(57)【要約】  本発明は、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体、及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を含む組み合わせ医薬組成物、並びに多発性硬化症及び他の神経変性疾患並びに神経感染症に関連する疾患及び状態を治療する方法に関する。
2013532182.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含むことを特徴とする組み合わせ医薬組成物。
【請求項２】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、配列番号１又は配列番号２のガンマインターフェロン全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項３】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３からなる群から選択される配列を有するガンマインターフェロンの断片に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項４】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、ウシＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項５】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、配列番号１４を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項６】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、配列番号１７を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項７】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０ホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、その後に前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項８】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、その後に前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項９】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０ホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、その後に前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１０】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態であり、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、その後に前記固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１１】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１２】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、ポリクローナル抗体である請求項１１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１３】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体が、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１４】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１５】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、ポリクローナル抗体である請求項１４に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１６】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１７】
神経変性疾患を治療する方法であって、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に実質的に同時に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】
神経変性疾患が、多発性硬化症である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、組み合わせ医薬組成物の形態で投与される請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物を投与することによって、多発性硬化症に罹患している患者における再発の出現頻度を減らすことを特徴とする方法。
【請求項２１】
組み合わせ医薬組成物が１つから２つの単位剤形で投与され、各剤形が１日１回から１日４回投与される請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
組み合わせ医薬組成物が１つから２つの単位剤形で投与され、各剤形が１日２回投与される請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
多発性硬化症に罹患している患者の治療において使用するための医薬組成物であって、それぞれ、ホメオパシーの技術に従って、連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回振とうすることによって調製した、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を提供し、次いで、前記増強溶液を混合することによって組み合わせるか、或いは、担体塊に組み合わせた前記溶液を浸透させる又は前記溶液を別々に浸透させることによって得られたことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２４】
多発性硬化症に罹患している患者の治療において使用するための医薬組成物であって、ホメオパシーの技術に従って、連続して繰り返し希釈し、得られた溶液を多数回振とうすることによって調製した、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を提供し、次いで、前記増強溶液を混合することによって組み合わせるか、或いは、担体塊に前記組み合わせた前記溶液を浸透させる又は前記溶液を別々に浸透させることによって得られたことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２５】
多発性硬化症を治療する方法であって、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、ウシＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、配列番号１４を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、配列番号１７を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、固体担体に浸透させたＣ１２、Ｃ３０及びＣ５０ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
患者にＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を投与することを含み、それによって、前記投与が、多発性硬化症に罹患している前記患者における症状の発症を遅延させる請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
多発性硬化症の攻撃を緩和する方法であって、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項３２】
神経感染症を治療する方法であって、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に実質的に同時に投与することを含む方法。
【請求項３３】
前記ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及び前記Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、組み合わせ医薬組成物の形態で投与される請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
神経感染症を治療する方法であって、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組み合わせ医薬組成物、並びに多発性硬化症及び他の神経変性疾患並びに神経感染症に関連する疾患及び状態を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多発性硬化症又はＭＳは、筋肉制御、平衡、及び感覚の損失（例えば、しびれなど）をもたらす、脳及び脊髄に影響を及ぼす慢性疾患である。現在、ＭＳの正確な原因は、依然として不明であるが、研究者は、いくつかの因子の組み合わせが関連する可能性があると考えている。ＭＳは遺伝的にかかりやすい個体において、おそらく、ＭＳの発生を導く特異的な外部因子の存在下で現れると考えられている。現在、ＭＳは、自己免疫プロセス−中枢神経系（ＣＮＳ−脳神経、脊髄神経及び視神経）におけるミエリン（神経線維を取り囲み、隔離する脂肪質の鞘）を対象とする体の免疫系の異常な応答を伴うことが一般に認められている。ＭＳにより、ミエリンが薄化又は完全に損失し、疾患が進展するにつれ、ニューロンの伸長又は軸索が切断（横断）される。ミエリンが損失すると、ニューロンはもはや電気信号を有効に伝導することができない。疾患初期では再ミエリン化と称される修復プロセスが起こるが、細胞の髄鞘を完全に再建することはできない。繰り返し攻撃されることにより、損傷を受けた軸索の周りに瘢痕様プラークができるまで有効な再ミエリン化が連続的に少なくなる。
【０００３】
脱髄に加えて、疾患の他の病理的な形質は炎症である。免疫学的説明に厳密に従うと、炎症過程は、一種のリンパ球であるＴ細胞によって引き起こされる。リンパ球は、体の防御において重要な役割を果たす細胞である。ＭＳでは、Ｔ細胞は血液脳関門を介した脳への侵入を増す。Ｔ細胞はミエリンを外来のものと認識し、それを攻撃して炎症プロセスを誘発し、それにより他の免疫細胞並びにサイトカイン及び抗体のような可溶性因子が刺激されると考えられている。
【０００４】
自己免疫障害に加えて、一部の研究者は、感染症により、どういうわけか免疫系が神経細胞を攻撃するように誘発されると考えている。基本的に、初感染を引き起こすウイルス（又は細菌）は神経細胞のように「見える」と考えられている。免疫系は、ウイルスを撃退するためにＴ細胞を発生する。これらのＴ細胞は、感染がなくなった後も体内に残り、神経細胞を「見る」と混乱し、それをインベーダーと間違える。その結果、免疫系が神経系を攻撃する。
【０００５】
ＭＳには４つの主要な種類がある。１．再発寛解型（ＲＲＭＳ）：その間、新しい症状が現れる可能性があり、古い症状が再び現れる、又は悪化する、再発を特徴とする。２．二次性進行型（ＳＰＭＳ）：再発の間に疾患が段階的に悪化することを特徴とする。３．進行再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）：この形態のＭＳは発症から進行性の経過をたどり、再発によって中断される。４．一次性進行型（ＰＰＭＳ）：この種類のＭＳは、疾患が、発症してから寛解を全く伴わずに段階的に進行することを特徴とする。
【０００６】
現在のところＭＳに対する公知の治癒法はない。しかし、疾患を遅らせることができる療法がある。治療の目的は、症状を制御することである。多発性硬化症を管理するために、免疫系を変化させる薬剤、例えばインターフェロンが使用される。インターフェロンは、免疫系の細胞が製造し、互いに意思疎通するために使用するタンパク質メッセンジャーである。アルファ、ベータ、及びガンマなどの異なる種類のインターフェロンがある。インターフェロンは全て、免疫系を調節する能力を有し、ウイルスを含めた侵入者からの保護において重要な役割を果たす。各インターフェロンは異なる機能を果たすが、その機能は重複している。ベータインターフェロンは、多発性硬化症の管理において有用であることが見いだされている。
【０００７】
ＭＳ及び関連する症状を治療するための所望の治療効果を有する新しい製剤が継続して必要とされている。
【０００８】
ホメオパシーの技術により増強された、極度に希釈された型（又は超低型）の抗体（活性化増強型）の治療効果が本特許出願の発明者であるＤｒ．Ｏｌｅｇ  Ｉ．Ｅｐｓｈｔｅｉｎにより発見されている。特許文献１には、ホメオパシーによる活性型の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に対する抗体を投与することによって良性前立腺肥大又は前立腺炎を治療するための医薬品が開示されている。
【０００９】
Ｓ−１００タンパク質は、主に脳の灰白質において、主にグリア細胞及びシュワン細胞において見いだされる細胞質内の酸性カルシウム結合性タンパク質である。このタンパク質は、２つの免疫学的に別個のサブユニット、アルファ及びベータからなる、いくつかのホモ二量体又はヘテロ二量体のアイソフォームで存在する。Ｓ−１００タンパク質は、脳卒中の場合と同様に、脳病変及び脳傷害に起因する神経損傷の診断及び評価を補助するものとして使用することが提案されている。非特許文献１、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１０】
超低用量の、Ｓ−１００タンパク質に対する抗体は、抗不安活性、抗無力症活性、抗攻撃性活性、ストレス−保護活性、抗低酸素活性、抗虚血活性、神経保護活性及び向知性活性を有することが示されている。全て参照として本明細書に組み込まれる、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、及び非特許文献５を参照されたい。
【００１１】
超低用量の、ガンマインターフェロンに対する抗体が、ウイルス起源の疾患を治療するための治療及び予防法において有用であることが示されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれる特許文献２を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第７，５８２，２９４号明細書
【特許文献２】米国特許第７，５７２，４４１号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｙａｒｄａｎら、Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｓ１００Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、Ｊ  Ｐａｋ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  ６１巻、３号、２０１１年３月
【非特許文献２】Ｃａｓｔａｇｎｅ  Ｖ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｓ１００  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｈａｖｅ  ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃ−ｌｉｋｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｔ  ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００８年、６０巻（３号）：３０９〜１６頁；
【非特許文献３】Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｏ．  Ｉ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓ１００Ｂ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋ  ｔｈｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ  ｓｎａｉｌ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｅｈａｖ．、２００９年、９４巻（１号）：３７〜４２頁；
【非特許文献４】Ｖｏｒｏｎｉｎａ  Ｔ．Ａ．ら、Ｃｈａｐｔｅｒ  ８．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｓ−１００  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａｎｘｉｅｔｙ−ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．「Ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ」
【非特許文献５】Ｅｄ．Ｋａｌｕｅｆｆ  Ａ．Ｖ．  Ｎ−Ｙ編、「Ｎｏｖａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｉｎｃ．」、２００６年、１３７〜１５２頁
【発明の概要】
【００１４】
一態様では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。
【００１５】
１つの変形では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物であって、抗体が、ガンマインターフェロン全体又はその断片に対するものである組成物を提供する。
【００１６】
１つの変形では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物であって、Ｓ−１００タンパク質に対する抗体が、Ｓ−１００タンパク質全体又はその断片に対する抗体である組成物を提供する。
【００１７】
１つの変形では、本発明のこの態様の組み合わせ医薬組成物は、固体担体に浸透させた、（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）ホメオパシー希釈物の混合物又は（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）ホメオパシー希釈物の混合物の形態のガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体を含む。その後に、（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）ホメオパシー希釈物の混合物又は（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）ホメオパシー希釈物の混合物の形態のＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を固体担体に浸透させることができる。
【００１８】
別の変形では、本発明のこの態様の組み合わせ医薬組成物は、固体担体に浸透させた、（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）ホメオパシー希釈物の混合物又は（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）ホメオパシー希釈物の混合物の形態のＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を含む。その後に、（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０）ホメオパシー希釈物の混合物又は（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）ホメオパシー希釈物の混合物の形態のガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体を固体担体に浸透させることができる。
【００１９】
ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体であることが好ましく、ポリクローナル抗体であることがより好ましい。本発明のこの態様の１つの変形では、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製される。
【００２０】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体であることが好ましく、ポリクローナル抗体であることがより好ましい。本発明のこの態様の１つの変形では、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製される。具体的には、垂直方向の振とうが意図されている。
【００２１】
別の態様では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体、及びｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を投与することによって、多発性硬化症に罹患している患者を治療する方法を提供する。ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体は、組み合わせ医薬組成物の形態で投与することが好ましい。
【００２２】
別の態様では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を投与することによって、多発性硬化症に罹患している患者における症状の発症を有意に遅延させる方法を提供する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ組成物を投与することによって、多発性硬化症に罹患している患者における再発の出現頻度を減らす方法をさらに提供する。
【００２４】
本発明の１つの変形では、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体の１つから２つの単位剤形、及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の１つから２つの単位剤形の投与が提供され、各剤形は１日１回から１日４回投与される。活性化増強型の抗体のそれぞれの１つから２つの単位剤形を１日２回投与することが好ましい。
【００２５】
本発明のこの態様の好ましい変形では、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ組成物の１つから２つの単位剤形の投与が提供され、各剤形は１日１回から１日４回投与される。１つから２つの単位剤形を１日２回投与することが好ましい。
【００２６】
好ましい本発明のこの態様の別の変形では、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む１つの単位剤形の形態で、組み合わせが、好ましくは１日２回投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】多発性硬化症の病理発生における免疫応答を例示する図である。
【図２】臨床症状の発症の平均日数を示す図である。
【図３】疾患の重症度（点数）を示す図である。
【図４】異なる病期における疾患の重症度（点数）を示す図である。
【図５】再発の出現頻度を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、添付の特許請求の範囲と関連して定義される。特許請求の範囲に関して、以下の用語解説によって関連する定義がもたらされる。
【００２９】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子の特定の空間的な極性の構成に特異的に結合し、それにより、それと相補的であると定義される免疫グロブリンを意味するものとする。特許請求の範囲において列挙されている抗体は、天然、ポリクローナル又はモノクローナルであってよい完全な免疫グロブリン又はその断片を含んでよく、それらとしては、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３、ＩｇＭなどの種々のクラス及びアイソタイプを挙げることができる。その断片としては、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’などを挙げることができる。単数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、複数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を含む。
【００３０】
「活性化増強型」又は「増強型」という用語はそれぞれ、本明細書において列挙されている抗体に関しては、任意の抗体の最初の溶液のホメオパシーポテンタイゼーション（ｐｏｔｅｎｔｉｚａｔｉｏｎ）の生成物を示すために使用される。「ホメオパシーポテンタイゼーション」とは、ホメオパシーの方法を用いて最初の関連物質の溶液にホメオパシーポーテンシーを付与することを示す。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、連続した希釈を、外部からの処理、特に（機械的な）振とうと組み合わせて繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振とうする。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０）に相当する抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。ホメオパシーポテンタイゼーションの例は、その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５７２，４４１号及び同第７，５８２，２９４号に記載されている。特許請求の範囲では「活性化増強型」という用語が使用され、実施例では「超低用量」という用語が使用される。「超低用量」という用語は、ホメオパシーにより希釈され、増強された型の物質の研究及び使用によって創出された技術分野における専門用語になった。「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅ）」又は「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ）」という用語は、特許請求の範囲において使用される「活性化増強」型という用語を完全に支持し、それと主に同義であるものとする。
【００３１】
言い換えれば、抗体は、３つの因子が存在すれば、「活性化増強」型又は「増強」型である。第１に、「活性化増強」型抗体は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている調製プロセスの生成物である。第２に、「活性化増強」型抗体は、現代薬理学において広く受け入れられている方法によって決定される生物活性を有さなければならない。第３に、「活性化増強」型抗体により示される生物活性は、ホメオパシーのプロセスの最終生成物に分子型抗体が存在することによっては説明することができない。
【００３２】
例えば、活性化増強型抗体は、最初の、単離された分子型抗体を、機械的な振とうなどの外部からの衝撃と併せて連続して多数回希釈することによって調製することができる。濃度低下の過程における外部からの処理は、例えば、超音波、電磁気、又は他の物理的因子に曝露させることによって実現することもできる。その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれるＶ．  Ｓｃｈｗａｂｅ  「Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ」、Ｍ．、１９６７年、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号には、ホメオパシーの技術分野において広く受け入れられているホメオパシー増強の方法であるそのようなプロセスが記載されている。この手順により、最初の分子型抗体の分子濃度が均一に低下する。所望のホメオパシーポーテンシーが得られるまでこの手順を繰り返す。個々の抗体について、所要のホメオパシーポーテンシーは、中間希釈物を所望の薬理学的モデルにおいて生物学的試験に供することによって決定することができる。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振とうと組み合わせて連続した希釈を繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振とうする。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌにわたる。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。所望のポーテンシーをどのように得るかの例も、例えば、明示された目的で参照により組み込まれる、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号において提供される。本明細書に記載の「活性化増強」型抗体に適用可能な手順は、下に詳しく記載されている。
【００３３】
ヒト対象のホメオパシー治療に関してはかなりの量の議論がなされてきた。本発明は、「活性化増強」型抗体を得るために、受け入れられているホメオパシーのプロセスに依拠するが、本発明は、活性を証明するためにはヒト対象におけるホメオパシー単独に依拠するのではない。驚くべきことに、本願の発明者は、認められている薬理学的モデルにおいて、出発分子型抗体を連続して多数回希釈することから最終的に得られた溶媒が、標的希釈物中に分子型抗体の痕跡が存在することとは無関係の決定的な活性を有することを発見し、十分に実証した。本明細書で提供される「活性化増強」型抗体を、生物活性について、広く受け入れられている活性の薬理学的モデルにおいて、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験において、又は適切な動物モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。該実験により、さらに以下に提供される、そのようなモデルにおける生物活性の証拠がもたらされた。ヒト臨床試験によっても、ヒト療法に首尾よく変換される、動物モデルにおいて観察された活性の証拠がもたらされる。ヒト研究によっても、医科学において病的状態として広く認められている特定のヒト疾患又は障害を治療するための、本明細書に記載の「活性化増強」型の利用可能性の証拠がもたらされている。
【００３４】
また、特許請求された「活性化増強」型抗体は、その生物活性が、最初の出発溶液から残っている分子型抗体が存在することによっては説明することができない溶液又は固体調製物のみを包含する。言い換えれば、「活性化増強」型抗体は、最初の分子型抗体の痕跡を含有してよいことが意図されているが、連続して希釈した後に残った分子型抗体は非常に低濃度であるので、当業者は、認められている薬理学的モデルにおいて観察される生物活性が、いかなる程度の妥当性でも残りの分子型抗体に起因すると考えることができない。本発明は特定の理論に限定されるものではないが、本発明の「活性化増強」型抗体の生物活性は、最初の分子型抗体には起因しない。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度が、認められている分析的な技法、例えば、キャピラリー電気泳動及び高速液体クロマトグラフィーなどの検出限界を下回る、液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が好ましい。その中に含まれる最初の分子型抗体の濃度がアボガトロ数未満である液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が特に好ましい。分子型の治療用物質の薬理学において、薬理学的反応のレベルが、対象に投与される、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験される活性薬物の濃度に対してプロットされた用量反応曲線を作成することは一般的である。任意の検出可能な反応を生じる薬物の最小レベルは、閾値用量として公知である。「活性化増強」型抗体は、もしあれば、分子抗体を、所与の生物学的モデルにおける分子型抗体の閾値用量を下回る濃度で含有することが具体的に意図されており、それが好ましい。
【００３５】
多発性硬化症の実験動物モデルは公知である。例えば、実験的自己免疫脳脊髄炎、時には、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）が、中枢神経系の炎症性脱髄性疾患の動物モデルである。これは、主にげっ歯類及びノックアウトマウスで用いられる。この実験モデルは、多発性硬化症などのヒト中枢神経系脱髄性疾患の動物モデルとして広範に試験される。知覚動物において、同種又は異種の大脳組織のホモジネート、精製されたミエリン又はタンパク質を動物の組成に導入することにより、ＥＡＥを誘導することが可能である（Ｒａｉｎｅら、Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、１９８４年、４３６巻：３３〜５１頁；ＭｃＣｏｍｂｅら、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９４年；５１巻（２号）：１５３〜１６７頁）。
【００３６】
現在のところ、免疫原性を保有し、ＥＡＥを導くために最も頻繁に使用されるミエリンタンパク質が２０種超記載されている（Ｂａｕｍａｎｎら、Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｖ．  ２００１年、８１巻（２号）：８７１〜９２７頁）。例としては、塩基性ミエリンタンパク質（「ＭＢＰ」）（Ｈａｓｈｉｍ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．、１９７８年、３９巻：６０〜１０７頁）；プロテオリピドタンパク質（「ＰＬＰ」）（Ｂｒａｄｌら、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．、１９９６年、６巻（３号）：３０３〜３１１頁；Ｔｕｏｈｙ、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．、１９９４年、１９巻（８号）：９３５〜９４４頁）；糖タンパク質：ミエリン関連糖タンパク質（「ＭＡＧ」）（Ｗｅｅｒｔｈら、１９９９年）；ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（「ＭＯＧ」）；及びオリゴデンドロサイト特異的タンパク質（「ＯＳＰ」）（Ｓｔｅｖｅｎｓら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９年；１６２巻（１２号）：７５０１〜７５０９頁）が挙げられる。総タンパク質だけでなく、これらのタンパク質の特異的な断片によっても、動物に導入するとＥＡＥが引き起こされ得ることが理解されている。げっ歯類において最も一般的に使用される抗原は脊髄ホモジネート（ＳＣＨ）、精製されたミエリン、ミエリンタンパク質、例えば、ＭＢＰ、ＰＬＰ及びＭＯＧなど、又はこれらのタンパク質のペプチドであり、全て、免疫学と病理学の両方に関して異なる疾患特性を有する別個のモデルをもたらす。
【００３７】
大部分の適切なモデルＭＳは、ＥＡＥモデルにおいて、脊髄のホモジネートを導入することによって引き起こされる（Ｇｉｌｅｒｏｖｉｃｈら、２０１０年；Ｚｈａｂｏｔｉｎｓｋｉｙ、Ｊｏｆｆｅ、１９７５年；Ｚｈｉｔｎｕｋｈｉｎら、２００８年；Ｓｉｎｈａら、２００９年）。このモデルでは、最初の疾患と同様に、ミエリンの全成分に対して免疫応答が生じる：炎症が誘導され、その後に脱髄、軸索の変性、次いで神経細胞自体の変性が伴う（Ｇｉｌｅｒｏｖｉｃｈら、２０１０年；Ｓｉｎｈａら、２００９年）。不全麻痺、麻痺及び他の疾患の症状の発生を伴う病理的な事象の連鎖が顕在化する。
【００３８】
ＥＡＥの発生において、４つの病期を区別することが可能であった：１．ＣＦＡをともなう大脳の抗原の影響下における末梢のＴ−リンパ球の感作及びＧＥＢの透過性の増加。２．活性化されたＴ細胞のＣＮＳへの遊走及び直接脳における抗原提示細胞（星状膠細胞及び小膠細胞）の活性化。これらの２つの病期は、臨床徴候が観察されない潜伏（誘導）期間に対応する。３．神経線維の脱髄を導く、脳における自己免疫応答及び炎症性応答の発生（臨床期間）。４．病理的プロセスの抑制及び損傷を受けた組織の修復（回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｐｈａｓｅ））。この期間の間に、大多数の動物において神経障害及び運動障害が和らぎ、部分的又は完全な回復が結果として起こり、その後、動物は繰り返しのＥＡＥ誘導に対して抵抗性になる。ＥＡＥの平均持続時間は３０日間：潜伏期（ｌａｔｅｎｔ  ｓｔａｇｅ）、臨床病期及び回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｓｔａｇｅ）である。各病期の持続時間は通常７〜１０日間である。
【００３９】
多発性硬化症でも、ＣＮＳにおける病理的プロセスの発生の類似の期が観察された。図１−多発性硬化症の病理発生における免疫応答を参照されたい（Ｗｉｅｎｄｌ  ＆  Ｋｉｅｓｅｉｅｒ、２００３年）。
【００４０】
本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。本明細書において上記されている通り、組み合わせの個々の成分のそれぞれは、それ自体の個々の医学的使用について一般に公知である。しかし、本特許出願の発明者らは、驚いたことに、組み合わせを投与することにより、多発性硬化症の患者において症状の発症が著しく遅延し、再発の確率が低下することを発見した。
【００４１】
本発明のこの態様による組み合わせ医薬組成物は、液体の形態であっても固体の形態であってもよい。医薬組成物中に含まれる活性化増強型の抗体のそれぞれは、最初の分子型抗体から、ホメオパシーの技術分野で受け入れられているプロセスによって調製される。出発抗体は、公知のプロセスに従って、例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれる、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｇ．  Ｆｒｉｍｅｌ，  Ｍ．、「Ｍｅｄｉｔｓｙｎａ」、１９８７年、９〜３３頁；「Ｈｕｍ．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ３０  ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ」、Ｌａｆｆｌｙ  Ｅ．、Ｓｏｄｏｙｅｒ  Ｒ．、２００５年、１４巻、１〜２号、３３〜５５頁に記載の通り調製されたモノクローナル抗体、又はポリクローナル抗体であってよい。
【００４２】
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術によって得ることができる。このプロセスの最初の段階は、ポリクローナル抗血清の調製の過程においてすでに開発された原理に基づいた免疫化を含む。研究のさらなる段階は、同一の特異性を有する抗体のクローンを生成するハイブリッド細胞の作製を伴う。それらの別々の単離は、ポリクローナル抗血清を調製する場合と同じ方法を使用して実施する。
【００４３】
ポリクローナル抗体は、動物の能動免疫によって得ることができる。この目的で、例えば、適切な動物（例えば、ウサギ）に、適切な抗原、Ｓ−１００タンパク質又はガンマインターフェロンのいずれかの一連の注射を受けさせる。動物の免疫系により、対応する抗体が生成し、それを公知の様式で動物から採取する。この手順により、単一特異性の抗体が豊富な血清を調製することが可能になる。
【００４４】
所望であれば、抗体を含有する血清は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、塩析による分画、又はイオン交換クロマトグラフィーを使用することによって精製することができる。得られた精製抗体濃縮血清を、活性化増強型の抗体を調製するための出発材料として使用することができる。得られた、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでにわたる。
【００４５】
本発明による組み合わせ薬物の各成分を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。固体剤形を調製するために、固体担体を、ホメオパシーのプロセスによって得られた所望の希釈物で処理する。本発明の組み合わせの固体単位剤形を得るために、担体集団に各希釈物を浸透させる。どちらの浸透の階数も、所望の組み合わせ剤形を調製するために適している。
【００４６】
好ましい実施形態では、本発明の組み合わせを含む活性化増強型を調製するための出発材料は、動物に産生させた、対応する抗原、すなわち、ガンマインターフェロン又はＳ−１００タンパク質に対するポリクローナル抗体である。ガンマインターフェロンに対する活性化増強型のポリクローナル抗体を得るために、所望の抗原を免疫原として実験動物、好ましくは、ウサギに注射することができる。ガンマインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のガンマインターフェロンの全分子を用いて得ることができる：
配列番号１
2013532182.tif 000003
【００４７】
ガンマインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のガンマインターフェロンの全分子を用いて得ることができる：
配列番号２
2013532182.tif 000004
【００４８】
ガンマインターフェロン断片を抗原として使用することも意図されている。そのような抗原に適した配列は以下の通りである：
配列番号３
2013532182.tif 000005
配列番号４
2013532182.tif 000006
配列番号５
2013532182.tif 000007
配列番号６
2013532182.tif 000008
配列番号７
2013532182.tif 000009
配列番号８
2013532182.tif 000010
配列番号９
2013532182.tif 000011
配列番号１０
2013532182.tif 000012
配列番号１１
2013532182.tif 000013
【００４９】
ガンマインターフェロンに対するポリクローナル抗体は、以下の配列のうちの１つの組換えガンマインターフェロン分子を用いて得ることができる：
配列番号１２
2013532182.tif 000014
配列番号１３
2013532182.tif 000015
【００５０】
ヒトガンマインターフェロンに対する出発ポリクローナル抗体を調製するための例示的な手順は、以下の通り説明することができる。血液試料を採取する７〜９日前に、所望の抗原を、ウサギに１〜３回静脈内注射して、ウサギの血流中のポリクローナル抗体のレベルを上昇させる。免疫化したら、抗体レベルを検査するために血液試料を取得する。一般には、可溶性抗原の免疫応答の最大レベルは、抗原を最初に注射した後４０〜６０日以内に実現される。第１の免疫化サイクルが達成されたら、ウサギを３０日のリハビリテーション期間におき、その後、さらに１〜３回静脈内注射して再免疫化を実施する。
【００５１】
所望の抗体を含有する抗血清を得るために、ウサギから、免疫化されたウサギの血液を採取し、５０ｍｌの遠心管に入れる。管の側面に形成された生成物である血餅を木べらで除去し、管の中心の血餅にロッドを入れる。次いで、血液を冷蔵庫に約４０℃の温度で一晩置く。次の日に、へらの上の血餅を除去し、残りの液体を１分当たり１３，０００回転で１０分間遠心分離する。上清の流体が標的抗血清である。得られた抗血清は一般には黄色である。抗血清に、２０％のＮａＮ３（重量濃度）を最終濃度が０．０２％になるまで加え、使用する前に、−２０℃の温度で凍結した状態で保管する、又は、ＮａＮ３なしで−７０℃の温度で保管する。ガンマインターフェロンに対する標的抗体を抗血清から分離するためには、以下の固相吸収の連続が適している：
【００５２】
ウサギの抗血清１０ｍｌを０．１５ＭのＮａＣｌで２倍希釈し、その後、６．２６ｇのＮａ２ＳＯ４を加え、混合し、４℃で１２〜１６時間インキュベートする。沈渣を遠心分離によって除去し、リン酸緩衝液１０ｍｌ中に希釈し、同じ緩衝液に対して外界温度で一晩にわたって透析する。沈渣を除去した後、溶液をリン酸緩衝液によって平衡させたＤＥＡＥ−セルロースカラムに適用する。溶出液の２８０ｎｍにおける光学濃度を測定することによって抗体画分を決定する。
【００５３】
単離された粗製の抗体を、アフィニティークロマトグラフィー法を使用し、得られた抗体を、クロマトグラフィー媒体の不溶性マトリックス上にあるガンマインターフェロンに付着させることによって精製し、その後濃縮した水性塩類溶液により溶出させる。
【００５４】
得られた緩衝溶液を、活性化増強型の抗体を調製するために用いるホメオパシー希釈プロセスの最初の溶液として使用する。ガンマインターフェロンに対する抗原精製ポリクローナルウサギ抗体の最初のマトリックス溶液の好ましい濃度は０．５〜５．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、２．０〜３．０ｍｇ／ｍｌである。
【００５５】
ニューロン及びグリア細胞（星状細胞及び乏突起膠細胞）によって発現される脳特異的Ｓ１００タンパク質は、直接的に、又は他のタンパク質との相互作用を通じて、学習プロセス及び記憶プロセス、ニューロンの成長及び生存能力、神経組織における代謝プロセスの調節などに影響を及ぼすことを含めた、正常な脳機能を維持するためのいくつかの機能をＣＮＳにおいて果たす。活性化増強型抗体を調製するために、脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する抗血清を、以下の通り雄ウシの脳組織から取り出し、処理することができる：
−特殊な粉砕機を用いて、液体窒素中で凍結させた雄ウシ脳組織を粉末に変化させる；
−抽出用緩衝液を用いてホモジナイゼーションして、タンパク質を１：３の比（重量／体積）で抽出する；
−ホモジネートを６０℃で１０分間加熱し、次いで、氷浴中で４℃まで冷却する；
−遠心分離によって、熱不安定性タンパク質を除去する；
−硫酸アンモニウム分画を段階的に実施し、沈殿したタンパク質を続いて除去する；
−ｐＨを４．０に落とすことによって達成される１００％飽和硫酸アンモニウムを用いてＳ−１００タンパク質を含有する画分を沈殿させる；遠心分離によって、所望の画分を回収する；
−ＥＤＴＡ及びメルカプトエタノールを含有する最小限の体積の緩衝液に沈殿物を溶解し、脱イオン水を用いて沈殿物を透析し、凍結乾燥する；
−酸性タンパク質を分画した後に、イオン交換媒体、ＤＥＡＥ−セルロースＤＥ−５２、次いでＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０中でのクロマトグラフィーを続ける；
−セファデックスＧ−１００を用いたゲル濾過により、分子量に従って、Ｓ−１００タンパク質を含有する回収し透析した画分を分割する；
−精製されたＳ−１００タンパク質を透析し、凍結乾燥する。
【００５６】
精製された脳特異的タンパク質Ｓ−１００の分子量は２１，０００Ｄである。
【００５７】
Ｓ−１００タンパク質に対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用して、ガンマインターフェロン抗体に関して記載されている方法と同様の方法によって得ることもできる。Ｓ−１００タンパク質の分子全体を、ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）として使用することができる。
ウシＳ１００Ｂ（配列番号１４）
2013532182.tif 000016
ヒトＳ１００Ｂ（配列番号１５）
2013532182.tif 000017
ヒトＳ１００Ａ１（配列番号１６）
2013532182.tif 000018
ウシＳ１００Ａ１（配列番号１７）
2013532182.tif 000019
【００５８】
分離された脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する脳特異的抗血清を得るために、精製されたＳ−１００タンパク質（抗原）の混合物を、完全フロイントアジュバントを入れた媒体としてメチル化された雄ウシ血清アルブミンによる複合体として調製し、それを実験動物であるウサギの脊椎領域内に１〜２ｍｌの量で皮下注射することができる。抗血清は、１：５００〜１：１０００の力価を有し得る。
【００５９】
組み合わせの各成分の活性化増強型は、最初の溶液から、ホメオパシーポテンタイゼーションによって、好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでの、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の濃度から出発して、（最初の溶液から開始する）前の溶液のそれぞれ１部を９部（１０倍希釈（ｄｅｃｉｍａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ））、又は９９部（１００倍希釈）、又は９９９部（１，０００倍希釈（ｍｉｌｌｅｓｉｍａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ））の中性の溶媒に入れて段階希釈することによる比例的な濃度低下の方法を外部からの衝撃と併せて用いて調製することができる。外部からの衝撃は、各希釈物を多数回垂直方向に振とうすること（ダイナマイゼーション）を伴うことが好ましい。その後の、所要のポーテンシーレベル、又は希釈因子に至るまでの希釈のそれぞれには別々の容器を使用することが好ましい。この方法は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている。例えば、明示された目的で参照により本明細書に組み込まれるＶ．  Ｓｃｈｗａｂｅ  「Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ」、Ｍ．、１９６７年、１４〜２９頁を参照されたい。
【００６０】
例えば、１２−１００倍希釈物（Ｃ１２と示される）を調製するために、３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のガンマインターフェロンに対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を、中性の、水を含む又は水−アルコールを含む溶媒（好ましくは、１５％エチルアルコール）９９部中に希釈し、次いで何回も（１０回以上）垂直方向に振とうして、第１の１００倍単位希釈物（Ｃ１と示される）を創出する。第１の１００倍希釈物Ｃ１から第２の１００倍単位希釈物（Ｃ２）を調製する。この手順を１１回繰り返して第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２を調製する。したがって、第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２は、異なる容器内で、３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のガンマインターフェロンに対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を中性の溶媒９９部中に１２回段階希釈することによって得られる溶液を表し、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２に相当する。関連する希釈因子を用いて同様の手順を実施して希釈物Ｃ３０、Ｃ５０、及びＣ２００を得る。中間希釈物を所望の生物学的モデルにおいて試験して活性を確認することができる。本発明の組み合わせを含む両方の抗体の好ましい活性化増強型は、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０希釈物又はＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００希釈物の混合物である。活性な物質の種々のホメオパシー希釈物（主に１００倍単位希釈物）の混合物を生物活性のある液体成分として使用する場合、組成物（例えば、Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０、Ｃ２００）の各成分は、上記の手順に従って、最後から二番目の希釈物が得られるまで（例えば、それぞれＣ１１、Ｃ２９、及びＣ１９９まで）別々に調製し、次いで各成分１部を、混合物の組成に従って１つの容器に加え、所要量（例えば、１００倍希釈するためには９７部）の溶媒と混合する。
【００６１】
活性な物質を種々のホメオパシー希釈物、例えば、１０倍希釈物及び／又は１００倍希釈物（Ｄ２０、Ｃ３０、Ｃ１００又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ５０又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ２００など）の混合物として使用することが可能であり、その効率は、希釈物を適切な生物学的モデル、例えば、本明細書の実施例に記載のモデルにおいて試験することによって実験的に決定される。
【００６２】
増強及び濃度低下の過程では、垂直方向の振とうを、超音波、電磁場への外部からの曝露又はホメオパシーの技術分野で受け入れられている任意の同様の外部からの衝撃手順と置き換えることができる。
【００６３】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、液体の形態又は固体単位剤形であってよい。好ましい液体の形態の医薬組成物は、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体とＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の混合物であり、その比率は１：１であることが好ましい。好ましい液体担体は水又は水とエチルアルコールの混合物である。
【００６４】
本発明の医薬組成物の固体単位剤形は、薬学的に許容される固体担体に、好ましくは１：１の比率で混合する活性化増強型、活性成分の水溶液又は水−アルコール溶液の混合物を浸透させるによって調製することができる。或いは、必要な希釈物のそれぞれを継続的に担体に浸透させることができる。どちらの浸透の階数も受け入れられる。
【００６５】
好ましくは、固体単位剤形の医薬組成物は、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の水希釈物又は水−アルコール希釈物を予め染み込ませた薬学的に許容される担体の顆粒剤から調製する。固体剤形は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、及びその他を含めた製薬技術分野で公知の任意の形態であってよい。不活性な医薬成分として、医薬品の製造において使用されるグルコース、スクロース、マルトース、デンプン、イソマルトース、イソマルト及び他の単糖、オリゴ糖及び多糖、並びに上記の不活性な医薬成分と、潤滑剤、崩壊剤、結合剤及び着色料を含めた他の薬学的に許容される賦形剤、例えば、イソマルト、クロスポビドン、シクラミン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、無水クエン酸など）との技術的混合物を使用することができる。好ましい担体は、ラクトース及びイソマルトである。薬剤剤形は、標準の製薬用賦形剤、例えば、結晶セルロース及びステアリン酸マグネシウムをさらに含んでよい。
【００６６】
経口用の固体形態を調製するために、ラクトースの顆粒１００〜３００μｍを、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水−アルコール溶液に、ラクトース５ｋｇ又は１０ｋｇに対して抗体溶液１ｋｇ（１：５〜１：１０）の比率で浸透させる。浸透に影響を及ぼすために、ラクトース顆粒を、煮沸ベッドプラント（例えば、Ｈｕｔｔｌｉｎ  ＧｍｂＨの「Ｈｕｔｔｌｉｎ  Ｐｉｌｏｔｌａｂ」）中の流動煮沸ベッド中で染み込ませるための注水に曝露させ、その後、４０℃未満の加熱した空気の流れによって乾燥する。活性化増強型抗体を染み込ませた乾燥顆粒（１０〜３４重量部）の推定量をミキサーに入れ、２５〜４５重量部の「染み込ませていない」純粋なラクトース（処理効率を低下させることなく技術的なプロセスの費用を縮小し、それを単純化及び加速するために使用する）と、０．１〜１重量部のステアリン酸マグネシウム、及び３〜１０重量部の結晶セルロースと一緒に混合する。得られた錠剤集団を均一に混合し、（例えば、Ｋｏｒｓｃｈ−ＸＬ４００打錠機において）直接乾式プレスすることによって錠剤化して、１５０〜５００ｍｇ、好ましくは、３００ｍｇの丸剤を形成する。錠剤化した後、ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の組み合わせの水−アルコール溶液（丸剤１粒当たり３．０〜６．０ｍｇ）を染み込ませた丸剤３００ｍｇを得る。担体に浸透させるために使用する組み合わせの各成分は、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０の混合物、又は１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００の混合物の形態である。
【００６７】
本発明はいかなる特定の理論にも限定されるものではないが、本明細書に記載の活性化増強型抗体は、分子型抗体を、そのような分子型に帰する生物活性を有するのに十分な量では含有しないと考えられる。本発明の組み合わせ薬物（組み合わせ医薬組成物）の生物活性は、添付の実施例において十分に実証されている。
【００６８】
本発明は、多発性硬化症の症状の発症を有意に遅延させる方法であって、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を投与することを含む方法をさらに提供する。
【００６９】
本発明は、ａ）ガンマインターフェロンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を投与することによって、多発性硬化症に罹患している患者におけるエピソードの再発の確率を低下させる方法をさらに提供する。
【００７０】
治療の目的で、本発明の組み合わせを、１日１回から１日４回まで、好ましくは１日２回、それぞれに１つ又は２つの組み合わせ単位剤形を含めて投与することが好ましい。
【実施例】
【００７１】
添付の非限定的な実施例を参照して本発明をさらに例示する。
【００７２】
実施例１
この試験では、Ｗｉｓｔａｒ系統の雌のラット（２００〜２２０ｇ）を用いた。動物１匹に対して１００ｍＨの同種脊髄のホモジネート、０．２ｍｌのＣＦＡ（マイコバクテリアの死菌の内容物５ｍｇ／ｍｌ）及び０．２ｍｌの生理溶液に基づくに基づく脳炎惹起性混合物を単回接種することにより、ＥＡＥを誘導した。軽いエーテル麻酔下で、ＥＧＳを０．４ｍｌ（右側と左側に０．２ｍｌずつ）の量で皮下投与した（尾の基部において尾静脈に沿って）（Ａｂｄｕｒａｓｕｌｏｖａ，  Ｉ．Ｎ．ら、２００４年；Ｚｈｉｔｎｕｋｈｉｎ，  Ｙ．Ｌ．ら、２００８年；Ｓｅｒｅｂｒｙａｎａｙａ，  Ｎ．Ｂ．ら、２０１０年）。ＥＡＥを誘導した日から初めて３０日間、１日２回、７時間の間隔で、以下を胃内に投与した：（ａ）超低用量の、Ｓ−１００タンパク質に対する抗体（以下「Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ」）（ｎ＝１０、１日当たり２．５ｍｌ／ｋｇ）；（ｂ）超低用量の、ガンマインターフェロンに対する抗体（以下「γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ」）（ｎ＝１０、１日当たり２．５ｍｌ／ｋｇ）；（ｃ）Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂとγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂの組み合わせ（以下「複合組み合わせ」）（ｎ＝１０、１日当たり５ｍｌ／ｋｇ）、及び（ｄ）蒸留水（対照；ｎ＝１０、１日当たり５ｍｌ／ｋｇ）。参照調製物として免疫調節物質Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）（Ｔｅｖａ、Ｉｓｒａｅｌ）を使用し、ＥＡＥを誘導した後２日目〜２５日目に４ｍｇ／ｋｇの用量で筋肉内注射した。結果が図２〜５に示されている。
【００７３】
実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の臨床症状を、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導した日から始めて３０日間、毎日評価した。試験の下で薬物を投与する直前に各ラットの検査を行った。疾患が急速に進行した場合は、１日２回臨床症状を評価した。
【００７４】
神経学的異常の重症度を点数で評価した：  筋肉の衰弱、振戦の存在（０．５点）；抵抗性不全麻痺（１点）；麻痺（１．５点）。臨床指数（ＣＩ）を４肢についての症状の合計として算出した。さらに、神経性の異常の目に見える臨床的な徴候がない場合は、ＣＩをゼロとし、動物が死亡した場合は６とした。全ての日で最大のＣＩ値を考慮に入れた。総疾患期間（３０日間）にわたる個々のＣＩの合計として算出した各ラットについての累積的な指数を記録した。３０日間の疾患期間は、以下の期に分けられた：潜伏期（ｌａｔｅｎｔ  ｐｈａｓｅ）（１〜１０日間）；臨床徴候期（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ）（１１〜１８日間）；及び回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｐｈａｓｅ）（１９〜３０日間）。
【００７５】
実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルにおける試験の下で薬物の有効性を評価するために、各試験群において以下のパラメータを評価した：１）疾患の発症時間（日数）；２）ある期間にわたる疾患の重症度の平均の変化（ＣＩ、点数）；３）異なる期における疾患の重症度の平均（ＣＩ、点数）４）再発の総数、疾患の症状が戻ること（％）。
【００７６】
Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂにより、陰性対照と比較しても（ｐ＜０．０５）Ｃｏｐａｘｏｎｅと比較しても（ｐ＞０．０５）、疾患期間の臨床症状の顕在化開始が後退した。γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂを受けた２つの群及びＣｏｐａｘｏｎｅを受けた群における疾患の発症は、対照と異ならなかった。図２を参照されたい。同時に、複合組み合わせを投与した動物では、多発性硬化症の臨床的徴候が出現する期間が対照と比較して短縮される傾向が観察された。Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂを受けている群と複合組み合わせを受けている群との間で疾患発症期の時間に統計的有意差が明らかになったことに留意するべきである。
【００７７】
疾患の重篤な経過（＞３点）を伴う動物の割合も、Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂを受けている群ではより低かった。複合組み合わせを受けた群における重篤な経過を伴う動物の百分率は、全疾患期間において、試験した他の群におけるものよりも高かった。図３を参照されたい。
【００７８】
多発性硬化症の発生の種々の期においてＥＡＥの病理発生の異なる機構が活性化されたという事実に関連して、潜伏期間、臨床的徴候の発生期及び回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｐｈａｓｅ）における疾患の重症度に対する調製物の効果を分析した。Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂを投与することは、臨床徴候期（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ  ｓｔａｇｅ）及び回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｓｔａｇｅ）における疾患の臨床的徴候の顕在化の平均点が軽減されることに有意に寄与したが、Ｃｏｐａｘｏｎｅ及びγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂでは、最後の期においてのみ、臨床症状の重症度が有意に低下した。複合組み合わせでは、対照及びγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ単独又はＳ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ単独を受けている群と比較して、疾患の臨床的徴候の出現期及び回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｓｔａｇｅ）における動物の疾患（ａｆｆｅｃｔｉｏｎ）の平均点が統計的に有意に増加した。図４を参照されたい。
【００７９】
動物の一部において、疾患の臨床的徴候が完全に消失した後、再発、すなわち、ＥＡＥの臨床徴候が戻ることにある程度の類似性が認められたことに留意するべきである。Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ群では、ＥＡＥの臨床経過に対するその有益な効果（疾患発症の期間が遅いこと、臨床的徴候の顕在化の重症度の低下）にもかかわらず、再発した動物の数が最大であったことが認められた（２５％）。同時に、疾患の早期発症及び病理過程の顕在化がより大きいことを特徴とした複合組み合わせの群では、再発の発生を示した動物はいなかった。図５を参照されたい。
【００８０】
結論：
実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルにおいて、Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂは疾患の経過に対する有益な効果を有した。Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂにより、エピソードの間の疾患の臨床的徴候が減弱し、症状の重症度が軽減した。γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ及び比較調製物であるＣｏｐａｘｏｎｅは、これらの物質について、疾患期間の臨床的徴候の大きさ及び症状の重症度が、対照（蒸留水）と異ならなかった、選択された多発性硬化症の実験モデルにおける死亡の経過に対する効果を有さなかった。
【００８１】
調製物の効果の顕在化は、ＥＡＥの発生の病期（潜伏期（ｌａｔｅｎｔ  ｐｈａｓｅ）、臨床的徴候期、回復期（ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｐｈａｓｅ））に左右された。
【００８２】
複合組み合わせの効果は、成分、すなわち、Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ単独又はγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ単独の効果と異なった。複合組み合わせを使用することにより、免疫応答が強化された。複合組み合わせにより、疾患の発症が早まり、病気の動物の一部及び疾患の重症度が増した。
【００８３】
Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ群の動物の２５％及びγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ群の動物の１５％が、試験期間（３０日間）中に再発を示した。同時に、複合組み合わせ群では、いずれの動物においても再発は記録されなかった。
【００８４】
多発性硬化症の最も一般的な経過は、予測不可能な攻撃（再発）、その後の疾患活動性の新しい徴候がなく相対的に寛解している期間を特徴とする再発寛解型サブタイプである。
【００８５】
多発性硬化症の療法の主要な目的は、急性の攻撃時の神経細胞の損傷を軽減すること及び攻撃後に機能を回復させること、並びに身体障害につながる新しい攻撃を予防することである。
【００８６】
Ｓ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ単独では、実験的疾患の全ての期においてＥＡＥの臨床症状を改善することができ、これにより、Ｓ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ単独が多発性硬化症の攻撃の治療において潜在的に有用なものになる。Ｓ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ＋γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂの組み合わせにより、ＥＡＥの臨床症状が戻ることが完全に妨げられ、したがって、ヒトにおける多発性硬化症の治療において、再発の予防手段として用いることができる。したがって、Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ＋γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂの組み合わせは、疾患発生のピークにおける免疫応答を強化することが、より有効なリハビリテーション及び再発の予防に寄与する可能性があると考えられている多発性硬化症を治療するための有望な調製物である。
【００８７】
実施例２
シグマ−１受容体−中枢神経系の細胞、末梢組織の大部分の細胞、及び免疫に細胞局在する細胞内受容体。この受容体は、細胞内のカルシウムの恒常性を制御することにより、対応する転写因子の活性化及び全遺伝子ファミリーの転写を導く細胞内シグナル伝達事象を調節すると考えられている。シグマ−１受容体は、疫病の状態及び神経変性状態を含めた種々の疾患の病理発生に関与する。この点について、この受容体及びリガンドとこの受容体の相互作用の効率に影響を及ぼす薬物が、神経感染性疾患及び神経変性疾患を治療するための有効な薬物であるとみなされる。
【００８８】
超低用量のＳ１００タンパク質抗体（ホメオパシー希釈物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０の混合物）及び超低用量のインターフェロンガンマ抗体（ホメオパシー希釈物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０の混合物）を比率  １：１で含む組成の複合組み合わせ、及び同様に組成物の成分（超低用量のＳ１００タンパク質抗体（ホメオパシー希釈物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０の混合物）（Ｓ−１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ）及び超低用量のインターフェロンガンマ抗体（ホメオパシー希釈物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０の混合物）（γ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ））の、標準のリガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける効果を調査し、放射性リガンド法によって評価した。対照として、増強蒸留水（ホメオパシー希釈物Ｃ１２＋Ｃ３０＋Ｃ５０の混合物）（増強水）を試験した。
【００８９】
複合組み合わせ２０μｌ又はＳ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ１０μｌ又はγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ１０μｌをインキュベーション培地に導入した。したがって、複合組み合わせの試験時に実験ウェルに導入したＳ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ及びγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂの量は、単一調製物として試験したＳ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ及びγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂの量と同一であり、それにより、複合組み合わせの有効性を、複合組成物を構成する別々の成分と比較することが可能になる。増強水を２０μｌの量及び１０μｌの量でインキュベーション培地に導入した。
【００９０】
次いで、Ｊｕｒｋａｔ株の細胞膜のホモジネート１６０μｌ（タンパク質約２００μｇ）（ヒト白血病性のＴ−リンパ球株）を導入し、次いで、トリチウムで標識した放射性リガンド［３Ｈ］ペンタゾシン（１５ｎＭ）２０μｌを導入した。
【００９１】
非特異的な結合を測定するために、標識されていない、リガンドであるハロペリドール（１０μＭ）２０μｌを調製物又は増強水の代わりにインキュベーション培地に導入した。
【００９２】
５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝７．４）中２２℃で１２０分間インキュベートし、ガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）で濾過した後、放射活性を、シンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）でシンチレーション混合物（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を用いて測定した。特異的な結合（実験又は対照における）を共有結合（実験又は対照における）と非特異的な結合の差異として算出した。
【００９３】
結果（共有結合の測定における）は、対照（増強水を対照として使用した）における特異的結合の阻害の百分率として示されている（表４参照）。
【００９４】
表４．被試験調製物及び増強水の、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合に対する効果
【表１】
2013532182.tif 000020
対照における特異的な結合の百分率（％）＝（実験における特異的な結合／対照における特異的な結合）＊１００％
対照における特異的な結合の阻害の百分率（％）＝１００％−（実験における特異的な結合／対照における特異的な結合）＊１００％）
【００９５】
５０％を超える阻害により、結合に対する有意な効果が存在することが示される。２５％から５０％までの阻害により、軽度〜中程度の効果が示される。２５％未満の阻害は、結合に対する効果の点で有意でなく、バックグラウンドの制限の範囲内であるとみなされる。
【００９６】
結論：
複合組み合わせは、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合を、その別々の成分（Ｓ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂ又はγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂ）よりも有効に阻害する。
【００９７】
実験ウェルに１０μｌの量で導入したＳ１００タンパク質に対するＵＬＤのＡｂにより、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合が阻害されるが、効果の表出量は複合組み合わせを用いた効果の表出量よりも劣る。
【００９８】
実験ウェルに１０μｌの量で導入したγ−ＩＦＮに対するＵＬＤのＡｂは、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合に対する効果を有さなかった。
【００９９】
実験ウェルに１０μｌ又は２０μｌの量で導入した増強水は、標準の放射性リガンドである［３Ｈ］ペンタゾシンと組換えヒトシグマ１受容体の結合に対する効果を有さなかった。
【図１】
2013532182.tif 000021
【図２】
2013532182.tif 000022
【図３】
2013532182.tif 000023
【図４】
2013532182.tif 000024
【図５】
2013532182.tif 000025
2013532182.tif 000026
2013532182.tif 000027
2013532182.tif 000028
2013532182.tif 000029
2013532182.tif 000030
【配列表】
2013532182000001.app
【国際調査報告】
2013532182.tif 000031
2013532182.tif 000032
2013532182.tif 000033
2013532182.tif 000034