(57)【要約】【解決手段】本発明は診断用及び／又は治療用の抗原特異的超音波診断用造影剤、その調製方法並びに超音波画像診断及び治療におけるその使用に関する。具体的には、前記造影剤は、患部組織に結合し適切に超音波照射されると、薬剤及び／又はその他の生物活性因子を患部組織に選択的に運搬し、前記薬剤及び／又はその他の生物活性因子を部位に放出する点で有用であることが証明されている。さらに、前記超音波診断用造影剤は、患部組織のみに対して改善されたコントラスト強調を長時間付与することによって、患部組織を周囲（健常）組織と差別化することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
互いに異なり一方が他方の内側にある少なくとも２つのミクロスフェアからなる１つの抗原特異的な超音波診断用造影剤であって、前記ミクロスフェアの各々が：
−ミクロスフェアごとに異なる膜によって被覆され、画像診断及び／又は医薬品処置に供される組織内に存在する特定の抗原に対して特異的である有効量の少なくとも１つの高親和性レセプターによって、及び有効量の少なくとも１つの安定剤によって実質的に構成され、レセプター：安定剤の重量相互比が１０：１〜１：１であり；さらに
−各ミクロスフェアで同一又は異なる不活性ガスを含有する、前記造影剤。
【請求項２】
２つのミクロスフェアから成り、前記ミクロスフェアが実質的に同心性である、請求項１に記載の造影剤。
【請求項３】
前記少なくとも１つの抗原特異的レセプターが：モノクロナール及び／又は非モノクロナール抗体、及び／又はそのフラグメント、Ｆａｂ、及び／又は血管内皮増殖因子レセプター、ＶＥＧＦＲであって内皮細胞、心筋細胞、粘膜固有層細胞、間質細胞、動脈硬化性プラークに発現する血栓細胞に特異なもの、及び／又は免疫グロブリン、補体フラグメント、ペプチド及び／又は脂質ホルモン、神経伝達物質に対する特異的レセプターからなる群より選択され；好ましくは、１つの抗原に特異的な抗体からのＦａｂである、請求項１又は２に記載の造影剤。
【請求項４】
前記少なくとも１つの安定剤が：アルブミン、リン脂質、ガラクトース、パルミチン酸、シアノアクリレート及び／又はこれらの混合物；好ましくはアルブミン、リン脂質、パルミチン酸、ガラクトース及び／又はそれらの混合物；最も好ましくは、アルブミン、リン脂質及びパルミチン酸／ガラクトース混合物からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の造影剤。
【請求項５】
前記レセプター：安定剤の相互重量比が７．５：１〜１．５：１；より好ましくは５：１〜２：１である、請求項１〜４のうちいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項６】
前記ミクロスフェアの前記膜が、膜の総重量を基準にして約９１重量％までの量のレセプターを含有する、請求項１〜５のうちいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項７】
前記不活性ガスが：六フッ化硫黄、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロカーボン、空気、窒素；好ましくは、六フッ化硫黄、空気及びペルフルオロヘキサン；最も好ましくは、六フッ化硫黄及び空気からなる群より選択される、請求項１〜６のうちいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項８】
前記少なくとも２つのミクロスフェアのいずれかが、有効量の少なくとも１つの生物活性物質を含有する又は有効量の少なくとも１つの生物活性物質と会合する、請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の造影剤。
【請求項９】
請求項１〜８のうちいずれか一項に記載の造影剤の注射可能な水性懸濁液を含む超音波診断用医薬組成物。
【請求項１０】
薬剤及び／又は生物活性因子を周囲の健常組織と比べて選択的及び特異的に患部組織に運搬するための、請求項９に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１１】
薬剤を、部位、組織若しくは器官又領域に、持続的及び漸進的な形で特異的／選択的に放出する方法であって、前記方法が、請求項９に記載の医薬組成物を生物に投与すること及び続いて効力及び強度の異なる超音波ビームの印加により特異的及び時間的に差別化されたキャビテーションに供することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断用及び／又は治療用の抗原特異的超音波造影剤、その調製方法並びに超音波画像診断（一般に超音波画像診断と呼ばれる）、及びその他の種類の画像診断及び／又は治療における使用に関する。
【０００２】
具体的には、前記造影剤は、患部組織のみに対して改良されたコントラスト強調を長時間付与することによって、腫瘍組織／体を選択的に検出及び開示しながら、それを隣接（健康な）組織と区別する能力があることから、適切な薬理物質及び／又はその他の生物活性因子を、非超音波造影剤も含めて、患部組織に選択的に運搬及び放出する際に有用であることが証明された。
【背景技術】
【０００３】
超音波造影剤（又はＣＭ）とは、超音波画像のコントラストを強調することができる物質である。
【０００４】
現在、最も使用されているものの中に、いわゆる第２世代のものがあり、これは適切なコーティングの内側に含有される微小気泡、好ましくは不活性ガス（例えば六フッ化硫黄、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロカーボン、空気、窒素など）の微小気泡によって実質的に構成され；好ましくは、前記コーティングは、全体的又は実質的に例えばリン脂質又はアルブミンのような好適な安定化物質によって形成された、いわゆるマイクロカプセル／微小気泡／ミクロスフェア／微小胞／マイクロバルーンの形態にある。
【０００５】
超音波信号を強調する要素は気体であり、これは大部分が生物学的な固体及び液体よりも十分に大きなエコー輝度係数（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）を有する。最も使用される造影剤は、固有の共鳴周波数ｆ０（通常はＭＨｚ単位で測定される）、すなわち粒子が圧縮及び希薄化の周期的位相に供され始める振動周波数によって特徴づけられる、例えばマイクロカプセル／微小気泡／ミクロスフェア／微小胞／マイクロバルーン（簡略化のため、以後通常はミクロスフェアという）を含有する気体によって構成される。いわゆる第２世代の造影剤は、既存の超音波装置ですでに一般的に使用されている超音波周波数の範囲内にある共鳴周波数を有することから、特に有用である。
【０００６】
血流中に注入された後、前記造影剤は、超音波ビームが照射された時に共鳴を開始する。したがって、造影剤は、注入された物質の特性によって又は入射する照射超音波ビームの１つによって引き起こされる物理的特性を示す超音波ビームの反射を生じる。
【０００７】
具体的には、ミクロスフェアの物理的特性に関して、その膜の厚さ及び剛性が大きい場合、より薄く、したがって弾性のより大きい膜を有する粒子と比較して、弱い（すなわち有用性が低い）音波応答を生じる。
【０００８】
他方、膜が薄すぎる場合、あまりにも弱く、そのため入射超音波ビームによって生じる圧力作用への耐性が低くなるという欠点がある。この場合、ミクロスフェアが（ソノポレーションによって又はキャビテーションによって）あまりにも短時間で破壊されるため、診断的に有用な画像を与えることができない可能性がある。
【０００９】
超音波ビームと接触するミクロスフェアの数が増えると、個々の粒子／ミクロスフェアのエコー輝度係数（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）の直線的増大が見られる。すなわち、前記係数は個々のミクロスフェアの係数に血流に注入されたミクロスフェアの総数を乗じることによって得られる合計値をとる。
【００１０】
入射超音波ビームによると、その基本特性は周波数及び音響強度（通常はＫＰａ単位で測定される）である。具体的には、音響強度は反射ビームの範囲及び粒子振動の種類の特性決定においてきわめて重要である。
【００１１】
厳密には、造影剤のミクロスフェアに低音圧（平均で１０〜２０ＫＰａ）及び造影剤（ＣＭ）の共鳴周波数に等しい周波数を有する超音波ビームが照射された場合、直線型の形状変化を起こすだけである。この場合、圧縮相は、平均して希薄化相に等しく、反射超音波信号は各方向に広がる（いわゆる散乱現象である）。反対に、入射ビーム（共鳴周波数に等しい周波数をなお維持している）が高い音圧値（例えば４０ＫＰａ〜５０ＫＰａ）をとる場合、希薄化相は圧縮相よりも大きくなる。この作用により、ミクロスフェアは、共鳴周波数の倍数（すなわち、２ｆ０、３ｆ０、４ｆ０など）である一連の高調波振動数に富んだ、反射超音波ビームを発生することができる。さらに、音響強度が大きい場合、例えば最大で約１ＭＰａでも、分数調波振動数（ｆ０／２、ｆ０／５など）を発生させる。通常、１ＭＰａを超える強度はミクロスフェアの破壊を引き起こし、この作用が第１世代ＣＭを用いた超音波画像診断技法に使用されている。
【００１２】
反射超音波ビーム強度（Ｐａ単位又はｄＢ単位で測定）は、入射超音波ビームの強度及び造影剤のエコー輝度係数（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）に正比例し、造影剤を構成するミクロスフェアの半径に反比例する。
【００１３】
高調波周波数は、上述のように、照射超音波ビームの基本周波数の倍数及び約数によって形成される。このような高調波発生は、実質的にはミクロスフェアの形状に起こる弾性変化によって引き起こされる。上に示したように、前記変化はミクロスフェア自体の圧縮及び希薄化相によって発生し、これは超音波ビームによる音圧の質によって引き起こされる。  
【００１４】
一般的に、好ましい高調波周波数は、超音波装置に容易に表示できることから、第２高調波周波数である。これは、第２高調波は基本波に最も近い周波数であり、より正しく認識できるという事実による。
【００１５】
超音波診断用プローブは、受信相の間に適切に設定されるときの周波数を検出／読み取りすることができる。さらに、使用する超音波診断手順によっては（適切なソフトウェアのおかげで）、種々の広範な技術体系を用いて、多様な構造から届く反射信号を分析することができる。例えば、信号の位相、幅、又はその両方を調節するため、静止組織から届いた高調波を差し引いて、血管器官からの反射信号のみを特性決定することができる。最終目標は、いずれの場合も、造影剤が浸透した解剖学的構造のみを、そうでない構造と比較して、大幅なコントラスト強調とともに選択的に認識及び区別することである。
【００１６】
技術的観点から、ＣＭが血流に注入され、超音波診断用プローブが分析されるべき特定の身体組織領域上に置かれたときに、次の３つの時相においてミクロスフェアの動きを追跡することができる：
−動脈相（１０〜３５秒）；
−実質相（４０〜１２０秒）；
−静脈相（１２０秒から、検査中の器官の循環から造影剤が消失するまで）。
【００１７】
有効な画像コントラストを作製できることに加え、超音波診断用造影剤は薬理物質及び／又はその他の生物活性因子を他の種類の非超音波造影剤を含めて含有してもよく、好適な超音波ビームが適切に照射されると、それらを患部組織に放出することができ、放出された物質は患部組織に集まることが周知である。
【００１８】
したがって、例えば患部組織（例えば腫瘍）を隣接する健常組織から、経時的に重要的及び選択的に区別することができ、薬理物質を制御され及びほぼ調節された形で前記組織に放出することができる、十分に安定で部位特異的な超音波診断用造影剤を有することは非常に有用であろう。換言すると、一方で、安定で、隣接する健常組織と比較して高いコントラスト強調を、少なくとも所望の超音波診断検査を実行するのに必要な時間にわたって、選択的に患部組織に付与できる超音波診断用造影剤を有することは重要である。他方、問題の薬剤の誤った点滴速度から誘発されうる合併症の治療の観点から、前記超音波診断用造影剤がオペレータによって調節可能な形で好適な薬剤を前記患部組織に選択的に放出できるか否かは、同じく非常に有用であろう。
【００１９】
上記の必要性に応えるための試みがなされてきた。
【００２０】
こうして、例として、その中に患部／腫瘍組織に存在する１つ又はそれ以上の抗原に特異的な１つ又はそれ以上のレセプターが含有される不活性ガス含有ミクロスフェアが作製されている。
【００２１】
先行技術のこの種の造影剤において、前記レセプター（例えば、モノクロナール及び非モノクロナール抗体及び／又はそのフラグメント、例えばＦａｂ、すなわち抗原結合フラグメント）はミクロスフェアの膜に組み込まれ、例えばそのリン脂質鎖部分に挿入される。このように、造影剤が潅流したときに画像化に供される組織内に存在するレセプターと対応する抗原との間の特異でおそらく強力な結合の形成を支持／推進するための試みがなされた。かかる手順は、ミクロスフェア内部に組み込まれた好適な薬剤の運搬にも有用となる可能性があり、薬剤は、所望の組織が超音波診断用ＣＭを含有する血流によって潅流された後に当該組織内に首尾よく放出されると予想される。
【００２２】
現在、かかるシステムはまだ実験段階のみで使用されており、ヒト組織内で都合よく再現することはまだ可能となっていない。
【００２３】
上記のシステムの主な欠点の１つは、微小気泡内部に含有される薬剤を、患者のニーズに適合した調節された形で放出することができず、ミクロスフェアと入射超音波ビームとの間の１回の相互作用のみを通じて一度に放出されるという事である；そのような形では、薬剤の低速点滴又は投与が必要な臨床的状況、例えば頸動脈プラークの血栓溶解療法において安全性が大きく脅かされる。
【００２４】
例えば、特許文献１は、生物学的材料を選択的に放出するためのリポソームでできた粒子のサブグループを含む超音波感受性粒子を含む組成物を開示している。ただし、
前記文献は、膜が特定抗原に特異的なレセプターによって実質的に構成されている同心性微小気泡の使用の可能性を開示せず、示唆さえもしていない。
【００２５】
特許文献２は、中性又はアルブミン被覆されている基本微小気泡の内側及び外側の両方でリポソーム結合を行う方法を開示しているが、ソノポレーションの効力を増大するための１つを超える界面の使用を記載せず、膜が特定抗原に特異的なレセプターによって実質的に又は主に構成されている同心性微小気泡の使用の可能性に言及せず、示唆さえもしていない。  
【００２６】
非特許文献１は、超音波分野における最新の発明を綿密に記載している；しかし、膜が特定抗原に特異的なレセプターによって実質的に又は主に構成されている同心性微小気泡の使用の可能性を記述せず、示唆さえもしていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２７】
【特許文献１】ＷＯ２００８／１１０９５８
【特許文献２】ＷＯ２００７／００８２２０
【非特許文献】
【００２８】
【非特許文献１】Ｌｉａｎｇ  Ｈ−Ｄ  ｅｔ  ａｌ．：”Ｓｏｎｏｐｏｒａｔｉｏｎ，  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ”，  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  Ｐａｒｔ  Ｈ，  Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ  ＧＢ，  Ｖｏｌ．  ２２４  ｎ°．２，（２０１０．０１．０１），ｐａｇｅｓ  ４３４−３６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
したがって、現在、医療分野では、適切な超音波照射型に従い、十分に長い／有用な時間にわたって、選択的及び適切にすなわち十分に強力に、及びその結果として、近隣組織（通常は健常組織）と比較して画像化に供される組織（通常は患部組織）のみとの結合を形成した後、関連する薬学的又は生物活性物質を調節及び制御された形で放出することができ、それにより所望の選択的な超音波診断画像の実行を成功する並びに所望の選択的治療処置及び必要に応じた調節を同時に実現するために必要且つ十分な時間にわたって、実質的に高く長時間のコントラスト強調を選択的に付与する、超音波診断用造影剤の必要性がなお強く及び深く感じられている。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本出願人は、まったく予想外に、１つが他方に挿入され、互いに実質的に同心である多数の好適な異なるミクロスフェアからなる超音波画像診断用造影剤を調製することによって上記の技術的課題に対する十分な回答を与えることが可能であることを見出し、前記造影剤において前記ミクロスフェアの各々は、特定抗原に対して抗原特異的な好適なレセプターの好適な量をその構成要素として含む膜によって被覆され、及び好適な不活性ガス及び好適な生物活性因子を含有する。
【００３１】
したがって、本発明の１つの実施形態は、添付の独立請求項に記載のように、互いに異なる少なくとも２つのミクロスフェアからなり、その１つが他の内側に挿入され、前記ミクロスフェアの各々が、画像化に供される組織の内側に存在する特定抗原に特異的な高親和性レセプターの好適な量、及び好適な量のその安定剤によって形成される膜によって被覆され、並びに好適な不活性ガスを含有する。
【００３２】
したがって、本発明のもう１つの実施形態は、添付の独立請求項に記載のような、上記造影剤を含むコントラストエコー用医薬組成物である。
【００３３】
さらに、本発明のもう１つの実施形態は、添付の独立請求項に記載のような、上記造影剤の調製方法である。
【００３４】
本発明のさらなる実施形態は、添付の独立請求項に記載のような、周囲（好ましくは、健常組織）と比較して選択的な組織（好ましくは、患部／腫瘍組織）の超音波造影を実施するための上記造影剤の使用である。
【００３５】
さらに、本発明のさらなる実施形態は、添付の独立請求項に記載のような、薬剤及び／又はその他の生物活性因子の選択的キャリアとしての上記超音波診断用造影剤の使用である。
【００３６】
さらに、本発明のさらなる実施形態は、添付の独立請求項に記載のような、製薬的活性因子を患部組織に選択的な及び調節された形で放出するための上記超音波診断用造影剤の使用である。
【００３７】
本発明のその他の実施形態は、添付の独立請求項に記載されている。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明による抗原特異的超音波診断用造影剤は、互いに異なり、１つが他の内側にある少なくとも２つ（又はそれを超える）ミクロスフェアからなり、その際前記ミクロスフェアの各々は：
膜によって被覆され、該膜は各ミクロスフェアによって異なり、画像化及び／又は薬物処置に供される組織に存在する特定抗原に特異的な、有効量の少なくとも１つの高親和性レセプターによって、及び有効最小量の少なくとも１つの安定剤によって実質的に構成され、レセプター：安定剤の相互重量比が１０：１〜１：１であり；及び
不活性ガスを含有し、該ガスは各ミクロスフェアで同一又は異なる。
【００３９】
好ましくは、本発明の造影剤は２つのミクロスフェアからなり、前記ミクロスフェアは互いに異なり、１つが他の内側にあり、実質的に互いに同心である。
【００４０】
前記少なくとも２つのミクロスフェアの各々を被覆している膜は異なっており：厳密には、外側のミクロスフェアを被覆する膜は、内側のミクロスフェアを被覆する膜と異なる。
【００４１】
前記膜は、画像化及び／又は薬物処置に供される組織に存在する特定抗原に対して高い親和性を有する少なくとも１つの抗原特異的レセプターの有効量を含有する。より好ましくは、前記膜は単一抗原特異的レセプターを１つだけ含有する。実際には、いずれのミクロスフェアも抗原特異的である。
【００４２】
本発明の特に好ましい実施形態において、前記レセプターはすべての種類の膜、すなわち、外側のミクロスフェアを被覆する膜及び内側のミクロスフェアを被覆する膜のいずれでも同じである。
【００４３】
例えば、前記レセプターは以下を含む群から選択されてもよい：モノクロナール若しくは非モノクロナール抗体、及び／又はＦａｂのようなそのフラグメント、及び／又は内皮細胞、心筋細胞、粘膜固有層細胞、間質細胞、動脈硬化性プラークに発現する細胞に特異なレセプターであるＶＥＧＦＲ（血管内皮増殖因子レセプター）、並びに免疫グロブリン、補体フラグメント、ペプチド及び脂質ホルモン、神経伝達物質に対する特異的レセプター。
【００４４】
特に好ましいレセプターは高い親和性を有する抗体Ｆａｂフラグメントであり、これは特定の抗原に特異的である。抗体Ｆａｂフラグメントの使用が全抗体と比較して好ましいのは、Ｆｃフラグメント（結晶性フラグメント）を奪われた抗体はその細胞毒性を失い、補体分子を活性化するためである。このようにして、副作用の発現をなくす、又は少なくとも実質的に低減することが可能である。
【００４５】
好ましくは、前記ミクロスフェアの各々を被覆している前記膜は、安定化作用のある少なくとも１つの物質（本発明の実現形態のいくつかにおいて、どの場合でも２つ又はそれ以上の安定剤の混合物を有することも可能である）の最小有効量を含有する。
前記少なくとも１つの安定剤は実質的にその作用を膜に及ぼすが、前記抗原特異的レセプターにも及ぼし、したがって膜（すなわち、厳密にはレセプター−安定剤集合体）は生物内でその実質的に球形の構造を適切な時間にわたって無傷に保ち、その結果標的部位に向かって前進し、診断及び／又は治療手順を実行するのに必要な全時間にわたって有効に結合することができる。
【００４６】
前記少なくとも１つの安定剤は膜の種類によって異なり：厳密には、外側のミクロスフェアを被覆する膜に含有される安定剤は、内側のミクロスフェアを被覆する膜に含有される安定剤と異なる。
【００４７】
前記安定剤は、例えば、以下を含む群から選択される：アルブミン、リン酸脂質、ガラクトース、パルミチン酸、シアノアクリレート。好ましい安定剤は結果として、アルブミン、リン脂質、パルミチン酸、ガラクトース及びこれらの混合物であり；特に好ましくはアルブミン、リン脂質及びパルミチン酸／ガラクトース混合物である。
【００４８】
アルブミンは、タンパク質（抗体、Ｆａｂなど）に強力な安定化作用を及ぼし、その後、低用量でも、ミクロスフェアの膜を形成するタンパク質を、その濃度、したがってその効力を過度に減少することなく、効率的にアマルガメイトする可能性があることから、さらに好ましい。
【００４９】
添加される安定剤の量は必要最小限である：いかなる場合も、ミクロスフェアの膜を適切な／所望の形で安定化するのに十分な量のみである。通常、レセプター：安定剤の相互重量比は１０：１〜１：１が妥当である；好ましくは、前記比は７．５：１〜１．５：１；より好ましくは、５：１〜２：１；さらにより好ましくは、４：１〜２．５：１である。特に好ましい本発明の実現形態において、前記レセプター：安定剤の相互重量比は３．５：１であり；好ましくは、約３：１である。
【００５０】
実際には、ミクロスフェアの膜は、膜の総重量を基準にして約９１重量％までの最大レセプター量を含有してもよい。好ましくは、所望の実現形態に応じて、前記レセプターの量は、膜の総重量を基準にして約８８重量％又は８３重量％又は８０重量％又は７７重量％；より好ましくは膜の総重量を基準にして７５重量％に達してもよい。結果として、上記から、前記抗原特異的レセプターは、当該技術分野で既知及び実施されているものと反対に、限られた量が平均して膜の中又はその外面又は内面に挿入されるのでなく、その構造的に一体化した部分であり、安定剤の量は膜自体に所望の安定性を付与するために必要な最低限の量（抗原特異的レセプターの種類に依存する）である。
【００５１】
実際には、前記の非常に少量の安定剤は、予想外にもミクロスフェアの膜に大きな安定性を付与するのに十分以上であることが明らかになった。したがって、当該技術分野で既知の方法と比較してまったく予想外の形で、膜が主に又は実質的に抗原特異的レセプター（好ましくは抗体のＦａｂ）で構成される非常に安定なミクロスフェアを得ることが可能である。結果として、前記ミクロスフェアは、当該技術分野で既知の抗原特異的レセプター含有微小気泡と比較して実質的に高い（少なくとも１０〜１５％を超えるが、おそらくは≧２０％及びそれ以上でもある）、所望の標的部位、組織又は器官に対する特異性を付与される。したがって、本発明の特に革新的及び有利な態様は、その膜が少量の安定剤及び既知技術のミクロスフェアと比較して実質的に優れた特異性を保証する大量の抗原特異的レセプターによって構造的に形成されるという事実にもかかわらず、予想外に安定でクロスフェアの実現である。
【００５２】
一例にすぎないが、本発明の好ましい実現形態において、アルブミンは外側のミクロスフェアを被覆している膜に含有される安定剤であり、リン脂質は内側のミクロスフェアを被覆している膜に含有される安定剤である。
【００５３】
本発明の別の好ましい実現形態においては、状況は反対である：すなわち、アルブミンは内側のミクロスフェアを被覆している膜に含有される安定剤であり、リン脂質は外側のミクロスフェアを被覆している膜に含有される安定剤である。
【００５４】
別の好ましい実現形態において、ミクロスフェアの１つを被覆している膜は、例えば、安定剤としてパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有してもよい。前記混合物において、２つの構成成分は、例えば、１０：１〜１：１０；好ましくは５：１〜１：５；より好ましくは約１：１の相互重量比（ｗ：ｗ）で存在する。
【００５５】
本発明による抗原特異的な超音波診断用造影剤を形成する前記少なくとも２つの実質的に同心性のミクロスフェアの各々に含有されるガスは、ミクロスフェアの各種類について同じ又は異なり；厳密には、外側のミクロスフェアに含有されるガスは、内側のミクロスフェアに含有されるガスと同じ又は異なる。
【００５６】
前記ガスは、例えば、以下を含む群から選択される：六フッ化硫黄、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロカーボン、空気、窒素。特に好ましいのは六フッ化硫黄、空気及びペルフルオロヘキサンであり；より好ましくは、六フッ化硫黄及び空気である。
【００５７】
一例にすぎないが、本発明の好ましい実現形態において、六フッ化硫黄は外側のミクロスフェアに含有されるガスであり、空気は内側のミクロスフェアに含有されるガスである。
【００５８】
本発明の別の好ましい実現形態においては、状況が反対である：すなわち、六フッ化硫黄は内側のミクロスフェアに含有されるガスであり、空気は外側のミクロスフェアに含有されるガスである。
【００５９】
本発明のさらに好ましい実現形態において、六フッ化硫黄又は空気又はペルフルオロヘキサンは、外側のミクロスフェア又は内側のミクロスフェアのいずれかに含有される。
【００６０】
本発明の特に好ましい実現形態において、本発明による前記抗原特異的超音波診断用造影剤は、有効量の少なくとも１つの生物活性物質をさらに含み、該物質は例えば：主たるものとは異なる抗原特異的レセプター；薬剤（例示にすぎず、完全に非限定的な例は、抗腫瘍性薬）；その他の種類の物質、例えば分子イメージングに使用される分子、従来の放射線学用の放射線造影剤、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、核磁気共鳴；ホルモン、ビタミンのような生物活性分子；ヌクレオシド、ヌクレオチドのような遺伝物質；ペプチド、脂質、糖質の性質の合成物質から選択され、その結果得られる超音波診断用造影剤（ＣＭ）は同時に前記物質の選択的伝達物質又はキャリアとしても使用できる。特に、画像診断に使用される上記の分子は、好ましくは：マグネタイトナノ粒子、ヨウ化化合物、常磁性イオン複合体から選択される。
【００６１】
前記少なくとも１つの生物活性物質は、好ましくは当該分野の既知技術に従って、本発明の造影剤からなる前記少なくとも２つのミクロスフェアに挿入されるか又は会合／結合される。好ましくは、前記生物活性物質は、各ミクロスフェア及び／又はその内側を被覆している膜に挿入される。
【００６２】
本発明の好ましいが完全に非限定的な例において、本発明の実施形態は以下からなる超音波診断用造影剤である：空気又は六フッ化硫黄又はペルフルオロヘキサンのようなガスの気泡によって構成され、有効最小量、例えば優先的重量比３：１のアルブミンで安定化された抗体からのＦａｂの膜によって被覆された、１つの外側ミクロスフェア；上記ミクロスフェアの内側（実質的にそれと同心の）にあり、空気又は六フッ化硫黄又はペルフルオロヘキサンのようなガスの気泡によって構成され、有効最小量、例えば優先的重量比３：１のアルブミンで安定化された抗体からのＦａｂの膜によって被覆された、１つの内側ミクロスフェア。
【００６３】
前記２つの同心性ミクロスフェアは、上記のような薬剤、造影剤、生体分子等の生物活性剤の有効量をさらに含有してもよい。
【００６４】
必要に応じて、逆処方を調製することも可能である。
【００６５】
例えば、本発明の別の実施形態において、構造の化学的構成成分を逆にすることによって超音波診断用造影剤を実現することが可能である。すなわち、前記薬剤は以下からなる：好ましくは３：１の重量比でリン脂質によって安定化された抗原特異的物質（好ましくはＦａｂ）によって構成され、ガスとしての六フッ化硫黄、及び場合によっては上記のように適量の生物活性剤及び／又は薬理物質を含有する１つの外側のミクロスフェア；上記ミクロスフェアの内側にあり、好ましくは３：１の重量比でアルブミンによって安定化された抗原特異的物質（好ましくはＦａｂ）によって構成され、ガスとしての六フッ化硫黄、及び場合によっては上記のように適量の生物活性剤及び／又は薬理物質を含有する１つの内側のミクロスフェア。
【００６６】
前記生物活性剤及び／又は薬理物質の好ましい量は、細胞／組織／器官の種類及び／又は処置される疾患によって変わり、いかなる場合も当該分野の熟練臨床的な治療知識の一部をすでに形成する。
【００６７】
本発明の非限定的なさらなる例として、本発明の超音波診断用造影剤は、２つの同心性ミクロスフェアから成ってもよく、その際：
【００６８】
ａ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとして空気及び膜安定剤として上記の相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとして六フッ化イオン及び膜安定剤としてリン脂質を含有する；
【００６９】
ｂ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとして空気及び膜安定化剤としてアルブミンを含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとして空気及び膜安定化剤として上記相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有する；
【００７０】
ｃ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとしてペルフルオロヘキサン及び膜安定化剤としてアルブミンを含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとして六フッ化硫黄及び膜安定化剤として上記相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有する；
【００７１】
ｄ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとして空気及び膜安定化剤としてアルブミンを含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとして六フッ化硫黄及び膜安定化剤として上記相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有する；
【００７２】
ｅ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとして六フッ化硫黄及び膜安定化剤として上記相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとしてペルフルオロヘキサン及び膜安定化剤としてリン脂質を含有する；
【００７３】
ｆ）外側のミクロスフェアは不活性ガスとして六フッ化硫黄及び膜安定化剤として上記相互重量比のパルミチン酸／ガラクトース混合物を含有し、
内側のミクロスフェアは不活性ガスとして空気及び膜安定化剤としてリン脂質を含有する；
【００７４】
ｇ）ａ）〜ｆ）の上記造影剤の各々で、外側のミクロスフェアの組成及び内側のミクロスフェアの組成が逆転されたもの。
【００７５】
好ましくは、ａ）〜ｇ）の前記造影剤において、膜を安定化する物質の総量とＦａｂとの間の重量比は約１：３であり、したがって当該分野の現在の知識を考慮して、かなり大量のＦａｂのまったく予想外の使用を裏付ける。
【００７６】
より好ましくは、ａ）〜ｇ）の前記造影剤は、上記の方法及び量を採用することによって、薬剤、造影剤、生体分子などのような生物活性剤の有効量を、さらに含有する。
【００７７】
寸法の観点から、１つの独立したミクロスフェアは、すべての可能な実施形態において、≦１μｍ〜＜７μｍの平均直径を有し；より好ましくは、前記平均直径は≦２μｍ〜＜４μｍ；より好ましくは、≦３．５μｍである。
【００７８】
個別に見ると、外側のミクロスフェアの膜厚は平均で４００ｎｍを超えず；好ましくは、＜３００ｎｍであり：より好ましくは、＜２００ｎｍである。
【００７９】
内側のミクロスフェアの膜厚も４００ｎｍを超えず；好ましくは、＜３００ｎｍであり：より好ましくは、＜２００ｎｍである。
【００８０】
結果として、本発明の造影剤（すなわち、本発明の超音波用造影剤を構成する前記少なくとも２つの同心性ミクロスフェアの実質的に球形の集団）の平均直径の合計は８μｍを超えず；好ましくは、＜７μｍであり；より好ましくは＜６μｍである。
【００８１】
前記値は、赤血球の平均直径（約８μｍ）を越えず、したがって本発明の造影剤の安全性が保証される。
【００８２】
さらに、１０μｍよりも低いことで、前記造影剤の粒子が肺障壁を通過できることも保証される。
【００８３】
上記開示の結果として、本発明の１つの実施形態は、上記のすべてに従う造影剤を含む超音波診断用造影組成物でもある。
【００８４】
前記造影剤は、好ましくは、当該分野の既知の処方手順に従って調製される。
【００８５】
本発明の１つの実施形態において、本発明の造影剤の構成成分、又は前駆体は、好適に個別に調製され、好適なキットに予め包装され（及びそのような形態で医師に配布され）てもよく、その結果、例えば前記構成成分／前駆体を適切に混合及び穏やかに攪拌することによって使用直前に容易に混合及び溶解することができる。前記キットは、既知の及び市販の診断用キットで通常行われているのと同様に、必要な変更を加えて、調製及び構成される。
【００８６】
本発明のミクロスフェア及び造影剤の調製方法は、好ましくは、当該技術分野で既知の超音波診断用造影剤のガス含有微小気泡の調製に一般的に使用されている既知の調製技術を採用することによって実施される。
【００８７】
したがって、本発明の好ましい実施形態において、内側のミクロスフェア膜は、有効量の少なくとも１つの抗原特異的レセプターによって構成される凍結乾燥物質の粉末が、以下の群より選択される好適量の安定剤と混合された少なくとも１つの相：リン脂質、アルブミン、ガラクトース、パルミチン酸、シアノアクリレート及び／又はそれらの混合物（好ましくは、リン脂質、アルブミン、ガラクトース、パルミチン酸）が、例えば不活性ガス（好ましくは、六フッ化硫黄、空気、ペルフルオロヘキサン）雰囲気下で、前記抗原特異的レセプター（好ましくは、抗体からのＦａｂ）を含有する抗体／抗原特異的膜によって被覆された前記ガスのミクロスフェアを得るのに十分な時間にわたって、生理溶液と適切に攪拌されることを含む従来方法によって作製される。
【００８８】
かかる膜は、当該技術分野で既知のＣＭのいくつかの構造を再現する場合があり、したがって、同じものが新規方法論を使用することによって合成され、これはその調製に一般的に使用される。
【００８９】
外側のミクロスフェア膜の実現は、その中で好ましくは相互重量比３：１のＦａｂ／安定剤混合物の凍結乾燥粉末が、不活性ガス（好ましくは、六フッ化硫黄、空気、ペルフルオロヘキサン）雰囲気下で、例えば密封バイアル内で、生理溶液（０．９％ＮａＣｌ）及び事前に得られた（内側の）ミクロスフェアの存在下で混合され、及び室温で数分間、例えば手動で又は超音波処理により適切に攪拌され、上記の本発明の造影剤の実質的に球形の核小体を与える、少なくとも１つの相を含む。
【００９０】
例示にすぎず、本発明の完全に非限定的な例では、前記プロセスは好ましくは、以下の第１相ａ）を含む：
【００９１】
ａ）少なくとも１つの抗原特異的レセプター（Ｆａｂ）及びある量のリン脂質（約１０〜２０ｍｇ）の相互重量比３：１によって構成される混合物によって形成される凍結乾燥粉末が、六フッ化硫黄雰囲気下で、例えば密封バイアル内で、約２．５ｍＬの生理溶液（０．９％ＮａＣｌ）と混合され、室温で数分間、例えば手動で又は超音波処理により適切に攪拌され、その結果、単一のリン脂質膜を有し、六フッ化硫黄を含有する、前記予め形成されたエコー源性ミクロスフェア（いわゆる内側のミクロスフェア）の第１のミクロ懸濁液を与える。
【００９２】
前記第１相ａ）に、以下の第２相ｂ）が続く：
ｂ）前記相ａ）から導出されたミクロスフェアに、Ｆａｂ／アルブミン３：１ｗ：ｗ（約１０〜２０ｍｇ）によって構成される凍結乾燥混合物を、六フッ化硫黄又はその他の不活性ガス雰囲気下で、約２．５ｍＬの生理溶液（０．９％ＮａＣｌ）が入った密封バイアルに添加する。全体を室温にて数分間、例えば手動又は超音波処理にて適切に攪拌し、本発明の同心性ミクロスフェア物体（１つの内側のミクロスフェア及び前記ミクロスフェアと異なる１つの外側のミクロスフェアからなる）を得る。
【００９３】
当該技術分野の微小気泡の最大貯蔵時間（密閉バイアル内）は、調製後約６時間である。
【００９４】
末梢血流中におけるその耐久時間は約６分である。  
【００９５】
既知の事実と比較して、本発明の超音波診断用造影剤の同心性ミクロスフェアの安定性は、当該技術分野の微小気泡の安定性よりも、平均してかなり高く（好ましくは、１．１〜５倍）、したがって、より優れる。平均して、発明の超音波診断用造影剤の同心性ミクロスフェアの抹消血流中における耐久時間は、少なくとも７分；好ましくは、少なくとも８分；より好ましくは、少なくとも９分；さらにより好ましくは１０分又はそれ以上評価できる。
【００９６】
本発明の超音波診断用造影剤によって示される上記の予想外の特性を考慮して、その構造が、本発明の造影剤の同心性ミクロスフェアの膜に存在するレセプター（Ｆａｂ）がそれに特異的な特定の抗原を発現する組織の内部における特に長い耐久性、又は２つのミクロスフェアの内側に含有される薬剤の的を絞った制御された形での放出のいずれかを得ることを可能にすることを示すことが、意外にも可能である。
【００９７】
実際には、少なくとも２つの同心性ミクロスフェアの膜は、その化学構造がその構成要素に関して実質的に異なり、超音波検査におけるその可視性の差別化及び薬剤放出の有効な調節が得られる。これは、膜の一方又は他方のいずれでキャビテーションを生じることが望ましいかによって異なる特性の超音波ビームを印加する必要があるために起こる。
【００９８】
換言すると、例えばアルブミンで被覆された空気からなるミクロスフェアのキャビテーションを生成するために必要な音響出力は、リン脂質で被覆された六フッ化硫黄によって形成される微小気泡に同じ作用を得るために必要な音響出力と異なる。したがって、（好適な音響出力を印加することによって）外側のミクロスフェア膜のキャビテーションの誘発に続いて、そこに含有されるか又はそれに会合する薬剤が対応して放出された後、（好適な異なる音響出力を印加することによって）内側のミクロスフェア膜のキャビテーションを、そこに含有される又はそれに会合する薬剤の対応するさらなる放出と共に引き続いて生じることが可能である。この方法で、放出が単一の同種の膜のみによって誘発される場合に比べて、十分に長時間の薬剤放出（及び、したがって、標的組織による同薬剤の持続的及び漸進的な吸収）を得ることが可能である。
【００９９】
したがって、異なる化学組成を有する膜によって及び同一の又は異なるガスによって形成される本発明の少なくとも２つの同心性ミクロスフェアの使用の発明的基本原理は、膜の化学的構成要素及びそこに含有されるガスが、キャビテーションを誘発するために使用される音響ビームの特性に影響するという事実にある。
【０１００】
したがって、キャビテーションに供されることが望ましいミクロスフェアの種類に応じて（すなわち、膜の種類及びその中に含有されるガスの種類に応じて）異なる効力を有する音響ビームを使用する必要がある。このようにして、照射ビームの音響出力を変えることによって、より長時間で調節された薬理学的放出を得られるように、本発明の少なくとも２つの同心性ミクロスフェアの異なる膜の連続的キャビテーションを引き起こすことが可能である。
【０１０１】
平均して、照射ビームの音響ビームは、０．１〜１ＭＰａ；好ましくは、０．１〜０．９ＭＰａ；より好ましくは、０．２〜０．８３ＭＰａの範囲で、キャビテーションに供される膜の化学的構成成分の種類（及びガスの種類）によって変わる。
【０１０２】
一方、超音波ビーム周波数は、平均して１〜３ＭＨｚ；好ましくは、１．１〜２．９ＭＨｚ；より好ましくは１．１５〜２．８５ＭＨｚの範囲である。
【０１０３】
例示にすぎず、完全に非拘束で非限定的な本発明の適用可能性の例は、２つの同心性ミクロスフェアからなる本発明の超音波診断用造影剤であり、外側のミクロスフェアはＦａｂ及びリン脂質（重量比３：１並びに六フッ化硫黄及び活性成分としての１つの抗腫瘍性物質）によって形成され、内側のミクロスフェアはＦａｂ及びアルブミン（重量比３：１並びに空気及び活性成分としての１つの抗腫瘍性物質）によって形成され、超音波処理に供された。
【０１０４】
前記造影剤は、最初に周波数１．１０〜２．８５ＭＨｚの超音波ビーム及び０．２〜０．４ＭＰａの音響出力を照射され（これは外側のミクロスフェアのリン脂質膜の穿孔及びそれに続くキャビテーションを、そこに含有される又はそれに会合する対応する薬剤の放出と共に引き起こす）、続いて同じ周波数で、音響出力が０．８３ＭＰａの超音波ビームを照射される（これは、内側のミクロスフェアのアルブミン膜の穿孔及びそれに続くキャビテーションを、そこに含有される又はそれに会合する対応する薬剤の放出と共に引き起こす）。
【０１０５】
このように、照射ビームの音響出力を適切に変えることによって、２つの異なる膜の連続的キャビテーションを引き起こし、それによって造影剤が極めて選択的で強力な結合を生じる領域への長時間で調節された薬理学的放出を得ることができることが示された。
【０１０６】
その両方／すべてが特定の抗原に特異的である少なくとも２つの同心性ミクロスフェアによって形成される造影剤は、本発明によると、従来の造影剤粒子よりもかなり長い時間抗原発現組織に固定され続けることができる。
【０１０７】
その結果として、前記組織の構造は、他の周囲組織と比較してコントラスト強調がより陽性及びより長時間である。平均して、この選択的及び長時間のコントラスト強調は、造影剤注入の１２０秒後から検出され始める。また、まったく予想外の形で、強調の選択的増大も投与１２０秒後までに起こる。
【０１０８】
これはすべて、本発明の造影剤の革新的構造（上記のように、特定の抗原に特異的な高親和性抗体によって主に形成される）を通じて、これらの２つの免疫学的要素（抗体：抗原）に卓越した結合強度を付与すること、並びにミクロスフェアすべてに卓越した安定性を付与することが可能になるという事実に帰することができる。
【０１０９】
さらに、本発明の特に重要な態様は、少なくとも２つの同心性ミクロスフェアの内部キャビティに含有される（又は会合する）薬理物質を制御及び調節された形で運搬できるという事実にある。
【０１１０】
これは、異なる音響出力を有し、同心性ミクロスフェアの膜を調節された形で（すなわち、順番に）ソノポレーション及びキャビテーションに供することができる２つの超音波ビームの印加によって実行される差別化された照射によって実現される。厳密には、例えば、アルブミンで被覆された空気ミクロスフェアのキャビテーションを作製するためには、リン脂質で被覆された六フッ化硫黄によって形成されるミクロスフェアに同じ作用を得るために必要な音響出力とは異なる音響出力が必要である。したがって、外側のミクロスフェア膜のキャビテーションを誘発した後、内側のミクロスフェア膜のキャビテーションを逐次的に誘発し、単一均質層のみから起こると予想される放出の場合と比較して、より長時間の薬剤放出（したがって組織による持続的及び漸進的な薬剤の吸収）を得ることが可能である。
【０１１１】
したがって本発明の目的は、本発明の造影剤を生物に投与し、その後効力及び／又は強度の異なる超音波ビームの印加により、経時的に特異的及び差別化されたキャビテーションに供することによって、薬剤を部位、組織又は器官に持続的及び漸進的な形で特異的／選択的に放出する方法でもある。
【０１１２】
好ましくは、本発明の造影剤は、所望の超音波造影剤を与えるための、適切な生理学的に許容可能な水性媒体を用いた注射可能な懸濁液として処方される。  
【０１１３】
本発明の造影剤は、多数の治療用途を可能にする。例えば、虚血性発作に苦しむ患者の血栓溶解療法は、使用する物質の薬力学（周知の出血性副作用を引き起こす）に関係するだけでなく、血栓形成が溶解される速度にも関係する多数の合併症を示す場合がある。したがって、血流から病変への薬剤の輸送速度を調節できる治療方法は、臨床的実施に有用となる場合がある。虚血性発作の治療において、少なくとも２つの同心性ミクロスフェアを有する造影剤は、
【０１１４】
虚血性発作の治療において、音響出力が異なる超音波ビームの印加の影響を受けやすい少なくとも２つの同心性ミクロスフェアを有する造影剤は、点滴速度に関連する危険の低減、及び局所‐極部的アプローチ使用の必要性の満足の両方に適切な保護を示す。（これは血管内動脈法で実施される虚血性発作血栓溶解に関する研究で非常に有効な結果を得ている）。
【０１１５】
同様の理論は、四肢末梢虚血又は心筋虚血における血栓溶解療法にも当てはまる。  
【０１１６】
さらに、このようなＣＭの種々の診断的利用分野は、例えば精巣、肝臓、甲状腺、乳房、四肢骨格筋のような、超音波診断が容易な器官に関する新生物の特性評価及び治療に特に存在する。この超音波診断用造影剤により、血管新生過程において内皮レベルで高発現される（ｉｐｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）新生物マーカー及び分子の両方を標的とすることによって病変を特性評価することができる。
【０１１７】
前記造影剤は、内皮レベルで発現されて、新生物性血管新生マーカーを表す分子に対して特異なレセプターを有する薬剤のキャリアとしても使用できる。
【０１１８】
同様に、前記造影剤は、周知の局所的な微細転移現象であり、血管を通じて腫瘍周囲への新生物細胞の拡散を誘発する、腫瘍マーカーに対する特異な造影剤として提案されてもよい。
【０１１９】
本発明の超音波診断用造影剤に考えられる有利な臨床的利用分野の完全に非限定的な例を以下の節で簡単に述べ、その広い応用可能性を説明する。
【０１２０】
−胚性癌腫細胞は、α−胎児蛋白（ＡＦＰ）及び絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）のような抗原に対して陽性を示す。本発明によるＣＭが抗体（ａｎｔｉｃｏｒｐａｌ）外包上に適切にチャージされた、これら２つの抗原に対する精巣腫瘤陽性の選択的試験は、患者にとって無駄及び危険となる外科的探査に頼る必要なく、診断の向上、または診断仮説からの除外を可能にするであろう。
【０１２１】
−多数の上皮性腫瘍がサイトケラチンを発現する：乳腺腫瘍のような腫瘍は、サイトケラチン８、１８又は１９の典型である。さらに、サイトケラチン５又はサイトケラチン６は扁平上皮細胞腫瘍の場合に検出される可能性がある。
【０１２２】
−α−胎児蛋白特異的な本発明の超音波診断用ＣＭを用いた研究は、肝新生物の診断プロセスにおいて利点を与える可能性がある。
【０１２３】
−本発明の超音波診断用ＣＭにチャージされたＣａ１２５は、子宮又は卵巣の悪性腫瘍の疑いがもたれる腫瘤の検査に使用できる。
【０１２４】
−ＣＥＡ（癌胎児抗原）は、肝臓レベルでの結腸直腸癌からの転移の有無を確認または除外するために使用できる。
【０１２５】
−特定のＣＤ（分化抗原群）の研究は、血液細胞腫瘍の診断に役立つ可能性がある。
【０１２６】
−血管新生過程で発現される分子は、悪性新生物成長過程において必須であり特徴的である。抗ＶＧＥＦ抗体は、この現象の特定に有利に役立つと考えられる。
【０１２７】
特に、これら超音波診断用造影剤の使用は、侵襲性の低い診断手法の利用がより必要とされより安全であることが間違いない小児年齢で特に有望とみられる。実際に、本発明の微小気泡の高い生物学的特異性／選択性は、生検の制限に特に有望とみられる；これは、小児年齢にとって確実に望ましい。
【国際調査報告】
2013532681.tif 000002
2013532681.tif 000003
2013532681.tif 000004