(57)【要約】  癌の治療における使用のための一般式(I)2013525403.tif 000031(式中、R1〜R17および------線は様々な意味を取る)の化合物。
2013525403.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式I
【化１】
2013525403.tif 000027
[式中、
それぞれのR1およびR2は、水素、ハロゲン、ORa、OCORa、およびOCOORaから独立に選択されるか、またはR1およびR2が一緒になって=Oであり;
それぞれのR3、R15、およびR16は、水素、ORa、OCORa、OCOORa、および=Oから独立に選択され、ただし、=O基が存在する場合、=Oが結合しているC原子の水素は存在せず;
それぞれのR4、R5、R6、R7、R11、R12、およびR14は、水素、ORa、OCORa、およびOCOORaから独立に選択され;
それぞれのR8、R9、およびR17は、水素、ORa、OCORa、OCOORa、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、および置換または非置換のC2〜C12アルキニルから独立に選択され;
R10は、水素、ORb、OCORa、OCOORa、および=Oから選択され、ただし、=O基が存在する場合、=Oが結合しているC原子の水素は存在せず;
R13は、水素、CORa、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、および置換または非置換のC2〜C12アルキニルから選択され;
それぞれのRaは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換の複素環式基から独立に選択され;
それぞれのRbは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、置換または非置換の複素環式基、および置換または非置換の糖から独立に選択され;
------線は、追加の結合、エポキシ基を表すか、または存在しない]
の化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体。
【請求項２】
R3、R5、R6、R14、およびR15が、水素、ORa、およびOCORaからそれぞれ独立に選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
R3、R5、R6、R14、およびR15が、水素である、請求項2に記載の化合物。
【請求項４】
R17が、置換または非置換のC1〜C6アルキルである、請求項1から3のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
R17が、メチルである、請求項4に記載の化合物。
【請求項６】
以下の式II
【化２】
2013525403.tif 000028
[式中、R1、R2、R4、R7、R8〜R13、R16、および------線は、請求項1において定義されたものである]
を有する、請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体。
【請求項７】
R1およびR2が、水素、ハロゲン、ORa、およびOCORaからそれぞれ独立に選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から6のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
R1およびR2が、水素およびハロゲンからそれぞれ独立に選択される、請求項7に記載の化合物。
【請求項９】
R4が、水素およびORaから選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から8のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
R4が、-OHである、請求項9に記載の化合物。
【請求項１１】
R7が、水素、ORa、およびOCORaから選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から10のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
R7が、水素である、請求項11に記載の化合物。
【請求項１３】
R8およびR9が、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、ORa、およびOCORaからそれぞれ独立に選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から12のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
R8およびR9が、置換または非置換のC1〜C6アルキルである、請求項13に記載の化合物。
【請求項１５】
R10が、ORb、OCORa、および=Oから選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択され、Rbが、水素、置換または非置換のC1〜C6アルキル、単糖、二糖、および三糖から選択され、ただし、R10が、=Oである場合、R10が結合しているC原子の水素は存在しない、請求項1から14のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
R10が、=OまたはORbであり、Rbが、メチルである、請求項15に記載の化合物。
【請求項１７】
R13が、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、およびCORaから選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から16のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８】
R13が、置換または非置換のメチル、置換または非置換のエチル、置換または非置換のプロピル、およびCOHから選択される、請求項17に記載の化合物。
【請求項１９】
R16が、水素、ORa、およびOCORaから選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から18のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
R16が、水素またはOHである、請求項19に記載の化合物。
【請求項２１】
------線が存在せず、R11およびR12が、水素、ORa、およびOCORaからそれぞれ独立に選択され、Raが、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルから選択される、請求項1から20のいずれかに記載の化合物。
【請求項２２】
------線が、追加の結合またはエポキシ基を表し、R11およびR12が、水素である、請求項1から20のいずれかに記載の化合物。
【請求項２３】
------線で示された場所に追加の結合が存在する、請求項22に記載の化合物。
【請求項２４】
------線で示された場所にエポキシ基が存在する、請求項22に記載の化合物。
【請求項２５】
以下の構造:
【化３】
2013525403.tif 000029
【化４】
2013525403.tif 000030
を有する、請求項1に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体。
【請求項２６】
請求項1から25のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２７】
医薬としての使用のための、請求項1から25のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体。
【請求項２８】
癌の治療における使用のための、請求項27に記載の化合物。
【請求項２９】
癌の治療のための医薬の調製における、請求項1から25のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体の使用。
【請求項３０】
癌に罹患した任意の哺乳類、特にヒトを治療する方法であって、治療有効量の請求項1から25のいずれかに記載の化合物を罹患個体に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗癌化合物、それらを含有する医薬組成物、および抗癌剤としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、従来技術において開示されたブファジエノライド化合物といくつかの構造的類似性を有する化合物に関する。ブファジエノライドの総説に関しては、Huimin Gao他、in Nat. Prod. Rep.、2011、28、953を参照されたい。
【０００３】
従来技術において報告されたブファジエノライド化合物は、Crassulaceae科、Hyacinthaceae科、Iridaceae科、Melianthaceae科、Ranunculaceae科、およびSantalaceaethe科の植物ならびにBufo属(ヒキガエル)、Photinus属(ホタル)、およびRhabdophis属(ヘビ)の動物などの陸生の天然源から当初は単離された、天然ステロイドである(Steyn他、Nat. Prod. Rep. 1998、15、397〜413; Krenn他、Phytochemistry、1998、48(1)、1〜29)。
【０００４】
これらのブファジエノライド化合物の中で、シリロシドおよび他のシラー化合物が、カイソウUrginea maritimaから単離され、毒性が高く、特に、心血管および中枢神経系に影響を及ぼすシリロシドは、痙攣および死を引き起こすことが開示されている(Verbiscar他、J. Agric. Food Chem.、1986、34、973〜979; Kopp他、Phytochemistry、1996、42(2)、513〜522)。Majinda他もUrginea sanguineaからブファジエノライド化合物を単離したが、この化合物によりその植物を薬用植物として使用するのは危険となる(Planta Med. 1997、63、188〜190)。
【０００５】
数種のブファジエノライド化合物の一連のライノウイルスに対する抗ウイルス活性および抗ヘルペス活性が、Kamano他(Chem. Pharm. Bull. 1988、36(1)、326〜332)およびTakechi他(Phytochemistry、1996、41(1)、125〜127)によって、それぞれ評価され、著者らは、化合物の多くがある阻害活性を示すことを発見した。
【０００６】
さらに、数種のブファジエノライド化合物の細胞毒性活性が、数人の著者によって評価された。特に、Jing他は、ブファリンが、白血病(HL-60、ML1、U937、およびK562細胞系)、類上皮癌(HeLa細胞系)、ヘパトーマ(PLC/PRF/5細胞系)、および類表皮癌(A431細胞系)のヒト癌細胞に対して強力な増殖阻害効果を有するが、このブファリンは、マウス白血病M1、メラノーマB16、およびリンパ系腫瘍P388細胞系ならびにラットヘパトーマAH66およびクロム親和性細胞PC12細胞系にはそれほど強力ではないことを報告した。著者らは、ブファリンが、ヒト白血病HL-60細胞系において典型的なアポトーシスを誘発するが、ヒト白血球においては誘発しないことも発見した(Jpn. J. Cancer Res. 1994、85(6)、645〜651)。
【０００７】
Kupchan他は、鼻咽頭(KB)細胞系のヒト癌に対する阻害活性を示す、Bersama abyssinicaから単離された数種のブファジエノライド化合物を開示した(Bioorg. Chem. 1971、1、13〜31; J. Org. Chem. 1971、36(18)、2611〜2616)。
【０００８】
Kamano他は、原発性肝癌PLC/PRF/5細胞系およびPLC/PRF/5のコルヒチン耐性細胞系に対する、中国の薬物Ch'an Su(Bufo gargarizansなどのヒキガエルの皮膚腺から得られた)から単離された、80種のブファジエノライドおよびカルデノリド化合物の細胞毒性活性を評価した。それらの中で、16種は、PLC/PRF/5細胞系に対する強力な細胞毒性(IC50<10-3μg/mL)を有することが示された(Bioorg. Med. Chem. 1998、6、1103〜1115; J. Med. Chem. 2002、45、5440〜5447)。追加のブファジエノライド化合物は、Nogawa他によって同じ供給源から単離され、鼻咽頭(KB)のヒト癌、ヒト白血病(HL-60)、マウス白血病(MH60)、膵腺癌(BXPC3)、乳腺癌(MCF7)、CNS神経膠芽腫(SF268)、肺NSC(NCIH460)、結腸癌(KM20L2)、および前立腺癌(DU145)細胞系に対して試験された(J. Nat. Prod. 2001、64、1148〜1152)。
【０００９】
Ye他は、新規なブファジエノライド化合物を微生物水酸化によってブファリンから調製した。それらの化合物は、ヒトヘパトーマBel-7402、ヒト胃癌BGC-823、ヒト子宮頚癌HeLa、およびヒト白血病HL-60細胞系に対して試験され、それらのいくつかがブファリンの細胞毒性に匹敵する強力な細胞毒性であることが示された(J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 2004、91、87〜98; J. Nat. Prod. 2005、68、626〜628)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】WO 01 /79256
【特許文献２】WO 2006/ 120472
【特許文献３】CA 2.418.458
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Huimin Gao他、in Nat. Prod. Rep.、2011、28、953
【非特許文献２】Steyn他、Nat. Prod. Rep. 1998、15、397〜413
【非特許文献３】Krenn他、Phytochemistry、1998、48(1)、1〜29
【非特許文献４】Verbiscar他、J. Agric. Food Chem.、1986、34、973〜979
【非特許文献５】Kopp他、Phytochemistry、1996、42(2)、513〜522
【非特許文献６】Planta Med. 1997、63、188〜190
【非特許文献７】Kamano他、Chem. Pharm. Bull. 1988、36(1)、326〜332
【非特許文献８】Takechi他、Phytochemistry、1996、41 (1)、125〜127
【非特許文献９】Jpn. J. Cancer Res. 1994、85(6)、645〜651
【非特許文献１０】Bioorg. Chem. 1971、1、13〜31
【非特許文献１１】J. Org. Chem. 1971、36(18)、2611〜2616
【非特許文献１２】Bioorg. Med. Chem. 1998、6、1103〜1115
【非特許文献１３】J. Med. Chem. 2002、45、5440〜5447
【非特許文献１４】J. Nat. Prod. 2001、64、1148〜1152
【非特許文献１５】J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 2004、91、87〜98
【非特許文献１６】J. Nat. Prod. 2005、68、626〜628
【非特許文献１７】Burger「Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed.」(Donald J. Abraham ed.、2001、Wiley)
【非特許文献１８】「Design and Applications of Prodrugs」(H. Bundgaard ed.、1985、Harwood Academic Publishers)
【非特許文献１９】Skehan他、J. Natl. Cancer Inst. 1990、82、1107〜1112
【非特許文献２０】Faircloth他、Methods in Cell Science、1988、11(4)、201〜205
【非特許文献２１】Mosmann他、Journal of Immunological Methods、1983、65(1〜2)、55〜63
【非特許文献２２】Boyd MR and Paull KD. Drug Dev. Res. 1995、34、91〜104
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
癌は、動物およびヒトにおける主要死因であるので、癌に罹っている患者に投与するのに活性があり安全である抗癌治療薬を得るために、いくつかの試みが今までに企てられ、今もなお企てられている。本発明によって解決される問題は、癌の治療において有用である化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
一態様において、本発明は、一般式I
【００１４】
【化１】
2013525403.tif 000003
【００１５】
[式中、
それぞれのR1およびR2は、水素、ハロゲン、ORa、OCORa、およびOCOORaから独立に選択されるか、またはR1およびR2が一緒になって=Oであり;
それぞれのR3、R15、およびR16は、水素、ORa、OCORa、OCOORa、および=Oから独立に選択され、ただし、=O基が存在する場合、=Oが結合しているC原子の水素は存在せず;
それぞれのR4、R5、R6、R7、R11、R12、およびR14は、水素、ORa、OCORa、およびOCOORaから独立に選択され;
それぞれのR8、R9、およびR17は、水素、ORa、OCORa、OCOORa、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、および置換または非置換のC2〜C12アルキニルから独立に選択され;
R10は、水素、ORb、OCORa、OCOORa、および=Oから選択され、ただし、=O基が存在する場合、=Oが結合しているC原子の水素は存在せず;
R13は、水素、CORa、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、および置換または非置換のC2〜C12アルキニルから選択され;
それぞれのRaは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換の複素環式基から独立に選択され;
それぞれのRbは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、置換または非置換の複素環式基、および置換または非置換の糖から独立に選択され;
------線は、追加の結合、エポキシ基を表すか、または存在しない]
の化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を対象とする。
【００１６】
別の態様において、本発明は、医薬として、特に癌を治療するための医薬としての使用のための、式Iの化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を対象とする。
【００１７】
別の態様において、本発明は、癌の治療における、または医薬の調製における、好ましくは癌の治療のための、式Iの化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体の使用も対象とする。本発明の他の態様は、治療の方法、およびこれらの方法における使用のための化合物である。したがって、本発明は、癌に罹患した任意の哺乳類、特にヒトを治療する方法であって、治療有効量の上記で定義した化合物を罹患個体に投与することを含む方法をさらに提供する。
【００１８】
さらに別の態様において、本発明は、抗癌剤としての使用のための、式Iの化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体も対象とする。
【００１９】
別の態様において、本発明は、式Iの化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を、薬学的に許容される担体または賦形剤と共に含む医薬組成物を対象とする。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、上記で定義した一般式Iの化合物に関する。
【００２１】
これらの化合物において、基は、以下の説明に従って選択することができる:
【００２２】
アルキル基は、分岐または非分岐であってもよく、好ましくは、1から約12個の炭素原子を有する。さらに好ましいアルキル基のクラスは、1から約6個の炭素原子を有する。1、2、3または4個の炭素原子を有するアルキル基が、さらにより好ましい。メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルは、本発明の化合物において、特に好ましいアルキル基である。本明細書では、アルキルという用語は、別段の言明がない限り、環式基または非環式基の両方を表すが、環式基は、少なくとも3個の炭素環員を含むことになる。
【００２３】
本発明の化合物における好ましいアルケニルおよびアルキニル基は、分岐または非分岐であってもよく、1つまたは複数の不飽和結合および2から約12個の炭素原子を有する。アルケニルおよびアルキニル基のさらに好ましい一クラスは、2から約6個の炭素原子を有する。2、3または4個の炭素原子を有するアルケニルおよびアルキニル基が、さらにより好ましい。アルケニルおよびアルキニルという用語は、本明細書では、環式基および非環式基の両方を表すが、環式基は、少なくとも3個の炭素環員を含むことになる。
【００２４】
本発明の化合物における適したアリール基は、分離したおよび/または縮合したアリール基を含有する複数の環の化合物を含めた、単一および複数の環の化合物を含む。典型的なアリール基は、1から3個の分離したまたは縮合した環および6から約18個の炭素環原子を含有する。好ましくは、アリール基は、6から約10個の炭素環原子を含有する。特に好ましいアリール基は、置換または非置換のフェニル、置換または非置換のナフチル、置換または非置換のビフェニル、置換または非置換のフェナントリルおよび置換または非置換のアントリルを含む。
【００２５】
適した複素環式基は、1から3個の分離したおよび/または縮合した環および5から約18個の環原子を含有する複素環式芳香族基および複素環式脂環式基を含む。好ましくは、複素環式芳香族基および複素環式脂環式基は、5から約10個の環原子を含有する。本発明の化合物における適した複素環式芳香族基は、N、OまたはS原子から選択される1、2または3個のヘテロ原子を含有し、例えば、8-クマリニルを含めたクマリニル、8-キノリルを含めたキノリル、イソキノリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、フリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ピリダジニル、トリアジニル、シンノリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニルおよびフロピリジルを含む。本発明の化合物における適した複素環式脂環式基は、N、OまたはS原子から選択される1、2または3個のヘテロ原子を含有し、例えば、ピロリジニル、テトラヒドロフリル、ジヒドロフリル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオキサニル、ピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、1,2,3,6-テトラヒドロピリジル、2-ピロリニル、3-ピロリニル、インドリニル、2H-ピラニル、4H-ピラニル、ジオキソラニル、ジオキサニル、1,3-ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、3-アザビシクロ[3.1.0]ヘキシル、3-アザビシクロ[4.1.0]ヘプチル、3H-インドリル、およびキノリジニルを含む。
【００２６】
糖という用語は、単糖、二糖、三糖、多糖、オリゴ糖、および糖類誘導体を含む。好ましくは、糖類は、ラムノース、グルコース、ジギトキソース、ジギタロース、ジギノース(gigginose)、サルメントース、バラロース、およびフルクトースから選択される。糖グリコシド、N-グリコシルアミン、O-アシル誘導体、O-メチル誘導体、糖アルコール、糖酸、デオキシ糖、および関連する基を含めた、それらの誘導体も、好ましい糖類である。
【００２７】
本発明の化合物における適したハロゲン基は、F、Cl、BrおよびIを含む。
【００２８】
上記の基は、1つまたは複数の利用可能な位置で、OR'、=O、SR'、SOR'、SO2R'、NO2、NHR'、N(R')2、=N-R'、NHCOR'、N(COR')2、NHSO2R'、NR'C(=NR')NR'R'、CN、ハロゲン、COR'、COOR'、OCOR'、OCONHR'、OCON(R')2、CONHR'、CON(R')2、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換の複素環式基(式中、R'基のそれぞれは、水素、OH、NO2、NH2、SH、CN、ハロゲン、COH、COアルキル、COOH、置換または非置換のC1〜C12アルキル、置換または非置換のC2〜C12アルケニル、置換または非置換のC2〜C12アルキニル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換の複素環式基から成る基から独立に選択される)などの1つまたは複数の適した基で置換されていてもよい。かかる基自体が、置換されている場合、置換基は、上記のリストから選択することができる。
【００２９】
「薬学的に許容される塩およびプロドラッグ」という用語は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和化合物、水和物、または患者に投与すると本明細書に記載の化合物を(直接的または間接的に)提供する能力がある任意の他の化合物を表す。しかしながら、薬学的に許容されない塩も、それらは薬学的に許容される塩の調製において有用であり得るので、本発明の範囲内であることが理解されよう。塩およびプロドラッグの調製は、当技術分野で知られている方法によって行うことができる。
【００３０】
例えば、本明細書で提供する化合物の薬学的に許容される塩は、慣習的な化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成する。一般に、かかる塩は、例えば、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基形を、水中または有機溶媒中または両方の混合物中で、化学量論的な量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製する。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルなどの非水媒質が、好ましい。酸付加塩の例は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸付加塩、ならびに例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩およびp-トルエンスルホン酸塩などの有機酸付加塩を含む。アルカリ付加塩の例は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびアンモニウム塩などの無機塩、ならびに例えば、エチレンジアミン塩、エタノールアミン塩、N,N-ジアルキレンエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩および塩基性アミノ酸塩などの有機アルカリ塩を含む。
【００３１】
本発明の化合物は、遊離化合物としてのまたは溶媒和化合物(例えば水和物)としての結晶形であってもよく、両方の形は、本発明の範囲内であることが意図されている。溶媒和の方法は、当技術分野内で一般に知られている。
【００３２】
式Iの化合物のプロドラッグである任意の化合物は、本発明の範囲内である。「プロドラッグ」という用語は、その最も広い意味で使用し、本発明の化合物にIn vivoで転換されるそれらの誘導体を包含する。プロドラッグの例は、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバミン酸塩、生加水分解性炭酸塩、生加水分解性ウレイド、および生加水分解性リン酸塩類似体などの生加水分解性部分を含む、式IまたはIIの化合物の誘導体および代謝産物を含むが、これらに限定されない。好ましくは、カルボキシル官能基を有する化合物のプロドラッグは、カルボン酸の低級アルキルエステルである。カルボン酸エステルは、分子上に存在するカルボン酸部分のいずれかをエステル化することによって好都合に形成される。プロドラッグは、Burger「Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed.」(Donald J. Abraham ed.、2001、Wiley)および「Design and Applications of Prodrugs」(H. Bundgaard ed.、1985、Harwood Academic Publishers)によって報告されているものなどのよく知られている方法を使用して、典型的に調製することができる。
【００３３】
本明細書で言及された任意の化合物は、かかる特定の化合物および所定の変性物または形態を意味することが意図されている。特に、本明細書で言及された化合物は、不斉中心を有することができ、したがって、種々の鏡像異性またはジアステレオマー形で存在することができる。したがって、本明細書で言及された任意の所定の化合物は、ラセミ化合物の任意の1つ、1つまたは複数のエナンチオマー形、1つまたは複数のジアステレオマー形、およびそれらの混合物を意味することが意図されている。同様に、二重結合についての立体異性または幾何異性も可能であり、したがって、いくつかの場合において、分子は、(E)-異性体または(Z)-異性体(トランス異性体およびシス異性体)として存在するであろう。分子が、数個の二重結合を含有する場合、それぞれの二重結合は、その分子の他の二重結合の立体異性と同じか、または異なるであろう、それ自体の立体異性を有することになる。さらに、本明細書で言及された化合物は、アトロプ異性体として存在することができる。本明細書で言及された化合物の鏡像異性体、ジアステレオマー、幾何異性体およびアトロプ異性体を含めた、すべての立体異性体およびそれらの混合物は、本発明の範囲内であるとみなされる。
【００３４】
さらに、本明細書で言及された任意の化合物は、同位体標識した形、すなわち1つまたは複数の同位体が濃縮された原子の存在下で異なる化合物で存在することができる。例えば、重水素または三重水素での少なくとも1個の水素原子の置換、または13Cもしくは14C濃縮炭素での少なくとも1個の炭素の置換、または15N濃縮窒素での少なくとも1個の窒素原子の置換を除いて、本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００３５】
より簡潔な説明を提供するために、本明細書で与えられたいくつかの量的表現は、「約」という用語で制限されない。「約」という用語が、明示的に使用されても使用されなくても、本明細書で与えられたすべての量は、実際の所定の値を表すものとし、それは、かかる所定の値に関する実験および/または測定状態による、同等値および近似値を含めた、当技術分野で通常の技能に基づいて合理的に推測されるであろうかかる所定の値の近似値を表すものともすることが理解されよう。
【００３６】
一般式Iの化合物において、それぞれのR1およびR2は、好ましくは、水素、ハロゲン、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R1およびR2は、水素およびハロゲンからそれぞれ独立に選択され、Clが最も好ましいハロゲンである。
【００３７】
特に好ましいR3、R5、R6、R14、およびR15は、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)からそれぞれ独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R3、R5、R6、R14、およびR15は、水素である。
【００３８】
R4は、好ましくは、水素およびORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R4はORaであり、Raは水素である。
【００３９】
R7は、好ましくは、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R7は水素である。
【００４０】
特に好ましいR8およびR9は、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)からそれぞれ独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R8およびR9は、それぞれ置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましく;メチルが、最も好ましい。
【００４１】
R10は、好ましくは、ORb、OCORa、および=O(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択され、Rbは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、および置換または非置換の糖から選択される)から選択され、ただし、R10が、=Oである場合、R10が結合しているC原子の水素は存在しない。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。特に好ましいRbは、水素、置換または非置換のC1〜C6アルキル、単糖、二糖、および三糖であり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、イソブチル、ラムノース、グルコース、ジギトキソース、ジギタロース、ジギノース、サルメントース、バラロース、およびフルクトースが、さらにより好ましい。より好ましくは、R10は、=OまたはORb(式中、Rbは、メチルである)である。
【００４２】
------線が存在しない、本発明の化合物の1つの好ましい態様において、特に好ましいR11およびR12は、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)からそれぞれ独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。
【００４３】
------線で示された場所において追加の結合またはエポキシ基が存在する、本発明の化合物の別の好ましい態様において、特に好ましいR11およびR12は、水素である。
【００４４】
R13は、好ましくは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、およびCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R13は、置換または非置換のC1〜C6アルキルおよびCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルである)である。さらにより好ましいR13は、置換または非置換のメチル、置換または非置換のエチル、置換または非置換のプロピル、およびCORa(式中、Raは水素である)である。メチル、エチル、およびプロピルの好ましい置換基は、OR'(式中、R'は、水素またはCOアルキルであり、水素が最も好ましいR'である)である。
【００４５】
R16は、好ましくは、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R16は、水素またはORa(式中、Raは、水素である)である。
【００４６】
特に好ましいR17は、置換または非置換のC1〜C12アルキルである。置換または非置換のC1〜C6アルキルが、より好ましく;メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。メチルが、最も好ましいR17である。
【００４７】
------線で示された場所における追加の結合またはエポキシ基の存在が、特に好ましい。
【００４８】
より詳細には、本発明は、一般式II
【００４９】
【化２】
2013525403.tif 000004
【００５０】
[式中、R1、R2、R4、R7、R8〜R13、R16および------線は、上記で与えられた同じ意味を有する]
の化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を提供する。
【００５１】
一般式IIの前記化合物の特に好ましい立体化学式は、以下である:
【００５２】
【化３】
2013525403.tif 000005
【００５３】
一般式IIの化合物において、それぞれのR1およびR2は、好ましくは、水素、ハロゲン、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R1およびR2は、水素およびハロゲンからそれぞれ独立に選択され、Clが最も好ましいハロゲンである。
【００５４】
R4は、好ましくは、水素およびORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R4はORaであり、Raは水素である。
【００５５】
R7は、好ましくは、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R7は水素である。
【００５６】
特に好ましいR8およびR9は、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)からそれぞれ独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R8およびR9は、それぞれ置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましく;メチルが、最も好ましい。
【００５７】
R10は、好ましくは、ORb、およびOCORa、および=O(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択され、Rbは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、および置換または非置換の糖から選択される)から選択され、ただし、R10が、=Oである場合、R10が結合しているC原子の水素は存在しない。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。特に好ましいRbは、水素、置換または非置換のC1〜C6アルキル、単糖、二糖、および三糖であり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、イソブチル、ラムノース、グルコース、ジギトキソース、ジギタロース、ジギノース、サルメントース、バラロース、およびフルクトースが、さらにより好ましい。より好ましくは、R10は、=OまたはORb(式中、Rbは、メチルである)である。
【００５８】
------線が存在しない、本発明の化合物の1つの好ましい態様において、特に好ましいR11およびR12は、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)からそれぞれ独立に選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。
【００５９】
------線で示された場所において追加の結合またはエポキシ基が存在する、本発明の化合物の別の好ましい態様において、特に好ましいR11およびR12は、水素である。
【００６０】
R13は、好ましくは、水素、置換または非置換のC1〜C12アルキル、およびCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R13は、置換または非置換のC1〜C6アルキルおよびCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルである)である。さらにより好ましいR13は、置換または非置換のメチル、置換または非置換のエチル、置換または非置換のプロピル、およびCORa(式中、Raは水素である)である。メチル、エチル、およびプロピルの好ましい置換基は、OR'(式中、R'は、水素またはCOアルキルであり、水素が最も好ましいR'である)である。
【００６１】
R16は、好ましくは、水素、ORa、およびOCORa(式中、Raは、水素および置換または非置換のC1〜C12アルキルから選択される)から選択される。特に好ましいRaは、水素および置換または非置換のC1〜C6アルキルであり;水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピルならびにn-ブチル、tert-ブチル、sec-ブチルおよびイソブチルを含めたブチルが、さらにより好ましい。より好ましくは、R16は、水素またはORa(式中、Raは、水素である)である。
【００６２】
------線で示された場所における追加の結合またはエポキシ基の存在が、特に好ましい。
【００６３】
本説明および定義において、本発明の化合物において存在する数個の置換基Raがある場合、それが、そうであると明示的に言明されない限り、それらは、所定の定義内でそれぞれ独立に異なっていてもよい、すなわちRaは、本発明の所定の化合物において必ずしも同じ基を同時に意味するのではないことが理解されよう。
【００６４】
前の段落において、置換基R1からR17および点線に関する好ましい態様を、定義した。これらの好ましい態様の異なる組合せも、本発明の化合物内で好ましいことも理解されよう。
【００６５】
特に好ましい本発明の化合物は、以下の化合物:
【００６６】
【化４】
2013525403.tif 000006
【００６７】
【化５】
2013525403.tif 000007
【００６８】
またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体である。Aegomycin A〜Hに関してここで示された立体化学式は、関連がある。
【００６９】
Aegomycin A〜Hは、Mycalidae科、Mycale属、Aegogropila亜属、Mycale (Aegogropila) crassissima種(Dendy、1905)の海綿動物から単離した。Mycale (Aegogropila) crassissima(Dendy、1905)の試料を、メキシコ国立自治大学海洋及び陸水学研究所に参照コードMFIA-399で寄託した。この海綿動物は、マフィア島（Mafia Island、07°39.558'S/39°55.043'E)において、5から31.4mにわたる深さで、スキューバダイビングを使用して、手で採取した。
【００７０】
海綿動物の説明は、以下である:調査した検体は、岩を薄く覆って生育していた。生きた検体の色は、茶色であったが、それらは、オレンジ色または黄土色としても報告されている。骨片補完物:主大骨片は、直線のサブチロスタイル(subtylostyle)であり、ほとんど知覚できないタイル(tyle)を有することが多く、通常、中央でわずかに曲がっていた。それらは、約270μmの平均長さ、約4.6μmの軸幅および約4.8μmのタイル幅を有した。微小骨片は、水かきのある異爪状体(3つのサイズ分類:平均で約36μmの異爪状体1、平均で約27μmの異爪状体2、および平均で約11μmの異爪状体3)、シグマ体(1つの分類:平均で約57μmのRobustシグマ体)、および束晶(非常にまれ)を含んだ。骨格の配置:サブチロスタイルの路(tracts)は、基板(basal plate)から外側へ上がり、わずかな房(tufts)またはブラシ(brushes)における表面で終わった。体外面は、よく発達したマイカロスタイル(mycalostyle)の束の網状組織を有しており、微小骨片は、体内(choanosome)および体外面の両方において、無作為にまき散らされていた。異爪状体は、ロゼット(rosettes)を形成しなかった。Mycale crassissimaは、マフィア島の採取した領域において、一般的であり、モンバサ（Mombassa）、ザンジバル（Zanzibar）、マダガスカル（Madagascar）、セイロン（Ceylon）、およびアラフラ海（Arafura Sea）においても、1から60mの深さの岩およびサンゴ礁上で発見されている。
【００７１】
さらに、本発明の化合物は、当業者に既に知られている、合成有機化学における通例の手順に従って、合成によって得ることもできる。例えば、本発明の化合物は、Steyn他、Nat. Prod. Rep. 1998、15、397〜413; Huimin Gao他、in Nat. Prod. Rep.、2011、28、953; WO01/79256; WO2006/120472; およびCA2,418,458などの文献において報告されている手順を適合させて、得ることができる。合成経路は、これらの参考文献の2つ以上から選んだステップの組合せを使用することもできる。
【００７２】
同様に、天然、合成または既に修飾された本発明の化合物を、様々な化学反応によってさらに修飾して、本発明の追加の化合物を得ることができる。したがって、ヒドロキシル基は、標準的なカップリングまたはアシル化手順によって、例えば、プリジン又はこれの類似物中の酢酸または無水酢酸を使用することによって、アシル化することができる。ギ酸基は、ギ酸中でヒドロキシル前駆体を加熱することによって得ることができる。ヒドロキシ基は、例えば、二酸化マンガンまたはクロムを使用することによって、オキソ(=O)に酸化することもできるか、または例えば、保護された2-ブロモエチルアミンを使用することによって、アミノ-低級アルコキシに転換することができる。カルボキシ基は、ジアゾメタンでの処理によって、アルキル化、例えば、メチル化することができる。グリコシド部分は、標準的な糖カップリング反応(sugar coupling reaction)によって、導入することができる。
【００７３】
上記の式IおよびIIの化合物の重要な特徴は、それらの生物活性および特にそれらの細胞毒性活性である。
【００７４】
本発明で、本発明者らは、細胞毒性活性を有する一般式IおよびIIの化合物の新規な医薬組成物および抗癌剤としてのそれらの使用を提供する。したがって、本発明は、薬学的に許容される担体を有する、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【００７５】
医薬組成物の例は、経口的、局所的または非経口的投与のための、任意の固体(錠剤、丸剤、カプセル剤、粒剤など)または液体(溶液、懸濁剤、またはエマルション)組成物を含む。
【００７６】
本発明の化合物または組成物の投与は、静脈内注入、経口調製物、ならびに腹腔内および静脈内投与などの、任意の適した方法によることができる。本発明者らは、最大24時間、より好ましくは1〜12時間の注入時間が使用されることを好み、1〜6時間が最も好ましい。病院での終夜の滞在なしに治療が行われることを可能にする短い注入時間が、特に望ましい。しかしながら、注入は、必要に応じて、12から24時間またはさらに長くてもよい。注入は、例えば1から4週間の適した間隔で行うことができる。本発明の化合物を含有する医薬組成物は、徐放製剤における、リポソームまたはナノ球体カプセル化によって、または他の標準的なデリバリー手段によって、デリバリーすることができる。
【００７７】
化合物の正確な投与量は、特定の製剤、適用様式、および治療する特定の位置、宿主および腫瘍に従って変わる。年齢、体重、性別、食事、投与の時間、排出の速度、宿主の状態、合剤、反応感度および疾患の重症度などの他の要因を、考慮すべきである。投与は、最大耐用量内で、連続的または定期的に行うことができる。
【００７８】
本明細書では、「治療する」、「治療すること」および「治療」という用語は、腫瘍または原発性、局所性、もしくは転移性の癌細胞または組織の根絶、除去、改変、または調節、および癌の転移の極小化または遅延を含む。
【００７９】
本発明の化合物は、肺癌、結腸癌、および乳癌を含むが、これらに限定されない、癌に対する活性を有する。
【実施例】
【００８０】
(試料採取:海洋生物および採取場所の説明)
Mycale(Aegogropila)crassissima(Dendy、1905)を、マフィア島(07°39.558'S/39°55.043'E)において5から31.4mにわたる深さで、スキューバダイビングを使用して手で採取した。動物性物質は、Dr. Jose Luis Carballo(メキシコ国立自治大学、Universidad Nacional Autonoma of Mexico)によって同定された。検体の試料を、（メキシコ国立自治大学海洋及び陸水学研究所、Institute of Marine Sciences and Limnology of the Universidad Nacional Autonoma of Mexicoに参照コードMFIA-399で寄託した。
【００８１】
(実施例1:AEGOMYCIN AおよびBの単離)
採取した、凍結した検体(67g)を粉砕し、23℃でH2OおよびMeOH:CH2Cl2(50:50)の混合物で抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させて500mgの粗生成物を得た。この物質をLichroprep RP-18においてH2OからMeOHおよびCH2Cl2の段階勾配でクロマトグラフィー(VLC)にかけた。このクロマトグラフィーによって得られた2つの画分を以下に記載したようにさらに精製した。H2O:MeOH 1:3で溶出した画分(23mg)を、半分取逆相HPLC(Symmetry Prep C18、7.8×150mm、10分間はMeCNが60から75%、次の10分間はMeCNが75から100%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速2.3mL/min)に供してAegomycin A(0.6mg)を得た。MeOHで溶出した画分(83mg)を半分取逆相HPLC(Symmetry Prep C18、7.8×150mm、30分間はMeCNが50から75%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速2.3mL/min)に供してAegomycin A(1.8mg)およびAegomycin B(0.8mg)を得た。
【００８２】
Aegomycin A:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 523.1622[M+H]+(C27H3335Cl2O6に関する計算値523.1649);CDCl3における、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表1を参照されたい。
【００８３】
Aegomycin B:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 525.1788[M+H]+(C27H3535Cl2O6に関する計算値525.1805);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表2を参照されたい。
【００８４】
【表１】
2013525403.tif 000008
【００８５】
【化６】
2013525403.tif 000009
【００８６】
【表２】
2013525403.tif 000010
【００８７】
【化７】
2013525403.tif 000011
【００８８】
(実施例2:AEGOMYCIN C、D、E、FおよびGの単離)
採取した検体の試料の第2群(160g)を粉砕し、23℃でH2OおよびMeOH:CH2Cl2(50:50)の混合物で抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させて3.12gの粗生成物を得た。この物質をLichroprep RP-18においてH2OからMeOHおよびCH2Cl2の段階勾配でクロマトグラフィー(VLC)  にかけた。このクロマトグラフィーによって得られた2つの画分を以下に記載したようにさらに精製した。H2O:MeOH 1:3で溶出した画分(122mg)を、半分取逆相HPLC(Symmetry Prep C18、7.8×150mm、30分間はMeCNが45から65%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速2.3mL/min)に供してAegomycin F(2.6mg)および他のAegomycin化合物(5.1mg)の混合物を得た。この混合物を半分取HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが45から65%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速2.3mL/min)によってさらに精製して、Aegomycin C(0.5mg)およびD(2.8mg)を得た。MeOHで溶出した画分(230mg)をヘキサン:EtOAcの勾配で溶出するフラッシュシリカゲルCCに供して11画分(S1からS11)を得た。画分S6(ヘキサン:EtOAc 70:30)およびS7(ヘキサン:EtOAc 60:40)を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが50から55%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.0mL/min)に供してS6からAegomycin E(1.3mg)およびS7からAegomycin G(0.3mg)を得た。
【００８９】
Aegomycin C:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 477.1581 [M+H]+(C26H3135Cl2O4に関する計算値477.1594);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表3を参照されたい。
【００９０】
Aegomycin D:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 509.1834 [M+H]+(C27H3535Cl2O5に関する計算値509.1856);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(125MHz)、表4を参照されたい。
【００９１】
Aegomycin E:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 493.1898 [M+H]+(C27H3535Cl2O4に関する計算値493.1907);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表5を参照されたい。
【００９２】
Aegomycin F:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 443.1997 [M+H]+(C26H3235ClO4に関する計算値443.1984);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表6を参照されたい。
【００９３】
Aegomycin G:非晶質白色固体。(+)HRMALDIMS m/z 459.2306 [M+H]+(C27H3635ClO4に関する計算値459.2297);CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表7を参照されたい。
【００９４】
【表３】
2013525403.tif 000012
【００９５】
【化８】
2013525403.tif 000013
【００９６】
【表４】
2013525403.tif 000014
【００９７】
【化９】
2013525403.tif 000015
【００９８】
【表５】
2013525403.tif 000016
【００９９】
【化１０】
2013525403.tif 000017
【０１００】
【表６】
2013525403.tif 000018
【０１０１】
【化１１】
2013525403.tif 000019
【０１０２】
【表７】
2013525403.tif 000020
【０１０３】
【化１２】
2013525403.tif 000021
【０１０４】
(実施例3:AEGOMYCIN D、FおよびHの単離)
採取した検体の試料の第3群(700g)を粉砕し、23℃でH2OおよびMeOH:CH2Cl2(50:50)の混合物で抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させて33gの粗生成物を得た。粗生成物をMeOH:H2O(1:9、500mL)に溶解し、ヘキサン(3×500mL)、EtOAc(3×500mL)およびnBuOH(2×500mL)で抽出した。
【０１０５】
ヘキサン画分(4g)をLichroprep RP-18においてH2O:MeOH(3:1)からMeOHへ、次いでCH2Cl2への段階勾配でクロマトグラフィー(VLC)にかけた。H2O:MeOH 1:3で溶出した画分(430mg)を半分取逆相HPLC(Symmetry Prep C18、19×150mm、30分間はMeCNが45から65%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速14.6mL/min)に供して7つの画分(H1からH7)を得た。画分H4を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが30から50%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.8mL/min)に供してAegomycin F(8.3mg)を得た。画分H5を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが45から60%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.8mL/min)に供してAegomycin D(20.4mg)を得た。
【０１０６】
EtOAc画分(1.2g)をLichroprep RP-18においてH2O:MeOH(3:1)からMeOHへ、次いでCH2Cl2への段階勾配でクロマトグラフィー(VLC)にかけた。H2O:MeOH 1:3で溶出した画分(162mg)を半分取逆相HPLC(Symmetry Prep C18、19×150mm、30分間はMeCNが45から65%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速14.6mL/min)に供して7つの画分(H1からH7)を得た。画分H2を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが30から55%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.8mL/min)に供してAegomycin H(1.4mg)を得た。画分H4を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、20分間はMeCNが30から50%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.8mL/min)に供してAegomycin F(12.2mg)を得た。画分H5を半分取逆相HPLC(X Terra Phenyl、10×150mm、30分間はMeCNが45から60%の勾配のH2O:MeCN、UV検出、流速3.8mL/min)に供してAegomycin D(21.7mg)を得た。
【０１０７】
Aegomycin H:非晶質白色固体。(+)ESIMS m/z 493 [M+H]+、CD3ODにおける、1H(500MHz)および13C NMR(75MHz)、表8を参照されたい。
【０１０８】
【表８】
2013525403.tif 000022
【０１０９】
【化１３】
2013525403.tif 000023
【０１１０】
(評価例:抗腫瘍活性の検出のためのバイオアッセイ)
本アッセイの目的は、試験する試料のin vitroの細胞分裂停止(腫瘍細胞増殖を遅延または停止させる能力)または細胞毒性(腫瘍細胞を死滅させる能力)活性を評価することである。
【０１１１】
【表９】
2013525403.tif 000024
【０１１２】
SBR比色分析アッセイを使用した細胞毒性活性の評価
スルホローダミンB(SRB)反応を使用した比色分析アッセイを、細胞増殖および生存率の定量的測定をもたらすように適用した(Skehan他、J. Natl. Cancer Inst. 1990、82、1107〜1112に記載の技法に従う)。
【０１１３】
アッセイのこのタイプは、SBS標準96ウェル細胞培養マイクロプレートを用いる(Faircloth他、Methods in Cell Science、1988、11(4)、201〜205;Mosmann他、Journal of Immunological Methods、1983、65(1〜2)、55〜63)。本試験において使用するすべての細胞系は、American Type Cultur Collection(ATCC)から入手し、種々のタイプのヒト癌由来である。
【０１１４】
細胞を5%CO2および98%湿度で、10%ウシ胎児血清(FBS)、2mM L-グルタミン、100U/mLのペニシリンおよび100U/mLのストレプトマイシンを補充したダルベッコ改変イーグル培地(Dulbecco’s Modified Eagle Medium、DMEM)中、37℃で維持した。実験のために、トリプシン処理を使用して細胞をサブコンフルエントな培養物から採取し、新鮮な培地に再懸濁した後、計数し、蒔いた。
【０１１５】
細胞を96ウェルマイクロタイタープレートにおいて1ウェルあたり150μLのアリコート中に細胞5×103個で播種し、薬物のない培地中で18時間(終夜)、プレート表面に付着させておいた。その後、それぞれの細胞系の1つの対照(処理されていない)プレートをフィックスし(以下に記載するように)、時間0の参照値のために使用した。次いで、培養プレートを10の段階希釈(10から0.00262μg/mLにわたる濃度)および３つの培養物(DMSOの1%最終濃度)を使用して、試験化合物(4%DMSOを加えた完全培地中の4×原液の50μLのアリコート)で処理した。72時間の処理後、抗腫瘍活性を、SRB手法を使用することによって測定した。簡潔に述べると、細胞をPBSで2回洗浄し、1%グルタルアルデヒド溶液中、室温で15分間保持し、PBS中で2回すすぎ、0.4%SRB溶液中で室温で30分間染色した。次いで、細胞を、1%酢酸溶液で数回すすぎ、室温で風乾した。次いで、SRBを10mMトリス塩基溶液中で抽出し、吸光度を自動分光光度プレートリーダー(automated spectrophotometric plate reader)において490nmで測定した。細胞増殖および生存に及ぼす効果は、NCIアルゴリズム(Boyd MR and Paull KD. Drug Dev. Res. 1995、34、91〜104)を適用することによって推定した。
【０１１６】
３つの培養物の平均値±SDを使用して、用量反応曲線を、非線形回帰分析を使用して自動的に作成した。3つの参照パラメーターを、自動内挿法によって計算した(NCIアルゴリズム):GI50=対照培養物と比較して、50%細胞増殖阻害を生じる化合物濃度;TGI=対照培養物と比較して、総細胞増殖阻害(細胞分裂停止効果)、およびLC50=50%正味細胞死滅(細胞毒性効果)を生じる化合物濃度。
【０１１７】
表10および表11は、本発明の化合物の生物活性に関するデータを例示する。
【０１１８】
【表１０】
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【０１１９】
【表１１】
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【国際調査報告】
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