(57)【要約】本発明は、式Ｉ：2013540746.tif 000098の化合物およびその薬剤的に許容される塩または溶媒和物、ならびに化合物を作製する方法および使用する方法に関する。
2013540746.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
2013540746.tif 000079
(式中：
Ａは、Ｎ、Ｃ-Ｈ、またはＣ-ＯＨである；
Ｂは、Ｃ-ＨまたはＮである；
Ｅは、存在しないか、またはＣ-Ｒ４である；
Ｇは、ＳＣ-Ｈ、またはＣ-Ｒ３である；
ＡがＣ-ＨもしくはＣ-ＯＨである場合、ＪはＣもしくはＮであるか、またはＡがＮである場合、ＪはＣである；
Ｘは、存在しないか、またはＮＨであるか、または場合によって置換されたＮ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキルである；
Ｙは、存在しないか、または場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンであり、ここで、(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンの２個までの炭素原子は、Ｏ、ＮＨ、Ｎ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、もしくは-(Ｃ＝Ｏ)-によって置換されている；
Ｑは、存在しないか、または(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンである；
Ｚは、存在しないか、またはＮＨ、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、ＮＨ(Ｃ１-Ｃ６)アルキレン、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、もしくはＯである；
Ｒ１は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、場合によって置換されたアリール、場合によって置換されたヘテロアリール、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-ＯＨ、ＮＨ２、-ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-((Ｃ１-Ｃ６)アルキル)２、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-Ｒ５、-(Ｃ＝Ｏ)ＮＲ６Ｒ７、または-ＮＨ-(ＳＯ２)-Ｒ８である；
Ｒ２は、ＮＨ２、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、または場合によって置換されたヘテロアリールであり、
Ｒ３は、それぞれの場合、独立して、ハロ、シアノ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、または(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシである；
Ｒ４は、Ｈまたは場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキルである；
Ｒ５は、Ｈ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、または場合によって置換されたヘテロアリールである；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、場合によって置換されたヘテロアリールであるか、またはＲ６およびＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、場合によって置換された３、４、５、６、もしくは７員環を形成する可能性がある；
Ｒ８は、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、または場合によって置換されたヘテロアリールである)
の化合物またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物であって、場合によってその薬剤的に許容される塩としての化合物。
【請求項２】
式Ｉ-ａまたはＩ-ｂ
2013540746.tif 000080
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉ-ｃ
2013540746.tif 000081
の化合物である、請求項１〜２記載の化合物。
【請求項４】
式Ｉ-ｄ
2013540746.tif 000082
の化合物である、請求項１〜３記載の化合物。
【請求項５】
Ｉ-ｅ
2013540746.tif 000083
の化合物である、請求項１〜４記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４が、Ｈまたはメチルである、請求項１〜５記載の化合物。
【請求項７】
Ｑが、存在しないかまたは(Ｃ１-Ｃ４)アルキレンであり、Ｚが存在しないかまたはＮＨ、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、Ｏ、もしくはＳである、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉ-ｆまたはＩ-ｇ
2013540746.tif 000084
(式中、Ｒ９はＨまたはＣＨ３である)の化合物である、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｙが、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンであり、ここで、(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンの２個までの炭素原子が、ＮＨ、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、または-(Ｃ＝Ｏ)-によって置換されている、請求項８記載の式Ｉ-ｇの化合物。
【請求項１０】
Ｑが、ＣＨ２またはＣＨ(ＣＨ３)である、請求項８〜９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｚが、存在しないか、または-ＮＨ-、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、もしくはＳである、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１が、ハロ、-ＯＨ、-ＮＨ２、もしくはシアノであるか、または(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジニル、オクタヒドロ-ピリドピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、ジアゼピニル、モルホリニル、-ＳＯ２-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＳＯ２-アリール、-ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-((Ｃ１-Ｃ６)アルキル)２、オクタヒドロイソキノリニル、ジヒドロイソキノリニル、ベンズイミダゾリル、フラニル、ピラジニル、チアゾリル、ジアザビシクロ[２．２．１]ヘプト-２-イル、ピラニル、テトラヒドロピラニルであり、そのいずれも場合によって置換されていてもよい、請求項１〜１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１が、ブロモ、-ＯＨ、-ＮＨ２、シアノ、-ＣＨ３、-ＯＣＨ３、ＳＯ２-ＣＨ３、
2013540746.tif 000085
2013540746.tif 000086
である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が、ＮＨ２、プリニル、ピラジニル、ピラゾロピリミジニル、ベンゾジオキシニル、フェニル、モルホリニル、オキサジアゾリル、シクロプロピル、またはピリジニルであり、そのいずれも場合によって置換されていてもよい、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２が、ＮＨ２、
2013540746.tif 000087
である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
式ＩＩ
2013540746.tif 000088
の化合物である、請求項１〜１５記載の化合物。
【請求項１７】
式ＩＩ-ａ、ＩＩ-ｂ、ＩＩ-ｃ、またはＩＩ-ｄ
2013540746.tif 000089
の化合物である、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｚが、存在しないか、またはＯ、Ｓ、-ＮＨ-もしくは-ＮＨ(Ｃ＝Ｏ)-である、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
９-{[２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[３-(２-メチルフェニル)キノキサリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
８-メチル-２-(２-メチルフェニル)-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]キノリン；
９-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-({２-[２-(エチルオキシ)フェニル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-({８-メチル-２-[３-(メチルオキシ)フェニル]キノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[８-メチル-２-(３-{[２-(メチルオキシ)エチル]オキシ}フェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[８-メチル-２-(３-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-({８-メチル-２-[２-(トリフルオロメチル)フェニル]キノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[２-(２，５-ジメチルフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[２-(２，３-ジメチルフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
７-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-７Ｈ-プリン-６-アミン；
９-[(８-メチル-２-モルホリン-４-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン；
２-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-３-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
２-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-４-カルボキサミド；
９-{[８-メチル-２-(４-メチルピペラジン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-[(８-メチル-２-ピロリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[８-メチル-２-(２-メチルピロリジン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
７-{[４-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-７Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[４-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-[２-(メチルオキシ)エチル]キノリン-２-アミン；
９-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)キノリン-２-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-(１-メチルピペリジン-４-イル)キノリン-２-アミン；
３-(２-メチルフェニル)-２-[(７Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]チエノ[３，２-ｄ]ピリミジン-４(３Ｈ)-オン；
２-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-３-(２-メチルフェニル)チエノ[３，２-ｄ]ピリミジン-４(３Ｈ)-オン；
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-６-ブロモ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-クロロ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-({[３，５-ビス(メチルオキシ)フェニル]メチル}オキシ)-８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン；
２-(２-アミノエチル)-５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キナゾリン-４(３Ｈ)-オン；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}メタンスルホンアミド；
Ｎ-{１-[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]エチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}-３-モルホリン-４-イルピラジン-２-カルボキサミド；
９-{[８-メチル-２-(５-メチル-２，５-ジアザビシクロ[２．２．１]ヘプト-２-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}-Ｎ，Ｎ’-ジメチルエタン-１，２-ジアミン；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-ピペリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
Ｎ-{[８-メチル-２-(４-メチル-１，４-ジアゼパン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
３-ヨード-１-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
Ｎ-{[２-(４-エチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-ブロモ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(４-メチル-１，４-ジアゼパン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１，４-ジアゼパン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[３-(ジメチルアミノ)プロピル]アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{３-[(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)(メチル)アミノ]プロピル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-ヨード-Ｎ-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
３-ヨード-１-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[３-(メチルアミノ)プロピル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
Ｎ〜５〜-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-４，５-ジアミン；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルアミノ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)エチル](メチル)アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(ジメチルアミノ)ピペリジン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
{１-[３-({[(３-アミノピラジン-２-イル)カルボニル]アミノ}メチル)-８-メチルキノリン-２-イル]ピペリジン-４-イル}メチルカルバミン酸１，１-ジメチルエチル；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-ヒドロキシエチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
Ｎ-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３-アミノピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２Ｒ，５Ｓ)-２，５-ジメチルピペラジン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{[２-(メチルアミノ)エチル]オキシ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-ヒドロキシエチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
９-{[３-(２-メチルフェニル)ナフタレン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
３-ヨード-１-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-ヨード-１-{１-[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]エチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｎ-メチルグリシル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[グリシル(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１-メチル-Ｌ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１Ｈ-ベンズイミダゾール-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１Ｈ-イミダゾール-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-５-イル)カルボニル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピロリジン-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
４-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-５-カルボキサミド；
３-アミノ-５-クロロ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-５-(メチルオキシ)-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-５-モルホリン-４-イルピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルオキシ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｌ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｄ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(メチルスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(１-メチルピペリジン-４-イル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(１-メチルピロリジン-３-イル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(２-ピリジン-３-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(２-ピリジン-２-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(２Ｈ-１，２，３-トリアゾール-２-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(３-ブロモキノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(１，３-チアゾール-４-イル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピラジン-２-イル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-ピリジン-２-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(２-メチル-１Ｈ-イミダゾール-１-イル)アセチル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(１Ｈ-イミダゾール-１-イルアセチル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(シアノメチル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(４-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-２-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-３-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-４-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピラジン-２-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(２-モルホリン-４-イル-２-オキソエチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[２-(メチルアミノ)-２-オキソエチル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{１-[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]エチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
２-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-５-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[１-(１-メチルエチル)-Ｄ-プロリル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({３-[３-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({３-[４-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({３-[２-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{３-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-２-イルメチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１-プロピル-Ｄ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{４-[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(ピリジン-４-イルメチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(ピリジン-３-イルメチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-５-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(２Ｈ-１，２，３-トリアゾール-２-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({３-[２-(ピペリジン-１-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(５-メチルフラン-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-ピロール-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)カルボニル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(２-メチル-１Ｈ-イミダゾール-１-イル)アセチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(１Ｈ-イミダゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(１Ｈ-ベンズイミダゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}-５-メチルキノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(３-ヒドロキシプロピル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-ピラゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(５-クロロ-３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[ビス(ピリジン-２-イルメチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[ビス(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{３-[(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]ピロリジン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(３-{[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル]アミノ}ピロリジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-{[(３，５-ジメチル-１Ｈ-１，２，４-トリアゾール-１-イル)アセチル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-テトラゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド；
３-{[３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)キノキサリン-２-イル]アミノ}ベンズアミド；
Ｎ-メチル-Ｎ’-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルアミノ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]シクロプロパン-１，１-ジカルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン；
Ｎ-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-{８-メチル-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-イル}エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ-メチル-Ｎ-[２-(メチル{８-メチル-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-イル}アミノ)エチル]-２-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イル)アセトアミド；
Ｎ-{２-[{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}(メチル)アミノ]エチル}-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イル)アセトアミド；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-３-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-３-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド；
Ｎ-{３-[５-(３-アミノピラジン-２-イル)-１，３，４-オキサジアゾール-２-イル]-８-メチルキノリン-２-イル}-Ｎ，Ｎ’-ジメチルエタン-１，２-ジアミン；
Ｎ-{２-[{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}(メチル)アミノ]エチル}-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-ピラゾール-１-イル)アセトアミド；
Ｎ-[(８-メチル-２-ピペリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-ブチル-Ｎ，８-ジメチル-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[２-(メチルオキシ)エチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[３-(メチルオキシ)フェニル]アミノ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[３-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-(モルホリン-４-イルメチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]アミノ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン；
Ｎ-{[２-(３，４-ジヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３-(メチルオキシ)アニリン；
２-(２-クロロフェニル)-８-メチル-３-(１-{[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}エチル)キノリン；
２-(２-クロロフェニル)-８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン；
３-({[３，５-ビス(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン；
９-{[２-(３，４-ジヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
９-{[８-メチル-２-(オクタヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[８-メチル-２-(オクタヒドロ-２Ｈ-ピリド[１，２-ａ]ピラジン-２-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-２-(メチルオキシ)アニリン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３，４-ビス(メチルオキシ)アニリン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３，５-ビス(メチルオキシ)アニリン；
３-[(１，３-ベンゾジオキソール-５-イルオキシ)メチル]-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン；
３-({[２-クロロ-４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン；
１-[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]-Ｎ-{[３-(メチルオキシ)フェニル]メチル}メタンアミン；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-２，３-ジヒドロ-１，４-ベンゾジオキシン-５-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]キノリン-２-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]キノリン-２-アミン；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピロリジン-２-イル)メチル]キノリン-２-アミン；または
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]キノリン-２-アミン
である、請求項１〜１８記載の化合物。
【請求項２０】
薬剤的に許容される担体または賦形剤と混合された請求項１〜１９記載の化合物を含む、製剤処方。
【請求項２１】
ＰＩ３Ｋデルタを阻害する方法であって、ＰＩ３Ｋデルタを有効量の請求項１〜２０記載の化合物と接触させることを含む、方法。
【請求項２２】
ＰＩ３Ｋデルタで調節される疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とするほ乳類に治療有効量の請求項１〜２０記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２３】
ＰＩ３Ｋデルタによって媒介される癌疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とするほ乳類に治療有効量の請求項１〜２０記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２４】
式ＩＩ-Ｂの化合物を作製するプロセスであって：
(ａ)アルコールへの還元およびアルコールのハライドへの変換によって、式ＩＩ-１の化合物を式ＩＩ-２(式中、Ｘ１はハロである)の化合物に変換すること；
2013540746.tif 000090
(ｂ)アジド形成およびそれに続く還元によって、式ＩＩ-２の化合物を式ＩＩ-３の化合物に変換すること；
2013540746.tif 000091
(ｃ)Ｒ２-Ｘ２(式中、Ｘ２はハロである)との反応によって、式ＩＩ-３の化合物を式ＩＩ-４の化合物に変換すること
2013540746.tif 000092
(ｄ)ＣＨ３ＮＨ-Ｙ-Ｒ１との反応によって、式ＩＩ-４の化合物を式ＩＩ-Ｂの化合物に変換すること；
2013540746.tif 000093
を含む、プロセス。
【請求項２５】
式ＩＩ-Ａの化合物を作製するためのプロセスであって：
(ａ)式ＩＩ-５のカルボン酸を式ＩＩ-６のアミドに変換すること；
2013540746.tif 000094
(ｂ)２-ハロアセチルクロリドでの処理によって、式ＩＩ-６の化合物を式ＩＩ-７(式中、Ｘ１はハロである)の化合物に変換すること；
2013540746.tif 000095
(ｃ)アジド形成とそれに続く還元によって、式ＩＩ-７の化合物を式ＩＩ-８の化合物に変換すること；
2013540746.tif 000096
(ｄ)Ｒ２-ＣＯ２Ｈとの反応によって、式ＩＩ-８の化合物を式ＩＩ-Ａの化合物に変換すること；
2013540746.tif 000097
を含むプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照することにより本明細書中に組み込まれる、２０１０年９月１４日付で出願された米国特許仮出願第６１／３８２，８７３号の優先権の利益を請求する。
【０００２】
本発明は、タンパク質キナーゼおよびそれらの阻害剤の分野に関する。特に、本発明は、ＰＩ３Ｋデルタの阻害剤、およびそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ホスホイノシチド３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)は、脂質およびタンパク質キナーゼ活性の両方を利用して、細胞生存、増殖、および分化ならびに炎症応答をはじめとする幅広い細胞活動の調整に関与する多くの脂質シグナリング経路を調節するヘテロ二量体酵素である。これらの無数の重要な細胞プロセスにおけるＰＩ３Ｋの重要な役割のために、これらは薬剤介入のための非常に魅力的な標的となる。本開示に関連するＰＩ３Ｋのクラスは、イノシトール環の３−ヒドロキシル基上のホスファチジル−イノシトール(４，５)−ビスホスフェート(ＰｔＩｎｓ(４，５)Ｐ２またはＰＩＰ２)をリン酸化してシグナリング分子ホスファチジル-イノシトール(３，４，５)-トリホスフェート(ＰｔＩｎｓ(３，４，５)Ｐ３またはＰＩＰ３)を産生するのを触媒する。
【０００４】
疾患におけるＰＩ３Ｋデルタイソ型の生理的役割の徹底的な研究の結果、ＰＩ３Ｋデルタは、多数の免疫学的、炎症性および細胞調節機能不全に関連付けられている。初期の研究は、免疫および炎症病理におけるその役割に重点を置いていた。ＰＩ３Ｋデルタは、Ｂ細胞およびＴ細胞の発生、分化、増殖ならびにエフェクター機能において重要な役割を果たす。ＰＩ３Ｋデルタノックインマウス(Ｄ９１０Ａ／Ｄ９１０Ａ)は、Ｔ細胞受容体特異抗原で刺激された場合に、増殖性Ｔ細胞応答およびケモカイン産生を損なうかまたは減弱することが示されている。さらに、これらのＰＩ３Ｋデルタを発現する動物は、脾臓、リンパ節およびパイエル板の胚中心の不十分な発生を伴う不十分なＴ細胞非依存性抗体応答ならびに免疫化後のリンパ過形成を示す。ＰＩ３Ｋデルタ機能の阻害はさらに、Ｔ細胞による炎症部位への機能不全ホーミングに至る。ＰＩ３Ｋデルタ活性は、Ｔｒｅｇ細胞制御にも関与する。ＰＩ３Ｋデルタ(Ｄ９１０Ａ／Ｄ９１０Ａ)マウスは：１)インビトロのＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞ならびに野生型動物由来のＴｒｅｇ細胞の増殖を抑制しない；２)検出可能なレベルの抗炎症性サイトカインＩＬ-１０を産生しない；そして３)実験的大腸炎から保護しない、Ｔｒｅｇ細胞を有する。
【０００５】
ＰＩ３ＫデルタのＢ細胞に対する効果も同様に重大である。ｐ１１０デルタ触媒活性欠損マウスは、Ｂ１および辺縁体(ＭＺ)Ｂ細胞の数が減少し、血清イムノグロブリンレベルが低下し、そして胸腺非依存性抗原での免疫化に対してほとんど反応せず、そして胸腺依存抗原に対するそれらの一次および二次応答が欠けている。ＰＩ３Ｋデルタ選択的阻害剤の使用によるＰＩ３Ｋデルタの阻害は、Ｂ細胞受容体で誘導されたＢ細胞増殖の阻害を示し、クラススイッチ組換えおよびＢ細胞走化性における欠陥を増大させた。
【０００６】
ＰＩ３Ｋデルタが非リンパ系造血細胞の炎症誘発的役割を媒介する重大な役割を果たし得るという実験の観察結果は、好中球、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞および好酸球などの造血免疫細胞が関与する研究から得られた。例えば、ＰＩ３Ｋデルタは、好中球拡散および局在化、好中球遊走の調節、肥満細胞脱顆粒などに必要とされる。自然および適応免疫応答におけるＰＩ３Ｋデルタの重要な役割の再検討により、アレルギー、喘息、自己免疫疾患、および炎症などの免疫疾患におけるＰＩ３Ｋデルタの役割が徹底的に調査された。
【０００７】
既刊の科学文献の大部分が、炎症、自己免疫疾患などの免疫疾患に重点を置いているが、研究の魅力的かつ成果のある分野には、癌におけるＰＩ３Ｋデルタの役割が含まれる。実験モデルはすでに：(ｉ)過剰発現は実験モデルにおいて変換を誘導することができる；(ｉｉ)細胞増殖および腫瘍血管形成への関与；(ｉｉｉ)Ｒａｓ誘発性変換および腫瘍形成への関与；(ｉｖ)乳腺および結腸腫瘍における螺旋状およびキナーゼドメインでの突然変異の活性化；ならびに(ｖ)インビトロおよびインビボでのＰＴＥＮ失活により誘導される変換をはじめとする、悪性細胞プロセスにおけるＰＩ３ＫアルファおよびＰＩ３Ｋベータの推定される役割を提供している。
【０００８】
ＰＩ３ＫアルファおよびＰＩ３Ｋベータと同様に、ＰＩ３Ｋデルタも培養物において発癌性形質転換を誘発する。トリレトロウイルスベクターを用いてＰＩ３Ｋデルタをニワトリ胚線維芽細胞(ＣＥＦ)に導入する場合、明確な病巣が１０日以内に形成される。Ｄ９１０Ａキナーゼ不活性ＰＩ３ＫデルタをＣＥＦに導入する場合、病巣形成は観察されず、このことは、変換が活性な触媒ドメインを必要とすることを示す。ＰＩ３Ｋアルファの腫瘍形成変異体(Ｈ１０４７Ｒ)について観察されたように、ＰＩ３Ｋデルタに感染したＣＥＦは、血清飢餓状態でさえも、ＰＩ３Ｋアルファに類似したレベルでＡｋｔの構成的活性化を示した。少なくとも前述した理由のために、特に癌、炎症および自己免疫疾患の分野で、ＰＩ３Ｋデルタ介在性疾患を予防、治療、または改善するために使用できる選択的ＰＩ３Ｋデルタ阻害剤が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
以下は、本発明のある態様を単に要約するものであり、事実上限定するものではない。これらの態様および他の態様ならびに実施形態を以下でさらに詳細に記載する。本明細書中の全ての引用文献は、全体として参照することによって本明細書中に組み込まれる。本明細書の明確な開示と、参照によって組み込まれる参考文献との間に相違がある場合、本明細書の明確な開示が支配する。
【００１０】
我々は、ＰＩ３Ｋ、特にＰＩ３Ｋデルタの、生物学的プロセスおよび病状での重要な役割を認識し、したがって、これらのタンパク質キナーゼの阻害剤が望ましいことがわかった。したがって、本発明は、ほ乳類における様々な癌、自己免疫疾患、炎症性疾患の治療に有用であるＰＩ３Ｋデルタを阻害、制御、および／または調節する化合物を提供する。本発明はさらに、化合物を作製する方法、ほ乳類、特にヒトにおける疾患、特に過剰増殖性疾患の治療でそのような化合物を使用する方法、ならびにそのような化合物を含有する医薬組成物も提供する。
【００１１】
本発明の第１の態様は、式Ｉ：
【化１】
2013540746.tif 000003
の化合物またはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩として提供し、式中：
Ａは、Ｎ、Ｃ-Ｈ、またはＣ-ＯＨである；
Ｂは、Ｃ-ＨまたはＮである；
Ｅは、存在しないか、またはＣ-Ｒ４である；
Ｇは、ＳＣ-Ｈ、またはＣ-Ｒ３である；
ＡがＣ-ＨもしくはＣ-ＯＨである場合、ＪはＣもしくはＮであるか、またはＡがＮである場合、ＪはＣである；
Ｘは、存在しないか、またはＮＨであるか、または場合によって置換されたＮ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキルである；
Ｙは、存在しないか、または場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンであり、ここで、(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンの２個までの炭素原子は、Ｏ、ＮＨ、Ｎ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、もしくは-(Ｃ＝Ｏ)-によって置換されている；
Ｑは、存在しないか、または(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンである；
Ｚは、存在しないか、またはＮＨ、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、ＮＨ(Ｃ１-Ｃ６)アルキレン、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、もしくはＯである；
Ｒ１は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、場合によって置換されたアリール、場合によって置換されたヘテロアリール、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-ＯＨ、ＮＨ２、-ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-((Ｃ１-Ｃ６)アルキル)２、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-Ｒ５、-(Ｃ＝Ｏ)ＮＲ６Ｒ７、または-ＮＨ-(ＳＯ２)-Ｒ８である；
Ｒ２は、ＮＨ２、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、または場合によって置換されたヘテロアリールであり、
Ｒ３は、それぞれの場合、独立して、ハロ、シアノ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、または(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシである；
Ｒ４は、Ｈまたは場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキルである；
Ｒ５は、Ｈ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、または場合によって置換されたヘテロアリールである；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して、Ｈ、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、場合によって置換されたヘテロアリールであるか、またはＲ６およびＲ７は、それらが結合している原子と一緒になって、場合によって置換された３、４、５、６、もしくは７員環を形成する可能性がある；
Ｒ８は、場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、場合によって置換されたシクロアルキル、場合によって置換されたヘテロシクロアルキル、場合によって置換されたアリール、または場合によって置換されたヘテロアリールである。
【００１２】
第２の態様において、本発明は、１)式Ｉの化合物またはその１つの立体異性体もしくは異性体の混合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩として、および２)薬剤的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
第３の態様において、本発明は、ＰＩ３Ｋデルタのインビボ活性を阻害する方法であって、患者に、有効なＰＩ３Ｋデルタ阻害量の式Ｉの化合物またはその１つの立体異性体もしくは立体異性体の混合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩もしくは溶媒和物またはその医薬組成物として投与することを含む方法を提供する。
【００１４】
第４の態様において、本発明は、疾患、障害、または症候群を治療する方法であって、患者に、治療有効量の式Ｉの化合物またはその１つの立体異性体もしくは異性体の混合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩もしくは溶媒和物として、あるいは治療有効量の式Ｉの化合物またはその１つの立体異性体もしくは異性体の混合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩もしくは溶媒和物として、および薬剤的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物として投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
第５の態様において、本発明は、式ＩＩ-Ｂの化合物を作製するためのプロセスであって：
(ａ)アルコールへの還元と、アルコールからハライドへの変換とによって、式ＩＩ-１の化合物を式ＩＩ-２(式中、Ｘ１はハロである)の化合物に変換すること；
【化２】
2013540746.tif 000004
(ｂ)アジド形成とそれに続く還元とによって式ＩＩ-２の化合物を式ＩＩ-３の化合物に変換すること；
【化３】
2013540746.tif 000005
(ｃ)Ｒ２-Ｘ２(式中、Ｘ２はハロである)との反応によって、式ＩＩ-３の化合物を式ＩＩ-４の化合物に変換すること
【化４】
2013540746.tif 000006
(ｄ)ＣＨ３ＮＨ-Ｙ-Ｒ１との反応によって、式ＩＩ-４の化合物を式ＩＩ-Ｂの化合物に変換すること：
【化５】
2013540746.tif 000007
を含むプロセスを提供する。
【００１６】
第６の態様において、本発明は、式ＩＩ-Ａの化合物を作製するためのプロセスであって：
(ａ)式ＩＩ-５のカルボン酸を式ＩＩ-６のアミドに変換すること；
【化６】
2013540746.tif 000008
(ｂ)２-ハロアセチルクロリドでの処理によって、式ＩＩ-６の化合物を式ＩＩ-７の化合物に変換すること(式中、Ｘ１はハロである)；
【化７】
2013540746.tif 000009
(ｃ)アジド形成とそれに続く還元によって、式ＩＩ-７の化合物を式ＩＩ-８の化合物に変換すること；
【化８】
2013540746.tif 000010
(ｄ)Ｒ２-ＣＯ２Ｈとの反応によって、式ＩＩ-８の化合物を式ＩＩ-Ａの化合物に変換すること；
【化９】
2013540746.tif 000011
を含むプロセスを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下の略語および用語は全体を通して表示された意味を有する：
2013540746.tif 000012
2013540746.tif 000013
【００１８】
記号「−」は単結合を意味し、「＝」は二重結合を意味し、「≡」は三重結合を意味し、
【化１０】
2013540746.tif 000014
は単結合または二重結合を意味する。記号
【化１１】
2013540746.tif 000015
は、その記号が結合している二重結合の末端上のいずれかの位置を占める；すなわち、二重結合の幾何配置(ＥまたはＺ)が曖昧である、二重結合上の基を指す。基がその親式から外れて図示されている場合、その基を親構造式から分離するために、理論的に切断された結合の末端で「〜」記号を使用する。
【００１９】
化学構造を表現または記載する場合、特に断りのない限り、全ての炭素は４の原子価に合致する水素置換を有すると見なされる。例えば、以下の概略図の左側の構造では、９個の水素が暗示される。９個の水素は右側の構造では表示されている。場合によって、構造中の特定の原子は、本文の式中で、例えば、-ＣＨ２ＣＨ２-など、水素(複数可)を置換(明確に規定された水素)として有するとして記載される。前述の表記技術は、他の方法では複雑な構造の記載を簡潔かつ単純にするために提供するために化学技術で一般的であることは、当業者には理解される。
【化１２】
2013540746.tif 000016
【００２０】
基「Ｒ」は、例えば、式：
【化１３】
2013540746.tif 000017
におけるように、環系上に「浮いて」いるように表示される場合、特に規定されない限り、置換基「Ｒ」は、環系の任意の原子上にある可能性があり、安定な構造が形成される限り、環原子の１つから、表示、暗示、または明示された水素を置換すると仮定する。
【００２１】
基「Ｒ」が、例えば、式：
【化１４】
2013540746.tif 000018
におけるように縮合または架橋環系上に浮いて記載されている場合、特に規定されない限り、置換基「Ｒ」は縮合または架橋環系の任意の原子上にある可能性があり、安定な構造が形成される限り、環原子のうちの１つからの表示された水素(例えば、上記式では-ＮＨ-)、暗示される水素(例えば、上記式におけるように水素は表示されていないが、存在すると解釈されるべきである場合)、または明確に規定された水素(例えば、上記式で、「Ｚ」が＝ＣＨ-に等しい場合)の置換が仮定される。示された例では、「Ｒ」基は、縮合または架橋環系の５員または６員環のいずれかにある可能性がある。
【００２２】
例えば、式：
【化１５】
2013540746.tif 000019
(式中、この例では、「ｙ」は２以上である可能性がある)におけるように「Ｒ]基が飽和炭素を含有する環系上に存在するとして表示されている場合、ここで図示、暗示、または明確に規定された環上の水素を置換するとされ；したがって、特に規定されない限り、この場合、結果として得られる構造は安定であり、２個の「Ｒ」は同じ炭素上にある可能性がある。別の例では、その炭素を含む同じ炭素上の２個のＲは環を形成する可能性があり、したがって、例えば、式：
【化１６】
2013540746.tif 000020
におけるような表示された環とスピロ環式環構造を形成する。
【００２３】
「アシル」は、-Ｃ(Ｏ)Ｒラジカル(式中、Ｒは、本明細書中で定義されるアルキル、ハロアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルアルキルである)、例えば、アセチル、トリフルオロメチルカルボニル、または２-メトキシエチルカルボニルなどを意味する。
【００２４】
「アシルアミノ」は、-ＮＲＲ’ラジカル(式中、Ｒは水素、ヒドロキシ、アルキル、またはアルコキシであり、Ｒ’は本明細書中で定義されるアシルである)を意味する。
【００２５】
「アシルオキシ」は、-ＯＲラジカル(式中、Ｒは、本明細書中で定義されるアシルである)、例えば、シアノメチルカルボニルオキシなどを意味する。
【００２６】
本発明の化合物に関連した「投与」およびその変形(例えば、化合物を「投与する」)とは、治療を必要とする動物の系に化合物の化合物を導入することを意味する。本発明の化合物またはそのプロドラッグが１以上他の活性な作用因子(例えば、手術、放射線、および化学療法など)と組み合わせて提供される場合、「投与」およびその変形は、それぞれ、化合物またはそのプロドラッグおよび他の作用因子の同時および連続導入を含むと理解される。
【００２７】
「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子の直線状一価炭化水素ラジカルまたは３〜６個の炭素原子の分枝一価炭化水素ラジカルであって、少なくとも１つ二重結合を含むラジカル、例えば、エテニル、プロペニル、１-ブト-３-エニル、および１-ペント-３-エニルなどを意味する。
【００２８】
「アルコキシ」は、-ＯＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキル基である)を意味する。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシなどが挙げられる。
【００２９】
「アルコキシアルキル」は、少なくとも１つ、特に１、２、または３個の本明細書中で定義されるアルコキシ基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。代表例としては、メトキシメチルなどが挙げられる。
【００３０】
「アルコキシカルボニル」は、-Ｃ(Ｏ)Ｒ基(式中、Ｒは、本明細書中で定義されるアルコキシである)を意味する。
【００３１】
「アルキル」は、１〜６個の炭素原子の直線状飽和一価炭化水素ラジカルまたは３〜６個の炭素原子の分枝飽和一価炭化水素ラジカル、例えば、メチル、エチル、プロピル、２-プロピル、ブチル(全ての異性体形態を含む)、またはペンチル(全ての異性体形態を含む)などを意味する。
【００３２】
「アルキルアミノ」は、-ＮＨＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキルである)を意味する。
【００３３】
「アルキルアミノアルキル」は、１または２個の本明細書中で定義されるアルキルアミノ基で置換されたアルキル基を意味する。
【００３４】
「アルキルアミノアルキルオキシ」は、-ＯＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキルアミノアルキルである)を意味する。
【００３５】
「アルキルカルボニル」は、-Ｃ(Ｏ)Ｒ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキルである)を意味する。
【００３６】
「アルキレン」は、場合によって置換された直鎖もしくは分枝鎖二価炭化水素ラジカルであって、特に明記されない限り、好ましくは１〜１０個の炭素原子を有するものを意味する。「アルキレンの例は、本明細書中で用いられる場合、メチレン、エチレン、ｎ-プロピレン、ｎ-ブチレンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３７】
「アルキルスルホニル」は、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキルである)を意味する。
【００３８】
「アルキルスルホニルアルキル」は、少なくとも１個、好ましくは１または２個の本明細書中で定義されるアルキルスルホニル基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００３９】
「アルキニル」は、２〜６個の炭素原子の直線状一価炭化水素ラジカルまたは３〜６個の炭素原子の分枝一価炭化水素ラジカルであって、少なくとも１つ三重結合を含むラジカル、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチン-２-イルなどを意味する。
【００４０】
「アミノ」は-ＮＨ２を意味する。
【００４１】
「アミノアルキル」は、少なくとも１個、特に１、２または３個のアミノ基で置換されたアルキル基を意味する。
【００４２】
「アミノアルキルオキシ」は、-ＯＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアミノアルキルである)を意味する。
【００４３】
「アミノカルボニル」は、-Ｃ(Ｏ)ＮＨ２基を意味する。
【００４４】
「アルキルアミノカルボニル」は、-Ｃ(Ｏ)ＮＨＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるアルキルである)を意味する。
【００４５】
「アリール」は、一価６〜１４員単または二炭素環であって、単環式環が芳香族であり、二環式環中の少なくとも１つの環が芳香族であるものを意味する。特に明記しない限り、基の結合価は、ラジカル中の任意の環の任意の原子上に位置する可能性があり、原子価則を可能にする。代表例としては、フェニル、ナフチル、およびインダニルなどが挙げられる。
【００４６】
「アリールアルキル」は、１または２個の本明細書中で定義されるアリール基で置換された、本明細書中で定義されるアルキルラジカル、例えば、ベンジルおよびフェネチルなどを意味する。
【００４７】
「アリールアルキルオキシ」とは、-ＯＲ基(ここで、Ｒは前記定義のようなアリールアルキルである)を意味する。
【００４８】
「シアノアルキル」は、１または２個のシアノ基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００４９】
「シクロアルキル」は、３〜１０個の炭素環原子の、単環式または縮合もしくは架橋二環式または三環式、飽和もしくは部分不飽和(芳香族ではない)、一価炭化水素ラジカルを意味する。特に明記しない限り、原子価則が許す限り、基の結合価は、ラジカル内の任意の環の任意の原子上に位置し得る。１または２個の環炭素原子は、-Ｃ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｓ)-、または-Ｃ(＝ＮＨ)-基によって置換されていてもよい。さらに詳細には、シクロアルキルという用語には、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキシル、シクロヘキシ-３-エニル、または(１ｒ，３ｒ，５Ｒ，７Ｒ)-トリシクロ[３．３．１．１３，７]デカン-２-イルなどが含まれる。
【００５０】
「シクロアルキルアルキル」は、少なくとも１個、特に１個または２個の本明細書中で定義されるシクロアルキル基で置換されたアルキル基を意味する。
【００５１】
「ジアルキルアミノ」は、-ＮＲＲ’ラジカル(式中、ＲおよびＲ’は本明細書中で定義されるアルキルである)、もしくはＮオキシド誘導体、またはその保護誘導体、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ，Ｎ-メチルプロピルアミノまたはＮ，Ｎ-メチルエチルアミノなどを意味する。
【００５２】
「ジアルキルアミノアルキル」は、１個または２個の本明細書中で定義されるジアルキルアミノ基で置換されたアルキル基を意味する。
【００５３】
「ジアルキルアミノアルキルオキシ」は、-ＯＲ基(式中、Ｒは本明細書中で定義されるジアルキルアミノアルキルである)を意味する。代表例としては、２-(Ｎ，Ｎ-ジエチルアミノ)-エチルオキシなどが挙げられる。
【００５４】
「ジアルキルアミノカルボニル」は、-Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ’基(式中、ＲおよびＲ’は本明細書中で定義されるアルキルである)を意味する。
【００５５】
「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
【００５６】
「ハロアルコキシ」は、-ＯＲ’基(式中、Ｒ’は本明細書中で定義されるハロアルキルである)、例えばトリフルオロメトキシまたは２，２，２-トリフルオロエトキシなどを意味する。
【００５７】
「ハロアルキル」は、１個以上のハロゲン、特に、１、２、３、４、５、または６個のハロ原子で置換されたアルキル基、例えば、トリフルオロメチル、２-クロロエチル、および２，２-ジフルオロエチルなどを意味する。
【００５８】
「ヘテロアリール」は、１個以上、特に１、２、３、または４個の環ヘテロ原子を含有する５〜１４個の環原子の単環式または縮合もしくは架橋二環式一価ラジカルを意味し、ここで、各ヘテロ原子は独立して、-Ｏ-、-Ｓ(Ｏ)ｎ-(ｎは０、１、もしくは２である)、-ＮＨ-、-Ｎ＝、またはＮ-オキシドであり、残りの環原子は炭素であり、ここで、単環式ラジカルを含む環は芳香族であり、少なくとも１つの二環式ラジカルを含む縮合環は芳香族である。二環式ラジカルを含む任意の非芳香族環の１または２個の環炭素原子は、-Ｃ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｓ)-、または-Ｃ(＝ＮＨ)-基で置換されていてもよい。特に明記しない限り、結合価はヘテロアリール基の任意の環の任意の原子上に位置する可能性があり、原子価則が可能になる。さらに詳細には、ヘテロアリールという用語には、限定されないが、１，２，４-トリアゾリル、１，３，５-トリアゾリル、フタルイミジル、ピリジニル、ピロリル、イミダゾリル、チエニル、フラニル、インドリル、２，３-ジヒドロ-１Ｈ-インドリル(例えば、２，３-ジヒドロ-１Ｈ-インドール-２-イルまたは２，３-ジヒドロ-１Ｈ-インドール-５-イルなどを含む)、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾジオキソール-４-イル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インドリジニル、ナフチリジン-３-イル、フタラジン-３-イル、フタラジン-４-イル、プテリジニル、プリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、テトラゾイル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル(例えば、テトラヒドロイソキノリン-４-イルまたはテトラヒドロイソキノリン-６-イルなどを含む)、ピロロ[３，２-ｃ]ピリジニル(例えば、ピロロ[３，２-ｃ]ピリジン-２-イルまたはピロロ[３，２-ｃ]ピリジン-７-イルなどを含む)、ベンゾピラニル、２，３-ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ[ｄ][１，３]ジオキソリル、２，３-ジヒドロベンゾ[ｂ][１，４]ジオキシニル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、およびそれらの誘導体、またはそれらのＮオキシドもしくは保護誘導体が含まれる。「５または６員ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール」という用語のサブセットを表す。
【００５９】
「ヘテロアリールアルキル」は、少なくとも１個、特に１または２個の本明細書中で定義されるヘテロアリール基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００６０】
「ヘテロシクロアルキル」は、３〜８個の環原子の飽和もしくは部分不飽和(芳香族ではない)一価単環式基または５〜１２個の環原子の飽和もしくは部分不飽和(芳香族ではない)一価縮合もしくは架橋二環式もしくは三環式基を意味し、ここで、１以上、具体的に１、２、３、または４個の環ヘテロ原子の場合、各ヘテロ原子は独立して、Ｏ、Ｓ(Ｏ)ｎ(ｎは０、１、もしくは２である)、-Ｎ＝、または-ＮＨ-であり、残りの環原子は炭素である。１または２個の環炭素原子は、-Ｃ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｓ)-、または-Ｃ(＝ＮＨ)-基で置換されていてもよい。特に明記しない限り、基の結合価は、ラジカル内の任意の環の任意の原子上に位置する可能性があり、原子価則を可能にする。結合価点が窒素原子上に位置する場合、Ｒｙは存在しない。さらに詳細には、ヘテロシクロアルキルという用語には、限定されないが、アゼチジニル、ピロリジニル、２-オキソピロリジニル、２，５-ジヒドロ-１Ｈ-ピロリル、ピペリジニル、４-ピペリドニル、モルホリニル、ピペラジニル、２-オキソピペラジニル、テトラヒドロピラニル、２-オキソピペリジニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、パーヒドロアゼピニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ジヒドロピリジニル、テトラヒドロピリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、オクタヒドロシクロペンタ[ｃ]ピロリル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、デカヒドロイソキノリル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、(３ａＲ，６ａＳ)-５-メチルオクタヒドロシクロペンタ[ｃ]ピロリル、および(３ａＳ，６ａＲ)-５-メチル-１，２，３，３ａ，４，６ａ-ヘキサヒドロシクロペンタ[ｃ]ピロリル、ならびにそれらの誘導体およびそれらのＮ-オキシドまたは保護誘導体が含まれる。
【００６１】
「ヘテロシクロアルキルアルキル」は、１または２個の本明細書中で定義されるヘテロシクロアルキル基で置換された、本明細書中で定義されるアルキルラジカル、例えば、モルホリニルメチル、Ｎ-ピロリジニルエチル、および３-(Ｎ-アゼチジニル)プロピルなどを意味する。
【００６２】
「ヘテロシクロアルキルオキシ」は、-ＯＲ基(Ｒは本明細書中で定義されるヘテロシクロアルキルである)を意味する。
【００６３】
「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個、好ましくは１、２、３、または４個のヒドロキシ基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００６４】
「フェニルアルキル」は、１または２個のフェニル基で置換された本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００６５】
「フェニルアルキルオキシ」は、-ＯＲ基(Ｒは本明細書中で定義されるフェニルアルキルである)を意味する。
【００６６】
「任意の」または「場合によって」とは、その後に記載される事象もしくは状況が起こるかもしれないし、または起こらないかもしれず、この記載が、前記事象もしくは状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。当業者は、１以上の任意の置換基を含有するとして記載される任意の分子に関して、立体的に実際的および／または合成的に実行可能な化合物だけが含まれるはずであることを理解するであろう。「場合によって置換された」は、特に明記しない限り、用語中の全てのその後の修飾語句にあてはまる。任意の置換の例のリストを、「置換された」の定義で以下に示す。
【００６７】
「場合によって置換されたアリール」は、独立してアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、カルボキシ、シアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、またはアミノアルコキシの１、２、もしくは３個の置換基で場合によって置換された、本明細書中で定義されるアリール基を意味する；あるいはアリールはペンタフルオロフェニルである。「アリール」上の任意の置換基内で、アルキルおよびアルケニルは、単独または別の基の一部(アルコキシカルボニル中のアルキルを含む)としてのいずれかで、独立して場合によって、１、２、３、４、または５個のハロで置換されている。
【００６８】
「場合によって置換されたアリールアルキル」は、本明細書中で定義される場合によって置換されたアリールで置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００６９】
「場合によって置換されたシクロアルキル」は、独立して、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、ニトロ、アルコキシアルキルオキシ、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、カルボキシ、またはシアノである１、２、または３個の基で置換された、本明細書中で定義されるシクロアルキル基を意味する。「シクロアルキル」上の前記任意の置換基内で、アルキルおよびアルケニルは、単独またはシクロアルキル環上の別の置換基の一部としてのいずれかで、独立して場合によって１、２、３、４、または５個のハロで置換され、例えばハロアルキル、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、またはハロアルキルスルホニルである。
【００７０】
「場合によって置換されたシクロアルキルアルキル」は、少なくとも１個、特に１または２個の、本明細書中で定義される場合によって置換されたシクロアルキル基で置換されたアルキル基を意味する。
【００７１】
「場合によって置換されたヘテロアリール」は、独立してアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、カルボキシ、シアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、またはジアルキルアミノアルコキシである１、２、または３個の置換基で場合によって置換されたヘテロアリール基を意味する。「ヘテロアリール」上の任意の置換基内で、アルキルおよびアルケニルは、単独または別の基の一部(例えば、アルコキシカルボニル中のアルキルを含む)としてのいずれかで、１、２、３、４、または５個のハロで場合によって置換されている。
【００７２】
「場合によって置換されたヘテロアリールアルキル」は、少なくとも１個、特に１または２個の、本明細書中で定義される場合によって置換されたヘテロアリール基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００７３】
「場合によって置換されたヘテロシクロアルキル」は、独立してアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、ハロアルキル、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、カルボキシ、シアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アミノアルコキシ、またはフェニルアルキルである１、２、または３個の置換基で場合によって置換された、本明細書中で定義されるヘテロシクロアルキル基を意味する。「ヘテロシクロアルキル」上の任意の置換基内で、アルキルおよびアルケニルは、単独または別の基の一部(例えば、アルコキシカルボニル中のアルキルを含む)としてのいずれかで、１、２、３、４、または５個のハロで独立して場合によって置換されている。
【００７４】
「場合によって置換されたヘテロシクロアルキルアルキル」は、少なくとも１個、特に１または２個の、本明細書中で定義される場合によって置換されたヘテロシクロアルキル基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００７５】
「場合によって置換されたフェニル」は、独立してアシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルケニルオキシ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、カルボキシ、シアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、またはアミノアルコキシである、１、２、もしくは３個の置換基で場合によって置換されたフェニル基を意味するか、あるいはアリールはペンタフルオロフェニルである。「フェニル」上の任意の置換基内で、アルキルおよびアルケニルは、単独または別の基の一部(例えば、アルコキシカルボニル中のアルキルを含む)としてのいずれかで、１、２、３、４、または５個のハロで独立して場合によって置換されている。
【００７６】
「場合によって置換されたフェニルアルキル」は、１または２個の本明細書中で定義される場合によって置換されたフェニル基で置換された、本明細書中で定義されるアルキル基を意味する。
【００７７】
「場合によって置換されたフェニルスルホニル」は、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ基(式中、Ｒは本明細書中で定義される場合によって置換されたフェニルである)を意味する。
【００７８】
「オキソ」は、二重結合によって結合している酸素を意味する。
【００７９】
本明細書中で記載される反応のそれぞれについての「収率」は、理論的収率のパーセンテージとして表される。
【００８０】
本発明について、「患者」は、ヒトおよび他の動物、特にほ乳類、ならびに他の生物を含む。したがって、当該方法は、ヒトの治療および獣医学的応用の両方に適用可能である。具体的な実施形態において、患者はほ乳類であり、さらに具体的な実施形態において、患者はヒトである。
【００８１】
化合物の「薬剤的に許容される塩」は、薬剤的に許容され、親化合物の所望の薬理学的活性を保有する塩を意味する。薬剤的に許容される塩は非毒性であると理解される。好適な薬剤的に許容される塩に関するさらなる情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９８５(参照することによって、本明細書中に組み込まれる)またはＳ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  １９７７；６６：１−１９(どちらも参照することによって本明細書中に組み込まれる)で見出すことができる。
【００８２】
薬剤的に許容される酸付加塩の例としては、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など；ならびに有機酸、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、３-(４-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２-エタンジスルホン酸、２-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４-クロロベンゼンスルホン酸、２-ナフタレンスルホン酸、４-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、グルコヘプトン酸、４，４’-メチレンビス-(３-ヒドロキシ-２-エン-１-カルボン酸)、３-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、およびサリチル酸などと形成されるものが挙げられる。
【００８３】
薬剤的に許容される塩基付加塩の例としては、親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などによって置換される場合に形成されるものが挙げられる。具体的な塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。薬剤的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、第１、第２、および第３アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンならびに塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。有機塩基の例としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２-ジメチルアミノエタノール、２-ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ-エチルピペリジン、トロメタミン、Ｎ-メチルグルカミン、ポリアミン樹脂などが挙げられる。例示的有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。「プラチン」および「プラチン含有剤」には、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチンが含まれる。
【００８４】
「治療有効量」は、患者に投与された場合、疾患の症状を改善する本発明の化合物の量である。「治療有効量」を構成する本発明の化合物の量は、化合物、病状およびその重症度、治療される患者の年齢などに応じて変わるであろう。治療有効量は、当業者が自身の知識および本開示を考慮して決定することができる。
【００８５】
疾患、障害、もしくは症候群を「予防する」または疾患、障害、もしくは症候群の「予防」とは、ヒトにおいて疾患が起こるのを阻害すること、すなわち、疾患、障害、もしくは症候群に曝露されるかまたはかかりやすいが、その疾患、障害、もしくは症候群の症状をまだ経験または示さない動物において、疾患、障害、もしくは症候群の臨床症状が発現しないようにすることを含む。
【００８６】
疾患、障害、もしくは症候群を「治療する」または疾患、障害、もしくは症候群の「治療」は、本明細書中で用いられる場合、(ｉ)疾患、障害、もしくは症候群を阻害すること、すなわち、その発生を阻止すること；および(ｉｉ)疾患、障害、または症候群を軽減すること、すなわち、疾患、障害、もしくは症候群の退縮を引き起こすことを含む。当該技術分野で公知のように、全身的送達対局所的送達、年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与時間、薬物間相互作用および状態の重症度についての調節が必要である可能性があり、当業者によって通例の実験で確かめることができるであろう。
【００８７】
発明の実施形態
以下の段落は、本発明の化合物の多くの実施形態を示す。それぞれの例において、実施形態は、記載された化合物、ならびにそれらの１つの立体異性体または立体異性体の混合物、ならびにその薬剤的に許容される塩を含む。
【００８８】
したがって、前述のように、１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化１７】
2013540746.tif 000021
の化合物を提供する。
【００８９】
１つの実施形態において、式Ｉの化合物は、式Ｉ-ａまたはＩ-ｂ
【化１８】
2013540746.tif 000022
の化合物である。
【００９０】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、式Ｉ-ｃ
【化１９】
2013540746.tif 000023
の化合物である。
【００９１】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、式Ｉ-ｄ
【化２０】
2013540746.tif 000024
の化合物である。
【００９２】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、Ｉ-ｅ
【化２１】
2013540746.tif 000025
の化合物である。
【００９３】
別の実施形態において、式Ｉ、Ｉ-ａ、Ｉ-ｂ、Ｉ-ｃ、Ｉ-ｄ、またはＩ-ｅの化合物中、Ｒ４はＨまたはメチルである。
【００９４】
別の実施形態において、式Ｉ、Ｉ-ａ、Ｉ-ｂ、Ｉ-ｃ、Ｉ-ｄ、またはＩ-ｅの化合物中、Ｑは存在しないかまたは(Ｃ１-Ｃ４)アルキレンであり、Ｚは存在しないかまたはＮＨ、Ｎ(Ｃ１−Ｃ６)アルキル、−ＮＨ−(Ｃ＝Ｏ)−、−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６)アルキル−(Ｃ＝Ｏ)−、Ｏ、もしくはＳである。
【００９５】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、式Ｉ−ｆまたはＩ−ｇ
【化２２】
2013540746.tif 000026
(式中、Ｒ９はＨまたはＣＨ３である)の化合物である。
【００９６】
別の実施形態において、式Ｉ-ｇの化合物中、Ｙは場合によって置換された(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンであり、ここで、(Ｃ１-Ｃ６)アルキレンの２個までの炭素原子は、ＮＨ、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、-Ｎ(Ｃ１-Ｃ６)アルキル-(Ｃ＝Ｏ)-、または-(Ｃ＝Ｏ)-によって置換されている。
【００９７】
別の実施形態において、式Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、ＱはＣＨ２またはＣＨ(ＣＨ３)である。
【００９８】
別の実施形態において、式Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、Ｚは、存在しないか、または-ＮＨ-、-ＮＨ-(Ｃ＝Ｏ)-、もしくはＳである。
【００９９】
別の実施形態において、式Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、Ｒ１は、ハロ、-ＯＨ、-ＮＨ２、もしくはシアノであるか、または(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、ピロリジニル、ピペリジニル(ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ)、ピペリジニル(ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｙｌ)、オクタヒドロ-ピリドピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、ジアゼピニル、モルホリニル、-ＳＯ２-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＳＯ２-アリール、-ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、-ＮＨ-((Ｃ１-Ｃ６)アルキル)２、オクタヒドロイソキノリニル、ジヒドロイソキノリニル、ベンズイミダゾリル、フラニル、ピラジニル、チアゾリル、ジアザビシクロ[２．２．１]ヘプト-２-イル、ピラニル、テトラヒドロピラニルであり、そのいずれも場合によって置換されていてもよい。
【０１００】
別の実施形態において、式Ｉ、Ｉ-ａ、Ｉ-ｂ、Ｉ-ｃ、Ｉ-ｄ、Ｉ-ｅ、Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、Ｒ１は、ブロモ、-ＯＨ、-ＮＨ２、シアノ、-ＣＨ３、-ＯＣＨ３、ＳＯ２-ＣＨ３、
【化２３】
2013540746.tif 000027
である。
【０１０１】
別の実施形態において、式Ｉ、Ｉ-ａ、Ｉ-ｂ、Ｉ-ｃ、Ｉ-ｄ、Ｉ-ｅ、Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、Ｒ２は、ＮＨ２、プリニル、ピラジニル、ピラゾロピリミジニル、ベンゾジオキシニル、フェニル、モルホリニル、オキサジアゾリル、シクロプロピル、またはピリジニルであり、そのいずれも場合によって置換されていてもよい。
【０１０２】
別の実施形態において、式Ｉ、Ｉ-ａ、Ｉ-ｂ、Ｉ-ｃ、Ｉ-ｄ、Ｉ-ｅ、Ｉ-ｆまたはＩ-ｇの化合物中、Ｒ２は、ＮＨ２、
【化２４】
2013540746.tif 000028
である。
【０１０３】
別の態様において、本発明は、式ＩＩ
【化２５】
2013540746.tif 000029
の化合物である式Ｉの化合物を提供する。
【０１０４】
別の態様において、本発明は、式ＩＩ-ＡまたはＩＩ-Ｂ
【化２６】
2013540746.tif 000030
(式中、Ｒａは水素またはＣ１-Ｃ６-アルキルである)の化合物である式Ｉの化合物を提供する。
【０１０５】
１つの実施形態において、式ＩＩの化合物は、式ＩＩ-Ａ１、ＩＩ-Ｂ１、ＩＩ-Ａ２、またはＩＩ-Ｂ２
【化２７】
2013540746.tif 000031
の化合物である。
【０１０６】
別の実施形態において、式ＩＩ、ＩＩ-Ａ、ＩＩ、Ｂ、Ａ１、ＩＩ-Ｂ１、ＩＩ-Ａ２、またはＩＩ-Ｂ２の化合物中、Ｚは、存在しないか、またはＯ、Ｓ、-ＮＨ-もしくは-ＮＨ(Ｃ＝Ｏ)-であり、Ｒ１およびＲ２は前記定義のとおりである。
【０１０７】
代表的な化合物
式Ｉの代表的な化合物を以下に示す。例は単に例示的であって、本発明の範囲を決して限定するものではない。本発明の化合物は、国際純正応用化学連合(ＩＵＰＡＣ)、国際生化学分子生物学連合(ＩＵＢＭＢ)、および化学情報検索サービス機関(ＣＡＳ)によって合意された命名法の系統的な適用にしたがって命名される。特に、表１中の名称は、ＡＣＤ／Ｌａｂｓ命名ソフトウェア８．００リリース、製品バージョン８．０８以上を用いて作製した。
表１
2013540746.tif 000032
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2013540746.tif 000071
【０１０８】
別の態様において、本発明は、１)その１つの立体異性体または異性体の混合物としての、式Ｉの式化合物のいずれか１つによるか、もしくは前記実施形態のいずれか１つによる化合物、または表１中の化合物を、場合によって薬剤的に許容される塩として、ならびに２)その薬剤的に許容される担体、賦形剤、および／または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
【０１０９】
別の態様において、本発明は、疾患、障害、または症候群を治療する方法であって、疾患がＰＩ３Ｋデルタによって直接的または間接的に影響を受ける無制御、異常、および／または不要な細胞活動と関連するものである方法を提供し、この方法は、それを必要とするヒトに、治療有効量の式Ｉの式化合物のいずれか１つに対する式のいずれかの化合物、前記実施形態のいずれか１つの化合物、または表１からの化合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩または医薬組成物として投与することを含む。実施形態(Ｖ)の別の実施形態において、疾患は癌である。実施形態(Ｖ)の別の実施形態において、疾患は癌であり、化合物は式Ｉの化合物であるか、または表１からの化合物である。
【０１１０】
別の態様において、本発明は、疾患、障害、または症候群を治療する方法を提供し、この方法は、治療有効量の式Ｉのいずれかの化合物、前記実施形態のいずれか１つの化合物、または表１からの化合物を、場合によってその薬剤的に許容される塩として、あるいは治療有効量の式Ｉの化合物、前記実施形態のいずれか１つの化合物、または表１からの化合物と、薬剤的に許容される担体、賦形剤、もしくは希釈剤とを含む医薬組成物として、患者に投与することを含む。
【０１１１】
別の実施形態において、疾患は癌であり、化合物は式Ｉの化合物であるか、または表１からの化合物である。
【０１１２】
一般的投与
１つの態様において、本発明は、本発明によるＰＩ３Ｋデルタの阻害剤と薬剤的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。ある他の特定の実施形態において、投与は経口経路による。本発明の化合物、またはそれらの薬剤的に許容される塩の、純粋な形態または適切な医薬組成物での投与は、承認された投与方法または類似した効用を果たす薬剤のいずれかによって実施することができる。したがって、投与は、例えば、経口的、経鼻的、非経口的(静脈内、筋肉内、もしくは皮下)、局所的、経皮的、膣内、膀胱内、大槽内、または直腸的に、固体、半固体、凍結乾燥粉末、または液体剤形の形態で、例えば、錠剤、坐剤、丸薬、軟カプセルおよび硬ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、またはエアゾルなど、特に正確な投与量の簡単な投与のために適した単位剤形である可能性がある。
【０１１３】
組成物は、通常の医薬担体または賦形剤および本発明の化合物を活性剤として含み、さらに、担体およびアジュバントなどを含んでもよい。
【０１１４】
アジュバントは、防腐剤、湿潤剤、懸濁剤、甘味料、矯味矯臭剤、香料、乳化剤、および分配剤を含む。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にすることができる。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい可能性もある。注射可能な剤形の長時間の吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらすことができる。
【０１１５】
所望により、本発明の医薬組成物はさらに、少量の補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、抗酸化剤など、例えば、クエン酸、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、ブチル化ヒドロキシトルエンなどを含んでもよい。
【０１１６】
処方の選択は、薬物投与方法(例えば、経口投与については、錠剤、丸薬またはカプセルの形態での処方)および製剤原料のバイオアベイラビリティーなどの様々な因子に依存する。近年では、バイオアベイラビリティーは、表面積を増加させること、すなわち粒子サイズを減少させることによって、増加させることができるという原則に基づいて、低バイオアベイラビリティーを示す薬物に関する製剤処方が開発されてきた。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、１０〜１，０００ｎｍのサイズ範囲の粒子を有する製剤処方を記載し、この範囲で、活性物質は巨大分子の架橋マトリックス上に担持される。米国特許第５，１４５，６８４号は、製剤処方の製造法であって、製剤原料を表面修飾剤の存在下で微粉砕してナノ粒子(４００ｎｍの平均粒子サイズ)にし、次いで液体媒体中に分散させて、著しく高いバイオアベイラビリティーを示す製剤処方を得る、製造法を記載する。
【０１１７】
非経口注射に好適な組成物は、生理学的に許容される滅菌水性もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョン、および滅菌注射可能溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含んでもよい。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール(プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど)、それらの好適な混合物、植物油(例えばオリーブ油)および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要とされる粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。
【０１１８】
１つの具体的な投与経路は、経口であって、治療される病状の重症度にしたがって調節することができる簡便な１日の投与計画を使用する。
【０１１９】
経口投与のための固体剤形としては、カプセル、錠剤、丸薬、粉末、および顆粒が挙げられる。そのような固体剤形では、活性化合物を少なくとも１つの不活性な慣例の賦形剤(もしくは担体)、例えばクエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムまたは(ａ)充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、(ｂ)バインダー、例えば、セルロース誘導体、デンプン、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアラビアゴム、(ｃ)保湿剤、例えば、グリセロール、(ｄ)崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、クロスカルメロースナトリウム、複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、(ｅ)溶解遅延剤、例えばパラフィン、(ｆ)吸収促進剤、例えば、第４アンモニウム化合物、(ｇ)湿潤剤、例えば、セチルアルコール、およびグリセロールモノステアレート、ステアリン酸マグネシウムなど(ｈ)吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイト、ならびに(ｉ)潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物と混合する。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、剤形は緩衝剤を含んでもよい。
【０１２０】
前述の固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば腸溶コーティングおよび当該技術分野で周知の他のもので調製することができる。それらは、鎮静剤を含んでもよく、それらが活性化合物または化合物を腸管のある部分で遅延した方法で放出するような組成を有するものである可能性もある。使用することができる包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。活性化合物は、適切ならば、１以上の前述の賦形剤を有するマイクロカプセル化形態でもあり得る。
【０１２１】
経口投与のための液体剤形には、薬剤的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。そのような剤形は、例えば、本発明の化合物(複数可)、またはその薬剤的に許容される塩、および任意の製薬アジュバントを担体、例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなど；可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３-ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド；油、特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールならびにソルビタンの脂肪酸エステル；またはこれらの物質の混合物などに、溶解させ、溶解させるなどによって、溶液または懸濁液を形成することによって、調製される。
【０１２２】
懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
【０１２３】
直腸投与のための組成物は、例えば、本発明の化合物を、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックスなどの好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製することができる坐剤であり、これらは常温で固体であるが、体温で液体であり、したがって、好適な体腔中にある間に溶融し、活性成分を体腔中に放出する。
【０１２４】
本発明の化合物の局所投与のための剤形には、軟膏、粉末、スプレー、および吸入剤が含まれる。活性成分を、滅菌条件下で生理学的に許容され担体および任意の防腐剤、緩衝液、またはプロペラントと必要に応じて混合する。眼科処方、眼軟膏、粉末、および溶液も本発明の範囲内に含まれることが想定される。
【０１２５】
圧縮ガスを用いて、本発明の化合物をエアゾル形態で分散させることができる。この目的に好適な不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。
【０１２６】
一般的に、意図される投与方法に応じて、薬剤的に許容される組成物は、約１％〜約９９重量％の本発明の化合物(複数可)、またはその薬剤的に許容される塩、および９９％〜１重量％の好適な医薬賦形剤を含有するであろう。一例において、組成は、約５％〜約７５重量％の本発明の化合物(複数可)、またはその薬剤的に許容される塩と、残余は好適な医薬賦形剤である。
【０１２７】
そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者には、公知であるか、または明らかであろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．，  (Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  １９９０)を参照のこと。投与される組成物は、いずれにしても、本発明の教唆にしたがった病状の治療のために、治療有効量の本発明の化合物、またはその薬剤的に許容される塩を含有する。
【０１２８】
本発明の化合物、またはそれらの薬剤的に許容される塩もしくは溶媒和物は、用いられる特定の化合物の活性、化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与方法および投与時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の病状の重症度、ならびに治療を受けている受容者をはじめとする様々な因子に応じて変わる治療有効量で投与される。本発明の化合物は、１日あたり約０．１〜約１，０００ｍｇの範囲の投薬量レベルで患者に投与することができる。体重約７０キログラムの正常なヒト成人について、１日あたり体重１キログラムにつき約０．０１〜約１００ｍｇの範囲の投薬量が一例である。しかしながら、使用される具体的な投薬量は、変化する可能性がある。例えば、投薬量は、患者の要件、治療される状態の重症度、および用いられる化合物の薬理学的活性をはじめとする多くの因子に依存する可能性がある。特定の患者について最適な投薬量の決定は当業者には周知である。
【０１２９】
一定用量として処方されるならば、そのような配合製品は、前述の投薬量範囲内の本発明の化合物およびその承認された投薬量範囲内の他の医薬的に活性な薬剤(複数可)を使用する。本発明の化合物は、別法として、併用処方が不適切である場合、公知の薬剤的に許容される薬剤(複数可)と連続して用いることができる。
【０１３０】
有用性
本発明の化合物はＰＩ３Ｋ-デルタの活性を有する。本発明の化合物を生物学的実施例で記載するアッセイを用いて試験し、ＰＩ３Ｋ-デルタの阻害剤であることが確認された。ＰＩ３Ｋデルタ活性および化合物によるその阻害を測定するための好適なインビトロアッセイは当該技術分野で公知である。ＰＩ３Ｋデルタを測定するためのインビトロアッセイのさらなる詳細に関しては、本明細書中の生物学的実施例を参照のこと。癌の治療におけるインビトロ有効性の測定のための細胞ベースのアッセイは当該技術分野で公知である。加えて、アッセイを本明細書中で提供する生物学的実施例で記載する。癌の好適なインビボモデルは当業者には公知である。前立腺腺癌、グリア芽腫，肺癌腫、および黒色腫のインビボモデルのさらなる詳細に関しては、本明細書中で記載する生物学的実施例を参照のこと。本明細書中で開示される実施例、および当該技術分野で開示されている例にしたがって、当業者は本発明の化合物の活性を測定することができる。
【０１３１】
式Ｉの化合物は、以下に記載する、自己免疫障害、炎症性疾患、および癌をはじめとする疾患の治療に有用である。
【０１３２】
癌：心臓：肉腫(血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫)、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性癌(扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌)、肺胞(細気管支)癌腫、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫；胃腸：食道(扁平上皮細胞癌腫、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫)、胃(癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫)、膵臓(導管腺)癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ)、小腸(腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫)、大腸(腺癌、腺管状線腫、絨毛状線腫、過誤腫、平滑筋腫)；尿生殖路：腎臓(腺癌、ウィルムス腫瘍[腎芽腫]、リンパ腫、白血病)、膀胱および尿道(扁平上皮細胞癌腫、移行上皮癌、腺癌)、前立腺(腺癌、肉腫)、精巣(セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫)；肝臓：肝癌(肝細胞癌)、胆管癌、肝芽細胞腫、血管肉腫、肝細胞性腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫(骨肉腫)、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫(細網肉腫)、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫(ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｆｒｏｍａ)(骨軟骨性外骨症)、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫；神経系：頭蓋骨(骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎)、髄膜(髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠種症)、脳(星細胞腫、髄芽細胞腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫[松果体腫]、多形膠芽細胞腫、希突起膠細胞腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍)、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫)；婦人科：子宮(子宮内膜癌)、頸部(子宮頸癌、前腫瘍性子宮頸部異形成(ｐｒｅ-ｔｕｍｏｒ  ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ))、卵巣(卵巣癌[漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌腫]、顆粒膜-莢膜細胞腫瘍、セルトリライディッヒ(ＳｅｒｔｏｌｉＬｅｙｄｉｇ)細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫)、外陰部(扁平上皮細胞癌腫、上皮内癌腫、腺癌、線維肉腫、黒色腫)、膣(明細胞癌、扁平上皮細胞癌腫、ブドウ状肉腫(胎児性横紋筋肉腫]、卵管(癌腫)；血液学：血液(骨髄性白血病[急性および慢性]、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群)、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫[悪性リンパ腫]；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌腫、カポジ肉腫、母斑異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽細胞腫。
【０１３３】
自己免疫疾患：橋本甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡(ＳＬＥ)、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、受容体自己免疫疾患、バセドウ病(グレーブス病)、重症筋無力症、インスリン耐性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、自己免疫脳脊髄炎、リウマチ、関節リウマチ、強皮症、混合型結合組織病、多発性筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、ある種の不妊症、糸球体腎炎、水疱性天疱瘡、シェーグレン症候群、ある種の糖尿病、アドレナリン作動性物質耐性、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、内分泌不全、白斑、血管炎、心臓手術後症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎および多発性硬化症、自己免疫多腺性疾患(自己免疫多腺性症候群としても知られる)、自己免疫脱毛症；悪性貧血；白斑；自己免疫下垂体機能低下症、およびギラン・バレー症候群。
【０１３４】
炎症性疾患：喘息、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎または骨関節炎、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、呼吸アレルギー(喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎)または皮膚アレルギー、強皮症、菌状息肉腫、急性炎症応答(例えば、急性呼吸窮迫症候群および虚血／再潅流傷害)、皮膚筋炎、アロペシアグレアタ(ａｌｏｐｅｃｉａ  ｇｒｅａｔａ)、慢性光線性皮膚炎、湿疹、ベーチェット病、手掌足底膿疱症、壊疽性膿皮症、セザリー症候群、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症、および限局性強皮症。
【０１３５】
したがって、１つの実施形態において、本発明は、ＰＩ３Ｋデルタを阻害する方法であって、ＰＩ３Ｋデルタを有効量の本明細書中で開示される化合物と接触させることを含む方法を提供する。
【０１３６】
別の実施形態において、本発明は、ＰＩ３Ｋデルタで調節される疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とするほ乳類に治療有効量の本明細書中で開示される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３７】
別の実施形態において、本発明は、ＰＩ３Ｋデルタによって媒介される癌疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とするほ乳類に、治療有効量の請求項１〜２０記載の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１３８】
本発明の化合物はさらに、本明細書中で記載される疾患を含む生物学的プロセスにおけるＰＩ３Ｋデルタのインビボの役割を研究するためのインビボのＰＩ３Ｋデルタの阻害剤としても有用である。したがって、本発明はさらに、本発明の化合物または組成物をほ乳類に投与することを含む、インビボでＰＩ３Ｋデルタを阻害する方法も含む。
【０１３９】
一般的合成
本発明の化合物は、後述の合成手順によって作製することができる。これらの化合物の調製で使用される出発物質および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．(Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  Ｗｉｓ．)、もしくはＢａｃｈｅｍ(Ｔｏｒｒａｎｃｅ，  Ｃａｌｉｆ．)などの商業的供給業者から入手可能であるか、またはＦｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−１７  (Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  １９９１)；  Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ  (Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  １９８９)；  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ１−４０  (Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  １９９１)，  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  (Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  ４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ)およびＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓ(ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，  １９８９)などの文献で記載されている手順にしたがって当業者に公知の方法により調製されるかのいずれかである。これらのスキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例示であり、これらのスキームに対して様々な修飾をなすことができ、本開示を参照する当業者に示唆される。反応の出発物質および中間体は、必要に応じて、限定されないが、ろ過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどをはじめとする通常の技術を用いて単離し、精製することができる。そのような材料は、物理定数およびスペクトルデータをはじめとする通常の手段を用いて特徴付けることができる。
【０１４０】
特に別段の定めがない限り、本明細書中で記載される反応は、大気圧で、約−７８℃〜約１５０℃の温度範囲にわたって、さらに詳細には、約０℃〜約１２５℃、さらに詳細には、ほぼ室温(または周囲温度)、例えば、約２０℃で行われる。特に別段の記載がない限り(水素化の場合のように)、全ての反応は、窒素雰囲気下で実施される。
【０１４１】
プロドラッグは、当業者に公知の技術によって調製することができる。これらの技術は、一般的に、所定の化合物中の適切な官能基を修飾する。これらの修飾された官能基は、通常の操作によって、またはインビボで、もとの官能基を再生する。本発明の化合物のアミドおよびエステルは、通常の方法にしたがって調製することができる。プロドラッグの詳細な考察は、Ｔ．  Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．  Ｓｔｅｌｌａ，  “Ｐｒｏ-ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”  Ｖｏｌ  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ，  ａｎｄ  ｉｎ  Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，  ｅｄ．  Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７(どちらも、あらゆる目的に関して参照することによって本明細書中に組み込まれる)で提供されている。
【０１４２】
本発明の化合物、またはそれらの薬剤的に許容される塩は、それらの構造中に不斉炭素原子または四級化窒素原子を有していてもよい。本明細書中で記載される合成法によって調製することができる本発明の化合物は、１つの立体異性体、ラセミ化合物として、ならびにエナンチオマーおよびジアステレオマーの混合物として存在し得る。化合物はさらに、幾何異性体としても存在し得る。全てのそのような１つの立体異性体、ラセミ化合物およびそれらの混合物、ならびに幾何異性体は、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【０１４３】
本発明の化合物のいくつかは、活性なケトン-Ｃ(Ｏ)ＣＦ３を含有し、そして部分的または全体的に、-Ｃ(ＯＨ２)ＣＦ３形態として存在し得る。化合物が-Ｃ(Ｏ)ＣＦ３または-Ｃ(ＯＨ２)ＣＦ３形として表すことができるかどうかにかかわらず、どちらも本発明の範囲内に含まれる。個々の化合物を-Ｃ(Ｏ)ＣＦ３形として表すことができるが、当業者は、化合物が部分的または全体的に-Ｃ(ＯＨ２)ＣＦ３形で存在することができ、２つの形態の比は、化合物およびそれが存在する状態に依存して変化し得ることを理解するであろう。
【０１４４】
本発明の化合物のいくつかは互変異性体として存在し得る。例えば、ケトンまたはアルデヒドが存在する場合、分子はエノール形で存在する可能性があり；アミドが存在する場合、分子はイミド酸として存在する可能性があり；そしてエナミンが存在する場合、分子はイミンとして存在する可能性がある。全てのそのような互変異性体は本発明の範囲内に含まれる。どの構造またはどの専門用語が用いられるかにかかわらず、各互変異性体は本発明の範囲内に含まれる。本発明はさらに、本発明の化合物のＮオキシド誘導体および保護誘導体も含む。例えば、本発明の化合物が酸化可能な窒素原子を含む場合、窒素原子を当該技術分野で周知の方法によってＮオキシドに変換することができる。本発明の化合物がヒドロキシ、カルボキシ、チオールまたは窒素原子(複数可)を含有する任意の基を含有する場合、これらの基を好適な「保護基( ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐまたはｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ)」で保護することができる。好適な保護基の総合的リストは、Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  １９９１(その開示は、全体が参照することによって本明細書中に組み込まれる)で見出すことができる。本発明の化合物の保護誘導体は当該技術分野で周知の方法によって調製することができる。
【０１４５】
立体異性体のラセミ混合物もしくは非ラセミ混合物から１つの立体異性体を調製および／または分離ならびに単離するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、光学活性(Ｒ)-異性体および(Ｓ)-異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製することができるか、または通常の技術を用いて分割することができる。エナンチオマー(Ｒ-異性体およびＳ-異性体)は、当業者に公知の方法、例えば：結晶化などによって分離することができる、ジアステレオ異性体塩または複合体の形成；例えば、結晶化、１つのエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応、例えば酵素的酸化または還元によって分離することができるジアステレオ異性体誘導体の形成と、それに続く修飾エナンチオマーおよび非修飾エナンチオマーの分離；あるいは、例えば結合したキラルリガンドを有するシリカなどのキラル支持体上、またはキラル溶媒の存在下などのキラル環境中での気液または液体クロマトグラフィーによって分割することができる。所望のエナンチオマーが前述の分離手順のうちの１つによって別の化学物質に変換される場合、所望のエナンチオマー形を遊離させるためにさらなるステップが必要である可能性があると理解される。別法として、特定のエナンチオマーは、光学活性試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用した不斉合成によるか、または１つのエナンチオマーを他のエナンチオマーに不斉変換によって変換することによって、合成することができる。特定のエナンチオマーを多く含むエナンチオマーの混合物について、主成分エナンチオマーを再結晶によってさらに富化させることができる(収率の損失を伴う)。
【０１４６】
加えて、本発明の化合物は、非溶媒和形態ならびに水、エタノールなどの薬剤的に許容される溶媒で溶媒和された形態で存在する可能性がある。一般的に、溶媒和形は、本発明の目的に関して非溶媒和形態と同等と見なされる。
【０１４７】
本発明の化合物の調製の化学は、当業者には公知である。実際、本発明の化合物を調製するためのプロセスが複数ある可能性がある。以下の実施例は、本発明を説明するが、限定するものではない。本明細書中で引用される全ての文献は、それらの全体として参照することによって本明細書中に組み込まれる。
合成例
Ｎ-(２-((３-((９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル)-８-メチルキノリン-２-イル)(メチルアミノ)エチル)-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イル)アセトアミド(７)
【化２８】
2013540746.tif 000072
【０１４８】
２-クロロ-３-(クロロメチル)-８-メチルキノリン(２)
２-クロロ-８-メチルキノリン-３-カルボキシアルデヒド(１、７．５９ｇ、３６．９ミリモル)のＴＨＦ(１５０ｍＬ)中撹拌溶液にＮａＢＨ４(１．４０ｇ、３７．０ミリモル)を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ３(水溶液、２００ｍＬ)で摩砕した。沈殿をろ過によって集め、Ｈ２Ｏで洗浄し、高真空下で乾燥して、アルコール(７．４７ｇ、９７％)を白色固体として得た。Ｃ１１Ｈ１０ＣｌＮＯについてのＭＳ(ＥＩ)、実測値２０８(ＭＨ＋)。
【０１４９】
前記で得られたアルコール(７．４７ｇ、３６．０ミリモル)のＣＨＣｌ３(１５０ｍＬ)中撹拌懸濁液に、ＳＯＣｌ２(１３．１ｍＬ、１８０ミリモル)をゆっくりと添加し、そして結果として得られた混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ(１０ｍＬ)で慎重にクエンチし、飽和ＮａＨＣＯ３(水溶液、２００ｍＬ)で希釈し、そして分離された水性層をＣＨ２Ｃｌ２(２００ｍＬ)で抽出した。合わせた抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、２-クロロ-３-(クロロメチル)-８-メチルキノリン(２、８．０１ｇ、９８％)を無色油状物として得た。Ｃ１１Ｈ９Ｃｌ２ＮについてのＭＳ(ＥＩ)、実測値２２６(ＭＨ＋)。
【０１５０】
１(２-クロロ-８-メチルキノリン-３-イル)メタンアミン(３)
２(８．０１ｇ、３５．４ミリモル)のＤＭＳＯ(１５０ｍＬ)中撹拌溶液に、ＮａＮ３(４．６１ｇ、７０．９ミリモル)を数回にわけて添加し、結果として得られた混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ(３００ｍＬ)／Ｈ２Ｏ(２００ｍＬ)で希釈した。分離した有機層を塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、アジド(７．６６ｇ、３２．９ミリモル)を得た。Ｃ１１Ｈ９ＣｌＮ４についてのＭＳ(ＥＩ)、実測値２３３(ＭＨ＋)。
【０１５１】
アジドのＴＨＦ(１５０ｍＬ)／Ｈ２Ｏ(２０ｍＬ)中撹拌溶液に、Ｐｈ３Ｐ(１２．９ｇ、４９．２ミリモル)を添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌し、その際に、１Ｎ  ＨＣｌ(１５０ｍＬ)／ＣＨ２Ｃｌ２(３００ｍＬ)で希釈した。分離した水性層をＣＨ２Ｃｌ２(１００ｍＬ)で洗浄し、１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＞１０に塩基性化した。沈殿した生成物３(５．１２ｇ)をろ過によって集め、Ｈ２Ｏで洗浄し、真空下で乾燥した。ろ液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した(３×１００ｍＬ)。合わせた抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、生成物のさらなるアリコート(０．７７ｇ)を得た。合計収率は８７％(５．８９ｇ)であった。Ｃ１１Ｈ１１ＣｌＮ２についてのＭＳ(ＥＩ)、実測値２０７(ＭＨ＋)。
【０１５２】
Ｎ-((２-クロロ-８-メチルキノリン-３-イル)メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン(４)
３(６２０ｍｇ、３．００ミリモル)、６-クロロプリン(４８７ｍｇ、３．１５ミリモル)およびヒューニッヒ塩基(０．６２７ｍＬ、３．６０ミリモル)の混合物を１時間８０℃にてＥｔＯＨ(３０ｍＬ)中で撹拌した。沈殿をろ過し、固体を水およびＥｔＯＨで洗浄して、４(７２６ｍｇ、７５％)を得た。Ｃ１６Ｈ１３ＣｌＮ６についてのＭＳ(ＥＩ)、実測値３２５(ＭＨ＋)。
【０１５３】
Ｎ１-(３-((９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル)-８-メチルキノリン-２-イル)-Ｎ１，Ｎ２-ジメチルエタン-１，２-ジアミン(５)
４(１８７ｍｇ、０．５８ミリモル)およびＮ，Ｎ’-ジメチルエチレンジアミン(０．６２４ｍＬ、５．８ミリモル)のＤＭＡ(１．５ｍＬ)中混合物を１４０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、５(１６５ｍｇ、７６％)を得た。Ｃ２０Ｈ２４Ｎ８についてのＭＳ(ＥＩ)、実測値３７７(ＭＨ＋)。
【０１５４】
Ｎ-(２-((３-((９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル)-８-メチルキノリン-２-イル)(メチルアミノ)エチル)-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イル)アセトアミド(７)
５(６５ｍｇ、０．１７３ミリモル)、１-１，２，３-トリアゾール酢酸(６、２２ｍｇ、０．１７３ミリモル)、およびヒューニッヒ塩基(０．０９１ｍＬ、０．５２２ミリモル)のＤＭＦ(２ｍＬ)中撹拌混合物に、ＨＡＴＵ(６６ｍｇ、０．１７４ミリモル)を添加し、そして反応混合物を３０分間撹拌した。粗混合物を分取ＨＰＬＣによって直接精製して、７(３９ｍｇ、４６％)を得た。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO):δ13.0 (s, 1H), 8.34 (bs, 1H), 8.16-8.11 (m, 2H), 8.00-7.95 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.55-7.42 (m, 2H), 7.19 (q, 1H), 5.51-5.43 (2s, 2H), 4.86-4.83 (m, 2H), 3.81-3.52 (m, 4H), 3.13-3.12 (2s, 3H), 3.04-2.97 (2s, 3H), 2.64-2.63 (2s, 3H).Ｃ２４Ｈ２７Ｎ１１ＯについてのＭＳ(ＥＩ)、実測値４８６(ＭＨ＋)。
【０１５５】
同様の方法で、以下の化合物を調製した：
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ１)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピロリジン-２-イル)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ２)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ３)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ４)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-２，３-ジヒドロ-１，４-ベンゾジオキシン-５-アミン(ＣＭＰＤ５)；
Ｎ-{[８-メチル-２-(オクタヒドロ-２Ｈ-ピリド[１，２-ａ]ピラジン-２-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１２)；
９-{[８-メチル-２-(オクタヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１３)；
９-{[２-(３，４-ジヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１４)；
Ｎ-{[２-(３，４-ジヒドロイソキノリン-２(１Ｈ)-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１９)；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[２-(メチルオキシ)エチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ２５)；
Ｎ-ブチル-Ｎ，８-ジメチル-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ２６)；
Ｎ-[(８-メチル-２-ピペリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ２７)；
Ｎ-{２-[{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}(メチル)アミノ]エチル}-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-ピラゾール-１-イル)アセトアミド(ＣＭＰＤ２８)；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-３-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ３２)；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ３３)；
Ｎ-{２-[{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}(メチル)アミノ]エチル}-Ｎ-メチル-２-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イル)アセトアミド(ＣＭＰＤ３４)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-{８-メチル-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-イル}エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ３６)；
Ｎ-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ３７)；
Ｎ，８-ジメチル-Ｎ-[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルアミノ)メチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ３８)；
３-ヨード-１-{１-[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]エチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１１７)；
３-ヨード-１-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１１９)；
９-{[３-(２-メチルフェニル)ナフタレン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１２０)；
３-ヨード-１-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１３４)；
３-ヨード-Ｎ-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１３５)；
３-ブロモ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１４１)；
Ｎ-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１４３)；
Ｎ-{[２-(４-エチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１４４)；
３-ヨード-１-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-１Ｈ-ピラゾロ[３，４-ｄ]ピリミジン-４-アミン(ＣＭＰＤ１４５)；
Ｎ-{[８-メチル-２-(４-メチル-１，４-ジアゼパン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１４６)；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}-Ｎ，Ｎ’-ジメチルエタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ１４９)；
９-{[８-メチル-２-(５-メチル-２，５-ジアザビシクロ[２．２．１]ヘプト-２-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１５０)；
Ｎ-{１-[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]エチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１５２)；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}メタンスルホンアミド(ＣＭＰＤ１５３)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１５４)；
Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１５５)；
Ｎ-{３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチルキノリン-２-イル}ベンゼンスルホンアミド(ＣＭＰＤ１５６)；
２-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-３-(２-メチルフェニル)チエノ[３，２-ｄ]ピリミジン-４(３Ｈ)-オン(ＣＭＰＤ１６２)；
３-(２-メチルフェニル)-２-[(７Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]チエノ[３，２-ｄ]ピリミジン-４(３Ｈ)-オン(ＣＭＰＤ１６３)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-(１-メチルピペリジン-４-イル)キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ１６４)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ１６５)；
９-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１６６)；
３-[(６-アミノ-９Ｈ-プリン-９-イル)メチル]-８-メチル-Ｎ-[２-(メチルオキシ)エチル]キノリン-２-アミン(ＣＭＰＤ１６７)；
９-{[４-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１６８)；
７-{[４-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-７Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１６９)；
９-{[８-メチル-２-(２-メチルピロリジン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７０)；
９-[(８-メチル-２-ピロリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７１)；
９-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７２)；
９-{[８-メチル-２-(４-メチルピペラジン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７３)；
９-[(８-メチル-２-モルホリン-４-イルキノリン-３-イル)メチル]-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７７)；
７-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-７Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７８)；
９-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１７９)；
９-{[２-(２，３-ジメチルフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８０)；
９-{[２-(２，５-ジメチルフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８１)；
９-({８-メチル-２-[２-(トリフルオロメチル)フェニル]キノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８２)；
９-{[８-メチル-２-(３-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８３)；
９-{[８-メチル-２-(３-{[２-(メチルオキシ)エチル]オキシ}フェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８４)；
９-({８-メチル-２-[３-(メチルオキシ)フェニル]キノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８５)；
９-({２-[２-(エチルオキシ)フェニル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８６)；
９-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８７)；
８-メチル-２-(２-メチルフェニル)-３-[(９Ｈ-プリン-６-イルチオ)メチル]キノリン(ＣＭＰＤ１８８)；
９-{[８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１８９)；
９-{[３-(２-メチルフェニル)キノキサリン-２-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１９０)；および
９-{[２-(２-メチルフェニル)キノリン-３-イル]メチル}-９Ｈ-プリン-６-アミン(ＣＭＰＤ１９１)。
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(１３)
【化２９】
2013540746.tif 000073
【０１５６】
２-アミノ-６-メチル安息香酸２-アミノ-６-メチル-Ｎ-ｏ-トリルベンズアミド(９)
塩化チオニル(２０．０ｍＬ、２７４ミリモル)および２-アミノ-６-メチル安息香酸(８、１０．０ｇ、６６．２ミリモル)をトルエン(１００ｍＬ)に添加し、そして混合物を１１０℃まで１時間加熱し、次いで濃縮した。粗酸塩化物をＴＨＦ(１００ｍＬ)中に溶解させ、０℃まで冷却し、そしてｏ-トルイジン(２１ｍＬ、１９６ミリモル)をゆっくりと添加した。反応混合物を８０℃まで加熱し、生成物を２時間にわたって沈殿させた。反応混合物を次いでＫ２ＣＯ３(１０％、水溶液)でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で希釈し、ろ過し、そして濃縮した。生成物をＤＣＭ／ヘキサンから再結晶して、９(１４．７ｇ、２ステップにわたって９２％)を灰白色固体として得た。
【０１５７】
２-(クロロメチル)-５-メチル-３-ｏ-トリルキナゾリン-４(３Ｈ)-オン(１０)
ＡｃＯＨ(５０ｍＬ)中９(１３．７ｇ、５７．０ミリモル)に、２-クロロアセチルクロリド(１３．６ｍＬ、１７１ミリモル)を添加し、そして反応混合物を１２０℃まで加熱した。１５分後、反応混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した(２×)。有機層をＨ２Ｏ(２×)で洗浄し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(ヘキサンから３：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)と、それに続いてＥｔＯＡｃから摩砕することにより、１０(５．１３ｇ、２６％)を無色固体として得た。
【０１５８】
２-(アミノメチル)-５-メチル-３-ｏ-トリルキナゾリン-４(３Ｈ)-オン(１１)
ＤＭＦ(１０ｍＬ)中１０(１．００ｇ、３．３６ミリモル)に、アジ化ナトリウム(０．４３６ｇ、６．７１ミリモル)を添加し、そして混合物を周囲温度で１５分間撹拌した。粗反応混合物を次いでメタノール(２０ｍＬ)およびギ酸アンモニウム(１．０ｇ、１６ミリモル)で希釈し、続いてＰｄ／Ｃ(１０％、２００ｍｇ)を添加した。反応混合物を８０℃まで３０分間加熱し、この際に周囲温度まで冷却し、セライトを通してろ過し、そしてＥｔＯＡｃおよびＨ２Ｏで希釈した。有機層をＨ２Ｏおよび塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、そして濃縮した。この方法で得られた粗１１をさらに精製することなく先に進めた。
【０１５９】
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(１３)
３-アミノピラジン-２-カルボン酸(１２、３９．０ｍｇ、０．２８０ミリモル)、ヒューニッヒ塩基(０．１ｍＬ、０．６ミリモル)、およびＨＡＴＵ(１０８ｍｇ、０．２８０ミリモル)をＤＭＦ(０．５ｍＬ)中に溶解させ、前記で得られた粗１１(３９．０ｍｇ、０．１４０ミリモル)を添加した。結果として得られた反応混合物を周囲温度で２０分間撹拌し、次いでメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製して、１３(３９．９ｍｇ、７１％を得た。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO): δ  9.07 (t, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79-7.63 (m, 1H), 7.57-7.38 (m, 5H), 7.34 (d, 1H), 4.11 (dd, 1H), 3.81 (dd, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). Ｃ２２Ｈ２０Ｎ６Ｏ２についてのＭＳ(ＥＩ)、実測値４０１(ＭＨ＋)。
【０１６０】
同様の方法で、以下の化合物を調製した：
１-[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]-Ｎ-{[３-(メチルオキシ)フェニル]メチル}メタンアミン(ＣＭＰＤ６)；
３-({[２-クロロ-４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン(ＣＭＰＤ７)；
３-[(１，３-ベンゾジオキソール-５-イルオキシ)メチル]-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン(ＣＭＰＤ８)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３，５-ビス(メチルオキシ)アニリン(ＣＭＰＤ９)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３，４-ビス(メチルオキシ)アニリン(ＣＭＰＤ１０)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-２-(メチルオキシ)アニリン(ＣＭＰＤ１１)；
３-({[３，５-ビス(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)-２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン(ＣＭＰＤ１５)；
２-(２-クロロフェニル)-８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン(ＣＭＰＤ１６)；
２-(２-クロロフェニル)-８-メチル-３-(１-{[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}エチル)キノリン(ＣＭＰＤ１７)；
Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３-(メチルオキシ)アニリン(ＣＭＰＤ１８)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]アミノ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２０)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-(モルホリン-４-イルメチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２１)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[３-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２２)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[４-(メチルオキシ)フェニル]オキシ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２３)；
Ｎ，Ｎ’-ジメチル-Ｎ-[８-メチル-３-({[３-(メチルオキシ)フェニル]アミノ}メチル)キノリン-２-イル]エタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２４)；
Ｎ-{３-[５-(３-アミノピラジン-２-イル)-１，３，４-オキサジアゾール-２-イル]-８-メチルキノリン-２-イル}-Ｎ，Ｎ’-ジメチルエタン-１，２-ジアミン(ＣＭＰＤ２９)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-３-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ３０)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-４-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ３１)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[(１-メチルピペリジン-２-イル)メチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ３９)；
Ｎ-メチル-Ｎ’-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルアミノ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]シクロプロパン-１，１-ジカルボキサミド(ＣＭＰＤ４０)；
３-{[３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)キノキサリン-２-イル]アミノ}ベンズアミド(ＣＭＰＤ４１)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-テトラゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４２)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-{[(３，５-ジメチル-１Ｈ-１，２，４-トリアゾール-１-イル)アセチル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４３)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(３-{[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル]アミノ}ピロリジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４４)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{３-[(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]ピロリジン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４５)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[ビス(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４６)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[ビス(ピリジン-２-イルメチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４７)；
３-アミノ-Ｎ-[(５-クロロ-３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４８)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-ピラゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ４９)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(３-ヒドロキシプロピル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５０)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５１)；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}-５-メチルキノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５２)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(１Ｈ-ベンズイミダゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５３)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(１Ｈ-イミダゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５４)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(２-メチル-１Ｈ-イミダゾール-１-イル)アセチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５５)；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)カルボニル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５６)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-ピロール-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５７)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(５-メチルフラン-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５８)；
３-アミノ-Ｎ-({３-[２-(ピペリジン-１-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ５９)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６０)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(２Ｈ-１，２，３-トリアゾール-２-イルアセチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６１)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-２-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６２)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{４-[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-５-イル)メチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６３)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(ピリジン-３-イルメチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６４)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[４-(ピリジン-４-イルメチル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６５)；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{４-[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル]-１，４-ジアゼパン-１-イル}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６６)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１-プロピル-Ｄ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６７)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-２-イルメチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６８)；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{３-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ６９)；
３-アミノ-Ｎ-({３-[２-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７０)；
３-アミノ-Ｎ-({３-[４-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７１)；
３-アミノ-Ｎ-({３-[３-(モルホリン-４-イルメチル)フェニル]キノリン-２-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７２)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[１-(１-メチルエチル)-Ｄ-プロリル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７３)；
２-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-５-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７４)；
３-アミノ-Ｎ-{１-[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]エチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７５)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[２-(メチルアミノ)-２-オキソエチル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７６)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(２-モルホリン-４-イル-２-オキソエチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７７)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピラジン-２-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７８)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-４-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ７９)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-３-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８０)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-２-イルカルボニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８１)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(４-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８２)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８３)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(シアノメチル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８４)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(１Ｈ-イミダゾール-１-イルアセチル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８５)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(２-メチル-１Ｈ-イミダゾール-１-イル)アセチル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８６)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８７)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-ピリジン-２-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８８)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)-２-オキソエチル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ８９)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピラジン-２-イル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９０)；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(１，３-チアゾール-４-イル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９１)；
３-アミノ-Ｎ-[(３-{２-[(ジメチルアミノ)メチル]フェニル}キノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９２)；
３-アミノ-Ｎ-[(３-ブロモキノリン-２-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９３)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(２Ｈ-１，２，３-トリアゾール-２-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９４)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(ピリジン-３-イルメチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９５)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(２-ピリジン-２-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９６)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[(２-ピリジン-３-イルエチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９７)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(１-メチルピロリジン-３-イル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９８)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(１-メチルピペリジン-４-イル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ９９)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１Ｈ-１，２，３-トリアゾール-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１００)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(メチルスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０１)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｄ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０２)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｌ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０３)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルオキシ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０４)；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}-５-モルホリン-４-イルピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０５)；
３-アミノ-５-(メチルオキシ)-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０６)；
３-アミノ-５-クロロ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０７)；
４-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-５-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０８)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(ピロリジン-１-イルアセチル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１０９)；
３-アミノ-Ｎ-({８-メチル-２-[メチル(２-{メチル[(１-メチル-１Ｈ-イミダゾール-５-イル)カルボニル]アミノ}エチル)アミノ]キノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１０)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１Ｈ-イミダゾール-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１１)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１Ｈ-ベンズイミダゾール-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１２)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(１-メチル-Ｌ-プロリル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１３)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１４)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{２-[グリシル(メチル)アミノ]エチル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１５)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(メチル{２-[メチル(Ｎ-メチルグリシル)アミノ]エチル}アミノ)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１６)；
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１１８)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-ヒドロキシエチル)(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２１)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{[２-(メチルアミノ)エチル]オキシ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２２)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２Ｒ，５Ｓ)-２，５-ジメチルピペラジン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２３)；
Ｎ-{[２-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}-３-アミノピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２４)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[(２-ヒドロキシエチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２５)；
{１-[３-({[(３-アミノピラジン-２-イル)カルボニル]アミノ}メチル)-８-メチルキノリン-２-イル]ピペリジン-４-イル}メチルカルバミン酸１，１-ジメチルエチル(ＣＭＰＤ１２６)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(ジメチルアミノ)ピペリジン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２７)；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)エチル](メチル)アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２８)；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[２-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１２９)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[２-(メチルアミノ)エチル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３０)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-ピペラジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３１)；
Ｎ〜５〜-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピリミジン-４，５-ジアミン(ＣＭＰＤ１３２)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-{メチル[３-(メチルアミノ)プロピル]アミノ}キノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３３)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[{３-[(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)(メチル)アミノ]プロピル}(メチル)アミノ]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３６)；
３-アミノ-Ｎ-({２-[４-(Ｎ，Ｎ-ジメチルグリシル)-１，４-ジアゼパン-１-イル]-８-メチルキノリン-３-イル}メチル)ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３７)；
３-アミノ-Ｎ-[(２-{[３-(ジメチルアミノ)プロピル]アミノ}-８-メチルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３８)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(１，４-ジアゼパン-１-イル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１３９)；
３-アミノ-Ｎ-{[８-メチル-２-(４-メチル-１，４-ジアゼパン-１-イル)キノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１４０)；
３-アミノ-Ｎ-{[３-(２-メチルフェニル)キノリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１４２)；
３-アミノ-Ｎ-[(８-メチル-２-ピペリジン-１-イルキノリン-３-イル)メチル]ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１４７)；
３-アミノ-Ｎ-{[２-(２-クロロフェニル)-８-メチルキノリン-３-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１４８)；
Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}-３-モルホリン-４-イルピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１５１)；
２-(２-アミノエチル)-５-メチル-３-(２-メチルフェニル)キナゾリン-４(３Ｈ)-オン(ＣＭＰＤ１５７)；
３-({[３，５-ビス(メチルオキシ)フェニル]メチル}オキシ)-８-メチル-２-(２-メチルフェニル)キノリン(ＣＭＰＤ１５８)；
３-クロロ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１５９)；
３-アミノ-６-ブロモ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピラジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１６０)；
３-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-２-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１６１)；
２-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-４-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１７４)；および
２-アミノ-Ｎ-{[５-メチル-３-(２-メチルフェニル)-４-オキソ-３，４-ジヒドロキナゾリン-２-イル]メチル}ピリジン-３-カルボキサミド(ＣＭＰＤ１７６)。
【０１６１】
生物学的実施例
実施例１．生化学アッセイ
１以上の後述のアッセイフォーマットを用いて、キナーゼ活性および化合物阻害を調査した。様々なアッセイで用いられるＡＴＰ濃度は、各キナーゼのそれぞれのＫＭとほぼ等しいか、またはそれよりも低かった。３８４ウェルマイクロタイタープレート中で１０の異なる阻害剤濃度でのプレート内希釈スキームを用いて、用量応答実験を実施した。ＩＣ５０値は、下記の４パラメータ式を用いた非線形回帰分析によって計算した：
【０１６２】
式１；Ｙ＝ｍｉｎ＋(ｍａｘ−ｍｉｎ)／(１＋(Ｘ／ＩＣ５０)Ｎ)
(式中、Ｙは観察されたシグナルであり、Ｘは阻害剤濃度であり、ｍｉｎは酵素の非存在下(０％酵素活性)でのバックグラウンドシグナルであり、ｍａｘは阻害剤の非存在下(１００％酵素活性)でのシグナルであり、ＩＣ５０は５０％酵素阻害での阻害剤濃度であり、Ｎは協同作用の尺度としての実験的ヒル勾配を表す)。典型的には、Ｎは１に近づく。曲線の適合は、ＸＬＦｉｔまたはＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅを用いて実施した。
【０１６３】
ルシフェラーゼ結合化学発光アッセイプロトコル
キナーゼ活性は、ルシフェラーゼ-ルシフェリン結合化学発光を用いてキナーゼ反応後に消費されるＡＴＰのパーセントとして測定される。反応を３８４または１５３６ウェル白色培地結合マイクロタイタープレート(Ｇｒｅｉｎｅｒ)中で実施した。試験化合物、キナーゼ、およびＡＴＰを２０μＬ容積(１５３６ウェルプレートについては６μＬ容積)で組み合わせることによって、キナーゼ反応を開始した。反応混合物を周囲温度で２時間インキュベートした。キナーゼ反応後、２０μＬ(または１５３６ウェルプレートについては３μＬ)アリコートのＫｉｎａｓｅＧｌｏ(Ｐｒｏｍｅｇａ)を添加し、化学発光シグナルは、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー(Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ)を用いて測定した。総ＡＴＰ消費量は２５〜６０％に限定され、ＩＣ５０値は放射分析によって測定される値とよく相関する。
【０１６４】
式Ｉの化合物のＰＩ３Ｋデルタ活性を表２に示す。
表２．式Ｉの化合物のＰＩ３Ｋデルタ活性
Ａ  ０＜ＰＩ３Ｋデルタ活性＜５０ｎＭ
Ｂ  ５０＜ＰＩ３Ｋデルタ活性＜２５０ｎＭ
Ｃ  ２５０＜ＰＩ３Ｋデルタ活性＜５００ｎＭ
Ｄ  ５００＜ＰＩ３Ｋデルタ活性＜１５００ｎＭ
2013540746.tif 000074
2013540746.tif 000075
2013540746.tif 000076
【０１６５】
阻害の可逆性
酵素阻害の可逆性は、酵素-阻害剤複合体を飽和ＡＴＰ中で希釈後に残留酵素活性を測定することによってＰＩ３Ｋデルタについて評価する。ＰＩ３Ｋデルタ(２μＭ)および式Ｉの化合物(２μＭ)を３０分間周囲温度にてインキュベートすることによって、阻害剤複合体が形成された。ＥＩ複合体を次いで緩衝液中に連続希釈し、平衡に到達させる。ＥＩ複合体の定量的阻害(約７５％)は、緩衝液中に希釈することなく酵素活性を測定することによって見出される。各希釈の５μＬ試料を次いで３８４ウェル低容積培地結合白色プレートに移し、次いで基質の５μＬアリコート(４０μＭのＰＩＰ２)および１ｍＭ  ＡＴＰをプレートに添加する。反応のインキュベーション(５〜６０分)後、ＡＤＰ-Ｇｌｏ試薬＃１の１０μＬアリコートを添加し、４０分間インキュベートする。最後に、１０μＬのＡＤＰ-Ｇｌｏ試薬＃２をプレートに添加し、６０分のインキュベーション後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーで反応を読み取った。
【０１６６】
キナーゼ阻害の機序
表１で記載される式Ｉの化合物は、結合の可逆性、阻害の種類、およびＫｉ値について特徴付けられる。ＡＴＰ変化の研究は、増加するＡＴＰ濃度を用いてＰＩ３Ｋデルタに対する化合物ＡのＩＣ５０値を測定することによって実施する。アッセイは、２μＬのＰＩ３Ｋデルタを０．１μＬの化合物と３８４ウェル低容積白色培地結合プレート中で混合することによって実施する。１５分のインキュベーション後、２μＬの基質(ＰＩＰ２)および様々な濃度(１５００、１０００、５００、２５０、１μＭ最終)のＡＴＰをプレートに添加する。キナーゼ反応のインキュベーション(１５〜１２０分)後、４μＬのＡＤＰ-Ｇｌｏ(Ｐｒｏｍｅｇａ)試薬＃１を全プレートに添加し、４０分間インキュベートする。最後に、８μＬのＡＤＰ-Ｇｌｏ試薬＃２を全プレートに添加し、６０分間インキュベートし、次いでＥｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーを用いてプレートを読み取る。結果として得られたＩＣ５０値をＡＴＰ濃度の関数としてプロットし、次式を用いてＫｉ値を導く。
式２  ＩＣ５０＝Ｋｉ／ＫＭ[ＡＴＰ]＋Ｋｉ＋[Ｅ]／２
(式中、[Ｅ]は酵素濃度を表す)
【０１６７】
ＡＴＰのＫＭ値の測定
前述のＡＤＰ-ＧＬＯアッセイフォーマットを用いてＡＴＰのＫＭ値を測定する。ＡＴＰのＫＭは、一定ＰＩＰ２濃度(５０μＭ)でＡＴＰ濃度を変える(１５〜１６００μＭ)ことによって誘導される。
【０１６８】
実施例２．細胞アッセイ
抗ＩｇＭ刺激ラージ細胞における内因性ＡＫＴＴ３０８リン酸化ＥＬＩＳＡアッセイ
ラージ細胞(ＡＴＣＣ，  ＣＣＬ-８６)を、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，３０−００２−ＣＩ)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ、３０−２００１)中９６ウェルプレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３９６０)上に１×１０６細胞／ウェルで播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中試験化合物の連続希釈を細胞に添加し、９０分間インキュベートする。細胞を０．２５μｇ／ｍＬの抗ＩｇＭ(Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  ９０２３−０１)で３０分間刺激する。最小シグナルウェルは、抗ＩｇＭ刺激なしに０．３％ＤＭＳＯで処理された細胞である；最大シグナルウェルは、抗ＩｇＭ刺激をした０．３％ＤＭＳＯ中である。刺激後、細胞を２９０×ｇで４分間沈降させ、１２０μＬの冷溶解緩衝液(５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；プロテアーゼ阻害剤カクテル(Ｒｏｃｈｅ，  １１６９７４９８００１)およびＰｈｏｓＳＴＯＰ(Ｒｏｃｈｅ，  ０４９０６８３７００１))で直ちに溶解させる。ホスホ−ＡＫＴＴ３０８および全ＡＫＴを検出するために、市販のＥＬＩＳＡキットを使用する(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＫＨＯ０２０１およびＫＨＯ０１０１)。１００または１０μＬの細胞溶解物をそれぞれホスホ−ＡＫＴＴ３０８または全ＡＫＴプレートに移す。さらなる９０μＬの溶解緩衝液を全ＡＫＴプレートに添加する。プレートを一晩４℃でインキュベートし、２００μＬの製造業者から提供されたｉｓｈ緩衝液(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＷＢ０１)で４回洗浄する。プレートを１００μＬの検出抗体溶液で１．５時間インキュベートする。プレートを２００μＬのｉｓｈ緩衝液で４回ｉｓｈし、次いで対応する緩衝液を用いて二次抗体とともに１時間インキュベートする。プレートを前述のようにｉｓｈし、続いて１００μＬ／ウェルの安定化色素原溶液を２０分間添加する。１００μＬの停止溶液の添加によって反応を停止させる。分光光度計(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ)を用いて４５０ｎｍの波長での吸光度を測定する。ホスホ−ＡＫＴＴ３０８ＯＤ値を全ＡＫＴ  ＯＤ値で割ることによって、ウェル内正規化を行う。次いで、化合物で処理した試料の値を前述の最小および最大シグナル状態ウェルの平均と比較することによって、ＩＣ５０値を推定する。
【０１６９】
抗ＩｇＭ刺激ラージ細胞のウェスタンブロットプロファイリング分析
１×１０７ラージ細胞(ＡＴＣＣ，  ＣＣＬ−８６)を１４ｍＬの丸底試験管中、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ、１００８２)、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。０．３％のＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中試験化合物の連続希釈を細胞に添加し、９０分間インキュベートし、続いて０．２５μｇ／ｍＬの抗ＩｇＭ(Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，，  ９０２３−０１)刺激を３０分間おこなう。刺激後、細胞を２９０×ｇで４分間沈降させ、冷リン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；  Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２１−０３０−ＣＶ)で１回洗浄し、直ちに、１２０μＬの冷溶解緩衝液(５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００；１ｍＭ  ＥＤＴＡ；プロテアーゼ阻害剤カクテル(Ｒｏｃｈｅ，，  １１６９７４９８００１)；およびＰｈｏｓＳＴＯＰ(Ｒｏｃｈｅ，  ０４９０６８３７００１))で３０分間溶解させる。溶解物を集め、１７，８００×ｇで１５分間遠心分離することによって清澄化する。タンパク質濃度をＢＣＡ法によって測定する(Ｐｉｅｒｃｅ，  ２３２２７)。溶解物をＮｕＰａｇｅ  ＬＤＳ試料緩衝液(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＮＰ０００７)および還元剤(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＮＰ０００４)と混合し、次いで７０℃で１０分間加熱する。２６μｇのタンパク質をＮｕＰａｇｅ４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＮＰ０３２３)上にロードする。タンパク質をニトロセルロース膜(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＬＣ２００１)に移し、１時間Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングｇ緩衝液(Ｌｉ−Ｃｏｒ，  ９２７−４００００)中でブロックし、そして４℃で一晩、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液中で希釈された以下の抗体とともにインキュベートする：抗ホスホ−ＡＫＴＴ３０８(１：５００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２９６５)、抗ホスホ−ＡＫＴＳ４７３(１：１，０００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ４０６０)、抗−ＡＫＴ(１：２，０００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＭＡＢ２０５５)、抗−ホスホ−ＰＲＡＳ４０Ｔ２４６(１：５００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２６４０)、抗−ホスホ−ＧＳＫ３βＳ９(１：５００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ９３３６)、抗−ホスホ−Ｓ６Ｓ２４０／２４４(１：５００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２２１５)、抗−Ｓ６(１：１，０００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２２１７)、抗−ＧＡＰＤＨ(１：１００，０００、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｃ，  ＭＡＢ６Ｃ５)。膜を４回、それぞれ１０分間ＴＢＳ−Ｔ緩衝液(５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．２；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０)で洗浄し、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液中、ヤギ抗マウス−ＩＲＤｙｅ６８０(Ｌｉ−Ｃｏｒ，  ９２６−３２２２０)およびヤギ抗−ウサギ−ＩＲＤｙｅ８００(Ｌｉ−Ｃｏｒ、９２��−３２２１１)二次抗体で６０分間、室温にてブロットする。膜を４回、それぞれ１０分間ＴＢＳ−Ｔ緩衝液で洗浄し、ＰＢＳで２回リンスする。Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ(Ｌｉ−Ｃｏｒ)を用いて膜をスキャンし、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ)を用いて各バンドのシグナル強度を定量化する。ＩＣ５０値を、ビヒクル(ＤＭＳＯ)対照と比較した化合物治療のシグナルに基づいて計算する。
【０１７０】
ヒト末梢血Ｂリンパ球における抗ＩｇＭで誘発されたＡＫＴリン酸化のウェスタンブロット分析
ヒト初代Ｂリンパ球(Ｂ細胞、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ０１０)を、６×１０５細胞／ウェルで、４８ウェルクラスタープレート(Ｎｕｎｃ  １５０６８７)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭ  β−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，  ２１９８５−０２３)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ、３０−２００１)中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中の試験化合物の連続希釈を細胞に添加し、２時間インキュベートし、続いて１０μｇ／ｍＬ抗ＩｇＭ(Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  ９０２３−０１)刺激を５分間おこなう。刺激後、細胞を２９０×ｇで４分間遠心分離し、冷リン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２１−０３０−ＣＶ)で１回洗浄し、そして直ちに４０μＬの冷溶解緩衝液(５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０ｍＭ  ＮａＦ、１ｍＭピロリン酸ナトリウム、１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、２ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル、１０μｇ／ｍＬアプロチニン、５μｇ／ｍＬロイペプチン、および５μｇ／ｍＬペプスタチンＡ)で３０分間溶解させる。溶解物を集め、１７，８００×ｇで１５分間遠心分離することによって清澄化する。溶解物をＮｕＰａｇｅ  ＬＤＳ試料緩衝液(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＮＰ０００７)および還元剤(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＮＰ０００４)と混合し、次いで７０℃で１０分間加熱する。試料をＮｕＰａｇｅ  ４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＮＰ０３２３)上にロードする。タンパク質をニトロセルロース膜(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＬＣ２００１)へ移し、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液(Ｌｉ−Ｃｏｒ，  ９２７−４００００)中で１時間ブロックし、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液中で希釈された以下の抗体とともに４℃で一晩インキュベートする：抗−ホスホ−ＡＫＴＴ３０８(１：２００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２９６５)、抗−ホスホ−ＡＫＴＳ４７３(１：２００、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ４０６０)、抗−ＡＫＴ(１：１，０００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＭＡＢ２０５５)、および抗−ＧＡＰＤＨ(１：１００，０００、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｃ，  ＭＡＢ６Ｃ５)。膜を１０分間、それぞれＴＢＳ−Ｔ緩衝液(５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．２；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０)で４回洗浄し、ヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ６８０(Ｌｉ−Ｃｏｒ、９２６−３２２２０)およびヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ８００(Ｌｉ−Ｃｏｒ、９２６−３２２１１)二次抗体で０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液中、６０分間室温でブロットする。膜を４回、それぞれ１０分間ＴＢＳ−Ｔ緩衝液で洗浄し、ＰＢＳで２回リンスする。Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ(Ｌｉ−Ｃｏｒ)を用いて膜をスキャンし、各バンドのシグナル強度を、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ)を用いて定量化する。ＩＣ５０値を、ビヒクル(ＤＭＳＯ)対照と比較した化合物治療のシグナルに基づいて計算する。
【０１７１】
抗ＩｇＭ刺激ラージ細胞ＴＮＦ−アルファサイトカイン放出アッセイ
ラージ細胞(ＡＴＣＣ，  ＣＣＬ−８６)を、２×１０５細胞／ウェルで９６ウェル細胞培養クラスター丸底プレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３７９０)中、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ、１００８２)と１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ、３０−００２−ＣＩ)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ、３０−２００１)中に播種する。細胞を、連続希釈された化合物で２時間３７℃にて５％ＣＯ２中で処理する。細胞を１μｇ／ｍＬ抗−ＩｇＭ抗体(Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  ９０２３−０１)で４時間刺激する。最小シグナルウェルを市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)で処理し、最大シグナルウェルは０．３％ＤＭＳＯ中であり、どちらも抗ＩｇＭで刺激する。刺激されていない細胞も負の対照として含める。処理後、培養上清を、９６ウェル０．２μｍＰＶＤＦフィルタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３５０４)を用いてろ過する。ろ過された条件培地をＭＳＤプレート(Ｋ１５１ＢＨＢ−２)に添加し、３時間室温でシェーカー(６００ｒｐｍ)上で撹拌しながらインキュベートする。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ、１６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)で３回洗浄する。検出抗体溶液(Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５１ＢＨＢ−２)を各ウェルに添加し、室温で２時間インキュベートする。プレートを次いで３回、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ，  １６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)で３回洗浄する。Ｒｅａｄ緩衝液Ｔ(Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５１ＢＨＢ−２)を各ウェルに添加し、次いでプレートをＭＳＤ  ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒで分析する。ＩＣ５０値を、対応する最大および最小シグナルウェルの値と比較した化合物処理をした細胞のシグナルに基づいて計算する。
【０１７２】
抗ＩｇＭ刺激ヒト末梢血Ｂリンパ球サイトカイン放出アッセイ
ヒト初代末梢血Ｂ細胞(負に選択、ＣＤ１９＋、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ０１０)を１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタークラスタープレート(Ｃｏｓｔａｒ，  ３７９０)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭ  β−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，２１９８５−０２３３)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中化合物の連続希釈を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。各化合物濃度について二連のウェルを使用する。最小シグナルウェルは３０μＭ  ＰＩ−１０３、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤を受容する。全ウェル中の細胞を次いで抗ＩｇＭ(Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，  １０９−００６−１２９)でさらに４時間３７℃、５％ＣＯ２で刺激する。細胞を次いで９６ウェルフィルタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，  ３５０４)上に移し、そして真空ろ過によって上清を集める。上清をアッセイの時まで−８０℃で凍結する。製造業者の指示書にしたがって、上清は、ヒト炎症誘発性９−Ｐｌｅｘ組織培養キット(ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−アルファ；Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５００７Ｂ−１)を用いてサイトカインレベルについて分析する。簡単に説明すると、上清をあらかじめブロックされたアッセイプレート上に添加し、室温にて２時間６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。検出抗体を次いで上清上に添加し、室温にてさらに２時間、６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ，  １６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)で３回洗浄し、そして電気化学発光を、ＭＳＤ  ＳＩ２４００プレートリーダーを用いて検出する。ＩＣ５０値は、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した最小シグナルを差し引いた、化合物処理のサイトカイン濃度計算値に基づいて計算される。
【０１７３】
ＣｐＧ  ＯＤＮ刺激ヒト末梢血Ｂリンパ球サイトカイン放出アッセイ
ヒト初代末梢血Ｂ細胞(負に選択、ＣＤ１９＋、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ０１０)を１×１０５細胞／ウェルで、９６ウェルマイクロタイタークラスタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３７９０)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭベータ−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，  ２１９８５−０２３)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中化合物の連続希釈を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。各化合物濃度について二連のウェルを使用する。最小シグナルウェルは、３０μＭ市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤を受容する。全ウェル中の細胞を次いでＣｐＧ  ＯＤＮ(Ｉｍｇｅｎｅｘ，  ＩＭＧ−２２０９Ｈ)でさらに４時間、３７℃、５％ＣＯ２にて刺激する。細胞を次いで９６ウェルフィルタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｓｔａｒ  ３５０４)上に移し、そして真空ろ過によって上清を集める。上清をアッセイの時まで−８０℃で凍結する。製造業者の指示書にしたがって、上清を、ヒト炎症誘発性９−Ｐｌｅｘ組織培養キット(ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−アルファ；Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５００７Ｂ−１)を用いてサイトカインレベルについて分析する。簡単に説明すると、上清をあらかじめブロックされたアッセイプレート上に添加し、室温にて２時間６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。検出抗体を次いで上清上に添加し、室温にてさらに２時間、６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ、１６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)で３回洗浄し、そして電気化学発光を、ＭＳＤ  ＳＩ２４００プレートリーダーを用いて検出する。ＩＣ５０値は、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した最小シグナルを差し引いた化合物処理のサイトカイン濃度の計算値に基づいて計算される。
【０１７４】
抗ＣＤ３媒介性ヒト末梢血Ｔ−リンパ球サイトカイン放出アッセイ
健常ヒトドナーからのヒト末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を、ジアトリアゾール酸ナトリウムポリスクロース勾配(Ａｃｃｕｓｐｉｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７，  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ａ７０５４)を用いて単離する。細胞を次いで、製造業者の指示書にしたがい、ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞富化キット(Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  １９０５１)を用いて負の選択をおこなう。細胞は９５％を超える純度である。ＣＤ３＋Ｔ細胞を、１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタークラスタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３７９０)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ、３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭベータ−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，  ２１９８５−０２３)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中化合物の連続希釈を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。各化合物濃度について二連のウェルを使用する。最小シグナルウェルは３０μＭの市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤を受容する。全ウェル中の細胞を次いで抗ヒトＣＤ３でコーティングされた９６ウェルマイクロタイタープレート(ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ３５４７２５)上にさらに４時間、３７℃、５％ＣＯ２で播種する。細胞を次いで９６ウェルフィルタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３５０４)上に移し、そして真空ろ過によって上清を集める。上清をアッセイの時まで−８０℃で凍結する。製造業者の指示書にしたがって、上清を、ヒトＴＨ１／ＴＨ２  １０−Ｐｌｅｘ組織培養キット(ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＴＮＦ−アルファ；Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５０１０Ｂ−１)を用いてサイトカインレベルについて分析する。簡単に説明すると、上清をあらかじめブロックされたアッセイプレート上に添加し、室温にて２時間６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。検出抗体を次いで上清上に添加し、室温にてさらに２時間、６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ、１６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)でプレートを３回洗浄し、ＭＳＤ  ＳＩ２４００プレートリーダーを用いて電気化学発光を検出する。ＩＣ５０値を、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した最小シグナルを差し引いた化合物処理のサイトカイン濃度計算値に基づいて計算する。
【０１７５】
ＬＰＳ刺激末梢血単核細胞サイトカイン放出アッセイ
ヒト初代末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ００１)を、２×１０５細胞／ウェルで、９６ウェルマイクロタイタークラスタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３７９０)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭβ−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，  ２１９８５−０２３)を含有するＲＰＭＩ１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度中化合物の連続希釈を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。各化合物濃度について二連のウェルを使用する。最小シグナルウェルは３０μＭの市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤を受容する。全ウェル中の細胞を次いでリポポリサッカライド(ＬＰＳ、Ｓｉｇｍａ，  Ｌ４３９１)でさらに６時間３７℃、５％ＣＯ２で刺激する。細胞を次いで９６ウェルフィルタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３５０４)上に移し、そして真空ろ過によって上清を集める。上清をアッセイの時まで−８０℃で凍結する。製造業者の指示書にしたがって、上清を、ヒト炎症誘発性９−Ｐｌｅｘ組織培養キット(ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−アルファ；Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  Ｋ１５００７Ｂ−１)を用いてサイトカインレベルについて分析する。簡単に説明すると、希釈していないか、または１：２に希釈した上清を、あらかじめブロックされたアッセイプレート上に添加し、室温にて２時間６００ｒｐｍで激しく振とうしながらインキュベートする。検出抗体を次いで上清上に添加し、６００ｒｐｍで激しく振とうしながらさらに２時間室温でインキュベートする。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(Ｂｉｏ−Ｒａｄ，  １６１−０７８１)を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)でプレートを３回洗浄し、ＭＳＤ  ＳＩ２４００プレートリーダーを用いて電気化学発光を検出する。ＩＣ５０値は、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した最小シグナルを差し引いた化合物処理のサイトカイン濃度の計算値に基づいて計算する。
【０１７６】
初代ヒトＢおよびＴ−リンパ球ＢｒｄＵ増殖アッセイ
ヒト初代Ｂリンパ球(Ｂ細胞、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ０１０)を１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタークラスタープレート(Ｃｏｒｎｉｎｇ，  Ｃｏｓｔａｒ  ３７９０)上に播種し、ヒト初代Ｔ−リンパ球(Ｔ細胞、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，  ＰＢ００９−１)を２×１０５細胞／ウェルにて抗ヒトＣＤ３でコーティングされた９６ウェルマイクロタイタープレート(ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ３５４７２５)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)、１％Ｌ−グルタミン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ２５−０１５−ＣＩ)、および５０μＭベータ−メルカプトエタノール(Ｇｉｂｃｏ，  ２１９８５−０２３)を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地(ＡＴＣＣ，  ３０−２００１)中に播種する。ヒト初代Ｂ細胞を、２５μｇ／ｍＬの最終濃度の抗ヒトＩｇＭ(Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，  １０９−００６−１２９)または２μｇ／ｍＬの最終濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ(Ｉｍｇｅｎｅｘ，  ＩＭＧ−２２０９Ｈ)のいずれかで刺激する。ＢおよびＴ細胞の両方を培地(０．３％ＤＭＳＯの最終濃度を含む)中化合物の連続希釈で刺激した直後に処理する。三連ウェルをＢ細胞中の各化合物濃度について使用し、二連ウェルをＴ細胞中の各化合物濃度について使用する。対照ウェルは０．３％ＤＭＳＯ培地を受容する。最小シグナルウェルは、３０μＭの市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤を受容する。培養物を３７℃、５％ＣＯ２で７２時間(Ｂ細胞)または９６時間(Ｔ細胞)インキュベートする。細胞を分析するために、それらを２０μＭのブロモデオキシウリジン(ＢｒｄＵ、Ｓｉｇｍａ，  Ｂ５００２−５００ＭＧ)で標識し、９６ウェルフィルタープレート(Ｃｏｓｔａｒ  ３５０４)に移し、次いでＦｉｘＤｅｎａｔ溶液(７０％エタノール＋０．１Ｍ  ＮａＯＨ)で固定する。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ(１：２，０００；Ｒｏｃｈｅ，  １１５８５８６０００１)複合体を細胞に添加し、その後、プレートを３回、リン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ；１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、６．５ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．７ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４)で洗浄する。１部の過酸化物(Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ３７０７５Ａ)および１部のルミノール(Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ３７０７５Ｂ)から作製された基質溶液を添加し、そしてプレートをＶｉｃｔｏｒ  Ｗａｌｌａｃ照度計を用いて発光(０．１ｓ)について読み取る。ＩＣ５０値を、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した最小シグナルを差し引いた化合物処理の細胞増殖に基づいて計算する。
【０１７７】
ＭＣ／９マウス肥満細胞β−ヘキソサミニダーゼ脱顆粒アッセイ
ＭＣ／９細胞(ＡＴＣＣ，  ＣＲＬ−８３０６)を１×１０６細胞ｓ／ｍＬで組織培養フラスコ(Ｎｕｎｃ，  １４４９０３)上、１０％ＦＢＳ(熱不活化、Ｇｉｂｃｏ，  １００８２)、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、１０％  ラットＴ−ＳＴＩＭ(ＢＤ，  ３５４１１５)、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  ３０−００２−ＣＩ)を含有するＤＭＥＭ(Ｃｅｌｌｇｒｏ，  １０−０１３−ＣＶ)中に播種する。細胞を２００ｎｇ／ｍＬの抗ＤＮＰ  ＩｇＥ(Ｓｉｇｍａ，  Ｄ８４０６)とともに一晩、３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートする。細胞を、タイロード緩衝液(１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５．６ｍＭ  グルコース、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、および０．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ；ｐＨ７．３)で２回洗浄し、２×１０５細胞／ウェルで９６ウェルマイクロタイタープレート(Ｃｏｓｔａｒ，  ３９０４)中、７０μＬのタイロード緩衝液中に播種する。０．３％ＤＭＳＯ(ビヒクル)の最終濃度の３０μＬのタイロード緩衝液中連続希釈された試験化合物を細胞に添加し、７５分間インキュベートする。細胞を２００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＨＳＡ(Ｓｉｇｍａ，  Ａ６６６１)で４５分間刺激する。バックグラウンドウェルは、ＤＮＰ−ＨＳＡ刺激のない０．３％ＤＭＳＯ中細胞である。最小シグナルウェルを市販のＰＩ−１０３(ＣＡＳ  ３７１９３５−７４−９)、１０μＭ)で処理し、最大シグナルウェルは０．３％ＤＭＳＯ中であり、どちらもＤＮＰ−ＨＳＡで刺激する。ウェルごとの最終容積は１１０μＬである。刺激後、細胞を４００×ｇで４分間沈降させる。５０μＬの上清を慎重に集め、９６ウェルプレート(Ｎｕｎｃ，  ２６０８９５)に移し、クエン酸塩緩衝液(ｐＨ４．５)中、３７℃で２時間、７５μＬの１ｍＭ  ｐ−ニトロフェニルアセチル−Ｄ−グルコサミン(Ｓｉｇｍａ，  Ｎ９３７６)とともにインキュベートする。反応は、７５μＬの２Ｍ  ＮａＯＨを添加することによって停止させる。ウェルを、分光光度計(Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ)を用いて６３０ｎｍで修正して、４０５ｎｍの波長での吸光度について測定する。平均バックグラウンドウェル値を全ウェルから差し引く。ＩＣ５０値は、対応する最大および最小シグナルウェルの吸光度と比較した、化合物処理した細胞の吸光度に基づいて計算する。
【０１７８】
実施例３．薬力学的異種移植腫瘍モデル
５〜８週齢および約２０〜２５ｇの体重のメスおよびオス胸腺欠損ヌードマウス(ＮＣｒ)を以下のモデルで使用する。研究の開始前に、動物を最低４８時間順応させる。これらの研究中に、動物に食物および水を任意に提供し、７０〜７５°Ｆおよび６０％相対湿度で調節した室内で飼育する。１２時間の明および１２時間の暗サイクルを自動タイマーで維持する。全動物を化合物で誘発される死または腫瘍に関連する死について毎日調査する。
【０１７９】
前記モデルにおける腫瘍重量(ＴＷ)は、垂直直径をキャリパーで測定し、次式：
腫瘍重量(ｍｇ)＝[腫瘍容積＝長さ(ｍｍ)×幅２(ｍｍ２)]／２
を用いることによって決定する。
これらのデータを記録し、腫瘍重量対移植後の日数の折れ線グラフにプロットし、腫瘍成長速度の指標としてグラフで表す。腫瘍成長の阻害パーセント(ＴＧＩ)を次式で決定する：
【数１】
2013540746.tif 000077
(式中：
Ｘ０＝グループ化当日の全腫瘍の平均ＴＷ
Ｘｆ＝ｆ日の治療群のＴＷ
Ｙｆ＝ｆ日のビヒクル対照群のＴＷ)。
腫瘍がそれらの出発サイズ以下に退縮するならば、腫瘍退縮パーセントは次式で決定される：
【数２】
2013540746.tif 000078
腫瘍サイズを各腫瘍について個々に計算して、各実験群の平均±ＳＥＭ値を得る。統計的有意差は、両側スチューデントｔ検定を用いて決定される(有意性はＰ＜０．０５として定義される)。
【０１８０】
明確さと理解のために、前述の発明を説明および例のために少し詳しく記載した。本発明を様々な具体的実施形態および技術に関して記載した。しかしながら、本発明の精神および範囲内にありながら多くの変形および修飾をなすことができるということを理解すべきである。変更および修飾を添付の特許請求の範囲内で実施できることは、当業者には明らかであろう。したがって、上記が例示であって、拘束することを意図しないことは理解されるべきである。本発明の範囲は、したがって、上記に関してではなく、以下の添付の特許請求の範囲と、そのような請求項が権利を与えられる同等物の全範囲に関連して決定されるべきである。本出願で引用される全ての特許、特許出願および刊行物は、個々の特許、特許出願または刊行物がそのように個々に示されているのと同じ範囲まで、あらゆる目的に関してそれらの全体が参照することによって本明細書中に組み込まれる。
【国際調査報告】
2013540746.tif 000099
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