(57)【要約】本発明はヒト遺伝子操作カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）抗体またはその抗原結合断片を提供する。加えて、本発明は、関節炎疼痛の治療のためのヒト遺伝子操作カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３アミノ酸を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１０であり、ＬＣＤＲ２は配列番号１１であり、ＬＣＤＲ３は配列番号５であり、ＨＣＤＲ１は配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２は配列番号３７であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３８であり、該ヒトＣＧＲＰ抗体はヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２】
ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号３）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１３）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹ（配列番号１４）である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項３】
ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号３）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹ（配列番号１４）である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項４】
ＬＣＤＲ１がＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮ（配列番号６）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＧＹＨＳ（配列番号７）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤ（配列番号１６）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項５】
ＬＣＤＲ１がＲＡＳＲＰＩＤＫＹＬＮ（配列番号８）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項６】
ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＤＩＤＫＹＬＮ（配列番号９）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＧＹＨＳ（配列番号７）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項７】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号４２であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号４３である、請求項１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項８】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号１７であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２２である、請求項２に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項９】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号１８であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２３である、請求項３に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１０】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号１９であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２４である、請求項４に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１１】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２０であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２５である、請求項５に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１２】
該ＬＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２１であり、該ＨＣＶＲアミノ酸配列が配列番号２６である、請求項６に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１３】
該抗体が軽鎖および重鎖を含み、該軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７であり、該重鎖アミノ酸配列が配列番号３２である、請求項８に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１４】
該抗体が軽鎖および重鎖を含み、該軽鎖アミノ酸配列が配列番号２８であり、該重鎖アミノ酸配列が配列番号３３である、請求項９に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１５】
該抗体が軽鎖および重鎖を含み、該軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９であり、該重鎖アミノ酸配列が配列番号３４である、請求項１０に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１６】
該抗体が軽鎖および重鎖を含み、該軽鎖アミノ酸配列が配列番号３０であり、該重鎖アミノ酸配列が配列番号３５である、請求項１１に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１７】
該抗体が軽鎖および重鎖を含み、該軽鎖アミノ酸配列が配列番号３１であり、該重鎖アミノ酸配列が配列番号３６である、請求項１２に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１８】
該抗体が２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々の軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７であり、各々の重鎖アミノ酸配列が配列番号３２である、請求項１３に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項１９】
該抗体が２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々の軽鎖アミノ酸配列が配列番号２８であり、各々の重鎖アミノ酸配列が配列番号３３である、請求項１４に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２０】
該抗体が２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々の軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９であり、各々の重鎖アミノ酸配列が配列番号３４である、請求項１５に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２１】
該抗体が２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々の軽鎖アミノ酸配列が配列番号３０であり、各々の重鎖アミノ酸配列が配列番号３５である、請求項１６に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２２】
該抗体が２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々の軽鎖アミノ酸配列が配列番号３１であり、各々の重鎖アミノ酸配列が配列番号３６である、請求項１７に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を、それを必要とするヒト患者に投与することを含む、骨関節炎疼痛を治療する方法。
【請求項２５】
治療に使用するための請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２６】
骨関節炎疼痛の治療に使用するための請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項２７】
骨関節炎疼痛の治療のための医薬の製造における使用のための請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体の使用。
【請求項２８】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を、それを必要とするヒト患者に投与することを含む、片頭痛を治療する方法。
【請求項２９】
片頭痛の治療に使用するための請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体。
【請求項３０】
片頭痛の治療のための医薬の製造における使用のための請求項１〜２２のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体の使用。
【請求項３１】
請求項１〜２２または２５〜２８のいずれか一項に記載のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体の抗原結合断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野、特にカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）に対する抗体の分野である。より具体的には、本発明は、ＣＧＲＰ抗体および骨関節炎疼痛または片頭痛の治療のためのＣＧＲＰ抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、中枢および末梢神経系の神経によって分泌される３７アミノ酸神経ペプチドである。ＣＧＲＰは、感覚神経において、末梢および中枢神経系の両方において広範に分布しており、多数の異なる生物活性を示す。ＣＧＲＰは役割を果たすと報告されている。三叉神経および他の神経線維から放出される場合、ＣＧＲＰは、特異的細胞表面受容体に結合することによって、その生物学的反応を媒介すると考えられている。
【０００３】
ＣＧＲＰは感覚神経の刺激により放出され、有効な血管拡張作用を有するので、ＣＧＲＰは片頭痛において役割を果たすと報告されている。ＣＧＲＰの放出により、血管透過性が増加し、およびその後、三叉神経線維を刺激するとそれらの線維により神経支配される組織における血漿タンパク質漏出（血漿タンパク質溢出）が増加する。加えて、片頭痛を患っている患者におけるＣＧＲＰの注入は、片頭痛様症状を生じるという研究が報告されている。
【０００４】
ＣＧＲＰはまた、骨関節炎（ＯＡ）において役割を果たすと報告されている。ＯＡは、世界中の多くの人々に影響を及ぼしている慢性的な病態である。関節炎における疼痛は、痛覚過敏（正常な非有害刺激に対する過敏）および自発性疼痛（安静時疼痛）により特徴付けられる。関節の炎症により、末梢性および中枢性感作が引き起こされる。末梢性感作において、正常な高閾値ＣＧＲＰ含有侵害受容器が、正常な関節運動に関連する軽い圧力に対して反応し始める。ＣＧＲＰは炎症過程の局所的促進因子（ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）として作用する。この継続した過程は最終的に脊髄において中枢性感作を導き、それにより、神経細胞が炎症および非炎症組織の刺激に反応する。ラットにおけるＯＡ疼痛の前臨床モデルにおいて、ＣＧＲＰ陽性神経線維の数の増加が観測され、疼痛の量と正に相関した。
【０００５】
ＯＡ疼痛についての現在の標準的なケアは、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）および選択的Ｃｏｘ−２阻害剤からなる。時間と共に、多くの患者は、これらの治療に反応しなくなるか、または効果的な疼痛緩和に必要とされる高用量を許容できなくなる。追跡治療は、関節内注射（ヒアルロナン）または鎮静剤からなる。最終的な治療は外科的な関節全置換術である。これらの治療の多くは、胃腸（ＮＳＡＩＤ）から心臓血管（Ｃｏｘ−２阻害剤）の範囲までマイナスの副作用を有し、扱いにくくおよび／または非常に有効ではなく（関節内注射）、乱用（鎮静剤）についての危険性を有するか、または１つの関節のみに制限される（関節内注射、外科的）。
【０００６】
片頭痛を治療するためおよび炎症性疼痛を治療するためのＣＧＲＰ抗体は開示されているが（片頭痛−特許文献１および特許文献２；ＯＡ−特許文献３の抗体Ｇ１を参照のこと）、代替物についての必要性が依然として存在している。好ましくは、代替治療は安全かつ効果的である。より好ましくは、ＯＡについての代替治療は、依存および／または乱用の危険性を有さずに患者に許容される多関節にわたる長期間の疼痛緩和を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００７／０７６３３６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００７／０５４８０９号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００９／１０９９０８Ａ１号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、それらは以下：
ａ）ＬＣＤＲ１はＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号３）であり、ＬＣＤＲ２はＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３はＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２はＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１３）であり、ＨＣＤＲ３はＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹ（配列番号１４）であり；
ｂ）ＬＣＤＲ１はＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号３）であり、ＬＣＤＲ２はＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３はＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２はＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３はＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹ（配列番号１４）であり；
ｃ）ＬＣＤＲ１はＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮ（配列番号６）であり、ＬＣＤＲ２はＹＴＳＧＹＨＳ（配列番号７）であり、ＬＣＤＲ３はＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２はＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤ（配列番号１６）であり、ＨＣＤＲ３はＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）であり；
ｄ）ＬＣＤＲ１はＲＡＳＲＰＩＤＫＹＬＮ（配列番号８）であり、ＬＣＤＲ２はＹＴＳＥＹＨＳ（配列番号４）であり、ＬＣＤＲ３はＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２はＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３はＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）であり；および
ｅ）ＬＣＤＲ１はＲＡＳＱＤＩＤＫＹＬＮ（配列番号９）であり、ＬＣＤＲ２はＹＴＳＧＹＨＳ（配列番号７）であり、ＬＣＤＲ３はＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２はＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧ（配列番号１５）であり、ＨＣＤＲ３はＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ（配列番号３９）である、
からなる群から選択され、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体はヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【０００９】
本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号３であり、ＬＣＤＲ２が配列番号４であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１３であり、ＨＣＤＲ３が配列番号１４であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片であって、ＬＣＤＲ１が配列番号３であり、ＬＣＤＲ２が配列番号４であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１５であり、ＨＣＤＲ３が配列番号１４であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を提供する。本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号６であり、ＬＣＤＲ２が配列番号７であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１６であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３９であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号８であり、ＬＣＤＲ２が配列番号４であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１５であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３９であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号９であり、ＬＣＤＲ２が配列番号７であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１５であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３９であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１０】
本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１がＲＡＳＸ１Ｘ２ＩＸ３Ｘ４ＹＬＮ（配列番号１０）であり、ＬＣＤＲ２がＹＴＳＸ５ＹＨＳ（配列番号１１）であり、ＬＣＤＲ３がＱＱＧＤＡＬＰＰＴ（配列番号５）であり、ＨＣＤＲ１がＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ（配列番号１２）であり、ＨＣＤＲ２がＡＩＹＥＧＴＧＸ６ＴＸ７ＹＩＱＫＦＡＸ８（配列番号３７）であり、ＨＣＤＲ３がＬＳＤＹＶＳＧＦＸ９Ｙ（配列番号３８）であり、Ｘ１がＱ、Ｒ、またはＫであり；Ｘ２がＤまたはＰであり、Ｘ３がＤまたはＳであり、Ｘ４がＮまたはＫであり、Ｘ５がＧまたはＥであり、Ｘ６がＫまたはＤであり、Ｘ７がＶまたはＲであり、Ｘ８がＤまたはＧであり、Ｘ９がＧまたはＳであり、該抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＶＲが
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＸ１Ｘ２ＩＸ３Ｘ４ＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＸ５ＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＸ６ＴＩＳＳＬＱＰＥＤＸ７ＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＸ８ＧＴＫＸ９ＥＩＫ
（配列中、Ｘ１がＱ、Ｋ、またはＲであり；Ｘ２がＤまたはＰであり；Ｘ３がＤまたはＳであり；Ｘ４がＫまたはＮであり；Ｘ５がＥまたはＧであり；Ｘ６がＦまたはＬであり；Ｘ７がＩまたはＦであり；Ｘ８がＱまたはＧであり；Ｘ９がＬまたはＶである）（配列番号４２）を含み、ＨＣＶＲが、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＸ１ＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＸ２ＴＸ３ＹＩＱＫＦＡＸ４ＲＶＴＸ５ＴＸ６ＤＸ７ＳＴＳＴＸ８ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＸ９ＹＷＧＱＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳ
（配列中、Ｘ１＝ＡまたはＳであり；Ｘ２＝ＫまたはＤであり；Ｘ３＝ＶまたはＲであり；Ｘ４＝ＧまたはＤであり；Ｘ５＝ＭまたはＩであり；Ｘ６＝ＲまたはＡであり；Ｘ７＝ＴまたはＫであり；Ｘ８＝ＶまたはＡであり；Ｘ９＝ＧまたはＳであり；Ｘ１０＝ＬまたはＴである）（配列番号４３）を含み、
該抗体がヒトＣＧＲＰに結合する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲは、
ａ．ＬＣＶＲが配列番号１７であり、ＨＣＶＲが配列番号２２であり；
ｂ．ＬＣＶＲが配列番号１８であり、ＨＣＶＲが配列番号２３であり；
ｃ．ＬＣＶＲが配列番号１９であり、ＨＣＶＲが配列番号２４であり；
ｄ．ＬＣＶＲが配列番号２０であり、ＨＣＶＲが配列番号２５であり；および
ｅ．ＬＣＶＲが配列番号２１であり、ＨＣＶＲが配列番号２６である、
からなる群から選択されるアミノ酸配列である、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１３】
本発明は、配列番号１７のＬＣＶＲおよび配列番号２２のＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、配列番号１８のＬＣＶＲおよび配列番号２３のＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、配列番号１９のＬＣＶＲおよび配列番号２４のＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、配列番号２０のＬＣＶＲおよび配列番号２５のＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。本発明は、配列番号２１のＬＣＶＲおよび配列番号２６のＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１４】
本発明はまた、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣおよびＨＣアミノ酸配列は、
ａ）ＬＣは配列番号２７であり、ＨＣは配列番号３２であり；
ｂ）ＬＣは配列番号２８であり、ＨＣは配列番号３３であり；
ｃ）ＬＣは配列番号２９であり、ＨＣは配列番号３４であり；
ｄ）ＬＣは配列番号３０であり、ＨＣは配列番号３５であり；および
ｅ）ＬＣは配列番号３１であり、ＨＣは配列番号３６である、
からなる群から選択されるヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１５】
一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、配列番号２７のＬＣおよび配列番号３２のＨＣを含む。別の実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、配列番号２８のＬＣおよび配列番号３３のＨＣを含む。別の実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、配列番号２９のＬＣおよび配列番号３４のＨＣを含む。別の実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、配列番号３０のＬＣおよび配列番号３５のＨＣを含む。別の実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、配列番号３１のＬＣおよび配列番号３６のＨＣを含む。一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々のＬＣアミノ酸配列は配列番号２７であり、各々のＨＣアミノ酸配列は配列番号３２である。一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々のＬＣアミノ酸配列は配列番号２８であり、各々のＨＣアミノ酸配列は配列番号３３である。一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々のＬＣアミノ酸配列は配列番号２９であり、各々のＨＣアミノ酸配列は配列番号３４である。一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々のＬＣアミノ酸配列は配列番号３０であり、各々のＨＣアミノ酸配列は配列番号３５である。一実施形態において、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含み、各々のＬＣアミノ酸配列は配列番号３１であり、各々のＨＣアミノ酸配列は配列番号３６である。本発明はまた、本明細書に開示される抗体の抗原結合断片を提供する。
【００１６】
本発明はまた、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜１．０ｎＭを有するヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号６であり、ＬＣＤＲ２が配列番号７であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１６であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３９であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体はヒトＣＧＲＰに結合し、また、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜１．０ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１９のＬＣＶＲアミノ酸配列および配列番号２４のＨＣＶＲアミノ酸配列を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜１．０ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２９のＬＣアミノ酸配列および配列番号３４のＨＣアミノ酸配列を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜１．０ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１７】
本発明はまた、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜０．５ｎＭを有するヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、ＬＣＤＲ１が配列番号６であり、ＬＣＤＲ２が配列番号７であり、ＬＣＤＲ３が配列番号５であり、ＨＣＤＲ１が配列番号１２であり、ＨＣＤＲ２が配列番号１６であり、ＨＣＤＲ３が配列番号３９であり、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体はヒトＣＧＲＰに結合し、また、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜０．５ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１９のＬＣＶＲアミノ酸配列および配列番号２４のＨＣＶＲアミノ酸配列を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜０．５ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２９のＬＣアミノ酸配列および配列番号３４のＨＣアミノ酸配列を含むヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体であって、該ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体は、実施例４に実質的に記載されているアッセイにおいてＩＣ５０＜０．５ｎＭを有する、ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体を提供する。
【００１８】
本発明はまた、本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。本発明はさらに、薬学的に許容可能な担体および必要に応じて他の治療成分と共に本発明のＣＧＲＰ抗体を含む医薬組成物を提供する。
【００１９】
さらなる態様において、本発明は、本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を、それを必要とする患者に投与することを含む、骨関節炎疼痛を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明は、本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を、それを必要とする患者に投与することを含む、片頭痛を治療する方法を提供する。
【００２０】
本発明はまた、治療に使用するための本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を提供する。別の態様において、本発明は、骨関節炎疼痛を治療するための本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を提供する。さらなる態様において、本発明は、片頭痛を治療するための本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００２１】
本発明はまた、骨関節炎疼痛の治療に使用するための本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。別の態様において、本発明はまた、片頭痛の治療に使用するための本発明のヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。本発明はまた、骨関節炎を治療するための医薬の製造におけるヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。本発明はまた、片頭痛を治療するための医薬の製造におけるヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
天然に存在する場合、完全長抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結される２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子である。各々の鎖のアミノ末端部分は、その中に含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）により抗原認識を主に担う約１００〜１１０アミノ酸の可変領域を含む。各々の鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を規定する。
【００２３】
ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、十分に保存される領域に散在する。８個の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲからなり、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配列される。軽鎖の３個のＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称され、重鎖の３個のＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成するほとんどの残基を含有する。ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付けおよび位置決定は、周知のＫａｂａｔ番号付け法に従う。
【００２４】
軽鎖はカッパまたはラムダと分類され、当該技術分野において公知の特定の定常領域によって特徴付けられる。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンと分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。ＩｇＧ抗体はさらに、サブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分けられ得る。各重鎖のタイプは、当該技術分野において周知の配列を有する特定の定常領域によって特徴付けられる。
【００２５】
本明細書に使用される場合、用語「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）とは、例えば、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む、単一のコピーまたはクローンに由来する抗体を意味し、産生される方法を意味するのはでない。本発明のＭａｂは、好ましくは、均一または実質的に均一の集団に存在する。完全なＭａｂは、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む。このようなモノクローナル抗体の「抗原結合フラグメント」としては、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、および一本鎖Ｆｖ断片が挙げられる。本発明のモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、例えばＣＤＲ移植、またはかかる技術の組み合わせ、あるいは当該技術分野において公知の他の技術により産生され得る。例えば、マウスは、ヒトＣＧＲＰまたはその断片で免疫化され得、得られた抗体は回収され、精製され得、それらが、本明細書に開示される抗体化合物と類似または同様の結合特性および機能特性を有するかどうかの決定が、以下の実施例に開示される方法によって評価され得る。抗原結合断片はまた、従来の方法によって調製され得る。抗体および抗原結合断片を産生し、精製するための方法は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第５〜８章、および１５章、ＩＳＢＮ０−８７９６９−３１４−２に見出され得る。
【００２６】
用語「ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体」とは、本発明に従う結合特性および機能特性を有し、ヒトＣＧＲＰに結合し、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ周囲の実質的にヒトまたは完全にヒトであるフレームワーク領域を有するように作製されおよび／または操作される、モノクローナル抗体を意味する。このようなヒト遺伝子操作抗体の「抗原結合フラグメント」としては、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、および一本鎖Ｆｖ断片が挙げられる。「フレームワーク領域」または「フレームワーク配列」とは、フレームワーク領域１〜４のいずれか１つを意味する。本発明に包含されるヒト遺伝子操作抗体およびその抗原結合断片には、フレームワーク領域１〜４のいずれか１つ以上が、実質的にまたは完全にヒトである（すなわち、個々の実質的または完全なヒトフレームワーク領域１〜４の可能な組み合わせのいずれかが存在する）分子が含まれる。例えば、これには、フレームワーク領域１とフレームワーク領域２、フレームワーク領域１とフレームワーク領域３、フレームワーク領域１、２と３などが実質的または完全にヒトである分子が含まれる。実質的にヒトフレームワークは、公知のヒト生殖細胞フレームワーク配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトフレームワークは、公知のヒト生殖細胞フレームワーク配列に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、または約９９％の配列同一性を有する。
【００２７】
完全にヒトフレームワークは、公知のヒト生殖細胞フレームワーク配列と同一のものである。ヒトフレームワーク生殖細胞配列は、ウェブサイトｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒを介してＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）から得られ得るか、またはＭａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  ＬｅｆｒａｎｃおよびＧｅｒａｒｄ  ＬｅｆｒａｎｃによるＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１，ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から得られ得る。例えば、生殖細胞の軽鎖フレームワークは、Ａ１１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２７、Ａ３０、ＬＩ、Ｌ１Ｉ、Ｌ１２、Ｌ２、Ｌ５、Ｌ１５、Ｌ６、Ｌ８、Ｏ１２、Ｏ２、およびＯ８からなる群より選択され得る。また、生殖細胞の重鎖フレームワーク領域は、ＶＨ２−５、ＶＨ２−２６、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−７２、ＶＨＩ−４６、ＶＨ３−９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−７４、ＶＨ４−３１、ＶＨＩ−１８、ＶＨＩ−６９、ＶＩ−１３−７、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−４８、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、およびＶＨ５−５Ｉからなる群より選択され得る。
【００２８】
本発明による類似の機能特性を示す、本明細書に開示されるものに加えてヒト遺伝子操作抗体は、いくつかの異なる方法を用いて生成され得る。本明細書に開示される特定の抗体化合物は、さらなる抗体化合物を調製するために鋳型または親抗体化合物として使用され得る。１つのアプローチにおいて、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークに移植される。新しいフレームワークの配列同一性は、通常、親抗体化合物における対応するフレームワークの配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％同一である。この移植により、親抗体のものと比べて結合親和性の減少が生じ得る。この場合、フレームワークは、Ｑｕｅｅｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：２８６９に開示されている特定の基準に基づいて特定の位置にて親フレームワークに復帰突然変異され得る。ヒト化マウス抗体に有用な方法を記載しているさらなる参考文献としては、米国特許第４，８１６，３９７号；同第５，２２５，５３９号、および同第５，６９３，７６１号；Ｌｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５−６２０に記載されているコンピュータプログラムＡＢＭＯＤおよびＥＮＣＡＤ；ならびにＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２７；ならびにＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６が挙げられる。
【００２９】
復帰突然変異とみなされる残基の同定は以下のように実施され得る：
アミノ酸が以下のカテゴリーの範囲内にある場合、使用されるヒト生殖細胞配列のフレームワークアミノ酸（「アクセプターフレームワーク」）は、親抗体化合物のフレームワーク（「ドナーフレームワーク」）由来のフレームワークアミノ酸に置換される：
（ａ）アクセプターフレームワークのヒトフレームワーク領域におけるアミノ酸は、その位置におけるヒトフレームワークには稀であるが、ドナー免疫グロブリンにおける対応するアミノ酸は、その位置におけるヒトフレームワークに典型的である；
（ｂ）アミノ酸の位置はＣＤＲの１つに直接隣接している；または
（ｃ）フレームワークアミノ酸の任意の側鎖原子は、三次元免疫グロブリンモデルにおいてＣＤＲアミノ酸の任意の原子の約５〜６オングストローム（中心〜中心）内である。
【００３０】
アクセプターフレームワークのヒトフレームワーク領域におけるアミノ酸およびドナーフレームワークにおける対応するアミノ酸の各々が、通常、その位置におけるヒトフレームワークに稀である場合、かかるアミノ酸は、その位置におけるヒトフレームワークに典型的であるアミノ酸に置換され得る。この復帰突然変異の基準により、親抗体化合物の活性を回復できる。
【００３１】
本明細書に開示される抗体化合物と類似の機能特性を示すヒト遺伝子操作抗体を生成するための別のアプローチは、フレームワークを変化させずに移植されたＣＤＲ内のアミノ酸をランダムに突然変異し、親抗体化合物のものと同程度か、またはより良い結合親和性および他の機能特性について、得られた分子をスクリーニングすることに関する。単一突然変異はまた、各ＣＤＲ内の各アミノ酸位置に導入され得、続いて、結合親和性および他の機能特性に対するかかる突然変異の効果を評価する。改良された特性を生じる単一突然変異が組み合わされて、互いに組み合わせたそれらの効果を評価してもよい。
【００３２】
さらに、前述のアプローチの両方の組み合わせが可能である。ＣＤＲ移植後、ＣＤＲにおけるアミノ酸変化を導入することに加えて、特定のフレームワーク領域を復帰突然変異してもよい。この方法論は、Ｗｕら（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２に記載されている。
【００３３】
本発明の教示を適用することで、当業者は、一般的な技術、例えば部位特異的突然変異誘発法を使用して、本明細書に開示されているＣＤＲおよびフレームワーク配列内のアミノ酸を置換でき、それによって、本発明の配列に由来するさらなる可変領域アミノ酸配列を生成する。全ての代替の天然に存在するアミノ酸が特定の置換部位に導入されてもよい。本明細書に開示される方法は、次いで、これらのさらなる可変領域アミノ酸配列をスクリーニングするために使用されて、示されるインビボでの機能を有する配列を同定できる。このように、本発明によるヒト遺伝子操作抗体およびその抗原結合部分を調製するのに適切なさらなる配列が同定され得る。好ましくは、フレームワーク内のアミノ酸置換は、本明細書に開示される４本の軽鎖および／または重鎖のフレームワーク領域のうちのいずれか１つ以上の中の１つ、２つまたは３つの位置に制限される。好ましくは、ＣＤＲ内のアミノ酸置換は、３本の軽鎖および／または重鎖ＣＤＲのいずれか１つ以上の中の１つ、２つまたは３つの位置に制限される。上記のこれらのフレームワーク領域およびＣＤＲ内の種々の変更の組み合わせもまた、可能である。
【００３４】
用語「治療している」（または「治療する」もしくは「治療」）とは、症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延、遮断、阻害、抑制、停止、減少、または反転することに関するプロセスを意味するが、ＣＧＲＰ活性に付随する全ての疾患関連の症状、状態、または障害の全ての除去に関与する必要はない。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「片頭痛」とは、Ｈｅａｄａｃｈｅ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｄａｃｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｄａｃｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００４）による「前兆のない片頭痛」（以前は、「普通型片頭痛」）および「前兆のある片頭痛」（以前は、「古典的片頭痛」）を意味する。例えば、「前兆のない片頭痛」は典型的に、拍動の性質、中程度または激しい強度を有すると特徴付けられ得、通常の身体的活動により悪化し、一側性で発生し、吐き気ならびに羞明および音恐怖に関連する。「前兆のある片頭痛」としては、色覚障害、他の感覚障害、一側脆弱性、および一部の場合において発話の困難性が挙げられ得る。
【００３６】
本発明のヒト遺伝子操作抗体は、様々な経路によって投与される、ヒト医療における医薬として使用され得る。最も好ましくは、このような組成物は非経口投与用である。このような医薬組成物は、当該技術分野において周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版（１９９５），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，Ｍａｃｋ  ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．を参照のこと）によって調製されることができ、本明細書に開示されるヒト遺伝子操作抗体と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
【００３７】
以下のアッセイの結果により、本発明の例示的なモノクローナル抗体およびその抗原結合断片が骨関節炎を治療するために使用され得ることが実証される。
【実施例】
【００３８】
実施例１  抗体の産生
抗体Ｉ〜Ｖを以下のように生成し、精製できる。最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比またはＬＣ（例えば、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、または配列番号３１）およびＨＣ（例えば、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５または配列番号３６）の両方をコードする単一のベクター系を用いて抗体を分泌するために、ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡまたはＣＨＯなどの適切な宿主細胞を発現系に一時的または安定的のいずれかでトランスフェクトする。抗体が分泌されている清澄化した培地を多くの一般的に使用されている技術のいずれかを用いて精製する。例えば、その培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）などの適合性緩衝液で平衡化したタンパク質ＡまたはＧセファロールＦＦカラムに簡便に付与できる。このカラムを洗浄して、非特異的結合成分を除去する。結合した抗体を例えばｐＨ勾配（例えば、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．８から０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ３．０）により溶出する。抗体画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥなどにより検出し、次いでプールする。更なる精製を、目的とする使用に応じて任意選択する。抗体は、一般的な技術を用いて濃縮でき、および／または、滅菌濾過できる。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術により効果的に除去できる。これらのクロマトグラフィー工程の後、抗体の純度は９９％より高い。生成物は−７０℃にて急速に凍結できるかまたは凍結乾燥できる。これらの例示的な抗体に関するアミノ酸配列を以下に示す。
【００３９】
【表１】
2013532143.tif 000002
【００４０】
【表２】
2013532143.tif 000003
【００４１】
実施例２  ヒト遺伝子操作ＣＧＲＰ抗体についての親和性（Ｋｄ）測定
例示した抗体のＣＧＲＰに対する結合親和性を、ＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）＋１５０ｍＭのＮａＣｌ＋３ｍＭのＥＤＴＡ＋０．０５％界面活性剤Ｐ２０）ランニング緩衝液を充填し、３７℃の分析温度に設定したＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００機器で、表面プラズモン共鳴アッセイを用いて決定する。全て４つのフローセル（Ｆｃ）上で固定化したタンパク質Ａ（標準的なＮＨＳ−ＥＤＣアミンカップリングを用いて生成した）を含有するＣＭ５チップを、捕捉方法を利用するために用いる。抗体サンプルをランニング緩衝液中で希釈することにより２μｇ／ｍＬで調製する。ヒトＣＧＲＰサンプルをランニング緩衝液中で希釈することにより５．０、２．５、１．３、０．６３、０．３１、および０（ブランク）ｎＭの最終濃度で調製する。新鮮な、単回使用のＣＧＲＰのアリコートを各々の複製実験に用いて、複数の凍結溶解サイクルを回避する。各々の分析サイクルは、（１）別個のフローセル（Ｆｃ２、Ｆｃ３、およびＦｃ４）上で抗体サンプルを捕捉する工程、（２）１００μＬ／分にて全てのＦｃに３５０μＬ（２１０秒）のＣＧＲＰを注入する工程、（３）解離段階をモニターするために１０分間、緩衝液フローに戻す工程、（４）グリシン（ｐＨ１．５）の５μＬ（１５秒）の注入によりチップ表面を再生する工程、（５）ＨＢＳ−ＥＰ＋の５μＬ（１５秒）の注入によりチップ表面を平衡化する工程からなる。各々のＣＧＲＰ濃度を２連で注入する。データを標準的な二重参照を用いて処理し、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００評価ソフトウェア、バージョン２．０．１を用いて１：１結合モデルにフィッティングして、会合速度（ｋｏｎ、Ｍ−１ｓ−１単位）、解離速度（ｋｏｆｆ、ｓ−１単位）、およびＲｍａｘ（ＲＵ単位）を決定する。平衡解離定数（ＫＤ）を関係ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎからモル単位にて計算する。表２に示す値はｎ回の実験の平均である。表２により、本発明の例示した抗体が２００ｐＭ未満の親和性でＣＧＲＰに結合することが実証される。
【００４２】
【表３】
2013532143.tif 000004
【００４３】
実施例３  ＭＩＡモデルにおける疼痛の軽減
モノヨード酢酸（ＭＩＡ）をラットの膝関節中に注入して急性炎症性損傷を生じさせ、次いで、注入した関節において関節組織の慢性変性を発現させる。関節損傷により生じる疼痛は、インキャパシタンステスタを用いて後肢を支える重量差により測定できる。ＭＩＡモデルは文献で十分に説明されており、種々の機構および化合物に関する有効性対疼痛を実証するために用いられている。有効性を、重量分布を部分的に正規化する化合物の能力により定期的に測定する。
【００４４】
疼痛を軽減する本発明の例示した抗体の能力を決定するために、ＭＩＡ注入時にて約８週齢のオスのＬｅｗｉｓラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用する。ラットをケージあたり２匹または３匹の群で収容し、一定温度および１２時間の明／１２時間の暗サイクルを維持する。データ収集の間以外は全ての時間において、動物に食料および水を自由に取らせることができるようにする。全ての実験をＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認されたプロトコルにしたがって実行する。
【００４５】
０日目に、各ラットの右膝には５０μＬ生理食塩水中の０．３ｍｇＭＩＡを注入し、左膝には５０μＬ生理食塩水を注入する。ＭＩＡ後の設定した日に、ヒトＩｇＧ４コントロールまたは試験ＣＧＲＰ抗体をＰＢＳ中で皮下注射する（１群あたりｎ＝６）。試験ＣＧＲＰ抗体を投与した３日後、ＭＩＡ処置した膝と生理食塩水を注入した膝との間で後肢を支える重量の差を測定するインキャパシタンス試験を用いて、疼痛を測定する。各測定値はそれぞれ１秒以上測定した３つの別の測定値の平均である。
【００４６】
ＣＧＲＰ抗体で処置した群の平均をコントロール抗体群の平均で除算し、この値を１から減算し、この得られた値を１００で乗算することによって計算した疼痛の抑制パーセントとして、データを提示する。ＣＧＲＰ処置した群もまた、ＪＭＰ（バージョン５．１および６）統計分析プログラム（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を用いる一元配置平均分析およびダネット検定によりビヒクル群と比較する。Ｐ値が０．０５より小さい場合、差異は有意であるとみなす。表３に示すように、このデータにより、本発明の例示したＣＧＲＰ抗体が有意に疼痛を軽減することが実証される。
【００４７】
【表４】
2013532143.tif 000005
【００４８】
実施例４  ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞中のＣＧＲＰ誘導性ｃＡＭＰ形成の阻害
本発明の抗体の能力を抗体Ｇ１（ＬＣＶＲ−配列番号４０およびＨＣＶＲ−配列番号４１）と比較するために、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ中のＣＧＲＰ誘導性ｃＡＭＰ形成の阻害を測定する。その受容体に対するＣＧＲＰの結合は、ｃＡＭＰ生成の刺激を生じる。ＣＧＲＰ受容体は、受容体成分タンパク質（ＲＣＰ）に細胞質で（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃａｌｌｙ）結合した、カルシトニン受容体様受容体（ＣＬＲ、Ｇ−タンパク質共役受容体）および受容体活性修飾タンパク質（ＲＡＭＰ）−１からなるヘテロ−三量体複合体である。ヒト神経上皮腫細胞株ＳＫ−Ｎ−ＭＣは、これら３つの分子を天然に発現し、そのため、シグナル変換事象に対するＣＧＲＰの効果を評価するために使用できる。ｃＡＭＰの生成は、Ｇタンパク質共役型受容体活性化についての標準的な尺度である。
【００４９】
ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞を、１０％ＦＢＳ、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸、１×１００ｍＭのＭＥＭピルビン酸ナトリウム、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを含有する、ＭＥＭ中で培養する。収集後、細胞を一度洗浄し、アッセイ緩衝液（０．５ｍＭのＩＢＭＸの最終濃度を含有するダルベッコＰＢＳで１：２に希釈した刺激緩衝液（ＭｇおよびＣａを含むＨＢＳＳ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のＢＳＡ、１００μＭのアスコルビン酸））中に再懸濁し、１ウェルあたり１５，０００細胞にて９６ウェルプレートに播種する。試験抗体またはコントロールヒトＩｇＧ４抗体を細胞に加え（アッセイ緩衝液中で連続４倍希釈、１０個の濃度）、その後、一定量のヒトα−ＣＧＲＰ（２ｎＭ、Ｂａｃｈｅｍ  Ｈ１４７０）を加えた。プレートを１時間室温にてインキュベートする。ｃＡＭＰのレベルを、均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）分析システム（Ｃｉｓｂｉｏ）により測定する。
【００５０】
種々の濃度の抗体の存在下で２ｎＭのヒトＣＧＲＰにより誘導したｃＡＭＰの量を、ＣＧＲＰのみと比較した阻害パーセントとして計算する。ｃＡＭＰ生成（ＩＣ５０）の５０％阻害を生じる抗体濃度を、次いで４パラメータ曲線フィットモデルから計算する。本明細書に記載された手順に従って、抗体ＩＩＩ（０．４１ｎＭのＩＣ５０）は、ＣＧＲＰ誘導性ｃＡＭＰの量を抗体Ｇ１（５．３６ｎＭのＩＣ５０）よりも非常に多くの程度阻害した。これはおそらく抗体ＩＩＩの速いＫｏｎ速度（Ｂｉａｃｏｒｅにより測定したＫｏｎ速度）に起因する。
【００５１】
実施例５  ラット硬膜血漿タンパク質溢出（ＰＰＥ）モデル
ラットＰＰＥモデルは、片頭痛の治療のための抗ＣＧＲＰ抗体の有効性を評価するのに使用され得る十分に確立された前臨床モデルである。
【００５２】
抗ＣＧＲＰ抗体（Ａｂ）の２ｍｇ／ｍＬ溶液を生理食塩水溶液中で調製する。その後、全ての希釈を生理食塩水で作製する。モノクローナルアイソタイプコントロール抗体（ＩｇＧ）の２ｍｇ／ｍＬ溶液も生理食塩水中で調製する。
【００５３】
Ｈａｒｌａｎ研究所（２５０から３５０ｇ）からのオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをネムブタル（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ．）で麻酔し、−２．５ｍｍにて切歯バーのセット（ｉｎｃｉｓｏｒ  ｂａｒ  ｓｅｔ）を備える定位フレーム（Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）内に入れた。正中線矢状頭皮切開（ｍｉｄ−ｌｉｎｅ  ｓａｇｉｔｔａｌ  ｓｃａｌｐ  ｉｎｃｉｓｉｏｎ）の後、２対の両側の穴を頭蓋骨に開ける（３．２ｍｍ後方、１．８および３．８ｍｍ側方、全座標はブレグマを参照）。先端を除いて絶縁したステンレス鋼刺激電極（Ｒｈｏｄｅｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ）の対を、硬膜の下９．２ｍｍの深さまで両方の脳半球中の穴を通して下げる。試験抗体または生理食塩水ビヒクルを、大腿静脈を介して静脈内に投与する（１ｍＬ／ｋｇ）。８分後、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）色素で標識化したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ＦＩＴＣ−ＢＳＡ、ＳｉｇｍａＡ９７７１）（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ．）の溶液を、タンパク質溢出に関するマーカーとして機能するように大腿静脈中に注入する。試験抗体またはビヒクルを投与してから１０分後、左側の三叉神経節をＭｏｄｅｌ  Ｓ４８  Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒを用いて１．０ｍＡ（５Ｈｚ、５ｍｓ持続時間）の電流の強さにて５分間刺激する。５分間の刺激の後、ラットを４０ｍＬの生理食塩水で放血させて殺傷する。放血はまた、血管から残留ＦＩＴＣ／ＢＳＡを洗い出す。頭蓋骨の先端を、硬膜を収集するために除去する。膜サンプルを両方の脳半球から除去し、水でリンスし、顕微鏡スライド上で平らに広げる。スライドをスライドウォーマー上で１５分間乾燥させ、７０％グリセロール／水溶液を用いてカバーガラスをかける。
【００５４】
回折格子モノクロメータおよび分光光度計を備えた蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）を、各硬膜サンプル中のＦＩＴＣ−ＢＳＡ色素の量を定量するために使用する。顕微鏡はパーソナルコンピュータとインターフェースで接続したモーター駆動ステージを備える。これは、各硬膜サンプル上の２５点（５００μｍステップ）での蛍光測定とともに、コンピュータ制御によるステージの移動を容易にする。三叉神経節の電気刺激により誘導された溢出は、同側効果である（すなわち、三叉神経節が刺激された硬膜側のみに生じる）。これにより、硬膜の他（未刺激）の半分をコントロールとして使用することができる。溢出比（すなわち、未刺激側と比較した刺激側からの硬膜における溢出量の比）を計算する。
【００５５】
配列
ＡＣＤＴＡＴＣＶＴＨＲＬＡＧＬＬＳＲＳＧＧＶＶＫＮＮＦＶＰＴＮＶＧＳＫＡＦ（配列番号１）
ＡＣＮＴＡＴＣＶＴＨＲＬＡＧＬＬＳＲＳＧＧＭＶＫＳＮＦＶＰＴＮＶＧＳＫＡＦ（配列番号２）
【００５６】
【表５】
2013532143.tif 000006
【００５７】
Ｘ１はＱ、ＲまたはＫであり；
Ｘ２はＤまたはＰであり；
Ｘ３はＤまたはＳであり；
Ｘ４はＮまたはＫであり；そして
Ｘ５はＧまたはＥである。
【００５８】
【表６】
2013532143.tif 000007
【００５９】
Ｘ６は、ＫまたはＤであり；
Ｘ７は、ＶまたはＲであり；
Ｘ８は、ＤまたはＧであり；そして
Ｘ９は、ＧまたはＳである。
【００６０】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７）
【００６１】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１８）
【００６２】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１９）
【００６３】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＰＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２０）
【００６４】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２１）
【００６５】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２）
【００６６】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）
【００６７】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４）
【００６８】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５）
【００６９】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２６）
【００７０】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）
【００７１】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２８）
【００７２】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２９）
【００７３】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＲＰＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３０）
【００７４】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３１）
【００７５】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号３２）
【００７６】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号３３）
【００７７】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号３４）
【００７８】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号３５）
【００７９】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号３６）
【００８０】
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＫＲＶＴＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＬＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＳＱＳＹＮＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４０）
【００８１】
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＳＥＳＤＡＳＡＴＨＹＡＥＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＬＡＹＦＤＹＧＬＡＩＱＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４１）
【００８２】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＸ１Ｘ２ＩＸ３Ｘ４ＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＸ５ＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＸ６ＴＩＳＳＬＱＰＥＤＸ７ＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＸ８ＧＴＫＸ９ＥＩＫ
Ｘ１＝Ｑ、Ｋ、またはＲであり；
Ｘ２＝ＤまたはＰであり；
Ｘ３＝ＤまたはＳであり；
Ｘ４＝ＫまたはＮであり；
Ｘ５＝ＥまたはＧであり；
Ｘ６＝ＦまたはＬであり；
Ｘ７＝ＩまたはＦであり；
Ｘ８＝ＱまたはＧ；そして
Ｘ９＝ＬまたはＶである。（配列番号４２）
【００８３】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＸ１ＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＸ２ＴＸ３ＹＩＱＫＦＡＸ４ＲＶＴＸ５ＴＸ６ＤＸ７ＳＴＳＴＸ８ＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＸ９ＹＷＧＱＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳ
Ｘ１＝ＡまたはＳであり；
Ｘ２＝ＫまたはＤであり；
Ｘ３＝ＶまたはＲであり；
Ｘ４＝ＧまたはＤであり；
Ｘ５＝ＭまたはＩであり；
Ｘ６＝ＲまたはＡであり；
Ｘ７＝ＴまたはＫであり；
Ｘ８＝ＶまたはＡであり；
Ｘ９＝ＧまたはＳであり；そして
Ｘ１０＝ＬまたはＴである。（配列番号４３）
【配列表】
2013532143000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年11月28日(2012.11.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2013532143000001.app
【国際調査報告】
2013532143.tif 000008
2013532143.tif 000009