(57)【要約】本発明は、ａ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体と、ｂ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体と、ｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。種々の実施形態及び変形が提供される。  本発明は、胃腸管の機能的病因の疾患又は状態を治療する方法であって、ａ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体と、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体と、ｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。種々の実施形態及び変形が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体と、ｂ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体と、ｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体とを含むことを特徴とする組み合わせ医薬組成物。
【請求項２】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、及びＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を浸透させた固体担体を更に含む請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項３】
錠剤の形態である請求項２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項４】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項５】
Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が、固体担体に浸透された請求項４に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項６】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項７】
Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が、固体担体に浸透された請求項６に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項８】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項９】
Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が、固体担体に浸透された請求項８に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１０】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１１】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体が、ポリクローナル抗体である請求項１０に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１２】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１３】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、ポリクローナル抗体である請求項１２に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１４】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１５】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、ポリクローナル抗体である請求項１４に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１６】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、配列番号１を有するＴＮＦ−アルファの分子全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１７】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２からなる群から選択される配列を有するＴＮＦ−アルファの断片に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１８】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、ウシＳ−１００タンパク質に対する抗体である請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項１９】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、配列番号１３を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項２０】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、配列番号１６を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項２１】
活性化増強型の抗体が、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することにより調製される請求項１に記載の組み合わせ医薬組成物。
【請求項２２】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態を治療する方法であって、ａ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及びｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に、実質的に同時に投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２３】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及びＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、組み合わせ医薬組成物の形態で投与される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、本質的に（ｉｎ  ｎａｔｕｒｅ）心身性である請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、過敏性腸症候群である請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、腹痛である請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、下痢である請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、便秘である請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、胃腸管の運動排泄機能の歪みである請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
組み合わせ医薬組成物が、薬学的に許容される担体、並びに前記担体に浸透させたヒスタミンに対する活性化増強型抗体、前記担体に浸透させたＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及び前記担体に浸透させたＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を含む固体経口剤形の形態で投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
固体経口剤形が、錠剤である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
担体が、ラクトース又はイソマルトである請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
組み合わせ医薬組成物が１つから２つの単位剤形で投与され、各剤形が１日１回から１日４回投与される請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
組み合わせ医薬組成物が１日２回投与され、各投与が２つの経口剤形からなる請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
組み合わせ医薬組成物が１つから２つの単位剤形で投与され、各剤形が１日２回投与される請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項２３又は３０に記載の方法。
【請求項３７】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項２３又は３０に記載の方法。
【請求項３８】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態である請求項２３又は３０に記載の方法。
【請求項３９】
活性化増強型の抗体のそれぞれが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体及び天然の抗体からなる群から選択される請求項２３又は３０に記載の方法。
【請求項４０】
活性化増強型の抗体のそれぞれが、ポリクローナル抗体である請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、配列番号１を有するＴＮＦ−アルファの分子全体に対するものである請求項２３に記載の方法。
【請求項４２】
ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２からなる群から選択される配列を有するＴＮＦ−アルファの断片に対するものである請求項２３に記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、雄ウシの脳のタンパク質Ｓ−１００に対するものである請求項２３に記載の方法。
【請求項４４】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、配列番号１３を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項２３に記載の方法。
【請求項４５】
タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体が、配列番号１６を有するＳ−１００タンパク質全体に対するものである請求項２４に記載の方法。
【請求項４６】
活性化増強型の抗体のそれぞれが、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製される請求項２４に記載の方法。
【請求項４７】
投与が、患者の代表的な集団におけるＨＡＤＳスコアの統計的に有意な低下を伴う請求項２３、２４、２５、２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項４８】
組み合わせ医薬組成物を、胃腸管の障害又は状態の治療に適した追加的な活性成分と同時投与することを更に含む請求項２３に記載の方法。
【請求項４９】
追加的な活性成分が、過敏性腸症候群の治療について認可されている請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
追加的な活性成分が、５−ＨＴ３アンタゴニスト、５−ＨＴ４アンタゴニスト、混合５−ＨＴ４アゴニスト／５−ＨＴ３アンタゴニスト、オピオイド薬、ＣＲＨ受容体アンタゴニスト、クロライドチャネルアクチベーター、ＣＣＫアンタゴニスト、ニューロキニンアンタゴニスト、抗うつ薬、鎮痙薬、抗コリン作用薬／抗ムスカリン薬、直接平滑筋弛緩剤、止痢薬、ベンゾジアゼピン系薬、プロトンポンプ阻害薬、及び抗生物質からなる群から選択される請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
過敏性腸症候群が、主に腹痛及び鼓腸を特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項５２】
過敏性腸症候群が、主に下痢を特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項５３】
過敏性腸症候群が、主に便秘を特徴とする請求項２６に記載の方法。
【請求項５４】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態に罹患している患者の治療において使用するための医薬組成物であって、それぞれ、ホメオパシーの技術に従って、連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回振とうすることによって調製した、ａ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及びｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を提供し、次いで、前記増強溶液を混合するか、或いは、担体塊に組み合わせた前記溶液を浸透させる又は前記溶液を別々に浸透させることによって得られたことを特徴とする医薬組成物。
【請求項５５】
胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が、過敏性腸症候群である請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
過敏性腸症候群が、主に腹痛及び鼓腸を特徴とする請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
過敏性腸症候群が、主に下痢を特徴とする請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
過敏性腸症候群が、主に便秘を特徴とする請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
活性化増強型抗体のそれぞれが、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物である請求項５４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組み合わせ医薬組成物及び胃腸管の機能的な疾患又は状態を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、医薬の分野に関し、過敏性腸症候群、及び腸を含めた胃腸管（ＧＩＴ）の運動排泄機能の障害を含めた、ＧＩＴの機能的な障害又は状態を治療するために使用することができる。
【０００３】
超低用量のヒスタミン抗体に基づいて胃腸管のびらん性炎症性疾患を治療することは、当技術分野で公知である（特許文献１）。しかし、この医薬調製物では、全ての場合において、機能的腸障害を治療するための十分な治療効果を確実にすることはできない。
【０００４】
ホメオパシーの技術によって増強された極度に希釈された型（又は超低型）の抗体（活性化増強型）の治療効果が、Ｄｒ．Ｏｌｅｇ  Ｉ．Ｅｐｓｈｔｅｉｎにより発見された。例えば、特許文献２には、ホメオパシーによる活性型の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に対する抗体を投与することによって良性前立腺肥大又は前立腺炎を治療するための医薬品が開示されている。超低用量の、ガンマインターフェロンに対する抗体が、ウイルス性病因の疾患を治療するための治療及び予防法において有用であることが示されている。その全体が参照により本明細書に組み込まれる特許文献３を参照されたい。
【０００５】
Ｓ−１００タンパク質は、主に脳の灰白質において、主にグリア細胞及びシュワン細胞において見いだされる細胞質内の酸性カルシウム結合性タンパク質である。このタンパク質は、２つの免疫学的に別個のサブユニット、アルファ及びベータからなる、いくつかのホモ二量体又はヘテロ二量体のアイソフォームで存在する。Ｓ−１００タンパク質は、脳卒中の場合と同様に、脳病変及び脳傷害に起因する神経損傷の診断及び評価を補助するものとして使用することが提案されている。非特許文献１、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００６】
超低用量の、Ｓ−１００タンパク質に対する抗体は、抗不安活性、抗無力症（ａｎｔｉ−ａｓｔｈｅｎｉｃ）活性、抗攻撃性（ａｎｔｉ−ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）活性、ストレス−保護活性、抗低酸素活性、抗虚血活性、神経保護活性及び向知性活性を有することが示されている。全て参照として本明細書に組み込まれる、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、及び非特許文献５を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】露国特許第２１９７２６６号明細書
【特許文献２】米国特許第７，５８２，２９４号明細書
【特許文献３】米国特許第７，５７２，４４１号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｙａｒｄａｎら、Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｓ１００Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、Ｊ  Ｐａｋ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  ６１巻、３号、２０１１年３月
【非特許文献２】Ｃａｓｔａｇｎｅ  Ｖ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｓ１００  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｈａｖｅ  ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃ−ｌｉｋｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｔ  ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００８年、６０巻（３号）：３０９〜１６頁
【非特許文献３】Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｏ．  Ｉ．、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓ１００Ｂ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋ  ｔｈｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ  ｓｎａｉｌ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｅｈａｖ．、２００９年、９４巻（１号）：３７〜４２頁
【非特許文献４】Ｖｏｒｏｎｉｎａ  Ｔ．Ａ．ら、Ｃｈａｐｔｅｒ  ８．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｓ−１００  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａｎｘｉｅｔｙ−ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．「Ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ」
【非特許文献５】Ｋａｌｕｅｆｆ  Ａ．Ｖ．  Ｎ−Ｙ編、「Ｎｏｖａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｉｎｃ．」、２００６年、１３７〜１５２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、組み合わせ医薬組成物並びに過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｔｅｄ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及び運動排泄機能の障害を含めた胃腸管の機能的障害の治療におけるその使用方法を対象とする。
【００１０】
存在する問題の解決法が、胃腸管の機能的病因の疾患又は状態の治療及び予防法のための、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）に対する活性化増強型抗体及び脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体を含む組み合わせ医薬組成物の形態で示されている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一態様では、本発明は、ａ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体と、ｂ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体と、ｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体とを含む組み合わせ医薬組成物を提供する。ある実施形態では、組み合わせ医薬組成物は、前記Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、前記ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、及び前記ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を浸透させた固体担体を更に含む。ある変形では、組み合わせ医薬組成物は、錠剤の形態である。
【００１２】
組み合わせ医薬組成物は、前記Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体をＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態で含むことが好ましい。具体的には、前記Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が固体担体に浸透されることが意図されている。
【００１３】
組み合わせ医薬組成物は、前記ヒスタミンに対する活性化増強型抗体をＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態で含むことが好ましい。具体的には、前記Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が、固体担体に浸透されることが意図されている。
【００１４】
組み合わせ医薬組成物は、前記ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体をＣ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物の形態で含むことが好ましい。具体的には、前記Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００ホメオパシー希釈物の混合物が、固体担体に浸透されることが意図されている。
【００１５】
ヒスタミンに対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体であってよい。具体的には、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体がポリクローナル抗体であることが意図されている。Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体であってよい。具体的には、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体がポリクローナル抗体であることが意図されている。ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体又は天然の抗体であってよい。具体的には、ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体がポリクローナル抗体であることが意図されている。本発明は、本明細書に記載されている配列及び添付の特許請求の範囲において特許請求されている配列を有する抗原（複数可）に対する活性化増強型抗体を提供する。
【００１６】
ある変形では、組み合わせ医薬組成物は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製したヒスタミンに対する活性化増強型抗体を含む。ある変形では、組み合わせ医薬組成物は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製したＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体を含む。ある変形では、組み合わせ医薬組成物は、希釈するごとに振とうしながら連続的に１００倍希釈することによって調製したＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を含む。具体的には垂直方向の振とうが意図されている。
【００１７】
別の態様では、本発明は、胃腸管の機能的病因の疾患又は状態を治療する方法であって、ａ）ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ｂ）Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及びｃ）ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及びＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体は、組み合わせ医薬組成物の形態で投与することが好ましい。
【００１８】
前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態は、本質的に（ｉｎ  ｎａｔｕｒｅ）心身性であることが意図されている。前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が過敏性腸症候群であることが好ましい。前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が腹痛であることが意図されている。前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が下痢であることが意図されている。前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が便秘であることが意図されている。前記胃腸管の機能的病因の疾患又は状態が胃腸管の運動排泄機能の歪みであることが意図されている。
【００１９】
ある実施形態では、組み合わせ医薬組成物は、薬学的に許容される担体、並びに前記担体に浸透させた前記ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、前記担体に浸透させた前記Ｓ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体、及び前記担体に浸透させた前記ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体を含む固体経口剤形の形態で投与される。ある変形では、前記固体経口剤形は錠剤である。変形及び実施形態が提供される。
【００２０】
本発明の方法態様によれば、組み合わせ医薬組成物は１つから２つの単位剤形で投与することができ、各剤形は１日１回から１日４回投与される。ある変形では、組み合わせ医薬組成物は１日２回投与され、各投与は２つの経口剤形からなる。ある変形では、組み合わせ医薬組成物は１つから２つの単位剤形で投与され、各剤形は１日２回投与される。本発明の組成物の態様に関して記載されている全ての変形及び実施形態は、本発明の方法態様と一緒に使用することができる。本発明の方法態様に関して、本発明の組み合わせの投与は、患者の代表的な集団におけるＨＡＤＳスコアの統計的に有意な低下を伴うことが具体的に意図されている。
【００２１】
組み合わせ医薬組成物を追加的な活性成分と同時投与することが具体的に意図されている。ある変形では、追加的な活性成分は、過敏性腸症候群の治療について認可されている。変形及び実施形態が意図されている。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、添付の特許請求の範囲と関連して定義される。特許請求の範囲に関して、以下の用語解説によって関連する定義がもたらされる。
【００２３】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子の特定の空間的な極性の構成に特異的に結合し、それにより、それと相補的であると定義される免疫グロブリンを意味するものとする。特許請求の範囲において列挙されている抗体は、天然、ポリクローナル又はモノクローナルであってよい完全な免疫グロブリン又はその断片を含んでよく、それらとしては、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３、ＩｇＭなどの種々のクラス及びアイソタイプを挙げることができる。その断片としては、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’などを挙げることができる。単数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、複数形の「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」を含む。
【００２４】
「活性化増強型」又は「増強型」という用語はそれぞれ、本明細書において列挙されている抗体に関しては、任意の抗体の最初の溶液のホメオパシーポテンタイゼーション（ｐｏｔｅｎｔｉｚａｔｉｏｎ）の生成物を示すために使用される。「ホメオパシーポテンタイゼーション」とは、ホメオパシーの方法を用いて最初の関連物質の溶液にホメオパシーポーテンシーを付与することを示す。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、連続した希釈を、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振とうと組み合わせて繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振とうする。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでに亘る。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００）に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０）に相当する抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。ホメオパシーポテンタイゼーションの例は、その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５７２，４４１号及び同第７，５８２，２９４号に記載されている。特許請求の範囲では「活性化増強型」という用語が使用され、実施例では「超低用量」という用語が使用される。「超低用量」という用語は、ホメオパシーにより希釈され、増強された型の物質の研究及び使用によって創出された技術分野における専門用語になった。「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅ）」又は「超低用量（ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｄｏｓｅｓ）」という用語は、特許請求の範囲において使用される「活性化増強」型という用語を完全に支持し、それと主に同義であるものとする。
【００２５】
言い換えれば、抗体は、３つの因子が存在すれば、「活性化増強」型又は「増強」型である。第１に、「活性化増強」型抗体は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている調製プロセスの生成物である。第２に、「活性化増強」型抗体は、現代薬理学において広く受け入れられている方法によって決定される生物活性を有さなければならない。第３に、「活性化増強」型抗体により示される生物活性は、ホメオパシーのプロセスの最終生成物に分子型抗体が存在することによっては説明することができない。
【００２６】
例えば、活性化増強型抗体は、最初の、単離された分子型抗体を、機械的な振とうなどの外部からの衝撃と併せて連続して多数回希釈することによって調製することができる。濃度低下の過程における外部からの処理は、例えば、超音波、電磁気、又は他の物理的因子に曝露させることによって実現することもできる。その全体が参照により明示された目的で本明細書に組み込まれるＶ．  Ｓｃｈｗａｂｅ  「Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ」、Ｍ．、１９６７年、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号には、ホメオパシーの技術分野において広く受け入れられているホメオパシー増強の方法であるそのようなプロセスが記載されている。この手順により、最初の分子型抗体の分子濃度が均一に低下する。所望のホメオパシーポーテンシーが得られるまでこの手順を繰り返す。個々の抗体について、所要のホメオパシーポーテンシーは、中間希釈物を所望の薬理学的モデルにおいて生物学的試験に供することによって決定することができる。そのように限定するものではないが、「ホメオパシーポテンタイゼーション」は、例えば、外部からの処理、特に垂直方向の（機械的な）振とうと組み合わせて連続した希釈を繰り返すことを伴ってよい。言い換えれば、ホメオパシーの技術に従って、抗体の最初の溶液を連続して繰り返し希釈し、得られた溶液をそれぞれ多数回、垂直方向に振とうする。溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌに亘る。各成分、すなわち、抗体溶液を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用すること、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液（母液）を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水希釈物若しくは水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。所望のポーテンシーをどのように得るかの例も、例えば、明示された目的で参照により組み込まれる、米国特許第７，２２９，６４８号及び同第４，３１１，８９７号において提供される。本明細書に記載の「活性化増強」型抗体に適用可能な手順は、下に詳しく記載されている。
【００２７】
ヒト対象のホメオパシー治療に関してはかなりの量の議論がなされてきた。本発明は、「活性化増強」型抗体を得るために、受け入れられているホメオパシーのプロセスに依拠するが、本発明は、活性を証明するためにはヒト対象におけるホメオパシー単独に依拠するのではない。驚いたことに、本出願の発明者は、認められている薬理学的モデルにおいて、出発分子型抗体を連続して多数回希釈することから最終的に得られた溶媒が、標的希釈物中に分子型抗体の痕跡が存在することとは無関係の決定的な活性を有することを発見し、十分に実証した。本明細書で提供される「活性化増強」型抗体を、生物活性について、広く受け入れられている活性の薬理学的モデルにおいて、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験において、又は適切な動物モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。該実験により、更に以下に提供される、そのようなモデルにおける生物活性の証拠がもたらされた。ヒト臨床試験によって、ヒト療法に首尾よく変換される、動物モデルにおいて観察された活性の証拠ももたらされる。ヒト研究によって、医科学において病的状態として広く認められている特定のヒト疾患又は障害を治療するための、本明細書に記載の「活性化増強」型の利用可能性の証拠ももたらされている。
【００２８】
また、特許請求された「活性化増強」型抗体は、その生物活性が、最初の出発溶液から残っている分子型抗体が存在することによっては説明することができない溶液又は固体調製物のみを包含する。言い換えれば、「活性化増強」型抗体は、最初の分子型抗体の痕跡を含有してよいことが意図されているが、連続して希釈した後に残った分子型抗体は非常に低濃度であるので、当業者は、認められている薬理学的モデルにおいて観察される生物活性が、いかなる程度の妥当性でも残りの分子型抗体に起因すると考えることができない。本発明は特定の理論に限定されるものではないが、本発明の「活性化増強」型抗体の生物活性は、最初の分子型抗体には起因しない。その中に含まれる分子型抗体の濃度が、認められている分析的な技法、例えば、キャピラリー電気泳動及び高速液体クロマトグラフィーなどの検出限界を下回る、液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が好ましい。その中に含まれる分子型抗体の濃度がアボガトロ数未満である液体又は固体の形態の「活性化増強」型抗体が特に好ましい。分子型の治療用物質の薬理学において、薬理学的反応のレベルが、対象に投与される、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験される活性薬物の濃度に対してプロットされた用量反応曲線を作成することは一般的である。任意の検出可能な反応を生じる薬物の最小レベルは、閾値用量として公知である。「活性化増強」型抗体は、もしあれば、分子抗体を、所与の生物学的モデルにおける分子型抗体の閾値用量を下回る濃度で含有することが具体的に意図されており、それが好ましい。
【００２９】
「胃腸管の機能的病因の疾患又は状態」又は「機能的腸障害」という用語は、腸を含めたＧＩＴの、ＧＩＴの機能に、患者の機能を任意の顕著な程度に干渉する障害が存在する場合の疾患又は状態を包含するものと理解されるべきである。しかし、具体的には、この用語は、器質的傷害の結果としてではなく、消化管の活動の調節における神経障害、心身障害、及び／又は体液性障害に関して観察され、生じる障害又は状態（例えば、器質的な腸の傷害が完全に存在しない、又は死亡の病因及び／又は患者の経験において副次的な役割を果たす）を定義するものとする。機能的腸障害は、形態学的な変化（それにより、臨床的な症状を説明することが可能になったであろう変化）がないこと、及び、第１に、興奮性が増すこととの関連、第２に、知覚過敏症との関連、第３に、心理社会的因子の影響下における中枢神経系のシグナルに対する内臓の不十分な反応との関連を特徴とする。
【００３０】
機能的腸障害は、胃腸管の機能的病態の最も頻度の高い形態であり、胃腸病プロファイルの患者の４０〜７０％において認められている。機能的腸障害の発生は、遺伝因子、環境因子、心理社会的因子、内臓過敏症及び感染症の影響を受けると考えられている。機能的腸障害は、機能的病態に関する胃腸管疾患の大きなグループの一部であり、機能的腸障害の分類（Ｒｏｍａｎ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ、１９９９年）によれば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能的鼓腸、機能的便秘、機能的下痢及び非特異的機能的腸障害などの臨床的状態を含む。
【００３１】
これらの疾患の発病において、胃腸の運動機能障害が不可欠な役割を果たすと考えられている。機能的腸障害の患者の特定の特徴は、運動感覚反応（複数可）の増大、及びストレスに反応した腹痛の出現である。機能的腸障害の症状としては、腹痛の訴え（通常、排便後に減少する）、鼓腸、絶えない鈍痛（ｇｒｕｍｂｌｉｎｇ）、残便感（ｆｅｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、便意切迫（ｉｍｐｅｒａｔｉｖｕｌｅ  ｕｒｇｅｓ  ｔｏ  ｄｅｆｅｃａｔｅ）、便秘、下痢又はそれらが交互に起こること及び／又はそれらの組み合わせが挙げられる。全ての胃腸管の機能的障害の特性を示す臨床的特徴としては、顕著な進行を伴わない疾患の経過の延長（通常、何年も）；臨床像の提示の幅広さ及び多様性（胃痛、消化不良及び片頭痛を伴う腸機能の障害、睡眠障害、摂食に伴う昏睡感、吸息不満足、左側を下にして眠ることができないこと、さらなる頻尿、種々の痙攣性結腸反応及び他の自律神経（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ）障害の組み合わせ）；訴えの可変性；健康の悪化と精神情緒的因子の関連性が挙げられる。
【００３２】
過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｔｅｄ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＩＢＳ）は、最も頻繁に生じる機能的腸障害の１つであり、近年の知見により示されている通り、第三世界諸国及び先進国のどちらにおいても見いだされる。世界中の大多数の国におけるＩＢＳの分布率は、平均で２０％であり、異なる試験のデータによって９％から４８％まで変動する。罹患率は、若い就労期間の年齢である３０〜４０歳でピークに達する。女性と男性の比率は、１：１から２：１まで変動する。５０歳を超えた男性の間では、ＩＢＳは、女性の間と同様に広範に亘る。患者の平均年齢は２４〜４１歳である。過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｔｅｄ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＩＢＳ）は、現代人に最も頻繁に生じる疾患の１つである。
【００３３】
ＩＢＳの病因及び病原性は、複雑であり、完全には理解されていない。大部分の研究者が、ＩＢＳの発生において精神情緒的なストレスが重要な役割を果たすことに賛同している。優勢な症状（複数可）に応じて、３つの可能性のあるＩＢＳの経過を区別することができる：腹痛及び鼓腸が優勢であるもの、下痢が優勢であるもの、及び便秘が優勢であるもの。
【００３４】
１９８８年まで、ＩＢＳは、別の名称、例えば、痙攣性大腸炎、粘液疝痛、神経性下痢、過敏性大腸、機能的腸痛症候群（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｄｉｓｔｒｅｓｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）及びその他などで記載されていた。これらの名称は、異なる疾患の症状を反映し、問題の画一的な理解は反映していなかった。１９８８年にローマにおいて、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ（ＧＩＴ）が、「過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｔｅｄ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」という表現を初めて公式に確認し、その定義を示し、診断を行うための基準を作った。その基準は、その後「ＩＢＳに対するローマ基準（Ｒｏｍａｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ＩＢＳ）」と称された。１９９９年に、この基準は補足され、「ＩＢＳに対するローマＩＩ基準（Ｒｏｍａｎ  ＩＩ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ＩＢＳ）」と称された。「ＩＢＳに対するローマＩＩ基準（Ｒｏｍａｎ  ＩＩ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ＩＢＳ）」によれば、ＩＢＳは、過去１２ヶ月の間に１２週間以上続く、排便後に消え、便の頻度及び硬さの変化を伴い、疾患期間の２５％に腸機能の障害の２つ以上の安定な症状を合併し、便の頻度、糞便の硬さ、排便時（便意切迫（ｉｍｐｅｒａｔｉｖｅ  ｕｒｇｅｓ）、しぶり腹、残便感（ｆｅｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｂｏｗｅｌ  ｅｖａｃｕａｔｉｏｎ）、排便困難（ｅｘｔｒａ  ｅｆｆｏｒｔ  ｏｎ  ｄｅｆｅｃａｔｉｏｎ））の変化を伴い、糞便と一緒に粘液が分泌されること及び鼓腸を伴う胃の痛み及び／又は不快感が顕在化する機能的障害の安定したセットである。
【００３５】
この症候群の治療において、他の調製物の中で活発に使用されるのは腸の運動活動の調節因子及び鎮痙剤である。
【００３６】
本発明は、それぞれ、本明細書において下により詳細に記載されている通り、一貫した希釈及びその中間の振とうの外部からの作用を繰り返すことによってホメオパシーの増強の技術に従って調製することができる、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ＴＮＦ−αに対する活性化増強型抗体及び脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する活性化増強型抗体を含む組み合わせ医薬組成物を提供する。本発明の組み合わせ医薬組成物は、機能的腸障害の治療において特に有用である。実施例において示されているように、本発明の組み合わせ医薬組成物は、それ自体は具体的には、機能的腸障害、具体的には、過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｔｅｄ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、腸を含めたＧＩＴの運動排泄機能の障害、便秘、下痢、及び同様の病因の他の障害の治療における治療有効性として顕在化する予想外の協同治療効果を保有する。組み合わせ医薬組成物の効果は、広く認められている適切な実験モデルにおいて示されているように、それ自体は、例えば、腸機能の神経性の調節、心身性の調節、及び体液性の調節の正常化、腸の運動系障害からの回復を導く大腸受容体の膨満に対する内臓過敏症の低下、腹部の張り感及び過剰な満腹感（ｓｅｎｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｂｕｌｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｏｖｅｒｆｉｌｌｉｎｇ  ｏｆ  ｓｔｏｍａｃｈ）の縮小、腹痛症候群の徴候の減少として顕在化する。並んで、平滑筋系の弱化、胃腸管（ＧＩＴ）壁の緊張度の低下、内部開口圧の急降下、便の硬さ、その頻度及び付随する症状の正常化（便意切迫（ｉｍｐｅｒａｔｉｖｕｌｅ  ｕｒｇｅｓ）、偽の便意（、残便感、排便困難及びその他の縮小）が生じる。
【００３７】
具体的には、本発明の組み合わせ医薬組成物は、他の活性成分、特にＧＩＴの疾患又は状態を治療するために使用される活性成分と組み合わせて使用することができることが意図されている。適切な追加的な活性成分の非限定的な例としては、アロセトロン、シランセトロン、ラモセトロンなどの５−ＨＴ３アンタゴニスト、テガセロッドなどの５−ＨＴ４アンタゴニスト、レンザプリド及びモサプリドなどの混合５−ＨＴ４アゴニスト／５−ＨＴ３アンタゴニスト、アルビモパン及びアシマドリンなどのオピオイド薬、ＣＲＨ（コルチコトロピン−放出ホルモン）受容体アンタゴニスト、ルビプロストンなどのクロライドチャネルアクチベーター、デキシロキシグルミド（Ｄｅｘｌｏｘｉｇｌｕｍｉｄｅ）などのＣＣＫ（コレシストキニン）アンタゴニスト、ニューロキニンアンタゴニスト、アミトリプチリン、クロミプラミン、デメキシプチリン、イミプラミン、ロフェプラミン、メタプラミン、ニトロキサゼピン、ノルトリプチリン、ピポフェジン、プロピゼピン、プロトリプチリン、及びキヌプラミンなどの三環系抗うつ薬を含めた抗うつ薬、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、セルトラリン、ビラゾドンなどのＳＳＲＩ、鎮痙薬、抗コリン作用薬／抗ムスカリン薬（例えば、ヒヨスチアミン、ジサイクロミン、シメトロピウム）、直接平滑筋弛緩剤（例えば、メベベリン、パパベリン、臭化オクチロニウム）、止痢薬、例えば、ロペラミド、ベンゾジアゼピン系薬、例えば、デキストフィソパム、並びに、リンコサミド、セファロスポリン、アンサマイシン、アミノグリコシド、ペニシリン、キノロン、スルホンアミド、テトラサイクリン、マクロライド、リンコサミド、モノバクタム、及びニトロフランなどの抗生物質が挙げられる。
【００３８】
本発明の医薬組成物により、機能的腸障害の治療及び予防法のために利用可能な調製物の集積が拡大する。
【００３９】
生体アミン（４（２−アミノエチル）−イミダゾール又は化学式Ｃ５Ｈ９Ｎ３を有するベータ−イミダゾリルエチルアミン）であるヒスタミンに対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用することによって得ることができ、ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）としてヒスタミン二塩酸塩を工業的に生産することができる。
【００４０】
血液を取得する前に、７〜９日にわたって静脈内注射を１〜３回行って、抗体のレベルを上昇させる。ウサギにおける免疫化プロセスでは、抗体の数量を評価するために少量の血液試料を取得する。大多数の可溶性抗原の導入に対する免疫応答は、最初に注射した４０〜６０日後に最大レベルに達した。３０日間のウサギ免疫化の第１のサイクルの終了後、健康を回復させ、１〜３回の静脈内注射を含む再免疫化を行う。免疫されたウサギから抗血清を得るために、血液を採取し、容量５０ｍｌの遠心管内に入れる。木べらを利用して、形成された血餅を試験管壁から除去し、試験管の中央に形成された血餅にスティックを入れる。血液を冷却器（温度４０℃）の中に一晩置く。次の日に、へらに付いた血餅を除去し、残った流体を１３，０００ｇで１０分間遠心分離する。上清（上清の流体）が抗血清である。得られた抗血清は、黄色であるはずである。抗血清に、２０％（重量濃度）のＮａＮ３を最終濃度が０．０２％になるまで加え、それを使用するまで、−２０℃の温度で凍結した状態で保管する、又は、ＮａＮ３なしで−７０℃の温度で保管する。ヒスタミン抗体の抗血清を分離するために、固相吸収を以下の順で行う：
１．ウサギ抗血清１０ｍｌを、０．１５ＭのＮａＣｌを用いて２回希釈し、６．２６ｇのＮａ２ＳＯ４を加え、混合し、４℃で１２〜１６時間インキュベートする；
２．降下した沈殿を遠心分離することによって除去し、リン酸緩衝液１０ｍｌに溶解させ、次いで同じ緩衝液に対して室温で一晩透析する；
３．遠心分離することによって沈殿を除去した後、溶液を、リン酸緩衝液によって平衡させたＤＥＡＥ−セルロースを用いたカラムに適用する；
４．溶出液の２８０ｎｍにおける光学濃度を測定し、抗体画分を決定する。
【００４１】
次いで、アフィニティークロマトグラフィー法により、得られた抗体を不溶性マトリックスに見いだされるヒスタミンに付けることによって抗体を精製し、その後、濃縮した塩類溶液によって溶出する。
【００４２】
そのように得られ、抗原に対して精製した、０．５〜５．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２．０〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のヒスタミンに対するポリクローナルウサギ抗体の緩衝溶液を、その後の活性化増強型を調製するためのマトリックス（一次）溶液として使用する。
【００４３】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体は、以下の配列を有する腫瘍壊死因子アルファの全分子を使用して、上記のポリクローナルヒスタミン抗体を得るための方法によって得ることができる。
配列番号１
2013532181.tif 000002
【００４４】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）に対するポリクローナル抗体を得るためには、例えば、以下の配列から選択された腫瘍壊死因子のポリペプチド断片を使用することも可能である。
配列番号２
2013532181.tif 000003
配列番号３
2013532181.tif 000004
配列番号４
2013532181.tif 000005
配列番号５
2013532181.tif 000006
配列番号６
2013532181.tif 000007
配列番号７
2013532181.tif 000008
配列番号８
2013532181.tif 000009
配列番号９
2013532181.tif 000010
配列番号１０
2013532181.tif 000011
配列番号１１
2013532181.tif 000012
配列番号１２
2013532181.tif 000013
【００４５】
ニューロン及びグリア細胞（星状細胞及び乏突起膠細胞）によって発現される脳特異的Ｓ１００タンパク質は、直接的に、又は他のタンパク質との相互作用を通じて、学習プロセス及び記憶プロセス、ニューロンの成長及び生存能力、神経組織における代謝プロセスの調節などに影響を及ぼすことを含めた、正常な脳機能を維持するためのいくつかの機能をＣＮＳにおいて果たす。活性化増強型抗体を調製するために、脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する抗血清を、以下の通り雄ウシの脳組織から取り出し、処理することができる：
−特殊な粉砕機を用いて、液体窒素中で凍結させた雄ウシ脳組織を粉末に変化させる；
−抽出用緩衝液を用いてホモジナイゼーションして、タンパク質を１：３の比（重量／体積）で抽出する；
−ホモジネートを６０℃で１０分間加熱し、次いで、氷浴中で４℃まで冷却する；
−遠心分離によって、熱不安定性タンパク質を除去する；
−硫酸アンモニウム分画を段階的に実施し、沈殿したタンパク質を続いて除去する；
−ｐＨを４．０に落とすことによって達成される１００％飽和硫酸アンモニウムを用いてＳ−１００タンパク質を含有する画分を沈殿させる。遠心分離によって、所望の画分を回収する；
−ＥＤＴＡ及びメルカプトエタノールを含有する最小限の体積の緩衝液に沈殿物を溶解し、脱イオン水を用いて沈殿物を透析し、凍結乾燥する；
−酸性タンパク質を分画した後に、イオン交換媒体、ＤＥＡＥ−セルロースＤＥ−５２、次いでＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０中でのクロマトグラフィーを続ける；
−セファデックスＧ−１００を用いたゲル濾過により、分子量に従って、Ｓ−１００タンパク質を含有する回収し透析した画分を分割する；
−精製されたＳ−１００タンパク質を透析し、凍結乾燥する。
【００４６】
精製された脳特異的タンパク質Ｓ−１００の分子量は２１，０００Ｄである。
【００４７】
Ｓ−１００タンパク質に対するポリクローナル抗体は、アジュバントを使用して、ヒスタミン抗体に関して記載されている方法と同様の方法によって得ることもできる。Ｓ−１００タンパク質の分子全体を、ウサギを免疫化するための免疫原（抗原）として使用することができる。
ウシＳ１００Ｂ（配列番号１３）
2013532181.tif 000014
ヒトＳ１００Ｂ（配列番号１４）
2013532181.tif 000015
ヒトＳ１００Ａ１（配列番号１５）
2013532181.tif 000016
ウシＳ１００Ａ１（配列番号１６）
2013532181.tif 000017
【００４８】
分離された脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対する脳特異的抗血清を得るために、精製されたＳ−１００タンパク質（抗原）の混合物を、完全フロイントアジュバントを入れた媒体としてメチル化された雄ウシ血清アルブミンによる複合体として調製し、それを実験動物であるウサギの脊椎領域内に１〜２ｍｌの量で皮下注射することができる。抗血清は、１：５００〜１：１，０００の力価を有し得る。
【００４９】
組み合わせ医薬組成物の成分を調製するためには、ヒスタミンに対するポリクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するポリクローナル抗体及び脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対するポリクローナル抗体を用い、最初のマトリックス（一次）溶液を０．５÷５．０ｍｇ／ｍｌ（好ましくは、２．０÷３．０ｍｇ／ｍｌ）の濃度で用いることが好ましい。その後、活性化増強型の成分を調製するために、下により詳細に記載されている通りマトリックス溶液を希釈する。
【００５０】
組み合わせ医薬組成物は、液体の形態であっても固体の形態であってもよい。医薬組成物に含まれる活性化増強型の抗体のそれぞれは、最初の分子型抗体から、ホメオパシーの技術分野で受け入れられているプロセスによって調製される。出発抗体は、公知のプロセスに従って、例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれる、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｇ．  Ｆｒｉｍｅｌ、Ｍ．、「Ｍｅｄｉｔｓｙｎａ」、１９８７年、９〜３３頁；「Ｈｕｍ．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ３０  ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ」、Ｌａｆｆｌｙ  Ｅ．、Ｓｏｄｏｙｅｒ  Ｒ．、２００５年、１４巻、１〜２号、３３〜５５頁に記載の通り調製されたモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってよい。
【００５１】
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術によって得ることができる。このプロセスの最初の段階  は、ポリクローナル抗血清の調製の過程ですでに開発された原理に基づく免疫化を含む。研究のさらなる段階は、同一の特異性を有する抗体のクローンを生成するハイブリッド細胞の作製を伴う。それらの別々の単離は、ポリクローナル抗血清調製物の場合と同じ方法を使用して実施する。
【００５２】
ポリクローナル抗体は、動物の能動免疫化によって得ることができる。この目的で、例えば、適切な動物（例えば、ウサギ）に、適切な抗原の一連の注射を受けさせる。動物の免疫系により、対応する抗体が生成し、それを公知の様式で動物から採取する。この手順により、単一特異性の抗体が豊富な血清を調製することが可能になる。
【００５３】
所望であれば、抗体を含有する血清は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、塩析による分画、又はイオン交換クロマトグラフィーを使用することによって精製することができる。得られた精製抗体濃縮血清を、活性化増強型の抗体を調製するための出発材料として使用することができる。得られた、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の好ましい濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでに亘る。
【００５４】
本発明による組み合わせ薬物の各成分を調製するための好ましい手順は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ５０に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００５０倍希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物、又は、それぞれ１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００に相当する、抗体の一次マトリックス溶液を１００１２倍希釈、１００３０倍希釈及び１００２００倍希釈した３種の水−アルコール希釈物の混合物を使用することである。固体剤形を調製するために、固体担体を、ホメオパシーのプロセスによって得られた所望の希釈物で処理する。本発明の組み合わせの固体単位剤形を得るために、担体塊に各希釈物を浸透させる。所望の組み合わせ固体剤形を調製するために、担体に、任意の順番で必要な最終的な希釈物又は希釈物の混合物を逐次的に浸透させること、並びに担体に全成分の液体混合物を浸透させることを含めた、固体担体の任意の浸透の順序が具体的に意図されている。
【００５５】
好ましい実施形態では、本発明の組み合わせを含む活性化増強型を調製するための出発材料は、動物に産生させた、対応する抗原に対するポリクローナル抗体である。
【００５６】
出発ポリクローナル抗体を調製するための例示的な手順は、以下の通り説明することができる。血液試料を採取する７〜９日前に、所望の抗原を、ウサギに１〜３回静脈内注射して、ウサギの血流中のポリクローナル抗体のレベルを上昇させる。免疫化したら、抗体レベルを検査するために血液試料を取得する。一般には、可溶性抗原の免疫応答の最大レベルは、抗原を最初に注射した後４０〜６０日以内に実現される。第１の免疫化サイクルが達成されたら、ウサギを３０日のリハビリテーション期間におき、その後、更に１〜３回静脈内注射して再免疫化を実施する。
【００５７】
所望の抗体を含有する抗血清を得るために、ウサギから、免疫化されたウサギの血液を採取し、５０ｍｌの遠心管に入れる。管の側面に形成された生成物である血餅を木べらで除去し、管の中心の血餅にロッドを入れる。次いで、血液を冷蔵庫に約４０℃の温度で一晩置く。次の日に、へらの上の血餅を除去し、残りの液体を１分当たり１３，０００回転で１０分間遠心分離する。上清の流体が標的抗血清である。得られた抗血清は一般には黄色である。抗血清に、２０％のＮａＮ３（重量濃度）を最終濃度が０．０２％になるまで加え、使用する前に、−２０℃の温度で凍結した状態で保管する、又は、ＮａＮ３なしで−７０℃の温度で保管する。標的抗体を抗血清から分離するためには、以下の固相吸収の連続が適している：
【００５８】
ウサギの抗血清１０ｍｌを０．１５ＭのＮａＣｌで２倍希釈し、その後、６．２６ｇのＮａ２ＳＯ４を加え、混合し、４℃で１２〜１６時間インキュベートする。沈渣を遠心分離によって除去し、リン酸緩衝液１０ｍｌ中に希釈し、同じ緩衝液に対して外界温度で一晩にわたって透析する。沈渣を除去した後、溶液をリン酸緩衝液によって平衡させたＤＥＡＥ−セルロースカラムに適用する。溶出液の２８０ｎｍにおける光学濃度を測定することによって抗体画分を決定する。
【００５９】
単離された粗製の抗体を、アフィニティークロマトグラフィー法を使用し、得られた抗体を、クロマトグラフィー媒体の不溶性マトリックスに付着させることによって精製することができ、その後濃縮した水性塩類溶液により溶出させる。
【００６０】
得られた緩衝溶液を、活性化増強型の抗体を調製するために用いるホメオパシー希釈プロセスのための最初の溶液として使用する。
【００６１】
組み合わせの各成分の活性化増強型は、最初の溶液から、ホメオパシーポテンタイゼーションによって、好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌまでの、溶媒、好ましくは水又は水とエチルアルコールの混合物中の抗体の最初の溶液の濃度から出発して、（最初の溶液から開始する）前の溶液のそれぞれ１部を９部（１０倍希釈（ｄｅｃｉｍａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ））、又は９９部（１００倍希釈）、又は９９９部（１，０００倍希釈（ｍｉｌｌｅｓｉｍａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ））の中性の溶媒に入れて段階希釈することによる比例的な濃度低下の方法を外部からの衝撃と併せて用いて調製することができる。外部からの衝撃は、各希釈物を多数回垂直方向に振とうすること（ダイナマイゼーション）を伴うことが好ましい。その後の、所要のポーテンシーレベル、又は希釈因子に至るまでの希釈のそれぞれには別々の容器を使用することが好ましい。この方法は、ホメオパシーの技術分野では広く受け入れられている。例えば、明示された目的で参照により本明細書に組み込まれるＶ．  Ｓｃｈｗａｂｅ  「Ｈｏｍｅｏｐａｔｈｉｃ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ」、Ｍ．、１９６７年、１４〜２９頁を参照されたい。
【００６２】
例えば、１２−１００倍希釈物（Ｃ１２と示される）を調製するために、３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のヒスタミンに対する抗体の最初のマトリックス溶液１部を、中性の、水を含む又は水−アルコールを含む溶媒（好ましくは、１５％エチルアルコール）９９部中に希釈し、次いで何回も（１０回以上）垂直方向に振とうして、第１の１００倍単位希釈物（Ｃ１と示される）を創出する。第１の１００倍希釈物Ｃ１から第２の１００倍単位希釈物（Ｃ２）を調製する。この手順を１１回繰り返して第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２を調製する。したがって、第１２の１００倍単位希釈物Ｃ１２は、異なる容器内で、３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗体の最初のマトリックス溶液１部を中性の溶媒９９部中に１２回段階希釈することによって得られる溶液を表し、１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２に相当する。関連する希釈因子を用いて同様の手順を実施して所望の希釈物を得る。中間希釈物を所望の生物学的モデルにおいて試験して活性を確認することができる。本発明の組み合わせを含む抗体の好ましい活性化増強型は、各活性化増強型についてＣ１２希釈物、Ｃ３０希釈物及びＣ２００希釈物である。活性な物質の種々のホメオパシー希釈物（主に１００倍単位希釈物）の混合物を生物活性のある液体成分として使用する場合、組成物（例えば、Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ５０、Ｃ２００）の各成分は、上記の手順に従って、最後から二番目の希釈物が得られるまで（例えば、それぞれＣ１１、Ｃ２９、及びＣ１９９まで）別々に調製し、次いで各成分１部を、混合物の組成に従って１つの容器に加え、所要量（例えば、１００倍希釈するためには９７部）の溶媒と混合する。
【００６３】
活性な物質を種々のホメオパシー希釈物、例えば、１０倍希釈物及び／又は１００倍希釈物（Ｄ２０、Ｃ３０、Ｃ１００又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ５０又はＣ１２、Ｃ３０、Ｃ２００など）の混合物として使用することが可能であり、その効率は、希釈物を適切な生物学的モデル、例えば、本明細書の実施例に記載のモデルにおいて試験することによって実験的に決定される。
【００６４】
増強及び濃度低下の過程では、垂直方向の振とうを、超音波、電磁場への外部からの曝露又はホメオパシーの技術分野で受け入れられている任意の同様の外部からの衝撃手順と置き換えることができる。
【００６５】
本発明の医薬組成物の固体単位剤形は、薬学的に許容される固体担体に、主に１：１：１の比率で混合し、液体剤形で用いる、活性化増強型、活性成分の水溶液又は水−アルコール溶液の混合物を浸透させるによって調製することができる。或いは、必要な希釈物のそれぞれを継続的に担体に浸透させることができる。
【００６６】
好ましくは、固体単位剤形の医薬組成物は、活性化増強型抗体の水希釈物又は水−アルコール希釈物を予め染み込ませた薬学的に許容される担体の顆粒剤から調製する。固体剤形は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、及びその他を含めた製薬技術分野で公知の任意の形態であってよい。不活性な医薬成分として、医薬品の製造において使用されるグルコース、スクロース、マルトース、デンプン、イソマルトース、イソマルト及び他の単糖、オリゴ糖及び多糖、並びに上記の不活性な医薬成分と、潤滑剤、崩壊剤、結合剤及び着色料を含めた他の薬学的に許容される賦形剤、例えば、イソマルト、クロスポビドン、シクラミン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、無水クエン酸など）との技術的混合物を使用することができる。好ましい担体は、ラクトース及びイソマルトである。薬剤剤形は、標準の製薬用賦形剤、例えば、結晶セルロース及びステアリン酸マグネシウムを更に含んでよい。
【００６７】
固体単位剤形の調製物の例は下に記載されている。経口用の固体形態を調製するために、ラクトースの顆粒１００〜３００μｍを、ヒスタミンに対する活性化増強型抗体、ＴＮＦ−アルファに対する活性化増強型抗体及びＳ−１００タンパク質に対する活性化増強型抗体の水溶液又は水−アルコール溶液に、ラクトース５ｋｇ又は１０ｋｇに対して抗体溶液１ｋｇ（１：５〜１：１０）の比率で浸透させる。浸透に影響を及ぼすために、ラクトース顆粒を、煮沸ベッドプラント（例えば、Ｈｕｔｔｌｉｎ  ＧｍｂＨの「Ｈｕｔｔｌｉｎ  Ｐｉｌｏｔｌａｂ」）中の流動煮沸ベッド中で染み込ませるための注水に曝露させ、その後、４０℃未満の加熱した空気の流れによって乾燥する。活性化増強型抗体を染み込ませた乾燥顆粒（１０〜３４重量部）の推定量をミキサーに入れ、２５〜４５重量部の「染み込ませていない」純粋なラクトース（処理効率を低下させることなく技術的なプロセスの費用を縮小し、それを単純化及び加速するために使用する）と、０．１〜１重量部のステアリン酸マグネシウム、及び３〜１０重量部の結晶セルロースと一緒に混合する。得られた錠剤集団を均一に混合し、（例えば、Ｋｏｒｓｃｈ−ＸＬ４００打錠機において）直接乾式プレスすることによって錠剤化して、１５０〜５００ｍｇ、好ましくは、３００ｍｇの丸剤を形成する。錠剤化した後、活性化増強型抗体の組み合わせの水−アルコール溶液（丸剤１粒当たり３．０〜６．０ｍｇ）を染み込ませた丸剤３００ｍｇを得る。担体に浸透させるために使用する組み合わせの各成分は、１００倍単位ホメオパシー希釈物、好ましくは、Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００の混合物の形態である。
【００６８】
本発明はいかなる特定の理論にも限定されるものではないが、本明細書に記載の活性化増強型抗体は、分子型抗体を、そのような分子型に帰する生物活性を有するのに十分な量では含有しないと考えられる。本発明の組み合わせ薬物（組み合わせ医薬組成物）の生物活性は、添付の実施例において十分に実証されている。
【００６９】
治療の目的で、本発明の組み合わせを、１日１回から１日４回まで、好ましくは１日２回、それぞれに１つ又は２つの組み合わせ単位剤形を含めて投与することが好ましい。
【実施例】
【００７０】
添付の非限定的な実施例を参照して本発明を更に例示する。
【００７１】
実施例１
ｉ）最初のマトリックス溶液を高希釈することによって得られ、抗原に対してアフィニティー精製した、超低用量の、ヒスタミンに対する抗体（Ｈｉｓ  Ａｂ）（１００１２希釈物、１００３０希釈物、１００２００希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）の混合物、並びにｉｉ）ａ）最初のマトリックス溶液を高希釈することによって得られ、抗原に対してアフィニティー精製した、超低用量の、ヒスタミンに対する抗体（Ｈｉｓ  Ａｂ）（１００１２希釈物、１００３０希釈物、１００２００希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）の混合物、ｂ）、最初のマトリックス溶液を高希釈することによって得られ、抗原に対してアフィニティー精製した、超低用量の、タンパク質Ｓ−１００に対する抗体（Ｓ−１００  Ａｂ）（１００１２希釈物、１００３０希釈物、１００２００希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０及びＣ２００）の混合物）及びｃ）最初のマトリックス溶液を高希釈することによって得られ、抗原に対してアフィニティー精製した、超低用量の、腫瘍壊死因子アルファに対する抗体（ＴＮＦ  Ａｂ）（１００１２希釈物、１００３０希釈物、１００２００希釈物（Ｃ１２、Ｃ３０、及びＣ２００）の混合物）の組み合わせ（Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ）の効果を調査する３つの実験的試験。
【００７２】
試験１．マウスの胃腸管（ＧＩＴ）の運動排泄機能に対する効果
非近交系の雄のマウス３１匹（質量１７．５〜２６．３ｇ、１．５〜２ヶ月齢）に、蒸留水（対照、１５ｍｌ／ｋｇ）か、Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）か、又はＳ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）を５日間にわたって胃内注射した。胃腸の運動排泄機能の状態を、「マーカー」法によって試験した［Ｃｏｏｐｍａｎ，  Ｇ．Ｐ．、Ｋｅｎｎｉｓ，  Ｈ．Ｍ．，、Ｔｗｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ａｓｓｅｓｓ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｎｓｉｔ−ｔｉｍｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ／／  Ｚ．  Ｖｅｒｓｈｕｃｈｓｔｉｅｒｋ、１９巻、５号、２９８〜３０３頁、１９７７年、参照により本明細書に組み込まれる］。最後に注射した１時間後、２％ジャガイモデンプン粘液で調製した活性炭の１０％懸濁液を、マウス当たり０．５ｍｌの量で、「マーカー」としてマウスの消化管に注射した。「マーカー」を注射してから１０分以内に、胃及び腸を回収し、ガラス板の上に広げた。マーカーで満たされた腸の全体的な長さを測定した（すなわち、腸の活性炭で満たされた部分の長さの全体的な長さに対する比率、百分率として表す）。
【００７３】
Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせを１５ｍｌ／ｋｇの用量で注射することにより、腸に沿った活性炭の全体的な経路の長さが、Ｈｉｓ  Ａｂ群及び蒸留水（対照）群の対応する値と比較して、それぞれ１．３倍及び１．２倍に、統計的に有意に増大することが確立された（表１）。Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせについては、炭で満たされた部分の長さと全体的な腸の長さに対する比率も、Ｈｉｓ  Ａｂ群における類似の指標（ｐ＜０．０５）及び対照群（ｐ＜０．０５）における類似の指標を超えた。
【００７４】
したがって、Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせはマウスのＧＩＴの運動排泄活性を強め、その効果はＨｉｓ  Ａｂの有効性を超えることが示された。
【００７５】
表１．非近交系の雄のマウスのＧＩＴの運動排泄活性に対する被試験調製物の効果
【表１】
2013532181.tif 000018
＊対照に関して、差異は統計的に有意である（ｐ＜０．０５）
＃Ｈｉｓ  Ａｂ群に関して、差異は統計的に有意である（ｐ＜０．０５）
【００７６】
試験２．マウスのＧＩＴの分泌機能に対する効果
非近交系の雄のマウス３３匹（質量１７．５〜２６．３ｇ、１．５〜２ヶ月齢）に、蒸留水（対照、１５ｍｌ／ｋｇ）か、Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）か、又はＳ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）を４回胃内注射した。腸の分泌機能の状態を、Ｇ．Ｖ．Ｏｂｏｌｅｎｔｓｅｖ法を用いて試験した（Ｇ．Ｖ．  Ｏｂｏｌｅｔｓｅｖ、Ｙ．  Ｉ．  Ｈａｄｚｈａｉ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｎｔａｇｌｕｓｉｄｅ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（ｉｎ  Ｒｕｓｓｉａｎ）、４号、４６９〜４７２頁、１９９６年、参照により本明細書に組み込まれる）。各試験調製物を、１０ｍｇ／ｋｇの用量の活性炭と一緒に注射した。炭の黒色が付いた糞便の出現を陽性とみなした。実験開始から３時間、６時間、及び２４時間の時点で測定を行った。各動物に対する効果の大きさ及び／又は性質は以下の通り示された：「＋」−形の良い黒ずんだ糞便の出現；「＋＋」−柔らかい黒ずんだ糞便の出現；「＋＋＋」−液状の黒ずんだ糞便の出現。陽性反応を有する動物の百分率に従った、群における総得点によって緩下活性を評価した。
【００７７】
表２．非近交系の雄のマウスにおける腸の排泄機能に対する被試験調製物の効果
【表２】
2013532181.tif 000019
【００７８】
Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂを注射した後最初の３時間のうちに、以下の通り蠕動の特定の強化が観察された：組み合わせについては２５点、対してＨｉｓ  Ａｂ群では１８点、対照群では２２点（表２）。効果は、Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ群については観察の６時間を超えて保持された：組み合わせについては２４点、対してＨｉｓ  Ａｂ群及び対照群については１８点。２４時間以内に、動物の４５％で排便がないことを含め、３つの実験全てにおいて排泄活性が著しく低下した。
【００７９】
したがって、Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせがＨｉｓ  Ａｂの効果を超える緩下効果を保有することが示された。
【００８０】
試験３．鎮痙活性
非近交系の雄のマウス３０匹（質量１７．５〜２６．３ｇ、１．５〜２ヶ月齢）に、蒸留水（対照、１５ｍｌ／ｋｇ）か、Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）か、又はＳ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ（１５ｍｌ／ｋｇ）を５日間にわたって胃内注射した。調製物の鎮痙活性を、Ｊ．Ｓｅｔｎｉｃａｒ法（１９５９年）［Ｓｅｎｔｉｃａｒ  Ｊ．、Ｄａ  Ｒｅ  Ｐ．、３−ｍｅｔｈｙｌ−６−（Ｎ−ｄｉｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏ−ｍｅｔｈｙｌ）−Ｆｌａｖｏｎｅ−ａ  ｎｅｗ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｒｅｌａｘａｎｔ／／Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈ、９号、６５３〜６９７頁（１９５９年））、参照により本明細書に組み込まれる］に従って評価した。最後に注射した１時間後、マウスに、０．１％のＢａＣｌ２溶液０．２ｍｌを腹腔内注射し、２％ジャガイモデンプン粘液で調製した活性炭の１０％懸濁液０．５ｍｌを胃内注射した。１０分後に動物を屠殺した。次いで、全体的な腸の長さと炭で満たされた部分の比率を決定した。比率を百分率で表し、一次的な実験結果とみなした。
【００８１】
Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせを受けた群では、炭が腸を通って進んだ最大の距離は、Ｈｉｓ  Ａｂ群及び対照群と比較して１．３倍であった（表３）。活性炭が腸を通って進む速度の低下を導く、ＢａＣｌ２の注射により引き起こされるＧＩＴの痙縮は、Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ群において最も少なかった。
【００８２】
表３．「炭素マーカー」法（ＢａＣｌ２を用いる）による被試験調製物の鎮痙効果の評価
【表３】
2013532181.tif 000020
＊対照に関して、差異は統計的に有意である（ｐ＜０．０５）
＃Ｈｉｓ  Ａｂ群に関して、差異は統計的に有意である（ｐ＜０．０５）
【００８３】
したがって、Ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせが、Ｈｉｓ  Ａｂの有効性を超える鎮痙効果を保有することが示された。  
【００８４】
実施例２
錠剤３００ｍｇを、超低用量の、アフィニティー精製した、ヒト腫瘍壊死因子アルファに対するポリクローナルウサギ抗体（ＴＮＦ  Ａｂ）、脳特異的タンパク質Ｓ−１００に対するポリクローナルウサギ抗体（Ｓ１００  Ａｂ）及びヒスタミンに対するポリクローナルウサギ抗体（Ｈｉｓ  Ａｂ）の水−アルコール溶液をラクトース担体に浸透させること（錠剤１錠当たり６ｍｇ）によって調製した。浸透させるために使用する各成分は、２．５ｍｇ／ｍｌの濃度の最初のマトリックス溶液を、１００１２倍、１００３０倍、１００２００倍に高希釈することによって得た（１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の混合物）。比較群については、２．５ｍｇ／ｍｌの濃度の最初のマトリックス溶液を１００１２倍、１００３０倍、１００２００倍に高希釈することによって得られ（１００倍単位ホメオパシー希釈物Ｃ１２、Ｃ３０、Ｃ２００の混合物）、抗原に対して精製した、超低用量の、ヒスタミンに対するポリクローナルウサギ抗体（Ｆｉｓ  Ａｂ）の水−アルコール溶液を染み込ませた（錠剤１錠当たり３ｍｇ）他の錠剤３００ｍｇを使用した。
【００８５】
この試験に参加する患者５２人について、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の診断を、ローマＩＩＩ基準（Ｒｏｍａｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ＩＩＩ）（２００６年）に従って検証した。この試験に登録された患者は、１２週間に亘る観察及び療法の外来過程に参加した。試験参加者２４人を、被試験調製物群（ＴＮＦ  Ａｂ＋  Ｓ１００  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ、１日２回、錠剤２錠）に含めた。患者２８人を、比較群（Ｈｉｓ  Ａｂ、１日２回、錠剤２錠）に含めた。どちらの患者群も、関連する最初の人口統計の指標、人体測定の指標及び臨床的試験の指標については同程度であった。１８人の患者は、便秘を伴うＩＢＳ（腸の排泄物全体のうち固体又は塊の多い便が２５％超含まれ、液状の便が２５％未満である）を有し、１４人の患者は、下痢を伴うＩＢＳ（腸の排泄物全体のうちペースト様又は液状の便が２５％超を成し、固体の便が２５％未満である）を有し、２０人の患者が、混合型のＩＢＳ（塊の多い便と液状の便の両方が腸の排泄物全体の２５％超含まれる）。療法の有効性の基準には、以下のパラメータを考慮に入れた：最初の状態と比較した疼痛／不快感の強さの低下（１週間の平均値、０点から１０点まで）、ＶＡＳ−ＩＢＳ尺度（Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｓｃａｌｅ  −Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  Ｂｏｗｅｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＶＡＳ−ＩＢＳ）：Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  Ｂｏｗｅｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  −Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ；Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）−２０１０年３月；Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌｉｓｓｎｅｒ，  Ｓ．、Ｋｏｃｈ，  Ｇ．、Ｔａｌｌｅｙ，  Ｎ．Ｊ．ら、２００４年、Ｓｕｂｊｅｃｔ’ｓ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｅｌｉｅｆ：Ａｎ  Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  Ａｓｓｅｓｓ  ｔｈｅ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ＩＢＳ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ、Ｊ  Ｃｌｉｎ．  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ、５６巻：３１０〜３１６頁；ＣＰＭＰ／ＥＷＰ／７８５／９７、２００３年、Ｐｏｉｎｔｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  ４８３  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  Ｂｏｗｅｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ、Ｌｏｎｄｏｎ、４８４  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍｅａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｐｄｆｓ／ｈｕｍａｎ／ｅｗｐ／０７８５９７ｅｎ．ｐｄｆ．において入手可能）での他の消化不良の症状のダイナミクス；ＶＳＩ尺度（Ｖｉｓｃｅｒａｌ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＶＳＩ）：Ｌａｂｕｓ、Ｓ．  Ｊｅｎｎｉｆｅｒら  Ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｘｉｅｔｙ  ｉｎ  Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  Ｂｏｗｅｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｆｕｒｔｈｅｒ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｖｉｓｃｅｒａｌ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ．  Ｐｓｙｃｈｏｍｏｔｏｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００７年；６９巻：８９〜９８頁）での内臓感受性指数の変化（最低−１５、最高−９０）、及びＨＡＤＳ尺度（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ａｎｘｉｅｔｙ  ａｎｄ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ（ＨＡＤＳ）：Ｓｎａｉｔｈ、Ｒ．  Ｐｈｉｌｉｐ．  Ｔｈｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ａｎｘｉｅｔｙ  ａｎｄ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ．  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ２００３年、１巻：１〜４頁、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｑｌｏ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／１／１／２９．）での評価。下痢が優勢のＩＢＳの患者では、便の種類が変化した患者の一部を便の形状のＢｒｉｓｔｏｌ尺度（Ｂｒｉｓｔｏｌ  ｓｃａｌｅ  ｏｆ  ｓｔｏｏｌ  ｆｏｒｍ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  Ｂｏｗｅｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  −Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）；Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）−２０１０年３月）で、最大５（しかし１週間の平均で≦２を下回らない）まで算出した；便秘が優勢のＩＢＳのサブグループの患者では、その患者の最初の状態と比較して排便行為の回数が平均で１週間に１回増加した患者の百分率。
【００８６】
どちらの群においても、疾患の臨床像では、腹痛症候群が優勢であった（ＶＡＳ−ＩＢＳによると、組み合わせ群では平均７．５６±０．２６点、比較群では７．２１±０．２４）（表を参照されたい）。この症状は、最初の検査時には患者の１００％において生じた。消化不良の徴候の中で、頻度が同等であったのは、下痢（活性な調製物群では患者の５４％、比較群では患者の５７％）及び便秘（それぞれ６２％及び５７％）、腹部の張り（ｂｕｌｇｉｎｇ  ｓｔｏｍａｃｈ）及び鼓腸（それぞれ４６％及び３６％）であり、その徴候は両群でほとんど同一であった（表を参照されたい）。悪心及び嘔吐はまれであった（それぞれ３０％及び３２％）。内臓感受性指数（ＶＳＩ）及びＨＡＤＳ尺度の指標の平均値は、両群で同様であり（表を参照されたい）、これは、ＩＢＳの発生において中枢神経系障害が有意に影響することを示している。どちらの群の患者も、便秘又は下痢に対して、それぞれ緩下剤Ｇｕｔｔａｌａｘ（登録商標）及び止痢薬Ｓｍｅｃｔａ（登録商標）の服用が許可された。胃内痙攣痛の徴候を軽減するための調製物Ｎｏ−ｓｈｐａ（登録商標）も許可された。これらの調製物は、患者が必要に応じて服用した。調査した群の患者全員が、試験プロトコールによって確立された期間内に治療を完了し、初期の離脱者はいなかった。
【００８７】
表４．療法の形態に応じた基本的な指標のダイナミクス
【表４】
2013532181.tif 000021
＊ＴＮＦ−α  Ａｂ＋Ｓ１００  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂ群とＨｉｓ  Ａｂ群の間の差異は、ｐ＜０．０５で統計的に有意である。
＊＊最初の指標との差異は、ｐ＜０．０５で統計的に有意である。
【００８８】
データを分析することにより、１２週間の療法の間に、Ｈｉｓ  Ａｂ＋ｓ１００  Ａｂ＋ＴＮＦ  Ａｂの組み合わせを服用している群の患者において、ＩＢＳ、腹痛症候群の基本的な臨床徴候の発現がその患者の最初の状態と比較して５０％超低下した（３．３２±０．１３点）ことが示された。この低下は、同様に疼痛／不快感の徴候の減少も促進されたが、有意に劣った程度ではない（３０％未満）、Ｈｉｓ  Ａｂを単独で使用することによって得られた治療転帰と比較して有意に異なった。
【００８９】
被試験組み合わせは、下痢（最初の値５．５２±０．１８点から療法の最後の３．３４±０．２２点までの低下）、便秘（それぞれ５．７９点±０．２６及び４．４１±０．３３点）、腹部の張り及び鼓腸（それぞれ４．９８±０．３４点及び３．８４±０．２４点）を含めた患者における他の消化不良に好都合に影響を及ぼした。更に、後者２つの症状に関する有効性は、その患者の最初の状態及びＨｉｓ  Ａｂ単独での有効性のどちらと比較しても統計的に有意であった。
【００９０】
下痢が優勢のＩＢＳの患者のサブグループ（ｎ＝１４）では、便の形状のＢｒｉｓｔｏｌ尺度で、最大５以下の点からの便の種類の変化を示した患者の一部は、組み合わせ群について５７％であった；便秘が優勢のＩＢＳのサブグループ（ｎ＝１８）では、排便行為の回数が平均で１週間に１回増加した患者の百分率は、９４％に達した；混合型のＩＢＳの患者（ｎ＝２０）の間では、類似の指標は、それぞれ４５％及び７５％であった。比較群の患者の間では、試験した指標は有意であるとみなすことができなかった。
【００９１】
組み合わせ調製物を用いた治療の効力は、内臓過敏症に対する正の効果として顕在化し、内臓過敏症は１２週間にわたって有意に低下し、ＶＳＩ指数は２２．３±１．６から６８．７±２．４に増加した（比較群ではそれぞれ２５．４±１．８及び３３．９±１．７であったのに対して）。組み合わせ調製物を用いて観察された正の変化は、ＨＡＤＳ尺度での総得点の減少としても顕在化し（１９．３±１．４から１２．８±０．６まで）、これにより、最初の無症状的に発現した不安及びうつ病の縮小が証明された。
【００９２】
療法の安全性の評価を、治療及び検査指標の経過観察試験の期間中の有害事象の記録に基づいて行い、調製物の優良な耐容能が立証された。安全性分析には、この試験に参加した患者全員（ｎ＝５２）のデータを含めた。１２週間の治療の間、いずれの群の患者においても、医薬を服用したことと「可能性のある」又は「明白な」な関連性があるいかなる有害事象も顕在化しなかった。一般血液分析、生化学的血液分析及び臨床的な尿分析を含めた検査室における試験では、療法の過程中にいかなる病理的な偏差も記録されなかった。
【００９３】
したがって、試験により、ＩＢＳの患者の治療における、超低用量の、ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｓ１００  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせの有効性及び安全性が実証された。組み合わせを１２週間服用することにより、ＩＢＳの患者における腹痛症候群の縮小及び同様に消化不良の徴候の発現の有意な減少が促進されたことが示された。治療の効果は、腸の排泄指標が改善された患者の百分率が高いことによって確認された。胃腸管の一部に対する基本的な症状の正のダイナミクスに加えて、患者の身体精神状態の自然な正常化が認められ、これは、内臓感受性の正の変化及び不安及びうつ病の症状の水準化として表れた。超低用量の、ＴＮＦ  Ａｂ＋Ｓ１００  Ａｂ＋Ｈｉｓ  Ａｂの組み合わせを用いた療法の効果は、その患者の最初の状態及びＨｉｓ  Ａｂ単独と比較して有意差があった。
【配列表】
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【国際調査報告】
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