(57)【要約】  ヒト患者において、癌を治療するための方法および組成物であって、ＦＣＧＲ３Ａに対して高アフィニティを有するＤＲ５のＦｃ−ポリペプチドアゴニストの療法的有効量を投与する工程を含む、前記方法および組成物。当該Ｆｃ−ポリペプチドを作製する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＤＲ４またはＤＲ５に特異的に結合し、そしてこれらをアゴナイズする、高アフィニティＦｃ−ポリペプチド。
【請求項２】
前記Ｆｃ−ポリペプチドが抗体である、請求項１のＦｃ−ポリペプチド。
【請求項３】
前記抗体が抗ＤＲ５抗体である、請求項２のＦｃ−ポリペプチド。
【請求項４】
前記抗体が完全ヒトＩｇＧ１抗体である、請求項３のＦｃ−ポリペプチド。
【請求項５】
前記抗体が脱フコシル化されている、請求項４のＦｃ−ポリペプチド。
【請求項６】
前記抗体がＥＵインデックスにしたがって番号付けされたＦｃの３３２位のアミノ酸を含み、前記アミノ酸がヒトＦＣＧＲ３Ａへの前記Ｆｃ−ポリペプチドのアフィニティを増加させる、請求項４のＦｃ−ポリペプチド。
【請求項７】
ヒト患者において癌増殖を阻害する方法であって、前記患者に療法的有効量の請求項４の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法。
【請求項８】
前記癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項７の方法。
【請求項９】
前記高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを単独療法として投与する、請求項８の方法。
【請求項１０】
前記ヒト患者がＦＣＧＲ３ＡのアレルＦ１５８に関してヘテロ接合性またはホモ接合性である、請求項８の方法。
【請求項１１】
ヒト癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞に有効量の請求項４の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１２】
癌細胞が非小細胞肺癌である、請求項１１の方法。
【請求項１３】
ヒト癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞に有効量の請求項５の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１４】
癌細胞が非小細胞肺癌である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
ヒト癌細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞に有効量の請求項６の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１６】
癌細胞が非小細胞肺癌である、請求項１５の方法。
【請求項１７】
ヒトＤＲ４またはＤＲ５に特異的に結合し、そしてこれらをアゴナイズする高アフィニティＦｃ−ポリペプチドで治療するための癌患者を選択するための方法であって、前記患者がＦＣＧＲ３Ａの少なくとも１つのＦ１５８アレルを有する、前記方法。
【請求項１８】
前記患者が２つのＦ１５８  ＦＣＧＲ３Ａアレルを有する、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記患者が非小細胞肺癌を有する、請求項１８の方法。
【請求項２０】
ヒトゲノムＤＮＡ試料において、Ｆ１５８Ｖ  ＦＣＧＲ３Ａ多型に関して遺伝子型決定する方法であって、配列番号１の順方向プライマーおよび配列番号２の逆方向プライマーを用いて、前記ゲノムＤＮＡ試料において、前記ＦＣＧＲ３Ａ多型を含む領域を増幅し、そして配列番号３および配列番号４のプローブを用いて、前記Ｆ１５８Ｖ多型のホモ接合性またはヘテロ接合性に関して前記ＤＮＡ試料を遺伝子型決定する工程を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
[0001]本出願は、２０１０年５月１４日出願の米国仮出願第６１／３４５，００３号の優先権を請求し、該出願の全開示は本明細書に頼られ、そして援用される。
【０００２】
発明の分野
[0002]本発明は、癌の治療において、デスレセプター・アゴニストから得られる臨床的利点を改善するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
[0003]デスレセプター５（ＤＲ５）またはデスレセプター４（ＤＲ４）およびそれらのリガンド、ＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ受容体アポトーシス誘導リガンド）の間の相互作用は、細胞のアポトーシス誘導において重要な役割を果たす。Ａｐｏ２リガンドとしても知られるＴＲＡＩＬは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの４つのメンバー（ＴＲＡＩＬ受容体１〜４）と、そして可溶性オステオプロテゲリン（「ＯＰＧ」）受容体と相互作用するホモ三量体リガンドである。感受性癌細胞表面でのＤＲ４またはＤＲ５へのＴＲＡＩＬの結合は、アポトーシス・カスケードを誘発し、該カスケードは、その効果を発揮するために、最初に架橋プロセスを必要とする。架橋は、デスレセプターのクラスター形成およびシグナル伝達カスケードの活性化を誘導し、アポトーシスの誘導を生じると考えられる。このプロセスは、ｉｎ  ｖｉｖｏでは、主にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で、そしてより低い度合いでマクロファージ上で発現される、Ｆｃγ受容体ＩＩＩＡ（「ＦＣＧＲ３Ａ」）によって仲介される。クラスター形成されると、細胞内タンパク質が受容体の細胞内デスドメインに補充され、シグナル伝達複合体が形成される。次に、特定の細胞内カスパーゼが次いで複合体に補充され、ここで自己活性化され、そして次にさらなるカスパーゼおよび細胞内アポトーシス・カスケードを活性化し、細胞死を導く。癌治療におけるアポトーシスの療法的可能性を認識し、研究者らは多様なＤＲ５およびＤＲ４アゴニスト性抗体を開発してきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
当該技術分野に必要なものは、ＤＲアゴニストの臨床的利点をさらに改善する手段である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
[0004]１つの側面において、本発明は、ヒトＤＲ４および／またはＤＲ５を発現する細胞に特異的に結合し、そしてアポトーシス誘導感受性細胞、例えばヒト癌細胞またはウイルス感染細胞においてアポトーシスを誘導する、アゴニスト性高アフィニティＦｃ−ポリペプチド、例えば抗体またはペプチボディに関する。本発明のＦｃ−ポリペプチドのＦｃは、天然Ｆｃに比較して、ＦＣＧＲ３Ａ受容体に対して増加したアフィニティを有する。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、完全ヒトＩｇＧ１抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃは３３２位（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）で脱フコシル化されるかまたは修飾されている。
【０００６】
[0005]本発明にはまた、本発明の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドの有効量を投与することによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでヒト癌細胞の増殖を阻害する方法も含まれる。いくつかの態様において、高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを、癌を含むヒト患者に投与する。いくつかの態様において、癌は非小細胞肺癌である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドを単独療法として投与し、一方、他の態様において、パクリタキセルと組み合わせて、カルボプラチンなどの１またはそれより多い化学療法剤とともに投与する。さらなる側面において、本発明は、本発明の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドでの治療から臨床的利点を得る統計的可能性が増加したヒト癌患者を選択する手段に関する。選択される患者はＦＣＧＲ３Ａ  Ｆ１５８アレルに関してヘテロ接合性またはホモ接合性である。ヒトゲノムＤＮＡ試料において、ＦＣＧＲ３Ａ多型を遺伝子型
決定するための組成物および方法もまた提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
[0006]本発明は、部分的に、ヒト細胞上のＤＲ５（および／またはＤＲ４）に特異的に結合し、そしてＤＲ５（および／またはＤＲ４）仲介性アポトーシス誘導に感受性である細胞においてアポトーシスを誘導する点で、ＤＲ５（またはＤＲ４）をアゴナイズする、高アフィニティＦｃ−ポリペプチドに関する。いくつかの高アフィニティ抗体がＡＤＣＣ（抗体依存性細胞仲介性細胞傷害）を改善すると報告されてきている。しかし驚くべきことに、本発明のアポトーシス性Ｆｃ−ポリペプチドの抗癌活性もまた増強される。
【０００８】
[0007]セクションの見出しは、本明細書において、構成目的のみのために用いられ、そして記載する主題を限定すると解釈してはならない。本明細書に引用するすべての特許、特許出願、および他の文書の開示は、その全体が、本明細書に明確に援用される。特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医学的および薬学的化学と関連して利用される術語体系、ならびにこうした化学の実験法および技術は、当該技術分野において周知であり、そして一般的に用いられるものである。標準的技術を化学合成、化学分析、薬学的調製、配合、および送達、ならびに患者の治療に用いてもよい。
【０００９】
定義
[0008]本明細書全体で用いる用語は、特別な例で別に限定されない限り、以下のように定義される。
【００１０】
[0009]Ｆｃとの関連において、用語「脱フコシル化」または「脱フコシル化された」は、ＥＵインデックス（Ｋａｂａｔら，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  メリーランド州ベセスダ（１９９１））にしたがって番号付けされたヒトＩｇＧ１  Ｆｃの残基２９７、あるいは非ＩｇＧ１または非ヒトＩｇＧ１免疫グロブリンにおける対応する残基に直接または間接的に共有結合したフコースが、実質的に欠如していることを指す。したがって、複数の脱フコシル化Ｆｃ−ポリペプチドを含む組成物において、少なくとも７０％のＦｃ−ポリペプチドが、Ｆｃの残基２９７で、直接または間接的に（例えば介在する糖を通じて）フコシル化されず、そしていくつかの態様において、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｆｃの残基２９７で、直接または間接的にフコシル化されないであろう。
【００１１】
[0010]Ｆｃ−ポリペプチドとの関連において、用語「アゴニスト」または「アゴニスト性」または「アゴナイズする」は、細胞表面上にＤＲ４および／またはＤＲ５を発現する、ヒト癌細胞などのアポトーシス感受性哺乳動物癌細胞における、ＤＲ４および／またはＤＲ５仲介性のアポトーシス誘導を指す。例示的な感受性ヒト癌細胞は、Ｃｏｌｏ２０５（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２２２）である。ＤＲ５アゴニストはＤＲ５を通じてアポトーシスを誘導し、ＤＲ４アゴニストはＤＲ４を通じてアポトーシスを誘導し、二重ＤＲ５／ＤＲ４アゴニスト（例えばＴＲＡＩＬリガンドまたは二重特異性アゴニスト性抗ＤＲ４／ＤＲ５抗体）は、ＤＲ４および／またはＤＲ５の両方を通じてアポトーシスを誘導可能である。アポトーシス誘導が、ＤＲ５および／またはＤＲ４を通じて仲介されるかどうかは、当該技術分野に知られる方法および試薬を用いて決定可能である。したがって、例えば、アポトーシス感受性ＤＲ特異的細胞株が当該技術分野に知られる。例示的なＤＲ５（＋）／ＤＲ４（−）細胞株はＷＭ３５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２８０７）である。例示的なＤＲ５（−）／ＤＲ４（＋）細胞株はＳＴ４８６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６４７）である。
【００１２】
[0011]用語「抗体」には、任意のアイソタイプまたはサブクラスのグリコシル化および非グリコシル化免疫グロブリン両方の単離型への言及が含まれ、これには：１）ヒト（例えばＣＤＲ移植）、ヒト化、およびキメラ抗体、２）単一特異性（例えばＤＲ５またはＤＲ４）または多重特異性抗体（例えばＤＲ４およびＤＲ５）、および３）モノクローナルまたはポリクローナル抗体の任意の組み合わせが含まれ、こうした抗体が、完全にまたは部分的に、免疫を通じて、組換え技術を通じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成手段によって、ま
たは別の方式で、産生されるかどうかには関わりがない。したがって、用語「抗体」には、組換え手段によって調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えばマウス）、または該動物から調製されたハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）抗体を発現するようにトランスフェクションされた宿主細胞から（例えばトランスフェクトーマから）単離される抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、および（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む他の手段いずれかによって、調製されるか、発現されるか、生成されるか、または単離される抗体が含まれる。抗体はまた、抗体断片、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、および誘導体、例えばディアボディも含む。いくつかの態様において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体、例えばヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体である。典型的には、本発明の抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２サブクラス抗体であろう。抗体は、約１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、または５００ｐＭ未満のＫｄで、そのターゲットに結合可能である。
【００１３】
[0012]用語「誘導」または「誘導体」は、半減期、生物学的利用能、免疫原性、可溶性、または過敏特性などの性質を修飾する一方、その療法的利点を保持するように、直接または間接的に共有結合することによる、Ｆｃ−ポリペプチド（例えば抗体）および／または化学療法剤の修飾を指す。誘導体は、グリコシル化、ＰＥＧ化、および脂質化によって、またはタンパク質コンジュゲート化によって、作製可能である。例示的な誘導化剤には、直鎖ポリマー（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリジン、デキストラン等）；分枝鎖ポリマー（例えば、１９８１年９月１５日発行のＤｅｎｋｅｎｗａｌｔｅｒらに対する米国特許第４，２８９，８７２号；１９９３年７月２０日発行のＴａｍに対する米国特許第５，２２９，４９０号；１９９３年１０月２８日に公表されたＦｒｅｃｈｅｔらによるＷＯ９３／２１２５９）；脂質またはリポソーム；コレステロール基（例えばステロイド）；炭水化物またはオリゴ糖が含まれる。
【００１４】
[0013]用語「ＤＲ４」または「デスレセプター４」または「ＴＲＡＩＬ−Ｒ１」または「ＴＲ−１」は、米国特許第６，３４２，３６３号（本明細書に援用される）の配列番号２に示される４６８アミノ酸、ならびに関連する天然（すなわち野生型）ヒト・ポリペプチド、例えば該ポリペプチドのアレル変異体、スプライス変異体、および成熟型（すなわちリーダー配列を欠く）を指す。
【００１５】
[0014]用語「ＤＲ５」または「ＴＲＡＩＬ−Ｒ」または「Ａｐｏ−２」または「ＴＲ−２」または「ＴＲＡＩＬ受容体２」は、米国特許第７，５２８，２３９号の配列番号２に示される４４０アミノ酸ポリペプチド、ならびに該ポリペプチドの成熟型（すなわちリーダー配列を欠く）を含む、関連する天然（すなわち野生型）ヒト・ポリペプチド、例えばアレル変異体またはスプライス変異体、例えば限定されるわけではないが、米国特許第６，３４２，３６９号の配列番号１、および米国特許第６，７４３，６２５号の配列番号２（各特許は配列番号に援用される）に示される４１１アミノ酸アイソフォームを指す。
【００１６】
[0015]用語「ＤＲ５アゴニスト」は、発現している細胞上の天然ヒトＤＲ５に特異的に結合し、そしてこの受容体を介して、アポトーシス・カスケードを誘発し、少なくとも１つのＤＲ５アゴニスト感受性細胞株（限定されるわけではないが、ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５、またはヒト肺癌細胞株Ｈ２１２２を含む）で測定した際、細胞死（すなわちアポトーシス）の統計的に有意な増加を生じる分子を指す。用語「ＤＲ４アゴニスト」は、発現している細胞上の天然ヒトＤＲ４に特異的に結合し、そしてこの受容体を介して、アポトーシス・カスケードを誘発し、少なくとも１つのＤＲ４アゴニスト感受性細胞株（限定されるわけではないが、ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５、またはヒト肺癌細胞株Ｈ２１２２を含む）で測定した際、細胞死（すなわちアポトーシス）の統計的に有意な増加を生じる分子を指す。特定の態様において、ＤＲ５および／またはＤＲ４アゴニストは、Ｆｃ−ポリペプチド、例えば抗体、ペプチボディ、ヒトＴＲＡＩＬ（どちらも本明細書に援用される米国特許第６，２８４，２３６号；第６，９９８，１１６号を参照されたい）、Ｆｃ−ヒトＴＲＡＩＬリガンド融合、あるいは約１０００ダルトン未満の非タンパク質
性非ポリマー性分子（「小分子」）、例えばＵＳＳＮ  １１／８６６，１６２（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら）のＤＲ５小分子アゴニストまたはＤＲ５小分子に共有結合したＦｃのようなものである。
【００１７】
[0016]用語「有効量」または「療法的有効量」は、ＤＲ５（および／またはＤＲ４）感受性癌を、単独で（すなわち単独療法として）または化学療法剤と組み合わせて（すなわち併用療法として）治療するため、ｅｘ  ｖｉｖｏで（ヒト患者由来の癌細胞と接触させることによって）またはｉｎ  ｖｉｖｏで（ヒト患者への投与によって）投与した際に、癌進行の統計的に有意な阻害を生じる、Ｆｃ−ポリペプチドの量および／または濃度を指す。本明細書において、用語「治療」、あるいは癌を「阻害する」、癌を「阻害している」または癌の「阻害」は：限定されるわけではないが、固形腫瘍に関する反応評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）などの標準的基準によって測定した際の、腫瘍増殖速度の統計的に有意な減少、腫瘍増殖の休止、または腫瘍のサイズ、質量、代謝活性、もしくは体積の減少、あるいは無進行生存（ＰＦＳ）または全生存（ＯＳ）の統計的に有意な増加、の少なくとも１つを指す。
【００１８】
[0017]「Ｆｃ−ポリペプチド」との関連において、用語「Ｆｃ」は、ヒトＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合する免疫グロブリンのＦｃ（結晶化可能断片）を指す。Ｆｃは、一般的に、天然存在（「天然」）ヒトＩｇＧ１  Ｆｃであるが、ＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合するＩｇＧ１  Ｆｃの一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型（「一部切除Ｆｃ」）、あるいはアミノ酸残基の置換、欠失、または付加によって作製される天然存在ＩｇＧ１  Ｆｃの変異体（「Ｆｃ変異体」）であって、ＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合する前記変異体もまた含む。一部切除Ｆｃは、全長Ｆｃの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であってもよい。一部切除ＦｃまたはＦｃ変異体の置換、欠失、または付加の数は、最大、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０であってもよい。一部切除ＦｃまたはＦｃ変異体のＦＣＧＲ３Ａへの特異的結合は、一般的に、天然Ｆｃ特異的結合の少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％である。
【００１９】
[0018]用語「ＦＣＧＲ３Ａ」または「ＣＤ１６ａ」「Ｆｃγ受容体ＩＩＩＡ」または「ＦｃγＲＩＩＩＡ」は、同じ指定のヒトＦｃ受容体を意味する。「Ｆ１５８Ｖ」と称されるヒトＩｇＧ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）の二アレル多型は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）一塩基多型（ＳＮＰ）データベース、クラスター・レポートｒｓ３９６９９１で同定される遺伝子座で、アミノ酸バリン（Ｖ）またはフェニルアラニン（Ｆ）の存在によって区別可能である。これらの２つのアレル型は、一般的に、文献において、そして本明細書において、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡのｒｓ３９６９９１  ＳＮＰ遺伝子座で残基バリンを有する多型に関しては、「バリン１５８」または「Ｖ１５８」として、そしてヒトＦｃγＲＩＩＩＡのｒｓ３９６９９１  ＳＮＰ遺伝子座で残基フェニルアラニンを有する多型に関しては、「フェニルアラニン１５８」または「Ｆ１５８」として、称される。Ｌｅｐｐｅｒｓ−ｖａｎ  ｄｅ  Ｓｔｒａａｔら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２４２：１２７−１３２（２０００）、ならびにＲａｖｅｔｃｈおよびＰｅｒｕｓｓｉａ，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １７０：４８１−４９７（１９８９）もまた参照されたい。
【００２０】
[0019]用語「Ｆｃ−ポリペプチド」は、Ｆｃ、ならびにＤＲ４および／またはＤＲ５に特異的に結合する少なくとも１つのポリペプチド間の共有結合産物を指す。Ｆｃおよびポリペプチドの融合は、直接共有結合（ペプチド結合を介する）または間接的共有結合（人工化学的リンカーを介する）を介してであってもよい。典型的には、Ｆｃ−ポリペプチドはアゴニスト性Ｆｃ−ポリペプチドである。例示的なＦｃ−ポリペプチドには、抗体、ペプチボディ（本明細書に援用されるＷＯ  ２０００／２４７８２）、ターゲティングペプチド（例えば、本明細書に援用されるＵＳ  ７，５２１，４２５を参照されたい）または細胞毒にコンジュゲート化された抗体、あるいはＦｃ−ヒトＴＲＡＩＬリガンド融合体が含まれる。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは二価である。いくつかの態様
において、Ｆｃ−ポリペプチドは二価および二重特異性である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは２つのＩｇＧ１  Ｆｃを含むホモ二量体であり、そしていくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは１つのＩｇＧ１  Ｆｃおよび１つの非ＩｇＧ１  Ｆｃを含むヘテロ二量体である。いくつかの態様において、ホモ二量体およびヘテロ二量体は、完全ヒト抗体である。
【００２１】
[0020]Ｆｃ−ポリペプチドに関連した用語「高アフィニティ」は：同一であるが脱フコシル化されたヒトＦｃ−ポリペプチド（例えば抗体）、またはイソロイシンからグルタミン酸置換のように、残基３３２（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる；米国特許第７，３１７，０９１号および／または米国特許第７，６６２，９２５号を参照されたい）でＦＣＧＲ３Ａアフィニティを増加させる修飾を含む同一ヒトＦｃポリペプチド、の少なくとも１つと少なくとも同じアフィニティで、Ｆ１５８アレルに関してホモ接合性である天然細胞（例えばヒトＮＫ細胞）によって発現されるヒトＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合するように、Ｆｃが修飾されるかまたは構築されることを意味する。一般的に、高アフィニティＦｃ−ポリペプチドは、天然フコシル化Ｆｃ−ポリペプチドがＶ１５８アレルに関してホモ接合性である天然細胞によって発現されるヒトＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合するのと少なくとも同じアフィニティで、ヒトＦＣＧＲ３Ａに特異的に結合する。結合アフィニティを測定する手段は、当該技術分野に知られ、そしてこれには、限定されるわけではないが、ＡｌｐｈａＬＩＳＡＴＭ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合アッセイが含まれる。Ｐｏｕｌｓｅｎ，  Ｊ．ら  ２００７．  Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．  １２：２４０；  Ｃａｕｃｈｏｎ，
Ｅ．ら  ２００９．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍを参照されたい。
【００２２】
[0021]用語「宿主細胞」は、核酸、例えば本発明の核酸、を発現するために使用可能な細胞を指す。宿主細胞は、原核生物、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）であってもよいし、または真核生物、例えば単細胞真核生物（例えば酵母（ｙｅａｓｔ）または他の真菌）、植物細胞（例えばタバコ（ｔｏｂａｃｃｏ）またはトマト（ｔｏｍａｔｏ）植物細胞）、動物細胞（例えばヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）またはハイブリドーマであってもよい。宿主細胞の例には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯなどのその誘導体および血清不含培地中で増殖する関連細胞株（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら，  Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１，  １９９８を参照されたい）またはＤＨＦＲが欠損しているＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Ｕｒｌａｕｂら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−２０，  １９８０を参照されたい）が含まれる。
【００２３】
[0022]用語「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、ヒト抗体が、ヒトに投与された際に、それ自体に対する免疫原性反応を実質的にまったく誘発せず、そして好ましくは検出可能な免疫原性反応をまったく誘発しないように、定常領域およびフレームワークの両方が、完全にまたは実質的にヒト配列からなる抗体を指す。したがって、定義される用語は、例えば、改善された配合または製造可能性を可能にする、天然ヒト抗体配列に比較して作製される、重要でないアミノ酸修飾（しばしば１、２、３、または４より多くないアミノ酸置換、付加、または欠失）（例えば不対システイン残基の除去）を意図する。
【００２４】
[0023]用語「ヒト化抗体」は、実質的に定常領域のすべてがヒト免疫グロブリン由来であるか、またはこれに対応するが、１またはそれより多い可変領域のすべてまたは一部が、別の種、例えばマウス由来である単離抗体を指す。
【００２５】
[0024]用語「単離された」は：（１）発現された状態で混合されている細胞構成要素から、存在する主な種であるように実質的に精製される（例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、または９０％）か、（２）天然には連結されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチドまたは他の部分にコンジュゲート化されるか、（３）より大きいポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一部として、天然には存在しないか、（４）よく定義された組成物において、異なる特異性を有する他の化学的または生物学的剤と組み合わされるか、あるいは（５）そうでなければ天然には見られない人為的操作配列を含む化合物を指す。
【００２６】
[0025]用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、典型的には同じ核酸分子によってコードされる、単一分子組成の単離抗体分子（例えば翻訳後修飾、例えばグリコシル化および／またはシグナル配列切断から生じる、重要でない不均一性にもかかわらず）の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性およびアフィニティを示す。特定の態様において、モノクローナル抗体は、単一ハイブリドーマまたは他の細胞株（例えばトランスフェクトーマ）によって、あるいはトランスジェニック哺乳動物によって、産生される。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法には限定されない。
【００２７】
[0026]用語「天然存在」または「天然」は、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞等の生物学的物質と関連して用いた場合、天然に見られ、そして人間によって修飾されていないものを指す。
【００２８】
[0027]用語「核酸」および「ポリヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド・ポリマー、あるいはそのキメラを指し、そして別に限定されない限り、参照配列の相補鎖を含む。核酸配列は、制御配列が該核酸配列の発現（例えば発現のレベル、タイミング、または位置）に影響を及ぼすならば、該制御配列に「機能可能であるように連結されて」いる。「制御配列」は、第二の核酸の発現（例えば発現のレベル、タイミング、または位置）に影響を及ぼす核酸である。したがって、制御配列および第二の配列は、制御配列および第二の配列間の機能的連結が、第二の配列に対応するＤＮＡ配列の転写を制御配列が開始し、そして仲介するようなものである場合、機能可能であるように連結されている。制御配列の例には、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現調節要素（例えばポリアデニル化シグナル）が含まれる。制御配列のさらなる例は、例えばＧｏｅｄｄｅｌ，  １９９０，  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  カリフォルニア州サンディエゴおよびＢａｒｏｎら，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２３：３６０５−３６０６，  １９９５に記載される。
【００２９】
[0028]用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書全体で交換可能に用いられ、そしてペプチド結合によって互いに連結された２またはそれより多いアミノ酸残基を含む分子を指す。用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」はまた、限定されるわけではないが、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化を含む修飾も含む。
【００３０】
[0029]用語「ペプチボディ」は、指定されたターゲットに特異的に結合し、そしてペプチドがヒトＩｇＧ１  Ｆｃなどの抗体ＦｃのＮまたはＣ末端に共有結合する（例えばペプチド結合を介して）ペプチドを指す。ペプチボディの産生は、一般的に、本明細書に援用される２０００年５月４日公表のＰＣＴ公報ＷＯ  ００／２４７８２に記載される。例示的なペプチドは、本明細書に示す方法いずれかによって生成されてもよく、例えばペプチドライブラリー（例えばファージディスプレイライブラリー）中に所持されても、化学合成によって生成されても、タンパク質消化によって得られても、または組換えＤＮＡ技術を用いて生成されてもよい。
【００３１】
[0030]用語「ペプチボディ断片」または「抗体断片」は、完全な損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ペプチボディまたは抗体より小さいものを含むが、そのターゲット分子（すなわちヒトＤＲ５またはヒトＤＲ４）に特異的に結合する能力を保持するペプチボディまたは抗体のペプチドを指す。例示的な断片には、Ｆ（ａｂ）またはＦ（ａｂ’）２断片が含まれる。こうした断片は、例えば、アミノ末端での一部切除、カルボキシ末端での一部切除、および／またはアミノ酸配列からの残基（単数または複数）の内部欠失から生じることも可能である。断片は、選択的ＲＮＡスプライシングから、あるいはｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏプロテアーゼ活性から生じてもよい。こうした断片はまた、化学ペプチド合成法によって、あるいは抗体またはペプチボディをコードするポリヌクレオチドを修飾することによっても構築可能である。
【００３２】
[0031]用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細
書全体で交換可能に用いられ、そしてこれには、ＤＮＡ分子（例えばｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えばｍＲＮＡ）、およびそのハイブリッドが含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよい。
【００３３】
[0032]用語「特異的に結合する」は、本発明のＦｃ−ポリペプチドが、特定の結合条件下で、十分な統計的サイズのランダムペプチドまたはポリペプチドのコレクションに対する同じ分子の平均アフィニティよりも、そのアフィニティが少なくとも１０倍大きいが、場合によって５０倍大きい、１００、２５０または５００倍大きい、あるいはさらに少なくとも１０００倍大きいように、ターゲット（例えばヒトＤＲ５、ヒトＤＲ４、またはヒトＦＣＧＲ３Ａ）に結合する能力を指す。Ｆｃ−ポリペプチドは、単一ターゲット分子に排他的に結合する必要はなく、ターゲットおよび非ターゲット（例えばパラログまたはオルソログ）間の構造的コンホメーションの類似性により、非ターゲット分子に特異的に結合してもよい。当業者は、異なる種の動物における同じ機能を有する分子（すなわちオルソログ）、またはターゲット分子と実質的に類似のエピトープを有する分子（例えばパラログ）への特異的結合が、ユニークな非ターゲット（例えばランダムポリペプチド）の統計的に有効な提示に比較して決定される用語「特異的結合」の範囲内に含まれることを認識するであろう。したがって、本発明の抗ＤＲ５  Ｆｃ−ポリペプチドは、ターゲット分子の１より多くの別個の種より多くに特異的に結合してもよく、例えばＤＲ５およびＤＲ４両方に特異的に結合してもよい。固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイを用いて、特異的結合を決定してもよい。一般的に、特異的結合は、少なくとも約１ｘ１０７Ｍ−１、そしてしばしば、少なくとも１ｘ１０８Ｍ−１、１ｘ１０９Ｍ−１、または１ｘ１０１０Ｍ−１の会合定数で進行する。
【００３４】
[0033]用語「ベクター」は、宿主細胞内への本発明のポリヌクレオチドの導入に用いられる核酸を指す。ベクターはしばしばレプリコンである。発現ベクターは、適切な宿主細胞に、または適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下に存在する場合、挿入された核酸の転写を可能にする。
【００３５】
Ｆｃ−ポリペプチド
[0034]本発明は、増強された抗癌活性を持つＦｃ−ポリペプチドを提供する。構造的に、これらのＦｃ−ポリペプチドは、ヒトＦＣＧＲ３Ａに対する増強されたアフィニティ（「高アフィニティ」）を、ＤＲ４および／またはＤＲ５アゴニスト性機能と組み合わせる。アゴニストとして、本発明のＦｃ−ポリペプチドは、ヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合し、そしてこれらを通じてアポトーシスを仲介することによって、感受性ヒト癌細胞のアポトーシスを誘導する。
【００３６】
[0035]本発明は、したがって、Ｆｃが脱フコシル化されて、ヒトＦＣＧＲ３Ａに対するアフィニティが増加している、アゴニスト性高アフィニティＦｃポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、Ｆｃは、脱フコシル化完全ヒトＩｇＧ１  Ｆｃである。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、脱フコシル化完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、脱フコシル化完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体は、ヒトＤＲ５および／またはヒトＤＲ４に特異的に結合する。したがって、いくつかの態様において、脱フコシル化完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体は、ヒトＤＲ５およびヒトＤＲ４に特異的に結合する二重特異性抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、ヒトＤＲ５に特異的に結合するが、ヒトＤＲ４に特異的に結合しない（すなわち交差反応しない）完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、ヒトＤＲ４に特異的に結合するが、ヒトＤＲ５に特異的に結合しない（すなわち交差反応しない）。脱フコシル化または抗体またはＦｃ−融合ペプチドを生成する方法が当該技術分野に知られ、そしてこれには、限定されるわけではないが、細胞性フコシルトランスフェラーゼ機能を阻害するために遺伝子（例えばｓｉＲＮＡ）手段または化学的手段を用いる組換え体発現、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子を欠く宿主細胞（例えばｆｕｔ８ノックアウト）の使用、あるいはｉｎ  ｖｉｔｒｏ化学的手段または酵素的手段によるＦｃの脱フコシル化が含まれる。例えば、本明細書に援用される米国特許第６，９４６，２９２号を参照されたい。当業者は、本発明の複数
の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを含む組成物が、増強された抗癌活性を示すために１００％脱フコシル化されている必要はなく、一般的に少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％の脱フコシル化Ｆｃ−ポリペプチドを含むことを認識するであろう。
【００３７】
[0036]本発明はまた、Ｆｃが米国特許第７，３１７，０９１号（本明細書に援用される）に記載されるような増強されたＦＣＧＲ３Ａアフィニティを生じる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、アゴニスト性高アフィニティＦｃ−ポリペプチドも提供する。いくつかの態様において、前述のアミノ酸置換を含むＦｃは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃである。いくつかの態様において、ＦＣＧＲ３Ａ結合を増強する少なくとも１つのアミノ酸置換を含むポリペプチドは、完全ヒトＩｇＧ１  Ｆｃモノクローナル抗体である。いくつかの態様において、完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体は、ヒトＤＲ５および／またはヒトＤＲ４に特異的に結合する。したがって、いくつかの態様において、完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体は、ヒトＤＲ５およびヒトＤＲ４に特異的に結合する二重特異性抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、ヒトＤＲ５に特異的に結合するが、ヒトＤＲ４に特異的に結合しない（すなわち交差反応しない）完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、ヒトＤＲ４に特異的に結合するが、ヒトＤＲ５に特異的に結合しない（すなわち交差反応しない）。いくつかの態様において、Ｆｃは、残基：２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２、および３３５の少なくとも１つで置換を含み、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスのものである。いくつかの態様において、Ｆｃは：Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、およびＴ３３５Ｙからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、数字に先行する文字は置換残基を１文字アミノ酸コードで示し、数字はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスにしたがって番号付けされるＦｃの残基を示し、そして数字の後の文字は天然残基を示す。いくつかの態様において、高アフィニティＦｃ−ポリペプチドは、上述のような、脱フコシル化ＦｃおよびＦＣＧＲ３Ａアフィニティを増強させるアミノ酸置換の両方を含む。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドのＦｃは、ＦＣＧＲ３Ａに対するアフィニティを増加させる置換を１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０含む。
【００３８】
[0037]本発明の高アフィニティＦｃ−ポリペプチドのポリペプチドは、ヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合し、そしてこれらをアゴナイズし、それによって、感受性ヒト癌細胞においてアポトーシスを誘導する。ＤＲ５および／またはＤＲ４をアゴナイズする能力に関してＦｃ−ポリペプチドをスクリーニングする方法は、一般の当業者に知られる。本発明のＦｃ−ポリペプチドのポリペプチドは、ＤＲ４および／またはＤＲ５ターゲットに特異的に結合するペプチドに関して、ファージライブラリーをスクリーニングすることによるなど、多くの供給源から得られうる。ペプチドライブラリーを作製し、そしてスクリーニングする方法が、当該技術分野に周知である。所望の特異的結合特性を有するペプチドを、直接または間接的に（すなわちリンカーを介して）Ｆｃに共有結合させて、Ｆｃ−ポリペプチドを得ることも可能である。いくつかの態様において、ＦｃはヒトＩｇＧ１  Ｆｃである。他の態様において、ポリペプチドは、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３を含む抗ＤＲ４および／または抗ＤＲ５抗体の抗原結合部位である。好適には、免疫グロブリン、例えばヒトＤＲ４お
よび／またはヒトＤＲ５に特異的に結合する抗体の可変重鎖および可変軽鎖を、本発明のＦｃ−ポリペプチドにおいて利用してもよい。したがって、いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは、それ自体、ヒトＤＲ５および／またはヒトＤＲ４に特異的に結合する、二価ＩｇＧ１抗体、例えば完全ヒトモノクローナル抗体である。いくつかの態様において、Ｆｃ−ポリペプチドのポリペプチドは、ヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合する抗体のｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片、あるいはヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合するペプチド・アプタマーである。本発明の方法にしたがって修飾して、増強された抗癌活性を持つ高アフィニティＦｃ−ポリペプチドを得ることが可能である、代表的なＦｃ−ポリペプチドには、抗ＤＲ５アゴニスト抗体、コナツムマブ（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．）、レキサツムマブ（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）、ドロジツマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，
Ｉｎｃ．）、およびチガツズマブ（第一三共）、ならびに抗ＤＲ４アゴニスト抗体、マパツムマブ（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）が含まれる。別の態様において、本発明のＦｃ−ポリペプチドのポリペプチドは、ヒトＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ受容体アポトーシス誘導リガンド）リガンドである。特定の態様において、Ｆｃ−ポリペプチドは二価Ｆｃ−ポリペプチドであり、ポリペプチドはヒトＴＲＡＩＬリガンドである。
【００３９】
[0038]本発明のＦｃ−ポリペプチドのＦｃは、当該技術分野に周知の多様な方法によって得られることも可能であり、これには、限定されるわけではないが、組換え発現法、固相ペプチド合成法、ヒト免疫グロブリンなどの天然供給源からの単離、またはこれらの方法の組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、ＦｃはヒトＩｇＧ１である。特定の態様において、１つのアイソタイプのＦｃを、アイソタイプスイッチングによって、異なるアイソタイプに変換する。アイソタイプスイッチングの方法には、限定されるわけではないが、とりわけ、直接組換え技術および細胞−細胞融合技術（例えば米国特許第５，９１６，７７１号）が含まれる。特定の態様において、ＦｃをヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスからヒトＩｇＧ１サブクラスに変換する。当業者は、可溶性、製造可能性、安定性、および生物製剤の製造に関連する他の要因を最適化するために、天然ヒトＩｇＧ１のいくつかのアミノ酸残基を修飾して、なおヒトＩｇＧ１の定義内にあることが可能であることを認識するであろう。一般的に、総数最大１５を越えない残基が、欠失され、付加され、およびまたは置換され、そしてこれらは、しばしば１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１を越えない。しかし、Ｆｃ−ポリペプチドのＦｃは、Ｆｃ−ポリペプチドの薬物動態学的または薬力学的特性を増強させる、標識、毒素、薬剤、組織特異的結合剤等に、直接または間接的に連結させることも可能である。
【００４０】
[0039]いくつかの態様において、２またはそれより多いＦｃ−ポリペプチドを、例えばシステイン−システイン・ジスルフィド結合によって互いに共有結合させて、Ｆｃ−ポリペプチドの二価（すなわち２つの抗原結合部位）、三価、またはより高次の構造を生成することも可能である。二価Ｆｃ−ポリペプチド、例えば抗体は、単一特異性であり、そしてターゲットの単一エピトープに特異的に結合してもよいし、あるいは同じターゲット（例えばヒトＤＲ５またはヒトＤＲ４）上の２つのユニークなエピトープ、または異なるターゲット（例えばヒトＤＲ４およびヒトＤＲ５）の２つのユニークなエピトープに特異的に結合するように、二重特異性であってもよい。さらなる態様において、ヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合する２またはそれより多いポリペプチドを単一のＦｃに共有結合させて、本発明のＦｃ−ポリペプチドを形成する。したがって、いくつかの態様において、２、３、または４のこうしたポリペプチドを、単一のＦｃに共有結合させる。こうしたＦｃ−ポリペプチドを二量体化（例えば、二価Ｆｃ−ポリペプチドを形成するＦｃ鎖間のジスルフィド結合によって）、三量体化等に供してもよい。ポリペプチドをＦｃのＮ末端またはＣ末端で、またはその近傍で、あるいはＦｃ内の残基で、Ｆｃに直接または間接的に付着させてもよい。他の態様において、ヒトＤＲ４および／またはヒトＤＲ５に特異的に結合する第二のまたはさらなるポリペプチドを、それ自体がＦｃに共有結合しているポリペプチドに、共有結合させる。したがって、Ｆｃ−ポリペプチドは、Ｆｃ
に、あるいはそれ自体がＦｃに直接または間接的に共有結合しているポリペプチドに、直接または間接的に共有結合している多数のポリペプチドを含んでもよい。
【００４１】
[0040]特定の態様において、組換え法を用いて、本発明のＦｃ−ポリペプチド（例えば抗体）を構築してもよい。したがって、本発明の別の側面は、本発明のＦｃ−ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。別の側面において、本発明は、Ｆｃ−ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。特定の態様において、発現ベクターは、適切な宿主細胞において、発現を補助するように、Ｆｃ−ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能可能であるように連結される調節配列（例えばプロモーター、エンハンサー）を含む。特定の態様において、発現ベクターはまた、宿主細胞において、染色体独立複製を可能にするポリヌクレオチド配列もまた含む。例示的なベクターには、限定されるわけではないが、プラスミド、コスミド、およびＹＡＣが含まれる。さらに別の側面において、本発明は、本発明の発現ベクターを含む宿主細胞を含む。適切な宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）を本発明の発現ベクターでトランスフェクションし、そしてＦｃ−ポリペプチドの発現に適した条件下で、トランスフェクションされた宿主細胞を培養する方法が、当該技術分野に知られる。用いるトランスフェクション法は、形質転換される宿主に応じる可能性もある。哺乳動物細胞内に異種ポリヌクレオチドを導入するための特定の方法が当該技術分野に知られ、そしてこれには、限定されるわけではないが、デキストラン仲介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン仲介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム中でのポリヌクレオチド（単数または複数）の被包、および核内へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが含まれる。発現のための宿主として利用可能な特定の哺乳動物細胞株が当該技術分野に知られ、そしてこれには、限定されるわけではないが、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が含まれ、これには、限定されるわけではないが、チャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｅ５細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞性癌腫細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２）、および多くの他の細胞株が含まれる。特定の態様において、どの細胞株が高レベル発現を有し、そして所望の抗原結合特性を持つＦｃ−ポリペプチドを産生するかを決定することを通じて、細胞株を選択してもよい。
【００４２】
療法適用
[0041]本発明のＦｃ−ポリペプチド（「療法組成物」）を用いて、単独療法として（すなわち単一の剤として）、少なくとも１つの化学療法剤と組み合わせて（すなわち併用療法）、および／または放射線療法と組み合わせて、ヒト癌細胞の増殖を阻害してもよい。療法組成物の有効量を投与して、ＤＲ４および／またはＤＲ５仲介性アポトーシスに感受性である癌の進行を阻害するか、停止するか、または逆転させる。ヒト癌細胞をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで治療してもよい。ヒト患者のｅｘ  ｖｉｖｏ治療において、癌細胞を含有する組織または体液を体外で処置して、そして次いで、組織または体液を患者内に再導入する。いくつかの態様において、ヒト患者に療法組成物を投与することによって、患者において、癌をｉｎ  ｖｉｖｏで治療する。したがって、本発明は、対照での治療に比較して、腫瘍の進行を阻害するか、停止させるか、または逆転させるか、あるいは別の方式で、無進行生存（すなわち患者が悪化しない膵臓癌を患いつつ生存している、治療中および治療後の期間の長さ）または全生存（「生存率」とも呼ばれる；すなわち癌と診断されるかまたは癌に関して治療された後、特定の期間に渡って生存している研究または治療群の人々の割合）の統計的に有意な増加を生じる、ｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ
ｖｉｖｏ法を提供する。
【００４３】
[0042]本発明の方法によって治療可能な癌には、限定されるわけではないが、肝臓癌、脳癌、腎癌、乳癌、膵臓癌（腺癌）、結腸直腸癌、肺癌（小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、脾臓癌、胸腺または血球の癌（すなわち白血病）、前立腺癌、精巣癌、卵巣癌、子宮癌、胃癌、頭頸部扁平細胞癌、黒色腫、およびリンパ腫が含まれる。いくつかの態様において、癌は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。
【００４４】
薬剤組成物
[0043]本発明の療法組成物（すなわちＦｃ−ポリペプチド）を各々、単独療法として、または併用療法として、すなわち他の剤（例えば抗血管新生剤、化学療法剤、放射線療法）と組み合わせて投与してもよい。例示的な化学療法剤には、限定されるわけではないが、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシン・アラビノシド、シクロホスファミド、チオテパ、ドセタキセル、ブスルファン、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール、パクリタキセル、メトトレキセート、ゲムシタビン、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラマイシン、メルファランおよび他の関連ナイトロジェンマスタードが含まれる。
【００４５】
[0044]本発明の化学療法剤を、本発明の特異的結合剤の前におよび／または後に（集合的に「連続治療」）、ならびに／あるいはそれと同時に（「同時治療」）投与してもよい。組み合わせの連続治療（例えば前治療、後治療、または重複治療）にはまた、薬剤を交互に投与する措置、または１つの構成要素を長期間投与し、そして他のもの（単数または複数）を断続的に投与する措置も含まれる。組み合わせの構成要素を、同じまたは別個の組成中で投与してもよいし、そして同じまたは異なる投与経路によって投与してもよい。
【００４６】
[0045]本発明の療法組成物と同時投与してもよい例示的な癌療法には、乳癌および他の型の癌を治療するのに使用可能なＨＥＲＣＥＰＴＩＮＴＭ（トラスツズマブ）；非ホジキンリンパ腫および他の型の癌を治療するのに使用可能なＲＩＴＵＸＡＮＴＭ（リツキシマブ）、ＺＥＶＡＬＩＮＴＭ（イブリツモマブ・チウキセタン）およびＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥＴＭ（エプラツズマブ）；慢性骨髄性白血病および胃腸間質腫瘍を治療するのに使用可能なＧＬＥＥＶＥＣＴＭ（メシル酸イマチニブ）；ならびに非ホジキンリンパ腫の治療に使用可能なＢＥＸＸＡＲＴＭ（トシツモマブ）が含まれる。特定の例示的な抗体にはまた、ＥＲＢＩＴＵＸＴＭ；ＶＥＣＴＩＢＩＸＴＭ、ＩＭＣ−Ｃ２２５；ＩＲＥＳＳＡＴＭ（ゲフィチニブ）；ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ（エルロチニブ）；ＫＤＲ（キナーゼドメイン受容体）阻害剤；抗ＶＥＧＦ抗体およびアンタゴニスト（例えばＡＶＡＳＴＩＮＴＭおよびＶＥＧＦ−トラップ）；抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）受容体抗体、ペプチボディ、および抗原結合領域；抗Ａｎｇ−１およびＡｎｇ−２抗体、ペプチボディ（例えばＡＭＧ  ３８６、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ）、および抗原結合領域；Ｔｉｅ−２、ならびに他のＡｎｇ−１およびＡｎｇ−２受容体に対する抗体；Ｔｉｅ−２リガンド；Ｔｉｅ−２キナーゼ阻害剤に対する抗体；およびＣＡＭＰＡＴＨＴＭ（アレムツズマブ）も含まれる。
【００４７】
薬学的配合物
[0046]本発明の療法組成物を含む薬学的組成物は、例えば組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘性、清澄性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着、あるいは浸透を修飾するか、維持するか、または保存するための配合材料を含有してもよい。薬学的組成物中の主なビヒクルまたはキャリアーは、天然で、水性または非水性いずれであってもよい。例えば、適切なビヒクルまたはキャリアーは、非経口投与のための組成物において一般的な他の材料を補充可能な、注射用水または生理学的生理食塩水であってもよい。中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。他の例示的な薬学的組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓ緩衝液または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含み、これらはさらに、ソルビトールまたは適切なその代替物を含んでもよい。本発明の１つの態様において、所望の度合いの純度を有する選択した組成物を、凍結乾燥ケークまたは水溶液の形で、場合による配合剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記）と混合することによって、結合剤組成物を貯蔵用に調製してもよい。さらに、適切な賦形剤、例えばスクロースを用いて、結合剤産物を凍結乾燥物として配合してもよい。
【００４８】
[0047]配合構成要素は、投与部位に許容されうる濃度で存在する。例えば、組成物を生理学的ｐＨまたはわずかにより低いｐＨ、典型的には約５〜約８のｐＨ範囲内に維持するように、緩衝剤を用いる。非経口投与に特に適したビヒクルは、結合剤が適切に保存され
た無菌等張溶液として配合される、無菌蒸留水である。さらに別の調製は、産物の徐放または持続放出を提供する、注射可能微小球体、生体内分解性粒子、ポリマー性化合物（ポリ乳酸、ポリグリコール酸）、ビーズ、またはリポソームなどの剤と、所望の分子を配合することを伴ってもよく、これを次いで、デポ注射を介して送達してもよい。
【００４９】
[0048]別の側面において、非経口投与に適した薬学的配合物を、水溶液中で、好ましくは生理学的に適合する緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理学的緩衝生理食塩水において、配合してもよい。水性注射懸濁物は、懸濁物の粘性を増加させる物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含有してもよい。さらなる薬学的組成物が当業者には明らかであり、これには、持続送達または調節送達配合物中に結合剤分子を含む配合物が含まれる。多様な他の持続送達手段または調節送達手段、例えばリポソームキャリアー、生体内分解性微小粒子または多孔性ビーズおよびデポ注射を配合するための技術もまた当業者に知られる。ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用しようとする薬学的組成物は、典型的には無菌でなければならない。これは、無菌ろ過膜を通じたろ過によって達成可能である。組成物を凍結乾燥する場合、この方法を用いた滅菌を、凍結乾燥および再構成の前または後のいずれに行うことも可能である。非経口投与のための組成物を、凍結乾燥型で、または溶液中で貯蔵してもよい。さらに、非経口組成物は、一般的に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル内に入れられる。
【００５０】
[0049]薬学的組成物が配合されたならば、これを、溶液、懸濁物、ジェル、エマルジョン、固体、あるいは脱水または凍結乾燥粉末として、無菌バイアル中に貯蔵することも可能である。こうした配合物をすぐに使用できる型または投与前に再構成を必要とする型（例えば凍結乾燥型）のいずれで保存してもよい。療法的に使用するための薬学的組成物の有効量は、例えば、療法背景および目的に応じるであろう。当業者は、したがって、治療に適切な投薬レベルが、部分的に、送達する分子、結合剤分子を用いている徴候、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面積または臓器サイズ）および状態（年齢および全身健康状態）に応じて多様であろうことを認識するであろう。したがって、臨床医は、投薬量を力価決定（ｔｉｔｅｒ）し、そして最適療法効果を得るために投与経路を修飾してもよい。典型的な投薬量は、上述の要因に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜最大約５０ｍｇ／ｋｇまたはそれより多い可能性もある。いくつかの態様において、投薬量は、１、３、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【００５１】
[0050]任意の化合物に関して、療法的有効用量は、まず、細胞培養アッセイにおいて、あるいは動物モデル、例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ブタ、またはサルにおいてのいずれかで概算可能である。また、動物モデルを用いて、適切な濃度範囲および投与経路を決定することも可能である。次いで、こうした情報を用いて、ヒトにおいて投与に有用な用量および経路を決定してもよい。正確な投薬量は、治療を必要とする被験体に関連する要因を考慮して決定されるであろう。投薬量および投与を調整して、十分なレベルの活性化合物を提供するか、または所望の効果を維持する。考慮されうる要因には、疾患状態の重症度、被験体の全身健康状態、被験体の年齢、体重、および性別、投与の時期および頻度、薬剤の組み合わせ（単数または複数）、反応感受性、ならびに療法に対する反応が含まれる。特定の配合物の半減期およびクリアランス速度に応じて、長期作用薬学的組成物を３〜４日ごと、毎週、または２週ごとに投与してもよい。投薬頻度は、用いる配合物における結合剤分子の薬物動態学的パラメーターに応じるであろう。典型的には、所望の効果を達成する投薬量に到達するまで、組成物を投与する。したがって、組成物を単一用量として、または長期に渡る多数回用量として（同じまたは異なる濃度／投薬量）、または連続注入として、投与してもよい。適切な投薬量のさらなる改良は、ルーチンに行われる。適切な用量−反応データの使用によって、適切な投薬量を確認してもよい。
【００５２】
ＦＣＧＲ３Ａ遺伝子型決定
[0051]本発明は、無進行生存および／または全生存において、統計的に有意な、増加した反応によって立証されるように、（対照に比較して）本発明のアゴニスト性高アフィニティＦｃ−ポリペプチドでの治療から、臨床的利点を得る可能性がより高い、ヒト患者（
単数または複数）を同定する方法を提供する。こうした患者は、ＦＣＧＲ３ＡのＦ１５８多型に関して、ヘテロ接合性（Ｆ１５８／Ｖ１５８）またはホモ接合性（Ｆ１５８／Ｆ１５８）である。このアレル相違に基づいて、患者を階層化し、そして次いで、ＦＣＧＲ３ＡのＦ１５８アレルをコードするアレルを１または２コピー有すると同定されるものを、本明細書に開示する療法組成物によって治療することも可能である。Ｖ１５８およびＦ１５８多型を有する患者を同定する工程は、ＰＣＲに基づく方法など、当業者に知られる分析法を使用して、達成可能である（Ｌｅｐｐｅｒｓ−ｖａｎ  ｄｅ  Ｓｔｒａａｔら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２４２：１２７−１３２（２０００））。好適には、臨床医は、こうした方法を実行する第三者実験室のサービスを用いて、こうした患者を同定してもよい。癌患者におけるＦＣＧＲ３ＡのＶ１５８またはＦ１５８アレルを０、１、または２コピー有する患者を同定するためのキットもまた、本発明の範囲内である。こうしたキットは、場合によって、高アフィニティＦｃ療法組成物に反応する可能性がより高い患者（すなわちＦ１５８／Ｖ１５８およびＦ１５８／Ｆ１５８患者）のアレル型を同定する書面の使用説明書を含有してもよい。
【００５３】
[0052]別の側面において、本発明は、アレル識別アッセイを用いて、ＦＣＧＲ３Ａ多型、Ｆ１５８およびＶ１５８に関して、ヒトゲノムＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）で遺伝子型決定するための組成物および方法に関する。ヒトゲノムＤＮＡを単離し、そして精製する方法が当該技術分野に知られる。該方法において、ＰＣＲプライマーは、Ｆ１５８Ｖ（ＳＮＰ  ＩＤ：ｒｓ３９６９９１）と一般的に称されるＦＣＧＲ３Ａの一塩基多型（ＳＮＰ）を含有する領域を特異的に増幅する。該方法において、順方向プライマーは、配列５’−ＴＴＣＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＣＡＡＡＣＡＣ−３’（配列番号１）を含み、一方、逆方向プライマーは：５’−ＴＧＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡ−３’（配列番号２）を含む。順方向プライマーは、ＳＮＰの上流の、ＦＣＧＲ３ＡおよびＦＣＧＲ２Ａ遺伝子間の一塩基相違を持つ領域中で特異的にアニーリングする。さらに、順方向プライマーには、３’端から３ヌクレオチドにミスマッチが取り込まれ、３’端の識別能を最大限にしている。逆方向プライマーは、ＦＣＧＲ３ＡおよびＦＣＧＲ２Ａ両方において、ＳＮＰの下流の、正確に同じ配列である領域中でアニーリングする。したがって、該アッセイは、遺伝子特異性に関して、順方向プライマーに頼る。該プライマーは、９３塩基対アンプリコンを増幅する。
【００５４】
[0053]ＰＣＲ増幅後、１対の二重標識プローブが、ドナーの遺伝子型を決定する。該プローブは、特定のアニーリング条件下で、ハイブリダイゼーション領域中央付近に位置するＳＮＰを含むアンプリコンの内部領域に特異的にアニーリングする。特異的アニーリングのための方法および組成物が、当業者に知られる。１つのプローブは、２つの測定されるＳＮＰアレル各々に特異的である。いくつかの態様において、プローブは標識される。１つの態様において、１つのプローブは、５’端で、蛍光レポーター色素、フルオレセインアミダイト（ＦＡＭ）で標識される。ＦＡＭは、多くの供給源より商業的に得られうる。例えば、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国バージニア州スターリングを参照されたい。もう一方のプローブは、異なるレポーター色素で標識される。１つの態様において、プローブは、ヤキマイエロー（ＹＡＫ）で標識される。Ｅｕｒｏｇｅｎｔｅｅ、米国カリフォルニア州サンディエゴを参照されたい。どちらのプローブも３’端で、消光剤、例えばＢｌａｃｋ−Ｈｏｌｅ消光剤（ＢＨＱ）で修飾されてもよい。ＢＨＱは、多くの供給源より商業的に得られうる。例えば、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国バージニア州スターリングを参照されたい。したがって、いくつかの態様において、１つのプローブはＶ１５８に関して特異的であり、そして配列：５’−＜ＦＡＭ＞ＴＴＡＣＴＣＣＣＡＡＡＡＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡ−３’＜ＢＨＱ＞（配列番号３）を含み、そしてもう一方のプローブは、Ｆ１５８アレルに関して特異的であり、そして配列：５’＜ＹＡＫ＞ＴＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡ−３’＜ＢＨＱ＞（配列番号４）を含む。
【００５５】
[0054]プローブが損なわれていない場合、レポーター色素の蛍光は、消光剤色素が近接していることによって消光される。各ＰＣＲ周期の伸長期中、ＤＮＡポリメラーゼがアニーリングしたプローブを切断し、プローブからレポーター色素を放出させ、蛍光の増加を
生じる。プローブは、ＰＣＲ周期中、ハイブリダイゼーションに関して競合し、そしてＤＮＡに存在するＳＮＰアレルに相補的なプローブからのみ、蛍光が生じる。ヘテロ接合の場合は、両方のプローブによって蛍光が生じる。ＰＣＲの十分な増幅周期後、例えば４０周期後に、蛍光レベルを測定する。したがって、このＳＮＰアッセイは、ヒトゲノムＤＮＡ試料を、Ｆ１５８／Ｆ１５８（ホモ接合体）、Ｖ１５８／Ｖ１５８（ホモ接合体）、およびＦ１５８／Ｖ１５８（ヘテロ接合体）として分類する。
【００５６】
[0055]上記リストは、例示目的のみであり、そして当業者によって知られるかまたは本明細書に示すガイドラインを用いて、当業者によって到達可能な、本明細書記載の化合物と同時に使用可能な他の化合物または治療の使用を排除しない。
【実施例】
【００５７】
実施例１
[0056]実施例１は、進行した非小細胞肺癌の第一の治療のための、パクリタキセルおよびカルボプラチンと組み合わせた、コナツムマブの１ｂ／２相研究を記載する。
【００５８】
主な目的は、無進行生存時間によって評価されるような、パクリタキセル／カルボプラチンと組み合わせた、コナツムマブ（ＡＭＧ６５５）（１ｂ相において選択された２つの用量：３ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇで）の有効性を概算することである。
【００５９】
研究のための包含基準には：
組織学的または細胞学的に確認された非小細胞肺癌。
【００６０】
被験体は、悪性胸水を伴う病期ＩＩＩＢまたは病期ＩＶと定義される進行した非小細胞肺癌あるいは再発疾患に罹患していなければならない。
【００６１】
最大６周期の化学療法を受けるよう計画される
０または１層の米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）スコア
年齢＞１８歳の男性または女性
適切な血液学的、腎、肝および凝固機能
[0057]研究の１ｂ相部分の間に、２相のコナツムマブ用量を決定した。この研究の２相部分は多施設無作為化二重盲検プラセボ対照研究であり、計画された総試料サイズは１５０人の被験体であった。１〜３の治療アームに対して、被験体を１：１：１の比に無作為化した：
アーム１：パクリタキセル／カルボプラチンに加えて１５ｍｇ／ｋｇコナツムマブ
アーム２：パクリタキセル／カルボプラチンに加えて３ｍｇ／ｋｇコナツムマブ
アーム３：パクリタキセル／カルボプラチンに加えてプラセボ
米国東海岸癌臨床試験グループ成績状態（ＥＣＯＧ）０または１、および疾患病期（ＩＩＩｂまたはＩＶ／再発）によって無作為化を階層化した。
【００６２】
[0058]登録後、パクリタキセル（２００ｍｇ／ｍ２）およびカルボプラチン（ＡＵＣ（曲線下面積）＝６ｍｇ／ｍＬ・分）を、コナツムマブ（アーム１およびアーム２）またはプラセボ（アーム３）と組み合わせて、各２１日周期の第１日に、最大６周期に渡って投与した。最大６周期のパクリタキセル／カルボプラチンを完了したか、または化学療法関連毒性のため、パクリタキセル／カルボプラチンを中断した被験体に、続けて、疾患進行、薬剤（コナツムマブまたはプラセボ）不耐容性、同意の取り下げ、または研究治療の最初の投与から３０ヶ月のうち、最初に生じるものが起こるまで、コナツムマブまたはプラセボ単独療法を行った。薬剤不耐容性が疑われるために、コナツムマブまたはプラセボ治療を中断した被験体では、すべての研究治療を中止した。
【００６３】
[0059]プロトコルに明記するすべての治療の最後の投与後、各被験体は、３０日（＋３日）後に、安全性追跡調査来診を受けるよう計画された。次いで、被験体は、長期追跡調査に入り、この間、生存状態を３ヶ月（±２週間）ごとに確認された。
【００６４】
[0060]疾患進行が立証される（治療研究者により、修飾ＲＥＣＩＳＴにしたがって、臨床的または放射線学的に決定される）まで、治療周期とは独立に、研究第１日から、６週ごと（±７日）に、腫瘍反応を評価する放射線画像撮影を行った。一般的に、疾患進行（臨床的進行）を示唆する症状を持つ被験体もまた、放射線学的に評価して、症状が生じた時点での疾患状態を評価した。疾患進行または死の前に、研究治療を中断した被験体はい
ずれも、長期追跡期間中、６週ごと（±７日）に放射線画像撮影を受け続けて、疾患進行、新規治療の開始、死亡、同意の取り下げ、管理上の決定または研究終了のうち、いずれか早いものが起こるまで、疾患状態を評価された。１２０人の被験体が、研究者が評価する疾患進行または死亡と立証された際に、一次分析を行った。
【００６５】
[0061]結果は、ＰＦＳ（無進行生存）における改善をまったく示さなかった。しかし、ＯＳ（全生存）曲線における改善を示唆する傾向が、およそ７ヶ月後から出現し；これは、治療の単独療法（コナツムマブ）期の開始の直後であった。患者は、６周期の化学療法＋コナツムマブまたはプラセボを完了した後（およそ４．２ヶ月）、単独療法期にあった。単独療法は、併用化学療法後、被験体の５１％で行われた。患者転帰を性別、ＥＣＯＧ、年齢、および組織学（扁平）に関して調整し、そしてＦＣＧＲ３Ａ遺伝子型と関連付けると、用量依存性反応がＶ１５８に関してヘテロ接合性およびホモ接合性である患者に関して観察された。示すように、ＦＣＧＲ３Ａ多型のＦ１５８／Ｖ１５８またはＶ１５８／Ｖ１５８遺伝子型に関連する生存傾向は、Ｆ１５８ホモ接合性患者に関する１．３７に比較した際、０．７２の危険率（ＨＲ）を生じた。さらに、ＦＶ（Ｆ１５８／Ｖ１５８）およびＶＶ（Ｖ１５８／Ｖ１５８）患者のＨＲは、用量−反応効果を示し、３ｍｇ／ｋｇの用量での０．８５と対照的に、１５ｍｇ／ｋｇの用量に関して０．６３のＨＲである。
【００６６】
以下の表１は、危険率（ＨＲ）および９５％信頼区間（９５％ＣＩ）を示す。
【００６７】
表１
【００６８】
【表１】
2013528599.tif 000002
【国際調査報告】
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2013528599.tif 000004
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