(57)【要約】  本発明は、特に癌、感染症及び他の過剰増殖性疾患のＰＤＴ、関節炎、炎症性疾患、ウィルス又は細菌感染症、皮膚疾患、眼科疾患又は泌尿器疾患などの非腫瘍性適応症の蛍光診断及びＰＤＴ治療のための診断的及び治療的用途における光感作物質として用いられ得る生物学的に活性な化合物を獲得するための方法を提供する。本発明の一実施形態は、ジケト−クロリン類を前駆体として合成するための方法からなる。更に別の実施形態では、これら前駆体が、β−官能化ヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリン類に変換される。別の実施形態は、より高い膜親和性及び増加したＰＤＴ効率を備える両親媒性化合物を提供するためのものである。別の実施形態は、テトラピロール系の注射部位での析出又は遅延した薬物動態のような望ましくない影響を回避しながら注射されるリポソーム製剤中への所望の異性体の製剤化からなる。【選択図】図１
2013532664.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2013532664.tif 000019
を有するテトラピロール化合物であり、
式中、Ｂが、
【化２】
2013532664.tif 000020
からなる群から選択され、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、水素、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル基又はフルオロアルキル基、並びに置換された又は非置換の芳香族環からなる群から選択され、
式中、Ｒ５が、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに置換された又は非置換の芳香族環からなる群から選択される、テトラピロール化合物。
【請求項２】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、水素、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル基又はフルオロアルキル基、フェニル環、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、Ｒ５が、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環又は１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
前記フェニル環の前記置換基Ｘが、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
式中、前記置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、及び−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｙが、ｎ＝１〜３０で（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基であり、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｚが、ペプチド及びオリゴペプチドの群から選択される、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、水素、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル基又はフルオロアルキル基、フェニル環、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記フェニル環の前記置換基Ｘが、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
前記置換基Ｘが、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、及び−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｙが、ｎ＝１〜３０で（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基であり、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｚが、ペプチド及びオリゴペプチドの群から選択され、
式中、Ｒ５が、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記ＣＦ３−基が、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにある、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項４】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、４〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル基又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘが、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
式中、前記置換基Ｘが、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、Ｒ５が、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記ＣＦ３−基が、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにある、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項５】
式
【化３】
2013532664.tif 000021
に特定的に基づき、
式中、Ｂが、
【化４】
2013532664.tif 000022
であり、
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘが、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
前記置換基Ｘが、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、及び−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｙが、ｎ＝１〜３０で（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、及び炭水化物部分からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｚが、ペプチド及びオリゴペプチドの群から選択される、
請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項６】
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環からなる群から選択され、式中、前記ＣＦ３−基が、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにある、請求項５に記載のテトラピロール化合物。
【請求項７】
式
【化５】
2013532664.tif 000023
に特定的に基づき、
式中、Ｂが、
【化６】
2013532664.tif 000024
であり、
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘが、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
前記置換基Ｘが、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、及び−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｙが、ｎ＝１〜３０で（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、及び炭水化物部分からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｚが、ペプチド及びオリゴペプチドの群から選択される、
請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項８】
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環からなる群から選択され、式中、前記ＣＦ３−基が、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにある、請求項７に記載のテトラピロール化合物。
【請求項９】
式
【化７】
2013532664.tif 000025
に特異的に基づき、
式中、Ｂが、
【化８】
2013532664.tif 000026
であり、
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環、並びに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘが、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにあり、
前記置換基Ｘが、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、及び−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｙが、ｎ＝１〜３０で（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、及び炭水化物部分からなる群から選択され、
式中、前記置換基Ｘの前記置換基Ｚが、ペプチド及びオリゴペプチドの群から選択される、
請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項１０】
式中、Ｒが、１〜１５個の炭素原子からなる置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、並びに１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環からなる群から選択され、式中、前記ＣＦ３−基が、オルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかにある、請求項７に記載のテトラピロール化合物。
【請求項１１】
式
【化９】
2013532664.tif 000027
に特定的に基づく化合物か、又はその薬学的に許容可能な誘導体である、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項１２】
式
【化１０】
2013532664.tif 000028
に特定的に基づく化合物か、又はその薬学的に許容可能な誘導体である、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項１３】
式
【化１１】
2013532664.tif 000029
に特定的に基づく化合物か、又はその薬学的に許容可能な誘導体である、請求項１に記載のテトラピロール化合物。
【請求項１４】
光力学療法の方法であり、請求項１の化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体の所定の量を患者に投与すること、所定時間休止すること、並びに前記患者を所定の強度及び波長の光に曝すことを含む方法。
【請求項１５】
腫瘍、皮膚疾患、ウィルス感染症、細菌感染症、眼科疾患及び泌尿器疾患からなる群から選択される疾患を治療するためである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
関節炎及び同様の炎症性疾患を診断及び治療するための方法であり、請求項１の化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体の有効量を患者に投与することを含む方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容可能な誘導体を活性成分として含む医薬組成物。
【請求項１８】
前記医薬組成物が、リポソーム製剤である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記活性成分が、従来型リポソーム、ペグ化リポソーム、ナノエマルジョン、ナノ結晶、ナノ粒子、脂肪エマルジョン、脂質製剤、自己微小乳化薬剤送達システム、α−フェトタンパク質（ＡＦＰ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ポリ（乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、脂肪エマルジョン及び有機ナノ粒子、及び非有機ナノ粒子からなる群から選択される担体中に製剤化される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
光力学療法治療のための請求項１７に記載の医薬組成物、又はその薬学的に許容可能な誘導体。
【請求項２１】
前記化合物又は前記その薬学的に許容可能な誘導体が、標的化薬剤に結合される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記医薬組成物が、リポソーム製剤である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記標的化薬剤が、抗体、抗体の断片及びペプチドからなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連案件情報
本願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１０年７月２２日に出願され、「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  β−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−Ｃｈｌｏｒｉｎｓ  ｆｏｒ  Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ」と題された、Ｄａｎｉｅｌ  Ａｉｃｈｅｒ、Ｖｏｌｋｅｒ  Ａｌｂｒｅｃｈｔ、Ｓｕｓａｎｎａ  Ｇｒａｆｅ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ  Ｂ．Ｗ．Ｓｔａｒｋ及びＡｒｎｏ  Ｗｉｅｈｅによる、米国特許仮出願第６１／３６６，７０７号の利益及び優先権を主張するものである。
【０００２】
２．発明の分野
本発明は、生物学的活性化合物の化学に関する。より具体的には、癌、感染症及び他の疾患の光力学療法などの広範囲の光線療法に光感作物質として用いられ得るβ−官能化クロリン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００３】
３．技術現状
光力学療法（ＰＤＴ）は、様々な医療用途における使用のために現在解明が始められている最も有望な新技術の１つであり、特に腫瘍の破壊のための周知の療法である。光力学療法は、その望まれる治療効果を達成するために、光線及び光感作物質（染料）を用いる。多数の天然型及び合成染料が、光力学療法のための潜在的光感作物質として評価されてきた。おそらくは、光感作物質で最も広範囲に研究された部類は、テトラピロール大環状化合物である。それらの中で、特にポルフィリン類及びクロリン類は、それらのＰＤＴ有効性に関して試験されてきた。ポルフィリン類は、特徴的なテトラピロール環構造を形成するためのピロールと結合する１つの炭素原子のブリッジを有する大環状化合物である。ジヒドロ−ピロール単位を含有するものを含むポルフィリン誘導体の多数の異なる部類がある。クロリンは、本発明で言及されるように、ポルフィリン誘導体であり、β位の芳香族系の１つの二重結合が不在である。光感作物質として用いられるテトラピロール大環状化合物の例としては、アミノカルボン酸の蛍光モノ、ジ−又はポリアミド及び少なくとも３個のカルボキシル基を含有するテトラピロールを開示するＢｏｍｍｅｒら著の米国特許公開第ＵＳ０４６５６１８６号、光感作物質としてβ，β−ジヒドロキシメソ−置換クロリンを提示するＭａｃＡｌｐｉｎｅら著の米国特許第７，０２２，８４３Ｂ１号、並びに化合物がＰＤＴ診断及び治療用途のためのクロリン又はバクテリオクロリンであるフッ化置換基を含有するテトラピロール化合物を開示するＰａｎｄｅｙら著、米国特許第７，１６６，７１９  Ｂ２号が挙げられる。
【０００４】
有効な光感作物質が達成するべきいくつかの特性がある。とりわけ、深部標的組織を効果的に破壊するための望ましい特性は、長波長での強力な吸収である。現行の光感作物質の多くは、スペクトルの赤色領域で低い吸収を有するために、十分に有効ではない。クロリン類は、それらが電磁スペクトルの赤色及び近赤外領域で強い吸収を有するという利点を有する。より長い波長の光が組織により深く貫通するために、ＰＤＴが腫瘍治療に使用される場合、例えばより増殖した腫瘍を処置することが可能である。ＰＤＴのための潜在能力を有するクロリン類は、天然供給源又は全合成からのいずれかから誘導され得る。
【０００５】
クロリン類が天然化合物から誘導される場合、それらは、例えば、Ｓｍｉｔｈによる米国特許第５，３３０，７４１号に開示された、光合成植物及び藻類のクロロフィルから誘導された光感作物質のような、クロロフィル又はバクテリオクロロフィルを誘導することによって、一般的に得られる。天然化合物の感受性のために、このことは困難なことが多く、並びに広大な生物資源を必要とする。したがって、全合成によるクロリン類の合成が、魅力的な選択肢である。全合成によってクロリン類及びバクテリオクロリン類を調製するための方法は、当該技術分野で既知である。一般的に、これら化合物は、まず初めにポルフィリンを合成し、次いでこのポルフィリン系をクロリン又はバクテリオクロリン系に変換することによって調製される。この工程は、例えば、インサイチュで発生するジイミンでの還元によって、又は四酸化オスミウムでのシス−ジヒドロキシル化によって実施され得る（欧州特許第００３３７６０１Ｂ１；国際特許出願第ＷＯ  ０９６１３５０４Ａ１号、国際特許出願第ＷＯ  ０００６１５８４Ａ１号；Ｃ．Ｂｒｕｃｋｎｅｒ、Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ著、「２，３−ｖｉｃ−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｍｅｓｏ−ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｏｓｍｉｕｍ  Ｔｅｔｒｏｘｉｄｅ  Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｓｏ−Ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｐｏｒｐｈｙｒｉｎ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９５年、３６、３２９５−３２９８頁；Ｃ．  Ｂｒｕｃｋｎｅｒ、Ｄｏｌｐｈｉｎ著、「β，β’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｓｏ−Ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｉｎｓ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９５年、３６、９４２５−９４２８ページ；Ｆ．Ｒａｎｃａｎ、Ａ．Ｗｉｅｈｅ、Ｍ．Ｎｏｂｅｌ、Ｍ．Ｏ．Ｓｅｎｇｅ、Ｓ．Ａｌ  Ｏｍａｒｉ、Ｆ．Ｂｏｈｍ、Ｍ．Ｊｏｈｎ、Ｂ．  ｏｄｅｒ著、「Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｇａｒｄ  ｔｏ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｕｐｔａｋｅ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｊｕｒｋａｔ  ｃｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００５年、７８；１７−２８頁；  Ｉ．Ｌａｖｉｌｌｅ、Ｔ．Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏ、Ｂ．Ｌｏｏｃｋ、Ｓ．Ｐｉｇａｇｌｉｏ、Ｐｈ．Ｍａｉｌｌａｒｄ、Ｄ．Ｓ．Ｇｒｉｅｒｓｏｎ、Ｄ．Ｃａｒｒｅｚ、Ａ．Ｃｒｏｉｓｙ、Ｊ．Ｂｌａｉｓ著、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｌｕｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｔｒｉ  ａｎｄ  Ｔｅｔｒａ（ｍｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｃｈｌｏｒｉｎｅｓ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３年、１１，１６４３−１６５２頁）。
【０００６】
クロリンの別の部類は、４つのピロールサブ単位の１つにジケト基を有する。しかしながら、これらジケト−クロリン類は、例えばそれらの赤色領域における非常に弱い吸収のために、ＰＤＴでの用途には適していない。クロリン類のこれらの種類を合成するために、いくつかの異なる方法が当該技術分野で見出し得る。可能な方法としては、例えば酸化剤としての２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−ベンゾキノンによるジヒドロキシル化によって得られたジヒドロキシクロリンの直接的酸化である（Ｈ．Ｗ．Ｄａｎｉｅｌｌ、Ｓ．Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ、Ｈ．Ａ．Ｊｅｎｋｉｎｓ、Ｃ．Ｂｒｕｃｋｎｅｒ著、「Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｓｏ−ｔｅｔｒａ−ｐｈｅｎｙｌ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎ：ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  β，β’−ｄｉｏｘｏｃｈｌｏｒｉｎｓ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ２００３，  ４４，  ４０４５−４０４９）。別の方法は、２−ヒドロキシポルフィリン類の対応するジケト−クロリン類への酸化である。この変換は、いくつかの酸化剤によって達成され得る（Ｒ．Ｂｅａｖｉｎｇｔｏｎ、Ｐ．Ａ．Ｒｅｅｓ、Ｐ．Ｌ．Ｂｕｒｎ著；「Ａ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ  ｔｏ  ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ−α−ｄｉｏｎｅｓ」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１９９８年、１、２８４７−２８５１頁）。興味深いことに、２−ヒドロキシポルフィリン類は、溶媒に応じて溶液中で互変異性を示し、ケト形又はエノール形で存在することができる（Ｍ．Ｊ．Ｃｒｏｓｓｌｅｙ、Ｍ．Ｍ．Ｈａｒｄｉｎｇ、Ｓ．Ｓｔｅｒｎｈｅｌｌ著、「Ｔａｕｔｏｍｅｒｉｓｍ  ｉｎ  ２−Ｈｙｄｒｏｘｙ−５，１０，１５，２０−ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｐｏｒｐｈｙｒｉｎ：Ａｎ  Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｅｎｏｌ，Ｋｅｔｏ  ａｎｄ  Ａｒｏｍａｔｉｃ  Ｈｙｄｒｏｘｙｌ  Ｔａｕｔｏｍｅｒｓ」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８８年、５３、１１３２−１１３７頁）。これらは、対応するジヒドロキシ−クロリンの脱水によって、又は２−ニトロポルフィリン類の変換のいずれかによって合成され得る（Ｍ．Ｊ．Ｃｒｏｓｓｌｅｙ、Ｌ．Ｇ．Ｋｉｎｇ、Ｓ．Ｍ．Ｐｙｋｅ著、「Ａ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９８７年、４３、４５６９−４５７７頁）。無水酢酸及び酢酸の混合物中でＣｕ（ＮＯ３）２を用いるポルフィリン類のβ−ニトロ化に関する穏やかかつ選択的方法は、様々なポルフィリン類に関して、一工程でのニトロ化及び銅による金属化を可能にする（Ａ．Ｇｉｒａｕｄｅａｕ、Ｈ．Ｊ．Ｃａｌｌｏｔ、Ｊ．Ｊｏｒｄａｎ，  、Ｉ．Ｅｚｈａｒ、Ｍ．  Ｇｒｏｓｓ著、「Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｌｅｃｔｒｏ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ」、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９７９年、１０１、３８５７−３８６２頁；Ｊ．Ｐ．Ｃ．Ｔｏｍｅ、Ａ．Ｍ．Ｖ．Ｍ．Ｐｅｒｅｉｒａ、Ｃ．Ｍ．Ａ．Ａｌｏｎｓｏ、Ｍ．Ｇ．Ｐ．Ｍ．Ｓ．Ｎｅｖｅｓ、Ａ．Ｃ．Ｔｏｍｅ、Ａ．Ｍ．Ｓ．Ｓｉｌｖａ、Ｊ．Ａ．Ｓ．Ｃａｖａｌｅｉｒｏ、Ｍ．Ｖ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｄｉａｚ、Ｔ．Ｔｏｒｒｅｓ、Ｇ．Ｍ．Ａ．Ｒａｈｍａｎ、Ｊ．Ｒａｍｅｙ、Ｄ．Ｍ．Ｇｕｌｄｉ著、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ−Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ  Ｄｙａｄｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｉｎｄｅｒｅｄ  Ｒｏｔａｔｉｏｎ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００６年、２５７−２６７頁）。例えば、酸化変換（Ｍ．Ｊ．Ｃｒｏｓｓｌｅｙ、Ｌ．Ｇ．Ｋｉｎｇ著、「Ｎｏｖｅｌ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｒｏｍ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ａｔ  ｔｈｅ  β−Ｐｙｒｒｏｌｉｃ  Ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ」、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８４年、９２０−９２２頁）又は環化されたヘテロ環系の合成（Ｍ．Ｊ．Ｃｒｏｓｓｌｅｙ、Ｐ．Ｌ．Ｂｕｒｎ、Ｓ．Ｊ．Ｌａｎｇｆｏｒｄ、Ｓ．Ｍ．Ｐｙｋｅ、Ａ．Ｇ．Ｓｔａｒｋ著、「Ａ  Ｎｅｗ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｗｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ−α−ｄｉｏｎｅｓ  ｔｈａｔ  ｉｓ  Ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓ−ａｎｎｕｌａｒ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９１年、１５６７−１５６８頁）などのジケト−クロリン類のいくつかの更なる官能化は当該技術分野で既知である。しかしながら、これら化合物は、ＰＤＴにおける用途に関して関連性を有さない。故に、電磁スペクトルの赤色領域及び近赤外領域における強力な光吸収によって、深部標的組織を効果的に破壊することが可能な有効な光感作物質を獲得する必要がある。
【発明の概要】
【０００７】
癌、感染症及び他の疾患のための光力学療法などの光線療法を含む広範囲の用途に光感作物質として用いられ得る生物学的に活性な化合物を提供することが本発明の意図である。
【０００８】
光力学療法などの多様な医療用途のための化学的に安定なクロリン誘導体を使用することが、本発明の目的である。
【０００９】
腫瘍及び他の過剰増殖性疾患、皮膚疾患、ウィルス又は細菌感染症、眼科疾患若しくは泌尿器疾患の光力学療法において用いられ得るβ−官能化ヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリン構造を提供することが、本発明の更なる目的である。
【００１０】
関節炎及び同様の炎症性疾患などの非腫瘍性の適応症の蛍光診断及びＰＤＴ治療用に用いられ得るβ−官能化ヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリン構造を提供することが、本発明の更なる目的である。
【００１１】
ジケト−クロリンを前駆体として調製するための方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【００１２】
ジケト−クロリン前駆体をβ−官能化ヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリンに変換するための方法を提供することが、本発明の更に別の目的である。
【００１３】
腫瘍、皮膚疾患、ウィルス又は細菌感染症、眼科疾患若しくは泌尿器疾患のＰＤＴ治療において用いられ得る高度に両親媒性の化合物を提供することが、本発明の更に他の目的である。
【００１４】
テトラピロール系の注射部位での析出又は遅延した薬物動態のような望ましくない影響を回避するために注射されるリポソーム製剤などの本発明の生物学的に活性な化合物のための薬学的に許容可能な製剤を提供することが、更に別の目的である。
【００１５】
簡単に言うと、本発明は、診断的及び治療的用途、特に癌、感染症及び他の過剰増殖性疾患のＰＤＴ、関節炎、炎症性疾患、ウィルス又は細菌感染症、皮膚疾患、眼科疾患又は泌尿器疾患などの非腫瘍性の適応症の蛍光診断及びＰＤＴ治療用に、光感作物質として用いられ得る生物学的に活性な化合物を得るための方法を提供する。本発明の一実施形態は、求核性又は有機金属剤でのジケト−クロリンの変換によって、酸化されたβ−ピロールサブ単位に追加的置換基を有する、ヒドロキシ−又はジヒドロキシ−クロリン類を合成する方法からなる。本発明の別の目的は、より高い膜親和性及び増加したＰＤＴ有効性を備える両親媒性化合物を提供することである。本発明の別の実施形態は、テトラピロール系の注射部位での析出又は遅延した薬物動態のような望ましくない影響を回避するために注射されるリポソーム製剤中に、所望の異性体を製剤化することからなる。
【００１６】
本発明の上記及び他の目的、特徴並びに利点は、添付する図面と兼ね合わせて読まれる以下の説明から明確になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明のテトラピロール化合物の実施形態の一般式を示す図である。
【図２】本発明のテトラピロール化合物の実施形態を基礎とする化学式１及び２を示す図である。
【図３】本発明のテトラピロール化合物の実施形態を基礎とする化学式３を示す図である。
【図４】本発明のテトラピロール化合物の実施形態を基礎とする化学式４を示す図である。
【図５】本発明のテトラピロール化合物の実施形態を基礎とする化学式５を示す図である。
【図６】化学式３に基づく本発明のテトラピロール化合物の一実施形態を示す図である。
【図７】化学式３に基づく本発明のテトラピロール化合物の別の実施形態を示す図である。
【図８】化学式３に基づく本発明のテトラピロール化合物の別の実施形態を示す図である。
【図９】ＨＴ２９細胞系に対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【図１０】ＨＴ２９細胞系に対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【図１１】ＨＴ２９細胞に対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【図１２】滑膜細胞及びマクロファージに対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【図１３】滑膜細胞及びマクロファージに対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【図１４】滑膜細胞及びマクロファージに対する５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの光力学的活性の一実施形態を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、癌、過剰増殖性疾患、皮膚疾患、ウィルス又は細菌感染症、眼科疾患及び／又は泌尿器疾患の光力学療法などの広範囲の光線療法用の光感作物質として用いられ得る生物学的に活性な化合物を提供する。本発明によって提供される別の光感作物質は、それらが容易に産生されかつ特性化されるという利点を有する。本発明は、光感作物質の活性、安定性を強化し、又は新しい用途を可能にするために、有効な光感作物質の更なる官能化を可能にする。更には、本発明が望ましいＰＤＴのための両親媒性化合物を製造するための方法を提供するので、標的組織選択性が増大され、故にＰＤＴ有効性も増大される。本発明は、先行技術の生物学的活性化合物の有効性を増強し、これによって、電磁スペクトルの赤色領域及び近赤外領域の長い波長でのそれらの強い吸収のために、より深部の組織貫通を提供し、特定のＰＤＴ用途に応じてそのあつらえられた両親媒性及びカスタムメイドされた薬物動態挙動のために、健康な周辺組織にわたる標的組織に関する増強した選択性を提供する。
【００１９】
異なる医療適応、特にＰＤＴに用いられ得る本発明の生物学的活性化合物は、メソ−置換及びβ−官能化ヒドロキシ−又はジヒドロキシ−クロリン構造である。加えて、本発明は、関節炎及び同様な炎症性疾患などの非腫瘍性適応症の蛍光診断及びＰＤＴ治療に使用され得る構造として、それらの用途を広げる。
【００２０】
好ましい実施形態では、テトラピロール化合物は、図１に示された一般式を有する。
以下の実施形態のそれぞれは、この一般構造の例を表す。
【００２１】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図２に示された式１又は２に基づき、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４は、独立して、水素、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、若しくはフルオロアルキル基、置換された又は非置換の芳香族環であり；並びにＲ５は、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル若しくはフルオロアルキル基、置換された又は非置換の芳香族環である。
【００２２】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図２に示された式１又は２に基づき、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４は、独立して、水素、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環である。置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であることが好ましく；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基であり；並びにＺ中の置換基はペプチド又はオリゴペプチドである。Ｒ５は、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環である。Ｒ５については、置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であり；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、又は炭水化物部分であり；並びに置換基Ｚは、ペプチド又はオリゴペプチドである。
【００２３】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図２に示された式１又は２に基づき；式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４は、独立して、水素、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環であり；置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であり；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基であり；並びに置換基Ｚはペプチド又はオリゴペプチドである。Ｒ５は、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかで１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環である。
【００２４】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図２に示された式１又は２に基づき；式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３又はＲ４は、独立して、４〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、又はフルオロアルキル基、若しくはメタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環であり、置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２である。この式では、Ｒ５は、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかで１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環である。
【００２５】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図３に示されるような式３に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環であり；置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であり；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、又は炭水化物部分であり；並びに置換基Ｚはペプチド又はオリゴペプチドである。
【００２６】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図３に示されるような式３に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、又はオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかで１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環である。
【００２７】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図４に示される式４に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環であり；置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であり；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分又はを含有するポリエチレングリコール残基、又は炭水化物部分であり；並びに置換基Ｚはペプチド又はオリゴペプチドである。
【００２８】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図４に示される式４に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、又はオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかで１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環である。
【００２９】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図５に示される式５に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、フェニル環若しくはオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかに１つ以上の置換基Ｘを有するフェニル環であり；置換基Ｘは、ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２，−ＣＦ３、−Ｆ、−ＣＯＯＹ、−ＮＨＹ、−ＯＹ、−ＮＨ−Ｚ−ＣＯＯＨ、又は−ＣＯ−Ｚ−ＮＨ２であり；置換基Ｙは、ｎ＝１〜３０で、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ部分を含有するポリエチレングリコール残基、又は炭水化物部分であり；並びに置換基Ｚはペプチド又はオリゴペプチドである。
【００３０】
別の実施形態では、テトラピロール化合物は、図５に記載されるような式５に基づき、式中、Ｒは、１〜１５個の炭素原子を含有する置換された又は非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル又はフルオロアルキル基、又はオルト−、メタ−又はパラ−位のいずれかで１つ以上のＣＦ３−基で置換されたフェニル環である。図６に示される別の実施形態では、テトラピロール化合物は、式３に基づき、式中、Ｒは−ＣＦ３又はその薬学的に許容可能な誘導体である。図７に示される更に別の実施形態では、テトラピロール化合物は、式３に基づき、式中、Ｒはヘキサン又はその薬学的に許容可能な誘導体である。
【００３１】
図８に示される別の実施形態では、テトラピロール化合物は、式３又はその薬学的に許容可能な誘導体に基づく。
【００３２】
別の実施形態では、式１、２、３、４及び５に基づく全ての先の実施形態のテトラピロール化合物、又はその薬学的に許容可能な誘導体は、診断及び光力学的療法用の医薬組成物の調製のために用いられる。
【００３３】
別の実施形態では、医薬組成物は、先の実施形態によるテトラピロール化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体を活性成分として含む。
【００３４】
別の実施形態では、先の実施形態のいずれかのテトラピロール化合物が活性成分である医薬組成物は、リポソーム製剤である。
【００３５】
別の実施形態では、先の実施形態の全てによるテトラピロール化合物、又はその薬学的に許容可能な誘導体が活性成分である医薬組成物は、標的化剤に結合される。好ましくは、医薬組成物の標的化剤は、抗体、抗体の断片、ペプチドである。この医薬組成物は、リポソーム製剤であることが好ましい。
【００３６】
別の実施形態では、式１、２、３、４及び５に基づく先の実施形態のすべてで示されたテトラピロール化合物、又はその薬学的に許容可能な誘導体は、腫瘍、皮膚疾患、ウィルス又は細菌感染症、眼科疾患又は泌尿器疾患、関節炎及び同様な炎症性疾患の光力学療法で用いられる。加えて、言及された化合物又はその薬学的に許容可能な誘導体は、関節炎及び同様な炎症性疾患の診断で用いられ得る。
【００３７】
別の実施形態では、前の実施形態で示されたテトラピロール化合物は、従来型リポソーム、ペグ化リポソーム、ナノエマルジョン、ナノ結晶、ナノ粒子、脂肪エマルジョン、脂質製剤、自己微小乳化薬剤送達システム、α−フェトタンパク質（ＡＦＰ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ポリ（乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、脂肪エマルジョン及び有機又は非有機ナノ粒子などの既知の担体を含む投与の方法による異なる治療用製剤で用いられる。
【００３８】
新規の光感作物質を得るために、本発明は、化学的に安定なポルフィリン誘導体を用い、並びに対応する前駆体ジケト−クロリン類の調製のための方法を提供する。
【００３９】
本発明の一実施形態は、（トリフルオロメチル）トリメチルシラン又はＧｒｉｇｎａｒｄ試薬、例えば臭化メチルマグネシウム、臭化ヘキシルマグネシウム、臭化３，５−（ビストリフルオロメチル）フェニルマグネシウム又は塩化アリルマグネシウムなどのような求核性薬剤を用いて、前駆体としてのジケト−クロリン類からヒドロキシ−又はジヒドロキシ−クロリン類を合成するための方法からなる。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、置換基の限定された配列でポルフィリンを合成し、それをジケト−クロリンに変換し、その後、対応するヒドロキシ−又はジヒドロキシ−クロリン類に変換し、次いで所望の化合物をリポソーム製剤に製剤化する工程からなる。
【００４１】
本発明の更に別の実施形態では、ｍ−メトキシフェニル置換基を有するＡ４型ポルフィリンが合成され、前駆体ジケト−クロリンに変換され、これが対応するβ−官能化ジヒドロキシ−クロリンに変換される。次いで残存するメトキシ基が、ＢＢｒ３で脱保護され、ヒドロキシル置換された誘導体を得る。
【００４２】
本発明の更に別の特に好ましい実施形態では、置換基Ａとしてヘキシル鎖及び置換基Ｂとしてメトキシカルボニルフェニル残基を有する「トランス」−Ａ２Ｂ２−型のポルフィリンが合成される。このポルフィリンが、ジヒドロキシクロリンに変換され、その後ジケト−クロリンに変換される。次いで、この前駆体がβ−官能化ジヒドロキシ−クロリンに変換され、残存するメチルエステルが加水分解され、対応するカルボン酸を受容する。
【００４３】
本発明の主題であるポルフィリン類の合成のための許容可能な出発物質は、ピロール及びアルデヒドである。これらは、縮合反応を受ける。この縮合に好適な方法は、当該技術分野で長く知られている（Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ、Ｉ．Ｃ．Ｓｃｈｒｅｉｍａｎ、Ｈ．Ｃ．Ｈｓｕ、Ｐ．Ｃ．Ｋｅａｒｎｅｙ及びＡ．Ｍ．Ｍａｒｇｕｅｒｅｔｔａｚ著、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７年、５２、８２７−８３６頁）。或いは、当該技術分野で既知であるように、非対称的に置換されたポルフィリンもまた、ジピロメタン類及びアルデヒド類を用いて合成され得る。（Ｃ．−Ｈ．Ｌｅｅ、Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ、「Ｏｎｅ−Ｆｌａｓｋ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｅｓｏ−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓ−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９４年、５０、１１４２７−１１４４０頁）。所望のポルフィリン類の縮合及び精製の後に、これらは、２種の異なる方法によって、ジケト−クロリン類に変換される。
【００４４】
第１番目の方法は、実施例１．１、１．３及び１．５で例示され、３工程にわたり進行する。第１の工程は、当該技術分野で既知であるような四酸化オスミウム媒介ジヒドロキシル化である。第２の工程は、還流するトリフルオロ酢酸中で対応する２−ヒドロキシポルフィリンを形成するためのジオールの定量的脱水である。したがって、本発明の別の実施形態は、このジヒドロキシポルフィリンの脱水のための簡便法を提供する。ジケト−クロリンへの２−ヒドロキシポルフィリンのＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン媒介酸化
はこの合成の最終工程である。
【００４５】
第２番目の方法は、当該技術分野で既知であり、実施例１．２及び１．４で例示されている。これは、四酸化オスミウムの使用を回避して２−ヒドロキシポルフィリン類を得るための別のルートである。第１の工程では、Ｃｕ（ＮＯ３）２を用いて、ポルフィリンが対応するＣｕ（ＩＩ）ニトロ−ポルフィリン誘導体に変換され、第２の工程では、ニトロ置換されたポルフィリン誘導体を、水素化ナトリウムの存在下、ジメチルスルホキシド中でＥ−ベンズアルデヒドオキシムのナトリウム塩で処理することによって、２−ヒドロキシポルフィリンが得られる。
【００４６】
ジケト−クロリン類のβ−官能化が、実施例２及び３で例示されている。実施例２は、（トリフルオロメチル）トリメチルシランを求核剤として用いる、トリフルオロメチル置換されたヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリン類の合成を示す。実施例３は、有機金属、より正確にはＧｒｉｇｎａｒｄ試薬を用いる、アルキル、アルケニル、アルキニル及びアリール置換されたヒドロキシ−及びジヒドロキシ−クロリン類の合成を示す。
【００４７】
本発明により産生された特別に置換された両親媒性クロリン誘導体は、癌及び他の（過剰）増殖性疾患及び感染症の光力学療法に使用されるのに好適である。
【００４８】
ＰＤＴは、まず初めに、特定の治療部位への誘導体の送達のために、誘導体を薬学的に許容可能な賦形剤（例えば、エタノール性溶液又はリポソーム製剤）に組み込むことによって達成される。賦形剤中の誘導体を治療領域に投与した後に、患部組織内にクロリン誘導体が優先的に蓄積するような十分な時間が与えられる。最後に、治療領域が、ポルフィリン誘導体を活性化し、前記患部組織の細胞において壊死又はアポトーシスを誘起するために適当な波長及び十分な威力を有する光で照射される。したがって、主な利点の１つは、通常の医薬品製剤が、テトラピロール系の注射部位での析出又は遅延した薬物動態のような望ましくない影響を回避しながら注射されるリポソーム製剤などの本発明の生物学的活性化合物に作り上げられることが可能であることである。それらの両親媒性特性のために、本発明の化学的に安定なクロリン誘導体は、例えば注射などの異なる投与方法に、様々な薬学的に許容可能かつ活性な調製物中で調製され得る。特に好ましい実施形態では、このような両親媒性化合物は、リポソーム中に製剤化される。このリポソーム製剤は、次いでテトラピロール系の注射部位での析出又は遅延した薬物動態のような望ましくない影響を回避しながら注射され得る。
【００４９】
ＨＴ２９細胞系での細胞培養実験における本発明の３つの特定のクロリン誘導体暗毒性（ＤＴ）及び光毒性の判定（実施例５．１、５．２及び５．３）は、ＰＤＴでの使用に関してこの化合物の優れた特性を示した。
【００５０】
本発明の別の目的が、開示されたポルフィリン及びクロリン誘導体を関節炎及び同様な炎症性疾患の診断及び治療で用いることであるので、実施例６．１、６．２及び６．３において提示されたデータは、特に関節炎に関して、本発明の３つの化合物での２種の細胞系（ＨＩＧ８２及びＪ７７４Ａ．１、ウサギ滑膜細胞及びマウスマクロファージ細胞系）の光力学療法の注目すべき結果を示す。
【００５１】
以下の実施例は、本発明のクロリン誘導体の生成方法の完全かつ例示的開示及び説明を当業者に提供し並びにそれらの光力学的活性を示すために提示されるものであり、発明者が発明とみなすものの範囲を制限することを意図されたものではない。用いられる数字（例えば、量、温度等）に関して正確さを保証するよう努力がなされてはいるが、いくつかの実験的誤差及び偏差は、明らかにされるべきである。また、基本的参照は実験上のスペクトルデータに基づく所与の構造式ではあるが、化合物をそれらの系統的ＩＵＰＡＣ化学名で命名するために最適な処置がとられた。
実施例
【００５２】
全ての試薬は、市販業者から購入されて使用された。テトラヘキシポルフィリン、テトラフェニルポルフィリン及びテトラキス−（３−メトキシフェニル）−ポルフィリンは、Ｌｉｎｄｓｅｙの条件（Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ、Ｉ．Ｃ．Ｓｃｈｒｅｉｍａｎ、Ｈ．Ｃ．Ｈｓｕ、Ｐ．Ｃ．Ｋｅａｒｎｅｙ及びＡ．Ｍ．Ｍａｒｇｕｅｒｅｔｔａｚ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７年  ５２、８２７−８３６頁）を用いて調製された。ジクロロメタンは、使用前にＫ２ＣＯ３上で蒸留することによって精製された。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、アルミニウムシート上にプレコートされたＭｅｒｃｋシリカゲル６０（蛍光指示薬なし）を用いて実施された。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｆｌｕｋａシリカゲル６０、０．０４０〜０．０６３ｍｍ（２３０〜４００メッシュ）を用いて実行された。１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３、（ＣＤ３）２ＣＯ、ＣＤ３ＯＤ又は（ＣＤ３）２ＳＯ中でＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ２５０、ＡＣ５００、ＥＣＸ４００又はＡＭＸ５００装置に記録された。化学シフトδは、内部標準としてのＴＭＳに対して又は残留溶媒ピークの共鳴に対してｐｐｍで提供され、Ｊ値はＨｚで提供される。マススペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  ＭＡＴ  ７７１、Ｖａｒｉａｎ  ＩｏｎＳｐｅｃ  ＱＦＴ−７又はＡｇｉｌｅｎｔ  ６２１０  ＥＳＩ−ＴＯＦ装置に記録された。電子吸収スペクトルは、ジクロロメタン又はアセトンを溶媒として用いて、Ｓｐｅｃｏｒｄ  Ｓ３００（Ａｎａｌｙｔｉｋ  Ｊｅｎａ）分光光度計に記録された。
実施例１
ジケト−クロリンの調製
１．１  ５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジオキソ−７，８−クロリンの調製
１．１．１  ５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００５３】
典型的な実験において、四酸化オスミウム（１ｇ、３．９ミリモル）を、ジクロロメタン／ピリジン１：１（１９５ｍｌ）中、５，１０，１５，２０−テトラヘキシルポルフィリン（２．５ｇ、３．９ミリモル）の攪拌した溶液に添加した。６時間の攪拌後に、水／メタノール１：１（１００ｍｌ）中の重亜硫酸ナトリウムの飽和溶液を添加し、混合物を１８時間攪拌した。セライトを通して反応混合物を濾過し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣を、溶出液としてジクロロメタン／酢酸エチル９５：５を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、続いてジクロロメタン／水性メタノールから再結晶させた。カラムからの第１のバンドは、開始物質（５９１ｍｇ、２４％）を含有し、第２のバンドは、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（１７０９ｍｇ、６５％）を含有した。
【化１】
2013532664.tif 000003
紫色固体；ｍｐ：１０９℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４０９（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２１９３００）、４３１（１６３５００）、５３２（２１２００）、５５９（２８５００）、５９７（１２８００）及び６５１（２２０００）；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）９．０３（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．６７（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．４８（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、５．７２（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、４．３０−４．３７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、４．１４−４．２０（ｍ、２Ｈ，ＣＨ２）、３．７３−３．８６（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、２．２３−２．３９（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、１．７８−１．９６（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、１．６９−１．７５（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、１．４０−１．６０（ｍ，１２Ｈ，６×ＣＨ２）、１．３５−１．３９（ｍ，８Ｈ，４×ＣＨ２）、１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ２×ＣＨ３）、０．９４−０．９６（ｍ，６Ｈ，２×ＣＨ３）、−２．１２（ｂｒ  ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１２５  ＭＨ；ＣＤＣｌ３）１５９．７４（α−Ｃ）、１５２．０９（α−Ｃ）、１３９．５９（α−Ｃ）、１３３．９９（α−Ｃ）、１２９．６９（β−Ｃ）、１２４．７５（β−Ｃ）、１２１．４３（β−Ｃ）、１２１．２９（β−Ｃ）、１１０．９０（メソ−Ｃ）、７３．０１（β−Ｃ）、３８．１０（ＣＨ２）、３６．２７（ＣＨ２）、３５．０１（ＣＨ２）、３２．９１（ＣＨ２）、３２．０３（ＣＨ２）、３２．０１（ＣＨ２）、３０．４４（ＣＨ２）、３０．２３（ＣＨ２）、２２．９５（ＣＨ２）、２２．９１（ＣＨ２）、１４．３５（ＣＨ２）、１４．３１（ＣＨ３）；ｍ／ｚ（ＥＩ）６８０．５０２３（Ｍ＋．Ｃ４４Ｈ６４Ｎ４Ｏ２は６８０．５０２９を要求する）、６６２（１００％）、６４６（２１）、６０９（２１）、５９１（４５）．
１．１．２  ５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリン
【００５４】
典型的実験において、トリフルオロ酢酸（３５ｍｌ）を、５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（５４８ｍｇ、０．８０ミリモル）に添加し、６５℃で８時間加熱した。反応混合物を冷却させて、３００ｍｌの氷／水に注いだ。水酸化ナトリウム溶液（３０％）を中性になるまで加えた。次いで酢酸エチル（２００ｍｌ）を添加し、有機相を分離し、水（３×１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリンを得た（５２４ｍｇ、９８％）。
【化２】
2013532664.tif 000004
紫色固体；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１９（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２４５０００）、４３３（１９３９００）、５３４（１５９００）、５７０（１９５００）、６０４（１０１００）及び６５９（５８００）；δＨ（２５０  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）９．２６−９．１２（ｍ，５Ｈ，，β−Ｈ）、８．８８−８．８３（ｍ，１Ｈ，β−Ｈ）、４．７４−４．６０（ｍ，６Ｈ，３×ＣＨ２）、４．５３（ｓ、２Ｈ，β−Ｈ）、３．８５−３．７８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．５６−２．３３（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、２．１７−１．９８（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、１．８５−１．３１（ｍ，２４Ｈ，１２×ＣＨ２）、０．９９−０．９１（ｍ，１２Ｈ，４×ＣＨ３）、−２．２３（ｓ、１Ｈ，ＮＨ）、−２．４６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）６６３．４９３７（〔Ｍ＋Ｈ〕＋、Ｃ４４Ｈ６３Ｎ４Ｏ＋は６６３．４９９６を要求する）
１．１．３  ５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン
【００５５】
典型的実験において、ジクロロメタン中Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン１５％溶液（１．６ｇ、１．８ミリモル）を、ジクロロメタン（１５ｍｌ）中５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリン（２５０ｍｇ、０．３７ミリモル）の攪拌した溶液に、出発物質が消費されるまで滴下により加えた。次いで水（５０ｍｌ）を添加し、有機相を分離し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、溶出液としてジクロロメタン／ヘキサン２：１を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（１３３ｍｇ、５３％）を産生した。
【化３】
2013532664.tif 000005
紫色固体；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４０７（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２０５６００）、４９１（１６９００）、７１５（５３００）；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）９．１３−９．１１（ｍ，４Ｈ，β−Ｈ）、９．０２−９．００（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、４．６３−４．５８（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、４．４１−４．３５（ｍ、４Ｈ，２×ＣＨ２）、２．４１−２．３４（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、２．０３−１．９５（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、１．８０−１．６９（ｍ，８Ｈ，４×ＣＨ２）、１．５３−１．３６（ｍ，１６Ｈ，８×ＣＨ２）、０．９７−０．９４（ｍ，１２Ｈ，４×ＣＨ３）、−２．６０（ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１２６  ＭＨ；ＣＤＣｌ３）１８９．２２（α−ＣＯ）、１５４．４１（α−Ｃ）、１３９．４８（α−Ｃ）、１３８．４７（α−Ｃ）、１３６．７８（α−Ｃ）、１３１．６６（β−Ｃ）、１２５．２８（β−Ｃ）、１２４．７６（β−Ｃ）、１２２．８０（メソ−Ｃ）、１１４．３５（メソ−Ｃ）、３８．３５（ＣＨ２）、３６．４４（ＣＨ２）、３５．５６（ＣＨ２）、３２．０１（ＣＨ２）、３１．９７（ＣＨ２）、３１．１５（ＣＨ２）、３０．４１（ＣＨ２）、３０．２２（ＣＨ２）、２２．９４（ＣＨ２）、２２．８９（ＣＨ２）、１４．３４（ＣＨ３）、１４．３０（ＣＨ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）６７７．４７９３（〔Ｍ＋Ｈ〕＋．Ｃ４４Ｈ６１Ｎ４Ｏ２−は６７５．４６４４を要求する）．
１．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリンの調製（方法Ａ）
１．２．１  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００５６】
典型的実験において、四酸化オスミウム（１０００ｍｇ、３．９ミリモル）を、ジクロロメタン／ピリジン１：１（３４０ｍｌ）中、５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−ポルフィリン（２５００ｍｇ、３．４ミリモル）の攪拌した溶液に添加した。４日間の攪拌後に、水／メタノール１：１（１５０ｍｌ）中の重亜硫酸ナトリウムの飽和溶液を添加し、混合物を１８時間攪拌した。セライトを通して反応混合物を濾過し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を蒸発させて、残渣を、溶出液としてジクロロメタン／酢酸エチル９：１を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、続いてジクロロメタン／水性メタノールから再結晶させた。カラムからの第１のバンドは、開始物質（７９３ｍｇ、３２％）を含有し、第２のバンドは、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（９５４ｍｇ、３６％）を含有した。
【化４】
2013532664.tif 000006
紫色個体；δＨ（４００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．６９−８．６６（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．５１（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．４０−８．３２（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．７７−７．４４（ｍ，１２Ｈ，Ａｒ）、７．３１−７．２１（ｍ、４Ｈ，Ａｒ）、６．４４−６．３２（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、３．９７−３．９１（ｍ，１２Ｈ，ＯＣＨ３）、３．２６−３．１９（ｍ，２Ｈ，β−ＯＨ）、−１．８４（ｓ、２Ｈ，ＮＨ）．
１．２．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリンの調製
【００５７】
典型的実験において、トリフルオロ酢酸（１００ｍｌ）を、５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（９３７ｍｇ、１．２２ミリモル）に添加し、６５℃で８時間加熱した。反応混合物を冷却させて、５００ｍｌの氷／水に注いだ。水酸化ナトリウム溶液（３０％）を中性になるまで加えた。次いで酢酸エチル（３００ｍｌ）を添加し、有機相を分離し、水（３×１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリンを得た（８９９ｍｇ、９８％）。
【化５】
2013532664.tif 000007
紫色固体；ｍｐ：＞３００℃；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）７５１．２９３６（〔Ｍ＋Ｈ〕＋．Ｃ４８Ｈ３９Ｎ４Ｏ５＋は７５１．２９１５を要求する）；ケト−エノール互変異性体混合物のために、ＮＭＲスペクトル分析を行わなかった。
１．２．３  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリンの調製
【００５８】
典型的実験において、ジクロロメタン中Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン１５％溶液（１ｇ、１．１ミリモル）を、ジクロロメタン（２０ｍｌ）中５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリン（１６０ｍｇ、０．２１ミリモル）の攪拌した溶液に、２時間以内で滴下により加え、更に３時間攪拌した。次いで水（５０ｍｌ）を添加し、有機相を分離し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、溶出液としてジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（１２３ｍｇ、７５％）を産生した。
【化６】
2013532664.tif 000008
紫色固体；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４０６（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １０４６００）；δＨ（２５０  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）  ８．８１（ｄｄ，４Ｊ＝１．０Ｈｚ，３Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．６８（ｄｄ，４Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．６２（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．７７−７．４５（ｍ，１２Ｈ，Ａｒ）、７．３５−７．２７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、３．９７（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９４（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）、−２．０４（ｂｒ  ｍ、２Ｈ，ＮＨ）；  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）７６５．２７２９（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ４８Ｈ３７Ｎ４Ｏ６＋は７６５．２７０８を要求する）．  
１．３  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７．８−クロリンの調製（方法Ｂ）
１．３．１  Ｃｕ（ＩＩ）−５，１０，１５，２０−（３−メトキシフェニル）−７−ニトロ−ポルフィリンの調製
【００５９】
典型的実験において、無水酢酸（５０ｍｌ）及び酢酸（１０ｍｌ）の混合物中のＣｕ（ＮＯ３）２・２．５Ｈ２Ｏ（５００ｍｇ、２．２ミリモル）を、ジクロロメタン（５００ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−ポルフィリン（６００ｍｇ、０．８ミリモル）溶液に添加し、混合物を１０時間環流した。次いで、溶媒を除去し、残渣を、ジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物Ｃｕ（ＩＩ）−５，１０，１５，２０−（３−メトキシフェニル）−７−ニトロ−ポルフィリン（６１０ｍｇ、９１％）を得た。
【化７】
2013532664.tif 000009
灰色固体；ｍｐ：２００℃；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）８４０．１９７０（〔Ｍ〕＋、Ｃ４８Ｈ３５ＣｕＮ５Ｏ６＋は８４０．１８７８を要求する）
１．３．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリンの調製
【００６０】
典型的な実験において、水素化ナトリウム（２００ｍｇ、５ミリモル）を乾燥ジメチルスルホキシド（２５０ｍｌ）に加えた。混合物をアルゴン下、７５℃で３０分間加熱し、次いでＥ−ベンズアルデヒドオキシム（１．５ｍｌ、１１ミリモル）を添加した。得られた黄色混合固体に、Ｃｕ（ＩＩ）−５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ニトロ−ポルフィリン（１．１ｇ、１．３ミリモル）を添加した。１２０分後に、混合物を氷浴中で冷却し、ジクロロメタン（３００ｍｌ）で希釈した。有機相を水（５×２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。
【００６１】
粗生成物を、トリフルオロ酢酸／濃硫酸１０：１（４４ｍｌ）の混合物中に溶解し、８分後に、酢酸エチル（２００ｍｌ）及び水（２００ｍｌ）を加え、並びに水酸化ナトリウム３０％溶液を中性になるまで加えた。有機相を水（４×２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７−ジヒドロ−８−オキソ−７，８−クロリンを得た（５０１ｍｇ、２工程にわたり５０％）。
スペクトル分析データは、１．２．２に提示されている。
１．３．３  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−−ジオキソ−７，８−クロリンの調製
【００６２】
１．２．３と比較されたい。
実施例２
トリフルオロメチルβ−置換クロリンの調製
２．１  ５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００６３】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（３ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（５０ｍｇ、０．０７ミリモル）の溶液を、−３５℃に冷却した。（トリフルオロメチル）トリメチルシラン（５０μｌ、０．３８ミリモル）及びフッ化テトラブチルアンモニウム三水和物（１０ｍｇ、０．０３ミリモル）を添加し、混合物を２０分間攪拌した。トリメチルシリル基を除去するために、更にフッ化テトラブチルアンモニウム三水和物（５０ｍｇ、０．３ミリモル）を添加し、完全な変換まで反応混合物を攪拌した。次いで水（２５ｍｌ）及びジクロロメタン（２５ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／ヘキサン１：１を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−トリフルオロメチル−７−ヒドロキシ−８−オキソ−７，８−クロリンを産生した。５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−トリフルオロメチル−７−ヒドロキシ−８−オキソ−７，８−クロリン（２５ｍｇ、０．０３ミリモル）を、ジクロロメタン／メタノール９：１（３ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５ｍｇ、０．１３ミリモル）を加え、出発物質が消費されるまで混合物を攪拌した。次いで、水（１０ｍｌ）及びジクロロメタン（１０ｍｌ）を添加し、有機相を分離し、水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−７−トリフルオロメチル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンを得た（２１ｍｇ、２工程にわたり６０％）。
【化８】
2013532664.tif 000010
紫色固体；ｍｐ：１２０−１２５℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１０（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２２０３００）、４３２（１４９１００）、５３３（１６６００）、５６２（２５１００）、５９９（１２１００）、６５１（１７４００）；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）９．２２−９．２０（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、９．１３（ｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ，β−Ｈ）、９．０９（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ，β−Ｈ）、９．０３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，β−Ｈ）、８．９７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ，β−Ｈ）、６．９６−６．９３（ｍ，１Ｈ，β−Ｈ）、４．７２−４．５６（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、４．４６−４．３５（ｍ、３Ｈ，ＣＨ２，ＣＨＡ）、４．２８−４．２０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＢ）、３．９３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，β−ＯＨ）、２．９３−２．８４（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、２．４４−２．３６（ｍ，４Ｈ，２×ＣＨ２）、２．３３−２．１６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．０２−１．９５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．８２−１．７１（ｍ，６Ｈ，３×ＣＨ２）、１．６１−１．２６（ｍ，１８Ｈ，９×ＣＨ２）、０．９９−０．８８（ｍ，１２Ｈ，４×ＣＨ３）、−１．５１（ｂｒ  ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１２６  ＭＨ；ＣＤＣｌ３）１５５．２５（α−Ｃ）、１５３．２５（α−Ｃ）、１５３．１５（α−Ｃ）、１４９．３０（α−Ｃ）、１４０．５８（α−Ｃ）、１４０．３０（α−Ｃ）、１３５．０２（α−Ｃ）、１３４．２４（α−Ｃ）、１３０．４１（β−Ｃ）、１２９．８８（β−Ｃ）、１２５．８０（β−Ｃ）、１２４．９５（β−Ｃ）、１２３．３０（メソ−Ｃ）、１２２．８５（β−Ｃ）、１２２．５２（β−Ｃ）、１２１．４９（メソ−Ｃ）、１１３．７８（メソ−Ｃ）、１０９．８９（メソ−Ｃ）、８９．１８（β−Ｃ）、３８．１５（ＣＨ２）、３８．０９（ＣＨ２）、３８．０４（ＣＨ２）、３６．４７（ＣＨ２）、３５．５５（ＣＨ２）、３５．１２（ＣＨ２）、３３．０４（ＣＨ２）、３２．８７（ＣＨ２）、３２．０４（ＣＨ２）、３１．９６（ＣＨ２）、３０．６２（ＣＨ２）、３０．４４（ＣＨ２）、３０．３９（ＣＨ２）、３０．２１（ＣＨ２）、２３．００（ＣＨ２）、２２．８９（ＣＨ２）、１４．３０（ＣＨ３）、１４．２５（ＣＨ３）；δＦ（４７１  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）−７２．６５（ＣＦ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）７４９．４９５５（〔Ｍ＋Ｈ〕＋．Ｃ４５Ｈ６４Ｆ３Ｎ４Ｏ２＋は７４９．４９７６を要求する）．
２．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−クロリンの調製
【００６４】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（７ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（１００ｍｇ、０．１３ミリモル）の溶液を、−４０℃に冷却した。（トリフルオロメチル）トリメチルシラン（３５０μｌ、２．６６ミリモル）及びフッ化テトラブチルアンモニウム三水和物（１０ｍｇ、０．０３ミリモル）を添加し、混合物を８時間攪拌した。トリメチルシリル基を除去するために、更にフッ化テトラブチルアンモニウム三水和物（１００ｍｇ、０．３ミリモル）を添加し、完全な変換まで反応混合物を攪拌した。次いで水（４０ｍｌ）及びジクロロメタン（５０ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（４０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−クロリンを得た（９２ｍｇ、７８％）。
【化９】
2013532664.tif 000011
紫色固体；ｍｐ：１７７℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４０９（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １３５３００）、５１８（９３００）、５４８（９２００）、５９９（４２００）、６５３（１７３００）；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．６３−８．６１（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．４７（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．０３−８．００（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．８９−７．７７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、７．６８−７．４３（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）、７．３５−７．２６（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）、４．１３−４．１１（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、４．０２−４．０１（ｍ、１Ｈ，β−ＯＨ）、４．００−３．９８（ｂｒ  ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９１−３．８９（ｂｒｍ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．８７−３．８５（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、−１．４８−−１．５２（ｂｒ  ｍ，２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１２６  ＭＨ；ＣＤＣｌ３）１５９．０２（Ａｒ）、１５８．２０（Ａｒ）、１５３．６３（α−Ｃ）、１４９．５４（α−Ｃ）、１４９．１７（α−Ｃ）、１４２．５５（Ａｒ）、１４１．５５（α−Ｃ）、１３８．９８（Ａｒ）、１３８．８２（Ａｒ）、１３６．０３（α−Ｃ）、１３３．２４（β−Ｃ）、１２８．９７（Ａｒ）、１２８．４８（β−Ｃ）、１２８．３８（Ａｒ）、１２７．８０（Ａｒ）、１２７．４６（Ａｒ）、１２６．９１（Ａｒ）、１２５．８７（Ａｒ）、１２５．０９（β−Ｃ）、１２４．５３（β−Ｃ）、１２４．４６（β−Ｃ）、１２０．６３（Ａｒ）、１１９．８１（Ａｒ）、１１９．２９（Ａｒ）、１１５．４０（Ａｒ）、１１３．８４（Ａｒ）、１１１．５７（メソ−Ｃ）、１１１．４５（メソ−Ｃ）、５５．６１（ＯＣＨ３）、５５．５０（ＯＣＨ３）、；δＦ（４７１  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）−７３．９２（ＣＦ３）、−７３．９４（ＣＦ３）、−７４．１２（ＣＦ３）、−７４．１５（ＣＦ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）９０５．２７７４（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ５０Ｈ３９Ｆ６Ｎ４Ｏ６＋は９０５．２７６８を要求する）．
２．３  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−クロリンの調製
【００６５】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−クロリン（８０ｍｇ、０．０９ミリモル）の溶液を−５０℃に冷却した。ジクロロメタン中、三臭化ホウ素溶液（１Ｍ、１．６ｍｌ）を１０分以上かけて滴下により添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めて、１８時間攪拌した。次いで、水（１００ｍｌ）及び酢酸エチル（１００ｍｌ）を加え、並びに３０％水酸化ナトリウム溶液を中性になるまで加えた。有機相を分離し、水（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／メタノール９５：５を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。更なる精製を、メタノール／水９５：５を溶出液として用いて、Ｃ１８逆相シリカゲルを有するカラムクロマトグラフィーによって達成した。ジクロロメタン／水性メタノールからの再結晶化後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヒドロキシ−７，８−ビス−（トリフルオロメチル）−７，８−クロリンを得た（６５ｍｇ、８７％）
【化１０】
2013532664.tif 000012
紫色固体；ｍｐ：＞３００℃；λｍａｘ（（ＣＨ３）２ＣＯ）／ｎｍ  ４０７（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １６６９００）、５１８（１５２００）、５４７（１５６００）、５９９（７７００）、６５３（２７６００）；δＨ（７００  ＭＨｚ；（ＣＤ３）２ＣＯ）８．８２−８．６６（ｍ，６Ｈ，２×β−Ｈ，４×Ａｒ−ＯＨ）、８．５０（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．１４−８．１２（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．８１−７．１１（ｍ，１６Ｈ，Ａｒ）、５．７５−５．５７（ｍ，２Ｈ，β−ＯＨ），−１．３８−−１．４２（ｍ，２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１７６  ＭＨ；（ＣＤ３）２ＣＯ）１５６．３５（Ａｒ）、１５６．３０（Ａｒ）、１５６．０５（Ａｒ）、１５５．９９（Ａｒ）、１５５．４６（Ａｒ）、１５５．４１（Ａｒ）、１５３．４４（α−Ｃ）、１５０．４７（α−Ｃ）、１５０．３９（α−Ｃ）、１５０．２８（α−Ｃ）、１５０．１９（α−Ｃ）、１４２．４２（Ａｒ）、１４２．３９（Ａｒ）、１４１．６８（α−Ｃ）、１４１．６１（α−Ｃ）、１４１．５８（α−Ｃ）、１４１．５１（α−Ｃ）、１３９．９１（Ａｒ）、１３９．８７（Ａｒ）、１３５．７５（α−Ｃ）、１３２．８６（β−Ｃ）、１２８．１５（Ａｒ）、１２８．１２（β−Ｃ）、１２８．０２（Ａｒ）、１２７．９６（Ａｒ）、１２７．９０（Ａｒ）、１２７．５２（Ａｒ）、１２７．４５（Ａｒ）、１２６．２１（Ａｒ）、１２６．００（Ａｒ）、１２５．５３（β−Ｃ）、１２５．４８（Ａｒ）、１２５．４３（Ａｒ）、１２５．３８（Ａｒ）、１２５．３３（Ａｒ）、１２５．２８（Ａｒ）、１２５．２３（Ａｒ）、１２４．３７（メソ−Ｃ）、１２４．３０（メソ−Ｃ）、１２１．９５（Ａｒ）、１２１．３９（Ａｒ）、１２１．３５（Ａｒ）、１２１．１６（Ａｒ）、１１５．５８（Ａｒ）、１１５．５２（Ａｒ）、１１５．４７（Ａｒ）、１１５．４０（Ａｒ）、）、１１５．１４（メソ−Ｃ）、１１２．５２（Ａｒ）、１１２．４４（Ａｒ）、１１２．２８（Ａｒ）、１１２．２２（Ａｒ）、９０．４−８９．８（ｍ，β−Ｃ）；δＦ（４７１  ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）−７５．０２（ＣＦ３）、−７５．０５（ＣＦ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）８４９．２１６３（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ４６Ｈ３１Ｆ６Ｎ４Ｏ６＋は８４９．２１４２を要求する）．
実施例３
アルキル、アルケニル及びアルキニルβ−置換クロリンの調製
３．１  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−アリル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００６６】
典型的な実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（１０２ｍｇ、０．１３ミリモル）を−５０℃に冷却した。テトラヒドロフラン中、塩化アリルマグネシウム（２Ｍ、３００μｌ）を添加し、混合物を１５分間撹拌した。次いで、水（８０ｍｌ）及びジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（８０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を溶出液として使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−アリル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（２４ｍｇ、２１％）を得た。
【化１１】
2013532664.tif 000013
紫色固体；ｍｐ：１７５℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１８（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １８７７００）、５１８（１５５００）、５４６（１０７００）、６００（５９００）、６５４（２６４００）；；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．６１−８．５９（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．４６（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．０９−８．０６（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．９４−７．７７（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、７．６７−７．４５（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）、７．２８−７．１１（ｍ，６Ｈ，Ａｒ）、４．９４−４．８０（ｍ，２Ｈ，アルキル）、４．６５−４．５３（ｍ，２Ｈ，アルキル）、４．１８−４．０９（ｍ，２Ｈ，アルキル）、４．００（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．８６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．２１−３．０９（ｍ，２Ｈ，アルキル）、２．８３−２．７５（ｍ，２Ｈ，アルキル）、２．６９−２．６７（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、２．６０−２．５８（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、−１．５７（ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）８４９．３６７１（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ５４Ｈ４９Ｎ４Ｏ６＋は８４９．３６４７を要求する）．
３．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジエチニル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００６７】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（２００ｍｇ、０．２６ミリモル）を−４５℃に冷却した。テトラヒドロフラン中、塩化エチニルマグネシウム（０．６Ｍ、２ｍｌ）を添加し、混合物を２．５時間撹拌した。次いで、水（８０ｍｌ）及びジクロロメタン（１００ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（８０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を溶出液として使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジエチニル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（１２０ｍｇ、５６％）を得た。
【化１２】
2013532664.tif 000014
紫色固体；ｍｐ：２４０℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１５（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １９４２００）、５１８（１３７００）、５４５（１３６００）、５９４（７７００）、６４５（１５８００）；；δＨ（２５０  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．７７−８．４６（ｍ，６Ｈ，β−Ｈ）、７．８３−７．１７（ｍ，１６Ｈ，Ａｒ）、４．０１−３．８６（ｍ，１２Ｈ，ＯＣＨ３）、３．６１−３．５２（ｍ，２Ｈ，Ｃ≡ＣＨ）、２．６９−２．４６（ｍ，２Ｈ，β−ＯＨ）、−２．０２――２．１９（ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）８１７．３００７（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ５２Ｈ４１Ｎ４Ｏ６＋は８１７．３０２１を要求する）．
３．３  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００６８】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（５０ｍｇ、０．０７ミリモル）を−４５℃に冷却した。ジエチルエーテル中、臭化エヘキシルマグネシウム（２Ｍ、５００μｌ）を添加し、混合物を３時間撹拌した。次いで、水（４０ｍｌ）及びジクロロメタン（５０ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（４０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタンを溶出液として使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／メタノールからの再結晶化後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（３２ｍｇ、５３％）を得た。
【化１３】
2013532664.tif 000015
紫色固体；ｍｐ：２０５℃；λｍａｘ（（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１８（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １７６１００）、５１８（１４６００）、５４６（９９００）、６０１（５３００）、６５５（２６９００）；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．６０−８．５８（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．４５（ｓ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．０５−８．０１（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．９４−７．９１（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．８８−７．８５（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．８２−７．７５（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）、７．６７−７．６３（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．６２−７．５０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、７．４９−７．４４（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．２８−７．２０（ｍ，４Ｈ，Ａｒ）、７．１５−７．１３（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、７．０８−７．０５（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）、４．００−３．９９（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９８−３．９５（ｂｒ  ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９２−３．８９（ｂｒ  ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．８４−３．８３（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、２．５２−２．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．３２−２．３１（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、２．２２−２．２０（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、１．８８−１．７７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．２５−１．１０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．９０−０．７５（ｍ，７Ｈ，３×ＣＨ２，ＣＨＡ）、０．７４−０．５８（ｍ，６Ｈ，３×ＣＨ２）、０．５３−０．４８（ｍ，６Ｈ，２×ＣＨ３）、−０．４０―−０．６０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＢ）、−１．５１（ｓ，２Ｈ，ＮＨ）；δＣ（１２６  ＭＨ；ＣＤＣｌ３）１５８．２７（Ａｒ）、１５２．６０（α−Ｃ）、１４３．１４（Ａｒ）、１４２．０１（α−Ｃ）、１４１．２５（Ａｒ）、１３５．３４（α−Ｃ）、１３２．３１（β−Ｃ）、１２８．０６（β−Ｃ）、１２７．９９（Ａｒ）、１２６．９３（Ａｒ）、１２６．４８（Ａｒ）、１２４．３１（β−Ｃ）、１２２．８９（メソ−Ｃ）、１２０．２４（Ａｒ）、１１９．７９（Ａｒ）、１１９．７２（Ａｒ）、１１９．５３（Ａｒ）、１１４．４３（Ａｒ）、１１３．８３（Ａｒ）、１１３３．６２（Ａｒ）、１１１．３６（メソ−Ｃ）、９０．３７（β−Ｃ）、５５．５４（ＯＣＨ３）、５５．３６（ＯＣＨ３）、４１．８４（ＣＨ２）、４１．８０（ＣＨ２）、３１．２６（ＣＨ２）、３１．２０（ＣＨ２）、２９．５６（ＣＨ２）、２９．４４（ＣＨ２）、２４．３０（ＣＨ２）、２４．２４（ＣＨ２）、２２．３８（ＣＨ２）、２２．３７（ＣＨ２）、１３．８４（ＣＨ３）、１３．８１（ＣＨ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）９３７．４８７０（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ６０Ｈ６５Ｎ４Ｏ６＋は９３７．４８９９を要求する）．
３．４  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００６９】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥ジクロロメタン（５ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（１５ｍｇ、０．０２ミリモル）の溶液を−６０℃に冷却した。ジクロロメタン中、三臭化ホウ素溶液（１Ｍ、３００μｌ）を１０分以上かけて滴下により添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めて、１８時間攪拌した。次いで、水（２０ｍｌ）及び酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、並びに３０％水酸化ナトリウム溶液を中性になるまで加えた。有機相を分離し、水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／メタノール９５：５を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。更なる精製を、メタノール／水９５：５を溶出液として用いて、Ｃ１８逆相シリカゲルを有するカラムクロマトグラフィーによって達成した。ジクロロメタン／水性メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンを得た（１２ｍｇ、８５％）。
【化１４】
2013532664.tif 000016
紫色固体；ｍｐ：１８０℃；λｍａｘ（（ＣＨ３）２ＣＯ）／ｎｍ  ４１８（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  １１６８００）、５１８（１０８００）、５４４（７４００）、６００（４６００）、６５３（２１９００）；δＨ（２５０ＭＨｚ；（ＣＤ３）２ＣＯ）８．８０−８．７２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−ＯＨ）、８．６４（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．６４（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−ＯＨ）、８．４３（ｓ，２Ｈ，β−ＯＨ）、８．１０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．９０−６．９９（ｍ，１６Ｈ，Ａｒ）、３．３２−３．２９（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、３．２５−３．２３（ｍ，１Ｈ，β−ＯＨ）、２．６２−２．４５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．９８−１．９０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．９０−０．５７（ｍ，１４Ｈ，７×ＣＨ２）、０．５０−０．４１（ｍ，６Ｈ，２×ＣＨ３）、−０．４３−−０．５７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２）、−１．４５（ｓ，２Ｈ，ＮＨ）；ｍ／Ｚ（ＥＳＩ）８８１．４２６４（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ５６Ｈ５７Ｎ４Ｏ６＋は８８１．４２７３を要求する）．
実施例４
３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニルβ−置換クロリンの調製
４．１  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロ−メチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００７０】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中、５，１０，１５，２０−テトラキスー（３−メトキシフェニル）−７，８−ジオキソ−７，８−クロリン（３００ｍｇ、０．３９ミリモル）を−５０℃に冷却した。テトラヒドロフラン中中、臭化３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニルマグネシウム（０．５Ｍ、３．９ｍｌ）を添加し、混合物を３時間撹拌した。次いで、水（２００ｍｌ）及び酢酸エチル（２００ｍｌ）を加え、有機相を分離し、水（２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタンを溶出液として使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ジクロロメタン／水性メタノールからの再結晶化後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（２０３ｍｇ、４４％）を得た。
【化１５】
2013532664.tif 000017
紫色固体；ｍｐ：１７０℃；λｍａｘ（ＣＨ２Ｃｌ２）／ｎｍ  ４１４（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２０６３００）、５１４（１４５００）、５４３（１３６００）、５９３（６６００）、６４５（２４８００）；；δＨ（５００  ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）８．７３−８．７１（ｍ，２Ｈ，β−Ｈ）、８．５９（２ｓ，３Ｈ，β−Ｈ）、８．１３（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ，β−Ｈ）、７．８１−６．９５（ｍ、２０Ｈ，Ａｒ）、５．９８−５．８７（ｍ、２Ｈ，Ａｒ）、３．９７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．９５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．８７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、３．７３、３．７１（２ｓ，１Ｈ，β−ＯＨ）、３．６２、３．６０（２ｓ，１Ｈ，β−ＯＨ）、３．４４、３．４２（２ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）、−１．７０（ｓ、２Ｈ，ＮＨ）；  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）１１９３．３１２０（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ６４Ｈ４５Ｆ１２Ｎ４Ｏ６＋は１１９３．３１４２を要求する）．
４．２  ５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロ−メチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの調製
【００７１】
典型的実験において、アルゴン雰囲気下、乾燥ジクロロメタン（１５ｍｌ）中の５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−メトキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（５０ｍｇ、０．０４ミリモル）の溶液を−６０℃に冷却した。ジクロロメタン中、三臭化ホウ素溶液（１Ｍ、８００μｌ）を１０分以上かけて滴下により添加した。反応混合物を室温までゆっくりと温めて、１８時間攪拌した。次いで、水（２０ｍｌ）及び酢酸エチル（５０ｍｌ）を加え、並びに３０％水酸化ナトリウム溶液を中性になるまで加えた。有機相を分離し、水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、溶媒を除去した。残渣を、ジクロロメタン／メタノール９５：５を溶出液として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。更なる精製を、メタノール／水９５：５を溶出液として用いて、Ｃ１８逆相シリカゲルを有するカラムクロマトグラフィーによって達成した。ジクロロメタン／水性メタノールからの再結晶化の後に、標題化合物５，１０，１５，２０−テトラキス−（３−ヒドロキシフェニル）−７，８−ビス−〔３，５−ビス−（トリフルオロメチル）−フェニル〕−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンを得た（２７ｍｇ、５７％）。
【化１６】
2013532664.tif 000018
紫色固体；ｍｐ：２３５℃；λｍａｘ（（ＣＨ３）２ＣＯ）／ｎｍ  ４１２（ε／ｄｍ３  ｍｏｌ−１  ｃｍ−１  ２１３３００）、５１４（１８３００）、５４３（１７８００）、５９２（９０００）、６４４（２５０００）；δＦ（３７６  ＭＨｚ；（ＣＤ３）２ＣＯ）−６３．１４、−６３．１７（２ｓ，６Ｆ，２×ＣＦ３），−６３．２７，−６３．２８（２ｓ，６Ｆ，２×ＣＦ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）１１９３．３１２０（〔Ｍ＋Ｈ〕＋，Ｃ６４Ｈ４５Ｆ１２Ｎ４Ｏ６＋は１１９３．３１４２を要求する）．
実施例５
ＨＴ２９細胞系における選択された化合物の細胞試験
【００７２】
光感作活性が、ヒト結腸腺癌細胞系ＨＴ２９において判定された。このＨＴ２９細胞系は、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）、１％のペニシリン（１００００ＩＵ）及びストレプトマイシン（１００００μｇ／ｍｌ、ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）で補充されたＤＭＥＭ（ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）中で増殖させた。細胞を、加湿したインキュベーター（３７℃で大気中５％のＣＯ２）内で単層培養として維持した。
【００７３】
光感作物質原液（２ｍＭ）の生成をＤＭＳＯ中で行い、４℃で暗所に維持した。更なる希釈を、１０％のＦＣＳで補充された、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地中で行い、それぞれ２又は１０μＭの最終光感作物質濃度に到達させた。
【００７４】
２・１０５細胞／ｍｌをマイクロプレートに播種した（２．１０４細胞／ウェル）。細胞を、２又は１０μＭの光感作物質を伴い、１０％のＦＣＳを含有する新鮮な培地（フェノールレッドを含まないＰＲＭＩ）で、光曝露前に２４時間インキュベートした。光感作前に、細胞を洗浄し、フェノールレッドを含まず１０％のＦＣＳで補充されたＲＰＭＩでインキュベートし、次いで６５２ｎｍのダイオードレーザー（Ｃｅｒａｌａｓ  ＰＤＴ  ６５２、ｂｉｏｌｉｔｅｃ  ＡＧ）を使用して、１００ｍＷ／ｃｍ２（５０Ｊ／ｃｍ２）の固定フルエンス率で、室温で照射した。照射後に、細胞を加湿したインキュベーター（３７℃で大気中５％のＣＯ２）内で、細胞生存率アッセイまで２４時間インキュベートした。
【００７５】
細胞生存率を、ＸＴＴアッセイによって判定した。５００ｍｇのＸＴＴ（ナトリウム３’−〔フェニルアミノカルボニル）−３，４−テトラゾリン〕−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸、Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ  ＧｍｂＨ）を５００ｍｌのＰＢＳ緩衝液（Ｃａ＋及びＭｇ２＋を含有しない）中に溶解させて、滅菌濾過した。溶液を、使用するまで、−２０℃で暗所に保存した。ＰＭＳ（Ｎ−メチルジベンゾピラジンメチルスルフェート、Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ  ＧｍｂＨ）を含有する滅菌溶液が、ＸＴＴについての活性化試薬として必要とされた。０．３８３ｍｇのＰＭＳを１ｍｌのＰＢＳ緩衝液中に溶解した。この溶液は凍結されて保存されるべきであり、光に曝されるべきではない。このＸＴＴ試薬溶液を３７℃の温浴中で融解し、活性化溶液（ＰＭＳ）を使用直前に添加した。１つのマイクロプレート（９６ウェル）用に十分な反応溶液を調製するために、０．１ｍｌの活性化溶液（ＰＭＳ）を５ｍｌのＸＴＴ試薬に供給した。１つのウェル当り５０μｌのＸＴＴ反応溶液を添加する前に、マイクロプレート中の培地を、１０％ＦＣＳ（１００μｌ）で補充されフェノールレッドを含まない新鮮なＲＰＭＩで交換した。オレンジ色染料が形成されるまで、マイクロプレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で２〜３時間インキュベートした。ウェル内の染料を均一に分布させるために、マイクロプレートを穏やかに振盪した。４９０ｎｍの波長で、分光光度計（Ｂｉｏ−Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｒｅａｄｅｒ  ＥＬ３１２ｅ；Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用して、サンプルの吸光度を測定した。参照吸光度を測定するために（非特異的読取りを測定するために）、６３０〜６９０ｎｍの波長を用いた。
【００７６】
図９〜１１は、細胞毒性薬剤に対して及び同様にＰＤＴに対して非常に抵抗性であるとして知られているＨＴ２９細胞系に対する、選択された光感作物質の光力学的活性を図示する。
実施例６
ウサギ滑膜細胞及びマウスマクロファージ細胞系、ＨＩＧ８２及びＪ７７４Ａ．１における選択された化合物の細胞試験
【００７７】
マウスの単球由来膜ファージ細胞系Ｊ７７４Ａ．１及びウサギ滑膜細胞系ＨＩＧ−８２を、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）、１％のペニシリン（１００００ＩＵ）及びストレプトマイシン（１００００μｇ／ｍｌ、ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）で補充されたＤＭＥＭ（ｃｃ−ｐｒｏ  ＧｍｂＨ）中で増殖させた。細胞を、加湿したインキュベーター（３７℃で大気中５％のＣＯ２）内で単層培養として維持した。
【００７８】
光感作物質原液（２ｍＭ）の生成をＤＭＳＯ中で行い、４℃で暗所に維持した。更なる希釈を、１０％のＦＣＳで補充された、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地中で行い、それぞれ２又は１０μＭの最終光感作物質濃度に到達させた。
【００７９】
２・１０５細胞／ｍｌをマイクロプレートに播種した（２．１０４細胞／ウェル）。細胞を、２又は１０μＭの光感作物質を伴い、１０％のＦＣＳを含有する新鮮な培地（フェノールレッドを含まないＰＲＭＩ）で、光曝露前に２４時間インキュベートした。光感作前に、細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを補充されたフェノールレッドを含まないＲＰＭＩでインキュベートし、次いで６５２ｎｍのダイオードレーザー（Ｃｅｒａｌａｓ  ＰＤＴ  ６５２、ｂｉｏｌｉｔｅｃ  ＡＧ）により、１００ｍＷ／ｃｍ２（５０Ｊ／ｃｍ２）の固定フルエンス率で、室温で照射された。照射後に、細胞を加湿したインキュベーター（３７℃で大気中５％のＣＯ２）内で、細胞生存率アッセイまで２４時間インキュベートした。
【００８０】
細胞生存率を、ＸＴＴアッセイによって判定した。５００ｍｇのＸＴＴ（ナトリウム３’−〔フェニルアミノカルボニル）−３，４−テトラゾリン〕−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸、Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ  ＧｍｂＨ）を５００ｍｌのＰＢＳ緩衝液（Ｃａ＋及びＭｇ２＋を含有しない）中に溶解させて、滅菌濾過した。溶液を、使用するまで、−２０℃で暗所に保存した。ＰＭＳ（Ｎ−メチルジベンゾピラジンメチルスルフェート、Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ  ＧｍｂＨ）を含有する滅菌溶液が、ＸＴＴについての活性化試薬として必要とされた。０．３８３ｍｇのＰＭＳを１ｍｌのＰＢＳ緩衝液中に溶解した。この溶液は凍結されて保存されるべきであり、光に曝されるべきではない。このＸＴＴ試薬溶液を３７℃の温浴中で融解し、活性化溶液（ＰＭＳ）を使用直前に添加した。１つのマイクロプレート（９６ウェル）用に十分な反応溶液を調製するために、０．１ｍｌの活性化溶液（ＰＭＳ）を５ｍｌのＸＴＴ試薬に供給した。１つのウェル当り５０μｌのＸＴＴ反応溶液を添加する前に、マイクロプレート中の培地を、１０％ＦＣＳ（１００μｌ）で補充されフェノールレッドを含まない新鮮なＲＰＭＩで交換した。オレンジ色染料が形成されるまで、マイクロプレートを、３７℃及び５％ＣＯ２で２〜３時間インキュベートした。ウェル内の染料を均一に分布させるために、マイクロプレートを穏やかに振盪した。
【００８１】
４９０ｎｍの波長で、分光光度計（Ｂｉｏ−Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｒｅａｄｅｒ  ＥＬ３１２ｅ；Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用して、サンプルの吸光度を測定した。参照吸光度を測定するために（非特異的読取りを測定するために）、６３０〜６９０ｎｍの波長を用いた。
【００８２】
図１２〜１４は、関節炎及び同様な炎症性疾患の治療に特に関連する滑膜細胞及びマクロファージ細胞型に対する、選択された光感作物質の光力学的活性を図示する。
【００８３】
付属の実施例を参照して、本発明の好ましい実施形態が説明されてきたが、本発明は詳細な実施形態に限定されるものではないこと、並びに添付の特許請求の範囲で定義されるように、本発明の範囲から逸脱しない限りにおいて、様々な変更及び修正が当業者によってその中でもたらされ得ることが理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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