(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物Ｚ  Ｎ  Ｎ  Ｏ  Ｎ  Ｏ  Ａ１  Ｒ２  Ｒ１  Ｒ３Ｒ  ３Ｌ  Ａ２  （Ｉ）または該化合物の薬学的に許容できる塩［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｚ、Ａ１、ＬおよびＡ５２は、本明細書において記述されている通りである］、その医薬組成物、および動物におけるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のそれらの使用を提供する。【化１】2013540119.tif 000098
2013540119.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2013540119.tif 000097
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、フルオロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはシアノであり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｌは直接結合または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンであり、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＨまたはＮ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルによって置き換えられていてもよく、
ＺはＣＨ２またはＯであり、
Ａ１およびＡ２は、それぞれ独立に、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、前記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノおよびアミドから独立に選択される１から３個の置換基でそれぞれ置換されていてもよく、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノのアルキル部は、１から５個のフルオロで置換されていてもよく、ここで、Ａ１またはＡ２の一方は、ＣＯ２Ｒ４、（Ｃ１〜Ｃ６）ＣＯ２Ｒ４、テトラゾリルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）テトラゾリルによって置換されており、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルである］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
Ｒ１が、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたはテトラヒドロフラニルであり、Ｒ２が水素またはメチルであり、各Ｒ３が水素であり、Ｌが直接結合またはＯである、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ１が（Ｃ２〜Ｃ４）アルキルであり、Ａ１およびＡ２が、それぞれ独立に、フェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、インドリル、ベンゾピラジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾロニル、ピロロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリジニル、ピラゾロピリミジニル、インダゾリル、インドリノニル、ナフチリジニル、キノリニル、キノリノニル、ジヒドロキノリノニル、オキソ−ジヒドロキノリノニル、イソキノリニル、イソキノリノニル、ジヒドロイソキノニルまたはオキソ−ジヒドロイソキノニルであり、ここで、各Ａ１およびＡ２は、フルオロ、クロロ、メチル、メトキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、アミドまたはシアノから独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい、請求項２に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ１がイソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ２が水素である、請求項３に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
Ａ１が、１個のメチル、メトキシ、メチルアミノまたはジメチルアミノでそれぞれ置換されていてもよい、フェニル、ピリジニル、インダゾリル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ピロロピリジニルまたはピロロピリミジニルである、請求項４に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
Ａ２が、ＣＯ２Ｈまたはテトラゾリルで置換されているフェニルであり、Ｌが直接結合である、請求項４または５に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項７】
Ａ１が、フェニル、メチルで置換されていてもよいインドリルもしくはベンゾイミダゾリル、またはメチルアミノもしくはジメチルアミノで置換されていてもよいピリジニルである、請求項６に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項８】
４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）安息香酸；
３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸；
３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル）安息香酸；
３−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４’−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ビフェニル−３−カルボン酸；
４’−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ビフェニル−３−カルボン酸；
４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（エチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛６−（エチルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
３−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（エチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛６−（エチルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−５−（１，３−オキサゾール−２−イル）安息香酸；
４−（｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］フェノキシ｝メチル）安息香酸；
３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−５−（１，３−オキサゾール−２−イル）安息香酸；
３−｛６−（イソプロピルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（イソプロピルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛６−（イソプロピルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−４−イル｝安息香酸；
３−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
（５−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝−２−メトキシフェニル）酢酸；
３−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
３−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝安息香酸；
４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
３−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−６−イル｝安息香酸；
４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル｝安息香酸；
４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；
３−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸；
４−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸；
１−イソプロピル−１’−｛［３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；および
１−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−｛［３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン
から選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項９】
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−イル｝安息香酸；
４−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；
４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；
３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸
から選択される、請求項８に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１０】
治療有効量の請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの追加の抗糖尿病剤をさらに含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗糖尿病剤が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイアビニーズ、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシン−Ｑ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン−３、エキセンディン−４、トロズスクエミン、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ）、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
動物における２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する、またはその進行もしくは発症を遅延させるための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を投与するステップを含む方法。
【請求項１４】
動物における２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する、またはその進行もしくは発症を遅延させるための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１５】
２型糖尿病および糖尿病関連障害の進行または発症を遅延させる、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（複数可）の阻害剤として作用する置換ピラゾロスピロケトン化合物、およびアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、ほとんどの種において見られる酵素のファミリーであり、アセチル−ＣｏＡからのマロニル−ＣｏＡの生成を触媒することによって脂肪酸合成および代謝と関連している。哺乳動物においては、ＡＣＣ酵素の２つのアイソフォームが同定されている。脂肪および肝臓等の脂質合成組織において高レベルで発現されるＡＣＣ１は、長鎖脂肪酸の生合成において第一の関与ステップ（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｓｔｅｐ）を制御する。アセチル−ＣｏＡがカルボキシル化されてマロニル−ＣｏＡを形成しない場合、クレブス回路によって代謝される。肝ＡＣＣの微量成分であるが心臓および骨格筋における主要なアイソフォームであるＡＣＣ２は、ミトコンドリアの細胞質側表面におけるマロニル−ＣｏＡの生成を触媒し、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼを阻害することによりβ−酸化においてどのくらいの量の脂肪酸が利用されるかを調節する。故に、脂肪酸利用を増加させ、デノボ脂肪酸合成の増加を防止することにより、ＡＣＣ阻害剤（ＡＣＣ−Ｉ）の慢性投与は、高または低脂肪食を摂取している肥満対象における肝臓および脂肪組織のトリグリセリド（ＴＧ）貯蔵も枯渇させ、体脂肪の選択的減少をもたらすことができる。
【０００３】
Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａらによって行われた研究は、ＡＣＣ２が脂肪酸酸化を制御する上で重要な役割を果たしており、そのため肥満および２型糖尿病等の肥満関連疾患に対する療法において標的を提供するであろうことを示唆している。Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａ，Ｌ．ら、「Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｍｕｔａｎｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ／ｈｉｇｈ−ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｄｉｅｔｓ」ＰＮＡＳ、１００（１８）  １０２０７〜１０２１２（２００３）を参照されたい。Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｆａｔ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｔａｌ  ｅｎｅｒｇｙ  ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ，ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆａｔ  ｍａｓｓ，ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」ＰＮＡＳ、１０４（４２）  １６４８０〜１６４８５（２００７）も参照されたい。
【０００４】
肝臓脂質蓄積は、肝臓のインスリン抵抗性を引き起こし、２型糖尿病の発病に寄与することが次第に明らかになりつつある。Ｓａｌｖａｇｅらは、肝細胞における脂肪酸化を調節することにＡＣＣ１およびＡＣＣ２の両方が関与しているのに対し、ラット肝臓における主要なアイソフォームであるＡＣＣ１は、脂肪酸合成の唯一の調節因子であることを実証した。さらに、それらのモデルにおいて、肝臓のマロニル−ＣｏＡレベルを大幅に低下させ、給餌状態での脂肪酸化を増加させ、脂質蓄積を減少させ、インスリン作用をインビボで改良するために、両方のアイソフォームを合わせた減少が必要とされる。故に、肝ＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤を示すことは、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓のインスリン抵抗性の治療において有用となり得る。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２７３００を参照されたい。Ｏｈ，Ｗ．ら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９（２００５）も参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
結果として、脂肪酸合成を阻害し脂肪酸酸化を増加させることにより、肥満および肥満関連疾患（ＮＡＦＬＤおよび２型糖尿病等）を治療するための、ＡＣＣ１および／またはＡＣＣ２阻害剤を含有する薬剤が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第一の実施形態は、式（Ｉ）の構造を有する化合物
【０００７】
【化１】
2013540119.tif 000003
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルであり、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ヒドロキシ、フルオロ、フェニル、テトラヒドロフラニルまたはオキセタニルから独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはシアノであり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、
Ｌは直接結合または（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンであり、ここで、該（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレンの１個の炭素は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルによって置き換えられていてもよく、
ＺはＣＨ２またはＯであり、
Ａ１およびＡ２は、それぞれ独立に、（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、前記（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールは、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノおよびアミドから独立に選択される１から３個の置換基でそれぞれ置換されていてもよく、ここで、該（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノのアルキル部は、１から５個のフルオロで置換されていてもよく、ここで、Ａ１またはＡ２の一方は、ＣＯ２Ｒ４、（Ｃ１〜Ｃ６）ＣＯ２Ｒ４、テトラゾリルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）テトラゾリルによって置換されており、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルである］
または薬学的に許容できるその塩である。
【０００８】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたはテトラヒドロフラニルであり、Ｒ２が水素またはメチルであり、各Ｒ３が水素であり、Ｌが直接結合またはＯである、直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【０００９】
本発明の別の実施形態は、Ｒ１が（Ｃ２〜Ｃ４）アルキルであり、Ａ１およびＡ２が、それぞれ独立に、フルオロ、クロロ、メチル、メトキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、アミドまたはシアノから独立に選択される１から３個の置換基でそれぞれ置換されていてもよい、フェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、インドリル、ベンゾピラジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイミダゾロニル、ピロロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリジニル、ピラゾロピリミジニル、インダゾリル、インドリノニル、ナフチリジニル、キノリニル、キノリノニル、ジヒドロキノリノニル、オキソ−ジヒドロキノリノニル、イソキノリニル、イソキノリノニル、ジヒドロイソキノニルまたはオキソ−ジヒドロイソキノニルである、直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１０】
本発明のまた別の実施形態は、Ｒ１がイソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ４が水素である、直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明のさらに別の実施形態は、Ａ１が、１個のメチル、メトキシ、メチルアミノまたはジメチルアミノでそれぞれ置換されていてもよい、フェニル、ピリジニル、インダゾリル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ピロロピリジニルまたはピロロピリミジニルである、直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明の別の実施形態は、Ａ２が、ＣＯ２Ｈまたはテトラゾリルで置換されているフェニルであり、Ｌが直接結合である、２つの直前の実施形態のいずれかの化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１１】
本発明の別の実施形態は、Ａ１が、フェニル、メチルで置換されていてもよいインドリルもしくはベンゾイミダゾリル、またはメチルアミノもしくはジメチルアミノで置換されていてもよいピリジニルである、直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１２】
本発明の別の実施形態は、
４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）安息香酸；３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸；３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル）安息香酸；３−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；４’−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ビフェニル−３−カルボン酸；４’−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ビフェニル−３−カルボン酸；４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−メトキシピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（エチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛６−（エチルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；３−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（エチルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛６−（エチルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−５−（１，３−オキサゾール−２−イル）安息香酸；４−（｛４−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］フェノキシ｝メチル）安息香酸；３−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−５−（１，３−オキサゾール−２−イル）安息香酸；３−｛６−（イソプロピルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛５−［（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（イソプロピルアミノ）ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛６−（イソプロピルアミノ）−５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インダゾール−４−イル｝安息香酸；３−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；（５−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝−２−メトキシフェニル）酢酸；３−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；３−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝安息香酸；４−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；３−｛６−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−６−イル｝安息香酸；４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル｝安息香酸；４−｛５−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；３−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１
Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸；４−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸；１−イソプロピル−１’−｛［３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オン；および１−ｔｅｒｔ−ブチル−１’−｛［３’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］カルボニル｝−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（６Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１３】
本発明のまた別の実施形態は、３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−イル｝安息香酸；４−｛６−（ジメチルアミノ）−４−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］ピリジン−２−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−４−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−４−イル｝安息香酸；４−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；３−｛２−［（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イル）カルボニル］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル｝安息香酸；３−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸；および４−（６−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−４−イル）安息香酸から選択される直前の実施形態の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１４】
本発明の別の態様は、ある量の実施形態のいずれかにおいて記述されている通りの式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物である。好ましくは、該組成物は、治療有効量の本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む。該組成物は、少なくとも１つの追加の薬学的作用物質も含有し得る。好ましい作用物質は、抗糖尿病剤および／または抗肥満剤（本明細書において後述される）を含む。
【００１５】
本発明のまた別の態様は、哺乳動物におけるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によって媒介される疾患、状態または障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトに、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその医薬組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１６】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤によって媒介される疾患、障害または状態は、ＩＩ型糖尿病、ならびに非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症、代謝症候群、耐糖能異常、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、肥満、脂質異常症、高血圧症、高インスリン血症およびインスリン抵抗性症候群等の糖尿病関連疾患を含む。好ましい疾患、障害または状態は、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症、耐糖能異常、肥満およびインスリン抵抗性症候群を含む。より好ましいのは、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症および肥満である。最も好ましいのは、ＩＩ型糖尿病である。
【００１７】
好ましい実施形態は、動物における２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する（例えば、その進行または発症を遅延させる）ための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１８】
別の好ましい実施形態は、動物における肥満および肥満関連障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１９】
また別の好ましい実施形態は、動物における非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓のインスリン抵抗性を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法。
【００２０】
本発明の化合物を、他の薬学的作用物質（特に、本明細書において後述される抗肥満剤および抗糖尿病剤）と組み合わせて投与してよい。併用療法は、（ａ）本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩と、本明細書において記述されている少なくとも１つの追加の薬学的作用物質と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む単一の医薬組成物として、または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体を含む第一の組成物と、（ｉｉ）本明細書において記述されている少なくとも１つの追加の薬学的作用物質、および薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体を含む第二の組成物とを含む、２つの別個の医薬組成物として、投与され得る。医薬組成物は、同時に、または任意の順序で順次に投与され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】トランスクリーナーインビトロアッセイにおいて用いられ得る組換えヒトＡＣＣ１（配列番号１）の配列を提供する図である。
【図２】トランスクリーナーインビトロアッセイにおいて用いられ得る組換えヒトＡＣＣ２（配列番号２）の配列を提供する図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
語句「治療有効量」は、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状を和らげる、寛解させるもしくは解消する、または（ｉｉｉ）本明細書において記述されている特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症を予防するもしくは遅延させる、本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩の量を意味する。
【００２３】
用語「動物」は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）、食物源動物、動物園の動物、海洋動物、鳥類、および他の同様の動物種を指す。「食用動物」は、雌ウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽等の食物源動物を指す。
【００２４】
語句「薬学的に許容できる」は、物質または組成物が、製剤を含む他の成分および／またはそれを用いて治療されている哺乳動物と、化学的にかつ／または毒物学的に適合しなくてはならないことを示す。
【００２５】
用語「治療すること」、「治療する」または「治療」は、予防、すなわち予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）治療および緩和治療の両方を包括する。
【００２６】
用語「モジュレートされる」または「モジュレートすること」または「モジュレートする」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、本発明の化合物によるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）の阻害を指す。
【００２７】
用語「媒介される」または「媒介すること」または「媒介する」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）を阻害することによる、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の治療もしくは予防、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の軽減、寛解もしくは解消、または（ｉｉｉ）本明細書において記述されている特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症の予防もしくは遅延を指す。
【００２８】
用語「本発明の化合物」は（別段の明確な同定がない限り）、式（Ｉ）の化合物および該化合物の任意の薬学的に許容できる塩、ならびに、すべての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む）、互変異性体、配座異性体および同位体標識化合物を指す。本発明の水和物および溶媒和物は、本発明の組成物とみなされ、ここで、化合物は、それぞれ水または溶媒と会合している。
【００２９】
用語「（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル」および「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」は、直鎖または分枝鎖のいずれであってもよい、指定数の炭素、それぞれ１から６個または１から３個までの炭素のアルキル基である。例えば、用語「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」は、１から３個までの炭素を有し、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルからなる。
【００３０】
用語「（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル」は、３から７個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルからなる。用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。用語「（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール」は、フェニルまたはナフチル等の６から１０個の炭素原子からなる芳香族炭素環基を意味する。
【００３１】
用語「５から１２員のヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、５から１２員の芳香族基を意味する。本明細書において使用される場合、「５から１２員のヘテロアリール」基の結合点は、その基の炭素原子上にある。「５から１２員のヘテロアリール」基は、単環式または二環式のいずれであってもよい。単環式ヘテロアリールの好ましい実施形態は、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、ピリジニルおよびピリミジニルを含むがこれらに限定されない。二環式ヘテロアリールの好ましい実施形態は、下記の環系の基を含むがこれらに限定されない。
【００３２】
【化２】
2013540119.tif 000004
【００３３】
用語「８から１２員の縮合複素環式アリール」は、非芳香族複素環式環がアリール環と縮合している８から１２員の環系を意味する。本明細書において使用される場合、「８から１２員の縮合複素環式アリール」基の結合点は、その基の炭素原子上にある。好ましい実施形態は、
【００３４】
【化３】
2013540119.tif 000005
等の環系の基を含む。
【００３５】
本発明の化合物は、特に本明細書に含有される記述に照らして、化学分野においてよく知られているものに類似するプロセスを含む合成経路によって合成できる。出発材料は、概して、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）等の商業的供給源から入手可能であるか、または当業者によく知られている方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７〜１９９９年編）またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（補足を含む）において概して記述されている方法によって調製される（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても利用可能である））。
【００３６】
例証を目的として、以下で描写する反応スキームは、本発明の化合物および重要中間体を合成するための潜在的経路を提供する。個々の反応ステップのさらに詳細な記述については、以下の実施例の項を参照されたい。当業者であれば、他の合成経路を使用して発明化合物を合成できることを理解するであろう。特定の出発材料および試薬がスキームにおいて描写され以下で論じられているが、多様な誘導体および／または反応条件を提供するために、他の出発材料および試薬で簡単に代用することができる。加えて、以下に記述する方法によって調製される化合物の多くは、本開示に照らして当業者によく知られている従来の化学を使用し、さらに修飾することができる。
【００３７】
本発明の化合物の調製において、中間体の遠隔官能基（例えば、第一級または第二級アミン）の保護が必要となる場合がある。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製法の条件に応じて変動することになる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基をブロックまたは保護するヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）は、例えば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジル、トリチル等を含む。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基およびそれらの使用の概要については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。
【００３８】
下記の反応スキーム、反応スキームＩから反応スキームは、式（Ｉ）の化合物を調製するために使用される代表的な手順を提供する。これらの反応スキームは非限定的な様式で解釈されるべきであること、および描写されている方法の合理的な変形形態を使用して式（Ｉ）の化合物を調製できることを理解されたい。
【００３９】
【化４】
2013540119.tif 000006
【００４０】
反応スキームＩは、最後から２番目の中間体から式（Ｉ）の化合物への３つの合成経路を提供する。化学反応式１において、式（ＩＩ）の化合物をＡ２’−Ｌ−Ａ１−Ｃ（Ｏ）Ｌｇ［式中、Ｌｇは、ヒドロキシまたはハロゲン化物等の適切な脱離基である］と反応させて、式（Ｉ）の化合物を提供する。例えば、化合物（Ｉ）は、所望のカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ［式中、Ａ２’は、Ａ２自体、または脱保護されてＡ２を提供することができるＡ２の保護バージョンのいずれか（ｗｉｔｈｅｒ）を表す］）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩ）およびカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル（ｄｉｍｅｔｈｙｌｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ））カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）等のペプチドカップリング試薬と、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の活性化剤の存在下または非存在下、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉ）の化合物を形成することができる。反応は、典型的には、０℃から９０℃で１から２４時間行われ得る。
【００４１】
代替として、式（Ｉ）の化合物は、塩化チオニルと反応させることによって等、最初にカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を酸塩化物（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯＣｌ）に変換し、次いで、該酸塩化物を、スピロピペリジエン（ｓｐｉｒｏｐｉｐｅｒｉｄｉｅｎｅ）誘導体（ＩＩａ）と、トリエチルアミン等の適切な塩基の存在下、ジクロロメタン等の適切な溶媒中で反応させて式（Ｉ）の化合物を形成することによって、形成され得る。さらに別の代替的方法は、カルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシトリアジンにより、Ｎ−メチルモルホリン等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ等の適切な溶媒中で処理することを伴う。活性化エステルに、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ等の適切な溶媒中のスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）およびＮ−メチルモルホリン等の塩基の溶液を添加し、これにより、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００４２】
反応スキームＩにおいて描写されている第二および第三の反応は、鈴木型カップリング反応を使用する式（Ｉ）の化合物の調製について描写するものである。鈴木型カップリング反応は、Ｍｉｙａｕｒａ，Ｎ．；Ｓｕｚｕｋｉ，Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９５、９５、２４５７〜２４８３において記述されているもの等、当業者に知られている方法に従って行うことができる。スキームＩの化学反応式２において、式（ＩＩ’）の化合物［式中、Ｌｇは、トリフレート、クロロ、ブロモまたはヨード等の適切な脱離基を表す］を、適切に置換されたボロネートＡ２’−Ｂ（ＯＲ）２と反応させる。反応は、典型的には、パラジウム触媒および塩基の存在下、適切な溶媒中で行われる。ボロネートは、ボロン酸またはボロン酸エステルの形態のいずれであってもよい。スキームＩの化学反応式３において、式（ＩＩ”）のボロネート化合物を、適切に置換された化合物Ａ２’−Ｌｇ［式中、Ｌｇは、トリフレート、クロロ、ブロモまたはヨード等の適切な脱離基を表す］と反応させる。これらの反応は、式（ＩＩ’）および（ＩＩ”）の化合物中のＡ１およびＡ２部分が、保護されたカルボン酸基を含有し得、その後これを脱保護して式（Ｉ）の化合物中に酸基を提供することができる場合に行われ得ることを理解されたい。
【００４３】
【化５】
2013540119.tif 000007
【００４４】
反応スキームＩＡは、式（Ｉ）の化合物である式（Ｉａ）を有する本発明の化合物［式中、Ｒ２および各Ｒ３はそれぞれ水素であり、ＺはＣＨ２である］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。保護されたスピロピペリジン誘導体（ＶＩＩＩａ）は、適切に保護されたピペリジンアルデヒド（Ｘａ）を、メチルビニルケトン（ＩＸａ）で処理することによって形成され得る。基Ｐｇは、適切なアミン保護基を表し、好ましくはＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）である。この反応は、エタノール性水酸化カリウムの存在下、Ｒｏｙ，Ｓ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００６、１２、３７７７〜３７８８、３７８６によって記述されているものに類似する手順に従って行われ得る。代替として、反応は、パラ−トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ）の存在下、還流ベンゼン中で行われ、所望生成物（ＶＩＩＩａ）を提供することができる。次いで、スピロピペリジン誘導体（ＶＩＩＩａ）をトリス−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）メタンと還流トルエン中で反応させて、エネアミン官能化されたスピロピペリジン誘導体（ＶＩＩａ）を提供することができる。次いで、化合物（ＶＩＩａ）を、適切なヒドラジン誘導体Ｒ１ＮＨＮＨ２と、酢酸の存在下、還流エタノール中で反応させて、式（ＶＩａ）の所望の環化化合物を提供する（Ｍｕｒａｌｉ  Ｄｈａｒ、Ｔ．Ｇ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００７、１７、５０１９〜５０２４、５０２０を参照されたい。次いで、式（ＶＩａ）の化合物を、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）で、水の存在下、ＴＨＦ中において処理して、式（Ｖａ）の対応するブロモヒドロキシ誘導体を提供することができる。次いで、ブロモヒドロキシ誘導体（Ｖａ）を、ジョーンズ試薬により、Ｗｏｌｉｎｓｋｙ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７８、４３（５）、８７５〜８８１、８７６、８７９において提供されているものに類似する方法で酸化させて、式（ＩＶａ）の  −ブロモケト誘導体を提供する。次いで、亜鉛および酢酸による、または代替として塩化アンモニウム水溶液の存在下での亜鉛による処理等の従来の方法を使用して、式（ＩＶａ）の化合物を脱臭素化し、式（ＩＩＩａ）の化合物を提供することができる。
【００４５】
次いで、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用し、式（ＩＩＩａ）の化合物を脱保護して、式（ＩＩａ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）を表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。Ｐｇがカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）を表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノール中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムによる処理を用いて、脱保護を行うことができる。
【００４６】
次いで、標準的な方法を用いて式（ＩＩａ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉａ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉａ）は、所望のカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ［式中、Ａ２’は、Ａ２自体、または脱保護されてＡ２を提供することができるＡ２の保護バージョンのいずれかを表す］）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩａ）およびカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ）等のペプチドカップリング試薬と、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の活性化剤の存在下または非存在下、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉａ）の化合物を形成することができる。
【００４７】
代替として、式（Ｉａ）の化合物は、塩化チオニルと反応させることによって等、最初にカルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を酸塩化物（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯＣｌ）に変換し、次いで、該酸塩化物を、スピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と、トリエチルアミン等の適切な塩基の存在下、ジクロロメタン等の適切な溶媒中で反応させて式（Ｉａ）の化合物を形成することによって、形成され得る。さらに別の代替的方法は、カルボン酸（Ａ２’−Ｌ−Ａ１−ＣＯ２Ｈ）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシトリアジンにより、Ｎ−メチルモルホリン等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ等の適切な溶媒中で処理することを伴う。活性化エステルに、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦ等の適切な溶媒中のスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）およびＮ−メチルモルホリン等の塩基の溶液を添加し、これにより、式（Ｉａ）の化合物を提供する。
【００４８】
【化６】
2013540119.tif 000008
【００４９】
反応スキームＩＩは、式（ＶＩａ）の中間体から出発する式（Ｉａ）の化合物の代替的合成を提供する。式（ＶＩａ）の化合物を、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）により、メタノールの存在下、ＴＨＦ中で処理（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｔ．ら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００８、１０（１８）、４０５７〜４０６０、４０５９）して、式（Ｖｂ）のメトキシブロモスピロピペリジン誘導体を提供する。ＴＨＦ中、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド等の強塩基での処理による化合物（Ｖｂ）の塩基誘起脱離は、式（ＩＶｂ）の化合物を提供し、次いでこれを、ＴＨＦ中、２Ｎ塩酸等の強酸で処理して、式（ＩＩＩａ）の化合物を提供する。次いで、化合物（ＩＩＩａ）を反応スキームＩにおいて前述した通りに脱保護およびアシル化して、式（Ｉａ）の化合物を提供することができる。
【００５０】
【化７】
2013540119.tif 000009
【００５１】
反応スキーム（Ｓｈｅｍｅ）ＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物である式（Ｉｂ）の化合物［式中、Ｒ２はブロモであり、各Ｒ３は水素である］の合成を提供する。式（ＶＩａ）の化合物を、およそ２当量のＮ−ブロモスクシンイミドと、メタノールの存在下で反応させて、式（Ｖｃ）のジブロモメトキシスピロピペリジン誘導体を提供する。次いで、化合物（Ｖｃ）を、適切な溶媒中、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド等の強塩基での処理によって脱離条件に供して、式（ＩＶｃ）の化合物を提供する。式（ＩＶｃ）の化合物の、２Ｎ塩酸等の強酸での処理により、式（ＩＩＩｂ）の化合物を提供する。化合物（ＩＩｂ）を提供するための化合物（ＩＩＩｂ）の脱保護、続いて式（Ｉｂ）の化合物を提供するためのアシル化は、反応スキームＩについて前述した通りに行われ得る。
【００５２】
【化８】
2013540119.tif 000010
【００５３】
反応スキームＩＶは、先に描写した中間体のある特定のものからの、式（Ｉ）内のある特定の他の化合物の調製について描写するものである。スキームＩＶにおける第一の反応は、式（ＩＩＩｂ）のブロモスピロピペリジン誘導体を、トリメトキシボレートと、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン等の適切なパラジウム触媒の存在下、炭酸カリウムおよび水の存在下で反応させて（ＩＩＩｃ）を提供することによる、Ｒ２位におけるメチル基の導入を示す。他のアルキル基を類似の様式でＲ２位に導入することができる。次いで、式（ＩＩＩｃ）の化合物を、前述した通りに脱保護およびアシル化することができる。反応スキームＩＶにおける第二の反応は、Ｒ２位におけるシアノ基の導入を描写するものである。ブロモスピロピペリジン化合物（ＩＩＩｂ）を、シアン化亜鉛と、亜鉛および適切なパラジウム触媒の存在下で反応させて（ＩＩＩｄ）を提供し、次いでこれを脱保護およびアシル化して、式（Ｉｄ）の化合物を提供することができる。スキームＩＶにおける第三の反応は、化合物（ＩＩＩｅ）のＲ３位における適切な基の導入を描写するものである。化合物（ＩＩＩｅ）を、ヘキサメチルジシラジドリチウム（ＬＨＭＤＳ）等の強塩基により、適切な無水条件下、適切な溶媒中、好ましくは低温で脱プロトン化する。次いで、このようにして形成されたエノレートを、適切な求電子試薬Ｒ３Ｌｇ［式中、Ｌｇは、適切な脱離基（Ｒ３Ｌｇがハロゲン化アルキルである場合、ハロゲン化物等）を表す］と反応させて、（ＩＩＩｆ）［式中、Ｒ３はアルキル基等の適切な基である］を提供する。次いで、所望ならば、（ＩＩＩｆ）の脱プロトン化および別のＲ３Ｌｇとの反応を再度行って、ジ−Ｒ３（ＩＩＩｆ）化合物［式中、Ｒ３基は同じであっても異なっていてもよい］を調製することができる。次いで、式（ＩＩＩｆ）の化合物を、前述した通りに脱保護およびアシル化して、式（Ｉｅ）の化合物を提供することができる。
【００５４】
【化９】
2013540119.tif 000011
【００５５】
反応スキームＶＩは、式（Ｉ）内の化合物［式中、Ｒ１はイソプロピルであり、Ｒ２は水素であり、各Ｒ３は水素であり、Ｚは酸素である］の合成を提供する。１−（１−（４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンを、１−ベンジルピペリジン−４−オンと、還流メタノール中、ピロリジンの存在下で反応させて、二重保護された（ｄｉｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）スピロ化合物（ＩＩＩｇ）を提供する。次いで、（ＩＩＩｇ）のパラ−メトキシベンジル基を、ジクロロエタン中、９０℃等の昇温でのトリフルオロ酢酸による処理時に除去して、ベンジル保護されたＮ−１（Ｈ）ピラゾール誘導体（ＩＩＩｈ）を提供する。次いで、このベンジル保護されたＮ−１（Ｈ）ピラゾール誘導体化合物を、ジ−ｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（ＤＢＡＤ）およびトリフェニルホスフィンの存在下、テトラヒドロフラン中、イソプロパノールを使用するＭｉｔｓｏｎｕｂｏカップリング条件に供して、対応するベンジル保護されたＮ−１−イソプロピル化合物（ＩＩＩｉ）を提供する。次いで、ベンジル保護されたＮ−１−イソプロピル化合物を、α−クロロエチルクロロホルメート（ＡＣＥ−Ｃｌ）およびメタノールでの処理時に脱ベンジル化して、対応する遊離スピロピペリジン誘導体（ＩＩｃ）を提供することができる。次いで、遊離スピロピペリジン誘導体（ＩＩｃ）を、前述した通りにアシル化して、式（Ｉｆ）の化合物を提供することができる。
【００５６】
【化１０】
2013540119.tif 000012
【００５７】
反応スキームＶＩＩは、式（Ｉｇ）の酸担持化合物を提供するための、式（Ｉｊ）の保護された酸中間体の加水分解について描写するものである。例えば、式（Ｉｊ）の化合物［式中、Ｒは、ｔ−ブチルまたはパラ−メトキシベンジル等の適切な酸保護基を表す］を、トリフルオロ酢酸または塩酸等の強酸により、ジクロロメタン等の適切な溶媒中で処理して、式（Ｉｇ）の化合物を提供することができる。この反応スキームにおいて、酸基はＡ２’に付加されているものとして示されており、該酸はＡ２’と一緒になって、式（Ｉ）の化合物中の基Ａ２を表す。酸基は、同じようにＡ１の一部にもなり得ることを理解されたい。
【００５８】
【化１１】
2013540119.tif 000013
【００５９】
反応スキームＶＩＩＩは、式（Ｉ）の化合物の調製において有用なある特定の中間体を調製するために有用な方法を提供する。反応スキームＶＩＩＩの化学反応式１は、適切な酸誘導体Ｘ−Ａ１−ＣＯ２Ｒａと適切なボロネート（ＲＯ）２Ｂ−Ａ２’−ＣＯ２Ｒｂ［式中、ＲａおよびＲｂは特異的に保護されているか、またはＲａおよびＲｂの一方は水素であり、Ｘはハロゲン化物またはトリフレート等のスルホネートであり、Ｒは水素またはメチル等のアルキルである］との間に鈴木型カップリングを提供する。反応スキームＶＩＩＩの化学反応式２は、Ｘ−Ａ１−ＣＯ２Ｒａと適切なボロネート（ＲＯ）２Ｂ−Ａ２’−テトラゾリルとの間に別の鈴木型カップリングを提供する。鈴木型カップリングは、反応スキームＩにおいて前述した通りに行われ得る。次いで、化学反応式１および２の最後の中間体化合物［式中、Ｒａは水素である］を、反応スキームＩの化学反応式１において記述されている通りの式（ＩＩ）の化合物とのアシル化型反応において使用することができる。
【００６０】
【化１２】
2013540119.tif 000014
【００６１】
反応スキームＩＸは、式（Ｉ）の化合物を調製するために有用なある特定の中間体を調製するために有用な別の方法を提供する。反応スキームＩＸの化学反応式１は、２−クロロ−６−置換ニコチン酸を提供するための、２，６−ジクロロニコチン酸と適切に置換されたボロネート（式中、Ｒは水素またはメチル等のアルキルであり、Ｒｂは典型的にはｔ−ブチル等の酸保護基である）との、鈴木型カップリング条件下での反応について描写するものである。次いで、２−クロロ−６−置換ニコチン酸を、適切な求核試薬ＨＹ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、典型的には、ハロで置換されていてもよいアルキルであり、Ｒ”は、典型的には、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピル等のアルキルである）と反応させて、二置換ニコチン酸誘導体を提供することができる。代替として、反応は、それを求核試薬ＨＹ−Ｒ’と最初に反応させ、続いて上述した通りにボロネートと鈴木型カップリングすることによって行われ得る。次いで、二置換ニコチン酸誘導体を、式（ＩＩ）の化合物とのアシル化反応に用い、続いて必要に応じて反応スキームＩに記述されている通りの脱保護をすることにより、式（Ｉ）の化合物［式中、Ａ１は、示されている通り、置換ピリジン部分である］を提供することができる。反応スキームＩＸの化学反応式２は、５−ブロモ−６−クロロニコチン酸を適切な求核試薬ＨＹ−Ｒ’と反応させて、５−ブロモ−６−置換ニコチン酸誘導体を提供し、次いでこれを適切なボロネートとＳｕｚｕｌｉ型カップリング条件下で反応させて、５，６−二置換ニコチン酸誘導体を提供することを描写するものである。次いで、５，６−二置換ニコチン酸誘導体を式（ＩＩ）の化合物とのアシル化反応に用い、続いて必要に応じて反応スキームＩにおいて前述した通りの脱保護をすることにより、式（Ｉ）の化合物［式中、Ａ１は、示されている通り、置換ピリジン部分である］を提供することができる。
【００６２】
本発明の化合物を単離し、そのまま、またはその薬学的に許容できる塩の形態で使用することができる。本発明に従って、複数の塩基性窒素原子を有する化合物は、様々な当量数（「ｅｑ．」）の酸と塩を形成することができる。そのような塩はすべて本発明の範囲内であることが、実務家には理解されよう。
【００６３】
薬学的に許容できる塩は、本発明の化合物に関して本明細書において使用される場合、前記化合物の薬学的に許容できる無機および有機塩を含む。これらの塩は、化合物の最終単離および精製中にインサイチュで、またはその化合物を適切な有機または無機酸と別個に反応させ、そのようにして形成された塩を単離することによって調製できる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、六フッ化リン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリル硫酸塩等を含むがこれらに限定されない。これらは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリおよびアルカリ土類金属ならびに非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムに基づくカチオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウム等を含むがこれらに限定されないアミンカチオンも含み得る。追加の例については、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９（１９７７）を参照されたい。
【００６４】
本発明のある特定の化合物は、複数の結晶形態で存在し得る。式（Ｉ）の化合物およびその塩（溶媒和物および水和物を含む）の多形体は、本発明の一部を形成し、異なる条件下での本発明の化合物の結晶化によって調製できる。例えば、再結晶に異なる溶媒または異なる溶媒混合物を使用すること、異なる温度での結晶化、結晶化における非常に速い冷却から非常に遅い冷却までの範囲の種々の冷却モード。多形体は、本発明の化合物を加熱または融解させ、続いて漸次または急速冷却することによって取得することもできる。多形体の存在は、固体プローブ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、赤外（ＩＲ）分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折またはそのような他の技術によって決定することができる。
【００６５】
本発明は、１個または複数の原子が、自然界において通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられているという事実を除き、式（１）によって記述されているものと同一である、同位体標識化合物も含む。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉ、１２９Ｉおよび１８Ｆ等、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体を含む。本発明のある特定の同位体標識化合物、例えば３Ｈおよび１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれたものは、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化（すなわち３Ｈ）および炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易さおよび検出性によって特に好ましい。さらに、重水素（すなわち２Ｈ）等のより重い同位体による置換は、より優れた代謝安定性から生じるある特定の治療上の利点、例えばインビボ半減期の増大または必要投薬量の低減を生じさせることができ、それ故、いくつかの状況においては好ましいことがある。本発明の同位体標識化合物は、概して、非同位体標識試薬を容易に入手可能な同位体標識試薬で代用することによって、スキームおよび／または以下の実施例において開示されている手順を行うことにより、調製できる。
【００６６】
本発明の化合物は、立体中心を含有し得る。これらの化合物は、鏡像異性体の混合物として、または純粋な鏡像異性体として存在し得る。化合物が立体中心を含む場合、該化合物は、当業者に知られている方法によって、例えば結晶化により分離され得るジアステレオ異性体塩の形成、例えば結晶化、気液もしくは液体クロマトグラフィーによって分離され得る立体異性誘導体もしくは錯体の形成、１つの鏡像異性体と鏡像異性体特異的試薬との選択的反応、例えば酵素的エステル化、または、キラルな環境における、例えばキラル支持体、例えば結合キラル配位子を有するシリカ上での、もしくはキラル溶媒の存在下での気液もしくは液体クロマトグラフィーによって、純粋な鏡像異性体に分割され得る。所望の立体異性体が、上述した分離手順の１つによって別の化学的実態に変換される場合、所望の鏡像異性形態を遊離させるためにさらなるステップが必要とされることが理解されよう。代替として、特定の立体異性体は、光学活性な出発材料を使用することによって、光学活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成によって、または不斉転換により一方の立体異性体を他方の立体異性体に変換することによって合成できる。
【００６７】
本発明のある特定の化合物は、分離可能であってよい異なる安定な配座形態で存在し得る。不斉単結合周囲での束縛回転によるねじれ不斉、例えば立体障害または環の歪みを理由とするものは、異なる配座体の分離を可能にし得る。本発明の化合物は、式（１）の化合物の各配座異性体およびそれらの混合物をさらに含む。
【００６８】
本発明の化合物は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）（特に、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療するために有用であり、したがって、本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物である。本発明の化合物（その中で使用される組成物およびプロセスを含む）は、本明細書において記述されている治療用途のための薬剤の製造においても使用され得る。
【００６９】
典型的な製剤は、本発明の化合物と、担体、賦形剤または添加剤とを混合することによって調製される。適切な担体、賦形剤および添加剤は当業者によく知られており、炭水化物、ワックス、水溶性および／または膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等の材料を含む。使用される特定の担体、賦形剤または添加剤は、本発明の化合物を適用する手段および目的によって決まることになる。溶媒は、概して、哺乳動物に投与するのに安全（ＧＲＡＳ）として当業者によって認識されている溶媒に基づいて選択される。概して、安全な溶媒は、水等の非毒性水性溶媒および水に可溶性または混和性の他の非毒性溶媒である。適切な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）等およびそれらの混合物を含む。製剤は、１つまたは複数の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、着香剤、香味剤、および整った造形の薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）を提供するため、または医薬生成物（すなわち薬剤）の製造を支援するための、他の知られている添加物も含み得る。
【００７０】
製剤は、従来の溶解および混合手順を使用して調製できる。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または該化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の知られている錯体形成剤との錯体））を、上述した添加剤の１つまたは複数の存在下、適切な溶媒に溶解する。水難溶性化合物の溶解率は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら、「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｐｏｏｒｌｙ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｄｒｕｇ（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）ｂｙ  ａ  ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｐｏｓｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３９、７６９〜７７３（１９８７）、およびＥＰ０９０１７８６Ｂ１（ＵＳ２００２／００９４９４）によって記述されているもの等、噴霧乾燥分散剤の使用によって増強することができる。本発明の化合物は、典型的には、医薬剤形に製剤化されて、容易に制御可能な投薬量の薬物を提供し、整っていて扱い易い製品を患者に届ける。
【００７１】
医薬組成物は、本発明の化合物の溶媒和物および水和物も含む。用語「溶媒和物」は、式（Ｉ）によって表される化合物（薬学的に許容できるその塩を含む）と１個または複数の溶媒分子との分子錯体を指す。そのような溶媒分子は、レシピエントに無害であることが知られている薬学分野において一般に使用されるもの、例えば、水、エタノール、エチレングリコール等である。用語「水和物」は、溶媒分子が水である場合の錯体を指す。溶媒和物および／または水和物は、好ましくは結晶形態で存在する。メタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｓ）−プロピレングリコール、（Ｒ）−プロピレングリコール、１，４−ブチン−ジオール等の他の溶媒を、より望ましい溶媒和物の調製における中間溶媒和物として使用してよい。
【００７２】
塗布用の医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて、多様な手法で包装され得る。概して、分配用の物品は、適切な形態の医薬製剤をその中に配置した容器を含む。適切な容器は当業者によく知られており、ボトル（プラスチックおよびガラス）、小袋、アンプル、ポリ袋、金属シリンダー等の材料を含む。容器は、包装の内容物への不用意なアクセスを防止するための不正開封防止構築物も含み得る。加えて、容器には、容器の内容物を記述するラベルがその上に貼り付けられている。ラベルは、適切な警告も含み得る。
【００７３】
本発明は、動物におけるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物、または有効量の本発明の化合物と薬学的に許容できる添加剤、賦形剤もしくは担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法をさらに提供する。該方法は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害が有益である疾患、状態および／または障害を治療するために特に有用である。
【００７４】
本発明の一態様は、肥満、および肥満関連障害（例えば、過体重、体重増加または体重維持）の治療である。
【００７５】
肥満および過体重は、概してボディマス指数（ＢＭＩ）によって定義され、該指数は、全体脂肪と相関し、疾患の相対リスクを推定するものである。ＢＭＩは、体重（キログラム）を高さ（平方メートル）で割る（ｋｇ／ｍ２）ことによって算出される。過体重は、典型的には２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義され、肥満は、典型的には３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義される。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ、Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９８〜４０８３（１９９８）を参照されたい。
【００７６】
本発明の別の態様は、糖尿病、または１型（インスリン依存性真性糖尿病、「ＩＤＤＭ」とも称される）および２型（非インスリン依存性真性糖尿病、「ＮＩＤＤＭ」とも称される）糖尿病、耐糖能異常、インスリン抵抗性、高血糖症、ならびに糖尿病性合併症（アテローム性動脈硬化症、冠動脈性心疾患、脳卒中、末梢血管疾患、腎症、高血圧症、神経障害および網膜症等）を含む糖尿病関連障害の治療のため、またはその進行もしくは発症を遅延させるためのものである。
【００７７】
本発明のまた別の態様は、代謝症候群等の肥満共存症の治療である。代謝症候群は、脂質異常症、高血圧症、インスリン抵抗性、糖尿病（例えば２型糖尿病）、冠動脈疾患および心不全等の疾患、状態または障害を含む。代謝症候群についてのさらに詳細な情報は、例えば、Ｚｉｍｍｅｔ，Ｐ．Ｚ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｐｅｒｈａｐｓ  ａｎ  Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ  Ｍｙｓｔｅｒｙ  ｂｕｔ  Ｆａｒ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｙｔｈ−Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏｅｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｎｄ？」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ＆Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、７（２）、（２００５）；およびＡｌｂｅｒｔｉ，Ｋ．Ｇ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ−Ａ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ」、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１０５９〜６２（２００５）を参照されたい。好ましくは、本発明の化合物の投与は、薬物を含有しないビヒクル対照と比較して、血漿レプチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および／またはコレステロールの低下等、少なくとも１つの心血管疾患危険因子における統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減を提供する。本発明の化合物の投与は、グルコース血清レベルにおける統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減も提供し得る。
【００７８】
本発明のまた別の態様は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓の（ｈｅｐｔｉｃ）インスリン抵抗性の治療である。
【００７９】
約１００ｋｇの体重を有する正常な成人では、典型的には体重１キログラムにつき約０．００１ｍｇから約１０ｍｇまで、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５．０ｍｇ／ｋｇまで、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇまでの範囲内の投薬量で十分である。しかしながら、治療されている対象の年齢および重量、意図されている投与経路、投与されている特定の化合物等に応じて、一般的な投薬量範囲における若干の変動性が必要となり得る。特定の患者のための投薬量範囲および最適投薬量の決定は、本開示の利益を有する当業者の能力内に十分入るものである。本発明の化合物は、持続放出、制御放出および遅延放出製剤中に使用され得、これらの形態も当業者によく知られていることにも留意されたい。
【００８０】
本発明の化合物は、本明細書において記述されている疾患、状態および／または障害の治療用の他の薬学的作用物質と併せて使用してもよい。したがって、本発明の化合物を他の薬学的作用物質と組み合わせて投与するステップを含む治療方法も提供される。本発明の化合物と組み合わせて使用され得る適切な薬学的作用物質は、抗肥満剤（食欲抑制剤を含む）、抗糖尿病剤、高血糖治療剤、脂質低下剤および降圧剤を含む。
【００８１】
適切な抗肥満剤は、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１（１１β−ＨＳＤ  １型）阻害剤、ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤（シブトラミン等）、交感神経様作用剤、β３アドレナリンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト（ブロモクリプチン等）、メラニン細胞刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃアゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタット等）、食欲低下剤（ボンベシンアゴニスト等）、ニューロペプチド−Ｙアンタゴニスト（例えば、ＮＰＹ  Ｙ５アンタゴニスト）、ＰＹＹ３〜３６（その類似体を含む）、甲状腺ホルモン様剤、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、グルココルチコイドアゴニストまたはアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１アゴニスト、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹおよびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）等）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリンアンタゴニスト、ヒスタミン３アンタゴニストまたは逆アゴニスト、ニューロメジンＵアゴニスト、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（例えば、ジルロタピド等の腸選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト等を含む。
【００８２】
本発明の併用態様において使用するための好ましい抗肥満剤は、腸選択的ＭＴＰ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ミトラタピドおよびインプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａアゴニスト（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００Ａ１号において記述されているＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃアゴニスト（例えば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４アゴニスト（例えば、ＵＳ６，８１８，６５８において記述されている化合物）、リパーゼ阻害剤（例えば、セチリスタット）、ＰＹＹ３〜３６（本明細書において使用される場合、「ＰＹＹ３〜３６」は、ペグ化（ｐｅｇｌａｔｅｄ）ＰＹＹ３〜３６、例えば、米国公開第２００６／０１７８５０１号において記述されているもの等の類似体を含む）、オピオイドアンタゴニスト（例えば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エキセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンを含む。好ましくは、本発明の化合物および併用療法は、運動および健康的な食習慣と合わせて投与される。
【００８３】
適切な抗糖尿病剤は、ナトリウム−グルコース共輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）−１０阻害剤、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）１または２阻害剤、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイアビニーズ、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミドおよびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ−３６８８）、α−グルコシド（ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）ヒドロラーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシン−Ｑおよびサルボスタチン）、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標）、エキセンディン−３およびエキセンディン−４）、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（例えば、トロズスクエミン、ヒルチオサール抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）によって開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（例えば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチダーゼ（ｐｅｐｔｉｄｅａｓｅ）ＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進物質（ｓｅｃｒｅａｔａｇｏｇｕｅ）、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２アンタゴニスト、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、インスリン、インスリン模倣物質、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ＶＰＡＣ２受容体アゴニストおよびグルコキナーゼ活性化因子を含む。好ましい抗糖尿病剤は、メトホルミン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標））およびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）である。
【００８４】
上記で列挙した米国特許および刊行物はすべて、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８５】
本明細書において以下で説明する実施例は、例証のみを目的とするものである。本明細書において反映されている組成物、方法および種々のパラメーターは、本発明の種々の態様および実施形態を例示することのみを意図されており、特許請求されている発明の範囲を何ら限定することは意図されていない。
【実施例】
【００８６】
以下に記述する化合物および中間体は、概して、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  ＣｈｅｍｉｓｔｒｙのＩＵＰＡＣ（国際純正応用化学連合）勧告およびＣＡＳ  Ｉｎｄｅｘルールに従って命名した。特に断りのない限り、すべての反応物質は市販のものを入手した。本明細書において以下で挙げる参考文献はすべて、参照により組み込まれる。
【００８７】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、４３、２９２３によって記述されている方法に従って実施した。
【００８８】
本明細書において論じられているすべてのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）精製は、ＫＰ−ＳＩＬシリカ（４０〜６３μＭ、６０オングストローム）（Ｂｉｏａｔｇｅ  ＡＢ；Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を含有する４０Ｍまたは４０Ｓ  Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）カラムのいずれかを使用して実施した。
【００８９】
本明細書において論じられているすべてのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）精製は、充填されたＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）シリカカラムを利用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎシステム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ；Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）を使用して実施した。
【００９０】
質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．；Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）マイクロマスプラットフォームＩＩ分光計で記録した。別段の指定がない限り、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）マイクロマスプラットフォームＩＩ分光計で記録した。
【００９１】
プロトンＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場へ１００万分の１単位で記され、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ４００または５００ＭＨｚ（メガヘルツ）分光計（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．；Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）で記録した。ＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシラン（プロトンの場合）またはフルオロトリクロロメタン（フッ素の場合）から低磁場へ１００万分の１単位で記される。
【００９２】
以下に記述する調製物を、下記の実施例において例示されている化合物の合成において使用した。
【００９３】
中間体および出発材料の調製
中間体１
以下に示す５−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−エトキシニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【００９４】
【化１３】
2013540119.tif 000015
【００９５】
ステップ１．以下に示す５−ブロモ−６−エトキシニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【００９６】
【化１４】
2013540119.tif 000016
【００９７】
無水エタノール（２ｍＬ）中の５−ブロモ−６−クロロニコチン酸（２４０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびナトリウムエトキシド（１３８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のスラリーを、マイクロ波条件下、１００℃で１５分間加熱し、追加分量のナトリウムエトキシド（７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加し、加熱を１時間続けた。冷却後、反応混合物を１Ｎ塩酸水溶液で４のｐＨに調整し、得られた固体を収集し、真空で乾燥させて、５−ブロモ−６−エトキシニコチン酸（１４０ｍｇ）を生じさせた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 1.33 (t, J=7.02 Hz, 3 H) 4.43 (q,
J=7.09 Hz, 2 H) 8.32 (d, J=2.15 Hz, 1 H) 8.64 (d, J=1.95 Hz, 1 H) 13.28 (br.
s., 1 H); m/z = 248.2 (M+1).
【００９８】
ステップ２．上記に示した表題化合物は、下記の通りに調製した：ｐ−ジオキサン（２ｍＬ）中の、５−ブロモ−６−エトキシニコチン酸（６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルフェニルボロン酸（７０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、２Ｎ炭酸ナトリウム水溶液（０．３７ｍＬ、０．７３ｍｍｏｌ）およびパラジウム１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロリド（９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のスラリーを、１００℃で２時間加熱した。追加分量の４−ｔｅｒｔ−ブチルカルボキシルフェニルボロン酸（７０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）およびパラジウム１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロリド（９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加し、加熱を１．５時間続けた。反応混合物を冷却し、水中に希釈し、１Ｎ塩酸水溶液を使用してｐＨを約５に調整した。この混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮して、表題化合物（１００ｍｇ）を生じさせ、これをさらに精製することなく利用した。m/z = 344.2 (M+1).
【００９９】
中間体２
以下に示す２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１００】
【化１５】
2013540119.tif 000017
【０１０１】
ステップ１．以下に示す２−クロロ−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸、塩酸塩は、下記の通りに調製した。
【０１０２】
【化１６】
2013540119.tif 000018
【０１０３】
２，６−ジクロロイソニコチン酸（２．００ｇ、１０．４２ｍｍｏｌ）を圧力チューブに入れ、テトラヒドロフラン中ジメチルアミンの溶液（２６ｍＬ、２Ｍ、５２ｍｍｏｌ）を添加した。ベッセルを密閉し、８０℃で２２時間加熱した。混合物を室温に冷却し、丸底フラスコに移し、濃縮乾固した。得られた白色半固体を、３０ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液に溶かした。撹拌しながら１Ｎ  ＨＣｌを滴下添加して溶液のｐＨを約３．５に調整し、この時点で淡黄色固体が形成された。これを濾過によって収集し、真空下、４５℃で終夜乾燥させて、２−クロロ−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸内塩（９１６ｍｇ、４４％）を提供した。水溶液のｐＨ１へのさらなる酸性化は、鮮黄色固体の形成をもたらし、これも収集し、真空下で乾燥させて、２−クロロ−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸塩酸塩（１．１５ｇ、４６％）を得た。m/z: 201+ [M+H]; 199- [M-H].  HCl塩: 1H
NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.64 (br. s.,
1 H), 6.96 (d, J=1.0 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=0.8 Hz, 1 H), 3.06 (s, 6 H), 2.53 (t,
J=5.1 Hz, 1 H).
内部塩: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δppm 6.95 (s, 1 H), 6.88 (s, 1 H), 3.04 (s, 6 H).
【０１０４】
ステップ２．以下に示す２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１０５】
水（３．３６ｍＬ）に溶解した２−クロロ−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸（４５０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ベンゼンボロン酸（６４８ｍｇ、２．９２ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（７．５ｍＬ）および炭酸ナトリウム（７１３ｍｇ、６．７３ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、撹拌しながら混合物に窒素を１０分間吹き込んで発泡させた。次いで、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（７５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を一緒に添加し、ベッセルを窒素でフラッシュし、密閉し、９０℃で５時間加熱した。次いで、混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、１．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、セライトのパッドに通して濾過した。層を分離し、水性分を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機分を無水硫酸ナトリウムおよび脱色木炭で処理し、３０分間撹拌した後、濾過した。溶液を濃縮乾固し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５ｍＬ）およびヘプタン（１００ｍＬ）の混合物での粉砕によって残留物を精製した。固体を濾過によって収集し、乾燥させて、２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−（ジメチルアミノ）イソニコチン酸（５０２ｍｇ、６５％）を淡黄色粉末として得た。m/z: 343+ [M+H]; 341- [M-H]; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δppm 8.12 - 8.21 (m, 2 H), 8.04 - 8.11 (m, 2 H), 7.67
(s, 1 H), 7.16 (s, 1 H), 3.23 (s, 6 H), 1.64 (s, 9 H).
【０１０６】
中間体３
以下に示す２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−エトキシイソニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１０７】
【化１７】
2013540119.tif 000019
【０１０８】
ナトリウム（６５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を無水エタノール（３ｍＬ）に、アルゴン下、室温で添加した。ナトリウムの溶解が完了した後、新たに調製したエトキシド溶液を２，６−ジクロロニコチン酸１（０．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）に添加した。この混合物を、マイクロ波中、１５０℃で３時間加熱した。混合物を濃縮乾固して粗製の２−クロロ−６−エトキシイソニコチン酸（０．５ｇ）を提供し、これを精製することなく使用した。m/z: 202+ [M+H]
【０１０９】
１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）中の、粗製の２−クロロ−６−エトキシイソニコチン酸（０．５ｇ、約２．６ｍｍｏｌ）、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ベンゼンボロン酸（０．５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．５ｇ、３．６ｍｍｏｌ）および水（０．１ｍＬ）を撹拌し、１０分間脱気した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．１ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、密閉チューブを９０℃で終夜加熱した。冷却後、反応物をセライトのプラグに通過させ、ジクロロメタンと水とに分配した。有機溶液を濃縮し、粗残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中１０％メタノール）によって精製して、表題化合物（９７ｍｇ、２０％）を生じさせた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 8.11 (2H, d), 8.08 (2H, d), 7.96 (1H, s), 7.34 (1H, s), 4.54
(2H, qd), 1.61 (9H, s), 1.46 (3H, t); m/z: 344+ [M+H].
【０１１０】
中間体４
以下に示す２−（（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）（メチル）アミノ）−６−メトキシイソニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１１１】
【化１８】
2013540119.tif 000020
【０１１２】
ｐ−ジオキサン（３ｍＬ）中の、２−クロロ−６−メトキシイソニコチン酸（１００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、サクルコシン（ｓａｃｒｃｏｓｉｎｅ）ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１６ｍｇ、（０．６４ｍｍｏｌ）、クロロ（ジ−２−ノルボリルホスフィノ（ｎｏｒｂｏｒｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｏ））（２−ジメチルアミノメチルフェロセン−１イル）パラジウム（ＩＩ）（９．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１２８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のスラリーを、１１０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を冷却し、溶媒を真空で除去した。残留物を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液で４にｐＨ調整し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（０〜１０％メタノール／ジクロロメタン）、表題化合物（６０ｍｇ）を黄色固体として生じさせた。m/z = 297.5 (M+1).
【０１１３】
中間体５
以下に示す２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１１４】
【化１９】
2013540119.tif 000021
【０１１５】
水（１６０ｍＬ）に溶解した２−クロロ−６−メトキシイソニコチン酸（１５．０ｇ、８０．０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾエート（２９．２ｇ、９６．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（５００ｍＬ）および炭酸ナトリウム（２５．４ｇ、２４０ｍｍｏｌ）を、内部温度計、コンデンサーおよび窒素入口を備えた１Ｌの三口フラスコ中で合わせた。撹拌しながら窒素を１５分間吹き込んで発泡させることにより、溶液を脱気した。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３．７０ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１７時間加熱還流した。次いで、混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮して濃褐色懸濁液を得、これを酢酸エチル（４００ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）とに分割した。水層を分離し、さらなる酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機分を合わせ、１Ｎ  ＨＣｌおよび水で洗浄し、セライトのパッドに通す濾過によって黒色固体を除去した。水層を廃棄し、有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。次いで、溶液を脱色（ｄｅｃｏｌｏｒｌｉｚｉｎｇ）木炭で処理し、７０℃に２０分間加熱した。次いで、溶液を熱いうちにセライトに通して濾過し、真空下で溶媒を除去して、黄色粉末を生じさせた。この材料を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５５ｍＬ）の添加によって精製し、続いて撹拌しながら１．８５Ｌのヘプタンをゆっくり添加した。混合物を２日間撹拌し、次いで濾過して、２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸（２２．０１ｇ、８４％）を淡黄色粉末として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δppm 1.61 (s, 9 H) 4.08 (s, 3 H) 7.34
(d, J=0.98 Hz, 1 H) 7.97 (d, J=1.17 Hz, 1 H) 8.09 (s, 2 H) 8.13 (s, 2 H); m/z:
330.2+ [M+H].
【０１１６】
中間体６
以下に示す６−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−２−（メチルアミノ）ニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１１７】
【化２０】
2013540119.tif 000022
【０１１８】
ステップ１．以下に示す６−クロロ−２−（メチルアミノ）ニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１１９】
【化２１】
2013540119.tif 000023
【０１２０】
スチール製オートクレーブに、２，６−ジクロロニコチン酸（工業用グレード）（３０ｇ、１５６．２ｍｍｏｌｅｓ）、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）およびモノメチルアミン（６８．２ｍＬ．エタノール中３３ｗｔ％、５００ｍｍｏｌ）を添加した。反応ベッセルを１００℃で４時間加熱した。反応混合物を冷却し、溶液をオートクレーブから５００ｍＬのフラスコに移し、真空下で濃縮して、緑色固体を得た。固体を３００ｍＬのＭｅＯＨおよび１．２ＬのＥｔＯＡｃに溶解し、分液漏斗に注ぎ入れ、１Ｎ  ＨＣｌ（２×３００ｍＬ）およびブラインで洗浄した。次いで、有機溶液を濃縮乾固して、６−クロロ−２−（メチルアミノ）ニコチン酸（２９ｇ、９６％）をオフホワイトの固体として産出した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm 13.14 (br. s., 1 H), 8.17 (d, J=2.7 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=8.0 Hz,
1 H), 7.57 (br. s., 1 H), 6.58 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 2.89 (d, J=4.1 Hz, 3 H).
m/z: 187+ [M+H]; 185- [M-H]
【０１２１】
ステップ２．２Ｌの三口フラスコに、水（３００ｍＬ）に溶解した６−クロロ−２−（メチルアミノ）ニコチン酸（２２．９ｇ、１２２．６ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンゾエート（３１．２ｇ、１０２．６ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（１．０２Ｌ）および炭酸ナトリウム（３２．６ｇ、３０７．７ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌しながら混合物に乾燥窒素を２０分間吹き込んで発泡させた。次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５．９３ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２時間加熱還流した（８９℃）。反応混合物を室温に冷却し、水（２５０ｍＬ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。混合物を１．５Ｌの酢酸エチルで抽出し、有機層を分離し、１０％炭酸ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（２×２５０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。次いで、溶液を最小撹拌体積に濃縮し、メタノール（６５０ｍＬ）を添加し、混合物を加熱還流して、固体を溶解した。３００ｍＬのＭｅＯＨを蒸留によって除去し、１００ｍＬの水を添加した。次いで、混合物を室温に冷却し、生成物を濾過によって収集し、１５０ｍＬの２：１  メタノール／水で洗浄し、真空オーブン内で乾燥させて、表題化合物（２４ｇ、７１％）を黄色固体として生じさせた。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δppm 8.27 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 8.13 - 8.21 (m, 2 H), 8.03 - 8.13 (m, 2
H), 7.82 (br. s., 1 H), 7.11 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 3.21 (s, 3 H), 1.63 (s, 9 H);
m/z: 329+ [M+H]; 327- [M-H].
【０１２２】
中間体７
以下に示す６−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−２−（エチルアミノ）ニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１２３】
【化２２】
2013540119.tif 000024
【０１２４】
ステップ１．以下に示す６−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−２−クロロニコチン酸は、下記の通りに調製した。
【０１２５】
【化２３】
2013540119.tif 000025
【０１２６】
２，６−ジクロロニコチン酸（１．２０ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）、３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ベンゼンボロン酸（２．０８ｇ、９．１０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．６０ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．７２ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、脱気した１，２−ジメトキシエタン（３０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）を、アルゴン雰囲気下で合わせ、混合物を９０℃で終夜加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。２Ｎ  ＨＣｌ溶液を使用して水層をｐＨ３〜４に酸性化し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機分を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製し、生成物含有画分を濃縮して固体を得、これを２：１  ヘプタン／酢酸エチルで粉砕して、純粋な６−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−２−クロロニコチン酸（１．４ｇ、６７％）をオフホワイトの泡状物として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 8.64 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.95 (d,
1H), 7.59 (t, 1H), 1.60 (s, 9H); m/z 334 [M+H].
【０１２７】
ステップ２．６−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−２−クロロニコチン酸（５００ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン中エチルアミンの２Ｍ溶液（７．０ｍＬ、１４．０ｍｍｏｌ）に溶解し、マイクロ波を使用して混合物を１４０℃で４時間加熱した。次いで、溶液を濃縮乾固し、粗混合物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製した。取得された固体を酢酸エチル／ヘプタン（１：４）で粉砕し、濾過して、表題化合物（３３０ｍｇ、６４％収率）を黄色固体として生じさせた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 8.70 (s, 1H), 8.27 (dd, 2H), 8.06 (d, 1H), 7.85 (br.s, 1H), 7.52
(t, 1H), 7.09 (d, 1H), 3.71 (q, 1H), 1.62 (s, 9H), 1.27 (t, 3H); m/z 343 [M+H].
【０１２８】
中間体８
以下に示す４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０１２９】
【化２４】
2013540119.tif 000026
【０１３０】
ステップ１．以下に示すメチル４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートは、下記の通りに調製した：
【０１３１】
【化２５】
2013540119.tif 000027
【０１３２】
ｐ−ジオキサン（３ｍＬ）／水（１ｍＬ）中の、メチル４−クロロ−７−アザインドール−２−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシ（メチル）ボリル）ベンゾエート（１３７ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（３０９ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の撹拌スラリーを、１００℃で１５時間加熱した。反応混合物を冷却し、真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにかけて（０〜１００％酢酸エチル：ヘプタン）、メチル４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレートを白色粉末（１４８ｍｇ）として生じさせた。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) d ppm 1.62 (s, 9
H) 3.99 (s, 3 H) 7.28 (d, J=5.23 Hz, 1 H) 7.36 (d, J= 2.62 Hz, 1H) 7.59 (t, 1H)
7.90 (d, 1 H) 8.09 (d, 1H) 8.35 (t, 1 H) 8.64 (d, J=4.70 Hz, 1H); m/z (M+1) =
353.2.
【０１３３】
ステップ２．メタノール（２ｍＬ）／テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のメチル４−（３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボキシレート（１４５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．８２ｍＬ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応混合物を真空で濃縮し、水中に希釈し、１Ｎ塩酸水溶液で約５にｐＨ調整し、黄色固体を濾過によって収集し、真空で乾燥させて、表題化合物（１２２ｍｇ）を生じさせた。m/z = 339.5 (M+1);1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm 12.56 (s, 1 H) 8.47 (d, J=4.88 Hz, 1 H) 8.24 (t, J=1.66 Hz, 1 H)
8.01 (tt, J=8.36, 1.29 Hz, 2 H) 7.69 (t, J=7.80 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=4.88 Hz, 1
H) 7.15 (d, J=2.15 Hz, 1 H) 1.52 - 1.59 (m, 9 H).
【０１３４】
中間体９
以下に示す１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１３５】
【化２６】
2013540119.tif 000028
【０１３６】
ステップ１．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１３７】
【化２７】
2013540119.tif 000029
【０１３８】
メチルビニルケトン（１４６ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（１８Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ホルミルピペリジン−１−カルボキシレート（３７５ｇ）の溶液に添加した。反応混合物を−５℃に冷却し、エタノール中水酸化カリウムの溶液（３Ｎ、０．２４３Ｌ）を１０分間かけて滴下添加した。反応混合物を室温に加温させ、１６時間撹拌した。シクロヘキサン（１０Ｌ）を添加し、溶液を飽和塩化ナトリウム（３×１０Ｌ）で洗浄した。有機層を濃縮して油とした。この油を２Ｌの８０：２０  シクロヘキサン／酢酸エチルに溶解し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過して、不溶性物質を除去した。濾液をフラッシュカラムクロマトグラフィー（７０：３０  ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、生成物を油として生じさせた。油をヘキサン中で粉砕して、所望生成物を白色固体（１３１ｇ、２８％）として生じさせた。
【０１３９】
ステップ２．以下に示す（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１４０】
【化２８】
2013540119.tif 000030
【０１４１】
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（１０１ｇ）およびトリス（ジメチルアミノメタン）（１３３ｍＬ）をトルエン（８００ｍＬ）に溶解し、１７時間加熱還流した。反応混合物を最小撹拌体積に濃縮し、酢酸エチル（６００ｍＬ）を添加した。この混合物を加熱還流し、ヘプタン（１．２Ｌ）を２０分間かけて添加した。熱溶液を室温に３時間かけて冷却した。固体をコース（ｃｏｕｒｓｅ）ガラスフリットに通して濾過し、ヘプタン（３００ｍＬ）で洗浄した。得られた固体を、真空オーブン内、４０℃で３時間乾燥させて、所望生成物を黄色固体（１０７ｇ）として生じさせた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.48 (s, 1 H), 6.57 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 5.99 (d, J=10.16 Hz, 1
H), 3.32 - 3.51 (m, 4 H), 3.06 (s, 6 H), 2.72 (s, 2 H), 1.57 - 1.66 (m, 2 H),
1.41 - 1.53 (m, 11 H).
【０１４２】
ステップ３．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１４３】
【化２９】
2013540119.tif 000031
【０１４４】
（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（１０７ｇ）をトルエン（７００ｍＬ）に溶かし、イソプロピルヒドラジン（４４．４ｇ）を添加した。反応物を４時間撹拌還流した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルを添加した（５００ｍＬ）。反応溶液を、クエン酸（２×３００ｍＬ、１０％水溶液）および水（４００ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートを黄色固体（１０９ｇ）として生じさせた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.25 (s, 1 H) 6.42 (dd, J=10.05, 0.49 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=9.95
Hz, 1 H) 4.42 - 4.52 (m, 1 H) 3.36 - 3.53 (m, 4 H) 2.62 (s, 2 H) 1.56 - 1.68
(m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 17 H).
【０１４５】
ステップ４．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１４６】
【化３０】
2013540119.tif 000032
【０１４７】
メタノール（１Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１０９ｇ）の溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６１．４ｇ）を添加した。反応物を１時間撹拌した。反応物をチオ硫酸ナトリウム（３００ｍＬの水中１０ｇ）でクエンチし、次いで蒸留して５００ｍＬの最終体積とした。溶液を周囲温度に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（１Ｌ）および水（１００ｍＬ）を添加した。有機層を除去し、水層を２−メチルテトラヒドロフランで抽出した。有機層を合わせ、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ、２５０ｍＬ）、水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して橙色油とした。油をテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７６．８ｇ）を添加した。溶液を６０℃に加熱し、１時間撹拌した。塩酸水溶液（１Ｎ、１Ｌ）を添加し、溶液を３０分間撹拌した。相を分離し、水層を酢酸エチル（７００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（４００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、残留物を得た。残留物を、真空オーブン内、４０℃で１６時間乾燥させて、表題化合物を橙色ワックス（１１７ｇ）として生じさせた。
1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δppm 7.35 (s, 1 H),
5.32-5.42 (m, 1 H), 3.29 - 3.51 (m, 4 H), 2.73 (s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47 -
1.57 (m, 4 H), 1.42 - 1.46 (m, 15 H); +ESI MS (M+H) = 348.5.
【０１４８】
ステップ５．以下に示す１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１４９】
【化３１】
2013540119.tif 000033
【０１５０】
ｔｅｒｔ−ブチル９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（２５０ｇ）およびトリス（ジメチルアミノメタン）（３２５ｍＬ）をトルエン（１．９Ｌ）に溶解し、４時間加熱還流した。混合物を蒸留し、最小撹拌体積に濃縮し（１１０℃）、次いでトルエン（１．９Ｌ）を添加した。反応物を再蒸留して最小撹拌体積とし、室温に冷却した。トルエン（１．８Ｌ）およびイソプロピルヒドラジン塩酸塩（１３５ｇ）を添加し、溶液を５時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、次いでクエン酸（１０％水溶液、２×１５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、その後、有機層を蒸留して最小撹拌体積とした。メタノール（２Ｌ）を添加し、蒸留して最小撹拌体積とした。メタノール（２Ｌ）を用いてこれを繰り返した。溶液をメタノール（２．５Ｌ）に再溶解し、Ｎ−ブロモスクシミニミド（ｂｒｏｍｏｓｕｃｃｉｍｉｍｉｄｅ）（１７６ｇ）を一度に添加した。溶液を２３℃で２時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム水溶液（５ｗｔ％、０．５Ｌ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。反応混合物を蒸留（４５℃、２１０ｍｍＨｇ）によって約０．５Ｌに濃縮し、次いで２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）を添加した。１５分間撹拌後、水層を廃棄した。有機層を約０．２Ｌに濃縮し、テトラヒドロフラン（０．５Ｌ）を添加した。混合物に、テトラヒドロフラン中カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド溶液（１．９Ｌ、１Ｍ溶液）を添加した。溶液を６０℃に加熱し、１時間撹拌した。室温に冷却後、塩酸水溶液（１Ｎ、２．２Ｌ）を２０分間かけて添加した。混合物を室温で２０分間撹拌し、次いで、層を分離させた。水層を除去し、酢酸エチル（１．７５Ｌ）で逆抽出した。合わせた有機層を水（１Ｌ）で洗浄し、有機層を蒸留によって濃縮した（４Ｌの溶媒を除去した）。酢酸エチル（１．８Ｌ）を添加し、溶液を最小撹拌体積に濃縮した。酢酸エチル（３Ｌ）およびメタノール（０．８Ｌ）を添加し、溶液を０℃に冷却した。塩化アセチル（４０１ｍＬ）を２０分間かけて滴下添加し、溶液を０℃で４時間撹拌した。沈殿物を、窒素下、濾過によって収集した。濾液を酢酸エチル（０．５Ｌ）で洗浄し、真空オーブン内、４０℃で乾燥させて、１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンをオフホワイトの固体（２４１ｇ）として生じさせた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.43 (s, 1 H), 5.32-5.42 (m, 1 H), 3.15 - 3.25 (m, 4 H), 2.89
(s, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 1.69 - 1.90 (m, 4 H), 1.37 - 1.45 (m, 6 H); +ESI (M+H)
= 248.4
【０１５１】
中間体１０
以下に示す１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１５２】
【化３２】
2013540119.tif 000034
【０１５３】
ステップ１．以下に示すベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１５４】
【化３３】
2013540119.tif 000035
【０１５５】
９−オキソ−３−アザ−スピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボン酸ベンジルエステル（１５．２ｇ、５１ｍｍｏｌ）を１８０ｍＬのトルエンに溶解し、トリス（ジメチルアミノ）メタン（２２．２ｇ、２７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５時間加熱還流し、次いで室温に終夜冷却させた。反応溶液を真空で濃縮して、表題化合物（１８．０ｇ、１００％）を提供した。+APCI MS (M+H) 354.6;  1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δppm 7.49 (s, 1 H), 7.28 - 7.40 (m, 5 H), 6.59 (d,
J=10.16 Hz, 1 H), 6.01 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.52 - 3.66 (m, 2
H), 3.39 - 3.52 (m, 2 H), 3.07 (s, 6 H), 2.74 (s, 2 H), 1.58 - 1.73 (m, 2 H),
1.41 - 1.58 (m, 2 H).
【０１５６】
ステップ２．以下に示すベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１５７】
【化３４】
2013540119.tif 000036
【０１５８】
ベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（５９．２ｇ、１６７ｍｍｏｌ）を、８３５ｍＬのエタノールに溶解した。反応溶液に、酢酸（２０ｍＬ、３４５ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩（２９．１ｇ、２３４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間加熱還流した。反応溶液を室温に冷却し、次いで真空で濃縮して橙色油を得、これを、ヘプタン中２０〜４０％酢酸エチルを溶離液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を淡黄色固体（５０ｇ、７９％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 380.5; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.26 - 7.40 (m, 5 H) 7.17 (s, 1 H) 6.66 (d, J=9.95 Hz, 1 H) 5.77
(d, J=10.15 Hz, 1 H) 5.12 (s, 2 H) 3.38 - 3.64 (m, 4 H) 2.58 (s, 2 H) 1.60 (s,
12 H) 1.50 (br. s., 1 H).
【０１５９】
ステップ３．以下に示すベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−ヒドロキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１６０】
【化３５】
2013540119.tif 000037
【０１６１】
ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５０ｇ、１３２ｍｍｏｌ）を、１Ｌのテトラヒドロフランに溶解した。反応物に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２４．６ｇ、１３８ｍｍｏｌ）および２５０ｍＬの水を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を酢酸エチルと水とに分配した。相を分離し、有機相を、水でさらに２回および飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮し、エーテルから結晶化させて、表題化合物をクリーム色の固体（６０．７ｇ、９７％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 476.5; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.28 - 7.36 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.23 (t, J=4.68 Hz, 1 H),
5.12 (s, 2 H), 4.24 (d, J=4.49 Hz, 1 H), 3.87 (br. s., 2 H), 3.12 (br. s., 2
H), 2.79 (d, J=16.00 Hz, 2 H), 2.59 (d, J=15.80 Hz, 2 H), 1.95 (br. s., 1 H),
1.66 (s, 11 H), 1.58 (br. s., 1 H).
【０１６２】
ステップ４．以下に示すベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１６３】
【化３６】
2013540119.tif 000038
【０１６４】
ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−ヒドロキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５７．９ｇ、１２２ｍｍｏｌ）を、１Ｌのアセトンに溶解し、次いで、氷浴中で０℃に冷却した。溶液に、１２２ｍＬのジョーンズ試薬（Ｆｉｌｌｉｏｎ，Ｅ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００４、４６、１０９１〜１０９４）を添加した。氷浴を除去し、反応物を室温に加温させ、その温度で４５分間撹拌した。ガス発生がそれ以上見られなくなり、ｐＨが７に達するまで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加した。得られた混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドに通して濾過し、酢酸エチルですすいだ。濾液層を分離し、水層を酢酸エチルで逆抽出した。有機抽出物を合わせ、水で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル／ヘプタンから結晶化させて、表題化合物（５０．４ｇ、８７％）を生じさせた。
+ESI MS (M+H) 474.5; 1H NMR (400
MHz, CDCl3) δppm 7.32 (d, J=9.38 Hz, 6 H),
5.11 (s, 2 H), 4.24 (s, 1 H), 3.58 - 3.84 (m, 2 H), 3.16 - 3.41 (m, 2 H), 2.67
- 2.91 (m, 2 H), 1.80 (br. s., 1 H), 1.61 - 1.76 (m, 11 H), 1.52 - 1.61 (m, 1
H).
【０１６５】
ステップ５．以下に示すベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１６６】
【化３７】
2013540119.tif 000039
【０１６７】
ベンジル６−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−ヒドロキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５０．４ｇ、１０６ｍｍｏｌ）を、６００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、これに、飽和塩化アンモニウム水溶液（６００ｍＬ）および亜鉛粉末（２０．８ｇ、３１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で３０分間撹拌した。反応物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過し、相を分離し、有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮して、泡状物を得た。泡状物を酢酸エチル／ヘプタン中で１回およびエーテル中で１回粉砕し、濾過して、表題化合物を白色固体（４０．４ｇ、９６％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 396.5; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.24 - 7.38 (m, 6 H), 5.11 (s, 2 H), 3.36 - 3.61 (m, 4 H), 2.74
(s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.64 (s, 9 H), 1.51 (br. s., 4 H).
【０１６８】
ステップ６．以下に示す１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１６９】
【化３８】
2013540119.tif 000040
【０１７０】
ベンジル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（４６．６ｇ、１１８ｍｍｏｌ）を、７３０ｍＬのエタノールに溶解し、溶液を１０％パラジウム炭素（９．４ｇ）に添加した。これに、１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン（９０ｍＬ、７６９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２時間撹拌還流した。反応物を室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した。濾液を真空で濃縮して、灰色固体を得た。固体を１５０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、これに、３５ｍＬのジオキサン中４Ｍ塩酸を添加した。沈殿物が形成され、濾過によって収集して、表題化合物を白色固体（３４ｇ、９７％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 262.5; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.34 (s, 1 H) 3.12 - 3.25 (m, 4 H) 2.90 (s, 2 H) 2.66 (s, 2 H) 1.67
- 1.85 (m, 4 H) 1.62 (s, 9 H).
【０１７１】
中間体１１
以下に示す１−（オキセタン−３−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１７２】
【化３９】
2013540119.tif 000041
【０１７３】
ステップ１．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１７４】
【化４０】
2013540119.tif 000042
【０１７５】
エチルヒドラジノアセテート塩酸塩（０．９２ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）を、エタノール（３０ｍＬ）中の、中間体１０の調製において記述したベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（１．２５ｇ、３．９０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を１時間撹拌還流する。アリコートは、１ＨＮＭＲによって反応が完了したことを示した。反応混合物を室温に冷却し、高真空下で濃縮して、褐色油とした。油をジエチルエーテル（５０ｍＬ）で粉砕した。沈殿物を濾過し、濾液を濃縮し、高真空下で乾燥させて、表題化合物（１．５０ｇ、１００％）を褐色油として産出した。+APCI MS (M+H) 376.2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1.21 - 1.26 (m, 3 H), 1.43 (s, 9 H), 1.45 - 1.52 (m, 2 H), 1.54
- 1.64 (m, 2 H), 2.62 (s, 2 H), 3.33 - 3.49 (m, 4 H), 4.15 - 4.22 (m, 2 H),
4.82 (s, 2 H), 5.87 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 6.26 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 7.24 (s, 1
H).
【０１７６】
ステップ２．以下に示すジエチル２−（１’−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１（４Ｈ）−イル）マロネートは、下記の通りに調製した。
【０１７７】
【化４１】
2013540119.tif 000043
【０１７８】
トルエン（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１．４５ｇ  ３．８６ｍｍｏｌ）を、炭酸ジエチル（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（０．１４８ｇ、鉱油中６０％分散）の懸濁液に、８０℃で３０分間かけて滴下添加した。反応物を１．５時間撹拌還流した。１Ｈ  ＮＭＲは、出発材料が消費されたこと、および所望生成物が形成されたことを示した。反応混合物を室温に冷却した。メタノール（１ｍＬ）を添加し、溶液を室温で５分間撹拌した。水（５ｍＬ）を添加した。溶液を２Ｎ塩酸水溶液（３ｍＬ）でｐＨ約３に酸性化し、次いでジクロロメタン（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥させて、褐色ガム状物（１．５９ｇ、９２％）を産出した。粗材料を１：１  ジエチルエーテル：ヘプタン（５０ｍＬ）で粉砕した。沈殿物を濾過した。濾液を濃縮し、高真空下で乾燥させて、表題化合物（１．２５ｇ、７２％）を産出した。+APCI MS (M+H) 348.1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1.13 - 1.32 (m, 6 H), 1.40 - 1.46 (m, 9 H), 1.46 - 1.54 (m, 2
H), 1.59 (d, J=13.68 Hz, 3 H), 2.62 (s, 2 H), 3.31 - 3.51 (m, 4 H), 4.27 (q,
J=7.23 Hz, 4 H), 5.85 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 6.34 (d, J=9.97 Hz, 1 H), 7.24 (s, 1
H).
【０１７９】
ステップ３．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１８０】
【化４２】
2013540119.tif 000044
【０１８１】
テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）を、窒素入口および温度計を備えた三口１２５ｍＬの丸底フラスコ中の水素化アルミニウムリチウム（９００ｍｇ）に添加した。溶液を−２℃に冷却した。テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中のジエチル２−（１’−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）スピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１（４Ｈ）−イル）マロネート（１ｇ）を５分間かけて滴下添加した。添加中、温度は決して−０．２℃を超えなかった。反応物を０℃で３時間撹拌し、次いで、反応物を、水（１．０ｍＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）および水（３ｍＬ）の順次添加によってクエンチした。添加中、内部温度は決して３．２℃を超えなかった。次いで、反応物を室温に１５分間かけて加温させた。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過し、ジエチルエーテル（３×２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥させて、淡黄色ガラス（５４８ｍｇ、６７％）を産出した。この材料を、３０分間にわたって、０．１％水酸化アンモニウムを加えたジクロロメタン中２％から８％メタノールで溶離する２５ｇのシリカ上でクロマトグラフィーにかけて、表題化合物（１３３ｍｇ、１６％）を産出した。+APCI MS (M+H) 364.2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1.45 (s, 9 H), 1.51 (br. s., 2 H), 1.60 (br. s., 4 H), 2.62 (s,
2 H), 3.32 - 3.53 (m, 4 H), 4.05 (br. s., 4 H), 4.26 (t, J=4.89 Hz, 1 H), 5.89
(s, 1 H), 6.40 (d, J=9.77 Hz, 1 H), 7.23 - 7.25 (m, 1 H).
【０１８２】
ステップ４．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−（オキセタン−３−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１８３】
【化４３】
2013540119.tif 000045
【０１８４】
ヘキサン中２．５Ｍ  ｎ−ブチルリチウム（０．３３ｍｌ  １６５ｕＬ）を、−６．２℃のテトラヒドロフラン（８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。添加中、温度は決して−３．７℃を超えなかった。溶液を−８℃で３０分間撹拌した。テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホニルクロリド（７９ｍｇ）の溶液を、−５℃の反応混合物に添加した。添加中、温度は決して−２℃を超えなかった。反応物を−５℃で１時間撹拌し、次いで反応混合物を−６℃に冷却し、ヘキサン中２．５Ｍ  ｎ−ブチルリチウム（０．３３ｍＬ、１６５ｕＬ）を２分間かけて添加した。添加中、温度は決して−３．５℃を超えなかった。冷却浴を除去し、反応物を６０℃の内部温度で１６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加した。反応溶液を水（３５ｍＬ）で洗浄し、水層を酢酸エチル（１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥させて、黄色固体を産出した。３６分間かけてヘプタン中２５％から７５％酢酸エチルで溶離する８ｇのシリカ上でのクロマトグラフィーによって固体を精製して、表題化合物（５８ｍｇ、４０％）を産出した。+ESI MS (M+H); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1.45 (s, 9 H), 1.49 (d, J=3.71 Hz, 1 H), 1.55 (s, 4 H), 1.59
(br. s., 1 H), 2.61 (s, 2 H), 3.32 - 3.50 (m, 4 H), 5.00 (m, J=7.22, 7.22 Hz, 2
H), 5.13 (t, J=6.44 Hz, 2 H), 5.36 - 5.46 (m, 1 H), 5.88 (d, J=9.95 Hz, 1 H),
6.43 (d, J=9.95 Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H).
【０１８５】
ステップ５．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル６−ブロモ−７−メトキシ−１−（オキセタン−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１８６】
【化４４】
2013540119.tif 000046
【０１８７】
Ｎ−ブロモスクシンイミド（３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、室温のメタノール（１．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−（オキセタン−３−イル）−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５６ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を室温で２時間撹拌し、次いでＮ−ブロモスクシンイミド（４．５ｍｇ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮して、残留物とした。酢酸エチル（１５ｍＬ）を添加し、反応溶液を、１０％クエン酸（３ｍＬ）、１Ｎ水酸化ナトリウム（３ｍＬ）およびブライン（３ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮し、高真空下で乾燥させて、表題化合物（７４ｍｇ、１００％）を無色固体として産出した。+APCI MS (M+H) 458.2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 1.44 (s, 9 H), 1.69 (br. s., 4 H), 2.51 (d, J=15.83 Hz, 1 H),
2.67 (d, J=15.83 Hz, 1 H), 3.06 - 3.31 (m, 3 H), 3.54 (s, 3 H), 3.62 - 3.72 (m,
1 H), 4.39 (s, 1 H), 4.66 (s, 1 H), 4.87 - 4.93 (m, 1 H), 4.97 (t, J=6.84 Hz, 1
H), 4.99 - 5.04 (m, 1 H), 5.30 (s, 1 H), 5.34 - 5.40 (m, 1 H), 7.43 (s, 1 H).
【０１８８】
ステップ６．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−（オキセタン−３−イル）−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１８９】
【化４５】
2013540119.tif 000047
【０１９０】
テトラヒドロフラン中１Ｍカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３２０ｍＬ）を、室温のテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６−ブロモ−７−メトキシ−１−（オキセタン−３−イル）−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート７２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。添加時に、無色溶液は黄色になった。溶液を室温で１６時間撹拌した。１Ｎ塩化水素水溶液（０．４７５ｍＬ、３当量）を添加し、溶液を室温で１時間撹拌した。テトラヒドロフランを窒素流下で濃縮した。水相を酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、次いで、有機層を濃縮し、高真空下で乾燥させて、表題化合物を淡黄色固体（５４ｍｇ、９６％）として得た。-APCI MS (M-H) 360.2; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 1.38 - 1.45 (m, 9 H), 1.46 - 1.56 (m, 4 H), 2.57 (s, 2 H), 2.82
(s, 2 H), 3.33 - 3.53 (m, 4 H), 4.94 - 5.06 (m, 4 H), 6.08 - 6.21 (m, 1 H),
7.53 (s, 1 H).
【０１９１】
ステップ７．以下に示す１−（オキセタン−３−イル）−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１９２】
【化４６】
2013540119.tif 000048
【０１９３】
トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を、０℃のジクロロメタン（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１−（オキセタン−３−イル）−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。冷却浴を除去し、反応物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮して残留物とし、高真空下で２０分間乾燥させた。残留物をジエチルエーテル（５ｍＬ）で粉砕した。溶媒をデカントし、得られた沈殿物を高真空下で乾燥させて、表題化合物（５２ｍｇ、１００）を淡黄色固体として産出した。+APCI MS (M+H) 262.2;1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 1.65 - 1.86 (m, 4 H), 2.63 (s, 2 H), 2.89 (s, 2 H), 3.14 - 3.27
(m, 4 H), 5.02 (s, 4 H), 6.07 - 6.21 (m, 1 H), 7.53 - 7.60 (m, 1 H).
【０１９４】
中間体１２
以下に示す１−イソプロピル−３−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１９５】
【化４７】
2013540119.tif 000049
【０１９６】
ステップ１．以下に示すベンジル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０１９７】
【化４８】
2013540119.tif 000050
【０１９８】
中間体１０の調製において記述されている通りに調製したベンジル１０−（（ジメチルアミノ）メチレン）−９−オキソ−３−アザスピロ［５．５］ウンデカ−７−エン−３−カルボキシレート（６．３８ｇ、１８ｍｍｏｌ）を、９０ｍＬのエタノールに溶解した。反応溶液に、酢酸（２．１６ｇ、３６ｍｍｏｌ）および１−イソプロピルヒドラジン塩酸塩（２．７９ｇ、２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２時間加熱還流し、次いで反応溶液を室温に冷却し、真空で濃縮して橙色油を得、これを、ヘプタン中１２〜１００％酢酸エチルを溶離液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を黄色ガム状物（６．５８ｇ、６９％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 366.5; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.28 - 7.39 (m, 5 H), 7.25 (s, 1 H), 6.42 (d, J=9.95 Hz, 1 H),
5.84 (d, J=9.95 Hz, 1 H), 5.14 (s, 2 H), 4.41 - 4.54 (m, 1 H), 3.42 - 3.65 (m,
4 H), 2.62 (s, 2 H), 1.58 - 1.70 (m, 2 H), 1.50 - 1.58 (m, 2 H), 1.49 (d,
J=6.83 Hz, 6 H).
【０１９９】
ステップ２．以下に示すベンジル３，６−ジブロモ−１−イソプロピル−７−メトキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２００】
【化４９】
2013540119.tif 000051
【０２０１】
ベンジル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（６７９ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのメタノールに溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（７２８ｍｇ、４．０９ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を周囲温度で１８時間撹拌した。メタノールを減圧下で除去した。結果として生じた黄褐色泡状物を５０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、０．５Ｍ水酸化ナトリウム（２×５０ｍＬ）および２０ｍＬの飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（２５ｇのシリカ、１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン勾配）、７８４ｍｇ（７６％）の表題化合物を白色泡状物として産出した。+APCI-MS (M+H) = 554.1,556.2, 558.2: 1H NMR (400 MHz,
CDCl3) δppm 7.26 - 7.42 (m, 5 H), 5.12 (s, 2
H), 4.67 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 4.36 (s, 1 H), 4.27 (m, 1 H), 3.79 (d, J=11.90
Hz, 1 H), 3.59 - 3.73 (m, 1 H), 3.53 (s, 3 H), 3.24 - 3.40 (m, 1 H), 3.19 (ddd,
J=13.61, 10.00, 3.12 Hz, 1 H), 2.56 (d, J=16.19 Hz, 1 H), 2.34 (d, J=16.19 Hz,
1 H), 1.56 - 1.85 (m, 4 H), 1.38 - 1.55 (m, 6 H).
【０２０２】
ステップ３．以下に示すベンジル３−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２０３】
【化５０】
2013540119.tif 000052
【０２０４】
ベンジル３，６−ジブロモ−１−イソプロピル−７−メトキシ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（７８４ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、１５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。カリウムｔ−ブトキシド（２．８２ｍＬ、２当量、１Ｍテトラヒドロフラン）を添加し、反応物を周囲温度で１８時間撹拌した。反応物に、２５ｍＬの２Ｎ塩酸を添加した。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。混合物を２５ｍＬの水で希釈し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（５０ｇのシリカ、８〜６６％酢酸エチル／ヘプタン勾配）、６１２ｍｇの表題化合物を白色泡状物として産出した。+ESI MS (M+H) = 462.5  1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δppm 7.25 - 7.38 (m, 5 H), 5.24 - 5.42 (m, 1 H), 5.12
(s, 2 H), 3.49 - 3.66 (m, 2 H), 3.46 (dd, J=7.41, 4.88 Hz, 2 H), 2.63 (s, 2 H),
2.52 (s, 2 H), 1.48 - 1.65 (m, 4 H), 1.44 (d, J=6.63 Hz, 6 H).
【０２０５】
ステップ４．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２０６】
【化５１】
2013540119.tif 000053
【０２０７】
ベンジル３−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（６１２ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの３３％臭化水素酸／酢酸に溶解し、混合物を周囲温度で６０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、赤橙色の残留物を５０ｍＬの水に溶かし、飽和炭酸ナトリウム水溶液で塩基性にし、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機相を２０ｍＬに濃縮し、２０ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム水溶液および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３４８ｍｇ）で処理した。二相混合物を周囲温度で１時間撹拌した。層を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（１０〜７０％酢酸エチル／ヘプタン、１０ｇのシリカ）、３６４ｍｇの表題化合物を産出した。
+ESI MS (M+H) = 413.5; 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δppm 5.24 - 5.43 (m, 1 H),
3.41 - 3.56 (m, 2 H), 3.28 - 3.41 (m, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.51 (s, 2 H), 1.47
- 1.56 (m, 4 H), 1.40 - 1.49 (m, 15 H).
【０２０８】
ステップ５．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−３−メチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２０９】
【化５２】
2013540119.tif 000054
【０２１０】
ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（４４０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（１１９ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１４６ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）および水（９４ｍｇ、５．１６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中で合わせ、窒素で２分間脱気した。反応バイアルを密閉し、マイクロ波反応器内、１００℃で３０分間加熱した。バイアルをマイクロ波反応器から除去し、次いで従来の加熱ブロック内、１００℃に４日間加熱した。反応物を真空で濃縮し、水（５ｍＬ）と酢酸エチル（５ｍＬ）とに分配した。相を分離し、有機層を濃縮し、次いで、ヘプタン中２０〜４０％酢酸エチル勾配で溶離する４０ｇのカラム上でクロマトグラフィーにかけて、２６８ｍｇ（７２％）の表題化合物を得た。+ESI MS (M+H) = 362.5; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δppm 5.20 - 5.53 (m, 1 H), 3.32 - 3.54 (m, 4 H), 2.62
(s, 2 H), 2.50 (s, 2 H), 2.23 (s, 3 H), 1.53 (t, J=5.76 Hz, 4 H), 1.46 (s, 9
H), 1.44 (d, J=6.64 Hz, 6 H).
【０２１１】
ステップ６．以下に示す１−イソプロピル−３−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２１２】
【化５３】
2013540119.tif 000055
【０２１３】
ｔｅｒｔ−ブチル１−イソプロピル−３−メチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３７５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を３ｍＬのジエチルエーテルに溶解し、ジオキサン中４Ｍ塩化水素（１ｍＬ）で処理した。溶液を１時間撹拌し、次いで真空で濃縮して、３００ｍｇの表題化合物を白色泡状物として提供した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm 5.10 - 5.35 (m, 1 H), 4.34 (br. s., 4 H), 2.70 (s, 2 H), 2.56
(s, 2 H), 2.17 (s, 3 H), 1.66 (br. s., 4 H), 1.34 (d, J=6.64 Hz, 6 H).
【０２１４】
中間体１３
以下に示す１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−３−カルボニトリルは、下記の通りに調製した。
【０２１５】
【化５４】
2013540119.tif 000056
【０２１６】
ステップ１．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル３−シアノ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２１７】
【化５５】
2013540119.tif 000057
【０２１８】
窒素でフラッシュしたシュレンクチューブ中、中間体１２の調製において記述されている通りに調製したｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（２５０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）−クロロホルム付加体（２３．８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、亜鉛末（９．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（７５．７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（２６．１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。無水ジメチルアセトアミド（３．５ｍＬ）を添加し、フラスコを窒素でフラッシュし、次いでＴｅｆｌｏｎ（登録商標）ねじ蓋で覆った。反応物を１２０℃で１６時間撹拌した。反応物を冷却し、次いで、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドに通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を水で洗浄し、水相を酢酸エチルで逆抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮した。ヘプタン中５〜３０％酢酸エチル勾配を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製して、２０４ｍｇの表題化合物を固体（９３％）として得た。+ESI MS (M-Boc+H) 273.5; 1H NMR (400 MHz, CD3OD)
δppm 5.44 (m, 1H), 3.44 (m, 4H), 2.89 (s, 2H), 2.64 (s,
2H), 1.53 (m, 4H), 1.46-1.43 (m, 15H).
【０２１９】
ステップ２．１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−３−カルボニトリル
【０２２０】
【化５６】
2013540119.tif 000058
【０２２１】
ｔｅｒｔ−ブチル３−シアノ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）に溶解し、周囲温度で９０分間撹拌した。溶媒を真空で濃縮し、残留物を、トルエン、続いて酢酸エチルと共蒸留して、１４９ｍｇ（１００％）の表題化合物を黄色固体として得た。+ESI MS (M+H) 273.5.
【０２２２】
中間体１４
以下に示す１−イソプロピル−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２２３】
【化５７】
2013540119.tif 000059
【０２２４】
ステップ１．以下に示すベンジル６−ブロモ−７−ヒドロキシ−１−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２２５】
【化５８】
2013540119.tif 000060
【０２２６】
中間体１２の調製において記述されている通りに調製したベンジル１−イソプロピル−１，４−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（４．２０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、１３０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。反応物に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．４９ｇ、１４ｍｍｏｌ）および３０ｍＬの水を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を、酢酸エチルと飽和塩化ナトリウム水溶液とに分配した。次いで、有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液でもう１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、表題化合物をオフホワイトの泡状物（５．３１ｇ、１００％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 463.8.
【０２２７】
ステップ２．以下に示すベンジル６−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２２８】
【化５９】
2013540119.tif 000061
【０２２９】
ベンジル６−ブロモ−７−ヒドロキシ−１−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５．３０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、５３ｍＬのアセトンに溶解し、次いで、氷浴中で０℃に冷却した。溶液に、８３ｍＬのジョーンズ試薬（Ｆｉｌｌｉｏｎ，Ｅ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００４、４６、１０９１〜１０９４）を添加した。氷浴を除去し、反応物を室温に加温させ、その温度で４５分間撹拌した。反応物を氷浴中で０℃に冷却し、次いでガス発生がそれ以上見られなくなるまで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加した。得られた混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドに通して濾過し、酢酸エチルですすいだ。濾液層を分離し、水層を酢酸エチルで逆抽出した。有機抽出物を合わせ、水で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、表題化合物（５．２７ｇ、１００％）を生じさせた。+ESI MS (M+H) 460.4.
【０２３０】
ステップ３．以下に示すベンジル１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２３１】
【化６０】
2013540119.tif 000062
【０２３２】
ベンジル６−ブロモ−１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（５．６３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、５５ｍＬの酢酸に溶解し、これに、亜鉛粉末（２．４０ｇ、３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で３５分間撹拌した。反応物を真空で濃縮し、次いで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液と酢酸エチルとに分配した。相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせ、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、油を得た。ヘプタン中１２〜１００％酢酸エチルを溶離液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって油を精製して、表題化合物を油（２．２５ｇ、４８％）として生じさせた。+ESI MS(M+H) 382.4; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.28 - 7.40 (m, 6 H), 5.32 - 5.45 (m, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 3.41
- 3.61 (m, 4 H), 2.76 (s, 2 H), 2.54 (s, 2 H), 1.50 - 1.62 (m, 4 H), 1.47 (d,
J=6.63 Hz, 6 H).
【０２３３】
ステップ４．以下に示すベンジル１−イソプロピル−６−メチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２３４】
【化６１】
2013540119.tif 000063
【０２３５】
テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中のベンジル１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（３９７ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を、−７０℃に冷却した。これに、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．５６ｍＬ、１．５６ｍｍｏｌ）を、テトラドヒドロフラン（ｔｅｔｒａｄｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）中１．０Ｍ溶液として１０分間かけて添加した。得られた黄色溶液を−７０℃で３０分間撹拌した。１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミドン（１．６ｍＬ）を反応物に添加し、撹拌を−７０℃で１０分間続けた。反応物に、ヨードメタン（７４６ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に加温させ、その温度で１８時間撹拌した。反応物に飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を添加し、次いで混合物を水（２０ｍＬ）と酢酸エチル（１５０ｍＬ）とに分配した。層を分離し、水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、次いで濃縮して、透明油を得た。ヘプタン中１０〜４０％酢酸エチルを溶離液として使用するシリカゲルクロマトグラフィーによって油を精製して、表題化合物を白色固体（３５１ｍｇ、８５％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 396.2; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δppm 7.44 (s, 1 H), 7.35 (s, 5 H), 5.17 - 5.34 (m, 1
H), 5.06 (s, 2 H), 3.52 - 3.72 (m, 4 H), 2.79 (s, 2 H), 2.42 - 2.48 (m, 1 H),
1.38 - 1.49 (m, 4 H), 1.35 (t, J=6.74 Hz, 6 H), 1.04 (d, J=7.04 Hz, 3 H).
【０２３６】
ステップ５．以下に示す１−イソプロピル−６−メチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２３７】
【化６２】
2013540119.tif 000064
【０２３８】
表題化合物は、ベンジル１−イソプロピル−６−メチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートから、中間体１０、ステップ６に類似する方式で調製した。
【０２３９】
中間体１５
以下に示す１−イソプロピル−６，６−ジメチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２４０】
【化６３】
2013540119.tif 000065
【０２４１】
ステップ１．以下に示すベンジル１−イソプロピル−６，６−ジメチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２４２】
【化６４】
2013540119.tif 000066
【０２４３】
１ｍＬのテトラヒドロフラン中の、中間体１４の調製において記述したベンジル１−イソプロピル−６−メチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（８４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の溶液を、−７０℃に冷却し、次いで、テトラドヒドロフラン中１．０Ｍ溶液としてのリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．３１８ｍＬ、０．３１８ｍｍｏｌ）で１０分間かけて処理した。次いで、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミドン（０．２ｍＬ）を反応物に添加した。撹拌を−７０℃で１０分間続け、次いでヨードメタン（１５２ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を反応物に添加した。混合物を室温に加温させ、その温度で４時間ホールドした。反応物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍＬ）を添加し、次いで、混合物を水（２ｍＬ）と酢酸エチル（１０ｍＬ）とに分配した。層を分離し、水層を酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、次いで濃縮して、透明な黄色油を得た。ヘプタン中１０〜４０％酢酸エチルを溶離液として使用するシリカゲルクロマトグラフィーによって油を精製して、表題化合物を透明油（５８ｍｇ、６７％）として生じさせた。+ESI MS (M+H) 410.3; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.28 - 7.44 (m, 5 H), 7.27 (s, 1 H), 5.40 (m, 1 H), 5.13 (s, 2
H), 3.85 - 4.24 (m, 2 H), 2.86 - 3.11 (m, 2 H), 1.58 - 1.79 (m, 2 H), 1.56 (s,
2 H), 1.46 (d, J=6.64 Hz, 6 H), 1.19 - 1.40 (m, 2 H), 1.15 (s, 6 H).
【０２４４】
ステップ２．以下に示す１−イソプロピル−６，６−ジメチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２４５】
【化６５】
2013540119.tif 000067
【０２４６】
表題化合物は、ベンジル１−イソプロピル−６，６−ジメチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートから、中間体１０、ステップ６に類似する方式で調製した。
【０２４７】
中間体１６
以下に示す３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２４８】
【化６６】
2013540119.tif 000068
【０２４９】
ステップ１．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２５０】
【化６７】
2013540119.tif 000069
【０２５１】
中間体１０の塩酸塩（１０４０ｍｇ、３．４９２ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８００ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｌｙａｍｉｎｅ）（７３０ｍｇ、７．２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中で合わせた。反応溶液を周囲温度で１６時間撹拌した。反応物に、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を添加した。反応溶液を、１Ｎ塩酸水溶液（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１２６２ｍｇ、１００％）を得た。-APCI MS (M-H) 360.3; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.30 (s, 1 H), 3.29 - 3.56 (m, 4 H), 2.77 (s, 2 H), 2.56 (s, 2
H), 1.67 (s, 9 H), 1.48 - 1.56 (m, 4 H), 1.46 (s, 9 H).
【０２５２】
ステップ２．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレートは、下記の通りに調製した。
【０２５３】
【化６８】
2013540119.tif 000070
【０２５４】
ｔｅｒｔ−ブチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１０９０ｍｇ、３．０１５ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（１０５０ｍｇ、１２．８０ｍｍｏｌ）を、エタノール（４０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中で合わせた。この溶液に臭素（１８７０ｍｇ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で４時間撹拌した。反応物にエタノール（４０ｍＬ）を添加した。反応物をもう１６時間撹拌した。反応溶液を水（２０ｍＬ）に注ぎ入れ、酢酸エチルで２回（各７５ｍＬ）抽出した。合わせた有機抽出物を、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液で２回（各２５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、２０ｍＬの最終体積に濃縮して、沈殿物を得た。混合物を濾過し、固体を収集して、表題化合物を固体（６７９ｍｇ、５１％）として得た。
+APCI MS (M+H-Boc) 342.1; 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δppm 3.28 - 3.60 (m, 4 H),
2.66 (s, 2 H), 2.56 (s, 2 H), 1.65 (s, 9 H), 1.48 - 1.55 (m, 4 H), 1.46 (s, 9
H). 
【０２５５】
ステップ３．以下に示す３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２５６】
【化６９】
2013540119.tif 000071
【０２５７】
ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（６７０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）およびジオキサン中４Ｍ塩化水素（８ｍＬ）を合わせ、２．５時間撹拌した。反応物にジエチルエーテル（２０ｍＬ）を添加した。沈殿物が形成され、これを濾過し、固体を収集して、表題化合物（５７３ｍｇ、９７％）を得た。+APCI MS (M+H) 342.1; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 3.24 (t, J=5.96 Hz, 4 H), 2.80 (s, 2 H), 2.74 (s, 2 H), 1.71 -
1.92 (m, 4 H), 1.65 (s, 9 H).
【０２５８】
中間体１７
以下に示す１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２５９】
【化７０】
2013540119.tif 000072
【０２６０】
ステップ１．以下に示す１−（４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンは、下記の通りに調製した：
【０２６１】
【化７１】
2013540119.tif 000073
【０２６２】
水（４００ｍＬ）中の（４−メトキシベンジル）ヒドラジン塩酸塩（１３．５ｇ、７１．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水（２００ｍＬ）中のピルビンアルデヒド（５．２ｇ、７１．５ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間かけて添加した。さらに５０分後、反応混合物をジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮し、残留物をさらに精製することなく次の転換において使用した。
【０２６３】
メタノール（３４ｍＬ）／水（３００ｍＬ）中の上記反応からの生成物（１２．３ｇ、５９．８ｍｍｏｌ）およびグリオキサル（４３ｇ、２９９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、１００℃で５時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮した。残留物の精製がＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）ユニット（３００ｇのカラム、勾配１０〜３５％酢酸エチル：ヘプタン）で実施され、表題化合物（６．０４ｇ）を生じさせた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 8.05 (s, 1 H) 7.18 (m, J=8.79 Hz, 2 H), 6.93 (s, 1 H), 6.87 (m,
J=8.60 Hz, 2 H), 5.15 (s, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 2.55 (s, 3 H); m/z (M+1) =
247.0.
【０２６４】
ステップ２．以下に示す１−ベンジル−２’−（４−メトキシベンジル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２６５】
【化７２】
2013540119.tif 000074
【０２６６】
１−（４−ヒドロキシ−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（３５０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのメタノールに懸濁し、Ｎ−ベンジル−４−ピペリドン（０．２５ｍＬ、１．４２ｍｍｏｌ）およびピロリジン（０．０３６ｍＬ、０．３当量）を添加した。次いで、混合物を１８時間加熱還流した。次いで、反応物を室温に冷却し、メタノールを減圧下で除去した。結果として生じた橙色油を、５０ｍＬの酢酸エチルと５０ｍＬの水とに分配した。水相を、さらに５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（５０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン勾配、２５ｇのシリカ）、４２８ｍｇ（７２％）の１−ベンジル−２’−（４−メトキシベンジル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンを淡黄色固体として産出した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.25 - 7.37 (m, 6 H), 6.95 (s, 1 H), 6.81 - 6.92 (m, 2 H), 5.20
(s, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 3.49 (s, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 2.57 (d, J=11.3 Hz, 2
H), 2.25 - 2.44 (m, 2 H), 2.02 (d, J=12.5 Hz, 2 H), 1.62 - 1.77 (m, 2 H); m/z
(M+1) = 418.5.
【０２６７】
ステップ３．以下に示す１−ベンジル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２６８】
【化７３】
2013540119.tif 000075
【０２６９】
１−ベンジル−２’−（４−メトキシベンジル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン（４２８ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの１，２−ジクロロエタンに溶解し、１０ｍＬのトリフルオロ酢酸で処理した。結果として生じた混合物を、９０℃で１８時間加熱した。反応物を周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮乾固した。結果として生じた残留物を５０ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム水溶液に溶かし、２×５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（２５ｇのシリカ、ステップ勾配５カラム体積５０％酢酸エチル／ヘプタン、１０ＣＶ  １００％酢酸エチル）、２７８ｍｇ（９１％）の１−ベンジル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンを淡黄色固体として産出した。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 7.27 (m, 6 H), 3.55 (s, 2 H), 2.64 (m, 4 H), 2.45 (td, J=11.7,
2.5 Hz, 2 H), 2.06 (d, J=12.1 Hz, 2 H), 1.74 (m, 2 H); m/z (M+1) = 298.5.
【０２７０】
ステップ４．以下に示す１−ベンジル−１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２７１】
【化７４】
2013540119.tif 000076
【０２７２】
１−ベンジル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン（２０４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した。２−プロパノール（０．１１ｍＬ、１．３７ｍｍｏｌ）およびポリマー支持トリフェニルホスフィン（０．５ｇ、３ｍｍｏｌ／ｇローディング）を添加し、続いてＤＢＡＤ（３２２ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を添加し、周囲温度で５日間撹拌した。ポリマー支持トリフェニルホスフィンを濾過除去し、濾過ケーキを１００ｍＬの酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮し、結果として生じた黄色油を１０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで処理した。混合物を周囲温度で１時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去した。結果として生じたスラッジを、５０ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム水溶液と５０ｍＬの酢酸エチルとに分配した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィーにかけて（３０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン勾配、１０ｇのシリカ）、９０ｍｇ（３５％）の１−ベンジル−１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンを淡黄色固体として産出した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.30 (m, 3 H), 7.24 (m, 2 H), 7.18 (s, 1 H), 5.14 (spt, 1 H),
3.52 (s, 2 H), 2.60 (m, 4 H), 2.41 (td, J=11.6, 2.5 Hz, 2 H), 2.06 (d, J=12.5
Hz, 2 H), 1.71 (m, 2 H), 1.44 (m, 6 H): m/z (M+1) = 340.5.
【０２７３】
ステップ５．以下に示す１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０２７４】
【化７５】
2013540119.tif 000077
【０２７５】
１−ベンジル−１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン（８１ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬの１，２−ジクロロエタンに溶解した。添加された１−クロロエチルクロロホルメート（６０ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間撹拌還流し、次いで室温に冷却した。揮発物を減圧下で除去し、残留物を１０ｍＬのメタノールに溶かし、１時間加熱還流した。混合物を周囲温度に冷却し、揮発物を減圧下で除去した。残留物を５０ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム水溶液に溶かし、２×３０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、４６ｍｇ（８６％）の１’−イソプロピル−１’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オンを白色固体として産出した。1H NMR (400 MHz, CD3OD)
δppm 7.20 (s, 1 H), 5.13 (spt, 1 H), 2.93 (m, 2 H),
2.80 (dt, J=12.8, 4.0 Hz, 2 H), 2.64 (s, 2 H), 2.02 (m, 2 H), 1.63 (m, 2 H),
1.40 (m, 6 H); m/z (M+1) = 250.2
【０２７６】
（実施例１）
以下に示す４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）安息香酸は、下記の通りに調製した。
【０２７７】
【化７６】
2013540119.tif 000078
【０２７８】
ステップ１．以下に示すメチル４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）ベンゾエートは、下記の通りに調製した。
【０２７９】
【化７７】
2013540119.tif 000079
【０２８０】
ジクロロメタン（０．２ｍＬ）中の、４−（４−（メトキシカルボニル）ベンジルオキシ）安息香酸（２５ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）、１−ｔｅｒｔ−ブチル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（２６ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（５３μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）、１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−オール、一水和物（１４ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（１９ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、３０℃で１８時間加熱した。反応混合物を酢酸エチル／０．３Ｎ塩酸（ａｃｉｉｄ）水溶液に分配し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、メチル４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）ベンゾエートを生じさせた。ＨＰＬＣカラム：ＷａｔｅｒｓアトランティスＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５ｕｍ、溶媒：アセトニトリル：水（０．０５％ＴＦＡ）；流速２ｍＬ／分；勾配（％有機）出発＝５％、終了＝９５％、勾配時間＝４分、保持時間＝３．６８分；m/z = 530 (M+1).
【０２８１】
ステップ２．テトラヒドロフラン（０．７５ｍＬ）中のメチル４−（（４−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）フェノキシ）メチル）ベンゾエート（３９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、水酸化リチウム水溶液（０．２２ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、０．３ｍＬの１Ｎ塩酸水溶液および０．２ｍＬの飽和塩化ナトリウム水溶液を添加した。得られた混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（３×４ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、ガム状物（４６ｍｇ）を生じさせた。分取ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物（２６ｍｇ）を生じさせた。ＨＰＬＣカラム：ＷａｔｅｒｓアトランティスＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５ｕｍ、溶媒：アセトニトリル：水（０．０５％ＴＦＡ）；流速２ｍＬ／分；勾配（％有機）出発＝５％、終了＝９５％、勾配時間＝４分、保持時間＝３．１９分；m/z = 516 (M+1).
【０２８２】
（実施例２）
以下に示す３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸は、下記の通りに調製した。
【０２８３】
【化７８】
2013540119.tif 000080
【０２８４】
ステップ１．以下に示すｔｅｒｔ−ブチル３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエートは、下記の通りに調製した。
【０２８５】
【化７９】
2013540119.tif 000081
【０２８６】
テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の２−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）フェニル）−６−メトキシイソニコチン酸（５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）および１，１−カルボニルジイミダゾール（２７１ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）の溶液を、１時間撹拌還流した。室温に冷却後、１−イソプロピル−４，６−ジヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−７（１Ｈ）−オン（５３９ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３２ｍＬ、２．２８ｍｍｏｌ）を順次に添加し、得られたスラリーを還流温度で１時間加熱した。冷却後、反応混合物を酢酸エチル中に希釈し、１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート（８５０ｍｇ）を白色泡状物として生じさせた。この材料をさらに精製することなく次のステップに持ち越した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 8.60 (t, J=1.66 Hz, 1 H), 8.20 (dt, J=8.05, 1.44 Hz, 1 H), 8.01
(dt, J=7.80, 1.37 Hz, 1 H), 7.50 (t, J=7.80 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 7.33 (d,
J=0.98 Hz, 1 H), 6.64 (d, 1 H), 5.35 (spt, J=6.44 Hz, 1 H), 4.04 (s, 3 H), 3.71
- 3.84 (m, 2 H), 3.36 - 3.42 (m, 2 H), 2.79 (d, J=2.34 Hz, 2 H), 2.58 (s, 2 H),
1.66 - 1.72 (m, 2 H), 1.61 (s, 9 H), 1.56 (s, 2 H), 1.40 - 1.48 (m, 6 H); m/z
(M+1) = 559.2.
【０２８７】
ステップ２．ジクロロメタン（４０ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（１３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）ベンゾエート（８５０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）の溶液を、１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、２０〜１００％酢酸エチル：ヘプタン（０．５％酢酸）の勾配で溶離するフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのシリカゲルカラムによって残留物を精製して、表題化合物を白色固体（５６８ｍｇ）として生じさせた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δppm 8.72 (t, J=1.66 Hz, 1 H), 8.31 (dt, J=8.15, 1.39 Hz, 1 H), 8.06
(dt, J=7.80, 1.27 Hz, 1 H), 7.57 (t, J=7.80 Hz, 1 H), 7.48 (d, J=0.98 Hz, 1 H),
7.40 (s, 1 H), 6.74 (d, 1 H), 5.36 (spt, J=6.76 Hz, 1 H), 4.05 (s, 3 H), 3.82 -
3.91 (m, 1 H), 3.65 - 3.74 (m, 1 H), 3.44 (t, J=5.76 Hz, 2 H), 3.24 (s, 0 H),
2.87 (d, J=1.37 Hz, 2 H), 2.63 (d, J=2.93 Hz, 2 H), 1.63 - 1.71 (m, 2 H), 1.52
- 1.60 (m, 2 H), 1.41 (d, J=6.24 Hz, 3 H), 1.38 (d, J=6.24 Hz, 3 H); m/z (M+1)
= 503.2
【０２８８】
（実施例３）
以下に示す３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル）安息香酸は、下記の通りに調製した。
【０２８９】
【化８０】
2013540119.tif 000082
【０２９０】
酢酸（１ｍＬ）中の３−（４−（１−イソプロピル−７−オキソ−１，４，６，７−テトラヒドロスピロ［インダゾール−５，４’−ピペリジン］−１’−イルカルボニル）−６−メトキシピリジン−２−イル）安息香酸（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（３０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物を、１２０℃で７時間撹拌した。反応混合物を濾過し、真空で濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（１２ｍｇ）を生じさせた。ＨＰＬＣカラム：ＷａｔｅｒｓアトランティスＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５ｕｍ、溶媒：アセトニトリル：水（０．０５％ＴＦＡ）；流速２ｍＬ／分；勾配（％有機）出発＝５％、終了＝９５％、勾配時間＝４分、保持時間＝２．３２分；m/z = 489.1451 (M+1).
【０２９１】
以下の表１に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１〜３の化合物の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０２９２】
【表１−１】
2013540119.tif 000083
【０２９３】
【表１−２】
2013540119.tif 000084
【０２９４】
【表１−３】
2013540119.tif 000085
【０２９５】
【表１−４】
2013540119.tif 000086
【０２９６】
【表１−５】
2013540119.tif 000087
【０２９７】
【表１−６】
2013540119.tif 000088
【０２９８】
【表１−７】
2013540119.tif 000089
【０２９９】
【表１−８】
2013540119.tif 000090
【０３００】
【表１−９】
2013540119.tif 000091
【０３０１】
【表１−１０】
2013540119.tif 000092
【０３０２】
【表１−１１】
2013540119.tif 000093
【０３０３】
薬理学的データ
生物学的プロトコール
動物、特に哺乳動物（例えばヒト）の疾患（本明細書において詳述されているもの等）の治療における本発明の化合物の有用性は、以下に記述するインビトロおよびインビボアッセイを含む当業者に知られている従来のアッセイにおいて、その活性により実証され得る。そのようなアッセイは、本発明の化合物の活性を他の知られている化合物の活性と比較することができる手段も提供する。
【０３０４】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、標準的な手順に基づく方法によって実証した。例えば、式（１）の化合物についてのＡＣＣ活性の直接阻害は、組換えヒトＡＣＣ１（ｒｈＡＣＣ１）および組換えヒトＡＣＣ２（ｒｈＡＣＣ２）の調製を使用して決定した。アッセイにおいて使用され得る組換えヒトＡＣＣ１およびＡＣＣ２の代表的な配列を、それぞれ図１（配列番号１）および図２（配列番号２）において提供する。
【０３０５】
［１］ｒｈＡＣＣ１の調製。完全長ヒトＡＣＣ１  ｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスに感染している２リットルのＳＦ９細胞を、氷冷細胞溶解緩衝液（２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１０％グリセロール；５ｍＭイミダゾール（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ）；２ｍＭ  ＴＣＥＰ（ＢｉｏＶｅｃｔｒａ；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ、Ｃａｎａｄａ）；ベンゾナーゼヌクレアーゼ（１００００Ｕ／１００ｇ細胞ペースト；Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）；ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル（１ｔａｂ／５０ｍＬ；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に懸濁した。細胞を３サイクルの凍結解凍によって溶解させ、４０，０００×ｇで４０分間（４℃）遠心分離した。上清をＨｉｓトラップＦＦ粗製カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）上に直接ロードし、最大０．５Ｍのイミダゾール勾配で２０カラム体積（ＣＶ）にわたって溶離した。ＡＣＣ１含有画分をプールし、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロールで１：５希釈し、ＣａｐｔｏＱ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム上に直接ロードし、最大１ＭのＮａＣｌ勾配で２０ＣＶにわたって溶離した。精製されたＡＣＣ１から、４℃で１４時間のラムダホスファターゼ（１００Ｕ／１０μＭ標的タンパク質；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）とのインキュベーションによってリン酸基を除去し、オカダ酸を添加して（１μＭの最終濃度；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ホスファターゼを阻害した。精製されたＡＣＣ１を、４℃で６時間の透析によって２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロール、０．５Ｍ  ＮａＣｌに交換した。アリコートを調製し、−８０℃で凍結させた。
【０３０６】
［２］ｒｈＡＣＣ１阻害の測定。ｈＡＣＣ１は、トランスクリーナーＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用するＣｏｓｔａｒ  ３６７６番（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中、５０μＭ  ＡＴＰ反応に対する製造業者の推奨条件を使用してアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌの反応物を２５℃で１２０分間流し、１０μｌのトランスクリーナー停止および検出緩衝液を添加し、その組合せを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用し、エンビジョン蛍光リーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）で獲得した。
【０３０７】
［３］ｒｈＡＣＣ２の調製。ヒトＡＣＣ２阻害は、精製された組換えヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を使用して測定した。手短に述べると、ＡＣＣ２の完全長サイトマックスクローンを、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列を決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）にサブクローニングした。ＡＣＣ２をテトラサイクリン誘導によってＣＨＯ細胞内に発現させ、１μｇ／ｍＬのテトラサイクリンとともにグルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含む５リットルのＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中に収穫した。次いで、ＡＣＣ２を含有する馴化培地をソフトリンクソフトリリースアビジンカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に適用し、５ｍＭビオチンで溶離した。４ｍｇのＡＣＣ２を０．０５ｍｇ／ｍＬ（Ａ２８０によって決定）の濃度で溶離し、推定純度は９５％（Ａ２８０によって決定）であった。精製されたＡＣＣ２を、５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび５％グリセロール中で透析した。プールしたタンパク質を凍結させ、−８０℃で貯蔵したが、解凍時に活性の損失はなかった。ＡＣＣ２活性の測定およびＡＣＣ２阻害の評価のために、試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、ｒｈＡＣＣ２酵素に１％の最終ＤＭＳＯ濃度を有する５×ストックとして添加した。
【０３０８】
［４］ヒトＡＣＣ２阻害の測定。ｈＡＣＣ２は、トランスクリーナーＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用するＣｏｓｔａｒ  ３６７６番（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中、５０ｕＭ  ＡＴＰ反応に対する製造業者の推奨条件を使用してアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび８ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌの反応物を２５℃で５０分間流し、１０μｌのトランスクリーナー停止および検出緩衝液を添加し、その組合せを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用し、エンビジョン蛍光リーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）で獲得した。
【０３０９】
上述した組換えｈＡＣＣ１および組換えｈＡＣＣ２トランスクリーナーアッセイを使用した結果を、上記の実施例において例示した式（Ｉ）の化合物についての以下の表にまとめる。両アッセイ中の例はいずれも、最小ｎ＝３で流した。
【０３１０】
【表２−１】
2013540119.tif 000094
【０３１１】
【表２−２】
2013540119.tif 000095
【０３１２】
【表２−３】
2013540119.tif 000096
【０３１３】
実験動物におけるＡＣＣ阻害の急性インビボ評価
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、治療されている動物由来の肝臓および筋肉組織におけるマロニル−ＣｏＡレベルを減少させる該化合物の能力の評定によってインビボで確認することができる。
【０３１４】
実験動物におけるマロニル−ＣｏＡ生成阻害の測定。この方法において、標準的な食餌および水を自由にさせておいた雄スプラーグドーリーラット（２２５〜２７５ｇ）を、研究前に無作為化した。実験の開始前１８時間、動物には給餌するか絶食させるかのいずれかとした。明サイクルが始まって２時間後、動物に、５ｍＬ／ｋｇの体積の（０．５％メチルセルロース；ビヒクル）または適切な化合物（ビヒクル中に調製したもの）を経口投薬した。ベースライン組織マロニル−ＣｏＡレベルを決定するために給餌したビヒクル対照群を含め、一方、マロニル−ＣｏＡレベルに対して絶食が有する影響を決定するために絶食した動物を含めた。化合物投与の１時間後、動物をＣＯ２で窒息させ、組織を取り出した。具体的には、心穿刺によって血液を収集し、ＥＤＴＡを含有するＢＤマイクロテイナーチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ）に入れ、混合し、氷上に置いた。血漿を使用して、薬物暴露を決定した。肝臓および大腿四頭筋を取り出し、直ちに凍結固定し、ホイルに包み、液体窒素中で貯蔵した。
【０３１５】
組織を液体Ｎ２下で微粉化して、試料採取の均一性を確実にした。ファストプレップＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、速度＝５．５；４５秒間）中、５体積の溶解マトリックスＡ中１０％トリカルボン酸（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＰＮ６９１０）で、マロニル−ＣｏＡを組織（１５０〜２００ｍｇ）から抽出した。マロニル−ＣｏＡを含有する上清を、１５０００×ｇで３０分間の遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５４０２）後に細胞残屑から除去した。分析が完了するまで、試料を−８０℃で安定に凍結させた。
【０３１６】
肝臓および筋肉組織中のマロニルＣｏＡレベルの分析は、下記の方法論を使用して評定することができる。
【０３１７】
該方法では、下記の材料を利用する：Ｉｓｏｔｅｃ（Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ、ＯＨ、ＵＳＡ）から購入したマロニル−ＣｏＡテトラリチウム塩およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡトリリチウム塩、過塩素酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号４１０２４１）、トリクロロ酢酸（ＡＣＲＯＳ、カタログ番号４２１４５）、リン酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号０２６０−０１）、ギ酸アンモニウム（Ｆｌｕｋａ、カタログ番号１７８４３）、メタノール（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号９０９３−３３）、ならびに水（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、４２１８−０３）を使用して、必要な移動相を作製した。ストラータＸオンライン固相抽出カラム、２５μｍ、２０ｍｍ×２．０ｍｍ内径（カタログ番号００Ｍ−Ｓ０３３−Ｂ０−ＣＢ）は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）から入手した。サンファイアＣ１８逆相カラム、３．５μｍ、１００ｍｍ×３．０ｍｍ内径（カタログ番号１８６００２５４３）は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０３１８】
この方法は、下記の設備を利用して実施することができる。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００バイナリポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００クォータナリーポンプおよび２つのＶａｌｃｏケミナート６ポート２ポジションバルブを使用する二次元クロマトグラフィー。試料を、１０℃に維持されたペルチェ冷却スタックおよび２０μＬのサンプリングループ付きのＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーによって導入した。オートサンプラー用の針洗浄液は、洗浄１では水中１０％トリクロロ酢酸（ｗ／ｖ）、および洗浄２では９０：１０  メタノール：水である。ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃマイクロＬＣカラムオーブンを使用して、分析カラム（サンファイア）を３５℃に維持した。溶離液を、ターボイオンスプレー付きのＡＢＩ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計で分析した。
【０３１９】
二次元クロマトグラフィーは、オンライン固相抽出および逆相クロマトグラフィーのための独特な勾配溶離条件を使用し並行して実施した。該方法の一般的設計は、試料クリーンアップおよび関心対象の分析物の捕捉に第一の次元を利用し、続いて第一の次元から第二の次元への溶離に両次元の一時的な連結を利用するようなものであった。次元は、その後連結を解かれて、定量化のために第二の次元からの分析物の勾配溶離を可能にし、一方で、同時に第一の次元には配列中の次の試料のための準備をさせた。両次元が一時的に一緒に連結された場合、第一の次元における移動相の流れは分析物溶離のために第二の次元に反転し、最適なピーク幅、ピーク形状および溶離時間を可能にした。
【０３２０】
ＨＰＬＣシステムの第一の次元は、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘストラータＸオンライン固相抽出カラムを利用し、移動相は、溶媒Ａについては１００ｍＭ過塩素酸ナトリウム／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸、溶媒Ｂについてはメタノールからなるものであった。
【０３２１】
ＨＰＬＣシステムの第二の次元は、ＷａｔｅｒｓサンファイアＣ１８逆相カラムを利用し、移動相は、溶媒Ａについては１００ｍＭギ酸アンモニウム、溶媒Ｂについてはメタノールからなるものであった。勾配の初期条件を２分間維持し、この時間の間に、分析物を分析カラムに移した。初期条件は、分析物を分析的に保持しながら、オンラインＳＰＥカラムから溶離するために十分な強度であることが重要であった。その後、勾配が４．５分で７４．５％Ａに直線的に上昇した後、洗浄および再平衡ステップを行った。
【０３２２】
ＨＰＬＣと連結した場合の質量分析は、複雑なマトリックス中の分析物を定量的に測定するための高選択的かつ高感度な方法となり得るが、依然として干渉および抑制を受ける。二次元ＨＰＬＣを質量分析計と連結することにより、これらの干渉は大幅に減少された。加えて、三連四重極質量分析計の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特色を利用することにより、シグナル対ノイズ比は大幅に改良された。
【０３２３】
このアッセイに、質量分析計は、２２５０Ｖのターボイオンスプレー電圧を有する陽イオンモードで操作した。霧化ガスを４５０℃に加熱した。クラスタ分離電位（ＤＰ）、集束電位（ＦＰ）および衝突エネルギー（ＣＥ）を、それぞれ６０、３４０および４２Ｖに設定した。四重極１（Ｑ１）解像度を単位解像度に設定し、四重極３（Ｑ３）を低に設定した。ＣＡＤガスを８に設定した。モニターされたＭＲＭ遷移は、マロニルＣｏＡでは８５４．１→３４７．０ｍ／ｚ（Ｌ．Ｇａｏら（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８５３、３０３〜３１３）であり、マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡでは８５７．１→３５０．０ｍ／ｚ、滞留時間は２００ｍｓであった。分析物の予測される溶離時間付近で溶離液を質量分析計のほうへ方向転換させ、そうでない場合は廃棄に回して、ソースを保存し計装のロバスト性を改良するのを助けた。得られたクロマトグラムを、アナリストソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して積分した。マロニルＣｏＡについての組織中濃度を、水中トリクロロ酢酸の１０％溶液において調製した標準曲線から算出した。
【０３２４】
組織抽出物中のマロニル−ＣｏＡの定量化のための標準曲線を含む試料を、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）中、０．０１から１ｐｍｏｌ／μＬまでの範囲で調製した。マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬの最終濃度）を各標準曲線成分および試料に内部標準として添加した。
【０３２５】
６つのイントラアッセイ品質の対照を調製し、３つは絶食した動物から調製したプール抽出物由来のもの、３つは給餌した動物から作製したプール由来のものであった。これらを、０、０．１または０．３ｐｍｏｌ／μＬの１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡおよびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を混ぜた独立の試料として流した。各イントラアッセイ品質の対照は８５％の水性組織抽出物を含有しており、残りの部分は内部標準（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）および１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡが寄与したものであった。各実行にインターアッセイ対照が含まれており、該対照は、大腿四頭筋の１つの絶食した試料および１つの給餌したプール試料ならびに／または肝臓の１つの絶食した試料および１つの給餌したプール試料からなる。そのような対照には、いずれもマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）が混ぜられている。
【配列表】
2013540119000001.app
【国際調査報告】
2013540119.tif 000099
2013540119.tif 000100
2013540119.tif 000101