(57)【要約】  本発明は、皮下脂肪蓄積を除去する薬を製造するための、少なくとも１種類のリン脂質、少なくとも１種類のグリチルリチン酸またはグリチルリチン酸の塩を含む、水性組成物の使用に関する。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも１種類のリン脂質と、
（ｂ）少なくとも１種類のグリチルリチン酸、または
（ｃ）グリチルリチン酸の塩と、
（ｄ）任意に助剤と、
を含み、前記リン脂質と前記グリチルリチン酸またはその塩との総含有量が２〜８０重量％であり、かつ前記リン脂質と前記グリチルリチン酸またはその塩との間の重量比が３０：１ないし０．５：１である、皮下脂肪蓄積を除去する薬を製造するための組成物の使用。
【請求項２】
前記リン脂質としてホスファチジルコリンを含む請求項１に記載の組成物の使用。
【請求項３】
動物または植物由来のホスファチジルコリンを含む請求項１または２に記載の組成物の使用。
【請求項４】
グリチルリチン酸あるいはグリチルリチン酸のカリウム、ナトリウム、アンモニウム、またはマグネシウム塩を含む請求項１ないし３のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５】
助剤として、糖、とりわけ、グルコースおよびマルトースおよび／またはそれらの誘導体、マンニトール、ソルビトール、あるいはラクトースを含む請求項１ないし４のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項６】
ホスファチジルコリンの総量が１５〜９８重量％、好ましくは３０〜９８重量％、より好ましくは５０〜９８重量％、特に好ましくは７５〜９８重量％、最も好ましくは７５〜９０重量％である、請求項１ないし５のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項７】
好適な溶媒に溶解される乾燥形態での請求項１ないし６のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項８】
乾燥形態で、好ましくは、凍結乾燥によって得られる凍結乾燥物として用いられる請求項１ないし７のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項９】
液状で用いられる請求項１ないし８のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１０】
水、生理食塩液、グルコース、一価アルコール（例えば、エタノール、２−プロパノール、ｎ−プロパノール）、ポリヒドロキシアルコール（例えばグリセロールおよび／またはプロパンジオール）、ポリグリコール（例えばポリエチレングリコール）および／またはミグリオール、グリセロール、ホルマール、ジメチルイソソルビトール、天然および合成油、ならびに／あるいはエーテルを含む生理的に好適な溶媒を含む、請求項１ないし９のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１１】
皮下脂肪蓄積、皮下脂肪組織疾患、とりわけ、脂肪分布局所障害を処置するための薬の製造のための請求項１ないし１０のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１２】
脂肪組織腫瘍を退縮および萎縮させる薬を製造するための請求項１ないし１１のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１３】
クリーム、軟膏、ゲル、ヒドロゲル、ローション、ペースト、粉末、または溶液の形態であることを特徴とする薬を製造するための請求項１ないし１２のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１４】
審美的または病的な性質である望ましくない脂肪分布障害が、脂肪性浮腫、脂肪腫、腹部の脂肪腫症、皮膚脂肪組織炎、偽女性乳房、ＨＩＶ患者の水牛様脂肪沈着、蜂巣炎、または非特異性の皮下脂肪組織であることを特徴とする請求項１ないし１３のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項１５】
調製物の投与が、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、または静脈内注射によって適用されることを特徴とする請求項１ないし１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
イオントフォレシス、エレクトロポレーション、またはフォノフォレシスを含む群から選択される方法が投与に用いられる請求項１ないし１４のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪の皮下分布障害等、種々の表現型を呈する皮膚下の脂肪沈着を処置するための、またダイエットでは落ちない脂肪パッド（ｄｉｅｔ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｆａｔ  ｐａｄ）を退縮させるための、リン脂質類と少なくとも１種類のグリチルリチン酸または１種類のグリチルリチン酸の塩とに基づく組成物の使用と、その医薬として適用可能な形態とに関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで、従来技術においては、脂肪種または脂肪性浮腫としての皮下脂肪蓄積または脂肪細胞異常増殖を処置するために、外科的方法が用いられた。そのような処置は、感覚消失、局所反応、および二次感染によって引き起こされる、既知の合併症またはリスクをもたらす。多くの場合、そのような状況下では、入院患者が病院に留まることが不可避である。そのような手術を回避するために、皮下脂肪蓄積をするための非外科的な選択肢が求められる。
【０００３】
種々のリン脂質化合物が既に開発されており、それらは患者に注射投与される。少なくとも１種類のリン脂質を含む水性処方物は、様々な用途で知られている。例えば、このような系は化粧品に用いられ、または医薬品の製造に用いられる。しばしば、このような系は、ミセル、または内側に水相を含むリポソームを形成する。
【０００４】
米国特許出願公開第２００５／１４３３４７（Ａ１）号とそれに関連する優先権書類であるドイツ特許出願公開第１０３  ６１０  ６７（Ａ１）号とには、少なくとも１種類のリン脂質および／または少なくとも１種類の胆汁酸と、リボフラビンのように脂肪分解を助ける成分と、水とを含み、皮下脂肪蓄積除去薬および脂肪層退縮薬の製造に適する水性組成物を開示している。その中で、エッセンシャル（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｅ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）（レッドリスト（Ｒｅｄ  Ｌｉｓｔ）、２００３年３月）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｒ静注（ｉ．ｖ．）が市販の調製物（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）として言及されている。
【０００５】
エッセンシャル（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｅ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）は、欧州特許出願公開第０  ６１５  ７４６（Ａ１）号には、大豆由来のリン脂質、胆汁、リボフラビン、α−トココフェロール、エタノール、および水を含む水性処方物として説明されている。この組成物は、ミセル系に加工され、ミセルの直径が３０ｎｍないし１００ｎｍになる。欧州特許出願公開第０  ６１５  ７４６（Ａ１）号では、グリチルリチン酸の使用については述べられていない。この調製物は、とりわけ、肝実質の過剰な脂肪分（液滴状の脂肪沈着）である肝脂肪変性を処置するために、静脈内投与される。
【０００６】
ドイツ特許出願公開第１０３  ６１  ０６７（Ａ１）号では、皮下脂肪蓄積を除去する薬を製造するために、少なくとも１種類のリン脂質および／または少なくとも１種類の胆汁酸と、脂肪分解を助ける成分と、水とを含む医薬調製物エッセンシャル（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｅ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）の水性処方物が開示されている。ここでも同様に、この調製物にはグリチルリチン酸が添加されていない。
【０００７】
リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）は、大豆由来のリン脂質、ＤＬ−α−トコフェロール、７−デオシキコール酸、アルコール、他の助剤、および水を含む。しかし、この化合物の活性物質組成にはグリチルリチン酸が含まれない。リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）を皮下注射することで、過体重の人々において目の下、腹部、または臀部に生ずる脂肪蓄積が取り除かれる。
【０００８】
リン脂質を主成分とし、かつ脂肪蓄積の脂肪分解を目的として皮下注射に用いられる調製物は、他にもあり、そのような調製物は、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／１１３４２１号、ドイツ特許出願公開第１０  ２００７  ０１５  ７０１号、米国特許出願公開第２００５／１４３３４７（Ａ１）、および米国特許出願公開第２００５／００８９５５５（Ａ１）に記載されている。
【０００９】
皮下脂肪分解のための上記従来の調製物の不都合な点として、とりわけ、処置後の、腫れ、血腫（挫傷）、処置領域の痛み、ならびに注射部位における灼熱感およびかゆみ等の不快感が挙げられる。しかし、特に不都合な点は、細胞構造および膜の完全性が損なわれることによる細胞死（細胞壊死）である。
【００１０】
上述の不都合を生ずることなく皮下脂肪蓄積を非外科的に除去するための活性化合物を見つけることを目指すなかで、急性および慢性肝疾患ならびに動脈硬化および関連疾患の脂質代謝障害を静脈内および経口投与によって処置するためのロシア登録特許２１３３１２２号（Ｃ１）に開示された組成物が、皮下脂肪分解（脂肪細胞溶解とも呼ばれている）に適しているという、驚くべき知見が得られた。
【００１１】
少なくとも1種類のリン脂質、好ましくはホスファチジルコリンと、1種類のグリチルリチン酸またはその塩とを含むこの組成物を本発明にもとづいて使用することによって、皮下脂肪分解に用いられた従来の調製物の既に説明した不都合な点が、減少および/または完全除去される。
【００１２】
脂肪蓄積の皮下脂肪分解のためのクレームされた組成物を本発明にもとづいて用いることの利点は、脂肪組織細胞（脂肪細胞）の細胞構造および膜完全性が損なわれるのを完全に防ぐための顕著な減少にある。クレームされた組成物による脂肪組織の皮下障害についての本発明の処置では、壊死の発生が著しく減少または完全に妨げられる。
【００１３】
本発明の使用を通じて、処置脂肪組織を有する身体にある貯蔵脂肪（ｄｅｐｏｔ  ｆａｔ）は、細胞膜のいかなる破壊も引き起こすこと無く、脂肪分解によって分解される。
【００１４】
腫れ、赤み、灼熱感、かゆみ、および一般的な痛み等の愁訴ならびに過敏症が完全に無くなるほどまでに、副作用の顕著な減少が観察される。
【００１５】
本発明にもとづいて使用される組成物は、主成分として、1種類のリン脂質と、グリチルジン酸またはその塩と、必要に応じて少なくとも1種類の助剤とを含む。
【００１６】
グリチルリチン酸（カンゾウ（Glycyrrhiza）属の植物であるカンゾウ（licorice）（例えば、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra））由来の抽出物から得ることができる）またはその塩（特にグリチルリジン酸ナトリウムまたはグリチルリジン酸アンモニウム）は、従来技術では、輸送（例えば、欧州特許出願公開第０３  ２７  ７５６（Ａ）号では粘膜を介したペプチドホルモン輸送）の吸収促進剤として述べられている。米国特許出願公開第５，２３８，９１７（Ａ）号では、経膣調製物化されたグリチルリチン酸によってポリペプチドの吸収が高まることが述べられている。
【００１７】
さらに、グリチルリチン酸は抗細菌成分および抗炎症成分として、ならびに乳化剤として、米国特許出願公開第２００４−０７６６５２（Ａ）号、米国特許出願公開第２００９−１６９５８８（Ａ）号、米国特許出願公開第２００７−０５３８５２（Ａ）号、国際特許出願公開第ＷＯ０８／０４６７９１（Ａ）号、国際特許出願公開第ＷＯ０８／０４６７９５（Ａ）号、国際特許出願公開第ＷＯ０５／０３７２３９（Ａ）号、欧州特許出願公開第１６７６５６１（Ａ）号、および日本特許出願公開第２００６／１３７６７０号の従来技術において、知られている。
【００１８】
細胞膜を介した分子の輸送におけるグリチルリチン酸の特異的機能は、クレームされた本発明の組成物の使用の迅速な作用機序が有する特定の長所をサポートする。グリチルリチン酸により、リン脂質は皮下組織の脂肪組織細胞に対して、特に十分かつ急速に、深く入りこむことができる。そのため、壊死等の上述した障害は、減少するか、全く起こらない。先行技術の調製物（特に胆汁酸またはその塩を含む調製物）による処置後の腫れ、血腫、痛み、および不快感は、グリチルリチン酸との併用で、軽減されるか、または全く起こらない。この改善された耐性は、グリチルリチン酸の抗炎症性および抗菌性の特性によって裏付けられる。
【００１９】
したがって、少なくとも１種類のリン脂質、好ましくはホスファチジルコリンと、１種類のグリチルリチン酸またはその塩とのクレームされた配合物（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）が、細胞毒性効果をほとんど示さないか、まったく示さず、また従来の調製物エッセンシャル（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｅ）（登録商標）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）と比較して、耐性を改善したという点で、本発明は特徴づけられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、組成物の使用に関するもので、該組成物は、
ａ）少なくとも１種類のリン脂質、
ｂ）少なくともグリチルリチン酸、または、
ｃ）グリチルリチン酸の塩と、
ｄ）必要に応じて、助剤と、
を含み、皮下脂肪蓄積を除去する薬物を製造するために、
・リン脂質とグリチルリチン酸またはその塩との総含有量が２〜８０重量％であり、かつ
・リン脂質とグリチルリチン酸またはその塩との間の重量比が３０：１ないし０．５：１である。
【００２１】
本発明は、さらに、上記組成物の使用に関するもので、該組成物はリン脂質としてホスファチジルコリンを含む。
【００２２】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は動物または植物由来のホスファチジルコリンを含む。
【００２３】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物はグリチルリチン酸のカリウム、ナトリウム、アンモニウム、またはマグネシウム塩あるいは他の好適な塩を含む。
【００２４】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、潜在的な賦形剤として、糖、とりわけマルトースおよび／またはその誘導体（ソルビトールもしくは乳糖）を含む。
【００２５】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、ホスファチジルコリンを、総量で、１５〜９８の重量％、好ましくは３０〜９８重量％、より好ましくは５０〜９８重量％、および最も好ましくは７５〜９８重量％含む。
【００２６】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、好適な溶媒に溶解される乾燥形態である。
【００２７】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、乾燥された状態で、好ましくは凍結乾燥によって得られる凍結乾燥物として、用いられる。
【００２８】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、溶液の状態で用いられる。
【００２９】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、生理的に好適な溶媒を含み、該溶媒には、水、生理的食塩水、グルコース溶液、一価アルコール（例えば、エタノール、2-プロパノール、n-プロパノール）、ポリヒドロキシアルコール（例えばグリセロールおよび／または6-プロパンジオール）、ポリグリコール（例えばポリエチレングリコール）および／またはミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）、グリセロール、ホルマール、ジメチルイソソルビトール、天然および合成の油ならびに／あるいはエーテルが含まれる。
【００３０】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、皮下脂肪蓄積、皮下脂肪組織疾患、特に脂肪分布の局所障害に関連したものを処置するための薬の製造に用いられる。
【００３１】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、該組成物は、脂肪組織腫瘍の分解および退化（退縮）のための薬の製造に用いられる。
【００３２】
本発明の調製物の投与は、クリーム、軟膏、ゲル、ヒドロゲル、ローション、ペースト、凍結乾燥物、溶液の状態でおこなわれる。種々の溶液の状態の水性調製物が好ましい。
【００３３】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、審美的（ａｅｓｔｈｅｔｉｃ）または病的な観点から望ましくない脂肪分布障害が、脂肪性浮腫、脂肪腫、腹部の脂肪腫症、不具皮膚組織層炎、偽女性乳房、ＨＩＶ患者の水牛様脂肪沈着、蜂巣炎、または非特異性皮下脂肪貯蔵であることを特徴とする。
【００３４】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、または静脈内注射によって調製物の投与がおこなわれることを特徴とする。
【００３５】
本発明は、さらに、上記組成物を含む調製物の使用に関するもので、投与のために、イオントフォレシス、エレクトロポレーション、マイクロポレーション、またはフォノフォレシスからなる群から選択される方法が用いられることを特徴とする。
【００３６】
本発明の別の目的は、皮下（真皮下層）の脂肪組織、特に、脂肪分布の局所障害を処置する薬を製造するための組成物の使用である。
【００３７】
本発明の別の目的は、脂肪組織腫瘍を退縮および萎縮させる薬を製造するための組成物の使用である。
【００３８】
本発明の別の目的は、審美的（ａｅｓｔｈｅｔｉｃ）または病的な性質の皮下組織における望ましくない脂肪分布障害（例えば、脂肪性浮腫、脂肪腫、腹部の脂肪腫症、皮膚脂肪組織炎、偽女性乳房、ＨＩＶ患者の水牛様脂肪沈着、蜂巣炎、または非特異性皮下脂肪組織）を処置する薬を製造するための組成物の使用である。
【００３９】
組成物の本発明の使用によって、従来の調製物（特に、デオキシコール酢酸およびその塩を含む）を用いた皮下処置または外科的処置に関する上記リスクおよび副作用を、回避することができる。さらに、外来処置は、外科的処置に比べて、患者にとってよりいっそう快適かつ安価である。
【００４０】
上記の高い治療効果は、組成物を介して脂肪組織が急速に分解することによって証明されるものであり、１種類のリン脂質および／または１種類のグリチルリチン酸もしくはその塩からなる本発明の配合物の相互作用による相乗効果と関連している。現在クレームされている本発明の組成物の使用は、副作用が著しく減少することによって、または、部分的には既に述べた副作用のいくつかがないことによって、特徴づけられる。
【００４１】
皮下脂肪分布障害は、ヒトおよび哺乳類の体の脂肪組織が変化することであり、このような脂肪組織は、局在化した脂肪沈着として、遺伝的なものまたは食生活を原因として生じるもので、審美的な（ａｅｓｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ）面で気にかかる重要な領域、特に腹部、臀部、腰、膝、ふくらはぎ、大腿、上腕、顎、頬部と見なすことができる。したがって、脂肪腫（異所増殖）等の脂肪細胞の良性腫瘍を扱うこともできる。
【００４２】
本発明の文脈における脂肪組織障害の例として、脂肪腫（脂肪組織腫瘍）が挙げられ、これは良性であり、成長が遅く、通常、球形であり、おそらくは有茎状（＝有茎脂肪種（  Ｌ．  ｐｅｎｄｕｌｕｍ））もしくは絨毛性（ｓｈａｇｇｙ）（＝樹枝状脂肪種（Ｌ．  ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）、例えば滑膜）の間葉性腫瘍であり、場合によっては、中心性骨形成を伴うもの（＝骨化性脂肪腫（Ｌ．ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ））、粘液質でブロックされているもの（＝粘液腫様脂肪腫（Ｌ．ｍｙｘｏｍａｔｏｄｅｓ））または石灰化されているもの（＝化石性脂肪腫（Ｌ．ｐｅｒｔｒｉｆｉｃａｎｓ））、さらには、結合組織及び被膜形成の増大を伴うもの（＝線維性脂肪腫（Ｌ．ｆｉｂｒｏｓｕｍ）、血管新生を伴うもの（＝毛細血管拡張様脂肪腫（Ｌ．ｔｅｌｅａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ））、まれに悪性変性のもの（＝肉腫性脂肪腫（ｌ．ｓａｒｃｏｍａｔｏｄｅｓ）、脂肪肉腫）がある。これらは、病的なものとして分類されるべきである。なぜなら、これらは成長し、かつ結合組織鞘自体が痛みを伴うとともに、血管を圧迫して神経痛を引き起こし得るからである。これには、患者体内に脂肪種の堆積をもたらす多発性脂肪腫症も含まれる。
【００４３】
疾患ダーカム病（有痛性脂肪腫症と呼ばれている）は、真皮脂肪筋膜（ｄｅｒｍａｌ  ｆａｔ  ｆａｓｃｉａ）（カンパ（Ｋａｍｐａ）脂肪筋膜）と真皮の下側との間に位置する脂肪組織の肥大増殖の独特な形態である。ホルモン効果は、これらの脂肪細胞の水結合能を高め、さらには、圧力現象により、最初のシダ型のリンパ管の領域においてリンパン管系閉塞が生ずる。それによって、さらなる圧迫および刺激が末梢感覚神経に及ぼされるので、これらの患者はかなりの痛みを伴う触感受性を有する。数年から数十年のうちに、不規則な脂肪結節（老化にともなって薄化する真皮の下に局所的に散在）が形成され、痛みおよび強い感覚異常特性を呈する。
【００４４】
マデルング（Ｍａｄｅｌｕｎｇ）氏脂肪頸（ロノワ・バンソード症候群（Ｌａｎｏｉｓ−Ｂｅｎｓａｕｄｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ））は、脂肪組織増殖性の脂肪組織炎であり、異栄養脂肪組織腫瘍形成に加えて、皮下間隙に瘢痕様の結合組織圧迫をもたらす。この場合、外科的手技は、しばしば部分的にしか成功しない。なぜなら、必須の解剖学的構造がこのプロセスに関与しており、障害が頭部、頸部、肩部の領域で現れるからである。
【００４５】
脂肪性浮腫は脂肪組織の疼痛性腫脹であり、特に女性の下腿に生じ、年齢の上昇にともなって進行性の経過および特性を示す。
【００４６】
脂肪分解の退縮とは、脂肪組織の加水分解と、増殖した脂肪領域の流動化による萎縮とを意味する。
【００４７】
黄色板症は、眼の下の脂肪の黄色がかった蓄積である。
【００４８】
ＨＩＶ患者は、従来技術の薬物に起因する脂肪組織蓄積の障害（例えば、この患者群では牛頸と呼ばれる水牛様脂肪沈着）をしばしば呈する。免疫力が低下した患者は、通常、外科的除去を受けることができないので、脂肪沈着が残り、患者は、外見的には紅斑を生じる。
【００４９】
上述の脂肪組織障害は、分化組織の変化または実体を病理学的に明らかに示しており、それは食事に関連した脂肪肥厚（それもまた、脂肪分布障害の観点から言えば、脂肪沈着に帰着する）とは対照的なものであって、組織学的瘢痕および炎症パラメータのみならず、結合組織被包形成によって、さらには組織学的脂肪組織形態そのものの変化によって、特徴づけられる。
【００５０】
本発明の別の目的は、セルライト（ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ）／蜂巣炎（ｃｅｌｌｕｌｉｔｉｓ）を処置する薬を製造するための組成物の使用である。セルライトは脂肪組織の肥大増殖の特別な形であり、皮膚のファット筋膜（カンパ（Ｋａｍｐａ）脂肪筋膜）と真皮の下側との間に位置する。ホルモン効果は、これらの脂肪細胞の水結合能を高め、さらには、圧力現象により、最初のシダ型のリンパ管の領域においてリンパン管系閉塞が生ずる。数年から数十年のうちに、不規則な脂肪結節（老化にともなって薄化する真皮の下に局所的に散在）が形成され、痛みおよび強い感覚異常特性を呈する。
【００５１】
本発明の別の目的は、偽女性乳房と乳腺脂肪症とを処置する薬を製造するための組成物の使用である。偽女性乳房は、男性における乳腺（胸部）周囲の脂肪蓄積であり、乳房の膨張をもたらし、それは、第一に、審美的（ａｅｓｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ）に示される。乳腺脂肪症は、乳腺体の腫張のない偽女性乳房の形態である。
【００５２】
本明細書中で述べられる医薬調製物組成物に含まれるリン脂質は、任意の動物性または植物性の製品（とりわけ、例えば鶏卵、油分の多い種および果物（例えば、乾燥ココナッツ、ナツメヤシの種、南京豆、ナタネ、向日葵の種、亜麻仁）、パーム油および／またはオリーブ油）から生産される。最適なものは、欧州特許第００５４  ７７０（Ｂ１）号と欧州特許第００５４  ７６９（Ｂ１）号とに記載された大豆から得られるリン脂質である。
【００５３】
このリン脂質は純度が高く、１５ないし９８重量％、好ましくは３０ないし９８重量％、より好ましくは５０ないし９８重量％、特に好ましくは７５ないし９８重量％、最も好ましくは７５ないし９０重量％のホスファチジルコリンを含む。そのような高純度のリン脂質は、他のリン脂質成分、特に、最大で１５重量％、より好ましくは最大で１２重量％のホスファチジルエタノールアミン、最大で８重量％のホスファチジン酸、最大で１０重量％のホスファチジルイノシトール、最大で６重量％のリソホスファチジルコリンまたはリソホスファチジルエタノールアミン、微量のホスファチジルセリン、および小量の他の脂質を含む。
【００５４】
本発明はまた、１種類のグリチルリチン酸または数種類のグリチルリチン酸（グリチルリチン酸は生理学的に許容される塩として存在する）の使用に関する。グリチルリチン酸の生理学的に許容される塩として、とりわけ、一、二、もしくは三ナトリウム塩またはカリウム塩、マグネシウム塩、あるいはアンモニウム塩が用いられる。一、二、もしくは三ナトリウム塩またはカリウム塩およびアンモニウム塩が好ましく、より好ましくは一、二、三ナトリウム塩またはカリウム塩である。
【００５５】
リン脂質とグリチルリチン酸との質量比は、３０：１ないし０．５：１、好ましくは１５：１ないし０．５：１、より好ましくは４：１ないし１：１、最も好ましくは３：１ないし２：１である。
【００５６】
組成物中のリン脂質濃度は、０．５重量％ないし３０重量％、好ましくは５重量％ないし２５重量％である。
【００５７】
リン脂質とグリチルリチン酸またはその塩との推奨される総含有量は、２ないし８０重量％であると考えられる。この場合、リン脂質とグリチルリチン酸またはその塩との重量比は、３：１または４：１が好ましい。リン脂質とグリチルリチン酸またはその塩との間の重量比が２：１ないし３：１である場合、含有量が２ないし４５重量％のリン脂質とグリチルリチン酸またはその塩とが好ましい。
【００５８】
薬のｐＨ値は、ｐＨ６．０ないしｐＨ９．０、好ましくはｐＨ７．５ないしｐＨ８．５、より好ましくはｐＨ６．５ないしｐＨ７．５、とりわけｐＨ６．５ないしｐＨ７．０である。
【００５９】
必要に応じて、好適な助剤が加えられる。薬理学的に許容される助剤として、糖、とりわけ、マルトース、グルコース、乳糖、ソルビトールとマンニトール、およびそれらの誘導体、コロイド性珪酸およびその誘導体、シリカゲル、滑石、乳糖、澱粉、ゼラチン、水、水酸基が１つ以上のアルコール、特にエタノール、グリセロール、およびプロピレングリコール、天然または合成油、とりわけ石油、鉱油、落花生油、ダイズ油、胡麻油、およびエーテルが与えられる。さらに好適な添加剤は、セルロース、ショ糖、モルト、米、フッ素、カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、および脱脂粉乳である。特に皮下脂肪分解に好ましい助剤として、水、アルコール、とりわけエタノール、食塩水、マルトース、および水性デキストロースが挙げられる。
【００６０】
本明細書中で述べられる医薬組成物は、乾燥形態または液体形態で用いることができる。
【００６１】
液体形態として、液滴、溶液、懸濁液、エマルジョン、注射可能な懸濁液または注射可能なエマルジョン、リポソーム−ミセル系、ならびにリポソーム−ミセル−水系が挙げられる。
【００６２】
溶液、懸濁液、エマルジョン、注射可能な懸濁液、または注射可能なエマルジョンとしての液状調製物が好ましい。とりわけ、注射可能な懸濁液または注射可能なエマルジョンが好ましい。
【００６３】
とりわけ、水、別の溶媒、または好適な緩衝液（例えばトリス緩衝液）を加えた後に直ちに液体になる、上記の成分、助剤、または固体物質の液状調製物、例えば溶液、懸濁液、エマルジョン、注射可能な懸濁液、または注射可能なエマルジョンを、容易に、注射剤用に用いることができる。好ましくは、液状調製物を得る主成分として、凍結乾燥物が使われる。
【００６４】
本明細書中で述べられる医薬調製物を注射剤として使用することで、望ましくない副作用が生じない好適な溶媒を使用することが推奨される。このような溶媒として、例えば水、食塩水、グルコース、一価アルコール（例えば、エタノール、２−プロパノール、ｎ−プロパノール）、ポリヒドロキシアルコール（例えばグリセロールおよび／またはプロパンジオール）、ポリグリコール（例えばポリエチレングリコール）および／またはミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ））、グリセロールホルマール、ジメチルイソソルビトール、天然および合成の油ならびに／あるいはエーテルが、各々単独で、または組み合わされて、含まれる。一方、注射剤用として、リポソーム−ミセル系の使用が推奨される。
【００６５】
濃縮後のアルコールの残量は、０容量パーセント（容量％）から最大で２０容量％まで、好ましくは０容量％から最大で１０容量％まで、とすべきである。
【００６６】
本明細書中に述べられた調製物のうち、最適な適用形態は、１種類のリン脂質とグリチルリチン酸またはその塩を含む活性物質がリポソーム−ミセル−水系の形態で含有される混合物である。注射剤として設計されるそのようなリポソーム−ミセル−水系は、好ましくは６．０〜７．５のｐＨ値を有する。
【００６７】
本明細書中で述べられる医薬調製物の乾燥形態として、凍結乾燥物、錠剤、とりわけフィルム−コーティングされた錠剤および丸剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、および糖衣剤が挙げられる。凍結乾燥物が好ましい。
【００６８】
組成物が凍結乾燥物の形態で生産される場合、水またはトリス緩衝液を加えることは、注射に用い得る水−リポソーム系の形成をもたらす。
【００６９】
水−リポソーム系はまた、滅菌濾過することができ、粒径が相対的に小さく、３０ｎｍないし１８０ｎｍ、好ましくは３０ないし１３０ｎｍ、特に好ましくは３０ないし９０ｎｍのリポソームおよびミセルを高濃度で含む。これらのリポソームを、孔径が０．２μｍのフィルターを用いて、滅菌濾過することができる。
【００７０】
本明細書中で述べられる調製物（水溶液の形で作られる）は、好ましくはリポソーム−ミセル系の形態（透過性が高い）であり、貯蔵寿命が長く、かつ滅菌濾過することができる。当該系は、例えば、凍結乾燥によって乾燥させることができ、それによって安定な凍結乾燥混合物が得られる。
【００７１】
本明細書中で述べられた医薬調製物が注射液として使われる場合、活性物質の配合物を適用することがとりわけ推奨され、該配合物にはリン脂質とグリチルリチン酸の三ナトリウム塩とが含まれ、ホスファチジルコリンとグリチルリチン酸の三ナトリウム塩との重量比が１：１ないし４：１、好ましくは２：１ないし３：１である。
【００７２】
本発明の調製物の製造は、例えば、少なくとも１種類のリン脂質と少なくとも１種類のグリチルリチン酸とを溶解または分散することによって、おこなう。その後、溶液または分散液を濃縮し、続いて水を添加する。
【００７３】
調製物を製造する方法は、欧州特許出願公開第０  ４７０  ４３７（Ａ）号または欧州特許出願公開第０  ６１５  ７４６（Ａ）号にも記載されている。
【００７４】
必要に応じて、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウムまたはピロ亜硫酸ナトリウム、α‐トコフェロール）、防腐剤（例えばベンジルアルコールまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸塩））、あるいは懸濁化剤（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム）を、本発明にもとづいて使用される調製物に、添加してもよい。
【００７５】
調製物は、コロイド構造（例えばミセルまたは混合ミセル）を任意に含むこともできる。これらの構造の粒径は、１０ないし５００Åである。これらは、グリチルリチン酸とリン脂質とからなる。グリチルリチン酸とリン脂質との質量比は、重量％で０．１：２から２：１まで、好ましくは１：２からである。薬に含まれるコロイド構造中のリン脂質濃度は、５重量％ないし１５重量％、好ましくは１０重量％である。コロイド構造の製造は、例えば、グリチルリチン酸を水に溶かすこと（それにより溶液がわずかにアルカリ性になる）によって、おこなう。続いて、それにリン脂質を分散する。最後に、それを濾過する。
【００７６】
本発明にもとづいて使用される調製物および比較対象となる剤形の投与は、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、または静脈内注射によって、おこなう。皮下注射が好ましい。
【００７７】
さらに、種々の担体媒体に包含し、かつ種々の手段（例えばイオントフォレシス）を用いた経皮投与をクレームにする。本発明にもとづいて使用される調製物および剤形の一様な挿入を、一様な分布を確実にするために、静水圧を利用するチューメセント法によって、おこなってもよい。
【００７８】
さらにまた、経皮投与が可能になり、この経皮投与は、種々の担体媒体（例えば、クリーム、軟膏、ゲル、ヒドロゲル、ローション又はペースト）に包含して、かつ様々な手段（とりわけ、イオントフォレシス、マイクロポレーション、エレクトロポレーション、またはフォノフォレシス）を用いて、おこなうことができる。
【００７９】
好適な調製物および剤形の例として、懸濁液、エマルジョン、または注射液、さらには活性物質を持続放出する調製物であり、一般的な製造手段が使用される。調製物を、例えば安定性を高めるために、濃縮物、乾燥物、または凍結乾燥物として存在させてもよい。
【００８０】
好ましくは、医薬調製物は、用量単位で製造および投与されるもので、各々の単位に一定用量の調製物が活性成分として含まれることになる。アンプルの形態になった注射液の場合、この用量は、１ｍｌあたり、リン脂質に基づいて約１０ｍｇから最大で約２０００ｍｇ、好ましくは約５０ｍｇから最大で約２０００ｍｇ、より好ましくは２５０ｍｇから５００ｍｇまで、であってもよい。
【００８１】
成人患者に対する処置の場合、処置すべき脂肪組織の大きさにもよるが、注射可能な溶液の投与に際して、必要とされる日用量は、最大２００回で１回の注射あたり、リン脂質に基づいて、５ｍｇないし２５００ｍｇ、好ましくは２５０ｍｇないし２５００ｍｇである。さらに、投与前に、注射可能な溶液を、好ましくは生理食塩液で希釈することもとできる。しかし、特定の状況下では、日用量を増減させることが適当な場合もある。用量はまた、脂肪蓄積の大きさに依存し、脂肪腫が小さい場合、リン脂質に基づいて、脂肪腫あたり１２５ｍｇないし５００ｍｇ、好ましくは２５０ｍｇないし５００ｍｇの量で完全に十分である。日用量の投与は、単回投与の形態で、またはいくつかの少ない用量単位とすることで、あるいは細別された用量を所定の間隔で複数回投与することで、おこなうことができる。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１ａ】処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像
【図１ｂ】処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞のＣＬＳＭによる位相差像
【図１ｃ】ＰＩ染色後の処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞のＣＬＳＭによる位相差像
【図２】形成外科的縮小手術の過程で除去されるヒト皮下脂肪組織からのＡＤＳＣの単離を示す模式図
【図３ａ】デオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）処理後の分化ＡＤＳＣの光学顕微鏡像
【図３ｂ】デオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）処理後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像
【図３ｃ】デオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）処理後の分化ＡＤＳＣの共焦点レーザー走査顕微鏡像
【図４ａ】ホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理後の分化ＡＤＳＣの光学顕微鏡像
【図４ｂ】ホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像
【図４ｃ】ホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像
【図５】処理済み分化３Ｔ３ーＬ１細胞のＣＬＳＭによる位相差像
【図６】処理済み分化３Ｔ３ーＬ１細胞のＣＬＳＭによる像
【図７】処理した分化３Ｔ３−Ｌ１細胞を用いた脂肪分解アッセイのグラフ図
【図８ａ−ｃ】Ｂａｌｂ／ｃマウスの脂肪組織へのＡＤＳＣ皮下注射後のルシフェラーゼ標識細胞のバイオルミネセンス像
【図８ｄ−ｆ】Ｂａｌｂ／ｃマウスの脂肪組織へのＡＤＳＣ皮下注射後のルシフェラーゼ標識細胞のバイオルミネセンス像
【図８ｇ−ｉ】Ｂａｌｂ／ｃマウスの脂肪組織へのＡＤＳＣ皮下注射後のルシフェラーゼ標識細胞のバイオルミネセンス像
【図９】処理された分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像
【図１０】被験者Ｎｏ．０１のホスホグリブおよびリポスタビル処置後の記録写真
【図１１】被験者Ｎｏ．０２のホスホグリブおよびリポスタビル処置後の記録写真
【発明を実施するための形態】
【００８３】
本発明を以下の実施例によってより詳細に説明する。
【００８４】
実施例１：皮下使用のための注射液の調製
０．２ｇ（８％）のグリチルリチン酸の三ナトリウム塩と、
１．８ｇ（７２％）のマルトースと、
４．５ｍｌの水と
からなる溶液と、
０．５ｇ（２０％）の大豆由来のリン脂質および
０．５ｍｌ（２０％）の９６パーセントエタノールの分散液とを、
不活性気体下で、十分に混合した。
【００８５】
リン脂質とグリチルリチン酸の塩とのの総含有量は、２８％であった。リン脂質とグリチルリチン酸の塩との比率は、２．５：１であった。
【００８６】
エマルジョンを音波処理（ＭＳＥソニプレプ（Ｓｏｕｉｐｒｅｐ）１５０粉砕機、英国）によって１分間の休みを含む３０秒間にわたり、４℃で分散した。約１０分後に、リポソーム懸濁液が形成された。
【００８７】
リポソーム懸濁液を０．２μｍフィルターでろ過して、その後、凍結乾燥した。
【００８８】
リポソーム懸濁液（５．０ｍｌ）は、５時間以内に凍結乾燥した。それによって、塊になっていない、わずかに黄色がかった粉体が約２．５ｇ得られた。
【００８９】
皮下注射液用に、アンプルに入った２．５ｇの調製物を９．０ｍｌの溶媒（水またはトリス緩衝液）に溶かした。
【００９０】
実施例２：皮下使用のためのリポソーム−水系の製造
５０ｇの大豆由来精製リン脂質（８２．５重量％のリン脂質＋３．５重量％のホスファチジルコリン、最大で１０重量％までのホスファチジルエタノールアミン、０．６重量％のリゾホスファチジルコリン、最大１０重量％の他の脂質）と、０．２５ｇのホスファチジルグリセロールナトリウム塩との溶液を、２５０ｍｌエタノールで調製した。調製した溶液を真空下で還元した。
【００９１】
結果として得られるリン脂質（約２０％）の混合物を、５００ｍｌの水（前もって、２０．０ｇ（７．９９％）のグリチルリチン酸の三ナトリウム塩と１８０．０ｇ（７１．９２％）のイソマルトースとを含む）と混合することで、不活性ガス流に分散した。
【００９２】
リン脂質とグリチルリチン酸の塩との総含有量は、２８．０７％であった。リン脂質とグリチルリチン酸の塩との比率は、２．５：１であった。
【００９３】
この分散液を、６００バールでの高圧ホモジナイゼーションに５回かけた。結果として生じるリポソーム系を０．２μｍフィルターで濾過し、不活性気体雰囲気下で１０．０ｍｌのアンプルに充填した。この生成物は、以下のような特性を有していた。
【００９４】
外見：透明でわずかに乳白色の液体、
ｐＨ値：６．５、
透明度（６６０ｎｍ）：８５％、
平均粒径（レーザー散乱）：７５ｎｍ、
無菌：必要に応じる、
顕微鏡的性質（凍結固定）：３０〜９０ｎｍの大部分が単層のリポソーム、単一二重層のリポソーム
【００９５】
アンプルに充填された調製物の透明度を、貯蔵後２、６、９、および１２ヶ月に調べた。調製物１の当初の清澄性との違いはなかった。
【００９６】
実施例３：３Ｔ３−Ｌ１細胞に対するホスファチジルコリンの膜障害効果の検討
膜完全性および安定性に対するホスファチジルコリンの効果を生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で試験するために、分化した３Ｔ３−Ｌ１細胞を、異なる濃度のホスファチジルコリンと４時間および２４時間にわたってインキュベートした後、光学顕微鏡法によって解析した。
【００９７】
モデル系として、マウス前脂肪細胞系３Ｔ３−Ｌ１を研究に用いた。３Ｔ３−Ｌ１細胞を、従来のホルモンカクテル（コルチコステロン、イソブチルメチルキサンチン、インドメタシン、インシュリン）によって刺激することで、脂質生成させ、さらに８日間にわたって分化させることで、脂肪細胞に成熟させた。
【００９８】
３Ｔ３−Ｌ１細胞の成熟脂肪細胞を、種々の濃度のホスファチジルコリンで処理した。
【００９９】
はじめに、ホスファチジルコリン原液を調製した。すなわち、７０％エタノールに溶かした５００ｍｇ／ｍｌホスファチジルコリンである。
【０１００】
ホスファチジルコリンの使用濃度を以下の通りとした。すなわち、１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌである。
【０１０１】
図１ａは、１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、および２０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンによって処理した２４時間後の３Ｔ３−Ｌ１細胞の光学顕微鏡像を示す。また、図１ｂでは、ホスファチジルコリンで処理した３Ｔ３−Ｌ１細胞の６３倍での詳細な共焦点レーザー顕微鏡（ＣＬＳＭ）像を観ることができる。図１ｃは、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した、ホスファチジルコリン処理後の３Ｔ３−Ｌ１細胞を示す。
【０１０２】
図１ａ：二次元細胞培養されている処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中の未処理細胞
（ｂ）ホスファチジルコリン1mg/ml、２４時間後
（ｂ）ホスファチジルコリン５mg/ml、２４時間後
（ｄ）ホスファチジルコリン１０mg/ml、２４時間後
（ｅ）ホスファチジルコリン１５mg/ml、２４時間後
（ｆ）ホスファチジルコリン２０mg/ml、２４時間後
（サイズバー＝１００μｍ）。
【０１０３】
図１ｂ：倍率６３倍でＣＬＳＭを用いて得られた、二次元培養中の処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像。
処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間後の未処理細胞。
（ｂ）ホスファチジルコリン１ｍｇ／ｍｌ、４時間後
（ｃ）ホスファチジルコリン５ｍｇ／ｍｌ、４時間後
（ｄ）ホスファチジルコリン１０ｍｇ／ｍｌ、４時間後
（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１０４】
図１ｃ：倍率６３倍でＣＬＳＭを用いて得られた、ＰＩ染色後の二次元培養中の処理済み分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像（ＰＣ）。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝エタノール中の未処理細胞。
（ｂ）陽性対照＝分化培地＋１％トリトン中の未処理細胞
（ｃ）ホスファチジルコリン５ｍｇ／ｍｌ、４時間後
（ｄ）ホスファチジルコリン１０ｍｇ／ｍｌ、４時間後
（ｅ）ホスファチジルコリン１５ｍｇ／ｍｌ、４時間後
インキュベーション（４時間）後、脂肪細胞を５μｇ／ｍｌのＰＩで染色し、ＣＬＳＭによって解析した。上側ＰＩ列（ａ〜ｅ）では、ＰＩ染色細胞の蛍光像が示されている。下側ＰＣ列（ａ〜ｅ）では、互いに重ね合わせられた蛍光像とともに、対応する位相差像が示されている（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１０５】
ホスファチジルコリンで処理された細胞（図１ａおよび１ｂ）には、未処理の対照群との形態学的差異が見られない。したがって、ホスファチジルコリンは細胞毒性を持たない。相当濃度（２０ｍｇ／ｍｌ）デオキシコール酸ナトリウムによって、細胞膜が明らかに破壊された。このような破壊は使用濃度のホスファチジルコリンでは起こっていない。
【０１０６】
ホスファチジルコリンが細胞毒性を持たないことは、処理した細胞のＰＩ染色によって確認された。
【０１０７】
この目的のために、分化した３Ｔ３−Ｌ１を５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、および１５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンで４時間にわたり処理した。その後、５分間にわたって５ｇ／ｍｌのＰｌを培地に添加し、細胞をＣＬＳＭで解析した（図１ｃ）。
【０１０８】
対照（図１ｃ（ａ））に対してはエタノールを添加することで、細胞処理用の溶液中の濃度と同じ濃度にした。図１ｃ（ａ）は、細胞がＰＩで染色されないことを示している。使用濃度ではエタノールには細胞毒性がなかったと、結論づけられる。
【０１０９】
図１ｃ（ｂ）には、１％トリトンによる陽性対照がＰｌによって赤く染められた数多くの細胞が示されている。このことは、細胞膜の損傷を示している。ここでは、細胞の膜安定性および完全性が損なわれている。
【０１１０】
比較すると、処理した細胞のなかには、検出可能な赤く染まった細胞は存在しない（図１ｃ（ｃ）ないし（ｅ））。その結果として、これらの細胞は、膜安定性および完全性が損なわれていない。したがって、ホスファチジルコリンは分化３Ｔ３−Ｌ１細胞に対する損傷効果を持たない。
【０１１１】
この結果は、光学顕微鏡解析との相関性（図１ａと図１ｂを比較）が高く、ここではホスファチジルコリンの細胞損傷効果も観察されなかった。
【０１１２】
実施例４：ヒト皮下脂肪組織からの脂肪由来幹細胞（ＡＤＳＣ）の抽出
臨床適用にアプローチするために、追実験において、ヒト間葉系幹細胞による異なるモデル系を用いた。
【０１１３】
ヒト皮下脂肪組織は、成体幹細胞の潜在的な供給源として、用いられ得る。これらのいわゆる「脂肪由来幹細胞」（ＡＤＳＣ）は、多分化能を有し、適当な刺激を受けることで種々の細胞型（例えば、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞）に分化することが可能である。形成外科的縮小手術（ｐｌａｓｔｉｃ  ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ  ｓｕｒｇｅｒｙ）の過程で除去されるヒト皮下脂肪組織からのＡＤＳＣの単離を、図２に模式的に示す。
【０１１４】
最初に、脂肪を緩衝液で洗うことで造血細胞を取り除き、続いて脂肪をつぶした。得られた脂肪組織片をコラゲナーゼで消化した。消化処理した組織を遠心することで、間質血管分画を分離し、浮いている成熟細胞を破棄した。ペレットに含まれる間質血管分画は、血液細胞、繊維芽細胞、周皮細胞、血管内皮細胞、および前脂肪細胞の不均一な細胞集団から構成される。
【０１１５】
この細胞集団を培地の入った培養瓶に移したところ、この培養瓶に細胞の一部が付着した。好適なカクテル、すなわちインシュリン、デキサメタゾン、インドメタシン、およびイソブチルメチルキサンチンからなるカクテルまたはインシュリン、コルチゾール、トログリタゾン、トリヨードサイロニン、およびイソブチルメチルキサンチンからなるカクテルを加えることで、脂肪生成に関して細胞を刺激することで、改善された脂肪細胞分化が達成された。
【０１１６】
実施例５：ＡＤＳＣのホスファチジルコリンおよびデオキシコール酸ナトリウムの膜損傷効果の検討
デオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）
実施例４のＡＤＳＣを、ホルモンカクテル（インシュリン、コルチゾール、トログリタゾン、トリヨードサイロニン、およびイソブチルメチルキサンチン）によって刺激することで脂肪生成させ、さらに２１日間にわたって成熟脂肪細胞に分化させた。
【０１１７】
この後に、デオキシコール酸ナトリウムによる処理を施した。このために、以下の濃度を用いた。すなわち、
０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０７５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、および０．５ｍｇ／ｍｌである。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
インキュベーション期間を４時間とした。
【０１１８】
この濃度範囲は、既に３Ｔ３−Ｌ１に効果的であることが証明されている。４時間にわたるインキュベーションの後、続いて、分化した処理細胞を光学顕微鏡法によって観察した（図３ａ）。
【０１１９】
さらに、デオキシコール酸ナトリウム処理したＡＤＳＣをＣＬＳＭで調べた。分化した成熟脂肪細胞を、
４時間にわたり、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムで処理した。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
これに続いて、６３倍の倍率でＣＬＳＭによる顕微鏡解析をおこなった（図３ｂ）。
【０１２０】
ＡＤＳＣに対するデオキシコール酸ナトリウムの細胞損傷効果のさらなる解析を、処理細胞のＰＩ染色とそれに続くＣＬＳＭによる解析とによって、おこなった。分化した成熟脂肪細胞を、
４時間にわたり、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、および０．５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムで処理した。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
【０１２１】
次に、細胞を、５ｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを含む培地で、５分間にわたってインキュベートした。これに続いて、６３倍の倍率でＣＬＳＭによる顕微鏡解析をおこなった（図３ｃ）。
【０１２２】
図３ａ：二次元細胞培地において種々の濃度のデオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣの光学顕微鏡像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）０．０１ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｃ）０．０５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｄ）０．０７５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｅ）０．１ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｆ）０．５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
黒矢印は、損傷した膜を有する細胞または細胞断片を示している。白矢印は、遊離脂肪滴を示している。
（サイズバー＝１００μｍ）。
【０１２３】
図３ｂ：二次元細胞培地において種々の濃度のデオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）０．０１ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｃ）０．０５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｄ）０．１ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
黒矢印は、損傷した膜を有する細胞または細胞断片を示している。白矢印は、遊離脂肪滴を示している。
（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１２４】
図３ｃ：二次元細胞培地において種々の濃度のデオキシコール酸ナトリウム（Ｎａ−ＤＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣの共焦点レーザー走査顕微鏡。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）陽性対照＝分化培地＋１％トリトン中の未処理細胞
（ｃ）０．０５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｄ）０．１ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
（ｅ）０．５ｍｇ／ｍｌのＮａ−ＤＣ、４時間後
インキュベーション（４時間）後、脂肪細胞を５μｍ／ｍｌのＰＩで染色し、ＣＬＳＭによって解析した。上側ＰＩ列（ａ〜ｅ）では、ＰＩ染色細胞の蛍光像が示されている。下側ＰＫ列（ａ〜ｅ）では、互いに重ね合わせられた蛍光像とともに、対応する位相差像が示されている。
（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１２５】
０．０１ｍｇ／ｍｌというあまりにも低いデオキシコール酸ナトリウム濃度では、細胞に対する効果がなかった（図３ａ（ｂ））。対照（図３ａ（ａ））との差異は観られなかった。脂肪細胞は生きていて、完全な細胞膜を有していた。０．０５ｍｇ／ｍｌからの濃度上昇は、既に、軽微な損傷を細胞膜にもたらされていた（図３ａ（ｃ））。このことは、次のより高い濃度で増強された（図３ａ（ｄ、ｅ））。最も高い用量０．０５ｍｇ／ｍｌは、細胞に対して著しい細胞毒性を及ぼした（図３ａ（ｆ））。脂肪細胞が致死し、細胞膜が完全に破壊されたことで、基本的に遊離脂肪滴と細胞断片のみになった。ＡＤＳＣに対するデオキシコール酸ナトリウムの効果は、３Ｔ３−Ｌ１に対する効果と異ならなかった。そのことは、同一の用量効果関係に設定される可能性がある。両方のモデル系において、０．０５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムで膜損傷効果が生じ、さらに０．５ｍｇ／ｍｌの濃度が非常に有毒であることがわかった。
【０１２６】
処理した細胞を共焦点顕微鏡によってより詳細に検査することで、既になされた観察を確認することができた。０．０１ｍｇ／ｍｌ、という低濃度のデオキシコール酸ナトリウム（図３ｂ（ｂ））が細胞に対して細胞毒性を示さなかった一方で、濃度０．１ｍｇ／ｍｌ（図３ｂ（ｄ））では強い膜損傷が生じた。このことは、デオキシコール酸ナトリウムの特徴的な膜損傷効果を証明するものである。
【０１２７】
この効果は、デオキシコール酸ナトリウム処理後のＡＤＳＣ細胞をヨウ化プロピジウムで染色することによって、再度確認された。
【０１２８】
１％トリトンによる陽性対照では、ＰＩによって染色された赤い細胞が鮮明に見られ、膜損傷細胞であることが示されている（図３ｃ（ｂ））。
【０１２９】
０．０５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムによる処理の後、赤く染まった細胞は検出されず、したがって膜の完全性および安定性が損なわれた細胞も検出されなかった（図３ｃ（ｃ））。０．１ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムによる処理の後、個々の赤く染まった細胞が検出可能であり、したがって膜の完全性および安定性が損なわれた細胞もわずかに検出可能であった（図３ｃ（ｄ））。０．５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムによる処理の後、鮮明に赤く染まった多くの細胞が検出可能であり、したがって膜の完全性および安定性が損なわれた多くの細胞が検出可能であった（図３ｃ（ｅ））。
【０１３０】
これは、ＡＤＳＣに対する０．５ｍｇ／ｍｌ濃度のデオキシコール酸ナトリウムの膜損傷効果を明らかに示す。
【０１３１】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）
デオキシコール酸ナトリウムと同様に、ホスファチジルコリンについても膜損傷効果を調べた。
【０１３２】
この目的のためにデオキシコール酸ナトリウムによる実験と同じように、実施例４のＡＤＳＣを用い、ホルモンカクテル（インシュリン、コルチゾール、トログリタゾン、トリヨードサイロニン、およびイソブチルメチルキサンチン）によって成熟脂肪細胞に分化させた。
【０１３３】
次いで、ホスファチジルコリンによる処理をおこなった。このために、以下の濃度を用いた。すなわち、
１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌである。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
インキュベーション期間を４時間とした。
【０１３４】
この濃度範囲は、既に３Ｔ３−Ｌ１において効果的であることが証明されている。４時間のインキュベーション期間の後分化した処理細胞を、光学顕微鏡法によって確認した（図４ａ）。
【０１３５】
さらに、ホスファチジルコリン処理ＡＤＳＣをＣＬＳＭによって調べた。分化した成熟脂肪細胞を、
１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、および１５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンで４時間にわたり処理した。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
これに続いて、６３倍の倍率でＣＬＳＭによる顕微鏡解析をおこなった（図４ｂ）。ＡＤＳＣに対するホスファチジルコリンの細胞損傷効果のさらなる解析を、処理細胞のＰＩ染色とそれに続くＣＬＳＭによる解析とによって、おこなった。分化した成熟脂肪細胞を、
５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、および１５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンで４時間にわたり処理した。
対照として、未処理のＡＤＳＣを用いた。
次に、細胞を、５μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムを含む培地で５分間にわたってインキュベートした。これに続いて、６３倍の倍率でＣＬＳＭによる顕微鏡解析をおこなった（図４ｃ）。
【０１３６】
図４ａ：二次元細胞培地において種々の濃度のホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣの光学顕微鏡像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）１ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｃ）５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｄ）１０ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｅ）１５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｆ）２０ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（サイズバー＝１００μｍ）。
【０１３７】
図４ｂ：二次元細胞培地において種々の濃度のホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）１ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｃ）５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｄ）１５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１３８】
図４ｃ：二次元細胞培地において種々の濃度のホスファチジルコリン（ＰＣ）による処理がなされた後の分化ＡＤＳＣのＣＬＳＭ像。処理を以下の通りとした。すなわち、  
（ａ）対照＝分化培地中４時間の未処理細胞
（ｂ）陽性対照＝分化培地＋１％トリトン中の未処理細胞。
（ｃ）５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｄ）１０ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
（ｅ）１５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、４時間後
インキュベーション（４時間）後、脂肪細胞を５μｇ／ｍｌのＰＩで染色し、ＣＬＳＭによって解析した。上側ＰＩ列（ａ〜ｅ）では、ＰＩ染色細胞の蛍光像が示されている。下側ＰＫ列（ａ〜ｅ）では、互いに重ね合わせられた蛍光像とともに、対応する位相差像が示されている（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１３９】
ホスファチジルコリンに関するＡＤＳＣ細胞モデルにおける３Ｔ３−Ｌ１（実施例３）の観察に一致して、細胞毒性は確立されなかった（図４ａ）。ＰＣ濃度に関係なく、細胞は生存しており、形態学的変化を示さない。
【０１４０】
それとは対照的に、Ｎａ−ＤＣに関して、既にＮａ−ＤＣ濃度０．０５ｍｇ／ｍｌで、損傷が示され、ＡＤＳＣ濃度０．５ｍｇ／ｍｌで致死した（図３ｃ）。
【０１４１】
ホスファチジルコリン処理後にＡＤＳＣをＣＬＳＭにより観察したところ、細胞（４ｂ）に対する損害が存在しないことが確認された。未処理の対照と１５ｍｇ／ｍｌ処理のＡＤＳＣとの両方が無傷の形態を示した。したがって、ホスファチジルコリンは細胞毒性を持たない。
【０１４２】
ホスファチジルコリンで処理したＡＤＳＣのＰＩ染色によって、ホスファチジルコリンが生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）細胞毒性を有しないことを確認した。
【０１４３】
１％トリトンによる陽性対照では、ＰＩによって染色された赤い細胞が鮮明に見られ、膜損傷細胞であることが示されている（図４ｃ（ｂ））。
【０１４４】
５、１０、および１５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウムによる処理後ならびに各々のＰＩ染色後、赤色に染まった細胞はなく、またそのことから、検出可能な膜の完全性および安定性が損なわれた細胞はなかった（図４ｃ（ｃ）ないし（ｅ））。
【０１４５】
このことは、ホスファチジルコリンによる処理がＡＤＳＣに対する膜損傷効果を持たないことを、はっきり示している。
【０１４６】
対照的に、デオキシコール酸ナトリウムによってＡＤＳＣの膜完全性および安定性が著しく損なわれた（図３ｃ（ｄ、ｅ））。
【０１４７】
デオキシコール酸ナトリウムおよびホスファチジルコリンによる実験は、デオキシコール酸ナトリウムのみが細胞毒性効果を有し、ホスファチジルコリンには細胞毒性効果がないことを示している。ホスファチジルコリンは、細胞膜または細胞に対して損傷を生じさせない。これらの観察を、光学顕微鏡法、ヨウ化プロピジウム染色後の蛍光顕微鏡法等のいくつかの方法を用いて確認した。
【０１４８】
物質の効果は、長時間にわたる研究期間中、変化しなかった。すなわち、２時間のインキュベーションと２４−時間のインキュベーションとが同一効果であることは、既に明らかである。デオキシコール酸ナトリウムによる実験では、この胆汁酸塩が膜を不安定化させ、かつネクローシス性であることが示された。生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での必要用量を評価した後、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で使われるデオキシコール酸ナトリウムの量が細胞毒性を示すと思われる。
【０１４９】
生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）でのホスファチジルコリンに関して、細胞毒性が示されることがなかった。このことは、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の場合におそらく当てはまる。このリン脂質は、細胞毒性を示さなかった。
【０１５０】
実施例６：ホスファチジルコリン、グリチルリチン酸塩、およびマルトースの配合物の検討
新規の物質配合物（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）の効果を検討した。この配合物は、
５０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン（ＰＣ）、
２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチル酸三ナトリウム、および
１８０ｍｇ／ｍｌのマルトースからなる。
【０１５１】
最初に、膜損傷および細胞毒性効果に関する用量反応相関を決定し、脂肪分解活性に関する試験をおこなった。
【０１５２】
モデル系として、マウス前脂肪細胞系３Ｔ３−Ｌ１を研究に用いた。３Ｔ３−Ｌ１細胞を、ホルモンカクテル（コルチコステロン、イソブチルメチルキサンチン、インドメタシン、インシュリン）によって刺激することで、脂質生成させ、さらに８日間にわたって分化させることで、脂肪細胞に成熟させた。
【０１５３】
３Ｔ３−Ｌ１細胞の成熟脂肪細胞を、０．１ｍｇ／ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌとの間の種々の濃度のホスファチジルコリンとともにインキュベートした。ホスファチジルコリンを、２〜２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩と１８〜１８０ｍｇ／ｍｌのマルトースとともに配合した。
【０１５４】
成熟３Ｔ３−Ｌ１細胞のインキュベーションをこの物質配合物とともに４時間にわたり実施した。
【０１５５】
次に、膜の不安定化および細胞毒性について、光学顕微鏡により倍率６３倍で、処理細胞を調べた。
【０１５６】
結果を、図５および図６に示す。
【０１５７】
図５：二次元細胞培養されている処理済み分化３Ｔ３ーＬ１細胞のＣＬＳＭによる位相差像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中の未処理細胞
（ｂ）５ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋  ２ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１８ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｃ）１０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋４ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋３６ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｄ）２０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋８ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋７２ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｅ）３０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋１２ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１０８ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｆ）５０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１８０ｍｇ／ｍｌのマルトース
（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１５８】
図６：二次元細胞培養されている処理済み分化３Ｔ３ーＬ１細胞のＣＬＳＭによる像。処理を以下の通りとした。すなわち、
（ａ）対照＝分化培地中の未処理細胞
（ｂ）陽性対照＝分化培地＋１％トリトン中の未処理細胞
（ｃ）２０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋８ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋７２ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｄ）３０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋１２ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１０８ｍｇ／ｍｌのマルトース
（ｅ）５０ｍｇ／ｍｌのＰＣ＋２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１８０ｍｇ／ｍｌのマルトース
インキュベーション期間（４時間）の後、脂肪細胞を５μｇ／ｍｌのＰＩで染色し、ＣＬＳＭにより解析した。左側ＰＩ列（ａ〜ｅ）にＰｌ染色細胞の蛍光像を示す。右側ＰＫ列（ａ〜ｅ）では、互いに重ね合わせられた蛍光像とともに、対応する蛍光像が示されている（サイズバー＝２０μｍ）。
【０１５９】
物質配合物で処理された脂肪細胞は、対照細胞（対照図５ａ）と異ならなかった。光学顕微鏡下で脂肪細胞は対照の細胞と同じ形態を示し、脂肪細胞は生きていて、完全な細胞膜を有していた。物質配合物は、濃度に関係なく、細胞に対して目に見える膜損傷効果を及ぼさなかった（図５）。
【０１６０】
無傷の膜完全性を確認するために、処理３Ｔ３−Ｌ１細胞および対照のＰＩ染色を実施した。このために、以下の濃度の物質配合物を用いた。すなわち、
２０ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン、
８ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、および２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩、ならびに７２ｍｇ／ｍｌ、１０８ｍｇ／ｍｌ、および１８０ｍｇ／ｍｌのマルトースである。
【０１６１】
インキュベーション期間を４時間とした。次に、処理細胞および２種類の対照を５μｇ／ｍｌのＰＩと５分間にわたりインキュベートした。解析は、ＣＬＳＭを用いて実施した（図６）。
【０１６２】
トリトンＸによる細胞の処理によって、膜完全性が損なわれた。このような理由で、ヨウ化プロピジウムが細胞内に入ることができ、膜が不安定化した細胞を染色することができた。予想していたように、陽性対照（図６ｂ）は、トリトンＸによって透過性を付与された細胞が染色されることを示した。陰性対照である未処理の細胞（図６ａ）は、ＰＩによって染色されなかった。このことは、これらの細胞の膜が完全なことを示す。
【０１６３】
２０ｍｇ／ｍｌのＰＣ（図６ｃ）および３０ｍｇ／ｍｌのＰＣ（図６ｄ）で処理した細胞は、ＰＩによる染色を示さなかった。したがって、これらの細胞は、膜の損傷を示さず、また使用した物質配合物は細胞毒性効果を示さなかった（図６ｃ、ｄ）。
【０１６４】
５０ｍｇ／ｍｌのＰＣで処理した細胞（図６ｅ）では、薄く赤色に染まることが示された（図６ｅ）。これらの細胞を高用量の物質配合物で処理した。それによって、細胞から培地を完全に取り去ることで栄養分の欠乏が生じ、長期間にわたるインキュベーションで細胞障害に至った。したがって、５０ｍｇ／ｍｌＰＣ処理細胞が薄く染まったことは、栄養分の欠乏に起因し得るものであり、ホスファチジルコリンによる細胞の損傷に起因し得るものではない。
【０１６５】
ホスファチジルコリン、グリチルリチン酸塩、およびマルトースの物質配合物は、実施された生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験において、膜損傷効果を示さなかった。留意すべきことは、本発明の物質配合物の潜在的な膜損傷を検出するために、かなりの高濃度を使用した。この濃度は、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で治療に用いられる濃度よりも著しく高い。
【０１６６】
生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）効果と生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）効果との関係は、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）／生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）相関として知られている。生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）／生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）相関を決定することは重要であり、種々の条件で異なった決定がおこなわれる。多くの場合、おおよそ、計算係数（ca. factor)
１００の生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）／生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）相関を仮定することができる。このことは、類似の効果を達成するために、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で使用される濃度が生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で使用される用量よりも、おおよそ小数二位の１０乗（ａｂｏｕｔ  ｔｗｏ  ｄｅｃｉｍａｌ  ｐｏｗｅｒｓ  ｏｆ  ｔｅｎ）少ないことを意味する。これをもとに、例えば、注射脂肪分解用のリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｎについて、表１に示す生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）濃度が考えられる。
【０１６７】
【表１】
2013525407.tif 000002
【０１６８】
デオキシコール酸ナトリウムの場合、単一の調製物として、同様にリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）に含まれる物質として、計算にもとづく予想生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）濃度は、容積（ｓｉｚｅ）に換算すると、実験にもとづいて決定される濃度と一致する（表１）。そこから、この物質が脂肪溶解注射における使用濃度で、細胞障害効果の可能性が非常に高いと結論することができる。
【０１６９】
したがって、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）治療に使用される本発明にもとづく物質配合物の濃度が従来のものと同じ細胞膜損傷を生じることは、極めて希である。したがって、同じ換算係数を、ホスファチジルコリンとグリチルリチン酸との配合物に想定することができる。
【０１７０】
実施例７：マウスにおける処理細胞の炎症反応についての生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）検討
炎症が脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）の移動の誘因となることから、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、グリチルリチン酸（ＧＲ）、およびマルトース（ＭＡＬ）を含む混合物（図８ｄ〜ｆ）（２５ｍｇ／ｍｌのＰＣ、１０ｍｇ／ｍｌのＧＲ、９０ｍｇ／ｍｌのＭＡＬ）、ＰＢＳ緩衝液（図８ｇ〜ｉ）、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞（図８ａ〜ｃ）のいずれかを、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右側皮下脂肪組織に注射した。インキュベーションは５日間、おこなった。
【０１７１】
続いて、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０の染色をおこない、細胞の炎症反応を調べた。
【０１７２】
さらに、脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）をレンチウイルス発現ベクターｅＧＦＰ／ルシフェラーゼによって標識し、ＢＡＬＢ／ｃマウスの反対側の脂肪組織に、最初の注射から４８時間後に注射した。
【０１７３】
ＡＤＳＣ細胞の移動を、バイオルミネセンスによって観察した。実施例７の結果を図８に示す。
【０１７４】
図８：Ｂａｌｂ／ｃマウスの右側脂肪組織にＡＤＳＣを皮下注射した後のルシフェラーゼ標識細胞のバイオルミネセンス像
（ａ〜ｃ）大腸菌細胞
（ｄ〜ｆ）ホスファチジルコリン＋マルトース＋グリチルリチン酸（ＰＭＣ）
（ｇ〜ｉ）ＰＢＳ緩衝液
４８時間後、ルシフェラーゼ標識ＡＤＳＣ細胞を各例に腹膜内注射し、バイオルミネセンスを用いてＡＳＣ細胞の移動を観察した。マウス（ｄ〜ｉ）において、ＡＳＣ細胞は、肝臓および脾臓に移動した。マウス（ａ〜ｃ）において、ＡＳＣ細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）注射によって感染した領域に移動し、そこに蓄積した。
【０１７５】
ＰＢＳ（図８ｇ〜ｌ）のマウスおよびＰＣ含有混合物のマウス（図８ｄ〜ｆ）では、ＡＤＳＣ細胞の移動に差は見られなかった。対照的に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を注射されたマウスでは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）注射により感染した領域でのＡＤＳＣ細胞の移動および蓄積が観察された。
【０１７６】
したがって、ここでは、ルシフェラーゼ標識脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）によって、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、グリチルリチル酸三ナトリウム、およびマルトースを含む混合物の生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）注射では炎症反応が生じないことが示された。このことは、混合物が注射された皮下脂肪組織にルシフェラーゼ標識ＡＤＳＣ細胞が移動も蓄積もしなかったという事実を通して、立証された。
【０１７７】
これらの結果から、ホスファチジルコリンをグリチルリチン酸と配合した場合に、重篤な炎症反応を引き起こすことなく脂肪分解性活性物質としてホスファチジルコリンを用いることができることが、確認される。
【０１７８】
実施例８：物質配合物の脂肪分解作用についての生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）検討
３Ｔ３−Ｌ１細胞をホルモンカクテルによって刺激することで脂肪生成させ、さらに８日間にわたって成熟脂肪細胞に分化させた。
この後、
１０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン、
４ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、および２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩、
３６ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、ならびに１８０ｍｇ／ｍｌのマルトースとともに、
細胞を４時間インキュベートした。
脂肪分解活性は、後述するように、脂肪分解アッセイを用いて測定した。
【０１７９】
脂肪分解アッセイの方法
トリグリセリドからグリセロールおよび３つの脂肪酸への分解は、脂肪分解として知られている。このプロセスは、ホルモン感受性リパーゼと脂肪トリグリセリドリパーゼとによって、主に触媒される。脂肪分解アッセイを用いて、細胞の脂肪分解活性を検出することができる。このアッセイは、脂肪分解の過程で生ずるグリセロールの測定に基づくもので、グリセロールが細胞から培地中に分泌される。グリセロールは、酵素反応によって、グリセロール−１−リン酸に代謝され、さらにジヒドロキシアセトンリン酸に代謝される。それによって過酸化水素が生じ、この過酸化水素の定量を、ペルオキシダーゼ染色法反応を用いる分光光度計によっておこなう。物質の脂肪分解作用について説明するために、物質同士の比較を、細胞の基礎脂肪分解活性およびβ−アドレナリン作動受容器によって刺激される脂肪分解について、おこなった。そのような刺激は、イソプロテレノールによって起こすことができる。
【０１８０】
実施例８の結果を図７に示す。
【０１８１】
図７：処理した分化３Ｔ３−Ｌ１細胞を用いた脂肪分解アッセイ（μｇグリセロール／μｇＤＮＡ）の解析のグラフ図。３Ｔ３−Ｌ１をホルモン誘導カクテルによって刺激することで脂肪生成させ、８日間にわたって分化させた。成熟脂肪細胞の処理は、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ中、４時間にわたり、以下のものによっておこなった。すなわち、
１０μＭのイソプロテレノール（刺激された脂肪分解の陽性対照）
１０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋４ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋３６ｍｇ／ｍｌのマルトース
２５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋１０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋９０ｍｇ／ｍｌのマルトース
５０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋２０ｍｇ／ｍｌのグリチルリチン酸塩＋１８０ｍｇ／ｍｌのマルトース
基礎脂肪分解活性の対照として、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の未処理の細胞を用いた。バーは、ｎ＝３の標準偏差を示す。実験は、二回おこなった。（ＰＣ＝ホスファチジルコリン）
【０１８２】
図７の第１のバーは、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の未処理の細胞の基礎脂肪分解活性がＤＮＡ１μｇあたりグリセロール８μｇ（８μｇグリセロール／μｇＤＮＡ）であることを示している。この基礎レベルに基づいて、他の試料の脂肪分解活性を決定した。陽性対照（図７）では、脂肪分解の刺激を、β−アドレナリン受容体アゴニストである１０μＭのイソプロテレノールによって、誘導した。陽性対照は脂肪分解活性を示しており、この活性が基礎レベルの８倍まで増加している。物質配合物（１０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのＰＣ）によって処理された細胞すべてにおいて、基礎レベルと比較して、脂肪分解活性の増加が見られた（図７）。１０または２５ｍｇ／ｍｌのＰＣを含む物質配合物による細胞の処理によって、基礎レベルと比較して、脂肪分解活性が５倍増加した。５０ｍｇ／ｍｌのＰＣを含む物質配合物での細胞の処理は、基礎レベルと比較して、脂肪分解活性の３倍増加につながった（図７）。最大濃度での脂肪分解活性の減少は、すでに説明されるように、おそらく以下の事実に起因すると思われる。すなわち、細胞の生存または正常な機能（例えば、脂肪分解活性）に必要である培地が取り除かれていることから、細胞は栄養分が欠乏している。
【０１８３】
本発明の物質配合物は、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で顕著な脂肪分解効果を示す。
【０１８４】
比較例１：（ホスファチジルコリンとデオキシコール酸ナトリウムとを含むリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標））
０．００５〜０．５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム濃度（０．０５ｍｇ／ｍｌ以上で単一物質としての効果）および０．０１〜１ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン濃度（単一物質としての効果なし）を用いた。
手順は、実施例８と同様であった。
比較例１の結果を図９に示す。
【０１８５】
図９：処理された分化３Ｔ３−Ｌ１細胞の位相差像。３Ｔ３−Ｌ１をホルモン誘導カクテルによって刺激することで脂肪生成させ、８日間にわたって分化させた。成熟脂肪細胞を、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）由来ホスファチジルコリンおよびデオキシコール酸ナトリウムを以下の濃度で用いて、２４時間にわたり処理した。
（ａ）対照＝分化培地中の未処理細胞
（ｂ）０．０１ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋０．００５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム、
（ｃ）０．１ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋０．０５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム、
（ｄ）０．２５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋０．１２５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム、
（ｅ）０．５ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋０．２５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム、
（ｆ）１ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリン＋０．５ｍｇ／ｍｌのデオキシコール酸ナトリウム。
【０１８６】
解析は、光学顕微鏡を用いておこなった。損傷した膜を有する細胞または細胞断片を、具体例として黒矢印で示す。一方、遊離の脂肪滴を白矢印で示す。
【０１８７】
最も低濃度のホスファチジルコリンおよびデオキシコール酸ナトリウムが効果を示さないままであった（図９ｂ）。その一方で、次に高い濃度では、軽微な損傷が細胞に見られた（図５ｃ）。このような損傷は、濃度が増加するにつれて大きくなった。図５ｅにおいて、細胞膜が著しく影響を受けており、ホスファチジルコリンの濃度が０．５ｍｇ／ｌであるとともにデオキシコール酸ナトリウムの濃度が０．２５ｍｇ／ｍｌであるリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）によって、細胞が著しく損傷を受けており、かつネクローシスによる細胞死が生ずることを示している。リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）の効果の性質は、デオキシコール酸ナトリウムの界面活性剤作用（細胞膜への典型的な損傷）に、よりいっそう匹敵するものであり、その効果は明らかによりいっそう重要である。単剤としてのホスファチジルコリンのそのような典型的膜損傷効果は、検出される可能性はないことから、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）の細胞毒性が主にデオキシコール酸ナトリウムから生ずることが示唆される。リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）の有効濃度範囲と個々の物質の有効濃度範囲との比較は、デオキシコール酸ナトリウムの優位性効果に関する結論を支持する。単剤としてのホスファチジルコリンが効果的でなかった一方で、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）は、濃度が０．１ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンで、すでに軽微な効果を達成した（この濃度では、単剤としてのＰＣには効果が見られなかった）。しかし、濃度が０．０５ｍｇ／ｍｌ以上では、一回量としてのデオキシコール酸ナトリウムは、既に最初の膜損傷を生じた。このことは、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）によってもその濃度で生じた。
【０１８８】
実施例９：ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）の女性被験者への投与、および皮下脂肪分解の有効性の決定
肝臓疾患に今まで使われてきたホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）静注（ｉ．ｖ．）は、ＤＣ（リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）に含まれる）の代わりに、グリチルリチン酸を含む。最初の実験結果および二人の被験者についての検討は、有意に良好な耐性で、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）Ｎ静注（ｉ．ｖ．）と同様の効果を示した。
【０１８９】
本明細書中で述べられる実験は、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）のリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）に相当する効果が、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）のより良好な耐性を伴うことを示している。
【０１９０】
管理下の前向き研究では、６人の女性被験者の左上腕部をホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）で処置し、右上腕部をリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）で処置した。
【０１９１】
使用したアンプルは、０．５ｇのＰＰＣ、０．２ｇのグリチルリチン酸塩、および１．８ｇのマルトースを凍結乾燥物（１回の注射あたり１０ｍｌの水で溶解される）として含むものであった。注射される領域の範囲によって、最高６０箇所の皮下穿刺を各上腕におこなった（１．５ｃｍ間隔でそれぞれ０．５ｍｌ）。
【０１９２】
調製物の効果の検査時期：
処置は、１６週間続けた。検査は処置開始１日前（ｔ＝−１）、初回処置日（ｔ＝０）、処置開始後８週目（ｔ＝８）、および処置開始後１６週目（ｔ＝１６）におこなった。
【０１９３】
効果の判定
効果を判定するために、被験者の上腕の周囲を測定した。上腕［ｃｍ］の周囲は、処置の前に、そして、８と１６週後にカリパス（キャリパー）および巻き尺（マイオテープ）を使用して測定した。
【０１９４】
また、血液脂肪総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、およびＨＤＬコレステロールをｍｇ／ｄｌで判定し、さらにＬＤＬコレステロールとのＨＤＬコレステロールとの動脈硬化指数を判定した。
【０１９５】
結果の提示
測定値から、ベースラインからの差としての測定値変化ならびにベースライン値および標準偏差からのパーセント変化を、判定した。
【０１９６】
【表２】
2013525407.tif 000003
Ｃａｌ  ｌｉ＝カリパス左側；Ｃａｌ  ｒｅ＝カリパス右側；Ｍｙｏ  ｌｉ＝マイオテープ左側；Ｍｙｏ  ｒｅ＝マイオテープ右側；Ｐ＝ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）；Ｌ＝リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）；ＤｅＩ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の限定的な改善。医師；ＤｅＩＰ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の限定的な改善。患者；ＤｒＩ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の劇的な改善。医師；ＤｒＩＰ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の劇的な改善。患者。
【０１９７】
被験者の上腕の周囲は、測定用カリパスまたはマイオテープ型カリパスの選択された方法によって異なった。使用された方法に無関係に、各々の例において、上腕周囲の減少が検出可能であった。ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）とリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）との間に、明白な差はなかった。これらの化合物は両方とも、上腕周囲の減少を同程度に誘導した（表３−１および３−２を参照）。
【０１９８】
【表３−１】
2013525407.tif 000004
【０１９９】
【表３−２】
2013525407.tif 000005
【０２００】
表３−２から明らかなように、カリパーを用いることで、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）による上腕周囲の減少が８週後に１９．２１％および１８．２９％になったことが明らかである。１６週後では、カリパーを用いて上腕周囲の減少が２１．２２％および２１．０４％になったと判定された。したがって、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）両方の化合物が同一の有効性を有している。
【０２０１】
【表４−１】
2013525407.tif 000006
【０２０２】
【表４−２】
2013525407.tif 000007
【０２０３】
表４−２から明らかなように、マイオテープ方法によれば、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）による上腕周囲の減少が８週後に７．６２％および６．９７％になったことが明らかである。１６週後では、マイオテープを用いて上腕周囲の減少が９．８１％および９．８９％になったと判定された。したがって、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）両方の調製物が同一の有効性を有している。
【０２０４】
カリパーおよびマイオテープの両方の方法が化合物による異なる減少を示しているが、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）およびリポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）の両方の有効性の度合いは、等しい。
【０２０５】
実施例１０：リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）処置による副作用の評価
この目的のために、実施例９に述べたような処置を女性被験者に対して実施し、その有効性を試験した。副作用を記録するために、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）による処置の前後に、女性被験者の上腕を撮像した（図１０および１１）。
【０２０６】
３分後、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）処置された被験者Ｎｏ．１の右上腕に、顕著な赤みと腫れがあると判定した。それと比較して、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）処置された左上腕では、わずかな赤みと腫れのみであると判定した。この表現型は、細胞に対する膜損傷効果を持たないホスファチジルコリンに対する生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験の結果を裏付けている（実施例５、図４ａ−ｃ）。図１１の被験者Ｎｏ．２の像は、上腕左側（ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標））と上腕右側（リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標））との間で、同じような差を示している。
【０２０７】
図１０：被験者Ｎｏ．０１の上腕左側（ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標））および上腕右側（リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標））の処置後の記録写真。像は、調製物リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標））の投与後３分に撮った。
【０２０８】
図１１：被験者Ｎｏ．０２の上腕左側（ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標））および上腕右側（リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標））の処置後の記録写真。像は、調製物リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）およびホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標））の投与後３分に撮った。
【０２０９】
さらに、副作用を下記の表５にまとめた。
【０２１０】
【表５】
2013525407.tif 000008
Ｐ＝ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）；Ｌ＝リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）
【０２１１】
１および２回目の処置の後に医師および被験者が言及したことは、一様に全例で、上腕脂肪パッドの明らかなまたは劇的な改善（減少）がなされたこと、  さらにホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）に対する耐性が著しく良好であったことである。皮膚抵抗は、処置後、全例で良好だった。
【０２１２】
表５のデータは、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）処置後の被験者の愁訴に、注射部位の腫れ、発赤、および痛みが含まれることを示している。そのような副作用は、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）処置の過程ではほとんど、またはまったく生じない。したがって、ホスホグリブ（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｉｖ）（登録商標）は、調製物リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）よりも、対象となった被験者によって、著しく良好に許容された。上記のように、その良好な耐性は、細胞障害の減少または起こらないことに、起因している。実施例５に示すように、ホスファチジルコリンは、細胞膜に損傷を与えない。一方、リポスタビル（Ｌｉｐｏｓｔａｂｉｌ）（登録商標）由来のデオキシコール酸ナトリウムは細胞に損傷を与える。
【０２１３】
実施例１１：皮下脂肪分解前後でのコレステロールレベルの判定
この目的のために、被験者の血液脂肪を治療期間中、観察した。総コレステロール、ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）コレステロール、およびＨＤＬ（高密度リポタンパク質）コレステロールを判定した。表６に、期間がｔ＝−１、ｔ＝８週間、およびｔ＝１６週間の場合の値をまとめた。
【０２１４】
平均的に、血中脂質は、治療期間、同じ方向に変化した。総コレステロールおよびＬＤＬコレステロールが著しく減少した２人の被験者（ＩＢおよびＣｈ．Ｋ．）の場合のみ、その値は低下し、その一方でＨＤＬコレステロール（表６）が上昇した。本研究の概要を、表７に示す。
【０２１５】
他の生化学制御変数ＡＳＴ、ＡＬＴ、γ−ＧＴ、ビリルビン、クレアチニンおよびグルコースは、正常の範囲内に留まっていたが、被験者Ｓ．Ａのγ−ＧＴはわずかに上昇した（処置前は正常の範囲内）。
【０２１６】
【表６】
2013525407.tif 000009
商ＬＤＨ／ＨＤＬ  −１週目  １．６４
（目標値＜３）    ８週目    １．４１
１６週目  １．６５
ＬＤＬコレステロール＝低密度リポプロテインコレステロール
ＨＤＬコレステロール＝高密度リポプロテインコレステロール
【０２１７】
【表７】
2013525407.tif 000010
2013525407.tif 000011
2013525407.tif 000012
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2013525407.tif 000014
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ＤｅＩＰ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の限定的な改善。患者；ＤｒＩ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の劇的な改善。医師；ＤｒＩＰ  ＝有効性（ｅｆｆｉｃａｎｃｙ）および適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）の劇的な改善。患者。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
2013525407.tif 000017
【図１ｃ】
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【図２】
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【図３ａ】
2013525407.tif 000020
【図３ｂ】
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【図３ｃ】
2013525407.tif 000022
【図４ａ】
2013525407.tif 000023
【図４ｂ】
2013525407.tif 000024
【図４ｃ】
2013525407.tif 000025
【図５】
2013525407.tif 000026
【図６】
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【図７】
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【図８ａ−ｃ】
2013525407.tif 000029
【図８ｄ−ｆ】
2013525407.tif 000030
【図８ｇ−ｉ】
2013525407.tif 000031
【図９】
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【図１０】
2013525407.tif 000033
【図１１】
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【国際調査報告】
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