(57)【要約】  本発明は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ダイマー複合体、これを含有する組成物、および治療への使用に関し、特に、抗癌剤としての使用に関する。本発明はまた、この複合体を調製する方法、この複合体の抗癌剤としての使用、また、これらのダイマーにも関する。式（Ｉ）において：は、単結合または二重結合を表す。2013532680.tif 000173
2013532680.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2013532680.tif 000148
の化合物であって、式中、
【化２】
2013532680.tif 000149
は、単結合または二重結合を表し、但し
【化３】
2013532680.tif 000150
が単結合を表す場合には、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ３−、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、
【化４】
2013532680.tif 000151
が二重結合を表す場合には、
ＵおよびＵ’は存在せず、
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ｑ＝０、１または２であるＳ（Ｏ）ｑＲを表し、
または、
Ｒ１とＲ２、および／またはＲ１’とＲ２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３を表し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ１は、
単結合、
または
ｉが２から４０の範囲の整数を表す、酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−基、
または
−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−を表すＤを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基
を表し、
Ｌ２は、
−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基、
または
ｊが１から４０の範囲の整数を表す、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−基、
または
ｊが１から４０の範囲の整数を表し、ならびにＲ”は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基を表す、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびに（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ基を表し、
Ｚａは、Ａｃ、ＲａまたはＳＲａを表し、
Ｒａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＮＯ２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、ならびにＲｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚｂは、単結合を表し、およびＲｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺａを表すことを条件とする、
化合物。
【請求項２】
Ｕ＝Ｕ’および／またはＷ＝Ｗ’および／またはＲ１＝Ｒ１’および／またはＲ２＝Ｒ２’および／またはＹ＝Ｙ’および／またはフェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基が同じである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＡ）または（ＩＢ）： 
【化５】
2013532680.tif 000152
の請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＡ）： 
【化６】
2013532680.tif 000153
の請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ＹおよびＹ’が、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基を表す、請求項１から４に記載の化合物。
【請求項６】
ＭがＮを表す、請求項１から５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌ１が単結合を表す場合、Ｌ２が、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊＣＨ２ＣＨ２−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−を表す、請求項１から６の一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｇが、−ＯＨ基、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、−ＮＨ２基、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル２基を表すか、または、Ｇが、−ＮＲＲ’基を表し、ここで、ＲとＲ’が、これらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびに（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項１から７の一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−；または
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−およびＬ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−；または
Ｌ１＝単結合およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−；または
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−；または
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−
である、請求項１から８の一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂである、請求項１から８に記載の化合物。
【請求項１１】
−ＣＯＺｂＲｂが、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、
【化７】
2013532680.tif 000154
または
【化８】
2013532680.tif 000155
基を表し、ＩＧが、少なくとも１個の誘導基または
【化９】
2013532680.tif 000156
を表す、請求項１から１０に記載の化合物。
【請求項１２】
−ＳＺａが、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは−ＳＳ−ヘテロアリールを表す、請求項１から１０に記載の化合物。
【請求項１３】
以下：
【化１０】
2013532680.tif 000157
2013532680.tif 000158
の１つから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
複合体を調製する方法であって、
（ｉ）場合により緩衝化した、場合により修飾剤を用いて修飾した結合剤の水溶液、
および
請求項１から１３のうち一項に定義されている通りの式（Ｉ）の化合物の溶液
を接触させ、放置して反応させる工程であって、
式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、前記化学基ＲＣＧ２は、必要に応じて、共有結合の生成を伴って、式（Ｉ）の化合物が結合剤に接続するように修飾剤によって導入されている工程、
（ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離する工程
を含む、方法。
【請求項１５】
−ＳＺａ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、結合剤が、
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、ジスルフィド化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＺａを表し、ＺａがＨではない場合には、チオール化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基
を含み、
−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、式（Ｉ）の誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシン（Ｌｙｓ）残基の側鎖に担持されるε−アミノ基と反応する、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、式
【化１１】
2013532680.tif 000159
の化合物（式中、Ｒは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル基、（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表す）；
【化１２】
2013532680.tif 000160
式
【化１３】
2013532680.tif 000161
のペグ化類似体、または式
【化１４】
2013532680.tif 000162
のスルホン酸類似体を表し、（Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、Ｘ１およびＸ２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ８Ｘ９、−ＮＯ２を表し、Ｘ８およびＸ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、Ｘ７は、−ＳＯ３−Ｍ＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、ならびにａは０から４の範囲の整数を示し、およびｂは、０から２０００の範囲の整数を示す。）から選択される；または、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；
【化１５】
2013532680.tif 000163
（Ｒは、−（ＣＨ２）ｎ−基、−（ＣＨ２）ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロへキシル−（ＣＨ２）ｎ−基を表し、ならびにｎは１から１０の範囲の整数である）；
【化１６】
2013532680.tif 000164
（ｂは０から２０００の整数である）； 
【化１７】
2013532680.tif 000165
スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート；スクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート；
【化１８】
2013532680.tif 000166
（ｂは０から２０００の整数である）
から選択される修飾剤によって修飾され、
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＺａ型であり、ＺａがＨではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、式
【化１９】
2013532680.tif 000167
の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、ここで、
−Ｈａｌは、ハロゲン原子を表し；
−Ｘ１０は、ハロゲン原子または−ＣＯＯＸ１４基、ニトロ、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ、非置換またはハロゲン化（Ｃ２−Ｃ８）アルケニル、非置換またはハロゲン化（Ｃ２−Ｃ８）アルキニル、非置換（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、非置換アリール、あるいはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルキル基、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシから選択される１から３個の置換基で置換されたアリールを表し；
−Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、Ｘ１０を表していてもよく；
または、Ｘ１０とＸ１１が一緒に、非置換か、または１から５個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基で置換された（Ｃ２−Ｃ５）アルキレン環を形成するか；
または、Ｘ１０またはＸ１１が、Ｘ１２と一緒に、非置換か、または１から５個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基で置換された（Ｃ１−Ｃ５）アルキレン環を形成し、
ならびにＸ１４は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキル基であり、
またはＸ１０＝Ｘ１１＝Ｘ１２＝Ｘ１３＝Ｈであり、
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤がチオール官能基を、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基ジスルフィド官能基に変換されるように修飾されるが、より具体的には、式
【化２０】
2013532680.tif 000168
の化合物（Ｘ１およびＸ２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ８Ｘ９または−ＮＯ２を表し、Ｘ８およびＸ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表す）
から選択される修飾剤を用いることによって修飾される、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１４から１６の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体。
【請求項１８】
請求項１４から１６の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体溶液、または請求項１７に定義される複合体を含む複合体溶液。
【請求項１９】
式
【化２１】
2013532680.tif 000169
のダイマーがＭのパラ位において共有結合する結合剤を調製するための、請求項１から１３の一項に記載の式（Ｉ）の誘導体の使用。
【請求項２０】
結合剤が抗体である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
ダイマーが式： 
【化２２】
2013532680.tif 000170
を有する、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
抗癌剤として使用するための請求項１から１３の一項に記載の化合物。
【請求項２３】
抗癌剤として使用するための請求項１７に記載の複合体。
【請求項２４】
抗癌剤として使用するための請求項１８に記載の複合体溶液。
【請求項２５】
式Ｐ２：
【化２３】
2013532680.tif 000171
の化合物であって、式中、
Ｌ１、Ｌ２、Ｑ、ｋ、ＡＬＫ、ＡＬＫ’およびＧは、請求項１から９の一項に定義したとおりであり、
ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を表し、
Ｘ’はＲＣＧ１を表す、
化合物。
【請求項２６】
請求項１から１３の一項に記載の化合物の調製における中間体化合物としての、請求項２５に記載の化合物の使用。
【請求項２７】
請求項１から１３の一項に定義される化合物と結合剤とを反応させた後に、式
【化２４】
2013532680.tif 000172
のダイマーがＭのパラ位に共有結合した結合剤。
【請求項２８】
腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞上に位置する抗原または抗原群に対して親和性を有する、請求項２７に記載の結合剤。
【請求項２９】
抗体、好ましくはモノクローナル抗体である、請求項２７または２８に記載の結合剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ダイマー複合体、これを含有する組成物、および治療への使用に関し、特に、抗癌剤としての使用に関する。本発明はまた、この複合体を調製する方法、この複合体の抗癌剤としての使用、また、これらのダイマーにも関する。
【背景技術】
【０００２】
（技術分野）
ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーは、細胞ＤＮＡに共有結合することによって作用する抗癌剤である。これらの誘導体は、特許出願ＷＯ００／１２５０８およびＷＯ２００５／０８５２６０に記載されており、以下の刊行物にも記載されている。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００５，４０，６４１−６５４；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９８８，２９（４０），５１０５−５１０８。
【０００３】
複合体の化学は、何年にもわたって知られており、数種類の細胞毒性剤、例えば、メイタンシノイド（ＷＯ０４１０３２７２）、タキサン（ＷＯ０６０６１２５８）、レプトマイシン（ＷＯ０７１４４７０９）、ＣＣ−１０６５およびこの類似体（ＷＯ２００７１０２０６９）に適用されており、複合体については、Ｍｏｎｎｅｒｅｔ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｄｕ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００，８７（１１），８２９−３８；Ｒｉｃａｒｔ  Ａ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００７，４，２４５−２５５；Ｓｉｎｇｈ  Ｒ．ａｎｄ  Ｒｉｃｋｓｏｎ  Ｈ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００９，５２５，４４５−４６７も参照。
【０００４】
（従来技術）
ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの複合体は、特許出願ＷＯ０７０８５９３０およびＷＯ２００９／０１６５１６に記載されている。使用されるダイマーは、以下の式を有し、
【０００５】
【化１】
2013532680.tif 000003
式中、Ｔは、−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−ＳＺａまたは−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂで置換されたアリール基またはヘテロアリール基を表していてもよい。Ｇは、単結合もしくは二重結合を表すか、または、−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＲ−を表す。Ｄは、単結合を表すか、または、以下の基：−Ｅ−、−Ｅ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｃ−Ｓ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−Ｆ−のいずれかを表し、このとき、ＥおよびＦは、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−アルキル、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロシクリル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロシクリル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−ヘテロシクリル−アルキル−、−アルキル−ヘテロシクリル−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から選択される。ｉおよびｊは、０から２０００の範囲の整数を表す。Ｚは、アルキル基を表し、ｐは、０または１の整数である。これらの化合物において、ＮＲ基のＲは、ＰＥＧ鎖を含まない。
【０００６】
２００９年１１月にＥＯＲＴＣ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓに記載された免疫原（Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｂ−１２６）は、以下の複合体であり、
【０００７】
【化２】
2013532680.tif 000004
リンカーの性質と、細胞毒性化合物の性質によって識別される。この化合物は、以下の前駆体とともに、２０１０年５月１７日から２１日に開催されたＳｉｘｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  ＰＥＧＳ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｂｏｓｔｏｎに再び記載され、
【０００８】
【化３】
2013532680.tif 000005
ここで、Ｒ＝Ｎ−スクシンイミジルまたはメチルである。
【０００９】
以下のダイマーは、特に、ＷＯ０７０８５９３０およびＷＯ２００９／０１６５１６にそれぞれ記載されている。
【００１０】
【化４】
2013532680.tif 000006
これら３つの出願は、１個または２個のペグ化鎖を含む本発明の新規リンカーを記載も示唆もしていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２０００／０１２５０８号
【特許文献２】国際公開第２００５／０８５２６０号
【特許文献３】国際公開第２００４／１０３２７２号
【特許文献４】国際公開第２００６／０６１２５８号
【特許文献５】国際公開第２００７／１４４７０９号
【特許文献６】国際公開第２００７／１０２０６９号
【特許文献７】国際公開第２００７／０８５９３０号
【特許文献８】国際公開第２００９／０１６５１６号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２００５，４０，６４１−６５４；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９８８，２９（４０），５１０５−５１０８
【非特許文献２】Ｍｏｎｎｅｒｅｔ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｄｕ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０００，８７（１１），８２９−３８
【非特許文献３】Ｒｉｃａｒｔ  Ａ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００７，４，２４５−２５５
【非特許文献４】Ｓｉｎｇｈ  Ｒ．ａｎｄ  Ｒｉｃｋｓｏｎ  Ｈ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００９，５２５，４４５−４６７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明が解決することを意図している技術課題は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの新規複合体を提案することである。
【００１４】
（定義）
以下の定義を適用する。
【００１５】
複合体：少なくとも１個の細胞毒性化合物分子が共有結合している細胞結合剤；
細胞結合剤：生物学的標的への親和性を有する分子であり、例えば、リガンド、タンパク質、抗体、さらに具体的には、モノクローナル抗体、タンパク質または抗体のフラグメント、ペプチド、オリゴヌクレオチドまたはオリゴ糖であってもよい。結合剤は、細胞毒性剤として生物学的活性のある化合物を、生物学的標的に向かわせる機能を有する；
生物学的標的：この腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞の表面に優先的に位置する抗原（または抗原群）。これらの抗原は、おそらく、例えば、成長因子受容体、変異した「腫瘍抑制剤」遺伝子または癌遺伝子の産物、血管形成に関連する分子、接着分子であり得る；
リンカー：細胞毒性化合物を結合剤に共有結合させるための一連の原子
アルキル基：アルカンから水素原子を取り除くことによって得られる飽和脂肪族炭化水素系基。アルキル基は、直鎖または分枝鎖であってもよい。あり得る例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２，２−ジメチルプロピル、ヘキシルが挙げられる；
シクロアルキル基：環構造に関わる炭素原子を３から８個含む環状アルキル基。あり得る例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基およびシクロヘキシル基が挙げられる；
アリール基：ヘテロ原子を含まない単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、フェニル基またはナフチル基である；
ヘテロアリール基：環構造に関わる少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含み、炭素原子に接続して環を形成する、単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、ピリジル基、ピローリル基、チエニル基、フリル基、ピリミジニル基またはトリアゾリル基である；
ヘテロシクロアルキル基：環構造に関わる少なくとも１個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含み、炭素原子に接続して環を形成する、シクロアルキル基。さらに具体的には、ピペラジノ基、Ｎ−メチルピペラジノ基、モルホリノ基、ピペリジノ基またはピロリジノ基である；
アルコキシ基：−Ｏ−アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである；
アルカノイルオキシ基：−Ｏ−ＣＯ−アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである；
アルキレン基：アルカンから２個の水素原子を取り除くことによって得られる実験式−ＣｍＨ２ｍ−の飽和二価の基。あり得る例としては、メチレン基（−ＣＨ２−）、エチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン基（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ブチレン基（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチレン基
【００１６】
【化５】
2013532680.tif 000007
およびヘキシレン基（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）基が挙げられる。アルキレン基は、さらに具体的には、式−（ＣＨ２）ｍ−であってもよく、ｍは、整数を表す。
値の範囲には、限界値が含まれている（例えば、「１から６の範囲のｉ」という種類の範囲は、限界値１と６を含む。）。さらに、この範囲は、範囲に含まれる全ての点も記載している。従って、「１から６の範囲のｉ」は、１、２、３、４、５および６という値を記述している。
【００１７】
（使用される省略語）
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；ＡＬＫ：アルキレン基；（Ｃｘ−Ｃｙ）ＡＬＫ：（Ｃｘ−Ｃｙ）アルキレン；ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；ＭＳＣ：メタンスルホニルクロリド；ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン；ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート；ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド；ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＭＥ：ジメトキシエタン；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ｅＷＬ  ｎｍ：波長ＷＬでのモル吸光係数；ＥＥＤＱ：２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン；ＥＤＣＩ：Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド；ＥＤＴＡ：エチレンジアミンテトラ酢酸；Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル；Ｈａｌ：ハロゲン原子；ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸；ＷＬ：波長；Ｍｅ：メチル；ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジノン；ＲＰ：減圧；Ｒｆ：保持因子；ＳＥＣ：立体排除クロマトグラフィー；ＲＴ：室温；ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ｔＲ：保持時間。
【００１８】
（図面）
（図１）ＳＰＤＰによる結合剤の修飾。
（図２）イミノチオランによる結合剤の修飾。
（図３）脱グリコシル化後の実施例８の複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル。
（図４）実施例９の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
（図５）実施例１０の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
（図６）実施例１１の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
【００１９】
これらの図は、それぞれの複合体について、０から８個のトマイマイシンダイマーを含む種の分布を示す（Ｄ０：ダイマーなし；Ｄｘ：ｘ個のダイマー）。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
（発明の簡単な説明）
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、
【００２１】
【化６】
2013532680.tif 000008
式中、
【００２２】
【化７】
2013532680.tif 000009
は、単結合または二重結合を表し、但し
【００２３】
【化８】
2013532680.tif 000010
が単結合を表す場合には、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ３−、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、
【００２４】
【化９】
2013532680.tif 000011
が二重結合を表す場合には、
ＵおよびＵ’は存在せず、
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ１とＲ２、および／またはＲ１’とＲ２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲、好ましくは３の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ２は、
−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ基を表し、
Ｚａは、Ａｃ、ＲａまたはＳＲａを表し、
Ｒａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＮＯ２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚｂは、単結合を表し、Ｒｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺａを表すことを条件とする。
【００２５】
さらに具体的には、これらは式（ＩＡ）または（ＩＢ）の化合物である。
【００２６】
【化１０】
2013532680.tif 000012
【００２７】
また、本発明は、（ｉ）修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液（場合により緩衝化した水溶液）と、式（Ｉ）の化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、（ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離することとを含む、複合体を調製する方法に関する。式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基ＲＣＧ２が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成により結合剤に式（Ｉ）の化合物が接続するように、導入される。
【００２８】
また、本発明は、上述の方法によって得られ得る複合体および複合体溶液に関する。
【００２９】
また、本発明は、以下の式のダイマーのＭのパラ位に共有結合する結合剤を調製するための、式（Ｉ）の誘導体の使用に関する。
【００３０】
【化１１】
2013532680.tif 000013
化合物、複合体および複合体溶液を抗癌剤として使用し得る。
【００３１】
また、本発明は、式Ｐ２の化合物に関し、
【００３２】
【化１２】
2013532680.tif 000014
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｑ、ｋ、ＡＬＫ、ＡＬＫ’およびＧは、すでに定義したとおりであり、ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を表し、Ｘ’はＲＣＧ１を表す。
【００３３】
また、本発明は、本発明の化合物と結合剤とを反応させた後、以下の式
【００３４】
【化１３】
2013532680.tif 000015
のダイマーがＭのパラ位において共有結合した結合剤にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】ＳＰＤＰによる結合剤の修飾。
【図２】イミノチオランによる結合剤の修飾。
【図３】脱グリコシル化後の実施例８の複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル。
【図４】実施例９の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
【図５】実施例１０の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
【図６】実施例１１の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、
【００３７】
【化１４】
2013532680.tif 000016
式中、
【００３８】
【化１５】
2013532680.tif 000017
は、単結合または二重結合を表し、但し
【００３９】
【化１６】
2013532680.tif 000018
が単結合を表す場合には、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ３−、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、
【００４０】
【化１７】
2013532680.tif 000019
が二重結合を表す場合には、
ＵおよびＵ’は存在せず、
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表すことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ１とＲ２、および／またはＲ１’とＲ２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲、好ましくは３の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ２は、
−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲、好ましくは２または３の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ基を表し、
Ｚａは、Ａｃ、ＲａまたはＳＲａを表し、
Ｒａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＮＯ２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚｂは、単結合を表し、Ｒｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺａを表すことを条件とする。
【００４１】
従って、式（Ｉ）の化合物は、以下の形態で存在していてもよい。
【００４２】
【化１８】
2013532680.tif 000020
【００４３】
また、本発明は、式（Ｉ’）の化合物に関し、
【００４４】
【化１９】
2013532680.tif 000021
式中、
【００４５】
【化２０】
2013532680.tif 000022
は、単結合または二重結合を表し、但し
【００４６】
【化２１】
2013532680.tif 000023
が単結合を表す場合には、
【００４７】
【化２２】
2013532680.tif 000024
は、単結合を表し、
Ｕおよび／またはＵ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈを表し；
Ｗおよび／またはＷ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＯＯＲ、−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状カルバメート、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状チオカルバメート、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＲ、−ＳＯＯＲ、−ＳＯ３−、−ＮＲＳＯＯＲ’、−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環に含まれる環状アミン、−ＮＲＯＲ’、−ＮＲＣＯＲ’、−Ｎ３、−ＣＮ、Ｈａｌ、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表すことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈ、Ｈａｌ、あるいはＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、Ｓ（Ｏ）ｑＲ（ｑ＝０、１または２）を表し、
または、
Ｒ１とＲ２、および／またはＲ１’とＲ２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３を形成し、
ＹおよびＹ’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Ｈまたは−ＯＲを表し、
Ｍは、ＣＨまたはＮを表し；
ＡＬＫおよびＡＬＫ’は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン基を示し、
ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基またはアリール基を表し、
Ｌ１は、
単結合、
または
酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−基（ｉは、２から４０、好ましくは２から１０の範囲の整数を表す。）、
または
Ｄを介してフェニル環またはピリジル環に接続した−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−を表す。）
を表し、
Ｌ２は、
−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲の整数を表す。）、
または
−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−単位を介して窒素原子に接続した−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−基（ｊは、１から４０、好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基を表す。）
を表し、
Ｑは、単結合またはＣ（＝Ｏ）基を表し、
ｋは、０から４０、好ましくは１から４０、より好ましくは１から１０の範囲の整数を表し、
Ｇは、−ＯＲ基または−ＮＲＲ’基を表し、ＲおよびＲ’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成し、
ＲＣＧ１は、−ＳＺａ基または−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ基を表し、
Ｚａは、Ａｃ、ＲａまたはＳＲａを表し、
Ｒａは、Ｈ、あるいは、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＮＯ２、アリール基またはヘテロアリール基から選択される１個以上の置換基で場合により置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、
Ｚｂは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、Ｒｂは、Ｈ、あるいは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Ｚｂは、単結合を表し、Ｒｂは、Ｈａｌを表し、但し
Ｌ１が単結合を表す場合には、ＲＣＧ１は−ＳＺａを表すことを条件とする。
【００４８】
用語Ｌは、
【００４９】
【化２３】
2013532680.tif 000025
によって定義されるリンカーを示す。
【００５０】
さらに具体的には、Ｌ１が単結合を表す場合、Ｌ２は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−を表し、および／またはｋは２ではない。
【００５１】
さらに具体的には、ＭがＮを表す場合、−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−は、望ましくは−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−を表す。
【００５２】
さらに具体的には、フェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基がメチレン基を示す。
【００５３】
さらに具体的には、Ｄは、−Ｏ−、−ＮＨ−または−ＮＭｅ−を表す。
【００５４】
上の式（Ｉ）および（Ｉ’）において、フェニル核またはピリジル核に接続するそれぞれのアルキレン基（従って、例えば、ＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基）は、同じであってもよく、異なっていてもよく、別の例によれば、−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−のＡＬＫ基は、フェニル核またはピリジル核に接続するＡＬＫ基と同じであってもよく、異なっていてもよい。ＡＬＫは、例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ２ＣＭｅ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−のいずれかから選択されてもよい。
【００５５】
ＹおよびＹ’は、さらに具体的には、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、特にメトキシ基を表す。ＲおよびＲ’は、さらに具体的には、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表していてもよい。
【００５６】
ある具体的な実施形態によれば、フェニル核またはピリジル核に接続するＵ＝Ｕ’および／またはＷ＝Ｗ’および／またはＲ１＝Ｒ１’および／またはＲ２＝Ｒ２’および／またはＹ＝Ｙ’および／またはＡＬＫおよびＡＬＫ’という２個の基が同じである（対称形ダイマー、調製するのが簡単である。）。
【００５７】
さらに具体的には、ＷとＷ’は同じであるか、または異なっており、ＯＨ、ＯＭｅ、ＯＥｔ、ＮＨＣＯＮＨ２、ＳＭｅを表す。
【００５８】
Ｒ”は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、特にＭｅを表していてもよい。
【００５９】
Ｍは、さらに具体的には、窒素原子（Ｎ）を表す。
【００６０】
さらに具体的には、Ｒ１とＲ２、および／またはＲ１’とＲ２’とがそれぞれ合わさって、二重結合＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３、さらに具体的には、＝ＣＨ−ＣＨ３を形成する。
【００６１】
Ｇは、−ＯＲ基、さらに具体的には、−ＯＨ基または−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、特に−ＯＭｅを表していてもよい。また、Ｇは、−ＮＲＲ’基を表していてもよく、ここで、ＲおよびＲ’は、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表す。さらに具体的には、従って、Ｇは、−ＮＨ２基、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基または−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル２基、特に、−Ｎ（ＣＨ３）２基を表していてもよい。また、Ｇは、−ＮＲＲ’基を表していてもよく、ここで、ＲおよびＲ’は、これらが結合している窒素原子とともに、Ｎ、ＯおよびＳから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも１個の置換基で場合により置換されていてもよい（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を形成する。ヘテロシクロアルキル基は、特に、ピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノおよびピロリジノから選択されてもよい。
【００６２】
ｋは、０から４０の範囲の整数を表す。ｋは、値０になってもよい（窒素原子に接続するＧが末端にあるＰＥＧ鎖はない。）。本発明の化合物の中で、窒素原子に接続するＧが末端にあり、ｋが１から４０の範囲、望ましくは１から１０、望ましくは１から５の範囲のＰＥＧ鎖を特記し得る。また、少なくとも１個のＰＥＧ鎖を含むもの、即ち、ｋが１から４０、好ましくは１から１０、望ましくは１から５の範囲であり、および／またはＬ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−および／またはＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−であるものを特記し得る。
【００６３】
例として与えられているものを含め、式（Ｉ）および（Ｉ’）の化合物は、塩基の形態、または医薬的に許容される酸との付加塩の形態で存在していてもよく、また、これらの塩基またはこれらの塩の水和物または溶媒和物の形態で存在していてもよい。
【００６４】
さらに具体的には、式（ＩＡ）または（ＩＢ）の化合物を特記し得る。
【００６５】
【化２４】
2013532680.tif 000026
【００６６】
さらに、以下を区別する。
【００６７】
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−の化合物である第１のサブグループ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−およびＬ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−の化合物である第２のサブグループ；
Ｌ１＝単結合およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−の化合物である第３のサブグループ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−の化合物である第４のサブグループ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−およびＬ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−の化合物である第５のサブグループ。
【００６８】
また、以下の化合物群も特記し得る。
【００６９】
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝単結合、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−ＳＺａ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、Ｌ２＝−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝１−１０、Ｇ＝ＯＲ、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝単結合、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ；
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｑ＝ＣＯ、ｋ＝０−１０、Ｇ＝ＮＲＲ’、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ。
【００７０】
上に定義した化合物群において、
ｉは、さらに具体的には、２から１０の範囲の整数、特に３の整数を表し、
ｊは、さらに具体的には、１から１０の範囲の整数、特に、２または３の整数を表し、
ｋは、さらに具体的には、０の整数を表すか、または１から５の範囲の整数を表す。
【００７１】
表Ｉは、具体的なリンカーＬと、これらに対応する化合物の例も記載する。この表のそれぞれの化合物は、Ｍ＝ＣＨ（ベンゼン）またはＭ＝Ｎ（ピリジン）の形態で存在していてもよい。Ｍ＝Ｎの化合物は、水溶性が高い。この表では、例は、形態（ＩＡ）で与えられているが、形態（ＩＢ）で存在し得る。Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、ｋおよびＧは、表Ｉに記載されているもの、または例の中から選択されてもよい。
【００７２】
【表１】
2013532680.tif 000027
2013532680.tif 000028
2013532680.tif 000029
2013532680.tif 000030
2013532680.tif 000031
記載されている化合物は、結合剤に存在する反応性化学基（ＲＣＧ２）に対して反応性である反応性化学基（ＲＣＧ１）を含む。ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって、共有結合の生成による結合剤に対する式（Ｉ）の化合物の接続が生じる。従って、式（Ｉ）の化合物は、結合剤に対して複合体化することができる。
【００７３】
ＲＣＧ１は、以下のものを表す。
【００７４】
（ｉ）ＺａがＨまたは−ＳＲａ基を表し、Ｒａが、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基−ＳＺａ；
（ｉｉ）Ｚｂが、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−、さらに特定的には−Ｏ−を表し、Ｒｂは、Ｈ、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基または（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ。
【００７５】
さらに具体的には、−ＳＺａは、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（特に、−ＳＳＭｅ）、または−ＳＳ−ヘテロアリール、特に、
【００７６】
【化２５】
2013532680.tif 000032
（Ｘ１およびＸ２は、以下に定義される。）を表していてもよい。さらに具体的には、−ＳＺａは、−ＳＨまたは−ＳＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特に−ＳＳＭｅを表していてもよい。
【００７７】
さらに具体的には、−ＺｂＲｂは、−ＯＨ（酸官能基）、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特に、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２（エステル官能基）を表していてもよく、または−ＺｂＲｂは、
【００７８】
【化２６】
2013532680.tif 000033
または
【００７９】
【化２７】
2013532680.tif 000034
基を表していてもよく、ここで、ＩＧは、少なくとも１個の電子誘導基、例えば、−ＮＯ２または−Ｈａｌ、特に−Ｆを表す。例えば、以下の基
【００８０】
【化２８】
2013532680.tif 000035
のいずれかであってもよい。別の種類の−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ基は、以下
【００８１】
【化２９】
2013532680.tif 000036
である。反応性基−ＳＨおよび
【００８２】
【化３０】
2013532680.tif 000037
は、良好な反応性を示す。
【００８３】
さらに具体的には、−ＺｂＲｂは、−ＯＨ（酸官能基）、−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特に、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３を表していてもよく、または、−ＺｂＲｂは、
【００８４】
【化３１】
2013532680.tif 000038
を表していてもよい。
【００８５】
さらに具体的には、ＲＣＧ１は、例に記載されるいずれかから選択されてもよい。
【００８６】
ＲＣＧ２の例として、抗体表面に存在するリシン残基の側鎖に担持されるリシンのε−アミノ基、ヒンジ領域の糖基または鎖内ジスルフィド結合の還元による、システインのチオールを挙げてもよい（Ｇａｒｎｅｔｔ  Ｍ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００１，５３，１７１−２１６）。もっと最近では、他の手法、例えば、変異によるシステインの導入（Ｊｕｎｕｔｕｌａ  Ｊ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００８，２６，９２５−９３２；ＷＯ０９０２６２７４）または他の化学種を可能にする非天然アミノ酸の導入（ｄｅ  Ｇｒａａｆ  Ａ．Ｊ．ｅｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ２００９，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｄａｔｅ（Ｗｅｂ）：Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ３，２００９（Ｒｅｖｉｅｗ）；ＤＯＩ：１０．１０２１／ｂｃ８００２９４ａ；ＷＯ２００６／０６９２４６およびＣｈｉｎ  Ｊ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ  ２００２，１２４，９０２６−９０２７（ＲｅＣｏｄｅ（登録商標）技術）による。）が考慮されてきた。抗体とともに使用されるこれらの接続様式は、これらの構造の関数として既知の標的となるあらゆる薬剤に適用可能である。
【００８７】
新しい反応性化学基ＲＣＧ２を導入するように、標的となる薬剤を化学修飾することも可能である。従って、修飾剤を用いて抗体をどのように修飾するかは、当業者にはよく知られている（特に、ＷＯ２００５／０７７０９０の１４ページを参照）。修飾によって、複合体化反応を改良し、さまざまなＲＣＧ１基を使用することが可能になる。
【００８８】
ジスルフィド基を導入するための修飾剤
修飾剤は、式
【００８９】
【化３２】
2013532680.tif 000039
の活性化エステルＮＨＳであってもよく、式中、Ｒは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル基、（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基を表し、例えば、ジチオピリジル反応性基ＲＣＧ２を導入するように、Ｎ−ピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）またはＮ−スクシンイミジルピリジルジチオブチラート（ＳＰＤＢ、即ち、４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル）を使用することが可能であり（Ｂｏｕｒｄｏｎ  Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９７８，１７３，７２３−７３７；ＵＳ５２０８０２０を参照）、次いで、ジスルフィド結合を含む複合体のために新しい−Ｓ−Ｓ−結合を生成するように、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーのリンカーに存在する−ＳＨ型の反応性化学基ＲＣＧ１と反応させることができる（実施例１を参照）。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド基は、アミド結合を生成するように、抗体に存在するアミノ基と優先的に反応する。修飾剤の別の例は、ＷＯ２００４／０１６８０１に式
【００９０】
【化３３】
2013532680.tif 000040
を有するものが記載されており、例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＮＰＰ）、またはＷＯ２００９／１３４９７６に記載される式
【００９１】
【化３４】
2013532680.tif 000041
を有するペグ化類似体、またはＷＯ２００９／１３４９７７に記載されている式
【００９２】
【化３５】
2013532680.tif 000042
を有するスルホン酸類似体を使用することが可能であり、式中、
−Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、
−Ｘ１およびＸ２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ８Ｘ９、−ＮＯ２を表し、Ｘ８およびＸ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、
−Ｘ７は、−ＳＯ３−Ｍ＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、
−ａは０から４の範囲の整数を示し、ｂは、０から２０００の範囲の整数、好ましくは、１から２００の範囲の整数を示し；ａおよびｂは、それぞれ０から４、または０から２０００の間のあらゆる値であってもよい。
【００９３】
好ましくは、式
【００９４】
【化３６】
2013532680.tif 000043
の化合物の中で、ａ＝１、Ｘ３＝ＭｅおよびＸ２＝ＮＯ２およびＸ１＝Ｘ４＝Ｘ５＝Ｘ６＝Ｘ７＝Ｈである。
【００９５】
マレイミド基を導入するための修飾剤
別の修飾剤は、
【００９６】
【化３７】
2013532680.tif 000044
の活性化エステルＮＨＳであってもよく、式中、Ｒは、−（ＣＨ２）ｎ−基、−（ＣＨ２）ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロヘキシル−（ＣＨ２）ｎ−基を表し、ｎは、１から１０の範囲の整数を表し、例えば、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（ＥＰ０３０６９４３による。）、またはスルホ−ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）を使用することが可能である。あり得る他の例としては、
【００９７】
【化３８】
2013532680.tif 000045
例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ３−マレイミドプロパノエート；
【００９８】
【化３９】
2013532680.tif 000046
例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ６−（３−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート；
【００９９】
【化４０】
2013532680.tif 000047
〔ｂは、０から２０００、好ましくは１から２００の範囲の整数である（ｂは、０から２０００の間のあらゆる値であってもよい。）。〕
【０１００】
例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ３−（２−｛２−［３−マレイミドプロピオニルアミノ］−エトキシ｝エトキシ）プロパノエートまたはＳＭ（ＰＥＧ）２；
【０１０１】
【化４１】
2013532680.tif 000048
例えば、マレイミドエチル  Ｎ−スクシンイミジルサクシネート；
【０１０２】
【化４２】
2013532680.tif 000049
例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（４−マレイミドフェニル）ブタノン、または
【０１０３】
【化４３】
2013532680.tif 000050
例えば、Ｎ−スクシンイミジル  ３−マレイミドベンゾエートが挙げられる。
【０１０４】
チオール基を導入するための修飾剤
ＷＯ９０／０６７７４に記載されている修飾剤の別の例は、式
【０１０５】
【化４４】
2013532680.tif 000051
を有し、式中、
−Ｈａｌは、ハロゲン原子を表し；
−Ｘ１０は、ハロゲン原子または−ＣＯＯＸ１４基、ニトロ、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ、非置換またはハロゲン化（Ｃ２−Ｃ８）アルケニル、非置換またはハロゲン化（Ｃ２−Ｃ８）アルキニル、非置換（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、非置換アリール、またはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルキル基、非置換またはハロゲン化（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシから選択される１から３個の置換基で置換されたアリールを表し；
−Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３基は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、Ｘ１０を表していてもよく；
または、Ｘ１０とＸ１１とで、非置換か、または１から５個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基で置換された（Ｃ２−Ｃ５）アルキレン環を形成するか；
または、Ｘ１０およびＸ１１と、Ｘ１２とを合わせて、非置換か、または１から５個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基で置換された（Ｃ１−Ｃ５）アルキレン環を形成し、
Ｘ１４は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキル基であるか、
またはＸ１０＝Ｘ１１＝Ｘ１２＝Ｘ１３＝Ｈである。
【０１０６】
好ましくは、Ｈａｌは、塩素原子または臭素原子を表す。可能なＸ１０−Ｘ１３は、以下の表に掲げる。
【０１０７】
【表２】
2013532680.tif 000052
【０１０８】
好ましいイミノチオランの例は、以下
【０１０９】
【化４５】
2013532680.tif 000053
である。
【０１１０】
ハロアセトアミド基を導入するための修飾剤
修飾剤の別の例は、スクシンイミジル−４−（Ｎ−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）
【０１１１】
【化４６】
2013532680.tif 000054
または類似化合物（スクシンイミジル−Ｎ−ヨードアセテート（ＳＩＡ）
【０１１２】
【化４７】
2013532680.tif 000055
スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート（ＳＢＡ）、またはスクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）またはＷＯ２００９／１３４９７６に記載の同様のペグ化化合物
【０１１３】
【化４８】
2013532680.tif 000056
を含む。）であり、ｂは、すでに記載したとおりである。図１および図２は、ＳＰＤＰまたは上の好ましいイミノチオールを用いた結合剤のアミノ基の修飾を示す。
【０１１４】
従って、ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、結合剤にジスルフィドＲＣＧ２基（−ＳＳＲ）、特にピリジルジスルフィド型
【０１１５】
【化４９】
2013532680.tif 000057
の基を導入することが可能である。同様に、ＲＣＧ１がジスルフィドを表す場合（即ち、ＲＣＧ１＝−ＳＺａであり、ＺａがＨではなく、例えば、Ｚａ＝
【０１１６】
【化５０】
2013532680.tif 000058
である。）場合には、例えば、イミノチオランを用い、結合剤にチオール（−ＳＨ）ＲＣＧ２基を導入することが可能である。また、対応する芳香族ジスルフィド
【０１１７】
【化５１】
2013532680.tif 000059
を用いる反応によって、これらのチオール（−ＳＨ）ＲＣＧ２基をジスルフィド（−ＳＳＲ）ＲＣＧ２基、特にピリジルジスルフィド型
【０１１８】
【化５２】
2013532680.tif 000060
の基に修飾することも可能である。両者の場合において、ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって生成する共有結合は、開裂可能なジスルフィド結合である。
【０１１９】
また、ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド（
【０１２０】
【化５３】
2013532680.tif 000061
）またはハロアセトアミド型（例えば、ブロモ−またはヨードアセトアミド
【０１２１】
【化５４】
2013532680.tif 000062
）のＲＣＧ２基を結合剤表面に導入することも可能である。この場合には、ＲＣＧ１とＲＣＧ２の反応によって生成する共有結合は、開裂不可能なスルフィド結合である。
【０１２２】
従って、
−ＳＺａ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、結合剤は、
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、ジスルフィド化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＺａを表し、ＺａがＨではない場合には、チオール化学基；
ＲＣＧ１が−ＳＨを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基
を含み、
−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂ型の反応性化学基ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の誘導体存在下、式（Ｉ）の誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシン（Ｌｙｓ）残基の側鎖に担持されるε−アミノ基と反応する。
【０１２３】
さらに具体的には、
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基が含まれる場合、後者は、以下の式
【０１２４】
【化５５】
2013532680.tif 000063
の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、式中、Ｒは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル基、（Ｃ４−Ｃ１０）ヘテロシクロアルキル基；
【０１２５】
【化５６】
2013532680.tif 000064
以下の式のペグ化類似体
【０１２６】
【化５７】
2013532680.tif 000065
または以下の式のスルホン酸類似体
【０１２７】
【化５８】
2013532680.tif 000066
を表し、ここで、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、Ｘ１およびＸ２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ８Ｘ９、−ＮＯ２を表し、Ｘ８およびＸ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、Ｘ７は、−ＳＯ３−Ｍ＋またはＨを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、ａは０から４の範囲の整数を示し、ｂは、０から２０００の範囲の整数を示すか、または、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；
【０１２８】
【化５９】
2013532680.tif 000067
〔Ｒは、−（ＣＨ２）ｎ−基、−（ＣＨ２）ｎ−シクロヘキシル−基、−シクロへキシル−（ＣＨ２）ｎ−基を表し、ｎは１から１０の範囲の整数である。〕
【０１２９】
【化６０】
2013532680.tif 000068
〔ｂは０から２０００の整数である。〕
【０１３０】
【化６１】
2013532680.tif 000069
スクシンイミジル−Ｎ−ブロモアセテート；スクシンイミジル−３−（Ｎ−ブロモアセトアミド）プロピオネート；
【０１３１】
【化６２】
2013532680.tif 000070
〔ｂは０から２０００の整数である。〕
から選択される。
【０１３２】
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＺａ型であり、ＺａがＨではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε−アミノ基、が含まれる場合、後者は、すでに記載されている以下の式
【０１３３】
【化６３】
2013532680.tif 000071
の修飾剤によって修飾される。
【０１３４】
反応性化学基ＲＣＧ１が−ＳＨ型である場合、および結合剤にチオール官能基、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基が、ジスルフィド官能基に変換される。例えば、以下の式の化合物
【０１３５】
【化６４】
2013532680.tif 000072
〔式中、Ｘ１およびＸ２は、−Ｈ、−ＣＯＮＸ８Ｘ９または−ＮＯ２を表し、Ｘ８およびＸ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表す。〕
から選択される修飾剤を使用することが可能である。
【０１３６】
以下の表ＩＩは、すでに述べた方法に従った、結合剤のアミノ基の修飾を示す。単純化のために、以下の省略語を使用する。
【０１３７】
【化６５】
2013532680.tif 000073
【０１３８】
【表３】
2013532680.tif 000074
2013532680.tif 000075
【０１３９】
従って、本発明の化合物を、式
【０１４０】
【化６６】
2013532680.tif 000076
のダイマーがＭのパラ位において共有結合した結合剤の調製に使用し得る。
【０１４１】
さらに具体的には、結合剤は抗体である。さらに具体的には、ダイマーは、式
【０１４２】
【化６７】
2013532680.tif 000077
を有する。
【０１４３】
式（Ｉ）の化合物を調製する方法
式（Ｉ）の化合物を、スキーム１に従って調製し得る。
【０１４４】
【化６８】
2013532680.tif 000078
化合物Ｐ１，Ｐ’１およびＰ２を一緒に反応させてＰ３を得る。ＬＧおよびＬＧ’は、脱離基を示す。「脱離基」との用語は、Ｐ２とＰ１またはＰ’１との不均一反応において、ＡＬＫとＬＧまたはＬＧ’とを接続する共有結合の電子の非共有電子対を取り去ったまま残る原子または原子群を示す。脱離基は、さらに具体的には、ハロゲン原子（特に、塩素または臭素）、メシレート基、トシレート基またはノシレート基、または−ＯＰＰｈ３＋から選択される。中間体化合物Ｐ２も、本発明の一部分を形成する。
【０１４５】
ＲＣＧ１を含む式（Ｉ）の化合物の調製において、Ｘ’は、このＲＣＧ１基を表していてもよく、この場合、Ｐ３は、式（Ｉ）の化合物を表す。また、Ｘ’は、−ＳＺａ型のＲＣＧ１基の前駆体または−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂであってもよく、この場合には、１つ以上の化学反応を用いることによって、Ｘ’をＲＣＧ１に変換することが必要である。ある改変例によれば、Ｘ’→ＲＣＧ１の変換は、Ｐ２上で行われてもよい。
【０１４６】
従って、Ｚａ＝Ｈの化合物Ｐ３（または改変例Ｐ２の化合物）の場合、対応するリンカーの前駆体を用い、Ｚａ＝−Ｓ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであるＸ’＝−ＳＺａ基を導入し、次いで、ジスルフィド官能基−ＳＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルをチオール官能基−ＳＨに還元することが好ましい。このために、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを使用し得る。この観点で、Ｂｕｒｎｓ  Ｊ．Ａ．ｅｔ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９１，５６（８），２６４８−２６５０を参照。−ＳＳ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル→−ＳＨの変換は、特に、表Ｉの化合物１から１９に適用し得る。
【０１４７】
ＲＣＧ１が−ＳＨ基を表すＸ’→ＲＣＧ１の変換によってＰ３から式（Ｉ）の化合物を調製する場合、Ｘ’が、イミン官能基に対するチオール官能基の付加物に対応する、Ｚａ＝
【０１４８】
【化６９】
2013532680.tif 000079
である−ＳＺａ基を表す化合物Ｐ３も生成し得る。
【０１４９】
同様に、ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂである基を含む式（Ｉ）の化合物を製造する場合、１つ以上の化学反応を用いることによって、Ｘ’＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂである基をＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂである基に変換することが可能である。特に、−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂが
【０１５０】
【化７０】
2013532680.tif 000080
である場合、化合物Ｐ３（または改変例Ｐ２の化合物）にＸ’基＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−アリルを導入し、次いで、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ基に変換し、最後に、Ｎ−Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートまたはＮＨＳと反応させることが可能である。−ＣＯＯアルキル／アリルから−ＣＯＯＨへの変換は、アミン「捕捉剤」、例えば、モルホリン存在下、塩基（例えば、ＬｉＯＨ）またはパラジウム触媒（例えば、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム）を用いる処理によって行われてもよい。Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルとの反応は、塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ）存在下で行われ、ＮＨＳとの反応は、カップリング剤（例えば、ＤＣＣ）存在下で行われる。同様に、−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ＝
【０１５１】
【化７１】
2013532680.tif 000081
である場合には、−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ＝−ＣＯＯＨ基を導入し、次いで、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールと反応させることが可能である（ＪＡＣＳ  １９５８，８０，４４２３；ＪＡＣＳ  １９６０，８２，４５９６）。このＸ’＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ→ＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂの変換は、特に、表Ｉの実施例２０から３６の化合物に適用し得る。
【０１５２】
化合物Ｐ１およびＰ’１は、特許出願ＷＯ００／１２５０８、ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０４０１７０、ＷＯ２００５／０８５２６０、ＷＯ０７０８５９３０またはＷＯ２００９／０１６５１６に記載されているか、または全合成によって利用可能である（Ｍｏｒｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９８６，４２，３７９３−３８０６）。Ｐ１および／またはＰ’１が、式
【０１５３】
【化７２】
2013532680.tif 000082
のトマイマイシンを表す場合、後者は、ＦＲ１５１６７４３の教示に従ってＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｒｏｃｅｕｓ株の助けを借りて、または全合成によって調製されてもよい（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９８３，ＸＸＸＶＩ（３），２７６−２８２  Ｚ．Ｔｏｚｕｋａ「Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎ．Ｔｏｔａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｅ−  ａｎｄ  Ｚ−ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎｓ」を参照）。市販の化合物Ｐ１／Ｐ’１も存在する。
【０１５４】
Ｗ／Ｗ’基を導入するために、イミン官能基（
【０１５５】
【化７３】
2013532680.tif 000083
＝二重結合）を種々の化合物ＨＷ／ＨＷ’（例えば、Ｈ２Ｏ、アルコールＲＯＨ）に付加することが可能である。
【０１５６】
Ｑ＝単結合の場合
【０１５７】
【化７４】
2013532680.tif 000084
【０１５８】
Ｐ２の調製
【０１５９】
【化７５】
2013532680.tif 000085
ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下でのＰ４の二級アミン官能基−ＮＨ−と、式ＬＧ”−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｇ（ＬＧ”＝脱離基）の試薬との求核反応。
【０１６０】
式ＨＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｇの化合物から、当業者に既知の化学反応を用いて−ＯＨ基を脱離基ＬＧ”と交換することによって、ＬＧ”−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｇ試薬が得られる。例えば、ＬＧ”がメシレート基を表す場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、メタンスルホニルクロリドが使用される。ＬＧ”がＩを表す場合には、例えば、Ｄ．Ｍａｒｑｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５，２４，７９８４−９６に従って、ヨウ化ナトリウムを用い、メシレートをＩと置換する。
【０１６１】
式ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３のＰＥＧ−アルコールは市販されている（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｃｏｍｐａｎｙ  ＱｕａｎｔａＢｉｏＤｅｓｉｇｎ，Ｌｔｄ．のカタログを参照）。ＲがＭｅではないＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＲである他のＰＥＧ−アルコールは、市販されており、または、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨから、当業者に既知の化学反応を用いて入手可能である。同様に、Ｇ＝ＮＲＲ’であり、ｋ≧１である特定の化合物は市販されており、例えば、
【０１６２】
【化７６】
2013532680.tif 000086
である。
【０１６３】
ｉｉ．ＬＧおよびＬＧ’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、ＭＳＣが使用される。
【０１６４】
Ｑ＝−Ｃ（＝Ｏ）の場合
【０１６５】
【化７７】
2013532680.tif 000087
【０１６６】
Ｐ２の調製
【０１６７】
【化７８】
2013532680.tif 000088
ｉ．Ｐ４と、式Ｔ−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｇのカルボン酸誘導体とのアミド化反応。
【０１６８】
カルボン酸誘導体は、ハロゲン化アシル（Ｔ＝−Ｈａｌ）であってもよい。ある改変例によれば、活性化エステル（例えば、Ｔ＝−ＯＮＨＳ）が使用されるか、または、カップリング剤存在下、カルボン酸（Ｔ＝−ＯＨ）が使用される。式ＨＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＲのＰＥＧ−酸を、Ｊ．Ｈｕｓｋｅｎｓ，Ｊ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｈ．ｖａｎ  Ｂｅｋｋｕｍ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３，１５，３１４９−６４に従って、式ＨＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−１−ＣＨ２ＣＨ２ＯＲの対応するＰＥＧ−アルコール（ｋ＝１から１１のものが市販されている。）から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって調製し得る。ＧがＮＲＲ’基であり、ｋ≧１である場合も、同様に、式Ｈ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋ−１−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲＲ’の対応する化合物から出発する。同様に、ＨＯＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２）−ＮＲＲ’（ｋ＝０）の化合物は市販されている。
【０１６９】
ｉｉ．ＬＧおよびＬＧ’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）のような塩基存在下、ＭＳＣが使用される。
【０１７０】
Ｐ４の調製
Ｘ’＝−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂの場合
【０１７１】
【化７９】
2013532680.tif 000089
ｉ．保護基ＰＧ”の導入。ノシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）またはピリジンのような塩基存在下、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。
【０１７２】
ｉｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基の脱保護。例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳの場合、塩酸またはＴＦＡ存在下。
【０１７３】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合、Ｐ５は、
【０１７４】
【化８０】
2013532680.tif 000090
を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を−ＣＨ２ＯＨに還元する工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。後で記載するとおり、ジエステルを用い、次いで、還元を適用することからなるこの改変例を他のＰ５まで一般化し得る。さらに、エステル官能基の還元は、Ｐ４上で行われてもよいが、場合により、ある改変例によれば、Ｐ５上でも行われてもよい。
【０１７５】
ｉｉｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下での保護されたアミン官能基−ＮＨ（ＰＧ”）と、式ＬＧ−Ｌ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＺｂＲｂの試薬との求核反応。
【０１７６】
Ｌ２＝（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫの場合、式Ｂｒ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＭｅのブロモ−アルキルエステルは市販されている。Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−の場合、式ＨＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂの対応するＰＥＧ−アルコールから出発し、ＬＧを導入し得る。このような化合物は、市販されており、または、Ｊ．Ｈｕｓｋｅｎｓ，Ｊ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｈ．ｖａｎ  Ｂｅｋｋｕｍ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３，１５，３１４９−６４に従って、式ＨＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−Ｈの対応するＰＥＧ−ジオール（ｊ＝１から１１まで市販されている。）から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって得てもよい。
【０１７７】
ｉｖ．ＰＧ”基の脱保護。例えば、ＰＧ”がノシレート基の場合、チオフェノールおよび塩基（例えば、炭酸セシウム）存在下。
【０１７８】
Ｘ’＝−ＳＺａの場合
Ｌ２＝（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫの場合
【０１７９】
【化８１】
2013532680.tif 000091
ｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳである場合、好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはＴＦＡ存在下での保護基ＰＧおよびＰＧ’の脱保護。
【０１８０】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合、Ｐ５は、
【０１８１】
【化８２】
2013532680.tif 000092
を表していてもよい。次いで、アルコール官能基の脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基の−ＣＨ２ＯＨ官能基への還元反応、次いで、アミン官能基の脱保護工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。
【０１８２】
ｉｉ．式ＨＣ（＝Ｏ）−ＡＬＫ−ＳＺａのアルデヒドを用いた還元的アミノ化
ｉｉｉ．Ａ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６，６１，３８４９−６２に従って、還元剤（例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。
【０１８３】
Ｌ２＝−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ”−ＡＬＫ−の場合
【０１８４】
【化８３】
2013532680.tif 000093
ｉ．保護基ＰＧ”の導入。ノシレート基の場合には、三級アミン（例えば、ＴＥＡ）またはピリジンのような塩基存在下、２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。
【０１８５】
ｉｉ．ＰＧ基およびＰＧ’基の脱保護。例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳの場合、塩酸またはＴＦＡ存在下。
【０１８６】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合、Ｐ５は、
【０１８７】
【化８４】
2013532680.tif 000094
を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を−ＣＨ２ＯＨ官能基に還元する工程と置き換えられる。このために、ＷＯ２００７／０８５９３０の６２−６３ページに与えられている還元条件を適用し得る。
【０１８８】
ｉｉｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下での保護されたアミン官能基−ＮＨ（ＰＧ”）と、式ＬＧ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ３の試薬との求核反応。ＷＯ０７／０８５９３０に従って、式ＨＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｊ＋１−Ｈの対応するＰＥＧ−ジオール（ｊ＝０から１０まで市販されている。）から出発して、このような化合物を得てもよい。
【０１８９】
ｉｖ．例えば、Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応に従って、トリフェニルホスフィンおよび水存在下、アジド基の還元。
【０１９０】
ｖ．式ＨＣ（＝Ｏ）−ＡＬＫ−ＳＺａのアルデヒドを用いた還元的アミノ化；
ｖｉ．Ａ．Ｆ．Ａｂｄｅｌ−Ｍａｇｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９６，６１，３８４９−６２に従って、還元剤（例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。
【０１９１】
ｖｉｉ．二級アミン官能基のアルキル化
ｖｉｉｉ．ＰＧ”基の脱保護。例えば、ＰＧ”がノシレート基の場合、例えば、チオフェノールおよび塩基（例えば、炭酸セシウム）存在下。
【０１９２】
Ｐ５の調製
Ｌ１＝−Ｄ−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−、Ｄ＝ＯまたはＮＨの場合
【０１９３】
【化８５】
2013532680.tif 000095
ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下での官能基−ＤＨと、式Ｂｒ（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−ＮＨｂｏｃのｂｏｃ保護されたブロモ−アミンとの求核反応（例えば、ＷＯ０７０８５９３０の６３ページの条件を参照）。
【０１９４】
ｉｉ．好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはＴＦＡ存在下でのアミンの選択的脱保護。選択的脱保護を行うことができない場合、例えば、ＰＧ基およびＰＧ’基がＴＢＤＭＳである場合には、アルコールの選択的な再保護が必要である。
【０１９５】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合には、式
【０１９６】
【化８６】
2013532680.tif 000096
の化合物Ｐ５を得るように、式
【０１９７】
【化８７】
2013532680.tif 000097
のジエステルを用いたブロモ−アミンの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ４の調製に使用する。
【０１９８】
Ｌ１＝−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）−（Ｃ１−Ｃ６）ＡＬＫ−の場合
【０１９９】
【化８８】
2013532680.tif 000098
ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下での官能基−ＮＨ−と、式Ｒ＊−Ｈａｌのハロゲン化アルキル（Ｒ＊＝（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）との求核反応。
【０２００】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合、式
【０２０１】
【化８９】
2013532680.tif 000099
の化合物Ｐ５を得るように、式
【０２０２】
【化９０】
2013532680.tif 000100
のジエステルを用いたハロゲン化アルキルの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ４の調製に使用する。
【０２０３】
Ｌ１＝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−の場合
【０２０４】
【化９１】
2013532680.tif 000101
ｉ．極性溶媒（例えば、ＤＭＦまたはＴＨＦ）中、塩基（例えば、Ｋ２ＣＯ３）存在下での、−ＯＨ官能基の１つ（その他の２つは、保護基を示すＰＧで保護されている。）と、離核性基（ＬＧ）（例えば、Ｈａｌまたはメシレート）を含む式ＬＧ−（ＣＨ２ＣＨ２）−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−１−Ｎ３のアジド−ＰＥＧ試薬との求核反応（例えば、ＷＯ０７０８５９３０の６３ページの条件を参照）。
【０２０５】
ｉｉ．例えば、トリフェニルホスフィンを用い、極性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中、アジド基の還元。
【０２０６】
ある改変例によれば、ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝−ＣＨ２−の場合、式
【０２０７】
【化９２】
2013532680.tif 000102
の化合物Ｐ５を得るように、式
【０２０８】
【化９３】
2013532680.tif 000103
のヒドロキシ−ジエステルを用いたアジド−ＰＥＧ試薬の求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でＰ４の調製に使用する。
【０２０９】
Ｌ１＝単結合の場合
【０２１０】
【化９４】
2013532680.tif 000104
【０２１１】
ｉ．アルコール基の保護
式
【０２１２】
【化９５】
2013532680.tif 000105
のハロ−ジオールから、Ｐ５を得てもよい。ハロ−ジオールおよび対応する保護されたジオールの例は、ＷＯ２００９／０１６５１６の４８ページのスキーム１に記載されている（スキーム１の化合物２および３）。保護されたジオールの２つの例は、ＣＡＳ  Ｎｏｓ．１８１２２５−４０−１および１８１２２５−４１−２のジオールである。対応する二酸またはジエステル化合物、例えば、ＣＡＳ  Ｎｏ．１９３０１０−４０−１の還元によって、ハロ−ジオールを得てもよい。また、ピリジン（Ｍ＝Ｎ）の場合には、Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎａｌｅｎ  ｄｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ  １９９１，１０，９８７−９８８またはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２００５，６１（７），１７５５−１７６３（スキーム１の化合物３）を参照。
【０２１３】
当業者は、特定のリンカーＬ１およびＬ２について与えられている以下に記載する実施例の操作条件から着想を得ると思われ、これらのリンカーを他のリンカーＬ１およびＬ２に応用することができる。
【０２１４】
複合体を調製する方法
複合体は、
（ｉ）修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液（場合により緩衝化した水溶液）と、式（Ｉ）の化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、
（ｉｉ）次いで、場合により、工程（ｉ）で生成した複合体を式（Ｉ）の化合物および／または未反応の結合剤および／または生成し得る任意の凝集物から分離することからなる、方法によって得られる。
【０２１５】
式（Ｉ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は、結合剤に存在する化学基ＲＣＧ２に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基ＲＣＧ２が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成を介して結合剤に式（Ｉ）の化合物が接続するように、導入される。
【０２１６】
ある改変例によれば、工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）で作られた複合体を、未反応の結合剤および溶液中に存在し得る任意の凝集物から分離する。別の改変例によれば、工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）から得た複合体を、式（Ｉ）の未反応の化合物および生成し得る凝集物、および溶液中に残る任意の未反応結合剤とからのみ分離する。
【０２１７】
結合剤の水溶液は、少なくとも１種類のバッファー（例えば、リン酸カリウムまたはＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳバッファー））で緩衝化されていてもよい。バッファーは、結合剤の性質によって変わる。式（Ｉ）の化合物を極性有機溶媒（例えば、ＤＭＳＯまたはＤＭＡ）に溶解する。
【０２１８】
反応は、一般的に、２０℃から４０℃の温度で行われる。反応時間は、１から２４時間の範囲であってもよい。結合剤と式（Ｉ）の化合物との反応は、反応の進行を決定するように、屈折率検出器および／または紫外線検出器を備えるＳＥＣによってモニタリングされてもよい。架橋度が十分ではない場合、反応物を長い時間放置してもよく、および／または式（Ｉ）の化合物を加えてもよい。複合体化に使用可能な特定の条件に関するさらなる詳細について、実施例の章に与えられている一般的な方法を参照し得る。
【０２１９】
当業者は、工程（ｉｉ）の分離のために、種々のクロマトグラフィー技術を自由に使用し、例えば、立体排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、吸着クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、ＩＥＣ）によって、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって、アフィニティクロマトグラフィーによって、セラミックヒドロキシアパタイトのような混合支持体のクロマトグラフィーによって、またはＨＰＬＣによって、複合体を精製し得る。透析または血液透析濾過による精製を用いてもよい。
【０２２０】
「凝集物」との用語は、２つ以上の結合剤の間で生成し得る会合を意味し、結合剤は、複合体化によって修飾される可能性がある。凝集物は、溶液中の高濃度の結合剤、溶液のｐＨ、高い剪断力、架橋ダイマーの数およびこの疎水性、温度のような多くのパラメータの影響を受けて生成する可能性があり（Ｊ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｓｃｉ．２００８，３１８，３１１−３１６の緒言に引用されている参考文献を参照）、これらのパラメータの一部の影響は、時折、正確に説明されていない。タンパク質または抗体の場合、ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ，「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ」２００６，８（３），Ｅ５７２−Ｅ５７９を参照し得る。凝集物の含有量は、ＳＥＣのような既知の技術によって決定されてもよい（この観点で、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９３，２１２（２），４６９−４８０を参照）。工程（ｉ）または（ｉｉ）の後、複合体溶液に対し、超濾過および／または血液透析濾過の工程（ｉｉｉ）を行ってもよい。これらの工程の後、このようにして水溶液中の複合体を得る。
【０２２１】
抗体
抗体（この観点で、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ」，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照）は、特許出願ＷＯ０４０４３３４４、ＷＯ０８０１０１０１、ＷＯ０８０４７２４２、ＷＯ０５００９３６９号（抗ＣＡ６）に特に記載されているものから選択されてもよい。抗体は、特に、モノクローナル、ポリクローナル、または多重特異的であってもよい。また、抗体フラグメントであってもよい。また、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であってもよい。
【０２２２】
複合体
複合体は、一般的に、結合剤に接続した約１から１０のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーを含む（これは、架橋度または「薬物対抗体比」（つまり「ＤＡＲ」）である。）。この数は、結合剤およびダイマーの性質の関数として変動し、また、複合体化に用いられる操作条件（例えば、結合剤に対するダイマーの当量数、反応時間、溶媒および共溶媒の性質）の関数としても変動する。結合剤とダイマーを接触させると、異なるＤＡＲによって互いに個々に識別される幾つかの複合体と、おそらく未反応の結合剤（不完全な反応の場合）と、おそらく凝集物とを含む混合物が得られる。ＤＡＲは、例えば、ＵＶ分光法によって最終的な溶液で決定されるため、平均ＤＡＲに対応する。
【０２２３】
結合剤が抗体である場合、ＵＶ分光法が、ＤＡＲを決定するために用いられる方法であってもよい。この方法は、Ａｎｔｏｎｙ  Ｓ．Ｄｉｍｉｔｒｏｖ（ｅｄ），ＬＬＣ，２００９，「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，ｖｏｌ．５２５，４４５，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅに提示されている方法から着想を得ている。この方法は、分離工程（ｉｉ）の後の複合体溶液の吸光度をＷＬ１およびＷＬ２と呼ばれる２種類の波長で測定することからなる。複合体化する前のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの覆われていない抗体の以下に示すモル吸光係数を使用する。
【０２２４】
複合体溶液のＷＬ１およびＷＬ２での吸光度（ＡＷＬ１）および（ＡＷＬ２）は、ＳＥＣスペクトルのいずれかの対応するピークを測定する（「ＤＡＲ（ＳＥＣ）」を計算することができる。）か、または標準的なＵＶ分光計を用いることによって測定する（「ＤＡＲ（ＵＶ）」を計算することができる。）。吸光度は、以下の形式で表されてもよい。
【０２２５】
ＡＷＬ１＝（ＣＤ×ｅＤ  ＷＬ１）＋（ＣＡ×ｅＡ  ＷＬ１）
ＡＷＬ２＝（ＣＤ×ｅＤ  ＷＬ２）＋（ＣＡ×ｅＡ  ＷＬ２）
この式について、
ＣＤおよびＣＡは、それぞれ、溶液中のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーに関連する複合体部分の濃度および抗体に関連する複合体部分の濃度を示す。
【０２２６】
ｅＤ  ＷＬ１およびｅＤ  ＷＬ２は、それぞれ、複合体化前のピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの波長ＷＬ１およびＷＬ２でのモル吸光係数を示す。
【０２２７】
ｅＡ  ＷＬ１およびｅＡ  ＷＬ２は、それぞれ、覆われていない抗体の２種類の波長ＷＬ１およびＷＬ２でのモル吸光係数を示す。
【０２２８】
「覆われていない抗体」との用語は、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーに接続していない抗体（即ち、複合体化工程の前の抗体）を意味する。
【０２２９】
これらの２つの式の解は、以下のように導かれる。
【０２３０】
ｃＤ＝［（ｅＡ  ＷＬ１×ＡＷＬ２）−（ｅＡ  ＷＬ２×ＡＷＬ１）］／［（ｅＤ  ＷＬ２×ｅＡ  ＷＬ１）−（ｅＡ  ＷＬ２×ｅＤ  ＷＬ１）］
ｃＡ＝［ＡＷＬ１−（ｃＤ×ｅＤ  ＷＬ１）］／ｅＡ  ＷＬ１
ここで、平均ＤＡＲは、ｃＤ／ｃＡに対応している。ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピンダイマーの場合、考慮される２つの波長は、ＷＬ１＝２８０ｎｍおよびＷＬ２＝３２０ｎｍである。平均ＤＡＲは、好ましくは、１から１０、好ましくは１．５から７である。
【０２３１】
複合体を抗癌剤として使用し得る。結合剤が存在しているため、複合体は、健康な細胞よりも腫瘍細胞に対して非常に選択的になる。これによって、抗癌活性を有する式（Ｉ）の化合物を、これらの腫瘍細胞に近い環境へと向かわせるか、または細胞の中に直接向かわせることができる（この観点で、癌処理におけるモノクローナル抗体複合体の使用を記載する以下の刊行物を参照：「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．２００８，１４，１５４−１６９；「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｔｏ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｄｒｕｇｓ」Ｃｈａｒｉ  Ｒ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２００８，４１，９８−１０７）。固形癌または液体癌を治療することが可能である。
【０２３２】
複合体を緩衝化した水溶液の形態で、一般的に１から１０ｍｇ／ｍｌの濃度で配合する。この溶液をそのまま灌流形態で注入してもよく、または再び希釈して灌流溶液を作成し得る。
【実施例】
【０２３３】
方法Ａ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ−ＳＱＤ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：１ｍｌ／分；勾配（２分）：０．８分でＢが５％から５０％；１．２分：Ｂ  １００％；１．８５分：Ｂ  １００％；１．９５：Ｂ  ５％。
【０２３４】
方法Ｂ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ  ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８  １００Ａ  ３×５０ｍｍ、粒子直径２．６μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ；カラム温度：５０℃；流速：１ｍｌ／分；勾配（６分）：６％  Ｂで０．８０分間；３．９分でＢが６％から１００％；４．８０分：Ｂ  １００％；５分：Ｂ  ６％；６分：Ｂ  ６％。
【０２３５】
方法Ｃ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ  ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８  ３×１００ｍｍカラム、粒子直径２．６μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（８．２分）：４％  Ｂで０．１５分間；６．８５分でＢ  ６％から１００％；７．１分：Ｂ  １００％；７．４分：Ｂ  ４％；８．２分：Ｂ  ４％。
【０２３６】
方法Ｄ：複合体の脱グリコシル化および質量分析法（ＨＲＭＳ）
脱グリコシル化は、グリコシダーゼを用いた酵素による消化技術である。５００μｌの複合体＋１００μｌのトリスＨＣｌ  ５０ｍＭバッファー＋１０μｌのグリコシダーゼ−Ｆ酵素（凍結乾燥した酵素１００単位／水１００μｌ）から出発して行う。混合物をボルテックスによって撹拌し、３７℃で一晩維持する。これで、脱グリコシル化したサンプルをＨＲＭＳで分析する準備ができた。状況に依存して、サンプルのＨＲＭＳ分析を、あらかじめ脱グリコシル化をせずに行ってもよい。両方の場合に、陽エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋）で、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｑ−Ｔｏｆ機を用いて質量スペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨ  ３００  Ｃ４  ２．１×１５０ｍｍカラム、粒子直径１．７μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ギ酸：Ｂ：ＣＨ３ＣＮ＋０．１％ギ酸；カラム温度  ７０℃：流速０．５ｍｌ／分；勾配（１０分）：Ｂ  ２０％で２分５０秒；２分５０秒でＢが２０％から８０％；８分５０秒：Ｂ  ８０％；８分５５秒：Ｂ  ２０％；１０分：Ｂ  ２０％。
【０２３７】
方法Ｅ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ  ２１０＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ−ＳＱＤラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×３０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：４５℃；流速：０．６ｍｌ／分；勾配（２分）：１分でＢが５％から５０％；０．３分でＢが５０％から１００％；１．４５分：Ｂ  １００％；０．３分でＢが１００％から５％；２分：Ｂ  １００％。
【０２３８】
方法Ｆ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）で、Ｕ．Ｖ．ＤＡＤ  ２００＜ＷＬ＜４００ｎｍ検出器を用い、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ１８  ３×７５ｍｍ、粒子直径３．５μｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（６分）：Ｂ  ６％を０．８０分；３．９分でＢが６％から１００％；４．８０分：Ｂ  １００％；５分：Ｂ  ６％；６分：Ｂ  ６％。
【０２３９】
方法Ｇ：高速液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＭＳＣ）
陽および／または陰エレクトロスプレーイオン化モード（ＥＳ＋／−）で、Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ−ＳＱＤ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件：カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  Ｃ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ギ酸）Ｂ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍｌ／分；勾配（２．５分）：１．８分でＢが５％から１００％；２．４０分：Ｂ  １００％；２．４５分：Ｂ  １００％  Ｂ；０．０５分でＢが１００％から５％。
【０２４０】
抗体ｈｕ２Ｈ１１（ＷＯ２００８０１０１０１の１５ページでｈｕ５３  ２Ｈ１１としても知られ、アミノ酸配列番号２４を有するＶｈを含む抗体である。）またはｈｕ５３  ２Ｈ１１の直接的な突然変異生成によって得られる抗体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４（ＷＯ２０１１０３９７２１の２０ページを参照。アミノ酸配列番号１８を有するＶｈと、配列番号１６を有するＶｌとを含む抗体である。）を使用する。
【０２４１】
第１章：新規トマイマイシン誘導体
［実施例１］
１．１．  ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン
【０２４２】
【化９６】
2013532680.tif 000106
２０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを９００μＬのＭｅＯＨおよび４００μＬのＤＭＦに溶解し、これに１７．５ｍｇのトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩および１５．８ｍｇのＮａＨＣＯ３の水３７０μＬ溶液を加える。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｒｏｍ  Ｐｕｒｉｆｌａｓｈ  Ｓｉｌｉｃａ  １５／３５Ｕ  ２Ｇ）で９：１  ＤＣＭ／アセトニトリル混合物中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。７ｍｇの４−｛２−［メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンをこのようにして得る：ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝１．０６分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９４１；［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９５９。
【０２４３】
１．２．  ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン
【０２４４】
【化９７】
2013532680.tif 000107
３０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンおよび６５．５μＬのジイソプロピルエチルアミンのＤＣＭ  ２００μＬ溶液を−２０℃に冷却し、これに１９．４μＬのＭＳＣを加える。２０分間撹拌した後、混合物を加水分解し、有機相を水で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣（３６ｍｇ）を４００μＬのＤＭＦに溶解し、これを、３９．６ｍｇのＫ２ＣＯ３および１５．８ｍｇのＫＩとともに、２６ｍｇのトマイマイシンのＤＭＦ  ４２５μＬ溶液に加える。混合物を３０℃で１２時間撹拌し、次いで、沈殿が生じるまで加水分解する。不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去し、ＤＣＭで洗浄し、有機相を合わせ、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ２５−８ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮し、１／１  ジオキサン／水混合物に入れ、再び減圧下で濃縮する。２３ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンをこのようにして得る。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）：ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌｓ：１．２０  ｔｏ  １．７８（ｍ，１２Ｈ）；２．４０（ｓ，３Ｈ）；２．７０  ｔｏ  ３．１０（ｍ，１０Ｈ）；３．３４（ｍ，４Ｈ）；３．４９  ｔｏ  ３．７０（ｍ，８Ｈ）；３．７１（ｓ，３Ｈ）；３．９１（ｍ，２Ｈ）；４．００（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．２７（ｍ，４Ｈ）；５．６０（ｍ，２Ｈ）；６．８６（ｓ，２Ｈ）；７．００（ｍ，２Ｈ）；７．５６（ｓ，２Ｈ）；７．６５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：Ｔｒ＝０．８１分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９８７。
【０２４５】
１．３．  ４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン
【０２４６】
【化９８】
2013532680.tif 000108
１００ｍｇの４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンのＤＭＦ  ２ｍＬ溶液に、９９ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタン（Ｂ．Ｂｅｎ  Ａｒｏｙａ  Ｂａｒ  Ｎｉｒ，Ｊ．Ｆ．Ｋａｄｌａ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００９，７６，６０−６７）および５４ｍｇのＫ２ＣＯ３を加える。６０℃で１２時間後、混合物に４０ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタンを加え、さらに５５ｍｇのＫ２ＣＯ３を加える。得られた混合物を８０℃でさらに２４時間撹拌する。減圧下で濃縮する後、このようにして得た未精製生成物を、最小限の量のＭｅＯＨに溶解し、Ｍｅｇａ  ＢＥ−ＳＣＸ，１ＧＭ  ６ＭＬ（Ｖａｒｉａｎ）に入れる。この相をＭｅＯＨで洗浄した後、目的生成物を２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液で溶出させる。ＭｅＯＨ相を減圧下で濃縮し、次いで、再びＭｅｇａ  ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ  １２ＭＬ（Ｖａｒｉａｎ）に同じプロトコルに従って入れる。メタノール／ＮＨ３相を減圧下で濃縮し、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  １０ｇカラム，Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３０ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンをこのようにして得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２７（ｓ，６Ｈ）；２．４０（ｓ，３Ｈ）；２．７５（ｓ，２Ｈ）；２．８０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．００（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；３．４７  ｔｏ  ３．５５（ｍ，８Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）；５．３０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４７９；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］−：ｍ／ｚ  ５２３。
【０２４７】
１．４．  ４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン
【０２４８】
【化９９】
2013532680.tif 000109
３９０ｍｇの４−［２−アミノ−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン（ＷＯ０７０８５９３０の１０１ページに記載されている４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンのｂｏｃ基の脱保護後に調製された。）のＴＨＦ  ２ｍＬ懸濁物に、２７０μｌの２−（メチルジチオ）−イソブチルアルデヒドおよび７３０μＬのチタンイソプロポキシドを加える。２０分後、さらなる２７０μｌの２−（メチルジチオ）−イソブチルアルデヒドおよび７３０μＬのチタンイソプロポキシドを加え、混合物を室温で２時間撹拌する。次いで、混合物に６ｍＬのエタノールを追加し、室温で２０分間撹拌し、次いで、１２４ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加える。４５分間撹拌した後、さらなる１２４ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加え、１時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃおよび水で希釈する。得られた沈殿を濾別し、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液に溶解する。得られた水相を５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて塩基性ｐＨにし、ＤＣＮで３回抽出し、有機相を合わせ、減圧下で濃縮する。３２２ｍｇの４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２６（ｓ，６Ｈ）；１．８１（ｂｒｏａｄ  ｍ，１Ｈ）；２．３９（ｓ，３Ｈ）；２．６７（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ）；２．９４（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．１１（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，４Ｈ）；５．３２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．２４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３４７。
【０２４９】
［実施例２］
２．１．  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタン酸
【０２５０】
【化１００】
2013532680.tif 000110
２８ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートをＴＨＦ５２７μｌおよび水６１μｌに溶解し、この溶液に、３２μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、さらなる５μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液をこの混合物に加える。室温で１時間３０分撹拌した後、８００μｌのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ＝３）を加えることによって、ｐＨが３に近くなるまで混合物を酸性化し、次いで、ＤＣＭで５回抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１０−４ｇ）で、ＤＣＭ中、３％から２０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１０．２ｍｇの４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾ−ジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．０８分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９３９。
【０２５１】
２．２．  エチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ１−エチル｝−アミノ）−ブタノエート
【０２５２】
【化１０１】
2013532680.tif 000111
５０．４ｍｇの（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２．１−ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オンのＤＭＦ  ４ｍｌ溶液に、７７ｍｇのＫ２ＣＯ３、３０．７ｍｇのヨウ化カリウムおよび６７ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレートを加える。混合物を３０℃で１８時間加熱し、次いで、室温まで冷却し、０．４５μｍ膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１５−１２ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。５１ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］エチル｝−アミノ）−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．２０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９６７。
【０２５３】
２．３．  エチル（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレート
【０２５４】
【化１０２】
2013532680.tif 000112
５１ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートのＤＣＭ  ５ｍｌ溶液をあらかじめ−２５℃に冷却しておき、これに１１０μｌのジイソプロピルエチルアミンおよび３４μｌのＭＳＣを加える。混合物を−１５℃で１時間撹拌し、次いで、５ｍｌの水で洗浄する。水相を５ｍｌのＤＣＭで抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。６９ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブチレートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．８７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ６１５。
【０２５５】
２．４．  エチル  ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエート
【０２５６】
【化１０３】
2013532680.tif 000113
１８０ｍｇのエチル  ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートのアセトニトリル１８ｍｌ溶液に、２０７ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタンおよび１９２μＬのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を８０℃で３日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  １５ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／水混合物（４０／５／０．５）を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。５１ｍｇのエチル  ４−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．７０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４５９。
【０２５７】
２．５．  エチル  ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエート
【０２５８】
【化１０４】
2013532680.tif 000114
３９０ｍｇのエチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−ブタノエートのアセトニトリル１０ｍｌ溶液に、アルゴン下、７６６ｍｇの炭酸セシウムおよび１６０μＬのチオフェノールを加える。混合物を室温で１７時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ  ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ  １２ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１８３ｍｇのエチル  ４−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．６８分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３１３。
【０２５９】
２．６．  エチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼン−スルホニル）−アミノ］−ブタノエート
【０２６０】
【化１０５】
2013532680.tif 000115
７６７ｍｇのＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドのＤＭＦ  １５ｍｌ溶液に、アルゴン下、３４４μｌのエチル  ３−ブロモ−ブチレートおよび１．３８ｇのＫ２ＣＯ３を加える。混合物を４０℃で約２０時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。未精製生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＰｒｅｐ  ９０ｇカラム，Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３９５ｍｇのエチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．７２分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４９８；［Ｍ＋ＨＣＯ２Ｈ−Ｈ］−：ｍ／ｚ  ５４２。
【０２６１】
２．７．  Ｎ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
【０２６２】
【化１０６】
2013532680.tif 000116
１．３ｇのジエチル  ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートのエタノール２００ｍＬ溶液に、３１５ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムおよび９４１ｍｇのＣａＣｌ２を順に加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、次いで、この混合物に５０ｍｌの水を加える。エタノールを減圧下で除去し、得られた残渣に５０ｍｌの水を加え、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。１．０６ｇのＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．５７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３８４。
【０２６３】
２．８．  ジエチル  ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート
【０２６４】
【化１０７】
2013532680.tif 000117
９５７ｍｇのジエチル  ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩をＤＣＭ  ３０ｍｌおよびピリジン７３４μｌに溶解し、この溶液をあらかじめ約５℃に冷却し、これに７９８ｍｇの２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドを加える。混合物を室温まで加温し、２時間撹拌する。さらなる２４４μｌのピリジンおよび６６５ｍｇの２−ニトロベンゼンスルホニルクロリドをこれに加え、１５時間撹拌を続ける。混合物を水２５ｍｌで洗浄し、水相を２５ｍｌのＤＣＭで２回抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ  １５０ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＥｔＯＡｃの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。９６０ｍｇのジエチル  ４−［２−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−エトキシ］−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；３．４１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）；４．２２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）；４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ）；７．５０（ｓ，２Ｈ）；７．８０（ｍ，２Ｈ）；７．９２（ｍ，１Ｈ）；８．０４（ｍ，２Ｈ）；８．４０（ｍ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．５０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４６８。
【０２６５】
２．９．  ジエチル  ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩
【０２６６】
【化１０８】
2013532680.tif 000118
２．６４ｇのジエチル  ４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート（ＷＯ０７０８５９３０の１０１ページに記載されている。）のジオキサン２７ｍｌ溶液に、２０．７ｍｌの４Ｎ  塩酸ジオキサン溶液を加える。混合物を室温で約２０時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。蒸発残渣を約７０ｍｌのジオキサンに取り、次いで、再び減圧下で濃縮する。この操作を３回繰り返す。混合物を５０ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに取り、得られた懸濁物を空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを用いて洗浄し、減圧下、室温でデシケーター内で乾燥させる。２ｇのジエチル  ４−（２−アミノ−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート一塩酸塩を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；３．２６（ｍ，２Ｈ）；４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ）；４．４５（ｍ，２Ｈ）；７．７７（ｓ，２Ｈ）；８．１６（ｂｒｏａｄ  ｍ，３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝２．３９分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ２８３。
【０２６７】
［実施例３］
３．１．  ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパン酸
【０２６８】
【化１０９】
2013532680.tif 000119
３０ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートをＴＨＦ５７６μｌおよび水６７μｌに溶解し、この溶液に、３５μｌの１Ｍ水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で１時間３０分撹拌し、次いで、４ｍｌのＤＣＭに取り、リン酸カリウムバッファー（ｐＨ＝３）を加えることによって、ｐＨが３に近くなるまで混合物を酸性化する。混合物をＤＣＭで４回抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１０−４ｇ）で、ＤＣＭ中、１０％から２０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１３ｍｇの３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．０７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９２５。
【０２６９】
３．２．  メチル  ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシ］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート
【０２７０】
【化１１０】
2013532680.tif 000120
８４ｍｇの（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２．１−ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オンのＤＭＦ  ５ｍｌ溶液に、１２８ｍｇのＫ２ＣＯ３、５１ｍｇのＫＩおよび１１０ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを加える。混合物を３０℃で１８時間加熱し、次いで室温まで冷却し、０．４５μｍ膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１５−２４ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。３３ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝３．２１分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ９３９。
【０２７１】
３．３．  メチル  ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート
【０２７２】
【化１１１】
2013532680.tif 000121
８０ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートのＤＣＭ  ８ｍｌ溶液をあらかじめ−２５℃に冷却しておき、これに１８３μｌのジイソプロピルエチルアミンおよび５７μｌのメタンスルホニルクロリドを加える。混合物を−１５℃で１時間撹拌し、次いで、５ｍｌの水で洗浄する。水相を５ｍｌのＤＣＭで抽出する。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４脱水し、減圧下で濃縮する。１１０ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−メタンスルホニルオキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝２．６７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５８７。
【０２７３】
３．４．  メチル  ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエート
【０２７４】
【化１１２】
2013532680.tif 000122
２８４ｍｇのメチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートのアセトニトリル２８ｍｌ溶液に、３５６ｍｇの１−ヨード−２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタン、３３０μｌのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を８０℃で３日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、５％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１６５ｍｇのメチル  ３−（［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．４４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４３１。
【０２７５】
３．５．  メチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエート
【０２７６】
【化１１３】
2013532680.tif 000123
１５５ｍｇのメチル  ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエートのアセトニトリル６ｍｌ溶液に、アルゴン下、３２５ｍｇの炭酸セシウムおよび６７μｌのチオフェノールを加える。混合物を室温で４時間撹拌し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキをＥｔＯＡｃを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ  ＢＥ−ＳＣＸ，２ＧＭ  １２ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。８２ｍｇのメチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｂ）：ｔｒ＝０．３３分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ２８５。
【０２７７】
３．６．  メチル  ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエート
【０２７８】
【化１１４】
2013532680.tif 000124
６７０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートのＤＣＭ  ２０ｍｌ溶液に、２ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で６時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、ＤＣＭに取り、再び減圧下で濃縮する。得られた残渣を１０ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、これに、５℃で、７ｍｌの２Ｍ（トリメチルシリル）ジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を５℃で１時間３０分撹拌し、次いで、２００μｌの酢酸を加える。混合物を水３０ｍｌおよびＥｔＯＡｃ  ３０ｍｌに入れる。水相を３０ｍｌのＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１５−２４ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１５５ｍｇのメチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝２．５６分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ４７０。
【０２７９】
３．７．  ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエート
【０２８０】
【化１１５】
2013532680.tif 000125
０．８ｇのジエチル  ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートのエタノール８０ｍＬ溶液に、１５２ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムおよび４４７ｍｇのＣａＣｌ２を順に加える。混合物を室温で撹拌し、次いで、反応終了時に２０ｍｌの水を加える。減圧下でエタノールを除去し、得られた残渣に１００ｍｌの水を加え、水相をＥｔＯＡｃで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。６７０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５１２。
【０２８１】
３．８．  ジエチル  ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレート
【０２８２】
【化１１６】
2013532680.tif 000126
１０．６ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートのＤＭＦ  ２２０ｍｌ溶液に、１６．２ｇのＫ２ＣＯ３および５．６ｇのジエチル  ４−ヒドロキシ−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを加える。混合物を６０℃で２０時間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、２００ｍｌの水および２００ｍｌのＥｔＯＡｃに入れる。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機相を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ  ６００ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から２０％  ＥｔＯＡｃの勾配によって精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。６．５６ｇのジエチル  ４−｛２−［（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−エトキシ｝−ピリジン−２，６−ジカルボキシレートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝４．１４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５９６。
【０２８３】
３．９．  ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネート
【０２８４】
【化１１７】
2013532680.tif 000127
９．２ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートのＤＣＭ  ９２ｍｌ溶液に、８．１ｍｌのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を−５℃まで冷却し、２．３４ｍｌのＭＳＣのＤＣＭ  １０ｍｌ溶液を滴下する。室温まで加温した後、混合物を約２時間撹拌し、次いで、１００ｍｌの水を追加する。水相をＤＣＭで２回抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ４０−２４０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から５％の酢酸エチルの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１０．６２ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−メタンスルホニルオキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．７７分；［Ｍ＋Ｎａ］＋：ｍ／ｚ  ４７５。
【０２８５】
３．１０  ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネート
【０２８６】
【化１１８】
2013532680.tif 000128
８．７ｇのＮ−（２−ヒドロキシ−エチル）−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（Ｓｋｅｒｌｊ，Ｒ．Ｔ．；Ｎａｎ，Ｓ．；Ｚｈｏｕ，Ｙ．；Ｂｒｉｄｇｅｒ，Ｇ．Ｊ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００２（４３）７５６９−７５７１）のＤＭＦ  ８７ｍｌ溶液に、アルゴン下、８．８ｍｌのｔｅｒｔ−ブチル  ３−ブロモプロピオネートおよび１４．６ｇのＫ２ＣＯ３を加える。混合物を４０℃で１５時間撹拌し、次いで、さらなる５ｍｌのｔｅｒｔ−ブチル  ３−ブロモプロピオネートを加える。混合物を４０℃で一晩加熱し、次いで、空隙率４の焼結物を通して濾過する。ケーキを酢酸エチルで洗浄し、次いで、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＥａｓｙＶａｒｉｏＰｒｅｐ  ４００ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％  ＥｔＯＡｃの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。９．５４ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［（２−ヒドロキシ−エチル）−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アミノ］−プロピオネートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｃ）：ｔｒ＝３．３９分；［Ｍ＋Ｎａ］＋：ｍ／ｚ  ３９７。
【０２８７】
［実施例４］
４．１．  ４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン
４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンから出発し、実施例１と同様に調製する。
【０２８８】
【化１１９】
2013532680.tif 000129
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２２（ｓ，６Ｈ）；１．６９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）；２．２８  ｔｏ  ２．４４（ｍ，６Ｈ）；２．３６（ｍ，３Ｈ）；２．７１（ｓ，２Ｈ）；２．７７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．８８  ｔｏ  ３．０８（ｍ，６Ｈ）；３．４２  ｔｏ  ３．５５（ｍ，１２Ｈ）；３．８６（ｓ，６Ｈ）；３．８８（ｍ，２Ｈ）；４．１０（ｓ，４Ｈ）；４．１５（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；５．１７（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．２３（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．５５（ｍ，２Ｈ）；６．９３（ｓ，２Ｈ）；７．０６（ｓ，２Ｈ）；７．３８（ｓ，２Ｈ）；７．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．６８分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０４２；［Ｍ＋２Ｈ］２＋：ｍ／ｚ  ５２１．５（ベースピーク）。
【０２８９】
４．２．  ４−［２−（（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−アミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジン
４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリンおよび４−［２−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピルアミノ）−エトキシ］−２，６−ビス−（ヒドロキシメチル）−ピリジンから出発し、実施例１と同様に調製する。
【０２９０】
【化１２０】
2013532680.tif 000130
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．２６（ｓ，６Ｈ）；２．３６（ｍ，４Ｈ）；２．３９（ｓ，３Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；２．７４（ｓ，２Ｈ）；２．７９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．００（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．４６  ｔｏ  ３．５５（ｍ，１２Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）；５．３０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝０．３３分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５３４。
【０２９１】
４．３．  ４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリン
【０２９２】
【化１２１】
2013532680.tif 000131
１．１２ｇの２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エタノールおよび９４０μｌのジイソプロピルエチルアミンのＤＣＭ  ６ｍｌ溶液を０℃まで冷却し、これに４４０μｌのメタンスルホニルクロリドのＤＣＭ  ３ｍＬ溶液を同じ温度で加える。混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで、水８ｍｌで洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を３０ｍｌのアセトンに溶解し、次いで、１．４２ｇのヨウ化ナトリウムを追加する。還流状態で５時間撹拌した後、不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去する。濾液を減圧下で濃縮し、次いで、ジクロロメタンに入れる。不溶性物質を再び濾過によって除去し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から５％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１．０９ｇの４−｛２−［２−（２−ヨード−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−モルホリンを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．３９（ｍ，４Ｈ）；２．４５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；３．３２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；３．４７  ｔｏ  ３．６０（ｍ，１０Ｈ）；３．６７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．２９分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３３０。
【０２９３】
［実施例５］
５．１．  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
【０２９４】
【化１２２】
2013532680.tif 000132
６５ｍｇの４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタン酸をＴＨＦ  ３．８ｍＬに溶解し、これに、６７μｌのＤＩＰＥＡおよび３３ｍｇのＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートを加える。室温で１時間後、８ｍＬのＤＣＭを加え、得られた有機相を水で２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ１０−８ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から７．５％  メタノールの勾配を用いて精製する。３５ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートをこのようにして得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｆ）：ｔｒ＝３．５４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １１０８；［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １１２６；［Ｍ＋２Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １１４４。
【０２９５】
５．２．  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタン酸
メチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例２と同様に調製する。
【０２９６】
【化１２３】
2013532680.tif 000133
ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝１．０５分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０１１；［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０２９；［Ｍ＋２Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０４７。
【０２９７】
５．３．  メチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例２と同様に調製する。
【０２９８】
【化１２４】
2013532680.tif 000134
ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝１．１４分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０２５；［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０４３；［Ｍ＋２Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０６１。
【０２９９】
５．４．  メチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
【０３００】
【化１２５】
2013532680.tif 000135
４６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートのＤＣＭ  ７ｍｌ溶液に、１．１４ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で１５時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。得られた残渣に３．８ｍｌのＭｅＯＨを加え、これに、５℃で３．１ｍｌの２Ｍ  （トリメチルシリル）ジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を５℃で１時間撹拌し、次いで、１００μｌの酢酸を加える。減圧下で濃縮した後、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ２５−４０ｇ）で、ＤＣＭ中、２％から１０％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ減圧下で濃縮する。２６５ｍｇのメチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．６７  ｔｏ  １．８６（ｍ，２Ｈ）；２．２７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３１  ｔｏ  ３．７５（ｍ，２１Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．６２分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５１７；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］−：ｍ／ｚ  ５６１。
【０３０１】
５．５．  ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
【０３０２】
【化１２６】
2013532680.tif 000136
５６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートのＤＭＦ  ４ｍｌ溶液に、６５８ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル  ３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート（参照。Ｍ．Ａ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎ．Ｂ．Ｍａｌｋａｒ，Ｄ．Ｓｅｖｅｒｙｎｓｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｋ．Ｇ．Ｙａｒｂｒｏｕｇｈ，Ｍ．Ｊ．Ｂｅｄｎａｒｃｉｋ，Ｒ．Ｅ．Ｄｕｇｄｅｌｌ，Ｍ．Ｅ．Ｐｕｓｋａｓ，Ｒ．Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｋ．Ｄ．Ｊａｍｅｓ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００６，１７，２６７−２７４）のＤＭＦ４ｍＬ溶液を加える。混合物を室温で１５時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２  ＳＦ４０−８０ｇ）で、ＤＣＭ中、０％から１０％の１０％アンモニアＭｅＯＨ溶液の勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。４６０ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．３９（ｓ，４．５Ｈ）；１．４０（ｓ，４．５Ｈ）；１．６３  ｔｏ  １．８１（ｍ，２Ｈ）；２．１６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．２５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３１  ｔｏ  ３．７４（ｍ，１８Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．８０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５５９；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］−：ｍ／ｚ  ６０３。
【０３０３】
５．６．  ｔｅｒｔ−ブチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエート
ｔｅｒｔ−ブチル  ３−ブロモ−ブチレートおよびＮ−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドから出発し、実施例２と同様に調製する。
【０３０４】
【化１２７】
2013532680.tif 000137
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．３９（ｓ，９Ｈ）；１．６２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；１．８４（ｂｒｏａｄ  ｍ，１Ｈ）；２．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．５５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．８６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．０７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；４．４５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，４Ｈ）；５．２９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３４１；ベースピーク：ｍ／ｚ  １５６。
【０３０５】
［実施例６］
６．１．  エチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。
【０３０６】
【化１２８】
2013532680.tif 000138
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：配座異性体の５０％−５０％混合物：１．１１  ｔｏ  １．１８（ｍ，３Ｈ）；１．５４  ｔｏ  １．８２（ｍ，８Ｈ）；２．２４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３２（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５３  ｔｏ  ２．６８（ｍ，４Ｈ）；２．８７  ｔｏ  ３．０７（ｍ，４Ｈ）；３．２０（ｓ，１．５Ｈ）；３．２１（ｓ，１．５Ｈ）；３．３１  ｔｏ  ４．２７（ｍ，３２Ｈ）；５．１６（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．２２（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．５５（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）；６．９４（ｓ，２Ｈ）；７．０８（ｓ，２Ｈ）；７．３７（ｓ，２Ｈ）；７．７６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．８６分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０３９；ベースピーク：ｍ／ｚ  ３７６。
【０３０７】
６．２．  エチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
エチル  ３−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチルアミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。
【０３０８】
【化１２９】
2013532680.tif 000139
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）配座異性体の５０％−５０％混合物：１．１６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１．５Ｈ）；１．１７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１．５Ｈ）；１．６７  ｔｏ  １．９７（ｍ，２Ｈ）；２．２５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．３４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）；２．５７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）；２．６６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）；３．２３（ｓ，３Ｈ）；３．３２  ｔｏ  ３．７４（ｍ，１８Ｈ）；４．０４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）；４．０５（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）；４．１４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．１９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）；４．４５（ｍ，４Ｈ）；５．３０（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，１Ｈ）；６．８６（ｓ，１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ａ）：ｔｒ＝０．４７分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５３１；ベースピーク：ｍ／ｚ  ３７６；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］−：ｍ／ｚ  ５７５。
【０３０９】
［実施例７］
７．１．  メチル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
メチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。
【０３１０】
【化１３０】
2013532680.tif 000140
ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ＝０．８８分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０８０；［Ｍ＋Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １０９８；［Ｍ＋２Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  １１１６。
【０３１１】
７．２．  メチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。
【０３１２】
【化１３１】
2013532680.tif 000141
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．８３（ｍ，２Ｈ）；２．３３（ｍ，２Ｈ）；２．４２（ｍ，４Ｈ）；２．４８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．６１（ｍ，２Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；３．４９  ｔｏ  ３．５５（ｍ，１０Ｈ）；３．５６（ｍ，４Ｈ）；３．６２（ｓ，３Ｈ）；３．６９（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）；４．２１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．４９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）；４．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．５０分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ５７２；ベースピーク：ｍ／ｚ  １９８；［Ｍ−Ｈ＋ＨＣＯ２Ｈ］−：ｍ／ｚ  ６１６。
【０３１３】
７．３．  ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエート
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートから出発し、実施例５と同様に調製する。
【０３１４】
【化１３２】
2013532680.tif 000142
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１．４２（ｓ，９Ｈ）；１．７８（ｍ，２Ｈ）；２．２２（ｍ，２Ｈ）；２．４２（ｍ，４Ｈ）；２．４８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．６１（ｍ，２Ｈ）；３．３９（ｍ，２Ｈ）；３．４８  ｔｏ  ３．５５（ｍ，１０Ｈ）；３．５６（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｂｒｏａｄ  ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）；４．２１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）；４．４９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）；４．９０（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ＝０．６５分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ６１４；ベースピーク：ｍ／ｚ  ２４０。
【０３１５】
７．４．  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート
【０３１６】
【化１３３】
2013532680.tif 000143
８３０ｍｇの３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸をＴＨＦ  ５０ｍＬに溶解し、これに１．１ｇのＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネートおよび１．５ｍＬのＤＩＰＥＡを加える。室温で２４時間後、２００ｍＬのＤＣＭを加え、得られた有機相を体積が半分になるまで減圧下で濃縮し、次いで、水で２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮する。１．０５ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートをこのようにして得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：２．３９（ｍ，４Ｈ）；２．４５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）；２．８１（ｓ，４Ｈ）；２．９２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；３．４５  ｔｏ  ３．５７（ｍ，１４Ｈ）；３．７２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ（Ｇ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．４９分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３８９。
【０３１７】
７．５．  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸
【０３１８】
【化１３４】
2013532680.tif 000144
１ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートのＤＣＭ  ５０ｍｌ溶液に、４ｍｌのＴＦＡを加える。混合物を室温で１０時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、Ｍｅｇａ  ＢＥ−ＳＣＸ，２５ＧＭ  １５０ＭＬカートリッジ（Ｖａｒｉａｎ）で精製し、ＭｅＯＨを用いて洗浄し、２ＮアンモニアＭｅＯＨ溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。８３０ｍｇの３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパン酸を得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．１６分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ２９２。
【０３１９】
７．６．  ｔｅｒｔ−ブチル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエート
【０３２０】
【化１３５】
2013532680.tif 000145
９８９ｍｇの２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エタノールの無水ＴＨＦ  ２．８ｍＬ溶液に、１．０４ｍｇのナトリウムを加える。４０℃で２時間１５分撹拌した後、７９３μＬのｔｅｒｔ−ブチルアクリレートを加える。４０℃でさらに２時間加熱した後、反応混合物を室温で２０分間放置し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＰｒｅｐ  ７０ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）で、ＤＣＭ中、０％から６％  ＭｅＯＨの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。１ｇのｔｅｒｔ−ブチル  ３−｛２−［２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロパノエートを得る。ＬＣ／ＭＳ（Ｅ）：ｔｒ（ＥＬＳＤ）＝０．５９分；［Ｍ＋Ｈ］＋：ｍ／ｚ  ３４８。
【０３２１】
ＲＣＧ１＝−ＳＺａ（Ｚａ＝ＳＭｅ）またはＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂ（ＺｂＲｂ＝ＯＭｅ）である式（ＩＡ）の化合物を用いた、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−Ａ１およびＨＣＴ１１６細胞株の増殖阻害に関する評価
指数関数的な成長段階にあるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、ＭＤＡ−Ａ１細胞またはＨＣＴ１１６細胞をトリプシン処理し、それぞれの培地（ＭＤＡ細胞の場合、ＤＭＥＭ／Ｆ１２  Ｇｉｂｃｏ番号２１３３１、１０％  ＦＣＳ  Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｎＭ  グルタミン  Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０；ＨＣＴ１１６細胞の場合、ＤＭＥＭ  Ｇｉｂｃｏ番号１１９６０、１０％  ＦＣＳ  Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｍＭ  グルタミン  Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０）に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったＣｙｔｏｓｔａｒ  ９６ウェル培養プレート（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ、番号ＲＰＮＱ０１６３）に、密度が５０００細胞／ウェル（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−Ａ１、ＨＣＴ１１６）になるように播種する。４時間インキュベートした後、トマイマイシンダイマーの連続希釈物を、ウェルに各濃度について３つ組で加える。５％  ＣＯ２雰囲気下、細胞毒性剤が存在する状態で、細胞を３７℃で３日間培養する。４日目に、１４Ｃ−チミジン（０．１μＣｉ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ番号ＮＥＣ５６８２５０００）の１０μｌの溶液を各ウェルに加える。実験開始から９６時間後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ放射線カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用い、１４Ｃ−チミジンの組み込み量を測定する。データは、細胞毒性剤で処理した細胞）を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞（培地のみで処理された。）を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。
【０３２２】
【表４】
2013532680.tif 000146
ＲＣＧ１＝−ＳＺａであり、Ｚａ＝ＳＭｅであるか、またはＲＣＧ１＝−Ｃ（＝Ｏ）ＺｂＲｂであり、ＺｂＲｂ＝ＯＭｅである試験化合物は、強力な抗癌活性を有することがわかり、このことは、別のＺｂＲｂ基で特徴づけられる同様の化合物が、少なくとも同一の活性を有する傾向があることを示唆している。
【０３２３】
第２章：新規トマイマイシン複合体
［実施例８］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＰＤＢで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１の調製
リン酸カリウム濃度が０．０５Ｍ、ＮａＣｌが０．０５Ｍ、ｐＨ＝６．５のエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）が２ｍＭである水系バッファー２．３７ｍｌ中、２４ｍｇのｈｕ２Ｈ１１（ＷＯ２００８０１０１０１の１５ページでは、ｈｕ５３  ２Ｈ１１と記載されている抗体。アミノ酸配列番号２４を有するＶｈを含む抗体である。）に、磁気撹拌しつつ、３２０μｇのＳＰＤＢ（ＷＯ２０１０／０７６４７４の７ページに記載されている。）を６２μＬのＤＭＡに溶解したものを加える。室温で４時間後、修飾された抗体を、濃度が０．０５Ｍ  Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ  ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ  エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５（ＰＤ−１０  ＧＥカラム）でゲル濾過によって精製する。修飾された抗体を等分し、これをジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理し、ジチオピリジン基を開裂させる。修飾された抗体を、放出されたピリジンチオールとともに、ピリジンチオールの吸光係数（ｅ３４３ｎｍ＝８０８０Ｍ−１ｃｍ−１）、ジチオピリジン基の吸光係数（ｅ２８０ｎｍ＝５１００Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１の吸光係数（ｅ２８０ｎｍ＝２０６９４１Ｍ−１ｃｍ−１）を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で３．２のジチオピリジン基を、濃度７．０８ｍｇ／ｍＬで決定した。
【０３２４】
濃度が０．０５Ｍ  Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ  ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ  エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー３．２ｍＬ中、１２ｍｇの上の修飾された抗体に、７１３μＬのＤＭＡおよび１．２２ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを、磁気撹拌しつつ、８７μＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解したものを加える。３０℃で１２時間後、混合物をＭｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＳＶ  ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、２０％  Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）を含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００分取グレードカラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０ＧＥカラム）で精製する。目的のフラクションを合わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ５０ｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、次いで、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨで＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５（ＰＤ１０、ＧＥカラム）で濾過する。
【０３２５】
得られた複合体（３．５ｍＬ）を、４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−２−メチルジスルファニル−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンの吸光係数ｅ３２０ｎｍ＝７８４３Ｍ−１ｃｍ−１およびｅ２８０ｎｍ＝４４３６Ｍ−１ｃｍ−１ならびにｈｕ２Ｈ１１の場合のｅ２８０ｎｍ＝２０６９４１Ｍ−１ｃｍ−１を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で２．９のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを、濃度１．７４ｍｇ／ｍＬで決定した。
【０３２６】
［実施例９］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＮＰＰで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
リン酸カリウム濃度が０．０５Ｍ、ＮａＣｌが０．０５ＭおよびｐＨ＝６．５のエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）が２ｍＭである水系バッファー８．２ｍｌ中、１００ｍｇのｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４（ＷＯ２０１１０３９７２１の２０ページを参照）に、磁気撹拌しつつ、１．３ｍｇのＳＮＰＰ（ＷＯ２００４／０１６８０１の３６ページに記載されている。）を１８６μＬのＤＭＡに溶解する。室温で４時間後、修飾された抗体の溶液を４つにわけ、濃度が０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ  ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ  エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいた４種類のＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラム（ＰＤ−１０  ＧＥカラム）でゲル濾過によって精製する。このようにして得られた４種類の濾液を混合し、均質化した後、修飾された抗体を、ニトロピリジンチオールの吸光係数（ｅ２８０ｎｍ＝３３４４Ｍ−１ｃｍ−１およびｅ３２５ｎｍ＝１０９６４Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の場合（ｅ２８０ｎｍ＝２１９５２８Ｍ−１ｃｍ−１）を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で４．４７のジチオ−ニトロピリジン基を、濃度６．２７ｍｇ／ｍＬで決定した。
【０３２７】
濃度が０．０５Ｍ  Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ  ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ  エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー２３．２４ｍｌ中、８７ｍｇの上の修飾された抗体に、４．３８ｍＬのＤＭＡおよび１７．７３ｍｇの４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを加え、磁気撹拌しつつ、１．４３ｍＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解する。３０℃で１７時間後、混合物をＳｔｅｒｉｆｌｉｐ（登録商標）０．４５μｍ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濾過し、２０％  Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）を含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００分取グレードカラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０ＧＥカラム）で３インジェクションによって精製する。目的のフラクションを合わせ、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  ５０ｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で濃縮し、次いで、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨ＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５（ＨｉＰｒｅｐ  ２６／１０脱塩、ＧＥカラム）で濾過する。
【０３２８】
得られた複合体（２８ｍＬ）を、ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の吸光係数ｅ２８０ｎｍ＝２１９５２８Ｍ−１ｃｍ−１を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で３．１３のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを、濃度１．９９ｍｇ／ｍＬで決定した。
【０３２９】
［実施例１０］
４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジンを含むＳＰＤＢで修飾された複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４から出発し、実施例８と同様に調製し、抗体分子あたり、平均で２．９２のトマイマイシン（４−｛２−［｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチル｝−（２−メチル−（２−メチル−２−メルカプト−プロピル）−アミノ］−エトキシ｝−２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン）ダイマーを決定した。
【０３３０】
［実施例１１］
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを用いた複合体ｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４の調製
１．５９ｍｇのｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４を、ｐＨ＝６．６のリン酸カリウムの濃度が０．０４３Ｍである水系バッファー１５０μＬに溶かし、この溶液に、６μＬの１Ｍ  ＨＥＰＥＳ水溶液を加えた後、濃度が０．０５Ｍ  Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍ  ＮａＣｌおよびｐＨ＝８の２ｍＭ  エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の水系バッファー２６７μＬを加え、１００μＬのＤＭＡ、次いで、８３μｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミジル  ４−（［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−ジメトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロピロロ［２，１ｃ］［１．４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートを５μｌのＤＭＡに溶解した。３０℃で４時間後、混合物を、１０％スクロースおよび５％ＮＭＰを含み、ヒスチジン濃度が１０ｍＭのｐＨ＝６．５の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５（ＮＡＰ−５  ＧＥカラム）で濾過する。
【０３３１】
得られた複合体（１ｍＬ）を、エチル  ４−［［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エチル］−（３−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオニル）−アミノ］−ブタノエートの吸光係数（ｅ３２２ｎｍ＝７９７１Ｍ−１ｃｍ−１およびｅ２８０ｎｍ＝５２１９Ｍ−１ｃｍ−１）を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で４．１８のトマイマイシンダイマーを濃度１．１４ｍｇ／ｍＬで決定した。
【０３３２】
細胞毒性複合体ｈｕ２Ｈ１１（または、それぞれｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４）を用いた、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖阻害に関する評価
指数関数的な成長段階にあるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をトリプシン処理し、培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２  Ｇｉｂｃｏ番号２１３３１、１０％  ＦＣＳ  Ｇｉｂｃｏ番号１０５００−０５６、２ｎＭ  グルタミン  Ｇｉｂｃｏ番号２５０３０）に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったＣｙｔｏｓｔａｒ  ９６ウェル培養プレート（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ、番号ＲＰＮＱ０１６３）に、密度が５０００細胞／ウェルになるように播種する。４時間インキュベートした後、抗体−細胞毒性剤免疫複合体の連続希釈物を、ウェルに濃度を１０−７から１０−１２Ｍまで減らしつつ加える（各濃度について３つ組）。５％  ＣＯ２雰囲気下、抗体−細胞毒性剤免疫複合体が存在する状態で、細胞を３７℃で３日間培養する。４日目に、１４Ｃ−チミジン（０．１μＣｉ／ウェル、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ番号ＮＥＣ５６８２５０００）の１０μＬの溶液を各ウェルに加える。実験開始から９６時間後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ放射線カウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用い、１４Ｃ−チミジンの組み込み量を測定する。データは、免疫複合体で処理した細胞を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞（培地のみで処理された。）を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。アステリスク（＊）で示されている特定の実施形態において、覆われていない抗体ｈｕ２Ｈ１１（またはそれぞれｈｕ２Ｈ１１Ｒ３５Ｒ７４）を、実験開始時に濃度１μＭでウェルに加え、すでに記載したように増殖阻害を測定した。
【０３３３】
【表５】
2013532680.tif 000147
【図１】
2013532680.tif 000174
【図２】
2013532680.tif 000175
【図３】
2013532680.tif 000176
【図４】
2013532680.tif 000177
【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2013532680.tif 000181