(57)【要約】本発明は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を提供する。本発明はまた、上記結晶塩を含む薬学的組成物、上記結晶塩を調製するためのプロセスおよび中間体、ならびに疾患を処置するために上記結晶塩を使用する方法も提供する。本発明のなお別の態様は、医薬の製造のため、特に、疼痛性障害、抑鬱性障害、情動障害、注意欠陥多動性障害、認知障害、腹圧性尿失禁の処置に、哺乳動物におけるセロトニン再取込みの阻害に、または哺乳動物におけるノルエピネフェリン再取込みの阻害に有用な医薬の製造のための本発明の結晶性化合物の使用に関する。2013532170.tif 000011
2013532170.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
８．７８±０．２０、１５．２６±０．２０、１９．０８±０．２０、２０．３６±０．２０、２１．５０±０．２０、および２５．４６±０．２０の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンと塩酸の１：１のモル比の結晶塩。
【請求項２】
２６．４２±０．２０、３０．６５±０．２０、２８．９１±０．２０、２４．７７±０．２０、１４．４２±０．２０、１６．７４±０．２０、および５．２０±０．２０より選択される２θ値に１つ以上のさらなる回折ピークを有することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ピーク位置が図１に示すパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項１〜２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４】
約１２８℃の融点を有する示差走査熱量測定法のトレースを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
図２に示すトレースと実質的に一致する示差走査熱量測定法のトレースを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
薬学的に許容され得る担体と請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物を含む薬学的組成物。
【請求項７】
アルツハイマー病治療薬、抗痙攣薬、抗鬱薬、パーキンソン病治療薬、セロトニン−ノルエピネフェリン二重再取込み阻害薬、非ステロイド系抗炎症薬、ノルエピネフェリン再取込み阻害薬、オピオイド作動薬、オピオイド拮抗薬、選択的セロトニン再取込み阻害薬、ナトリウムチャンネル遮断薬、交感神経遮断薬、およびこれらの組み合わせより選択される第２の治療薬をさらに含む、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
以下の工程を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物を調製するためのプロセス：
（ａ）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの塩酸塩を極性溶媒で処理して第１の組成物を形成させるか、または（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルを不活性希釈剤中で塩酸で脱保護して第１の組成物を形成させる工程；および
（ｂ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させる工程であって、前記第２の組成物から請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物が形成される、工程。
【請求項９】
工程（ｂ）は以下を含む、請求項８に記載のプロセス：
（ｉ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させる工程；
（ｉｉ）必要に応じて冷却して結晶化させる工程；および
（ｉｉｉ）得られた固体を単離して前記化合物を得る工程。
【請求項１０】
前記極性溶媒がイソプロパノールである、請求項８〜９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１１】
脱保護が３ＭのＨＣｌを用いて行われ、前記不活性希釈剤がシクロペンチルメチルエーテルである、請求項８〜９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記非極性溶媒がジイソプロピルエーテルである、請求項８〜９のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項１３】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物を調製する工程を含む、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンを精製するためのプロセス。
【請求項１４】
治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
疼痛性障害、抑鬱性障害、情動障害、注意欠陥多動性障害、認知障害、腹圧性尿失禁、慢性疲労症候群、肥満症、または閉経に伴う血管運動症状を処置するための、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記疼痛性障害が、神経因性疼痛、線維筋痛症、慢性腰痛、および変形性関節症より選択される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬。
【請求項１８】
医薬の製造のための請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
前記医薬が、疼痛性障害、抑鬱性障害、情動障害、注意欠陥多動性障害、認知障害、腹圧性尿失禁、慢性疲労症候群、肥満症、または閉経に伴う血管運動症状の処置のためのものである、請求項１８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−フェノキシメチルピロリジン化合物の新規の結晶形態に関する。これは、セロトニン（５−ＨＴ）およびノルエピネフェリン（ＮＥ）再取込み阻害薬としての活性を有する。本発明はまた、結晶性化合物を含有しているか、またはそのような化合物から調製された薬学的組成物、結晶性化合物を調製するためのプロセスおよび中間体、ならびに疼痛性障害（例えば、神経因性疼痛）および他の病気を処置するためにそのような化合物を使用する方法にも関係する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛は、実際のまたは潜在的な組織の損傷と関係があるか、あるいはそのような損傷に関して記載されている不快な感覚的および感情的経験である（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（ＩＡＳＰ），Ｐａｉｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ）。慢性痛は、実際の疼痛よりも長く、または損傷から治癒までの予測時間よりも長く持続する（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｉｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．「Ｐａｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｃａｒｅ  Ｓｅｔｔｉｎｇ．」２００６：１５）。神経因性疼痛は、一次病巣もしくは神経系の機能障害により開始するかまたは起こる疼痛である。末梢神経因性疼痛は、その病巣または機能障害が末梢神経系に影響を及ぼす場合に起こり、そして中枢神経因性疼痛は、その病巣または機能障害が中枢神経系に影響を及ぼす場合に起こる（ＩＡＳＰ）。
【０００３】
例えば、三環系抗鬱薬、セロトニンおよびノルエピネフェリン再取込み阻害薬、カルシウムチャンネルリガンド（例えば、ガバペンチンおよびプレガバリン）、局所リドカイン、およびオピオイド作動薬（例えば、モルヒネ、オキシコドン、メタドン、レボルファノール、およびトラマドール）を含むいくつかのタイプの治療薬が、現在、神経因性疼痛を処置するために使用されている。
【０００４】
Ｓｔａｎｇｅｌａｎｄらの２０１０年７月１２日に提出された同一出願人による米国特許出願番号第１２／８３４，１２８号に記載されている（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンは、セロトニントランスポーターおよびノルエピネフェリントランスポーターに結合することにより、セロトニンとノルエピネフェリンの両方の再取り込みを阻害する。長期保存用の化合物を調製する場合と、薬学的組成物および処方物を調製する場合には、吸湿性でも潮解性でもない結晶形態の治療薬を有することが望ましい場合が多くある。比較的高い融点（すなわち、約１２８℃）を持つ結晶形態を有することもまた有利であり、これにより、有意に分解させることなくその材料を処理する、例えば、微粉化することができる。したがって、許容され得るレベルの吸湿性と比較的高い融点を持つ、安定な非潮解性形態の（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンが必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩に関する。１つの実施形態においては、本発明は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンと塩酸の１：１のモル比の結晶塩に関する。
【０００６】
本発明の１つの態様は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を調製するためのプロセスに関する。１つの実施形態においては、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を調製するためのプロセスに以下の工程が含まれる：（ａ）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの塩酸塩を極性溶媒で処理して第１の組成物を形成させるか、または（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルを不活性希釈剤中で塩酸で脱保護して第１の組成物を形成させる工程；および（ｂ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させる工程（この第２の組成物から本発明の結晶性塩酸塩が形成される）。１つの特定の実施形態においては、工程（ｂ）に：（ｉ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させる工程；（ｉｉ）状況に応じて冷却して結晶化させる工程；および（ｉｉｉ）得られた固体を単離して本発明の結晶性塩酸塩を得る工程が含まれる。
【０００７】
本発明の別の態様は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンを精製するためのプロセスに関する。１つの実施形態においては、このプロセスに、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を形成させる工程が含まれる。本発明はまた、本明細書中に記載されるプロセスにより調製された生成物にも関する。
【０００８】
本発明の１つの態様は、薬学的に許容され得る担体と（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を含む薬学的組成物に関する。そのような組成物には、状況に応じて他の活性薬剤（例えば、アルツハイマー病治療薬、抗痙攣薬、抗鬱薬、パーキンソン病治療薬、セロトニン−ノルエピネフェリン二重再取込み阻害薬、非ステロイド系抗炎症薬、ノルエピネフェリン再取込み阻害薬、オピオイド作動薬、オピオイド拮抗薬、選択的セロトニン再取込み阻害薬、ナトリウムチャンネル遮断薬、交感神経遮断薬、およびそれらの組み合わせ）が含まれ得る。したがって、本発明のなお別の態様においては、薬学的組成物に、本発明の結晶塩、第２の活性薬剤、および薬学的に許容され得る担体が含まれる。本発明の別の態様は、本発明の結晶塩と第２の活性薬剤を含む活性薬剤の組み合わせに関する。本発明の結晶塩は、さらなる薬剤（単数または複数）と一緒に処方することができ、また、別々に処方することもできる。別々に処方される場合は、薬学的に許容され得る担体がさらなる薬剤（単数または複数）とともに含まれ得る。したがって、本発明のなお別の態様は薬学的組成物の組み合わせに関し、この組み合わせには、本発明の結晶塩と第１の薬学的に許容され得る担体を含む第１の薬学的組成物；および第２の活性薬剤と第２の薬学的に許容され得る担体を含む第２の薬学的組成物が含まれる。本発明はまた、そのような薬学的組成物を含むキット（例えば、第１の薬学的組成物と第２の薬学的組成物が別の薬学的組成物である場合）に関する。
【０００９】
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンは、セロトニン再取込み阻害活性とノルエピネフェリン再取込み阻害活性を持つ。この化合物の結晶性塩酸塩は同じ活性を有すると予想され、これにより、セロトニンおよび／もしくはノルエピネフェリントランスポーターの阻害により処置される疾患または障害に罹患している患者の処置用の治療薬としても同じ有用性を持つと予想される。したがって、本発明の１つの態様は、疼痛性障害（例えば、神経因性疼痛または線維筋痛症）；抑鬱性障害（例えば、大鬱病）；情動障害（例えば、不安障害）；注意欠陥多動性障害；認知障害（例えば、認知症）；腹圧性尿失禁；慢性疲労症候群；肥満症；または閉経に伴う血管運動症状を処置する方法に関し、この方法には、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。
【００１０】
本発明のなお別の態様は、医薬の製造のため、特に、疼痛性障害、抑鬱性障害、情動障害、注意欠陥多動性障害、認知障害、腹圧性尿失禁の処置に、哺乳動物におけるセロトニン再取込みの阻害に、または哺乳動物におけるノルエピネフェリン再取込みの阻害に有用な医薬の製造のための本発明の結晶性化合物の使用に関する。本発明の他の態様および実施形態を本明細書中に開示する。
【００１１】
本発明の様々な態様を、添付の図面を参照して説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
【図２】図２は、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）サーモグラフを示す。
【図３】図３は、熱重量分析（ＴＧＡ）トレースを示す。
【図４】図４は、動的水分吸着性（ＤＭＳ）プロフィールを示す。
【図５】図５は、顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩を提供する。驚くべきことに、この結晶性化合物は、大気中の水分に曝された場合にもなお、潮解性ではないことが明らかにされている。さらに、この結晶性化合物は、許容され得るレベルの吸湿性と高い融点を有する。
【００１４】
（定義）
本発明の化合物、組成物、方法、およびプロセスについて記載する場合は、以下の用語は、特に明記されない限りは以下の意味を有する。さらに、本明細書中で使用する場合は、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、使用状況が他の場所で明確に示されていない限りは、対応する複数形も含まれる。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は包含的であるように意図され、列挙される要素以外のさらなる要素が存在し得ることを意味する。本明細書中で使用する成分の量、分子量のような特性、反応条件などを表わしている全ての数は、特に明記されない限りは、用語「約」によって全ての場合において修飾されていると理解されるものとする。したがって、本明細書中に示す数はおおよそであり、これらは本発明により得ようとする所望する特性に応じて様々であり得る。少なくとも、そして特許請求の範囲の均等論の適用を限定しようとするものではなく、それぞれの数は、報告される有効数字を参照して、通常の丸めの技術を適用することにより少なくとも解釈されるべきである。
【００１５】
本明細書中で使用される場合は、表現「式の（ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍｕｌａ）」、「式を有する（ｈａｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍｕｌａ）」、または「構造を有する（ｈａｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」は、限定を意図しているものではなく、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が一般的に使用される方法と同じ方法で使用される。
【００１６】
本明細書中で使用される用語「融点」は、固体から液体への相変化に対応する温度遷移について最大の吸熱性熱流が示差走査熱量測定法により観察される温度を意味する。
【００１７】
用語「薬学的に許容され得る」は、本発明において使用される場合は、生物学的または別の意味で許容されないものではない材料を意味する。例えば、用語「薬学的に許容され得る担体」は、許容され得ない生物学的作用を引き起こすこと、または組成物の他の成分と許容され得ない方法で相互作用することなく組成物中に取り込ませることができ、患者に投与することができる材料を意味する。そのような薬学的に許容され得る材料は、典型的には、毒性試験および製造検査の必要な基準を満たし、これには米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により適切な不活性成分と確認されているそのような材料が含まれる。
【００１８】
用語「治療有効量」は、それを必要とする患者に投与された場合に処置を実現するために十分な量、すなわち、所望される治療効果を得るために必要な薬物の量を意味する。例えば、神経因性疼痛の処置についての治療有効量は、例えば、神経因性疼痛の症候を軽減、抑制、排除、もしくは予防するため、または神経因性疼痛の根本にある原因を処置するために必要な化合物の量である。一方、用語「有効量」は、所望される結果を得るために十分な量を意味し、所望される結果は必ずしも治療結果である必要はない。例えば、ノルエピネフェリントランスポーターを含むシステムを研究する場合は、「有効量」は、ノルエピネフェリンの再取込みを阻害するために必要な量であり得る。
【００１９】
本明細書中で使用される用語「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、患者（例えば、哺乳動物（特に、ヒト））において疾患または医学的症状（例えば、神経因性疼痛）を処置することまたはその処置を意味する。これには、以下の１つ以上が含まれる：（ａ）疾患または医学的症状が生じることを防ぐこと、すなわち、患者の予防的処置；（ｂ）疾患または医学的症状を寛解させること、すなわち、患者において疾患または医学的症状を排除するかまたは逆行を生じさせること；（ｃ）疾患または医学的症状を抑えること、すなわち、患者において疾患または医学的症状の発症を遅らせるかまたは停止させること；あるいは、（ｄ）患者において疾患または医学的症状の症候を緩和すること。例えば、用語「神経因性疼痛を処置すること」には、神経因性疼痛が起こることを防ぐこと、神経因性疼痛を寛解させること、神経因性疼痛を抑えること、および神経因性疼痛の症候を緩和することが含まれる。用語「患者」は、疾患の予防のために、または特定の疾患もしくは医学的症状について現在処置されている、処置あるいは疾患の予防を必要としている哺乳動物（例えば、ヒト）、ならびに本発明の化合物がその中で評価されるかまたはアッセイにおいて使用される試験被検体（例えば、動物モデル）を含むように意図される。
【００２０】
本明細書中で使用する全ての他の用語は、それらが属する分野の当業者により理解されているとおりのそれらの通常の意味を有するものとする。
【００２１】
本発明の結晶性化合物は、以下および実施例に記載するような容易に入手することができる出発材料から合成することができる。典型的な、または好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力など）が与えられている場合は、特に明記されない限り、他の処理条件を使用することもできることが理解されるものとする。具体的な処理条件（すなわち、結晶化温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力など）が与えられる場合でも、特に明記されない限りは、他の処理条件を使用することもできることが理解されるものとする。いくつかの場合には、反応または結晶化を室温で行い、実際の温度の測定は行わなかった。室温は、研究室環境下での周囲温度に一般的に伴う範囲内の温度を意味するととることができると理解され、典型的には、約２５℃〜約５０℃の範囲内であろう。他の場合には、反応または結晶化を室温で行い、その温度を実際に測定し、記録した。
【００２２】
一般的には、結晶化は適切な溶媒中で行われる。結晶化が完了すると、結晶性化合物を、沈殿、濃縮、遠心分離などのような任意の従来の手段により反応混合物から単離することができる。本発明の方法の中で記載するモル比は、当業者が利用できる様々な方法により容易に決定することができる。例えば、そのようなモル比は、１Ｈ  ＮＭＲにより容易に決定することができる。あるいは、元素分析およびＨＰＬＣ法を、モル比を決定するために使用することができる。
【００２３】
出発材料は、当該分野で周知の手順を使用して、商業的に入手することができる出発材料と試薬から容易に調製することができる。例を本明細書中の実施例の中で提供する。１つの実施形態においては、出発材料は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの塩酸塩であり、これを、求核芳香族置換反応（ＳＮＡｒ）、その後の塩酸での脱保護により調製する。例えば、この塩酸塩は、（Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１．０等量）と１−クロロ−４−フルオロベンゼン（３．０等量）を適切な溶媒中に溶解させ、続いて、水素化ナトリウム（ＮａＨ、１．５等量）を添加することにより調製することができる。これにより、ＢＯＣ保護された中間体を得、これを次に、ＥｔＯＨ中の１．２０ＭのＨＣｌで脱保護して、所望する塩酸塩を得ることができる。別の実施形態においては、出発材料は、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルであり、これを光延カップリング反応により調製する。例えば、上記エステルは、（Ｓ）−３−（（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１．０等量）、ｐ−クロロフェノール（２．０等量）、およびホスフィン触媒（例えば、トリフェニルホスフィン）（１．１等量）を適切な溶媒中に溶解させ、続いて、アゾジカルボン酸エステル（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピルまたはアゾジカルボン酸ジエチル）を添加することにより調製することができる。
【００２４】
１つの実施形態においては、本発明の結晶性塩酸塩は、ａ）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの塩酸塩を極性溶媒で処理して完全に溶解させ、第１の組成物を形成させること、そしてｂ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させることにより調製することができる。上記第２の組成物から結晶性塩酸塩を形成させる。極性溶媒は、典型的には、プロトン性溶媒（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、エチレングリコール、水、酢酸、ギ酸など）である。１つの特定の実施形態においては、極性溶媒はイソプロパノールである。一般的には、溶解は約３０〜７０℃の範囲の高温で、例えば、約５０〜６０℃の範囲の温度で行う。１つの実施形態においては、溶液を約５５℃の温度に加熱する。
【００２５】
別の実施形態においては、本発明の結晶性塩酸塩は、ａ）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルを不活性希釈剤中で塩酸で脱保護して完全に溶解させて、第１の組成物を形成させること、そしてｂ）非極性溶媒を添加して第２の組成物を形成させることにより調製することができる。上記第２の組成物から結晶性塩酸塩を形成させる。１つの実施形態においては、脱保護を３ＭのＨＣｌを用いて行い、不活性希釈剤はシクロペンチルメチルエーテルである。一般的には、溶解は室温で行われる。
【００２６】
本発明のプロセスの工程（ｂ）で使用する適切な非極性溶媒としては、例えば、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、四塩化炭素、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、およびジブチルエーテルなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。１つの実施形態においては、非極性溶媒はジイソプロピルエーテルである。その後、この溶液を状況に応じて冷却して、本発明の結晶性化合物を形成させる。１つの特定の実施形態においては、この溶液を約１５〜３０℃に冷却し、別の実施形態においては、ほぼ室温の温度に冷却する。適切な時間の後、結晶が観察されるであろう。１つの実施形態においては、結晶は数時間後に観察され、１つの実施形態においては、約１〜３時間後に観察される。結晶が観察された後、母液の容量を減少させることができ、結晶を単離し、乾燥させる（例えば、濾過により単離し、減圧下で乾燥させる）ことができる。１つの実施形態においては、結晶を観察したら、結晶を、単離前の約０．５〜３時間、成長させることができる。
【００２７】
別の実施形態においては、冷却工程の間に、溶液に、予め形成させておいた塩酸塩の結晶を播種する。そのような種晶は、極性溶媒中で塩酸塩を加熱すること、その後、上記のような非極性溶媒の存在下でこの溶液を冷却することにより作製することができる。
【００２８】
結晶特性
いくつかある利点の中で特に、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩の形成が、その化合物自体の精製に有用であることを発見した。例えば、本発明の結晶性塩酸塩は約９９％の純度を有する。
【００２９】
粉末Ｘ線回折の分野で周知であるように、ＰＸＲＤスペクトルの相対的なピークの高さは、試料の調製と計器の幾何学的形状に関する多数の要因に応じて様々であるが、ピーク位置は、実験の詳細に対して比較的反応しにくい。実施例２に示すようなＰＸＲＤパターンが得られた。このように、１つの実施形態においては、本発明の結晶性化合物は特定のピーク位置を有しているＰＸＲＤパターンを特徴とする。
【００３０】
結晶性化合物は、ピーク位置が図１に示すピーク位置に実質的に一致するＰＸＲＤパターンを特徴とする。これらのピークを、相対強度が大きい順に以下に列挙する。全てのＰＸＲＤピーク強度は、各ピークについての対応するバックグラウンド強度を減算することにより補正した。
【００３１】
【表１】
2013532170.tif 000003
このように、１つの実施形態においては、結晶性化合物は、８．７８±０．２０、１５．２６±０．２０、１９．０８±０．２０、２０．３６±０．２０、２１．５０±０．２０、および２５．４６±０．２０の２θ値での回折ピークを含む粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とし；さらに、２６．４２±０．２０、３０．６５±０．２０、２８．９１±０．２０、２４．７７±０．２０、１４．４２±０．２０、１６．７４±０．２０、および５．２０±０．２０より選択される２θ値での１つ以上のさらなる回折ピークを有することを特徴とする。
【００３２】
実施例３に示すような示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）のトレースが得られた。このように、１つの実施形態においては、結晶性化合物は、そのＤＳＣサーモグラフを特徴とする。１つの実施形態においては、結晶性化合物は、図２に見られるように、約１２８℃の融点を示し、約２００℃未満では有意な熱分解がないＤＳＣサーモグラフを特徴とする。
【００３３】
熱重量分析（ＴＧＡ）を、実施例３に記載するように結晶性化合物について行った。このように、１つの実施形態においては、結晶性化合物はそのＴＧＡトレースを特徴とする。１つの実施形態においては、結晶性化合物は、図３に見られるような、約２００℃未満の温度では有意な量の重量減少（残留水分または溶媒の減少と一致する）を全く示さないＴＧＡトレースを特徴とする。
【００３４】
本発明の結晶性化合物は、許容され得るレベルの吸湿性を持つ可逆的吸着／脱着プロフィールを有することが実証された。例えば、結晶性化合物は、わずかな吸湿性しか有さず、図４に見られるように、８５％までの相対湿度に曝された場合でも、約１．０％未満の増量しか示さない。
【００３５】
本発明の結晶性化合物のこれらの特性を以下の実施例でさらに説明する。
【００３６】
有用性
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンは、セロトニン再取り込み阻害活性とノルエピネフェリン再取込み阻害活性を持つ。したがって、この化合物と本発明の結晶性化合物は、複合セロトニン・ノルエピネフェリン再取込み阻害薬（ＳＮＲＩ）としての治療的有用性を有すると予想される。
【００３７】
化合物の阻害定数（Ｋｉ）は、放射性リガンド結合阻害アッセイにおいて放射性リガンドが存在しない場合にトランスポーターの５０％を占有するであろうリガンドの濃度である。Ｋｉ値は、アッセイ１に記載するように、３Ｈ−ニソキセチン（ノルエピネフェリントランスポーター（ＮＥＴ）について）および３Ｈ−シタロプラム（セロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）について）を用いる放射線リガンド結合研究により決定することができる。これらのＫｉ値は、チェン−プルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ）式と放射性リガンドのＫｄを使用する結合アッセイにおけるＩＣ５０値から導かれる（Ｃｈｅｎｇ  ＆  Ｐｒｕｓｏｆｆ（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−３１０８）。機能的ＩＣ５０値は、アッセイ２に記載する取込みアッセイの機能的阻害において決定することができる。これらのＩＣ５０値は、チェン−プルソフ式とトランスポーターについてのトランスミッターのＫｍを使用してＫｉ値に変換することができる。しかし、アッセイ２に記載する取込みアッセイ条件が、そのアッセイで使用する神経伝達物質（５−ＨＴ、ＮＥ、またはＤＡ）の濃度がそれぞれのトランスポーターに対するそのＫｍをはるかに下回るので、ＩＣ５０値がＫｉ値に非常に近く、数学的に変換されることが望ましいものであることに留意されたい。
【００３８】
本発明の化合物のセロトニンおよび／またはノルエピネフェリン再取込み阻害活性を決定するための例示的なアッセイとして、例えば、アッセイ１に記載する、およびＴｓｕｒｕｄａら（２０１０）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６１（２）：１９２−２０４に記載されているようなＳＥＲＴとＮＥＴの結合を測定するアッセイが挙げられるがこれらに限定されるわけではない。加えて、アッセイ１に記載するアッセイのような１つのアッセイにおいては、ＤＡＴの結合と取込みのレベルを理解することが有用である。有用な第２のアッセイとしては、アッセイ２に記載するような、ヒトまたはラットそれぞれの組み換え体トランスポーター（ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、またはｈＤＡＴ）を発現する細胞中へのセロトニンおよびノルエピネフェリンの取込みの阻害、ならびにエキソビボでの放射性リガンドの結合を測定するための神経伝達物質取込みアッセイと、アッセイ３に記載するような、組織中でのＳＥＲＴ、ＮＥＴ、およびＤＡＴのインビボでの占有率を決定するために使用される神経伝達物質取込みアッセイが挙げられる。試験化合物の薬理学的特性を評価するために有用な他のアッセイとしては、アッセイ４に列挙するものが挙げられる。例示的なインビボアッセイとしては、アッセイ５に記載するホルマリン足蹠試験（これは神経因性疼痛の処置の臨床的有効性についての信頼できる予測判断材料である）、およびアッセイ６に記載する脊髄神経結紮モデルが挙げられる。上記アッセイは、本発明の化合物の治療的有用性（例えば、神経因性疼痛を緩和する活性）の決定に有用である。本発明の化合物の他の特性および有用性は、当業者に周知の様々なインビトロおよびインビボアッセイを使用して決定することができる。
【００３９】
本発明の結晶性化合物は、モノアミントランスポーター機能の調節が関与している医学的症状（特に、セロトニンおよびノルエピネフェリンの再取込みの阻害により媒介されるか、またはそれらに反応するそのような症状）の処置および／または予防に有用であると予想される。したがって、セロトニンおよび／またはノルエピネフェリントランスポーターの阻害により処置される疾患あるいは障害に罹患している患者を、治療有効量の本発明の結晶性化合物を投与することにより処置することができると予想される。そのような医学的症状として、例えば、疼痛性障害（例えば、神経因性疼痛、線維筋痛症、および慢性痛）、抑鬱性障害（例えば、大鬱病）、情動障害（例えば、不安障害、注意欠陥多動性障害）、認知障害（例えば、認知症）、および腹圧性尿失禁が挙げられる。
【００４０】
１回の投与につき投与される活性薬剤の量、または１日に投与される合計量は予め決定することができ、また、患者の症状の性質および重篤度、処置する症状、患者の年齢、体重、および全身の健康状態、活性薬剤に対する患者の耐性、投与経路、薬理学的考慮事項（例えば、活性薬剤の活性、効力、薬物動態プロフィール、および毒物学プロフィール）、投与する任意の第２の薬剤などを含む、多数の要因を考慮して個々の患者ごとに決定することができる。疾患または医学的症状（例えば、神経因性疼痛）に罹患している患者の処置は、予め決定した投与量または処置を行う医師によって決定された投与量で開始することができ、これを、疾患または医学的症状の症候を予防する、寛解させる、抑える、または緩和するために必要な期間、継続する。そのような処置を受けている患者は、典型的には、治療の有効性を決定するために定期的にモニターされる。例えば、神経因性疼痛の処置においては、処置の有効性の測定に、患者の生活の質の評価（例えば、患者の睡眠パターン、勤務状況、運動および歩行能力などの改善）が含まれ得る。ポイントに基づいて処理される疼痛スケールもまた、患者の疼痛のレベルを評価する手助けとなるように使用することができる。本明細書中に記載する他の疾患および症状についての指標は当業者に周知であり、処置を行う医師が容易に利用できる。医師による継続的なモニタリングにより、活性薬剤の最適量がいつどんな時にでも投与されること、さらには、処置期間の決定を容易にすることを確実にすることができる。これは、第２の薬剤もまた投与する場合に、それらの選択、投薬量、および治療期間もまた調整が必要であるので、特に有用である。この方法では、処置の用法・用量のスケジュールは、所望する有効性を示す最少量の活性薬剤を投与し、さらに、疾患または医学的症状をうまく処置するために必要である期間に限り投与を継続するように、治療過程全体を通じて調整することができる。
【００４１】
疼痛性障害
ＳＮＲＩは、有痛性糖尿病性神経障害（デュロキセチン、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら（２００５）Ｐａｉｎ  １１６：１０９−１１８；ベンラファキシン、Ｒｏｗｂｏｔｈａｍら（２００４）Ｐａｉｎ  １１０：６９７−７０６）、線維筋痛症（デュロキセチン、Ｒｕｓｓｅｌｌら（２００８）Ｐａｉｎ  １３６（３）：４３２−４４４；ミルナシプラン、Ｖｉｔｔｏｎら（２００４）Ｈｕｍａｎ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９：Ｓ２７−Ｓ３５）、および偏頭痛（ベンラファキシン、Ｏｚｙａｌｃｉｎら（２００５）Ｈｅａｄａｃｈｅ  ４５（２）：１４４−１５２）のような疼痛に対して有用な効果を有していることが示されている。したがって、本発明の１つの実施形態は、疼痛性障害の処置方法に関し、この方法には治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。典型的には、治療有効量は疼痛を緩和するために十分な量である。例示的な疼痛性障害としては、例えば、急性疼痛、持続性疼痛、慢性疼痛、炎症性疼痛、および神経因性疼痛が挙げられる。さらに具体的には、これらには、関節炎；慢性腰痛を含む腰痛；腫瘍に関連する疼痛（例えば、骨痛、頭痛、顔面痛、または内蔵痛）を含む癌、ならびに癌治療に伴う疼痛（例えば、化学療法後症候群、慢性術後疼痛症候群、および放射線照射後症候群）；手根管症候群；線維筋痛症；慢性緊張型頭痛を含む頭痛；多発性筋痛、関節リウマチ、および変形性関節症に伴う炎症；偏頭痛；複合性局所性疼痛症候群を含む神経因性疼痛；全身の疼痛；術後疼痛；肩の痛み；脳卒中後疼痛ならびに脊髄損傷および多発性硬化症に伴う疼痛を含む中枢性疼痛症候群；幻肢痛；パーキンソン病に伴う疼痛；および内蔵痛（例えば、過敏性大腸症候群）と関係があるか、あるいはこれらにより生じる疼痛が含まれる。特に関心が高いものは、糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）、ＨＩＶ関連神経障害、帯状疱疹後神経痛（ＰＨＮ）、および化学療法誘発性末梢神経障害を含む神経因性疼痛の処置である。神経因性疼痛のような疼痛性障害を処置するために使用する場合は、本発明の化合物を、抗痙攣薬、抗鬱薬、筋弛緩薬、ＮＳＡＩＤ、オピオイド作動薬、オピオイド拮抗薬、選択的セロトニン再取込み阻害薬、ナトリウムチャンネル遮断薬、および交感神経遮断薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４２】
抑鬱性障害
本発明の別の実施形態は抑鬱性障害を処置する方法に関し、この方法には、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。典型的には、治療有効量は、鬱病を緩和し、全般的に健康である感覚をもたらすために十分な量である。例示的な抑鬱性障害としては、例えば、アルツハイマー病、双極性障害、癌、児童虐待、不妊症、パーキンソン病、心筋梗塞後、および精神病に伴う鬱病；胸線機能不全；気難しいまたは怒りっぽい老人症候群（ｇｒｕｍｐｙ  ａｎｄ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｏｌｄ  ｍａｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）；副作用としての鬱病（ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）；大鬱病；小児鬱病；閉経後の鬱病；分娩後の鬱病；反復性鬱病；単一エピソード鬱病；および亜症候群性の症候性鬱病（ｓｕｂｓｙｎｄｒｏｍａｌ  ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）が挙げられるがこれらに限定されない。特に関心の高いものは、大鬱病の処置である。抑鬱性障害を処置するために使用する場合は、本発明の化合物を、抗鬱薬とセロトニン−ノルエピネフェリン二重再取込み阻害薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４３】
情動障害
本発明の別の実施形態は情動障害の処置方法に関する。この方法には、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。例示的な情動障害として、例えば、不安障害（例えば、全般性不安障害）；回避性人格障害；摂食障害（例えば、神経性無食欲症、神経性過食症、および肥満症）；強迫神経症；パニック障害；人格障害（例えば、回避性人格障害および注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ））；心的外傷後ストレス障害；恐怖症（例えば、広場恐怖症、ならびに単純な特定恐怖症および他の特定恐怖症、ならびに対人恐怖症；月経前症候群；精神病（例えば、精神分裂病および躁病）；季節性情動障害；性機能障害（早漏症、男性の勃起不全、および女性機能障害（例えば、女性の性的興奮障害）を含む）；社会不安障害；ならびに、薬物乱用障害（薬物依存（例えば、アルコール、ベンゾジアゼピン、コカイン、ヘロイン、ニコチン、およびフェノバルビタール中毒）ならびに禁断症候群（これらの依存症により生じ得る）を含む）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。情動障害を処置するために使用する場合は、本発明の化合物を、抗鬱薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４４】
アトモキセチン（これは１０倍のＮＥＴ選択性がある）は、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）の治療について承認されており、臨床研究は、ＳＮＲＩであるベンラファキシンもまた、ＡＤＨＤの処置に有用な効果を有し得ることを示している（Ｍｕｋａｄｄｅｓら（２００２）Ｅｕｒ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．１２（Ｓｕｐｐ  ３）：４２１）。したがって、本発明の結晶性化合物はまた、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程による注意欠陥多動性障害の処置方法においても有用であると予想される。鬱病を処置するために使用する場合は、本発明の結晶性化合物を、抗鬱薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４５】
認知障害
本発明の別の実施形態は認知障害を処置する方法に関し、この方法には、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。例示的な認知障害として、例えば、認知症（退行性認知症（例えば、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、ピック病、および老人性認知症）、血管性認知症（例えば、多発脳梗塞性認知症）、ならびに、頭蓋内空間を占有している病巣、外傷、感染症、および関連する症状（ＨＩＶ感染を含む）、代謝、毒素、無酸素症およびビタミン欠乏症と関係がある認知症を含む）；ならびに、老化と関係がある軽度認知機能障害（例えば、加齢に伴う記憶障害、健忘症、および加齢による認知機能低下）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。認知障害を処置するために使用する場合は、本発明の結晶性化合物を、アルツハイマー病治療薬およびパーキンソン病治療薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４６】
他の障害
ＳＮＲＩはまた、腹圧性尿失禁の処置に有効であることも示されている（Ｄｍｏｃｈｏｗｓｋｉ（２００３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ  １７０（４）：１２５９−１２６３）。したがって、本発明の別の実施形態は腹圧性尿失禁の処置方法に関し、この方法には、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程が含まれる。腹圧性尿失禁を処置するために使用する場合は、本発明の化合物を、抗痙攣薬を含む他の治療薬と組み合わせて投与することができる。これらのクラスの化合物の例を本明細書中に記載する。
【００４７】
ＳＮＲＩであるデュロキセチンについて、慢性疲労症候群の処置におけるその有効性を評価するための臨床試験が行われており、最近になって、線維筋痛症の処置に有効であることが示された（Ｒｕｓｓｅｌｌら（２００８）Ｐａｉｎ  １３６（３）：４３２−４４４）。本発明の結晶性化合物もまた、ＳＥＲＴおよびＮＥＴを阻害するその予想される能力の理由からこの有用性を有すると予想され、本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程を含む、慢性疲労症候群の処置方法に関する。
【００４８】
ノルエピネフェリンおよびドーパミン再取込み阻害薬であるシブトラミンは、肥満症の処置に有用であることが示されている（Ｗｉｒｔｈら（２００１）ＪＡＭＡ  ２８６（１１）：１３３１−１３３９）。本発明の結晶性化合物もまた、ＮＥＴを阻害するその予想される能力の理由からこの有用性を有すると予想され、本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程を含む、肥満症の処置方法に関する。
【００４９】
ＳＮＲＩであるデスベンラファキシンは、閉経に伴う血管運動症状を緩和することが示されている（Ｄｅｅｃｈｅｒら（２００７）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４８（３）：１３７６−１３８３）。本発明の結晶性化合物もまた、ＳＥＲＴおよびＮＥＴを阻害するその予想される能力の理由からこの有用性を有すると予想され、本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の結晶性化合物を患者に投与する工程を含む、閉経に伴う血管運動症状の処置方法に関する。
【００５０】
研究手段
本発明の結晶性化合物は、セロトニン再取込み阻害活性とノルエピネフェリン再取込み阻害活性を併せ持つと予想されるので、この化合物についてはまた、セロトニントランスポーターまたはノルエピネフェリントランスポーターを含む生物学的系または試料を調べるあるいは研究するための研究手段としての有用性も見出されると期待される。セロトニントランスポーターおよび／またはノルエピネフェリントランスポーターを含む任意の適切な生物学的系または試料は、インビトロまたはインビボのいずれかで行うことができるそのような研究において利用することができる。そのような研究に適している代表的な生物学的系または試料としては、細胞、細胞抽出物、原形質膜、組織試料、単離された臓器、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ブタ、ヒトなど）などが挙げられるが、これらに限定されるわけではなく、特に関心が高いものは哺乳動物である。本発明の１つの特定の実施形態においては、哺乳動物中でのセロトニン再取込みを、セロトニン再取込みを阻害する量の本発明の結晶性化合物を投与することにより阻害する。別の特定の実施形態においては、哺乳動物中でのノルエピネフェリン再取込みを、ノルエピネフェリン再取込みを阻害する量の本発明の結晶性化合物を投与することにより阻害する。本発明の結晶性化合物はまた、そのような化合物を使用する生物学的アッセイを実施することにより、１つの研究手段として使用することができる。
【００５１】
研究手段として使用する場合は、典型的には、セロトニントランスポーターおよび／またはノルエピネフェリントランスポーターを含む生物学的系または試料を、セロトニン再取込みを阻害するかまたはノルエピネフェリン再取込みを阻害する量の本発明の結晶性化合物と接触させる。生物学的系または試料を上記化合物に対して暴露した後、セロトニン再取込みおよび／またはノルエピネフェリン再取込みを阻害する効果を従来の手順および機器を使用して決定する。暴露には、細胞または組織を上記化合物と接触させること、上記化合物を哺乳動物に投与すること（例えば、腹腔内投与または静脈内投与による）などが含まれる。この決定工程には、応答（すなわち、定量分析）を測定する工程が含まれ得るか、または観察（すなわち、定性分析）が含まれ得る。応答の測定には、例えば、従来の手順および機器（例えば、セロトニンおよびノルエピネフェリン再取込みアッセイ）を使用する生物学的系または試料に対する化合物の効果の決定が含まれる。上記アッセイの結果を、所望する結果を達成するために必要な活性レベルならびに化合物の量（すなわち、セロトニン再取込みを阻害し、そしてノルエピネフェリン再取込みを阻害する量）を決定するために使用することができる。
【００５２】
さらに、本発明の結晶性化合物は、他の化学物質を評価するための研究手段として使用することができ、したがって、例えば、セロトニン再取込み阻害活性とノルエピネフェリン再取込み阻害活性を併せ持つ新規の化合物を発見するためのスクリーニングアッセイにおいても有用である。この方法では、本発明の結晶性化合物を、もし存在するならば、ほぼ同等であるかまたはより優れた再取込み阻害活性を持つそのような試験化合物を同定するために、試験化合物を用いて得られた結果と本発明の結晶性化合物を用いて得られた結果とを比較することができるアッセイにおいて標準物として使用する。例えば、試験化合物または試験化合物の群についての再取込みデータを、存在するならば、所望する特性を持つ試験化合物（例えば、本発明の結晶性化合物とほぼ同等であるかまたはより優れた再取込み阻害活性を持つ試験化合物）を同定するために、本発明の結晶性化合物についての再取り込みデータと比較する。本発明のこの態様には、別の実施形態として、目的の試験化合物を同定するための、（適切なアッセイを使用する）比較データの作製と試験データの分析の両方が含まれる。したがって、試験化合物を、以下の工程を含む方法によって生物学的アッセイにおいて評価することができる：（ａ）試験化合物を用いて生物学的アッセイを実施して、第１のアッセイ値を得る工程；（ｂ）本発明の結晶性化合物を用いて生物学的アッセイを実施して、第２のアッセイ値を得る工程（ここでは、工程（ａ）は、工程（ｂ）の前、後、または工程（ｂ）と同時のいずれかで実施される）；および（ｃ）工程（ａ）による第１のアッセイ値を工程（ｂ）による第２のアッセイ値と比較する工程。例示的な生物学的アッセイとしては、セロトニンおよびノルエピネフェリン再取込みアッセイが挙げられる。
【００５３】
薬学的組成物および薬学的処方物
本発明の結晶性化合物は、典型的には、薬学的組成物または薬学的処方物の形態で患者に投与される。そのような薬学的組成物は、経口、直腸、膣、鼻腔、吸入、局所（経皮を含む）、および非経口の投与態様を含むがこれらに限定されない任意の許容され得る投与経路により患者に投与することができる。しかし、本発明の結晶性化合物を処方すると、これはもはや結晶形態ではない場合があり、すなわち、これが適切な担体中に溶解される場合があることが当業者に理解される。さらに、本発明の結晶性化合物は、例えば、経口で、１日に複数回の用量で（例えば、１日に２回、３回、または４回）、１日に１回の用量で、１日に２回の用量で、１週間に１回の用量でなど）投与することができる。
【００５４】
したがって、１つの実施形態においては、本発明は、薬学的に許容され得る担体と本発明の結晶性化合物を含む薬学的組成物に関する。上記組成物には、必要に応じて、他の治療薬および／または処方用薬剤を含めることができる。組成物について議論する場合は、「本発明の結晶性化合物」をまた、本明細書中では、これを担体のような処方物の他の成分と区別するために「活性薬剤」と呼ぶ場合もある。
【００５５】
本発明の薬学的組成物には、典型的には、治療有効量の本発明の結晶性化合物が含まれる。しかし、当業者は、薬学的組成物に治療有効量を上回る量が含まれる場合（すなわち、バルク組成物）、または治療有効量を下回る量が含まれる場合（すなわち、治療有効量に到達させるための複数回投与用に設計された個々の単位用量）があることを理解するであろう。典型的には、組成物には、約０．０１〜９５ｗｔ％の活性薬剤（約０．０１〜３０ｗｔ％、例えば、約０．０１〜１０ｗｔ％を含む）が含まれ、実際の量は、処方物自体、投与経路、投与頻度などにより様々である。１つの実施形態においては、経口投薬形態に適している組成物に、例えば、約５〜７０ｗｔ％、または約１０〜６０ｗｔ％の活性薬剤が含まれ得る。１つの例示的な実施形態においては、薬学的組成物に、約１〜２０ｍｇの活性薬剤（約１〜１５ｍｇの活性薬剤、および約１〜１０ｍｇの活性薬剤を含む）が含まれる。別の例示的な実施形態においては、薬学的組成物に、約５〜２０ｍｇの活性薬剤（約７．５〜１５ｍｇの活性薬剤を含む）が含まれる。例えば、活性薬剤は、１ｍｇおよび１０ｍｇの単位用量中に処方することができる。
【００５６】
任意の従来の担体または賦形剤を本発明の薬学的組成物において使用することができる。特定の担体または賦形剤、あるいは担体または賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者または特定のタイプの医学的もしくは疾患状態を処置するために使用する投与の態様に応じて様々である。これに関して、特定の投与態様に適している組成物の調製は、薬学分野の当業者の能力の範囲に十分含まれる。さらに、そのような組成物において使用する担体または賦形剤は、商業的に入手することができる。さらなる例として、従来の処方物技術が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００５７】
薬学的に許容され得る担体となり得る材料の代表的な例として、以下が挙げられるが、これらに限定されるわけではない：糖（例えば、ラクトース、グルコース、およびスクロース）；デンプン（例えば、コーンスターチ、およびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース））；トラガカント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、ココアバターおよび坐剤用ワックス）；油（例えば、ピーナッツ油、ココナッツ油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；圧縮推進用ガス（例えば、クロロフルオロカーボンおよびヒドロフルオロカーボン）；ならびに、薬学的組成物中で利用される他の非毒性の適合性物質。
【００５８】
薬学的組成物は、典型的には、活性薬剤を薬学的に許容され得る担体および１種類以上の随意的成分と徹底的に、そしてしっかりと混合または混ぜ合わせることにより調製する。その後、得られた均一に混ぜ合わせた混合物は、従来の手順と機器を使用して、成型することができるか、または錠剤、カプセル剤、丸剤、キャニスター、カートリッジ、ディスペンサーなどに充填することができる。
【００５９】
１つの実施形態においては、薬学的組成物は経口投与に適している。１つの例示的な投与計画は、１日に１回または２回投与される経口用の投薬形態である。経口投与に適している組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤；水性もしくは非水性の液体中の溶液または懸濁液；水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョン；エリキシル剤またはシロップ剤などの形態であり得、それぞれが予め決定された量の活性薬剤を含有している。
【００６０】
固体の投薬形態で（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤などとしての）経口投与しようとする場合は、組成物には、典型的に、活性薬剤と１種類以上の薬学的に許容され得る担体（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）が含まれる。固体の投薬形態にはまた、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシア）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、天草、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および／または炭酸ナトリウム）；溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ）；滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはこれらの混合物）；着色剤；ならびに、緩衝剤も含まれ得る。
【００６１】
剥離剤（ｒｅｌｅａｓｅ  ａｇｅｎｔ）、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香剤、防腐剤、ならびに抗酸化剤もまた、薬学的組成物の中に存在させることができる。錠剤、カプセル剤、丸剤などについての例示的なコーティング剤として、腸溶コーティングに使用されるもの、例えば、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、トリメリト酸酢酸セルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなどが挙げられる。薬学的に許容され得る抗酸化剤の例として、水溶性抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性抗酸化剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）；ならびに、金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸）などが挙げられる。
【００６２】
組成物はまた、例えば、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、または他のポリマーマトリックス、リポソーム、および／もしくはマイクロスフェアを使用して、活性薬剤の持続放出または徐放を提供するように処方することもできる。加えて、本発明の薬学的組成物には不透明化剤を含めることができ、また、消化管の特定の部分において、必要に応じて遅延様式で活性薬剤だけを、あるいは活性薬剤を優先的に放出するように処方することもできる。使用することができる包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。活性薬剤はまた、必要に応じて、１種類以上の上記賦形剤を用いたマイクロカプセル化された形態であってもよい。
【００６３】
経口投与に適している液体の投薬形態としては、例えば、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が挙げられる。液体の投薬形態には、典型的には、活性薬剤と不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒）、可溶化剤、および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（例えば、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物が含まれる。懸濁剤には、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、天草、およびトラガカント、ならびにこれらの混合物のような懸濁化剤が含まれ得る。
【００６４】
経口で投与しようとする場合は、本発明の薬学的組成物を単位投薬形態にパッケージすることができる。用語「単位投薬形態」は、患者への投与に適している物理的にわかれている単位をいい、すなわち、個々の単位は、単独で、または１つ以上のさらなる単位との組み合わせにおいてのいずれで所望される治療効果を生じるように計算された予め決定された量の活性薬剤を含有している。例えば、そのような単位投薬形態は、カプセル剤、錠剤、丸剤などであり得る。
【００６５】
別の実施形態においては、本発明の組成物は吸入投与に適しており、これは典型的には、エアゾールまたは散剤の形態である。そのような組成物は、一般的に、周知の送達デバイス（例えば、ネブライザー、乾燥粉末吸入器または定量吸入器）を使用して投与される。ネブライザーデバイスは高速の空気の流れを生じさせ、この高速の空気の流れにより患者の気道に運ばれる霧として組成物を噴霧する。例示的なネブライザー処方物には、担体中に溶解させて溶液を形成させたか、または微粉化し、担体と混ぜ合わせて呼吸に適する大きさの微分化された粒子の懸濁液を形成させた活性薬剤が含まれる。乾燥粉末吸入器は、活性薬剤を、吸気の際に患者の空気の流れの中に分散させられた自由に流動する粉末として活性薬剤を投与する。例示的な乾燥粉末処方物には、賦形剤（例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、デキストロース、ポリ乳酸、ポリラクチド−コ−グリコリド、およびそれらの組み合わせ）と乾燥状態で混ぜ合わせられた活性薬剤が含まれる。定量吸入器は、圧縮された推進用ガスを使用して一定量の活性薬剤を送り出す。例示的な定量処方物には、液化させられた高圧ガス（例えば、クロロフルオロカーボンまたはヒドロフルオロアルカン）中の活性薬剤の溶液または懸濁液が含まれる。そのような処方物の随意的成分としては、共溶媒（例えば、エタノールまたはペンタン）および界面活性剤（例えば、トリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸、レシチン、およびグリセリン）が挙げられる。そのような組成物は、典型的には、冷却または加圧したヒドロフルオロアルカンを、活性薬剤、エタノール（存在するならば）および界面活性剤（存在するならば）を含有している適切な容器に添加することにより調製する。懸濁液を調製するためには、活性薬剤を微粉化し、次に、噴射剤と混ぜ合わせる。あるいは、懸濁剤処方物は、活性薬剤の微粒子上に界面活性剤のコーティングを噴霧乾燥することによって調製することができる。次に、この処方物を、吸入器の一部を形成するエアゾールキャニスター中に充填する。
【００６６】
本発明の結晶性化合物は、非経口で（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、または腹腔内注射により）投与することもできる。そのような投与のためには、活性薬剤を、滅菌された溶液、懸濁液またはエマルジョン中で提供する。そのような処方物を調製するための例示的な溶媒としては、水、生理食塩水、低分子量アルコール（例えば、プロピレングリコール）、ポリエチレングリコール、油、ゼラチン、および脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチル）などが挙げられる。典型的な非経口処方物は活性薬剤のｐＨ４〜７の滅菌水溶液である。非経口処方物には、１種類以上の可溶化剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤もまた含めることができる。これらの処方物は、滅菌された注射用媒体、滅菌剤の使用、濾過、照射、または加熱により滅菌された状態にすることができる。
【００６７】
本発明の結晶性化合物はまた、公知の経皮送達系および賦形剤を使用して経皮投与することもできる。例えば、上記化合物を、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート、アザシクロアルカン−２−オンなどの透過促進剤と混合し、パッチまたは類似する送達系に取り込ませることができる。所望される場合は、ゲル化剤、乳化剤、および緩衝剤を含むさらなる賦形剤を、そのような経皮用組成物中で使用することができる。
【００６８】
所望される場合は、本発明の結晶性化合物は、１種類以上の他の治療薬と組み合わせて投与することができる。したがって、１つの実施形態においては、本発明の組成物に、状況に応じて、本発明の結晶性化合物と同時投与される他の薬物を含めることができる。例えば、上記組成物に、アルツハイマー病治療薬、抗痙攣薬（抗癲癇薬）、抗鬱薬、パーキンソン病治療薬、セロトニン−ノルエピネフェリン二重再取込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ノルエピネフェリン再取込み阻害薬、オピオイド作動薬（オピオイド鎮痛剤）、オピオイド拮抗薬、選択的セロトニン再取込み阻害薬、ナトリウムチャンネル遮断薬、交感神経遮断薬、およびこれらの組み合わせの群より選択される１種類以上の薬物（「第２の薬剤」とも呼ぶ）をさらに含めることができる。そのような治療薬の多くの例は当該分野で周知であり、その例を本明細書に記載する。本発明の結晶性化合物を第２の薬剤と組み合わせることによって、２種類の活性成分だけを使用して、三重の治療、すなわち、セロトニン再取込み阻害活性、ノルエピネフリン再取込み阻害活性、および第２の薬剤に付随する活性（例えば、抗鬱薬活性）を実現することができる。２種類の活性成分を含む薬学的組成物は、典型的には、３種類の活性成分を含む組成物よりも処方することが容易であるので、このような２成分組成物は、３種類の活性成分を含む組成物を上回る優れた利点を提供する。したがって、本発明のなお別の態様においては、薬学的組成物に、本発明の結晶性化合物、第２の活性薬剤、および薬学的に許容される担体が含まれる。第３の活性薬剤、第４の活性薬剤などもまた、組成物中に含めることができる。併用治療では、投与される本発明の化合物の量ならびに第２の薬剤の量は、単剤治療で通常投与される量より少ない場合がある。
【００６９】
本発明の結晶性化合物は、第２の活性薬剤と物理的に混合されて両方の薬剤を含む組成物を形成させること、あるいは、各薬剤を、患者に同時にまたは連続して投与される別個の異なる組成物中に存在させることのいずれもが可能である。例えば、本発明の結晶性化合物は、従来の手順および機器を使用して第２の活性薬剤と組み合わせて、本発明の結晶性化合物と第２の活性薬剤を含む活性薬剤の組み合わせを形成させることができる。さらに、活性薬剤を薬学的に許容され得る担体と組み合わせて、本発明の結晶性化合物、第２の活性薬剤、および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物を形成させることができる。この実施形態では、組成物の成分を、通常は、混合するかまたは混ぜ合わせて物理的混合物を生成させる。次に、この物理的混合物を、本明細書中に記載される経路のいずれかを使用して治療有効量で投与する。
【００７０】
あるいは、活性薬剤は、患者への投与の前は、別々に離して保持することができる。この実施形態では、これらの薬剤は、投与前は互いに物理的に混合されていないが、同時に投与されるか、または別の組成物として別のタイミングで投与される。このような組成物は１つのキットの中に別々にパッケージすることができ、また、一緒にパッケージすることもできる。別のタイミングで投与される場合は、第２の薬剤は、典型的には、本発明の化合物の投与後２４時間未満で、本発明の化合物の投与と同時の時点から投与後約２４時間の範囲のどこかで投与される。これも連続投与とも呼ばれる。したがって、本発明の結晶性化合物は、２つの錠剤（各活性薬剤に対して１つの錠剤を用いる）を使用して、別の活性薬剤と同時にまたは連続して経口投与することができる。ここでは、連続は、本発明の化合物の投与後直ちに投与されること、または、ある所定時間の後（例えば、１時間後または３時間後）に投与されることを意味し得る。あるいは、上記組み合わせは、異なる投与経路、すなわち、一方は経口で他方は吸入により投与される場合がある。
【００７１】
１つの実施形態においては、キットに、本発明の結晶性化合物を含む第１の投薬形態と、本明細書中に示す１種類以上の第２の薬剤を含む少なくとも１つのさらなる投薬形態が、本発明の方法を実施するために十分な量で含まれる。第１の投薬形態と第２の（または第３などの）投薬形態には、全体として、患者の疾患もしくは医学的状態を治療または予防するための治療有効量の活性薬剤が含まれる。
【００７２】
含まれる場合は、第２の薬剤（単数または複数）は、治療有効量で存在する、すなわち、典型的には、本発明の結晶性化合物と同時投与された場合に治療上有益な効果をもたらす量で投与される。第２の薬剤は薬学的に許容され得る塩、溶媒和物、光学的に純粋な立体異性体などの形態であり得る。したがって、以下に列挙する第２の薬剤はそのような形態の全てを含むように意図され、これらは市販されているか、または従来の手順および試薬を使用して調製することができる。
【００７３】
代表的なアルツハイマー病治療薬としては、ドネペジル、ガランタミン、メマンチン、リバスティグミン、セレギリン、タクリンおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７４】
代表的な抗痙攣薬（抗癲癇薬）としては、アセタゾールアミド、アルブトイン、４−アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、ベクラミド、カルバマゼピン、シンロミド、クロメチアゾール、クロナゼパム、ジアゼパム、ジメタジオン、エテロバーブ、エタジオン、エトスクシミド、エトトイン、フェルバメート、ホスフェニトイン、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリジン、ロラゼパム、臭化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メフェニトイン、メホバルビタール、メトスクシミド、ミダゾラム、ニトラゼパム、オキサゼパム、オクスカルバゼピン（ｏｘｃａｒｂａｚｅｐｉｎｅ）、パラメタジオン、フェナセミド、フェネツリッド、フェノバルビタール、フェンスクシミド、フェニトイン、臭化カリウム、プレガバリン、プリミドン、プロガビド、臭化ナトリウム、バルプロ酸ナトリウム、スルチアム、チアガビン、トピラマート、トリメタジオン、バルプロ酸、バルプロミド、ビガバトリン、ゾニサミドおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特定の実施形態では、抗痙攣剤は、カルバマゼピン、ガバペンチン、プレガバリンおよびこれらの組合せより選択される。
【００７５】
代表的な抗鬱薬としては、アジナゾラム、アミトリプチリン、クロミプラミン、デシプラミン、ドチエピン（例えば、塩酸ドチエピン）、ドキセピン、イミプラミン、ロフェプラミン、ミルタザピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、トリミプラミン、ベンラファキシン、ジメリジンおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７６】
代表的なパーキンソン病治療薬としては、アマンタジン、アポモルヒネ、ベンズトロピン、ブロモクリプチン、カルビドパ、ジフェンヒドラミン、エンタカポン、レボドパ、ペルゴリド、プラミペキソール、ロピニロール、セレギリン、トルカポン、トリヘキシフェニジルおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７７】
代表的なセロトニン−ノルエピネフェリン二重再取込み阻害薬（ＳＮＲＩ）としては、ビシファジン、デスベンラファキシン、デュロキセチン、ミルナシプラン、ネファゾドン、ベンラファキシンおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７８】
代表的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としては、アセメタシン、アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸、アルクロフェナック、アルミノプロフェン、アンフェナク、アミプリロース、アモキシプリン、アニロラク、アパゾン、アザプロパゾン、ベノリラート、ベノキサプロフェン、ベズピペリロン、ブロペラモール、ブクロキシ酸、カルプロフェン、クリダナク、ジクロフェナク、ジフルニサール、ジフタロン、エノリカム、エトドラク、エトリコキシブ、フェンブフェン、フェンクロフェナック、フェンクロジン酸、フェノプロフェン、フェンチアザク、フェプラゾン、フルフェナム酸、フルフェニサル、フルプロフェン、フルルビプロフェン、フロフェナク、イブフェナク、イブプロフェン、インドメタシン、インドプロフェン、イソキセパク、イソキシカム、ケトプロフェン、ケトロラク、ロフェミゾール、ロルノキシカム、メクロフェナム酸塩、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メサラミン、ミロプロフェン、モフェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、ニフルム酸、ニメスリド、ニトロフルルビプロフェン、オルサラジン、オキサプロジン、オキシピナク、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プラノプロフェン、サルサラート、スドキシカム、スルファサラジン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チオピナク、チアプロフェン酸、チオキサプロフェン、トルフェナム酸、トルメチン、トリフルミダート、ジドメタシン、ゾメピラクおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特定の実施形態では、ＮＳＡＩＤは、エトドラク、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メロキシカム、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカムおよびこれらの組合せより選択される。特定の実施形態では、ＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、インドメタシン、ナブメトン、ナプロキセン（例えば、ナプロキセンナトリウム、およびこれらの組合せより選択される。
【００７９】
代表的な筋弛緩薬としては、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、ジフルニサール、メタキサロン、メトカルバモールおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００８０】
代表的なノルエピネフェリン再取込み阻害薬としては、アトモキセチン、ブプロプリオンおよびブプロプリオン代謝産物であるヒドロキシブプロプリオン、マプロチリン、レボキセチン（例えば、（Ｓ，Ｓ）−レボキセチン）、ビロキサジンおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特定の実施形態では、ノルエピネフリン再取込み阻害剤は、アトモキセチン、レボキセチンおよびこれらの組合せより選択される。
【００８１】
代表的なオピオイド作動薬（オピオイド鎮痛剤）およびオピオイド拮抗薬としては、ブプレノルフィン、ブトルファノール、コデイン、ジヒドロコデイン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レバロルファン、レボルファノール、メペリジン、メタドン、モルヒネ、ナルブフィン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾシン、プロポキシフェン、トラマドールおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特定の実施形態では、オピオイド作動薬は、コデイン、ジヒドロコデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルホン、トラマドールおよびこれらの組合せより選択される。
【００８２】
代表的な選択的セロトニン再取込み阻害薬（ＳＳＲＩ）としては、シタロプラムおよびシタロプラム代謝産物であるデスメチルシタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム（例えば、シュウ酸エスシタロプラム）、フルオキセチンおよびフルオキセチンデスメチル代謝産物であるノルフルオキセチン、フルボキサミン（例えば、マレイン酸フルボキサミン）、パロキセチン、セルトラリンおよびセルトラリン代謝産物であるデスメチルセルトラリン（ｄｅｍｅｔｈｙｌｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ）およびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特定の実施形態では、ＳＳＲＩは、シタロプラム、パロキセチン、セルトラリンおよびこれらの組合せより選択される。
【００８３】
代表的なナトリウムチャンネル遮断薬としては、カルバマゼピン、ホスフェニトイン、ラモトリギン（ｌａｍｏｔｒｉｇｎｉｎｅ）、リドカイン、メキシレチン、オクスカルバゼピン、フェニトインおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００８４】
代表的な交感神経遮断薬としては、アテノロール、クロニジン、ドキサゾシン、グアネチジン、グアンファシン、モダフィニル、フェントラミン、プラゾシン、レセルピン、トラゾリン（例えば、塩酸トラゾリン）、タムスロシンおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００８５】
以下の処方物は、本発明の代表的な薬学的組成物を示す。
【００８６】
経口投与用の硬ゼラチンカプセル剤の例
本発明の結晶性化合物（５０ｇ）、噴霧乾燥させたラクトース（４４０ｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（１０ｇ）を十分に混ぜ合わせる。次に、得られた組成物を、硬ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１つ当たり５００ｍｇの組成物）。
【００８７】
あるいは、結晶性化合物（２０ｍｇ）を、デンプン（８９ｍｇ）、微結晶性セルロース（８９ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）と十分に混ぜ合わせる。次に、この混合物を４５番メッシュの米国標準篩（Ｎｏ．４５  ｍｅｓｈ  Ｕ．Ｓ．ｓｉｅｖｅ）にかけ、硬ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１つ当たり２００ｍｇの組成物）。
【００８８】
経口投与用のゼラチンカプセル処方物の例
本発明の結晶性化合物（１００ｍｇ）を、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（５０ｍｇ）およびデンプン粉末（２５０ｍｇ）と十分に混ぜ合わせる。次に、この混合物をゼラチンカプセルに充填する（カプセル１つ当たり４００ｍｇの組成物）。
【００８９】
あるいは、結晶性化合物（４０ｍｇ）を、微結晶性セルロース（Ａｖｉｃｅｌ  ＰＨ１０３；２５９．２ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム（０．８ｍｇ）と十分に混ぜ合わせる。次に、この混合物をゼラチンカプセルに充填する（サイズ＃１、白色、不透明）（カプセル１つ当たり３００ｍｇの組成物）。
【００９０】
経口投与用の錠剤処方物の例
本発明の結晶性化合物（１０ｍｇ）、デンプン（４５ｍｇ）、および微結晶性セルロース（３５ｍｇ）を２０番メッシュの米国標準篩にかけ、十分に混合する。このようにして得られた顆粒を５０〜６０℃で乾燥させ、１６番メッシュの米国標準篩にかける。ポリビニルピロリドンの溶液（４ｍｇを滅菌水の１０％溶液として）をカルボキシメチルデンプンナトリウム（４．５ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（０．５ｍｇ）、およびタルク（１ｍｇ）と混合し、次いでこの混合物を１６番メッシュの米国標準篩にかける。次に、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを顆粒に加える。混合した後、混合物を打錠機で圧縮して１００ｍｇの重量の錠剤とする。
【００９１】
あるいは、結晶性化合物（２５０ｍｇ）を、微結晶性セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）と十分に混ぜ合わせる。次に、この混合物を圧縮して錠剤（錠剤１つ当たり６６５ｍｇの組成物）を形成させる。
【００９２】
あるいは、結晶性化合物（４００ｍｇ）を、コーンスターチ（５０ｍｇ）、クロスカルメロースナトリウム（２５ｍｇ）、ラクトース（１２０ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）と十分に混ぜ合わせる。次に、この混合物を圧縮して一本割線入錠剤（錠剤１つ当たり６００ｍｇの組成物）を形成させる。
【００９３】
経口投与用の懸濁処方物の例
以下の成分を混合して、懸濁液１０ｍＬ当たり１００ｍｇの活性薬剤を含む懸濁液を形成させる：
【００９４】
【表２】
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注射投与用の注射可能な処方物の例
本発明の結晶性化合物（０．２ｇ）を０．４Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（２．０ｍＬ）と混ぜ合わせる。得られた溶液のｐＨを、必要に応じて０．５Ｎ塩酸水溶液または０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ４に調節し、次に、十分な量の注射用水を加えて２０ｍＬの合計容量にする。次に、この混合液を滅菌フィルター（０．２２ミクロン）に通すことにより濾過して注射による投与に適している滅菌溶液を得る。
【００９５】
吸入投与用組成物の例
本発明の結晶性化合物（０．２ｍｇ）を微粉化し、次に、ラクトース（２５ｍｇ）と混ぜ合わせる。次に、この混ぜ合わせた混合物をゼラチン吸入カートリッジに充填する。カートリッジの内容物は、例えば乾燥粉末吸入器を使用して投与する。
【００９６】
あるいは、微粉化した本発明の化合物（１０ｇ）を、脱塩水（２００ｍＬ）中にレシチン（０．２ｇ）を溶解させることにより調製した溶液中に分散させる。得られた懸濁液を噴霧乾燥させ、次に、微粉化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有している粒子を含む微粉化組成物を形成させる。次に、この微粉化組成物を、吸入器により投与する場合に、１用量当たり約１０μｇ〜約５００μｇの本発明の化合物を提供するために十分な量で、加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含む定用量吸入器カートリッジに充填する。
【００９７】
あるいは、結晶性化合物（２５ｍｇ）をクエン酸塩緩衝化（ｐＨ５）等張性生理食塩水（１２５ｍＬ）中に溶解させる。この混合物を攪拌し、化合物が溶解するまで超音波処理する。この溶液のｐＨをチェックし、必要であれば、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液をゆっくりと加えることによりｐＨ５に調節する。１用量当たり約１０μｇ〜約５００μｇの上記結晶性化合物を提供するネブライザー装置を使用してこの溶液を投与する。
【実施例】
【００９８】
本発明の具体的な実施形態を説明するために以下の調製例および実施例を提供する。しかし、これらの具体的な実施形態は、特に明記されない限りは、本発明の範囲を限定するようには決して意図されない。
【００９９】
別段の表示のない限りは、以下の略語は以下の意味を有し、本明細書で使用するが定義されない任意の他の略語はその標準的な意味を有するものとする：
ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＢＳ：ウシ胎仔血清
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＰＢＳ：リン酸緩衝化生理食塩水
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
本明細書で使用するが定義されない任意の他の略語は、それらの標準的な一般に受け入れられている意味を有する。別段の言及のない限りは、試薬、出発材料および溶媒のような全ての材料は、商業的供給業者（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ  Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｎなど）から購入し、これをさらに精製することなく使用した。
【０１００】
以下に記載する化合物においては、＊および＊＊の記号により２つのキラル中心を示す。＊のキラル中心はすでに知られているが、＊＊のキラル中心は明白には知られておらず、ジアステレオマー中間体の混合物（保護されたアルコール）からの逆相ＨＰＬＣによる第１のピークに基づく。
【０１０１】
（調製例１）
（Ｓ）−３−（Ｓ）−１−ヒドロキシ−２メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル
【０１０２】
【化１】
2013532170.tif 000005
（Ｓ）−３−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１０．０ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１００ｍＬ、１０００ｍｍｏｌ）を窒素下で混ぜ合わせ、得られた溶液を−７８℃に冷却した。次に、ＴＨＦ（３０．１ｍＬ、６０．２ｍｍｏｌ）中の２．０Ｍの塩化イソプロピルマグネシウムを、１０分間かけて１滴ずつ添加した。この混合物を一晩かけてゆっくりと室温に温めた。その後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）を一滴ずつ添加して反応をクエンチした。ＴＨＦを減圧下で除去し、得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出し（２×１００ｍＬ）、合わせて１つにした有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し（１×１００ｍＬ）、次いで、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を順相クロマトグラフィー（３００ｇのＳｉＯ２、１２ｇの粗精製物、ヘキサン中の５０〜６０％のジエチルエーテル）によって精製すると、以下が透明な油として得られた：
（Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３．８ｇ；第１の溶離ピーク）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ４．６０  −  ４．３８  （ｂｒｓ，  １Ｈ），  ３．４０  −  ３．２２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２８  −  ３．０２  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．９４  −  ２．８２  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２８  −  ２．１２  （ｍ，  １Ｈ），  １．９２  −  １．８２  （ｍ，  １Ｈ），  １．７０  −  １．５６  （ｍ，  １Ｈ），  １．５２  −  １．４４  （ｍ，  １Ｈ），  １．３８  （ｓ，  ９Ｈ），  ０．８７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．８３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ）。
【０１０３】
（Ｓ）−３−（（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２．８ｇ；第２の溶離ピーク）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ４．５０  −  ４．４０，  （ｂｒｓ，  １Ｈ）  ３．４２  −  ３．２８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．１８  −  ３．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０４  −  ２．９２  （ｍ，  １Ｈ），  ２．２６  −  ２．１２  （ｍ，  １Ｈ），  １．７８  −  １．６８  （ｍ，  １Ｈ），  １．６２  −  １．４６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．３８  （ｓ，  ９Ｈ），  ０．８８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．８２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．７  Ｈｚ，  ３Ｈ）。
【０１０４】
表題化合物の立体化学の決定を、２番目に溶離した材料についてのモーシャーエステル分析（Ｍｏｓｈｅｒ  ｅｓｔｅｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｄａｌｅ  ａｎｄ  Ｍｏｓｈｅｒ（１９６９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３４（９）：２５４３−２５４９）により行った。この分析を使用して、第２の溶離ピーク材料が、（Ｓ，Ｒ）であることを決定した：
【０１０５】
【表３】
2013532170.tif 000006
最初の２つの文字が第２の溶離ピークの材料に対応し、ジアステレオマーの３番目の文字が、モーシャ−エステルのキラル中心を意味することに留意されたい。
【０１０６】
ＳＲＳジアステレオマー：１Ｈ，  ＣＤＣｌ３，  δ  ｐｐｍ  ７．６０−７．５１  （ｍ，  ２Ｈ）；  ７．４３  −  ７．３７  （ｍ，  ３Ｈ）；  ５．０４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．０，  ４．０，  １Ｈ）；  ３．５２  （ｓ，  ３Ｈ）；  ３．５１  −  ３．４５  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．３６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．４，  １Ｈ）；  ３．２８  −  ３．１２  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．０７  −  ２．９０  （ｍ，  １Ｈ）；  ２．５９  −  ２．３９  （ｍ，  １Ｈ）；  １．９７  −  １．８０  （ｍ，  ２Ｈ）；  １．５９  −  １．４５  （ｍ，  １Ｈ）；  １．４３  （ｓ，  ９Ｈ）；  ０．９３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８，  ３Ｈ）；  ０．９０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８，  ３Ｈ）。
【０１０７】
ＳＲＲジアステレオマー：１Ｈ，  ＣＤＣｌ３，  δ  ｐｐｍ  ７．６２  −  ７．５２  （ｍ，  ２Ｈ）；  ７．４４  −  ７．３６  （ｍ，  ３Ｈ）；  ５．０６−４．９８  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．５２  （ｓ，  ３Ｈ）；  ３．５２−３．４５  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．８，  １Ｈ）；  ３．３０−３．１４  （ｍ，  １Ｈ）；  ３．１０  −  ２．９６  （ｍ，  １Ｈ）；  ２．６０  −  ２．４０  （ｍ，  １Ｈ）；  １．９６  −  １．８０  （ｍ，  ２Ｈ）；  １．５８  −  １．４５  （ｍ，  １Ｈ）；  １．４３  （ｓ，  ９Ｈ）；  ０．９６  （ｍ，  ６Ｈ）。
【０１０８】
（実施例１）
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジンの結晶性塩酸塩
【０１０９】
【化２】
2013532170.tif 000007
（Ｓ）−３−（（Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２．６ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、１．０等量）と１−クロロ−４−フルオロベンゼン（３．４ｍＬ、３２．０ｍｍｏｌ、３．０等量）をＤＭＦ（１２ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）中に溶解させた。ＮａＨ（３８５ｍｇ、１６．０ｍｍｏｌ、１．５等量）を３つに分けてゆっくりと添加し、この混合物を窒素下で１０分間、室温で撹拌した。この混合物を９０℃で３時間加熱し、次に室温に冷却した。この混合物をヘキサン（５０ｍＬ）で抽出し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。水層をヘキサン（５０ｍＬ）で再度抽出した。有機層を合わせて１つにし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。次に、粗生成物であるＢＯＣ保護された中間体をカラムクロマトグラフィー（ヘキサンおよびエーテル、０〜１００％、フラッシュクロマトグラフィーで溶離させる）により精製した。脱保護を、ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ）中の１．２ＭのＨＣｌを使用して行った。この混合物を室温で４８時間撹拌した。この溶液を、粗生成物が乾燥してモノ−ＨＣｌ塩となるまで濃縮した。粗生成物であるこのモノ−ＨＣｌ塩をイソプロパノール（５ｍＬ）中に溶解させて油を得、これを５５℃に加熱した。ジイソプロピルエーテル（２５ｍＬ）を、一定速度で撹拌しながらゆっくりと添加して、均質な溶液を形成させ、これを室温に冷却した。反応容器に傷をつけ、種晶（１００ｍｇの粗生成物であるＨＣｌ塩を同様の条件を使用して加熱し、ゆっくりと冷却することによる）を冷却手順の間に添加した。固体が形成し、溶液を室温で１時間置いておいた。この固体を濾過し、ジイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄すると、白色固体（１．４ｇ）が得られた。濾液を濃縮し、結晶化を２回繰り返すと、（３つの沈殿物から）２．４ｇの合計量が得られた。この沈殿を水に溶解させ、凍結乾燥させると、表題化合物が灰白色の結晶性固体として得られた（２．４ｇ、９９％の純度）。
【０１１０】
（表題結晶性塩酸塩の別の調製例）
【０１１１】
【化３】
2013532170.tif 000008
（Ｓ）−３−（（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３５．０ｇ、１４４ｍｍｏｌ、１．０等量）、トリフェニルホスフィン（４１．５ｇ、１５８ｍｍｏｌ、１．１等量）、ｐ−クロロフェノール（３７．０ｇ、２８８ｍｍｏｌ、２．０等量）、および２−メチル−テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）を合わせて１つにし、容器に窒素をパージした。ジイソプロピルアゾジカルボン酸エステル（３１．２ｍＬ、１．１等量）を、室温で２時間かけてゆっくりと添加した。次に、この混合物を室温で一晩撹拌した。ヘキサン（６００ｍＬ）を添加し、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。相を分離させ、有機層を水中の１．０ＭのＮａＯＨ（６００ｍＬ）で洗浄し、希釈した飽和ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させると、粗生成物であるＢＯＣ保護された中間体が得られた。さらにヘキサン（５０ｍＬ）を添加し、得られた混合物を３０分間撹拌した。固体を濾過して取り出すと、粗生成物であるＢＯＣ保護された中間体が濃化油として得られた。次に、これをシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１０〜２０％のヘキサン中のＥｔＯＡｃ）によって精製すると、（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（５．５ｇ）が得られた。
【０１１２】
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−１−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルプロピル］ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２４．７ｇ、６９．８ｍｍｏｌ、１．０等量）をシクロペンチルメチルエーテル（２００ｍＬ、８．０等量）中の３ＭのＨＣｌと混ぜ合わせた。この混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒の大部分を回転蒸発によって除去すると、濃化油が得られた。ジイソプロピルエーテル（３００ｍＬ）を添加し、次いで、容量を回転蒸発によって約２００ｍＬまでゆっくりと減少させると、スラリーが得られた。このスラリーを室温で２時間撹拌し、次に、濾過し、濾過ケーキをジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させると、表題化合物が得られた（１８．１ｇ、９８．５％の純度）。この生成物を５倍容量のＥｔＯＡｃ中に再度スラリーとする（室温、５０℃に加熱し、その後、室温に冷却した）と、表題化合物が結晶性固体として得られた（１８．０ｇ、＞９９％の純度）。
【０１１３】
（実施例２）
粉末Ｘ線回折
粉末Ｘ線回折パターン（ＰＸＲＤ）を、Ｒｉｇａｋｕ  Ｍｉｎｉｆｌｅｘ  ＰＸＲＤ回折計でＣｕ  Ｋα（３０．０ｋＶ、１５．０ｍＡ）放射線を使用して得た。分析は、ゴニオメーターを用いて、２〜４０°の２θ角の範囲にわたって０．０３°の刻み幅で、２°（２θ）／分の連続走査方式で作動させて行った。試料を、石英製標本ホルダー上に粉末状物質の薄層として調製した。計器は、ケイ素金属標準品を用いて±０．２０°の２θ角以内で較正した。本発明の結晶性塩酸塩についての代表的なＰＸＲＤパターンを図１に示す。粒子サイズによる相対強度に対する干渉を減らすために、試験する前に試料を手でつぶした。
【０１１４】
図１に示す多くの強い粉末回折ピークと比較的平らな基線は、この結晶性塩酸塩が良好な結晶性を持つことを強く示している。
【０１１５】
（実施例３）
熱分析
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）を、熱分析コントローラーを備えたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−１００モジュールを使用して行った。データを収集し、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いて解析した。本発明の結晶性塩酸塩の１．２２ｍｇの試料を、フタ付きのアルミニウム製の皿に正確に量り取った。２２℃で５分間の等温平衡時間の後、試料を１０℃／分の線形加熱勾配を使用して２２℃から２５０℃に加熱した。代表的なＤＳＣサーモグラフを図２に示す。
【０１１６】
このＤＳＣサーモグラフは、この結晶性化合物が、約１２８℃の融点を持ち、約２００℃未満では有意な熱分解を起こさない優れた熱安定性を有していることを示している。
【０１１７】
代表的なＴＧＡトレースを図３に示す。これは、結晶性塩酸塩の試料が室温から２００℃では重量の有意な減少を示さず、これが残留水分または溶媒の減少と一致することを示している。
【０１１８】
（実施例４）
動的水分吸着性の評価
動的水分吸着性（ＤＭＳ）の評価（水分吸着−脱着プロフィールとしても公知である）を、本発明の結晶性塩酸塩について、ＶＴＩ大気微量てんびん、ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ  ３３０１６）を使用して行った。およそ２．７３ｍｇの試料サイズを使用し、湿度は、分析の開始時に周囲値に設定した。ＤＭＳ分析は、２％の相対湿度から９０％の相対湿度までの全湿度範囲にわたって、５％相対湿度／ステップの走査速度とした。ＤＭＳの実行は２５℃の等温で行った。代表的なＤＭＳプロフィールを図４に示す。
【０１１９】
ＤＭＳプロフィールは、結晶性塩酸塩が、わずかな吸湿性しか持たない可逆的な吸着／脱着プロファイルをもつことを実証している。この結晶性化合物は、２％の相対湿度から最大で９０％の相対湿度までの広い湿度範囲に曝露した場合にわずかな増量を示し、８５％までの相対湿度に曝露した場合には約１．０重量％未満の増量を示す。これは、この結晶性塩酸塩には、８５％未満の相対湿度では極わずかな吸湿性のリスクしかないことを示している。
【０１２０】
（実施例５）
溶解度と安定性
本発明の結晶性塩酸塩は、広いｐＨ範囲で極めて良好な水溶性を有する。
【０１２１】
【表４】
2013532170.tif 000009
本発明の結晶性塩酸塩（１０μｇ／ｍＬの濃度）はまた、４０℃で３日間の保存後も、純度を損なうことなく良好な安定性を有している。
【０１２２】
【表５】
2013532170.tif 000010
本発明の結晶性塩酸塩はまた室温でも優れた安定性を持ち、１ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの濃度で３０日間以上分解しない。
【０１２３】
（アッセイ１）
ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、およびｈＤＡＴ結合アッセイ
トランスポーターでの試験化合物のｐＫｉ値を決定するために、膜放射性リガンド結合アッセイを使用して、それぞれのヒト組換え体トランスポーター（ｈＳＥＲＴまたはｈＮＥＴまたはｈＤＡＴ）を発現する細胞から調製した膜に対する標識リガンド（３Ｈ−シタロプラムまたは３Ｈ−ニソキセチンまたは３Ｈ−ＷＩＮ３５４２８）結合の阻害を測定した。
【０１２４】
ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴまたはｈＤＡＴを発現する細胞からの膜の調製
ｈＳＥＲＴまたはｈＮＥＴをそれぞれ安定的にトランスフェクションした、組換え体ヒト胎児腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３）由来の細胞株を、３７℃の５％のＣＯ２の加湿インキュベーター中で、１０％の透析したＦＢＳ（ｈＳＥＲＴについて）またはＦＢＳ（ｈＮＥＴについて）、１００μｇ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミン、および２５０μｇ／ｍｌのアミノグリコシド系抗生物質Ｇ４１８を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）培地中で増殖させた。培養物が８０％のコンフルエンスに達した時点で、細胞をＰＢＳ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない）中で十分に洗浄し、ＰＢＳ中の５ｍＭのＥＤＴＡでリフトした。細胞を遠心分離によりペレット化し、溶解緩衝液（１ｍＭのＥＤＴＡを含む１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５））に再懸濁し、ホモジナイズし、遠心分離によりペレット化し、その後、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）および１０％のスクロース中に４℃で再懸濁した。この膜懸濁液のタンパク質濃度をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓｓａｙキットを使用して測定した。膜を瞬間冷凍し、−８０℃で保存した。ｈＤＡＴ（ＣＨＯ−ＤＡＴ）を発現するチャイニーズハムスター卵巣膜をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入し、−８０℃で保存した。
【０１２５】
結合アッセイ
結合アッセイを、９６ウェルアッセイプレートにおいて、２００μｌの全容量のアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、ｐＨ７．４）中で、ＳＥＲＴ、ＮＥＴおよびＤＡＴについてそれぞれ、０．５μｇ、１μｇ、および３μｇの膜タンパク質を用いて行った。３Ｈ−シタロプラム、３Ｈ−ニソキセチン、または３Ｈ−ＷＩＮ３５４２８それぞれについての放射性リガンドＫｄ値を決定するための飽和結合試験を、０．００５〜１０ｎＭ（３Ｈ−シタロプラム）；０．０１〜２０ｎＭ（３Ｈ−ニソキセチン）、および０．２〜５０ｎＭ（３Ｈ−ＷＩＮ３５４２８）の範囲の１２の異なる放射性リガンド濃度を使用して実施した。試験化合物のｐＫｉ値を決定するための阻害アッセイを、１０ｐＭから１００μＭまでの範囲の試験化合物の１１の異なる濃度で、１．０ｎＭの３Ｈ−シタロプラム、１．０ｎＭの３Ｈ−ニソキセチンまたは３．０ｎＭの３Ｈ−ＷＩＮ３５４２８を用いて実施した。
【０１２６】
試験化合物のストック溶液（ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ）を調製し、希釈緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ（ｐＨ７．４）、０．１％のＢＳＡ、４００μＭのアスコルビン酸）を使用して連続希釈物を作製した。ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、またはｈＤＡＴアッセイについて、それぞれ、非特異的放射性リガンドの結合を、１μＭのデュロキセチン、１μＭのデシプラミン、または１０μＭのＧＢＲ１２９０９（それぞれ希釈緩衝液中）の存在下で決定した。
【０１２７】
２２℃で６０分間（または平衡に達するために十分な時間）のインキュベーションの後、膜を、０．３％のポリエチレンイミンで前処理した９６ウェルＵｎｉＦｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｂプレート上での迅速濾過により回収し、３００μｌの洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．９％のＮａＣｌ、ｐＨ７．５、４℃で）で６回洗浄した。プレートを室温で一晩乾燥させ、およそ４５μｌのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ（商標）−２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、液体シンチレーション分光法により、結合した放射能を定量した。阻害曲線および飽和等温線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して解析した。ＩＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄのシグモイド型用量応答（Ｓｉｇｍｏｉｄａｌ  Ｄｏｓｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（可変勾配）アルゴリズムを使用して濃度応答曲線から得た。放射性リガンドについてのＫｄ値およびＢｍａｘ値は、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄの飽和結合グローバルフィット（Ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ）アルゴリズムを使用して飽和等温線から得た。試験化合物についてのｐＫｉ（Ｋｉの１０を底とした負の対数）値を、チェン−プラソフ方程式（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）（Ｃｈｅｎｇ  ＆  Ｐｒｕｓｏｆｆ（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９〜３１０８頁）：Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ）（式中、［Ｌ］＝放射性リガンドの濃度）を使用して最適ＩＣ５０値および放射性リガンドのＫｄ値から計算した。
【０１２８】
実施例１の化合物（ＴＦＡ塩）をこのアッセイで試験して、ＳＥＲＴについてはｐＫｉ≧８．０、およびＮＥＴについてはｐＫｉ≧８．０を示すことを明らかにした。
【０１２９】
（アッセイ２）
ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、およびｈＤＡＴ神経伝達物質取込みアッセイ
トランスポーターについての試験化合物のｐＩＣ５０値を決定するために、神経伝達物質取込みアッセイを使用して、それぞれのトランスポーター（ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、またはｈＤＡＴ）を発現する細胞中への３Ｈ−セロトニン（３Ｈ−５−ＨＴ）、３Ｈ−ノルエピネフリン（３Ｈ−ＮＥ）および３Ｈ−ドーパミン（３Ｈ−ＤＡ）取込みの阻害を測定した。
【０１３０】
３Ｈ−５−ＨＴ、３Ｈ−ＮＥ、および３Ｈ−ＤＡ取込みアッセイ
ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、またはｈＤＡＴをそれぞれ安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ−２９３由来細胞株を、３７℃の５％ＣＯ２の加湿インキュベーター中で、１０％の透析したＦＢＳ（ｈＳＥＲＴについて）またはＦＢＳ（ｈＮＥＴおよびｈＤＡＴについて）、１００μｇ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミン、および２５０μｇ／ｍｌのアミノグリコシド系抗生物質Ｇ４１８（ｈＳＥＲＴおよびｈＮＥＴについて）または８００μｇ／ｍｌのアミノグリコシド系抗生物質Ｇ４１８（ｈＤＡＴについて）を補充したＤＭＥＭ培地で増殖させた。培養物が８０％のコンフルエンスに達した時点で、細胞をＰＢＳ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない）中で十分に洗浄し、ＰＢＳ中の５ｍＭのＥＤＴＡでリフトした。１１００ｒｐｍで５分間の遠心分離により細胞を回収し、ＰＢＳに再懸濁して１回洗浄し、その後、遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２．２ｍＭ）、アスコルビン酸（２００μＭ）、およびパーギリン（２００μＭ）を含むクレブス−リンガー（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ）重炭酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）中に、室温で、緩やかに粉砕することにより再懸濁した。細胞懸濁液中の細胞の最終濃度は、ＳＥＲＴ、ＮＥＴおよびＤＡＴ細胞株についてそれぞれ、７．５×１０４細胞／ｍｌ、１．２５×１０５細胞／ｍｌおよび５．０×１０４細胞／ｍｌであった。
【０１３１】
神経伝達物質取込みアッセイを、９６ウェルアッセイプレートにおいて、４００μｌの全容積のアッセイ緩衝液（ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、ＣａＣｌ２（２．２ｍＭ）、アスコルビン酸（２００μＭ）、およびパーギリン（２００μＭ）を含むクレブス−リンガー重炭酸塩緩衝液、ｐＨ７．４）中で、ＳＥＲＴ、ＮＥＴ、およびＤＡＴそれぞれについて、１．５×１０４および２．５×１０４細胞で行った。試験化合物のｐＩＣ５０値の決定のための阻害アッセイを、１０ｐＭから１００μＭまでの範囲の１１の異なる濃度で実施した。試験化合物のストック溶液（ＤＭＳＯ中１０ｍＭ）を調製し、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ（ｐＨ７．４）、０．１％のＢＳＡ、４００μＭのアスコルビン酸を使用して連続希釈物を調製した。試験化合物をそれぞれの細胞とともに３７℃で３０分間インキュベートし、その後、放射性標識した神経伝達物質、３Ｈ−５−ＨＴ（２０ｎＭの最終濃度）、３Ｈ−ＮＥ（５０ｎＭの最終濃度）、または３Ｈ−ＤＡ（１００ｎＭの最終濃度）を添加した。非特異的神経伝達物質の取込みを、ｈＳＥＲＴ、ｈＮＥＴ、またはｈＤＡＴアッセイについて、それぞれ、２．５μＭのデュロキセチン、２．５μＭのデシプラミン、または１０μＭのＧＢＲ−１２９０９（それぞれ希釈緩衝液中）の存在下で決定した。
【０１３２】
放射性リガンドとともに３７℃で１０分間インキュベーションした後、細胞を、１％のＢＳＡで前処理した９６ウェルＵｎｉＦｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｂプレート上での迅速濾過により回収し、６５０μｌの洗浄緩衝液（氷冷したＰＢＳ）で６回洗浄した。プレートを３７℃で一晩乾燥させ、約４５μｌのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ（商標）−２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、取り込まれた放射能を液体シンチレーション分光法により定量した。阻害曲線をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して分析した。ＩＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄのシグモイド型用量応答（可変勾配）アルゴリズムを使用して濃度応答曲線から得た。
【０１３３】
実施例１の化合物（ＴＦＡ塩）をこのアッセイにおいて試験し、セロトニン再取込み阻害については≧８．０のｐＩＣ５０値、そしてノルエピネフェリン再取込み阻害については≧８．０のｐＩＣ５０値を示すことを明らかにした。
【０１３４】
（アッセイ３）
エキソビボでのＳＥＲＴおよびＮＥＴトランスポーターの占有率試験
エキソビボでの放射性リガンド結合および神経伝達物質取込みアッセイを使用して、試験化合物のインビボでの投与（急性または長期）後の、選択した脳領域におけるインビボでのＳＥＲＴおよびＮＥＴの占有率を決定する。適切な用量（０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ）での試験化合物の投与（静脈内、腹腔内、経口、皮下または他の経路による）後、ラット（１グループあたり≧ｎ＝４）を、特定の時点（１０分間〜４８時間）で断頭により安楽死させ、氷上で脳を解剖する。関係する脳の領域を解剖し、凍結させ、使用するまで−８０℃で保存する。
【０１３５】
エキソビボでのＳＥＲＴおよびＮＥＴ放射性リガンド結合アッセイ
エキソビボでの放射性リガンド結合アッセイのため、ＳＥＲＴ（３Ｈ−シタロプラム）およびＮＥＴ（３Ｈ−ニソキセチン）選択的放射性リガンドと、媒体で処理した動物および試験化合物で処理した動物から調製したラット脳の粗生成物であるホモジネートとの会合の初速度をモニターする（Ｈｅｓｓら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３１０（２）：４８８−４９７を参照のこと）。粗生成物である脳組織ホモジネートは、０．１５ｍｌ（１ｍｇの湿重量あたり）の５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ（ｐＨ７．４）緩衝液中で凍結組織片をホモジナイズずることにより調製する。放射性リガンド会合アッセイは、９６ウェルアッセイプレートにおいて、２００μｌの全容積のアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、０．０２５％のＢＳＡ（ｐＨ７．４））中で、６５０μｇの湿重量組織（２５μｇのタンパク質と等量）を用いて行う。ホモジネートを、それぞれ３Ｈ−シタロプラム（３ｎＭ）および３Ｈ−ニソキセチン（５ｎＭ）とともに最長で５分間インキュベートし、その後、０．３％ポリエチレンイミンで前処理した９６ウェルＵｎｉＦｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｂプレート上での迅速濾過によりアッセイを終結させる。次に、フィルターを３００μｌの洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、０．９％のＮａＣｌ、ｐＨ７．４、４℃）で６回洗浄する。非特異的放射性リガンドの結合を、３Ｈ−シタロプラムまたは３Ｈ−ニソキセチンについて、それぞれ、１μＭのデュロキセチンまたは１μＭのデシプラミン（ｄｅｓｐｉｒａｍｉｎｅ）の存在下で決定する。プレートを室温で一晩乾燥させ、約４５μｌのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ（商標）−２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、液体シンチレーション分光法により結合した放射能を定量する。３Ｈ−シタロプラムおよび３Ｈ−ニソキセチンの会合の初速度を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用する線形回帰により決定する。媒体で処理した動物由来の脳組織ホモジネートに対する放射性リガンド会合の平均速度を決定する。次に、試験化合物の占有率（％）を以下の方程式を使用して決定する：
占有率（％）＝１００×（１−（試験化合物で処理した組織についての会合初速度／媒体で処理した組織についての平均会合速度））
ＥＤ５０値を、試験化合物の用量のｌｏｇ１０対占有率（％）をプロットすることにより決定する。ＥＤ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍのシグモイド型用量応答（可変勾配）アルゴリズムを使用して濃度応答曲線から得る。
【０１３６】
エキソビボでのＳＥＲＴおよびＮＥＴ取込みアッセイ
媒体で処理した動物および試験化合物で処理した動物から調製したラット脳の粗生成物であるホモジネートへの３Ｈ−５−ＨＴまたは３Ｈ−ＮＥの取込みによるエキソビボでの神経伝達物質取込みアッセイを使用して、インビボでのＳＥＲＴおよびＮＥＴトランスポーター占有率を測定する（Ｗｏｎｇら（１９９３）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ８（１）：２３〜３３を参照のこと）。粗生成物である脳組織ホモジネートを、０．３２Ｍのスクロース、２００μＭのアスコルビン酸および２００μＭのパーギリンを含む０．５ｍＬ（１ｍｇの湿重量当たり）の１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中、２２℃で、凍結組織片をホモジナイズすることにより調製する。神経伝達物質取込みアッセイは、９６ウェルＡｘｙｇｅｎプレートにおいて、３５０μｌの全容積のアッセイ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２．２ｍＭのＣａＣｌ２、２００μＭのアスコルビン酸、および２００μＭのパーギリンを含むクレブス−リンガー重炭酸塩緩衝液、ｐＨ７．４）中で、５０μｇのタンパク質を用いて行う。ホモジネートを、３Ｈ−５−ＨＴ（２０ｎＭ）および３Ｈ−ＮＥ（５０ｎＭ）とともに、それぞれ、３７℃で５分間インキュベートし、その後、１％のＢＳＡで前処理した９６ウェルＵｎｉＦｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｂプレート上での迅速濾過によりアッセイを終結させる。プレートを６５０μｌの洗浄緩衝液（氷冷したＰＢＳ）で６回洗浄し、３７℃で一晩乾燥させ、その後、約４５μｌのＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ（商標）−２０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加する。取り込まれた放射能を液体シンチレーション分光法により定量する。非特異的神経伝達物質取込みを、組織ホモジネートを３Ｈ−５−ＨＴ（２０ｎＭ）または３Ｈ−ＮＥ（５０ｎＭ）とともに４℃で５分間インキュベートする並行するアッセイにおいて決定する。
【０１３７】
（アッセイ４）
他のアッセイ
試験化合物の薬理学的特性を評価するために使用される他のアッセイとしては、ｈＳＥＲＴまたはｈＮＥＴを発現する細胞から調製された膜を用いる冷リガンド結合動力学アッセイ（Ｍｏｔｕｌｓｋｙ  ａｎｄ  Ｍａｈａｎ（１９８４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２５（１）：１−９）；放射能標識された（例えば、トリチウム化された）試験化合物を使用する従来の膜放射性リガンド結合アッセイ；例えば、齧歯類またはヒトの脳由来の天然の組織を使用する放射性リガンド結合アッセイ；ヒトまたは齧歯類の血小板を使用する神経伝達物質取込みアッセイ；齧歯類の脳由来の粗生成物であるシナプトソーム調製物または純粋なシナプトソーム調製物を使用する神経伝達物質取込みアッセイが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１３８】
（アッセイ５）
ホルマリン足蹠試験
化合物を、５０μｌのホルマリン（５％）の注射によって誘発される行動反応を阻止するそれらの能力について評価する。金属バンドを、複数の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００〜２５０ｇ）の左後足に貼り、各ラットを、プラスチック製の円筒（直径１５ｃｍ）の中で６０分間そのバンドに馴じませる。薬学的に許容され得る媒体中に化合物を調製し、ホルマリンチャレンジの前の予め指定された時間に全身的に（腹腔内、経口）投与する。注射された（バンドをした）後足の縮みあがり（ｆｌｉｎｃｈｉｎｇ）からなる無意識の侵害受容行動を、自動侵害受容分析器（ＵＣＳＤ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して６０分間連続してカウントする。被験体の抗侵害受容特性を、媒体で処置したラットと化合物で処置したラットにおける縮みあがりの回数を比較することにより決定する（Ｙａｋｓｈ  ＴＬら、「Ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｆｌｉｎｃｈ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｌｉｎ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｂｉｏａｓｓａｙ」（２００１）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９０（６）：２３８６−２４０２）。
【０１３９】
（アッセイ６）
脊髄神経結紮モデル
化合物を、神経損傷によって誘導される接触性アロディニア（非侵害性の機械的刺激に対する高い感受性）を逆転させるそれらの能力について評価する。雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、Ｋｉｍ  ａｎｄ  Ｃｈｕｎｇ、「Ａｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｓｐｉｎａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ」（１９９２）Ｐａｉｎ  ５０（３）：３５５−３６３に記載されているように外科的に準備した。機械的感受性は、神経損傷の前後の、非侵害性機械的刺激に反応した５０％引き込め率（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）として決定する（Ｃｈａｐｌａｎら、「Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔａｃｔｉｌｅ  ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｐａｗ」（１９９４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ５３（１）：５５−６３）。外科処置後１〜４週間、薬学的に許容され得る媒体中で化合物を調製し、全身投与（腹腔内、経口）する。処置の前後での神経損傷により誘導された機械的感受性の程度が、化合物の抗侵害受容特性の指標となる。
【０１４０】
本発明をその特定の態様または実施形態を参照して記載してきたが、当業者は本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができること、または等価物で置き換えることができることを理解するであろう。さらに、適用可能な特許法および特許規則により認められる範囲で、本明細書中で引用した全ての刊行物、特許、および特許出願が、それぞれの文献が本明細書中での言及により個別に組み込まれているのと同程度に、それらの全体が言及により本明細書に組み込まれたこととなる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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