(57)【要約】本発明は、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患の治療又は予防用組成物に関する。本発明の有効成分であるグリセオリンは、骨芽細胞でＲｕｎｘ２  タンパク質の分解を促進させ、ＲａｎｋｌのｍＲＮＡレベルを減少させて破骨細胞の分化を抑制し、高用量ビタミンＤの投与によって誘導された骨粗鬆症動物モデルで骨粗鬆症の症状を大きく緩和させる。本発明の組成物は、骨粗鬆症及びがん細胞の骨転移によって発生する骨疾患等の予防及び治療用薬物及び食品として開発される可能性が非常に高い。【選択図】図５ａ
2013528583.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリセオリンを有効成分として含むことを特徴とする骨疾患の予防又は治療用組成物。
【請求項２】
前記骨疾患は、がん細胞の骨転移によってもたらされる骨の損失若しくは損傷、骨粗鬆症、骨軟化症、くる病、線維性骨炎、無形成骨症又は代謝性骨疾患である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記グリセオリンは、破骨細胞の分化を抑制する請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記グリセオリンは、骨芽細胞又は前骨芽細胞（ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）においてＲｕｎｘ２タンパク質の分解を促進する請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記グリセオリンは、骨芽細胞においてＲａｎｋｌ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦκＢ  ｌｉｇａｎｄ）のｍＲＮＡ発現を抑制する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記グリセオリンは、骨芽細胞又は破骨細胞の分化を抑制して骨リモデリング率又は骨代謝率を減少させる請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記グリセオリンは、グリセオリンＩである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
（ａ）グリセオリンの治療的有効量；及び（ｂ）薬剤的に許容される担体を含むことを特徴とする骨疾患の予防又は治療用の医薬組成物。
【請求項９】
（ａ）グリセオリンの食品的有効量；及び（ｂ）食品的に許容される担体を含むことを特徴とする骨疾患改善用の食品。
【請求項１０】
骨疾患の予防又は治療用組成物を製造するためのグリセオリンの使用。
【請求項１１】
グリセオリンを有効成分として含む医薬組成物を骨疾患患者に投与する工程を含むことを特徴とする骨疾患の予防又は治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨疾患の予防又は治療用組成物に関する。より詳細には、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患の予防、治療又は改善用の医薬組成物又は食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
正常な骨のリモデリング過程は、骨形成と骨吸収とのバランスでなされ、このような骨形成と骨吸収は、大きく３つの細胞、すなわち、軟骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞の相互作用によって行われる。特に、骨芽細胞の増殖と分化は、骨の石灰化と密接な関係があり、骨芽細胞において重要な転写因子であるＲＵＮＸ２に変異が生じるか発現量が減少すると、骨の石灰化が生じない。ＲＡＮＫＬ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦ−κＢ  ｌｉｇａｎｄ）は、骨芽細胞の分化過程において発現し、破骨細胞の分化を促進する因子であることが報告されている。ＯＰＧ（Ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）も、骨芽細胞において発現し、ＲＡＮＫＬの役割を抑制することにより破骨細胞の分化を抑制する因子であることが示唆されている。
【０００３】
骨は、人体の軟組織と体重を支持し、内部機関を取り囲んで内部の臓器を外部の衝撃から保護する。また、筋肉や内臓を構造的に支持するだけでなく、体内のカルシウム、リンやマグネシウムのような必須ミネラルを貯蔵する人体の重要な部分の一つである。したがって、成長が終わった大人の骨は死ぬ日まで、絶え間なく、古い骨は除去して新しい骨に取り替える生成と吸収の過程を非常に動的、持続的に繰り返し再生しながらバランスを維持する。これを骨リモデリング（ｂｏｎｅ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）と言う（非特許文献１）。古い骨は除去して新しい骨に取り替える骨代謝（ｂｏｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ）は、成長とストレスによって起こる骨の微細な損傷を回復させて適切に骨の機能を維持するのに欠かせないことである（非特許文献２）。
【０００４】
骨リモデリングには、大きく二種類の細胞が関与することが知られている。二つの細胞中の一つは骨を生成する骨芽細胞であり、他の一つは骨を破壊する破骨細胞である。骨芽細胞は、ＲＡＮＫＬ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦ−κＢ  ｌｉｇａｎｄ）とこれのデコイ受容体（ｄｅｃｏｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）であるＯＰＧ（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）を生成する。ＲＡＮＫＬが破骨前駆細胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ）の表面にある受容体であるＲＡＮＫに結合すると、破骨前駆細胞が破骨細胞に成熟化（ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）して骨吸収（ｂｏｎｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ）が起こる。しかし、ＯＰＧがＲＡＮＫＬと結合すると、ＲＡＮＫＬとＲＡＮＫとの結合が遮られて破骨細胞の形成が抑制され、必要以上の骨吸収が抑制される（非特許文献３及び４）。
【０００５】
骨粗鬆症は、様々な原因によって骨の質量が減少し、骨組職の微細構造の退化により骨折の危険が持続的に増加する疾患であって、骨を構成するミネラル（特にカルシウム）と基質が減少した状態である。さらに、この疾患は、骨リモデリングのバランスが崩れて破骨作用が造骨作用よりも増加した状態で発生する（非特許文献５）。正常な骨の内部は、網目のように緻密な構造をなしているが、骨粗鬆症の場合には構造間の間隔が広くなり微細構造が薄くなって弱化することにより、小さい衝撃にも骨折し易い状態に進行する（非特許文献６）。骨粗鬆症では、閉経期が始まると同時に急速な骨損失（年間２％〜３％）が始まり、脊椎の圧迫骨折及び手首骨折のリスクが増加する閉経期以後の骨粗鬆症（Ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）と、７０歳以上の男女の老人に徐々に発生し（年間０．５％〜１％）、寛骨（ｈｉｐ  ｂｏｎｅ）と脊椎骨の漸進的な骨損失をもたらす老年期の骨粗鬆症（Ｓｅｎｉｌｅ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）と、年齢に関わらず疾病（例えば、内分泌疾患、消化管疾患、悪性腫瘍等）や薬物（例えば、副腎皮質ホルモン、坑がん化学療法、甲状腺ホルモン、抗痙攣剤、抗凝固剤、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、ＧｎＲＨ等）、アルコール、喫煙、事故によって発生する続発性骨粗鬆症（Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）と、に分類される（非特許文献７及び８）。
【０００６】
乳がん、前立腺がん又は多発性骨髓腫の患者においてほとんど常に骨転移が生じており（非特許文献９）、上記がん患者らがどのぐらい長生きできるかは骨転移の有無によって影響されるものと示唆されている。乳がんの患者や前立腺がんの患者の死亡率が高くなる理由は、がん細胞が選択的に骨に転移するためである。乳がんで観察される骨転移は、ほとんど骨を破壊する溶解性骨転移（ｏｓｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）であって、乳がん細胞が骨に直接的な影響を及ぼすのではなく破骨細胞を刺激することで起こることが知られている（非特許文献１０）。一方、前立腺がんで観察される骨転移は、造骨性骨転移（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）である。造骨性骨転移も骨溶解と密接な関連があることが知られている。骨に転移したがん細胞は、骨周囲の微細環境で増殖し、破骨細胞や造骨細胞の活性を刺激することで、溶解性骨転移に進行するか、造骨性骨転移に進行するかを決定する（非特許文献１１）。乳がん患者の約８０％が、がん細胞の骨転移を発症し、転移した乳がん細胞は破骨細胞を活性化させる（非特許文献１２及び１３）。活性化された破骨細胞は、骨周囲の微細環境のバランスを破壊させて骨溶解をもたらし、このような現象によって病的骨折がよく発生するだけでなく、白血球減少症（ｌｅｕｋｏｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｉｃ  ａｎａｅｍｉａ）、骨の奇形、高カルシウム血症、痛み、神経圧迫症侯群（ｎｅｒｖｅｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）等の骨に係わる疾患が引き起こされる（非特許文献１４）。
【０００７】
エストロゲン不足現象は、閉経以後の女性でよく見られ、骨芽細胞と破骨細胞に影響を与えて骨形成の程度より骨吸収の程度がより多くなって骨粗鬆症を誘発する主な要因となることが知られるようになった。このような理由から、骨粗鬆症の治療のためにエストロゲンのようなホルモンが長期間に亘り患者に投与されていたが、乳がん、子宮体がん等の発病原因になるという研究も多くある。現在は、エストロゲン受容体と結合してエストロゲンと類似する機能をするが副作用はない、植物由来のフィトエストロゲンを開発するために多くの研究が進められており、単離された候補物質の、閉経以後のエストロゲン欠乏による骨粗鬆症の予防及び治療効果に関する研究が活発に行われているところである。実例として、フィトエストロゲンは骨と心血関係でエストロゲン活性を示す一方で、乳房と子宮では抗エストロゲン活性を持つことが報告された。全てのフィトエストロゲンは構造的にエストロゲンと類似するフェノール性化合物であり、イソフラボン、リグナン、及びクメスタン等がフィトエストロゲンの代表的な物質である。フィトエストロゲンのエストロゲン活性は、骨吸収を防止して骨密度を維持することが知られるようになった。多くの研究で大豆のイソフラボンが卵巣を摘除したネズミにおいて骨減少を効果的に防止することを示している。民間で骨粗鬆症の予防のためによく紅花の種を服用してきたことを見ると、大豆のイソフラボンだけでなく、他の植物来由のフィトエストロゲンも、骨を保護する効果を有することが分かる。
【０００８】
大豆から新しく抽出したフィトアレキシンの一種類であるグリセオリン（ｇｌｙｃｅｏｌｌｉｎ）は、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）であり、ダイドゼインから作られる抗エストロゲン効果を有する物質である。最近、グリセオリンの抗エストロゲン効果によって乳がんと子宮がんを抑制するという内容の研究結果が活発に行われている。このような研究結果は、閉経以後の女性のエストロゲン欠乏による骨粗鬆症治療のために甘受しなければならない危ない副作用である乳がんと子宮体がんを誘発するホルモン剤に代替できるということから、非常に重要な候補物質である。
【０００９】
本明細書の全体にわたって多数の論文及び特許文献が参照され、その引用が表示されている。引用された論文及び特許文献の開示内容は、その全体が本明細書に参照として組み込まれ、本発明の属する技術分野の水準及び本発明の内容がより明確に説明される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｎｐａｋｕｓｈｉｔｓｕ  Ｋａｋｕｓａｎ  Ｋｏｓｏ．，５０（６Ｓｕｐｐｌ）：６６４−６６９（２００５）
【非特許文献２】Ｃｏｈｅｎ−Ｓｏｌａｌ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒａｐｉｅ．，５８（５）：３９１−３９３（２００３）
【非特許文献３】Ｔｈｅｉｌｌ  ＬＥ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０：７９５−８２３（２００２）
【非特許文献４】Ｗａｇｎｅｒ  ＥＦ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｇｅｎｅｔ  Ｄｅｖ．，１１：５２７−５３２（２００１）
【非特許文献５】Ｉｑｂａｌ  ＭＭ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｍｅｄ  Ｊ．，９３（１）：２−１８（２０００）
【非特許文献６】Ｓｔｅｐａｎ  ＪＪ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ  Ｒｅｇｕｌ．，３７（４）：２２５−２３８（２００３）
【非特許文献７】Ｒｏｓｅｎ  ＣＪ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，３５３（６）：５９５−６０３（２００５）
【非特許文献８】Ｄａｖｉｄｓｏｎ  Ｍ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｉｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ．，  １２（４）：７５−８２（２００２）
【非特許文献９】Ｋｏｚｌｏｗ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍａｍｍａｒｙ  Ｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌ  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．，１０（２）：１６９−１８０（２００５）
【非特許文献１０】Ｂｏｙｄｅ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃ．，４：１５３７−１５５４（１９８６）
【非特許文献１１】Ｃｈｏｏｎｇ  ＰＦ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｌａｔ  Ｒｅｓ．，４１５Ｓ：Ｓ１９−Ｓ３１（２００３）
【非特許文献１２】Ｂｅｎｄｒｅ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｌａｔ  Ｒｅｓ．，４１５（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３９−Ｓ４５（２００３）
【非特許文献１３】Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９（６）：３３５３−３３６２（２００２）
【非特許文献１４】Ｒｏｏｄｍａｎ  ＧＤ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，３５０：１６５５−１６６４（２００４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者らは骨疾患の治療又は予防に副作用無しで有用に使用できる物質を開発するために研究努力した。その結果、大豆から抽出したフィトアレキシン（ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ）の一種であるグリセオリン（ｇｌｙｃｅｏｌｌｉｎ）が、動物細胞モデルによる実験で骨芽細胞から破骨細胞への分化及び活性を抑制し、骨粗鬆症誘導動物モデルで骨粗鬆症の治療の効能を有することを実験的に確認し、骨粗鬆症をはじめ多様な骨疾患の治療に有用な活性成分として開発される可能性があることを証明することで、本発明を完成した。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患の予防又は治療用組成物を提供することにある。
【００１３】
本発明の他の目的は、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患の予防又は治療用の医薬組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明のまた他の目的は、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患改善用の食品を提供することにある。
【００１５】
本発明のまた他の目的は、骨疾患の予防又は治療用組成物を製造するためのグリセオリンの使用を提供することにある。
【００１６】
本発明のまた他の目的は、グリセオリンを有効成分として含む医薬組成物を骨疾患患者に投与する工程を含む骨疾患の予防又は治療方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の目的及び利点は、下記の発明の詳細な説明、請求の範囲及び図面によってより明確に説明される。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の一態様によれば、本発明は、グリセオリンを有効成分として含む骨疾患の予防又は治療用組成物を提供する。
【００１９】
本発明の他の一態様によれば、本発明は、（ａ）グリセオリンの治療的有効量；及び（ｂ）薬剤的に許容される担体を含む骨疾患の予防又は治療用の医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明のまた他の一態様によれば、本発明は、（ａ）グリセオリンの食品的有効量；及び（ｂ）食品的に許容される担体を含む骨疾患改善用の食品を提供する。
【００２１】
本発明のまた他の一態様によれば、本発明は、骨疾患の予防又は治療用組成物を製造するためのグリセオリンの使用を提供する。
【００２２】
本発明のまた他の一態様によれば、本発明は、グリセオリンを有効成分として含む医薬組成物を骨疾患患者に投与する工程を含む骨疾患の予防又は治療方法を提供する。
【００２３】
本発明者らは、骨疾患の治療又は予防に副作用無しで有用に使用できる物質を開発するために研究努力した。その結果、大豆から抽出したフィトアレキシンの一種であるグリセオリンが、動物細胞モデルによる実験で骨芽細胞から破骨細胞への分化及び活性を抑制し、骨粗鬆症誘導動物モデルで骨粗鬆症の治療の効能を持つことを実験的に確認し、骨粗鬆症をはじめ多様な骨疾患の治療に有用な活性成分として開発される可能性があることを証明することで、本発明を完成した。
【００２４】
本発明の有効成分である「グリセオリン」は、大豆から過敏性反応又は真菌ストレス（ｆｕｎｇａｌ  ｓｔｒｅｓｓ）中に生成される一種のフィトアレキシン（ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ）物質である。
【００２５】
本発明の具体的な一実施例によれば、上記グリセオリン化合物は、水浸された大豆（ｓｏｙｂｅａｎ）をアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）菌株とともに培養した大豆の抽出物から、通常の精製方法、例えばクロマトグラフィー分離方法によって分離及び精製して得られる。
【００２６】
上記グリセオリンは、自然界でグリセオリンＩが最も主な形態であり、これの２つの異性体（ｉｓｏｍｅｒ）であるグリセオリンＩＩ及びＩＩＩは微量で存在する（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００６；１２（２３）Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １，２００６，７１５９−７１６４，Ａｎｔｉｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ  Ｇｌｙｃｅｏｌｌｉｎｓ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ）。
【００２７】
本発明において活性成分「グリセオリン」とは、グリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ、グリセオリンＩＩＩ、又はこれらの混合物をいずれも含む意味である。
【００２８】
本発明の好ましい実現例によれば、上記グリセオリンは、グリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ、グリセオリンＩＩＩ、又はこれらの混合物である。本発明のより好ましい実現例によれば、上記グリセオリンはグリセオリンＩである。
【００２９】
本発明の好ましい実現例によれば、本発明のグリセオリンは破骨細胞の分化を抑制する。
【００３０】
破骨細胞は、血液細胞（造血母細胞）から発生した細胞であって、血液内にカルシウムが不足するか骨リモデリングしなければならない場合に、骨を破壊する機能を持つ。また、本明細書において「骨吸収」とは、破骨細胞が強力な酸及びタンパク質分解酵素を分泌して骨を分解することを意味する。
【００３１】
本発明の他の好ましい実現例によれば、本発明のグリセオリンは、骨芽細胞又は前骨芽細胞（ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）においてＲｕｎｘ２タンパク質の分解を促進する。
【００３２】
本発明のまた他の好ましい実現例によれば、本発明のグリセオリンは、骨芽細胞においてＲａｎｋｌ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦ  κＢ  ｌｉｇａｎｄ）のｍＲＮＡ発現を抑制して破骨細胞の分化を抑制する効能を持つ。
【００３３】
結果として、本発明のグリセオリンは、骨芽細胞又は前骨芽細胞の分化を抑制し、骨代謝率（ｂｏｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｒａｔｅ）を減少させて骨疾患の治療又は予防の効能を持つ。
【００３４】
また、本発明の有効成分のグリセオリンは、上記のような破骨細胞の分化を抑制する作用を通じて、骨疾患の治療又は予防の効能を持つ。
【００３５】
本発明の他の好ましい実現例によれば、本発明の組成物によって治療又は予防され得る骨疾患の例は、がん細胞の骨転移によってもたらされる骨の損失若しくは損傷、骨粗鬆症、骨軟化症、くる病、線維性骨炎、無形成骨症又は代謝性骨疾患、骨溶解、白血球減少症、骨の奇形、高カルシウム血症又は神経圧迫症侯群等である。
【００３６】
特に、本発明の組成物は、骨粗鬆症の予防及び治療に優れた効能を発揮する。
【００３７】
骨粗鬆症は、原発性（一次性）骨粗鬆症と続発性（二次性）骨粗鬆症とに分けることができる。原発性骨粗鬆症は、カルシウムとビタミンＤを適切に摂取しないか、肉体的運動を適切にしないか、吸煙するか、閉経期以後の女性や老年期の男性に主に発生し得る骨粗鬆症を意味する。続発性骨粗鬆症は、特定の疾患や薬物によって骨粗鬆症が誘発されることを意味する。この場合、若い人でも骨粗鬆症が引き起こされることがあり、疾患や薬物の深刻性と曝された期間に比例して骨強度が減少して骨折の発生率が増加する。疾患としては、甲状腺機能亢進症、副甲状線機能亢進症、クッシング症候群（副腎皮質ホルモン過多分泌疾患）、早期閉経、人為的手術（卵巣切除）による閉経、性腺機能低下症、慢性肝疾患（肝硬変症）、関節リウマチ、慢性腎不全、胃切除手術等が挙げられ、薬物としてはステロイド（副腎皮質ホルモン剤）、抗痙攣剤（抗てんかん薬）、ヘパリン等がある。
【００３８】
本発明の組成物は、がん細胞又はがん組織の骨転移による骨疾患の予防及び治療に優れた効果を奏する。例えば、上記がん細胞又はがん組織は、胃がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、肝がん、直膓がん、気管支がん、鼻咽頭がん、喉頭がん、膵臓がん、膀胱がん、結腸がん、子宮頸がん、子宮体がん、悪性の脳腫瘍、前立腺がん、骨がん、皮膚がん、甲状腺がん、白血病、非ホジキンリンパ腫、副甲状線がん及び尿管がんの細胞又は組職を含むが、これに限定されるものではない。
【００３９】
本発明の組成物は、医薬組成物に調製されてもよい。本発明の好ましい実現例によれば、本発明の組成物は、（ａ）グリセオリンの治療的有効量；及び（ｂ）薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物である。本明細書において「治療的有効量」とは、上述したグリセオリンの骨疾患の治療又は予防の効能を達成するのに十分な量を意味する。
【００４０】
本発明の組成物が医薬組成物に調製される場合、本発明の医薬組成物は薬剤的に許容される担体を含む。本発明の医薬組成物に含まれる薬剤的に許容される担体は、製剤時に通常用いられるものであって、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、滑石、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油等を含むが、これに限定されるものではない。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、上記成分の他に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤等をさらに含んでもよい。好適な薬剤的に許容される担体及び製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈ  ｅｄ．，１９９５）に詳しく記載されている。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、経口又は非経口投与することができ、好ましくは経口投与方式で適用される。本発明の医薬組成物の好適な投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性といった要因によって多様に処方されることができる。本発明の医薬組成物の一般的な投与量は、大人基準で０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。
【００４３】
本発明の医薬組成物は、当該発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法によって、薬剤的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することにより、単位用量形態で製造されるか、あるいは多用量形態で製造されてもよい。このとき、剤形はオイル又は水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤又は乳化液の形態であるか、エキス剤、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤の形態であってもよく、分散剤又は安定化剤をさらに含んでもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、食品に調製されてもよい。
【００４５】
本発明の好ましい実現例によれば、本発明の組成物は、（ａ）グリセオリンの食品的有効量；及び（ｂ）食品的に許容される担体を含む食品である。
【００４６】
本発明の組成物が食品に調製される場合、有効成分としてグリセオリンだけでなく、食品製造時に通常添加される成分を含み、例えば、タンパク質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味料及び甘味料を含む。上述した炭水化物の例は、単糖類、例えば、ブドウ糖、果糖等；二糖類、例えば、マルトース、スクロース、オリゴ糖等；及び多糖類、例えば、デキストリン、シクロデキストリン等のような通常の糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトール等の糖アルコールである。甘味料としては、天然甘味料［タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、グリチルリチン等）］及び合成甘味料（サッカリン、アスパルテーム等）を用いることができる。例えば、本発明の食品が飲料に調製される場合には、本発明のグリセオリン以外に、クエン酸、異性化糖、砂糖、ブドウ糖、酢酸、リンゴ酸、果汁、トチュウ抽出液、ナツメ抽出液、カンゾウ抽出液等をさらに含ませてもよい。
【発明の効果】
【００４７】
本発明の特徴及び利点を要約すれば次の通りである。：
（Ｉ）本発明は、有効成分としてグリセオリンを含む骨疾患の治療又は予防用組成物を提供する。
（ＩＩ）本発明の有効成分であるグリセオリンは、骨芽細胞でＲｕｎｘ２タンパク質の分解を促進させ、ＲａｎｋｌのｍＲＮＡ発現を減少させて骨芽細胞又は破骨細胞の分化を抑制し、高用量ビタミンＤの投与によって誘導された骨粗鬆症動物モデルで骨粗鬆症の症状を大きく緩和させる。
（ＩＩＩ）本発明の組成物は、骨粗鬆症をはじめ破骨細胞の過度な増殖及び活性によって発生する骨疾患の予防及び治療の効能を持つ。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１ａ】図１ａは、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞が増殖する間、グリセオリンを２０μＭの濃度で処理して細胞の形状を測定した結果である。細胞の形状がグリセオリンを処理した場合と処理していない場合とで類似することを示す。
【図１ｂ】図１ｂは、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞が増殖する間、グリセオリンを１０及び２０μＭの濃度で処理した後、細胞の数を測定した結果である。細胞の数がグリセオリンを処理していない場合と類似するレベルであることを示す。
【図１ｃ】図１ｃは、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞が増殖する間、グリセオリンを１０及び２０μＭの濃度で処理した後、ＭＴＴ測定した結果である。細胞の数がグリセオリンを処理していない場合と類似するレベルであることを示す。
【図１ｄ】図１ｄは、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞を分化誘導させながらグリセオリンを０、５、１０、２５、５０μＭの濃度で処理してＲｕｎｘ２タンパク質レベルを測定した結果である。グリセオリンの処理濃度が増加するほどＲｕｎｘ２タンパク質レベルが減少する結果を示す。
【図１ｅ】図１ｅは、ＭＣ３Ｔ３細胞を分化誘導させながらグリセオリンを１０及び２０μＭの濃度で処理してＲｕｎｘ２のｍＲＮＡレベルを測定した結果である。Ｒｕｎｘ２のｍＲＮＡレベルがグリセオリンの処理濃度と関係なく変化がないことを示す。
【図１ｆ】図１ｆは、ＭＣ３Ｔ３細胞を分化誘導させながらグリセオリンを２０μＭの濃度で処理し、ここにプロテアソーム阻害剤であるＭＧ１３２を処理したものと、処理していないものとのＲｕｎｘ２タンパク質レベルを比較した結果である。プロテアソーム阻害剤であるＭＧ１３２で処理した場合、処理していない場合に対して、減少したＲｕｎｘ２タンパク質レベルが回復することを示す。
【図２ａ】図２ａは、マウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞を分化誘導させながらグリセオリンを０、１０、２０μＭの濃度で処理してＲｕｎｘ２タンパク質レベルを測定した結果である。Ｒｕｎｘ２タンパク質レベルがグリセオリンの処理濃度が増加するほど減少することを示す。Ｄ２１は骨芽細胞の分化誘導後の２１日目を意味する。
【図２ｂ】図２ｂは、図２ａと同じ条件でＲｕｎｘ２  ｍＲＮＡレベルを測定した結果である。Ｒｕｎｘ２  ｍＲＮＡレベルはグリセオリンの処理濃度と関係なく変化がないことを示す。しかし、骨芽細胞の分化マーカーであるオステオカルシンのｍＲＮＡレベルはグリセオリンの処理濃度によって減少することを示す。
【図２ｃ】図２ｃは、ＲａｎｋｌとＯｐｇのｍＲＮＡレベルをリアルタイムＰＣＲで測定した結果である。グリセオリンの処理濃度によって減少したＲａｎｋｌ  ｍＲＮＡは、Ｏｐｇ  ｍＲＮＡは類似するか少し増加する傾向を示す。
【図３ａ】図３ａは、マウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞を分化誘導させながらグリセオリンを０、１０、２０μＭの濃度で処理してＡＬＰ染色して測定した結果である。グリセオリンの処理濃度が増加するにつれて骨芽細胞の分化が抑制されることを、ＡＬＰ染色（分化後７日）の減少から確認することができる。
【図３ｂ】図３ｂは、図３ａと同じ条件でＡｌｉｚａｒｉｎ  Ｒｅｄ染色（分化後２１日）を通じて骨芽細胞の分化を測定した結果である。グリセオリンの処理濃度が増加するにつれて骨芽細胞の分化が抑制されることが分かる。
【図３ｃ】図３ｃは、図３ａと同じ条件下で骨芽細胞の分化誘導後２１日にカルシウム濃度を測定した結果である。グリセオリンの処理濃度が増加するほどカルシウム濃度が減少することが分かる。
【図４ａ】図４ａは、ＲＡＷ２６４．７細胞を分化誘導させながらグリセオリンを０、５、１０、２５μＭの濃度で処理して破骨細胞への分化をＴＲＡＰ染色により確認した結果である。グリセオリンの処理濃度が増加するにつれて破骨細胞への分化が抑制される結果を示す。
【図５ａ】図５ａは、高用量ビタミンＤの投与によって得られた骨粗鬆症マウス動物モデルを利用してグリセオリンの骨保護効果を立証する実験結果を示す。図５ａは、動物モデルマウスの頭蓋骨をマイクロＣＴ分析した３次元写真である。
【図５ｂ】図５ｂは、高用量ビタミンＤの投与によって得られた骨粗鬆症マウス動物モデルを利用してグリセオリンの骨保護効果を立証する実験結果を示す。図５ｂは、動物モデルマウスの頭蓋骨のマイクロＣＴ分析後、ＢＭＣ分析、ＢＭＤ分析及びＴＭＤ分析を行った結果である。高用量ビタミンＤの投与によって誘導されるマウスの頭蓋骨の骨粗鬆症状がグリセオリンの投与によって確実に回復することが分かる。
【図６ａ】図６ａは、高用量ビタミンＤの投与によって得られた骨粗鬆症マウス動物モデルを利用してグリセオリンの骨保護効果を立証する実験結果を示す。図６ａは、高用量ビタミンＤの投与によって得られた骨粗鬆症マウス動物モデルで、グリセオリンの投与によるコラーゲン合成の影響を  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色方法により測定した結果である。グリセオリンの投与によってコラーゲン合成が増加することが分かる。また、グリセオリンの投与による破骨細胞の増殖に対する影響をＴＲＡＰ染色により測定した結果、グリセオリンの投与によって破骨細胞の数が減少されることが分かる。
【図６ｂ】図６ｂは、高用量ビタミンＤの投与によって得られた骨粗鬆症マウス動物モデルを利用してグリセオリンの骨保護効果を立証する実験結果を示す。図６ｂは、図６ａにおける測定結果を数値化してグラフで示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。これら実施例は、単に本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の要旨に沿って本発明の範囲がこれら実施例によって制限されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【実施例】
【００５０】
実験方法及び材料
実施例１：細胞培養
胎児１８．５日目のマウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞とマウス由来のＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞を１０％ウシ胎児血清が含まれたα−ＭＥＭ培地とともに培養容器に入れて、５％二酸化炭素を含む湿潤雰囲気下で３７℃恒温器で培養した。骨芽細胞とＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞の分化誘導のために１０％ウシ胎児血清が含まれたα−ＭＥＭ培地に５０ｕｇ／ｍｌのアスコルビン酸と１０ｍＭ  β−グリセロホスフェートを添加した。ＲＡＷ２６４．７（ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）細胞は１０％ウシ胎児血清が含まれたＤ−ＭＥＭ培地で培養し、破骨細胞への分化を誘導するために１０％ウシ胎児血清が含まれたα−ＭＥＭ培地に２００ｎｇ／ｍｌのＲＡＮＫＬを添加した。
【００５１】
実施例２：骨粗鬆症マウスモデル
正常マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を骨粗鬆症マウスに誘導するために高用量ビタミンＤ（６０×１０４ＩＵ／ｋｇ体重）を一日に一回ずつ３日間皮下注射した後、最初に注射した日から１０日間観察した。高用量ビタミンＤの投与によって破骨細胞の活性が増加し、これによってマウスの骨量が減少することになる。
【００５２】
実施例３：グリセオリンの準備
市販の１０時間程度水浸されたプンサンナムル豆（Ｇｌｙｃｉｎ  ｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ）１ｋｇを０．５％のアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）菌株で処理した後、２０℃で３日間培養した大豆をメタノール（５Ｌ）溶媒で処理して、グリセオリンが１，３００ｐｐｍ含有された２１０ｇの抽出物を得た。得られたグリセオリン含有抽出物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後、溶解した画分を減圧蒸留してシリカゲルを充填剤として用いたカラムクロマトグラフィー法を利用し、ＣＨ２Ｃｌ２とメタノールの割合を９７：３にした溶媒を用いて純粋なグリセオリンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、又はこれらの混合物形態に分離し、これらを実験に使用した。
【００５３】
実施例４：グリセオリンの処理
ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞は、分化誘導の過程の間、グリセオリンを０、５、１０、２５、５０μＭの濃度で処理した。ＲＡＷ２６４．７細胞は、分化誘導の過程の間、グリセオリンを０、５、１０、２５μＭの濃度で処理した。マウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞は、分化誘導の過程の間、グリセオリンを０、１０、２０μＭの濃度で処理した。高用量ビタミンＤを投与して骨粗鬆症を誘導したマウスは、グリセオリンを０、０．５、５μｇ／ｋｇ体重の濃度で９日間一日に一回ずつ処理した。
【００５４】
実験結果
実験例１：骨芽細胞の増殖と分化過程におけるグリセオリンの効果
グリセオリンの骨芽細胞の増殖に係る機能を明らかにするために、ＭＣ３Ｔ３細胞にグリセオリンを処理した後、細胞の形状、細胞の数、ＭＴＴ分析を行った結果、グリセオリンを処理していない場合と類似することが分かった（図１ａ、図１ｂ及び図１ｃ参照）。
また、ＭＣ３Ｔ３細胞の増殖及び分化を誘導させながらグリセオリンを０、５、１０、２５、５０μＭの濃度で処理して、Ｒｕｎｘ２タンパク質レベルを測定した結果、処理したグリセオリンの濃度が増加するほどＲｕｎｘ２タンパク質レベルが減少することが分かった（図１ｄ参照）。
【００５５】
次に、グリセオリンの処理によってＲｕｎｘタンパク質レベルが減少するのが、Ｒｕｎｘ２のｍＲＮＡレベルが減少したことに起因するのかを確認するために、グリセオリンを処理した後、Ｒｕｎｘ２のｍＲＮＡレベルを調べた。その結果、Ｒｕｎｘ２のｍＲＮＡ量はグリセオリンの処理に関係なく変わらないことが分かった（図１ｅ参照）。
【００５６】
次に、グリセオリンが骨芽細胞の増殖及び分化過程でＲｕｎｘ２タンパク質の量を減少させる効果が、ユビキチン結合されたＲｕｎｘ２タンパク質の分解を促進することでＲｕｎｘ２タンパク質の安定性を低める機序によってなされるものなのかを調べた。骨芽細胞にプロテアソーム阻害剤であるＭＧ１３２を処理してＲｕｎｘ２タンパク質レベルを確認した結果、グリセオリンによって減少したＲｕｎｘ２タンパク質の量がＭＧ１３２の処理によって回復することを確認した（図１ｆ参照）。このような結果は、グリセオリンが骨芽細胞でユビキチンと結合されたＲｕｎｘ２の分解を促進させることにより骨芽細胞の分化を抑制する効果を有することを立証するものである。
【００５７】
グリセオリンの機能を明らかにするために、マウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞を分化させながら（分化誘導後２１日間）、グリセオリンを０、１０、２０μＭの濃度で処理した後、骨芽細胞の分化に係るタンパク質とｍＲＮＡを分離し、これらのレベルを調べた。  ＭＣ３Ｔ３細胞と同様に、グリセオリンの処理濃度が増加するほどＲｕｎｘ２タンパク質レベルは減少したが（図２ａ参照）、ｍＲＮＡレベルは変わらないことが、再度証明された（図２ｂ参照）。
【００５８】
グリセオリンの処理濃度が増加するにつれて骨芽細胞分化のマーカーであるオステオカルシンのｍＲＮＡレベルが減少することから、骨芽細胞への分化がグリセオリンによって抑制されることが分かった（図２ｂ参照）。さらに、骨芽細胞の分化過程中に分泌して破骨細胞の分化を促進させるＲａｎｋｌ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦ  κＢ  ｌｉｇａｎｄ）及びＲａｎｋｌのデコイ受容体であるＯｐｇ（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）のｍＲＮＡ発現レベルをリアルタイムＰＣＲにより調べた。その結果、ＲａｎｋｌのｍＲＮＡレベルはグリセオリンの濃度が増加するにつれて減少することを確認したが、ＯｐｇのｍＲＮＡレベルは変化がないか少し増加する傾向があった（図２ｃ参照）。結果として、グリセオリンは骨芽細胞の分化過程中にＲａｎｋｌ／Ｏｐｇ比を減少させるという結果を確認した（図２ｃ参照）。結果として、  グリセオリンは骨芽細胞の増殖過程には大きな影響を与えなかったが、分化過程でＲｕｎｘ２のタンパク質分解を促進させて分化を抑制し、これによりＲａｎｋｌ／Ｏｐｇ比を減少させることで破骨細胞の分化を抑制させることと推定される。
【００５９】
実験例２：グリセオリンの骨芽細胞分化の抑制効果
マウスの頭蓋骨から分離した骨芽細胞を分化誘導する過程の間、グリセオリンを０、１０、２０μＭの各濃度で処理してＡＬＰ染色（分化誘導後７日）とＡｌｉｚａｒｉｎ  Ｒｅｄ染色（分化誘導後２１日）により分化の程度を測定した結果、グリセオリンの濃度が増加するほど骨芽細胞の分化が抑制されることを確認した（図３ａ、図３ｂ参照）。
【００６０】
また、カルシウム濃度（分化誘導後２１日）を測定した結果、グリセオリンの濃度が増加するほどカルシウム濃度が減少することを確認した（図３ｃ参照）。このような結果は、実験例１で示した骨芽細胞の分化過程中の機能遺伝子を調べた結果と一致する。
【００６１】
実験例３：グリセオリンの破骨細胞分化の抑制効果
ＲＡＷ２６４．７細胞を破骨細胞に分化誘導する過程の間、グリセオリンを０、５、１０、２５μＭの各濃度で処理し、４日後にＴＲＡＰ染色法で破骨細胞を観察した。その結果、グリセオリンの濃度が増加するほどＴＲＡＰ染色された破骨細胞が減少することを確認した（図４ａ参照）。このような結果は、実験例１で示した骨芽細胞の分化過程に関与する機能遺伝子を調べた結果と一致する。
【００６２】
実験例４：グリセオリンの骨粗鬆症誘導マウスモデルにおける骨保護効果
インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で検証されたグリセオリンの破骨細胞分化の抑制効果をインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）実験で検証するために、マウスに高用量ビタミンＤを３日間一日に一回注射して骨粗鬆症を誘導した。最初にビタミンＤを注射した日から９日間、一日に一回ずつグリセオリンを各濃度で注射した後、１０日目にマウスを犠牲にし、頭蓋骨に対してマイクロＣＴ分析、Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色、ＴＲＡＰ染色で観察した。その結果、骨ミネラル含量（ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｃｏｎｔｅｎｔｓ，ＢＭＣ）、骨ミネラル密度（ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ，ＢＭＤ）、組職ミネラル含量（ｔｉｓｓｕｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｃｏｎｔｅｎｔｓ，ＴＭＣ）が、グリセオリンの濃度が増加するほど増加することを確認した（図５ａ及び図５ｂ参照）。Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色で骨の細胞外基質と知られているコラーゲンがグリセオリンの投与によって増加することを確認し、ＴＲＡＰ染色で破骨細胞を観察した結果、グリセオリンによって破骨細胞の数が減少することを確認した（図６ａ及び図６ｂ参照）。
【００６３】
以上、本発明の特定の部分を詳しく記述したが、当業界における通常の知識を有する者にとってこのような具体的な記述は単に好ましい実現例に過ぎず、これに本発明の範囲が制限されるものではない点は明きらかである。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれの等価物によって定義されると言えよう。
【図１ａ】
2013528583.tif 000003
【図１ｂ】
2013528583.tif 000004
【図１ｃ】
2013528583.tif 000005
【図１ｄ】
2013528583.tif 000006
【図１ｅ】
2013528583.tif 000007
【図１ｆ】
2013528583.tif 000008
【図２ａ】
2013528583.tif 000009
【図２ｂ】
2013528583.tif 000010
【図２ｃ】
2013528583.tif 000011
【図３ａ】
2013528583.tif 000012
【図３ｂ】
2013528583.tif 000013
【図３ｃ】
2013528583.tif 000014
【図４ａ】
2013528583.tif 000015
【図５ａ】
2013528583.tif 000016
【図５ｂ】
2013528583.tif 000017
【図６ａ】
2013528583.tif 000018
【図６ｂ】
2013528583.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成24年12月28日(2012.12.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）グリセオリンの治療的有効量；及び（ｂ）薬剤的に許容される担体を含むことを特徴とする骨疾患の予防又は治療用の医薬組成物。
【請求項２】
前記骨疾患は、がん細胞の骨転移によってもたらされる骨の損失若しくは損傷、骨粗鬆症、骨軟化症、くる病、線維性骨炎、無形成骨症又は代謝性骨疾患である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記グリセオリンは、破骨細胞の分化を抑制する請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記グリセオリンは、骨芽細胞又は前骨芽細胞（ｐｒｅｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）においてＲｕｎｘ２タンパク質の分解を促進する請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記グリセオリンは、骨芽細胞においてＲａｎｋｌ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ＮＦκＢ  ｌｉｇａｎｄ）のｍＲＮＡ発現を抑制する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記グリセオリンは、骨芽細胞又は破骨細胞の分化を抑制して骨リモデリング率又は骨代謝率を減少させる請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記グリセオリンは、グリセオリンＩである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
食品又は飲料に添加するための請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
食品又は飲料に対する添加剤としての請求項１から７のいずれかに記載の組成物の使用。
【国際調査報告】
2013528583.tif 000020
2013528583.tif 000021
2013528583.tif 000022
2013528583.tif 000023
2013528583.tif 000024
2013528583.tif 000025