(57)【要約】  本発明は、ＳＤＦ−１と結合可能な、好ましくはＳＤＦ−１を阻害可能な核酸分子であって、核酸分子が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のための薬剤として使用するためのものであり、疾患または障害が癌である核酸分子に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＤＦ−１と結合可能な、好ましくはＳＤＦ−１を阻害可能な核酸分子であって、前記核酸分子が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法に補助治療として使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のための薬剤として使用するためのものであり、前記疾患または障害が癌である核酸分子。
【請求項２】
前記癌が、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、前記血液癌が、白血病および骨髄腫を含む群から選択される、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
白血病が、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される、請求項２に記載の核酸分子。
【請求項４】
骨髄腫が、多発性骨髄腫である、請求項２に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記癌が、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、前記固形腫瘍が、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記補助治療が、対象を感受性化し、前記感受性化された対象が、前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法が、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む、請求項６に記載の核酸。
【請求項８】
前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される、請求項７に記載の核酸分子。
【請求項９】
前記抗体が、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
前記アルキル化剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１１】
前記代謝拮抗薬が、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１２】
前記植物性テルペノイドが、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１３】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１４】
前記核酸分子が、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体との間の相互作用を遮断可能であり、前記ＳＤＦ−１受容体が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７を含む群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項１５】
前記疾患または障害の治療または予防が、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体との間の相互作用を阻害する前記核酸分子によってもたらされる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項１６】
前記核酸分子が、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、およびＤ型のＳＤＦ−１結合核酸分子を含む群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項１７】
前記Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、次のヌクレオチド配列：
５’  ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ  ３’（配列番号５２）
を含む、請求項１６に記載の核酸。
【請求項１８】
前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、次のヌクレオチド配列：
５’  ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＵＧＧＣＵＧＡＵＣＣＵＡＧＵＣＡＧＧ  ３’（配列番号５３）
を含む、請求項１７に記載の核酸分子。
【請求項１９】
前記Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む、請求項１７〜１８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２０】
前記Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む、請求項１７〜１８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２１】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＢＶＢＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵであり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在である）、請求項１９〜２０のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２２】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ１Ｘ２ＣＲＷＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＫＲＹＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在またはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在またはＵである）、請求項１９〜２１のいずれか一項、好ましくは請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２３】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ１Ｘ２ＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＵＡＣＧＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含み
（式中、Ｘ１は不在またはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在またはＵである）、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＡＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＵＡＣＧＣＵ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項１９〜２２のいずれか一項、好ましくは請求項２１または２２に記載の核酸分子。
【請求項２４】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ１Ｘ２ＳＳＢＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＢＶＳＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含み
（式中、Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在またはＧであり、Ｘ３は不在またはＣであり、Ｘ４は不在である）、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＵＡＣＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項１９〜２１のいずれか一項、好ましくは請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２５】
前記Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、配列番号５から配列番号２０および配列番号２２から配列番号２８のいずれか１つ、好ましくは、配列番号５から配列番号７、配列番号１６、配列番号２２および配列番号２８のいずれか１つ、より好ましくは、配列番号２２および配列番号２８のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１６〜２４のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２６】
前記Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号１０８）のヌクレオチド配列を含む（式中、ＸＡは不在またはＡである）、請求項１６に記載の核酸分子。
【請求項２７】
前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、５’  ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１０９）、５’  ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１０）、または５’  ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１１）、好ましくは５’  ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１１）のヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の核酸分子。
【請求項２８】
前記Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む、請求項２６〜２７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２９】
前記Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む、請求項２６〜２７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３０】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ  ３’（配列番号１３８）のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２のストレッチが、５’  ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ  ３’（配列番号１３９）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＲＫＳＢＵＧＳＶＧＲ  ３’（配列番号１４０）のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＹＣＮＲＣＡＳＳＭＹ  ３’（配列番号１４１）のヌクレオチド配列を含む、請求項２８〜２９のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３１】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＸＳＳＳＳＶ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＢＳＳＳＸＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み（式中、Ｘは不在またはＳである）、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＳＧＧＳＲ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＹＳＣＣＳ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項２８〜２９のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３２】
ａ）前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＧＣＣＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＣＧＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含み、または
ｂ）前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＣＧＵＧＣＧＣＵＵＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’（配列番号２２０）のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡＣＧ  ３’（配列番号２２１）のヌクレオチド配列を含み、または
ｃ）前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ  ３’（配列番号２２２）のヌクレオチド配列を含み、または
ｄ）前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項２８〜２９のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３３】
前記Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸分子が、配列番号９５から配列番号１０７、配列番号１１２から配列番号１３７、配列番号２２３、および配列番号２２４のいずれか１つ、好ましくは、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号２２３、および配列番号２２４のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２６〜３２のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項３４】
前記Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７４）のヌクレオチド配列を含む（式中、ＸＡは不在またはＡである）、請求項１６に記載の核酸分子。
【請求項３５】
前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、
５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７５）、または
５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７６）、または
５’  ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７７）
のヌクレオチド配列を含み、好ましくは、前記ヌクレオチドの中心ストレッチが、５’  ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列を含む、請求項３４に記載の核酸分子。
【請求項３６】
前記Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む、請求項３４〜３５のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３７】
前記Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む、請求項３４〜３５のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３８】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＢＮＢＮＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹであり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在である）、請求項３６〜３７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項３９】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＲＳＨＲＹＲ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＹＲＹＤＳＹ  ３’のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＧＣＵＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＧＣＡＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項３６〜３８のいずれか一項、好ましくは３８に記載の核酸分子。
【請求項４０】
前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  Ｘ２ＢＢＢＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＳＢＢＶＸ３  ３’のヌクレオチド配列を含み（式中、Ｘ２は不在またはＳであり、Ｘ３は不在またはＳである）、
好ましくは、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＣＵＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＧＣＡＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、
または、前記ヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、５’  ＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチドの第２の末端ストレッチが、５’  ＣＧＣＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む、請求項３６〜３８のいずれか一項、好ましくは３８に記載の核酸分子。
【請求項４１】
前記Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、配列番号６０から配列番号７３、配列番号７８から配列番号８２、配列番号８４から配列番号８７、配列番号８９から配列番号９４、および配列番号１４５のいずれか１つ、好ましくは、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６６、配列番号７８、配列番号８４、および配列番号１４６のいずれか１つ、より好ましくは、配列番号８４および配列番号１４６のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項４２】
前記Ｄ型のＳＤＦ−１結合核酸分子が、配列番号１４２から配列番号１４４のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１６に記載の核酸分子。
【請求項４３】
前記ＳＤＦ−１が、ヒトＳＤＦ−１であり、好ましくは、前記ヒトＳＤＦ−１が、ヒトＳＤＦ−１アルファ、またはヒトＳＤＦ−１ベータであり、より好ましくは、前記ヒトＳＤＦ−１が、ヒトＳＤＦ−１アルファである、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項４４】
前記核酸分子が、修飾を含み、前記修飾が、好ましくは高分子量の部分であり、かつ／または前記修飾が、好ましくは、動物またはヒトの身体、好ましくはヒトの身体における滞留時間に関する前記核酸分子の特徴を修飾することを可能にする、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項４５】
前記修飾が、ＨＥＳ部分、ＰＥＧ部分、生分解性修飾、およびそれらの組み合わせを含む群から選択される、請求項４４に記載の核酸分子。
【請求項４６】
前記修飾が、直鎖状または分岐状のＰＥＧからなるＰＥＧ部分であり、好ましくは、前記直鎖状または分岐状のＰＥＧの分子量が、約２０，０００〜１２０，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜８０，０００Ｄａ、最も好ましくは、約４０，０００Ｄａである、請求項４５に記載の核酸分子。
【請求項４７】
前記修飾が、ＨＥＳ部分であり、好ましくは、前記ＨＥＳ部分の分子量が、約１０，０００〜２００，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜１７０．０００Ｄａ、最も好ましくは、約１５０，０００Ｄａである、請求項４５に記載の核酸分子。
【請求項４８】
前記修飾が、リンカーを介して前記核酸分子に結合し、好ましくは、前記リンカーが、生体安定性リンカーまたは生分解性リンカーである、請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項４９】
前記修飾が、前記核酸分子の５’末端ヌクレオチド、および／または前記核酸分子の３’末端ヌクレオチド、および／または前記核酸分子の５’末端ヌクレオチドと前記核酸分子の３’末端ヌクレオチドとの間の前記核酸分子のヌクレオチドにおいて前記核酸分子に結合している、請求項４４〜４８のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項５０】
核酸分子のヌクレオチドまたは核酸分子を形成するヌクレオチドが、Ｌ−ヌクレオチドである、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項５１】
Ｌ−核酸分子である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項５２】
第１の薬学的活性剤として請求項１〜５１のいずれか一項に記載の前記核酸分子、および場合によりさらなる構成要素を含む医薬組成物であって、前記さらなる構成要素が、薬学的に許容される賦形剤、薬学的に許容される担体、およびさらなる薬学的活性剤を含む群から選択され、前記医薬組成物が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のためのものであり、前記疾患または障害が癌である医薬組成物。
【請求項５３】
前記補助治療が、対象を感受性化し、前記感受性化された対象が、前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法が、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記抗体が、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記アルキル化剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記代謝拮抗薬が、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記植物性テルペノイドが、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記癌が、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、前記血液癌が、白血病および骨髄腫の群から選択される、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
白血病が、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
骨髄腫が、多発性骨髄腫である、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
前記癌が、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、前記固形腫瘍が、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
１つまたはいくつかの投与単位の少なくとも１つの第１の薬学的活性剤を含む薬剤であって、前記第１の薬学的活性剤が、請求項１〜５１のいずれか一項に定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子であり、前記薬剤が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のためのものであり、前記疾患または障害が癌である薬剤。
【請求項６６】
前記補助治療が、対象を感受性化し、前記感受性化された対象が、前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる、請求項６５に記載の薬剤。
【請求項６７】
前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法が、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む、請求項６６に記載の薬剤。
【請求項６８】
前記薬剤が、さらなる薬学的活性剤、好ましくは１つまたはいくつかの投与単位のさらなる薬学的活性剤を含み、前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、およびフルオロウラシルを含む群から選択される、請求項６５〜６７のいずれか一項、好ましくは請求項６５に記載の薬剤。
【請求項６９】
前記薬剤が、さらなる薬学的活性剤、好ましくは１つまたはいくつかの投与単位の前記さらなる薬学的活性剤を含み、前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される、請求項６７に記載の薬剤。
【請求項７０】
前記抗体が、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される、請求項６８〜６９のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７１】
前記アルキル化剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される、請求項６８〜６９のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７２】
前記代謝拮抗薬が、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される、請求項６８〜６９のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７３】
前記植物性テルペノイドが、タキサンの群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される、請求項６８〜６９のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７４】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される、請求項６８〜６９のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７５】
前記癌が、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、前記血液癌が、白血病、および骨髄腫を含む群から選択される、請求項６５〜７４のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７６】
白血病が、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される、請求項７５に記載の薬剤。
【請求項７７】
骨髄腫が、多発性骨髄腫である、請求項７５に記載の薬剤。
【請求項７８】
前記癌が、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、前記固形腫瘍が、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される、請求項６５〜７４のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項７９】
疾患または障害の治療および／または予防のための薬剤の製造のための、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するための、請求項１〜５１のいずれか一項に定義されている核酸分子の使用であって、前記疾患または障害が癌である使用。
【請求項８０】
前記補助治療が、対象を感受性化し、前記感受性化された対象が、前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる、請求項７９に記載の使用。
【請求項８１】
前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法が、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む、請求項８０に記載の使用。
【請求項８２】
前記薬剤が、さらなる薬学的活性剤と組み合わせて用いられ、前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である、請求項７９〜８１のいずれか一項、好ましくは請求項７９に記載の使用。
【請求項８３】
前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である、請求項８１に記載の使用。
【請求項８４】
前記抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８５】
前記アルキル化剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８６】
前記代謝拮抗薬が、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８７】
前記植物性テルペノイドが、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンの群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８８】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８９】
前記癌が、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、前記血液癌が、白血病および骨髄腫を含む群から選択される、請求項８２〜８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９０】
白血病が、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される、請求項８９に記載の使用。
【請求項９１】
骨髄腫が、多発性骨髄腫である、請求項８９に記載の使用。
【請求項９２】
前記癌が、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、前記固形腫瘍が、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される、請求項７９〜８８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９３】
癌を患っている対象または癌を発症するリスクがある対象の治療のための方法であって、
ａ）薬学的有効量の、請求項１〜５１のいずれか一項に定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項９４】
前記方法が、ｂ）前記対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法および／または薬学的有効量のさらなる薬学的活性剤の前記対象への投与を行うステップであって、前記さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤であるステップを含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
薬学的有効量の、請求項１〜５１のいずれか一項に定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子が、補助治療または補助治療の一部として投与される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記補助治療が、対象を感受性化し、前記感受性化された対象が、前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記疾患または障害の治療および／または予防のための治療法が、ステップｂ）において行われる前記さらなる薬学的活性剤の投与および／または前記対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される、請求項９４〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項９９】
前記アルキル化剤が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される、請求項９４〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項１００】
前記代謝拮抗薬が、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される、請求項９４〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０１】
前記植物性テルペノイドが、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンの群から選択される、請求項９４〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０２】
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される、請求項９４〜９７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０３】
前記癌が、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、前記血液癌が、白血病および骨髄腫を含む群から選択される、請求項９３〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
白血病が、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
骨髄腫が、多発性骨髄腫である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記癌が、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、前記固形腫瘍が、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される、請求項９３〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＸＣケモカイン間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）と結合する核酸分子、癌の治療のための方法、および薬剤の製造におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
間質細胞由来因子−１（略語：ＳＤＦ−１；同義語、ＣＸＣＬ１２；ＰＢＳＦ［プレＢ細胞増殖刺激因子］；ＴＰＡＲ−１［ＴＰＡ抑制遺伝子１（ＴＰＡ  ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ  ｇｅｎｅ  １）］；ＳＣＹＢ１２；ＴＬＳＦ［胸腺リンパ腫細胞刺激因子］；ｈＩＲＨ［肝細胞腫におけるヒトインタークリン減少（ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｃｒｉｎｅ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｍａｓ）］）は、ＩＬ−８様ケモカインに特有のＥＬＲモチーフを含有しないが（Ｓａｌｃｅｄｏ、Ｗａｓｓｅｒｍａｎら、１９９９；Ｓａｌｃｅｄｏ  ａｎｄ  Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ、２００３）、Ｇタンパク質共役受容体ＣＸＣＲ４と結合し活性化させる血管新生ＣＸＣケモカインである。選択的スプライシングの結果、２型のＳＤＦ−１、ＳＤＦ−１α（６８アミノ酸、配列番号１）、およびＳＤＦ−１αと比較して５個の追加的アミノ酸をＣ末端に有するＳＤＦ−１β（配列番号２）が存在する（Ｓｈｉｒｏｚｕ、Ｎａｋａｎｏら、１９９５）。
【０００３】
異なる種に由来するＳＤＦ−１間のアミノ酸配列保存は注目に値する。ヒトＳＤＦ−１α（配列番号１）およびマウスＳＤＦ−１α（配列番号３）は、実際的に同一である。両者の間には、１８位におけるＶからＩへの単一の保存的変化しか存在しない（Ｓｈｉｒｏｚｕ、Ｎａｋａｎｏら、１９９５）。
【０００４】
ＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４は、白血球、成熟樹状細胞、内皮細胞、脳細胞、および巨核球において広範に発現するため、ＳＤＦ−１の活性は多面的である。このケモカインは、これまで同定された任意の他のケモカインと比べて、最も広範な生物学的機能を示す。ＳＤＦ−１の最も重要な機能的効果は次の通りである。
−  網膜の脈絡膜部分における血管新生部位への上皮細胞のホーミングおよび付着、
−  ＳＤＦ−１は、成体の骨髄における幹細胞および前駆細胞、例えば造血前駆（通常ＣＤ３４＋）細胞の維持に必要とされる、
−  ＳＤＦ−１は、プレＢ細胞の増殖を支持し、骨髄Ｂ細胞前駆細胞の成長を増大させ、プレＢ細胞およびプロＢ細胞の特異的遊走を誘導するが、成熟Ｂ細胞の有意な化学誘引物質として作用していない、
−  ＳＤＦ−１は、最も効果的なＴ細胞化学誘引物質の１種である、
−  ＳＤＦ−１およびその受容体ＣＸＣＲ４は、胚発生に不可欠である。
【０００５】
ＳＤＦ−１もしくはその受容体ＣＸＣＲ４の発現レベルの変化またはこれらの分子に対する応答の変化は、網膜症（Ｂｒｏｏｋｓ、Ｃａｂａｌｌｅｒｏら、２００４；Ｂｕｔｌｅｒ、Ｇｕｔｈｒｉｅら、２００５；Ｍｅｌｅｔｈ、Ａｇｒｏｎら、２００５）；乳房（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら、２００１；Ｃａｂｉｏｇｌｕ、Ｓａｈｉｎら、２００５）、卵巣（Ｓｃｏｔｔｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎら、２００２）、膵臓（Ｋｏｓｈｉｂａ、Ｈｏｓｏｔａｎｉら、２０００）、甲状腺（Ｈｗａｎｇ、Ｃｈｕｎｇら、２００３）および上咽頭（Ｗａｎｇ、Ｗｕら、２００５）の癌；神経膠腫（Ｚｈｏｕ、Ｌａｒｓｅｎら、２００２）；神経芽細胞腫（Ｇｅｍｉｎｄｅｒ、Ｓａｇｉ−Ａｓｓｉｆら、２００１）；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂｕｒｇｅｒ、Ｔｓｕｋａｄａら、２０００）；ＷＨＩＭ症候群（ＷＨＩＭは、疣贅、低ガンマグロブリン血症、感染症、ミエロカセキシス（Ｗａｒｔｓ，Ｈｙｐｏｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ｍｙｅｌｏｋａｔｈｅｘｉｓ）症候群の略語である）（Ｇｕｌｉｎｏ、Ｍｏｒａｔｔｏら、２００４；Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら、２００５ｂ；Ｋａｗａｉ、Ｃｈｏｉら、２００５）；免疫不全症候群（Ａｒｙａ、Ｇｉｎｓｂｅｒｇら、１９９９；Ｍａｒｅｃｈａｌ、Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓら、１９９９；Ｓｏｒｉａｎｏ、Ｍａｒｔｉｎｅｚら、２００２）；病的血管形成（Ｓａｌｖｕｃｃｉ、Ｙａｏら、２００２；Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、Ｋｕｓａｎｏら、２００３；Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ、Ａｖｒａｈａｍら、２００６）；炎症（Ｍｕｒｄｏｃｈ、２０００；Ｆｅｄｙｋ、Ｊｏｎｅｓら、２００１；Ｗａｎｇ、Ｇｕａｎら、２００１）；多発性硬化症（Ｋｒｕｍｂｈｏｌｚ、Ｔｈｅｉｌら、２００６）；関節リウマチ／変形性関節症（Ｂｕｃｋｌｅｙ、Ａｍｆｔら、２０００；Ｋａｎｂｅ、Ｔａｋａｇｉｓｈｉら、２００２；Ｇｒａｓｓｉ、Ｃｒｉｓｔｉｎｏら、２００４）等、多くのヒト疾患と関連すると考えられている。
【０００６】
腫瘍（固形および血液系の腫瘍症および悪性腫瘍を含む）は、単なる癌細胞の集団ではない。免疫細胞による腫瘍の浸潤は、癌に特徴的である。多くのヒト癌は、この浸潤の程度および表現型ならびに腫瘍増殖、生存、遊走、および血管新生に影響を与える複雑なケモカインネットワークを有する。大部分の固形腫瘍は、多くの非悪性間質細胞を含有する。実際のところ、間質細胞は癌細胞に数で勝ることもある。癌に存在する主要な間質細胞は、マクロファージ、リンパ球、内皮細胞、および線維芽細胞である。
【０００７】
異なる癌型由来の細胞は、異なるケモカイン受容体発現プロファイルを有するが、ＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４は通例、マウスおよびヒトの腫瘍細胞に存在する。上皮、間葉系、および造血系起源の少なくとも２３種類の異なるヒト癌由来の腫瘍細胞は、ＣＸＣＲ４を発現し（Ｂａｌｋｗｉｌｌ、２００４）、ＳＤＦ−１は、唯一の公知のＣＸＣＲ４リガンドである。これが構成的に発現されている骨髄および二次リンパ組織を除き、ＳＤＦ−１は、リンパ腫における原発性腫瘍部位（Ｃｏｒｃｉｏｎｅ、Ｏｔｔｏｎｅｌｌｏら、２０００）ならびに神経細胞およびアストロサイト系列両方の脳腫瘍に存在する。さらに、これは、卵巣癌（Ｓｃｏｔｔｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎら、２００２）および膵癌（Ｋｏｓｈｉｂａ、Ｈｏｓｏｔａｎｉら、２０００）ならびに乳癌（Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら、２００１）および甲状腺癌（Ｈｗａｎｇ、Ｃｈｕｎｇら、２００３）における転移部位、神経芽細胞腫ならびに血液系悪性腫瘍（Ｇｅｍｉｎｄｅｒ、Ｓａｇｉ−Ａｓｓｉｆら、２００１）に高レベルで存在する。
【０００８】
ＣＸＣＲ４に加えて、別のＳＤＦ−１受容体、ＲＤＣ１／ＣＸＣＲ７が同定された（Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら、２００５ａ、Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら、２００６）。前立腺癌細胞株によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験およびｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、ＣＸＣＲ７／ＲＤＣ１発現の変化が、生存上の利点に加えて接着性および浸潤性活性の増強に関与することを示唆する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験およびｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、どちらのＳＤＦ−１受容体も、即ち、ＣＸＣＲ４もＣＸＣＲ７も、多数の腫瘍、例えば、乳癌、神経膠芽腫、卵巣癌、神経芽細胞腫、肺癌、結腸直腸癌および前立腺癌における腫瘍増殖、転移可能性および（化学療法により誘導された）アポトーシスに対する抵抗性を促進することを示した（Ｂｕｒｎｓら、２００６；Ｌｉら、２００８；Ｓｃｏｔｔｏｎら、２００２；Ｙａｎｇら、２００８；Ｚａｇｚａｇら、２００８）。
【０００９】
よって、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７の発現は、いくつかの腫瘍の一般的特徴であると思われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の根底にある問題は、ＳＤＦ−１と特異的に相互作用する手段であって、癌の予防および／または治療に適切な手段を提供することである。
【００１１】
本発明の根底にある別の問題は、癌治療法を支援する手段を提供することであり、このような癌治療法は通常、化学療法および／または放射線照射を利用する。
【００１２】
本発明の根底にあるさらなる問題は、癌の治療における補助治療としての使用に適切な手段を提供することである。
【００１３】
本発明の根底にあるまたさらなる問題は、癌を患っている患者を化学感受性化し、かつ／または癌を形成するまたは癌の一部である細胞を化学感受性化することができる手段を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の根底にあるこれらおよび他の問題は、添付した独立請求項の内容によって解決される。好ましい実施形態は、従属請求項から得ることができる。
【００１５】
より具体的には、本発明の根底にある問題は、第１の態様の第１の実施形態でもある第１の態様において、ＳＤＦ−１と結合可能な、好ましくはＳＤＦ−１を阻害可能な核酸分子であって、核酸分子が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法に補助治療としての使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のための薬剤として使用するためのものであり、疾患または障害が癌である核酸分子によって解決される。
【００１６】
第１の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２の実施形態において、癌は、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、血液癌は、白血病、および骨髄腫を含む群から選択される。
【００１７】
第１の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病、および急性骨髄性白血病を含む群から選択される。
【００１８】
第１の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４の実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。
【００１９】
第１の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第５の実施形態において、癌は、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、固形腫瘍は、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される。
【００２０】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第６の実施形態において、補助治療は、対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる。
【００２１】
第１の態様の第６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第７の実施形態において、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法は、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む。
【００２２】
第１の態様の第７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第８の実施形態において、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される。
【００２３】
第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第９の実施形態において、抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される。
【００２４】
第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１０の実施形態において、アルキル化剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される。
【００２５】
第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１１の実施形態において、代謝拮抗薬は、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される。
【００２６】
第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１２の実施形態において、植物性テルペノイドは、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される。
【００２７】
第１の態様の第８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１３の実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される。
【００２８】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、および第１３の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１４の実施形態において、核酸分子は、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体との間の相互作用を遮断可能であり、ＳＤＦ−１受容体は、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７を含む群から選択される。
【００２９】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、および第１４の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１５の実施形態において、疾患または障害の治療または予防は、ＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体との間の相互作用を阻害する核酸分子によってもたらされる。
【００３０】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、および第１５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１６の実施形態において、核酸分子は、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子、およびＤ型のＳＤＦ−１結合核酸分子を含む群から選択される。
【００３１】
第１の態様の第１６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１７の実施形態において、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、ヌクレオチドの中心ストレッチは、次のヌクレオチド配列：
５’  ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＷＧＧＣＵＧＷＵＣＣＵＡＧＵＹＡＧＧ  ３’（配列番号５２）
を含む。
【００３２】
第１の態様の第１７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１８の実施形態において、ヌクレオチドの中心ストレッチは、次のヌクレオチド配列：
５’  ＧＵＧＵＧＡＵＣＵＡＧＡＵＧＵＡＤＵＧＧＣＵＧＡＵＣＣＵＡＧＵＣＡＧＧ  ３’（配列番号５３）
を含む。
【００３３】
第１の態様の第１７および第１８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第１９の実施形態において、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む。
【００３４】
第１の態様の第１７および第１８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２０の実施形態において、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む。
【００３５】
第１の態様の第１９および第２０の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２１の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＢＶＢＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在もしくはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在もしくはＵであり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＧであり、Ｘ３は不在もしくはＣであり、Ｘ４は不在である）。
【００３６】
第１の態様の第１９、第２０および第２１、好ましくは第２１の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２２の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ１Ｘ２ＣＲＷＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＫＲＹＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在またはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在またはＵである）。
【００３７】
第１の態様の第１９、第２０、第２１、第２２、好ましくは第２１または第２２の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２３の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ１Ｘ２ＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＵＡＣＧＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含み
（式中、Ｘ１は不在またはＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＣであり、Ｘ４は不在またはＵである）、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＡＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＵＡＣＧＣＵ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００３８】
第１の態様の第１９、第２０、および第２１、好ましくは第２１の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２４の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ１Ｘ２ＳＳＢＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＢＶＳＳＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含み
（式中、Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在またはＧであり、Ｘ３は不在またはＣであり、Ｘ４は不在である）、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＵＡＣＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００３９】
第１の態様の第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２５の実施形態において、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、配列番号５から配列番号２０および配列番号２２から配列番号２８のいずれか１つ、好ましくは、配列番号５から配列番号７、配列番号１６、配列番号２２、および配列番号２８のいずれか１つ、より好ましくは、配列番号２２および配列番号２８のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
【００４０】
第１の態様の第１６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２６の実施形態において、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、ヌクレオチドの中心ストレッチは、ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＸＡＡＧＵＣＧＧ（配列番号１０８）のヌクレオチド配列を含む（式中、ＸＡは不在またはＡである）。
【００４１】
第１の態様の第２６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２７の実施形態において、ヌクレオチドの中心ストレッチは、５’  ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１０９）、５’  ＧＧＵＹＡＧＧＧＣＵＨＲＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１０）、または５’  ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１１）、好ましくは５’  ＧＧＵＵＡＧＧＧＣＵＨＧＡＡＧＵＣＧＧ  ３’（配列番号１１１）のヌクレオチド配列を含む。
【００４２】
第１の態様の第２６および第２７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２８の実施形態において、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む。
【００４３】
第１の態様の第２６および第２７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第２９の実施形態において、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む。
【００４４】
第１の態様の第２８および第２９の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３０の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ  ３’（配列番号１３８）のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２のストレッチは、５’  ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ  ３’（配列番号１３９）のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＲＫＳＢＵＧＳＶＧＲ  ３’（配列番号１４０）のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＹＣＮＲＣＡＳＳＭＹ  ３’（配列番号１４１）のヌクレオチド配列を含む。
【００４５】
第１の態様の第２８および第２９の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３１の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＸＳＳＳＳＶ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＢＳＳＳＸＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み（式中、Ｘｓは不在またはＳである）、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＳＧＧＳＲ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＹＳＣＣＳ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４６】
第１の態様の第２８および第２９の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３２の実施形態において、
ａ）ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＧＣＣＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＣＧＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含み、または
ｂ）ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＣＧＵＧＣＧＣＵＵＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’（配列番号２２０）のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡＣＧ  ３’（配列番号２２１）のヌクレオチド配列を含み、または
ｃ）ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ  ３’（配列番号２２２）のヌクレオチド配列を含み、または
ｄ）ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＧＡＧＡＵＡＧＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４７】
第１の態様の第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、および第３２の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３３の実施形態において、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸分子は、配列番号９５から配列番号１０７、配列番号１１２から配列番号１３７、配列番号２２３、および配列番号２２４のいずれか１つ、好ましくは、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号２２３、および配列番号２２４のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
【００４８】
第１の態様の第１６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３４の実施形態において、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、ヌクレオチドの中心ストレッチを含み、ヌクレオチドの中心ストレッチは、５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＸＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ３’（配列番号７４）のヌクレオチド配列を含む（式中、ＸＡは不在またはＡである）。
【００４９】
第１の態様の第３４の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３５の実施形態において、ヌクレオチドの中心ストレッチは、
５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７５）、または
５’  ＡＡＡＧＹＲＡＣＡＨＧＵＭＡＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７６）、または
５’  ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７７）
のヌクレオチド配列を含み、好ましくは、ヌクレオチドの中心ストレッチは、５’  ＡＡＡＧＹＡＡＣＡＨＧＵＣＡＡＵＧＡＡＡＧＧＵＡＲＣ  ３’（配列番号７７）のヌクレオチド配列を含む。
【００５０】
第１の態様の第３４および第３５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３６の実施形態において、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む。
【００５１】
第１の態様の第３４および第３５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３７の実施形態において、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、５’→３’の方向に、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチを含む。
【００５２】
第１の態様の第３６および第３７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３８の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＢＮＢＮＸ３Ｘ４  ３’のヌクレオチド配列を含む
（式中、Ｘ１は不在もしくはＲであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＳであり、Ｘ４は不在もしくはＹであり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在もしくはＳであり、Ｘ３は不在もしくはＳであり、Ｘ４は不在である）。
【００５３】
第１の態様の第３６、第３７、および第３８、好ましくは第３８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第３９の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＲＳＨＲＹＲ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＹＲＹＤＳＹ  ３’のヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＧＣＵＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＧＣＡＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００５４】
第１の態様の第３６、第３７、および第３８、好ましくは第３８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４０の実施形態において、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  Ｘ２ＢＢＢＳ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＳＢＢＶＸ３  ３’のヌクレオチド配列を含み（式中、Ｘ２は不在またはＳであり、Ｘ３は不在またはＳである）、
好ましくは、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＣＵＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＧＣＡＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、
または、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチは、５’  ＧＣＧＵＧ  ３’のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、５’  ＣＧＣＧＣ  ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００５５】
第１の態様の第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、および第４０の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４１の実施形態において、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、配列番号６０から配列番号７３、配列番号７８から配列番号８２、配列番号８４から配列番号８７、配列番号８９から配列番号９４、および配列番号１４５のいずれか１つ、好ましくは、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６６、配列番号７８、配列番号８４、および配列番号１４６のいずれか１つ、より好ましくは、配列番号８４および配列番号１４６のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
【００５６】
第１の態様の第１６の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４２の実施形態において、Ｄ型のＳＤＦ−１結合核酸分子は、配列番号１４２から配列番号１４４のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
【００５７】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、および第４２の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４３の実施形態において、ＳＤＦ−１は、ヒトＳＤＦ−１であり、好ましくは、ヒトＳＤＦ−１は、ヒトＳＤＦ−１アルファまたはヒトＳＤＦ−１ベータであり、より好ましくは、ヒトＳＤＦ−１は、ヒトＳＤＦ−１アルファである。
【００５８】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、および第４３の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４４の実施形態において、核酸分子は、修飾を含み、修飾は、好ましくは高分子量の部分であり、かつ／または修飾は、好ましくは、動物またはヒトの身体、好ましくはヒトの身体における滞留時間に関する核酸分子の特徴を修飾することを可能にする。
【００５９】
第１の態様の第４４の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４５の実施形態において、修飾は、ＨＥＳ部分、ＰＥＧ部分、生分解性修飾、およびそれらの組み合わせを含む群から選択される。
【００６０】
第１の態様の第４５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４６の実施形態において、修飾は、直鎖状または分岐状のＰＥＧからなるＰＥＧ部分であり、好ましくは、直鎖状または分岐状のＰＥＧの分子量は、約２０，０００〜１２０，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜８０，０００Ｄａ、最も好ましくは、約４０，０００Ｄａである。
【００６１】
第１の態様の第４５の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４７の実施形態において、修飾は、ＨＥＳ部分であり、好ましくは、ＨＥＳ部分の分子量は、約１０，０００〜２００，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜１７０．０００Ｄａ、最も好ましくは、約１５０，０００Ｄａである。
【００６２】
第１の態様の第４４、第４５、第４６、および第４７の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４８の実施形態において、修飾は、リンカーを介して核酸分子に結合し、好ましくは、リンカーは、生体安定性または生分解性リンカーである。
【００６３】
第１の態様の第４４、第４５、第４６、第４７、および第４８の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第４９の実施形態において、修飾は、核酸分子の５’末端ヌクレオチドおよび／または核酸分子の３’末端ヌクレオチド、および／または核酸分子の５’末端ヌクレオチドと核酸分子の３’末端ヌクレオチドとの間の核酸分子のヌクレオチドにおいて核酸分子に結合している。
【００６４】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、および第４９の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第５０の実施形態において、核酸分子のヌクレオチドまたは核酸分子を形成するヌクレオチドは、Ｌ−ヌクレオチドである。
【００６５】
第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、および第５０の実施形態の実施形態でもある第１の態様の第５１の実施形態において、核酸分子は、Ｌ−核酸分子である。
【００６６】
本発明の根底にある問題は、第２の態様の第１の実施形態でもある第２の態様において、第１の薬学的活性剤として、第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、第５０、および第５１の実施形態のいずれか１つに記載の核酸分子および場合によりさらなる構成要素を含む医薬組成物であって、さらなる構成要素が、薬学的に許容される賦形剤、薬学的に許容される担体、およびさらなる薬学的活性剤を含む群から選択され、医薬組成物が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法に使用するため、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のためのものであり、疾患または障害が癌である医薬組成物によって解決される。
【００６７】
第２の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第２の実施形態において、補助治療は、対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる。
【００６８】
第２の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第３の実施形態において、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法は、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む。
【００６９】
第２の態様の第１、第２および第３の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第４の実施形態において、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である。
【００７０】
第２の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第５の実施形態において、抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される。
【００７１】
第２の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第６の実施形態において、アルキル化剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される。
【００７２】
第２の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第７の実施形態において、代謝拮抗薬は、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される。
【００７３】
第２の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第８の実施形態において、植物性テルペノイドは、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される。
【００７４】
第２の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第９の実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される。
【００７５】
第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、および第９の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第１０の実施形態において、癌は、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、血液癌は、白血病および骨髄腫の群から選択される。
【００７６】
第２の態様の第１０の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第１１の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病、および急性骨髄性白血病を含む群から選択される。
【００７７】
第２の態様の第１０の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第１２の実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。
【００７８】
第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、および第９の実施形態の実施形態でもある第２の態様の第１３の実施形態において、癌は、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、固形腫瘍は、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される。
【００７９】
本発明の根底にある問題は、第３の態様の第１の実施形態でもある第３の態様において、１つまたはいくつかの投与単位の少なくとも１つの第１の薬学的活性剤を含む薬剤であって、第１の薬学的活性剤が、第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、第５０、および第５１の実施形態のいずれか１つに定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子であり、薬剤が、疾患または障害の治療および／または予防のための方法における使用のため、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療としての使用のため、あるいは疾患または障害の治療および／または予防のためのものであり、疾患または障害が癌である薬剤によって解決される。
【００８０】
第３の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第２の実施形態において、補助治療は、対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる。
【００８１】
第３の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第３の実施形態において、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法は、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む。
【００８２】
第３の態様の第１、第２および第３、好ましくは第１の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第４の実施形態において、薬剤は、さらなる薬学的活性剤、好ましくは１つまたはいくつかの投与単位のさらなる薬学的活性剤を含み、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、およびフルオロウラシルを含む群から選択される。
【００８３】
第３の態様の第３の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第５の実施形態において、薬剤は、さらなる薬学的活性剤、好ましくは１つまたはいくつかの投与単位のさらなる薬学的活性剤を含み、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される。
【００８４】
第３の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第６の実施形態において、抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される。
【００８５】
第３の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第７の実施形態において、アルキル化剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される。
【００８６】
第３の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第８の実施形態において、代謝拮抗薬は、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される。
【００８７】
第３の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第９の実施形態において、植物性テルペノイドは、タキサンの群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンを含む群から選択される。
【００８８】
第３の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第１０の実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される。
【００８９】
第３の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、および第１０の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第１１の実施形態において、癌は、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、血液癌は、白血病および骨髄腫を含む群から選択される。
【００９０】
第３の態様の第１１の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第１２の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される。
【００９１】
第３の態様の第１１の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第１３の実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。
【００９２】
第３の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、および第１０の実施形態の実施形態でもある第３の態様の第１４の実施形態において、癌は、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、固形腫瘍は、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される。
【００９３】
本発明の根底にある問題は、第４の態様の第１の実施形態でもある第４の態様において、疾患または障害の治療および／または予防のための薬剤の製造のための、あるいは疾患もしくは障害を患っている対象または疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象の治療のための方法における補助治療として使用するための、第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、第５０、および第５１の実施形態のいずれか１つに定義されている核酸分子の使用であって、疾患または障害が癌である使用によって解決される。
【００９４】
第４の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第２の実施形態において、補助治療は、対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる。
【００９５】
第４の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第３の実施形態において、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法は、さらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む。
【００９６】
第４の態様の第１、第２および第３、好ましくは第１の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第４の実施形態において、薬剤は、さらなる薬学的活性剤と組み合わせて用いられ、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である。
【００９７】
第４の態様の第３の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第５の実施形態において、さらなる薬学的活性剤は、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤である。
【００９８】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第６の実施形態において、抗体は、リツキシマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される。
【００９９】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第７の実施形態において、アルキル化剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される。
【０１００】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第８の実施形態において、代謝拮抗薬は、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される。
【０１０１】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第９の実施形態において、植物性テルペノイドは、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンの群から選択される。
【０１０２】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第１０の実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される。
【０１０３】
第４の態様の第４および第５の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第１１の実施形態において、癌は、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、血液癌は、白血病および骨髄腫を含む群から選択される。
【０１０４】
第４の態様の第１１の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第１２の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される。
【０１０５】
第４の態様の第１１の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第１３の実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。
【０１０６】
第４の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、および第１０の実施形態の実施形態でもある第４の態様の第１４の実施形態において、癌は、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、固形腫瘍は、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される。
【０１０７】
本発明の根底にある問題は、第５の態様の第１の実施形態でもある第５の態様において、癌を患っている対象または発症リスクがある対象の治療のための方法であって、
ａ）薬学的有効量の、第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、第５０、および第５１の実施形態のいずれか１つに定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子を対象に投与するステップを含む方法によって解決される。
【０１０８】
第５の態様の第１の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第２の実施形態において、方法は、
ｂ）対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法および／または薬学的有効量のさらなる薬学的活性剤の対象への投与を行うステップであって、さらなる薬学的活性剤が、抗体、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物性アルカロイド、好ましくはビンクリスチン、植物性テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシル、およびプレドニゾンを含む群から選択される薬学的活性剤であるステップを含む。
【０１０９】
第５の態様の第２の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第３の実施形態において、薬学的有効量の、第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３、第３４、第３５、第３６、第３７、第３８、第３９、第４０、第４１、第４２、第４３、第４４、第４５、第４６、第４７、第４８、第４９、第５０、および第５１の実施形態のいずれか１つに定義されているＳＤＦ−１と結合可能な核酸分子は、補助治療または補助治療の一部として投与される。
【０１１０】
第５の態様の第３の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第４の実施形態において、補助治療は、対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなる。
【０１１１】
第５の態様の第４の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第５の実施形態において、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法は、ステップｂ）において行われるさらなる薬学的活性剤の投与および／または対象の放射線照射および／または手術および／または細胞療法を含む。
【０１１２】
第５の態様の第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第６の実施形態において、抗体は、リツキシマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびアレムツズマブを含む群から選択される。
【０１１３】
第５の態様の第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第７の実施形態において、アルキル化剤は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、テモゾロミド、およびメルファランを含む群から選択される。
【０１１４】
第５の態様の第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第８の実施形態において、代謝拮抗薬は、プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビンを含む群から選択される。
【０１１５】
第５の態様の第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第９の実施形態において、植物性テルペノイドは、タキサンを含む群から選択され、より好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、およびエポチロンの群から選択される。
【０１１６】
第５の態様の第２、第３、第４、および第５の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第１０の実施形態において、トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、およびミトキサントロンを含む群から選択される。
【０１１７】
第５の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、および第１０の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第１１の実施形態において、癌は、血液癌の群から選択される癌であり、好ましくは、血液癌は、白血病、および骨髄腫を含む群から選択される。
【０１１８】
第５の態様の第１１の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第１２の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病を含む群から選択される。
【０１１９】
第５の態様の第１１および第１２の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第１３の実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。
【０１２０】
第５の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、および第１０の実施形態の実施形態でもある第５の態様の第１４の実施形態において、癌は、固形腫瘍の群から選択される癌であり、好ましくは、固形腫瘍は、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、腎癌、卵巣癌、および肺癌を含む群から選択される。
【０１２１】
どんな理論にも拘泥するものではないが、本発明者らは、本発明による核酸分子が、ＳＤＦ−１とそのＳＤＦ−１受容体との結合を阻害し、よって、癌の治療のために直接的または間接的に用いられることを見出した。さらに、本発明者らは、本発明による核酸分子が、ＳＤＦ−１と、ＳＤＦ−１受容体であるＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７それぞれとの相互作用の遮断に適すことを見出した。その限りにおいて、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子は、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７それぞれのアンタゴニストとして考慮することもできる。
【０１２２】
本発明による核酸分子またはこれを含む組成物、好ましくは医薬組成物を用いることによって治療または予防され得る様々な疾患、状態、および障害に関して、このような疾患、状態、および障害が、特に本願の導入部において記載および説明されている疾患、状態および障害等、本明細書に記載されている疾患、状態、および障害であることを認識する必要がある。その限りにおいて、個々の文章は、前記疾患、状態、および障害のそれぞれ予防および治療に対する核酸分子の適合性を教示する本開示の不可欠な部分を構成する。
【０１２３】
本明細書において、ＳＤＦ−１という用語は、これに限定されないが哺乳動物ＳＤＦ−１を含む任意のＳＤＦ−１を指す。好ましくは、哺乳動物ＳＤＦ−１は、マウスＳＤＦ−１、ラットＳＤＦ−１、ウサギＳＤＦ−１、ハムスターＳＤＦ−１、サルＳＤＦ−１、およびヒトＳＤＦ−１を含む群から選択される。より好ましくは、ＳＤＦ−１は、ＳＤＦ−１α（配列番号１）および／またはヒトＳＤＦ−１β（配列番号２）とも称されるヒトＳＤＦ−１、最も好ましくは、ＳＤＦ−１α（配列番号１）とも称されるヒトＳＤＦ−１である。
【０１２４】
ＳＤＦ−１は、２種の異なる受容体、受容体ＣＸＣＲ４およびＲＤＣ１／ＣＸＣＲ７を介して作用する（Ｂａｌａｂａｎｉａｎ、Ｌａｇａｎｅら、２００５ａ、Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら、２００６）（本願の導入部を参照）。本明細書に記載されている通り、いくつかの癌型に対しＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７の発現上昇が示された。
【０１２５】
ＳＤＦ−１は、２種の異なる受容体を介して作用するため、２種のＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７のうち一方に特異的な化合物によるＳＤＦ−１に関連する疾患または障害の治療は、
ａ）細胞、好ましくは癌細胞において発現した２種の異なるＳＤＦ−１受容体に起因して、有効性が低くなる筈であり、
ｂ）細胞において発現した個々のＳＤＦ−１受容体に起因して、特徴的な細胞集団、好ましくは、特徴的な癌細胞集団に限定される。
【０１２６】
癌は、細胞が、制御されない増殖、浸潤、そして多くの場合、転移（癌細胞が身体の他の部位、局所性リンパ節または脳、骨、肝臓、もしくは他の臓器等の遠位身体部位へと拡散する）を示す、疾患の大規模な不均一群である悪性新生物についての用語である。癌のこれら３つの悪性的特性は、悪性腫瘍を良性腫瘍から区別し、本明細書において、癌という用語は、本明細書において腫瘍とも称される悪性腫瘍も包含するものとする。悪性腫瘍は、その起源に基づく２種のカテゴリー、血液腫瘍および固形腫瘍に分類される。血液腫瘍は、血液、骨髄、およびリンパ節に発症する癌型である。固形腫瘍は、血液、骨髄、またはリンパ系細胞以外の体組織細胞の異常増殖によって形成される。
【０１２７】
癌の好ましい形態は次のものである：
副腎皮質癌
カポジ肉腫およびリンパ腫等、ＡＩＤＳ関連癌
肛門癌
虫垂癌
非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍
基底細胞癌
胆管癌、肝外
膀胱癌
骨癌
骨肉腫
悪性線維性組織球腫
脳幹神経膠腫
星状細胞腫、脳脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、小児、中枢神経系非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胚性腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣芽細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄上皮腫、中等度分化の松果体実質腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫等、脳腫瘍
乳癌
気管支腫瘍
カルチノイド腫瘍
原発不明癌
非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍およびリンパ腫等、中枢神経系の癌
子宮頸癌
小児癌
脊索腫
慢性骨髄増殖性障害
結腸癌
結腸直腸癌
頭蓋咽頭腫
皮膚Ｔ細胞リンパ腫
胚性腫瘍
子宮内膜癌
上衣芽細胞腫
上衣腫
食道癌
感覚神経芽細胞腫
腫瘍のユーイング肉腫ファミリー
頭蓋外生殖細胞腫瘍
性腺外生殖細胞腫瘍
肝外胆管癌
眼球内黒色腫および網膜芽細胞腫等の眼癌
骨の線維性組織球腫
骨肉腫
胆嚢癌
胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ（Ｓｔｏｍａｃｈ）  Ｃａｎｃｅｒ）
胃腸カルチノイド腫瘍
胃腸間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）
生殖細胞腫瘍（頭蓋外、性腺外または卵巣）
妊娠性絨毛性腫瘍
神経膠腫
ヘアリー細胞白血病
頭頸部癌
心臓癌（Ｈｅａｒｔ  Ｃａｎｃｅｒ）
肝細胞（肝臓）癌
組織球増殖症
下咽頭癌
眼球内黒色腫
膵島細胞腫瘍（膵内分泌部）
カポジ肉腫
腎癌
ランゲルハンス細胞組織球増殖症
喉頭癌
急性リンパ芽球性白血病（略語、ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（略語、ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（略語、ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（略語、ＣＭＬ）およびヘアリー細胞白血病等の白血病
口唇および口腔癌
肝臓癌（原発性）
非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）
肺癌
ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキット、菌状息肉腫およびセザリー症候群、ホジキン、非ホジキンおよび原発性中枢神経系（略語、ＣＮＳ）の白血病等、リンパ腫
マクログロブリン血症
骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫
髄芽腫
髄上皮腫
黒色腫
メルケル細胞癌
中皮腫
原発不明の転移性扁平上皮頸部癌
ＮＵＴ遺伝子関連正中管癌（Ｍｉｄｌｉｎｅ  Ｔｒａｃｔ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）
口腔癌（Ｍｏｕｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ）
多発性内分泌腫瘍症候群
多発性骨髄腫
菌状息肉腫
骨髄異形成症候群
骨髄異形成／骨髄増殖性新生物
骨髄増殖性障害
鼻腔および副鼻腔癌
鼻咽頭癌
神経芽細胞腫
非小細胞肺癌
口腔癌（Ｏｒａｌ  Ｃａｎｃｅｒ）
口腔癌（Ｏｒａｌ  Ｃａｖｉｔｙ  Ｃａｎｃｅｒ）
中咽頭癌
骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫
卵巣癌
膵癌
乳頭腫
傍神経節腫
副鼻腔および鼻腔癌
副甲状腺癌
陰茎癌
咽頭癌
褐色細胞腫
中等度分化の松果体実質腫瘍
松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍
下垂体腫瘍
形質細胞新生物／多発性骨髄腫
胸膜肺芽腫、小児
原発性中枢神経系（略語、ＣＮＳ）リンパ腫
前立腺癌
直腸癌
腎細胞（腎）癌
腎盂および尿管、移行細胞癌
網膜芽細胞腫
横紋筋肉腫
唾液腺癌
腫瘍のユーイング肉腫ファミリー、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫等の肉腫
黒色腫、メルケル細胞癌および非黒色腫等の皮膚癌
小細胞肺癌
小腸癌
軟部組織肉腫
扁平上皮細胞癌
扁平上皮頸部癌胃癌（Ｓｑｕａｍｏｕｓ  Ｎｅｃｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔｏｍａｃｈ（Ｇａｓｔｒｉｃ）  Ｃａｎｃｅｒ）
テント上原始神経外胚葉性腫瘍
Ｔ細胞リンパ腫
精巣癌
咽頭癌（Ｔｈｒｏａｔ  Ｃａｎｃｅｒ）
胸腺腫および胸腺癌
甲状腺癌
腎盂および尿管の移行細胞癌
絨毛性腫瘍、妊娠性
尿管および腎盂、移行細胞癌
尿道癌
子宮癌、子宮内膜
子宮肉腫
腟癌
外陰部癌
ワルデンシュトレームマクログロブリン血症
ウィルムス腫瘍
【０１２８】
ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸は、癌幹細胞等の幹細胞動員、脈管形成、腫瘍増殖、および転移に関与することが示された。ＳＤＦ−１受容体であるＣＸＣＲ４は、ＣＸＣＲ７と同様に、ｉｎ  ｖｉｖｏで、種々の癌および血液悪性腫瘍において発現する（Ｍａｋｓｙｍ、Ｔａｒｎｏｗｓｋｉら、２００９；Ｗａｎｇ、Ｓｈｉｏｓａｗａら、２００８；Ｍｉａｏ、Ｌｕｃｋｅｒら、２００７）。腫瘍細胞の増殖および浸潤シグナルは、特に細胞がＳＤＦ−１の受容体を発現する場合、ＳＤＦ−１である（Ｂａｔｃｈｅｌｏｒら、２００７；Ｚｈｕら、２００９；Ｘｕら、２００９；Ｋｏｚｉｎら、２０１０）。
【０１２９】
ＣＸＣＲ４とＳＤＦ−１はともに、低酸素によって誘導される（Ｃｅｒａｄｉｎｉら、２００４）。これらはＶＥＧＦと共に、血管新生／血管原性経路を引き起こし維持する強力な相乗軸を表す（Ｋｒｙｃｚｅｋら、２００５）。脈管形成における役割は、ＳＤＦ−１が、循環からＣＸＣＲ４発現内皮前駆細胞を誘引するという証拠によって支持される（Ｓｅｎｇｕｐｔａら、２００５）。ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４媒介性の、血管新生を支持する骨髄由来細胞の動員も、放射線療法後の神経膠芽腫再発の原因となり得る（Ｋｉｏｉら、２０１０）。Ｋｉｏｉらによって立証された通り、頭蓋内多形神経膠芽腫（略語、ＧＢＭ）マウス異種移植モデルにおいて、高線量の放射線照射によるＧＢＭ患者の治療は、放射線照射が骨髄由来細胞（略語、ＢＭＤＣ）の動員を誘導するため、有効性が低い。ＣＸＣＲ４アンタゴニストＡＭＤ３１００によるＳＤＦ−１とその受容体ＣＸＣＲ４との相互作用の遮断は、放射線照射した腫瘍におけるＢＭＤＣの流入を抑制した（Ｋｉｏｉら、２０１０）。２０１０年にＴｓｅｎｇらは、ヒトＧＢＭを精密に模倣するモデルであるＥＮＵ誘導性神経膠芽腫ラットモデルを用いて、ＣＸＣＲ４に加えてＣＸＣＲ７も放射線照射誘導性ＢＭＤＣ動員に関与するというデータを示した。この研究において、ＣＸＣＲ７アンタゴニストＣＣＸ２２０６は、放射線照射した腫瘍におけるＢＭＤＣの流入を抑制した（Ｔｓｅｎｇら、２０１０）。これを踏まえ、また、本発明による核酸分子は、ＳＤＦ−１とＣＸＣＲ４およびＳＤＦ−１とＣＸＣＲ７の両方の相互作用を遮断することができることから、放射線照射後の生存における効果は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＣＸＣＲ７アンタゴニストのうち１種類単独の使用に見られる効果よりも良好であることが予想される。
【０１３０】
さらに、ＳＤＦ−１はＶＥＧＦの分泌を誘導し、一方、ＶＥＧＦは、ＣＸＣＲ４の発現（Ｓａｌｃｅｄｏら、１９９９）および血管新生シグナルを増加させる。したがって、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸の阻害は、単独療法により、あるいは特にＶＥＧＦ阻害剤等の他の抗血管形成剤（ａｎｔｉｖａｓｃｕｌａｒ  ａｇｅｎｔ）と組み合わせて血管新生／脈管形成を阻害することにより腫瘍増殖を低下または抑制し得る。
【０１３１】
さらに、ＣＸＣＲ４発現癌細胞のＳＤＦ−１−発現臓器への「ホーミング」は、転移性細胞を肝臓、骨髄、肺、およびリンパ節へと優先的に導くことから（Ａｌｓａｙｅｄら、２００７；Ｂｕｒｇｅｒ＆Ｐｅｌｅｄ、２００９）、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸が転移に関与することが示唆される。
【０１３２】
したがって、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子等の単一の化合物によるＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸およびＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７軸の阻害は、単独療法として、またはこれらに限定されないが薬物療法、細胞療法、放射線照射、および手術等、他の治療と組み合わせた癌および／もしくは腫瘍、特に広範囲の血液系および固形腫瘍両方の治療において有効であるはずである。さらに、２種のＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７のうち一方と結合して阻害する化合物と比較すると、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子等の単一の化合物によるＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸およびＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７軸の阻害は、単独療法として、またはこれらに限定されないが薬物療法、細胞療法、放射線照射および手術等、他の治療と組み合わせた癌および／もしくは腫瘍、特に広範囲の血液系および固形腫瘍両方の治療における有効性が高くなるはずである。
【０１３３】
薬物療法が、薬物、好ましくは薬学的活性剤、より好ましくは本明細書に定義されている薬学的活性剤による疾患または障害の治療および／または予防を含むことは、本発明の範囲内である。
【０１３４】
好ましくは、本明細書において、細胞療法とも称される細胞治療法において、ヒツジまたはウシ等の動物の臓器、胚または胎仔に由来する処理された組織は、疾患もしくは障害を患っている対象またはそれを発症するリスクがある対象に注射され、好ましくは、疾患または障害は癌であり、細胞治療法は、癌治療の一形態である。
【０１３５】
理論的には、非血液癌は、手術により完全に取り除けば治癒することができる。手術前に癌が身体の他の部位に転移した場合、完全な外科的切除は通常不可能である。癌の外科手技または手術の例として、乳癌のための乳房切除術、前立腺癌のための前立腺切除術および非小細胞肺癌のための肺癌手術が挙げられる。手術の目標は、腫瘍のみの除去であっても、あるいは臓器全体の除去であってもよい。多くの場合、手術は、化学療法および放射線照射等、他の癌治療または治療法と組み合わされる。癌手術は、１つまたはいくつかの目標の達成に用いることができる。このような目標として、癌予防、診断、ステージ分類、初期治療、腫瘍減量（ｄｅｂｕｌｋｉｎｇ）、および症状または副作用の軽減を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１３６】
放射線療法（Ｘ線療法または放射線照射とも言う）は、癌細胞を死滅させるための電離放射線の使用のことである。放射線療法は、ほぼ全種類の固形腫瘍を治療するための医術において用いられる。放射線照射は、白血病およびリンパ腫の治療にも用いられる。放射線療法は、治療下の部位における細胞の遺伝物質を損傷し、これらの細胞の成長および分裂を継続不能にすることにより、細胞に傷害を与えるまたは破壊する。放射線療法の効果は、治療下の領域に局在化および限局化される。各部位への放射線照射線量は、各癌型の放射線感受性や、放射線照射により損傷され得る組織および臓器が近傍に存在するか等の多数の要因に依存する。放射線療法の目標は、近傍の健常組織に与える害を限定しつつ可能な限り多くの癌細胞を損傷することである。
【０１３７】
さらに、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸および／またはＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７軸の生理学的効果が、より高いＳＤＦ−１の血漿レベルに関与する場合、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子が好ましい。例えば、パクリタキセルおよびベバシズマブ等の特定の治療薬は、血漿ＳＤＦ−１レベルの上昇をもたらし、これはより多くの骨髄由来内皮前駆細胞を放出することにより、または増殖、侵襲もしくは転移を刺激することにより、腫瘍治療法において負の効果を有し得る（Ｓｈａｋｅｄ、Ｈｅｎｋｅら、２００８；Ｘｕ、Ｄｕｄａら、２００９）。この場合、ＳＤＦ−１結合核酸の同時投与が、血漿ＳＤＦ−１レベル上昇の効果を寛解するであろう。
【０１３８】
さらに、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子によるＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸および／またはＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７軸の阻害は、これらの治療法に対する生存および薬剤抵抗性をもたらす白血病およびその他の癌細胞との接着性間質性相互作用を妨げることにより、他の治療薬の抗腫瘍効果を増強するであろう（Ｊｉｎら、２００８；Ｎｅｒｖｉら、２００９）。ＳＤＦ−１結合核酸分子のこのような使用は、化学感受性化として公知のプロセスとして知られている。
【０１３９】
化学療法または放射線療法に対する腫瘍細胞の感受性化は、それぞれ「化学感受性化」または「放射線感受性化」として知られている。好ましくは本発明による核酸分子によるこのような「化学感受性化」または「放射線感受性化」は、疾患または障害を患う対象を感受性化し、感受性化された対象は、疾患または障害の治療および／または予防のための治療法に対する応答性が高くなり、好ましくは、疾患または障害は癌である。初期治療、好ましくは癌治療と共に用いられるこのような治療は，本発明による補助治療であり、補助的治療法とも呼ばれる。このような補助治療の目的は、初期治療、好ましくは初期癌治療を補助することである。したがって、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸および／またはＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７軸の阻害は、単独療法として、またはこれらに限定されないが、薬物療法、細胞療法、放射線照射および手術等の他の治療と組み合わせた広範囲の血液系および固形腫瘍の両方の治療において特に有効となる。
【０１４０】
これらの手段により、また、概要を述べたＳＤＦ−１およびＳＤＦ−１受容体（ＣＸＣＲ４やＣＸＣＲ７等）の関与を考慮すると、ＳＤＦ−１と結合する、およびＳＤＦ−１とＳＤＦ−１受容体との間の相互作用を阻害する本発明による核酸分子は、このような疾患の減弱に有用となることができ、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子によるＳＤＦ−１の阻害は、化学療法により治療しようとする悪性細胞の化学感受性化、増殖および侵襲性の低下もしくは阻害、血管新生／脈管形成の阻害、転移の阻害、および／または化学療法に対する宿主の応答による血漿ＳＤＦ−１レベル上昇の阻害をもたらす。
【０１４１】
さらに、本発明は、ＳＤＦ−１と特異的かつ高親和性で結合する核酸分子を作製し、これによりＳＤＦ−１の効果、特にＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７等のその受容体におけるＳＤＦ−１の効果を阻害およびアンタゴナイズすることが可能であるとの驚くべき知見に基づく。
【０１４２】
ＳＤＦ−１に対するアンタゴニストは、ＳＤＦ−１と結合する分子（本発明によるＳＤＦ−１結合核酸分子等）であり、好ましくは、実施例に記載されているｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるＳＤＦ−１の機能を阻害する。
【０１４３】
本発明による核酸が核酸分子であることは、本発明の範囲内である。その限りにおいて、核酸および核酸分子という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。さらに、このような核酸は、好ましくは、本明細書において、本発明による核酸分子、本発明による核酸、本発明の核酸または本発明の核酸分子とも称される。
【０１４４】
本明細書に記載されている本発明による核酸の特徴は、核酸が単独で、あるいはいずれかの組み合わせで用いられる、本発明のいずれかの態様において実現することができる。
【０１４５】
本明細書においてより詳細に概要を述べる通り、本発明者らは、本明細書においてボックス（Ｂｏｘ）とも称されるヌクレオチドのストレッチに関して特徴付けることができる多数の異なるＳＤＦ−１結合核酸分子を同定した（実施例１を参照）。実施例５〜１１において実験により示す通り、本発明者らは驚くべきことに、いくつかのシステムにおいて、ＳＤＦ−１結合核酸分子が、癌の治療に適し、癌を実際に治療できると立証することができた。
【０１４６】
異なる種類のＳＤＦ−１結合核酸分子は、ヌクレオチドの３種の異なるストレッチであるヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチを含む。一般に、本発明のＳＤＦ−１結合核酸分子は、その５’末端および３’末端に、ヌクレオチドの末端ストレッチであるヌクレオチドの第１の末端ストレッチおよびヌクレオチドの第２の末端ストレッチ（ヌクレオチドの５’末端ストレッチおよびヌクレオチドの３’末端ストレッチとも称される）を含む。ヌクレオチドの第１の末端ストレッチおよびヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、原則的に、その塩基相補性により、互いにハイブリダイズし、ハイブリダイゼーションにより二本鎖構造を形成することができる。しかし、このようなハイブリダイゼーションは、必ずしも生理的および／または非生理的条件下の分子において実現される必要はない。ＳＤＦ−１結合核酸分子のヌクレオチドの３種のストレッチであるヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチは、互いに５’→３’の方向に、即ち、ヌクレオチドの第１の末端ストレッチ−ヌクレオチドの中心ストレッチ−ヌクレオチドの第２の末端ストレッチで配置される。しかし、代替的には、ヌクレオチドの第２の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第１の末端ストレッチが、互いに５’→３’の方向に配置される。
【０１４７】
異なるＳＤＦ−１結合核酸分子間の規定のボックスまたはストレッチの配列の差異は、ＳＤＦ−１との結合親和性に影響を与える。本発明の異なるＳＤＦ−１結合核酸分子の結合解析に基づき、中心ストレッチおよびこれを形成するヌクレオチドは、それぞれが、より好ましくはこれら全体が、ヒトＳＤＦ−１との結合に不可欠である。
【０１４８】
「ストレッチ」および「ヌクレオチドのストレッチ」という用語は、本明細書において、反対のことを示さない場合は同意語のように使用される。
【０１４９】
好ましい一実施形態において、本発明による核酸は、単一核酸分子である。さらなる一実施形態において、単一核酸分子は、多数の単一核酸分子または多数の単一核酸分子種として存在する。
【０１５０】
当業者であれば、本発明における核酸分子が、好ましくは、好ましくはリン酸ジエステル結合（ｌｉｎｋ）または結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を介して互いに共有結合したヌクレオチドからなることを認められよう。
【０１５１】
本発明による核酸が原則的に、互いにハイブリダイズできる２以上のストレッチまたはその部分（複数可）を含むことは、本発明の範囲内である。このようなハイブリダイゼーションにより、二本鎖構造が形成される。当業者であれば、このようなハイブリダイゼーションが、特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏ条件下で起こっても起こらなくてもよいことが認められよう。また、このようなハイブリダイゼーションの場合、少なくとも塩基対形成の法則に基づいてこのようなハイブリダイゼーション、従って二本鎖構造の形成が原理的に起こる２個のストレッチの全長にわたってハイブリダイゼーションが必ずしも起こるとは限らない。好ましくは、本明細書において、二本鎖構造は、核酸分子の２本以上の別個の鎖または１本の鎖の２個の空間的に離間したストレッチにより形成された核酸分子または構造の一部であり、好ましくは、ワトソン・クリック塩基対形成の法則に従って塩基対形成された少なくとも１、好ましくは２以上の塩基対が存在する。当業者であれば、フーグスティーン塩基対形成等、他の塩基対形成が、このような二本鎖構造に存在し得、またはこれを形成し得ることも認められよう。２個のストレッチがハイブリダイズするという特徴は、好ましくは、このようなハイブリダイゼーションが２個のストレッチの塩基相補性により生じると想定されることを示すことも認められよう。
【０１５２】
好ましい一実施形態では、本明細書において配置という用語は、本明細書に開示されている核酸に関連した、本明細書に記載されている構造的または機能的な特徴またはエレメントの順序または配列を意味する。
【０１５３】
当業者であれば、本発明による核酸が、ＳＤＦ−１と結合できることを認められよう。どんな理論にも拘泥するものではないが、本発明者らは、ＳＤＦ−１結合が、特許請求に係る核酸分子の三次元構造的形質またはエレメントの組み合わせに由来し、この三次元構造的形質またはエレメントが、このような形質またはエレメントを形成するヌクレオチドの一次配列の方向性およびフォールディングパターンに起因し、好ましくは、このような形質またはエレメントが、ＳＤＦ−１結合核酸分子のヌクレオチドの第１の末端ストレッチ、ヌクレオチドの中心ストレッチ、およびヌクレオチドの第２の末端ストレッチであることを想定する。個々の形質またはエレメントが、このようなエレメントまたは形質が必然的に形成する三次元構造に応じてその多様性の程度が変動し得る、様々な異なる個々の配列によって形成され得ることは明らかである。特許請求に係る核酸の全体的な結合特徴は、それぞれ様々なエレメントおよび形質の相互関係に由来し、これは最終的に、特許請求に係る核酸とその標的、即ち、ＳＤＦ−１との相互作用をもたらす。重ねて、どんな理論にも拘泥するものではないが、ＳＤＦ−１結合核酸の特徴であるヌクレオチドの中心ストレッチは、特許請求に係る核酸分子とＳＤＦ−１との結合の媒介に重要であると思われる。したがって、本発明による核酸は、ＳＤＦ−１との相互作用に適す。また、当業者であれば、本発明による核酸がＳＤＦ−１に対するアンタゴニストであることが認められよう。このため、本発明による核酸は、ＳＤＦ−１に関連するまたはそれによってもたらされる任意の疾患または状態の治療および予防のそれぞれに適す。このような疾患および状態は、ＳＤＦ−１が前記疾患および状態のそれぞれに関与または関連することを明らかにする先行技術から得ることができ、このような先行技術は、参照することにより本明細書の一部をなすものとし、本発明による核酸の治療的使用に科学的根拠をもたらす。
【０１５４】
本発明による核酸は、本明細書に開示されている特定の配列と本質的に相同な核酸も含むものとする。実質的に相同という用語は、相同性が、少なくとも７５％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を超えるようなものと理解されるものとする。
【０１５５】
本発明による核酸に存在する相同ヌクレオチドの実際のパーセンテージは、核酸に存在するヌクレオチド総数によって決まるであろう。修飾率は、核酸に存在するヌクレオチド総数に基づき得る。
【０１５６】
２種の核酸分子間の相同性は、当業者に知られている通りに決定することができる。より具体的には、参照配列に対する被験配列（複数可）の配列相同性率を計算するために、指定のプログラムパラメータに基づき、配列比較アルゴリズムを用いることができる。被験配列は、好ましくは、参照配列とも称される異なる核酸分子と相同であると考えられる、あるいは相同か検査され、相同である場合どの程度まで相同か検査されると考えられる配列または核酸分子である。一実施形態において、参照配列は、本明細書に記載されている核酸分子、好ましくは、配列番号５から配列番号２２５のいずれか１つに記載の配列を有する核酸分子、より好ましくは、配列番号２２、配列番号２８、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号８４、配列番号１４６、配列番号１４２、配列番号１４３、および配列番号１４４のいずれか１つに記載の配列を有する核酸分子である。例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎの局所的相同性アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ、１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈの相同性アライメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎの類似性検索方法（Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ、１９８８）、コンピュータ処理によるこれらアルゴリズムの実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、ウィスコンシン州マディソンにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）または目視検査により、比較のための配列の最適なアライメントを行うことができる。
【０１５７】
配列同一性率の決定に適したアルゴリズムの一例は、基礎局所的アライメント検索ツール（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ）（以下、「ＢＬＡＳＴ」）において用いられるアルゴリズムである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７）を参照されたい。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（以下、「ＮＣＢＩ」）により公開されている。ＮＣＢＩから入手できるソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列用）およびＢＬＡＳＴＰ（アミノ酸配列用）を用いた配列同一性の決定において用いられるデフォルトパラメータは、ＭｃＧｉｎｎｉｓら（ＭｃＧｉｎｎｉｓら、２００４）において記載されている。
【０１５８】
本発明による核酸は、本明細書に開示され、それらのヌクレオチド配列により定義される核酸に対し、ある程度の同一性を有する核酸も含むものとする。より好ましくは、本発明は、本明細書に開示され、それらのヌクレオチド配列またはそれらの一部により定義される核酸に対し、少なくとも７５％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を超える同一性を有する核酸分子も含む。
【０１５９】
本発明の核酸または本発明による核酸という用語は、好ましくは核酸または前記部分がＳＤＦ−１に関与するまたはＳＤＦ−１と結合することができる範囲で、例えば本発明による核酸の代謝産物もしくは誘導体等、本明細書に開示されている核酸配列またはその一部を含む核酸も含むものとする。このような核酸は、例えばトランケーションにより、本明細書に開示されている核酸から得ることができる。トランケーションは、本明細書に開示されている核酸の末端のいずれかまたはその両方に関連し得る。また、トランケーションは、ヌクレオチドの内側の配列に関連し得る、即ち、それぞれ５’末端および３’末端ヌクレオチドの間のヌクレオチド（複数可）に関連し得る。さらに、トランケーションは、本明細書に開示されている核酸の配列からのわずか１個のヌクレオチドの欠失を含むものとする。トランケーションは、本発明の核酸（複数可）の２以上のストレッチにも関与することもでき、ストレッチは、わずか１ヌクレオチド長の短さとなり得る。本発明による核酸の結合は、当業者であれば、ルーチン実験を用いることにより、あるいは本明細書に記載されている、好ましくは本明細書の実施例部分に記載されている方法を使用または採用することにより決定することができる。
【０１６０】
本発明による核酸は、Ｄ−核酸であってもＬ−核酸であってもよい。好ましくは、本発明の核酸は、Ｌ−核酸である。さらに、核酸の１つまたはいくつかの部分が、Ｄ−核酸として存在する、あるいは核酸の少なくとも１つまたはいくつかの部分がＬ−核酸となることが可能である。核酸の「部分」という用語は、わずか１ヌクレオチドをも意味するものとする。このような核酸は、一般に、本明細書においてそれぞれＤ−核酸およびＬ−核酸を言う。したがって、特に好ましい一実施形態において、本発明による核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなり、少なくとも１個のＤ−ヌクレオチドを含む。このようなＤ−ヌクレオチドは、好ましくは、本発明による核酸を定義するストレッチとは異なる部分、好ましくは、核酸の他の部分との相互作用に関与する部分に結合する。好ましくは、このようなＤ−ヌクレオチドは、それぞれストレッチのいずれかおよび本発明による核酸のいずれかの末端に結合する。さらなる好ましい一実施形態において、このようなＤ−ヌクレオチドは、好ましくは、ＰＥＧおよびＨＥＳ等の修飾を本発明による核酸に結合するスペーサーまたはリンカーとして作用し得る。
【０１６１】
本明細書に記載されているそれぞれの核酸分子のいずれも、その核酸配列（複数可）の全体にわたり特定のヌクレオチド配列（複数可）に限定されることも本発明の範囲内である。即ち、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」という用語は、このような実施形態において、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）またはからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）の意味で解釈されるものとする。
【０１６２】
本発明による核酸が、より長い核酸の部分であり、このようなより長い核酸が、数個の部分を含み、このような部分の少なくとも１個が、本発明による核酸またはその部分であることも本発明の範囲内である。このようなより長い核酸の他の部分（複数可）は、１つまたはいくつかのＤ−核酸（複数可）であってもＬ−核酸（複数可）であってもよい。本発明に関連して、任意の組み合わせを用いてよい。より長い核酸のこのような他の部分（複数可）は、結合とは異なる、好ましくは、ＳＤＦ−１との結合とは異なる機能を提示することができる。可能性のある一機能は、好ましくは、例えば固定化、架橋結合、検出または増幅等のために、ＳＤＦ−１とは異なる他の分子と相互作用させることである。本発明のさらなる一実施形態において、本発明による核酸は、個々にまたは組み合わせた部分として、本発明の核酸を複数含む。本発明の核酸を複数含むこのような核酸も、より長い核酸という用語に包含される。
【０１６３】
本明細書におけるＬ−核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなる、好ましくは、完全にＬ−ヌクレオチドからなる核酸である。
【０１６４】
本明細書におけるＤ−核酸は、Ｄ−ヌクレオチドからなる、好ましくは、完全にＤ−ヌクレオチドからなる核酸である。
【０１６５】
核酸および核酸分子という用語は、反対のことを明示しない場合は本明細書において互換的に使用される。
【０１６６】
また、反対のことを示さない場合は任意のヌクレオチド配列が、本明細書において５’→３’の方向で表記されている。
【０１６７】
好ましくは、本明細書において、ヌクレオチドの任意の位置が、配列、ストレッチ、またはサブストレッチの５’末端に関連して決定または参照される。したがって、２番目のヌクレオチドは、それぞれ配列、ストレッチ、およびサブストレッチの５’末端から数えて２番目のヌクレオチドである。また、これを踏まえると、最後から２番目のヌクレオチドは、それぞれ配列、ストレッチ、およびサブストレッチの３’末端から数えて２番目のヌクレオチドである。
【０１６８】
本発明の核酸が、Ｄ−ヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、または両者の組み合わせ、例えばランダムな組み合わせからなるか、あるいは少なくとも１個のＬ−ヌクレオチドおよび少なくとも１個のＤ−核酸からなるストレッチの規定の配列からなるかにかかわりなく、核酸は、デオキシリボヌクレオチド（複数可）、リボヌクレオチド（複数可）またはそれらの組み合わせからなることができる。
【０１６９】
本発明の核酸をＬ−核酸として設計することは、いくつかの理由から有利である。Ｌ−核酸は、天然起源の核酸のエナンチオマーである。一方、Ｄ−核酸は、ヌクレアーゼが広範に存在するため、水溶液において、特に生物システムまたは生物試料において非常に安定的という訳ではない。天然起源のヌクレアーゼ、特に動物細胞由来のヌクレアーゼは、Ｌ−核酸を分解することができない。このため、Ｌ−核酸の生体半減期は、動物およびヒトの身体等、このようなシステムにおいて有意に増加する。Ｌ−核酸は分解できないため、ヌクレアーゼ分解産物は生成されず、よってそれにより生じる副作用も観察されない。本態様は、ＳＤＦ−１の存在に関与する疾患および／または障害の治療法において用いられる事実上あらゆる他の化合物のＬ−核酸の境界を定める。ワトソン・クリック塩基対形成とは異なる機序により標的分子と特異的に結合するＬ−核酸、あるいは特にアプタマーの部分が標的分子とアプタマーの結合に関与する、部分的または完全にＬ−ヌクレオチドからなるアプタマーは、スピーゲルマーとも呼ばれる。アプタマーおよびスピーゲルマーそれ自体は、当業者にとって公知のものであり、とりわけ、「Ｔｈｅ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ編、２００６）に記載されている。
【０１７０】
Ｄ−核酸、Ｌ−核酸、またはＤ，Ｌ−核酸として存在するか、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡであるかに関係なく、本発明の核酸が、一本鎖核酸または二本鎖核酸として存在し得ることも本発明の範囲内である。通常、本発明の核酸は、一次配列によって画定された二次構造を示す一本鎖核酸であり、よって、三次構造を形成することもできる。しかし、本発明の核酸は、互いに相補的または部分的に相補的な２本の鎖が、互いにハイブリダイズしているという意味において二本鎖であってもよい。
【０１７１】
本発明の核酸は、修飾されていてよい。このような修飾は、核酸の単一のヌクレオチドに関与することができ、当技術分野において周知のものである。このような修飾の例は、とりわけ、Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎら（Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎ、Ｋｉｍら、２００３）およびＫｕｓｓｅｒ（Ｋｕｓｓｅｒ、２０００）によって記載されている。このような修飾は、核酸を形成する個々のヌクレオチドの２’位におけるＨ原子、Ｆ原子、またはＯ−ＣＨ３基もしくはＮＨ２基であり得る。また、本発明による核酸は、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを含むことができる。一実施形態において、本発明による核酸は、ＬＮＡヌクレオチドからなる。
【０１７２】
一実施形態において、本発明による核酸は、多数の部分に分割された核酸となり得る。本明細書における多数の部分に分割された核酸は、少なくとも２本の別個の核酸鎖からなる核酸である。このような少なくとも２本の核酸鎖は、標的分子に対するリガンドである機能単位を形成する。少なくとも２本の核酸鎖は、核酸分子を切断して２本の鎖を作製することによるか、または本発明の核酸、即ち核酸全体の第１の部分に対応する一方の核酸、および核酸全体の第２の部分に対応するもう一方の核酸の合成による本発明の核酸のいずれかに由来し得る。切断および合成の両方を適用して、上に例示する通り３本以上の鎖が存在する多数の部分に分割された核酸を作製してよいことが認められよう。即ち、少なくとも２本の別個の核酸鎖は通常、互いに相補的でハイブリダイズしている２本の鎖とは異なるが、前記少なくとも２本の別個の核酸鎖間にある程度の相補性が存在し、このような相補性により、前記別個の鎖のハイブリダイゼーションを可能にしてもよい。
【０１７３】
最後に、本発明による核酸の完全閉鎖型、即ち環状構造が実現される、即ち、本発明による核酸が、一実施形態において好ましくは共有結合により閉鎖され、より好ましくは、このような共有結合が、本明細書に開示されている核酸配列またはその任意の誘導体の５’末端と３’末端との間でなされることも本発明の範囲内である。
【０１７４】
本発明による核酸分子の結合定数を決定する１つの方法は、本発明による核酸が有利なＫＤ値範囲を示すという上述の知見を確認する実施例３および４に記載されている方法の使用である。個々の核酸分子と、この場合はＳＤＦ−１である標的との間の結合の強度を表すための適切な測定値は、いわゆるＫＤ値であるが、これは、その決定のための方法が当業者にとって公知のものであるからである。
【０１７５】
好ましくは、本発明による核酸によって示されるＫＤ値は、１μＭを下回る。約１μＭのＫＤ値は、核酸と標的との非特異的結合の特徴であると考えられる。当業者であれば認められる通り、本発明による核酸等の化合物群のＫＤ値は、ある一定の範囲内にある。上述の約１μＭのＫＤは、ＫＤ値の好ましい上限である。標的結合核酸のＫＤの下限は、わずか約１０ピコモル濃度であってもよく、またはそれより高くてもよい。ＳＤＦ−１と結合する個々の核酸のＫＤ値が、好ましくはこの範囲内に収まることは、本発明の範囲内である。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数値と、この範囲内の任意の第２の数値を選ぶことによって定義することができる。好ましい上位ＫＤ値は２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下位ＫＤ値は５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭおよび１０ｐＭである。より好ましい上位ＫＤ値は２．５ｎＭであり、より好ましい下位ＫＤ値は１００ｐＭである。
【０１７６】
本発明による核酸分子の結合特性に加えて、本発明による核酸分子は、この場合はＳＤＦ−１である個々の標的分子の機能を阻害する。ＳＤＦ−１の機能（例えば、以前に記載されている通り、個々の受容体の刺激）の阻害は、本発明による核酸分子とＳＤＦ−１を結合し、本発明による核酸分子とＭＣＰ−１とＳＤＦ−１との複合体を形成することによって達成される。このような核酸分子とＳＤＦ−１との複合体は、正常にはＳＤＦ−１によって刺激される受容体を刺激することができない。したがって、本発明による核酸分子による受容体機能の阻害は、ＳＤＦ−１によって刺激され得る個々の受容体に非依存的であるが、本発明による核酸分子による、ＭＣＰ−１およびＳＤＦ−１による受容体刺激の抑制に起因する。
【０１７７】
本発明による核酸分子の阻害定数を決定する１つの方法は、本発明による核酸が、治療処置計画における前記核酸の使用を可能にする有利な阻害定数を示すという上述の知見を確認する実施例５および６（それぞれＣＸＣＲ４およびＣＸＣＲ７に関する）に記載されている方法の使用である。標的、この場合はＳＤＦ−１と個々の受容体との相互作用における個々の核酸分子の阻害効果の強度を表すための適切な測定値は、いわゆる最大半数阻害濃度（略語、ＩＣ５０）であるが、これは、その決定のための方法が当業者にとって公知のものであるからである。
【０１７８】
好ましくは、本発明による核酸分子によって示されるＩＣ５０値は、１μＭを下回る。約１μＭのＩＣ５０値は、核酸分子による標的機能の非特異的阻害の特徴であると考えられる。当業者であれば認められる通り、本発明による核酸分子等の化合物群のＩＣ５０値は、ある一定の範囲内にある。上述の約１μＭのＩＣ５０は、ＩＣ５０値の好ましい上限である。標的結合核酸分子のＩＣ５０の下限は、わずか約１０ピコモル濃度であってもよく、またはそれより高くてもよい。ＳＤＦ−１と結合する個々の核酸のＩＣ５０値が、好ましくはこの範囲内に収まることは、本発明の範囲内である。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数値と、この範囲内の任意の第２の数値を選ぶことによって定義することができる。好ましい上位ＩＣ５０値は２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下位ＩＣ５０値は５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、および１０ｐＭである。より好ましい上位ＩＣ５０値は２．５ｎＭであり、より好ましい下位ＩＣ５０値は１００ｐＭである。
【０１７９】
本発明による核酸分子は、依然として標的分子と結合することができるのであれば、任意の長さであってよい。当技術分野において、本発明による核酸には好ましい長さが存在することが認められよう。通常、この長さは、１５〜１２０ヌクレオチドの間である。当業者であれば、１５〜１２０の間の任意の整数が、本発明による核酸に可能な長さであることが認められよう。本発明による核酸の長さのより好ましい範囲は、約２０〜１００ヌクレオチド、約２０〜８０ヌクレオチド、約２０〜６０ヌクレオチド、約２０〜５０ヌクレオチド、および約２９〜４５０ヌクレオチドの長さである。
【０１８０】
本明細書に開示されている核酸が、好ましくは、高分子量の部分であるおよび／または好ましくは、とりわけ動物の身体、好ましくはヒトの身体における滞留時間に関する核酸の特徴を修飾することを可能にする部分を含むことは、本発明の範囲内である。このような修飾の特に好ましい一実施形態は、本発明による核酸のＰＥＧ化およびＨＥＳ化である。本明細書において、ＰＥＧはポリ（エチレングリコール）を表し、ＨＥＳはヒドロキシエチルデンプンを表す。好ましくは、本明細書において、ＰＥＧ化は、本発明による核酸の修飾であり、このような修飾は、本発明による核酸と結合しているＰＥＧ部分からなる。好ましくは、本明細書において、ＨＥＳ化は、本発明による核酸の修飾であり、このような修飾は、本発明による核酸と結合しているＨＥＳ部分からなる。これらの修飾と共に、このような修飾を用いて核酸を修飾するプロセスは、欧州特許出願ＥＰ  １  ３０６  ３８２に記載されており、その全体が参照することにより本明細書の一部をなすものとする。
【０１８１】
ＰＥＧがこのように高分子量の部分である場合、分子量は、好ましくは、約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜約８０，０００Ｄａ、最も好ましくは、約４０，０００Ｄａである。ＨＥＳがこのように高分子量の部分である場合、分子量は、好ましくは、約５０〜約１０００ｋＤａ、より好ましくは、約１００〜約７００ｋＤａ、最も好ましくは、２００〜５００ｋＤａである。ＨＥＳは、０．１〜１．５、より好ましくは、１〜１．５のモル置換を示し、およそ０．１〜１５、好ましくは、およそ３〜１０のＣ２／Ｃ６比として表される置換試料を示す。ＨＥＳ修飾のプロセスは、例えば、独国特許出願ＤＥ  １  ２００４  ００６  ２４９．８に記載されており、その全体が参照することにより本明細書の一部をなすものとする。
【０１８２】
修飾は、原則的に、本発明の核酸分子の任意の位置になされてよい。好ましくは、このような修飾は、５’末端ヌクレオチドに、３’末端ヌクレオチドに、および／または核酸分子の５’ヌクレオチドと３’ヌクレオチドとの間のいずれかのヌクレオチドになされる。
【０１８３】
修飾、好ましくは、ＰＥＧ部分および／またはＨＥＳ部分は、直接的または間接的に、好ましくは、リンカーを介して本発明の核酸分子と結合し得る。本発明による核酸分子が、１つまたはいくつかの修飾、好ましくは、１つまたはいくつかのＰＥＧおよび／またはＨＥＳ部分を含むことも、本発明の範囲内である。一実施形態において、個々のリンカー分子は、２以上のＰＥＧ部分またはＨＥＳ部分を本発明による核酸分子に結合させる。本発明に関連して用いられるリンカーそれ自体は、直鎖状でも分枝状でもよい。この種類のリンカーは、当業者にとって公知のものであり、特許出願ＷＯ２００５／０７４９９３およびＷＯ２００３／０３５６６５においてさらに記載されている。
【０１８４】
好ましい一実施形態において、リンカーは生分解性リンカーである。生分解性リンカーは、本発明による核酸からの修飾の放出により、とりわけ、動物の身体、好ましくはヒトの身体における滞留時間に関する本発明による核酸の特徴を修飾することを可能にする。生分解性リンカーの利用は、本発明による核酸の滞留時間のより優れた制御を可能にし得る。このような生分解性リンカーの好ましい一実施形態は、これらに限定されないが、国際特許出願ＷＯ２００６／０５２７９０、ＷＯ２００８／０３４１２２、ＷＯ２００４／０９２１９１、およびＷＯ２００５／０９９７６８に記載されている生分解性リンカーである。
【０１８５】
修飾または修飾基が、生分解性修飾であり、生分解性修飾が、直接的または間接的に、好ましくは、リンカーを介して本発明の核酸分子と結合し得ることは、本発明の範囲内である。生分解性修飾は、本発明による核酸からの修飾の放出または分解により、とりわけ、動物の身体、好ましくはヒトの身体における滞留時間に関する本発明による核酸の特徴を修飾することを可能にする。生分解性修飾の利用は、本発明による核酸の滞留時間のより優れた制御を可能にし得る。このような生分解性修飾の好ましい一実施形態は、これらに制限されないが、国際特許出願ＷＯ２００２／０６５９６３、ＷＯ２００３／０７０８２３、ＷＯ２００４／１１３３９４、およびＷＯ２０００／４１６４７、好ましくは、ＷＯ２０００／４１６４７の１８頁、４〜２４行に記載されている生分解性である。
【０１８６】
上述の修飾以外にも、他の修飾を用いて、本発明による核酸の特徴を修飾することができ、このような他の修飾は、タンパク質、コレステロール等の脂質、およびアミラーゼ（ａｍｙｌａｓｅ）やデキストラン等の糖鎖の群から選択され得る。
【０１８７】
どのような理論にも拘泥するものではないが、本発明による核酸を、好ましくは生理学的に許容されるポリマー、より具体的には、本明細書に開示されているポリマーの１つまたはいくつか等の高分子量部分で修飾することにより、排泄動態が変化すると考えられる。より具体的には、このような修飾された本発明の核酸の分子量の増加により、また、特にＬ型の、代謝に付されない本発明の核酸により、動物の身体、好ましくは哺乳動物の身体、より好ましくはヒトの身体からの排泄が減少すると考えられる。排泄は通常、腎臓経由で行われるため、本発明者らは、このように修飾された核酸の糸球体濾過率が、この種の高分子量修飾がない核酸と比較して有意に低下し、これにより動物の身体における滞留時間が増加することを想定する。これに関連し、このような高分子量の修飾にもかかわらず、本発明による核酸の特異性が有害な方法で影響を及ぼさないことは特に注目に値する。その限りにおいて、本発明による核酸は、持続放出をもたらす医薬品製剤が、本発明による核酸の持続放出の達成に必ずしも要求されないような、とりわけ驚くべき特徴（通常、薬学的活性化合物からは予想できない）を有する。むしろ、高分子量の部分を含む修飾型の本発明による核酸それ自体は、その修飾のため、あたかも既に持続放出製剤から放出されているかの如く、作用する際に持続放出製剤として既に用いられていてよい。その限りにおいて、本明細書に開示されている本発明による核酸分子の修飾（複数可）と、従って修飾された本発明による核酸分子およびこれを含む任意の組成物は、その明確な、好ましくは制御された薬物動態および体内分布をもたらし得る。これは、循環における滞留時間および組織への分布も含む。このような修飾は、特許出願ＷＯ２００３／０３５６６５にさらに記載されている。
【０１８８】
しかし、本発明による核酸が修飾を全く含まず、特に、ＰＥＧ化またはＨＥＳ化等の高分子量修飾を含まないことも本発明の範囲内である。このような実施形態は、本発明による核酸が、体内の任意の標的臓器または組織への優先的分布を示す場合、あるいは投与後に身体からの本発明による核酸の急速なクリアランスが望ましい場合、特に好ましい。体内の任意の標的臓器または組織への優先的分布プロファイルを有する本明細書に開示されている本発明による核酸は、核酸の全身濃度を低く保ちつつ、標的組織における有効局所的濃度の確立を可能にするであろう。これは、経済的観点から有益であるのみならず、核酸薬剤への他の組織の不必要な曝露を低下させ、従って潜在的な副作用リスクを低下させる、低用量での使用を可能にするであろう。投与後の身体からの本発明による核酸の急速なクリアランスは、とりわけ、本発明による核酸またはこれを含む薬剤を用いたｉｎ  ｖｉｖｏイメージングまたは特異的な治療的投薬の必要の場合、望ましくなり得る。
【０１８９】
本発明による核酸および／または本発明によるアンタゴニストは、薬剤の作製または製造に用いることができる。本発明によるこのような薬剤または医薬組成物は、ＳＤＦ−１結合核酸の群から選択される本発明の核酸の少なくとも１種を、必要に応じてさらなる薬学的活性化合物と共に含有し、本発明の核酸は、好ましくは薬学的活性化合物それ自体として作用する。このような薬剤は、好ましい実施形態において、少なくとも薬学的に許容される担体を含む。このような担体は、例えば、水、緩衝液、ＰＢＳ、グルコース溶液、好ましくは５％グルコース塩平衡溶液、デンプン、糖、ゼラチン、またはその他の許容される担体物質であり得る。このような担体は一般に、当業者にとって公知のものである。当業者であれば、本発明の薬剤またはそれに関する任意の実施形態、使用、および態様が、本発明の医薬組成物にも適用可能であり、その逆も同じであることが認められよう。
【０１９０】
本発明における核酸、医薬組成物、および薬剤、あるいは本発明に従って調製された核酸、医薬組成物、および薬剤が治療および／または予防するための徴候、疾患および障害は、個々の病原性機序における直接または間接的なＳＤＦ−１の関与に起因する。
【０１９１】
当然ながら、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸は、ヒトＳＤＦ−１またはマウスＳＤＦ−１と相互作用または結合するため、当業者は一般に、本発明によるＳＤＦ−１結合核酸が、ヒトおよび動物の本明細書に記載されているいずれかの疾患の治療、予防および／または診断に容易に用いられ得ることを理解するであろう。これに関連し、本発明による核酸分子が、本明細書に記載されている疾患、障害または状態のいずれかの治療および予防に、このような疾患、障害および状態の根底にある作用機序にかかわりなく用いられ得ることが認められよう。
【０１９２】
次に、様々な疾患、障害、および状態に関連する本発明による核酸分子の使用の論拠を提供し、これにより、本発明による核酸分子の特許請求に係る治療上、予防上、および診断上の適用可能性に妥当性を付与する。不必要な反復を完全に回避するため、これに関連して概要を述べているＳＤＦ−１−ＳＤＦ−１受容体軸の関与のために、特許請求に係る治療上、予防上、および診断上の効果が達成されるように、前記軸は、本発明による核酸分子によって対処され得ることを認めるべきである。さらに、患者の疾患、障害、および状態の特殊性、ならびにそれに関連して記載されている治療計画のあらゆる詳細が、本願の好ましい実施形態の対象となり得ることを認めるべきである。
【０１９３】
特に血液系悪性腫瘍に関し、白血病細胞が、ニッチと称される特定の組織微小環境内において従来の治療法（特異抗体またはキナーゼ阻害剤等の様々な標的化薬剤と組み合わせた化学療法）から保護され得るとの注目に値する根拠がある。このようなニッチは、特に骨髄において見出され、そこでニッチは悪性細胞を有し、その後悪性細胞が増殖して初期治療後に再発させることができる（Ｂｕｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｐｐｓ、２００２；Ｂｕｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｌｅ、２００７；Ｍｅａｄｓら、２００８；Ｂｕｒｇｅｒ、Ｇｈｉａら、２００９）。化学療法中におけるこのような悪性細胞の保存は、大部分は、悪性細胞と間質細胞との間の直接的な接触によるものであると考えられるが（Ｌａｇｎｅａｕｘ、Ｄｅｌｆｏｒｇｅら、１９９８；Ｋｕｒｔｏｖａ、Ｂａｌａｋｒｉｓｈｎａｎら、２００９；Ｄａｍｉａｎｏ、Ｃｒｅｓｓら、１９９９）、しかし、この微小環境の複雑性において、化学療法に対する悪性細胞の抵抗性をもたらし得る複数の細胞シグナルおよび分子シグナルが存在する。この複雑性にもかかわらず、間質細胞が、ケモカインＳＤＦ−１を産生すること、また、ＣＸＣＲ４を発現する正常細胞および悪性細胞の両方が、このようなニッチへと遊走し、そこで維持されることは明らかである。この分子経路がこの相互作用の手がかりであることは、この相互作用の特異的阻害が、ニッチからの正常細胞および悪性細胞の両方の放出に十分であるという事実によって立証される（Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ、Ｏｒｓｃｈｅｌｌら、２００５；Ｄｅｖｉｎｅ、Ｆｌｏｍｅｎｂｅｒｇら、２００４；Ａｚａｂ、Ｒｕｎｎｅｌｓら、２００９）。ニッチとの相互作用の減退に加えて、多数の血液悪性腫瘍に対し、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸の崩壊が、他の治療法に対する細胞の脆弱性を増加させること、いわゆる「化学感受性化」が示された。この化学感受性化は、多発性骨髄腫（Ａｚａｂ、Ｒｕｎｎｅｌｓら、２００９）ならびに様々な急性および慢性白血病（Ｄｉｌｌｍａｎｎ、Ｖｅｌｄｗｉｊｋら、２００９；Ｌａｇｎｅａｕｘ、Ｄｅｌｆｏｒｇｅら、１９９８）に関して記載されている。
【０１９４】
したがって、悪性細胞とその環境との間のクロストークを崩壊させて、他の治療法に対し細胞を感受性化するための本発明によるＳＤＦ−１結合核酸の使用は、血液系悪性腫瘍の治療のための興味深い戦略である。本発明によるＳＤＦ−１結合核酸との組み合わせにより増強され得る治療法の例として、フルダラビン、シクロホスファミド、リツキサン、クロラムブシル、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、メルファラン、イマチニブ、またはニロチニブが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９５】
上の記述は、血液系悪性腫瘍のための化学療法または他の標的化治療法の効果からの悪性細胞の保護における骨髄間質細胞および骨髄ニッチの役割を強調した。しかし、固形腫瘍における高い比率の細胞は、癌細胞ではなく、むしろ腫瘍細胞と密接に相互作用する宿主由来の間質細胞、免疫細胞、または血管細胞であるため、固形腫瘍内に局所的に生じる類似の相互作用の根拠が存在する。多くの異なる種類の固形腫瘍は、構成的に、あるいは低酸素または様々な治療に応答して、ＣＸＣＲ４（Ｅｎｇｌ、Ｒｅｌｊａら、２００６；Ｍｕｌｌｅｒ、Ｈｏｍｅｙら、２００１；Ｋｏｓｈｉｂａ、Ｈｏｓｏｔａｎｉら、２０００、Ｅｈｔｅｓｈａｍ、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、２００８；Ｚｅｅｌｅｎｂｅｒｇ、Ｒｕｕｌｓ−Ｖａｎ  Ｓｔａｌｌｅら、２００３；Ｓａｕｅｒ、Ｓｅｉｄｌｅｒら、２００５；Ｓｕ、Ｚｈａｎｇら、２００５）および／またはＣＸＣＲ７（Ｂｕｒｎｓ、Ｓｕｍｍｅｒｓら、２００６；Ｍｉａｏら、２００７；Ｗａｎｇら、２００８；Ｚｈｅｎｇ、Ｌｉら、２０１０）受容体を発現する。悪性細胞は、ＡｋｔおよびＥｒｋの活性化により、生存および遊走のためにこのシグナル伝達経路を用いることができる。ＳＤＦ−１は、悪性細胞それ自身または腫瘍内の間質細胞によって産生され得る。この場合も、この複雑な環境において、腫瘍細胞が増殖し、化学療法または他の治療アプローチから逃避する正確な機序は、明確に定義されていない。しかし、ＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ４軸およびＳＤＦ−１−ＣＸＣＲ７が、重要な役割を果たすことは明らかである。例えば、ＣＸＣＲ４の阻害は、神経膠腫細胞株をｉｎ  ｖｉｔｒｏ化学療法に対し感受性化し（Ｒｅｄｊａｌら、２００６）、ＣＸＣＲ４の高発現は、乳癌（Ｈｏｌｍ、Ａｂｒｅｏら、２００８；Ｍｉｚｅｌｌ、Ｓｍｉｔｈら、２００９）および胃腸癌（Ｓｃｈｉｍａｎｓｋｉら、２００８）における予後不良を予測する。したがって、多種多様な固形腫瘍におけるＣＸＣＲ４受容体またはＣＸＣＲ７受容体いずれかにおけるＳＤＦ−１の作用を阻害するための本発明によるＳＤＦ−１結合核酸の使用は、直接作用により、あるいは腫瘍における他の細胞との相互作用を遮断することにより、治療法に対し細胞をより脆弱にすることにより現行の治療法を増強するであろう。
【０１９６】
上述の態様に加えて、ＣＸＣＲ４は、血管新生促進性および免疫抑制性骨髄由来細胞（ＢＭＤＣ）の動員および保持に重大であると考えられるシグナルも伝達する。したがって、この経路は、ＶＥＧＦ非依存的血管新生にも用いられ得る。その結果、抗ＶＥＧＦ療法または放射線照射に対し腫瘍を感受性化するためのＳＤＦ１−ＣＸＣＲ４軸の遮断が、固形癌のための興味深い戦略的治療として出現した。
【０１９７】
しかし、ＣＸＣＲ４遮断が、癌または間質細胞におけるＣＸＣＲ７とも結合し得るＳＤＦ−１の効果の遮断に十分ではない可能性が懸念されている。例えば、近年、ＣＸＣＲ７は、脳腫瘍細胞において発現し、抗アポトーシス効果を媒介することが報告され、また、ヒト肝細胞癌の浸潤、血管新生、および腫瘍増殖を調節することも示された。このような場合、単一の薬剤における、ＣＸＣＲ７受容体およびＣＸＣＲ４受容体の両方におけるＳＤＦ−１の作用を遮断するＳＤＦ−１結合核酸の作用が、特異的な受容体遮断薬と比較して、特別な効力を生じるであろう。
【０１９８】
本発明による薬剤は、（該）癌細胞を損傷、破壊および／または標識するさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤と組み合わせて用いることができる。本発明による核酸分子が、さらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤と共に用いられる場合、核酸分子に基づく治療法は、好ましくは、さらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤を利用する、あるいはそれに基づく治療法に対する補助治療法である。このようなさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、好ましくは、
ａ）リツキシマブ（標的：ＣＤ２０）、セツキシマブ（標的：上皮増殖因子受容体）、イブリツモマブ  チウキセタン（標的：ＣＤ２０）、トシツモマブ（標的：ＣＤ２０）、トラスツズマブ（標的：ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ベバシズマブ（標的：ＶＥＧＦ）、アレムツズマブ（標的：ＣＤ５２）等、抗体；
ｂ）シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ベンダムスチン、メルファラン、テモゾロミド等、アルキル化剤；
ｃ）プリンアザチオプリン、メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、クラドリビン等、代謝拮抗薬；
ｄ）ビンカアルカロイド等、植物性アルカロイド；タキサン、好ましくは、ドセタキセル、パクリタキセル、ポドフィロトキシン、エポチロン等、植物性テルペノイド；
ｅ）カンプトテシン、イリノテカン、ミトキサントロン等、トポイソメラーゼ阻害剤；
ｆ）ロイコボリン、メトトレキサート、タモキシフェン、ソラフェニブ、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、フルオロウラシルおよびプレドニゾン等、その他
を含む群から選択されるが、これらに制限されない。
【０１９９】
癌の治療においてさらなる薬学的活性剤として用いることのできる他の薬剤は、当技術分野において周知のものであり、免疫抑制薬、サイトカイン、および細胞分裂阻害薬が挙げられるが、これらに限定されない（参考のため：「Ａｌｌｇｅｍｅｉｎｅ  ｕｎｄ  Ｓｐｅｚｉｅｌｌｅ  Ｐｈａｒｍａｋｏｌｏｇｉｅ  ｕｎｄ  Ｔｏｘｉｋｏｌｏｇｉｅ  ２０１１」、編集者：Ｔｈｏｍａｓ  Ｋａｒｏｗ；ドイツ、プルハイム）。当技術分野において周知であるこのような薬剤は、特定の癌患者集団のケアの現行標準に従った癌の治療において用いられる。
【０２００】
上に定めるさらなる薬学的活性剤が、このようなさらなる薬学的活性剤を利用する本発明の任意の態様それぞれに関連して用いられ得ることが認められよう。
【０２０１】
さらなる薬剤または薬学的活性剤は、化学療法の機能を有する、またはこれを生じ得る。化学療法に代えて、または化学療法に加えて、放射線療法を用いてもよい。
【０２０２】
さらなる薬剤もしくはさらなる薬学的活性剤と組み合わせてまたはそれなしで、あるいは放射線療法と共にまたはそれなしで、本発明による薬剤は、癌、好ましくは、
ａ）より好ましくは、白血病および骨髄腫の群から選択される血液癌、
ｂ）より好ましくは、神経膠芽腫、結腸直腸癌、乳癌、リンパ腫、前立腺癌、膵癌、肺癌、腎癌、および卵巣癌の群から選択される固形腫瘍
の治療および／または予防に用いることができる。
【０２０３】
好ましくは、乳癌は、進行性ＨＥＲ２陰性乳癌の群から選択される。
【０２０４】
好ましくは、白血病は、慢性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病の群から選択される。
【０２０５】
好ましくは、骨髄腫は、多発性骨髄腫の群から選択される。
【０２０６】
神経膠芽腫の治療のための好ましいさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、放射線療法またはテモゾロミドによる化学療法またはベバシズマブによる治療法である。結腸直腸癌の治療のための好ましいさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、フルオロウラシル、ロイコボリン、オキサリプラチン、イリノテカン、およびベバシズマブを含む群から選択される。
【０２０７】
進行性ＨＥＲ２陰性乳癌の治療のための好ましいさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、メトトレキサート、フルオロウラシル、ベバシズマブ、タモキシフェン、およびアロマターゼ阻害剤の群から選択される。
【０２０８】
慢性リンパ性白血病の治療のための好ましいさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ、クロラムブシル、アレムツズマブ、ビンクリスチン、ペントスタチン、ミトキサントロン、ドキソルビシン、クラドリビン、およびベンダムスチンを含む群から選択される。
【０２０９】
多発性骨髄腫の治療のための好ましいさらなる薬剤またはさらなる薬学的活性剤は、レナリドマイド、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、メルファラン、シクロホスファミド、リポソームドキソルビシン、およびプレドニゾンを含む群から選択される。
【０２１０】
本発明の薬剤の一実施形態において、このような薬剤は、本明細書に開示されている疾患、特に、本発明の薬剤を用いるべき疾患のいずれかのための他の治療と組み合わせた使用のためのものである。
【０２１１】
「併用療法」（または「連携療法（ｃｏ−ｔｈｅｒａｐｙ）」）は、本発明の薬剤および少なくとも１つの第二のまたはさらなる薬剤の投与を、これらの治療薬、即ち、本発明の薬剤および前記第二のまたはさらなる薬剤の共作用から有益な効果を得ることを意図する特定の治療計画の一部として含む。組み合わせの有益な効果として、治療薬の組み合わせに起因する薬物動態または薬力学的共作用が挙げられるが、これらに限定されない。組み合わせたこれら治療薬の投与は通常、所定の期間（通常、選択された組み合わせに応じて数分間、数時間、数日間、または数週間）にわたって行われる。
【０２１２】
「併用療法」は、別個の単独療法レジメンの一部としてこれら治療薬の２種以上の投与を包含することを意図する場合もあるが、一般には意図しない。「併用療法」は、これら治療薬の連続様式での投与、即ち、各治療薬の異なる時点での投与と共に、これら治療薬、あるいは治療薬の少なくとも２種の実質的に同時様式での投与を包含することを意図する。実質的な同時投与は、例えば、固定比率の各治療薬を有する単一のカプセルまたは複数の、治療薬それぞれのための単一のカプセルを対象に投与することにより達成することができる。
【０２１３】
各治療薬の連続または実質的な同時投与は、これらに限定されないが、局所経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を経た直接吸収を含む任意の適切な経路により達成することができる。治療薬は、同一経路または異なる経路によって投与することができる。例えば、選択された組み合わせの第一の治療薬は、注射により投与することができ、一方、組み合わせの他の治療薬は、局所的に投与することができる。
【０２１４】
あるいは、例えば、全治療薬を局所的に投与しても、あるいは全治療薬を注射により投与してもよい。他に断りがなければ、治療薬が投与される順序は、厳密に決定的という訳ではない。「併用療法」は、他の生物学的有効成分とさらに組み合わせた上述の治療薬の投与も包含し得る。併用療法が、非薬物治療をさらに含む場合、治療薬および非薬物治療の組み合わせの共作用による有益な効果が達成される限り、非薬物治療は、任意の適切な時点で行うことができる。例えば、適切な場合において、非薬物治療が、治療薬の投与から一時的に、おそらく数日間またはさらには数週間取り除かれる場合、有益な効果は依然として達成される。
【０２１５】
上述の一般的見解において概要を述べた通り、本発明による薬剤は、原則的に、当業者に知られた任意の形態で投与することができる。好ましい投与経路は、より好ましくは、非経口投与、好ましくは注射による全身投与である。あるいは、薬剤は、局所的に投与することができる。他の投与経路は、筋肉内、腹腔内および皮下、口周囲（ｐｅｒ  ｏｒｕｍ）、鼻腔内、気管内または肺性を含み、効率を保証しつつ浸潤性が最も少ない投与経路を優先する。
【０２１６】
非経口投与は、一般に、皮下、筋肉内または静脈内注射および注入に用いられる。さらに、非経口投与のためのアプローチの１つは、一定レベルの投薬量が維持されることを保証する、当業者によく知られた徐放または持続放出システムの埋め込みを利用する。
【０２１７】
さらに、本発明の好ましい薬剤は、適切な鼻腔内媒体、吸入剤の局所使用による鼻腔内形態で、あるいは、当業者によく知られた経皮性皮膚パッチの形態を用いた経皮性経路により投与することができる。経皮性送達系の形態で投与するため、当然ながら、投薬は、投薬レジメンを通して間欠的よりむしろ連続的となるであろう。他の好ましい局所的調製物として、クリーム、軟膏、ローション、エアゾールスプレー、およびゲルが挙げられる。
【０２１８】
本発明の方法に対し有利に応答するであろう対象として、一般に人間およびヒト患者を含む医学的および獣医学的対象が挙げられる。本発明の方法および手段が有用となる他の対象として、ネコ、イヌ、大型動物、ニワトリ等のトリ等が挙げられる。
【０２１９】
本発明の薬剤は、一般に、これらに限定されないが、薬学的に許容される媒体中に溶解または分散させた本発明の核酸分子を含む治療法の有効量の有効成分（複数可）を含む。薬学的に許容される媒体または担体として、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤等が挙げられる。医薬品有効物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野において周知のものである。補足的な有効成分が、本発明の薬剤に取り込まれていてもよい。
【０２２０】
さらなる一態様において、本発明は、医薬組成物に関する。このような医薬組成物は、本発明による核酸および好ましくは薬学的に許容される結合剤のうち少なくとも１種を含む。このような結合剤は、当技術分野において用いられるおよび／または知られた任意の結合剤であってもよい。より具体的には、このような結合剤は、本明細書に開示されている薬剤の製造に関連して記載されているいずれかの結合剤である。さらなる一実施形態において、医薬組成物は、さらなる薬学的活性剤を含む。
【０２２１】
薬剤および医薬組成物の調製は、本開示を踏まえ、当業者にとって公知のものとなるであろう。通常、このような組成物は、液体の溶液または懸濁液のいずれかとしての注射剤として；注射前の液体における溶液または懸濁液に適した固形として；経口投与用の錠剤または他の固体として；経時放出カプセルとして；または点眼剤、クリーム、ローション、軟膏、吸入剤等、現在用いられているその他の形態で調製することができる。手術分野における特定の範囲を治療するための外科医、内科医または医療従事者による生理食塩水ベースの洗浄液等、無菌製剤の使用もまた、特に有用となり得る。組成物は、微小デバイス、微粒子またはスポンジを介して送達されてもよい。
【０２２２】
製剤化した後に、薬剤は、投薬製剤と適合した様式で、薬理学的に有効な量が投与されるであろう。製剤は、上述の注射用溶液型等の種々の剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセルその他が用いられてもよい。
【０２２３】
本発明の薬剤は、経時放出および持続放出錠剤またはカプセル、丸薬、粉末、顆粒、エリキシル剤、チンキ、懸濁液、シロップ、およびエマルジョンとしての経口の剤形で投与することもできる。坐剤は、脂肪性エマルジョンまたは懸濁液から有利に調製される。
【０２２４】
医薬組成物または薬剤は、滅菌することもでき、かつ／または保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調節のための塩および／または緩衝液等、アジュバントを含有することもできる。さらに、これらは、他の治療上有用な物質を含有することもできる。組成物は、従来の混合、顆粒化、またはコーティングの方法に従って調製され、通常、約０．１％〜７５％、好ましくは約１％〜５０％の有効成分を含有する。
【０２２５】
液体、特に注射用組成物を、例えば、溶解、分散等により調製することができる。活性化合物は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水、グリセロール、エタノール等、薬学的に純粋な溶媒に溶解またはそれと混合されて、これにより、注射用溶液または懸濁液を生成する。さらに、注射前に液体に溶解するのに適した固形を製剤化することができる。
【０２２６】
本発明の薬剤および核酸分子はそれぞれ、小型の単層小胞、大型の単層小胞および多層状小胞等、リポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンを含有する種々のリン脂質から生成することができる。一部の実施形態において、脂質成分の薄膜は、薬物の水溶液により水分補給されて、当業者によく知られた、薬物を被包する脂質層を形成する。例えば、本明細書に記載されている核酸分子は、当技術分野で公知の方法を用いて構築された親油性化合物または非免疫原性高分子量化合物との複合体として提供することができる。さらに、リポソームは、標的化のためにその表面にこのような核酸分子を有し、細胞毒を内部に有して細胞殺傷性を媒介することができる。核酸と結び付いた複合体の例は、米国特許第６，０１１，０２０号明細書に提示されている。
【０２２７】
本発明のそれぞれ薬剤および核酸分子は、標的化可能な薬物担体としての可溶性ポリマーと共役することもできる。このようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパナミドフェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌａｓｐａｎａｍｉｄｅｐｈｅｎｏｌ）またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを含み得る。さらに、本発明のそれぞれ薬剤および核酸分子は、薬物の徐放の達成において有用な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレートおよびハイドロゲルの架橋結合または両親媒性ブロックコポリマーと共役することができる。
【０２２８】
必要に応じて、投与すべき医薬組成物および薬剤はそれぞれ、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤ならびに例えば酢酸ナトリウムおよびオレイン酸トリエタノールアミン等の他の物質等、少量の無毒性補助物質を含有していてもよい。
【０２２９】
本発明の核酸分子および薬剤のそれぞれを利用する投薬レジメンは、患者の種類、種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療すべき状態の重症度；投与経路；患者の腎および肝機能；ならびに用いられている特定のアプタマーまたはその塩等、種々の要因に基づき選択される。通常の技能を有する医師または獣医師は、状態の進行の抑制、対抗または抑止に必要とされる薬物の有効量を容易に決定および処方することができる。
【０２３０】
本発明による核酸の有効血漿レベルは、好ましくは、本明細書に開示されている疾患のいずれかの治療において、５００ｆＭ〜２００μＭ、好ましくは１ｎＭ〜２０μＭ、より好ましくは５ｎＭ〜２０μＭ、最も好ましくは５０ｎＭ〜２０μＭの範囲にわたる。
【０２３１】
本発明の核酸分子および薬剤はそれぞれ、好ましくは、一日量、２日もしくは３日毎、毎週、２週毎、毎月または３か月毎の用量で投与することができる。
【０２３２】
本明細書に記載されている薬剤が、本明細書に開示されている医薬組成物を構成することは、本発明の範囲内である。
【０２３３】
さらに別の一態様において、本発明は、このような治療を必要としている対象の治療のための方法であって、薬学的有効量の本発明による核酸の少なくとも１種の投与を含む方法に関連する。一実施形態において、対象は、疾患を患うまたはこのような疾患を発症するリスクがあり、疾患は、本明細書に開示されている疾患のいずれか、特に、薬剤を製造するための本発明による核酸のいずれかの使用に関連して開示されている疾患のいずれかである。
【０２３４】
好ましくは、本明細書において、治療という用語は、好ましい一実施形態では、追加的にまたは代替的に予防および／または経過観察を含む。
【０２３５】
好ましくは、本明細書において、疾患および障害という用語は、反対のことを示さない場合は互換的に使用されるものとする。
【０２３６】
本明細書において、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）という用語は、好ましくは、このような用語に続くまたはこれによって説明される内容の限定を意図しない。しかし、代替的な一実施形態において、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）という用語は、含有（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の意味で、したがって、このような用語に続くまたはこれによって説明される内容を限定するものとして理解されるものとする。
【０２３７】
様々な配列番号、本発明による核酸分子および本明細書における標的分子ＳＤＦ−１の化学的性質、その実際の配列ならびに内部参照番号は、次表に要約されている。核酸が、アプタマー、即ち、ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１（配列番号４）によるＤ−核酸レベル（Ｄ−ＲＮＡ）で、またはスピーゲルマーレベル、即ち、天然の立体配置のＳＤＦ−１、Ｌ−ＳＤＦ−１（ヒトＳＤＦ−１α、配列番号１）によるＬ−核酸（Ｌ−ＲＮＡ）で特徴付けられていることに留意されたい。異なる核酸は、１個の内部参照名を共有するが、それぞれＤ−ＲＮＡ（アプタマー）分子に対し１個の配列番号およびＬ−ＲＮＡ（スピーゲルマー）分子に対し１個の配列番号を有する。
【表１Ａ】
2013540725.tif 000002
【表１Ｂ】
2013540725.tif 000003
【表１Ｃ】
2013540725.tif 000004
【表１Ｄ】
2013540725.tif 000005
【表１Ｅ】
2013540725.tif 000006
【表１Ｆ】
2013540725.tif 000007
【表１Ｇ】
2013540725.tif 000008
【表１Ｈ】
2013540725.tif 000009
【表１Ｉ】
2013540725.tif 000010
【表１Ｊ】
2013540725.tif 000011
【表１Ｋ】
2013540725.tif 000012
【表１Ｌ】
2013540725.tif 000013
【表１Ｍ】
2013540725.tif 000014
【表１Ｎ】
2013540725.tif 000015
【表１Ｏ】
2013540725.tif 000016
【表１Ｐ】
2013540725.tif 000017
【０２３８】
本発明は、図面、実施例および配列表によってさらに説明され、それらからさらなる特徴、実施形態および利点を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【０２３９】
【図１】「Ａ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子の配列のアラインメントを示す。
【図２Ａ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９２−Ａ１０−００１（「Ａ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図２Ｂ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９２−Ａ１０−００１（「Ａ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図３】「Ｂ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子の配列のアラインメントを示す。
【図４Ａ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｇ２−００１（Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図４Ｂ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｇ２−００１（Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図５】「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子の配列のアラインメントを示す。
【図６】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９０−Ａ３−００１（「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図７Ａ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９０−Ｄ５−００１（「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図７Ｂ】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９０−Ｄ５−００１（「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図８】ＳＤＦ−１結合核酸分子１９７−Ｂ２（「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子）の誘導体を示す。
【図９】他のＳＤＦ−１結合核酸分子に加えて、ＳＤＦ−１結合核酸分子をさらに示し、該分子は「Ｄ型」のＳＤＦ−１結合核酸分子とも称される。
【図１０】ヒトＴ細胞白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔを用いた走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ａ１２とも称される）、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧの効果を示し、種々の量のスピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧと共に３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に対して細胞を移動させ、スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、１９７−Ｂ２−００６−５’−ＰＥＧ、１９１−Ｄ５−００７−５’−ＰＥＧおよび１９１−Ａ１０−００８−５’−ＰＥＧの濃度に対する対照の割合として表す。
【図１１】図１１Ａは、ヒトｐｒｅ−Ｂ  ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ−６を用いた走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、種々の量のスピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２と共に３７℃でプレインキュベートした０．３ｎＭヒトＳＤＦ−１に対して細胞を移動させ、スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の濃度に対する対照の割合として表す。図１１Ｂは、ヒト白血性単球リンパ腫細胞株Ｕ９３７を用いた走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、種々の量のスピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２と共に３７℃でプレインキュベートした３ｎＭヒトＳＤＦ−１に対して細胞を移動させ、スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の濃度に対する対照の割合として表す。
【図１２】ヒトｐｒｅ−Ｂ細胞白血病細胞株ＢＶ−１７３を用いた走化性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、種々の量のスピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２と共に３７℃でプレインキュベートした３ｎＭヒトＳＤＦ−１に対して細胞を移動させ、スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の濃度に対する対照の割合として表す。
【図１３】β−ガラクトシダーゼの断片に両方融合したＣＸＣＲ７およびβ−アレスチンを安定に発現するＣＨＯ細胞を用いた相補性アッセイにおけるＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、種々の量のスピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２と共に３７℃でプレインキュベートした１０ｎＭヒトＳＤＦ−１に対して細胞のＣＸＣＲ７を活性化させ、スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の濃度に対する対照の割合として表す。
【図１４】大動脈輪発芽アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ａ１２とも称される）、およびＰＥＧ化対照スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘導性発芽の阻害を示し、ラット大動脈由来の輪をコラーゲンマトリクスに埋め込み、スピーゲルマーを有するかまたは有さないＳＤＦ−１と共に６日間インキュベートした（ａ：対照、ｂ：１０ｎＭのＳＤＦ−１、ｃ：１０ｎＭのＳＤＦ−１＋１μＭのヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧ、ｄ：１０ｎＭのＳＤＦ−１＋１μＭのＰＥＧ化対照スピーゲルマー）。
【図１５】大動脈輪発芽アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ａ１２とも称される）、およびＰＥＧ化対照スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘導性発芽の阻害を示し、病態ごとに５つの輪について発芽指標を平均＋／−ＳＤとして示す（＊：ＳＤＦ−１についての値は対照と顕著に異なる（マンホイットニー検定、ｐ＝０．００９）、＊＊：ＳＤＦ−１＋ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧについての値はＳＤＦ−１についての値と顕著に異なる（マンホイットニー検定、ｐ＝０．０２８）。
【図１６】Ｆ−ａｒａ−Ａ（フルダラビン）に対してＲＰＭＩ−８２２６ＮＭ細胞を感受性化するヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、ＳＤＦ−１を分泌するコンフルエントなマウスＢＭ間質ＭＳ−５細胞をヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２または非機能的ｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２と共にインキュベートし、続いてＲＰＭＩ−８２２６ＭＭ細胞と共培養し、細胞を１μＭのＦ−ａｒａ−Ａを用いて４０時間処理し、ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を使用したフローサイトメトリーにより細胞生存率を測定し、エラーバーはＳＤ、Ｎ＝５、＊ｐ＝０．０１３４、＊＊＊ｐ＝０．０００３（両側、独立ｔ検定）を示す。
【図１７】間質ＭＳ−５細胞との共培養におけるＪｕｒｋａｔ細胞の増殖を阻害するヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、ＳＤＦ−１を分泌するマウス間質ＭＳ−５細胞を、高濃度のヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２と共にインキュベートし、Ｊｕｒｋａｔ細胞をコンフルエントなＭＳ−５細胞層に加え、ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を使用したフローサイトメトリーにより細胞数を４０時間後に測定した。エラーバーは、ＳＤ、Ｎ＝４、＊＊＊ｐ＝０．０００８（両側、独立ｔ検定）を示す。
【図１８】図１８Ａは、Ｊｕｒｋａｔ細胞のフィブロネクチンに対するＳＤＦ−１用量依存性接着を反転するヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＳＤＦ−１単独（Ａ）と共に３０分間インキュベートし、フィブロネクチンをコーティングしたプレートに１５分間播種し、続いて細胞を培地から洗い落とし、付着した細胞を、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を使用して定量し、エラーバーはＳＤを示す。図１８Ｂは、Ｊｕｒｋａｔ細胞のフィブロネクチンに対するＳＤＦ−１用量依存性接着を反転するヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を示し、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＳＤＦ−１および高濃度のヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２またはＳＤＦ−１および高濃度の対照スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２（Ｂ）と共に３０分間インキュベートし、フィブロネクチンをコーティングしたプレートに１５分間播種し、続いて細胞を培地から洗い落とし、付着した細胞を、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を使用して定量し、エラーバーはＳＤを示す。
【実施例】
【０２４０】
［実施例１：ヒトＳＤＦ−１に結合する核酸］
以下において、「核酸」および「核酸分子」という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。さらに、「ストレッチ」および「ヌクレオチドのストレッチ」という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。
【０２４１】
ヒトＳＤＦ−１に結合するＬ−核酸分子およびそれぞれのヌクレオチド配列を図１〜９に示す。ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１を用いた競合的または直接プルダウン結合アッセイを使用してアプタマー、すなわちＤ−核酸レベルで核酸を特徴付けた（プロトコル、実施例３を参照）。Ｂｉａｃｏｒｅ２０００装置（プロトコル、実施例５を参照）および細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイ（プロトコル、実施例４を参照）を使用して表面プラズモン共鳴測定によってＳＤＦ−１（Ｌ−ＳＤＦ−１）の天然立体配置を用いてスピーゲルマーを試験した。
【０２４２】
ＳＤＦ−１結合核酸分子は異なる配列モチーフを表し、３つの主な種類を、図１、２Ａ、および２Ｂ（Ａ型）、図３、４Ａ、および４Ｂ（Ｂ型）、図５、４、７Ａ、７Ｂ、および８（Ｃ型）に示す。核酸分子は異なる配列モチーフを表す。ヌクレオチド配列モチーフの定義のために、曖昧なヌクレオチドに関してＩＵＰＡＣ略称を以下のように使用する。
Ｓ  強          ＧまたはＣ、
Ｗ  弱          ＡまたはＵ、
Ｒ  プリン      ＧまたはＡ、
Ｙ  ピリミジン  ＣまたはＵ、
Ｋ  ケト        ＧまたはＵ、
Ｍ  イミノ      ＡまたはＣ、
Ｂ  Ａでない    ＣまたはＵまたはＧ、
Ｄ  Ｃでない    ＡまたはＧまたはＵ、
Ｈ  Ｇでない    ＡまたはＣまたはＵ、
Ｖ  Ｕでない    ＡまたはＣまたはＧ、
Ｎ  全て        ＡまたはＧまたはＣまたはＵ。
反対のことを示さない場合、任意の核酸配列またはストレッチおよびボックスの配列は、それぞれ５’→３’の方向で示す。
【０２４３】
＜Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子＞
図１に示すように、Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子の全ての配列は、ヌクレオチドの第１の末端（５’末端）ストレッチおよび第２の末端（３’末端）ストレッチ（ヌクレオチドの第１の末端ストレッチおよびヌクレオチドの第２のストレッチとも称される）に隣接する、ヌクレオチドの中心ストレッチを１つ含み、両方のストレッチは互いにハイブリダイズできる。しかしながら、このようなハイブリダイゼーションは分子内に必ずしも与えられるわけではない。
【０２４４】
以下において、「Ａ型のＳＤＦ−１結合核酸分子」および「Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸」または「Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸分子」という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。
【０２４５】
定義されたヌクレオチドのボックスまたはストレッチの配列は、ＳＤＦ−１に対する結合親和性に影響を与えるＡ型のＳＤＦ−１結合核酸の間で異なっていてもよい。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸としてまとめた異なるＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、以下に記載しているようにヌクレオチドの中心ストレッチおよびそのヌクレオチド配列は個々に、より好ましくはそれらの全体がＳＤＦ−１との結合に不可欠である。
【０２４６】
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の全ての特定された配列のヌクレオチドの中心ストレッチは、配列
【化１】
2013540725.tif 000018
（Ａ型式−１、配列番号７４）（式中、ＸＡは不在または「Ａ」のいずれかである）を共有する。「Ａ」が不在である場合、中心ヌクレオチド配列の配列はＡ型式−２（
【化２】
2013540725.tif 000019
配列番号７５としてまとめることができる。中心ヌクレオチド配列内にさらなるヌクレオチド「Ａ」を保有し、ＳＤＦ−１に依然として結合しているＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ａ６（中心ヌクレオチド配列：
【化３】
2013540725.tif 000020
配列番号５４）は、代替の中心ヌクレオチド配列（
【化４】
2013540725.tif 000021
Ａ型式−３、配列番号７６）と結論付けられる。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の他の核酸の全てについての例は、ヒトＳＤＦ−１に対するその結合親和性について特徴付けた。平衡結合定数ＫＤは、プルダウン結合アッセイ（ＫＤ＝１．５ｎＭ）を使用し、表面プラズモン共鳴測定（ＫＤ＝１．０ｎＭ）により決定した。１９２−Ａ１０−００１についての０．１２ｎＭのＩＣ５０（阻害濃度５０％）は、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。その結果として、図１に示したような全てのＡ型ＳＤＦ−１結合核酸は、１９２−Ａ１０−００１に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析された。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０は、これらの競合実験において１９２−Ａ１０−００１と同等の結合親和性を示した。より弱い結合親和性を、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｇ１０、１９２−Ｆ１０、１９２−Ｃ９、１９２−Ｅ１０、１９２−Ｄ１１、１９２−Ｇ１１、１９２−Ｈ１１および１９１−Ａ６について決定した。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｄ１０、１９２−Ｅ９および１９２−Ｈ９は１９２−Ａ１０−００１より大変弱い結合親和性を有する。
【０２４７】
上述のように、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０は、１９２−Ａ１０−００１と同等のＳＤＦ−１に対する結合親和性を表す。しかしながら、それらはヌクレオチドの中心ストレッチのヌクレオチド配列のわずかな差異を示す。したがって、ほぼ同じ高親和性でＳＤＦ−１に結合する３つの分子のコンセンサス配列はヌクレオチド配列
【化５】
2013540725.tif 000022
（Ａ型式−４、配列番号７７））によりまとめることができ、１９２−Ａ１０−００１のヌクレオチドの中心ストレッチのヌクレオチド配列（ヌクレオチド配列：
【化６】
2013540725.tif 000023
配列番号８４）は、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の最適な結合親和性を有するヌクレオチド配列を表す。
【０２４８】
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端ストレッチ（第１の末端ストレッチとも称される）の６個のヌクレオチドのうちの５または６個は、３’末端ストレッチ（第２の末端ストレッチとも称される）の６個のヌクレオチドのうちのそれぞれの５または６個のヌクレオチドとハイブリダイズして末端ヘリックスを形成できる。これらのヌクレオチドはいくつかの位置において可変であるが、異なるヌクレオチドが、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの各々の６個のヌクレオチドのうちの５または６個のハイブリダイゼーションを可能にする。図１に示すようにＡ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端および３’末端ストレッチは、５’末端ストレッチ（「ＲＳＨＲＹＲ」、Ａ型式−５−５’）について、および３’末端ストレッチ（「ＹＲＹＤＳＹ」、Ａ型式−５−３’）についての一般式にまとめることができる。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１のトランケートされた誘導体を、元の分子１９２−Ａ１０−００１および１９２−Ａ１０−００８に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析した（図２Ａおよび２Ｂ）。これらの実験により、１９２−Ａ１０−００１の６個の末端ヌクレオチド（５’末端：ＧＣＵＧＵＧ、３’末端：ＣＧＣＡＧＣ）から誘導体１９２−Ａ１０−００２の５個のヌクレオチド（５’末端：ＣＵＧＵＧ、３’末端：ＣＧＣＡＧ）への減少が、結合親和性を減少させずに行われ得ることが示された。しかしながら、４個の末端ヌクレオチド（５’末端：ＵＧＵＧ、３’末端：ＣＧＣＡ、１９２−Ａ１０−００３）またはそれ未満（１９２−Ａ１０−００４／−００５／−００６／−００７）へのトランケーションは、ＳＤＦ−１に対する低い結合親和性を導いた（図２Ａ）。図２Ａおよび２Ｂに示すようなＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の誘導体の５個および４個のヌクレオチドの長さを有する決定した５’末端および３’末端ストレッチは、５’末端ストレッチ（「Ｘ２ＢＢＢＳ」、Ａ型式−６−５’）について、および３’末端ストレッチ（「ＳＢＢＶＸ３」、Ａ型式−６−３’）についての一般式で記載できる（式中、Ｘ２は不在または「Ｓ」のいずれかであり、Ｘ３は不在または「Ｓ」のいずれかである）。
【０２４９】
５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのヌクレオチド配列は、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の結合親和性に影響を与える。これは核酸１９２−Ｆ１０および１９２−Ｅ１０により示されるだけでなく、１９２−Ａ１０−００１の誘導体によっても示される（図２Ｂ）。１９２−Ｆ１０および１９２−Ｅ１０の中心ストレッチは、１９２−Ｂ１１および１９２−Ｃ１０と同一であるが、５’末端ストレッチの３’末端においておよび３’末端ストレッチの５’末端においてわずかな相違を含み、低い結合親和性を生じる。
【０２５０】
Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２の５’ 末端ヌクレオチドおよび３’末端ヌクレオチド「ＣＵＧＵＧ」および「ＣＧＣＡＧ」の「ＧＣＧＣＧ」および「ＣＧＣＧＣ」（１９２−Ａ１０−０１５）による置換は低い結合親和性を生じるのに対して、「ＧＣＧＵＧ」および「ＣＧＣＧＣ」（１９２−Ａ１０−００８）による置換は１９２−Ａ１０−００２について示したものと同じ結合親和性を生じる（図２Ｂ）。さらに、４個の５’ 末端ヌクレオチドおよび３’末端ヌクレオチドをそれぞれ保有するＡ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１の９個の誘導体（１９２−Ａ１０−０１４／−０１５／−０１６／−０１７／−０１８／−０１９／−０２０／−０２１／−０２２／−０２３）を、１９２−Ａ１０−００１またはその誘導体１９２−Ａ１０−００８（両方ともＳＤＦ−１に対して同一の結合親和性を有する）に対するそれらの結合親和性についてのアプタマーとして試験した。全ての分子は、それぞれ、１９２−Ａ１０−００１（末端ヘリックスを形成する６個のヌクレオチド）のような、または５個の末端ヌクレオチドを有する１９２−Ａ１０−００８のようなＳＤＦ−１に対して弱い、大変弱い、または非常に大変弱い結合親和性を示した（図２Ｂ）。したがって、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのヌクレオチドの配列および数はＳＤＦ−１に対する効果的な結合に必須である。Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２および１９２−Ａ１０−０８について示しているように、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの好ましい組み合わせは、「ＣＵＧＵＧ」および「ＣＧＣＡＧ」（Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００２の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチ）ならびに「ＧＣＧＵＧ」および「ＣＧＣＧＣ」（Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００８の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチ）である。
【０２５１】
しかしながら、全ての試験したＡ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを組み合わせると、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端ストレッチについての一般式は「Ｘ１Ｘ２ＮＮＢＶ」（Ａ型式−７−５’）であり、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸の３’末端ストレッチについての一般式は「ＢＮＢＮＸ３Ｘ４」（Ａ型式−７−３’）である
（式中、Ｘ１は「Ｒ」もしくは不在であり、Ｘ２は「Ｓ」であり、Ｘ３は「Ｓ」であり、Ｘ４は「Ｙ」もしくは不在であり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は「Ｓ」もしくは不在であり、Ｘ３は「Ｓ」もしくは不在であり、Ｘ４は不在である）。
【０２５２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのスピーゲルマーの血漿残留時間を延長するために、スピーゲルマー１９２−Ａ１０−００８を、２章に記載しているように５’末端において４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に共有結合した。ＰＥＧ部分は、ＳＤＦ−１誘導走化性を阻害するスピーゲルマーの効果に影響を与えない。
【０２５３】
＜Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子＞
図３に示すように、Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸の全ての配列は、互いにハイブリダイズできる５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチ（ヌクレオチドの第１および第２の末端ストレッチとも称される）に隣接するヌクレオチドの１つの中心ストレッチを含む。しかしながら、このようなハイブリダイゼーションは分子内に必ずしも与えられるわけではない。
【０２５４】
以下において、「Ｂ型のＳＤＦ−１結合核酸分子」および「Ｂ型ＳＤＦ−１結合核酸」またはＢ型ＳＤＦ−１結合核酸分子」という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。
【０２５５】
定義したボックスまたはストレッチの配列は、ＳＤＦ−１に対する結合親和性に影響を与えるＳＤＦ−１結合核酸の間で異なっていてもよい。異なるＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、以下に記載しているようなヌクレオチドの中心ストレッチおよびそのヌクレオチド配列は、個々に、より好ましくはそれらの全体が、ＳＤＦ−１との結合に不可欠である。
【０２５６】
ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｃ２−００１、１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｆ２−００１、１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２、１９３−Ｄ３−００２、１９３−Ｂ３−００２、１９３−Ｈ３−００２、１９３−Ｅ３−００２および１９３−Ｄ１−００２の全ての特定された配列のヌクレオチドの中心ストレッチは、配列
【化７】
2013540725.tif 000024
（Ｂ型式−１、配列番号５２）を共有する。ヌクレオチドの中心ストレッチ（ヌクレオチドの中心ストレッチのコンセンサス配列：
【化８】
2013540725.tif 000025
（Ｂ型式−２、配列番号５３）の１つの位置が異なるＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１を、ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析した（プルダウン結合アッセイにおいて決定した１．５ｎＭのＫＤ、０．１２ｎＭのＩＣ５０）。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２の各々は、ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１と比較してヒトＳＤＦ−１に対して優れた結合を示し、１９３−Ｇ２−００１の結合親和性は１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１と同程度である（図３）。このデータにより、ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１、１９３−Ｃ２−００１および１９３−Ｆ２−００１のヌクレオチドの中心ストレッチのヌクレオチド配列の相違は、ＳＤＦ−１に対する結合親和性に対して影響を与えないことが示唆される。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２、１９３−Ｄ３−００２、１９３−Ｂ３−００２、１９３−Ｈ３−００２、１９３−Ｅ３−００２および１９３−Ｄ１−００２は、ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１と比較してヒトＳＤＦ−１に対して低い結合を示した。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１をヒトＳＤＦ−１に対するその結合親和性について特徴付けた。平衡結合定数ＫＤはプルダウン結合アッセイを使用して決定した（ＫＤ＝０．３ｎＭ）。１９３−Ｇ２−００１についての０．０８ｎＭのＩＣ５０（阻害濃度５０％）は、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイ使用して測定した。
【０２５７】
ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端ストレッチの６個のヌクレオチドのうちの４、５または６個のヌクレオチドはそれぞれＳＤＦ−１結合核酸の３’末端ストレッチの６個のヌクレオチドのうちの４、５または６個とハイブリダイズして末端ヘリックスを形成できる。
【０２５８】
ヌクレオチドはいくつかの位置において可変であるが、異なるヌクレオチドが、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの各々の６個のヌクレオチドのうちの４、５または６個のヌクレオチドに対するハイブリダイゼーションを可能にする。図３に示すようなＳＤＦ−１結合核酸の５’末端および３’末端ストレッチは、５’末端ストレッチ（「Ｘ１Ｘ２ＧＣＲＷＧ」（式中、Ｘ１は「Ａ」または不在であり、Ｘ２は「Ｇ」である））について、および３’末端ストレッチ（「ＫＲＹＳＣＸ３Ｘ４」（式中、Ｘ３は「Ｇ」であり、Ｘ４は「Ｕ」または不在である））についての一般式にまとめることができる。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２および１９３−Ｄ３−００２は、ＳＤＦ−１に対して、より弱い結合親和性を有するが、それらは、１９３−Ｃ２−００１、１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｆ２−００１とヌクレオチドの同一の中心ストレッチを共有する（図３）。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ１−００２、１９３−Ｄ２−００２、１９３−Ａ１−００２および１９３−Ｄ３−００２の好ましくない結合特性は、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのヌクレオチドおよび配列の数に起因し得る。
【０２５９】
ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−００１のトランケートされた誘導体をそれぞれ１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｇ２−０１２に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析した（図４Ａおよび４Ｂ）。これらの実験により、ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−００１の６個の末端ヌクレオチド（５’末端：ＡＧＣＧＵＧ、３’末端：ＵＡＣＧＣＵ）から５個のヌクレオチド（５’末端：ＧＣＧＵＧ、３’末端：ＵＡＣＧＣ）への減少が同様の結合親和性を有する分子（１９３−Ｃ２−００２および１９３−Ｇ２−０１２）を導くことが示された。平衡解離定数ＫＤをプルダウン結合アッセイを使用して決定した（ＫＤ＝０．３ｎＭ）。４個（５’末端：ＣＧＵＧ、３’末端：ＵＡＣＧ、１９３−Ｃ２−００３）またはそれ未満のヌクレオチド（１９３−Ｃ２−００４、１９３−Ｃ２−００５、１９３−Ｃ２−００６、１９３−Ｃ２−００７）へのトランケーションは、競合的プルダウン結合アッセイを使用することにより測定したＳＤＦ−１に対して低い結合親和性を生じた（図４Ａ）。５’末端および３’末端における５個の末端ヌクレオチドのヌクレオチド配列はそれぞれＳＤＦ−１結合核酸の結合親和性に影響を与える。「ＧＣＧＣＧ」および「ＣＧＣＧＣ」（１９３−Ｇ２−０１３）による５’ 末端ヌクレオチドおよび３’末端ヌクレオチド「ＧＣＧＵＧ」および「ＵＡＣＧＣ」（１９３−Ｃ２−００２、１９３−Ｇ２−１２）の置換により、低い結合親和性が生じた。さらに、４個の塩基対合ヌクレオチドの長さを有する末端ヘリックスを有するＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１の４個の異なる誘導体（１９３−Ｇ２−０１４／−０１５／−０１６／−０１７）を試験した。それらの全てはＳＤＦ−１に対して低い結合親和性を示した（図４Ｂ）。したがって、５’ 末端ヌクレオチドおよび３’末端ヌクレオチドの配列および長さはＳＤＦ−１に対する効果的な結合に不可欠である。図４Ａおよび４Ｂに示すようなＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｃ２−００３および１９３−Ｇ２−０１２の誘導体の５および４個のヌクレオチドの長さを有する５’末端および３’末端ストレッチは、５’末端ストレッチ（「Ｘ１Ｘ２ＳＳＢＳ」）（式中、Ｘ１は不在であり、Ｘ２は不在または「Ｇ」のいずれかである）について、および３’末端ストレッチ（「ＢＶＳＳＸ３Ｘ４」）（式中、Ｘ３は不在または「Ｃ」のいずれかであり、Ｘ４は不在である）についての一般式に記載できる。ＳＤＦ−１結合核酸１９３−Ｇ２−００１および１９３−Ｃ２−０１ならびにそれらの誘導体１９３−Ｇ２−０１２および１９３−Ｃ２−００２について示すように、５’末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの好ましい組み合わせは、「Ｘ１Ｘ２ＧＣＧＵＧ」（５’末端ストレッチ）および「ＵＡＣＧＣＸ３Ｘ４」（３’末端ストレッチ）（式中、Ｘ１は「Ａ」または不在のいずれかであり、Ｘ２は「Ｇ」であり、Ｘ３は「Ｃ」であり、’Ｘ４は「Ｕ」または不在である）である。
【０２６０】
しかしながら、全ての試験したＳＤＦ−１結合核酸の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを組み合わせると、ＳＤＦ−１結合核酸の５’末端ストレッチについての一般式は「Ｘ１Ｘ２ＳＶＮＳ」であり、３’末端ストレッチＳＤＦ−１結合核酸についての一般式は「ＢＶＢＳＸ３Ｘ４」である（式中、
Ｘ１は「Ａ」もしくは不在であり、Ｘ２は「Ｇ」であり、Ｘ３は「Ｃ」であり、Ｘ４は「Ｕ」もしくは不在であり、または
Ｘ１は不在であり、Ｘ２は「Ｇ」もしくは不在であり、Ｘ３は「Ｃ」もしくは不在であり、Ｘ４は不在である）。
【０２６１】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのスピーゲルマーの血漿残留時間を延長するために、スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２を、２章（ＰＥＧ化核酸分子：１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧはＮＯＸ−Ａ１２とも称される）に記載しているように５’末端において４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に共有結合した。ＰＥＧ化スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２をｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおける細胞培養中で分析し、ＳＤＦ−１誘導走化性の阻害を決定した（０．２ｎＭのＩＣ５０）。ＰＥＧ化スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２をＢｉａｃｏｒｅ測定により分析し、０．２ｎＭの結合定数（ＫＤ）を決定した。
【０２６２】
＜Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子＞
図１２に示すように、Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸の全ての配列は、互いにハイブリダイズできる５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチ（ヌクレオチドの第１の末端ストレッチおよび第２の末端ストレッチとも称される）に隣接するヌクレオチドの１つの中心ストレッチを含む。しかしながら、このようなハイブリダイゼーションは分子内に必ずしも与えられるわけではない。
【０２６３】
以下において、「Ｃ型のＳＤＦ−１結合核酸分子」および「Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸」またはＣ型ＳＤＦ−１結合核酸分子」という用語は、反対のことを示さない場合は同意語のように本明細書で使用される。
【０２６４】
定義したボックスまたはストレッチの配列は、ＳＤＦ−１に対する結合親和性に影響を与えるＣ型のＳＤＦ−１結合核酸の間で異なっていてもよい。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸としてまとめられる異なるＳＤＦ−１結合核酸の結合分析に基づいて、以下に記載しているようなヌクレオチドの中心ストレッチおよびそのヌクレオチド配列は、個々に、より好ましくはそれらの全体がＳＤＦ−１との結合に不可欠である。
【０２６５】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸の全ての特定された配列のヌクレオチドの中心ストレッチは、配列
【化９】
2013540725.tif 000026
（Ｃ型式−１、配列番号１０８）（式中、Ｘ４は不在または「Ａ」のいずれかである）を共有する。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｄ１を除いて、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸の全ての特定された配列のヌクレオチドの中心ストレッチは、ヌクレオチド配列
【化１０】
2013540725.tif 000027
（Ｃ型式−２、配列番号１０９）を共有する。ヌクレオチドの中心ストレッチ内の１つのヌクレオチド「Ａ」を欠失し、依然としてＳＤＦ−１に結合しているＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｄ１（ヌクレオチドの中心ストレッチ：
【化１１】
2013540725.tif 000028
（配列番号５６）は、ヌクレオチドの代替の中心ストレッチ（
【化１２】
2013540725.tif 000029
Ｃ型式−３、配列番号１１０）と結論付けられる。最初に、図５に示したような全てのＣ型ＳＤＦ−１結合核酸を、Ａ型ＳＤＦ−１結合核酸１９２−Ａ１０−００１に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析した（プルダウンアッセイにより、および表面プラズモン共鳴測定により決定したＫＤ＝１．５ｎＭ、ＩＣ５０＝０．１２ｎＭ）。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｂ２、１９０−Ａ３−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｈ３および１９７−Ｅ３は、競合実験において１９２−Ａ１０−００１より弱い結合親和性を示した。大変弱い結合親和性を１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｄ１、１９７−Ｈ２および１９７−Ｄ２について決定した（図５）。それらの分子または誘導体を、さらなる競合的プルダウン結合アッセイ、プラズモン共鳴測定およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイによりさらに特徴付けた。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１をヒトＳＤＦ−１に対するその結合親和性について特徴付け、一方で、平衡結合定数ＫＤを表面プラズモン共鳴測定により決定した（ＫＤ＝０．８ｎＭ）。１９１−Ｄ５−００１についての０．２ｎＭのＩＣ５０（阻害濃度５０％）を、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。ヒトＳＤＦ−１についてのＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２の結合親和性を表面プラズモン共鳴測定（ＫＤ＝０．９ｎＭ）により決定し、０．２ｎＭのそのＩＣ５０（阻害濃度５０％）を、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイにおいて分析した。これらのデータにより、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１および１９７−Ｂ２がＳＤＦ−１と同様の結合親和性を有することが示される（図５および８）。
【０２６６】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９０−Ａ３−００１は、１７個のヌクレオチド（「ＣＧＵＧＣＧＣＵＵＧＡＧＡＵＡＧＧ」、配列番号２２０）の５’末端ストレッチおよび１２個のヌクレオチド（「ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡＣＧ」、配列番号２２１）の３’末端ストレッチを含み、一方で、５’末端ストレッチの５’末端における４個のヌクレオチドおよび３’末端ストレッチの３’末端における４個のヌクレオチドは、互いにハイブリダイズして末端ヘリックスを形成できる。代替として、５’末端ストレッチにおけるヌクレオチド「ＵＧＡＧＡ」は、３’末端ストレッチにおけるヌクレオチド「ＵＣＵＣＡ」にハイブリダイズして末端ヘリックスを形成できる。分子１９０−Ａ３−００１の５’末端ストレッチ（「ＵＧＡＧＡＵＡＧＧ」）の９個のヌクレオチドまで、および３’末端ストレッチ（「ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ」）の１０個（「ＣＵＧＡＵＵＣＵＣＡ」、配列番号２２２）のヌクレオチドまでの減少はＳＤＦ−１との結合親和性に対して影響を与えない（１９０−Ａ３−００３、図１３）。分子１９０−Ａ３−００１の５’末端ストレッチ（「ＧＡＧＡＵＡＧＧ」）の８個のヌクレオチドまで、および３’末端ストレッチ（「ＣＵＧＡＵＵＣＵＣ」）の９個のヌクレオチドまでの減少はＳＤＦ−１との結合親和性に対して影響を与えない（１９０−Ａ３−００４、図６）。１９０−Ａ３−００４の平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイ（ＫＤ＝４．６ｎＭ）を使用して、表面プラズモン共鳴測定（ＫＤ＝４．７ｎＭ）により決定した。１９０−Ａ３−００４についての０．１ｎＭのＩＣ５０（阻害濃度５０％）を、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。しかしながら、５’末端ストレッチにおける２個のヌクレオチドへのトランケーションは結合親和性の非常に強力な低下を導く（１９０−Ａ３−００７、図６）。
【０２６７】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｂ２および１９７−Ｈ１（ヌクレオチドの中心ストレッチ：
【化１３】
2013540725.tif 000030
配列番号５７、１９７−Ｈ３／１９１−Ａ５（ヌクレオチドの中心ストレッチ：
【化１４】
2013540725.tif 000031
配列番号５８および１９７−Ｅ３／１９７−Ｂ１（ヌクレオチドの中心ストレッチ：
【化１５】
2013540725.tif 000032
配列番号５９は、ほぼ同一のヌクレオチドの中心ストレッチ（Ｃ型式−４；ヌクレオチド配列：
【化１６】
2013540725.tif 000033
配列番号１１１）を共有する。１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｂ２および１９７−Ｈ１は同様の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを共有しない（１９７−Ｈ３および１９７−Ｅ３は１９７−Ｂ２と同一の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを有する）。しかしながら、５’末端ストレッチのそれぞれの１０個（１９７−Ｂ２、１９７−Ｅ３、１９７−Ｈ３）または１０個のうちの９個（１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１）のヌクレオチドは、３’末端ストレッチのそれぞれの１０個（１９７−Ｂ２、１９７−Ｅ３、１９７−Ｈ３）または１０個のうちの９個（１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１）のヌクレオチドとハイブリダイズできる（図５）。したがって、上述のＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３の５’末端ストレッチに加えて１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｈ２、１９７−Ｄ１および１９７−Ｄ２は、「ＲＫＳＢＵＳＮＶＧＲ」（Ｃ型式−５−５’、配列番号１３８）の共通の一般的ヌクレオチド配列を含む。上述のＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３、および１９７−Ｈ３の３’末端ストレッチに加えて１９１−Ａ５、１９７−Ｂ１、１９７−Ｈ２、１９７−Ｄ１および１９７−Ｄ２は、「ＹＹＮＲＣＡＳＳＭＹ」（Ｃ型式−５−３’、配列番号１３９）の共通の一般的ヌクレオチド配列を含み、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチが好ましい。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９７−Ｅ３および１９７−Ｈ３のこれらの好ましい５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチは、一般式「ＲＫＳＢＵＧＳＶＧＲ」（Ｃ型式−６−５’、５’末端ストレッチ、配列番号１４０）および「ＹＣＮＲＣＡＳＳＭＹ」（Ｃ型式−６−３’、３’末端ストレッチ、配列番号１４１）にまとめることができる。
【０２６８】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１のトランケートされた誘導体を、元の分子１９１−Ｄ５−００１に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて構築し、試験した（図７Ａ、図７Ｂ）。最初に、図１４Ａに示されるように、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの長さを、各々１０個のヌクレオチド（１９１−Ｄ５−００１）から各々７個のヌクレオチド（１９１−Ｄ５−００４）まで短くし、５’末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの１０個のうちの９個（１９１−Ｄ５−００１）または７個のヌクレオチドのうちの６個（１９１−Ｄ５−００４）はそれぞれ互いにハイブリダイズできる。それぞれ５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチの７個のヌクレオチド（一方で７個のヌクレオチドのうちの６個は互いにハイブリダイズできる）までの減少は、ＳＤＦ−１（１９１−Ｄ５−００４）に対する低い結合親和性を導いた。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００４の末端ストレッチを修飾し、１９１−Ｄ５−００４の３’末端ストレッチ内の非対合ヌクレオチド「Ａ」を「Ｃ」（１９１−Ｄ５−００５）に置換した。この修飾は結合の向上を導いた。この誘導体、Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００５は、１９１−Ｄ５−００１と同様のＳＤＦ−１に対する結合を示した。５個のヌクレオチドまでの５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのさらなるトランケーションはそれぞれ合計２９個のヌクレオチドの長さを有する分子（１９１−Ｄ５−００７）を導いた。１９１−Ｄ５−００１ならびにＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２、１９１−Ｄ５−００１、１９７−Ｈ１、１９１−Ａ５、１９７−Ｈ３、１９７−Ｂ１、１９７−Ｅ３、１９７−Ｄ１、１９７−Ｈ２および１９７−Ｄ２の類似性のために、ならびに１９１−Ｄ５−００７について示されるデータのために、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチが、原則として５個のヌクレオチドに至るまでトランケートできることが想定でき、５’末端ストレッチについてのヌクレオチド配列「ＣＧＧＧＡ」および３’末端ストレッチについての「ＵＣＣＣＧ」を成功裏に試験した（Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００７）。Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００７は驚くべきことに、１９１−Ｄ５−００１よりＳＤＦ−１に対していくらか良く結合する（競合的結合アッセイを使用してアプタマーで決定した）。１９１−Ｄ５−００７の平衡結合定数ＫＤを、プルダウン結合アッセイ（ＫＤ＝２．２ｎＭ）を使用して、表面プラズモン共鳴測定（ＫＤ＝０．８ｎＭ）により決定した。１９１−Ｄ５−００７についての０．１ｎＭのＩＣ５０（阻害濃度５０％）を、細胞培養ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイを使用して測定した。両方の末端ストレッチを４個のヌクレオチドまでさらにトランケーションする（１９１−Ｄ５−０１０、図７Ａ）。
【０２６９】
それぞれ４個のヌクレオチドの５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを保有するＣ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１のさらなる誘導体（１９１−Ｄ５−０１７／−０２４／−０２９）もまた、１９１−Ｄ５−００７に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいてＳＤＦ−１に対して低い結合親和性を示した（図７Ｂ）。それぞれ５個のヌクレオチドの長さを有する代替の５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチもさらに試験した（１９１−Ｄ５−０１７−２９ａ、１９１−Ｄ５−０１７−２９ｂ、１９１−Ｄ５−０１９−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ）。５’末端ストレッチについてのこれらの誘導体の一般式は「ＸＳＳＳＳＶ」（Ｃ型式７−５’）であり、３’ストレッチについては「ＢＳＳＳＸＳ」Ｃ型式７−３’）である（式中、ＸＳは不在または「Ｓ」である）。５個の試験した変異体のうちの２個は、１９１−Ｄ５−００７と同一のＳＤＦ−１に対する結合親和性を示した（１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ、図７Ｂ）。ＳＤＦ−１に対する最適な結合親和性を示し、５個のヌクレオチド（１９１−Ｄ５−００７、１９１−Ｄ５−０２４−２９ａ、１９１−Ｄ５−０２４−２９ｂ）のそれぞれの５’末端および３’末端ストレッチを含む１９１−Ｄ５−００１誘導体の５’末端および３’末端ストレッチの配列は、一般式（５’末端ストレッチ：「ＳＧＧＳＲ」、Ｃ型式８−５’、３’末端ストレッチ：「ＹＳＣＣＳ」、Ｃ型式−８−３’）にまとめることができる。
【０２７０】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９７−Ｂ２のトランケートされた誘導体を、元の分子１９７−Ｂ２および１９１−Ｄ５−００７に対する競合的プルダウン結合アッセイにおいて分析した（図７）。１９１−Ｄ５−００７に対する競合的プルダウン結合アッセイを使用することにより、１９７−Ｂ２が、１９１−Ｄ５−００７と同じＳＤＦ−１に対する結合親和性を有することが示された。５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを、各々１０個のヌクレオチド（１９７−Ｂ２）から各々５個のヌクレオチド（１９７−Ｂ２−００５）まで結合親和性を損失させずに短くし、５’末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのヌクレオチドは互いに完全にハイブリダイズできる。１９７−Ｂ２−００５の５’末端（「ＧＣＧＧＧ」）および３’末端（「ＣＣＵＧＣ」）ストレッチを、１９７−Ｂ２−００６の「ＧＣＣＧＧ」（５’末端ストレッチ）により、および「ＣＣＧＧＣ」（３’末端ストレッチ）により置換した場合、ＳＤＦ−１に対する結合親和性は完全に持続した。１９７−Ｂ２および１９１−Ｄ５−００１（およびそれらの誘導体）は、それぞれ試験した４個のヌクレオチドの長さを有する５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチを有する１９１−Ｄ５の同一のコアヌクレオチド配列およびいくつかの誘導体を共有するので、５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチのさらなるトランケーションは省略した。５’ 末端および３’末端（５’ 末端ストレッチおよび３’末端ストレッチ）にそれぞれ６個のヌクレオチドを含む２つのさらなる誘導体を設計した。両方の分子（１９７−Ｂ２−００６−３１ａおよび１９７−Ｂ２−００６−３１ｂ）のＳＤＦ−１に対する結合親和性は、１９１−Ｄ５−００７および１９７−Ｂ２−００６について示したものと同じである（図１５）。ＳＤＦ−１に対する最適な結合親和性を示し、５個のヌクレオチドの５’末端および３’末端ストレッチをそれぞれ含む１９７−Ｂ２誘導体の５’末端および３’末端ストレッチの配列は一般式（５’末端ストレッチ：「ＧＣＳＧＧ」、Ｃ型式−９−５’、３’末端ストレッチ：「ＣＣＫＧＣ」、Ｃ型式−９−３’）にまとめることができる。
【０２７１】
Ｃ型ＳＤＦ−１結合核酸１９１−Ｄ５−００１（５’末端ストレッチ：「ＳＧＧＳＲ」、Ｃ型式−８−５’、３’末端ストレッチ：「ＹＳＣＣＳ」、Ｃ型式−８−３’）および１９７−Ｂ２（５’末端ストレッチ：「ＧＣＳＧＧ」、Ｃ型式−９−５’；３’末端ストレッチ：「ＣＣＫＧＣ」、Ｃ型式−９−３’）のトランケートされた誘導体の好ましい５’ストレッチおよび３’ストレッチを組み合わせると、５’末端および３’末端ストレッチについての共通の好ましい一般式は「ＳＳＳＳＲ」（５’末端ストレッチ、Ｃ型式−１０−５）および「ＹＳＢＳＳ」（３’末端ストレッチ：Ｃ型式−１０−３’）である。
【０２７２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのスピーゲルマーの血漿残留時間を延長するために、スピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６および１９１−Ｄ５−００７を、２章に記載しているようにそれらの５’末端において４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に共有結合した。ＰＥＧ化スピーゲルマー１９７−Ｂ２−００６および１９１−Ｄ５−００７を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性において細胞培養中で分析した。ＰＥＧ部分は、ＳＤＦ−１誘導走化性を阻害するスピーゲルマーの効果に影響を与えない。
【０２７３】
＜Ｄ型のＳＤＦ−１結合核酸分子＞
さらに、「Ａ型」、「Ｂ型」および「Ｃ型」のＳＤＦ−１結合モチーフを共有していないさらなる３つのＳＤＦ−１結合核酸を特定し、本明細書で「Ｄ型」と称する。それらを、プルダウン結合アッセイを使用してアプタマーとして分析した（図９）。
【０２７４】
図１〜９に示した配列のいずれも、それらのトランケート型の形態を含むが、但しそれらの伸長型形態も含む本発明による核酸分子であるが、しかしながら、このようなトランケート型および伸長型のそれぞれの核酸分子は依然として標的に結合できることは理解されるべきである。
【０２７５】
［実施例２：アプタマーおよびスピーゲルマーの合成および誘導体化］
＜小規模合成＞
２’ＴＢＤＭＳ  ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用してＡＢＩ３９４合成装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いた固相合成によって、アプタマーおよびスピーゲルマーを生成した。Ｄ−立体配置およびＬ−立体配置のｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−ホスホラミダイト、ｒＣ（Ａｃ）−ホスホラミダイト、ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−ホスホラミダイト、およびｒＵ−ホスホラミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。アプタマーおよびスピーゲルマーはゲル電気泳動によって精製した。
【０２７６】
＜大規模合成および修飾＞
２’ＴＢＤＭＳ  ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用して、ＡｋｔａＰｉｌｏｔ１００合成装置（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）を用いた固相合成によって、スピーゲルマーを生成した。Ｌ−ｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−ホスホラミダイト、Ｌ−ｒＣ（Ａｃ）−ホスホラミダイト、Ｌ−ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−ホスホラミダイト、およびＬ−ｒＵ−ホスホラミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。５’−アミノ−修飾剤は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。スピーゲルマーの合成を、Ｌ−リボＧ、Ｌ−リボＣ、Ｌ−リボＡまたはＬ−リボＵ修飾ＣＰＧ孔径１０００Å（Ｌｉｎｋ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌａｓｇｏｗ、ＵＫ）でそれぞれ開始した。カップリング（１サイクル当たり１５分）について、アセトニトリル中の０．３Ｍのベンジルチオテトラゾール（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）、およびアセトニトリル中のそれぞれの０．２Ｍのホスホラミダイト溶液３．５当量を使用した。酸素−キャッピングサイクルを使用した。オリゴヌクレオチド合成のためのさらなる標準的な溶媒および試薬は、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ（Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ、ＮＬ）から購入した。スピーゲルマーをＤＭＴ−ＯＮ合成し、脱保護後、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｗｉｎｃｏｔｔ  Ｆ．ら、１９９５）によって精製した。５’ＤＭＴ−基を、８０％酢酸（室温で９０分）で除去した。続いて、水性２ＭのＮａＯＡｃ溶液を加え、５Ｋ再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用した接線流濾過によってスピーゲルマーを脱塩した。
【０２７７】
＜ＰＥＧ化＞
ｉｎ  ｖｉｖｏでのスピーゲルマーの血漿残留時間を延長するために、スピーゲルマーを、４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分の５’末端に共有結合した。
【０２７８】
ＰＥＧ化（ＰＥＧ化のための方法の技術的詳細については、欧州特許出願ＥＰ  １  ３０６  ３８２を参照）のために、精製５’−アミノ修飾スピーゲルマーを、Ｈ２Ｏ（２．５ｍｌ）、ＤＭＦ（５ｍｌ）、および緩衝液Ａ（５ｍｌ、クエン酸・Ｈ２Ｏ［７ｇ］、ホウ酸［３．５４ｇ］、リン酸［２．２６ｍｌ］、および１ＭのＮａＯＨ［３４３ｍｌ］を混合し、１ｌの最終容量まで水を加えることにより調製し、ｐＨ＝８．４は１ＭのＨＣｌで調整した）の混合物に溶解させた。
【０２７９】
スピーゲルマー溶液のｐＨを、１ＭのＮａＯＨで８．４にした。次いで、４０ｋＤａのＰＥＧ−ＮＨＳエステル（Ｊｅｎｋｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．、Ａｌｌｅｎ、ＴＸ）を、３７℃で３０分ごとに０．２５当量を６回に分けて、７５〜８５％の最大収率に達するまで加えた。反応混合物のｐＨは、ＰＥＧ−ＮＨＳエステルを加える間、１ＭのＮａＯＨで８〜８．５に保った。
【０２８０】
反応混合物を４ｍｌの尿素溶液（８Ｍ）、および４ｍｌの緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ中に０．１Ｍのトリエチルアンモニウムアセテート）と混ぜ、９５℃まで１５分間加熱した。次いでＰＥＧ化スピーゲルマーを、アセトニトリル勾配（緩衝液Ｂ、緩衝液Ｃ：アセトニトリル中に０．１Ｍのトリエチルアンモニウムアセテート）を使用して、Ｓｏｕｒｃｅ  １５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いたＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。過剰なＰＥＧは５％緩衝液Ｃで、ＰＥＧ化スピーゲルマーは１０〜１５％の緩衝液Ｃで溶出した。９５％超の純度（ＨＰＬＣにより評価した場合）を有する生成物画分を合わせ、３ＭのＮａＯＡＣ４０ｍｌと混合した。接線流濾過（５Ｋ再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ  ＭＡ）によってＰＥＧ化スピーゲルマーを脱塩した。
【０２８１】
［実施例３：結合定数の決定（プルダウン結合アッセイ）］
＜直接プルダウン結合アッセイ＞
ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１に対するアプタマーの親和性を、３７℃にてプルダウン結合アッセイ形式において測定した。アプタマーを、［γ−３２Ｐ］−標識ＡＴＰ（Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって５’−リン酸標識した。標識アプタマーの比放射能は、２００，０００〜８００，０００ｃｐｍ／ｐｍｏｌであった。アプタマーを、変性および復元後、低濃度で平衡に達するために、１０、２０、３０または４０ｐＭの濃度、３７℃で選択緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＣａＣｌ２、０．１％［ｗ／ｖｏｌ］のＴｗｅｅｎ−２０）中で、様々な量のビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１と一緒に４〜１２時間インキュベートした。結合相手の使用されたプラスチック容器または固定化マトリクスの表面との吸着を避けるために、選択緩衝液に１０μｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）および１０μｇ／ｍｌの酵母ＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＵＳＡ）を添加した。ビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度範囲は８ｐＭ〜１００ｎＭに設定し、全反応容量は１ｍｌであった。ペプチドおよびペプチド−アプタマーの複合体を、選択緩衝液で予め平衡化された１．５μｌのストレプトアビジンＵｌｔｒａｌｉｎｋ  Ｐｌｕｓ粒子（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＵＳＡ）上に固定し、全容量６μｌ中に再懸濁した。粒子を、それぞれの温度で３０分間、サーモミキサー中で懸濁し続けた。上清の分離および適切な洗浄後、固定された放射能をシンチレーションカウンターで定量した。結合の割合をビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１の濃度に対してプロッティングし、１：１の化学量論比を仮定して、ソフトウェアアルゴリズム（ＧＲＡＦＩＴ、Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓｕｒｒｅｙ  Ｕ．Ｋ．）を使用することによって解離定数を得た。
【０２８２】
＜競合的プルダウン結合アッセイ＞
異なるＤ−ＳＤＦ−１結合アプタマーを比較するために、競合的順位付けアッセイを実施した。この目的のために、利用可能な大部分のアフィンアプタマーを放射性標識（上記参照）し、参照とした。変性および復元の後、これをビオチン化ヒトＤ−ＳＤＦ−１と一緒に３７℃で１ｍｌの選択的緩衝液において、競合なしでニュートラアビジンアガロースまたはストレプトアビジンＵｌｔｒａｌｉｎｋ  Ｐｌｕｓ（共にＰｉｅｒｃｅ製）における固定化および洗浄後にペプチドに対する約５〜１０％の結合をもたらす条件でインキュベートした。過剰の変性および復元された標識されていないＤ−ＲＮＡアプタマー変異体を、結合反応を並行させるために標識された参照アプタマーと一緒に、種々の濃度（例えば２、１０、および５０ｎＭ）に添加した。試験されるアプタマーは、標的結合に関して参照アプタマーと競合したため、それらの結合特性に依存して結合シグナルを減少させた。したがって、このアッセイにおいて最も活性であると判明したアプタマーは、さらなるアプタマー変異体の競合分析のための新しい参照として機能することができた。
【０２８３】
［実施例４：表面プラズモン共鳴測定による結合分析］
Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、ヒトＳＤＦ−１αに対するスピーゲルマーの結合を分析した。ヒトＳＤＦ−１αのカップリングをアミン基により達成した場合、ヒトＳＤＦ−１αを１〜２時間水に対して透析して（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＶＳＷＰ混合セルロースエステル、孔径、０．０２５μＭ）、干渉アミンを除去した。ＣＭ４センサチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を、１：１希釈の０．４ＭのＮＨＳおよび０．１ＭのＥＤＣ３５μｌを５μｌ／分の流量で注入することによりタンパク質カップリングの前に活性化した。次いで装置の反応が１０００〜２０００ＲＵ（相対単位）の範囲になるまで、ヒトＭＣＰ−１またはヒトＳＤＦ−１αを２μｌ／分の流量で０．１〜１．５μｇ／ｍｌの濃度で注入した。未反応のＮＨＳエステルを、５μｌ／分の流量で３５μｌのエタノールアミン塩酸塩溶液（ｐＨ８．５）を注入することにより非活性化した。センサチップを、結合緩衝液を用いて２回プライミングして、ベースラインが安定に見えるまで１０μｌ／分で１〜２時間平衡化した。全てのタンパク質について、選択緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２０ｎＭ、ＮａＣｌ、１３７ｍＭ、ＫＣｌ、５ｍＭ、ＣａＣｌ２、１ｍＭ、ＭｇＣｌ２、１ｍＭ、Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％「ｗ／ｖ」、ｐＨ７．４）中の１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、および０ｎＭ濃度の一連のスピーゲルマー注入によって、動態パラメータおよび解離定数を評価した。全ての実験において、１０μｌ／分の流量で１８０秒の結合時間および３６０秒の解離時間を定量するＫｉｎｊｅｃｔコマンドを使用して３７℃で分析を実施した。データ分析および解離定数（ＫＤ）の算出は、Ｌａｎｇｍｕｉｒ１：１化学量論的適合アルゴリズムを使用して、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３．０ソフトウェア（ＢＩＡＣＯＲＥ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）により行った。
【０２８４】
［実施例５：ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーによるＳＤＦ−１誘導走化性の阻害の分析］
ヒトＴ細胞白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔ、ヒト白血病単球リンパ腫細胞株Ｕ９３７、ヒトｐｒｅ−Ｂ細胞白血病細胞株ＢＶ−１７３およびヒトｐｒｅ−Ｂ  ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ−６はＣＸＣＲ４を発現する。Ｊｕｒｋａｔ細胞はＣＸＣＲ７を発現しないが、白血病株ＢＶ−１７３およびＵ−９３７はＣＸＣＲ７発現について検査で陽性が出た。使用した全ての細胞はＤＳＭＺ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ）から得た。全ての細胞株を、１０％のウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニリシンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有するＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地中で３７℃および５％ＣＯ２にて培養した。実験の１日前に、細胞を、０．３×１０６／ｍｌ（Ｊｕｒｋａｔ、Ｕ９３７、ＢＶ−１７３）または０，７５×１０６／ｍｌ（Ｎａｌｍ−６）のそれぞれの密度で新たなＴ１７５フラスコ中で播種した。
【０２８５】
実験のために、細胞を遠心分離し（３００ｇで５分）、再懸濁し、計数し、１５ｍｌのＨＢＨ（１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンおよび２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するハンクス平衡塩類溶液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で一度洗浄した。次いで細胞を１．３３×１０６／ｍｌ（Ｊｕｒｋａｔ、Ｕ９３７、ＢＶ−１７３）または２．６７×１０６／ｍｌ（Ｎａｌｍ−６）のそれぞれで再懸濁した。次いで細胞を、ＳＤＦ−１を含有する溶液および種々の量のスピーゲルマーの方へフィルタープレートの多孔質膜を通して３時間移動させた。０．２ｍｌの低プロファイル９６チューブプレート中で１０×溶液として刺激溶液（ＳＤＦ−１＋種々の濃度のスピーゲルマー）を作製した。２１２μｌのＨＢＨを輸送プレートの下側部分内にピペットで取り、２３，５μｌの刺激溶液を加えた。全ての条件を３連として作製した。２０〜３０分後、フィルタープレートを、刺激溶液を含有するプレート内に挿入し、１．３３×１０６／ｍｌまたは２．６７×１０６／ｍｌのそれぞれを含む７５μｌの細胞懸濁液をフィルタープレートのウェル（１×１０５または２×１０５細胞／ウェル）に加えた。次いで細胞を３７℃で３時間移動させた。校正のために、０、１０および３０μｌの細胞懸濁液を、別個の９６ウェルプレートのウェル中の２３５、２２５および２０５μｌのＨＢＨにそれぞれ加えた。３時間のインキュベーション後、挿入プレートを除去し、３０μｌのレザズリン作業溶液（ＰＢＳ中４４０μＭ）を下側のウェルおよび校正プレートのウェルに加えた。次いでプレートを３７℃で２．５時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウェルの１００μｌをブラック９６ウェルプレートに移した。
【０２８６】
評価のために、蛍光値をバックグラウンド蛍光（ウェル中に細胞が存在しない）について補正した。次いでＳＤＦ−１を有する実験条件とＳＤＦ−１を有さない実験条件との間の相違を算出した。スピーゲルマーを有さない試料（ＳＤＦ−１のみ）についての値を１００％に設定し、この割合としてスピーゲルマーを有する試料についての値を算出した。用量反応曲線のために、割合値をスピーゲルマー濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値（スピーゲルマーを有さない５０％の活性が存在するスピーゲルマーの濃度）を得られた曲線からグラフを用いて決定した。
【０２８７】
＜結果＞
ヒトＳＤＦ−１は、約０．３ｎＭにて最大半数刺激を有し、用量依存的にＪｕｒｋａｔ細胞の移動を刺激することを見出した。
【０２８８】
ヒトＳＤＦ−１は、約３ｎＭにて最大半数刺激を有し、用量依存的にヒト白血病単球リンパ腫細胞株Ｕ９３７の細胞の移動を刺激することを見出した。
【０２８９】
ヒトＳＤＦ−１は、約３ｎＭにて最大半数刺激を有し、用量依存的にヒトｐｒｅ−Ｂ細胞白血病細胞株ＢＶ−１７３の細胞の移動を刺激することを見出した。
【０２９０】
ヒトＳＤＦ−１は、約０．３ｎＭにて最大半数刺激を有し、用量依存的にヒトｐｒｅ−Ｂ  ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ−６の細胞の移動を刺激することを見出した。
【０２９１】
ヒトＳＤＦ−１を含有する溶液に対して細胞を移動させ、さらにＳＤＦ−１結合スピーゲルマーの濃度を増加させた場合、用量依存的阻害が観察された。実施例１において特定したような試験したスピーゲルマーのそれぞれのＩＣ５０を、ヒトＴ細胞白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔ細胞において決定した。例えば、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２（１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧとも称される）について、０．２ｎＭのＩＣ５０を決定した（図１０）。特定していない対照スピーゲルマーをＳＤＦ−１結合スピーゲルマーの代わりに使用した場合、１μＭまで阻害効果は観察されなかった。
【０２９２】
ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２によるＳＤＦ−１誘導走化性の阻害もまた、３つの他の異なる白血病細胞種：ヒト白血病単球リンパ腫細胞株Ｕ９３７（図１１Ｂ）、ヒトｐｒｅ−Ｂ細胞白血病細胞株ＢＶ−１７３（図１２）およびヒトｐｒｅ−Ｂ  ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ−６（図１１Ａ）において観察した。さらに、我々は、原発性慢性リンパ性白血病細胞がＳＤＦ−１の方へ移動し、ＳＤＦ−１依存性走化性がＮＯＸ−Ａ１２により効果的に遮断されることを証明した。
【０２９３】
白血病株ＢＶ−１７３およびＵ−９３７はまた、ＣＲＣＲ７発現について検査で陽性が出た。ＳＤＦ−１およびＣＸＣＲ７の相互作用を遮断するＳＤＦ−結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を実施例６に示すように決定した。
【０２９４】
［実施例６：ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２によるＣＸＣＲ７活性化の阻害］
ＣＸＣＲ４以外に、ＳＤＦ−１もまた、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ７に結合する。ＣＸＣＲ７に対するＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の阻害可能性を、β−ガラクトシダーゼの断片に融合したＣＸＣＲ７およびβ−アレスチンの両方を安定に発現するＣＨＯ細胞を用いた相補性アッセイにおいて試験した（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒＴＭ−β−アレスチンアッセイ、ＤｉｓｃｏｖｅＲＸ、ＣＡ、ＵＳＡ）。ＳＤＦ−１結合β−アレスチンがＣＸＣＲ７と複合体化すると、それにより化学発光基質を用いて測定したβ−ガラクトシダーゼの相補性および活性を導いた。
【０２９５】
（方法）
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  ｅＸｐｒｅｓｓ  ＣＨＯ−Ｋ１ヒトＣＸＣＲ７  β−アレスチン細胞をＯＣＣ２培地中で４８時間プレーティングし、１０ｎＭのＳＤＦ−１および種々の濃度のＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２を用いて９０分間刺激した。刺激後、ＰａｔＨＵｎｔｅｒ検出キットおよび製造業社の推薦によるプロトコル（ＤｉｓｃｏｖｅＲＸ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してシグナルを検出した。
【０２９６】
（結果）
１０ｎＭのヒトＳＤＦ−１を用いたβ−ガラクトシダーゼおよびそれによるＣＸＣＲ７活性化の刺激は、５．４ｎＭのＩＣ５０でＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２により効果的に遮断した（図１３）。
【０２９７】
［実施例７：大動脈輪発芽アッセイにおけるヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧの機能的分析］
ヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧはまた、標準的な血管形成器官培養アッセイにおいても機能するかどうかを試験するために、大動脈輪発芽アッセイを実施した。外植片からの血管状伸長の長さおよび量を評価するこのアッセイは、血管形成のために最も広範に使用されている器官培養モデルである（Ａｕｅｒｂａｃｈら、２００３）。ＳＤＦ−１がこの種のアッセイにおいて発芽を誘導することは既に示されている（Ｓａｌｃｅｄｏら、１９９９）。
【０２９８】
ラットの大動脈を輪状に切断し、コラーゲンマトリクスに埋め込み、ＳＤＦ−１およびＳＤＦ−１とさらにヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧまたはＳＤＦとさらにＳＤＦ−１に結合しない非機能的ＰＥＧ化対照スピーゲルマーと共にインキュベートした。６〜７日後、写真を撮り、発芽指標を決定することによって発芽（すなわち内皮細胞の成長）を分析した。
【０２９９】
＜方法＞
オスのラットからの大動脈はＢａｇｈｅｒｉ  Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。大動脈を新たに調製し、５０単位／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（共にＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）および２．５μｇ／ｍｌのファンギゾン（ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ）（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＵＳＡ）を含有するＭＣＤＢ１３１−培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に氷上で移した。
【０３００】
実験のために、単一の大動脈を培地と共に細胞培養ディッシュに移し、残りの結合組織を除去した。次いで大動脈を、外科用メスを用いて約１〜２ｍｍの長さの輪に切断した。輪を、培地１９９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中で集中的に（少なくとも５回）洗浄し、次いで１つのウェル当たり４５０μｌのコラーゲン溶液を含有する２４ウェルプレートのウェル中に置いた。９ｍｌのラットの尾のコラーゲン（０，１％酢酸中に３ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と、１．１２ｍｌの１０×培地１９９（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、１，１２ｍｌの１０×コラーゲン緩衝液（０，０５ＮのＮａＯＨ、２００ｍＭのＨＥＰＥＳ、２６０ｍＭのＮａＨＣＯ３）および０．６ｍｌの２００ｍＭのグルタミンを混合することによってこのコラーゲン溶液を調製した。整えた端部がウェルの底部に対して垂直になるように輪を得た。３７℃で少なくとも１時間、プレートをインキュベートすることによってコラーゲンを凝固させた。その後、付加物（ＳＤＦ−１およびスピーゲルマー）を含む１ｍｌのＭＣＤＢ１３１培地をウェルごとに加えた。次いで３７℃で６〜７日間、輪をインキュベートした。発芽のための対照として、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）を用いて実験をさらに行った。
【０３０１】
デジタルカメラで写真を撮ることによって発芽を記録した。一部の場合、１０％のパラホルムアルデヒド１ｍｌを加えることによって輪を固定し、さらなる証拠記録のために２〜８℃で保存した。Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅ画像処理ソフトウェアを用いて写真を分析した。ステージマイクロメーターから撮った写真を用いて校正した後、輪の一端から０．３３ｍｍの距離で線を引いた。ソフトウェアによって、この線に沿ったプロットヒストグラムを作成し、ヒストグラムを印刷し、ピーク（線を交差する発芽を表している）を計数した。この数を発芽指標として得た。１つの条件につき４〜５個の輪を評価した。Ｅｘｃｅｌ用のＷｉｎＳＴＡＴを用いて統計的分析を実施した。
【０３０２】
＜結果＞
ＳＤＦ−１は発芽を誘導し、この作用はヒトＳＤＦ−１結合スピーゲルマー１９３−Ｇ２−０１２−５’−ＰＥＧを用いて遮断できることが実証され得る。非機能的ＰＥＧ化対照スピーゲルマーによってＳＤＦ−１誘導性発芽の遮断は観察されなかった（図１４および１５）。
【０３０３】
［実施例８：白血病細胞の化学増感に対するＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果］
白血病細胞が、それらのＣＸＣＲ４受容体と、骨髄（略語、ＢＭ）ニッチなどの特定の組織微環境内の間質細胞によって分泌されたＳＤＦ−１との間の相互作用によって従来の化学療法から保護できるという重要な証拠が存在している。したがって、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２を使用することによってＣＸＣＲ４−ＳＤＦ−１軸を標的にすることは、ＳＤＦ−１分泌間質細胞の保護効果を破壊するため、および後の化学療法に対して白血球細胞を感受性化するための魅力的なアプローチである。
【０３０４】
白血病細胞を有するＢＭ微小環境のｉｎ  ｖｉｖｏ相互作用を模倣するために、マウスＢＭ間質ＭＳ−５細胞および多発性骨髄腫（略語、ＭＭ）細胞株ＲＰＭＩ  ８２２６を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ共培養システムを確立した。実験の目的は、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２が、間質細胞との共培養において化学療法剤の作用に対してＮＭ細胞を感受性化するかどうかを示すことである。ＳＤＦ１を分泌する間質ＭＳ−５細胞を、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２または非機能的ｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２と共にインキュベートした。ＭＭ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６をコンフルエントな間質細胞層に加えた。次いで細胞を４０分間、化学療法剤Ｆ  ａｒａ  Ａ（フルダラビン）と共にインキュベートした。細胞生存の生存率を測定した。
【０３０５】
（方法）
マウス間質細胞株ＭＳ−５（ＡＣＣ４４１）はＤＳＭＺから購入し、多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６（ＣＣＬ−１５５）はＡＴＣＣから購入した。１０％のＦＢＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）およびペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ培地１６４０ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６を維持し、１０％のＦＢＳおよびペニシリン−ストレプトマイシンを含むＭＥＭアルファＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中でＭＳ−５細胞を培養した。化学増感共培養実験のために、ＭＥＭアルファＧｌｕｔａＭＡＸ培地（＋１０％のＦＢＳ）を含む８×１０４／ｍＬ／ウェルの濃度の２４ウェルプレート（内側に８個のウェル）上で前日に間質ＭＳ−５細胞を播種し、５％のＣＯ２中で３７℃にてインキュベートした。コンフルエントな間質細胞層を洗浄し、０．５ｍＬのＲＰＭＩ培地１６４０（＋１％ＦＢＳ）をウェルに加えた。続いてＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２またはｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２を１００ｎＭの最終濃度までウェルに加え、４時間インキュベートした。ＲＰＭＩ培地１６４０（＋１％のＦＢＳ）中の３．５×１０５のＲＰＭＩ８２２６細胞を間質細胞層に加えた。４時間後、示した場合、１μＭのＦ−ａｒａ−Ａ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を細胞に加えた。４０時間のインキュベーション後、１５ｍＬのチューブに細胞を回収し、最初に上清を収集し、次いでＭＳ−５細胞を含む付着した細胞をトリプシン処理した。回収した細胞をＰＢＳ（＋１％のＢＳＡ）で２回洗浄し、２ｍＬのＰＢＳ（＋１％のＢＳＡ）中で再懸濁した。１５０μＬの細胞懸濁液をｕ字形９６ウェルプレートに移し、次いで室温にて１５分間、５０μＬのＶｉａＣｏｕｎｔ試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）と共にインキュベートした。Ｇｕａｖａ  ＥａｓｙＣｙｔｅ  ６ＨＴ／２Ｌ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用したフローサイトメトリーによって細胞生存率および細胞数を決定した。
【０３０６】
（結果）
間質ＭＳ−５細胞と共培養したＲＰＭＩ−８２２６細胞の細胞生存率は、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ  Ａ１２によりわずかだけ影響を受けた。１μＭのＦ−ａｒａ−ＡはＲＰＭＩ−８２２６細胞の生存率に対して有意な効果を示さなかった。しかしながら、ＮＯＸ−Ａ１２およびＦ−ａｒａ−Ａを合わせた場合、細胞生存率の相乗的減少が観察された（図１６）。したがって、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２は、ＢＭ間質細胞株ＭＳ５と共培養した場合、化学療法剤Ｆ−ａｒａ−Ａの処理に対してＭＭ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６を感受性化することが示された。間質ＭＳ−５細胞の生存率は、Ｆ−ａｒａ−ＡにもＮＯＸ−Ａ１２にも影響を受けなかった（データは示さず）。これらの結果により、ＢＭ間質細胞により分泌されたＳＤＦ−１の保護効果を破壊するために破壊する際のＮＯＸ  Ａ１２の可能性の原理の証明が実証される。
【０３０７】
［実施例９：白血病細胞の増殖に対するＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果］
この実験の目的は、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２が、骨髄（略語、ＢＭ）間質細胞との共培養において白血病細胞の増殖に対して影響を与えるかどうかを示すことであった。ＳＤＦ−１を分泌するマウス間質ＭＳ−５細胞を、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２または非機能的スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２とインキュベートした。白血病Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔをコンフルエントな間質細胞層に加え、３７℃および５％のＣＯ２にて４０時間インキュベートした。Ｇｕａｖａ  ＥａｓｙＣｙｔｅおよびＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を使用したフローサイトメトリーによって細胞数を定量した。
【０３０８】
（方法）
マウスの間質細胞株ＭＳ−５（ＡＣＣ  ４４１）はＤＳＭＺから購入し、１０％のＦＢＳおよびペニシリン−ストレプトマイシンを含むＭＥＭアルファＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。増殖共培養実験のために、ＭＥＭアルファＧｌｕｔａＭＡＸ培地（＋１０％のＦＢＳ）を含む８×１０４／ｍＬ／ウェルの濃度の２４ウェルプレート（内側の８個のウェル）上で、前日に間質ＭＳ−５細胞を播種し、５％ＣＯ２中で３７℃にてインキュベートした。コンフルエントな間質細胞層を洗浄し、０．５ｍＬのＲＰＭＩ培地１６４０（＋１％のＦＢＳ）をウェルに加えた。続いてＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２またはスピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ  Ａ１２を１００ｎＭの最終濃度までウェルに加え、４時間インキュベートした。ＲＰＭＩ培地１６４０（＋１％のＦＢＳ）中の２×１０５のＪｕｒｋａｔ細胞（ほぼ対数増殖期、一度洗浄した）をコンフルエントな間質細胞層に加え、５％ＣＯ２を用いて３７℃にて４８時間インキュベートした。次いで細胞を１５ｍＬのチューブに回収し、ＭＳ−５細胞を含む付着した細胞をトリプシン処理した。回収した細胞をＰＢＳ（＋１％のＢＳＡ）を用いて２回洗浄した。１５０μＬのこの細胞懸濁液をｕ字形９６ウェルプレートに移し、次いで５０μＬのＶｉａＣｏｕｎｔ試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）と共に室温にて１５分間インキュベートした。Ｇｕａｖａ  ＥａｓｙＣｙｔｅ６ＨＴ／２Ｌを使用したフローサイトメトリーによって細胞生存率および細胞数を決定した。
【０３０９】
（結果）
培養の４０時間後、１ｎＭのＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞数に対する効果を示さなかったが、間質ＭＳ−５細胞を、１０または１００ｎＭのＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２とプレインキュベートした場合、細胞数は２０％まで減少した（図１７）。したがって、間質細胞によって分泌されたＳＤＦ−１はＪｕｒｋａｔ細胞の増殖を刺激しているように見える。増殖のＳＤＦ−１依存性誘導はＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２により遮断され得、より少数の白血病細胞の検出を導く。
【０３１０】
［実施例１０：白血病細胞の接着特性に対するＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果］
白血病細胞と細胞外マトリクス（略語、ＥＣＭ）タンパク質との相互作用は、白血病発病において重要な役割を果たす。したがって、我々は、ＥＣＭタンパク質フィブロネクチン上での白血病細胞の接着に対するＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２の効果を試験した。ＳＤＦ−１によるＪｕｒｋａｔ白血病Ｔ細胞株の刺激は、フィブロネクチンに対する接着の用量依存性調節を導いた。
【０３１１】
（方法）
Ｔ細胞白血病Ｊｕｒｋａｔ（ＡＣＣ  ２８２）はＤＳＭＺから購入し、１０％のＦＢＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）およびペニシリン−ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ培地１６４０ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に維持した。接着実験のために、ＰＢＳ中の１０μｇ／ｍＬのヒトフィブロネクチン（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を含む９６ウェル培養プレートを３７℃で２時間インキュベートした。１００μＬのＰＢＳを用いてプレートを２回洗浄し、続いてＰＢＳ−ＢＳＡ（０．１％）を用いて３７℃で２時間遮断した。次いでＲＰＭＩ培地を用いてウェルを洗浄した。ＲＰＭＩ培地（＋０．１％のＢＳＡ）を用いて対数増殖期からのＪｕｒｋａｔ細胞を洗浄し、種々の濃度のヒトＳＤＦ−１（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）およびＮＯＸ−Ａ１２と共に３７℃で１５分間インキュベートした。ＮＯＸ−Ａ１２およびＳＤＦ−１を３０分間プレインキュベートした。１×１０５個の刺激したＪｕｒｋａｔ細胞を、フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレートに播種し、３０分間インキュベートした。次いでＲＰＭＩ培地を用いてプレートを５回洗浄した。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって付着した細胞を定量した。そのために、５０μＬのＲＰＭＩ培地、続いて５０μＬのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を各ウェルに加えた。プレートを２分間混合し、続いて室温にて１０分間インキュベートした。相対発光シグナルによって細胞数を定量した。
【０３１２】
（結果）
ＳＤＦ−１の培地濃度（１〜１０ｎＭ）を低くすると、Ｊｕｒｋａｔ細胞のフィブロネクチンに対する接着は減少したが、より高い濃度（３０〜３００ｎＭ）ではＪｕｒｋａｔ細胞の接着特性は増加した（図１８Ａ）。ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２はこの効果を反転するが、対照スピーゲルマーｒｅｖＮＯＸ−Ａ１２はそうではないことが示された（図１８Ｂ）。したがって、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２は、それらの保護的ＥＣＭ環境で白血病細胞相互作用の破壊に対して影響を与え得る。さらに、この例は、骨髄ニッチ由来の造血細胞のＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２依存性分離および動員を説明できる。
【０３１３】
［実施例１１：骨髄環境ｉｎ  ｖｉｖｏでの多発性骨髄腫細胞の相互作用の破壊、それによる治療に対する多発性骨髄腫細胞の感受性の向上］
ＳＤＦ−１／ＣＸＣＲ４軸は、多発性骨髄腫（略語、ＭＭ）細胞の骨髄（略語、ＢＭ）へのホーミングおよび輸送において主要な役割を果たす。したがって、ＳＤＦ−１阻害による周囲のＢＭ環境からのＭＭ細胞の脱接着は治療剤に対するＭＭ感受性を向上させる。Ａｚａｂらは、同様に化学療法剤に対するＭＭ細胞の感受性を向上させる、局在化ＭＭ細胞に影響を与えるＢＭ環境ｉｎ  ｖｉｖｏでＭＭ細胞の相互作用を破壊するＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ３１００の効果を試験するためのプロトコルを公開している。彼らは、ＣＸＣＲ４特異的アンタゴニストによるＳＤＦ−１受容体ＣＸＣＲ４の遮断が、治療に対するＭＭ細胞の感受性を向上させ、結果としてボルテゾミブにより誘発される腫瘍減少を向上させるために、ＢＭ環境ｉｎ  ｖｉｖｏでＭＭ細胞の相互作用の破壊を導くことを報告している（Ａｚａｂら、２００９）。このプロトコル（Ａｚａｂら、２００９）に基づいて、ＳＤＦ−１結合スピーゲルマーＮＯＸ−Ａ１２を、ＢＭ環境ｉｎ  ｖｉｖｏでＭＭ細胞の相互作用を破壊するその効果について試験し、それにより治療に対するＭＭ細胞の感受性を向上させる。
【０３１４】
ＭＭ動物モデルのために、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを使用し、Ｌｕｃ＋／ＧＦＰ＋ＭＭ．１Ｓ細胞（２×１０６／マウス）をＳＣＩＤマウスの尾静脈に注射する。３〜４週後、十分な腫瘍進行が生物発光画像法により検出される（プロトコルについてＡｚａｂら、２００９を参照）。マウスを４群：群１、対照マウス（ビヒクル：５％のグルコースを与えた）、群２、一日おきに２０ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ａ１２の皮下注射で処置したマウス、群３、１週間に２回、０．５ｍｇ／ｋｇの腹腔内ボルテゾミブ注射で処置したマウス、群４、１週間に２回、０．５ｍｇ／ｋｇの腹腔内ボルテゾミブ注射および一日おきに２０ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ａ１２の皮下注射で処置したマウスに無作為に分ける。
【０３１５】
骨髄におけるＭＭ腫瘍細胞の局在化を、蛍光標識した抗ＳＤＦ抗体を使用するｉｎ  ｖｉｖｏ共焦点顕微鏡で決定し（プロトコルについてＡｚａｂら、２００９を参照）、ＮＯＸ−Ａ１２の投与は、（ｅｘ  ｖｉｖｏフローサイトメトリー（プロトコルについてＡｚａｂら、２００９を参照）により決定したように）骨髄から血液までのＭＭ細胞動員および（ｉｎ  ｖｉｖｏ生物発光検出により（プロトコルについてＭｉｔｓｉａｄｅｓら、２００３、Ｍｉｔｓｉａｄｅｓら、２００４を参照））ボルテゾミブと一緒に投与した場合、腫瘍増殖の減少を導く。ボルテゾミブ単独での処置と比較してボルテゾミブとさらにＮＯＸ−Ａ１２による腫瘍増殖に対する強力な効果により、実施例８のデータがＭＭ細胞の化学増感に対するＮＯＸ−１２の陽性効果を示すことが支持される。
【０３１６】
［参照文献］
本明細書に列挙した文書の完全な書誌データは、反対のことを示さない場合は以下の通りであり、当該参照文献の開示は参照することにより本明細書の一部をなすものとする。
【表２Ａ】
2013540725.tif 000034
【表２Ｂ】
2013540725.tif 000035
【表２Ｃ】
2013540725.tif 000036
【表２Ｄ】
2013540725.tif 000037
【表２Ｅ】
2013540725.tif 000038
【表２Ｆ】
2013540725.tif 000039
【０３１７】
明細書、特許請求の範囲、および／または図面において開示されている本発明の特徴は、その様々な形態において、別個で、および任意の組み合わせの両方で、本発明を実現化するための材料とすることができる。
【図１】
2013540725.tif 000040
【図２Ａ】
2013540725.tif 000041
【図２Ｂ】
2013540725.tif 000042
【図３】
2013540725.tif 000043
【図４Ａ】
2013540725.tif 000044
【図４Ｂ】
2013540725.tif 000045
【図５】
2013540725.tif 000046
【図６】
2013540725.tif 000047
【図７Ａ】
2013540725.tif 000048
【図７Ｂ】
2013540725.tif 000049
【図８】
2013540725.tif 000050
【図９】
2013540725.tif 000051
【図１０】
2013540725.tif 000052
【図１１】
2013540725.tif 000053
【図１２】
2013540725.tif 000054
【図１３】
2013540725.tif 000055
【図１４】
2013540725.tif 000056
【図１５】
2013540725.tif 000057
【図１６】
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【図１７】
2013540725.tif 000059
【図１８】
2013540725.tif 000060
【配列表】
2013540725000001.xml
【国際調査報告】
2013540725.tif 000127
2013540725.tif 000128
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