(57)【要約】液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法が開示されている。液体クロマトグラフィーカラムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定できる液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムも開示されている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法であって、
クロマトグラフィー保持データを利用する工程であって、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離中で、２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定し、前記第２の溶媒体積濃度は、前記第１の溶媒体積濃度とは異なる工程と、
最適な容量比値ｋｏｐｔと組み合わせて、前記推定された容量比を利用する工程であって、前記液体クロマトグラフィー分離のための（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値と（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値とを決定する工程とを含む方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、
前記容量比、ｋ’ｓ、および前記第１のおよび第２の溶媒体積濃度を利用する工程であって、
順相システムのためのｋ＝ｋ０φ−ｍ、および逆相システムのためのｌｎｋ＝ａ−ｍφから選択された少なくとも１つの式のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを決定する工程と、
初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅのそれぞれを演算する工程であって、
順相システムのためのφ＝［（ｋ０／ｋｏｐｔ）１／ｍ］および逆相システムのためのφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］から選択された少なくとも１つの式中の最適な容量比値、ｋｏｐｔおよびパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを使用する工程と、を含む方法。
【請求項３】
請求項２記載の方法において、
前記最適な容量比値、ｋｏｐｔは２．０である方法。
【請求項４】
請求項２記載の方法において、
前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、およびグラジエント持続期間値を利用する工程であって、
（ｉ）（Ｉ）、および（ＩＶ）から選択された少なくとも１つの式を使用して、それぞれの溶出可能な化合物に対する保持容量を演算する工程であって、
【数４】
2013518286.tif 000011
および
【数５】
2013518286.tif 000012
ここで、Ａ＝前記開始グラジエント体積濃度値、Ｂ＝［（前記終了グラジエント体積濃度値）−（前記開始グラジエント体積濃度値）］／（前記グラジエント持続期間値）であって、Ｖｍはカラムボイド体積、ＶＤは滞留体積、およびＶｈは初期の保持容量であり、
（ｉｉ）式（ＩＩ）を使用して、各溶出可能な化合物のピークの平均バンド幅、ｗｇを演算する工程である工程と、
【数６】
2013518286.tif 000013
ここで、Ｖ１およびＶ２は、前記式Ｉまたは式ＩＶを使用した、溶出可能な化合物１および２に対するＶＲ値であり、およびＮはカラム効率である工程と、
（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用して成分ピーク間の分離度を演算する工程であって、
Ｒｓ（Ｖ２−Ｖ１）／ｗｇ（ＩＩＩ）および
（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記初期のグラジエント持続値、ｔｇ、を検討のためにユーザに提供する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに、グラジエント持続期間を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項５】
請求項４記載の方法において、
前記グラジエント持続期間を調節する手順は、
（ａ）前記初期のグラジエント持続期間値を増加したグラジエント持続期間値へ増加させる工程と、
（ｂ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つ、および前記増加したグラジエント持続期間値を使用した、各溶出可能な化合物に対する保持容量、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇおよび（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｃ）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示されるように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する工程を含み、または
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように完全に溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含み、ここで工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、第１の固定回数まで繰り返され、
前記第１の固定回数に到達する場合には、
前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する方法。
【請求項６】
請求項５記載の方法において、
前記方法は、さらに前記開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程を含み、
前記開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順は、
（ｅ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｆ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、前記増加したグラジエント持続期間値、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇ、および（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｇ）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含み、および
（１）前記２以上の溶出可能な化合物がＶ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する工程を含み、または
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに工程（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）を繰り返す工程を含み、ここで工程（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）は、第２の固定回数まで繰り返され、および
前記第２の固定回数に到達する場合には、
前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する方法。
【請求項７】
請求項６記載の方法において、
前記方法は、さらに前記終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程を含み、前記終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順は、
（ｐ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｑ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、前記増加したグラジエント持続期間値、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇ、および（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｒ）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに、工程（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）を繰り返す工程であって、工程（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）は、第３の固定回数まで繰り返される工程を含み、
前記第３の固定回数に到達すると、
前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する方法。
【請求項８】
請求項７記載の方法において、
前記初期のグラジエント持続期間値は１カラム体積であり、それぞれの増加したグラジエント持続期間値は約１カラム体積ずつそれぞれが異なり、それぞれの減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値は、前回の開始グラジエント溶媒体積濃度値の約９０％を含み、それぞれの減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値は、前回の終了グラジエント溶媒体積濃度値の約９０％を含み、前記第１の固定回数は約１０であり、前記第２の固定回数は約１００であり、前記第３の固定回数は約１００である方法。
【請求項９】
請求項２記載の方法において、
前記容量比を利用する前記工程は、パラメータｋ０およびｍを決定する工程を含む方法。
【請求項１０】
請求項５記載の方法において、
前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する工程も、前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアで用いる、液体クロマトグラフィー分離ユニットに提供する工程を含み、
前記液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアは、液体クロマトグラフィー分離手順中に、前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を受け入れおよび利用するように動作可能に構成される方法。
【請求項１１】
請求項５記載の方法を実施するために、コンピュータが実行可能な命令が記憶されたコンピュータ読み取り可能な媒体。
【請求項１２】
請求項８記載の方法を実施するために、コンピュータが実行可能な命令が記憶されたコンピュータ読み取り可能な媒体。
【請求項１３】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、
請求項８記載の方法を実施できるプログラム可能な命令またはソフトウェアを含むシステム。
【請求項１４】
請求項１３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
液体クロマトグラフィーカラムと、
フラクションコレクターと、
液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアであって、前記液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアは、液体クロマトグラフィーカラムのサンプルを分離中に、前記演算システムから、１つまたは複数の最適化されたプロセスパラメータを受け入れおよび利用するように動作可能に構成されるソフトウェアを含む液体クロマトグラフィー分離ユニットと、をさらに含むシステム。
【請求項１５】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数の分離パラメータ値をユーザに提供できる液体クロマトグラフィーシステムであって、前記システムは、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、を備え、
前記演算システムは、
クロマトグラフィー保持データを利用する工程であって、（１）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離中に２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定し、前記第２の溶媒体積濃度は、前記第１の溶媒体積濃度とは異なる工程と、
最適な容量比値、ｋｏｐｔ、と組み合わせて、前記推定された容量比を利用する工程であって、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程と、
ユーザが検討するために、（ｉ）、前記開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）、前記終了グラジエント溶媒体積濃度値を提供する工程と、を実施できるシステム。
【請求項１６】
請求項１５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記ユーザインターフェースは、ユーザのために可視のディスプレイを含むシステム。
【請求項１７】
請求項１５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
前記容量比、ｋ、および、前記第１のおよび第２の溶媒体積濃度を利用する工程であって、
順相システムのためのｋ＝ｋ０φ−ｍ、および逆相システムのためのｌｎｋ＝ａ−ｍφから選択された少なくとも１つの式のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを決定する工程と、
初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅのそれぞれを演算する工程であって、
順相システムのためのφ＝［（ｋ０／ｋｏｐｔ）１／ｍ］および逆相システムのためのφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］から選択された少なくとも１つの式中の最適な容量比値、ｋｏｐｔおよびパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを利用して演算する工程と、
前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、およびグラジエント持続期間値を利用する工程であって、
（ｉ）（Ｉ）および（ＩＶ）から選択された少なくとも１つの式を使用して、それぞれの溶出可能な化合物に対する保持容量を演算する工程であって、
【数７】
2013518286.tif 000014
および
【数８】
2013518286.tif 000015
ここで、Ａ＝前記開始グラジエント体積濃度値、Ｂ＝［（前記終了グラジエント体積濃度値）−（前記開始グラジエント体積濃度値）］／（前記グラジエント持続期間値）であって、Ｖｍはカラムボイド体積、ＶＤは滞留体積、およびＶｈは初期の保持容量である工程と、
（ｉｉ）式（ＩＩ）を使用して、各溶出可能な化合物のピークの平均バンド幅、ｗｇを演算する工程であって、
【数９】
2013518286.tif 000016
ここで、Ｖ１およびＶ２は、前記式Ｉまたは式ＩＶを使用した、溶出可能な化合物１および２に対するＶＲ値であり、およびＮはカラム効率である工程と、
（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用して成分ピーク間の分離度を演算する工程であって、
Ｒｓ（Ｖ２−Ｖ１）／ｗｇ（ＩＩＩ）；および
（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに、前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および、前記初期のグラジエント持続値、ｔｇ、を検討のためにユーザに提供する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに、前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および、初期のグラジエント持続値、ｔｇを、検討のためにユーザに提供し、または、グラジエント持続期間を調節する手順を開始する工程を実施することができるシステム。
【請求項１８】
請求項１７記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、前記グラジエント持続期間を調節する手順を開始する前記工程は、
（ａ）前記初期のグラジエント持続期間値を増加したグラジエント持続期間値へ増加させる工程と、
（ｂ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つ、および、前記増加したグラジエント持続期間値を使用した、各溶出可能な化合物に対する保持容量、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇおよび（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｃ）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示されるように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに、前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および、前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように完全に溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含み、ここで工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、第１の固定回数まで繰り返され、
前記第１の固定回数に到達する場合には、
前記初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および、前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する前記工程は、
（ｅ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｆ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、前記増加したグラジエント持続期間値、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇ、並びに（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｇ）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、前記２以上の溶出可能な化合物が完全に溶出し、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程であって、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物がＶ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または、
（１）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように前記２以上の溶出可能な化合物が、完全には溶出されない、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、工程（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）を繰り返し、工程（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）は、第２の固定回数まで繰り返され、
前記第２の固定回数に達する場合には、
前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供し、または、終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項２０】
請求項１９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、前記終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する前記工程は、
（ｐ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｑ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、前記増加したグラジエント持続期間値、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇ、および（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程と、
（ｒ）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含み、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、前記方法は、さらに、前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する工程を含み、または、
（１）前記２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、前記方法は、さらに、工程（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）を繰り返す工程であって、工程（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）は、第３の固定回数まで繰り返される工程を含み、
前記第３の固定回数に到達すると、
前記減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、前記減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および前記増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する方法。
【請求項２１】
請求項１９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、さらに（ｉ）初期のまたは減少した開始溶媒体積濃度値、（ｉｉ）初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉｉ）前記増加したグラジエント持続値を、液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアで用いる液体クロマトグラフィー分離ユニットに提供でき、
前記液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアは、液体クロマトグラフィー分離手順中に、（ｉ）前記初期のまたは減少した開始溶媒体積濃度値、（ｉｉ）前記初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉｉ）前記増加したグラジエント持続値を受け入れおよび利用するように動作可能に構成される方法。
【請求項２２】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法であって、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程を含む方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法において、
薄層クロマトグラフィーを使用して、クロマトグラフィー保持データが得られる方法。
【請求項２４】
請求項２２記載の方法において、
前記２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、クロマトグラフィー保持データを利用する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を含み、前記第２の溶媒体積濃度は、前記第１の溶媒体積濃度とは異なる方法。
【請求項２５】
請求項２２記載の方法において、
さらに各溶出可能な化合物の保持容量を演算するために、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程を含む方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の方法において、
さらに各溶出可能な化合物の間の分離度を演算するために、前記各溶出可能な化合物の保持容量を利用する工程を含む方法。
【請求項２７】
請求項２６記載の方法において、
さらに各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項２８】
請求項２７記載の方法において、
さらに、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項２９】
請求項２２記載の方法において、
さらに開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項３０】
請求項２９記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項３１】
請求項２２記載の方法において、
さらに終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項３３】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法であって、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程と、
前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、各溶出可能な化合物の保持容量を演算する工程と、を含む方法。
【請求項３４】
請求項３３記載の方法において、
さらに前記各溶出可能な化合物の保持容量を利用して、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算する工程を含む方法。
【請求項３５】
請求項３４記載の方法において、
さらに各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項３６】
請求項３５記載の方法において、
さらに、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のための保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項３７】
請求項３３記載の方法において、
さらに開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項３８】
請求項３７記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項３９】
請求項３３記載の方法において、
さらに終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項４０】
請求項３９記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項４１】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法であって、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程と、
前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程を含む方法。
【請求項４２】
請求項４１記載の方法において、
さらに各溶出可能な化合物間の前記分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項４３】
請求項４２記載の方法において、
さらに、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項４４】
請求項４１記載の方法において、
さらに開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項４５】
請求項４４記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含む方法。
【請求項４６】
請求項４１記載の方法において、
さらに終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む方法。
【請求項４７】
請求項４６記載の方法において、
さらに、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物の間の分離度が達成されたか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程と、を含む方法。
【請求項４８】
請求項４１記載の方法において、
前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変えることによって、前記分離度が再演算される方法。
【請求項４９】
請求項４１記載の方法において、
前記分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算される方法。
【請求項５０】
液体クロマトグラフィーシステムのソフトウェアを使用して、演算システムによって実施される、請求項４１記載の方法において、分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値は、前記化合物を分離するために、自動的に前記液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザへ提供される方法。
【請求項５１】
液体クロマトグラフィーシステムのソフトウェアを使用して、演算システムによって実施される、請求項４１記載の方法において、
ユーザが、溶出可能な化合物の特性を前記演算システムに入力後に、前記演算システムは、溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒ユーザに提供する方法。
【請求項５２】
液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法において、
溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、液体クロマトグラフィーシステムの演算システムに入力する工程と、
グラジエントパラメータ値を生成するために前記演算システムを使用する工程と、
前記液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザに前記グラジエントパラメータを自動的に提供する工程と、
前記２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含む方法。
【請求項５３】
請求項５２記載の方法において、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程と、
溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程と、を含む方法によって、前記グラジエントパラメータ値が決定される方法。
【請求項５４】
請求項５３記載の方法において、
前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変えることによって、前記分離度が再演算される方法。
【請求項５５】
請求項５３記載の方法において、
前記分離度は、グラジエント溶媒持続値を変えて再演算される方法。
【請求項５６】
液体クロマトグラフィーシステムのソフトウェアを使用して、演算システムによって実施される、請求項５２記載の方法において、
ユーザが、溶出可能な化合物の特性を前記演算システムに入力後に、前記演算システムは、前記溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供する方法。
【請求項５７】
液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法において、
溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、液体クロマトグラフィーシステムの演算システムに入力する工程と、
溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、前記演算システムを利用する工程と、
グラジエントパラメータ値を生成するために前記演算システムを使用する工程を含む方法。
【請求項５８】
請求項５７記載の方法において、
さらに、
前記液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザに前記グラジエントパラメータを自動的に提供する工程と、
前記２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含む方法。
【請求項５９】
請求項５７記載の方法において、
さらにグラジエントパラメータを生成するために、前記演算システムを使用する工程を実施する前に、前記２以上の溶出可能な化合物のクロマトグラフィー保持データを入力する工程を含む方法。
【請求項６０】
請求項５７記載の方法において、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程と、
前記溶出可能な化合物の保持容量および前記溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程を含む方法によって、前記グラジエントパラメータ値が決定される方法。
【請求項６１】
請求項５７記載の方法において、
前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変えることによって、前記分離度が再演算される方法。
【請求項６２】
請求項５７記載の方法において、
前記分離度は、グラジエント溶媒持続値を変えて再演算される方法。
【請求項６３】
液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法において、
溶出可能な化合物のクロマトグラフィー保持データを、液体クロマトグラフィー装置の演算システムに入力する工程と、
前記２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、前記演算システムを利用する工程と、
前記２以上の溶出可能な化合物が、前記推定された容量比で分離しないか否かを決定するために、前記演算システムを利用する工程と、
溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、前記演算システムを利用する工程と、
前記２以上の溶出可能な化合物を分離するために、前記少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用する工程と、を含む方法。
【請求項６４】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えたユーザインターフェースを具備し、
前記演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程と、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程と、を実施できるシステム。
【請求項６５】
請求項６４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
薄層クロマトグラフィーを使用して、前記クロマトグラフィー保持データが得られるシステム。
【請求項６６】
請求項６４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を含む、前記２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、前記第２の溶媒体積濃度は、前記第１の溶媒体積濃度とは異なるシステム。
【請求項６７】
請求項６４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、各溶出可能な化合物の保持容量を演算できるシステム。
【請求項６８】
請求項６７記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記各溶出可能な化合物の保持容量を利用して、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算することができるシステム。
【請求項６９】
請求項６８記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始できるシステム。
【請求項７０】
請求項６９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項７１】
請求項６４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項７２】
請求項７１記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項７３】
請求項６４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項７４】
請求項７３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
さらに、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物の間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を含むシステム。
【請求項７５】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システム、および、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースを具備するシステムにおいて、
前記演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；および、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量を演算する工程を実施できるシステム。
【請求項７６】
請求項７５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算するために、前記各溶出可能な化合物の保持容量を利用することができるシステム。
【請求項７７】
請求項７６記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項７８】
請求項７７記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項７９】
請求項７５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項８０】
請求項７９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項８１】
請求項７５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項８２】
請求項８１記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値まで低減する工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物の間の分離度が達成されたか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項８３】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、を具備するシステムにおいて、
前記演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；並びに、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程を実施できるシステム。
【請求項８４】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、各溶出可能な化合物の間の分離度が達成されていない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始できるシステム。
【請求項８５】
請求項８４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項８６】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項８７】
請求項８６記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）前記開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項８８】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができるシステム。
【請求項８９】
請求項８８記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
（ａ）前記終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程と、
（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程と、
（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程と、
（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程を実施できるシステム。
【請求項９０】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変化させることによって、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項９１】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、グラジエント溶媒持続体積を変化させて、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項９２】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、分離度の計算の完了後に、前記化合物の分離のために、グラジエントパラメータ値を前記液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザに、自動的に提供するシステム。
【請求項９３】
請求項８３記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、ユーザが、溶出可能な化合物の特性を前記演算システムに入力後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒をユーザに提供するシステム。
【請求項９４】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、を具備するシステムにおいて、
前記液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）前記液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）前記演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）前記クロマトグラフィーシステムまたはユーザに前記グラジエントパラメータを自動的に提供する工程を実施できるシステム。
【請求項９５】
請求項９４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程と、
（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用する工程と、
前記溶出可能な化合物の保持容量および前記溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程によって、前記グラジエントパラメータ値を決定することができるシステム。
【請求項９６】
請求項９５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変化させることによって、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項９７】
請求項９５記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、グラジエント溶媒持続体積を変化させて、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項９８】
請求項９４記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、ユーザが、溶出可能な化合物の特性を前記演算システムに入力後に、前記溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒をユーザに提供できるシステム。
【請求項９９】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、を具備するシステムにおいて、
前記液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）前記液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、前記演算システムを利用する工程；および（ｃ）前記溶出可能な化合物を液体クロマトグラフィーで分離するために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、前記演算システムを利用する工程を実施できるシステム。
【請求項１００】
請求項９９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
前記グラジエントパラメータを、前記液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザに自動的に提供する工程；および前記２以上の溶出可能な化合物を分離するために、前記液体クロマトグラフィーシステムと通信する工程を実施できるシステム。
【請求項１０１】
請求項９９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、
クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程と、
最適な容量比値と組み合わせて前記推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）前記液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程と、
前記開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、前記溶出可能な化合物の保持容量および前記溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程によって、前記グラジエントパラメータ値を決定することができるシステム。
【請求項１０２】
請求項９９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、前記開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変化させることによって、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項１０３】
請求項９９記載の液体クロマトグラフィーシステムにおいて、
前記演算システムは、グラジエント溶媒持続体積を変化させて、前記分離度を再演算できるシステム。
【請求項１０４】
液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数の分離パラメータ値をユーザに提供できる液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システム、および前記演算システムを備えるユーザインターフェースを具備するシステムにおいて、
前記液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）前記液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）前記演算システムによって実施される、前記溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）ユーザが、前記溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、前記演算システムに入力した後に、前記溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供する工程を実施できるシステム。
【請求項１０５】
液体クロマトグラフィーシステムであって、
演算システムと、
前記演算システムを備えるユーザインターフェースと、を具備するシステムにおいて、
前記液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）前記演算システムを利用し、演算システムに入力された前記溶出可能な化合物の保持データを使用して、前記２以上の溶出可能な化合物の容量比を推測する工程；（ｂ）前記演算システムを利用して、前記２以上の溶出可能な化合物が、前記推定された容量比で分離しないか否かを決定する工程；（ｃ）前記演算システムを利用して、前記溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成する工程；および（ｄ）前記少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用して、前記２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施できるシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法を対象とする。本発明は、液体クロマトグラフィーカラムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定することができる液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムを対象とする。
【背景技術】
【０００２】
[0002]液体クロマトグラフィーシステムにおいて、成分分離を最適化するための多くの方法が、当技術分野において開示されている。たとえば、Ｐ．Ｊａｎｄｅｒａ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、１１２６、１９５−２１８（２００６年）、およびＰ．Ｊａｎｄｅｒａ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、７９７、１１−２２（１９９８年）を参照されたい。さらに、これに限定されるものではないが、ＤＲＹＬＡＢ（登録商標）ソフトウェア（Ｒｈｅｏｄｙｎｅ、Ｒｏｈｎｅｒｔ  Ｐａｒｋ、カリフォルニア州）、ＣＨＲＯＭＤＲＥＡＭ（登録商標）ソフトウェア（Ｉｒｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌａｗｒｅｎｃｅ、カンザス州）、ＣＨＲＯＭＳＷＯＲＤ（登録商標）ソフトウェア（Ｉｒｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌａｗｒｅｎｃｅ、カンザス州），およびＥＬＵＥＸ（商標）ソフトウェア（ＣｏｍｐｕＤｒｕｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｔｄ．（ブダペスト、ハンガリー）を含む市販されている最適化ソフトウェアパッケージが多数ある。これらのシステムまたはパッケージは、完全には自動化されておらず、液体クロマトグラフィーシステムにおいて、正確で、効率的で、予測可能で迅速なフラクション捕集を提供していない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｐ．Ｊａｎｄｅｒａ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、１１２６、１９５−２１８（２００６年）
【非特許文献２】Ｐ．Ｊａｎｄｅｒａ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、７９７、１１−２２（１９９８年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
[0003]当技術分野において、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法が必要とされている。さらに、当技術分野において、液体クロマトグラフィーカラムで成分の分離をするために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定することができる液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
[0004]本発明は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法を対象とする。１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値には、これに限定されるものではないが、開始グラジエント溶媒体積濃度値、終了グラジエント溶媒体積濃度値、グラジエント持続期間の長さ、およびこれらの組み合わせが含まれてもよい。所定の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値の使用によって、１つまたは複数の可能性のある利益が提供されてもよい。可能性のある利益は、これに限定されるものではないが、最短周期での成分の分離、より少ない溶媒の使用による成分の分離、より良好な成分の分離、所定の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムの生産性の向上、分離のためのコスト削減、およびこれらの組み合わせを含む。
【０００６】
[0005]１つの例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定する工程であって、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる工程；並びに最適な容量比値ｋｏｐｔと組み合わせて推定された容量比、を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程と、を含む。
【０００７】
[0006]溶媒体積濃度は、０．１％三フッ素酸を含むアセトニトリル、水性緩衝液などのマルチ成分溶媒の組み合わせを指してもよい。第１の溶媒体積濃度に使用される溶媒は、第２の溶媒体積濃度に使用される溶媒と同じである必要は無く、たとえば第１の溶媒体積濃度にヘキサン／酢酸エチルが使用され、第２の溶媒体積濃度にクロロホルム／メタノールが使用されてもよい。いかなる保持データが利用されてもよく、これに限定されるものではないが、薄層クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、疑似移動層クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動クロマトグラフィー等のなどの技法のいかなるコモンモードの保持データを含んでもよい。これらの技法のコモンモードは、イオン交換、逆相、順相、親和性、サイズ排除、電子移動度およびその他を含む。さらに、これに限定されるものではないが、上述した方法を含む、いかなる液体クロマトグラフィー方法が、本発明の成分分離に利用されてもよい。
【０００８】
[0007]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；および最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程を含む。
【０００９】
[0008]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、クロマトグラフィー保持データを使用して２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；および開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量を演算する工程を含む。
【００１０】
[0009]１つの例示的な実施形態では、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用する工程を含み、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００１１】
[0010]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；および開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程を含む。
【００１２】
[0011]１つの例示的な実施形態では、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用する工程を含み、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００１３】
[0012]別の例示的な実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。
【００１４】
[0013]別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算される。
【００１５】
[0014]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、ここで分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物を分離するために、自動的にクロマトグラフィーユニットまたはユーザへ提供される。
【００１６】
[0015]さらに例示的な実施形態では、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用して、演算システムによって実行されてもよく、ここでユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を演算システムに入力後に、演算システムは、溶出可能な化合物を分離するめに使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒をユーザに提供する。
【００１７】
[0016]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、クロマトグラフィー分離ユニットの演算システムに入力する工程と、グラジエントパラメータ値を生成するために演算システムを利用する工程と、グラジエントパラメータをクロマトグラフィー分離ユニットまたはユーザに自動的に提供する工程と、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含む。
【００１８】
[0017]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、液体クロマトグラフィーシステムの演算システムに入力する工程；溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程；並びにグラジエントパラメータ値を生成するために演算システムを使用する工程を含む。別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、さらに、液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザにグラジエントパラメータを自動的に提供する工程、および２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含んでもよい。
【００１９】
[0018]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物のクロマトグラフィー保持データを、液体クロマトグラフィー装置の演算システムに入力する工程；２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、演算システムを利用する工程；２以上の溶出可能な化合物が、推定された容量比で分離しないか否かを決定するために、演算システムを利用する工程；溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程；および２以上の溶出可能な化合物を分離するために、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用する工程を含む。
【００２０】
[0019]いくつかの例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、薄層クロマトグラフィープレート上でサンプルを分離する工程であって、サンプルが２以上の溶出可能な化合物を含み、および溶媒システムが第１の溶媒体積濃度を有する工程；第２の溶媒体積濃度を有する溶媒システムを使用して、別の薄層クロマトグラフィープレート上で、同一サンプルを分離する工程であって、ここで第２の溶媒体積濃度が第１の溶媒体積濃度よりも濃い工程；サンプル内の２以上の溶出可能な化合物のそれぞれに対して、容量比、ｋ’ｓを演算する工程であって、ここでそれぞれのｋ＝（１−Ｒｆ）／Ｒｆであって、Ｒ１は、所定の溶媒システムの所定の溶出可能な化合物に対する、保持比を示す工程；順相システムのためのｋ＝ｋ０φ―ｍ、および逆相システムのためのｌｎｋ＝ａ−ｍφから選択された少なくとも１つの式中のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを決定するために、容量比、ｋ’ｓ、および第１のおよび第２の溶媒体積濃度を利用する工程；および初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓ、およびφｉｅのそれぞれを、最適な容量比値、ｋｏｐｔ並びに順相システムのためのφ＝［（ｋｏ／ｋｏｐｔ）１／ｍ］、および逆相システムではφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］から選択された少なくとも１つの式中のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを使用して演算する工程を含む。
【００２１】
[0020]液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な方法は、さらに、必要に応じて、所定の液体クロマトグラフィー分離のための最適なグラジエントパラメータ値を決定するために多くの追加の工程を含む。
【００２２】
[0021]いくつかの例示的な実施形態では、追加の工程は、これに限定されるものではないが、グラジエント持続期間を調節する手順を開始する工程、開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程、終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程、またはそれらの組み合わせのいずれかを含む。
【００２３】
[0022]本発明は、さらに、入力された保持データ（たとえば、薄層クロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、疑似移動層クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動クロマトグラフィー等からのデータ）を、１つまたは複数の最適化されたグラジエントパラメータ値に変換でき、および１つまたは複数の最適化されたグラジエントパラメータ値を、ユーザディスプレイおよび／または液体クロマトグラフィー分離ユニットに提供することができる、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）最適化ソフトウェアに関する。
【００２４】
[0023]１つの例示的な実施形態では、ＬＣ最適化ソフトウェアは、２つの異なる溶媒濃度を利用した、２つの分離ＴＬＣプレート中に溶出したそれぞれの成分の、Ｒｆ値形式で入力されたＴＬＣデータを、２つの異なる溶媒体積濃度での各溶出可能な化合物に対する、演算された容量比、ｋ’ｓに変換し；および最適な容量比値、ｋｏｐｔと組み合わせて演算された保持比を利用して、液体クロマトグラフィーシステム要素に対する（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する。ＬＣ最適化ソフトウェアは、最適化されたグラジエント持続期間、最適化された開始グラジエント溶媒体積濃度、最適化された終了グラジエント溶媒体積濃度、またはそれらの組み合わせのいずれかを提供するために利用されてもよい。
【００２５】
[0024]本発明は、さらにもっと、演算システム、およびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含む液体クロマトグラフィーシステムに関し、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用して、２つの異なる溶媒体積濃度で少なくとも２つの溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定でき；および最適な容量比値、ｋｏｐｔと組み合わせて推定された容量比を利用して、最適化されたグラジエント持続期間、最適化された開始グラジエント溶媒体積濃度、最適化された終了グラジエント溶媒体積濃度、またはそれらの組み合わせのいずれかを決定することができる。
【００２６】
[0025]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００２７】
[0026]いくつかの例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数の分離パラメータ値をユーザに提供でき、並びに、演算システム、およびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定するために、保持データを利用することができ；最適な容量比値、ｋｏｐｔと組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定でき；並びにユーザが検討するために、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を提供することができる。
【００２８】
[0027]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（１）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定でき、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００２９】
[0028]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ；および、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定することができる。
【００３０】
[0029]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用して、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００３１】
[0030]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用することができ；（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用することができ；並びに各溶出可能な化合物の保持容量を演算するために、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用することができる。
【００３２】
[0031]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００３３】
[0032]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用し、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、液体クロマトグラフィー分離のための（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定することができ；並びに、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算することができる。
【００３４】
[0033]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００３５】
[0034]一実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変化させることによって、再演算されてもよい。
【００３６】
[0035]別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算されてもよい。１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、ここで分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物の分離のために、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【００３７】
[0036]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力され、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき；演算システムで実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき；並びにユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を演算システムに入力後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供できる。
【００３８】
[0037]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）クロマトグラフィーシステムまたはユーザにグラジエントパラメータを自動的に提供する工程を実施できる。
【００３９】
[0038]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき、演算システムで実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき、およびクロマトグラフィーシステムまたはユーザに、グラジエントパラメータを自動的に提供できる。
【００４０】
[0039]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程；および（ｃ）溶出可能な化合物を液体クロマトグラフィーで分離するために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、演算システムを利用する工程を実施できる。
【００４１】
[0040]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変化させることによって、分離度を再演算できる。別の例示的な実施形態では、演算システムは、グラジエント溶媒持続体積を変化させて、分離度を再演算できる。
【００４２】
[0041]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき、演算システムで実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき、クロマトグラフィーシステムまたはユーザに、グラジエントパラメータを自動的に提供でき、並びに、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用することができる。
【００４３】
[0042]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）ユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、演算システムに入力した後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供する工程を実施できる。
【００４４】
[0043]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）演算システムに入力された溶出可能な化合物の保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を、推測するために演算システムを利用する工程；（ｂ）２以上の溶出可能な化合物が、推定された容量比で分離しないか否かを決定するために、演算システムを利用する工程；（ｃ）溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために演算システムを利用する工程；および（ｄ）２以上の溶出可能な化合物を分離するために、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用する工程を実施できる。
【００４５】
[0044]本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、さらに液体クロマトグラフィーカラムを含む液体クロマトグラフィー分離ユニット、フラクションコレクター、および液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアを含んでもよく、液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアは、１つまたは複数の最適化されたプロセスパラメータを演算システムから受け入れるように動作可能に構成されるので、効率的に所定のＬＣサンプルを操作できる。
【００４６】
[0045]本発明は、さらにもっと、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、開示された方法を実行するために、コンピュータ実行可能な命令が記憶されたコンピュータ読み取り可能な媒体に関する。コンピュータ読み取り可能なメディアは、コンピュータで実行可能な命令を実行できる演算システムに、コンピュータ実行可能な命令を読み込むために利用されてもよい。
【００４７】
[0046]本発明のこれらおよび他の特徴と利点は、開示された実施形態および添付の特許請求の範囲の以下の詳細な説明を参照することにより、明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明による、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値をユーザに提供できる、例示的な液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムの概略図を示す[0047]。
【図２】例示的な液体クロマトグラフィー（ＬＣ）分離のための、開始グラジエント溶媒体積濃度、終了グラジエント溶媒体積濃度、およびグラジエント持続期間を図示する[0048]。
【図３】例示的な薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分離のための、例示的な薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）保持比測定を示す[0049]。
【図４】本発明による、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0050]。
【図５】本発明による、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0050]。
【図６】本発明による、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0050]。
【図７】本発明による、開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程のための、例示的な方法の工程のフローダイヤグラムを示す[0051]。
【図８】本発明による終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する工程のための、例示的な方法の工程のフローダイヤグラムを示す[0052]。
【図９】本発明による、ユーザによって選択された「スピードプロセス」モードを利用する、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0053]。
【図１０】ユーザによって選択された、「純粋プロセス」または「純粋プロセス」モードを利用する、本発明による液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0054]。
【図１１】本発明による液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0055]。
【図１２】本発明による液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する、例示的な方法のフローダイヤグラムを示す[0055]。
【図１３】実施例１に記載されている、本発明の最適化されたグラジエント手順を使用する、実際の成分分離を図示する[0056]。
【図１４】実施例２に記載されている、本発明の最適化されたグラジエント手順を使用する、実際の成分分離を図示する[0057]。
【図１５】実施例３に記載されている、本発明の最適化されたグラジエント手順を使用する、実際の成分分離を図示する[0058]。
【図１６】実施例４に記載されている、本発明の最適化されたグラジエント手順を使用する、実際の成分分離を図示する[0059]。
【図１７】実施例５に記載されている、本発明の最適化されたグラジエント手順を使用する、実際の成分分離を図示する[0060]。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
[0061]本発明の原理の理解を促進するために、本発明の特定の実施形態の記述が以下に続き、特定の言語が、特定の実施形態を記述することに使用される。しかしながら、当然のことながら、特定の言語の使用によって、本発明の範囲を制限することは意図されない。変更形態、さらなる修正形態、および上述された本発明の原理のさらなる用途等は、当技術分野における当業者であれば容易に想到することが考えられる。
【００５０】
[0062]本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合には、単数形の「１つ（ａ）」、「および（ａｎｄ）」、および「前記（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他の場合を示している場合を除き、複数形の指示対象を含むことに留意しなければいけない。このように、たとえば、「１つの溶媒」を参照する場合には、複数の該溶媒を含み、「溶媒」を参照する場合には、１つまたは複数の溶媒、および当業者に知られているそれらの均等物、並びにその他のものを含む。
【００５１】
[0063]「約（ａｂｏｕｔ）」で修飾される場合には、たとえば、本開示の実施形態の記載に用いられた、組成物中の材料、濃度、量、プロセス温度、プロセス時間、回収量または生産量、流量、および同様の値、並びにそれらの範囲の量の数量の変動を示し、これは、たとえば、典型的な測定手順および取り扱い手順を介して、これらの手順の不測のエラーを介して、該方法を実施するために使用される材料の違いを介して、および同様の近似した事情によって発生する可能性がある。「約」という用語は、さらに特定の初期濃度または混合物を有する処方物の経時変化によって異なる量、および特定の初期濃度または混合物を有する処方物の混合または処理によって異なる量を包含する。「約」を意味する用語によって、修飾されるか否かにかかわらず、本明細書に添付の特許請求の範囲は、これらの量の均等物を含む。
【００５２】
[0064]本明細書で使用する場合、用語「クロマトグラフィー」は、１つは静止状態（固定相）であり、もう一方（移動相）は明確な方向に移動する、２相間で分散されている、分離されるべき構成部品を分離する物理的方法を意味する。
【００５３】
[0065]本明細書で使用する場合、用語「クロマトグラフィー保持データ」は、固定相または同種のもの上での、被分析物（たとえば、標的物質または溶出可能な化合物）の保持に関する情報を意味し、および、これに限定されるものではないが、保持時間、保持容量、各溶出可能な成分のＲｆ値、溶媒組成および濃度、プレートタイプ、固定相等を含む。
【００５４】
[0066]本明細書で使用する場合、用語「流体」は、気体、液体、および超臨界流体を意味する。
【００５５】
[0067]本明細書で使用する場合、用語「グラジエントパラメータ値」は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムの成分分離に使用される溶媒グラジエントに関する値を意味する。グラジエントパラメータ値は、これに限定されるものではないが、開始グラジエント溶媒体積濃度値、終了グラジエント溶媒体積濃度値、グラジエント持続期間の長さ、他のグラジエント溶媒濃度値、およびこれらの組み合わせを含んでもよい。
【００５６】
[0068]本明細書で使用する場合、用語「液体クロマトグラフィー」は、「移動相」に溶解させた流体混合物を、固定相を含むカラムの中を通過させることによって、混合物を分離することを意味し、混合物中で、他の分子から被分析物（すなわち、標的物質）を分離し、およびそれを単離できる。液体クロマトグラフィー方法は、これに限定されるものではないが、重力流動、低圧、中圧、高圧、超高圧、準備、プロセス等を含んでもよい。
【００５７】
[0069]本明細書で使用する場合、用語「特性」は、化合物の化学組成を破壊することなく測定されうる、化合物の化学的および物理的特性を意味する。たとえば、溶出可能な化合物の特性は、たとえば溶解度、極性、電荷、対イオン、親和性、ｐＨ、解離定数、錯形成特性、分子の大きさ、双極子モーメント、電気陰性度、化学的構造などのクロマトグラフィー分離条件を決定するものを含む。
【００５８】
[0070]本明細書で使用する場合、用語「固定相」は、「移動相」に溶解している混合流体を、固定相を含むカラムに通して、移動相のサンプルから混合物を分離することによって、被分析物を選択的に吸着するカラムまたはカートリッジに固定されている材料を意味し、それによって混合物中の他の分子から、測定されるべき被分析物を分離し、それを単離できる。
【００５９】
[0071]本明細書で使用する場合、用語「実質的に」は合理的な量を意味し、絶対値の約０％から約５０％、約０％から約４０％、約０％から約３０％、約０％から約２０％または約０％から約１０％で変化する量を含む。
【００６０】
[0072]本発明は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法を対象とする。本発明は、さらに、所定の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値をユーザに提供できる、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムに関する。１つまたは複数のグラジエントパラメータ値をユーザに提供できる、本発明の例示的な液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムの概略図が、図１に示される。
【００６１】
[0073]図１に示すように、例示的な液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システム１０は、ユーザ（図示せず）からのデータ１３を受け入れ、データ１３を処理し、並びに１つまたは複数のグラジエントパラメータ値１４をＬＣシステム要素１２へ提供し、およびディスプレイスクリーン（図示せず）などのユーザインターフェースを介してユーザ（図示せず）に提供する、ＬＣ方法オプティマイザ要素１１を含む。次にＬＣシステム要素１２は実際のサンプルの分離を実施し、および分離の結果１５を、ディスプレイスクリーン（図示せず）などのユーザインターフェースを介してユーザ（図示せず）に提供する。
【００６２】
[0074]さらに例示的な方法および液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムが以下に記載される。
【００６３】
Ｉ．ＬＣシステムのための、最適化グラジエントパラメータ値を決定する方法
[0075]本発明は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムで、成分を分離するために、１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値を決定する方法を対象とする。１つまたは複数の最適なグラジエントパラメータ値は、これに限定されるものではないが、開始グラジエント溶媒体積濃度値、終了グラジエント溶媒体積濃度値、グラジエント持続期間の長さ、およびこれらの組み合わせを含んでもよい。図２は、本発明の方法を使用して最適化された、いくつかのパラメータを図示する。
【００６４】
[0076]図２に示すように、グラフ２０は、線２４で示されるようにＬＣ分離中の、グラジエント溶媒体積濃度値の変化を示す。時刻０において、グラジエント溶媒体積濃度は、開始グラジエント溶媒体積濃度値２１を含む。時間０以降の時間で、グラジエント溶媒体積濃度値はグラジエント持続期間２３に入り、その間にグラジエント溶媒体積濃度値は増加して、終了グラジエント溶媒体積濃度値２２になる。本発明のいくつかの実施形態では、開始グラジエント溶媒体積濃度値２１、終了グラジエント溶媒体積濃度値２２、およびグラジエント持続期間２３の長さを決定する方法を開示するので、分離中に、所望のレベルの分離度を維持しながら、成分の溶出を最適化する。
【００６５】
[0077]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程；および（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用する工程を含む。一実施形態では、薄層クロマトグラフィーを使用して、クロマトグラフィー保持データが得られる。
【００６６】
[0078]別の例示的な実施形態では、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、クロマトグラフィー保持データを利用する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を含み、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。例示的な実施形態では、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値は、各溶出可能な化合物の保持容量を演算するために利用されてもよい。別の例示的な実施形態では、各溶出可能な化合物の保持容量は、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算するために利用される。
【００６７】
[0079]別の例示的な実施形態では、該方法は、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む。グラジエント持続調節には、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００６８】
[0080]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらに、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００６９】
[0081]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらに終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００７０】
[0082]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程；（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用する工程；および溶出可能な化合物の保持容量を演算するために、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程を含む。
【００７１】
[0083]１つの例示的な実施形態では、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用する工程を含み、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００７２】
[0084]別の例示的な実施形態では、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算するために、各溶出可能な化合物の保持容量が利用される。別の例示的な実施形態では、該方法は、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む。グラジエント持続調節は、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００７３】
[0085]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらには、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００７４】
[0086]別の例示的な実施形態では、該方法はさらに、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００７５】
[0087]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程；（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用する工程；および溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程を含む。
【００７６】
[0088]１つの例示的な実施形態では、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程は、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用する工程を含み、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【００７７】
[0089]一実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。
【００７８】
[0090]別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算される。別の例示的な実施形態では、該方法は、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む。グラジエント持続調節は、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００７９】
[0091]別の例示的な実施形態では、方法は、さらには、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００８０】
[0092]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらには、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【００８１】
[0093]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、ここで分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物の分離のために、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【００８２】
[0094]１つの例示的な実施形態では、本発明の方法は、クロマトグラフィー保持データ（たとえば、薄層クロマトグラフィー保持データ）を利用し、液体クロマトグラフィー分離のための１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する。例示的な方法では、薄層クロマトグラフィーデータ（たとえば、各溶出可能な成分のＲｆ値、溶媒組成および濃度、およびプレートタイプ）は、２つの異なる溶媒体積濃度で少なくとも２つの溶出可能な化合物の容量比ｋ’ｓを演算するために使用され、ここで、各ｋ＝（１−Ｒｆ）／Ｒｆ、およびＲｆは所定の溶媒システムの所定の化合物のための保持比を示す。該薄層クロマトグラフィーデータは、図３に描かれている。
【００８３】
[0095]図３に示すように、例示的な薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）データ３０は、（ｉ）第１の溶媒組成値（φ１（操作３１）および（２）第２の溶媒組成値φ２（操作３２）を使用する例示的な薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレート操作３１および３２のための、保持比の測定３４を含む。演算された保持比（すなわち、図３に示されるＲｆ１、ｔ、Ｒｆ１、ｂ、Ｒｆ２、ｔおよびＲｆ２、ｂ）は、次に最適な容量比値、ｋｏｐｔ、と組み合わせで使用され、以下でさらに論じる、液体クロマトグラフィーシステム成分（たとえば、図１に示されるＬＣシステム要素１２）のための（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する。図３は、前記第２の溶媒組成値よりも大きい第２の溶媒組成値を示すが、反対もまた明細書で考慮される。
【００８４】
[0096]本発明による、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する例示的な一方法は、図４〜図６に描かれている。図４に示すように、例示的な方法１００は、ブロック４０で開始されて、ステップ４１に進み、ここで、ＴＬＣプレートタイプ（たとえば、シリカ）が、ユーザによって選択される。ステップ４１から、例示的な方法１００は、ステップ４２に進み、ここで、分離されるべきサンプルは、ユーザによって選択される。サンプルは、２以上の溶出可能な成分から成る。ステップ４２から、例示的な方法１００は、ステップ４３に進み、ここで、サンプルは、体積濃度値φ１を有する第１の溶媒混合物を使用して、ＴＬＣプレート上で操作される。ステップ４３から、例示的な方法１００は、ステップ４４に進み、ここで、体積濃度値φ２を有する第２の溶媒混合物を使用して、サンプルは別のＴＬＣプレート上で操作され、値φ２は、φ１とは異なる。
【００８５】
[0097]ステップ４４から、例示的な方法１００は、ステップ４５に進み、ここで、２つの溶媒混合物のそれぞれの、２以上の溶出可能な成分のそれぞれに対して、保持比、Ｒｆがユーザによって演算される。ステップ４５から、例示的な方法１００は、ステップ４６に進み、ここで、ユーザは、（ｉ）所望の大きさおよび（ｉｉ）前回に使用されたＴＬＣプレート（たとえば、シリカ）と類似しているタイプを有するカラムを選択する。ステップ４６から、例示的な方法１００は、ステップ４７に進み、ここで、ユーザは、データをＬＣオプティマイザ１１に入力する。入力されたデータは、これに限定されるものではないが、ユーザによって演算された保持比Ｒｆ；カラムの種類（たとえば、順相、逆相等）；カラムサイズ；流量；および、前回の２つのＴＬＣ操作の間に使用された第１のおよび第２の溶媒体積濃度値φ１およびφ２、を含んでもよい。演算された保持比Ｒｆから、ＬＣオプティマイザ１１は容量比、ｋを演算し、ｋ＝（１−Ｒｆ）／Ｒｆ、およびＲｆは、第１のおよび第２の溶媒混合物それぞれの、所定の溶出可能な化合物の保持比を示す。ステップ４７から、例示的な方法１００は、ブロック４８に進み、ここで例示的な方法１００は、図５に示されるブロック４９に進む。
【００８６】
[0098]ブロック４９から、例示的な方法１００は、決定ブロック５０に進む。決定ブロック５０で、ＬＣオプティマイザ１１が、ステップ４７で入力されるデータに基づいて、次回の液体クロマトグラフィー操作（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２で）を、順相操作または逆相操作として実行すべきかを決定する。決定ブロック５０で、次回の液体クロマトグラフィー操作が、順相操作として実施されることが決定される場合には、例示的な方法１００は、ステップ５１に進み、ここで、パラメータｋ０およびｍは、式ｋ＝ｋ０φ−ｍ、ステップ４７で演算された容量比、ｋ、および、ステップ４７で入力された第１のおよび第２の溶媒体積濃度を使用して最適化される。すなわち、ステップ５１で、ＬＣオプティマイザ１１は、式ｋ＝ｋ０φ−ｍを使用して、演算されたｋ値および入力された溶媒体積濃度値の線形最小二乗法を実施して、各溶出可能な成分のためのパラメータｋ０およびｍ値を得る。
【００８７】
[0099]ステップ５１から、例示的な方法１００は、ステップ５２に進み、ここで、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅそれぞれは、ＬＣオプティマイザ１１に記憶されまたは上記のステップ４７でユーザによって入力されうる、式、φ＝［（ｋ０／ｋｏｐｔ）１／ｍ］、前回演算されたパラメータｋ０およびｍ値、並びに最適な容量比値、ｋｏｐｔを使用して、ＬＣオプティマイザ１１によって演算される。このステップでは、第１の溶出した化合物に対するパラメータｋ０およびｍを使用して、演算された溶媒濃度が、開始グラジエント体積濃度、φｉｓとして指定され、第２の溶出した化合物に対するパラメータｋ０およびｍを使用して演算された溶媒濃度が、終了グラジエント体積濃度、φｉｅとして指定される。いくつかの例示的な実施形態では、値２．０が、最適な容量比値、ｋｏｐｔとして（ｉ）ＬＣオプティマイザ１１に記憶され、または（ｉｉ）ユーザによって選択され、および入力され、ステップ５２から、例示的な方法１００は、以下に記載されるブロック５５に進む。
【００８８】
[0100]決定ブロック５０において、ＬＣオプティマイザ１１が、次回の液体クロマトグラフィー操作を（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２において）逆相操作として実施するという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ５３に進み、ここで、パラメータａおよびｍは、式ｌｎｋ＝ａ−ｍφ、ステップ４７で前回演算された容量比、ｋ、およびステップ４７で入力された第１のおよび第２の溶媒体積濃度を使用して最適化される。すなわち、ステップ５３で、ＬＣオプティマイザ１１は、各溶出可能な成分に対して式ｌｎｋ＝ａ−ｍφを使用して、演算されたｋ値および入力された溶媒体積濃度値に線形最小二乗法を実施し、パラメータａおよびｍの値を得る。
【００８９】
[0101]ステップ５３から、例示的な方法１００は、ステップ５４に進み、ここで、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅそれぞれは、ＬＣオプティマイザ１１によって、式、（φ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］、パラメータａおよびｍに対して前回演算された値、および上記で論じたｋｏｐｔを使用して演算される。このステップでは、第１の溶出した化合物に対してパラメータａおよびｍを使用して演算された溶媒濃度は、開始グラジエント体積濃度、φｉｓとして指定され、第２の溶出した化合物に対してパラメータａおよびｍを使用して演算された溶媒濃度は、終了グラジエント体積濃度、φｉｅとして指定される。上記で論じたように、いくつかの例示的な実施形態では、値２．０が最適な容量比値、ｋｏｐｔとして（ｉ）ＬＣオプティマイザ１１に記憶され、または（ｉｉ）ユーザによって選択され、および入力される（ステップ４７などで）。ステップ５４から、例示的な方法１００は、ブロック５５に進む。
【００９０】
[0102]ブロック５５から、例示的な方法１００は、図６に示されるブロック５６に進む。ブロック５６から、例示的な方法１００は、ステップ５７に進み、ここで、グラジエント持続期間に対して、一つのカラム体積と等しい初期の値がＬＣオプティマイザ１１によって利用される。ＬＣオプティマイザ１１は、このステップで初期のグラジエント持続期間に、他の初期値を使用してもよいことに留意されたい（すなわち、２以上のカラム体積）。ステップ５７から、例示的な方法１００は、決定ブロック５８に進む。
【００９１】
[0103]決定ブロック５８で、ＬＣオプティマイザ１１が、ステップ４７で入力されるデータに基づいて、使用されるべき次回の液体クロマトグラフィーカラム（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２において）は、順相または逆相カラムであるかを決定する。決定ブロック５８において、ＬＣオプティマイザ１１がクロマトグラフィー操作は順相カラムで実施されるべきであるという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ５９に進み、ここで、各溶出可能な成分に対する保持容量、ＶＲは、式１を使用してＬＣオプティマイザ１１によって演算される。
【数１】
2013518286.tif 000003
ここで、
ｍおよびｋ０は、ステップ５１で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ５２で前回演算された開始グラジエント体積濃度φｉｓ、
Ｂ＝［（ステップ５２で前に演算された終了グラジエント体積濃度φｉｅ）−（ステップ５２で前回演算された開始グラジエント体積濃度φｉｓ）／（グラジエント持続期間）、
Ｖｍはカラム体積（すなわち、ボイド値）であり、ＶＤは滞留体積（すなわち、溶媒が混合する点とカラムの先頭点との間の体積）であり、Ｖｈは初期の保持容量である。
【００９２】
[0104]Ｖｈは、第１の溶出可能な成分がグラジエント開始の近くのカラムに出る最小値であることに留意されたい。Ｖｈは流量の０から１倍である。任意に最後の保持容量も選択される、たとえば２（Ｖｍ＋ＶＤ＋Ｖｈ）である。
【００９３】
[0105]ステップ５９では、ＬＣオプティマイザ１１は、式ＩＩを使用して、２以上の化合物のピークの平均バンド幅、ｗｇも演算する。
【数２】
2013518286.tif 000004
ここで、
Ｖ１およびＶ２は、上述の式Ｉを使用して演算された、溶出可能な化合物１および２に対するＶＲ’ｓであり、Ｎはカラム効率である。
【００９４】
[0106]ステップ５９から、例示的な方法１００は、ステップ６１に進み、ここで、成分ピーク間の分離度が演算される。一般に、成分ピーク間の分離度は、式ＩＩＩによって決定される。
Ｒｓ＝（Ｖ２−Ｖ１）／ｗｇ（ＩＩＩ）。
以下でさらに論じるように、いくつかの例示的な実施形態では、分離度（すなわち、式ＩＩＩによって演算されるＲｓ）は、望ましくは少なくとも約１．５に等しい。ステップ５９から、例示的な方法１００は、以下に記述する決定ブロック６２に進む。
【００９５】
[0107]決定ブロック５８に戻って、ＬＣオプティマイザ１１が、ステップ４７で入力されるデータに基づいて、次回の液体クロマトグラフィーカラム（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２において）を逆相カラムを使用して実施することが決定される場合には、例示的な方法１００は、ステップ６０に進み、ここで、各溶出可能な成分に対する保持容量、ＶＲは、ＬＣオプティマイザ１１によって式ＩＶを使用して演算される。
【数３】
2013518286.tif 000005
ここで、
ｍおよびａは、ステップ５３で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ５４で前回演算された開始グラジエント体積濃度φｉｓであり、
Ｂ＝［（ステップ５４で前に演算された終了グラジエント体積濃度φｉｅ）−（ステップ５４で前回演算された開始グラジエント体積濃度φｉｓ）／（グラジエント持続期間）；および
Ｖｍ、ＶＤおよびＶｈは、式Ｉを参照して上述された体積である。
【００９６】
[0108]ステップ、６０では、Ｖｈは上記のような最小値である。ステップ６０では、ＬＣオプティマイザ１１は、上述の式ＩＩを使用してｗｇも演算する。
【００９７】
[0109]ステップ６０から、例示的な方法１００は、ステップ６１に進み、成分ピーク間の分離度は、上述の式ＩＩＩを使用して演算される。ステップ６１から、例示的な方法１００は、決定ブロック６２に進む。
【００９８】
[0110]決定ブロック６２で、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、（ステップ５２または５４からのφｉｓおよびφｉｅ）および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１は（ｉ）２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）および（ｉｉ）所望の最小分離度（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ≧１．５）が得られるか否かを決定する。決定ブロック６２において、ＬＣオプティマイザ１１が、（ｉ）２以上の溶出可能な成分が完全に溶出しおよび（ｉｉ）操作の間に所望の最小分離度が得られるという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ６３に進み、ここで、推奨されるグラジエントパラメータ、すなわち、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ５２または５４からのφｉｓおよびφｉｅ）およびグラジエント持続期間長（すなわち、ユーザによって選択された初期のグラジエント持続期間、たとえば、１カラム体積）が、たとえば、ディスプレイスクリーンを介して、ユーザに提供される。推奨されるグラジエントパラメータは、ステップ６３のＬＣオプティマイザ１１によって、ＬＣシステム要素１２に同時に提供されてもよいので、ユーザは、推奨されるグラジエントパラメータを単純に受け入れて、推奨されるグラジエントパラメータを利用して、ＬＣシステム要素１２の液体クロマトグラフィー操作を開始することができる。上記の条件のもとで、例示的な方法１００は、ステップ６３で終了する。
【００９９】
[0111]決定ブロック６２に戻って、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ５２または５４からのφｉｓおよびφｉｅ）並びに初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１が決定ブロック６２で（ｉ）２以上の溶出可能な成分が、完全には溶出しない（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧのいずれか）または（ｉｉ）所望の最小分離度が得られず（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＜１．５）と決定する場合には、例示的な方法１００は、決定ブロック６４に進む。決定ブロック６４で、ＬＣオプティマイザ１１が所定の最大グラジエント持続体積が利用されたか否かを決定する。
【０１００】
[0112]決定ブロック６４において、ＬＣオプティマイザ１１が所定の最大グラジエント持続体積がまだ利用されてない（たとえば、１０カラム体積）という決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ６５に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１はグラジエント持続体積（たとえば、１つまたは複数のカラム体積ずつ）を増加させる。ステップ６５から、例示的な方法１００が決定ブロック５８に戻り、上記で論じたように進む。ステップ６５およびそれに続くステップは、本明細書に記載されるグラジエント持続期間値を調節する手順を参照することに留意されたい。
【０１０１】
[0113]例示的な方法１００などのいくつかの実施形態では、グラジエント持続期間値を調節する手順の間に、グラジエント持続体積は、初期の値のたとえば、１カラム体積から最大の１０カラム体積に、１カラム体積ずつ繰り返して増加される。所定の最大カラム体積は、所望の純度によって変化してもよい。グラジエント持続体積のそれぞれの値で、例示的な方法１００は、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出され（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）たか否か、および演算された分離度（すなわち、式ＩＩＩを使用したＲｓ）が所望の量、たとえば、成分のＶＲ’ｓに基づく１．５よりも大きいか否かを検査する。所定の最大カラム体積（たとえば、１０カラム体積）に到達する前に、両方の条件が満たされる場合には、例示的な方法１００は上記で論じたステップ６３に進む。
【０１０２】
[0114]いくつかの実施形態では、ユーザは、（１）両方の条件、すなわち、完全な溶出および所望の分離度が満たされ、または（２）持続体積が所定のカラム体積（たとえば、１０カラム体積）になった場合に、例示的な方法１００を停止することを選択してもよい。このような場合には、ユーザは、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ５２または５４のφｉｓおよびφｉｅ）および最後のグラジエント持続期間（たとえば、１から１０または１５カラム体積）を使用して、ＬＣシステム要素１２の液体クロマトグラフィー操作を開始することをさらに選択してもよい。
【０１０３】
[0115]さらに以下に記載するように、ユーザは、例示的な方法１００の初期において（たとえば、ステップ４７で）オプションの「スピードモード」を選択してもよい。スピードモードでは、ＬＣオプティマイザ１１はステップ６３またはステップ６６で停止し、および開始グラジエント体積濃度、終了グラジエント体積濃度およびグラジエント持続期間を、ユーザおよびＬＣシステム要素１２に出力する。
【０１０４】
[0116]決定ブロック６４に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック６４で、所定の最大グラジエント持続体積が利用され（たとえば、１０カラム体積）および「純粋モード」オプションが選択された（たとえばステップ４７で）と決定されると、例示的な方法１００は、ブロック６６に進む。ブロック６６から、例示的な方法１００は、図７に示されるブロック６７に進み、ここで開始グラジエント溶媒体積濃度値を調節する手順が開始される。
【０１０５】
[0117]図７に示すように、例示的な方法１００はブロック６７からステップ６８に進み、前回使用された開始グラジエント溶媒体積濃度値（たとえば、初期の開始グラジエント溶媒体積濃度値）が、ＬＣオプティマイザ１１によって設定された量だけ低減され、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値になる。いくつかの実施形態では、所定の開始グラジエント溶媒体積濃度値は約１０％に等しい設定量だけ低減される。ステップ６８から、例示的な方法１００は、決定ブロック６９に進む。決定ブロック６９で、ＬＣオプティマイザ１１が、ステップ４７で入力されるデータに基づいて、使用されるべきクロマトグラフィーカラムは、順相または逆相カラムであるか否かを決定する。決定ブロック６９において、ＬＣオプティマイザ１１がクロマトグラフィー操作（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２において）は順相カラムを使用して実施されることを決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ７０に進み、ここで、保持容量およびピーク幅が、上述の数式ＩおよびＩＩを使用して演算され、
ｍおよびｋ０は、ステップ５１で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓであり、
Ｂ＝［（ステップ５２の前に演算された終了グラジエント体積濃度φｉｅ）―（ステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓ）］／（グラジエント持続期間）；および
Ｖｍ、ＶＤおよびＶｈは式Ｉで定義した値である。
【０１０６】
[0118]ステップ７０から、例示的な方法１００は、ステップ７２に進み、ここで、成分ピーク間の分離度は、上述の式ＩＩＩを使用して演算される。ステップ７２から、例示的な方法１００は、以下に記述する決定ブロック７３に進む。
【０１０７】
[0119]決定ブロック６９に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック６９で、クロマトグラフィー操作は逆相カラムを使用して実施されることが決定されると、例示的な方法１００は、ステップ７１に進み、ここで、保持容量およびピーク幅が、上述の数式ＩＶおよびＩＩを使用して演算され、ｍおよびａは、ステップ５３で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓであり、
Ｂ＝［（ステップ５２の前に演算された終了グラジエント体積濃度φｉｅ）―（ステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓ）］／（グラジエント持続期間）；および
Ｖｍ、ＶＤおよびＶｈは上述の式ＩＶで定義した値である。
【０１０８】
[0120]ステップ７１から、例示的な方法１００は、ステップ７２に進み、ここで、成分ピーク間の分離度が、上述の式ＩＩＩを使用して演算される。ステップ７２から、例示的な方法１００は、決定ブロック７３に進む。
【０１０９】
[0121]決定ブロック７３で、ＬＣオプティマイザ１１が、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）たか否かを決定する。決定ブロック７３において、ＬＣオプティマイザ１１が２以上の溶出可能な成分が完全に溶出したという決定をする場合には、例示的な方法１００は、決定ブロック７５に進み、ここで、所望の最小分離度（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ≧１．５）で、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）たか否かが決定される。決定ブロック７５において、ＬＣオプティマイザ１１が、所望の最小分離度で、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出したという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ７６に進み、ここで、推奨されるグラジエントパラメータ、すなわち、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続期間長が、たとえば、ディスプレイスクリーンを介して、ユーザに提供される。
【０１１０】
[0122]推奨されるグラジエントパラメータは、ステップ７６でＬＣオプティマイザ１１によって、ＬＣシステム要素１２に同時に提供されてもよいので、ユーザは、推奨されるグラジエントパラメータを単純に受け入れ、推奨されるグラジエントパラメータを利用して、ＬＣシステム要素１２の液体クロマトグラフィー操作を開始できる。上記の条件のもとで、例示的な方法１００は、ステップ７６で終了する。
【０１１１】
[0123]決定ブロック７５において、ＬＣオプティマイザ１１が、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）、しかし所望の最小分離度を示していない（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＜１．５）という決定をする場合には、例示的な方法１００は、決定ブロック７７に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、所定の最小開始グラジエント体積濃度値が利用されたか否かが決定される。決定ブロック７７において、ＬＣオプティマイザ１１が、所定の最小開始グラジエント体積濃度値がまだ使用されていないという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ６８に戻り、上記および下記で論じるように進む。
【０１１２】
[0124]例示的な方法１００などのいくつかの例示的な実施形態では、開始グラジエント体積濃度を、１０％ずつ（すなわち、開始値＊０．９）最大１００回まで反復的に減少させる。開始グラジエント体積濃度のそれぞれの値で、ＬＣオプティマイザ１１は、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出され（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）、および演算された分離度（すなわち、式ＩＩＩを使用してＲｓ）が所望の量、たとえば１．５よりも大きいか否かを、成分のＶＲ’ｓに基づいて検査する。最大数の開始グラジエント体積濃度値（たとえば、１００）に到達する前に、両方の条件が満たされる場合には、例示的な方法１００は、上記で論じたステップ７６に進む。最大数の開始グラジエント体積濃度値（たとえば、１００）に到達する前に、両方の条件が満たされない場合には、例示的な方法１００は、以下に記載するステップ７８に進む。
【０１１３】
[0125]決定ブロック７７において、ＬＣオプティマイザ１１が所定の最小開始グラジエント体積濃度値が利用された（すなわち、反復減少によって最大数に到達した）という決定をする場合には、例示的な方法１００は、ブロック７８に進む。ブロック７８から、例示的な方法１００は、図８に示されるブロック７９に進み、ここで終了グラジエント溶媒体積濃度値を調節する手順が、以下でさらに論じるように、ＬＣオプティマイザ１１によって開始される。
【０１１４】
[0126]決定ブロック７３に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック７３で、２以上の溶出可能な成分が、完全には溶出しないと決定されると、例示的な方法１００は、ステップ７４に進み、ここで、開始グラジエント溶媒体積濃度値は、典型的には前回の開始グラジエント溶媒体積濃度値に増加される（たとえば、初期の開始グラジエント溶媒体積濃度値または前回の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値）。ステップ７４から、例示的な方法１００は、ブロック７８に進む。ブロック７８から、例示的な方法１００は、図８に示されるブロック７９に進み、ここで終了グラジエント溶媒体積濃度値を調節する手順がＬＣオプティマイザ１１によって開始される。
【０１１５】
[0127]図８に示すように、例示的な方法１００はブロック７９からステップ８０に進み、前回に使用された終了グラジエント溶媒体積濃度値（たとえば、初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値）が、ＬＣオプティマイザ１１によって、設定された量だけ低減され、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値になる。いくつかの実施形態では、所定の終了グラジエント溶媒体積濃度値は、約１０％に等しい設定量だけ低減される。ステップ８０から、例示的な方法１００は、決定ブロック８１に進む。
【０１１６】
[0128]決定ブロック８１で、ＬＣオプティマイザ１１が、ステップ４７で入力されるデータに基づいて、使用さるべきクロマトグラフィーカラム（すなわち、図１に示されるＬＣシステム要素１２において）は、順相または逆相カラムであるか否かを決定する。決定ブロック８１において、ＬＣオプティマイザ１１が、クロマトグラフィー操作は順相カラムを使用して実施されることを決定する場合には、例示的な方法１００は、ステップ８２に進み、ここで、保持容量およびピーク幅が上述の数式ＩおよびＩＩを使用して演算され、
ｍおよびｋ０は、ステップ５１で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ５２で前回演算された初期の開始グラジエント体積濃度φｉｅまたはステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓであり、
Ｂ＝［（ステップ８０の減少した終了グラジエント体積濃度φｉｅ）−（ステップ５２の前回演算された初期の開始グラジエント体積濃度φｉｅまたはステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓ）］／（１から１５カラム体積の範囲のグラジエント持続期間）であり、
Ｖｍ、ＶＤおよびＶｈは上述の式Ｉで定義した値である。
【０１１７】
[0129]ステップ８２から、例示的な方法１００は、ステップ８４に進み、ここで、成分ピーク間の分離度は、上記で論じた式ＩＩＩを使用して演算される。ステップ８４から、例示的な方法１００は、以下に記載する決定ブロック８５に進む。
【０１１８】
[0130]決定ブロック８１に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック８１で、クロマトグラフィー操作が逆相カラムを使用して実施されることが決定されると、例示的な方法１００は、ステップ８３に進み、ここで、保持容量およびピーク幅は、上述の数式ＩＶおよびＩＩを使用して演算され、
ｍおよびａは、ステップ５３で前に演算されたパラメータであり、
Ａ＝ステップ５２で前回演算された初期の開始グラジエント体積濃度φｉｓまたはステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓであり、
Ｂ＝［（ステップ８０の減少した終了グラジエント体積濃度φｉｅ）−（ステップ５２の前回演算された初期の開始グラジエント体積濃度φｉｅまたはステップ６８の減少した開始グラジエント体積濃度φｉｓ）］／（１から１５カラム体積の範囲のグラジエント持続期間）であり、
Ｖｍ、ＶＤおよびＶｈは上述の式ＩＶで定義した値である。
【０１１９】
[0131]ステップ８３から、例示的な方法１００は、ステップ８４に進み、ここで、成分ピーク間の分離度は、上記で論じた式ＩＩＩを使用して演算される。ステップ８４から、例示的な方法１００は、決定ブロック８５に進む。
【０１２０】
[0132]決定ブロック８５で、ＬＣオプティマイザ１１が２以上の溶出可能な成分が完全に溶出したかを決定する。決定ブロック８５において、ＬＣオプティマイザ１１が２以上の溶出可能な成分が、完全には溶出しない（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧのいずれか）という決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ８６に進み、ここで、終了グラジエント溶媒体積濃度値は、一般に前回の終了グラジエント溶媒体積濃度値（たとえば、初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値または前回の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値）に増加される。
【０１２１】
[0133]ステップ８６から、例示的な方法１００は、ステップ８８に進み、ここで、推奨されるグラジエントパラメータ、すなわち、初期のまたは減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続期間長が、たとえば、ディスプレイスクリーンを介して、受け入れまたは修正をするためにユーザに提供される。推奨されるグラジエントパラメータは、ステップ８６でＬＣオプティマイザ１１によって、ＬＣシステム要素１２に同時に提供されてもよいので、ユーザは推奨されるグラジエントパラメータを単純に受け入れて、推奨されるグラジエントパラメータを利用して、ＬＣシステム要素１２の液体クロマトグラフィー操作を開始することができる。上記の条件のもとで、例示的な方法１００は、ステップ８８で終了する。
【０１２２】
[0134]決定ブロック８５に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック８５で、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出した（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）と決定されると、例示的な方法１００は、決定ブロック８７に進み、ＬＣオプティマイザ１１によって所望の最小分離度で２以上の溶出可能な成分が完全に溶出したか否かが決定される。決定ブロック８７で、所望の最小分離度（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ≧１．５）で、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出したと決定される場合には、例示的な方法１００は、ステップ８８に進み、ここで、推奨されるグラジエントパラメータ、すなわち、初期のまたは減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続期間長がユーザに提供され、および任意でＬＣシステム要素１２に提供される。上記の条件のもとで、例示的な方法１００は、ステップ８８で終了する。
【０１２３】
[0135]ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック８７で、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）、しかし所望の最小分離度を示していない（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＜１．５）と決定されると、例示的な方法１００は、決定ブロック８９に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、所定の最小終了グラジエント体積濃度値が利用されたか否かが決定される。決定ブロック８９において、ＬＣオプティマイザ１１が所定の最小終了グラジエント体積濃度値がまだ利用されていない、という決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ８０に戻り、上記および下記で論じるように進む。
【０１２４】
[0136]例示的な方法１００などのいくつかの例示的な実施形態では、終了グラジエント体積濃度を、１０％ずつ（すなわち、開始値＊０．９）最大１００回まで反復的に希釈させる。終了グラジエント体積濃度のそれぞれの値で、ＬＣオプティマイザ１１は、２以上の溶出可能な成分が完全に溶出されるか（すなわち、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）、および演算された分離度（すなわち、式ＩＩＩを使用してＲｓ）が所望の量、たとえば１．５よりも大きいか否かを、成分のＶＲ’ｓに基づいて検査する。終了グラジエント体積濃度値の最大値（たとえば、１００）に到達する前に、両方の条件が満たされる場合には、例示的な方法１００は、上記で論じたステップ８８に進む。終了グラジエント体積濃度値の最大値（たとえば、１００）に到達する前に、両方の条件が満たされない場合には、例示的な方法１００は、以下に記載するステップ８９に進む。
【０１２５】
[0137]決定ブロック８９において、ＬＣオプティマイザ１１が、所定の最小終了グラジエント体積濃度値が利用されたという決定をする場合には、例示的な方法１００は、ステップ８８に進み、ここで、推奨されるグラジエントパラメータ、すなわち、初期のまたは減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続期間長が、受け入れまたは修正するためにユーザに提供され、および任意でＬＣシステム要素１２に提供される。上記の条件のもとで、例示的な方法１００は、ステップ８８で終了する。
【０１２６】
[0138]例示的な方法１００は、方法ステップの特定の進行（すなわち、オプションのグラジエント持続期間を調節する手順の開始、次にオプションの開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順の開始、およびその後に必要に応じて、オプションの終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順の開始）に従うけれども、例示的な方法１００の変形形態も本発明の範囲内であることに留意されたい。たとえば、本発明の他の方法は、方法ステップの他の進行、すなわち、オプションのグラジエント持続期間を調節する手順をする前に、オプションの開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順および／またはオプションの終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始してもよい。
【０１２７】
[0139]上述のように、ユーザは、ＬＣオプティマイザ１１に「スピードプロセス」モードを選択してもよい。該プロセスは、図９に描かれている。図９に示すように、例示的な方法２００は、ステップ２０１から開始し、ユーザは、クロマトグラフィー保持データ（たとえば、ユーザによって演算された保持比Ｒｆ；以前の２つのＴＬＣ操作中で使用された第１のおよび第２の溶媒組成および体積濃度値φ１およびφ２；およびプレートタイプ）、分離モード（すなわち、順相または逆相）、および最適化目標（すなわち、スピードまたは分離度モード）を、ＬＣオプティマイザ１１に入力する。ステップ２０１から、例示的な方法２００は、ステップ２０２に進み、ここで、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅのそれぞれは、ＬＣオプティマイザ１１によって、式（ｉ）順相に対してφ＝［（ｋ０／ｋｏｐｔ）１／ｍまたは（ｉｉ）逆相に対してφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］のいずれか、パラメータｋ０およびｍ、またはｍおよびａに対する前回演算された値、並びに、ＬＣオプティマイザ１１に記憶されまたは上記で論じたステップ２０１でユーザによって入力された、最適な容量比値、ｋｏｐｔを使用して演算される。
【０１２８】
[0140]ステップ２０２から、例示的な方法２００は、ステップ２０３に進み、ここで、保持容量および分離度は、数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩを使用して、所定のグラジエント周期値（たとえば、初期の１カラム体積）の間、上記のＬＣオプティマイザ１１によって演算される。ステップ２０３から、例示的な方法２００は、決定ブロック２０４に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ２０２のφｉｓおよびφｉｅ）および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した理論的操作中に、（ｉ）２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、上述の式ＩまたはＩＶを使用して、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）および（ｉｉ）所望の最小分離度（たとえば、上述の式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１２９】
[0141]決定ブロック２０４において、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ２０２のφｉｓおよびφｉｅ）および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られない（たとえば、式ＩＩＩを用いてＲｓ＜１．５）という決定をする場合には、例示的な方法２００は、決定ブロック２０５に進む。決定ブロック２０５で、ＬＣオプティマイザ１１は、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）未満か否かを決定する。
【０１３０】
[0142]決定ブロック２０５において、ＬＣオプティマイザ１１がグラジエント持続期間は所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）未満であるという決定をする場合には、例示的な方法２００は、ステップ２０３に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１はグラジエント持続体積を増加し（たとえば、１カラム体積分）、増加したグラジエント周期値（たとえば、２から１０カラム体積）に対して、数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩを使用して、上述の保持容量および分離度を再演算する。ステップ２０３から、例示的な方法２００は、上記および以下に続く。
【０１３１】
[0143]決定ブロック２０５に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によって決定ブロック２０５で、グラジエント持続期間は所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）に等しいと決定されると、例示的な方法２００は、決定ブロック２０６に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は純粋モードまたはスピードモードがユーザによって選択されたか否かを決定する。ＬＣオプティマイザ１１がスピードモードはユーザによって選択された（すなわち、純粋モードはユーザによって選択されていない）と決定する場合には、例示的な方法２００は、ステップ２０７に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１はユーザおよびＬＣシステム要素１２に最適化された処理条件を提供する。
【０１３２】
[0144]決定ブロック２０４に戻って、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ２０２のφｉｓおよびφｉｅ）および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１から１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によって所望の最小分離度が得られる（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）と決定されると、例示的な方法２００は、決定ブロック２０６に進み、上記および下記で論じるように進む。
【０１３３】
[0145]決定ブロック２０６に戻って、ＬＣオプティマイザ１１によってユーザはスピードモードを選択していない（すなわち、純粋モードがユーザによって選択された）と決定されると、例示的な方法２００は純粋モードプロセス３００に進み、ここでＬＣオプティマイザ１１は、さらに図１０に記載された純粋モードを開始する。
【０１３４】
[0146]スピードモードを選択する代わりに、純粋モード、すなわち図１０に記載されたプロセスをユーザは選択してもよい。図１０に示すように、例示的な方法３００は、上記のように例示的なプロセス２００から開始し、例示的なプロセス２００の決定ブロック２０６から継続する。決定ブロック２０６から、例示的なプロセス３００は、ステップ３０１に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、（１）開始グラジエント濃度を１０％低減し、および（２）数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩを使用して上記の保持容量および分離度、および、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ２０２の前回演算された終了グラジエント溶媒体積濃度値、並びに（たとえば、１０カラム体積）の所定のグラジエント持続期間を演算する。
【０１３５】
[0147]ステップ３０１から、例示的な方法３００は、決定ブロック３０２に進み、ここで、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ２０２のφｉｓおよびφｉｅ）並びに所定のグラジエント周期値（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１は、（ｉ）２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、上述の式ＩまたはＩＶを使用して、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）および（ｉｉ）所望の最小分離度（たとえば、上述の式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）が得られるか否かを決定する。
【０１３６】
[0148]決定ブロック３０２において、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ２０２の前回演算された終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られない（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＜１．５）という決定をする場合には、例示的な方法３００は、決定ブロック３０３に進む。決定ブロック３０３で、ＬＣオプティマイザ１１が、開始グラジエント溶媒体積濃度値が１００倍未満に希釈したか否かを決定する。
【０１３７】
[0149]決定ブロック３０３において、ＬＣオプティマイザ１１が開始グラジエント溶媒体積濃度値は１００倍未満に減少したという決定をする場合には、例示的な方法３００は、ステップ３０１に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１は、開始グラジエント溶媒体積濃度値を希釈し（たとえば、１０％）、さらに減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値を使用して、数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩを使用して、上記の保持容量および分離度を再演算する。ステップ３０１から、例示的な方法３００は、上記および以下に続く。
【０１３８】
[0150]決定ブロック３０２に戻って、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ２０２の前回演算された終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によって所望の最小分離度が得られる（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）と決定されると、例示的な方法３００は、ステップ３０４に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、最適化された処理条件（たとえば、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ２０２の前回演算された終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）をユーザおよびＬＣシステム要素１２に提供する。
【０１３９】
[0151]決定ブロック３０３に戻って、決定ブロック３０３で、ＬＣオプティマイザ１１によって開始グラジエント溶媒体積濃度値が１００倍に希釈されたと決定されると、例示的な方法３００は、ステップ３０５に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、（１）終了グラジエント溶媒体積濃度値を希釈し（たとえば、１０％）、および（２）数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩ、並びにステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ３０５の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）を使用して、上記の保持容量および分離度を再演算する。
【０１４０】
[0152]ステップ３０５から、例示的な方法３００は、決定ブロック３０６に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、（ｉ）２以上の溶出可能な成分が完全に溶出し（すなわち、上述の式ＩまたはＩＶを使用してＶ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧ）および（ｉｉ）減少した開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値（すなわち、ステップ３０１およびステップ３０５のφｉｓおよびφｉｅ）および所定のグラジエント周期値（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作の間に、所望の最小分離度（たとえば、上述の式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１４１】
[0153]決定ブロック３０６において、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ３０５の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られないという決定をする場合には（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＜１．５）、例示的な方法３００は、決定ブロック３０７に進む。
【０１４２】
[0154]決定ブロック３０７で、ＬＣオプティマイザ１１は、終了グラジエント溶媒体積濃度値が１００倍未満に減少したか否かを決定する。決定ブロック３０７において、ＬＣオプティマイザ１１が、終了グラジエント溶媒体積濃度値は１００倍未満に希釈したという決定をする場合には、例示的な方法３００は、ステップ３０５に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１は、（１）さらに終了グラジエント溶媒体積濃度値を（たとえば、１０％）希釈し、および（２）数式ＩまたはＩＶおよびＩＩＩ並びにさらに減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値を使用して、上記の保持容量および分離度を再演算する。ステップ３０５から、例示的な方法３００は、上記および以下に続く。
【０１４３】
[0155]決定ブロック３０６に戻って、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ３０５の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によって所望の最小分離度が得られる（たとえば、式ＩＩＩを使用してＲｓ＞１．５）と決定されると、例示的な方法３００は、ステップ３０８に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、最適化された処理条件（たとえば、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ３０５の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積））をユーザおよびＬＣシステム要素１２に提供する。
【０１４４】
[0156]決定ブロック３０７に戻って、決定ブロック３０７でＬＣオプティマイザ１１によって、終了グラジエント溶媒体積濃度値が１００倍に希釈されたと決定されると、例示的な方法３００は、ステップ３０８に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、最適化された処理条件（たとえば、ステップ３０１の減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、ステップ３０５の減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１０カラム体積））をユーザおよびＬＣシステム要素１２に提供する。
【０１４５】
[0157]一つのサンプルで３つ以上の成分が分離されるべき場合には、本発明のＬＣオプティマイザは、成分分離を実施するためのプロセス条件を、ユーザまたは演算システムに提供するために利用されてもよい。動作またはプロセスは、２成分分離の場合と同一であるが、３つ以上の濃度グラジエントが、追加の成分（単数または複数）を分離するために生成される。たとえば、図１１および図１２は、３つの成分を分離する方法を示す。図１１に示すように、例示的な方法４００は、ステップ４０１で開始され、ここでユーザは、ＴＬＣデータ（たとえば、ユーザによって演算された保持比Ｒｆ；第１の、第２のおよび第３の溶媒組成および体積濃度値；およびプレートタイプ）、分離モード（すなわち、順相または逆相）をＬＣオプティマイザ１１に入力する。ステップ４０１から、例示的な方法４００は、ステップ４０２に進み、ここで、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値が、ＬＣオプティマイザ１１によって、セグメント１（成分１および２、ペア１と称する）およびセグメント２（成分２および３、ペア２と称する）のために演算される。
【０１４６】
[0158]ステップ４０２から、例示的な方法４００は、ステップ４０３に進み、ここで、セグメント１の所定のグラジエント周期値（たとえば、初期１カラム体積）の間に、ペア１のための保持容量および分離度が、上記のＬＣオプティマイザ１１によって演算される。ステップ４０３から、例示的な方法４００は、決定ブロック４０４に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、（ｉ）セグメント１の溶出可能な成分の第１のペアが完全に溶出し、および（ｉｉ）前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した、理論的操作の間に、所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１４７】
[0159]決定ブロック４０４において、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用する理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られないという決定をする場合には（たとえば、Ｒｓ＜１．５）、例示的な方法４００は、決定ブロック４０５に進む。決定ブロック４０５で、ＬＣオプティマイザ１１は、セグメント１のグラジエント持続期間が、所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であるか否かを決定する。
【０１４８】
[0160]決定ブロック４０５において、ＬＣオプティマイザ１１がグラジエント持続期間は所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上でないという決定をする場合には、例示的な方法４００は、ステップ４０３に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１はグラジエント持続体積を増加させ（たとえば、１カラム体積だけ）、セグメント１の増加したグラジエント周期値（たとえば、２から１０カラム体積）に対して、上記のペア１のための保持容量および分離度を再演算する。ステップ４０３から、例示的な方法４００は、上記および以下に続く。
【０１４９】
[0161]決定ブロック４０５に戻って、決定ブロック４０５でＬＣオプティマイザ１１によって、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４０６に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は成分３が溶出したか否かを決定する。ＬＣオプティマイザ１１が成分３が溶出していないと判断する場合には、例示的な方法４００は、以下に記載するステップ４０７に進む。ＬＣ１１オプティマイザが成分３が溶出していると判断する場合には、例示的な方法４００は、決定ブロック４１１に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は以下に記述する分離度問題が存在するか否かを決定する。
【０１５０】
[0162]決定ブロック４０４に戻って、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および所定のグラジエント持続期間（すなわち、１から１０カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によってペア１に対して所望の最小分離度が得られる（たとえば、Ｒｓ＞１．５）と決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４０７に進み、上記および下記で論じるように進む。
【０１５１】
[0163]ステップ４０７では、オプティマイザ１１はセグメント２の所定のグラジエント周期値（たとえば、最初は１カラム体積）に対して、上記のペア２の保持容量および分離度を演算する。ステップ４０７から、例示的な方法４００は、決定ブロック４０８に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって（１）セグメント１の溶出可能な成分のペア１が完全に溶出し、および（ｉｉ）前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した、理論的操作の間に、所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１５２】
[0164]決定ブロック４０８において、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られないという決定をする場合には（たとえば、Ｒｓ＜１．５）、例示的な方法４００は、決定ブロック４０９に進む。決定ブロック４０９で、ＬＣオプティマイザ１１がセグメント２のグラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上か否かを決定する。
【０１５３】
[0165]決定ブロック４０９において、ＬＣオプティマイザ１１がグラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上でないという決定をする場合には、例示的な方法４００は、ステップ４０７に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１はグラジエント持続体積を増加させ（たとえば、１カラム体積分）、およびセグメント２の増加したグラジエント周期値（たとえば、２から１０カラム体積）のために、上記のペア２の保持容量および分離度を再演算する。ステップ４０７から、例示的な方法４００は、上記および以下に続く。
【０１５４】
[0166]決定ブロック４０９に戻って、決定ブロック４０９でＬＣオプティマイザ１１によって、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であると決定される場合には、例示的な方法４００は、決定ブロック４１１に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１は、以下に記述する分離度問題が存在するか否かを決定する。
【０１５５】
[0167]決定ブロック４０８に戻って、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びにセグメント２（たとえば、１から１０カラム体積）の所定のグラジエント持続期間を使用した理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア２に対して所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４１０に進み、および上記および以下の純粋プロセス３００で論じられるように進む。
【０１５６】
[0168]図１２は、溶液の分離度問題に対するプロセスを示し、ここで２つのペアの成分の最も大きな問題が、２つではなく１セグメントだけを使用して、さらに最適化するために選択される。図１１のステップ４１１から、例示的な方法４００は、ステップ４１２に進む。ステップ４１２では、前回演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに所定のグラジエント持続期間（すなわち、１から１０カラム体積）使用する理論的操作中に、ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア２に対して所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られ、およびペア１に対して所望の最小分離度が得られない（たとえば、Ｒｓ＜１．０）と決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４１３に進み、ここでＬＣオプティマイザは、第１から第３の成分溶媒組成から１セグメントグラジエントを選択する。
【０１５７】
[0169]ステップ４１３から、例示的な方法４００は、ステップ４１４に進み、ここで、所定のグラジエント周期値（たとえば、初期の１カラム体積）の間に、ペア１に対する保持容量および分離度が、上記のＬＣオプティマイザ１１によって演算される。ステップ４１４から、例示的な方法４００は、決定ブロック４１５に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって（ｉ）第１のペアの溶出可能な成分が完全に溶出し、および（ｉｉ）前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した、理論的操作の間に、所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１５８】
[0170]決定ブロック４１５において、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用する理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られないという決定をする場合には（たとえば、Ｒｓ＜１．５）、例示的な方法４００は、決定ブロック４１６に進む。決定ブロック４１６で、ＬＣオプティマイザ１１は、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上か否かを決定する。
【０１５９】
[0171]決定ブロック４１６において、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上ではないという決定をＬＣオプティマイザ１１がする場合には、例示的な方法４００は、ステップ４１４に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１は、グラジエント持続体積を増加させ（たとえば、１カラム体積分）、および、増加したグラジエント周期値（たとえば、２から１０カラム体積）のために、上記のペア１に対する保持容量および分離度を再演算する。ステップ４１４から、例示的な方法４００は、上記および以下に続く。
【０１６０】
[0172]決定ブロック４１６に戻って、決定ブロック４１６でＬＣオプティマイザ１１によって、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４１７および純粋プロセス３００に進む。
【０１６１】
[0173]決定ブロック４１５に戻って、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１から１０カラム体積）を使用した理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア１に対して、所望の最小分離度が得られる（たとえば、Ｒｓ＞１．５）と決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４１７および純粋プロセス３００に進む。
【０１６２】
[0174]ステップ４１２に戻って、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値および所定のグラジエント持続期間（たとえば、１から１０カラム体積）を使用した理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア２に対して所望の分離度が得られない（たとえば、Ｒｓ＞１．５）、またはペア１に対して分離度が最小しきい値（たとえば、Ｒｓ＞１．０）であると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４１８に進み、ここでＬＣオプティマイザ１１は、ペア２に対する分離度が、最小しきい値である（たとえば、Ｒｓ＜１．０）か否かを決定する。ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア２に対する最小しきい分離度が得られないと決定される場合には、例示的な方法４００は、決定ブロック４１９に進み、ここでＬＣオプティマイザは、第２から第３の成分溶媒組成から１セグメントグラジエントを選択する。
【０１６３】
[0175]ステップ４１９から、例示的な方法４００は、ステップ４２０に進み、ここで、所定のグラジエント周期値（たとえば、初期の１カラム体積）の間、上記のＬＣオプティマイザ１１によってペア２の保持容量および分離度が演算される。ステップ４２０から、例示的な方法４００は、決定ブロック４２１に進み、ここで、ＬＣオプティマイザ１１によって、（ｉ）第１のペアの溶出可能な成分が完全に溶出し、および（ｉｉ）前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用した、理論的操作の間に、所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られるか否かが決定される。
【０１６４】
[0176]決定ブロック４２１において、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに初期のグラジエント持続期間（すなわち、１カラム体積）を使用する理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１が所望の最小分離度が得られないという決定をする場合には（たとえば、Ｒｓ＜１．５）、例示的な方法４００は、決定ブロック４２２に進む。決定ブロック４２２で、ＬＣオプティマイザ１１は、グラジエント持続期間が所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であるか否かを決定する。
【０１６５】
[0177]決定ブロック４２２において、ＬＣオプティマイザ１１がグラジエント持続期間は所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上でないという決定をする場合には、例示的な方法４００は、ステップ４２０に戻り、ここでＬＣオプティマイザ１１は、グラジエント持続体積を増加し（たとえば、１カラム体積分）、および増加したグラジエント周期値（たとえば、２から１０カラム体積）に対する、上記のペア２の保持容量および分離度を再演算する。ステップ４２０から、例示的な方法４００は、上記および以下に続く。
【０１６６】
[0178]決定ブロック４２２に戻って、決定ブロック４２２でＬＣオプティマイザ１１によって、グラジエント持続期間は所定のグラジエント持続体積（たとえば、１０カラム体積）以上であると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４２３および純粋プロセス３００に進む。
【０１６７】
[0179]決定ブロック４２１に戻って、前回に演算された初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値並びに所定のグラジエント持続期間（たとえば、１から１０カラム体積）を使用した理論的操作の間に、ＬＣオプティマイザ１１によって、ペア２に対して所望の最小分離度（たとえば、Ｒｓ＞１．５）が得られると決定されると、例示的な方法４００は、決定ブロック４２３および純粋プロセス３００に進む。
【０１６８】
[0180]上述の例示的な方法のいずれかでは、一旦、最適化されたグラジエントパラメータの組み合わせがユーザおよびＬＣシステム要素１２に提供されると、ユーザは、ＬＣオプティマイザ１１によって提供された、最適化されたグラジエントパラメータの組み合わせを、単に受け入れ、破棄し、または修正できる。ＬＣオプティマイザ１１は、これに限定されるものではないが、流量、初期の保持容量、最後の保持容量、カラムタイプ、カラムサイズ、サンプル組成物、および溶媒組成を含む、１つまたは複数の前回決定された、または入力されたパラメータを、ユーザが検討をするために、さらに提供してもよい。
【０１６９】
[0181]適切なカラムがユニットに取り付けられ、適切な溶媒がユニットに入力され、およびサンプルの注入が一旦準備されると、ＬＣオプティマイザ１１によって提供される、最適化されたグラジエントパラメータまたはそれらを変化させた組み合わせを使用して、ＬＣシステム要素１２を使用する自動クロマトグラフィーの操作およびフラクションの捕集を開始できる。
【０１７０】
[0182]別の例示的な実施形態では、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する方法は、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用して、演算システムによって実行されてもよく、ここでユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を演算システムに入力後に、演算システムは、溶出可能な化合物を分離するめに使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒をユーザに提供する。
【０１７１】
[0183]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、クロマトグラフィー分離ユニットの演算システムに入力する工程、グラジエントパラメータ値を生成するために演算システムを利用する工程、グラジエントパラメータをクロマトグラフィー分離ユニットまたはユーザに自動的に提供する工程、および２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含む。
【０１７２】
[0184]例示的な実施形態では、グラジエントパラメータ値は、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、クロマトグラフィー保持データを使用する工程によって決定されてもよく、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用する工程と、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程によって決定されてもよい。
【０１７３】
[0185]一実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算されてもよい。
【０１７４】
[0186]別の例示的な実施形態では、該方法は、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む。グラジエント持続調節は、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１７５】
[0187]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらに、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１７６】
[0188]別の例示的な実施形態では、該方法はさらに、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１７７】
[0189]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、ここで分離度の計算が完了した後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物の分離のために、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【０１７８】
[0190]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、クロマトグラフィー分離ユニットの演算システムに入力する工程、グラジエントパラメータを生成するために演算システムを使用する工程、グラジエントパラメータをクロマトグラフィー分離ユニットまたはユーザに自動的に提供する工程、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程、および２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含む。
【０１７９】
[0191]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、液体クロマトグラフィーシステムの演算システムに入力する工程；溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程；およびグラジエントパラメータ値を生成するために演算システムを使用する工程を含む。
【０１８０】
[0192]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、さらに、液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザにグラジエントパラメータを自動的に提供する工程；および２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を含んでもよい。
【０１８１】
[0193]例示的な実施形態では、方法は、さらに、グラジエントパラメータを生成するために、演算システムを使用する工程を実施する前に、２以上の溶出可能な化合物のクロマトグラフィー保持データを入力する工程を含んでもよい。
【０１８２】
[0194]例示的な実施形態では、グラジエントパラメータ値は、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、クロマトグラフィー保持データを使用する工程によって決定されてもよく、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用する工程；および溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算するために、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用する工程を含む。
【０１８３】
[0195]一実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算されてもよい。
【０１８４】
[0196]別の例示的な実施形態では、該方法は、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始する工程を含む。グラジエント持続調節は、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１８５】
[0197]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらに、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順は、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１８６】
[0198]別の例示的な実施形態では、該方法は、さらに、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始する工程を含む。終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順は（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程を含んでもよい。
【０１８７】
[0199]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、ここで分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物の分離のために、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【０１８８】
[0200]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーを使用して、２以上の溶出可能な化合物を分離する方法は、溶出可能な化合物のクロマトグラフィー保持データを、液体クロマトグラフィー装置の演算システムに入力する工程；２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するために、演算システムを利用する工程；２以上の溶出可能な化合物が、推定された容量比で分離しないか否かを決定するために、演算システムを利用する工程；溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成するために、演算システムを利用する工程；および２以上の溶出可能な化合物を分離するために、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用する工程を含む。
【０１８９】
ＩＩ．液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムおよびＬＣ最適化ソフトウェア
[0201]本発明は、さらに、液体クロマトグラフィー分離ユニットにおいて使用するために、１つまたは複数の分離パラメータ値をユーザに提供できる、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）システムおよびＬＣ最適化ソフトウェアに関する。
【０１９０】
[0202]１つの例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システム、およびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離中に、２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定するために、クロマトグラフィー保持データを使用することができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる工程と；（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定するために、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比、ｋｏｐｔ、を利用する工程と、およびユーザが検討するために、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を提供する工程を含む。
【０１９１】
[0203]本発明は、さらにもっと、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含む液体クロマトグラフィーシステムに関し、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２つの異なる溶媒体積濃度で少なくとも２つの溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓ、推定することができ、および、最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比、ｋｏｐｔを利用して、最適化されたグラジエント持続期間、最適化された開始グラジエント溶媒体積濃度、最適化された終了グラジエント溶媒体積濃度、またはそれらの組み合わせのいずれかを決定できる。
【０１９２】
[0204]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０１９３】
[0205]いくつかの例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数の分離パラメータ値をユーザに提供でき、並びに、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、保持データを利用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比、ｋ’ｓを推定することができ；最適な容量比値ｋｏｐｔと組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定でき；並びにユーザが検討するために、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度値を提供できる。
【０１９４】
[0206]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（１）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０１９５】
[0207]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み；ここで、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；および最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程を実施できる。
【０１９６】
[0208]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離とを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０１９７】
[0209]１つの例示的な実施形態では、薄層クロマトグラフィーを使用して、クロマトグラフィー保持データが得られる。
【０１９８】
[0210]別の例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離および（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を含む、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０１９９】
[0211]別の例示的な実施形態では、演算システムは、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、各溶出可能な化合物の保持容量を演算することができる。
【０２００】
[0212]さらに例示的な実施形態では、各溶出可能な化合物の保持容量を利用して、演算システムは、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算することができる。
【０２０１】
[0213]さらにもっと例示的な実施形態では、演算システムは、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始することができる。
【０２０２】
[0214]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、グラジエント持続を調節する手順を実施する。
【０２０３】
[0215]別の例示的な実施形態では、演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。
【０２０４】
[0216]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、開始グラジエント溶媒を調節する手順を実施する。
【０２０５】
[0217]さらに例示的な実施形態では、演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を実施する。
【０２０６】
[0218]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システム、およびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定することができ；並びに、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して各溶出可能な化合物の保持容量を演算することができる。
【０２０７】
[0219]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するができ、ここで第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０２０８】
[0220]さらに例示的な実施形態では、各溶出可能な化合物の保持容量を利用して、演算システムは、各溶出可能な化合物の間の分離度を演算することができる。
【０２０９】
[0221]さらにもっと例示的な実施形態では、演算システムは、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始することができる。
【０２１０】
[0222]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、グラジエント持続を調節する手順を実施する。
【０２１１】
[0223]別の例示的な実施形態では、演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。
【０２１２】
[0224]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、開始グラジエント溶媒を調節する手順を実施する。
【０２１３】
[0225]さらに例示的な実施形態では、演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。
【０２１４】
[0226]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を実施する。
【０２１５】
[0227]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定でき；および開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算できる。
【０２１６】
[0228]一実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを利用し、（ｉ）第１の溶媒体積濃度を含む第１の分離と（ｉｉ）第２の溶媒体積濃度を含む第２の分離を使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定することができ、第２の溶媒体積濃度は、第１の溶媒体積濃度とは異なる。
【０２１７】
[0229]一実施形態では、分離度は、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。
【０２１８】
[0230]別の例示的な実施形態では、分離度は、グラジエント溶媒持続体積を変えて再演算される。
【０２１９】
[0231]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、分離度の計算が完了後に、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、化合物の分離のために、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【０２２０】
[0232]さらにもっと例示的な実施形態では、演算システムは、各溶出可能な化合物間の分離度が得られない場合に、グラジエント持続を調節する手順を開始することができる。
【０２２１】
[0233]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を、増加したグラジエント持続期間値に増加させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、グラジエント持続を調節する手順を実施する。
【０２２２】
[0234]別の例示的な実施形態では、演算システムは、開始グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。
【０２２３】
[0235]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を繰り返す工程によって、開始グラジエント溶媒を調節する手順を実施する。
【０２２４】
[0236]さらに例示的な実施形態では、演算システムは、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を開始することができる。
【０２２５】
[0237]例示的な実施形態では、演算システムは、（ａ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｂ）各溶出可能な化合物のために保持容量を再演算する工程；（ｃ）各溶出可能な化合物間の分離度が達成されるか否かを決定する工程；および（ｄ）分離度が達成されない場合には、工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返す工程によって、終了グラジエント溶媒濃度を調節する手順を実施する。
【０２２６】
[0238]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、分離度演算が完了した後に、化合物の分離のために、グラジエントパラメータ値を液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザに、自動的に提供する。
【０２２７】
[0239]別の例示的な実施形態では、演算システムは、ユーザが、溶出可能な化合物の特性を演算システムに入力後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供する。
【０２２８】
[0240]演算システムは、本発明に開示された方法を実施することができる、いずれかのコンピュータまたはマイクロプロセッサであってもよい。好適な演算システムは、これに限定されるものではないが、パーソナルコンピュータ、メインフレームコンピュータ、マイクロプロセッサ等を含む。
【０２２９】
[0241]液体クロマトグラフィーシステムは、１つまたは複数のユーザインターフェース要素を含む。好適なユーザインターフェース成分は、これに限定されるものではないが、データ（たとえば、クロマトグラフィー保持データ１３）を液体クロマトグラフィーシステムに入力するためのキーボード、結果（たとえば、推奨される液体クロマトグラフィーシステムパラメータ１４）をユーザに提供するための、可視ディスプレイ、またはそれらの組み合わせのいずれかを含む。
【０２３０】
[0242]本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、２以上の溶出可能な化合物を含むサンプルのための薄層クロマトグラフィープレートデータを利用して、２つの溶媒混合物システムで使用される、２以上の溶出可能な化合物のそれぞれの容量比、ｋを演算する工程であって、ｋ＝（１−Ｒｆ）／Ｒｆであり、Ｒｆが所定の溶媒混合物システムの所定の化合物のための保持比を示す工程と；演算された容量比および第１のおよび第２の溶媒混合物システムの第１のおよび第２のグラジエント溶媒体積濃度を使用して、順相システムのためのｋ＝ｋ０φ−ｍおよび逆相システムのためのｌｎｋ＝ａ−ｍφから選択された、少なくとも１つの式中のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを決定する工程と；並びに、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓ、およびφｉｅのそれぞれを、最適な容量比値、ｋｏｐｔ並びに順相システムのためのφ＝［（ｋｏ／ｋｏｐｔ）１／ｍ］、および逆相システムではφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］から選択された少なくとも１つの式中のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを使用して演算する工程を、望ましくは実施できる。上記で論じたように、いくつかの実施形態では、最適な容量比値、ｋｏｐｔは２．０に等しくてもよい。
【０２３１】
[0243]本発明の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、（ｉ）グラジエント持続期間を調節する手順（たとえば、図６に示すように）、（ｉｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順（たとえば、図７に示すように）、（ｉｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順（たとえば、図８に示すように）、または（ｉｖ）（ｉ）から（ｉｉｉ）の組み合わせのいずれかを必要に応じて開始して、１つまたは複数の最適化された分離パラメータ値をユーザに提供することがさらにできる、演算システムを含む。
【０２３２】
[0244]いくつかの実施形態では、本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、容量比、ｋ’ｓ、および第１のおよび第２の溶媒体積濃度を利用して、順相システムのためのｋ＝ｋ０φ−ｍ、および逆相システムのためのｌｎｋ＝ａ−ｍφから選択された少なくとも１つの式のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを決定し；最適な容量比値、ｋｏｐｔ、並びに、順相システムのためのφ＝［（ｋｏ／ｋｏｐｔ）１／ｍ］および逆相システムのためのφ＝［（ａ−ｌｎｋｏｐｔ）／ｍ］から選択された、少なくとも１つの式中のパラメータ（ｉ）ｋ０およびｍまたは（ｉｉ）ａおよびｍを使用して、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、φｉｓおよびφｉｅをそれぞれ演算し；初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、およびグラジエント持続期間値を利用し、（ｉ）Ｉ（順相モードのための）またはＩＶ（逆相モードのための）の少なくとも１つの数式を使用して、各溶出可能な化合物に対する保持容量を演算し、ここでＡ＝開始グラジエント体積濃度値、Ｂ＝［（終了グラジエント体積濃度値）−（開始グラジエント体積濃度値）］／（グラジエント持続期間値）、Ｖｍはカラムボイド体積、ＶＤは滞留体積、およびＶｈは初期の保持容量であり、（ｉｉ）式ＩＩを使用して、各溶出可能な化合物のピークの平均バンド幅、ｗｇを演算し、ここでＶ１およびＶ２は、上記式Ｉまたは式ＩＶを使用した、溶出可能な化合物１および２のためのＶＲ値、およびＮはカラム効率であり、並びに、（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した成分ピーク間の分離度を演算することができる、システムのソフトウェアまたはコードを含む。
【０２３３】
[0245]（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように完全に溶出され、並びに（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、システムは、ユーザが検討するために、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および初期のグラジエント持続値、ｔｇ、を提供する。（１）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られずに、２以上の溶出可能な化合物が、完全には溶出されない場合には、システムは、（ｉ）ユーザが検討するために、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、並びに初期のグラジエント持続値、ｔｇ、を提供するか、または（ｉｉ）グラジエント持続期間を調節する手順を開始する。
【０２３４】
[0246]いくつかの実施形態では、本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、システムにグラジエント持続期間を調節する手順も開始させることができるソフトウェアまたはコードを含む。グラジエント持続期間を調節する手順は、（ａ）初期のグラジエント持続期間値を増加したグラジエント持続期間値へ増加させる工程；（ｂ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、および増加したグラジエント持続期間値、並びに（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇ、および（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を、再演算する工程；並びに（ｃ）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、２以上の溶出可能な化合物が完全に溶出されるか否か、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含んでもよい。（１）２以上の溶出可能な化合物がＶ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、システムは、初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する。
【０２３５】
[0247]（１）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、２以上の溶出可能な化合物が完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、システムは、ステップ（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）を繰り返し、ここでステップ（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、第１の固定回数まで繰り返される。第１の固定回数に到達すると、システムは、（ｉ）初期の開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供するか、または（ｉｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する。
【０２３６】
[0248]いくつかの実施形態では、本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、さらにシステムに開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始させることができるソフトウェアまたはコードを含む。開始グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順は、（ｅ）開始グラジエント溶媒体積濃度を、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｆ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、増加したグラジエント持続期間値、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値を再演算し、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇを再演算し、および（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程；および（ｇ）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、２以上の溶出可能な化合物が完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含んでもよい。
【０２３７】
[0249]（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示すように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、システムは、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を検討のためにユーザに提供する。（１）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、２以上の溶出可能な化合物が、完全には溶出されず、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、システムはステップ（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）を繰り返し、ここでステップ（ｅ）、（ｆ）および（ｇ）は、第２の固定回数まで繰り返される。第２の固定回数に到達すると、システムは、（ｉ）減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、初期の終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供するか、または（ｉｉ）終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始する。
【０２３８】
[0250]いくつかの実施形態では、本発明の液体クロマトグラフィーシステムは、システムに終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順を開始させるソフトウェアまたはコードを含む。終了グラジエント溶媒体積濃度を調節する手順は、（ｐ）終了グラジエント溶媒体積濃度を、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値に低減させる工程；（ｑ）（ｉ）数式ＩおよびＩＶの少なくとも１つを使用した各溶出可能な化合物に対する保持容量、増加したグラジエント持続期間値、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、および減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値を再演算し、（ｉｉ）式ＩＩを使用したピークの平均バンド幅、ｗｇを再演算し、並びに（ｉｉｉ）式ＩＩＩを使用した分離度を再演算する工程；並びに（ｒ）Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧで示されるように、２以上の溶出可能な化合物が完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られるか否かを決定する工程を含んでもよい。
【０２３９】
[0251]（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示されるように完全に溶出され、および（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られる場合には、システムは、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する。（１）２以上の溶出可能な化合物が、Ｖ１＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧおよびＶ２＜Ｖｍ＋Ｖｈ＋ＶＤ＋ＶＧに示されるように、完全には溶出されない、または（２）少なくとも１．５の分離度Ｒｓが得られない場合には、システムは、ステップ（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）を繰り返し、ここでステップ（ｐ）、（ｑ）および（ｒ）は、第３の固定回数まで繰り返される。第３の固定回数に到達する場合には、システムは、減少した開始グラジエント溶媒体積濃度値、減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および増加したグラジエント持続値を、検討のためにユーザに提供する。
【０２４０】
[0252]上述の液体クロマトグラフィーシステムのいずれにおいても、演算システムは、さらに（ｉ）初期のまたは減少した開始溶媒体積濃度値、（ｉｉ）初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉｉ）増加したグラジエント持続値を、液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアで用いる液体クロマトグラフィー分離ユニットに提供でき、ここで液体クロマトグラフィー分離ユニットソフトウェアは、液体クロマトグラフィー分離手順中に（ｉ）初期のまたは減少した開始溶媒体積濃度値、（ｉｉ）初期のまたは減少した終了グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉｉ）増加したグラジエント持続値を受け入れて利用するように動作可能に構成される。ユーザは、液体クロマトグラフィーシステムによって提示された、最適化されたプロセスパラメータを単純に受け入れ、修正し、または破棄して、液体クロマトグラフィーシステムによって提示される最適化されたプロセスパラメータまたはそれらの変動値を使用して、液体クロマトグラフィー分離操作を開始する。
【０２４１】
[0253]別の例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき、演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき、並びに、ユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を演算システムに入力後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供できる。
【０２４２】
[0254]さらに例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき、演算システムで実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき、並びにクロマトグラフィーシステムに、グラジエントパラメータを自動的に提供できる。
【０２４３】
[0255]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み；ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）クロマトグラフィーシステムまたはユーザにグラジエントパラメータを自動的に提供する工程を実施できる。
【０２４４】
[0256]例示的な実施形態では、演算システムは、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定するためにクロマトグラフィー保持データを使用する工程；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用し、（１）開始グラジエント溶媒体積濃度値、および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；並びに、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用し、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程によって、グラジエントパラメータ値を決定することができる。
【０２４５】
[0257]一実施形態では、分離度は、本明細書に記載されるように、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。
【０２４６】
[0258]別の例示的な実施形態では、分離度は、本明細書に記載のグラジエント溶媒持続体積を変えて再演算されてもよい。
【０２４７】
[0259]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、分離度の計算が完了後に、化合物を分離するために、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）を、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供する。
【０２４８】
[0260]さらにもっと例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、液体クロマトグラフィーシステムと通信する演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程を実施でき、演算システムで実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定でき、クロマトグラフィーシステムに、グラジエントパラメータを自動的に提供でき、並びに、演算システムを利用して、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成することができる。
【０２４９】
[0261]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システム；およびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）演算システムを利用して、溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成する工程；および（ｃ）演算システムを利用して、溶出可能な化合物を液体クロマトグラフィーで分離するために、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程を実施できる。
【０２５０】
[0262]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、液体クロマトグラフィーシステムまたはユーザにグラジエントパラメータを自動的に提供する工程；および２以上の溶出可能な化合物を分離するために、液体クロマトグラフィーシステムと通信する工程を実施できる。
【０２５１】
[0263]例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推定する工程；最適な容量比値と組み合わせて推定された容量比を利用して、（ｉ）開始グラジエント溶媒体積濃度値および（ｉｉ）液体クロマトグラフィー分離のための終了グラジエント溶媒体積濃度値を決定する工程；並びに、開始および終了グラジエント溶媒体積濃度値を利用して、溶出可能な化合物の保持容量および溶出可能な化合物間の分離度を演算する工程によって、グラジエントパラメータ値を決定することができる。
【０２５２】
[0264]一実施形態では、分離度は、本明細書に記載されているように、開始または終了グラジエント溶媒体積濃度値を変更して、再演算されてもよい。
【０２５３】
[0265]別の例示的な実施形態では、分離度は、本明細書に記載のグラジエント溶媒持続体積を変えて再演算される。
【０２５４】
[0266]１つの例示的な実施形態では、演算システムは、クロマトグラフィー分離ユニットのソフトウェアを使用し、分離度の計算が完了後に、化合物を分離するために、グラジエントパラメータ値（時間表および濃度表）は、クロマトグラフィーユニットまたはユーザへ自動的に提供される。
【０２５５】
[0267]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）液体クロマトグラフィーシステムと通信する、演算システムに入力される、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を使用して、液体クロマトグラフィーで、２以上の溶出可能な化合物を分離する工程；（ｂ）演算システムによって実施される、溶出可能な化合物の液体クロマトグラフィー分離のための、１つまたは複数のグラジエントパラメータ値を決定する工程；および（ｃ）ユーザが、溶出可能な化合物の１つまたは複数の特性を、演算システムに入力した後に、溶出可能な化合物を分離するために使用する、望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を、ユーザに提供する工程を実施できる。
【０２５６】
[0268]例示的な実施形態では、液体クロマトグラフィーシステムは、演算システムおよびユーザ演算システムを備えるユーザインターフェースを含み、ここで液体クロマトグラフィーシステムは、（ａ）演算システムを利用し、演算システムに入力された溶出可能な化合物の保持データを使用して、２以上の溶出可能な化合物の容量比を推測する工程；（ｂ）２以上の溶出可能な化合物が、推定された容量比で分離しないか否かを決定するために、演算システムを利用する工程；（ｃ）演算システムを利用して、溶出可能な化合物を分離するために使用する、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を生成する工程；並びに、（ｄ）２以上の溶出可能な化合物を分離するために、少なくとも１つの望ましい種類のクロマトグラフィー方法、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラムサイズ、およびクロマトグラフィー溶媒を利用する工程を実施できる。
【０２５７】
[0269]本発明は以上のように記載され、さらに、本発明の範囲を制限するものと解釈されない一例が以下に記載される。むしろ、当業者であれば、明細書の記載を読めば、本発明の精神および／または添付の特許請求の範囲を逸脱することなく、多様な他の実施形態、修正形態、および均等物を容易に想到できるということが明確に理解されるであろう。
【実施例】
【０２５８】
実施例１：２つの成分の順相分離（スピードモード）
[0270]ユーザは、ＴＬＣプレートタイプ（順相）としてシリカを選択し、２つの成分（ブチルパラベンおよびメチルパラベン）をプレートの上に付け、２０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．３５および０．２４であった。ユーザは別のプレートに付け、これを３０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．５０および０．３９であった。ユーザは、ＬＣ分離のために、１２ｇシリカカラム（順相）および流量３６ｍＬ／分を選択した。ユーザがデータを、フラッシュクロマトグラフィーシステム（すなわち、Ｇｒａｃｅ  Ｄａｖｉｓｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手できる、ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（商標）フラッシュシステム）にインストールされたＬＣオプティマイザに入力し、スピードモードを選択する。
【０２５９】
[0271]オプティマイザは、式ｋ＝ｋ０φ―ｍのパラメータとして、第１のピークのために、ｍ＝１．５３およびｋ０＝０．１６、並びに、第２のピークのためにｍ＝１．７４およびｋ０＝０．１９で演算する。この式中でｋとしてｋｏｐｔ＝２および第１のピークのパラメータを使用することによって、１９％の開始グラジエント体積濃度が得られる。第２のピークのパラメータを使用することによって２７％の終了グラジエント体積濃度が得られる。
【０２６０】
[0272]グラジエント体積を１カラム体積に設定して反復的にそれを増加させることによって、１０カラム体積の最大グラジエント体積で終了（この場合）し、両方の成分がカラムから溶出する。スピードモードに基づくＬＣオプティマイザは、以下の表１に記載のグラジエントプロファイルを、ユーザが検討するために、出力として提供する。
【表１】
2013518286.tif 000006
時間（分）
グラジエント体積濃度
【０２６１】
[0273]グラジエントプロファイルは、液体クロマトグラフィーシステム要素（たとえば、液体クロマトグラフィーシステム要素１２）への入力としても提供された。ユーザは、データを受け入れて、および液体クロマトグラフィー分離手順を開始した。図１３は、上の実施例１に記載された、最適化されたグラジエント手順を使用した、２つの溶出可能な成分の分離を示す、実際のクロマトグラムを図示する。
【０２６２】
実施例２：２つの成分の順相分離（純粋モード）
[0274]ユーザはＴＬＣプレートタイプとしてシリカを選択し、２つの成分（ブチルパラベンおよびメチルパラベン）をプレートに付け、２０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．３５および０．２４であった。次にユーザは別のプレートに付け、これを３０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．５０および０．３９であった。ユーザは、ＬＣ分離のために１２ｇシリカカラムおよび流量３６ｍＬ／分を選択した。ユーザがデータを、ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（商標）フラッシュシステムにインスト−ルされた、ＬＣオプティマイザに入力し、純粋モードを選択する。
【０２６３】
[0275]オプティマイザは、式ｋ＝ｋ０φ−ｍに対するパラメータとして、第１のピークに対してｍ＝１．５３およびｋ０＝０．１６並びに第２のピークに対してｍ＝１．７４およびｋ０＝０．１９で演算する。この式中でｋとしてｋｏｐｔ＝２および第１のピークのパラメータを使用することによって、１９％の開始グラジエント体積濃度が得られる。第２のピークのパラメータを使用することによって、２７％の終了グラジエント体積濃度が得られる。
【０２６４】
[0276]グラジエント体積を１カラム体積に設定し、それを反復的に増加させて、最大グラジエント体積の１０カラム体積で終了（この場合）し、両方の成分がカラムから溶出する。純粋モードでは良好な分離度が得られないので、ＬＣオプティマイザは開始グラジエント体積濃度の最適化を実施する。
【０２６５】
[0277]両方の成分がカラムから溶出するけれども、良好な分離度が得られない場合は、開始グラジエント体積濃度を反復して０％までずっと減少させる。ＬＣオプティマイザは、終了グラジエント体積濃度の最適化を実施する。
【０２６６】
[0278]終了グラジエント体積濃度を反復して１９％まで減少させて、両方の成分がカラムから溶出する。この操作時間に対する最適な分離度が得られた。以下の表２に記載のグラジエントプロファイルが、出力としてユーザに提供された。
【表２】
2013518286.tif 000007
時間（分）
グラジエント体積濃度
【０２６７】
[0279]グラジエントプロファイルは、液体クロマトグラフィーシステム要素（たとえば、液体クロマトグラフィーシステム要素１２）への入力としても提供された。ユーザは、データを受け入れて、液体クロマトグラフィー分離手順を開始した。図１４は、上の実施例２に記載された、最適化されたグラジエント手順を使用した、２つの溶出可能な成分の分離を示す、実際のクロマトグラムを図示する。
【０２６８】
実施例３：２つの成分の順相分離（スピードモード）
[0280]ユーザはＴＬＣプレートタイプとしてシリカを選択し、２つの成分（ジオクチルフタレートおよびブチルパラベン）をプレートに付けて、２０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、は、０．７５および０．３５であった。次にユーザは別のプレートに付けて、これを３０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．８０および０．５０であった。ユーザは、ＬＣ分離に対して１２ｇシリカカラムおよび流量３６ｍＬ／分を選択した。ユーザはデータを、ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（商標）フラッシュシステムにインスト−ルされたＬＣオプティマイザに入力し、スピードモードを選択する。
【０２６９】
[0281]オプティマイザは、式ｋ＝ｋ０φ−ｍに対するパラメータとして、第１のピークに対してｍ＝０．７１およびｋ０＝０．１１、並びに、第２のピークに対してｍ＝１．５３およびｋ０＝０．１６で演算する。この式中でｋとしてｋｏｐｔ＝２および第１のピークのパラメータを使用することによって、２％の開始グラジエント体積濃度が得られる。第２のピークのパラメータを使用することによって、終了グラジエント体積濃度は２０％となる。
【０２７０】
[0282]グラジエント体積を１カラム体積に設定して、それを反復的に増加させて、最大グラジエント体積の５カラム体積で終了（この場合）し、両方の成分がカラムから溶出し、良好な分離度が得られる。スピードモードに基づくＬＣオプティマイザは、以下の表３に記載のグラジエントプロファイルを、ユーザが検討するために、出力として提供する。
【表３】
2013518286.tif 000008
時間（分）
グラジエント体積濃度
【０２７１】
[0283]グラジエントプロファイルは、液体クロマトグラフィーシステム要素（たとえば、液体クロマトグラフィーシステム要素１２）への入力としても提供された。ユーザは、データを受け入れて、および液体クロマトグラフィー分離手順を開始した。図１５は、上の実施例３に記載された、最適化されたグラジエント手順を使用した、２つの溶出可能な成分の分離を示す、実際のクロマトグラムを図示する。
【０２７２】
実施例４：２つの成分の順相分離（純粋モード）
[0284]ユーザはＴＬＣプレートタイプとしてシリカを選択し、２つの成分（ジオクチルフタレートおよびブチルパラベン）をプレートに付けて、２０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分の（ジオクチルフタレートおよびブチルパラベン）Ｒｆ値は、０．７５および０．３５であった。次にユーザは、別のプレートに付けて、これを３０％溶媒体積濃度で操作した。２つの成分のＲｆ値は、０．８０および０．５０であった。ユーザは、ＬＣ分離のために１２ｇシリカカラムおよび流量３６ｍＬ／分を選択した。ユーザがデータを、ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（商標）フラッシュシステムにインスト−ルされたＬＣオプティマイザに入力し、および純粋モードを選択する。
【０２７３】
[0285]オプティマイザは、式ｋ＝ｋ０φ−ｍに対するパラメータとして、第１のピークに対してｍ＝０．７１およびｋ０＝０．１１、並びに、第２のピークに対してｍ＝１．５３およびｋ０＝０．１６で演算する。この式中でｋとしてｋｏｐｔ＝２および第１のピークに対するパラメータを使用して、２％の開始グラジエント体積濃度を得る。第２のピークのパラメータを使用することによって、２０％の終了グラジエント体積濃度を得る。
【０２７４】
[0286]グラジエント体積を１カラム体積に設定して、反復的にそれを増加させることによって、純粋モードの設定に基づいてこれらを１０カラム体積の最大グラジエント体積で終了（この場合）し、両方の成分がカラムから溶出する。純粋モードの厳密な条件設定のために、スピードモードよりも、より良い分離度が得られる。ＬＣオプティマイザは、以下の表４に記載のグラジエントプロファイルを、ユーザが検討するために、出力として提供する。
【表４】
2013518286.tif 000009
時間（分）
グラジエント体積濃度
【０２７５】
[0287]グラジエントプロファイルは、液体クロマトグラフィーシステム要素（たとえば、液体クロマトグラフィーシステム要素１２）への入力としても提供された。ユーザは、データを受け入れて、および液体クロマトグラフィー分離手順を開始した。図１６は、上の実施例４に記載された、最適化されたグラジエント手順を使用した、２つの溶出可能な成分の分離を示す、実際のクロマトグラムを図示する。
【０２７６】
実施例５：３つの成分の順相分離
[0288]ユーザはＴＬＣプレートタイプとしてシリカを選択し、３つの成分（α−トコフェロール、δ−トコフェロール、およびメチルパラベン）をプレートに付けて、２０％溶媒体積濃度で操作した。３つの成分のＲｆ値は０．６９、０．５７および０．２４であった。次にユーザは別のプレートに付け、これを３０％溶媒体積濃度で操作した。３つの成分のＲｆ値は、０．７５、０．６８および０．３９であった。ユーザは、ＬＣ分離をするために１２ｇシリカカラムおよび流量３６ｍＬ／分を選択した。ユーザがデータを、ＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（商標）フラッシュシステムにインスト−ルされたＬＣオプティマイザに入力する。
【０２７７】
[0289]オプティマイザは、式ｋ＝ｋ０φ−ｍに対するパラメータとして、第１のピークのためにｍ＝０．７４およびｋ０＝０．１４、第２のピークのためにｍ＝１．１６およびｋ０＝０．１２、並びに、第３のピークのためにｍ＝１．７４およびｋ０＝０．１９で演算する。この式中でｋとしてｋｏｐｔ＝２および第１のピークのパラメータを使用することによって、３％の開始グラジエント体積濃度が得られる。第２のピークのパラメータを使用することによって、第１のセグメントの終了グラジエント体積濃度として９％を得る。第３のピークのパラメータを使用することによって、第２のセグメントのために、２７％の終了グラジエント体積濃度を与える。
【０２７８】
[0290]第１のセグメントのグラジエント体積を１カラム体積に設定して反復的にそれを増加させることによって、３カラム体積のグラジエント体積で終了し、良好な分離度が得られる。第１のおよび第２のピークは溶出するが、第３のピークは溶出しない。従って、第２のセグメントを使用するには、成分分離を達成することが必要になる。第２のセグメントのグラジエント体積を１カラム体積に設定して反復的にそれを増加させることによって、４カラム体積のグラジエント体積で終了し、良好な分離度が得られる。ＬＣオプティマイザは、以下の表５に記載のグラジエントプロファイルを、ユーザが検討するために、出力として提供する。
【表５】
2013518286.tif 000010
時間（分）
グラジエント体積濃度
【０２７９】
[0291]グラジエントプロファイルは、液体クロマトグラフィーシステム要素（たとえば、液体クロマトグラフィーシステム要素１２）への入力としても提供された。ユーザは、データを受け入れて、および液体クロマトグラフィー分離手順を開始した。図１７は、上の実施例５に記載された、最適化されたグラジエント手順を使用した、３つの溶出可能な成分の分離を示す実際のクロマトグラムを図示する。
【０２８０】
[0292]本発明は限られた数の実施形態について記載されてきたが、これらの特定の実施形態は、明細書の記載および特許請求の範囲を除き、本発明の範囲を制限することを意図していない。本明細書の例示的な実施形態を参照すれば、さらなる修正形態、均等形態、および変形形態が可能であることは、当業者にとっては明白である。実施例のすべての部分および百分率、および明細書の残りの部分は、他に記載がない限り重量による。
【０２８１】
[0293]さらに、特定の一連の特性、測定単位、条件、物理的状態または百分率などを示す、明細書または請求の範囲で引用されるすべての数値範囲は、参照により文字通り明示的に明細書に取り入れられ、または、そこで引用される全範囲のサブセット数値を含む、該範囲に入るすべての数値が取り入れられることが意図される。たとえば、下限ＲＬ、および上限Ｒｕを含む数値範囲が開示される場合には常に、該範囲に含まれるすべての数値Ｒが明確に開示される。特に、次の範囲に含まれる数値Ｒ（Ｒ＝ＲＬ＋ｋ（ＲＵ−ＲＬ））は明確に開示される。ここでｋは、増分が１％である１％から１００％までの可変範囲であり、たとえば、ｋは１％、２％、３％、４％、５％．．．．５０％、５１％、５２％．．．．９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である。さらに、任意の２つのＲ値で示されるすべての数値範囲も、上記で演算されるように、明確に開示される。
【０２８２】
[0294]本明細書に記載されて示された修正形態に加え、本発明のいかなる修正形態も、前述の記述および添付図面から当業者には明らかである。該修正形態は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。本明細書に引用されるすべての刊行物は、参照によってその全体がここに組み込まれる。
【図１】
2013518286.tif 000017
【図２】
2013518286.tif 000018
【図３】
2013518286.tif 000019
【図４】
2013518286.tif 000020
【図５】
2013518286.tif 000021
【図６】
2013518286.tif 000022
【図７】
2013518286.tif 000023
【図８】
2013518286.tif 000024
【図９】
2013518286.tif 000025
【図１０】
2013518286.tif 000026
【図１１】
2013518286.tif 000027
【図１２】
2013518286.tif 000028
【図１３】
2013518286.tif 000029
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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