(57)【要約】  本発明は、婦人科疾患、特に外陰腟感染症の局所治療用の、ラタニア抽出物、遊離型およびリン脂質との複合体での８β−グリシルレチン酸、ならびにカホクサンショウ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）抽出物の組合せに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ラタニア抽出物、
ｂ）遊離またはリン脂質との複合体の形態での１８β−グリシルレチン酸、および
ｃ）カホクサンショウ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）抽出物
を含む組成物。
【請求項２】
単位用量当たり
ａ）ラタニア抽出物：０．０１〜１％、
ｂ）遊離またはリン脂質との複合体の形態での１８β−グリシルレチン酸：０．０１〜１％、および
ｃ）カホクサンショウ抽出物：０．０１〜１％
の範囲で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
油／水型乳剤、ソフトゼラチンカプセル剤、腟坐剤もしくは同等の製剤、クリーム剤、軟膏剤またはローション剤の形態での請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
腟疾患の治療用の局所製剤の調製のための、
ａ）ラタニア抽出物、
ｂ）遊離またはリン脂質との複合体の形態での１８β−グリシルレチン酸、および
ｃ）カホクサンショウ抽出物
の使用。
【請求項５】
前記腟疾患が腟症および腟炎である、請求項４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の概要
本発明は、婦人科疾患、特に外陰腟感染症の局所治療用の、ラタニア抽出物、遊離型またはリン脂質との複合体での１８β−グリシルレチン酸、およびカホクサンショウ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）抽出物の組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
序文
細菌性腟症とは、腟感染症の最もよくある形態の１つである。これは、腟内細菌叢およびそのｐＨの変化に起因し、正常な非病原菌叢(ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃ  ｆｌｏｒａ)、特に乳酸桿菌(デーデルライン桿菌)の減少、ならびにＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓおよび嫌気性細菌(Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ＢａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓおよびＥｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ)のような片利共生菌の異常な成長を引き起こす。
【０００３】
細菌性腟症は、性行為の活発な女性および妊娠中の女性が罹患することが他の人より多く、クリーム状または泡沫状でやや白色の分泌物が現れ、この分泌物は、細菌代謝に由来するアミンが存在することと、腟のｐＨが高くなり、弱酸性ではなく、値が変化して４．５を超えることに起因する悪臭(腐魚臭が典型的である)がある。顕微鏡検査では、典型的な「クルー細胞」、すなわち細菌に包囲された細胞が認められる。
【０００４】
不快な症状が起こらない場合でも、細菌性腟症には、婦人科の問題(化膿性の子宮頚管炎、子宮内膜炎、骨盤炎症性疾病および不妊)および心理的な問題(悪臭が原因での性生活への影響)がつきまとうことがある。
【０００５】
さらに産科学の点では、腟症は、流産を引き起こしたり、羊膜繊毛膜感染症が原因での早産および分娩後の子宮内膜炎のリスクを高めたりする可能性がある。
【０００６】
腟炎は急性または慢性の腟の炎症であり、炎症が外陰にも広がれば、外陰腟炎と呼ばれる。主な症状は、多少なりとも強い場合があり、主に刺激性のもの、すなわち刺痛、外陰または腟の掻痒、液状または半流動状の分泌物である。
【０００７】
病原因子は、様々な種の微生物で構成され、最も一般的なものはカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）(カンジダ症)のような真菌、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ(腟症)のようなグラム(−)菌、ならびにＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ(トリコモナス症)のような原生生物である。他の感染因子には、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｏｌｉ、およびｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘがある。
【０００８】
腟炎はきわめて一般的な状態である。すなわち、１００人中７５人の女性が、真菌感染に起因する外陰腟炎に少なくとも１回は罹患していると推定される。
【０００９】
腟炎のよくある原因は、日和見感染の発症に至る非病原菌の腟内細菌叢の疲弊(たとえば抗生物質治療後)である。
【００１０】
細菌性腟症および腟炎の治療は、通常、抗生物質、腟内細菌叢のバランスを回復する薬剤、またはこの２つの組合せでの治療に基づいたものである。
【００１１】
抗生物質での治療(通常、局所用クリンダマイシン、または局所用もしくは全身用メトロニダゾール)は、主に、妊娠中の女性、症状のある患者および手術を受ける予定の女性に推奨される。抗生物質の効果は迅速であるが、これを使用すると腟内細菌叢の増殖が低減されることによってそのバランスが悪化し、頻繁に再燃する恐れがあるためである。
【００１２】
プロバイオティクス剤(Probiotic agents)は腟内細菌叢のバランスを回復し、乳酸桿菌の増殖を刺激し、したがって、病原細菌の成長を抑制する。乳酸桿菌系の製剤、および腟のｐＨに対して酸性化効果のある化合物で、通常乳酸またはビタミンＣ系のものが、この目的で使用される。しかし、これらの薬剤を使用しても問題の解決にはならない。第１に、腟のｐＨの変化は、乳酸桿菌の生存を阻害するような塩基性レベルに到達することがあるためであり、第２に、酸性化剤の効果は通常持続しないためである。
【００１３】
残念ながら、腟症および腟炎のケースにおいて、抗生物質治療が常に効果的であるというわけではない。抗生物質の使用がますます普及し、時には無節操に使用されることによって、これらの薬物に攻撃された細菌が経時で耐性を発現するに至ったためである。
【００１４】
細菌は、
ａ）抗生物質の作用標的の変異
ｂ）不活性化酵素（β−ラクタマーゼなど）の生成
ｃ）細菌の細胞の外膜の不浸透化
ｄ）薬剤がその抗菌作用を発揮できてしまわないうちにもう、細菌の細胞から抗生物質を排出する、活性流出系
など様々な機序を配備して、抗生物質に対して非感受性になり得る。
【００１５】
抗生物質に対する様々な細菌種の耐性は、容赦なく年々増加する傾向にあり、抗菌活性のある新たな分子の研究は、近年ほとんどなされていない。
【００１６】
したがって、研究は、他のすべての抗生物質とは異なる作用機序を伴い、病原微生物と闘うのに有用であり得る物質に焦点を当てている。
【００１７】
科学文献では常に、医療において植物の誘導体が果たす役割に関心が寄せられている。
【００１８】
ブラインドスクリーニングを基に、ラタニア（ｒｈａｔａｎｙ）(Ｋｒａｍｅｒｉａ  ｔｒｉａｎｄａ  Ｒｕｉｚ)が特に興味深い役割を有することが最近わかった。ラタニアの根およびその由来物は、古代から、ペルーの住民によって口腔の炎症および損傷を治療するために使用されてきた。この植物を薬用として使用することは、約２世紀前にヨーロッパに首尾よく伝えられた。
【００１９】
現在、この植物は様々な薬局方に載り、その使用が、口腔、咽頭、扁桃および皮膚を冒す炎症性および感染性の疾患の治療において推奨されている。
【００２０】
ラタニアの親油性抽出物が抗菌および抗真菌の役割を果たすのは、ベンゾフラン構造をもつ特定のネオリグナンおよびノル−ネオリグナンが存在するためであり、これはラタニアの親油性抽出物には標準的で、多くの微生物、特にグラム陽性菌および真菌の増殖を効果的に抑制する。
【００２１】
１８β−グリシルレチン酸は五員環トリテルペンであり、抽出および加水分解によってカンゾウ根(Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ)から得られ、著しい抗炎症活性を有する。
【００２２】
１８β−グリシルレチン酸とリン脂質との複合体は、ＥＰ０２８３７１３（特許文献１）に記載されており、本願では、この複合体を「Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ(登録商標)」という用語で示す。グリシルレチン酸のＰｈｙｔｏｓｏｍｅ(登録商標)は、局所的に投与すると、有用な抗炎症薬としても作用し、クロトン油の接種によって誘発された実験動物の足の浮腫を、一般的な非ステロイド性抗炎症薬(インドメタシンなど)を超える有効性(約９０％)で抑制する。
【００２３】
その活性は、コルチゾールを活性型から不活性型へ変換する、組織の１１−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ(１１−β−ＨＳＤ)の抑制に関連していると考えられる。すなわち、この酵素の相互作用によって、グリシルレチン酸が、炎症性刺激の後に組織部位に放出されるコルチゾールの正常な抗炎症活性を長引かせる。したがって、１８β−グリシルレチン酸Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ(登録商標)は天然の有効な局所抗炎症薬と考えられ得る。その活性は、モル濃度が等しいとき、デキサメタゾンおよびヒドロコルチゾンが示す活性の２５％に相当する。
【００２４】
Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ果皮抽出物は抗炎症活性および鎮痛活性を有し、経皮的に適用すると、掻痒を治療するために使用することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２５】
【特許文献１】欧州特許第０２８３７１３号明細書
【特許文献２】欧州特許第１０９６９４４号明細書
【発明を実施するための形態】
【００２６】
発明の説明
本発明は、婦人科疾患、特に腟症および腟炎の治療用の、
ａ）ラタニア抽出物、
ｂ）遊離またはリン脂質との複合体の形態での１８β−グリシルレチン酸、および
ｃ）カホクサンショウ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）抽出物
を含有する組成物に関する。
【００２７】
本発明による組成物は、抗炎症作用に加えて、グラム陽性(メチシリン耐性を含む)微生物、グラム陰性微生物およびＣａｎｄｉｄａに対して広域スペクトル抗菌作用を発揮し、したがって、腟症および腟炎のような婦人科疾患の治療において有用な手立てを提供することがわかっている。本発明による組成物によって実現される抗真菌および抗菌活性は特に重要である。婦人科の真菌感染症の主な原因であるカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）は、周知の通り、現在使用されているすべての抗生物質に耐性があり、一方で、メチシリン耐性のブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）は、臨床診療で使用される大多数の抗生物質に非感受性であるためである。本発明による組成物の驚くべき活性は、これらの微生物に対する活性成分間の相乗作用によるものであり、したがって、腟症および腟炎の局所治療における有効な手立てを医師に提供し、これらの感染症の最も多い原因である病原体を根絶することが可能となる。Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ抽出物は、掻痒および／または痛みを除去するのを助けることがわかっている。
【００２８】
本発明によれば、組成物は次の区間内で活性成分を含有する。
【００２９】
ａ）ラタニア抽出物：０．０１〜１％、および
ｂ）遊離またはリン脂質との複合体の形態での１８β−グリシルレチン酸：０．０１〜１％、および
ｃ）カホクサンショウ（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）抽出物：０．０１〜１％。
【００３０】
本発明の好ましい態様によれば、カホクサンショウ抽出物は、ＥＰ１０９６９４４（特許文献２）に記載されている通りに調製される。
【実施例】
【００３１】
本発明による組成物に関する薬理学的な実験を以下に記載する。
【００３２】
実験の項
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性
材料および方法
様々な感染症の患者の腟から分離した２３の微生物菌株を検査した
菌株は以下の通りであった
−膣ガルドネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）(腟から分離した１０菌株)
−カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）(腟から分離した５菌株)
−メチシリン耐性の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）(腟から分離した５菌株)
−膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）(腟から分離した４菌株)。
【００３３】
すべての微生物菌株を特定の培地で、すなわち、
−ブルセラブロスでＧ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを
−マンニトール塩寒天でｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉを
−サブロー寒天培地でＣａｎｄｉｄａ菌株を
−ダイアモンドでＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ菌株を
再分離した。
【００３４】
播種後、３７℃で２４時間、すべての培地を恒温器中に放置してインキュベートした。ただしサブロー寒天培地は３５℃で４８時間インキュベートした。
【００３５】
試験を実施する前に、試験される物質を、以下の通り溶液中に入れた。
−ＤＭＳＯ中のラタニア、１５％乾燥抽出物、
−９５％エチルアルコール中の１８β−グリシルレチン酸、
−ＤＭＳＯ中のカホクサンショウ抽出物。
【００３６】
本発明による組成物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗微生物活性を、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定することによって評価し、次いで、個々の構成要素のＭＩＣと比較した。
【００３７】
メチシリン耐性のＳ．ａｕｒｅｕｓ菌株のＭＩＣを、ＣＬＳＩ文書Ｍ７−Ａ５に記載のある方法によって、培養ブロス中で微量希釈の技術を使用して決定した。ミューラーヒントンブロス中での物質の２倍段階希釈を実施し、１３３３〜０．６５ｍｃｇ／ｍｌの間の濃度を得た。接種材料を５０．０００ＣＦＵ／ｍｌで表した。ＭＩＣを、培養ブロスに濁りがないことを基本とし、裸眼で視認できる細菌繁殖の阻止が可能な最も低い物質の濃度と定義した。
【００３８】
膣ガルドネレラ菌株のＭＩＣを決定するために用いた方法は、ＣＬＳＩ文書Ｍ１１−Ａ４に記載されている(液体希釈法)。このケースで感受性試験に使用した培地は、２．５％のウマ溶血血液を伴い、１０％のビタミン複合体を添加したブルセラブロスとした。接種材料(inoculum)の後、ウェルのあるプレートを３７℃で１８／２４時間、ＣＯ２中でインキュベートした。
【００３９】
Ｃａｎｄｉｄａ菌株のＭＩＣを、ＣＬＳＩ文書Ｍ２７−Ａに記載されている方法（液体微量希釈法(microdilution in broth method)）に従って決定した。物質を希釈するために使用した培地は、２％グルコースを加え、０．１６５ＭのＭＯＰＳ（モルホリンプロパンスルホン酸）でｐＨ７まで緩衝したＲＰＭＩ１６４０ブロスとした。接種材料は、サブロー寒天培地で培養した菌株から滅菌食塩水中で調製した。
【００４０】
最終接種材料は２５００ＣＦＵ／ｍｌとした。接種後、プレートを３５℃で２４〜４８時間インキュベートした。ここでもＭＩＣを、成長の抑制が可視的に可能な最も低い物質の濃度と定義した。
【００４１】
膣トリコモナス菌株については、各ウェルに接種材料の２００００の原生生物を入れた９６ウェルプレートにおいて、ダイアモンド培地で、３連でＭＩＣを決定した。試験対象の種々の物質を加え、濃度５００ｍｃｇ／ｍｌで開始し、次いで２倍段階希釈を行った。
【００４２】
９６ウェルプレートを放置して終夜３７℃でインキュベートし、光学顕微鏡下で観察して菌の生存能力を評価し、生体染色の使用による確認も行った。
【００４３】
膣トリコモナス菌株についてのＭＩＣを、存在するこの原生生物が、光学顕微鏡下で運動性を欠いたように見えた最も高い個々の物質の希釈値と定義した。
【００４４】
組合せの結果は発育阻止濃度比（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＩＣ）およびＦＩＣ指数に基づいて評価した。
【００４５】
ＦＩＣは、組合せのＭＩＣと単独で使用された物質のＭＩＣとの比を表し、一方、ＦＩＣ指数は、２つの物質間の相互作用を明らかにするもので、個々の物質のＦＩＣの合計である。
【００４６】
ＦＩＣおよびＦＩＣ指数を以下のように計算した。
【００４７】
【数１】
2013526553.tif 000002
【００４８】
ＦＩＣ指数＝物質ＡのＦＩＣ＋物質ＢのＦＩＣ＋物質ＣのＦＩＣ。
【００４９】
２つの物質の組合せは、ＦＩＣ指数が０．５以下の場合は相乗であり、０．５を超え、２未満である場合は不関であり、指数値が２を超える場合は拮抗であると考えられる。
【００５０】
結果
表に記載した試験結果は、組成物の成分の驚くべき相乗活性を示す。組合せが驚くべき活性を呈し、ラタニア抽出物の活性を超え、他の成分が実質上不活性であるため、カンジダ・アルビカンス菌株に関する結果は特に重要である。
【００５１】
腟感染症の原因となる菌株に対して、ラタニアおよび１８β−グリシレティック酸（ｇｌｙｃｙｒｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性に鑑みると、カホクサンショウ抽出物は実質上不活性であり、これらの物質の局所使用を考慮すれば、感染部位ではＭＩＣをはるかに超える濃度に到達し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでこれらの物質に対して感受性がある、または適度に感受性があると見られる病原体を根絶する優れた能力を発揮する可能性があるだろう。
【００５２】
表−本発明による組成物の抗微生物活性。ｍｃｇ／ｍｌで表されたＭＩＣ。
【００５３】
【表１−１】
2013526553.tif 000003
【００５４】
【表１−２】
2013526553.tif 000004
【００５５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ活性
材料および方法
製剤例２に記載したクリームを、腟ｐＨ＞６．５の２２人の女性(年齢幅２５〜５０歳)に、インフォームドコンセントを得てから、１日１回、２週間、使い捨てディスペンサーで塗布した
ベースラインと治療終了時に、機器による次のような評価を実施した。すなわち、ｐＨおよび腟の湿度の測定、ならびに細菌および真菌の数を決定するための腟スワブである。女性らには通常の性習慣を伴う普通の生活をするように求めたが、スワブの前２日間は性交を避けてもらった。
【００５６】
結果
１７人の女性が試験を終了し、次のような結果を得た
ｐＨが平均値７．８９から値５．０１へと顕著に下がり（ｐ＜０．０１）、これは生理学的な腟の状態が調整されたことを示している
細菌数が、３．５２×１０７から治療後には９．９５×１０６に顕著に減少した(−７２％)。真菌数も１．４８×１０４から１．０１×１０４へと、顕著に３２％減少した。
【００５７】
４７％の女性から以前の腟の乾燥の状態が改善したと報告があり、３８％の女性から以前の刺すような／ずきずきする痛みの感覚が減少したと報告があった。
【００５８】
本発明による製剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．、ＵＳＡに記載されているものなど、周知の従来の方法によって、好適な賦形剤と一緒に調製することができる。
【００５９】
本発明による組成物は、生殖器粘膜の治療用には、水／油型乳剤および他の適合性の賦形剤の中に処方して差し支えないであろう。化合物は、体内の治療用には、腟道内に挿入後容易に崩壊する腟坐剤として処方されるであろう。
【００６０】
本発明による製剤の例には、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、腟坐剤または同等の製剤、たとえば体内温度で溶解するカプセル剤などが含まれる。
【００６１】
本発明による製剤の例をいくつか以下に挙げる。
【００６２】
【表２】
2013526553.tif 000005
【００６３】
【表３】
2013526553.tif 000006
【００６４】
【表４】
2013526553.tif 000007
【国際調査報告】
2013526553.tif 000008
2013526553.tif 000009
2013526553.tif 000010
2013526553.tif 000011