(57)【要約】  本発明は、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤であり、癌を含めたｃ−Ｍｅｔに関連する疾患の処置において有用である、イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジンに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド、
２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド、
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド、
Ｎ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミド、もしくは
Ｎ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
である化合物、または前述のうちの任意のものの薬学的に許容される塩。
【請求項２】
前記化合物２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
前記化合物２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項５】
ｃ−Ｍｅｔキナーゼの活性を阻害する方法であって、前記キナーゼを、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させることを含む、方法。
【請求項６】
細胞におけるＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させることを含む、方法。
【請求項７】
細胞の増殖活性を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させることを含む、方法。
【請求項８】
患者における腫瘍成長を阻害する方法であって、前記患者に、治療上有効な量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項９】
患者における腫瘍転移を阻害する方法であって、前記患者に、治療上有効な量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
患者における疾患を処置する方法であって、ここで、前記疾患は、ＨＧＦ／ｃ−ＭＥＴシグナル伝達経路の調節異常に関連するものであり、前記患者に、治療上有効な量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記疾患が、癌、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、腎線維症および再生、肝疾患、アレルギー性障害、炎症性疾患、自己免疫疾患、脳血管疾患、心血管疾患、または臓器移植に関連する状態である、方法。
【請求項１２】
患者における癌を処置する方法であって、前記患者に、治療上有効な量の請求項１に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、前記癌が、癌腫、筋骨格肉腫、軟組織肉腫、または造血器悪性腫瘍である、方法。
【請求項１４】
請求項１２に記載の方法であって、前記癌が、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、鼻咽頭癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、ＭＦＨ／線維肉腫、平滑筋肉腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、膠芽細胞腫、星状細胞腫、黒色腫、中皮腫、またはウィルムス腫瘍である、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、２０１０年２月３日に出願の表題「Ｃ−Ｍｅｔ阻害剤としてのイミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン（ＩＭＩＤＡＺＯ［１，２−ｂ］［１，２，４］ＴＲＩＡＺＩＮＥＳ  ＡＳ  Ｃ−ＭＥＴ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ）」の米国仮出願第６１／３００，９４６号の優先権を主張するものである。本明細書全体にわたって引用されている任意の特許、特許出願、および参考文献の内容は、その全体で参考として本明細書中に組み込まれている。
【発明の分野】
【０００２】
本発明は、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤であり、癌を含めたｃ−Ｍｅｔに関連する疾患の処置において有用である、イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジンに関する。
【背景技術】
【０００３】
プロテインキナーゼ（ＰＫ）とは、とりわけ細胞の成長、生存および分化、器官の形成および形態形成、血管新生、組織の修復および再生を含めた、多様な重要な生物学的プロセスを調節する酵素の群である。プロテインキナーゼは、様々な生物学的コンテキストにおいて、タンパク質（または基質）のリン酸化反応を触媒し、それにより基質の細胞活性を調節することによって、その生理的機能を発揮する。正常な組織／器官中における機能に加えて、多くのプロテインキナーゼは、癌を含めたヒト疾患の宿主において、より特化された役割も果たす。プロテインキナーゼの部分集合（サブセット）（発癌性プロテインキナーゼとも呼ばれる）は、調節異常となった場合に、腫瘍の形成および成長を引き起こす場合があり、腫瘍の維持および進行にさらに寄与する（Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  Ｐら、Ｎａｔｕｒｅ、２００１、４１１（６８３５）：３５５〜３６５）。これまでに、発癌性プロテインキナーゼは、癌介入及び薬剤開発のための最大かつ最も魅力的なタンパク質標的群の１つを表している。
【０００４】
原癌遺伝子であるｃ−Ｍｅｔは、Ｍｅｔ、Ｒｏｎ、およびＳｅａを含めたヘテロ二量体受容体チロシンキナーゼの明確なサブファミリーのメンバーである（Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、２００３、４（１２）：９１５〜９２５、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６）。ｃ−Ｍｅｔの唯一の高親和性リガンドは肝細胞成長因子（ＨＧＦ）であり、散乱因子（ＳＦ）としても知られる。ＨＧＦのｃ−Ｍｅｔへの結合は自己リン酸化を介した受容体の活性化を誘導し、これは受容体依存性シグナル伝達の増加をもたらす。ｃ−ＭｅｔおよびＨＧＦはどちらも様々な器官中で広く発現されるが、その発現は、通常はそれぞれ上皮起源および間葉起源の細胞に限定される。正常組織および癌などのヒト悪性腫瘍におけるｃ−Ｍｅｔ（またはｃ−Ｍｅｔシグナル伝達経路）の生物学的機能は、十分に文書化されている（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６、Ｃｏｒｓｏ，Ｓ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、２００５、１１（６）：２８４〜２９２）。
【０００５】
ＨＧＦおよびｃ−Ｍｅｔはそれぞれ正常な哺乳動物の発生に必要であり、ＨＧＦヌルおよびｃ−Ｍｅｔヌルのマウスの両方で報告されている異常は、器官の形態形成中における胚発現の近接性および上皮−間葉移行の欠陥と一致している（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６）。これらの発見と一貫して、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔ経路のシグナル伝達および続く生物学的効果は、発生中における、上皮−間葉の相互作用および細胞遊走の調節、侵襲、細胞の増殖および生存、血管形成、形態形成ならびに三次元管状構造（たとえば腎尿細管細胞、腺形成）の組織化に重要であることが示されている。所定の細胞／組織におけるｃ−Ｍｅｔ経路の活性化の具体的な結果は、高度にコンテキスト依存性である。
【０００６】
調節異常のｃ−Ｍｅｔ経路は、腫瘍の形成、成長、維持および進行において重要かつ場合によってはその原因となる（遺伝子変化の場合）役割を果たす（Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２００３、４（１２）：９１５〜９２５、Ｂｏｃｃａｃｃｉｏ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、２００６、６（８）：６３７〜６４５、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６）。ＨＧＦおよび／またはｃ−Ｍｅｔは、ほとんどのヒト癌の大部分において過剰発現されており、しばしば、より攻撃的な疾患、疾患進行、腫瘍転移および短縮された患者生存などの臨床成績の不良に関連している。さらに、高レベルのＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔタンパク質を有する患者は、化学療法および放射線療法に対してより耐性がある。また、異常なＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔ発現に加えて、ｃ−Ｍｅｔ受容体は、癌患者において遺伝子突然変異（生殖系列および体性の両方）ならびに遺伝子増幅によっても活性化される場合がある。遺伝子増幅および突然変異が患者において報告されている最も一般的な遺伝子変化であるが、受容体は、欠失、切断、遺伝子再配列、ならびに異常な受容体プロセッシングおよび欠陥性の負の調節機構によっても活性化される場合がある。
【０００７】
ｃ−Ｍｅｔが関連づけられている様々な癌には、それだけには限定されないが、癌腫（たとえば、膀胱、乳房、頸部、胆管癌、結腸直腸、食道、胃、頭頸部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、卵巣、膵臓、前立腺、甲状腺）、筋骨格肉腫（たとえば、骨肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫）、軟組織肉腫（たとえば、ＭＦＨ／線維肉腫、平滑筋肉腫、カポジ肉腫）、造血器悪性腫瘍（たとえば、多発性骨髄腫、リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病）、ならびに他の新生物（たとえば、膠芽細胞腫、星状細胞腫、黒色腫、中皮腫およびウィルムス腫瘍）が含まれる（ｗｗｗ．ｖａｉ．ｏｒｇ／ｍｅｔ／、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６）。
【０００８】
活性化されたｃ−Ｍｅｔ経路が腫瘍の形成および進行に寄与し、有効な癌の介入のための良好な標的となる可能性があるという考えは、数々の前臨床研究によってさらに固められている（Ｂｉｒｃｈｍｅｉｅｒ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、２００３、４（１２）：９１５〜９２５、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６、Ｃｏｒｓｏ，Ｓ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、２００５、１１（６）：２８４〜２９２）。たとえば、研究により、ｔｐｒ−ｍｅｔ融合遺伝子、ｃ−ｍｅｔの過剰発現および活性化されたｃ−ｍｅｔ突然変異がすべて、様々なモデル細胞系の発癌性形質転換を引き起こし、マウスにおいて腫瘍形成および転移をもたらしたことが示されている。より重要なことに、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達を特異的に損なわせるおよび／または遮断する薬剤で、顕著な抗腫瘍（場合によっては腫瘍退縮）および抗転移の活性がｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで実証されている。これらの薬剤には、抗ＨＧＦおよび抗ｃ−Ｍｅｔ抗体、ＨＧＦペプチド拮抗剤、おとりｃ−Ｍｅｔ受容体、ｃ−Ｍｅｔペプチド拮抗剤、ドミナントネガティブｃ−Ｍｅｔ突然変異、ｃ−Ｍｅｔ特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイム、ならびに選択的小分子ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害剤が含まれる（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．、２００５、２２５（１）：１〜２６）。
【０００９】
癌における確立された役割に加えて、異常なＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達は、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、腎線維症および再生、肝疾患、アレルギー性疾患、炎症性および自己免疫疾患、脳血管疾患、心血管疾患、臓器移植に関連する状態にも関連づけられている（Ｍａ，Ｈ．ら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．、２００２、１６４（１）：７９〜８７、Ｃｒｅｓｔａｎｉ，Ｂ．ら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、２００２、８２（８）：１０１５〜１０２２、Ｓｅｑｕｒａ−Ｆｌｏｒｅｓ，Ａ．Ａ．ら、Ｒｅｖ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｅｘ．、２００４、６９（４）２４３〜２５０、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｒ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、２００４、４（２）１９９〜２０６、Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｒ．ら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｊ．、２００２、４９（３）２７３〜２８４、Ｌｉｕ，Ｙ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．、２００２、１１（１）：２３〜３０、Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｋ．ら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．、２００１、５９（６）：２０２３〜２０３８、Ｂａｌｋｏｖｅｔｚ，Ｄ．Ｆ．ら、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．、１９９９、１８６：２２５〜２５０、Ｍｉｙａｚａｗａ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．、１９９８、１８（４）３４５〜３４８、Ｋｏｃｈ，Ａ．Ｅ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、１９９６、３９（９）：１５６６〜１５７５、Ｆｕｔａｍａｔｓｕ，Ｈ．ら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．、２００５、９６（８）８２３〜８３０、Ｅｇｕｃｈｉ，Ｓ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、１９９９、１３（６）５３６〜５４４）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ｃ−Ｍｅｔなどのキナーゼを阻害する既存の薬剤の新しいまたは改良された形態が、癌および他の疾患を処置するためのより有効な医薬品を開発するために、常に必要とされている。本明細書中に記載の化合物および塩は、これらの必要性および他の目的に向けられている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、とりわけ、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤である以下の化合物を提供する：
２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式Ｉ）、
２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド（式ＩＩ）、
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式ＩＩＩ）、
Ｎ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミド（式ＩＶ）、および
Ｎ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式Ｖ）。
【００１２】
本発明は、前述の化合物のうちの任意の１つの薬学的に許容される塩をさらに提供する。
【００１３】
本発明は、キナーゼを本発明の化合物または塩と接触させることを含む、ｃ−Ｍｅｔキナーゼの活性を阻害する方法をさらに提供する。
【００１４】
本発明は、細胞を本発明の化合物または塩と接触させることを含む、前記細胞においてＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路を阻害する方法をさらに提供する。
【００１５】
本発明は、細胞を本発明の化合物または塩と接触させることを含む、前記細胞の増殖活性を阻害する方法をさらに提供する。
【００１６】
本発明は、患者に治療上有効な量の本発明の化合物または塩を投与することを含む、前記患者において腫瘍成長を阻害する方法をさらに提供する。
【００１７】
本発明は、患者に治療上有効な量の本発明の化合物または塩を投与することを含む、前記患者において腫瘍転移を阻害する方法をさらに提供する。
【００１８】
本発明は、患者に治療上有効な量の本発明の化合物または塩を投与することを含む、前記患者においてＨＧＦ／ｃ−ＭＥＴシグナル伝達経路の調節異常に関連する疾患を処置する方法をさらに提供する。
【００１９】
本発明は、患者に治療上有効な量の本発明の化合物または塩を投与することを含む、前記患者において癌を処置する方法をさらに提供する。
【００２０】
本発明は、治療で使用するための本発明の化合物を提供する。
【００２１】
本発明は、治療で使用するための薬物を調製するための、本発明の化合物の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、癌の処置で使用するための薬物を調製するための、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの化合物のうちの任意の１つの使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、とりわけ、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤である以下の化合物を提供する：
２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式Ｉ）、
２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド（式ＩＩ）、
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式ＩＩＩ）、
Ｎ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミド（式ＩＶ）、および
Ｎ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド（式Ｖ）。
【００２３】
【化１】
2013518887.tif 000002
式Ｉ
【化２】
2013518887.tif 000003
式ＩＩ
【化３】
2013518887.tif 000004
式ＩＩＩ
【化４】
2013518887.tif 000005
式ＩＶ
【化５】
2013518887.tif 000006
式Ｖ
【００２４】
ここおよび他の箇所で、化合物の名称と化合物の構造との間に矛盾が存在する場合は、化学構造が支配する。
【００２５】
本発明は、前述の化合物のうちの任意のものの薬学的に許容される塩をさらに提供する。
【００２６】
本明細書中に記載した化合物は、不斉であることができる（たとえば１つまたは複数の立体中心を有する）。別段に指定しない限りは、鏡像異性体およびジアステレオマーなどのすべての立体異性体が意図される。非対称的に置換された炭素原子を含有する本発明の化合物は、光学活性のある形態またはラセミ体で単離することができる。
【００２７】
また、本発明の化合物には互変異性体も含まれる。互変異性体は、単結合を隣接する二重結合で取り替えること、およびそれに随伴するプロトン転位から生じる。互変異性体には、同じ実験式および総荷電を有する異性体プロトン化状態であるプロトトロピック互変異性体が含まれる。プロトトロピック互変異性体の例には、ケトン−エノールの対、アミド−イミド酸の対、ラクタム−ラクチムの対、アミド−イミド酸の対、エナミン−イミンの対、ならびにプロトンが複素環系、たとえば、１Ｈ−および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾールの２つ以上の位置を占有することができる、環状の形態が含まれる。互変異性体は、平衡状態にあるか、または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定されていることができる。
【００２８】
また、本発明の化合物には、中間体または最終化合物中に存在する原子のすべての同位体も含まれる。同位体には、同じ原子番号を有するが異なる質量数である原子が含まれる。たとえば、水素の同位体にはトリチウムおよび重水素が含まれる。
【００２９】
一部の実施形態では、本発明の化合物またはその塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離されている」とは、化合物または塩が、それが形成または検出された環境から少なくとも部分的にまたは実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離には、たとえば、本発明の化合物が濃縮された組成物が含まれることができる。実質的な分離には、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９重量％の本発明の化合物またはその塩を含有する組成物が含まれることができる。
【００３０】
また、本発明には、本明細書中に記載した化合物の薬学的に許容される塩も含まれる。本明細書中で使用する「薬学的に許容される塩」とは、親化合物が、存在する酸または塩基をその塩形態へと変換することによって改変されている、開示した化合物の誘導体をいう。薬学的に許容される塩の例には、それだけには限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱物または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩等が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩には、たとえば無毒性の無機または有機酸から形成された、親化合物の慣用の無毒性塩が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性の部分を含有する親化合物から慣用の化学方法によって合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、理論量の適切な塩基または酸と、水もしくは有機溶媒または両者の混合物中で反応させることによって調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、そのそれぞれがその全体で本明細書中に参考として組み込まれているＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ、１９８５、ページ１４１８およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、２（１９７７）中に見つかる。
【００３１】
本明細書中において用いられる語句「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、または他の問題もしくは合併症なしに人間および動物の組織と接触させて使用するために適しており、合理的な損益比に見合っている化合物、材料、組成物、および／または剤形をいう。
【００３２】
使用方法
本発明の化合物はｃ−Ｍｅｔの阻害剤として作用することができる。ｃ−Ｍｅｔを発現する細胞を本発明の化合物で処理することは（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）、リガンド／キナーゼのシグナル伝達経路の阻害ならびに細胞増殖および細胞運動増加などのシグナル伝達経路に関連する下流現象の阻害をもたらす場合がある。たとえば、本発明の化合物は、それだけには限定されないが、ｃ−Ｍｅｔキナーゼの活性化（たとえばｃ−Ｍｅｔのリン酸化）やシグナル伝達（Ｇａｂ１、Ｇｒｂ２、Ｓｈｃおよびｃ−Ｃｂｌなどの細胞基質の活性化および動員、ならびに続くＰＩ−３キナーゼ、ＰＬＣ−γ、ＳＴＡＴｓ、ＥＲＫ１／２およびＦＡＫを含めたいくつかのシグナル伝達物質の活性化）、細胞の増殖および生存、細胞の運動、遊走および侵襲、転移、血管形成などを含めた、ｃ−Ｍｅｔ経路の活性化から生じる生化学的および生物学的プロセスを遮断するおよび／または損なわせる場合がある。したがって、本発明は、細胞を本発明の化合物と接触させることによって、細胞中のＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路などのリガンド／キナーゼのシグナル伝達経路を阻害する方法をさらに提供する。本発明は、細胞を本発明の化合物と接触させることによって、細胞の増殖活性を阻害または細胞の運動を阻害する方法をさらに提供する。
【００３３】
本発明は、そのような処置を必要としている個体に、治療上有効な量または用量の本発明の化合物またはその医薬組成物を投与することによって、個体（たとえば患者）において異常な活性および／またはｃ−Ｍｅｔの過剰発現を含めた調節異常のｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路に関連する疾患を処置する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、調節異常のキナーゼは、患者の患部組織中で過剰発現されている。一部の実施形態では、調節異常のキナーゼは、患者の患部組織中で異常の活性を有する。ｃ−ＭｅｔおよびＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナル伝達経路の調節異常とは、それだけには限定されないが、ＨＧＦ依存性の自己分泌（オートクリン）および傍分泌（パラクリン）の活性化、ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現および増幅、点突然変異、欠失、切断、再配列、ならびに異常なｃ−Ｍｅｔ受容体プロセッシングおよび欠陥性の負の調節機構を含めた様々な機構による酵素の活性化が含まれることを意味する。
【００３４】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、癌、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、腎線維症および再生、肝疾患、アレルギー性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、脳血管疾患、心血管疾患、または臓器移植に関連する状態などの疾患の処置に有用である。さらなる実施形態では、本発明の化合物は、患者において腫瘍成長または腫瘍転移を阻害する方法に有用な場合がある。
【００３５】
本明細書中の方法によって処置可能な癌の例には、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、鼻咽頭癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、甲状腺癌、骨肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、ＭＦＨ／線維肉腫、平滑筋肉腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、膠芽細胞腫、星状細胞腫、黒色腫、中皮腫、またはウィルムス腫瘍などが含まれる。
【００３６】
したがって、一実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象に２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、対象において癌を処置する方法が提供される。
【００３７】
別の実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象に２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、対象において癌を処置する方法が提供される。
【００３８】
別の実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象に２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、対象において癌を処置する方法が提供される。
【００３９】
別の実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象にＮ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、対象において癌を処置する方法が提供される。
【００４０】
別の実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象にＮ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において癌を処置する方法が提供される。
【００４１】
したがって、一実施形態では、本明細書中では、対象に２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において腫瘍成長を阻害する方法が提供される。
【００４２】
別の実施形態では、本明細書中では、対象に２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において腫瘍成長を阻害する方法が提供される。
【００４３】
別の実施形態では、本明細書中では、対象に２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において腫瘍成長を阻害する方法が提供される。
【００４４】
別の実施形態では、本明細書中では、癌が処置されるように、対象にＮ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において腫瘍成長を阻害する方法が提供される。
【００４５】
別の実施形態では、本明細書中では、対象にＮ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミドまたは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、それを必要としている対象において腫瘍成長を阻害する方法が提供される。
【００４６】
本明細書中で使用する用語「細胞」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏである細胞をいうことを意味する。一部の実施形態では、ｅｘ  ｖｉｖｏ細胞は、哺乳動物などの生物から切除した組織試料の一部であることができる。一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞は、細胞培養物中の細胞であることができる。一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏ細胞は、哺乳動物などの生物中の生きた細胞である。
【００４７】
本明細書中で使用する用語「接触させる」とは、示した部分をｉｎ  ｖｉｔｒｏ系またはｉｎ  ｖｉｖｏ系中で一緒にすることをいう。たとえば、本発明の化合物をプロテインキナーゼと「接触させる」ことには、本発明の化合物をヒトなどの個体または患者に投与すること、および、たとえば本発明の化合物をプロテインキナーゼの細胞調製物または精製した調製物を含有する試料内に導入することが含まれる。
【００４８】
本明細書中で使用する用語「個体」または「患者」とは、互換性があるように使用され、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒトを含めた、任意の動物をいう。
【００４９】
本明細書中で使用する語句「治療上有効な量」とは、以下のうちの１つまたは複数を含めた、研究者、獣医師、医者または他の臨床家によって組織、系、動物、個体またはヒト中で求められている生物学的または薬用的な応答を誘発する活性化合物または医薬品の量をいう：（１）疾患を予防すること、たとえば、疾患、状態または障害に罹りやすい可能性があるが、未だ疾患の病変または総体症状を経験または示してない個体において、疾患、状態または障害を予防すること、（２）疾患を阻害すること、たとえば、疾患、状態または障害の病変または総体症状を経験または示している個体において、疾患、状態または障害を阻害すること、ならびに（３）疾患を寛解させること、たとえば、疾患、状態または障害の病理または総体症状を経験または示している個体において、疾患、状態または障害を寛解させること（すなわち病変および／または総体症状を覆すこと）、たとえば疾患の重篤度を減少させること。
【００５０】
用語「処置した」、「処置すること」または「処置」には、ｃ−Ｍｅｔキナーゼの活性、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路、および／または細胞の増殖活性に関連する少なくとも１つの症状の減弱または軽減が含まれる。疾患または状態に言及して使用する用語「処置した」、「処置すること」または「処置」とは、疾患または状態の発生を予防もしくは遅延させる、その進行を予防もしくは遅延させる、その進行を停止させる、またはそれを排除するために、そのような疾患または状態に介入することを意味する。
【００５１】
用語「使用」には、別段に記述されていない場合は、必要および便宜に応じて、本発明の以下の実施形態のうちの任意の１つまたは複数がそれぞれ含まれる：疾患の処置における使用、疾患の処置で使用するための医薬組成物の製造、たとえば薬物の製造における使用、これらの疾患の処置における本発明の化合物の使用方法、これらの疾患を処置するための本発明の化合物を有する医薬調製物、およびこれらの疾患の処置において使用するための本発明の化合物。具体的には、処置すべきであり、したがって本発明の化合物の使用に好ましい疾患は、ｃ−Ｍｅｔキナーゼの活性、ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔキナーゼのシグナル伝達経路、および／または細胞の増殖活性に関連する疾患、ならびに癌から選択される。
【００５２】
組合せ療法
たとえば化学療法剤、抗癌剤、細胞毒性剤、または抗癌治療（たとえば放射線、ホルモンなど）等の１つまたは複数の追加の薬剤または処置方法を、本明細書中に記載の疾患、障害または状態を処置するための本発明の化合物および塩と組み合わせて使用することができる。薬剤もしくは治療は、本発明の化合物もしくは塩と一緒に（たとえば単一剤形内で合わせて）投与することができるか、または、薬剤もしくは治療は、同時にもしくは別々の投与経路によって順次に投与することができる。
【００５３】
適切な抗癌剤には、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、塩酸エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ）、ならびに、たとえば、ＷＯ２００５／００４８０８号、ＷＯ２００５／００４６０７号、ＷＯ２００５／００５３７８号、ＷＯ２００４／０７６４１２号、ＷＯ２００５／１２１１２５号、ＷＯ２００５／０３９５８６号、ＷＯ２００５／０２８４７５号、ＷＯ２００５／０４０３４５号、ＷＯ２００５／０３９５８６号、ＷＯ２００３／０９７６４１号、ＷＯ２００３／０８７０２６号、ＷＯ２００５／０４０１５４号、ＷＯ２００５／０３０１４０号、ＷＯ２００６／０１４３２５号、ＷＯ２００５／０７０８９１号、ＷＯ２００５／０７３２２４号、ＷＯ２００５／１１３４９４号、米国特許出願公開第２００５／００８５４７３号、第２００６／００４６９９１号、および第２００５／００７５３４０号に記載のＲＴＫ阻害剤を含めたキナーゼ阻害剤が含まれる。
【００５４】
適切な化学療法剤または他の抗癌剤には、たとえば、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレン−メラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、およびテモゾロマイドなどのアルキル化剤（それだけには限定されないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素およびトリアゼンが含まれる）がさらに含まれる。
【００５５】
適切な化学療法剤または他の抗癌剤には、たとえば、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビンなどの代謝拮抗剤（それだけには限定されないが、葉酸拮抗剤、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤が含まれる）がさらに含まれる。
【００５６】
適切な化学療法剤または他の抗癌剤には、たとえば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ミトラマイシン、デオキシコ−ホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン（特にＩＦＮ−ａ）、エトポシド、およびテニポシドなどの特定の天然物およびその誘導体（たとえば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍性抗生物質、酵素、リンホカインおよびエピポドフィロトキシン）がさらに含まれる。
【００５７】
他の細胞毒性剤には、ナベルベン、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホスファミド、およびドロロキサフィンが含まれる。
【００５８】
また、エピドフィロトキシンなどの細胞毒性剤、抗新生物性酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、プロカルバジン、ミトキサントロン、シス−プラチンおよびカルボプラチンなどの白金配位錯体、生物学的応答調節物質、成長阻害剤、抗ホルモン性治療剤、ロイコボリン、テガフール、ならびに造血性成長因子も適切である。
【００５９】
他の抗癌剤には、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）などの抗体治療剤、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢおよびＰＤ−１などの共刺激分子に対する抗体、またはサイトカイン（ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βなど）に対する抗体が含まれる。さらなる抗体治療剤には、抗ＨＧＦ抗体および／または抗ｃ−Ｍｅｔ抗体などの、チロシンキナーゼおよび／またはそのリガンドに対する抗体が含まれる。用語「抗体」には、全抗体（たとえば、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、ヒトなど）およびその抗原結合断片が含まれることを意味する。
【００６０】
また、他の抗癌剤には、ＣＣＲ２およびＣＣＲ４を含めたケモカイン受容体に対する拮抗剤などの、免疫細胞の遊走を遮断するものも含まれる。
【００６１】
また、他の抗癌剤には、アジュバントまたは養子Ｔ細胞移入などの免疫系を増大させるものも含まれる。
【００６２】
他の抗癌剤には、樹状細胞、合成ペプチド、ＤＮＡワクチンおよび組換えウイルスなどの抗癌ワクチンが含まれる。
【００６３】
上記薬剤のほとんどのものの安全かつ有効な投与方法は、当業者に知られている。また、その投与は標準の文献中に記載されている。たとえば、化学療法剤のうちの多くの投与は、その全体で記載されているかのようにその開示が本明細書中に参考として組み込まれている、「医師用卓上参考書（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」（ＰＤＲ、たとえば、１９９６年版、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ニュージャージー州Ｍｏｎｔｖａｌｅ）中に記載されている。
【００６４】
医薬配合物および剤形
医薬品として用いた場合、本発明の化合物または塩は、本発明の化合物（またはその塩）と薬学的に許容される担体との組合せに対応する医薬組成物の形態で投与することができる。これらの組成物は、医薬分野で周知の様式で調製することができ、局所的または全身的処置のどちらが所望されているか、および処置する領域に応じて、様々な経路によって投与することができる。投与は、外用（眼、および鼻腔内、経膣や直腸送達を含めた粘膜へのものが含まれる）、肺（たとえば、噴霧器によるものを含めた粉末もしくはエアロゾルの吸入もしくはガス注入によるもの、気管内、鼻腔内、表皮および経皮）、眼球、経口または非経口であり得る。眼球送達の方法には、外用投与（点眼剤）、結膜下、眼周囲もしくは硝子体内への注射、またはバルーンカテーテルもしくは結膜嚢中に外科的に配置した眼挿入物による導入が含まれることができる。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内もしくは筋肉内の注射もしくは輸液、または頭蓋内、たとえばくも膜下腔内もしくは脳室内の投与が含まれる。非経口投与は、単一のボーラス用量の形態であることができるか、または、たとえば連続的な灌流ポンプによるものであり得る。外用投与用の医薬組成物および配合物には、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、滴剤、坐薬、スプレー、溶液および粉末が含まれ得る。慣用の医薬担体、水性、粉末または油性の基材、シックナーなどが必要または望ましい場合がある。
【００６５】
また、本発明には、活性成分として上記の本発明の化合物のうちの１つまたは複数を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体と組み合わせて含有する医薬組成物も含まれる。本発明の組成物の作製において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合されている、賦形剤によって希釈されている、または、たとえばカプセル、サッシェ、紙もしくは他の容器の形態でそのような担体中に封入されている。賦形剤が希釈剤として役割を果たす場合、これは固体、半固体、または液体の材料であることができ、活性成分のビヒクル、担体または媒体として作用する。したがって、組成物は、錠剤、丸薬、粉末、ロゼンジ、サッシェ、カシェ剤、エリキシル、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体中）、たとえば１０重量％までの活性化合物を含有する軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、坐薬、無菌的注射用溶液、ならびに無菌的な梱包された粉末の形態であることができる。
【００６６】
配合物の調製において、他の成分と合わせる前に、適切な粒子径をもたらすために活性化合物を粉砕することができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合は、２００メッシュ未満の粒子径に粉砕することができる。活性化合物が実質的に水溶性である場合は、配合物中に実質的に均一な分布、たとえば約４０メッシュをもたらすために、粒子径を粉砕によって調節することができる。
【００６７】
適切な賦形剤の一部の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが含まれる。配合物には、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油などの潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁液、メチル−およびプロピルヒドロキシ−ベンゾエートなどの保存料、甘味剤、ならびに香味料がさらに含まれることができる。本発明の組成物は、当分野で知られている手順を用いることによって、患者に投与した後に活性成分の急速、持続または遅延放出をもたらすように配合することができる。
【００６８】
組成物は、単位剤形で配合することができ、それぞれの剤形は、約５〜約５００ｍｇ、より通常には約１０〜約１００ｍｇの活性成分を含有する。用語「単位剤形」とは、ヒト対象および他の哺乳動物のための単位用量に適した物理的に別々の単位をいい、それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された事前に決定された量の活性物質を、適切な医薬賦形剤を伴って含有する。
【００６９】
活性化合物は幅広い用量範囲にわたって有効である場合があり、一般に医薬上有効な量で投与する。しかし、実際に投与する化合物の量は、通常、処置する状態、選択された投与経路、投与する実際の化合物、個々の患者の年齢、重量、および応答、患者の症状の重篤度などの関連する状況に応じて、医師によって決定されることを理解されたい。
【００７０】
錠剤などの固体組成物の調製には、主活性成分を医薬賦形剤と混合して、本発明の化合物の均質な混合物を含有する固体プレフォーミュレーション組成物を形成する。これらのプレフォーミュレーション組成物を均質という場合、活性成分は、組成物を錠剤、丸薬およびカプセルなどの等しく有効な単位剤形へと容易に細分割することができるように、組成物全体にわたって均等に分散されている。その後、この固体プレフォーミュレーションを、たとえば０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上述の種類の単位剤形へと細分割する。
【００７１】
本発明の錠剤または丸薬は、コーティングするまたは他の様式で化合して、持続的作用の利点を与える剤形を提供することができる。たとえば、錠剤または丸薬は、内部用量および外部用量の構成成分を含むことができ、後者は前者を包む外皮の形態である。２つの構成成分は、胃内での分解に耐えて内部構成成分が無傷で十二指腸内まで通過するまたはその放出が遅延されることを可能にする役割を果たす、腸溶層によって分離されていることができる。様々な材料をそのような腸溶層またはコーティングに使用することができ、そのような材料には、いくつかのポリマー酸ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物が含まれる。
【００７２】
経口または注射による投与のために本発明の化合物および組成物を取り込ませることができる液体形態には、水溶液、適切に香味づけられたシロップ、水性または油性の懸濁液、綿実油、ゴマ油、ヤシ油、またはピーナッツ油などの食用油との香味づけられた乳濁液、およびエリキシルならびに同様の医薬ビヒクルが含まれる。
【００７３】
吸入またはガス注入のための組成物には、薬学的に許容される水性もしくは有機性の溶媒またはその混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、上述のように適切な薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。一部の実施形態では、組成物は、局所的または全身的な効果のために、経口または経鼻の呼吸器経路によって投与する。組成物は、不活性ガスを使用することによって噴霧することができる。噴霧された溶液を噴霧化装置から直接呼吸し得るか、または、噴霧化装置は、顔面マスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸器に取り付けられていることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、経口または経鼻的に、配合物を適切な様式で送達する装置から投与することができる。
【００７４】
患者に投与する化合物または組成物の量は、何が投与されているか、予防または治療などの投与の目的、患者の状態、投与の様式などに応じて変動する。治療的な応用では、組成物は、既に疾患を患っている患者に、疾患およびその合併症の症状を治癒または少なくとも部分的に停止させるために十分な量で投与することができる。有効用量は、処置する病状、ならびに疾患の重篤度、患者の年齢、重量および全体的な状態などの要因に応じた担当の臨床家の判断に依存する。
【００７５】
患者に投与する組成物は、上述の医薬組成物の形態であることができる。これらの組成物は、慣用の滅菌技法によって滅菌することができるか、または滅菌濾過し得る。水溶液は、そのままで使用するために梱包するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥した調製物は、投与前に無菌的な水性担体と合わせる。化合物調製物のｐＨは、典型的には３〜１１、より好ましくは５〜９、最も好ましくは７〜８となる。前述の賦形剤、担体、または安定化剤のうちの特定のものの使用が医薬塩の形成をもたらすことを理解されたい。
【００７６】
本発明の化合物の治療的用量は、たとえば、処置を行う理由である具体的な使用、化合物の投与様式、患者の健康および状態、ならびに処方する医師の判断に応じて変動する場合がある。医薬組成物中の本発明の化合物の割合または濃度は、用量、化学的特徴（たとえば疎水性）、および投与経路を含めたいくつかの要因に応じて変動する場合がある。たとえば、本発明の化合物は、非経口投与のためには、約０．１〜約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する水性の生理的緩衝溶液中で提供することができる。一部の典型的な用量範囲は、１日あたり体重１ｋｇあたり約１μｇ〜約１ｇである。一部の実施形態では、用量範囲は１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇである。用量は、疾患または障害の種類および進行の程度、具体的な患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対的な生物学的有効性、賦形剤の配合、ならびにその投与経路などの変数に依存する可能性が高い。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から誘導した用量応答曲線から外挿することができる。
【００７７】
また、本発明の化合物は、抗ウイルス剤、ワクチン、抗体、免疫賦活剤、免疫抑制剤、抗炎症剤などの任意の医薬品が含まれることができる１つまたは複数の追加の活性成分と組み合わせて配合することもできる。
【００７８】
明確にするために別々の実施形態のコンテキストで記載されている本発明の特定の特長は、単一の実施形態中で組み合わせて提供することもできることを、さらに理解されたい。逆に、簡潔にするために単一の実施形態のコンテキストで記載されている本発明の様々な特長は、別々にまたは任意の適切な部分組合せで提供することもできる。
【００７９】
本発明は、具体的な実施例によってさらに詳述する。以下の実施例は例示目的のために提供し、いかなる様式でも本発明を限定することを意図しない。当業者は、本質的に同じ結果を得るために変化させるまたは改変することができる様々な重大でないパラメータを容易に理解するであろう。実施例の化合物は、本明細書中で提供するアッセイのうちの１つまたは複数によって、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤であると判明した。
【実施例】
【００８０】
本発明の化合物の実験手順を以下に提供する。一般に、生成物は、実施例中に示すように、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）またはフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によって調製用スケールで精製した。典型的な調製用逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）カラム条件は以下のとおりであった。
【００８１】
ｐＨ＝２の精製：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５  Ｔｍ、１９×１００ｍｍのカラム、移動相Ａ：水中の０．１％のＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）および移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のＴＦＡを用いて溶出させ、流速は３０ｍｌ／分であり、分離勾配は、文献中に記載のように化合物特異的な方法最適化プロトコルを使用して、それぞれの化合物について最適化する［「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」、Ｋ．Ｂｌｏｍ、Ｂ．Ｇｌａｓｓ、Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ、Ａ．Ｃｏｍｂｓ、Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．、６、８７４〜８８３（２００４）］。
【００８２】
ｐＨ＝１０の精製：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ５  Ｔｍ、１９×１００ｍｍのカラム、移動相Ａ：水中の０．１５％のＮＨ４ＯＨおよび移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１５％のＮＨ４ＯＨを用いて溶出させ、流速は３０ｍｌ／分であり、分離勾配は、文献中に記載のように化合物特異的な方法最適化プロトコルを使用して、それぞれの化合物について最適化する［「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＬＣＭＳ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」、Ｋ．Ｂｌｏｍ、Ｂ．Ｇｌａｓｓ、Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ、Ａ．Ｃｏｍｂｓ、Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．、６、８７４〜８８３（２００４）］。
【００８３】
分離された異性体は、典型的には、以下の条件下で、純度について分析用液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）に供した：機器、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ、ＬＣ／ＭＳＤ、カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ１８  ５  Ｔｍ、２．１×５．０ｍｍ、緩衝液：移動相Ａ：水中の０．０２５％のＴＦＡおよび移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．０２５％のＴＦＡ、勾配は３分間で２％〜８０％のＢ、流速は１．５ｍＬ／分。
【００８４】
（実施例１）
２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化６】
2013518887.tif 000007
ステップ１：４−ブロモ−３−フルオロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド
【化７】
2013518887.tif 000008
塩化オキサリル（３８．１ｍＬ、４５０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３００ｍＬ）中の４−ブロモ−３−フルオロ安息香酸（４９．３ｇ、２２５ｍｍｏｌ）（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、カタログ＃Ｂ２５４７５）の混合物にゆっくりと加えた。続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）を加え、反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエンと共に３回共蒸発させた。その後、残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶かした。溶液をジクロロメタン（３００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）中の塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（３０．７ｇ、３１５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１２０ｇ、９００ｍｍｏｌ）の混合物に滴下した。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。有機層を分離した。水層をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、生成物が得られた。（５８．５ｇ）ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２６１．９／２６３．９。
【００８５】
ステップ２：１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）エタノン
【化８】
2013518887.tif 000009
テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中の４−ブロモ−３−フルオロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド（ステップ１、５８．５ｇ、２２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中の３Ｍの塩化メチルマグネシウム（１２５ｍＬ、３８０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を１時間、０℃で撹拌し、冷塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍＬ）で反応停止させた。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）に再度溶かした。水層を水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。濾過および減圧下での濃縮により生成物が得られ（４８．４ｇ）、これをさらに精製せずに次の反応ステップで使用した。
【００８６】
ステップ３：（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）（オキソ）アセトアルデヒドおよび１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−２，２−ジヒドロキシエタノン
【化９】
2013518887.tif 000010
ジメチルスルホキシド（４０ｍＬ）中の１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）エタノン（ステップ２、９．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化水素の４８％水溶液（１４ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を６０℃で終夜撹拌し、その後、周囲温度まで冷却し、氷水中に注いだ。沈殿物を濾過し、水で洗浄し、固形物を真空下で終夜乾燥させて、８．１ｇの所望の生成物が得られた。水層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた抽出物を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮して、さらに２．２ｇの所望の生成物が得られた（合計１０．３ｇ）。
【００８７】
ステップ４：１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−２，２−ジエトキシエタノン
【化１０】
2013518887.tif 000011
トルエン（５０ｍＬ）中の１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−２，２−ジヒドロキシエタノンおよび４−ブロモ−３−フルオロフェニル）（オキソ）アセトアルデヒド（ステップ３からの粗生成物、７．０ｇ、２８ｍｍｏｌ）の混合物に、オルトギ酸エチル（１２ｍＬ、７０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸（２００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４時間灌流した。反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。減圧下での濃縮により所望の生成物が得られ、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００８８】
ステップ５：６−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミン
【化１１】
2013518887.tif 000012
エタノール（２００ｍＬ）および水（４ｍＬ）中の１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−２，２−ジエトキシエタノン（ステップ４、１５．２ｇ、５０ｍｍｏｌ）、炭酸水素アミノグアニジン（１０．２ｇ、７５ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム（６．６ｇ、１００ｍｍｏｌ）の混合物を終夜灌流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をアセトニトリルで洗浄し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶かし、水、ブラインで洗浄し、減圧下で濃縮した。残渣をエタノール（５０ｍＬ）に溶かした。溶液に０．２Ｎの塩酸（５０ｍＬ）を加えた。生じた混合物を１１０℃まで８時間加熱し、氷水浴で冷却した。形成された沈殿物を濾過によって収集し、イソプロパノールで洗浄して、所望の生成物が得られた。（５．５ｇ、４１％）ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＝２８６．８／２８８．８。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：８．６０（ｓ、１Ｈ）、７．７９（ｄｄ、Ｊ＝８．６、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６８（ｄｄ、Ｊ＝８．３、７．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６１（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．４３（ｓ、２Ｈ）。
【００８９】
ステップ６：３−キノリン−６−イルプロパナール
【化１２】
2013518887.tif 000013
フラスコ内のトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（４８０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃３２８７７４）およびトリ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスホニウムテトラフルオロボレート（３００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を真空排気し、窒素を再充填した（２回）。１，４−ジオキサン（３１ｍＬ）を加え、続いて６−ブロモキノリン（７．２ｇ、３５ｍｍｏｌ）（ＴＣＩ、カタログ＃Ｂ２０１５）、２−プロペン−１−オール（４．７ｍＬ、６９ｍｍｏｌ）およびＮ−シクロヘキシル−Ｎ−メチル−シクロヘキサンアミン（８．９ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を連続的に加えた。反応器を真空排気し、窒素を再充填した（２回）。反応混合物を３０℃で２４時間撹拌した。ジエチルエーテル（３０ｍＬ）を反応混合物に加え、その後、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。有機抽出物を減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中の酢酸エチル（０〜５０％）で溶出させるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物が得られた。（約５５％）ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝１８６．０、（Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２０４．０。
【００９０】
ステップ７：１−（２−クロロ−１−ヒドロキシ−３−キノリン−６−イルプロピル）ピロリジン−２，５−ジオン
【化１３】
2013518887.tif 000014
０℃に冷却したクロロホルム（５ｍＬ）中の３−キノリン−６−イルプロパナール（ステップ６、２．３ｇ、０．０１２ｍｏｌ）の溶液に、Ｌ−プロリン（０．４ｇ、０．００４ｍｏｌ）を加えた。その後、混合物にＮ−クロロスクシンイミド（１．７４ｇ、０．０１３０ｍｏｌ）を０℃で加えた。反応を室温まで温め、終夜撹拌した。反応は濃いスラリーであった。固形物を濾過し、クロロホルムで洗浄して、純粋な生成物が得られた（２ｇ、５０．５％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：８．９０（ｄｄ、Ｊ＝４．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．７３（ｓ、１Ｈ）、７．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、４．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．４６（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．９５（ｄｄｄ、Ｊ＝９．４、８．０、３．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．７３（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、３．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．１９（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、８．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｓ、４Ｈ）。
【００９１】
ステップ８：６−［２−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］メチルキノリン
【化１４】
2013518887.tif 000015
密封したチューブ内のイソプロピルアルコール（７．４ｍＬ）および水（０．１１ｍＬ）中の６−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−１，２，４−トリアジン−３−アミン（ステップ５、２００ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）および１−（２−クロロ−１−ヒドロキシ−３−キノリン−６−イルプロピル）ピロリジン−２，５−ジオン（ステップ７、２８４ｍｇ、０．８９２ｍｍｏｌ）の混合物を１０５℃で５日間加熱した。反応混合物を周囲温度まで冷却した後、沈殿物を濾過によって収集し、イソプロパニルアルコールで洗浄し、真空中で乾燥させて、所望の生成物が得られた（１８０ｍｇ、５５％）ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４３３．９／４３６．０。
【００９２】
ステップ９：２−フルオロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンゾニトリル
【化１５】
2013518887.tif 000016
シアン化亜鉛（１３１ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃３２８７７４）、（９，９−ジメチル−９Ｈ−キサンテン−４，５−ジイル）ビス−（ジフェニルホスフィン）（７８．５ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃５２６４６０）、およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（０．２２ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を、マイクロ波用チューブ内のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８．７ｍＬ）中の６−［２−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］−トリアジン−７−イル］メチルキノリン（ステップ８、４８０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）の混合物に次々と加えた。チューブを密封し、３回脱気し、マイクロ波照射下で５００秒間、１６０℃まで加熱した。溶媒のほとんどを減圧下で除去し、残渣を酢酸エチルに溶かし、炭酸水素ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。濾過および濃縮により残渣が得られ、これをジクロロメタン中のメタノール（０〜６％）を用いてシリカゲルカラム上で精製して、所望の生成物が得られた。（９０％）ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３８１．０。
【００９３】
ステップ１０：２−フルオロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］安息香酸
【化１６】
2013518887.tif 000017
塩酸（５．０ｍＬ、５３ｍｍｏｌ）および水（１．０ｍＬ）の濃溶液中の２−フルオロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンゾニトリル（ステップ、９、７５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を１０５℃で終夜撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、生じた残渣を水で洗浄し、濾過して、粗生成物がＨＣｌ塩としてもたらされ、これをさらに精製せずに次の反応ステップで直接使用した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４００．０。
【００９４】
ステップ１１：２−フルオロ−Ｎ−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化１７】
2013518887.tif 000018
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９．０ｍＬ）中の２−フルオロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］安息香酸ＨＣｌ塩（１８０．０ｍｇ、０．３８１ｍｍｏｌ、ステップ１０）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（２２０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃２２６０８４）の混合物を室温で３分間撹拌した。その後、（２Ｒ）−１−アミノプロパン−２−オール（５７ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を、続いてトリエチルアミン（３１８．７μＬ、２．２８７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、その後、水を加えた。沈殿物を濾過によって収集し、アセトニトリル水溶液で洗浄した。沈殿物を１ＮのＨＣｌ水溶液に溶かし、その後、凍結乾燥によって乾燥させて、所望の生成物がＨＣｌ塩として得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４５７．３。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：９．３０（ｓ、１Ｈ）、９．２０（ｄｄ、Ｊ＝５．０、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．０２（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．３７（ｓ、１Ｈ）、８．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｄｄ、Ｊ＝８．５、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、１Ｈ）、８．０４（ｓ、１Ｈ）、８．０２（ｓ、１Ｈ）、８．００（ｄｄ、Ｊ＝８．５、５．０、Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、３．７９（ｍ、１Ｈ）、３．２１（ｍ、２Ｈ）、１．０９（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【００９５】
Ｓ鏡像異性体は、上記手順に従って（２Ｓ）−１−アミノプロパン−２−オールを使用して、または生成物をラセミ化し、標準のキラル分離技法（たとえばキラルカラム）を使用して鏡像異性体を分離することによって、作製することができる。
【００９６】
（実施例２）
２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド
【化１８】
2013518887.tif 000019
ステップ１：６−ブロモ−１，２，４−トリアジン−３−アミン
【化１９】
2013518887.tif 000020
アセトニトリル（４０ｍＬ）中の１，２，４−トリアジン−３−アミン（３．８４ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃１００６２５）の懸濁液に水（６０ｍＬ）を加え、透明な溶液が形成されるまで撹拌した。この溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（７．４８ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）を０℃で加え、生じた混合物を１０分間撹拌した。冷却浴を取り外し、混合物を室温まで温めさせた。その後、混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、０℃まで冷却した（氷水浴）。Ｎａ２ＣＯ３（３．０ｇ）を加え、１０分間撹拌した。２つの層を分離し、水相を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の生成物が得られた（４ｇ、５７．１５％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝１７５．２／１７７．２。
【００９７】
ステップ２：メチル４−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−２−クロロベンゾエート
【化２０】
2013518887.tif 000021
１，４−ジオキサン（２２ｍＬ）中の６−ブロモ−１，２，４−トリアジン−３−アミン（ステップ１、１．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）および［３−クロロ−４−（メトキシカルボニル）フェニル］ボロン酸（１．５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）（ＶＭＲ、カタログ＃１０００１３−４０４）の混合物に、水（５．１ｍＬ）中のリン酸カリウム（２．４ｇ、１１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。窒素を１０分間パージすることによって混合物を脱気した。混合物にテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．２０ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、窒素で再度脱気した。混合物を撹拌し、８２℃（油浴）で１時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、水で希釈し、３０分間撹拌し、灰色の固形物が形成された。固形物を濾過によって単離し、水で数回すすぎ、空気中で乾燥させた。その後、固形物をヘキサン、ジクロロメタン−ヘキサン（１：１）、およびヘキサンで順次粉砕して、所望の生成物が得られた（８４０ｍｇ、５５．５４％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２６４．９／２６７．０。
【００９８】
ステップ３：メチル２−クロロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンゾエート
【化２１】
2013518887.tif 000022
１−ブタノール（１１．６ｍＬ）中のメチル４−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−２−クロロベンゾエート（ステップ２、０．８４０ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）および１−（２−クロロ−１−ヒドロキシ−３−キノリン−６−イルプロピル）ピロリジン−２，５−ジオン（１．１１ｇ、３．４９ｍｍｏｌ、実施例１、ステップ７）の混合物を１１０℃で２２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣を酢酸エチルで粉砕した。沈殿物を濾過によって収集し、酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄して、所望の生成物が得られた（０．９０８ｇ）。母液を半分の体積まで濃縮した。沈殿物を濾過によって収集し、酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄して、さらなる所望の生成物が得られた（０．３４２ｇ）。得られた全生成物は１．１０ｇであった（８０．６％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４３０．０／４３１．９。
【００９９】
ステップ４：２−クロロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］安息香酸
【化２２】
2013518887.tif 000023
テトラヒドロフラン（７．０ｍＬ）およびメタノール（５．０ｍＬ）中のメチル２−クロロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンゾエート（ステップ３、１．１０ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（３．０ｍＬ）中の水酸化リチウム（０．２４５ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、約３ｍＬの体積まで減圧下で濃縮した。残渣を水（３ｍＬ）で希釈し、１ＮのＨＣｌで約４〜５のｐＨに調節した。沈殿物を濾取し、水で数回洗浄し、空気中で終夜乾燥させた。その後、沈殿物をエーテルおよびジクロロメタン（ＤＣＭ）−ヘキサン（１：１）で順次粉砕した。所望の生成物（６３８ｍｇ、６０％）が得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４１５．９／４１７．９。
【０１００】
ステップ５：２−クロロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド
【化２３】
2013518887.tif 000024
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中の２−クロロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］安息香酸（ステップ４、５．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）および（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１０．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃２２６０８４）を、室温で３分間撹拌した。その後、テトラヒドロフラン中の２．０Ｍのメチルアミン（０．０１２ｍＬ、０．０２３ｍｍｏｌ）を０℃で、続いてトリエチルアミン（６．４μＬ、０．０４６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝２）によって精製して、所望の生成物がトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）塩として得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４２９．３。
【０１０１】
（実施例３）
２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化２４】
2013518887.tif 000025
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−２−オキソエチル］カルバメート
【化２５】
2013518887.tif 000026
０℃のＴＨＦ中の（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパン酸（１ｇ、０．００５ｍｏｌ）の撹拌溶液に、４−メチルモルホリン（０．５８８ｇ、０．００５８１ｍｏｌ）を加え、クロロギ酸イソブチル（０．７９４ｇ、０．００５８１ｍｏｌ）を２分間かけて滴下した。反応を０℃で３０分間撹拌し、その後、３０ｗｔ％の水酸化アンモニウムの溶液（１２．０ｍＬ、０．０９２５ｍｏｌ）を反応中に素早く注いだ。反応を室温まで温め、５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗生成物が得られ、これをさらに精製せずに次のステップの反応で直接使用した（８００ｍｇ、８０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１２．４０（ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８８（ｍ、１Ｈ）、１．３５（ｓ、９Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１０２】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−シアノエチル］カルバメート
【化２６】
2013518887.tif 000027
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−２−オキソエチル］カルバメート（ステップ１、０．７ｇ、０．００４ｍｏｌ）の撹拌溶液に、３４３ｍｇの塩化シアヌル（０．００１８６ｍｏｌ）を一度に加えた。反応混合物を４時間撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃ（３０〜５０％）を用いたシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物が得られた（４００ｍｇ、６３％）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．７４（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．４８（ｍ、１Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）、１．３５（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１０３】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ，２Ｚ）−２−アミノ−２−（ヒドロキシイミノ）−１−メチルエチル］カルバメート
【化２７】
2013518887.tif 000028
エタノール（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ）−１−シアノエチル］カルバメート（ステップ２、２５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（０．４１ｍＬ、２．９ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミン（５８ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮して、所望の粗生成物が得られ（３００ｍｇ）、これをさらに精製せずに次のステップの反応で直接使用した。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．９４（ｓ、１Ｈ）、６．８０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、４．０１（ｍ、１Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１０４】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル｛（１Ｓ，２Ｚ）−２−［（アセチルオキシ）イミノ］−２−アミノ−１−メチルエチル｝カルバメート
【化２８】
2013518887.tif 000029
０℃に冷却した塩化メチレン（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル［（１Ｓ，２Ｚ）−２−アミノ−２−（ヒドロキシイミノ）−１−メチルエチル］カルバメート（ステップ３、１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。その後、混合物に塩化アセチル（４２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応を室温まで温めた。室温で１時間撹拌した後、反応を濃縮した。残渣をジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶かし、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、所望の粗生成物が得られ（１００ｍｇ、８２．８％）、これをさらに精製せずに次のステップの反応で直接使用した。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：６．９０（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．２２（ｓ、２Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、２．０１（ｓ、３Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．２０（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１０５】
ステップ５：（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エタンアミン
【化２９】
2013518887.tif 000030
エタノール（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル｛（１Ｓ，２Ｚ）−２−［（アセチルオキシ）イミノ］−２−アミノ−１−メチルエチル｝カルバメート（ステップ４、８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１ｍＬ）中の酢酸ナトリウム三水和物（４９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を８５℃で３時間加熱した。エタノールを蒸発させ、水を加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を塩化メチレン（１ｍＬ）に溶かした。溶液にトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応混合物を濃縮して、所望の生成物がＴＦＡ塩として得られ、これをさらに精製せずに次のステップの反応で直接使用した。
【０１０６】
ステップ６：２−クロロ−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エチル］−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３０】
2013518887.tif 000031
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）中の２−クロロ−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］安息香酸（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、実施例２、ステップ４）の溶液に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（６８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃２２６０８４）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４２μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１５分間撹拌した後、（１Ｓ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エタンアミンＴＦＡ塩（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、ステップ５）を加え、終夜撹拌した。混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝１０）によって精製して、所望の生成物が得られ、これをＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝２）によってさらに精製して、所望の純粋な生成物がＴＦＡ塩として得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝５２５．０／４２７．０。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：９．２２（ｓ、１Ｈ）、８．９８（ｄｄ、Ｊ＝５．０、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．１５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．５６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．１６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．０、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、８．０４（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０２（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄｄ、Ｊ＝９．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６８（ｄｄ、Ｊ＝８．５、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｍ、１Ｈ）、４．６６（ｓ、２Ｈ）、２．６０（ｓ、３Ｈ）、１．５１（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１０７】
Ｒ鏡像異性体は、上記手順に従って（１Ｒ）−１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）エタンアミンを使用して、または生成物をラセミ化し、標準のキラル分離技法（たとえばキラルカラム）を使用して鏡像異性体を分離することによって、作製することができる。
【０１０８】
（実施例４）
Ｎ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミド
【化３１】
2013518887.tif 000032
ステップ１：５−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−Ｎ−メチルピリジン−２−カルボキサミド
【化３２】
2013518887.tif 000033
トルエン（１．３ｍＬ）、エタノール（０．６６ｍＬ）および水（０．６６ｍＬ）中のＮ−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−カルボキサミド（２００ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）（ＶＷＲ、カタログ＃２０００６８−６４０）、６−ブロモ−１，２，４−トリアジン−３−アミン（１３０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、実施例２、ステップ１）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．３２ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１．５時間加熱した。混合物を濾過し、メタノールで洗浄した。濾液をＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝１０）によって精製して、所望の生成物が得られた（８０ｍｇ、４５．５４％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２３１．４、ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ）＋：ｍ／ｚ＝２４９．３。
【０１０９】
ステップ２：Ｎ−メチル−５−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ピリジン−２−カルボキサミド
【化３３】
2013518887.tif 000034
１，２−エタンジオール（１００ｍＬ）中の５−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−Ｎ−メチルピリジン−２−カルボキサミド（ステップ１、６．５ｇ、０．０２２ｍｏｌ）および１−（２−クロロ−１−ヒドロキシ−３−キノリン−６−イルプロピル）ピロリジン−２，５−ジオン（８．７１ｇ、０．０２７３ｍｏｌ、実施例１、ステップ７）の混合物を１２０℃で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮した。混合物をＴＨＦ溶液中のメチルアミン（２．０Ｍ）でｐＨ＝１０まで中和し、その後、ジクロロメタン中の５％のＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物が得られ、これはいくらかの出発物質で汚染されていた。生成物をジクロロメタン中の１０％のＭｅＯＨに溶かし、約２ｍＬの体積まで濃縮した。生じた固形物を濾過し、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）で洗浄して、純粋な生成物が得られた（４．５０ｇ、５０％）。生成物を２ＮのＨＣｌ（水溶液）およびアセトニトリルで処理し、凍結乾燥によって乾燥させて、所望の生成物がＨＣｌ塩として得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝３９６．４。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：９．４０（ｓ、１Ｈ）、９．２７（ｓ、１Ｈ）、９．２０（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．１０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．６４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．３０（ｓ、１Ｈ）、８．２６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝８．０、Ｈｚ、１Ｈ）、８．１９（ｓ、１Ｈ）、８．１７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｄｄ、Ｊ＝８．０、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．８１（ｓ、３Ｈ）。
【０１１０】
（実施例５）
Ｎ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３４】
2013518887.tif 000035
ステップ１：４−ブロモ−Ｎ，２−ジメチルベンズアミド
【化３５】
2013518887.tif 000036
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０μＬ）を、塩化オキサリル（２．０ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）中の４−ブロモ−２−メチル安息香酸（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮して、粗塩化カルボニルが得られ、これを塩化メチレン（２ｍＬ）に溶かした。溶液をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のメチルアミン（２．０Ｍ、０．４６５ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１０ｍｌ）中のトリエチルアミン（１．３ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくりと加えた。３０分後、反応混合物を飽和炭酸ナトリウム（１０ｍＬ）で反応停止させ、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物が得られた（９８０ｍｇ、９２％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２２８．１／２３０．２。
【０１１１】
ステップ２：Ｎ，２−ジメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド
【化３６】
2013518887.tif 000037
１，４−ジオキサン（５．２８ｍＬ）中の４−ブロモ−Ｎ，２−ジメチルベンズアミド（ステップ１、０．５０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）および４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］（０．６７ｇ、２．６ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃４７３２９４）の溶液に、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）とジクロロメタンとの錯体（１：１）（０．０９ｇ、０．１ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃３７９６７０）、酢酸カリウム（０．６４ｇ、０．００６６ｍｏｌ）、および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（０．０６ｇ、０．１ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃１７７２６１）を窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を８０℃で終夜撹拌した。室温まで冷却した後、混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中の１０％のメタノールを用いたシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物が得られた。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２７６．４。
【０１１２】
ステップ３：４−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−Ｎ，２−ジメチルベンズアミド
【化３７】
2013518887.tif 000038
トルエン（１．９ｍＬ）、エタノール（０．９４ｍＬ）および水（０．９４ｍＬ）中のＮ，２−ジメチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（ステップ２、０．３ｇ、０．００１ｍｏｌ）、６−ブロモ−１，２，４−トリアジン−３−アミン（０．２１ｇ、１．２ｍｍｏｌ、実施例２、ステップ１）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０６ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．４５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の混合物。生じた混合物を１３０℃で２．５時間加熱した。混合物をＭｅＯＨで希釈し、濾過し、ＤＣＭ／メタノール（９０％）で洗浄した。濾液を濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中の１０％のＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物が得られた（１１０ｍｇ、４１％）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝２４４．３。
【０１１３】
ステップ４：２−クロロ−３−キノリン−６−イルプロパナール
【化３８】
2013518887.tif 000039
Ｌ−プロリン（４１０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（３９ｍＬ）中の３−キノリン−６−イルプロパナール（３．２７ｇ、１７．６ｍｍｏｌ、実施例１、ステップ６）の溶液に０℃で加え、続いてＮ−クロロスクシンイミド（２．４８ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を周囲温度までゆっくりと温め、ＬＣＭＳで監視しながら１時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をヘキサン中の酢酸エチル（０〜５０％）を用いてシリカゲルカラム上で精製して、所望の生成物が得られた。（９５％）ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋Ｈ２Ｏ）＝２３７．９／２３９．９。
【０１１４】
ステップ５：Ｎ，２−ジメチル−４−［７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル］ベンズアミド
【化３９】
2013518887.tif 000040
密封したチューブ内のエタノール（２．５ｍＬ）中の４−（３−アミノ−１，２，４−トリアジン−６−イル）−Ｎ，２−ジメチルベンズアミド（ステップ３、０．３０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）および２−クロロ−３−キノリン−６−イルプロパナール（ステップ４、０．３２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で終夜撹拌した。冷却後、反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ｐＨ＝２）によって精製して、所望の生成物がＴＦＡ塩として得られた（１５０ｍｇ）。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋：ｍ／ｚ＝４０９．３。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：９．６４（ｓ、１Ｈ）、９．２１（ｄ、Ｊ＝５．０、１Ｈ）、９．１８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．４４（ｓ、１Ｈ）、８．３９（ｓ、１Ｈ）、８．３２（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．１２（ｄｄ、Ｊ＝９．０、５．０、Ｈｚ、１Ｈ）、８．０５（ｓ、１Ｈ）、８．０３（ｓ、１Ｈ）、７．５７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．８６（ｓ、２Ｈ）、２．９２（ｓ、３Ｈ）、２．４８（ｓ、３Ｈ）。
【０１１５】
（実施例Ａ）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃ−Ｍｅｔキナーゼ酵素アッセイ
本発明の化合物を、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ活性を阻害するその能力についてｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングした。ｃ−Ｍｅｔキナーゼの阻害のＩＣ５０値を、一部の改変を用いて文献に記載のように決定した（Ｗａｎｇ，Ｘ．ら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、２００３、２（１１）：１０８５〜１０９２、Ｃａｌｉｃ，Ｍ．ら、Ｃｒｏａｔｉｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＡＣＴＡ．、２００５、７８（３）：３６７〜３７４）。手短に述べると、ヒスチジンでタグ付けしたｃ−Ｍｅｔ触媒ドメイン融合タンパク質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３１４３）をアッセイに使用した。ＩＣ５０の測定は、９６ウェルのマイクロプレート（Ｒ&Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＤＹ９９０）上にコーティングした（０．０１ｍｇ／ウェル）ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、＃Ｐ０２７５）のリン酸化の度合に基づいていた。反応は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５ｍＭのＤＴＴ、１００μＭのＮａ３ＶＯ４、５μＭのＡＴＰ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃９８０４）および試験化合物の段階希釈液を含有する５０μＬの溶液で実施した。反応は３０℃で２５分間持続した。反応が完了した後、プレートの内容物を廃棄した。その後、プレートをＴＢＳ−Ｔ（２５０μＬ／ウェル、５×）で洗浄し、その後、１％のＢＳＡを含有するＴＢＳ−Ｔで２時間遮断した。プレートの内容物を廃棄し、その後、ＴＢＳ−Ｔを含有する１％のＢＳＡ中で希釈した（１：６０，０００）、１００μＬ（ウェル１個あたり）のペルオキシダーゼで標識した抗ホスホ−チロシン抗体（Ｓｉｇｍａ、＃Ａ５９６４）を加え、１時間インキュベーションした。プレートをＴＢＳ−Ｔ（２５０μＬ／ウェル、５×）で洗浄し、続いて、１００μＬのＨ２Ｏ２およびテトラメチルベンジジン（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＤＹ９９９）（１：１の混合物）を使用した呈色反応を行った。反応を数分以内に１００μＬの２ＮのＨ２ＳＯ４で停止させた。光学密度を、マイクロプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍで、５４０ｎｍでの波長補正を用いてすぐに測定した。ＩＣ５０値はＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算した。直線範囲（すなわち、速度が初期速度と等価に保たれた期間）をキナーゼについて決定し、ＩＣ５０の決定をこの範囲内で行った。
【０１１６】
Ｗａｎｇ，Ｘ．ら、Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｅｔ［ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ  ｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ／ＳＦ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ］ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｂｌｏｃｋ  ＨＧＦ／ＳＦ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｉｎｖａｓｉｏｎ．、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、２００３、２（１１）：１０８５〜１０９２。
【０１１７】
Ｃａｌｉｃ，Ｍ．ら、Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｌｃｋ  ａｎｄ  Ｆｙｎ  ｋｉｎａｓｅｓ．、Ｃｒｏａｔｉｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａ  ＡＣＴＡ．、２００５、７８（３）：３６７〜３７４。
【０１１８】
本発明の化合物のＩＣ５０結果を以下に示す。
【０１１９】
【表１】
2013518887.tif 000041
【０１２０】
（実施例Ｂ）
細胞増殖／生存アッセイ
様々なヒト癌を表す細胞系（ＳＮＵ−１およびＳＵＮ−５胃、Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ４４１肺、Ｕ−８７膠芽細胞腫、ＨＴ−２９結腸、７８６−Ｏ腎臓、ＰＣ−３膵臓）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手し、ＡＴＣＣによって推奨される培養培地および条件中でルーチン的に維持することができる。増殖／生存アッセイで使用する最適な細胞密度は、個々の細胞系について事前に決定することができる。化合物を、細胞増殖／生存を阻害するその能力についてスクリーニングし、ＩＣ５０値を決定する。以下は、ＳＮＵ−５およびＳＮＵ−１の細胞増殖／生存アッセイの試料プロトコルである。ＳＮＵ−５およびＳＮＵ−１細胞を、９６ウェルの細胞培養プレートに、それぞれ４０００個の細胞／ウェルおよび２０００個の細胞／ウェルで、２％のＦＢＳを含有し、個々の化合物の段階希釈液を添加した適切な培地中で、１００μＬ／ウェルの最終体積で播種する。７２時間のインキュベーション後、２４μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ３５８１）をそれぞれのウェルに加え（最終濃度＝３３３μｇ／ｍＬ）、プレートを３７℃のインキュベーター中でさらに２時間インキュベーションする。光学密度は、直線範囲で、マイクロプレートリーダーを使用して、４９０ｎｍで、６５０ｎｍでの波長補正を用いて測定する。ＩＣ５０値はＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算する。Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４４１、Ｕ−８７、ＨＴ−２９、７８６−０およびＰＣ−３細胞を使用した増殖アッセイには、最初に、細胞を４８時間、低血清条件（適切な培養培地中に０．１〜０．５％のＦＢＳ）中で飢餓させ、その後、様々な濃度の化合物で２時間処理する。細胞をＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）（Ｒ&Ｄ、＃２９４−ＨＧＮ）で２４時間処理した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ試薬を加え、プレートを２時間インキュベーションする。結果をプレートリーダーで記録する。
【０１２１】
（実施例Ｃ）
細胞に基づくｃ−Ｍｅｔリン酸化アッセイ
関連する細胞系（ＳＮＵ−５胃、Ａ５４９およびＮＣＩ−Ｈ４４１肺、Ｕ−８７膠芽細胞腫、ＨＴ−２９結腸、７８６−Ｏ腎臓およびＰＣ−３膵臓の癌細胞系ならびにＨＵＶＥＣ細胞系）における、ｃ−Ｍｅｔのリン酸化に対する化合物の阻害効果は、免疫ブロッティング分析およびＥＬＩＳＡに基づくｃ−Ｍｅｔリン酸化アッセイを使用して評価することができる。細胞を適切な培養培地中で成長させ、様々な濃度の個々の化合物で処理する。ＳＮＵ−５、ＨＴ−２９、７８６−０細胞には、細胞を０．２％または２％のＦＢＳを添加した、適切にした培地中で成長させ、化合物で３〜４時間処理する。全細胞タンパク質抽出物は、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから得られた試薬およびプロトコル（＃ＦＮＮ００１１）を使用して、軽微な改変を用いて調製する。手短に述べると、タンパク質抽出物は、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む溶解緩衝液［５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのフッ化ナトリウム、アプロチニン（２μｇ／ｍＬ）、ロイペプチン（２μｇ／ｍＬ）、ペプスタチンＡ（２μｇ／ｍＬ）、およびフッ化フェニルメチルスルホニル（１ｍＭ）］中、４℃でのインキュベーションによって作製する。タンパク質抽出物は、１４，０００×ｇで２０分間の遠心分離によって細胞細片を取り除く。Ａ５４９、Ｈ４４１、Ｕ−８７およびＰＣ−３細胞には、細胞を少なくとも２４時間、血清（０．２％のＦＢＳ）飢餓させ、その後、様々な濃度の化合物で１時間、前処理する。細胞をＨＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）で１０分間処理した後に全細胞抽出物が調製される。
【０１２２】
免疫ブロッティング分析
関連する抗体は商業的供給業者から得られ、ウサギポリクローナル抗体には抗ヒトｃ−Ｍｅｔ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃ｓｃ−１６１）ならびに抗リン酸化ｃ−Ｍｅｔ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ｐＹ１２３０／４／５およびｐＹ１００３）が含まれていた。免疫ブロッティングには、個々の処理条件からの１０〜２０μｇのタンパク質抽出物を１０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の電気泳動によって分離し、ニトロセルロース（またはＰＶＤＦ）膜に電気転写させた。膜を、３％の乳および０．１％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中で１時間遮断し、その後、遮断溶液中の一次抗ｃ−Ｍｅｔ抗体と共に１時間インキュベーションする。３回の洗浄の後、膜を適切な西洋ワサビとコンジュゲートさせた二次抗体と共に１時間インキュベーションする。最終洗浄の後、ブロットを化学発光検出試薬と共に５分間インキュベーションし、Ｘ線フィルムに曝露させる。画像を走査し、定量し、全ｃ−Ｍｅｔを用いて補正して、ＩＣ５０値を計算する。１０μＭ以下のＩＣ５０を有する化合物が、活性であるとみなされる。
【０１２３】
ＥＬＩＳＡ
細胞タンパク質抽出物を、ヒトホスホ−ｃ−Ｍｅｔ  ＥＬＩＳＡキットを使用して、製造者の指示に従って分析する（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＤＹＣ２４８０）。最適な量のタンパク質抽出物が個々の細胞系について事前に決定されている。手短に述べると、アッセイのために、適切な量のタンパク質抽出物を、捕捉抗ヒトｃ−Ｍｅｔ抗体で２時間、９６ウェルのマイクロプレート中で捕捉する。洗浄の後、検出抗体（ＨＲＰとコンジュゲートさせた抗ホスホ−チロシン抗体）を加え、２時間インキュベーションする。さらなる洗浄の後、１００μＬの基質溶液（Ｈ２Ｏ２およびテトラメチルベンジジンの１：１の混合物）をそれぞれのウェル内に加え、発色中の適切な時間以内に反応を２ＮのＨ２ＳＯ４で停止させる。光学密度は、直線範囲で、マイクロプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍで、５４０ｎｍでの波長補正を用いて測定する。ＩＣ５０値はＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算する。
【０１２４】
前述の記載から、本明細書中に記載したものに加えて、本発明の様々な改変が当業者に明らかであろう。そのような改変も、添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。本特許出願中に引用されている、すべての特許、特許出願、および出版物を含めたそれぞれの参考文献は、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている。
【国際調査報告】
2013518887.tif 000042
2013518887.tif 000043