(57)【要約】分光光コヒーレンストモグラフィ（ＳＯＣＴ）信号解析についての現行の装置および方法は、時間（深さ）と周波数（波長）分解能との間に固有のトレードオフに悩まされている。非限定的な一実施形態において、光学および時間分解能を独立に決定する２つのウィンドウを適用する時間周波数分布（ＴＦＤ）を再構成するための多重または二重ウィンドウ（ＤＷ）装置および方法が提供される。例えば、光学的分解能は、サンプルに関する散乱情報に関連し、時間分解能は、吸収または深さ関連情報に関連し得る。本装置および方法の有効性は、時間および周波数により変化する領域を含む測定されたＯＣＴ信号のシミュレーションおよび処理において示される。ＤＷ技術は、高スペクトルおよび時間分解能を維持し、他の処理方法で一般に認められるアーチファクトおよび制限がないＴＦＤを得ることができる。【選択図】図５Ａ
2013518256.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプルの深さ分解スペクトルを取得し、前記サンプル内の散乱および吸収特性を決定するための方法であって、
スプリッタ上にビームを放射し、前記スプリッタが、前記ビームからの光を分割し、参照ビームおよび前記サンプルへの入力ビームを発生させることと、
前記参照ビームと前記サンプルから戻ったサンプルビームとを混合することにより、前記参照ビームと前記入力ビームの結果として前記サンプルからの前記戻りサンプルビームとを相互相関させ、前記戻りサンプルビームに関する光学的深さ分解情報を有する相互相関プロファイルを得るとと、
それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を有する、前記相互相関プロファイルの第１の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する光学情報を取得することと、
前記サンプルに関する前記光学情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する高分解能光学情報を同時に復元することと、
それぞれが、所定の中心波長で前記第１の幅を超える第２の幅を有する、前記相互相関プロファイルの第２の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する吸収情報を取得することと、
深さの関数として前記サンプルに関する前記吸収情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する高分解能深さ情報を同時に復元することと、
前記サンプルに関する前記高分解能光学情報および前記高分解能深さ情報を共記録し、前記サンプルに関する単一の高分解能分光の光学的に分解された、深さ分解プロファイルを得ることと、により、前記サンプルに関する光学的性質を含む分光深さ分解プロファイルを生成することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記分光深さ分解プロファイルから前記サンプルに関する散乱情報を復元することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記散乱情報の復元は、前記分光深さ分解プロファイルにおけるスペクトル変調の周波数を測定することにより取得される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記散乱情報の復元は、前記分光深さ分解プロファイルを前記サンプルの予測された分析的または数値的分布と比較することにより取得される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の１つ以上の分光ウィンドウの提供は、第１の１つ以上のガウスウィンドウ、第１の１つ以上の複数の同時ウィンドウ、または第１の１つ以上の他のウィンドウを提供することからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記第２の１つ以上の分光ウィンドウの提供は、第２の１つ以上のガウスウィンドウ、第２の１つ以上の複数の同時ウィンドウ、または第２の１つ以上の他のウィンドウを提供することからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記スプリッタは、ビームスプリッタおよび光ファイバスプリッタからなる群からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記スプリッタ上へのビームの放射は、平行ビームを放射することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記入力ビームは、平行ビームを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記参照ビームは、平行ビームを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ビームは、アーク灯または熱光源からの白色光、およびスーパーコンティニウムレーザからなる光のうちの１つからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記参照ビームと前記戻りサンプルビームとの相互相関は、前記戻りサンプルビームおよび前記参照ビームの強度を独立に測定し、前記戻りサンプルビームの全強度からそれらを減算することにより、干渉項を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記参照ビームは、参照ミラーから反射される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記参照ビームの経路長が固定されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記スプリッタが、固定された参照アームに取り付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記サンプルが、固定されたサンプルアームに取り付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１の１つ以上の分光ウィンドウの帯域幅が、約０．３マイクロメートル−１（ｕｍ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２の１つ以上の分光ウィンドウの帯域幅が、約０．８マイクロメートル−１（ｕｍ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記戻りサンプルビームは、前記サンプル中の散乱体からの散乱光からなる散乱サンプルビームからなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記混合された参照ビームおよび前記散乱サンプルビームをスペクトル的に分散し、前記散乱サンプルビームに関する深さ分解情報を有するスペクトル的に分解された深さ分解相互相関プロファイルを得ることをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
分光器を用いて前記混合された参照ビームおよび前記散乱サンプルビームを分散することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記散乱体が、細胞核である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記高分解能光学情報は、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関するスペクトル情報からなる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記高分解能スペクトル情報を１つ以上の生体吸収体の既知のスペクトルと比較することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記１つ以上の生体吸収体は、１つ以上の造影剤を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記１つ以上の生体吸収体は、１つ以上の粒子からなる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記１つ以上の生体吸収体は、ナノ粒子からなる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記高分解能スペクトル情報を１つ以上の色チャネルに分離することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
サンプルの深さ分解情報を取得し、前記サンプル内の散乱および吸収特性を決定するための装置であって、
参照ビームと、サンプルがサンプルビームを受光するのに応じて前記サンプルから戻った光を含む戻りサンプルビームとを受光するように適合される受光器であって、前記参照ビームを前記戻りサンプルビームと相互相関させるようにさらに適合される、受光器と、
前記相互相関参照ビームおよび前記戻りサンプルビームを検出して、前記戻りサンプルビームに関する深さ分解情報を有する相互相関プロファイルを得るように適合される、検出器と、
それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を有する、前記相互相関プロファイルの第１の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する光学情報を取得することと、
波長の関数として前記サンプルに関する前記光学情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの一定の中心波長での前記サンプルに関する高分解能光学情報を同時に復元することと、
それぞれが、所定の中心波長で前記第１の幅を超える第２の幅を有する、前記相互相関プロファイルの第２の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する吸収情報を取得することと、
深さの関数として前記サンプルに関する前記吸収情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する高分解能深さ情報を同時に復元することと、
前記サンプルに関する前記高分解能光学情報および前記高分解能深さ情報を共記録し、前記サンプルに関する単一の高分解能分光の光学的に分解された、深さ分解プロファイルを得ることと、により、前記サンプルに関する光学的性質を含む分光深さ分解プロファイルを生成するように適合される、プロセッサユニットと、を備える、装置。
【請求項３０】
前記プロセッサユニットは、前記分光深さ分解プロファイルから前記サンプルに関する散乱情報を復元するようにさらに適合される、請求項２９に記載の装置。
【請求項３１】
前記プロセッサユニットは、前記分光深さ分解プロファイルのスペクトル変調の周波数を測定することにより、散乱情報を復元するようにさらに適合される、請求項２９に記載の装置。
【請求項３２】
前記プロセッサユニットは、前記分光深さ分解プロファイルを前記サンプルの予測された分析的または数値的散乱分布と比較することにより、散乱情報を復元するようにさらに適合される、請求項２９に記載の装置。
【請求項３３】
前記第１の１つ以上の分光ウィンドウの提供は、第１の１つ以上のガウスウィンドウ、第１の１つ以上の複数の同時ウィンドウ、または第１の１つ以上の他のウィンドウを提供することからなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項３４】
前記第２の１つ以上の分光ウィンドウの提供は、第２の１つ以上のガウスウィンドウ、第１の１つ以上の複数の同時ウィンドウ、または第２の１つ以上の他のウィンドウを提供することからなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項３５】
前記受光器は、スプリッタからなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項３６】
前記スプリッタは、ビームスプリッタおよび光ファイバスプリッタからなる群からなる、請求項３５に記載の装置。
【請求項３７】
前記サンプルビームは、平行ビームを含む、請求項２９に記載の装置。
【請求項３８】
前記参照ビームは、平行ビームを含む、請求項２９に記載の装置。
【請求項３９】
前記受光されたビームは、アーク灯または熱光源により生成した白色光、およびスーパーコンティニウムレーザからなる群からなる光のうちの１つからなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項４０】
前記参照ビームの経路長が固定されている、請求項２９に記載の装置。
【請求項４１】
前記受光器が、固定された参照アームに取り付けられる、請求項２９に記載の装置。
【請求項４２】
前記サンプルが、固定されたサンプルアームに取り付けられる、請求項２９に記載の装置。
【請求項４３】
前記検出器は、分散要素からなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項４４】
前記分散要素は、分光器である、請求項４３に記載の装置。
【請求項４５】
前記第１の１つ以上の分光ウィンドウの帯域幅が、約０．３マイクロメートル−１（ｕｍ）である、請求項２９に記載の装置。
【請求項４６】
前記第２の１つ以上の分光ウィンドウの帯域幅が、約０．８マイクロメートル−１（ｕｍ）である、請求項２９に記載の装置。
【請求項４７】
前記戻りサンプルビームは、前記サンプル中の散乱体からの散乱光からなる散乱サンプルビームからなる、請求項２９に記載の装置。
【請求項４８】
前記検出器は、前記混合された参照ビームおよび前記散乱サンプルビームをスペクトル的に分散し、前記散乱サンプルビームに関する深さ分解情報を有するスペクトル的に分解された相互相関プロファイルを得るように適合される、請求項４７に記載の装置。
【請求項４９】
前記散乱体が、細胞核である、請求項４７に記載の装置。
【請求項５０】
前記高分解能光学情報は、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する高分解能スペクトル情報からなる、請求項４７に記載の装置。
【請求項５１】
前記プロセッサユニットは、それぞれの所定の中心波長での前記サンプルに関する前記高分解能スペクトル情報を、１つ以上の生体吸収体の既知のスペクトルと比較するようにさらに適合される、請求項５０に記載の装置。
【請求項５２】
前記１つ以上の生体吸収体は、１つ以上の造影剤を含む、請求項５１に記載の装置。
【請求項５３】
前記１つ以上の生体吸収体は、１つ以上の粒子からなる、請求項５１に記載の装置。
【請求項５４】
前記１つ以上の生体吸収体は、ナノ粒子からなる、請求項５１に記載の装置。
【請求項５５】
前記プロセッサユニットは、前記高分解能スペクトル情報を１つ以上の色チャネルに分離するようにさらに適合される、請求項５０に記載の装置。
【請求項５６】
前記光学情報は、前記サンプルに関する散乱情報を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５７】
前記光学情報は、前記サンプルに関する散乱情報を含む、請求項２９に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１０年１月２２日に出願された表題「ＤＵＡＬ  ＷＩＮＤＯＷ  ＰＲＯＣＥＳＳＩＮＧ  ＳＣＨＥＭＥＳ  ＦＯＲ  ＳＰＥＣＴＲＯＳＣＯＰＩＣ  ＯＰＴＩＣＡＬ  ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＴＯＭＯＧＲＡＰＨＹ  （ＯＣＴ）  ＡＮＤ  ＦＯＵＲＩＥＲ  ＤＯＭＡＩＮ  ＬＯＷ  ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ」の米国特許仮出願第６１／２９７，５８８号に対する優先権を主張し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、表題「ＦＯＵＲＩＥＲ  ＤＯＭＡＩＮ  ＬＯＷ−ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ  ＦＯＲ  ＬＩＧＨＴ  ＳＣＡＴＴＥＲＩＮＧ  ＳＰＥＣＴＲＯＳＣＯＰＹ  ＡＰＰＡＲＡＴＵＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤ」の米国特許第７，１０２，７５８号に関し、当該特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本出願はまた、表題「ＦＯＵＲＩＥＲ  ＤＯＭＡＩＮ  ＬＯＷ−ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ  ＦＯＲ  ＬＩＧＨＴ  ＳＣＡＴＴＥＲＩＮＧ  ＳＰＥＣＴＲＯＳＣＯＰＹ  ＡＰＰＡＲＡＴＵＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤ」の米国特許再発行出願第１２／２０５，２４８号に関し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００４】
本出願はまた、表題「ＳＹＳＴＥＭＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＥＮＤＯＳＣＯＰＩＣ  ＡＮＧＬＥ−ＲＥＳＯＬＶＥＤ  ＬＯＷ  ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ」の米国特許第７，５９５，８８９号に関し、当該特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００５】
本出願はまた、表題「ＳＹＳＴＥＭＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＥＮＤＯＳＣＯＰＩＣ  ＡＮＧＬＥ−ＲＥＳＯＬＶＥＤ  ＬＯＷ  ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ」の米国特許出願第１２／５３８，３０９号に関し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００６】
本出願はまた、表題「ＡＰＰＡＲＡＴＵＳＥＳ，ＳＹＳＴＥＭＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＬＯＷ−ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ（ＬＣＩ）」の米国特許出願第１２／２１０，６２０号に関し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００７】
本出願はまた、表題「ＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥ  ＰＲＯＢＥ  ＴＩＰ，ＰＡＲＴＩＣＵＬＡＲＬＹ  ＦＯＲ  ＵＳＥ  ＯＮ  ＦＩＢＥＲ−ＯＰＴＩＣ  ＰＲＯＢＥ  ＵＳＥＤ  ＩＮ  ＡＮ  ＥＮＤＯＳＣＯＰＩＣ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ」の米国特許出願第１１／７８０，８７９号に関し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００８】
本出願はまた、表題「ＳＹＳＴＥＭＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＴＩＳＳＵＥ  ＥＸＡＭＩＮＡＴＩＯＮ，ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣ，ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＡＮＤ／ＯＲ  ＭＯＮＩＴＯＲＩＮＧ」の米国特許出願第１２／３５０，６８９号に関し、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
付属文書
【０００９】
本明細書に添付された付属文書は、角括弧［  ］により示される付属文書内の対応する番号により本出願で参照される参照文献を列挙する。
背景
【００１０】
本開示の技術は、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）システムおよび方法、ならびにフーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆ／ＬＣＩ）およびフーリエドメイン角度分解低コヒーレンス干渉法（ｆａ／ＬＣＩ）システムおよび方法を用いて、深さ分解スペクトルを取得するための装置および方法に関する。
【背景技術】
【００１１】
小さな物体または他の物理的現象の正確な測定は、多くの様々な分野の科学的試みにおいて追求されている目標である。例えば、細胞生物学および細胞構造の研究では、細胞の構造的な特徴を調べることは、多くの臨床的および実験室研究で重要である。細胞の研究のための試験中に用いられる最も一般的な道具は、顕微鏡である。顕微鏡的検査は、細胞およびそれらの構造の理解に大きな進歩をもたらしたが、標本のアーチファクトにより本質的に制限されている。細胞の特性は、化学薬品の添加のために構造的な特徴が変質するため、瞬間的に見ることができるに過ぎない。さらに、試験用の細胞サンプルを得るには、侵襲が必要とされる。
【００１２】
このため、光散乱分光法（ＬＳＳ）が、細胞を含むインビボ試験への適用を可能にするために開発された。ＬＳＳ技術は、細胞小器官の弾性散乱性質の変化を試験し、これらのサイズおよび他の寸法情報を推定する。組織および他の細胞構造における細胞特徴を測定するために、拡散光から、複数回散乱され、散乱物質に関する容易にアクセス可能な情報をもはや保有していない個々に散乱された光を区別することが必要である。この区別または分化は、研究および分析を弱散乱するサンプルに制限または限定することにより、またはモデリングを用いて拡散成分を除去することにより、偏光格子の適用等の複数の方法において達成することができる。
【００１３】
ＬＳＳは、細胞形態の探査および異形成の診断の手段として最近多くの注目を集めている。Ｂａｃｋｍａｎ，Ｖ．，Ｖ．Ｇｏｐａｌ，Ｍ．Ｋａｌａｓｈｎｉｋｏｖ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｒ．Ｇｕｒｊａｒ，Ａ．Ｗａｘ，Ｉ．Ｇｅｏｒｇａｋｏｕｄｉ，Ｍ．Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，ＩＥＥＥ  Ｊ．Ｓｅｌ．Ｔｏｐ．Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ．，７（６）：ｐ．８８７  ８９３（２００１）、Ｍｏｕｒａｎｔ，Ｊ．Ｒ．，Ｍ．Ｃａｎｐｏｌａｔ，Ｃ．Ｂｒｏｃｋｅｒ，Ｏ．Ｅｓｐｏｎｄａ−Ｒａｍｏｓ，Ｔ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ａ．Ｍａｔａｎｏｃｋ，Ｋ．Ｓｔｅｔｔｅｒ，ａｎｄ  Ｊ．Ｐ．Ｆｒｅｙｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｏｐｔ．，５（２）：ｐ．１３１  １３７（２０００）、Ｗａｘ，Ａ．，Ｃ．Ｙａｎｇ，Ｖ．Ｂａｃｋｍａｎ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，８２：ｐ．２２５６  ２２６４（２００２）、Ｇｅｏｒｇａｋｏｕｄｉ，Ｉ．，Ｅ．Ｅ．Ｓｈｅｅｔｓ，Ｍ．Ｇ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｖ．Ｂａｃｋｍａｎ，Ｃ．Ｐ．Ｃｒｕｍ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ，１８６：ｐ．３７４  ３８２（２００２）、Ｂａｃｋｍａｎ，Ｖ．，Ｍ．Ｂ．Ｗａｌｌａｃｅ，Ｌ．Ｔ．Ｐｅｒｅｌｍａｎ，Ｊ．Ｔ．Ａｒｅｎｄｔ，Ｒ．Ｇｕｒｊａｒ，Ｍ．Ｇ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｑ．Ｚｈａｎｇ，Ｇ．Ｚｏｎｉｏｓ，Ｅ．Ｋｌｉｎｅ，Ｔ．ＭｃＧｉｌｌｉｃａｎ，Ｓ．Ｓｈａｐｓｈａｙ，Ｔ．Ｖａｌｄｅｚ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｍ．Ｆｉｔｚｍａｕｒｉｃｅ，Ｓ．Ｋａｂａｎｉ，Ｈ．Ｓ．Ｌｅｖｉｎ，Ｍ．Ｓｅｉｌｅｒ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，Ｉ．Ｉｔｚｋａｎ，Ｊ．Ｖａｎ  Ｄａｍ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｎａｔｕｒｅ，４０６（６７９１）：ｐ．３５  ３６（２０００）、Ｗａｘ，Ａ．，Ｃ．Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｒ．Ｎｉｎｅｓ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｖ．Ｅ．Ｓｔｅｅｌｅ，Ｇ．Ｄ．Ｓｔｏｎｅｒ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（出版刊行物が承認）等の参照文献の開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００１４】
表面下の部位からの個々の散乱光を選択的に検出する代替の手法として、低コヒーレンス干渉法（ＬＣＩ）もまた、ＬＳＳの方法として詳しく研究されている。ＬＣＩは、例えば、広帯域の白色光源等の、低い時間コヒーレンスを有する光源を利用する。干渉は、干渉計の経路長遅延が光源のコヒーレンス時間と一致する時にのみ実現される。システムの軸方向の分解能は、光源のコヒーレンス長さにより決定され、通常、組織サンプルの試験に好適なマイクロメートル範囲にある。実験結果は、広帯域光源およびその２次高調波を用いることにより、ＬＣＩを用いる弾性散乱に関する情報の復元を可能にすることを示している。ＬＣＩは、サンプル上に光源を誘導する参照アームに対してサンプルを移動させ、サンプル上の特定の点から散乱情報を受信することにより、時間深さ走査を用いている。したがって、サンプルを完全に走査するための走査時間は、５から３０分程度であった。
【００１５】
最近になり、角度分解ＬＣＩ（ａ／ＬＣＩ）は、試験中のサンプルまたは対象からの散乱光の角度分布を試験することにより構造情報を取得するための能力が実証されている。ａ／ＬＣＩ技術は、細胞形態の測定および発癌現象の動物モデルにおける上皮内腫瘍の診断に適用されて好結果を得ている。ａ／ＬＣＩは、細胞のサイズに関する表面下の構造情報を取得するための別の手段である。光は、参照およびサンプルビームに分割され、サンプルビームは、散乱光の角度分布を試験するために異なる角度でサンプルに投射される。ａ／ＬＣＩ技術は、表面下の部位からの個々の散乱光を検出する（ＬＣＩ）の能力と、サブ波長の精度および正確度で構造情報を取得する光散乱方法の性能とを組み合わせることにより、深さ分解断層撮影画像を構成する。構造情報は、伝達角を備える参照場と混合される単一広帯域光源を用いて、後方散乱光の角度分布を試験することにより決定される。細胞のサイズ分布は、測定された角度分布の振動部分とＭｉｅ理論の予測とを比較することにより決定される。そのようなシステムは、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｄ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｇｌｅ−Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｌｏｗ−Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｆｅｒｏｍｅｔｒｙ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，８２，Ａｐｒｉｌ  ２００２，２２５６−２２６５に説明されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１６】
ａ／ＬＣＩ技術は、細胞形態の測定および発癌現象の動物モデルにおける上皮内腫瘍の診断に適用されて好結果を得ている。そのようなシステムは、Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ａｎｇｌｅ−ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｌｏｗ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，２００３，１１（２５）：ｐ．３４７３−３４８４に説明されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。サンプルに関する構造情報を取得するａ／ＬＣＩ方法は、組織およびインビトロの細胞形態の測定、ならびに発癌現象の動物モデルにおける上皮内腫瘍の診断および化学予防剤の有効性の評価に適用されて好結果を得ている。ａ／ＬＣＩは、組織処理することなく、組織サンプルを予測的に選別するのに用いられ、生物医学診断として技術の可能性を実証している。
【００１７】
別の技術は、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）である。ＯＣＴは、高分解能、速度、および感度で生体サンプルの断面を画像化する卓越した技術として確立されている［１］。近年は、ＯＣＴのいくつかの専門化した拡張が、プローブサンプルに関する機能情報を得るために開発されている［２〜５］。実験サンプルに関する深さ分解分光情報の分析に努める、１つのそのような拡張は、画像技術［２、６］として適用される場合、分光ＯＣＴ（ＳＯＣＴ）として、分析方法［７、８］として適用される場合、フーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆＬＣＩ）として知られている。実験サンプルのスペクトル散乱および吸収性質が、その分子構造により異なるため、ＳＯＣＴは、コヒーレンス回折格子画像へのスペクトル特性を空間的にマッピングすることにより増加した対照および機能情報を得る。
【００１８】
単一ドメインにおいて収集されたデータからの深さ分解分光情報を発生させるために、ＳＯＣＴは、一般的に、短時間フーリエ変換（ＳＴＦＴ）または連続ウェーブレット変換（ＣＷＴ）を採用する。得られた深さ波長分布は、信号処理文献［９、１０］において広範囲に分析されているが、ごく最近になってＳＯＣＴ［１１、１２］との関連で分析されている、時間周波数分布（ＴＦＤ）に類似している。時間コヒーレンス情報がウィグナーＴＦＤ交差項に含まれることを示すために、ＧｒａｆおよびＷａｘはコーヘンクラスの関数［１３］からウィグナーＴＦＤを使用して、ＳＯＣＴ信号［１２］を経由して、サンプルの構造的知識を得るためにウィグナーＴＦＤ交差項に含まれる時間コヒーレンス情報を利用できることを示した。しかしながら、ＳＴＦＴにより生成されたＴＦＤは、時間（深さ）分解能と周波数（波長）分解能との間に固有のトレードオフを生じる時間と周波数との関係により大幅に制限される。
【００１９】
信号処理および量子物理学分野の作業は、時間周波数分解能のトレードオフの有害な影響を改善する新しいＳＯＣＴ処理技術の方法を築いている。Ｔｈｏｍｓｏｎは、例えば、高分解能スペクトル情報［９］を得るために、スペクトル近似の加重平均を推定するための手段として直交ウィンドウを用いた、特に定常ガウス信号に適している方法を開発した。後に、ＢａｙｒａｍおよびＢａｒａｎｉｕｋは、２つのエルミート関数ベースのウィンドウを実行することによりＴｈｏｍｓｏｎ法をさらに拡大し、レーダ、ソーナー、音響学、生物学、および地球物理学［１０］等の分野に適切である、非定常信号のスペクトルを時間に変化するロバスト解析を提供した。さらに最近、Ｌｅｅら［１４］は、多重ウィンドウの同時使用は、光照射野の位置および運動量の測定において、類似した分解能のトレードオフを回避することができることを示した。
【００２０】
分光光コヒーレンストモグラフィ（ＳＯＣＴ）信号の解析についての現行の方法は、時間（深さ）と周波数（波長）分解能との間に固有のトレードオフに悩まされている。より高い周波数分解能が求められる場合、深さ分解能の併用損失がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｂａｃｋｍａｎ，Ｖ．，Ｖ．Ｇｏｐａｌ，Ｍ．Ｋａｌａｓｈｎｉｋｏｖ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｒ．Ｇｕｒｊａｒ，Ａ．Ｗａｘ，Ｉ．Ｇｅｏｒｇａｋｏｕｄｉ，Ｍ．Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，ＩＥＥＥ  Ｊ．Ｓｅｌ．Ｔｏｐ．Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ．，７（６）：ｐ．８８７  ８９３（２００１）
【非特許文献２】Ｍｏｕｒａｎｔ，Ｊ．Ｒ．，Ｍ．Ｃａｎｐｏｌａｔ，Ｃ．Ｂｒｏｃｋｅｒ，Ｏ．Ｅｓｐｏｎｄａ−Ｒａｍｏｓ，Ｔ．Ｍ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ａ．Ｍａｔａｎｏｃｋ，Ｋ．Ｓｔｅｔｔｅｒ，ａｎｄ  Ｊ．Ｐ．Ｆｒｅｙｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｏｐｔ．，５（２）：ｐ．１３１  １３７（２０００）
【非特許文献３】Ｗａｘ，Ａ．，Ｃ．Ｙａｎｇ，Ｖ．Ｂａｃｋｍａｎ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，８２：ｐ．２２５６  ２２６４（２００２）
【非特許文献４】Ｇｅｏｒｇａｋｏｕｄｉ，Ｉ．，Ｅ．Ｅ．Ｓｈｅｅｔｓ，Ｍ．Ｇ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｖ．Ｂａｃｋｍａｎ，Ｃ．Ｐ．Ｃｒｕｍ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ，１８６：ｐ．３７４  ３８２（２００２）
【非特許文献５】Ｂａｃｋｍａｎ，Ｖ．，Ｍ．Ｂ．Ｗａｌｌａｃｅ，Ｌ．Ｔ．Ｐｅｒｅｌｍａｎ，Ｊ．Ｔ．Ａｒｅｎｄｔ，Ｒ．Ｇｕｒｊａｒ，Ｍ．Ｇ．Ｍｕｌｌｅｒ，Ｑ．Ｚｈａｎｇ，Ｇ．Ｚｏｎｉｏｓ，Ｅ．Ｋｌｉｎｅ，Ｔ．ＭｃＧｉｌｌｉｃａｎ，Ｓ．Ｓｈａｐｓｈａｙ，Ｔ．Ｖａｌｄｅｚ，Ｋ．Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｍ．Ｆｉｔｚｍａｕｒｉｃｅ，Ｓ．Ｋａｂａｎｉ，Ｈ．Ｓ．Ｌｅｖｉｎ，Ｍ．Ｓｅｉｌｅｒ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，Ｉ．Ｉｔｚｋａｎ，Ｊ．Ｖａｎ  Ｄａｍ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｎａｔｕｒｅ，４０６（６７９１）：ｐ．３５  ３６（２０００）
【非特許文献６】Ｗａｘ，Ａ．，Ｃ．Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｒ．Ｎｉｎｅｓ，Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ，Ｖ．Ｅ．Ｓｔｅｅｌｅ，Ｇ．Ｄ．Ｓｔｏｎｅｒ，Ｒ．Ｒ．Ｄａｓａｒｉ，ａｎｄ  Ｍ．Ｓ．Ｆｅｌｄ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ
【非特許文献７】Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｕｂｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｄ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｇｌｅ−Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｌｏｗ−Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｆｅｒｏｍｅｔｒｙ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，８２，Ａｐｒｉｌ  ２００２，２２５６−２２６５
【非特許文献８】Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ａｎｇｌｅ−ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｌｏｗ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，２００３，１１（２５）：ｐ．３４７３−３４８４
【発明の概要】
【００２２】
発明の詳細な説明に開示される実施形態は、スペクトル情報を含む情報、およびサンプル内で高分解能情報を同時に取得することが可能であるような時間分解能を独立に決定するために使用することができる２つ以上のウィンドウ（例えば、直交ガウス）を適用する時間周波数分布（ＴＦＤ）を再構成するための多重ウィンドウ（ＭＷ）の方法および装置を含む。一実施形態において、ＭＷ技術は、二重ウィンドウ（ＤＷ）を含む。例えば、一実施形態において、この情報は、高分解能スペクトル情報および時間深さ分解能情報を含むことができる。開示されたＭＷおよびＤＷ技術は、分解能、例えば、スペクトルまたは時間分解能を損失することなく、局在化した再構成場を含むＴＦＤを得ることができる。
【００２３】
一実施形態において、サンプルの深さ分解スペクトルを取得し、サンプル内の散乱および吸収特性を決定するための方法が提供される。本方法は、スプリッタ上にビームを放射し、このスプリッタが、ビームからの光を分割し、参照ビームおよびサンプルへの入力ビームを発生させることを含む。本方法はまた、参照ビームとサンプルから戻ったサンプルビームとを混合することにより、参照ビームと入力ビームの結果としてサンプルからの戻りサンプルビームとを相互相関させ、戻りサンプルビームに関する光学的深さ分解情報を有する相互相関プロファイルを得ることも含む。本方法はまた、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を有する、相互相関プロファイルの第１の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する光学情報を取得することと、波長の関数としてサンプルに関する光学情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能光学情報を同時に復元することと、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を超える第２の幅を有する、相互相関プロファイルの第２の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する吸収情報を取得することと、深さの関数としてサンプルに関する吸収情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能深さ情報を同時に復元することと、サンプルに関する高分解能光学情報および高分解能深さ情報を共記録し、サンプルに関する単一の高分解能の分光光学的に分解された、深さ分解プロファイルを得ることと、により、サンプルに関する光学的性質を含む分光深さ分解プロファイルを生成することも含む。
【００２４】
別の実施形態において、サンプルの深さ分解情報を取得し、サンプル内の散乱および吸収特性を決定するための装置が提供される。本装置は、参照ビームと、サンプルがサンプルビームを受光するのに応じてサンプルから戻った光を含む戻りサンプルビームとを受光するように適合される受光器を含み、この受光器は、参照ビームを戻りサンプルビームと相互相関させるようにさらに適合される。本装置はまた、相互相関参照ビームおよび戻りサンプルビームを検出して、戻りサンプルビームに関する深さ分解情報を有する相互相関プロファイルを得るように適合される、検出器も含む。本装置はまた、プロセッサユニットも含む。本プロセッサユニットは、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を有する、相互相関プロファイルの第１の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する光学情報を取得することと、波長の関数としてサンプルに関する光学情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能光学情報を同時に復元することと、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を超える第２の幅を有する、相互相関プロファイルの第２の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する吸収情報を取得することと、深さの関数としてサンプルに関する吸収情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能深さ情報を同時に復元することと、サンプルに関する高分解能光学情報および高分解能深さ情報を共記録し、サンプルに関する単一の高分解能の分光光学的に分解された、深さ分解プロファイルを得ることと、により、光学的性質を含むサンプルに関する分光深さ分解プロファイルを生成するように適合される。
【００２５】
二重ウィンドウ装置および方法の有効性は、時間および周波数により変化する領域を含む測定された光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）信号のシミュレーションおよび処理において示されている。本明細書に記載される例示的なＤＷ技術は、高スペクトルおよび時間分解能を維持し、他の処理方法で一般に認められるアーチファクトおよび限界がない、または実質的にアーチファクトおよび限界がない、ＴＦＤを得ることができる。ＤＷ技術を適用して、散乱または吸収によるＯＣＴ信号の変調を検出し、ひいては、ＤＷ技術に対する十分に条件付けされた問題を提起することができる。本明細書に記載される例示的な二重ウィンドウ技術は、ＳＯＣＴ信号のウィグナーＴＦＤの再構成により、スペクトルおよび時間分解能を独立に決定する２つの直交ウィンドウを用い、現行のＳＯＣＴ信号処理を制限する時間周波数分解能トレードオフを回避することができる。散乱および吸収ファントムからのシミュレーションおよび実験結果は、この手法の性能を正当化することが示される。
【００２６】
さらなる機能および利点は、続く発明の詳細な説明に記載され、一部において、その説明から当業者には容易に明白であるか、または続く発明の詳細な説明、特許請求の範囲、ならびに添付図を含む、本明細書に記載される実施形態を実施することにより認識されよう。
【００２７】
前述の要約および以下の詳細な説明の両方が本実施形態を示し、本開示の性質および特徴を理解するための概説または構成を提供するように意図されることを理解されよう。添付図は、さらなる理解を提供するために含まれ、本明細書に組み込まれ、本明細書の一部の構成要素となる。これらの図は、様々な実施形態を説明し、説明と共に、開示される概念の原則および動作を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１Ａ】ｆＬＣＩシステムの例示的な実施形態の略図である。
【図１Ｂ】ファイバ光学結合を用いたｆＬＣＩシステムの別の例示的な実施形態の略図である。
【図２Ａ】白色光源の例示的な性質を示す略図である。
【図２Ｂ】白色光源の例示的な性質を示す略図である。
【図３Ａ】カバースリップサンプルの例示的な軸方向の空間相互相関関数を示す図である。
【図３Ｂ】カバースリップサンプルの例示的な軸方向の空間相互相関関数を示す図である。
【図４Ａ】微小球が存在しない場合のカバーガラスのサンプルの、正面および裏面のそれぞれのために得られた例示的なスペクトルの図である。
【図４Ｂ】微小球が存在しない場合のカバーガラスのサンプルの、正面および裏面のそれぞれのために得られた例示的なスペクトルの図である。
【図４Ｃ】微小球が存在する場合のカバーガラスのサンプルの、正面および裏面のそれぞれのために得られた例示的なスペクトルの図である。
【図４Ｄ】微小球が存在する場合のカバーガラスのサンプルの、正面および裏面のそれぞれのために得られた例示的なスペクトルの図である。
【図５Ａ】フーリエ変換処理を行う前に第１の狭域ウィンドウを干渉項に適用して、サンプルに関する高分解能スペクトル情報を取得し、フーリエ変換処理を行う前に第２の広域ウィンドウを干渉項に別々に適用して、サンプルに関する高分解能深さ情報を取得する、サンプルから得られた例示的なスペクトルの図を示す。
【図５Ｂ】図５Ａにおいて、干渉項に対して２つの異なるサイズのウィンドウを用いてフーリエ変換を別々に行った後の波数および深さの関数として、サンプルに関する高分解能スペクトル情報および高分解能深さ情報をそれぞれ含む例示的な高分解能深さ分解スペクトル情報プロファイルの図を示す。
【図５Ｃ】図５Ｂにおいて、混合した高分解能スペクトルおよび深さ情報深さ分解スペクトル情報プロファイルとを一緒に混合して、高分解能スペクトルおよび深さ情報を含むサンプルに関する単一の深さ分解スペクトル情報プロファイルを提供する例示的な図である。
【図６Ａ】前面および裏面反射に対する球の散乱効率を示す図４Ａ〜５Ｃにおけるスペクトルの例示的な比率の図である。
【図６Ｂ】前面および裏面反射に対する球の散乱効率を示す図４Ａ〜５Ｃにおけるスペクトルの例示的な比率の図である。
【図７】図１Ａおよび１Ｂにおいて示されるシステムの一般化されたバージョンの図である。
【図８Ａ】Ｍａｃｈ−Ｚｅｈｎｄｅｒ干渉計を採用するｆａ／ＬＣＩシステムの例示的な一実施形態の図である。
【図８Ｂ】図８Ａの干渉計配置における分光器のスリットに対する検出された散乱角の関係を示す説明図である。
【図９】分析用のサンプルに関する深さ分解空間相互相関情報を復元するために、干渉計装置により行われるステップを示すフローチャートである。
【図１０Ａ】全体の得られた信号（図１０Ａ）、参照場強度（図１０Ｂ）、信号場強度（図１０Ｃ）、および参照場強度と信号場強度との間に抽出された相互相関信号（図１０Ｄ）を含む、ポリスチレンビーズの例示的サンプルにおけるスペクトルドメインに復元されたｆａ／ＬＣＩデータの例を示す。
【図１０Ｂ】全体の得られた信号（図１０Ａ）、参照場強度（図１０Ｂ）、信号場強度（図１０Ｃ）、および参照場強度と信号場強度との間に抽出された相互相関信号（図１０Ｄ）を含む、ポリスチレンビーズの例示的サンプルにおけるスペクトルドメインに復元されたｆａ／ＬＣＩデータの例を示す。
【図１０Ｃ】全体の得られた信号（図１０Ａ）、参照場強度（図１０Ｂ）、信号場強度（図１０Ｃ）、および参照場強度と信号場強度との間に抽出された相互相関信号（図１０Ｄ）を含む、ポリスチレンビーズの例示的サンプルにおけるスペクトルドメインに復元されたｆａ／ＬＣＩデータの例を示す。
【図１０Ｄ】全体の得られた信号（図１０Ａ）、参照場強度（図１０Ｂ）、信号場強度（図１０Ｃ）、および参照場強度と信号場強度との間に抽出された相互相関信号（図１０Ｄ）を含む、ポリスチレンビーズの例示的サンプルにおけるスペクトルドメインに復元されたｆａ／ＬＣＩデータの例を示す。
【図１１Ａ】深さと角度の関数としての、図１０Ｄに示される相互相関ｆａ／ＬＣＩデータにおいて行われた軸方向の空間相互相関関数の図である。
【図１１Ｂ】サンプルに関するサイズ情報を復元するために、角度の関数としての、散乱サンプル信号強度に関する生データおよびフィルタ処理されたデータの角度分布プロットの図である。
【図１２Ａ】サンプルに関するサイズ情報を決定するために、最適Ｍｉｅ理論と比較された、散乱サンプル信号強度のフィルタ処理された角度分布図である。
【図１２Ｂ】サンプル中の細胞の直径を推定するための、サンプルに関するサイズ情報のカイ２乗最小化である。
【図１３】光ファイバプローブを採用するｆａ／ＬＣＩシステムの例示的な一実施形態の図である。
【図１４Ａ】図６Ａおよび６Ｂに示されるｆａ／ＬＣＩシステムにより採用され得るａ／ＬＣＩファイバ光プローブ先端の切断図である。
【図１４Ｂ】図１４Ａに示されるｆａ／ＬＣＩシステムにおけるファイバプローブの配置を示す。
【図１５Ａ】本明細書に記載される実施形態で採用され得る代替の光ファイバｆａ／ＬＣＩシステムの図である。
【図１５Ｂ】図１５Ｂに示されるｆａ／ＬＣＩシステムにおけるプローブの遠位端におけるサンプル照射および散乱光収集の図である。
【図１５Ｃ】図１５Ａに示されるｆａ／ＬＣＩシステムのプローブの照射された遠位端の画像の図である。
【図１６Ａ】第１のシミュレーションにおいて、ｚ０＝５およびｋ１＝１３で中心にあるＥ１ならびにｚ０＝０およびｋ２＝２６で中心にあるＥ２を有する例示的な理想の時間周波数分布（ＴＦＤ）を示す。
【図１６Ｂ】第１のシミュレーションにおいて、例示的なウィグナーＴＦＤを示す。
【図１６Ｃ】第１のシミュレーションにおいて、例示的なＭＨ  ＴＦＤを示す。
【図１６Ｄ】第１のシミュレーションにおいて、二重ウィンドウ法を用いて生成した例示的なＴＦＤを示す。
【図１７Ａ】マイケルソン干渉計からのＳＯＣＴ信号をモデリングする第２のシミュレーションにおいて、Δｋ＝３５長さ−１ユニットの模源の帯幅を有する例示的な理想ＴＦＤを示す。
【図１７Ｂ】第２のシミュレーションにおいて、標準偏差＝２長さ−１ユニットを有する狭域スペクトルウィンドウＳＴＦＴにより生成した例示的なＴＦＤを示す。
【図１７Ｃ】第２のシミュレーションにおいて、標準偏差＝４５長さ−１ユニットを有する広域スペクトルウィンドウＳＴＦＴにより生成した例示的なＴＦＴＤを示す。
【図１７Ｄ】図１７Ｂおよび１７Ｃに示されるＴＦＤの積を計算する二重ウィンドウ法を用いることにより生成される例示的なＴＦＤを示す。
【図１７Ｅ】図１７Ａ、１７Ｂ、および１７Ｄから計算された例示的な時間限界（深さプロファイル）を示す。
【図１７Ｆ】ＤＷ技術がより高いスペクトル忠実性を維持することを示す図１７Ｂ〜１７Ｄにおける裏面反射の例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図１８Ａ】二重ウィンドウ（ＤＷ）処理方法により生成されたシミュレーション２の例示的なＴＦＤを示す。
【図１８Ｂ】図１８Ａに示されるサンプルを反射する前面からの例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図１８Ｃ】１．５ユニットの距離の間隔をあけるサンプルに対応するピークを有する例示的な相関プロットを示す。
【図１９Ａ】吸収染料で充填したガラス製ウェッジから構成される例示的な吸収ファントムの図である。
【図１９Ｂ】２つの内部ガラス表面が明確に視認できる吸収ファントムの例示的な並列周波数ドメインＯＣＴ（ｐｆｄＯＣＴ）画像を示す。
【図１９Ｃ】検出スペクトルの高波数範囲での強力な吸収を示す吸収ファントムに使用された吸収染料の例示的な透過スペクトルを示す。
【図２０Ａ】狭域スペクトルウィンドウＳＴＦＴにより生成された吸収ファントムの例示的なＴＦＤを示す。
【図２０Ｂ】広域スペクトルウィンドウＳＴＦＴにより生成された吸収ファントムの例示的なＴＦＤを示す。
【図２０Ｃ】中程度スペクトルウィンドウＳＴＦＴにより生成された吸収ファントムの例示的なＴＦＤを示す。
【図２０Ｄ】二重ウィンドウ技術により生成された吸収ファントムの例示的なＴＦＤを示す。
【図２１Ａ】図２０Ｃおよび２０ＤのＴＦＤにおける吸収ファントムの裏面に対応する深さからの例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２１Ｂ】参照用の光源の反射率スペクトルと共に、吸収ファントムの前面に対応する深さからの例示的なスペクトラルの切断面を示す。
【図２１Ｃ】図１９Ｂからの対応するＡ走査とともに、図２０Ｃおよび２０ＤからのそれぞれのＴＦＤに対する例示的な時間限界を示す。
【図２２Ａ】除去された高周波数変調を有する図２１Ａの例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２２Ｂ】除去された高周波数変調を有する図２１Ｂの例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２３Ａ】ＤＷ技術を用いて生成された例示的な吸収ファントムＴＦＤを示す。
【図２３Ｂ】図２３Ａにおいて破線に対応する吸収ファントムの前面からの例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２３Ｃ】ＯＣＴ厚さ測定と十分一致している距離に間隔をあけるファントムに対応するピークを有する例示的な相関プロットを示す。
【図２４Ａ】ＤＷ技術を用いて生成したハムスターの頬袋組織からの例示的なＴＦＤを示す。
【図２４Ｂ】基部組織層に対応する１５μｍの深さセグメントからの例示的な平均スペクトルを示す。
【図２４Ｃ】４．９４μｍの散乱直径に対応するピークを有する例示的な相関プロットを示す。
【図２５Ａ】走査がない単一の０．３秒曝露により得られるファントムの例示的なＯＣＴ画像を示す。
【図２５Ｂ】走査がない単一の０．３秒曝露により得られるファントムの例示的なＯＣＴ画像を示す。
【図２６Ａ】ＤＷ技術を用いて図２５Ａおよび２５Ｂ中の例示的に処理されたＴＦＤの画像を示す。
【図２６Ｂ】図２６ＡのＴＦＤに対する例示的な対応するＡ走査を示す。
【図２７Ａ】図２６ＢのＡ走査からの２点の例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２７Ｂ】図２６ＢのＡ走査からの２点の例示的なスペクトルプロファイルを示す。
【図２７Ｃ】図２６ＢのＡ走査からの２点に対する例示的な相関プロットを示す。
【図２７Ｄ】図２６ＢのＡ走査からの２点に対する例示的な相関プロットを示す。
【図２８】例示的なｐｆｄＯＣＴシステムの例示的な概略図を示す。
【図２９Ａ】表示された入射場および散乱場のある例示的な細胞核を示す。
【図２９Ｂ】波数に依存する振動が前面と裏面反射間の干渉により生じる例示的な干渉スペクトルを示す。
【図３０Ａ】３つの分光計チャネルからのスペクトルが示される、完全な動物試験からの例示的な生データを示す。
【図３０Ｂ】図３０Ａ中のスペクトルをＤＷ処理し、最終的なＴＦＤを生成する全ての１２０チャネルからのプロットを加算することにより得られた、３つの例示的な一般的な深さ分解分光プロットを示す。
【図３１Ａ】未処理の上皮組織に対する例示的な組織病理学的画像および対応する深さプロットを示す。
【図３１Ｂ】処理した上皮組織に対する例示的な組織病理学的画像および対応する深さプロットを示す。
【図３２Ａ】破線ボックスにより示される基底層を有する例示的な深さ分解分光プロットを示す。
【図３２Ｂ】指数法則フィット（ｐｏｗｅｒ  ｌａｗ  ｆｉｔ）に加えて基底組織層からの例示的なスペクトルを示す。
【図３２Ｃ】基底組織層からの例示的な剰余スペクトルを示す。
【図３２Ｄ】図３２Ｃのスペクトルをフーリエ変換することにより生成された例示的な相関プロットを示し、このピーク相関距離は、散乱体サイズに直接関連することができる。
【図３３】完全な動物試験のそれぞれのサンプルに対する例示的な細胞核の直径測定を示す。
【図３４】２、３、４つの異常な腺窩を含む３つの異常腺窩巣（ＡＣＦ）による処理から４週間後の例示的な染色組織サンプルの写真である。
【図３５】散乱モードにおいて動作する例示的な並列周波数ドメインＯＣＴシステムを示す。
【図３６】エクスビボラット結腸サンプルの例示的なｐｆｄＯＣＴ画像を示す。
【図３７Ａ】低周波数成分（黒い点線）の変化に従って図３６の線引きした領域からの例示的な平均スペクトルを示し、この低周波数成分は、局部振動を得る平均スペクトルから減算され（図３７Ａ）、フーリエ変換は、相関関数を得て（図３７Ｂ）、ピークは、分析の領域において平均細胞核直径に対応する（図３７Ｃ）。
【図３７Ｂ】低周波数成分（黒い点線）の変化に従って図３６の線引きした領域からの例示的な平均スペクトルを示し、この低周波数成分は、局部振動を得る平均スペクトルから減算され（図３７Ａ）、フーリエ変換は、相関関数を得て（図３７Ｂ）、ピークは、分析の領域において平均細胞核直径に対応する（図３７Ｃ）。
【図３７Ｃ】低周波数成分（黒い点線）の変化に従って図３６の線引きした領域からの例示的な平均スペクトルを示し、この低周波数成分は、局部振動を得る平均スペクトルから減算され（図３７Ａ）、フーリエ変換は、相関関数を得て（図３７Ｂ）、ピークは、分析の領域において平均細胞核直径に対応する（図３７Ｃ）。
【図３８Ａ】処理群と比較した場合の全ての時点で処理したサンプルに対してｐ値＜１０−４＊＊を有する、最上位の結果を提供する中心部を有する深さ断面（例えば、深さ３５μｍ）による例示的な細胞核の直径を示す。
【図３８Ｂ】処理群と比較した場合の全ての時点で処理したサンプルに対してｐ値＜１０−４＊＊を有する、最上位の結果を提供する中心部を有する深さ断面（例えば、深さ３５μｍ）による例示的な細胞核の直径を示す。
【図３８Ｃ】処理群と比較した場合の全ての時点で処理したサンプルに対してｐ値＜１０−４＊＊を有する、最上位の結果を提供する中心部を有する深さ断面（例えば、深さ３５μｍ）による例示的な細胞核の直径を示す。
【図３９】深さ断面による例示的な測定細胞核直径を含む表である（μｍでの測定；ｐ値＜１０−４＊＊；ｐ値＜０．０５＊；Ｎ＝１０）。
【図４０】例示的な測定細胞核直径（ｆＬＣＩ測定）および長さセグメントによるＡＣＦの数を含む表である。
【図４１Ａ】結腸長さセグメントによる例示的な結果を示し、高度に統計的な差異（ｐ値＜１０−４＊＊）は、近位左結腸（ＬＣ）（図４１Ａ）および遠位ＬＣ（図４１Ｂ）に対する対照群と処理群の間で観察され、図４１Ｃは、ＡＣＦの数の関数として測定した細胞核直径をプロットし、明確にするために、測定の時点はそれぞれの点（ｗｋ＝週間）に隣接して示される。
【図４１Ｂ】結腸長さセグメントによる例示的な結果を示し、高度に統計的な差異（ｐ値＜１０−４＊＊）は、近位左結腸（ＬＣ）（図４１Ａ）および遠位ＬＣ（図４１Ｂ）に対する対照群と処理群の間で観察され、図４１Ｃは、ＡＣＦの数の関数として測定した細胞核直径をプロットし、明確にするために、測定の時点はそれぞれの点（ｗｋ＝週間）に隣接して示される。
【図４１Ｃ】結腸長さセグメントによる例示的な結果を示し、高度に統計的な差異（ｐ値＜１０−４＊＊）は、近位左結腸（ＬＣ）（図４１Ａ）および遠位ＬＣ（図４１Ｂ）に対する対照群と処理群の間で観察され、図４１Ｃは、ＡＣＦの数の関数として測定した細胞核直径をプロットし、明確にするために、測定の時点はそれぞれの点（ｗｋ＝週間）に隣接して示される。
【図４２】本明細書に記載されるＤＷ技術を行うために例示的なコンピュータ可読媒体からの命令を実行するように適合させた例示的なコンピュータシステムの例示的な形式で例示的な機械を示す概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
ここで、実施形態を参照しながら詳細に説明していくが、これらの例は、添付図面において説明されるが、全ての実施形態が示されるわけではない。実際には、概念は、多くの異なる形態で具体化され得、本明細書を制限するものとして解釈されるべきではなく、むしろ、これらの実施形態は、本開示が適用できる法的必須条件を満たすように提供される。可能であればいつでも、同様の参照符号を用いて、同様の要素または部品を指す。
【００３０】
発明の詳細な説明に開示される実施形態は、スペクトル情報を含む情報、およびサンプル内で高分解能情報を同時に取得することが可能であるような時間分解能を独立に決定するために使用することができる２つ以上のウィンドウ（例えば、直交ガウス）を適用する時間周波数分布（ＴＦＤ）を再構成するための多重ウィンドウ（ＭＷ）の方法および装置を含む。一実施形態において、ＭＷ技術は、二重ウィンドウ（ＤＷ）を含む。例えば、一実施形態において、この情報は、高分解能スペクトル情報および時間深さ分解能情報を含むことができる。開示されたＭＷおよびＤＷ技術は、分解能、例えば、スペクトルまたは時間分解能を損失することなく、局在化した再構成場を含むＴＦＤを得ることができる。
【００３１】
一実施形態において、サンプルの深さ分解スペクトルを取得し、サンプル内の散乱および吸収特性を決定する方法が提供される。本方法は、スプリッタ上にビームを放射し、スプリッタが、ビームからの光を分割し、参照ビームおよびサンプルへの入力ビームを発生させることを含む。本方法はまた、参照ビームとサンプルから戻ったサンプルビームとを混合することによって、参照ビームと入力ビームの結果としてサンプルからの戻りサンプルビームとを相互相関させ、戻りサンプルビームに関する光学的な深さ分解情報を有する相互相関プロファイルを得ることも含む。本方法はまた、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を有する、相互相関プロファイルの第１の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する光学情報を取得することと、波長の関数としてサンプルに関する光学情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能光学情報を同時に復元することと、それぞれが、所定の中心波長で第１の幅を超える第２の幅を有する、相互相関プロファイルの第２の１つ以上の分光ウィンドウを提供し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する吸収情報を取得することと、深さの関数としてサンプルに関する吸収情報にフーリエ変換を適用し、それぞれの所定の中心波長でのサンプルに関する高分解能深さ情報を同時に復元することと、サンプルに関する高分解能光学情報および高分解能深さ情報を共記録し、サンプルに関する単一の高分解能の分光光学的に分解された、深さ分解プロファイルを得ることと、により、サンプルに関する光学的性質を含む分光深さ分解プロファイルを生成することも含む。
【００３２】
二重ウィンドウ装置および方法は、一実施形態において、広帯域ＯＣＴまたはＬＣＩ信号から同時にスペクトルおよび深さ情報を復元するために使用されるように設計された。この手法はまた、角度分解低コヒーレンス干渉法（ａ／ＬＣＩ）に対するマルチスペクトル情報を検出するように適応することもできる。ａ／ＬＣＩでは、散乱光は、散乱物体の構造を決定するための角度の関数として検出される。例として、ａ／ＬＣＩ光源は、細胞規模の深さ分解能（３０ミクロン）を可能にするために２０〜４０ｎｍの帯域幅を有し得る。しかしながら、広帯域幅を有する光源が使用された場合、二重ウィンドウ装置および方法は、角度分解散乱に加えて、同時に深さおよびスペクトル情報を提供するように適用され得る。複数の波長での散乱データと散乱角の組み合わせは、より正確なデータ分析を可能にし、構造情報の改善された決定をもたらすことができる。このスキームでは、複数の広帯域光源または広帯域を有する単一の光源が使用され得る。ここで主な決定要因は、利用可能なスペクトル的に分解されたデータがあることである。時間ドメインａ／ＬＣＩがフーリエ変換されて、スペクトルデータを得る一方、周波数ドメインデータ取得様式のそれ自体が、必然的に、このタイプの分析に役立つ。具体的には、スペクトルデータが分光計を用いて取得されるフーリエドメインａ／ＬＣＩ、およびデータが時間内に狭帯域レーザの周波数を掃引することにより取得される掃引源ａ／ＬＣＩの両方は、二重ウィンドウ手法を用いてマルチスペクトルａ／ＬＣＩの実装によく適している。
【００３３】
例示的なＤＷ技術を検討する前に、本明細書に記載される例示的なＤＷ技術を使用することができるＬＣＩを用いて、サンプルに関する高分解能深さ分解スペクトル情報を取得するために、サンプルに関する深さ分解スペクトル情報を捕捉するように採用することができる例示的なシステムが、まず、以下に検討される。例えば、本明細書に記載されるＤＷ技術はまた、ｆ／ＬＣＩシステムにおいても使用することができる。以下は、ｆ／ＬＣＩシステムの一実施形態の説明である。
例示的なｆ／ＬＣＩシステム
【００３４】
Ｗｏｊｔｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．，Ａ．Ｋｏｗａｌｃｚｙｋ，Ｒ．Ｌｅｉｔｇｅｂ，ａｎｄ  Ａ．Ｆ．Ｆｅｒｃｈｅｒ，Ｏｐｔ．Ｌｅｔｔ．，２７（１６）：ｐ．１４１５  １４１７（２００２）、Ｗｏｊｔｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．，Ｒ．Ｌｅｉｔｇｅｂ，Ａ．Ｋｏｗａｌｃｚｙｋ，Ｔ．Ｂａｊｒａｓｚｅｗｓｋｉ，ａｎｄ  Ａ．Ｆ．Ｆｅｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｏｐｔ．，７（３）：ｐ．４５７  ４６３（２００２）、Ｌｅｉｔｇｅｂ，Ｒ．，Ｍ．Ｗｏｊｔｋｏｗｓｋｉ，Ａ．Ｋｏｗａｌｃｚｙｋ，Ｃ．Ｋ．Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓｔｉｃｋｅｒ，ａｎｄ  Ａ．Ｆ．Ｆｅｒｃｈｅｒ，Ｏｐｔ．Ｌｅｔｔ，２５（１１）：ｐ．８２０  ８２２（２０００）における参照文献の内容は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【００３５】
一般に、スペクトルレーダは、深さ分解構造情報が、フーリエ変換を２つの混合場のスペクトルに適用することにより復元される技術を使用する。ｆＬＣＩでは、スペクトルレーダ応用に用いられた前述の手法が、深さ分解構造を復元するだけでなく、深さの関数として散乱光に関する分光情報を取得するまでに拡大される。ｆＬＣＩの性能により、それらの光錯乱スペクトルに基づいて表面下層中のポリスチレンビーズの粒径を抽出することが可能である。本明細書に記載される例示的な実施形態による装置および方法は、多くの異なる領域に適用することができる。あるそのような応用の領域は、表面下細胞層の核形態を復元することである。
【００３６】
ｆＬＣＩスキームの例示的な一実施形態を図１Ａに示す。タングステン光源１００からの白色光（例えば、６．５Ｗ、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ（商標））は、マルチモードファイバ１０１（例えば、コア径２００μｍ）に結合される。ファイバ１０１の出力は、アクロマートレンズ１０２により平行光にされ、ビーム１０４（例えば、ペンシルビーム直径５ｍｍ）を発生させる。次いで、ビームは、ｆＬＣＩシステム１０に転送される。
【００３７】
この照明スキームは、ファイバが、視野絞りとしての役割を果たす点において、ケーラー照明を達成し、入射光または照射光の適切な位置合わせを得、それによって、サンプルの臨界照明を達成する。ｆＬＣＩシステム１０では、白色光ビームは、ビームスプリッタ１０６（ＢＳ）により、参照ビーム１０５およびサンプル１０８への入力ビーム１０７に分割される。サンプル１０８により戻った光、または光学情報は、参照ミラー１１４（Ｍ）により反射された光と、ＢＳ１０６で再結合される。サンプル１０８により戻ったこの光学情報は、散乱もしくは反射性質または情報を含むことができる。一実施形態において、サンプル１０８により散乱する光は、参照ミラー１１４により反射された光と、ＢＳ１０６で再結合され、サンプル１０８に関する深さ分解スペクトル情報または性質を有する干渉項を生成し得る。あるいは、サンプル１０８により反射された光は、参照ミラー１１４により反射された光と、ＢＳ１０６で再結合され、サンプル１０８に関する深さ分解光学情報または特性を有する干渉項を生成し得る。サンプル１０８により戻った光はまた、散乱もしくは反射特性または情報に加えて、サンプル１０８に関する吸収情報または特性を含むこともできる。
【００３８】
参照ミラー１１４と連結して参照ビーム１０５は、第１の参照光を受光する参照アームの一部を形成し、第２の参照光を出力する。入力ビーム１０７およびサンプル１０８は、第１のサンプル光を受光するサンプルアームの一部を形成し、第２のサンプル光を出力する。
【００３９】
当業者は、光ビームが、本明細書に記載される実施形態の精神と範囲から逸脱することなく、複数の参照ビームおよび入力ビーム（例えば、Ｎ個の参照ビームおよびＮ個の入力ビーム）に分割され得ることを認識されよう。さらに、ビームの分割は、例示的な実施形態の光ファイバ実装の場合、ビームスプリッタまたはファイバスプリッタにより達成することができる。
【００４０】
図１Ａに示される例示的な実施形態において、結合ビームは、非球面レンズ１１０によりマルチモードファイバ１１３に結合される。また、他の結合機構またはレンズ型および形状は、本出願の精神および範囲から逸脱することなく、使用することができる。ファイバの出力は、光が、スペクトル的に分散および検出される小型分光器１１２（例えば、ＵＳＢ２０００、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ（商標））の入力スリットと一致する。
【００４１】
検出された信号は、波長Ι（λ）の関数として強度に直線的に相関し、これは、信号および参照場（Ｅｓ、Ｅｒ）と以下の式のように相関させることができる。
【数１】
2013518256.tif 000003
式中、φは、２つの場の間の位相差であり、＜．．．＞は、アンサンブル平均を示す。
【００４２】
干渉項は、信号ビームおよび参照ビームの強度を独立に測定し、全体強度からこれらを減算することにより、抽出される。
【００４３】
サンプルと参照場との間の軸空間相互相関関数、ГＳＲ（Ｚ）は、波長スペクトルを波数（ｋ＝２π／λ）スペクトルに再封鎖し、フーリエ変換することによって得られる。
【数２】
2013518256.tif 000004
【００４４】
この項は、２つの場の時間または縦方向コヒーレンスと相関させる場合、軸空間相互相関として表示される。
【００４５】
ｆＬＣＩスキームの別の例示的な実施形態を図１Ｂに示す。この例示的な実施形態において、光ファイバケーブルは、様々な構成部品を接続するために使用する。当業者は、他の光学的結合機構またはその組み合わせは、本出願の精神および範囲から逸脱することなく、構成部品を接続するために使用することができることを認識されよう。
【００４６】
図１Ｂでは、タングステン光源１２０からの白色光は、マルチモードファイバ１２２に結合され、マルチモードファイバ中の白色光ビームは、ファイバスプリッタ（ＦＳ）１２４により参照ファイバ１２５およびサンプル１３０へのサンプルファイバ１２７に分割される。ファイバスプリッタ１２４は、１つの光ファイバ光源からの光を複数の光源に分割するために使用する。
【００４７】
レンズ１２６（好ましくは、非球面レンズ）および参照ミラー１２８と連結して、参照ファイバ１２５中の参照光は、第１の参照光を受光する参照アームの一部を形成し、第２の参照光を出力する。具体的には、参照ファイバ１２５中の参照光は、レンズ１２６により参照ミラー１２８に誘導され、参照ミラー１２８により反射された参照光（第２の参照光）は、レンズ１２６を用いて参照ファイバ１２５に戻って結合される。サンプルファイバ１２７中のサンプル光およびサンプル１３０は、第１のサンプル光を受光するサンプルアームの一部を形成し、第２のサンプル光を出力する。具体的には、サンプルファイバ１２７中のサンプル光は、レンズ１３１（好ましくは、非球面レンズ）によりサンプル１３０に誘導され、サンプル１３０により散乱されるサンプル光の少なくとも一部は、レンズ１３１によりサンプルファイバ１２７に結合される。図１Ｂに示される例示的な実施形態において、サンプル１３０は、好ましくは、レンズ１３１の焦点距離とほぼ等しい距離で、レンズ１３１との間隔をあける。
【００４８】
参照ファイバ１２５中の反射した参照光の少なくとも一部およびサンプルファイバ１２７における散乱したサンプル光の少なくとも一部は、ＦＳ１２４により検出ファイバ１３３に結合される。検出ファイバ１３３は、説明されるように、サンプル１３０から散乱した光を収集する、または、代替として、サンプル１３０から反射した光を収集するように設置することができる。
【００４９】
検出ファイバ１３３の出力は、光が、スペクトル的に分散および検出される小型分光器１３２の入力と一致する。
【００５０】
図２Ａおよび２Ｂは、白色光源の性質のいくつかを示す。図２Ａは、コヒーレンス長（ｌｃ＝１．２μｍ）を示す自己相関関数を示す。図２Ａは、サンプルが、参照ミラー（Ｍ）と同一であるミラーである場合の信号場と参照場との間の相互相関を示す。この例示的なシナリオにおいて、場は、同一であり、自己相関は、中心波数ｋｏ＝１０．３μｍ−１およびｌ／ｅ  幅Δｋ１／ｅ＝２．０４μｍ−１を有するガウススペクトルとしてモデル化された、入射場スペクトルの変換により与えられる（図２Ｂ）。
【００５１】
図２Ｂは、本明細書に記載される実施形態に従って使用することができる光源の例示的なスペクトルを示す。
【００５２】
この自己相関から、場のコヒーレンス長ｌｃ＝１．２１μｍが決定される。これは、計算された幅のｌｃ＝２／Δｋｌ／ｃ＝０．９８μｍよりも若干上回り、いくつかの相違は、非補償型の分散効果に起因する可能性が高い。波数空間への場の再スケーリングは、適切に実行されない場合、スペクトルを歪曲させ得る非線形過程であることに留意する［１３］。
【００５３】
データ処理では、適合アルゴリズムが再スケーリングされた波数スペクトルに適用され（例えば、立方スプラインフィット）、次いで、再サンプル化される（例えば、同間隔での再サンプル）。次いで、再サンプル化されたスペクトルは、フーリエ変換されて、サンプルの空間相関を得る。当業者は、他の周波数ベースのアルゴリズムまたはアルゴリズムの組み合わせを、フーリエ変換の代わりに使用して、空間相関を得ることができることを認識されよう。リアルタイムまたはほぼリアルタイムでこの処理を達成するために使用することができるソフトウェアツールの一例は、ＬａｂＶｉｅｗ（商標）ソフトウェアを使用することである。
【００５４】
一実施形態において、サンプルは、裏面上で懸濁液から乾燥させているポリスチレンビーズ（平均直径１．５５μｍ、３％分散）を用いたガラス製のカバースリップ（例えば、厚さｄ約２００μｍ）からなる。したがって、サンプルにより散乱した場は、以下の式のように表すことができる。
【数３】
2013518256.tif 000005
【００５５】
方程式３では、Ｅ前およびＥ裏は、カバースリップの前面および裏面により散乱した場を示し、δｚは、参照ビームの経路長と前面から反射した光の経路長との差であり、ｎは、ガラスの屈折の指標である。微小球の効果は、ビーズが小さく、裏面に密着する場合のＥ裏の項に現れる。式３を式２に置換すると、光源のコヒーレンス長により与えられたピークの幅を持つ２つのピーク分布が得られる。
【００５６】
分光情報を得るために、ガウスウィンドウが、フーリエ変換処理を行う前に、干渉項に適用される。当業者は、他の確率論的ウィンドウ手法が、本明細書に記載される実施形態の精神および範囲を逸脱することなく、適用することができることを認識されよう。これにより、特定の深さで散乱した光に関するスペクトル情報を復元することが可能になる。
【００５７】
ウィンドウ表示の干渉項は、以下の式を得る。
【数４】
2013518256.tif 000006
【００５８】
ウィンドウ表示の干渉項の適切なサイジングは、処理作業を促進することができる。例えば、ＥｓおよびＥｋの機能と比較して、比較的狭いウィンドウ（Δｋｗ小）を選択することにより、効果的に得られる＜Ｅｓ（ｋｗ）Ｅ＊ｒ（ｋｗ）＞。以下のデータを処理する際、１６．７の因数でコヒーレンス長を低下させるΔｋｗ＝０．１２μｍ−１が使用される。この例示的なウィンドウ設定は、６μｍ−１の有効スペクトルの範囲にわたる５０の異なる波数での散乱を可能にする。この例では、単一のガウスウィンドウが、フーリエ変換を行う前に、干渉項に適用される。しかしながら、以下に詳細に論じられるように、２つのウィンドウは、干渉項に適用することができる。
【００５９】
図３Ａおよび３Ｂでは、一実施形態に従うカバースリップサンプルの軸空間相互相関関数が、示される。図３Ａおよび３Ｂは、処理作業前および後のカバースリップサンプルの深さ分解相互相関プロファイルを示す。図３Ａでは、それぞれのガラス表面に対応するピークを示す矢印のある高分解能走査が示される。図３Ｂでは、図３Ａ中の走査から得られる低分解能走査が、ガウスウィンドウを用いることにより示される。
【００６０】
相関関数は、ｚ＝０に関して対称であり、走査の重複ミラー画像に得られることに留意する。これらは、相互相関関数として示されるため、プロットは、ｚ＝０に関して対称である。したがって、ｚ＞０の前面反射は、ｚ＜０の裏面反射と対をなし、逆もまた同様である。
【００６１】
図３Ａでは、カバースリップからの反射は、参照アームからの反射に対して分散を導入し、プロファイルにおいて複数のピークを生じる。分光ウィンドウが適用される場合、単一ピークのみがそれぞれの表面に見られるが、信号のエイリアシングにより、いくつかのドロップアウトが現れる。
【００６２】
散乱光のスペクトルを取得するために、ガウスウィンドウが、中心波数が、連用間で０．１２μｍ−１増加する場合、繰り返して適用される。上記のように、Δｋｗ＝０．１２μｍ−１は、１６．７の因数でコヒーレンス長を低下させるために使用する。これにより、分光学的深さ分解プロファイルが生じる。
【００６３】
図４Ａおよび４Ｂは、それぞれ、微小球が存在しない場合、カバーガラスサンプルの前面（ａ）および裏面（ｂ）から散乱した光に対して得られたスペクトルを示す。前面からの反射は、光源スペクトルのわずかに変調された変形として現れる。しかしながら、裏面からの反射のスペクトルは、著しく変調している。したがって、式３において、これより、Ｔ（ｋ）がカバースリップによる透過を表すＥ前（ｋ）＝Ｅｓ（ｋ）およびＥ裏（ｋ）＝Ｔ（ｋ）Ｅｓ（ｋ）が得られる。
【００６４】
図４Ｃおよび４Ｄでは、カバースリップの裏面に微小球が存在する場合、カバーガラスサンプルの前面（ａ）および裏面（ｂ）に対して得られた散乱する光のスペクトルが、図４Ｃおよび図４Ｄに示される。前面から反射スペクトルは、予想通りに著しく変化しないことが見られ得る。しかしながら、これより、裏面のスペクトルは変調される。図６Ａの実線として示される、Ｅ球（ｋ）＝Ｓ（ｋ）Ｔ（ｋ）Ｅｓ（ｋ）として散乱場を書き込み、比率Ｅ球（ｋ）／Ｅ裏（ｋ）＝Ｓ（ｋ）を取ることにより、微小球の散乱性質Ｓ（ｋ）を分析することができる。微小球がスペクトルの周期的変調を誘発することはこの比率から見られ得る。
【００６５】
以下に詳細に論じられるように、多重ウィンドウ（ＭＷ）、例えば、二重ウィンドウ（ＤＷ）技術を提供し、深さ分解スペクトル情報を得ることも可能である。上で論じられるように、１つのウィンドウを提供する場合、同一のウィンドウサイズは、深さ情報およびスペクトル情報の両方を復元するために提供される。トレードオフは、干渉項をサンプリングするために単一ウィンドウサイズを提供する場合に存在する。単一ウィンドウサイズが提供される場合、分解能は、干渉項からのスペクトル情報および深さ情報の両方を損失する。これは、広域ウィンドウの適用が、低分解能スペクトル情報を提供するが、フーリエ変換の性質により高分解能深さ情報を提供するためである。狭域ウィンドウの適用は、低分解能深さ情報を提供するが、フーリエ変換の性質により高分解能スペクトル情報を提供する。したがって、干渉項の広域ウィンドウと狭域ウィンドウとの間に妥協を提供する単一ウィンドウを提供することにより、分解能情報が、サンプルに関するスペクトル情報と深さ情報の両方に対して損失する。
【００６６】
深さ分解分光情報を得るために、本明細書に開示されるある実施形態において、ＤＷ技術が使用される。この点において、図５Ａは、サンプルから得られた例示的なスペクトルのインターフェログラム５００、５０２のダイアグラムを示し、フーリエ変換処理を行う前に、第１の狭域ウィンドウ５０４を干渉項に適用して、サンプルに関する高分解能スペクトル情報を得る、そして、フーリエ変換処理を行う前に、第２の広域ウィンドウ５０６を干渉項に適用して、サンプルに関する高分解能深さ情報を得る。ＤＷ技術は、それぞれのインターフェログラム５０２、５０２において作用する２つのＳＴＦＴを乗算することからなる。ＳＴＦＴは、干渉法によるデータを通してウィンドウを掃引し、一方、それぞれのステップでフーリエ変換を同時に行い、したがって、空間（または軸）領域内に限定されたスペクトル成分のマップを得ることにより実施される。これらのマップは、時間周波数分布（ＴＦＤ）として知られている。しかしながら、単一ＳＴＦＴを用いて得られたＴＦＤは、得られたスペクトルと空間分解能との間に固有のトレードオフに悩まされている。その一方で、ＤＷ技術は、狭域ウィンドウを用いてＳＴＦＴの高スペクトル分解能、および広域ウィンドウを用いてＳＴＦＴの高空間分解能を利用して、時間周波数トレードオフの有害な効果を回避する。この例では、標準偏差ｗ１＝０．０２９μｍ−１およびｗ２＝０．８０４μｍ−１を有するガウスウィンドウが使用され、３．４５μｍの軸分解能および１．６６ｎｍのスペクトル分解能を有するＴＦＤが生じた。このプロセスは、それぞれのＡ走査に対して行われ、したがって、ＯＣＴ画像のそれぞれの点に対してスペクトルを得る。
【００６７】
図５Ｂは、図５Ａにおいて干渉項に対してフーリエ変換を行った後の、波数および深さの関数として、それぞれ、サンプルに関する例示的に得られる高分解能スペクトルおよび深さ情報の深さ分解スペクトル情報プロファイルダイアグラム５０８、５１０を示す。図５Ｂに示されるように、ダイアグラム５０８は、高分解能スペクトル情報を提供するが、低分解能深さ情報を提供しない。図５Ｂのダイアグラム５１０は、高分解能深さ情報を提供するが、低分解能スペクトル情報を提供しない。このプロセスは、画像を用いて、組織表面の輪郭を特定し、この「ゼロ」深さに対して分析を調整することを含む。表面が、任意の特定のＡ走査ではっきりと認識できない場合、さらなる分析が行われないことに留意する。この情報を用いて、二重ウィンドウのＴＦＤは、適切に位置合わせされ、それ故に、特定の組織深さからのスペクトル情報を一貫して提供することができる。
【００６８】
スペクトルが図５Ｂにおいて、適切に位置合わせされると、横方向および軸方向の両方の対象となる領域は、特定され、続くスペクトル分析のために十分な信号対雑音比を提供するために平均化される。本例における横方向において、２０個の二重ウィンドウのＴＦＤを平均化して、それぞれのＯＣＴ画像の１０個の異なる横セグメントを得る。前の研究において、画像中の全てのＴＦＤは、平均化され、したがって、本明細書に提供される分析は、空間情報の１０倍の増加を得る。軸方向において、本例において、２５μｍの深さセグメントのスペクトル平均は、表面（表面部分０〜２５μｍ）、深さ約３５μｍの中心（中心部分２２．５〜４７．５μｍ）、および深さ約５０μｍの中心（低部分３７．５〜６２．５μｍ）の３つの異なる部分から計算することができる。
【００６９】
サンプルに関する高分解能スペクトルと深さ情報の両方を含む単一の深さ分解スペクトル情報を取得するために、深さ分解スペクトル情報プロファイルダイアグラムまたは図５Ｂ中のＯＣＴ画像５０８、５１０を、図５Ｃに図示されるように、組み合わせるか、または共記録することができる。図５Ｃは、図５Ｂ中の混合した高分解能スペクトルおよび深さ情報深さ分解スペクトル情報プロファイル５０８、５１０を一緒に混合して、高分解能スペクトルおよび深さ情報を含むサンプルに関する単一の深さ分解スペクトル情報プロファイルを提供する例示的なダイアグラム５１２である。図５Ｃ中のダイアグラム５１２は、ＤＷ  ＴＦＤを用いて図５Ｂ中のＯＣＴ画像５０８、５１０を共記録することによって提供される。
【００７０】
高分解能スペクトルおよび深さ情報を含む深さ分解スペクトル情報プロファイルの提供は、図５Ｃに図示されるように、例えば、マイクロメータの深さまで、高分解能までサンプルの散乱性質の単離および観察が可能である。これにより、サンプルの細胞の吸収特性の観察が可能である。したがって、高分解能スペクトル性質を有する、色の関数として散乱性質は、深さで特定および区別することができ、低分解能深さ分解スペクトル情報プロファイルとは対照的に、波長情報が混合されて、深さの関数としてサンプルの散乱性質から特に色性質を正確に示す能力を喪失する。
【００７１】
高分解能散乱性質の取得は、低分解能情報により散乱性質が平均化された、より広域領域とは対照的に、一例として、数マイクロメータ内の散乱性質の分析を可能にする。したがって、高分解能散乱性質の取得はまた、散乱性質に対する正確な色情報を提供することも可能である。例えば、血中のヘモグロビンは、ヘモグロビンが青色光を吸収するため、赤色が出現する。したがって、高分解能スペクトル情報を妥協することなく、散乱性質の高分解能深さ情報を提供することにより、ヘモグロビンは、サンプルの深さ分解スペクトル情報プロファイルを正確に特定することができる。また、生物学的吸収体の吸収は、高分解能深さ分解スペクトル情報プロファイルを用いて見ることができ、認識可能である。生物学的吸収体の例には、ヘモグロビンおよびメラニンが含まれる。生物学的吸収体はまた、例えば、蛍光発光等の造影剤を含むこともできる。本出願は、いかなる特定の造影剤にも限定されない。
【００７２】
図６Ａ中の単一のウィンドウ技術の例に戻ると、図４Ａおよび４Ｂ、ならびに図４Ｃおよび４Ｄに見られるスペクトルの比率が示される。これは、前面（破線により示される）および裏面（実線により示される）の反射に対する球の散乱効率を示す。図６Ｂでは、裏面反射の比率から得られた相関関数が示される。ピークは、個々の微小球を介して往復光経路で生じ、球のサイズは、サブ波長の正確度で決定することが可能である。
【００７３】
比較のために、前面反射（図６Ａの破線）の同じ比率は、わずかな線形変形のみ示す。Ｓ（ｋ）のフーリエ変換に従って、ｚ＝５．２４μｍの物理的距離で、明確な相関ピーク（図６Ｂ）を得る。これは、微小球ｎ＝１．５９の指数を有するｚ＝２ｎｌにより、球を通じて光学経路長に関連し得る。微小球の直径は、ｌ＝１．６５μｍ＋／−０．３３μｍであり、相関ピクセルサイズにより不確実性が与えられる。したがって、ｆＬＣＩを用いて、サブ波長の正確度で、さらにはこの白色光源および従来の技術ＬＣＩ画像を用いて達成可能な分解能を超えて、微小球のサイズを決定することができる。
【００７４】
本出願の様々な例示的な実施形態の多くの用途がある。１つの例示的なｆＬＣＩの適用は、細胞小器官、特に、上皮組織中の細胞核のサイズを決定する場合である。生物学的培地において、例えば、相対屈折指数は、微小球と比較して細胞小器官に対して低く、したがって、より小さな散乱信号が期待される。高出力光源の使用は、より小さな信号を検出することが可能である。他の例には、製造された集積回路を含む製造部品の表面下の欠陥の検出、神経剤または生物毒素等の空中エアロゾルの検出、および呼吸管内の上皮組織を検査することによる、そのようなエアロゾルへの曝露の検出が含まれる。
【００７５】
さらに、細胞核のサイズが大きいほど（この実験において微小球と比較）、スペクトルの周波数変調が高い。当業者は、高周波数振動が、フーリエ変換分光技術において、より低効率で検出されることを認識されよう。したがって、これらの高周波数振動を検出するために、高分解能分光器が使用される。
【００７６】
図７は、図１に示され、上でさらに詳しく論じられる、ｆＬＣＩシステムの一般化実施形態を示す。図７では、光源７００（例えば、多波長光）が、ｆＬＣＩシステム７０２に結合される。ｆＬＣＩシステム７０２内で、サンプル部分７０４および参照部分７０６が位置する。サンプル部分７０４は、光ビームおよびサンプルから散乱した光を含む。例えば、サンプル部分７０４は、サンプルホルダー、自由空間光学アーム、または光ファイバを含むことができる。参照部分７０６は、光ビームおよび参照から反射する光を含む。例えば、参照部分７０６は、光学ミラーを含むことができる。相互相関器７０８は、参照からの光とともにサンプルからの光を受光し、相互相関させる。
例示的なｆａ／ＬＣＩシステム
【００７７】
ＤＷ技術はまた、フーリエドメインａ／ＬＣＩ（ｆａ／ＬＣＩ）と称されるａ／ＬＣＩ技術を含み、この方法により、インビボ用途を実行可能にするのに十分な単一走査により高速のデータ収集を可能にし、ａ／ＬＣＩシステムにも適用される。角度分解および深さ分解スペクトル情報は、サンプルに関して取得することができ、サンプルに関する深さおよびサイズ情報は、単一走査で得られ得、参照アームは、１つの走査のみが必要とされるため、サンプルに対して固定されたままであり得る。参照信号および散乱サンプル信号は、相互相関され、サンプルからの複数の散乱角度で分散され、それによって、並行して、同時に、サンプル上の複数の点からの散乱体を表す。
【００７８】
この角度分解、相互相関した信号が、スペクトル的に分散されるため、新しいデータ収集スキームは、データが１秒未満で取得され、インビボ組織からデータを収集するために必要である閾値が決定されることを可能である場合、有意である。サンプル上の複数の異なる点のそれぞれでサンプルの全ての深さに関する情報は、約４０ミリ秒で１回走査により取得することができる。空間的な相互相関参照信号から、構造（サイズ）情報はまた、散乱体のサイズ情報が角度分解データから得ることができる技術を用いて取得することもできる。
【００７９】
ｆａ／ＬＣＩ技術は、フーリエドメイン概念を用いて、深さ分解情報を収集する。データ収集時間の信号対雑音および同一基準の低減は、フーリエ（またはスペクトル）ドメインにおける深さ走査を記録することにより可能である。ｆａ／ＬＣＩシステムは、フーリエドメイン概念を画像分光器の使用と組み合わせることにより、角度分布を並行してスペクトル的に記録する。その後、深さ分解は、サンプルに対するフーリエ変換平面における画像分光器の入口スリットを置くことにより得られる角度分解測定により２つの混合場のスペクトルをフーリエ変換することにより達成される。これは、スペクトル情報を深さ分解情報に、角度情報を横方向空間分布に変換する。ｆａ／ＬＣＩの性能は、最初は、深さ分解測定におけるポリスチレンビーズのサイズを抽出することにより実証された。
【００８０】
例示的な装置、ならびにサンプルから散乱される角度および深さ分解分布データを取得するプロセスに含まれるステップはまた、図９に示されている。一実施形態によるｆａ／ＬＣＩスキームは、図８Ａに示される改良されたＭａｃｈ−Ｚｅｈｎｄｅｒ干渉計に基づいている。スーパールミネッセントダイオード（ＳＬＤ）１２からの広帯域光１１は、ミラー１３により方向付けられ（図９のステップ６０）、ビームスプリッタＢＳ１  ２０により参照ビーム１４とサンプル１８への入力ビーム１６に分割される（図９のステップ６２）。ＳＬＤ１２の出力パワーは、３ミリワットであってもよく、例えば、λο＝８５０ｎｍ、Δλ＝２０ｎｍ  ＦＷＨＭの仕様を有し、組織内の細胞層から散乱を単離するのに十分な低コヒーレンス長さを提供する。参照ビーム１４の経路長は、逆反射体ＲＲ２２を調節するにより設定されるが、測定中は固定された状態を維持する。参照ビーム１４は、レンズＬ１（２４）およびＬ２（２６）を用いて拡大され、照射光を生成し（図９のステップ６４）、この照射光は、均一であり、かつ画像分光器２９内の分光器スリット４８に到達する平行光にされる。例えば、Ｌ１は、１．５センチメートルの焦点距離を有してもよく、Ｌ２  ２６は、１５センチメートルの焦点距離を有してもよい。
【００８１】
レンズＬ３（３１）およびＬ４（３８）は、サンプル１８上に入射する平行ペンシルビーム３０を生成するように配置される（図９のステップ６６）。レンズＬ３（３１）に対して垂直にレンズＬ４（３８）を配置することにより、入力ビーム３０は、光軸に対して０．１０ラジアンの角度でサンプルを照射するように生成される。この配置によりレンズＬ４（３８）の全開口角を用いて、サンプル１８から散乱光４０を収集できる。レンズＬ４（３８）は、３．５センチメートルの焦点距離を有してもよい。
【００８２】
サンプル１８により散乱された光４０は、レンズＬ４（３２）により収集され、レンズＬ５（４３）およびＬ６（４４）から構成される４ｆ画像システムにより中継され、これにより、レンズＬ４（３２）のフーリエ平面が分光器スリット４８で位相および振幅を再生される（図９のステップ６８）。散乱光４０は、第２のビームスプリッタＢＳ２  ４２において参照場１４と混合され、混合場４６は、画像分光器２９への入口スリット（要素４８として図８Ｂに示されている）にあたる（図９のステップ７０）。画像分光器２９は、例えば、Ａｃｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社により製造されているモデルＳＰ２１５０ｉであってもよい。図８Ｂは、スリット４８の寸法に対する散乱角の分布を示す。混合場は、高分解能格子（例えば、１２００１／ｍｍ）で分散され、冷却されたＣＣＤ５０（例えば、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社により製造されている１３４０×４００、２０μｍ×２０μｍピクセル、仕様１０：４００）を使用して検出される（図９のステップ７２）。
【００８３】
検出信号４６は、一旦光が分光器２９により分散されると、分光器スリット４８上の垂直位置ｙおよび波長λの関数である。ピクセル（ｍ、ｎ）における検出信号は、信号４０および参照場１６（Ｅｓ、Ｅｒ）と以下の式のように関連付けることができる。
【数５】
2013518256.tif 000007
式中、φは、２つの場３０、１６の間の位相差であり、＜．．．＞は、時間におけるアンサンブル平均を示す。干渉項は、信号ビーム３０および参照ビーム１６の強度を独立に測定し、全体強度からこれらを減算することにより、抽出される。
【００８４】
深さ分解情報を得るために、それぞれの散乱角における波長スペクトルは、波数（ｋ＝２π／λ）スペクトルに補間され、フーリエ変換されて、以下の式で表されるそれぞれの垂直ピクセルｙｎに対する空間相互相関，ΓＳＲ（ｚ）を与える。
【数６】
2013518256.tif 000008
参照場１４は、以下の式になる。
【数７】
2013518256.tif 000009
式中、ｋｏ（ｙｏおよびΔｋ（Δｙ））は、ガウス波動ベクトル（空間）分布の中心および幅を表し、Δｌは、選択された経路長の差である。散乱場４０は、以下の式になる。
【数８】
2013518256.tif 000010
式中、Ｓｊは、深さｌｊに置かれたｊ番目の界面から生じる散乱の振幅分布を表す。散乱場４０の角度分布は、ｙ＝ｆ４θによりレンズＬ４のフーリエ画像平面における位置分布に変換される。ＣＣＤ５０のピクセルサイズ（例えば、２０μｍ）に対して、これは角度分解能（例えば、０．５７ミリラジアン）および予測される角度範囲（例えば、２２８ミリラジアン）が得られる。
【００８５】
式（７）および（８）を式（６）に代入し、参照場１４（Δｙ＞＞スリットの高さ）の均一性に注目することにより、検出器２９上のｎ番目の垂直位置における空間相互相関性が得られる。
【数９】
2013518256.tif 000011
単一界面に対してこの式の値を求めると、以下のようになる。
【数１０】
2013518256.tif 000012
【００８６】
この例においては、散乱増幅Ｓは、光源１２の帯域幅全体にわたって感知できるほど変化しないと仮定される。この表現は、それぞれの垂直ピクセルが散乱角に対応する散乱分布４０の深さ分解プロファイルを得ることができることを示す。
【００８７】
図１０Ａは、参照場１６と、後方散乱方向に対して与えられる、波長および角度の関数として与えられた周波数ドメインにおける、ポリスチレンビーズのサンプルにより散乱された場４０との和の全体の検出強度（上記の式（５））を表す典型的なデータを以下に示す。例示的な実施形態において、このデータは、４０ミリ秒で収集され、予測範囲の約８５％の１８６ミリラジアン全体にわたるデータを記録しており、高角度において信号の若干の損失を有する。
【００８８】
図１０Ｂおよび１０Ｃは、それぞれ、参照場および信号場１４、３０の強度を示す。全体の検出強度から、信号場および参照場１４、３０を減算すると、２つの場の間の干渉４６は、図１０Ｄに示される通りに実現する。それぞれの角度で、干渉データ４６は、ｋ空間に補間され、フーリエ変換されて、図１１Ａに示される通りにサンプル１８の角度深さ分解プロファイルを得る。角度分解相互相関信号４６のフーリエ変換は、サンプル１８からの複数の反射角度で散乱され、レンズＬ４（３２）のフーリエ平面において得られた信号４０の結果であって、角度および深さの関数としてサンプル１８に関する深さ分解情報を生成する。これは、サンプル１８に関する深さ分解情報を提供する。角度分解、相互相関信号４６は、スペクトル的に分散しているため、データ収集においては１秒未満でデータを取得することができる。サンプル１８上の複数の異なる点（すなわち、角度）のそれぞれにおいて、サンプル１８の全ての深さに関する情報は、約４０ミリ秒で１回走査により取得できる。通常、時間ドメインベースの走査は、複数の異なる点におけるサンプルの全ての深さに関する情報を取得するように要求され、その結果、かなりの時間とサンプルに対する参照アームの運動を要求する。
【００８９】
図１１Ａに示されるサンプル１８の深さ分解利益を生成した実験では、サンプル１８は、中立浮力を提供するために、水８０％およびグリセリン２０％（ｎ＝１．３６）の混合物に懸濁するポリスチレン微小球（例えば、ｎ＝１．５９、平均直径１０．１μｍ、８．９％の分散、ＮＩＳＴ認定、Ｄｕｋｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）からなる。溶液は、散乱長ｌ＝２００μｍを得るために調製された。サンプルは、ガラスカバースリップ（厚さ、ｄ約１７０μｍ）の後方の円形ウェル（直径８ｍｍ、深さ１ｍｍ）内に含まれる（図示せず）。サンプルビーム３０は、カバースリップを通してサンプル１８上に入射する。カバースリップを通る往復厚み（第２＝２（１．５）（１７０μｍ）＝０．５３ｍｍ  、図１１Ａを参照）は、この手法の深さ分解性能を示す。データは、１つの平均自由行程（ＭＦＰ）全体を積分することによりアンサンブル平均される。空間平均により、低コヒーレンス光を使用する場合のスペックルを低減して、散乱サンプルを試験することができる。適合手順を容易にするために、散乱分布は、ローパスフィルタされ、平滑な曲線を生成し、カットオフ周波数は、１６μｍを超える長さスケールにおける空間相関を抑圧するために選択される。
【００９０】
サンプル１８に関する深さ分解情報を取得することに加えて、開示されたデータ収集スキームを用いてサンプル１８から得られる散乱分布データ（すなわち、ａ／ＬＣＩデータ）を用いて、Ｍｉｅ理論を用いて核のサイズを決定することもできる。サンプル１８の散乱分布７４は、プロット線図（ｃｏｎｔｏｕｒ  ｐｌｏｔ）として図１１Ｂに示される。サンプル１８に関する生の散乱情報７４は、信号場３０および角度の関数として示される。フィルタ処理された曲線は、散乱データ７４を用いて決定される。フィルタ処理された散乱分布曲線７６（すなわち、散乱データ７４の表示）とＭｉｅ理論の予測との比較（図１２Ａの曲線７８）によりサイズの決定を行うことができる。
【００９１】
散乱データ７６をＭｉｅ理論に適合させるために、ａ／ＬＣＩ信号を処理して、核のサイズの特性である振動成分を抽出する。平滑化データ７６は、低次多項式（例えば、本明細書では４次が使用されるが、さらに最近の研究ではより低次の２次を使用する）に適合され、その後、背景傾向を除去するために分布７６から減算される。得られた振動要素は、次いで、Ｍｉｅ理論７８を用いて得られる理論上の予測値のデータベースと比較され、分析のために緩やかに変化する特徴が同様に除去される。
【００９２】
フィルタ処理されたａ／ＬＣＩデータ７６とＭｉｅ理論データ７８との直接比較は、カイ２乗適合アルゴリズムが特有の振動でなく、背景傾きと一致する傾向があるため、不可能である可能性がある。計算された理論的予測は、平均直径（ｄ）および標準偏差（δＤ）により特徴付けられるサイズのガウス分布ならびに波長の分布を含み、広範な帯域幅光源を正確にモデル化する。
【００９３】
最良適合（図１２Ａ）は、データ７６とＭｉｅ理論との間のカイ２乗を最小化することにより決定され（図１２Ｂ）、１０．２＋／−１．７μｍのサイズが得られ、真のサイズと優れた一致を示す。測定誤差は、測定において記録される角度の制限範囲によるために、ビーズの大きさの分散より大きい。
【００９４】
ａ／ＬＣＩデータを処理する、およびＭｉｅ理論との比較の代替として、診断情報を得ることができるいくつかの他の手法がある。これらは、フーリエ変換を用いて、角度データを分析することにより、細胞核の周期的振動特性を識別することを含む。周期的振動は、核のサイズとの相関があり、したがって、診断価値を有する。ａ／ＬＣＩデータを分析するための別の手法は、データを、有限要素法（ＦＥＭ）または遷移マトリクス計算を用いて生成される角度散乱分布のデータベースと比較することである。そのような計算は、Ｍｉｅ理論と同一の制限を受けないため、優れた分析を提供することができる。例えば、ＦＥＭまたは遷移マトリクス計算は、非球形散乱体および含有物を有する散乱体をモデル化できるのに対して、Ｍｉｅ理論は、同質球体だけしかモデル化できない。
【００９５】
代替の実施形態として、本明細書に記載されるシステムはまた、内視鏡用途に対してａ／ＬＣＩシステムにおいて使用するために、対象となるサンプルに光を送出および光を収集する光ファイバを採用することもできる。この代替の実施形態は、図１３に示される。
【００９６】
この代替の実施形態における光ファイバａ／ＬＣＩスキームは、レンズのフーリエ変換性質を利用する。この性質は、物体がレンズの前方焦点面に配置される場合、共役画像平面における画像は、この物体のフーリエ変換であることを示す。空間分布のフーリエ変換（物体または画像）は、ｍｍ当たりの周期についての画像情報内容の表示である、空間周波数分布により表される。弾性散乱光の光学画像においては、波長は、固定された最初の値を維持し、空間周波数表示は、単に、散乱光の角度分布の倍率変更バージョンである。
【００９７】
光ファイバａ／ＬＣＩスキームでは、角度分布は、集光レンズを用いてサンプルの共役フーリエ変換平面にファイバ束の遠位端を配置することにより捕捉される。次いで、この角度分布は、画像分光器の入口スリット上に４ｆシステムを用いて画像化されるファイバ束の遠位端に伝達される。ビームスプリッタは、スリットに入る前に参照場と散乱場を重ね合わせるために使用されるため、低コヒーレンス干渉法はまた、深さ分解測定値を得るためにも使用することができる。
【００９８】
次に図１３を参照すると、光ファイバｆａ／ＬＣＩスキームが示される。広帯域光源１１′からの光１２′は、ファイバスプリッタ（ＦＳ）８０を用いて参照場１４′と信号場１６′とに分割される。一実施形態において、スプリッタ比２０：１は、組織から戻される光が、一般にわずかな入射パワーであるため、信号アーム８２を介してサンプル１８′により大きいパワーを誘導するように選択される。あるいは、光源１１′は、米国特許出願第１２／２１０，６２０号の表題「ＡＰＰＡＲＡＴＵＳＥＳ，ＳＹＳＴＥＭＳ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＬＯＷ−ＣＯＨＥＲＥＮＣＥ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＭＥＴＲＹ（ＬＣＩ）」に記載される、スーパーコンティニウムレーザ、または掃引源レーザ等の別の光源により提供することができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９９】
参照ファイバ１４′内の光は、ファイバＦ１から出て、参照アーム経路長の全体位置合わせを可能にするために、変換ステージ８６上に取り付けられたレンズＬ１（８４）により平行光にされる。この経路長は、作動中に走査されないが、位置合わせ中に変更されてもよい。平行ビーム８８は、ファイバ束Ｆ３（９０）の端部９１に寸法的に等しくなるように配置されるため、平行ビーム８８は、等しい強度でＦ３内の全てのファイバを照射する。Ｆ３（９０）の遠位先端から出る参照場１４′は、ファイバＦ４（９４）により伝達された散乱場と重ね合わせるために、レンズＬ３（９２）により平行光にされる。代替の実施形態において、ファイバＦ１から出る光（１４′）は、平行光にされ、次いで、レンズ系を用いて拡大されて、広いビームを生成する。
【０１００】
散乱場は、コヒーレントファイバ束を用いて検出される。散乱場は、レンズＬ２（９８）を用いて対象となるサンプル１８′の方向に向けられる信号アーム８２内で光を用いて生成される。自由空間システムと同様に、レンズＬ２（９８）は、単一モードファイバＦ２の中心から横方向に変位されるため、光軸に対してある角度で移動する平行ビームが生成される。入射ビームが、ある傾斜角でサンプルを照射するという事実は、鏡面反射から弾性散乱情報を分離するのに不可欠である。サンプル１８′により散乱される光は、コヒーレント単一モードまたは多重モードファイバのアレイからなるファイバ束により収集される。ファイバの遠位先端は、散乱光の角度分布を画像化するためにレンズＬ２（９８）から離れて１つの焦点距離を維持される。図１３に示される実施形態において、サンプル１８′は、機械式取り付け台１１００を用いてレンズＬ２（９８）の前面焦点平面に配置される。図１４Ａに示される内視鏡と互換性のあるプローブでは、サンプルは、透明シース（要素１１０２）を用いてレンズＬ２（９８）の前面焦点平面に配置される。
【０１０１】
図１３および図１４Ｂにも示されるように、ファイバプローブＦ４（９４）の近位端１１０５から出る散乱光１１０４は、レンズＬ４（１１０４）により再度平行光にされ、ビームスプリッタＢＳ（１１０８）を用いて、参照場１４′と重ね合わされる。２つの混合場１１１０は、レンズＬ５（１１１２）を用いた画像分光器２９′のスリット（図１４の要素４８′）に再画像化される。レンズＬ５（１１１２）の焦点距離は、スリット４８′を最適に満たすように変更されてもよい。得られた光信号は、図８Ａおよび８Ｂの装置に対して上述されるように、スリット４８′の垂直寸法全体にわたるそれぞれの散乱角に関する情報を含む。
【０１０２】
上述のａ／ＬＣＩ光ファイバプローブは、０．４５ラジアン範囲（約３０°）にわたる角度分布を収集し、一瞬の間に完全な深さ分解散乱分布１１１０を収集することが予想される。
【０１０３】
光工学の点からは同一であるファイバプローブを生成するためのいくつかの可能なスキームが存在する。１つの可能な実装は、信号および参照アームの両方における単一モードファイバの線形アレイである。代替として、参照アーム９６は、コヒーレントファイバ束または線形ファイバアレイのいずれかからなる信号アーム８２を備える個別の単一モードファイバからなる。
【０１０４】
ファイバプローブの先端はまた、実質的に同等であるいくつかの実装を有することもできる。これらは、レンズＬ２（９８）の代わりにドラムレンズまたはボールレンズの使用を含む。側視型プローブは、レンズおよびミラーまたはプリズムの組み合わせを用いて、またはレンズ−ミラーの組み合わせと交換するために凸型ミラーを用いることにより作製することができる。最終的に、プローブ全体は、探求される範囲の周辺走査を可能にするために半径方向に回転するように作製され得る。
【０１０５】
さらに別のデータ収集の実施形態は、図１５Ａに示されるような改良されたＭａｃｈ−Ｚｅｈｎｄｅｒ干渉計に基づくｆａ／ＬＣＩシステムである。ファイバ結合型スーパールミネッセントダイオード（ＳＬＤ）光源１２′′（例えば、Ｓｕｐｅｒｌｕｍ、Ｐｏ＝１５ｍＷ、λο＝８４１．５ｎｍ、Δλ＝４９．５ｎｍ、コヒーレンス長＝６．３μｍ）からの出力１０′′は、９０／１０ファイバスプリッタＦＳ（８０′）（例えば、ＡＣ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ社により製造されている）によりサンプルアーム送出ファイバ１６′′および参照アーム送出ファイバ１４′′に分割される。サンプルアーム送出ファイバ１６′′は、例えば、（１）先端部で統合された偏光制御を備える単一モードファイバ、または（２）偏光維持ファイバのいずれかからなり得る。サンプルプローブ１１１３は、送出ファイバ１６′′の端面が、ファイバ束１１１６の面と平行かつ同一平面となるように、ファイバ束１１１６の遠位端にフェルール１１１４に沿って送出ファイバ１６′′
【数１１】
2013518256.tif 000013
を取り付けることにより組み立てられる。ボールレンズＬ１（１１１５）（例えば、ｆ１＝２．２ｍｍ）は、プローブ１１１３の面から１つの焦点距離に位置付けられ、ファイバ束１１１６上に中心合わせされ、レンズＬ１（１１１５）の光軸から送出ファイバ１６′′をオフセットする。図１５Ｂにも示されるこの構成は、例えば、０．２５ラジアンの角度で、サンプル１８′′上に入射する０．５ｍｍの直径（例えば、２ｆ１ＮＡ）を有する平行ビーム１１２０（例えば、Ｐ＝９ｍＷ）を生成する。
【０１０６】
サンプルからの散乱光１１２２は、レンズＬ１（１１１５）およびレンズＬ１（１１１５）のフーリエ変換性質により収集され、散乱場１１２２の角度分布は、レンズＬ１（１１１５）のフーリエ画像平面に配置される多重モードコヒーレントファイバ束１１１６（例えば、Ｓｃｈｏｔｔ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．、長さ＝８４０ｍｍ、ピクセルサイズ＝８．２μｍ、画素数＝１３．５Ｋ）の遠位面において、空間分布に変換される。ファイバ束上の垂直位置ｙ′と散乱角θの関係は、ｙ′＝ｆ１θにより与えられる。図のように、３つの選択された散乱角における散乱光１２２の光経路は、図１５Ｂに示される。全体として、角度分布は、図１５Ｃにおいて強調表示された領域により示されるように、ファイバ束１６′′の垂直ストリップを交差して、例えば、約１３０の個別ファイバによりサンプリングされる。例えば、送出ファイバ１６′′およびファイバ束１１１６を分離する０．２ｍｍの厚いフェルール（ｄ１）は、この例では、最小の理論的集束角（θｍｉｎ，ｔｈ＝ｄ１／ｆ１）を０．０９ラジアンに制限する。最大の理論的集束角は、ｄ１およびｄ２により決定され、ファイバ束の直径は、θｍａｘ，ｔｈ＝（ｄ１＋ｄ２）／ｆ１により０．５０ラジアンになるように決定される。標準的な散乱サンプル１１２２を用いる実験では、有効角度範囲は、θｍｉｎ＝０．１２ラジアンからθｍａｘ＝０．４５ラジアンを示す。ｄ１は、例えば、遠位フェルール１１２３内にチャネルを形成し、チャネル内に送出ファイバ１６′′を位置付けることにより最小化することができる。
【０１０７】
ファイバ束１１１６は、空間的にコヒーレントであり、近位面で収集される角度散乱分布の再生成をもたらす。加えて、束１１１６内の全てのファイバが、コヒーレンス長さ内に一致する経路長であるため、それぞれの角度における散乱光１１２２により移動される光経路長は同一である。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｔ．Ｑ．Ｘｉｅ，Ｄ．Ｍｕｋａｉ，Ｓ．Ｇ．Ｇｕｏ，Ｍ．Ｂｒｅｎｎｅｒ，ａｎｄ  Ｚ．Ｐ．Ｃｈｅｎ  ｉｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３０（１４），１８０３−１８０５（２００５）（以下「Ｘｉｅ」）による「Ｆｉｂｅｒ−ｏｐｔｉｃ−ｂｕｎｄｌｅ−ｂａｓｅｄ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ」に開示されているシステムは、時間ドメイン光コヒーレンストモグラフィシステムにおける多重モードコヒーレントファイバ束を開示しており、個別のファイバに結合された光のモードは、異なる経路長を移動することを実証した。一例では、高次モードは、関連データを臨床的に収集するのに要求される深さ（約１００μｍ）をはるかに超えて、基本モードから３．７５ｍｍのオフセットがあることが実験的に決定された。加えて、サンプルアームパワーが参照アームパワーより大幅に小さいため、高次モードにおけるパワーは、ダイナミックレンジに大きな影響を与えなかった。最終的に、Ｘｉｅに開示されたシステムは、個別のファイバを通して順次にデータを収集するが、本明細書に開示された例では、１３０のファイバを用いて、ある角度範囲全体にわたって同時に並行して散乱光を収集し、高速データ収集が得られる。
【０１０８】
ファイバ束１１１６の近位端１１２４から出る角度分布は、Ｌ２およびＬ３の４ｆ画像システム（ｆ２＝３．０ｃｍ、ｆ３＝２０．０ｃｍ）により中継され、画像分光器２９′′（例えば、Ａｃｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＩｎＳｐｅｃｔｒｕｍ  １５０）の入力スリット４８′′に達する。４ｆ画像システムの理論上の大きさは、この例では、（ｆ３／ｆ２）６．６７である。実験的に、この大きさは、この例では、Ｍ＝７．０と測定されたが、恐らくは、レンズＬ２（１２６）に対するファイバ束１１１６の近位面１１２４の位置に起因する相違を有する。分光器スリット４８′′上の垂直位置ｙとθとの間に得られる関係は、ｙ＝Ｍｆ１（θ−θｍｉｎ）である。参照アームの光経路長は、サンプルアームの基本モードの光経路長と一致する。参照ファイバ１４′′から出る光１１２７は、レンズＬ４（１１２８）により平行光にされ（例えば、ｆ＝３．５ｃｍ、スポットサイズ＝８．４ｍｍ）、サンプル光の位相面曲率と一致し、画像分光器２９′′のスリット４８′′全体にわたる一様な照射を生成する。参照場１１３０は、中性濃度フィルタ１１３２により減衰され、ビームスプリッタＢＳ（１１３４）において、角度散乱分布と混合される。混合場１１３６は、高分解能格子（例えば、１２００ライン／ｍｍ）により分散され、例えば、８４０ｎｍを中心とするスペクトル範囲の９９ｎｍをカバーする、一体型冷却ＣＣＤ（図示せず）（例えば、１０２４×２５２、２４μｍ×２４μｍピクセル、０．１ｎｍ分解能）を使用して検出される。
【０１０９】
検出信号１１３６、波長λおよびθの関数は、以下の式の通り、信号および参照場（Ｅｓ、Ｅｒ）に相関させることができる。
【数１２】
2013518256.tif 000014
式中、φは２つの場の間の位相差であり、（ｍ，ｎ）はＣＣＤ上のピクセルを表し、＜．  ．  ．＞は時間平均を示す。Ι（λｍ，θｎ）は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社ソフトウェアにより製造されたＬａｂ  ＶＩＥＷを用いてＰＣにアップロードされ、３２０ｍｓで処理されて散乱強度の深さおよび角度分解プロット線図を生成する。次いで、上述の、および特に、図８Ａおよび８Ｂのデータ収集装置を参照して、深さおよびサイズ情報を取得するための角度分解散乱場の処理を用いて、図１５Ａ〜１５Ｃの装置により生成される散乱混合場１１３６を用いてサンプル１８′′に関する角度分解、深さ分解情報を得ることができる。
二重ウィンドウ（ＤＷ）技術
【０１１０】
本明細書に開示される実施形態のＤＷ装置および方法は、例として、分光器１１２（図１Ａ）、２９（図８Ａ）、および２９′（図１３）に結合されるマイクロプロセッサを実行するソフトウェアにより計算することができる。本開示の最後で以下に論じられる図４２は、本明細書に記載されるＤＷ技術を行うために例示的なコンピュータ可読の媒体からの命令を実行するように適合させた例示的なコンピュータシステムの例示的な形式で例示的な機械を示す概略図を提供する。
【０１１１】
ＤＷ装置および方法は、２つ以上の別々のＳＴＦＴを計算し、次いで、結果を組み合わせることに基づいている。この例では、２つのＳＴＦＴを取得する。この例における第１のＳＴＦＴは、広域スペクトルガウスウィンドウを用いて、高時間／深さ分解能を得る一方、この例における第２のＳＴＦＴは、狭域スペクトルを用いて、高分光分解能を生成する。次いで、２つの得られるＴＦＤを共に乗算し、高スペクトルおよび時間分解能を同時に有する単一のＴＦＤを得る。
【０１１２】
このアプローチの数学的な解析は、ＤＷ技術が、スペクトルおよび空間／時間寸法に独立して合わせることができる２つの直交ガウスウィンドウを用いてウィグナーＴＦＤを探査することと同等であることを示し、したがって、ＳＴＦＴを妨害するトレードオフを回避する。
【０１１３】
この例におけるＤＷ技術が示すことを理解するために、ＦＤＯＣＴ信号を検討し、
【数１３】
2013518256.tif 000015
式中、Ｉ（ｋ）は、全検出強度であり、ＩＲおよびＩＳは、それぞれ、参照場およびサンプル場の強度であり、ｄは、サンプルアームと参照アームとの間の一定の光学的経路差である。ＳＴＦＴの相互相関の項２ＥＲＥＳ＊・ｃｏｓ（ｋ・ｄ）は、以下の式で表すことができる。
【数１４】
2013518256.tif 000016
【０１１４】
ガウスウィンドウの幅または標準偏差ｕは、許容可能なスペクトルまたは時間分解能を取得するために慎重に選択されるべきであることに留意する。例えば、ｕが光源の帯域幅と同一の指標であるように選択される場合、ＳＴＦＴは、良好な時間／深さ分解能を有するが、場合によっては、不良なスペクトル分解能を有するＴＦＤを得る。一方、ｕが光源の帯域幅よりもはるかに下回るように選択される場合、ＳＴＦＴは、良好なスペクトル分解能を有するが、場合によっては、不良な時間分解能を有するＴＦＤを得る。しかしながら、ＤＷ技術は、この分解能トレードオフを回避することができる。
【０１１５】
それぞれが、狭域スペクトルウィンドウおよび広域スペクトルウィンドウにより生成される、２つのＳＴＦＴ、Ｓ１およびＳ２から得られるＴＦＤを検討する。等式（１２）における参照場が、対象となる周波数にわたって徐々に変化すると仮定すると、処理した信号は、以下の式により与えられる。
【数１５】
2013518256.tif 000017
式中、ａおよびｂは、独立して、ウィンドウの幅を設定するパラメータであり、ｂ＞＞ａである。さらなる洞察力のある形式の処理信号を得るために、以下の式のように座標変化を検討する。
【数１６】
2013518256.tif 000018
式中、ヤコビの変換は、一貫性がある。したがって、処理した信号ＤＷは、以下の式のように書くことができる。
【数１７】
2013518256.tif 000019
【０１１６】
等式（１６）からの項
【数１８】
2013518256.tif 000020
は、あいまい度関数を利用することによりウィグナーＴＦＤに関して表すことができる［１２、１３］。
【数１９】
2013518256.tif 000021
式中、
【数２０】
2013518256.tif 000022
は、新しい座標システムにおけるサンプル場のウィグナーＴＦＤである。等式（１７）を等式（１６）に置換し、簡略化した後、処理信号を得る。
【数２１】
2013518256.tif 000023
【０１１７】
ｑに対して等式（１８）を積分し、ａ２／ｂ２＜＜１であるように、ｂと比較してａが小さいと仮定することにより、ＤＷ信号は、以下の式のように簡略化する。
【数２２】
2013518256.tif 000024
【０１１８】
等式（１９）は、ＤＷ技術が、１つが、スペクトル次元においてｂ／２の標準偏差を有し、他方が、空間／時間次元において、ｌ／（２ａ）の標準偏差を有する２つの直交ガウスウィンドウを用いてサンプル場のウィグナーＴＦＤを探査することと同等であることを示す。さらに、ａおよびｂは、それぞれ、独立して、スペクトルおよび空間／時間分解能を調整し、したがって、ＳＴＦＴを妨害するトレードオフを回避する。等式（１９）はまた、処理信号が、サンプルアームと参照アームとの間の一定の経路差ｄにより異なる振動により変調されることも示す。この事象はまた、ウィグナーＴＦＤの交差項においても見られ、これは、位相差に関する一定の有益情報を含むように特定されている［１２］。この振動項の有用性は、以下に研究される。
【０１１９】
ａがゼロに近似し、ｂが光源の帯幅Δｋよりもはるかに上回るように得られる場合、別の興味深い結果が、得られる。これらの制限において、標準偏差ａ→０を有するウィンドウは、デルタ関数に近似するが、標準偏差がｂ＞＞Δｋである第２のウィンドウは、スペクトルにわたって一定になる。信号Ｆ（ｋ）＝２ＥＲＥＳ・ｃｏｓ（ｋ・ｄ）であり、
【数２３】
2013518256.tif 000025
がフーリエ変換対である場合、等式（１４）は以下を得る。
【数２４】
2013518256.tif 000026
【０１２０】
等式（２０）は、Ｋｉｒｋｗｏｏｄ  ＆  Ｒｉｈａｃｚｅｋ  ＴＦＤと同等であり、実数部が得られる場合、Ｍａｒｇｅｎａｕ  ＆  Ｈｉｌｌ（ＭＨ）ＴＦＤと同等である［１３］。これらの２つの分布のいずれかは、ウィグナーＴＦＤ等のコーヘンクラスの関数［１３］のいずれかを生成するように単に変換することができる。
ＤＷシミュレーション
【０１２１】
ＤＷ技術の出力を説明するために、２つの異なるシミュレーションが示される。第１のシミュレーションにおいて、時間および中心周波数において分離された２つの光場からなる信号がシミュレートされる。全サンプル場は、ＥＳ＝Ｅ１＋Ｅ２により与えられ、式中、
【数２５】
2013518256.tif 000027
、
【数２６】
2013518256.tif 000028
、およびｋ１＞ｋ２である。全サンプル場のウィグナー分布は、以下の式により与えられ、
【数２７】
2013518256.tif 000029
全サンプル場のＭＨ分布は、以下の式により与えられる。
【数２８】
2013518256.tif 000030
式中、
【数２９】
2013518256.tif 000031
は、フーリエ変換対である。図１６Ａ〜１６Ｄは、得られるＴＦＤを説明する。
【０１２２】
図１６Ａに示される一例の理想ＴＦＤ１２００は、個々の場としてそれぞれのパルスを処理し、１つのマップ上にそれらのそれぞれのＴＦＤを重ね合わせることにより生成される。しかしながら、これは、個々の場の予備知識で得ることができる。図１６Ａ中の理想ＴＦＤ１２００は、時間およびスペクトル次元の両方において、ガウス形状を有する２つのパルス１２０２、１２０４を含む。パルス１２０２、１２０４は、それぞれの次元において十分に分離される。図１６Ｂ〜１６Ｄは、単一混合場から生成することができる異なる例示的なＴＦＤ１２０６、１２０８、１２１０を示す。図１６Ｂに示されるウィグナー分布１２０６は、それらの間に出現するさらなる交差項と共に２つのガウスパルスを示す。交差項は、時間位相差に関する重要な情報を示す、それぞれの次元の変調を含む場合もある［１２］。しかしながら、しばしば、これらの交差項は、場に存在しない時間／深さおよび周波数で非ゼロ値を得るような望ましくないアーチファクトとして、見られる。さらに、さらなる成分が場に加えられる場合、交差項は、局部信号を干渉することができる。
【０１２３】
図１６Ｃに示される例示的なＭＨ分布１２０８は、４つのパルスを含む。信号場を含む２つのパルスに加えて、ＭＨ  ＴＦＤ１２０８はまた、「時間的反射（ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｉｍｅ）」として知られている２つのアーチファクトパルスを含む［１３］。ウィグナー分布と同様に、これらのアーチファクトは、信号が含まれているはずがない時間および周波数で非ゼロ強度を得る。
【０１２４】
例示的なＤＷ技術を用いて生成されたＴＦＤ１２１０を、図１６Ｄに示す。例示的なＴＦＤ１２１０は、それぞれが、広域および狭域スペクトルウィンドウで処理される２つのＳＴＦＴの積を単にコンピュータで計算することにより生成される。図１６Ｄにおいて、ウィグナーおよびＭＨ分布１２０６、１２０８に存在する交差項は、２つの直交ウィンドウの使用の結果として抑制される。
【０１２５】
第２のシミュレーションは、２つの異なる反射面を含む実験サンプルを用いてマイケルソン干渉計からのＳＯＣＴ信号をモデル化する。第１のサンプル面は、光源の全ガウススペクトルを反射するが、一方、第２のサンプル面は、光源スペクトルの高周波数部分（上半分）を吸収する。このシミュレーションは、以下に論じられる吸収ファントム実験に類似している。このシミュレーションのシナリオにおいて、すなわち、検出信号が場の強度であるため、ウィグナー分布でもＭＨ分布でもないＳＯＣＴシステムが、構築され得、したがって、位相情報が失われる。したがって、ＴＦＤは、ＳＴＦＴおよびＤＷ技術により本例に再構成される。
【０１２６】
図１７Ａは、擬似信号の例示的な理想ＴＦＤ１２１２を示す一方、図１７Ｂおよび１７Ｃは、それぞれ、狭域および広域スペクトルウィンドウを用いたＳＴＦＴにより生成した例示的なＴＦＤ１２１４、１２１６を示す。いずれの場合にも、時間周波数分解能トレードオフの効果は、明白である。広域スペクトルウィンドウを用いて生成されたＴＦＤは、分解した時間分解能に悩まされている一方、狭域スペクトルウィンドウを用いて生成されたＴＦＤは、分解したスペクトル分解能に悩まされている。Ｘｕらが示すように、ＳＴＦＴウィンドウは、特定の用途のために最適化され得るが、ウィンドウサイズに関わらず、分解能トレードオフが行われなければならない［１１］。図１７Ｄは、ＤＷ技術を用いて生成された例示的なＴＦＤ１２１８を示し、これは、図１７Ｂおよび１７Ｃに示されるＴＦＤ１２１４、１２１６の積を計算する。図１７Ｅは、図１７Ｂ〜１７Ｄから計算した例示的な時間限界１２２０を示し、ＤＷ技術は、理想事例の分解能に匹敵する分解能を用いて２つのサンプル面を分解する一方、狭域スペクトルウィンドウＳＴＦＴは分解しないことを実証する。図１７Ｆは、ＤＷ技術が広域スペクトルウィンドウＳＴＦＴよりも高いスペクトル忠実性を維持することを示す図１７Ｂ〜１７Ｄにおける裏面反射の例示的なスペクトルプロファイル１２２２を示す。ＤＷ技術が、吸収された波数を正確に表現することができる一方、広域スペクトルウィンドウＳＴＦＴは、吸収情報を示さないことに留意する。ＤＷ周波数プロファイルはまた、狭域ウィンドウＳＴＦＴにおいて見られ、ウィグナーＴＦＤの特徴である同一のスペクトル変調も示す。この変調は、時間内に重ね合わせる場の要素間の相互相関に由来し、以下にさらに分析される。
局部振動
【０１２７】
ウィグナーＴＦＤの交差項からの時間コヒーレンス情報を利用して、ＳＯＣＴ信号によりサンプルの構造的知識を得ることができることが前述されている［１２］。しかしながら、これらの交差項は、実際には、場に存在しない時間／深さおよび周波数で非ゼロ値を得るような望ましくないアーチファクトとして、一般に見られる。
【０１２８】
等式（１９）は、ＤＷ技術により処理された信号が、周波数がサンプルアームと参照アームとの間の一定の経路差ｄにより異なるコサイン項により変調されることを示す。これは、ウィグナーＴＦＤの交差項に観察される同一の現象であり、これらの振動を用いて、位相差に関する有益情報を得ることができる。
【０１２９】
図１８Ｂは、シミュレーション２（図１７Ａ〜１７Ｆ）におけるサンプルの前面反射面からの例示的な周波数プロファイル１２２６を示す。この周波数スペクトルは、ＤＷ技術により生成された、図１８Ａに示されるＴＦＤ１２２４の深さ３から得られる。存在するスペクトル変調は、擬似実験サンプルに関する構造情報を示すようにさらに処理することができる。図１８Ｂからの周波数プロファイル１２２６のスペクトルのフーリエ変換は、１．５の物理的距離に対応する明白な相関ピークを示す、図１８Ｃに示される相関プロット１２２８を生成する。この距離は、擬似サンプルにおいて１．５ユニットの表面の間隔と一致し、したがって、サンプルの構造に関するさらなる情報を提供する。
吸収ファントム実験の実験結果
【０１３０】
［１５］において、Ｇｒａｆらにより前述されるような白色光並列周波数ドメインＯＣＴ（ｐｆｄＯＣＴ）システムを用いて、例示的な実験を行った。高スペクトル分解能および時間分解能を同時に用いてＴＦＤを生成するＤＷを処理する方法の能力を評価するために、図１９Ａに示されるように、吸収染料１２３０で充填したガラス製ウェッジから構成される吸収ファントムを構築する。図１９Ｂは、２つの内部ガラス表面が明確に視認できる吸収ファントムの例示的なｐｆｄＯＣＴ走査１２３２を示す。裏面からの信号は、さらに多量の吸収染料が存在するため、かなりの信号吸収のため、ウェッジの厚い末端で著しく減衰されることに留意する。実験システムは、可視波長域において動作するため、赤色の食品着色料のゲルおよび水溶液からなる可視吸収染料が使用され得る。図１９Ｃは、検出されたスペクトルの高波数範囲の強力な吸収を示す吸収染料の透過スペクトル１２３４を示す。ファントムの前面から戻る信号は、比較的平坦なスペクトルを示す一方、ファントムの裏面により反射された信号は、高波数の著しい減衰を有するスペクトルを示し、それが通過した染料の吸収スペクトルを反映することを予測する。
【０１３１】
図１９Ｂにおいて、例示的な赤色破線１２３６の位置に対応する生データは、図２０Ａ〜２０Ｂに示される４つのＴＦＤを得るための４つの異なる方法で処理された。図２０Ａは、０．０４０５μｍ−１の狭域スペクトルウィンドウを用いた例示的なＳＴＦＴ処理方法を用いて生成された。得られた例示的なＴＦＤ１２３８は、卓越したスペクトル分解能を有し、ファントムの前面に対応する深さで全ての波長にわたって比較的平坦なスペクトルを示す。高波数での鋭いスペクトルのカットオフ、染料吸収の特性は、より深い深さで明白である。しかしながら、このＴＦＤを生成するために使用される狭域スペクトルウィンドウは、非常に不良な時間分解能を得て、ファントムの２つの表面の分解能力の喪失をもたらす。図２０Ｂはまた、例示的なＳＴＦＴ方法を用いて処理されたが、この場合、０．６６５μｍ−１の広域スペクトルウィンドウが使用された。得られたＴＦＤ１２４０は、ファントムの２つの表面を明確に分解する卓越した時間分解能を有する。しかしながら、得られたＴＦＤのスペクトル分解能は、非常に不良で裏面スペクトルに予測されるスペクトル変調を分解しない。図２０Ｃは、０．０４８μｍ−１の中程度のスペクトル幅のウィンドウを用いたＳＴＦＴ方法を用いて生成された例示的なＴＦＤを示す。予測されるように、得られたＴＦＤ１２４２のスペクトルおよび時間分解能は、図２０Ａおよび２０Ｂの分解能の間にあり、これは、ＳＴＦＴ処理方法と関連する時間−空間分解能のトレードオフを示す。吸収染料のスペクトル特性が、このＴＦＤにおいて明白であるが、２つのファントム面は、なお分解することができない。
【０１３２】
図２０Ｄにおける例示的なＴＦＤ１２４４は、ＤＷ技術を用いて生成された。狭域スペクトルウィンドウおよび広域スペクトルウィンドウの両方を用いて生データを処理することにより、ＴＦＤは、高スペクトルおよび時間分解能を同時に達成する。前面ファントム面は、全ての波長にわたって比較的平坦なスペクトルを示す一方、裏面スペクトルは、信号場が通過した吸収染料のため、高波数でのスペクトルカットオフを明確に示す。さらに、ファントムの前面および裏面は、明確に深さで分解される。
【０１３３】
ＤＷ処理方法の有用性は、生成されたＴＦＤのスペクトル横断図および時間限界を試験することによりさらに実証される。図２１Ａは、図２０Ｃおよび２０ＤのＴＦＤ１２４２、１２４４における吸収ファントムの裏面に対応する深さからの例示的なスペクトルプロファイル１２４６を示す。参照用に、吸収染料透過スペクトルも示される。図２１Ｂは、参照用のファントムの反射率スペクトルと共に、ファントムの前面に対応する深さからの例示的なスペクトルの切断図１２４８を示す。それぞれのＴＦＤ１２４６、１２４８の例示的な時間限界１２５０は、図１９Ｂからの対応するＡ走査と共に、図２１Ｃに示される。ＤＷ技術により生成されたＴＦＤが吸収ファントムの２つのピークを分解する能力を維持するが、一方、ＳＴＦＴ方法により生成されたＴＦＤは維持しないことが明白である。
【０１３４】
ＳＴＦＴと関連する分解能のトレードオフを制限するのに加えて、例示的なＤＷ技術はまた、生成されたＴＦＤのスペクトル忠実性の増加も達成する。図２１Ａおよび２１Ｂからの例示的な正規化スペクトルは、図２２Ａおよび２２Ｂにおいてプロットされ、高周波数変調は低域フィルタにより除去される。高周波数局部振動から低周波数成分を分離することにより、それぞれの処理方法が理想スペクトルを再構成する忠実性を評価することができる。それぞれの処理方法に対するカイ二乗値を計算して、適合度を評価した。下表１は、例示的なカイ二乗値を要約する。図２２Ａの例示的な裏面スペクトル１２５２および図２２Ｂの前面スペクトル１２５４の両方に関して、ＤＷ技術と関連するカイ二乗値は、ＳＴＦＴのカイ二乗値よりも低く、ＤＷ処理方法が、より大きなスペクトルの忠実性を有する理想信号を再構成することを示す。加えて、ＳＴＦＴの平方に対する適合度は、ＤＷ技術が双線分布を生じるという事実を説明するように、本例において計算される。例示的なＤＷ技術はまた、二乗されたＳＴＦＴよりも優れたスペクトル忠実性を生じることも見られる。
【表１】
2013518256.tif 000032
【０１３５】
擬似ＳＯＣＴ信号と同様に、吸収ファントムの探査から得られるＴＦＤに見られる局部振動（図２２Ａおよび２２Ｂ）はまた、実験サンプルに関する構造情報を得るために分析することもできる。図２３Ｂは、図２３Ａの赤色破線１２６０により示される吸収ファントム１２５８の前面からの例示的なスペクトルプロファイル１２５６を示す。このスペクトルのフーリエ変換は、明白な相関ピークが２０．６０μｍの物理的距離に対応する、図２３Ｃに示される例示的な相関プロット１２６２を生成する。この測定は、ファントム面の間の間隔を示し、ファントムのＯＣＴ画像において測定された間隔、２０．６０μｍ±５．９７μｍと卓越して一致する。ここで、ガラス表面が、信号を増加させ、より広範な範囲の経路長を生じるように若干磨耗されたという事実により、測定不確実性が、１．２２μｍの深さ分解能より大きい。
動物組織実験
【０１３６】
生物学的サンプルからのＳＯＣＴおよびｆＬＣＩ信号を処理するためにＤＷ技術の有用性を示すために、ｐｆｄＯＣＴシステムは、エクスビボハムスター頬袋の上皮組織からのスペクトルを捕捉するために本実施例において適用された。組織サンプルは、新たに切除され、走査前に２つのカバーガラス間に設置された。データは、組織のいかなる固化、染色、またはさらなる調製する必要なく収集された。生データは、ＤＷ技術を用いて処理され、図２４Ａに示されるように例示的なＴＦＤ１２６４をもたらした。
【０１３７】
生成したＴＦＤを用いて、サンプル内の散乱によるスペクトル変調を特定する、具体的には、散乱シグネチャーに基づいて原位置で核形態学を評価することができる。上皮組織において、核散乱の大部分は、病理組織学的分析により決定されるように、組織表面下約４０μｍの基底層で生じる。図２４Ａにおいて例示的なＴＦＤ１２６４の対応する深さが選択され、１５個の隣接線からのスペクトルは、信号対雑音比を増加させるために平均化された。平均化されたスペクトルは、まず、指数法則により固定され、例示的な剰余スペクトル１２６６が、図２４Ｂに示される。この信号に存在している局部振動は、組織中の散乱に関する有益な構造情報を含む。これらの局部振動を用いて、スペクトルのフーリエ変換を分析し、厚み相関関数のプロットを生成することにより、核形態学を定量的に決定することができることが前述されている［８］。図２４Ｂからの例示的な剰余スペクトル１２６６をフーリエ変換すると、図２４Ｃに示される相関プロット１２６８が得られ、４．９４μｍの平均散乱直径に対応する明白な相関ピークを示す。この直径は、ハムスター頬袋の上皮組織の基底組織層に予測される細胞核の直径とうまく対応する。
【０１３８】
要約すれば、本明細書に開示される例示的なＤＷ技術は、ＳＯＣＴ信号を処理するために使用され得、高スペクトルおよび時間分解能を同時に維持することができる。さらに、この手法が、チャープパルスによるもの等の急に変化する周波数成分を有する信号に対して機能しない可能性があることが予期されるとしても、ＳＯＣＴ信号の性質が、ＤＷ技術に対する十分条件付けされ、かつ最適な問題を提供する。ＤＷ技術は、スペクトルおよび時間分解能を独立に決定し、ひいては、従来のＳＯＣＴおよびｆＬＣＩ処理方法を妨害する分解能のトレードオフを回避する２つの直交ウィンドウを有する信号場のウィグナーＴＦＤを探査することを示している。加えて、ＤＷ技術により生成されるＴＦＤに含まれる局部振動は、実験サンプルの構造に関する有益情報を含むことが示されている。吸収ファントムからのＳＯＣＴ信号を分析する際、ＤＷおよびＳＴＦＴ処理方法の性能を比較することにより、ＤＷ技術が、高スペクトルおよび時間分解能を同時に維持しながら、優れた忠実性を伴ってＴＦＤを復元することが示されている。また、散乱に関する形態学的情報を得るために、生物学的サンプルからのＳＯＣＴおよびｆＬＣＩ信号を処理するためのＤＷ技術の有用性も示されている。
【０１３９】
その導入のため、ＳＯＣＴは、深さ分解画像上にスペクトル情報をマッピングすることにより、生物学的サンプルの空間的および機能的知識を得る見込みがある。残念ながら、ＳＴＦＴおよびＣＷＴ等の従来のＳＯＣＴ処理方法は、分光分解能と深さ分解能との間に固有のトレードオフにより限定されている。この時間周波数トレードオフは、重要な特徴が正確に再構成することができなくなるほど深さ分解能あるいはスペクトル分解能のいずれかで分解することにより、分析の有用性を大幅に減らす。このトレードオフを回避することにより、ＤＷ処理方法は、ＳＯＣＴおよび深さ分解された分光法において新しい方向性を可能にすることが期待される。
【０１４０】
本明細書に開示される例示的なＤＷ技術は、光散乱分光法（ＬＳＳ）およびフーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆＬＣＩ）を用いて、濃厚な混濁サンプル中の形態学的特徴の測定を処理するために使用されている。白色光源を用いた並列周波数ドメイン光学コヒーレンスシステムを用いて、上層および下層上に、それぞれ、直径４．００μｍおよび６．９８μｍのポリスチレンビーズを含有する２層ファントムを画像化する。ＤＷ技術は、同時に高スペクトルおよび空間分解能がある時間周波数分布にそれぞれのＯＣＴ  Ａ走査を分解する。サンプル中の局所領域からのスペクトル情報を用いて、散乱体構造を決定する。結果は、２つのビーズ集団が、ＬＳＳおよびｆＬＣＩを用いて、正確かつ精密に分化することができることを示す。
【０１４１】
光散乱分光法（ＬＳＳ）［１７］は、フーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆＬＣＩ）［１８］を含む多くの技術の例示的な基礎を有し、これは、前癌発生［１９］と関連する上皮細胞核肥大を測定するために開発されている。ｆＬＣＩにおいて、深さ分解能は、短時間フーリエ変換（ＳＴＦＴ）を用いて、取得されるスペクトル情報を有するコヒーレンス回折格子により得られる。この処理は、分光光コヒーレンストモグラフィ（ＳＯＣＴ）において実行されるものと類似している［２０］。しかしながら、ｆＬＣＩにおいて、ＳＴＦＴで処理された後、所定の深さからのスペクトルは、散乱する物体のサイズを決定するために定量的に分析される［１８］。
【０１４２】
光コヒーレンストモグラフィの延長であるＳＯＣＴは、ＯＣＴの同一の切断面のトモグラフィ画像能力［２１］に分光ベースの対照のさらなる利益［２０］を提供する。上述のように、ＳＯＣＴは、ＳＴＦＴまたはウェーブレット変換を使用し、サンプルに関するさらなる情報を提供する分光情報を取得する。残念ながら、ＳＴＦＴのウィンドウイング処理は、深さ分解されたスペクトルのさらなる定量的処理を限定する、空間的分解能とスペクトル分解能との間に固有のトレードオフを導入する。ＳＯＣＴ信号を処理するための二重ウィンドウ（ＤＷ）方法は、高スペクトルおよび空間分解能の両方を達成し、深さ分解されたスペクトル情報のさらに完全な定量的処理を可能にする［２２］。
【０１４３】
混濁培地中の散乱体の異なる集団の形態学的測定は、ＤＷ技術を用いて処理され、ＬＳＳおよびｆＬＣＩ技術で分析され得る。ＤＷ技術は、それぞれ、時間周波数分布（ＴＦＤ）にＯＣＴ信号からの深さ分解されたＡ走査を分解し、ＯＣＴ画像を用いて定量的スペクトル分析を本質的に位置合わせし、周辺散乱体構造を決定する。この手法は、２層ファントムの画像および分析を通して示され、それぞれの層が異なるサイズのポリスチレンビーズの懸濁液を含有する。
【０１４４】
Ｇｒａｆらにより記載されるように［２３］、白色光並列周波数ドメインＯＣＴシステムを使用することができる。つまり、マイケルソン干渉計形状は、４つのさらなるレンズを用いて修正され、４Ｆ画像システムを形成し、それにより、サンプルおよび参照アームを照明する空間モード数を限定することができる。この実施例において、２つのアームにより戻った光は、組み合わされ、画像分光器の入口スリット上に画像化される。干渉信号は、１５０本の空間線および３．７５ｍｍの範囲を含む一次元にわたって平行に得られる。分光器は、それぞれのチャネルをその波長要素に分散することができ、λο＝５５０ｎｍで中心にある１５０ｎｍの帯域幅が分析されて、１．２２μｍの軸分解能を得る。分光器は、例えば、ＲＧＢディスプレイ上にＲＧＢ値を用いて情報を表示するために使用することができる赤、緑、および青色の波長要素に対する色チャネルにそれぞれのチャネルを分散するように設定することができる。
【０１４５】
ＯＣＴ画像を処理するために、６つのステップが一例として考えられ得る。１．サンプルおよび参照アーム強度は、別々に得られ、信号から減算される。２．得られる干渉信号は、参照場の強度により分割されて、λの関数として光源スペクトルおよび検出器の効率に対して正規化される。このステップは、残りのスペクトル依存性が、前方散乱光の吸収および後方散乱光の散乱する横断面から単に起因すると仮定されるため、深さ分解スペクトルの定量的比較には特に重要である。３．データは、線形波数ベクトル、ｋ＝２π／λに再サンプル化される。４．色分散は、デジタル修正される。５．高速フーリエ変換を実行し、Ａ走査を取得する。６．１５０本の空間線のそれぞれに対して処理を繰り返して、ＯＣＴ画像を取得することができる。
【０１４６】
ＯＣＴ画像の生成と同様に、例示的なＤＷ技術は、干渉法の情報を使用し、上述のように、例示的なステップ１〜４を提供することができる。最終ステップとして、２つのＳＴＦＴの積が得られる：１つは、高スペクトル分解能に対して狭域ウィンドウを有するＳＴＦＴであり、高空間分解能に対して広域ウィンドウを有するＳＴＦＴである。等式２３は、単一の空間線からの例示的なＤＷ技術を用いて得られた分布を記載する。
【数３０】
2013518256.tif 000033
式中、ｚは、軸方向距離であり、ａおよびｂは、ウィンドウの標準偏差である。Ｒｏｂｌｅｓらは、２つの線形動作の積のＤＷが、コーヘンクラスの双線関数により記載することができることを示している［２２］。ｂ＞＞ａである、ＤＷは、パラメータａおよびｂにより独立して設定される２つの直交ウィンドウを有するウィグナーＴＦＤをサンプル化し、多くの共通のアーチファクトの抑制をもたらす。
【０１４７】
例示的なＤＷは、本実施例において独立して分析される、情報を中継する２つの要素を含む。ＤＷの低周波数に含まれる第１の要素（ｋ、ｚ０）は、ｚ０での光信号のスペクトル依存性に対応し、サンプルにおいて吸収および散乱から発生する。この要素は、ＬＳＳで分析される。第２の要素は、ｚ０に関する形態学的特徴であり、散乱光の時間コヒーレンスから生じ、信号の局部振動（高周波数）に含まれる［２２］。これは、ｆＬＣＩで分析される。
【０１４８】
この研究は、ＬＳＳおよびｆＬＣＩ方法を用いて濃厚な混濁サンプル中の散乱構造の分析に努める。したがって、ｎａ＝１．３５である、寒天（２重量％）と水の混合物中に懸濁された、異なるサイズ（それぞれ、上層および下層において、ｄ＝６．９８μｍおよび４．００μｍ）のポリスチレンビーズ（ｎｂ＝１．５９）を含有する２層ファントムが、使用される。散乱体濃度は、さらに深い深さで十分なＳＮＲを確実にするｌｓ＝１ｍｍの平均自由散乱経路長を得るように選択される。図２５Ａは、走査を必要としない、単一の０．３秒曝露により得られるファントムのＯＣＴ画像１２７０を示す。
【０１４９】
例示的なＤＷ技術は、それぞれの側線に対するＴＦＤを計算するために使用することができ、高スペクトルおよび空間分解能を有するＯＣＴ画像においてそれぞれの点に対するスペクトルを得る（ＤＷパラメータは、ａ＝０．０４５４μｍ−１およびｂ＝０．６６７０μｍ−１に設定）。図２５Ｂは、対応するＡ走査１２８０（図２６Ｂ）を用いて、代表線１２７６（図２５Ａの赤色破線）の処理ＴＦＤ１２７２を示す。２つの代表点が選択され、それぞれの点からのスペクトルが一例として分析される。図２７Ａおよび２７Ｂは、それぞれ、点１および２からスペクトルプロファイル１２８２、１２８４（青色実線）を得る。
【０１５０】
低周波の深さ分解スペクトルは、本実施例において、吸収および散乱断面積に関する情報を含む。発色団が存在しないため、スペクトル依存性により、ビーズの散乱断面積を得、したがって、ファン・デ・フルストの概算［２４］を用いて、ビーズサイズを決定することができる。これを得るための、ＤＷスペクトルプロファイルは、３．５μｍの低域フィルタのハードカットオフ周波数（３つのサイクル）であり、最小二乗適合を用いて、散乱体直径を得る。図２７Ａおよび２７Ｂにおいて、緑色破線１２８６、１２８８は、適合に使用された低域フィルタのデータを示し、これにより、真のビーズサイズと十分一致している点１および２に対して、それぞれ、ｄ１＝３．９７μｍおよびｄ２＝６．９１μｍを得る。赤色破線により、最良適合に対応する理論的な散乱断面積を得る：これらが処理信号と卓越して一致していることに留意する。
【０１５１】
本実施例において、ＤＷの高周波数成分（ｋ、ｚ０）により、ｆＬＣＩ測定を得る。第１に、スペクトル依存性は、上の分析から最良適合ラインを減算することにより除去される。次いで、剰余は、フーリエ変換されて、最大値が、分析領域内の優性散乱特徴間の距離を得る相関関数を得る。ビーズファントムに対して、局部振動は、主に、前面および裏面による散乱により生じる。さらに、Ｙｉらによる擬似ＯＣＴ画像は、単一の微小球が、複数のピークを発生させることを示し［２５］、これらも考慮に入れる。図２７Ｃおよび２７Ｄは、それぞれ、点１および２に対する相関関数１２９０、１２９２をプロットし、ＬＳＳ測定および真のビーズサイズの両方と十分一致しているｄc＝ΔＯＰＬ／（２ｎｂ）＝４．２５μｍおよび６．８７μｍで相関ピークを得る。
【０１５２】
本実施例における手順は、自動化アルゴリズムが、相関関数において閾値（ｉｎｔ．＞１００）を上回り、他の最大値よりも１０％高いピークを選択した場合、ＯＣＴ画像の全ての点に対して繰り返された。さらに、ＬＳＳおよびｆＬＣＩ測定がシステムの分解能（±１．２２μｍ）内で一致している点のみが、考慮される。図２５Ｂは、ＯＣＴ画像によるｆＬＣＩ測定のオーバーレイ１２７２を示す。上層において、平均散乱サイズは、ｆＬＣＩおよびＬＳＳ測定に対して、それぞれ、３．８２±０．６７μｍおよび３．６８±０．４１μｍであり、８２％の一致であった（１１２個の点）。下層において、平均散乱サイズは、ｆＬＣＩおよびＬＳＳに対して、それぞれ、６．５５±０．４７μｍおよび６．７５＋０．４２μｍであり、より深いサンプル深さでより低いＳＮＲであるため、３５％の低い一致であった（１１３個の点）。これらの結果は、２つの独立した方法を利用することにより、散乱構造（ｆＬＣＩおよびＬＳＳ）を分析し、我々の技術が、全ＯＣＴ画像を通じて正確かつ精密な測定を得ることを示す。ｆＬＣＩ測定における誤差の原因は、複数のビーズが、相関関数において複数の最大値を得る単一のピクセル領域（２５μｍ×１．１５μｍ）内に位置する場合の部分容積効果により生じる場合がある。
【０１５３】
簡潔に言えば、例示的なＤＷ技術で処理することにより、ＬＳＳおよびｆＬＣＩを用いた波長精度を有する形態学的特徴の正確な測定を達成している。近年、Ｙｉらは、弱く散乱する培地中の蛍光および非蛍光微小球を識別するために類似の光学系およびＳＴＦＴ処理を用いる結果を示した［２５］。Ｙｉらの分析は、散乱体の構造（すなわち、直径）による高周波数スペクトル変調を意図的に破棄したため、薄層（＜１００μｍ）に制限され、構造を評価しなかった。比較すると、本明細書に示した結果は、無傷組織内の前癌発生を検出するために、吸収しない上皮細胞核肥大を測定する可能性を確認する。
【０１５４】
本明細書に開示される新規の二重ウィンドウ手法はまた、分光ＯＣＴ測定にも使用し、ハムスター頬袋癌性モデルから採取された組織サンプルにおける核形態学を探査するために適用されている。二重ウィンドウ手法は、高スペクトルおよび深さ分解能を同時に可能にし、上皮組織の基底層において細胞核の構造を決定するために単離されるスペクトル振動の検出を可能にする。測定は、熱源からの光を使用する我々の並列周波数ドメインＯＣＴシステムを用いて実行され、高帯域およびスペクトルの可視部分へのアクセスを提供した。構造測定は、未処理（正常）組織と処理（増殖性／異形成）組織との間に高度に統計的に有意な差異を示し、これは、診断方法としてこの手法の潜在的有用性を示す。
【０１５５】
癌は、一般に、時間と共に徐々に進行し、成長および増殖するごくわずかの異常細胞から始まる。悪性腫瘍の大部分は、構造上および細胞学的異常のレベルを変化させることにより特徴付けられた前癌状態から発生する［２７］。できるだけ初期の段階での組織におけるこれらの構造変化の検出は、治療的介入の機会の増加をもたらし、ひいては、死亡率および罹患率を大幅に削減し得る。しかしながら、前癌発生の検出は、利用可能なスクリーニング技術の大きな課題である。
【０１５６】
上皮組織の癌を検出するための現行の「究極の判断基準」は、生検サンプルの病理組織学的分析である。生検サンプルは、検査下の組織から切除され、固定、切断、染色し、最終的に、形態学的な異常に対して病理学者による検査を受ける。この手順は、癌の診断の標準的技法であるが、診断の主観性、生検の固有の侵襲性、生検と診断との間の時間遅延、および潜在的に危険な状態にある組織の範囲の不良を含む、この手法のいくつかの不利点がある。
【０１５７】
改善されたスクリーニングおよび診断技術は、これらの限界を克服する必要があることは明らかである。近年、大量の研究は、初期癌検出の光学的方法を開発することに焦点をあてている［２８〜３０］が、そのような方法は、上で列挙された従来の生検の限界を克服するのにかなり有望であるためである。１つの特定の技術である弾性光散乱分光法は、散乱光を分析し、光が相互に作用する構造に関する情報を取得する光学的技術である。数十年間、弾性光散乱は、物理的性質の直接測定が実行不可能または不可能である、様々な用途に利用されている。ごく最近、生体フォトニクスの進歩により、生物学および医薬への弾性光散乱の適用が可能になっている。強力な、広帯域光源を用いて、弾性散乱分光法（ＥＳＳ）は、インビボおよびエクスビボ組織サンプルの細胞形態学を調査するためにいくつかの群により使用されている［３１〜３４］。細胞核の直径の肥大が、前癌成長［２７］の重要な指標であるため、細胞核の形態学は、光散乱研究における戦略目標になる。
【０１５８】
これらの前進は、フーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆＬＣＩ）として知られている弾性光散乱技術を可能にする［３５、３６］。ｆＬＣＩ手法は、干渉法を用いて、深さ分解分光情報を取得して、サンプル中の特定の層からの、核形態学等の構造情報を分析し、復元することができる。初期癌検出のために、ｆＬＣＩを適用して、細胞核の直径の肥大を検出することができ、これは前癌変換のバイオマーカとしての役割を果たし得る。このバイオマーカは、単独で、あるいは光散乱信号から得られる他の情報と組み合わせて、高感受性および特異性を有する正常上皮組織と異形成上皮組織とを区別することが必要である定量的情報を提供することができる。
【０１５９】
正常エクスビボ上皮組織と異形成エクスビボ上皮組織を区別するために、ｆＬＣＩ技術の能力を評価する第１の研究の結果は、本明細書により示される。この研究において、定量的核形態学測定は、バイオマーカとして使用し、正常ハムスター頬袋の上皮組織と異形成ハムスター頬袋の上皮組織を区別する。
材料および方法
動物モデル
【０１６０】
動物研究は、ハムスター頬袋発癌モデルを用いて完成した。動物研究のために、全ての実験プロトコルは、Ｄｕｋｅ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＮｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの動物実験委員会により、ならびに国立衛生研究所（ＮＩＨ）に従って承認された。６週齢の雄のシリアンゴールデンハムスターが、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から得られ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙで収容された。動物は、１２時間の明／暗サイクルにおいて、制御温度および湿度の部屋中にケージあたり４匹収容した。定期的なケージの交換により、衛生的な条件の維持が確保された。全ての動物は、ＡＩＮ−９３Ｍの食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）が与えられた。食餌は、１４％  カゼイン、０．１８％  １−シスチン、４９．５％  コーンスターチ、１２．５％  マルトデキストリン１０、１０％  スクロース、５％  セルロース、４％  大豆油、０．０００８％  ｔ−ブチルヒドロキノン、３．５％  鉱物混合物、１％  ビタミン混合物、および０．２５％  重酒石酸コリンから構成された。水道水を不断給水した。１週間の慣化後、それぞれの動物の左頬袋を、絵筆を用いて、鉱油中の１００μｌの０．５％  ７，１２−ジメチルベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、週３回で６週間、局所的に処置した。右頬袋は、未処置のままにし、対照群としての役割を果たした。
実験プロトコル
【０１６１】
ＤＭＢＡでの初期処置から２４週間後、ハムスターは、光学分光分析のためにＤｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙに出荷された。ハムスターは、肉眼検死に供される前に、ＣＯ２窒息により殺処分された。左および右頬袋全体を切除し、２つの破片に分割した。サンプルは、２つのカバーガラスの間に平らに置き、ＰＢＳで湿らせ、並列周波数ドメイン光コヒーレンストモグラフィ（ｐｆｄＯＣＴ）システムにより直ちに走査した。光学的測定後、走査した領域は、墨で印を付け、組織サンプルを１０％  ＰＢＳ緩衝ホルマリン中に固定した。その後、固定したサンプルをパラフィンに包埋し、切片にし、病理組織学的分析のため、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。
【０１６２】
完全な動物試験は、２１匹のハムスターからの組織サンプルを分析した。１つの処置サンプルおよび１つの未処置サンプルが、それぞれの動物から抽出され、ｆＬＣＩシステムにより走査されたが、２１個の未処置サンプルのうち１６個の未処置サンプルのみがこの研究に使用された。残りの５個の未処置サンプルからの走査の信号対雑音比は、有用なデータを提供するには不十分であった。したがって、これらの走査は、分光分析には含まれなかった。
並列周波数ドメイン光コヒーレンストモグラフィ
【０１６３】
エクスビボ組織サンプルは、Ｇｒａｆらにより初めに記載されたｐｆｄＯＣＴシステムを用いて検査した［３７］。図２８に示されるｐｆｄＯＣＴシステム２８００は、修正されたマイケルソン干渉計形状に基づき、Ｗａｘらにより初めに示される４ｆ干渉計を利用する［３８］。このシステムは、一実施形態において、照明用のキセノンアーク灯光源（１５０Ｗ，Ｎｅｗｐｏｒｔ  Ｏｒｉｅｌ，Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ，ＣＴ）であり得る、光源２８０２を利用する。４ｆ干渉計は、検出器への光源２８０２からの光を空間分解するために、２つの４ｆ画像システムを使用する。システム２８００はまた、ビームスプリッタ２８０４、レンズ２８０６、２８０８、２８１０、２８１２、および２８１４、ならびに参照ミラー２８１６も含むことができる。図２８のシステム２８００は、サンプル２８１７を試験するために使用することができる。画像システムの検出平面は、画像分光計２８２０の入口スリット２８２２と一致し、これは、一実施形態において、それぞれ、幅２５μｍで２５５検出チャネルを空間分解する、モデルＳｈａｍｒｏｃｋ  ３０３ｉ，Ａｎｄｏｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈ  Ｗｉｎｄｓｏｒ，ＣＴ等の分光計であり得る。入口スリット２８２２は、少量の入射光のみ画像分光計２８２０に入るようにする。画像分光計２８２０は、６００ライン／ｍｍの回折格子と１０２４ピクセルのＣＣＤアレイの組み合わせを伴う光学を含み、スペクトルの検出を５００〜６２５ｎｍの範囲に制限する。画像分光計２８２０からのデータは、ＵＳＢ２．０のインターフェースにより、ラップトップ型ＰＣに即時ダウンロードすることができ、分光計の制御およびデータ収集は、カスタムＬａｂ  ＶＩＥＷ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）ソフトウェアを用いて達成することができる。
【０１６４】
ｆＬＣＩ方法は、弾性散乱した光の強度の波長依存性を試験することにより散乱に関する構造情報の復元に努める。この技術は、サンプルの特定の表面層から出ているスペクトルのフーリエ変換を分析することにより散乱サイズを決定する。深さ分解能は、周波数ドメインＯＣＴに一般に使用されるコヒーレンス回折格子法を採用することにより得られる。干渉法スキームにおいて、広帯域光源の低時間的コヒーレンス長を利用することにより、ｆＬＣＩは、探査サンプル中の最も診断に関連する層からのスペクトル情報を選択的に分析することができる。
【０１６５】
深さ分解分光を行うために、ｆＬＣＩデータは、単一ドメインにおいて得られるデータから、深さ分解能およびスペクトル分解能を同時に取得するために処理されなければならない。この処理を実行するために、ｆＬＣＩおよび分光ＯＣＴは、一般に、短時間フーリエ変換（ＳＴＦＴ）を採用し、ここで、ガウスウィンドウを、フーリエ変換する前に、干渉信号に適用して、特定の中心波数に関して中心にある深さ走査を得る。ガウスウィンドウの中心をシフトし、プロセスを繰り返すことにより、深さおよびスペクトル分解能の両方で設定されるデータを生成することができる。しかしながら、この手法を用いたスペクトル分解能を増加させるためのあらゆる試みは、深さ分解能の分解をもたらし、その逆も同様であることに留意すべきである。ごく最近、Ｒｏｂｌｅｓらは、ｆＬＣＩ分析に組み込むことができる分光ＯＣＴ（ＳＯＣＴ）信号を処理するための二重ウィンドウ（ＤＷ）方法を導入した［３９］。ＤＷ技術は、２つの別々のＳＴＦＴを行い、高深さおよびスペクトル分解能を同時に達成するために結果を組み合わせることに基づいている。
【０１６６】
深さ分解分光情報から、対象となる特定の深さから戻った光のスペクトルにおける振動を分析することにより、ｆＬＣＩは、構造情報の決定に努める。より具体的には、ｆＬＣＩは、前癌発生の最も初期の段階で生じる核肥大を検出することにより正常上皮組織と異形成上皮組織との区別に努める。図２９Ａは、屈折変化指数が存在する場合の２つの細胞核１３０２、１３０４、ならびにそれぞれの細胞核１３０２、１３０４の前面および裏面１３０６、１３０８（細胞核１３０２のため）と１３１０、１３１２（細胞核１３０４のため）の両方で行われる散乱事象を表す、説明図１３００を示す。サンプルにより誘発された場のコヒーレンスにより異なり［４０］、細胞核１３０２、１３０４の前面および裏面１３０６、１３０８、１３１０、１３１２からの反射は、互いに干渉し、図２９Ｂに示されるように、建設的または相殺的干渉１３１４を生じる。この振動の周波数は、散乱体の直径および屈折率により直接依存し、粒子が大きいほど、高周波数の振動をもたらし、粒子が小さいほど、低周波数の振動をもたらす。ｆＬＣＩ方法は、細胞核の直径を測定するために、これらのスペクトル振動の検出および分析に努める。
データ処理
【０１６７】
ｐｆｄＯＣＴシステムにより得られる生データは、１２０個のスペクトルからなり、これらのそれぞれは、実験サンプルにおける隣接する２５μｍの直径空間点により生じる。そのような３つのスペクトル１３１６、１３１８、１３２０のプロットと共に、生の干渉データ１３１４を図３０Ａに示す。信号ビームの直径は、測定の信号対雑音比を保存するために、画像分光計の２５５個のうちの１２０個のみのスペクトルチャネルを照明するように成形された。
【０１６８】
本実施例において特定の組織層からのスペクトルを分析するために、画像分光計のそれぞれのチャネルにより検出されたスペクトルは、ＤＷ技術を用いて処理された［３９］。簡潔に言えば、ＤＷ技術は、干渉信号の時間周波数分布（ＴＦＤ）を再構成するために、２つのＳＴＦＴの積を使用し、あるＳＴＦＴは、高スペクトル分解能に対して狭域ウィンドウを有し、別のＳＴＦＴは、高空間分解能に対して広域ウィンドウを有する。等式２４により、単一空間線からＤＷ技術により得た分布の数学的記述を得る。
【数３１】
2013518256.tif 000034
ａおよびｂは、ウィンドウの標準偏差として得られる。この特定の配置において、スペクトル分解能は、使用された分光計の実際の分解能により制限され、一方、深さ分解能は、検出した光のコヒーレンス長により制限される。
【０１６９】
Ｒｏｂｌｅｓらは、ＤＷ技術から得られた分布が、２つの線形動作を用いて構成されるとしても、コーヘンのクラスの双線形関数に関連することができる［３９］ことを示している。ａ２／ｂ２＜＜１である、１つの制限において、ＤＷ分布により、スペクトルおよび深さ分解能を２つの直交ウィンドウ、ａおよびｂの幅により独立して設定したウィグナーＴＦＤの測定が得られる。有意に、２つの直交ウィンドウの使用は、ウィグナーＴＦＤからの交差項アーチファクト、およびＭａｒｇｅｎａｕ  ＆  Ｈｉｌｌ  ＴＦＤからの時間的反射のアーチファクト等の、他のＴＦＤの測定において一般的な多くのアーチファクトを除外する。さらに、ＤＷは、スペクトル次元において局部振動を含み、これは、サンプルに関する形態学的情報、特に、分析の地点に近い散乱面間の距離を示す。
【０１７０】
例示的なＤＷ技術は、０．０４０５μｍ−１の狭域スペクトルウィンドウの半値全幅および０．６６５μｍ−１の広域スペクトルウィンドウの半値全幅の両方を有するデータを処理するためにカスタムＭａｔｌａｂプログラムを用いて実行された。それぞれのウィンドウにより生成された深さ分解スペクトルを共に乗算し、高スペクトルおよび深さ分解能を同時に有するプロットを得た。得られた１２０個の深さ分解分光プロット１３２２、１３２４、１３２６を共に合計し、信号対雑音比を改善し、図３０Ｂに示されるような、それぞれの組織サンプルに対して単一の深さ分解分光プロット１３２８を得た。
【０１７１】
悪性形質転換において、核形態学変化は、まず、上皮組織の基底層において観察される。ハムスター頬袋組織において、基底層は、正常組織に対して表面下に約３０〜５０μｍあり、異形成組織に対して表面下に約５０〜１５０μｍあった。基底層の試験は、異形成症の発症を検出するための最も初期の機会を提供するため、それは、ｆＬＣＩ技術およびこの研究に対して標的組織層である。
【０１７２】
上皮組織の基底層を標的にするために、生の実験データをまず、処理し、各行ごとのフーリエ変換により並行ＦＤＯＣＴ画像を得た。これらの「Ｂモード」画像は、図３１Ａおよび３１Ｂに示されるもののように、単一の深さプロット（Ａ走査）を生成するために横軸にわたって合計された。いくつかの重要な組織学的特徴は、深さ走査において特定され、対応する組織学的画像を用いて共記録され得る。図３１Ａおよび３１Ｂは、未処置および処置された組織サンプルから固定され、染色された組織学的切片の顕微鏡写真における、上皮組織の角化層１３４０、１３４２（緑色矢印）、基底層１３４４、１３４６（赤色矢印）、ならびに下層の固有層１３４８、１３５０（青色矢印）の配置を示す。同一の組織層に対応する散乱ピークは、それぞれの深さ走査において特定された。組織画像の距離と深さ走査の距離を相関させるために、組織の屈折率を考慮に入れた。ｎ＝１．３８の組織の平均屈折率を用いて、深さ走査距離を光学経路長に変換した［４１、４２］。組織内の屈折率の変動は、現行の方法の潜在的な限界であり、以下にさらに論じられる。
【０１７３】
それぞれのサンプルに対して、基底層の位置に対応する１５μｍの深さセグメントは、深さ走査から選択され、図３２Ａに示されるように、深さ分解分光プロット１３５２の分析を誘導するために使用された。それぞれのＡ走査において、基底層で確認される深さからのスペクトルを平均化して、基底層により散乱した光に対する単一スペクトルを生成した。図３２Ｂに示されるように、式ｙ＝ｂ・ｘａの指数法則曲線１３５４を、初めに、それぞれのスペクトルに適合させ、細胞核の基礎構造の異質性を含む、細胞器官のフラクタル構造によって生じるスペクトル依存性をモデル化した［４３〜４５］。それぞれのスペクトルの剰余は、実験スペクトルから指数法則曲線を減算し、図３２Ｃに示されるような、振動特徴を単離する正規化スペクトル１３５６を得ることにより、計算された。
【０１７４】
正規化スペクトルは、基底細胞核の前面および裏面から散乱することにより生成された干渉によって生じる明らかな振動を示した。それぞれの正規化スペクトルは、フーリエ変換されて、図３２Ｄに示されるものと同様の相関プロット１３５８を生成し、これは、正規化スペクトルにおける優位周波数に対応する明らかなピークを示す。自動化されたカスタムＭａｔｌａｂプログラム（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）により、ピーク検出を実行した。スクリプトは、まず、指数法則適合により除去されないあらゆる低周波数成分を除去するために、４サイクルのカットオフでスペクトルを広域フィルタされた。次いで、相関プロットのピーク位置は、Ｍａｔｌａｂスクリプトにより自動的に検出され、一次方程式ｄ＝相関距離／（２・ｎ）（式中、ｎは、屈折率であり、ｄは、細胞核の直径である）を用いて、散乱体の直径に関連させた。ｎ＝１．３９５の細胞核の屈折率が仮定された（９）。
結果
完全動物試験の結果を、表２に要約し、図３３のチャート１３６０にグラフを用いて示す。
【表２】
2013518256.tif 000035
【０１７５】
１６個の未処置組織サンプルは、基底層の平均核直径が４．２８μｍであり、標準偏差は０．６９μｍであった。２１個の処置組織サンプルは、基底層の平均核直径が９．５０μｍであり、標準偏差は２．０８μｍであった。統計的ｔ検定は、０．０００１未満のｐ値を示し、これは、２つの集団の基底層の核直径間の非常に統計的に有意な差異を示した。組織学的分析は、未処置サンプルが未変化上皮組織として現れたことを示したが、一方、処置サンプルは全て、炎症および過形成から異形成の範囲に及ぶ罹患組織状態を示した。
【０１７６】
図３３は、その測定した基底層の核直径の関数として、それぞれの処置（青色□）組織サンプル１３６２および未処置（赤色ｘ）組織サンプル１３６４をプロットする。表示した決定ラインは、正常サンプルと罹患サンプルとの間の卓越した分離をもたらす。表示した決定ラインを用いて、研究結果は、２１個中２１個の処置サンプルを正確に分類し、これは、１００％の感度を提供し、１６個中１６個の未処置サンプルを正確に分類し、これは、１００％の特異度を提供した。
考察
【０１７７】
完全動物試験の実験結果は、ｆＬＣＩが、正常上皮組織と異形成上皮組織を区別するための技術として大いなる可能性があることを示す。実験的測定は、バイオマーカとして核直径の原位置測定を用いて、処置動物組織と未処置動物組織を精密かつ正確に区別する優れた能力を示した。測定した直径は、測定が細胞核の短軸のｆＬＣＩの測定に相当するように調節される場合［４７］、ハムスター頬袋の上皮組織の基底層に対して予測される核直径とうまく対応する［４６］。異形成の発症は、基底層の組織の肥厚および細胞構成の破壊をもたらすことに留意すべきである。結果として、ｆＬＣＩ測定は、罹患組織の一部の細胞核の長軸を探査する可能性が高く、正常組織と比較した場合、検出した核の肥大のさらなる一因となる。
【０１７８】
動物組織データから深さ分解スペクトルを抽出するためのＤＷ技術の使用は、重要な進歩である。ＤＷ処理方法は、ＳＴＦＴで処理したデータに検出され得ない核散乱により誘発されたスペクトル振動の測定を可能にした。ＳＴＦＴで処理したｆＬＣＩデータは、スペクトル分解能と深さ分解能との間に固有のトレードオフに悩まされている。このトレードオフの結果として、許容可能なスペクトル分解能の達成は、核散乱により誘発されたスペクトル振動が消耗される程度まで深さ分解能の分解を必然的に必要とする。この消耗は、異なる組織層から生じるスペクトルの位相差および周波数差による可能性が高く、これらは、不良な深さ分解能の結果として組み合わされる。対照的に、ＤＷ技術は、高深さおよびスペクトル分解能を同時に有する深さ分解分光プロットを生成した。ＤＷ技術は、十分なスペクトル分解能を生成するが、一方、高深さ分解能を維持し、故に、薄い組織セグメントのスペクトル分析を可能にした。多くの組織層からの望ましくない信号の組み合わせを回避することにより、基底層の組織から生じるスペクトルの振動要素は、保存され、分析用に利用可能であった。
【０１７９】
動物試験の結果は非常に有望であるが、現行の方法は、限界がないわけではない。対象となる組織層を選択する際の屈折率における依存性は、将来さらに検査しなければならない課題である。現行のｆＬＣＩデータ処理アルゴリズムは、組織内の屈折率の電位変化を説明しない。現行の方法はまた、交絡因子でもあり得る異形成の発症により誘発された潜在指数変化に対しても調節しない。組織サンプル内の光学経路長を正確に測定するために、屈折率の力学モデルが開発されなければならない。同様に、悪性形質転換中の基底層の肥厚および位置の変更を説明するためのロバスト法が、実行されるべきである。
【０１８０】
さらに、組織内の散乱体のより複雑なモデルが、将来の研究において開発されるべきである。他の光散乱研究［４７〜４９］は、スペクトル変更に加えて、スペクトル形状が組織マイクロアーキテクチャおよび健康状態の洞察を得ることができることを示す。この情報を捕捉することができる光散乱モデルの開発は、ｆＬＣＩ技術がさらに開発される場合、優先されよう。本研究における相関プロットのピークの検出が自動化されて、バイアスを除去するが、相関データのその後の分析は、いくつかのプロットが複数の著しいピークを含むことを示した。隣接する細胞構造間の相関および組織層間の相関が、いかに、生成した相関プロットの一因となるかについての理解は、進歩した散乱モデルの開発を促進する。
【０１８１】
相関ピークは、３つの主な理由について、核間の分離とは対照的に、核直径を表すことが考えられる。第１に、それぞれの核の前面および裏面は、軸方向の干渉に対して比較的良好に位置合わせされ、一方、異なる核間の位置合わせは、あまり良好に整列されず、したがって、空間的に平均化されたスペクトルにおいてあまり振動を生じない。第２に、核間の距離が個々の核の直径よりもはるかに大きな変動を有するため、核間の分離が、相関プロットにおいて見られる狭い相関ピークよりもむしろはるかに広い距離の分布を得ることが期待される。最後に、この研究は、相関ピークが、処置（罹患）サンプルに対してより長い距離にシフトされる一方、正常サンプルに対してより短い距離のままである。この所見は、過形成および異形成組織に見られる核の肥大の測定と一致する。その一方で、相関プロットが核対核の相関を測定した場合、異形成組織において観察された核対細胞質比の増加のため、罹患組織においてより短い距離にピークシフトすることが期待される。
【０１８２】
この研究の結果は、高感度および高特異度を有する正常上皮組織と罹患した（ＤＭＢＡで処置した）上皮組織を区別するｆＬＣＩの能力を示す。原位置核形態学測定は、外因性染色剤または固定剤を必要とせずに得られる。定量的核形態学測定を行うｆＬＣＩ技術の能力は、光学的測定を用いて異形成を非侵襲的に検出するために有効な技術としてのその可能性を示す。これらの実験の結果は、初期の癌発生の検出等の臨床的診断的適用の技術へのｆＬＣＩのさらなる開発のための土台を築く。
【０１８３】
本明細書に記載される技術はまた、初期の癌性細胞発生を検出するために使用することもできる。例えば、実験は、ｆＬＣＩを用いて、アゾキシメタンラット発癌モデルにおける初期の結腸直腸癌発生を検出するために、本明細書に記載される技術を用いて行われた。
【０１８４】
結腸直腸癌（ＣＲＣ）は、３番目に一般的な癌であり、米国の男性および女性における、癌死亡の３番目の主要な原因である［５０］。一般的に知られているように、癌死亡を防止するのに最も成功している診療は、危険性がる人々を定期的にスクリーニングすることである。これは、この疾患が、かなり進行した段階に達するまで、概して、無症候であるため、ＣＲＣに特に重要であり、幸いにも、初期で診断された場合、生存率は、劇的に向上する。今日、ＣＲＣをスクリーニングするための究極の判断基準は、従来の大腸内視鏡検査法であり、これは、ポリープおよびアデノーマを検出するために内視鏡を通して目視検査に依存する。一旦特定されると、これらの粘膜増殖を切除する決断は、サイズに基づき、直径が５ｍｍを超える病変は切除することが推奨される［５１］。しかしながら、この手法は、深刻な欠点に悩まされる：１．病変が腺腫様または化生性であるかの判定には信頼できる測定基準がなく、したがって、これらの病変を切除する決断は、医師の裁量に委ねられる。ＣＲＣの全ての症例のうち約９０％は、良性腺腫により生じる［５１］。２．小さな病変（５ｍｍ未満）が、一般的には切除されないという事実にもかかわらず、いくつかの研究は、これらが、特に、左結腸に近接する病変に対して、腫瘍を含む可能性が非常に高いという証拠を提示している［５２］。３．同様の大きさのポリープと比較して悪性腫瘍を含む可能性が１０倍高い平坦な腺腫は、周辺組織に同様に現れ、それ故に、大腸内視鏡検査法を用いて検出するのは非常に困難である［５３］。４．全ての検出されたポリープは、腺腫様であると見なされるため［５１］、多くの不必要な生検およびポリープ切除が行われ、これは、合併症の可能性を増大させる［５４］。最後に、糞便潜血検査、Ｓ状結腸鏡検査法、および仮想大腸内視鏡を含む他のスクリーニング試験が利用可能であるが、これらは、さらに制限があり、あまり有効ではなく、さらに、異常がこれらの代替のスクリーニング試験で検出される事象において、患者は、大腸内視鏡検査法を受けなければならない［５５］。
【０１８５】
上述されたように、大腸内視鏡検査法の欠点は、定量的かつ最小限に侵襲的な様式で組織の健康状態を評価する技術を必要とすることを強調する。この目的を達成するために、生物医学光学が有望な分野として浮上しており、ここで、様々な技術が、光吸収および／または散乱測定によってアクセス可能な異なるバイオマーカをプローブするように開発されている。例えば、４次元弾性散乱光フィンガープリント法（４Ｄ  ＥＬＦ）［５６］および拡散反射分光法［５７］は、悪性腫瘍に対する代理のバイオマーカとして組織ヘモグロビン濃度を定量化することができる。さらに、低コヒーレンス増強後方散乱分光法（ＬＥＢＳ）［５８］および角度分解低コヒーレンス干渉法［５９］は、ナノおよびマイクロ組織形態学に関する情報を検索し、それにより、前癌状態への洞察を提供する。
【０１８６】
本開示において、新たな光学技術の別の例示的な適用の、フーリエドメイン低コヒーレンス干渉法（ｆＬＣＩ）は、アゾキシメタン（ＡＯＭ）ラット発癌モデルから採取されたエクスビボ組織の分析を用いて、初期のＣＲＣ変化を測定する。ｆＬＣＩは、局部振動としても知られている深さ分解スペクトルの振動特徴を測定し、組織中の細胞核の前面および裏面による散乱により誘発されたコヒーレント場から生じる［６０］。したがって、ｆＬＣＩは、疾患のバイオマーカとして核形態学を使用し、それが、前癌発生の最も初期の段階に対して感受性があるようにする。深さ分解分光分析を達成するために、高スペクトルおよび深さ分解能を同時に取得し、局部振動へのアクセスをもたらす本明細書に記載される二重ウィンドウ（ＤＷ）技術を採用することができる［６１］。さらに、フーリエドメイン光コヒーレンストモグラフィ（ＦＤ−ＯＣＴ）［６２］と同様に、ｆＬＣＩ信号は、サンプルの断面画像を生じるように処理され、それにより、分光分析を用いた構造情報の共記録を可能にすることができる。ＤＷ技術を用いたｆＬＣＩの性能は、散乱ファントム［６３］およびハムスター頬袋モデル［６０］からのエクスビボサンプルを用いて示している。ここ本実施例では、ｆＬＣＩを用いて、３つの深さでのエクスビボサンプル、および左結腸の２つの異なる部分の間に空間的に分解された関数解析を提供して、初期のＣＲＣ発生を検出するｆＬＣＩの能力を示す。
材料および方法
動物モデル
【０１８７】
この研究は、ＡＯＭラット発癌モデルの、結腸癌の研究および薬物開発についてよく特徴付けされ、構築されたモデルを使用した［６４］。このモデルの癌進行は、ヒトにおいて見られるものと同様であり、ヒト結腸癌発生に対して良好な代用である。加えて、前癌病変部［６５］である、異常腺窩巣（ＡＣＦ）の短期誘発期および高発生率は、このモデルを結腸中の前癌発生を検出するｆＬＣＩの能力を試験するための実用的選択にさせる。
【０１８８】
全ての動物実験プロトコルは、Ｈａｍｎｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅおよびＤｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの動物実行委員会により承認された。４０匹のＦ３４４ラット（６週齢の雄；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）を、あらゆる試験前の１０日間の慣化期間、Ｈａｍｎｅｒの動物施設において収容された。動物の全ては、慣化の初めの４日間、国立衛生研究所の通常の０７食餌（Ｚｉｅｇｌｅｒ  Ｂｒｏｔｈｅｒｓ，Ｇａｒｄｎｅｒｓ，ＰＡ）を与えた。その後、食餌は、米国国立栄養研究所（ＡＩＮ）−７６Ａ（Ｄｙｅｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ，ＰＡ）のペレット型に切り替えられ、研究の残りの期間継続した。ケージあたり２匹の動物は、１２時間の明／暗のサイクルで動物飼育室において、アルファ乾燥した寝床材料を用いたポリカーボネートの固体底部のケージ中に収容した。ケージは、週２回取り替えた。ペレット化された半精製したＡＩＮ−７６Ａ食餌および水は、不断給餌した。全研究期間中、週ごとに体重を計測し、臨床的観察を行い、動物の健康をモニターした。
【０１８９】
慣化から１０日間後、４０匹のラットを１０の群に無作為化した。３０匹の動物は、１週間に１回、１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量レベルで、２週間連続（動物あたり２用量）、１３．４Ｍのモル濃度のある９０％を超える純度のＡＯＭ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）の腹腔内（ＩＰ）投与を行った。残りの１０匹の動物は、ＩＰにより生理食塩水を与え、対照群としての役目を果たした。投薬レジメンが完了してから４、８、および１２週間後、動物（時点あたり１０匹のＡＯＭで処置したラットおよび３または４匹の生理食塩水で処置したラット）をＣＯ２窒息により殺処分した。結腸組織を採取し、縦方向に開口し、生理食塩水で洗浄した。次いで、組織を、それぞれが、３〜４ｃｍの長さになるように、４〜５の異なるセグメントに分割した。遠位左結腸（ＬＣ）および近位ＬＣの、結腸の２つの最遠位セグメントのみをこれらの実験のために分析した。次いで、サンプルは、上述のように、並列周波数ドメインＯＣＴシステムを用いて試験のために、カバーガラス上に設置した。最後に、組織サンプルをホルマリン中に固定し、メチレンブルーで染色し、２つを超える異常腺窩を含有する病巣として画定されるＡＣＦの数に基づいて採点した。図３４は、「２」、「３」、および「４」の異常腺窩を含有する３つのＡＣＦを有する処置してから４週間後の例示的な染色組織サンプルの画像１３７０を示す。
検出システム
【０１９０】
図３５は、散乱モードを動作する例示的な並列周波数ドメインＯＣＴシステム１３７２を示す。使用した例示的なシステム１３７２は、並列周波数ドメインＯＣＴ（ｐｆｄＯＣＴ）システム［６６］であり、これは、４−Ｆ干渉計［６７］を形成するさらに４つのレンズを備えたマイケルソン干渉計形状からなる。図３５に見られるように、レンズＬ２およびＬ３の１３７４、１３８４を用いて、キセノンアーク灯１３７８（例えば、１５０Ｗ、Ｎｅｗｐｏｒｔ  Ｏｒｉｅｌ，Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）からの多重モードのファイバ結合した光は、サンプル１３８０に平行光される。サンプル１３８０は、＃０のカバーガラス１３８２の上に設置され、若干傾けて、ガラス−空気界面による正反射からの彩度を避け、ひいては、散乱光のみの検出を可能にした。これは、散乱モード画像として知られている。エクスビボ結腸組織のために、図３５の差し込み図に見られるように、光は、サンプルより下から照明するため、内腔側は、面を下に向けて設置した（カバーガラス１３８２に対して）。次いで、レンズＬ３およびＬ５の１３８４、１３８６を用いて、サンプル１３８０から散乱した光は、画像分光器１３９０（例えば、ＳＰ２１５６、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｔｒｅｎｔｏｎ，ＮＪ）の入口スリット１３８８上に画像化される。参照アーム１３９２は、レンズＬ２およびＬ４の１３７４、１３７６、ならびにレンズＬ４およびＬ５の１３７６、１３８６を用いて、同様の光学経路を追跡する。光が、画像分光器１３９０によりその波長要素に分散された後、サンプル場と参照場との間の干渉は、ＣＣＤカメラ（例えば、Ｐｉｘｉｓ  ４００、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｔｒｅｎｔｏｎ，ＮＪ）を用いて記録される。検出は、２４０ｎｍの帯域幅を有する約６００ｎｍを中心にする。この形態により、２０１インターフェログラムを同時に復元することができ（ビーム幅により制限される）、単一の曝露からのＢモードＯＣＴ画像を得る。
【０１９１】
この特定の形態のために、システム１３７２は、［６０、６３、６６］に報告された前述のシステムの実現と比較して若干修正が行われた。第１に、分光計のスリットでサンプル場の２倍の倍率は、５０ｍｍに相当するレンズＬ３およびＬ４の１３８４、１３７６の焦点距離、ならびに１００ｍｍに相当するレンズＬ２およびＬ５の１３７４、１３８６の焦点距離を設定することにより達成され、２０μｍのピクセルサイズを有し、これにより、１０μｍの方位分解能をもたらした。より短い焦点距離レンズの使用はまた、システムの全設置面積を削減することができ、最終的に、システムを携帯可能にした。携帯性は、組織サンプルの現場解析への運搬のために、頑丈なステンレス製の実用カート上に８インチ×１８インチ×２４インチの特注のアルミニウム合金ボックス内にシステムを設置することにより達成される。
データ処理
【０１９２】
細胞核直径を評価するためのｆＬＣＩプロセスは、本実施例において複数のステップを含む。第１のステップは、サンプルのＯＣＴ画像を取得することである。次に、空間的に分解されたスペクトルは、ＤＷ技術を用いて計算される。次いで、ＯＣＴ画像により提供された空間情報を用いて、分光情報を共記録し、これにより、スペクトルを特定の組織深さで一貫して分析することが可能となる。最後に、組織内の特定の領域からのスペクトルを平均化して、細胞核直径を示すスペクトル振動を得る。この項において、これらのステップの詳細な例示的な手順が提供される。
【０１９３】
本実施例においてＯＣＴ画像を取得するために、初めのステップは、サンプルアーム、参照アーム、および暗色信号の別々の取得を用いて、干渉法による信号からＤＣバックグラウンドをデジタル処理で除去することである。次いで、干渉法によるデータは、参照アーム強度により正規化され、光源および検出器の効率から生じるあらゆるスペクトル依存性を除去する。次いで、インターフェログラムは、波長から線形波数ベクトル（ｋ＝２π／λ）までサンプル化し、色分散に対してデジタル修正される［６８］。続いて、これらの信号が、フーリエ変換されて、約１．１０μｍの軸分解能（実験的）を有するＯＣＴ画像を取得する。ｎ＝１．３８の屈折率（ＲＩ）を用いて、光経路長を組織中の物理的な軸方向距離に変換する［６９］。図３６は、エクスビボラット結腸サンプルの例示的な代表的な画像１４００を示す。
【０１９４】
深さ分解分光情報を取得するために、ＤＷ技術が使用される［６１］。図５Ａ〜５Ｃに上述されるように、この方法は、それぞれのインターフェログラムにおいて動作する図５Ａの２つのＳＴＦＴ５００、５０２の乗算からなる。ＳＴＦＴは、図５Ａの干渉法によるデータにわたってウィンドウを掃引することによって実施され、一方、それぞれのステップで同時にフーリエ変換されるため、図５Ｂに示されるように、空間（または軸方向）領域内に限定されるスペクトル成分のマップを得る。これらのマップは、時間周波数分布（ＴＦＤ）として知られている。しかしながら、単一ＳＴＦＴを用いて得られたＴＦＤは、得られたスペクトルと空間分解能との間に固有のトレードオフに悩まされている。その一方で、ＤＷ技術は、狭域ウィンドウを用いてＳＴＦＴの高スペクトル分解能、および広域ウィンドウを用いてＳＴＦＴの高空間分解能を利用して、時間周波数トレードオフの有害な効果を回避する［６１］。ここでは、標準偏差ｗ１＝０．０２９μｍ−１およびｗ２＝０．８０４μｍ−１を有するガウスウィンドウが使用され、３．４５μｍの軸分解能および１．６６ｎｍのスペクトル分解能を有するＴＦＤが生じた。このプロセスは、それぞれのＡ走査に対して行われ、したがって、ＯＣＴ画像のそれぞれの点に対してスペクトルを得る。
【０１９５】
特定の組織深さ（すなわち、局部振動）からスペクトル情報を取得するための最終ステップは、二重ウィンドウのＴＦＤを用いて、図５ＢのＯＣＴ画像５０８、５１０を共記録することである。このプロセスは、画像を用いて、組織表面の輪郭を特定し、この「ゼロ」深さに対して分析を調整することを含む。表面が、任意の特定のＡ走査ではっきりと認識できない場合、さらなる分析が行われないことに留意する。この情報を用いて、二重ウィンドウのＴＦＤは、適切に調整され、それ故に、特定の組織深さからのスペクトル情報を一貫して提供することができる。
【０１９６】
狭域ウィンドウを用いて取得したものおよび広域ウィンドウを用いた別のものである、図５Ｂの２つのＳＴＦＴ５０８、５１０は、一緒に乗算して、図５Ｃの二重ウィンドウのＴＦＤ５１２を取得する。標準偏差ｗ１＝０．０２９μｍ−１およびｗ２＝０．８０４μｍ−１を有するガウスウィンドウが使用され、３．４５μｍの軸分解能および１．６６ｎｍのスペクトル分解能を有するＴＦＤが生じた。
【０１９７】
スペクトルが適切に位置合わせされると、横方向および軸方向の両方の対象となる領域は、特定され、続くスペクトル分析のために十分な信号対雑音比を提供するために平均化される。横方向において、２０個の二重ウィンドウのＴＦＤを平均化して、それぞれのＯＣＴ画像の１０個の異なる横セグメントを得る。前の研究において、画像中の全てのＴＦＤは、平均化され［６０］、したがって、本明細書に提供される分析は、空間情報の１０倍の増加を得る。軸方向において、３つの異なる部分の２５μｍの深さセグメントのスペクトル平均は、表面（表面部分０〜２５μｍ）、深さ約３５μｍの中心（中央部分２２．５〜４７．５μｍ）、および深さ約５０μｍの中心（低部分３７．５〜６２．５μｍ）で計算することができる。図３６の赤色破線内の領域は、得られた中央部分の例を挙げ、これから、このスペクトルを平均化して、核直径を決定する。
【０１９８】
平均化した領域からのスペクトルは、２つの要素を含む。第１の要素は、球形散乱体により誘発した周期的微細構造と関連がある低周波数振動を含み、これらは、光散乱分光法（ＬＳＳ）において、ファン・デ・フルストの概算を用いて、上記で分析されている［６３、７０〜７２］。概算は、球形散乱体の散乱断面への分析的解明を与え、スペクトル振動の周期性が、サイズ、ならびに散乱体および周囲媒質のＲＩ間の比率により異なることを示す［７２］。最終的に、これは、比較的低い周波数振動をもたらす。しかしながら、散乱体および周囲媒質の精密なＲＩの知識不足のため［７３］、ＬＳＳ方法から抽出することができる有用な情報量は、制限されることが観察されている。したがって、低周波数振動は、Ｍａｔｌａｂ（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）の平滑化関数を用いて単離され、続いて、スペクトルから除去される。このプロセスは、平均化した領域内の細胞核により誘発したコヒーレント場によって生じる局部振動に対応する、第２の要素であるスペクトルの高周波数振動を単離する。ＬＳＳにおいて周期的微細構造とは異なって、局部振動は、サイズおよび散乱体のＲＩのみによって異なり、そのため、高周波数を生じる。具体的には、局部振動の周期性は、散乱体であると考えられるサンプル場の往復の光学経路長（ΔＯＰＬ）により得られ、ｄｃ＝ΔＯＰＬ／（２ｎｎ）（式中、ｎｎは、細胞核のＲＩである）による散乱サイズ（この場合、ｄｃ）に関連している。図３７Ａは、図３６に示される平均化した領域に対する単離した低周波数成分（黒色破線）と共に、平均スペクトル１４０２（青色実線）を示す。図３７Ｂは、得られた局部振動１４０４を示す。
【０１９９】
最後に、局部スペクトル振動のフーリエ変換を行って、相関関数を生じ、この関数のピークは、分析の領域における平均細胞核直径を示すと考えられる［６０］。他の散乱体、例えば、他の細胞器官および核の内容物はまた、この関数のピークを生じることができるが、それらのランダムな位置付け、サイズ、および互いの間隔により、得られた信号は、平均細胞核直径のものよりも振幅の大きいピークを生じる可能性は低い。図３７Ｂの局部振動に対する相関関数１４０６を図３７Ｃに示し、ここで、相関距離（ｄｃ）は、往復の光学経路長および細胞核のＲＩを説明するように適切に計られている。ｎｎ＝１．３９５の一定の核ＲＩが、本分析［６９］に対して仮定された。最終ステップとして、ピーク検出プロセスを自動化して、膨大なデータセットの分析を可能にする。これを達成するために、相関関数は、ｌ／ｆ騒音が、平滑化関数を用いて除去される、さらなる処理に供される。次いで、相関関数の平均を上回る３．５の標準偏差である最大値のみが、明確なピークであると考えられる。この基準がいずれの特定の領域で満たされない場合、その測定値は、破棄される。
結果
深さ部分
【０２００】
３つの異なる組織深さ部分および全ての時点での核直径は、図３８Ａ〜３８Ｃおよび図３９の表１４０８に要約される。対照群の間で統計的に有意な差異が見出されなかったため、全ての時点の対照群の測定が、組み合わされたことに留意する。統計的検定は、両側スチューデントｔ検定を用いて行われた。
【０２０１】
図３８Ａ〜３８Ｃに示されるように、中央部分（深さ３５μｍ）は、対照群と比較した場合、最も有意な結果を提供し、全て３つの時点での処置群は、ｐ値＜１０−４＊＊を得た。中央部分での対照群についてのｆＬＣＩ測定は、５．１５＋／−０．０５μｍの平均細胞核直径を得る一方、処置群については、処置から４、８、および１２週間後に、それぞれ、５．９１＋／−０．１５μｍ、６．０２＋／−０．１８μｍ、および６．４９＋／−０．４９μｍであることが見出された。最深（低、深さ５０μｍ）部分については、ｐ値＜０．０５＊で、軽度に統計的に有意な結果が観察された。表面での統計的有意性は見出されず、低（５０μｍ）部分での軽度に有意な差異（ｐ値＜０．０５＊）は見出された。
長さセグメント
【０２０２】
２つの組織セグメント（近位および遠位左結腸）は、中央深さ部分において別々にさらに分析された。ＡＣＦの測定された細胞核直径および数は、図４０の表１４１０に要約される。全ての時点において、および両方のセグメントにおいて、処置群において測定された核直径は、対照群とは異なり有意であった（ｐ値＜１０−４＊＊）ことが見出された。
【０２０３】
これらの結果はまた、図４１Ａおよび４１Ｂにも要約される。有意な差異が、本実施例において、処置からわずか４週間後に両方のセグメントにおいて観察されたことに留意する。しかしながら、測定された核直径の増加は、近位ＬＣにおいて最終時点を除いて、その後、比較的一定したままであった。ここでは、核直径は、約６．０μｍから約７．２μｍに劇的に増加した。このことをさらに調査するために、図４１Ｃは、前癌病変部である、ＡＣＦの平均数の関数として核直径をプロットする。明確にするために、その対応する時点によるそれぞれの点もまた特定される。ＡＣＦの形成が、遠位ＬＣと比較して近位ＬＣにおいて速く、プロットが、ＡＣＦの初期形成後、一領域のわずかな核形態学的変化を示すことを留意する。この平坦領域は、両方の部分に存在し、初めは、ＡＣＦの数とは無関係である。しかしながら、一旦ＡＣＦの数が、本研究において観察される最大値まで増加すると（約７０）、測定した核直径の増加は、平坦領域の遍在的かつ比較的一定した細胞核直径測定とは対照的に、さらに進行した新生物発生が現れる領域に特異的であった。
【０２０４】
これらの結果は、組織の健康状態を評価するための空間的に分解された情報を取得する重要性を強調する。他の光学的方法はまた、深さ選択性の必要性を示すが、最も診断に関する情報を提供する特定の深さは、変化している。組織ナノ構造の変化を評価するＬＥＢＳを用いて、７０μｍの侵入深さが、最も有意な結果［５８］を得る一方で、ヘモグロビン濃度を測定するための４Ｄ  ＥＬＦを用いて、１００μｍの侵入深さは、有意な結果［５６］を得ることが見出された。しかしながら、これらの光学的方法を用いて、有用な情報は、特定の位置をサンプリングするようにもむしろ、特定の深さに対して積分することにより取得され、これは、差異を説明することができる。対照的に、ｆＬＣＩは、広帯域光源を用いる干渉法技術であり、ひいては、ＯＣＴのコヒーレンスゲート画像の性能を可能にし、３次元空間において特定の点のサンプリングを可能にする。画像ガイダンスは、組織表面を特定し、特定の組織深さを探査するために、本研究において極めて重要であった。
【０２０５】
ｆＬＣＩの画像性能と共に、ＤＷ技術は、本研究を可能にするのに同様に重要な特徴である。ＤＷ技術は、ＳＴＦＴまたは連続ウェーブレット変換を用いて、定量化を妨害するスペクトルおよび空間分解能のトレードオフを回避する。局部振動の取得は、両方向において高分解能を必要とし、そうでなければ、異なる散乱核から位相および周波数差から生じるフリンジ流出（ｆｒｉｎｇｅ  ｗａｓｈｏｕｔ）の現象は、細胞核直径が評価される局部振動を分かりにくくする。
【０２０６】
これらの結果は、結腸の長さに従ってセグメントにより分析された。ここでは、ｆＬＣＩは、前癌発生の初期証拠を提示する時点での、セグメントの有意な変化を検出し、この方法の感度を強調した。さらに、測定した初期核形態学的変化は、両方のセグメントにおいて観察され、結腸の遍在的微細形態学的変化を示唆する、ＡＣＦの数とは無関係であった。しかしながら、これは、新生物発生が、さらに進行した（多数のＡＣＦにより画定された）場合の症例ではなく、この時点での、核直径の増加は、病変領域に特異的であった。一連のこれらの結果は、有意な所見を提示する。第１に、これらの結果は、ｆＬＣＩが、発癌の「場効果」を検出することが可能であることを示唆している。この現象は、結腸の一部分において新生物発生が、ナノおよびマイクロ組織形態学、ならびに、全器官に通じる、組織機能を曲解する観察を説明する。これは、適切スクリーニングが、ある種の（およびさらに容易にアクセス可能な）結腸部分［５６、５８、７４］を探査するのみにより、達成することができることを示すため、とても関心がある主題である。これらの結果はまた、ｆＬＣＩが、ＣＲＣ発生を検出し、局所的療法を開始するには、最も重要である、さらに進行した新生物発生が生じる特定の領域を特定することができることも示す。
【０２０７】
ここで提示される結果が、非常に有望であるものの、この方法により提供される情報の全てを生かすために、なお詳しく研究する必要があるある種の限界がある。上述のように、ｆＬＣＩ測定を取得するための手順は、細胞核における一定のＲＩ値、およびバルク組織の異なる一定値を仮定するが、ＲＩは、組織型および組織の健康状態により異なる場合があることが知られている。したがって、現今、我々の方法により評価されないこれらの変動は、計算された核直径の不確実性のさらなる度合いを導入することができる。さらに、これらの変動は、組織ファントム［６３］を用いて上で行われたように、ＬＳＳを用いた低周波数振動を使用する能力を妨害している。しかしながら、ＬＳＳ適合アルゴリズムのより厳密な処置は、将来の分析において、ＲＩの変動への洞察を提供することができと考えられる。
【０２０８】
本研究では、ＡＯＭで処置したラットモデルを用いて、正常であるエクスビボ結腸組織と初期の前癌発生を示すエクスビボ結腸組織を定量的に区別するｆＬＣＩの能力を示した。これらの結果は、ＡＯＭ処置サンプルと対照群サンプルとの間に高度に統計的に有意な差異を示す。さらに、これらの結果は、ｆＬＣＩが、発癌の場効果による変化を検出し、また、さらに進行した新生物発生を生じる領域を特定することができることを示唆している。将来の研究は、非侵襲性インビボ初期ＣＲＣ検出を示すために、光ファイバベースのｐｆｄＯＣＴシステムを開発するために行われよう。
【０２０９】
図４２は、一実施形態に従って本明細書に記載されるＤＷ技術の機能を行うために例示的なコンピュータ可読の媒体からの命令を実行するように適合させた例示的なコンピュータシステム１４２２の例示的な形式で例示的な機械１４２０を示す概略図である。機械１４２０は、サンプルに関する深さ分解スペクトル情報を含む散乱する干渉項情報を受光するために、例えば、本明細書に記載される分光器に、インターフェースで連結することができる。この点において、機械１４２０は、機械１４２０に、本明細書で論じられるいずれか１つ以上の手順を実行させるための、一組の命令を実行することができる、コンピュータシステム１４２２を備えることができる。機械１４２０は、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、イントラネット、エクストラネト、またはインターネットにおいて、他の機械に接続（例えば、ネットワーク接続）することができる。機械１４２０は、クライアントサーバーネットワーク環境における、またはピアツーピア（または分散型）ネットワーク環境におけるピア機械として、作動することができる。単一の機械１４２０のみが例示されるが、「機械」という用語はまた、本明細書に論じられるいずれか１つ以上の手順を行うための、一組（または複数の組）の命令を個々に、または共同で実行するいかなる機械の集まりを含むとも理解されるものとする。機械１４２０は、サーバー、パーソナルコンピュータ、デスクトップコンピュータ、ラップトップコンピュータ、パーソナルデジタルアシスタント（ＰＤＡ）、コンピューティングパッド、モバイル装置、またはあらゆる他の装置であり得、例えば、サーバーまたはユーザのコンピュータの役目をすることができる。
【０２１０】
例示的なコンピュータシステム１４２２には、プロセッシング装置またはプロセッサ１４２４、メインメモリ１４２６（例えば、リードオンリーメモリ（ＲＯＭ）、フラッシュメモリ、ダイナミック・ランダム・アクセス・メモリ（ＤＲＡＭ）、例えば、シンクロナスＤＲＡＭ（ＳＤＲＡＭ）等）、およびスタティックメモリ１４２８（例えば、フラッシュメモリ、スタティック・ランダム・アクセス・メモリ（ＳＲＡＭ）等）が含まれ、これらは、バス１４３０を経由して互いに通信することができる。代替として、プロセッシング装置１４２４は、直接、またはいくつかの他の接続手段を経由して、メインメモリ１４２６および／またはスタティックメモリ１４２８に接続することができる。
【０２１１】
プロセッシング装置１４２４は、マイクロプロセッサ、中央演算処理装置等の１つ以上の汎用プロセッシング装置である。より具体的には、プロセッシング装置１４２４は、複合命令セットコンピュータ（ＣＩＳＣ）マイクロプロセッサ、縮小命令セットコンピュータ（ＲＩＳＣ）マイクロプロセッサ、超長命令語（ＶＬＩＷ）マイクロプロセッサ、他の命令セットを実行するプロセッサ、または命令セットの組み合わせを実行するプロセッサであってもよい。プロセッシング装置１４２４は、本明細書に論じられる動作およびステップを行うための命令１４３２の処理論理回路を実行するように設定される。
【０２１２】
コンピュータシステム１４２２は、さらに、ネットワークインターフェース装置１４３４を含むことができる。また、命令を実行する場合、コンピュータシステム１４２２に通信するように入力および選択を受信するための入力１４３６を含んでも含まなくてもよい。また、それには、ディスプレイ、ビデオディスプレイ装置（例えば、液晶ディスプレイ（ＬＣＤ）もしくは陰極線管（ＣＲＴ））、英数字入力装置（例えば、キーボード）、および／またはカーサル制御装置（例えば、マウス）が挙げられるが、これらに限定されない、出力１４３８を含んでも含まなくてもよい。
【０２１３】
コンピュータシステム１４２２は、機械アクセス可能記憶もしくはコンピュータ可読媒体１４４２に保存される分析もしくはＦＰＥツール１４４０を含むデータ記憶装置を含んでも含まなくてもよく、ここに、本明細書に記載されるいずれかの１つ以上の手順または機能を具体化する１組以上の命令１４４４（例えば、ソフトウェア）が記憶される。命令１４４４はまた、機械アクセス可能記憶媒体も構成する、コンピュータシステム１４２２、メインメモリ１４２６、およびプロセッシング装置１４２４により、その実行中、メインメモリ１４２６内、および／またはプロセッシング装置１４２４内に、完全に、または少なくとも部分的に存在することもできる。命令１４４４は、さらに、ネットワークインターフェース装置１４３４を経由して、ネットワーク１４４６上に送信または受信することができる。
【０２１４】
機械アクセス可能記憶媒体１４４２が、例示的な実施形態において単一媒体として示される一方で、「機械アクセス可能記憶媒体」という用語は、１組以上の命令を記憶する単一媒体または複数の媒体（例えば、集中型もしくは分散型データベース、ならびに／または関連キャッシュおよびサーバー）を含むとも理解されるものとする。「機械アクセス可能記憶媒体」という用語はまた、機械による実行のための１組の命令を記憶、コード化、もしくは保持することができる、および本明細書に開示される実施形態のいずれか１つ以上の手順を機械に行わせる、あらゆる媒体を含むとも理解されるものとする。したがって、「機械アクセス可能記憶媒体」という用語は、ソリッドステートメモリ、光学および磁気媒体、ならびに搬送波信号が挙げられるが、これらに限定されないと理解されるものとする。
【０２１５】
上記の説明および関連図面に提示される教示の利点を持つ、本実施形態が関連する、本明細書に記述されている実施形態の多くの修正および他の実施形態が、当業者には考えられよう。本開示は、二重ウィンドウに限定されない。２つを超えるウィンドウを有する多重ウィンドウは、必要に応じて採用され得る。本開示は、サンプルからの戻った光の特定の性質に限定されない。これらの光学性質には、散乱特性、反射性質、および吸収性質を含むことができる。したがって、本説明および特許請求の範囲は、開示された特定の実施形態に限定されず、修正および他の実施形態は、記載される実施形態の範囲内に含まれることが意図されることを理解されよう。本明細書には特定の用語が採用されているが、それらは限定のためではなく、一般的かつ説明的な意味で使用されるものにすぎない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ−１６Ｄ】
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【図１７Ａ−１７Ｆ】
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【図１８Ａ−１８Ｃ】
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【図１９Ａ−１９Ｃ】
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【図２０Ａ−２０Ｄ】
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【図２１Ａ−２１Ｃ】
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【図２２Ａ−２２Ｂ】
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【図２３Ａ−２３Ｃ】
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【図２４Ａ−２４Ｃ】
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【図２５Ａ−２５Ｂ】
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【図２６Ａ−２６Ｂ】
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【図２７Ａ−２７Ｄ】
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【図２８】
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【図２９Ａ−２９Ｂ】
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【図３０Ａ−３０Ｂ】
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【図３１Ａ−３１Ｂ】
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【図３２Ａ−３２Ｄ】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７Ａ−３７Ｃ】
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【図３８Ａ−３８Ｃ】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１Ａ−４１Ｃ】
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【図４２】
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【国際調査報告】
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