗ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｌｋｙｌｂｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ．  Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｋ．Ａ．；  Ｈｅｓｓ，Ｇ．Ｐ．；  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７４），１３，５３４５−５０）および抗菌剤として（Ｂｏｒｏｎ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ：  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｕｎｄｅｒ  Ｖａｒｉｏｕｓ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．  Ｂａｉｌｅｙ，Ｐ．Ｊ．；  Ｃｏｕｓｉｎｓ，Ｇ．；  Ｓｎｏｗ，Ｇ．Ａ．；  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ，Ａ．Ｊ．；  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，（１９８０），１７，５４９−５５３）が挙げられ��）を有することが示された。抗菌活性を有する上記ホウ素含有化合物は、２つの大きなクラスにさらに分けられ得る；ジアザボリニン（これは、１９６０年代以来、知られている）、およびジチエニルボリン酸錯体。この後者のクラスは、強力な抗菌活性を有する多くの異なるジアリールボリン酸錯体を含むように拡大された（Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉａｒｙｌｂｏｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｓｔｅｒｓ  ａｓ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．  Ｂｅｎｋｏｖｉｃ，Ｓ．Ｊ．；  Ｓｈａｐｉｒｏ，Ｌ．；  Ｂａｋｅｒ，Ｓ．Ｊ．；  Ｗａｈｎｏｎ，Ｄ．Ｃ．；  Ｗａｌｌ，Ｍ．；  Ｓｈｉｅｒ，Ｖ．Ｋ．；  Ｓｃｏｔｔ，Ｃ．Ｐ．；  Ｂａｂｏｖａｌ，Ｊ．；  ＰＣＴ国際出願（２００２），ＷＯ  ２００２０４４１８４）。
【０１５０】
（ｉｉ．検出可能な因子）
開示される上記組成物中の部分はまた、検出可能な因子であり得る。種々の検出可能な因子は、開示される上記方法において有用である。本明細書で使用される場合、用語「検出可能な因子」とは、検出され得る任意の分子を指す。有用な検出可能な因子としては、インビボで投与され得、その後検出され得る化合物および分子を含む。開示される上記組成物および方法において有用な検出可能な因子は、放射標識および蛍光分子が挙げられるが、さらにまたこれらに限定されない。上記検出可能な因子は、例えば、直接的もしくは間接的のいずれかで、好ましくは、非侵襲性技術および／もしくはインビボ視覚化技術によって、検出を容易にする任意の分子であり得る。例えば、検出可能な因子は、任意の公知の画像化技術（例えば、放射線技術、磁気共鳴技術、もしくは超音波技術が挙げられる）によって検出可能であり得る。検出可能な因子は、例えば、造影剤（例えば、ここで上記造影剤は、イオン性もしくは非イオン性である）を含み得る。いくつかの実施形態において、例えば、上記検出可能な因子は、タンタル化合物および／もしくはバリウム化合物（例えば、硫酸バリウム）を含む。いくつかの実施形態において、上記検出可能な因子は、ヨウ素（例えば、放射活性ヨウ素）を含む。いくつかの実施形態において、例えば、上記検出可能な因子は、有機ヨード酸（例えば、ヨードカルボン酸、トリヨードフェノール、ヨードホルムおよび／もしくはテトラヨードエチレン）を含む。いくつかの実施形態において、上記検出可能な因子は、非放射活性の検出可能な因子（例えば、非放射活性同位体）を含む。例えば、Ｇｄは、特定の実施形態において非放射活性の検出可能な因子として使用され得る。
【０１５１】
検出可能な因子の他の例としては、検出可能な放射線を発するかもしくは発するようにされ得る分子（例えば、蛍光励起、放射性崩壊、スピン共鳴励起など）、局所的電磁場に影響を及ぼす分子（例えば、磁性種、強磁性種、強磁性種、常磁性種、および／もしくは超常磁性種）、放射エネルギーを吸収もしくは散乱する分子（例えば、発色団および／もしくは蛍光団）、量子ドット、重元素および／もしくはそれらの化合物が挙げられる。例えば、米国特許公開第２００４／０００９１２２号に記載される検出可能な因子を参照のこと。検出可能な因子の他の例としては、プロトン放射分子、放射線不透過性分子、および／もしくは放射活性分子（例えば、Ｔｃ−９９ｍおよび／もしくはＸｅ−１３のような放射性核種）が挙げられる。このような分子は、放射性薬品として使用され得る。さらに他の実施形態において、開示される上記組成物は、１種以上の異なるタイプの検出可能な因子（本明細書で開示される検出可能な因子の任意の組み合わせを含む）を含み得る。
【０１５２】
有用な蛍光部分としては、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、５，６−カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イル（ＮＢＤ）、クマリン、ダンシルクロリド、ローダミン、アミノ−メチルクマリン（ＡＭＣＡ）、エオシン、エリスロシン、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）、カスケードブルー（登録商標）、オレゴングリーン（登録商標）、ピレン、リサミン、キサンテン、アクリジン、オキサジン、フィコエリトリン、ランタニドイオンの大環状キレート（例えば、ｑｕａｎｔｕｍ  ｄｙｅＴＭ、蛍光エネルギー移動色素（例えば、チアゾールオレンジ−エチジウムヘテロダイマー）、ならびにシアニン色素Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５およびＣｙ７が挙げられる。他の具体的な蛍光標識の例としては、以下が挙げられる：３−ヒドロキシピレン  ５，８，１０−トリスルホン酸、５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）、酸性フクシン、アリザリンコンプレクソン、アリザリンレッド、アロフィコシアニン、アミノクマリン、ステアリン酸アンスロイル、アストラゾンブリリアントレッド４Ｇ、アストラゾンオレンジＲ、アストラゾンレッド６Ｂ、アストラゾンイエロー７  ＧＬＬ、アタブリン、オーラミン、オーロホスフィン、オーロホスフィンＧ、ＢＡＯ  ９（ビスアミノフェニルオキサジアゾール）、ＢＣＥＣＦ、硫酸ベルベリン、ビスベンズアミド、ブランコホル（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ）ＦＦＧ溶液、ブランコホルＳＶ、Ｂｏｄｉｐｙ  Ｆ１、ブリリアントスルホフラビンＦＦ、カルセインブルー（Ｃａｌｃｉｅｎ  Ｂｌｕｅ）、カルシウムグリーン、カルコフロールＲＷ溶液、カルコフロールホワイト、カルコホールホワイトＡＢＴ溶液、カルコホールホワイト標準溶液、カルボスチリル、カスケードイエロー、カテコールアミン、キナクリン、コリホスフィンＯ、クマリン−ファロイジン、ＣＹ３．１  ８、ＣＹ５．１  ８、ＣＹ７、Ｄａｎｓ（１−ジメチルアミノナファリン  ５  スルホン酸）、Ｄａｎｓａ（ジアミノ  ナフチルスルホン酸）、Ｄａｎｓｙｌ  ＮＨ−ＣＨ３、ジアミノフェニルオキシジアゾール（ＤＡＯ）、ジメチルアミノ−５−スルホン酸、ジピロメテンボロンジフルオリド、ジフェニルブリリアントフラビン  ７ＧＦＦ、ドパミン、エリスロシン  ＩＴＣ、オイクリシン、ＦＩＦ（ホルムアルデヒド誘導性蛍光）、フラゾオレンジ、Ｆｌｕｏ  ３、フルオレスカミン、Ｆｕｒａ−２、ゲナクリルブリリアントレッドＢ、ゲナクリルブリリアントイエロー１０ＧＦ、ゲナクリルピンク３Ｇ、ゲナクリルイエロー５ＧＦ、グロキサン酸（Ｇｌｏｘａｌｉｃ  Ａｃｉｄ）、グラニュラーブルー、ヘマトポルフィリン、Ｉｎｄｏ−１、イントラホワイトＣｆリキッド、ロイコホールＰＡＦ、ロイコホールＳＦ、ロイコホールＷＳ、リサミン  ローダミン  Ｂ２００（ＲＤ２００）、ルシファーイエローＣＨ、ルシファーイエローＶＳ、マグダラレッド、マリーナブルー、マキシロンブリリアントフラビン１０  ＧＦＦ、マキシロンブリリアントフラビン８  ＧＦＦ、ＭＰＳ（メチルグリーンピロニンスチルベン）、ミトラマイシン、ＮＢＤアミン、ニトロベンゾキサジドール（Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｘａｄｉｄｏｌｅ��、ノルアドレナリン、ニュークリアーファストレッド、ニュークリアーイエロー、ニロサンブリリアントフラビンＥ８Ｇ、オキサジアゾール、パシフィックブルー、パラロサニリン（Ｆｅｕｌｇｅｎ）、Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＡＲ溶液、Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＢＫＬ、Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  Ｒｅｖ、Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＲＰＡ、ホスフィン３Ｒ、フタロシアニン、フィコエリトリンＲ、ポリアザインダセンポントクロームブルーブラック、ポルフィリン、プリムリン、プロシオンイエロー、ピロニン、ピロニンＢ、ピロザールブリリアントフラビン７ＧＦ、キナクリンマスタード、ローダミン１２３、ローダミン５  ＧＬＤ、ローダミン６Ｇ、ローダミンＢ、ローダミンＢ  ２００、ローダミンＢ  Ｅｘｔｒａ、ローダミン  ＢＢ、ローダミンＢＧ、ローダミンＷＴ、セロトニン、セブロンブリリアントレッド２Ｂ、セブロンブリリアントレッド４Ｇ、セブロンブリリアントレッドＢ、セブロンオレンジ、セブロンイエローＬ、ＳＩＴＳ（プリムリン）、ＳＩＴＳ（スチルベンイソチオスルホン酸）、スチルベン、スナーフ１、スルホローダミンＢ  Ｃａｎ  Ｃ、スルホローダミン  Ｇ  Ｅｘｔｒａ、テトラサイクリン、チアジンレッドＲ、チオフラビンＳ、チオフラビンＴＣＮ、チオフラビン５、チオライト、チオゾールオレンジ、チノポールＣＢＳ、トルーブルー、ウルトラライト、ウラニンＢ、Ｕｖｉｔｅｘ  ＳＦＣ、キシレンオレンジ、およびＸＲＩＴＣ。
【０１５３】
特に有用な蛍光標識としては、フルオレセイン（５−カルボキシフルオレセイン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ローダミン（５，６−テトラメチルローダミン）、およびシアニン色素Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５およびＣｙ７が挙げられる。これら蛍光物質の吸収最大および発光最大は、それぞれ、以下である：ＦＩＴＣ（４９０ｎｍ；５２０ｎｍ）、Ｃｙ３（５５４ｎｍ；５６８ｎｍ）、Ｃｙ３．５（５８１ｎｍ；５８８ｎｍ）、Ｃｙ５（６５２ｎｍ：６７２ｎｍ）、Ｃｙ５．５（６８２ｎｍ；７０３ｎｍ）およびＣｙ７（７５５ｎｍ；７７８ｎｍ）。従って、それらの同時検出を可能にする。フルオレセイン色素の他の例としては、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、２’，４’，１，４，−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、２’，４’，５’，７’，１，４−ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、２’，７’−ジメトキシ−４’，５’−ジクロロ−６−カルボキシローダミン（ＪＯＥ）、２’−クロロ−５’−フルオロ−７’，８’−縮合フェニル−１，４−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン（ＮＥＤ）、および２’−クロロ−７’−フェニル−１，４−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン（ＶＩＣ）が挙げられる。蛍光標識は、種々の化学供給源（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；およびＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，Ｏｈｉｏが挙げられる）から得られ得る。蛍光プローブおよびその使用はまた、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．  ＨａｕｇｌａｎｄによるＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓに記載される。
【０１５４】
放射活性検出可能な因子のさらなる例としては、γ放射体（例えば、ガンマ放射体Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２５およびＩ−１３１、レニウム−１８６および１８８、ならびにＢｒ−７７（例えば、Ｔｈａｋｕｒ，Ｍ．Ｌ．ら，  Ｔｈｒｏｍ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．９  ｐｇ．３４５（１９７６）；Ｐｏｗｅｒｓら，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．３２  ｐｇ．９３８（１９８２）；および米国特許第５，０１１，６８６号を参照のこと））；ポジトロン放射体（例えば、Ｃｕ−６４、Ｃ−１１、およびＯ−１５）、ならびにＣｏ−５７、Ｃｕ−６７、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｒｕ−９７、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１３ｍ、Ｈｇ−１９７、Ａｕ−１９８、およびＰｂ−２０３が挙げられる。他の放射活性検出可能な因子としては、例えば、トリチウム、Ｃ−１４および／もしくはタリウム、ならびにＲｈ−１０５、Ｉ−１２３、Ｎｄ−１４７、Ｐｍ−１５１、Ｓｍ−１５３、Ｇｄ−１５９、Ｔｂ−１６１、Ｅｒ−１７１および／もしくはＴｌ−２０１が挙げられ得る。
【０１５５】
テクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）の使用は、好ましく、他の適用において記載されてきた。例えば、米国特許第４，４１８，０５２号および同第５，０２４，８２９号を参照のこと。Ｔｃ−９９ｍは、単一光子エネルギー１４０ｋｅＶおよび半減期約６時間を有するガンマ放射体であり、Ｍｏ−９９／Ｔｃ−９９ジェネレータから容易に得られ得る。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、放射活性の検出可能な因子を含む組成物は、標的化部分と、検出に適した放射性同位元素とを結合させることによって調製され得る。結合は、キレート剤（例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ−，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’”−四酢酸（ＤＯＴＡ）および／もしくはメタロチオネイン）を介して起こり得、これらのうちのいずれかは、上記標的化された部分に共有結合で結合され得る。いくつかの実施形態において、テクネチウム−９９ｍ、還元剤、および水溶性リガンドの水性混合物が調製され得、次いで、開示される標的化部分と反応させられる。このような方法は、当該分野で公知である（例えば、国際特許公開番号ＷＯ  ９９／６４４４６を参照のこと）。いくつかの実施形態において、放射活性ヨウ素を含む組成物は、交換反応を使用して調製され得る。例えば、ホットなヨウ素のコールドのヨウ素に代えての交換は、当該分野で周知である。あるいは、放射性ヨウ素標識化合物は、トリブチルスタンニル中間体を介して対応する臭素化合物から調製され得る。
【０１５７】
磁性の検出可能な因子としては、例えば、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）で使用される常磁性造影剤（例えば、ガドリニウムジエチレントリアミン五酢酸）が挙げられる（例えば、Ｄｅ  Ｒｏｏｓ，Ａ．ら，  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄ．Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｖｏｌ．７  ｐｇ．１３３（１９９１）を参照のこと）。いくつかの好ましい実施形態は、上記検出可能な因子として、原子番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、４２、４４、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、もしくは７０を有する元素の二価イオンもしくは三価イオンである常磁性原子を使用する。適切なイオンとしては、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、プラセオジム（ＩＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）およびイッテルビウム（ＩＩＩ）、ならびにガドリニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ｄｉｓｏｐｒｏｓｉｕｍ）（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、およびエルビウム（ＩＩＩ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態は、強磁気モーメントを有する原子（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ））を使用する。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、磁性の検出可能な因子を含む組成物は、標的化部分と常磁性原子とを結合することによって調製され得る。例えば、適切な常磁性原子の金属酸化物もしくは金属塩（例えば、硝酸塩、塩化物もしくは硫酸塩）は、水／アルコール媒体（例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、および／もしくはイソプロピルアルコール）中に溶解もしくは懸濁され得る。その混合物は、類似の水／アルコール媒体中の等モル量の標的化部分の溶液に添加され得、撹拌され得る。上記混合物は、反応が完了するかもしくはほぼ完了するまで穏やかに加熱され得る。形成される不溶性の組成物は、濾過によって得られ得る一方で、可溶性の組成物は、溶媒をエバポレートすることによって得られ得る。キレート部分の酸基が開示される上記組成物に残っている場合、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウムおよび／もしくは炭酸水素ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウムおよび／もしくは炭酸水素カリウム、ならびに／または水酸化リチウム、炭酸リチウムおよび／もしくは炭酸水素リチウム）、有機塩基、ならびに／または塩基性アミノ酸が、例えば、上記組成物の単離もしくは精製を促進するために、酸性基を中和するために使用され得る。
【０１５９】
上記検出可能な因子は、上記ホーミング分子が標的部位と相互作用するその能力に干渉しないような方法で、上記組成物に結合され得る。いくつかの実施形態において、上記検出可能な因子は、例えば、上記表面分子、ホーミング分子、および／もしくは膜を混乱させる分子に化学的に結合され得る。いくつかの実施形態において、上記検出可能な因子は、例えば、上記表面分子、ホーミング分子、および／もしくは膜を混乱させる分子にそれ自体化学基に結合される部分に化学的に結合され得、画像化部分と標的化部分とを間接的に連結する。
【０１６０】
（Ｃ．内部移行エレメントおよび組織浸透エレメント）
開示される上記組成物、表面分子、積荷分子、ペプチド、タンパク質、アミノ酸配列などは、１種以上の内部移行エレメント、組織浸透エレメント、もしくはその両方を含み得る。内部移行エレメントおよび組織浸透エレメントは、上記組成物の他のペプチド成分（例えば、ペプチドホーミング分子およびペプチド積荷分子）へと組み込まれ得るか、または上記他のペプチド成分と融合され得る。内部移行エレメントは、内部移行エレメントおよび会合される成分が、生物学的膜を通過することを可能にする分子（しばしば、ペプチドもしくはアミノ酸配列）である。組織浸透エレメントは、上記組織浸透エレメントおよび会合される成分が組織の中へおよび組織を通って通過することを可能にする分子（しばしば、ペプチドもしくはアミノ酸配列）である。「内部移行」とは、原形質膜もしくは他の生物学的バリアを通る通過を指す。「浸透」とは、膜、細胞、組織、もしくは他の生物学的バリアの中へのおよび膜、細胞、組織、もしくは他の生物学的バリアを通っての通過を指す。浸透は、一般に、内部移行に関与しかつ内部移行を含む。いくつかの分子（例えば、ＣｅｎｄＲエレメント）は、内部移行エレメントおよび組織浸透エレメントの両方として機能する。
【０１６１】
内部移行エレメントは、例えば、細胞浸透ペプチド（ＣＰＰ）およびＣｅｎｄＲペプチドを含む。細胞の中に内部移行されるペプチドは、細胞浸透ペプチドと一般にいわれる。このようなペプチドには大きく２つのクラスがある：疎水性およびカチオン性（Ｚｏｒｋｏ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｌ，２００５）。上記カチオン性ペプチドは、核酸、タンパク質を細胞に導入するために一般に使用され、プロトタイプの細胞浸透ペプチド（ＣＰＰ）、Ｔａｔ、およびペネトラチンを含む（Ｄｅｒｏｓｓｉら，１９９８；Ｍｅａｄｅ  ａｎｄ  Ｄｏｗｄｙ，２００７）。ヘルペスウイルスタンパク質ＶＰ２２は、細胞への出入りおよびそれと一緒のペイロードを有することの両方を可能にする（Ｅｌｌｉｏｔｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｈａｒｅ，１９９７；Ｂｒｅｗｉｓら，２００３）。
【０１６２】
（１．ＣｅｎｄＲエレメント）
内部移行エレメントおよび組織浸透エレメントの有用な形態は、ＣｅｎｄＲエレメントである。ＣｅｎｄＲエレメントは、細胞の中へのファージおよび遊離ペプチドの高度に効率的な内部移行をシグナル伝達する明瞭に示す特徴としてＣ末端エレメントを有するアミノ酸配列である。この内部移行現象は、「Ｃ末端ルール」もしくは「ＣｅｎｄＲ」と名付けられた。そのＣｅｎｄＲ経路はまた、血管系からの目的の組成物の通過およびそれらの組織への拡散のために使用され得る。上記Ｃ末端エレメントは、上記血管系からの組成物の拡散を引き起こすことができる（そして、従って、例えば、静脈内注射から腫瘍組織へ拡がり得る）。ＣｅｎｄＲエレメントはまた、目的の組成物が他のＣｅｎｄＲ能のある膜（例えば、粘膜および血液脳関門）を通過するのを媒介するために使用され得る。本明細書で使用される場合、「組織浸透」および「組織の浸透」とは、細胞の外層もしくは第１層を越えてもしくは通っての、または組織膜を通っての、組織の中へのもしくは組織を通っての通過を指す。組織を通ってのこのような通過もしくは浸透（これはまた、管外遊出および組織浸透ということができる）は、例えば、細胞内部移行および上記組織における細胞間の通過の機能であり得る。本願全体を通して、用語「組織浸透」が使用される場合、このような浸透がまた、身体全体を通じて見いだされる他のバリアおよびＣｅｎｄＲ能のある膜（例えば、血液脳関門）にまで拡大され得ることが理解される。
【０１６３】
公知の細胞浸透ペプチドとは異なって、上記ＣｅｎｄＲ内部移行エレメントは、位置依存性である（それは、上記ペプチドのＣ末端以外の位置にある場合は、不活性である）。別の区別できる特徴は、上記ＣｅｎｄＲエレメントが立体特異的であり、すなわち、Ｄ−アミノ酸から構成されるＣｅｎｄＲエレメントが不活性であることである。潜在的なＣｅｎｄＲペプチドは、例えば、適切なタンパク質分解酵素によって切断されることで活性化されて、例えば、Ｃ末端アルギニン、リジン、もしくはリジン−グリシンを露出することができる。本願全体を通じて、用語「ＣｅｎｄＲエレメント」もしくは「Ｃ末端エレメント」が使用される場合、それは、Ｃ末端アルギニン、Ｃ末端リジン、もしくはＣ末端リジン−グリシン対を記載するために使用され、ここでグリシンは、最も遠いＣ末端の位置にある。言い換えると、リジンがＣ末端にある場合、上記ＣｅｎｄＲエレメントは、上記リジンのＣ末端側にグリシンを有して機能性のままでいることができる。しかし、上記リジン残基がＣ末端エレメントとして機能性であるために、その末端にグリシンを有する必要があるわけではない。そのため、上記リジンは、グリシンなしでも存在し得、なお機能性である。しかし、グリシンは、これに隣り合うリジンの存在なくしてはＣ末端エレメントとして機能できないという点で、逆は真ではない。アルギニンは、最も遠くのＣ末端側の位置に残っている限りにおいて、Ｃ末端エレメントとして機能するのに、リジン、グリシンのいずれも必要としない。このようなＣｅｎｄＲエレメントは、１型ＣｅｎｄＲエレメントということができる。
【０１６４】
用語「ＣｅｎｄＲエレメント」もしくは「Ｃ末端エレメント」はまた、Ｃ末端ヒスチジンおよび配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４（ここでＸ１はＲ、ＫもしくはＨであり得、Ｘ４は、Ｒ、Ｋ、Ｈ、もしくはＫＧであり得、Ｘ２およびＸ３は、各々独立して、任意のアミノ酸であり得る）を有するアミノ酸配列を記載するために使用され得る。このようなＣｅｎｄＲエレメントは、２型ＣｅｎｄＲエレメントということができる。上記Ｘ２およびＸ３のアミノ酸は、特定の目的のために選択され得る。例えば、Ｘ２、Ｘ３、もしくは両方は、プロテアーゼ認識配列のすべてもしくは一部を形成するために選択され得る。これは、例えば、潜在的もしくは隠れたＣｅｎｄＲエレメント（これは、上記Ｘ４アミノ酸の後ろを切断することによって活性化される）として上記ＣｅｎｄＲエレメントを有するペプチドの切断の特性をもたせるかもしくは切断を可能にするために、有用である。このようなアミノ酸選択の例は、表１および表２に示される。上記Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のアミノ酸はまた、例えば、さらなるタンパク質を、細胞表面においてＮＲＰ−１分子へ動員するために選択され得る。これは、例えば、ＣｅｎｄＲエレメント（および上記組成物、結合体、タンパク質、およびＣｅｎｄＲエレメントを含むペプチド）の選択性および内部移行、ならびに／もしくは組織浸透力を調節するために適用され得る。上記Ｘ２およびＸ３のアミノ酸はまた、Ｘ１−Ｘ４モチーフ内のプロテアーゼで切断を妨げるように選択され得る。必要に応じて、特定のアミノ酸がまた、Ｘ２、Ｘ３、もしくは両方のために使用されることから排除され得る。例えば、望ましい場合、ＧおよびＤは、それぞれ、Ｘ２およびＸ３として同時に使用することから排除され得る。いくつかの２型ＣｅｎｄＲエレメントはまた、Ｒ／Ｋ／ＨＸＸＲ／Ｋ／Ｈ（配列番号１３０）およびＲ／Ｋ／ＨＸＸＫＧ（配列番号１３１）として記載され得る。
【０１６５】
ＣｅｎｄＲエレメントの例としては、
【０１６６】
【化９】
2013525285.tif 000012
が挙げられる。
【０１６７】
細胞において内部移行され得るＣｅｎｄＲエレメントは、内部移行ＣｅｎｄＲエレメントということができる。組織に浸透し得るＣｅｎｄＲエレメントは、浸透ＣｅｎｄＲエレメントということができる。細胞において内部移行され得かつ組織に浸透し得るＣｅｎｄＲエレメントは、内部移行および浸透ＣｅｎｄＲエレメントということができる。文脈が明らかに別のことを示さない限り、「ＣｅｎｄＲエレメント」への言及は、個々に、まとめて、もしくは任意の組み合わせのいずれかにおいて、これらのうちのいずれかを指す。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「ＣｅｎｄＲ組成物」とは、ＣｅｎｄＲエレメントを含む組成物を指す。上記ＣｅｎｄＲエレメントは、例えば、活性であり得るか、活性化可能であり得るか、もしくはブロックされ得る。例えば、上記ＣｅｎｄＲ組成物は、ＣｅｎｄＲエレメントを含むアミノ酸配列を含むタンパク質もしくはペプチドを含み得、ここで、上記アミノ酸配列は、上記タンパク質もしくはペプチドのＣ末端にある。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、「活性化可能なＣｅｎｄＲエレメント」とは、上記ＣｅｎｄＲエレメントに（例えば、上記Ｃ末端エレメントの末端カルボキシル基に）共有結合で結合される分子、部分、ナノ粒子、化合物もしくは他の組成物を有するＣｅｎｄＲエレメントを指し、ここで上記分子、部分、ナノ粒子、化合物もしくは他の組成物は、上記ＣｅｎｄＲ組成物、結合体、分子、タンパク質、ペプチドなどの内部移行および／もしくは組織浸透をブロックし得、そして上記分子、部分、ナノ粒子、化合物もしくは他の組成物は、除去され得る（例えば、末端カルボキシ基を露出するために）。例えば、上記活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、上記ペプチドのＣ末端に存在し得、上記ＣｅｎｄＲエレメントが内部移行しないように、そして／または組織に浸透しないようにし得る。上記ＣｅｎｄＲエレメントに共有結合で結合された分子、ナノ粒子、部分、化合物もしくは他の組成物は、「ブロッキング基」ということができる。例えば、上記ブロッキング基は、上記ＣｅｎｄＲエレメントのＣ末端アルギニンもしくはリジンの、または他のＣ末端アミノ酸の末端カルボキシル基に、上記ＣｅｎｄＲエレメントのＣ末端アミノ酸に、あるいは上記Ｃ末端アミノ酸以外の上記ＣｅｎｄＲエレメントのアミノ酸に結合され得る。上記ブロッキング基はまた、これが、上記ＣｅｎｄＲエレメントが内部移行しないように、そして／または組織に浸透しないようにし得る限りにおいて、上記ＣｅｎｄＲエレメント以外の、ＣｅｎｄＲ組成物、結合体、分子、タンパク質、ペプチドなどの一部に結合され得るかもしくはこれらと会合され得る。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを含むＣｅｎｄＲ組成物は、活性化可能なＣｅｎｄＲ組成物ということができる。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを含むＣｅｎｄＲ分子は、活性化可能なＣｅｎｄＲ分子ということができる。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを含むＣｅｎｄＲ結合体は、活性化可能なＣｅｎｄＲ結合体ということができる。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを含むＣｅｎｄＲタンパク質は、活性化可能なＣｅｎｄＲタンパク質ということができる。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを含むＣｅｎｄＲペプチドは、活性化可能なＣｅｎｄＲペプチドということができる。
【０１７０】
活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、細胞への内部移行から、組織浸透から、もしくはその両方からブロックされ得る。一般に、活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、細胞への内部移行および組織の浸透の両方からブロックされ得る。このような活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、活性化可能な内部移行および浸透ＣｅｎｄＲエレメントということができる。しかし、いくつかの活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、組織浸透からのみもしくは細胞への内部移行からのみブロックされ得る。このような活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、活性化可能な内部移行ＣｅｎｄＲエレメント（細胞への内部移行からのみブロックされるＣｅｎｄＲエレメントに関して）もしくは活性化可能な内部移行および浸透ＣｅｎｄＲエレメントｓ（組織の浸透からのみブロックされるＣｅｎｄＲエレメントに関して）ということができる。一般に、活性化可能である内部移行ＣｅｎｄＲエレメントは、活性化可能な内部移行ＣｅｎｄＲエレメントである。同様に、活性化可能である浸透ＣｅｎｄＲエレメントは、一般に、活性化可能な浸透ＣｅｎｄＲエレメントである。活性化可能である内部移行および浸透ＣｅｎｄＲエレメントは、活性化可能な内部移行および浸透ＣｅｎｄＲエレメントである。ブロッキング基の除去は、上記ＣｅｎｄＲエレメントが細胞へ内部移行されるか、組織に浸透するか、もしくはその両方を可能にする。
【０１７１】
活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントの切断可能な結合は、任意の適切な方法で切断され得る。例えば、上記切断可能な結合は、酵素的にもしくは非酵素的に切断され得る。酵素切断に関しては、切断酵素は、上記ＣｅｎｄＲエレメントが送達されるか、ホーミングするか、移動するかもしくは蓄積する部位に供給され得るか、または存在し得る。例えば、上記酵素は、上記ＣｅｎｄＲエレメントが送達されるか、ホーミングするか、移動するかもしくは蓄積する細胞の近位に存在し得る。非酵素切断に関しては、上記ＣｅｎｄＲエレメントは、切断因子と接触させられ得るか、切断条件に置かれ得るか、またはその両方であり得る。切断因子は、切断される結合の切断を媒介もしくは刺激し得る任意の物質である。非酵素切断因子は、酵素を除く任意の切断因子である。切断条件は、上記切断される結合の切断を媒介もしくは刺激し得る任意の溶液もしくは環境条件であり得る。例えば、いくつかの不安定な結合は、酸性条件、アルカリ性条件、反応基の存在下などにおいて切断され得る。非酵素切断条件は、酵素の存在を除く任意の切断条件である。因子のない切断条件は、切断因子の存在を除く任意の切断条件である。
【０１７２】
「プロテアーゼで活性化可能なＣｅｎｄＲエレメント」（もしくは「プロテアーゼによる活性化ＣｅｎｄＲエレメント」）とは、上記ブロッキング基がペプチド結合を介して上記ＣｅｎｄＲエレメントに結合され、かつ上記ペプチド結合がプロテアーゼによって切断され得る活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントを指す。プロテアーゼで活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントにおけるこのペプチド結合の切断は、上記ＣｅｎｄＲエレメントを、細胞への内部移行および／もしくは組織浸透が可能となるようにする。一例において、上記ブロッキング基は、切断可能なもしくは不安定な結合を介して上記ＣｅｎｄＲエレメントに結合され得る。上記切断可能な結合は、例えば、酵素もしくは化合物によって切断され得る。活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントにおける切断もしくは「不安定化」結合は、上記ＣｅｎｄＲエレメントを細胞への内部移行および／もしくは組織浸透が可能となるようにする。このような切断もしくは「不安定化」は、上記ＣｅｎｄＲエレメントの活性化として言及され得る。プロテアーゼで活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントは、活性化可能なＣｅｎｄＲエレメントの形態である。
【０１７３】
Ｃ末端エレメントを露出させるタンパク質分解は、内部移行シグナルを誘発するスイッチとして働き得る。種々の組成物が、この機構を介して内部移行され得る。例えば、ホーミング分子媒介性蓄積は、標的誘発内部移行をともなう高度に特異的なホーミングシステムを可能にする、Ｃ末端エレメントを曝す細胞タイプ特異的タンパク質分解により、標的部位において起こり得る。このプロテアーゼ制御可能な内部移行システムは、組成物を、細胞タイプ特異的および／もしくは組織タイプ特異的取り込みなどの機能、ならびにその組成物を組織に拡げる能力を有するように工学的に作製することにおいて有用であり得る。
【０１７４】
ＣｅｎｄＲエレメントは、米国特許出願公開第２００９−０２２６３７２および同第２０１０−０３２２８６２号（これらは、それらの全体において参考として、ならびにＣｅｎｄＲエレメントおよびペプチドの形態、構造、および使用の説明のために具体的に本明細書に援用される）にさらに記載される。
【０１７５】
（Ｄ．表面分子）
本明細書で開示される表面分子（あるいは、表面粒子といわれる）は、上記組成物が標的に送達されるような方法において、ホーミング分子および積荷分子と結合体化され得る。上記表面分子は、上記ホーミング分子および積荷分子とともに使用され得、サイズもしくは物質によって制限されない任意の物質であり得る。例としては、ナノ粒子（例えば、酸化鉄ナノ粒子もしくはアルブミンナノ粒子）、リポソーム、有機低分子、マイクロ粒子、もしくはマイクロバブル（例えば、フルオロカーボンマイクロバブル）が挙げられるが、これらに限定されない。上記用語、表面分子は、開示される上記組成物の成分を同定するために使用されるが、限定であるとは解釈されない。特に、開示される上記表面分子は、単一分子から構成される物質、化合物、組成物、粒子もしくは他の材料に限定されない。むしろ、開示される上記表面分子は、上記ホーミング分子および／もしくは積荷分子のうちの少なくともいくつかが、上記表面分子の表面に提示され、そして／もしくは上記表面分子の表面に接近可能であるように、複数のホーミング分子および積荷分子と結合体化され得る任意の物質（複数可）、化合物（複数可）、組成物（複数可）、粒子（複数可）および／もしくは他の材料（複数可）である。適切な表面分子の種々の例は、本明細書に記載され、開示される。
【０１７６】
上記表面分子は、検出可能であり得るか、または治療剤（例えば、ｉＲＧＤ、ＲＧＤ、もしくはアブラキサンＴＭ）であり得る。検出可能であり得るかもしくは治療剤であり得る積荷分子および部分を述べる本明細書の節はまた、上記表面分子に適用される。
【０１７７】
表面分子は、種々の構成にある上記組成物と会合させられ得、整えられ得る。いくつかの形態において、表面分子は、複数のホーミング分子、複数の積荷分子、もしくはその両方と会合され得るか、結合体化され得るか、そして／または共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、表面分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、結合体化され得るか、そして／または共有結合で結合され得、ここで上記ホーミング分子は、複数の積荷分子と会合され得るか、結合体化され得るか、そして／または共有結合で結合され得る。いくつかの形態において、表面分子は、複数の積荷分子と会合され得るか、結合体化され得るか、そして／または共有結合で結合され得、ここで上記積荷分子は、複数のホーミング分子と会合され得るか、結合体化され得るか、そして／または共有結合で結合され得る。これら組み合わせの組み合わせもまた、使用され得る。
【０１７８】
（１．ナノ粒子、マイクロ粒子、およびマイクロバブル）
用語「ナノ粒子」とは、ナノメートル単位で測定されるサイズを有するナノスケール粒子（例えば、約１００ｎｍ未満の少なくとも１つの寸法を有するナノ範囲の（ｎａｎｏｓｃｏｐｉｃ）粒子）を指す。ナノ粒子の例としては、常磁性ナノ粒子、超常磁性ナノ粒子、金属ナノ粒子、ナノワーム、フラーレン様材料、無機ナノチューブ、デンドリマー（例えば、共有結合された金属キレートを有する）、ナノファイバー、ナノホーン、ナノオニオン、ナノロッド、ナノロープ（ｎａｎｏｒｏｐｅ）および量子ドットが挙げられる。ナノ粒子は、例えば、光子の吸収および／もしくは発光（無線周波数および可視光子を含む）およびプラズモン共鳴を介して、検出可能なシグナルを生成し得る。
【０１７９】
マイクロスフェア（もしくはマイクロバブル）はまた、本明細書で開示される方法とともに使用され得る。発色団を含むマイクロスフェアは、広範な種々の適用（フォトニック結晶、生物学的標識、および微小流体チャネルにおけるフローの視覚化が挙げられる）において利用されてきた。例えば、Ｙ．Ｌｉｎ，ら，  Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓ  Ｌｅｔｔ．２００２，８１，３１３４；  Ｄ．Ｗａｎｇ，ら，  Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ．２００３，１５，２７２４；  Ｘ．Ｇａｏ，ら，  Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｏｐｔ．２００２，７，  ５３２；  Ｍ．Ｈａｎ，ら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２００１，１９，６３１；  Ｖ．Ｍ．Ｐａｉ，ら，  Ｍａｇ．＆Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｍａｔｅｒ．１９９９，１９４，２６２（これらの各々は、その全体において参考として援用される）を参照のこと。上記発色団の光安定性および上記マイクロスフェアの単分散性の両方が、重要であり得る。
【０１８０】
ナノ粒子（例えば、金属ナノ粒子、金属酸化物ナノ粒子、もしくは半導体ナノ結晶など）は、マイクロスフェアの中に組み込まれ得る。上記ナノ粒子の光学的、磁気的および電気的特性は、それらの観察を可能にしながら上記マイクロスフェアとの会合を可能にし得、上記マイクロスフェアの同定および空間的モニターを可能にし得る。コロイド状に合成された半導体ナノ結晶の、例えば、高い光安定性、良好な蛍光効率および広い発光可調整性は、それらを、発色団の優れた選択肢にし得る。有機色素とは異なって、異なる色（すなわち、異なる波長）を発するナノ結晶は、単一光源で同時に励起され得る。コロイド状に合成された半導体ナノ結晶（例えば、コアシェルＣｄＳｅ／ＺｎＳ結晶およびＣｄＳ／ＺｎＳナノ結晶など）は、マイクロスフェアの中に組み込まれ得る。上記マイクロスフェアは、単分散性シリカマイクロスフェアであり得る。
【０１８１】
上記ナノ粒子は、金属ナノ粒子、金属酸化物ナノ粒子、もしくは半導体ナノ結晶であり得る。上記金属ナノ粒子もしくは上記金属酸化物ナノ粒子の金属は、チタン、ジルコニウム、ハフニウム、バナジウム、ニオブ、、タンタル、クロム、モリブデン、タングステン、マンガン、テクネチウム、レニウム、鉄、ルテニウム、オスミウム、コバルト、ロジウム、イリジウム、ニッケル、パラジウム、白金、銅、銀、金、亜鉛、カドミウム、スカンジウム、イットリウム、ランタン、ランタニド系列もしくはアクチニド系列の元素（例えば、セリウム、プラセオジム、ネオジム、プロメチウム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、イッテルビウム、ルテチウム、トリウム、プロトアクチニウム、およびウラニウム）、ホウ素、アルミニウム、ガリウム、インジウム、タリウム、ケイ素、ゲルマニウム、スズ、鉛、アンチモン、ビスマス、ポロニウム、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウム、およびバリウムが挙げられ得る。特定の実施形態において，上記金属は、鉄、ルテニウム、コバルト、ロジウム、ニッケル、パラジウム、白金、銀、金、セリウムもしくはサマリウムであり得る。上記金属酸化物は、これら材料もしくは材料の組み合わせのうちのいずれかの酸化物であり得る。例えば、上記金属は、金であり得るか、または上記金属酸化物は、酸化鉄、酸化コバルト、酸化亜鉛、酸化セリウム、もしくは酸化チタンであり得る。金属ナノ粒子および金属酸化物ナノ粒子の調製は、例えば、米国特許第５，８９７，９４５号および同第６，７５９，１９９号（これらの各々は、その全体において参考として援用される）に記載される。
【０１８２】
上記ナノ粒子は、積荷分子およびキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）から構成され得る。このようなナノ粒子は、例えば、疎水性もしくは可溶性に乏しい化合物を送達するために有用である。水溶性に乏しい薬物（例えば、タキサン）のナノ粒子は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；同第６，５０６，４０５号；および同第６，５３７，５７９号に、および同様に、米国特許公開第２００５／０００４００２Ａ１号に開示されている。
【０１８３】
形態において、上記ナノ粒子は、約１０００ナノメートル（ｎｍ）以下の平均（ａｖｅｒａｇｅ  ｏｒ  ｍｅａｎ）直径（例えば、約９００ｎｍ以下、約８００ｎｍ以下、約７００ｎｍ以下、約６００ｎｍ以下、約５００ｎｍ以下、約４００ｎｍ以下、約３００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、および約１００ｎｍ以下のうちのいずれか）を有し得る。いくつかの形態において、上記ナノ粒子の上記平均直径は、約２００ｎｍ以下であり得る。いくつかの形態において、上記ナノ粒子の上記平均直径は、約１５０ｎｍ以下であり得る。いくつかの形態において、上記ナノ粒子の上記平均直径は、約１００ｎｍ以下であり得る。いくつかの形態において、上記ナノ粒子の上記平均直径は、約２０〜約４００ｎｍであり得る。いくつかの形態において、上記ナノ粒子の上記平均直径は、約４０〜約２００ｎｍであり得る。いくつかの実施形態において、上記ナノ粒子は、滅菌濾過可能である。
【０１８４】
上記ナノ粒子は、乾燥処方物（例えば、凍結乾燥組成物）において存在し得るか、または生体適合性媒体に懸濁され得る。適切な生体適合性媒体としては、水、緩衝化水性媒体、食塩水、緩衝化食塩水、必要に応じて緩衝化されたアミノ酸の溶液、必要に応じて緩衝化されたタンパク質の溶液、必要に応じて緩衝化された糖の溶液、必要に応じて緩衝化されたビタミンの溶液、必要に応じて緩衝化された合成ポリマーの溶液、脂質含有エマルジョンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
適切なキャリアタンパク質の例としては、血中もしくは血漿中で通常見いだされるタンパク質が挙げられ、上記タンパク質としては、アルブミン、免疫グロブリン（ＩｇＡを含む）、リポプロテイン、アポリポプロテインＢ、α−酸性糖タンパク質、β−２−マクログロブリン、サイログロブリン、トランスフェリン、フィブロネクチン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記キャリアタンパク質は、非血液タンパク質（例えば、カゼイン、α−ラクトアルブミン、およびβ−ラクトグロブリン）である。上記キャリアタンパク質は、天然起源であり得るか、もしくは合成により調製され得るかのいずれかである。いくつかの実施形態において、上記薬学的に受容可能なキャリアは、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）を含む。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、Ｍｒ  ６５Ｋの非常に可溶性の球状タンパク質であり、５８５アミノ酸からなる。ＨＳＡは、血漿中で最も豊富なタンパク質であり、ヒト血漿のコロイド浸透圧の７０〜８０％を占める。ＨＳＡのアミノ酸配列は、合計１７個のジスルフィド架橋、１個の遊離チオール（Ｃｙｓ  ３４）、および１個のトリプトファン（Ｔｒｐ  ２１４）を含む。ＨＳＡ溶液の静脈内での使用は、循環血液量減少性ショックの予防および処置に関して（例えば、Ｔｕｌｌｉｓ，  ＪＡＭＡ  ２３７：３５５−３６０，４６０−４６３（１９７７）およびＨｏｕｓｅｒら，Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，１５０：８１１−８１６（１９８０）を参照のこと）、ならびに新生児高ビリルビン血症の処置における交換輸液に関連して（例えば、Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ，  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，６：８５−１２０（１９８０）を参照のこと）示されてきた。他のアルブミン（例えば、ウシ血清アルブミン）が企図される。このような非ヒトアルブミンの使用は、例えば、非ヒト哺乳動物（例えば、獣医学（飼い慣らされたペットおよび農業の状況を含む）におけるこれら組成物の使用の状況において、適切であり得る。
【０１８６】
上記組成物におけるキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）は、一般に、疎水性の上記積荷分子のためのキャリアとして働く（すなわち、上記組成物における上記キャリアタンパク質は、上記積荷分子を、水性媒体により容易に懸濁可能にするか、またはキャリアタンパク質を含まない組成物と比較して、懸濁物を維持するのを助ける）。これは、上記積荷分子を可溶化するための毒性のある溶媒（もしくは界面活性剤）の使用を回避し得、それによって、個体（例えば、ヒト）への上記積荷分子の投与による１つ以上の副作用を低減し得る。従って、いくつかの実施形態において、本明細書で記載される組成物は、界面活性剤（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ．ＲＴＭ．（ＢＡＳＦ）を含む）を実質的に含まない可能性がある（例えば、含まない）。いくつかの実施形態において、上記組成物は、界面活性剤を実質的に含まなくてよい（例えば、含まない）。組成物は、上記組成物が個体に投与される場合に、上記組成物中のＣｒｅｍｏｐｈｏｒもしくは界面活性剤の量が、上記個体において１つ以上の副作用を引き起こすのに十分でなければ、「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒを実質的に含まない」か、または「界面活性剤を実質的に含まない」。
【０１８７】
本明細書に記載される組成物中のキャリアタンパク質の量は、上記組成物中の他の成分に依存して、変動する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、水性懸濁物中で、例えば、安定なコロイド懸濁物（例えば、ナノ粒子の安定な懸濁物）の形態において上記積荷分子を安定化させるに十分な量でキャリアタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、上記キャリアタンパク質は、水性媒体の上記積荷分子の沈降速度を低下させる量で存在する。粒子含有組成物に関しては、上記キャリアタンパク質の量はまた、上記積荷分子のナノ粒子のサイズおよび密度に依存する。
【０１８８】
ナノ粒子組成物を作製する方法は、当該分野で公知である。例えば、積荷分子およびキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）を含むナノ粒子は、高い剪断力（例えば、超音波処理、高圧ホモジナイゼーションなど）の条件下で調製され得る。これら方法は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；同第６，５０６，４０５号；および同第６，５３７，５７９号に、ならびに同様に米国特許公開第２００５／０００４００２Ａ１号において開示される。
【０１８９】
簡潔には、疎水性の上記キャリア分子は、有機溶媒に溶解され得、その溶液は、ヒト血清アルブミン溶液に添加され得る。その混合物は、高圧ホモジナイゼーションに供される。次いで、上記有機溶媒は、エバポレーションによって除去され得る。得られた分散物は、さらに凍結乾燥され得る。適切な有機溶媒としては、例えば、ケトン、エステル、エーテル、塩素化溶媒、および当該分野で公知の他の溶媒が挙げられる。例えば、上記有機溶媒は、塩化メチレンおよびクロロホルム／エタノール（例えば、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、もしくは９：１の比で）であり得る。
【０１９０】
上記ナノ粒子はまた、例えば、熱生成ナノシェルであり得る。本明細書で使用される場合、「ナノシェル」は、１種以上の伝導性シェル層によって囲まれる別個の誘電体コアセクションもしくは半導体コアセクションを有するナノ粒子である。米国特許第６，５３０，９４４号は、金属ナノシェルを作製および使用するための方法の教示のために、その全体において本明細書に参考として援用される。標的化分子は、開示される上記組成物および／もしくはキャリアに結合され得る。例えば、上記標的化された分子は、抗体もしくはそのフラグメント、特定のレセプターのリガンド、または標的にされるべき細胞の表面に特異的に結合する他のタンパク質であり得る。
【０１９１】
（２．リポソーム）
「リポソーム」とは、この用語が本明細書で使用される場合、内側の水性空間を囲む外側の脂質二重層の膜もしくは多重層の膜を含む構造をいう。リポソームは、細胞への送達のための任意の生物学的に活性な因子をパッケージするために使用され得る。
【０１９２】
リポソームを形成するための材料および手順は、当業者に周知である。適切な媒体に分散させる際に、広く種々のリン脂質は膨潤し、水和し、上記脂質二重層を分離する水性媒体の層とマルチラメラの同心性の二重層の小胞を形成する。これらシステムは、マルチラメラリポソームもしくはマルチラメラ脂質小胞（「ＭＬＶ」）といわれ、１０ｎｍ〜１００μｍの範囲内の直径を有する。これらＭＬＶは、Ｂａｎｇｈａｍら，  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−２５２（１９６５）によって最初に記載された。一般に、脂質もしくは親油性物質は、有機溶媒に溶解する。上記溶媒が例えば、ロータリーエバポレーションにより真空下で除去される場合、上記脂質残渣は、その容器の壁にフィルムを形成する。次いで、代表的には、電解質もしくは親水性の生物学的に活性な材料を含む水性溶液が、上記フィルムに添加される。大きなＭＬＶは、撹拌の際に生成される。より小さなＭＬＶが望ましい場合、より大きな小胞は、超音波処理、漸減する孔サイズを有するフィルタを介する逐次的濾過に供されるか、または機械的剪断の他の形態によって縮小させられる。ＭＬＶが、例えば、加圧押し出しによって、ラメラのサイズおよび数の両方において低下され得る技術もまた存在する（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚら，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．９９：２１０−２１４（１９７９））。
【０１９３】
リポソームはまた、ユニラメラ小胞の形態をとり得、これは、ＭＬＶのより徹底的な超音波処理により調製され、そして、それは水性溶液を囲む単一の球状の脂質二重層からなる。ユニラメラ小胞（「ＵＬＶ」）は、小さく、２０〜２００ｎｍの範囲内の直径を有し得る一方で、より大きなＵＬＶは、２００ｎｍ〜２μｍの範囲内の直径を有し得る。ユニラメラ小胞を作製するためのいくつかの周知の技術が存在する。Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら，Ｂｉｏｃｈｉｍ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １３５：６２４−２３８（１９６８）において、リン脂質の水性懸濁物の超音波処理は、水性溶液を取り囲む脂質二重層を有する小さなＵＬＶを生成する。Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，米国特許第４，０８９，８０１号は、超音波処理、続いて、両親媒性化合物を含む水性媒体の添加、および生体分子脂質層システムを形成するための遠心分離によるリポソーム前駆物質の形成を記載する。
【０１９４】
小さなＵＬＶはまた、Ｂａｔｚｒｉら，Ｂｉｏｃｈｉｍ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ２９８：１０１５−１０１９（１９７３）によって記載されるエタノール射出技術、およびＤｅａｍｅｒら，Ｂｉｏｃｈｉｍ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ４４３：６２９−６３４（１９７６）のエーテル射出技術によって調製され得る。これら方法は、ユニラメラリポソームの迅速な形成をもたらす脂質の有機溶液を緩衝溶液に迅速に射出することを包含する。ＵＬＶを作製するための別の技術は、Ｗｅｄｅｒら  「Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，  ｅｄ．  Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，ｐｇ．７９−１０７（１９８４）に教示される。この界面活性剤除去法は、所望の小胞を生成するために撹拌もしくは超音波処理によって、界面活性剤で上記脂質および添加物を可溶化することを包含する。
【０１９５】
Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら、米国特許第４，２３５，８７１号は、有機溶媒中での脂質の油中水型エマルジョンの形成および、上記薬物の水性緩衝溶液中への封入を包含する逆相エバポレーション技術による大きなＵＬＶの調製を記載する。上記有機溶媒は、圧力下で除去されて、水性媒体での撹拌もしくは分散の際に、大きなＵＬＶに変換される混合物を生じる。Ｓｕｚｕｋｉら、米国特許第４，０１６，１００号は、因子および脂質の水性リン脂質分散物を凍結／融解することによって、ユニラメラ小胞中に上記因子を封入する別の方法を記載する。
【０１９６】
上記ＭＬＶおよびＵＬＶに加えて、リポソームはまた、多小胞体であり得る。Ｋｉｍら，Ｂｉｏｃｈｉｍ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ７２８：３３９−３４８（１９８３）に記載されるように、これら多小胞体リポソームは、球状であり、内部顆粒構造を含む。その外側の膜は、脂質二重層であり、その内側の領域は、二重層の隔膜によって分離される小さな区画を含む。リポソームのさらになお別のタイプは、オリゴラメラ小胞（「ＯＬＶ」）であり、これは、いくつかの周辺脂質層によって取り囲まれた大きな中心区画を有する。これら小胞は、直径２〜１５μｍを有し、Ｃａｌｌｏら，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２２（３）：２５１−２６７（１９８５）に記載される。
【０１９７】
Ｍｅｚｅｉら、米国特許第４，４８５，０５４号および同第４，７６１，２８８号はまた、脂質小胞を調製する方法を記載する。より最近では、Ｈｓｕ、米国特許第５，６５３，９９６号は、エアロゾル化を利用して、リポソームを調製する方法を記載し、Ｙｉｏｕｒｎａｓら、米国特許第５，０１３，４９７号は、高速剪断混合チャンバを利用して、リポソームを調製するための方法を記載する。ＵＬＶ（Ｗａｌｌａｃｈら，米国特許第４，８５３，２２８号）もしくはＯＬＶ（Ｗａｌｌａｃｈ，米国特許第５，４７４，８４８号および同第５，６２８，９３６号）を生成するための特定の出発材料を使用する方法もまた、記載される。
【０１９８】
前述の脂質小胞すべておよびそれら調製のための方法の包括的な総説は、「Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，  ｅｄ．  Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，Ｖｏｌ．Ｉ，  ＩＩ  ＆  ＩＩＩ（１９８４）に記載される。本発明における使用に適した種々の脂質小胞を記載するこのおよび前述の参考文献は、参考として本明細書に援用される。
【０１９９】
（３．ミセル）
「ミセル」とは、本明細書で使用される場合、外側の脂質単層を含む構造を指す。ミセルは、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える場合に、水性媒体において形成され得る。ほぼ臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）にある希釈溶液中の小さなミセルは、一般に、球状であると考えられる。しかし、他の条件下で、それらは、ゆがんだ球状、ディスク、ロッド、ラメラなどの形状にあり得る。比較的低分子量の両親媒性の分子から形成されるミセルは、高いＣＭＣを有し得る。その結果、形成される上記ミセルは、希釈の際にかなり迅速に解離する。これが望ましくなければ、大きな疎水性領域を有する両親媒性分子が、使用され得る。例えば、長い脂肪酸鎖もしくは２個の脂肪酸鎖を有する脂質（例えば、リン脂質およびスフィンゴ脂質）もしくはポリマー（具体的には、ブロックコポリマー）が、使用され得る。
【０２００】
１０−６Ｍ（モル濃度）程度のＣＭＣを有するポリマーミセルが、調製されてきた。従って、それらは、非常に安定であると同時に、両親媒性ミセルと同じ有益な特徴を示す傾向にある。当該分野で現在公知であるか、またはそれ自体将来的に公知になり得る任意のミセル形成ポリマーは、開示される上記組成物および方法において使用され得る。ミセル形成ポリマーの例としては、メトキシポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリ（エチレングリコール）とホスファチジルエタノールアミンとの結合体、ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリエステル、ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（Ｌ−アミノ酸）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）−ｂｌ−ポリ（オルトエステル）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）−ｂ−ポリ酸無水物およびポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）−ｂ−ポリ（アルキルアクリレート）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０１】
ミセルは、当該分野で常套のプロセスによって生成され得る。このようなものの例としては、例えば、Ｌｉｇｇｉｎｓ（Ｌｉｇｇｉｎｓ，Ｒ．Ｔ．  ａｎｄ  Ｂｕｒｔ，Ｈ．Ｍ．，「Ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ−ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ  ｄｉｂｌｏｃｋ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｌｏａｄｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｍｉｃｅｌｌｅ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．」  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．５４：１９１−２０２，（２００２））；Ｚｈａｎｇら（Ｚｈａｎｇ，Ｘ．ら，「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｄｉｂｉｏｃｋ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  ｍｉｃｅｌｌａｒ  ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  ｔａｘｏｌ．」  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１３２：１９５−２０６，（１９９６））；およびＣｈｕｒｃｈｉｌｌ（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ，Ｊ．Ｒ．，  ａｎｄ  Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｆ．Ｇ．，  「Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．」  米国特許第４，７４５，１６０号（１９８８））に記載される。１つのこのような方法において、ポリエーテル−ポリエステルブロックコポリマー（これは、親水性（ポリエーテル）および疎水性（ポリエステル）セグメントを有する両親媒性ポリマーである）は、ミセル形成キャリアとして使用される。
【０２０２】
別のタイプのミセルは、例えば、Ｔｕｚａｒ（Ｔｕｚａｒ，Ｚ．  ａｎｄ  Ｋｒａｔｏｃｈｖｉｌ，Ｐ．，「Ｂｌｏｃｋ  ａｎｄ  ｇｒａｆｔ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｍｉｃｅｌｌｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．」，Ａｄｖ．Ｃｏｌｌｏｉｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉ．６：２０１−２３２，（１９７６））；およびＷｉｌｈｅｌｍら（Ｗｉｌｈｅｌｍ，Ｍ．ら，「Ｐｏｌｙ（ｓｔｙｒｅｎｅ−ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）  ｂｌｏｃｋ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｍｉｃｅｌｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｗａｔｅｒ：  ａ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｐｒｏｂｅ  ｓｔｕｄｙ．」，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２４：１０３３−１０４０（１９９１））に記載されるように、例えば、親水性セグメントおよび疎水性セグメントの両方を有するＡＢタイプのブロックコポリマーを使用して形成され得る。これらポリマーミセルは、満足のいく水性安定性を維持し得る。これらミセルは、約２００ｎｍ未満のサイズの範囲において、非選択的ＲＥＳ除去を低下させることにおいて効果的であり、増強した浸透性および保持を示す。
【０２０３】
さらに、Ｋａｔａｏｋａらに対する米国特許第５，９２９，１７７号は、特に、薬物送達キャリアとして使用可能であるポリマー分子を記載する。上記ミセルは、その末端の両方に官能基を有し、親水性／疎水性セグメントを含むブロックコポリマーから形成される。上記ブロックコポリマーの末端にあるポリマー官能基は、α−末端にアミノ、カルボキシルおよびメルカプト基、ならびにω末端にヒドロキシル、カルボキシル基、アルデヒド基およびビニル基を含む。上記親水性セグメントは、ポリエチレンオキシドを含む一方で、上記疎水性セグメントは、ラクチド、ラクトンもしくは（メタ）アクリル酸エステルに由来する。
【０２０４】
さらに、例えば、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）−ｂ−メトキシポリエチレングリコール（ＭｅＰＥＧ：ＰＤＬＬＡ）ジブロックコポリマーは、ＭｅＰＥＧ  １９００および５０００を使用して作製され得る。上記反応は、触媒としてオクタン酸スズ（０．２５％）を使用して、３時間にわたって１６０℃において進められ得る。しかし、上記反応が約６時間にわたって進められる場合には、１３０℃程度の温度が使用され得るか、または上記反応がわずか約２時間にわたって行われる場合には、１９０℃程度の温度が使用され得る。
【０２０５】
別の例として、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（「ＩＰＡＡｍ」）（Ｋｏｈｊｉｎ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）およびジメチルアクリルアミド（「ＤＭＡＡｍ」）（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）は、Ｋｏｈｏｒｉ，Ｆ．ら（１９９８）．（Ｋｏｈｏｒｉ，Ｆ．ら，「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒｍａｌｌｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｂｌｏｃｋ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｍｉｃｅｌｌｅｓ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ｐｏｌｙ（Ｎ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｃｒｙｌａｍｉｄｅ−ｂ−Ｄ，Ｌ−ｌａｃｔｉｄｅ）．」  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．５５：８７−９８，（１９９８））の方法を使用して、ラジカル重合プロセスにおいてヒドロキシル末端をもつポリ（ＩＰＡＡｍ−ｃｏ−ＤＭＡＡｍ）を作製するために使用され得る。得られた上記コポリマーは、冷水中に溶解され得、１０，０００分子量カットオフおよび２０，０００分子量カットオフを有する２つの限外濾過膜を通して濾過され得る。上記ポリマー溶液を、最初に、２０，０００分子量カットオフ膜を通して濾過する。次いで、その濾液を、１０，０００分子量カットオフ膜を通して再び濾過した。３つの分子量画分を、結果として得ることができる：低い分子量、中間の分子量、および高い分子量の画分。次いで、ブロックコポリマーを、上記中間の分子量画分の上記ポリ（ＩＰＡＡｍ−ｃｏ−ＤＭＡＡｍ）の末端ヒドロキシル基からＤ，Ｌ−ラクチドの開環重合によって合成され得る。得られたポリ（ＩＰＡＡｍ−ｃｏ−ＤＭＡＡｍ）−ｂ−ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）コポリマーを、Ｋｏｈｏｒｉ，Ｆ．ら（１９９９）．（Ｋｏｈｏｒｉ，Ｆ．ら，  「Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅｒｍａｌｌｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｍｉｃｅｌｌｅｓ  ｃｏｍｐｏｓｅｄ  ｏｆ  ｐｏｌｙ（Ｎ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｃｒｙｌａｍｉｄｅ−ｃｏ−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）−ｂ−ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ−ｌａｃｉｄｅ）．−」，  Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ：  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ  １６：１９５−２０５，（１９９９））に記載されるように精製し得る。
【０２０６】
それからミセルが調製され得、支持体表面をコーティングするために使用され得るブロックコポリマーの例は、Ｋａｔａｏｋａらに対する米国特許第５，９２５，７２０号、Ｓａｋａｒａｉらに対する米国特許第５，４１２，０７２号、Ｋａｔａｏｋａらに対する米国特許第５，４１０，０１６号、Ｋａｔａｏｋａらに対する米国特許第５，９２９，１７７号、Ｓａｋｕｒａｉらに対する米国特許第５，６９３，７５１号、Ｙｏｋｏｙａｍａらに対する米国特許第５，４４９，５１３号、ＷＯ  ９６／３２４３４、ＷＯ  ９６／３３２３３およびＷＯ  ９７／０６２３（これらすべての内容は、参考として援用される）に見いだされる。適切な官能基（エチレン不飽和の重合可能な基が挙げられる）を導入することによって調製されるそれの改変はまた、本発明のミセルが好ましくは調製されるブロックコポリマーの例である。好ましいブロックコポリマーは、上記特許および／もしくは国際特許公開において開示されるものである。上記ブロックコポリマーが、ＷＯ  ９６／３２４３４のブロックコポリマーにおいてのように、上記親水性ポリマーセグメントの一方の末端に糖残基を有する場合、上記糖残基は、好ましくは、対応するアルデヒド基が形成され得るように、マラプラード酸化に供され得る。
【０２０７】
（４．脂質）
脂質は、合成分子もしくは天然に存在する分子であり、これら分子としては、脂肪、ワックス、ステロール、プレノール脂質、脂溶性ビタミン（例えば、ビタミンＡ、Ｄ、ＥおよびＫ）、グリセロ脂質、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、リン脂質、脂肪酸モノグリセリド、サッカロ脂質などが挙げられる。脂質は、疎水性もしくは両親媒性の低分子であり得；いくつかの脂質の両親媒性の性質は、上記脂質が適切な環境（すなわち、水性環境）において、単層、小胞、ミセル、リポソーム、二重層もしくは膜のような構造を形成することを可能にする。多くの脂質のうちのいずれかは、両親媒性分子（両親媒性、中性、カチオン性、およびアニオン性の脂質が挙げられる）として使用され得る。このような脂質は、単独もしくは組み合わせにおいて使用され得、二重層安定化成分（例えば、ポリアミドオリゴマー（例えば、米国特許第６，３２０，０１７号，「Ｐｏｌｙａｍｉｄｅ  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ」，Ａｎｓｅｌｌによる、を参照のこと）、ペプチド、タンパク質、界面活性剤、脂質誘導体（例えば、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧおよびセラミドに結合体化したＰＥＧ（米国特許第５，８８５，６１３号を参照のこと）もまた挙げられ得る。好ましい実施形態において、クローキング因子（ｃｌｏａｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（これは、宿主免疫系によるリポソームの排除を低下させる）もまた、含まれ得る（例えば、ポリアミド−オリゴマー結合体（例えば、ＡＴＴＡ−脂質（米国特許出願第０８／９９６，７８３号（１９９８年２月２日出願）を参照のこと）およびＰＥＧ−脂質結合体（米国特許第５，８２０，８７３号、同第５，５３４，４９９号および同第５，８８５，６１３号を参照のこと））。
【０２０８】
多くの中性脂質のうちのいずれかが含まれ得る（生理学的ｐＨにおいて非荷電性もしくは中性の双極性形態のいずれかで存在する多くの脂質種のうちのいずれか（ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド、およびジアシルグリセロールが挙げられる）を指す）。
【０２０９】
カチオン性脂質（生理学的ｐＨにおいて正味の正電荷を有する）は、両親媒性分子として容易に使用され得る。このような脂質としては、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＤＡＣ」）；Ｎ−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ−Ｎ−トリエチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＴＭＡ」）；Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（「ＤＤＡＢ」）；Ｎ−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（「ＤＯＴＡＰ」）；３β−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル）コレステロール（「ＤＣ−Ｃｈｏｌ」）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ−２−（スペルミンカルボキサミド）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−アンモニウムトリフルオロアセテート（「ＤＯＳＰＡ」）、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（「ＤＯＧＳ」）、１，２−ジオレオイル（ｄｉｌｅｏｙｌ）−ｓｎ−３−ホスホエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウムプロパン（「ＤＯＤＡＰ」）、およびＮ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（「ＤＭＲＩＥ」）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、多くの市販のカチオン性脂質の調製物が使用され得る（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（ＤＯＴＭＡおよびＤＯＰＥを含む（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能））、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＤＯＳＰＡおよびＤＯＰＥを含む（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能））、およびＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（エタノール中にＤＯＧＳを含む（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．製））。
【０２１０】
アニオン性脂質は、両親媒性分子として使用され得、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、および中性脂質に結合された他のアニオン性改変基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１１】
両親媒性脂質はまた、適切な両親媒性分子であり得る。「両親媒性脂質」とは、任意の適切な物質を指し、ここでその脂質物質の疎水性部分は、疎水性相に側に配向する一方で、親水性部分は、水性相に配向する。このような化合物としては、脂肪酸、リン脂質、アミノ脂質、およびスフィンゴ脂質が挙げられるが、これらに限定されない。代表的なリン脂質としては、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、もしくはジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられる。他のリンを欠く化合物（例えば、スフィンゴ脂質、グリコスフィンゴ脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、およびβ−アシルオキシ酸）はまた、使用され得る。さらに、このような両親媒性脂質は、他の脂質（例えば、トリグリセリドおよびステロール）と容易に混合され得る。双極性脂質は、両親媒性脂質の形態である。
【０２１２】
スフィンゴ脂質は、脂肪族アミノアルコールスフィンゴシンに結合体化した脂肪酸である。上記脂肪酸は、アミド結合を介してスフィンゴシンに共有結合され得る。上記のような任意のアミノ酸は、スフィンゴシンに共有結合されて、スフィンゴ脂質を形成し得る。スフィンゴ脂質は、α−ヒドロキシル基を介した共有結合によってさらに改変され得る。その改変は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、芳香族基、ヘテロ芳香族基、シクリル基、ヘテロシクリル基、ホスホン酸基を含み得る。スフィンゴ脂質（ｓｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ）の非限定的例は、Ｎ−アシルスフィンゴシン、Ｎ−アシルスフィンゴミエリン、フォルスマン抗原である。
【０２１３】
サッカロ脂質は、脂肪酸および糖の両方を含む化合物である。上記脂肪酸は、糖骨格に共有結合される。上記糖骨格は、１種以上の糖を含み得る。上記脂肪酸は、アミドもしくはエステル結合のいずれかを介して上記糖に結合され得る。上記糖は、任意の糖塩基（ｓｕｇａｒ  ｂａｓｅ）であり得る。上記脂肪酸は、本明細書のどこかで記載されるように、任意の脂肪酸であり得る。提供される上記組成物は、中性もしくは合成のいずれかのサッカロ脂質を含み得る。非限定的なサッカロ脂質は、ＵＤＰ−３−Ｏ−（β−ヒドロキシミリストイル）−ＧｌｃＮＡｃ、脂質  ＩＶ  Ａ、Ｋｄｏ２−脂質Ａである。
【０２１４】
（Ｅ．リンカー）
開示される上記組成物の成分を会合させるためのリンカーが開示される。このようなリンカーは、開示される上記組成物の成分を会合させるために使用され得る任意の分子、結合体、組成物などであり得る。一般に、リンカーは、表面分子以外の成分を表面分子に会合させるために使用され得る。有用なリンカーとしては、生体適合性であり、低い生体活性を有し、低い抗原性を有するなどの材料を含む。すなわち、このような有用なリンカー材料は、開示される上記組成物に望ましくない生体反応性を付加することなく、連結／会合機能に役立ち得る。多くのこのような材料は公知であり、類似の連結および会合機能のために使用される。ポリマー材料は、リンカー材料の特に有用な形態である。例えば、ポリエチレングリコールが使用され得る。
【０２１５】
リンカーは、表面分子上の成分（例えば、ホーミング分子および膜を混乱させる分子）の有用な数および密度を達成するために有用である。例えば、繊維形態のリンカーは、１表面分子あたりもしくは上記表面分子の所定の領域あたりの成分の数を増加させるために有用である。同様に、分枝形態を有するリンカーは、１表面分子あたりもしくは上記表面分子の所定の領域あたりの成分の数を増加させるために有用である。リンカーはまた、分枝状の繊維形態を有し得る。
【０２１６】
異なる長さのリンカーは、表面分子におよび互いに、開示される上記成分を結合させるために使用され得る。可撓性リンカーは、比較的短い場合ですら十分に機能し得る一方で、より硬いリンカーは、効率的な曝露および密度を可能にするためにより長くてよい場合がある。リンカーの長さは、上記成分が連結されている結合点の間の連続する共有結合鎖中の原子の数、または上記成分が連結される結合点の間の連続する共有結合鎖の長さ（例えば、ナノメートル単位）を指すことができる。文脈が明らかに別のことを示さない限り、上記長さは、側鎖、分枝、もしくはループを考慮しない、上記成分が連結される結合点の間の最も短い連続した共有結合鎖を指す。上記リンカーの可撓性に起因して、上記リンカーのすべてが、上記表面分子から同じ距離を有さなくてもよい。従って、異なる鎖長を有するリンカーは、得られた組成物をより効率的にし得る（例えば、密度を増大させることによって）。複数の成分を有する分枝状リンカーはまた、上記表面分子の所定の部位において１種より多くの成分の結合を可能にする。リンカーに有用な長さとしては、少なくとも、最大で、約、正確に、１０原子、１５原子、２０原子、２５原子、３０原子、３５原子、４０原子、４５原子、５０原子、６０原子、７０原子、８０原子、９０原子、１００原子、１２０原子、１４０原子、１５０原子、１６０原子、１８０原子、２００原子、２５０原子、３００原子、３５０原子、４００原子、４５０原子、５００原子、５５０原子、６００原子、６５０原子、７００原子、７５０原子、８００原子、８５０原子、９００原子、９５０原子、１，０００原子、２，０００原子、３，０００原子、４，０００原子、５，０００原子、６，０００原子、７，０００原子、８，０００原子、９，０００原子、および１０，０００原子、もしくは１０原子、１５原子、２０原子、２５原子、３０原子、３５原子、４０原子、４５原子、５０原子、６０原子、７０原子、８０原子、９０原子、１００原子、１２０原子、１４０原子、１５０原子、１６０原子、１８０原子、２００原子、２５０原子、３００原子、３５０原子、４００原子、４５０原子、５００原子、５５０原子、６００原子、６５０原子、７００原子、７５０原子、８００原子、８５０原子、９００原子、９５０原子、１，０００原子、２，０００原子、３，０００原子、４，０００原子、５，０００原子、６，０００原子、７，０００原子、８，０００原子、９，０００原子、および１０，０００原子の間を含む。リンカーに有用な長さとしては、少なくとも、最大で、約、正確に、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１２０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１８０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、５５０ｎｍ、６００ｎｍ、６５０ｎｍ、７００ｎｍ、７５０ｎｍ、８００ｎｍ、８５０ｎｍ、９００ｎｍ、９５０ｎｍ、１，０００ｎｍ、２，０００ｎｍ、３，０００ｎｍ、４，０００ｎｍ、５，０００ｎｍ、６，０００ｎｍ、７，０００ｎｍ、８，０００ｎｍ、９，０００ｎｍ、および１０，０００ｎｍ、もしくは１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１２０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１８０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、５５０ｎｍ、６００ｎｍ、６５０ｎｍ、７００ｎｍ、７５０ｎｍ、８００ｎｍ、８５０ｎｍ、９００ｎｍ、９５０ｎｍ、１，０００ｎｍ、２，０００ｎｍ、３，０００ｎｍ、４，０００ｎｍ、５，０００ｎｍ、６，０００ｎｍ、７，０００ｎｍ、８，０００ｎｍ、９，０００ｎｍ、および１０，０００ｎｍの間を含む。これらリガンドの任意の範囲および列挙された上記長さの間のすべての長さは、具体的に企図される。
【０２１７】
親水性もしくは水溶性のリンカーは、結合された上記成分の可動性を増大し得る。リンカーとして働き得る水溶性、生体適合性ポリマーの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクリルアミド、および天然ポリマー（例えば、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、カルボキシメチルセルロース、およびデンプン）のようなポリマー。分枝状つなぎ鎖（ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｔｅｔｈｅｒ）の有用な形態としては、スターＰＥＯおよびくし状ＰＥＯが挙げられる。スターＰＥＯは、共通するコアから出る多くのＰＥＯ「アーム」から形成され得る。
【０２１８】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、生体工学的および生体医学的適用において非常に注目されてきた単純な中性のポリエーテルである（Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ，  Ｊ．（ｅｄ）  「Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９２）。ＰＥＧは、水を含め、大部分の溶媒に可溶性であり、２個もしくは３個の水分子が各エチレングリコールセグメントに結合して、水性環境において高度に水和している；この水和現象は、ＰＥＧ改変表面への他のポリマーもしくはタンパク質のいずれかの吸着を妨げる効果を有する。さらに、ＰＥＧは、容易に改変され得、それらの化学的性質に対してごくわずかしか効果を有さずに、他の分子に結合され得る。それらの有利な溶解性および生物学的特性は、ＰＥＧおよびそのコポリマー（ＰＥＧ−ポリウレタンおよびＰＥＧ−ポリプロピレンのようなブロックコポリマーが挙げられる）の多くの実行できる使用から明らかである。開示される上記組成物において使用されるＰＥＧリンカーの適切な分子量は、約１２０ダルトン〜約２０キロダルトンであり得る。例えば、ＰＥＧは、少なくとも、最大で、約、正確に、１００ダルトン、１５０ダルトン、２００ダルトン、２５０ダルトン、３００ダルトン、３５０ダルトン、４００ダルトン、４５０ダルトン、５００ダルトン、６００ダルトン、７００ダルトン、８００ダルトン、９００ダルトン、１０００ダルトン、１２００ダルトン、１４００ダルトン、１５００ダルトン、１６００ダルトン、１８００ダルトン、２０００ダルトン、２５００ダルトン、３０００ダルトン、３５００ダルトン、４０００ダルトン、４５００ダルトン、５０００ダルトン、５５００ダルトン、６０００ダルトン、６５００ダルトン、７０００ダルトン、７５００ダルトン、８０００ダルトン、８５００ダルトン、９０００ダルトン、９５００ダルトン、１０，０００ダルトン、２０，０００ダルトン、３０，０００ダルトン、４０，０００ダルトン、および５０，０００ダルトン、もしくは１００ダルトン、１５０ダルトン、２００ダルトン、２５０ダルトン、３００ダルトン、３５０ダルトン、４００ダルトン、４５０ダルトン、５００ダルトン、６００ダルトン、７００ダルトン、８００ダルトン、９００ダルトン、１０００ダルトン、１２００ダルトン、１４００ダルトン、１５００ダルトン、１６００ダルトン、１８００ダルトン、２０００ダルトン、２５００ダルトン、３０００ダルトン、３５００ダルトン、４０００ダルトン、４５００ダルトン、５０００ダルトン、５５００ダルトン、６０００ダルトン、６５００ダルトン、７０００ダルトン、７５００ダルトン、８０００ダルトン、８５００ダルトン、９０００ダルトン、９５００ダルトン、１０，０００ダルトン、２０，０００ダルトン、３０，０００ダルトン、４０，０００ダルトン、および５０，０００ダルトンの間であり得る。これら質量の任意の範囲および列挙された上記質量の間のすべての質量は、具体的に企図される。ＰＥＧは、ある程度不均一な質量の混合物として通常入手可能であり、平均質量が示される（例えば、ＰＥＧ−５０００）。
【０２１９】
開示される上記組成物は、任意の適切な技術を使用して生成され得る。本明細書で開示されるタイプの成分を連結するための多くの技術、反応基、化学的性質などは、公知であり、開示される上記成分および組成物とともに使用され得る。開示される上記組成物を生成するためのいくつかの技術の例は、本実施例に記載される。
【０２２０】
他の分子、エレメント、部分などを、開示される上記組成物、表面分子、ホーミング分子、膜を混乱させる分子、内部移行エレメント、組織浸透エレメント、カーボ組成物、ＣｅｎｄＲエレメント、組成物、タンパク質、ペプチド、アミノ酸配列などに架橋するために使用され得るタンパク質架橋剤は、当該分野で公知であり、利用性および構造に基づいて規定され、ＤＳＳ（ジスクシンイミジルスベレート）、ＤＳＰ（ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート））、ＤＴＳＳＰ（３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート））、ＳＵＬＦＯ  ＢＳＯＣＯＥＳ（ビス［２−（スルホスクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン）、ＢＳＯＣＯＥＳ（ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン）、ＳＵＬＦＯ  ＤＳＴ（ジスルホスクシンイミジルタートレート）、ＤＳＴ（ジスクシンイミジルタートレート）、ＳＵＬＦＯ  ＥＧＳ（エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート））、ＥＧＳ（エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシネート））、ＤＰＤＰＢ（１，２−ジ［３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ブタン）、ＢＳＳＳ（ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート）、ＳＭＰＢ（スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート）、ＳＵＬＦＯ  ＳＭＰＢ（スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート）、ＭＢＳ（３−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＳＵＬＦＯ  ＭＢＳ（３−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル）、ＳＩＡＢ（Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート）、ＳＵＬＦＯ  ＳＩＡＢ（Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート）、ＳＭＣＣ（スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＳＵＬＦＯ  ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＮＨＳ  ＬＣ  ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６−［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］］ヘキサノエート］、ＳＵＬＦＯ  ＮＨＳ  ＬＣ  ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル−６−［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］］ヘキサノエート］、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＮＨＳ  ＢＲＯＭＯＡＣＥＴＡＴＥ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルブロモアセテート）、ＮＨＳ  ＩＯＤＯＡＣＥＴＡＴＥ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルヨードアセテート）、ＭＰＢＨ（４−（Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジドヒドロクロリド）、ＭＣＣＨ（４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ヒドラジドヒドロクロリド）、ＭＢＨ（ｍ−マレイミド安息香酸ヒドラジドヒドロクロリド）、ＳＵＬＦＯ  ＥＭＣＳ（Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミド）、ＥＭＣＳ（Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミド）、ＰＭＰＩ（Ｎ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアネート）、ＫＭＵＨ（Ｎ−（κ−マレイミドウンデカン酸）ヒドラジド）、ＬＣ  ＳＭＣＣ（スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ（６−アミドカプロエート））、ＳＵＬＦＯ  ＧＭＢＳ（Ｎ−（γ-マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル）、ＳＭＰＨ（スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミドヘキサノエート））、ＳＵＬＦＯ  ＫＭＵＳ（Ｎ−（κ−マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル）、ＧＭＢＳ（Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スクシンイミド）、ＤＭＰ（ジメチルピメリミデートヒドロクロリド）、ＤＭＳ（ジメチルスベルイミデートヒドロクロリド）、ＭＨＢＨ（Ｗｏｏｄ試薬；メチル−ｐ−ヒドロキシベンズイミデートヒドロクロリド，９８％）、ＤＭＡ（ジメチルアジピミデートヒドロクロリド）。
【０２２１】
開示される上記組成物の成分（例えば、表面分子、ホーミング分子、膜を混乱させる分子、内部移行エレメント、組織浸透エレメントなど）はまた、例えば、マレイミドカップリングを使用して結合され得る。例示に拠れば、成分は、上記成分の遊離システインスルフヒドリル基を利用することによって、例えば、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）２０００；ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−マレイミド］（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ）に結合させることによって、脂質へ結合され得る。上記反応は、例えば、水性溶液中、室温において４時間にわたって行われ得る。このカップリング化学反応は、共組成物（ｃｏ−ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）および積荷組成物の成分を結合するために使用され得る。
【０２２２】
開示される上記組成物の成分（例えば、表面分子、ホーミング分子、膜を混乱させる分子、内部移行エレメント、組織浸透エレメントなど）はまた、例えば、アミノ基官能化デキストラン化学反応を使用して結合され得る。粒子（例えば、ナノ粒子、ナノワーム、およびミセルなど）は、アミノ基官能化デキストランで被覆され得る。アミノ化粒子へのＰＥＧの結合は、おそらく、オプソニン作用に関与する血漿タンパク質の結合を低下させることによって、循環時間を増大させる（Ｍｏｇｈｉｍｉら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．５３，２８３−３１８（２００１））。上記粒子は、例えば、細網内皮系回避（ＰＥＧ）およびホーミング（ホーミング分子）、エンドソーム回避（ｐＨ感受性ペプチド；例えば、Ｐｉｒｏｌｌｏら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７，２９３８−４３（２００７））、検出可能な因子、治療化合物、もしくは組み合わせのために、表面改変を有し得る。すべてのこれら機能を１個の粒子に適用するために、最適化作用研究が行われて、これらエレメントのうちのいずれか１つが標的化およびペイロード送達の最良な組み合わせを与えるように占有すべき、上記粒子の表面における利用可能な連結部位の割合の程度を決定し得る。このような組成物の上記細胞内部移行および／もしくは組織浸透は、開示される上記ＣｅｎｄＲエレメント、アミノ酸配列、ペプチド、タンパク質、分子、結合体、および組成物によって媒介され得る。
【０２２３】
提供される上記ペプチドおよびポリペプチドは、さらなるＮ末端、Ｃ末端、もしくは中間アミノ酸配列（例えば、アミノ酸リンカーもしくはタグ）を有し得る。用語「アミノ酸リンカー」とは、２つの別個のペプチド、ポリペプチド、もしくはポリペプチドフラグメントを接続するかもしくは分離するために使用され得るアミノ酸配列または挿入物を指し、ここで上記リンカーは、上記組成物の本質的な機能に特段寄与しない。用語「アミノ酸タグ」とは、提供される上記ポリペプチドを検出もしくは精製するために使用され得る別個のアミノ酸配列を指し、ここで上記タグは、上記組成物の本質的な機能に特段寄与しない。提供される上記ペプチドおよびポリペプチドは、上記ペプチドおよびポリペプチドの本質的な活性に寄与しないＮ末端アミノ酸もしくはＣ末端アミノ酸もしくは中間アミノ酸をさらに欠失している場合がある。
【０２２４】
成分は、表面分子にもしくは互いに、任意の官能基（例えば、アミン、カルボニル、カルボキシル、アルデヒド、アルコール）によって直接的もしくは間接的に共有結合され得る。例えば、上記成分の上の１個以上のアミン、アルコールもしくはチオール基は、上記表面分子もしくは他の成分に組み込まれるイソチオシアネート、アシルアジド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、アルデヒド、エポキシド、無水物、ラクトン、もしくは他の官能基と直接反応させられ得る。上記成分上のアミン基と、上記表面分子もしくは他の成分の上のアルデヒド基との間に形成されるシッフ塩基は、剤（例えば、シアノ水素化ホウ素ナトリウム）で還元されて、加水分解に対して安定したアミン連結を形成し得る（Ｆｅｒｒｅｉｒａら，  Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ２００３，２１，１８９−１９９）。成分は、例えば、ヘテロ二官能化シランリンカー試薬の使用によって、または上記表面分子もしくは上記成分のいずれかの官能基を活性化する他の反応によって、表面分子および他の成分に結合され得る。
【０２２５】
成分を、表面分子およびもう一方の成分に連結するための有用な様式としては、ヘテロ官能性リンカーもしくはスペーサーが挙げられる。このようなリンカーは、成分上のアミンとスルフヒドリル基とを反応させるための末端アミンおよびチオール反応性官能基の両方を有し得、それによって、配向された方法で上記成分を結合することができる。これらリンカーは、種々の多くの原子を含み得る。このようなリンカーの例としては、Ｎ−スクシンイミジル  ３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ，３原子スペーサーおよび７原子スペーサー）、長鎖−ＳＰＤＰ（１２原子スペーサー）、（スクシンイミジルオキシカルボニル−ａ−メチル−２−（２−ピリジルジチオ）トルエン）（ＳＭＰＴ，８原子スペーサー）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）（ＳＭＣＣ，１１原子スペーサー）およびスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、（スルホ−ＳＭＣＣ，１１原子スペーサー）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ  ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ，９原子スペーサー）、Ｎ−（ｇ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ，８原子スペーサー）、Ｎ−（ｇ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ，８原子スペーサー）、スクシンイミジル  ６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ＳＩＡＸ，９原子スペーサー）、スクシンイミジル  ６−（６−（（（４−ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ）ヘキサノエート（ＳＩＡＸＸ，１６原子スペーサー）、およびｐ−ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ，２原子スペーサー）が挙げられるが、これらに限定されない。当業者はまた、多くの他のカップリング剤もしくは連結（異なる数の原子を有する）が使用され得ることを認識する。
【０２２６】
親水性スペーサー原子は、リンカーに組み込まれて、上記反応性官能基の間の距離を増大させ得る。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、スルホ−ＧＭＢＳに組み込まれ得る。親水性分子（例えば、ＰＥＧ）はまた、非特異的結合（ＮＳＢ）を低下させ、共有結合で結合された場合に表面の親水性を増大させることが示されてきた。ＰＥＧはまた、主なリンカー材料として使用され得る。
【０２２７】
成分の遊離アミン基はまた、ホモ二官能性リンカーを介して反応性アミン基を包含する表面分子もしくは他の成分に結合され得る。リンカー（例えば、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ，８原子スペーサー）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ，８原子スペーサー）、グルタルアルデヒド（４原子スペーサー）、ビス［２−（スクシンイミジルオキシカルボニルオキシ）エチル]スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ，９原子スペーサー）（すべて、高ｐＨを要する）は、この目的のために使用され得る。ホモ二官能性スルフヒドリル反応性リンカーの例としては、１，４−ジ−［３’−２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ブタン（ＤＰＤＰＢ，１６原子スペーサー）およびビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ，１４原子スペーサー）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、これらホモ二官能性リンカーは、最初に、水性溶液（例えば、ＰＢＳ，ｐＨ７．４）中でチオール化表面と反応させられ得、次いで、第２の工程において、上記チオール化抗体もしくはタンパク質は、上記連結によって結合される。ホモ多官能性リンカーおよびヘテロ多官能性リンカーもまた、使用され得る。
【０２２８】
成分の、表面分子および他の成分上のチオール、アミン、もしくはカルボン酸官能基への直接結合は、ウイルス結合（例えば、成分の増大した密度に起因する）を示す組成物を生成するために使用され得、増大した感度を生じる。
【０２２９】
例として、高いペプチド結合密度を達成するために必要な場合、さらなるアミノ基は、上記表面分子（例えば、商業的に得られるＳＰＩＯ）に以下のように付加され得る：第１に、アミノ化工程の前に上記粒子を架橋するために、上記コロイドの３ｍｌ（再蒸留水中約１０ｍｇＦｅ／ｍｌ）を、５ｍｌの５Ｍ  ＮａＯＨおよび２ｍｌのエピクロロヒドリン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に添加した。その混合物を、２４時間にわたって室温において撹拌して、有機相（エピクロロヒドリン）と水相（デキストラン被覆粒子コロイド）との間の相互作用を促進した。過剰のエピクロロヒドリンを除去するために、その反応混合物を、透析カセット（１０，０００Ｄａカットオフ，Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ）を使用して、再蒸留水に対して２４時間にわたって透析した。アミノ基を、上記粒子の表面に、以下のように付加した：０．０２ｍｌの濃水酸化アンモニウム（３０％）を、１ｍｌのコロイド（約１０ｍｇ  Ｆｅ／ｍｌ）に添加した。その混合物を、室温において２４時間にわたって撹拌した。その反応混合物を、再蒸留水に対して２４時間にわたって透析した。上記粒子をさらにすすぐために、上記コロイドを、ＭＡＣＳ（登録商標）  Ｍｉｄｉ磁性分離カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ  ＣＡ）に捕捉し、ＰＢＳで３回すすぎ、１ｍｌ  ＰＢＳで上記カラムから溶出した。
【０２３０】
ＣＧＫＲＫペプチド（および他のペプチド）をＳＰＩＯに結合体化するために、上記粒子を濃度１ｍｇ  Ｆｅ／ｍｌにおいて再懸濁し、ヘテロ二官能性リンカーＮ−［ａ−マレイミドアセトキシ］スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ；Ｐｉｅｒｃｅ）を、ボルテックスしながら添加した（２．５ｍｇ  リンカー／２ｍｇ  Ｆｅ）。室温において４０分間インキュベートした後、上記粒子を、ＭＡＣＳカラムに対して１０ｍｌ  ＰＢＳで３回洗浄した。次いで、遊離末端システインを有する上記ペプチドを、添加した（１００μｇペプチド／２ｍｇ  Ｆｅ）。４℃において一晩インキュベートした後、上記粒子を再び洗浄し、ＰＢＳ中に、濃度０．３５ｍｇ／ｍｌ  のＦｅにおいて再懸濁した。上記粒子に結合体化したペプチド分子の数を定量化するために、既知の量のストックもしくはＡＭＡＳ活性化粒子を、種々の量の上記ペプチドとともにインキュベートした。インキュベーション完了の後、上記粒子を、１００．０００Ｇにおいて、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＴＬＡ  １００．３超遠心分離ローター（３０分）を使用してペレットにし、結合していない上記ペプチドの量を、蛍光によって定量化した。上記粒子から結合体化した上記ペプチドを切断するために、上記粒子を、３７℃において一晩、ｐＨ１０でインキュベートした。その上清中の遊離ペプチドの濃度を、蛍光を読み取り、同じペプチドについて得られた較正曲線を使用することによって決定した。既知の量の粒子の蛍光強度を、ペプチド結合体化密度の関数としてプロットし、勾配方程式を使用して、異なるバッチにおける結合体化密度を決定した。
【０２３１】
（Ｆ．ペプチドおよびアミノ酸セグメント）
いくつかの形態において、上記ホーミング分子、積荷分子、内部移行エレメント、組織浸透エレメントなどは、ペプチド、ペプチド摸倣物、および／もしくはアミノ酸セグメントであり得るか、またはこれらを含み得る。文脈が別のことを示さない限り、本明細書での「ペプチド」への言及は、アミノ酸セグメントにも言及すると解釈される。上記アミノ酸セグメントは、ペプチドの一部を形成し得るか、またはペプチド全体を構成し得る。開示される上記ペプチドは、単離された形態にあり得る。開示される上記ペプチドに言及して本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、細胞中でペプチドと通常会合しているか、またはライブラリーもしくは粗製調製物においてペプチドと会合している、夾雑ポリペプチド、脂質、核酸および他の細胞物質のような物質を比較的含まない形態にあるペプチドを意味する。
【０２３２】
開示される上記ペプチドおよびアミノ酸セグメントは、任意の適切な長さを有し得る。開示される上記ペプチドは、例えば、６残基、７残基、８残基、９残基、１０残基、１２残基、１５残基、２０残基、２５残基、３０残基、３５残基もしくは４０残基未満の比較的短い長さを有し得る。開示される上記ペプチドはまた、顕著により長い配列の状況において有用であり得る。従って、上記ペプチドは、例えば、最大で５０残基、１００残基、１５０残基、２００残基、２５０残基、３００残基、４００残基、５００残基、１０００残基もしくは２０００残基までの長さを有し得る。特定の実施形態において、ペプチドは、少なくとも１０残基、２０残基、３０残基、４０残基、５０残基、６０残基、７０残基、８０残基、９０残基、１００残基もしくは２００残基の長さを有し得る。さらなる実施形態において、ペプチドは、５〜２００残基、５〜１００残基、５〜９０残基、５〜８０残基、５〜７０残基、５〜６０残基、５〜５０残基、５〜４０残基、５〜３０残基、５〜２０残基、５〜１５残基、５〜１０残基、１０〜２００残基、１０〜１００残基、１０〜９０残基、１０〜８０残基、１０〜７０残基、１０〜６０残基、１０〜５０残基、１０〜４０残基、１０〜３０残基、１０〜２０残基、２０〜２００残基、２０〜１００残基、２０〜９０残基、２０〜８０残基、２０〜７０残基、２０〜６０残基、２０〜５０残基、２０〜４０残基もしくは２０〜３０残基の長さを有し得る。本明細書で使用される場合、用語「残基」とは、アミノ酸もしくはアミノ酸アナログを指す。
【０２３３】
開示される上記アミノ酸セグメントは、例えば、６残基、７残基、８残基、９残基、１０残基、１２残基、１５残基、２０残基、２５残基、３０残基、３５残基もしくは４０残基未満の比較的短い長さを有し得る。開示される上記アミノ酸セグメントはまた、顕著により長い配列の状況において有用であり得る。従って、上記アミノ酸セグメントは、例えば、最大で５０残基、１００残基、１５０残基、２００残基、２５０残基、３００残基、４００残基、５００残基、１０００残基もしくは２０００残基までの長さを有し得る。特定の実施形態において、アミノ酸セグメントは、少なくとも１０残基、２０残基、３０残基、４０残基、５０残基、６０残基、７０残基、８０残基、９０残基、１００残基もしくは２００残基の長さを有し得る。さらなる実施形態において、アミノ酸セグメントは、５〜２００残基、５〜１００残基、５〜９０残基、５〜８０残基、５〜７０残基、５〜６０残基、５〜５０残基、５〜４０残基、５〜３０残基、５〜２０残基、５〜１５残基、５〜１０残基、１０〜２００残基、１０〜１００残基、１０〜９０残基、１０〜８０残基、１０〜７０残基、１０〜６０残基、１０〜５０残基、１０〜４０残基、１０〜３０残基、１０〜２０残基、２０〜２００残基、２０〜１００残基、２０〜９０残基、２０〜８０残基、２０〜７０残基、２０〜６０残基、２０〜５０残基、２０〜４０残基もしくは２０〜３０残基の長さを有し得る。本明細書で使用される場合、用語「残基」とは、アミノ酸もしくはアミノ酸アナログを指す。
【０２３４】
本明細書が種々のタンパク質、タンパク質配列、ペプチド、ペプチド配列、およびアミノ酸配列を述べるときは、それら配列をコードし得る核酸もまた開示されることは理解される。これは、特定のタンパク質配列に関連するすべての縮重配列（すなわち、１つの特定のタンパク質配列をコードする配列を有するすべての核酸、ならびに上記タンパク質配列の開示される上記改変体および誘導体をコードする縮重核酸を含むすべての核酸）を含む。従って、各特定の核酸配列は、本明細書ですべて書き出されなくてもよいが、各々のおよびあらゆる配列は、開示される上記タンパク質配列を通じて、本明細書で実際に開示され記載されていることは理解される。開示される上記ペプチドおよびタンパク質は、ペプチド結合を介して互いに結合されて、融合ペプチドおよびタンパク質を形成し得る。
【０２３５】
開示される上記ペプチドおよびアミノ酸セグメントは、改変され得る。本明細書で使用される場合、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などの「メチル化誘導体」は、上記タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などのメチル化されている形態を指す。文脈が別のことを示さない限り、タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などのメチル化誘導体への言及は、メチル化以外の基本タンパク質、ペプチド、アミノ酸セグメント、アミノ酸配列などに対するいかなる改変をも含まない。メチル化誘導体はまた、他の改変を有し得るが、このような改変は、一般に、注記される。例えば、アミノ酸配列の保存的改変体は、上記基本アミノ酸配列の保存的アミノ酸置換を含む。従って、例えば、特定のアミノ酸配列の「メチル化誘導体」および「その保存的改変体」への言及は、上記特定のアミノ酸配列のメチル化形態および上記特定のアミノ酸配列の保存的改変体のメチル化形態を含むが、誘導体のいかなる他の改変をも含まない。別の例として、アミノ酸置換を含むアミノ酸セグメントのメチル化誘導体への言及は、上記アミノ酸セグメントの上記アミノ酸配列のメチル化形態を含み、および上記アミノ酸セグメントの上記アミノ酸配列のメチル化形態は、アミノ酸置換を含む。
【０２３６】
タンパク質改変体および誘導体は、当業者によって十分に理解され、アミノ酸配列改変を含み得る。例えば、アミノ酸配列改変は、代表的には、３つのクラスのうちの１つ以上に入る：置換改変体、挿入改変体もしくは欠失改変体。挿入は、アミノ末端および／もしくはカルボキシル末端の融合、ならびに単一もしくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。挿入は、通常、例えば、１〜４個の残基程度での、アミノ末端融合物もしくはカルボキシル末端融合物のものより小さな挿入であり得る。免疫原性融合タンパク質誘導体（例えば、実施例に記載されるもの）は、インビトロで架橋することによって、もしくは上記融合物をコードするＤＮＡで形質転換された組換え細胞培養物によって、上記標的配列に免疫原性を付与するに十分大きなポリペプチドを融合することによって作製される。欠失は、上記タンパク質配列から１個以上のアミノ酸残基の除去によって特徴付けられる。代表的には、約２〜６残基以下が、上記タンパク質分子内の任意の１つの部位において欠失される。これら改変体は、通常、上記タンパク質をコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドの部位特異的変異誘発によって調製され、それによって、上記改変体をコードするＤＮＡを生成し、その後、組換え細胞培養物において上記ＤＮＡを発現する。公知の配列を有するＤＮＡにおける所定の部位において置換変異を作製するための技術は周知である（例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発およびＰＣＲ変異誘発）。アミノ酸置換は、代表的には、１個の残基の置換であるが、多くの異なる部位において一度に起こり得る；挿入は、通常、約１〜１０アミノ酸残基程度である；そして欠失は、約１〜３０残基の範囲である。欠失もしくは挿入は、好ましくは、隣接する対においてなされる（すなわち、２残基の欠失もしくは２残基の挿入）。置換、欠失、挿入もしくはこれらの任意の組み合わせは、最終構築物に達するように組み合わされ得る。上記変異は、リーディングフレームの外に配列を配置せねばならず、好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造を生成し得る相補的領域を作らない。
【０２３７】
指定したアミノ酸配列に言及して本明細書で使用される場合、「保存的改変体」とは、第１のアミノ酸が、別のアミノ酸もしくは上記第１のアミノ酸のものに類似の少なくとも１つの生化学的特性を有するアミノ酸アナログで置き換えられる配列である；類似の特性としては、例えば、類似のサイズ、電荷、疎水性もしくは水素結合能が挙げられる。保存的改変体はまた、「保存的アミノ酸置換」、「保存的アミノ酸改変体」、「保存的置換」、および類似の語句として本明細書で言及される。参照配列の「保存的誘導体」とは、保存的置換においてのみ上記参照配列とは異なるアミノ酸配列を指す。
【０２３８】
例として、保存的改変体は、第１の非荷電極性アミノ酸が、第２の（非同一）非荷電極性アミノ酸（例えば、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、グリシン、グルタミンもしくはアスパラギンまたはこれらのアナログ）で保存的に置換される配列であり得る。保存的改変体はまた、第１の塩基性アミノ酸が、第２の塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン、リジン、ヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、Ｎ−メチルリジンもしくはこれらのアナログ）で保存的に置換される配列であり得る。同様に、保存的改変体は、第１の疎水性アミノ酸が、第２の疎水性アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、フェニルアラニンもしくはトリプトファンまたはこれらのアナログ）で保存的に置換される配列であり得る。同じ方法で、保存的改変体は、第１の酸性アミノ酸が、第２の酸性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸またはこれらのアナログ）で保存的に置換される配列であり得る。芳香族アミノ酸（例えば、フェニルアラニン）が、第２の保存的アミノ酸もしくはアミノ酸アナログ（例えば、チロシン）で保存的に置換される配列；あるいは第１の比較的小さなアミノ酸（例えば、アラニン）が、第２の比較的小さなアミノ酸もしくはアミノ酸アナログ（例えば、グリシンもしくはバリンまたはこれらのアナログ）で置換されている配列であり得る。例えば、１つのアミノ酸残基を、生物学的におよび／もしくは化学的に類似の別のもので置き換えることは、保存的置換として当業者に公知である。例えば、保存的置換は、１つの疎水性残基を別の疎水性残基に代えて、または１つの極性残基を別の極性残基に代えて置き換えることである。上記置換は、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒのような組み合わせを含む。各々明示的に開示される配列のこのような保存的置換された改変は、本明細書で提供されるモザイクポリペプチドの中に含まれる。開示される上記アミノ酸配列の保存的改変体は、上記参照配列に対して、例えば、１個、２個、３個、４個もしくはそれより多くのアミノ酸置換を含む配列を包含し得ること、このような改変体が、天然に存在するおよび天然に存在しないアミノ酸アナログを含み得ることは、理解される。
【０２３９】
置換改変体は、少なくとも１個の残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されるものである。このような置換（保存的置換といわれる）の例は、一般に、以下の表２に従って作製され得る。
【０２４０】
【表２】
2013525285.tif 000013
機能もしくは免疫学的同一性における実質的変化は、保存的ではない置換を選択すること（すなわち、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスのコンフォーメーションとしての、上記置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）上記標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）その側鎖のかさ高さを維持することに対するそれらの効果においてより顕著に異なる残基を選択すること）によって、なされ得る。一般に、上記タンパク質の特性において最大の変化を生じると予測される置換は、（ａ）親水性残基（例えば、セリルもしくはスレオニル）が、疎水性残基（例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルもしくはアラニル）に代えて（もしくは該疎水性残基によって）置換される；（ｂ）システインもしくはプロリンが任意の他の残基に代えて（もしくは該任意の他の残基によって）置換される；（ｃ）正に荷電した側鎖を有する残基（例えば、リジル、アルギニル、もしくはヒスチジル）が、負に荷電した残基（例えば、グルタミルもしくはアスパルチル）に代えて（もしくは該負に荷電した残基によって）置換される；あるいは（ｄ）かさ高い側鎖を有する残基（例えば、フェニルアラニン）は、この場合に、側鎖を有さないもの（例えば、グリシン）に代えて（もしくは該側鎖を有さないものによって）置換される、（ｅ）硫酸化および／もしくはグリコシル化の部位の数を増加させることによるものである。これらは、保存性が低い改変体ということができる。
【０２４１】
ペプチドは、種々の改変を有し得る。改変は、上記ペプチドの特性を変化もしくは改善するために使用され得る。例えば、開示される上記ペプチドは、Ｎ−メチル化、Ｏ−メチル化、Ｓ−メチル化、Ｃ−メチル化、または１個以上のアミノ酸での組み合わせであり得る。
【０２４２】
開示される上記ペプチドのアミノ末端および／もしくはカルボキシ末端は、改変され得る。アミノ末端改変としては、メチル化（例えば、−ＮＨＣＨ３もしくは−Ｎ（ＣＨ３）２）、アセチル化（例えば、酢酸もしくはそのハロゲン化誘導体（例えば、α−クロロ酢酸、α−ブロモ酢酸、もしくはα−ヨード酢酸）で）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基の付加、またはＲＣＯＯ−によって定義されるカルボキシレート官能基もしくはＲ−ＳＯ２−によって定義されるスルホニル官能基（ここでＲは、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールなど、および類似の基からなる群より選択される）を含む任意のブロッキング基でのアミノ末端のブロッキングが挙げられる。上記Ｎ末端でのデスアミノ酸もまた、組み込まれて（その結果、Ｎ末端アミノ基は存在しない）、プロテアーゼに対する感受性を低下させ得るか、または上記ペプチド化合物のコンホメーションを制限し得る。好ましい実施形態において、上記Ｎ末端は、酢酸もしくは酢酸無水物でアセチル化される。
【０２４３】
カルボキシ末端改変は、カルボキサミド基で遊離酸を置き換えること、またはカルボキシ末端において環式ラクタムを形成して、構造的制約を導入することを含む。開示される上記ペプチドは環化され得るか、またはデスアミノ残基もしくはデスカルボキシ残基が、上記ペプチドの末端に組み込まれ得、その結果、末端アミノ基もしくは末端カルボキシル基は存在せず、プロテアーゼに対する感受性を低下させるか、または上記ペプチドのコンホメーションが制限される。開示される上記ペプチドのＣ末端官能基は、アミド、アミド低級アルキル、アミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシ、およびカルボキシ、ならびにその低級エステル誘導体、ならびに薬学的に受容可能なその塩を含む。
【０２４４】
遺伝的にコードされるアミノ酸（もしくは立体異性のＤアミノ酸）の天然に存在する側鎖が他の側鎖で（例えば、アルキル、低級（Ｃ１−６）アルキル、環式４員、５員、６員、から７員のアルキル、アミド、アミド低級アルキルアミドジ（低級アルキル）、低級アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシおよびこれらの低級エステル誘導体のような基で、および４員、５員、６員、から７員の複素環式で）置換され得る。特に、プロリン残基の環サイズが、５員から４員、６員、もしくは７員に変化したプロリンアナログが、使用され得る。環式基は、飽和であっても不飽和であってもよく、そして不飽和であれば、芳香族であっても非芳香族であってもよい。複素環式基は、好ましくは、１個以上の窒素、酸素、および／もしくは硫黄のヘテロ原子を含む。このような基の例としては、フラザニル、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル（例えば、モルホリノ）、オキサゾリル、ピペラジニル（例えば、１−ピペラジニル）、ピペリジル（例えば、１−ピペリジル、ピペリジノ）、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル（例えば、１−ピロリジニル）、ピロリニル、ピロリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、チオモルホリニル（例えば、チオモルホリノ）、およびトリアゾリルが挙げられる。これら複素環式基は、置換されていてもよいし、置換されていなくてもよい。ある基が置換される場合、その置換基は、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、酸素、または置換されたもしくは置換されていないフェニルであり得る。
【０２４５】
リン酸化、および他の方法［例えば、Ｈｒｕｂｙ，ら（１９９０）  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２６８：２４９−２６２に記載されるように］によっても、ペプチドは容易に改変され得る。
【０２４６】
開示される上記ペプチドはまた、類似の生物学的活性を有する非ペプチド化合物の構造モデルとして働く。当業者は、種々の技術が、リードペプチド化合物と同じもしくは類似の所望の生物学的活性を有するが、溶解度、安定性、ならびに加水分解およびタンパク質分解に対する感受性に関して上記リードより有利な活性を有する化合物を構築するために利用可能であることを認識する［Ｍｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ｇａｉｎｏｒ（１９８９）  Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：２４３−２５２を参照のこと］。これら技術としては、上記ペプチド骨格を、ホスホネート、アミデート、カルバメート、スルホンアミド、二級アミン、およびＮ−メチルアミノ酸から構成される骨格で置き換えることが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４７】
ペプチドに似ているが、天然のペプチド連結を介してつながれていない分子が、生成され得る。例えば、アミノ酸もしくはアミノ酸アナログのための連結としては、ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨＨ２ＳＯ−（これらおよび他は、Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐ．２６７（１９８３）；Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，Ｖｅｇａ  Ｄａｔａ（Ｍａｒｃｈ  １９８３），Ｖｏｌ．１，Ｉｓｓｕｅ  ３，Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（包括的総説）において見いだされ得る）；Ｍｏｒｌｅｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ（１９８０）  ｐｐ．４６３−４６８；Ｈｕｄｓｏｎ，Ｄ．ら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔ  Ｒｅｓ  １４：１７７−１８５（１９７９）（−ＣＨ２ＮＨ−、ＣＨ２ＣＨ２）；Ｓｐａｔｏｌａら  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３８：１２４３−１２４９（１９８６）（−ＣＨＨ２−Ｓ）；Ｈａｎｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ  ３０７−３１４（１９８２）（−ＣＨ−ＣＨ−、シスおよびトランス）；Ａｌｍｑｕｉｓｔら  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（１９８０）（−ＣＯＣＨ２−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅら  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２３：２５３３（１９８２）（−ＣＯＣＨ２−）；Ｓｚｅｌｋｅら  欧州特許出願ＥＰ  ４５６６５  ＣＡ（１９８２）：９７：３９４０５（１９８２）（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）；Ｈｏｌｌａｄａｙら  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．Ｌｅｔｔ  ２４：４４０１−４４０４（１９８３）（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ２−）；およびＨｒｕｂｙ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３１：１８９−１９９（１９８２）（−ＣＨ２−Ｓ−）（これらの各々は、本明細書に参考として援用される）が挙げられ得る。特に好ましい非ペプチド連結は、−ＣＨ２ＮＨ−である。ペプチドアナログは、上記結合原子の間の１個より多くの原子を有し得ることは理解される（例えば、β−アラニン、γ−アミノ酪酸など）。
【０２４８】
置換変異誘発もしくは欠失変異誘発は、Ｎ−グリコシル化（Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ）もしくはＯ−グリコシル化（ＳｅｒもしくはＴｈｒ）のための部位を挿入するために使用され得る。システインもしくは他の不安定な残基の欠失はまた、望ましいものであり得る。潜在的なタンパク質分解部位（例えば、Ａｒｇ）の欠失もしくは置換は、例えば、上記塩基性残基のうちの１個を欠失させるか、または１個をグルタミニルもしくはヒスチジル残基で置換することによって、達成され得る。
【０２４９】
特定の翻訳後誘導体化は、発現される上記ポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果であり得る。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、その対応するグルタミニルおよびアスパルチル残基（ａｓｐａｒｙｌ  ｒｅｓｉｄｕｅ）へと頻繁に翻訳後脱アミド化される。あるいは、これら残基は、軽度に酸性条件下で脱アミド化される。他の翻訳後修飾としては、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基もしくはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のｏ−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：    Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｐｐ  ７９−８６［１９８３］）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびにいくつかの例においては、Ｃ末端カルボキシルのアミド化が挙げられる。
【０２５０】
本明細書において、開示されるアミノ酸配列、アミノ酸セグメント、ペプチド、タンパク質などの改変体および誘導体を規定する１方法が、特定の公知の配列に対する相同性／同一性の点で、上記改変体および誘導体を規定することを介するものであることが、理解される。例えば、示された配列に対して少なくとも７０％もしくは７５％もしくは８０％もしくは８５％もしくは９０％もしくは９５％の相同性を有する、本明細書で開示されるこれらおよび他のアミノ酸配列、アミノ酸セグメント、ペプチド、タンパク質などの改変体が具体的に開示される。当業者は、２個のタンパク質の相同性をどのように決定するかを容易に理解する。例えば、上記相同性は、上記相同性がその最高レベルにあるように、その２個の配列を整列させた後に計算され得る。
【０２５１】
相同性を計算するための別の方法は、公開されたアルゴリズムによって行われ得る。比較のための最適な配列アラインメントは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＬ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法によって、これらアルゴリズムのコンピューター化された実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または点検によって、行われ得る。
【０２５２】
相同性の同じタイプは、例えば、Ｚｕｋｅｒ，Ｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：４８−５２，１９８９、Ｊａｅｇｅｒら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７７０６−７７１０，１９８９、Ｊａｅｇｅｒら  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１−３０６，１９８９（これらは、核酸アラインメントに関する少なくとも材料に関して本明細書に参考として援用される）に開示されるアルゴリズムによって核酸について得ることができる。
【０２５３】
保存的改変体および相同性の記載は、任意の組み合わせにおいて（例えば、上記改変体が保存的改変体である特定の配列に対して少なくとも７０％相同性を有する実施形態）一緒に組み合わされ得ることは、理解される。
【０２５４】
本明細書が、種々のアミノ酸配列、アミノ酸セグメント配列、ペプチド配列、タンパク質配列などを述べる場合、それら配列をコードし得る核酸もまた、開示されることは理解される。これは、特定のアミノ酸配列に関するすべての縮重配列（すなわち、１つの特定のアミノ酸配列をコードする配列を有するすべての核酸、ならびに上記アミノ酸配列の開示される上記改変体および誘導体をコードするすべての核酸（縮重核酸を含む）を含む。従って、各特定の核酸配列がが、本明細書で書き出されていなくてもよい一方で、各々のおよびあらゆる配列が、実際に開示され、開示される上記アミノ酸配列を介して本明細書に記載されることは、理解される。
【０２５５】
二機能性ペプチド（これは、別個の機能を有する第２のペプチドに縮合された上記ホーミングペプチドを含む）もまた、開示される。このような二機能性ペプチドは、全長分子の異なる部分によって付与される少なくとも２つの機能を有し、例えば、標的にホーミングする能力に加えて、抗抗原性活性もしくはアポトーシス促進活性を示し得る。
【０２５６】
少なくとも２個の部分配列（各々独立して、ペプチドもしくはアミノ酸セグメントを含む）を含む単離された多価ペプチドもまた、開示される。上記多価ペプチドは、このような部分配列（各々は、ペプチドを独立して含む）のうちの例えば、少なくとも３個、少なくとも５個もしくは少なくとも１０個を有し得る。特定の実施形態において、上記多価ペプチドは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個もしくは２０個の同一のもしくは非同一の部分配列を有し得る。これは、複数の上記ホーミング分子に加えて、例えば、開示される上記組成物を含み得る複数の膜を混乱させる分子である。さらなる実施形態において、上記多価ペプチドは、同一の部分配列（例えば、指定されたアミノ酸配列の反復）を含み得る。さらなる実施形態において、上記多価ペプチドは、連続する同一もしくは非同一部分配列を含み、これらは、いかなる中断するアミノ酸によっても分離されない。
【０２５７】
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」とは、タンパク質などのペプチド、タンパク質、フラグメントを意味するために広く使用される。用語「ペプチド摸倣物」とは、本明細書で使用される場合、構造的に基づいている上記ペプチドの活性を有するペプチド様分子を意味する。このようなペプチド摸倣物は、化学的に改変されたペプチド、天然に存在しないアミノ酸を含むペプチド様分子、およびペプトイドを含み、上記ペプチド摸倣物が由来する上記ペプチドの標的との選択的相互作用のような活性を有する（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｒｏ，Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，「Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」  Ｖｏｌ．１（ｅｄ．  Ｍ．Ｅ．Ｗｏｌｆｆ；  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９５），ｐａｇｅｓ  ８０３−８６１を参照のこと）。
【０２５８】
種々のペプチド摸倣物は、当該分野で公知であり、例えば、束縛されたアミノ酸を含むペプチド様分子、ペプチド二次構造を摸倣する非ペプチド成分、もしくはアミド結合同配体が挙げられる。束縛された、天然に存在しないアミノ酸を含むペプチド摸倣物としては、例えば、α−メチル化アミノ酸；α，α−ジアルキルグリシンもしくはα−アミノシクロアルカンカルボン酸；Ｎα−Ｃα環化アミノ酸；Ｎα．−メチル化アミノ酸；β−もしくはγ-アミノシクロアルカンカルボン酸；α，β−不飽和アミノ酸；β，β−ジメチルもしくはβ−メチルアミノ酸；β−置換された２，３−メタノアミノ酸（ｍｅｔｈａｎｏ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）；Ｎ−ＣεもしくはＣα−ＣD環化アミノ酸；置換されたプロリンもしくは別のアミノ酸摸倣物が挙げられる。ペプチド二次構造を摸倣するペプチド摸倣物は、例えば、非ペプチドβ−ターン摸倣物；γ−ターン摸倣物；β−シート構造の摸倣物；もしくはヘリックス構造の摸倣物（これらの各々は、当該分野で周知である）を含み得る。ペプチド摸倣物はまた、例えば、アミド結合同配体（例えば、レトロ−インベルソ改変；還元されたアミド結合；メチレンチオエーテルもしくはメチレンスルホキシド結合；メチレンエーテル結合；エチレン結合；チオアミド結合；トランス−オレフィンもしくはフルオロオレフィン結合；１，５−二置換されたテトラゾール環；ケトメチレンもしくはフルオロケトメチレン結合または別のアミド同配体を含むペプチド様分子であり得る。当業者は、これらおよび他のペプチド摸倣物が、本明細書で使用される用語「ペプチド摸倣物」の意味内に包含されることを理解する。
【０２５９】
ペプチド摸倣物を同定するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、潜在的ペプチド摸倣物のライブラリーを含むデータベースのスクリーニングが挙げられる。例として、ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅは、公知の結晶構造を有する３００，０００より多くの化合物のコレクションを含む（Ａｌｌｅｎら，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｑｒ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ，３５：２３３１（１９７９））。この構造寄託は、新たな結晶構造が決定されるごとに継続的に更新され、適切な形状（例えば、開示されるペプチドと同じ形状）、ならびに標的分子に対する潜在的な幾何的および化学的相補性を有する化合物についてスクリーニングされ得る。ペプチドもしくはそのペプチドに結合する標的分子の結晶構造が利用可能でない場合、構造は、例えば、プログラムＣＯＮＣＯＲＤ（Ｒｕｓｉｎｋｏら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．２９：２５１（１９８９））を使用して生成され得る。別のデータベースであるｔｈｅ  Ａｖａｉｌａｂｌｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ  Ｃａｌｉｆ．）は、商業的に利用可能でありかつあるペプチドの潜在的なペプチド摸倣物を、例えば、癌細胞と選択的に相互作用することにおける活性で同定するためにも検索され得る
、約１００，０００の化合物を含む。
【０２６０】
（Ｇ．薬学的組成物およびキャリア）
開示される上記組成物は、単独でもしくは薬学的に受容可能なキャリア中のいずれかで、インビボで投与され得る。「薬学的に受容可能な」とは、生物学的にも別の点からも望ましくないのではない材料を意味する（すなわち、上記材料は、本明細書で開示される組成物とともに、任意の望ましくない生物学的作用を引き起こさずに、もしくは上記材料が含まれる薬学的組成物の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用せずに、被験体に投与され得る）。上記キャリアは、当然のように、当業者に周知であるように、活性成分のいかなる分解をも最小限にするように、および上記被験体における任意の有害な副作用を最小限にするように選択される。上記材料は、溶液、懸濁物中に存在し得る（例えば、マイクロ粒子、リポソーム、もしくは細胞に組み込まれる）。
【０２６１】
（１．薬学的に受容可能なキャリア）
本明細書で開示される組成物は、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて治療的に使用され得る。
【０２６２】
適切なキャリアおよびそれらの処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（１９ｔｈ  ｅｄ．）  ｅｄ．  Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １９９５に記載される。代表的には、薬学的に受容可能な塩の適切な量は、上記処方物を等張性にするために、上記処方物において使用される。上記薬学的に受容可能なキャリアの例としては、食塩水、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液が挙げられるが、これらに限定されない。上記溶液のｐＨは、好ましくは、約５〜約８であり、より好ましくは、約７〜約７．５である。さらにキャリアは、上記抗体を含む固体の疎水性ポリマーの半透性マトリクスのような徐放性調製物を含む。上記マトリクスは、成形物品（例えば、フィルム、リポソームもしくはマイクロ粒子）の形態にある。特定のキャリアが、より好ましくは、例えば、投与経路および投与される組成物の濃度に依存し得ることは、当業者に明らかである。
【０２６３】
薬学的キャリアは、当業者に公知である。これらは、最も代表的には、ヒトへの薬物の投与のための標準的キャリア（滅菌水、食塩水および生理学的ｐＨにある緩衝化した溶液などの溶液が挙げられる）である。上記組成物は、筋肉内もしくは皮下に投与され得る。他の化合物は、当業者によって使用される標準的手順に従って投与される。
【０２６４】
薬学的組成物は、選択された分子に加えて、キャリア、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤などを含み得る。薬学的組成物はまた、１種以上の活性成分（例えば、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤など）を含み得る。
【０２６５】
上記薬学的組成物は、局所的処置もしくは全身処置のどちらが望ましいか、および処置されるべき領域に依存して、多くの方法で投与され得る。投与は、局所的に（眼に、膣に、直腸に、鼻内に、が挙げられる）、経口的に、吸入によって、もしくは非経口的に（例えば、静脈内点滴注入、皮下注射、腹腔内注射もしくは筋肉内注射による）、であり得る。開示される上記抗体は、静脈内に、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、腔内、もしくは経皮的に投与され得る。
【０２６６】
非経口投与のための調製物は、滅菌の水性溶液もしくは非水性溶液、懸濁物、およびエマルジョンを含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物性油（例えば、オリーブ油）および注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）である。水性のキャリアとしては、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンもしくは懸濁物質（食塩水および緩衝化媒体が挙げられる）が挙げられる。非経口的ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸添加リンゲル液、もしくは不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体補充物および栄養補充物、電解質補充物（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などが挙げられる。保存剤および他の添加剤もまた存在し得る（例えば、抗菌物質、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどのような）。
【０２６７】
局所投与のための処方物は、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、スプレー、液剤および散剤が挙げられ得る。従来の薬学的キャリア、水性基剤、粉末基剤もしくは油性基剤、増粘剤などは、必要であり得るかもしくは所望され得る。
【０２６８】
経口投与のための組成物は、散剤もしくは顆粒剤、水もしくは非水性媒体における懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、サシェ、もしくは錠剤を含む。増粘剤、矯味矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散補助物質もしくは結合剤が所望され得る。
【０２６９】
上記組成物のうちのいくつかは、薬学的に受容可能な酸付加塩もしくは塩基付加塩として投与され得、上記酸付加塩もしくは塩基付加塩は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、およびリン酸）、および有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸）との反応によって、または無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム）および有機塩基（例えば、モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミンおよびアリールアミン、ならびに置換されたエタノールアミン）との反応によって形成される。
【０２７０】
（Ｈ．類似の機能を有する組成物）
本明細書で開示される組成物は、特定の機能（例えば、クロットへの結合またはクロット形成の増強）を有することが理解される。開示される上記機能を発揮するための特定の構造要件が、本明細書で開示され、そして開示される上記構造に関連する同じ機能を発揮し得る種々の構造が存在し、これら構造が、同じ結果（例えば、刺激もしくは阻害）を最終的に達成することは、理解される。
【０２７１】
（Ｉ．キット）
本明細書で開示される方法を行うにあたって使用され得る試薬に関するキットが、本明細書で開示される。上記キットは、本明細書で述べられるか、または開示される上記方法の実施において必要とされるかもしくは有益であると理解される任意の試薬もしくは試薬の組み合わせを含み得る。例えば、上記キットは、本明細書で開示される組成物を含み得る。
【０２７２】
（Ｊ．混合物）
上記方法が、組成物もしくは成分もしくは試薬を混合する工程もしくは接触させる工程を包含する場合は常に、上記方法を行うことにより、多くの異なる混合物が作られる。例えば、上記方法が、３つの混合工程を含む場合、上記工程が別個に行われれば、これら工程の各々１つの後に、特有の混合物が形成される。さらに、混合物は、上記工程がどのように行われたに関わらず、上記工程のうちのすべてが完了したときに形成される。本開示は、開示される上記方法の実行によって得られるこれら混合物、ならびに開示される任意の試薬、組成物、もしくは成分（例えば、本明細書で開示される）を含む混合物を企図する。
【０２７３】
（Ｋ．システム）
開示される上記方法を行うために有用なシステム、もしくは開示される上記方法の実施を補助するための有用なシステムが開示される。システムは、一般に、製造物品（例えば、構造物、機械、デバイスなど）、および組成物、化合物、材料などの組み合わせを含む。開示されるかもしくは上記開示から明らかなこのような組み合わせは、企図される。
【０２７４】
（Ｌ．ペプチド合成）
本明細書で開示される組成物および開示される上記方法を行うために必要な組成物は、その特定の試薬もしくは化合物に関して別段具体的に記載されない限り、当業者に公知の任意の方法を使用して作製され得る。
【０２７５】
開示される上記タンパク質を生成する一つの方法は、２個以上のペプチドもしくはポリペプチドを、タンパク質化学技術によって一緒に連結することである。例えば、ペプチドもしくはポリペプチドは、現在利用可能な実験装置を使用して、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）化学もしくはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）化学のいずれかを使用して、化学合成され得る（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）。当業者は、開示される上記タンパク質に対応するあるペプチドもしくはポリペプチドが、例えば、標準的化学反応によって合成され得ることを容易に認識し得る。例えば、あるペプチドもしくはポリペプチドは、合成され得、それの合成のための樹脂（ｉｔｓ  ｓｙｓｔｈｅｓｉｓ  ｒｅｓｉｎ）から切断され得ない一方で、あるペプチドもしくはタンパク質の他のフラグメントは、合成され得、その後、上記樹脂から切断され得、それによって、上記他のフラグメント上で機能的にブロックされる末端基を露出し得る。ペプチド縮合反応によって、これら２個のフラグメントは、それぞれ、それらのカルボキシル末端およびアミノ末端においてペプチド結合を介して共有結合で接合されて、抗体もしくはそのフラグメントを形成し得る（Ｇｒａｎｔ  ＧＡ（１９９２）  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ．  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  Ｎ．Ｙ．（１９９２）；  Ｂｏｄａｎｓｋｙ  Ｍ  ａｎｄ  Ｔｒｏｓｔ  Ｂ．，  Ｅｄ．（１９９３）  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｉｎｃ．，  ＮＹ（これは、少なくともペプチド合成に関する材料に関して、本明細書に参考として援用される））。あるいは、上記ペプチドもしくはポリペプチドは、独立して、本明細書で記載されるように、インビボで合成される。いったん単離されると、これら無関係のペプチドもしくはポリペプチドは、類似のペプチド縮合反応を介して、ペプチドもしくはそのフラグメントを形成するために連結され得る。
【０２７６】
例えば、クローニングされたかもしくは合成のペプチドセグメントの酵素による連結は、比較的短いペプチドフラグメントが、より大きなペプチドフラグメント、ポリペプチドもしくは完全なタンパク質ドメインを生成するように結合されることを可能にする（Ａｂｒａｈｍｓｅｎ  Ｌら，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：４１５１（１９９１））。あるいは、合成ペプチドの天然の化学的連結は、大きなペプチドもしくはポリペプチドを、より短いペプチドフラグメントから合成的に構築するために利用され得る。この方法は、２工程の化学反応からなる（Ｄａｗｓｏｎら  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂｙ  Ｎａｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６６：７７６−７７９（１９９４））。上記第１の工程は、保護されていない合成ペプチド−チオエステルと、アミノ末端Ｃｙｓ残基を含む別の保護されていないペプチドセグメントとを化学選択的に反応させて、最初の共有結合性生成物としてチオエステル結合中間体を得ることである。その反応条件の変化なしに、この中間体は、自発的で迅速な分子内反応を受けて、その連結部位において天然のペプチド結合を形成する（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ  Ｍら（１９９２）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３０７：９７−１０１；  Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ  Ｉら，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：１６０７５（１９９４）；  Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ  Ｉら，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：３１２８（１９９１）；  Ｒａｊａｒａｔｈｎａｍ  Ｋら，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：６６２３−３０（１９９４））。
【０２７７】
あるいは、保護されていないペプチドセグメントは、上記化学的連結の結果としての上記ペプチドセグメント間で形成される結合が非天然（非ペプチド）結合である（Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ，Ｍら  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５６：２２１（１９９２））場合に、化学的に連結される。この技術は、タンパク質ドメインのアナログ、ならびに完全な生物学的活性を有する多量の比較的純粋なタンパク質を合成するために使用されてきた（ｄｅＬｉｓｌｅ  Ｍｉｌｔｏｎ  ＲＣら，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＶ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．２５７−２６７（１９９２））。
【０２７８】
（方法）
顕著な量の目的の化合物を標的化された細胞および組織に送達するために有用な方法が開示される。開示される上記方法は、例えば、標的化された細胞および組織に、過度に毒性である有効量の化合物を送達するために有用である。例えば、開示される上記組成物を被験体に投与する工程を包含する方法もまた、開示される。例えば、被験体に、開示される上記組成物を投与する工程、および上記組成物を検出する工程、測定する工程、画像化する工程などを包含する、細胞および組織を検出する、測定する、画像化するなどの方法もまた、開示される。
【０２７９】
上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系にホーミングし得る。上記ホーミング分子は、目的の標的（例えば、目的の細胞および組織）に選択的にホーミングし得る。例えば、上記ホーミング分子は、腫瘍血管系に選択的にホーミングし得る。上記組成物は、上記標的化されるべき部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。上記組成物は、細胞において内部移行され得る。上記組成物は、組織に浸透し得る。上記組成物は、上記標的化された部位において細胞に内部移行され得る。上記組成物は、上記標的化された部位において組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、癌細胞において内部移行され得る。上記組成物は、例えば、腫瘍組織に浸透し得る。上記組成物は、例えば、腫瘍血管の内側に結合し得る。
【０２８０】
いくつかの形態において、上記組成物は、治療効果を有し得る。いくつかの形態において、上記組成物は、腫瘍増殖を低下させ得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍負荷の増大における遅延もしくは腫瘍負荷の低減であり得る。いくつかの形態において、上記治療効果は、腫瘍サイズの増大の遅延もしくは腫瘍サイズの低減であり得る。いくつかの形態において、上記被験体は、標的化された１つ以上の部位を有し得、ここで上記組成物は、標的化された上記部位のうちの１つ以上にホーミングし得る。いくつかの形態において、上記被験体は、腫瘍を有し得、ここで上記組成物は、上記腫瘍に対して治療効果を有し得る。
【０２８１】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の内部移行エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記ホーミング分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記膜を混乱させる分子のうちの１種以上は、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記表面分子は、上記ホーミング分子もしくは上記膜を混乱させる分子のいずれにも含まれない、上記内部移行エレメントのうちの１種以上を含み得る。いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の組織浸透エレメントをさらに含み得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントのうちの１種以上は、内部移行エレメントに含まれ得る。いくつかの形態において、上記組織浸透エレメントは、ＣｅｎｄＲエレメントであり得る。
【０２８２】
いくつかの形態において、上記組成物は、１種以上の部分をさらに含み得る。いくつかの形態において、上記部分は、抗脈管形成因子、脈管形成促進因子、癌化学療法剤、細胞傷害因子、抗炎症剤、抗関節炎因子、ポリペプチド、核酸分子、低分子、画像造影剤、蛍光団、フルオレセイン、ローダミン、放射性核種、インジウム−１１１、テクネチウム−９９、炭素−１１、および炭素−１３からなる群より独立して選択され得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、治療剤であり得る。いくつかの形態において、上記治療剤は、ｉＲＧＤ、ＲＧＤ、アブラキサン、パクリタキセル、タキソール、もしくは組み合わせであり得る。いくつかの形態において、上記部分のうちの少なくとも１種は、検出可能な因子であり得る。いくつかの形態において、上記検出可能な因子は、ＦＡＭであり得る。
【０２８３】
いくつかの形態において、上記組成物は、治療効果を有し得る。これは、上記標的部位への治療的積荷分子の送達によって達成され得る。上記治療効果は、腫瘍負荷の増大における遅延もしくは腫瘍負荷の低減であり得る。上記腫瘍負荷の増大におけるこの遅延もしくは上記腫瘍負荷の低減は、非処置腫瘍、もしくは異なる方法によって処置された腫瘍と比較して、上記腫瘍負荷における増大もしくは低下において、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、もしくは１０００％以上の改善であり得る。
【０２８４】
開示される上記組成物は、制御されない細胞増殖が起こる任意の疾患（例えば、癌）を処置するために使用され得る。癌の異なるタイプの非限定的リストは、以下のとおりであり得る：リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、白血病、癌腫、固形組織の癌腫、扁平上皮癌、腺癌、肉腫、神経膠腫、高悪性度の神経膠腫、芽細胞腫、神経芽細胞腫、形質細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、低酸素腫瘍、骨髄腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫もしくは肉腫、転移癌、または一般に癌。
【０２８５】
開示される上記組成物が処置するために使用され得る癌の代表的であるが非限定的なリストは、以下である：リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、ホジキン病、骨髄性白血病、膀胱癌、脳の癌、神経系の癌、頭頸部癌、頭頸部の扁平上皮癌、腎臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、神経芽細胞腫／神経膠芽腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、肝臓癌、黒色腫、口腔、咽頭、喉頭および肺の扁平上皮癌、結腸癌、子宮頸癌、子宮頸癌腫、乳癌、および上皮癌、腎癌、尿生殖器癌、肺癌、食道癌、頭頸部癌腫、大腸癌、造血器癌（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）；精巣癌；結腸および直腸の癌、前立腺癌、もしくは膵臓癌。
【０２８６】
開示される上記組成物はまた、細網内皮系（ＲＥＳ）組織による上記組成物の取り込みを低下させるように、デコイ粒子による予備処置の後に投与され得る。このようなデコイ粒子による予備処置は、上記粒子の血中半減期を延長し得、腫瘍標的化を増大する。
【０２８７】
上記方法は、投与後に、開示される上記組成物を検出する工程をさらに包含し得る。開示される上記組成物は、蛍光、ＣＴスキャン、ＰＥＴもしくはＭＲＩによって検出され得る。開示される上記組成物は、蛍光によって検出され得る。開示される上記組成物は、被験体における腫瘍血管系もしくは腫瘍と結合体化し得る。
【０２８８】
「処置」とは、疾患、病的状態、もしくは障害を治癒、改善、安定化もしくは予防する目的での、患者の医療的管理を意味する。この用語は、能動的な処置、すなわち、疾患、病的状態、もしくは障害の改善に具体的に指向される処置を含み、また、原因療法、すなわち、その関連する疾患、病的状態、もしくは障害の原因の除去に指向される処置を含む。さらに、この用語は、待機的処置、すなわち、上記疾患、病的状態、もしくは障害の治癒よりむしろ、症状の軽減のために設計された処置；予防的処置、すなわち、その関連する疾患、病的状態、もしくは障害の発症を最小限にするか、または部分的にもしくは完全に阻害することに向けられた処置；および支持的処置、すなわち、その関連する疾患、病的状態、もしくは障害の改善に指向される別の具体的治療を補助するために使用される処置を含む。
【０２８９】
本明細書で使用される場合、「被験体」としては、動物、植物、細菌、ウイルス、寄生生物および任意の他の生物または核酸を有する実体が挙げられるが、これらに限定されない。上記被験体は、脊椎動物、より具体的には、哺乳動物（例えば、ヒト、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、非ヒト霊長類、ウシ、ネコ、モルモットもしくは齧歯類）、魚類、トリ、爬虫類もしくは両生類であり得る。特に、ペットおよび家畜は、被験体であり得る。上記被験体は、無脊椎動物（例えば、蠕虫もしくは節足動物（例えば、昆虫および甲殻類）であり得る。上記用語は、特定の年齢も性別も意味しない。従って、成体の被験体および新生児（仔）の被験体、ならびに胎児（仔）は、雄性であろうが雌性であろうが、網羅されると解釈される。患者は、疾患もしくは障害に罹った被験体を指す。用語「患者」は、ヒトおよび獣医学的被験体を含む。子宮内膜症および子宮内膜症細胞の状況において、被験体が子宮内膜症および／もしくは子宮内膜症細胞を有するかまたは有し得る被験体であることは、理解される。
【０２９０】
一局面において、本明細書に記載される化合物は、認識された医学的状態からの軽減もしくは改善が必要な状態にあるヒトもしくは動物（マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ウシもしくはヒツジなどが挙げられるが、これらに限定されない）を含む被験体に投与され得る。
【０２９１】
本明細書で提供されるように、化合物の「有効量」という用語は、非毒性であるが、所望の結果を提供するために十分な上記化合物の量を意味する。以下に指摘されるように、必要とされる正確な量は、上記被験体の種、年齢、および全身的な状態、処置されている疾患の重篤度、使用される具体的化合物、その投与様式などに依存して、被験体間で変動する。従って、正確な「有効量」を特定することは可能ではない。しかし、適切な有効量は、慣用的な実験のみを使用して、当業者によって決定され得る。
【０２９２】
本明細書で記載される化合物の投与量もしくは量は、方法により送達が起こる、その方法において所望の効果を生成するために十分多い。上記投与量は、有害な副作用（例えば、所望でない交さ反応、アナフィラキシー反応など）を引き起こすほどには多くするべきでない。一般に、上記投与量は、上記被験体の年齢、状態、性別および疾患の程度によって変動し、当業者によって決定され得る。上記投与量は、罹患した上記被験体の臨床状態に基づいて、個々の医師によって調節され得る。用量、投与スケジュール、および投与経路は、変動し得る。
【０２９３】
本明細書で記載される方法に従う化合物もしくは組成物の特定の用量の投与の効力は、病歴、徴候、症状の具体的な局面、ならびに癌または他の疾患および／もしくは状態の処置を必要とする被験体の状態を評価することにおいて有用であることが公知の客観的な実験室試験を評価することによって、決定され得る。これら徴候、症状、および客観的な実験室試験は、このような患者を処置する任意の医師もしくはこの分野での実験を行う研究者に公知であるように、処置もしくは予防される上記特定の疾患または状態に依存して、変動する。例えば、適切なコントロール群との比較および／もしくは一般的集団もしくは特定の個人における上記疾患の通常の進行の知識に基づいて、（１）被験体の身体的状態が改善することが示される（例えば、腫瘍が部分的にもしくは完全に退縮した）、（２）上記疾患もしくは状態の進行が、安定化するか、遅延されるか、もしくは逆転することが示される、または（３）上記疾患もしくは状態を処置するための他の投薬の必要性が、低下もしくは不要になる場合、そのときは、特定の処置レジメンは、有効であるとみなされる。
【０２９４】
「薬学的に受容可能な」とは、生物学的にも他の点でも所望されない材料（すなわち、上記材料は、いかなる望ましくない生物学的作用も引き起こさず、これが含まれる薬学的組成物の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用も引き起こさず、選択される化合物とともに個体に投与され得る）を意味する。
【０２９５】
式Ｉを有する化合物のいずれも、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて治療的に使用され得る。本明細書で記載される化合物は、薬学的に受容可能なキャリアと共同で上記化合物のうちの１種以上から構成される薬学的組成物へと慣習的に処方され得る。例えば、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，最新版（これは、代表的キャリアおよび本明細書に記載される化合物の処方物の調製に関して使用され得る薬学的組成物を調製する従来の方法を開示し、本明細書に参考として援用される）を参照のこと。これらは、最も代表的には、ヒト（一局面においては、ヒトおよび非ヒト）への組成物の投与のための標準的なキャリア（滅菌水、食塩水、および生理学的ｐＨにある緩衝化した溶液のような溶液が挙げられる）である。他の化合物は、当業者によって使用される標準的手順に従って投与される。
【０２９６】
本明細書で記載される薬学的組成物は、選択された分子に加えて、キャリア、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤、界面活性剤などを含み得るが、これらに限定されない。薬学的組成物はまた、１種以上の活性成分（例えば、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤など）を含み得る。
【０２９７】
本明細書に記載される化合物および薬学的組成物は、局所的もしくは全身的な処置のどちらが望ましいかに、および処置されるべき領域に依存して、多くの方法で上記被験体に投与され得る。従って、例えば、本明細書に記載される化合物もしくは薬学的組成物は、眼用の液剤および／もしくは軟膏剤として、眼の表面に投与され得る。さらに、化合物もしくは薬学的組成物は、膣に、直腸に、鼻内に、経口で、吸入によって、もしくは非経口的に（例えば、皮内経路、皮下経路、筋肉内経路、腹腔内経路、直腸内経路、動脈内経路、リンパ内経路、静脈内経路、髄腔経路および気管内経路による）被験体に投与され得る。非経口投与は、使用される場合、一般に、注射によって特徴づけられる。注射剤は、液体の溶液もしくは懸濁物、注射前に液体中の溶液もしくは懸濁物に適した固体形態として、あるいはエマルジョンとしてのいずれかで、従来の形態に調製され得る。非経口投与のためのより最近に改訂されたアプローチは、一定の投与量が維持されるように、遅延放出系もしくは徐放系の使用を包含する。例えば、米国特許第３，６１０，７９５号（本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【０２９８】
非経口投与のための調製物は、緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加剤もまた含み得る滅菌の水性溶液もしくは非水性溶液、懸濁物、およびエマルジョンを含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物性油（例えば、オリーブ油）および注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）である。水性のキャリアとしては、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンもしくは懸濁物質（食塩水および緩衝化媒体を含む）が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸添加リンゲル液、もしくは不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体補充物および栄養補充物、電解質補充物（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などが挙げられる。保存剤および他の添加剤もまた存在し得る（例えば、抗菌物質、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどのような）。
【０２９９】
局所投与のための処方物は、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル、滴剤、坐剤、スプレー、液剤および散剤を含み得る。従来の薬学的キャリア、水性基剤、粉末基剤もしくは油性基剤、増粘剤などは、必要であり得るかもしくは所望され得る。
【０３００】
経口投与のための組成物としては、散剤もしくは顆粒剤、水もしくは非水性媒体における懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、サシェ、もしくは錠剤が挙げられ得る。増粘剤、矯味矯臭剤、希釈剤、乳化剤、分散補助物質もしくは結合剤が、所望であり得る。
【実施例】
【０３０１】
以下の実施例は、当業者に本明細書で特許請求された上記化合物、組成物、物品、デバイスおよび／もしくは方法が、どのように作製され、評価されるかに関する完全な開示および説明を提供するように示されるものであって、純粋に例示であると解釈され、上記開示を限定するとは解釈されない。数字（例えば、量、温度など）に関して正確さを確保するように努力したが、幾分かの誤差および偏差が、考慮される必要がある。別段示されなければ、部（ｐａｒｔ）は、重量による部（ｐａｒｔｓ  ｂｙ  ｗｅｉｇｈｔ）であり、温度は℃においてであるかまたは周囲温度でのものであり、圧力は、大気圧もしくはほぼ大気圧付近でのものである。
【０３０２】
（Ａ．実施例１：  腫瘍にホーミングするナノ粒子）
多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）は、最も一般的でありかつ頭蓋内腫瘍の致死的な形態である。それらは、米国において毎年成人で診断される新たな２２，５００症例の悪性原発性脳腫瘍のうちの約７０％を占めている。比較的希ではあるが、悪性神経膠腫は、不釣り合いに高い罹病率および死亡率と関連する（メジアン生存は、わずか１２〜１５ヶ月である）。ヒト腫瘍の最も血管性のものの中には、悪性神経膠腫がある。腫瘍血管系は、レセプターベースの標的化のための部位として特に十分に適していることが判明した。それは、正常組織の血管においては発現されない多数の分子を発現する。ペプチドＣＧＫＲＫ（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｊ．Ａ．，ら  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ４，３８３−３９１（２００３））は、種々の種の腫瘍における血管に結合する。実験から、静脈内注射したＣＧＫＲＫペプチドは、マウスにおけるレンチウイルス（Ｈ−ＲａｓＶ１２−ｓｉｐ５３）誘発性神経膠腫に効率的にホーミングすることが示された。上記ＣＧＫＲＫペプチドは、α−ヘリックス両親媒性ペプチドＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２に結合し、これは、真核生物細胞において内部移行した場合、その細胞に対して毒性である（Ｅｌｌｅｒｂｙ，Ｈ．Ｍ．，ら  Ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５，１０３２−１０３８（１９９９））。そのキメラペプチドは、活発に増殖するヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）もしくはＵ８７神経膠腫細胞に添加した場合、ミトコンドリアと同時局在したのに対して、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２は、そうではなかった。そのキメラＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＣＧＫＲＫペプチドで被覆した酸化鉄ナノワーム（ＮＷ）は、インビトロで遊離ペプチドより上記ＨＵＶＥＣ細胞およびＵ８７細胞に対して１００〜２００倍毒性が高く、神経膠腫の血管に特異的に蓄積した。Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＣＧＫＲＫ−ＰＥＧ−ＮＷでのマウスにおけるレンチウイルス誘発性神経膠腫の処置は、腫瘍増殖を阻害し、コントロール処置マウスと比較して、顕著な生存増大を示した。
【０３０３】
脳腫瘍（右海馬へのＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍）を有するマウスに、２００μｇのＦＡＭ標識ＣＧＫＲＫペプチドを静脈内注射し、３時間にわたって循環させた。上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、その器官を回収した。ＣＧＫＲＫペプチドは、正常脳組織と比較して、神経膠芽腫に蓄積した。点線は、上記腫瘍を表す。倍率×２００。
【０３０４】
培養細胞を、ＣＧＫＲＫ、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドで処理した。上記細胞を、ペプチドとともに２４時間にわたってインキュベートし、細胞死をＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、細胞系におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。図２Ａおよび図２Ｂは、ＨＵＶＥＣ細胞（Ａ）およびＴ３細胞（Ｂ）におけるＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドの細胞傷害性を示す。スチューデントｔ検定で統計分析を行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【０３０５】
２時間にわたって３７℃においてＫＡＫＥＣ−ＮＷ（配列番号１３５）、もしくはＣＧＫＲＫ−ＮＷ、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷとともにインキュベートしたＨＵＶＥＣ細胞の共焦点顕微鏡画像を調製した。ナノワームの細胞下局在を、ＨＵＶＥＣ細胞において同定した。ＣＧＫＲＫ−ＮＷおよびＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷとミトコンドリアマーカーとの高い部分同時局在（ｓｕｂ−ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）が存在する。
【０３０６】
２時間にわたって３７℃においてＣＧＫＲＫ−ＮＷもしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷとともにインキュベートしたＨＵＶＥＣ細胞の共焦点顕微鏡画像を調製した。ＨＵＶＥＣ細胞におけるナノワームの細胞下局在の競合は、ＣＧＫＲＫ−ＮＷ処理細胞およびＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ処理細胞の両方で認められた。上記標識ペプチド−ＮＷを添加する１５分前に、１０×非標識ペプチド−ＮＷを上記細胞に添加した。培養したＨＵＶＥＣ細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）、もしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）で処理した。図３Ａおよび図３Ｂは、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫのＨＵＶＥＣ細胞における細胞傷害性を示す。上記細胞を、洗浄なしで４８時間にわたってＮＷとともにインキュベートした（Ａ）か、または上記ＮＷを、２０分後に洗浄した（Ｂ）。そして細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した（ｎ＝３）。スチューデントｔ検定で統計分析を行った。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【０３０７】
培養Ｔ３細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ）、ＣＲＥＫＡ結合体化ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）、もしくはＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）で処理した。上記細胞を、ＮＷとともに４８時間にわたってインキュベートし、細胞死を、ＭＴＴアッセイによって定量化した。図４は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫのＴ３細胞における細胞傷害性を示す。
【０３０８】
２時間にわたって３７℃においてＣＧＫＲＫ−ＮＷ、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ、もしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ（キメラ−ＮＷ）とともにインキュベートしたＵ８７細胞の共焦点顕微鏡画像を調製した。ナノワームの細胞下局在を、Ｕ８７細胞において同定した。ＣＧＫＲＫ−ＮＷおよびＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷと、ミトコンドリアとの高い部分同時局在が存在する。
【０３０９】
培養したＵ８７細胞を、非標的化Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２結合体化ＮＷ、ＫＡＫＥＣ（配列番号１３５）結合体化ＮＷ（ＫＡＫＥＣ−ＮＷ）、ＣＧＫＲＫ結合体化ＮＷ（ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）、もしくはＮＷと結合体化したＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２（Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ）で処理した。上記細胞を、ＮＷとともに２４時間もしくは４８時間にわたってインキュベートし、細胞死をＭＴＴアッセイによって定量化した。図５は、Ｕ８７細胞におけるＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫの細胞傷害性を示す。これら結果は、Ｕ２５１で認められたものとほぼ同じ結果であり、５０〜６０％の細胞生存を有した。
【０３１０】
５−ｋＤａ  ＰＥＧリンカーを介してＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫで被覆したＮＷを、ＤＴＴを使用して上記粒子から切断し、上記粒子に存在するペプチドの量を計算して、上記ペプチドで被覆したナノ粒子  ＩＣ５０値に対して遊離ペプチドの量を比較した。図６は、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチド  対  ナノワーム上のペプチドのＩＣ５０値を示す。
【０３１１】
ＨＵＶＥＣ細胞を、未処理のまま（コントロール）にしたか、または無関係のペプチド−ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ）もしくは上記Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで２４時間、４８時間および７２時間にわたって処理した。細胞を、７−アミノ−アクチノマイシン（７−ＡＡＤ）を含む緩衝液中でアネキシンＶ−ＰＥとともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。図７は、ＨＵＶＥＣ細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ誘導性アポトーシスを示す。アネキシンＶ陽性細胞（アポトーシス細胞＋末期アポトーシスもしくは既に死滅した細胞）のパーセンテージを、各グラフにおいて示す。
【０３１２】
Ｔ３細胞（腫瘍内皮細胞）を、未処理のまま（コントロール）にしたか、または２４時間および４８時間にわたって無関係のペプチド−ＮＷ（ＣＲＥＫＡ−ＮＷ）もしくは上記Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで処理した。細胞を、７−アミノ−アクチノマイシン（７−ＡＡＤ）を含む緩衝液中でアネキシンＶ−ＰＥとともにインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析した。図８は、Ｔ３細胞における、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ誘導性アポトーシスを示す。アネキシンＶ陽性細胞（アポトーシス細胞＋末期アポトーシスもしくは既に死滅した細胞）のパーセンテージを、各グラフに示す。
【０３１３】
初代ＨＵＶＥＣを、５％  ＦＣＳ培地単独中の増殖因子を低下させたマトリゲル（コントロール）、またはＣＧＫＲＫ−ＮＷ（１０μｇ／ｍｌ）を含む上記培地中の上記マトリゲル、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ（５μｇおよび１０μｇ／ｍｌ）を含む上記培地中の上記マトリゲル上でプレート培養した。毛細管様構造のネットワークの形成を、プレート培養の２４時間後に、位相差顕微鏡法で×４０倍率において調べた。図９は、ＮＷと結合体化したＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫが、ＨＵＶＥＣの毛細管様管形成をインビトロで阻害することを示す。
【０３１４】
カスパーゼ−３活性を、カスパーゼ−Ｇｌｏ  ３／７アッセイキットを使用して、３μｇもしくは１０μｇのＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷでの処理の２４時間後に、ＨＵＶＥＣ細胞において決定した。試薬を添加した２時間後に、発光をルミノメーターで記録した。図１０は、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷで処理したＨＵＶＥＣ細胞におけるカスパーゼ活性を示す。
【０３１５】
ＨＵＶＥＣ細胞を、コントロールとしてＣＲＥＫＡ−ＮＷ（配列番号９２）（１０μｇ）もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ（１０μｇ）のいずれかとともに、２４時間、４８時間および７２時間にわたって処理した。全細胞抽出物を調製し、切断したカスパーゼ−３（実験１）もしくはカスパーゼ３（実験２）に対する抗体を使用したウェスタンブロッティングによって分析した。Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷは、カスパーゼ−３活性を増大させた。
【０３１６】
ＨＵＶＥＣ細胞を未処理のまま（コントロール）であったか、またはＣＲＥＫＡ−ＮＷ（１０μｇ）、もしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ（１０μｇ）のいずれかで、２４時間にわたって処理した。Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷとともにインキュベートしたＨＵＶＥＣ細胞の共焦点顕微鏡法による画像は、未処理もしくはＣＲＥＫＡ−ＮＷ（配列番号９２）処理細胞と比較して、切断したカスパーゼ−３の増大を示した。５Ｋ−ＰＥＧ−ＦＡＭ標識Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫペプチドで被覆した酸化鉄ＮＷを、ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍（右海馬にウイルス注射）を有するマウスに静脈内注射した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ  体重）。注射の６時間後に、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、その器官を回収した。腫瘍切片を染色し、共焦点顕微鏡法で検鏡した。ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷは、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）にホーミングすることが示された。ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍を有するマウス（注射の３週間後）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子を、１４日間にわたって１日おきに投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日、総蓄積用量３５ｍｇ／ｋｇ）。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。図１１は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置（実験番号１）の模式図である。
【０３１７】
ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍を有するマウス（注射の３週間後）を、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子を、１４日間にわたって１日おきに投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日、総蓄積用量３５ｍｇ／ｋｇ）。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。図１２は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置（実験番号１）を示す。
【０３１８】
ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍を有するマウス（右海馬への注射）を、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。上記粒子単独もしくはｉＲＧＤとの同時注射を、尾静脈注射を介して、６週間にわたって１週間に１回（ウイルス注射後の１週間（ｏｎｅ  ｗｅｅｋｓ））、または２週間半にわたって１日おきに（ウイルス注射後の３週間）投与した。すべてのマウスを、ＩＶＩＳシステム（レンチベクターは、ルシフェラーゼレポーターを含む）を使用してルシフェラーゼシグナルについてモニターした。図１３Ａおよび図１３Ｂは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置（実験番号２）を示す。上記マウスの生存を、現在記録している（ｎ＝３／群）。
【０３１９】
上記処置を開始する１日前および２週間半の処置コースの１日後に、マウスから採血した。１日おきに注射したマウス群に関しては、処置の最後の日の２週間後にもう一度採血を行った。ＡＬＴのレベルを、上記マウスすべての血清において試験した。正常値は、１０〜４０Ｕ／Ｌになる。図１４は、ナノワーム処置前および処置後のマウスにおけるＡＬＴ（Ｌ−アラニン−２−オキソグルタル酸アミノトランスフェラーゼ）レベルを示す。
【０３２０】
ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍を有するマウス（右海馬に注射）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。凍結ＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍の共焦点免疫蛍光を分析した。上記示された群（左側）の各々から１匹のマウスを安楽死させ、凍結切片をその脳から調製した。腫瘍治療後のＮＷ分布から、上記腫瘍においてペプチドで被覆したＮＷの存在が示された。ＦＡＭ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷを注射したＲＡＳ−ｓｉｐ５３誘発性脳腫瘍を有するマウスの正常器官の共焦点画像を、撮影した。（上記処置の最後に）正常器官におけるＦＡＭ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷの分布から、腎臓および脾臓におけるＦＡＭ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷの存在が示された。上記腎臓および脾臓は、顕著なＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ蛍光を示す唯一の非腫瘍組織であった。上記脾臓におけるキメラペプチド−ＮＷの存在は、上記ホーミングペプチドに関連しないナノ粒子の一般的な取り込みに起因し、腎臓は、上記粒子からの上記ペプチドの切断に起因する。
【０３２１】
図１５Ａおよび図１５Ｂは、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷナノワームでのＧＢＭ処置を示す。パネルＡは、上記実験の模式図を示す。００５脳腫瘍細胞を有するマウス（注射の１０日後）に、５−ｋＤａ  ポリエチレングリコールスペーサーを介してペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。ｉＲＧＤなしの上記粒子、およびｉＲＧＤとの同時注射を、１４日間にわたって１日おきに投与した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ／日，総蓄積用量３５ｍｇ／ｋｇ）。パネルＢは、生存のグラフを示す。生存を経時的にモニターした（ｎ＝３／群）。
【０３２２】
Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷを、Ｕ８７を有するマウスに静脈内注射した。上記粒子を、６時間にわたって循環させた（上記時間は、識別的ホーミングに関して最適であるように予備実験において決定した）。Ｕ８７  Ｔ２強調ＭＲ画像（Ｆａｓｔ  Ｓｐｉｎ  Ｅｃｈｏ，ＴＲ＝６．４ｓ，ＴＥ＝６９ｍｓ）でのＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＣＧＫＲＫ−ＮＷのＭＲ画像は、上記腫瘍を全体通じて低強度の脈管シグナルを示す。非標的化ナノワームは、上記ナノ粒子の大部分が血液から取り除かれた後に、これら腫瘍において検出可能なシグナルを与えなかった。
【０３２３】
（Ｂ．実施例２：神経膠芽腫に対するホーミング分子組成物のホーミング、局在化、および効果）
この実施例は、開示される上記腫瘍ホーミングナノ粒子結合体の例を記載する。上記結合体は、３種の新規なエレメントに基づいて構築した：（１）腫瘍内皮細胞および腫瘍細胞のミトコンドリアにそのペイロードを特異的に送達する腫瘍ホーミングペプチド；（２）ミトコンドリアに対して作用するアポトーシス促進性ペプチドとのこのホーミングペプチドの結合体化；および（３）上記アポトーシス促進活性を大いに増強する、酸化鉄ナノ粒子へのそのキメラペプチドの結合。上記ナノ粒子での神経膠芽腫（ＧＢＭ）を有するマウスの処置は、１つのＧＢＭモデルにおいて大部分の腫瘍を根絶し、より攻撃的なモデルにおいては腫瘍の発達を顕著に遅らせた。上記ナノ粒子の酸化鉄成分は、上記腫瘍の画像化を可能にした。最後に、これら治療診断的粒子と上記腫瘍浸透ペプチドｉＲＧＤとの同時注射は、上記治療効果をさらに増強した。
【０３２４】
抗脈管形成治療は、有望な、特に、非常に脈管形成したＧＢＭ腫瘍のための治療ストラテジーであると考えられた。しかし、これら治療は、ＧＭＢにおいて有効であるとは未だ証明されていない。本明細書で開示される新しいナノシステム技術は、１つのマウスＧＢＭモデルにおいて大部分の腫瘍を根絶し、かつ別のより攻撃的なモデルにおいて上記動物の死亡を大いに遅らせたので、ＧＢＭを処置するにおいて先例のない効力を示す。これらモデルはともに、他の処置モダリティー（抗脈管形成因子を含む）に完全に抵抗性であると判明した。
【０３２５】
腫瘍血管は、近年において、重要な治療標的になっている。腫瘍が増殖するにつれて、血管は腫瘍とともに増殖し、この増殖は、最初に、新脈管形成を介して起こる（Ｈａｎａｈａｎ，１９９６；Ａｌｉｔａｌｏ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒａｒａ）。従って、新脈管形成の阻害は、癌処置における主流の治療ストラテジーになってきた。腫瘍血管系の特別な特徴はまた、別のストラテジーである、ホーミングベースの（シナプス的（ｓｙｎａｐｈｉｃ））薬物の送達を可能にする（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，２０１０）。腫瘍血管は、正常な血管が発現しないかまたは腫瘍血管より遙かに低いレベルで発現する種々の細胞表面タンパク質および細胞外マトリクスタンパク質を発現する（Ｈａｎａｈａｎ，１９９６；Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，２０１０）。これら特異的脈管マーカーは、循環するリガンド（例えば、ペプチドおよび抗体）を結合するのに容易に利用可能である（Ａｌｌｅｎ，２００４；  Ｊａｉｎ，１９８６；  Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，２００２）。このようなリガンドに結合した薬物は、腫瘍組織において濃縮され、効力を改善し、正常組織の曝露が低下するのを可能にする（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，２０１０）。
【０３２６】
脈管マーカーは、ランダムペプチド配列をディスプレイするファージライブラリーのインビボスクリーニングによって、不偏の様式において調査され得る（Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ  ａｎｄ  Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，１９９６）。このアプローチは、腫瘍血管系および腫瘍細胞に特異的な種々のホーミングペプチドを生じた（Ａｒａｐ，１９９８；  Ｌａａｋｋｏｎｅｎ，２００２；  Ｓｕｇａｈａｒａ，２００９）。上記ペンタペプチドＣＧＫＲＫ（Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ；配列番号１）は、表皮腫瘍でのインビボファージライブラリースクリーニングによって最初に同定された（Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）。上記ペンタペプチドは、大部分の腫瘍における脈管およびマトリゲルプラグ新脈管形成アッセイにおいて上記脈管を認識する（Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）。ＣＧＫＲＫは、上記標的細胞中に内部移行され、あるペイロードをそれとともに導くことができる。腫瘍マウスへと静脈内注射したＣＧＫＲＫは、上記腫瘍に特異的に蓄積し、内皮細胞および腫瘍細胞の両方に局在するが、正常組織においては検出可能でない（Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）。ＣＧＫＲＫペプチドを、その細胞外標的化特異性、細胞内部移行特性、単純な構造、および結合体化のためにそのシステイン側鎖におけるスルフヒドリル基が利用可能であることの理由で、この研究のためのホーミングペプチドとして選択した。
【０３２７】
αヘリックス両親媒性ペプチドであるＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２（配列番号３）は、細菌細胞膜を破壊するが、真核生物細胞にはそれほど毒性でない合成抗菌ペプチドとして最初に設計された（Ｊａｖａｄｐｏｕｒ，１９９６）。しかし、真核生物細胞へと内部移行された場合、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２は、細菌の細胞膜と同様に、ミトコンドリア膜を破壊し、アポトーシス細胞死を開始する（Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９）。Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２とホーミングペプチドとを結合体化すると、上記ホーミングペプチドの標的において特異的に蓄積して細胞死滅を引き起こす化合物が生成された（Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９；  Ａｒａｐ，２００２；  Ｇｅｒｌａｇら）。この実施例において、腫瘍ホーミングＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２化合物を、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２をＣＧＫＲＫに結合体化することによって作製した。
【０３２８】
Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２は、腫瘍に特異的に標的化される場合ですら、非常に毒性の化合物である（Ａｒａｐら，２００２）。ナノ粒子処方物での毒性薬物の投与は、毒性を低下させ得る。例としては、パクリタキセル−アルブミンナノ粒子（アブラキサン（登録商標））およびドキソルビシンリポソームｓ（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））が挙げられ、これらはともに、臨床使用にある。ナノ粒子の他の利点としては、それらの表面に結合した化合物が、上記標的における結合効率を増大する多価様式で提示され得ること、および複数の機能がナノ粒子に作り上げられ得ることが挙げられる。ナノ粒子のこれら特徴は、開示される上記組成物において、および上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２結合体を使用することにおいて使用される。酸化鉄ナノワーム（ＮＷ）は、上記ナノ粒子の足場として有用である。なぜなら、例えば、酸化鉄は、ＭＲＩ造影剤として使用され得、得られたナノ粒子を治療診断的化合物（治療機能および診断機能の両方を有する化合物）にするからである。
【０３２９】
薬物としてのナノ粒子の一般的な欠点は、それらの大きなサイズから、単純な分子を用いた場合より、上記ナノ粒子が血液から組織へ浸透するのを困難にし得ることであり、このことは、脈管およびそのすぐ付近への効果を制限する。最近になって発見された腫瘍浸透ペプチドは、この問題を解決するために開示される上記組成物で使用され得る。これらペプチドは、その例が、ｉＲＧＤ（ＣＲＧＤＫＧＰＤＣもしくはＣｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ；配列番号１３４）と称される９アミノ酸ペプチドである。これらペプチドは、主なレセプター（ｉＲＧＤの場合にはαｖインテグリン）に結合し、次いで、タンパク質分解により処理されて、Ｒ／ＫＸＸＲＫ−ＯＨモチーフをアンマスクし、上記モチーフは、上記血管壁を横断し、組織を通過する輸送経路を活性化するニューロピリン−１に結合する（Ｔｅｅｓａｌｕら，２００９；  Ｓｕｇａｈａｒａら，２００９）。あるペーロードは、輸送されるべき上記ペプチドに結合される必要がない；上記経路は、傍観分子（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）およびナノ粒子と一緒に一掃されるバルク輸送経路（ｂｕｌｋ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｐａｔｈｗａｙ）である（Ｓｕｇａｈａｒａら，２０１０）。本発明者らのＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ナノ粒子レジメンの最終エレメントは、腫瘍治療において上記ナノ粒子とｉＲＧＤとを組み合わせることであった。
【０３３０】
神経膠芽腫（ＧＢＭ）は、成体における最も頻繁な原発性脳腫瘍であり、予後がよくない。外科手術、照射、および化学療法を含むマルチモダリティー処置アプローチにも拘わらず；メジアン生存は、わずか１２ヶ月である（Ｗｅｎ，２００８）。従って、この癌に対する、より有効な処置がひどく必要とされている。ここでは、本発明者らは、上記標的化Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノ粒子を使用して、実験的ＧＢＭ腫瘍を処置する。
【０３３１】
（１．結果）
（ｉ．脳腫瘍にホーミングするＣＧＫＲＫペプチドおよび細胞中のミトコンドリアとのその同時局在）
上記ＣＧＫＲＫペプチドは、内皮細胞および種々のタイプの腫瘍における腫瘍細胞を認識する（Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）。ＧＢＭ腫瘍へホーミングするＣＧＫＲＫ（Ｍａｒｕｍｏｔｏ，２００９；  Ｓｏｄａ，２０１１）を、この実施例に関して試験した。静脈内注射したＣＧＫＲＫは、上記ペプチドに対するローダミン標識によって示される場合、ＧＢＭ腫瘍において強く蓄積したが、正常組織においては蓄積しなかった。このペプチドを、この実施例における組成物のための上記神経膠芽腫に対する標的化因子として使用した。
【０３３２】
ＣＧＫＲＫは、上記標的細胞へと内部移行し、あるペイロードをそれと共に導く能力を有する（Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）。ＣＧＫＲＫペプチドの細胞内局在化を評価するために、生きた細胞の画像化をＦＡＭ−ＣＧＫＲＫで行なったところ、ＨＵＶＥＣ細胞およびＵ８７細胞、ヒト神経膠腫細胞において、ミトコンドリアマーカーと同時局在化することがわかった。上記ミトコンドリアに対するＣＧＫＲＫの特異性を決定するために、ミトコンドリアを肝臓から単離し、ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫおよび過剰の、非標識ＣＧＫＲＫもしくはコントロールペプチド（ＣＲＥＫＡ；配列番号９２）のいずれかとともにインキュベートした。上記ミトコンドリアへのＣＧＫＲＫペプチド結合の特異性は、非標識ＣＧＫＲＫによって競合的に阻害されたが、ＣＲＥＫＡによっては阻害されなかった（図１７）。さらに、単離された上記ミトコンドリアへのファージ結合アッセイを行ったところ、コントロールと比較して、ＣＧＫＲＫ−ファージの結合において８０倍増加が見いだされた（図１８）。このことは、ミトコンドリアが、ＣＧＫＲＫペプチドの主な細胞下標的オルガネラであることを示した。
【０３３３】
（ｉｉ．ＣＧＫＲＫペプチドは、ｐ３２タンパク質に結合する）
ミトコンドリアにおける上記ＣＧＫＲＫペプチドの標的を同定するために、ＣＧＫＲＫペプチドが結合したＳｕｌｆｏＬｉｎｋ  Ｒｅｓｉｎを、本発明者らがＣＧＫＲＫを顕著に結合することを示した、マウス肝臓から精製したミトコンドリアからの抽出物とともにインキュベートした（図１７および図１８）。結合したタンパク質を、過剰の遊離ＣＧＫＲＫペプチド（２ｍＭ）もしくはコントロールとしてのＣＲＥＫＡペプチドで溶出した。ＣＧＫＲＫは、３６−ｋＤａ未満の特定のバンドに結合し、上記コントロールにおいては認められなかった。その特定のバンドは、質量分析によってＣ１ｑＢＰもしくはｐ３２と同定された。そのＣＧＫＲＫ結合タンパク質をｐ３２として同定したことは、イムノブロッティングによって確認した。
【０３３４】
飽和結合実験は、ＣＧＫＲＫ−ｐ３２相互作用に関して平均結合親和性Ｋｄ＝０．２ｍｇ／ｍｌを与えた（図１９）。最後に、精製ｐ３２を、ｐ３２に対する全長抗体でブロックしたところ、最大４０％まで濃度依存性様式においてビオチンＣＧＫＲＫの結合が低下した（図２６）。これら結果は、実際に、ＣＧＫＲＫが上記ミトコンドリア中のｐ３２を認識することを示す。
【０３３５】
（ｉｉｉ．ＣＧＫＲＫＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２で被覆した酸化鉄ナノワームの腫瘍内分布）  
種々の抗癌薬は、それらが腫瘍ホーミングペプチドに結合される場合に、増強された抗腫瘍効果を示す（Ａｒａｐ，２００２；  Ｃｕｒｎｉｓ，２０００；  Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９；  Ｈａｍｚａｈ，２００８；  Ｋａｒｍａｌｉ，２００９）。ＣＧＫＲＫのミトコンドリア局在化が、アポトーシス促進ペプチドの送達を改善する方法を提供することが認識された。３つのエレメントからなる標的化システムを、組み立てた：腫瘍ホーミングペプチド（ＣＧＫＲＫ；  Ｈｏｆｆｍａｎ，２００３）、アポトーシス促進ペプチド［Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２；  Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９（膜を混乱させるペプチドの一例）］、および細長く伸びた形状のために、ナノワーム（ＮＷ）と呼ばれる（ｄｕｂｂｅｄ）酸化鉄ナノ粒子（Ａｇｅｍｙ，２０１０；  Ｐａｒｋ，２００９）。上記２種のペプチドを、５Ｋ−ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーを介して上記ＮＷに共有結合で連結されるキメラペプチドとして合成した。
【０３３６】
静脈内注射した、そのＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２キメラペプチドで被覆したＮＷは、種々のマウスおよびヒトＧＢＭ異種移植片モデル腫瘍（００５，ヒトＧＢＭスフェア、およびＵ８７）の腫瘍脈管に主に蓄積した。無傷の脳の脈管は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを引き寄せなかった。ＣＧＫＲＫでのみ被覆されたＮＷはまた、腫瘍脈管に蓄積したのに対して、Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２被覆ＮＷは、蓄積しなかった。種々のＮＷ処方物からの蛍光は、すべてのナノ粒子を非選択的に取り込む肝臓および脾臓を除いて腫瘍を有するマウスの正常組織において認められなかった。
【０３３７】
臨床適用のためにＭＲＩ造影剤として標的化した上記アポトーシス促進ペプチド−ＮＷにおいて酸化鉄成分の使用を示すために、磁気共鳴画像化法（ＭＲＩ）を行った。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷの静脈内注射後の００５腫瘍の磁気共鳴画像化から、上記腫瘍全体を通して低強度の脈管シグナルが示された。
【０３３８】
（ｉｖ．標的化したアポトーシス促進ペプチド−ＮＷは、アポトーシスを誘導する）
ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷがアポトーシスを誘導する能力を評価するために、上記粒子とミトコンドリアマーカーとの同時局在を評価した。ＣＧＫＲＫ−ＮＷおよびＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを、上記細胞に取り込ませると、ミトコンドリアと同時局在したのに対して、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは少量のみが内部移行し、ミトコンドリアと同時局在した。次に、上記標的化されたＮＷと比較して、上記ペプチドの細胞死への影響しやすさ（ａｆｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）を評価した。上記ＮＷに結合されるペプチドの量を定量化できるように、ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドを、還元可能な５−ｋＤａ  ＰＥＧリンカーを介して上記ＮＷに結合した。上記リンカーを、上記ＮＷから切断し、上記ＮＷに存在するペプチドの量を、上記遊離ＦＡＭペプチドの標準曲線を使用して、ＵＶ−分光光度計によって決定し、ＩＣ５０を計算するために使用した。ＨＵＶＥＣ細胞、癌内皮細胞にトランス分化する００５細胞（Ｔ３）（Ｓｏｄａ，２０１１）、およびＵ８７細胞を使用した。上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドをＮＷに結合すると、上記モノマーペプチドより数百倍もの細胞傷害性が増大する。
【０３３９】
この細胞傷害性効果をさらに分析するために、内部移行ペプチドに結合したＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２に関して以前に報告されたように（Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９）、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷがアポトーシスを介して細胞死をもたらし得るか否かをチェックした。アネキシンＶ染色から、アポトーシス促進ペプチド−ＮＷでの処理が、アポトーシスを介して細胞死を誘導することが確認された（図２１および図２７）。アポトーシス細胞の顕著な増加は、ＨＵＶＥＣにおいて（４８時間後に約６０％）、およびＴ３細胞において（７２時間後に約３５％）、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷでの処理の後に観察された。上記コントロール粒子ＣＲＥＫＡ−ＮＷおよびＣＧＫＲＫ−ＮＷは、顕著な効果を示さなかった。さらに、上記粒子を、インキュベーションの３０分後に洗浄した場合、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷのみが、両方の細胞タイプにおいて顕著なアポトーシスを誘導した（７２時間後に４０〜５０％）。このことは、内部移行ペプチドとしてのＣＧＫＲＫの重要な役割を強調する（図２２）。さらに、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷによるアポトーシス細胞死は、カスパーゼ−３切断を誘導した。
【０３４０】
脈管形成性血管に対するＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷの役割を研究するために、ＨＵＶＥＣ細胞におけるインビトロでの管形成を試験した。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、ＨＵＶＥＣがマトリゲル上で管様構造を形成する能力を顕著に低下させるのに対して、ＣＧＫＲＫ−ＮＷは、顕著な効果を有しない。インビボでの抗脈管形成効果を評価するために、マトリゲルプラークアッセイを使用した。マトリゲル／ｂＦＧＦを有するＢａｌｂ／ｃヌードマウスに、ＰＢＳもしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷのいずれかをｉ．ｖ．で処置した。１４日後、上記マウスにｃｙ５−レクチンを灌流させ、マトリゲルプラグを摘出した。近赤外色素（ｎｅａｒ−ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｄｙｅ）および共焦点顕微鏡法による上記マトリゲルプラークの画像化から、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷでの処置は、上記コントロールプラークと比較して、血管形成において顕著な低下をもたらすことが明らかになった。
【０３４１】
（ｖ．神経膠芽腫における標的化したアポトーシス促進ペプチドで被覆したＮＷの治療効力）
標的化した上記アポトーシス促進ペプチドで被覆したＮＷが、上記ペプチド単独より細胞死において効率的であること、および上記細胞死が同じ機構によって誘導されるという観察を考慮して、ＧＢＭにおける上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷの治療効果を試験した。それらの攻撃性および正常脳組織へと上記腫瘍細胞がびまん性に拡がる点においてヒト神経膠芽腫に非常に似ている（Ｍａｒｕｍｏｔｏ，２００９）マウス神経膠芽腫モデルを使用した。上記モデルを、Ｈ−ＲａｓＶ１２癌遺伝子およびｓｉＲＮＡ標的化ｐ５３を発現する単一のレンチウイルスベクター（Ｓｏｄａ，２０１１）を使用することによってさらに正確にした。海馬に上記レンチウイルスを注射したマウスは、神経膠芽腫を一様に発症する（これは、注射の２〜３ヶ月後に上記マウスの死をもたらす非常に推定可能な腫瘍形成の経過を有する）。３週間にわたる１日おきの全身のＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ処置は、ほぼ同時に上記疾患により死亡したＰＢＳもしくはＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷ単独を受けたマウスと比較して、Ｈ−ＲａｓＶ１２−ｓｉｐ５３レンチウイルスベクターを注射したマウスほぼすべてを治癒した（図２３）。ウイルス注射の６週間後（これはまた、上記処置の終了に対応する）から開始して、６週間、７．５週間、８週間、９．５週間、１１週間、および１３週間において、ルシフェラーゼシグナルをモニターした（上記レンチウイルスベクターは、ルシフェラーゼレポーターを含む）。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスにおいては、腫瘍は視覚化されなかった。さらに、Ｈ＆Ｅ染色から、上記処置の最後に比較的大きな腫瘍を有するコントロールマウスと比較して、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスにおいては、検出可能な腫瘍組織がないことが示された。上記研究の終わりに、上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ処置腫瘍を組織学的に分析したところ、大きな腫瘍が明らかになりかつ上記腫瘍において粒子の証拠がなかった非標的化Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷと比較して、血管中に多くの粒子を有する小さな腫瘍が示された。
【０３４２】
毒性分析から、肝臓酵素Ｌ−アラニン−２−オキソグルタル酸アミノトランスフェラーゼの血清レベルの緩やかな上昇から判断して、いくらかの肝臓毒性（ナノ粒子は、肝臓に非特異的に蓄積する）が示された（図２８）。上記値は、上記処置を中止した後２週間以内に正常になった。上記粒子は、処置マウスの血清における抗ローダミンＡｂに対するＥＬＩＳＡによって決定される場合、免疫原性ではない（図２９Ａ）。ＩＬ−６アッセイにおけるマクロファージ活性化というそれほど重要でない証拠が見いだされた（図２９Ｂ）。さらに、Ｈ＆Ｅ染色によって腎臓への損傷の証拠は存在しない。これらのわずかな毒性は、以前使用されてきた１価Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２結合体の重篤な毒性（例えば、Ａｒａｐ，２００２）とは対照的である。
【０３４３】
第２のモデルは、腫瘍細胞系（００５）を使用する。上記細胞系は、元は、上記レンチウイルス法（Ｍａｒｕｍｏｔｏ，２００９）によって誘発された神経膠芽腫腫瘍から単離された。００５腫瘍細胞を移植したマウスは、通常、接種の５〜６週間後に死亡する。上記腫瘍は、先に記載される侵襲性ヒト神経膠芽腫様特性を保持する（Ｍａｒｕｍｏｔｏ，２００９）。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ処置は、この実験において、メジアン生存時間を３２日から５２日へと増大させた（図２４）。このモデルでの反復実験で与えられた連続処置は、さらなる利益を与えなかった（図２４）。上記処置の最後に共焦点顕微鏡法で確認したところ、ＣＧＫＲＫ−Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷで処置したマウスの腫瘍における血管の多くが、ペプチド粒子で満たされていることが確認された。上記処置の最後における上記００５腫瘍マウスのレクチン灌流から、上記処置した腫瘍が、血管灌流をほぼ有さないことを示した。このことは、上記標的化されたＮＷが、上記血管の大多数を破壊したことを示していた。Ｕ８７（ヒト神経膠芽腫細胞系）において、上記腫瘍の発達はまた、顕著に遅延した（３０日）（図３０）。
【０３４４】
（ｉｖ．ｉＲＧＤによるＣＧＫＲＫＤ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２−ＮＷの腫瘍浸透および治療効力の増強）
ｉＲＧＤと呼ばれるペプチド［配列：
【０３４５】
【化１０】
2013525285.tif 000014
（配列番号４）；ＣｅｎｄＲ配列には下線を付した］は、ｉＲＧＤ結合した、および驚くべきことには、同時投与した化合物の腫瘍浸透を増強する（Ｓｕｇａｈａｒａ，２００９；  Ｓｕｇａｈａｒａ，２０１０；  米国特許出願公開第２００９−０２４６１３３号）。このペプチドは、２個の活性部位を含む：  ＲＧＤモチーフ（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，２００２）および隠れたＣｅｎｄＲ配列ＲＧＤＫ（Ｔｅｅｓａｌｕ，２００９）。上記ＲＧＤホーミングモチーフは、上記ペプチドを腫瘍内非常のαｖインテグリンに指向させ、ここで上記ペプチドは、Ｃ末端において上記ＣｅｎｄＲモチーフを露出するようにタンパク質分解的に処理される。上記活性化ＣｅｎｄＲモチーフは、ニューロピリン−１（ＮＲＰ−１）に結合し、これは、管外遊出、腫瘍浸透、および上記Ｃ末端短縮ペプチドの細胞進入を媒介する（Ｓｕｇａｈａｒａ，２００９；  Ｔｅｅｓａｌｕ，２００９）。ｉＲＧＤと非結合薬物との同時投与は、腫瘍組織における上記薬物の蓄積および拡散を増大させ、上記薬物の活性を増強するが、副作用は増強しない（Ｓｕｇａｈａｒａ，２０１０）。
【０３４６】
００５腫瘍モデルにおける上記ＮＷとｉＲＧＤとの組み合わせ（ＮＷ処置は、部分的にのみ成功であった）を、ｉＲＧＤ同時投与システムが、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷの腫瘍浸透および治療効力を増強するために使用され得ることを決定するために試験した。非標識ｉＲＧＤを、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷとともに静脈内に同時投与したところ、共焦点顕微鏡分析から、ｉＲＧＤと同時注射したＮＷは、上記粒子が腫瘍脈管に主に蓄積したＣＲＧＤＣとの同時注射と比較して、血管外腫瘍組織の中に拡がり得たことが示された。ｉＲＧＤ処置と同時注射したＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、メジアン生存時間を約５０日から８０日超へと増大させた（図２５）。
【０３４７】
（２．考察）
この実施例において使用したペプチドは、ミトコンドリアに対して特異的な親和性を有することが示された。いくつかの系統の証拠から、ＣＧＫＲＫは、上記ミトコンドリアへあるペイロードを導く能力を有することが示される。第１に、生きた細胞の画像化は、ファージ結合アッセイより上記ミトコンドリアマーカーとの同時局在を示し、およびマウス肝臓由来の精製ミトコンドリアに対する阻害アッセイは、ミトコンドリアに対するＣＧＫＲＫの特異性を示す。第２に、ＣＧＫＲＫペプチドでのミトコンドリア抽出物のプルダウンアッセイ（ｐｕｌｌ−ｄｏｗｎ  ａｓｓａｙ）から、質量分析により同定された特定のバンドがｐ３２であると明らかになった。上記ｐ３２タンパク質（溶液中および固体状態ではホモトリマー）は、主にミトコンドリアに存在するが、細胞質、核、および細胞表面において見いだされ得る（Ｇｈｅｂｒｅｈｉｗｅｔ，１９９４；  Ｂｒａｕｎ，２０００；  Ｄｅｄｉｏ，１９９６；  Ｋｉｔｔｌｅｓｅｎ，２０００；  Ｍａｈｄｉ，２００２；  Ｍａｈｄｉ，２００１）。腫瘍ホーミングペプチドＬｙｐ−１はまた、ｐ３２を標的とする（Ｆｏｇａｌ，２００８）。ＣＧＫＲＫおよびＬｙｐ−１（ＣＧＮＫＲＴＲＧＣ；配列番号１２７）は、ｐ３２上の同じ結合部位を共有し得る。ＣＧＫＲＫの親和性結合は、Ｌｙｐ−１より１５倍高く（Ｆｏｇａｌ，２００８）、このことは、そのサイズおよび線状の構造に原因がある可能性があり、そのトリマータンパク質の３個の結合部位の各々における低下した立体雲（ｓｔｅｒｉｃ  ｃｌｏｕｄ）に起因する。
【０３４８】
多くの報告が、以前から、種々の細胞浸透ペプチド（Ａｒａｐ，２００２；  Ｆａｎｔｉｎ，２００５；  Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ，２０１１；  Ｍａｉ，２００１；  Ｒｅｇｅ，２００７）、抗体フラグメント（Ｍａｒｋｓ，２００５；  Ｒｅｇｅ，２００７）への上記アポトーシス促進ペプチドであるＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２の結合体化、または特定の腫瘍タイプを標的にするためのナノ構造物への封入（Ｋｏ，２００９；  Ｓｔａｎｄｌｅｙ，２０１０）を記載している。より疎水性の残基を導入する他の配列改変は、内部移行および毒性の増加をもたらす（Ｈｏｒｔｏｎ，２００９）。この処置の主な制限は、必要とされる高用量のＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２が、おそらく、上記ペプチド中の非タンパク質分解性のＤ残基によって、腎毒性を引き起こすことである（Ａｒａｐ，２００２；  Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ，２０１１）。この研究において、上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドを、ＮＷに結合させた。このことは、上記ペプチドの多官能性ディスプレイを作り出し、上記ペプチドを上記モノマーペプチドより数百倍も効率的にする（ＮＷのＬＣ５０値は、上記遊離ペプチドの１４〜２５μＭと比較して、０．０５〜０．１５μＭであった）（表３）。ナノ粒子上の上記Ｄ（ＫＬＡＫＬＡＫ）２の非標的化多価ディスプレイは、細胞への上記ナノ粒子のインビトロ内部移行を増強することが報告された（Ｓｔａｎｄｌｅｙ，２０１０）一方で、そのインビボ効果は研究されなかった。さらに、腫瘍処置後の組織病理学および血液毒性アッセイの結果から、上記ＮＷは、いかなる明らかな毒性も、負の健康への作用をも誘発しないことが示された。
【０３４９】
この実施例は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷが、上記ペプチド結合体Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２単独と同じ機構でアポトーシスによる細胞死を誘導する（Ｅｌｌｅｒｂｙ，１９９９）ことを示す。上記細胞の生存度の結果と一致して、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、アネキシン発現を誘導したのに対して、ＣＧＫＲＫ−ＮＷは誘導しなかった（図２１）。上記粒子のインキュベーションの直ぐ後に上記細胞を洗浄すると、このキメラにおける上記部分の標的化効力が増強される。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷによる細胞死は、プロ−カスパーゼ３プロセシングを介して得られるカスパーゼ依存性であった。増殖している内皮細胞、癌内皮細胞、および細胞をインビトロで上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処理したＧＢＭ細胞系におけるアポトーシスは、上記細胞へのＣＧＫＲＫ媒介性送達およびその後のミトコンドリア、次いでＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２モチーフへの内部移行がミトコンドリア膜を混乱させて、細胞死を引き起こすことを示す。
【０３５０】
ＣＧＫＲＫ−ＮＷは、前立腺癌において血管にホーミングする（Ａｇｅｍｙ，２０１０）。神経膠芽腫は、一般に、非常に血管形成性の腫瘍であり（Ｃｈｉ，２００９；  Ｊａｉｎ，２００７）、それによって、この治療の理想的なモデルとして働く。現在の研究において、ＣＧＫＲＫペプチドがＧＢＭ腫瘍モデルへの顕著なホーミングを示すこと、およびＣＧＫＲＫ−ＮＷが、ＧＢＭ腫瘍血管にホーミングすることを見いだした。酸化鉄へのＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２の結合体化は、ヒトモデルを含む種々のタイプのＧＢＭにおいてその生物学的特性を保持した。この実施例は、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷが脳の神経膠腫のための良好な造影剤であり、インビボでのＭＲＩによる腫瘍の検出を選択的に改善するために使用され得ることを示す。
【０３５１】
（３．実験手順）
細胞系および腫瘍。  ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；  Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、内皮細胞増殖補充物を含むＥＢＭ−２培地（Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を使用して培養した。ヒト星状細胞腫細胞系（Ｕ８７）を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％  ウシ胎仔血清および１％  グルタミン  ペニシリン−ストレプトマイシン（ｐｅｎ−ｓｔｒｅｐ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａｕｃｋｌａｎｄ，ＮＺ）中で増殖させた。マウスＧＢＭを開始する００５細胞系を、記載されるように樹立した（Ｍａｒｕｍｏｔｏ，２００９）。上記００５細胞を、Ｎ２培地（これは、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（Ｏｍｅｇａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％  Ｎ２補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２０ｎｇ／ｍＬ  ヒトＦＧＦ−２（Ｐｒｅｐｏｔｅｃｈ）、２０ｎｇ／ｍＬ  ヒトＥＧＦ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍｅｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、および４０μｇ／ｍＬ  ヘパリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含む）中で維持した。Ｔ３細胞を、ＥＧＭ−２（Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中で培養した００５細胞の分化誘導によって得た。ヒトＧＢＭスフェアを得、以前に記載されるように培養した（Ｓｏｄａ，２０１１）。マウスＧＢＭを開始する００５細胞を、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの脳に移植した。合計３×１０５細胞を、１．５μｌのＰＢＳ中に懸濁させ、右海馬に定位注射した。ヒトＧＢＭスフェアの異種移植片を、１．５μｌのＰＢＳ中、０．５×１０６細胞を同所性にＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスに注射することによって作り出した。動物実験を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎｔａ  Ｂａｒｂａｒａ、Ｔｈｅ  Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、およびＴｈｅ  Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏの動物実験委員会によって承認された手順に従って行った。
【０３５２】
ペプチド合成。  ペプチドを、２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタンアミニウム（Ａｎａｓｐｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）をカップリング試薬として用いて、標準的な固相Ｆｍｏｃ／ｔ−Ｂｕ化学を使用して、自動マイクロ波補助ペプチド合成機（Ｌｉｂｅｒｔｙ；ＣＥＭ，  Ｍａｔｔｈｅｗｓ，ＮＣ）で合成した。合成の間に、上記ペプチドを、配列から色素を分離する６−アミノヘキサン酸スペーサーを有する５（６）−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で標識した。上記ペプチドを、９５％  トリフルオロ酢酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）と２．５％  水およびトリイソプロピルシラン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を使用して、樹脂から切断した。高速液体クロマトグラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）によるその後の精製から、＞９０％純度を有するペプチドを得た。
【０３５３】
ミトコンドリアの単離およびペプチド／ファージ結合。  ミトコンドリアを、製造業者の指示（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）に従って、組織用のＰｉｅｒｃｅミトコンドリア単離キットの緩衝液による分画遠心分離を使用して、Ｂａｌｂ／ｃマウスの肝臓から単離した。ミトコンドリアへの上記ＣＧＫＲＫペプチドの結合を試験するために、精製ミトコンドリアを、種々の濃度の非標識ＣＧＫＲＫもしくはコントロールペプチド（ＣＲＥＫＡ；配列番号９２）とともに３０分間にわたって４℃において予めインキュベートした。次いで、ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫを添加し、さらに１時間にわたってインキュベートした。上記ＦＡＭペプチドの結合を、蛍光によって定量化した。ファージ結合アッセイにおいて、精製ミトコンドリアを、１０ｍｌのＤＭＥＭ（１％  ＢＳＡを補充した）中に懸濁させ、５×１０８プラーク形成単位（ｐｆｕ）のペプチドをディスプレイしているファージとともに、４℃において一晩インキュベートした。上記ミトコンドリアを、ＤＭＥＭ／ＢＳＡで３回洗浄し、上記ファージを、１％  ＮＰ−４０を含む溶原培地とともに集め、プラークアッセイによって定量化した。
【０３５４】
アフィニティークロマトグラフィー。  ミトコンドリアを、４００ｍＭ  ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を含むＰＢＳ中に溶解し、清澄化した溶解物を、ＣＧＫＲＫ被覆したＳｕｌｆｏｌｉｎｋ−ビーズ（Ｐｉｅｒｃｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）とともにインキュベートした。洗浄後、結合したタンパク質を、２ｍＭの遊離ＣＧＫＲＫペプチドを含む溶解緩衝液で溶出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。銀染色したゲルから切り出したゲルバンドを、Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅにおいて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって分析した。
【０３５５】
親和性測定。  ｐ３２に対するＣＧＫＲＫの親和性を、ＥＬＩＳＡベースのアッセイによって測定した。９６ウェルプレートにおけるウェルを、３μｇ／ｍｌの精製ｐ３２タンパク質で被覆し、１時間にわたって３７℃において、ＰＢＳ中の種々の濃度のビオチン化ＬｙＰ−１ペプチド（１００μｌ／ウェル）とともにインキュベートした。１ｍｍｏｌ／ｌ  ＣａＣｌ２および０．０１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むＴＢＳで洗浄した後、ストレプトアビジン結合体化西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｚｙｍｅｄ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を上記ウェルに添加し、１時間にわたって室温においてインキュベートした。ｐ３２へのペプチド結合を、基質として２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて定量化した。ｐ３２被覆なしのウェルを使用して、バックグラウンドの結合を決定した。Ｋｄ値を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。
【０３５６】
細胞増殖アッセイおよび画像化。  ＭＴＴ［３−［４，５−ジメチルチアゾール（ｔｈａｚｏｌ）−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム−ブロミド］アッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）を使用して、細胞増殖を定量化した。細胞を、９６ウェルプレートの完全培地中で播種し（５×１０３細胞／ウェル）、３７℃において加湿５％  ＣＯ２雰囲気中で一晩結合させた。次いで、その培養培地を除去し、種々の濃度のペプチドもしくはＮＷを添加した。４８時間後および７２時間後、１０μＬのＭＴＴ試薬（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加した。その培地を３時間後に細胞から除去し、１００ｍｌのＤＭＳＯ：ＭＥＯＨ（１：１  ｖ／ｖ）を各ウェルに添加した。そのプレートを、波長５９５ｎＭにおいて読み取った。生きた細胞の画像化については、細胞を、ガラス底プレート（Ｗｉｌｌｃｏ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に播種し、２４時間後に、上記細胞を洗浄し、ＦＡＭ標識ペプチドもしくはＮＷとともに４５分間にわたって３７℃においてインキュベートした。次いで、上記細胞をＰＢＳで３回すすぎ、さらに１５分間にわたって３７℃において５００ｎｍ  ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ  Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）とともにインキュベートし、続いて、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２  ＤＮＡ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）で１２分間にわたる核染色を行った。上記細胞を、Ｆｌｕｏｖｉｅｗ  ＦＶ  ５００共焦点顕微鏡法（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ）で分析した。
【０３５７】
ＮＷ結合タンパク質のイムノブロット分析。  ＨＵＶＥＣ細胞を、２４時間および４８時間、１０μｇ／ｍｌ  ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷもしくはＣＲＥＫＡ−ＮＷとともにインキュベートし、製造業者の指示に従って、ＲＩＰＡ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で溶解した。その溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。そのタンパク質をニトロセルロース膜に２時間にわたって２００ｍＡにおいて転写した後、上記膜を、１時間にわたって室温において５％  ミルク含有ＴＢＳ−０．０５％  Ｔｗｅｅｎで処理し、１ｍｇ／ｍｌ  抗カスパーゼ３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｄｅｎｖｅｒｓ，ＭＡ）および抗ｐ３２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とともにインキュベートし、続いて、抗ウサギＩｇＧ（ＨＲＰ結合抗体）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｄｅｎｖｅｒｓ，ＭＡ）とともにインキュベートした。
【０３５８】
フローサイトメトリー。  細胞を回収し、アネキシンＶ−ＰＥアポトーシス検出キット（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して染色し、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で分析した。
【０３５９】
インビボマトリゲル新脈管形成。  ２ヶ月齢のＢａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウスに、新脈管形成刺激因子として５００ｎｇ  組換えヒトｂＦＧＦ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）ありもしくはなしで、５００ｍｌのマトリゲル（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を両側の鼠径部に皮下注射した。上記マウスを、ＰＢＳもしくはＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇ／ｋｇ）で２週間にわたって１日おきに処置した。上記処置の終わりに、上記マウスを麻酔下で、遠赤外蛍光性Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７イソレクチンＧＳ−ＩＢ４結合体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）で心臓を介して灌流し、続いて、約１０ｍｌの４％  ＰＦＡでのさらなる灌流によって、屠殺した。上記マトリゲルプラグを、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｎｅｂｒａｓｋａ）によって画像化し、組織学的分析のために、７〜１０μｍ切片を切り出し、Ｆｌｕｏｖｉｅｗ  ５００共焦点顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ）の下で検査した。上記処置群およびＰＢＳコントロール群は、３回の独立した実験の各々において２匹のマウス（４個のプラグ）からなった。
【０３６０】
管形成アッセイ。  ２４ウェルプレート中のウェルを、２５０μｌ  マトリゲル（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｓｏｎ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で被覆した。ＨＵＶＥＣをトリプシン（Ｌｏｎｚａ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）で剥がし、ＰＢＳで洗浄し、上記のように補充物を含むＥＢＭ２培地中の１０５個の細胞を、その後、５μｇ／ｍｌもしくは１０μｇ／ｍｌのＮＷの存在下で上記マトリゲルの上に蒔いた。上記細胞を、３７℃において２４時間にわたってインキュベートし、明視野顕微鏡下で４０×倍率において（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）撮影した。
【０３６１】
インビボペプチドホーミング。  上記のように誘導された同所性の脳の癌を有するマウスを、それらが腫瘍塊の存在の症状を示した場合に使用した。ローダミン標識ＣＧＫＲＫ（２００μｇ）をマウスに静脈内注射し、３時間循環させた。上記マウスをＰＢＳで心臓を通じて麻酔下で灌流させ、組織を集め、蛍光分析のために処置した。
【０３６２】
ＮＷの調製。  ペプチドで被覆したＮＷを、記載されるように調製した（Ａｇｅｍｙ，２０１０；  Ｐａｒｋ，２００９）。アミノ化ナノワームを、マレイミド−５ＫＰＥＧ−ＮＨＳ（ＪｅｎｋｅｍＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｉｔｙ，Ｃｈｉｎａ）でｐｅｇ化した。上記アミノ化ナノワームを、マレイミド−５ＫＰＥＧ−ＮＨＳ（ＪｅｎｋｅｍＴｅｃｈｎｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎａ）でｐｅｇ化した。ペプチドを、ペプチド配列のシステインチオールと官能化粒子のマレイミドとの間のチオエーテル結合を介して上記ナノ粒子に結合体化した。
【０３６３】
ＮＷ上のペプチドの定量化。  上記アミノ化ナノワームを、ＯＰＳＳ−５ＫＰＥＧ−ＮＨＳ（ＪｅｎｋｅｍＴｅｃｈｎｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎａ）でｐｅｇ化した。ペプチドを、ペプチド配列のシステインチオールと、官能化粒子上のピリジルスルフェニル保護チオールとの間のジスルフィド結合を介して、上記ナノ粒子に結合体化した。上記ジスルフィド連結を介して共有結合で連結した上記ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを、ＤＴＴで処理した。溶液中でこのようにして得られた遊離ペプチドの濃度を、蛍光分光法を使用して、ペプチド標準曲線で推定した。
【０３６４】
インビボＮＷ注射。  同所性ＧＢＭ腫瘍を有するマウスに、ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ  体重）を尾静脈に注射した。ホーミング実験において、上記マウスを、麻酔下でＰＢＳを用いた心臓灌流による注入の５〜６時間後に安楽死させ、器官を切り出し、ＮＷに関して分析した。腫瘍処置実験において、腫瘍マウスに、１５０μｌ  ＰＢＳ中のＮＷ、もしくはコントロールとしてのＰＢＳを、３週間にわたって１日おきに静脈内注射した。００５腫瘍を有するマウスにまた、４ｍｍｏｌ／ｋｇの、上記腫瘍浸透ペプチド、ｉＲＧＤ、もしくはコントロールとしてのＣＲＧＤＣ（配列番号１３６）のいずれかとを組み合わせて、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）を静脈内注射した。上記処置の最後に、２匹  マウス／群を安楽死させ、上記マウスの残りを、上記動物施設スタッフが、マウスの症状が安楽死を要することを決定するまでモニターした。
【０３６５】
組織学および免疫組織学。  組織を、４％  パラホルムアルデヒド中で一晩４℃において固定し、３０％  スクロース中で一晩低温保護し、ＯＣＴ包埋媒体中で凍結した。組織切片（７μｍ）を切り出し、Ｈ＆Ｅ染色したか、もしくは免疫染色のために処理した。ＣＤ３１に関して染色するために、切片を、１時間にわたって室温において、２次抗体が生成された種に由来する１０％  血清とともに最初にインキュベートし、続いて、モノクローナル抗マウスＣＤ３１（１０ｍｇ／ｍｌ；  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、およびＡｌｅｘａ  ６４７ヤギ抗ラット２次抗体（１：１０００；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）とともにインキュベートした。各染色実験は、陰性コントロールとして上記２次抗体のみで染色した切片を含んだ。核を、ＤＡＰＩ（５ｍｇ／ｍＬ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で対比染色した。上記切片を、Ｇｅｌ／Ｍｏｕｎｔマウント媒体（Ｂｉｏｍｅｄａ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）中でマウントし、Ｆｌｕｏｖｉｅｗ  ５００共焦点顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ）の下で検査した。
【０３６６】
バイオフォトニック腫瘍画像化。  ルシフェラーゼ標識ＧＢＭ腫瘍を有するマウスに、新たに調製した、ＰＢＳ中に懸濁したルシフェリン基質（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍｅｄｉｓｏｎ，ＷＩ）の３ｍｇ／マウスを注射で与えた。次いで、上記マウスを、イソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）で麻酔し、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ（登録商標）  １００  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｘｅｎｏｇｅｎ，Ｃａｌｉｐｅｒ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、スモールビニングモードにおいて１分間の獲得時間においてルシフェリンの腹腔内注射１０分後に画像化した。
【０３６７】
ＮＷの毒性研究。  血清を、処置前に、処置が終わった１日後、および上記処置が完了した２週間後にマウスから集めた。血清中のＡＬＴレベルを、製造業者の指示に従って、ＡＬＴ（ＧＰＴ）試薬（ＩｎｆｉｎｉｔｙＴＭ）を使用して決定した。同じ血清サンプルを、マウスＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ  Ｓｅｔ（ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡＴＭ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＩＬ−６のレベルを決定するために使用した。
【０３６８】
磁気共鳴画像化。同所性００５腫瘍を有するマウスに、ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）を静脈内注射した。上記ＮＷ注射の約５時間後に、上記マウスをイソフルランで麻酔し、以下の条件を使用して、Ｔ２＊強調ＭＲＩに供した：３Ｄ  ＳＰＧＲ（ｓｐｏｉｌｅｄ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｅｃｈｏ）、ＴＲ＝４０ｍｓ，ＴＥ＝１８．６ｍｓ，フリップ角＝１５°，バンド幅＝１１５Ｈｚ／ピクセル，解像度：平面および０．３ｍｍスライス厚において（０．１６ｍｍ）２）。３枚のスライスを、改善されたシグナル−対−ノイズについて平均した）。機器は、Ｓｉｇｍａ  ＨＤｘ  ３  Ｔスキャナ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）であった。画像化の後、目的の組織を採取し、Ｈ＆Ｅ染色のために処理した。
【０３６９】
統計分析。  データを、対応のない両側スチューデントｔ検定によって分析した。０．０５未満のＰ値を、統計的に有意と見なした。
【０３７０】
神経膠芽腫は、一般に、非常に脈管形成性の腫瘍であり、ＶＥＧＦは、上記腫瘍細胞によって高レベルで産生される（Ｃｈｉ，２００９；  Ｊａｉｎ，２００７）。従って、抗脈管形成治療は、特にグリオーマについて有望な治療ストラテジーであると考えられた（Ｊａｉｎ，２００７）。最良の公知の抗脈管形成因子は、ＶＥＧＦ−Ａのインヒビター、注目に価するのは、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ−Ａに対する中和抗体）（これは、前臨床研究において良好な抗グリオーマ活性を示す）であるが、臨床においては、十分であるとはいえない効果があるのみである。新脈管形成インヒビターと他の抗癌剤とを組み合わせると、より良好な治療効果が示された。例えば、第ＩＩ相臨床試験において、ＧＢＭを有する患者のうちの半分超が、抗ＶＥＧＦ抗体ベバシズマブおよびイリノテカンの組み合わせ処置に応答したが、この効果は、大部分の患者において一過性であった（Ｖｒｅｄｅｎｂｕｒｇｈ，２００７）。抗ＶＥＧＦ治療に対する抵抗性を説明するために提唱された機構としては、他の脈管形成促進シグナル伝達経路の活性化、脈管細胞を保護し、そして栄養を与える骨髄（ＢＭ）由来骨髄性細胞の動員、増大した周皮細胞被覆による血管の保護、および増大した腫瘍侵襲が挙げられる（Ｂｅｒｇｅｒｓ，２００８；  Ｓｈｏｊａｅｉ，２００８）。近年の研究から、神経膠芽腫細胞が内皮細胞にトランス分化することによる、ＶＥＧＦ−Ａレセプター（ＶＥＧＦＲ２）およびｂＦＧＦレセプターの欠如が、潜在的に、この抵抗性の主要な寄与であることが示された（Ｓｏｄａ，２０１１）。
【０３７１】
（４．結果）
（ｉ．神経膠芽腫（ＧＭＢ）腫瘍へのＣＧＫＲＫペプチドのホーミングおよびＣＧＫＲＫペプチドとミトコンドリアとの相互作用）
右海馬に００５神経膠腫腫瘍を有するマウスに、２００μｇの、ローダミンで標識したＣＧＫＲＫペプチドを静脈内注射した。３時間後に、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、上記腫瘍および正常脳組織を回収した。最後のパネルにおける挿入図は、正常脳組織の切片を示す。ＣＧＫＲＫペプチドは、腫瘍血管に集まる。増殖しているヒト内皮細胞（ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）；脈管形成性内皮細胞に似ている）およびＵ８７細胞を、ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫペプチドおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒとともにインキュベートし、蛍光顕微鏡法によって試験して、上記ＣＧＫＲＫペプチドがミトコンドリアを標的とするかどうかを評価した。その２つの標識が同時にあることから、ＣＧＫＲＫペプチドがミトコンドリアと同時局在することが示された。ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫを、非標識ＣＧＫＲＫもしくはコントロールとして非関連ペプチド（ＣＲＥＫＡ）のいずれかの漸増濃度の存在下で、精製ミトコンドリアとともにインキュベートした（図１７）。上記標識ＣＧＫＲＫペプチドの結合は、非標識ＣＧＫＲＫペプチドの量に比例して低下したが、上記ＣＲＥＫＡペプチドの場合においては低下しなかった。このことは、上記ＣＧＫＲＫペプチドによるミトコンドリアへの結合が特異的であることを示す。ＣＧＫＲＫファージおよびＣＲＥＫＡファージ（コントロールとして）を、精製ミトコンドリアとともにインキュベートした（図１８）。結合したファージの力価測定から、上記コントロールより上記ＣＧＫＲＫファージの結合が約８０倍高いことが示される。
【０３７２】
（ｉｉ．ＣＧＫＲＫペプチドは、ミトコンドリア抽出物中のｐ３２タンパク質に結合する）
タンパク質を、マウス肝臓から精製したミトコンドリアから抽出し、ＣＧＫＲＫペプチド結合ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ  Ｒｅｓｉｎでのアフィニティークロマトグラフィーによって分画した。結合したタンパク質を、遊離ＣＧＫＲＫペプチド（２ｍＭ）、もしくはコントロールとしてＣＲＥＫＡペプチドで溶出した。ｐ３２タンパク質は、上記ＣＧＫＲＫペプチドで、上記アフィニティーマトリクスから迅速に溶出したが、上記コントロールＣＲＥＫＡペプチドでは溶出しなかった。このことは、上記ＣＧＫＲＫペプチドが、上記ｐ３２タンパク質に特異的に結合することを示す。溶出サンプルの抗ｐ３２イムノブロットを行った。このことから、溶出した上記タンパク質が、上記ｐ３２タンパク質に対応することが確認された。固定化ｐ３２タンパク質への、漸増量のビオチン標識ＣＧＫＲＫペプチドの結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたストレプトアビジンで検出し、ｐ３２の非存在下での非特異的結合に対して正規化した（図１９）。結合曲線から計算したｐ３２に対する上記ペプチドの親和性は、Ｋｄ＝０．２±０．０６８μｇ／ｍｌである。阻害のパーセントを、非標識ＣＧＫＲＫペプチドもしくはＬｙＰ−１ペプチドの漸増濃度の存在下で、結合阻害曲線を使用して評価した（図２０）。結合の阻害は、非標識ＬｙＰ−１ペプチドに対してよりも、非標識ＣＧＫＲＫの存在下で両方のペプチドに対して遙かにより早く低下する。
【０３７３】
（ｉｉｉ．ＧＭＢ腫瘍へのＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ナノワーム（ＮＷ）のホーミング）
腫瘍ホーミングペプチド（ＣＧＫＲＫ）およびアポトーシス促進ペプチド（Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２）からなるキメラペプチドを、酸化鉄ナノ粒子（ＮＷ；長さ８０〜１００ｎｍ、幅３０ｎｍ；図１６）に共有結合で結合させた。Ｒｄ標識ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドで（５Ｋ−ＰＥＧリンカーを介して）被覆した酸化鉄ＮＷを、００５腫瘍、またはヒトＧＢＭスフェアもしくはＵ８７細胞で生成した異種移植片腫瘍のいずれかを有するマウスに静脈内注射した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ  体重）。その腫瘍細胞を、右海馬に注射した。上記注射の５〜６時間後、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、その器官を集めた。腫瘍切片を染色し、共焦点顕微鏡法で検査した。上記Ｒｄ標識ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２被覆粒子、腫瘍細胞（上記ヒトＧＢＭスフェアおよびＵ８７細胞の両方が、緑色蛍光タンパク質を発現した）、抗ＣＤ３１で染色した血管、およびＤＡＰＩで染色した核を視覚化した。ＣＧＫＲＫペプチドは、３種の腫瘍タイプすべてに関して腫瘍血管に集まる。Ｒｄ標識ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを、腫瘍を有するマウスに静脈内注射し、腫瘍を、Ｔ２＊強調ＭＲＩ（３Ｄ  ＳＰＧＲ）によって視覚化した。上記ナノワーム組成物からのシグナルは、上記腫瘍位置と一致した。
【０３７４】
（ｉｖ．Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ＣＧＫＲＫ−ＮＷ結合体は、活性化内皮細胞において内部移行し、ミトコンドリアと同時局在し、アポトーシスによる細胞死を誘導する）
生きているＨＵＶＥＣを、２時間にわたって３７℃において、フルオレセイン（ＦＡＭ）標識ＮＷ（ＣＧＫＲＫペプチド、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチド、もしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチド）の存在下でおよび１５分間にわたってミトコンドリアのためのマーカー（ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ）の存在下で、インキュベートした。ＤＮＡを、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で対比染色した。上記細胞を、共焦点顕微鏡法によって視覚化した。上記ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドのみが、ミトコンドリアにおける大量の局在を示した。ＦＡＭ−ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドを、上記ＮＷに、還元可能な５−ｋＤａ  ＰＥＧリンカーを介して結合させた。上記リンカーを、ＤＴＴを使用して上記ＮＷから切断し、上記ＮＷに存在するペプチドの量を、溶液中の蛍光測定によって決定し（上記ＮＷ表面でのクエンチを回避するため）、ＩＣ５０を計算するために使用した（表３）。
【０３７５】
【表３】
2013525285.tif 000015
ＨＵＶＥＣおよびＴ３細胞は、未処理のまま（コントロール）であったか、またはコントロールペプチド（ＣＲＥＫＡ）、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２、もしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２のいずれかで被覆した、濃度１０μｇ／ｍｌのＮＷで、２４時間、４８時間および７２時間にわたって処理した（図２１）か、あるいは上記粒子を３０分後に洗い流し、インキュベーションを７２時間にわたって続けた（図２２）。上記細胞をアネキシンで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）の全パーセンテージを、図２１および図２２に示す。図２１における実験からの全細胞抽出物（ＨＵＶＥＣ）を調製し、切断されたカスパーゼ−３に対する抗体および負荷コントロールとしてβ-アクチンを使用してイムノブロッティングすることによって分析し、切断されたカスパーゼ−３、チューブリン、および染色された核での共焦点顕微鏡法によっても分析した。カスパーゼ−３は、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノワームとともにインキュベートした細胞においてのみ切断を示した。
【０３７６】
（ｖ．レンチウイルス注射によって誘発された腫瘍のＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷによる処置）
右海馬にレンチウイルス（Ｈ−ＲａｓＶ１２−ｓｉｐ５３）誘発性脳腫瘍を有するマウスに、ペプチドで被覆したＮＷを静脈内注射した。その粒子を、ウイルス注射の３週間後から開始して、１８日間にわたって１日おきに投与した。図２３は、上記非処置（コントロール）マウスの生存曲線およびＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノワームもしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノワームで処置したマウスについての生存曲線を示す。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノワームは、上記コントロールおよび上記Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ナノワームと比較して、生存の劇的な増大を提供する。上記マウスを、ＩＶＩＳシステムを使用してルシフェラーゼシグナルについてモニターした（上記レンチウイルスベクターは、ルシフェラーゼレポーターを含む）。上記コントロールマウスのみが、検出可能なルシフェラーゼシグナルを有した。上記処置の最後にＨ＆Ｅ染色した後に、癌は、コントロールマウスにおいてのみ上記レンチウイルス注射部位において目に見えた。上記処置の終わりに代表的なマウスの脳切片の共焦点顕微鏡画像から、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ処置マウスにおいて小さな残留腫瘍が示されたが、上記Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ処置マウスにおいて顕著により多くの腫瘍細胞が示された。
【０３７７】
（ｖｉ．移植したＧＢＭ腫瘍に対するＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷによる処置）
腫瘍を、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの右海馬に３×１０５の００５細胞を移植することによって発達させた。腫瘍細胞移植の１０日後に、上記マウスに、ＮＷを静脈内注射した。上記ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）を、３週間にわたって１日おきに投与したか、または同じ期間にわたって連続的に投与した（ｎ＝８／群）。図２４は、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ、ＣＧＫＲＫ−ＮＷ、およびＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスの生存曲線を示す。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、１日おきもしくは連続的に投与したかに拘わらず、より長い生存を示した。上記処置の最後に代表的なマウスの脳切片を、抗ＣＤ３１およびＤＡＰＩで染色した。上記ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを、ローダミンで標識した。上記腫瘍細胞は、緑色蛍光タンパク質を発現した。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、腫瘍血管にホーミングした。Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、腫瘍にホーミングしなかった。レクチンを、上記処置の最後に、代表的な腫瘍マウスに灌流した。ビオチン化Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍレクチンの灌流によって血管を染色し、抗ビオチンを使用して共焦点顕微鏡法によって視覚化した。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスでは、腫瘍血管の標識化がほとんど示されず、上記コントロールマウスと比較して腫瘍細胞の標識化の少ないことが示され、そのことにより、腫瘍および腫瘍血管の低減が示された。
【０３７８】
（ｖｉｉ．ｉＲＧＤと同時注射したＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷの抗腫瘍効果の増強）
同所性００５腫瘍を有するマウスに、４ｍｍｏｌ／ｋｇの、非標識ＣＲＧＤＣもしくはｉＲＧＤペプチドのいずれかと組み合わせて、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）を静脈内注射した。上記腫瘍および組織を５〜６時間後に集め、共焦点顕微鏡法によって分析した。マウスにおいてＣＲＧＤＣと同時注射したＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、大部分は、腫瘍血管に一致し、このことは、腫瘍血管へのホーミングを示していた。マウスにおいてｉＲＧＤと同時注射したＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、上記腫瘍血管から離れて上記腫瘍内に局在し、このことは、細胞内部移行および腫瘍浸透の増大を示していた。１０日前に移植した同所性００５腫瘍を有するマウスに、３週間にわたって１日おきに、４ｍｍｏｌ／ｋｇのｃＲＧＤもしくはｉＲＧＤと混合したＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇの鉄／ｋｇ）のいずれかの静脈内注射を与えた。図２５は、生存曲線を示す（ｎ＝８〜１０／群）。ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスは、コントロールマウスおよびｉＲＧＤ単独で処置したマウスと比較して、生存時間の明らかな増大を示し、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびｉＲＧＤを一緒に処置したマウスは、最も長い生存時間を示した（そのマウスのうちの８０％は、８０日後にもなお生存していた）。
【０３７９】
（ｖｉｉｉ．腫瘍を有するマウスの正常組織におけるＣＧＫＲＫペプチドおよびＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ）
右海馬に００５腫瘍を有するマウスに、２００μｇのＲｄ標識ＣＧＫＲＫペプチドを静脈内注射した。３時間後、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、組織を集め、切片を作り、ローダミン蛍光について分析した。かなりのＣＧＫＲＫペプチドが腎臓に出現したが、心臓にも、膵臓にも、肝臓にも、肺にも、脾臓にも出現しなかった。Ｒｄ標識ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを、００５腫瘍を有するマウスに静脈内注射した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ  体重）。上記腫瘍は、００５腫瘍細胞を右海馬に注射することによって生成した。上記注射の５〜６時間後、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、組織を集めた。腫瘍切片を、抗体で染色し、共焦点顕微鏡法によって試験した。かなりのＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは腎臓に出現したが、膵臓にも、肝臓にも、肺にも、脾臓にも、正常脳にも出現しなかった。上記標識はまた、上記マウスの尿中に出現した。
【０３８０】
（ｉｘ．抗ｐ３２による、ｐ３２へのＣＧＫＲＫペプチドの結合の阻害）
１μｇ／ｍｌのビオチン−ＣＧＫＲＫを、精製ｐ３２で被覆したマイクロタイターウェル中でインキュベートし、その結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたストレプトアビジンで検出し、ｐ３２の非存在下での非特異的結合に対して正規化した。上記抗ｐ３２抗体を全長ｐ３２タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に対して調製した。上記実験を三連で行った；類似の結果を有した２回の実験のうちの１回を、図２６に示す。その結果は、上記ＣＧＫＲＫペプチドがｐ３２に結合することを示す。
【０３８１】
（ｘ．ＧＭＢ腫瘍へのＣＧＫＲＫ−ＮＷのホーミング）
５Ｋ−ＰＥＧリンカーを介してＲｄ標識ＣＧＫＲＫもしくはＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２ペプチドで被覆した酸化鉄ＮＷを、００５腫瘍を有するマウスに静脈内注射した（５ｍｇ  鉄／ｋｇ  体重）。上記腫瘍を、００５腫瘍細胞を右海馬に注射することによって生成した。上記注射の５〜６時間後、上記マウスを、心臓を介してＰＢＳで灌流し、組織を集めた。腫瘍切片を抗体で染色し、共焦点顕微鏡法によって試験した。上記ＣＧＫＲＫ−ＮＷは、上記腫瘍における血管にホーミングした。上記Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷは、上記腫瘍に集まらなかった。
【０３８２】
（ｘｉ．ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体は、アポトーシスによる細胞死を誘導する）
ＨＵＶＥＣ細胞およびＴ３細胞は、未処理のまま（コントロール）であったか、または１０μｇ／ｍｌの、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで被覆したＮＷで４８時間もしくは７２時間にわたって処理した。アネキシン陽性細胞（アポトーシス細胞および死細胞）のパーセンテージを示すこれらＨＵＶＥＣ細胞およびＴ３細胞の代表的な結果を、それぞれ、図２７Ａおよび図２７Ｂに示す。ＨＵＶＥＣ細胞およびＴ３細胞をまた、ＣＧＫＲＫ−ＮＷ、ＣＲＥＫＡ−ＮＷ、Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ、もしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷとともにインキュベートした。上記細胞を３０分後に洗浄して、過剰なＮＷを除去し、次いで、７２時間にわたってインキュベートした。アネキシン陽性細胞のパーセンテージを示す、これらＨＵＶＥＣ細胞およびＴ３細胞についての代表的な結果を、図２７Ｃに示す。アネキシン染色およびフローサイトメトリーによる分析を使用して、上記培養物におけるアポローシスを測定した。
【０３８３】
（ｘｉｉ．ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ結合体は、インビトロおよびインビボでの新脈管形成を阻害する）
管形成アッセイを、５％  ＦＣＳ培地単独（コントロール）中のまたはＣＧＫＲＫ−ＮＷもしくはＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷを含む増殖因子を低下させたマトリゲル上でプレート培養した初代ＨＵＶＥＣを使用して、行った。毛細管様構造のネットワークの形成を、プレート培養の２４時間後に位相差顕微鏡法によって４０×倍率において調べた。毛細管形成は、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置した細胞において中断されたが、ＣＧＫＲＫ−ＮＷで処理した細胞においては中断されなかった。ｂＦＧＦありもしくはなしのマトリゲルプラグを、Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウスに皮下注射した。上記マウスを、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷ（５ｍｇ／ｋｇ）もしくはＰＢＳのいずれかの静脈内注射で１日おきに処置した。上記マウスを１４日後に安楽死させ、６４７  Ａｌｅｘａイソレクチンで灌流した。上記マトリゲルプラグを上記マウスから除去し、蛍光下で肉眼によって、もしくは上記プラグの切片の共焦点顕微鏡分析によって調べた。ｂＦＧＦなしでのマトリゲルで処置した代表的マウス、ならびにマトリゲル、ｂＦＧＦ、およびＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスは、顕著な血管形成を示さなかった一方で、上記コントロール（マトリゲルおよびｂＦＧＦで処置）は、強い血管形成を示した。
【０３８４】
（ｘｉｉｉ．ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスの毒性分析）
３週間の処置コースの前（処置前）、その完了後（処置後）およびその後の２週間の回復期間の後（処置後２週間）に測定した血中Ｌ−アラニン−２−オキソグルタル酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを、図２８に示す。顕著な増大がＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷでの処置後のマウスのうちの２匹において認められたが、この作用は、処置の２週間後に消失した。ＮＷに対する起こり得る活動的免疫応答および生得の免疫応答は、上記のように集めたマウスの血清において、抗体レベル（図２９Ａ）およびＩＬ−６レベル（図２９Ｂ）を測定することによって試験した。コントロールマウスおよびＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷで処置したマウスの腎臓を、上記処置の最後においてＨ＆Ｅ染色後に視覚化した。上記処置間で、有意差は認められなかった。
【０３８５】
（ｘｉｖ．頭蓋内Ｕ８７腫瘍を有するマウスの、ＣＧＫＲＫＤ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷでの処置）
５×１０５  ＧＦＰ発現Ｕ８７細胞をマウスの右海馬に注射することによって、腫瘍を誘導した。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷおよびコントロールＮＷの静脈内注射による処置を、上記腫瘍細胞注射の１０日後に開始し、３週間にわたって１日おきに継続した（ｎ＝５／群）。生存曲線を図３０に示す。ＣＧＫＲＫ−Ｄ［ＫＬＡＫＬＡＫ］２−ＮＷでの処置は、生存時間を顕著に増大させた。
【０３８６】
（ｘｖ．神経膠芽腫腫瘍抽出物中のＣＧＫＲＫ結合タンパク質）
脳腫瘍抽出物からのタンパク質を、不溶化（ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ  Ｒｅｓｉｎ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）ＣＧＫＲＫペプチドに結合させた。タンパク質を、ＣＧＫＲＫペプチドもしくはＣＲＥＫＡ（配列番号９２）ペプチド（陰性コントロール）のいずれかで、アフィニティーマトリクスから溶出した。銀染色したゲルを使用して、ＣＧＫＲＫおよびＣＲＥＫＡ（配列番号９２）で溶出したタンパク質を示した。ＣＲＥＫＡ（配列番号９２）は、いかなる目に見えるタンパク質バンドをも溶出しなかった。ＣＧＫＲＫペプチドは、ナルディライシン（ｎａｒｄｉｌｙｓｉｎ）（１３２Ｋｄ）、ヌクレオリン（９７Ｋｄ）、細胞骨格関連タンパク質４（ｐ６３）、Ｈｎｒｎｐａ３／Ｈｎｒｎｐａ２ｂ１（３９Ｋｄ）、およびｐ３２タンパク質（３３Ｋｄ）を溶出した。上記ＣＧＫＲＫ溶出物のバンドは、列挙されたタンパク質として質量分析によって同定した。
【０３８７】
参考文献
【０３８８】
【数１】
2013525285.tif 000016
【０３８９】
【数２】
2013525285.tif 000017
【図１】
2013525285.tif 000018
【図２Ａ】
2013525285.tif 000019
【図２Ｂ】
2013525285.tif 000020
【図２Ｃ】
2013525285.tif 000021
【図３Ａ】
2013525285.tif 000022
【図３Ｂ】
2013525285.tif 000023
【図３Ｃ】
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【図４】
2013525285.tif 000025
【図５】
2013525285.tif 000026
【図６】
2013525285.tif 000027
【図７−１】
2013525285.tif 000028
【図７−２】
2013525285.tif 000029
【図８】
2013525285.tif 000030
【図１０】
2013525285.tif 000031
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2013525285.tif 000043
【図２１】
2013525285.tif 000044
【図２２】
2013525285.tif 000045
【図２３】
2013525285.tif 000046
【図２４】
2013525285.tif 000047
【図２５】
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【図２６】
2013525285.tif 000049
【図２７Ａ】
2013525285.tif 000050
【図２７Ｂ】
2013525285.tif 000051
【図２７Ｃ−１】
2013525285.tif 000052
【図２７Ｃ−２】
2013525285.tif 000053
【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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