(57)【要約】  本発明は、１種以上の再生促進因子、好ましくはトレフォイルファミリー因子（ＴＦＦ）ファミリー由来のペプチドもしくはタンパク質の局所沈着を用いた、気道上皮の修復および／もしくは再生を増強もしくは誘導するための方法、ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための方法を提供する。再生促進因子は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、喘息、気管支拡張、汎細気管支炎、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）およびカリニ肺炎菌の治療薬として患者に投与されるか、または、例えば有毒ガスの吸入による、完全に機能している繊毛に対して粘膜繊毛輸送系の機能を低下させる肺損傷を患う患者に投与される。本発明はまた、進行中の気道上皮の修復および／または気道繊毛の再生を増強させ、粘膜繊毛クリアランスを改善するための、治療およびまたは予防的なもしくは先制の、すなわち喫煙者における介入などあらかじめ定められた患者群に基づいた予防法を提供する。再生促進因子は、気管内、気管支内、肺胞内または気管支肺胞に投与される。例えば、エアロゾルもしくは乾燥粉末の吸入により、および／または気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）として、有効量の薬剤が投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
末端肺単位（ＴＬＵ）、肺胞間中隔、肺間質および肺柔組織における気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための医薬としての使用のための、１種以上の再生促進因子を含有する組成物。
【請求項２】
前記有効量の１種以上の再生促進因子は、気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与により対象に投与される、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記再生促進因子は、トレフォイルファミリー因子（ＴＦＦ）ファミリーもしくはその改変体由来のペプチドまたはタンパク質である、
請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記再生促進因子は、トレフォイルファミリー因子（ＴＦＦ）ファミリーペプチドのダイマーである、
請求項１〜請求項３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記再生促進因子は、トレフォイルファミリー因子３（ＴＦＦ３）またはその改変体である、
請求項１〜請求項４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記再生促進因子は、トレフォイルファミリー因子３（ＴＦＦ３）のダイマーである、
請求項１〜請求項５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記再生促進因子は、トレフォイルファミリー因子３（ＴＦＦ３）のダイマーの誘導体または類似体である、
請求項１〜請求項６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記対象は、慢性気道症状を有する、
請求項１〜請求項７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記慢性気道症状は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）およびカリニ肺炎菌からなる群から選択される、
請求項１〜請求項８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記対象は、１種以上の再生促進因子の噴霧溶液または懸濁液を投与される、
請求項１〜請求項９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記対象は、１種以上の再生促進因子由来の噴霧エアロゾルまたは吸入粉末を投与される、
請求項１〜請求項１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記対象は、１種以上の再生促進因子の溶液を、気管支肺胞洗浄により投与される、
請求項１〜請求項１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記対象は、１種以上の再生促進因子の溶液を、ブラインド気管洗浄により投与される、
請求項１〜請求項１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記対象は、１種以上の再生促進因子のペグ化されたリポソーム調製形態またはナノ粒子調製形態を投与される、
請求項１〜請求項１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記対象は、気管支鏡法の間に１種以上の再生促進因子を投与される、
請求項１〜請求項１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記対象は、１種以上の再生促進因子の投与と共に、さらなる薬物、例えば、局所的に肺に吸入されるステロイドを投与される、
請求項１〜請求項１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記さらなる薬物は、前記再生促進因子（すなわち、ＴＦＦ型の薬物またはその改変体）の前、間、または後に適用されてもよく、例えば、吸入またはＩＶ投与としての１種以上の再生促進因子の投与に伴う、局所的に肺に吸入されるβ−２アゴニストもしくは他の気管支拡張薬または吸入されるステロイドである、
請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記さらなる薬物は、処置前、処置中、処置後に、例えばＩＶ抗炎症薬、ステロイドとして全身的に投与され、およびまたは増殖因子を促進する、
請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記さらなる薬物は、例えば、ＩＶステロイドとして全身的に投与され、およびまたは経口投与される増殖因子を促進する、
請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
１種以上の再生促進因子は、対象に、１日に体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜約１０ｍｇの量で投与される、
請求項１〜請求項１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
前記対象は、哺乳動物である、
請求項１〜請求項２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記哺乳動物は、ヒトである、
請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ヒトは、１２歳未満の年齢の小児である、
請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ヒトは、１２歳よりも年齢が高い成人である、
請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
対象における、肺投与により、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの阻害のための、
請求項１〜請求項２４に記載の組成物の使用。
【請求項２６】
末端肺単位（ＴＬＵ）、肺胞間中隔、肺間質および肺柔組織における、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための、対象における医薬としての使用のための有効量の１種以上の再生促進因子を含む組成物。
【請求項２７】
気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための医薬の製造のための活性成分として、有効量の１種以上の再生促進因子を含む組成物の、使用。
【請求項２８】
対象における、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための医薬としての使用のための活性成分として、１種以上の再生促進因子を含む組成物。
【請求項２９】
有効量の１種以上の再生促進因子を対象に投与するからなる、ヒト対象における、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願、すなわち本出願中に挙げられる全ての特許文献および非特許文献はまた、本明細書により、その全体が参考として組み込まれる。
【０００２】
本発明は、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、喫煙者肺、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌を患う対象において、この対象に有効量の１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバーおよび／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを、肺気道投与によって投与することによる、気道上皮の修復および／もしくは粘膜繊毛クリアランスメカニズムの再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化の方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
呼吸上皮は、上気道および下気道を被覆し、ここで、いわゆる粘膜繊毛クリアランスにより気道を湿らせそして保護することに寄与することが見出される。呼吸上皮はまた、潜在的な病原体および外来物質に対する障壁としても機能し、繊毛エスカレーター（本明細書中以下で説明される）の作用により感染を防ぐ。
【０００４】
呼吸上皮は、円柱上皮細胞の並びに起因して、繊毛偽重層円柱上皮として知られ、例えば、核が、同一平面上に並ばず、細胞の幾つかの層が存在するかのように見せている。実際は、全ての細胞は、基底膜に接触しているので、細胞の単層である、それ故に、この上皮は、偽重層と呼ばれる。杯細胞が、この円柱細胞の間に存在し、上皮を湿潤に保ち且つ気道を通って移動する粒子状物質を捕捉する粘液を、分泌する。
【０００５】
気道の特定の部分、例えば中咽頭は、擦傷性の食物の嚥下を受ける。これらの領域において呼吸上皮の破壊を防ぐために、呼吸上皮は、絶え間ない脱落および擦傷により適している重層扁平上皮に変わる。中咽頭の扁平層は、食道に連続している。
【０００６】
呼吸上皮の繊毛は、一緒になって脈打ち、捕捉した外来粒子および細胞屑、死んだ肺胞マクロファージなどの死んだ細胞を含む分泌粘液を、中咽頭の方向へ向かって移動させる。気道の最も狭い部分は、中枢気道に位置し、ここで、咳嗽メカニズムは、痰を吐き出すかまたはその酸性ｐＨが外来物質および微生物を不活性化する場である胃に飲み込むために、気管／主気管支壁から痰を吹き飛ばすのに充分な剪断応力を持つ乱気流を増強するために充分な、気流速度を生じる。咳嗽メカニズムが有効に機能している小気道から中枢気道への気道系は、繊毛エスカレーターとして総称して知られ、２つの機能を務める。すなわち、遠位気道から、細菌、外来物質、肺胞の死んだ細胞を除去し、さらに、肺における粘液蓄積を防いで正常なガス交換を保証する。このように、繊毛機能は、気道生体防御の重要な役割を担う。
【０００７】
繊毛の頂上における粘液層は、繊毛が上方へ脈打つ漿液性のゾル層と、より気道腔中枢寄りの粘弾性層すなわちゲル層との二層性である。
【０００８】
気道の上皮細胞内面は、例えば煙草の煙、汚染物質、煙霧ならびに細菌やウイルスのような微生物病原体などの吸入した毒性粒子のような主要損傷源からの気道粘膜の保護に関わる。そしてさらに、周辺および上方から気管に向かって、死んだ肺胞細胞および細胞屑を輸送する。死んだ肺胞細胞および細胞屑は、肺胞領域から除去されなければ、その内容物であるエラスターゼなどのプロテアーゼを放出し、肺組織を末期慢性閉塞性肺疾患および肺気腫によって損傷する。気道の上皮内面は、粘液の力学的クリアランス、イオンおよび水の輸送のホメオスタシス、生化学的な抗菌機能、抗酸化機能および抗プロテアーゼ機能、ならびに細胞間上皮連絡による細胞障壁機能などの相互依存機能を介して、微生物および攻撃性の分子に対して有効な障壁として作用する。これらの機能の全ては、気道上皮の完全性の保護および維持における基礎である。
【０００９】
気道上皮は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張および嚢胞性線維症のような慢性疾患に関連する炎症後または感染後に、急速に乱される。
【００１０】
気道の上皮は、例えば煙草の煙、汚染物質、煙霧ならびに細菌やウイルスのような微生物病原体などの吸入した毒性粒子、さらには肺周辺および上方からのプロテアーゼに富んだ死んだ肺胞細胞および細胞屑により、頻繁に損傷する。このような損傷の後に、上皮修復、再生およびリモデリングを含む創傷治癒プロセスが、特別の指令を受けた一連の事象によって開始する：
１．上皮障壁機能の初期修復期は、近隣細胞の移動からなる。およそ２４時間以内に、これらの細胞の多くが、細胞周期に入る。
２．炎症プロセス、細胞増殖および分化によって特徴付けられる第２修復期が起こり、時間をかけて気道構造における細胞学的変化および組織学的変化をもたらす、気道リモデリングと呼ばれるプロセス。
【００１１】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において、悪化は、一般に幾つかの原因に関連し、これらの原因としては、喫煙、煙草の煙への曝露および環境的汚染、特に汚染物質粒子、ウイルスおよび細菌への曝露が挙げられる。これらの状態は、活性化した上皮細胞および炎症細胞によって放出された過剰な炎症メディエータおよび炎症誘発性サイトカインによる気道炎症に起因する。損傷に対する気道表面上皮の正常な応答は、表面上皮完全性の喪失から、単なる上皮の部分的な脱落または基底膜の完全な表皮剥脱までに及ぶ全ての範囲を伴う、連続する細胞事象を含む。
【００１２】
再生促進因子は、中枢気道に関するクリアランス機能と最も重要には末梢気道および肺胞からのクリアランス機能との両方に関する改善を伴うかまたは伴わず、痰の量的および質的変化、すなわち、細胞の杯細胞への変形の抑制による、粘性のより低い粘液の性質を伴う粘液産生の低下を特に含み得る気道回復治療能力によって、上皮修復を増強する。これにより、粘液の流動性は、濃い粘液の産生が少ない状態から、粘性の低い漿液をより多く産生する方へと改善される。
【００１３】
肺の再生促進因子の幾つかは公知であり、デフェンシンのような防御タンパク質、ＳＰ−Ａ、ＳＰ−Ｂ、ＳＰ−Ｄのような界面活性タンパク質、ムチン、ｓｌｇＡ、ラクトフェリン、グリコサミノグリカン、クララ細胞分泌タンパク質（ＣＣＳＰ）、Ｚ０１、オクルディン、クローディンのようなタイトジャンクションタンパク質および肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）が挙げられる。
【００１４】
気道修復および再生に関する細胞因子および分子因子は、上皮細胞および間葉細胞によって放出されるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、サイトカインおよび増殖因子によって調節される。
【００１５】
トレフォイル因子ファミリーのタンパク質は、３つの保存的ジスルフィド結合を有する４０アミノ酸のトレフォイルモチーフを特徴とする。３つの鎖内ジスルフィド結合は、トレフォイルモチーフ（ＴＦＦドメイン）を形成する。トレフォイルモチーフは、当該分野で公知である。例えば、Ｔａｕｐｉｎ  ａｎｄ  Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．４（９）：７２１−３２，２００３；Ｈｏｆｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  １６（Ｉ）：３１９−３４，２００１；およびＴｈｉｍ，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５３（ＩＩ−１２）：８８８−９０３，１９９７。
【００１６】
ヒトにおいて、トレフォイルペプチドの３つの別個のメンバーが、これまでに同定されている。ＴＦＦ１またはｐＳ２が、哺乳動物の癌細胞株において、エストロゲン誘導性遺伝子として最初に検出された。これは、ヒトの胃において、胃粘膜の胃小窩細胞に主に局在している。ＴＦＦ２（かつての鎮痙性ポリペプチドまたはＳＰ）は、ブタ膵臓から最初に精製され、胃腺頸部粘液細胞、幽門腺深部およびブルンナ−腺で発現する。ＴＦＦ３または腸のトレフォイル因子（ＩＴＦ）が、最後に同定された。これは、主に小腸および大腸の杯細胞において発現する。トレフォイルペプチドは、粘膜治癒プロセスに関与し、新生物疾患において異常に高いレベルで発現する。消化性潰瘍および大腸炎、クローン症候群、膵炎および胆汁性疾患を含む広範なヒト癌腫および胃腸炎症性悪性病変が、トレフォイルペプチドを異常に発現する。これらのヒトタンパク質の相同遺伝子が、他の動物、例えば、ラット、マウスおよび霊長類において同定されている。
【００１７】
ＴＦＦは、胃腸粘膜において発現する安定的な分泌タンパク質である。その機能は、明らかにされていない。
【００１８】
３つのトレフォイルファミリーメンバー遺伝子、すなわちトレフォイルファミリー因子Ｉ（ＴＦＦ１）、トレフォイルファミリー因子ＩＩ（ＴＦＦ２）およびトレフォイルファミリー因子ＩＩＩ（ＴＦＦ３）は、第２１番染色体におけるクラスターにおいて見出される。
【発明の概要】
【００１９】
本発明の第１の態様は、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のために、対象における肺投与の医薬として使用するために、有効量の１種以上の再生促進因子からなる組成物を提供することである。
【００２０】
本発明の別の態様は、対象における、肺投与を介した、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの阻害のための、請求項１〜１８に記載の組成物の使用に関する。
【００２１】
本発明のなお別の態様は、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための、対象における肺投与のための医薬の製造のための活性成分としての、有効量の１種以上の再生促進因子からなる組成物の使用に関する。
【００２２】
本発明のさらなる態様は、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための、対象における肺投与のための医薬として使用するための活性成分として１種以上の再生促進因子からなる組成物を提供することである。
【００２３】
本発明の別の態様は、有効量の１種以上の再生促進因子を、肺投与により対象に投与することからなる、ヒト対象における、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のための方法に関する。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、「肺における薬物の沈着」およびこの主題における他の改変は、図２において示されるように、気道を介しての局所肺薬物投与を意味し、全身的薬物投与ではない。
【００２５】
「気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化」による本発明の目的とは、気道上皮内面の修復および／もしくは再生ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化における何らかの検出可能な改善を意味し、そのための方法は、本明細書中以下で記載される。
【００２６】
定義および略語
アミノ酸残基：ポリペプチド鎖中に存在するアミノ酸部分であり、ポリペプチド鎖中のアミノ酸は、他のアミノ酸に対しペプチド（アミド）結合によって結合している。本明細書中で記載されるアミノ酸残基は、好ましくは「Ｌ」異性体型におけるものである。しかし、アミノ酸は、所望の機能特性がそのポリペプチドによって保持される限り、全てのアミノ酸、例えばＬ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、α−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、天然アミノ酸および合成アミノ酸などを含む。さらに、修飾されている天然アミノ酸または合成アミノ酸が含まれる。ＮＨ２は、ポリペプチドのアミノ末端に存在する遊離アミノ基をいう。ＣＯＯＨは、ポリペプチドのカルボキシ末端に存在する遊離カルボキシ基をいう。アミノ酸残基についての標準的ポリペプチド略記号が、本明細書中で使用される。
【００２７】
本明細書中で式によって表されるアミノ酸残基配列の全ては、アミノ末端からカルボキシ末端への従来的な方向において、左から右への向きを有することに留意されるべきである。さらに、アミノ酸残基配列の開始または終了におけるダッシュは、さらなる１つ以上のアミノ酸残基の配列に対してのペプチド結合、またはＮＨ２もしくはアセチルなどのアミノ末端基に対してまたはＣＯＯＨのようなカルボキシ末端に対しての共有結合を示すことに留意されるべきである。
【００２８】
修飾アミノ酸：その任意の基が化学修飾されているアミノ酸。特に、α−アミノ酸におけるα−炭素原子において化学修飾された修飾アミノ酸が好ましい。
【００２９】
ポリペプチド：語句ポリペプチドは、隣接するアミノ酸残基の間にアミノ結合以外の結合を含まない、アミノ酸残基からなる分子をいう。語句ペプチドは、状況に応じて使用される。
【００３０】
薬物の肺沈着：本明細書中で使用される場合、用語「薬物の肺における沈着」およびこの主題における他の改変は、図２において示されるように、局所肺薬物投与を意味し、気道を介した全身的薬物投与ではない。したがって、局所用量の肺沈着または送達は、肺の疾患のための肺への局部的な投与をいう。あるいは、全身用量は、代表的に、全身的障害、例えば糖尿病、偏頭痛、骨粗鬆症およびホルモン調節を処置するための、肺胞領域から循環への吸収のための肺を介した投与を意味する。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「気道上皮」「呼吸上皮」および「肺上皮」は、相互交換可能に使用されることを意味する。
【００３２】
本発明にしたがい、薬学的有効量または治療有効量は、所望の生物学的結果を誘導するために充分な量、すなわち、所望の応答を達成すると用量を滴定してもよい適任の医師によって決定される有効用量と理解される。用量を考察するための因子としては、効力、生物学的利用能、所望の薬物動態学／薬理学プロフィールおよび処置の条件、患者関連因子、例えば、体重、健康、年齢などまたは医師に公知の他の因子が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】Ａ）ヒトＴＦＦタンパク質１〜３の配列アラインメント。Ｂ）ヒトＴＦＦ１、ヒトＴＦＦ２、ヒトＴＦＦ３、マウスＴＦＦ１、マウスＴＦＦ２、マウスＴＦＦ３、ラットＴＦＦ１、ラットＴＦＦ１およびブタＴＦＦ２のタンパク質配列のアラインメント。同一の残基は、「＊」で印をし、保存的置換された残基は、「：」で印をし、半保存的置換された残基は、「．」で印をする。
【図２】Ａ）全身的薬物投与と、Ｂ）全身的肺薬物投与と、Ｃ）局所肺薬物沈着との相違。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、有効量の１種以上の再生促進因子を含むが、気道上皮の修復および／もしくは再生ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化を増強するために調製された組成物の、気管内投与、気管支内投与、気管支肺胞上皮投与または肺胞内投与、例えば、吸入によるを含むがこれらに限定されない任意の適切な方法による、成人および小児をともに含むヒト対象への肺投与に関する。
【００３５】
気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与を介した有効量の１種以上の再生因子の投与は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌を含むがこれらに限定されない症候の緩和および／またはこれらを含むがこれらに限定されない肺状態を患う対象の処置において特に有用である。
【００３６】
上皮修復、再生およびリモデリング
本明細書中上で記載されるように、気道上皮は、何らかの感染または慢性疾患、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張および嚢胞性線維症に関する炎症の後に急速に乱され得る。
【００３７】
気道上皮の損傷後のリモデリングプロセスは、構造的変化、例えば、扁平上皮細胞および／または杯細胞の過形成／異形成（ＧＣＨ／ＧＣＭ）、粘液過形成、小唾液腺の肥大、上皮下線維症ならびに気道平滑筋細胞の過形成および肥大を含む。これは、粘液過分泌および気道壁の肥大をもたらし、気道における特徴的制限を起こす。
【００３８】
気道上皮の繊毛のない漿液性のクララ細胞は、ヒトの小気道における気道の再生のための主要な始原細胞を代表する。慢性閉塞性肺疾患および慢性気管支炎において、気道内面は破壊されている。これは、非常に粘性の高い粘液による杯細胞変形ならびに気道に沈着した粒子および死んだ肺胞マクロファージの繊毛クリアランスの損傷を伴う気道モデリングを意味する。
【００３９】
この繊毛クリアランスメカニズムなしでは、末梢気道、すなわち細気管支および肺胞は、死んだ肺胞マクロファージから放出されるプロテアーゼ由来のタンパク分解性の変質を受ける。対照的に、中枢気道からの粘液のクリアランスは、痰の咳嗽のみに依存するが、粘液の粘性が非常に高くなった場合、中枢気道クリアランスもまた、妨げられる。したがって、末梢クリアランスメカニズムおよび中枢クリアランスメカニズムの両方全ては、ＣＯＰＤ慢性肺疾患および嚢胞性線維症においてみられる気道の炎症性損傷後の病理学的気道リモデリングの後に妨げられる。
【００４０】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症および喘息のような慢性気道疾患において、上述の気道リモデリングは、気道上皮の自然免疫と呼吸機能との両方を、相当に乱し得る。
【００４１】
気道上皮の創傷修復および再生のインビトロモデル（例えば、２−Ｄ培養細胞）およびインビボモデル（例えば、マウスにおけるヒト気道異種移植片）は、細胞分子間相互作用因子、すなわち炎症誘発性サイトカイン、マトリックスプロテイナーゼおよびそれらのインヒビターならびに細胞間接着分子のいわゆる「時間空間的」調節の研究を可能にする。２−Ｄ培養細胞は、例えば、気道上皮再形成の間の第１のそして最も重要な事象のひとつは、細胞移動であって増殖ではないことを示している。マウスにおけるヒト気道異種移植片は、例えば、損傷後の気道上皮の再生の細胞メカニズムおよび分子メカニズムの役割を研究するために使用されている。
【００４２】
気道上皮の修復および／もしくは再生の増強ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化は、例えば、より遠位の気道内の粘液層上にエアロゾル送達の吸入によって沈着された放射性標識された不溶なマーカーのクリアランス速度の測定によって、決定され得る。このクリアランス速度は、続いて、局所肺の気道上皮の修復および／もしくは再生ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化のパラメータ、例えば上皮細胞の移動、細胞増殖、細胞分化および細胞機能をシンチグラフィーモニタリングすることによって、測定され得る。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態において、１種以上の再生因子の投与は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌の何らかの症候を、本明細書中以下で記載されるように、緩和させるかまたは予防し得る。
【００４４】
再生促進因子
本発明に記載の再生促進因子は、中枢気道に関するクリアランス機能と最も重要には末梢気道および肺胞からのクリアランス機能との両方に関する改善を伴うかまたは伴わず、痰の量的および質的変化、すなわち、細胞の杯細胞への変形の抑制による、粘性のより低い粘液の性質を伴う粘液産生の低下を特に含み得る気道回復治療能力を伴って、上皮修復を増強する、任意の因子であり得る。これにより、粘液の流動性は、濃い粘液の産生が少ない状態から、粘性の低い漿液をより多く産生する方へと改善される。さらなる、およびこのような治療は、繊毛細胞の成長および再生を刺激する。まとめると、このような気道リモデリングプロセスが、粘性の高い粘液を減少させることによってクリアランスメカニズムを改善し、そして改善された繊毛クリアランスは、患者の症候と肺機能との両方を効果的に改善する。
【００４５】
本発明に記載の再生促進因子としては、デフェンシンのような防御タンパク質、ＳＰ−Ａ、ＳＰ−Ｂ、ＳＰ−Ｄのような界面活性タンパク質、ムチン、ｓｌｇＡ、ラクトフェリン、グリコサミノグリカン、クララ細胞分泌タンパク質（ＣＣＳＰ）、Ｚ０１、オクルディン、クローディンのようなタイトジャンクションタンパク質および肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）ならびにトレフォイル因子ファミリータンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
本発明に記載の他の再生促進因子としては、上皮細胞および間葉細胞によって放出されるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、サイトカインおよび増殖因子によって調節される気道修復および再生に関与する細胞因子および分子因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
トレフォイルファミリー
本明細書中で、「ＴＦＦ」、「ＴＦＦタンパク質」、「トレフォイルファミリータンパク質」または「タンパク質のＴＦＦファミリー」の言及は、ＴＦＦ１、ＴＦＦ２およびＴＦＦ３を含む関連タンパク質の群をいう。ＴＦＦタンパク質は、少なくともおよそ２８〜４５％のアミノ酸同一性を、同じ種内で共有する（図１ＡおよびＢ参照）。トレフォイルファミリーの全てのメンバーは、本発明の範囲内に含まれ、配列番号１のヒトトレフォイルファミリー因子１、配列番号２のヒトトレフォイルファミリー因子２および配列番号３のヒトトレフォイルファミリー因子３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４８】
Ｐ−型トレフォイルすなわちＰ−ドメイン［ＫＲＨ］−ｘ（２）−Ｃ−ｘ−［ＦＹＰＳＴＶ］−ｘ（３，４）−［ＳＴ］−ｘ（３）−Ｃ−ｘ（４）−Ｃ−Ｃ−［ＦＹＷＨ］は、４５残基のシステインリッチな領域、つまり以下のように、３つのジスルフィド結合を介して１−５、２−４、３−６の連結で互いに連結する６つのシステインである。
【００４９】
【化１】
2013537168.tif 000002
【００５０】
このドメインは、「Ｐ」ドメイン、「トレフォイル」ドメインまたは「ＴＦＦ」ドメインのいずれかとして知られ、３つのジスルフィド結合により１−５、２−４、３−６の連結で連結する６つのシステインを含む。このドメインは、種々の細胞外真核性タンパク質、例えば、タンパク質ｐＳ２（ＴＦＦ１）、胃粘膜から分泌されるタンパク質、鎮痙性ポリペプチド（ＳＰ）（ＴＦＦ２）、胃腸運動性および胃酸分泌を阻害する約１１５残基のタンパク質、腸トレフォイル因子（ＩＴＦ）（ＴＦＦ３）において見出されている。
【００５１】
ヒトＴＦＦ１において、ＴＦＦドメインは、アミノ酸残基３０〜７０にわたる。ヒトＴＦＦ２は、それぞれアミノ酸残基３０〜７２およびアミノ酸残基８０〜１２１にわたる２つのＴＦＦドメインを有する。ヒトＴＦＦ３において、ＴＦＦドメインは、アミノ酸残基３１〜７２にわたる。
【００５２】
ＴＦＦ３の機能分析は、その発現が、同時に起こる有糸分裂誘発および細胞生存の増加による総細胞数の増加、ヒト癌腫細胞の足場非依存性増殖の支持ならび浮遊培養における増殖および増殖巣の形成を含むに腫瘍原性の他の指標を刺激するために充分であると判定されている。さらに、ＴＦＦは、不死化されているが他の点では正常であるヒト上皮細胞の発癌性形質転換を支持した。ｓｉＲＮＡ媒介型のＴＦＦ３発現の低下は、合致するように、ヒト癌腫細胞の足場非依存性増殖を抑止した。これらの結果は、ＴＦＦ発現および／または活性の阻害が、細胞増殖の低下ならびに癌および他の増殖性障害の進行および重症度の軽減をもたらすことを示す。同様の結果は、ＴＦＦファミリーのタンパク質の他のメンバーによって見出され得る。
【００５３】
本発明の好ましい実施形態において、再生促進因子は、配列番号１のＴＦＦ１、配列番号２のＴＦＦ２および配列番号３のＴＦＦ３を含むトレフォイルファミリータンパク質である。非常に好ましい実施形態において、再生促進因子は、ＴＦＦ３である。
【００５４】
本発明の他の好ましい実施形態において、再生促進因子は、配列番号１のＴＦＦ１、配列番号２のＴＦＦ２および配列番号３のＴＦＦ３のダイマーである。ＴＦＦペプチドのダイマーは、ジスルフィド結合によって互いに連結した２つのＴＦＦモノマーから成る。ＴＦＦ１ダイマーについて、ジスルフィド結合は、好ましくは、各ＴＦＦ１モノマーの残基５８におけるアミノ酸であるシステインの間であってもよい。ＴＦＦ３ダイマーについて、ジスルフィド結合は、好ましくは、各ＴＦＦ３モノマーの残基５７におけるアミノ酸であるシステインの間であってもよい。ＴＦＦダイマーは、例えば、ＷＯ  ９６／０６８６１に記載されるように生産されてもよい。
【００５５】
ＴＦＦの改変体
ＴＦＦペプチドまたはＴＦＦダイマーペプチドの改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリペプチドであり、１種以上のＴＦＦ機能を有する。
【００５６】
好ましくは、本明細書中任意の所定の配列の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３などの機能的改変体であってもよく、以下のように定義される：
【００５７】
ｉ）改変体は、同時に起こる有糸分裂誘発および細胞生存の増加による総細胞数の増加を刺激可能なアミノ酸配列を含む
ｉｉ）改変体は、ヒト癌腫細胞の足場非依存性増殖を支持することが可能である
ｉｉｉ）改変体は、浮遊培養における増殖および増殖巣の形成が可能である
ｉｖ）改変体は、気道上皮の修復および／もしくは再生の増強および／または気道上皮のリモデリングの正常化が可能である
【００５８】
ＴＦＦペプチドの改変体またはフラグメントがＴＦＦペプチドまたはＴＦＦダイマーペプチドの生物学的活性を示す能力は、当業者に公知の方法によって評価され得る。
【００５９】
本発明における使用のためのＴＦＦタンパク質の機能的活性をアッセイするための方法は、本明細書により参考として組み込まれる、ＷＯ／２００６／０６９２５３（に記載される方法を含む。
【００６０】
ＴＦＦ活性はまた、１．０〜１０．０μｇ／ｍｌの濃度範囲を用いて、ヒト単球を化学誘引する能力によって判定され得る。
【００６１】
好ましくは、ＴＦＦの異なる近縁種間での進化的保存、例えば、配列アラインメントによって評価されるは、個々の残基における進化圧力の程度を正確に示すために使用され得る。好ましくは、ＴＦＦ配列は、ＴＦＦ機能が保存される種間で比較される。
【００６２】
高い選択圧下の残基は、種間で変化する残基よりも容易に置換できない必須アミノ酸を表すことが多い。相当な数のヒトＴＦＦ配列の修飾および改変が本発明に記載のＴＦＦ分子の活性を妨害しないことが、上から明らかである。このようなＴＦＦ分子を、本明細書中で、ヒトＴＦＦの改変体といい、例えば、本明細書中で記載される天然ヒトＴＦＦの改変体およびフラグメントであってもよい。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、表現「改変体」は、適宜ヒトＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３である基本的なタンパク質に対し相同であるが、ベースとなる配列における配列内の１つ以上のアミノ酸が他のアミノ酸と置換されているという点で区別される、ベースとなる配列と異なるポリペプチドまたはタンパク質をいう。アミノ酸置換は、アミノ酸が、概ね類似の性質の別のアミノ酸と置換されている場合、「保存的」であると考えられ得る。非保存的置換は、アミノ酸が、異なるタイプのアミノ酸と置換されているものである。大まかにいえば、ポリペプチドの生物学的活性を変えずには、より少ない数の非保存的置換しか可能ではない。図１Ｂは、ヒトＴＦＦ１、ヒトＴＦＦ２、ヒトＴＦＦ３、マウスＴＦＦ１、マウスＴＦＦ２、マウスＴＦＦ３、ラットＴＦＦ１、ラットＴＦＦ１およびブタＴＦＦ２のタンパク質配列のアラインメントを示し、ここで、同一の残基（「＊」）および保存的置換を有する残基（「：」）ならびに半保存的置換を有する残基（「．」）に、印をつける。
【００６４】
したがって、本発明の１つの実施形態において、ヒトＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３に対し高い配列同一性を有する配列を含むことが好ましく、ここで、図１Ｂにおいて「＊」で印される保存的残基は、１つも置換されない。本実施形態において、図１Ｂにおいて「：」で印される残基もまた置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸により置換されることが、さらに好ましい。
【００６５】
したがって、本発明の１つの実施形態において、ヒトＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３に対し高い配列同一性を有する配列を含むことが好ましく、ここで、図１Ａにおいて「＊」で印される保存的残基は、１つも置換されない。本実施形態において、図１Ａにおいて「：」で印される残基もまた置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸により置換されることのいずれかが、さらに好ましい。
【００６６】
したがって、１つの実施形態において、ヒトＴＦＦ１の改変体は、配列番号１に対し高い配列同一性を有する配列を有することが好ましく、ここで、残基Ｍ４、Ｌ１２、Ｌ１８、Ａ２４、Ｒ３８、Ｃ４１、Ｇ４２、Ｐ４４、Ｔ４７、Ｃ５１、Ｇ５５、Ｃ５６、Ｃ５７、Ｆ５８、Ｄ５９、Ｇ６４、Ｖ６５、Ｐ６６、Ｗ６７、Ｃ６８、Ｆ６９、Ｐ７１、Ｃ８２、Ｋ７、Ｖ１５、Ｔ２２、Ｅ２９、Ｖ３３、Ｒ３６、Ｅ３７、Ｎ４０、Ｆ４３、Ｖ４６、Ｑ５０、Ｎ５３、Ｖ６２、Ｅ８１およびＦ８４もまた、置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸により置換されることのいずれかである。
【００６７】
別の実施形態において、ヒトＴＦＦ２の改変体は、配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有することが好ましく、ここで、残基Ｍ１、Ｌ９、Ｌ１５、Ａ２１、Ｒ３９、Ｃ４２、Ｇ４３、Ｐ４５、Ｔ４８、Ｃ５２、Ｇ５６、Ｄ５７、Ｃ５８、Ｆ５９、Ｄ６０、Ｇ６５、Ｖ６６、Ｐ６７、Ｗ６８、Ｃ６９、Ｆ７０、Ｐ７３、Ｃ９２、Ｒ４、Ｌ１２、Ａ１９、Ｑ３０、Ｌ３４、Ｈ３７、Ｎ３８、Ｎ４１、Ｆ４４、Ｉ４７、Ｑ５１、Ｄ５４、Ｖ６３、Ｎ９１およびＹ９４もまた、置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸により置換されることのいずれかである。
【００６８】
なお別の実施形態において、ヒトＴＦＦ２の改変体は、配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有することが好ましく、ここで、残基Ｍ１、Ｌ９、Ｌ１５、Ａ２１、Ｒ３９、Ｃ４２、Ｇ４３、Ｐ４５、Ｔ４８、Ｃ５２、Ｇ５６、Ｄ５７、Ｃ５８、Ｆ５９、Ｄ６０、Ｇ６５、Ｖ６６、Ｐ６７、Ｗ６８、Ｃ６９、Ｆ７０、Ｐ７２、Ｃ７９、Ｆ８１、Ｒ４、Ｖ１２、Ｓ１９、Ｎ３０、Ｖ３４、Ｋ３７、Ｄ３８、Ｄ４１、Ｙ４４、Ｖ４７、Ｅ５１、Ｎ５４、Ｉ６３、Ｅ７７もまた、置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸により置換されることのいずれかである。
【００６９】
本発明の範囲内で、ＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１または配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有することがなおさらに好ましく、ここで、図１Ｂにおいて「．」で印される残基もまた、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。
【００７０】
本発明の範囲内で、ＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１または配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有することがなおさらに好ましく、ここで、図１Ａにおいて「．」で印される残基もまた、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。
【００７１】
したがって、ヒトＴＦＦ１の改変体は、配列番号１に対し高い配列同一性を有する配列を有することが好ましく、ここで、Ａ３４、Ｐ３５、Ｐ４８、Ｓ４９、Ｋ５４、Ｄ６０およびＥ７９もまた、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。また、ヒトＴＦＦ２の改変体は、配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有することも好ましく、ここで、Ｓ３２、Ｓ３５、Ｐ３６、Ｓ４９、Ｄ５０、Ｎ５５、Ｓ６１およびＲ８９もまた、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。さらに、ヒトＴＦＦ３の改変体は、配列番号３に対し高い配列同一性を有する配列を有することが好ましく、ここで、Ｃ３２、Ｐ３５、Ａ３６、Ｐ４９、Ｋ５０、Ｒ５５、Ｓ６１およびＥ７５もまた、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。
【００７２】
ＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３に対し高い配列同一性を有し得、ここで、図１Ｂにおいて印をつけられていない残基は、任意の他のアミノ酸と置換され得ることもまた、本発明に含まれる。
【００７３】
ＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３に対し高い配列同一性を有し得、ここで、図１Ａにおいて印をつけられていない残基は、任意の他のアミノ酸と置換され得ることもまた、本発明に含まれる。
【００７４】
したがって、ヒトＴＦＦ１の改変体は、配列番号１に対し高い配列同一性を有する配列を有し得、ここで、残基Ｍ１、Ａ２、Ｔ３、Ｅ５、Ｎ６、Ｖ８、Ｉ９、Ｃ１０、Ａ１１、Ｖ１３、Ｌ１４、Ｑ３９、Ｇ４５、Ａ５２、Ｔ６１、Ｒ６３、Ｙ７０、Ｎ７２、Ｔ７３、Ｉ７４、Ｄ７５、Ｖ７６、Ｐ７７、Ｐ７８、Ｅ８０およびＥ８３もまた、置換されないか、または任意の他のアミノ酸と置換されることのいずれかである。したがって、ヒトＴＦＦ２の改変体は、配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有し得、ここで、残基Ｇ２、Ｒ３、Ｄ５、Ａ６、Ｑ７、Ｌ８、Ａ１０、Ａ１１、Ｌ１３、Ｖ１４、Ｇ１６、Ｌ１７、Ｃ１８、Ｌ２０、Ｇ２１、Ｓ２３、Ｅ２４、Ｋ２５、Ｐ２６、Ｓ２７、Ｐ２８、Ｃ２９、Ｃ３１、Ｒ３３、Ｔ４０、Ｇ４６、Ｆ５３、Ｓ６２、Ｔ６４、Ｈ７１、Ｌ７３、Ｐ７４、Ｋ７５、Ｑ７６、Ｅ７７、Ｓ７８、Ｄ７９、Ｑ８０、Ｃ８１、Ｖ８２、Ｍ８３、Ｅ８４、Ｖ８５、Ｓ８６、Ｄ８７、Ｒ８９、Ｇ９２、Ｐ９４、Ｇ９５、Ｉ９６、Ｓ９７、Ｐ９８、Ｅ９９、Ｅ１００、Ｃ１０１、Ａ１０２、Ｓ１０３、Ｒ１０４、Ｋ１０５、Ｃ１０６、Ｃ１０７、Ｆ１０８、Ｓ１０９、Ｎ１１０、Ｆ１１１、Ｉ１１２、Ｆ１１３、Ｅ１１４、Ｖ１１５、Ｐ１１６およびＷ１１７もまた、置換されないか、または任意の他のアミノ酸と置換されることのいずれかである。ヒトＴＦＦ３の改変体は、配列番号３に対し高い配列同一性を有する配列を有し得、ここで、残基Ａ２、Ａ３、Ａ５、Ｌ６、Ｃ７、Ｍ８、Ｇ１０、Ｌ１１、Ｌ１３、Ａ１４、Ｌ１６、Ｓ１７、Ｓ１８、Ｓ２０、Ｅ２２、Ｅ２３、Ｙ２４、Ｖ２５、Ｇ２６、Ｌ２７、Ｓ２８、Ａ２９、Ｑ３１、Ａ３３、Ｖ４０、Ｈ４６、Ｎ５３、Ｒ６２、Ｐ６４、Ｋ７１、Ｌ７３、Ｑ７４、Ａ７６およびＴ７９もまた、置換されないか、または任意の他のアミノ酸と置換されることのいずれかである。
【００７５】
本発明の他の好ましい実施形態において、配列番号１、配列番号２または配列番号３のＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３のＴＦＦドメインもまた、置換されないか、または保存的置換のみ、より好ましくは、本明細書中以下で規定される高レベルの類似性を有するアミノ酸のみにより置換されることのいずれかである。したがって、これらの実施形態において、ヒトＴＦＦ１の改変体は、配列番号１に対し高い配列同一性を有する配列を有し、ここで、アミノ酸３０〜７０は、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである、ヒトＴＦＦ２の改変体は、配列番号２に対し高い配列同一性を有する配列を有し、ここで、アミノ酸３０〜７２および８０〜１２１は、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである、ヒトＴＦＦ３の改変体は、配列番号３に対し高い配列同一性を有する配列を有し、ここで、アミノ酸３１〜７２は、置換されないか、または本明細書中以下で規定される低レベルまたは高レベルの類似性を有するアミノ酸による保存的置換のみにより置換されることのいずれかである。
【００７６】
当業者は、１つのアミノ酸が１つ以上の化学的特徴および／または物理的特徴を共有する別のアミノ酸と置換されることにより、「保存的」アミノ酸置換を作製する方法および評価する方法を理解する。保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能性に影響しにくい。アミノ酸は、共有する特徴にしたがってグループ分けされ得る。保存的アミノ酸置換は、所定のアミノ酸のグループ内の１つのアミノ酸の、同じグループ内の別のアミノ酸との置換であり、所定のグループ内のアミノ酸は、類似または実質的に類似の特徴を示す。本明細書中で用いられる場合、用語「保存的アミノ酸置換」の意味の範囲内で、１つのアミノ酸は、類似の化学物理的特徴（すなわち、極性、親水性、疎水性、電荷または以下に列挙する他の特徴）を有することにより特徴付けられるアミノ酸のグループ内の別のアミノ酸と置換され得る。
【００７７】
本明細書中で用いられる場合、用語「保存的アミノ酸置換」の意味の範囲内で、１つのアミノ酸は、本明細書中以下に示すアミノ酸のグループ内の別のアミノ酸と置換され得る：
【００７８】
低レベルの類似性：
極性：
ｉ）極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｙｒおよびＣｙｓ）
ｉｉ）非極性側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、ＰｒｏおよびＭｅｔ）
親水性または疎水性：
ｉｉｉ）疎水性アミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、ｌｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ）
ｉｖ）親水性アミノ酸（Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ）
電荷：
ｖ）中性アミノ酸（Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、ｌｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ）
ｖｉ）塩基性アミノ酸（Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ）
ｖｉｉ）酸性アミノ酸（ａｓｐ、Ｇｌｕ）
高レベルの類似性：
ｖｉｉｉ）酸性アミノ酸およびそのアミド（Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ）
ｉｘ）脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、ＡｌａＶａｌ、Ｌｅｕ、ｌｌｅ）
ｘ）芳香族側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）
ｘｉ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）
ｘｉｉ）ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
ｘｉｉｉ）硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）
【００７９】
好ましい保存的アミノ酸置換グループは：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、およびアスパラギン−グルタミンである。
【００８０】
本発明の範囲内の改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３によってそれぞれ同定されるヒトＴＦＦ１、ＴＦＦ２またはＴＦＦ３と少なくとも７０％の配列同一性を示すポリペプチドであり、好ましくは、改変体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３と、少なくとも７５％の配列同一性、例えば、少なくとも８０％の配列同一性、例えば、少なくとも８５％の配列同一性、例えば、少なくとも９０％の配列同一性、例えば、少なくとも９１％の配列同一性、例えば、少なくとも９１％の配列同一性、例えば、少なくとも９２％の配列同一性、例えば、少なくとも９３％の配列同一性、例えば、少なくとも９４％の配列同一性、例えば、少なくとも９５％の配列同一性、例えば、少なくとも９６％の配列同一性、例えば、少なくとも９７％の配列同一性、例えば、少なくとも９８％の配列同一性、例えば、９９％の配列同一性を有する。
【００８１】
配列同一性は、多くの周知のアルゴリズムを用いて、多くの異なるギャップペナルティーを適用して計算され得る。任意の配列アラインメントアルゴリズム、例えば、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＥＴＳＥＱであるがこれらに限定されないが、同族体を探すためおよび配列同一性を計算するために使用され得る。さらに、適切であれば、任意の周知の置換マトリクス、（例えば、ＰＡＭマトリクス、ＢＬＯＳＳＵＭマトリクスまたはＰＳＳＭマトリクスであるがこれらに限定されないが、探索アルゴリズムと共に適用され得る。例えば、ＰＳＳＭ（位置特異的スコアリングマトリクス）は、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムにより適用され得る。さらに、配列アラインメントは、ギャップ開始およびギャップ伸長についての様々なペナルティーを用いて実施され得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、５〜１２の範囲のギャップ開始ペナルティーおよび１〜２の範囲のギャップ伸長ペナルティーを用いて使用され得る。
【００８２】
したがって、本発明に記載の改変体またはそのフラグメントは、配列またはそのフラグメントの同じ改変体の内に、または配列またはそのフラグメントの異なる改変体の間に、少なくとも１つの置換、例えば、互いに独立して導入された複数の置換）を含み得る。
【００８３】
同じ改変体またはそのフラグメントは、本明細書中上で規定された保存的アミノ酸のグループの１つより多くに由来する１つより多くの保存的アミノ酸置換を含み得ることが、上の概要から明らかである。
【００８４】
２０個の標準的アミノ酸および２つの特別なアミノ酸、つまりセレノシステインおよびピロリジン）は別として、インビボでタンパク質中に組み込まれない莫大な数の「標準的でないアミノ酸」が存在する。標準的でないアミノ酸の例としては、硫黄含有タウリンならびに神経伝達物質ＧＡＢＡおよびドパミンが挙げられる。他の例は、ランチオニン、２−アミノイソ酪酸およびデヒドロアラニンである。さらに、標準的でないアミノは、オルニチンおよびシトルリンである。
【００８５】
標準的でないアミノ酸は、通常、標準的アミノ酸に対する修飾を通じて形成される。例えば、タウリンは、システインの脱炭酸によって形成され得、一方、ドパミンは、チロシンから合成され、ヒドロキシプロリンは、プロリン（コラーゲン中によく見られる）の翻訳後修飾によって作製される。天然でないアミノ酸の例は、例えば、その全ては本明細書中で参考として組み込まれる、米国特許法規則１．８２２節（ｂ）（４）に列挙されるものである。
【００８６】
本明細書中で記載される標準的アミノ酸残基および標準的でないアミノ酸残基は、「Ｄ」または「Ｌ」の異性体型であり得る。
【００８７】
本発明に記載の改変体は、標準的でないアミノ酸を含む任意のアミノ酸を含み得ることが、企図される。好ましい実施形態において、改変体は、標準的アミノ酸のみを含む。
【００８８】
標準的アミノ酸および／または標準的でないアミノ酸は、ペプチド結合によって、または非ペプチド結合によって、連結され得る。用語ペプチドはまた、当該分野で公知の通り、化学反応または酵素によって触媒される反応によって誘導される、翻訳後修飾をも包含する。このような翻訳後修飾は、所望される場合、分割の前に導入され得る。本明細書中で特定されるアミノ酸は、好ましくは、Ｌ−ステレオ異性体型であるだろう。アミノ酸類似体は、２０個の天然に存在するアミノ酸の代わりに使用され得る。このような類似体の幾つかは公知であり、フルオロフェニルアラニン、ノルロイシン、アゼチジン−２−カルボン酸、Ｓ−アミノエチルシステイン、４−メチルトリプトファンなどが挙げられる。
【００８９】
改変体は、化学修飾、例えばユビキチン化、ラベリング（例えば、放射性核種、種々の酵素などによるラベリング）、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、またはオルニチンのようなヒトタンパク質中で天然に存在しないアミノ酸の挿入（もしくは化学合成による置換）をさらに含み得る。
【００９０】
本明細書中で記載されるペプチジル化合物に加え、立体的に類似の化合物が、ペプチド構造の鍵となる部分を模倣するように処方され得、このような化合物もまた、本発明のペプチドと同じ様式で使用され得る。これは、当業者に公知のモデリングおよび化学設計の技術によって達成され得る。例えば、エステル化および他のアルキル化が、例えば、ジ−アルギニンペプチド骨格のアミノ末端を修飾し、テトラペプチド構造を模倣するために使用され得る。これらの全ての立体的に類似の構造物は、本発明の範囲内であることが、理解されるだろう。
【００９１】
Ｎ末端アルキル化およびＣ末端エステル化を有するペプチドもまた、本発明の範囲内に包含される。改変体はまた、ダイマーまたは関連しない化学的部分を含む同じ分子によって形成されるグリコシル化および共有結合によるかまたは凝集による結合体をも包含する。このような改変体は、当該分野で公知の方法により、Ｎ末端およびＣ末端のいずれか１つまたは両方を含むフラグメントにおいて見出される基への官能基の連結によって調製される。
【００９２】
用語「そのフラグメント」は、所定のアミノ酸配列およびその改変体の任意の部分を言及してもよい。フラグメントは、互いに連結する、全長タンパク質からの１つ以上の部分を含み得る。この部分は、ベースとなる配列からの少なくとも５個および好ましくは少なくとも１０個の保存的アミノ酸を好適に含むだろう。これらは、タンパク質またはそれらの組み合わせからの小領域を含んでもよい。
【００９３】
好適なフラグメントは、付加変異体であってもよい。少なくとも１つのアミノ酸の付加は、好ましくは２〜２５０個のアミノ酸、例えば１０〜２０個のアミノ酸、例えば２０〜３０個のアミノ酸、例えば４０〜５０個のアミノ酸の付加であってもよい。フラグメントは、タンパク質またはそれらの組み合わせからの小領域を含んでもよい。
【００９４】
好適なフラグメントは、気道上皮の修復および／もしくは再生の増大ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化が可能な、欠失変異体であってもよい。少なくとも１つのアミノ酸の欠失は、好ましくは２〜１８０個のアミノ酸、例えば１０〜２０個のアミノ酸、例えば２０〜３０個のアミノ酸、例えば４０〜５０個のアミノ酸の欠失であってもよい。欠失および／または付加は、互いに独立して、配列内のおよび／もしくは配列末端の欠失ならびに／または付加であってもよい。
【００９５】
欠失変異体は、好適には、少なくとも２０個または４０個の長さの連続するアミノ酸を含み、より好ましくは、少なくとも８０個または１００個の長さの連続するアミノ酸を含む。したがって、このようなフラグメントは、配列番号１、配列番号２または配列番号３によって同定される配列よりも短い配列であってもよく、少なくとも２０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも３０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも４０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも５０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも６０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも７０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも８０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも９０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも９５個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１００個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１０５個のアミノ酸、例えば、少なくとも１１０個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１１５個の連続するアミノ酸、例えば、少なくとも１２０個の連続するアミノ酸を含み、ここで、この欠失変異体は、配列番号１、配列番号２または配列番号３と、好ましくは、少なくとも７５％配列同一性、例えば、少なくとも８０％配列同一性、例えば、少なくとも８５％配列同一性、例えば、少なくとも９０％配列同一性、例えば、少なくとも９１％配列同一性、例えば、少なくとも９１％配列同一性、例えば、少なくとも９２％配列同一性、例えば、少なくとも９３％配列同一性、例えば、少なくとも９４％配列同一性、例えば、少なくとも９５％配列同一性、例えば、少なくとも９６％配列同一性、例えば、少なくとも９７％配列同一性、例えば、少なくとも９８％配列同一性、例えば、９９％配列同一性を有する。
【００９６】
好ましくは、置換、欠失または付加の数は、２０アミノ酸未満、例えば、１５アミノ酸未満、例えば、１０アミノ酸未満、例えば、９アミノ酸未満、例えば、８アミノ酸未満、例えば、７アミノ酸未満、例えば、６アミノ酸未満、例えば、５アミノ酸未満、例えば、４アミノ酸未満、例えば、３アミノ酸未満、例えば、２アミノ酸未満（例えば１）であるか、これらの量の間の任意の整数である。本発明の１つの態様において、置換は、１つ以上の保存的置換、例えば、２０個以下の保存的置換、例えば、１８個以下、例えば、１６個以下、例えば、１４個以下、例えば、１２個以下、例えば、１０個以下、例えば、８個以下、例えば、６個以下、例えば、４個以下、例えば、３個以下、例えば、２個以下の保存的置換を含む。
【００９７】
本発明に記載の改変体は、挿入による改変体であってもよく、ここで、１つ以上のアミノ酸残基が、ＴＦＦの所定の部位に導入される。例えば、挿入改変体は、サブユニットのアミノ末端またはカルボキシル末端への異種タンパク質またはポリペプチドの融合であってもよい。
【００９８】
医療適用
有効量の１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、ＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーの気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与による投与は、特に、上皮修復を増強することにより症候を緩和するために有用であり、および／または症状に罹患する対象を処置するために有用であり、この症状は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌を含むが、これらに限定されない。
【００９９】
患者は、単離された微生物病原体に対する抗生物質の全適用範囲での処置または基礎疾患の処置と同時に、すなわちそれにもかかわらず、熱、胸部Ｘ線浸潤、呼吸困難、咳嗽または膿痰、生物マーカー、例えば、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、プロカルシトニン試験、（ＰＣＴ）およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ））の上昇、ならびにＰａＯ２／ＦｉＯ２比（動脈血酸素分圧／吸入酸素濃度（ｍｍＨｇ）の低下によって明らかになるような酸化能力の低下をさらに伴う肺障害のような症候を示し得る。本発明の好ましい実施形態において、１種以上の再生促進因子の投与は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌の何らかの上記症候を緩和し得るか、または予防し得る。
【０１００】
１つの実施形態において、患者は、例えば、感染によって起こる慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において、急な悪化を経験し得る。気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与による有効量の１種以上の再生促進因子の投与もまた、例えば、感染、例えば、細菌感染によって起こる慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）における急な悪化の症候の緩和および／または処置において有用である。
【０１０１】
感染は、例えば、細菌、真菌、ウイルス、寄生虫による感染であってもよい。例えば、感染は、熱帯熱マラリヤ原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）のような寄生虫によるものであってもよい。例えば、アクロモバクター・キシロソキシダンス（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、好ましくはＡ．アニトラタス（Ａ．ａｎｉｔｒａｔｕｓ）、Ａ．ヘモリティカス（Ａ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、Ａ．アルカリゲネス（Ａ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）およびＡ．ルオフィイ（Ａ．ｌｗｏｆｆｉｉ）、アクチノマイセス・イスラエリイ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）、エロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉａ）、アルカリゲネス種、好ましくはＡ．フェカリス（Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ａ．オドランス（Ａ．ｏｄｏｒａｎｓ）およびＡ．デニトリフィカンス（Ａ．ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、アリゾナ・ヒンシャウイ（Ａｒｉｚｏｎａ  ｈｉｎｓｈａｗｉｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、セレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデス・メラニノゲニカス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、回帰熱ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ）、ブルセラ種、好ましくはＢ．アボルタス（Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓ）、Ｂ．スイス（Ｂ．ｓｕｉｓ）、Ｂ．メリテンシス（Ｂ．ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）およびＢ．カニス（Ｂ．ｃａｎｉｓ）、肉芽腫カリマトバクテリウム（Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、カンピロバクター・フィタス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ）亜種インテスティナリス（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、カンピロバクター・フィタス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ）亜種ジェジュニ（ｊｅｊｕｎｉ）、クラミジア種、好ましくはＣ．シッタシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）およびＣ．トラコマチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クロモバクテリウム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、シトロバクター種、好ましくはＣ．フレウンディイ（Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ）およびＣ．デヴェルズス（Ｃ．ｄｉｖｅｒｓｕｓ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クリストリジウム・テータニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム、好ましくはＣ．ウルセランス（Ｃ．ｕｌｃｅｒａｎｓ）、ヘモリティカム（Ｃ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）およびＣ．シュードツベルク���ーシス（Ｃ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｑ熱リケッチア（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、エドワージエラ・タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｔａｒｄａ）、エイケネラ・コローデンス（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ  ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ）、エンテロバクター、好ましくはＥ．クロアカ（Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ）、Ｅ．アエロゲネス（Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、Ｅ．ハフニエ（Ｅ．ｈａｆｎｉａｅ）（ハフニア・アルヴェイ（Ｈａｆｎｉａ  ａｌｖｅｉ）とも呼ばれる）およびＥ．アグロメランス（Ｅ．ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、エリジペロスリックス・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、フラボバクテリウム・メニンゴセプチカム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ガードネレラ・バギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ヘモフィルス・デュクレイ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘリコバクター種、クレブシエラ種、好ましくはＫ．ニューモニエ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、臭鼻菌（Ｋ．ｏｚａｅｎａｅ）または鼻硬腫菌（Ｋ．ｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍａｔｉｓ）、レジオネラ種、レプトスピラ・インテロガンス（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、モラクセラ種、好ましくはＭ．ラクナータ（Ｍ．ｌａｃｕｎａｔａ）およびＭ．オスロエンシス（Ｍ．ｏｓｌｏｅｎｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｏｕｍ  ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコプラズマ種、好ましくはＭ．ニューモニエ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、ノカルジア種、好ましくはＮ．アステロイデス（Ｎ．ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）およびＮ．ブラジリエンシス（Ｎ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、パスツレラ・ヘモリチカ（Ｐａｓｔｅｒｕｒｅｌｌａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ペプトコッカス・マグナス（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｇｎｕｓ）、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ  ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉ）、プロテウス種、好ましくはＰ．ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、Ｐ．ブルガリス（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）、Ｐ．レットゲリ（Ｐ．ｒｅｔｔｇｅｒｉ）およびＰ．モルガニイ（Ｐ．ｍｏｒｇａｎｉｉ）（それぞれ、プロビデンシア・レットゲリ（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｒｅｔ���ｇｅｒｉ）およびモルガネラ・モルガニイ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ  ｍｏｒｇａｎｉｉ）とも呼ばれる）、プロビデンシア種、好ましくはＰ．アルカリファシエンス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ）、Ｐ．スチュアルティイ（Ｐ．ｓｔｕａｒｔｉｉ）およびＰ．レットゲリ（Ｐ．ｒｅｔｔｇｅｒｉ）（プロテウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｒｅｔｔｇｅｒｉ）とも呼ばれる）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・マレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ）、シュードモナス・シュードマレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、リケッチア、ロシャリメア・ヘンセラ（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｉａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、サルモネラ種、好ましくはＳ．エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｄｉｓ）、Ｓ．チフィ（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）およびＳ．ダービー（Ｓ．ｄｅｒｂｙ）、最も好ましくはサルモネラＤＴ１０４型のサルモネラ種、セラチア種、好ましくはＳ．マルセセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、Ｓ．フレックスネリ（Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、Ｓ．ボイディ（Ｓ．ｂｏｙｄｉｉ）およびＳ．ソネイ（Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ）、スピリルム・ミノール（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｍｉｎｏｒ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）、ストレプトバシラス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ストレプトコッカス、好ましくはＳ．フェカリス（Ｓ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、Ｓ．フェシウム（Ｓ．ｆａｅｃｉｕｍ）およびＳ．デュランス（Ｓ．ｄｕｒａｎｓ）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、トレポネーマ・カラテウム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｃａｒａｔｅｕｍ）、トレポネーマ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅａｍ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・ペルテニュ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、好ましくはＴ．パリダム（Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ）、ウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）およびエルシニア・ペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）からなる群から選択される１種以上の細菌による感染。
【０１０２】
感染はまた、例えば、トリコモナス感染、例えば、ペンタトリコモナス感染であるが、これらに限定されない原虫感染をも含む。例えば、Ｔ．ブカリス（Ｔ．ｂｕｃｃａｌｉｓ）、Ｔ．テナックス（Ｔ．ｔｅｎａｘ）、Ｔ．フィータス（Ｔ．ｆｏｅｔｕｓ）、Ｔ．ガリネ（Ｔ．ｇａｌｌｉｎａｅ）、Ｔ．ガリナルム（Ｔ．ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、Ｔ．ホミニス（Ｔ．ｈｏｍｉｎｉｓ）、Ｔ．インテスティナリス（Ｔ．ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、Ｔ．テナックス（Ｔ．ｔｅｎａｘ）、Ｔ．バジナリス（Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）である。
【０１０３】
本発明の他の実施形態において、再生促進因子は、真菌感染によって起こる任意の状態の処置のために使用され得る。真菌感染は、以下を含むが、これらに限定されない：アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジタ症、コクシジオイドミコーシス、クリプトコックス症、ヒストプラスマ症、パラコクシジオイドミコーシス、スポロトリクム症、接合菌症。この組成物はまた、クロモブラストミコーシス、糸状菌性角膜炎、内因性眼真菌症、伸長性眼真菌症、ロボミコーシス、菌腫、爪疾患、髪疾患、および皮膚疾患（例えば、爪真菌症（爪白癬）、砂毛、黒色癜風、白癬性毛瘡、頭部白癬、体白癬、股部白癬、黄癬、黒癬、足白癬）、耳真菌症、黒色菌糸症、リノスポリジウム症のような状態における真菌感染を処置するために使用され得る。
【０１０４】
好ましい実施形態において、対象は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌からなる群から選択される疾患に罹患している。
【０１０５】
肺投与
本明細書中で使用される場合、用語「肺における薬物の沈着」およびこの主題における他の改変は、再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバーおよび／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３の、全身的なばらまきをなくすか、少なくとも最小化し、それによって再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーの全身投与に伴う多くの副作用を避けるかまたは最小化することにより、正しい局所効果を保証するために、局所肺薬物投与を意味し、気道を介した全身的薬物投与ではない。
【０１０６】
気管支および末梢気道（小気道）における繊毛粘膜上への、例えば吸入を用いた沈着を最適化するために、鍵となる決定変数は、エアロゾル粒子サイズである。１〜４ミクロンの空気力学径を有する粒子について、遠位も保証されることが、一般に受容される。この因子は、非常に重要である。何故なら、肺胞から気管支への移動は、正しい繊毛機能にのみ依存しているからである。さもなければ、死んだ細胞または細胞屑の蓄積は、肺胞腔へタンパク質分解酵素を放出し、重篤な炎症繊維症および肺気腫を引き起こす。しかし、約５ミクロンより大きいなど、より大きなエアロゾル径は、気道のこの重要な部分に届かず、より中枢の気道においてのみ沈着される。
【０１０７】
吸入された処方物について、所望の局所効果と望まない全身活性との間のバランスは、Ｌ／Ｔによって表され得、ここで、Ｌは、肺からの薬物の生物学的利用能を表し、Ｔは、全ての全身的生物学的利用能を表す。例えば吸入によって得られる高いＬ／Ｔは、標的部位への有効量の薬物送達を暗示するため望ましく、ここで、咳嗽の除去効果は、すなわち、繊毛機能のみに依存し、また、非標的薬物送達からの望まない活性を最小化する。
【０１０８】
全身薬物投与と、全身肺薬物投与と、局所肺薬物沈着との間の相違の概略的な表示は、図２において示され得る。
【０１０９】
気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支−肺胞投与の方法は、１種以上の再生促進因子が溶解している生理学的に許容され得る液体組成物を用いる、エアロゾル化溶液の吸入、乾燥粉末吸入、噴霧、洗浄、洗い流しまたは滴下を含むが、これらに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「吸入投与、気管内投与、気管支内投与もしくは肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与」は、このような局所肺投与の全ての形態を含み、これにより、安定剤もしくは他の賦形剤を添加するかまたは添加しない、１種以上の再生促進因子の溶液の滴下によってか、粉末形態で１種以上の再生促進因子を適用することによってか、あるいは１種以上の再生促進因子をエアロゾル化した溶液もしくは噴霧溶液または懸濁液または吸入粉末もしくは吸入ゲルとして吸入することにより気道の関連する部分に到達させることによって、１種以上の再生促進因子が、それぞれ気管、気管支または肺胞に適用される。
【０１１０】
気管支内／肺胞投与の方法は、１種以上の再生促進因子が溶解されている生理学的に許容され得る洗浄液組成物を用いる当業者に周知の方法にしたがう気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）、または乾燥形態の１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーを含む吸入粉末（賦形剤を含むかまたは含まない）の使用、あるいは確かに、溶液もしくは懸濁液または粉末形態中の１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーの気管支鏡法の間の直接適用を含む気管支内投与の任意の他の有効な形態を含むが、これらに限定されない。気管内投与のための方法は、１種以上の溶解した再生促進因子、（好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーの同様の溶液によるブラインド気管洗浄または１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦもしくはＴＦＦ３ダイマーの懸濁液によるブラインド気管洗浄、あるいは１種以上の溶解した再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを含む噴霧液体小滴の吸入、この目的のために適切な噴霧装置の使用によって得られる１種以上の再生促進因子の懸濁液が挙げられるが、これらに限定されない。このような噴霧器の品質は、吸入分子の活性部位を改変することもまたは妨害することもない噴霧器として、例えば、電気駆動式、機械駆動式または圧縮空気駆動式のマイクロポンプ噴霧器の適用により特徴付けられる。
【０１１１】
別の実施形態において、気管内投与、気管支内投与または肺胞内投与は、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーの吸入を含まないが、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーの溶液、あるいは１種以上の再生促進因子を含む粉末もしくはゲルを、気管内または下気道内へ吸入もしくは滴下または適用することを含む。
【０１１２】
他の好ましい投与方法は、以下のデバイスを用いることを含み得る：
１．電気駆動式、機械駆動式または圧縮空気駆動式のマイクロポンプ噴霧器（例えば、Ｐａｒｉ  Ａｅｒｏｎｅｂ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ、Ｐａｒｉ  ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）
２．超音波噴霧器
３．圧縮空気／酸素混合物を用いる圧縮噴霧器
４．定量吸入器（ＭＤＩ）
５．乾燥粉末吸入システム（ＤＰＩ）
６．単位用量吸入器
【０１１３】
エアロゾルは、ａ）マウスピース、ｂ）フェイスマスクまたはｃ）挿管されている患者における機械的呼吸の間の気管チューブ（デバイス１、２および３）により送達され得る。デバイス１、４、５および６もまた、補助無しの患者による自己投与によって使用され得る。
【０１１４】
したがって、１つの実施形態において、有効量の１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーは、好ましくは吸入によって投与され得るが、気管内投与、気管支内投与、肺胞内投与または気管支肺胞上皮投与が適用され得る。
【０１１５】
別の実施形態において、対象は、１種以上の再生促進因子、好ましくは、ＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーの溶液を、気管支肺胞洗浄により投与される。
【０１１６】
別の実施形態において、対象は、１種以上の再生促進因子、好ましくは、ＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを、ブラインド気管洗浄により投与される。
【０１１７】
別の実施形態において、対象は、１種以上の再生促進因子、好ましくは、ＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーの噴霧溶液または懸濁液を投与される。
【０１１８】
別の実施形態において、対象は、噴霧エアロゾルまたは吸入粉末形態の、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーを投与される。
【０１１９】
別の実施形態において、対象は、ペグ化調製形態、リポソーム調製形態またはナノ粒子調製形態の、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３を投与される。
【０１２０】
別の実施形態において、対象は、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを、気管支鏡法の間に直接適用によって投与される。
【０１２１】
別の実施形態において、対象は、哺乳動物である。
【０１２２】
別の実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【０１２３】
別の実施形態において、ヒトは、１２歳未満の年齢の小児である。
【０１２４】
別の実施形態において、ヒトは、１２歳以上の年齢の成人である。
【０１２５】
１種以上の再生促進因子および／または再生促進因子の改変体、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを含む溶液についての好ましい濃度は、広範に、すなわち、約５重量％〜約１００重量％まで変動し得る。代表的な濃度は、約５０重量％〜約１００重量％の範囲内である。
【０１２６】
好ましい濃度は、溶液１ｍｌあたり０．１μｇ〜１００００μｇの範囲内の活性成分であってもよい。好適な濃度は、多くの場合、溶液１ｍｌあたり０．１μｇ〜５０００μｇの範囲内、例えば、溶液１ｍｌあたり約０．１μｇ〜３０００μｇの範囲内、特に、溶液１ｍｌあたり約０．１μｇ〜１０００μｇの範囲内、例えば、溶液１ｍｌあたり約０．１μｇ〜２５０μｇの範囲内である。好ましい濃度は、溶液１ｍあたり、約０．１〜約５．０ｍｇまで、好ましくは約０．３ｍｇ〜約３．０ｍｇまで、例えば約０．５〜約１．５ｍｇまで、特に、０．８〜１．０ｍｇの範囲内である。好ましい濃度は、溶液１ｍｌあたり、約０．１〜約５．０ｍｇまで、好ましくは約０．３ｍｇ〜約３．０ｍｇまで、例えば約０．２〜約２．５ｍｇまで、特に０．２〜１．０ｍｇの範囲内である。
【０１２７】
薬学的組成物
本発明において使用される薬学的組成物または処方物は、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、および／またはＴＦＦダイマー、より好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを、単独で、または組み合わせて、乾燥粉末調製物、しかし好ましくは、薬学的に許容され得るキャリア、好ましくは水性キャリアまたは希釈剤中に溶解される乾燥粉末調製物として、または下気道に運ばれるペグ化調製物として、または吸入によりエアロゾルとして投与されるリポソーム調製物もしくはナノ粒子調製物として、または気管支肺胞洗浄またはブラインド気管内洗い流しもしくは洗浄として気管支鏡により投与される洗浄液として含む。種々の水性キャリアが使用され得、これらには、０．９％生理食塩水、緩衝化生理食塩水、生理学的適合性の緩衝液などが挙げられるが、これらに限定されない。この組成物は、当業者に周知の従来技術によって滅菌され得る。得られた水溶液は、使用のために包装され得るか、または無菌状態で濾過されて凍結乾燥され得、凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌水溶液中に溶解される。
【０１２８】
１つの実施形態において、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３またはＴＦＦ３ダイマーの凍結乾燥調製物は、例えば、単回投薬形態中に事前に包装されてもよい。なおより好ましい実施形態において、単回投薬形態は、患者に対して調整される。
【０１２９】
組成物は、薬学的に許容され得る補助物質またはアジュバントを含み得、これらとしては、限定ではなく、ｐＨ調整剤および緩衝剤ならびに／または張度調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどが挙げられる。
【０１３０】
処方物は、薬学的に許容され得るキャリアおよび賦形剤を含み得、これらとしては、ミクロスフェア、リポソーム、マイクロカプセル、ナノ粒子などが挙げられる。従来のリポソームは、代表的に、リン脂質（中性または負荷電）および／またはコレステロールからなる。リポソームは、水性区画を取り巻く脂質二重層に基づく小胞構造である。これらは、その生理化学的特性、例えば、大きさ、脂質組成、表面電荷および数ならびに脂質二重層の流動性において、変動し得る。リポソーム処方物のために最も多く使用される脂質は、以下のものである：
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファート（一ナトリウム塩）（ＤＭＰＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファート（一ナトリウム塩）（ＤＰＰＡ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファート（一ナトリウム塩）（ＤＯＰＡ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ナトリウム塩）（ＤＭＰＧ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ナトリウム塩）（ＤＰＰＧ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ナトリウム塩）（ＤＯＰＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］（ナトリウム塩）（ＤＭＰＳ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン）（ナトリウム塩）（ＤＰＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］（ナトリウム塩）（ＤＯＰＳ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（グルタリル）（ナトリウム塩）および１，１’，２，２’−テトラミリストイルカルジオリピン（アンモニウム塩）。ＤＰＰＣと他の脂質またはリポソームの修飾剤との組み合わせからなる処方物は、例えば、コレステロールおよび／またはホスファチジルコリンとの組み合わせで、好ましい。
【０１３１】
長期循環型のリポソームは、血管壁の浸透性が上昇する身体の部位において血管外遊出するその能力によって特徴付けられる。長期循環型リポソームを製造する最も一般的な方法は、親水性ポリマーポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、リポソームの外側に共有結合させることである。好ましい脂質のいくつかは、以下である：１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩）、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（塩化物塩）（ＤＯＴＡＰ）。
【０１３２】
リポソームに適用可能であり得る脂質は、Ａｖａｎｔｉ，Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬによって供給される。さらにリポソーム懸濁液は、脂質を保存におけるフリーラジカルおよび脂質過酸化損傷から保護する脂質保護剤を含み得る。親油性フリーラジカルクエンチャー、例えば、α−トコフェロールおよび水溶性鉄特異的キレーター、例えば、フェリオキサニンが、好ましい。
【０１３３】
リポソームを調製するために、種々の方法が利用可能であり、例えば、以下に記載される：これら全ては、本明細書中に参考として組み込まれる、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７（１９８０）、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号および同第４，８３７，０２８号。別の方法は、不均質な大きさの多層状小胞を生成する。この方法において、小胞を形成する脂質は、好適な有機溶媒または溶媒系に溶解され、真空下または不活性ガス下で乾燥させられて、薄い脂質フィルムを形成する。所望される場合、このフィルムは、好適な溶媒、例えば第三級ブタノール中に再溶解されて、次いで、凍結乾燥されて、より均一な脂質混合物を形成してもよく、これは、より容易な水和型粉末様形態である。このフィルムは、標的薬物および標的する成分の水溶液で被覆され、代表的には１５〜６０分間にわたる撹拌によって水和させられる。生じた多層小胞のサイズ分布は、より激しい撹拌条件の下でまたは可溶化洗浄剤、例えば、デオキシコール酸塩を添加することにより、脂質を水和することによって、より小さな大きさにシフトし得る。
【０１３４】
ミセルは、水溶液中の界面活性剤（疎水部分と１種以上のイオン性の基もしくはさもなければ強親水性である基とを含む分子）によって形成される。
【０１３５】
当業者に周知である一般的な界面活性剤が、本発明において使用され得る。好適な界面活性剤としては、ラウリル酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オクタオキシエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクトキシノール９およびＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−１２７（Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．）が挙げられる。好ましい界面活性剤は、ＩＶ注射に適合性の非イオン性ポリオキシエチレン洗浄剤および非イオン性ポリオキシプロピレン洗浄剤、例えば、ＴＷＥＥＮ−８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−６８、ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシドなどである。さらに、リン脂質、例えばリポソームの生成における使用のために記載されたリン脂質もまた、ミセル形成のために使用され得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、ミセル形成は、特に、エアロゾルデバイス、例えば、定量吸入器（ＭＤＩ）を介して送達される、例えば、頬粘膜に適用される場合、テトラフルオロエタン、ヘプタフルオロエタン、ジメチルフルオロプロパン、テトラフルオロプロパン、ブタン、イソブタン、ジメチルエーテルならびに他の非ＣＦＣ高圧ガスおよびＣＦＣ高圧ガスのような高圧ガスと混合され得る。
【０１３７】
いくつかの場合、活性物質のその標的への送達を促進する化合物を含むことは、有益である。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、エアロゾルとして処方される。効率的に肺に到達するために、この処方物は、約１〜１０μｍ、好ましくは２〜５μｍの空気力学サイズを有する粒子へと霧状にされ得る。このようなエアロゾルは、一般に、血管形成を阻害し得る１種以上の薬剤と、１種以上の高圧ガスと、界面活性剤または溶媒のいずれかとを含み得る。
【０１３９】
したがって、特定の実施形態において、本発明に記載の組成物は、フルオロカーボンおよび水素含有クロロフルオロカーボンが挙げられるがこれらに限定されない高圧ガス、および例えば、ＥＰ  ０３７２７７７、ＷＯ９１／０４０１１、ＷＯ９１／１１１７３、ＷＯ９１／１１４９５およびＷＯ９１／１４４２２に記載されるような高圧ガスシステムを用いる多くの薬用エアロゾル処方物を含み得る。
【０１４０】
本発明の範囲内の薬学的調製物のために好適な溶媒は、少なくとも７０％（ｖ／ｖ）のエタノールを含む溶液である、少なくとも８５％（ｖ／ｖ）を含む溶液が好ましく、一方、９５％（ｖ／ｖ）以上のエタノール含量を有する溶液が、特に好ましい。この濃度は、容量百分率（ｖ／ｖ）で与えられ、残りは水である。特に最も好ましいのは、あらかじめ少量の水を含むエタノール、例えば、９６％エタノールであり、したがって、もはや吸湿性ではなく、共沸蒸発する。
【０１４１】
１つの代替は、薬理学的に活性な物質を含む水溶液が高圧下で噴霧され、吸引可能な粒子の霧を生成する噴霧器の開発である。これらの噴霧器の利点は、いかなる高圧ガスも何ら必要としないことである。活性物質を含む規定の容量の溶液が、高圧下で小さなノズルから噴霧されて、好ましい粒子サイズ、１〜１０μｍ、好ましくは２〜５μｍを有する吸入可能なエアロゾルを生成する。
【０１４２】
用量
本発明において、薬学的有効量または治療的有効量は、所望の生物学的結果を誘導するために充分な量と理解される。この結果は、上皮修復もしくは再生の増大および／もしくは気道上皮のリモデリングの正常化ならびに／または疾患の徴候、症候または病因を緩和することであり得る。この疾患は、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、気管支拡張、汎細気管支炎、肺癌、肺炎、人工呼吸器関連肺炎（ＶＡＰ）、院内感染性肺炎（ＨＡＰ）、市中感染性肺炎（ＣＡＰ）、重症市中感染性肺炎（ｓＣＡＰ）またはカリニ肺炎菌であり、例えば、有効量は、一般に、症状の主観的な軽減かまたは医師もしくは他の有資格観察者によって認められる客観的に同定され得る改善のいずれかを提供し、好ましくは、このような症候の軽減は、著しい軽減である。したがって、１種以上の再生促進因子、好ましくは、ＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３の「有効量の」とは、肺投与により投与された場合に、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３の濃度が、対象の気道および／または肺柔組織において、気道上皮の修復および／もしくは再生ならびに／または気道上皮のリモデリングの正常化を達成する用量であることを意味する。
【０１４３】
調製物は、投薬処方物に適合する方法で、かつ治療的に有効である量で投与される。投与される量は、処置される対象、例えば、対象の体重および年齢、処置される疾患および疾患の段階に依存する。好適な用量範囲は、通常、１回の投与に体重１ｋｇあたり数百μｇ（マイクログラム）の桁の活性成分であり、好ましい範囲は、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１００００μｇである。
【０１４４】
調製物は、投薬処方物に適合する方法、かつ治療的に有効である量で投与される。投与される量は、処置される対象、例えば、対象の体重および年齢、処置される疾患および疾患の段階に依存する。好適な用量範囲は、通常、１回の投与に体重１ｋｇあたり数百μｇの桁の活性成分であり、好ましい範囲は、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１００００μｇである。モノマー形態の化合物を使用する場合、好適な用量は、多くの場合、体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜５０００μｇの範囲内、例えば体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜３０００μｇの範囲内、特に、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１０００μｇの範囲内である。マルチマー形態の化合物を使用する場合、好適な用量は、多くの場合、体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１０００μｇの範囲内、例えば体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜７５０μｇの範囲内、特に、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜５００μｇの範囲内、例えば体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜２５０μｇの範囲内である。
【０１４５】
投与は、単回で実施されてもよく、連続する投与を続けてもよい。体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜５０００μｇ、例えば体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜３０００μｇの範囲内、特に、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１０００μｇの範囲内、好ましくは５μｇ〜５００μｇの範囲内、なおさらに約５０μｇ〜約２００μｇが、１日に１回または２回、吸入により投与される。用量は、処置される対象の年齢、性別および体重によって変動する。マルチマー形態の好ましい用量は、体重７０ｋｇあたり１ｍｇ〜７０ｍｇの間である。
【０１４６】
体重１ｋｇあたりに１日あたりの好適な日用量は、通常、１日あたり約数百μｇの活性成分であり、好ましい範囲は、１日に体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１００００μｇである。化合物のモノマー形態を使用する場合、好適な用量は、多くの場合、１日に体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜５０００μｇの範囲内、例えば、１日に体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜３０００μｇの範囲内、特に、１日に体重１ｋｇあたり約０．１μｇ〜１０００μｇの範囲内であり、配列番号１、配列番号２または配列番号３に対し同一である配列を有するモノマー形態をベースとする場合、改変体およびフラグメントについて、用量は、モノマー形態の分子量対同族体またはフラグメントの分子量に基づいて計算される。
【０１４７】
組成物の単位用量は、約１ｍｇ〜約２００ｍｇまで、代表的には、約２５ｍｇ〜約７５ｍｇまで、例えば約５０ｍｇの再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバーおよび／またはＴＦＦダイマー、最も好ましくはＴＦＦ３もしくはＴＦＦ３ダイマーを含み得る。
【０１４８】
投薬の継続期間は、代表的に、１日〜約４ヶ月、例えば、２日〜約３ヶ月、例えば、１〜２日間〜２ヶ月の範囲内、例えば、１〜２日間〜１ヶ月の範囲内である。
【０１４９】
医療包装
本発明で使用される化合物は、単独でまたは薬学的に許容され得るキャリアもしくは賦形剤と組み合わせて、単回用量でまたは多回用量で、投与され得る。処方物は、当該分野で公知の方法によって、単位投薬形態で便利に提供され得る。
【０１５０】
本発明に記載の化合物は、キットで提供されることが好ましい。このようなキットは、代表的に、活性化合物を、投与のための投薬形態で含む。投薬形態は、対象に投与された場合に所望の効果が得られ得る充分な量の活性化合物を含む。
【０１５１】
したがって、医療包装は、関連のある投薬レジメンに対応する投薬単位の量を含む。したがって、１つの実施形態において、医療包装は、上で規定される化合物またはその薬学的に許容され得る塩ならびに薬学的に許容され得るキャリア、ビヒクルおよび／または賦形剤を含む薬学的組成物を含み、この包装は、１個〜７個の投薬単位を含み、それにより、１日以上の投薬単位を有するか、または７個〜２１個の投薬単位もしくはその倍数の投薬単位、したがって、１週間の投与または数週間の投与のための投薬単位を有する。
【０１５２】
投薬単位は、上で規定され得る。医療包装は、気管内投与、気管支内投与、気管支肺胞上皮投与または肺胞内投与のために好適な任意の形態であり得る。好ましい実施形態において、包装は、バイアル、アンプル、チューブ、ブリスターパック、カートリッジまたはカプセルの形態である。
【０１５３】
医療包装が１個以上の投薬単位を含む場合、医療包装は、各回の投与を１投薬単位のみに調整するメカニズムと共に提供されることが、好ましい。
【０１５４】
好ましくは、キットは、所望の効果を達成するための投薬形態の用法および特定の時間間隔にわたる投薬形態の量を示す指示書を含む。したがって、１つの実施形態において、医療包装は、薬学的組成物を投与するための指示書を含む。
【０１５５】
なおより好ましくは、１種以上の再生促進因子、好ましくはＴＦＦメンバー、より好ましくはＴＦＦ３の凍結乾燥調製物が、例えば、単回投薬単位であらかじめ包装される。なおより好ましい実施形態において、単回投薬単位は、患者に対して調整される。
【０１５６】
参考文献
Ｈｏｆｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ  １６（Ｉ）：３１９−３４，２００１
Ｔａｕｐｉｎ  ａｎｄ  Ｐｏｄｏｌｓｋｙ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．  ４（９）７２１−３２，２００３
Ｔｈｉｍ，  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５３（ＩＩ−１２）：８８８−９０３，１９９７
【実施例】
【０１５７】
実施例１
ＴＦＦ３による気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を介した局所肺処置のためのプロトコール  
Ｉ．処置される患者群：
慢性閉塞性肺疾患を有するヘビースモーカーの患者
ＩＩ．処置レジメン：
２×２０ｍｇのＴＦＦ３乾燥粉末の吸入。
ＩＩＩ．結果の分析：
ａ）一連の胸部Ｘ線および／または胸部ＣＴスキャンのモニタリングを、休憩時または運動後の肺機能障害、例えば、呼吸困難の徴候および症候、最初の１秒における努力性呼気流量（ＦＥＶ１）ならびに肺活量（ＶＣ）の測定値、ＰａＯ２／ＦｉＯ２比（動脈血酸素分圧／吸入酸素濃度（ｍｍＨｇ））によってモニタリングされる酸化能力の測定値を用いる肺機能の低下と組み合わせた。粘膜繊毛の機能を、吸入された不溶な放射活性粒子を用いて試験し、その後、クリアランス速度のシンチグラフィー測定を用いて、粘膜繊毛クリアランス速度の測定を行う。
【０１５８】
処置が成功した繊毛クリアランス速度、ＦＥＶ１およびＶＣの上昇および／または肺障害の徴候および症候の軽減などを反映させた肺機能測定値の低下の限度もしくはさらなる改善、すなわち、呼吸困難の消失、呼吸困難、痰および咳嗽速度の低下は、初期ＳＡＴ  Ｏ２％が異常に低く、ｐａＣＯ２（動脈ＣＯ２圧（動脈穿刺））を正常化し、および前処置のＰＨが７．４を下回る場合にｐＨが増大するに限り、最終的に、ＳＡＴ  Ｏ２の改善および正常化された動脈測定とパルスオキシメトリを用いて組み合わされる。
【０１５９】
【表１】
2013537168.tif 000003
【図１】
2013537168.tif 000004
【図２】
2013537168.tif 000005
【配列表】
2013537168000001.app
【国際調査報告】
2013537168.tif 000006
2013537168.tif 000007
2013537168.tif 000008