(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに指向性を有するアミノ酸配列と、これを含むタンパク質、構築物及び化合物と、またこれをコードする核酸とに関する。  ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の変異体であるアミノ酸配列であって、ＰＭＰ１１９Ａ３のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）突然変異Ｈ３７Ｙ及び突然変異Ｍ４３Ｋの内の少なくとも１つ又は両方と、（ｉｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉｉ）５つのヒト化置換の内の少なくとも１つ、又は少なくとも２つ、又は少なくとも３つ、又は少なくとも４つと、（ｉｖ）任意で１つ又は複数の更なる好適なアミノ酸置換とを含む、ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の変異体であるアミノ酸配列。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の変異体であるアミノ酸配列であって、ＰＭＰ１１９Ａ３のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）突然変異Ｈ３７Ｙ及び突然変異Ｍ４３Ｋの内の少なくとも１つ又は両方と、（ｉｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉｉ）５つのヒト化置換の内の少なくとも１つ、又は少なくとも２つ、又は少なくとも３つ、又は少なくとも４つと、（ｉｖ）任意で１つ又は複数の更なる好適なアミノ酸置換とを含む、ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の変異体であるアミノ酸配列。
【請求項２】
１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）の変異体であるアミノ酸配列であって、ＰＭＰ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉ）５つのヒト化置換の内の少なくとも１つ、又は少なくとも２つ、又は３つ、４つと、（ｉｉｉ）任意で１つ又は複数の更なる好適なアミノ酸置換とを含む、１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）の変異体であるアミノ酸配列。
【請求項３】
１１９Ａ３ｖ１７（配列番号３）の変異体であるアミノ酸配列であって、１１９Ａ３ｖ１７のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉ）任意で１１９Ａ３ｖ１７の配列と比較して１つ、２つ又は３つ等の１つ〜５つの更なるアミノ酸差異とを含む、１１９Ａ３ｖ１７（配列番号３）の変異体であるアミノ酸配列。
【請求項４】
１１９Ａ３ｖ１８（配列番号４）、１１９Ａ３ｖ２０（配列番号５）、１１９Ａ３ｖ２１（配列番号６）又は１１９Ａ３ｖ２２（配列番号７）から選ばれるアミノ酸配列。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列から本質的になるタンパク質又はポリペプチド。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、１つ又は複数の他の基、残基、部分、結合ドメイン又は結合単位とを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、１つ又は複数の他の免疫グロブリン単一可変ドメイン、ＶＨＨ、（単一）ドメイン抗体、ナノボディ又はｄＡｂとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対する１つ又は複数の他の免疫グロブリン単一可変ドメイン、ＶＨＨ、（単一）ドメイン抗体、ナノボディ又はｄＡｂとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する１つ又は複数の他の免疫グロブリン単一可変ドメイン、ＶＨＨ、（単一）ドメイン抗体、ナノボディ又はｄＡｂとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対するナノボディである別のナノボディとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１２】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対するナノボディである別のナノボディとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対するナノボディである別のナノボディとを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、８１Ａ１２（国際公開第０９／０６８６２７号の配列番号１９３６）である別のナノボディ、又は８１Ａ２ｖ１２〜８１Ａ１２ｖ５（国際公開第０９／０６８６２７号の配列番号２５８０〜配列番号２５８５）の１つから選ばれる該（ヒト化）変異体、又は該更なるヒト化変異体とを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸配列と、８１Ｇ２（国際公開第０９／０６８６２７号の配列番号１９３０）である別のナノボディ、又は８１Ｇ２ｖ１〜８１Ｇ２ｖ１１（国際公開第０９／０６８６２７号の配列番号２５８６〜配列番号２５９７）の内の１つから選ばれる該（ヒト化）変異体、又は該更なるヒト化変異体とを含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１６】
ペグ化、アルブミンとの融合、血清アルブミンと結合することができるナノボディの包含、又は血清アルブミン結合ペプチドの結合から選ばれる修飾により半減期の増大がもたらされた、請求項５〜１５のいずれか一項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに指向性を有するアミノ酸配列と、これを含むタンパク質、構築物及び化合物と、またこれをコードする核酸とに関する。
【０００２】
本発明の更なる態様、実施の形態、特徴、利点、使用、用途及び利点は本明細書の更なる記載から明らかとなるであろう。
【背景技術】
【０００３】
本出願人による「ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列、並びにこれを含むポリペプチド（Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/ortheir receptors and polypeptides comprising the same）」と題された特許文献１に係る国際出願は、ｐ１９と呼ばれるヘテロ二量体サイトカインＩＬ−２３のサブユニットに対するアミノ酸配列を記載している（ＩＬ−３０Ｂ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１６５８４）とも呼ばれる。ヘテロ二量体サイトカインに関しては、特許文献１の例えば２頁から３頁にまたがる段落で引用された従来技術も参照する）。
【０００４】
明細書中に特にはっきりと言及されていなければ、本明細書で言及される用語は全て、特許文献１で（又は特許文献１に引用された従来技術で）与えられる意味を有する。また、方法又は技法が本明細書で具体的に記載されていない場合、方法又は技法を特許文献１に（又は特許文献１に引用される従来技術に）記載のように実施することができる。例えば、「ナノボディ」という用語は、特許文献１で記載されたようなものであり、そのため特定の態様では包括的に、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ（例えばラクダ化ヒトＶＨ）を意味する。
【０００５】
特許文献１は、（特許文献１に記載されるように）ｐ１９に指向性を有する多くのアミノ酸配列を記載している（例えば特許文献１の表Ａ−２、並びに特許文献１の図２０〜図２１及び実施例に言及される「Ｐ１９＋」配列及び「Ｐ１９−」配列を参照されたい）。特許文献１は、これらのＰ１９配列のヒト化変異体、並びにＩＬ−２３（に存在するｐ１９サブユニット）に指向性を有し、少なくとも１つのかかるｐ１９配列を含む、多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの構築物（特許文献１に記載されている）も記載している。例えば特許文献１の１７３頁（最下段落）〜１７５頁（第１段落）、並びに特許文献１の図３０、図３１、図３２及び図３３、並びに特許文献１の実施例に言及される構築物を参照する）。
【０００６】
特許文献１によるＰ１９サブユニットに対するアミノ酸配列の特に好ましい例の一つは１１９Ａ３と呼ばれる配列である（特許文献１の配列番号１８９８を参照されたい）：
EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRIFSLPASGNIFNLLTIAWHRQAPGMQRELVATINSGSRTNYADSVKGRFTISRDNAQKTVYLQMNNLKPEDTAVYYCQTSGSGSPNFWGQGTQVTVSS（配列番号１）
【０００７】
特許文献１は、多くの１１９Ａ３変異体、特に変異体Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ）（特許文献１の配列番号２５５９）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｍ４３Ｋ）（特許文献１の配列番号２５６０）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（特許文献１の配列番号２５６０、配列番号２として添付の配列表にも示される）、並びにＰ２３ＩＬ  １１９Ａ３−ＢＡＳＩＣ及びＰ２３ＩＬ１１９Ａ３Ｖ１〜Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３Ｖ１７（特許文献１の配列番号２５６１〜配列番号２５７９。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３Ｖ１７の配列は配列番号３として添付の配列表にも示される）と呼ばれる、１１９Ａ３の一連のヒト化変異体（Ｈ３７Ｙ突然変異及びＭ４３Ｋ突然変異を有する）も記載している。
【０００８】
特許文献１は、１１９Ａ３又はそのヒト化変異体を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの構築物の非限定的な例の更に幾つかを示す（例えば配列番号２１５１〜配列番号２１５９、配列番号２５３３、配列番号２５３７、配列番号２５３９、配列番号２５４１〜配列番号２５４７及び配列番号２６１５〜配列番号２６２８を参照されたい）。
【０００９】
２００９年５月２７日付けの、Ablynx. N.V.により出願され「ＩＬ−２３に指向性を有する二重パラトピックタンパク質構築物（Biparatopic protein constructs directed against IL-23）」と題された特許文献２は、１１９Ａ３及びそのヒト化変異体を含む構築物を含む、ＩＬ−２３に指向性を有する二重パラトピックタンパク質構築物を記載している。この出願の実施例１では、１１９Ａ３及びＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの結合相互作用も記載されている。
【００１０】
概して、特許文献１及び特許文献２の抗ｐ１９配列及び構築物は優れた生体活性及び他の所望の特性を示す。しかしながら、このことは（更に）改善された特性を有する抗ｐ１９配列が当該技術分野にとって重要な付加事項（addition）とならないことを意味してはいない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第０９／０６８６２７号
【特許文献２】米国仮出願第６１／１８１，３８４号
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、かかる改善されたｐ１９結合配列（binders）、特に配列１１９Ａ３（配列番号１）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）及びＰＭＰ１１９Ａ３ｖ１７（配列番号３）の（更に）改善された変異体を提供する。
【００１３】
本発明により提供されるアミノ酸配列は７８位（特許文献１に従ったナンバリング）にバリン残基を含む、１１９Ａ３のヒト化変異体である。好ましい態様では、本発明のアミノ酸配列は７８位（特許文献１に従ったナンバリング）にバリン残基を含む、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）のヒト化変異体であり得る。これに関連して、「野生型」ＰＭＰ１１９Ａ３は自然状態で７８位にＶを含有し、また特許文献１が、７８位にＶを含有するＰＭＰ１１９Ａ３の３つの変異体（それぞれＰ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ）（配列番号２５５９を参照されたい）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｍ４３Ｋ）（配列番号２５６０を参照されたい）、及びＰ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２５６１を参照されたい）と呼ばれる）も記載しているが、これらの変異体はいずれも本明細書で記載されるようなヒト化置換を含有していないことに留意すべきである（以下に記載のように、突然変異Ｈ３７Ｙは「特徴的な（Hallmark）残基」での突然変異であり、突然変異Ｍ４３Ｋは或る「ラクダ（camelid）残基」を別の「ラクダ残基」に置き換えたものである）。特許文献１に記載の１１９Ａ３の全てのヒト化変異体（特許文献１では「Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３Ｂａｓｉｃ」から「Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１７」と呼ばれる）は、２つの突然変異Ｈ３７Ｙ及びＭ４３Ｋ、並びに少なくとも１つのヒト化置換（例えばＡ１４Ｐ、Ｑ７５Ｋ又はＮ８２ｂＳ）に加えて、７８位にロイシンを含有することにも留意すべきである。
【００１４】
一般的に、アミノ酸配列の「ヒト化変異体」は本明細書に記載されるような１つ又は複数の「ヒト化」置換を含む変異体である。好ましくは、野生型配列１１９Ａ３と比較して、本発明のアミノ酸配列は少なくとも１つのかかるヒト化置換、好ましくは少なくとも２つのかかるヒト化置換、好ましくは少なくとも３つのヒト化置換を含有する。また、更に野生型配列１１９Ａ３と比較して、本発明のアミノ酸配列は最大７つのヒト化置換、好ましくは合計で３つ、４つ又は５つのヒト化置換を含むのが好ましい（ただし選ばれるヒト化置換に応じて場合によっては、その最大数が重要ではないこともある）。かかるヒト化置換の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書の更なる記載から明らかとなり、例えばＡ１４Ｐ、Ｑ７５Ｋ、Ｎ８２ｂＳ及び／又はＡ４９Ｓを包含するが、これらに限定されない。
【００１５】
また本明細書に更に記載されるように、本発明のアミノ酸配列は１つ又は複数の他の／更なる置換を含有することができる。さらに、かかる他の／更なる置換の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書の更なる記載から明らかとなり、例えば以下の置換（本明細書では「置換（ａ）〜置換（ｃ）」とも称される）の内の１つ又は複数を包含し得る（好ましくはこれらから本質的になる）：
（ａ）１つ若しくは複数の保存的アミノ酸置換；並びに／又は
（ｂ）或る特定位置の「ラクダ」アミノ酸残基を上記位置に生じる異なる「ラクダ」アミノ酸残基に置き換える１つ若しくは複数の置換（これに関しては例えば図１〜図４を参照する）。かかる置換の幾つかの非限定的な例はＶ５Ｌ、Ｍ４３Ｋ（ヒトＶＨ及びＶＨＨの両方においてこの位置に最もよく見られる残基への置換）、Ｓ４９Ａ及び／若しくはＡ７４Ｓである；並びに／又は
（ｃ）タンパク質の（他の）特性を改善する１つ又は複数の置換、例えばタンパク質の保存下での長期にわたる安定性及び／若しくは特性を改善する置換。これらは例えば、酸化事象（例えばメチオニン残基の酸化事象）を防ぐ若しくは低減する置換、ピログルタメート形成を防ぐ若しくは低減する置換、及び／若しくはアスパラギン酸若しくはアスパラギン（例えばＤＧモチーフ、ＤＳモチーフ、ＮＧモチーフ又はＮＳモチーフのもの）の異性化若しくは脱アミド化を防ぐ若しくは低減する置換であり得るが、これらに限定されない。かかる置換に関しては、例えば概してかかる置換により単一免疫グロブリン可変ドメインを安定化する方法に関し、好適な置換の幾つかの具体例も示す（例えば４頁〜５頁及び１０頁〜１５頁を参照されたい）、国際公開第０９／０９５２３５号に係る国際出願を参照する。かかる置換の一例は、８２ａ位及び８２ｂ位のＮＳモチーフをＮＮモチーフに置き換えることであり得る；又は
上述の置換（ａ）〜置換（ｃ）の内のいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ。
【００１６】
本発明のアミノ酸配列は、それぞれ１１９Ａ３、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）及び１１９Ａ３ｖ１７の配列の各々と比較して少なくとも１つの「アミノ酸差異」を含有することが本明細書の開示から明らかであろう（ここで「アミノ酸差異」という用語は、特許文献１で記載されるものと同じ意味で、すなわち第１の配列の或る位置での第２の配列と比較した単一アミノ酸残基の挿入、欠失又は置換として本明細書で用いられる。２つのアミノ酸配列は、１つ、２つ又はそれ以上のかかるアミノ酸差異を含有することができることが理解される。本発明との関連では、任意のアミノ酸差異は置換であるのが好ましい）。
【００１７】
特に１１９Ａ３及びＰ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）の配列と比較して、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも１つのヒト化置換（本明細書で記載されている）を含有し、任意で１つ又は複数の更なる置換（例えば本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）を含有し得る。
【００１８】
ヒト化配列１１９Ａ３ｖ１７と比較して、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも置換Ｌ７８Ｖを含有し、任意で１つ若しくは複数の更なるヒト化置換（本明細書で記載されている）、及び／又は任意で１つ若しくは複数の更なる置換（例えば本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）、又はかかるヒト化置換と、かかる他の置換との好適な組合せを含有し得る。
【００１９】
好ましい態様では、本発明のアミノ酸配列は、１１９Ａ３の野生型配列と比較して、合計で７個〜１５個、好ましくは９個〜１３個、例えば１０個、１１個又は１２個のアミノ酸差異（特許文献１で用いられる定義を参照することにより本明細書で記載されている）を含有する。上述のように、これらの差異は、好ましくは少なくとも置換Ｈ３７Ｙ及び／又はＭ４３Ｋの内の１つ、好ましくは両方と、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、例えば３つ、４つ又は５つのヒト化置換とを含み、任意で１つ又は複数の更なる置換（例えば本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）を含んでいてもよい。更に本明細書の開示に基づき、任意で限定的な試行錯誤の後に、当業者は１つ又は複数のかかる好適なヒト化置換及び／又は更なる置換（の好適な組合せ）を選択することが可能であろう。
【００２０】
別の特定の態様では、本発明のアミノ酸配列は、１１９Ａ３ｖ１７の配列と比較して１つ、２つ又は３つ等の合計で１つ〜５つのアミノ酸差異を含有し、ここでこれらのアミノ酸差異の少なくとも１つが置換Ｌ７８Ｖであり、他の置換は、例えばいずれか１つ若しくは複数の更なるヒト化置換（１１９Ａ３ｖ１７に既に存在するヒト化置換は別のものである（compared to））、及び／又は１つ若しくは複数の更なる置換（例えば本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）であってもよく、好ましくはこれらの置換である。更に本明細書の開示に基づき、任意で限定的な試行錯誤の後に、当業者は１つ又は複数のかかる好適なヒト化置換及び／又は更なる置換（の好適な組合せ）を選択することが可能であろう。
【００２１】
また最も好ましくは、１１９Ａ３及び／又は１１９Ａｖ１７と比較したこれらのアミノ酸差異は、フレームワーク領域（カバットナンバリングに従って規定され、更に特許文献１も参照する）に位置するのが最も好ましいが、これは、（これらのアミノ酸差異が所望の親和性、結合速度（on-rate）又は解離速度（off-rate）を（過度に）損なわない限り、非常に限られた数（例えば１つ又は２つのみ）のこれらのアミノ酸差異がＣＤＲに存在し得ることを完全に排除するものではない（例えばＣＤＲにおけるかかるアミノ酸差異が親和性成熟の結果として導入されてもよい）。１つのＣＤＲにおける好適な置換の好ましいが非限定的な例は、置換Ｎ５２Ｅであり得る。
【００２２】
本発明のアミノ酸配列の好ましいが非限定的な例は、７８位がバリンである以外は、配列１１９Ａ３ｖ１７と一致する配列１１９Ａ３ｖ１８である（１１９Ａ３ｖ１７は７８位にロイシンを含む）。
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFSLPASGNIFNLLTIAWYRQAPGKGRELVATINSGSRTYYADSVKGRFTISRDNSKKTVYLQMNSLRPEDTAVYYCQTSGSGSPNFWGQGTLVTVSS（配列番号４）
【００２３】
本発明の他のアミノ酸配列は例えば、１１９Ａ３ｖ１８の配列と比較して１つ、２つ又は３つ等の合計で１つ〜５つのアミノ酸差異を含有することができ（ただし７８位はバリンのままである）、ここでかかるアミノ酸差異は、例えばいずれか１つ若しくは複数の更なるヒト化置換（例えばヒト化置換Ａ４９Ｓ等）、及び／又は本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ若しくはいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ（例えば置換Ｎ５２Ｅ及び／又は置換Ｓ８２ｂＮ等）であってもよく、最も好ましくはこれらの置換によるものである。１１９Ａ３ｖ１８のかかる変異体の幾つかの好ましいが非限定的な例は、１１９Ａ３ｖ２０（配列番号５）、１１９Ａ３ｖ２１（配列番号６）及び１１９Ａ３ｖ２２（配列番号７）であり、これらの特定の変異体（及び本明細書に更に記載されるようなこれを含む本発明のポリペプチド）は本発明の更なる態様を形成する。
【００２４】
本発明では概して、７８位にバリンを含む１１９Ａ３のヒト化変異体（好ましくは本明細書に更に記載されるようなものである）が、７８位にロイシンを含む１１９Ａ３の（対応する）ヒト化変異体と比較してより安定であり、より高い発現若しくは生産収率を与えることができ、かつ／又は他の利点を有し得ることが見出された。特定の解釈又は仮説に限定されるものではないが、このことは、７８位にバリンを含む１１９Ａ３のヒト化変異体（のフレームワーク配列）がナノボディを所望の免疫グロブリンドメイン構造へとより良好にフォールディングすることができること、及び／又は７８位にバリンを含む１１９Ａ３のヒト化変異体がフォールディングの際に、より安定した免疫グロブリンドメイン構造の形を取ることによるものであり得ると考えられている。
【００２５】
このため、具体的であるが非限定的な態様では、本発明は、ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の（ヒト化）変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）であって、ＰＭＰ１１９Ａ３のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）突然変異Ｈ３７Ｙ及び突然変異Ｍ４３Ｋの内の少なくとも１つ、好ましくは両方と、（ｉｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉｉ）（本明細書に記載されるような）５つのヒト化置換の内の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、４つと、（ｉｖ）任意で１つ又は複数の更なる好適なアミノ酸置換（好ましくは本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）とを含む、ＰＭＰ１１９Ａ３（配列番号１）の（ヒト化）変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）に関する。
【００２６】
上述のように、１１９Ａ３のかかる変異体は、（ｉ）１１９Ａ３の野生型配列と比較して、合計で７個〜１５個、好ましくは９個〜１３個、例えば１０個、１１個又は１２個のアミノ酸差異と、（ｉｉ）最大７つのヒト化置換、好ましくは合計で３つ、４つ又は５つのヒト化置換（ただし選ばれるヒト化置換に応じて場合によっては、その最大数が重要ではないこともある）とを含有するのが好ましい。
【００２７】
別の態様では、本発明は、１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）の（ヒト化）変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）であって、ＰＭＰ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉ）（本明細書に記載されるような）５つのヒト化置換の内の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、より好ましくは３つ、４つと、（ｉｉｉ）任意で１つ又は複数の更なる好適なアミノ酸置換（好ましくは本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ又はいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ）とを含む、１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）（配列番号２）の（ヒト化）変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）に関する。１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）のかかる変異体は、（ｉ）１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）の配列と比較して、合計で５個〜１３個、好ましくは７個〜１１個、例えば９個、１０個又は１１個のアミノ酸差異と、（ｉｉ）最大７つのヒト化置換、好ましくは合計で３つ、４つ又は５つのヒト化置換（ただし選ばれるヒト化置換に応じて場合によっては、その最大数が重要ではないこともある）とを含有するのが好ましい。
【００２８】
別の態様では、本発明は、１１９Ａ３ｖ１７の変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）であって、１１９Ａ３ｖ１７のアミノ酸配列と比較して、（ｉ）７８位のバリン残基と、（ｉｉ）任意で１１９Ａ３ｖ１７の配列と比較した１つ、２つ又は３つ等の１つ〜５つの更なるアミノ酸差異とを含み、ここで上記アミノ酸差異は、好ましくは置換、より好ましくは１つ若しくは複数の更なるヒト化置換（１１９Ａ３ｖ１７に既に存在するヒト化置換は別のものである）から、及び／又は本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ若しくはいずれか２つ以上の任意の好適な組合せから選ばれる置換である、１１９Ａ３ｖ１７の変異体であるアミノ酸配列（すなわち本発明のアミノ酸配列）に関する。
【００２９】
本発明のアミノ酸配列の幾つかの好ましいが非限定的な例（特に１１９Ａ３ｖ１７のかかる変異体の幾つかの好ましいが非限定的な例）としては、１１９Ａ３ｖ１８、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１及び１１９Ａ３ｖ２２（配列番号４〜配列番号７）が挙げられるが、これらに限定されず、またこれらは本発明の更に好ましい態様を形成する。
【００３０】
本発明は、本発明のアミノ酸配列を含むか、又はこれから本質的になるタンパク質及びポリペプチドにも関する。
【００３１】
１１９Ａ３（特許文献１）、１１９Ａ３ｖ１６（特許文献１）及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明）のアラインメントを図５に示す。
【００３２】
本発明のアミノ酸配列に存在し得る任意のヒト化置換に関して（すなわち１１９Ａ３、１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）及び／又は１１９Ａ３ｖ１７と比較して）、特許文献１の記載によると、ヒト化置換は概して、ラクダＶＨＨドメインのフレームワーク領域に生じるアミノ酸残基を、ヒトＶＨドメイン（好ましくはヒトＶＨ３ドメイン）のフレームワーク領域における同じ位置に生じる異なるアミノ酸に置き換える置換として定義することができると述べられている。このため、好適なヒト化置換は、本明細書の開示、特許文献１の開示に基づき、及び所与のＶＨＨ配列と、１つ又は複数のヒトＶＨ配列とのアミノ酸配列の比較により当業者にとって明らかとなるであろう。
【００３３】
例えば添付の図１〜図４（特許文献１の表Ａ−６〜表Ａ−９から抜粋した）を参照する。これらの図は、ラクダＶＨＨドメインのフレームワーク領域に生じることが分かっているアミノ酸残基、及びほとんどの場合、ヒトＶＨ３配列（例えば生殖細胞系列配列ＤＰ−４７、ＤＰ−５１又はＤＰ−２９等）のフレームワーク領域に生じる対応するアミノ酸残基（複数も可）の一部を挙げている。これらの図から選ぶことができるヒト化置換は本発明に用いられる好ましいヒト化置換の一部でもあるが、他の生殖細胞系列配列（ＶＨ３クラスのもの、又は場合によっては更に他のＶＨクラスのもの）との比較により得られたヒト化置換を使用することも可能であり得る。特許文献１から（及び本出願人による特許出願、及び特許文献１に言及される更なる従来技術から）一般的に知られるように、かかる配列比較に基づき、特に適した及び／又は最適なヒト化置換（及びこれらの組合せ）を、概して限定的な試行錯誤により、すなわち１つ又は複数の想定されるヒト化置換を導入し、ＶＨＨドメイン若しくはナノボディ、又はこれを含むタンパク質／ポリペプチドの１つ又は複数の所望の特性、例えば融解温度、親和性、効力、フォーマット時の特性、所望の宿主生物における発現レベル、及び／又は他の所望の特性に関して、このようにして得られたヒト化変異体を試験することにより決定することができる。このことに関しても特許文献１及びそこで言及される本出願人による更なる特許出願を参照する）。
【００３４】
例えばこれに限定するものではないが、１１９Ａ３及び１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）の配列と比較して、本発明のアミノ酸配列は、置換Ａ１４Ｐ、Ｑ７５Ｋ及び／又はＮ８２ｂＳ（１１９Ａ３ｖ１７（特許文献１）及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明）には全て存在する）の内の１つ、いずれか２つ、好ましくは３つ全てを含むことができ（ただし上述のように、８２ａ／８２ｂ位にはＮＳモチーフではなくＮＮモチーフを有するのが望ましい場合もある）、また例えば（例えば１１９Ａ３ｖ１８と比較して）置換Ａ４９Ｓを含んでいてもよい。
【００３５】
ヒト化置換に関連して、本出願では、ラクダの「特徴的な残基」のいずれかにおける任意の置換（これも特許文献１及び図１〜図４を参照されたい）は「ヒト化置換」として数えないことに留意すべきである。特徴的な残基のいずれかにおけるかかる置換は、存在していても又は存在していなくてもよく、存在する場合、ＶＨＨにおけるアミノ酸残基をヒトＶＨ配列の同じ位置で生じるアミノ酸残基に置き換える置換であっても又はそうでなくてもよい。例えば特徴的な残基におけるかかる置換は、例えば特徴的な位置に生じるアミノ酸残基を、ラクダＶＨＨ配列の同じ位置に生じる別のアミノ酸残基に置き換える置換であってもよい（これに関しても図１〜図４を参照する）。
【００３６】
１１９Ａ３の配列と比較した、本発明のアミノ酸配列に存在し得る特徴的な残基でのかかる置換の例は、Ｈ３７Ｙ、Ｑ４４Ｇ、Ｋ８４Ｒ及び／又はＱ１０８Ｌの内の１つ、いずれか２つ、いずれか３つ、好ましくは４つ全てである。これらは例えば１１９Ａ３ｖ１７（特許文献１）及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明）には全て存在する。
【００３７】
例えば１１９Ａ３、１１９Ａ３ｖ１７及び／又は１１９Ａ３ｖ１８の配列と比較した、存在し得る他の／更なる置換の好適な例は、本明細書で言及されるような更なる置換（ａ）〜置換（ｃ）のいずれか１つ若しくはいずれか２つ以上の任意の好適な組合せ、及び／又は例えば置換Ｎ５２Ｅでもある。
【００３８】
本発明のアミノ酸配列が、ＩＬ−２３（特にＩＬ−２３のｐ１９サブユニット）に指向性を有し、特許文献１に記載のような１１９Ａ３の改善された変異体、及びその（ヒト化）変異体であることは、本明細書の開示から当業者にとって明らかであろう。このため、本発明のアミノ酸配列は、特許文献１に記載のものと同じ目的、使用及び用途に、例えばＩＬ−２３及び／若しくはその受容体（複数も可）により媒介されるシグナル伝達を調整するのに、並びに／又はＩＬ−２３及び／若しくはＩＬ−２３により媒介されるシグナル伝達に関連する疾患、例えば腸疾患（大腸炎、クローン病、ＩＢＤ）等の炎症及び炎症性障害、感染性疾患、乾癬（psoriasis）、がん、自己免疫疾患（例えばＭＳ）、類肉腫（carcoidis）、移植片拒絶反応、嚢胞性線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、関節リウマチ、ウイルス感染症、分類不能型免疫不全症、並びに本明細書で挙げられる従来技術において言及される様々な疾患及び障害等の予防若しくは治療に使用することができる。更に特許文献１を参照する。
【００３９】
特に、本発明のアミノ酸配列は、「ｐ１９＋」配列（特許文献１に記載されている）であり、このため特に他の「ｐ１９＋配列」に関して特許文献１に記載されるものと同じ目的で使用することができる。例えば特許文献１の１５頁及び１６頁、並びに特許文献１の更なる包括的な開示を参照する。より具体的には、本発明のアミノ酸配列は、１１９Ａ３及びそのヒト化変異体の改善された代替物として使用することができ、このため特に１１９Ａ３及びそのヒト化変異体に関して特許文献１に記載されるものと同じ目的で使用することができる。
【００４０】
特許文献１で既に言及されているように、ｐ１９＋配列、並びに／又は１１９Ａ３及びそのヒト化変異体（ひいては本発明のアミノ酸配列）のこれらの用途の一つは、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列に隣接して、１つ又は複数の他の基、残基、部分、結合ドメイン又は結合単位（特許文献１に記載されている）を含む化合物又は構築物における構成要素としての用途である。例えば、特許文献１に記載されるように、かかる１つ又は複数の更なる結合ドメイン又は結合単位は、他の免疫グロブリン単一可変ドメイン、ＶＨＨ、（単一）ドメイン抗体、ナノボディ又はｄＡｂとすることができ、例えばこれらは、ｐ１９、又はＩＬ−１２／ＩＬ−２３ファミリーのヘテロ二量体サイトカインの別のサブユニット、例えばｐ４０に指向性を有し得る。
【００４１】
特に、特許文献１に記載されるように、かかる化合物又は構築物は、１つ又は複数（好ましくは１つ）の本発明のアミノ酸配列に加えて、１つ又は複数の他のナノボディ、例えばこれに限定されないが、特許文献１に記載され、言及され、かつ／又は表される１つ又は複数のナノボディを含む、二価若しくは多価、二重特異性若しくは多重特異性、及び／又は二重パラトピックの構築物（特許文献１に記載されている）であり得る。例えば特許文献１の１２頁〜１６頁、２７頁〜３０頁、及び特許文献１の３１頁に言及されるような少なくとも１つのｐ１９＋配列を含む構築物を参照する。特許文献１で言及されるように、かかる別のナノボディは例えば、ｐ１９に対する別のナノボディ若しくはｐ４０に対するナノボディ、又は任意の他の好適なナノボディであり得る。更に特許文献１に記載されるように（例えば１７２頁〜１７３頁を参照されたい）、かかる化合物又は構築物は、それらの半減期（例えば循環による）を増大させるように改良してもよく、又は半減期の増大をもたらすタンパク質若しくは結合単位（例えば、アルブミン、又はアルブミン等の血清タンパク質と結合することができる結合単位若しくは結合ペプチド）を含んでいても、かつ／又はこれらと融合していてもよい。
【００４２】
かかる化合物及び（二価若しくは多価、二重特異性若しくは多重特異性、及び／又は二重パラトピック）構築物は好ましくは、特許文献１でも包括的に記載されているように、（すなわちヌクレオチド配列によりコードされる、かつ／又は宿主若しくは宿主細胞により発現することが可能である）タンパク質及びポリペプチドである。これらは包括的に本明細書で「本発明のポリペプチド」とも称される。本発明のかかるポリペプチドの幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号８〜配列番号４０に示し、これらのポリペプチドは本発明の幾つかの好ましい態様を形成する。
【００４３】
このため、本明細書に記載される「本発明のポリペプチド」は、本質的に特許文献１に記載の「本発明のポリペプチド」に記載されるようなものであり得るが、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列を（すなわち特許文献１に記載の「本発明のポリペプチド」に存在し得る別のＰ１９＋配列の代わりに）含む。
【００４４】
具体的に好ましくは、本明細書に記載される「本発明のポリペプチド」は本質的に、特許文献１に記載のｐ１１９Ａ３又はその変異体の内の１つを含む、特許文献１に記載の「本発明のポリペプチド」に記載されるようなものであり得るが、本明細書に記載される「本発明のポリペプチド」は本発明のアミノ酸配列を含む（特許文献１に記載される「本発明のポリペプチド」は特許文献１に記載の１１９Ａ３又はその変異体の内の１つを含む）。換言すると、本発明のポリペプチドの幾つかの好ましい例は、特許文献１に記載の１１９Ａ３又はその変異体の内の１つを含む、特許文献１に記載の本発明のポリペプチドの内の１つを取り、１１９Ａ３又は上記変異体を、本発明のアミノ酸配列に（例えば好ましくは、１１９Ａ３ｖ１８、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１又は１１９Ａ３ｖ２２に）置き換えることにより簡単に得ることができる。
【００４５】
例えば、特許文献１、その配列表、及びその実験部が、１１９Ａ３又はその変異体の内の１つを含む、二価若しくは多価、二重特異性若しくは多重特異性、及び／又は二重パラトピックの構築物の具体例を示す（例えば、配列番号２１５１〜配列番号２１５９、配列番号２５３３、配列番号２５３７、配列番号２５３９、配列番号２５４１〜配列番号２５４７、及び配列番号２６１５〜配列番号２６２８、実施例１２〜実施例１５、実施例２４、実施例２５及び実施例２８〜４６、並びに図４、図７、図８、図９、図４２及び図４５を参照されたい）。かかる構築物において１１９Ａ３又はその変異体を本発明のアミノ酸配列に置き換え、（本）発明のポリペプチドである二価若しくは多価、二重特異性若しくは多重特異性、及び／又は二重パラトピックの構築物を提供することができることが想定される。
【００４６】
１つの特定の態様では、かかる構築物（すなわち本発明のポリペプチド）は、少なくとも１つ（好ましくは１つだけ）の本発明のアミノ酸配列と、少なくとも１つ（好ましくは１つだけ）の、ｐ１９サブユニットと結合することができる他のナノボディ（例えば特許文献１に記載のナノボディの内の１つ）とを含む二重パラトピック構築物である。かかる他のナノボディは例えば、ｐ１９＋配列であってもよいが、ｐ１９−配列であるのが好ましい。１つの特定の態様では、かかる二重パラトピック構築物は、本発明のアミノ酸配列と、８１Ａ１２（特許文献１の配列番号１９３６）、若しくはその（ヒト化）変異体、例えば８１Ａ２ｖ１２〜８１Ａ１２ｖ５（特許文献１の配列番号２５８０〜配列番号２５８５）の内の１つ、又はその更なるヒト化変異体である別のナノボディとを含む。８１Ａ１２のかかる（ヒト化）変異体は任意で、上記の置換（ａ）〜置換（ｃ）の内の１つ又は複数の置換と本質的に類似した１つ又は複数の置換も含有することができる。別の特定の態様では、かかる二重パラトピック構築物は、本発明のアミノ酸配列と、８１Ｇ２（特許文献１の配列番号１９３０）、若しくはその（ヒト化）変異体、例えば８１Ｇ２ｖ１〜８１Ｇ２ｖ１１（特許文献１の配列番号２５８６〜配列番号２５９７）の内の１つ、又はその更なるヒト化変異体である別のナノボディとを含む。８１Ｇ２のかかる（ヒト化）変異体は任意で、上記の置換（ａ）〜置換（ｃ）の内の１つ又は複数の置換と本質的に類似した１つ又は複数の置換も含有することができる。かかる構築物は１つ又は複数の更なるナノボディ又は他の結合単位、並びに好適なリンカー及び他の官能基（全て特許文献１に記載されるようなものである）も含有することができる。例えば、かかる構築物に、例えばペグ化、アルブミンとの融合、血清アルブミンと結合することができるナノボディ（例えば特許文献１に記載のナノボディＡｌｂ−１若しくはＡｌｂ−８、又は国際公開第０８／０２８９７７号に記載の他の血清アルブミン結合ナノボディの内の１つ）の包含、又は血清アルブミン結合ペプチド（例えば国際公開第０８／０６８２８０号、国際公開第０９／１２７６９１号に記載のもの、又はかかるペプチドの更なる改善された変異体）の結合等の好適な修飾により半減期の増大をもたらすことができる。
【００４７】
このため、１つの好ましい本発明のポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列（例えば好ましくは１１９Ａ３ｖ１８、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１又は１１９Ａ３ｖ２２）及び８１Ｇ２のヒト化変異体（例えば８１Ｇ２ｖ１１）から本質的になる。その半減期を増大するために、かかるポリペプチドは好適にペグ化することができるか、ヒト血清アルブミンと好適に融合することができるか、又はヒト血清アルブミンと結合することができるナノボディ（例えば好ましくはＡｌｂ−８）を包含することができる（全て本質的に国際公開第０８／０２８９７７号に記載されるとおりである）。本発明のかかるポリペプチドに存在するナノボディは、任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して互いに好適に連結することができる（これも本質的に国際公開第０８／０２８９７７号に記載されるとおりである）。本発明のかかるポリペプチドの幾つかの好ましいが非限定的な例を配列表に示し、これらのポリペプチドは本発明の好ましい態様を形成する。
【００４８】
本発明の別の好ましいポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列（例えば好ましくは１１９Ａ３ｖ１８、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１又は１１９Ａ３ｖ２２）及び８１Ａ１２のヒト化変異体（例えば８１Ａ１２ｖ５）から本質的になる。その半減期を増大するために、かかるポリペプチドは好適にペグ化することができるか、ヒト血清アルブミンと好適に融合することができるか、又はヒト血清アルブミンと結合することができるナノボディ（例えば好ましくはＡｌｂ−８）を包含することができる（全て本質的に国際公開第０８／０２８９７７号に記載されるとおりである）。本発明のかかるポリペプチドに存在するナノボディは、任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して互いに好適に連結することができる（これも本質的に国際公開第０８／０２８９７７号に記載されるとおりである）。本発明のかかるポリペプチドの幾つかの好ましいが非限定的な例を配列表に示し、これらのポリペプチドは本発明の好ましい態様を形成する。
【００４９】
本明細書に記載される幾つかの（他の）特に好ましい「本発明のポリペプチド」は本質的に、２００９年５月２７日付けでAblynx N.V.により出願され、「ＩＬ−２３に指向性を有する二重パラトピックタンパク質構築物」と題された特許文献２において１１９Ａ３又はその変異体を含む二重パラトピック構築物に関して記載されるようなものであり得るが、本明細書に記載される幾つかの（他の）特に好ましい「本発明のポリペプチド」は本発明のアミノ酸配列を含む（特許文献２によるかかる二重パラトピック構築物は特許文献１に記載の１１９Ａ３又はその変異体の内の１つを含む）。換言すると、本発明のポリペプチドの幾つかの特に好ましい例を、１１９Ａ３又はその変異体を含む、特許文献２に記載されるような二重パラトピック構築物の内の１つを取り、１１９Ａ３又は上記変異体を本発明のアミノ酸配列に（例えば好ましくは、１１９Ａ３ｖ１８、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１又は１１９Ａ３ｖ２２に）置き換えることにより簡単に得ることができる。
【００５０】
１つの具体的であるが、非限定的な態様では、本発明の二重パラトピックタンパク質又はポリペプチドは、１１９Ａ３の変異体又は類似体（特に例えば本明細書に更に記載されるようなものであり得る１１９Ａ３のヒト化変異体）である１つの結合ドメインと、８１Ａ１２の変異体又は類似体（特に例えば本明細書に更に記載されるようなものであり得る８１Ａ１２のヒト化変異体）である１つの結合ドメインとを含むことができ、８１Ａ１２の変異体又は類似体（特に８１Ａ１２のヒト化変異体）である結合ドメインは、１１９Ａ３の変異体又は類似体（特に例えば本明細書に更に記載されるようなものであり得る１１９Ａ３のヒト化変異体）である結合ドメインと比較してタンパク質又はポリペプチドのＮ末端側に（すなわち「上流に」）ある。８１Ａ１２系結合単位がＮ末端側にあるかかる二重パラトピック構築物は更に本質的に、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６６３６５号に記載されるようなものであってもよく、例えば１つ又は複数の更なるナノボディ又は他の結合単位、並びに好適なリンカー及び他の官能基（全て特許文献１に記載されるようなものである）を含有してもよい。例えばかかる構築物に、例えばペグ化、アルブミンとの融合、血清アルブミンと結合することができるナノボディ（例えば特許文献１に記載のナノボディＡｌｂ−１若しくはＡｌｂ−８、又は国際公開第０８／０２８９７７号に記載の他の血清アルブミン結合ナノボディの内の１つ）の包含、又は血清アルブミン結合ペプチド（例えば国際公開第０８／０６８２８０号、国際公開第０９／１２７６９１号に記載のもの、又はかかるペプチドの更なる改善された変異体）の結合等の好適な修飾により半減期の増大をもたらすことができる。
【００５１】
Ｎ末端側に８１Ａ１２系結合単位を有するかかるタンパク質及びポリペプチドの幾つかの非限定的な例は以下のように表すことができる（右側にポリペプチドのＮ末端があり、左側にＣ末端がある）：
［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］（この構築物は任意で半減期の増大のためにペグ化され得る）、
［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［血清アルブミンと結合するナノボディ、例えばＡｌｂ−１又はＡｌｂ−８］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］、
［血清アルブミン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］、
［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［血清アルブミン]、
［血清アルブミン結合ペプチド（一価又はタンデムで（in tandem））］−［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］、
［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］−［血清アルブミン結合ペプチド（一価又はタンデムで）］。
【００５２】
８１Ａ１２系結合ドメインがＮ末端側に（すなわち１１９Ａ３系結合ドメインと比べてＮ末端側に）位置する本発明のポリペプチドが、１１９Ａ３系結合ドメインがＮ末端側に（すなわち８１Ａ１２系結合ドメインと比べてＮ末端側に）位置する対応する構築物と比較して１つ又は複数の有益な特性を有する可能性がある。例えば、８１Ａ１２系結合ドメインがＮ末端側に位置するポリペプチドは、１１９Ａ３系結合ドメインがＮ末端側に位置する対応する構築物と比較してより高い発現又は生産収率を示し得る。実験部を参照する。
【００５３】
Ｎ末端側に１１９Ａ３系結合単位を有する構築物は例えば、以下のように表すことができる：
［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］（この構築物は任意で半減期の増大のためにペグ化され得る）、
［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［血清アルブミンと結合するナノボディ、例えばＡｌｂ−１又はＡｌｂ−８］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］、
［血清アルブミン］−リンカー−［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］、
［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］−リンカー−［血清アルブミン]、
［血清アルブミン結合ペプチド（一価又はタンデムで）］−［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］、
［１１９Ａ３系結合ドメイン］−リンカー−［８１Ａ１２系結合ドメイン］−［血清アルブミン結合ペプチド（一価又はタンデムで）］。
【００５４】
好ましくは、本発明のアミノ酸配列及び本発明のポリペプチドは全て、１１９Ａ３、１１９Ａ３の変異体、及び１１９Ａ３又はその変異体を含むポリペプチドに関して特許文献２に記載のものと本質的に同じ結合相互作用を受けることが可能である。例えば実施例１を参照する。
【００５５】
本発明のポリペプチドは、６０℃を超える融点（Ｔｍ）（（実験部において設定した条件下で）ＤＳＣを用いて決定される）を有するのが好ましい。
【００５６】
また、本発明のアミノ酸配列は、好ましくはｐ１９に対する１１９Ａ３の親和性と本質的に同じ又はｐ１９に対する１１９Ａ３の親和性よりも良好なｐ１９に対する親和性（特許文献１の実施例１２に記載のビアコアアッセイを用いて測定される）、より好ましくはｐ１９に対する１１９Ａ３ｖ１７の親和性と本質的に同じ又はｐ１９に対する１１９Ａ３ｖ１７の親和性よりも良好なｐ１９に対する親和性を有する。
【００５７】
さらに、本発明のアミノ酸配列は、好ましくは１１９Ａ３の効力と本質的に同じ又は１１９Ａ３の効力よりも良好な効力（特許文献１の実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイを用いて測定される）、より好ましくは１１９Ａ３ｖ１７の効力と本質的に同じ又は１１９Ａ３ｖ１７の効力よりも良好な効力を有する。
【００５８】
その上、本発明のアミノ酸配列は、好ましくは１１９Ａ３の中和活性と本質的に同じ又は１１９Ａ３の中和活性よりも良好なマウス脾細胞アッセイにおける中和活性（特許文献１の実施例１５及び実施例２３を参照されたい）、より好ましくは１１９Ａ３ｖ１７の中和活性と本質的に同じ又は１１９Ａ３ｖ１７の中和活性よりも良好な中和活性を有する。
【００５９】
その上、本発明のアミノ酸配列は、好ましくは１１９Ａ３の中和活性と本質的に同じ又は１１９Ａ３の中和活性よりも良好なマウス脾細胞アッセイにおける中和活性（特許文献１の実施例１５及び実施例２３を参照されたい）、より好ましくは１１９Ａ３ｖ１７の中和活性と本質的に同じ又は１１９Ａ３ｖ１７の中和活性よりも良好な中和活性を有する。
【００６０】
本発明のポリペプチドは好ましくは、ｈＩＬ−２３を用いたマウス脾細胞アッセイ（特許文献１の実施例３０を参照されたい）において、５０ｐＭより良好な（すなわち５０ｐＭ未満の）、好ましくは２０ｐＭより良好な、より好ましくは１０ｐＭより良好な、例えば８ｐＭ〜１ｐＭ又はそれ未満の中和活性（ＩＣ５０として表される）を有する。
【００６１】
本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドの（及びこれを含む組成物の）可能性のある用途及び使用は、特許文献１（例えば特許文献１の７頁〜８頁、３２頁及び３２８頁〜３３７頁を参照されたい）を通じて言及されている。かかる構築物の他の態様、実施の形態、用途及び使用は、特許文献１の開示（例えば４９頁〜５１頁でのｐ１９＋配列に対する言及を参照されたい）を通じて記載されている。１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列を含む、かかる二価若しくは多価、二重特異性若しくは多重特異性、及び／又は二重パラトピックの構築物が本発明の更なる態様を形成する。
【００６２】
概して、これらは、ヘテロ二量体サイトカイン及びその受容体に（特にＩＬ−２３又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達に）関連する疾患及び障害の予防及び／又は治療（のための医薬組成物）における使用を含み得る。これらの疾患及び障害は、特許文献１に言及されるように、それを必要とする（すなわち疾患若しくは障害、若しくは少なくとも１つのその症状を有する、及び／又は疾患若しくは障害を誘引若しくは発症する危険性がある）被験体に、本発明のポリペプチド又は組成物のいずれかを（特にその薬学的に活性のある量で）、並びに／又はヘテロ二量体サイトカイン（特にＩＬ−２３）及び／若しくはその受容体、若しくはヘテロ二量体サイトカイン（特にＩＬ−２３）及び／若しくはその受容体が関わる生物学的な経路若しくは機構に対して活性のある既知の活性成分を（特にその薬学的に活性のある量で）好適に投与することにより、それぞれ予防及び／又は治療することができる疾患及び障害である。ヘテロ二量体サイトカイン及びその受容体と関連するかかる疾患及び障害の例は、本明細書の開示に基づき当業者にとって明らかとなり、例えば以下の疾患及び障害を包含する：腸疾患（大腸炎、クローン病、ＩＢＤ）等の炎症及び炎症性障害、感染性疾患、乾癬、がん、自己免疫疾患（例えばＭＳ）、類肉腫、移植片拒絶反応、嚢胞性線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、関節リウマチ、ウイルス感染症、分類不能型免疫不全症、並びに本明細書で挙げられる従来技術において言及される様々な疾患及び障害。これに基づき、ヘテロ二量体サイトカイン（及び／又はその受容体）がどの特定の疾患及び障害に関わるのかも、当業者にとって明らかになるであろう。
【００６３】
例えば、特許文献１の４頁〜５頁で言及されるように、ＩＬ２３は炎症性腸疾患で観察される慢性炎症に関与することが示されてきた。このことは、炎症性腸疾患に関わるものとしてＩＬ２３Ｒ遺伝子が特定されたことにより確認された。ｐ１９ノックアウトマウスはコラーゲン誘発性の関節炎及び大腸炎に耐性があることも見出されており、同様のｐ３５ノックアウトマウスはコラーゲン誘発性の関節炎により罹患しやすいことが見出された。また、ｐ１９ノックアウトマウスをＩＬ−１０ノックアウトマウスと交配させた場合、得られる子孫は大腸炎に耐性があり、ｐ１９ノックアウトマウスをＩＬ−１０ノックアウトマウスと同じように交配させると、大腸炎に罹患しやすい子孫が生じた。ｐ１９に対するモノクローナル抗体は、多発性硬化症の前臨床動物モデルであるＥＡＥの発症を抑え、ＩＬ−１７の血清レベルを低減することが更に見出された（これはＩＬ−１２では調節されない）。また、ＩＬ−１２ではなくＩＬ−２３が、ＣＮＳ自己免疫炎症における必須のサイトカインであると考えられる。この結果は全て、ＩＬ−２３／ｐ１９が大腸炎、クローン病、ＩＢＤ、多発性硬化症、関節リウマチ及び本明細書で言及される他の疾患及び障害の一部の治療に魅力的な標的であり得ることを示唆している。また、ＩＬ−１２ファミリーの他のヘテロ二量体サイトカインの内の２つ、ＩＬ２３及びＩＬ２７も、異なる機能によってではあるがＴＨ１細胞応答を調節する。ＣＤ４＋  Ｔ細胞を刺激し、ＩＬ−１７を産生するＩＬ−２３の能力は、自己免疫炎症の発症及び維持において主要な役割を有するとも記載されている。
【００６４】
また、特許文献１の実施例４５は、特許文献１のポリペプチド（ひいては（thus, by extension）本発明のポリペプチド）が、全身／非経口投与による又は例えばクリーム若しくはローションを用いた局所的な治療による乾癬の予防及び治療にも有用であり得ることを示している（特許文献１の３２８頁及び３３１頁〜３３２頁を参照されたい）。
【００６５】
別の態様では、本発明は、本発明のアミノ酸配列又は本発明のポリペプチド（又はその好適な断片）をコードする核酸に関する。かかる核酸は、本明細書で「本発明の核酸」とも称され、例えば特許文献１に更に記載されるようなものであってもよく、特に特許文献１（例えば３１６頁〜３２０頁を参照されたい）でも更に記載されるように、遺伝子構築物の形態であってもよい。
【００６６】
別の態様では、本発明は、本発明のアミノ酸配列及び／若しくは本発明のポリペプチドを発現する（又は好適な状況下で本発明のアミノ酸配列及び／若しくは本発明のポリペプチドを発現することが可能である）、並びに／又は本発明の核酸を含有する宿主又は宿主細胞に関する。かかる宿主又は宿主細胞も概して、特許文献１（例えば３１５頁〜３２８頁を参照されたい）に記載されるようなものであり得る。
【００６７】
本発明は、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドを生成／発現する方法にも関する。かかる方法は概して、（ｉ）好適な宿主細胞若しくは宿主生物において、又は別の好適な発現系において本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドをコードする核酸を発現する工程と、任意でその後（ｉｉ）このようにして得られた本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドを単離及び／又は精製する工程とを含み得る。特に、かかる方法は、（ｉ）本発明の宿主を、上記本発明の宿主が少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列及び／又はポリペプチドを発現及び／又は生成するような条件下で培養及び／又は維持する工程と、任意でその後（ｉｉ）このようにして得られた本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを単離及び／又は精製する工程とを含み得る。これらの方法も本質的に、特許文献１（例えば３１５頁〜３２８頁を参照されたい）に記載されるように実施することができる。
【００６８】
本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドを生成／発現するための具体的な方法の一つが、国際出願日が２０１０年４月３０日である「ドメイン抗体の生産方法（Method for the production of domain antibodies）」と題されたAblynx N.V.の国際出願に記載されている。
【００６９】
本発明は、生成物又は組成物であって、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、少なくとも１つの本発明のポリペプチド（又はその好適な断片）、及び／又は少なくとも１つの本発明の核酸と、任意で（すなわち組成物の使用目的に応じて）それ自体が既知のかかる組成物の１つ又は複数の更なる成分とを含有するか又は含む、生成物又は組成物に更に関する。かかる生成物又は組成物は例えば、医薬組成物（本明細書に記載されている）、獣医学的組成物又は診断用途のための生成物若しくは組成物（これも本明細書に記載されている）であり得る。かかる生成物又は組成物も概して、特許文献１（例えば３２９頁〜３３７頁を参照されたい）に記載されるようなものであり得る。
【００７０】
本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかでの（特許文献１に記載のような）ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達の（特許文献１に記載のような）調節（のための方法又は組成物）における本発明のアミノ酸配列若しくはポリペプチド、又はこれを含む組成物の使用にも関する。
【００７１】
本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばＩＬ−２３及び／又はその受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかで（特許文献１に記載のような）ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達を（特許文献１に記載のように）調節する方法であって、ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達を調節するのに適した方法及び量で、ＩＬ−２３を、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列若しくはポリペプチド、又はこれを含む組成物に接触させる工程を少なくとも含む、方法にも関する。
【００７２】
本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかで（特許文献１に記載のような）ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達を（特許文献１に記載のように）調節するための組成物（例えば、これらに限定されないが、本明細書中で更に記載されるような医薬組成物又は医薬調製物）の調製における１つの本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドの使用にも関する。
【００７３】
本発明はこれより、以下の非限定的な実験部及び添付の非限定的な配列表及び非限定的な図を参照して更に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】ヒトＶＨ３ドメインのフレームワーク領域１と、ラクダＶＨＨ配列のフレームワーク領域１との配列比較を示す表（特許文献１から入手したデータ）である。
【図１−２】続き
【図２】ヒトＶＨ３ドメインのフレームワーク領域２と、ラクダＶＨＨ配列のフレームワーク領域２との配列比較を示す表（特許文献１から入手したデータ）である。
【図３】ヒトＶＨ３ドメインのフレームワーク領域３と、ラクダＶＨＨ配列のフレームワーク領域３との配列比較を示す表（特許文献１から入手したデータ）である。
【図３−２】続き
【図４】ヒトＶＨ３ドメインのフレームワーク領域４と、ラクダＶＨＨ配列のフレームワーク領域４との配列比較を示す表（特許文献１から入手したデータ）である。
【図５】１１９Ａ３（特許文献１）、１１９Ａ３ｖ１６（特許文献１）及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明）のアラインメントを示す図である。
【図６】様々なｐＨ値（ｘ軸）でＴＳＡにより求められるような１１９Ａ３の２つのヒト化変異体（１１９Ａ３ｖ１６（特許文献１）及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明））の融解温度（ｙ軸、Ｔｍ（単位℃））を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００７５】
実験部
結晶構造及び分子モデリングに基づき、ヒト化変異体１１９Ａ３ｖ１６（特許文献１の配列番号２５７８を参照されたい）の物理的安定性を突然変異Ｌ７８Ｖにより改善することができるという仮説を立てた。
【００７６】
Ｌ７８Ｖの復帰突然変異後の安定性の増大が実験により確認された。少量のＨｉｓ−ｍｙｃによりタグ付けされた１１９Ａ３ｖ１８（突然変異Ｌ７８Ｖを含有する）を準備し、熱シフトアッセイ（ＴＳＡ）により融解温度を求め、１１９Ａ３ｖ１６と比較した。図６は、実際に１２℃という融解温度の大幅な増大を観察することができたことをはっきりと示しており、これによりタンパク質のコアにおけるＬ７８Ｖ突然変異がこのナノボディ（商標）の安定性を増大させることが確認された。試験されるｐＨ範囲での相対的安定性（Ｔｍ）は同程度であった。
【００７７】
また１１９Ａ３ｖ１８構成要素及び８１Ａ１２構成要素に基づく二重パラトピック構築  物に関して（ここでも１１９Ａ３ｖ１６構成要素に基づく同様の構築物と比較して）示差走査熱量測定法を用いて融解曲線を得て、これらにより、構成要素が二重パラトピック型に組み込まれた場合でも、１１９Ａ３における突然変異Ｌ７８Ｖにより熱安定性の明らかな改善が与えられることが確認された（データは示していない）。データは、Ｎ末端側に８１Ａ１２系構成要素を有する試験構築物（配列番号３５及び配列番号３８）が、Ｎ末端側に１１９Ａ３系構成要素を有する試験構築物よりも高い融解温度を有することも示している。
【００７８】
本発明のアミノ酸配列の特性に対する他の置換の影響を研究するために、化学的ストレス後の１１９Ａ３ｖ１８のペプチドマップ分析を実施した（これも１１９Ａ３ｖ１６と比較した）。
【００７９】
例えば、参照となる二重パラトピック構築物１１９Ａ３ｖ１６−９ＧＳ−Ａｌｂ８−９ＧＳ−８１Ａ１２ｖ５（これは特許文献１に記載の構成要素１１９Ａ３ｖ１６及び構成要素８１Ａ１２ｖ５に基づくものである）が、１１９Ａ３ｖ１６構成要素のＣＤＲ２に位置するＮ５２（カバット番号）の或る程度の脱アミド化を示すことが見出された。この変異体は、３７℃及び２５℃で６週間保存した後に０．０５％（ｖ：ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ８０及び１０％（ｗ：ｖ）スクロースを有するＬ−ヒスチジンバッファー（ｐＨ６）中に２５ｍｇ／ｍＬで配合した試料のｃＩＥＦ分析で分離され、ＬＣ／ＭＳペプチドマップ分析による強制脱アミド化試料（室温で３日間、ｐＨ９の炭酸アンモニウムバッファー中に保存）の分析により確認された。
【００８０】
このため、１１９Ａ３ｖ１８と比較して置換Ｎ５２Ｅ又はＳ８２ｂＮの内の１つ又は両方を含む、１１９Ａ３ｖ２０、１１９Ａ３ｖ２１及び１１９Ａ３ｖ２２と呼ばれる１１９Ａ３ｖ１８（本発明）の更なる変異体を設計した。化学的ストレス（室温、ｐＨ９で３日間）後のこれらの変異体のペプチドマップを求め（データは示していない）、このことは、Ｎ５２がＮ８２ａよりも脱アミド化を受けやすい可能性があることを示していた。
【００８１】
驚くべきことに、１１９Ａ３ｖ１６（特許文献１）の及び１１９Ａ３ｖ１８（本発明）のペプチドマップの比較は、Ｎ５２の脱アミド化の速度が１１９Ａ３ｖ１８では低減することを示しており、このことにより、Ｌ７８Ｖ突然変異により（更なるＮ５２Ｅ突然変異又はＳ８２ｂＮ突然変異なしで）達成される熱力学的安定性の増大によって、既に分子の化学的安定性の増大ももたらされていたことが実証された。
【００８２】
本発明のアミノ酸配列を含む二重パラトピック構築物の効力を、特許文献１による１１９Ａ３ｖ１６構成要素を含む同じような二重パラトピック構築物の効力と比較した。試験構築物は、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８の構築物であった。これらを参照構築物１１９Ａ３ｖ１６−９ＧＳ−Ａｌｂ８−９ＧＳ−８１Ａ１２ｖ５（これは特許文献１に記載の構成要素１１９Ａ３ｖ１６及び８１Ａ１２ｖ５に基づくものである）と比較した。使用するアッセイは、特許文献１の実施例１５及び実施例２５に本質的に記載されるマウス脾細胞アッセイであった。第１の実験では、配列番号３５、配列番号３６及び配列番号３７の構築物を参照構築物と比較した場合、これらは同程度の効力を示した（参照構築物の０．０２８ｎｍと比較して配列番号３５、配列番号３６及び配列番号３７でそれぞれ、０．０３３ｎｍ、０．０２８ｎｍ及び０．０３２ｎｍのＩＣ５０）。第２の実験では、配列番号３８の構築物は、参照構築物の０．０３０と比較して０．０３９のＩＣ５０を示した。このことは、本発明のアミノ酸配列における（及びこれを含む構築物における）Ｌ７８Ｖ置換が、特許文献１に記載の１１９３ｂ１６構成要素と比較して効力に対する主だった影響を有しないことを示している。
【００８３】
発現レベルに対する突然変異Ｌ７８Ｖの影響を求めるために、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）Ｘ−３３株（Invitrogen）において一般的な（generic）高密度細胞発酵プロセスを用いて、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８の構築物の発現レベルを、参照構築物１１９Ａ３ｖ１６−９ＧＳ−Ａｌｂ８−９ＧＳ−８１Ａ１２ｖ５の発現レベルと比較した。複合体成分としてトリプトンを含有する富栄養培地であるＡｂｌｙ１培地、並びに３０℃、ｐＨ５及び３０％の溶存酸素等の標準的な発酵パラメータを用いた。バッチ相の後、およそ４００ｇ／Ｌの細胞湿重量が達成されるまで、グリセロール供給バッチを適用した。その後、ＭｅＯＨを培養物に添加することにより誘導を開始した。培養物をＣ供給源であるＭｅＯＨに適応させるため、適応相を実施し（１．５ｍＬ／Ｌ／ｈで２時間、その後３ｍＬ／Ｌ／ｈで２時間）、その後発酵が終了するまで４ｍｌ／ｈ／Ｌの一定の供給速度とした（１１４時間の総誘導時間）。プロテインＡ試料を浄化した後、生成物関連の変異体を確認するために発酵試料をＲＰＣ分析により分析した。要約すると、浄化した培養上清を固定量のＰｒｏｔＡ樹脂と混合し、０．１％のＴＦＡを含有するＭＱ中で溶出させ、それによってＲＰＣに充填する準備が整う。結果を以下の表に示し、これにより、ＤＳＣにおける本発明のアミノ酸配列／ポリペプチドのＴｍの増大が発現収率の顕著な増大に対応することが示されている。
【００８４】
表：細胞無含有培地のプロテインＡの浄化及びＣｕ２＋処理後のＲＰＣ分析により求められる未処理タンパク質の純度及び収率の評価。
【表１】
2013525408.tif 000002
＊全てのジスルフィド架橋の完全な形成のためのＣｕ２＋処理、及びプロテインＡの浄化後のＲＰＣ結果に基づくものである。
＊＊これらの試料に存在する主要な不純物は、Ｎ末端に結合するシグナル配列の一部が切断できていないタンパク質であり、これは発酵条件を適合させることにより回避することができる。  
【符号の説明】
【００８５】
図１
Figure 1:Comparison of human VH3 and Camelid VHH's - Framework 1:  図１：ヒトＶＨ３及びラクダＶＨＨ（フレームワーク１）の比較：
Pos.  位置
Amino acidresidue(s):  アミノ酸残基（複数も可）：
Human VH3  ヒトＶＨ３
Camelid VHH's  ラクダＶＨＨ
VHHEnt.  ＶＨＨエントロピー
VHH Var.  ＶＨＨ変動性
Hallmarkresidue  特徴的な残基
preferably  好ましくは
図２
Figure 2:Comparison of human VH3 and Camelid VHH's - Framework 2:  図２：ヒトＶＨ３及びラクダＶＨＨ（フレームワーク２）の比較：
Pos.  位置
Amino acidresidue(s):  アミノ酸残基（複数も可）：
Human VH3  ヒトＶＨ３
Camelid VHH's  ラクダＶＨＨ
VHHEnt.  ＶＨＨエントロピー
VHH Var.  ＶＨＨ変動性
Hallmarkresidue  特徴的な残基
preferably  好ましくは
or  又は
most  preferably  最も好ましくは 
図３
Figure 3:Comparison of human VH3 and Camelid VHH's - Framework 3:  図３：ヒトＶＨ３及びラクダＶＨＨ（フレームワーク３）の比較：
Pos.  位置
Amino acidresidue(s):  アミノ酸残基（複数も可）：
Human VH3  ヒトＶＨ３
Camelid VHH's  ラクダＶＨＨ
VHHEnt.  ＶＨＨエントロピー
VHH Var.  ＶＨＨ変動性
Hallmarkresidue  特徴的な残基
preferably  好ましくは
or  又は
mostpreferably  最も好ましくは 
図４
Figure 4:Comparison of human VH3 and Camelid VHH's - Framework 4:  図４：ヒトＶＨ３及びラクダＶＨＨ（フレームワーク４）の比較：
Pos.  位置
Amino acidresidue(s):  アミノ酸残基（複数も可）：
Human VH3  ヒトＶＨ３
Camelid VHH's  ラクダＶＨＨ
VHHEnt.  ＶＨＨエントロピー
VHH Var.  ＶＨＨ変動性
Hallmarkresidue  特徴的な残基
preferably  好ましくは
or  又は 
図５
Consensus  コンセンサス
Conservation  保存
Sequence logo  配列ロゴ
【図１】
2013525408.tif 000003
【図１−２】
2013525408.tif 000004
【図２】
2013525408.tif 000005
【図３】
2013525408.tif 000006
【図３−２】
2013525408.tif 000007
【図４】
2013525408.tif 000008
【図５】
2013525408.tif 000009
【図６】
2013525408.tif 000010
【配列表】
2013525408000001.app
【国際調査報告】
2013525408.tif 000011
2013525408.tif 000012
2013525408.tif 000013
2013525408.tif 000014