(57)【要約】本発明は、２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）のある種の長鎖飽和及びモノ不飽和脂肪酸誘導体のための非経口製剤に関する。特に本発明は、がん治療におけるコンプライアンスを改善する治療上有効量の前記誘導体を収容するための非経口医薬組成物及びその製造法に関する。当該組成物は、２．５−３０ｎｍの範囲の平均粒径を有し、典型的にはリン脂質を含有する。好ましい活性成分はゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである。【選択図】図２【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2013511516.tif 000006
［式中、Ｒ１及びＲ３は水素であり、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基である］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含む医薬組成物であって、
前記活性成分は、
ａ）塩形成又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤；及び
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、
前記活性成分対リン脂質のモル比は１：５〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する医薬組成物。
【請求項２】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
可溶化剤のリン脂質が、６〜８のｐＨ範囲で中性の双性イオンリン脂質を含む鶏卵由来の天然リン脂質を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
可溶化剤のリン脂質が鶏卵由来の精製ホスファチジルコリンを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
共可溶化剤が鶏卵ホスファチジルグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
等張剤がグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルであり、可溶化剤がホスファチジルコリンであり、共可溶化剤がホスファチジルグリセロールであり、そして等張剤がグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
活性成分対リン脂質のモル比が１：５〜１：２である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
医薬品として使用するための、式Ｉ：
【化２】
2013511516.tif 000007
［式中、Ｒ１及びＲ３は水素であり、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基である］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含む医薬組成物であって、
前記活性成分は、
ａ）塩形成又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤； 
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、
前記活性成分対リン脂質のモル比は１：５〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する医薬組成物。
【請求項１０】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
活性成分対リン脂質のモル比が１：５〜１：２である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
がんの治療に使用するための、式Ｉ：
【化３】
2013511516.tif 000008
［式中、Ｒ１及びＲ３は水素であり、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基である］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含む医薬組成物であって、
前記活性成分は、
ａ）塩形成又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤；及び
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、
前記活性成分対リン脂質のモル比は１：５〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する医薬組成物。
【請求項１３】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
活性成分対リン脂質のモル比が１：５〜１：２である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
がんが、転移性膵臓がん、非転移性膵臓がん、転移性乳がん、非転移性乳がん、非小細胞肺がん、子宮がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、胆管がん、頭頸部がん、リンパ腫、骨髄腫、及び軟組織肉腫からなる群から選ばれる、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
他の認可又は実験的がん療法との組合せをさらに含む、請求項１２又は１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の医薬組成物の製造法であって、
ａ）リン脂質と式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体を適切な水混和性有機溶媒に溶解し；
ｂ）ステップａ）で得られた有機溶液を水溶液中に注ぎ、直ちに脂質ナノ粒子を形成させ；
ｃ）ステップｂ）で得られた中間バルク溶液をホモジナイズ及び有機溶媒の除去に付する
ステップを含む方法。
【請求項１８】
水混和性有機溶媒が、エタノール、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、エチレングリコール、グリセロール、メタノール、１−プロパノール、２−プロパノール又はＤＭＳＯからなる群から選ばれる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ステップａ）の水混和性溶媒がエタノールである、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性成分として２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）のある種の長鎖飽和及びモノ不飽和脂肪酸誘導体を含む医薬組成物に関する。特に、本発明は、がん治療におけるコンプライアンスを改善するために、治療上有効量の前記誘導体を非経口投与するのに適切な医薬組成物及びその製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
イーライリリー＆Ｃｏ社からジェムザール(Gemzar)の商品名で販売されているゲムシタビンは、よく知られた細胞分裂抑制化合物であり、式：
【０００３】
【化１】
2013511516.tif 000002
【０００４】
を有している。
本発明の医薬組成物の活性成分は、式Ｉ：
【０００５】
【化２】
2013511516.tif 000003
【０００６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、水素並びにＣ１８−及びＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基から独立して選ばれるが、ただしＲ１、Ｒ２及びＲ３はすべてが水素ではあり得ない］のゲムシタビン誘導体を含む。
【０００７】
ＷＯ９８／３２７６２から、式（Ｉ）の化合物はがんの治療に有用であることが知られている。
ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体、例えばゲムシタビンの細胞取込みは、主に選択的ヌクレオシド輸送（ＮＴ）受容体を介して起こる。この受容体の変調／阻害は、臨床的状況では薬物に対する抵抗性（耐性）と見なされうる。この現象は、インビトロではＮＴ阻害薬の添加を通じて観察することができる。我々は以前、我々の誘導体はＮＴ阻害薬の存在に影響されないことを報告した。それは、好適な誘導体の細胞分裂抑制活性は、そのような阻害薬の存在下でも保存されるためである（ＷＯ９８／３２７６２）。
【０００８】
がん治療に関与するその他の薬物耐性機構も存在しうる。多剤耐性（ＭＤＲ）は、そうでなければ有効な薬物が機能しなくなる主要理由の一つである。我々は、本発明の誘導体は、ＭＤＲポンプの基質ではないようであること、従ってこの問題は回避されることを見出した。
【０００９】
ゲムシタビンの血漿中半減期は、内因性酵素デオキシシチジンデアミナーゼによる対応ウラシル誘導体（ｄＦｄＵ）への迅速脱アミノ化のためにおよそ１０分である（Ｐ．Ｇ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ，Ａｎｎｕａｌ  １６，１９９６，Ｃｈａｐ．１，編集Ｐｉｎｅｄｏ  Ｈ．Ｍ．ら）。これに対し、本発明の誘導体は脱アミノ酵素の不良基質(poor substrate)である。従って、本発明の誘導体は、ゲムシタビンそのものよりも悪性腫瘍の全身又は局所治療用として、より適切である。
【００１０】
しかしながら、難溶性の式（Ｉ）の誘導体の治療上有効な量を非経口投与に適切な医薬組成物に製剤化するのには問題がある。前記誘導体を静脈内投与するためには、前記誘導体が可溶化されるか又はナノサイズの粒子を形成するような賦形剤の組成を選ばねばならない。式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体は両親媒性で、水にも油にも難溶性であるので、それらを可溶化できる可能性のある賦形剤の選択が限定される。製剤が微粒子系であると、静脈内投与用の製剤における粒子のサイズに一定の要件が存在する。さらに、非経口製品は無菌でなければならず、滅菌ろ過が医薬用微粒子系のための唯一の実行可能な方法であることが多い。つまり、これらの製剤の粒径は、滅菌フィルターの孔径である２２０ｎｍ（０．２２μｍ）よりも小さくなければならないことになる。実際的には及び工業規模のプロセスの場合には、粒子はフィルターの目詰まりを回避するためにさらに小さくなければならない。
【００１１】
別の問題は、前記誘導体はゲムシタビンのプロドラッグとして働くので、それらの臨床用量はゲムシタビンのそれと同じ桁数になることが予想されることである（最近確認された。本文書の実施例１４参照）。ジェムザールは１０００ｍｇ／ｍ２の用量（活性成分３．３ｍｍｏｌ／ｍ２）で静脈内投与（ｉ．ｖ．）されるので、静脈内ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの推奨用量は１２５０ｍｇ／ｍ２（活性成分２．４ｍｍｏｌ／ｍ２）となる。すなわち、１．８ｍ２の表面積を有する平均的患者の場合、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの総用量は単独療法として２２５０ｍｇになるということである。
【００１２】
このことは更なる課題をもたらす。ａ）大量の液体を患者に非経口投与するのを制限するために、製剤中の薬物濃度を増大させる必要性、及びｂ）抗酸化剤及び保存剤などの追加的な機能性賦形剤の使用の回避（これらを少量しか加えなくても、総投与量は容認できないレベルになる）。
【００１３】
最後に、式（Ｉ）の誘導体は、生理的ｐＨで加水分解を受けやすく、その速度は誘導体及び緩衝液の種類に依存する。例として、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルは、ｐＨ７．４でおよそ３０分の半減期を有する。これは、製剤及び製造プロセスパラメーターの両方に対して更なる課題を突き付ける。医薬品はすぐに使えるのが（ready-to-useであるのが）通常は好適であるが、製品の保存期間中、劣化を回避するために、製剤を凍結乾燥させることも可能である。すぐに使えるready-to-useの場合、前記誘導体は、その全保存期間にわたって非経口製剤の水性環境における加水分解から保護されなければならない。
【００１４】
本発明は上記問題のすべてに対する解決策を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】ＷＯ９８／３２７６２
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｐ．Ｇ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ，Ａｎｎｕａｌ  １６，１９９６，Ｃｈａｐ．１，編集Ｐｉｎｅｄｏ  Ｈ．Ｍ．ら
【発明の概要】
【００１７】
我々は驚くべきことに、リン脂質に基づくすぐに使える高薬物量(high drug load)の水性ナノ粒子製剤をもたらす、式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体のための非経口投与に適切な医薬組成物及びその製造法を見出した。薬物対脂質のモル比は１：２の高さ、さらに好ましくは１：１の高さであり、前記脂質ナノ粒子は、窒素ブランケット下２〜８℃で貯蔵した場合、前記誘導体がゲムシタビンに加水分解するのを少なくとも３８ヶ月間防止する。さらに、該方法は、卵黄由来の天然リン脂質を使用し、界面活性剤を何ら配合せず、そしてＭａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏのような小粒径分析用に設計された機器を用いた測定で、体積ベースのＤ（ｖｏｌ，０．９９）直径５〜２０ｎｍ、又は強度をベースにしたＺ平均ベースの直径３０〜５０ｎｍを有するミセル様ナノ粒子をもたらす。このサイズの粒子は容易に滅菌ろ過できる。さらに、該製造法は、水性無菌製品の製造に適切な、工業的に拡張可能な方法である。
【００１８】
米国特許第６，４０６，７１３号及び米国特許第６，９８４，３９５号の製剤について記載された制限を考慮すると、本発明に記載された医薬組成物が前記独自の特徴をもたらすことになろうとは予期されないことであった。これは、主に、好適なゲムシタビン−５’−脂肪酸エステルの物理化学的特徴と、前記文献に記載されたものと比べて改良された製造法のおかげである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、小粒子及び大粒子を示すサンプルＴＥＭを２００ｎｍのバーと共に示す。
【図２】図２は、一貫した小粒子を示すサンプルＴＥＭを２００ｎｍのバーと共に示す。
【図３】図３は、より小粒子を示す図２の拡大版を５０ｎｍのバーと共に示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の主な目的は、活性成分として式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体を含む、非経口投与に適切な、天然リン脂質に基づく医薬組成物を提供することである。該組成物は、治療上有効量の前記誘導体を包含（収容(accommodate)）しており、がんの治療においてゲムシタビンと同等に有効、又はゲムシタビンより有効である。
【００２１】
本発明のこの目的及びその他の目的は、添付の特許請求の範囲に記載されている医薬組成物及びその製造法によって達成される。
１．活性医薬成分（原薬）
本発明の態様に従って、式（Ｉ）：
【００２２】
【化３】
2013511516.tif 000004
【００２３】
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、水素並びにＣ１８−及びＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基から独立して選ばれるが、ただしＲ１、Ｒ２及びＲ３はすべてが水素ではあり得ない］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含み、前記活性成分はリン脂質中に溶解又は分散されている医薬組成物を提供する。
【００２４】
活性成分は、
ａ）塩形成(salted)又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤；
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、活性成分対リン脂質のモル比は１：５〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する。
【００２５】
好適な態様において、式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体は、Ｒ１及びＲ３を水素として有し、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和又はモノ不飽和アシル基である。
ゲムシタビンは、３個の誘導体化可能な官能基を有している。すなわち、５’−及び３’−ヒドロキシル基とＮ４−アミノ基である。各基はエステル又はアミド誘導体に選択的に変換できるが、二付加物（ジエステル又はエステル−アミド）及び三付加物も形成されうる。二及び三付加物の場合、アシル置換基は必ずしも同じである必要はない。
【００２６】
現在、モノアシル誘導体、すなわちＲ１、Ｒ２及びＲ３の二つが水素というのが、本医薬組成物の活性成分として使用するのに好適である。アシル基による一置換は糖部分の３’−Ｏ及び５’−Ｏ位であるべきというのが特に好適で、５’−Ｏ置換が最も好適である。
【００２７】
モノ不飽和アシル基の二重結合は、シス又はトランス配置のいずれかでありうるが、治療効果は使用される配置によって異なりうる。
モノ不飽和アシル基の二重結合の位置も活性に影響するようである。現在、我々は、ω−９位に不飽和を有するエステル又はアミドを好んで使用している。命名法のω系において、モノ不飽和脂肪酸の二重結合の位置ωは、末端メチル基から数えるので、例えば、エイコセン酸（Ｃ２０：１  ω−９）は鎖中に２０個の炭素原子を有し、単一の二重結合は鎖のメチル末端から数えて炭素９と１０の間に形成されている。我々は、オレイン酸（Ｃ１８：１  ω−９、シス）、エライジン酸（Ｃ１８：１  ω−９、トランス）、エイコセン酸（Ｃ２０：１  ω−９、シス）及び（Ｃ２０：１  ω−９、トランス）から誘導されるエステル、エステル−アミド及びアミドを好んで使用しており、アミド及び５’−エステルが現在最も好適な誘導体である。
【００２８】
場合によっては、ステアリン酸（Ｃ１８：０）及びエイコサン酸（Ｃ２０：０）から誘導されたゲムシタビンのエステル、エステル−アミド及びアミドが都合よく使用される。
ゲムシタビン（Ｎ４）−エライジン酸アミド、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル及びゲムシタビン−３’−エライジン酸エステルは最も好適な誘導体で、本発明の好適な態様によれば、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルが医薬組成物の活性成分である。
【００２９】
式（Ｉ）の誘導体は、先行技術で公知の方法に従って製造される（更なる詳細についてはＷＯ９８／３２７６２参照）。
本発明の医薬組成物は、本明細書では、活性医薬成分（上記の通り）、可溶化剤、共可溶化剤及び等張剤を含有する水性製剤として記載されている。本発明の好適な態様によれば、医薬組成物は、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、グリセロール及び水を含む。
【００３０】
２．可溶化剤
本発明の好適な態様によれば、前記医薬組成物のリン脂質は、中性的に荷電されたリン脂質単独、又は他のリン脂質（少なくとも一つは負に荷電されたリン脂質）との組合せを含む。
【００３１】
リン脂質は細胞膜の天然成分であるので、非常に生体適合性である。リン脂質は、水と接触すると自然に二重層を形成し、さらに希釈されるとリポソームと呼ばれるマイクロ及びナノサイズの粒子に変わる両親媒性分子である。親油性及び両親媒性分子は、一定のモル比まで、リポソームの構造を損傷することなくリン脂質の二重層中に可溶化できる。そのような製剤中の最大薬物濃度は、リン脂質の種類及び濃度と活性物質の物理化学的特徴に依存する。そのような製剤中の薬物対リン脂質の頻用されるモル比は１：２０の範囲にある。
【００３２】
リポソームは、天然又は合成リン脂質、主にホスファチジルコリンから製造される。コロイド粒子の安定化のために、少量の負に荷電されたリン脂質、例えばホスファチジルグリセロールを配合することもできる。粒子の負電荷による静電反発力は、凝集及び大粒子形成に対する有効なバリアを提供する。
【００３３】
リン脂質は、胆汁塩、グリココール酸、タウロコール酸、ポロキサマー、ポリソルベート、クレモフォア、ソルビタンモノラウレートなどの界面活性剤と組み合わせると、（混合）ミセルも形成できる。そのような場合、両親媒性又は親油性薬物は、リポソームから期待されるより高いモル比でミセル中に可溶化できる。その理由は、水のコア不在及びリポソーム二重層の組織構造欠如のために、ミセルは、リポソームよりもそれらのナノ粒子の単位体積あたり、より高濃度のリン脂質、ひいてはより高濃度の両親媒性／親油性薬物を可能にするためである。それでも、界面活性剤は一般的に濃度依存性の有毒有害作用を示すと考えられているので、医薬製剤へのこれらの賦形剤の添加は最小限に制限されるべきである。
【００３４】
製剤の脂質ナノ構造は、可溶化剤、二重層形成又はミセル形成賦形剤として機能する下記リン脂質：ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン、カルジオリピンを含みうるが、これらに限定されない。リン脂質は、塩形成(salted)又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態でよい。また、細網内皮系（ＲＥＳ）による迅速クリアランスを回避するために、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような親水性ポリマーをリン脂質に付けることも可能である。
【００３５】
好適な態様では、可溶化剤として鶏卵由来の天然不飽和リン脂質を単独で又は組み合わせて使用する。
本発明のさらに別の態様において、天然卵リン脂質は、卵ホスファチジルコリンのような、６〜８のｐＨ範囲で中性の双性イオンリン脂質を含む。好適な態様において、可溶化剤は、９６．０％を超えるホスファチジルコリンと１．０％以下のリゾホスファチジルコリン、１．０％以下のスフィンゴミエリン、及び０．１％以下のホスファチジルエタノールアミンである精製鶏卵ホスファチジルコリンである。
【００３６】
３．共可溶化剤
本発明の製剤は共可溶化剤の使用を考えている。共可溶化剤は任意の適切な荷電リン脂質でありうる。好適な態様において、リン脂質は負に荷電されている。さらに好適な態様において、共可溶化剤のリン脂質は６〜８のｐＨ範囲で負に荷電されている。例えば、９８．０％を超えるホスファチジルグリセロールナトリウム塩、１．５％以下のホスファチジン酸、０．５％以下のリゾホスファチジルグリセロール、及び０．５％以下のホスファチジルコリンである鶏卵ホスファチジルグリセロールである。
【００３７】
４．等張剤
本発明の一態様において、等張剤が医薬組成物に含まれる。等張剤は、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポロキサマー、ポリオール、炭水化物、糖、デキストラン、アミノ酸又はタンパク質、有機又は無機塩、及びそれらの混合物などであるが、これらに限定されない。好適な態様において、等張剤はグリセロールである。
【００３８】
５．任意の賦形剤
一態様において、ステロールが添加される。好適な態様において、このステロールはコレステロールである。
【００３９】
一態様において、抗酸化剤などのその他の成分、さらに好ましくはα−トコフェロール、又は脂肪酸が添加される。
別の態様では、凍結乾燥を容易にするために医薬製剤に凍結保護剤が添加される。凍結保護剤は、マルトース、セロビオース、ラクトース、キシロビオース、スクロース、トレハロース、マンニトール又はデキストランなどであるが、これらに限定されない。
【００４０】
さらに別の態様において、等張剤は凍結保護剤でもあり、医薬製剤に等張性のため及び凍結乾燥を容易にするために添加される。好適な態様において、この等張剤及び凍結保護剤は、ラクトース、トレハロース、スクロース、マンニトールなどの二糖類である。
【００４１】
６．製剤の製造
本発明の一態様において、賦形剤の組成、薬物対脂質比、及び製造法は、リポソーム構造に有利に働くように選択される。特に好適な態様において、前記パラメーターは、ミセルナノ粒子、又はミセルとリポソームの組合せに有利に働くように選択される。
【００４２】
医薬組成物の一部の賦形剤は、式（Ｉ）の化合物を可溶化する又は溶解度を増大するために選択される。一態様において、前記賦形剤は最終製品から除去されることがある。好適な態様において、この賦形剤はエタノールであり、最終製品から大部分除去される。
【００４３】
本発明による医薬組成物は、固体、半固体又は液体、好ましくは液体形であり、バイアル、輸液バッグなどのような個別単位中に提供されうる。最終組成物の医薬品形態は、リポソーム又はミセル様ナノ粒子のいずれか、又はその両方の組合せのナノサイズ懸濁液又は分散液である。
【００４４】
高い薬物対脂質比を有する非リポソーム脂質複合体の製造法は、米国特許第６，４０６，７１３号及び米国特許第６，９８４，３９５号に記載されている。これらのいわゆる高薬物：脂質複合体（ＨＤＬＣ）は一番目の特許に記載されており、合成飽和リン脂質の使用を基にしている（好適モル比７：３のホスファチジルコリンとホスファチジルグリセロールの組合せ）。これらの注意深く選択されたリン脂質複合体は、界面活性剤を何ら添加せずとも５０モルパーセントまでの親油性薬物を包含（収容）することができる。それでも、この特許のＨＤＬＣのサイズはミクロン範囲であると報告されており、そのような製剤を静脈内投与用に適用することを除外している。粒子のより小さい画分を選別するための分離法が記載されているが、これは製品の製造法に時間のかかる追加ステップを導入することになる。
【００４５】
米国特許第６，９８４，３９５号にはさらに、加工条件及び緩衝液中の塩の有無を変更することによって、リポソーム製剤か又はミセル構造を有するＨＤＬＣかを選ぶことができると記載されている。発明者らは、これらの構造は非リポソームであること（二重層が検出されなかった）、及び製造プロセスに応じてＨＤＬＣのサイズを１０〜２０ｎｍほどに小さくできることを示した。前者の特許に記載されていた大粒子と比べて、この後者のミセル製剤の主な欠点は、薬物対脂質のモル比がずっと低くなる、すなわち１：７〜１：１０の範囲になることである。発明者らは、薬物に比べて脂質の量の増加は、小粒子形成のために製品の滅菌ろ過性の改良に貢献すると説明している。にもかかわらず、この手法では５００ｍＬのろ過容量しか達成されなかった。医薬品の日常的な商業生産の場合、もっと大容量であることが求められる。
【００４６】
本明細書で使用されている“最終医薬組成物”という用語は、患者にそのまま投与できる調製済み医薬組成物のことを言う。つまり、医薬組成物が凍結乾燥固体の場合、最終医薬組成物は、予め決められた指示に従って前記製剤を再構成した（戻した）溶液を指すことを意味する。
【００４７】
本明細書で使用されている“治療上有効量”という用語は、１日あたり約０．００１〜１０グラムの式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体又はその製薬学的に許容しうる塩、さらに好ましくは１日あたり約１０ｍｇ〜６グラムの式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体又はその製薬学的に許容しうる塩のことを言い、この量が非経口投与用に製剤化された０．００１〜８０％の前記誘導体又はその塩を含有する製剤中に含まれている。
【００４８】
最終医薬組成物中のリン脂質相の量は、約０．１％〜５０％、好ましくは１〜１５％、さらに好ましくは５〜１２％の範囲で変動しうる。最も好適ではあるが非制限的な態様において、リン脂質相の量は最終医薬組成物の９．５〜１０％である。０．１％から５０％までのすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００４９】
最終医薬組成物中のリン脂質の総量に対する式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体のモル比は１：１３０〜１：１、好ましくは１：７０〜１：２の範囲で変動しうる。別の好適な範囲は、１：６．６（最終製剤中の脂質に対し１０ｍｇ／ｍｌのゲムシタビン誘導体に相当）〜１：１．９（最終製剤中の脂質に対し３５ｍｇ／ｍｌのゲムシタビン誘導体に相当）を含む。別の好適な範囲は、１：５．３（最終製剤中の脂質に対し１２．５ｍｇ／ｍｌのゲムシタビン誘導体に相当）〜１：２．２（最終製剤中の脂質に対し３０ｍｇ／ｍｌのゲムシタビン誘導体に相当）を含む。別の好適な範囲は１：５〜１：２である。最も好適な範囲は１：５〜１：１である。リン脂質の総量に対する式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体の別の最も好適なモル比は１：４．４である（最終製剤中の脂質に対し１５ｍｇ／ｍｌのゲムシタビン誘導体に相当）。１：１３０〜１：１の間のすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００５０】
組成物中の卵ホスファチジルコリン対卵ホスファチジルグリセロールのモル比は、１：１〜９９：１、好ましくは２：１〜８０：１の範囲で変動しうるが、最も好適な比率は２５：１である。別の好適な範囲は１５：１〜４０：１、さらに好ましくは２０：１〜３０：１、なおさらに好ましくは２３：１〜２７：１を含む。１：１〜９９：１の間のすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００５１】
コレステロールもリン脂質に０．０５：１〜１：１、さらに好ましくは０．２：１〜０．５：１のモル比で加えてもよい。
等張剤としてのグリセロールの量は、最終医薬組成物中の等浸透圧条件を提供するために調整され、添加されることもされないこともある。添加される場合、その量は製剤の他の成分に応じておよそ５０ｍＭ〜３５０ｍＭの間で変動しうる。好適な態様において、グリセロールの量は２６０〜３００ｍＭであり、特に好適な量は２８５ｍＭである。５０〜３５０ｍＭの間のすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００５２】
等張剤／凍結保護剤として使用される二糖類の量は、最終医薬組成物の１〜５０％、さらに好ましくは５〜１５％、最も好ましくは７〜１０％の範囲で変動しうる。１〜５０％の間のすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００５３】
別の態様において、全リン脂質に対する等張剤／凍結保護剤のモル比は、１０：１〜１：５、さらに好ましくは５：１〜１：１である。１０：１〜１：５の間のすべての部分範囲も本発明の一部として含まれる。
【００５４】
本発明は、前述の医薬組成物の製造法も提供する。前記方法は、リン脂質と式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体を適切な水混和性有機溶媒に溶解するステップを含む。水混和性溶媒の例は、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、エチレングリコール、グリセロール、メタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、エタノール及びＤＭＳＯである。リン脂質と式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体は、同じ又は異なる水混和性有機溶媒中に、両有機溶液が一緒に混合できる限り、溶解できる。注意深く選択された条件下で、前記有機溶液を次に水溶液中に注ぐと、脂質ナノ粒子が形成される。前記“中間バルク溶液”中のナノ粒子のサイズ及び構造は、製剤及び注入パラメーターによって決定される。一つの重要なパラメーターは、中間バルク溶液中の有機溶媒の種類と濃度である。一つの好適な態様において、有機溶媒は、中間バルク溶液の５〜４０％、さらに好ましくは１０〜３０％の量で使用されるエタノールである。５〜４０％の間のすべての中間値も本発明によってカバーされる。最後に、中間バルク溶液はホモジナイズ及び有機溶媒の除去に付される。
【００５５】
好適な態様において、活性医薬成分、可溶化剤（好ましくは精製ホスファチジルコリン）及び共可溶化剤（好ましくはホスファチジルグリセロール）をエタノール中に溶解した後、水と等張剤（好ましくはグリセロール）を含有する水溶液中に注入し、中間バルク溶液を形成する。
【００５６】
一態様において、中間バルク溶液は、従来装置を用いて目的の粒径が達成されるまでホモジナイズされ、次いでバルク溶液はタンジェンシャルフローろ過(tangential flow filtration)によって最終体積に濃縮され、有機溶媒は更なるダイアフィルトレーション(diafiltration)によって除去される。別の態様では、前記バルク溶液をまず最終又は中間体積に濃縮した後、従来の技術及び装置を用いて所望粒径が達成されるまでホモジナイズする。その後、必要であればバルク溶液をさらに濃縮し、有機溶液をダイアフィルトレーションによって最終的に除去する。最終濃縮とダイアフィルトレーションを組み合わせて一つのステップにすることも可能である。
【００５７】
好適な手順では、中間バルク溶液を高圧ホモジナイズ（典型的には６２５〜１０００ｂａｒ）に数回、それ以上の粒径の変化が次の回に観察されなくなるまでかける。粒径は、レーザー光散乱によって都合よく測定でき、体積ベースの直径測定Ｄ（ｖｏｌ）が得られる。上記製造法に従って形成された粒子は以下のＤ（ｖｏｌ）を有する（表示範囲より小さいサイズを有する粒子のパーセンテージとして測定）。
【００５８】
Ｄ（ｖｏｌ，０．９９）：５〜１１ｎｍ
Ｄ（ｖｏｌ，０．９０）：４〜７ｎｍ
Ｄ（ｖｏｌ，０．５０）：２．５〜５ｎｍ
我々は、粒子の大部分は  Ｄ（ｖｏｌ）２．５〜３０ｎｍのサイズ範囲内に入ると見積もっている。
【００５９】
あるいは、レーザー光散乱技術によって測定された粒径は、強度ベースの平均流体力学的体積（Ｚ−平均）として表現することもできる。当業者であれば、粒径分析のために体積及び強度ベースの単位を用いて報告された異なる絶対値のことは分かるであろう。上記製造法に従って形成された粒子は以下の測定Ｚ−平均範囲を有する。
【００６０】
Ｚ−平均：２０〜５０ｎｍ
かなり小さい評価サンプルが対象であるにもかかわらず、粒径の物理的測定も実施できる。ガラス状の非晶質氷(vitreous ice)中に保持された粒子を透過型電子顕微鏡法によって評価した。粒子は、主に観測直径１５〜２０ｎｍを有する小粒子であるが、少数の観測直径５０ｎｍまでの大粒子も含まれているようである。図１及び２に、実施例１に記載のようにして製造された薬品の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）のサンプルを提供する。図３は、図２の画像の拡大図を示す。
【００６１】
製薬用湿潤剤は、脂質賦形剤との混合前に活性物質に最初に添加されてよい。湿潤剤の例は、ポリマー、界面活性剤、炭水化物、多糖類、無機固体、油、アルコール又は酸（有機又は無機）である。
【００６２】
最終医薬組成物のナノ粒子は、リポソーム様、すなわちリン脂質二重層に取り囲まれた小胞、又はミセル様のいずれか、又はその両方の組合せである。粒径分布は、これがバルク溶液の滅菌ろ過性に影響を与えなければ、単峰性でも、二峰性でも、さらには多峰性でもよい。レーザー光散乱により測定し、体積ベースの直径単位で表した最終医薬組成物の粒径は、２．５ｎｍ〜２２０ｎｍの範囲でありうる。一態様において、粒径分布は単峰性で、平均サイズは２．５ｎｍ〜３０ｎｍ、又は３０ｎｍ〜２２０ｎｍの範囲である。別の態様において、粒径分布は二峰性で２つの分布を有し、一つは２．５ｎｍ〜３０ｎｍ、第二は３０〜２２０ｎｍである。さらに別の態様において、粒径分布は多峰性で、分布は２．５〜２２０ｎｍの平均を有する。一つの好適ではあるが非制限的な態様において、最終医薬組成物の粒径分布は二峰性で、主たる粒子画分は２．５〜２５ｎｍの平均サイズを有し、第二の微量の粒子画分は４０〜１２０ｎｍの平均粒径を有する。２．５〜２２０ｎｍの間のすべての中間的粒径も本発明によってカバーされる。代替の測定技術又は表現単位は、上記の絶対範囲に小変化をもたらすかもしれないが、測定された粒径は一貫して直径２００ｎｍ未満である。
【００６３】
７．投与
本発明の医薬組成物は様々ながんの治療に有用である。具体的には、転移性膵臓がん、非転移性膵臓がん、転移性乳がん、非転移性乳がん、非小細胞肺がん、子宮がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、胆管がん、頭頸部がん、リンパ腫、骨髄腫、及び軟組織肉腫などである。該医薬組成物は、単独療法としても、又は他の認可又は実験的がん療法と組み合わせても使用できる。
【００６４】
本発明は、がんの治療、特に上記がんの治療に使用するための上に定義された医薬組成物を提供する。
静脈内投与のための好適な投与スケジュールは、１２５０ｍｇ／ｍ２を４週間のうち３週間、週１回というものである。代替の投与スケジュールも、特定のがんの種類の場合、又はゲムシタビン−５’−エライデートを他の治療薬と組み合わせて使用する場合、適切であり得る。
【００６５】
以下で本発明を実施例によってさらに説明する。実施例は例示のみを意図したものであり、制限と見なされてはならない。
【実施例】
【００６６】
実施例１
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を５．８：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：４．４で、エタノールに１：７．２の重量比で加えた。混合物を５０℃までの加熱下で全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００６７】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に撹拌しながら２５０ｍｌ／分で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：７．６であった。バルク溶液をタンジェンシャルフローろ過によって濃縮し、濃縮バルクを１５〜２０℃でホモジナイザーに６回通して処理した。得られた生成物をタンジェンシャルフローろ過によって最終バッチ体積２０Ｌにまでさらに濃縮し、最終ゲムシタビン−５’−エライデート濃度１５ｍｇ／ｍＬにした。次に残留エタノールを洗浄ステップを通じてダイアフィルトレーションにより除去し、最終生成物を滅菌ろ過して滅菌バイアルに無菌的に詰め、窒素でパージして封をした。バイアルは遮光されて２〜８℃で貯蔵された。バッチの安定性を３８ヶ月までモニターした。この安定性試験期間中、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの内容に変化は観察されなかった。主な分解産物であるゲムシタビンの量は３８ヶ月後に０．０３％であった。該バッチは二峰性の粒径分布を示し、３８ヶ月後、主画分（９９．７％）の平均サイズは４．３ｎｍ、他の画分（０．３％）の平均サイズは６９ｎｍであった。製造時、この生成物のＤ（ｖｏｌ，０．９９）は１１ｎｍと測定され、Ｚ−平均は４７ｎｍと測定された。
【００６８】
実施例２
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を１３．５：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．９で、エタノールに１：６の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００６９】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に撹拌しながら注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：８．７であった。バルク溶液を２回ホモジナイズした後、タンジェンシャルフローろ過によって濃縮した。次に、濃縮バルクをホモジナイザーに４回通して処理した。得られた生成物をタンジェンシャルフローろ過によって最終バッチ体積にまでさらに濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度３５ｍｇ／ｍＬにした。次に残留エタノールを洗浄ステップを通じてダイアフィルトレーションにより除去し、最終生成物を滅菌ろ過してバイアルに詰め、窒素でパージして封をした。このバッチの測定Ｄ（ｖｏｌ，０．９９）は７．２ｎｍであった。測定Ｚ−平均強度ベースの粒径は４６ｎｍであった。
【００７０】
実施例３
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を１３．５：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．９で、エタノールに１：０．７の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００７１】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に、ホモジナイザーのすぐ上流で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：５．３であった。ホモジナイザーは、これらの運転条件下で、混合と粒径縮小の両方のために利用された。バルク溶液をタンジェンシャルフローろ過によって濃縮し、濃縮バルクをホモジナイザーに１２回通して処理した。得られた生成物をタンジェンシャルフローろ過によって最終バッチ体積にまでさらに濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度３５ｍｇ／ｍＬにした。次に残留エタノールを洗浄ステップを通じてダイアフィルトレーションにより除去し、最終生成物を滅菌ろ過した。該バッチは二峰性の体積粒径分布を示し、主画分（９９．９％）のサイズは３．９ｎｍ、他の画分（０．１％）の平均サイズは７９ｎｍであった。測定Ｚ−平均強度ベースの粒径は６１ｎｍであった。
【００７２】
実施例４
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を１３．５：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．９で、エタノールに１：２．５の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００７３】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に、ホモジナイザーのすぐ上流で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：２．２であった。ホモジナイザーは、これらの運転条件下で、混合と粒径縮小の両方のために利用された。バルク溶液をホモジナイザーに３回通して処理した。得られた生成物をタンジェンシャルフローろ過によって最終バッチ体積にまで濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度３５ｍｇ／ｍＬにした。次に、バルク溶液をホモジナイザーにさらに６回通して処理した。次に残留エタノールを洗浄ステップを通じてダイアフィルトレーションにより除去し、最終生成物を滅菌ろ過した。該バッチは二峰性の体積粒径分布を示し、主画分（９９．９％）のサイズは２．９ｎｍ、他の画分（０．１％）の平均サイズは４２ｎｍであった。測定Ｚ−平均強度ベースの粒径は１５ｎｍであった。
【００７４】
実施例５
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を１３．５：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．９で、エタノールに１：１．５の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００７５】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に、ホモジナイザーのすぐ上流で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：３であった。ホモジナイザーは、これらの運転条件下で、混合と粒径縮小の両方のために利用された。バルク溶液をホモジナイザーに３回通して処理した。得られた生成物をタンジェンシャルフローろ過によって最終バッチ体積にまで濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度３５ｍｇ／ｍＬにした。次に、バルク溶液をホモジナイザーにさらに６回通して処理した。次に残留エタノールを洗浄ステップを通じてダイアフィルトレーションにより除去し、最終生成物を滅菌ろ過した。該バッチは二峰性の体積粒径分布を示し、主画分（９９．９％）のサイズは３．９ｎｍ、他の画分（０．１％）の平均サイズは４４ｎｍであった。測定Ｚ−平均強度ベースの粒径は１４ｎｍであった。
【００７６】
実施例６
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を１５．４：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．７で、エタノールに１：５．２の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００７７】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に、ホモジナイザーのすぐ上流で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：８．５であった。ホモジナイザーは、これらの運転条件下で、混合と粒径縮小の両方のために利用された。バルク溶液をホモジナイザーに２回通した後、タンジェンシャルフローろ過によって濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度４０ｍｇ／ｍＬにし、残留エタノールをダイアフィルトレーションにより除去した。次にバルク溶液をホモジナイザーにさらに４回通して処理し、滅菌ろ過してバイアルに詰め、窒素でパージして封をした。バッチの測定Ｄ（ｖｏｌ，０．９９）は９．１ｎｍであった。測定Ｚ−平均強度ベースの粒径は３３ｎｍであった。
【００７８】
実施例７
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を２３．２：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．１で、エタノールに１：５．２の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００７９】
その後、エタノール溶液をグリセロール／水（２．６％  ｗ／ｗ）溶液に、ホモジナイザーのすぐ上流で注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：８．５であった。ホモジナイザーは、これらの運転条件下で、混合と粒径縮小の両方のために利用された。バルク溶液をホモジナイザーに６回通した後、タンジェンシャルフローろ過によって濃縮し、ゲムシタビン−５’−エライデート濃度６０ｍｇ／ｍＬにし、残留エタノールをダイアフィルトレーションにより除去した。次にバルク溶液を滅菌ろ過してバイアルに詰め、窒素でパージして封をした。測定されたＺ−平均強度ベースの粒径は４４ｎｍであった。
【００８０】
実施例８
実施例１に記載の製剤の示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）による熱分析を実施し、製品の貯蔵及び輸送温度を確認した。凝固点は、おそらく水の過冷却のために低く、−２２℃であった。融点はおよそ−３℃であった。このことは、２〜８℃の貯蔵及び輸送温度はリン脂質の融解も凍結も起こさないであろうこと、従って粒子の構造に何ら悪影響を及ぼさないであろうことを示唆していた。
【００８１】
安定性試験は、実施例１に記載の手順を用いて製造された薬品バッチに対して、２〜８℃／周囲ＲＨ（相対湿度）の貯蔵条件下で３８ヶ月間、及び２５℃／６０％ＲＨの貯蔵条件下で９ヶ月間実施した。これらの試験結果は、評価期間中、規定の貯蔵条件下で製品の不変性を示している。
【００８２】
安定性試験は、実施例２及び６に記載の手順を用いて製造された薬品バッチに対して、２〜８℃／周囲ＲＨの貯蔵条件下で６ヶ月間、及び２５℃／６０％ＲＨの貯蔵条件下で６ヶ月間実施した。これらの試験結果は、評価期間中、規定の貯蔵条件下で、ゲムシタビン−５’−エライデートの内容及び粒径に関して製品の不変性を示している。記載の貯蔵条件下で沈殿は観察されなかった。
【００８３】
実施例９
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）及び卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）を５．９：２５：１のモル比、すなわち活性剤対脂質比１：１．４．５で、エタノールに１：１４の重量比で加えた。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。この溶液をアセテート／スクロース緩衝液ｐＨ５．０に制御孔径注入装置を用いて注入し、懸濁液を最終体積に濃縮して１５ｍｇ／ｍｌというゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの最終濃度にした。最後に、緩衝液をグリセロール／水２．６％ｗ／ｗに変えた。このバッチの粒径は９２ｎｍ（Ｚ−平均）であり、多分散指数は０．２４であった。
【００８４】
脂質及び薬物の出発濃度を２０％減らし、残りのパラメーターは一定に保つことによって別のバッチを製造した。このバッチの粒径は５３ｎｍ（Ｚ−平均）であり、多分散指数は０．２７であった。
【００８５】
両バッチの粒子はリポソーム構造を有していたと考えられる。両バッチを２〜８℃で貯蔵し、５ヶ月後に分析した。９２ｎｍバッチの場合、粒径は不変のままであったが、小さい方の粒径のバッチは二峰性の分布を示した（粒子の凝集を示す）。さらに、両バッチとも５ヶ月後ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの４〜５％の分解を示した。実施例１で説明した臨床用バッチと比べて、この製剤はずっと不安定である。
【００８６】
実施例１０
リン脂質不使用の粒子形成はうまくいかなかった。ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルをエタノールに１：２４の重量比で溶解した。混合物を全固形物が溶解するまで撹拌した。
【００８７】
その後、エタノール溶液を注射溶液用の水に激しく撹拌しながら注入した。エタノール溶液対グリセロール溶液の重量比は１：１２であった。混合物は、目視検査によれば、集塊を含有しているようであった。ホモジナイズの試みは成功せず、ゲムシタビン−５’−エライデートはリン脂質の不在下では安定な粒子を形成できないことを示していた。
【００８８】
実施例１１
リン脂質と非イオン性界面活性剤を用いた混合ミセル製剤は、高薬物量(high drug load)製剤の製造においては不成功に終わった。混合ミセルは、１：１の重量比の卵レシチン：トゥイーン２０を用いて製造し、溶解固形物の最終濃度を５０ｍｇ／ｍＬとした。混合ミセルにゲムシタビン−５’−エライデートを負荷(load)しようとしたが、５ｍｇ／ｍＬ未満という最大濃度に終わった。界面活性剤成分をグリコール酸(glycholic acid)に置換したところ、最大ゲムシタビン−５’−エライデート濃度は２ｍｇ／ｍＬとなった。
【００８９】
実施例１２
卵レシチンとオレイン酸を用いたリポソーム製剤は、高薬物量製剤の製造においては不成功に終わった。リポソームは、ゲムシタビン−５’−エライデート、卵レシチン、及びオレイン酸をエタノール中に１：１４．４：２のモル比で溶解することによって製造した。溶媒を蒸発させ、残留固形物を水中２．６％グリセロールにＵｌｔｒａｔｕｒｒａｘを用いて分散させ、その後高圧ホモジナイズをした。３ｍｇ／ｍＬのゲムシタビン−５’−エライデートまでは安定な製剤が達成できた。さらに高濃度のゲムシタビン−５’−エライデートを有する製剤は非溶解固形物を含有していることがわかった。
【００９０】
実施例１３
実施例１〜７及びセクション６の製剤の製造に記載された製剤で達成された思いがけず高濃度（１５ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ）の活性化合物というのは、式（Ｉ）に示された化合物に特有であるのか、又は該方法はより一般的な性質のものであるのかを調べた。式（II）に示された構造的に類似した化合物エラシタラビン(elacytarabine)（ａｒａ−Ｃ−５’−エライジン酸エステル）を関連モデル物質として使用した。このモデル物質は、式（Ｉ）（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝エライデート）に見られるのと同じ５’−エライジン酸エステル部分、及び同じシトシンヌクレオシド環系を含有している。式（Ｉ）及び式（II）に記載の化合物間のわずかな相違はリボース環の２位の置換で、式（Ｉ）ではジェミナル(geminal：１個の原子に同種原子が２個結合）フッ素を含有しているが、式（II）はＨとＯＨを含有している。
【００９１】
【化４】
2013511516.tif 000005
【００９２】
一貫したリン脂質及び製造技術を用いて、式IIの化合物を２０ｍｇ／ｍＬより過剰に含めた製剤を製造したところ、加工中に沈殿が発生するという結果になった。式IIの化合物の標的濃度を１５ｍｇ／ｍＬ未満にすると製剤を製造することは可能であったが、この同じ製剤は貯蔵中、沈殿と凝集に関して不安定であることがわかった。そこで、式Ｉの化合物は、記載された脂質ベースの製剤に対して高薬物量(high loading)及び安定性という思いがけない独自の属性を提供していると結論づけられる。
【００９３】
実施例１
実施例１に記載のゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの静脈内製剤をヒト臨床試験における最初の第Ｉ相試験に使用した。この試験の目的は、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルの安全性、毒性、ＭＴＤ（最大耐量）及びＲＤ（推奨用量）を決定し、その薬物動態（ＰＫ）特性を記述し、そしてその予備的抗腫瘍活性を評価することであった。
【００９４】
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルを４週間ごとに第１、８及び１５日（ｄ）に３０分間の静注によって投与した。用量範囲は３０〜１６００ｍｇ／ｍ２／ｄであった。４３人の患者を登録し、ＲＤは１２５０ｍｇ／ｍ２／ｄで確立された。薬物は良好な耐容性を示し、最も頻度の高い毒性は、吐き気、疲労、嘔吐及び食欲不振で、大部分は軽度であった。疾患の安定化（≧３ヶ月）が７人の患者（膵臓、結腸及び卵巣がん）で報告され、３．５〜＞８ヶ月続いた。一人の卵巣がん患者は、腫瘍量が２８．３％減少した。
【００９５】
ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルは、投与後２４時間まで血漿中に検出された。ゲムシタビン（ｄＦｄＣ）暴露のＡＵＣは、ゲムシタビンを同等の用量レベルで静脈内投与した場合に報告されたよりも著しく高かった。最初の２４時間中の主要代謝産物ｄＦｄＵの尿中排泄は用量の４８〜７１％であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年6月19日(2012.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
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［式中、Ｒ１及びＲ３は水素であり、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基である］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含む医薬組成物であって、
前記活性成分は、
ａ）塩形成又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤；及び
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、
前記活性成分対リン脂質のモル比は１：６．６〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する医薬組成物。
【請求項２】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
可溶化剤のリン脂質が、６〜８のｐＨ範囲で中性の双性イオンリン脂質を含む鶏卵由来の天然リン脂質を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
可溶化剤のリン脂質が鶏卵由来の精製ホスファチジルコリンを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
共可溶化剤が鶏卵ホスファチジルグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
等張剤がグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルであり、可溶化剤がホスファチジルコリンであり、共可溶化剤がホスファチジルグリセロールであり、そして等張剤がグリセロールである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
活性成分対リン脂質のモル比が１：５〜１：２である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
がんの治療に使用するための、式Ｉ：
【化３】
2013511516.tif 000013
［式中、Ｒ１及びＲ３は水素であり、Ｒ２はＣ１８−又はＣ２０−飽和及びモノ不飽和アシル基である］のゲムシタビン誘導体、又はその製薬学的に許容しうる塩を活性成分として含む医薬組成物であって、
前記活性成分は、
ａ）塩形成又は脱塩、水素化又は部分水素化、天然、半合成又は合成を含むあらゆる形態のホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、スフィンゴミエリン及びカルジオリピンからなる群から選ばれる可溶化剤のリン脂質；
ｂ）荷電リン脂質からなる群から選ばれる共可溶化剤；及び
ｃ）等張剤
を含む製剤中に調製され、
前記活性成分対リン脂質のモル比は１：６．６〜１：１であり、製剤は２．５〜３０ｎｍの範囲の平均Ｄ（ｖｏｌ）粒径を有する医薬組成物。
【請求項１０】
活性成分がゲムシタビン−５’−エライジン酸エステルである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
活性成分対リン脂質のモル比が１：５〜１：２である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
がんが、転移性膵臓がん、非転移性膵臓がん、転移性乳がん、非転移性乳がん、非小細胞肺がん、子宮がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、胆管がん、頭頸部がん、リンパ腫、骨髄腫、及び軟組織肉腫からなる群から選ばれる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
他の認可又は実験的がん療法と組合せて投与するための、請求項９又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の医薬組成物の製造法であって、
ａ）リン脂質と式（Ｉ）のゲムシタビン誘導体を適切な水混和性有機溶媒に溶解し；
ｂ）ステップａ）で得られた有機溶液を水溶液中に注ぎ、直ちに脂質ナノ粒子を形成させ；
ｃ）ステップｂ）で得られた中間バルク溶液をホモジナイズ及び有機溶媒の除去に付する
ステップを含む方法。
【請求項１５】
水混和性有機溶媒が、エタノール、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、エチレングリコール、グリセロール、メタノール、１−プロパノール、２−プロパノール又はＤＭＳＯからなる群から選ばれる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ステップａ）の水混和性溶媒がエタノールである、請求項１４に記載の方法。
【国際調査報告】
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