(57)【要約】  本発明は、多重抗原特異性を有する抗体、及びヒトの疾患の治療におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる抗体：
（ａ）それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５、並びに配列番号２６、２７、及び２８のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２８に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｂ）それぞれ、配列番号２９、３０、及び３１、並びに配列番号３２、３３、及び３４のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号２９、３０、３１、３２、３３、及び３４に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｃ）それぞれ、配列番号３５、３６、及び３７、並びに配列番号３８、３９、及び４０のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号３５、３６、３７、３８、３９、及び４０に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｄ）それぞれ、配列番号４１、４２、及び４３、並びに配列番号４４、４５、及び４６のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号４１、４２、４３、４４、４５、及び４６に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｅ）それぞれ、配列番号４７、４８、及び４９、並びに配列番号５０、５１、及び５２のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号４７、４８、４９、５０、５１、及び５２に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｆ）それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５、並びに配列番号５６、５７、及び５８のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号５３、５４、５５、５６、５７、及び５８に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｇ）それぞれ、配列番号５９、６０、及び６１、並びに配列番号６２、６３、及び６４のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号５９、６０、６１、６２、６３、及び６４に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｈ）それぞれ、配列番号６５、６６、及び６７、並びに配列番号６８、６９、及び７０のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号６５、６６、６７、６８、６９、及び７０に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｉ）それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３、並びに配列番号７４、７５、及び７６のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｊ）それぞれ、配列番号７７、７８、及び７９、並びに配列番号８０、８１、及び８２のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上、あるいは
（ｋ）それぞれ、配列番号８３、８４、及び８５、並びに配列番号８６、８７、及び８８のＣＤＲアミノ酸配列、又は配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８に列挙する配列の保存的配列修飾であり得る前記ＣＤＲ配列のうちの１以上。
【請求項２】
請求項１に記載の可変重鎖または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる、発現ベクター。
【請求項３】
請求項１に記載の抗体を産生する、組換え宿主細胞。
【請求項４】
治療上有効な量の請求項１に記載の抗体を用いて、ヒト患者におけるＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、又は子宮内膜症を治療又は予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多重特異性を有する抗体に関する。具体的には、本発明の抗体は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合（すなわち、交差反応）する能力を有する。また、本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８のうちの１以上の量の増加又は不均衡を特徴とする疾患又は障害、特に、ＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
公開されているデータ及び報告書は、多くの疾患においてＣＸＣＬケモカインのＥＬＲＣＸＣサブファミリーのメンバーが増加することを示している。ＣＸＣＬファミリーには合計１６のメンバーが存在する。ケモカインは、ＣＯＰＤを含む多くの炎症性疾患でアップレギュレートされることが報告されており、ＣＸＣＬ１〜３、５、及び８は、それぞれ、Ｇｒｏ−α、β、γ（Ｈａｓｋｉｌｌ，Ｓ．，ら．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９０：８７，７７３２−７７３６）、ＥＮＡ−７８（Ｗａｎｇ，Ｄ．及びＲｉｃｈｍｏｎｄ，Ａ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｊ．及びＦｅｌｄｍａｎ，Ｍ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１０２３−１０２７及びＰｏｗｅｒｍ  Ｃ．Ａ．ら  Ｇｅｎｅ．，１９９４：１５１，３３３−３３４）、及びＩＬ−８（Ｉｉｚａｓａ，Ｈ．及びＭａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｋ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｊ．及びＦｅｌｄｍａｎ，Ｍ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１０６１−１０６７及びＭａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８８：１６７，１８８３−１８９３）としても知られている（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６３：３４９−３５５，２００１；Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６８：９６８−９７５，２００３；Ｔｈｏｒａｘ，５７：５９０−５９５，２００２）。これらケモカインの長期及び高度発現は、ＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症等の疾患の発現に関与している可能性があると推測されている。これらＣＸＣケモカインは、ＣＸＣＲ１及び／又はＣＸＣＲ２受容体と結合し、活性化することにより好中球走化性を刺激することが知られている。したがって、これらケモカインを阻害すると、炎症細胞が肺組織に浸潤するのを防ぎ、ひいては組織損傷を防ぐことができた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合（すなわち、交差反応）する能力を有する抗体を用いることによるＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体の活性化を阻害することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、１つの免疫グロブリン内に含有される多重特異性を有する抗体（免疫グロブリン）に関する。具体的には、本発明の抗体は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合（すなわち、交差反応）する能力を有する。また、本発明は、前記抗体を用いて、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８のうちの１以上の量の増加又は不均衡を特徴とする疾患又は障害、特に、ＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、又は子宮内膜症を治療する方法に関する。
【０００５】
１つの態様では、本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合（すなわち、交差反応）する能力を有する単離抗体に関する。抗体の定義は、抗原結合部分（又は断片）がヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合（すなわち、交差反応）するような抗体の抗原結合部分（又は断片）を含む。本発明の抗体は、好ましくはマウスモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である。
【０００６】
１つの実施形態では、本発明は、本発明の抗体を用いて、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原を中和することにより、ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２受容体の活性化を阻害することを通して好中球走化性を減少させる方法を含んでなる。
【０００７】
１つの実施形態では、本発明は、本発明の抗体を投与することにより、それを必要としている患者における好中球走化性を減少させる方法に関する。
【０００８】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、各ＭＡＰユニットが配列番号８９〜９３のポリペプチドに由来する１つの個別の配列を有する５つの多重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）のセットと共に、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物（カクテル）を用いるＲＩＭＭ（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ，Ｋ．Ｅ．，ら．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ．１９９７：１６，３８１．）型プロトコールを用いる工程を含んでなる方法により作製することができる。
ＬＡＴＥＬＲＳＱＳＬＱＴＬＱＧ  配列番号８９
ＳＡＫＥＬＲＳＱＳＩＫＴＹＳＫ  配列番号９０
ＬＲＥＬＲＳＶＳＬＱＴＴＱＧ  配列番号９１
ＳＰＧＰＨＳＡＱＴＥＶＩＡＴ  配列番号９２
ＥＳＧＰＨＳＡＮＴＥＩＩＶＫ  配列番号９３
【０００９】
理論に縛られるものではないが、ＭＡＰは、免疫化プロトコールにおいて２つの機能を発揮する。第１に、ＭＡＰにより、公知の標的アミノ酸配列を宿主免疫系に対して選択的に複数提示することができる。第２に、リシン等が挙げられるがこれらに限定されないコアを介して複数コピーの配列が連結されることにより質量が増加するので、個々のペプチドの免疫原性よりも前記配列の免疫原性が高くなる（Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｊ．Ｐ．，ら．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１：７３；２４９，Ｓｃｈｏｔｔ，Ｍ．Ｅ．，ら．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏ．１９９６：１７４：１９９−２０９，Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９８８：８５；５４０９−５４１３）。
【００１０】
本発明を作製するために用いられるＭＡＰは、標的ケモカインのＥＬＲＣＸＣ及びＧＰＨＣＡ領域に又は前記領域の周囲にみられる複数コピーの保存標的配列（例えば、配列番号８９〜９３）から構成される。例示的なＭＡＰセットを図１に示す。
【００１１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、以下の工程を含んでなる方法により作製することができる：
ａ．完全フロイントアジュバント（ｃＦＡ）中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物をマウスに注射する工程と、
ｂ．不完全フロイントアジュバント（ｉＦＡ）中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物を前記マウスに注射する工程と、
ｃ．不完全フロイントアジュバント中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物並びに各ＭＡＰユニットが配列番号８９〜９３のポリペプチドに由来する１つの個別の配列を有する５つの多重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）のセットを前記マウスに注射する工程と、
ｄ．前記マウスからＢ細胞を単離する工程と、
ｅ．前記Ｂ細胞を骨髄細胞と融合させて、望ましい抗体を分泌する不死ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、
ｆ．前記ハイブリドーマの培養上清から抗体を単離する工程。
【００１２】
必要に応じて、工程ｃと工程ｄとの間に、ＰＢＳ中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物並びに各ＭＡＰユニットが配列番号８９〜９３のアミノ酸配列を含むＭＡＰのセットを任意でマウスに注射してもよい。
【００１３】
別の実施形態では、本発明の抗体は、以下の工程を含んでなる方法により作製することができる：
ａ．完全フロイントアジュバント中における各ＭＡＰユニットが配列番号８９〜９３のポリペプチドに由来する１つの個別の配列を有する５つの多重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）のセット（以下ＭＡＰセットとも称する）をマウスに注射する工程と、
ｂ．不完全フロイントアジュバント中における前記ＭＡＰセットを前記マウスに注射する工程と、
ｃ．不完全フロイントアジュバント中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の全ての混合物、並びに前記ＭＡＰセットを前記マウスに注射する工程と、
ｄ．前記マウスからＢ細胞を単離する工程と、
ｅ．前記Ｂ細胞を骨髄細胞と融合させて、望ましい抗体を分泌する不死ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、
ｆ．前記ハイブリドーマの培養上清から抗体を単離する工程。
【００１４】
必要に応じて、工程ｃと工程ｄとの間に、ＰＢＳ中におけるヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８の混合物、並びに配列番号８９〜９３を有するＭＡＰのセットを任意でマウスに注射してもよい。
【００１５】
別の実施形態では、本発明の抗体は、以下の工程を含んでなる方法により作製することができる：
ａ．完全フロイントアジュバント中におけるヒト組換え精製ケモカイン（ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、及びＥＮＡ−７８）のカクテルをマウスに注射する工程と、
ｂ．不完全フロイントアジュバント中における前記ケモカインのカクテルを前記マウスに注射する工程と、
ｃ．前記マウスからＢ細胞を単離する工程と、
ｄ．前記Ｂ細胞を骨髄細胞と融合させて、望ましい抗体を分泌する不死ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、
ｅ．前記ハイブリドーマの培養上清から抗体を単離する工程。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、前述の方法によって作製される抗体に関する。
【００１７】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）アミノ酸配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１若しくは２２、又は（ｉｉ）上記（ｉ）のアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％、９５％、９８％若しくは９９％同一であるアミノ酸配列から選択される少なくとも１つの可変領域を含んでなる。
【００１８】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９又は２１、及び配列番号２、４、６、１０、１２、１４、１６、１８、２０又は２２のアミノ酸配列、並びにこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００１９】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９若しくは２１、又は配列番号２、４、６、１０、１２、１４、１６、１８、２０若しくは２２のアミノ酸配列、及びこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖又は軽鎖の可変領域を含んでなるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００２０】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９若しくは２１、又は配列番号２、４、６、１０、１２、１４、１６、１８、２０若しくは２２のアミノ酸配列、及びこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖又は軽鎖の可変領域を含んでなる抗体に関する。
【００２１】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９又は２１、及び配列番号２、４、６、１０、１２、１４、１６、１８、２０又は２２のアミノ酸配列、並びにこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる抗体に関する。
【００２２】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００２３】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００２４】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２８のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７及び２８の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００２５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７及び２８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００２６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７及び２８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【００２７】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２３、２４、２５、２６、２７、若しくは２８、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【００２８】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号２５のポリペプチドを含んでなる。
【００２９】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２８からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２８に列挙した配列の保存的置換であってもよい。
【００３０】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５、並びに配列番号２６、２７、及び２８のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなるか、又は前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、及び２８に列挙した配列の保存的置換であってもよい。
【００３１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ３３が、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＳｅｒ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号２３記載のＣＤＲＨ１又は配列番号２３の変異体、
ｉｉ）Ｔｒｐ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＴｙｒ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＳｅｒ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＶａｌ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ５８が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号２４記載のＣＤＲＨ２又は配列番号２４の変異体、
ｉｉｉ）Ｖａｌ１０２が、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号２５記載のＣＤＲＨ３又は配列番号２５の変異体、
ｉｖ）Ａｓｎ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＩｌｅ２９が、Ｖａｌに置換されている及び／又はＴｙｒ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＳｅｒ３１が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｎ３２が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｌａ３４が、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号２６記載のＣＤＲＬ１又は配列番号２６の変異体、
ｖ）Ａｌａ５１が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号２７記載のＣＤＲＬ２又は配列番号２７の変異体、並びに
ｖｉ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＨｉｓ９０が、Ｇｌｎ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｐｈｅ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＴｒｐ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｈｒ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号２８記載のＣＤＲＬ３又は配列番号２８の変異体。
【００３２】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号２３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号２４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号２５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号２６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号２７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号２８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００３３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号２５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号２３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号２４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号２６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号２７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号２８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｍｅｔ
位置６９  Ｐｈｅ
位置７１  Ｌｅｕ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｌｅｕ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｇｌｎ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００３４】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５、又は配列番号２３、２４、及び２５のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００３５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７又は２８から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００３６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７及び２８からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００３７】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号２３、２４、及び２５のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号２６、２７、及び２８のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【００３８】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００３９】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００４０】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、及び３４のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００４１】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００４２】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【００４３】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２９、３０、３１、３２、３３、若しくは３４、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【００４４】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号３１のポリペプチドを含んでなる。
【００４５】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、及び３４からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００４６】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号２９、３０、及び３１、並びに配列番号３２、３３、及び３４のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００４７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｒｙ３３が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号２９記載のＣＤＲＨ１又は配列番号２９の変異体、
ｉｉ）Ａｓｐ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＶａｌ５１が、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｐ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｒｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｐ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｐ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ５８が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号３０記載のＣＤＲＨ２又は配列番号３０の変異体、
ｉｉｉ）Ｖａｌ１０２が、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号３１記載のＣＤＲＨ３又は配列番号３２の変異体、
ｉｖ）Ａｓｐ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＩｌｅ２９が、Ｖａｌに置換されている及び／又はＡｒｇ３０が、Ｔｒｙ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＡｓｎ３１が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＴｒｙ３２が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｓｎ３４が、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号３２記載のＣＤＲＬ１又は配列番号３２の変異体、
ｖ）Ｔｈｒ５１が、Ａｌａ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号３３記載のＣＤＲＬ２又は配列番号３３の変異体、並びに
ｖｉ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ａｌａ９１が、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＡｓｎ９２が、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｈｒ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＬｅｕ９４が、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号３４記載のＣＤＲＬ３又は配列番号３４の変異体。
【００４８】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号２９記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号３０記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号３１記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号３２記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号３３記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号３４記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００４９】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号３１記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号２９記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号３０記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号３２記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号３３記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号３４記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｇｌｎ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｐｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００５０】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号２９、３０、及び３１、又は配列番号３２、３３、及び３４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００５１】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３又は３４から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００５２】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号２９、３０、３１、３２、３３及び３４からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００５３】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号２９、３０、及び３１のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号３２、３３、及び３４のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【００５４】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００５５】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００５６】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、及び４０のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００５７】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００５８】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【００５９】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号３５、３６、３７、３８、３９、若しくは４０、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【００６０】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号３７のポリペプチドを含んでなる。
【００６１】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、及び４０からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００６２】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号３５、３６、及び３７、並びに配列番号３８、３９、及び４０のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００６３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ａｓｎ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＡｓｐ３３が、Ｔｒｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＩｌｅ３４が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号３５記載のＣＤＲＨ１又は配列番号３５の変異体、
ｉｉ）Ｔｒｐ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＰｈｅ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＧｌｙ５３が、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｐ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＳｅｒ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＬｙｓ５８が、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号３６記載のＣＤＲＨ２又は配列番号３６の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号３７記載のＣＤＲＨ３又は配列番号３７の変異体、
ｉｖ）Ａｓｐ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＶａｌ２９が、Ｉｌｅに置換されている及び／又はＧｌｙ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｌａ３２が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＶａｌ３３が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｌａ３４が、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号３８記載のＣＤＲＬ１又は配列番号３８の変異体、
ｖ）Ｔｈｒ５１が、Ａｌａ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号３９記載のＣＤＲＬ２又は配列番号３９の変異体、並びに
ｖｉ）Ｈｉｓ８９が、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｔｙｒ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＶａｌに置換されている及び／又はＡｓｎ９２が、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＡｓｎ９３が、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｙｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＬｅｕ９６が、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号４０記載のＣＤＲＬ３又は配列番号４０の変異体。
【００６４】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号３５記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号３６記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号３７記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号３８記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号３９記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号４０記載のＣＤＲＬ３、及び
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｔｈｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００６５】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号３７記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号３５記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号３６記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号３８記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号３９記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号４０記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｌｅｕ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｔｈｒ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｔｈｒ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００６６】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号３５、３６、及び３７、又は配列番号３８、３９、及び４０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００６７】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９又は４０から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００６８】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９及び４０からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００６９】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号３５、３６、及び３７のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号３８、３９、及び４０のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【００７０】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００７１】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号７及び配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００７２】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、及び４６のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００７３】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００７４】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【００７５】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４１、４２、４３、４４、４５、若しくは４６、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【００７６】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４３のポリペプチドを含んでなる。
【００７７】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、及び４６からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００７８】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４１、４２、及び４３、並びに配列番号４４、４５、及び４６のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００７９】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３３が、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＩｌｅ３４が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＨｉｓ３５が、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号４１記載のＣＤＲＨ１又は配列番号４１の変異体、
ｉｉ）Ｔｒｙ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｒｐ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＳｅｒ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＧｌｙ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＧｌｙ５８が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号４２記載のＣＤＲＨ２又は配列番号４２の変異体、
ｉｉｉ）Ｐｈｅ１０２が、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号４３記載のＣＤＲＨ３又は配列番号４３の変異体、
ｉｖ）Ｓｅｒ２５が、Ｐｒｏに置換されている及び／又はＴｈｒ２６が、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＳｅｒ２７Ａが、ＳＮＤＴＥ  Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＩｌｅ２７Ｂが、Ｌｅｕに置換されている及び／又はＶａｌ２７Ｃが、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＰｒｏ２７Ｄが、Ｈｉｓ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＡｓｎ２８が、Ａｓｐ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＨｉｓ３２が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＧｌｕ３４が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されている配列番号４４記載のＣＤＲＬ１又は配列番号４４の変異体、並びに
ｖ）Ｐｈｅ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ａｌａ９１が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＨｉｓ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＶａｌ９４が、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号４６記載のＣＤＲＬ３又は配列番号４６の変異体。
【００８０】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号４１記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号４２記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号４３記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号４４記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号４５記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号４６記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００８１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号４３記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号４１記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号４２記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号４４記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号４５記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号４６記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｍｅｔ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｖａｌ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｉｌｅ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置３  Ｌｅｕ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００８２】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４１、４２、及び４３、又は配列番号４４、４５、及び４６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００８３】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５又は４６から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００８４】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５及び４６からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００８５】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号４１、４２、及び４３のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号４４、４５、及び４６のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【００８６】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号９及び配列番号１０のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００８７】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号９及び配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【００８８】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１、及び５２のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００８９】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【００９０】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【００９１】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１、若しくは５２、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【００９２】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４９のポリペプチドを含んでなる。
【００９３】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１、及び５２からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００９４】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号４７、４８、及び４９、並びに配列番号５０、５１、及び５２のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【００９５】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｒｙ３３が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号４７記載のＣＤＲＨ１又は配列番号４７の変異体、
ｉｉ）Ａｓｐ５０が、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５４が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｎ５６が、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＡｓｎ５８が、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号４８記載のＣＤＲＨ２又は配列番号４８の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号４９記載のＣＤＲＨ３又は配列番号４９の変異体、
ｉｖ）Ｓｅｒ２７Ａが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＳｅｒ２９が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＰｈｅ３２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号５０記載のＣＤＲＬ１又は配列番号５０の変異体、並びに
ｖ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｔｙｒ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｙｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号５２記載のＣＤＲＬ３又は配列番号５２の変異体。
【００９６】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号４７記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号４８記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号４９記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号５０記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号５１記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号５２記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００９７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号４９記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号４７記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号４８記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号５０記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号５１記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号５２記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｇｌｙ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【００９８】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号４７、４８、及び４９、又は配列番号５０、５１、及び５２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【００９９】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１又は５２から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１００】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１０１】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号４７、４８、及び４９のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号５０、５１、及び５２のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１０２】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１０３】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１０４】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、及び５８のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１０５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１０６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１０７】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号５３、５４、５５、５６、５７、若しくは５８、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１０８】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号５５のポリペプチドを含んでなる。
【０１０９】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７、及び５８からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１１０】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５、並びに配列番号５６、５７、及び５８のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１１１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｒｙ３３が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号５３記載のＣＤＲＨ１又は配列番号５３の変異体、
ｉｉ）Ａｓｐ５０が、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５４が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＧｌｙ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＡｓｎ５８が、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号５４記載のＣＤＲＨ２又は配列番号５４の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号５５記載のＣＤＲＨ３又は配列番号５５の変異体、
ｉｖ）Ｓｅｒ２７Ａが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＳｅｒ２９が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＴｙｒ３２が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号５６記載のＣＤＲＬ１又は配列番号５６の変異体、並びに
ｖ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｐｈｅ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｙｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号５８記載のＣＤＲＬ３又は配列番号５８の変異体。
【０１１２】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号５３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号５４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号５５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号５６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号５７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号５８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１１３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号５５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号５３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号５４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号５６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号５７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号５８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｐｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｇｌｙ
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１１４】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５、又は配列番号５６、５７、及び５８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１１５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７又は５８から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１１６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５３、５４、５５、５６、５７及び５８からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１１７】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号５３、５４、及び５５のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号５６、５７、及び５８のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１１８】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を有する。
【０１１９】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１３及び配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを有する重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１２０】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３、及び６４のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１２１】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１２２】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１２３】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号５９、６０、６１、６２、６３、若しくは６４、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１２４】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号６１のポリペプチドを含んでなる。
【０１２５】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３、及び６４からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１２６】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号５９、６０、及び６１、並びに配列番号６２、６３、及び６４のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１２７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｒｐ３３が、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＨｉｓ３５が、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号５９記載のＣＤＲＨ１又は配列番号５９の変異体、
ｉｉ）Ａｒｇ５０が、Ｔｒｐ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＨｉｓ５２が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＳｅｒ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｒｙ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｐ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｐ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＡｓｎ５８が、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号６０記載のＣＤＲＨ２又は配列番号６０の変異体、
ｉｉｉ）Ｌｅｕ１０２が、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号６１記載のＣＤＲＨ３又は配列番号６１の変異体、
ｉｖ）Ｔｈｒ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＩｌｅ２９が、Ｖａｌに置換されている及び／又はＧｌｙ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｙｒ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＴｒｐ３２が、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｌａ３４が、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号６２記載のＣＤＲＬ１又は配列番号６２の変異体、
ｖ）Ａｌａ５１が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号６３記載のＣＤＲＬ２又は配列番号６３の変異体、並びに
ｖｉ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｌｅｕ９１が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＳｅｒ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号６４記載のＣＤＲＬ３又は配列番号６４の変異体。
【０１２８】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号５９記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号６０記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号６１記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号６２記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号６３記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号６４記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｉｌｅ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１２９】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号６１記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号５９記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号６０記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号６２記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号６３記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号６４記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｖａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｉｌｅ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｇｌｎ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１３０】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号５９、６０、及び６１、又は配列番号６２、６３、及び６４のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１３１】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３又は６４から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１３２】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号５９、６０、６１、６２、６３及び６４からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１３３】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号５９、６０、及び６１のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号６２、６３、及び６４のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１３４】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１３５】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１３６】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、及び７０のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９及び７０の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１３７】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９又は７０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１３８】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９及び７０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１３９】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６５、６６、６７、６８、６９、若しくは７０、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１４０】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号６７のポリペプチドを含んでなる。
【０１４１】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、及び７０からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９及び７０に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１４２】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号６５、６６、及び６７、並びに配列番号６８、６９、及び７０のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９及び７０に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１４３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＡｓｎ３３が、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＨｉｓ３５が、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号６５記載のＣＤＲＨ１又は配列番号６５の変異体、
ｉｉ）Ａｌａ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＴｙｒ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＧｌｙ５３が、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５４が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｐ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＳｅｒ５８が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号６６記載のＣＤＲＨ２又は配列番号６６の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号６７記載のＣＤＲＨ３又は配列番号６７の変異体、
ｉｖ）Ｓｅｒ２７Ａが、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＳｅｒ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＴｈｒ３１が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＴｙｒ３２が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号６８記載のＣＤＲＬ１又は配列番号６８の変異体、並びに
ｖ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｐｈｅ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｙｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＴｒｐ９６が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号７０記載のＣＤＲＬ３又は配列番号７０の変異体。
【０１４４】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号６５記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号６６記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号６７記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号６８記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号６９記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号７０記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ａｌａ  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１４５】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号６７記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号６５記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号６６記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号６８記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号６９記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号７０記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ａｌａ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｍｅｔ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ａｓｎ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１４６】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号６５、６６、及び６７、又は配列番号６８、６９、及び７０のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１４７】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９、及び７０から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１４８】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号６５、６６、６７、６８、６９及び７０からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１４９】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号６５、６６、及び６７のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号６８、６９、及び７０のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１５０】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１７及び配列番号１８のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１５１】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１７及び配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１５２】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１５３】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１５４】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１５５】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号７１、７２、７３、７４、７５、若しくは７６、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１５６】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７３のポリペプチドを含んでなる。
【０１５７】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１５８】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３、並びに配列番号７４、７５、及び７６のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１５９】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ３３が、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＩｌｅ３４が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＨｉｓ３５が、Ｓｅｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号７１記載のＣＤＲＨ１又は配列番号７１の変異体、
ｉｉ）Ｔｒｐ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＡｓｎ５２が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＡｓｎ５３が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＴｈｒ５４が、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＧｌｕ５６が、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ５８が、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号７２記載のＣＤＲＨ２又は配列番号７２の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号７３記載のＣＤＲＨ３又は配列番号７３の変異体、
ｉｖ）Ａｓｎ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＩｌｅ２９が、Ｖａｌに置換されている及び／又はＴｙｒ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＳｅｒ３１が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｎ３２が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｅｕ３３が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｌａ３４が、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号７４記載のＣＤＲＬ１又は配列番号７４の変異体、
ｖ）Ａｌａ５１が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号７５記載のＣＤＲＬ２又は配列番号７５の変異体、
ｖｉ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＨｉｓ９０が、Ｇｌｎ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｐｈｅ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ又はＶａｌに置換されている及び／又はＴｒｐ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＧｌｙ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｈｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＬｅｕ９６が、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号７６記載のＣＤＲＬ３又は配列番号７６の変異体。
【０１６０】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号７１記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号７２記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号７３記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号７４記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号７５記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号７６記載のＣＤＲＬ３、及び
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１６１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号７３記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号７１記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号７２記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号７４記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号７５記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号７６記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｌｅｕ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｍｅｔ
位置６９  Ｐｈｅ
位置７１  Ｌｅｕ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｌｅｕ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ｌｙｓ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｇｌｎ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１６２】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３、又は配列番号７４、７５、及び７６のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１６３】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５又は７６から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１６４】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７１、７２、７３、７４、７５及び７６からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１６５】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号７１、７２、及び７３のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号７４、７５、及び７６のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１６６】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１９及び配列番号２０のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１６７】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号１９及び配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１６８】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１６９】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１７０】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１７１】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号７７、７８、７９、８０、８１、若しくは８２、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１７２】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７９のポリペプチドを含んでなる。
【０１７３】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１７４】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号７７、７８、及び７９、並びに配列番号８０、８１、及び８２のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１７５】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ａｓｎ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｙｒ３３が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＩｌｅ３４が、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＡｓｐ３５が、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号７７記載のＣＤＲＨ１又は配列番号７７の変異体、
ｉｉ）Ｔｒｐ５０が、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＩｌｅ５１が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＰｈｅ５２が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ若しくはＴｙｒに置換されている及び／又はＧｌｙ５３が、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＳｅｒ５４が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｓｎ５６が、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＬｙｓ５８が、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号７８記載のＣＤＲＨ２又は配列番号７８の変異体、
ｉｉｉ）Ｖａｌ１０２が、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号７９記載のＣＤＲＨ３又は配列番号７９の変異体、
ｉｖ）Ａｓｐ２８が、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＶａｌ２９が、Ｉｌｅに置換されている及び／又はＧｌｙ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｔｒｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＳｅｒ３１が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＡｌａ３２が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＶａｌ３３が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている及び／又はＡｌａ３４が、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号８０記載のＣＤＲＬ１又は配列番号８０の変異体、
ｖ）Ａｌａ５１が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＶａｌに置換されている配列番号８１記載のＣＤＲＬ２又は配列番号８１の変異体、並びに
ｖｉ）Ｇｌｎ８９が、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ｔｙｒ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｈｒ９３が、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＴｙｒ９４が、Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＬｅｕ９６が、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号８２記載のＣＤＲＬ３又は配列番号８２の変異体。
【０１７６】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号７７記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号７８記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号７９記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号８０記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号８１記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号８２記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ又はＴｙｒ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ｖａｌ、Ａｌａ又はＬｅｕ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｓｅｒ又はＣｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ、Ｌｅｕ又はＰｈｅ
位置４６  Ｌｅｕ、Ａｒｇ又はＶａｌ
位置４９  Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ又はＬｙｓ
位置７１  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１７７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号７９記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号７７記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号７８記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号８０記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号８１記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号８２記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｉｌｅ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ
位置６９  Ｌｅｕ
位置７１  Ｖａｌ
位置７８  Ａｌａ
位置８０  Ｍｅｔ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｍｅｔ
位置２３  Ｓｅｒ
位置３５  Ｔｒｐ
位置３６  Ｔｙｒ
位置４６  Ｌｅｕ
位置４９  Ｔｙｒ
位置７１  Ｐｈｅ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１７８】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号７７、７８、及び７９、又は配列番号８０、８１、及び８２のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１７９】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１又は８２から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１８０】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号７７、７８、７９、８０、８１及び８２からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１８１】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号７７、７８、及び７９のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号８０、８１、及び８２のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１８２】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列、又はこれらの保存的配列修飾を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１８３】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドを含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでなる。
【０１８４】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８のＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８の配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１８５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生するハイブリドーマに関する。
【０１８６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体を産生する組換え真核細胞又は原核細胞に関する。
【０１８７】
１つの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号８３、８４、８５、８６、８７、若しくは８８、又は（ｉｉ）（ｉ）に列挙した配列の保存的配列修飾から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含んでなる。
【０１８８】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号８５のポリペプチドを含んでなる。
【０１８９】
１つの実施形態では、抗体は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８からなる群より選択される少なくとも４つのＣＤＲ配列を含んでなるか、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１９０】
１つの実施形態では、抗体は、それぞれ、配列番号８３、８４、及び８５、並びに配列番号８６、８７、及び８８のＣＤＲアミノ酸配列を含んでなる重鎖及び軽鎖の可変領域を含んでもよく、又は、前記ＣＤＲ配列のうちの１以上は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８に列挙した配列の保存的配列修飾であってもよい。
【０１９１】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）Ｔｙｒ３２が、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＴｒｙ３３が、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＭｅｔ３４が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、若しくはＴｒｐに置換されている及び／又はＴｙｒ３５が、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ若しくはＴｈｒに置換されている配列番号８３記載のＣＤＲＨ１又は配列番号８３の変異体、
ｉｉ）Ｔｈｒ５０が、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＶａｌ５１が、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＳｅｒ５２が、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ若しくはＨｉｓに置換されている及び／又はＶａｌ５３が、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ若しくはＡｓｎに置換されている及び／又はＧｌｙ５４が、Ｓｅｒに置換されている及び／又はＴｙｒ５６が、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＬｙｓ５８が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＴｙｒに置換されている配列番号８４記載のＣＤＲＨ２又は配列番号８４の変異体、
ｉｉｉ）Ｔｒｙ１０２が、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＧｌｙに置換されている配列番号８５記載のＣＤＲＨ３又は配列番号８５の変異体、
ｉｖ）Ｓｅｒ２９が、Ｖａｌ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｈｒ若しくはＧｌｕに置換されている及び／又はＶａｌ３０が、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｇｌｙ若しくはＴｈｒに置換されている及び／又はＳｅｒ３１が、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ若しくはＧｌｙに置換されている及び／又はＴｙｒ３２が、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ若しくはＡｒｇに置換されている及び／又はＭｅｔ３３が、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号８６記載のＣＤＲＬ１又は配列番号８６の変異体、並びに
ｖ）Ｈｉｓ８９が、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ若しくはＬｅｕに置換されている及び／又はＧｌｎ９０が、Ｈｉｓ若しくはＡｓｎに置換されており、Ａｒｇ９１が、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ若しくはＶａｌに置換されている及び／又はＳｅｒ９２が、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ａｌａ若しくはＡｓｐに置換されている及び／又はＳｅｒ９３が、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ａｒｇ若しくはＡｌａに置換されている及び／又はＰｈｅ９４が、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ若しくはＳｅｒに置換されている及び／又はＰｒｏ９６が、Ｔｒｐ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ若しくはＰｈｅに置換されている配列番号８８記載のＣＤＲＬ３又は配列番号８８の変異体。
【０１９２】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号８３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉ）配列番号８４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｉｉ）配列番号８５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｖ）配列番号８６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号８７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号８８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ、Ｉｌｅ又はＧｌｙ
位置４  Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置２０  Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ又はＳｅｒ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ又はＳｅｒ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕ
位置６９  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＶａｌ
位置７１  Ａｒｇ
位置７８  Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置８０  Ｌｅｕ又はＭｅｔ、
位置９０  Ｔｙｒ又はＰｈｅ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｈｉｓ又はＡｓｎ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ
位置３  Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ又はＧｌｕ
位置４  Ｍｅｔ又はＬｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１９３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は以下を含んでなる：
ｉ）配列番号８５記載のＣＤＲＨ３、
ｉｉ）配列番号８３記載のＣＤＲＨ１、
ｉｉｉ）配列番号８４記載のＣＤＲＨ２、
ｉｖ）配列番号８６記載のＣＤＲＬ１、
ｖ）配列番号８７記載のＣＤＲＬ２、
ｖｉ）配列番号８８記載のＣＤＲＬ３、
ｖｉｉ）以下の残基を含んでなる重鎖フレームワーク：
位置２  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２０  Ｌｅｕ
位置２２  Ｃｙｓ
位置２４  Ａｌａ
位置２６  Ｇｌｙ
位置２９  Ｐｈｅ
位置３６  Ｔｒｐ
位置４７  Ｔｒｐ
位置４８  Ｖａｌ
位置６９  Ｉｌｅ
位置７１  Ａｒｇ
位置７８  Ｌｅｕ
位置８０  Ｌｅｕ
位置９０  Ｔｙｒ
位置９２  Ｃｙｓ
位置９４  Ａｒｇ、及び
ｖｉｉｉ）以下の残基を含んでなる軽鎖フレームワーク：
位置２  Ｉｌｅ
位置３  Ｖａｌ
位置４  Ｌｅｕ
位置２３  Ｃｙｓ
位置３５  Ｔｒｐ
位置７１  Ｔｙｒ
位置８８  Ｃｙｓ
位置９８  Ｐｈｅ。
【０１９４】
１つの実施形態では、本発明は、それぞれ、配列番号８３、８４、及び８５、又は配列番号８６、８７、及び８８のＣＤＲ配列を含んでなる抗体の可変重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１９５】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７又は８８から選択される抗体のＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１９６】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号８３、８４、８５、８６、８７及び８８からなる群より選択される抗体の少なくとも４つのＣＤＲ配列をコードするヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターに関する。
【０１９７】
１つの実施形態では、本発明は、単一の宿主細胞において抗体（免疫グロブリン）を産生する方法であって、
（ｉ）配列番号８３、８４、及び８５のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン重鎖の可変ドメインを少なくともコードする第１のＤＮＡ配列と、配列番号８６、８７、及び８８のＣＤＲドメインを含んでなる免疫グロブリン軽鎖の可変ドメインを少なくともコードする第２のＤＮＡ配列とにより前記単一の宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｉｉ）前記形質転換された単一の宿主細胞において前記免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が別々の分子として産生されるように、前記第１のＤＮＡ配列及び第２のＤＮＡ配列を発現させる工程と、
を含み、
更に、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、異なるベクター中に存在するように実施してもよく、前記第１及び第２のＤＮＡ配列が、単一のベクター中に存在するように実施してもよい方法に関する。
【０１９８】
１つの実施形態では、本発明は、ＥＬＩＳＡアッセイ等のイムノアッセイにおいて、４以下のヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＥＮＡ−７８、ＮＡＰ２、及びＧＣＰ−２からなる群より選択される抗原に対する前述の抗体のいずれか１つの結合を完全に又は部分的にブロックする抗体に関する。１つの実施形態では、抗体が抗体の結合を１０％、２０％、４０％又は５０％超ブロックする場合、部分的なブロックが生じる。
【０１９９】
１つの実施形態では、本発明は、４以下のヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＥＮＡ−７８、ＮＡＰ２、及びＧＣＰ−２からなる群より選択される抗原に対する前述の抗体のいずれかの結合と競合する抗体に関する。
【０２００】
１つの実施形態では、本発明は、前述の抗体と薬学的に許容しうる担体とを含んでなる組成物に関する。
【０２０１】
１つの実施形態では、本発明は、哺乳類のＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害及び／又は子宮内膜症を治療又は予防する方法であって、有効な量の前述の抗体を前記哺乳類に投与することを含んでなる方法に関する。
【０２０２】
１つの実施形態では、本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、及びＥＮＡ−７８のうちの１以上の量の増加又は不均衡を特徴とする疾患又は障害、特に、ＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害又は子宮内膜症等の治療において使用するための前述の抗体に関する。
【０２０３】
１つの態様では、本発明は、哺乳類におけるＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応痛風癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症の予防及び／又は治療において使用するための前述の抗体に関する。
【０２０４】
１つの態様では、本発明は、哺乳類におけるＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症の予防及び／又は治療において使用するための薬剤の製造における前述の抗体の使用に関する。
【０２０５】
１つの態様では、本発明は、哺乳類におけるＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症を予防及び／又は治療するための薬剤の製造における前述の抗体の使用に関する。
【０２０６】
１つの実施形態では、上記哺乳類はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【０２０７】
【図１】図１は、抗体を作製するための例示的なＭＡＰセットを示す。疑念を避けるために、５つのＭＡＰペプチドユニットを示す。各ユニットは、配列番号８９〜９３の直鎖状ペプチドから選択される１つの同一のアミノ酸配列を含有する。
【発明を実施するための形態】
【０２０８】
本発明で使用する「抗体」は、「免疫グロブリン」とも称される。本発明の抗体は、単離されている。本発明で使用する用語「抗体」は、最も広い意味で、免疫グロブリン様ドメインを有する分子を指し、例えば、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体及びヘテロコンジュゲート抗体、単一可変ドメイン、ドメイン抗体、抗原結合断片、免疫学的に有効な断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２等）、単鎖Ｆｖ、ダイアボディ、Ｔａｎｄａｂｓ（商標）等が挙げられる（別の「抗体」フォーマットの概要については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ及びＨｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５年，２３巻，９号，１１２６−１１３６を参照されたい）。１つの実施形態では、本発明の抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、及び免疫学的に有効な断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２等）である。
【０２０９】
語句「単一可変ドメイン」とは、異なる可変領域又はドメインとは独立に、抗原又はエピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質の可変ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ）を指す。
【０２１０】
「ドメイン抗体」又は「ｄＡｂ」は、抗原に結合することができる「単一可変ドメイン」と同一であると考えてよい。単一可変ドメインは、ヒト抗体可変ドメインであってもよいが、げっ歯類（例えば、国際公開第００／２９００４号パンフレットに開示されている）、テンジクザメ及びラクダ科のＶＨＨｄＡｂ等の他の種に由来する単一抗体可変ドメインも含む。ラクダ科のＶＨＨは、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ及びグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドであり、天然に軽鎖が欠けている重鎖抗体を産生する。このようなＶＨＨドメインは、当技術分野において利用可能な標準技術に従ってヒト化することができ、このようなドメインは、「ドメイン抗体」であると考えられる。本発明で使用するＶＨとしては、ラクダ科のＶＨＨドメインが挙げられる。
【０２１１】
本発明で使用する用語「ドメイン」は、タンパク質の残りとは無関係な三次構造を有する折り畳みタンパク質構造を指す。一般的に、ドメインは、タンパク質の個別の機能特性に関与しており、多くの場合、タンパク質及び／又はドメインの残りの機能を失うことなく付加、除去、又は他のタンパク質に転移することができる。「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳みポリペプチドドメインである。したがって、ドメインは、完全な抗体可変ドメイン及び、例えば、抗体可変ドメインに特徴的ではない配列によって１以上のループが置換されている改変可変ドメイン、あるいは切頭されているか又はＮ末端若しくはＣ末端に伸長を含む抗体可変ドメイン、並びに完全長ドメインの結合活性及び特異性を少なくとも保持する可変ドメインの折り畳み断片を含む。ドメインは、異なる可変領域又はドメインとは無関係に抗原又はエピトープに結合することができる。
【０２１２】
抗原結合断片は、ドメイン等の非抗体タンパク質スカフォールドに１以上のＣＤＲを配置することにより提供することができる。非抗体タンパク質スカフォールド又はドメインは、例えば、以下から選択されるスカフォールドの誘導体であるドメイン等の天然リガンド以外のリガンドに結合させるためにタンパク質工学に供されたものである：ＣＴＬＡ−４（エヴィボディ）、リポカイン、プロテインＡのＺドメイン等のプロテインＡに由来する分子（アフィボディ、ＳｐＡ）、Ａドメイン（アヴィマー／マキシボディ）、ＧｒｏＥｌ及びＧｒｏＥＳ等の熱ショックタンパク質、トランスフェリン（トランスボディ）、アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、ペプチドアプタマー、Ｃ−型レクチンドメイン（テトラネクチン）、ヒトγ−クリスタリン及びヒトユビキチン（アフィリン）、ＰＤＺドメイン、ヒトプロテアーゼ阻害剤のサソリ毒素クニッツ型ドメイン、及びフィブロネクチン（アドネクチン）、これらは、その天然リガンド以外のリガンドに結合させるためにタンパク質工学に供されている。
【０２１３】
ＣＴＬＡ−４（細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原４）は、主にＣＤ４＋Ｔ細胞で発現するＣＤ２８ファミリー受容体である。その細胞外ドメインは、可変ドメイン様Ｉｇフォールドを有する。異なる結合特性を付与するために、抗体のＣＤＲに対応するループを異種配列で置換することもできる。異なる結合特異性を有するように改変されたＣＴＬＡ−４分子は、エヴィボディとしても知られている。更なる詳細については、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８（１−２），３１−４５（２００１年）を参照されたい。
【０２１４】
リポカインは、ステロイド、ビリン、レチノイド及び脂質等の小さな疎水性分子を輸送する細胞外タンパクのファミリーである。これは、異なる標的抗原に結合するように改変することができるカノニカルな構造の開放端に多くのループを有する強固なβシート二次構造を有する。アンチカリンの長さは１６０〜１８０アミノ酸であり、リポカリンに由来する。更なる詳細については、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １４８２：３３７−３５０（２０００年）、米国特許第７２５０２９７Ｂ１号明細書及び米国特許出願公開第２００７０２２４６３３号明細書を参照されたい。
【０２１５】
アフィボディは、抗原に結合するように改変することができる黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）のプロテインＡに由来するスカフォールドである。ドメインは、約５８アミノ酸の３つのへリックス束からなる。表面残基のランダム化によりライブラリが作製されている。更なる詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７，４５５−４６２（２００４年）及び欧州特許出願公開第１６４１８１８Ａ１号を参照されたい。
【０２１６】
アヴィマーは、Ａドメインスカフォールドファミリーに由来する複数ドメインタンパク質である。約３５アミノ酸のネイティブドメインは、規定のジスルフィド結合構造を有する。Ａドメインのファミリーの示す自然変動をシャッフルすることにより多様性が生じる。更なる詳細については、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（１２），１５５６−１５６１（２００５年）及びＥｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  １６（６），９０９−９１７（２００７年７月）を参照されたい。
【０２１７】
トランスフェリンは、モノマー性血清輸送糖タンパク質である。トランスフェリンは、１以上のＣＤＲ等のペプチド配列を許容表面ループに挿入することにより異なる標的抗原に結合するように改変することができる。改変されたトランスフェリンスカフォールドの例としては、トランスボディが挙げられる。更なる詳細については、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７４，２４０６６−２４０７３（１９９９年）を参照されたい。
【０２１８】
設計アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）は、細胞骨格に対する不可欠な膜タンパク質の結合を媒介するタンパク質のファミリーであるアンキリンに由来する。単一アンキリン反復は、２つのα−へリックス及びβ−ターンからなる３３残基のモチーフである。これらは、各反復の最初のα−へリックス及びβ−ターンにおける残基をランダム化するか、又は１以上のＣＤＲ等のペプチド配列を挿入することにより、異なる標的抗原に結合するように改変することができる。これらの結合界面は、モジュール数を増加させることにより増加し得る（親和性成熟の方法）。更なる詳細については、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３２，４８９−５０３（２００３年），ＰＮＡＳ  １００（４），１７００−１７０５（２００３年）、及びＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６９，１０１５−１０２８（２００７年）、米国特許出願公開第２００４０１３２０２８Ａ１号明細書を参照されたい。
【０２１９】
フィブロネクチンは、抗原に結合するように改変することができるスカフォールドである。アドネクチンは、ヒトフィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３）の１５の反復単位のうちの１０番目のドメインの天然アミノ酸配列の骨格からなる。β−サンドイッチの一端における３つのループは、対象となる治療標的をアドネクチンが特異的に認識できるように改変することができる。更なる詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１８，４３５−４４４（２００５年）、米国特許出願公開第２００８０１３９７９１号明細書、国際公開２００５０５６７６４号パンフレット、及び米国特許第６８１８４１８Ｂ１号明細書を参照されたい。
【０２２０】
ペプチドアプタマーは、定常スカフォールドタンパク質、典型的には、活性部位に挿入された拘束可変ペプチドループを含有するチオレドキシン（ＴｒｘＡ）からなるコンビナトリアルな認識分子である。更なる詳細については、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．５，７８３−７９７（２００５年）を参照されたい。
【０２２１】
ミクロボディーは、３〜４つのシステイン架橋を含有する長さ２５〜５０アミノ酸の天然に存在する微小タンパク質に由来し、微小タンパク質の例としては、ＫａｌａｔａＢ１及びコノトキシン及びノッティンが挙げられる。微小タンパク質は、微小タンパク質の折り畳み全体に影響を与えることなく、最高２５アミノ酸を含むように改変することができるループを有する。改変されたノッティンドメインの更なる詳細については、国際公開第２００８０９８７９６号パンフレットを参照されたい。
【０２２２】
他の結合ドメインとしては、異なる標的抗原結合特性を改変するためにスカフォールドとして用いられているタンパク質、例えば、ヒトγ−クリスタリン及びヒトユビキチン（アフィリン）、ヒトプロテアーゼ阻害剤のクニッツ型ドメイン、Ｒａｓ結合タンパク質ＡＦ−６のＰＤＺドメイン、サソリ毒素（カリブドトキシン）、Ｃ−型レクチンドメイン（テトラネクチン）が挙げられ、これらは、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓの第７章Ｎｏｎ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（２００７年，Ｓｔｅｆａｎ  Ｄｕｂｅｌ編）及びＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１４−２７（２００６年）に概説されている。本発明の結合ドメインは、これら代替タンパク質ドメインのいずれか、及び前記ドメインにグラフトされた本発明のＣＤＲの任意の組み合わせに由来し得る。
【０２２３】
抗原結合断片又は免疫学的に有効な断片は、部分的に重鎖又は軽鎖の可変配列を含み得る。断片の長さは、少なくとも５、６、８、又は１０アミノ酸である。あるいは、断片の長さは、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも７５、又は少なくとも１００アミノ酸である。
【０２２４】
本明細書全体にわたって、可変ドメイン配列及び完全長抗体配列におけるアミノ酸残基は、特に明記しない限り、Ｋａｂａｔの番号付け規則に従って番号付けされる。更なる情報については、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第４版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（１９８７年）を参照されたい。
【０２２５】
本発明で使用する「と交差反応する抗体」は、抗体が１つの抗原のみに結合するのではなく、他の抗原にも同様に結合することを意味する。
【０２２６】
本発明の抗体は、単離されている。
【０２２７】
「４以下」という用語は、１、２、３、又は４を意味する。
【０２２８】
本発明で使用する「中和」は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原の生物活性の部分的又は完全な阻害を指すことを意図する。例えば、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ２、ＧＣＰ−２、又はＥＮＡ−７８の生物活性のうちの１つは、好中球走化性を誘導する能力である。
【０２２９】
抗体の結合動態を測定する１つの方法は、表面プラズモン共鳴による方法である。本発明で使用する用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク濃度の変化を検出することによりリアルタイムに生体特異的相互作用を分析することを可能にする光学現象を指す。更なる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ら．（１９９３年）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ら．（１９９１年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ら．（１９９５年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ら．（１９９１年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照されたい。
【０２３０】
用語「エピトープ」は、抗体に特異的に結合することができるタンパク質決定因子を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性のある表面分類からなり、また、通常、特有の電荷特性に加えて特有の三次元構造特性を有する。
【０２３１】
本発明で使用する（ポリクローナル抗体の対語としての）「モノクローナル抗体」又はｍＡｂは、単一の分子組成の抗体分子の調製物を指す。例えば、マウスに由来するモノクローナル抗体（マウスモノクローナル抗体）は、標準的なＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎのハイブリドーマ方法論等のハイブリドーマ技術により調製することができる。
【０２３２】
抗体産生細胞は、被験体から得ることができ、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎにより最初に報告されたハイブリドーマ技術等の標準技術によりモノクローナル抗体を調製するために用いることができる（Ｂｒｏｗｎら（１９８１年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２７：５３９−４６；Ｂｒｏｗｎら（１９８０年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈら（１９７６年）ＰＮＡＳ  ７６：２９２７−３１；及びＹｅｈら（１９８２年）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２９：２６９−７５も参照されたい）。モノクローナル抗体ハイブリドーマを産生するための技術は、周知である（一般的に、Ｒ．Ｈ．Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  Ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８０年）；Ｅ．Ａ．Ｌｅｒｎｅｒ（１９８１年）Ｙａｌｅ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，５４：３８７−４０２；Ｍ．Ｌ．Ｇｅｆｔｅｒら（１９７７年）Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．，３：２３１−３６）。
【０２３３】
ヌクレオチド及びアミノ酸配列の修飾に関する「保存的配列修飾」は、前記ヌクレオチド配列によってコードされているか又は前記アミノ酸配列を含有している抗体の結合特性に対して著しい影響を与えたり変化させたりしない変化を意味する。このような保存的配列修飾は、ヌクレオチド及びアミノ酸の置換、付加、及び欠失を含む。部位特異的変異誘発及びＰＣＲ介在性突然変異誘発等の当技術分野において公知である標準技術により、修飾を配列に導入することができる。保存的アミノ酸置換としては、あるアミノ酸残基が、類似する側鎖を有する別アミノ酸残基で置換されているものが挙げられる。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、配列が具体的に開示されている抗体において非本質的であると予測されているアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基に置換されることが好ましい。したがって、１つの態様では、本発明の抗体は、具体的に開示するアミノ酸配列の保存的配列修飾を全て含む。
【０２３４】
また、本発明は、具体的に開示するアミノ酸配列の「誘導体」であって、アミノ酸残基のうちの１以上が、前記アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に著しい影響を与えたり変化させたりすることなく、例えば、アシル化又はグリコシル化により誘導されている誘導体を包含する。
【０２３５】
核酸について、用語「実質的に同一」とは、最適に整列され比較されたとき、適切にヌクレオチドを挿入又は欠失させた状態で、２つの核酸又はその設計配列のヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常、ヌクレオチドの少なくとも約９０％〜９５％、より好ましくは少なくとも約９８％〜９９．５％が同一であることを示す。あるいは、選択的なハイブリダイゼーション条件下でセグメントが相補鎖にハイブリダイズするとき、実質的に同一である。
【０２３６】
ヌクレオチド及びアミノ酸配列について、用語「同一性」は、最適に整列させ、適切に挿入又は欠失させた状態で比較したときの、２つの核酸配列又は２つのアミノ酸配列間の同一性の程度を示す。あるいは、選択的なハイブリダイゼーション条件下でＤＮＡセグメントが相補鎖にハイブリダイズするとき、実質的同一性が存在する。
【０２３７】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適に整列させるために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮して、配列が共有している同一位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。以下の非限定的な例に記載の通り、数学アルゴリズムを使用して、配列を比較し、２つの配列間の同一性パーセントを求めることができる。
【０２３８】
２つのヌクレオチド配列又はポリペプチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）におけるＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、並びにギャップ重み付け４０、５０、６０、７０、又は８０、及びギャップ長重み付け１、２、３、４、５、又は６を使用して求めることができる。２つのヌクレオチド配列又はアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８年））のアルゴリズムを使用し、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を用いて求めることもできる。更に、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）におけるＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０年））のアルゴリズムを使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、並びにギャップ重み付け１６、１４、１２、１０、８、６又は４、及びギャップ長重み付け１、２、３、４、５、又は６を使用して、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントを求めることもできる。
【０２３９】
別の核酸配列と機能的関係に配置されるとき、核酸は「機能的に連結されている」。例えば、配列の転写に影響を与える場合、プロモーター又はエンハンサーは、コード配列に機能的に連結している。調節配列の転写に関して、機能的に連結しているとは、連結されているＤＮＡ配列が隣接していることを意味し、２つのタンパク質コード領域を接合させることが必要な場合は、隣接し且つリーディングフレーム内であることを意味する。スイッチ配列について、機能的に連結しているとは、配列がスイッチ組換えに影響を与え得ることを示す。
【０２４０】
本発明で使用する用語「ベクター」は、それに連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの１種は「プラスミド」であり、これは、更なるＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、更なるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができるウイルスベクターである。特定のベクターは、それを導入する宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌の複製開始点及びエピソーム性の哺乳類ベクターを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性の哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入する際に前記宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって、前記宿主細胞のゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、機能的に連結している遺伝子の発現を導くことができる。このようなベクターは、本発明では「組換え発現ベクター」（単に「発現ベクター」）と称される。一般的に、組換ＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態をしている。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」を互換的に使用する場合があるが、その理由は、プラスミドが最も一般に用いられるベクターの形態であるためである。しかし、本発明は、等価な機能を有するウイルスベクター（例えば、複製欠損性レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）等の発現ベクターの他のこのような形態を含むことを意図する。
【０２４１】
本発明で用いられる用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」又は「組換え細胞」）は、組換え発現ベクターが導入されている細胞を指すことを意図する。このような用語は、特定の被験体細胞だけではなく、このような細胞の後代も指すことを意図していることを理解すべきである。突然変異又は環境の影響のいずれかにより特定の修飾が次の世代で生じる可能性があるので、このような後代は、実際には親細胞と同一ではない場合もあるが、本発明で使用する用語「組換え宿主細胞」の範囲に含まれる。組換え宿主細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞及びリンパ球細胞等のトランスフェクトーマが挙げられる。
【０２４２】
本発明で使用する用語「被験体」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類、並びに非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、雌ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等の非哺乳類等を含む。
【０２４３】
１．抗体の構造
インタクトな抗体
インタクトな抗体は、通常、少なくとも２本の重鎖及び軽鎖を含むヘテロ多量体の糖タンパク質である。ＩｇＭに加えて、インタクトな抗体は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０Ｋｄａのヘテロ多量体の糖タンパク質である。典型的に、各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変動する。また各重鎖及び軽鎖は、鎖内にもジスルフィド結合を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて多数の定常領域を有する。各軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ）及び他の末端に定常領域を有し、軽鎖の定常領域は、重鎖の第１の定常領域と整列し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。大部分の脊椎動物種に由来する抗体の軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基いてカッパ及びラムダと呼ばれる２種類のうちの１つに帰属し得る。その重鎖の定常領域のアミノ酸配列によって、ヒト抗体は、５つの異なるクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに帰属し得る。ＩｇＧ及びＩｇＡは、サブクラス、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２に更に細分化することができる。種による変異体が存在し、マウス及びラットは少なくともＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂを有する。抗体の可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる特に変動性の高い特定の領域により抗体に結合特異性を付与する。可変領域のより保存されている部分をフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ぶ。インタクトな重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、３つのＣＤＲによって連結されている４つのＦＲを含む。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域に極近接して保持され、他の鎖のＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は、抗体の抗原に対する結合に直接関与する訳ではないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃγ受容体への結合を介する食作用、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介する半減期／クリアランス速度、及び補体カスケードのＣ１ｑ成分を介する補体依存性細胞傷害への関与等の様々なエフェクター機能を示す。ヒトＩｇＧ２定常領域は、古典的経路によって補体を活性化するか又は抗体依存性細胞性細胞傷害を媒介する能力を欠く。ヒトＩｇＧ４定常領域は、古典的経路によって補体を活性化する能力を欠き、且つ抗体依存性細胞性細胞傷害をほんのわずかしか媒介しない。これらエフェクター機能を本質的に欠く抗体を「非溶解性」抗体と呼ぶ場合もある。
【０２４４】
ヒト抗体
ヒト抗体は、当業者に公知の多数の方法によって作製することができる。ヒト抗体は、ヒト骨髄腫又はマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株を用いてハイブリドーマ法により作製することができる。Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３，３００１，（１９８４年）及びＢｒｏｄｅｕｒ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ，１９８７年）を参照されたい。別の方法としては、ファージライブラリ又はトランスジェニックマウスの使用が挙げられ、これらは両方ともヒトＶ領域レパートリーを利用する（Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ，（１９９４年），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２，４３３−４５５、Ｇｒｅｅｎ  ＬＬ（１９９９年），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１，１１−２３）。
【０２４５】
マウスの免疫グロブリン遺伝子座がヒトの免疫グロブリン遺伝子セグメントに置換されている幾つかの系統のトランスジェニックマウスが現在入手可能である（Ｔｏｍｉｚｕｋａ  Ｋ，（２０００年）ＰＮＡＳ  ９７，７２２−７２７；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  Ｄ．Ｍ（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４，８４５−８５１；Ｍｅｎｄｅｚ  ＭＪ，１９９７年，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６を参照されたい）。抗原チャレンジの際、このようなマウスは、ヒト抗体のレパートリーを産生することができ、それから対象となる抗体を選択することができる。
【０２４６】
特に、ヒトリンパ球を放射線照射マウスに移植するＴｒｉｍｅｒａ（商標）システム（Ｅｒｅｎ  Ｒら，（１９９８年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９３：１５４−１６１を参照されたい）、ヒト（又は他の種の）リンパ球を、受動的にプールされたインビトロにおける抗体の作製手順に有効に供し、次いで、デコンボリューション処理、限界希釈、及び選択手順に供する選択リンパ球抗体システム（ＳＬＡＭ、Ｂａｂｃｏｏｋら，ＰＮＡＳ（１９９６年）９３：７８４３−７８４８を参照されたい）、及びＸｅｎｏｍｏｕｓｅ  ＩＩ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ）に留意されたい。別のアプローチは、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ  Ｉｎｃから入手可能であり、Ｍｏｒｐｈｏｄｏｍａ（商標）技術を用いる。
【０２４７】
ファージディスプレイ技術を使用して、ヒト抗体（及びその断片）を作製することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ；Ｎａｔｕｒｅ  ３４８，５５２−５５３（１９９０年）及びＧｒｉｆｆｉｔｈｓ  ＡＤら（１９９４年）ＥＭＢＯ  １３：３２４５−３２６０を参照されたい。この技術に従って、抗体のＶドメイン遺伝子を、Ｍ１３又はｆｄ等の繊維状バクテリオファージのタンパク質遺伝子のメジャーコート又はマイナーコートのいずれかにインフレームでクローニングし、（通常、ヘルパーファージを用いて）ファージ粒子の表面上に機能的抗体断片としてディスプレイする。抗体の機能特性に基いた選択により、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子が選択される。ファージディスプレイ技術を用いて、上記疾患又は障害に罹患している個体から、あるいは免疫されていないヒトドナーから採取されたヒトＢ細胞から作製されたライブラリから抗原特異的抗体を選択することができる（Ｍａｒｋｓ；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２２２，５８１−５９７，１９９１を参照されたい）。Ｆｃドメインを含むインタクトなヒト抗体が望ましい場合、望ましい定常領域を含み且つ安定な発現細胞株を確立する哺乳類の発現ベクターに、ファージディスプレイに由来する断片を再クローニングする必要がある。
【０２４８】
親和性成熟の技術（Ｍａｒｋｓ；Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌ  １０，７７９−７８３（１９９２年））を用いて、結合親和性を改善することができ、この場合、順次Ｈ及びＬ鎖のＶ領域を天然に存在する変異体で置換し、改善された結合親和性に基づいて選択することにより、一次ヒト抗体の親和性が改善される。「エピトープインプリンティング」等のこの技術の変形例も現在利用可能である。例えば、国際公開第９３／０６２１３号パンフレットを参照されたい。また、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３年）も参照されたい。
【０２４９】
キメラ及びヒト化抗体
ヒトの疾患又は障害の治療におけるインタクトな非ヒト抗体の使用では、特に抗体を反復投与した際に、患者の免疫系が前記インタクトな非ヒト抗体を非自己として認識し、中和反応を開始する場合があるという潜在的な免疫原性の問題が十分に確立されている。完全なヒト抗体（上記を参照されたい）の開発に加えて、これら問題を克服するために長年にわたって様々な技術が開発されており、一般的に、免疫された動物、例えば、マウス、ラット、又はウサギからの非ヒト抗体の比較的容易な入手性を保持しながら、インタクトな治療用抗体における非ヒトアミノ酸配列の組成を減少させることを含む。概して、これを達成するために２つのアプローチが使用されている。第１は、キメラ抗体であり、これは、一般的に、ヒトの定常領域に融合された非ヒト（例えば、マウス等のげっ歯類）の可変ドメインを含む。抗体の抗原結合部位は可変領域内に局在するので、キメラ抗体は、抗原に対する結合親和性を保持するが、ヒトの定常領域のエフェクター機能を獲得するので、上記のようなエフェクター機能を発揮することができる。キメラ抗体は、典型的に、組換えＤＮＡ方法を使用して作製される。抗体（例えばｃＤＮＡ）をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、本発明の抗体のＨ鎖及びＬ鎖の可変領域をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの典型的な起源として機能する。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れられ、次いで、発現ベクターが存在しなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞又は骨髄細胞等の宿主細胞にトランスフェクトされて、抗体を合成する。ヒトのＬ及びＨ鎖のコード配列を、対応する非ヒト（例えば、マウス）のＨ及びＬ定常領域の代わりに用いることによりＤＮＡを改変してもよい。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ；ＰＮＡＳ  ８１，６８５１（１９８４年）を参照されたい。したがって、本発明の別の実施形態は、ヒトの定常領域（ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１であってよい）に融合している、配列番号２、６、又は１０の配列を有するＶＨドメインと、配列番号４、８、又は１２の配列を有するＶＬとを含むキメラ抗体を提供する。
【０２５０】
第２のアプローチは、可変領域をヒト化することにより、抗体の非ヒト含有量を減少させるヒト化抗体の作製を含む。ヒト化のための２つの技術が、広く用いられている。第１は、ＣＤＲのグラフトによるヒト化である。ＣＤＲは、抗体のＮ末端に近接してループを構築し、フレームワーク領域により提供されるスカフォールドに備え付けられた表面を形成する。抗体の抗原結合特異性は、主にトポグラフィー、及びそのＣＤＲ表面の化学的特性によって定義される。これら特徴は、個々のＣＤＲの高次構造、ＣＤＲの相対的な配置、及びＣＤＲを含む残基の側鎖の性質及び配置によって決定される。非ヒト（例えば、マウス）抗体（「ドナー」抗体）のＣＤＲのみを好適なヒトフレームワーク（「アクセプタフレームワーク」）及び定常領域にグラフトすることにより免疫原性を大きく低下させることができる（Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１，５２２−５２５及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  Ｍら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９，１５３４−１５３６）。しかし、ＣＤＲのグラフト自体は、抗原結合特性を完全に保持させることはできないので、多くの場合、有意な抗原結合親和性を回復させたい場合、ドナー抗体のうち幾つかのフレームワーク残基をヒト化分子中に保存しておく必要がある（時に「復帰突然変異」とも呼ばれる）ことが見出されている（Ｑｕｅｅｎ  Ｃら（１９８９年）ＰＮＡＳ  ８６，１０，０２９−１０，０３３、Ｃｏ，Ｍら（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ  ３５１，５０１−５０２）。この場合、ヒトフレームワーク（ＦＲ）を提供するために、非ヒトドナー抗体に対して最も高い配列相同性を示す（典型的に、６０％以上）ヒトＶ領域をデータベースから選択してよい。ヒトＦＲの選択は、ヒトのコンセンサス又は個々のヒト抗体のいずれかから行うこともできる。必要な場合、ＣＤＲの高次構造を保存するために、ヒトアクセプターフレームワークにドナー抗体由来の重要な残基を置換して入れる。抗体のコンピュータモデリングを用いて、このような構造的に重要な残基を同定するのに役立てることができる。国際公開第９９／４８５２３号パンフレットを参照されたい。
【０２５１】
あるいは、ヒト化は、「ベニアリング」のプロセスにより行うことができる。独自のヒト及びマウスの免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域を統計分析することにより、露出残基の正確なパターンはヒト抗体とマウス抗体とで異なり、そして、大部分の個々の表面位置は少数の異なる残基に対して強い偏好性を有することが明らかになった（Ｐａｄｌａｎ  Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８，４８９−４９８及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  Ｊ．Ｔ．ら（１９９４年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５；９５９−９７３を参照されたい）。したがって、ヒト抗体で通常みられるものとは異なるフレームワーク領域内の露出残基を置換することにより、非ヒトＦｖの免疫原性を低下させることが可能である。タンパク質の抗原性は表面の接近可能性と相関している場合があるので、表面残基の置換は、マウス可変領域をヒト免疫系に「見えない」ようにするのに十分であり得る（Ｍａｒｋ  Ｇ．Ｅ．ら（１９９４年）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１１３：Ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ｐｐ１０５−１３４も参照されたい）。このヒト化の手順は、抗体の表面だけを改変し、支持残基はそのまま保つので、「ベニアリング」と呼ばれる。更なる別のアプローチは、国際公開号０４／００６９５５号パンフレットに記載されている。更なる別のアプローチとしては、国際公開号０４／００６９５５号パンフレットに記載されているもの、及び細菌の発現系を使用して配列がヒト生殖細胞系に近い抗体を産生させるＨｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ（商標）（Ｋａｌｏｂｉｏｓ）の手順が挙げられる（Ａｌｆｅｎｉｔｏ−Ｍ  Ａｄｖａｎｃｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ２００７年１月，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。別のヒト化アプローチは、フレームワーク領域等の抗体の他の領域間の相同性ではなくドナーマウス抗体のＣＤＲ領域に対するヒトＣＤＲ領域の構造的類似性に基づいてヒトアクセプターフレームワークを選択することを含む。このプロセスは、Ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ（商標）（Ｅｖｏｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．；Ｈｗａｎｇら（２００５年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：３５−４２）としても知られている。
【０２５２】
用語「由来する」は、その意味における源が、物質の物理的起源であることを定義するだけでなく、物質と構造的に同一であるがレファレンス源を起源としない物質も定義することを意図することが、当業者には明らかであろう。したがって、「ドナー抗体でみられる残基」は必ずしもドナー抗体から精製されたものである必要はない。
【０２５３】
抗体断片
本発明の特定の実施形態では、抗原結合断片である治療抗体を提供する。このような断片は、上記抗体のＦａｂ、Ｆｄ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＳｃＦｖ断片等のインタクトな抗体及び／又はヒト化抗体及び／又はキメラ抗体の機能的抗原結合断片であり得る。定常領域を欠く断片は、古典的経路によって補体を活性化するか又は抗体依存性細胞性細胞傷害を媒介する能力を欠く。従来より、このような断片は、例えば、パパイン消化によりインタクトな抗体をタンパク質分解することにより作製されるが（例えば、国際公開第９４／２９３４８号パンフレットを参照されたい）、組換え技術により形質転換された宿主細胞から直接産生させてもよい。ＳｃＦｖの産生については、Ｂｉｒｄら；（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６を参照されたい。更に、抗体断片は、下記のような様々な改変技術を使用して作製してもよい。
【０２５４】
Ｆｖ断片は、２本の鎖の相互作用エネルギーがＦＡｂ断片よりも低いと考えられる。ＶＨ及びＶＬドメインの会合を安定化させるために、これらは、ペプチド（Ｂｉｒｄら，（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら，ＰＮＡＳ，８５，５８７９−５８８３）、ジスルフィド架橋（Ｇｌｏｃｋｓｈｕｂｅｒら，（１９９０年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，１３６２−１３６７）及び「ｋｎｏｂ  ｉｎ  ｈｏｌｅ」突然変異（Ｚｈｕら（１９９７年），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，６，７８１−７８８）で連結されている。ＳｃＦｖ断片は、当業者に周知の方法により作製することができる。Ｗｈｉｔｌｏｗら（１９９１年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２，９７−１０５及びＨｕｓｔｏｎら（１９９３年）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０，１９５−２１７を参照されたい。ＳｃＦｖは、大腸菌等の細菌細胞で産生させることもできるが、より典型的には、真核細胞で産生される。ＳｃＦｖの１つの問題点は、生成物が一価性であるので多価結合により結合活性を高めることができないこと及び半減期が短いことである。これら問題点を克服する試みとしては、化学的カップリング（Ａｄａｍｓら（１９９３年）Ｃａｎ．Ｒｅｓ  ５３，４０２６−４０３４及びＭｃＣａｒｔｎｅｙら（１９９５年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８，３０１−３１４）により、又は不対Ｃ末端システイン残基を含有するＳｃＦｖの自然発生的部位特異的二量体化（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９５年）Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｐｈｙｓ  ２６，１８７−２０４）により、更なるＣ末端システインを含有するＳｃＦＶから二価の（ＳｃＦｖ’）２を作製することが挙げられる。あるいは、ペプチドリンカーを３〜１２残基まで短くすることによりＳｃＦｖに多量体を形成させて「ダイアボディ」を形成することもできる。Ｈｏｌｌｉｇｅｒら  ＰＮＡＳ（１９９３年），９０，６４４４−６４４８を参照されたい。リンカーを更に短くすることによりＳｃＦＶの三量体（「トリアボディ」、Ｋｏｒｔｔら（１９９７年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ，１０，４２３−４３３を参照されたい）及び四量体（「テトラボディ」、Ｌｅ  Ｇａｌｌら（１９９９年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，４５３，１６４−１６８を参照されたい）を生じさせることもできる。また、タンパク質を二量体化させるモチーフと遺伝的に融合させて、「ミニ抗体」（Ｐａｃｋら（１９９２年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１，１５７９−１５８４を参照されたい）及び「ミニボディ」（Ｈｕら（１９９６年），Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６，３０５５−３０６１）を形成することにより二価ＳｃＦＶ分子を構築することができる。また、ＳｃＦｖ−Ｓｃ−Ｆｖタンデム（（ＳｃＦＶ）２）は、第３のペプチドリンカーによって２つのＳｃＦｖ単位を連結させることにより作製することができる。Ｋｕｒｕｃｚら（１９９５年）Ｊ．Ｉｍｍｏｌ．１５４，４５７６−４５８２を参照されたい。二重特異性ダイアボディは、短いリンカーによって別の抗体のＶＬドメインに接続されている、ある抗体に由来するＶＨドメインからなる２つの単鎖融合生成物の非共有結合を通じて作製することができる。Ｋｉｐｒｉｙａ��ｏｖら（１９９８年），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ  ７７，７６３−７７２を参照されたい。上記のようなジスルフィド架橋若しくは「ｋｎｏｂ  ｉｎ  ｈｏｌｅ」突然変異の導入により、又は２つのハイブリッドＳｃＦｖ断片がペプチドリンカーを通して接続されている単鎖ダイアボディ（ＳｃＤｂ）の形成により、このような二重特異性ダイアボディの安定性を高めることができる。Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎら（１９９９年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２２６  １７９−１８８を参照されたい。四価の二重特異性分子は、例えば、ヒンジ領域を通してＩｇＧ分子のＣＨ３ドメイン又はＦａｂ断片にＳｃＦｖ断片を融合させることにより入手可能である。Ｃｏｌｏｍａら（１９９７年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−１６３を参照されたい。あるいは、四価の二重特異性分子は、二重特異性単鎖ダイアボディの融合により作製することができる（Ａｌｔら（１９９９年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ４５４，９０−９４を参照されたい）。また、より小さな四価の二重特異性分子は、ヘリックス−ループ−ヘリックスモチーフを含有するリンカーを用いてＳｃＦｖ−ＳｃＦｖタンデムを（ＤｉＢｉミニ抗体、Ｍｕｌｌｅｒら（１９９８年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ４３２，４５−４９）又は４つの抗体可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）を含む単鎖分子を、分子内の対合を防ぐ配向で二量体化させることにより形成することができる（タンデムダイアボディ、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９９年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３，４１−５６を参照されたい）。二重特異性Ｆ（ａｂ’）２断片は、Ｆａｂ’断片の化学的カップリングにより、又はロイシンジッパーを通じたヘテロ二量体化により作製することができる（Ｓｈａｌａｂｙら，（１９９２年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５，２１７−２２５；及びＫｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２年），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３を参照されたい）。また、単離ＶＨ及びＶＬドメインに基づくいわゆるドメイン抗体も利用可能である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ  Ｌｔｄ．）、米国特許第６，２４８，５１６号明細書；米国特許第６，２９１，１５８号明細書；米国特許第６，１７２，１９７号明細書を参照されたい。
【０２５５】
ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体は、本発明の実施形態を形成する誘導体である。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の便利な架橋法を使用して形成される、２つの共有結合した抗体で構成される。米国特許第４，６７６，９８０号を参照されたい。
【０２５６】
他の改変
また、本発明の抗体は、定常領域に任意の他の修飾を組み込んでもよい。例えば、これらの定常領域の保存されている位置における抗体のグリコシル化は、抗体機能、特に、上記のようなエフェクター機能に対する重要な作用を有することが知られている。例えば、Ｂｏｙｄら（１９９６年），Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２，１３１１−１３１８を参照されたい。１以上の炭水化物部分が付加、置換、欠失、又は修飾されている本発明の治療用抗体のグリコシル化変異体が考えられる。アスパラギン−Ｘ−セリン又はアスパラギン−Ｘ−トレオニンモチーフを導入すると炭水化物部分が酵素的に結合する可能性のある部位が作製されるので、抗体のグリコシル化を操作するために用いることができる。Ｒａｊｕら（２００１年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０，８８６８−８８７６では、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ及び／又はα，２，３シアリルトランスフェラーゼを用いる再ガラクトシル化及び／又は再シアリル化のプロセスを通してＴＮＦＲ−ＩｇＧイムノアドヘシンの末端シアリル化が増加した。末端のシアリル化を増加させると、免疫グロブリンの半減期が延長されると考えられる。ほとんどの糖タンパク質と同様に、抗体は、典型的に、グリコフォームの混合物として自然界では産生される。抗体が真核生物、特に哺乳類細胞において産生されるとき、この混合物は特に明らかである。規定のグリコフォームを製造するために様々な方法が開発されている。Ｚｈａｎｇら  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００４年），３０３，３７１，Ｓｅａｒｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，（２００１年）２９１，２３４４，Ｗａｃｋｅｒら（２００２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９８  １７９０，Ｄａｖｉｓら（２００２年）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０２，５７９，Ｈａｎｇら（２００１年）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ  ３４，７２７を参照されたい。したがって、本発明は、規定の数（例えば、７以下、例えば、５以下、例えば、２つ又は１つ）の前記抗体のグリコフォームを含む本明細書に記載する複数の治療用抗体（例えばＩｇＧ１等のＩｇＧアイソタイプであり得る）に関する。
【０２５７】
また、本発明に係る誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキルエン等の非タンパク質ポリマーにカップリングされている本発明の治療用抗体を含む。ＰＥＧに対するタンパク質のコンジュゲート化は、タンパク質の抗原性及び免疫原性を低下させることに加えて、タンパク質の半減期を延長するために確立されている技術である。Ｆａｂ’断片に加えてインタクトな抗体でも、様々な分子量及び形状（直鎖又は分岐）のＰＥＧ化の使用について研究されている。Ｋｏｕｍｅｎｉｓ  Ｉ．Ｌ．ら（２０００年）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．１９８：８３−９５を参照されたい。特定の実施形態は、ａ）古典的経路により補体を活性化する；及び抗体依存性細胞性細胞傷害を媒介するエフェクター機能を有しない、ＰＥＧにカップリングされている本発明の抗原結合断片（Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ）を含む。
【０２５８】
抗体のＦｃ領域と様々なＦｃ受容体（ＦｃγＲ）との間の相互作用は、抗体依存細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体の固定、食作用及び抗体の半減期／クリアランスを含む抗体のエフェクター機能を媒介すると考えられる。望ましいエフェクター特性に応じて、本発明の抗体のＦｃ領域に様々な修飾を行ってもよい。具体的には、ａ）古典的経路により補体を活性化する；及びｂ）抗体依存性細胞性細胞傷害を媒介する機能を本質的に欠くヒトの定常領域としては、例えば、欧州特許第０３０７４３４号明細書（国際公開第８８０７０８９号パンフレット）、欧州特許第０６２９  ２４０号明細書（国際公開第９３１７１０５号パンフレット）、及び国際公開第２００４／０１４９５３号パンフレットに開示されている位置２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、及び／又は３２２における突然変異等の特定の突然変異を含有するＩｇＧ４定常領域、ＩｇＧ２定常領域及びＩｇＧ１定常領域が挙げられる。重鎖定常領域のＣＨ２ドメイン内の残基２３５又は２３７（Ｋａｂａｔの番号付け；ＥＵインデックスシステム）における突然変異は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩに対する結合を減少させて、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を低下させることが別々に報告されている（Ｄｕｎｃａｎら  Ｎａｔｕｒｅ  １９８８，３３２；５６３−５６４；Ｌｕｎｄら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４７；２６５７−２６６２；Ｃｈａｐｐｅｌら  ＰＮＡＳ  １９９１，８８；９０３６−９０４０；Ｂｕｒｔｏｎ及びＷｏｏｆ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２，５１；１−８４；Ｍｏｒｇａｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９５，８６；３１９−３２４；Ｈｅｚａｒｅｈら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２００１，７５（２４）；１２１６１−１２１６８）。更に、幾つかの報告には、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の動員又は媒介にこれら残基の一部が関与していることが記載されている（Ｍｏｒｇａｎら，１９９５；Ｘｕら，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；２００：１６−２６；Ｈｅｚａｒｅｈら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２００１，７５（２４）；１２１６１−１２１６８）。したがって、残基２３５及び２３７が両方ともアラニン残基に突然変異すると、補体媒介性作用及びＦｃγＲ媒介性作用の両方が低下する（Ｂｒｅｔｔら  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９７，９１；３４６−３５３；Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗら  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９９５，８５；４１−４８；及び国際公開第９９５８６７９号パンフレット）。これら定常領域を含む抗体は、「非溶解性」抗体を呼ばれる場合がある。
【０２５９】
サルベージ受容体結合エピトープを抗体に組み込んで、血清半減期を延長することができる。米国特許第５，７３９，２７７号を参照されたい。
【０２６０】
現在、５種類のヒトＦｃγ受容体：ＦｃγＲ（Ｉ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及び新生児ＦｃＲｎが存在することが認められている。Ｓｈｉｅｌｄｓら，（２００１年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７６，６５９１−６６０４は、ＩｇＧ１残基の共通のセットは、全てのＦｃγＲの結合に関与しているが、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩは、この共通のセットの外側の異なる部位を利用することを立証した。以下に記載するＩｇＧ１残基の１つの群は、アラニンに変更されたとき全てのＦｃγＲに対する結合を減少させる：Ｐｒｏ−２３８、Ａｓｐ−２６５、Ａｓｐ−２７０、Ａｓｎ−２９７及びＰｒｏ−２３９。これらは全てＩｇＧのＣＨ２ドメインに存在し、ＣＨ１及びＣＨ２を連結するヒンジの近傍でクラスタを形成する。ＦｃγＲＩは、結合のためにＩｇＧ１残基の共通のセットのみを利用するが、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩは、前記共通のセットに加えて異なる残基とも相互作用する。幾つかの残基を変化させると、ＦｃγＲＩＩ（例えばＡｒｇ−２９２）又はＦｃγＲＩＩＩ（例えばＧｌｕ−２９３）に対する結合のみが減少する。幾つかの変異体では、ＦｃγＲＩＩ又はＦｃγＲＩＩＩに対する結合が改善されたが、他の受容体に対する結合は影響を受けなかった（例えば、Ｓｅｒ−２６７  Ａｌａは、ＦｃγＲＩＩに対する結合を改善したが、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合には影響を与えなかった）。他の変異体は、ＦｃγＲＩＩ又はＦｃγＲＩＩＩに対する結合を改善すると共に、他の受容体に対する結合を減少させた（例えば、Ｓｅｒ−２９８  Ａｌａは、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合を改善し、ＦｃγＲＩＩに対する結合を減少させた）。ＦｃγＲＩＩＩａの場合、最も優れた結合を示すＩｇＧ１変異体は、Ｓｅｒ−２９８、Ｇｌｕ−３３３及びＬｙｓ−３３４におけるアラニン置換の組合せを有していた。新生児ＦｃＲｎ受容体は、ＩｇＧ分子を分解から保護して血清半減期を延長させること及び組織を横断するトランスサイトーシスの両方に関与していると考えられる（Ｊｕｎｇｈａｎｓ  Ｒ．Ｐ（１９９７年）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ  １６．２９−５７及びＧｈｅｔｉｅら（２０００年）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８，７３９−７６６を参照されたい）。ヒトＦｃＲｎと直接相互作用することが見出されているヒトＩｇＧ１残基としては、Ｉｌｅ２５３、Ｓｅｒ２５４、Ｌｙｓ２８８、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｎ４３４及びＨｉｓ４３５が挙げられる。
【０２６１】
本発明の治療用抗体に、上記定常領域修飾のいずれかを組込んでもよい。
【０２６２】
２．産生方法
本発明の抗体は、ヤギ（Ｐｏｌｌｏｃｋら（１９９９年），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７−１５７を参照されたい）、ニワトリ（Ｍｏｒｒｏｗ  ＫＪＪ（２０００年）Ｇｅｎｅｔ．Ｅｎｇ．Ｎｅｗｓ  ２０：１−５５を参照されたい）、マウス（Ｐｏｌｌｏｃｋら  上記を参照されたい）又は植物（Ｄｏｒａｎ  ＰＭ，（２０００年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１，１９９−２０４，Ｍａ  ＪＫ−Ｃ（１９９８年），Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４；６０１−６０６，Ｂａｅｚ  Ｊら，ＢｉｏＰｈａｒｍ（２０００年）１３：５０−５４，Ｓｔｏｇｅｒ  Ｅら；（２０００年）Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２：５８３−５９０）等のトランスジェニック生物で産生させることができる。また、抗体は、化学合成によって作製することもできる。しかし、本発明の抗体は、典型的には、当業者に周知の組換え細胞培養技術を使用して作製される。抗体をコードするポリヌクレオチドを単離し、更に宿主細胞におけるクローニング（増幅）又は発現のためにプラスミド等の複製可能なベクターに挿入する。特に宿主細胞がＣＨＯ又はＮＳ０である場合、１つの有用な発現系は、グルタミン酸合成酵素系（例えば、Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓにより販売されている）である（以下を参照されたい）。抗体をコードするポリヌクレオチドは、従来の手順（例えば、オリゴヌクレオチドプローブ）を使用して容易に単離され、配列決定される。使用することができるベクターとしては、プラスミド、ウイルス、ファージ、トランスポゾン、ミニ染色体が挙げられ、この中でもプラスミドが典型的な実施形態である。一般的に、このようなベクターは、発現を促進するために軽鎖及び／又は重鎖ポリヌクレオチドに機能的に連結しているシグナル配列、複製開始点、１以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列を更に含む。軽鎖及び重鎖をコードするポリヌクレオチドを別々のベクターに挿入し、（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、又は形質導入により）同時に又は順次同じ宿主細胞に導入してもよく、必要に応じて、このような導入前に重鎖及び軽鎖の両方を同じベクターに挿入してもよい。
【０２６３】
遺伝子コードの冗長性により、本発明のポリペプチドをコードする、本明細書に開示するものとは別のポリヌクレオチドも利用可能であることが直ちに明らかになるであろう。
【０２６４】
シグナル配列
本発明の抗体は、成熟タンパク質のＮ末端に、特異的な切断部位を有する異種のシグナル配列を含む融合タンパク質として作製してもよい。シグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされなければならない。原核生物の宿主細胞の場合、シグナル配列は、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーであり得る。酵母分泌については、シグナル配列は、例えば酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー又は酸性ホスファターゼリーダーであり得る。例えば、国際公開第９０／１３６４６号パンフレットを参照されたい。哺乳類細胞系では、単純ヘルペスｇＤシグナル及びネイティブな免疫グロブリンシグナル配列（ヒトＩｇ重鎖等）等のウイルス分泌リーダーが利用可能である。典型的に、シグナル配列は、リーディングフレームにおいて本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドにライゲーションされる。
【０２６５】
複製開始点
複製開始点は、ほとんどのグラム陰性菌に好適なｐＢＲ３２２、ほとんどの酵母に好適な２μプラスミド、ほとんどの哺乳類細胞に好適なＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ等の様々なウイルス開始点が当技術分野において周知である。一般的に、複製開始点の成分は、大腸菌におけるベクターの増殖が必要でない限り、哺乳類の発現ベクターに組み込まれる必要はない。しかし、ＳＶ４０  ｏｒｉは、初期プロモータを含有しているため用いてもよい。
【０２６６】
選択マーカー
典型的な選択遺伝子は、（ａ）例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート又はテトラサイクリン等の抗生物質又は他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質、又は（ｂ）栄養要求性の欠損を補完したり複合培地では入手不可能な栄養素を供給したりするタンパク質をコードするか、又は（ｃ）これら両方の組合せである。選択スキームは、ベクターを含有しない宿主細胞の増殖を妨げることを含んでいてもよい。本発明の治療用抗体をコードする遺伝子による形質転換が成功した細胞は、例えば、同時に送達された選択マーカーにより付与された薬剤耐性により生存する。一例は、ＤＨＦＲ陰性宿主株において形質転換体が作製されるＤＨＦＲ選択マーカーである（例えば、Ｐａｇｅ及びＳｙｄｅｎｈａｍ  １９９１年  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８を参照されたい）。この系では、ＤＨＦＲ遺伝子を本発明の抗体のポリヌクレオチド配列と共に同時送達し、次いで、ヌクレオシドの引抜き（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）によりＤＨＦＲ陽性細胞を選択する。必要に応じて、ＤＨＦＲ阻害剤であるメトトレキセートを使用して、ＤＨＦＲ遺伝子を増幅させる形質転換体を選択する。ＤＨＦＲ遺伝子を本発明の抗体をコードする配列又はその機能的誘導体に機能的連結させることにより、ＤＨＦＲ遺伝子を増幅させて、対象となる望ましい抗体配列を同時に増幅させる。ＣＨＯ細胞は、このＤＨＦＲ／メトトレキセート選択に特に有用な細胞株であり、ＤＨＦＲ系を使用して宿主細胞を増幅及び選択する方法は当技術分野において十分に確立されている。Ｋａｕｆｍａｎ  Ｒ．Ｊ．ら  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８２年）１５９，６０１−６２１を参照されたい。概説については、Ｗｅｒｎｅｒ  ＲＧ，Ｎｏｅ  Ｗ，Ｋｏｐｐ  Ｋ，Ｓｃｈｌｕｔｅｒ  Ｍ，”Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”，Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ．４８（８）：８７０−８０，１９９８年８月を参照されたい。更なる例は、グルタミン酸合成酵素発現系（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）である。酵母で使用するのに適した選択遺伝子は、ｔｒｐ１遺伝子である。Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら  Ｎａｔｕｒｅ  ２８２，３８，１９７９年を参照されたい。
【０２６７】
プロモーター
本発明の抗体を発現させるのに適したプロモーターは、前記抗体をコードするＤＮＡ／ポリヌクレオチドに機能的に連結される。原核生物の宿主のプロモーターとしては、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン、及びＴａｃ等のハイブリッドプロモーターが挙げられる。酵母細胞で発現させるのに好適なプロモーターとしては、特に、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖系酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフクルトキナーゼ、グルコース６リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、及びグルコキナーゼが挙げられる。誘導性酵母プロモーターとしては、特に、アルコール脱水素酵素２、イソチトクロームＣ、酸性ホスファターゼ、メタロチオネイン、及び窒素代謝又はマルトース／ガラクトース利用に関与する酵素が挙げられる。
【０２６８】
哺乳類細胞系で発現させるためのプロモーターとしては、特に、ポリオーマ、鶏痘、及びアデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウィルス（特に、前初期遺伝子プロモーター）、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、アクチン、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、及び初期又は後期シミアンウイルス４０等のウイルスプロモータ；並びにＥＦ−１α等の非ウイルスプロモータを含むＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが挙げられる（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ及びＮａｇａｔａ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １９９０年  １８（１７）；５３２２）。プロモーターの選択は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づいてよい。
【０２６９】
エンハンサーエレメント
適切な場合、例えば、高等真核生物で発現させる場合、上記プロモーターに位置することが見出されているものの代わり又はそれに加えて、更なるエンハンサーエレメントを含んでもよい。好適な哺乳類のエンハンサー配列としては、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、フェトプロテイン、メタロチオニン及びインスリン由来のエンハンサーエレメントが挙げられる。あるいは、ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウィルス早期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、バキュウイルスエンハンサー又はマウスＩｇＧ２ａ遺伝子座等の真核細胞ウイルスに由来するエンハンサーエレメントを用いてもよい（国際公開第０４／００９８２３号パンフレットを参照されたい）。このようなエンハンサーは、典型的に、ベクターにおいてプロモーターの上流の部位に位置するが、例えば、非翻訳領域内又はポリアデニル化シグナルの下流等、いずこに位置してもよい。エンハンサーの選択及び配置は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づいてよい。
【０２７０】
ポリアデニル化／終結
真核細胞系では、ポリアデニル化シグナルは、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結される。このようなシグナルは、典型的に、オープンリーディングフレームの３’に配置される。哺乳類系では、非限定的なシグナルとしては、成長ホルモン、伸長因子１アルファ及びウイルスの（例えば、ＳＶ４０）遺伝子、又はレトロウイルスの長い末端反復配列に由来するシグナルが挙げられる。酵母系では、ポリアデニル化／終結シグナルの非限定的な例としては、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）及びアルコール脱水素酵素１（ＡＤＨ）遺伝子に由来するものが挙げられる。原核細胞系では、ポリアデニル化シグナルは、典型的には必要とされず、その代わりに、より短く且つより明確なターミネーター配列が通常使用される。ポリアデニル化／終結配列の選択は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づいてよい。
【０２７１】
収率を高めるための他の方法／エレメント
上記に加えて、収率を高めるために使用することができる他の機構としては、クロマチンリモデリングエレメント、イントロン、及び宿主細胞に特異的なコドン修飾が挙げられる。本発明の抗体のコドン使用頻度を変化させて、転写物及び／又は生成物の収率を高めるように宿主細胞のコドンバイアスを適応させてもよい（例えば、Ｈｏｅｋｅｍａら  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９８７年  ７（８）：２９１４−２４）。コドンの選択は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づいてよい。
【０２７２】
宿主細胞
本発明の抗体をコードするベクターをクローニング又は発現させるのに好適な宿主細胞は、例えば、原核生物、酵母、又は高等真核生物の細胞である。好適な原核細胞としては、真性細菌が挙げられ、例えば、腸内細菌科、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば、ＡＴＣＣ３１，４４６；３１，５３７；２７，３２５）等のエシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、例えばネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）等のサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）等のセラシア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び赤痢菌属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）に加えて、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びリケニホルミス菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）（旧東独国特許第２６６  ７１０号明細書を参照されたい）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）等のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）等である。酵母宿主細胞の中でも出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、分裂酵母（ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、クリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）（例えば、ＡＴＣＣ１６，０４５；１２，４２４；２４１７８；５６，５００）、ヤロウイア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（欧州特許第４０２，２２６号明細書）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  Ｐａｓｔｏｒｉｓ）（欧州特許第１８３，０７０号明細書、Ｐｅｎｇら（２００４年）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０８：１８５−１９２も参照されたい）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、トリコデルマ・リーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ）（欧州特許第２４４  ２３４号明細書）、ペニシリン、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）、並びに偽巣性コウジ菌（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びクロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）等のアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の宿主も考えられる。
【０２７３】
本発明は、原核生物及び酵母の宿主細胞について具体的に検討するが、典型的に、本発明の宿主細胞は、脊椎動物細胞である。好適な脊椎動物宿主細胞としては、ＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ  １６５０）ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）、ヒト胚腎臓系統２９３、ＰｅｒＣ６（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ．１６３２）、ＢＨＫ５７０（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ  １０３１４）、２９３（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ  １５７３）、チャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ−Ｋ１、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ  ６１、ＤＧ４４等のＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞株（Ｕｒｌａｕｂら（１９８６年）上記を参照されたい）、特に懸濁培養に適応したＣＨＯ細胞株、マウスセルトリ細胞、サル腎培養細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ＨＥＬＡ細胞、イヌ腎臓細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、ヒト肺細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、Ｈｅｐ  Ｇ２及び骨髄腫、又はリンパ腫細胞、例えばＮＳ０（米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）、Ｓｐ２／０、Ｙ０等の哺乳類細胞が挙げられる。
【０２７４】
したがって、本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載する通り、治療用抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするベクターを含む安定的に形質転換された宿主細胞を提供する。典型的に、このような宿主細胞は、軽鎖をコードする第１のベクターと前記重鎖をコードする第２のベクターとを含む。
【０２７５】
また、このような宿主細胞は、本発明の抗体の品質、機能、及び／又は収率を改良するために更に改変又は適応させてもよい。非限定的な例としては、特異的修飾（例えば、グリコシル化）酵素及びタンパク質ホールディングシャペロンの発現が挙げられる。
【０２７６】
細胞培養方法
本発明の治療用抗体をコードするベクターで形質転換された宿主細胞は、当業者に公知の任意の方法により培養することができる。宿主細胞は、スピナーフラスコ、振盪フラスコ、ローラーボトル、又は中空ファイバー系で培養することができるが、大規模に製造する場合、特に懸濁培養には撹拌槽型反応器又は袋型反応器（例えば、Ｗａｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ  ＵＳＡ）を使用することが好ましい。典型的に、撹拌槽は、例えば、スパージャー、バッフル、又は低剪断インペラ等を用いるエアレーションに適応する。気泡塔及びエアリフト反応器については、空気又は酸素の気泡を用いて直接エアレーションを行ってもよい。宿主細胞を無血清培地で培養する場合、ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８等の細胞保護剤を培地に添加して、エアレーションプロセスに起因する細胞の損傷を防ぐのを補助することが好ましい。宿主細胞の特徴に応じて、足場依存性細胞株に対する成長基材としてマイクロキャリアを使用してもよく、細胞を懸濁培養に適応させてもよい（これが典型的である）。宿主細胞、特に脊椎動物の宿主細胞の培養は、バッチ、フェッドバッチ、反復バッチ処理（Ｄｒａｐｅａｕら（１９９４年）ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５：１０３−１０９を参照されたい）、延長バッチ処理、又は灌流培養等の様々な操作方式を利用してよい。組換え技術を用いて形質転換された哺乳類宿主細胞は、ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含む培地等の血清含有培地で培養してもよいが、このような宿主細胞は、Ｋｅｅｎら（１９９５年）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １７：１５３−１６３に開示されているような合成無血清培地、又はＰｒｏＣＨＯ−ＣＤＭ若しくはＵｌｔｒａＣＨＯ（商標）（Ｃａｍｂｒｅｘ  ＮＪ，ＵＳＡ）等の市販培地で培養されることが好ましく、これら培地には、必要な場合、グルコース等のエネルギー源及び組換えインスリン等の合成成長因子が添加される。宿主細胞の無血清培養は、これら細胞が無血清条件における成長に適応していることを必要とする場合がある。１つの適応アプローチは、血清含有培地中でこのような宿主細胞を培養し、宿主細胞が無血清条件に適応できるようになるように培養培地の８０％を無血清培地に繰り返し交換することである（例えば、Ｓｃｈａｒｆｅｎｂｅｒｇ  Ｋら（１９９５年）Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｈｅ  ２１ｓｔ  ｃｅｎｔｕｒｙ（Ｂｅｕｖｅｒｙ  Ｅ．Ｃ．ら編），ｐｐ６１９−６２３，Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）。
【０２７７】
培地に分泌される本発明の抗体は、意図する用途に好適な精製度を得るために様々な技術を用いて培地から回収及び精製することができる。例えば、ヒト患者を治療するための本発明の治療用抗体の使用には、典型的に、治療用抗体を含む培養培地と比較して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを還元することにより測定したとき、少なくとも純度９５％、より典型的には９８％又は９９％の純度が要求される。第１の例では、培養培地の細胞残屑は、典型的に、遠心分離し、次いで、例えば、精密濾過、限外濾過、及び／又は深層濾過等の上清の清澄化工程を用いて除去される。あるいは、予め遠心分離せずに、精密濾過、限外濾過又は深層濾過により抗体を回収してもよい。透析及びゲル電気泳動、並びにハイドロキシアパタイト（ＨＡ）、親和性クロマトグラフィー（任意でポリヒスチジン等の親和性タギング系を含む）及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ、米国特許第５，４２９，７４６号を参照されたい）等のクロマトグラフィー技術等の様々な他の技術が利用可能である。
【０２７８】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、以下の様々な清澄化工程に従って、プロテインＡ又はＧ親和性クロマトグラフィーを使用し、その後、イオン交換及び／又はＨＡクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換、サイズ排除クロマトグラフィー、及び硫安分画等の更なるクロマトグラフィー工程を使用して捕捉される。典型的に、様々なウイルス除去工程が使用される（例えば、ＤＶ−２０フィルタを用いるナノ濾過等）。これら様々な工程後、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ以上、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ以上の本発明の抗体を含む精製された（典型的に、モノクローナルな）調製物が得られ、それが本発明の実施形態を形成する。１００ｍｇ／ｍＬ以上の濃度は、超遠心により得ることができる。このような調製物は、本発明の抗体の凝集形態を実質的に含まないことが好ましい。
【０２７９】
細菌系は、特に抗体断片の発現に適している。このような断片は、細胞内又は周辺細胞質内に局在する。当業者に公知の方法に従って不溶性周辺細胞質タンパク質を抽出及びリフォールディングして、活性タンパク質を形成することができる。Ｓａｎｃｈｅｚら（１９９９年）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７２，１３−２０；及びＣｕｐｉｔ  ＰＭら（１９９９年）Ｌｅｔｔ  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２９，２７３−２７７を参照されたい。
【０２８０】
３．医薬組成物及び投与方法
上記の通り精製された本発明の抗体の調製物は、上に概説したもの等のヒトの疾患及び障害の治療に使用するための医薬組成物に配合してもよい。典型的に、このような組成物は、公知であり且つ許容し得る薬務により要求される薬学的に許容し得る（すなわち、不活性）担体を更に含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版（１９８０年）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．を参照されたい。このような担体の例としては、好適なバッファによりｐＨ５〜８に緩衝されている生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液等の無菌担体が挙げられる。（例えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、門内に）注射又は持続注入するための医薬組成物は、目に見える粉粒体を含まないことが好ましく、０．１ｍｇ〜１０ｇの治療用抗体、典型的には、５ｍｇ〜２５ｍｇの抗体を含み得る。このような医薬組成物を調製する方法は、当業者に周知である。１つの実施形態では、医薬組成物は、単位剤形中に本発明の治療用抗体を０．１ｍｇ〜１０ｇ含み、任意で使用説明書を共に含む。本発明の医薬組成物は、当業者に周知であるか又は当業者に明らかである方法に従って、投与前に再構成するために凍結乾燥（フリーズドライ）してもよい。本発明の実施形態がＩｇＧ１アイソタイプを有する本発明の抗体を含む場合、銅触媒によるこのアイソタイプの抗体の分解の程度を低下させるために医薬組成物にクエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）又はＥＤＴＡ又はヒスチジン等の銅のキレート化剤を添加してもよい。欧州特許第０６１２２５１号明細書を参照されたい。
【０２８１】
本発明の抗体を投与するための有効量及び治療レジメンは、一般的に、経験的に決定され、患者の年齢、体重、及び健康状態、並びに治療される疾患又は障害等の要因に依存する。このような要因は、主治医の理解の範囲内である。適切な用量の選択における指針は、例えば、Ｓｍｉｔｈら（１９７７年）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに見出すことができるが、一般には、０．１ｍｇ〜１ｇである。１つの実施形態において、ヒト患者を治療するための投与レジメンでは、本発明の治療用抗体０．１ｍｇ〜１０ｇを１週間に１回若しくは２週間に１回皮下投与するか、１ヶ月若しくは２ヶ月毎に静脈内注入する。本発明の組成物は、予防的に用いてもよい。
【０２８２】
４．臨床用途
本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ２及びＥＮＡ−７８からなる群より選択される４以下の抗原に結合する能力を有する抗体に関する。また、本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ２及び／又はＥＮＡ−７８のうちの１以上の量の増加又は不均衡を特徴とする疾患又は障害、特に、ＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、及び／又は子宮内膜症を、前記抗体、前記抗体を含んでなる医薬組成物を用いて治療する方法、並びに前記抗体、前記抗体を含んでなる医薬組成物を製造する方法に関する。
【０２８３】
また、本発明は、ヒトのＩＬ−８、Ｇｒｏ−アルファ、Ｇｒｏ−ベータ、Ｇｒｏ−ガンマ、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ２及び／又はＥＮＡ−７８の量の増加又は不均衡を特徴とする疾患又は障害、特にＣＯＰＤ、変形性関節症、関節リウマチ、びらん性関節炎、喘息、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎を含む）、乾癬、移植拒絶反応、痛風、癌、急性肺傷害、急性肺疾患、敗血症、ＡＲＤＳ、末梢動脈疾患、全身性硬化症、新生児性呼吸窮迫症候群、喘息及びＣＯＰＤの増悪、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、再潅流傷害、又は子宮内膜症等を治療するための薬剤の製造における抗体の使用に関する。本発明は、ヒトの疾患又は障害の治療について主に記載したが、本発明は、非ヒト哺乳類における同様の疾患又は障害の治療においても適用することができる。
【実施例】
【０２８４】
実施例１  マウスモノクローナル抗体の作製
複数の方法及びスキームを使用して、本発明のｍＡｂを作製するためにマウスを免疫する。完全又は不完全フロイントアジュバント（ｃＦＡ又はｉＦＡ）中で混合された多重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）及び／又はインタクトな標的ケモカイン（ＩＬ−８、Ｇｒｏ−α、−β、−γ及びＥＮＡ−７８）の様々な混合物を用い、改良反復免疫化多重部位（ＲＩＭＭＳ）プロトコールに従って、ＳＪＬ／ＪＯｒｌＣｒｌマウス系統においてｍＡｂを作製した。
【０２８５】
ＭＡＰ又は多重抗原性ペプチドは、免疫化プロトコールにおいて２つの機能を発揮する。第１に、ＭＡＰにより、公知の標的アミノ酸配列を選択的に複数提示することができる。第２に、リシンコア等を介して複数コピーの配列が連結されることにより質量が増加するので、個々のペプチドの免疫原性よりも前記配列の免疫原性が高くなる（Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｊ．Ｐ．，ら．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１：７３；２４９，Ｓｃｈｏｔｔ，Ｍ．Ｅ．，ら．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏ．１９９６：１７４：１９９−２０９，Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９８８：８５；５４０９−５４１３）。図Ｉは、配列番号８９〜９３のアミノ酸配列を有するＭＡＰのセットの概略図である。ＭＡＰ中のリンカーは、リシン以外に任意のリンカーであってよい。
【０２８６】
一般的な免疫化タイムライン：
上記タイムラインによる２つの異なる免疫化プロトコールにより、本発明の幾つかのｍＡｂを作製した：
１．最初の免疫化（０日目）は、ｃＦＡ中で混合された全ての標的ケモカイン（各１０μｇ）を複数回皮下注射（後四半身、背中、及び首）することからなる。続く４回の追加免疫は、ｉＦＡ中で混合された全ての標的ケモカインの混合物（各１０μｇ）からなっていた。５回目及びその後の全ての追加免疫は、ｉＦＡ中における全ての標的ケモカイン及び５つ全ての直鎖状ＭＡＰ（各１０μｇ）のカクテルからなっていた。屠殺及び融合の３日前の最後の追加免疫は、ＰＢＳ中における全ての標的ケモカイン及び直鎖状ＭＡＰからなっており、腹腔内（ＩＰ）注入を介して送達された。
２．最初の免疫化（０日目）は、ｃＦＡ中で混合された５つ全ての直鎖状ＭＡＰ（各１０μｇ）を複数回皮下注射（後四半身、背中、及び首）することからなる。続く４回の追加免疫は、ｉＦＡ中で混合された５つ全ての直鎖状ＭＡＰの混合物（各１０μｇ）からなっていた。５回目及びその後の全ての追加免疫は、ｉＦＡ中における５つ全ての直鎖状ＭＡＰ及び全ての標的ケモカイン（各１０μｇ）のカクテルからなっていた。屠殺及び融合の３日前の最後の追加免疫は、ＰＢＳ中における５つ全ての直鎖状ＭＡＰ及び全ての標的ケモカイン（各１０μｇ）からなっており、腹腔内（ＩＰ）注入を介して送達された。
【０２８７】
上記の方法１により、表Ｉの抗体１Ｌ１３２．２３及び１Ｌ３５１．１７を作製した。上記の方法２により、表Ｉの抗体２Ｘ３５２．３、２Ｘ８１０．３及び２Ｘ９０７．１５を作製した。
【０２８８】
実施例２  ＣＸＣＲ２媒介性Ｃａ２＋動員を使用して、マウスｍＡｂによる機能的な汎阻害を確認した
ｈＣＸＣＲ２及びＧα１６でトランスフェクトされ、これらを安全に発現しているＣＨＯ−Ｋ１細胞におけるＥＬＲ＋ケモカイン誘導性［Ｃａ２＋］ｉ−動員に対する抗体の中和作用を機能的に特性評価するために、マイクロタイタープレートに基いたカルシウム動員アッセイ、ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ  ＣＡ，［Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，１９９６］）を使用した。
【０２８９】
アッセイの前日に、９６ウェルの黒壁、透明底プレート（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｖｉｅｗ）に１ウェル当たり４００００細胞の濃度で細胞をプレーティングした。１８〜２４時間後、細胞から培地を吸引し、１００μＬのロード培地（Ｅａｒｌ塩及びＬ−グルタミンを含むイーグル最低必須培地（ＥＭＥＭ）、０．１％のＢＳＡ（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、４μＭのＦｌｕｏ−４−アセトキシメチルエステル蛍光指示染料（Ｆｌｕｏ−４  ＡＭ）及び２．５ｍＭのプロベネシドを含有する）で置換した。３７℃で１時間、この染料を含有する培地中で細胞をインキュベートした。次いで、染料を含有する培地を細胞から吸引し、Ｆｌｕｏ−４  ＡＭを含まず、且つ０．１％のゼラチン（ＢＳＡを除去した）及び２．５ｍＭのプロベネシドを含む同一培地で置換した。細胞を１０分間３７℃でインキュベートし、次いで、ＫＲＨアッセイバッファ［０．１％のゼラチン及び２．５ｍＭのプロベネシドを含むＫｒｅｂｓ  Ｒｉｎｇｅｒ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（１２０ｍＭのＮａＣｌ、４，６ｍＭのＫＣｌ、１．０３ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、２５ｍＭのＮａＨＣＯ３、１．０ｍＭのＣａＣｌ２、１．１ｍＭのＭｇＣｌ２、１１ｍＭのグルコース、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）］で３回洗浄した。最終のバッファで洗浄した後、０．１％のゼラチン及び２．５のｍＭプロベネシドを含む１００μＬのＫＲＨアッセイバッファを細胞に添加し、１０分間かけて３７℃に加温した後、ＦＬＩＰＲ内に配置し、そこで染料をロードした細胞を、６ワットのアルゴンレーザからの励起光（４８８ｎｍ）に曝露した。Ｃａ２＋に結合したときのＦｌｕｏ−４の５１６ｎｍ発光強度の増加の結果として［Ｃａ２＋］ｉ動員をモニタした。発光強度の変化は、細胞質のカルシウム濃度、［Ｃａ２＋］ｉと直接関連する。１０秒間ベースラインをモニタした後、ある濃度範囲の抗体と共に予めインキュベートされている３×ＥＬＲ＋ケモカイン５０μＬを細胞プレートに添加し、１分間毎秒データを収集し、次いで、３秒間隔で更に３０秒間記録した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０３）においてプロットするために、基準読み取り値を上回る最大細胞応答をエクスポートした。
【０２９０】
３×ＥＣ８０ケモカインの前処理中に、ＥＬＲ＋ケモカインのＥＣ８０濃度のＣＸＣＲ２媒介性刺激作用を５０％中和するのに必要な抗体の濃度として、ＩＣ５０を定義した。２５μＭのＡＴＰに対する第２の細胞応答をモニタして、細胞生存率を試験した［Ｓａｒａｕ，１９９９］。
【０２９１】
Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ＫＳ，Ｎｅａｇｌｅ，ＢＤ．ＦＬＩＰＲ：ａ  ｎｅｗ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｃｃｕｒａｔｅ，ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．１９９６：１−７５．
Ｓａｒａｕ  ＨＭ，Ａｍｅｓ  ＲＳ，Ｃｈａｍｂｅｒｓ  Ｊ，Ｅｌｌｉｓ  Ｃ，Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ，Ｆｏｌｅｙ  ＪＪら  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９；５６：６５７−６６３．
【０２９２】
【表１】
2013518606.tif 000002
【０２９３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を引く。
配列番号１
５Ｄ２．２Ｄ１０重鎖
ＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＡＹＧＭＳＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＨＦＫＧＲＦＤＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＰＴＶＶＤＰＷＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２
５Ｄ２．２Ｄ１０軽鎖
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＡＡＴＮＬＧＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＴＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３
１Ａ１．４Ｃ６重鎖
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＩＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＱＧＫＳＬＥＷＩＧＤＶＮＰＤＤＧＤＴＴＹＮＱＱＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＤＤＲＴＳＧＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号４
１Ａ１．４Ｃ６軽鎖
ＤＩＱＭＴＱＳＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮＷＦＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＶＨＳＲＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＮＮＬＤＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＡＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＴＫ
配列番号５
７Ａ１２．１Ｆ１０重鎖
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＮＤＩＮＷＶＲＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＮＳＴＫＦＮＥＫＦＲＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＧＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＴＦＹＧＳＴＹＧＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号６
７Ａ１２．１Ｆ１０軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＴＤＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＥＳＥＤＣＶＤＹＦＣＨＱＹＮＮＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号７
９Ｄ１２．１Ｈ４重鎖
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＲＭＳＣＫＡＳＧＮＴＶＩＤＹＮＩＨＷＶＫＱＳＱＧＫＳＬＥＷＩＧＹＩＮＰＮＳＧＧＴＧＹＮＥＫＦＫＤＫＡＴＬＴＩＮＫＳＳＳＴＡＨＭＤＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＦＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号８
９Ｄ１２．１Ｈ４軽鎖
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＴＱＳＩＶＰＶＮＧＮＴＨＬＥＷＹＬＨＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＡＳＨＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号９
２Ｂ１２．１Ｅ１重鎖
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＮＴＮＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＦＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＧＬＧＲＩＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１０
２Ｂ１２．１Ｅ１軽鎖
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＴＦＬＨＷＹＱＱＫＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＤＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１
１７Ｄ１．１Ｄ２重鎖
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＬＲＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＫＦＫＮＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＦＹＣＡＧＬＧＲＩＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１２
１７Ｄ１．１Ｄ２軽鎖
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＦＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨＷＹＱＱＫＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＤＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＦＳＧＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１３
１Ｌ１３２．２３重鎖
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＨＷＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＨＰＳＤＮＤＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＩＧＶＹＤＧＦＩＧＬＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
配列番号１４
１Ｌ１３２．２３軽鎖
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＱＳＡＳＬＧＥＳＶＴＩＴＣＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＬＬＩＹＡＡＴＲＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＫＦＳＦＫＩＳＳＬＱＡＥＤＦＶＳＹＹＣＱＱＬＳＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１５
１Ｌ３５１．１７重鎖
ＱＡＹＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＫＱＴＰＲＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＤＬＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１６
１Ｌ３５１．１７軽鎖
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＦＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨＷＹＱＱＫＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＤＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＦＳＧＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１７
２Ｘ３５２．３重鎖
ＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＬＴＹＹＧＩＨＷＶＴＱＴＰＧＫＧＬＮＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＥＰＴＹＶＥＥＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＴＤＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＡＫＡＴＹＤＧＹＳＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１８
２Ｘ３５２．３軽鎖
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＶＳＶＧＥＳＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＱＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＤＡＴＮＬＡＨＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＳＬＲＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＦＷＧＴＰＬＴＦＧＡＧＴＲＬＥＬＫ
配列番号１９
２Ｘ８１０．３重鎖
ＱＩＱＬＱＱＳＧＰＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＤＮＹＩＤＷＶＱＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＴＦＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＥＩＤＹＤＹＤＧＦＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２０
２Ｘ８１０．３軽鎖
ＤＩＶＭＴＰＳＨＴＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＩＩＴＳＫＡＳＱＤＶＧＳＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＴＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＬＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＴＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
配列番号２１
２Ｘ９０７．１５重鎖
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＹＷＶＲＱＳＰＥＫＲＬＥＷＶＡＴＶＳＤＶＧＳＹＴＹＹＳＧＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＮＬＹＬＱＭＳＳＬＱＳＥＤＴＡＩＹＹＣＳＲＤＲＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＩＶＴＳ
配列番号２２
２Ｘ９０７．１５軽鎖
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＩＴＣＮＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＴＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＦＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２３
ＡＹＧＭＳ
配列番号２４
ＷＩＮＴＹＳＧＶＰＴＹＡＤＨＦＫＧ
配列番号２５
ＰＴＶＶＤＰＷＹＦＤＶ
配列番号２６
ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ
配列番号２７
ＡＡＴＮＬＧＤ
配列番号２８
ＱＨＦＷＴＴＰＷＴ
配列番号２９
ＤＹＹＭＮ
配列番号３０
ＤＶＮＰＤＤＧＤＴＴＹＮＱＱＦＫＤ
配列番号３１
ＤＤＲＴＳＧＹＦＤＶ
配列番号３２
ＲＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮ
配列番号３３
ＹＴＳＩＶＨＳ
配列番号３４
ＱＱＡＮＴＬＰＷＴ
配列番号３５
ＳＮＤＩＮ
配列番号３６
ＷＩＦＰＧＤＮＳＴＫＦＮＥＫＦＲＤ
配列番号３７
ＦＹＧＳＴＹＧＹＹＦＤＹ
配列番号３８
ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡ
配列番号３９
ＷＴＤＴＲＨＴ
配列番号４０
ＨＱＹＮＮＹＰＬＴ
配列番号４１
ＤＹＮＩＨ
配列番号４２
ＹＩＮＰＮＳＧＧＴＧＹＮＥＫＦＫＤ
配列番号４３
ＦＤＦ
配列番号４４
ＲＳＴＱＳＩＶＰＶＮＧＮＴＨＬＥ
配列番号４５
ＫＶＳＮＲＦＳ
配列番号４６
ＦＱＡＳＨＶＰＷＴ
配列番号４７
ＤＹＹＭＮ
配列番号４８
ＤＩＮＰＮＮＧＮＴＮＹＮＱＫＦＫＧ
配列番号４９
ＬＧＲＩＦＤＹ
配列番号５０
ＲＡＳＳＳＶＳＳＴＦＬＨ
配列番号５１
ＳＴＳＤＬＡＳ
配列番号５２
ＱＱＹＳＧＹＰＷＴ
配列番号５３
ＤＹＹＭＮ
配列番号５４
ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＮＹＮＱＫＦＫＮ
配列番号５５
ＬＧＲＩＦＤＹ
配列番号５６
ＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨ
配列番号５７
ＳＴＳＤＬＡＳ
配列番号５８
ＱＱＦＳＧＹＰＷＴ
配列番号５９
ＮＹＷＭＨ
配列番号６０
ＲＩＨＰＳＤＮＤＴＮＹＮＱＫＦＫＤ
配列番号６１
ＧＶＹＤＧＦＩＧＬ
配列番号６２
ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ
配列番号６３
ＡＡＴＲＬＡＤ
配列番号６４
ＱＱＬＳＳＴＰＷＴ
配列番号６５
ＳＹＮＭＨ
配列番号６６
ＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ
配列番号６７
ＤＬＹＹＦＤＹ
配列番号６８
ＲＡＳＳＳＶＳＳＴＹＬＨ
配列番号６９
ＳＴＳＤＬＡＳ
配列番号７０
ＱＱＦＳＧＹＰＷＴ
配列番号７１
ＹＹＧＩＨ
配列番号７２
ＷＩＮＴＮＴＧＥＰＴＹＶＥＥＦＫＧ
配列番号７３
ＡＴＹＤＧＹＳＤＹ
配列番号７４
ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡ
配列番号７５
ＤＡＴＮＬＡＨ
配列番号７６
ＱＨＦＷＧＴＰＬＴ
配列番号７７
ＤＮＹＩＤ
配列番号７８
ＷＩＦＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ
配列番号７９
ＥＩＤＹＤＹＤＧＦＦＤＶ
配列番号８０
ＫＡＳＱＤＶＧＳＡＶＡ
配列番号８１
ＷＡＳＴＲＨＴ
配列番号８２
ＱＱＹＳＴＹＰＬＴ
配列番号８３
ＤＹＹＭＹ
配列番号８４
ＴＶＳＤＶＧＳＹＴＹＹＳＧＳＶＲＧ
配列番号８５
ＤＲＴＬＤＹ
配列番号８６
ＮＡＳＳＳＶＳＹＭＨ
配列番号８７
ＳＴＳＮＬＡＳ
配列番号８８
ＨＱＲＳＳＦＰＰＴ
【図１】
2013518606.tif 000003
【配列表】
2013518606000001.app